(57)【要約】【課題】優れたメラニン生成抑制作用を示し、しかも安全性にも優れた美白剤及び該美白剤を配合した、例えば、美白作用、防シワ作用等を有する皮膚外用剤や化粧水、ローション等の化粧料を提供すること。【解決手段】本発明の美白剤は、シイタケ子実体の酢酸エチル抽出物又は酢酸エチル逐次抽出物を有効成分として含み、本発明の化粧料は、該美白剤を含むことを特徴とする。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シイタケ子実体の酢酸エチル抽出物を有効成分として含む美白剤。
【請求項２】
酢酸エチル抽出物が、酢酸エチルよりも極性の低い有機溶媒でシイタケ子実体を抽出した残渣を、酢酸エチルにより抽出処理した抽出物である請求項１記載の美白剤。
【請求項３】
酢酸エチル抽出物が、酢酸エチルよりも極性の低い少なくとも２種の有機溶媒でシイタケ子実体を逐次抽出した残渣を、酢酸エチルにより抽出処理した抽出物である請求項１記載の美白剤。
【請求項４】
酢酸エチルよりも極性の低い有機溶媒が、ジエチルエーテル、ヘキサン、シクロヘキサン及びヘプタンからなる群より選択される１種又は２種以上である請求項２又は３の美白剤。
【請求項５】
シイタケ子実体が、凍結乾燥物又は乾燥物であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項記載の美白剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項記載の美白剤を含むことを特徴とする化粧料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、シイタケ子実体の酢酸エチル抽出物を有効成分とし、安全性に優れ、且つ優れた美白作用を有する美白剤及び皮膚外用剤、化粧水等の化粧料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、皮膚のシミ、ソバカスの予防又は治療を目的として、チロシナーゼ活性を阻害することによりメラニン生成を抑制する物質が種々提案されている。具体的には、ビタミンＣ、ハイドロキノン、コウジ酸、アルブチン、チオール系化合物、種々の動植物抽出物が知られており、これらを配合する化粧料が開発され、商品化されている。
ところで、従来からシイタケ抽出物の様々な効能が探求され、一部が化粧料、医薬、健康食料品等に利用されている。シイタケ抽出物としては、シイタケ子実体抽出物、菌糸体抽出物が知られており、各抽出物によりその成分や効能が異なることも知られている。例えば、シイタケ菌糸体抽出物が、メラニン生成抑制作用を有することが知られている（例えば、特許文献１及び２参照）。また、シイタケのエタノール抽出物に若干の美白作用があることも知られている（例えば、特許文献３参照）。
しかし、シイタケ子実体の酢酸エチル抽出物が、従来提案されている各種シイタケ抽出物よりも優れたメラニン生成抑制作用を有すること、更には、酢酸エチルによるシイタケの逐次抽出物が、特に優れたメラニン生成抑制作用を有することについては知られていない。
【０００３】
【特許文献１】
特開昭６１−１０３８１５号公報
【特許文献２】
特開昭６１−１０３８１６号公報
【特許文献３】
特開平７−１７８４５号公報
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
従って本発明の目的は、優れたメラニン生成抑制作用を示し、しかも安全性にも優れた美白剤及び該美白剤を配合した、例えば、美白作用、防シワ作用等を有する皮膚外用剤や化粧水、ローション等の化粧料を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明によれば、シイタケ子実体の酢酸エチル抽出物を有効成分として含む美白剤が提供される。
