(57)【要約】【課題】　従来にない優れた生体内抗酸化作用と外用抗酸化作用を有する発酵組成物及び該発酵組成物を含有する抗酸化性組成物を提供する。【解決手段】　本発明の発酵組成物は（１）乾燥グアバ葉粉砕末を８０℃の精製水に浸漬後、濾過して得られたグアバ熱水抽出物と、（２）米糠類、大豆類及び炭素源を含むｐＨ７．０の培地で納豆菌を４２℃、４８時間培養した後、該培養液を、圧搾、濾過、活性炭による脱色脱臭後、再度濾過することにより得られる米糠・大豆発酵物と、を含有する。【選択図】　　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
　（１）グアバ抽出物と、（２）米糠類、大豆類及び炭素源を含む培地に微生物を接種し、発酵培養して得られる米糠・大豆発酵物と、を含有することを特徴とする発酵組成物。
【請求項２】
　上記微生物が細菌又は酵母である請求項１記載の発酵組成物。
【請求項３】
　上記微生物が納豆菌、枯草菌、又はＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属に属する酵母である請求項１記載の発酵組成物。
【請求項４】
　請求項１乃至３のいずれか１項に記載の発酵組成物を含有することを特徴とする抗酸化性組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
　本発明は、抗酸化性組成物に関する。更に詳しくは米糠、大豆、グアバ発酵組成物を含有する優れた生体内抗酸化作用と外用抗酸化作用を有する抗酸化性組成物に関する。本発明は、活性酸素が原因となる各種の成人病、内科疾患、皮膚病等の病気の治療・改善、健康増進、及び美容などに広く利用される。
【背景技術】
【０００２】
　活性酸素は、外からの異物や刺激に対して防御の目的で人体内において作られ、適量ならば細菌、ウィルスなどを攻撃し、身体を守る。しかし、活性酸素の量が多ければ、逆に、身体の細胞や内臓を傷つけ、結果的に、成人病などの疾患の一因となる。本来、人体には、過剰になった活性酸素を除去するスーパーオキシドジスムターゼ（以下、ＳＯＤという。）がある。このＳＯＤは、酸素分子の１電子還元で生成するスーパーオキシドラジカル（Ｏ２−）の不均化反応（下式）を拡散律速に近い速さで触媒し、細胞内のＯ２−濃度を低下させる酵素である。
　　　２Ｏ２−＋２Ｈ＋→Ｈ２Ｏ２＋Ｏ２
【０００３】
　従って、Ｏ２−の除去酵素であるＳＯＤは、生体を活性酸素種から守るために存在するものであり、この活性酸素種を起因として生じると考えられる病気等に有効であるとの観点から、近年、その反応機構、生理機構等が研究されている（下記非特許文献１）。また、癌細胞ではＳＯＤ活性が低いという事実があり、更に、ＳＯＤと発癌との直接因果関係は明らかではないが、ＳＯＤ又はＳＯＤ様物質を癌細胞に注入すると、増殖を抑えるという報告もある（下記非特許文献１第６４頁）。
【０００４】
　このＳＯＤの活動力は、加齢で減少し、個人差もある。このＳＯＤの活動力低下は、各種の成人病などの疾患の一因となり、低下したＳＯＤの活動力を補う一方法として、ＳＯＤと同様な作用を有する抗酸化性組成物の摂取があげられる。安全で且つＳＯＤ作用（活性酸素濃度を減少させる作用のみならず、これに起因して生じると考えられる種々の病気の予防、改善の作用をも含む。）を有し、食品等に用いられるものがあれば、人の健康及び美容にとって非常に有用であり、その必要性は極めて大きい。
　従来、このような観点から、生体内において安全な天然物を主成分としたものが日々研究されている。例えば、米糠・大豆発酵物に緑茶抽出エキスを添加した活性酸素抑制組成物（下記特許文献１）やグアバ抽出物から活性酸素抑制作用を有する抗酸化剤が開発されている（下記特許文献２）。
【０００５】
【非特許文献１】中野稔ら編著「活性酸素−生物での生成・消去・作用の分子機構」新装版２刷、共立出版株式会社発行
【特許文献１】特開平６−２８４８７２号公報
【特許文献２】特開平５−２４６８３７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
　しかし、近時の医薬品、化粧品、健康食品、健康補助食品等の分野における進歩は著しく、より優れた生体内抗酸化作用、活性酸素除去効果を奏する抗酸化性組成物の開発が望まれている。
【０００７】
