(57)【要約】【課題】特定部位に集積する化合物のスクリーニング方法を提供する。【解決手段】式（Ｉ）（Ｓ１−Ｌ１）ｍ−Ｂ１−（Ｆ１）ｎ　（Ｉ）（式中、Ｓ１は被験化合物残基を表し、Ｌ１はＳ１とＢ１とをＬ１を介して位置特異的かつ化学的に結合させることができる生体適合性高分子残基を表し、Ｆ１は画像化試薬残基を表し、Ｂ１は１〜６０個のＬ１と１〜１０個のＦ１とをＢ１を介して化学的に結合させることができる、または１〜６０個のＬと結合することのできるリンカーを表し、ｍは１〜６０の整数を表し、ｎは０〜１０の整数を表す）で表されるプローブをヒト以外の動物に投与し、一定時間後に、動物自体または該動物から採取した臓器、組織もしくは細胞の画像測定により該プローブの定量を行い、被験化合物が集積する臓器、組織または細胞を同定することを特徴とする、動物の特定部位に集積する化合物のスクリーニング方法を提供すること。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
（Ｓ１−Ｌ１）ｍ−Ｂ１−（Ｆ１）ｎ　　　（Ｉ）
（式中、Ｓ１は被験化合物残基を表し、Ｌ１はＳ１とＢ１とをＬ１を介して位置特異的かつ化学的に結合させることができる生体適合性高分子残基を表し、Ｆ１は画像化試薬残基を表し、Ｂ１は１〜６０個のＬ１と１〜１０個のＦ１とをＢ１を介して化学的に結合させることができる、または１〜６０個のＬ１と結合することのできるリンカーを表し、ｍは１〜６０の整数を表し、ｎは０〜１０の整数を表す）で表されるプローブをヒト以外の動物に投与し、一定時間後に、動物自体または該動物から採取した臓器、組織もしくは細胞の画像測定により該プローブの定量を行い、被験化合物が集積する臓器、組織または細胞を同定することを特徴とする、動物の特定部位に集積する化合物のスクリーニング方法。
【請求項２】
Ｓ１が、単糖、二糖、オリゴ糖、アミノ酸、ペプチド、抗体フラグメント、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、輸送基質、ホルモン、脂質および合成低分子化合物からなる群より選ばれる化合物の残基である請求項１記載のスクリーニング方法。
【請求項３】
Ｓ１が、オリゴ糖残基である請求項１記載のスクリーニング方法。
【請求項４】
Ｌ１が、ポリアルキレングリコール類、多糖類、スチレンマレイン酸コポリマー、ジビニルエーテル無水マレイン酸コポリマー、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）およびＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドからなる群より選ばれる化合物の残基である請求項１〜３のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項５】
Ｌ１が、ポリエチレングリコール残基である請求項１〜３のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項６】
Ｂ１が、アルブミン、アビジン、グリーンフルオレッセントプロテイン、イエローフルオレッセントプロテイン、シアンフルオレッセントプロテイン、ブルーフルオレッセントプロテイン、ポリリジン、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸およびリポソームからなる群より選ばれる化合物の残基である請求項１〜５のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項７】
Ｆ１が、蛍光物質または発光物質の残基である請求項１〜６のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項８】
Ｆ１が、フルオレセイン誘導体残基である請求項１〜６のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項９】
式（Ｉ）
（Ｓ１−Ｌ１）ｍ−Ｂ１−（Ｆ１）ｎ　　　（Ｉ）
（式中、Ｓ１は被験化合物残基を表し、Ｌ１はＳ１とＢ１とをＬ１を介して位置特異的かつ化学的に結合させることができる生体適合性高分子残基を表し、Ｆ１は画像化試薬残基を表し、Ｂ１は１〜６０個のＬ１と１〜１０個のＦ１とをＢ１を介して化学的に結合させることができる、または１〜６０個のＬ１と結合することのできるリンカーを表し、ｍは１〜６０の整数を表し、ｎは０〜１０の整数を表す）で表される、被検化合物の生体内集積部位検出用プローブ。
【請求項１０】
Ｓ１が、単糖、二糖、オリゴ糖、アミノ酸、ペプチド、抗体フラグメント、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、輸送基質、ホルモン、脂質、および合成低分子化合物からなる群より選ばれる化合物の残基である請求項９記載のプローブ。
【請求項１１】
Ｓ１が、オリゴ糖残基である請求項９記載のプローブ。
【請求項１２】
Ｌ１が、ポリアルキレングリコール類、多糖類、スチレンマレイン酸コポリマー、ジビニルエーテル無水マレイン酸コポリマー、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）およびＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドからなる群より選ばれる化合物の残基である請求項９〜１１のいずれかに記載のプローブ。
【請求項１３】
Ｌ１がポリエチレングリコール残基である請求項９〜１１のいずれかに記載のプローブ。
【請求項１４】
Ｂ１が、アルブミン、アビジン、グリーンフルオレッセントプロテイン、イエローフルオレッセントプロテイン、シアンフルオレッセントプロテイン、ブルーフルオレッセントプロテイン、ポリリジン、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸およびリポソームからなる群より選ばれる化合物の残基である請求項９〜１３のいずれかに記載のプローブ。
【請求項１５】
Ｆ１が、蛍光物質または発光物質の残基である請求項９〜１４のいずれかに記載のプローブ。
【請求項１６】
Ｆ１が、フルオレセイン誘導体残基である請求項９〜１４のいずれかに記載のプローブ。
【請求項１７】
Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃで表されるオリゴ糖（ＬＮｎＴ）または構造中にＬＮｎＴモチーフを有するオリゴ糖誘導体の残基と生理活性物質残基とを含む化合物であって、動物に投与した場合、膵臓、胸腺、精巣および前立腺からなる群より選ばれる一つ以上の臓器に特異的に集積し、該生理活性物質を該臓器に送達することができる臓器送達性化合物。
【請求項１８】
ＬＮｎＴまたは構造中にＬＮｎＴモチーフを有するオリゴ糖誘導体残基と生理活性物質残基とを含む化合物が、式（ＩＩ）
［Ｓ２−（Ｌ２）ｕ］ｔ−Ｂ２　　　（ＩＩ）
（式中、Ｓ２は、ＬＮｎＴまたは構造中にＬＮｎＴモチーフを有するオリゴ糖誘導体の残基を表し、Ｌ２は、Ｓ２とＢ２とをＬ２を介して位置特異的かつ化学的に結合させる生体適合性高分子残基を表し、Ｂ２は、生理活性物質残基を表し、ｕは０または１を表し、ｔは１以上の整数を表す）で表される化合物である請求項１７記載の臓器送達性化合物。
【請求項１９】
Ｌ２が、ポリアルキレングリコール類、多糖類、スチレンマレイン酸コポリマー、ジビニルエーテル無水マレイン酸コポリマー、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）およびＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドからなる群より選ばれる化合物の残基である請求項１８記載の臓器送達性化合物。
【請求項２０】
Ｌ２がポリエチレングリコール残基である請求項１８記載の臓器送達性化合物。
【請求項２１】
生理活性物質残基における生理活性物質が、化学療法剤、毒素、放射線治療剤、放射線感受性試薬、アンチセンス化合物、サイトカイン、酵素、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ホルモン、同種抗原、異種抗原、遺伝子治療用ＤＮＡ、画像化試薬およびこれらのうちの１つまたは２つ以上を包含する粒子からなる群より選ばれるものである請求項１７〜２０のいずれかに記載の臓器送達性化合物。
【請求項２２】
生理活性物質残基における生理活性物質が、組換えタンパク質である請求項１７〜２０のいずれかに記載の臓器送達性化合物。
【請求項２３】
化学療法剤が、抗癌剤、抗炎症剤、抗血管形成剤および血管形成促進剤からなる群より選ばれるものである請求項２１記載の臓器送達性化合物。
【請求項２４】
粒子が、リポソーム、マイクロスフェアー、ナノスフェアーおよびミセルからなる群より選ばれる請求項２１記載の臓器送達性化合物。
【請求項２５】
画像化試薬が、蛍光物質または発光物質である請求項２１記載の臓器送達性化合物。
【請求項２６】
画像化試薬が、フルオレセイン誘導体である請求項２１記載の臓器送達性化合物。
【請求項２７】
放射線治療剤が、インジウム１１１、テクネチウム９９、ヨード１２３、ヨード１２５、ヨード１３１、クリプトン８１、キセノン３３およびガリウム６７からなる群より選ばれるものである請求項２１記載の臓器送達性化合物。
【請求項２８】
生理活性物質残基における生理活性物質がインスリン分泌促進剤またはβ細胞増殖因子である請求項１７〜２０のいずれかに記載の臓器送達性化合物。
【請求項２９】
生理活性物質残基における生理活性物質が免疫抑制剤である請求項１７〜２０のいずれかに記載の臓器送達性化合物。
【請求項３０】
オリゴ糖誘導体が、ＮｅｕＡｃα２−６Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃまたはＯ−アセチル（Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ）である請求項１７〜２９のいずれかに記載の臓器送達性化合物。
【請求項３１】
請求項１７〜３０のいずれかに記載の臓器送達性化合物を含有する膵臓を構成する細胞の機能障害を伴う疾患、前立腺を構成する細胞の機能障害を伴う疾患または胸腺を構成する細胞の機能亢進や障害を伴う疾患の診断薬。
【請求項３２】
膵臓を構成する細胞の機能障害を伴う疾患が、膵癌、急性膵炎、慢性膵炎または糖尿病であり、前立腺を構成する細胞の機能障害を伴う疾患が前立腺癌であり、胸腺を構成する細胞の機能亢進や障害を伴う疾患が自己免疫疾患、アレルギー、アトピー、喘息、花粉症、気道過敏症、ＨＩＶ感染症、慢性関節リウマチ、移植片−対−宿主疾患、インスリン依存性糖尿病または糸球体腎炎である請求項３１記載の診断薬。
【請求項３３】
請求項１７〜３０のいずれかに記載の臓器送達性化合物を含有する膵臓を構成する細胞の機能障害を伴う疾患、前立腺を構成する細胞の機能障害を伴う疾患または胸腺を構成する細胞の機能亢進や障害を伴う疾患の治療剤。
