(57)【要約】　　　（修正有）【課題】細胞障害によって上昇した血清中Ｓ−１００βや尿中８−ＯＨｄＧを低下させる作用を有する医薬を提供する。【解決手段】下記式（Ｉ）：2004137252.tif 000010（式中、Ｒ１は、水素原子、アリール基、炭素数１〜５のアルキル基又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキル基を表し；Ｒ２は、水素原子、アリールオキシ基、アリールメルカプト基、炭素数１〜５のアルキル基又は炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基を表し；あるいは、Ｒ１及びＲ２は、共同して炭素数３〜５のアルキレン基を表し；Ｒ３は、水素原子、炭素数１〜５のアルキル基、炭素数５〜７のシクロアルキル基、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基、ベンジル基、ナフチル基、フェニル基、又は同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニル基を表す。）で示されるピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はその水和物若しくは溶媒和物を有効成分として含む細胞障害マーカー抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）：
【化１】
2004137252.tif 000006
（式中、Ｒ１は、水素原子、アリール基、炭素数１〜５のアルキル基又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキル基を表し；Ｒ２は、水素原子、アリールオキシ基、アリールメルカプト基、炭素数１〜５のアルキル基又は炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基を表し；あるいは、Ｒ１及びＲ２は、共同して炭素数３〜５のアルキレン基を表し；Ｒ３は、水素原子、炭素数１〜５のアルキル基、炭素数５〜７のシクロアルキル基、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基、ベンジル基、ナフチル基、フェニル基、又は炭素数１〜５のアルキル基、炭素数１〜５のアルコキシ基、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル基、炭素数１〜３のアルキルメルカプト基、炭素数１〜４のアルキルアミノ基、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ基、ハロゲン原子、トリフルオロメチル基、カルボキシル基、シアノ基、水酸基、ニトロ基、アミノ基及びアセトアミド基からなる群から選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニル基を表す。）
で示されるピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を有効成分として含む、細胞障害マーカー抑制剤。
【請求項２】
式（Ｉ）で示されるピラゾロン誘導体が３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オンである請求項１に記載の細胞障害マーカー抑制剤。
【請求項３】
細胞障害が神経細胞障害である請求項１又は２に記載の細胞障害マーカー抑制剤。
【請求項４】
細胞障害マーカーがＳ−１００βである請求項１から３のいずれかに記載の細胞障害マーカー抑制剤。
【請求項５】
細胞障害マーカーが８−ＯＨｄＧである請求項１から３のいずれかに記載の細胞障害マーカー抑制剤。
【請求項６】
下記式（Ｉ）：
【化２】
2004137252.tif 000007
（式中、Ｒ１は、水素原子、アリール基、炭素数１〜５のアルキル基又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキル基を表し；Ｒ２は、水素原子、アリールオキシ基、アリールメルカプト基、炭素数１〜５のアルキル基又は炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基を表し；あるいは、Ｒ１及びＲ２は、共同して炭素数３〜５のアルキレン基を表し；Ｒ３は、水素原子、炭素数１〜５のアルキル基、炭素数５〜７のシクロアルキル基、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基、ベンジル基、ナフチル基、フェニル基、又は炭素数１〜５のアルキル基、炭素数１〜５のアルコキシ基、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル基、炭素数１〜３のアルキルメルカプト基、炭素数１〜４のアルキルアミノ基、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ基、ハロゲン原子、トリフルオロメチル基、カルボキシル基、シアノ基、水酸基、ニトロ基、アミノ基及びアセトアミド基からなる群から選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニル基を表す。）
で示されるピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を有効成分として含む、細胞障害マーカーが上昇している患者の治療に用いる医薬。
【請求項７】
細胞障害マーカーが上昇していると予想される患者の細胞障害マーカーを測定し、その結果、細胞障害マーカーが上昇していると判断された患者の治療のために用いる、下記式（Ｉ）：
【化３】
2004137252.tif 000008
