(57)【要約】【課題】活性基を有するＰＨＡの微生物による生産性が高く、活性基を有する側鎖のユニット比を制御でき、さらにポリマーとしての応用が制限されないように物性を任意に制御し得るようなＰＨＡ及びその製造方法を提供する。【解決手段】３-ヒドロキシ-ω-アルケン酸ユニットもしくは３-ヒドロキシ-ω-カルボキシアルカン酸ユニットもしくは３-ヒドロキシ-ω-アルコキシカルボニルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むことを特徴とするＰＨＡ及びその製造方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルケン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(２)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むことを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート共重合体。
【化１】
2004162044.tif 000221
(nは、化学式中に示した範囲内から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化２】
2004162044.tif 000222
(ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒはフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化３】
2004162044.tif 000223
(式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基である；kは、化学式中に示した範囲から選ばれた整数である；複数のユニットが存在する場合、Ｒ1およびkは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【請求項２】
前記化学式(２)におけるＲ、即ちフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基が、化学式(８)、(９)、(10)、(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、及び(18)からなる残基群より選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項１記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体。
ここで、化学式(８)は、
【化４】
2004162044.tif 000224
(式中、Ｒ2は芳香環への置換基を示し、Ｒ2はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＨ＝ＣＨ2基、ＣＯＯＲ3(Ｒ3:Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子のいずれかを表す)、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ2は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニル基の群であり、
化学式(９)は、
【化５】
2004162044.tif 000225
(式中、Ｒ4は芳香環への置換基を示し、Ｒ4はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＳＣＨ3基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ4は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェノキシ基の群であり、
化学式(10)は、
【化６】
2004162044.tif 000226
(式中、Ｒ5は芳香環への置換基を示し、Ｒ5はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ5は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換ベンゾイル基の群であり、
化学式(11)は、
【化７】
2004162044.tif 000227
(式中、Ｒ6は芳香環への置換基を示し、Ｒ6はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ7、ＳＯ2Ｒ8(Ｒ7:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ8:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ6は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルファニル基の群であり、
化学式(12)は、
【化８】
2004162044.tif 000228
(式中、Ｒ9は芳香環への置換基を示し、Ｒ9はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ10、ＳＯ2Ｒ11(Ｒ10:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ11:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ9は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換(フェニルメチル)スルファニル基の群であり、
化学式(13)は、
【化９】
2004162044.tif 000229
で示される２-チエニル基であり、
化学式(14)は、
【化１０】
2004162044.tif 000230
で示される２-チエニルスルファニル基であり、
化学式(15)は、
【化１１】
2004162044.tif 000231
で示される２-チエニルカルボニル基であり、
化学式(16)は、
【化１２】
2004162044.tif 000232
(式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14(Ｒ13:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ14:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ12は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフィニル基の群であり、
化学式(17)は、
【化１３】
2004162044.tif 000233
(式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17(Ｒ16:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ17:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ15は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフォニル基の群であり、
化学式(18)は、
【化１４】
2004162044.tif 000234
で示される(フェニルメチル)オキシ基である。
【請求項３】
化学式(19)に示す３-ヒドロキシ-ω-カルボキシアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(２)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むことを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート共重合体。
【化１５】
2004162044.tif 000235
(nは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ18は、Ｈ原子、Ｎa原子またはＫ原子である；複数のユニットが存在する場合、nおよびＲ18は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化１６】
2004162044.tif 000236
(ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒはフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化１７】
2004162044.tif 000237
(式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基である；kは、化学式中に示した範囲から選ばれた整数である；複数のユニットが存在する場合、Ｒ1及びkは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【請求項４】
前記化学式(２)におけるＲ、即ちフェニル構造或いはチエニル構造を有する残基が、化学式(８)、(９)、(10)、(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、及び(18)からなる残基群より選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項３記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体。
ここで、化学式(８)は、
【化１８】
2004162044.tif 000238
(式中、Ｒ2は芳香環への置換基を示し、Ｒ2はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＨ＝ＣＨ2基、ＣＯＯＲ3(Ｒ3:Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子のいずれかを表す)、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ2は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニル基の群であり、
化学式(９)は、
【化１９】
2004162044.tif 000239
(式中、Ｒ4は芳香環への置換基を示し、Ｒ4はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＳＣＨ3基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ4は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェノキシ基の群であり、
化学式(10)は、
【化２０】
2004162044.tif 000240
(式中、Ｒ5は芳香環への置換基を示し、Ｒ5はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ5は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換ベンゾイル基の群であり、
化学式(11)は、
【化２１】
2004162044.tif 000241
(式中、Ｒ6は芳香環への置換基を示し、Ｒ6はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ7、ＳＯ2Ｒ8(Ｒ7:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ8:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ6は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルファニル基の群であり、
化学式(12)は、
【化２２】
2004162044.tif 000242
(式中、Ｒ9は芳香環への置換基を示し、Ｒ9はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ10、ＳＯ2Ｒ11(Ｒ10:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ11:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ9は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換(フェニルメチル)スルファニル基の群であり、
化学式(13)は、
【化２３】
2004162044.tif 000243
で示される２-チエニル基であり、
化学式(14)は、
【化２４】
2004162044.tif 000244
で示される２-チエニルスルファニル基であり、
化学式(15)は、
【化２５】
2004162044.tif 000245
で示される２-チエニルカルボニル基であり、
化学式(16)は、
【化２６】
2004162044.tif 000246
(式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14(Ｒ13:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ14:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ12は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフィニル基の群であり、
化学式(17)は、
【化２７】
2004162044.tif 000247
(式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17(Ｒ16:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ17:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ15は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフォニル基の群であり、
化学式(18)は、
【化２８】
2004162044.tif 000248
で示される(フェニルメチル)オキシ基である。
【請求項５】
数平均分子量が1000から1000000の範囲である請求項１乃至４のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体。
【請求項６】
化学式(24)で示すω-アルケン酸の少なくとも１種、及び、化学式(25)で示す化合物の少なくとも１種もしくは化学式(26)で示すω-シクロヘキシルアルカン酸の少なくとも１種、を原料として、
化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルケン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(27)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産する能力を有する微生物により生合成せしめることを特徴とする、化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルケン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(27)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【化２９】
2004162044.tif 000249
(pは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である)
【化３０】
2004162044.tif 000250
(qは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ23はフェニル構造、或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる)
【化３１】
2004162044.tif 000251
(式中、Ｒ24はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ24はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、rは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である)
【化３２】
2004162044.tif 000252
(nは、化学式中に示した範囲内から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化３３】
2004162044.tif 000253
(ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ25はフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲ25は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化３４】
2004162044.tif 000254
(式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、kは化学式中に示した範囲から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ1及びkは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【請求項７】
前記化学式(25)におけるＲ23及び前記化学式(27)におけるＲ25、即ちフェニル構造或いはチエニル構造を有する残基が、化学式(31)、(９)、(10)、(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、及び(18)からなる残基群より選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項６記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
ここで、化学式(31)は、
【化３５】
2004162044.tif 000255
(式中、Ｒ26は芳香環への置換基を示し、Ｒ26はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＨ＝ＣＨ2基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ26は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニル基の群であり、
化学式(９)は、
【化３６】
2004162044.tif 000256
(式中、Ｒ4は芳香環への置換基を示し、Ｒ4はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＳＣＨ3基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ4は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェノキシ基の群であり、
化学式(10)は、
【化３７】
2004162044.tif 000257
(式中、Ｒ5は芳香環への置換基を示し、Ｒ5はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ5は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換ベンゾイル基の群であり、
化学式(11)は、
【化３８】
2004162044.tif 000258
(式中、Ｒ6は芳香環への置換基を示し、Ｒ6はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ7、ＳＯ2Ｒ8(Ｒ7:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ8:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ6は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルファニル基の群であり、
化学式(12)は、
【化３９】
2004162044.tif 000259
(式中、Ｒ9は芳香環への置換基を示し、Ｒ9はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ10、ＳＯ2Ｒ11(Ｒ10:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ11:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ9は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換(フェニルメチル)スルファニル基の群であり、
化学式(13)は、
【化４０】
2004162044.tif 000260
で示される２-チエニル基であり、
化学式(14)は、
【化４１】
2004162044.tif 000261
で示される２-チエニルスルファニル基であり、
化学式(15)は、
【化４２】
2004162044.tif 000262
で示される２-チエニルカルボニル基であり、
化学式(16)は、
【化４３】
2004162044.tif 000263
(式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14(Ｒ13:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ14:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ12は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフィニル基の群であり、
化学式(17)は、
【化４４】
2004162044.tif 000264
(式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17(Ｒ16:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ17:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ15は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフォニル基の群であり、
化学式(18)は、
【化４５】
2004162044.tif 000265
で示される(フェニルメチル)オキシ基である。
【請求項８】
前記化学式(24)で示すω-アルケン酸の少なくとも１種を含み、かつ、前記化学式(25)で示す化合物の少なくとも１種もしくは前記化学式(26)で示すω-シクロヘキシルアルカン酸の少なくとも１種を含む培地中で前記微生物を培養する、請求項６または７に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【請求項９】
前記化学式(24)で示すω-アルケン酸の少なくとも１種を含み、かつ、前記化学式(25)で示す化合物の少なくとも１種もしくは前記化学式(26)で示すω-シクロヘキシルアルカン酸の少なくとも１種に加えて、ペプチド類、酵母エキス、有機酸及びその塩、アミノ酸及びその塩、糖類、並びに、炭素数４から12の直鎖アルカン酸及びその塩からなる群より選ばれる少なくとも１種類を含む培地中で、前記微生物を培養する請求項８に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【請求項１０】
前記化学式(24)で示すω-アルケン酸の少なくとも１種を含み、かつ、前記化学式(25)で示す化合物の少なくとも１種もしくは前記化学式(26)で示すω-シクロヘキシルアルカン酸の少なくとも１種を含む培地中で前記微生物を培養し、前記微生物が産生した前記化学式(１)で示す３-ヒドロキシ-ω-アルケン酸ユニット、及び前記化学式(27)で示すユニット、もしくは前記化学式(３)で示すω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を微生物細胞から回収する工程を有する請求項６乃至９のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【請求項１１】
前記微生物として、シュードモナス(Ｐseudoｍonas)属に属する微生物を用いることを特徴とする請求項６乃至１０のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【請求項１２】
前記微生物として、シュードモナス・チコリアイ ＹＮ２株(Ｐseudoｍonas cichorii ＹＮ２;ＦＥＲＭ ＢＰ-7375)、シュードモナス・チコリアイ Ｈ45株(Ｐseudoｍonas cichorii Ｈ45;ＦＥＲＭ ＢＰ-7374)、シュードモナス・ジェッセニイ Ｐ161株(Ｐseudoｍonas jessenii Ｐ161;ＦＥＲＭ ＢＰ-7376、シュードモナス・プチダ Ｐ91株(Ｐseudoｍonas putida Ｐ91;ＦＥＲＭ ＢＰ-7373)のいずれか１つ以上の株を用いる請求項１１に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【請求項１３】
化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルケン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(２)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を原料として、
化学式(１)に示されるポリヒドロキシアルカノエートの二重結合部分を酸化させることにより、
化学式(19)に示す３-ヒドロキシ-ω-カルボキシアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(２)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生成させることを特徴とする、化学式(19)に示す３-ヒドロキシ-ω-カルボキシアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(２)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【化４６】
2004162044.tif 000266
(nは、化学式中に示した範囲内から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化４７】
2004162044.tif 000267
(ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒはフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化４８】
2004162044.tif 000268
(式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基である；kは、化学式中に示した範囲から選ばれた整数である；複数のユニットが存在する場合、Ｒ1およびkは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化４９】
2004162044.tif 000269
(nは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ18は、Ｈ原子、Ｎa原子またはＫ原子である；複数のユニットが存在する場合、nおよびＲ18は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【請求項１４】
前記化学式(２)におけるＲ、即ちフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基が、化学式(８)、(９)、(10)、(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、及び(18)からなる残基群より選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項１３に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
ここで、化学式(８)は、
【化５０】
2004162044.tif 000270
(式中、Ｒ2は芳香環への置換基を示し、Ｒ2はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＨ＝ＣＨ2基、ＣＯＯＲ3(Ｒ3:Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子のいずれかを表す)、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ2は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニル基の群であり、
化学式(９)は、
【化５１】
2004162044.tif 000271
(式中、Ｒ4は芳香環への置換基を示し、Ｒ4はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＳＣＨ3基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ4は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェノキシ基の群であり、
化学式(10)は、
【化５２】
2004162044.tif 000272
(式中、Ｒ5は芳香環への置換基を示し、Ｒ5はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ5は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換ベンゾイル基の群であり、
化学式(11)は、
【化５３】
2004162044.tif 000273
(式中、Ｒ6は芳香環への置換基を示し、Ｒ6はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ7、ＳＯ2Ｒ8(Ｒ7:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ8:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ6は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルファニル基の群であり、
化学式(12)は、
【化５４】
2004162044.tif 000274
(式中、Ｒ9は芳香環への置換基を示し、Ｒ9はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ10、ＳＯ2Ｒ11(Ｒ10:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ11:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ9は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換(フェニルメチル)スルファニル基の群であり、
化学式(13)は、
【化５５】
2004162044.tif 000275
で示される２-チエニル基であり、
化学式(14)は、
【化５６】
2004162044.tif 000276
で示される２-チエニルスルファニル基であり、
化学式(15)は、
【化５７】
2004162044.tif 000277
で示される２-チエニルカルボニル基であり、
化学式(16)は、
【化５８】
2004162044.tif 000278
(式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14(Ｒ13:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ14:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ12は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフィニル基の群であり、
化学式(17)は、
【化５９】
2004162044.tif 000279
(式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17(Ｒ16:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ17:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ15は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフォニル基の群であり、
化学式(18)は、
【化６０】
2004162044.tif 000280
で示される(フェニルメチル)オキシ基である。
【請求項１５】
請求項６乃至１２のいずれかに記載の方法で製造された、前記、化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルケン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(27)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体
を原料として用いることを特徴とする、請求項１３または１４に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【化６１】
2004162044.tif 000281
(nは、化学式中に示した範囲内から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化６２】
2004162044.tif 000282
(ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ25はフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲ25は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化６３】
2004162044.tif 000283
(式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、また、kは化学式中に示した範囲から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ1及びkは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【請求項１６】
前記酸化反応に用いられる酸化方法として、過マンガン酸塩、重クロム酸塩、及び過ヨウ素酸塩からなる群より選択される一つ以上の酸化剤を用いて、酸化する請求項１３乃至１５のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【請求項１７】
