(57)【要約】【課題】炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｂｏｗｅｌ　ｄｉｓｅａｓｅ；　ＩＢＤ）を反映する疾患マーカー、該疾患マーカーを利用したＩＢＤの検出方法、該疾患の改善に有用な薬物のスクリーニング方法を提供する。【解決手段】ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子の塩基配列、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子の塩基配列、Ｍｉｇ遺伝子の塩基配列、ＮＲＧ−２遺伝子の塩基配列、ヘキソキナーゼ　３遺伝子の塩基配列、ＨＭ７４遺伝子の塩基配列、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子の塩基配列、ＬＰＡＰ遺伝子の塩基配列、Ｍｉｐ−１β遺伝子の塩基配列、Ｌ−セレクチン遺伝子の塩基配列、ＥＧＦＬ６遺伝子の塩基配列、ＩＤＯ遺伝子の塩基配列、ＩＬ−８遺伝子の塩基配列、ＣＤ１１ｃ遺伝子の塩基配列またはＴＬＲ２遺伝子の塩基配列において、連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／または該ポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドを、ＩＢＤの疾患マーカーとして利用する。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子の塩基配列、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子の塩基配列、Ｍｉｇ遺伝子の塩基配列、ＮＲＧ−２遺伝子の塩基配列、ヘキソキナーゼ　３遺伝子の塩基配列、ＨＭ７４遺伝子の塩基配列、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子の塩基配列、ＬＰＡＰ遺伝子の塩基配列、Ｍｉｐ−１β遺伝子の塩基配列、Ｌ−セレクチン遺伝子の塩基配列、ＥＧＦＬ６遺伝子の塩基配列、ＩＤＯ遺伝子の塩基配列、ＩＬ−８遺伝子の塩基配列、ＣＤ１１ｃ遺伝子の塩基配列またはＴＬＲ２遺伝子の塩基配列において、連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／または該ポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドからなる、炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｂｏｗｅｌ　ｄｉｓｅａｓｅ；　以下ＩＢＤ）の疾患マーカー。
【請求項２】
ＩＢＤの検出においてプローブまたはプライマーとして使用される請求項１記載の疾患マーカー。
【請求項３】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＩＢＤの検出方法：（ａ）被験者の生体試料から調製されたＲＮＡまたはそれから転写された相補的ポリヌクレオチドと請求項１または２に記載の疾患マーカーとを結合させる工程、（ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試料由来のＲＮＡまたは該ＲＮＡから転写された相補的ポリヌクレオチドを、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の測定結果に基づいて、ＩＢＤの罹患を判断する工程。
【請求項４】
工程（ｃ）におけるＩＢＤの罹患の判断が、被験者について得られる測定結果を正常者について得られる測定結果と対比して、疾患マーカーへの結合量が増大していることを指標として行われる、請求項３に記載のＩＢＤの検出方法。
【請求項５】
ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２を認識する抗体を含有する、ＩＢＤの疾患マーカー。
【請求項６】
ＩＢＤの検出においてプローブとして使用される請求項５記載の疾患マーカー。
【請求項７】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含むＩＢＤの検出方法：
（ａ）被験者の生体試料から調製されたタンパク質と請求項５または６に記載の疾患マーカーとを結合させる工程、
（ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試料由来のタンパク質を、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の測定結果に基づいて、ＩＢＤの罹患を判断する工程。
【請求項８】
工程（ｃ）におけるＩＢＤの罹患の判断が、被験者について得られる測定結果を正常者について得られる測定結果と対比して、疾患マーカーへの結合量が増大していることを指標として行われる請求項７記載のＩＢＤの検出方法。
【請求項９】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質とＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞におけるＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応する遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現量を減少させる被験物質を選択する工程。
【請求項１０】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質とＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞における　ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応するタンパク質の発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現量を減少させる被験物質を選択する工程。
【請求項１１】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の機能または活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質を　ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２に接触させる工程、
（ｂ）上記（ａ）の工程に起因して生じるＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の機能または活性を測定し、該機能または活性を被験物質を接触させない場合のＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の機能または活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の機能または活性の低下をもたらす被験物質を選択する工程。
【請求項１２】
ＩＢＤの改善または治療剤の有効成分を探索するための方法である、請求項９乃至１１のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項１３】
ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質を有効成分とする、ＩＢＤの改善または治療剤。
【請求項１４】
ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質が請求項９記載のスクリーニング法により得られるものである、請求項１３記載のＩＢＤの改善または治療剤。
【請求項１５】
ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現量、機能または活性を抑制する物質を有効成分とする、ＩＢＤの改善または治療剤。
【請求項１６】
ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現量、機能または活性を抑制する物質が、請求項１０または１１に記載のスクリーニング法により得られるものである、請求項１５記載のＩＢＤの改善または治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｂｏｗｅｌ　ｄｉｓｅａｓｅ；　以下ＩＢＤと略する）の診断に有用な疾患マーカーに関する。より詳細には、本発明は、ＩＢＤの診断においてプライマーまたは検出プローブとして有効に利用できる疾患マーカーに関する。また本発明は、かかる疾患マーカーを利用したＩＢＤの検出方法（診断方法）に関する。
【０００２】
さらに本発明は、上記疾患マーカーを利用して、ＩＢＤの改善薬または治療薬として有効な物質をスクリーニングする方法、並びに該方法によって得られる上記物質を有効成分とするＩＢＤの改善薬または治療薬に関する。
【０００３】
【従来の技術】
腸は、生体の生命活動に必須である栄養分・水分を消化吸収する器官である。一方で病原体などの異物を排除するための免疫防御機能も備えており相反する性質をバランスよく制御することで生命の維持を担っている器官でもある。しかしこれら機能バランスに異常が生じると、この動的平衡状態が破綻し様々な腸疾患が引き起こされることが知られている。特に近年患者数が増加してきている炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｂｏｗｅｌ　ｄｉｓｅａｓｅ；　ＩＢＤと略される）は、スルファサラジン等の５−アミノサリチル酸製剤やステロイド等の薬物療法では満足できる治療効果が得られておらず、そのため腸切除手術、白血球除去等で治療している状態であり、よりよい薬物が必要とされている。
【０００４】
ＩＢＤは、その病態から潰瘍性大腸炎（ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ　ｃｏｌｉｔｉｓ；　ＵＣと略される）とクローン病（Ｃｒｏｈｎ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ；　ＣＤと略される）とに分類されている。近年、抗ＴＮＦ抗体などのタンパク製剤がクローン病の治療剤として有効であることが知られている。しかしながら高価な薬剤でありステロイド耐性の患者のみの適応であり、また潰瘍性大腸炎に対する効果も弱いことから、未だ満足できる医療状況に無いのが現状である。
さらに、個々の患者によって薬物療法への反応が異なっており、現在用いられている治療薬すべてにおいて薬物療法に反応しないＩＢＤ患者が存在している。また、遺伝子多型と疾患感受性の解析からインターロイキン−１の多型やＮＯＤ２遺伝子の多型が疾患原因遺伝子と考えられるケースがあり、基礎医学的な研究においても個々の患者による病態発症の遺伝的背景に差異のあることが明らかになりつつある。
【０００５】
最近の医療現場では、ＩＢＤに限らず、個々の患者の症状に合わせて治療法を的確に選択することが望まれるようになってきている。高齢化社会でのＱＯＬ（Ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　ｌｉｆｅ）向上の必要性が認識されてきた近年では、特に、万人に共通した治療ではなく、個々の患者の症状に合わせて適切な治療が施されることが強く求められている。このような所謂テイラーメイド治療を行うためには、個々の疾患について患者の症状やその原因（遺伝的背景）を的確に反映する疾患マーカーが有用であり、その探索並びに開発を目指した研究が精力的に行われているのが現状である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ＩＢＤの診断及び治療に有用な疾患マーカーを提供することを目的とする。より詳細には、本発明はＩＢＤを特異的に反映した疾患マーカーを提供することを目的とする。さらに本発明は該疾患マーカーを利用したＩＢＤの検出方法（遺伝子診断方法）、該疾患の改善または治療に有用な薬物をスクリーニングする方法、並びに該疾患の改善または治療に有用な薬物を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を行っていたところ、従来はＩＢＤとの関連が明らかではなかった以下の遺伝子：ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子が、ＩＢＤ患者（潰瘍性大腸炎及びクローン病）の結腸病変組織において、結腸正常組織（正常人の結腸組織）と比較して有意に発現上昇していることを見出した。さらにこれらの遺伝子は、ＩＢＤ病態関連組織である消化管系組織、およびＩＢＤの発症機構に関与する免疫系組織以外の臓器では、ほとんど発現していないことを見出した。
【０００８】
以上のように本発明者らは、消化管が傷害する自己免疫疾患と考えられているＩＢＤにおいて、これらＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子、及びこれらの発現産物（タンパク質）が、優れた疾患マーカーであるとの知見を得た。さらに、これら遺伝子の発現抑制、または当該遺伝子によりコードされるタンパク質の発現抑制や機能（活性）抑制を指標としたスクリーニング系は、ＩＢＤの予防、改善または治療薬の探索に有効であるとの知見を得た。
本発明はかかる知見を基礎にして完成するに至ったものである。
【０００９】
すなわち、本発明は、下記に掲げるものである：
（１）　ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子の塩基配列、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子の塩基配列、Ｍｉｇ遺伝子の塩基配列、ＮＲＧ−２遺伝子の塩基配列、ヘキソキナーゼ　３遺伝子の塩基配列、ＨＭ７４遺伝子の塩基配列、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子の塩基配列、ＬＰＡＰ遺伝子の塩基配列、Ｍｉｐ−１β遺伝子の塩基配列、Ｌ−セレクチン遺伝子の塩基配列、ＥＧＦＬ６遺伝子の塩基配列、ＩＤＯ遺伝子の塩基配列、ＩＬ−８遺伝子の塩基配列、ＣＤ１１ｃ遺伝子の塩基配列またはＴＬＲ２遺伝子の塩基配列において、連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／または該ポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドからなる、ＩＢＤの疾患マーカー、
（２）　ＩＢＤの検出においてプローブまたはプライマーとして使用される前記（１）記載の疾患マーカー、
（３）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＩＢＤの検出方法：
（ａ）被験者の生体試料から調製されたＲＮＡまたはそれから転写された相補的ポリヌクレオチドと前記（１）または（２）に記載の疾患マーカーとを結合させる工程、
（ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試料由来のＲＮＡまたは該ＲＮＡから転写された相補的ポリヌクレオチドを、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の測定結果に基づいて、ＩＢＤの罹患を判断する工程、
（４）　工程（ｃ）におけるＩＢＤの罹患の判断が、被験者について得られる測定結果を正常者について得られる測定結果と対比して、疾患マーカーへの結合量が増大していることを指標として行われる、前記（３）に記載のＩＢＤの検出方法、
（５）　ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２を認識する抗体を含有する、ＩＢＤの疾患マーカー、
（６）　ＩＢＤの検出においてプローブとして使用される前記（５）記載の疾患マーカー、
（７）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含むＩＢＤの検出方法：
（ａ）被験者の生体試料から調製されたタンパク質と前記（５）または（６）に記載の疾患マーカーとを結合させる工程、
（ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試料由来のタンパク質を、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の測定結果に基づいて、ＩＢＤの罹患を判断する工程、
（８）　工程（ｃ）におけるＩＢＤの罹患の判断が、被験者について得られる測定結果を正常者について得られる測定結果と対比して、疾患マーカーへの結合量が増大していることを指標として行われる前記（７）記載のＩＢＤの検出方法、
（９）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質とＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞におけるＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応する遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現量を減少させる被験物質を選択する工程、
（１０）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質とＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞における　ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応するタンパク質の発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現量を減少させる被験物質を選択する工程、
（１１）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の機能または活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質を　ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２に接触させる工程、
（ｂ）上記（ａ）の工程に起因して生じるＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の機能または活性を測定し、該機能または活性を被験物質を接触させない場合のＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の機能または活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の機能または活性の低下をもたらす被験物質を選択する工程、
（１２）　ＩＢＤの改善または治療剤の有効成分を探索するための方法である、前記（９）乃至（１１）のいずれかに記載のスクリーニング方法、
（１３）　ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質を有効成分とする、ＩＢＤの改善または治療剤、
（１４）　ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質が前記（９）記載のスクリーニング法により得られるものである、前記（１３）記載のＩＢＤの改善または治療剤、
（１５）　ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現量、機能または活性を抑制する物質を有効成分とする、ＩＢＤの改善または治療剤、ならびに
（１６）　ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現量、機能または活性を抑制する物質が、前記（１０）または（１１）に記載のスクリーニング法により得られるものである、前記（１５）記載のＩＢＤの改善または治療剤。
【００１０】
上記のように、本発明によれば、ＩＢＤの疾患マーカー、該疾患の検出系、ＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子またはＴＬＲ２遺伝子の発現を抑制する物質のスクリーニング系、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の発現、機能もしくは活性を抑制する物質のスクリーニング系、およびこれらの物質を有効成分とするＩＢＤの改善および治療剤が提供される。
【００１１】
本発明は、前述するように、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子が、ＩＢＤ患者（潰瘍性大腸炎及びクローン病）の結腸病変組織において、結腸正常組織（正常者の結腸組織）と比較して有意に発現上昇しており、またこれらの遺伝子は、正常組織においては、ＩＢＤ病態関連組織である消化管組織、およびＩＢＤの発症機構に関与する免疫系組織以外の臓器では、ほとんど発現していないことを見出したことに基づくものである。従って、これらの遺伝子及びその発現産物〔タンパク質、（ポリ）（オリゴ）ペプチド〕は、ＩＢＤの解明、診断、予防及び治療に有効に利用することができ、かかる利用によって医学並びに臨床学上、有用な情報や手段を得ることができる。さらに、個体（生体組織）における、上記遺伝子の発現またはその発現産物の検出、または該遺伝子の変異またはその発現異常の検出は、ＩＢＤの解明や診断に有効に利用することができる。
【００１２】
また、これらの遺伝子およびその発現産物並びにそれらからの派生物（例えば、遺伝子断片、抗体など）は、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子またはＴＬＲ２遺伝子の発現を抑制する物質、およびＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の発現、機能もしくは活性を抑制する物質のスクリーニングに有用であり、該スクリーニングによって得られる物質は、ＩＢＤの予防、改善および治療薬として有効である。更に、これらの遺伝子のアンチセンス核酸（アンチセンスヌクレオチド）は、ＩＢＤの予防、改善及び治療薬として有用である。
【００１３】
【発明の実施の形態】
以下、本明細書において、アミノ酸、（ポリ）ペプチド、（ポリ）ヌクレオチドなどの略号による表示は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢの規定〔ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ，　Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ．，　１３８：　９　（１９８４）〕、「塩基配列又はアミノ酸配列を含む明細書等の作成のためのガイドライン」（日本国特許庁編）、および当該分野における慣用記号に従う。
【００１４】
本明細書において「遺伝子」または「ＤＮＡ」とは、２本鎖ＤＮＡのみならず、それを構成するセンス鎖およびアンチセンス鎖といった各１本鎖ＤＮＡを包含する趣旨で用いられる。またその長さによって特に制限されるものではない。従って、本明細書において遺伝子（ＤＮＡ）とは、特に言及しない限り、ヒトゲノムＤＮＡを含む２本鎖ＤＮＡおよびｃＤＮＡを含む１本鎖ＤＮＡ（正鎖）並びに該正鎖と相補的な配列を有する１本鎖ＤＮＡ（相補鎖）、およびこれらの断片のいずれもが含まれる。また当該「遺伝子」または「ＤＮＡ」には、特定の塩基配列（配列番号：１，２，３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４及び２９）で示される「遺伝子」または「ＤＮＡ」だけでなく、これらによりコードされるタンパク質と生物学的機能が同等であるタンパク質（例えば同族体（ホモログやスプライスバリアントなど）、変異体及び誘導体）をコードする「遺伝子」または「ＤＮＡ」が包含される。かかる同族体、変異体または誘導体をコードする「遺伝子」または「ＤＮＡ」としては、具体的には、後述の（１−１）項に記載のストリンジェントな条件下で、前記の配列番号：１〜１４及び２９で示されるいずれかの特定塩基配列の相補配列とハイブリダイズする塩基配列を有する「遺伝子」または「ＤＮＡ」を挙げることができる。
【００１５】
例えばヒト由来のタンパク質のホモログをコードする遺伝子としては、当該タンパク質をコードするヒト遺伝子に対応するマウスやラットなど他生物種の遺伝子が例示でき、これらの遺伝子（ホモログ）は、ＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ／）により同定することができる。具体的には、特定ヒト塩基配列をＢＬＡＳＴ（Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ　９０：５８７３−５８７７，　１９９３、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／）にかけて一致する（Ｓｃｏｒｅが最も高く、Ｅ−ｖａｌｕｅが０でかつＩｄｅｎｔｉｔｙが１００％を示す）配列のアクセッション番号を取得する。そのアクセッション番号をＵｎｉＧｅｎｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＵｎｉＧｅｎｅ／）に入力して得られたＵｎｉＧｅｎｅ　Ｃｌｕｓｔｅｒ　ＩＤ（Ｈｓ．で示す番号）をＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅに入力する。結果として得られた他生物種遺伝子とヒト遺伝子との遺伝子ホモログの相関を示したリストから、特定の塩基配列で示されるヒト遺伝子に対応する遺伝子（ホモログ）としてマウスやラットなど他生物種の遺伝子を選抜することができる。なお、遺伝子またはＤＮＡは、機能領域の別を問うものではなく、例えば発現制御領域、コード領域、エキソン、またはイントロンを含むことができる。
【００１６】
従って本明細書において「ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子」または「ＦｃγＲ　ＩＩＩａのＤＮＡ」といった用語を用いる場合、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号２９）で示されるヒトＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：２９に記載のヒトＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０００５６９）や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００１７】
また本明細書において「ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子」または「ＦｃγＲ　ＩＩＩｂのＤＮＡ」といった用語を用いる場合、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号１）で示されるヒトＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：１に記載のヒトＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０００５７０）や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００１８】
また本明細書において「Ｍｉｇ遺伝子」または「ＭｉｇのＤＮＡ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号２）で示されるヒトＭｉｇ遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：２に記載のヒトＭｉｇ遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｓ６０７２８）や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００１９】
また本明細書において「ＮＲＧ−２遺伝子」または「ＮＲＧ−２のＤＮＡ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号３）で示されるヒトＮＲＧ−２遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：３に記載のヒトＮＲＧ−２遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＡＢ００５０６０）や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００２０】
また本明細書において「ヘキソキナーゼ　３遺伝子」または「ヘキソキナーゼ　３のＤＮＡ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号４）で示されるヒトヘキソキナーゼ　３遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：４に記載のヒトヘキソキナーゼ　３遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｕ５１３３３）や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００２１】
また本明細書において「ＨＭ７４遺伝子」または「ＨＭ７４のＤＮＡ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号５）で示されるヒトＨＭ７４遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：５に記載のヒトＨＭ７４遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｄ１０９２３）や、そのマウスホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０３０７０１）、ラットホモログが包含される。
【００２２】
また本明細書において「ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子」または「ＲＥＧ　ＩＩＩのＤＮＡ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号６）で示されるヒトＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：６に記載のヒトＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿００２５８０）や、そのマウスホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０１１０３６）、ラットホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．Ｄ２３６７６）などが包含される。
【００２３】
また本明細書において「ＬＰＡＰ遺伝子」または「ＬＰＡＰのＤＮＡ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号７）で示されるヒトＬＰＡＰ遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：７に記載のヒトＬＰＡＰ遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｘ８１４２２）や、そのマウスホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０１６９３３）、ラットホモログなどが包含される。
【００２４】
