(57)【要約】【課題】  上部消化管疾患の予防・治療剤などの提供。【解決手段】 本発明は、優れた胃酸分泌抑制剤、あるいは優れた上部消化管疾患の予防・治療剤、およびこれらのスクリーニングなどを提供する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩を含有してなる上部消化管疾患の予防・治療剤。
【請求項２】
（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、または（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有してなる上部消化管疾患の予防・治療剤。
【請求項３】
（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの、または（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる上部消化管疾患の予防・治療剤。
【請求項４】
配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩を含有してなる胃酸分泌抑制剤。
【請求項５】
配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩を含有してなる消化不良症、骨代謝障害または貧血症の予防・治療剤。
【請求項６】
配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる消化不良症、骨代謝障害または貧血症の予防・治療剤。
【請求項７】
配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチドを含有してなる消化不良症、骨代謝障害または貧血症の予防・治療剤。
【請求項８】
配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩を含有してなる胃酸分泌促進剤。
【請求項９】
配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる胃液分泌能検査剤。
【請求項１０】
配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩を含有してなる胃液分泌能検査剤。
【請求項１１】
（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする上部消化管疾患の予防・治療剤のスクリーニング方法。
【請求項１２】
（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩を含有することを特徴とする上部消化管疾患の予防・治療剤のスクリーニング用キット。
【請求項１３】
（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチド、および（または）（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドを用いることを特徴とする上部消化管疾患の予防・治療剤のスクリーニング方法。
【請求項１４】
（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチド、および（または）（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドを含有することを特徴とする上部消化管疾患の予防・治療剤のスクリーニング用キット。
【請求項１５】
（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする胃酸分泌抑制剤のスクリーニング方法。
【請求項１６】
（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする消化不良症、骨代謝障害または貧血症の予防・治療剤のスクリーニング方法。
【請求項１７】
（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする胃酸分泌促進剤のスクリーニング方法。
【請求項１８】
哺乳動物に対して、（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、（ii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、（iii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチド、（iv）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、（v）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、（vi）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチドの有効量を投与することを特徴とする上部消化管疾患の予防・治療法。
【請求項１９】
（a）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を阻害する、または（b）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害することを特徴とする上部消化管疾患の予防・治療法。
【請求項２０】
胃酸分泌抑制剤を製造するための（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、（ii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、（iii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチド、（iv）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、（v）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、（vi）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチドの使用。
【請求項２１】
哺乳動物に対して、（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、（ii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、（iii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチド、（iv）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、（v）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、（vi）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチドの有効量を投与することを特徴とする胃酸分泌抑制法。
【請求項２２】
（a）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を阻害する、または（b）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害することを特徴とする胃酸分泌抑制法。
【請求項２３】
上部消化管疾患の予防・治療剤を製造するための（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、（ii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、（iii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチド、（iv）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、（v）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、（vi）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチドの使用。
【請求項２４】
哺乳動物に対して、（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、（ii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（iii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチド、（iv）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、（v）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、または（vi）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの有効量を投与することを特徴とする消化不良症、骨代謝障害または貧血症の予防・治療法。
【請求項２５】
（a）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する、または（b）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を促進することを特徴とする消化不良症、骨代謝障害または貧血症の予防・治療法。
【請求項２６】
消化不良症、骨代謝障害または貧血症の予防・治療剤を製造するための（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、（ii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（iii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチド、（iv）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、（v）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、または（vi）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの使用。
【請求項２７】
哺乳動物に対して、（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、（ii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（iii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチド、（iv）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、（v）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、または（vi）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの有効量を投与することを特徴とする胃酸分泌促進法。
【請求項２８】
（a）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する、または（b）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を促進することを特徴とする胃酸分泌促進法。
【請求項２９】
胃酸分泌促進剤を製造するための（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、（ii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（iii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチド、（iv）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、（v）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、または（vi）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの使用。
【請求項３０】
配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、または上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩を用いることを特徴とする、胃液分泌能検査法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、上部消化管疾患の予防・治療剤およびそのスクリーニングなどに関する。さらに詳しくは、消化不良症、骨代謝障害、貧血症などの予防・治療剤、胃酸分泌抑制剤、胃酸分泌促進剤およびこれらのスクリーニング、さらには胃液分泌能検査剤などに関する。
【背景技術】
【０００２】
消化管疾患は、日常臨床診療において常見な疾患の一つである。その中で逆流性食道炎、胃炎および消化性潰瘍は胃酸分泌と関連が深い疾患である。逆流性食道炎は下部食道括約筋の逆流防止機構の障害が原因で胃液や十二指腸液が食道内に逆流することにより、食道粘膜に障害を受ける疾患である。高齢者が増えると共に、逆流性食道炎患者が増加している。また、逆流性食道炎が長期化すると、食道下端にバレット上皮が形成され、将来的に食道の円柱上皮癌のリスクが増加する可能性が高い。胃炎の原因の約80％はヘリコバクターに起因し、それ以外は薬剤、ストレス、刺激性食物などとされている。消化性潰瘍の病因は様々な因子が絡んでいるが、（i）ヘリコバクター・ピロリの感染、（ii）非ステロイド性消炎鎮痛剤の障害、（iii）Zollinger-Ellison症候群のような過酸症、の三つに大きく分類されている。これらの疾患治療の大原則としては攻撃因子抑制剤、防御因子増強剤とヘリコバクター・ピロリの除菌剤を同時に行うことである。攻撃因子抑制剤としては、制酸薬（乾燥水酸化アルミニウムゲル、酸化マグネシウムなど）、抗ペプシン薬（スクラルファート、エカベトナトリウムなど）、酸分泌抑制薬（抗コリン作動薬、H2拮抗薬、プロトンポンプ抑制薬など）などが臨床で用いられている。H2拮抗剤およびプロトンポンプ抑制剤が開発されてから、上部消化管疾患の治療に画期的な進歩をもたらした。しかしながら、酸分泌抑制剤は、臨床では高齢者の逆流性食道炎患者など外科治療の不適患者、ヘリコバクター・ピロリ感染患者の除菌後の急性胃十二指腸潰瘍、逆流性食道炎の発生および難治性潰瘍などの治療にいずれも長期投与することになる。動物実験ではこれらの薬剤を長期間投与すると、胃粘膜の異常増殖を引き起こし、カルチノーマ（胃癌）になることが報告されている。臨床では酸分泌抑制剤を長期間投与すると、胃粘膜の増殖が見られ、さらに投与中止後に酸分泌のリバウンドにより、潰瘍の再発などが起こる。また、H2拮抗剤やプロトンポンプ抑制剤は、腎または肝機能障害を持つ患者には慎重に投与することが必要であり、副作用としてはショック、アナフィラキシー反応、汎血球減少、血小板減少、無顆粒球症、溶血性貧血、顆粒球減少、貧血、中毒性表皮壊死症、皮膚粘膜眼症候群、発疹、そう痒感、肝機能障害、黄疸、好酸球増多、消化器症状、頭痛、眠気不眠、眩暈、振戦、発熱、総コレステロール、尿酸の上昇、女性化乳房、かすみ目、浮腫、脱力感、倦怠感、舌・口唇のしびれ感、関節痛、筋肉痛、脱毛などが知られている。
一方、ヒトGPR8（Genomics、28巻、84-91頁、1995年）のリガンドとして、摂食作用、プロラクチン分泌促進などを有するペプチド（特許文献１ WO 01/98494号公報、J. Biol. Chem.、277巻、35826-35832頁、2002年）（Neuropetide W、NPW、GPR8リガンドなどと称される）が報告されている。
【特許文献１】WO 01/98494号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
上述したように、酸分泌のリバウンドが起こらず、かつ副作用が少ない新しい酸分泌抑制剤が望まれている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、このような現状に鑑み、鋭意検討した結果、GPR8リガンドが、ラットの胃酸分泌を促進することを見出し、更に研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
【０００５】
すなわち、本発明は、
（１）  配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩を含有してなる上部消化管疾患の予防・治療剤、
（１ａ）  配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩を含有してなる上部消化管疾患の予防・治療剤、
（１ｂ）  配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩のアンタゴニストを含有してなる上部消化管疾患の予防・治療剤、
（２）  （i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、または（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有してなる上部消化管疾患の予防・治療剤、
（３）  （i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの、または（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチドを含有してなる上部消化管疾患の予防・治療剤、
（４）  配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩を含有してなる胃酸分泌抑制剤、
（４ａ）  配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩を含有してなる胃酸分泌抑制剤、
（４ｂ）  配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩のアンタゴニストを含有してなる胃酸分泌抑制剤、
（５）  配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩を含有してなる消化不良症、骨代謝障害または貧血症の予防・治療剤、
（５ａ）  配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩を含有してなる消化不良症、骨代謝障害または貧血症の予防・治療剤、
（５ｂ）  配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩のアゴニストを含有してなる消化不良症、骨代謝障害または貧血症の予防・治療剤、
（６）  配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる消化不良症、骨代謝障害または貧血症の予防・治療剤、
（７）  配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチドを含有してなる消化不良症、骨代謝障害または貧血症の予防・治療剤、
（８）  配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩を含有してなる胃酸分泌促進剤、
（８ａ）  配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩を含有してなる胃酸分泌促進剤、
（８ｂ）  配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩のアゴニストを含有してなる胃酸分泌促進剤、
（９）  配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる胃液分泌能検査剤、
（１０）  配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩を含有してなる胃液分泌能検査剤、
（１１）  （i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする上部消化管疾患の予防・治療剤のスクリーニング方法、
（１２）  （i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩を含有することを特徴とする上部消化管疾患の予防・治療剤のスクリーニング用キット、
（１２ａ）  上記（１１）記載のスクリーニング方法または上記（１２）記載のスクリーニング用キットを用いて得られる上部消化管疾患の予防・治療剤、
（１３）  （i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチド、および（または）（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドを用いることを特徴とする上部消化管疾患の予防・治療剤のスクリーニング方法、
（１４）  （i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチド、および（または）（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドを含有することを特徴とする上部消化管疾患の予防・治療剤のスクリーニング用キット、
（１４ａ）  上記（１３）記載のスクリーニング方法または上記（１４）記載のスクリーニング用キットを用いて得られる上部消化管疾患の予防・治療剤、
（１５）  （i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする胃酸分泌抑制剤のスクリーニング方法、
（１５ａ）  上記（１５）記載のスクリーニング方法を用いて得られる胃酸分泌抑制剤、
（１６）  （i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする消化不良症、骨代謝障害または貧血症の予防・治療剤のスクリーニング方法、
（１６ａ）  上記（１６）記載のスクリーニング方法を用いて得られる消化不良症、骨代謝障害または貧血症の予防・治療剤、
（１７）  （i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）（ii）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする胃酸分泌促進剤のスクリーニング方法、
（１７ａ）  上記（１７）記載のスクリーニング方法を用いて得られる胃酸分泌促進剤、
（１８）  哺乳動物に対して、（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、（ii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、（iii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチド、（iv）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、（v）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、（vi）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチドの有効量を投与することを特徴とする上部消化管疾患の予防・治療法、
（１９）  （a）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を阻害する、または（b）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害することを特徴とする上部消化管疾患の予防・治療法、
（２０）  胃酸分泌抑制剤を製造するための（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、（ii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、（iii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチド、（iv）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、（v）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、（vi）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチドの使用、
（２１）  哺乳動物に対して、（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、（ii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、（iii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチド、（iv）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、（v）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、（vi）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチドの有効量を投与することを特徴とする胃酸分泌抑制法、
（２２）  （a）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を阻害する、または（b）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害することを特徴とする胃酸分泌抑制法、
（２３）  上部消化管疾患の予防・治療剤を製造するための（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、（ii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、（iii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチド、（iv）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、（v）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、（vi）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスポリヌクレオチドの使用、
（２４）  哺乳動物に対して、（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、（ii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（iii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチド、（iv）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、（v）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、または（vi）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの有効量を投与することを特徴とする消化不良症、骨代謝障害または貧血症の予防・治療法、
（２５）  （a）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する、または（b）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を促進することを特徴とする消化不良症、骨代謝障害または貧血症の予防・治療法、
（２６）  消化不良症、骨代謝障害または貧血症の予防・治療剤を製造するための（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、（ii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（iii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチド、（iv）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、（v）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、または（vi）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの使用、
（２７）  哺乳動物に対して、（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、（ii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（iii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチド、（iv）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、（v）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、または（vi）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの有効量を投与することを特徴とする胃酸分泌促進法、