（式中、Ｒ１は、水素原子、アリール基、炭素数１〜５のアルキル基又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキル基を表し；Ｒ２は、水素原子、アリールオキシ基、アリールメルカプト基、炭素数１〜５のアルキル基又は炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基を表し；あるいは、Ｒ１及びＲ２は、共同して炭素数３〜５のアルキレン基を表し；Ｒ３は、水素原子、炭素数１〜５のアルキル基、炭素数５〜７のシクロアルキル基、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基、ベンジル基、ナフチル基、フェニル基、又は炭素数１〜５のアルキル基、炭素数１〜５のアルコキシ基、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル基、炭素数１〜３のアルキルメルカプト基、炭素数１〜４のアルキルアミノ基、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ基、ハロゲン原子、トリフルオロメチル基、カルボキシル基、シアノ基、水酸基、ニトロ基、アミノ基及びアセトアミド基からなる群から選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニル基を表す。）
で示されるピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を有効成分として含む医薬。
【請求項８】
式（Ｉ）で示されるピラゾロン誘導体が３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オンである請求項６又は７に記載の医薬。
【請求項９】
細胞障害が神経細胞障害である請求項６から８のいずれかに記載の医薬。
【請求項１０】
細胞障害マーカーがＳ−１００βである請求項６から９のいずれかに記載の医薬。
【請求項１１】
細胞障害マーカーが８−ＯＨｄＧである請求項６から９のいずれかに記載の医薬。
【請求項１２】
下記式（Ｉ）：
【化４】
2004137252.tif 000009
（式中、Ｒ１は、水素原子、アリール基、炭素数１〜５のアルキル基又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキル基を表し；Ｒ２は、水素原子、アリールオキシ基、アリールメルカプト基、炭素数１〜５のアルキル基又は炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基を表し；あるいは、Ｒ１及びＲ２は、共同して炭素数３〜５のアルキレン基を表し；Ｒ３は、水素原子、炭素数１〜５のアルキル基、炭素数５〜７のシクロアルキル基、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基、ベンジル基、ナフチル基、フェニル基、又は炭素数１〜５のアルキル基、炭素数１〜５のアルコキシ基、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル基、炭素数１〜３のアルキルメルカプト基、炭素数１〜４のアルキルアミノ基、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ基、ハロゲン原子、トリフルオロメチル基、カルボキシル基、シアノ基、水酸基、ニトロ基、アミノ基及びアセトアミド基からなる群から選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニル基を表す。）
で示されるピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を投与した被験者の血清中のＳ−１００β又は尿中の８−ＯＨｄＧを測定することを含む、当該ピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物が有する細胞障害抑制作用の有効性を評価する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を有効成分として含む細胞障害マーカー抑制剤、及び細胞障害マーカーが上昇している患者の治療に用いる医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
酸化ストレスマーカーは、活性酸素種などのフリーラジカルの暴露を受けた生体細胞や組織の損傷状態やその変化をとらえるための指標であり、生体成分中の脂質、ＤＮＡ、タンパク質などの酸化生成物やその分解物などが酸化ストレスマーカーとして用いられている。酸化ストレスマーカーは、フリーラジカルによる細胞障害の程度を細胞や組織を侵襲することなく血液や尿などの成分解析から把握することができ、また治療薬の有効性を臨床的に評価するのにも利用できるので臨床上きわめて興味深い。
８−ヒドロキシ−２’−デオキシグアノシン（以下、８−ＯＨｄＧ）は、酸化ストレスマーカーや細胞障害マーカーの一つとして知られている。８−ＯＨｄＧは、細胞中のＤＮＡの構成成分であるデオキシグアノシン（ｄＧ）が酸化ストレスにより生じたヒドロキシラジカルによって酸化されることによって生成する。８−ＯＨｄＧは、定常的に修復酵素系で異物として検出され、正常塩基と入れ替わりに切り出された後、生体内で代謝されることなく血液を経て最終的に尿中に排出される。従って、尿中の８−ＯＨｄＧの変化を測定すれば、生体内での酸化ストレスの変化を推定でき、また生活習慣の一時的な評価も可能である。
また、上述したとおり、８−ＯＨｄＧは細胞内で生成し、細胞外へ移行し、最終的に尿中に排出される。従って、何らかの理由により細胞に障害をきたしている場合には、８−ＯＨｄＧは細胞内から細胞外へ移行しやすくなっているため、尿中８−ＯＨｄＧの変化を測定すれば、細胞障害の程度を推定できる。
【０００３】