　本発明は、上記現状に鑑みてなされたものであり，従来にない高い生体内抗酸化作用と外用抗酸化作用を有する抗酸化性組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
　本発明は、以下に示す通りである。
　<１>（１）グアバ抽出物と、（２）米糠類、大豆類及び炭素源を含む培地に微生物を接種し、発酵培養して得られる米糠・大豆発酵物と、を含有することを特徴とする発酵組成物。
　<２>上記微生物が細菌又は酵母である上記<１>記載の発酵組成物。
　<３>上記微生物が納豆菌、枯草菌、又はＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属に属する酵母である上記<１>記載の発酵組成物。
　<４>上記<１>乃至<３>のいずれか１項に記載の発酵組成物を含有することを特徴とする抗酸化性組成物。
【発明の効果】
【０００９】
　本発明の発酵組成物は、優れた抗酸化作用を有する。この抗酸化作用は、グアバ抽出物、又は米糠、大豆発酵物単独の場合の抗酸化作用に比較して大きく、相乗効果を有する。
　また、本発明の発酵組成物において、上記微生物は細菌又は酵母とすることができ、優れた抗酸化作用を有する発酵物を得ることが可能である。
　更に、本発明の発酵組成物において、上記微生物は納豆菌、枯草菌、或いはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属に属する酵母とすることができ、更に優れた抗酸化作用を有する発酵物を得ることができる。
　また、本発明の抗酸化性組成物は、上記発酵物から容易に得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
　本発明の発酵組成物は、（１）グアバ抽出物と、（２）米糠類、大豆類及び炭素源を含む培地に微生物を接種し、発酵培養して得られた米糠・大豆発酵物と、を含有することを特徴とする。
【００１１】
　上記「グアバ抽出物」とは、グアバを原料として抽出することにより得られるものである。ここで、上記「グアバ」は、バンジロウ或いは番石榴と呼ばれ、フトモモ科、バンジロウ属の植物で、学名をプジジウム グアヤバ エル（Ｐｓｉｄｉｕｍ　Ｇｕａｊａｖａ　Ｌ）という。この「グアバ」というときには，グアバの葉、茎、花、根及び種子等の他の部位も含む。これらのうちで、グアバの葉が好ましく用いられる。また、上記グアバ抽出物には、グアバを原料として抽出することにより得られる抽出液を、タンナーゼ等の酵素を用いて酵素処理したものも含まれる。更に、上記グアバ抽出物は、抽出液を濾過したままの液でもよいし、これを濃縮した濃縮液でもよい。その他にも、凍結乾燥等の公知の方法により溶媒を除去した固形物や粉末化した粉末物でもよい。
【００１２】
　このグアバ抽出物を得るための抽出方法、抽出条件については特に限定はない。例えば、原料であるグアバは未粉砕でも、粉砕したものでもよく、また、乾燥したものでもよく、乾燥前のものでもよい。抽出物の品質を維持できる限り、不純物除去等の前処理をしてもよい。また、抽出溶媒としては、水又は熱水の他、エタノール、酢酸エチル、ｎ−ヘキサン等の有機溶媒や、これらの有機溶媒と水又は熱水との混合溶媒等を用いることができる。水又は熱水の温度は、通常、０〜１００℃、好ましくは７０〜１００℃、更に好ましくは８５〜９５℃である。また、抽出の際の抽出溶媒のｐＨは通常３〜８、好ましくは４〜８、更に好ましくは５〜８である。ｐＨがあまり高くなると、グアバ及びグアバ抽出物に含まれているポリフェノール類が不安定となることから好ましくない。
【００１３】
　上記「米糠・大豆発酵物」とは、米糠類、大豆類及び炭素源を含む培地に微生物を接種し、発酵培養して得られるものである。上記「米糠類」とは、米胚芽、脱脂米胚芽、米糠、脱脂米糠等をいい、上記「大豆類」とは、脱脂大豆、キナ粉、大豆粉、大豆カス、これらの加水分解物等をいう。更に、上記「炭素源」としては、通常用いられる糖類等を使用でき、例えば、グルコース、デキストリン、乳糖及びデンプン等の１種又は２種以上を用いることができる。
【００１４】
　また、上記「培地」としては、それぞれの原料を含み、後述する微生物、特に納豆菌、枯草菌やＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属に属する酵母が増殖できるものであれば特に制限はない。通常は液体培地であるが、固形培地であってもかまわない。
