(57)【要約】【課題】ＮＭＲ測定後のタンパク質試料回収して再使用に供することでＮＭＲ測定コストの低減を図ることができ、また、ＮＭＲ測定を効率的に行うことができるＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質の回収方法およびそのシステムを提供する。【解決手段】タンパク質回収システムは、オートサンプラー１０、ＮＭＲ装置１２、カラム１４およびタンパク質回収容器１６を備える。オートサンプラー１０から連続的に供給されるタンパク質試料について、ＮＭＲ装置１２でタンパク質と低分子化合物との相互作用の状態を測定した後、カラム１４でタンパク質と低分子化合物を含む他の成分とを分離した後、他の成分と分離されて流出するタンパク質を回収し、再使用する。【選択図】      図１
2004168712.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＮＭＲでタンパク質と低分子化合物との相互作用の状態を測定した後のタンパク質試料を該タンパク質と該低分子化合物を含む他の成分とを分離することができるタンパク質分離カラムに通す分離工程と、
該タンパク質分離カラムで該低分子化合物を含む他の成分と分離されて流出するタンパク質を回収する回収工程とを有することを特徴とするＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質の回収方法。
【請求項２】
前記分離工程において、ＮＭＲ測定される前記タンパク質試料の前記タンパク質はラベル化されたものであり、前記回収工程において、ラベル化されたタンパク質を回収することを特徴とする請求項１記載のＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質の回収方法。
【請求項３】
前記分離工程において、前記タンパク質分離カラムとして、前記低分子化合物を含む他の成分に先だって前記タンパク質を流出する特性を有するカラムを用い、該タンパク質が流出した後、該低分子化合物を含む他の成分が分離して逐次流出する前に、該カラムを洗浄して、該低分子化合物を含む他の成分を該カラムから排出することを特徴とする請求項１または２に記載のＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質の回収方法。
【請求項４】
前記カラムは、前記タンパク質が浸入できない程度であって前記低分子化合物を含む他の成分が浸入できる程度の大きさの径の細孔が形成されて、該細孔内に疎水性官能基結合を有するとともに、外表面に親水性官能基結合を有する多孔性担体よりなるカラム充填剤が充填されてなることを特徴とする請求項３記載のＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質の回収方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質の回収方法を実施するためのシステムであって、
ＮＭＲ測定後のタンパク質試料を送出する送出部と、
送出される該タンパク質試料を分離処理するタンパク質分離カラムと、
タンパク質を回収する回収部とを有することを特徴とするＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質回収システム。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質の回収方法を実施するためのシステムであって、
タンパク質試料を複数個貯留して、順次送出するオートサンプラーと、
該タンパク質試料の複数個についてＮＭＲ測定を連続的に行うフロー型のＮＭＲ装置と、
該ＮＭＲ装置から送出される該タンパク質試料を分離処理するタンパク質分離カラムと、
タンパク質を回収する回収部とを有することを特徴とするＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質回収システム。
【請求項７】
前記ＮＭＲ装置から送出される前記タンパク質試料を個々のタンパク質試料ごとに一端抜き取ることなく、該タンパク質試料を搬送する導管によって順次そのままタンパク質分離カラムに送り、逐次処理するように構成してなることを特徴とする請求項６記載のＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質回収システム。
【請求項８】