（２８）  （a）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する、または（b）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を促進することを特徴とする胃酸分泌促進法、
（２９）  胃酸分泌促進剤を製造するための（i）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、（ii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、（iii）上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩をコードするポリヌクレオチド、（iv）配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、（v）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、または（vi）上記蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩をコードするポリヌクレオチドの使用、
（３０）  配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、または上記ポリペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩を用いることを特徴とする、胃液分泌能検査法などに関する。
【発明の効果】
【０００６】
本発明のポリペプチドまたは受容体の活性を阻害する化合物またはその塩、本発明の抗体、本発明のアンチセンスＤＮＡは、低毒性で安全な、例えば胃酸分泌抑制剤、粘膜保護剤、ミネラル吸収促進剤などとして有用であり、例えば上部消化管疾患〔例、消化性潰瘍（例、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、吻合部潰瘍、Zollinger-Ellison症候群など）、胃炎、逆流性食道炎、NUD（Non Ulcer Dyspepsia）、胃癌、胃MALTリンパ腫、非ステロイド系抗炎症剤に起因する潰瘍、手術後ストレスによる胃酸過多および潰瘍など〕の予防・治療剤、ヘリコバクター・ピロリ除菌剤などとして使用できる。
本発明のポリペプチドまたは受容体の活性を促進する化合物またはその塩、本発明のポリペプチドまたは受容体、本発明のＤＮＡは、例えば胃酸分泌促進剤として使用することができ、例えば、消化不良症（例、下垂体性消化不良症、腎性消化不良症など）、骨代謝障害（例、骨粗しょう症、骨軟化症など）、貧血症（例、鉄欠乏性貧血など）などの予防・治療剤として使用することができる。さらに、本発明のポリペプチドまたは受容体の活性を促進する化合物またはその塩、本発明のポリペプチドまたは受容体、本発明のＤＮＡは、胃液分泌能検査剤として使用できる。
本発明のポリペプチドまたは受容体、本発明のＤＮＡは、上記予防・治療剤のスクリーニングにも有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド（以下、本発明のポリペプチドと称する場合がある）は、ヒトや温血動物（例えば、モルモット、ラット、マウス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サルなど）の細胞（例えば、網膜細胞、肝細胞、脾細胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくは癌細胞など）もしくはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の各部位（例、網膜、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋など、または血球系の細胞もしくはその培養細胞（例、MEL,M1、CTLL-2、HT-2、WEHI-3、HL-60、JOSK-1、K562、ML-1、MOLT-3、MOLT-4、MOLT-10、CCRF-CEM、TALL-1、Jurkat、CCRT-HSB-2、KE-37、SKW-3、HUT-78、HUT-102、H9、U937、THP-1、HEL、JK-1、CMK、KO-812、MEG-01など）に由来するポリペプチドであってもよく、合成ポリペプチドであってもよい。
【０００８】
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と例えば約７０％以上、好ましくは約８０％以上、好ましくは約９０％以上、好ましくは約９５％以上、より好ましくは約９８％以上の相同性を有するアミノ酸配列などがあげられる。
特に、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、上記のアミノ酸配列の他、(i) 配列番号：１で表されるアミノ酸配列中の１〜５個（好ましくは１〜３個、さらに好ましくは１〜２個、より好ましくは、１個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、(ii) 配列番号：１で表されるアミノ酸配列に１〜５個（好ましくは１〜３個、さらに好ましくは１〜２個、より好ましくは、１個）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、(iii) 配列番号：１で表されるアミノ酸配列に１〜５個（好ましくは１〜３個、さらに好ましくは１〜２個、より好ましくは、１個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、(iv) 配列番号：１で表されるアミノ酸配列中の１〜５個（好ましくは１〜３個、さらに好ましくは１〜２個、より好ましくは、１個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、(v) 上記(i)〜(iv)を組み合わせたアミノ酸配列などがあげられる。
【０００９】
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドとしては、例えば、前記の配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を有するポリペプチドと実質的に同質の活性を有するポリペプチドなどが好ましい。
実質的に同質の活性としては、例えば、本発明のポリペプチドの有する活性（例、胃酸分泌促進作用など）などがあげられる。
実質的に同質の活性とは、それらの活性が性質的に（例、生理化学的に、または薬理学的に）同質であることを示す。
胃酸分泌促進の測定は、公知の方法に準じて行うことができ、例えば、Gastroenterology、5巻、43-45頁、1945年に記載の方法またはそれに準じた方法、後述の実施例に記載の方法などに従って測定することができる。
配列番号：１で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列の具体例としては、例えば、配列番号：２、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：２１、配列番号：２４、配列番号：２５、配列番号：３０、配列番号：３１、配列番号：３６、配列番号：３７、配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４４、配列番号：４５、配列番号：４６、配列番号：４７、配列番号：４８、配列番号：４９、配列番号：５０、配列番号：５１、配列番号：５２、配列番号：５３、配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：７１で表されるアミノ酸配列などがあげられる。
【００１０】
本発明のポリペプチドの具体例としては、例えば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：２で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：２１で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：７で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：８で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：９で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：１０で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：１１で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：１２で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：２４で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：２５で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：３０で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：３１で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：３６で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：３７で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：４０で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：４１で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：４２で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：４３で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：４４で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：４５で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：４６で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：４７で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：４８で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：４９で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：５０で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：５１で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：５２で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：５３で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：５４で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：５５で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：５６で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：５７で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドおよび配列番号：５８で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：７１で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドなどの本発明のポリペプチドと特異的に結合する能力を有するポリペプチドがあげられる。
【００１１】
また、本発明のポリペプチドは、本発明のポリペプチドの前駆体ポリペプチドをも包含する意味で用いられる。
該前駆体ポリペプチドの具体例としては、例えば、配列番号：６で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とするポリペプチド等があげられる。
より、具体的には、配列番号：６で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号：６で表わされるアミノ酸配列と約８０％以上、好ましくは約９０％以上、より好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などがあげられる。
特に、配列番号：６で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、上記のアミノ酸配列の他、(i) 配列番号：６で表されるアミノ酸配列中の１〜１５個（好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個、より好ましくは、１〜３個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、(ii) 配列番号：６で表されるアミノ酸配列に１〜１００個（好ましくは１〜５０個、さらに好ましくは１〜５個、より好ましくは、１〜３個）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、(iii) 配列番号：６で表されるアミノ酸配列に１〜１５個（好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個、より好ましくは、１〜３個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、(iv) 配列番号：６で表されるアミノ酸配列中の１〜１５個（好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個、より好ましくは、１〜３個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、(v) 上記(i)〜(iv)を組み合わせたアミノ酸配列などがあげられる。
配列番号：６で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列の具体例としては、例えば、配列番号：２０、配列番号：２３、配列番号：２９または配列番号：３５で表されるアミノ酸配列などがあげられる。
上記前駆体ポリペプチドの具体例としては、例えば、配列番号：６で表わされるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：２０で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：２３で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号：２９で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドおよび配列番号：３５で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドなどがあげられる。
【００１２】
本発明のポリペプチドに対する受容体としては、種々の受容体のうち、本発明のポリペプチドと結合活性を有し、本発明のポリプチドにより該受容体発現細胞の細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ca2+遊離、細胞内cAMP生成／抑制、細胞内cGMP生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、c-fosの活性化、pHの低下、GTPγS結合活性などを促進する活性等）が観察されるものなどがあげられる。
具体的には、（１）GPR8（配列番号：７３；Genomics、28巻、84-91頁、1995年）または配列番号：７３で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質、（２）ラットTGR26（配列番号：７５；WO 02/44368号公報）または配列番号：７５で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する受容体、（３）マウスTGR26（配列番号：７７；WO 02/44368号公報）または配列番号：７７で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する受容体、（４）GPR7（配列番号：７９；Genomics、28巻、84-91頁、1995年）または配列番号：７９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する受容体などがあげられる。
配列番号：７３で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する蛋白質、配列番号：７６で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する蛋白質、配列番号：７７で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する蛋白質、配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する蛋白質（以下、これらを本発明の受容体と称する場合がある）は、ヒトや温血動物（例えば、モルモット、ラット、マウス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サルなど）の細胞（例えば、網膜細胞、肝細胞、脾細胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくは癌細胞など）もしくはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の各部位（例、網膜、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋など、または血球系の細胞もしくはその培養細胞（例、MEL、M1、CTLL-2、HT-2、WEHI-3、HL-60、JOSK-1、K562、ML-1、MOLT-3、MOLT-4、MOLT-10、CCRF-CEM、TALL-1、Jurkat、CCRT-HSB-2、KE-37、SKW-3、HUT-78、HUT-102、H9、U937、THP-1、HEL、JK-1、CMK、KO-812、MEG-01など）に由来する蛋白質であってもよく、合成蛋白質であってもよい。
【００１３】
配列番号：７３で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号：７３で表わされるアミノ酸配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列などがあげられる。
配列番号：７５で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、例えば、配列番号：７５で表されるアミノ酸配列と８５％以上、好ましくは約９０％以上、より好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。
配列番号：７７で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、例えば、配列番号：７７で表されるアミノ酸配列と８６％以上、好ましくは約９０％以上、より好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。
配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列などがあげられる。
配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質としては、例えば、配列番号：７３、配列番号：７６、配列番号：７７または配列番号：７９で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、配列番号：７３、配列番号：７６、配列番号：７７または配列番号：７９で表されるアミノ酸配列を有する蛋白質と実質的に同質の活性を有する蛋白質などが好ましい。
配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、(i) 配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表されるアミノ酸配列中の１〜１５個（好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個、より好ましくは、１〜３個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、(ii) 配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表されるアミノ酸配列に１〜１５個（好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個、より好ましくは、１〜３個）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、(iii) 配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表されるアミノ酸配列に１〜１５個（好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個、より好ましくは、１〜３個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、(iv) 配列番号：７３、配列番号：７５、配列番号：７７または配列番号：７９で表されるアミノ酸配列中の１〜１５個（好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個、より好ましくは、１〜３個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、(v) 上記(i)〜(iv)を組み合わせたアミノ酸配列などがあげられる。
本発明の受容体の具体例としては、例えば、配列番号：７３で表されるアミノ酸配列を含有する蛋白質、配列番号：７５で表されるアミノ酸配列を含有する蛋白質、配列番号：７７で表されるアミノ酸配列を含有する蛋白質、配列番号：７９で表されるアミノ酸配列を含有する蛋白質などが用いられる。
【００１４】
本発明のポリペプチドに対する受容体の部分ペプチド（以下、本発明の部分ペプチドと称する場合がある）としては、後述の医薬等のスクリーニング方法に用いることのできる部分ペプチドであれば、いかなるものであっていてもよいが、好ましくは、本発明のポリペプチドに対する結合能を有する部分ペプチド、細胞膜外領域に相当するアミノ酸配列を含有する部分ペプチド等が用いられる。本発明の受容体の構成アミノ酸配列のうち２０個以上、好ましくは５０個以上、より好ましくは１００個以上のアミノ酸配列を有するペプチドなどが好ましい。（i）上記アミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１〜５個））のアミノ酸が欠失し、（ii）上記アミノ酸配列に１または２個以上（好ましくは１〜２０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１〜５個））のアミノ酸が付加し、または（iii）上記アミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは１〜１０個程度、より好ましくは数個、さらに好ましくは１〜５個程度）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されていてもよい。
具体例としては、（a）配列番号：７３で表されるアミノ酸配列中、1番目（Met）〜123番目（Phe）のアミノ酸残基からなる部分アミノ酸配列もしくはその一部、301番目（Asn）〜358番目（Lys）のアミノ酸残基からなる部分アミノ酸配列もしくはその一部、548番目（Tyr）〜593番目（Arg）のアミノ酸残基からなる部分アミノ酸配列もしくはその一部、および843番目（Ala）〜895番目（Ile）のアミノ酸残基からなる部分アミノ酸配列もしくはその一部から選択される１または２以上の部分アミノ酸配列を含有する部分ペプチド、（b）配列番号：７５で表されるアミノ酸配列中、1番目（Met）〜85番目（Asp）のアミノ酸残基からなる部分アミノ酸配列もしくはその一部、または222番目（Cys）〜329番目（Ala）のアミノ酸残基からなる部分アミノ酸配列もしくはその一部を含有するペプチドなどがあげられる。
【００１５】
本発明のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドは、ペプチド標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端がＣ末端（カルボキシル末端）である。本発明のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドは、Ｃ末端がカルボキシル基（-COOH）、カルボキシレート(-COO-）、アミド（-CONH2）またはエステル（-COOR）の何れであってもよい。
ここでエステルにおけるＲとしては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルもしくはｎ−ブチルなどのＣ1-6アルキル基、例えば、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのＣ3-8シクロアルキル基、例えば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ6-12アリール基、例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ1-2アルキル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−ナフチル−Ｃ1-2アルキル基などのＣ7-14アラルキル基のほか、経口用エステルとして汎用されるピバロイルオキシメチル基などが用いられる。
本発明のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドがＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されているものも本発明のポリペプチドに含まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用いられる。
さらに、本発明のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドには、Ｎ末端のアミノ酸残基（例、メチオニン残基）のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ1-6アルカノイルなどのＣ1-6アシル基など）で保護されているもの、生体内で切断されて生成するＮ末端のグルタミン残基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例えば-OH、-SH、アミノ基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基など）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ1-6アルカノイル基などのＣ1-6アシル基など）で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖蛋白質などの複合蛋白質なども含まれる。
【００１６】
本発明のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドの塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸、有機酸）や塩基（例、アルカリ金属塩）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。このような塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる。
本発明のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドは、前述したヒトや温血動物の細胞または組織から公知のポリペプチドの精製方法によって製造することもできるし、後述するポリペプチドをコードするＤＮＡで形質転換された形質転換体を培養することによっても製造することができる。また、後述のペプチド合成法に準じて製造することもできる。例えば、WO 01/98494号公報、WO 02/44368号公報などに記載の方法に準じて製造することができる。
ヒトや哺乳動物の組織または細胞から製造する場合、ヒトや哺乳動物の組織または細胞をホモジナイズした後、酸などで抽出を行ない、該抽出液を逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーを組み合わせることにより精製単離することができる。