【請求項３４】
膵臓を構成する細胞の機能障害を伴う疾患が、膵癌、急性膵炎、慢性膵炎または糖尿病であり、前立腺を構成する細胞の機能障害を伴う疾患が前立腺癌であり、胸腺を構成する細胞の機能亢進や障害を伴う疾患が自己免疫疾患、アレルギー、アトピー、喘息、花粉症、気道過敏症、ＨＩＶ感染症、慢性関節リウマチ、移植片−対−宿主疾患、インスリン依存性糖尿病または糸球体腎炎である請求項３３記載の治療剤。
【請求項３５】
請求項１７〜３０のいずれかに記載の臓器送達性化合物を含有する膵臓を構成する細胞の機能障害を伴う疾患、前立腺を構成する細胞の機能障害を伴う疾患または胸腺を構成する細胞の機能亢進や障害を伴う疾患の予防剤。
【請求項３６】
膵臓を構成する細胞の機能障害を伴う疾患が、膵癌、急性膵炎、慢性膵炎または糖尿病であり、前立腺を構成する細胞の機能障害を伴う疾患が前立腺癌であり、胸腺を構成する細胞の機能亢進や障害を伴う疾患が自己免疫疾患、アレルギー、アトピー、喘息、花粉症、気道過敏症、ＨＩＶ感染症、慢性関節リウマチ、移植片−対−宿主疾患、インスリン依存性糖尿病または糸球体腎炎である請求項３５記載の予防剤。
【請求項３７】
生理活性物質を膵臓、胸腺、精巣および前立腺からなる群より選ばれる臓器に送達することができる臓器送達性化合物の製造のための、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃで表されるオリゴ糖（ＬＮｎＴ）または構造中にＬＮｎＴモチーフを有するオリゴ糖誘導体の使用。
【請求項３８】
ＮｅｕＡｃα２−６Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃで表されるオリゴ糖誘導体。
【請求項３９】
Ｏ−アセチル（Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ）で表されるオリゴ糖誘導体。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、オリゴ糖、ペプチド等の低分子化合物ライブラリーから、生体内の特定の部位（臓器、組織、細胞）に親和性を有し、各種治療薬または診断薬の部位特異的送達に有用な化合物を見出すためのインビボ（ｉｎ　ｖｉｖｏ）スクリーニング方法、ならびに該方法によって見出される化合物およびその用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】
医薬品の治療効果は、薬物の生体内作用部位への到達量、薬物の体内動態、薬物に対する生体感受性に影響される。また非作用部位での薬効発現は、副作用につながる。部位特異的な薬物送達（以下、ターゲティングという）は、標的部位での薬物濃度を上昇させることによってその薬効を増強するだけでなく、このような副作用を低下させる。
【０００３】
薬物ターゲティングの方法としては、プロドラッグ化の方法と薬物輸送体（キャリアー）を用いる方法が知られている。前者は作用部位環境で薬物が活性体となるように化学修飾を施すもので、後者は薬物を作用部位へ特異的に送達することが可能な素子を、薬物と結合させるものである。さらに、キャリアーを用いる方法には能動的ターゲティングと受動的ターゲティングがある。能動的ターゲティングは、作用部位に親和性を示すリガンドをキャリアーに付加するものであり、受動的ターゲティングは、非作用部位への集積を回避するような物理化学的性質をキャリアーにもたせるものである。一般的に能動的ターゲティングを用いた場合の方が受動的ターゲティングを用いた場合より体内分布の選択性が高く、低投与量で高い薬効が得られる。
【０００４】
能動的ターゲティングに用いられるリガンドとしては、高分子化合物ではモノクローナル抗体、レクチン、ペプチドホルモン、糖タンパク質等があり、低分子化合物では輸送基質、ホルモン、糖、アミノ酸、ジペプチド等がある。抗原−抗体間または糖−レクチン間の認識機構を用いる能動的ターゲティング方法、すなわちリガンドとしてモノクローナル抗体または糖を用いる方法が研究されている。例えば、癌細胞を特異的に認識するモノクローナル抗体（またはその抗原認識部分）と、放射性同位元素、抗癌剤、毒素等との結合体を用いる癌治療方法は、「免疫ミサイル療法」として活発に研究され、癌化学療法の有力な手段になることが期待されている。
【０００５】
一方、糖認識機構が抗体同様全身性の薬物ターゲティングに用いられることが知られている。例えば、肝実質細胞表面に存在するガラクトースレセプター、Ｋｕｐｆｆｅｒ細胞をはじめとする種々のマクロファージ上のマンノースレセプターが糖認識機構に関与するレクチンとして挙げられる。ガラクトースで修飾されたＩＦＮ−αおよびＩＬ−２は、未修飾のものに比べ高い肝集積性を示す　（ＷＯ９８　／１３３８１）。アルキル化マンノースおよびアルキル化グルコースは腎集積性を示す［ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・アンド・エクスペリメンタル・セラピューティックス（Ｊ．　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．　Ｅｘｐ．　Ｔｈｅｒ．），　２８８，　８８８−８９７　（１９９９）］。グルコース誘導体は中枢神経系、脳、前立腺癌組織に親和性を有する　（ＷＯ９７／０２０４６）。そしてＮ−アセチルガラクトサミンβ１−４ガラクトースおよびＮ−アセチルガラクトサミンβ１−３ガラクトースは肺上皮細胞および肺静脈内皮細胞へ集積する　（ＵＳ５４５５２４０）。
【０００６】
ｉｎ　ｖｉｖｏで膵臓や胸腺に特異的集積性を示す糖または糖誘導体は知られていない。また臓器特異的集積性を示す糖または糖誘導体に、共通する部分構造が存在することは知られていない。
なお、標的臓器としての膵臓および胸腺は、下記理由により薬剤の特異的ターゲティングが特に望まれている臓器である。膵癌では、放射線治療や薬剤による化学療法で十分な効果が期待できない。放射線治療が困難であるのは、膵臓が周囲を放射線感受性の臓器に囲まれているためである。化学療法が有効でない理由として、膵癌は血管の少ない腫瘍であることが多いため薬剤の腫瘍内濃度を十分上昇させることができないことがあげられる。このような膵臓内血管構造の変化は他の膵疾患でも観察され、急性または慢性膵炎では、結果として、膵臓内血流量が減少することが知られている［インターナショナル・ジャーナル・オブ・パンクレアトロジー　（Ｉｎｔ．　Ｊ．　Ｐａｎｃｒｅａｔｏｌ．），　１２，　１１−２１　（１９９２）］。薬剤の腫瘍内濃度を上昇させる方法の一つに動脈内投与療法があるが、膵癌の場合は胃、十二指腸、脾臓等にも薬剤が分散するため、その効果は期待し難い。これに対して、木村らはアンジオテンシン（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ）ＩＩを用いた昇圧化学療法により、膵癌に対する薬効、延命効果ともに上昇することを見出している［第３１回日本癌治療学会総会要旨　（Ｔｈｅ　３１ｓｔ　ｍｅｅｔｉｎｇ　ｏｆ　Ｊｐｎ．　Ｓｏｃ．　Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｈｅｒ．），　６５８，　２９９　（１９９３）］。また、膵癌特異的モノクローナル抗体と抗癌剤アドリアマイシンの複合体は、マウス静脈内投与で高い腫瘍集積性を示し、単回投与後１３日間は腫瘍径の増大を抑制する［ジャパニーズ・ジャーナル・オブ・キャンサー・リサーチ　（Ｊｐｎ．　Ｊ．　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．），　８６，　１０７２　（１９９５）］。
【０００７】
以上のことを考慮すると、膵癌や膵炎を含む膵疾患治療に薬物ターゲティングによるドラッグデリバリーシステムを適用することは有効であり、能動的ターゲティングにより薬剤の膵臓内濃度を上昇させることは、特に有効な治療法として期待される。さらに調製の簡便さおよび免疫原性の低さという点で、ターゲティングリガンドは抗体のように高分子量でなく低分子量のものが望ましい［ジーン・セラピー　（Ｇｅｎｅ　Ｔｈｅｒａｐｙ），　５，　８４８　（１９９８）］。従来、コレシストキニン（ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｏｋｉｎｉｎ）のＣ末端オクタペプチドＣＣＫ８とＤＮＡとの複合体は腹腔内投与時に膵集積性を示すことが知られている［ジーン・セラピー　（Ｇｅｎｅ　Ｔｈｅｒａｐｙ），　５，　８４８　（１９９８）］が、経口もしくは静脈内投与で集積性を示すものがさらに望ましい。
【０００８】
胸腺はＴ細胞の成熟と自己寛容の誘導において中心的な役割を果たす。特に後者の機能を利用して、臓器移植後の拒絶反応を回避する試みがなされている。ポセルト（Ｐｏｓｓｅｌｔ）らは同種（異系）のランゲルハンス島を、抗原として糖尿病モデルラットに胸腺内投与すると、糖尿病が改善され、末梢ランゲルハンス島移植片への免疫寛容も誘導されることを報告している［サイエンス　（Ｓｃｉｅｎｃｅ），　２４９，　１２９３　（１９９０）］。これを契機に、多くの研究グループで同種または異種抗原の胸腺内投与が行われ、本投与経路の免疫寛容誘導に対する有効性が確認された。すなわち、同種または異種抗原の胸腺ターゲティングは、自己免疫疾患治療および臓器移植後の拒絶反応回避に有効である。なお、インビトロ（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）で胸腺細胞に親和性を示す低分子化合物としてインターフェロン−α２部分ペプチドが知られている［フェブス・レターズ　（ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ．），　２７８，　１８７，　（１９９１）］が、ｉｎ　ｖｉｖｏで胸腺集積性を示す低分子化合物は知られていない。
【０００９】
一方、低分子化合物ライブラリーの中からターゲティングリガンドを見出す方法についていくつか報告例がある。橋本らは、ビオチン化したアルブミンと多数の糖鎖リガンドを導入したストレプトアビジンを組み合わせることによって、一分子内に１４０〜２５０本の糖鎖リガンドを包含するプローブを作製し、対象の受容体を細胞表面に発現させたＣＨＯ細胞との結合性を評価することによって、その受容体によって認識される糖鎖の同定をｉｎ　ｖｉｔｒｏで行っている（非特許文献１参照）。カーン（Ｋａｈｎｅ）らは固相担体上でオリゴ糖ライブラリーを作製し、それを用いてレクチンとの結合性評価を行う方法を報告している（特許文献１参照）。パスクアリニ（Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ）らは、ファージランダムペプチドライブラリーをマウス静脈内投与し、特定臓器に集積したファージを回収し、それらをさらにマウス静脈内投与するという操作を繰り返すことによって、ファージランダムペプチドライブラリーの中からターゲティングリガンドを見出すｉｎ　ｖｉｖｏスクリーニング方法を開発した［ネイチャー　（Ｎａｔｕｒｅ），　３８０，　３６４−３６６　（１９９６）］。該方法によって見出された腫瘍血管特異的に集積するペプチドとアポトーシス誘導因子とのコンジュゲートは、顕著な延命効果を示し［ネイチャー・メディシン　（Ｎａｔ．　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ），５，　１０３２−１０３８　（１９９９）］、ｉｎ　ｖｉｖｏスクリーニングで見出されたターゲティングリガンドが治療薬に応用できることが示された。従来、ペプチド以外の低分子化合物ライブラリー、例えば細胞間相互作用において重要な役割を果たすオリゴ糖ライブラリーの中からターゲティングリガンドを見出すためのｉｎ　ｖｉｖｏスクリーニング方法は知られていない。