前記導管の途中に切り換えバルブが設けられるとともに、該切り換えバルブに送出ラインが接続される流速調整液を送出する送出ポンプが設けられ、該切り換えバルブを切り換えることで、前記ＮＭＲ装置から前記タンパク質試料が１個送出される後、前記導管を遮断し、該送出されるタンパク質試料に流速調整液を同伴させて所定の流速で前記タンパク質分離カラムに送るように構成してなることを特徴とする請求項７記載のＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質回収システム。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ＮＭＲ測定後のタンパク質試料の取り扱いに関する。
【０００２】
【従来の技術】
特定のタンパク質に特定の低分子化合物を加えたときの両者の相互作用によるタンパク質の分子構造の変化を核磁気共鳴スペクトルを測定して把握し（以下、これをＮＭＲ測定という。）、薬物等としての低分子化合物の意義を評価することが広く行われている。
【０００３】
このとき、例えば１５Ｎでラベル化されたタンパク質を用いてＮＭＲ測定が行われている（例えば、非特許文献１、２参照。）。
【０００４】
ＮＭＲで測定した後のタンパク質試料は、薬物としての効果を評価するために加えた低分子化合物やその他の試薬等を含んだ状態にあるため、ＮＭＲ測定を終えるとそのまま廃棄されているのが現状である。
【０００５】
【非特許文献１】
Ａｌｆｒｅｄ  Ｒｏｓｓ  ｅｔ．ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ＮＭＲ，  １６：１３９−１４６，２０００
【非特許文献２】
Ｂｏｅｌ  Ｌｉｎｄｅｇａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｎｏ．２４ｐ．ｐ．４４９０−４４９７  １９９４）
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、測定に用いるタンパク質は高価であるため、回収して再使用することが望ましい。
【０００７】
また、測定に用いるラベル化したタンパク質は、ラベル化のための処理コストが無視できず、またラベル化のための作業を要しているため、回収して再使用することがさらに望まれる。
【０００８】
本発明は、上記の課題に鑑みてなされたものであり、ＮＭＲ測定後のタンパク質試料回収して再使用に供することでＮＭＲ測定コストの低減を図ることができるＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質の回収方法およびそのシステムを提供することを目的とする。
【０００９】
また、本発明は、比較的少数のタンパク質を繰り返し使用することにより、ＮＭＲ測定を効率的に行うことができるＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質の回収方法およびそのシステムを提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するために、本発明に係るＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質の回収方法は、ＮＭＲでタンパク質と低分子化合物との相互作用の状態を測定した後のタンパク質試料を該タンパク質と該低分子化合物を含む他の成分とを分離することができるタンパク質分離カラムに通す分離工程と、該タンパク質分離カラムで該低分子化合物を含む他の成分と分離されて流出するタンパク質を回収する回収工程とを有することを特徴とする。
【００１１】
これにより、回収したタンパク質を再使用に供することでＮＭＲ測定コストの低減を図ることができる。また、比較的少数のタンパク質を繰り返し使用することにより、ＮＭＲ測定を効率的に行うことができる。このとき回収されるタンパク質は、変質することなく、実質的に低分子化合物と相互作用させる前の状態のものである。
【００１２】
この場合、前記分離工程において、ＮＭＲ測定される前記タンパク質試料の前記タンパク質はラベル化されたものであり、前記回収工程において、ラベル化されたタンパク質を回収すると、ＮＭＲ測定コストをさらに低減することができ、また、ラベル化作業の煩雑さを軽減することができる。
【００１３】
また、この場合、前記分離工程において、前記タンパク質分離カラムとして、前記低分子化合物を含む他の成分に先だって前記タンパク質を流出する特性を有するカラムを用い、該タンパク質が流出した後、該低分子化合物を含む他の成分が分離して逐次流出する前に、該カラムを洗浄して、該低分子化合物を含む他の成分を該カラムから排出すると、タンパク質を回収するためのタンパク質分離カラムでの処理時間が、実質的にタンパク質が分離されるまでの時間のみで済むため、回収作業を効率的に行うことができる。
【００１４】