【００１７】
本発明のポリペプチド、受容体、その部分ペプチド、もしくはそれらの塩、またはそれらのアミド体の合成には、通常市販のポリペプチド合成用樹脂を用いることができる。そのような樹脂としては、例えば、クロロメチル樹脂、ヒドロキシメチル樹脂、ベンズヒドリルアミン樹脂、アミノメチル樹脂、４−ベンジルオキシベンジルアルコール樹脂、４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂、ＰＡＭ樹脂、４−ヒドロキシメチルメチルフェニルアセトアミドメチル樹脂、ポリアクリルアミド樹脂、４−（２',４'-ジメトキシフェニル−ヒドロキシメチル）フェノキシ樹脂、４−（２',４'-ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃアミノエチル）フェノキシ樹脂などをあげることができる。このような樹脂を用い、α−アミノ基と側鎖官能基を適当に保護したアミノ酸を、目的とするポリペプチドの配列通りに、公知の各種縮合方法に従い、樹脂上で縮合させる。反応の最後に樹脂からポリペプチドを切り出すと同時に各種保護基を除去し、さらに高希釈溶液中で分子内ジスルフィド結合形成反応を実施し、目的のポリペプチド、受容体、部分ペプチドまたはそれらのアミド体を取得する。
上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、ポリペプチド合成に使用できる各種活性化試薬を用いることができるが、特に、カルボジイミド類がよい。カルボジイミド類としては、ＤＣＣ、Ｎ，Ｎ'−ジイソプロピルカルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ'−（３−ジメチルアミノプロリル）カルボジイミドなどが用いられる。これらによる活性化にはラセミ化抑制添加剤（例えば、ＨＯＢｔ、ＨＯＯＢｔ）とともに保護アミノ酸を直接樹脂に添加するかまたは、対称酸無水物またはＨＯＢｔエステルあるいはＨＯＯＢｔエステルとしてあらかじめ保護アミノ酸の活性化を行なった後に樹脂に添加することができる。
保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用いられる溶媒としては、ポリペプチド縮合反応に使用しうることが知られている溶媒から適宜選択されうる。例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド，Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド，Ｎ−メチルピロリドンなどの酸アミド類、塩化メチレン，クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類、トリフルオロエタノールなどのアルコール類、ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類、ピリジン，ジオキサン，テトラヒドロフランなどのエーテル類、アセトニトリル，プロピオニトリルなどのニトリル類、酢酸メチル，酢酸エチルなどのエステル類あるいはこれらの適宜の混合物などが用いられる。反応温度はポリペプチド結合形成反応に使用され得ることが知られている範囲から適宜選択され、通常約−２０〜５０℃の範囲から適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体は通常１.５〜４倍過剰で用いられる。ニンヒドリン反応を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合には保護基の脱離を行なうことなく縮合反応を繰り返すことにより十分な縮合を行なうことができる。反応を繰り返しても十分な縮合が得られないときには、無水酢酸またはアセチルイミダゾールを用いて未反応アミノ酸をアセチル化することによって、後の反応に影響を与えないようにすることができる。
【００１８】
原料のアミノ基の保護基としては、例えば、Ｚ、Ｂｏｃ、ｔ−ペンチルオキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、Ｃｌ−Ｚ、Ｂｒ−Ｚ、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホルミル、２−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホスフィノチオイル、Ｆｍｏｃなどが用いられる。
カルボキシル基は、例えば、アルキルエステル化（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｔ−ブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、２−アダマンチルなどの直鎖状、分枝状もしくは環状アルキルエステル化）、アラルキルエステル化（例えば、ベンジルエステル、４−ニトロベンジルエステル、４−メトキシベンジルエステル、４−クロロベンジルエステル、ベンズヒドリルエステル化）、フェナシルエステル化、ベンジルオキシカルボニルヒドラジド化、ｔ−ブトキシカルボニルヒドラジド化、トリチルヒドラジド化などによって保護することができる。
セリンの水酸基は、例えば、エステル化またはエーテル化によって保護することができる。このエステル化に適する基としては、例えば、アセチル基などの低級（Ｃ１−６）アルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイル基、ベンジルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基などの炭酸から誘導される基などが用いられる。また、エーテル化に適する基としては、例えば、ベンジル基、テトラヒドロピラニル基、t-ブチル基などである。
チロシンのフェノール性水酸基の保護基としては、例えば、Ｂｚｌ、Ｃｌ２−Ｂｚｌ、２−ニトロベンジル、Ｂｒ−Ｚ、ｔ−ブチルなどが用いられる。
ヒスチジンのイミダゾールの保護基としては、例えば、Ｔｏｓ、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル、ＤＮＰ、ベンジルオキシメチル、Ｂｕｍ、Ｂｏｃ、Ｔｒｔ、Ｆｍｏｃなどが用いられる。
【００１９】
原料のカルボキシル基の活性化されたものとしては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エステル〔アルコール（例えば、ペンタクロロフェノール、２，４，５−トリクロロフェノール、２，４−ジニトロフェノール、シアノメチルアルコール、パラニトロフェノール、ＨＯＮＢ、Ｎ−ヒドロキシスクシミド、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、ＨＯＢｔ）とのエステル〕などが用いられる。原料のアミノ基の活性化されたものとしては、例えば、対応するリン酸アミドが用いられる。
保護基の除去（脱離）方法としては、例えば、Ｐｄ−黒あるいはＰｄ−炭素などの触媒の存在下での水素気流中での接触還元や、また、無水フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸あるいはこれらの混合液などによる酸処理や、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピペリジン、ピペラジンなどによる塩基処理、また液体アンモニア中ナトリウムによる還元なども用いられる。上記酸処理による脱離反応は、一般に約−２０〜４０℃の温度で行なわれるが、酸処理においては、例えば、アニソール、フェノール、チオアニソール、メタクレゾール、パラクレゾール、ジメチルスルフィド、１，４−ブタンジチオール、１，２−エタンジチオールなどのようなカチオン捕捉剤の添加が有効である。また、ヒスチジンのイミダゾール保護基として用いられる２，４−ジニトロフェニル基はチオフェノール処理により除去され、トリプトファンのインドール保護基として用いられるホルミル基は上記の１，２−エタンジチオール、１，４−ブタンジチオールなどの存在下の酸処理による脱保護以外に、希水酸化ナトリウム溶液、希アンモニアなどによるアルカリ処理によっても除去される。
原料の反応に関与すべきでない官能基の保護ならびに保護基、およびその保護基の脱離、反応に関与する官能基の活性化などは公知の基または公知の手段から適宜選択しうる。
【００２０】
本発明のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドのアミド体を得る別の方法としては、例えば、まず、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基をアミド化して保護した後、アミノ基側にペプチド（ポリペプチド）鎖を所望の鎖長まで延ばした後、該ペプチド鎖のＮ末端のα−アミノ基の保護基のみを除いたポリペプチドとＣ末端のカルボキシル基の保護基のみを除去したポリペプチドとを製造し、この両ポリペプチドを上記したような混合溶媒中で縮合させる。縮合反応の詳細については上記と同様である。縮合により得られた保護ポリペプチドを精製した後、上記方法によりすべての保護基を除去し、所望の粗ポリペプチドを得ることができる。この粗ポリペプチドは既知の各種精製手段を駆使して精製し、主要画分を凍結乾燥することで所望のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドのアミド体を得ることができる。
本発明のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドのエステル体を得るには、例えば、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基を所望のアルコール類と縮合しアミノ酸エステルとした後、ポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドのアミド体と同様にして、所望のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドのエステル体を得ることができる。
【００２１】
本発明のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドは、公知のペプチドの合成法に従って、あるいは受容体の部分ペプチドについては、受容体を適当なペプチダーゼで切断することによって製造することができる。ペプチドの合成法としては、例えば、固相合成法、液相合成法のいずれによっても良い。すなわち、本発明のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドを構成し得る部分ペプチドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合させ、生成物が保護基を有する場合は保護基を脱離することにより目的のペプチドを製造することができる。公知の縮合方法や保護基の脱離としては、例えば、以下の（a）〜（e）に記載された方法があげられる。
（a）M. Bodanszky および M.A. Ondetti、ペプチド・シンセシス (Peptide Synthesis), Interscience Publishers, New York (1966年)
（b）SchroederおよびLuebke、ザ・ペプチド(The Peptide), Academic Press, New York (1965年)
（c）泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株) （1975年）
（d）矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 タンパク質の化学IV、 205、(1977年)
（e）矢島治明監修、続医薬品の開発、第14巻、ペプチド合成、広川書店
また、反応後は通常の精製法、例えば、溶媒抽出・蒸留・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー・再結晶などを組み合わせて本発明のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドを精製単離することができる。上記方法で得られるポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドが遊離体である場合は、公知の方法あるいはそれに準じる方法によって適当な塩に変換することができるし、逆に塩で得られた場合は、公知の方法あるいはそれに準じる方法によって遊離体または他の塩に変換することができる。
【００２２】
本発明のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、前述した本発明のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。
ライブラリーに使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよい。また、前記した細胞・組織よりtotalＲＮＡまたはｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて直接Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction（以下、RT-PCR法と略称する）によって増幅することもできる。
【００２３】
本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、例えば（a）配列番号：３、配列番号：４、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：５９、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６３、配列番号：６４、配列番号：６５、配列番号：６６、配列番号：６７、配列番号：６８、配列番号：６９、配列番号：７０または配列番号：７２で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、（b）配列番号：３、配列番号：４、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：５９、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６３、配列番号：６４、配列番号：６５、配列番号：６６、配列番号：６７、配列番号：６８、配列番号：６９、配列番号：７０または配列番号：７２で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明のポリペプチドと実質的に同質の活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡ、（c）配列番号：５、配列番号：１９、配列番号：２２、配列番号：２８または配列番号：３４で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、または（d）配列番号：５、配列番号：１９、配列番号：２２、配列番号：２８または配列番号：３４で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有するＤＮＡなどであれば何れのものでもよい。
（i）配列番号：３、配列番号：４、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：５９、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６３、配列番号：６４、配列番号：６５、配列番号：６６、配列番号：６７、配列番号：６８、配列番号：６９、配列番号：７０または配列番号：７２で表わされる塩基配列、または（ii）配列番号：５、配列番号：１９、配列番号：２２、配列番号：２８または配列番号：３４で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、それぞれ（i）配列番号：３、配列番号：４、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：５９、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６３、配列番号：６４、配列番号：６５、配列番号：６６、配列番号：６７、配列番号：６８、配列番号：６９、配列番号：７０または配列番号：７２で表される塩基配列、または（ii）配列番号：５、配列番号：１９、配列番号：２２、配列番号：２８または配列番号：３４で表わされる塩基配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、さらに好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
【００２４】
ハイブリダイゼーションは、公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、Molecular Cloning 2nd（J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法などに従って行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。より好ましくは、ハイストリンジェントな条件に従って行なうことができる。
ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナトリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９〜２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６０〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１９ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ましい。
より具体的には、
(i) 配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：３で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(ii) 配列番号：２で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：４で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(iii) 配列番号：７で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１３で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(iv) 配列番号：８で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１４で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(v) 配列番号：９で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１５で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(vi) 配列番号：１０で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１６で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(vii) 配列番号：１１で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１７で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(viii) 配列番号：１２で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：１８で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(ix) 配列番号：２４で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２６で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(x) 配列番号：２５で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２７で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xi) 配列番号：３０で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：３２で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xii) 配列番号：３１で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：３３で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xiii) 配列番号：３６で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：３８で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xiv) 配列番号：３７で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：３９で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xv) 配列番号：４０で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：３で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xvi) 配列番号：４１で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：５９で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xvii) 配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：６０で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xviii) 配列番号：４３で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：６１で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xix) 配列番号：４４で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：６２で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xx) 配列番号：４５で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：６３で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xxi) 配列番号：４６で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：６４で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xxii) 配列番号：４７で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：６５で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xxiii) 配列番号：４８で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２６で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xxiv) 配列番号：４９で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：３２で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xxv) 配列番号：５０で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：３で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xxvi) 配列番号：５１で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：３で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xxvii) 配列番号：５２で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：６６で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xxviii) 配列番号：５３で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：６７で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xxix) 配列番号：５４で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：６８で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xxx) 配列番号：５５で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：６９で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xxxi) 配列番号：２１で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：７０で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xxxii) 配列番号：５６で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：６６で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xxxiii) 配列番号：５７で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：３で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xxxiv) 配列番号：５８で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：６６で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ、
(xxxv) 配列番号：７１で表わされるアミノ酸配列を含有するポリペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：７２で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
【００２５】
本発明の受容体をコードするＤＮＡとしては、例えば、（１）配列番号：７４で表される塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：７４で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：７３で表されるアミノ酸を含有する蛋白質と実質的に同質の活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ、（２）配列番号：７６で表される塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：７６で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：７５で表されるアミノ酸を含有する蛋白質と実質的に同質の活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ、（３）配列番号：７８で表される塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：７８で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：７７で表されるアミノ酸を含有する蛋白質と実質的に同質の活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ、（４）配列番号：８０で表される塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：８０で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：７９で表されるアミノ酸を含有する蛋白質と実質的に同質の活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡなどであれば何れのものでもよい。