また本発明によれば、前記美白剤を含むことを特徴とする化粧料が提供される。
【０００６】
【発明の実施の形態】
以下本発明を更に詳細に説明する。
本発明の美白剤は、シイタケ子実体の酢酸エチル抽出物を有効成分として含む。
該有効成分の原料として用いるシイタケ子実体は、シイタケ（学名：Ｌｅｎｔｉｎｕｓ  ｅｄｏｄｅｓ）の子実体であり、凍結乾燥物又は乾燥物の使用が好ましい。
前記シイタケ子実体に含有される成分組成は、シイタケ菌糸体とは異なり、その抽出物の効能等も子実体と菌糸体とで異なることが知られている。また、後述する実施例からも明らかなとおり、シイタケ菌糸体の酢酸エチル逐次抽出物は、シイタケ子実体の酢酸エチル抽出物とは異なり、メラニン生成抑制作用が全く認められない。
【０００７】
前記シイタケ子実体の酢酸エチル抽出物は、シイタケ子実体を、酢酸エチル抽出したものと同等なものであれば特に限定されず、抽出液であっても、抽出液を濃縮、乾燥等により得られる抽出固形物であっても良い。また、抽出物は、前記抽出液をチロシナーゼ阻害活性の高い分画成分に更に精製したものであっても良い。
前記抽出は１回の抽出操作でも良いが、所望に応じて他の溶媒を用いて抽出操作を複数回行うこともできる。
前記シイタケ子実体の酢酸エチル抽出物の製造は、例えば、（１）シイタケ子実体を酢酸エチルで抽出する方法、（２）酢酸エチルよりも極性の低い有機溶媒、例えば、ジエチルエーテル等のエーテル類、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン等でシイタケ子実体を抽出し、その残渣を酢酸エチルにより更に抽出する方法、（３）酢酸エチルよりも極性の低い少なくとも２種の有機溶媒でシイタケ子実体を逐次抽出し、その残渣を酢酸エチルにより更に抽出する方法、（４）前記（１）〜（３）の方法で得られる抽出液を、チロシナーゼ阻害活性及び／又はメラニン生成抑制作用が高い成分に更に分画、精製、濃縮等の操作を行う方法等が挙げられる。この抽出操作には、本発明の所望の効果を損なわない範囲で、酢酸エチルや、酢酸エチルよりも極性の低い有機溶媒以外の溶媒による抽出操作や、二酸化炭素や水等を用いた超臨界物質による抽出操作を含んでいても良い。また、（３）の逐次抽出において、酢酸エチルによる抽出の前に行う酢酸エチルよりも極性の低い有機溶媒での抽出は、極性の低い溶媒の順で行うことが好ましい。
特に、そのメラニン生成抑制効果が顕著である、前記（２）又は（３）や、これらを含む（４）の逐次抽出法が好ましい。
【０００８】
前記抽出条件は特に限定されないが、例えば、温度は５℃以上、好ましくは２０℃以上であり、その上限は、抽出方法等により適宜選択でき、例えば、還流冷却を利用する連続抽出法等では、用いる溶媒の沸点で行うことができる。抽出時間は、数時間〜数日間であり、また、抽出に使用する溶媒量は、原料に対して質量比で通常１〜１００倍量、好ましくは２〜１０倍量である。
抽出操作も特に限定的ではなく、例えば、浸透、浸漬等を行うバッチ抽出法、ソックスレー型抽出器等を用いた、還流により連続抽出する連続抽出法、固相抽出法等が挙げられる。また、抽出効率を向上させるため、バッチ抽出法において撹拌器等を備えた抽出器を用いても良い。
抽出液は、濾過、遠心分離又はデカンテーション等によって抽出液と抽出残渣に分離することができる。最終的に得られる酢酸エチル抽出液は、溶媒を除去して用いることができる他、必要により、更に濃縮処理及び／又は分画・精製処理したものを本発明に用いる酢酸エチル抽出物とすることもできる。また、得られた酢酸エチル抽出液は、本発明の所望の効果を損なわない範囲で更に他の抽出処理を施すこともできる。
【０００９】
