(57)【要約】【課題】真皮線維芽細胞におけるコラーゲンやヒアルロン酸の産生を促進することにより、シワやハリの低下といった皮膚の老化症状の予防，改善効果に優れた皮膚外用剤を提供する。【解決手段】コラーゲン中の主要構成アミノ酸成分でるヒドロキシプロリン若しくはヒドロキシプロリンのアシル化誘導体又はその塩と、オリゴペプチドのアシル化誘導体とを併用して皮膚外用剤に配合する。オリゴペプチドのアシル化誘導体としては、特に限定されないが、リジン，スレオニン，セリン，グリシン，ヒスチジンから選択される１種又は２種以上のアミノ酸が２〜６個結合したオリゴペプチドのアシル化誘導体が好ましい。【選択図】　　　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒドロキシプロリン若しくはヒドロキシプロリンのアシル化誘導体又はその塩と、オリゴペプチドのアシル化誘導体とを含有して成る、皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、真皮線維芽細胞におけるコラーゲンやヒアルロン酸の産生を促進することにより、シワやハリの低下といった皮膚の老化症状の予防，改善効果に優れた皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、加齢，紫外線曝露等によリ、皮膚の角質層及び表皮細胞，真皮細胞がダメージを受け、表皮の細胞数が減少、表皮細胞の代謝が低下して皮膚のターンオーバー速度が遅くなり、真皮においてはヒアルロン酸の減少、コラーゲンやエラスチンなどの変性が起こり、しわの形成や弾性の低下といった皮膚の老化や肌荒れ症状の原因となることが知られている。これらの進行を防止あるいは改善するため、多くの皮膚外用剤が提案されてきた。最近では自然志向及び植物志向を反映してか、植物抽出成分において、真皮マトリックスの構成成分であるコラーゲンやエラスチン，ヒアルロン酸等の分解を抑制したり、これらの産生を促進したりする成分、表皮細胞や真皮線維芽細胞を賦活化する成分の検索が盛んに行われている。
【０００３】
たとえば、表皮細胞を賦活化する成分としては、パセリ抽出物とブナの木抽出物の併用（特開平１１−３３５２５７）等が開示されている。また、線維芽細胞の賦活或いは増殖促進剤としては、ビワ抽出物（特公平５−１７２０６），α−ヒドロキシ酢酸（特開平５−１１２４２２），α−ヒドロキシ酸のステロールエステル（特開平８−１０４６３２），６−ベンジルアミノプリン（特開平７−２３３０３７），特定のリボヌクレアーゼ（特開平７−３０９７７８），Ｌ−リシル−Ｌ−グリシル−Ｌ−ヒスチジン（特開平７−３１６１９２），乳汁由来線維芽細胞増殖因子（特開平８−１１９８６７），酸化型コエンザイムＡ（特開平８−１７５９６１）、アーモンド、セイヨウタンポポ、セイヨウニワトコ、センキュウ、センブリ、ソウハクヒ、トウニン、ニンジン、ホップ、ムクゲ、ヨクイニン（特開平１０−３６２７９）等が、コラーゲン代謝改善剤としてはケイ酸関連物質（特開平７−１８８０３６）が、コラーゲン合成促進剤としてはグリシン，プロリン，アラニン併用系（特開平７−１９４３７５）が、ヒアルロン酸産生促進剤としては、牛血清の分子量５，０００以下の低分子量画分（特開平８−２３９４０４），酵母エキス（特開平８−１６３９８３）等が開示されている。
【０００４】
しかしながら、上記した細胞賦活効果を有する成分等の中には、作用効果が不十分であったり、安定性が悪かったりして、皮膚外用剤基剤中に含有させた場合、有効な効果を得るにはかなりの量を含有させなければならないものも存在していた。また、好ましくない副作用や刺激性等を有していたり、製剤安定性に悪影響を及ぼすものや、臭いや色の点で外用剤に配合しにくいもの、一定の作用，品質を維持することの困難なものも多かった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
そこで本発明においては、真皮線維芽細胞におけるコラーゲンやヒアルロン酸の産生を促進することにより、シワやハリの低下といった皮膚の老化症状の予防，改善効果に優れた皮膚外用剤を得ることを目的とした。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
上記課題を解決するべく種々検討したところ、ヒドロキシプロリン若しくはヒドロキシプロリンのアシル化誘導体又はその塩と、オリゴペプチドのアシル化誘導体とを併用して皮膚外用剤に配合することにより、真皮線維芽細胞におけるコラーゲンやヒアルロン酸の産生を促進し、優れたシワやハリの低下といった皮膚の老化症状の予防，改善効果を発揮することを見いだし、本発明を完成するに至った。
【０００７】
ヒドロキシプロリン若しくはそのアシル化誘導体又はその塩を化粧料については、その老化抑制，肌質改善効果（ＷＯ００／５１５６１）、及び水溶性ビタミン，油溶性ビタミン，高分子ペプチド，高分子多糖，スフィンゴ脂質及び海草エキスとの併用（特開２００２−８０３２１）が既に知られている。また、オリゴペプチドのアシル化誘導体、特にパルミトイルオリゴペプチドは、米国化粧品工業会（ＣＴＦＡ）から出版されている化粧品原料辞典に記載されている、化粧品原料であり、スキンコンディショニング剤，界面活性剤として使用されている。しかしながら、ヒドロキシプロリン若しくはそのアシル化誘導体又はその塩と、オリゴペプチドのアシル化誘導体を併用して皮膚外用剤に配合すること、また、それにより得られる真皮線維芽細胞におけるコラーゲンやヒアルロン酸の産生が促進し、優れたシワやハリの低下といった皮膚の老化症状の予防，改善効果を発揮することは、これまで全く示唆すらされていなかった。
