(57)【要約】【課題】　安定であり、しかも既存のサイクロスポリン製剤に比べて薬物動力学的特性の観点からも高い生体利用率を有し、個人間の血中濃度差も少なくすることのできるサイクロスポリン含有製剤を提供する。【解決手段】　（１）活性成分としてサイクロスポリン、　（２）ポリエチレングリコールまたはプロピレンカーボネートまたはこれらの混合物、　（３）オイル成分として、脂肪酸と第一級アルコールのエステル化合物、および　　　　脂肪酸モノグリセリドの混合物、並びに　（４）ＨＬＢ（親水親油バランス）値が８〜１７である界面活性剤、を含有する組成物を含むサイクロスポリン含有製剤である。【選択図】　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
　（１）活性成分としてサイクロスポリン；
　（２）ポリエチレングリコールまたはプロピレンカーボネートまたはこれらの混合物；
　（３）オイル成分として、脂肪酸と第一級アルコールのエステル化合物、および
　　　　脂肪酸モノグリセリドの混合物；並びに
　（４）ＨＬＢ（親水親油バランス）値が８〜１７である界面活性剤
を含有する組成物を含むことを特徴とするサイクロスポリン含有製剤。
【請求項２】
　前記サイクロスポリンがサイクロスポリンＡであり、ゼラチン皮膜内に、可塑剤としてポリエチレングリコールおよびプロピレングリコールを含有する請求項１に記載のサイクロスポリン含有製剤。
【請求項３】
　前記ポリエチレングリコールの分子量が２００〜６００である請求項１または２に記載のサイクロスポリン含有製剤。
【請求項４】
　前記ポリエチレングリコールの分子量が２００ある請求項１〜３のいずれかに記載のサイクロスポリン含有製剤。
【請求項５】
　前記成分（２）は、ポリエチレングリコールとプロピレンカーボネートを１：（０．１〜５）の比で配合した混合物である請求項１〜４のいずれかに記載のサイクロスポリン含有製剤。
【請求項６】
　前記成分（２）は、ポリエチレングリコールとプロピレンカーボネートを１：（０．２〜２）の比で配合した混合物である請求項５に記載のサイクロスポリン含有製剤。
【請求項７】
　前記オイル成分において、脂肪酸と第一級アルコールの前記エステル化合物はリノール酸エチルである請求項１〜６のいずれかに記載のサイクロスポリン含有製剤。
【請求項８】
　前記オイル成分において、必要に応じてカプリル酸／カプリン酸トリグリセリドの中級脂肪酸トリグリセリドをさらに含有する請求項１〜７のいずれかに記載のサイクロスポリン含有製剤。
【請求項９】
　前記脂肪酸モノグリセリドはオレイン酸モノグリセリドである請求項１〜８のいずれかに記載のサイクロスポリン含有製剤。
【請求項１０】
　前記オイル成分において、脂肪酸モノグリセリド：脂肪酸と第一級アルコールのエステル化合物の混合比が重量基準で１：（０．１〜５）である請求項１〜９のいずれかに記載のサイクロスポリン含有製剤。
【請求項１１】
　前記界面活性剤は、水素化植物性オイルのポリオキシエチレン生成物またはポリオキシエチレン−ソルビタン−脂肪酸エステルである請求項１〜１０のいずれかに記載のサイクロスポリン含有製剤。
【請求項１２】
　前記界面活性剤は、ポリオキシエチレン（５０）水酸化ひまし油とモノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンを重量基準で１：（０．１〜５）の比で配合したものである請求項１１に記載のサイクロスポリン含有軟質カプセル製剤。
【請求項１３】
　前記サイクロスポリン、前記成分（２）、前記オイル成分、および前記界面活性剤を重量基準で１：（０．１〜１０）：（１〜１０）：（１〜１０）の比で含有する請求項１〜１２のいずれかに記載のサイクロスポリン含有軟質カプセル製剤。
【請求項１４】
　前記サイクロスポリン、前記成分（２）、前記オイル成分、および前記界面活性剤を重量基準で１：（０．５〜８）：（２〜６）：（２〜８）の比で含有する請求項１３に記載のサイクロスポリン含有軟質カプセル製剤。
【請求項１５】
　前記可塑剤は、ポリエチレングリコールとプロピレングリコールの混合物を、ゼラチン１重量部あたり０．１〜０．５重量部の比で配合するものである請求項２〜１４のいずれかに記載のサイクロスポリン含有製剤。
【請求項１６】
　前記可塑剤において、ポリエチレングリコール１重量部に対してプロピレングリコールを１〜１０重量部の比で配合するものである請求項２〜１５のいずれかに記載のサイクロスポリン含有製剤。
【請求項１７】
　成分（２）、オイル成分、および界面活性剤を均一に混合した後、サイクロスポリンを加えて撹拌しつつ約６０℃で温和に加熱しながら溶解させ、好ましくは、得られた濃縮液を軟質カプセル製造器を用いて可塑剤としてポリエチレングリコールおよびプロピレングリコールを含有するゼラチン皮膜内に封入させてから、冷却ドラムで風冷却することを特徴とする請求項１〜１６のいずれかに記載のサイクロスポリン含有製剤の製造方法。
【請求項１８】
　５〜１５ｍ3／分の風量で風冷却するものである請求項１７に記載の製造方法。
【請求項１９】