前記酸化反応に用いられる酸化方法として、酸化剤として過マンガン酸塩を用いて、酸性条件下で酸化する請求項１６に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【請求項１８】
前記酸化反応に用いられる酸化方法として、オゾンを用いる請求項１３乃至１５のいずれかに記載の製造方法。
【請求項１９】
化学式（32）に示す３-ヒドロキシ-ω-アルコキシカルボニルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(27)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(3)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットとを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体。
【化６４】
2004162044.tif 000284
(nは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ27は、式中に示した残基のいずれかである；複数のユニットが存在する場合、nおよびＲ27は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化６５】
2004162044.tif 000285
(ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ25はフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲ25は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化６６】
2004162044.tif 000286
(式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、kは化学式中に示した範囲から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【請求項２０】
前記化学式(27)におけるＲ25、即ちフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基が、化学式(31)、(９)、(10)、(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、及び(18)からなる残基群より選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項１９に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体。
ここで、化学式(31)は、
【化６７】
2004162044.tif 000287
(式中、Ｒ26は芳香環への置換基を示し、Ｒ26はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＨ＝ＣＨ2基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ26は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニル基の群であり、
化学式(９)は、
【化６８】
2004162044.tif 000288
(式中、Ｒ4は芳香環への置換基を示し、Ｒ4はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＳＣＨ3基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ4は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェノキシ基の群であり、
化学式(10)は、
【化６９】
2004162044.tif 000289
(式中、Ｒ5は芳香環への置換基を示し、Ｒ5はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ5は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換ベンゾイル基の群であり、
化学式(11)は、
【化７０】
2004162044.tif 000290
(式中、Ｒ6は芳香環への置換基を示し、Ｒ6はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ7、ＳＯ2Ｒ8(Ｒ7:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ8:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ6は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルファニル基の群であり、
化学式(12)は、
【化７１】
2004162044.tif 000291
(式中、Ｒ9は芳香環への置換基を示し、Ｒ9はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ10、ＳＯ2Ｒ11(Ｒ10:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ11:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ9は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換(フェニルメチル)スルファニル基の群であり、
化学式(13)は、
【化７２】
2004162044.tif 000292
で示される２-チエニル基であり、
化学式(14)は、
【化７３】
2004162044.tif 000293
で示される２-チエニルスルファニル基であり、
化学式(15)は、
【化７４】
2004162044.tif 000294
で示される２-チエニルカルボニル基であり、
化学式(16)は、
【化７５】
2004162044.tif 000295
(式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14(Ｒ13:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ14:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ12は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフィニル基の群であり、
化学式(17)は、
【化７６】
2004162044.tif 000296
(式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17(Ｒ16:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ17:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ15は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフォニル基の群であり、
化学式(18)は、
【化７７】
2004162044.tif 000297
で示される(フェニルメチル)オキシ基である。
【請求項２１】
化学式（33）に示す３-ヒドロキシ-ω-アルコキシカルボニルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(34)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットまたは、化学式(40)もしくは(41)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体。
【化７８】
2004162044.tif 000298
(nは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ28は、式中に示した残基のいずれかである；複数のユニットが存在する場合、nおよびＲ28は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化７９】
2004162044.tif 000299
（ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ29はフェニル構造或いはチエニル構造を有する残基であり、この構造を有する残基が化学式(35)、(36)、(37)、(38)、(39)、(16)、(17)、及び(18)からなる残基群より選ばれる一種以上の残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲ29は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
ここで、化学式(35)は、
【化８０】
2004162044.tif 000300
(式中、Ｒ30は芳香環への置換基を示し、Ｒ30はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基、ＮＯ2基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ30は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換フェニル基の群であり、
化学式(36)は、
【化８１】
2004162044.tif 000301
(式中、Ｒ31は芳香環への置換基を示し、Ｒ31はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基またはＮＯ2基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ31は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換フェノキシ基の群であり、
化学式(37)は、
【化８２】
2004162044.tif 000302
(式中、Ｒ32は芳香環への置換基を示し、Ｒ32はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基またはＮＯ2基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ32は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換ベンゾイル基の群であり、
化学式(38)は、
【化８３】
2004162044.tif 000303
(式中、Ｒ33は芳香環への置換基を示し、Ｒ33はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ34またはＳＯ2Ｒ35(Ｒ34:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ35:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ33は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換フェニルスルファニル基の群であり、
化学式(39)は、
【化８４】
2004162044.tif 000304
(式中、Ｒ36は芳香環への置換基を示し、Ｒ36はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ37、ＳＯ2Ｒ38(Ｒ37:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ38:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ36は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換(フェニルメチル)スルファニル基の群であり、
化学式(16)は、
【化８５】
2004162044.tif 000305
(式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14(Ｒ13:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ14:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ12は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフィニル基の群であり、
化学式(17)は、
【化８６】
2004162044.tif 000306
(式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17(Ｒ16:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ17:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ15は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフォニル基の群であり、
化学式(18)は、
【化８７】
2004162044.tif 000307
で示される(フェニルメチル)オキシ基である。
【化８８】
2004162044.tif 000308
(式中、Ｒ39はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ39はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、kは化学式中に示した範囲から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化８９】
2004162044.tif 000309
(式中、Ｒ40はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ40はＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、kは化学式中に示した範囲から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【請求項２２】
数平均分子量が1000から1000000の範囲である請求項１９乃至２１のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体。
【請求項２３】
化学式（42）に示すジカルボン酸モノエステル化合物、及び化学式(25)で示す化合物の少なくとも１種もしくは化学式(26)で示すω-シクロヘキシルアルカン酸の少なくとも１種、を原料として、
化学式（32）に示す３-ヒドロキシ-ω-アルコキシカルボニルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(27)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(3)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産する能力を有する微生物により生合成せしめることを特徴とする、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【化９０】
2004162044.tif 000310
(pは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値を取り得る；R41は式中に示した残基のうち任意の一つ以上をとり得る)
【化９１】
2004162044.tif 000311
(qは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ23はフェニル構造、或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる)
【化９２】
2004162044.tif 000312
(式中、Ｒ24はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ24はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、rは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である)
【化９３】
2004162044.tif 000313
(nは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ27は、式中に示した残基のいずれかである；複数のユニットが存在する場合、nおよびＲ27は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化９４】
2004162044.tif 000314
(ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ25はフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲ25は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化９５】
2004162044.tif 000315
(式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、kは化学式中に示した範囲から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ1及びkは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【請求項２４】
前記化学式(25)におけるＲ23及び前記化学式(27)におけるＲ25、即ちフェニル構造或いはチエニル構造を有する残基が、化学式(31)、(９)、(10)、(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、及び(18)からなる残基群より選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項２３に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
ここで、化学式(31)は、
【化９６】
2004162044.tif 000316
(式中、Ｒ26は芳香環への置換基を示し、Ｒ26はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＨ＝ＣＨ2基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ26は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニル基の群であり、
化学式(９)は、
【化９７】
2004162044.tif 000317
(式中、Ｒ4は芳香環への置換基を示し、Ｒ4はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＳＣＨ3基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ4は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェノキシ基の群であり、
化学式(10)は、
【化９８】
2004162044.tif 000318
(式中、Ｒ5は芳香環への置換基を示し、Ｒ5はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ5は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換ベンゾイル基の群であり、
化学式(11)は、
【化９９】
2004162044.tif 000319
(式中、Ｒ6は芳香環への置換基を示し、Ｒ6はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ7、ＳＯ2Ｒ8(Ｒ7:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ8:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ6は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルファニル基の群であり、
化学式(12)は、
【化１００】
2004162044.tif 000320
(式中、Ｒ9は芳香環への置換基を示し、Ｒ9はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ10、ＳＯ2Ｒ11(Ｒ10:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ11:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ9は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換(フェニルメチル)スルファニル基の群であり、
化学式(13)は、
【化１０１】
2004162044.tif 000321
で示される２-チエニル基であり、
化学式(14)は、
【化１０２】
2004162044.tif 000322
で示される２-チエニルスルファニル基であり、
化学式(15)は、
【化１０３】
2004162044.tif 000323
で示される２-チエニルカルボニル基であり、
化学式(16)は、
【化１０４】
2004162044.tif 000324
(式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14(Ｒ13:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ14:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ12は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフィニル基の群であり、
化学式(17)は、
【化１０５】
2004162044.tif 000325
(式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17(Ｒ16:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ17:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ15は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフォニル基の群であり、
化学式(18)は、
【化１０６】
2004162044.tif 000326
で示される(フェニルメチル)オキシ基である。
【請求項２５】
化学式（43）に示すジカルボン酸モノエステル化合物、及び化学式(44)で示す化合物の少なくとも１種または、化学式(45)で示す3-シクロヘキシルプロパン酸化合物もしくは化学式（46）で示すω-シクロヘキシルアルカン酸化合物の少なくとも１種、を原料として、
化学式（33）に示す３-ヒドロキシ-ω-アルコキシカルボニルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(34)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットまたは、化学式(40)に示す3-ヒドロキシ-シクロヘキシルプロパン酸ユニットもしくは化学式（41）で示す3-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産する能力を有する微生物により生合成せしめることを特徴とする、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【化１０７】
2004162044.tif 000327
(pは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値を取り得る；R42は式中に示した残基のうち任意の一つ以上をとり得る)
化学式（44）：
【化１０８】
2004162044.tif 000328
（化学式(44)におけるqは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である。またＲ43はフェニル構造、或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基であり、化学式(35)、(36)、(37)、(38)、(39)、(16)、(17)、及び(18)からなる残基群より選ばれる一種以上の残基を含んでいる。）
化学式(35)は、
【化１０９】
2004162044.tif 000329
(式中、Ｒ30は芳香環への置換基を示し、Ｒ30はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基、ＮＯ2基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ30は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換フェニル基の群であり、
化学式(36)は、
【化１１０】
2004162044.tif 000330
(式中、Ｒ31は芳香環への置換基を示し、Ｒ31はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基またはＮＯ2基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ31は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換フェノキシ基の群であり、
化学式(37)は、
【化１１１】
2004162044.tif 000331
(式中、Ｒ32は芳香環への置換基を示し、Ｒ32はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基またはＮＯ2基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ32は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換ベンゾイル基の群であり、
化学式(38)は、
【化１１２】
2004162044.tif 000332
(式中、Ｒ33は芳香環への置換基を示し、Ｒ33はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ34またはＳＯ2Ｒ35(Ｒ34:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ35:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ33は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換フェニルスルファニル基の群であり、
化学式(39)は、
【化１１３】
2004162044.tif 000333
(式中、Ｒ36は芳香環への置換基を示し、Ｒ36はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ37、ＳＯ2Ｒ38(Ｒ37:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ38:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ36は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換(フェニルメチル)スルファニル基の群であり、
化学式(16)は、
【化１１４】
2004162044.tif 000334
(式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14(Ｒ13:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ14:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ12は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフィニル基の群であり、
化学式(17)は、
【化１１５】
2004162044.tif 000335
(式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17(Ｒ16:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ17:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ15は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフォニル基の群であり、
化学式(18)は、
【化１１６】
2004162044.tif 000336
で示される(フェニルメチル)オキシ基である。
化学式（45）：
【化１１７】
2004162044.tif 000337
(式中、Ｒ44はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ44はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基である；複数のユニットが存在する場合、Ｒ44は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
化学式（46）：
【化１１８】
2004162044.tif 000338
(式中、Ｒ45はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ45はＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基である；rは、化学式中に示した範囲から選ばれた整数である；複数のユニットが存在する場合、Ｒ45およびrは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
化学式（33）：
【化１１９】
2004162044.tif 000339
(nは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ28は、式中に示した残基のいずれかである；複数のユニットが存在する場合、nおよびＲ28は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化１２０】
2004162044.tif 000340
（ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ29はフェニル構造或いはチエニル構造を有する残基であり、この構造を有する残基が化学式(35)、(36)、(37)、(38)、(39)、(16)、(17)、及び(18)からなる残基群より選ばれる一種以上の残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲ29は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
化学式（40）：
【化１２１】
2004162044.tif 000341
(式中、Ｒ39はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ39はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、kは化学式中に示した範囲から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
化学式（41）：
【化１２２】
2004162044.tif 000342
(式中、Ｒ40はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ40はＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、kは化学式中に示した範囲から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【請求項２６】
前記化学式（42）に示すジカルボン酸モノエステル化合物を含み、且つ、前記化学式(25)で示す化合物の少なくとも１種もしくは化学式(26)で示すω-シクロヘキシルアルカン酸の少なくとも１種を含む培地中で微生物を培養する請求項２３または２４に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【請求項２７】
前記化学式（43）に示すジカルボン酸モノエステル化合物を含み、且つ、前記化学式(44)で示す化合物の少なくとも１種または前記化学式(45)で示す3-シクロヘキシルプロパン酸化合物もしくは前記化学式（46）で示すω-シクロヘキシルアルカン酸化合物の少なくとも１種を含む培地中で微生物を培養する請求項２５に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【請求項２８】
前記培地に、さらに、ペプチド類、酵母エキス、有機酸及びその塩、アミノ酸及びその塩、糖類、並びに、炭素数４から12の直鎖アルカン酸及びその塩からなる群より選ばれる少なくとも１種類を含む培地中で、微生物を培養する、請求項２６または２７に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【請求項２９】
前記微生物が産生したポリヒドロキシアルカノエート共重合体を微生物細胞から回収する工程を有する請求項２３乃至２８のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【請求項３０】
前記微生物として、シュードモナス(Ｐseudoｍonas)属に属する微生物を用いることを特徴とする請求項２３乃至２９のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【請求項３１】
前記微生物として、シュードモナス・チコリアイ ＹＮ２株(Ｐseudoｍonas cichorii ＹＮ２;ＦＥＲＭ ＢＰ-7375)、シュードモナス・チコリアイ Ｈ45株(Ｐseudoｍonas cichorii Ｈ45;ＦＥＲＭ ＢＰ-7374)、シュードモナス・ジェッセニイ Ｐ161株(Ｐseudoｍonas jessenii Ｐ161;ＦＥＲＭ ＢＰ-7376)、シュードモナス・プチダ Ｐ91株(Ｐseudoｍonas putida Ｐ91;ＦＥＲＭ ＢＰ-7373)のいずれか１つ以上の株を用いる請求項３０に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【請求項３２】
化学式(48)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルコキシカルボニルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(27)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を原料として、