一方、Ｓ−１００はアストログリア細胞の細胞質の主要部分を占め、カルシウム結合能を有する神経系特異タンパク質である。Ｓ−１００は、α鎖とβ鎖の２種のサブユニットで構成され、その組み合わせはββ、αβ、ααの３種が存在する。このサブユニットの組み合わせ構造は生体内の存在部位によって異なり、例えば、Ｓ−１００ββはセレタ（ｃｅｌｌｅｔａ）細胞とシュワン（ｓｃｈｗａｎｎ）細胞に、Ｓ−１００αβはグリア（ｇｌｉａｌ）細胞に、Ｓ−１００ααは横紋筋、心臓、腎臓に見られる。現在Ｓ−１００を測定するキットとして、イムノラジオメトリックアッセイキット　（ｉｍｍｕｎｏｒａｄｉｏｍｅｔｒｉｃ　ａｓｓａｙ　ｋｉｔ）（Ｓａｎｇｔｅｃ社、ｓ−１００キット）が市販されており、これはＳ−１００ββ、Ｓ−１００αβを特異的に測定するキットである（以下、本明細書においてＳ−１００βという場合には、Ｓ−１００ββ、Ｓ−１００αβのことをいうものとする。）。血清中Ｓ−１００βの上昇は脳における虚血、梗塞、出血及び重症頭部外傷時の脳損傷度と相関し、脳損傷の指標となりうることが報告されている（Ｉｍａｍｕｒａ，　Ｔ．，　ｅｔ　ａｌ．，　神経免疫研究，ｖｏｌ．９，　ｐ．２５７−２６０，　１９９６）。
近年のＣＴやＭＲＩ等の画像診断の進歩により、脳神経外科領域の種々の疾患における脳損傷の経過観察は主に画像所見によるところが大きい。しかしながら、くも膜下出血や重症頭部外傷のように瀰漫性に脳損傷を受けた症例においてその予後を見るのに画像診断はある程度有効ではあるものの、その機能的な予後を察知することは容易ではない。従って、正確な予後の診断には血液成分など何らかの液性成分の解析が重要であるが、これまで脳損傷の指標となる血液成分の解析としては上記Ｓ−１００βなど僅かな報告があるのみである。
また、これらの血清中Ｓ−１００βや尿中８−ＯＨｄＧを低下させる作用を有する薬剤についてはこれまで報告がない。
【０００４】
一方、下記式（Ｉ）：
【化５】
2004137252.tif 000002
（式中、Ｒ１は水素原子、アリール、炭素数１〜５のアルキル又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキルを表し、Ｒ２は、水素原子、アリールオキシ、アリールメルカプト、炭素数１〜５のアルキル又は１〜３のヒドロキシアルキルを表し、あるいは、Ｒ１及びＲ２は、共同して炭素数３〜５のアルキレンを表し、Ｒ３は水素原子、炭素数１〜５のアルキル、炭素数５〜７のシクロアルキル、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、ベンジル、ナフチル又はフェニル、又は炭素数１〜５のアルコキシ、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル、炭素数１〜３のアルキルメルカプト、炭素数１〜４のアルキルアミノ、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ、ハロゲン原子、トリフルオロメチル、カルボキシル、シアノ、水酸基、ニトロ、アミノ、及びアセトアミドからなる群から選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニルを表す。）で表されるピラゾロン誘導体については、医薬の用途として、脳機能正常化作用（特公平５−３１５２３号公報）、過酸化脂質生成抑制作用（特公平５−３５１２８号公報、例１の化合物）、抗潰瘍作用（特開平３−２１５４２５号公報）、及び血糖上昇抑制作用（特開平３−２１５４２６号公報）等が知られている。
【０００５】
また、上記式（Ｉ）の化合物のうち、３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オンを有効成分とする製剤は、２００１年６月以来、脳保護剤（一般名「エダラボン」、商品名「ラジカット」：三菱ウェルファーマ株式会社製造・販売）として上市されている。この「エダラボン」は、活性酸素に対して高い反応性を有することが報告される（Ｋａｗａｉ，　Ｈ．，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｊ．　Ｐｈａｍａｃｏｌ．　Ｅｘｐ．　Ｔｈｅｒ．，　２８１（２），　９２１，　１９９７；　Ｗｕ，　ＴＷ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ，　６７（１９），　２３８７，　２０００）。このように、エダラボンは活性酸素をはじめとする種々のフリーラジカルを消去することで、細胞障害などを防ぐ働きをするフリーラジカルスカベンジャーである。しかしながら、エダラボンが血清中Ｓ−１００βや尿中８−ＯＨｄＧを低下させる作用を有する否かの検討については従来全く報告がない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、細胞障害によって上昇した血清中Ｓ−１００βや尿中８−ＯＨｄＧを低下させる作用を有する医薬を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく種々の検討を行った結果、式（Ｉ）で示されるピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物が、脳梗塞急性期の患者における血清中Ｓ−１００βや尿中８−ＯＨｄＧの上昇を有意に抑制し、また意識障害の程度を改善できることを見出した。本発明は上記の知見を基にして完成された。
【０００８】
即ち、本発明によれば、下記式（Ｉ）で示されるピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を有効成分として含む細胞障害マーカー抑制剤が提供される。
【０００９】
【化６】
2004137252.tif 000003
【００１０】