　１）活性成分としてサイクロスポリン、および
　２）プロピレンカーボネート
を含有する組成物を含むことを特徴とするサイクロスポリン製剤。
【請求項２０】
　更に、請求項１〜１６のいずれかに記載の成分を１種以上含有する請求項１９に記載のサイクロスポリン製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
　本発明は、活性成分としてサイクロスポリンを含有する軟質カプセル製剤に関する。より詳細には、本発明は、特定の可塑剤を含有するゼラチン皮膜内にサイクロスポリン組成物を安定して含有する軟質カプセル製剤、およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
　サイクロスポリンは１１個のアミノ酸が互いにサイクリックペプチド結合で構成されている巨大分子（分子量１２０２．６４）であり、広範囲に及ぶ有用な薬理学的作用、特に免疫抑制作用および抗炎症作用を有する。従って、サイクロスポリンは組織および器官の移植時（例えば心臓、肺、肝臓、腎臓、膵臓、骨髄、皮膚または角膜の移植時、特に外来組織および器官の移植時）に惹起される生体固有の免疫反応を抑制するのに使用され、さらに貧血等の血液性疾患、全身性紅斑性狼創、突発性吸収障害等の多様な自己免疫疾患、および関節炎、リューマチ性疾患などの炎症の抑制にも有用な化合物である。その他、サイクロスポリンはマラリア、住血吸虫症等の原虫性疾患の治療にも有用であり、最近では化学療法にも利用されている。
【０００３】
　サイクロスポリンは優れた親油性を示す反面、疎水性が非常に大きいので、水に対する溶解性は非常に低いが、メタノール、エタノール、アセトン、エーテル、クロロホルム等の有機溶媒には良く溶解する。このような物性を有するサイクロスポリンは水溶解度が低いため経口投与時における生体利用率が非常に低く、患者個々人の状態によって生体利用率にも大きな影響を及ぼすことから、効果的な治療濃度を維持することが困難であった。更にサイクロスポリンは腎臓毒性等の副作用を示すこともある。この様にサイクロスポリンは水に対する溶解性が非常に低いため、経口投与用に剤型化することは非常に困難であった。そこで、一定の適切な投与量で投与でき、しかも生体利用率にも優れた経口投与用サイクロスポリン製剤の研究が広範囲に行われている。
【０００４】
　従来技術において、水難溶性サイクロスポリンを経口投与用製剤に剤型化するには、エマルション濃縮液形態(pre-concentrate)にする方法が主に用いられてきた。
【０００５】
　この様な方法の代表的なものが1983年6月14日発行の米国特許第4,388,307号に教示されており、エタノールを使用したサイクロスポリンの液体製剤が開示されている。この米国特許の方法によると、サイクロスポリンを、共界面活性剤であるエタノール、植物性オイルであるオリーブ油、および界面活性剤として天然植物性オイルのトリグリセリドとポリアルキレンポリオールとのトランスエステル化生成物からなる担体と配合することによって、液体製剤を製造している。
【０００６】
　しかしながら、この液体製剤は水に希釈して服用しなければならないため服薬順応度が低く、服用時における投与容量を一定に調節することが困難であるという短所がある。
【０００７】
　従って、サイクロスポリン液体製剤を水で希釈してから服用するという不都合を解消する目的で、エマルション濃縮液形態の液体製剤をそのまま軟質カプセル製剤に剤型化したSandimmune（登録商標）が市販されている。この場合、サイクロスポリン軟質カプセル製剤は、サイクロスポリンの溶解度を考慮してエタノールを含有している。しかし、エタノールは常温でもカプセル製剤のゼラチン皮膜を透過して揮発するため、保管中および流通期間中にエタノールが軟質カプセル製剤から揮発するのを防止するために、軟質カプセル製剤はアルミニウム箔薄発泡膏包装のような特殊な包装を施さなければならない。
【０００８】
　最近になって、保管中に安定であり生物学的利用率および被検体間における該生物学的利用率の差が実質的に変動しないため、サイクロスポリンによる生物学的効果を一定に維持することのできるサイクロスポリン製剤が開発されている。このような目的を達成するために開発された製剤の一つに、大韓民国特許公開公報第93-113号がある。この製剤は、Sandimmun Neoral（登録商標）という商品名で市販されている。しかしながら、この製剤もエタノールを使用するため、既存のエタノール含有製剤と同様、保存中の安定性に問題があるだけでなく、エタノールの含有量が変化するという問題も抱えている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
　そこで、本発明者はさまざまな界面活性剤、オイル成分、共界面活性剤などのあらゆる組み合わせについて鋭意研究を行った結果、安定であり、しかも既存のサイクロスポリン製剤に比べて薬物動力学的特性の観点からも高い生体利用率を有し、個人間の血中濃度差も少なくすることのできるサイクロスポリン組成物を見出した。このサイクロスポリン組成物は、以下に記載の成分からなり、上述の要求特性を満たすものである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
