(57)【要約】【課題】ビタミンＥの抗酸化性を高めた組成物を提供すること。【解決手段】カビを、ｄｌ−トコフェロールと蛋白質を含有する植物又はその加工品とを含む培地で培養させて得られる抗酸化性組成物であり、医薬として服用するのもビタミンＥに比べて少量で効果があり、副作用が少なくて済み、また、お菓子に入れてもおいしさが失われない量で抗酸化性効果を発揮することが可能である。カビとしては、リゾプス・オリゼ、アスペルギルス・オリゼ、アスペルギルス・ソーヤ、アスペルギルス・ニガー、アスペルギルス・タマリが好ましい。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カビを、ｄｌ−トコフェロール（ビタミンＥ）と蛋白質を含有する植物又はその加工品とを含む培地で培養させることにより得られることを特徴とする抗酸化性組成物。
【請求項２】
カビが、リゾプス・オリゼ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルス・ソーヤ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｏｊａｅ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）およびアスペルギルス・タマリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔａｍａｒｉｉ）から選ばれたものである請求項１に記載の抗酸化性組成物。
【請求項３】
蛋白質を含有する植物又はその加工品が、穀類、種実類、豆類、野菜類、きのこ類、藻類および茶類から選ばれたものである請求項１又は２に記載の抗酸化性組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ビタミンＥ（ｄｌ−トコフェロール、以下「ＶＥ」と略す。）関連物質を含有してなる新規な抗酸化性組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ＶＥに関する化学及び生化学の領域は５０年以上にわたって重要な研究テーマとなってきた。最近のプライヤー（Ｐｒｙｏｒ）氏の総説（非特許文献１参照。）は、種々の活性酸素による酸化のストレスから防御するものとしてのＶＥの有効性について、心臓疾患をあげて詳細に説明している。活性酸素はある量を超えない限り生体にとって必須のものである。しかし過剰の活性酸素は癌や老化をはじめとする成人病や急性慢性毒性の原因となっている。現代社会にあっては活性酸素を過剰にする原因が多くあり、それから生体を防御することは健康維持のためにも不可欠になっている。こうした過剰活性酸素と反応して無害化するものとして必須ビタミンであるＶＥが挙げられる。
【０００３】
従来から上記の活性酸素に対するＶＥの防御効果についての研究が数多くなされてきた。例えば、医薬への応用として、ＶＥ誘導体を有効成分とする皮膚疾患治療剤に関するもの（特許文献１参照。）、ＶＥ誘導体を含有してなる抗炎症剤又は抗アレルギー剤に関するもの（特許文献２参照。）、脳機能改善剤や白内障治療薬としてのＶＥ誘導体に関するもの（特許文献３参照。）、ビタミンＣ誘導体とＶＥ誘導体の併用による発ガン抑制剤に関するもの（特許文献４参照。）、更に、ＶＥ誘導体を有効成分とする抗潰瘍剤に関するもの（特許文献５参照。）などが提案されている。又、例えば、紫外線に伴う活性酸素に対するＶＥの防御効果としての化粧品についての提案など、ＶＥの抗酸化性に関する研究報告は枚挙にいとまがないほどである（特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９、特許文献１０参照。）
【０００４】
しかしながら、数多くの研究は、ＶＥの誘導体を安価に作る方法や新しい置換基をＶＥの骨格のどこかに付加して水溶性にするといったもので、ＶＥ本来の抗酸化性を高めるための研究は殆ど見あたらない。ＶＥの抗酸化性を向上させたＶＥ誘導体を用いた活性酸素抑制組成物も提案されてはいる（特許文献１１、特許文献１２参照。）。しかし、それらＶＥ誘導体の抗酸化性はＶＥのそれに比べてせいぜい１０％程度の向上しか図れていない。又、上記した白内障治療薬としてＶＥを水溶性にした誘導体（特許文献３参照。）は、抗酸化性の点ではＶＥより明らかに劣ると予想されるものである。これはＶＥのもつ−ＯＨ基のＨを置きかえるために起こる現象である。即ち、ＶＥによる抗酸化性は、このＨが主な役割を果たすからである。そして、上記した従来公知の数多くのＶＥ誘導体は、ＯＨ基から離れたところでの置換基の導入であるから、抗酸化性が飛躍的に向上するはずはないのである。
【０００５】
もしＶＥの抗酸化性が飛躍的に上がる方法がみつかれば、医薬として服用するのも少量で効果があるのだから、副作用が少なくて済み（先述したプライヤー氏の論文にはＶＥの取り過ぎの危険についての記述もある。非特許文献１のｐ．１４５−１４６参照。）、また、お菓子に入れてもおいしさが失われない量で効果があるようにもすることができる。
【０００６】
【特許文献１】
特開平７−１３８１５９号公報
【特許文献２】
特開２０００−１９１５２８号公報
【特許文献３】
特開平８−３４７７９号公報
【特許文献４】
特開２００２−１２１１３２号公報
【特許文献５】
特開平６−２５６１８５号公報
【特許文献６】
特開平６−７２８４５号公報
【特許文献７】
特開平６−２３４７５８号公報
【特許文献８】
特開平９−２７８７７０号公報
【特許文献９】
特開平１１−３５５７７号公報
【特許文献１０】
特開２０００−２９０２７６号
【特許文献１１】
特開平７−３０４６６６号公報
【特許文献１２】