酸またはアルカリの存在下に加水分解する方法、或いは接触還元を含む水素化分解する方法により、
化学式(19)に示す３-ヒドロキシ-ω-カルボキシアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(27)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生成させることを特徴とする、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
【化１２３】
2004162044.tif 000343
(nは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ47は、式中に示した残基のいずれかである；複数のユニットが存在する場合、nおよびＲ47は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化１２４】
2004162044.tif 000344
(ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ25はフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲ25は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化１２５】
2004162044.tif 000345
(式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、また、kは化学式中に示した範囲から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ1及びkは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【化１２６】
2004162044.tif 000346
(nは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ18は、Ｈ原子、Ｎa原子またはＫ原子である；複数のユニットが存在する場合、nおよびＲ18は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【請求項３３】
前記化学式(27)におけるＲ25、即ちフェニル構造或いはチエニル構造を有する残基が、化学式(31)、(９)、(10)、(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、及び(18)からなる残基群より選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする、請求項３２に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
ここで、化学式(31)は、
【化１２７】
2004162044.tif 000347
(式中、Ｒ26は芳香環への置換基を示し、Ｒ26はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＨ＝ＣＨ2基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ26は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニル基の群であり、
化学式(９)は、
【化１２８】
2004162044.tif 000348
(式中、Ｒ4は芳香環への置換基を示し、Ｒ4はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＳＣＨ3基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ4は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェノキシ基の群であり、
化学式(10)は、
【化１２９】
2004162044.tif 000349
(式中、Ｒ5は芳香環への置換基を示し、Ｒ5はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ5は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換ベンゾイル基の群であり、
化学式(11)は、
【化１３０】
2004162044.tif 000350
(式中、Ｒ6は芳香環への置換基を示し、Ｒ6はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ7、ＳＯ2Ｒ8(Ｒ7:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ8:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ6は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルファニル基の群であり、
化学式(12)は、
【化１３１】
2004162044.tif 000351
(式中、Ｒ9は芳香環への置換基を示し、Ｒ9はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ10、ＳＯ2Ｒ11(Ｒ10:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ11:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ9は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換(フェニルメチル)スルファニル基の群であり、
化学式(13)は、
【化１３２】
2004162044.tif 000352
で示される２-チエニル基であり、
化学式(14)は、
【化１３３】
2004162044.tif 000353
で示される２-チエニルスルファニル基であり、
化学式(15)は、
【化１３４】
2004162044.tif 000354
で示される２-チエニルカルボニル基であり、
化学式(16)は、
【化１３５】
2004162044.tif 000355
(式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14(Ｒ13:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ14:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ12は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフィニル基の群であり、
化学式(17)は、
【化１３６】
2004162044.tif 000356
(式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17(Ｒ16:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ17:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ15は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフォニル基の群であり、
化学式(18)は、
【化１３７】
2004162044.tif 000357
で示される(フェニルメチル)オキシ基である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、二重結合を有する新規なユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート(以下、ＰＨＡと略すこともある)共重合体と、微生物を利用するその製造方法、さらに前記共重合体から誘導され、カルボキシル基またはその塩を有する新規なユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体とその製造方法に関する。
また、本発明は、エステル基を有する新規なユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体と、微生物を利用するその製造方法、さらには前記共重合体から誘導され、カルボキシル基またはその塩を有する新規ユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体とその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
これまで、多くの微生物が、ポリ-３-ヒドロキシ酪酸(ＰＨＢ)あるいはその他のポリ-３-ヒドロキシアルカノエート(ＰＨＡ)を生産し、その菌体内に蓄積することが報告されている。これらＰＨＡなどの微生物が産生するポリマーは、従来のプラスチックと同様に、溶融加工等により各種製品の生産に利用することができる。さらに、微生物が産生するポリマー、例えば、ＰＨＡなどは、生分解性を有しており、自然界の微生物により完全分解されるという利点を有している。従って、例えば、微生物が産生するＰＨＡは、廃棄した際、従来の多くの合成高分子化合物のように自然環境にそのまま残留し、汚染を引き起こす要因となることがない。また、微生物が産生するＰＨＡは、一般に生体適合性にも優れており、医療用軟質部材等としての応用も期待されている。
【０００３】
しかし、このような微生物産生ＰＨＡのより広範囲な応用、例えば機能性ポリマーとしての応用を考慮した場合、アルキル基以外の置換基を側鎖に導入したＰＨＡ「unusual ＰＨＡ」が極めて有用であることが期待される。置換基の例としては、芳香環を含むもの(フェニル基、フェノキシ基、など)や、不飽和炭化水素、エステル基、アリル基、シアノ基、ハロゲン化炭化水素、エポキシドなどが挙げられる。これらの中でも、特に、芳香環を有するＰＨＡの研究が盛んになされている。
【０００４】
(a)フェニル基もしくはその部分置換体を含むもの
Ｍakroｍol.Ｃheｍ.,191，1957-1965(1990)（非特許文献１）及びＭacroｍolecules,24，5256-5260(1991)（非特許文献２）には、５-フェニル吉草酸を基質として、シュードモナス オレオボランス(Ｐseudoｍonas oleovorans)が３-ヒドロキシ-５-フェニル吉草酸をユニットとして含むＰＨＡを生産することが報告されている。
【０００５】
Ｍacroｍolecules,29，1762-1766(1996)（非特許文献３）には、５-(４'-トリル)吉草酸を基質として、シュードモナス オレオボランス(Ｐseudoｍonas oleovorans)が３-ヒドロキシ-５-(４'-トリル)吉草酸をユニットとして含むＰＨＡを生産することが報告されている。
【０００６】
Ｍacroｍolecules,32，2889-2895(1999)（非特許文献４）には、５-(２',４'-ジニトロフェニル)吉草酸を基質として、シュードモナス オレオボランス(Ｐseudoｍonas oleovorans)が３-ヒドロキシ-５-(２',４'-ジニトロフェニル)吉草酸及び３-ヒドロキシ-５-(４'-ニトロフェニル)吉草酸をユニットとして含むＰＨＡを生産することが報告されている。
【０００７】
(b)フェノキシ基もしくはその部分置換体を含むもの
Ｍacroｍol.Ｃheｍ.Ｐhys.,195，1665-1672(1994)（非特許文献５）には、11-フェノキシウンデカン酸を基質として、シュードモナス オレオボランス(Ｐseudoｍonas oleovorans)が３-ヒドロキシ-５-フェノキシ吉草酸と３-ヒドロキシ-９-フェノキシノナン酸のＰＨＡコポリマーを生産することが報告されている。
【０００８】
特許第2989175号公報（特許文献１）には、３-ヒドロキシ、５-(モノフルオロフェノキシ)ペンタノエート(３Ｈ５(ＭＦＰ)Ｐ)ユニットあるいは３-ヒドロキシ、５-(ジフルオロフェノキシ)ペンタノエート(３Ｈ５(ＤＦＰ)Ｐ)ユニットからなるホモポリマー、少なくとも３Ｈ５(ＭＦＰ)Ｐユニットあるいは３Ｈ５(ＤＦＰ)Ｐユニットを含有するコポリマー；これらのポリマーを合成するシュードモナス・プチダ；シュードモナス属を用いた前記のポリマーの製造法に関する発明がされている。加えて、その効果として、置換基をもつ長鎖脂肪酸を資化して、側鎖末端が１から２個のフッ素原子が置換したフェノキシ基をもつポリマーを合成することができ、融点が高く良い加工性を保持しながら、立体規則性、撥水性を与えることができるとしている。
【０００９】
このユニット中の芳香環上にフッ素置換を有するフッ素置換ＰＨＡ以外に、ユニット中の芳香環上にシアノ基やニトロ基が置換したＰＨＡの研究もなされている。
【００１０】
Ｃan.Ｊ.Ｍicrobiol.,41，32-43(1995)（非特許文献６）及びＰolyｍer International,39，205-213(1996)（非特許文献７）には、シュードモナス オレオボランス(Ｐseudoｍonas oleovorans)ＡＴＣＣ29347株及びシュードモナス プチダ(Ｐseudoｍonas putida)ＫＴ2442株を用いて、オクタン酸と６-(p-シアノフェノキシ)ヘキサン酸あるいは６-(p-ニトロフェノキシ)ヘキサン酸を基質として、３-ヒドロキシ-６-(p-シアノフェノキシ)ヘキサン酸あるいは３-ヒドロキシ-６-(p-ニトロフェノキシ)ヘキサン酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡの生産が報告されている。
【００１１】
これらの報告は側鎖がアルキル基である一般的なＰＨＡとは異なり、いずれもＰＨＡの側鎖に芳香環を有しており、それに由来する物性を有するポリマーを得る上で有益である。
【００１２】
また新たなカテゴリーとして、単に物性の変化に留まらず、側鎖に適当な官能基を有するＰＨＡを生産し、その官能基を利用して新たな機能を生み出そうとする研究も行なわれている。
【００１３】
そのための具体的な方法として、ユニット中にブロモ基やビニル基のような付加反応などにおける反応性が高い活性基を有するＰＨＡを生産し、活性基を利用した化学変換により任意の官能基をポリマー側鎖に導入し、多機能のＰＨＡを得ることを目的とした研究も行われている。
【００１４】
Ｍacroｍol.Ｒapid Ｃoｍｍun.,20，91-94(1999)（非特許文献８）には、シュードモナス オレオボランス(Ｐseudoｍonas oleovorans)を用いて、側鎖にブロモ基を有するＰＨＡを生産し、アセチル化マルトースのチオール化物を側鎖に修飾し、その溶解性や親水性の異なるＰＨＡを合成したことが報告されている。
【００１５】
Ｐolyｍer,41，1703-1709(2000)（非特許文献９）には、シュードモナス・オレオボランス(Ｐseudoｍonas oleovolans)を用いて、10-ウンデセン酸を基質として、側鎖末端に不飽和結合(ビニル基)を有する３-ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡを生産した後、過マンガン酸カリウムを用いた酸化反応により合成した側鎖末端にジオールを有する３-ヒドロキシアルカン酸がメタノール、アセトン-水(80/20,v/v)混合溶媒、ジメチルスルホキシド等の極性溶媒に可溶化し、クロロホルム、テトラヒドロフラン、アセトン等の非極性溶媒に不溶化するといった、溶媒への溶解性が変化したことが報告されている。
【００１６】
同じく、Ｍacroｍolecules,31，1480-1486(1998)（非特許文献１０）には、シュードモナス・オレオボランス(Ｐseudoｍonas oleovolans)を用いて側鎖にビニル基を有するポリエステルを生産し、ビニル基をエポキシ化することにより、エポキシ基を側鎖に有するポリエステルを生産したことが報告されている。
【００１７】
また、Ｐolyｍer,35，2090-2097(1994)（非特許文献１１）には、ポリエステル側鎖のビニル基を利用し、ポリエステル分子内の架橋反応を行い、ポリエステルの物性を改良したことが報告されている。
【００１８】
Ｍacroｍolecular cheｍistry，４，289-293(2001)（非特許文献１２）には、10-ウンデセン酸を基質として、３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡを生産した後、過マンガン酸カリウムを用いた酸化反応により合成した３-ヒドロキシ-10-カルボキシデカン酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡについて、その分解速度の向上が認められたことが報告されている。
【００１９】
さらに、ユニット中に活性基を有するＰＨＡの物性を変化させ、ポリマーとして実際に利用していくために、活性基を有するユニット以外のユニットを含むＰＨＡ共重合体を微生物合成することが検討されており、Ｍacroｍolecules,25，1852-1857(1992)（非特許文献１３）に、シュードモナス オレオボランス(Ｐseudoｍonas oleovorans)を用いて、11-ブロモウンデカン酸、８-ブロモオクタン酸、６-ブロモヘキサン酸といったω-ブロモアルカン酸とn-ノナン酸の共存下で３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニットと直鎖アルカン酸ユニットを含むＰＨＡ共重合体を生産した例が報告されている。
【００２０】
このように、ユニット中にブロモ基やビニル基のような反応性が高い活性基を有するＰＨＡでは、様々な官能基の導入や、化学的変換を施すことが可能であり、また、ポリマーの架橋点ともなり得るため、活性基を有するＰＨＡは、ＰＨＡの多機能化を図る上で非常に有効な方法であると言える。
【００２１】
なお、本願発明に関連する技術としては、他に炭素-炭素の二重結合を、酸化剤により、酸化してカルボン酸を得る技術に関するもの(特開昭59-190945号公報（特許文献２）、Ｊ.Ｃheｍ.Ｓoc.,Ｐerkin.Ｔrans.1，806(1973)（非特許文献１４）、Ｏrg.Ｓynth.,４，698(1963)（非特許文献１５）、Ｊ.Ｏrg.Ｃheｍ.,46，19(1981)（非特許文献１６）、Ｊ.Ａｍ.Ｃheｍ.Ｓoc.,81，4273(1959)（非特許文献１７）)がある。
【００２２】
また、その一方で、ユニット中にエステル基を有するPHAを基に、多機能のPHAを得ることを目的とした研究も盛んに行われている。
【００２３】
Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．，１９５，１４０５−１４２１（１９９４）（非特許文献１８）には、ポリヒドロキシアルカノエート生産微生物としてシュードモナス オレオボランス （Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ）を用いて、アルカン酸エステルを原料として側鎖にエステル基を有するユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートの生産が生産されたと報告されている。
【００２４】
また、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ  Ｐｈ．Ｄ．Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ  Ｏｒｄｅｒ  Ｎｕｍｂｅｒ  ９１３２８７５（１９９１）（非特許文献１９）には、同じくシュードモナス オレオボランスを生産微生物として、側鎖にベンジルエステル構造を有するユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートが生産されたと報告されている。
【特許文献１】特許第2989175号公報
【特許文献２】特開昭59-190945号公報
【非特許文献１】Ｍakroｍol.Ｃheｍ.,191，1957-1965(1990)
【非特許文献２】Ｍacroｍolecules,24，5256-5260(1991)
【非特許文献３】Ｍacroｍolecules,29，1762-1766(1996)
【非特許文献４】Ｍacroｍolecules,32，2889-2895(1999)
【非特許文献５】Ｍacroｍol.Ｃheｍ.Ｐhys.,195，1665-1672(1994)
【非特許文献６】Ｃan.Ｊ.Ｍicrobiol.,41，32-43(1995)
【非特許文献７】Ｐolyｍer International,39，205-213(1996)
【非特許文献８】Ｍacroｍol.Ｒapid Ｃoｍｍun.,20，91-94(1999)
【非特許文献９】Ｐolyｍer,41，1703-1709(2000)
【非特許文献１０】Ｍacroｍolecules,31，1480-1486(1998)
【非特許文献１１】Ｐolyｍer,35，2090-2097(1994)
【非特許文献１２】Ｍacroｍolecular cheｍistry，４，289-293(2001)
【非特許文献１３】Ｍacroｍolecules,25，1852-1857(1992)
【非特許文献１４】Ｊ.Ｃheｍ.Ｓoc.,Ｐerkin.Ｔrans.1，806(1973)
【非特許文献１５】Ｏrg.Ｓynth.,４，698(1963)
【非特許文献１６】Ｊ.Ｏrg.Ｃheｍ.,46，19(1981)
【非特許文献１７】Ｊ.Ａｍ.Ｃheｍ.Ｓoc.,81，4273(1959)
【非特許文献１８】Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．，１９５，１４０５−１４２１（１９９４）
【非特許文献１９】Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ  Ｐｈ．Ｄ．Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ  Ｏｒｄｅｒ  Ｎｕｍｂｅｒ  ９１３２８７５（１９９１）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
しかしながら、上記の報告では、側鎖末端にカルボキシル基やエステル基を有するモノマーユニットと側鎖に直鎖アルキル基を有するモノマーユニットとからなるＰＨＡ(usual ＰＨＡ)との共重合体とのものであった。そのため、このポリマーは、ガラス転移温度が低い等の問題点があった。一方、熱的安定なポリマーとして有用であると考えられる、フェニル構造、チエニル構造、シクロヘキシル構造といった直鎖アルキル基以外の置換基を側鎖に導入したＰＨＡ「unusual ＰＨＡ」との共重合体との報告はされておらず、そのポリヒドロキシアルカノエート及びその製造方法が求められていた。
【００２６】
また、ビニル基を活性基とするＰＨＡの場合も、直鎖アルキル基を有するモノマーユニットとからなるＰＨＡ(usual ＰＨＡ)との共重合体とのものであり、ガラス転移温度や融点が低く、ポリマーの加工上及び使用上好ましい物性とは言えなかった。
【００２７】
以上の点から、活性基を有するＰＨＡの微生物による生産性が高く、活性基を有する側鎖のユニット比を制御でき、さらにポリマーとしての応用が制限されないように物性を任意に制御し得るようなＰＨＡ及びその製造方法が求められていた。
【課題を解決するための手段】
【００２８】
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意研究の結果、反応性の高いビニル基や、エステル基、更にはカルボキシル基を活性基として有するユニットと、ポリマー物性の向上に寄与できるフェニル構造、チエニル構造、シクロヘキシル構造のいずれかを有するユニットとを共重合したＰＨＡを合成する方法を見出し、上述の課題を解決する本発明に至った。即ち本発明の概要は以下の通りである。
【００２９】
本発明は、
化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルケン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(２)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むことを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート共重合体である。
【００３０】
【化１】
2004162044.tif 000002
【００３１】
(nは、化学式中に示した範囲内から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００３２】
【化２】
2004162044.tif 000003
【００３３】
(ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒはフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００３４】
【化３】
2004162044.tif 000004
【００３５】
(式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基である；kは、化学式中に示した範囲から選ばれた整数である；複数のユニットが存在する場合、Ｒ1およびkは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
また、本発明は、
化学式(19)に示す３-ヒドロキシ-ω-カルボキシアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(２)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むことを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート共重合体である。
【００３６】
【化４】
2004162044.tif 000005
【００３７】
(nは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ18は、Ｈ原子、Ｎa原子またはＫ原子である；複数のユニットが存在する場合、nおよびＲ18は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００３８】
【化５】
2004162044.tif 000006
【００３９】
(ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒはフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００４０】
【化６】
2004162044.tif 000007
【００４１】
(式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基である；kは、化学式中に示した範囲から選ばれた整数である；複数のユニットが存在する場合、Ｒ1及びkは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
また、本発明は、
化学式(24)で示すω-アルケン酸の少なくとも１種、及び、化学式(25)で示す化合物の少なくとも１種もしくは化学式(26)で示すω-シクロヘキシルアルカン酸の少なくとも１種、を原料として、
化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルケン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(27)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産する能力を有する微生物により生合成せしめることを特徴とする、化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルケン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(27)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法である。
【００４２】
【化７】
2004162044.tif 000008
【００４３】
(pは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である)
【００４４】
【化８】
2004162044.tif 000009
【００４５】
(qは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ23はフェニル構造、或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる)
【００４６】
【化９】
2004162044.tif 000010
【００４７】
(式中、Ｒ24はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ24はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、rは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である)
【００４８】
【化１０】
2004162044.tif 000011
【００４９】
(nは、化学式中に示した範囲内から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００５０】
【化１１】
2004162044.tif 000012
【００５１】
(ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ25はフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲ25は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００５２】
【化１２】
2004162044.tif 000013
【００５３】
(式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、kは化学式中に示した範囲から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ1及びkは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
また、本発明は、
化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルケン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(２)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を原料として、
化学式(１)に示されるポリヒドロキシアルカノエートの二重結合部分を酸化させることにより、
化学式(19)に示す３-ヒドロキシ-ω-カルボキシアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(２)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生成させることを特徴とする、化学式(19)に示す３-ヒドロキシ-ω-カルボキシアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(２)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法である。
【００５４】
【化１３】
2004162044.tif 000014
【００５５】
(nは、化学式中に示した範囲内から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００５６】
【化１４】
2004162044.tif 000015
【００５７】
(ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒはフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００５８】
【化１５】
2004162044.tif 000016
【００５９】
(式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基である；kは、化学式中に示した範囲から選ばれた整数である；複数のユニットが存在する場合、Ｒ1およびkは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００６０】
【化１６】
2004162044.tif 000017
【００６１】
(nは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ18は、Ｈ原子、Ｎa原子またはＫ原子である；複数のユニットが存在する場合、nおよびＲ18は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
また、本発明は、
化学式（32）に示す３-ヒドロキシ-ω-アルコキシカルボニルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(27)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(3)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットとを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体である。
【００６２】
【化１７】
2004162044.tif 000018
【００６３】
(nは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ27は、式中に示した残基のいずれかである；複数のユニットが存在する場合、nおよびＲ27は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００６４】
【化１８】
2004162044.tif 000019
【００６５】
(ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ25はフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲ25は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００６６】
【化１９】
2004162044.tif 000020
【００６７】
(式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、kは化学式中に示した範囲から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
また、本発明は、
化学式（33）に示す３-ヒドロキシ-ω-アルコキシカルボニルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(34)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットまたは、化学式(40)もしくは(41)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体である。
【００６８】
【化２０】
2004162044.tif 000021
【００６９】