前記濃縮処理は特に限定されず、例えば、溶媒除去、水及び／又は有機溶媒に対する溶解性を利用した可溶分回収処理、不溶分回収処理、液液分配処理、再結晶処理、再沈澱処理、クロマトグラフィーによる不要成分除去、若しくはこれらから選択される２種以上の処理を組合せる方法等が挙げられる。
前記分画・精製処理も特に限定されず、例えば、ＨＰＬＣ、薄層クロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー等の各種クロマトグラフィーによる処理が挙げられる。
ＨＰＬＣに使用するカラムとしては、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、超臨界クロマトグラフィー等が挙げられる。
【００１０】
本発明の美白剤において、前記有効成分であるシイタケ子実体の酢酸エチル抽出物は、該抽出物と同等なものであれば、必ずしも酢酸エチルを用いて抽出した前述のものには限定されない。要するに、例えば、公知の超臨界物質を用いて、前述の酢酸エチル抽出と同様な極性を有する抽出物を得る方法等により得られたものであっても本発明における有効成分としてのシイタケ子実体の酢酸エチル抽出物の範囲である。
本発明の美白剤において、有効成分であるシイタケ子実体の抽出物の有効濃度は、その抽出方法や使用形態等により適宜選択できる。
【００１１】
本発明の化粧料は、前記本発明の美白剤を含んでおれば良く、その剤型は特に制限されない。
本発明の化粧料において、本発明の美白剤の配合割合は、化粧料の種類に応じて適宜選択することができるが、通常、化粧料全量に対して、シイタケ子実体の酢酸エチル抽出物の乾燥固形分として０．００１〜１０質量％、好ましくは０．１〜５質量％である。
【００１２】
本発明の化粧料には、前記美白剤の他に、その目的に応じて種々の材料を配合することができる。特に従来公知の美白剤、しわ予防剤、保湿剤又はこれらの混合物を配合することにより、所望効果を相乗的に向上させることができる。
前記美白剤としては、例えば、コウジ酸、アスコルビン酸、ハイドロキノン、チオール系化合物、これらの誘導体、これらを含有する動植物の抽出物又はこれらの混合物等が挙げられる。
前記保湿剤としては、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、ジプロピレングリコール等の多価アルコール類；アミノ酸、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等のＮＭＦ成分；ヒアルロン酸；コラーゲン；エラスチン；コンドロイチン硫酸；フィブロネクチン；セラミド類；ヘパリン類似様物質；キトサン等の水溶性高分子物質又はこれらの混合物等が挙げられる。
前記美白剤、しわ防止剤又は保湿剤を配合する際の配合割合は、好ましくは前記本発明の美白剤の有効成分の０．０００１〜５０００倍量、特に好ましくは０．００２〜５００倍量の範囲で配合するのが望ましい。
【００１３】
本発明の化粧料には、その種類に応じて一般に配合される油脂類、界面活性剤、アルコール類、脂肪酸類、防腐剤、殺菌剤、増粘剤、酸化防止剤、色素、香料、水溶性高分子、紫外線吸収剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤、精製水等の他の成分を適宜配合することもできる。
前記増粘剤としては、例えば、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、ケイ酸アルミニウム、マルメロ種子抽出物、トラガントガム、デンプン等の天然高分子物質；メチルセルロース、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、可溶性デンプン、カチオン化セルロース等の半合成高分子物質；カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール等の合成高分子物質又はこれらの混合物等が挙げられる。