　この様に本発明の目的の１つは、活性成分としてサイクロスポリン；親水性成分のポリエチレングリコールまたは非親水性成分のプロピレンカーボネートまたはこれらの混合物；以下に記載のオイル成分；および界面活性剤を含有する、軟質カプセル製剤の製剤化に適した組成物を提供することにある。
【００１１】
　本発明の他の目的は、活性成分としてサイクロスポリン；親水性成分のポリエチレングリコールまたは非親水性成分のプロピレンカーボネートまたはこれらの混合物；オイル成分として、脂肪酸と第一級アルコールのエステル化合物、（必要であれば）中級脂肪酸トリグリセリド、及び脂肪酸モノグリセリドの混合物；およびＨＬＢ（親水親油バランス）値が８〜１７の界面活性剤を含有する組成物を含む、軟質カプセル製剤を提供することにある。
【００１２】
　さらに、本発明の他の目的は、上述の軟質ゼラチンカプセル製剤を製造する方法を提供することにある。
【００１３】
　この様に本発明は主に軟質カプセル製剤に関するものであるが、例えばSandimmun Neoralのような液体製剤やその他の服用形態で使用される組成物自体も本発明の範囲内に包含される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
　本発明は、サイクロスポリン含有カプセル製剤に関する。本発明のサイクロスポリン含有カプセル製剤は保存中の安定性に優れるため組成物の経時変化がほどんどなく、また生体利用率が高いものである。本発明のカプセル製剤は、活性成分としてサイクロスポリン；第2の成分として、親水性成分のポリエチレングリコールまたは非親水性成分のプロピレンカーボネートまたはこれらの混合物；以下に記載のオイル成分；および界面活性剤を含有する組成物を含むものである。
【００１５】
　サイクロスポリン含有組成物を軟質カプセル製剤に製剤化するには、ゼラチン皮膜を使用する必要がある。しかしながら、可塑剤としてグリセリンを含有するゼラチン皮膜を使用して軟質カプセル製剤に製剤化する場合、グリセリンがエマルションに流入し、エマルション濃縮剤の乳化状態が変化するため、サイクロスポリンの溶解度が著しく低くなってエマルションからサイクロスポリンが沈殿するという不具合が生じる。
【００１６】
　従って、本発明では、可塑剤としてグリセリンではなく、プロピレングリコールとポリエチレングリコールの混合物を使用したゼラチン皮膜を選択することが好ましい。これによって、グリセリンの流入に伴なう問題点を解決することができる。
【００１７】
　しかしながら、本発明において、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコールを含有するカプセル皮膜バンドを、冷却ドラムを用いた従来の水冷方法によって製造しようとすると、上記カプセル皮膜を冷却ドラムから脱離するのが困難である。このような問題を回避するために、冷却ドラムを冷却水で連続して循環させることにより、カプセル皮膜の温度を約１７℃まで過冷却してカプセル皮膜バンドが冷却ドラムから脱離するのを改善することもできるが、カプセル封入工程中に過冷却された皮膜の密封強度が低下し、生産性が劣るという新たな問題が生じる。
【００１８】
　そこで本発明法では、可塑剤としてグリセリンを含まないゼラチン皮膜バンドを製造するために、従来の如く水冷却を行う代わりに風冷却を行う方法を採用している。すなわち、ファンから風量を与えることによってカプセル皮膜バンドを至適温度にまで低下させることにより、冷却ドラムからの脱離を容易にし、約２１℃を維持することができる結果、カプセル成形工程中の密封強度を高め、生産性を向上させることができる。
【００１９】
　この様に本発明の製剤は、グリセリンを含まないゼラチンカプセル皮膜を風冷却法によって製造しており、しかも組成物中には、低沸点の揮発性溶媒であるエタノールを含まないため、経時変化が少なく貯蔵安定性に優れ、しかも生体利用率も著しく向上している。
【００２０】
　より詳細には、本発明のサイクロスポリン製剤は、例えば可塑剤としてポリエチレングリコールおよびプロピレングリコールを含有するゼラチン皮膜内に、
　１）活性成分としてサイクロスポリン；
　２）ポリエチレングリコールまたはプロピレンカーボネートまたはこれらの混合物；
　３）オイル成分として、脂肪酸と第一級アルコールのエステル化合物；
　　　脂肪酸モノグリセリド、および必要に応じて中級脂肪酸トリグリセリドの混合物；
　および
　４）ＨＬＢ（親水親油バランス）値が８〜１７の界面活性剤
を含有する組成物を含むものである。さらに本発明のサイクロスポリン製剤は、
　１）活性成分としてサイクロスポリン、および
　２）プロピレンカーボネート
を含有する組成物を含むものである。
【００２１】
　本発明の組成物は、必要に応じてさらに本明細書に記載の他の成分を、本明細書に記載の量含有する。
【００２２】