(nは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ28は、式中に示した残基のいずれかである；複数のユニットが存在する場合、nおよびＲ28は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００７０】
【化２１】
2004162044.tif 000022
【００７１】
（ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ29はフェニル構造或いはチエニル構造を有する残基であり、この構造を有する残基が化学式(35)、(36)、(37)、(38)、(39)、(16)、(17)、及び(18)からなる残基群より選ばれる一種以上の残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲ29は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
ここで、化学式(35)は、
【００７２】
【化２２】
2004162044.tif 000023
【００７３】
(式中、Ｒ30は芳香環への置換基を示し、Ｒ30はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基、ＮＯ2基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ30は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換フェニル基の群であり、
化学式(36)は、
【００７４】
【化２３】
2004162044.tif 000024
【００７５】
(式中、Ｒ31は芳香環への置換基を示し、Ｒ31はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基またはＮＯ2基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ31は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換フェノキシ基の群であり、
化学式(37)は、
【００７６】
【化２４】
2004162044.tif 000025
【００７７】
(式中、Ｒ33は芳香環への置換基を示し、Ｒ32はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基またはＮＯ2基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ32は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換ベンゾイル基の群であり、
化学式(38)は、
【００７８】
【化２５】
2004162044.tif 000026
【００７９】
(式中、Ｒ33は芳香環への置換基を示し、Ｒ33はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ34またはＳＯ2Ｒ35(Ｒ34:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ35:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ33は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換フェニルスルファニル基の群であり、
化学式(39)は、
【００８０】
【化２６】
2004162044.tif 000027
【００８１】
(式中、Ｒ36は芳香環への置換基を示し、Ｒ36はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ37、ＳＯ2Ｒ38(Ｒ37:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ38:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ36は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換(フェニルメチル)スルファニル基の群であり、
化学式(16)は、
【００８２】
【化２７】
2004162044.tif 000028
【００８３】
(式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14(Ｒ13:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ14:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ12は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフィニル基の群であり、
化学式(17)は、
【００８４】
【化２８】
2004162044.tif 000029
【００８５】
(式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17(Ｒ16:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ17:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ15は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフォニル基の群であり、
化学式(18)は、
【００８６】
【化２９】
2004162044.tif 000030
【００８７】
で示される(フェニルメチル)オキシ基である。
【００８８】
【化３０】
2004162044.tif 000031
【００８９】
(式中、Ｒ39はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ39はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、kは化学式中に示した範囲から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００９０】
【化３１】
2004162044.tif 000032
【００９１】
(式中、Ｒ40はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ40はＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、kは化学式中に示した範囲から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
また、本発明は、
化学式（42）に示すジカルボン酸モノエステル化合物、及び化学式(25)で示す化合物の少なくとも１種もしくは化学式(26)で示すω-シクロヘキシルアルカン酸の少なくとも１種、を原料として、
化学式（32）に示す３-ヒドロキシ-ω-アルコキシカルボニルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(27)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(3)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産する能力を有する微生物により生合成せしめることを特徴とする、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法である。
【００９２】
【化３２】
2004162044.tif 000033
【００９３】
(pは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値を取り得る；R41は式中に示した残基のうち任意の一つ以上をとり得る)
【００９４】
【化３３】
2004162044.tif 000034
【００９５】
(qは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ23はフェニル構造、或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる)
【００９６】
【化３４】
2004162044.tif 000035
【００９７】
(式中、Ｒ24はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ24はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、rは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である)
【００９８】
【化３５】
2004162044.tif 000036
【００９９】
(nは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ27は、式中に示した残基のいずれかである；複数のユニットが存在する場合、nおよびＲ27は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【０１００】
【化３６】
2004162044.tif 000037
【０１０１】
(ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ25はフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲ25は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【０１０２】
【化３７】
2004162044.tif 000038
【０１０３】
(式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、kは化学式中に示した範囲から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ1及びkは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
また、本発明は、
化学式（43）に示すジカルボン酸モノエステル化合物、及び化学式(44)で示す化合物の少なくとも１種または、化学式(45)で示す3-シクロヘキシルプロパン酸化合物もしくは化学式（46）で示すω-シクロヘキシルアルカン酸化合物の少なくとも１種、を原料として、
化学式（33）に示す３-ヒドロキシ-ω-アルコキシカルボニルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(34)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットまたは、化学式(40)に示す3-ヒドロキシ-シクロヘキシルプロパン酸ユニットもしくは化学式（41）で示す3-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産する能力を有する微生物により生合成せしめることを特徴とする、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法である。
【０１０４】
【化３８】
2004162044.tif 000039
【０１０５】
(pは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値を取り得る；R42は式中に示した残基のうち任意の一つ以上をとり得る)
化学式（44）：
【０１０６】
【化３９】
2004162044.tif 000040
【０１０７】
（化学式(44)におけるqは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である。またＲ43はフェニル構造、或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基であり、化学式(35)、(36)、(37)、(38)、(39)、(16)、(17)、及び(18)からなる残基群より選ばれる一種以上の残基を含んでいる。）
化学式(35)は、
【０１０８】
【化４０】
2004162044.tif 000041
【０１０９】
(式中、Ｒ30は芳香環への置換基を示し、Ｒ30はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基、ＮＯ2基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ30は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換フェニル基の群であり、
化学式(36)は、
【０１１０】
【化４１】
2004162044.tif 000042
【０１１１】
(式中、Ｒ31は芳香環への置換基を示し、Ｒ31はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基またはＮＯ2基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ31は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換フェノキシ基の群であり、
化学式(37)は、
【０１１２】
【化４２】
2004162044.tif 000043
【０１１３】
(式中、Ｒ33は芳香環への置換基を示し、Ｒ32はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基またはＮＯ2基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ32は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換ベンゾイル基の群であり、
化学式(38)は、
【０１１４】
【化４３】
2004162044.tif 000044
【０１１５】
(式中、Ｒ33は芳香環への置換基を示し、Ｒ33はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ34またはＳＯ2Ｒ35(Ｒ34:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ35:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ33は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換フェニルスルファニル基の群であり、
化学式(39)は、
【０１１６】
【化４４】
2004162044.tif 000045
【０１１７】
(式中、Ｒ36は芳香環への置換基を示し、Ｒ36はハロゲン原子（Ｆ原子は除く）、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ37、ＳＯ2Ｒ38(Ｒ37:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ38:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ36は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される置換(フェニルメチル)スルファニル基の群であり、
化学式(16)は、
【０１１８】
【化４５】
2004162044.tif 000046
【０１１９】
(式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14(Ｒ13:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ14:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ12は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフィニル基の群であり、
化学式(17)は、
【０１２０】
【化４６】
2004162044.tif 000047
【０１２１】
(式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17(Ｒ16:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ17:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ15は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフォニル基の群であり、
化学式(18)は、
【０１２２】
【化４７】
2004162044.tif 000048
【０１２３】
で示される(フェニルメチル)オキシ基である。
化学式（45）：
【０１２４】
【化４８】
2004162044.tif 000049
【０１２５】
(式中、Ｒ44はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ44はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基である；複数のユニットが存在する場合、Ｒ44は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
化学式（46）：
【０１２６】
【化４９】
2004162044.tif 000050
【０１２７】
(式中、Ｒ45はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ45はＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基である；rは、化学式中に示した範囲から選ばれた整数である；複数のユニットが存在する場合、Ｒ45およびrは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
化学式（33）：
【０１２８】
【化５０】
2004162044.tif 000051
【０１２９】
(nは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ28は、式中に示した残基のいずれかである；複数のユニットが存在する場合、nおよびＲ28は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【０１３０】
【化５１】
2004162044.tif 000052
【０１３１】
（ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ29はフェニル構造或いはチエニル構造を有する残基であり、この構造を有する残基が化学式(35)、(36)、(37)、(38)、(39)、(16)、(17)、及び(18)からなる残基群より選ばれる一種以上の残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲ29は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
化学式（40）：
【０１３２】
【化５２】
2004162044.tif 000053
【０１３３】
(式中、Ｒ39はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ39はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、kは化学式中に示した範囲から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
化学式（41）：
【０１３４】
【化５３】
2004162044.tif 000054
【０１３５】
(式中、Ｒ40はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ40はＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、kは化学式中に示した範囲から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
また、本発明は、
化学式(48)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルコキシカルボニルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(27)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を原料として、
酸またはアルカリの存在下に加水分解する方法、或いは接触還元を含む水素化分解する方法により、
化学式(19)に示す３-ヒドロキシ-ω-カルボキシアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に含み、かつ、化学式(27)に示す３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットもしくは化学式(３)に示す３-ヒドロキシ-ω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生成させることを特徴とする、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法である。
【０１３６】
【化５４】
2004162044.tif 000055
【０１３７】
(nは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ47は、式中に示した残基のいずれかである；複数のユニットが存在する場合、nおよびＲ47は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【０１３８】
【化５５】
2004162044.tif 000056
【０１３９】
(ｍは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ25はフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる；複数のユニットが存在する場合、ｍおよびＲ25は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【０１４０】
【化５６】
2004162044.tif 000057
【０１４１】
(式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、また、kは化学式中に示した範囲から選ばれた整数であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ1及びkは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【０１４２】
【化５７】
2004162044.tif 000058
【０１４３】
(nは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ18は、Ｈ原子、Ｎa原子またはＫ原子である；複数のユニットが存在する場合、nおよびＲ18は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【発明の効果】
【０１４４】
本発明の方法により、新規ポリヒドロキシアルカノエート共重合体である、側鎖にビニル基を有するユニットと、側鎖にフェニル構造、チエニル構造、シクロヘキシル構造のいずれかを有する残基を含むユニットとを分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体が提供された。
【０１４５】
また、ＰＨＡの生産性が高く、ビニル基を有する側鎖のユニット比を制御でき、さらに生産されるＰＨＡの物性を制御し得るＰＨＡの製造方法が提供された。本発明により、側鎖末端にカルボキシル基を有するモノマーユニットと側鎖にフェニル構造、チエニル構造、シクロヘキシル構造といった直鎖アルキル基以外の置換基を導入したＰＨＡ「unusual ＰＨＡ」とのポリヒドロキシアルカノエート共重合体とその製造方法が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１４６】
以下に本発明の内容を詳細に述べる。
【０１４７】
本発明において、前述の化学式(２)におけるＲ、即ちフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基が、化学式(８)、(９)、(10)、(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、及び(18)からなる残基群より選ばれる少なくとも１種であることが好ましい。また、前述の化学式(25)におけるＲ23及び前述の化学式(27)におけるＲ25、即ちフェニル構造或いはチエニル構造を有する残基が、化学式(31)、(９)、(10)、(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、及び(18)からなる残基群より選ばれる少なくとも１種であることが好ましい。
ここで、化学式(８)は、
【０１４８】
【化５８】
2004162044.tif 000059
【０１４９】
(式中、Ｒ2は芳香環への置換基を示し、Ｒ2はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＨ＝ＣＨ2基、ＣＯＯＲ3(Ｒ3:Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子のいずれかを表す)、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ2は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニル基の群であり、
また、化学式(31)は、
【０１５０】
【化５９】
2004162044.tif 000060
【０１５１】
(式中、Ｒ26は芳香環への置換基を示し、Ｒ26はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＨ＝ＣＨ2基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ26は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニル基の群であり、
化学式(９)は、
【０１５２】
【化６０】
2004162044.tif 000061
【０１５３】
(式中、Ｒ4は芳香環への置換基を示し、Ｒ4はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＳＣＨ3基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ4は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェノキシ基の群であり、
化学式(10)は、
【０１５４】
【化６１】
2004162044.tif 000062
【０１５５】
(式中、Ｒ5は芳香環への置換基を示し、Ｒ5はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ5は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換ベンゾイル基の群であり、
化学式(11)は、
【０１５６】
【化６２】
2004162044.tif 000063
【０１５７】
(式中、Ｒ6は芳香環への置換基を示し、Ｒ6はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ7、ＳＯ2Ｒ8(Ｒ7:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ8:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ6は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルファニル基の群であり、
化学式(12)は、
【０１５８】
【化６３】
2004162044.tif 000064
【０１５９】
(式中、Ｒ9は芳香環への置換基を示し、Ｒ9はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ10、ＳＯ2Ｒ11(Ｒ10:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ11:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ9は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換(フェニルメチル)スルファニル基の群であり、
化学式(13)は、
【０１６０】
【化６４】
2004162044.tif 000065
【０１６１】
で示される２-チエニル基であり、
化学式(14)は、
【０１６２】
【化６５】
2004162044.tif 000066
【０１６３】
で示される２-チエニルスルファニル基であり、
化学式(15)は、
【０１６４】
【化６６】
2004162044.tif 000067
【０１６５】
で示される２-チエニルカルボニル基であり、
化学式(16)は、
【０１６６】
【化６７】
2004162044.tif 000068
【０１６７】
(式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14(Ｒ13:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ14:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ12は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフィニル基の群であり、
化学式(17)は、
【０１６８】
【化６８】
2004162044.tif 000069
【０１６９】
(式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17(Ｒ16:Ｈ、Ｎa、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ17:ＯＨ、ＯＮa、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ15は、ユニット毎に異なっていてもよい。)
で示される無置換または置換フェニルスルフォニル基の群であり、
化学式(18)は、
【０１７０】
【化６９】
2004162044.tif 000070
【０１７１】
で示される(フェニルメチル)オキシ基である。
【０１７２】
なお、前述した化学式の有するｎ、ｍ、ｋ、ｐ、ｑ、ｒ、Ｒ、Ｒ1〜Ｒ18、Ｒ23〜Ｒ40、Ｒ43〜Ｒ45、Ｒ47及びＲ48は、これらをそれぞれ含むモノマーユニット又はモノマーの２種以上が用いられている場合に、各モノマーユニット又はモノマーごとに独立して上記の意味を表す。
【０１７３】
本発明のポリヒドロキシアルカノエートは、いずれも、数平均分子量が1000から1000000の範囲であることが好ましい。
【０１７４】
本発明の最終生産物となるポリヒドロキシアルカノエート共重合体は、化学式(19)で示す側鎖にカルボキシル基を有するユニットと化学式(２)若しくは化学式(３)で示すユニットとを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(以下必要に応じカルボキシルＰＨＡとも呼ぶ)である。
【０１７５】
その製造方法は、
・化学式(１)で示す側鎖末端に炭素-炭素の二重結合を含む３-ヒドロキシ-ω-アルケン酸ユニットと化学式(２)若しくは化学式(３)で示すユニットとを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(以下前駆体ビニルＰＨＡとも呼ぶ)において、二重結合部分を酸化させる方法、
或いは、
・化学式(48)で示す側鎖末端にエステル基を含む３-ヒドロキシ-ω-アルコキシカルボニルアルカン酸ユニットと化学式(27)若しくは化学式(３)で示すユニットとを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(以下前駆体アルコキシカルボニルＰＨＡとも呼ぶ)のアルコキシカルボニルの部分を加水分解する方法、
に大別される。以下、必要に応じ前駆体ビニルＰＨＡと前駆体アルコキシカルボニルＰＨＡを一括して前駆体ＰＨＡと呼ぶ。
【０１７６】
これら前駆体ＰＨＡを製造する方法としては、特に限定されてはいないが、微生物生産により製造する方法、遺伝子操作した植物作物システムにより製造する方法、化学的に重合して製造する方法などを用いて製造することができる。好ましくは、微生物生産により製造する方法が用いられる。
【０１７７】
なお、前駆体ビニルＰＨＡ及び前駆体エステルPHAは、この度、発明者らにより初めて合成されたものであり、したがって、本発明は前駆体ビニルＰＨＡ自体及び前駆体エステルPHA、ならびにその微生物生産プロセスをも包括するものである。そしてこの前駆体ビニルＰＨＡ及び前駆体エステルPHAは今回の目的物であるカルボキシルＰＨＡのみならず、他の官能基の導入にも有用に用いることが可能である。
【０１７８】
以下、各前駆体ＰＨＡを用いた場合の製造方法について各々説明する。
【０１７９】
前駆体ビニルＰＨＡの製造は、化学式(24)で示すω-アルケン酸と、化学式(25)で示す化合物もしくは前記化学式(26)で示すω-シクロヘキシルアルカン酸とを含む培地中で前記微生物を培養することで可能となる。
【０１８０】
同様に、前駆体アルコキシカルボニルＰＨＡの製造は、下記化学式(49)で示すカルボン酸モノエステル化合物と、化学式(25)で示す化合物もしくは前記化学式(26)で示すω-シクロヘキシルアルカン酸とを含む培地中で前記微生物を培養することで可能となる。
【０１８１】
【化７０】
2004162044.tif 000071
【０１８２】
(pは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ4.は、式中に示した残基のいずれかである。)
【０１８３】
【化７１】
2004162044.tif 000072
【０１８４】
(qは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である；Ｒ23はフェニル構造、或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる)
【０１８５】
【化７２】
2004162044.tif 000073
【０１８６】
(式中、Ｒ24はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ24はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、rは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である)
更に詳細には、前記各前駆体ＰＨＡの製造は、それぞれについての原料となる化合物、すなわち前駆体ビニルＰＨＡの場合化学式(24)で示すω-アルケン酸の少なくとも１種と、化学式(25)で示す化合物の少なくとも１種もしくは前記化学式(26)で示すω-シクロヘキシルアルカン酸の少なくとも１種；前駆体アルコキシカルボニルＰＨＡの場合化学式(49)で示すカルボン酸モノエステル化合物の少なくとも１種と、化学式(25)で示す化合物の少なくとも１種もしくは前記化学式(26)で示すω-シクロヘキシルアルカン酸の少なくとも１種、のそれぞれの組み合わせに加えて、ペプチド類、酵母エキス、有機酸及びその塩、アミノ酸及びその塩、糖類、並びに、炭素数４から12の直鎖アルカン酸及びその塩からなる群より選ばれる少なくとも１種類を含む培地中で、前記微生物を培養することによりより好適に行いうる。