【００１０】
【特許文献１】
国際公開第９７／３５２０２号パンフレット
【００１１】
【非特許文献１】
ジャーナル・オブ・バイオケミストリー　（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），　日本生化学会，　１９９８年，　第１２３巻，　ｐ．　４６８−４７８
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、生理活性物質を生体内の特定の臓器、例えば膵臓または胸腺に特異的に送達する方法を提供することにある。本発明のもう一つの目的は、ペプチドライブラリーだけでなくあらゆる低分子化合物ライブラリーに適用可能で、かつラジオアイソトープ取り扱い実験施設のような特殊な施設を必要とせず、従来のような、臓器をすりつぶして上清をＨＰＬＣ分析する、臓器をすりつぶしてＥＬＩＳＡ（酵素免疫測定）で測定する等の操作やサンプル調製等、煩雑になりがちで時間がかかり、特定の目的化合物にしか適用できないといった欠点を克服した、簡便なターゲティングリガンドのｉｎ　ｖｉｖｏスクリーニング方法を提供することにある。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明は、以下の（１）〜（３９）に関する。
（１）式（Ｉ）
（Ｓ１−Ｌ１）ｍ−Ｂ１−（Ｆ１）ｎ　　　（Ｉ）
（式中、Ｓ１は被験化合物残基を表し、Ｌ１はＳ１とＢ１とをＬ１を介して位置特異的かつ化学的に結合させることができる生体適合性高分子残基を表し、Ｆ１は画像化試薬残基を表し、Ｂ１は１〜６０個のＬ１と１〜１０個のＦ１とをＢ１を介して化学的に結合させることができる、または１〜６０個のＬ１と結合することのできるリンカーを表し、ｍは１〜６０の整数を表し、ｎは０〜１０の整数を表す）で表されるプローブをヒト以外の動物に投与し、一定時間後に、動物自体または該動物から採取した臓器、組織もしくは細胞の画像測定により該プローブの定量を行い、被験化合物が集積する臓器、組織または細胞を同定することを特徴とする、動物の特定部位に集積する化合物のスクリーニング方法。
（２）　Ｓ１が、単糖、二糖、オリゴ糖、アミノ酸、ペプチド、抗体フラグメント、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、輸送基質、ホルモン、脂質および合成低分子化合物からなる群より選ばれる化合物の残基である上記（１）記載のスクリーニング方法。
（３）　Ｓ１が、オリゴ糖残基である上記（１）記載のスクリーニング方法。
（４）　Ｌ１が、ポリアルキレングリコール類、多糖類、スチレンマレイン酸コポリマー、ジビニルエーテル無水マレイン酸コポリマー、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）およびＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドからなる群より選ばれる化合物の残基である上記（１）〜（３）のいずれかに記載のスクリーニング方法。
（５）　Ｌ１が、ポリエチレングリコール残基である上記（１）〜（３）のいずれかに記載のスクリーニング方法。
（６）　Ｂ１が、アルブミン、アビジン、グリーンフルオレッセントプロテイン、イエローフルオレッセントプロテイン、シアンフルオレッセントプロテイン、ブルーフルオレッセントプロテイン、ポリリジン、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸およびリポソームからなる群より選ばれる化合物の残基である上記（１）〜（５）のいずれかに記載のスクリーニング方法。
（７）　Ｆ１が、蛍光物質または発光物質の残基である上記（１）〜（６）のいずれかに記載のスクリーニング方法。
（８）　Ｆ１が、フルオレセイン誘導体残基である上記（１）〜（６）のいずれかに記載のスクリーニング方法。
（９）　式（Ｉ）
（Ｓ１−Ｌ１）ｍ−Ｂ１−（Ｆ１）ｎ　　　（Ｉ）
（式中、Ｓ１は被験化合物残基を表し、Ｌ１はＳ１とＢ１とをＬ１を介して位置特異的かつ化学的に結合させることができる生体適合性高分子残基を表し、Ｆ１は画像化試薬残基を表し、Ｂ１は１〜６０個のＬ１と１〜１０個のＦ１とをＢ１を介して化学的に結合させることができる、または１〜６０個のＬ１と結合することのできるリンカーを表し、ｍは１〜６０の整数を表し、ｎは０〜１０の整数を表す）で表される、被検化合物の生体内集積部位検出用プローブ。
（１０）　Ｓ１が、単糖、二糖、オリゴ糖、アミノ酸、ペプチド、抗体フラグメント、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、輸送基質、ホルモン、脂質、および合成低分子化合物からなる群より選ばれる化合物の残基である上記（９）記載のプローブ。
（１１）　Ｓ１が、オリゴ糖残基である上記（９）記載のプローブ。
（１２）　Ｌ１が、ポリアルキレングリコール類、多糖類、スチレンマレイン酸コポリマー、ジビニルエーテル無水マレイン酸コポリマー、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）およびＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドからなる群より選ばれる化合物の残基である上記（９）〜（１１）のいずれかに記載のプローブ。
（１３）　Ｌ１がポリエチレングリコール残基である上記（９）〜（１１）のいずれかに記載のプローブ。
（１４）　Ｂ１が、アルブミン、アビジン、グリーンフルオレッセントプロテイン、イエローフルオレッセントプロテイン、シアンフルオレッセントプロテイン、ブルーフルオレッセントプロテイン、ポリリジン、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸およびリポソームからなる群より選ばれる化合物の残基である上記（９）〜（１３）のいずれかに記載のプローブ。
（１５）　Ｆ１が、蛍光物質または発光物質の残基である上記（９）〜（１４）のいずれかに記載のプローブ。
（１６）　Ｆ１が、フルオレセイン誘導体残基である上記（９）〜（１４）のいずれかに記載のプローブ。
（１７）　Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃで表されるオリゴ糖（ＬＮｎＴ）または構造中にＬＮｎＴモチーフを有するオリゴ糖誘導体の残基と生理活性物質残基とを含む化合物であって、動物に投与した場合、膵臓、胸腺、精巣および前立腺からなる群より選ばれる一つ以上の臓器に特異的に集積し、該生理活性物質を該臓器に送達することができる臓器送達性化合物。
（１８）　ＬＮｎＴまたは構造中にＬＮｎＴモチーフを有するオリゴ糖誘導体残基と生理活性物質残基とを含む化合物が、式（ＩＩ）
［Ｓ２−（Ｌ２）ｕ］ｔ−Ｂ２　　　（ＩＩ）
（式中、Ｓ２は、ＬＮｎＴまたは構造中にＬＮｎＴモチーフを有するオリゴ糖誘導体の残基を表し、Ｌ２は、Ｓ２とＢ２とをＬ２を介して位置特異的かつ化学的に結合させる生体適合性高分子残基を表し、Ｂ２は、生理活性物質残基を表し、ｕは０または１を表し、ｔは１以上の整数を表す）で表される化合物である上記（１７）記載の臓器送達性化合物。
（１９）　Ｌ２が、ポリアルキレングリコール類、多糖類、スチレンマレイン酸コポリマー、ジビニルエーテル無水マレイン酸コポリマー、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）およびＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドからなる群より選ばれる化合物の残基である上記（１８）記載の臓器送達性化合物。
（２０）　Ｌ２がポリエチレングリコール残基である上記（１８）記載の臓器送達性化合物。
（２１）　生理活性物質残基における生理活性物質が、化学療法剤、毒素、放射線治療剤、放射線感受性試薬、アンチセンス化合物、サイトカイン、酵素、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ホルモン、同種抗原、異種抗原、遺伝子治療用ＤＮＡ、画像化試薬およびこれらのうちの１つまたは２つ以上を包含する粒子からなる群より選ばれるものである上記（１７）〜（２０）のいずれかに記載の臓器送達性化合物。
（２２）　生理活性物質残基における生理活性物質が、組換えタンパク質である上記（１７）〜（２０）のいずれかに記載の臓器送達性化合物。
（２３）　化学療法剤が、抗癌剤、抗炎症剤、抗血管形成剤および血管形成促進剤からなる群より選ばれるものである上記（２１）記載の臓器送達性化合物。
（２４）　粒子が、リポソーム、マイクロスフェアー、ナノスフェアーおよびミセルからなる群より選ばれる上記（２１）記載の臓器送達性化合物。
（２５）　画像化試薬が、蛍光物質または発光物質である上記（２１）記載の臓器送達性化合物。
（２６）　画像化試薬が、フルオレセイン誘導体である上記（２１）記載の臓器送達性化合物。
（２７）　放射線治療剤が、インジウム１１１、テクネチウム９９、ヨード１２３、ヨード１２５、ヨード１３１、クリプトン８１、キセノン３３およびガリウム６７からなる群より選ばれるものである上記（２１）記載の臓器送達性化合物。
（２８）　生理活性物質残基における生理活性物質がインスリン分泌促進剤またはβ細胞増殖因子である上記（１７）〜（２０）のいずれかに記載の臓器送達性化合物。
（２９）　生理活性物質残基における生理活性物質が免疫抑制剤である上記（１７）〜（２０）のいずれかに記載の臓器送達性化合物。
（３０）　オリゴ糖誘導体が、ＮｅｕＡｃα２−６Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃまたはＯ−アセチル（Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ）である上記（１７）〜（２９）のいずれかに記載の臓器送達性化合物。
