(57)【要約】【課題】グラム陽性菌に対する抗菌活性および抗腫瘍活性を示す新しい分子骨格を有する抗生物質を提供する。【解決手段】一般式（Ｉ）2004137175.tif 000026〔式中、Ｒは次式2004137175.tif 000027の糖鎖、あるいはその他の種々な糖鎖を示す〕で表わされるキガマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥが新規抗生物質としてアミコラトプシス　ｓｐ．　ＭＬ６３０−ｍＦ１株の培養により得られた。キガマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥ、あるいはそれらの塩は各種の細菌に対する抗菌活性と抗腫瘍活性とを有する抗生物質である。【選択図】　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（Ｉ）：
2004137175.tif 000020
〔式中、ＲはキガマイシンＡでは次式
2004137175.tif 000021
の糖鎖を示し、キガマイシンＢでは次式
2004137175.tif 000022
の糖鎖を示し、キガマイシンＣでは次式
2004137175.tif 000023
の糖鎖を示し、キガマイシンＤでは次式
2004137175.tif 000024
の糖鎖を示し、またキガマイシンＥでは次式
2004137175.tif 000025
の糖鎖を示す〕で表される化合物である、抗生物質キガマイシンＡ、キガマイシンＢ、キガマイシンＣ、キガマイシンＤ、およびキガマイシンＥ、あるいはこれらキガマイシン類の製薬学的に許容される塩。
【請求項２】
アミコラトプシス属に属する、請求項１に記載の一般式（Ｉ）のキガマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＤまたはＥの少くとも１つを生産するキガマイシン生産菌を栄養培地に培養し、培養物からキガマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＤまたはＥの少くとも一つを採取することを特徴とする、抗生物質キガマイシンＡ、キガマイシンＢ、キガマイシンＣ、キガマイシンＤおよび（または）キガマイシンＥの製造法。
【請求項３】
一般式（Ｉ）で表されるキガマイシンの生産菌として、アミコラトプシスｓｐ．　ＭＬ６３０−ｍＦ１株（独立行政法人産業技術総合研究所にＦＥＲＭ　Ｐ−１８８７５として寄託）を用いる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表されるキガマイシンＡ、キガマイシンＢ、キガマイシンＣ、キガマイシンＤおよびキガマイシンＥの少くとも１つ、またはその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有し、また製薬学的に許容される担体を配合されて含有することを特徴とする、医薬組成物。
【請求項５】
抗菌剤組成物である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
抗腫瘍剤組成物である、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される抗生物質キガマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥを生産する特性を持つアミコラトプシスｓｐ．　ＭＬ６３０−ｍＦ１株。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、抗菌活性と抗腫瘍活性または抗癌活性とを示す新規抗性物質キガマイシン　（Ｋｉｇａｍｉｃｉｎ）　類、詳しくはキガマイシンＡ、キガマイシンＢ、キガマイシンＣ、キガマイシンＤおよびキガマイシンＥあるいはこれらの塩に関する。
【０００２】
また、本発明はそれらのキガマイシン類の製造法に関する。さらに本発明は、キガマイシン類またはそれらの塩を有効成分とする医薬組成物、特に抗菌剤及び抗腫瘍剤組成物に関する。さらに、本発明は新規抗生物質キガマイシン類を生産する特性を持つ新規な微生物としてアミコラトプシス　ｓｐ．　ＭＬ６３０−ｍＦ１株を包含する。
【０００３】
なお、本明細書では、キガマイシンＡ、キガマイシンＢ、キガマイシンＣ、キガマイシンＤ、キガマイシンＥの少くとも一つまたは全部、あるいはそれらの少くとも２つの混合物を、総括的にキガマイシン類（ａ　ｋｉｇａｍｉｃｉｎ）と称することがある。
【０００４】
【従来の技術】
種々な多数の抗菌物質が知られており、また種々な多数の抗腫瘍性物質が知られている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
細菌感染症および癌の化学療法において、従来知られているまたは使用されている既知の化合物とは、異なる化学構造を有し且つ優れた活性を示す新しい化合物の発見または創製をすることは常に望まれており、そのための研究が行われている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記の要望に応えることができる抗菌活性及び抗腫瘍活性を持つ新規な抗生物質を提供することを目的に、従来より有用な抗生物質の開発と実用化の研究を促進してきた。その結果、土壌試料から新規な微生物としてアミコラトプシス属に属する菌株を分離することに成功し、またこの菌株が新しい構造骨格を有する抗生物質の少くとも５種を生産していることを見い出した。これらの新規抗生物質を単離して且つそれらの化学構造を決定することに成功し、総括的にキガマイシンと命名した。さらに、単離された５種の抗生物質をキガマイシンＡ、キガマイシンＢ、キガマイシンＣ、キガマイシンＤ、キガマイシンＥとそれぞれ命名した。更に、これらの新規抗生物質が薬剤耐性菌（メチシリン耐性菌等）をふくんだグラム陽性の細菌に抗菌活性を示し、また癌細胞の増殖に対して抑制活性を示すことを見い出した。