【０１８７】
培地中に含有されるペプチド類としてはポリペプトン；培地中に含有される有機酸或いはその塩としては、ピルビン酸、オキサロ酢酸、クエン酸、イソクエン酸、ケトグルタル酸、コハク酸、フマル酸、リンゴ酸、乳酸、及びこれらの塩からなる群より選択される１つ以上の化合物；また、培地中に含有されるアミノ酸或いはその塩としては、グルタミン酸、アスパラギン酸、及びこれらの塩からなる群より選択される１つ以上の化合物；また、培地中に含有される糖類としては、グリセロアルデヒド、エリトロース、アラビノース、キシロース、グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース、グリセロール、エリトリトール、キシリトール、グルコン酸、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マルトース、スクロース、及びラクトースからなる群より選択される１つ以上の化合物が好適に用いられる。
【０１８８】
本発明に係る前駆体ＰＨＡ共重合体の製造方法における微生物の培養条件の詳細は、以下のとおりである。
【０１８９】
リン酸緩衝液及びアンモニウム塩或いは硝酸塩を基本とした無機塩培地に、以下に示すように種々の必要基質及び栄養素を加える。
【０１９０】
前駆体ＰＨＡのそれぞれについての原料となる化合物、すなわち前駆体ビニルＰＨＡの場合化学式(24)で示すω-アルケン酸の少なくとも１種と、化学式(25)で示す化合物の少なくとも１種もしくは前記化学式(26)で示すω-シクロヘキシルアルカン酸の少なくとも１種；前駆体アルコキシカルボニルＰＨＡの場合化学式(49)で示すカルボン酸モノエステル化合物の少なくとも１種と、化学式(25)で示す化合物の少なくとも１種もしくは前記化学式(26)で示すω-シクロヘキシルアルカン酸の少なくとも１種、のそれぞれの組み合わせは、培地あたりそれぞれ0.01％から１％(ｗ/v)、更に好ましくは0.02％から0.2％の割合で含有していることが望ましい。
【０１９１】
微生物増殖のための炭素源及び窒素源、ポリヒドロキシアルカノエート生産のためのエネルギー供給源として加える上記の共存基質濃度は、通常培地あたり0.1％から５％(ｗ/v)、更に好ましくは0.2％から２％の割合で含有していることが望ましい。
【０１９２】
用いる培地としては、リン酸塩及びアンモニウム塩或いは硝酸塩等の窒素源を含む無機塩培地ならいかなる培地でも良いが、窒素源の濃度を調節することでＰＨＡの生産性を向上せしめることが可能である。
【０１９３】
培養温度としては上記の菌株が良好に増殖可能な温度であれば良く、15℃から37℃、更に好ましくは20℃から30℃程度が適当である。
【０１９４】
培養は液体培養、固体培養等該微生物が増殖し、ＰＨＡを生産する培養方法ならいかなる培養方法でも用いることができる。さらに、バッチ培養、フェドバッチ培養、半連続培養、連続培養等の種類も問わない。液体バッチ培養の形態としては、振とうフラスコによって振とうさせて酸素を供給する方法、ジャーファーメンターによる攪拌通気方式の酸素供給方法がある。
【０１９５】
微生物にＰＨＡを生産・蓄積せしめる方法としては、上に示した方法の他に、一旦十分に増殖させて後に、塩化アンモニウムのような窒素源を制限した培地へ菌体を移し、目的ユニットの基質となる化合物を加えた状態で更に培養すると生産性が向上する場合がある。
【０１９６】
更に本発明における前駆体ビニルＰＨＡの製造方法は、上記のような条件下で前記微生物を培養し、前記微生物が産生した前記化学式(１)で示す３-ヒドロキシ-ω-アルケン酸ユニット、及び前記化学式(27)で示すユニット、もしくは前記化学式(３)で示すω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットとを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を微生物細胞から回収する工程を有することを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【０１９７】
また、本発明における前駆体アルコキシカルボニルＰＨＡの製造方法は、上記のような条件下で前記微生物を培養し、前記微生物が産生した前記化学式(48)で示す３-ヒドロキシ-ω-アルコキシカルボニルアルカン酸ユニット、及び前記化学式(27)で示すユニット、もしくは前記化学式(３)で示すω-シクロヘキシルアルカン酸ユニットとを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を微生物細胞から回収する工程を有することを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【０１９８】
微生物細胞から目的の前駆体ＰＨＡを回収する方法としては、通常行なわれている方法を適用することができる。例えば、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、アセトンなどの有機溶媒による抽出が最も簡便ではあるが、それ以外にジオキサン、テトラヒドロフラン、アセトニトリルが用いられる場合もある。また、有機溶媒が使用しにくい環境中においては、ＳＤＳ等の界面活性剤による処理、リゾチーム等の酵素による処理、次亜塩素酸塩、アンモニア、ＥＤＴＡ等の薬剤による処理、或いは超音波破砕法、ホモジナイザー法、圧力破砕法、ビーズ衝撃法、摩砕法、擂潰法、凍結融解法のいずれかの方法を用いて微生物細胞を物理的に破砕することによって、ＰＨＡ以外の菌体成分を除去して、ＰＨＡを回収する方法を用いることもできる。
【０１９９】
本発明の出発原料の製造方法で用いる微生物としては、前記条件を満たす能力を有する微生物であれば如何なる微生物でも良いが、その中でも特にシュードモナス(Ｐseudoｍonas)属に属する微生物が望ましく、更に詳しくはシュードモナス チコリアイ(Ｐseudoｍonas cichorii)、シュードモナス プチダ(Ｐseudoｍonas putida)、シュードモナス フルオレセンス(Ｐseudoｍonas fluorecense)、シュードモナス オレオボランス(Ｐseudoｍonas oleovorans)、シュードモナス アルギノーサ(Ｐseudoｍonas aeruginosa)、シュードモナス スツッツェリ(Ｐseudoｍonas stutzeri)、シュードモナス ジェッセニイ(Ｐseudoｍonas jessenii)等が望ましい。更に詳しくは、シュードモナス チコリアイ ＹＮ２株(Ｐseudoｍonas cichorii ＹＮ２；ＦＥＲＭ ＢＰ-7375)、シュードモナス チコリアイ Ｈ45株(Ｐseudoｍonas cichorii Ｈ45、ＦＥＲＭ ＢＰ-7374)、シュードモナス ジェッセニイＰ161株(Ｐseudoｍonas jessenii Ｐ161、ＦＥＲＭ ＢＰ-7376)、シュードモナス プチダＰ91株(Ｐseudoｍonas putida Ｐ91、ＦＥＲＭ ＢＰ-7373)が挙げられる。これら４種の微生物は独立行政法人産業技術総合研究所(旧通商産業省工業技術院)生命工学工業技術研究所特許微生物寄託センターに寄託されており、特開2002-80571号に記載されている微生物である。
【０２００】
なお、本発明の微生物の培養、本発明の微生物によるＰＨＡの生産と菌体への蓄積、並びに、本発明における菌体からのＰＨＡの回収は、上記の方法に限定されるものではない。
【０２０１】
本発明の一方法に用いた無機塩培地(Ｍ９培地)の組成を以下に示す。
【０２０２】
[Ｍ９培地]
Ｎa2ＨＰＯ4 :6.3 g/L
ＫＨ2ＰＯ4 :3.0 g/L
ＮＨ4Ｃl :1.0 g/L
ＮaＣl :0.5 g/L、
pＨ＝7.0
更に、良好な増殖及びＰＨＡの生産のためには、上記の無機塩培地に以下に示す微量成分溶液を0.3%(v/v)程度添加する必要がある。
【０２０３】
[微量成分溶液]
ニトリロ 三酢酸:1.5；ＭgＳＯ4:3.0；ＭnＳＯ4:0.5；ＮaＣl:1.0；ＦeＳＯ4:0.1；ＣaＣl2:0.1；ＣoＣl2:0.1；ＺnＳＯ4:0.1；ＣuＳＯ4:0.1；ＡlＫ(ＳＯ4)2:0.1；Ｈ3ＢＯ3:0.1；Ｎa2ＭoＯ4:0.1；ＮiＣl2:0.1 (g/L)
上記の製造方法により合成されたポリヒドロキシアルカノエートの中で、化学式(１)で示すユニットと化学式(２)で示すユニットもしくは化学式(３)で示すユニットとを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体は、この化学式(１)で示される炭素-炭素二重結合部分を酸化剤により酸化することで、化学式(19)で示すユニットと化学式(２)で示すユニットもしくは化学式(３)で示すユニットとを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体が得られる。このように、炭素-炭素の二重結合を酸化剤により、酸化してカルボン酸を得る方法としては、例えば、過マンガン酸塩を用いる方法(Ｊ.Ｃheｍ.Ｓoc.,Ｐerkin.Ｔrans.1，806(1973);非特許文献14)、重クロム酸塩を用いる方法(Ｏrg.Ｓynth.,４，698(1963);非特許文献15)、過ヨウ素酸塩を用いる方法(Ｊ.Ｏrg.Ｃheｍ.,46，19(1981);非特許文献16)、硝酸を用いる方法(特開昭59-190945号公報;特許文献２)、オゾンを用いる方法(Ｊ.Ａｍ.Ｃheｍ.Ｓoc.,81，4273(1959);非特許文献17)等が知られており、更には、ポリヒドロキシアルカノエートに関しては、前述のＭacroｍolecular cheｍistry,４，289-293(2001)(非特許文献12)に、ポリヒドロキシアルカノエートの側鎖末端の炭素-炭素二重結合を酸化剤として過マンガン酸カリウムを用い、反応を酸性条件下で行うことで、カルボン酸を得る方法が報告されている。本発明においても同様の方法を用いることができる。
【０２０４】
特に限定されないが、本発明で用いる酸化剤としては、特に過マンガン酸塩が好ましい。また、酸化剤として用いる前記過マンガン酸塩としては、過マンガン酸カリウムが一般的である。過マンガン酸塩の使用量は、酸化反応が化学量論的反応であるため、化学式(１)で示すユニット１モルに対して、通常１モル当量以上、好ましくは、２〜10モル当量使用するのがよい。また、オゾンを用いる方法も好ましい。
【０２０５】
反応系を酸性条件下にするためには通常、硫酸、塩酸、酢酸、硝酸などの各種の無機酸や有機酸が用いられる。しかしながら、硫酸、硝酸、塩酸などの酸を用いた場合、ポリヒドロキシアルカノエートの主鎖のエステル結合が切断され、分子量低下を引き起こす恐れがある。そのため酢酸を用いることが好ましい。酸の使用量は、化学式(１)で示すユニット１モルに対して、通常、0.2〜2000モル当量、好ましくは0.4〜1000モル当量の範囲で用いられる。0.2モル当量に満たない場合には低収率となり、2000モル当量を越える場合には酸による分解物が副生するため、いずれの場合もあまり好ましくない。また、反応を促進する目的でクラウン-エーテルを用いることができる。この場合、クラウン-エーテルと過マンガン酸塩とは、錯体を形成し、反応活性が増大する効果が得られる。クラウン-エーテルとしては、ジベンゾ-18-クラウン-６-エーテル、ジシクロ-18-クラウン-６-エーテル、18-クラウン-６-エーテルが一般的に用いられる。クラウン-エーテルの使用量は、過マンガン酸塩１モルに対して、通常0.005〜2.0モル当量、好ましくは、0.01〜1.5モル当量の範囲で用いることが望ましい。
【０２０６】
また、本発明の酸化反応における溶媒としては、反応に不活性な溶媒であれば特に限定されず、たとえば、水、アセトン；テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル類；ベンゼン等の芳香族炭化水素類；ヘキサン、ヘプタン等の脂肪族炭化水素類；メチルクロリド、ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類等を使用できる。これらの溶媒のなかでも、ポリヒドロキシアルカノエートの溶解性を考慮すれば、メチルクロリド、ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類及びアセトンが好ましい。
【０２０７】
本発明の前記酸化反応において、化学式(１)で示すユニットと化学式(２)で示すユニットもしくは化学式(３)で示すユニットとを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体と、過マンガン酸塩及び酸は一括して最初から溶媒とともに仕込んで反応させてもよく、それぞれを連続的若しくは断続的に系内に加えながら反応させてもよい。また、過マンガン酸塩のみを先に溶媒に溶解若しくは懸濁させておき続いて、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体及び酸を連続的若しくは断続的に系内に加えて反応させてもよく、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体のみを先に溶媒に溶解若しくは懸濁させておき、続いて過マンガン酸塩及び酸を連続的若しくは断続的に系内に加えて反応させてもよい。さらには、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体及び酸を先に仕込んでおき続いて過マンガン酸塩を連続的若しくは断続的に系内に加えて反応させてもよく、過マンガン酸塩及び酸を先に仕込んでおき続いてポリヒドロキシアルカノエート共重合体を連続的若しくは断続的に系内に加えて反応させてもよく、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体及び過マンガン酸塩を先に仕込んでおき続いて酸を連続的若しくは断続的に系内に加えて反応させてもよい。
【０２０８】
反応温度は、通常-40〜40℃、好ましくは-10〜30℃とするのがよい。反応時間は、化学式(１)で示すユニットと過マンガン酸塩の量論比及び反応温度に依存するが、通常２〜48時間とするのがよい。
【０２０９】
また、本発明の前記酸化反応において、化学式(２)で示すユニットのうち、化学式(２)におけるＲ2が、化学式(11)で示される残基である場合、そのスルフィド結合は、スルホキシドもしくはスルホンへ酸化される場合がある。
【０２１０】
本発明において出発原料として化学式(48)で示すユニットと化学式(27)で示すユニットもしくは化学式(３)で示すユニットとを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を用いた場合の製造方法について説明する。
【０２１１】
上述の製造方法により合成された、出発原料である化学式(48)で示すユニットと化学式(27)で示すユニットもしくは化学式(３)で示すユニットとを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体は、この化学式(48)で示されるエステル結合部分を酸またはアルカリの存在下に加水分解する方法、或いは接触還元を含む水素化分解する方法を用いることで、化学式(19)で示すユニットと化学式(27)で示すユニットもしくは化学式(３)で示すユニットとを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体が得られる。このように、酸またはアルカリの存在下に加水分解する方法を用いる場合、溶媒として水溶液中または、メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドなどの水親和性の有機溶媒中において、塩酸、硫酸、硝酸、或いはリン酸などの無機酸類の水溶液あるいはトリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、p-トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸などの有機酸を用いるか或いは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどの水性苛性アルカリ類、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどの炭酸アルカリ類の水溶液、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシドなどの金属アルコキシド類のアルコール溶液を用いておこなうことができる。反応温度は、通常０〜40℃、好ましくは０〜30℃とするのがよい。反応時間は、通常0.5〜48時間とするのがよい。但し、酸またはアルカリにより加水分解した場合、何れにおいても主鎖のエステル結合も切断され、分子量低下が認められる場合もある。
【０２１２】
接触還元を含む水素化分解する方法を用いてカルボン酸を得る方法を用いる場合、下記の如く行われる。即ち、適宜な溶媒中において、-20℃〜使用溶媒の沸点、好ましくは、０〜50℃の範囲の温度で、還元触媒存在下、水素を常圧又は、加圧下で作用させて接触還元をおこなう。使用溶媒としては、例えば水、メタノール、エタノール、プロパノール、酢酸エチル、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ベンゼン、トルエン、ジメチルホルムアミド、ピリジンなどが挙げられる。特に、溶解性を考慮すれば、テトラヒドロフラン、トルエン、ジメチルホルムアミドが好ましい。還元触媒としては、パラジウム、白金、ロジウムなどの単独または担体に担持された触媒またはラネーニッケルなどが用いられる。但し、接触還元を用いた場合においても主鎖のエステル結合も切断され、分子量低下が認められる場合もある。
【０２１３】
以下に、実施例を挙げて、本発明をより具体的に説明する。なお、これらの実施例は、本発明にかかる最良の実施形態の一例ではあるものの、本発明は、これら実施例の形態によって、限定されるものではない。
【実施例】
【０２１４】
実施例中の「％」は「％（ｗ／ｖ）」を示す。
【０２１５】
[実施例１]
0.5%のポリペプトン(和光純薬)、６ｍｍol/Lの５-フェノキシ吉草酸、及び１ｍｍol/Lの10-ウンデセン酸を前記Ｍ９培地200ｍlに溶解し、200ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後、室温まで冷却した。調製した培地中に、予め0.5％のポリペプトンを含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス・チコリアイＹＮ２株の培養液を２ｍl加え、30℃、64時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を回収し、メタノールで洗浄した後乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、35℃で72時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０２１６】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)及び13Ｃ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；共鳴周波数:100ＭＨz；測定核種: 13Ｃ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行った。
【０２１７】
得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図１に示す。その結果、以下の化学式(50)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ＋Ｃ＋Ｄ:その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸)=87:９:４)であることが確認された。また、13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｂのユニット即ち３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニットと、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＢユニットとＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０２１８】
【化７３】
2004162044.tif 000074
【０２１９】
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソー ＨＬＣ-8220 ＧＰＣ、カラム:東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ Ｓuper ＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０２２０】
得られたポリマーの重量(ＰＤＷ)は0.19g/L、得られたポリマーの数平均分子量は30,000であった。
【０２２１】
[実施例２]
実施例１で用いた５-フェノキシ吉草酸を４-フェノキシ酪酸に変更した以外は実施例１と同様の方法で、目的とするポリマーを得た。
【０２２２】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行った。得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図２に示す。その結果、以下の化学式(51)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ＋Ｃ＋Ｄ:その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸)=74:11:15)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｂのユニット即ち３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニットと、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＢユニットとＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０２２３】
【化７４】
2004162044.tif 000075
【０２２４】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０２２５】
得られたポリマーの重量(ＰＤＷ)は0.05g/L、得られたポリマーの数平均分子量は25,000であった。
【０２２６】
[実施例３]
実施例１で用いた５-フェノキシ吉草酸を４-シクロヘキシル酪酸に変更した以外は実施例１と同様の方法で、目的とするポリマーを得た。
【０２２７】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(52)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ＋その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸):Ｂ＋Ｃ＋Ｄ=89:11)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｂのユニット即ち３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニットと、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＢユニットとＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０２２８】
【化７５】
2004162044.tif 000076
【０２２９】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０２３０】
得られたポリマーの重量(ＰＤＷ)は0.52g/L、得られたポリマーの数平均分子量は154,000であった。
【０２３１】
[実施例４]
実施例３で用いたポリペプトンを酵母エキスに変更した以外は実施例３と同様にしてポリマーを得た。
【０２３２】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(52)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ＋その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸):Ｂ＋Ｃ＋Ｄ=85:15)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｂのユニット即ち３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニットと、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＢユニットとＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０２３３】
【化７６】
2004162044.tif 000077
【０２３４】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０２３５】
得られたポリマーの重量(ＰＤＷ)は0.45g/L、得られたポリマーの数平均分子量は132,000であった。
【０２３６】
[実施例５]
実施例３で用いたＹＮ２株をシュードモナス チコリアイＨ45株に、ポリペプトンをグルコースに変更した以外は実施例３と同様にしてポリマーを得た。得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(52)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ＋その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸):Ｂ＋Ｃ＋Ｄ=83:17)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｂのユニット即ち３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニットと、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＢユニットとＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０２３７】
【化７７】
2004162044.tif 000078
【０２３８】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０２３９】
得られたポリマーの重量(ＰＤＷ)は0.41g/L、得られたポリマーの数平均分子量は164,000であった。
【０２４０】
[実施例６]
実施例３で用いたＹＮ２株をシュードモナス チコリアイＨ45株に、ポリペプトンをピルビン酸ナトリウムに変更した以外は実施例３と同様にしてポリマーを得た。得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(52)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ＋その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸):Ｂ＋Ｃ＋Ｄ=87:13)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｂのユニット即ち３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニットと、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＢユニットとＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０２４１】
【化７８】
2004162044.tif 000079
【０２４２】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０２４３】
得られたポリマーの重量(ＰＤＷ)は0.28g/L、得られたポリマーの数平均分子量は156,000であった。
【０２４４】
[実施例７]
実施例３で用いたＹＮ２株をシュードモナス ジェッセニイＰ161株に、ポリペプトンをグルタミン酸ナトリウムに変更した以外は実施例３と同様にしてポリマーを得た。得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(52)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ＋その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸):Ｂ＋Ｃ＋Ｄ=88:12)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｂのユニット即ち３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニットと、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＢユニットとＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０２４５】
【化７９】
2004162044.tif 000080
【０２４６】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０２４７】
得られたポリマーの重量(ＰＤＷ)は0.38g/L、得られたポリマーの数平均分子量は145,000であった。
【０２４８】
[実施例８]
実施例３で用いたＹＮ２株をシュードモナス ジェッセニイＰ161株に、0.5%のポリペプトンを0.1%のノナン酸に変更した以外は実施例３と同様にしてポリマーを得た。得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(52)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ＋その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸):Ｂ＋Ｃ＋Ｄ＝80:20)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｂのユニット即ち３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニットと、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＢユニットとＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０２４９】
【化８０】
2004162044.tif 000081
【０２５０】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０２５１】
得られたポリマーの重量(ＰＤＷ)は0.18g/L、得られたポリマーの数平均分子量は132,000であった。
【０２５２】
[実施例９]
500ｍl容振盪フラスコを20本用意し、各々についてポリペプトン(和光純薬)0.5ｗt%、５-フェノキシ吉草酸６ｍｍol/L及び10-ウンデセン酸3.75ｍｍol/Lを前記Ｍ９培地200ｍlに溶解し、500ｍl容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後、室温まで冷却した。調整した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で８時間振盪培養したシュードモナス・チコリアイ ＹＮ２株の培養液を各々に２ｍl加え、30℃、64時間培養した。培養後、培養液を纏めて、遠心分離により菌体を回収し、メタノール洗浄した後乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、25℃で72時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムを0.45μｍメンブランフィルターにより濾過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノール中に再沈殿し、ポリマーを回収した。その後、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０２５３】
得られたポリマーを秤量した結果、本例では、ＰＨＡ1528ｍg(乾燥重量)が得られた。
【０２５４】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝104000、重量平均分子量Ｍｗ＝231000であった。得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行った。
【０２５５】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式(53)に示す３-ヒドロキシ-５-フェノキシ吉草酸ユニット、化学式(５)に示す３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、化学式(６)に示す３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、化学式(７)に示す３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０２５６】
【化８１】
2004162044.tif 000082
【０２５７】
【化８２】
2004162044.tif 000083
【０２５８】
【化８３】
2004162044.tif 000084
【０２５９】
【化８４】
2004162044.tif 000085
【０２６０】
また、そのユニットの割合は1Ｈ-ＮＭＲスペクトルより、３-ヒドロキシ-５-フェノキシ吉草酸ユニット69ｍol%、３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、３-ヒドロキシ-８-ノネンユニット、３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの３つのユニット合計23ｍol％、その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸)８ｍol%であることを確認した。
【０２６１】
ここで得られたポリヒドロキシアルカノートは、次の反応に利用した。
【０２６２】
ポリヒドロキシアルカノエート303ｍgを200ｍl容ナスフラスコ中に加え、ジクロロメタン20ｍlを加えて溶解した。これを氷浴下に置き、酢酸３ｍl、18-クラウン-６-エーテル300ｍgを加えて攪拌した。次に氷浴下で過マンガン酸カリウム241ｍgをゆっくり加えて、室温で20時間攪拌した。反応終了後、水50ｍl及び亜硫酸水素ナトリウムを500ｍg加えた。その後、1.0Ｎ塩酸により液性をpＨ＝１にした。混合溶液中のジクロロメタンをエバポレーターにより留去した後、溶液中のポリマーを回収した。これをメタノール100ｍlで洗浄し、更に純水100ｍlで３回洗浄した後、ポリマーを回収した。減圧乾燥することで目的とするＰＨＡを247ｍg得た。
