(57)【要約】【課題】肺がん細胞増殖抑制剤を提供する。【解決手段】トウガラシに含まれるカロテノイドの一種カプソルビンまたはその脂肪酸エステルが、肺がん細胞の増殖を抑制する活性を持つことを認め、カプソルビンまたはその脂肪酸エステルもしくはこれらの成分を有効成分として含有するトウガラシ抽出物からなる事を特徴とする肺がん細胞増殖抑制剤である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
カプソルビンまたはその脂肪酸エステルを有効成分とするがん細胞増殖抑制剤。
【請求項２】
トウガラシに含まれるカプソルビンまたはその脂肪酸エステルを有効成分とするがん細胞増殖抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はカロテノイドを用いるがん細胞増殖抑制剤に関しさらに詳しくはカプソルビン（ｃａｐｓｏｒｕｂｉｎ）（化１）またはその脂肪酸エステルを用いるがん細胞増殖抑制剤に関する。
【０００２】
【化１】
2004043418.tif 000002
【０００３】
【従来の技術】
日本人の死亡原因の第一位はがんであり、がん予防とがん治療は国民の健康上極めて重要な課題である。疫学調査の結果、緑黄色野菜や果物を多く摂取すると発がんのリスクが軽減されることが明らかになり、それらに含まれるカロテノイドががん予防の観点から注目されてきた（Ｍ．Ｍ．Ｍａｔｈｅｗｓ−Ｒｏｔｈ，Ｐｕｒｅ　Ａｐｌｌ．Ｃｈｅｍ．，６３　１４７−１５６（１９９１））。一般にがんはイニシエーションとプロモーションの二段階の過程を経て発症する事が知られており、緑黄色野菜や果物に含まれるβ−カロテン、α−カロテン、リコペン、ルテイン、ラクツカキサンチンなどのカロテノイドは発がんプロモーションの過程を抑制する事が明らかになっている（Ｍ．Ｔｓｕｓｈｉｍａ　ｅｔ　ａｌ．，Ｂｉｏｌ，Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１８，２２７−２３３（１９９５））。
【０００４】
一方北欧では、多量のβ−カロテンを用いた肺がんの介入試験が行われたが予想に反してβ−カロテンを投与したグループでは、β−カロテンを投与していないグループに対して肺発がんを、むしろ高める結果が発表されている。また、カロテノイドががん細胞自身に作用して、その増殖を抑制した例は報告されていない。
【０００５】
【発明が解決しようとするための課題】
本発明は天然物由来のカロテノイドを用いてがん細胞の増殖を抑制することを目的としている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
発明者らは肺がん細胞の増殖を抑制するカロテノイドについて数多くの微生物、植物を対象として系統的な研究、実験を重ねた結果、トウガラシ（Ｃａｐｓｊｃｕｍａｎｎｕｕｍ）に含まれるカロテノイドの一つであるカプソルビンが肺がん細胞株Ａ５４９の増殖を抑制するという刮目すべき知見を得て本発明を完成した。
【０００７】
カプソルビンはカロテノイドのなかでは特異な５員環構造のエンドグループ（κ−エンドグループ）を有するＣ４０Ｈ５６Ｏ４の分子式を持つ赤色カロテノイドでトウガラシのなかにカプサンチンと共に含まれている。カプソルビンの脂肪酸エステルはカプソルビンの水酸基の１つまたは２つにパルミチン酸、ミリスチン酸またはラウリル酸がエステル結合したもので、カプソルビンと共にトウガラシ中に含まれている。肺がん細胞株Ａ５４９の増殖を（培地へ添加後５日目で）カプソルビンは５０μＭの濃度で９８％以上、２５μＭの濃度で８５％以上の抑制効果をしめした。ちなみにβ−カロテン、アスタキサンチンおよびリコペンなどのカロテノイドでは増殖抑制効果が認められなかった。
【０００８】
がん細胞の増殖にはがん細胞内のタンパク質のうちサイクリンＤ１やＮＦκＢ（ｎｕｃｌｅａｒ　ｆａｃｔｏｒ　κＢ）などのがん遺伝子の転写因子が重要な役割を果たしていることが知られている。すなわち、がん細胞周期依存性タンパク質であるサイクリンＤ１ががん細胞では過剰に発現する事が報告されている。また、ＮＦκＢはＩκＢ（ｉｎｈｉｂｏｔｏｒ　ｏｆ　κＢ）と呼ばれる抑制タンパク質と複合体を形成し不活性な状態で核内に存在するが、増殖刺激や酸化ストレスによっつて活性化されＮＦκＢががん細胞の核内へ移行しＤＮＡと結合することにより、遺伝子の転写を発現してがん細胞の増殖を促進する。
【０００９】
カプソルビンはがん細胞内のタンパク質のうちサイクリンＤ１やＮＦκＢ（ｎｕｃｌｅａｒ　ｆａｃｔｏｒ　κＢ）などのがん遺伝子の転写因子の発現を阻害した。
【００１０】
【発明の実施の形態】
以下に本発明の実施形態を説明する。
（実施例）
カプソルビンの抽出と分離精製
トウガラシ可食部８００ｇをメタノールで抽出し抽出液を濃縮した後１０％ＫＯＨ−メタノールを加え室温で６時間ケン化した。その後、カロテノイドをヘキサン−エーテル（１：１）溶液で抽出、水洗した後、濃縮して粗カロテノイドを得た。これをシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィーで個々のカロテノイドに分画した。アセトン−メタノール（５：５）で溶出した画分を濃縮しカプソルビン２４ｍｇを得た。
【００１１】