【０００７】
すなわち、第１の本発明においては、次の一般式（Ｉ）：
2004137175.tif 000002
〔式中、ＲはキガマイシンＡでは次式
2004137175.tif 000003
の糖鎖を示し、キガマイシンＢでは次式
2004137175.tif 000004
の糖鎖を示し、キガマイシンＣでは次式
2004137175.tif 000005
の糖鎖を示し、キガマイシンＤでは次式
2004137175.tif 000006
の糖鎖を示し、またキガマイシンＥでは次式
2004137175.tif 000007
の糖鎖を示す〕で表される化合物である、抗生物質キガマイシンＡ、キガマイシンＢ、キガマイシンＣ、キガマイシンＤ、およびキガマイシンＥ、あるいはこれらキガマイシン類の製薬学的に許容される塩が提供される。
【０００８】
一般式（Ｉ）で表されるキガマイシン類は、酸性物質であり、その製薬学的に許容される塩としては、第４級アンモニウム塩などの有機塩基との塩、あるいは各種金属との塩、例えばナトリウムのようなアルカリ金属との塩があり、これらの塩も上記の抗菌活性と抗腫瘍活性を有する。
【０００９】
次に、本発明の抗生物質キガマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥの理化学的性状を記載する。
（１）次式（Ｉａ）
2004137175.tif 000008
で表される抗生物質キガマイシンＡの理化学的性状は次のとおりである。
Ａ）　外観及び性質：黄色粉末、酸性物質
Ｂ）　融点：２２５℃
Ｃ）　比旋光度：［α］Ｄ２４　−１５３．０°（ｃ　１．００、メタノール　）
Ｄ）　ＨＰＬＣでの保持時間（Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ）値：　４．４６分
カプセルパック（タイプＵＧ１２０Å　５μｍ、４．６径×１５０　ｍｍ、資生堂製）の高速液体クロマトグラフィーで溶出溶媒として４０％アセトニトリル−６０％精製水で溶出して測定した場合である。
Ｅ）　マススペクトル（ｍ　／　ｚ）：６６６．３０　（Ｍ＋Ｈ）＋　６６４．３４　（Ｍ−Ｈ）−
2004137175.tif 000009
Ｇ）　分子式：Ｃ３４Ｈ３５ＮＯ１３
Ｈ）　紫外線吸収スペクトル：添付図面の図１に１０μｇ／ｍｌの濃度の溶液でのスペクトル図を示す。
（実線）　メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（４７２００）、２３６　（４３９００）、２５４　（４３６００）、２８０　（３４６００）、３４１　（１９１００）
（点線）　０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（４７３００）、　２３６　（４６６００）、２５４　（４７４００）、２８０　（３７４００）、３４１　（２１３００）
（破線）　０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２８０　（３０９００）、３６６　（２００００）
Ｉ）　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ　錠剤法）：添付図面の図２に示す。
νｍａｘ（ｃｍ−１）　２９３５、２８７３、１６５４、１６１９、１５８７、１４８６、１４６９、１４３６、１３６１、１２５７、１１９３、１１６６、１１２２、１０６４、９４１、８７１、８０４、６１９、４３１、４１２
Ｊ）　　１Ｈ−ＮＭＲ　スペクトル（ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）：添付図面の図３に示す。
Ｋ）　１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）：添付図面の図４に示す。
【００１０】
（２）次式（Ｉｂ）
2004137175.tif 000010
で表される抗生物質キガマイシンＢの理化学的性状は次のとおりである。
Ａ）　外観及び性質：黄色粉末、酸性物質
Ｂ）　融点：２２５℃
Ｃ）　比旋光度：濃度が不足して測定が不正確なので記載しない。
Ｄ）　ＨＰＬＣでの保持時間（Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ）値：　７．９９分
カプセルパック（タイプＵＧ１２０Å　５μｍ、４．６径×１５０　ｍｍ、資生堂製）の高速液体クロマトグラフィーで溶出溶媒として４０％アセトニトリル−６０％精製水で溶出して測定した場合である。
Ｅ）　マススペクトル（ｍ　／　ｚ）：７８０．４　（Ｍ＋Ｈ）＋　　７７８．４　（Ｍ−Ｈ）−
2004137175.tif 000011
Ｇ）　分子式：Ｃ４０Ｈ４５ＮＯ１５
Ｈ）　紫外線吸収スペクトル：添付図面の図５に１０μｇ／ｍｌの濃度の溶液でのスペクトル図を示す。
（実線）　メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（５３３００）、　２３６　（５１４００）、２５４　（５０９００）、２８０　（４０５００）、３４１　（２２２００）
（点線）　０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（５７０００）、　２３６　（５４５００）、２５４　（５６９００）、２８０　（４３６００）、３４１　（２４９００）
（破線）　０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２８０　（３７０００）、３６６　（２３４００）
Ｉ）　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ　錠剤法）：添付図面の図６に示す。