【０２６３】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ Ｓuper ＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝29400、重量平均分子量Ｍｗ＝102800であった。
【０２６４】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、その結果、モノマーユニットとして以下の化学式(53)に示す３-ヒドロキシ-５-フェノキシ吉草酸ユニット、化学式(54)に示す３-ヒドロキシ-９-カルボキシノナン酸ユニット、化学式(55)に示す３-ヒドロキシ-７-カルボキシヘプタン酸ユニット、化学式(56)に示す３-ヒドロキシ-５-カルボキシ吉草酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０２６５】
【化８５】
2004162044.tif 000086
【０２６６】
【化８６】
2004162044.tif 000087
【０２６７】
【化８７】
2004162044.tif 000088
【０２６８】
【化８８】
2004162044.tif 000089
【０２６９】
更に、得られたＰＨＡのユニットの割合を算出するため、トリメチルシリルジアゾメタンを用いたＰＨＡの側鎖末端にあるカルボキシル基をメチルエステル化することで算出を行った。
【０２７０】
目的物であるＰＨＡ 50ｍgを100ｍl容ナスフラスコ中に加え、クロロホルム3.5ｍl、メタノール0.7ｍlを加えて溶解した。これに0.63ｍol/Lのトリメチルシリルジアゾメタン-ヘキサン溶液(東京化成工業)２ｍlを加えて、室温で30分間攪拌した。反応終了後、エバポレーターにより留去した後、ポリマーを回収した。これをメタノール50ｍlで洗浄後、ポリマーを回収した。減圧乾燥することでＰＨＡを49ｍg得た。
【０２７１】
実施例1と同様の方法を用いてＮＭＲ分析を行った。その結果、ユニットの割合は、３-ヒドロキシ-５-フェノキシ吉草酸ユニット83ｍol%、３-ヒドロキシ-９-カルボキシノナン酸ユニット、３-ヒドロキシ-７-カルボキシヘプタン酸ユニット、３-ヒドロキシ-５-カルボキシ吉草酸ユニットの３つのユニット合計８ｍol％、その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸)９ｍol%であることを確認した。
【０２７２】
[実施例10]
500ｍl容振盪フラスコを20本用意し、各々にポリペプトン(和光純薬)0.5ｗt%、４-シクロヘキシル酪酸６ｍｍol/L及び10-ウンデセン酸３ｍｍol/Lを前記Ｍ９培地200ｍlに溶解し、500ｍl容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後、室温まで冷却した。調整した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で８時間振盪培養したシュードモナス・チコリアイ ＹＮ２株の培養液を各々２ｍl加え、30℃、60時間培養した。培養後、培養液を纏めて、遠心分離により菌体を回収し、メタノール洗浄した後乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、25℃で72時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムを0.45μｍメンブランフィルターにより濾過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノール中に再沈殿し、ポリマーを回収した。その後、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０２７３】
得られたポリマーを秤量した結果、本例では、ＰＨＡ1433ｍg(乾燥重量)が得られた。
【０２７４】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝143000、重量平均分子量Ｍｗ＝458000であった。
【０２７５】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０２７６】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式(57)に示す３-ヒドロキシ-４-シクロヘキシル酪酸ユニット、化学式(５)に示す３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、化学式(６)に示す３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、化学式(７)に示す３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０２７７】
【化８９】
2004162044.tif 000090
【０２７８】
【化９０】
2004162044.tif 000091
【０２７９】
【化９１】
2004162044.tif 000092
【０２８０】
【化９２】
2004162044.tif 000093
【０２８１】
また、そのユニットの割合は1Ｈ-ＮＭＲスペクトルより、３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの３つのユニット合計37ｍol％、３-ヒドロキシ-４-シクロヘキシル酪酸ユニット、その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸)63ｍol%であることを確認した。
【０２８２】
ここで得られたポリヒドロキシアルカノートは、次の反応に利用した。
【０２８３】
ポリヒドロキシアルカノエート301ｍgを200ｍl容ナスフラスコ中に加え、ジクロロメタン20ｍlを加えて溶解した。これを氷浴下に置き、酢酸３ｍl、18-クラウン-６-エーテル541ｍgを加えて攪拌した。次に氷浴下で過マンガン酸カリウム430ｍgをゆっくり加えて、室温で20時間攪拌した。反応終了後、水50ｍl及び亜硫酸水素ナトリウムを1000ｍg加えた。その後、1.0Ｎ塩酸により液性をpＨ＝１にした。混合溶液中のジクロロメタンをエバポレーターにより留去した後、溶液中のポリマーを回収した。これをメタノール100ｍlで洗浄し、更に純水100ｍlで３回洗浄した後、ポリマーを回収した。減圧乾燥することで目的とするＰＨＡを184ｍg得た。
【０２８４】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ Ｓuper ＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝111800、重量平均分子量Ｍｗ＝272800であった。
【０２８５】
得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０２８６】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式(57)に示す３-ヒドロキシ-４-シクロヘキシル酪酸ユニット、化学式(54)に示す３-ヒドロキシ-９-カルボキシノナン酸ユニット、化学式(55)に示す３-ヒドロキシ-７-カルボキシヘプタン酸ユニット、化学式(56)に示す３-ヒドロキシ-５-カルボキシ吉草酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０２８７】
【化９３】
2004162044.tif 000094
【０２８８】
【化９４】
2004162044.tif 000095
【０２８９】
【化９５】
2004162044.tif 000096
【０２９０】
【化９６】
2004162044.tif 000097
【０２９１】
更に、得られたＰＨＡのユニットを算出するため、トリメチルシリルジアゾメタンを用いＰＨＡの側鎖末端にあるカルボキシル基をメチルエステル化することで算出を行った。
【０２９２】
目的物であるＰＨＡ 30ｍgを100ｍl容ナスフラスコ中 に加え、クロロホルム2.1ｍl、メタノール0.4ｍlを加えて溶解した。これに0.63ｍol/Lのトリメチルシリルジアゾメタン-ヘキサン溶液(東京化成工業)0.9ｍlを加えて、室温で30分間攪拌した。反応終了後、エバポレーターにより留去した後、ポリマーを回収した。これをメタノール50ｍlで洗浄後、ポリマーを回収した。減圧乾燥することでＰＨＡを31ｍg得た。
【０２９３】
実施例1と同様の方法を用いてＮＭＲ分析を行った。その結果、ユニットの割合は、1Ｈ-ＮＭＲスペクトルより、３-ヒドロキシ-９-カルボキシノナン酸ユニット、３-ヒドロキシ-７-カルボキシヘプタン酸ユニット、３-ヒドロキシ-５-カルボキシ吉草酸ユニットの３つのユニット合計９ｍol％、３-ヒドロキシ-４-シクロヘキシル酪酸ユニット及びその他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸)合計91ｍol%であることを確認した。
【０２９４】
[実施例11]
2000ｍl容振盪フラスコを３本用意し、各々にポリペプトン(和光純薬)0.5ｗt%５‐(フェニルスルファニル)吉草酸4.8ｍｍol/L及び10-ウンデセン酸２ｍｍol/Lを前記Ｍ９培地1000ｍlに溶解し、2000ｍl容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後、室温まで冷却した。調整した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で８時間振盪培養したシュードモナス・チコリアイ ＹＮ２株の培養液を各々10ｍl加え、30℃、38時間培養した。培養後、培養液を纏めて、遠心分離により菌体を回収し、メタノール洗浄した後乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、35℃で25時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムを0.45μｍメンブランフィルターにより濾過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノール中に再沈殿し、ポリマーを回収した。その後、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０２９５】
得られたポリマーを秤量した結果、本例では、ＰＨＡ1934ｍg(乾燥重量)が得られた。
【０２９６】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝150000、重量平均分子量Ｍｗ＝430000であった。
【０２９７】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。その1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図３に示す。
【０２９８】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式(58)に示す３-ヒドロキシ-５-(フェニルスルファニル)吉草酸ユニット、化学式(５)に示す３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、化学式(６)に示す３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、化学式(７)に示す３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０２９９】
【化９７】
2004162044.tif 000098
【０３００】
【化９８】
2004162044.tif 000099
【０３０１】
【化９９】
2004162044.tif 000100
【０３０２】
【化１００】
2004162044.tif 000101
【０３０３】
また、そのユニットの割合は1Ｈ-ＮＭＲスペクトルより、３-ヒドロキシ-５-(フェニルスルファニル)吉草酸ユニット78ｍol%、３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの３つのユニット合計19ｍol％、その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸)３ｍol%であることを確認した。
【０３０４】
ここで得られたポリヒドロキシアルカノートは、次の反応に利用した。ポリヒドロキシアルカノエート302ｍgを200ｍl容ナスフラスコ中に加え、ジクロロメタン20ｍlを加えて溶解した。これを氷浴下に置き、酢酸３ｍl、18-クラウン-６-エーテル1154ｍgを加えて攪拌した。次に氷浴下で過マンガン酸カリウム917ｍgをゆっくり加えて、室温で19時間攪拌した。反応終了後、水50ｍl及び亜硫酸水素ナトリウムを3010ｍg加えた。その後、1.0Ｎ塩酸により液性をpＨ＝１にした。混合溶液中のジクロロメタンをエバポレーターにより留去した後、溶液中のポリマーを回収した。これをメタノール100ｍlで洗浄し、更に純水100ｍlで３回洗浄した後、ポリマーを回収した。減圧乾燥することで目的とするＰＨＡを311ｍg得た。
【０３０５】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ Ｓuper ＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝62000、重量平均分子量Ｍｗ＝260000であった。
【０３０６】
得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。その1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図４に示す。
【０３０７】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式(59)に示す３-ヒドロキシ-５-(フェニルスルホニル)吉草酸ユニット、化学式(54)に示す３-ヒドロキシ-９-カルボキシノナン酸ユニット、化学式(55)に示す３-ヒドロキシ-７-カルボキシヘプタン酸ユニット、化学式(56)に示す３-ヒドロキシ-５-カルボキシ吉草酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０３０８】
【化１０１】
2004162044.tif 000102
【０３０９】
【化１０２】
2004162044.tif 000103
【０３１０】
【化１０３】
2004162044.tif 000104
【０３１１】
【化１０４】
2004162044.tif 000105
【０３１２】
更に、得られたＰＨＡのユニットを算出するため、トリメチルシリルジアゾメタンを用いＰＨＡの側鎖末端にあるカルボキシル基をメチルエステル化することで算出を行った。
【０３１３】
目的物であるＰＨＡ30ｍgを100ｍl容ナスフラスコ中 に加え、クロロホルム2.1ｍl、メタノール0.7ｍlを加えて溶解した。これに２ｍol/Lのトリメチルシリルジアゾメタン-ヘキサン溶液(Ａldrich)0.5ｍlを加えて、室温で30分間攪拌した。反応終了後、エバポレーターにより留去した後、ポリマーを回収した。これをメタノール50ｍlで洗浄後、ポリマーを回収した。減圧乾燥することでＰＨＡを31ｍg得た。
【０３１４】
実施例1と同様の方法を用いてＮＭＲ分析を行った。その結果、ユニットの割合は、1Ｈ-ＮＭＲスペクトルより、３-ヒドロキシ-５-(フェニルスルホニル)吉草酸ユニット89ｍol%、３-ヒドロキシ-９-カルボキシノナン酸ユニット、３-ヒドロキシ-７-カルボキシヘプタン酸ユニット、３-ヒドロキシ-５-カルボキシ吉草酸ユニットの３つのユニット合計８ｍol％、その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸)合計３ｍol%であることを確認した。
【０３１５】
[実施例１２]
2000ｍl容振盪フラスコを3本用意し、各々にポリペプトン(和光純薬)0.5ｗt%、５-フェニル吉草酸６ｍｍol/L及び10-ウンデセン酸1.5ｍｍol/Lを前記Ｍ９培地1000ｍlに溶解し、2000ｍl容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後、室温まで冷却した。調整した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で８時間振盪培養したシュードモナス・チコリアイ ＹＮ２株の培養液を各々10ｍl加え、30℃、60時間培養した。培養後、各培養液を集めて遠心分離により菌体を回収し、メタノール洗浄した後乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、25℃で72時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムを0.45μｍメンブランフィルターにより濾過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノール中に再沈殿し、ポリマーを回収した。その後、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０３１６】
得られたポリマーを秤量した結果、本例では、ＰＨＡ1533ｍg(乾燥重量)が得られた。
【０３１７】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝72000、重量平均分子量Ｍｗ＝170000であった。
【０３１８】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０３１９】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式(60)に示す３-ヒドロキシ-５-フェニル吉草酸ユニット、化学式(５)に示す３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、化学式(６)に示す３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、化学式(７)に示す３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０３２０】
【化１０５】
2004162044.tif 000106
【０３２１】
【化１０６】
2004162044.tif 000107
【０３２２】
【化１０７】
2004162044.tif 000108
【０３２３】
【化１０８】
2004162044.tif 000109
【０３２４】
また、そのユニットの割合は1Ｈ-ＮＭＲスペクトルより、３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの３つのユニット合計１２ｍol％、３-ヒドロキシ-５-フェニル吉草酸ユニット８５ｍol%、その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸)３ｍol%であることを確認した。
【０３２５】
ここで得られたポリヒドロキシアルカノエートは、次の反応に利用した。
【０３２６】
上記ポリヒドロキシアルカノエート1002mgを500ml容ナスフラスコ中に加え、ジクロロメタン60mlを加えて溶解した。これを氷浴下に置き、酢酸10ml、18−クラウン−6−エーテル537mgを加えて攪拌した。次に氷浴下で過マンガン酸カリウム429mgをゆっくり加えて、氷浴下で2時間攪拌し、更に室温で18時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチル40ｍｌ、水30ml及び亜硫酸水素ナトリウム1000mg加えた。その後、1.0N塩酸により液性をpH=1にした。ポリマーを抽出し、溶媒留去により、ポリマーを回収した。これを純水200mlで洗浄し、更にメタノール200mlで洗浄、更に純水200mlで3回洗浄した後、、最後に２００mlメタノールで洗浄しポリマーを回収した。ここで得られたポリマーは、テトラヒドロフラン10mlに溶解させ、透析膜（Spectrum社製、Spectra/Por  Standard Regenarated Cellurose Dialysis Membrane ３）を用いて、メタノール500mlの入った１Lビーカー中で１昼夜、透析を行った。透析膜中にあるポリマーを回収し、減圧乾燥することで目的とするPHAを953mg得た。
【０３２７】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝43000、重量平均分子量Ｍｗ＝94000であった。
【０３２８】
得られたPHAの構造を特定するため、実施例1と同様の条件でNMR分析を行った。
【０３２９】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式（60）に示す3−ヒドロキシ−5−フェニル吉草酸ユニット、化学式(54)に示す3−ヒドロキシ−9−カルボキシノナン酸ユニット、化学式(55)に示す3−ヒドロキシ−7−カルボキシヘプタン酸ユニット、化学式(56)に示すに示す3−ヒドロキシ−5−カルボキシ吉草酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０３３０】
【化１０９】
2004162044.tif 000110
【０３３１】
【化１１０】
2004162044.tif 000111
【０３３２】
【化１１１】
2004162044.tif 000112
【０３３３】
【化１１２】
2004162044.tif 000113
【０３３４】
更に、得られたPHAのユニットを算出するため、トリメチルシリルジアゾメタンを用いPHAの側鎖末端にあるカルボキシル基をメチルエステル化することで算出を行った。
【０３３５】
目的物であるPHA30mgを100ml容ナスフラスコ中に加え、クロロホルム2.1ml、メタノール0.7mlを加えて溶解した。これに2.0mol%/Lのトリメチルシリルジアゾメタン−ヘキサン溶液（Aldrich社製）0.3mlを加えて、室温で30分間攪拌した。反応終了後、エバポレーターにより溶媒を留去した後、ポリマーを回収した。更にメタノール50mlで洗浄した後、ポリマーを回収した。減圧乾燥することでPHAを30mg得た。
【０３３６】
実施例1と同様の条件でNMR分析を行った。その結果、ユニットの割合は、3−ヒドロキシ−5−フェニル吉草酸ユニット86mol%、3−ヒドロキシ−9−カルボキシノナン酸ユニット、3−ヒドロキシ−7−カルボキシヘプタン酸ユニット、3−ヒドロキシ−5−カルボキシ吉草酸ユニットの3つのユニット合計9mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)5mol%であることを確認した。
【０３３７】
[実施例１３]
実施例１２の微生物生産に製造されたモノマーユニットとして化学式(60)に示す３-ヒドロキシ-５-フェニル吉草酸ユニット、化学式(５)に示す３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、化学式(６)に示す３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、化学式(７)に示す３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体500mgを500ml三つ口フラスコに入れ、過酸化水素50ppmを添加した蒸留水150mlを加えて懸濁させた。オゾンを50mg/時間で吹き込み、３時間室温で攪拌した。
【０３３８】
反応終了後、反応液をろ過してポリマーを回収した。ポリマーを蒸留水に再懸濁した後、遠心分離を行って残余する過酸化水素水を洗浄した。更に、ここで得られたポリマーは、テトラヒドロフラン5mlに溶解させ、透析膜（Spectrum社製、Spectra/Por  Standard Regenarated Cellurose Dialysis Membrane ３）を用いて、メタノール250mlの入った300mｌビーカー中で１昼夜、透析を行った。透析膜中にあるポリマーを回収し、減圧乾燥することで目的とするPHAを450mg得た。
【０３３９】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝35000、重量平均分子量Ｍｗ＝72000であった。
【０３４０】
得られたPHAの構造を特定するため、実施例1と同様の条件でNMR分析を行った。
その結果、モノマーユニットとして化学式（60）に示す3−ヒドロキシ−5−フェニル吉草酸ユニット、化学式(54)に示す3−ヒドロキシ−9−カルボキシノナン酸ユニット、化学式(55)に示す3−ヒドロキシ−7−カルボキシヘプタン酸ユニット、化学式(56)に示すに示す3−ヒドロキシ−5−カルボキシ吉草酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０３４１】
【化１１３】
2004162044.tif 000114
【０３４２】
【化１１４】
2004162044.tif 000115
【０３４３】
【化１１５】
2004162044.tif 000116
【０３４４】
【化１１６】
2004162044.tif 000117
【０３４５】
更に、得られたPHAのユニットを算出するため、トリメチルシリルジアゾメタンを用いPHAの側鎖末端にあるカルボキシル基をメチルエステル化することで算出を行った。
【０３４６】
目的物であるPHA30mgを100ml容ナスフラスコ中に加え、クロロホルム2.1ml、メタノール0.7mlを加えて溶解した。これに2.0mol%/Lのトリメチルシリルジアゾメタン−ヘキサン溶液（Aldrich社製）0.3mlを加えて、室温で30分間攪拌した。反応終了後、エバポレーターにより溶媒を留去した後、ポリマーを回収した。更にメタノール50mlで洗浄した後、ポリマーを回収した。減圧乾燥することでPHAを30mg得た。
【０３４７】
実施例1と同様の条件でNMR分析を行った。その結果、ユニットの割合は、3−ヒドロキシ−5−フェニル吉草酸ユニット85mol%、3−ヒドロキシ−9−カルボキシノナン酸ユニット、3−ヒドロキシ−7−カルボキシヘプタン酸ユニット、3−ヒドロキシ−5−カルボキシ吉草酸ユニットの3つのユニット合計10mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)5mol%であることを確認した。
【０３４８】
[実施例１４]
2000ｍl容振盪フラスコを５本用意し、各々にポリペプトン(和光純薬)0.5ｗt%、５-（４−ビニルフェニル）吉草酸６ｍｍol/L及び10-ウンデセン酸1ｍｍol/Lを前記Ｍ９培地1000ｍlに溶解し、2000ｍl容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後、室温まで冷却した。調整した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で８時間振盪培養したシュードモナス・チコリアイ ＹＮ２株の培養液を各々10ｍl加え、30℃、60時間培養した。培養後、各培養液を集めて遠心分離により菌体を回収し、メタノール洗浄した後乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、25℃で72時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムを0.45μｍメンブランフィルターにより濾過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノール中に再沈殿し、ポリマーを回収した。その後、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０３４９】
得られたポリマーを秤量した結果、本例では、ＰＨＡ1097ｍg(乾燥重量)が得られた。
【０３５０】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝70000、重量平均分子量Ｍｗ＝150000であった。
【０３５１】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０３５２】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式(61)に示す３-ヒドロキシ-５−（４-ビニルフェニル）吉草酸ユニット、化学式(５)に示す３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、化学式(６)に示す３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、化学式(７)に示す３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０３５３】
【化１１７】
2004162044.tif 000118
【０３５４】
【化１１８】
2004162044.tif 000119
【０３５５】
【化１１９】
2004162044.tif 000120
【０３５６】
【化１２０】
2004162044.tif 000121
【０３５７】
また、そのユニットの割合は1Ｈ-ＮＭＲスペクトルより、３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの３つのユニット合計９ｍol％、３-ヒドロキシ-５−（４-ビニルフェニル）吉草酸ユニット８４ｍol%、その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸)７ｍol%であることを確認した。
【０３５８】
[実施例１５]
2000ｍl容振盪フラスコを２０本用意し、各々にポリペプトン(和光純薬)0.5ｗt%、５-ベンゾイル吉草酸６ｍｍol/L及び10-ウンデセン酸1ｍｍol/Lを前記Ｍ９培地1000ｍlに溶解し、2000ｍl容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後、室温まで冷却した。調整した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で８時間振盪培養したシュードモナス・チコリアイ ＹＮ２株の培養液を各々10ｍl加え、30℃、60時間培養した。培養後、各培養液を集めて遠心分離により菌体を回収し、メタノール洗浄した後乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、25℃で72時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムを0.45μｍメンブランフィルターにより濾過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノール中に再沈殿し、ポリマーを回収した。その後、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０３５９】
得られたポリマーを秤量した結果、本例では、ＰＨＡ1027ｍg(乾燥重量)が得られた。
【０３６０】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝120000、重量平均分子量Ｍｗ＝370000であった。
【０３６１】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０３６２】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式(62)に示す３-ヒドロキシ-５-ベンゾイル吉草酸ユニット、化学式(５)に示す３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、化学式(６)に示す３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、化学式(７)に示す３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０３６３】
【化１２１】
2004162044.tif 000122
【０３６４】
【化１２２】
2004162044.tif 000123
【０３６５】
【化１２３】
2004162044.tif 000124
【０３６６】
【化１２４】
2004162044.tif 000125
【０３６７】
また、そのユニットの割合は1Ｈ-ＮＭＲスペクトルより、３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの３つのユニット合計１１ｍol％、３-ヒドロキシ-５-ベンゾイル吉草酸ユニット８２ｍol%、その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸)７ｍol%であることを確認した。
【０３６８】
ここで得られたポリヒドロキシアルカノエートは、次の反応に利用した。
上記製造されたポリヒドロキシアルカノエート1003mgを500ml容ナスフラスコ中に加え、ジクロロメタン60mlを加えて溶解した。これを氷浴下に置き、酢酸10ml、18−クラウン−6−エーテル410mgを加えて攪拌した。次に氷浴下で過マンガン酸カリウム327mgをゆっくり加えて、氷浴下で2時間攪拌し、更に室温で18時間攪拌した。反応終了後、水100ml及び亜硫酸水素ナトリウム1000mg加えた。その後、1.0N塩酸により液性をpH=1にした。混合溶媒中のジクロロメタンをエバポレーターにより留去した後、溶液中のポリマーを回収した。これを純水200mlで洗浄し、更にメタノール200mlで洗浄、更に純水200mlで3回洗浄した後、、最後に２００mlメタノールで洗浄しポリマーを回収した。ここで得られたポリマーは、テトラヒドロフラン10mlに溶解させ、透析膜（Spectrum社製、Spectra/Por  Standard Regenarated Cellurose Dialysis Membrane ３）を用いて、メタノール500mlの入った１Lビーカー中で１昼夜、透析を行った。透析膜中にあるポリマーを回収し、減圧乾燥することで目的とするPHAを948mg得た。
【０３６９】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝76000、重量平均分子量Ｍｗ＝235000であった。
【０３７０】
得られたPHAの構造を特定するため、実施例1と同様の条件でNMR分析を行った。
その結果、モノマーユニットとして化学式（62）に示す3−ヒドロキシ−5−ベンゾイル吉草酸ユニット、化学式(54)に示す3−ヒドロキシ−9−カルボキシノナン酸ユニット、化学式(55)に示す3−ヒドロキシ−7−カルボキシヘプタン酸ユニット、化学式(56)に示すに示す3−ヒドロキシ−5−カルボキシ吉草酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０３７１】
【化１２５】
2004162044.tif 000126
【０３７２】
【化１２６】
2004162044.tif 000127
【０３７３】
【化１２７】
2004162044.tif 000128
【０３７４】
【化１２８】
2004162044.tif 000129
【０３７５】
