(57)【要約】【課　題】凍結した生物試料から、生命科学の研究に利用できる薄い薄切片をスライドグラス上に作製する。【解決手段】低温下でも粘着力を有し、且つ有機溶媒に容易に溶解する粘着剤を、透明で伸張性の小さいプラスチックフィルムの所定面に塗布し、薄切試料の薄切面と同等の大きさに粘着性を付与した薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムを作製し、乾燥後、そのフィルムを薄切片支持材として用いて変形や損傷のない薄切片を作製する。次に、薄切片をスライドグラスに密着し、薄切片と薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムが貼付いた状態のスライドグラスを有機溶媒に没入し、粘着剤を溶解してフィルムを薄切片から剥離し、薄切片のみをスライドグラスに残す。【選択図】　　　図１６
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
水溶性包埋剤で凍結包埋した生物試料の薄切面、あるいはパラフィンで包埋した生物試料の薄切面に、薄切片支持材として粘着性を有する薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムを試料の所定面に貼り付け、薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムが貼り付いた状態で、刃物で薄切片を作製し、その薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムに貼り付いた薄切片を表面処理したスライドグラスに密着し、薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムと薄切片が貼り付いたスライドグラスを有機溶媒に没入し、粘着剤を溶解させてプラスチックフィルムを剥離させ、生物組織薄切片をスライドグラス上に作製する生物組織薄切片作製方法。
【請求項２】
生物試料の薄切片を作製する際に、薄切片を支持するために用いる透明な薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムにおいて、
プラスチックフィルム上に低温度でも粘着性を有する領域と、粘着性の無い領域を設け、上記粘着性の無い領域で挟まれる粘着性を有する領域の長さは、上記生物試料を薄切する長さとほぼ等しくした薄切片支持用粘着性プラスチックフィルム。
【請求項３】
請求項２記載の薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムにおいて、
低温度でも強い粘着性を有し、しかも有機溶媒に没入すると簡単に溶解する粘着剤を、薄くて透明なプラスチックフィルムの片面の全面に塗布し、乾燥後、帯状の薄いプラスチックフィルムを所定の間隔で密着させて、上記粘着性の無い領域を形成させた薄切片支持用粘着性プラスチックフィルム。
【請求項４】
請求項２記載の薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムにおいて、
低温度でも強い粘着性を有し、有機溶媒に没入すると簡単に溶解する粘着剤を、薄くて透明なプラスチックフィルムの片面に、帯状に塗布した薄切片支持用粘着性プラスチックフィルム。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、包埋（例えば、凍結包埋）した生物試料（例えば、実験動物試料、植物試料）から生命科学の研究（例えば、組織学的研究、組織化学的研究、酵素組織化学的研究、免疫組織化学的研究、遺伝子組織化学的研究）に利用できる薄切片（例えば、厚さ２〜１０μｍ）をスライドグラス上に作製するのに好適な生物組織薄切片作製方法及び薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
生命科学の研究では、凍結した生物試料の薄切片（例えば、厚さ２〜１０μｍ）が必要とされている。しかし、従来の方法では、凍結した大きな生物試料（例えば、骨を含んだ試料、実験動物の全身、植物試料）から、形状の保たれた生命科学の研究に利用できる薄い薄切片（例えば、厚さ２〜１０μｍ）をスライドグラス上に作製することができなかった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
従来の生物組織薄切片作製方法では、凍結薄切の実施中に薄切片が簡単に壊れ、硬組織や大きな生物試料から組織の形熊が良好に保たれた薄い薄切片をスライドグラス上に作製できなかった。
【０００４】
本発明は、上記の問題を解決するために、低温下（例えば、−２５℃）でも凍結薄切片を粘着支持できる薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムを用いて、組織の形態が良好に保たれた凍結薄切片を作製し、その薄切片をスライドグラスに転写し、生命科学の研究に利用しようとするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明は、水溶性包埋剤中に凍結包埋した生物試料の所定面に、低温下（例えば、−２５℃）でも粘着力を有し、しかも有機溶媒に容易に溶解する粘着剤を薄いプラスチックフィルムに塗布して作製した薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムを貼り付け、薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムが貼り付いた試料を、所定の刃物により薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムが貼り付いた状態で、所定の厚さの薄切片を作製する。