また本明細書において「Ｍｉｐ−１β遺伝子」または「Ｍｉｐ−１βのＤＮＡ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号８）で示されるヒトＭｉｐ−１β遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：８に記載のヒトＭｉｐ−１β遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｊ０４１３０）や、そのマウスホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０１３６５２）、ラットホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．Ｕ０６４３４）などが包含される。
【００２５】
また本明細書において「Ｌ−セレクチン遺伝子」または「Ｌ−セレクチンのＤＮＡ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号９）で示されるヒトＬ−セレクチン遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：９に記載のヒトＬ−セレクチン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０００６５５）や、そのマウスホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０１１３４６）、ラットホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０１９１７７）などが包含される。
【００２６】
また本明細書において「ＥＧＦＬ６遺伝子」または「ＥＧＦＬ６のＤＮＡ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号１０）で示されるヒトＥＧＦＬ６遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：１０に記載のヒトＥＧＦＬ６遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０１５５０７）や、そのマウスホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０１９３９７）、ラットホモログなどが包含される。
【００２７】
また本明細書において「ＩＤＯ遺伝子」または「ＩＤＯのＤＮＡ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号１１）で示されるヒトＩＤＯ遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：１１に記載のヒトＩＤＯ遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿００２１６４）や、そのマウスホモログ、ラットホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０２３９７３）などが包含される。
【００２８】
また本明細書において「ＩＬ−８遺伝子」または「ＩＬ−８のＤＮＡ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号１２）で示されるヒトＩＬ−８遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：１２に記載のヒトＩＬ−８遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０００５８４）や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００２９】
また本明細書において「ＣＤ１１ｃ遺伝子」または「ＣＤ１１ｃのＤＮＡ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号１３）で示されるヒトＣＤ１１ｃ遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：１３に記載のヒトＣＤ１１ｃ遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０００８８７）や、そのマウスホモログ、ラットホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０３１６９１）などが包含される。
【００３０】
また本明細書において「ＴＬＲ２遺伝子」または「ＴＬＲ２のＤＮＡ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号１４）で示されるヒトＴＬＲ２遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：１４に記載のヒトＴＬＲ２遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｕ８８８７８）や、そのマウスホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０１１９０５）、ラットホモログなどが包含される。
【００３１】
本明細書において「ポリヌクレオチド」とは、ＲＮＡおよびＤＮＡのいずれをも包含する趣旨で用いられる。なお、上記ＤＮＡには、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡのいずれもが含まれる。また上記ＲＮＡには、ｔｏｔａｌ　ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、及び合成のＲＮＡのいずれもが含まれる。
【００３２】
本明細書において「タンパク質」または「（ポリ）ペプチド」には、特定のアミノ酸配列（配列番号：１５，１６，１７，１８，１９，２０，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８または３０）で示される「タンパク質」または「（ポリ）ペプチド」だけでなく、これらと生物学的機能が同等であることを限度として、その同族体（ホモログやスプライスバリアント）、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などが包含される。ここでホモログとしては、ヒトのタンパク質に対応するマウスやラットなど他生物種のタンパク質が例示でき、これらはＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ／）により同定された遺伝子の塩基配列から演繹的に同定することができる。また変異体には、天然に存在するアレル変異体、天然に存在しない変異体、及び人為的に欠失、置換、付加および挿入されることによって改変されたアミノ酸配列を有する変異体が包含される。なお、上記変異体としては、変異のないタンパク質または（ポリ）ペプチドと、少なくとも７０％、好ましくは８０％、より好ましくは９５％、さらにより好ましくは９７％相同なものを挙げることができる。またアミノ酸修飾体には、天然に存在するアミノ酸修飾体、天然に存在しないアミノ酸修飾体が包含され、具体的にはアミノ酸のリン酸化体が挙げられる。
【００３３】
従って本明細書において「ＦｃγＲ　ＩＩＩａタンパク質」または単に「ＦｃγＲ　ＩＩＩａ」といった用語を用いる場合、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号３０）で示されるヒトＦｃγＲ　ＩＩＩａやその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：３０（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０００５６９）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＦｃγＲ　ＩＩＩａや、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００３４】
また本明細書において「ＦｃγＲ　ＩＩＩｂタンパク質」または単に「ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ」といった用語を用いる場合、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号１５）で示されるヒトＦｃγＲ　ＩＩＩｂやその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：１５（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０００５７０）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＦｃγＲ　ＩＩＩｂや、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００３５】
また本明細書において「Ｍｉｇタンパク質」または単に「Ｍｉｇ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号１６）で示されるヒトＭｉｇやその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：１６（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｓ６０７２８）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＭｉｇや、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００３６】
また本明細書において「ＮＲＧ−２タンパク質」または単に「ＮＲＧ−２」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号１７）で示されるヒトＮＲＧ−２やその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：１７（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＡＢ００５０６０）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＮＲＧ−２や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００３７】
また本明細書において「ヘキソキナーゼ　３タンパク質」または単に「ヘキソキナーゼ　３」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号１８）で示されるヒトヘキソキナーゼ　３やその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：１８（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｕ５１３３３）に記載のアミノ酸配列を有するヒトヘキソキナーゼ　３や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００３８】
また本明細書において「ＨＭ７４タンパク質」または単に「ＨＭ７４」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号１９）で示されるヒトＨＭ７４やその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：１９（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｄ１０９２３）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＨＭ７４や、そのマウスホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０３０７０１）、ラットホモログが包含される。
【００３９】
また本明細書において「ＲＥＧ　ＩＩＩタンパク質」または単に「ＲＥＧ　ＩＩＩ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号２０）で示されるヒトＲＥＧ　ＩＩＩやその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：２０（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿００２５８０）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＲＥＧ　ＩＩＩや、そのマウスホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０１１０３６）、ラットホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．Ｄ２３６７６）などが包含される。
【００４０】
また本明細書において「ＬＰＡＰタンパク質」または単に「ＬＰＡＰ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号２１）で示されるヒトＬＰＡＰやその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：２１（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｘ８１４２２）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＬＰＡＰや、そのマウスホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０１６９３３）、ラットホモログなどが包含される。
【００４１】
また本明細書において「Ｍｉｐ−１βタンパク質」または単に「Ｍｉｐ−１β」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号２２）で示されるヒトＭｉｐ−１βやその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：２２（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｊ０４１３０）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＭｉｐ−１βや、そのマウスホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０１３６５２）、ラットホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．Ｕ０６４３４）などが包含される。
【００４２】
また本明細書において「Ｌ−セレクチンタンパク質」または単に「Ｌ−セレクチン」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号２３）で示されるヒトＬ−セレクチンやその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：２３（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０００６５５）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＬ−セレクチンや、そのマウスホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０１１３４６）、ラットホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０１９１７７）などが包含される。
【００４３】
また本明細書において「ＥＧＦＬ６タンパク質」または単に「ＥＧＦＬ６」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号２４）で示されるヒトＥＧＦＬ６やその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：２４（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０１５５０７）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＥＧＦＬ６や、そのマウスホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０１９３９７）、ラットホモログなどが包含される。
【００４４】
また本明細書において「ＩＤＯタンパク質」または単に「ＩＤＯ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号２５）で示されるヒトＩＤＯやその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：２５（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿００２１６４）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＩＤＯや、そのマウスホモログ、ラットホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０２３９７３）などが包含される。
【００４５】
また本明細書において「ＩＬ−８タンパク質」または単に「ＩＬ−８」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号２６）で示されるヒトＩＬ−８やその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：２６（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０００５８４）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−８や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００４６】
また本明細書において「ＣＤ１１ｃタンパク質」または単に「ＣＤ１１ｃ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号２７）で示されるヒトＣＤ１１ｃやその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：２７（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０００８８７）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＣＤ１１ｃや、そのマウスホモログ、ラットホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０３１６９１）などが包含される。
【００４７】
また本明細書において「ＴＬＲ２タンパク質」または単に「ＴＬＲ２」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号２８）で示されるヒトＴＬＲ２やその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：２８（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｕ８８８７８）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＴＬＲ２や、そのマウスホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿０１１９０５）、ラットホモログなどが包含される。
【００４８】
本明細書でいう「抗体」には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、またはＦａｂフラグメントやＦａｂ発現ライブラリーによって生成されるフラグメントなどのように抗原結合性を有する上記抗体の一部が包含される。
【００４９】
本明細書における「ＩＢＤ」とはｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｂｏｗｅｌ　ｄｉｓｅａｓｅの略であり、日本では炎症性腸疾患と呼ばれる。病態から潰瘍性大腸炎（ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ　ｃｏｌｉｔｉｓ：ＵＣと略される）とクローン病（Ｃｒｏｈｎ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ：ＣＤと略される）に分類されている。
【００５０】
さらに本明細書において「疾患マーカー」とは、ＩＢＤの罹患の有無、罹患の程度若しくは改善の有無や改善の程度を診断するために、またＩＢＤの予防、改善または治療に有用な候補物質をスクリーニングするために、直接または間接的に利用されるものをいう。これには、ＩＢＤの罹患に関連して生体内、特に大腸組織において、発現が変動する遺伝子またはタンパク質を特異的に認識し、また結合することのできる（ポリ）（オリゴ）ヌクレオチドまたは抗体が包含される。これらの（ポリ）（オリゴ）ヌクレオチドおよび抗体は、上記性質に基づいて、生体内、組織や細胞内などで発現した上記遺伝子及びタンパク質を検出するためのプローブとして、また（オリゴ）ヌクレオチドは生体内で発現した上記遺伝子を増幅するためのプライマーとして有効に利用することができる。
【００５１】
さらに本明細書において診断対象となる「生体組織」とは、ＩＢＤに伴い本発明のＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子またはＴＬＲ２遺伝子が発現上昇する組織を指す。具体的には大腸組織及びその周辺組織などを指す。
【００５２】
以下、これらのＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子（以下これらの遺伝子を併せて本発明遺伝子と称する場合がある）、並びにこれらの発現産物（ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃ、およびＴＬＲ２、以下これらのタンパク質を併せて本発明タンパク質と称する場合がある）、およびそれらの派生物について、具体的な用途を説明する。
【００５３】
（１）ＩＢＤの疾患マーカーおよびその応用
（１−１）　ポリヌクレオチド
本発明における　ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子は、ＣＤ　１６ａ遺伝子もしくはＦｃ−ｇａｍｍａ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ＩＩＩａ遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子としては、配列番号２９に示すポリヌクレオチドが知られており（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０００５６９）、その取得方法についてもＰｅｌｔｚ，　Ｇ．　Ａ．　ら、Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　Ｕ．Ｓ．Ａ．，　８６，　１０１３−１０１７，　１９８９　に記載されるように公知である。
【００５４】
本発明におけるＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子は、ＣＤ　１６ｂ遺伝子もしくはＦｃ−ｇａｍｍａ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ＩＩＩｂ遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子としては、配列番号１に示すポリヌクレオチドが知られており（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０００５７０）、その取得方法についてもＲａｖｅｔｃｈ，Ｊ．Ｖ．　ら，　Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　１７０，　４８１−４９７，　１９８９に記載されるように公知である。
【００５５】
本発明におけるＭｉｇ遺伝子はｍｏｎｏｋｉｎｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｇａｍｍａ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ遺伝子もしくはＣＸＣＬ９遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＭｉｇ遺伝子としては、配列番号２に示すポリヌクレオチドが知られており（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｓ６０７２８）、その取得方法についてもＦａｒｂｅｒ，Ｊ．Ｍ．　ら，　Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ｒｅｓ．　Ｃｏｍｍｕｎ．，　１９２，　２２３−２３０，　１９９３に記載されるように公知である。
【００５６】
本発明におけるＮＲＧ−２遺伝子はｎｅｕｒｅｇｕｌｉｎ　２遺伝子もしくはＮＴＡＫ遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＮＲＧ−２遺伝子としては、配列番号３に示すポリヌクレオチドが知られており（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＡＢ００５０６０）、その取得方法についてもＣａｒｒａｗａｙ，Ｋ．Ｌ．　ＩＩＩ　ら，　Ｎａｔｕｒｅ，　３８７，　５１２−５１６，　１９９７に記載されるように公知である。
【００５７】
本発明におけるヘキソキナーゼ　３（ｈｅｘｏｋｉｎａｓｅ　３）遺伝子は公知の遺伝子である。例えばヒト由来のヘキソキナーゼ　３遺伝子としては、配列番号４に示すポリヌクレオチドが知られており（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｕ５１３３３）、その取得方法についてもＦｕｒｕｔａ，Ｈ．　ら，　Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，　３６，　２０６−２０９，　１９９６に記載されるように公知である。
【００５８】
本発明におけるＨＭ７４遺伝子はｃｈｅｍｏｋｉｎｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ＨＭ７４遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＨＭ７４遺伝子としては、配列番号５に示すポリヌクレオチドが知られており（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｄ１０９２３）、その取得方法についてもＮｏｍｕｒａ，Ｈ．　ら，　Ｉｎｔ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　５，　１２３９−１２４９，　１９９３に記載されるように公知である。
【００５９】
本発明におけるＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子はｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子としては、配列番号６に示すポリヌクレオチドが知られており（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿００２５８０）、その取得方法についてもＤｕｓｅｔｔｉ，Ｎ．Ｊ．　ら，　Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，　１９，　１０８−１１４，　１９９４に記載されるように公知である。
【００６０】
本発明におけるＬＰＡＰ遺伝子は、Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ遺伝子、もしくはｐｒｏｔｅｉｎ−ｔｙｒｏｓｉｎｅ　ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｔｙｐｅ　Ｃ　ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＬＰＡＰ遺伝子としては、配列番号７に示すポリヌクレオチドが知られており（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｘ８１４２２）、その取得方法についてもＳｃｈｒａｖｅｎ，Ｂ．　ら，　Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２６９，　２９１０２−２９１１１，　１９９４に記載されるように公知である。
【００６１】
本発明におけるＭｉｐ−１β遺伝子はｓｍａｌｌ　ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ　Ａ４遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＭｉｐ−１β遺伝子としては、配列番号８に示すポリヌクレオチドが知られており（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｊ０４１３０）、その取得方法についてもＬｉｐｅｓ，Ｍ．Ａ．　ら，　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．，　８５，　９７０４−９７０８，　１９８８に記載されるように公知である。
【００６２】
本発明におけるＬ−セレクチン（ｓｅｌｅｃｔｉｎ　Ｌ）遺伝子は公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＬ−セレクチン遺伝子としては、配列番号９に示すポリヌクレオチドが知られており（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０００６５５）、その取得方法についてもＳｉｅｇｅｌｍａｎ，Ｍ．Ｈ．　ら，　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．，　８６，　５５６２−５５６６，　１９８９に記載されるように公知である。
【００６３】
本発明におけるＥＧＦＬ６遺伝子はｅｐｉｄｅｒｍａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ−ｌｉｋｅ　６遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＥＧＦＬ６遺伝子としては、配列番号１０に示すポリヌクレオチドが知られており（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０１５５０７）、その取得方法についてもＹｅｕｎｇ，Ｇ．　ら，　Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，　６２，　３０４−３０７，　１９９９に記載されるように公知である。
【００６４】
本発明におけるＩＤＯ遺伝子はｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ　２，３−ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＩＤＯ遺伝子としては、配列番号１１に示すポリヌクレオチドが知られており（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿００２１６４）、その取得方法についてもＤａｉ，Ｗ．　ら，　Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ｒｅｓ．　Ｃｏｍｍｕｎ．，　１６８，　１−８，　１９９０に記載されるように公知である。
【００６５】