特開平９−６７３６３号公報
【非特許文献１】
Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２８，  １４１（２０００），  ｐ．１４１−１６４
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、かかる状況に鑑みてなされたものであり、飛躍的に抗酸化性を高めたＶＥ関連物質を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、従来とは全く異なる手法でＶＥの抗酸化性を高める手法を見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は以下の事項に関する。
〈１〉カビを、ＶＥと蛋白質を含有する植物又はその加工品とを含む培地で培養させることにより得られることを特徴とする抗酸化性組成物。
〈２〉カビが、リゾプス・オリゼ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルス・ソーヤ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｏｊａｅ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）およびアスペルギルス・タマリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔａｍａｒｉｉ）から選ばれたものであることを特徴とする前記〈１〉に記載の抗酸化性組成物。
〈３〉蛋白質を含有する植物又はその加工品が、穀類、種実類、豆類、野菜類、きのこ類、藻類および茶類から選ばれたものであることを特徴とする前記〈１〉又は〈２〉に記載の抗酸化性組成物。
【０００９】
なお、前記培養により得られる本発明の「組成物」とは、菌の活動の結果生産された全ての生産物を意味し、培地および菌体内生産物、菌体外分泌物の全てを含むものである。本発明によれば、ＶＥを含む培地でカビを培養することで、培地中にＶＥと比較して優れた抗酸化性を有するＶＥ関連物質が生成されるものと考えられる。
【００１０】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明の抗酸化物質は、カビのごく一般的な培養方法により得られる。培養方法としては、いわゆる振蕩培養がその生産性のゆえに好ましい態様である。具体的には、蛋白質を含む植物又はその加工品を必要に応じて粉砕し、培養液としての５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液中に、前記粉砕植物又は加工品がおよそ０．１〜１０重量％となるように溶解又は懸濁し、更に終濃度が０．１〜１０ｍＭとなるようにＶＥ（α−トコフェロール）を添加し、この培養液中に少量のカビを植菌し、培養温度３０℃にて６日間程度振蕩培養する。振蕩のスピードは一般に使用されている１００ｒｐｍ程度でよい。
【００１１】
本発明に使用するカビとしては、リゾプス・オリゼ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルス・ソーヤ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｏｊａｅ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・タマリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔａｍａｒｉｉ）から選ばれたカビが好ましく、特に、現在食品加工に使用され、安全な菌株であるリゾプス・オリゼ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＩＦＯ６１５５株、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＩＦＯ５２３８株、アスペルギルス・ソーヤ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｏｊａｅ）ＩＦＯ３３０８４株、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）ＩＦＯ４０６７株、更にアスペルギルス・タマリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔａｍａｒｉｉ）ＩＦＯ４３５７株から選ばれたカビが本発明にとって特に好ましい株である。
【００１２】
本発明の培地に入れる必須の物質としてＶＥが挙げられる。当然、α−トコフェロールリン酸エステルナトリウムなどのＶＥの誘導体も本発明におけるＶＥの範囲に入る。培地中のＶＥ又はその誘導体の濃度は、０．１ｍＭ〜１０ｍＭの範囲で任意に選択できる。
【００１３】
