(57)【要約】【目的】マツタケ菌糸が土壌の粒の間にまんべんなく増殖しているマツタケの種菌を作製し、それをアカマツ山林へ植え込むことで新たな「シロ」を形成させ、マツタケを増産する。【構成】マツタケ子実体が発生するアカマツ山林内の「シロ」と同一の土壌に、水、各種栄養分及びゲル化剤を混ぜ合わせ、その土壌が粒となり、土壌中に空気が混じり込んで隙間ができるようにする。そこに、マツタケ菌糸を植え込み培養して、マツタケ菌糸が土壌の粒の間にまんべんなく増殖したら、それをマツタケの種菌とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
土壌が粒状となり、土壌中に空気が混じり込んで隙間ができるように、少なくとも水、各種栄養分及びゲル化剤の３種を前記土壌と混ぜ合わせることを主要件とし、これらはそれぞれ加える前か、いくつかを混ぜ合わせた後か、又は最終的に全部を混合した後か、このいずれの段階かで滅菌処理し、そこにマツタケ菌糸を植え込み、それらを培養してマツタケの種菌を作製することを特徴としたマツタケの菌種作製法。
【請求項２】
少なくとも水、各種栄養分及びゲル化剤の３種を混ぜ合わせて滅菌した後、それを冷ましてゲル状に固化し、それに滅菌済みの土壌を混ぜ合わせることを特徴とする請求項１記載のマツタケの種菌作製法。
【請求項３】
ゲル化剤として、寒天を用いることを特徴とする請求項１及び請求項２記載のマツタケの種菌作製法。
【請求項４】
用いる寒天の量は水１００ミリリットルに対して寒天１．８グラム以上の割合にすることを特徴とする請求項３記載のマツタケの種菌作製法。
【請求項５】
ゲル化剤として、細菌が生産する多糖類を原料とするものを用いることを特徴とする請求項１及び請求項２記載のマツタケの種菌作製法。
【請求項６】
ゲル化剤として、カラギーナンを用いることを特徴とする請求項１及び請求項２記載のマツタケの種菌作製法。
【請求項７】
ゲル化剤として、ペクチンを用いることを特徴とする請求項１及び請求項２記載のマツタケの種菌作製法。
【請求項８】
土壌として、アカマツ山林内のマツタケの「シロ」と同一の土壌を用いることを特徴とする請求項１及び請求項２記載のマツタケの種菌作製法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は、マツタケ菌糸が土壌の粒の間にまんベんなく増殖しているマツタケの種菌を作製し、それをアカマツ山林へ植え込むことで新たな「シロ」を形成させ、マツタケの増産に結びつけることを可能にした。
【０００２】
【従来の技術】
『［マツタケ］の生物学　補訂版』、小川　真著、築地書館（１９９１年）第３０９頁から第３１０頁に記載されているように、アカマツの山林において、マツタケを増産する試みは今までにいくつか行われてきた。それらの方法は、マツタケの子実体発生を促すことではなく、新たに「シロ」を形成させることに重点が置かれていた。それらは、アカマツの苗を「シロ」の周辺に植えてマツタケ菌糸が付着した「感染苗」を作り、それをアカマツの山林に移植する方法と、マツタケの子実体から胞子を摂取して、それをアカマツの山林に蒔く「胞子散布」の方法である。しかし、「感染苗」及び「胞子散布」のいずれの方法を用いても、マツタケの増産に結びつく顕著な結果は得られておらず、これらの方法は実用的ではなかった。
【０００３】
そこで、マツタケの「シロ」の形成に関する新たな試みとして、次のような特許が出願された。（１）マツタケ菌糸の生育を抑制する微生物の影響を排除して「シロ」を形成させるために、マツタケ菌糸の生育は抑制しないが、その他の微生物の生育を抑制するストレプトマイセス属の放線菌及びコリネバクテリウム属の細菌とマツタケ菌糸の混合微生物を、「シロ」形成の場に適用する方法（特開平５−１５３８５６）、（２）「シロ」をより確実に形成するために、アカマツの根に菌根を形成させる「場」である菌根形成容器内に充填する鉱物質及び「シロ」の形成が行われる土壌を、（１）に記載の混合微生物で処理する方法（特開平５−３１６８７６）、（３）菌根性茸の宿主となる木の根を２月から５月の間に切断して、そこに新たな毛根が生ずる２月から５月の間に、その切断箇所の土壌に菌根性茸の菌を接種して、人工的に「シロ」の形成を行なう方法（特開平５−２６０８４８）、（４）地面を掘削して宿主の木の根を露出させ、その根の表面から木質部に至るまでの切欠部を穿設し、その切欠部ないしその近傍に菌根性茸の菌を接種して、腐葉層を含まない山土でそれらを覆い「シロ」を順調に形成させる方法（特開平１０−１１３０７０）、及び（５）アカマツの木を中心とする円弧上に定角度間隔で針穴を掘り下げ、その一つ置きの針穴にマツタケ菌糸を、残りの針穴に菌糸活性材をそれぞれ充填し、「シロ」を発生させる方法（特開平１１−１０３６６８）である。