【０００８】
【発明の実施の形態】
ヒドロキシプロリンは、コラーゲン中の主要構成アミノ酸成分として、また、エラスチンの構成アミノ酸成分として自然界に広く存在する。天然に存在するヒドロキシプロリンとしては、プロリンがＤ体かＬ体か、水酸基の位置が３位か４位か、およびその立体異性体がシス体かトランス体かによって、８種類の立体異性体が知られている。通常は、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンが一般的であり、他の立体異性体の存在は自然界では極めて限定されている。
【０００９】
本発明で用いるヒドロキシプロリンは、その基原を問わず、豚や牛等の動物由来のコラーゲンより精製したものや、微生物を用いて製造したものを用いることができる。ここで、動物由来のヒドロキシプロリンを用いる場合は、動物由来のウイルスや、狂牛病の原因タンパク質であるプリオン等の混入に充分注意する必要がある。そこで、本発明においては、微生物を用いて製造したものを用いることが好ましい。
【００１０】
微生物としては、アミコラトプシス（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ）属、ダクチロスポランジウム（Ｄａｃｔｙｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）属、及びストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属から選ばれる属に属する微生物由来のプロリン３位水酸化酵素またはプロリン４位水酸化酵素遺伝子を導入された微生物等を用いることができる。アミコラトプシス属、ダクチロスポランジウム属およびストレプトマイセス属から選ばれる属に属する微生物由来のプロリン３位水酸化酵素またはプロリン４位水酸化酵素遺伝子の微生物への導入は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，　Ｓｅｃｏｎｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ　（１９８９）、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆；　Ｓｏｎｓ　（１９８７−１９９７）等に記載の方法に準じて行うことができる。
【００１１】
また、例えば、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンは、アミコラトプシス属またはダクチロスポランジウム属より単離したプロリン４位水酸化酵素（特開平７−３１３１７９号公報）を用い製造することができ、また、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンは、ストレプトマイセス属より単離したプロリン３位水酸化酵素（特開平７−３２２８８５号公報）を用い製造することもできる〔バイオインダストリー，　１４，　３１　（１９９７）〕。
【００１２】
本発明で用いるヒドロキシプロリンのアシル化誘導体のアシル部分としては、例えば、炭素数２〜２３の直鎖または分岐状のアシルがあげられ、より具体的には、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、ヘキサノイル、ヘプタノイル、オクタノイル、デカノイル、エイコサノイル、ラウロイル等があげられるが、中でも、アセチル、プロピオニルが好ましい。
【００１３】
ヒドロキシプロリンのアシル化誘導体は、公知の方法により製造することができる。例えば、炭素数１〜２２のアルキル基を有する脂肪酸の活性誘導体（酸無水物、酸塩化物等）を用い、ヒドロキシプロリンを水性媒体中または有機溶媒中でアシル化することにより調製することができる。得られたヒドロキシプロリンのアシル化誘導体は、そのままでも、また結晶化、クロマトグラフィー等の通常の精製法を用いて精製したものを用いてもよい。
【００１４】
ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのアシル化誘導体の塩における塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム等のアンモニウム塩、モルホリン、ピペリジン等の付加した有機アミン付加塩等があげられる。
【００１５】
本発明の皮膚外用剤において、シス／トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ／Ｄ−プロリン、シス／トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ／Ｄ−プロリン等のヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのアシル化誘導体またはその塩は、単独または混合して用いることができる。
【００１６】
これらヒドロキシプロリンもしくはそのアシル化誘導体又はその塩の皮膚外用剤中の配合量は、目的とする効果に応じて特に限定されないが、全重量に対し、好ましくは０．０１〜５重量％、より好ましくは０．１〜５重量％、さらに好ましくは０．５〜３重量％配合することができる。５重量％以上配合しても、本発明の効果の向上は認められない。
【００１７】