本発明におけるＩＬ−８遺伝子はｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　８遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＩＬ−８遺伝子としては、配列番号１２に示すポリヌクレオチドが知られており（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０００５８４）、その取得方法についてもＳｃｈｍｉｄ，Ｊ．　ら，　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　１３９，　２５０−２５６，　１９８７に記載されるように公知である。
【００６６】
本発明におけるＣＤ１１ｃ遺伝子はｌｅｕｋｏｃｙｔｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｐ１５０，９５　ａｌｐｈａ　ｓｕｂｕｎｉｔ遺伝子、もしくはｉｎｔｅｇｒｉｎ　ａｌｐｈａ−ｘ遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＣＤ１１ｃ遺伝子としては、配列番号１３に示すポリヌクレオチドが知られており（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０００８８７）、その取得方法についてもＣｏｒｂｉ，Ａ．Ｌ．　ら，　ＥＭＢＯ　Ｊ．，　６，　４０２３−４０２８，　１９８７に記載されるように公知である。
【００６７】
本発明におけるＴＬＲ２遺伝子はｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　２遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＴＬＲ２遺伝子としては、配列番号１４に示すポリヌクレオチドが知られており（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｕ８８８７８）、その取得方法についてもＲｏｃｋ，Ｆ．Ｌ．　ら，　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．，　９５，　５８８−５９３，　１９９８に記載されるように公知である。
【００６８】
本発明は、前述するように、ＩＢＤに罹患した患者の大腸（結腸）組織において、正常大腸（結腸）組織に比して、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子、およびＴＬＲ２遺伝子が特異的に発現上昇しているという知見を発端に、これらの遺伝子発現の有無や発現の程度を検出することによって上記ＩＢＤの罹患の有無や罹患の程度が特異的に検出でき、該疾患の診断を正確に行うことができるという知見に基づくものである。
【００６９】
上記ポリヌクレオチドは、従って、被験者における上記遺伝子の発現の有無またはその程度を検出することによって、該被験者がＩＢＤに罹患しているか否かまたはその罹患の程度を診断することのできるツール（疾患マーカー）として有用である。
また上記ポリヌクレオチドは、後述の（３−１）項に記載するようなＩＢＤの予防、改善または治療に有用な候補物質のスクリーニングにおいて、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子、またはＴＬＲ２遺伝子の発現変動を検出するためのスクリーニングツール（疾患マーカー）としても有用である。
【００７０】
本発明の疾患マーカーは、前記ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子、またはＴＬＲ２遺伝子の塩基配列において、連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／またはそれに相補的なポリヌクレオチドからなることを特徴とするものである。
【００７１】
具体的には、本発明の疾患マーカーは、配列番号２９に記載のＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子の塩基配列、配列番号１に記載のＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子の塩基配列、配列番号２に記載のＭｉｇ遺伝子の塩基配列、配列番号３に記載のＮＲＧ−２遺伝子の塩基配列、配列番号４に記載のヘキソキナーゼ　３遺伝子の塩基配列、配列番号５に記載のＨＭ７４遺伝子の塩基配列、配列番号６に記載のＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子の塩基配列、配列番号７に記載のＬＰＡＰ遺伝子の塩基配列、配列番号８に記載のＭｉｐ−１β遺伝子の塩基配列、配列番号９に記載のＬ−セレクチン遺伝子の塩基配列、配列番号１０に記載のＥＧＦＬ６遺伝子の塩基配列、配列番号１１に記載のＩＤＯ遺伝子の塩基配列、配列番号１２に記載のＩＬ−８遺伝子の塩基配列、配列番号１３に記載のＣＤ１１ｃ遺伝子の塩基配列、または配列番号１４に記載のＴＬＲ２遺伝子の塩基配列において、連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／またはそれに相補的なポリヌクレオチドからなるものを挙げることができる。
【００７２】
ここで相補的なポリヌクレオチド（相補鎖、逆鎖）とは、前記ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子、またはＴＬＲ２遺伝子の塩基配列からなるポリヌクレオチドの全長配列、または該塩基配列において少なくとも連続した１５塩基長の塩基配列を有するその部分配列（ここでは便宜上、これらを「正鎖」ともいう）に対して、Ａ：ＴおよびＧ：Ｃといった塩基対関係に基づいて、塩基的に相補的な関係にあるポリヌクレオチドを意味するものである。ただし、かかる相補鎖は、対象とする正鎖の塩基配列と完全に相補配列を形成する場合に限らず、対象とする正鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズすることができる程度の相補関係を有するものであってもよい。なお、ここでストリンジェントな条件は、Ｂｅｒｇｅｒ　ａｎｄ　Ｋｉｍｍｅｌ　（１９８７，　Ｇｕｉｄｅ　ｔｏ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，　Ｖｏｌ．　１５２，　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ　ＣＡ）　に教示されるように、複合体或いはプローブを結合する核酸の融解温度（Ｔｍ）に基づいて決定することができる。例えばハイブリダイズ後の洗浄条件として、通常「１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、３７℃」程度の条件を挙げることができる。相補鎖はかかる条件で洗浄しても対象とする正鎖とハイブリダイズ状態を維持するものであることが好ましい。特に制限されないが、より厳しいハイブリダイズ条件として「０．５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、４２℃」程度、さらに厳しいハイブリダイズ条件として「０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃」程度の洗浄条件を挙げることができる。具体的には、このような相補鎖として、対象の正鎖の塩基配列と完全に相補的な関係にある塩基配列からなる鎖、並びに該鎖と少なくとも９０％、好ましくは９５％の相同性を有する塩基配列からなる鎖を例示することができる。
【００７３】
ここで、正鎖側のポリヌクレオチドには、前記ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子、またはＴＬＲ２遺伝子の塩基配列、またはその部分配列を有するものだけでなく、上記相補鎖の塩基配列に対してさらに相補的な関係にある塩基配列からなる鎖を含めることができる。
【００７４】
さらに上記正鎖のポリヌクレオチド及び相補鎖（逆鎖）のポリヌクレオチドは、各々一本鎖の形態で疾患マーカーとして使用されても、また二本鎖の形態で疾患マーカーとして使用されてもよい。
【００７５】
本発明のＩＢＤの疾患マーカーは、具体的には、前記ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子、またはＴＬＲ２遺伝子の塩基配列（全長配列）からなるポリヌクレオチドであってもよいし、その相補配列からなるポリヌクレオチドであってもよい。またこれら本発明遺伝子もしくは該遺伝子に由来するポリヌクレオチドを選択的に（特異的に）認識するものであれば、上記全長配列またはその相補配列の部分配列からなるポリヌクレオチドであってもよい。この場合、部分配列としては、上記全長配列またはその相補配列の塩基配列から任意に選択される少なくとも１５個の連続した塩基長を有するポリヌクレオチドを挙げることができる。
【００７６】
なお、ここで「選択的に（特異的に）認識する」とは、例えばノーザンブロット法においては、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子、ＴＬＲ２遺伝子、またはこれらに由来するポリヌクレオチドが特異的に検出できること、またＲＴ−ＰＣＲ法においては、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子、ＴＬＲ２遺伝子、またはこれらに由来するポリヌクレオチドが特異的に生成されることを意味するが、それに限定されることなく、当業者が上記検出物または生成物がこれらの遺伝子に由来するものであると判断できるものであればよい。
【００７７】
本発明の疾患マーカーは、例えば配列番号２９に記載のＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子の塩基配列、配列番号１に記載のＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子の塩基配列、配列番号２に記載のＭｉｇ遺伝子の塩基配列、配列番号３に記載のＮＲＧ−２遺伝子の塩基配列、配列番号４に記載のヘキソキナーゼ　３遺伝子の塩基配列、配列番号５に記載のＨＭ７４遺伝子の塩基配列、配列番号６に記載のＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子の塩基配列、配列番号７に記載のＬＰＡＰ遺伝子の塩基配列、配列番号８に記載のＭｉｐ−１β遺伝子の塩基配列、配列番号９に記載のＬ−セレクチン遺伝子の塩基配列、配列番号１０に記載のＥＧＦＬ６遺伝子の塩基配列、配列番号１１に記載のＩＤＯ遺伝子の塩基配列、配列番号１２に記載のＩＬ−８遺伝子の塩基配列、配列番号１３に記載のＣＤ１１ｃ遺伝子の塩基配列、または配列番号１４に記載のＴＬＲ２遺伝子の塩基配列をもとに、例えばｐｒｉｍｅｒ　３（　ＨＹＰＥＲＬＩＮＫ　ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｅ．ｗｉ．ｍｉｔ．ｅｄｕ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｐｒｉｍｅｒ／ｐｒｉｍｅｒ３．ｃｇｉ）あるいはベクターＮＴＩ（Ｉｎｆｏｍａｘ社製）を利用して設計することができる。具体的には前記本発明遺伝子の塩基配列を　ｐｒｉｍｅｒ　３またはベクターＮＴＩのソフトウエアにかけて得られる、プライマーまたはプローブの候補配列、若しくは少なくとも該配列を一部に含む配列をプライマーまたはプローブとして使用することができる。
【００７８】
本発明の疾患マーカーは、上述するように連続する少なくとも１５塩基の長さを有するものであればよいが、具体的にはマーカーの用途に応じて、長さを適宜選択し設定することができる。
【００７９】
（１−２）プローブまたはプライマーとしてのポリヌクレオチド
本発明においてＩＢＤの検出（診断）は、被験者の生体組織、特に大腸組織におけるＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子から選ばれるいずれかの遺伝子の発現の有無または発現レベル（発現量）を評価することによって行われる。この場合、上記本発明の疾患マーカーは、上記遺伝子の発現によって生じたＲＮＡまたはそれに由来するポリヌクレオチドを特異的に認識し増幅するためのプライマーとして、または該ＲＮＡまたはそれに由来するポリヌクレオチドを特異的に検出するためのプローブとして利用することができる。
【００８０】
本発明疾患マーカーをＩＢＤの検出（遺伝子診断）においてプライマーとして用いる場合には、通常１５ｂｐ〜１００ｂｐ、好ましくは１５ｂｐ〜５０ｂｐ、より好ましくは１５ｂｐ〜３５ｂｐの塩基長を有するものが例示できる。また検出プローブとして用いる場合には、通常１５ｂｐ〜全配列の塩基数、好ましくは１５ｂｐ〜１ｋｂ、より好ましくは１００ｂｐ〜１ｋｂの塩基長を有するものが例示できる。
【００８１】
本発明の疾患マーカーは、ノーザンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲ法、ｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダーゼーション法などといった、特定遺伝子を特異的に検出する公知の方法において、常法に従ってプライマーまたはプローブとして利用することができる。該利用によってＩＢＤにおけるＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子またはＴＬＲ２遺伝子の発現の有無または発現レベル（発現量）を評価することができる。
測定対象試料としては、使用する検出方法の種類に応じて、被験者の大腸組織の一部をバイオプシ等で採取するか、若しくは腸管洗浄液等から回収し、そこから常法に従って調製したｔｏｔａｌ　ＲＮＡを用いてもよいし、さらに該ＲＮＡをもとにして調製される各種のポリヌクレオチドを用いてもよい。
【００８２】
また、生体組織における本発明遺伝子の遺伝子発現レベルは、ＤＮＡチップを利用して検出あるいは定量することができる。この場合、本発明の疾患マーカーは当該ＤＮＡチップのプローブとして使用することができる（例えば、アフィメトリックス社の　Ｇｅｎｅ　Ｃｈｉｐ　Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５　Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅの場合、２５ｂｐの長さのポリヌクレオチドプローブとして用いられる）。かかるＤＮＡチップを、生体組織から採取したＲＮＡをもとに調製される標識ＤＮＡまたはＲＮＡとハイブリダイズさせ、該ハイブリダイズによって形成された上記プローブ（本発明疾患マーカー）と標識ＤＮＡまたはＲＮＡとの複合体を、該標識ＤＮＡまたはＲＮＡの標識を指標として検出することにより、生体組織中での本発明遺伝子の発現の有無または発現レベル（発現量）が評価できる。
【００８３】
上記ＤＮＡチップは、本発明遺伝子のいずれかと結合し得る１種または２種以上の本発明疾患マーカーを含んでいれば良い。複数の疾患マーカーを含むＤＮＡチップの利用によれば、ひとつの生体試料について、同時に複数の遺伝子の発現の有無または発現レベルの評価が可能である。
【００８４】
本発明の疾患マーカーは、ＩＢＤの診断、検出（罹患の有無や罹患の程度の診断）に有用である。具体的には、該疾患マーカーを利用したＩＢＤの診断は、被験者の大腸組織と正常者の大腸組織におけるＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの遺伝子の遺伝子発現レベルの違いを判定することによって行うことができる。この場合、遺伝子発現レベルの違いには、発現のある／なしの違いだけでなく、被験者の大腸組織と正常者の大腸組織の両者ともに発現がある場合でも、両者間の発現量の格差が２倍以上、好ましくは３倍以上の場合が含まれる。具体的にはＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子はＩＢＤで発現誘導を示すので、被験者の大腸組織で発現しており、該発現量が正常者の大腸組織の発現量と比べて２倍以上、好ましくは３倍以上多ければ、被験者についてＩＢＤの罹患が疑われる。
【００８５】
（１−３）抗体
本発明は、ＩＢＤの疾患マーカーとして、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＦｃγＲ　ＩＩＩａ」ともいう）、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ」ともいう）、Ｍｉｇ遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「Ｍｉｇ」ともいう）、ＮＲＧ−２遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＮＲＧ−２」ともいう）、ヘキソキナーゼ　３遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ヘキソキナーゼ　３」ともいう）、ＨＭ７４遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＨＭ７４」ともいう）、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＲＥＧ　ＩＩＩ」ともいう）、ＬＰＡＰ遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＬＰＡＰ」ともいう）、Ｍｉｐ−１β遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「Ｍｉｐ−１β」ともいう）、Ｌ−セレクチン遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「Ｌ−セレクチン」ともいう）、ＥＧＦＬ６遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＥＧＦＬ６」ともいう）、ＩＤＯ遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＩＤＯ」ともいう）、ＩＬ−８遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＩＬ−８」ともいう）、ＣＤ１１ｃ遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＣＤ１１ｃ」ともいう）、またはＴＬＲ２遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＴＬＲ２」ともいう）を特異的に認識することのできる抗体を提供する。
【００８６】
ここで、ＦｃγＲ　ＩＩＩａとしては配列番号２９に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂとしては配列番号１に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、Ｍｉｇとしては配列番号２に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、ＮＲＧ−２としては配列番号３に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、ヘキソキナーゼ　３としては配列番号４に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、ＨＭ７４としては配列番号５に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、ＲＥＧ　ＩＩＩとしては配列番号６に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、ＬＰＡＰとしては配列番号７に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、Ｍｉｐ−１βとしては配列番号８に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、Ｌ−セレクチンとしては配列番号９に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、ＥＧＦＬ６としては配列番号１０に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、ＩＤＯとしては配列番号１１に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、ＩＬ−８としては配列番号１２に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、ＣＤ１１ｃとしては配列番号１３に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、ＴＬＲ２としては配列番号１４に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質を挙げることができる。
【００８７】
なお、配列番号２９に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号３０で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号１に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号１５で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号２に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号１６で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号３に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号１７で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号４に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号１８で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号５に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号１９で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号６に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号２０で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号７に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号２１で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号８に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号２２で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号９に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号２３で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号１０に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号２４で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号１１に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号２５で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号１２に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号２６で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号１３に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号２７で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、そして配列番号１４に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号２８で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を例示することができる。
【００８８】
なお、配列番号３０に示すタンパク質はヒト由来のＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その取得方法についても文献（Ｐｅｌｔｚ，　Ｇ．　Ａ．　ら、Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　Ｕ．Ｓ．Ａ．，　８６，　１０１３−１０１７，　１９８９）に記載されるように公知である。
【００８９】
また配列番号１５に示すタンパク質はヒト由来のＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その取得方法についても文献（Ｒａｖｅｔｃｈ，Ｊ．Ｖ．ら，　Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　１７０，　４８１−４９７，　１９８９）に記載されるように公知である。
【００９０】
また配列番号１６に示すタンパク質はヒト由来のＭｉｇ遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その取得方法についても文献（Ｆａｒｂｅｒ，Ｊ．Ｍ．　ら，　Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ｒｅｓ．　Ｃｏｍｍｕｎ．，　１９２，　２２３−２３０，　１９９３）に記載されるように公知である。
【００９１】
また配列番号１７に示すタンパク質はヒト由来のＮＲＧ−２遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その取得方法についても文献（Ｃａｒｒａｗａｙ，Ｋ．Ｌ．　ＩＩＩ　ら，　Ｎａｔｕｒｅ，　３８７，　５１２−５１６，　１９９７）に記載されるように公知である。
【００９２】
また配列番号１８に示すタンパク質はヒト由来のヘキソキナーゼ　３遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その取得方法についても文献（Ｆｕｒｕｔａ，Ｈ．　ら，　Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，　３６，　２０６−２０９，　１９９６）に記載されるように公知である。
【００９３】
また配列番号１９に示すタンパク質はヒト由来のＨＭ７４遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その取得方法についても文献（Ｎｏｍｕｒａ，Ｈ．　ら，　Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　５，　１２３９−１２４９，　１９９３に記載されるように公知である。
【００９４】
また配列番号２０に示すタンパク質はヒト由来のＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その取得方法についても文献（Ｄｕｓｅｔｔｉ，Ｎ．Ｊ．　ら，　Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，　１９，　１０８−１１４，　１９９４）に記載されるように公知である。
【００９５】
また配列番号２１に示すタンパク質はヒト由来のＬＰＡＰ遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その取得方法についても文献（Ｓｃｈｒａｖｅｎ，Ｂ．　ら，　Ｊ．Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２６９，　２９１０２−２９１１１，　１９９４）に記載されるように公知である。
【００９６】
また配列番号２２に示すタンパク質はヒト由来のＭｉｐ−１β遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その取得方法についても文献（Ｌｉｐｅｓ，Ｍ．Ａ．　ら，Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．，　８５，　９７０４−９７０８，　１９８８）に記載されるように公知である。
【００９７】
また配列番号２３に示すタンパク質はヒト由来のＬ−セレクチン遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その取得方法についても文献（Ｓｉｅｇｅｌｍａｎ，Ｍ．Ｈ．　ら，　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．，　８６，　５５６２−５５６６，　１９８９）に記載されるように公知である。
【００９８】
また配列番号２４に示すタンパク質はヒト由来のＥＧＦＬ６遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その取得方法についても文献（Ｙｅｕｎｇ，Ｇ．　ら，　Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，　６２，　３０４−３０７，　１９９９）に記載されるように公知である。
【００９９】
また配列番号２５に示すタンパク質はヒト由来のＩＤＯ遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その取得方法についても文献（Ｄａｉ，Ｗ．　ら，　Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ｒｅｓ．　Ｃｏｍｍｕｎ．，　１６８，　１−８，　１９９０）に記載されるように公知である。
【０１００】
また配列番号２６に示すタンパク質はヒト由来のＩＬ−８遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その取得方法についても文献（Ｓｃｈｍｉｄ，Ｊ．　ら，　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　１３９，　２５０−２５６，　１９８７）に記載されるように公知である。
【０１０１】
また配列番号２７に示すタンパク質はヒト由来のＣＤ１１ｃ遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その取得方法についても文献（Ｃｏｒｂｉ，Ａ．Ｌ．　ら，　ＥＭＢＯ　Ｊ．，　６，　４０２３−４０２８，　１９８７）に記載されるように公知である。
【０１０２】
また配列番号２８に示すタンパク質はヒト由来のＴＬＲ２遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その取得方法についても文献（Ｒｏｃｋ，Ｆ．Ｌ．　ら，　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．，　９５，　５８８−５９３，　１９９８）に記載されるように公知である。
【０１０３】