（式中、Ｒ１は、水素原子、アリール基、炭素数１〜５のアルキル基又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキル基を表し；Ｒ２は、水素原子、アリールオキシ基、アリールメルカプト基、炭素数１〜５のアルキル基又は炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基を表し；あるいは、Ｒ１及びＲ２は、共同して炭素数３〜５のアルキレン基を表し；Ｒ３は、水素原子、炭素数１〜５のアルキル基、炭素数５〜７のシクロアルキル基、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基、ベンジル基、ナフチル基、フェニル基、又は炭素数１〜５のアルキル基、炭素数１〜５のアルコキシ基、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル基、炭素数１〜３のアルキルメルカプト基、炭素数１〜４のアルキルアミノ基、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ基、ハロゲン原子、トリフルオロメチル基、カルボキシル基、シアノ基、水酸基、ニトロ基、アミノ基及びアセトアミド基からなる群から選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニル基を表す。）
【００１１】
本発明の好ましい態様によれば、式（Ｉ）で示されるピラゾロン誘導体が３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物である上記細胞障害マーカー抑制剤が提供される。
本発明のさらに好ましい態様によれば、細胞障害が神経細胞障害である上記細胞障害マーカー抑制剤が提供される。
本発明の特に好ましい態様によれば、細胞障害マーカーがＳ−１００βである上記細胞障害マーカー抑制剤；細胞障害マーカーが８−ＯＨｄＧである上記細胞障害マーカー抑制剤が提供される。
【００１２】
本発明の別の態様によれば、式（Ｉ）で示されるピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を有効成分として含む、細胞障害マーカーが上昇している患者の治療に用いる医薬が提供される。
【００１３】
本発明のさらに別の態様によれば、細胞障害マーカーが上昇していると予想される患者の細胞障害マーカーを測定し、その結果、細胞障害マーカーが上昇していると判断された患者の治療のために用いる、式（Ｉ）で示されるピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を有効成分として含む医薬が提供される。
【００１４】
本発明の別の局面によれば、式（Ｉ）で示されるピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を投与した被験者の血清中のＳ−１００βの含有量又は尿中の８−ＯＨｄＧの含有量を測定することを含む、当該ピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物が有する細胞障害抑制作用の有効性を評価する方法が提供される。
【００１５】
本発明のさらに別の側面によれば、式（Ｉ）で示されるピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物の予防及び／又は治療有効量をヒトを含む哺乳動物に投与する工程を含む、血清中のＳ−１００β又は尿中の８−ＯＨｄＧの上昇を伴うし細胞障害疾患の予防及び／又は治療方法が提供される。
【００１６】
本発明のさらに別の側面によれば、上記医薬の製造のための式（Ｉ）で示されるピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物の使用が提供される。
【００１７】
本発明の細胞障害マーカー抑制剤、及び細胞障害マーカーが上昇している患者の治療に用いる医薬（以下、これらを総称して本発明の医薬という）は、本明細書に定義する式（Ｉ）で示されるピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を含む。
【００１８】
本発明で用いる式（Ｉ）で示される化合物は、互変異性により、以下の式（Ｉ’）又は（Ｉ”）で示される構造をもとりうる。本明細書の式（Ｉ）には、便宜上、互変異性体のうちの１つを示したが、当業者には下記の互変異性体の存在は自明である。本発明の医薬の有効成分としては、下記の式（Ｉ’）又は（Ｉ”）で表される化合物若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を用いてもよい。
【００１９】
【化７】
2004137252.tif 000004
【００２０】
式（Ｉ）において、Ｒ１の定義におけるアリール基は単環性又は多環性アリール基のいずれでもよい。例えば、フェニル基、ナフチル基などのほか、メチル基、ブチル基などのアルキル基、メトキシ基、ブトキシ基などのアルコキシ基、塩素原子などのハロゲン原子、又は水酸基等の置換基で置換されたフェニル基等が挙げられる。アリール部分を有する他の置換基（アリールオキシ基など）におけるアリール部分についても同様である。
【００２１】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の定義における炭素数１〜５のアルキル基は直鎖状、分枝鎖状のいずれでもよい。例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基等が挙げられる。アルキル部分を有する他の置換基（アルコキシカルボニルアルキル基）におけるアルキル部分についても同様である。
【００２２】
Ｒ１の定義における総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキル基としては、メトキシカルボニルメチル基、エトキシカルボニルメチル基、プロポキシカルボニルメチル基、メトキシカルボニルエチル基、メトキシカルボニルプロピル基等が挙げられる。
【００２３】
Ｒ２の定義におけるアリールオキシ基としては、ｐ−メチルフェノキシ基、ｐ−メトキシフェノキシ基、ｐ−クロロフェノキシ基、ｐ−ヒドロキシフェノキシ基等が挙げられ、アリールメルカプト基としては、フェニルメルカプト基、ｐ−メチルフェニルメルカプト基、ｐ−メトキシフェニルメルカプト基、ｐ−クロロフェニルメルカプト基、ｐ−ヒドロキシフェニルメルカプト基等が挙げられる。
【００２４】