νｍａｘ　（ｃｍ−１）　２９４６、２８６７、２８３４、１６１７、１４８６、１４４０、１３６１、１３３２、１２７４、１２５７、１２０３、１１７０、１１２６、１０６０、９７７、９４４、８７５、７５７、６２２、４３０
Ｊ）　　１Ｈ−ＮＭＲ　スペクトル（ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）：添付図面の図７に示す。
Ｋ）　１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）：添付図面の図８に示す。
【００１１】
（３）次式（Ｉｃ）
2004137175.tif 000012
で表される抗生物質キガマイシンＣの理化学的性状は次のとおりである。
Ａ）　外観及び性質：黄色粉末、酸性物質
Ｂ）　融点：２１０℃
Ｃ）　比旋光度：［α］Ｄ２４　−１５４．０°（ｃ　１．００、メタノール）
Ｄ）　ＨＰＬＣでの保持時間（Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ）値：　７．７４分
カプセルパック（タイプＵＧ１２０Å　５μｍ、４．６径×１５０　ｍｍ、資生堂製）の高速液体クロマトグラフィーで溶出溶媒として４０％アセトニトリル−６０％精製水で溶出して測定した場合である。
Ｅ）　マススペクトル（ｍ　／　ｚ）：８１０．４（Ｍ＋Ｈ）＋　８０８．４　（Ｍ−Ｈ）−
2004137175.tif 000013
Ｇ）　分子式：Ｃ４１Ｈ４７ＮＯ１６
Ｈ）　紫外線吸収スペクトル：添付図面の図９に１０μｇ／ｍｌでの図を示す。
（実線）　メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（２３４００）、　２３６　（２１８００）、２５４　（２１０００）、２８０　（１６６００）、３４１　（１０５００）
（点線）　０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（２２７００）、　２３６　（２１８００）、２５４　（２２２００）、２８０　（１７６００）、３４１　（９７０）
（破線）　０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２８０　（１４２００）、３６６　（８５００）
Ｉ）　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ　錠剤法）：添付図面の図１０に示す。
νｍａｘ（ｃｍ−１）　２９４６、２８７７、２８３０、１６４８、１６１９、１５８３、１４８６、１４６７、１４４２、１３６３、１２７６、１２０５、１１７０、１１０３、１０６２、９４４、８７７、８０４、６２４、４１８
Ｊ）　　１Ｈ−ＮＭＲ　スペクトル（ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）：添付図面の図１１に示す。
Ｋ）　１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）：添付図面の図１２に示す。
【００１２】
（４）次式（Ｉｄ）
2004137175.tif 000014
で表される抗生物質キガマイシンＤの理化学的性状は次のとおりである。
【００１３】
Ａ）　外観及び性質：黄色粉末、酸性物質
Ｂ）　融点：２１０℃
Ｃ）　比旋光度：［α］Ｄ２４　−１９０．６°（ｃ　１．００、メタノール　）
Ｄ）　ＨＰＬＣでの保持時間（Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ）値：　１１．６９分
カプセルパック（タイプＵＧ１２０Å　５μｍ、４．６径×１５０　ｍｍ、資生堂製）の高速液体クロマトグラフィーで溶出溶媒として４０％アセトニトリル−６０％精製水で溶出して測定した場合である。
Ｅ）　マススペクトル（ｍ　／　ｚ）：９５４．６（Ｍ＋Ｈ）＋　　　９５２．４　（Ｍ−Ｈ）−
2004137175.tif 000015
Ｇ）　分子式：Ｃ４８Ｈ５９ＮＯ１９
Ｈ）　紫外線吸収スペクトル：添付図面の図１３に１０μｇ／ｍｌの濃度の溶液でのスペクトル図を示す。
（実線）　メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（３６２００）、　２３６　（３２９００）、２５４　（３１７００）、２８０　（２４８００）、３４１　（１３３００）
（点線）　０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（３４３００）、　２３６　（３２７００）、２５４　（３３４００）、２８０　（２５９００）、３４１　（１５０００）
（破線）　０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２８０　（２１０００）、３６６　（１３３００）
Ｉ）　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ　錠剤法）：添付図面の図１４に示す。
νｍａｘ（ｃｍ−１）　　２９７５、２９３８、２８７３、２８３２、１６１９、１５８５、１４６７、１４４２、１２７６、１２０３、１１６６、１１０５、１０６２、９８９、９４４、８０２、６２２、４７０、４４７、４０６
Ｊ）　　１Ｈ−ＮＭＲ　スペクトル（ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）：添付図面の図１５に示す。
Ｋ）　１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）：添付図面の図１６に示す。
【００１４】
（５）次式（Ｉｅ）
2004137175.tif 000016
で表される抗生物質キガマイシンＥの理化学的性状は次のとおりである。
Ａ）　外観及び性質：黄色粉末、酸性物質
Ｂ）　融点：２１０℃
Ｃ）　比旋光度：［α］Ｄ２４　−１７５．２°（ｃ　１．００、メタノール　）