本発明は、前述するように、ＩＢＤに罹患した患者の大腸（結腸）組織において、正常な大腸（結腸）組織に比して、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子が特異的に発現上昇しているという知見を発端に、これらの遺伝子の発現産物（タンパク質）の有無やその発現の程度を検出することによって上記ＩＢＤの罹患の有無や罹患の程度が特異的に検出でき、該疾患の診断を正確に行うことができるという発想に基づくものである。上記抗体は、従って、被験者における上記タンパク質の発現の有無またはその程度を検出することによって、該被験者がＩＢＤに罹患しているか否かまたはその疾患の程度を診断することのできるツール（疾患マーカー）として有用である。また上記抗体は、後述の（３−２）項に記載するようなＩＢＤの予防、改善または治療に有用な候補物質のスクリーニングにおいて、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現変動を検出するためのスクリーニングツール（疾患マーカー）としても有用である。
【０１０４】
本発明の抗体は、その形態に特に制限はなく、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかを免疫抗原とするポリクローナル抗体であっても、またそのモノクローナル抗体であってもよい。さらにこれら本発明タンパク質のアミノ酸配列のうち少なくとも連続する、通常８アミノ酸、好ましくは１５アミノ酸、より好ましくは２０アミノ酸からなるポリペプチドに対して抗原結合性を有する抗体も、本発明の抗体に含まれる。
【０１０５】
これらの抗体の製造方法は、すでに周知であり、本発明の抗体もこれらの常法に従って製造することができる（Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，　Ｃｈａｐｔｅｒ　１１．１２〜１１．１３（２０００））。具体的には、本発明の抗体がポリクローナル抗体の場合には、常法に従って大腸菌等で発現し精製したＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２を用いて、あるいは常法に従ってこれら本発明タンパク質の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドを合成して、家兎等の非ヒト動物に免疫し、該免疫動物の血清から常法に従って得ることが可能である。一方、モノクローナル抗体の場合には、常法に従って大腸菌等で発現し精製したＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２、あるいはこれらタンパク質の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドをマウス等の非ヒト動物に免疫し、得られた脾臓細胞と骨髄腫細胞とを細胞融合させて調製したハイブリドーマ細胞の中から得ることができる（Ｃｕｒｒｅｎｔ　ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｅｄｉｔ．　Ａｕｓｕｂｅｌ　ｅｔ　ａｌ．　（１９８７）　Ｐｕｂｌｉｓｈ．　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　Ｓｏｎｓ．　Ｓｅｃｔｉｏｎ　１１．４〜１１．１１）。
【０１０６】
抗体の作製に免疫抗原として使用されるＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２は、本発明により提供される遺伝子の配列情報（配列番号１〜１４，２９）に基づいて、ＤＮＡクローニング、各プラスミドの構築、宿主へのトランスフェクション、形質転換体の培養および培養物からのタンパク質の回収の操作により得ることができる。これらの操作は、当業者に既知の方法、あるいは文献記載の方法（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ　ｅｔ　ａｌ．，　ＣＳＨ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　（１９８３），　ＤＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　ＤＭ．　Ｇｌｏｖｅｒ，　ＩＲＬ　ＰＲＥＳＳ　（１９８５））などに準じて行うことができる。
【０１０７】
具体的には、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２をコードする遺伝子が所望の宿主細胞中で発現できる組み換えＤＮＡ（発現ベクター）を作製し、これを宿主細胞に導入して形質転換し、該形質転換体を培養して、得られる培養物から、目的タンパク質を回収することによって、本発明抗体の製造のための免疫抗原としてのタンパク質を得ることができる。また、これらＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の部分ペプチドは、本発明により提供されるアミノ酸配列の情報（配列番号１５〜２８，　３０）に従って、一般的な化学合成法（ペプチド合成）によって製造することもできる。
【０１０８】
なお、本発明のＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２には、配列番号１５，１６，１７，１８，１９，２０，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８または３０に示す各アミノ酸配列に関わるタンパク質のみならず、その相同物も包含される。該相同物としては、上記配列番号１５〜２８及び３０のいずれかで示されるアミノ酸配列において、１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、且つ改変前の元のタンパク質と免疫学的に同等の活性を有するタンパク質を挙げることができる。
【０１０９】
ここで同等の免疫学的活性を有するタンパク質としては、適当な動物あるいはその細胞において特定の免疫反応を誘発し、かつＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２に対する抗体と特異的に結合する能力を有するタンパク質を挙げることができる。
【０１１０】
なお、タンパク質におけるアミノ酸の変異数や変異部位は、その免疫学的活性が保持される限り制限はない。免疫学的活性を喪失することなくアミノ酸残基が、どのように、何個置換、挿入あるいは欠失されればよいかを決定する指標は、当業者に周知のコンピュータプログラム、例えばＤＮＡ　Ｓｔａｒ　ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて見出すことができる。例えば変異数は、典型的には、全アミノ酸の１０％以内であり、好ましくは全アミノ酸の５％以内であり、さらに好ましくは全アミノ酸の１％以内である。また置換されるアミノ酸は、置換後に得られるタンパク質がＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２と同等の免疫学的活性を保持している限り、特に制限されないが、タンパク質の構造保持の観点から、残基の極性、電荷、可溶性、疎水性、親水性並びに両親媒性など、置換前のアミノ酸と似た性質を有するアミノ酸であることが好ましい。例えば、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ及びＴｒｐは互いに非極性アミノ酸に分類されるアミノ酸であり、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、Ａｓｎ及びＧｌｎは互いに非荷電性アミノ酸に分類されるアミノ酸であり、Ａｓｐ及びＧｌｕは互いに酸性アミノ酸に分類されるアミノ酸であり、またＬｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓは互いに塩基性アミノ酸に分類されるアミノ酸である。ゆえに、これらを指標として同群に属するアミノ酸を適宜選択することができる。
【０１１１】
本発明抗体は、また、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドを用いて調製されるものであってよい。かかる抗体の製造のために用いられるオリゴ（ポリ）ペプチドは、機能的な生物活性を有することは要しないが、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２と同様な免疫原特性を有するものであることが望ましい。好ましくはこの免疫原特性を有し、且つＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２のアミノ酸配列において少なくとも連続する８アミノ酸、好ましくは１５アミノ酸、より好ましくは２０アミノ酸からなるオリゴ（ポリ）ペプチドを例示することができる。
【０１１２】
かかるオリゴ（ポリ）ペプチドに対する抗体の製造は、宿主に応じて種々のアジュバントを用いて免疫学的反応を高めることによって行うこともできる。限定はされないが、そのようなアジュバントには、フロイントアジュバント、水酸化アルミニウムのようなミネラルゲル、並びにリゾレシチン、プルロニックポリオル、ポリアニオン、ペプチド、油乳剤、キーホールリンペットヘモシアニン及びジニトロフェノールのような表面活性物質、ＢＣＧ（カルメット−ゲラン桿菌）やコリネバクテリウム−パルヴムなどのヒトアジュバントが含まれる。
【０１１３】
本発明の抗体は、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２に特異的に結合する性質を有することから、該抗体を利用することによって、被験者の組織内に発現した上記タンパク質を特異的に検出することができる。すなわち、当該抗体は被験者の組織内におけるＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２のタンパク発現の有無を検出するためのプローブとして有用である。
【０１１４】
具体的には、患者の大腸組織の一部をバイオプシ等で採取、もしくは腸管洗浄液等から回収し、そこから常法に従ってタンパク質を調製して、例えばウェスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ法など公知の検出方法において、上記抗体を常法に従ってプローブとして使用することによって、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２を検出することができる。
【０１１５】
ＩＢＤの診断に際しては、被験者の大腸組織におけるＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれか少なくとも一つと正常な大腸組織におけるこれらのタンパク質との量の違いを判定すればよい。この場合、タンパク量の違いには、タンパクのある／なし、あるいはタンパク量の違いが２倍以上、好ましくは３倍以上の場合が含まれる。具体的には、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２はＩＢＤで発現誘導を示すので、被験者の大腸組織で該遺伝子の発現産物（ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃ、ＴＬＲ２）が存在しており、該量が正常な大腸組織の発現産物量と比べて２倍以上、好ましくは３倍以上多いことが判定されれば、ＩＢＤの罹患が疑われる。
【０１１６】
（２）ＩＢＤの検出方法（診断方法）
本発明は、前述した本発明疾患マーカーを利用したＩＢＤの検出方法（診断方法）を提供するものである。
【０１１７】
具体的には、本発明の検出方法（診断方法）は、被験者の大腸組織の一部をバイオプシ等で採取するか、もしくは腸管洗浄液等から回収し、そこに含まれるＩＢＤに関連するＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの遺伝子発現レベル、およびこれらの遺伝子に由来するタンパク質（ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃ、ＴＬＲ２）の量（レベル）を検出し、その発現量またはそのタンパク質量を測定することにより、ＩＢＤの罹患の有無またはその程度を診断するものである。また本発明の検出（診断）方法は、例えばＩＢＤ患者において、該疾患の改善のために治療薬を投与した場合における、該疾患の改善の有無またはその程度を検出（診断）することもできる。
【０１１８】
本発明の検出方法は次の（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の工程を含むものである：
（ａ）　被験者の生体試料と本発明の疾患マーカーを接触させる工程、
（ｂ）　生体試料中のＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの遺伝子発現レベル、またはＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかのタンパク質量を、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）　（ｂ）の結果をもとに、ＩＢＤの罹患を判断する工程。
【０１１９】
ここで用いられる生体試料としては、被験者の生体組織（大腸組織及びその周辺組織など）から調製される試料を挙げることができる。具体的には、該組織から調製されるＲＮＡ含有試料、若しくはそれからさらに調製されるポリヌクレオチドを含む試料、または上記組織から調製されるタンパク質を含む試料を挙げることができる。かかるＲＮＡ、ポリヌクレオチドまたはタンパク質を含む試料は、被験者の大腸組織の一部をバイオプシ等で採取するか、もしくは腸管洗浄液等から回収し、そこから常法に従って調製することができる。
本発明の診断方法は、測定対象として用いる生体試料の種類に応じて、具体的には下記のようにして実施される。
【０１２０】
（２−１）　測定対象の生体試料としてＲＮＡを利用する場合
測定対象物としてＲＮＡを利用する場合、ＩＢＤの検出は、具体的に下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む方法によって実施することができる：
（ａ）被験者の生体試料から調製されたＲＮＡまたはそれから転写された相補的ポリヌクレオチドと、前記本発明の疾患マーカー（ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子またはＴＬＲ２遺伝子の塩基配列において連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／又は該ポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチド）とを結合させる工程、
（ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試料由来のＲＮＡまたは該ＲＮＡから転写された相補的ポリヌクレオチドを、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の測定結果に基づいて、ＩＢＤの罹患を判断する工程。
【０１２１】
測定対象物としてＲＮＡを利用する場合は、本発明の検出方法（診断方法）は、該ＲＮＡ中のＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現レベルを検出し、測定することによって実施される。具体的には、前述のポリヌクレオチドからなる本発明の疾患マーカー（ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子またはＴＬＲ２遺伝子の塩基配列において連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／又はその相補的なポリヌクレオチド）をプライマーまたはプローブとして用いて、ノーザンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲ法、ＤＮＡチップ解析法、ｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダイゼーション解析法などの公知の方法を行うことにより実施できる。
【０１２２】
ノーザンブロット法を利用する場合は、本発明の上記疾患マーカーをプローブとして用いることによって、ＲＮＡ中のＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現の有無やその発現レベルを検出、測定することができる。具体的には、本発明の疾患マーカー（相補鎖）を放射性同位元素（３２Ｐ、３３Ｐなど：ＲＩ）や蛍光物質などで標識し、それを、常法に従ってナイロンメンブレン等にトランスファーした被験者の生体組織由来のＲＮＡとハイブリダイズさせた後、形成された疾患マーカー（ＤＮＡ）とＲＮＡとの二重鎖を、疾患マーカーの標識物（ＲＩ若しくは蛍光物質）に由来するシグナルを放射線検出器（ＢＡＳ−１８００ＩＩ、富士フィルム社製）または蛍光検出器で検出、測定する方法を例示することができる。また、ＡｌｋＰｈｏｓ　Ｄｉｒｅｃｔ　Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ　ａｎｄ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）を用いて、該プロトコールに従って疾患マーカー（プローブＤＮＡ）を標識し、被験者の生体組織由来のＲＮＡとハイブリダイズさせた後、疾患マーカーの標識物に由来するシグナルをマルチバイオイメージャーＳＴＯＲＭ８６０（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）で検出、測定する方法を使用することもできる。
【０１２３】
ＲＴ−ＰＣＲ法を利用する場合は、本発明の上記疾患マーカーをプライマーとして用いることによって、ＲＮＡ中のＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現の有無や発現レベルを検出、測定することができる。具体的には、被験者の生体組織由来のＲＮＡから常法に従ってｃＤＮＡを調製して、これを鋳型として標的のＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子またはＴＬＲ２遺伝子の領域が増幅できるように、本発明の疾患マーカーから調製した一対のプライマー（上記ｃＤＮＡ（−鎖）に結合する正鎖、＋鎖に結合する逆鎖）をこれとハイブリダイズさせて、常法に従ってＰＣＲ法を行い、得られた増幅二本鎖ＤＮＡを検出する方法を例示することができる。なお、増幅された二本鎖ＤＮＡの検出は、上記ＰＣＲを予めＲＩや蛍光物質で標識しておいたプライマーを用いて行うことによって産生される標識二本鎖ＤＮＡを検出する方法、産生された二本鎖ＤＮＡを常法に従ってナイロンメンブレン等にトランスファーさせて、標識した疾患マーカーをプローブとして使用してこれとハイブリダイズさせて検出する方法などを用いることができる。なお、生成された標識二本鎖ＤＮＡ産物はアジレント２１００バイオアナライザ（横河アナリティカルシステムズ社製）などで測定することができる。また、ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　ＲＴ−ＰＣＲ　Ｒｅａｇｅｎｔｓ　（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　社製）で該プロトコールに従ってＲＴ−ＰＣＲ反応液を調製し、ＡＢＩ　ＰＲＩＳＭ　７７００　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　社製）で反応させて、該反応物を検出することもできる。
【０１２４】
ＤＮＡチップ解析を利用する場合は、本発明の上記疾患マーカーをＤＮＡプローブ（１本鎖または２本鎖）として貼り付けたＤＮＡチップを用意し、これに被験者の生体組織由来のＲＮＡから常法によって調製されたｃＲＮＡとハイブリダイズさせて、形成されたＤＮＡとｃＲＮＡとの二本鎖を、本発明の疾患マーカーから調製される標識プローブと結合させて検出する方法を挙げることができる。また、上記ＤＮＡチップとして、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの遺伝子発現レベルの検出、測定が可能なＤＮＡチップを用いることもできる。かかる遺伝子の発現レベルを検出、測定することができるＤＮＡチップとしては、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社のＧｅｎｅ　Ｃｈｉｐ　Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５　Ａ，　Ｂ，Ｃ，　Ｄ，　Ｅを挙げることができる。かかるＤＮＡチップを用いた、被験者ＲＮＡ中のＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの遺伝子発現レベルの検出、測定については、実施例において詳細に説明する。
【０１２５】
（２−２）　測定対象の生体試料としてタンパク質を用いる場合
測定対象物としてタンパク質を用いる場合は、本発明のＩＢＤの検出方法（診断方法）は、生体試料中のＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかを検出し、その量を測定することによって実施される。具体的には下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む方法によって実施することができる：
（ａ）被験者の生体試料から調製されたタンパク質と抗体に関する本発明の疾患マーカー（ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２を認識する抗体）とを結合させる工程、
（ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試料由来のタンパク質を、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の測定結果に基づいて、ＩＢＤの罹患を判断する工程。
【０１２６】
より具体的には、本発明の疾患マーカーとして抗体（ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２を認識する抗体）を用いて、ウエスタンブロット法などの公知方法で、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかを検出、定量する方法を挙げることができる。
【０１２７】
ウエスタンブロット法は、一次抗体として本発明疾患マーカーを用いた後、二次抗体として１２５Ｉなどの放射性同位元素、蛍光物質、ホースラディッシュペルオキシターゼ（ＨＲＰ）などの酵素等で標識した標識抗体（一次抗体に結合する抗体）を用い、得られる標識化合物の放射性同位元素、蛍光物質などに由来するシグナルを放射線測定器（ＢＡＳ−１８００ＩＩ：富士フィルム社製など）、蛍光検出器などで検出し、測定することによって実施できる。また、一次抗体として本発明疾患マーカーを用いた後、ＥＣＬ　Ｐｌｕｓ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔｔｉｎｇ　Ｄｅｔｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　（アマシャム　ファルマシアバイオテク社製）を用いて、該プロトコールに従って検出し、マルチバイオイメージャーＳＴＯＲＭ８６０（アマシャム　ファルマシアバイオテク社製）で測定することもできる。
【０１２８】
なお、上記において測定対象とするＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２の機能または活性は、既に知られており、該タンパク質の量と機能乃至活性とは一定の相関関係を有している。従って、上記タンパク質の量の測定に代えて、該タンパク質の機能または活性の測定を行うことによっても、本発明のＩＢＤの検出（診断）を実施することができる。すなわち本発明は、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の公知の機能または活性を指標として、これを公知の方法（具体的には後述の（３−３）項を参照）に従って測定、評価することからなる、ＩＢＤの検出（診断）方法をも包含する。
【０１２９】
（２−３）ＩＢＤの診断
ＩＢＤの診断は、例えば、被験者の大腸組織におけるＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの遺伝子発現レベル、もしくはこれらの遺伝子の発現産物であるタンパク質（ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃ、ＴＬＲ２）の量、機能若しくは活性（以下これらを合わせて「タンパク質レベル」ということがある）を、正常な大腸組織における当該遺伝子発現レベルまたは当該タンパク質レベルと比較し、両者の違いを判定することによって行うことができる。
【０１３０】
この場合、正常な大腸組織から採取調製した生体試料（ＲＮＡまたはタンパク質を含む試料）が必要であるが、これらはＩＢＤに罹患していない人の大腸組織をバイオプシ等で採取するか、もしくは腸管洗浄液等から回収することによって取得することができる。なお、ここでいう「ＩＢＤに罹患していない人」とは、少なくともＩＢＤの自覚症状がなく、好ましくは他の検査方法、例えば内視鏡検査や、注腸Ｘ腺検査、消化管の生検などの結果、ＩＢＤでないと診断された人をいう。なお、当該「ＩＢＤに罹患していない人」を以下、本明細書では単に正常者という場合もある。
【０１３１】
被験者の大腸組織と正常な大腸組織（ＩＢＤに罹患していない人の大腸組織）との遺伝子発現レベルまたはタンパク質の量（レベル）の比較は、被験者の生体試料と正常者の生体試料を対象とした測定を並行して行うことで実施できる。並行して行わない場合は、複数（少なくとも２つ、好ましくは３以上、より好ましくは５以上）の正常な大腸組織を用いて均一な測定条件で測定して得られたＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの遺伝子発現レベル、若しくはこれらの遺伝子の発現産物であるタンパク質（ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃ、ＴＬＲ２）の量（レベル）の平均値または統計的中間値を、正常者の遺伝子発現レベル若しくはタンパク質の量として、比較に用いることができる。
【０１３２】
被験者が、ＩＢＤであるかどうかの判断は、該被験者の大腸組織におけるＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの遺伝子発現レベル、またはその発現産物であるタンパク質（ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃ、ＴＬＲ２）の量（レベル）が、正常者のそれらのレベルと比較して２倍以上、好ましくは３倍以上多いことを指標として行うことができる。また、被験者の上記遺伝子発現レベルまたはタンパク質レベルが、いかなる正常者のそれらのレベルに比べて多ければ、該被験者はＩＢＤであると判断できるか、該疾患の罹患が疑われる。
【０１３３】
（３）候補薬のスクリーニング方法
（３−１）　遺伝子発現レベルを指標とするスクリーニング方法
本発明は、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質のスクリーニング方法を提供する。
【０１３４】
本発明のスクリーニング方法は次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）被験物質とＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞におけるＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応する遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現量を減少させる被験物質を選択する工程。
【０１３５】
かかるスクリーニングに用いられる細胞としては、内在性および外来性を問わず、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかを発現する培養細胞全般を挙げることができる。培養細胞においてこれら本発明遺伝子が発現しているか否かは、公知のノーザンブロット法やＲＴ−ＰＣＲ法にてこれらの遺伝子発現を検出することにより、容易に確認することができる。
【０１３６】
当該スクリーニングに用いられる細胞の具体例としては、例えば以下の（１）〜（３）：
（１）　ＩＢＤの動物モデルより単離、調製した腸管組織やリンパ系組織由来の細胞、（２）　種々の刺激剤で処理又は未処理の腸管組織やリンパ系組織由来の細胞、
（３）　本発明遺伝子のいずれかを導入した細胞、
等を挙げることができる。
【０１３７】
ここで前記（１）の動物モデルとしては、ＩＢＤの動物モデルとして周知である如何なる動物モデルをも用いることができ、具体的には、（１）自然発症ＩＢＤモデル（Ｃ３Ｈ／ＨｅＪＢｉｒマウス、Ｃｏｔｔｏｎ　ｔｏｐ　ｔａｍａｒｉｎｓ等）、（２）化学物質誘発モデル（ジニトロクロロベンゼン誘発モデル（ラット）、酢酸モデル（ラット）、トリニトロスルホン酸誘発モデル（マウス、ラット、ウサギ）、デキストラン硫酸誘発モデル（マウス、ラット、ハムスター）、カラゲナン誘発モデル（ラット、モルモット）、インドメタシン誘発モデル（ラット）等）、（３）トランスジェニック、ミュータント（ＩＬ−２ノックアウトマウス、ＩＬ−１０ノックアウトマウス、ＴＣＲノックアウトマウス等）、または（４）移入モデル（ＣＤ４５ＲＢｈｉ移入ＳＣＩＤマウス等）を挙げることができる。
また前記（１）の腸管組織由来の細胞としては、好ましくは大腸（結腸）由来の初代培養細胞が挙げられる。
【０１３８】
前記（２）の腸管組織由来の細胞としては、好ましくは大腸（結腸）由来の株化細胞が挙げられ、具体的には　Ｃａｃｏ−２細胞（ヒト結腸腺癌由来、ＡＴＴＣ株番号ＨＴＢ−３７）、ＨＴ−２９細胞（ヒト結腸腺癌由来、ＡＴＴＣ株番号ＨＴＢ−３８）またはＣＯＬＯ　２０５　細胞（ヒト結腸腺癌由来、ＡＴＴＣ株番号ＣＣＬ−２２２）等を挙げることができる。また前記（２）のリンパ系組織由来の細胞としては、好ましくはリンパ球、単球、マクロファージ、好中球または好酸球が挙げられる。また株化細胞としてＲＡＷ　２６４．７細胞（マウス単球由来、ＡＴＴＣ株番号ＴＩＢ−７１）、Ｕ−９３７細胞（ヒト組織球性リンパ腫由来、ＡＴＴＣ株番号ＣＲＬ−１５９３．２）、ＴＨＰ−１細胞（ヒト単球由来、ＡＴＴＣ株番号ＴＩＢ−２０２）またはＪｕｒｋａｔ細胞（ヒトＴ細胞リンパ腫由来、ＡＴＴＣ株番号ＴＩＢ−１５２）等を挙げることができる。
前記（２）において刺激剤とは、リポポリサッカライド（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　：ＬＰＳ）、ホルボールエステル（ＰＭＡ等）、カルシウムイオノフォア、サイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＴＮＦα、ＩＦＮγ等）等を挙げることができる。これら刺激剤で刺激することにより、細胞は炎症部位の環境により近い活性化状態になることが知られている。
【０１３９】
前記（３）の遺伝子導入細胞としては、前記（１）及び（２）に挙げた細胞の他、通常遺伝子導入に用いられる宿主細胞、すなわちＣＯＰ、Ｌ、Ｃ１２７、Ｓｐ２／０、ＮＳ−１、ＮＩＨ３Ｔ３、ＳＴ２等のマウス由来細胞、ラット由来細胞、ＢＨＫ、ＣＨＯ等のハムスター由来細胞、ＣＯＳ１、ＣＯＳ３、ＣＯＳ７、ＣＶ１、Ｖｅｒｏ等のサル由来細胞、ＨｅＬａ、２９３等のヒト由来細胞、およびＳｆ９、Ｓｆ２１、Ｈｉｇｈ　Ｆｉｖｅ等の昆虫由来細胞などが例示される。
さらに、本発明のスクリーニング方法に用いられる細胞には、細胞の集合体である組織なども含まれる。
【０１４０】
本発明スクリーニング方法によってスクリーニングされる被験物質（候補物質）は、制限されないが、核酸（本発明遺伝子のアンチセンスヌクレオチドを含む）、ペプチド、タンパク質、有機化合物、無機化合物などであり、本発明スクリーニングは、具体的にはこれらの被験物質またはこれらを含む試料（被験試料）を上記細胞および／または組織と接触させることにより行われる。かかる被験試料としては、被験物質を含む細胞抽出液、遺伝子ライブラリーの発現産物、合成低分子化合物、合成ペプチド、天然化合物などが挙げられるが、これらに制限されない。