また、この場合、前記カラムは、前記カラムは、前記タンパク質が浸入できない程度であって前記低分子化合物を含む他の成分が浸入できる程度の大きさの径の細孔が形成されて、該細孔内に疎水性官能基結合を有するとともに、外表面に親水性官能基結合を有する多孔性担体よりなるカラム充填剤が充填されてなると、親水性を有するタンパク質が親水性官能基によってカラム充填剤の細孔から遠ざけられて変性することなく溶出（送出）し、疎水性部位を有する低分子化合物を含む他の成分が細孔内の疎水性官能基に一端保持された後、タンパク質に遅れて溶出するため、タンパク質の分離操作を好適に行うことができる。
【００１５】
また、本発明に係るＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質回収システムは、上記のＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質の回収方法を実施するためのシステムであって、ＮＭＲ測定後のタンパク質試料を送出する送出部と、送出される該タンパク質試料を分離処理するタンパク質分離カラムと、タンパク質を回収する回収部とを有することを特徴とする。
【００１６】
また、本発明に係るＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質回収システムは、タンパク質試料を複数個貯留して、順次送出するオートサンプラーと、該タンパク質試料の複数個についてＮＭＲ測定を連続的に行うフロー型のＮＭＲ装置（ＮＭＲ分光装置）と、該ＮＭＲ装置から送出される該タンパク質試料を分離処理するタンパク質分離カラムと、タンパク質を回収する回収部とを有することを特徴とする。
【００１７】
これにより、本発明のタンパク質回収方法の効果を好適に得ることができる。
【００１８】
この場合、前記ＮＭＲ装置から送出される前記タンパク質試料を個々のタンパク質試料ごとに一端抜き取ることなく、該タンパク質試料を搬送する導管によって順次そのままタンパク質分離カラムに送り、逐次処理するように構成してなると、自動制御化することで、能率的にタンパク質の回収操作を行うことができて好適である。
【００１９】
また、この場合、前記導管の途中に切り換えバルブが設けられるとともに、該切り換えバルブに送出ラインが接続される流速調整液を送出する送出ポンプが設けられ、該切り換えバルブを切り換えることで、前記ＮＭＲ装置から前記タンパク質試料が１個送出される後、前記導管を遮断し、該送出されるタンパク質試料に流速調整液を同伴させて所定の流速で前記タンパク質分離カラムに送るように構成してなると、ＮＭＲ装置における流速と無関係にタンパク質分離カラムでの分離操作に望ましい流速に設定して分離操作を行うことができて好適である。
【００２０】
【発明の実施の形態】
本発明に係るＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質の回収方法およびそのシステムの好適な実施の形態（以下、本実施の形態例という。）について、図を参照して、以下に説明する。
【００２１】
前記のように、特定のタンパク質に特定の低分子化合物を加えたときの両者の相互作用によるタンパク質の分子構造の変化をＮＭＲ測定して、薬物等としての低分子化合物の意義を評価することが広く行われている。
【００２２】
例えば、生理的に酸素貯蔵体として機能し、通常、生体の筋肉組織に見られるタンパク質であるミオグロビン（Ｍｙｏｇｌｏｂｉｎ）に対する、低分子化合物であるアセトアミドフェノール（Ａｃｅｔａｍｉｄｏｐｈｅｎｏｌ）の薬効を評価する場合を例にとって、ＮＭＲ測定の手順を概略説明する。なお、ミオグロビンは、ｐｌ（等電点）が８．１でＦＷ（分子量）が１８０００である。
【００２３】
ミオグロビンは、例えば１ｍＭが０．１Ｍのリン酸バッファ液（ｐＨ６．８）および５〜１０％（ｖ／ｖ）の重水に溶解される。一方、アセトアミドフェノールは、０．５１ｍＭのジメチルスルホキシド（以下重ＤＭＳＯという。）に溶解される。これら２つの溶解液をＮＭＲ測定を行う直前に混合した後、ＮＭＲ測定装置にかけて、ミオグロビンとアセトアミドフェノールとの相互作用の状態を核磁気共鳴スペクトルを測定することで判断する。このとき、必要に応じて、測定を迅速に行うために、予めミオグロビンを例えば１５Ｎでラベル化しておく。
【００２４】
前記のように、ＮＭＲ測定を行った後のタンパク質試料は、薬物としての評価のために加えた低分子化合物やその他の試薬等を含んだ状態にあるため、ＮＭＲ測定を終えた後、そのまま廃棄されているのが現状である。
【００２５】
本発明では、上記のＮＭＲ測定を行った後のタンパク質試料をタンパク質と低分子化合物、重ＤＭＳＯ等の他の成分とに分離することが可能なカラムで処理して、タンパク質を他の成分と分離し、回収する。
【００２６】
以下、本実施の形態例に係るＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質の回収方法およびそのシステムについて、図１および図２を参照して説明する。