（３１）　上記（１７）〜（３０）のいずれかに記載の臓器送達性化合物を含有する膵臓を構成する細胞の機能障害を伴う疾患、前立腺を構成する細胞の機能障害を伴う疾患または胸腺を構成する細胞の機能亢進や障害を伴う疾患の診断薬。
（３２）　膵臓を構成する細胞の機能障害を伴う疾患が、膵癌、急性膵炎、慢性膵炎または糖尿病であり、前立腺を構成する細胞の機能障害を伴う疾患が前立腺癌であり、胸腺を構成する細胞の機能亢進や障害を伴う疾患が自己免疫疾患、アレルギー、アトピー、喘息、花粉症、気道過敏症、ＨＩＶ感染症、慢性関節リウマチ、移植片−対−宿主疾患、インスリン依存性糖尿病または糸球体腎炎である上記（３１）記載の診断薬。
（３３）　上記（１７）〜（３０）のいずれかに記載の臓器送達性化合物を含有する膵臓を構成する細胞の機能障害を伴う疾患、前立腺を構成する細胞の機能障害を伴う疾患または胸腺を構成する細胞の機能亢進や障害を伴う疾患の治療剤。
（３４）　膵臓を構成する細胞の機能障害を伴う疾患が、膵癌、急性膵炎、慢性膵炎または糖尿病であり、前立腺を構成する細胞の機能障害を伴う疾患が前立腺癌であり、胸腺を構成する細胞の機能亢進や障害を伴う疾患が自己免疫疾患、アレルギー、アトピー、喘息、花粉症、気道過敏症、ＨＩＶ感染症、慢性関節リウマチ、移植片−対−宿主疾患、インスリン依存性糖尿病または糸球体腎炎である上記（３３）記載の治療剤。
（３５）　上記（１７）〜（３０）のいずれかに記載の臓器送達性化合物を含有する膵臓を構成する細胞の機能障害を伴う疾患、前立腺を構成する細胞の機能障害を伴う疾患または胸腺を構成する細胞の機能亢進や障害を伴う疾患の予防剤。
（３６）　膵臓を構成する細胞の機能障害を伴う疾患が、膵癌、急性膵炎、慢性膵炎または糖尿病であり、前立腺を構成する細胞の機能障害を伴う疾患が前立腺癌であり、胸腺を構成する細胞の機能亢進や障害を伴う疾患が自己免疫疾患、アレルギー、アトピー、喘息、花粉症、気道過敏症、ＨＩＶ感染症、慢性関節リウマチ、移植片−対−宿主疾患、インスリン依存性糖尿病または糸球体腎炎である上記（３５）記載の予防剤。
（３７）　生理活性物質を膵臓、胸腺、精巣および前立腺からなる群より選ばれる臓器に送達することができる臓器送達性化合物の製造のための、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃで表されるオリゴ糖（ＬＮｎＴ）または構造中にＬＮｎＴモチーフを有するオリゴ糖誘導体の使用。
（３８）　ＮｅｕＡｃα２−６Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃで表されるオリゴ糖誘導体。
（３９）　Ｏ−アセチル（Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ）で表されるオリゴ糖誘導体。
【００１４】
【発明の実施の形態】
以下、式（Ｉ）で表されるプローブをプローブ（Ｉ）という。
式（Ｉ）において、被験化合物残基における被験化合物としては、例えば単糖、二糖、オリゴ糖、アミノ酸、ペプチド、抗体フラグメント、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、輸送基質、ホルモン、脂質、合成低分子化合物等が挙げられ、好ましくはオリゴ糖が挙げられる。
【００１５】
単糖としては、例えばグルコース、フルクトース、ガラクトース、キシロース等の天然物由来のものまたはこれらの誘導体等が挙げられる。
二糖としては、例えばマルトース、スクロース、ラクトース、セロビオース等の天然物由来のものまたはこれらの誘導体等が挙げられる。
オリゴ糖としては、例えば天然オリゴ糖、合成オリゴ糖等が挙げられ、より具体的には、甜菜オリゴ糖、大豆オリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、乳果オリゴ糖が挙げられ、合成オリゴ糖はＷＯ９９／４０２０５等に示された方法に従って調製することが可能である。
【００１６】
アミノ酸としては、例えばグリシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−バリン、Ｌ−セリン等の天然アミノ酸またはその誘導体、それらの異性体であるＤ−アミノ酸、ノルロイシン等の異常アミノ酸、非天然アミノ酸等が挙げられる。
ペプチドとしては、例えば合成ペプチド、天然ペプチド、タンパク質、臓器もしくは組織等の分解物または抽出物等で、アミノ酸の２〜１００ｍｅｒ程度の鎖長のものが挙げられる。
【００１７】
抗体フラグメントとしては、例えば抗体をペプシン、パパイン等の酵素で消化して得られるＦａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２等のフラグメント、１本鎖抗体等が挙げられ、抗体としては免疫グロブリンの各クラス、サブクラス等が挙げられる。
ヌクレオチドとしては、例えばＡＴＰ、ＧＴＰ、ＣＴＰ、ＵＴＰ、これらのデオキシ体、ｃＡＭＰ等のプリンヌクレオチド、ピリミジンヌクレオチド、これらの誘導体等が挙げられる。
【００１８】
オリゴヌクレオチドとしては、前記ヌクレオチドの２〜１００ｍｅｒ程度の鎖長のものが挙げられる。
輸送基質とは、細胞膜等に存在する輸送蛋白の基質となる物質であり、例えばテトラサイクリン（ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎ）、クロラムフェニコール（ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ）、ビシクロマイシン（ｂｉｃｙｃｌｏｍｙｃｉｎ）、スルファチアゾール（ｓｕｌｆａｔｈｉａｚｏｌｅ）、マクロリド（ｍａｃｒｏｌｉｄｅ）、フルオロキノロン（ｆｌｕｏｒｏｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）、ローダミン（ｒｈｏｄａｍｉｎｅ）、アミロリド（ａｍｉｌｏｒｉｄｅ）、モノアミン（ｍｏｎｏａｍｉｎｅ）、プロスタグランジン（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ）、オーガニックカチオン（ｏｒｇａｎｉｃ　ｃａｔｉｏｎ）、オーガニックアニオン（ｏｒｇａｎｉｃ　ａｎｉｏｎ）等が挙げられる。
【００１９】
ホルモンとしては、例えばグルココルチコイド、エストロゲン、アンドロゲン等のステロイドホルモン、アドレナリン、ノルアドレナリン、トリヨードチロニン等のアミノ酸誘導体ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン放出因子、甲状腺刺激ホルモン放出因子、ソマトスタチン、黄体形成ホルモン、成長ホルモン、ロイシンエンケファリン、オキシトシン、バソプレシン、グルカゴン、インスリン、セクレチン、カルシトニン等のペプチドホルモン等が挙げられる。
【００２０】
脂質としては、例えば天然脂質、合成脂質等が挙げられ、より具体的にはホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン等のリン脂質、スフィンゴ脂質、レシチン、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、糖脂質、これらの誘導体等が挙げられる。
合成低分子化合物としては、例えばＡｌｄｒｉｃｈ等から供給されるあらゆる化合物が挙げられる。
【００２１】
なお、これらの被験化合物は単独でまたは２つ以上混合して用いられる。
生体適合性高分子残基における生体適合性高分子としては、プローブの生体内安定性の向上に寄与するものが好ましく、例えばポリアルキレングリコール類、多糖類、スチレンマレイン酸コポリマー、ジビニルエーテル無水マレイン酸コポリマー、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド等が挙げられ、好ましくはポリアルキレングリコール類が挙げられる。
【００２２】
ポリアルキレングリコール類としては、例えば（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｑ、（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）ｑ、（ＯＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２）ｑ、（ＯＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２）ｑ（式中、ｑは任意の正の整数を表す）、（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒ−（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）ｓ（式中、ｒおよびｓは同一または異なって、任意の正の整数を表す）、（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒａ−［ＯＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２］ｓａ（式中、ｒａおよびｓａはそれぞれ前記ｒおよびｓと同義である）、（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒｂ−［ＯＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）　ＣＨ２］ｓｂ（式中、ｒｂおよびｓｂはそれぞれ前記ｒおよびｓと同義である）等が挙げられる。
【００２３】
多糖類として好ましくは、プルラン、マンナン、デキストラン、キトサン等が挙げられる。
リンカーの原料としては、反応性を有する基を複数有するものであればいかなるものも包含され、例えばアルブミン、アビジン、グリーンフルオレッセントプロテイン、イエローフルオレッセントプロテイン、シアンフルオレッセントプロテイン、ブルーフルオレッセントプロテイン、ポリリジン、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、リポソーム等が挙げられる。
【００２４】
画像化試薬残基における画像化試薬としては、例えば蛍光物質、発光物質等が挙げられるが、好ましくは蛍光物質が挙げられる。蛍光物質としては、フルオレセイン誘導体、ローダミン誘導体、インドシアニン誘導体、４，４−ジフルオロ−４−ボーラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン（４，４−ｄｉｆｌｕｏｒｏ−４−ｂｏｒａ−３ａ，４ａ−ｄｉａｚａ−ｓ−ｉｎｄａｃｅｎｅ）誘導体、クマリン誘導体、ナフタレン誘導体、ピレン誘導体、アントラセン誘導体等が挙げられる。発光物質としては、ルミノール、イソルミノール、アミノベンジジン、アミノベンジジンテトラハイドロクロライド、シュウ酸クロリド、シュウ酸エステル、ルシフェリン、アクオリン、アクリジニウム、セレンテラジン、４−（５，６−ジメトキシ−２−ベンゾチアゾリル）フタリルヒドラジド、１０−メチル−９−（フェノキシカルボニル）アクリジニウム　フルオロスルホネート、これらの誘導体等が挙げられる。なおＢ１自身が蛍光等を発する場合、すなわちグリーンフルオレッセントプロテイン、イエローフルオレッセントプロテイン、シアンフルオレッセントプロテイン、ブルーフルオレッセントプロテイン等の残基である場合、画像化試薬残基Ｆ１はなくてもよい（すなわち　ｎ＝０）。