配列番号：７４、配列番号：７６、配列番号：７８または配列番号：８０で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、それぞれ配列番号：７４、配列番号：７６、配列番号：７８または配列番号：８０で表わされる塩基配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、さらに好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
【００２６】
ハイブリダイゼーションは、公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・クローニング（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法などに従って行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。より好ましくは、ハイストリンジェントな条件に従って行なうことができる。
ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナトリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９〜２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６０〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１９ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ましい。
より具体的には、配列番号：７３で表わされるアミノ酸配列を含有する蛋白質をコードするＤＮＡとしては、配列番号：７４で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、配列番号：７５で表わされるアミノ酸配列を含有する蛋白質をコードするＤＮＡとしては、配列番号：７６で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、配列番号：７７で表わされるアミノ酸配列を含有する蛋白質をコードするＤＮＡとしては、配列番号：７８で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、配列番号：７９で表わされるアミノ酸配列を含有する蛋白質をコードするＤＮＡとしては、配列番号：８０で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
【００２７】
本発明の受容体の部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、前述した本発明の受容体の部分ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。
本発明の受容体の部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、例えば、（１）配列番号：７４で表わされる塩基配列を有するＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡ、または配列番号：７４で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：７３で表されるアミノ酸を含有する蛋白質と実質的に同質の活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡ、（２）配列番号：７６で表わされる塩基配列を有するＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡ、または配列番号：７６で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：７５で表されるアミノ酸を含有する蛋白質と実質的に同質の活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡ、（３）配列番号：７８で表わされる塩基配列を有するＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡ、または配列番号：７７で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：７５で表されるアミノ酸を含有する蛋白質と実質的に同質の活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡ、（４）配列番号：８０で表わされる塩基配列を有するＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡ、または配列番号：８０で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：７９で表されるアミノ酸を含有する蛋白質と実質的に同質の活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡなどが用いられる。
配列番号：７４、配列番号：７６、配列番号：７８または配列番号：８０で表わされる塩基配列とハイブリダイズできるＤＮＡは、前記と同意義を示す。
ハイブリダイゼーションの方法およびハイストリンジェントな条件は前記と同様のものが用いられる。
また、本発明の受容体の部分ペプチドをコードするＤＮＡとしてより具体的には、配列番号：７３で表されるアミノ酸配列中、1番目（Met）〜43番目（Phe）、101番目（Asn）〜118番目（Lys）、188番目（Tyr）〜213番目（Arg）および283番目（Ala）〜295番目（Ile）で表される部分アミノ酸配列から選択される１または２以上の部分アミノ酸配列を含有する部分ペプチドをコードする塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡ、またはこれらとハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡなどがあげられる。
【００２８】
本発明のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡは、公知の方法で標識化されていてもよく、具体的にはアイソトープラベル化されたもの、蛍光標識されたもの（例えば、フルオレセインなどによる蛍光標識）、ビオチン化されたものまたは酵素標識されたものなどがあげられる。好ましくはアイソトープラベル化された本発明のポリペプチドが用いられる。
本発明のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチド（以下、これらポリペプチド等をコードするＤＮＡのクローニングおよび発現の説明においては、これらポリペプチド等を単に本発明のポリペプチドと略記する場合がある）を完全にコードするＤＮＡのクローニングの手段としては、本発明のポリペプチドの部分塩基配列を有する合成ＤＮＡプライマーを用いて公知のＰＣＲ法によって増幅するか、または適当なベクターに組み込んだＤＮＡを本発明のポリペプチドの一部あるいは全領域をコードするＤＮＡ断片もしくは合成ＤＮＡを用いて標識したものとのハイブリダイゼーションによって選別することができる。ハイブリダイゼーションの方法は、例えば、Molecular Cloning 2nd（J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法などに従って行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。
【００２９】
ＤＮＡの塩基配列の変換は、公知のキット、例えば、MutanTM-super Express Km（宝酒造（株））、MutanTM-K（宝酒造（株））等を用いて、ODA-LA PCR法、Gapped duplex法、Kunkel法等の公知の方法あるいはそれらに準じる方法に従って行なうことができる。
クローン化されたポリペプチドをコードするＤＮＡは目的によりそのまま、または所望により制限酵素で消化したり、リンカーを付加したりして使用することができる。該ＤＮＡはその５’末端側に翻訳開始コドンとしてのＡＴＧを有し、また３’末端側には翻訳終止コドンとしてのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡＧを有していてもよい。これらの翻訳開始コドンや翻訳終止コドンは、適当な合成ＤＮＡアダプターを用いて付加することもできる。
【００３０】
本発明のポリペプチドの発現ベクターは、例えば、（イ）本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡから目的とするＤＮＡ断片を切り出し、（ロ）該ＤＮＡ断片を適当な発現ベクター中のプロモーターの下流に連結することにより製造することができる。
ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミド（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１２，ｐＵＣ１３）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ１１０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミド（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファージなどのバクテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウイルス，バキュロウイルスなどの動物ウイルスなどの他、ｐＡ１−１１、ｐＸＴ１、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどが用いられる。
本発明で用いられるプロモーターとしては、遺伝子の発現に用いる宿主に対応して適切なプロモーターであればいかなるものでもよい。例えば、動物細胞を宿主として用いる場合は、ＳＲαプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＨＩＶ・ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＨＳＶ-ＴＫプロモーターなどがあげられる。
これらのうち、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）プロモーター、ＳＲαプロモーターなどを用いるのが好ましい。宿主がエシェリヒア属菌である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰLプロモーター、ｌｐｐプロモーター、Ｔ７プロモーターなどが、宿主がバチルス属菌である場合は、ＳＰＯ１プロモーター、ＳＰＯ２プロモーター、ｐｅｎＰプロモーターなど、宿主が酵母である場合は、ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨプロモーターなどが好ましい。宿主が昆虫細胞である場合は、ポリヘドリンプロモーター、Ｐ１０プロモーターなどが好ましい。
発現ベクターには、以上の他に、所望によりエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加シグナル、選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場合がある）などを含有しているものを用いることができる。選択マーカーとしては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（以下、ｄｈｆｒと略称する場合がある）遺伝子〔メソトレキセート（ＭＴＸ）耐性〕、アンピシリン耐性遺伝子（以下、Ａｍｐｒと略称する場合がある）、ネオマイシン耐性遺伝子（以下、Ｎｅｏｒと略称する場合がある、Ｇ４１８耐性）等があげられる。特に、ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニーズハムスター細胞を用いてｄｈｆｒ遺伝子を選択マーカーとして使用する場合、目的遺伝子をチミジンを含まない培地によっても選択できる。
また、必要に応じて、宿主に合ったシグナル配列を、本発明のポリペプチドのＮ端末側に付加する。宿主がエシェリヒア属菌である場合は、PhoＡ・シグナル配列、OmpＡ・シグナル配列などが、宿主がバチルス属菌である場合は、α−アミラーゼ・シグナル配列、サブチリシン・シグナル配列などが、宿主が酵母である場合は、ＭＦα・シグナル配列、ＳＵＣ２・シグナル配列など、宿主が動物細胞である場合には、インシュリン・シグナル配列、α−インターフェロン・シグナル配列、抗体分子・シグナル配列などがそれぞれ利用できる。
このようにして構築された本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡを含有するベクターを用いて、形質転換体を製造することができる。
宿主としては、例えば、エシェリヒア属菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞などが用いられる。
【００３１】
エシェリヒア属菌の具体例としては、例えば、エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１２・ＤＨ１〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA，60巻，160(1968)〕，ＪＭ１０３〔Nucleic Acids Research，9巻，309(1981)〕，ＪＡ２２１〔Journal of Molecular Biology，120巻，517(1978)〕，ＨＢ１０１〔Journal of Molecular Biology，41巻，459(1969)〕，Ｃ６００〔Genetics，39巻，440(1954)〕などが用いられる。
バチルス属菌としては、例えば、バチルス・サブチルス（Bacillus subtilis）ＭＩ１１４〔Gene，24巻,255(1983)〕，２０７−２１〔Journal of Biochemistry，95巻,87(1984)〕などが用いられる。
酵母としては、例えば、サッカロマイセス  セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）ＡＨ２２，ＡＨ２２Ｒ−，ＮＡ８７−１１Ａ，ＤＫＤ−５Ｄ，２０Ｂ−１２、シゾサッカロマイセス  ポンベ（Schizosaccharomyces pombe）ＮＣＹＣ１９１３，ＮＣＹＣ２０３６、ピキア  パストリス（Pichia pastoris）ＫＭ７１などが用いられる。
【００３２】
昆虫細胞としては、例えば、ウイルスがＡｃＮＰＶの場合は、夜盗蛾の幼虫由来株化細胞（Spodoptera frugiperda cell；Ｓｆ細胞）、Trichoplusia niの中腸由来のＭＧ１細胞、Trichoplusia niの卵由来のHigh FiveTM細胞、Mamestra brassicae由来の細胞またはEstigmena acrea由来の細胞などが用いられる。ウイルスがＢｍＮＰＶの場合は、蚕由来株化細胞（Bombyx mori N 細胞；ＢｍＮ細胞）などが用いられる。該Ｓｆ細胞としては、例えば、Ｓｆ９細胞（ATCC CRL1711）、Ｓｆ２１細胞（以上、In Vivo,13, 213-217,(1977)）などが用いられる。
昆虫としては、例えば、カイコの幼虫などが用いられる〔前田ら、ネイチャー（Nature），315巻，592(1985)〕。
動物細胞としては、例えば、サル細胞COS-7，Vero，チャイニーズハムスター細胞CHO（以下、CHO細胞と略記），dhfr遺伝子欠損チャイニーズハムスター細胞CHO（以下、CHO(dhfr-)細胞と略記），マウスL細胞，マウスAtT-20，マウスミエローマ細胞，ラットGH3，ヒトFL細胞などが用いられる。
エシェリヒア属菌を形質転換するには、例えば、Proc. Natl. Acad. Sci. USA，69巻，2110(1972)やGene，17巻，107(1982)などに記載の方法に従って行なうことができる。
バチルス属菌を形質転換するには、例えばMolecular & General Genetics，168巻，111(1979)などに記載の方法に従って行なうことができる。
酵母を形質転換するには、例えば、Methods in Enzymology，194巻，182-187(1991)、Proc. Natl. Acad. Sci. USA，75巻，1929(1978)などに記載の方法に従って行なうことができる。
【００３３】
昆虫細胞または昆虫を形質転換するには、例えば、Bio/Technology, 6, 47-55(1988)などに記載の方法に従って行なうことができる。
動物細胞を形質転換するには、例えば、細胞工学別冊８  新細胞工学実験プロトコール．263-267(1995)（秀潤社発行）、Virology，52巻，456(1973)に記載の方法に従って行なうことができる。
このようにして、ポリペプチドをコードするＤＮＡを含有する発現ベクターで形質転換された形質転換体を得ることができる。
宿主がエシェリヒア属菌、バチルス属菌である形質転換体を培養する際、培養に使用される培地としては液体培地が適当であり、その中には該形質転換体の生育に必要な炭素源、窒素源、無機物その他が含有せしめられる。炭素源としては、例えば、グルコース、デキストリン、可溶性澱粉、ショ糖など、窒素源としては、例えば、アンモニウム塩類、硝酸塩類、コーンスチープ・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大豆粕、バレイショ抽出液などの無機または有機物質、無機物としては、例えば、塩化カルシウム、リン酸二水素ナトリウム、塩化マグネシウムなどがあげられる。また、酵母エキス、ビタミン類、成長促進因子などを添加してもよい。培地のｐＨは約５〜８が望ましい。
エシェリヒア属菌を培養する際の培地としては、例えば、グルコース、カザミノ酸を含むＭ９培地〔Journal of Experiments in Molecular Genetics，431-433，Cold Spring Harbor Laboratory, New York 1972〕が好ましい。ここに必要によりプロモーターを効率よく働かせるために、例えば、３β−インドリルアクリル酸のような薬剤を加えることができる。
【００３４】
宿主がエシェリヒア属菌の場合、培養は通常約１５〜４３℃で約３〜２４時間行ない、必要により、通気や撹拌を加えることもできる。
宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常約３０〜４０℃で約６〜２４時間行ない、必要により通気や撹拌を加えることもできる。
宿主が酵母である形質転換体を培養する際、培地としては、例えば、バークホールダー（Burkholder）最小培地〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA，77巻,4505(1980)〕や０.５％カザミノ酸を含有するＳＤ培地〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA，81巻,5330(1984)〕があげられる。培地のｐＨは約５〜８に調整するのが好ましい。培養は通常約２０〜３５℃で約２４〜７２時間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。
宿主が昆虫細胞または昆虫である形質転換体を培養する際、培地としては、Grace's Insect Medium（Nature,195,788(1962)）に非動化した１０％ウシ血清等の添加物を適宜加えたものなどが用いられる。培地のｐＨは約６．２〜６．４に調整するのが好ましい。培養は通常約２７℃で約３〜５日間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。
宿主が動物細胞である形質転換体を培養する際、培地としては、例えば、約５〜２０％の胎児牛血清を含むＭＥＭ培地〔Science，122巻，501(1952)〕，ＤＭＥＭ培地〔Virology，8巻，396(1959)〕，ＲＰＭＩ １６４０培地〔The Journal of the American Medical Association 199巻，519(1967)〕，１９９培地〔Proceeding of the Society for the Biological Medicine，73巻，1(1950)〕などが用いられる。ｐＨは約６〜８であるのが好ましい。培養は通常約３０〜４０℃で約１５〜６０時間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。
以上のようにして、形質転換体の細胞内、細胞膜または細胞外などに本発明のポリペプチドを生成せしめることができる。
上記培養物から本発明のポリペプチドを分離精製するには、例えば、下記の方法により行なうことができる。
【００３５】
本発明のポリペプチドを培養菌体あるいは細胞から抽出するに際しては、培養後、公知の方法で菌体あるいは細胞を集め、これを適当な緩衝液に懸濁し、超音波、リゾチームおよび／または凍結融解などによって菌体あるいは細胞を破壊したのち、遠心分離やろ過によりポリペプチドの粗抽出液を得る方法などが適宜用いられる。緩衝液の中に尿素や塩酸グアニジンなどの蛋白質変性剤や、トリトンＸ−１００ＴＭなどの界面活性剤が含まれていてもよい。培養液中にポリペプチドが分泌される場合には、培養終了後、公知の方法で菌体あるいは細胞と上清とを分離し、上清を集める。
このようにして得られた培養上清、あるいは抽出液中に含まれるポリペプチドの精製は、公知の分離・精製法を適宜組み合わせて行なうことができる。これらの公知の分離、精製法としては、塩析や溶媒沈澱法などの溶解度を利用する方法、透析法、限外ろ過法、ゲルろ過法、およびＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法などの主として分子量の差を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィーなどの荷電の差を利用する方法、アフィニティークロマトグラフィーなどの特異的親和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳動法などの等電点の差を利用する方法などが用いられる。
かくして得られるポリペプチドが遊離体で得られた場合には、公知の方法あるいはそれに準じる方法によって塩に変換することができ、逆に塩で得られた場合には公知の方法あるいはそれに準じる方法により、遊離体または他の塩に変換することができる。
なお、組換え体が産生するポリペプチドを、精製前または精製後に適当な蛋白修飾酵素を作用させることにより、任意に修飾を加えたり、ポリペプチドを部分的に除去することもできる。蛋白修飾酵素としては、例えば、トリプシン、キモトリプシン、アルギニルエンドペプチダーゼ、プロテインキナーゼ、グリコシダーゼなどが用いられる。
【００３６】
本発明のポリペプチドまたは受容体に対する抗体（以下、単に本発明の抗体と称する場合がある）は、本発明のポリペプチドまたは受容体を認識し得る抗体であれば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の何れであってもよい。
本発明のポリペプチドまたは受容体に対する抗体は、本発明のポリペプチドまたは受容体を抗原として用い、公知の抗体または抗血清の製造法に従って製造することができる。
〔モノクローナル抗体の作製〕
（ａ）モノクローナル抗体産生細胞の作製
本発明のポリペプチドまたは受容体は、温血動物に対して投与により抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とともに投与される。投与に際して抗体産生能を高めるため、完全フロイントアジュバントや不完全フロイントアジュバントを投与してもよい。投与は通常２〜６週毎に１回ずつ、計２〜１０回程度行われる。用いられる温血動物としては、例えば、サル、ウサギ、イヌ、モルモット、マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ニワトリがあげられるが、マウスおよびラットが好ましく用いられる。
モノクローナル抗体産生細胞の作製に際しては、抗原で免疫された温血動物、例えばマウスから抗体価の認められた個体を選択し最終免疫の２〜５日後に脾臓またはリンパ節を採取し、それらに含まれる抗体産生細胞を同種または異種動物の骨髄腫細胞と融合させることにより、モノクローナル抗体産生ハイブリドーマを調製することができる。抗血清中の抗体価の測定は、例えば、後記の標識化ポリペプチドと抗血清とを反応させたのち、抗体に結合した標識剤の活性を測定することにより行なうことができる。融合操作は既知の方法、例えば、ケーラーとミルスタインの方法〔Nature、256、495 (1975)〕に従い実施することができる。融合促進剤としては、例えば、ポリエチレングリコール（PEG）やセンダイウィルスなどがあげられるが、好ましくはPEGが用いられる。
骨髄腫細胞としては、例えば、NS-1、P3U1、SP2/0、AP-1などの温血動物の骨髄腫細胞があげられるが、P3U1が好ましく用いられる。用いられる抗体産生細胞（脾臓細胞）数と骨髄腫細胞数との好ましい比率は1：1〜20：1程度であり、PEG（好ましくはPEG1000〜PEG6000）が10〜80％程度の濃度で添加され、20〜40℃、好ましくは30〜37℃で1〜10分間インキュベートすることにより効率よく細胞融合を実施できる。
モノクローナル抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングには種々の方法が使用できるが、例えば、ポリペプチド（蛋白質）抗原を直接あるいは担体とともに吸着させた固相（例、マイクロプレート）にハイブリドーマ培養上清を添加し、次に放射性物質や酵素などで標識された抗免疫グロブリン抗体（細胞融合に用いられる細胞がマウスの場合、抗マウス免疫グロブリン抗体が用いられる）またはプロテインＡを加え、固相に結合したモノクローナル抗体を検出する方法、抗免疫グロブリン抗体またはプロテインＡを吸着させた固相にハイブリドーマ培養上清を添加し、放射性物質や酵素などで標識されたポリペプチドを加え、固相に結合したモノクローナル抗体を検出する方法などがあげられる。
モノクローナル抗体の選別は、公知あるいはそれに準じる方法に従って行なうことができる。通常HAT（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）を添加した動物細胞用培地で行なうことができる。選別および育種用培地としては、ハイブリドーマが生育できるものならばどのような培地を用いても良い。例えば、1〜20％、好ましくは10〜20％の牛胎児血清を含むRPMI 1640培地、1〜10％の牛胎児血清を含むGIT培地（和光純薬工業（株））あるいはハイブリドーマ培養用無血清培地（SFM-101、日水製薬（株））などを用いることができる。培養温度は、通常20〜40℃、好ましくは約37℃である。培養時間は、通常5日〜3週間、好ましくは1週間〜2週間である。培養は、通常5％炭酸ガス下で行なうことができる。ハイブリドーマ培養上清の抗体価は、上記の抗血清中の抗体価の測定と同様にして測定できる。
（ｂ）モノクローナル抗体の精製
モノクローナル抗体の分離精製は、公知の方法、例えば、免疫グロブリンの分離精製法〔例、塩析法、アルコール沈殿法、等電点沈殿法、電気泳動法、イオン交換体（例、DEAE）による吸脱着法、超遠心法、ゲルろ過法、抗原結合固相あるいはプロテインＡあるいはプロテインＧなどの活性吸着剤により抗体のみを採取し、結合を解離させて抗体を得る特異的精製法〕に従って行なうことができる。
【００３７】
〔ポリクローナル抗体の作製〕
本発明のポリクローナル抗体は、公知あるいはそれに準じる方法に従って製造することができる。例えば、免疫抗原（ポリペプチド抗原）自体、あるいはそれとキャリアー蛋白質との複合体をつくり、上記のモノクローナル抗体の製造法と同様に温血動物に免疫を行ない、該免疫動物から本発明のポリペプチドに対する抗体含有物を採取して、抗体の分離精製を行なうことにより製造することができる。
温血動物を免疫するために用いられる免疫抗原とキャリアー蛋白質との複合体に関し、キャリアー蛋白質の種類およびキャリアー蛋白質とハプテンとの混合比は、キャリアー蛋白質に架橋させて免疫したハプテンに対して抗体が効率良くできれば、どのようなものをどのような比率で架橋させてもよいが、例えば、ウシ血清アルブミンやウシサイログロブリン、ヘモシアニン等を重量比でハプテン１に対し、約０．１〜２０、好ましくは約１〜５の割合でカプルさせる方法が用いられる。
また、ハプテンとキャリアー蛋白質のカプリングには、種々の縮合剤を用いることができるが、グルタルアルデヒドやカルボジイミド、マレイミド活性エステル、チオール基、ジチオビリジル基を含有する活性エステル試薬等が用いられる。
縮合生成物は、温血動物に対して、抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とともに投与される。投与に際して抗体産生能を高めるため、完全フロイントアジュバントや不完全フロイントアジュバントを投与してもよい。投与は、通常約２〜６週毎に１回ずつ、計約３〜１０回程度行なわれる。
ポリクローナル抗体は、上記の方法で免疫された温血動物の血液、腹水など、好ましくは血液から採取することができる。
抗血清中のポリクローナル抗体価の測定は、上記の抗血清中の抗体価の測定と同様にして測定できる。ポリクローナル抗体の分離精製は、上記のモノクローナル抗体の分離精製と同様の免疫グロブリンの分離精製法に従って行なうことができる。
【００３８】