以下にカプソルビンの紫外、可視部吸収スペクトル（ＵＶ−ＶＩＳ）、ファブマススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ），水素および炭素核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ）データを示す。ＵＶ−ＶＩＳλｍａｘ（Ｅｔ２Ｏ）ｎｍ４４５，４７９ａｎｄ５１０；ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ６００［Ｍ＋］；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．８４（６Ｈ，ｓ，Ｈ−１６，１６’），１．２１（６Ｈ，ｓ，Ｈ−１７，１７’），１４．９（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．５，３．５Ｈｚ，Ｈ−４β，４’β）．１．３７（６Ｈ，ｓ，Ｈ−１８，１８’），１．７１（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．５，３．５Ｈｚ，Ｈ−２β，２’β），１．９６（６Ｈ，ｓ，Ｈ−１９，１９’），１．９９（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２０，２０’），２．００（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．５，８Ｈｚ，Ｈ−２α，２’α），２．９６（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．５，９Ｈｚ，Ｈ−４α，４’ａ），４．５１（２Ｈ，ｍ，Ｈ−３，３’），６．３６（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１４，１４’），６．４４（２Ｈ．ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，Ｈ−７，７’）．６．５５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，Ｈ−１２，１２’），６．５９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，Ｈ−１０，１０’），６．６８（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５，１１Ｈｚ，Ｈ−１１，１１’），６．７０（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１５，１５’），７．３４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ，Ｈ−８，８’），１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１２．８（Ｃ−２０，２０’），１２．９（Ｃ−１９，１９’），２１．４（Ｃ−１８，１８’），２５．２（Ｃ−１７，１７’），２５．９（Ｃ−１６，１６’），４５．４（Ｃ−４，４’），４４．０（Ｃ−１，１’），５１．０（Ｃ−２，２’），５９．０（Ｃ−５．５’），７０．４（Ｃ−３．３’），１２１．１（Ｃ−７，７’），１２４．６（Ｃ−１１，１１’），１３１．２（Ｃ−１５，１５’），１３４．０（Ｃ−９，９’），１３５．０（Ｃ−１４，１４’），１３６．９（Ｃ−１３，１３’），１４０．７（Ｃ−１０，１０’），１４１．８（Ｃ−１２，１２’），１４７．０（Ｃ−８，８’），２０２．６（Ｃ−６，６’）．
【００１２】
肺がん細胞株Ａ５４９の増殖抑制効果
肺がん細胞株Ａ５４９を細胞培養ボトルに５×１０５細胞／ｍｌの濃度になるように調整してＲＰＭＩ１６４０に１０％ＦＢＳを添加した培地を用いて３７℃で培養した。培養開始１日後にカプソルビンを加えてそのままの状態で培養し、さらにその２日後にもう一度カプソルビンを加えて培養した。５日後にトリパンブルーで染色し生存している細胞数をカウントした。その結果カプソルビンは肺がん細胞株Ａ５４９の増殖を５０μＭの濃度で９８％以上、２５μＭの濃度で８５％以上抑制した。なおこの濃度ではβ−カロテン、アスタキサンチン、リコペンなどのカロテノイドではＡ５４９の増殖抑制効果が認められなかった。
【００１３】
ウエスタン・ブロット法によるタンパク質の解析
上記の方法で肺がん細胞株Ａ５４９を５日間培養後セルスクラッパーにて細胞を集めて遠心分離して培養液を除き、細胞をＰＢＳ（−）で３回洗浄した後、氷上において乾固しない程度に乾燥した。そこに細胞膜消化液を加えて細胞膜を消化し、１００００ｒｐｍで遠心分離してえられた上澄みをタンパク質の解析用試料とした。市販のタンパク質定量キットで上澄みのタンパク質含量を定量した後、ウエスタン・ブロット法によりタンパク質を解析した。すなわち、上述の方法で得られた上澄みのタンパク質をゲル電気泳動して、それを定法によりメンブレンに移し、泳動された試料を、市販のサイクリンＤ１とＮＦκＢの特異的抗体を一次抗体として低温で一晩以上反応させる。二次抗体反応としてａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ　Ｉｇまたはａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ　ＩｇＨＲＰで反応し、それをＸ線フイルムに反応させ現像し得られたパターンでサイクリンＤ１とＮＦκＢの発現を解析した。さらにスキャナーでそれぞれのタンパク質量を定量した。その結果カプソルビンはサイクリンＤ１とＮＦκＢを強く抑制する事が明らかになった。なお、同様の効果がカプソルビンの脂肪酸エステルについても認められた。
【００１４】
【発明の効果】
本発明によればトウガラシに含まれるカロテノイド、カプソルビンを用いることにより肺がん細胞の増殖抑制効果が得られる。