【０００６】
次いで、薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムに貼り付いた薄切片をスライドグラスに密着し、薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムと薄切片が密着したスライドグラスを有機溶媒（例えば、ヘキサン）に没入し、粘着剤を溶解させてスライドグラスからプラスチックフィルムを剥離させ、薄切片だけをスライドグラスに残そうとするものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下、添付図面を参照して、本発明の一実施の形態について説明する。
【０００８】
凍結試料の薄切を実施する際に、薄切片の支持材として用いる、非粘着域と粘着域を設けた薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムは、次の第１実施例又は第２実施例により作製する。
【０００９】
・第１実施例
第１実施例における、薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムの作製手順について、図１〜図５と図１２を参照して説明する。まず、図１及びその断面図である図２に示すように、透明で、薄くて伸張性の小さい第１のプラスチックフィルム２（例えば、厚さ１０μｍのポリ塩化ビニリデンフィルム）上に、低温下（例えば、−２５℃）でも粘着性を有する粘着剤１を塗布する。この粘着剤１の乾燥後、図１に符号４で示す粘着面の幅が、図１２Ａに符号１５で示す凍結試料の薄切方向とほぼ同等の長さになるように、図１に符号５および６で示す幅の薄い第２のプラスチックフィルム３を粘着面に密着する。次いで、図２に示すように剥離紙７を粘着面に密着させる。使用時に図１２Ａに示すように、薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムの粘着面の大きさが、凍結包埋ブロック１４の薄切面の大きさとほぼ同等になるように、図３に示す切断線８にそって切断し、図４及びその断面図である図５に示す薄切片支持用薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムを作製する。
【００１０】
・第２実施例
第２実施例における、薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムの作製手順について、図６〜図１０と図１２を参照して説明する。まず、図６に示すように、透明で、薄くて伸張性の小さい第１のプラスチックフィルム２（例えば、厚さ１０μｍのポリ塩化ビニリデンフィルム）上に、低温下（例えば、−２５℃）でも粘着力を有する粘着剤１を、図１２Ｂに符号１５で示す凍結包埋ブロック１４の薄切方向の長さとほぼ同等の幅で、帯状に塗布する。この粘着剤１の乾燥後、剥離紙７を粘着面に密着させる。使用時に図１２Ｂに示すように薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムの粘着面の大きさが凍結包埋ブロック１４の薄切面の大きさとほぼ同等になるように、図８に示す切断線１２にそって切断し、図９及びその断面図である図１０に示す切片支持用粘着性プラスチックフィルムを作製する。
【００１１】
次に、上記説明した薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムを用いて、生物試料からスライドグラス上に凍結薄切片を作製する生物組織薄切片作製方法について、順に説明する。
ｉ）図１１Ａに示すように、生物試料と水溶性包埋剤（例えば、５％カルボキシメチルセルロースゲル）を箱型の金属製容器１３に入れて凍結する。
ｉｉ）図１１Ｂに示すように、凍結包埋ブロック１４を金属製容器１３から取り出し、凍結薄切装置に固定する。
ｉｉｉ）上記の手順で作製した薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムを、図１２Ａと図１２Ｂに示すように凍結包埋ブロック１４の薄切面に貼り付ける。
ｉｖ）この状態で、所定の刃物１７で薄切を実施することにより、図１３Ａと図１３Ｂに示すように凍結薄切片が薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムに貼り付いた状熊で採れる。
ｖ）薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムに貼り付いた状態の薄切片を、図１４に示すように表面処理（例えば、シランコート）したスライドグラス１９に密着する。
ｖｉ）図１５に示すように、薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムと薄切片が密着した状態のスライドグラス１９を、透明なガラス製容器２１に入れた有機溶媒２０（例えば、ヘキサン）中に、立てた状態で放置し、粘着剤１を溶解させて、プラスチックフィルム２をスライドグラス１９から剥離させる。