更に、得られたPHAのユニットを算出するため、トリメチルシリルジアゾメタンを用いPHAの側鎖末端にあるカルボキシル基をメチルエステル化することで算出を行った。
【０３７６】
目的物であるPHA30mgを100ml容ナスフラスコ中に加え、クロロホルム2.1ml、メタノール0.7mlを加えて溶解した。これに2.0mol%/Lのトリメチルシリルジアゾメタン−ヘキサン溶液（Aldrich社製）0.3mlを加えて、室温で30分間攪拌した。反応終了後、エバポレーターにより溶媒を留去した後、ポリマーを回収した。更にメタノール50mlで洗浄した後、ポリマーを回収した。減圧乾燥することでPHAを29mg得た。
【０３７７】
実施例1と同様の条件でNMR分析を行った。その結果、ユニットの割合は、3−ヒドロキシ−5−ベンゾイル吉草酸ユニット84mol%、3−ヒドロキシ−9−カルボキシノナン酸ユニット、3−ヒドロキシ−7−カルボキシヘプタン酸ユニット、3−ヒドロキシ−5−カルボキシ吉草酸ユニットの3つのユニット合計9mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)7mol%であることを確認した。
【０３７８】
[実施例１６]
2000ｍl容振盪フラスコを１０本用意し、各々にポリペプトン(和光純薬)0.5ｗt%、５-[（フェニルメチル）スルファニル]吉草酸６ｍｍol/L及び10-ウンデセン酸1.5ｍｍol/Lを前記Ｍ９培地1000ｍlに溶解し、2000ｍl容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後、室温まで冷却した。調整した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で８時間振盪培養したシュードモナス・チコリアイ ＹＮ２株の培養液を各々10ｍl加え、30℃、60時間培養した。培養後、各培養液を集めて遠心分離により菌体を回収し、メタノール洗浄した後乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、25℃で72時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムを0.45μｍメンブランフィルターにより濾過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノール中に再沈殿し、ポリマーを回収した。その後、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０３７９】
得られたポリマーを秤量した結果、本例では、ＰＨＡ1714ｍg(乾燥重量)が得られた。
【０３８０】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝110000、重量平均分子量Ｍｗ＝380000であった。
【０３８１】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０３８２】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式(６３)に示す３-ヒドロキシ-５-[（フェニルメチル）スルファニル]吉草酸ユニット、化学式(５)に示す３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、化学式(６)に示す３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、化学式(７)に示す３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０３８３】
【化１２９】
2004162044.tif 000130
【０３８４】
【化１３０】
2004162044.tif 000131
【０３８５】
【化１３１】
2004162044.tif 000132
【０３８６】
【化１３２】
2004162044.tif 000133
【０３８７】
また、そのユニットの割合は1Ｈ-ＮＭＲスペクトルより、３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの３つのユニット合計１２ｍol％、３-ヒドロキシ-５-[（フェニルメチル）スルファニル]吉草酸ユニット８０ｍol%、その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸)８ｍol%であることを確認した。
【０３８８】
[実施例１７]
2000ｍl容振盪フラスコを3本用意し、各々にポリペプトン(和光純薬)0.5ｗt%、５-（２−チエニル）吉草酸６ｍｍol/L及び10-ウンデセン酸1.5ｍｍol/Lを前記Ｍ９培地1000ｍlに溶解し、2000ｍl容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後、室温まで冷却した。調整した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で８時間振盪培養したシュードモナス・チコリアイ ＹＮ２株の培養液を各々10ｍl加え、30℃、60時間培養した。培養後、各培養液を集めて遠心分離により菌体を回収し、メタノール洗浄した後乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、25℃で72時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムを0.45μｍメンブランフィルターにより濾過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノール中に再沈殿し、ポリマーを回収した。その後、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０３８９】
得られたポリマーを秤量した結果、本例では、ＰＨＡ1171ｍg(乾燥重量)が得られた。
【０３９０】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝74000、重量平均分子量Ｍｗ＝180000であった。
【０３９１】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０３９２】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式(64)に示す３-ヒドロキシ-５-（２−チエニル）吉草酸ユニット、化学式(５)に示す３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、化学式(６)に示す３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、化学式(７)に示す３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０３９３】
【化１３３】
2004162044.tif 000134
【０３９４】
【化１３４】
2004162044.tif 000135
【０３９５】
【化１３５】
2004162044.tif 000136
【０３９６】
【化１３６】
2004162044.tif 000137
【０３９７】
また、そのユニットの割合は1Ｈ-ＮＭＲスペクトルより、３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの３つのユニット合計１２ｍol％、３-ヒドロキシ-５−（２−チエニル）吉草酸ユニット８５ｍol%、その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸)３ｍol%であることを確認した。
【０３９８】
ここで得られたポリヒドロキシアルカノエートは、次の反応に利用した。
【０３９９】
ポリヒドロキシアルカノエート1001mgを500ml容ナスフラスコ中に加え、ジクロロメタン60mlを加えて溶解した。これを氷浴下に置き、酢酸10ml、18−クラウン−6−エーテル527mgを加えて攪拌した。次に氷浴下で過マンガン酸カリウム420mgをゆっくり加えて、氷浴下で2時間攪拌し、更に室温で18時間攪拌した。反応終了後、水100ml及び亜硫酸水素ナトリウム1000mg加えた。その後、1.0N塩酸により液性をpH=1にした。混合溶媒中のジクロロメタンをエバポレーターにより留去した後、溶液中のポリマーを回収した。これを純水200mlで洗浄し、更にメタノール200mlで洗浄、更に純水200mlで3回洗浄した後、、最後に２００mlメタノールで洗浄しポリマーを回収した。ここで得られたポリマーは、テトラヒドロフラン10mlに溶解させ、透析膜（Spectrum社製、Spectra/Por  Standard Regenarated Cellurose Dialysis Membrane ３）を用いて、メタノール500mlの入った１Lビーカー中で１昼夜、透析を行った。透析膜中にあるポリマーを回収し、減圧乾燥することで目的とするPHAを946mg得た。
【０４００】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝45000、重量平均分子量Ｍｗ＝95000であった。
【０４０１】
得られたPHAの構造を特定するため、実施例1と同様の条件でNMR分析を行った。
【０４０２】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式（64）に示す3−ヒドロキシ−5−（2−チエニル）吉草酸ユニット、化学式(54)に示す3−ヒドロキシ−9−カルボキシノナン酸ユニット、化学式(55)に示す3−ヒドロキシ−7−カルボキシヘプタン酸ユニット、化学式(56)に示すに示す3−ヒドロキシ−5−カルボキシ吉草酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０４０３】
【化１３７】
2004162044.tif 000138
【０４０４】
【化１３８】
2004162044.tif 000139
【０４０５】
【化１３９】
2004162044.tif 000140
【０４０６】
【化１４０】
2004162044.tif 000141
【０４０７】
更に、得られたPHAのユニットを算出するため、トリメチルシリルジアゾメタンを用いPHAの側鎖末端にあるカルボキシル基をメチルエステル化することで算出を行った。
【０４０８】
目的物であるPHA30mgを100ml容ナスフラスコ中に加え、クロロホルム2.1ml、メタノール0.7mlを加えて溶解した。これに2.0mol%/Lのトリメチルシリルジアゾメタン−ヘキサン溶液（Aldrich社製）0.3mlを加えて、室温で30分間攪拌した。反応終了後、エバポレーターにより溶媒を留去した後、ポリマーを回収した。更にメタノール50mlで洗浄した後、ポリマーを回収した。減圧乾燥することでPHAを30mg得た。
【０４０９】
実施例1と同様の条件でNMR分析を行った。その結果、ユニットの割合は、3−ヒドロキシ−5−（2−チエニル）吉草酸ユニット85mol%、3−ヒドロキシ−9−カルボキシノナン酸ユニット、3−ヒドロキシ−7−カルボキシヘプタン酸ユニット、3−ヒドロキシ−5−カルボキシ吉草酸ユニットの3つのユニット合計10mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)5mol%であることを確認した。
【０４１０】
[実施例１８]
2000ｍl容振盪フラスコを3本用意し、各々にポリペプトン(和光純薬)0.5ｗt%、５-（２−チエニルスルファニル）吉草酸６ｍｍol/L及び10-ウンデセン酸1ｍｍol/Lを前記Ｍ９培地1000ｍlに溶解し、2000ｍl容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後、室温まで冷却した。調整した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で８時間振盪培養したシュードモナス・チコリアイ ＹＮ２株の培養液を各々10ｍl加え、30℃、60時間培養した。培養後、各培養液を集めて遠心分離により菌体を回収し、メタノール洗浄した後乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、25℃で72時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムを0.45μｍメンブランフィルターにより濾過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノール中に再沈殿し、ポリマーを回収した。その後、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０４１１】
得られたポリマーを秤量した結果、本例では、ＰＨＡ1257ｍg(乾燥重量)が得られた。
【０４１２】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝68000、重量平均分子量Ｍｗ＝160000であった。
【０４１３】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０４１４】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式(65)に示す３-ヒドロキシ-５-（２−チエニルスルファニル）吉草酸ユニット、化学式(５)に示す３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、化学式(６)に示す３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、化学式(７)に示す３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０４１５】
【化１４１】
2004162044.tif 000142
【０４１６】
【化１４２】
2004162044.tif 000143
【０４１７】
【化１４３】
2004162044.tif 000144
【０４１８】
【化１４４】
2004162044.tif 000145
【０４１９】
また、そのユニットの割合は1Ｈ-ＮＭＲスペクトルより、３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの３つのユニット合計９ｍol％、３-ヒドロキシ-５-（２−チエニルスルファニル）吉草酸ユニット８４ｍol%、その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸)７ｍol%であることを確認した。
【０４２０】
[実施例１９]
2000ｍl容振盪フラスコを10本用意し、各々にポリペプトン(和光純薬)0.5ｗt%、５-（２−チエニルカルボニル）吉草酸６ｍｍol/L及び10-ウンデセン酸1ｍｍol/Lを前記Ｍ９培地1000ｍlに溶解し、2000ｍl容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後、室温まで冷却した。調整した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で８時間振盪培養したシュードモナス・チコリアイ ＹＮ２株の培養液を各々10ｍl加え、30℃、60時間培養した。培養後、各培養液を集めて遠心分離により菌体を回収し、メタノール洗浄した後乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、25℃で72時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムを0.45μｍメンブランフィルターにより濾過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノール中に再沈殿し、ポリマーを回収した。その後、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０４２１】
得られたポリマーを秤量した結果、本例では、ＰＨＡ1251ｍg(乾燥重量)が得られた。
【０４２２】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝75000、重量平均分子量Ｍｗ＝180000であった。
【０４２３】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０４２４】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式(66)に示す３-ヒドロキシ-５-（２−チエニルカルボニル）吉草酸ユニット、化学式(５)に示す３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、化学式(６)に示す３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、化学式(７)に示す３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０４２５】
【化１４５】
2004162044.tif 000146
【０４２６】
【化１４６】
2004162044.tif 000147
【０４２７】
【化１４７】
2004162044.tif 000148
【０４２８】
【化１４８】
2004162044.tif 000149
【０４２９】
また、そのユニットの割合は1Ｈ-ＮＭＲスペクトルより、３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの３つのユニット合計１０ｍol％、３-ヒドロキシ-５-（２−チエニルカルボニル）吉草酸ユニット８１ｍol%、その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸)９ｍol%であることを確認した。
【０４３０】
ここで得られたポリヒドロキシアルカノエートは、次の反応に利用した。
【０４３１】
上記ポリヒドロキシアルカノエート999mgを500ml容ナスフラスコ中に加え、ジクロロメタン60mlを加えて溶解した。これを氷浴下に置き、酢酸10ml、18−クラウン−6−エーテル382mgを加えて攪拌した。次に氷浴下で過マンガン酸カリウム304mgをゆっくり加えて、氷浴下で2時間攪拌し、更に室温で18時間攪拌した。反応終了後、水100ml及び亜硫酸水素ナトリウム1000mg加えた。その後、1.0N塩酸により液性をpH=1にした。混合溶媒中のジクロロメタンをエバポレーターにより留去した後、溶液中のポリマーを回収した。これを純水200mlで洗浄し、更にメタノール200mlで洗浄、更に純水200mlで3回洗浄した後、、最後に２００mlメタノールで洗浄しポリマーを回収した。ここで得られたポリマーは、テトラヒドロフラン10mlに溶解させ、透析膜（Spectrum社製、Spectra/Por  Standard Regenarated Cellurose Dialysis Membrane ３）を用いて、メタノール500mlの入った１Lビーカー中で１昼夜、透析を行った。透析膜中にあるポリマーを回収し、減圧乾燥することで目的とするPHAを935mg得た。
【０４３２】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝45000、重量平均分子量Ｍｗ＝99000であった。
【０４３３】
得られたPHAの構造を特定するため、実施例1と同様の条件でNMR分析を行った。
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式（66）に示す3−ヒドロキシ−5−（2−チエニルカルボニル）吉草酸ユニット、化学式(54)に示す3−ヒドロキシ−9−カルボキシノナン酸ユニット、化学式(55)に示す3−ヒドロキシ−7−カルボキシヘプタン酸ユニット、化学式(56)に示すに示す3−ヒドロキシ−5−カルボキシ吉草酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０４３４】
【化１４９】
2004162044.tif 000150
【０４３５】
【化１５０】
2004162044.tif 000151
【０４３６】
【化１５１】
2004162044.tif 000152
【０４３７】
【化１５２】
2004162044.tif 000153
【０４３８】
更に、得られたPHAのユニットを算出するため、トリメチルシリルジアゾメタンを用いPHAの側鎖末端にあるカルボキシル基をメチルエステル化することで算出を行った。
【０４３９】
目的物であるPHA31mgを100ml容ナスフラスコ中に加え、クロロホルム2.1ml、メタノール0.7mlを加えて溶解した。これに2.0mol%/Lのトリメチルシリルジアゾメタン−ヘキサン溶液（Aldrich社製）0.3mlを加えて、室温で30分間攪拌した。反応終了後、エバポレーターにより溶媒を留去した後、ポリマーを回収した。更にメタノール50mlで洗浄した後、ポリマーを回収した。減圧乾燥することでPHAを30mg得た。
【０４４０】
実施例1と同様の条件でNMR分析を行った。その結果、ユニットの割合は、3−ヒドロキシ−5−（2−チエニルカルボニル）吉草酸ユニット83mol%、3−ヒドロキシ−9−カルボキシノナン酸ユニット、3−ヒドロキシ−7−カルボキシヘプタン酸ユニット、3−ヒドロキシ−5−カルボキシ吉草酸ユニットの3つのユニット合計7mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)10mol%であることを確認した。
【０４４１】
[実施例２０]
2000ｍl容振盪フラスコを15本用意し、各々にポリペプトン(和光純薬)0.5ｗt%、５-[（フェニルメチル）オキシ]吉草酸６ｍｍol/L及び10-ウンデセン酸1ｍｍol/Lを前記Ｍ９培地1000ｍlに溶解し、2000ｍl容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後、室温まで冷却した。調整した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で８時間振盪培養したシュードモナス・チコリアイ ＹＮ２株の培養液を各々10ｍl加え、30℃、60時間培養した。培養後、各培養液を集めて遠心分離により菌体を回収し、メタノール洗浄した後乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、25℃で72時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムを0.45μｍメンブランフィルターにより濾過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノール中に再沈殿し、ポリマーを回収した。その後、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０４４２】
得られたポリマーを秤量した結果、本例では、ＰＨＡ1348ｍg(乾燥重量)が得られた。
【０４４３】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝79000、重量平均分子量Ｍｗ＝190000であった。
【０４４４】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０４４５】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式(67)に示す３-ヒドロキシ-５-[（フェニルメチル）オキシ]吉草酸ユニット、化学式(５)に示す３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、化学式(６)に示す３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、化学式(７)に示す３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０４４６】
【化１５３】
2004162044.tif 000154
【０４４７】
【化１５４】
2004162044.tif 000155
【０４４８】
【化１５５】
2004162044.tif 000156
【０４４９】
【化１５６】
2004162044.tif 000157
【０４５０】
また、そのユニットの割合は1Ｈ-ＮＭＲスペクトルより、３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの３つのユニット合計１０ｍol％、３-ヒドロキシ-５-[（フェニルメチル）オキシ]吉草酸ユニット８２ｍol%、その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸)８ｍol%であることを確認した。
【０４５１】
ここで得られたポリヒドロキシアルカノエートは、次の反応に利用した。
【０４５２】
上記合成したポリヒドロキシアルカノエート1004mgを500ml容ナスフラスコ中に加え、ジクロロメタン60mlを加えて溶解した。これを氷浴下に置き、酢酸10ml、18−クラウン−6−エーテル389mgを加えて攪拌した。次に氷浴下で過マンガン酸カリウム３１０mgをゆっくり加えて、氷浴下で2時間攪拌し、更に室温で18時間攪拌した。反応終了後、水100ml及び亜硫酸水素ナトリウム1000mg加えた。その後、1.0N塩酸により液性をpH=1にした。混合溶媒中のジクロロメタンをエバポレーターにより留去した後、溶液中のポリマーを回収した。これを純水200mlで洗浄し、更にメタノール200mlで洗浄、更に純水200mlで3回洗浄した後、、最後に２００mlメタノールで洗浄しポリマーを回収した。ここで得られたポリマーは、テトラヒドロフラン10mlに溶解させ、透析膜（Spectrum社製、Spectra/Por  Standard Regenarated Cellurose Dialysis Membrane ３）を用いて、メタノール500mlの入った１Lビーカー中で１昼夜、透析を行った。透析膜中にあるポリマーを回収し、減圧乾燥することで目的とするPHAを940mg得た。
【０４５３】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝48000、重量平均分子量Ｍｗ＝106000であった。
【０４５４】
得られたPHAの構造を特定するため、実施例1と同様の条件でNMR分析を行った。
【０４５５】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式（67）に示す3−ヒドロキシ−5−[ (フェニルメチル)オキシ]吉草酸ユニット、化学式(54)に示す3−ヒドロキシ−9−カルボキシノナン酸ユニット、化学式(55)に示す3−ヒドロキシ−7−カルボキシヘプタン酸ユニット、化学式(56)に示す3−ヒドロキシ−5−カルボキシ吉草酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０４５６】
【化１５７】
2004162044.tif 000158
【０４５７】
【化１５８】
2004162044.tif 000159
【０４５８】
【化１５９】
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【０４５９】
【化１６０】
2004162044.tif 000161
【０４６０】
更に、得られたPHAのユニットを算出するため、トリメチルシリルジアゾメタンを用いPHAの側鎖末端にあるカルボキシル基をメチルエステル化することで算出を行った。
【０４６１】
目的物であるPHA30mgを100ml容ナスフラスコ中に加え、クロロホルム2.1ml、メタノール0.7mlを加えて溶解した。これに2.0mol%/Lのトリメチルシリルジアゾメタン−ヘキサン溶液（Aldrich社製）0.3mlを加えて、室温で30分間攪拌した。反応終了後、エバポレーターにより溶媒を留去した後、ポリマーを回収した。更にメタノール50mlで洗浄した後、ポリマーを回収した。減圧乾燥することでPHAを29mg得た。
【０４６２】
実施例1と同様の条件でNMR分析を行った。その結果、ユニットの割合は、3−ヒドロキシ−5−[(フェニルメチル)オキシ]吉草酸ユニット84mol%、3−ヒドロキシ−9−カルボキシノナン酸ユニット、3−ヒドロキシ−7−カルボキシヘプタン酸ユニット、3−ヒドロキシ−5−カルボキシ吉草酸ユニットの3つのユニット合計8mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)8mol%であることを確認した。
【０４６３】
[実施例２１]
2000ｍl容振盪フラスコを5本用意し、各々にポリペプトン(和光純薬)0.5ｗt%、５-フェノキシ吉草酸３ｍｍol/L及び５-シクロヘキシル吉草酸３ｍｍol/L及び10-ウンデセン酸1ｍｍol/Lを前記Ｍ９培地1000ｍlに溶解し、2000ｍl容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後、室温まで冷却した。調整した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で８時間振盪培養したシュードモナス・チコリアイ ＹＮ２株の培養液を各々10ｍl加え、30℃、60時間培養した。培養後、各培養液を集めて遠心分離により菌体を回収し、メタノール洗浄した後乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、25℃で72時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムを0.45μｍメンブランフィルターにより濾過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノール中に再沈殿し、ポリマーを回収した。その後、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０４６４】
得られたポリマーを秤量した結果、本例では、ＰＨＡ1285ｍg(乾燥重量)が得られた。
【０４６５】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝86000、重量平均分子量Ｍｗ＝230000であった。
【０４６６】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０４６７】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式(53)に示す３-ヒドロキシ-５-フェノキシ吉草酸ユニット、化学式(68)に示す３-ヒドロキシ-５-シクロヘキシル吉草酸ユニット、化学式(５)に示す３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、化学式(６)に示す３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、化学式(７)に示す３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０４６８】
【化１６１】
2004162044.tif 000162
【０４６９】
【化１６２】
2004162044.tif 000163
【０４７０】
【化１６３】
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【０４７１】
【化１６４】
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【０４７２】
【化１６５】
2004162044.tif 000166
【０４７３】
また、そのユニットの割合は1Ｈ-ＮＭＲスペクトルより、３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットの３つのユニット合計７ｍol％、３-ヒドロキシ-５-フェノキシ吉草酸ユニット４８ｍol%、３-ヒドロキシ-５-シクロヘキシル吉草酸ユニット４１ｍol%、その他(炭素数４〜12の直鎖３-ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の３-ヒドロキシアルカ-５-エン酸)４ｍol%であることを確認した。
【０４７４】
ここで得られたポリヒドロキシアルカノエートは、次の反応に利用した。
【０４７５】
実施例20で合成したポリヒドロキシアルカノエート1002mgを500ml容ナスフラスコ中に加え、ジクロロメタン60mlを加えて溶解した。これを氷浴下に置き、酢酸10ml、18−クラウン−6−エーテル288mgを加えて攪拌した。次に氷浴下で過マンガン酸カリウム230mgをゆっくり加えて、氷浴下で2時間攪拌し、更に室温で18時間攪拌した。反応終了後、水100ml及び亜硫酸水素ナトリウム1000mg加えた。その後、1.0N塩酸により液性をpH=1にした。混合溶媒中のジクロロメタンをエバポレーターにより留去した後、溶液中のポリマーを回収した。これを純水200mlで洗浄し、更にメタノール200mlで洗浄、更に純水200mlで3回洗浄した後、、最後に２００mlメタノールで洗浄しポリマーを回収した。ここで得られたポリマーは、テトラヒドロフラン10mlに溶解させ、透析膜（Spectrum社製、Spectra/Por  Standard Regenarated Cellurose Dialysis Membrane ３）を用いて、メタノール500mlの入った１Lビーカー中で１昼夜、透析を行った。透析膜中にあるポリマーを回収し、減圧乾燥することで目的とするPHAを967mg得た。
【０４７６】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝51000、重量平均分子量Ｍｗ＝108000であった。
【０４７７】
得られたPHAの構造を特定するため、実施例1と同様の条件でNMR分析を行った。
【０４７８】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式（53）に示す3−ヒドロキシ−5−フェノキシ吉草酸ユニット、化学式（68）に示す3−ヒドロキシ−5−シクロヘキシル吉草酸ユニット、化学式(54)に示す3−ヒドロキシ−9−カルボキシノナン酸ユニット、化学式(55)に示す3−ヒドロキシ−7−カルボキシヘプタン酸ユニット、化学式(56)に示すに示す3−ヒドロキシ−5−カルボキシ吉草酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０４７９】
【化１６６】
2004162044.tif 000167
【０４８０】
【化１６７】
2004162044.tif 000168
【０４８１】
【化１６８】
2004162044.tif 000169
【０４８２】
【化１６９】
2004162044.tif 000170
【０４８３】
【化１７０】
2004162044.tif 000171
【０４８４】
更に、得られたPHAのユニットを算出するため、トリメチルシリルジアゾメタンを用いPHAの側鎖末端にあるカルボキシル基をメチルエステル化することで算出を行った。
【０４８５】
目的物であるPHA30mgを100ml容ナスフラスコ中に加え、クロロホルム2.1ml、メタノール0.7mlを加えて溶解した。これに2.0mol%/Lのトリメチルシリルジアゾメタン−ヘキサン溶液（Aldrich社製）0.3mlを加えて、室温で30分間攪拌した。反応終了後、エバポレーターにより溶媒を留去した後、ポリマーを回収した。更にメタノール50mlで洗浄した後、ポリマーを回収した。減圧乾燥することでPHAを28mg得た。
【０４８６】