【０１４１】
また本発明スクリーニングに際して、被験物質と細胞とを接触させる条件は、特に制限されないが、該細胞が死滅せず且つ本発明遺伝子を発現できる培養条件（温度、ｐＨ、培地組成など）を選択するのが好ましい。
【０１４２】
実施例に示すように、ＩＢＤに罹患した患者の大腸（結腸）組織では、正常な大腸（結腸）組織に比して、特異的にＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子が発現上昇している。この知見から、これら本発明遺伝子の発現亢進はＩＢＤと関連していると考えられる。よって本発明のスクリーニング方法には、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現レベルを指標として、その発現を抑制する物質（発現レベルを正常レベルに戻す物質）を探索する方法が包含される。このスクリーニング方法によって、ＩＢＤの緩和／抑制作用を有する（ＩＢＤに対して改善／治療効果を発揮する）候補物質を提供することができる。
すなわち本発明のスクリーニング方法は、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質を探索することによって、ＩＢＤの改善薬または治療薬の有効成分となる候補物質を提供するものである。
【０１４３】
候補物質の選別は、具体的にはＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかが発現している細胞を用いる場合は、被験物質（候補物質）を添加した細胞における前記本発明遺伝子の発現レベルが、被験物質（候補物質）を添加しない細胞のそのレベルに比して低くなることをもって、行うことができる。また、これらＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現に発現誘導物質を必要とする細胞を用いる場合は、発現誘導物質（例えばリポポリサッカライド（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：ＬＰＳ）、ホルボールエステル（ＰＭＡ等）、カルシウムイオノフォア、サイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＴＮＦα、ＩＦＮγ等）等）によって誘導される発現が被験物質の存在によって抑制されること、すなわち発現誘導物質の存在下で被験物質を接触させた細胞の遺伝子発現が、発現誘導物質存在下で被験物質を接触させなかった対照細胞（正のコントロール）に比して低くなることを指標として、当該被験物質を候補物質として選別することができる。
【０１４４】
より具体的には、例えば結腸由来細胞であるＣａｃｏ−２細胞、ＨＴ−２９細胞またはＣＯＬＯ　２０５　細胞等の細胞を用いてＩＢＤの改善薬または治療薬の有効成分となる候補物質をスクリーニングするには、被験物質を加えない細胞（対照細胞）と、被験物質を加えた細胞とで、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現レベルを比較し、その発現レベルの減少を指標として候補物質を選別することができる。また、リポポリサッカライド（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：ＬＰＳ）、ホルボールエステル（ＰＭＡ等）、カルシウムイオノフォア、サイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＴＮＦα、ＩＦＮγ等）などの刺激剤を添加した細胞（対照細胞）と、刺激剤と被験物質とを同時に加えた細胞とで、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現レベルを比較し、その発現レベルの減少を指標として候補物質を選別することができる。また、前記刺激剤を添加して、既にＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかが発現誘導された状態の細胞に被験物質を添加し、被験物質を添加しない対照細胞とで、前記本発明遺伝子の発現レベルを比較して、その発現レベルの低下を指標として候補物質を選別することもできる。
【０１４５】
ここでＭｉｇに関しては、ＩＦＮγを添加したマクロファージ（対照細胞）と、ＩＦＮγと被験物質とを同時に加えたマクロファージとで、当該Ｍｉｇ遺伝子の発現レベルを比較し、その発現レベルの減少を指標として候補物質を選別することができる。また、ＩＦＮγを添加して、既にＭｉｇ遺伝子が発現誘導された状態のマクロファージに被験物質を添加し、被験物質を添加しない対照細胞とで、当該Ｍｉｇ遺伝子の発現レベルを比較して、その発現レベルの低下を指標として候補物質を選別することもできる（Ｌｉａｏ，　Ｆ．ら、Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，１８２，　１３０１−１３１４，１９９５）。
【０１４６】
またＭｉｐ−１βに関しては、ピコリン酸（ＰＡ）若しくはリポポリサッカライド（ＬＰＳ）を添加した単球（対照細胞）と、ＰＡ若しくはＬＰＳと被験物質とを同時に加えた単球とで、当該Ｍｉｐ−１β遺伝子の発現レベルを比較し、その発現レベルの減少を指標として候補物質を選別することができる。また、ＰＡ若しくはＬＰＳを添加して、既にＭｉｐ−１β遺伝子が発現誘導された状態の単球に被験物質を添加し、被験物質を添加しない対照細胞とで、当該Ｍｉｐ−１β遺伝子の発現レベルを比較して、その発現レベルの低下を指標として候補物質を選別することもできる（Ｂｏｓｃｏ，　Ｍ．Ｃ．Ｊ．ら、Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　１６４，　３２８３−３２９１，　２０００）。
【０１４７】
またＩＤＯに関しては、ＩＦＮγを添加したマクロファージ（対照細胞）と、ＩＦＮγと被験物質とを同時に加えたマクロファージとで、当該ＩＤＯ遺伝子の発現レベルを比較し、その発現レベルの減少を指標として候補物質を選別することができる。また、ＩＦＮγを添加して、既にＩＤＯ遺伝子が発現誘導された状態のマクロファージに被験物質を添加し、被験物質を添加しない対照細胞とで、当該ＩＤＯ遺伝子の発現レベルを比較して、その発現レベルの低下を指標として候補物質を選別することもできる（Ｃａｒｌｉｎ，　Ｊ．　Ｍ．ら，　Ｊ．　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　Ｒｅｓ．，　９，　３２９−３３７，　１９８９、もしくは繊維芽細胞を用いた方法として、Ｄａｉ，　Ｗ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ｒｅｓ．　Ｃｏｍｍｕｎ．，　１６８，　１−８，　１９９０）。
【０１４８】
このような本発明のスクリーニング方法における遺伝子発現レベルの検出及び定量は、前記細胞から調製したＲＮＡまたは該ＲＮＡから転写された相補的ポリヌクレオチドと本発明の疾患マーカーとを用いて、前記（２−１）項に記述したように、ノーザンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲ法など公知の方法、あるいはＤＮＡチップを利用する方法に従って実施できる。指標とする遺伝子発現レベルの低下（抑制、減少）の程度は、被験物質（候補物質）を接触させた細胞におけるＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現が、被験物質（候補物質）を接触させない対照細胞における発現量と比較して１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％以上の低下（抑制、減少）を例示することができる。
【０１４９】
またＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現レベルの検出及び定量は、これら本発明遺伝子の発現を制御する遺伝子領域（発現制御領域）に、例えばルシフェラーゼ遺伝子などのマーカー遺伝子をつないだ融合遺伝子を導入した細胞株を用いて、マーカー遺伝子由来のタンパク質の活性を測定することによっても実施できる。本発明のＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現抑制物質のスクリーニング方法には、かかるマーカー遺伝子の発現量を指標として標的物質を探索する方法も包含されるものであり、この意味において、請求項９に記載する「ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子、ＴＬＲ２遺伝子」の概念には、これら本発明遺伝子の発現制御領域とマーカー遺伝子との融合遺伝子が含まれる。
【０１５０】
なお、上記マーカー遺伝子としては、発光反応や呈色反応を触媒する酵素の構造遺伝子が好ましい。具体的には、上記のルシフェラーゼ遺伝子のほか、分泌型アルカリフォスファターゼ遺伝子、クロラムフェニコール・アセチルトランスフェラーゼ遺伝子、βグルクロニダーゼ遺伝子、βガラクトシダーゼ遺伝子、及びエクオリン遺伝子などのレポーター遺伝子が例示できる。
また、ここで前記本発明遺伝子の発現制御領域は、例えば該遺伝子の転写開始部位上流約１ｋｂ、好ましくは約２ｋｂを用いることができる。
【０１５１】
本発明遺伝子の発現制御領域は、例えば（ｉ）５’−ＲＡＣＥ法（例えば、５’ｆｕｌｌ　Ｒａｃｅ　Ｃｏｒｅ　Ｋｉｔ（宝酒造社製）等を用いて実施される）、オリゴキャップ法、Ｓ１プライマーマッピング等の通常の方法により、５’末端を決定するステップ；（ｉｉ）Ｇｅｎｏｍｅ　Ｗａｌｋｅｒ　Ｋｉｔ（クローンテック社製）等を用いて５’−上流領域を取得し、得られた上流領域について、プロモーター活性を測定するステップ；を含む手法等により同定することができる。また融合遺伝子の作成、およびマーカー遺伝子由来の活性測定は公知の方法で行うことができる。
【０１５２】
本発明のスクリーニング方法により選別される物質は、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子の少なくとも一種の遺伝子の遺伝子発現抑制剤として位置づけることができる。これらの物質が有する本発明遺伝子に対する発現抑制作用は、大腸組織障害の抑制に深く関わっているものと考えられる。よってこれらの物質は、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する薬物の有力な候補物質となる。
【０１５３】
（３−２）タンパク質の発現量を指標とするスクリーニング方法
本発明は、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ（ＦｃγＲ　ＩＩＩａタンパク質）、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ（ＦｃγＲ　ＩＩＩｂタンパク質）、Ｍｉｇ（Ｍｉｇタンパク質）、ＮＲＧ−２（ＮＲＧ−２タンパク質）、ヘキソキナーゼ　３（ヘキソキナーゼ　３タンパク質）、ＨＭ７４（ＨＭ７４タンパク質）、ＲＥＧ　ＩＩＩ（ＲＥＧＩＩＩタンパク質）、ＬＰＡＰ（ＬＰＡＰタンパク質）、Ｍｉｐ−１β（Ｍｉｐ−１βタンパク質）、Ｌ−セレクチン（Ｌ−セレクチンタンパク質）、ＥＧＦＬ６（ＥＧＦＬ６タンパク質）、ＩＤＯ（ＩＤＯタンパク質）、ＩＬ−８（ＩＬ−８タンパク質）、ＣＤ１１ｃ（ＣＤ１１ｃタンパク質）、およびＴＬＲ２（ＴＬＲ２タンパク質）のいずれかの発現を抑制する（減少させる）物質をスクリーニングする方法を提供する。
本発明スクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含む：
【０１５４】
（ａ）被験物質とＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞における　ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応するタンパク質の発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現量を減少させる被験物質を選択する工程。
【０１５５】
本発明スクリーニングに用いられる細胞は、内在性および外来性を問わず、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかを発現し、発現産物としてのＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかを有する培養細胞全般を挙げることができる。ここでＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃ、ＴＬＲ２の発現は、遺伝子産物であるタンパク質を公知のウエスタン法にて検出することにより、容易に確認することができる。該細胞としては、具体的には、前記（３−１）項の（１）〜（３）に記載したような、ＩＢＤの動物モデルより単離、調製した腸管組織やリンパ系組織由来の初代培養細胞、種々の刺激剤で処理した腸管組織やリンパ系組織由来の初代培養細胞若しくは株化細胞、または本発明遺伝子のいずれかを導入した株化細胞などが挙げられる。また当該細胞の範疇には、その細胞膜画分、細胞質画分、細胞核画分なども含まれる。
【０１５６】
本発明スクリーニング方法によってスクリーニングされる被験物質（候補物質）は、制限されないが、核酸（本発明遺伝子のアンチセンスヌクレオチドを含む）、ペプチド、タンパク質、有機化合物、無機化合物などであり、本発明スクリーニングは、具体的にはこれらの被験物質またはこれらを含む試料（被験試料）を上記細胞や細胞膜画分と接触させることにより行われる。かかる被験試料としては、被験物質を含む細胞抽出液、遺伝子ライブラリーの発現産物、合成低分子化合物、合成ペプチド、天然化合物などが挙げられるが、これらに制限されない。
【０１５７】
実施例に示すように、ＩＢＤに罹患した患者の大腸（結腸）組織では、正常な大腸（結腸）組織に比して、特異的にＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子が発現上昇している。この知見から、これら本発明遺伝子の発現産物（タンパク質）の発現亢進はＩＢＤと関連していると考えられる。よって本発明のスクリーニング方法には、これらＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかのタンパク発現レベルを指標として、その発現量を低下させる物質（発現レベルを正常レベルに戻す物質）を探索する方法が包含される。このスクリーニング方法によって、ＩＢＤの緩和／抑制作用を有する（ＩＢＤに対して改善／治療効果を発揮する）候補物質を提供することができる。
すなわち本発明のスクリーニング方法は、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現量を低下させる物質を探索することによって、ＩＢＤの改善薬または治療薬の有効成分となる候補物質を提供するものである。
【０１５８】
候補物質の選別は、具体的にはＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかを発現産生している細胞を用いる場合は、被験物質（候補物質）を添加した細胞における前記本発明タンパク質のタンパク量（レベル）が、被験物質（候補物質）を添加しない細胞のその量（レベル）に比して低くなることを指標として、行うことができる。また、これらＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現産生に発現誘導物質を必要とする細胞を用いる場合は、発現誘導物質（例えばリポポリサッカライド（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：ＬＰＳ）、ホルボールエステル（ＰＭＡ等）、カルシウムイオノフォア、サイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＴＮＦα、ＩＦＮγ等）等）によって誘導される当該タンパクの産生が被験物質の存在によって抑制されること、すなわち発現誘導物質の存在下で被験物質を接触させた細胞の遺伝子発現が、発現誘導物質存在下で被験物質を接触させなかった対照細胞（正のコントロール）に比して低くなることを指標として、当該被験物質を候補物質として選別することができる。
【０１５９】
より具体的には、例えば結腸由来細胞であるＣａｃｏ−２細胞、ＨＴ−２９細胞またはＣＯＬＯ　２０５　細胞等の細胞を用いてＩＢＤの改善薬または治療薬の有効成分となる候補物質をスクリーニングするには、被験物質を加えない細胞（対照細胞）と、被験物質を加えた細胞とで、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかのタンパク質の量（レベル）を比較し、その量（レベル）の減少を指標として候補物質を選別することができる。また、リポポリサッカライド（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：ＬＰＳ）、ホルボールエステル（ＰＭＡ等）、カルシウムイオノフォア、サイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＴＮＦ等）などの刺激剤を添加した細胞（対照細胞）と、刺激剤と被験物質とを同時に加えた細胞とで、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかのタンパク質の量（レベル）を比較し、その量（レベル）の低下を指標として候補物質を選別することができる。また、前記刺激剤を添加して、既にＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかが産生された状態の細胞に被験物質を添加し、被験物質を添加しない対照細胞とで、前記本発明タンパク質の量（レベル）を比較して、その量（レベル）の低下を指標として候補物質を選別することもできる。
【０１６０】
本発明のスクリーニング方法にかかるＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの産生量は、前述したように、例えば抗体に関する本発明疾患マーカー（例えばヒトＦｃγＲ　ＩＩＩａタンパク質またはそのホモログ、ヒトＦｃγＲ　ＩＩＩｂタンパク質またはそのホモログ、ヒトＭｉｇタンパク質またはそのホモログ、ヒトＮＲＧ−２タンパク質またはそのホモログ、ヒトヘキソキナーゼ　３タンパク質またはそのホモログ、ヒトＨＭ７４タンパク質またはそのホモログ、ヒトＲＥＧ　ＩＩＩタンパク質またはそのホモログ、ヒトＬＰＡＰタンパク質またはそのホモログ、ヒトＭｉｐ−１βタンパク質またはそのホモログ、ヒトＬ−セレクチンタンパク質またはそのホモログ、ヒトＥＧＦＬ６タンパク質またはそのホモログ、ヒトＩＤＯタンパク質またはそのホモログ、ヒトＩＬ−８タンパク質またはそのホモログ、ヒトＣＤ１１ｃタンパク質またはそのホモログ、ヒトＴＬＲ２タンパク質またはそのホモログを認識する抗体）を用いたウエスタンブロット法などの公知方法に従って定量できる。ウエスタンブロット法は、一次抗体として本発明疾患マーカーを用いた後、二次抗体として１２５Ｉなどの放射性同位元素、蛍光物質、ホースラディッシュペルオキシターゼ（ＨＲＰ）などの酵素等で標識した一次抗体に結合する抗体を用いて標識し、これら標識物質由来のシグナルを放射線測定器（ＢＡＳ−１８００ＩＩ：富士フィルム社製など）、蛍光検出器などで測定することによって実施できる。また、一次抗体として本発明疾患マーカーを用いた後、ＥＣＬ　Ｐｌｕｓ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔｔｉｎｇ　Ｄｅｔｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　（アマシャム　ファルマシアバイオテク社製）を利用して、該プロトコールに従って検出し、マルチバイオイメージャーＳＴＯＲＭ８６０（アマシャム　ファルマシアバイオテク社製）で測定することもできる。
【０１６１】
（３−３）　タンパク質の機能（活性）を指標とするスクリーニング方法
本発明は、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングする方法を提供する。
本発明のスクリーニング方法は次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
【０１６２】
（ａ）被験物質を　ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２に接触させる工程、
（ｂ）上記（ａ）の工程に起因して生じるＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の機能または活性を測定し、該機能または活性を被験物質を接触させない場合のＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の機能または活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の機能または活性の低下をもたらす被験物質を選択する工程。
【０１６３】
本発明のスクリーニング方法おいては、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の公知の機能・活性に基づく如何なる機能・活性測定方法をも利用することができる。すなわち、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の公知の機能・活性測定系に被験物質を添加し、当該ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の公知の機能・活性を抑制・阻害する被験物質を、ＩＢＤに対して改善／治療効果を有する候補物質として選択するスクリーニング方法であれば、本発明のスクリーニング方法の範疇に含まれる。
【０１６４】
前記本発明のスクリーニングは、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２を含む水溶液、細胞または該細胞から調製した細胞画分と、被験物質とを接触させることにより行うことができる。
【０１６５】
ここでＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２を含む水溶液としては、例えばＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２を含む通常の水溶液の他、これらのタンパク質を含む細胞溶解液、細胞破砕液、核抽出液あるいは細胞の培養上清などを例示することができる。
【０１６６】
また、本発明のスクリーニング方法に用いられる細胞としては、内在性及び外来性を問わず、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２を発現し得る細胞を挙げることができる。該細胞としては、具体的には、前記（３−１）項の（１）〜（３）に記載したような、ＩＢＤの動物モデルより単離、調製したリンパ系組織や腸管組織由来の初代培養細胞、種々の刺激剤で処理したリンパ系組織や腸管組織由来の初代培養細胞若しくは株化細胞、または本発明遺伝子のいずれかを導入した株化細胞などを用いることができる。
また本発明のスクリーニング方法に用いられる細胞画分とは、上記細胞に由来する各種の画分を意味し、これには、例えば細胞膜画分、細胞質画分、細胞核画分などが含まれる。
【０１６７】
前記スクリーニングにおいて用いられるＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２は、いずれも公知のタンパク質であり、前記（１−３）に記述したように、本発明により提供される遺伝子の配列情報（配列番号１〜１４，２９）に基づいて、ＤＮＡクローニング、各プラスミドの構築、宿主へのトランスフェクション、形質転換細胞の培養、および必要に応じて培養物からのタンパク質の回収の操作により得ることができる。これらの操作は、当業者に既知の方法、あるいは文献記載の方法（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ　ｅｔ　ａｌ．，　ＣＳＨ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　（１９８３），　ＤＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　ＤＭ．　Ｇｌｏｖｅｒ，　ＩＲＬ　ＰＲＥＳＳ　（１９８５））などに準じて行うことができる。
【０１６８】
実施例に示すように、ＩＢＤに罹患した患者の大腸（結腸）組織では、正常な大腸（結腸）組織に比して、特異的にＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子が発現上昇している。この知見から、これらの遺伝子の発現産物（タンパク質）の機能（活性）亢進は、ＩＢＤと関連していると考えられる。よって本発明のスクリーニング方法には、これらＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の機能（活性）を指標として、該タンパク質の機能（活性）を抑制する物質を探索する方法が包含される。本発明スクリーニング方法によれば、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の機能または活性を抑制する物質を探索でき、かくしてＩＢＤの緩和／抑制作用を有する（ＩＢＤに対して改善／治療効果を発揮する）候補物質が提供される。
【０１６９】
すなわち本発明のスクリーニング方法は、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の機能または活性を抑制する物質を探索することによって、ＩＢＤの改善薬または治療薬の有効成分となる候補物質を提供するものである。
【０１７０】
本発明スクリーニング方法によってスクリーニングされる被験物質（候補物質）は、制限されないが、核酸、ペプチド、蛋白質（ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２に対する抗体を含む）、有機化合物、無機化合物などであり、本発明スクリーニングは、具体的にはこれらの被験物質またはこれらを含む試料（被験試料）を上記水溶液、細胞または細胞画分と接触させることにより行われる。被験試料としては、被験物質を含む、細胞抽出液、遺伝子ライブラリーの発現産物、合成低分子化合物、合成ペプチド、天然化合物などが挙げられるが、これらに制限されない。
【０１７１】
本発明の各タンパク質の機能または活性に基づくスクリーニング方法のうち、共通のアッセイ法に基づくスクリーニング方法については、以下の「Ｉ．受容体結合阻害活性に基づくスクリーニング」、および「ＩＩ．ＧＰＣＲ活性に基づくスクリーニング」の項に記述する。また本発明の各タンパク質の個々のスクリーニング方法については、以下の「ＩＩＩ．本発明の各タンパク質の機能（活性）に基づくスクリーニング」の項に記述する。
【０１７２】
Ｉ．受容体結合阻害活性に基づくスクリーニング
本発明タンパク質のうち、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｌ−セレクチンおよびＴＬＲ２は受容体であり、そのリガンド（受容体結合物質）として以下のものが知られている。
・ＦｃγＲ　ＩＩＩａ：ＩｇＧ（モノマー）、３Ｇ８（ＦｃγＲ　ＩＩＩａのモノクローナル抗体）
・ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ：ＩｇＧ（集合体）
・Ｌ−セレクチン：シアリルルイス酸、ＧｌｙＣＡＭ−１
・ＴＬＲ２：バクテリア由来のリポタンパク質、ペプチドグリカン
【０１７３】
またＭｉｇ、ＮＲＧ−２、Ｍｉｐ−１β及びＩＬ−８はリガンドであり、その受容体として以下のものが知られている。
・Ｍｉｇ：ＣＸＣＲ３
・ＮＲＧ−２：ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ２，３，４
・Ｍｉｐ−１β：ＣＣＲ５
・ＩＬ−８：ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２
【０１７４】
よって、これら本発明タンパク質（ＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｌ−セレクチン、ＴＬＲ２、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、Ｍｉｐ−１β及びＩＬ−８）の機能または活性の低下をもたらす被験物質（候補物質）のスクリーニングは、被験物質が、前記受容体とリガンドとの結合を阻害するか否かを測定することによって行うことができる。具体的には本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質の存在下で、前記受容体と前記リガンドとを接触させる工程、
（ｂ）　上記受容体に対するリガンドの結合量を測定し、当該結合量を、被験物質非存在下で受容体とリガンドとを接触させることによって得られる受容体に対するリガンドの結合量（対照結合量）と比較する工程、及び
（ｃ）　上記（ｂ）の結果に基づいて、対照結合量に比して結合量を低下させる被験物質を選択する工程。
【０１７５】
この場合、前記受容体とリガンドとの結合阻害は、▲１▼受容体に結合することによって、リガンドの受容体への結合を阻害する態様のものであってもよいし、▲２▼リガンドに結合することによって、リガンドの受容体への結合を阻害する態様のものであってもよい。但し、とりわけ▲１▼の態様の場合は、受容体に結合してもリガンドと同じ作用を発揮しない被験物質を選択することが必要である。このため、上記のスクリーニング方法で選別された被験物質は更に、下記：
（ｄ）上記（ｃ）で選択された被験物質の中から、更にリガンドと同じ作用を発揮しない被験物質を選択する工程、
に供することが好ましい。
【０１７６】
本発明スクリーニングで用いる受容体は、精製物（単離物）であっても良いし、当該受容体を含有する細胞またはその細胞画分の形態であっても良い。
本発明スクリーニングで用いる受容体を含有する細胞は、当該受容体を天然に発現している細胞を用いても良いし、また当該受容体をコードする遺伝子を細胞に導入して作製した形質転換細胞を用いても良い。
【０１７７】
前記形質転換細胞は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　２ｎｄ　Ｅｄｔ．，　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ　（１９８９）等の基本書に従い、当業者にとって公知の方法で調製することができる。例えば、前記受容体のｃＤＮＡをｐＣＡＧＧＳ（Ｇｅｎｅ　１０８，１９３−１９９（１９９１））、ｐｃＤＮＡ１．１、ｐｃＤＮＡ３．１誘導体（インビトロジェン社）などの公知の発現ベクターに挿入する。その後、適当な宿主に導入し、培養することにより、導入した受容体のＤＮＡに対応するタンパク質を発現させた形質転換細胞を作製することができる。宿主としては、一般的に広く普及している、ＣＨＯ細胞、Ｃ１２７細胞、ＢＨＫ２１細胞、ＣＯＳ細胞などを用いることができるが、これに限定されることなく、酵母、細菌、昆虫細胞などを用いることもできる。
【０１７８】
受容体タンパク質のｃＤＮＡを有する発現ベクターの宿主細胞への導入方法としては、公知の発現ベクターの宿主細胞への導入方法であれば、どのような方法でもよく、例えばリン酸カルシウム法（Ｊ．　Ｖｉｒｏｌ．，　５２，　４５６−４６７（１９７３））、ＬＴ−１（Ｐａｎｖｅｒａ社製）を用いる方法、遺伝子導入用リピッド（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ、Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ；Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ社製）を用いる方法などが挙げられる。