【０００４】
ところで、段落番号０００３に記載の（１）〜（５）の全ての方法では、それらに適用するマツタケの種菌が必要となる。マツタケの種菌を作製する方法の特許には、次のような出願がある。（１）破砕パルプの表面に、又は土と破砕パルプとを混合した混合土中に、マツタケ菌糸を植え付けて培養して、マツタケの種菌を作製する方法（特開平５−１２３０５２）、（２）ピートモス及びパルプをそれぞれ単独で又は混合したもの、ピートモス又はパルプのそれぞれに山土やバーミキュライト等を混合したもの、又はピートモス、パルプ、山土及びバーミキュライト等を混合したものを培地の基材として、それらに栄養素と水分を加えて培地とし、これを用いてマツタケの種菌を作製する方法（特開平５−２１１８１９）、（３）切断の仕方が異なる５種の砕木パルプ、又は板紙と段ボール紙を破砕して混合したものを培養体として、それを用いてマツタケの種菌を作製する方法（特開平５−２８４８５３）、（４）各種松の木と各種雑木とを破砕した砕木粒に、各種紙製品に水を加えて破砕した細片紙と土を混合した混合土に、又はその細片紙と大鋸屑を混合したものに、マツタケ菌糸を植え付けて培養し、マツタケの種菌を作製する方法（特開平６−１４６５１）、及び（５）腐葉土、又はそれに大鋸屑、米ヌカ、フスマ、リグニンを単独で、その内の幾つかを又は全てを加えたものに、マツタケ菌糸を植え付けて培養し、マツタケの種菌を作製する方法（特開平１０−２１５６７８）である。更に、マツタケの種菌作製に関する報告としては、『広島県林業技術センター研究報告、第３３号』、衛藤慎也著、（２００１年）第３７頁から第３９頁に記載があり、それはバーミキュライトに培養液を加えて培地とし、それにマツタケ菌糸を接種して培養し、マツタケの種菌を作製する方法である。
【０００５】
しかし、段落番号０００４に記載の全ての方法において、作製されたマツタケの種菌をアカマツ山林へ植え込んで新たな「シロ」を形成させようとした場合、マツタケ菌糸はその種菌内部でまんべんなく増殖はしているが、パルプ、ピートモス、バーミキュライト、細片紙、砕木粒、大鋸屑、米ヌカ、フスマ等と混在した状態であり、これらは天然の「シロ」には全く存在しないものであるため、結果的に天然の「シロ」と同等なものは形成されないことになる。
【０００６】
そこで、パルプ、ピートモス、バーミキュライト、細片紙、砕木粒、大鋸屑、米ヌカ、フスマ等を全く含まずに、「シロ」と同一の土壌だけに水及び各種栄養分を混ぜ合わせて培地とし、それにマツタケ菌糸を植え付けて培養し、その菌糸が土壌の粒の間にまんベんなく増殖したマツタケの種菌を作製することが望まれる。そして、この種菌をアカマツ山林へ植え込めば、天然の「シロ」と同等なものが形成されると考えられる。しかし、実際にこの方法で種菌を作製してみると、培地全体に水が行きわたって土壌中に隙間ができず、そこでマツタケ菌糸を培養しても、その培地の表面だけでその菌糸が増殖してしまい、土壌中にその菌糸が伸びていかなかった。また、混ぜ合わせる水の量を少なく調整して、その土壌が粒となり、土壌中に隙間ができる培地にして、それにマツタケ菌糸を植え付けて培養しても、水分含量が少ないためにその菌糸は新たな培地でほとんど増殖できなかった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、「シロ」と同一の土壌、水及び各種栄養分を培地の基材とした時に、その土壌が粒となり、土壌中に空気が混じり込んで隙間ができるようにして、そこでマツタケ菌糸を培養し、土壌の粒の間にその菌糸がまんべんなく増殖することが望まれる。
【０００８】