【００２７】
まず、タンパク質の回収方法を実施するための本実施の形態例に係るタンパク質回収システムについて図１を参照して説明する。
【００２８】
タンパク質回収システムは、オートサンプラー１０、ＮＭＲ装置１２、カラム（タンパク質分離カラム）１４およびタンパク質回収容器（回収部）１６を備える。
【００２９】
オートサンプラー１０には、タンパク質をバッファ液に溶解したものおよび低分子化合物等を溶解したものの２つの液が別々にセットされるとともに、この２つの液の組み合わせ試料が多数組セットされる（図示せず。）。なお、タンパク質は、必要に応じて、ラベル化されたものが使用される。
【００３０】
オートサンプラー１０とＮＭＲ装置１２とは、六方切り換えバルブ１８ａを介して導管２０ａで接続される。
【００３１】
六方切り換えバルブ１８ａには、さらに、導管２０ｂを介してシリンジ２２が接続される。
【００３２】
ＮＭＲ装置１２は、複数の試料を順次流通させて連続的に測定することができるフロー型を用いる。但し、これに限らず、タンパク質の回収をバッチ処理で行うとき等においては、回分型のＮＭＲ装置を用いてもよい。
【００３３】
ＮＭＲ装置１２に導管２０ｃが接続され、導管２０ｃの端部に六方切り換えバルブ１８ｂが設けられる。
【００３４】
六方切り換えバルブ１８ｂには、さらに、導管（送出ライン）２０ｌを介してポンプ２４ａおよびポンプ２４ｂが切り換え可能にが接続されるとともに、ループ部２６を有する導管２０ｄおよび導管２０ｅが接続される。
【００３５】
導管２０ｄの端部に六方切り換えバルブ１８ｃが設けられる。
【００３６】
六方切り換えバルブ１８ｃには、さらに、導管２０ｆおよび導管２０ｇが接続される。
【００３７】
導管２０ｆの端部は、カラム１４に接続される。
【００３８】
カラム１４は、タンパク質を他の成分と分離できるものである限り、特に限定されないが、好ましくは、前記低分子化合物を含む他の成分に先だって前記タンパク質を流出する特性を有するカラムを用いる。このようなカラムとして、より好適には、タンパク質が浸入できない程度であって低分子化合物を含む他の成分が浸入できる程度の大きさの径の細孔が形成されて、細孔内に疎水性官能基結合を有するとともに、外表面に親水性官能基結合を有する多孔性担体よりなるカラム充填剤が充填されたものを用いる。例えば、カラムサイズが４．６ｍｍｉ．ｄ．×５０ｍｍのカプセルパックＭＦ（登録商標名：株式会社資生堂製）を好適に用いることができる。これにより、親水性を有するタンパク質が親水性官能基によってカラム充填剤の細孔から遠ざけられて変性することなく溶出（送出）し、疎水性を有する低分子化合物を含む他の成分が細孔内の疎水性官能基に一端保持された後、タンパク質に遅れて溶出するため、タンパク質の分離操作を好適に行うことができる。
【００３９】
カラム１４に導管２０ｈが接続され、導管２０ｈの端部に六方切り換えバルブ１８ｄが設けられる。
【００４０】
六方切り換えバルブ１８ｄには、導管２０ｉが接続される。
【００４１】
なお、本実施の形態例では、六方切り換えバルブ１８ｄには、さらに導管２０ｊが接続され、導管２０ｊの端部は、ＵＶ計（紫外線吸光測定装置）２８に接続される。
【００４２】
ＵＶ計２８の出口には、導管２０ｋを介してタンパク質回収容器１６が設けられる。
【００４３】
上記のように構成される本実施の形態例に係るタンパク質回収システムの作用、すなわち、本実施の形態例に係るタンパク質の回収方法を説明する。
【００４４】
シリンジ２２には、予め、上記したタンパク質を溶解するバッファ液と同じ液を例えば１０ｍｌ溜めておく。なお、シリンジ２２は、六方切り換えバルブ１８ｅを切り換えることにより容器３０のバッファ液を所定量送液可能である。
【００４５】
オートサンプラー１０がタンパク質をバッファ液に溶解したものおよび低分子化合物等を溶解したものの２つの液を自動的に混合し、六方切り換えバルブ１８ａの導管に注入すると、注入された混合液は、シリンジ２２から送られる、例えば１００μｌのバッファ液に押されてＮＭＲ装置１２まで送られる。混合液は所定の測定位置に来ると、移動を停止する。
【００４６】
ＮＭＲ測定が終了すると、予め導管２０ｃの端部を閉塞していた六方切り換えバルブ１８ｂを切り換えて、シリンジ２２によって六方切り換えバルブ１８ｅを介して供給される２００μｌのバッファ液で導管２０ｃにＮＭＲ測定済みのタンパク質試料を押しだす。六方切り換えバルブ１８ｂを介して導管２０ｄのループ部２６にタンパク質試料が送られるとタンパク質試料の移動を停止する。すなわち、導管２０ｄのループ部２６は１個分のタンパク質試料の全量を一旦貯留する役割を有する。
【００４７】
なお、カラム１４には、予めポンプ２４ａによって例えば５０μｌ／ｍｉｎの流速でバッファ液と同じ液を送液し、カラム１４を安定化しておく。
【００４８】