Ｒ２及びＲ３の定義における炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基としては、ヒドロキシメチル基、２−ヒドロキシエチル基、３−ヒドロキシプロピル基等が挙げられる。Ｒ３の定義における炭素数５〜７のシクロアルキル基としては、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基等が挙げられる。
【００２５】
Ｒ３の定義において、フェニル基の置換基における炭素数１〜５のアルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基等が挙げられ、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル基としては、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、ブトキシカルボニル基等が挙げられ、炭素数１〜３のアルキルメルカプト基としては、メチルメルカプト基、エチルメルカプト基、プロピルメルカプト基等が挙げられ、炭素数１〜４のアルキルアミノ基としては、メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、ブチルアミノ基等が挙げられ、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ基としては、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基、ジブチルアミノ基等が挙げられる。
【００２６】
本発明の医薬の有効成分として好適に用いられる化合物（Ｉ）として、例えば、以下に示す化合物が挙げられる。
３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−１−（２−メチルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−１−（３−メチルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−１−（４−メチルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−１−（３，４−ジメチルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−エチルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−１−（４−プロピルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ブチルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３−トリフルオロメチルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
【００２７】
１−（４−トリフルオロメチルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（２−メトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３−メトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−メトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３，４−ジメトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−エトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−１−（４−プロポキシフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ブトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（２−クロロフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３−クロロフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−クロロフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
【００２８】
１−（４−ブロモフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−フルオロフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３−クロロ−４−メチルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３−メチルメルカプトフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−メチルメルカプトフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
４−（３−メチル−５−オキソ−２−ピラゾリン−１−イル）安息香酸；
１−（４−エトキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ニトロフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−エチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−フェニル−３−プロピル−２−ピラゾリン−５−オン；
【００２９】
１，３−ジフェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−フェニル−１−（ｐ−トリル）−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−クロロフェニル）−３−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