本発明は、マツタケ菌糸が土壌の粒の間にまんべんなく増殖しているマツタケの種菌作製を可能にした。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明は、マツタケの「シロ」と同一の土壌を用いて、その土壌が粒となり、土壌中に空気が混じり込んで隙間ができるように、水、各種栄養分及びゲル化剤をその土壌と混ぜ合わせる。そしてそこにマツタケ菌糸を植え込み培養すると、その菌糸が土壌の粒の間にまんべんなく増殖しているマツタケの種菌が作製できる。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明を以下の実施例により更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００１１】
【実施例１】
アカマツの山林から、まだかさが開ききらないマツタケの子実体を摂取した。この子実体のかさの一部から、マツタケの胞子を２％寒天上に降らせた。その寒天を切り出して２％寒天を含むＨａｍａｄａ培地（水１リットルに乾燥酵母５グラム及びブドウ糖２０グラムを溶かし、ｐＨを５．０に調節した）上に置き、それを２２℃の温度下で約４カ月培養してマツタケ菌糸を得た。２％寒天を含むＨａｍａｄａ培地をプラスチック製の滅菌済みペトリ皿（直径：９０ｍｍ、高さ：２０ｍｍ）の中で固め、その培地上でマツタケ菌子を２２°Ｃの温度下で継代培養し続けた。
【００１２】
ゲル化剤として寒天を用いた。そして１．０％、１．２％、１．４％、１．６％、１．８％、２．０％、３．０％、４．０％又は５．０％寒天を含むＨａｍａｄａ培地（段落番号００１１に記載）８０ｍｌをそれぞれポリカーボネイト製の蓋付き培養容器（直径：７８ｍｍ、高さ：６９ｍｍ）に入れて、１２１℃で１５分間滅菌処理した後、それらを冷まして培地を固めた。マツタケの「シロ」と同一の土壌を１２１℃で１８０分間滅菌処理した後冷まして、培地の入ったその培養容器の中へ８５グラムづつ入れた。固まったそれらの培地を滅菌済みの薬サジで小さく破砕しながら、その培養容器の中でその土壌と混ぜ合わせた。寒天の濃度が１．８％以上のＨａｍａｄａ培地の場合、その土壌が粒状となり、土壌中に空気が混じり込んで隙間ができた。一方、寒天の濃度が１．６％以下の培地の場合、土壌全体に水が行きわたって、土壌中に隙間はできなかった。段落番号００１１に記載されたようにして植え継いで約３ヶ月間１枚のペトリ皿中で培養したマツタケ菌糸から、その菌糸全部を切り出し、それらの土壌上にそれぞれ置いて、２２°Ｃの温度下で約３ヶ月間それぞれ培養した。その結果、寒天の濃度が１．８％以上のＨａｍａｄａ培地の場合、マツタケ菌糸が土壌の粒の間にまんべんなく増殖して、このようなマツタケの種菌を作製することができた。しかし、寒天の濃度が１．６％以下の培地の場合、その土壌の表面だけでマツタケ菌糸が増殖してしまい、土壌中にその菌糸が全く伸びていかなかった。
【００１３】
【実施例２】
ゲル化剤として寒天を用いた。そして２．０％寒天を含むＨａｍａｄａ培地（段落番号００１１に記載）８０ｍｌを、段落番号００１２に記載のポリカーボネイト製の培養容器に入れて、１２１℃で１５分間滅菌処理した後、冷ましてその培地を固めた。（１）マツタケの「シロ」と同一の土壌、（２）アカマツ山林の上部腐葉土又は（３）同山林の下部腐葉土を、１２１℃で１８０分間それぞれ滅菌処理した後冷ました。培地の入ったその培養容器の中へ、それらの土壌８５グラムをそれぞれ入れた。固まったＨａｍａｄａ培地を滅菌済みの薬サジで小さく破砕しながら、その培養容器の中でそれらの土壌とそれぞれ混ぜ合わせた。すると、それらの土壌はそれぞれ粒状となり、土壌中に空気が混じり込んで隙間ができた。段落番号００１１に記載されたようにして植え継いで約３ヶ月間１枚のペトリ皿中で培養したマツタケ菌糸から、その菌糸全部を切り出し、それらの土壌中にそれぞれ入れて、２２°Ｃの温度下で約３ヶ月間それぞれ培養した。その結果、（１）マツタケの「シロ」と同一の土壌を用いた場合、マツタケ菌糸は土壌の粒の間にまんべんなく増殖してその土壌全体に広がり、このようなマツタケの種菌を作製することができた。一方、（２）アカマツ山林の上部腐葉土又は（３）同山林の下部腐葉土を用いた場合は、マツタケ菌糸はそれらの土壌中でそれぞれ少しだけ増殖した。
【００１４】
【実施例３】
ゲル化剤として和光純薬工業（株）が植物組織培養用として市販しているゲランガムを用いた。これは、細菌のプソイドモナス　エローディア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｅｌｏｄｅａｅ）が菌体外に生産する多糖類を脱アセチル処理後に精製し乾燥粉末にしたものである。