前記防腐剤としては、例えば、安息香酸塩、ソルビン酸塩、ジヒドロ酢酸塩、パラオキシ安息香酸エステル、２，２，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテル、３，４，４’−トリクロロカルバニド、塩化ベンザルコニウム、エタノール等が挙げられる。
前記酸化防止剤としては、例えば、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、ビタミンＥ、没食子酸プロピル等が挙げられる。
前記紫外線吸収剤としては、例えば、４−メトキシベンゾフェノン、オクチルジメチルパラアミノベンゾエート、エチルヘキシルパラメトキシサイナメート、酸化チタン、カオリン、タルク等が挙げられる。
前記キレート剤としては、例えば、エチレンジアミン四酢酸塩、ピロリン酸塩、ヘキサメタリン酸塩、クエン酸塩、酒石酸、グルコン酸等が挙げられる。
前記ｐＨ調整剤としては、例えば、水酸化ナトリウム、リン酸水素カリウム、炭酸カリウム、クエン酸等が挙げられる。
【００１４】
本発明の化粧料は、前記必須成分や必要に応じて他の成分を、各種目的に応じて配合することによって、医薬品、医薬部外品又は化粧品として調製することができる。具体的には、ローション、乳液、クリーム、パック剤、皮膚洗浄剤、ハップ剤、プラスター剤、ペースト剤、軟膏、エッセンス、ゲル剤、シャンプー、リンス、パウダー、ファンデーション、化粧水、洗顔料、ヘアートニック、養毛剤、浴用剤等にすることができる。この際他の成分は、前述の成分の他に、このような各用途に従来使用されている成分を適宜選択して配合することができる。
本発明の化粧料には、本発明の所望の効果を損なわない範囲で、通常、化粧料原料として用いられる種々の他の成分を配合することができる。他の成分としては、例えば、水、油剤、界面活性剤、潤滑剤、アルコール類、水溶性高分子剤、ゲル化剤、保湿剤、緩衝剤、防腐剤、抗炎症剤、増粘剤、香料、ビタミン類、本発明の美白剤や抗酸化剤以外の美白剤、抗酸化剤等を挙げることができ、使用に際しては、化粧料の種類や他の目的、更にはその形態等に応じて適宜選択して配合することができる。
【００１５】
【実施例】
以下、本発明を実施例及び比較例により更に詳細に説明するが本発明はこれらに限定されない。
実施例１−１
シイタケ子実体の乾燥物をヘキサンに３２時間常温浸漬し、フィルターにて濾過して得た残渣を、更に、ジエチルエーテルに３２時間常温浸漬し、フィルターにて濾過した。次いで、得られた残渣を酢酸エチルに３２時間常温浸漬し、残渣を除去した後、酢酸エチル抽出液を蒸発乾固し、溶媒を除去して抽出乾固物を得た。
得られた抽出乾固物を用いて以下に示す試験を行なった。Ｂ−１６メラノーマ細胞に対するメラニン生成抑制及び細胞毒性試験結果を表１に、モルモットによる色素沈着評価試験結果を表２示す。
【００１６】
Ｂ−１６メラノーマ細胞に対するメラニン生成抑制及び細胞毒性試験
最終濃度０．１ｍＭとなるようにテオフィリンを加えたＭＥＭ培地を調製し、１ウェル当たり１．８ｍｌとなるようにプレートに注入する。次いで、Ｂ−１６マウスメラノーマ細胞を５×１０５個／ｍｌに調製した細胞懸濁液１００μｌを加える。続いて、所定の最終濃度の２０倍になるようにＭＥＭ培地にて濃度を調整した被検試料１００μｌを加え、３７℃で４日間培養する。培養後、培地を十分に取り除き、６Ｍ−ＫＯＨを２ｍｌ加え、５０℃で４時間程度放置してメラニンを溶解し、波長４２０ｎｍでの吸光度を測定した。コントロールとしては滅菌水を用い、該コントロールのメラニン産生量を１００％とし、メラニン生成抑制率を算出した。また、ポジティブコントロールとしては、コウジ酸を用いた。
【００１７】
モルモットによる色素沈着評価試験