Ｄ）　ＨＰＬＣでの保持時間（Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ）値：　１６．４９分
カプセルパック（タイプＵＧ１２０Å　５μｍ、４．６径×１５０　ｍｍ、資生堂製）の高速液体クロマトグラフィーで溶出溶媒として４０％アセトニトリル−６０％精製水で溶出して測定した場合である。
Ｅ）　マススペクトル（ｍ　／　ｚ）：１０９８．６　（Ｍ＋Ｈ）＋　１０９６．６　（Ｍ−Ｈ）−
2004137175.tif 000017
Ｇ）　分子式：Ｃ５５Ｈ７１ＮＯ２２
Ｈ）　紫外線吸収スペクトル：添付図面の図１７に１０μｇ／ｍｌでの図を示す。
（実線）　メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（３８９００）、　２３６　（３５１００）、２５４　（３３１００）、２８０　（２６５００）、３４１　（１４３００）
（点線）　０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２１７　（３７３００）、　２３６　（３５１００）、２５４　（３５３００）、２８０　（１６７００）、３４１　（１５６００）
（破線）　０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−メタノール溶液中で測定したＵＶ吸収スペクトル。主なピークは次のとおりである。
λｍａｘ　ｎｍ　（ε）　２８０　（２２５００）、３６６　（１３７００）
Ｉ）　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ　錠剤法）：添付図面の図１８に示す。
νｍａｘ（ｃｍ−１）　　２９７５、２９３５、２８３４、１６５０、１６１９、１５８３、１４６９、１４４２、１３７６、１３１１、１２７６、１２０３、１１６２、１１０５、１０６２、９８９、９４４、８７７、８０４、６２０
Ｊ）　　１Ｈ−ＮＭＲ　スペクトル（ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）：添付図面の図１９に示す。
Ｋ）　１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）：添付図面の図２０に示す。
【００１５】
さらに、本発明による一般式（Ｉ）の抗生物質キガマイシン類の生物学的性質を次に記載する。
【００１６】
Ａ）　抗菌活性
本発明による抗生物質キガマイシン類の各種細菌に対する最低発育阻止濃度は、次の表１にしめす通りである。この抗菌スペルトルは日本化学療法学会標準法に基づき、ミュラーヒントン寒天培地で倍数希釈法により測定した。
2004137175.tif 000018
【００１７】
Ｂ）癌細胞増殖抑制活性
各種の癌細胞を用いて癌細胞の増殖を５０％抑制するキガマイシンＤの濃度（ＩＣ５０値）を、ＭＴＴ法（「Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ」　６５巻、５５−６０頁　（１９８３年）　参照）で測定した。その結果を表２に示す。
2004137175.tif 000019
【００１８】
さらに、キガマイシン類は膵臓癌細胞ＰＡＮＣ−１細胞で、通常の細胞培養の条件下より栄養飢餓状態で細胞死を惹起する作用が強い。キガマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥの結果を図２１に示した。キガマイシンＣとＤの場合、通常の培地を使用した場合は１０μｇ／ｍｌで１００％の細胞死を来たしたが、栄養飢餓状態では０．１ｇ／ｍｌで１００％の細胞死を惹起した。固形がんでは血管新生が追い付かずに栄養飢餓状態にあると考えられ、栄養条件のいい正常部位と比べてキガマイシンは選択的な制癌活性を示すと考えられる。
【００１９】
上記表１の結果から明らかなように、本発明による抗生物質キガマイシン類は、各種の細菌に対して抗菌活性を有することから抗菌剤として有用である。また、表２および図２１の結果から明らかなように、キガマイシン類は各種の癌細胞の増殖を抑制する抗腫瘍活性または抗癌活性を有するから抗腫瘍剤または抗癌剤として有用である。
【００２０】
さらに第２の本発明によれば、アミコラトプシス属に属する、前記の一般式（Ｉ）のキガマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＤまたはＥの少くとも１つを生産するキガマイシン生産菌を栄養培地に培養し、培養物からキガマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＤまたはＥの少くとも一つを採取することを特徴とする、抗生物質キガマイシンＡ、キガマイシンＢ、キガマイシンＣ、キガマイシンＤおよび（または）キガマイシンＥの製造法を提供される。
【００２１】
第２の本発明の方法で使用できるキガマイシン生産菌の一例として、アミコラトプシスＭＬ６３０−ｍＦ１株がある。
この生産菌は平成１３年６月、微生物化学研究所において、三重県鳥羽市の土壌より分離された放線菌で、ＭＬ６３０−ｍＦ１の菌株番号が付された。
【００２２】
ＭＬ６３０−ｍＦ１株の菌学的性状は下記のとおりである。
１．形態
基生菌糸はよく分技し、ジグザグ状を呈する。また分断が認められる。気菌糸は比較的長く、直状あるいは不規則な曲状に伸長し、円筒形の胞子に分断する。また、気菌糸が絡まり、胞子のう様を呈する場合がある。胞子の表面は平滑で、大きさは約０．４　〜　０．６　×　０．８　〜　１．９ミクロンである。輪生技、菌束糸、胞子のう及び運動性胞子は認められない。
【００２３】
２．各種培地における生育状態
色の記載について［　］内に示す標準は、コンティナー・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモニー・マニュアル（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆＡｍｅｒｉｃａ　の　ｃｏｌｏｒ　ｈａｒｍｏｎｙ　ｍａｎｕａｌ）を用いた。