実施例1と同様の条件でNMR分析を行った。その結果、ユニットの割合は、3−ヒドロキシ−5−フェノキシ吉草酸ユニット49mol%、3−ヒドロキシ−5−シクロヘキシル吉草酸ユニット42mol%、3−ヒドロキシ−9−カルボキシノナン酸ユニット、3−ヒドロキシ−7−カルボキシヘプタン酸ユニット、3−ヒドロキシ−5−カルボキシ吉草酸ユニットの3つのユニット合計6mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)3mol%であることを確認した。
【０４８７】
[実施例２２]
2000ml容振盪フラスコを2本用意し、各々にポリペプトン（和光純薬）0.5wt%、5-フェニル吉草酸4mmol/L、ドデカン二酸モノエチルエステル1mmol/Lを前記M9培地1000mlに溶解し、2000ml容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン０．５％を含むＭ９培地で３０℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ  ＹＮ２株の培養液を５  ｍＬ加え、３０℃、４１時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後凍結乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、５０℃で４８時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。得られたポリマーを秤量した結果、本例では、PHA910mg（乾燥重量）が得られた。
【０４８８】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝78000、重量平均分子量Ｍｗ＝157000であった。
【０４８９】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０４９０】
その結果、化学式（60）で示される3-ヒドロキシ-5-フェニル吉草酸ユニット78mol%、化学式（69）で示される3-ヒドロキシ-11-エトキシカルボニルウンデカン酸ユニット、化学式（70）で示される3-ヒドロキシ-9-エトキシカルボニルノナン酸ユニット、化学式（71）で示される3-ヒドロキシ-7-エトキシカルボニルヘプタン酸ユニットの三つのユニット合わせて14mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)8mol%を含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることを確認した。
【０４９１】
【化１７１】
2004162044.tif 000172
【０４９２】
【化１７２】
2004162044.tif 000173
【０４９３】
【化１７３】
2004162044.tif 000174
【０４９４】
【化１７４】
2004162044.tif 000175
【０４９５】
[実施例２３]
2000ml容振盪フラスコを2本用意し、各々に酵母エキス（DIFCO）0.5wt%、5-フェニル吉草酸4mmol/L、ドデカン二酸モノエチルエステル1mmol/Lを前記M9培地1000mlに溶解し、2000ml容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン０．５％を含むＭ９培地で３０℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ  Ｈ４５株の培養液を５  ｍＬ加え、３０℃、４０時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後凍結乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、５０℃で４８時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。得られたポリマーを秤量した結果、本例では、PHA250mg（乾燥重量）が得られた。
【０４９６】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝75000、重量平均分子量Ｍｗ＝152000であった。
【０４９７】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０４９８】
その結果、化学式（60）で示される3-ヒドロキシ-5-フェニル吉草酸ユニット75mol%、化学式（69）で示される3-ヒドロキシ-11-エトキシカルボニルウンデカン酸ユニット、化学式（70）で示される3-ヒドロキシ-9-エトキシカルボニルノナン酸ユニット、化学式（71）で示される3-ヒドロキシ-7-エトキシカルボニルヘプタン酸ユニットの三つのユニット合わせて15mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)10mol%を含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることを確認した。
【０４９９】
【化１７５】
2004162044.tif 000176
【０５００】
【化１７６】
2004162044.tif 000177
【０５０１】
【化１７７】
2004162044.tif 000178
【０５０２】
【化１７８】
2004162044.tif 000179
【０５０３】
[実施例２４]
2000ml容振盪フラスコを2本用意し、各々にＤ-グルコース（キシダ化学）0.5wt%、5-フェニル吉草酸4mmol/L、ドデカン二酸モノエチルエステル1mmol/Lを前記M9培地1000mlに溶解し、2000ml容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン０．５％を含むＭ９培地で３０℃、８時間振とう培養したシュードモナス ジェッセニイ  Ｐ１６１株の培養液を５  ｍＬ加え、３０℃、４０時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後凍結乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、５０℃で４８時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。得られたポリマーを秤量した結果、本例では、PHA300mg（乾燥重量）が得られた。
【０５０４】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝71000、重量平均分子量Ｍｗ＝149000であった。
【０５０５】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０５０６】
その結果、化学式（60）で示される3-ヒドロキシ-5-フェニル吉草酸ユニット78mol%、化学式（69）で示される3-ヒドロキシ-11-エトキシカルボニルウンデカン酸ユニット、化学式（70）で示される3-ヒドロキシ-9-エトキシカルボニルノナン酸ユニット、化学式（71）で示される3-ヒドロキシ-7-エトキシカルボニルヘプタン酸ユニットの三つのユニット合わせて14mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)8mol%を含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることを確認した。
【０５０７】
【化１７９】
2004162044.tif 000180
【０５０８】
【化１８０】
2004162044.tif 000181
【０５０９】
【化１８１】
2004162044.tif 000182
【０５１０】
【化１８２】
2004162044.tif 000183
【０５１１】
[実施例２５]
2000ml容振盪フラスコを2本用意し、各々にポリペプトン（和光純薬）0.5wt%、5-フェノキシ吉草酸4mmol/L、ドデカン二酸モノエチルエステル1mmol/Lを前記M9培地1000mlに溶解し、2000ml容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン０．５％を含むＭ９培地で３０℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ  ＹＮ２株の培養液を５  ｍＬ加え、３０℃、４１時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後凍結乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、５０℃で４８時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。得られたポリマーを秤量した結果、本例では、PHA680mg（乾燥重量）が得られた。
【０５１２】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝69000、重量平均分子量Ｍｗ＝135000であった。
【０５１３】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０５１４】
その結果、化学式（53）で示される3-ヒドロキシ-5-フェノキシ吉草酸ユニット74mol%、化学式（69）で示される3-ヒドロキシ-11-エトキシカルボニルウンデカン酸ユニット、化学式（70）で示される3-ヒドロキシ-9-エトキシカルボニルノナン酸ユニット、化学式（71）で示される3-ヒドロキシ-7-エトキシカルボニルヘプタン酸ユニットの三つのユニット合わせて17mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)9mol%を含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることを確認した。
【０５１５】
【化１８３】
2004162044.tif 000184
【０５１６】
【化１８４】
2004162044.tif 000185
【０５１７】
【化１８５】
2004162044.tif 000186
【０５１８】
【化１８６】
2004162044.tif 000187
【０５１９】
[実施例２６]
2000ml容振盪フラスコを2本用意し、各々にポリペプトン（和光純薬）0.5wt%、4-シクロヘキシル酪酸4mmol/L、ドデカンニ酸モノエチルエステル1mmol/Lを前記M9培地1000mlに溶解し、2000ml容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン０．５％を含むＭ９培地で３０℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ  ＹＮ２株の培養液を５  ｍＬ加え、３０℃、４０時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後凍結乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、５０℃で４８時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。得られたポリマーを秤量した結果、本例では、PHA720mg（乾燥重量）が得られた。
【０５２０】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝81000、重量平均分子量Ｍｗ＝160000であった。
【０５２１】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０５２２】
その結果、化学式（57）で示される3-ヒドロキシ-4-シクロヘキシル酪酸ユニット76mol%、化学式（69）で示される3-ヒドロキシ-11-エトキシカルボニルウンデカン酸ユニット、化学式（70）で示される3-ヒドロキシ-9-エトキシカルボニルノナン酸ユニット、化学式（71）で示される3-ヒドロキシ-7-エトキシカルボニルヘプタン酸ユニットの三つのユニット合わせて16mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)8mol%を含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることを確認した。
【０５２３】
【化１８７】
2004162044.tif 000188
【０５２４】
【化１８８】
2004162044.tif 000189
【０５２５】
【化１８９】
2004162044.tif 000190
【０５２６】
【化１９０】
2004162044.tif 000191
【０５２７】
[実施例２７]
2000ml容振盪フラスコを2本用意し、各々にポリペプトン（和光純薬）0.5wt%、5-（フェニルスルファニル）吉草酸4mmol/L、ドデカンニ酸モノエチルエステル1mmol/Lを前記M9培地1000mlに溶解し、2000ml容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン０．５％を含むＭ９培地で３０℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ  ＹＮ２株の培養液を５  ｍＬ加え、３０℃、４２時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後凍結乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、５０℃で４８時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。得られたポリマーを秤量した結果、本例では、PHA890mg（乾燥重量）が得られた。
【０５２８】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝84000、重量平均分子量Ｍｗ＝169000であった。
【０５２９】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０５３０】
その結果、化学式（58）で示される3-ヒドロキシ-5-（フェニルスルファニル）吉草酸ユニット80mol%、化学式（69）で示される3-ヒドロキシ-11-エトキシカルボニルウンデカン酸ユニット、化学式（70）で示される3-ヒドロキシ-9-エトキシカルボニルノナン酸ユニット、化学式（71）で示される3-ヒドロキシ-7-エトキシカルボニルヘプタン酸ユニットの三つのユニット合わせて14mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)6mol%を含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることを確認した。
【０５３１】
【化１９１】
2004162044.tif 000192
【０５３２】
【化１９２】
2004162044.tif 000193
【０５３３】
【化１９３】
2004162044.tif 000194
【０５３４】
【化１９４】
2004162044.tif 000195
【０５３５】
[実施例２８]
2000ml容振盪フラスコを2本用意し、各々にポリペプトン（和光純薬）0.5wt%、5-ベンゾイル吉草酸4mmol/L、ドデカンニ酸モノエチルエステル1mmol/Lを前記M9培地1000mlに溶解し、2000ml容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン０．５％を含むＭ９培地で３０℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ  ＹＮ２株の培養液を５  ｍＬ加え、３０℃、４１時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後凍結乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、５０℃で４８時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。得られたポリマーを秤量した結果、本例では、PHA450mg（乾燥重量）が得られた。
【０５３６】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝156000、重量平均分子量Ｍｗ＝325000であった。
【０５３７】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０５３８】
その結果、化学式（62）で示される3-ヒドロキシ-5-ベンゾイル吉草酸ユニット69mol%、化学式（69）で示される3-ヒドロキシ-11-エトキシカルボニルウンデカン酸ユニット、化学式（70）で示される3-ヒドロキシ-9-エトキシカルボニルノナン酸ユニット、化学式（71）で示される3-ヒドロキシ-7-エトキシカルボニルヘプタン酸ユニットの三つのユニット合わせて18mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)13mol%を含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることを確認した。
【０５３９】
【化１９５】
2004162044.tif 000196
【０５４０】
【化１９６】
2004162044.tif 000197
【０５４１】
【化１９７】
2004162044.tif 000198
【０５４２】
【化１９８】
2004162044.tif 000199
【０５４３】
[実施例２９]
2000ml容振盪フラスコを2本用意し、各々にポリペプトン（和光純薬）0.5wt%、5-（4-シアノフェノキシ）吉草酸4mmol/L、セバシン酸モノメチルエステル1mmol/Lを前記M9培地1000mlに溶解し、2000ml容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン０．５％を含むＭ９培地で３０℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ  ＹＮ２株の培養液を５  ｍＬ加え、３０℃、４１時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後凍結乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、５０℃で４８時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。得られたポリマーを秤量した結果、本例では、PHA450mg（乾燥重量）が得られた。
【０５４４】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝68000、重量平均分子量Ｍｗ＝129000であった。
【０５４５】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０５４６】
その結果、化学式（72）で示される3-ヒドロキシ-5-(4-シアノフェノキシ)吉草酸ユニット34mol%、化学式（73）で示される3-ヒドロキシ-9-メトキシカルボニルノナン酸ユニット、化学式（74）で示される3-ヒドロキシ-7-メトキシカルボニルヘプタン酸ユニットの二つのユニット合わせて16mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)50mol%を含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることを確認した。
【０５４７】
【化１９９】
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【０５４８】
【化２００】
2004162044.tif 000201
【０５４９】
【化２０１】
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【０５５０】
[実施例３０]
2000ml容振盪フラスコを2本用意し、各々にn-ノナン酸（キシダ化学）0.1wt%、5-（4-ニトロフェニル）吉草酸4mmol/L、セバシン酸モノメチルエステル1mmol/Lを前記M9培地1000mlに溶解し、2000ml容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン０．５％を含むＭ９培地で３０℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ  ＹＮ２株の培養液を５  ｍＬ加え、３０℃、７２時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後凍結乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、５０℃で４８時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。得られたポリマーを秤量した結果、本例では、PHA140mg（乾燥重量）が得られた。
【０５５１】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝59000、重量平均分子量Ｍｗ＝125000であった。
【０５５２】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０５５３】
その結果、化学式（75）で示される3-ヒドロキシ-5-（4-ニトロフェニル）吉草酸ユニット8mol%、化学式（73）で示される3-ヒドロキシ-9-メトキシカルボニルノナン酸ユニット、化学式（74）で示される3-ヒドロキシ-7-メトキシカルボニルヘプタン酸ユニットの二つのユニット合わせて18mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)74mol%を含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることを確認した。
【０５５４】
【化２０２】
2004162044.tif 000203
【０５５５】
【化２０３】
2004162044.tif 000204
【０５５６】
【化２０４】
2004162044.tif 000205
【０５５７】
[実施例３１]
2000ml容振盪フラスコを2本用意し、各々にポリペプトン（和光純薬）0.5wt%、5-[(フェニルメチル)オキシ]吉草酸4mmol/L、セバシン酸モノメチルエステル1mmol/Lを前記M9培地1000mlに溶解し、2000ml容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン０．５％を含むＭ９培地で３０℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ  ＹＮ２株の培養液を５  ｍＬ加え、３０℃、４０時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後凍結乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、５０℃で４８時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。得られたポリマーを秤量した結果、本例では、PHA330mg（乾燥重量）が得られた。
【０５５８】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝79000、重量平均分子量Ｍｗ＝152000であった。
【０５５９】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０５６０】
その結果、化学式（68）で示される3-ヒドロキシ-5-[(フェニルメチル)オキシ]吉草酸ユニット81mol%、化学式（73）で示される3-ヒドロキシ-9-メトキシカルボニルノナン酸ユニット、化学式（74）で示される3-ヒドロキシ-7-メトキシカルボニルヘプタン酸ユニットの二つのユニット合わせて13mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)6mol%を含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることを確認した。
【０５６１】
【化２０５】
2004162044.tif 000206
【０５６２】
【化２０６】
2004162044.tif 000207
【０５６３】
【化２０７】
2004162044.tif 000208
【０５６４】
[実施例３２]
2000ml容振盪フラスコを2本用意し、各々にポリペプトン（和光純薬）0.5wt%、5−フェニル吉草酸4mmol/L、セバシン酸モノメチルエステル1mmol/Lを前記M9培地1000mlに溶解し、2000ml容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン０．５％を含むＭ９培地で３０℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ  ＹＮ２株の培養液を５  ｍＬ加え、３０℃、４０時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後凍結乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、５０℃で４８時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。得られたポリマーを秤量した結果、本例では、PHA1340mg（乾燥重量）が得られた。
【０５６５】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝81000、重量平均分子量Ｍｗ＝159000であった。
【０５６６】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０５６７】
その結果、化学式（60）で示される3-ヒドロキシ-5-フェニル吉草酸ユニット77mol%、化学式（73）で示される3-ヒドロキシ-9-メトキシカルボニルノナン酸ユニット、化学式（74）で示される3-ヒドロキシ-7-メトキシカルボニルヘプタン酸ユニットの二つのユニット合わせて19mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)4mol%を含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることを確認した。
【０５６８】
【化２０８】
2004162044.tif 000209
【０５６９】
【化２０９】
2004162044.tif 000210
【０５７０】
【化２１０】
2004162044.tif 000211
【０５７１】
ここで得られたポリヒドロキシアルカノエートは、次の反応に利用した。
【０５７２】
上記合成したポリヒドロキシアルカノエートのフィルムを作製し、このフィルム500mgをシャーレ上に置き、100ｍｌ0.1Ｎ水酸化ナトリウム水溶液中で5時間静置した。反応終了後、水酸化ナトリウム水溶液を取り除き、ポリマーを100ｍｌ蒸留水で３回洗浄した。ポリマーを200ｍｌ酢酸エチルに溶解させ、次に100ｍｌ1.0Ｎ塩酸水溶液を加えて、１時間室温で攪拌した。ポリマーを抽出し、100ｍｌ蒸留水で洗浄した後、溶媒留去することでポリマーを回収した。その後、減圧乾燥して、目的とするポリマーを350mg得た。
【０５７３】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝9500、重量平均分子量Ｍｗ＝32000であった。
【０５７４】
得られたPHAの構造を特定するため、実施例1と同様の条件でNMR分析を行った。
【０５７５】
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式（60）に示す3−ヒドロキシ−5−フェニル吉草酸ユニット、化学式(54)に示す3−ヒドロキシ−9−カルボキシノナン酸ユニット、化学式(55)に示す3−ヒドロキシ−7−カルボキシヘプタン酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０５７６】
【化２１１】
2004162044.tif 000212
【０５７７】
【化２１２】
2004162044.tif 000213
【０５７８】
【化２１３】
2004162044.tif 000214
【０５７９】
また、得られたポリマーのユニットの割合は、エステル基の減少から算出を行い、その結果、ユニットの割合は、3-ヒドロキシ-5-フェニル吉草酸78mol%、3-ヒドロキシ-9-カルボキシノナン酸、3-ヒドロキシ-7-カルボキシヘプタン酸合わせて12mol%、3-ヒドロキシ-9-メトキシカルボニルノナン酸、3-ヒドロキシ-7-メトキシカルボニルヘプタン酸合わせて6mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)4mol%であることを確認した。
【０５８０】
[実施例３３]
2000ml容振盪フラスコを2本用意し、各々にポリペプトン（和光純薬）0.5wt%、5−フェノキシ吉草酸4mmol/L、セバシン酸モノメチルエステル1mmol/Lを前記M9培地1000mlに溶解し、2000ml容振盪フラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン０．５％を含むＭ９培地で３０℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ  ＹＮ２株の培養液を５  ｍＬ加え、３０℃、４０時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後凍結乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、５０℃で４８時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。得られたポリマーを秤量した結果、本例では、PHA710mg（乾燥重量）が得られた。
【０５８１】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝71000、重量平均分子量Ｍｗ＝148000であった。
【０５８２】
更に、得られたＰＨＡの構造を特定するため、実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った。
【０５８３】
その結果、化学式（53）で示される3-ヒドロキシ-5-フェノキシ吉草酸ユニット74mol%、化学式（73）で示される3-ヒドロキシ-9-メトキシカルボニルノナン酸ユニット、化学式（74）で示される3-ヒドロキシ-7-メトキシカルボニルヘプタン酸ユニットの二つのユニット合わせて18mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)8mol%を含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることを確認した。
【０５８４】
【化２１４】
2004162044.tif 000215
【０５８５】
【化２１５】
2004162044.tif 000216
【０５８６】
【化２１６】
2004162044.tif 000217
【０５８７】
ここで得られたポリヒドロキシアルカノエートは、次の反応に利用した。
【０５８８】
上記合成したポリヒドロキシアルカノエートのフィルムを作製し、このフィルム500mgをシャーレ上に置き、100ｍｌ0.1Ｎ水酸化ナトリウム水溶液中で5時間静置した。反応終了後、水酸化ナトリウム水溶液を取り除き、ポリマーを100ｍｌ蒸留水で３回洗浄した。ポリマーを200ｍｌ酢酸エチルに溶解させ、次に100ｍｌ1.0Ｎ塩酸水溶液を加えて、１時間室温で攪拌した。ポリマーを抽出し、100ｍｌ蒸留水で洗浄した後、溶媒留去することでポリマーを回収した。その後、減圧乾燥して、目的とするポリマーを370mg得た。
【０５８９】
得られたＰＨＡの平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー(ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ-8220、カラム；東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算)により評価した。その結果、数平均分子量Ｍn＝8700、重量平均分子量Ｍｗ＝30900であった。
【０５９０】
得られたPHAの構造を特定するため、実施例1と同様の条件でNMR分析を行った。
その結果、モノマーユニットとして以下の化学式（53）に示す3−ヒドロキシ−5−フェノキシ吉草酸ユニット、化学式(54)に示す3−ヒドロキシ−9−カルボキシノナン酸ユニット、化学式(55)に示す3−ヒドロキシ−7−カルボキシヘプタン酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体であることが確認された。
【０５９１】
【化２１７】
2004162044.tif 000218
【０５９２】
【化２１８】
2004162044.tif 000219
【０５９３】
【化２１９】
2004162044.tif 000220
【０５９４】
また、得られたポリマーのユニットの割合は、エステル基の減少から算出を行い、その結果、ユニットの割合は、3-ヒドロキシ-5-フェノキシ吉草酸73mol%、3-ヒドロキシ-9-カルボキシノナン酸、3-ヒドロキシ-7-カルボキシヘプタン酸合わせて10mol%、3-ヒドロキシ-9-メトキシカルボニルノナン酸、3-ヒドロキシ-7-メトキシカルボニルヘプタン酸合わせて8mol%、その他(炭素数4〜12の直鎖3−ヒドロキシアルカン酸及び炭素数10若しくは12の3−ヒドロキシアルカ−5−エン酸)9mol%であることを確認した。
【図面の簡単な説明】
【０５９５】
【図１】実施例１で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図２】実施例２で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３】実施例11で取得された化学式(49)に示す３-ヒドロキシ-５-(フェニルスルファニル)吉草酸ユニット、化学式(５)に示す３-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸ユニット、化学式(６)に示す３-ヒドロキシ-８-ノネン酸ユニット、化学式(７)に示す３-ヒドロキシ-６-ヘプテン酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体の1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４】実施例11で取得された化学式(50)に示す３-ヒドロキシ-５-(フェニルスルホニル)吉草酸ユニット、化学式(45)に示す３-ヒドロキシ-９-カルボキシノナン酸ユニット、化学式(46)に示す３-ヒドロキシ-７-カルボキシヘプタン酸ユニット、化学式(47)に示す３-ヒドロキシ-５-カルボキシ吉草酸ユニットを含む、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体の1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図１】
2004162044.tif 000358
【図２】
2004162044.tif 000359
【図３】
2004162044.tif 000360
【図４】
2004162044.tif 000361