本発明のポリペプチド、受容体またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡ（以下、これらのＤＮＡを本発明のＤＮＡと略記する場合がある）に相補的な、または実質的に相補的な塩基配列を有するアンチセンスポリヌクレオチド（好ましくはＤＮＡ）（以下、アンチセンスＤＮＡと略記する場合がある）としては、本発明のＤＮＡに相補的な、または実質的に相補的な塩基配列を有し、該ＤＮＡの発現を抑制し得る作用を有するものであれば、いずれのアンチセンスＤＮＡであってもよい。
本発明のＤＮＡに実質的に相補的な塩基配列とは、例えば、本発明のＤＮＡに相補的な塩基配列（すなわち、本発明のＤＮＡの相補鎖）の全塩基配列あるいは部分塩基配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列などがあげられる。特に、本発明のＤＮＡの相補鎖の全塩基配列うち、本発明のポリペプチドのＮ末端部位をコードする部分の塩基配列（例えば、開始コドン付近の塩基配列など）の相補鎖と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有するアンチセンスＤＮＡが好適である。これらのアンチセンスＤＮＡは、公知のＤＮＡ合成装置などを用いて製造することができる。
本発明のアンチセンスＤＮＡは、変化せしめられたり、修飾された糖、塩基、結合を含有していて良く、リポゾーム、ミクロスフェアのような特殊な形態で供与されたり、遺伝子治療により適用されたり、付加された形態で与えられることができうる。こうして付加形態で用いられるものとしては、リン酸基骨格の電荷を中和するように働くポリリジンのようなポリカチオン体、細胞膜との相互作用を高めたり、核酸の取込みを増大せしめるような脂質（例えば、ホスホリピド、コレステロールなど）といった疎水性のものが挙げられる。付加するに好ましい脂質としては、コレステロールやその誘導体（例えば、コレステリルクロロホルメート、コール酸など）が挙げられる。こうしたものは、核酸の３'端あるいは５'端に付着させることができ、塩基、糖、分子内ヌクレオシド結合を介して付着させることができうる。その他の基としては、核酸の３'端あるいは５'端に特異的に配置されたキャップ用の基で、エキソヌクレアーゼ、ＲＮａｓｅなどのヌクレアーゼによる分解を阻止するためのものが挙げられる。こうしたキャップ用の基としては、ポリエチレングリコール、テトラエチレングリコールなどのグリコールをはじめとした当該分野で知られた水酸基の保護基が挙げられるが、それに限定されるものではない。
アンチセンスＤＮＡの阻害活性は、本発明の形質転換体、本発明の生体内や生体外の遺伝子発現系、あるいは本発明のペプチドまたは受容体の生体内や生体外の翻訳系を用いて調べることができる。
【００３９】
以下に、（a）本発明のポリペプチド、（b）本発明の受容体（以下、その部分ペプチドも含む）、（c）本発明のＤＮＡ、（d）本発明の抗体および（e）本発明のアンチセンスＤＮＡなどの用途を説明する。
（１）本発明のポリペプチドが関与する疾患の予防・治療剤、胃液分泌能検査剤
本発明のポリペプチドは、本発明の受容体、例えばGPR8、GPR7、ラットTGR26またはマウスTGR26などの発現細胞の細胞刺激活性を有し、本発明の受容体の内因性リガンドである。本発明のポリペプチドは、胃酸分泌促進作用などを有する。
本発明のポリペプチドまたは本発明のＤＮＡに異常があったり、欠損している場合、または本発明の受容体または該受容体をコードするＤＮＡに異常があったり、欠損している場合には、例えば、消化不良症（例、下垂体性消化不良症、腎性消化不良症など）、骨代謝障害（例、骨粗しょう症、骨軟化症など）、貧血症（例、鉄欠乏性貧血など）などとなる可能性が高い。従って、本発明のポリペプチドおよび本発明のＤＮＡは、例えば、胃酸分泌促進剤として使用することができ、例えば、消化不良症（例、下垂体性消化不良症、腎性消化不良症など）、骨代謝障害（例、骨粗しょう症、骨軟化症など）、貧血症（例、鉄欠乏性貧血など）などの予防・治療剤として使用することができる。本発明のポリペプチドは、さらに胃液分泌能検査剤としても使用できる。
本発明のポリペプチドおよび本発明のＤＮＡは、例えば、生体内において本発明のポリペプチドが減少あるいは欠損している患者がいる場合に、（イ）本発明のＤＮＡを該患者に投与し、生体内で本発明のポリペプチドを発現させることによって、（ロ）細胞に本発明のＤＮＡを挿入し、本発明のポリペプチドを発現させた後に、該細胞を患者に移植することによって、または（ハ）本発明のポリペプチドを該患者に投与することなどによって、該患者における本発明のポリペプチドの役割を十分に、あるいは正常に発揮させることができる。
本発明のＤＮＡを上記の予防・治療剤として使用する場合は、該ＤＮＡを単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って、ヒトまたは温血動物に投与することができる。本発明のＤＮＡは、そのままで、あるいは摂取促進のための補助剤などの生理学的に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与できる。
本発明のポリペプチドを上記の予防・治療剤として使用する場合は、少なくとも９０％、好ましくは９５％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９％以上に精製されたものを使用するのが好ましい。
本発明のポリペプチドは、例えば、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的（好ましくは皮下投与）に使用できる。例えば、本発明のポリペプチドを生理学的に認められる担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な用量が得られるようにするものである。
【００４０】
錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、前記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することができる。
注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムなど）などがあげられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例えば、エタノールなど）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート80TM、HCO-50など）などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などがあげられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液など）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。調製された注射液は、通常、適当なアンプルに充填される。
本発明のＤＮＡが挿入されたベクターも上記と同様に製剤化され、通常、非経口的に使用される。
このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは温血動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、トリ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、など）に対して投与することができる。
本発明のポリペプチドの投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、骨粗しょう症の治療の目的で本発明のポリペプチドを皮下投与する場合、一般的に成人（体重60kgとして）においては、一日につき該ポリペプチドを約0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。他の動物の場合も、体重60kg当たりに換算した量を投与することができる。
本発明のポリペプチドは、胃液分泌能検査剤として使用できる。本発明のポリペプチドを被験者に投与し、胃液の分泌程度を、BAO（basal acid output）、MAO（maximal acid output）などを指標とし、測定する。これより、胃液分泌細胞の機能残存程度、胃細胞の萎縮程度などが判明し、十二指腸潰瘍、逆流性食道炎、胃炎、胃潰瘍、萎縮性胃炎、胃癌などの治療効果、経過観察、再発、予防の上で一指標となるとともに、手術範囲を決める際にも有用である。
【００４１】
（２）胃酸分泌促進または阻害作用を有する医薬候補化合物のスクリーニング
本発明のポリペプチドは本発明の受容体のリガンドとしての機能などを有するため、本発明のポリペプチドの機能・活性を促進する（例、胃酸分泌促進作用を有するなど）化合物またはその塩は、例えば、胃酸分泌促進剤などとして有用であり、例えば、消化不良症（例、下垂体性消化不良症、腎性消化不良症など）、骨代謝障害（例、骨粗しょう症、骨軟化症など）、貧血症（例、鉄欠乏性貧血など）などの予防・治療剤などとして使用できる。該化合物またはその塩は、さらに、胃液分泌能検査剤としても使用することができる。
一方、本発明のポリペプチドの機能・活性（胃酸分泌促進作用など）を阻害する化合物またはその塩は、例えば胃酸分泌抑制剤、粘膜保護剤、ミネラル吸収促進剤などとして有用であり、例えば上部消化管疾患〔例、消化性潰瘍（例、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、吻合部潰瘍、Zollinger-Ellison症候群など）、胃炎、逆流性食道炎、NUD（Non Ulcer Dyspepsia）、胃癌、胃MALTリンパ腫、非ステロイド系抗炎症剤に起因する潰瘍、手術後ストレスによる胃酸過多および潰瘍など〕の予防・治療剤、ヘリコバクター・ピロリ除菌剤などとして使用できる。
該スクリーニングは、本発明のポリペプチドを用いるか、または組換え型本発明のポリペプチドの発現系を構築し、該発現系を用いたレセプター結合アッセイ系を用いることによって、本発明のポリペプチドとその受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のポリペプチドの活性を促進または阻害する化合物）（例えば、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物など）またはその塩をスクリーニングすることができる。このような化合物には、本発明の受容体を介して細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ca2+遊離、細胞内cAMP生成／抑制、細胞内cGMP生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、c-fosの活性化、pHの低下、GTPγS結合活性などを促進する活性など）を有する化合物（即ち本発明のポリペプチドの受容体アゴニスト）と該細胞刺激活性を有しない化合物（即ち本発明のポリペプチドの受容体アンタゴニスト）などが含まれる。「本発明のポリペプチドとの結合性を変化させる」とは、本発明のポリペプチドとの結合を阻害する場合と本発明のポリペプチドとの結合を促進する場合の両方を包含するものである。
【００４２】
本発明のポリペプチドを用いることを特徴とする本発明のポリペプチドの活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法の具体例としては、（i）本発明の受容体またはその部分ペプチド（以下、これらを単に本発明の受容体と略称する場合がある）に、本発明のポリペプチドを接触させた場合と（ii）上記した本発明の受容体に、本発明のポリペプチドおよび試験化合物を接触させた場合との比較を行なうことを特徴とする本発明のポリペプチドと本発明の受容体の結合性を変化させる化合物（本発明のポリペプチドの活性を促進または阻害する化合物）またはその塩のスクリーニング方法が挙げられる。
上記スクリーニング方法においては、（i）上記した本発明の受容体に、本発明のポリペプチドを接触させた場合と（ii）上記した本発明の受容体に、本発明のポリペプチドおよび試験化合物を接触させた場合における、例えば該本発明の受容体に対する該ポリペプチドの結合量、細胞刺激活性などを測定して、比較する。
【００４３】
上記スクリーニング方法のさらなる具体例としては、
（a）標識された本発明のポリペプチドを、上記した本発明の受容体に接触させた場合と、標識された本発明のポリペプチドおよび試験化合物を本発明の受容体に接触させた場合における、標識された本発明のポリペプチドの本発明の受容体に対する結合量を測定し、比較することを特徴とする本発明のポリペプチドと本発明の受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のポリペプチドの活性を促進または阻害する化合物）またはその塩のスクリーニング方法、
（b）標識された本発明のポリペプチドを、本発明の受容体を含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合と、標識された本発明のポリペプチドおよび試験化合物を本発明の受容体を含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合における、標識された本発明のポリペプチドの該細胞または該膜画分に対する結合量を測定し、比較することを特徴とする本発明のポリペプチドと本発明の受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のポリペプチドの活性を促進または阻害する化合物）またはその塩のスクリーニング方法、
（c）標識された本発明のポリペプチドを、本発明の受容体をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現した本発明の受容体に接触させた場合と、標識された本発明のポリペプチドおよび試験化合物を本発明の受容体をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現した本発明のポリペプチドの受容体に接触させた場合における、標識された本発明のポリペプチドの本発明の受容体に対する結合量を測定し、比較することを特徴とする本発明のポリペプチドと本発明の受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のポリペプチドの活性を促進または阻害する化合物）またはその塩のスクリーニング方法、
【００４４】
（d）本発明の受容体を活性化する化合物（例えば、本発明のポリペプチド）を本発明の受容体を含有する細胞に接触させた場合と、本発明の受容体を活性化する化合物および試験化合物を本発明の受容体を含有する細胞に接触させた場合における、本発明の受容体を介した細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ca2+遊離、細胞内cAMP生成／抑制、細胞内cGMP生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、c-fosの活性化、pHの低下、GTPγS結合活性などを促進する活性または抑制する活性など）を測定し、比較することを特徴とする本発明のポリペプチドと本発明の受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のポリペプチドの活性を促進または阻害する化合物）またはその塩のスクリーニング方法、および
（e）本発明の受容体を活性化する化合物（例えば、本発明のポリペプチドなど）を本発明の受容体をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現した本発明の受容体に接触させた場合と、本発明の受容体を活性化する化合物および試験化合物を、本発明の受容体をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現した本発明の受容体に接触させた場合における、本発明の受容体を介する細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ca2+遊離、細胞内cAMP生成／抑制、細胞内cGMP生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、c-fosの活性化、pHの低下、GTPγS結合活性などを促進する活性または抑制する活性など）を測定し、比較することを特徴とする本発明のポリペプチドと本発明の受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のポリペプチドの活性を促進または阻害する化合物）またはその塩のスクリーニング方法などである。
標識された本発明のポリペプチドの好ましい具体例は、〔125I〕でそれぞれ標識された配列番号：１、配列番号：２、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：２１、配列番号：２４、配列番号：２５、配列番号：３０、配列番号：３１、配列番号：３６、配列番号：３７、配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４４、配列番号：４５、配列番号：４６、配列番号：４７、配列番号：４８、配列番号：４９、配列番号：５０、配列番号：５１、配列番号：５２、配列番号：５３、配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：７１で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドなどが挙げられる。
【００４５】
上記スクリーニング方法の具体的な説明を以下にする。
まず、本発明のスクリーニング方法に用いる本発明の受容体としては、本発明のポリペプチドをリガンドとして認識するものであれば何れのものであってもよいが、ヒトや温血動物の臓器の膜画分などが好適である。しかし、特にヒト由来の臓器は入手が極めて困難なことから、スクリーニングに用いられるものとしては、組換え体を用いて大量発現させた本発明の受容体などが適している。
本発明の受容体を製造するには、前述の製造方法などが用いられる。
本発明のスクリーニング方法において、本発明の受容体を含有する細胞あるいは該細胞膜画分などを用いる場合、後述の調製法に従えばよい。
本発明の受容体を含有する細胞を用いる場合、該細胞をグルタルアルデヒド、ホルマリンなどで固定化してもよい。固定化方法は公知の方法に従って行うことができる。
本発明の受容体を含有する細胞としては、本発明の受容体を発現した宿主細胞をいうが、該宿主細胞としては、前述の大腸菌、枯草菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが挙げられる。また、本発明の受容体を発現した宿主細胞は、前述の本発明のポリペプチドを含有する発現ベクターで形質転換された形質転換体の製造方法と同様の方法などがあげられる。
膜画分としては、細胞を破砕した後、公知の方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをいう。細胞の破砕方法としては、Potter−Elvehjem型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、ワーリングブレンダーやポリトロン（Kinematica社製）による破砕、超音波による破砕、フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させることによる破砕などがあげられる。細胞膜の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠心力による分画法が主として用いられる。例えば、細胞破砕液を低速（500〜3000rpm）で短時間（通常、約1〜10分）遠心し、上清をさらに高速（15000〜30000rpm）で通常30分〜2時間遠心し、得られる沈澱を膜画分とする。該膜画分中には、発現した本発明の受容体と細胞由来のリン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含まれる。
該本発明の受容体を含有する細胞や膜画分中の本発明の受容体の量は、1細胞当たり103〜108分子であるのが好ましく、105〜107分子であるのが好適である。なお、発現量が多いほど膜画分当たりのリガンド結合活性（比活性）が高くなり、高感度なスクリーニング系の構築が可能になるばかりでなく、同一ロットで大量の試料を測定できるようになる。
【００４６】
本発明のポリペプチドと本発明の受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のポリペプチドの活性を促進または阻害する化合物）をスクリーニングする前記の（a）〜（c）を実施するためには、適当な本発明の受容体画分と、標識された本発明のポリペプチドなどが用いられる。本発明の受容体画分としては、天然型の本発明の受容体画分か、またはそれと同等の活性を有する組換え型本発明の受容体画分などが望ましい。ここで、同等の活性とは、同等のリガンド結合活性などを示す。標識されたポリペプチドとしては、例えば〔3H〕、〔125I〕、〔14C〕、〔35S〕などで標識されたポリペプチドなどを利用することができる。このうち好ましくは、〔125I〕で標識されたポリペプチドである。
具体的には、本発明のポリペプチドと本発明の受容体との結合性を変化させる化合物のスクリーニングを行うには、まず本発明の受容体を含有する細胞または細胞の膜画分を、スクリーニングに適したバッファーに懸濁することによりレセプター標品を調製する。バッファーには、pH4〜10（望ましくはpH6〜8）のリン酸バッファー、トリス−塩酸バッファーなどのリガンドとレセプターとの結合を阻害しないバッファーであればいずれでもよい。また、非特異的結合を低減させる目的で、CHAPS、Tween-80TM（花王−アトラス社）、ジギトニン、デオキシコレートなどの界面活性剤をバッファーに加えることもできる。さらに、プロテアーゼによる本発明の受容体や本発明のポリペプチドの分解を抑える目的でＰＭＳＦ、ロイペプチン、E-64（ペプチド研究所製）、ペプスタチンなどのプロテアーゼ阻害剤を添加することもできる。0.01〜10mlの該レセプター溶液に、一定量（5000〜500000cpm）の標識された本発明のポリペプチドを添加し、同時に10-10〜10-7Mの試験化合物を共存させる。非特異的結合量（NSB）を知るために大過剰の未標識の本発明のポリペプチドを加えた反応チューブも用意する。反応は0〜50℃、望ましくは4〜37℃で20分〜24時間、望ましくは30分〜3時間行う。反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過し、適量の同バッファーで洗浄した後、ガラス繊維濾紙に残存する放射活性を液体シンチレーションカウンターまたはγ−カウンターで計測する。拮抗する物質がない場合のカウント(B0）から非特異的結合量（NSB）を引いたカウント（B0-NSB）を100％とした時、特異的結合量（B-NSB）が例えば50％以下になる試験化合物を拮抗阻害能力のある候補物質として選択することができる。
【００４７】
本発明のポリペプチドと本発明の受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のポリペプチドの活性を促進または阻害する化合物）をスクリーニングする前記の（d）〜（e）の方法を実施するためには、本発明の受容体を介する細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ca2+遊離、細胞内cAMP生成／抑制、細胞内cGMP生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、c-fosの活性化、pHの低下、GTPγS結合活性などを促進する活性または抑制する活性など）を公知の方法または市販の測定用キットを用いて測定することができる。具体的には、まず、本発明の受容体を含有する細胞をマルチウェルプレート等に培養する。スクリーニングを行うにあたっては前もって新鮮な培地あるいは細胞に毒性を示さない適当なバッファーに交換し、試験化合物などを添加して一定時間インキュベートした後、細胞を抽出あるいは上清液を回収して、生成した産物をそれぞれの方法に従って定量する。細胞刺激活性の指標とする物質（例えば、アラキドン酸など）の生成が、細胞が含有する分解酵素によって検定困難な場合は、該分解酵素に対する阻害剤を添加してアッセイを行なってもよい。また、cAMP産生抑制などの活性については、フォルスコリンなどで細胞の基礎的産生量を増大させておいた細胞に対する産生抑制作用として検出することができる。
細胞刺激活性を測定してスクリーニングを行なうには、適当な本発明の受容体を発現した細胞が必要である。本発明の受容体を発現した細胞としては、前述の本発明の受容体発現細胞株などが望ましい。
試験化合物としては、例えばペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液などがあげられる。
【００４８】
本発明のポリペプチドと本発明の受容体との結合性を変化させる化合物（本発明のポリペプチドの活性を促進または阻害する化合物）またはその塩のスクリーニング用キットは、本発明の受容体またはその塩、本発明の受容体の部分ペプチドまたはその塩、本発明の受容体を含有する細胞、あるいは本発明の受容体を含有する細胞の膜画分、および本発明のポリペプチドを含有するものである。
本発明のスクリーニング用キットの例としては、次のものが挙げられる。
１．スクリーニング用試薬
（a）測定用緩衝液および洗浄用緩衝液
Hanks' Balanced Salt Solution（ギブコ社製）に、0.05％のウシ血清アルブミン（シグマ社製）を加えたもの。
孔径0.45μmのフィルターで濾過滅菌し、4℃で保存するか、あるいは用時調製しても良い。
（b）本発明の受容体標品
本発明の受容体を発現させたCHO細胞を、12穴プレートに5×105個／穴で継代し、37℃、5％ CO2、95％ airで2日間培養したもの。
（c）標識リガンド
〔3H〕、〔125I〕、〔14C〕、〔35S〕などで標識された本発明のポリペプチドを適当な溶媒または緩衝液に溶解したものを4℃あるいは-20℃にて保存し、用時に測定用緩衝液にて1μMに希釈する。
（d）リガンド標準液
本発明のポリペプチドを0.1％ウシ血清アルブミン（シグマ社製）を含むPBSで1mMとなるように溶解し、-20℃で保存する。
【００４９】
２．測定法
（a）12穴組織培養用プレートにて培養した本発明の受容体を発現させた細胞を、測定用緩衝液1mlで2回洗浄した後、490μlの測定用緩衝液を各穴に加える。
（b）10-3〜10-10Mの試験化合物溶液を5μl加えた後、標識された本発明のペプチドを5μl加え、室温にて1時間反応させる。非特異的結合量を知るためには試験化合物の代わりに10-3Mの本発明のポリペプチドを5μl加えておく。
（c）反応液を除去し、1mlの洗浄用緩衝液で3回洗浄する。細胞に結合した標識された本発明のポリペプチドを0.2N NaOH-1％ SDSで溶解し、4mlの液体シンチレーターA（和光純薬製）と混合する。
（d）液体シンチレーションカウンター（ベックマン社製）を用いて放射活性を測定し、Percent Maximum Binding（PMB）を次式で求める。
PMB＝［(B-NSB)/(B0-NSB)］×100
PMB ：Percent Maximum Binding
B   ：検体を加えた時の値
NSB ：Non-specific Binding（非特異的結合量）
B0   ：最大結合量
【００５０】
上記スクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩は、本発明のポリペプチドと本発明の受容体との結合を変化させる（結合を阻害あるいは促進する）化合物（本発明のポリペプチドの活性を促進または阻害する化合物）であり、具体的には本発明の受容体を介して細胞刺激活性を有する化合物またはその塩（いわゆる本発明の受容体アゴニスト）、あるいは該刺激活性を有しない化合物（いわゆる本発明の受容体アンタゴニスト）である。該化合物としては、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
上記本発明の受容体アゴニストであるかアンタゴニストであるかの具体的な評価方法は以下の（i）または（ii）に従えばよい。
（i）前記（a）〜（c）のスクリーニング方法で示されるバインディング・アッセイを行い、本発明のポリペプチドと本発明の受容体との結合性を変化させる（特に、結合を阻害する）化合物を得た後、該化合物が上記した本発明の受容体を介する細胞刺激活性を有しているか否かを測定する。細胞刺激活性を有する化合物またはその塩は本発明の受容体アゴニストであり、該活性を有しない化合物またはその塩は本発明の受容体アンタゴニストである。
（ii）(a)試験化合物を本発明の受容体を含有する細胞に接触させ、上記本発明の受容体を介した細胞刺激活性を測定する。細胞刺激活性を有する化合物またはその塩は本発明の受容体アゴニストである。
(b) 本発明の受容体を活性化する化合物（例えば、本発明のポリペプチドまたは本発明の受容体アゴニストなど）を本発明の受容体を含有する細胞に接触させた場合と、本発明の受容体を活性化する化合物および試験化合物を本発明の受容体を含有する細胞に接触させた場合における、本発明の受容体を介した細胞刺激活性を測定し、比較する。本発明の受容体を活性化する化合物による細胞刺激活性を減少させ得る化合物またはその塩は本発明の受容体アンタゴニストである。
上記本発明の受容体アゴニストは、本発明の受容体に対する本発明のポリペプチドが有する生理活性と同様の作用を有しているので、本発明のポリペプチドと同様に胃酸分泌促進剤として有用であり、安全で低毒性な、例えば、消化不良症（例、下垂体性消化不良症、腎性消化不良症など）、骨代謝障害（例、骨粗しょう症、骨軟化症など）、貧血症（例、鉄欠乏性貧血など）などの予防・治療剤などとして使用することができる。