前記受容体を天然に発現する細胞、および前記受容体を発現する形質転換細胞は、そのままスクリーニングに用いることができるが、細胞膜をスクリーニングに用いる場合は、例えば以下のようにして細胞膜画分を得ることができる。すなわちまず細胞に低張バッファーを添加し、細胞を低張破壊した後、ホモジナイズし、遠心分離することにより細胞膜画分の沈殿物を得る。そしてこの沈殿物をバッファーに懸濁することにより、受容体を含有する細胞膜画分を得ることができる。得られた細胞膜画分は、抗体を結合させたカラム等により常法で精製することもできる。
【０１７９】
本発明スクリーニングで用いられる前記リガンドも、前記受容体と同様の手法で調製された形質転換細胞から、常法により組換えタンパクを回収することにより得ることができる。さらに、前記天然リガンドの他、アゴニストリガンドとして公知のものも用いることができる。
これらリガンドは、そのままで用いても良いし、任意の標識物質で標識されたものを用いることもできる。ここで標識物質としては、放射性同位体（３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、１２５Ｉ等）、蛍光物質（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｐｒｏｂｅｓ社Ａｌｅｘａ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｌａｂｅｌｉｎｇ　Ｋｉｔｓ等）、化学発光物質（Ａｓｓａｙ　Ｄｅｓｉｇｎｓ社Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ　Ｌａｂｅｌｉｎｇ　Ｋｉｔ等）、ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ社ＥＺ−Ｌｉｎｋ　Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ　Ｋｉｔｓ等）、マーカータンパク質、またはペプチドタグなどを例示することができる。マーカータンパク質としては、例えばアルカリフォスファターゼ（Ｃｅｌｌ，　６３，１８５−１９４，１９９０）、抗体のＦｃ領域（Ｇｅｎｂａｎｋ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ　Ｍ８７７８９）、またはＨＲＰ（Ｈｏｒｓｅ　ｒａｄｉｓｈ　ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）などの従来公知のマーカータンパク質を挙げることができる。またペプチドタグとしては、例えばＭｙｃタグ、Ｈｉｓタグ、ＦＬＡＧタグなどの従来公知のペプチドタグを挙げることができる。
【０１８０】
受容体結合阻害活性の測定は、具体的には、以下の方法が例示される。すなわち、前記受容体を含有する水溶液（通常緩衝液が用いられる）、前記細胞若しくは細胞膜画分に、１０−３〜１０−１０Ｍの適当な濃度に調製した被験化合物溶液（通常溶媒には水もしくは緩衝液が用いられるが、溶解度に応じてエタノールやＤＭＳＯを添加することもできる）を加えた後、標識した前記リガンドを加え、一定時間（通常、１０分〜２時間）反応させる。その後遠心分離等により上清を単離して放射活性を測定し、上清中に含まれる標識したリガンド量を計測することができる。あるいは、形質転換細胞もしくは細胞膜画分を含む沈殿物を界面活性剤、塩基を含む溶液に溶解し、その放射活性を測定し、沈殿物に含まれる標識リガンド量を計測することもできる。
【０１８１】
上記の数値を、被験化合物の代わりに溶媒をブランクとして用いて実施した場合の値（対照結合量）と比較することにより、被験化合物が、受容体と標識リガンドの結合を阻害するか否かを評価することができる。すなわち候補物質のスクリーニングは、被験物質存在下での結合量が、被験物質非存在下での結合量に比して、減少するか否かを指標にして行うことができる。
具体的な阻害率（％）については、以下の式：
｛１−（被験物質を添加した場合に本発明タンパク質と結合した標識アゴニストリガンド量）／（被験物質非添加時における本発明タンパク質と結合した標識アゴニストリガンド量）｝Ｘ１００
で算出することによって求めることができる。
【０１８２】
ＩＩ．　ＧＰＣＲ活性に基づくスクリーニング
本発明タンパク質のうち、Ｍｉｇ、Ｍｉｐ−１β及びＩＬ−８はいずれもリガンドであり、その受容体は以下の如きＧＰＣＲ（Ｇ蛋白共役型受容体；Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｕｐｌｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ）であることが知られている。
Ｍｉｇ：ＣＸＣＲ３
Ｍｉｐ−１β：ＣＣＲ５
ＩＬ−８：ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２
【０１８３】
また本発明タンパク質のうちＨＭ７４はＧＰＣＲである。よって、これら本発明タンパク質（Ｍｉｇ、Ｍｉｐ−１β及びＩＬ−８及びＨＭ７４）の機能または活性の低下をもたらす被験物質（候補物質）のスクリーニングは、ＧＰＣＲ活性を阻害するか否かを測定することによって、行うことができる。以下、代表的な手法として、（１）　ＧＴＰとの結合活性に基づくスクリーニング、及び（２）　ＧＰＣＲの生理活性に基づくスクリーニングについて記述する。
【０１８４】
（１）ＧＴＰとの結合活性に基づくスクリーニング
ＧＰＣＲとの結合活性に基づくスクリーニングは、ＧＰＣＲがＧＤＰ存在下でＧＴＰアナログであるＧＴＰγＳと結合する性質を利用して行うことが出来る。すなわち本発明のスクリーニングは、ＧＰＣＲとＧＴＰγＳとの結合（より具体的にはＧＰＣＲとＧタンパク質との複合体とＧＴＰγＳとの結合）を被験物質が阻害（抑制）するか否かを測定することによって、行うことができる。具体的には本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質の存在下で、前記ＧＰＣＲ、前記リガンドおよびＧＴＰを接触させる工程、
（ｂ）　上記（ａ）の工程に起因して生じるＧＴＰ結合量を測定し、当該結合量を、被験物質非存在下でＧＰＣＲ、リガンドおよびＧＴＰを接触させることによって得られるＧＴＰ結合量（対照結合量）と比較する工程、及び
（ｃ）　上記（ｂ）の結果に基づいて、対照結合量に比してＧＴＰ結合量を低下させる被験物質を選択する工程。
【０１８５】
本発明スクリーニングで用いるＧＰＣＲを含有する細胞は、当該ＧＰＣＲを天然に発現している細胞を用いても良いし、また当該ＧＰＣＲをコードする遺伝子を細胞に導入して作製した形質転換細胞を用いても良い。具体的には、以下の方法が例示される。
すなわち、当業者に公知の方法を用いて、前記ＧＰＣＲの発現ベクターを作製し、ＣＨＯ−Ｋ１細胞・ＨＥＫ２９３細胞等に過剰発現させた形質転換細胞か、若しくは前記ＧＰＣＲを天然に発現している細胞を準備する。ここで、必要に応じて、Ｇタンパク質の発現ベクターを共発現させることもできる。次に、前記細胞から遠心分離等の操作により、細胞膜画分を調製する。これを、適当な緩衝液などの溶媒中で、前記リガンドおよび被験物質とともに混合し、一定時間（例えば、３０分〜２時間）インキュベートする。更に、［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳを混合し、一定時間（例えば、３０分〜２時間）インキュベートする。グラスフィルター上で、緩衝液で洗浄することにより結合反応を終了させた後、フィルター上の放射活性を測定することにより、前記ＧＰＣＲとＧタンパク質との複合体に結合した［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ　量を算出することができる。候補物質のスクリーニングは、被験物質存在下での［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ結合量が、被験物質非存在下での［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ結合量に比して、減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０１８６】
なお、リガンドが不明であるＨＭ７４については、ＨＭ７４およびＧタンパク質の融合タンパク質を用いる方法、ＧＰＣＲにｍｕｔａｉｏｎを入れる方法、あるいは過剰発現させる方法等を用いることにより、リガンド非存在下で上記のスクリーニングを実施することができる。これについては、本明細書実施例、および　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ．　３４３：２６０−７３，２００２，　Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，　２７６：　３５８８３−９０，２００１　に記載された方法に従って実施することができる。
【０１８７】
（２）　ＧＰＣＲの生理活性に基づくスクリーニング
ＧＰＣＲにアゴニストリガンドが結合することによって生ずる生理活性を指標として、ＧＰＣＲの機能（活性）を抑制する候補物質を選別することもできる。具体的には本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質の存在下で、前記受容体と前記リガンドとを接触させる工程、
（ｂ）　上記（ａ）の工程に起因して生じるＧＰＣＲを介した生理活性を測定し、当該生理活性を、被験物質非存在下で受容体とリガンドとを接触させることによって得られるＧＰＣＲを介した生理活性（対照生理活性）と比較する工程、及び
（ｃ）　上記（ｂ）の結果に基づいて、対照生理活性に比して生理活性を低下させる被験物質を選択する工程。
【０１８８】
ここでＧＰＣＲを介した生理活性としては、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内カルシウムイオン濃度の増加もしくはその抑制、細胞内ｃＡＭＰ濃度の増加もしくはその抑制、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内タンパク質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓ活性化、ｃＡＭＰ応答性エレメントのレポータージーンの活性化もしくはその抑制等が挙げられる。
該生理活性は、公知の方法、または市販の測定用キットを用いて測定することができる。すなわち、前記ＧＰＣＲを含有する細胞をマルチウェルプレート等に培養する。新鮮な培地、あるいは細胞毒性を示さない適当なバッファーに交換し、被験化合物、および／またはリガンド等を添加して一定時間インキュベートした後、細胞を抽出、あるいは上清液を回収して生成した産物をそれぞれ該当する方法に従って定量する。生理活性の指標とする物質（例えばアラキドン酸など）の生成が、細胞が含有する分解酵素によって測定不能な場合は、該分解酵素に対する阻害剤を併用することもできる。また、ｃＡＭＰ産生抑制などの活性については、フォルスコリンなどで細胞の産生量を増大させて、感度良く測定することもできる。
【０１８９】
具体的な測定手順としては、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｉｍａｇｉｎｇ　ｐｌａｔｅ　ｒｅａｄｅｒ（ＦＬＩＰＲ）を用いて、細胞内カルシウム濃度の変動を検出することなどが挙げられる。前記ＧＰＣＲが、Ｇｑ蛋白ではなくＧｓ蛋白もしくはＧｉ蛋白と共役して存在する場合でも、そのシグナルをＧｑタイプのシグナルに変換し、細胞内カルシウムイオン量を測定することにより、スクリーニングを行うことができる。すなわち、
１）前記ＧＰＣＲ遺伝子の発現ベクターと、Ｇｑ蛋白、もしくはＧｑｓ５蛋白（Ｇｑｓ５とは、Ｃ末端に、Ｇｓ蛋白のＣ末端アミノ酸５残基を置換したＧｑ蛋白を意味する。）、もしくはＧｑｉ５蛋白（Ｇｑｉ５とは、Ｃ末端に、Ｇｉ蛋白のＣ末端アミノ酸５残基を置換したＧｑ蛋白を意味する。）の発現ベクターを作製する。ここで、細胞株としては、ＣＨＯ−Ｋ１細胞等を用いることができ、上記発現ベクターを遺伝子導入試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔｏａｍｉｎｅ　（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）等を用いて共導入することができる。
２）次に該細胞を、ｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄ（色素を細胞内に保持するために、ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｄｒｕｇ−ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｐｕｍｐの阻害剤として用いる。）、およびＦｌｕｏ−３　ＡＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｐｒｏｂｅ社）等のカルシウムイオンによって蛍光活性を示す色素を含むＦ１２培養培地中で、ＣＯ２インキュベーターにて一定時間（例えば３０分〜２時間）培養する。
３）リガンドをｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄを含むＨＢＳＳ等の培養培地に溶解した溶液を、添加し、２分後までＦＬＩＰＲにて計測する。検出は、４８８ｎｍのアルゴンレーザーで細胞を励起し、カルシウムイオンが結合したＦｌｕｏ−３の蛍光を５００−５６０ｎｍの波長でとらえることによって行う。リガンド添加直後から６０秒後までの蛍光強度から、添加前の値をバックグラウンドとして差し引いた値を活性とする。被験物質を添加する場合はリガンドを添加する前に添加し、その後リガンドを添加する。
４）候補物質の選択は、被験物質の存在下におけるカルシウムイオン量が、被験物質非存在下におけるカルシウムイオン量に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０１９０】
また、ｃＡＭＰ応答性エレメントのレポータージーンアッセイを用いる方法は、前記ＧＰＣＲにリガンドが結合して生じるシグナル伝達により活性化されるｃＡＭＰ応答性エレメント（ＣＲＥ）の下流にルシフェラーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、成長ホルモン、ＧＦＰなどのレポーター遺伝子を連結し、レポータージーンアッセイを行う方法である。すなわち、
１）前記ＧＰＣＲ遺伝子の発現ベクターと、Ｇタンパク（Ｇｓ、Ｇｉ）の発現ベクター、およびｃＡＭＰ応答性エレメント（ＣＲＥ）の下流にルシフェラーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、成長ホルモン、ＧＦＰなどのレポーター遺伝子を連結した遺伝子を作製する。ここで、細胞株としては、ＣＨＯ−Ｋ１細胞等を用いることができ、上記発現ベクターを遺伝子導入試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔｏａｍｉｎｅ　（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）等を用いて共導入することができる。また、前記Ｇタンパクを発現している細胞を用いる場合は、前記ＧＰＣＲの遺伝子発現ベクターおよびレポーターベクターのみを導入する。
２）次に該細胞を、適当な培地中で、ＣＯ２インキュベーターにて一定時間（例えば４〜８時間）培養する。
３）培地交換後、リガンドを適当な培養培地に溶解した溶液を添加し、一定時間（４時間〜２４時間）後、レポーター活性を測定する。例えばルシフェラーゼの場合は、細胞溶解液で細胞を溶かし、その一部分を用いてルシフェラーゼ基質溶液（プロメガ社Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　ａｓｓａｙ　ｓｙｓｔｅｍ等）と反応させた際の発光をルミノメーターで測定する。被験物質はリガンドを添加する前に添加する。
４）候補物質の選択は、被験物質の存在下におけるレポーター活性が、被験物質非存在下におけるレポーター活性に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０１９１】
ＩＩＩ．本発明の各タンパク質の機能（活性）に基づくスクリーニング
以下、本発明タンパク質の各々の機能（活性）に基づくスクリーニング方法につき例示する。
【０１９２】
（１）　ＦｃγＲ　ＩＩＩａの機能（活性）に基くスクリーニング方法
免疫グロブリンの構造は、抗原結合部位を形成するＦａｂとよばれる部分と補体などを結合するＦｃと呼ばれる部分より構成されている。このＦｃ部位と特異的に結合する分子がＦｃ受容体で、ＩｇＧに対するものがＦｃγＲである。このうちＦｃγＲ　ＩＩＩはＣＤ１６ともよばれ、ＦｃγＲ　ＩＩＩａはマクロファージ、単球、ＮＫ細胞、マスト細胞、好酸球、樹状細胞、ランゲルハンス細胞などで発現、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂは好中球（多形核白血球）とＩＦＮ−γによって活性化された好酸球にて発現していることが知られている。
ＦｃγＲ　ＩＩＩａの機能としてＩｇＧやＦｃγＲ　ＩＩＩａに対するモノクローナル抗体（３Ｇ８など）との結合（Ｅｄｂｅｒｇ，　Ｊ．　Ｃ．　ら、Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　１５９，　３８４９−３８５７，　１９９７）や、結合によって起こるＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２Ｒ、ｃ−ｆｏｓ等の産生増加（Ｃａｓｓａｔｅｌｌａ，　Ｍ．　Ａ．　ら、Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　１６９，　５４９−５６７，　１９８９、Ａｎｅｇｏｎ，　Ｉ．　ら、Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　１６７，　４５２−４７２，　１９８８、Ｓｕｌｉｃａ，　Ａ．　ら、Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　２６，　１１９９−１２０３，　１９９６、Ｔｒｏｔｔａ，　Ｒ．　ら、Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　１８４，　１０２７−１０３５，　１９９６）、細胞内カルシウムやＩＰ３の濃度の上昇（Ｃａｓｓａｔｅｌｌａ，　Ｍ．　Ａ．　ら、Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　１６９，　５４９−５６７，　１９８９）、Ｖａｖ、ＰＬＣ−γ１、ＰＬＣ−γ２、ｐｐ７０　等のリン酸化（Ｘｕ，　Ｘ．　ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｊ．，　３１８，　５２７−５３２，　１９９６、Ｌｉａｏ，　Ｆ．　ら、Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　１５０，　２６６８−２６７４，　１９９３、Ｖｉｖｉｅｒ，　Ｅ．　ら、Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　２３，　１８７２−１８７６，　１９９３）、ＮＫ細胞の増殖変化（ＩｇＧモノマー［ｍＩｇＧ］　とＩＬ−２　共存にて亢進、３Ｇ８　［モノクローナル抗体］　とＩＬ−２　共存にて低下）、Ｃｙｔｏｔｏｘｙｃｉｔｙ活性の減少（Ｓｕｌｉｃａ，　Ａ．　ら、Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２８，　１０３１−１０３６，　１９８２、ＩＬ−２　非存在下の３Ｇ８刺激では増加　［Ｓｕｌｉｃａ，　Ａ．　ら、Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　２６，　１１９９−１２０３，　１９９６］）などが知られている。従って、該ＦｃγＲ　ＩＩＩａの公知の性質に基づいて、ＦｃγＲ　ＩＩＩａの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
具体的には、以下のスクリーニング方法を例示することができる。
【０１９３】
▲１▼ＦｃγＲ　ＩＩＩａとＩｇＧとの結合活性
ＦｃγＲ　ＩＩＩａとＩｇＧとの結合作用を利用することにより、ＦｃγＲ　ＩＩＩａの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質の存在下で、ＦｃγＲ　ＩＩＩａとＩｇＧとを接触させる工程、
（ｂ）　ＦｃγＲ　ＩＩＩａに対するＩｇＧの結合量を測定し、当該結合量を、被験物質非存在下でＦｃγＲ　ＩＩＩａとＩｇＧとを接触させることによって得られるＦｃγＲ　ＩＩＩａに対するＩｇＧの結合量（対照結合量）と比較する工程、及び
（ｃ）　上記（ｂ）の結果に基づいて、対照結合量に比して結合量を低下させる被験物質を選択する工程。
【０１９４】
当該スクリーニングは、前記Ｉ．「受容体結合阻害活性に基づくスクリーニング」に記載の方法に基づき行うことができる。ここでＦｃγＲ　ＩＩＩａとしては、ＦｃγＲ　ＩＩＩａを発現する細胞又はその細胞膜画分を用いることが好ましく、具体的には前述のＮＫ細胞を挙げることができる。
【０１９５】
▲２▼ＦｃγＲ　ＩＩＩａの細胞内カルシウムイオン増加活性
ＦｃγＲ　ＩＩＩａの有する細胞内カルシウムイオン増加活性を利用することにより、ＦｃγＲ　ＩＩＩａの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ発現細胞、およびＦｃγＲ　ＩＩＩａ作動性リガンド（ＩｇＧ、３Ｇ８　など）を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞の細胞内カルシウムイオン増加活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞の細胞内カルシウムイオン増加活性と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞の細胞内カルシウムイオン増加活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０１９６】
ここでＦｃγＲ　ＩＩＩａの細胞内カルシウムイオン増加活性は、Ｃａｓｓａｔｅｌｌａ，　Ｍ．　Ａ．　ら、Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　１６９，　５４９−５６７，　１９８９　に記載の方法を参考にして測定することができる。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した場合の細胞内カルシウムイオン増加量が、被験物質を添加しない場合の細胞内カルシウムイオン増加量に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０１９７】
▲３▼細胞活性化活性
ＦｃγＲ　ＩＩＩａが発現しているＮＫ細胞をＦｃγＲ　ＩＩＩａ作動性リガンド（ＩｇＧ、３Ｇ８　など）などで刺激することで細胞の活性化、サイトカインやＩＬ−２Ｒ　の産生が起こることが知られている。従って、該活性を利用することにより、ＦｃγＲ　ＩＩＩａの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＦｃγＲ　ＩＩＩａを発現しておりかつサイトカインもしくはＩＬ−２Ｒの産生が可能な細胞、およびＦｃγＲ　ＩＩＩａ作動性リガンドとを接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のサイトカインもしくはＩＬ−２Ｒ　産生量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のサイトカインもしくはＩＬ−２Ｒ　産生量と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のサイトカインもしくはＩＬ−２Ｒ　産生量を低下させる被験物質を選択する工程。
【０１９８】
ここで用いられる「ＦｃγＲ　ＩＩＩａを発現しておりかつサイトカインもしくはＩＬ−２Ｒの産生が可能な細胞」としては、ＮＫ細胞などが挙げられる。また「ＦｃγＲ　ＩＩＩａ作動性リガンド」としては、３Ｇ８などのモノクローナル抗体やＩｇＧなどが挙げられる。また測定対象である「サイトカイン」としては、炎症性サイトカインであるＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−γなどが挙げられる。当該サイトカイン産生量の測定は、例えばＳｕｌｉｃａ，　Ａ．　ら、Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　２６，　１１９９−１２０３，　１９９６、やＡｎｅｇｏｎ，　Ｉ．　ら、Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　１６７，　４５２−４７２，　１９８８　に記載の方法を参考にすることができる。
【０１９９】
▲４▼ＦｃγＲ　ＩＩＩａのシグナル活性化
ＦｃγＲ　ＩＩＩａにリガンドが結合することによって、ｐｐ７０、Ｖａｖ、ＭＡＰＫ等の細胞内シグナル伝達分子が活性化され、ｃ−ｆｏｓ遺伝子の発現量が増加することが知られている。従ってこれらの活性化を検出することによって、またはｃ−ｆｏｓ遺伝子の発現を検出することによっても、ＦｃγＲ　ＩＩＩａの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ発現細胞、およびＦｃγＲ　ＩＩＩａ作動性リガンドとを接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のｐｐ７０、Ｖａｖ、ＭＡＰＫの活性化もしくはｃ−ｆｏｓ遺伝子の発現量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のｐｐ７０、Ｖａｖ、ＭＡＰＫの活性化もしくはｃ−ｆｏｓ遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のｐｐ７０、Ｖａｖ、ＭＡＰＫの活性化もしくはｃ−ｆｏｓ遺伝子の発現を抑制する被験物質を選択する工程。
【０２００】
ここで用いられる「ＦｃγＲ　ＩＩＩａ発現細胞」としては、ＮＫ細胞などが挙げられる。また「ＦｃγＲ　ＩＩＩａ作動性リガンド」としては、３Ｇ８などのモノクローナル抗体やＩｇＧなどが挙げられる。また「ｐｐ７０、Ｖａｖ、ＭＡＰＫの活性化」とは、具体的には各因子のリン酸化をさす。当該活性化に関わる各因子の活性化およびｃ−ｆｏｓ遺伝子発現量の測定は、例えばＸｕ，　Ｘ．　ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｊ．，　３１８，　５２７−５３２，　１９９６や、Ｖｉｖｉｅｒ，　Ｅ．　ら、Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　２３，　１８７２−１８７６，　１９９３　等に記載の方法を参考にして行うことができる。
【０２０１】
（２）ＦｃγＲ　ＩＩＩｂの機能（活性）に基くスクリーニング方法
ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ　発現細胞はＩｇＧでコートされた粒子や可溶性免疫複合体を効率よく貪食、またはエンドサイトーシスにより取り込み、代謝と自然免疫に寄与するとともに、抗原ペプチドを再び提示してＴ細胞を活性化し、免疫応答の賦活にも寄与する。ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ　の細胞外部分が遊離し（可溶性レセプター）、Ｉｇ結合因子となってＩｇ産生を調節すること、好中球のアポトーシスを抑制することなどが知られている。（Ｒｅｇｎａｕｌｔ，　Ａ．ら、Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　１８９，　３７１−８０，　１９９９、Ｔｅｉｌｌａｕｄ，Ｊ．Ｌ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，　４，　４８−６４，　１９９４、Ｄｕｒａｎｄ，　Ｖ．　ら、Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３１，　１９５２−１９６１，　２００１）。従って、該ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ　の公知の性質に基づいて、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ　の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
具体的には、以下のスクリーニング方法を例示することができる。
【０２０２】
▲１▼ＦｃγＲ　ＩＩＩｂの貪食活性
細胞表面にＦｃγＲ　ＩＩＩｂを発現している細胞がＩｇＧを貪食する作用を利用することにより、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂを発現する細胞およびＩｇＧを接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＩｇＧの貪食活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＩｇＧの貪食活性と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＩｇＧの貪食活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０２０３】
ここでＦｃγＲ　ＩＩＩｂのファゴサイト（貪食作用）活性は、例えばＬｅｗ，　Ｄ．　Ｐ．　ら、Ｎａｔｕｒｅ，　３１５，　５０９−５１１，　１９８５　およびＨｅｄ，　Ｊ．　ら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，　４５，　７２７−７３６，　１９８２の方法を参考にして測定することができる。すなわち、ボランティアから採血し、精製した好中球と、ＦＩＴＣで標識した酵母を、抗酵母抗体（Ｌｅｗ，　Ｄ．　Ｐ．　ら、Ｎａｔｕｒｅ，　３１５，　５０９−５１１，　１９８５　およびＨｅｄ，　Ｊ．　ら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，　４５，　７２７−７３６，　１９８２）とともにインキュベートして作製したＦＩＴＣ−ＩｇＧ粒子を用いる。好中球とＦＩＴＣ−ＩｇＧ粒子をインキュベートした後、細胞外のＦＩＴＣ−ＩｇＧ粒子をトリパンブルーでクエンチングし、細胞内に取り込まれたＦＩＴＣの蛍光をモニターする。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した前記細胞におけるＦＩＴＣ量が、被験物質を添加しない対照細胞の当該ＦＩＴＣ量に比して、減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０２０４】
▲２▼ＦｃγＲ　ＩＩＩｂとＩｇＧとの結合活性
ＦｃγＲ　ＩＩＩｂとＩｇＧとの結合作用を利用することにより、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質の存在下で、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂとＩｇＧとを接触させる工程、
（ｂ）　ＦｃγＲ　ＩＩＩｂに対するＩｇＧの結合量を測定し、当該結合量を、被験物質非存在下でＦｃγＲ　ＩＩＩｂとＩｇＧとを接触させることによって得られるＦｃγＲ　ＩＩＩｂに対するＩｇＧの結合量（対照結合量）と比較する工程、及び
（ｃ）　上記（ｂ）の結果に基づいて、対照結合量に比して結合量を低下させる被験物質を選択する工程。
【０２０５】