　本発明の組成物に薬学的活性成分として使用されるサイクロスポリンは、上述の様に、免疫抑制作用および抗炎症作用を有する環状ペプチドである。本発明で使用することができるサイクロスポリンには、サイクロスポリンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＧ等が挙げられるが、最も好ましいのは、その臨床的有用性および薬学的特性が最もよく立証されているサイクロスポリンＡである。
【００２３】
　次に、二番目の必須成分である共界面活性剤としては、高沸点、非揮発性であり、軟質カプセルのゼラチン皮膜に対する膜透過性が少ないだけでなく、サイクロスポリンに対して高い溶解度を示すポリエチレングリコールが親水性成分として挙げられる。このポリエチレングリコールは液化できるものであれば全て使用できるが、分子量２００〜６００のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が好ましく、特にＰＥＧ２００が好ましい。
【００２４】
　また、非親水性成分としては、プロピレンカーボネート（沸点約２４２℃）が使用される。本発明では、上述の非親水性成分および親水性成分の混合物を使用してもよい。ポリエチレングリコールおよびプロピレンカーボネートの混合物を使用する場合、これらは一般に重量基準で１：（０．１〜５）、好ましくは１：（０．１〜３）、最も好ましくは１：（０．２〜２）である。
【００２５】
　本発明では、ポリエチレングリコールおよびプロピレンカーボネートを使用することによって、サイクロスポリン含有組成物の貯蔵安定性が向上するため、組成物の含有量を実質的に均一化することができるという利点がある。さらに、プロピレンカーボネートを使用することによって、活性成分であるサイクロスポリンの溶解度を著しく高めることができ、さらにゼラチンカプセル皮膜から組成物中への水分の流入が抑制され、さらに安定した組成物を供給することができる。
【００２６】
　本発明の組成物では、上記第2の成分はサイクロスポリン１重量部あたり０．１〜１０重量部の比で使用することが好ましく、より好ましくは０．５〜８重量部、最も好ましくは１〜５重量部である。
【００２７】
　本発明のエマルション濃縮液に使用される第3の成分はオイル成分である。本発明のオイル成分としては、脂肪酸と第一級アルコールのエステル化合物、（必要に応じて）中級脂肪酸トリグリセリド、および脂肪酸モノグリセリドの混合物を使用することができる。本発明で使用される脂肪酸および第一級アルコールのエステル化合物としては、炭素数８〜２０の脂肪酸と、炭素数２〜３の第一級アルコールのエステル化合物、例えば、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、リノール酸エチル、オレイン酸エチル等が挙げられ、なかでもリノール酸とエタノールのエステル化合物であるリノール酸エチルが好ましい。さらに、必要に応じて添加される中級脂肪酸トリグリセリドとしては、好ましくは炭素数８〜１０の飽和脂肪酸のトリグリセリドが使用され、特に好ましいのは飽和脂肪酸の植物性オイルトリグリセリドであるカプリル酸／カプリン酸トリグリセリドである。さらに、本発明のオイル成分として用いられる脂肪酸モノグリセリドとしては炭素数１８〜２０の脂肪酸モノグリセリドが挙げられ、特に好ましくはオレイン酸モノグリセリドである。
【００２８】
　本発明のマイクロエマルション濃縮液において、オイル成分は、サイクロスポリン１重量部あたり１〜１０重量部、好ましくは２〜６重量部の比で配合される。
【００２９】
　好ましくは、オイル成分として存在する脂肪酸モノグリセリドおよび脂肪酸エステルの比は、１：１〜１：２、例えば１：１〜１：１．２である。
【００３０】
　必要に応じて、リノール酸エチルに対してカプリル酸／カプリン酸トリグリセリドを１：０．１〜０．２の比で使用してもよい。
【００３１】
　本発明のオイル成分として使用されるオイル混合物において、脂肪酸モノグリセリド：脂肪酸および第一級アルコールのエステル化合物：（存在する場合）中級脂肪酸トリグリセリドの混合比は一般に重量基準で１：（０．１〜５）：（０．１〜１０）であり、好ましくは１：（０．１〜３．０）：（０．１〜３．０）である。
【００３２】
　本発明の組成物に含有される第４の必須成分は界面活性剤である。本発明に使用するのに適した界面活性剤は、薬学的に許容されるＨＬＢ（親水親油バランス）値が８〜１７の界面活性剤であって、オイル成分およびサイクロスポリンを含有する親油性成分と、共界面活性剤を含有する親水性成分とを水中で安定に乳化させることにより安定したマイクロエマルションを形成することのできるものであればいずれも使用することができる。好ましくは水素化植物性オイルのポリオキシエチレン生成物やポリオキシエチレン−ソルビタン−脂肪酸エステル等が使用され、例えばNIKKOL HCO−５０、NIKKOL HCO−４０、NIKKOL HCO−６０等、TWEEN２０、TWEEN２１、TWEEN４０、TWEEN６０、TWEEN８０、TWEEN８１等が挙げられる。特に好ましくは、酸価が１以下、ケン化価が約４８〜５６、水酸基価が約４５〜５５、ｐＨ（５％）が４．５〜７．０である商品名NIKKOL HCO−５０（NIKKOL Chemical Co., Ltd.）で市販されているポリオキシエチレン（５０）水素化ひまし油、および商品名TWEEN２０（ICI Chemicals）で市販されているモノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンである。