上記本発明の受容体アンタゴニストは、本発明の受容体に対する本発明のポリペプチドが有する生理活性を抑制することができるので、例えば胃酸分泌抑制剤、粘膜保護剤、ミネラル吸収促進剤などとして有用であり、安全で低毒性な、例えば上部消化管疾患〔例、消化性潰瘍（例、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、吻合部潰瘍、Zollinger-Ellison症候群など）、胃炎、逆流性食道炎、NUD（Non Ulcer Dyspepsia）、胃癌、胃MALTリンパ腫、非ステロイド系抗炎症剤に起因する潰瘍、手術後ストレスによる胃酸過多および潰瘍など〕の予防・治療剤、ヘリコバクター・ピロリ除菌剤などして使用することができる。
上記本発明の受容体アゴニストは、胃液分泌能検査剤としても使用できる。該アゴニストを被験者に投与し、胃液の分泌程度を、BAO（basal acid output）、MAO（maximal acid output）などを指標とし、測定する。これより、胃液分泌細胞の機能残存程度、胃細胞の萎縮程度などが判明し、十二指腸潰瘍、逆流性食道炎、胃炎、胃潰瘍、萎縮性胃炎、胃癌などの治療効果、経過観察、再発、予防の上で一指標となるとともに、手術範囲を決める際にも有用である。
【００５１】
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩は、例えば、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などから選ばれた化合物であり、本発明のポリペプチドの活性または機能を促進または阻害する化合物である。
該化合物の塩としては、前記した本発明のポリペプチドの塩と同様のものが用いられる。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物を上述の予防・治療剤として使用する場合、常套手段に従って実施することができる。例えば、前記した本発明のポリペプチドを含有する医薬と同様にして、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、無菌性溶液、懸濁液剤などとすることができる。
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは温血動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、トリ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、その作用、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はある。例えば、逆流性食道炎の治療の目的で本発明のポリペプチドの活性を阻害する化合物を皮下投与する場合、一般的に成人（体重60kg当たり）においては、一日につき該化合物を約0.1〜100ｍｇ、好ましくは約1.0〜50ｍｇ、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。他の動物の場合も、体重60kg当たりに換算した量を投与することができる。例えば、消化不良症の治療の目的で本発明のポリペプチドの活性を促進する化合物を皮下投与する場合、一般的に成人（体重60kg当たり）においては、一日につき該化合物を約0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。他の動物の場合も、体重60kg当たりに換算した量を投与することができる。
【００５２】
（３）本発明のポリペプチドの定量
本発明の抗体は、本発明のポリペプチドまたは受容体を特異的に認識することができるので、被検液中の本発明のポリペプチドまたは受容体の定量、特にサンドイッチ免疫測定法による定量などに使用することができる。
本発明は、
（i）本発明の抗体と、被検液および標識化された本発明のポリペプチドまたは受容体とを競合的に反応させ、該抗体に結合した標識化された本発明のポリペプチドの割合を測定することを特徴とする被検液中の本発明のポリペプチドの定量法、および
（ii）被検液と担体上に不溶化した本発明の抗体および標識化された本発明の別の抗体とを同時あるいは連続的に反応させたのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定することを特徴とする被検液中の本発明のポリペプチドまたは受容体の定量法を提供する。
上記（ii）の定量法においては、一方の抗体が本発明のポリペプチドまたは受容体のＮ端部を認識する抗体で、他方の抗体が本発明のポリペプチドまたは受容体のＣ端部に反応する抗体であることが望ましい。
また、本発明のポリペプチドまたは受容体に対するモノクローナル抗体を用いて本発明のポリペプチドまたは受容体の定量を行うことができるほか、組織染色等による検出を行なうこともできる。これらの目的には、抗体分子そのものを用いてもよく、また、抗体分子のF(ab')2、Fab'、あるいはFab画分を用いてもよい。
本発明の抗体を用いる本発明のポリペプチドまたは受容体の定量法は、 特に制限されるべきものではなく、被測定液中の抗原量（例えば、ポリペプチド量）に対応した抗体、抗原もしくは抗体−抗原複合体の量を化学的または物理的手段により検出し、これを既知量の抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算出する測定法であれば、いずれの測定法を用いてもよい。例えば、ネフロメトリー、競合法、イムノメトリック法およびサンドイッチ法が好適に用いられるが、感度、特異性の点で、後述するサンドイッチ法を用いるのが特に好ましい。
【００５３】
標識物質を用いる測定法に用いられる標識剤としては、放射性同位元素（例、〔125I〕、〔131I〕、〔3H〕、〔14C〕、〔32P〕、〔33P〕、〔35S〕など）、蛍光物質〔例、シアニン蛍光色素（例、Cy2、Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7（アマシャムバイオサイエンス社製）など）、フルオレスカミン、フルオレッセンイソチオシアネートなど〕、酵素（例、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素など）、発光物質（例、ルミノール、ルミノール誘導体、ルシフェリン、ルシゲニンなど）、ビオチン、ランタニド元素などが用いられる。さらに、抗体あるいは抗原と標識剤との結合にビオチン−アビジン系を用いることもできる。
抗原あるいは抗体の不溶化に当っては、物理吸着を用いてもよく、また通常ポリペプチドあるいは酵素等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用いる方法でもよい。担体としては、アガロース、デキストラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹脂、あるいはガラス等があげられる。
サンドイッチ法においては不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検液を反応させ（１次反応）、さらに標識化した別の本発明のモノクローナル抗体を反応させ（２次反応）たのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定することにより被検液中の本発明のポリペプチド量を定量することができる。１次反応と２次反応は逆の順序に行っても、また、同時に行なってもよいし時間をずらして行なってもよい。標識化剤および不溶化の方法は前記のそれらに準じることができる。また、サンドイッチ法による免疫測定法において、固相用抗体あるいは標識用抗体に用いられる抗体は必ずしも１種類である必要はなく、測定感度を向上させる等の目的で２種類以上の抗体の混合物を用いてもよい。
【００５４】
本発明のサンドイッチ法による本発明のポリペプチドの測定法においては、１次反応と２次反応に用いられる本発明のモノクローナル抗体は、本発明のポリペプチドの結合する部位が相異なる抗体が好ましく用いられる。すなわち、１次反応および２次反応に用いられる抗体は、例えば、２次反応で用いられる抗体が、本発明のポリペプチドのＣ端部を認識する場合、１次反応で用いられる抗体は、好ましくはＣ端部以外、例えばＮ端部を認識する抗体が用いられる。
本発明のモノクローナル抗体をサンドイッチ法以外の測定システム、例えば、競合法、イムノメトリック法あるいはネフロメトリーなどに用いることができる。
競合法では、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体に対して競合的に反応させたのち、未反応の標識抗原(Ｆ）と、抗体と結合した標識抗原（Ｂ）とを分離し（Ｂ／Ｆ分離）、Ｂ，Ｆいずれかの標識量を測定し、被検液中の抗原量を定量する。本反応法には、抗体として可溶性抗体を用い、Ｂ／Ｆ分離をポリエチレングリコール、前記抗体に対する第２抗体などを用いる液相法、および、第１抗体として固相化抗体を用いるか、あるいは、第１抗体は可溶性のものを用い第２抗体として固相化抗体を用いる固相化法とが用いられる。
イムノメトリック法では、被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の標識化抗体に対して競合反応させた後固相と液相を分離するか、あるいは、被検液中の抗原と過剰量の標識化抗体とを反応させ、次に固相化抗原を加え未反応の標識化抗体を固相に結合させたのち、固相と液相を分離する。次に、いずれかの相の標識量を測定し被検液中の抗原量を定量する。
また、ネフロメトリーでは、ゲル内あるいは溶液中で抗原抗体反応の結果生じた不溶性の沈降物の量を測定する。被検液中の抗原量が僅かであり、少量の沈降物しか得られない場合にもレーザーの散乱を利用するレーザーネフロメトリーなどが好適に用いられる。
これら個々の免疫学的測定法を本発明の定量方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて本発明のポリペプチドの測定系を構築すればよい。これらの一般的な技術手段の詳細については、総説、成書などを参照することができる。
例えば、入江  寛編「ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和４９年発行）、入江  寛編「続ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和５４年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（医学書院、昭和５３年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第２版）（医学書院、昭和５７年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年発行）、「Methods in ENZYMOLOGY」 Vol. 70(Immunochemical Techniques(Part A))、 同書 Vol. 73(Immunochemical Techniques(Part B))、 同書 Vol. 74(Immunochemical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunochemical Techniques(Part D : Selected Immunoassays))、 同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E : Monoclonal Antibodies and General Immunoassay Methods))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part I : Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodies))(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照することができる。
以上のようにして、本発明の抗体を用いることによって、本発明のポリペプチドまたは受容体を感度良く定量することができる。
【００５５】
本発明の抗体を用いて本発明のポリペプチドまたは受容体の濃度を定量することによって、本発明のポリペプチドまたは受容体の濃度の減少が検出された場合、例えば、消化不良症（例、下垂体性消化不良症、腎性消化不良症など）、骨代謝障害（例、骨粗しょう症、骨軟化症など）、貧血症（例、鉄欠乏性貧血など）などの疾病である、または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
また、本発明のポリペプチドまたは受容体の濃度の増加が検出された場合には、例えば上部消化管疾患〔例、消化性潰瘍（例、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、吻合部潰瘍、Zollinger-Ellison症候群など）、胃炎、逆流性食道炎、NUD（Non Ulcer Dyspepsia）、胃癌、胃MALTリンパ腫、非ステロイド系抗炎症剤に起因する潰瘍、手術後ストレスによる胃酸過多および潰瘍など〕などの疾病である、または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
また、本発明の抗体は、体液や組織などの被検体中に存在する本発明のポリペプチドまたは受容体を検出するために使用することができる。また、本発明のポリペプチドまたは受容体を精製するために使用する抗体カラムの作製、精製時の各分画中の本発明のポリペプチドまたは受容体の検出、被検細胞内における本発明のポリペプチドまたは受容体の挙動の分析などのために使用することができる。
【００５６】
（４）遺伝子診断薬
本発明のＤＮＡは、例えば、プローブとして使用することにより、ヒトまたは温血動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、トリ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、など）における本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡの異常（遺伝子異常）を検出することができるので、例えば、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの損傷、突然変異あるいは発現低下や、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの増加あるいは発現過多などの遺伝子診断薬として有用である。
本発明のＤＮＡを用いる上記の遺伝子診断は、例えば、公知のノーザンハイブリダイゼーションやPCR-SSCP法（Genomics，第5巻，874−879頁（1989年）、Proceedings of the National Academy of Sciences of USA，第86巻，2766−2770頁（1989年））などにより実施することができる。
例えば、ノーザンハイブリダイゼーションにより本発明のポリペプチドまたは受容体の遺伝子の発現低下が検出された場合は、 例えば、消化不良症（例、下垂体性消化不良症、腎性消化不良症など）、骨代謝障害（例、骨粗しょう症、骨軟化症など）、貧血症（例、鉄欠乏性貧血など）などの疾病である可能性が高い、または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
また、ノーザンハイブリダイゼーションにより本発明のポリペプチドまたは受容体の遺伝子の発現過多が検出された場合は、例えば、上部消化管疾患〔例、消化性潰瘍（例、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、吻合部潰瘍、Zollinger-Ellison症候群など）、胃炎、逆流性食道炎、NUD（Non Ulcer Dyspepsia）、胃癌、胃MALTリンパ腫、非ステロイド系抗炎症剤に起因する潰瘍、手術後ストレスによる胃酸過多および潰瘍など〕などの疾病である可能性が高い、または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
【００５７】
（５）アンチセンスＤＮＡを含有する医薬
本発明のアンチセンスＤＮＡは、例えば胃酸分泌抑制剤、粘膜保護剤、ミネラル吸収促進剤などとして有用であり、例えば上部消化管疾患〔例、消化性潰瘍（例、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、吻合部潰瘍、Zollinger-Ellison症候群など）、胃炎、逆流性食道炎、NUD（Non Ulcer Dyspepsia）、胃癌、胃MALTリンパ腫、非ステロイド系抗炎症剤に起因する潰瘍、手術後ストレスによる胃酸過多および潰瘍など〕の予防・治療剤、ヘリコバクター・ピロリ除菌剤などとして使用できる。
例えば、該アンチセンスＤＮＡを用いる場合、該アンチセンスＤＮＡを単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って実施することができる。該アンチセンスＤＮＡは、そのままで、あるいは摂取促進のために補助剤などの生理学的に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与できる。
さらに、該アンチセンスＤＮＡは、組織や細胞における本発明のＤＮＡの存在やその発現状況を調べるための診断用オリゴヌクレオチドプローブとして使用することもできる。
【００５８】
（６）本発明の抗体を含有する医薬
本発明の抗体（例、本発明のポリペプチドを中和する作用を有する中和抗体）は、例えば胃酸分泌抑制剤、粘膜保護剤、ミネラル吸収促進剤などとして有用であり、例えば上部消化管疾患〔例、消化性潰瘍（例、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、吻合部潰瘍、Zollinger-Ellison症候群など）、胃炎、逆流性食道炎、NUD（Non Ulcer Dyspepsia）、胃癌、胃MALTリンパ腫、非ステロイド系抗炎症剤に起因する潰瘍、手術後ストレスによる胃酸過多および潰瘍など〕の予防・治療剤、ヘリコバクター・ピロリ除菌剤などとして使用できる。
本発明の抗体を含有する上記疾患の剤は、そのまま液剤として、または適当な剤型の医薬組成物として、ヒトまたは哺乳動物（例、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して経口的または非経口的に投与することができる。投与量は、投与対象、対象疾患、症状、投与ルートなどによっても異なるが、例えば、成人の逆流性食道炎の治療のために使用する場合には、本発明の抗体を１回量として、通常0.01〜20mg/kg体重程度、好ましくは0.1〜10mg/kg体重程度、さらに好ましくは0.1〜5mg/kg体重程度を、1日1〜5回程度、好ましくは1日1〜3回程度、静脈注射により投与するのが好都合である。他の非経口投与および経口投与の場合もこれに準ずる量を投与することができる。症状が特に重い場合には、その症状に応じて増量してもよい。
本発明の抗体は、それ自体または適当な医薬組成物として投与することができる。上記投与に用いられる医薬組成物は、上記またはその塩と薬理学的に許容され得る担体、希釈剤もしくは賦形剤とを含むものである。かかる組成物は、経口または非経口投与に適する剤形として提供される。
すなわち、例えば、経口投与のための組成物としては、固体または液体の剤形、具体的には錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤を含む）、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などがあげられる。かかる組成物は公知の方法によって製造され、製剤分野において通常用いられる担体、希釈剤もしくは賦形剤を含有するものである。例えば、錠剤用の担体、賦形剤としては、乳糖、でんぷん、蔗糖、ステアリン酸マグネシウムなどが用いられる。
【００５９】
非経口投与のための組成物としては、例えば、注射剤、坐剤などが用いられ、注射剤は静脈注射剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉注射剤、点滴注射剤などの剤形を包含する。かかる注射剤は、公知の方法に従って、例えば、上記抗体またはその塩を通常注射剤に用いられる無菌の水性もしくは油性液に溶解、懸濁または乳化することによって調製する。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液などが用いられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン界面活性剤〔例、ポリソルベート80、HCO-50（polyoxyethylene（50mol）adduct of hydrogenated castor oil）〕などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどを併用してもよい。調製された注射液は、通常、適当なアンプルに充填される。直腸投与に用いられる坐剤は、上記抗体またはその塩を通常の坐薬用基剤に混合することによって調製される。
上記の経口用または非経口用医薬組成物は、活性成分の投与量に適合するような投薬単位の剤形に調製されることが好都合である。かかる投薬単位の剤形としては、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが例示され、それぞれの投薬単位剤形当たり通常5〜500mg、とりわけ注射剤では5〜100mg、その他の剤形では10〜250mgの上記抗体が含有されていることが好ましい。
なお前記した各組成物は、上記抗体との配合により好ましくない相互作用を生じない限り他の活性成分を含有してもよい。
【００６０】
（７）ＤＮＡ転移動物
外来性の本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ（以下、本発明の外来性ＤＮＡと略記する）またはその変異ＤＮＡ（本発明の外来性変異ＤＮＡと略記する場合がある）を有する非ヒト哺乳動物も、消化管疾患の予防・治療剤などをスクリーニングするために用いられる。
本発明の外来性ＤＮＡまたはその変異ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物（以下、本発明のＤＮＡ転移動物と略記する）は、未受精卵、受精卵、精子およびその始原細胞を含む胚芽細胞などに対して、好ましくは、非ヒト哺乳動物の発生における胚発生の段階（さらに好ましくは、単細胞または受精卵細胞の段階でかつ一般に８細胞期以前）に、リン酸カルシウム法、電気パルス法、リポフェクション法、凝集法、マイクロインジェクション法、パーティクルガン法、ＤＥＡＥ−デキストラン法などにより目的とするＤＮＡを転移することによって作出することができる。また、該ＤＮＡ転移方法により、体細胞、生体の臓器、組織細胞などに目的とする本発明の外来性ＤＮＡを転移し、細胞培養、組織培養などに利用することもでき、さらに、これら細胞を上述の胚芽細胞と公知の細胞融合法により融合させることにより本発明のＤＮＡ転移動物を作出することもできる。
非ヒト哺乳動物としては、例えば、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、マウス、ラットなどが用いられる。なかでも、病体動物モデル系の作成の面から個体発生および生物サイクルが比較的短く、また、繁殖が容易なゲッ歯動物、とりわけマウス（例えば、純系として、Ｃ５７ＢＬ／６系統，ＤＢＡ２系統など、交雑系として、Ｂ６Ｃ３Ｆ１系統，ＢＤＦ１系統，Ｂ６Ｄ２Ｆ１系統，ＢＡＬＢ／ｃ系統，ＩＣＲ系統など）またはラット（例えば、Ｗｉｓｔａｒ，ＳＤなど）などが好ましい。
哺乳動物において発現しうる組換えベクターにおける「哺乳動物」としては、上記の非ヒト哺乳動物の他にヒトなどがあげられる。
【００６１】
本発明の外来性ＤＮＡとは、非ヒト哺乳動物が本来有している本発明のＤＮＡではなく、いったん哺乳動物から単離・抽出された本発明のＤＮＡをいう。
本発明の変異ＤＮＡとしては、元の本発明のＤＮＡの塩基配列に変異（例えば、突然変異など）が生じたもの、具体的には、塩基の付加、欠損、他の塩基への置換などが生じたＤＮＡなどが用いられ、また、異常ＤＮＡも含まれる。
該異常ＤＮＡとしては、異常な本発明のポリペプチドを発現させるＤＮＡを意味し、例えば、正常な本発明のポリペプチドの機能を抑制するポリペプチドを発現させるＤＮＡなどが用いられる。
本発明の外来性ＤＮＡは、対象とする動物と同種あるいは異種のどちらの哺乳動物由来のものであってもよい。本発明のＤＮＡを対象動物に転移させるにあたっては、該ＤＮＡを動物細胞で発現させうるプロモーターの下流に結合したＤＮＡコンストラクトとして用いるのが一般に有利である。例えば、本発明のヒトＤＮＡを転移させる場合、これと相同性が高い本発明のＤＮＡを有する各種哺乳動物（例えば、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来のＤＮＡを発現させうる各種プロモーターの下流に、本発明のヒトＤＮＡを結合したＤＮＡコンストラクト（例、ベクターなど）を対象哺乳動物の受精卵、例えば、マウス受精卵へマイクロインジェクションすることによって本発明のＤＮＡを高発現するＤＮＡ転移哺乳動物を作出することができる。
【００６２】
本発明のポリペプチドの発現ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミド、酵母由来のプラスミド、λファージなどのバクテリオファージ、モロニー白血病ウィルスなどのレトロウィルス、ワクシニアウィルスまたはバキュロウィルスなどの動物ウイルスなどが用いられる。なかでも、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミドまたは酵母由来のプラスミドなどが好ましく用いられる。
上記のＤＮＡ発現調節を行なうプロモーターとしては、例えば、（a）ウイルス（例、シミアンウイルス、サイトメガロウイルス、モロニー白血病ウイルス、ＪＣウイルス、乳癌ウイルス、ポリオウイルスなど）に由来するＤＮＡのプロモーター、（b）各種哺乳動物（ヒト、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来のプロモーター、例えば、アルブミン、インスリンＩＩ、ウロプラキンＩＩ、エラスターゼ、エリスロポエチン、エンドセリン、筋クレアチンキナーゼ、グリア線維性酸性蛋白質、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、血小板由来成長因子β、ケラチンＫ１，Ｋ１０およびＫ１４、コラーゲンＩ型およびＩＩ型、サイクリックＡＭＰ依存蛋白質キナーゼβＩサブユニット、ジストロフィン、酒石酸抵抗性アルカリフォスファターゼ、心房ナトリウム利尿性因子、内皮レセプターチロシンキナーゼ（一般にＴｉｅ２と略される）、ナトリウムカリウムアデノシン３リン酸化酵素（Ｎａ，Ｋ−ＡＴＰａｓｅ）、ニューロフィラメント軽鎖、メタロチオネインＩおよびＩＩＡ、メタロプロティナーゼ１組織インヒビター、ＭＨＣクラスＩ抗原（Ｈ−２Ｌ）、Ｈ−ｒａｓ、レニン、ドーパミンβ−水酸化酵素、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、ポリペプチド鎖延長因子1α（ＥＦ−１α）、βアクチン、αおよびβミオシン重鎖、ミオシン軽鎖１および２、ミエリン基礎蛋白質、チログロブリン、Ｔｈｙ−１、免疫グロブリン、Ｈ鎖可変部（ＶＮＰ）、血清アミロイドＰコンポーネント、ミオグロビン、トロポニンＣ、平滑筋αアクチン、プレプロエンケファリンＡ、バソプレシンなどのプロモーターなどが用いられる。なかでも、全身で高発現することが可能なサイトメガロウイルスプロモーター、ヒトポリペプチド鎖延長因子１α（ＥＦ−１α）のプロモーター、ヒトおよびニワトリβアクチンプロモーターなどが好適である。
上記ベクターは、ＤＮＡ転移哺乳動物において目的とするメッセンジャーＲＮＡの転写を終結する配列（一般にターミネターと呼ばれる）を有していることが好ましく、例えば、ウイルス由来および各種哺乳動物由来の各ＤＮＡの配列を用いることができ、好ましくは、シミアンウイルスのＳＶ４０ターミネターなどが用いられる。
【００６３】
その他、目的とする外来性ＤＮＡをさらに高発現させる目的で各ＤＮＡのスプライシングシグナル、エンハンサー領域、真核ＤＮＡのイントロンの一部などをプロモーター領域の５’上流、プロモーター領域と翻訳領域間あるいは翻訳領域の３’下流 に連結することも目的により可能である。
正常な本発明のポリペプチドの翻訳領域は、ヒトまたは各種哺乳動物（例えば、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来の肝臓、腎臓、甲状腺細胞、線維芽細胞由来ＤＮＡおよび市販の各種ゲノムＤＮＡライブラリーよりゲノムＤＮＡの全てあるいは一部として、または肝臓、腎臓、甲状腺細胞、線維芽細胞由来ＲＮＡより公知の方法により調製された相補ＤＮＡを原料として取得することが出来る。また、外来性の異常ＤＮＡは、上記の細胞または組織より得られた正常なポリペプチドの翻訳領域を点突然変異誘発法により変異した翻訳領域を作製することができる。
該翻訳領域は転移動物において発現しうるＤＮＡコンストラクトとして、前記のプロモーターの下流および所望により転写終結部位の上流に連結させる通常のＤＮＡ工学的手法により作製することができる。