【００２５】
プローブ（Ｉ）は、下記の方法で製造することができる。
式（Ｉ）において、Ｓ１とＬ１、Ｌ１とＢ１、Ｂ１とＦ１との結合は、通常の有機合成法で知られている反応を組み合わせて行うことができる［日本化学会編、有機合成Ｉ〜ＩＶ、丸善（１９９０年）］。
式（Ｉ）においてＳ１、Ｌ１、Ｂ１およびＦ１をそれぞれ互いに結合させるためには、例えばＳ１、Ｌ１、Ｂ１およびＦ１のそれぞれに対応する原料に含まれる官能基をそのまま利用してもよいし、また適当な試薬を用いて、該官能基をより反応性の高い、または異なる反応特異性を有する官能基に変換してもよい。
【００２６】
Ｓ１とＬ１、Ｌ１とＢ１、およびＢ１とＦ１の間の結合様式としては、例えばエーテル（−Ｏ−）、アミノ（−ＮＲ−）（式中、Ｒは水素原子、低級アルキルまたは低級アルカノイルを表す）、チオエーテル（−Ｓ−）、エステル（−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−）、アミド（−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＡ−）（式中、ＲＡは前記Ｒと同義である）、チオエステル（−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−）、カーボネート（−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−）、カルバメート（−ＮＲＢＣ（＝Ｏ）Ｏ−）（式中、ＲＢは前記Ｒと同義である）、チオカーボネート（−ＳＣ（＝Ｏ）Ｏ−）、スルホンアミド（−ＮＲＣＳ（＝Ｏ）２−）（式中、ＲＣは前記Ｒと同義である）、ジスルフィド（−ＳＳ−）結合等が挙げられる。ここで、低級アルキルおよび低級アルカノイルの低級アルキル部分としては、例えば炭素数１〜８の直鎖または分岐状のアルキル、より具体的にはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル等が挙げられる。
【００２７】
Ｓ１は、Ｌ１、（Ｌ１）ｍ−Ｂ１または（Ｌ１）ｍ−Ｂ１（Ｆ１）ｎのいずれの残基に対応する化合物中のＬ１部に導入してもよく、Ｓ１−Ｌ１は、Ｂ１またはＢ１−（Ｆ１）ｎのいずれの残基に対応する化合物中のＢ１部に導入してもよく、Ｆ１は、Ｂ１、（Ｌ１）ｍ−Ｂ１または（Ｓ１−Ｌ１）ｍ−Ｂ１のいずれの残基に対応する化合物中のＢ１部に導入してもよい。
式（Ｉ）のうち、Ｂ１に対応する原料が複数のアミノを有し、Ｌ１に対応する原料が複数の水酸基を有する場合、例えば次の反応工程でプローブ（Ｉ）を製造することができる。なお、プローブ（Ｉ）の製造法はこれらに限定されるものではない。
【００２８】
【化１】
2004138397.tif 000002
【００２９】
［式中、Ｌ１’はＬ１の部分構造を表し、Ｓ１’はＳ１の部分構造を表し、Ｂ１’はＢ１の部分構造を表し、Ｆ１’はＦ１の部分構造を表し、Ｒ２は低級アルキルまたは低級アルカノイルを表し、Ｒ４は脱離基を表し、Ｒ１およびＲ３は同一または異なって低級アルキレン、低級アルケニレン、低級アルキニレンまたは結合を表し、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は同一または異なって、結合、Ｏ、Ｓ、アルキレン、Ｏ（ＣＨ２）ｔａ（式中、ｔａは１〜８の整数を表す）、（ＣＨ２）ｔｂＯ（式中、ｔｂは前記ｔａと同義である）、ＮＲ５（式中、Ｒ５は前記Ｒと同義である）、Ｎ＝ＣＲ５ａ（式中、Ｒ５ａは前記Ｒ５と同義である）、Ｃ（Ｒ５ａ）＝Ｎ（式中、Ｒ５ａは前記Ｒ５と同義である）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、ＯＣ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５ｂ（式中、Ｒ５ｂは前記Ｒ５と同義である）、ＮＲ５ｂＣ（＝Ｏ）（式中、Ｒ５ｂは前記Ｒ５と同義である）、Ｃ（＝Ｏ）Ｓ、ＳＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ、ＮＲ５ｃＣ（＝Ｏ）Ｏ（式中、Ｒ５ｃは前記Ｒ５と同義である）、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ５ｃ（式中、Ｒ５ｃは前記Ｒ５と同義である）、ＳＣ（＝Ｏ）Ｏ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｓ、ＮＲ５ｄＳ（＝Ｏ）２（式中、Ｒ５ｄは前記Ｒ５と同義である）、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ５ｄ（式中、Ｒ５ｄは前記Ｒ５と同義である）またはＳＳを表す］
【００３０】
低級アルキルおよび低級アルカノイルは、それぞれ前記と同義である。脱離基としては、スクシンイミドオキシ、置換もしくは非置換のアリールオキシ、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ等が挙げられる。ここでアリールオキシのアリール部分としては炭素数６〜１４のアリール、例えばフェニル、ナフチル、ビフェニル、アントリル等が挙げられ、置換アリールオキシにおける置換基としては、同一または異なって置換数１〜３の、例えば、水酸基、カルボキシ、シアノ、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等が挙げられる。低級アルキレンは、前記低級アルキルから水素原子を１つ除いた基と同義であり、低級アルケニレンとしては、例えば炭素数２〜６の直鎖または分岐状のアルケニレン、より具体的にはビニレン、アリレン、１−プロペニレン、メタクリレン、クロチレン、１−ブテニレン、３−ブテニレン、２−ペンテニレン、４−ペンテニレン、２−ヘキセニレン、５−ヘキセニレン等が挙げられ、低級アルキニレンとしては、例えば炭素数２〜６の直鎖または分岐状のアルキニレン、より具体的にはエチニレン、プロピニレン、ブチニレン、ペンチニレン、ヘキシニレン等が挙げられる。
【００３１】
プローブ（Ｉａ）は、例えば次の反応工程に従い製造することができる。
（工程　１）
水酸基を２個以上有する生体適合性高分子［化合物（ａ）］を、水、塩化メチレン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等の適当な溶媒に溶解または懸濁し、触媒量または１〜２０％の塩基存在下、１〜３０モル当量のアクリル酸、アクリルアミド、アクリロニトリル等と、−２０〜１５０℃で１時間〜１０日間反応させることにより、カルボキシル基を有する化合物（ｂ）が得られる。このとき塩基としては、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水素化ナトリウム等が用いられる。
【００３２】
化合物（ｂ）は、化合物（ａ）を無水状態で塩化メチレン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等の適当な溶媒に溶解または懸濁し、１〜５０モル当量の水素化ナトリウム、酸化亜鉛、水酸化ナトリウム、トリエチルアミン等の適当な塩基の存在下、１〜５０モル当量相当のα−ハロゲン化酢酸エステルと、−２０〜１５０℃で１時間〜数日間反応させた後、加水分解して得ることもできる。
【００３３】
さらに、化合物（ｂ）は、化合物（ａ）を水、塩化メチレン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等の適当な溶媒に溶解または懸濁し、１〜５０モル当量の水素化ナトリウム、酸化亜鉛、水酸化ナトリウム、トリエチルアミン等の適当な塩基の存在下、１〜５０モル当量のスクシンイミジルカーボネート、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメート、カルボニルジイミダゾール等の活性化剤と、−２０〜１００℃で１時間〜１０日間反応させて活性化し、その後、γ−アミノ酪酸、グリシン、β−アラニン等のアミノ酸またはそれらの誘導体と反応させることによっても得られる。
【００３４】
また、化合物（ａ）を前記同様の塩基存在下、無水コハク酸、無水グルタル酸等の酸無水物と反応させることによっても化合物（ｂ）を製造することができる。
化合物（ｂ）は、陰イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、二相分配、再結晶等の既知の方法で、任意の純度で精製、単離することができる。
（工程　２）
化合物（ｂ）を、メタノール、エタノール等のアルコール、またはこれらのアルコールを大過剰モル当量含む塩化メチレン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等の適当な溶媒に溶解または懸濁し、触媒量の酸存在下、−２０〜１５０℃で１時間〜１０日間反応させることにより、化合物（ｃ）が得られる。このとき酸としては、塩酸、硫酸等が用いられる。
【００３５】
化合物（ｂ）を、メタノール、エタノール等のアルコールを大過剰モル当量含む塩化メチレン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等の適当な溶媒に溶解または懸濁し、１〜３０モル当量のトリメチルシリルジアゾメタンと−２０〜１５０℃で１時間〜１０日間反応させることによっても、化合物（ｃ）が得られる。
（工程　３）
化合物（ｄ）は、化合物（ｃ）を水、塩化メチレン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等の適当な溶媒に溶解または懸濁し、１〜５０モル当量の水素化ナトリウム、酸化亜鉛、水酸化ナトリウム、トリエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン等の適当な塩基の存在下、１〜５０モル当量のスクシンイミジルカーボネート、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメート、カルボニルジイミダゾール等の活性化剤と、−２０〜１００℃で１時間〜１０日間反応させて活性化し、その後、１モル当量〜過剰量のエチレンジアミンやプロピレンジアミン等のジアミン類と適当な塩基存在下で反応させることによって得られる。
【００３６】