【００１５】
　上記米糠・大豆発酵物を得るための上記「微生物」としては、通常は細菌や酵母が用いられる。この中で、納豆菌、枯草菌、或いはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属に属する酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｕｖａｒｕｍ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｂａｙａｎｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ及びＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｒｏｕｘｉｉ種等）が好ましく用いられる。これらのうちで細菌の１種及び２種以上を併用してもよく、または酵母の１種及び２種以上を併用してもよく、更に細菌及び酵母を併用しても良い。これらのうちで特に納豆菌が好適に用いられる。また、上記「納豆菌」、「枯草菌」及び「Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属に属する酵母」は、市販されている一般的なものを用いることができる。しかし、自然的、又はニトロソグアニジン等の化学物質、Ｘ線、紫外線等により人為的変異手段により得られ、菌学的性質が変異した変異株であっても、抗酸化作用を有する発酵組成物を産出する性質を失わない限り利用することができる。
【００１６】
　上記米糠・大豆発酵物を得るための発酵培養条件については、発酵が行われる限り特に制限はない。通常、発酵培養は通気攪拌を行うことにより行われ、培養温度は４０〜４５℃程度であり、ｐＨは７．５〜１０、好ましくは８．０〜９．０である。培地のｐＨを調節する場合は、アルカリ剤として炭酸水素ナトリウム等を用いることができる。尚、培地原料としてはプロテアーゼを用いることができる。この場合は、大豆ペプチドを更に分解するので有用である。
【００１７】
　本発明の発酵組成物は、抗酸化作用という効果を奏するとともに、天然素材を使用しているので、従来の合成素材と比較してより安全に抗酸化性組成物として利用することができる。抗酸化性組成物には、抗酸化性を阻害しない限り他の組成物を含ませることができる。この場合、含まれる発酵組成物の量（固形分換算、Ｗ／Ｖ）は、通常０．０００１％以上、好ましくは０．０００５〜５％、更に好ましくは０．００１〜０．５％、最も好ましくは０．０１〜０．０５％である。本発明の抗酸化性組成物に含まれる発酵組成物の量が０．０００１％未満では、抗酸化作用が減弱するので好ましくない。また、５％を超える量を添加しても、抗酸化作用は頭打ちとなるので、経済的に好ましくない。
【００１８】
　また、本発明の発酵組成物の形態については特に限定はない。通常は抽出物の種々の形態で用いられる。例えば、それぞれ培養して得られた培養発酵液を濾過したままの液でもよいし、これを脱色等の後処理をした液でもよいし、又はこれを濃縮した濃縮液でもよい。その他にも、凍結乾燥等の公知の方法により溶媒を除去した固形物や粉末化した粉末物でもよい。
【実施例】
【００１９】
　以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。
（１）グアバ抽出物及び発酵組成物の調整
　<１>試料１（グアバ熱水抽出物）
　乾燥グアバ葉粉砕末１ｋｇを８０℃の精製水５０ｋｇに２時間浸漬後、ガーゼで濾過し、さらに、濾過助剤としてパーライトを添加しフィルター（ＡＤＶＡＮＴＥＣ　５Ａ、９０ｍｍ）にて濾過し、抽出液（以下、「グアバエキス」という）を得た。これを試料１とした。
　<２>試料２（米糠、大豆発酵物）
　米糠３．００ｋｇ、リン酸ナトリウム１．００ｋｇ、大豆ペプチド０．４０ｋｇ、炭酸水素ナトリウム４．５０ｋｇ、グルコース０．５０ｋｇ、アルカリ性プロテアーゼ０．０１ｋｇ、精製水５０．００ｋｇを混合した後、ｐＨ７．０に調整した培地で納豆菌（バチルス　ナットウ）を４２℃、４８時間培養した後、該培養液を、圧搾、濾過、活性炭による脱色脱臭後、再度濾過することにより液状の発酵物を得た。これを試料２とした。
