(57)【要約】【課題】安定性、安全性、価格に優れたＡＶＰ受容体に関連する疾患、例えば浮腫、腹水、腎機能障害、バソプレッシン分泌異常症候群、オキシトシン関連、肝硬変、低ナトリウム血症、低カリウム血症、糖尿病、循環不全、肥満などに対する予防又は治療のための組成物を提供すること。【解決手段】ケール又はその抽出物を含有する、バソプレッシンが関与する疾患、特に　バソプレッシン受容体に関する障害により引き起こされる疾患に有用な組成物及びそれらを含有する経口又は非経口組成物。【選択図】　　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ケール又はその抽出物を含有することを特徴とするバソプレッシン受容体拮抗化剤。
【請求項２】
ケール又はその抽出物を含有することを特徴とする浮腫、腹水、腎機能障害、バソプレッシン分泌異常症候群、オキシトシン関連、肝硬変、低ナトリウム血症、低カリウム血症、糖尿病、循環不全、肥満などの疾患予防又は治療剤。
【請求項３】
請求項１〜２のいずれかに記載の剤を含有する経口用又は非経口用組成物
【請求項４】
食品の形態である請求項３記載の経口用組成物。
【請求項５】
医薬の形態である請求項３記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】本発明は、バソプレッシンが関与する疾患、特に　バソプレッシン受容体に関する障害により引き起こされる疾患に有用な組成物及びそれらを含有する経口又は非経口組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】ヒトを含めた多くの哺乳類のバソプレッシンは、アルギニンバソプレッシン（以下ＡＶＰと記す）である。ＡＶＰは、血圧調節ホルモンとしての心血管系への作用及び腎での水再吸収促進作用に基づく抗利尿作用を主たる生理機能として持つ下垂体後葉から血中に放出されるホルモンで、体液の恒常性の維持を図る。その構造は、９個のアミノ酸からなるペプチドであり、その受容体としてＶ１　及びＶ２受容体が知られている。このうちＶ１受容体は更に、Ｖ１ａ受容体とＶ１ｂ受容体の２つに分類されている（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２３，３６４，１９８０，　Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，３９，１８６−１８８，１９８４）。
【０００３】
Ｖ１ａ受容体は肝臓、血小板、血管平滑筋、腎メサンギウム細胞などに発現しており、糖代謝、凝集、血圧調節に関与すると考えられている（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｒｅｖｅｗ，４３，７３−１００，１９９１）。一方、Ｖ１ｂ受容体は脳下垂体前葉に発現しており、副腎皮質刺激ホルモン、β−エンドルフィンの分泌制御などに関与していると考えられている（Ａｃｔａ　Ｅｎｄｏｃｌｉｎｏｌｏｇｉｃａ，１２９，４８９−４９６，１９９３）。また、Ｖ２受容体は、腎臓の尿細管に発現しており、抗利尿作用を通して、血圧の調節に関与していると考えられている。
【０００４】
このようにＡＶＰは様々な作用を有するが、例えば、うっ血性心不全（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ，４３，７３−１０８，１９９１　）、脳浮腫（Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，４３，３９９−４０３，１９８８）、糖尿病（Ｄｉａｂｅｔｅｓ，３８，５４−５７，１９８９）などの病態時では、ＡＶＰの作用が病態悪化の一因となっていると考えられている。また腎炎などの腎臓疾患は、慢性化すると糸球体硬化や間質の線維化などが起こり、腎不全にいたるため、早い段階での的確な治療が望まれる。数少ない治療薬の一つであるステロイド系薬物は、明確な効果が認められる反面、副作用が非常に強いという問題があり、新しい優れた治療薬が強く求められている。
【０００５】
以上のようなことから、ＡＶＰ関連疾患の予防又は治療のために種々のバソプレッシン拮拮抗薬が開発されてきた（特開平７−２３３０７３号公報、特開２００１−２３３７８７、特開２０００−６３３６３等）が、現状では有効な治療薬は極めて少ない。そこで、安全性、価格面において問題のない優れたＡＶＰ受容体拮抗剤が必要となっている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、安定性、安全性、価格に優れたＡＶＰ受容体に関連する疾患、例えば浮腫、腹水、腎機能障害、バソプレッシン分泌異常症候群、オキシトシン関連、肝硬変、低ナトリウム血症、低カリウム血症、糖尿病、循環不全、肥満などに対する予防又は治療のための組成物を提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ケールがＡＶＰ受容体拮抗作用を有することを見出し、本発明を完成させた。