本発明で培地に加えるもう１つの物質は、蛋白質を含有する植物又はその加工品である。この蛋白質を含有する植物としては、あわ、えんばく、おおむぎ、きび、こむぎ、こめ、とうもろこし、そば、ライ麦、といった穀類、きくいも、さつまいも、さといも、じゃがいも、でんぷん、やまのいも、といった、いも類、アーモンド、銀杏、ごま、くるみ、落花生といった種実類、大豆、小豆、えだまめ、えんどう、といった豆類、かんぴょう、きく、くわい、にんにく、ブロッコリー、ほうれんそう、もやし、よもぎ、わさび、といった野菜類、きくらげ、えのきたけ、しいたけ、しめじ、マッシュルーム、といったキノコ類、あおさ、あおのり、いわのり、こんぶ、ひじき、わかめ、といった藻類、緑茶、ウーロン茶、といった茶類というように、多くの植物の中から選ぶことができる。また、これらの加工品、例えば大豆の加工品であるきな粉、じゃがいもの加工品であるでんぷん、緑茶の加工品である抹茶といったものを使用することもできる。これらの蛋白質を含む植物又はその加工品は、１００ｍｌの液体培地中に０．１〜１０ｇの範囲の任意の割合で添加することができる。これらの植物又は加工品は、水に溶解又は懸濁するように必要に応じて粉砕して培地に添加される。添加された植物又は加工品は、培養液中で完全に溶解しても、一部懸濁状態であっても良い。本発明において、カビを培養する培地に蛋白質を含有する植物又はその加工品を加えることで、該植物中の炭水化物がカビの栄養源となると同時にカビが蛋白質を資化し、抗酸化性に優れたＶＥ誘導体を生産すると推測される。
【００１４】
本発明の抗酸化性組成物は、その適量を食品や飲料に配合して使用することが出来る。食品や飲料としては、例えば、チョコレート、ガム、キャンディ、グミ、ヨーグルト、清涼飲料、コーヒー、紅茶、パン、ビスケット、ゼリー、アルコール飲料などが挙げられる。
【００１５】
本発明の抗酸化性組成物を食品又は飲料に適用する場合には、必要に応じて種々の物質を添加することが出来る。例えば、蔗糖、果糖、ブドウ糖などの糖類、キシリトールなどの糖アルコール、アミノ酸、クエン酸、乳酸、りんご酸、フラボノイド、カテキンなどの抗酸化物質の他、ゼラチン、ビタミン類、色素、香料、カルシウム剤、グリセリン脂肪酸エステル、ペクチンなどを添加することが出来る。更に、食品に通常使用されているものも任意に配合して用いることが出来る。
【００１６】
また、本発明の抗酸化性組成物は、医薬品に適用することもできる。この場合には、錠剤、カプセル等種々の形態のものに配合して使用することができる。ＶＥとビタミンＣ等との併用は抗酸化性のアップになることがわかっている（例えば、Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，  ９，  （１９９４），ｐ．１４１−１４５）ので、こうした他の抗酸化剤との併用も可能である。
【００１７】
【実施例】
次に実施例によって本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら制限されるものではない。
【００１８】
（実施例１〜５）
５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液１００ｍｌに、１００ｍＭのｄｌ−α−トコフェロール（和光純薬（株）製）１ｍｌと粉砕した大豆（前原製粉（株）製のきな粉）５ｇを加えたものを培地とした。この培地を５つ用意し、それぞれに、リゾプス・オリゼ  ＩＦＯ６１５５、アスペルギルス・オリゼ  ＩＦＯ５２３８、アスペルギルス・ソーヤ  ＩＦＯ３３０８４、アスペルギルス・ニガー  ＩＦＯ４０６７、アスペルギルス・タマリ  ＩＦＯ４３５７（いずれも財団法人発酵研究所より購入）のカビ懸濁液［５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．０）を用いて、波長６６０ｎｍの吸光度が１．０になるように調製した胞子懸濁液］を１％となるように植菌し、３０℃にて６日間、１３０ｒｐｍで振蕩培養した。
インドフェノール法による還元力を下記のように測定した。すなわち、前記培養後の培地２ｍｌに、０．０１５％（ｗ／ｖ）２，６−ジクロロフェノールインドフェノール溶液２．５ｍｌ、０．２Ｍ酢酸−酢酸ソーダ緩衝液（ｐＨ４．０）１ｍｌを加えて攪拌し、３分間発色させた。そこに７．５ｍｌのキシレンを加えよく攪拌して、色素をキシレンに抽出した後、キシレン層の５３０ｎｍの吸光度を分光光度計により測定し、吸光の程度、即ち２，６−ジクロロフェノールインドフェノールの脱色具合から還元力を求めた。上記した２，６−ジクロロフェノールインドフェノール溶液は、２，６−ジクロロフェノールインドフェノールナトリウム（和光純薬（株）製）を用いて作成した。上記のようにして求めた培地の還元力をアスコルビン酸当量として表１に示した。
【００１９】
【表１】
2004168919.tif 000002
【００２０】
（実施例６）
実施例１において、粉砕した大豆に代えて市販の培地組成物であるポテトデキストロースブロス（Ｐｏｔａｔｏ  Ｄｅｘｔｒｏｓｅ  Ｂｒｏｔｈ、ＤＩＦＣＯ（株）製）２．４ｇを培養液に加え、リゾプス・オリゼ  ＩＦＯ６１５５（財団法人発酵研究所より購入）を用いて同様な実験を行った。アスコルビン酸当量の値として５５μｇ／ｍｌが得られた。
【００２１】
（実施例７）
実施例１の培養上清液を薄相クロマトグラフィーを行った。即ち、薄相にはＴＬＣアルミニウムシートシリカゲル６０Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ（株）製）を用い、展開溶媒にメタノール−ベンゼン（３：１）を使用した、展開後乾燥させ、ヨウ素発色の場合は展開層にヨウ素を入れ飽和させたところに、プレートを入れ呈色させた。ＥＥ試薬は０．５％２，２’−ビピリジルエタノール溶液と０．２％塩化第二鉄エタノール溶液を使用直前に等量混合して噴霧した。その結果、ｄｌ−α−トコフェロールの発色は顕著に減少したが、ＶＥより下位に新たな複数の発色が観察された。つまり、還元力を有する複数の水溶性ＶＥ関連物質の存在が示された。
【００２２】
【発明の効果】
本発明によれば、ビタミンＥの抗酸化性を向上させた組成物を提供できる。この抗酸化性組成物は、医薬として服用するのもビタミンＥに比べて少量で効果があり、副作用が少なくて済み、また、お菓子に入れてもおいしさが失われない量で抗酸化性効果を発揮することが可能である。