３，４−ジメチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
４−イソブチル−３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
４−（２−ヒドロキシエチル）−３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−４−フェノキシ−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−４−フェニルメルカプト−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
【００３０】
３，３’，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−２−フェニル−２Ｈ−インダゾール−３−オン；
３−（エトキシカルボニルメチル）−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１，３−ジメチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−エチル−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−ブチル−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（２−ヒドロキエチル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−シクロヘキシル−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−ベンジル−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
【００３１】
１−（α−ナフチル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−メチル−３−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−１−（４−メチルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ブチルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−メトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ブトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−クロロフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（２−ヒドロキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３−ヒドロキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
【００３２】
１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３，４−ヒドロキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ヒドロキシメチルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−アミノフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−メチルアミノフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−エチルアミノフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ブチルアミノフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ジメチルアミノフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（アセトアミドフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；及び
１−（４−シアノフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン
【００３３】
本発明の医薬の有効成分としては、式（Ｉ）で表される遊離形態の化合物のほか、生理学的に許容される塩を用いてもよい。生理学的に許容される塩としては、塩酸、硫酸、臭化水素塩、リン酸等の鉱酸との塩；メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、酢酸、グリコール酸、グルクロン酸、マレイン酸、フマル酸、シュウ酸、アスコルビン酸、クエン酸、サリチル酸、ニコチン酸、酒石酸等の有機酸との塩；ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩；マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属との塩；アンモニア、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、Ｎ，Ｎ−ビス（ヒドロキシエチル）ピペラジン、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール、エタノールアミン、Ｎ−メチルグルタミン、Ｌ−グルタミン等のアミンとの塩が挙げられる。また、グリシンなどのアミノ酸との塩を用いてもよい。
【００３４】