【０００８】
すなわち、本発明は、ケール又はその抽出物を含有することを特徴とする、ＡＶＰ受容体拮抗作用を有する剤、浮腫、腹水、腎機能障害、バソプレッシン分泌異常症候群、オキシトシン関連、肝硬変、低ナトリウム血症、低カリウム血症、糖尿病、循環不全、肥満などの疾患予防又は治療剤、これらを含有する経口用組成物、非経口用組成物、さらに、食品、医薬の形態であるこれらの組成物に関する。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明で使用されるケール（Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｏｌｅｒａｃｅａ　ｖａｒ．　ａｃｅｐｈａｌａ　ＤＣ．）には、キッチンケール、マローケール、ブッシュケール、ツリーケール、コラード、緑葉カンランなどがある。アブラナ科の植物でもともと南ヨーロッパ原産の野菜であり、キャベツの原種といわれている。葉など通常食用として供されているもので構わないし、栽培方法や栽培地も特に限定されるものでもない。
【００１０】
ケール、その抽出物としては、ケール自身を乾燥させた乾燥物、その粉砕物、圧搾汁、水あるいはアルコール、エーテル、アセトンなどの有機溶媒による粗抽出物、および粗抽出物を分配、カラムクロマトなどの各種クロマトグラフィーなどで段階的に精製して得られた抽出物画分など、全てを含む。これらは単独で用いても良く、また２種以上混合して用いても良い。
【００１１】
例えば、ケールの葉、茎、花や根などの乾燥物１Ｋｇに９９．５％エタノール抽出液３Ｌを加え、室温で一晩浸漬することにより得た抽出液を、そのままバソプレッシン受容体拮抗化剤として使用しても良いし、その抽出液を各種クロマトグラフィーを組み合わせて、精製したものを使用しても良い。
【００１２】
抽出されたケール抽出物の溶液中の抽出物濃度は特に制限はないが、１５〜７０質量％、好ましくは２０〜６０質量％程度が好ましい。この濃度が１５質量％未満では、乾燥時に多量のエタノールや水などの溶液を蒸発させる必要があり、７０質量％を超えると溶液の粘度が高くなり過ぎ、加工適性が悪くなる恐れがある。
【００１３】
ケール又はその抽出物は、ＡＶＰ受容体に対して拮抗作用を有しており、血管拡張作用、血圧降下作用、心機能亢進作用、心筋細胞肥大抑制作用、血管平滑筋増殖及び肥大抑制作用、メサンギウム細胞増殖及び肥大抑制作用、血小板凝集抑制作用、血管透過性亢進因子（ＶＰＦ）及び血管新生因子（ＶＥＧＥ）産生抑制作用、エンドセリン産生抑制作用、肝糖新生抑制作用等を介して、これら関連疾患に有効である。
【００１４】
本発明のケール又はその抽出物を含有するＡＶＰ受容体に拮抗作用を有する組成物は、経口用の食品、経口用あるいは非経口用の医薬として製造することができる。
【００１５】
医薬としての適用方法は、経口投与又は非経口投与のいずれも採用することができる。投与に際しては、有効成分を経口投与、直腸内投与、注射などの投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬製剤の形態で投与することができる。このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などの固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤などの液剤、凍結乾燥製剤などが挙げられ、これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングルコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水などが挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤などの慣用の添加剤を適宜添加することもできる。
【００１６】
食品としては、ケール乾燥物又は抽出物などをそのまま、又は種々の栄養成分を加えて、若しくは飲食品中に含有せしめて、ＡＶＰの関与する疾患の治療及び予防に有用な保健用食品又は食品素材として使用できる。例えば、澱粉、乳糖、麦芽糖、植物油脂粉末、カカオ脂末、ステアリン酸などの適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して食用に供してもよく、また種々の食品、例えば、ハム、ソーセージなどの食肉加工食品、かまぼこ、ちくわなどの水産加工食品、パン、菓子、バター、粉乳、発酵乳製品に添加して使用したり、水、果汁、牛乳、清涼飲料などの飲料に添加して使用してもよい。本発明の配合量は、当当該食用組成物の種類や状態等により適宜設定される。