【００３３】
　これらの界面活性剤はそれぞれ単独で使用できるが、２種以上を混合して使用することもできる。本発明の組成物において、界面活性剤はサイクロスポリン１重量部あたり１〜１０重量部、好ましくは２〜８重量部の比で存在する。
【００３４】
　また、２種の界面活性剤、すなわちポリオキシエチレン（５０）水素化ひまし油とモノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンの混合物を本発明の組成物に使用する場合は、重量基準でポリオキシエチレン（５０）水素化ひまし油：モノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンを１：（０．１〜５）の比で、さらに好ましくは１：（０．５〜４）の比で使用することが好ましい。
【００３５】
　本発明の組成物において、上記４種の成分は重量基準で、好ましくはサイクロスポリン：第２の成分：オイル成分：界面活性剤＝１：（０．１〜１０）：（１〜１０）：（１〜１０）の比で存在し、より好ましくはサイクロスポリン：第２の成分：オイル成分：界面活性剤＝１：（０．５〜８）：（２〜６）：（２〜８）の比で存在する。
【００３６】
　この他に以下の実施例で例示される本発明に従う組成物も好ましい組成例として挙げられる。
【００３７】
　上述の成分を含有する本発明の組成物は、経口投与の目的で軟質カプセル製剤の形態に製剤化して使用する。
【００３８】
　本発明の軟質カプセル製剤は、低沸点の揮発性溶媒であるエタノールを使用しないので製剤学的に安定であるのみならず、生体利用率の改善といった所期の目的を達成することができる。しかしながら、従来と同様の製造方法によって軟質カプセル製剤皮膜を生産性良く製造することは困難である。可塑剤としてグリセリンを含有する従来のカプセル皮膜を使用して軟質カプセルを製剤化した場合、得られた軟質カプセルにおいて、エマルション中へのグリセリンの流入によりエマルション濃縮液の乳化状態が変化し、サイクロスポリンの溶解度が著しく低下して沈殿が生じるという問題が見られる。
【００３９】
　従って本発明の他の側面において、可塑剤としてグリセリンではなく、ポリエチレングリコールとプロピレングリコールの混合物を使用してカプセル皮膜を製造することにより、長期間安定した製剤が得られることがわかった。可塑剤として使用されるポリエチレングリコールは、液化できるものであれば全て使用できるが、好ましくは分子量２００〜６００のものが好ましい。
【００４０】
　特に、ポリエチレングリコール２００を使用することが好ましい。本発明の軟質カプセル皮膜において、ポリエチレングリコールとプロピレングリコールの混合物は、カプセル皮膜に使用するゼラチン１重量部あたり０．１〜０．５重量部で使用することが好ましく、より好ましくはゼラチン１重量部あたり０．１〜０．４重量部、最も好ましくはゼラチン１重量部あたり０．２〜０．３重量部の比で使用する。可塑剤として使用される、ポリエチレングリコールとプロピレングリコールの混合物における混合比は、好ましくはポリエチレングリコール１重量部あたりプロピレングリコールを１〜１０重量部、より好ましくは３〜８重量部、最も好ましくは３〜６重量部である。
【００４１】
　冷却ドラムから軟質カプセル皮膜バンドを効率よく脱離させる為に、本発明のゼラチンカプセル皮膜の製造方法は水冷却法ではなく風冷却法を採用する。本発明の風冷却法によると、カプセル皮膜バンドは過熱されることがないため、成形時の適正温度を約２１℃に維持しながら該カプセル皮膜を冷却ドラムから容易に脱離させることができるので、成形工程時の密封強度が高まって生産性が向上し、生産が効率よく行われる。
【００４２】
　本発明の軟質カプセル製剤製造工程時にカプセル皮膜を冷却させる冷却ドラムの風量は、５〜１５ｍ3／分が好ましく、最も好ましくは約１０ｍ3／分である。
【００４３】
　本発明の組成物を軟質カプセル製剤に製剤化する際、カプセル製剤には上記組成物以外にも、必要に応じて軟質カプセル製剤の製造に通常利用される薬学的に許容される添加剤をさらに含有することができる。このような添加剤としては例えばレシチン、粘土調節剤、芳香剤（例えば薄荷油等）、酸化防止剤（例えばトコフェロール、ビタミンＥ等）、防腐剤（例えばパラベン類等）、色素、アミノ酸などが挙げられる。
【００４４】