受精卵細胞段階における本発明の外来性ＤＮＡの転移は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞のすべてに存在するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽細胞において、本発明の外来性ＤＮＡが存在することは、作出動物の後代がすべて、その胚芽細胞および体細胞のすべてに本発明の外来性ＤＮＡを保持することを意味する。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫はその胚芽細胞および体細胞のすべてに本発明の外来性ＤＮＡを有する。
本発明の外来性正常ＤＮＡを転移させた非ヒト哺乳動物は、交配により外来性ＤＮＡを安定に保持することを確認して、該ＤＮＡ保有動物として通常の飼育環境で継代飼育することが出来る。
受精卵細胞段階における本発明の外来性ＤＮＡの転移は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞の全てに過剰に存在するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽細胞において本発明の外来性ＤＮＡが過剰に存在することは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性ＤＮＡを過剰に有することを意味する。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫はその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性ＤＮＡを過剰に有する。
導入ＤＮＡを相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配することによりすべての子孫が該ＤＮＡを過剰に有するように繁殖継代することができる。
【００６４】
本発明の正常ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物は、本発明の正常ＤＮＡが高発現させられており、内在性の正常ＤＮＡの機能を促進することにより最終的に本発明のポリペプチドの機能亢進症を発症することがあり、その病態モデル動物として利用することができる。例えば、本発明の正常ＤＮＡ転移動物を用いて、本発明のポリペプチドの機能亢進症や、本発明のポリペプチドが関連する疾患の病態機序の解明およびこれらの疾患の治療方法の検討を行なうことが可能である。
また、本発明の外来性正常ＤＮＡを転移させた哺乳動物は、遊離した本発明のポリペプチドの増加症状を有することから、本発明のポリペプチドに関連する疾患に対する治療薬のスクリーニング試験にも利用可能である。
一方、本発明の外来性異常ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物は、交配により外来性ＤＮＡを安定に保持することを確認して該ＤＮＡ保有動物として通常の飼育環境で継代飼育することが出来る。さらに、目的とする外来ＤＮＡを前述のプラスミドに組み込んで原料として用いることができる。プロモーターとのＤＮＡコンストラク卜は、通常のＤＮＡ工学的手法によって作製することができる。受精卵細胞段階における本発明の異常ＤＮＡの転移は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞の全てに存在するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽細胞において本発明の異常ＤＮＡが存在することは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の異常ＤＮＡを有することを意味する。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫は、その胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の異常ＤＮＡを有する。導入ＤＮＡを相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配することによりすべての子孫が該ＤＮＡを有するように繁殖継代することができる。
【００６５】
本発明の異常ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物は、本発明の異常ＤＮＡが高発現させられており、内在性の正常ＤＮＡの機能を阻害することにより最終的に本発明のポリペプチドの機能不活性型不応症となることがあり、その病態モデル動物として利用することができる。例えば、本発明の異常ＤＮＡ転移動物を用いて、本発明のポリペプチドの機能不活性型不応症の病態機序の解明およびこの疾患を治療方法の検討を行なうことが可能である。
また、具体的な利用可能性としては、本発明の異常ＤＮＡ高発現動物は、本発明のポリペプチドの機能不活性型不応症における本発明の異常ポリペプチドによる正常ポリペプチドの機能阻害（dominant negative作用）を解明するモデルとなる。
また、本発明の外来異常ＤＮＡを転移させた哺乳動物は、遊離した本発明のポリペプチドの増加症状を有することから、本発明のポリペプチドの機能不活性型不応症に対する治療薬スクリーニング試験にも利用可能である。
また、上記２種類の本発明のＤＮＡ転移動物のその他の利用可能性として、例えば、
（a）組織培養のための細胞源としての使用、
（b）本発明のＤＮＡ転移動物の組織中のＤＮＡもしくはＲＮＡを直接分析するか、またはＤＮＡにより発現されたポリペプチド組織を分析することによる、本発明のポリペプチドにより特異的に発現あるいは活性化するポリペプチドとの関連性についての解析、
（c）ＤＮＡを有する組織の細胞を標準組織培養技術により培養し、これらを使用した、一般に培養困難な組織からの細胞の機能の研究、
（d）上記（c）記載の細胞を用いることによる細胞の機能を高めるような薬剤のスクリーニング、および
（e）本発明の変異ポリペプチドを単離精製およびその抗体作製などが考えられる。
さらに、本発明のＤＮＡ転移動物を用いて、本発明のポリペプチドの機能不活性型不応症などを含む、本発明のポリペプチドに関連する疾患の臨床症状を調べることができ、また、本発明のポリペプチドに関連する疾患モデルの各臓器におけるより詳細な病理学的所見が得られ、新しい治療方法の開発、さらには、該疾患による二次的疾患の研究および治療に貢献することができる。
また、本発明のＤＮＡ転移動物から各臓器を取り出し、細切後、トリプシンなどの蛋白質分解酵素により、遊離したＤＮＡ転移細胞の取得、その培養またはその培養細胞の系統化を行なうことが可能である。さらに、本発明のポリペプチド産生細胞の特定化、アポトーシス、分化あるいは増殖との関連性、またはそれらにおけるシグナル伝達機構を調べ、それらの異常を調べることなどができ、本発明のポリペプチドおよびその作用解明のための有効な研究材料となる。
さらに、本発明のＤＮＡ転移動物を用いて、本発明のポリペプチドの機能不活性型不応症を含む、本発明のポリペプチドに関連する疾患の治療薬の開発を行なうために、上述の検査法および定量法などを用いて、有効で迅速な該疾患治療薬のスクリーニング法を提供することが可能となる。また、本発明のＤＮＡ転移動物または本発明の外来性ＤＮＡ発現ベクターを用いて、本発明のポリペプチドが関連する疾患のＤＮＡ治療法を検討、開発することが可能である。
【００６６】
（８）ノックアウト動物
本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞および本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物も、胃酸分泌促進剤などをスクリーニングするために用いられる。
本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞とは、該非ヒト哺乳動物が有する本発明のＤＮＡに人為的に変異を加えることにより、ＤＮＡの発現能を抑制するか、もしくは該ＤＮＡがコードしている本発明のポリペプチドの活性を実質的に喪失させることにより、ＤＮＡが実質的に本発明のポリペプチドの発現能を有さない（以下、本発明のノックアウトＤＮＡと称することがある）非ヒト哺乳動物の胚幹細胞（以下、ＥＳ細胞と略記する）をいう。
非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものが用いられる。
本発明のＤＮＡに人為的に変異を加える方法としては、例えば、遺伝子工学的手法により該ＤＮＡ配列の一部又は全部の削除、他ＤＮＡを挿入または置換させることによって行なうことができる。これらの変異により、例えば、コドンの読み取り枠をずらしたり、プロモーターあるいはエキソンの機能を破壊することにより本発明のノックアウトＤＮＡを作製すればよい。
【００６７】
本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞（以下、本発明のＤＮＡ不活性化ＥＳ細胞または本発明のノックアウトＥＳ細胞と略記する）の具体例としては、例えば、目的とする非ヒト哺乳動物が有する本発明のＤＮＡを単離し、そのエキソン部分にネオマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子を代表とする薬剤耐性遺伝子、あるいはｌａｃＺ（β−ガラクトシダーゼ遺伝子）、ｃａｔ（クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子）を代表とするレポーター遺伝子等を挿入することによりエキソンの機能を破壊するか、あるいはエキソン間のイントロン部分に遺伝子の転写を終結させるＤＮＡ配列（例えば、polyＡ付加シグナルなど）を挿入し、完全なメッセンジャーＲＮＡを合成できなくすることによって、結果的に遺伝子を破壊するように構築したＤＮＡ配列を有するＤＮＡ鎖（以下、ターゲッティングベクターと略記する）を、例えば相同組換え法により該動物の染色体に導入し、得られたＥＳ細胞について本発明のＤＮＡ上あるいはその近傍のＤＮＡ配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーション解析あるいはターゲッティングベクター上のＤＮＡ配列とターゲッティングベクター作製に使用した本発明のＤＮＡ以外の近傍領域のＤＮＡ配列をプライマーとしたＰＣＲ法により解析し、本発明のノックアウトＥＳ細胞を選別することにより得ることができる。
また、相同組換え法等により本発明のＤＮＡを不活化させる元のＥＳ細胞としては、例えば、前述のような既に樹立されたものを用いてもよく、また公知 EvansとKaufmaの方法に準じて新しく樹立したものでもよい。例えば、マウスのＥＳ細胞の場合、現在、一般的には１２９系のＥＳ細胞が使用されているが、免疫学的背景がはっきりしていないので、これに代わる純系で免疫学的に遺伝的背景が明らかなＥＳ細胞を取得するなどの目的で例えば、Ｃ５７ＢＬ／６マウスやＣ５７ＢＬ／６の採卵数の少なさをＤＢＡ／２との交雑により改善したＢＤＦ１マウス（Ｃ５７ＢＬ／６とＤＢＡ／２とのＦ１）を用いて樹立したものなども良好に用いうる。ＢＤＦ１マウスは、採卵数が多く、かつ、卵が丈夫であるという利点に加えて、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを背景に持つので、これを用いて得られたＥＳ細胞は病態モデルマウスを作出したとき、Ｃ５７ＢＬ／６マウスとバッククロスすることでその遺伝的背景をＣ５７ＢＬ／６マウスに代えることが可能である点で有利に用い得る。
また、ＥＳ細胞を樹立する場合、一般には受精後３.５日目の胚盤胞を使用するが、これ以外に８細胞期胚を採卵し胚盤胞まで培養して用いることにより効率よく多数の初期胚を取得することができる。
また、雌雄いずれのＥＳ細胞を用いてもよいが、通常雄のＥＳ細胞の方が生殖系列キメラを作出するのに都合が良い。また、煩雑な培養の手間を削減するためにもできるだけ早く雌雄の判別を行なうことが望ましい。
【００６８】
ＥＳ細胞の雌雄の判定方法としては、例えば、ＰＣＲ法によりＹ染色体上の性決定領域の遺伝子を増幅、検出する方法が、その１例としてあげることができる。この方法を使用すれば、従来、核型分析をするのに約１０６個の細胞数を要していたのに対して、１コロニー程度のＥＳ細胞数（約５０個）で済むので、培養初期におけるＥＳ細胞の第一次セレクションを雌雄の判別で行なうことが可能であり、早期に雄細胞の選定を可能にしたことにより培養初期の手間は大幅に削減できる。
また、第二次セレクションとしては、例えば、Ｇ−バンディング法による染色体数の確認等により行うことができる。得られるＥＳ細胞の染色体数は正常数の１００％が望ましいが、樹立の際の物理的操作等の関係上困難な場合は、ＥＳ細胞の遺伝子をノックアウトした後、正常細胞（例えば、マウスでは染色体数が２ｎ＝４０である細胞）に再びクローニングすることが望ましい。
このようにして得られた胚幹細胞株は、通常その増殖性は大変良いが、個体発生できる能力を失いやすいので、注意深く継代培養することが必要である。例えば、ＳＴＯ繊維芽細胞のような適当なフィーダー細胞上でLIF（1〜10000U/ml）存在下に炭酸ガス培養器内（好ましくは、5％炭酸ガス、95％空気または5％酸素、5％炭酸ガス、90％空気）で約37℃で培養するなどの方法で培養し、継代時には、例えば、トリプシン/EDTA溶液（通常0.001〜0.5％トリプシン/0.1〜5mM EDTA、好ましくは約0.1％トリプシン/1mM EDTA）処理により単細胞化し、新たに用意したフィーダー細胞上に播種する方法などがとられる。このような継代は、通常1〜3日毎に行なうが、この際に細胞の観察を行い、形態的に異常な細胞が見受けられた場合はその培養細胞は放棄することが望まれる。
ＥＳ細胞は、適当な条件により、高密度に至るまで単層培養するか、または細胞集塊を形成するまで浮遊培養することにより、頭頂筋、内臓筋、心筋などの種々のタイプの細胞に分化させることが可能であり〔Nature 第292巻、154頁、1981年、Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 第78巻、7634頁、1981年；ジャーナル・オブ・エンブリオロジー・アンド・エクスペリメンタル・モルフォロジー、第87巻、27頁、1985年〕、本発明のＥＳ細胞を分化させて得られる本発明のＤＮＡ発現不全細胞は、インビトロにおける本発明のポリペプチドまたは本発明の受容体の細胞生物学的検討において有用である。
【００６９】
本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、該動物のｍＲＮＡ量を公知方法を用いて測定して間接的にその発現量を比較することにより、正常動物と区別することが可能である。
該非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものが用いられる。
本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、例えば、前述のようにして作製したターゲッティングベクターをマウス胚幹細胞またはマウス卵細胞に導入し、導入によりターゲッティングベクターの本発明のＤＮＡが不活性化されたＤＮＡ配列が遺伝子相同組換えにより、マウス胚幹細胞またはマウス卵細胞の染色体上の本発明のＤＮＡと入れ換わる相同組換えをさせることにより、本発明のＤＮＡをノックアウトさせることができる。
本発明のＤＮＡがノックアウトされた細胞は、本発明のＤＮＡ上またはその近傍のＤＮＡ配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーション解析またはターゲッティングベクター上のＤＮＡ配列と、ターゲッティングベクターに使用したマウス由来の本発明のＤＮＡ以外の近傍領域のＤＮＡ配列とをプライマーとしたＰＣＲ法による解析で判定することができる。非ヒト哺乳動物胚幹細胞を用いた場合は、遺伝子相同組換えにより、本発明のＤＮＡが不活性化された細胞株をクローニングし、その細胞を適当な時期、例えば、８細胞期の非ヒト哺乳動物胚または胚盤胞に注入し、作製したキメラ胚を偽妊娠させた該非ヒト哺乳動物の子宮に移植する。作出された動物は正常な本発明のＤＮＡ座をもつ細胞と人為的に変異した本発明のＤＮＡ座をもつ細胞との両者から構成されるキメラ動物である。
該キメラ動物の生殖細胞の一部が変異した本発明のＤＮＡ座をもつ場合、このようなキメラ個体と正常個体を交配することにより得られた個体群より、全ての組織が人為的に変異を加えた本発明のＤＮＡ座をもつ細胞で構成された個体を、例えば、コートカラーの判定等により選別することにより得られる。このようにして得られた個体は、通常、本発明のポリペプチドのヘテロ発現不全個体であり、本発明のポリペプチドまたは本発明の受容体のヘテロ発現不全個体同志を交配し、それらの産仔から本発明のポリペプチドまたは本発明の受容体のホモ発現不全個体を得ることができる。
【００７０】
卵細胞を使用する場合は、例えば、卵細胞核内にマイクロインジェクション法でＤＮＡ溶液を注入することによりターゲッティングベクターを染色体内に導入したトランスジェニック非ヒト哺乳動物を得ることができ、これらのトランスジェニック非ヒト哺乳動物に比べて、遺伝子相同組換えにより本発明のＤＮＡ座に変異のあるものを選択することにより得られる。
このようにして本発明のＤＮＡがノックアウトされている個体は、交配により得られた動物個体も該ＤＮＡがノックアウトされていることを確認して通常の飼育環境で飼育継代を行なうことができる。
さらに、生殖系列の取得および保持についても常法に従えばよい。すなわち、該不活化ＤＮＡの保有する雌雄の動物を交配することにより、該不活化ＤＮＡを相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得しうる。得られたホモザイゴート動物は、母親動物に対して、正常個体１，ホモザイゴート複数になるような状態で飼育することにより効率的に得ることができる。ヘテロザイゴート動物の雌雄を交配することにより、該不活化ＤＮＡを有するホモザイゴートおよびヘテロザイゴート動物を繁殖継代する。
本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を作出する上で、非常に有用である。
また、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のポリペプチドまたは本発明の受容体により誘導され得る種々の生物活性を欠失するため、本発明のポリペプチドまたは本発明の受容体の生物活性の不活性化を原因とする疾病のモデルとなり得るので、これらの疾病の原因究明及び治療法の検討に有用である。
【００７１】
（８ａ）本発明のＤＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病に対して治療・予防効果を有する化合物のスクリーニング方法
本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のＤＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病に対して治療・予防効果を有する化合物のスクリーニングに用いることができる。
すなわち、本発明は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に試験化合物を投与し、該動物の変化を観察・測定することを特徴とする、本発明のＤＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病に対して治療・予防効果を有する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
該スクリーニング方法において用いられる本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものがあげられる。
試験化合物としては、例えば、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などがあげられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
具体的には、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を、試験化合物で処理し、無処理の対照動物と比較し、該動物の各器官、組織、疾病の症状などの変化を指標として試験化合物の治療・予防効果を試験することができる。
試験動物を試験化合物で処理する方法としては、例えば、経口投与、静脈注射などが用いられ、試験動物の症状、試験化合物の性質などにあわせて適宜選択することができる。また、試験化合物の投与量は、投与方法、試験化合物の性質などにあわせて適宜選択することができる。
【００７２】
例えば、胃酸分泌促進剤をスクリーニングする場合、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に、幽門を結紮し、試験化合物を投与し、該動物の胃酸分泌量の変化を経時的に測定する。
該スクリーニング方法において、試験動物に試験化合物を投与した場合、該試験動物の胃酸分泌量が約１０％以上、好ましくは約３０％以上、より好ましくは約５０％以上上昇した場合、試験化合物を上記の疾患に対して予防・治療効果を有する化合物として選択することができる。
【００７３】
該スクリーニング方法を用いて得られる化合物は、上記した試験化合物から選ばれた化合物であり、本発明のポリペプチドの欠損や損傷などによって引き起こされる疾患に対して治療・予防効果を有するので、該疾患に対する安全で低毒性な予防・治療剤などの医薬として使用することができる。さらに、上記スクリーニングで得られた化合物から誘導される化合物も同様に用いることができる。
該スクリーニング方法で得られた化合物は塩を形成していてもよく、該化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸、有機酸など）や塩基（例、アルカリ金属など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。このような塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。
該スクリーニング方法で得られた化合物またはその塩を含有する医薬は、前記した本発明のポリペプチドを含有する医薬と同様にして製造することができる。
このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、該化合物を皮下投与する場合、一般的に成人（体重60kgとして）の患者においては、一日につき該化合物を約0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物を注射剤の形で通常成人（体重60kgとして）の消化不良症患者に投与する場合、一日につき該化合物を約0.01〜30mg程度、好ましくは約0.1〜20mg程度、より好ましくは約0.1〜10mg程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重60kg当たりに換算した量を投与することができる。
【００７４】
（８ｂ）本発明のＤＮＡに対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物をスクリーニング方法
本発明は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に、試験化合物を投与し、レポーター遺伝子の発現を検出することを特徴とする本発明のＤＮＡに対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
上記スクリーニング方法において、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物としては、前記した本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物の中でも、本発明のＤＮＡがレポーター遺伝子を導入することにより不活性化され、該レポーター遺伝子が本発明のＤＮＡに対するプロモーターの制御下で発現しうるものが用いられる。
試験化合物としては、前記と同様のものがあげられる。
レポーター遺伝子としては、前記と同様のものが用いられ、β−ガラクトシダーゼ遺伝子（ｌａｃＺ）、可溶性アルカリフォスファターゼ遺伝子またはルシフェラーゼ遺伝子などが好適である。
本発明のＤＮＡをレポーター遺伝子で置換された本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物では、レポーター遺伝子が本発明のＤＮＡに対するプロモーターの支配下に存在するので、レポーター遺伝子がコードする物質の発現をトレースすることにより、プロモーターの活性を検出することができる。
例えば、本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ領域の一部を大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子（ｌａｃＺ）で置換している場合、本来、本発明のポリペプチドの発現する組織で、本発明のポリペプチドの代わりにβ−ガラクトシダーゼが発現する。従って、例えば、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−ｇａｌ）のようなβ−ガラクトシダーゼの基質となる試薬を用いて染色することにより、簡便に本発明のポリペプチドの動物生体内における発現状態を観察することができる。具体的には、本発明のポリペプチド欠損マウスまたはその組織切片をグルタルアルデヒドなどで固定し、リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）で洗浄後、Ｘ−ｇａｌを含む染色液で、室温または３７℃付近で、約３０分ないし１時間反応させた後、組織標本を１ｍＭ ＥＤＴＡ／ＰＢＳ溶液で洗浄することによって、β−ガラクトシダーゼ反応を停止させ、呈色を観察すればよい。また、常法に従い、ｌａｃＺをコードするｍＲＮＡを検出してもよい。
上記スクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、上記した試験化合物から選ばれた化合物であり、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物である。
該スクリーニング方法で得られた化合物は塩を形成していてもよく、該化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸など）や塩基（例、有機酸など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。このような塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。
【００７５】
本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩は、本発明のポリペプチドの発現を促進し、該ポリペプチドの機能を促進することができるので、例えば、胃酸分泌促進剤として使用することができ、例えば、消化不良症（例、下垂体性消化不良症、腎性消化不良症など）、骨代謝障害（例、骨粗しょう症、骨軟化症など）、貧血症（例、鉄欠乏性貧血など）などの予防・治療剤として使用することができる。
また、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を阻害する化合物またはその塩は、本発明のポリペプチドの発現を阻害し、該ポリペプチドの機能を阻害することができるので、例えば胃酸分泌抑制剤、粘膜保護剤、ミネラル吸収促進剤などとして有用であり、例えば上部消化管疾患〔例、消化性潰瘍（例、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、吻合部潰瘍、Zollinger-Ellison症候群など）、胃炎、逆流性食道炎、NUD（Non Ulcer Dyspepsia）、胃癌、胃MALTリンパ腫、非ステロイド系抗炎症剤に起因する潰瘍、手術後ストレスによる胃酸過多および潰瘍など〕の予防・治療剤、ヘリコバクター・ピロリ除菌剤などとして使用できる。
さらに、上記スクリーニングで得られた化合物から誘導される化合物も同様に用いることができる。
【００７６】
該スクリーニング方法で得られた化合物またはその塩を含有する医薬は、前記した本発明のポリペプチドまたはその塩を含有する医薬と同様にして製造することができる。
このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物を経口投与する場合、一般的に成人（体重60kgとして）の患者においては、一日につき該化合物を約0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物を注射剤の形で通常成人（体重60kgとして）の患者に投与する場合、一日につき該化合物を約0.01〜30mg程度、好ましくは約0.1〜20mg程度、より好ましくは約0.1〜10mg程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重60kg当たりに換算した量を投与することができる。
一方、例えば、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を阻害する化合物を経口投与する場合、一般的に成人（体重60kgとして）の患者においては、一日につき該化合物を約0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を阻害する化合物を注射剤の形で通常成人（体重60kgとして）の患者に投与する場合、一日につき該化合物を約0.01〜30mg程度、好ましくは約0.1〜20mg程度、より好ましくは約0.1〜10mg程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重60kg当たりに換算した量を投与することができる。