（１）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２、２７℃培養）
うす黄茶［２　ｌｅ，　Ｍｕｓｔａｒｄ］−うす茶［３　ｌｅ，　Ｃｉｎｎａｍｏｎ］の発育上に、白の気菌糸をうっすらと着生し、可溶性色素は認められない。
（２）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３、２７℃培養）
無色−うす黄［２　ｇｃ，　Ｂａｍｂｏｏ］の発育上に、白の気菌糸を着生し、可溶性色素は認められない。
（３）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４、２７℃培養）
無色の発育上に、白の気菌糸をうっすらと着生し、可溶性色素は認められない。
（４）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−培地５、２７℃培養）
うす黄［２　ｇｃ，　Ｂａｍｂｏｏ］−うす黄茶［２　ｌｅ，　Ｍｕｓｔａｒｄ］の発育上に、白−茶白［３ｃｂ，　Ｓａｎｄ］の気菌糸を着生し、可溶性色素は認められない。
（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７、２７℃培養）
うす黄［２　ｇｃ，　Ｂａｍｂｏｏ］−うす黄茶［２　ｌｅ，　Ｍｕｓｔａｒｄ］の発育上に、白−黄味白［２　ｃｂ，　Ｉｖｏｒｙ　Ｔｉｎｔ］の気菌糸を着生し、可溶性色素は認められない。
（６）シュクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）
無色の発育上に、白の気菌糸を着生し、可溶性色素は認められない。
【００２４】
３．生理的性質
（１）生育温度範囲
グルコース・アスパラギン寒天培地（グルコース　１．０％、Ｌ−アスパラギン　０．０５％、リン酸水素二カリウム　０．０５％、ひも寒天　３．０％、ｐＨ７．０）を用い、１０℃、２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７℃及び４５℃の各温度で試験した結果、１０℃、４５℃での生育は認められず、２０℃−３７℃の範囲で生育した。生育至適温度は３０℃付近である。
（２）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地、ＩＳＰ−培地４、２７℃培養）
２７日間の培養でスターチの加水分解は認められない。
（３）メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・ブロス、ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イースト・鉄寒天培地、ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天培地、ＩＳＰ−培地７；　いずれも２７℃培養）
いずれの培地においても陰性である。
（４）炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培地、ＩＳＰ−培地９、２７℃培養）
Ｄ−グルコース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フルクトース、ｍｙｏ−イノシトール、Ｄ−マンニトールを利用して発育し、ラムノース、ラフィノースは利用しない。Ｌ−アラビノース、シュクロースもおそらく利用しない。
（５）硝酸塩の還元反応（０．１％硝酸カリウム含有ペプトン水、ＩＳＰ−培地８、２７℃培養）
硝酸塩の還元性は判然としないが、おそらく陰性である。
【００２５】
４．菌体成分
（１）細胞壁組成
メソ型の２、６−ジアミノピメリン酸を含有する。
（２）全菌体中の還元糖
アラビノース、ガラクトースを含み、Ａ型である。
（３）イソプレノイド・キノン
主要なメナキノンとして、ＭＫ−９（Ｈ４）を含有する。
（４）リン脂質
ホスファチジルエタノールアミンを含み、ホスファチジルコリン及び未知のグルコサミン含有リン脂質を含まず、ＰＩＩ型を示す。
（５）ミコール酸
含有しない。
【００２６】
５．１６ＳｒＲＮＡ遺伝子解析
１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の部分塩基配列（１２３９　ｎｔ）を決定し、ＤＮＡデータベースに登録された公知菌株のデータと比較した。その結果、ＭＬ６３０−ｍＦ１株の塩基配列は以下に示したとおり、アミコラトプシス（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ）属放線菌の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子と高い相同性を示した。Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ　ａｌｂｉｄｏｆｌａｖｕｓ　（９８％）、Ａ．　ｒｕｂｉｄｕｓ　（９８％）、Ａ．　ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｉ　（９７％）、Ａ．　ａｚｕｒｅａ　（９７％）　及びＡ．　ｃｏｌｏｒａｄｅｎｓｉｓ　（９７％）　等である。なお、カッコ内は塩基配列の相同値を表記した。
【００２７】
以上の性状を要約すると、ＭＬ６３０−ｍＦ１株は、その形態上、基生菌糸はよく分枝し、分断を認める。気菌糸は直状あるいは曲状で、円筒形の胞子に分断する。輪生技、菌束糸、胞子のう及び運動性胞子は認められない。種々の培地で、うす黄−うす黄茶の発育上に白の気菌糸を着生する。可溶性色素は認められない。メラニン様色素は生成せず、硝酸塩の還元反応はおそらく陰性、スターチの水解性は認められない。