　<３>試料３（混合液の調製）
　上記<１>にて製造した抽出液（試料１）３０ｇと、上記<２>にて製造した発酵物（試料２）９７０ｇとを混合し、試料３を得た。
【００２０】
（２）ＤＰＰＨ（ジフェニルピクリルヒドラジル）フリーラジカル消去能測定法による抗酸化能の評価
　測定試薬であるＤＰＰＨ溶液として、０．５ｍＭ　ＤＰＰＨエタノール溶液２０ｍＬ、０．１Ｍ　Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７・４）４０ｍＬ、７５％エタノール４０ｍＬにより調整する。測定試料は試料１〜試料５とする。試験管に各試料の２０倍希釈の水溶液を１００μＬ、ＤＰＰＨ溶液を４ｍＬ入れミキサにて混合、３０分間放置後に分光光度計にて５２０ｎｍでの吸光度測定を行ない、Ｔｒｏｌｏｘ濃度換算した結果を表１に示す。
　尚、Ｔｒｏｌｏｘ濃度換算に用いる検量線は、０．２、０．４、０．６、０．８、１ｍＭのＴｒｏｌｏｘ３０％エタノール水溶液を用いて、分光光度計にて５２０ｎｍでの吸光度測定を行ない作成した。また、１μｍｏｌ　Ｔｒｏｌｏｘ換算量を１ｕｎｉｔとし、単位はｕｎｉｔ／ｇで表示した。
【００２１】
【表１】
2004043505.tif 000002
【００２２】
（３）ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）還元法によるＳＯＤ活性の評価。
　測定キットとして和光純薬工業製の「ＳＯＤテストワコー」を用い、Ｏ２−とＮＢＴとの反応に基づくジホルマザン形成の減少の程度を、分光光度計にて５６０ｎｍでの吸光度測定を行ない、阻害率を求めることにより、試料中のＳＯＤ活性値を求めた。その結果を表１に示す。
【００２３】
（４）実施例の効果
　表１によると、フリーラジカル消去能は、試料１（グアバ抽出液のみ）は１４．９（ｕｎｉｔ／ｇ）であり、試料２（米糠、大豆発酵物）は１５．６（ｕｎｉｔ／ｇ）である。これに対して，試料３（試料１と試料２との混合）は、２１．３（ｕｎｉｔ／ｇ）であり、試料１に対して約４３％、試料２に対して約３７％高い。従って、グアバ抽出液のみ又は米糠、大豆発酵物のみを用いたいずれの場合より高いため、グアバ抽出液と米糠、大豆発酵物を混合すると相乗効果を奏することが判る。
【００２４】
　一方、ＳＯＤ活性は、試料１（グアバ抽出物のみ）は４２．３（％）であり、試料２（米糠、大豆発酵物）は５６．７（％）である。これに対して，試料３（試料１と試料２との混合）は、７６．８（％）であり、試料１に対して約８２％高く、試料２に対して約３６％高い。従って、グアバ抽出物のみ又は米糠、大豆発酵物のみを用いたいずれの場合より高いため、グアバ抽出液と米糠、大豆発酵物を混合すると相乗効果を奏することが判る。以上のことから、本発明の発酵物の抗酸化作用は、フリーラジカル消去能及びＳＯＤ活性の測定のいずれによっても、同様に高い抗酸化作用を有することが判る。
【００２５】
　尚、本発明においては、上記具体的実施例に示すものに限られず、目的、用途に応じて本発明の範囲内で種々変更した実施例とすることができる。即ち、上記組成物の形態は、通常、水溶液若しくは原液等の液状であるが、これに限らず、この抽出物を吸液性粉末に含浸させた粉末品、造粒した造粒品、増量剤等他の粉末成分を配合した錠剤、又はマイクロカプセル等とすることができる。また、これらの水溶液、粉末品等を所定容器に充填してなる商品形態、またこれ単独で使用するか他剤（水溶液のもの、油性液のもの若しくは粉末を問わない。）に配合して使用するかについても特に限定されず、例えば、ポーション型でもよいし、他形状容器に充填してもよいし、粉末品をスティック状容器（袋）に充填したものでもよい。更に、従来の清涼飲料水、ドリンク剤、乳製品、油剤化製品等に配合、分散して使用してもよい。尚、この分散は油中水型、水中油型を問わない。また、他の栄養成分（例えば、各種ビタミン類、カルシウムイオン成分、鉄イオン成分等）、薬効成分、調味成分、匂い成分等を配合してもよい。これらのうち、特に水溶性成分が好ましい。均一に溶解した商品とすることができるからである。
【産業上の利用可能性】
【００２６】
　以上のことから、本発明による発酵物は、優れた抗酸化作用を有して、これを含有する抗酸化性組成物は、医薬品、健康食品、健康補助食品、化粧品の分野に広く利用することができる。