　本発明の軟質カプセル製剤を製造するにあたって、共界面活性剤、オイル成分、および界面活性剤を均一に混合した後、約６０℃の温度で温和に加熱および撹拌しながらサイクロスポリンを溶解させる。次に、生成した濃縮液をそのまま、または必要に応じて上述した軟質カプセル製剤の製造に通常用いられる薬学的に許容される添加剤を添加して軟質カプセル製造器に注ぎ、可塑剤としてポリエチレングリコールとプロピレングリコールを含有するゼラチン皮膜を使用し、風冷却により所望のサイクロスポリン軟質カプセル製剤を製造する。
【００４５】
　本発明の組成物および製剤は、従来のサイクロスポリン組成物と同様の用途に有用であり、必要に応じて後述の犬などの動物、または人間などを用いた標準的な生体利用率実験を基準に投与量を調節しながら、従来と同様の投与方法および投与量で投与できる。
【００４６】
　賦形剤または成分の組成について本明細書では詳細な説明は行わないが、これについては、例えば、H.P.Fiedler, Lexikon der Hilfsstoffe, Edito Cantor Verlag, Aulendorf, Germany第4版、1996年；Handbook of Pharmaceutical Excipients American Pahrmaceutical Association, Washington；The Pharmaceutical Society, 第2版、1994年、および1994年９月11日出願の韓国特許出願第94-29208号などの文献を参照すれば良い。
【００４７】
　本発明は以下の実施例によってさらに詳細に説明されるが、本発明の技術範囲はこれらの実施例によって何ら制限されるものではない。
【００４８】
　実施例１：
　　　成 分　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　含有量（ｍｇ／カプセル）
　　　サイクロスポリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２５
　　　ポリエチレングリコール２００　　　　　　　　　　　　　　４５
　　　プロピレンカーボネート　　　　　　　　　　　　　　　　　２５
　　　ポリオキシエチレン（５０）水素化ひまし油　　　　　　　　３５
　　　モノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン　　　８５
　　　リノール酸エチル　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４０
　　　カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド　　　　　　　　　　　５
　　　オレイン酸モノグリセリド　　　　　　　　　　　　　　　　３５
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　総　　　　　　　　　２９５ｍｇ
　実施例２：
　　　成 分　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　含有量（ｍｇ／カプセル）
　　　サイクロスポリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２５
　　　ポリエチレングリコール２００　　　　　　　　　　　　　　７０
　　　ポリオキシエチレン（５０）水素化ひまし油　　　　　　　　３５
　　　モノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン　　　８５
　　　リノール酸エチル　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４０
　　　カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド　　　　　　　　　　　５
　　　オレイン酸モノグリセリド　　　　　　　　　　　　　　　　３５
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　総　　　　　　　　２９５ｍｇ
　実施例３
　　　成 分　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　含有量（ｍｇ／カプセル）
　　　サイクロスポリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２５
　　　ポリエチレングリコール２００　　　　　　　　　　　　　１００
　　　プロピレンカーボネート　　　　　　　　　　　　　　　　　５０
　　　ポリオキシエチレン（５０）水素化ひまし油　　　　　　　　３５
　　　モノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン　　　８５
　　　リノール酸エチル　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４０
　　　カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド　　　　　　　　　　　５
　　　オレイン酸モノグリセリド　　　　　　　　　　　　　　　　３５