さらに、六方切り換えバルブ１８ｂを切り換えて、ポンプ２４ａによりバッファ液（流速調整液）を導管２０ｄに供給し、タンパク質試料をループ部２６から押し出し、例えば５０μＬ／ｍｉｎのタンパク質の分離条件に適した流速でカラム１４にタンパク質試料を送る。
【００４９】
タンパク質が出てくる前にカラム１４から出てくる不要なバッファ液は、導管２０ｉを介してそのまま排出する。
【００５０】
その後、六方切り換えバルブ１８ｄを切り換えて、カラム１４から出てくる分離されたタンパク質を導管２０ｊを介してＵＶ計２８に送る。
【００５１】
ＵＶ計２８で、送られてくる液がタンパク質であって低分子化合物等を実質的に含まないことを確認しながら、タンパク質を導管２０ｋを介してタンパク質回収容器１６に回収する。
【００５２】
一方、タンパク質を分離した後にカラム１８ｄから出てくる低分子化合物等のその他の成分は、六方切り換えバルブ１８ｄを切り換えて、導管２０ｉから排出される。
【００５３】
このとき、先の分離条件をそのまま継続して、順次分離された成分を排出し、その後、ポンプ２４ｂを用いて、溶出力の強い例えば１０％ＣＨ３ＣＮ等の液を例えば１００μｌ／ｍｉｎの流速でカラム１４に流してカラム１４を洗浄してもよいが、これに変えて、カラム１４からタンパク質を送出した直後、ポンプ２４ｂを用いて、１０％ＣＨ３ＣＮ等の液を例えば５００μｌ／ｍｉｎの流速でカラム１４に流して、タンパク質以外の成分を短時間に排出すると、より好適である。
【００５４】
本実施の形態例に係るタンパク質回収システムの上記の作用は、自動制御される。すなわち、各液の移動のタイミングや送り量等は、予め確認された好適な条件に設定され、各機器の動作が制御される。特に、カラムついては、予め、タンパク質と他の成分との分離特性（クロマトグラフ）を確認しておいて、確認された所定のタイミングで、タンパク質の回収と他の成分の排出の操作を切り換えるため、実質的にはＵＶ計を設ける必要がない。但し、念のためのタンパク質品質の確認、あるいは、回収されたタンパク質の品質保証を目的とし、または、システムの異常作動によるタンパク質の汚染を看視する等の目的でＵＶ計を用いることができる。
【００５５】
回収されるタンパク質は、バッファー液を含んだ状態で得られるが、バッファ液はもともとＮＭＲ測定の段階で用いられるものであるため、回収されるタンパク質を再使用するうえで支障はない。これにより、回収したタンパク質を再使用に供することでＮＭＲ測定コストの低減を図ることができる。また、比較的少数のタンパク質を回収して繰り返し使用することにより、ＮＭＲ測定を効率的に行うことができ、薬剤候補の低分子化合物とタンパク質との相互作用を網羅的かつ迅速に解析することができる。このとき回収されるタンパク質は、変質することなく、実質的に低分子化合物と相互作用させる前の状態のものである。
【００５６】
また、ラベル化したタンパク質を用いてＮＭＲ測定する場合、タンパク質はラベル化されたままの状態で回収されるため、回収されるタンパク質を再使用するとき、再度ラベル化する必要がない。これにより、ＮＭＲ測定コストをさらに低減することができ、また、ラベル化作業の煩雑さを軽減することができる。
【００５７】
なお、タンパク質の回収と再使用を多数回繰り返すことにより、タンパク質の品質が劣化するおそれがあるとき等、回収されるタンパク質から不純物を取り除く必要がある場合、例えば、カチオン交換ポリマーにより塩基性のタンパク質を濃縮し、さらに、脱塩処理を行ってもよい。
【００５８】
また、本実施の形態例に係るタンパク質回収システムは、以上説明したシステムからＮＭＲ装置およびこれに関連するシリンジ、オートサンプラー、第１ポンプを除き、変わりにタンパク質試料をカラムに送出するための送出部としての例えばシリンジを少なくとも備え、さらに必要に応じて複数のタンパク質試料を貯留するためのオートサンプラーを備えた構成であってもよい。
【００５９】
本実施の形態例に係るタンパク質回収システムの処理条件および処理結果の一例について説明する。
【００６０】
タンパク質および低分子化合物ならびにバッファー液として、それぞれ前記したミオグロビンおよびアセトアミドフェノールならびにリン酸バッファ液を用い、前記した量配合して、ＮＭＲ装置にかける。
【００６１】
ＮＭＲ測定後のタンパク質試料をカラムで処理する時の処理条件は、以下のとおりである。
【００６２】
移動相      ：０．１Ｍリン酸バッファ液（ｐＨ６．８）
カラム温度  ：３５℃
ＵＶ検出波長：２１４ｎｍ
タンパク質試料をカラムで所定の分離条件で連続的に分離し、逐次ＵＶ計で測定したときクロマトグラムを図２に示す。図２中、（１）はミオグロビンのピークであり、（２）は重ＤＭＳＯのピークであり、（３）はアセトアミドフェノールのピークである。
【００６３】