本発明の医薬の有効成分としては、上記式（Ｉ）で表される化合物若しくはその生理学的に許容される塩の水和物、又は上記式（Ｉ）で表される化合物若しくはその生理学的に許容される塩の溶媒和物を用いてもよい。溶媒和物を形成する有機溶媒の種類は特に限定されないが、例えば、メタノール、エタノール、エーテル、ジオキサン、テトラヒドロフランなどを例示することができる。また、上記式（Ｉ）で表される化合物は、置換基の種類により１以上の不斉炭素を有する場合があり、光学異性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体が存在する場合がある。本発明の医薬の有効成分としては、純粋な形態の立体異性体、立体異性体の任意の混合物、ラセミ体などを用いてもよい。
【００３５】
式（Ｉ）で表される化合物はいずれも公知の化合物であり、特公平５−３１５２３号公報などに記載された方法により当業者が容易に合成できる。
【００３６】
本発明の医薬の投与量は特に限定されないが、通常は、有効成分である式（Ｉ）で示される化合物の重量として一般に経口投与の場合には一日あたり０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは一日あたり０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、であり、非経口投与の場合には一日あたり０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重である。上記投与量は１日１回又は２〜３回に分けて投与するのが好ましく、年齢、病態、症状により適宜増減してもよい。
【００３７】
本発明の医薬としては、上記式（Ｉ）で表される化合物若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物をそのまま投与してもよいが、一般的には、有効成分である上記の物質と薬理学的及び製剤学的に許容される添加物を含む医薬組成物を調製して投与することが好ましい。
【００３８】
薬理学的及び製剤学的に許容しうる添加物としては、例えば、賦形剤、崩壊剤ないし崩壊補助剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、色素、希釈剤、基剤、溶解剤ないし溶解補助剤、等張化剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、噴射剤、及び粘着剤等を用いることができる。
【００３９】
経口投与に適する医薬組成物には、添加物として、例えば、ブドウ糖、乳糖、Ｄ−マンニトール、デンプン、又は結晶セルロース等の賦形剤；カルボキシメチルセルロース、デンプン、又はカルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤又は崩壊補助剤；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、又はゼラチン等の結合剤；ステアリン酸マグネシウム又はタルク等の滑沢剤；ヒドロキシプロピルメチルセルロース、白糖、ポリエチレングリコール又は酸化チタン等のコーティング剤；ワセリン、流動パラフィン、ポリエチレングリコール、ゼラチン、カオリン、グリセリン、精製水、又はハードファット等の基剤を用いることができる。
【００４０】
注射あるいは点滴用に適する医薬組成物には、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール等の水性あるいは用時溶解型注射剤を構成しうる溶解剤又は溶解補助剤；ブドウ糖、塩化ナトリウム、Ｄ−マンニトール、グリセリン等の等張化剤；無機酸、有機酸、無機塩基又は有機塩基等のｐＨ調節剤等の添加物を用いることができる。
【００４１】
本発明の医薬の形態は特に限定されず、当業者に利用可能な種々の形態をとることができる。経口投与に適する医薬として、例えば、固体の製剤用添加物を用いて錠剤、散剤、顆粒剤、硬ゼラチンカプセル剤、坐剤、又はトローチ剤などを調製することができ、液状の製剤用添加物を用いてシロップ剤、乳剤、軟ゼラチンカプセル剤などを調製することができる。また、非経口投与に適する医薬として、注射剤、点滴剤、吸入剤、坐剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤などを調製することができる。なお、上記の式（Ｉ）の化合物を有効成分とする脳保護剤（点滴剤）が、すでに臨床において使用されているので（一般名「エダラボン」、商品名「ラジカット」：三菱ウェルファーマ株式会社製造・販売）、本発明の医薬において上記市販製剤をそのまま用いることができる。
【００４２】
本発明の医薬で有効成分として用いる式（Ｉ）で示されるピラゾロン誘導体又はその薬学的に許容される塩は、細胞障害マーカー、特には血清中のＳ−１００β又は尿中の８−ＯＨｄＧを抑制する作用を有する。従って、本発明の医薬は、細胞障害マーカー、好ましくは血清中のＳ−１００β又は尿中の８−ＯＨｄＧが上昇している患者の治療に好適に用いられる。
【００４３】
上記の血清中のＳ−１００β又は尿中の８−ＯＨｄＧが上昇している患者が有する疾患としては、具体的には細胞障害疾患がある。従って、本発明の医薬はまた、細胞障害マーカー、好ましくは血清中のＳ−１００β又は尿中の８−ＯＨｄＧの上昇が伴う細胞障害疾患の治療及び／又は予防のための医薬として使用することができる。
【００４４】
本明細書において、「血清中のＳ−１００β又は尿中の８−ＯＨｄＧの上昇を伴う細胞障害疾患」としては、活性酸素種などのフリーラジカルによって細胞、特には神経細胞が損傷され、その細胞障害の程度が血清中のＳ−１００β又は尿中の８−ＯＨｄＧの上昇と連関している疾患をいう。上記疾患の具体例としては、脳梗塞（脳血栓症、脳塞栓症）、脳出血、脳動脈硬化、一過性脳虚血発作等の脳血管障害；頭部外傷；運動ニューロン疾患（筋萎縮性側索硬化症等）等を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。
【００４５】