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　総　　　　　　　３７５ｍｇ
　実施例４：
　　　成 分　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　含有量（ｍｇ／カプセル）
　　　サイクロスポリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２５
　　　ポリエチレングリコール２００　　　　　　　　　　　　　　４５
　　　プロピレンカーボネート　　　　　　　　　　　　　　　　　２５
　　　ポリオキシエチレン（５０）水素化ひまし油　　　　　　　　５０
　　　モノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン　　１００
　　　リノール酸エチル　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４０
　　　カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド　　　　　　　　　　　５
　　　オレイン酸モノグリセリド　　　　　　　　　　　　　　　　３５
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　総　　　　　　　３２５ｍｇ
　実施例５：
　　　成 分　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　含有量（ｍｇ／カプセル）
　　　サイクロスポリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２５
　　　ポリエチレングリコール２００　　　　　　　　　　　　　　４５
　　　プロピレンカーボネート　　　　　　　　　　　　　　　　　２５
　　　ポリオキシエチレン（５０）水素化ひまし油　　　　　　　　３５
　　　モノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン　　　８５
　　　リノール酸エチル　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８０
　　　カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド　　　　　　　　　　１０
　　　オレイン酸モノグリセリド　　　　　　　　　　　　　　　　７０
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　総　　　　　　　３７５ｍｇ
　実施例６：
　実施例１の組成物を用いて軟質カプセル製剤を製造するに当たり、下記の様なカプセル皮膜組成物を使用し、グリセリンの流入による内容物の性状変化を目視観察した。
【００４９】
　　　６．１（対照群）
　　　　　　成分　　　　　　　　　　　　　重量比
　　　　　　ゼラチン　　　　　　　　　　　　２０
　　　　　　精製水　　　　　　　　　　　　　１６
　　　　　　グリセリン　　　　　　　　　　　　９
　　　６．２（試験群）
　　　　　　成分　　　　　　　　　　　　　重量比
　　　　　　ゼラチン　　　　　　　　　　　　２０
　　　　　　精製水　　　　　　　　　　　　　１６
　　　　　　プロピレングリコール　　　　　　　４
　　　　　　ポリエチレングリコール２００　　　１
　観察結果を下記表１に示す。
【００５０】
　表１：各カプセル皮膜を含有する軟質カプセル製剤の内容物の安定性
【００５１】
【表１】
2004043511.tif 000002
【００５２】
　上記表１の結果からわかるように、６．１（対照群）の組成物のように可塑剤としてグリセリンを使用して製造したカプセル製剤は、グリセリンの流入により沈殿生成を含む幾つかの問題が生じたのに対し、６．２（試験群）の組成物のように可塑剤としてポリエチレングリコールとプロピレングリコールを使用して製造したカプセル製剤は安定した状態を維持することができた。
【００５３】
　実施例７：
　実施例１の組成物を用いて軟質カプセル製剤を製造するにあたり、上記実施例６で使用した６．２（試験群）のカプセル皮膜組成物を使用し、水冷却法（水温約１２℃）と風冷却法（風量約１０ｍ3／分）により各々成形した。
【００５４】
　各カプセル皮膜バンドの冷却ドラムからの脱離性を観察し比較した。観察結果を下記表２に示す。
【００５５】
　表２：各冷却方法を適用した場合のゼラチン皮膜バンドの冷却ドラムからの脱離性
【００５６】
【表２】
2004043511.tif 000003
【００５７】
　上記表２の結果からわかるように、本発明法である風冷却法により成形した軟質カプセル製剤は、水冷却法により製造した軟質カプセル製剤に比べ、冷却ドラムからの脱離性が遥かに優れていた。一般に冷却ドラムからのゼラチン皮膜バンドの脱離角度は約７０°以上であれば脱離性が不良であり、約７０°未満であれば脱離性は良好であると判断される。水冷却法により製造される軟質カプセル製剤は、１００°以上の角度で脱離させたとしても、冷却ドラムから十分に脱離されない。