当該スクリーニングは、前記Ｉ．「受容体結合阻害活性に基づくスクリーニング」に記載の方法に基づき行うことができる。ここでＦｃγＲ　ＩＩＩｂとしては、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂを発現する細胞又はその細胞膜画分を用いることが好ましく、具体的には前述の好中球を挙げることができる。
【０２０６】
その他、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂのＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｂｕｒｓｔ活性に基づくスクリーニングは、例えばＣｏｘｏｎ，　Ｐ．　Ｙ．　ら、Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　１６４，　６５３０−６５３７，　２０００、およびＤｕｒａｎｄ，　Ｖ．ら、Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　３１，　１９５２−１９６１，　２００１の方法を参考にして行うことができる。さらに、ＭＡＰ　ｋｉｎａｓｅ　の活性化（Ｃｏｘｏｎ，　Ｐ．　Ｙ．　ら、Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　１６４，　６５３０−６５３７，　２０００）、細胞内カルシウムイオン濃度変化（Ｃｈｕａｎｇ，　Ｆ．　Ｙ．　Ｓ．ら、Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　１６４，　３５０−３６０，　２０００）、可溶性ＦｃγＲ　ＩＩＩｂによる細胞粘着性やアポトーシスの抑制作用（Ｄｕｒａｎｄ，　Ｖ．　ら、Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　３１，　１９５２−１９６１，　２００１）といったＦｃγＲ　ＩＩＩｂの他の活性を指標としても、本発明のスクリーニングを行うことができる。
【０２０７】
（３）　Ｍｉｇの機能（活性）に基くスクリーニング方法
Ｍｉｇ（ｍｏｎｏｋｉｎｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｇａｍｍａ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ）はＣＸＣスーパーファミリーに属するケモカインの一種で、インターフェロンγの刺激によってマクロファージなどで作られ、Ｔ細胞を遊走させる作用を有する。また、その受容体はＣＸＣＲ３であることが知られている。従って、該Ｍｉｇの公知の性質に基づいて、Ｍｉｇの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
具体的には、以下のスクリーニング方法を例示することができる。
【０２０８】
▲１▼ＭｉｇとＣＸＣＲ３との結合活性
ＭｉｇとＣＸＣＲ３との結合活性を利用することにより、Ｍｉｇの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質の存在下で、ＣＸＣＲ３とＭｉｇとを接触させる工程、
（ｂ）　ＣＸＣＲ３に対するＭｉｇの結合量を測定し、当該結合量を、被験物質非存在下でＣＸＣＲ３とＭｉｇとを接触させることによって得られるＣＸＣＲ３に対するＭｉｇの結合量（対照結合量）と比較する工程、及び
（ｃ）　上記（ｂ）の結果に基づいて、対照結合量に比して結合量を低下させる被験物質を選択する工程。
【０２０９】
当該スクリーニングは、前記Ｉ．「受容体結合阻害活性に基づくスクリーニング」に記載の方法により行うことができる。ここでＣＸＣＲ３としては、ＣＸＣＲ３を発現する細胞又はその細胞膜画分を用いることが好ましく、具体的には　ｈｕｍａｎ　ｔｕｍｏｒ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ（ＴＩＬ）や、ＣＸＣＲ３の遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃ．Ｎｏ．ＮＭ＿００１５０４）を導入した形質転換細胞を挙げることができる。
【０２１０】
▲２▼Ｔ細胞遊走活性
ＭｉｇによるＴ細胞遊走活性を利用することにより、Ｍｉｇの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、活性化Ｔ細胞およびＭｉｇを接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞の遊走活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞の遊走活性と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞の遊走活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０２１１】
その他、Ｍｉｇの細胞遊走活性に基づくスクリーニングは、例えばＭｅｙｅｒ，　Ｍ．ら、Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　３１，　２５２１−２５２７，　２００１に記載の方法を参考にして測定することができる。
【０２１２】
当該ＭｉｇのＴ細胞遊走活性は、例えばＧａｓｐｅｒｉｎｉ，　Ｓ．ら、Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　１６２，　４９２８−４９３７，　１９９９に記載の方法を参考にして測定することができる。
【０２１３】
その他、ＣＸＣＲ３のＧＰＣＲ活性に基づくスクリーニングは、前記ＩＩ．「ＧＰＣＲ活性に基づくスクリーニング」に記載の方法に基づき行うことができる。具体的には、例えばＭｉｇによる細胞内カルシウムイオン増加活性は、例えばＬｉａｏ，　Ｆ．ら、Ｊ．　Ｅｘｐ．Ｍｅｄ　１９９５　（１８２）　１３０１−１３１４に記載の方法を参考にして測定することができる。すなわち、ｈｕｍａｎ　ｔｕｍｏｒ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　（ＴＩＬ）　などＣＸＣＲ３レセプターを発現している細胞にＭｉｇを添加し、細胞内カルシウムイオン濃度の測定を行うことによりスクリーニングすることができる。
【０２１４】
（４）ＮＲＧ−２の機能（活性）に基くスクリーニング方法
ＮＲＧ（ニューレグリン）−２　は、ＥＧＦ（上皮成長因子）ファミリーに含まれる成長・分化因子の１つである。ニューレグリンの受容体は、膜貫通型のタイロシンカイネースであるＥＲＢＢファミリーの、ＥＧＦ受容体、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４などである。ＥＲＢＢとインターラクションすることで、上皮細胞、神経細胞、グリア細胞などの他、様々なタイプの細胞の増殖と分化を誘導すること、また神経および心臓組織の発達、癌の形成に関与することなどがわかっている。従って、該ＮＲＧ−２の公知の性質に基づいて、ＮＲＧ−２の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
具体的には、以下のスクリーニング方法を例示することができる。
【０２１５】
▲１▼ＮＲＧ−２によるＥＲＢＢ発現細胞の増殖活性
ＮＲＧ−２によるＥＲＢＢ発現細胞の増殖活性を利用することにより、ＮＲＧ−２の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＮＲＧ−２反応性細胞（上皮細胞もしくは神経グリア細胞など）およびＮＲＧ−２を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞の増殖活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞の増殖活性と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞の増殖活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０２１６】
ここでＮＲＧ−２によるＥＲＢＢ発現細胞の増殖活性は、例えばＰｉｇｎａｔｅｌｌｉ，　Ｍ．ら、Ｊ．　Ｃｅｌｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，　１１４，　４１１７−４１２６，　２００１に記載の方法を参考にして測定することができる。すなわち、ＭＣＦ−７　などのＮＲＧ−２反応性細胞にＮＲＧ２を添加し、　［３Ｈ］チミジンの取り込み量を測定する。ここで用いるＮＲＧ−２はＣａｒｒａｗａｙらの方法（Ｎａｔｕｒｅ，　３８７，　５１２−５１６，　１９９７）にて調製したものを用いても良い。すなわち、ＮＲＧ−２のＥＧＦ様ドメイン（アミノ酸配列２４６−３１４）とグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼの融合蛋白質を、Ｈｉｇｈ　Ｆｉｖｅ細胞（昆虫細胞）にて発現させ、グルタチオン親和性カラムにて回収したものを用いることもできる。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した前記細胞における［３Ｈ］チミジンの取り込み量が、被験物質を添加しない対照細胞の当該［３Ｈ］チミジンの取り込み量に比して、減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０２１７】
その他、ＮＲＧ−２のＥＲＢＢへの結合およびチロシンリン酸化に基づくスクリーニングは、前記Ｉ．「受容体結合阻害活性に基づくスクリーニング」に記載の方法や、Ｃａｒｒａｗａｙ，　Ｋ．Ｌ．　３ｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ，　３８７，　５１２−５１６，　１９９７　に記載の方法や、Ｃｈａｎｇ，　Ｈ．　ら、Ｎａｔｕｒｅ，　３８７，　５０９−５１２，　１９９７に記載の方法を参考にして行うことができる。
【０２１８】
（５）ヘキソキナーゼ３の機能（活性）に基くスクリーニング方法
ヘキソキナーゼは、ＡＴＰとＤ−ヘキソースより、ＡＤＰとＤ−ヘキソース６−リン酸を生じる反応を触媒する（ＥＣ　２．７．１．１）。反応にはマグネシウムイオンを必要とする。生体内において反応は不可逆であり、解糖系の律速の一つとなっている。生成物Ｄ−グルコース６−リン酸で反応が阻害される。３種のアイソザイムＩ〜ＩＩＩが存在し、ＩＩＩ型（ヘキソキナーゼ３）はＤ−グルコースに対するＫｍ値が小さい（Ｉ：　１０　ｕＭ，　ＩＩ：　１００　ｕＭ，　ＩＩＩ：　１　ｕＭのオーダー）（酵素ハンドブック　第６刷　朝倉書店　３３０−３３１）。従って、該ヘキソキナーゼ３の公知の性質に基づいて、ヘキソキナーゼ３の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
具体的には、以下のスクリーニング方法を例示することができる。
【０２１９】
▲１▼ヘキソキナーゼ３の酵素活性
ヘキソキナーゼ３の前記酵素活性を利用することにより、ヘキソキナーゼ３の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＡＴＰ、Ｄ−ヘキソースおよびヘキソキナーゼ３を水溶液中で接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた水溶液のＤ−ヘキソース６−リン酸生成量を測定し、該量を被験物質を接触させない対照水溶液のＤ−ヘキソース６−リン酸生成量と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記水溶液のＤ−ヘキソース６−リン酸生成量を減少させる被験物質を選択する工程。
【０２２０】
当該ヘキソキナーゼ３の活性は、例えば生化学実験講座１２　エネルギー代謝と生体酸化　上　１０４−１０８に記載の方法を参考にして測定することができる。すなわち、精製酵素溶液もしくは溶血上清液と　ＭｇＣｌ２、ＮＡＤＰ、グルコース（ヘキソース）、ＡＴＰ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（溶血上清液の場合不要）をインキュベートする。ヘキソキナーゼ活性によって生成したグルコース−６−リン酸と、あらかじめ添加してあるＮＡＤＰを基質として、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼがＮＡＤＰＨを生成するので、これを３４０　ｎｍの吸光度にて測定する。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した水溶液におけるＤ−ヘキソース６−リン酸生成量が、被験物質を添加しない対照水溶液の当該Ｄ−ヘキソース６−リン酸生成量に比して、減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０２２１】
（６）ＨＭ７４の機能（活性）に基くスクリーニング方法
ＨＭ７４は、ＩＬ−８、Ｃ５ａ、ＦＰ　（Ｎ−ｆｏｒｍｙｌ　ｐｅｐｔｉｄｅ）　などのレセプターに共通な配列を用いて、ヒトモノサイトからクローニングされたＧＰＣＲである（Ｎｏｍｕｒａ，　Ｈ．ら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，　５，　１２３９−１２４９，　１９９３）。
当該ＨＭ７４の活性は、ＨＭ７４がＧＤＰ存在下でＧＴＰアナログであるＧＴＰγＳと結合する性質を利用して測定することが出来る。すなわち本発明のスクリーニングは、被験物質がＨＭ７４とＧＴＰγＳの結合を阻害（抑制）するか否かを測定することによって、行うことができる。具体的には本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質の存在下で、ＨＭ７４を過剰発現する細胞又は該細胞から調製した細胞膜画分とＧＴＰ（ＧＴＰγＳ）とを接触させる工程、
（ｂ）　上記（ａ）の工程に起因して生じるＧＴＰ結合量を測定し、当該結合量を、被験物質非存在下でＨＭ７４を発現する細胞又は該細胞から調製した細胞膜画分とＧＴＰとを接触させることによって得られるＧＴＰ結合量（対照結合量）と比較する工程、及び
（ｃ）　上記（ｂ）の結果に基づいて、対照結合量に比してＧＴＰ結合量を低下させる被験物質を選択する工程。
【０２２２】
当該スクリーニングは、前記ＩＩ．「ＧＰＣＲ活性に基づくスクリーニング」に記載の方法により行うことができる。ＨＭ７４はリガンド不明であるが、細胞に過剰発現させることにより、リガンド非存在下で前記のスクリーニングを行うことが可能である。
【０２２３】
（７）ＲＥＧ　ＩＩＩの機能（活性）に基くスクリーニング方法
ＲＥＧ　及び　ＲＥＧ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅｓ　はカルシウム依存性レクチンファミリーに属する。消化管基底部や組織損傷部において発現される再生に関与する遺伝子群である。Ｒｅｇ　ＩＩＩ　は別名ＰＡＰ　（Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ−ａｓｓｏｓｉｅｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ）とも呼ばれる。ＰＡＰは膵炎の急性期にその発現が大きく増加することと、肝臓ガンにて発現が大きく増加するＨＩＰ　（Ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａ−ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ−ｐａｎｃｒｅａｓ）と同一であることが知られている。他には運動神経の損傷、胃粘膜の損傷などにおいても発現が増加することが知られている。機能として、シュワン細胞の増殖促進のほか、細菌の凝集、細胞外マトリックスへの吸着、ＴＮＦ−α誘導性アポトーシスの抑制などが知られている（ＯＭＩＭデータベース：１６７８０５、およびＣｈｒｉｓｔａ，　Ｌら、Ａｍ　Ｊ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，　２７１，　９９３−１００２，　１９９６、およびＭａｌｋａ，　Ｄら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，　１１９，　８１６−８２８，　２０００、およびＨａｒｔｕｐｅｅ，　Ｊ．　Ｃ．ら、Ｂｉｏｃｈｉｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ａｃｔａ，　１５１８，　２８７−２９３，　２００１）。従って、該ＲＥＧ　ＩＩＩの公知の性質に基づいて、ＲＥＧ　ＩＩＩの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
具体的には、以下のスクリーニング方法を例示することができる。
【０２２４】
▲１▼ＲＥＧ　ＩＩＩのアポトーシス抑制活性
ＲＥＧ　ＩＩＩの有するアポトーシス抑制活性を利用することにより、ＲＥＧ　ＩＩＩの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、膵臓由来細胞もしくはＲＥＧ　ＩＩＩ発現細胞、およびアポトーシス誘導物質（ＴＮＦ−α等）を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた細胞のアポトーシスを測定し、該アポトーシスを被験物質を接触させない対照細胞のアポトーシスと比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のアポトーシスの抑制を解除する被験物質を選択する工程。
【０２２５】
ここでＲＥＧ　ＩＩＩのアポトーシス抑制活性は、Ｍａｌｋａ，　Ｄら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，　１１９，　８１６−８２８，　２０００の方法を参考にして測定することができる。すなわち、ＡＲ４−２Ｊ細胞（ラット膵臓腺房細胞）を調製し、ＲＥＧ　ＩＩＩ　遺伝子を導入する。ＴＮＦ−α、アクチノマイシンＤとともに７２時間インキュベートし、ＭＴＳなどの試薬を添加することによって、生存細胞の割合、すなわちアポトーシスの割合を吸光度にて測定する。ベクターのみを導入したＡＲ４−２Ｊを０％アポトーシス抑制活性、２０　μＭのＺ−ＶＡＤ−ＦＭＫ（アポトーシス阻害剤）を添加したものを１００％アポトーシス抑制活性を示すコントロールとして用いても良い。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した細胞における生存の割合が、被験物質を添加しない対照細胞における生存の割合に比して、減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０２２６】
▲２▼ＲＥＧ　ＩＩＩの細菌凝集活性
ＲＥＧ　ＩＩＩの有する細菌凝集活性を利用することにより、ＲＥＧ　ＩＩＩの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、細菌およびＲＥＧ　ＩＩＩを接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた細菌の凝集活性を測定し、該凝集活性を被験物質を接触させない対照細菌の凝集活性と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細菌の凝集活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０２２７】
ここでＲＥＧ　ＩＩＩの細菌凝集活性は、Ｉｏｖａｎｎａ，　Ｊ，　ら、Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，　２６６，　２４６６４−２４６６９，　１９９１の方法を参考にして測定することができる。すなわち、ＪＭ１０１株などの大腸菌懸濁液にＲＥＧ　ＩＩＩを添加することにより数分から３時間後には大腸菌の凝集を観察することができる。ネガティブコントロールとして、アルブミン、ポジティブコントロールとしてコンカナバリンＡを用いても良い。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した場合の細菌凝集が、被験物質を添加しない場合の細菌凝集に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０２２８】
▲３▼ＲＥＧ　ＩＩＩのシュワン細胞増殖活性
ＲＥＧ　ＩＩＩの有するシュワン細胞増殖活性を利用することにより、ＲＥＧ　ＩＩＩの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＲＥＧ　ＩＩＩ反応性細胞（シュワン細胞）およびＲＥＧ　ＩＩＩを接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞の増殖活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞の増殖活性と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞の増殖活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０２２９】
ここでＲＥＧ　ＩＩＩのシュワン細胞増殖活性は、Ｌｉｖｅｓｅｙ　Ｆ．Ｊ．ら、Ｎａｔｕｒｅ，　３９０，　６１４−６１８，　１９９７の方法を参考にして測定することができる。すなわち、ラット新生仔よりシュワン細胞を初代培養する。フォルスコリン、ブロモデオキシウリジン（ＤＮＡ合成の指示薬）とともにＲＥＧ　ＩＩＩを添加し、増殖活性を測定する。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した細胞の増殖活性が、被験物質を添加しない対照細胞の増殖活性に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０２３０】
その他、ｌａｍｉｎｉｎ−１やｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎへの吸着活性（Ｃｈｒｉｓｔａ，　Ｌら、Ａｍ　Ｊ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，　２７１，　Ｇ９９３−１００２，　１９９６）、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子のプロモーター領域と、転写因子Ｃｄｘ１との結合、続いて起こるＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子の転写活性化、もしくは小腸上皮細胞の増殖活性（Ｍｏｕｃａｄｅｌ　Ｖ．　ら、Ｅｕｒ　Ｊ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ，　８０，　１５６−１６３，　２００１）などの活性に基づくスクリーニングも行うことができる。
【０２３１】
（８）ＬＰＡＰの機能（活性）に基くスクリーニング方法
ＬＰＡＰ（Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ−ａｓｓｏｓｉａｔｅｄ　ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ）は３２　ｋＤａ　の細胞膜結合性のリン蛋白質である。リンパ球においてＣＤ　４５と非共有結合している。ＣＤ　４５はチロシンフォスファターゼで、リンパ球の活性化に重要な役割を果たしている。従って、該ＬＰＡＰの公知の性質に基づいて、ＬＰＡＰの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
具体的には、以下のスクリーニング方法を例示することができる。
【０２３２】
▲１▼ＬＰＡＰのＣＤ４５結合活性
ＬＰＡＰ有するＣＤ４５結合活性を利用することにより、ＬＰＡＰの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＣＤ４５およびＬＰＡＰを発現する細胞または該細胞から調製した細胞画分を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞またはその細胞から調製した細胞画分のＬＰＡＰの発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞またはその細胞から調製した細胞画分のＬＰＡＰの発現量と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞またはその細胞から調製した細胞画分のＬＰＡＰの発現量を抑制する被験物質を選択する工程。
【０２３３】
ここでＬＰＡＰのＣＤ４５結合活性は、Ｓｃｈｒａｖｅｎ，　Ｂ．，ら、Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２６９，　２９１０２−２９１１１，　１９９４に記載の方法を参考にして測定することができる。すなわち、Ｊｕｒｋａｔ　Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓを、Ｂｒｉｊｉ　５８　などの界面活性剤を含む氷冷ＴＢＳ（Ｔｒｉｓ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ　ｓａｌｉｎｅ）に溶解し、ＣＤ４５　モノークローナル抗体を結合させたＣＮＢｒ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅビーズ　３　ｍｌに結合させることで、ＬＰＡＰ−ＣＤ４５複合体の抽出を行う。次いで被験物質を含むＴＢＳ溶液にて溶出を行い、ＬＰＡＰの溶出をＥＬＩＳＡ法にてモニターし、ＬＰＡＰが溶出されたとき、結合阻害がなされたものと判断する。
もしくは、ＣＤ４５と複合体を形成しない場合、速やかに分解されるという性質を利用する（Ｓｃｈｒａｖｅｎ，　Ｂ．，ら、Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２６９，　２９１０２−２９１１１，　１９９４）。細胞としては、Ｊｕｒｋａｔ　細胞、または人為的にＣＤ４５とＬＰＡＬを発現させた細胞を用いる。被験物質を細胞に接触させ、ＬＰＡＬおよびＣＤ４５の蛋白質量をＥＬＩＳＡ法もしくはウェスタンブロット解析などでモニターする。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した場合のＬＰＡＰ量が、被験物質を添加しない場合のＬＰＡＰ量に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０２３４】
（９）Ｍｉｐ−１βの機能（活性）に基くスクリーニング方法
ケモカインは、特定の白血球のサブセットの遊走作用・活性化を支配する一連のサイトカインとして発見されたものの総称である。細胞遊走惹起活性およびインテグリン等の細胞接着因子の発現増強作用、さらには細胞接着の増強作用等を有しており、炎症組織等の病変部位への白血球等の接着・浸潤過程を担う必須の蛋白性因子と考えられている。分子内には保存されたシステイン残基をもち、この分子構造上の位置よりＣＸＣ、ＣＣ、Ｃ、ＣＸ３Ｃの４つのサブファミリーに分類されている。
【０２３５】
Ｍｉｐ−１β（Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　Ｐｒｏｔｅｉｎ−１β、別名スモールインデューシブルサイトカインＡ４）は、Ｍｉｐ−１α、ＭＣＰ−１（Ｍｏｎｏｃｙｔｅ　Ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ　Ｐｒｏｔｅｉｎ−１）、ＲＡＮＴＥＳ（Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｏｎ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，　ｎｏｒｍａｌ　Ｔ−ｃｅｌｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ａｎｄ　ｓｅｃｒｅｔｅｄ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ）などと共にＣＣケモカインに分類される。Ｍｉｐ−１遺伝子は、活性化Ｔ−ｃｅｌｌライブラリーよりディファレンシャルハイブリダイゼーション法によって見つかった（ＡＣＴ２遺伝子、Ｌｉｐｅｓ　１９８８）。植物性血球凝集素によるＴ−ｃｅｌｌの活性化、黄色ブドウ球菌によるＢ−ｃｅｌｌの活性化、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）による単球の活性化ですみやかにその発現が誘導される。推定アミノ酸配列は９２アミノ酸残基からなり、Ｎ末端部分はシグナル配列と考えられている（ＯＭＩＭデータベース、エントリーナンバー１８２２８４）。
【０２３６】
ケモカインに対する特異的レセプターに関しても、その遺伝子のクローニングが進み、種々の白血球上に存在するＧ蛋白共役型の７回膜貫通型レセプターであることが明らかとなっている（従ってケモカインレセプター拮抗剤がケモカインの標的細胞への作用を阻害する薬剤として有用なことが期待できる）。Ｍｉｐ−１αはＣＣＲ１とＣＣＲ５の、Ｍｉｐ−１βはＣＣＲ５のリガンドとなることが知られている。近年、ＣＸＣＲ４とともにＣＣＲ５がＨＩＶ感染のコレセプターであることが判明し、エイズ治療の新たな分子標的となっている（橋本ら、Ｂｉｏ　Ｓｃｉｅｎｃｅ新用語ライブラリー　免疫　第２版　、羊土社、１６０−１６４）。従って、該Ｍｉｐ−１βの公知の性質に基づいて、Ｍｉｐ−１βの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
具体的には、以下のスクリーニング方法を例示することができる。
【０２３７】
▲１▼Ｍｉｐ−１βとＣＣＲ５との結合活性
Ｍｉｐ−１βとＣＣＲ５との結合活性を利用することにより、Ｍｉｐ−１βの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質の存在下で、ＣＣＲ５とＭｉｐ−１βとを接触させる工程、
（ｂ）　ＣＣＲ５に対するＭｉｐ−１βの結合量を測定し、当該結合量を、被験物質非存在下でＣＣＲ５とＭｉｐ−１βとを接触させることによって得られるＣＣＲ５に対するＭｉｐ−１βの結合量（対照結合量）と比較する工程、及び
（ｃ）　上記（ｂ）の結果に基づいて、対照結合量に比して結合量を低下させる被験物質を選択する工程。
【０２３８】
当該スクリーニングは、前記Ｉ．「受容体結合阻害活性に基づくスクリーニング」に記載の方法により行うことができる。ここでＣＣＲ５としては、ＣＣＲ５を発現する細胞又はその細胞膜画分を用いることが好ましく、具体的には単球やヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１細胞）や、ＣＣＲ５の遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃ．Ｎｏ．ＮＭ＿０００５７９）を導入した形質転換細胞を挙げることができる。
【０２３９】
▲２▼Ｍｉｐ−１βの細胞内カルシウムイオン増加活性
Ｍｉｐ−１βの有する細胞内カルシウムイオン増加活性を利用することにより、Ｍｉｐ−１βの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、Ｍｉｐ−１β反応性細胞、およびＭｉｐ−１βを接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞の細胞内カルシウムイオン増加活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞の細胞内カルシウムイオン増加活性と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞の細胞内カルシウムイオン増加活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０２４０】