また、化合物（ｄ）は、化合物（ｃ）を水、塩化メチレン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等の適当な溶媒中、触媒量または１〜２０％の水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水素化ナトリウム等の塩基存在下、１〜３０モル当量のアクリロニトリル等と、−２０〜１５０℃で１時間〜数日間反応させた後、適当な還元剤を作用させることにより得られる。還元剤としては、水素化リチウムアルミニウム、水素化ホウ素ナトリウム、水素化シアノホウ素ナトリウム、水素等が用いられる。
【００３７】
化合物（ｄ）は、化合物（ｃ）を水、塩化メチレン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等の適当な溶媒に溶解または懸濁し、１〜３０モル当量の水素化ナトリウム、酸化亜鉛、水酸化ナトリウム、トリエチルアミン、カリウムナフタレン等の適当な塩基の存在下、水酸基当たり１〜３モル当量のハロゲン化トシルを加えて、−２０〜１５０℃で１時間〜数日間反応させた後、５モル当量〜過剰量のエチレンジアミン、プロピレンジアミン等のジアミン類を適当な塩基存在下で反応させることによっても得られる。
（工程　４）
化合物（ｅ）は、化合物（ｄ）をホルミル基を含む化合物と共に水、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等の適当な溶媒に溶解または懸濁し、適当な還元剤の存在下、−２０〜１５０℃で１時間〜数日間反応させることによって得られる。還元剤としては、水素、水素化シアノホウ素ナトリウム、ボラン−ピリジン錯体、ボラン−ジメチルアミン錯体、ボラン−トリエチルアミン錯体等が用いられる。
【００３８】
（工程　５）
化合物（ｆ）は、例えば以下の２段階の反応で得ることができる。化合物（ｅ）を水、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等の適当な溶媒に溶解または懸濁し、水素化ナトリウム、酸化亜鉛、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、トリエチルアミン等の適当な塩基の存在下、−２０〜１００℃で１時間〜１０日間処理することにより、Ｒ２を水素原子に変換する。その後、１〜１０モル当量のＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド等の縮合剤存在下、１〜１０モル当量のＮ−ヒドロキシスクシンイミド、置換もしくは非置換のアリールアルコール、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド等を、ジメチルホルムアミド、塩化メチレン、ジメチルスルホキシド等の適当な溶媒中、−２０〜１００℃で１〜２４時間反応させることによって化合物（ｆ）を得ることができる。
【００３９】
アリールアルコールのアリール部分は前記アリールオキシのアリール部分と同義であり、置換アリールアルコールにおける置換基としては、前記置換アリールオキシにおける置換基と同様のものが挙げられる。
（工程　６）
複数のアミノ基を有する化合物［化合物（ｇ）］を水、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等の適当な溶媒に溶解または懸濁し、フルオレセインイソチオシアナート、フルオレセインスクシンイミジルエステル、ローダミンスルホクロリド等のアミノ基に反応性を有する適当な画像化試薬（Ｆ１）と、−２０〜１００℃で１〜２４時間反応させることによって化合物（ｈ）を得ることができる。
（工程　７）
プローブ（Ｉａ）は、化合物（ｆ）と化合物（ｈ）を水、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等の適当な溶媒中、水素化ナトリウム、酸化亜鉛、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、トリエチルアミン等の適当な塩基の存在下、−２０〜１００℃で１時間〜１０日間反応させることにより得ることができる。
【００４０】
上記プローブ（Ｉ）をマウス、ラット等の動物に、例えば静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、経鼻、経肺または経口投与し、望ましくは静脈内投与し、一定時間後、例えば１分〜数十日間後に生きたまま、または各種臓器、組織または細胞を取り出して、例えば冷却電荷結合素子カメラおよび励起光源を備えた暗箱内に静置し、生じる蛍光画像または発光画像を観察することによってターゲティングリガンドを見出すことができる。すなわち、動物特定部位に集積する化合物をスクリーニングすることができる。
【００４１】
また、同様にして生体内特定臓器、特定細胞等に集積した該プローブまたはリガンドを定量することができる。
構造中にＬＮｎＴモチーフを有するオリゴ糖誘導体としては、上述のスクリーニング方法を用いて、オリゴ糖ライブラリーの中からターゲティングリガンドの探索を行い、例えば静脈内投与で膵臓、胸腺、精巣、前立腺等の臓器に特異的に集積し、ＬＮｎＴモチーフを有するものであれば、いかなるものも包含されるが、例えば、ＮｅｕＡｃα２−６Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（６’−ＳＬＮｎＴ）、Ｏ−アセチル（Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ）（Ｏ−アセチル−ＬＮｎＴ）等で表されるオリゴ糖誘導体等が挙げられる。なお、式中、最も左に位置する糖は非還元末端糖を表し、最も右に位置する糖は還元末端糖誘導体を表す。
【００４２】
ＬＮｎＴおよびＬＮｎＴをモチーフとするオリゴ糖誘導体は、ＷＯ９９／４０２０５に記載の方法に準じて合成できる。
本発明の臓器送達性化合物としては、ＬＮｎＴまたは構造中にＬＮｎＴモチーフを有するオリゴ糖誘導体残基と生理活性物質残基とを含む化合物であって、動物に投与した場合、膵臓、胸腺、精巣および前立腺からなる群より選ばれる一つ以上の臓器に特異的に集積し、該生理活性物質を該臓器に送達することができる化合物であれば、いかなるものも包含されるが、式（ＩＩ）
［Ｓ２−（Ｌ２）ｕ］ｔ−Ｂ２　　　（ＩＩ）
（式中、Ｓ２、Ｌ２、Ｂ２、ｕおよびｔはそれぞれ前記と同義である）で表される化合物［以下、化合物（ＩＩ）と略す］が好ましい。
【００４３】
Ｓ２とＬ２、およびＬ２とＢ２との化学的結合は共有結合または非共有結合のいずれでもよい。
式（ＩＩ）において、生体適合性高分子残基は、前記と同義である。
生理活性物質残基における生理活性物質としては、化学療法剤、毒素、放射線治療剤、放射線感受性試薬、アンチセンス化合物、サイトカイン、酵素、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ホルモン、同種抗原、異種抗原、遺伝子治療用ＤＮＡ、画像化試薬、これらのうちの１つまたは２つ以上を含有する粒子等が挙げられる。
【００４４】
化学療法剤とは、細胞に接触しまたはその後取り込まれることにより、細胞死を誘導もしくは阻害する薬剤、細胞分裂を誘導もしくは阻害する薬剤、細胞分化を誘導もしくは阻害する薬剤、または細胞機能を増強もしくは抑制する薬剤を指す。化学療法剤の例としては、メトトレキセート（アメトプテリン）［ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ　（ａｍｅｔｈｏｐｔｅｒｉｎ）］、ドキソルビシン（アドリアマイシン）［ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ　（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）］、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、シトシンアラビノシド（ｃｙｔｏｓｉｎａｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ）、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、５−４フルオロウラシル（５−４　ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、クロランブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、シス−プラチナム（ｃｉｓ−ｐｌａｔｉｎｕｍ）、ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）、マイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）、ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）、プロチオニン（ｐｕｒｏｔｈｉｏｎｉｎ）、マクロモマイシン（ｍａｃｒｏｍｏｍｙｃｉｎ）、１，４−ベンゾキノン（１，４−ｂｅｎｚｏｑｕｉｎｏｎｅ）誘導体、トリニモン（ｔｒｉｎｉｍｏｎ）等が挙げられる。
【００４５】
毒素とは、細胞に接触しまたはその後取り込まれることにより、細胞死を誘導する物質を指す。毒素の例としては、リシン（ｒｉｃｉｎ）、リシンＡ鎖（ｒｉｃｉｎ　Ａ　ｃｈａｉｎ）、シュードモナス外毒素（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｅｘｏｔｏｘｉｎ）、ジフテリア毒素（ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ　ｔｏｘｉｎ）、クロストリジウム・パーフリンゲンス　ホスフォリパーゼＣ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ　ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ　Ｃ）、牛膵臓リボヌクレアーゼ（ｂｏｖｉｎｅ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ）、ポークウイード抗ウイルスタンパク質（ｐｏｋｅｗｅｅｄ　ａｎｔｉｖｉｒａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ）、アブリン（ａｂｒｉｎ）、アブリンＡ鎖（ａｂｒｉｎ　Ａ　ｃｈａｉｎ）、コブラ毒素（ｃｏｂｒａ　ｖｅｎｏｍ　ｆａｃｔｏｒ）、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、サポリン（ｓａｐｏｒｉｎ）、モデシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）、ビスクミン（ｖｉｓｃｕｍｉｎ）、ボルケンシン（ｖｏｌｋｅｎｓｉｎ）等が挙げられる。