このように、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のＤＮＡに対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩をスクリーニングする上で極めて有用であり、本発明のＤＮＡ発現不全に起因する各種疾患の原因究明または予防・治療薬の開発に大きく貢献することができる。
また、本発明のポリペプチドのプロモーター領域を含有するＤＮＡを使って、その下流に種々の蛋白質をコードする遺伝子を連結し、これを動物の卵細胞に注入していわゆるトランスジェニック動物（遺伝子移入動物）を作成すれば、特異的にそのポリペプチドを合成させ、その生体での作用を検討することも可能となる。さらに上記プロモーター部分に適当なレポーター遺伝子を結合させ、これが発現するような細胞株を樹立すれば、本発明のポリペプチドそのものの体内での産生能力を特異的に促進もしくは抑制する作用を持つ低分子化合物の探索系として使用できる。
【００７７】
本明細書および図面において、塩基やアミノ酸などを略号で表示する場合、IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclatureによる略号あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。
ＤＮＡ          ：デオキシリボ核酸
ｃＤＮＡ        ：相補的デオキシリボ核酸
Ａ            ：アデニン
Ｔ            ：チミン
Ｇ            ：グアニン
Ｃ            ：シトシン
Ｉ            ：イノシン
Ｒ            ：アデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）
Ｙ            ：チミン（Ｔ）またはシトシン（Ｃ）
Ｍ            ：アデニン（Ａ）またはシトシン（Ｃ）
Ｋ            ：グアニン（Ｇ）またはチミン（Ｔ）
Ｓ            ：グアニン（Ｇ）またはシトシン（Ｃ）
Ｗ            ：アデニン（Ａ）またはチミン（Ｔ）
Ｂ            ：グアニン（Ｇ）、グアニン（Ｇ）またはチミン（Ｔ）
Ｄ            ：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）またはチミン（Ｔ）
Ｖ            ：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）またはシトシン（Ｃ）
Ｎ            ：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）もしく
はチミン（Ｔ）または不明もしくは他の塩基
ＲＮＡ          ：リボ核酸
ｍＲＮＡ        ：メッセンジャーリボ核酸
ｄＡＴＰ        ：デオキシアデノシン三リン酸
ｄＴＴＰ        ：デオキシチミジン三リン酸
ｄＧＴＰ        ：デオキシグアノシン三リン酸
ｄＣＴＰ        ：デオキシシチジン三リン酸
ＡＴＰ          ：アデノシン三リン酸
ＥＤＴＡ        ：エチレンジアミン四酢酸
ＳＤＳ          ：ドデシル硫酸ナトリウム
ＢＨＡ          ：ベンズヒドリルアミン
ｐＭＢＨＡ      ：ｐ−メチルベンズヒドリルアミン
Ｔｏｓ          ：ｐ−トルエンスルフォニル
Ｂｚｌ          ：ベンジル
Ｂｏｍ          ：ベンジルオキシメチル
Ｂｏｃ          ：ｔ−ブチルオキシカルボニル
ＤＣＭ          ：ジクロロメタン
ＨＯＢｔ        ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール
ＤＣＣ          ：Ｎ,Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＴＦＡ          ：トリフルオロ酢酸
ＤＩＥＡ        ：ジイソプロピルエチルアミン
ＢＳＡ          ：ウシ血清アルブミン
ＣＨＡＰＳ      ：３−〔（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ〕
−１−プロパンスホナート
Ｇｌｙ又はＧ    ：グリシン
Ａｌａ又はＡ    ：アラニン
Ｖａｌ又はＶ    ：バリン
Ｌｅｕ又はＬ    ：ロイシン
Ｉｌｅ又はＩ    ：イソロイシン
Ｓｅｒ又はＳ    ：セリン
Ｔｈｒ又はＴ    ：スレオニン
Ｃｙｓ又はＣ    ：システイン
Ｍｅｔ又はＭ    ：メチオニン
Ｇｌｕ又はＥ    ：グルタミン酸
Ａｓｐ又はＤ    ：アスパラギン酸
Ｌｙｓ又はＫ    ：リジン
Ａｒｇ又はＲ    ：アルギニン
Ｈｉｓ又はＨ    ：ヒスチジン
Ｐｈｅ又はＦ    ：フェニルアラニン
Ｔｙｒ又はＹ    ：チロシン
Ｔｒｐ又はＷ    ：トリプトファン
Ｐｒｏ又はＰ    ：プロリン
Ａｓｎ又はＮ    ：アスパラギン
Ｇｌｎ又はＱ    ：グルタミン
ｐＧｌｕ        ：ピログルタミン酸
Ｔｙｒ（Ｉ）    ：３−ヨードチロシン
ＤＭＦ          ：Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド
Ｆｍｏｃ        ：Ｎ−９−フルオレニルメトキシカルボニル
Ｔｒｔ          ：トリチル
Ｐｂｆ          ： ２,２,４,６,７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン
−５−スルホニル
Ｃｌｔ          ：２−クロロトリチル
Ｂｕｔ           ：ｔ−ブチル
Ｍｅｔ（Ｏ）    ：メチオニンスルフォキシド
【００７８】
本願明細書の配列表の配列番号は、以下の配列を示す。
〔配列番号：１〕
ヒトＧＰＲ８リガンドペプチド（ｈＮＰＷ２３）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２〕
ヒトＧＰＲ８リガンドペプチド（ｈＮＰＷ３０）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：３〕
配列番号：１で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：４〕
配列番号：２で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：５〕
ヒトＧＰＲ８リガンドペプチド前駆体の一部をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：６〕
ヒトＧＰＲ８リガンドペプチド前駆体の一部のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：７〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（１−２９）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：８〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（１−２８）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：９〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（１−２７）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１０〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（１−２６）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１１〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（１−２５）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１２〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（１−２４）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１３〕
配列番号：７で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：１４〕
配列番号：８で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：１５〕
配列番号：９で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：１６〕
配列番号：１０で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：１７〕
配列番号：１１で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：１８〕
配列番号：１２で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：１９〕
ヒトＧＰＲ８リガンドペプチド前駆体をコードするｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：２０〕
ヒトＧＰＲ８リガンドペプチド前駆体のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２１〕
ブタＧＰＲ８リガンドペプチドのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２２〕
ブタＧＰＲ８リガンドペプチド前駆体をコードするｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：２３〕
ブタＧＰＲ８リガンドペプチド前駆体のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２４〕
ブタＧＰＲ８リガンドペプチドのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２５〕
ブタＧＰＲ８リガンドペプチドのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２６〕
配列番号：２４で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：２７〕
配列番号：２５で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：２８〕
ラットＧＰＲ８リガンドペプチド前駆体をコードするｃＤＮＡの配列を示す。
〔配列番号：２９〕
ラットＧＰＲ８リガンドペプチド前駆体のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：３０〕
ラットＧＰＲ８リガンドペプチドのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：３１〕
ラットＧＰＲ８リガンドペプチドのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：３２〕
配列番号：３０で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：３３〕
配列番号：３１で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：３４〕
マウスＧＰＲ８リガンドペプチド前駆体をコードするｃＤＮＡの配列を示す。
〔配列番号：３５〕
マウスＧＰＲ８リガンドペプチド前駆体のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：３６〕
マウスＧＰＲ８リガンドペプチドのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：３７〕
マウスＧＰＲ８リガンドペプチドのアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：３８〕
配列番号：３６で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：３９〕
配列番号：３７で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
【００７９】
〔配列番号：４０〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（１−２３）酸化体のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：４１〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（１−２２）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：４２〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（１−２１）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：４３〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（１−２０）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：４４〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（１−１９）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：４５〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（１−１８）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：４６〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（１−１７）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：４７〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（１−１６）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：４８〕
合成ＧＰＲ８リガンド（１−２３）酸化体のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：４９〕
合成ラットまたはマウスＧＰＲ８リガンド（１−２３）酸化体のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：５０〕
合成Fmoc化ヒトＧＰＲ８リガンド（１−２３）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：５１〕
合成［Nα-Acetyl-Trp1］−ヒトＧＰＲ８リガンド（１−２３）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：５２〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（２−２３）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：５３〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（４−２３）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：５４〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（９−２３）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：５５〕
合成ヒトＧＰＲ８リガンド（１５−２３）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：５６〕
合成［N-Acetyl-Tyr2］−ヒトＧＰＲ８リガンド（２−２３）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：５７〕
合成［D-Trp1］−ヒトＧＰＲ８リガンド（１−２３）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：５８〕
合成［N-3-Indolepropanoyl-Tyr2］−ヒトＧＰＲ８リガンド（２−２３）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：５９〕
配列番号：４１で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：６０〕
配列番号：４２で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：６１〕
配列番号：４３で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：６２〕
配列番号：４４で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：６３〕
配列番号：４５で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：６４〕
配列番号：４６で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：６５〕
配列番号：４７で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：６６〕
配列番号：５２で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：６７〕
配列番号：５３で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：６８〕
配列番号：５４で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：６９〕
配列番号：５５で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：７０〕
配列番号：２１で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：７１〕
［Phe2］ヒトＧＰＲ８リガンド（１−２０）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：７２〕
配列番号：７１で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：７３〕
ヒトＧＰＲ８のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：７４〕
配列番号：７３で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
〔配列番号：７５〕
ラットＴＧＲ２６のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：７６〕
ラットＴＧＲ２６をコードするｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：７７〕
マウスＴＧＲ２６のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：７８〕
マウスＴＧＲ２６をコードするｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：７９〕
ヒトＧＰＲ７のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：８０〕
ヒトＧＰＲ７をコードする塩基配列を示す。
【００８０】
以下に参考例および実施例を示して、本発明をより詳細に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
【００８１】
参考例１
［Phe2］ヒトGPR8リガンド（1-20）（配列番号：７１）の製造
アプライドバイオシステムズ社のペプチド自動合成機（ABI 433モデル）を使用し、プログラムに従ってＣ端より逐次Fmoc法によりペプチド鎖を延長し目的の保護ペプチド樹脂の合成を行った。
出発アミノ酸樹脂担体はWang（p-benzyloxybenzyl alcohol）樹脂（0.25 mmol）を使用し、Fmoc-Leu、Fmoc-Gly、Fmoc-Ala、Fmoc-Arg(Pbf)、Fmoc-Val、Fmoc-Thr(But)、Fmoc-His(Trt)、Fmoc-Tyr(But)、Fmoc-Pro、Fmoc-Ser(But)、Fmoc-Lys(Boc)、Fmoc-Phe、Fmoc-Trp(Boc)のFmocアミノ酸誘導体をHBTU（2−（1H−ベンゾトリアゾール−1−イル）−1,1,3,3−テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート）によりシークエンスにしたがって逐次縮合した。 
樹脂上へのペプチドの構築が終了後、保護ペプチド樹脂を乾燥した。得られた保護ペプチドの脱保護処理とペプチドの樹脂担体からの切り離しはTFA処理によって行なった。得られた粗ペプチドは0.1％ TFA水によって抽出し、凍結乾燥により粉末固体として得た。続いて、粗ペプチドを逆相高速クロマトグラフィー（島津製作所、分取装置：モデルLC8A）によりアセトニトリル−0.1％ TFA水の系（15-35％、80分）を用いて分取精製を行なって目的とする精製ペプチド35 mgを得た。
精製物を0.2％ 3-(2-アミノエチル)インドールを含む4N メタンスルホン酸によって110℃・22時間の条件で加水分解して得た加水分解物のアミノ酸分析値は（括弧内は理論値）以下のとおり。
Thr (1) 0.93, Ser (1) 0.92, Gly (2) 2.03, Ala (3) 3.09, Val (2) 1.90, Leu (2) 2.02, Tyr (1) 1.02, Phe (1) 1.00, His (2) 1.91, Lys (1) 0.98, Trp (1) 0.88, Arg (2) 2.06, Pro (1) 1.02
純度はHPLCにより98.8％と算出された。また、質量分析値は2266.6（理論値2266.6）であった。
【００８２】
参考例２
ラクトパーオキシダーゼ法を用いた［Phe2,125I-Tyr10］ヒトGPR8リガンド（1-20）の作製
DMSO 10μlに溶かした、参考例１に記載した製法に準じて得られた[Phe2] ヒトGPR8リガンド(1-20)（配列番号：７１）10 nmolを、0.1 M塩化ニッケル水溶液10μl、0.1 M HEPES (pH 7.6)に溶かした0.001％過酸化水素水10μl、0.1 M HEPES (pH 7.6)に溶かしたラクトパーオキシダーゼ (シグマ社) 10μg/mlを10μl、および[125I]NaI 40 MBq（NENライフサイエンスプロダクツ社）10μlを混合して室温で50分間反応させた後、生成した[Phe2, 125I-Tyr10] ヒトGPR8リガンド(1-20)を以下の条件のHPLCにより分取した。
用いたカラムは、ODS-80TM (4.6 mm x 15 cm)(トーソー社)、溶出液Aとして10％アセトニトリル/0.1％ TFA、溶出液Bとして60％アセトニトリル/0.1％ TFAを用い、0-0 (2 min)、0-27 (5 min)、27-32 (40 min) ％B/A+Bのグラディエント溶出法を行なった。流速は1 mL/min、カラム温度は40℃、検出は215 nmとした。このHPLC条件では、[Phe2, 125I-Tyr10] ヒトGPR8リガンド(1-20)は25分付近に溶出した。
【００８３】
実施例１
hNPW23静脈投与によるラットの胃酸分泌に対する作用
Wistar系雄性ラット（日本チャルズリバー、320〜360g）を自由飲水下で16時間絶食後、カルバミド酸エチル（和光純薬）を腹腔内投与し (1.0 g/ml/kg)、麻酔下にてラット手術台に固定して開腹した。胃カテーテル（Medtop X2-50、外径3.5mm、内径2.1mm）を十二指腸経由で胃内に（2cm）挿管し、幽門管を結紮後、右大腿静脈を遊離し、静脈挿管した。37℃に加温した蒸留水（大塚製薬）を用いて胃内洗浄を行い、約1時間放置した。hNPW23を生理食塩水（大塚製薬）に80μMとなるように溶解した。対照群には生理食塩水を投与し、各群8例で行なった。hNPW23および生理食塩水の投与は、インフェージョンポンプ（Harvard Apparatus）を用いて、1 ml/hの流速で 30 分間大腿静脈より行なった。測定は、胃内にあらかじめ37℃に加温したの蒸留水（1ml）を注入しておき、10分後、その胃内容液を採集した。各々採集した胃液に、30μlのBromthymol blue indicator solution（BTB、和光純薬）を加え、0.1N NaOH溶液を用いて当量点（pH 7.0）に達するまでに消費したNaOH量（消耗量）を測定し、胃酸分泌量を算出した。hNPW23投与前後の胃酸分泌量を計測し、投与前後の胃酸分泌量変化の比率（％）をもってT-検定を行なった。
hNPW23投与による胃酸分泌量の変動は、次式に従って表記した。
胃酸分泌量(μEq)＝0.1N NaOH×消耗量（μl）
（％）＝（hNPW23投与後胃酸分泌量）/（hNPW23投与前胃酸分泌量）×100
胃酸分泌量変化の結果は、対照群が103.7 ± 5.1％であったのに対して、hNPW23投与群は145.6 ± 8.5％であり、hNPW23投与群はP値0.01以下をもって有意に胃酸分泌量が増加した。値は平均値±標準誤差（mean±SE）を示す。
これより明らかなように、hNPW23投与群の胃酸分泌量は対照群に比較し、有意に増加した。
【００８４】
実施例２
幽門結紮ラットにおけるhNPW23投与による胃液量、胃液pH、酸度および胃酸分泌量に対する作用
Wistar系雄性ラット（340〜360g）を自由飲水下で16時間絶食後、エーテル麻酔下にて開腹し、幽門結紮術を行い、腹壁を閉じた。hNPW23を生理食塩水に溶解（2 mg/ml）し、腹腔内投与（2 mg/kg）した。対照群には生理食塩水を投与し、各群8例で行なった。幽門結紮3時間後にラットをネンブタール（40 mg/kg、大日本製薬）麻酔下にて開腹し、噴門部を結紮後、胃を摘出した。胃内容液を採集し、遠心（2500 rqm×10 min）後、その上清を用いて、胃液量（ml）、胃内pH、胃酸度（mEq/l）および総酸分泌量(μEq/kg/h)を測定した。
1 mlの胃液に30μlのBTB（和光純薬）溶液を加え、0.1N NaOH溶液を滴下し、当量点（pH 7.0）に達するまでに消費したNaOH量を測定し、酸度および総酸分泌量を算出した。
胃液pHは、Twin pHメーター B-212（堀場製作所）を用いて測定した。
各測定値は以下の式に従って算出し、T-検定を行なった。
酸度(mEq/l)＝0.1N NaOH×消耗量（μl）/胃液（1000μl）
総酸分泌量 (μEq/kg/h)＝酸度×胃液量/体重/時間
結果を表１に示す。
〔表１〕
胃内pH     胃液量（ml）酸度(mEq/l) 総酸分泌量 (μEq/kg/h)
対照群   1.12±0.08   4.0±0.7    69.4±6.2     294.6±86.6
hNPW23   0.83±0.03*  7.9±1.2*   96.0±4.2**   747.4±121.5**     
表の値は平均値±標準誤差（Mean±SE）で示す。
＊は対照群に比べて、p値が0.05以下であることを示す。
＊＊は対照群に比べて、p値が0.01以下であることを示す。
ラットにhNPW23を投与（静脈、腹腔内）すると、酸分泌量は有意に増加することから、hNPW23は胃酸分泌促進作用を有することがわかる。
【００８５】
実施例３
幽門結紮ラットにおけるhNPW23投与によるガストリン分泌量に対する作用
上記実施例２と同様にWistar系雄性ラット（340〜360g）を自由飲水下で16時間絶食後、エーテル麻酔下にて開腹し、幽門結紮術を行い、腹壁を閉じた。hNPW23を生理食塩水に溶解（2 mg/ml）し、腹腔内投与した。対照群には生理食塩水を投与し、各群8例で行なった。幽門結紮3時間後ラットをネンブタール（40 mg/kg ip）麻酔下にて開腹し、腹部大動脈から採血し、血液を7mlの採血管（テルモ、EDTA含有）に入れ、遠心（3000 rpm×10 min）し、計測するまで-40℃に冷凍保管した。血中ガストリン濃度の測定はガストリン RIA KITII(ABBOTT JAPAN)を用いて測定した。各測定値の平均値をもってF-検定を行なった。2000 μg/kg投与群において血中ガストリン濃度が有意に上昇したことから、NPWの胃酸分泌促進作用にはガストリンが関与し、NPWがガストリン分泌促進作用を有していることが明らになった。
【図面の簡単な説明】
【００８６】
【図１】NPW投与による血中ガストリン濃度の変化を示す。値は平均値±標準偏差（mean±SE）（n＝8）を示す。＊は生理食塩水投与群に比べて、P値が0.05以下であることを示す。
【図１】
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【配列表】
2004292444000001.app