【００１７】
本発明のケール又はその抽出物の有効投与量は、患者の年齢、体重、症状、患者の程度、投与経路、投与スケジュール、製剤形態などにより、適宜決定することができ、例えば、ケール抽出物の経口投与の場合、乾燥重量として、通常成人換算で０．１ｇ／体重ｋｇ以上である。１日に数回に分けて投与してもよい。本発明のケール又はその抽出物は、天然物であるためその毒性は低く、有害な副作用など報告されていない。また、ケールは栽培により入手できる野菜類であるから、ケール、又はその抽出物を有効成分とする本発明の組成物は、安全であるとともに、価格面においても問題のない優れたものである。
【００１８】
【実施例】以下に実施例を挙げて具体的に説明するが、これに限定されるものではない。
【００１９】
［製造例１］ケール抽出物
ケールの葉を９０℃で乾燥させ、苦みの渋味成分となる酵素を失活させた。なお、ケール葉乾燥方法については、特に限定されるものではない。その粉砕物４ｋｇを電熱式水浴機で加熱還流しながら、９９．５％エタノール（和光純薬工業）２０Ｌを用いて抽出を行い、ケール抽出物８０ｇを得た。
【００２０】
［実施例１］ＡＶＰ（Ｖ１ａ）受容体結合阻害試験
ＡＶＰ受容体結合阻害試験は、Ｍａｒｋ　Ｋｅｓｔｅｒらの方法（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１２９（６），１９９１）を参考に行った。ヒト由来ＡＶＰ（Ｖ１ａ）受容体を発現させたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞から、既存の方法に従って膜標品の調製を行った。それから各試験管に、緩衝液［５０　ｍＭトリス緩衝液、２０％グリセロール、１０　ｍＭ塩化マグネシウム（ｐＨ７．４）］を加え、さらに製造例１で得られたケール抽出物（最終濃度：５００μｇ／ｍｌ）と［３Ｈ］　ＡＶＰ（最終濃度０．３　ｎＭ）及び受容体膜標品（１００〜６００μｇの蛋白質を含む）を加えて反応液（総量５００　μｌ）とし、反応の開始は膜標品の添加により行った。２２℃、６０分間のインキュベーションの後、受容体に結合した標識リガンドをセルハーベスター（ブランデル社製）を用いてワットマンＧＦ／Ｂグラスファイバーフィルター上に吸引濾過して反応を停止し、直ちに、氷冷５０　ｍＭトリトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．７）５　ｍｌで３回洗浄した。次いで、フィルター上の放射能活性を液体シンチレーションカウンターにより測定し、全結合量を求めた。また、同時に測定した１　μＭ　ＡＶＰ存在下における結合量を非特異的結合量とし、これを全結合量から差し引くことにより特異的結合量を求めた。結果を表１に示す。ここで示す阻害率（％）は、次式により算出した。
阻害率（％）＝１００−〔（Ｃ１−Ｂ１）／（Ｃ２　−Ｂ１）〕×１００
（式中、Ｃ１は、既知量のサンプルと［３Ｈ］ＡＶＰが共存している状態での［３Ｈ］ＡＶＰの膜画分に対する結合量を表わし、Ｃ２は、サンプルを除いた時の［３Ｈ］ＡＶＰの膜画分に対する結合量を表わし、Ｂ１は、過剰のＡＶＰ（１μＭ）存在下での［３Ｈ］ＡＶＰの膜画分に対する結合量を表わす。）なお、本反応系におけるポジティブコントロールとして、ＡＶＰ受容体の拮抗薬である［３Ｈ］　ｄ（ＣＨ２）５　Ｔｙｒ　（Ｍｅ）　ＡＶＰのＩＣ５０値（ＡＶＰ受容体結合を５０％阻害する濃度）は、１．９　ｎＭであった。表１からもわかるように、本発明のケール抽出物に、ＡＶＰ（Ｖ１ａ）受容体拮抗化作用を有することがわかる。
【００２１】
【表１】
2004043372.tif 000002
【００２２】
以下に処方例を示す。
［飼料の製造］
製造例１で得られたケールのエタノール抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成の飼料を製造した。
2004043372.tif 000003
【００２３】［錠剤の製造］
製造例１で得られたケールのエタノール抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成の錠剤を製造した。
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【００２４】
【発明の効果】本発明のケール又はその抽出物は、ＡＶＰ（Ｖ１ａ）受容体拮抗作用を有することから、浮腫、腹水、腎機能障害、バソプレッシン分泌異常症候群、オキシトシン関連、肝硬変、低ナトリウム血症、低カリウム血症、糖尿病、循環不全、肥満などの疾患に有効に使用される。