本発明で用いるオリゴペプチドのアシル化誘導体としては、特に限定されないが、リジン，スレオニン，セリン，グリシン，ヒスチジンから選択される１種又は２種以上のアミノ酸が２〜６個結合したオリゴペプチドのアシル化誘導体が好ましく、特にパルミトイル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン、若しくはパルミトイル−グリシン−ヒスチジン−リジンを用いることが本発明の効果の点から好ましい。なお、オリゴペプチドのアシル化誘導体は、ヒドロキシプロリンのアシル化誘導体と同様の方法により製造することができる。これらオリゴペプチドのアシル化誘導体の皮膚外用剤中の配合量は、目的とする効果に応じて特に限定されないが、全重量に対し、好ましくは０．０００１〜３重量％、より好ましくは０．０００１〜５重量％、さらに好ましくは０．００５〜３重量％配合することができる。３重量％以上配合しても、本発明の効果の向上は認められない。
【００１８】
本発明に係る皮膚外用剤は、ローション剤，乳剤，ゲル剤，クリーム剤，軟膏剤，粉末剤，顆粒剤等、種々の剤型で提供することができる。また、化粧水，乳液，クリーム，美容液，パック等の皮膚化粧料、メイクアップベースローション，メイクアップベースクリーム等の下地化粧料、乳液状，油性，固形状等の各剤型のファンデーション，アイカラー，チークカラー等のメイクアップ化粧料、クレンジングクリーム，クレンジングローション，クレンジングフォーム，洗顔石鹸，ボディシャンプー等の皮膚洗浄料、ヘアーシャンプー，ヘアーリンス，ヘアートリートメント等の毛髪用化粧料等としても提供することができる。
【００１９】
なお、本発明に係る皮膚外用剤には、ヒドロキシプロリン若しくはヒドロキシプロリンのアシル化誘導体又はその塩と、オリゴペプチドのアシル化誘導体のほかに、油性成分，界面活性剤，保湿剤，顔料，紫外線吸収剤，抗酸化剤，香料，防菌防黴剤等の一般的な医薬品及び化粧料用原料や、抗炎症剤，美白剤等の生理活性成分を含有させることができる。
【００２０】
【実施例】
更に、実施例により、本発明の特徴について詳細に説明する。
【００２１】
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製法：（１）〜（１１）の油相成分を混合し、加熱溶解して７５℃とする。一方、（１２）〜（１７）の水相成分を混合，溶解して７５℃とする。これに前記油相を加えてホモミキサーにて均一に乳化し、次いで（１８）を加えて増粘させた後冷却し、４０℃で（１９），（２０）を添加し、混合する。
【００２２】
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製法：（６）に（１）〜（５）を順次添加して溶解した後、予め混合均質化しておいた（７）〜（１３）の成分を添加し、混合する。
【００２３】
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製法：（１）〜（７）の油相成分を混合，溶解して７５℃とする。一方、（８）〜（１０）を混合，溶解し、７５℃に加熱する。次いで、この水相成分に前記油相成分を添加して予備乳化した後、ホモミキサーにて均一に乳化する。撹拌しながら冷却し、４０℃にて予め混合しておいた（１１）〜（１７）の成分を添加して、混合する。
【００２４】
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製法：（５），（６）を（１０）の一部に溶解して５０℃とし、あらかじめ５０℃に加温した（４）に撹拌しながら徐々に添加する。これをあらかじめ混合し、７０℃に加熱溶解した（１）〜（３）に均一に分散する。これに、（７）〜（９）を（１０）の残部に添加し、７０℃に加熱したものを撹拌しながら加え、ホモミキサーにて乳化する。冷却後、４０℃にて予め混合しておいた（１１）〜（１５）の成分を添加して、混合する。
【００２５】
本発明の実施例１〜実施例４について使用試験を行い、シワ，ハリ等の皮膚の老化症状の改善効果を評価した。同時に、実施例１に於いて配合したパルミトイル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン若しくはヒドロキシ−Ｌ−プロリンをそれぞれ精製水に代替して乳剤を調製し、それぞれ比較例１，比較例２として、使用試験を行った。皮膚の老化症状の改善は、各試料について、かかる症状が顕著に認められる４０〜６０才代の男女パネラー各２０名にブラインドにて１カ月間使用させ、使用前後の皮膚状態の変化を観察して評価した。皮膚の老化症状の指標として、皮膚のしわ，きめ，はりの３項目を選び、しわ，きめについては写真撮影及び皮膚表面のレプリカにより観察し、改善状況を評価した。皮膚のはりについては、皮膚弾性の測定により評価した。改善状況は、「改善」，「やや改善」，「変化なし」の三段階で評価し、表１に各評価を得たパネラー数にて示した。
【００２６】
【表１】
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【００２７】
表１から明らかなように、ヒドロキシプロリン若しくはオリゴペプチドのアシル化誘導体を単独で配合した比較例使用群のそれぞれにおいても、ある程度のしわ及び皮膚弾性の改善傾向が認められていたが、両成分を併用して配合した実施例使用群においては、比較例使用群に比べて、明確な改善を認めたパネラーが多くなっていた。
【００２８】
なお実施例１〜実施例４については、２５℃で６カ月間保存した場合において状態の変化は全く認められず、男性パネラー３０名による４８時間の背部閉塞貼付試験においても、問題となる皮膚刺激性反応は認められなかった。
【００２９】
【発明の効果】
以上詳述したように、本発明により、しわ，きめ，はり等皮膚の老化症状の改善効果が相乗的に向上した皮膚外用剤を得ることができた。