ＭＬ６３０−ｍＦ１株の菌体成分は、細胞壁にメソ型の２、６−ジアミノピメリン酸を含有し、全菌体中の還元糖はＡ型、主要なメナキノンはＭＫ−９（Ｈ４）で、リン脂質はＰＩＩ型である。ミコール酸を含有しない。
１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の部分塩基配列を公知菌株のデータと比較したところ、アミコラトプシス属放線菌の塩基配列と高い相同性を示した。
【００２８】
以上の結果より、ＭＬ６３０−ｍＦ１株はアミコラトプシス（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ、文献、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、３６巻、２９−３７頁、１９８６年）属に属するものと考えられる。そこで、ＭＬ６３０−ｍＦ１株をアミコラトプシス・エスピー（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ　ｓｐ．）ＭＬ６３０−ｍＦ１とする。
なお、ＭＬ６３０−ｍＦ１株を独立行政法人産業技術総合研究所に寄託申請し、平成１４年６月７日、ＦＥＲＭ　Ｐ−１８８７５として受託された。
【００２９】
第２の本発明の方法を実施するに当たっては、アミコラトプシス属に属するキガマイシン生産菌を栄養培地に接種し、この培地中で培養する。ここで用いる栄養培地は、前記の生産菌が資化できる炭素源と窒素源を栄養成分として含有するものである。
【００３０】
その栄養源としては、通常微生物の栄養源として通常使用されるもの、例えば炭素源、窒素源、無機塩などの同化できる栄養源を使用できる。例えば、ぶどう糖、麦芽糖、糖密、デキストリン、グリセリン、澱粉などの炭水化物や、大豆油、落花生油などの油脂のごとき炭素源、ならびにペプトン、肉エキス、綿実粉、大豆粉、酵母エキス、カゼイン、コーン・スチープ・リカー、ＮＺ−アミン、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウムなどの窒素源、さらに燐酸二カリウム、燐酸ナトリウム、食塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、塩化マンガンなどの無機塩が使用でき、必要により微量金属例えばコバルト、鉄などを添加することができる。栄養源としては、その他、抗生物質キガマイシンを生産するのに使用菌が利用しうるものであればいずれの公知の栄養源でも使用できる。
【００３１】
培地における上記のごとき栄養源の配合割合は特に制約されるものでなく、広範囲に亘って変えることができ、使用するキガマイシン類の生産菌によって、最適の栄養源の組成及び配合割合は、当事者であれば簡単な小規模実験により容易に決定することができる。また、上記の栄養源からなる栄養培地は、培養に先立ち殺菌することができ、この殺菌の前又は後で、培地のｐＨを６−８の範囲、特にｐＨ６．５−７．５の範囲に調節するのが有利である。
【００３２】
かかる栄養培地でのキガマイシン類の生産菌の培養は、一般の放線菌による抗生物質の製造において通常使用されている方法に準じて行なうことができる。通常は好気条件下に培養するのが好適であり、通常攪拌しながら及び／又は通気しながら行なうことができる。また、培養方法としては静置培養、振とう培養、通気攪拌をともなう液内培養のいずれも使用可能であるが、液体培養がキガマイシンの大量生産に適している。
【００３３】
使用しうる培養温度はキガマイシン類の生産菌の発育が実質的に阻害されず、該抗生物質を生産しうる範囲であれば、特に制限されるものではなく、使用する生産菌に応じて適宜選択できるが、特に好ましいのは２５−３０℃の範囲内の温度を挙げることができる。
【００３４】
培養は通常はキガマイシン類が十分に蓄積するまで継続することができる。その培養時間は培地の組成や培養温度、使用温度、使用生産菌株などにより異なるが、通常７２−１２０時間の培養で目的の抗生物質を得ることができる。
【００３５】
培養中の新規抗生物質キガマイシン類の蓄積量はスタヒロコッカス・アウレウス・スミスを使用して、通常の抗生物質の定量に用いられる円筒平板法により定量することができる。
【００３６】
かくして、培養物中に蓄積されたキガマイシン類は、これを培養物から採取する。培養後、必要により、濾過、遠心分離などのそれ自体公知の分離方法によって菌体を除去した後、その濾液を有機溶媒、特に酢酸ブチルなどを用いた溶媒抽出や、吸着やイオン交換能を利用したクロマトグラフィー、ゲルろ過、向流分配を利用したクロマトグラフィーを単独でまたは、組み合わせて使用することにより単離精製して採取することができる。吸着やイオン交換能を有するクロマトグラフィー用担体としては、活性炭、シリカゲル、多孔性ポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂もしくは各種のイオン交換樹脂を用いることができる。また、分離した菌体からは、適当な有機溶媒を用いた溶媒抽出法や菌体破砕による溶出法により菌体から目的の抗生物質を抽出し、上記と同様に単離精製することができる。かくして、前記した特性を有する新規抗生物質キガマイシン類が得られる。
【００３７】
さらに、第３の本発明では、前記に記載の一般式（Ｉ）で表されるキガマイシンＡ、キガマイシンＢ、キガマイシンＣ、キガマイシンＤおよびキガマイシンＥの少くとも１つ、またはその製薬学的に許容される塩を有効成分にして含有し、また製薬学的に許容される担体を配合されて含有することを特徴とする、医薬組成物が提供される。
【００３８】
さらに、第３の本発明に係る医薬組成物は抗腫瘍剤組成物、あるいは抗腫瘍剤組成物であることができる。
【００３９】
この医薬組成物においては、有効成分としての一般式（Ｉ）のキガマイシン類あるいはその塩は製薬学的に許容できる常用の固体または液体担体、例えばエタノール、水、デンプン等と混和されている形の組成物であることができる。