【００１５】
このゲランガムを１．０％、１．５％又は２．０％を含むＰＧＹ改変培地（水１リットルに乾燥酵母２グラム、ブドウ糖２０グラム、ポリペプトン２グラム、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ２グラム及びＫＨ２ＰＯ４２グラムを溶かし、ｐＨを５．０に調節した）８０ｍｌを、段落番号００１２に記載のポリカーボネイト製の培養容器に入れて、１２１℃で１５分間滅菌処理した後、冷ましてその培地を固めた。マツタケの「シロ」と同一の土壌を１２１℃で１８０分間滅菌処理した後冷まして、培地の入ったその培養容器の中へ８５グラムづつ入れた。固まったＰＧＹ改変培地を滅菌済みの薬サジで小さく破砕しながら、その培養容器の中でそれらの土壌とそれぞれ混ぜ合わせた。すると、全濃度のゲランガムを用いた場合で、それらの土壌はそれぞれ粒状となり、土壌中に空気が混じり込んで隙間ができた。段落番号００１１に記載されたようにして植え継いで約３ヶ月間１枚のペトリ皿中で培養したマツタケ菌糸から、その菌糸全部を切り出し、それらの土壌中にそれぞれ入れて、２２°Ｃの温度下で約３ヶ月間それぞれ培養した。その結果、全濃度のゲランガムを用いた場合で、マツタケ菌糸は土壌の粒の間にまんべんなく増殖してその土壌全体に広がり、このようなマツタケの種菌を作製することができた。
【００１６】
【実施例４】
ゲル化剤としてカラギーナン（Ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）を用いた。このカラギーナンの、３．０％又は５．０％カラギーナンを含むＰＧＹ改変培地（段落番号００１５に記載）８０ｍｌを、段落番号００１２に記載のポリカーボネイト製の培養容器に入れて、１２１℃で１５分間滅菌処理した後、冷ましてその培地を固めた。マツタケの「シロ」と同一の土壌を１２１℃で１８０分間滅菌処理した後冷まして、培地の入ったその培養容器の中へ８５グラムづつ入れた。固まったＰＧＹ改変培地を滅菌済みの薬サジで小さく破砕しながら、その培養容器の中でそれらの土壌とそれぞれ混ぜ合わせた。すると、両濃度のカラギーナンを用いた場合で、それらの土壌はそれぞれ粒状となり、土壌中に空気が混じり込んで隙間ができた。段落番号００１１に記載されたようにして植え継いで約３ヶ月間１枚のペトリ皿中で培養したマツタケ菌糸から、その菌糸全部を切り出し、それらの土壌中にそれぞれ入れて、２２°Ｃの温度下で約３ヶ月間それぞれ培養した。その結果、両濃度のカラギーナンを用いた場合で、マツタケ菌糸は土壌の粒の間にまんべんなく増殖してその土壌全体に広がり、このようなマツタケの種菌を作製することができた。
【００１７】
【実施例５】
ゲル化剤として、ペクチン（Ｐｅｃｔｉｎ）を用いた。このペクチンの１．０％、３．０％又は５．０％ペクチンを含むＰＧＹ改変培地（段落番号００１５に記載）８０ｍｌを、段落番号００１２に記載のポリカーボネイト製の培養容器に入れて、１２１℃で１５分間滅菌処理した後、冷ましてその培地を固めた。マツタケの「シロ」と同一の土壌を１２１℃で１８０分間滅菌処理した後冷まして、培地の入ったその培養容器の中へ８５グラムづつ入れた。固まったＰＧＹ改変培地を滅菌済みの薬サジで小さく破砕しながら、その培養容器の中でそれらの土壌とそれぞれ混ぜ合わせた。すると、全濃度のペクチンを用いた場合で、それらの土壌はそれぞれ粒状となり、土壌中に空気が混じり込んで隙間ができた。段落番号００１１に記載されたようにして植え継いで約３ヶ月間１枚のペトリ皿中で培養したマツタケ菌糸から、その菌糸全部を切り出し、それらの土壌中にそれぞれ入れて、２２°Ｃの温度下で約３ヶ月間それぞれ培養した。その結果、全濃度のペクチンを用いた場合で、マツタケ菌糸は土壌の粒の間にまんべんなく増殖してその土壌全体に広がり、このようなマツタケの種菌を作製することができた。
【００１８】
【発明の効果】
パルプ、ピートモス、バーミキュライト、細片紙、砕木粒、大鋸屑、米ヌカ、フスマ等を全く含まずに、「シロ」と同一の土壌中で、マツタケ菌糸がその土壌の粒の間にまんべんなく増殖したマツタケの種菌を作製することは今までできなかった。しかし、本発明によって、このような種菌が作製できた。そこで、この種菌をアカマツ山林へ植え込めば、天然の「シロ」と同等なものが形成されると考えられ、結果的にマツタケの増産が大いに期待できる。