【００４６】
放射線治療剤とは、細胞に接触し、またはその後取り込まれることにより、細胞死を誘導する放射性核種を含む薬剤を指す。放射性核種の例としては、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１０９Ｐｄ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂ、３２Ｐ、３３Ｐ、７１Ｇｅ、７７Ａｓ、１０３Ｐｂ、１０５Ｒｈ、１１１Ａｇ、１１９Ｓｂ、１２１Ｓｎ、１３１Ｃｓ、１４３Ｐｒ、１６１Ｔｂ、１７７Ｌｕ、１９１Ｏｓ、１９３ＭＰｔ、１９７Ｈｇ等が挙げられる。
【００４７】
放射線感受性試薬とは、電離放射線による傷害効果に対する細胞の感受性を増強させる試薬を指す。放射線感受性試薬の使用により、放射線照射量を減らすことができる。放射線感受性試薬の例としては、ニトロイミダゾール（ｎｉｔｒｏｉｍｉｄａｚｏｌｅ）、メトロニダゾール（ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ）、ミソニダゾール（ｍｉｓｏｎｉｄａｚｏｌｅ）等が挙げられる。
【００４８】
アンチセンス化合物とは、ＤＮＡまたはＲＮＡと複合体を形成することによりＤＮＡの複製またはＲＮＡの転写を阻害する分子を指す。
サイトカインとは、生体諸組織の細胞に由来し、特定の細胞に接触し、またはその後取り込まれることにより、免疫応答の発現や調節等細胞間相互作用に関与するタンパク質を指す。サイトカインの例としては、インスリン様成長因子（ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ）、上皮細胞成長因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ）、線維芽細胞増殖因子（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ）、神経成長因子（ｎｅｒｖｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ）、血小板由来増殖因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ）、コロニー刺激因子（ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ）、再生遺伝子タンパク質（ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ　ｇｅｎｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ）、インターロイキン（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ）、インターフェロン（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ）、腫瘍壊死因子（ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ）等が挙げられる。
【００４９】
酵素とは、生体内の種々の化学反応を触媒するタンパク質を指す。酵素の例としては、スーパーオキシド・ジスムターゼ（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）、ヘム・オキシゲナーゼ（ｈｅｍｅ　ｏｘｙｇｅｎａｓｅ）、グルコキナーゼ（ｇｌｕｃｏｋｉｎａｓｅ）等が挙げられる。
抗体とは、特定の細胞表面分子に接触し、またはその後細胞に取り込まれることにより、細胞死を誘導もしくは阻害するタンパク質、細胞分裂を誘導もしくは阻害するタンパク質、細胞分化を誘導もしくは阻害するタンパク質、細胞機能を増強もしくは抑制するタンパク質、または体液中に存在する分子と結合することにより該分子の機能を阻害するタンパク質を指す。
【００５０】
抗体フラグメントは、前記抗体を酵素消化して得られる断片であり、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、遺伝子組換えにより可変領域同士を結合した単鎖抗体等が挙げられる。
ペプチドとは、アミノ酸の２〜１００ｍｅｒ程度の鎖長のものからなり、例えば合成的に得るか、天然物より抽出等により得るか、あるいはタンパク質、臓器もしくは組織等の分解物または抽出物等より得られるもの等を指す。
【００５１】
ホルモンとは、動物体内の限定された部分（一般には内分泌腺）で生産され、導管を経ずに直接体液中に分泌されて体内の他の場所に運ばれ、そこにある特定の器官（標的器官）、組織、細胞等の活動に一定の変化を与える化学物質を指す。ホルモンの例としては、インシュリン、グルカゴン、下垂体ホルモン、副甲状腺ホルモン、アドレナリン、甲状腺ホルモン、性ホルモン、副腎皮質ホルモン等が挙げられる。
【００５２】
同種または異種抗原とは、生体内で免疫応答を誘導またはその後免疫寛容を誘導する化学物質を指す。
遺伝子治療用ＤＮＡとは、疾患の治療に用いるＤＮＡであって、例えばアンチセンスＤＮＡ、センスＤＮＡまたは構造遺伝子を含有し発現させることが可能なＤＮＡ等を指す。
【００５３】
画像化試薬とは、細胞に接着し、またはその後取り込まれることにより、特定の臓器、器官、組織、細胞の形態または内部現象を可視化する試薬を指す。画像化方法としては、例えば蛍光検出、発光検出、可視光検出等が挙げられる。画像化試薬としては、例えばフルオレセイン誘導体、ローダミン誘導体、インドシアニン誘導体、４，４−ジフルオロ−４−ボーラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン（４，４−ｄｉｆｌｕｏｒｏ−４−ｂｏｒａ−３ａ，４ａ−ｄｉａｚａ−ｓ−ｉｎｄａｃｅｎｅ）誘導体、クマリン誘導体、ナフタレン誘導体、ピレン誘導体、アントラセン誘導体等が挙げられる。
【００５４】
粒子としては、例えばリポソーム、マイクロスフェアー、ナノスフェアー、高分子ミセル等が挙げられる。
臓器送達性化合物の製造、具体的にはＳ２とＬ２との結合、およびＬ２とＢ２との結合等に関しては、プローブ（Ｉ）の調製法に準じて実施可能である。
臓器送達性化合物は、投与形態に適した塩または水和物として用いることもでき、これらも本発明の臓器送達性化合物に包含される。臓器送達性化合物の塩は、例えば目的とする任意の塩を含有する溶媒中に臓器送達性化合物またはその溶液等を添加後、溶媒を除去することで調製可能である。溶媒の除去方法としては、例えば自然乾燥、減圧乾燥、加熱乾燥、再結晶、溶媒沈殿、凍結乾燥等が挙げられる。
【００５５】
臓器送達性化合物の水和物は、例えば臓器送達性化合物を含有する水溶液より溶媒を除去することによって得られる。溶媒の除去方法としては前記と同様の方法が挙げられる。
化合物（ＩＩ）の投与方法は、通常の医薬組成物を投与する方法であればいかなる方法でもよい。投与方法として具体的には、静脈内投与、動脈内投与、経口投与、経肺投与、経鼻投与、腹腔内投与、経皮投与、皮下投与、腫瘍が存在する臓器の血流への局所投与、腫瘍自身への局所投与等が挙げられる。
【００５６】
化合物（ＩＩ）は、製薬上許容される経口用または非経口用媒介物と組み合わされた溶液、サスペンジョン、エマルジョン、凍結乾燥製剤等として医薬組成物に供することができる。該媒介物としては、水、塩水、リンガー液、デキストロース溶液、５％ヒト血清アルブミン、リポソーム等が挙げられる。該媒介物は等張性を保持するために塩化ナトリウム、マンニトール等を含んでいてもよいし、化学安定性を保持するために緩衝液、ごま油、オリーブ油、大豆油等の油類、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル類等の防腐剤、ストロベリーフレーバー、ペパーミント等のフレーバー類、澱粉等の崩壊剤、乳糖、マンニット等の賦形剤、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、ヒドロキシプロピルセルロース等の結合剤、脂肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤、ソルビット、果糖等の糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等のグリコール類等を含んでいてもよい。該医薬組成物は通常用いられている方法に従って滅菌することができる。例えば注射投与に適した非経口用該医薬組成物は、０．９％塩化ナトリウム水溶液に化合物（ＩＩ）を１．５％の重量比で溶解することによって調製することができる。該医薬組成物は１日に単回、または複数回投与されうる。該医薬組成物は単一の治療薬として、または他の治療薬と組み合わせて投与されうる。該医薬組成物による治療は、従来の治療と組み合わせられ、連続または同時投与によって行うこともできる。
【００５７】
化合物（ＩＩ）は、製薬上許容される伝統的な割賦剤、基材等と組み合わされた錠剤、ピル、カプセル等としても医薬組成物に供することができる。該割賦剤または基材は、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム等の賦形剤を含んでいてもよい。
化合物（ＩＩ）は経皮投与される場合、クリーム、軟膏、ローション、溶液、ゲル等として用いられる。
【００５８】
以下、本発明の実施例を示すが、本発明はこれらにより限定されるものではない。
【００５９】
【実施例】
実施例１　　動物の特定部位に集積する化合物のスクリーニング用プローブの作製
スクリーニング用プローブ作製工程を下記に示す。
【００６０】
【化２】
2004138397.tif 000003
【００６１】
（式中、ｐはＢＳＡへの結合数を表し、Ｒ６は、水素原子、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３、ＮｅｕＡｃα２−６Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３−またはＯ−アセチル（Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３）を表し、ＢＳＡは、牛血清アルブミンまたはその残基を表し、ＦＩＴＣは、フルオレセイン・イソチオシアネート（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ　ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）またはその残基を表し、ＰＥＧは、ポリエチレングリコール残基を表す）
（工程１）