褐色モルモット（ブラウンタケイ、雄性、６週令）の背部を剃り毛し、１．４×１．４ｃｍの６分割部位に、紫外線（２２５ｍＪ、１９３秒）を１日１回、合計４日間連続照射した。その後、被検試料（エタノール：プロピレングリコール：イソステアリン酸＝９０：９：１の溶媒に抽出物２質量％を溶解したもの）を１日２回、２０μｌづつ塗布し、２９日間試験を行なった。但し、１０、１１、１７、１８、２４及び２５日目においては、被検試料の塗布を行わなかった。
色素沈着評価を、色彩色差計による明度（Ｌ値）及び肉眼による色素沈着評価により、８、１６、２３及び３０日目にそれぞれ行った。尚、肉眼による色素沈着評価は、２人の専門パネルにより、５段階評価（沈着なしを０点、軽度沈着を１点、中度沈着を２点、強度沈着を３点、極度沈着を４点）し、その平均点によって評価した。点数が低い方が色素沈着が少ないことを示す。また、コントロールは、被検試料の塗布を行わなかったものを用い、ポジティブコントロールとしては、ルシノール及びアルブチンを用いた。
【００１８】
実施例１−２
シイタケ子実体の乾燥物の代わりにシイタケ子実体の凍結乾燥物を用いた以外は実施例１と同様に抽出乾固物を得、Ｂ−１６メラノーマ細胞に対するメラニン生成抑制及び細胞毒性試験を行った。結果を表１に示す。
【００１９】
実施例１−３
シイタケ子実体の乾燥物をヘキサンに３２時間常温浸漬し、フィルターにて濾過した。次いで、得られた残渣を酢酸エチルに３２時間常温浸漬し、残渣を除去した後、酢酸エチル抽出液を蒸発乾固し、溶媒を除去して抽出乾固物を得た。
得られた抽出乾固物を用いて実施例１と同様に、Ｂ−１６メラノーマ細胞に対するメラニン生成抑制及び細胞毒性試験を行った。結果を表１に示す。
【００２０】
実施例１−４
シイタケ子実体の乾燥物をジエチルエーテルに３２時間常温浸漬し、フィルターにて濾過した。次いで、得られた残渣を酢酸エチルに３２時間常温浸漬し、残渣を除去した後、酢酸エチル抽出液を蒸発乾固し、溶媒を除去して抽出乾固物を得た。
得られた抽出乾固物を用いて実施例１と同様に、Ｂ−１６メラノーマ細胞に対するメラニン生成抑制及び細胞毒性試験を行った。結果を表１に示す。
【００２１】
実施例１−５
シイタケ子実体の乾燥物を酢酸エチルに３２時間常温浸漬し、残渣を除去した後、酢酸エチル抽出液を蒸発乾固し、溶媒を除去して抽出乾固物を得た。
得られた抽出乾固物を用いて実施例１と同様に、Ｂ−１６メラノーマ細胞に対するメラニン生成抑制及び細胞毒性試験を行った。結果を表１に示す。
【００２２】
比較例１
シイタケ子実体の乾燥物の代わりにシイタケ菌糸体を用いた以外は実施例１と同様に抽出乾固物を得、Ｂ−１６メラノーマ細胞に対するメラニン生成抑制及び細胞毒性試験を行った。結果を表１に示す。
【００２３】
比較例２〜４
シイタケ子実体の乾燥物を、ヘキサン（比較例２）、ジエチルエーテル（比較例３）又はメタノール（比較例４）に、それぞれ３２時間常温浸漬し抽出し、蒸発乾固して溶媒を除去して抽出乾固物を得た。
得られた抽出乾固物を用いて実施例１と同様に、Ｂ−１６メラノーマ細胞に対するメラニン生成抑制及び細胞毒性試験を行った。結果を表１に示す。
【００２４】
【表１】
2004168710.tif 000002
【００２５】
【表２】
2004168710.tif 000003
【００２６】
表１及び２より、本発明のシイタケ子実体の酢酸エチル抽出物及び逐次抽出物は、従来既知の美白剤と同等若しくはそれ以上の美白作用があることが判る。また、他の抽出操作により得られた抽出物やシイタケ菌糸体の酢酸エチル逐次抽出物は、比較例より美白作用が無いことが判る。更に、表２のポジティブコントロールとして用いたルシノールは、本発明の抽出物やアルブチンに比して使用後の肌荒れが認められた。
【００２７】
実施例２−１