本発明の医薬の投与経路は特に限定されず、経口的又は非経口的に投与することができる。例えば、上記各疾患の治療に先立って予防的に本発明の医薬を経口投与しておくことができ、注射若しくは点滴などの非経口的投与によって手術中又はその前後に予防的に投与することもできる。また、上記各疾患の患者に対しては、症状の悪化の防止ないしは症状の軽減などを目的として、静脈内、動脈内に注射により投与することもできる。
【００４６】
血清中のＳ−１００β又は尿中の８−ＯＨｄＧは、生体内において生成した活性酸素種などのフリーラジカルによる細胞障害の程度を反映するものである。従って、本発明の医薬を投与した被験者の血清中のＳ−１００β又は尿中の８−ＯＨｄＧの含有量の測定値から、上記の血清中のＳ−１００β又は尿中の８−ＯＨｄＧの上昇を伴う細胞障害疾患の病態を分析または評価することができる。あるいはまた、本明細書に定義した式（Ｉ）で示されるピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物が有する細胞障害抑制作用の有効性を評価することもできる。血清中のＳ−１００β又は尿中の８−ＯＨｄＧの測定は公知の各種の測定手法にて測定すればよい。
【実施例】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明は下記の実施例により限定されるものではない。
【００４７】
合成例：３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン（以下、エダラボンと称す）の合成
エタノール５０ｍｌ中にアセト酢酸エチル１３．０ｇ及びフェニルヒドラジン１０．８ｇを加え、３時間還流攪拌した。反応液を放冷後、析出した結晶をろ取し、エタノールより再結晶して、表題の化合物１１．３ｇを無色結晶として得た。
収率　６７％
融点　１２７．５〜１２８．５℃
【００４８】
実施例１
（１）実験方法
脳梗塞急性期の患者（発症２４時間以内の脳塞栓症患者）に、ヘパリン１０００単位／日を２４時間持続点滴静注にて１４日間投与するとともに、エダラボン３０ｍｇ、グリセロール２００ｍｌを朝夕（午前９時、午後９時）２回、１回につき３０分間持続点滴静注にて１４日間投与した（以下、この脳塞栓症患者をエダラボン投与患者という）。また、ＧＳＣ（Ｇｌａｓｇｏｗ　Ｃｏｍａ　Ｓｃａｌｅ）による意識障害の分類に基づく評価及び画像診断によって上記の脳塞栓症患者と同程度に中大脳動脈領域に広範な脳塞栓があると判断される脳塞栓症患者を選択し、同患者にはエダラボンは投与せず、ヘパリン１０００単位／日を２４時間持続点滴静注にて１４日間投与するとともに、グリセロール２００ｍｌを朝夕（午前９時、午後９時）２回、１回につき３０分間持続点滴静注にて１４日間投与した（以下、この脳塞栓症患者をエダラボン非投与患者という）。
上記のエダラボン投与患者、エダラボン非投与患者、及び糖尿病患者について毎朝（午前７時）採血し、Ｓ−１００βの血清中濃度を投薬開始から１４日間測定した。
また、上記のエダラボン投与患者、エダラボン非投与患者について２４時間蓄尿を毎朝（午前７時）回収し、一日８−ＯＨｄＧ量を投薬開始から１４日間測定した。
【００４９】
（２）実験結果
▲１▼血清中Ｓ−１００β濃度
エダラボン投与患者（−■−）及び糖尿病患者（−◆−）の血清中Ｓ−１００β濃度の経日変化を図１に示す。
また、下記表１に示すＧＳＣ（Ｇｌａｓｇｏｗ　Ｃｏｍａ　Ｓｃａｌｅ）による意識障害の分類に基づいて評価した（Ｅ，Ｖ，Ｍの合計で３〜１５の１３段階で評価）上記エダラボン投与患者の意識レベルを合わせて図１に示す（−▲−）。
【００５０】
【表１】
2004137252.tif 000005
【００５１】
図１に示すように、エダラボン投与患者の血清中Ｓ−１００β濃度は初め高値を示していたが、徐々に減少していった。これに対し、図２に示すようにエダラボン非投与患者では投与開始後３日目に血清中Ｓ−１００β濃度が最高値に達し、抗凝固薬であるヘパリンや抗脳浮腫薬であるグリセロールでは急性期における血清中Ｓ−１００βの抑制効果は認められない。また、エダラボン投与患者のＧＳＣ評価による意識レベルもスコアが徐々に増加し、神経系統の身体症状の異常が顕著に改善された。従って、急性期における血清中Ｓ−１００βの抑制にはエダラボンが特異的に作用しており、すなわち神経細胞障害の抑制があったと考えられる。また、糖尿病患者の血清中Ｓ−１００β濃度は検出限界以下であった。
【００５２】
▲２▼１日尿中８−ＯＨｄＧ量
エダラボン投与患者（−■−）及びエダラボン非投与患者（−●−）の１日尿中８−ＯＨｄＧ量の経日変化を図３に示す。エダラボン非投与患者では発症３日目から５日目にかけて１日尿中８−ＯＨｄＧ量が持続的に高値であり、エダラボン非投与患者では同期間の８−ＯＨｄＧ量は低値であった。従って、８−ＯＨｄＧの上昇は脳梗塞による神経細胞障害に起因する可能性が高く、エダラボンは神経細胞障害を改善し、結果として８−ＯＨｄＧを減少させていると考えられる。
【００５３】
【発明の効果】
本発明の医薬は、血清中Ｓ−１００β又は尿中８−ＯＨｄＧの上昇している患者、例えば脳梗塞急性期の患者の治療に有用である。
本発明によれば、血清中のＳ−１００β又は尿中の８−ＯＨｄＧの上昇を伴う細胞障害疾患の病態を的確かつ定量的に分析または評価することができ、また本明細書に記載した一定の構造を有するピラゾロン誘導体が有する細胞障害抑制作用の有効性を評価することもできる。
【図面の簡単な説明】
【図１】エダラボン投与患者（−■−）及び糖尿病患者（−◆−）の血清中Ｓ−１００β濃度の経日変化、ならびにＧＳＣによる意識障害の分類に基づいて評価したエダラボン投与患者の意識レベル（−▲−）示す。
【図２】エダラボン投与患者（−■−）及びエダラボン非投与患者（−●−）の血清中Ｓ−１００β濃度の経日変化を示す。
【図３】エダラボン投与患者（−■−）及びエダラボン非投与患者（−●−）の一日尿中８−ＯＨｄＧ量の経日変化を示す。
【図１】
2004137252.tif 000011
【図２】
2004137252.tif 000012
【図３】
2004137252.tif 000013