ＰＥＧ　５０ｇ［平均分子量９，０００、日本油脂（株）製］を８％水酸化カリウム水溶液（約１００ｍｌ）に溶解し、アクリルアミド　２３．７ｇを添加し、室温で２日間攪拌した。その後８％水酸化カリウム水溶液（約１００ｍｌ）を添加し、アルカリ性として終夜攪拌した。反応液を酸性（ｐＨ約１．０）とした後、クロロホルムで抽出した。クロロホルム層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮した。得られた残渣を少量のクロロホルムに溶解して、ジエチルエーテルに滴下した。生成した白色沈殿を濾過により回収し、減圧下で乾燥して化合物１を粗生成物として４１ｇ得た（収率８２％）。この粗生成物３２ｇを１０００ｍｌのＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆ．Ｆ．（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）で精製し、化合物１を１２．９ｇ（収率４０％）得た。
化合物１：１Ｈ−ＮＭＲ分析（ＣＤＣｌ３，　３００ＭＨｚ）
δ（ｐｐｍ）：　２．４９　（ｔ，　２Ｈ，　Ｊ＝５．９），　３．６４　（ｓ，　４ｎＨ）
【００６２】
（工程２）
１０ｇの化合物１をメタノール２０ｍｌと脱水アセトニトリル１８０ｍｌの混合溶液に溶解し、０℃に冷却した。２ｍｏｌ／ｌのトリメチルシリルジアゾメタンを含むヘキサン溶液１．５ｍｌを滴下し、そのまま０℃で２時間攪拌した。反応溶液を減圧濃縮し、得られた残渣を少量のクロロホルムに溶解して、ジエチルエーテルに滴下した。生成した白色沈殿を濾過により回収し、減圧下で乾燥して化合物２を９．３ｇ得た（収率９３％）。
化合物２：１Ｈ−ＮＭＲ分析（ＣＤＣｌ３，　３００ＭＨｚ）
δ（ｐｐｍ）：　２．６０　（ｔ，　２Ｈ，　Ｊ＝６．４），　３．６４　（ｓ，　４ｎＨ）
【００６３】
（工程３）
ラヌチ（Ｒａｎｕｃｃｉ）らの方法［シンセティック・コミニュケーションズ　（Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ），　２０（１９），　２９５１−２９５７　（１９９０）］に従って化合物２から化合物３を合成した。
化合物３：１Ｈ−ＮＭＲ分析（ＣＤＣｌ３，　３００ＭＨｚ）
δ（ｐｐｍ）：　１．６３　（ｍ，　２Ｈ），　２．６０　（ｔ，　２Ｈ，　Ｊ＝６．５），　２．７８　（ｔ，　２Ｈ，　Ｊ＝６．７），　３．２７　（ｑ，　２Ｈ，　Ｊ＝６．４），　３．６４　（ｓ，　４ｎＨ），　４．２１　（ｔ，　２Ｈ，　Ｊ＝４．８），　５．３５　（ｓ，　１Ｈ）
【００６４】
（工程４）
オリゴ糖Ａ（ＬＮｎＴ）とオリゴ糖Ｂ（６’−ＳＬＮｎＴ）およびオリゴ糖Ｄ（Ｏ−アセチル−ＬＮｎＴ）をＷＯ９９／４０２０５に記載の方法に準じて合成した。また、オリゴ糖Ｃ（ラクトース：Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ）としては市販品（国産化学社製）を使った。カバクンガン（Ｃａｂａｃｕｎｇａｎ）らの方法［アナリティカル・バイオケミストリー　（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），　１２４，　２７２−２７８　（１９８２）］に従ってオリゴ糖Ａ、Ｂ、ＣおよびＤをそれぞれ化合物３に導入して化合物４Ａ、４Ｂ、４Ｃおよび４Ｄを得た。化合物４Ａ、４Ｂ、４Ｃおよび４Ｄの精製は、反応液を水で平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−２５（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）に通塔して行った。
【００６５】
化合物４Ａ、４Ｂ、４Ｃおよび４Ｄの末端カルボン酸をバックマン（Ｂｕｃｋｍａｎｎ）らの方法［マクロモレキュラー・ケミストリー　（Ｍａｋｒｏｍｏｌ．　Ｃｈｅｍ．），　１８２，　１３７９−１３８４　（１９８１）］に従ってエステル化し、それぞれ化合物５Ａ、５Ｂ、５Ｃおよび５Ｄを得た。
１７ｍｇのＢＳＡを５７５μｌの１５０ｍｍｏｌ／ｌリン酸水素二ナトリウム水溶液に溶解し、２５℃に設定した。ＦＩＴＣ（同仁化学社製）を１．０ｍｇ含む４．４ｍｌの１５０ｍｍｏｌ／ｌリン酸水素二ナトリウム水溶液を滴下し、２５℃で１時間静置した。反応液を５０ｍｍｏｌ／ｌホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．５）で平衡化したＰＤ−１０カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）に通塔し、化合物６を得た。ＦＩＴＣ導入数（ｎ）はジョバギイ（Ｊｏｂｂａｇｙ）らの方法［バイオキミカ・エ・バイオフィジカ・アクタ　（Ｂｉｏｃｈｉｍ．　Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ａｃｔａ．），
１２４，　１６６−１７５　（１９６６）］に従って、５と決定された。
【００６６】
１．５ｍｇの化合物６を含む５５５μｌの５０ｍｍｏｌ／ｌホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．５）を氷冷し、４７ｍｇの化合物５Ａ、５Ｂ、５Ｃおよび５Ｄをそれぞれ添加し、５℃で終夜攪拌した。反応液を等張リン酸緩衝液１０ｍｌで希釈し、分画分子量１００，０００のウルトラフリー（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ社製）を用いて濃縮し、スクリーニング用プローブ７Ａ、７Ｂ、７Ｃおよび７Ｄを得た。プローブ７Ａ、７Ｂ、７Ｃおよび７Ｄのタンパク質換算濃度（０．１ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌ）はゴナール（Ｇｏｎａｌｌ）らの方法［ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー　（Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．），　１７７，　７５１　（１９４９）］に従って決定し、ＰＥＧ導入数（平均結合数５〜４５）はハイネス（Ｈａｙｎｅｓ）らの方法［バイオケミカル・ジャーナル　（Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｊ．），　１２４，　５８１　（１９７１）］に従って決定した。さらにフィルター（０．２２μｍ）滅菌処理し、マウス投与用サンプルとした。
【００６７】
化合物４Ａの末端がオリゴ糖の代わりにメチルであるｍＰＥＧ［平均分子量９，０００、日本油脂（株）製］を用いて、化合物４Ａよりプローブ７Ａを製造するのと同様の方法で、プローブ７Ａの末端がオリゴ糖の代わりにメチルであるプローブＡを製造し、対照化合物とした。
【００６８】
実施例２　　ラクトースを含むスクリーニング用プローブ７Ｃのｉｎ　ｖｉｖｏ評価
ラクトースは肝集積性を示すことが知られている。このラクトースをポジティブコントロールリガンドとして用い、スクリーニング用プローブの部位特異的集積性が蛍光検出できるかどうか検討した。
【００６９】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（オス、８週齢）に等張リン酸緩衝液（ＰＢＳ）、またはタンパク質換算で１．０ｍｇ／ｋｇ相当のプローブＡまたはプローブ７Ｃを尾静脈内投与した。１０分後に放血死させ、肝臓を取り出し、蛍光画像を観察した。なお、放血死させる１０時間以上前からマウスは絶食させた。
蛍光測定は下記の条件で行った。
【００７０】
測定システム：ルミノ・イメージアナライザーＬＡＳ−１０００（富士フィルム社製）
レンズ：ＵＲＦ２０Ｌ　（富士フィルム社製）
励起光源　　　　：落射型ＬＥＤユニット　（富士フィルム社製）
蛍光用フィルター：ＦＬ−Ｆｉｌｔｅｒ　Ｙ５１５−Ｄｉ　（富士フィルム社製）
露光時間：４分間
その結果、ＰＢＳ投与、プローブＡ投与、プローブ７Ｃ投与（プローブ７Ｃ投与のみ、ｎ＝２）した場合の単位表面積当たりの蛍光強度は、それぞれ１２４８０、１３４２０、１５０００および１４５７０であった。プローブＡを投与したマウスの肝臓はＰＢＳを投与したマウスの肝臓とほぼ同等の蛍光強度を示し、リガンドを有さない化合物に肝集積性はないことが示されたのに対し、プローブ７Ｃを投与したマウスの肝臓は、プローブＡのそれより高い蛍光強度を示した。
【００７１】
すなわち、肝集積性を示すことが知られているリガンド（ラクトース）を用いてプローブ（Ｉ）を作製し、マウスに静脈内投与することにより、該プローブの肝集積が蛍光カメラで観測された。この結果は、プローブ（Ｉ）が、ターゲティングリガンドを見出すためのｉｎ　ｖｉｖｏスクリーニングに適用可能であることを示している。
【００７２】
従来、ｉｎ　ｖｉｖｏ投与された物質の体内動態を調べるには、その物質を放射性同位体ラベルし制限された施設内で評価するという非常に煩雑な操作が必要であったが、本結果は、ターゲティングリガンドを含むプローブのｉｎ　ｖｉｖｏ臓器集積性が、蛍光画像測定という簡便な方法によって確認できることを示している。
実施例３　　各種オリゴ糖を含むプローブのｉｎ　ｖｉｖｏ評価
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（オス、８週齢）にＰＢＳ、またはタンパク質換算で１．０ｍｇ／ｋｇ相当のプローブＡ、７Ａ、７Ｂもしくは７Ｄを尾静脈内投与した（ｎ＝４）。２４時間後にマウスを放血死させ、各種臓器を取り出し、蛍光画像を観察した。なお、放血死させる１０時間以上前からマウスは絶食させた。
【００７３】
蛍光画像観察は実施例２と同様の条件で行った。
得られた各種臓器の蛍光画像から、臓器単位表面積当りの蛍光強度を算出した（図１）。
図１においてＰＢＳ投与で得られた値は、マウス自家蛍光に相当する。リガンドを持たないプローブＡ投与時の各種臓器の蛍光強度は、自家蛍光強度とほぼ変わらない値を示し、リガンドを持たないプローブに特定臓器集積性はないことが示された。リガンドを持たないプローブＡ投与時の各種臓器と比較して、より高い蛍光強度が得られたのは、プローブ７Ａ投与時の膵臓および前立腺、プローブ７Ｂ投与時の胸腺、膵臓および精巣、プローブ７Ｄ投与時の膵臓および精巣であった。すなわちＬＮｎＴおよび部分構造としてＬＮｎＴ残基を含むオリゴ糖は特定臓器への親和性を有することが明らかとなった。
【００７４】
【発明の効果】
本発明により、低分子化合物ライブラリーから、生体内の特定の部位に親和性を有し、各種治療薬または診断薬の部位特異的送達に有用な化合物をスクリーニングすることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、ＰＢＳ、プローブ７Ａ、プローブ７Ｂ、プローブ７ＤおよびプローブＡをそれぞれマウス尾静脈内投与し、１０分後に放血死させ、その後摘出した各種臓器の単位表面積当たりの蛍光強度を示す。
【符号の説明】
Ａ：ＰＢＳ投与群
Ｂ：プローブＡ（対照化合物）投与群
Ｃ：プローブ７Ａ投与群
Ｄ：プローブ７Ｂ投与群
Ｅ：プローブ７Ｄ投与群
【図１】
2004138397.tif 000004