【００４０】
また、第４の本発明では、新規な微生物として、上記の一般式（Ｉ）のキガマイシン類を生産する特性をもつアミコラトプシス　ｓｐ．　ＭＬ６３０−ｍＦ１株が提供される。
【００４１】
【発明の実施の形態】
次に実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。
【００４２】
【実施例１】
抗生物質キガマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥの製造
ポテトスターチ２％、グルコース２％、酵母エキス０．５％、塩化ナトリウム０．２５％、トーストソーヤミール２％、炭酸カリウム０．３２％、硫酸銅０．０００５％、塩化マンガン０．０００５％、硫酸亜鉛０．００５％を含む液体培地（ｐＨ７．４に調整）を三角フラスコ（５００ｍｌ容）に１１０ｍｌずつ分注し、常法により１２０℃で２０分滅菌した。この滅菌した培地に寒天斜面培地に培養したアミコラトプシスＭＬ６３０−ｍＦ１株（ＦＥＲＭ　Ｐ−１５４４２）を接種し、その後３０℃で５日間回転振とう培養した。これにより種母培養液を得た。
【００４３】
ガラクトース２％、デキストリン２％、ソイペプトン１％、コーンスティープリカー０．５％、グリセロール１％、硫酸アンモニウム．０２％、炭酸カリウム０．２％を含む液体培地（ｐＨ７．４に調整）を三角フラスコ（５００ｍｌ容）に１１０ｍｌずつ分注し、常法により１２０℃で２０分滅菌後、この滅菌された液体培地に上記種母培養液をそれぞれ２ｍｌずつ接種し、２７℃で４日間回転振とう培養した。
【００４４】
培地１０リットルを用いて、このようにして得られた培養液を遠心分離し、菌体を分離した。培養ろ液８．６リットルは、１Ｎ塩酸を添加してｐＨを２．０に調整して酢酸ブチル８．６リットルで抽出し、酢酸ブチル層を無水硫酸ナトリウムにより脱水した。
【００４５】
菌体は、メタノール９００　ｍｌを加え、撹拌後濾過した。このメタノール溶液は減圧下で２００ｍｌまで濃縮した。これを１Ｎ塩酸を添加してｐＨを２．０に調整して、酢酸ブチルで２００　ｍｌで二度抽出し、酢酸ブチル層は無水硫酸ナトリウムにより脱水した。
【００４６】
上記の二つの酢酸ブチル層を合わせ減圧下で濃縮乾固した。得られた残渣（約４．１　ｇ）をクロロホルム１００　ｍｌと水１００　ｍｌで撹拌し、クロロホルム層を濃縮乾固して１．５１　ｇ、不溶物として５２８　ｍｇを得た。それぞれシリカゲル６０Ｎ（フラッシュクロマトグラフィー用、関東化学）のカラムクロマトグラフィーを行った。クロロホルム層から得た１．５１　ｇは、２１０　ｇのシリカゲル６０Ｎを充填したカラム（径５．５　ｃｍ）に、不溶物の５２８　ｍｇは７０　ｇのシリカゲル６０Ｎを充填したカラム（径３．５　ｃｍ）にチャージした。それぞれクロロホルム−メタノール混液で展開し、薄層クロマトグラフィーで分析して同一成分を溶出する２活性画分を得た。フラクション１８６−２５０を濃縮乾固し、９３４．９　ｍｇ、フラクション１８６−２５０を濃縮乾固し、１０７　ｍｇの固形物を得た。前者の一部の２９４．８　ｍｇを９分割して、それぞれ高速液体クロマトグラフィー（Ｐｅｇａｓｉｌ　ＯＤＳ、径３０×２５０　ｍｍ）で４０％アセトニトリル−メタノールで溶出した。
【００４７】
分画３１−３９を集め減圧下に濃縮乾固して３７．２　ｍｇのキガマイシンＣ、分画４６−６０を集め１６８．３　ｍｇのキガマイシンＤおよび分画７６−９４を集め減圧下に濃縮乾固して２８．１　ｍｇのキガマイシンＥを得た。
【００４８】
シリカゲルクロマトグラフィーのフラクション１８６−２５０を濃縮乾固して得た１０７　ｍｇの固体物質を４分割して、それぞれ高速液体クロマトグラフィー（Ｐｅｇａｓｉｌ　ＯＤＳ、径３０×２５０　ｍｍ）で４０％アセトニトリル−メタノールで溶出した。その分画２６−３０を集め減圧下に濃縮乾固して３６．１　ｍｇのキガマイシンＡを得た。
【００４９】
培地３リットルを用いた別の培養からは、同様な精製法を行い、高速液体クロマトグラフィー（Ｐｅｇａｓｉｌ　ＯＤＳ、径３０×２５０　ｍｍ）で４０％アセトニトリル−メタノールで溶出した時、分画３５−３６を集め減圧下に濃縮乾固して１．９　ｍｇのキガマイシンＣを得た。分画３９−４１を集め１．９　ｍｇのキガマイシンＢを得た。また分画５１−５６を集め４６．６　ｍｇのキガマイシンＤ、および分画８２−８６を集め１２．９　ｍｇのキガマイシンＥを得た。
【図面の簡単な説明】
【図１】キガマイシンＡ　（１０　μｇ／ｍｌ）　の紫外線吸収スペクトルである。
実線：メタノール溶液中のスペクトル
点線：０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中のスペクトル
破線：０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−のメタノール溶液中のスペクトル
【図２】キガマイシンＡのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
【図３】キガマイシンＡの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定したプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
【図４】キガマイシンＡの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定した炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
【図５】キガマイシンＢ　（１０　μｇ／ｍｌ）　の紫外線吸収スペクトルである。
実線：メタノール溶液中のスペクトル