ステアリン酸４．０質量部、セチルアルコール３．０質量部、ステアリルアルコール１．０質量部、流動パラフィン６．５質量部、ワセリン１０．０質量部、ソルビタンモノステアレート１．５質量部及びポリオキシエチレンモノステアレート（２５Ｅ．Ｏ．）３．０質量部を加熱溶解した。次いで、この加熱溶解溶液に、実施例１−１で調製した抽出乾固物２質量部、１，３−ブチレングリコール５．０質量部、水酸化カリウム０．１質量部及び合計量が１００質量部となる量の精製水を混合した後、冷却してクリームを得た。
【００２８】
実施例２−２
実施例１−２で調製した抽出乾固物１質量部、ポリオキシエチレンセチルエーテル０．５質量部、プロピレングリコール２．０質量部、ｌ−メントール０．１質量部及び合計量が１００質量部となる量の精製水を均一に撹拌して化粧水を得た。
【００２９】
実施例２−３
実施例１−３で調製した抽出乾固物５質量部、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）１．０質量部、エタノール１５．０質量部、１，３−ブチレングリコール４．０質量部及び合計量が１００質量部となる量の精製水を混合撹拌し、各成分を溶解してローションを調製した。
【００３０】
実施例２−４
スクワラン８．０質量部、ワセリン２．０質量部、ミツロウ０．５質量部、ソルビタンセスキオレート０．８質量部及びポリオキシエチレンオレイルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）１．２質量部を加熱溶解した。得られた加熱溶解溶液に、実施例１−１で調製した抽出乾固物０．５質量部、カルボキシビニルポリマー０．２質量部、プロピレングリコール５．０質量部、水酸化カリウム０．１質量部、エタノール２．０質量部及び合計量が１００質量部となる量の精製水を混合した後、冷却して乳液を調製した。
【００３１】
実施例２−５
スクワラン８．０質量部、ワセリン２．０質量部、ミツロウ０．５質量部、ソルビタンセスキオレート０．８質量部及びポリオキシエチレンオレイルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）  １．２質量部を加熱溶解した。得られた加熱溶解溶液に、実施例１−１で調製した抽出乾固物５質量部、カルボキシビニルポリマー０．２質量部、プロピレングリコール５．０質量部、水酸化カリウム０．１質量部、エタノール２．０質量部、コウジ酸１．０質量部及び合計量が１００質量部となる量の精製水を混合した後、冷却して乳液を調製した。
【００３２】
実施例２−６
モノステアリン酸ポリエチレングリコール１．０質量部、親油型モノステアリン酸グリセリン２．０質量部、オリーブ油５．０質量部、オレイン酸２．０質量部を加熱溶解した。得られた加熱溶解溶液に、実施例１−１で調製した抽出乾固物２質量部、ヒドロキシエチルセルロース０．２質量部、プロピレングリコール２．０質量部、グリチルリチン酸ジカリウム０．１質量部及び合計量が１００質量部となる量の精製水を混合した後、冷却して乳液を調製した。
【００３３】
実施例２−７
ステアリン酸４．０質量部、セチルアルコール３．０質量部、ステアリルアルコール１．０質量部、流動パラフィン６．５質量部、ワセリン１０．０質量部、ソルビタンモノステアレート１．５質量部及びポリオキシエチレンモノステアレート（２５Ｅ．Ｏ．）３．０質量部を加熱溶解した。次いで、この加熱溶解溶液に、実施例１−１で調製した抽出乾固物１質量部、１，３−ブチレングリコール５．０質量部、水酸化カリウム０．１質量部、アルブチン０．２質量部及び合計量が１００質量部となる量の精製水を混合した後、冷却してクリームを得た。
【００３４】
【発明の効果】
本発明の美白剤は、シイタケ子実体の酢酸エチル抽出物を有効成分とするので、強力なメラニン生成抑制作用を示すと共に安全性にも優れる。従って、美白効果を期待して化粧品に利用可能である。