ｖｉｉ）図１６に示すように薄切片のみが残った状態のスライドグラスを１００％エタノール中に移す。
ｖｉｉｉ）次いで、スライドグラスを水溶液中に移す。
ｉｘ）スライドグラスに貼り付いた薄切片を、研究目的に応じて染色する。
【００１２】
上記の手順により、包埋（例えば、凍結包埋）した試料（例えば、未固定非脱灰の硬組織、脳、実験動物の全身、植物）から、各組織の位置関係が保たれ、さらに組織構造が良好に保たれた厚さ２〜１０μｍの薄切片を簡単に、効率よくスライドグラス上に作製することができ、その薄切片を生命科学の研究に使用することができる。
【００１３】
【発明の効果】
本発明は以上に説明したような方法と材料により、次のような効果を奏する。請求項１に記載されている方法及び請求項２に記載されている薄い薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムにより、包埋（例えば、凍結包埋）した生物試料（例えば、骨を含んだ試料、実験動物の全身、植物試料）から、形状が保たれ、しかも損傷のない厚さ２〜１０μｍの薄切片を効率よく作製でき、その薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムに貼り付いた状態の薄切片をスライドグラスに密着し、その状態で有機溶媒に没入して粘着剤を溶解することにより、プラスチックフィルムを剥離して薄切片のみをスライドグラス上に残すようにしているので、損傷がなく、形状の保たれた薄切片をスライドグラス上に効率よく作製することができる。
【００１４】
請求項１に記載されている方法でスライドグラス上に作製された薄切片は、水溶液や有機溶媒（例えばアルコール）を用いた処理を実施することができるために、多くの生命科学の研究（例えば、組織学的研究、組織化学的研究、酵素組織化学的研究、免疫組織化学的研究、遺伝子組織化学的研究）に利用することができる。
【００１５】
請求項１に記載されている方法により、薄切片はスライドグラス上に作製されるため、従来の封入剤（例えば、エンテランニュー）で永久標本として保存できる。
【００１６】
請求項３及び４に記載されている薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムは、使用の際に掴む領域として粘着力を有しない領域を設けているために、効率よく作業を実施することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の一実施の形態（第１実施例）による粘着処理したプラスチックフィルムの平面図である。
【図２】図１のＩ−Ｉ線に沿う断面図である。
【図３】図１の粘着処理したプラスチックフィルムの切断個所を示す平面図である。
【図４】図３に示す切断線に沿って切断された粘着処理したプラスチックフィルムの平面図である。
【図５】図４のＩＩ−ＩＩ線に沿う断面図である。
【図６】本発明の一実施の形態（第２実施例）による粘着処理したプラスチックフィルムの平面図である。
【図７】図６のＩＩＩ−ＩＩＩ線に沿う断面図である。
【図８】図６の粘着処理したプラスチックフィルムの切断個所を示す平面図である。
【図９】図８に示す切断線に沿って切断された粘着処理したプラスチックフィルムの平面図である。
【図１０】図９のＩＶ−ＩＶ線に沿う断面図である。
【図１１】箱型金属製容器と、その容器で凍結包埋された生物試料の凍結包埋ブロックを示す斜視図である。
【図１２】図４と図９の薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムから剥離紙を除去し、薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムを凍結包埋ブロックの薄切面に貼付した斜視図である。
【図１３】図４と図９の薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムを用いて、薄切片の作製を実施している状態を示す断面図である。
【図１４】薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムに貼り付いた薄切片をスライドグラスに密着した状態を示す断面図である。
【図１５】薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムと薄切片が密着したスライドグラスを、有機溶媒中に没入して、粘着剤を溶解している状態を示す断面図である。
【図１６】粘着剤が溶解して、スライドグラスに薄切片のみが残った状態を示す断面図である。
【符号の説明】
１…粘着剤、２…第１のプラスチックフィルム、３…第２のプラスチックフィルム、４…粘着領域、５…非粘着域、６…非粘着域、７…剥離紙、８…切断線、９…粘着領域、１０…非粘着域、１１…非粘着域、１２…切断線、１３…箱型金属製容器、１４…凍結包埋ブロック、１５…凍結試料の縦（薄切方向）の長さ、１６…凍結試料の横の長さ、１７…薄切用ナイフ、１８…薄切片、１９…スライドグラス、２０…粘着剤溶解用有機溶媒、２１…透明なガラス製容器
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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