【００５８】
　これに対し、風冷却法により製造される本発明の軟質カプセル製剤は５０°以下の角度で冷却ドラムから容易に脱離することができるため、密封強度も遥かに良好であり生産性も高かった。
【００５９】
　実施例８：
　試験製剤として、本発明の実施例１により製造した組成物を、６．２（試験群）の組成を有するゼラチン皮膜に封入した検体を使用し、対照製剤として、エタノール含有市販製剤であるSANDIMMUN Capsuleを使用し、両製剤間の生体利用率を比較することにより、サイクロスポリン製剤の生体利用率および個体差に及ぼす影響を評価した。
【００６０】
　本実施例において、試験製剤および対照製剤はすべて兎１ｋｇあたりサイクロスポリンを３００ｍｇ投与した。
【００６１】
　兎は金網ケージの中で同一条件下で4日間以上、通常の兎用固体飼料を定期的に与えた。尚、経口製剤の投与時には鉄製拘束ケージ中で４８時間絶食させ、絶食時には水分を自由に摂取することができるようにした。表面に摩擦を少なくするためのワセリンを塗った直径５ｍｍのレビン管（Levin's tube）を食道の長さ３０ｃｍまで入れた。試験製剤および対照製剤の内容物をそれぞれ水５０ｍｌに乳化させ、レビン管に連結した注射器に入れ、連結した注射器を介しておしこんだ。次いで、兎の耳静脈血管をキシレンで拡張させた後、ヘパリン処理した注射器を用い、耳静脈血を投薬前、投薬後０．５時間、１時間、１．５時間、２時間、３時間、４時間、６時間、１０時間、２４時間目に採取した。血液１ｍｌあたり、飽和塩化ナトリウム水溶液０．５ｍｌおよびエーテル２ｍｌを加えた後、５分間振蕩した。この混液を５０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して上澄液（エーテル層）１ｍｌを分取し、活性化されたシリカセップ−パック（Silica sep-pakR:Waters）に展開した。展開したセップ−パックをｎ−ヘキサン５ｍｌで洗浄し、メタノール２ｍｌで溶出させた後、この液を窒素ガス中で減圧下で蒸発乾燥させ、残留物をＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）によって分析した。[ＨＰＬＣ条件：カラムμ−BondapakR C18 (Waters)、移動相ＣＨ3ＣＮ：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ＝５５：１５：３０、検出器２１０ｎｍ、流速１．０ｍｌ／分、カラム温度７０℃、感度０．０１Aufs、注入量１００μｌ]。
【００６２】
　試験製剤と対照製剤の試験結果を下記表３に示す。
【００６３】
　表３：本発明の試験製剤および市販品（ＳＡＮＤＩＭＭＵＮR）の生体利用率
【００６４】
【表３】
2004043511.tif 000004
【００６５】
　注）AUC    ：血中濃度曲線以下の面積
　　　Cmax   :サイクロスポリンの最高血中濃度
　　　M±S.D.：平均値±標準偏差
　　　CV     :平均値に対する標準偏差の比
　　　P(B/A)：対照製剤の平均値に対する試験製剤の平均値の比
　上記表の結果からわかるように、試験製剤は対照製剤に比べてAUC値の比が約４倍以上、Cmax値の比が約７倍以上増加しており、試験製剤の生体利用率が対照製剤の生体利用率に比べて顕著に増加することを示した。さらに、本発明の試験製剤は、個体間の偏差（CV%）がAUC値では約２倍以上、Cmax値では約１．５倍程度減少するという効果を示した。
【００６６】
　従って、本発明の軟質カプセル製剤を経口投与した場合、その生体利用率は、エタノール含有市販製剤であるSANDIMMUN Capsuleの対照製剤と比較すると、約4倍程度増加しており、個体間におけるサイクロスポリン生体利用率の差も軽減される等の効果を示すと共に、長期間保管しても経時変化がほとんどなく維持されるので、サイクロスポリン軟質カプセル製剤の製造分野での顕著な進歩を示すものである。
【００６７】
　実施例９：
　以下の組成の軟質ジェルを製造した。
【００６８】
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｉ　　　　　　　ＩＩ
　　　サイクロスポリンＡ　　　　　　　　　　　　２５ｍｇ　　　　１００ｍｇ
　　　ポリエチレングリコール２００　　　　　　　４５ｍｇ　　　　１８０ｍｇ
　　　プロピレンカーボネート　　　　　　　　　　２５ｍｇ　　　　１００ｍｇ
　　　ポリオキシエチレン５０−水素化ひまし油　　４０ｍｇ　　　　１６０ｍｇ
　　　ポリソルベート２０　　　　　　　　　　　　８５ｍｇ　　　　３４０ｍｇ
　　　リノール酸エチル　　　　　　　　　　　　　４０ｍｇ　　　　１６０ｍｇ
　　　オレイン酸モノグリセリド　　　　　　　　　４０ｍｇ　　　　１６０ｍｇ
　　　ビタミンＥ　　　　　　　　　　　　　　　　　１ｍｇ　　　　　　４ｍｇ
　　　　　　　　　　　　　総　　　　　　　　　３０１ｍｇ　　　１２０４ｍｇ