以上説明した本実施の形態例に関わらず、タンパク質試料として、他の評価目的で付加、脱離、分解等を伴わない反応条件でタンパク質と低分子化合物を処理したものを用いることができる。また、タンパク質試料をＮＭＲ法以外の、熱分解を伴わない吸収分光法やＸ線回折法で測定したものについても、本発明を適用することができる。
【００６４】
【発明の効果】
本発明に係るＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質の回収方法によれば、ＮＭＲでタンパク質と低分子化合物との相互作用の状態を測定した後のタンパク質試料をタンパク質と低分子化合物を含む他の成分とを分離することができるタンパク質分離カラムに通す分離工程と、タンパク質分離カラムで低分子化合物を含む他の成分と分離されて流出するタンパク質を回収する回収工程とを有するため、回収したタンパク質を再使用に供することでＮＭＲ測定コストの低減を図ることができる。また、比較的少数のタンパク質を繰り返し使用することにより、ＮＭＲ測定を効率的に行うことができる。
【００６５】
また、本発明に係るＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質の回収方法によれば、分離工程において、ＮＭＲ測定されるタンパク質試料のタンパク質はラベル化されたものであり、回収工程において、ラベル化されたタンパク質を回収するため、ＮＭＲ測定コストをさらに低減することができ、また、ラベル化作業の煩雑さを軽減することができる。
【００６６】
また、本発明に係るＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質の回収方法によれば、分離工程において、タンパク質分離カラムとして、低分子化合物を含む他の成分に先だってタンパク質を流出する特性を有するカラムを用い、タンパク質が流出した後、低分子化合物を含む他の成分が分離して逐次流出する前に該カラムを洗浄して、低分子化合物を含む他の成分をカラムから排出するため、回収作業を効率的に行うことができる。
【００６７】
また、本発明に係るＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質回収システムによれば、上記のＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質の回収方法を実施するためのシステムであって、ＮＭＲ測定後のタンパク質試料を送出する送出部と、送出される該タンパク質試料を分離処理するタンパク質分離カラムと、タンパク質を回収する回収部とを有し、または、タンパク質試料を複数個貯留して、順次送出するオートサンプラーと、タンパク質試料の複数個についてＮＭＲ測定を連続的に行うフロー型のＮＭＲ装置と、ＮＭＲ装置から送出されるタンパク質試料を分離処理するタンパク質分離カラムと、タンパク質を回収する回収部とを有するため、本発明のタンパク質回収方法の効果を好適に得ることができる。
【００６８】
また、本発明に係るＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質回収システムによれば、ＮＭＲ装置から送出されるタンパク質試料を個々のタンパク質試料ごとに一端抜き取ることなく、タンパク質試料を搬送する導管によって順次そのままタンパク質分離カラムに送り、逐次処理するように構成してなるため、自動制御化することで、能率的にタンパク質の回収操作を行うことができる。
【００６９】
また、本発明に係るＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質回収システムによれば、導管の途中に切り換えバルブが設けられるとともに、切り換えバルブに送出ラインが接続される流速調整液を送出する送出ポンプが設けられ、切り換えバルブを切り換えることで、ＮＭＲ装置からタンパク質試料が１個送出される後、導管を遮断し、送出されるタンパク質試料に流速調整液を同伴させて所定の流速でタンパク質分離カラムに送るように構成してなるため、分離操作を好適に行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明に係るＮＭＲ測定後のタンパク質試料からのタンパク質回収システムの概略構成を示す図である。
【図２】図１のタンパク質回収システムに用いるカラムでのタンパク質等の分離状態を示すクロマトグラムを示すグラフ図である。
【符号の説明】
１０  オートサンプラー
１２  ＮＭＲ装置
１４  カラム
１６  タンパク質回収容器
１８ａ〜１８ｅ  六方切り換えバルブ
２０ａ〜２０ｌ  導管
２２  シリンジ
２４ａ、２４ｂ  ポンプ
２８  ＵＶ計
【図１】
2004168712.tif 000003
【図２】
2004168712.tif 000004