点線：０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中のスペクトル
破線：０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−のメタノール溶液中のスペクトル
【図６】キガマイシンＢのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
【図７】キガマイシンＢの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定したプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
【図８】キガマイシンＢの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定した炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
【図９】キガマイシンＣ　（１０　μｇ／ｍｌ）　の紫外線吸収スペクトルである。
実線：メタノール溶液中のスペクトル
点線：０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中のスペクトル
破線：０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−のメタノール溶液中のスペクトル
【図１０】キガマイシンＣのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
【図１１】キガマイシンＣの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定したプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
【図１２】キガマイシンＣの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定した炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
【図１３】キガマイシンＤ　（１０　μｇ／ｍｌ）　の紫外線吸収スペクトルである。
実線：メタノール溶液中のスペクトル
点線：０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中のスペクトル
破線：０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−のメタノール溶液中のスペクトル
【図１４】キガマイシンＤのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
【図１５】キガマイシンＤの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定したプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
【図１６】キガマイシンＤの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定した炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
【図１７】キガマイシンＥ　（１０　μｇ／ｍｌ）　の紫外線吸収スペクトルである。
実線：メタノール溶液中のスペクトル
点線：０．０１Ｎ　ＨＣｌ−メタノール溶液中のスペクトル
破線：０．０１Ｎ　ＮａＯＨ−のメタノール溶液中のスペクトル
【図１８】キガマイシンＥのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
【図１９】キガマイシンＥの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定したプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
【図２０】キガマイシンＥの重クロロホルム溶液（内部標準：トリメチルシラン）にて測定した炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
【図２１】キガマイシンＡ〜Ｅの栄養条件を異にするＰＡＮＣ−１細胞に対する効果の比較である。
黒四角の線は栄養飢餓条件での培養の場合を示す
白丸の線は通常の培養の場合を示す
【図１】
2004137175.tif 000028
【図２】
2004137175.tif 000029
【図３】
2004137175.tif 000030
【図４】
2004137175.tif 000031
【図５】
2004137175.tif 000032
【図６】
2004137175.tif 000033
【図７】
2004137175.tif 000034
【図８】
2004137175.tif 000035
【図９】
2004137175.tif 000036
【図１０】
2004137175.tif 000037
【図１１】
2004137175.tif 000038
【図１２】
2004137175.tif 000039
【図１３】
2004137175.tif 000040
【図１４】
2004137175.tif 000041
【図１５】
2004137175.tif 000042
【図１６】
2004137175.tif 000043
【図１７】
2004137175.tif 000044
【図１８】
2004137175.tif 000045
【図１９】
2004137175.tif 000046
【図２０】
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【図２１】
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