ここでＭｉｐ−１βの細胞内カルシウムイオン増加活性は、前記ＩＩ．「ＧＰＣＲ活性に基づくスクリーニング」に記載の方法に基づき行うことができる。またＬａｕｒｅｎｃｅ，　Ｊ．　Ｓ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　３９，　３４０１−３４０９，　２０００およびＳｔａｂｌｅｓ，　Ｊ．ら、Ａｎａｌ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ．，　２５２，　１１５−１２６，　１９９７に記載の方法を参考にして測定することができる。当該手法はａｅｑｕｏｒｉｎの蛍光でＧＰＣＲのレスポンスを測定する方法である。すなわち、ＣＣＲ５遺伝子を導入したＣＨＯ細胞に、ａｐｏａｅｑｕｏｒｉｎ遺伝子、Ｇα１６遺伝子をコードするプラスミドをさらに導入し、ｃｏｅｌｅｎｔｅｒａｚｉｎｅ　Ｈ　（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｐｒｏｂｅｓ）存在下、暗所でインキュベートする。Ｍｉｐ−１βを加え、蛍光（４６９　ｎｍ）を測定する。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した場合の細胞内カルシウムイオン増加量が、被験物質を添加しない場合の細胞内カルシウムイオン増加量に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０２４１】
（１０）Ｌ−セレクチンの機能（活性）に基くスクリーニング方法
セレクチンは、白血球が血管から組織実質に遊走する際の初期過程に必要な接着性相互作用に関与している細胞膜貫通型糖タンパク質であり、細胞外のＮ末端側からカルシウム依存性レクチンドメイン１個、上皮増殖因子（ＥＧＦ）と相同な複数のドメインから構成される。カルシウム依存性の糖結合分子であり、シアルルイスＸ糖鎖（シアル酸、フコース、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミンからなる４糖構造）および類縁の糖鎖を認識する。しかし、充分な結合親和性を得るには、糖鎖提示分子の役割が重要である。Ｌ−セレクチンはほとんどの白血球に発現しており、分子量９０ｋＤである。（今井ら、Ｂｉｏ　Ｓｃｉｅｎｃｅ新用語ライブラリー　免疫　第２版　、羊土社、２１７−２１８）従って、該Ｌ−セレクチンの公知の性質に基づいて、Ｌ−セレクチンの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
具体的には、以下のスクリーニング方法を例示することができる。
【０２４２】
▲１▼Ｌ−セレクチンとＬ−セレクチン結合基質との結合活性
Ｌ−セレクチンとシアルルイス酸もしくはＧｌｙＣＡＭ−１などのＬ−セレクチン結合基質との結合活性を利用することにより、Ｌ−セレクチンの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、シアルルイス酸もしくはＧｌｙＣＡＭ−１などのＬ−セレクチン結合基質およびＬ−セレクチンを接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させたＬ−セレクチン結合基質のＬ−セレクチンとの結合活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照Ｌ−セレクチン結合基質のＬ−セレクチンとの結合活性と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記Ｌ−セレクチン結合基質のＬ−セレクチンとの結合を抑制する被験物質を選択する工程。
【０２４３】
ここでＬ−セレクチンのシアリルルイスＸとの結合活性は、例えば特開平１１−２３６３９４に記載の方法を参考にして測定することができる。すなわち、シアリルルイスＸ（ナフトアミドＳＬｅＸポリマー）をプレートに固定し、Ｌ−セレクチン／Ｉｇキメラ、検出用二次抗体を入れてインキュベートし、結合を測定する。既にＬ−セレクチンの阻害剤として報告されているグリチルリチンをコントロールとして用いると良い。Ｌ−セレクチン／Ｉｇキメラタンパクは、Ｌ−セレクチンと免疫グロブリン（Ｉｇ）からなるキメラ遺伝子を構築し、ヒト腎由来細胞株２９３細胞に導入し、培養上清をプロテインＡカラム（ファルマシア社製）にかけることで得ることができる。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した場合の両者の結合量が、被験物質を添加しない場合の結合量に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。
また、Ｌ−セレクチンとそのリガンドであるＧｌｙＣＡＭ−１との接着活性は、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　３４，　１４２７１−１４２７７（１９９５）を参考にして測定することができる。さらに、前記Ｉ．「受容体結合阻害活性に基づくスクリーニング」に記載の方法により行うこともできる。
【０２４４】
（１１）　ＥＧＦＬ６の機能（活性）に基くスクリーニング方法
ＥＧＦ様リピートモチーフはＥＧＦ（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ；上皮細胞成長因子）をはじめ、細胞の生理学的な過程を調節する様々な蛋白質に含まれ、スーパーファミリーを形成している。３０から４０アミノ酸配列の中にいくつかの保存されたシステイン残基とグリシン残基をもつことを特徴とする。ＥＧＦ様リピートモチーフを持つファミリーメンバーは、基本的に分泌されるか、もしくは細胞表面に位置しており、セルサイクルや増殖、発達の過程の調節を行うものが多い。Ｙｅｕｎｇ　らはハイスループットハイブリダイゼーションアプローチ法によってＥＧＦ様リピートモチーフを持つ新規蛋白質（ＥＧＦＬ６と命名）をコードする遺伝子を単離した。ＥＧＦＬ６はＥＧＦ様リピートモチーフの他に、シグナルペプチド（分泌蛋白質であることを意味する）およびインテグリンアソシエーションモチーフなどを持つ。成人の正常組織では発現しておらず、胎児や癌組織で発現していることがわかっている（Ｙｅｕｎｇ，　Ｇ．ら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，　６２，　３０４−３０７，１９９９）。該ＥＧＦＬ６の有する細胞増殖活性に基づいて、ＥＧＦＬ６の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
具体的には、以下のスクリーニング方法を例示することができる。
【０２４５】
▲１▼ＥＧＦＬ６の細胞増殖活性
ＥＧＦＬ６の有する細胞増殖活性を利用することにより、ＥＧＦＬ６の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＥＧＦＬ６反応性細胞（繊維芽細胞もしくは小腸上皮細胞など）およびＥＧＦＬ６を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた細胞のＥＧＦＬ６による増殖活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＥＧＦＬ６による増殖活性と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＥＧＦＬ６による増殖活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０２４６】
ここでＥＧＦＬ６の細胞増殖活性は、例えば特開平７−１９６５２７に記載の方法を参考にして測定することができる。すなわち、マウス線維芽細胞Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３またはラット小腸上皮細胞ＩＥＣ１８（共にＡｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから購入）などにＥＧＦＬ６を添加し、増殖を［３Ｈ］　チミジン　（アマシャム社）の取り込みなどによって測定する。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した細胞の増殖活性が、被験物質を添加しない細胞の増殖活性に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０２４７】
（１２）　ＩＤＯの機能（活性）に基くスクリーニング方法
ＩＤＯ（インドールアミン２，３ジオキシゲナーゼ、ＥＣ　１．１３．１１．１７　）は、生体内においてＬ−トリプトファンの異化作用を担う。トリプトファンはインドール環が開かれたＮ−フォルミルキヌレニンに分解される。ＩＦＮ−γによって発現が誘導され、ＩＦＮ−γの抗細胞内ウイルス作用や、抗細胞増殖作用は、ＩＤＯによる必須アミノ酸であるトリプトファンの分解によるものと考えられている（Ｄａｉ，　Ｗ．ら、　Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ｒｅｓ．　Ｃｏｍｍｕｎ．，　１６８，　１−８，　１９９０）。従って、ＩＤＯの公知の性質に基づいて、ＩＤＯの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
具体的には、以下のスクリーニング方法を例示することができる。
【０２４８】
▲１▼トリプトファン分解活性
ＩＤＯの有するトリプトファン分解活性を利用することにより、ＩＤＯの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、Ｌ−トリプトファンおよびＩＤＯを水溶液中で接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた水溶液のインドールアミン分解活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照水溶液のインドールアミン分解活性と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記水溶液のインドールアミン分解活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０２４９】
ここでトリプトファン分解活性は、例えばＣａｒｌｉｎ，　Ｊ．　Ｍ．ら，　Ｊ．　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　Ｒｅｓ．，　９，　３２９−３３７，１９８９の方法を参考にして測定することができる。すなわち、単球細胞をＰｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ　ｃｅｌｌ　より調製し、１０−１４日培養してマクロファージとして成熟させる。さらにＩＦＮ−γに暴露し、ＩＤＯを誘導した後、トリプトファン、［５−３Ｈ］トリプトファンを添加する。インキュベートした後の培養上清（−２０℃にて保存可能）について、トリプトファンの分解の程度を調べる。上清よりＣ１８カラムを用いた逆相ＨＰＬＣにてＬ−トリプトファン、分解物であるＮ−フォルミルキヌレニンもしくはキヌレニンを分画し、各画分の放射活性をシンチレーションカウンターにて計測する。自然分解量を細胞非存在下の上清より同様に測定して差し引き、細胞によるトリプトファンの分解量をＩＤＯ活性として算出する。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した場合のトリプトファン分解量が、被験物質を添加しない場合のトリプトファン分解量に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０２５０】
なお、プラセンタからの酵素の調製法および酵素活性の測定法として、Ｋｕｄｏ，　Ｙ．　ら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ　ｅｔ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ　Ａｃｔａ，　１５００，　１１９−１２４，　２０００の方法を参考とすることもできる。
【０２５１】
（１３）　ＩＬ−８の機能（活性）に基くスクリーニング方法
ＩＬ−８は、ＬＰＳ刺激ヒト末梢血単球培養上清から好中球の走化能を亢進させる因子として精製、クローニングされた。ＩＬ−８は、細菌、ウイルス由来成分、重金属、サイトカイン（ＩＬ−１、ＴＮＦ−α）などの炎症性起因物質の刺激により単球、Ｌａｒｇｅ　ｇｒａｎｕｌａｒ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ、血管内皮細胞、繊維芽細胞、ケラチノサイト、肝実質細胞、消化器癌細胞など多くの細胞から産生される。ＩＬ−８はケモカインのＣＸＣサブファミリーに属し、その受容体はＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２であることが知られている。ＩＬ−８は急性炎症での好中球による組織破壊にかかわっていることが明らかになっている。またｉｎ　ｖｉｔｒｏにおいて、好中球の走化性のみでなく、好塩基球・Ｔ細胞に対する遊走活性、骨髄より末梢血への好中球の動員、好中球活性化（細胞内リソソーム酵素の放出、ロイコトリエンＢ４、活性酸素の産生誘導など）、ＬＦＡ−１などの接着分子発現亢進、好中球の血管内皮細胞への接着増強など、多彩な作用を示す（橋本ら、Ｂｉｏ　Ｓｃｉｅｎｃｅ新用語ライブラリー　免疫　第２版　、羊土社、１８６−１８７）。従って、ＩＬ−８の公知の性質に基づいて、ＩＬ−８の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
具体的には、以下のスクリーニング方法を例示することができる。
【０２５２】
▲１▼ＩＬ−８とＣＸＣＲ１・ＣＸＣＲ２との結合活性
ＩＬ−８とＣＸＣＲ１・ＣＸＣＲ２との結合活性を利用することにより、ＩＬ−８の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質の存在下で、ＣＸＣＲ１及び／又はＣＸＣＲ２とＩＬ−８とを接触させる工程、
（ｂ）　ＣＸＣＲ１及び／又はＣＸＣＲ２に対するＩＬ−８の結合量を測定し、当該結合量を、被験物質非存在下でＣＸＣＲ１及び／又はＣＸＣＲ２とＩＬ−８とを接触させることによって得られるＣＸＣＲ１及び／又はＣＸＣＲ２に対するＩＬ−８の結合量（対照結合量）と比較する工程、及び
（ｃ）　上記（ｂ）の結果に基づいて、対照結合量に比して結合量を低下させる被験物質を選択する工程。
【０２５３】
当該スクリーニングは、前記Ｉ．「受容体結合阻害活性に基づくスクリーニング」に記載の方法により行うことができる。ここでＣＸＣＲ１及び／又はＣＸＣＲ２としては、ＣＸＣＲ１及び／又はＣＸＣＲ２を発現する細胞又はその細胞膜画分を用いることが好ましく、具体的には、ヒトＴＨＰ−１細胞（単球由来細胞株、ＡＴＣＣ　Ｎｏ．　ＴＩＢ−２０２）や、ＣＸＣＲ１の遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃ．Ｎｏ．ＮＭ＿０００６３４）及び／又はＣＸＣＲ２の遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃ．Ｎｏ．ＮＭ＿００１５５７）を導入した形質転換細胞を挙げることができる。
【０２５４】
▲２▼好中球遊走活性
ＩＬ−８の有する好中球遊走活性を利用することにより、ＩＬ−８の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、好中球およびＩＬ−８を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞の遊走活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞の遊走活性と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞の遊走活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０２５５】
ここで好中球の遊走活性測定は、Ｂｏｙｄｅｎ法（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．　１１５，　４５３−４６６，　１９６２）、又はその改良法（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　１０，４０９−４１６，１９６６，　　Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．６４，５２１−５３０，１９７１，Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　４６，２５１−２５８，１９８１，　　Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ　３５，１８２−１８５，１９８２）を参考にして行うことができる。また最近になり，Ｇａｌｌｉｎら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．　１１０，２３３−２４０，１９７３）やＫｕｒｉｈａｒａら（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｙｎ．　７，７４７−７５４，１９８４）　はＣｒ標識した好中球を用いてこれまで問題であったＢｏｙｄｅｎ法の欠点をカバーできるケモタキシスアッセイ法を考案しており、この手法を用いて行うこともできる。また、Ｗａｔａｎａｂｅら（Ｊａｐａｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，　３９，１０２−１０４，１９８５，　Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，　２２，１３−１８，１９８９）はマルチウエルタイプのボイデンチェンバーを考案し、これを用いて多数のサンプルの好中球走化性を測定することもできる。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した場合の好中球遊走活性が、被験物質を添加しない場合の好中球遊走活性に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０２５６】
▲３▼ライソザイム酵素または活性酵素産生活性
ＩＬ−８により活性化された好中球は脱顆粒を起こし、エラスターゼ、カテプシンＧ、ミエロパーオキシダーゼ、βグルクロニダーゼ、コラゲナーゼ、Ｔｙｐｅ　ＩＶ　ゼラチナーゼなどの酵素を放出したり、活性酸素を放出することが知られている。この放出されたライソザイム酵素や活性酵素を測定することにより、ＩＬ−８の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ライソザイム酵素及び／又は活性酸素産生可能な細胞およびＩＬ−８を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のライソザイム酵素又は活性酵素産生量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のライソザイム酵素又は活性酵素産生量と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のライソザイム酵素又は活性酵素産生量を抑制する被験物質を選択する工程。
【０２５７】
ここでライソザイム酵素又は活性酵素産生量の測定は、例えば　Ｇｒｙｋｉｅｗｉｃｚ，　Ｇ．　ら、Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２６０，　３４４０（１９８５）、又は　Ｐｅｖｅｒｉ，　Ｐ．　ら、Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，１６７，　１５４７（１９８８）　）等に記載の方法を参考にして行うことができる。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した場合のライソザイム酵素又は活性酵素産生量が、被験物質を添加しない場合のライソザイム酵素又は活性酵素産生量に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０２５８】
（１４）　ＣＤ１１ｃの機能（活性）に基くスクリーニング方法
ＣＤ１１ｃ（別名インテグリンα−Ｘ）についてはＮＣＢＩのＯＭＩＭデータベースに記載されている（エントリーナンバー１５１５１０）。ＣＤ１１ｃは、白血球表面抗原（若しくは白血球表面接着分子）ｐ１５０，９５のαサブユニットであり、血小板糖タンパクＩＩｂ／ＩＩＩａ、ビトロネクチン受容体、フィブロネクチン受容体と高い相同性を有する。ＣＤ１１ｃは、化学的誘引物質等により刺激された多形核白血球（ＰＭＮ）が内皮細胞に接着する際に機能する分子であることが知られている（Ｓｔａｃｋｅｒ，　Ｓ．Ａ．　ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　１４６，　６４８−６５５，　１９９１）。従って、ＣＤ１１ｃの公知の性質に基づいて、ＣＤ１１ｃの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
具体的には、以下のスクリーニング方法を例示することができる。
【０２５９】
▲１▼内皮細胞との接着活性
ＣＤ１１ｃの有する内皮細胞との接着活性を利用することにより、ＣＤ１１ｃの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、内皮細胞およびＣＤ１１ｃを接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた場合のＣＤ１１ｃの内皮細胞への接着活性を測定し、該接着活性を被験物質を接触させない場合の内皮細胞への接着活性と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記ＣＤ１１ｃの内皮細胞への接着活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０２６０】
ここで用いるＣＤ１１ｃとしては、ＣＤ１１ｃタンパク質、または当該ＣＤ１１ｃを発現可能な細胞を挙げることができる。
またＣＤ１１ｃと内皮細胞との接着活性は、例えば　Ｓｔａｃｋｅｒ，　Ｓ．Ａ．　ら、Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　１４６，　６４８−６５５，　１９９１に記載の方法を参考にして行うことができる。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した場合のＣＤ１１ｃと内皮細胞との接着活性が、被験物質を添加しない場合の内皮細胞との接着活性に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０２６１】
（１５）　ＴＬＲ２の機能（活性）に基くスクリーニング方法
ＴＬＲ２（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　２）については緒方ら、Ｂｉｏ　Ｓｃｉｅｎｃｅ新用語ライブラリー　免疫　第２版　、羊土社、２３６−２３７に記載されている。すなわち、ハエの免疫機構における病原体センサーであるＴｏｌｌのヒトホモログとして見つかったレセプター型の膜蛋白である。グラム陽性菌、マイコプラズマ、マイコバクテリアを認識し、Ｍｙｄ８８、ＩＲＡＫ、ＴＲＡＦ６、ＮＩＫ、ＩＫＫ等の細胞内シグナル伝達分子を活性化し、最終的にＮＦ−ｋＢ転写因子の活性化を経てさまざまな感染防御作用を惹起すると考えられている。従って、ＴＬＲ２の公知の性質に基づいて、ＴＬＲ２の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
具体的には、以下のスクリーニング方法を例示することができる。
【０２６２】
▲１▼ＴＬＲ２とバクテリア由来のリポタンパク質／ペプチドグリカンとの結合活性
ＴＬＲ２がバクテリア由来のリポタンパク質やペプチドグリカンと結合する性質を利用することにより、ＴＬＲ２の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質の存在下で、ＴＬＲ２とバクテリア由来のリポタンパク質又はペプチドグリカンとを接触させる工程、
（ｂ）　ＴＬＲ２に対するバクテリア由来のリポタンパク質又はペプチドグリカンの結合量を測定し、当該結合量を、被験物質非存在下でＴＬＲ２とバクテリア由来のリポタンパク質又はペプチドグリカンとを接触させることによって得られるＴＬＲ２に対するバクテリア由来のリポタンパク質又はペプチドグリカンの結合量（対照結合量）と比較する工程、及び
（ｃ）　上記（ｂ）の結果に基づいて、対照結合量に比して結合量を低下させる被験物質を選択する工程。
【０２６３】
当該スクリーニングは、前記Ｉ．「受容体結合阻害活性に基づくスクリーニング」に記載の方法により行うことができる。ここでＴＬＲ２としては、ＴＬＲ２を発現する細胞又はその細胞膜画分を用いることが好ましく、具体的には、単球、マクロファージや、ＴＬＲ２の遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃ．Ｎｏ．　Ｕ８８８７８）を導入した形質転換細胞を挙げることができる。
【０２６４】
▲２▼細胞活性化活性
ＴＬＲ２が発現している単球、マクロファージを細菌外膜成分などで刺激することで細胞の増殖、活性化、炎症物質やサイトカイン、一酸化窒素の産生が起こることが知られている。従って、該活性を利用することにより、ＴＬＲ２の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＴＬＲ２を発現しておりかつサイトカインもしくは一酸化窒素産生可能な細胞、および細菌または細菌由来成分とを接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のサイトカインもしくは一酸化窒素産生量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のサイトカインもしくは一酸化窒素産生量と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のサイトカインもしくは一酸化窒素産生量を低下させる被験物質を選択する工程。
【０２６５】
ここで用いられる「ＴＬＲを発現しておりかつサイトカインもしくは一酸化窒素産生可能な細胞」としては、単球やマクロファージが挙げられる。また「細菌または細菌由来成分」としては、バクテリア由来のリポタンパク質やペプチドグリカンが挙げられる。また測定対象である「サイトカイン」としては、炎症性サイトカインであるＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γなどが挙げられる。当該サイトカイン産生量の測定は、例えば特開２００２−４５０８６に記載の方法を参考にすることができる。また測定対象である「一酸化窒素」については、特開２００２−４５０８６に記載の方法を参考に、代謝物である亜硝酸イオンをグリース法により測定することができる。
【０２６６】
▲３▼ＴＬＲ２のシグナル活性化
ＴＬＲ２にリガンドが結合することによって、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＴＲＡＦ６、ＮＩＫ、ＩＫＫ等の細胞内シグナル伝達分子が活性化され、最終的にＮＦ−ｋＢ転写因子が活性化されることが知られている。従ってこれらの活性化を検出することによって、またはＮＦ−κＢによって誘導される標的遺伝子の発現を検出することによっても、ＴＬＲ２の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＴＬＲ２発現細胞、および細菌または細菌由来成分とを接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＩＲＡＫよりＭＡＰキナーゼを経てＮＦ−κＢにいたるシグナル経路の活性化を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＩＲＡＫよりＭＡＰキナーゼを経てＮＦ−κＢにいたるシグナル経路の活性化の程度と比較する工程、
（ｃ）　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＩＲＡＫよりＭＡＰキナーゼを経てＮＦ−κＢにいたるシグナル経路の活性化を抑制する被験物質を選択する工程。
【０２６７】
ここで「ＴＬＲ２発現細胞」とは、単球やマクロファージが挙げられる。また「細菌および細菌由来成分」としては、バクテリア由来のリポタンパク質やペプチドグリカンが挙げられる。また「ＩＲＡＫよりＭＡＰキナーゼを経てＮＦ−κＢにいたるシグナル経路」とは、具体的には　ＭｙＤ８８→ＩＲＡＫ→ＴＲＡＦ→ＮＩＫ→ＩＫＫ→ＮＦ−κＢという一連のシグナル伝達経路を指す。当該シグナル伝達に関わる各因子の活性化の測定は、例えばＢｉｏ　Ｓｃｉｅｎｃｅ新用語ライブラリー　免疫　第２版　、羊土社、２３６−２３７，　１３４−１３７、Ｓｈｕｔｏ，　Ｔ．ら、Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　Ｕ　Ｓ　Ａ．，　９８，　８７７４−８７７９，　２００１、Ｙａｎｇ，　Ｒ．Ｂ．ら、Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏ，　１６３，　６３９−６４３，　１９９９等に記載の方法を参考にして行うことができる。
【０２６８】
かくして選抜取得される被験物質は、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する薬物の有力な候補となる。
【０２６９】
上記（３−１）〜（３−３）に記載する本発明のスクリーニング方法によって選別された候補物質は、さらにＩＢＤのモデル動物である以下の（１）〜（３）の動物：（１）自然発症ＩＢＤモデル（Ｃ３Ｈ／ＨｅＪＢｉｒマウス、Ｃｏｔｔｏｎ　ｔｏｐ　ｔａｍａｒｉｎｓ等）、（２）化学物質誘発モデル（ジニトロクロロベンゼン誘発モデル（ラット）、酢酸モデル（ラット）、トリニトロスルホン酸誘発モデル（マウス、ラット、ウサギ）、デキストラン硫酸誘発モデル（マウス、ラット、ハムスター）、カラゲナン誘発モデル（ラット、モルモット）、インドメタシン誘発モデル（ラット）等）、（３）トランスジェニック、ミュータント（ＩＬ−２ノックアウトマウス、ＩＬ−１０ノックアウトマウス、ＴＣＲノックアウトマウス等）、または（４）移入モデル（ＣＤ４５ＲＢｈｉ移入ＳＣＩＤマウス等）、を用いた薬効試験、安全性試験、さらにＩＢＤ患者への臨床試験に供してもよく、これらの試験を実施することによって、より実用的なＩＢＤの改善または治療薬を取得することができる。このようにして選別された物質は、さらにその構造解析結果に基づいて、化学的合成、生物学的合成（発酵）または遺伝子学的操作によって、工業的に製造することができる。
【０２７０】
なお、上記（３−１）〜（３−３）に記載するスクリーニング方法は、ＩＢＤの改善または治療薬の候補物質を選別するのみならず、ＩＢＤの既存の若しくは新規な改善または治療薬（候補薬）が、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現を抑制するか否か、あるいはＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現若しくは機能・活性を抑制するか否かを評価、確認するためにも用いることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法の範疇には、候補物質の探索のみならず、このような評価あるいは確認を目的とするものも含まれる。
【０２７１】
（４）ＩＢＤの改善・治療剤
本発明は、ＩＢＤの改善・治療剤を提供するものである。
本発明はＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子、ＴＬＲ２遺伝子及びこれらの遺伝子によりコードされるタンパク質が、ＩＢＤと関係しているという新たな知見から、これら遺伝子の発現を抑制する物質、あるいは、これら遺伝子によりコードされるタンパク質の発現若しくは機能（活性）を抑制する物質が、上記疾患の改善または治療に有効であるという考えに基づくものである。すなわち、本発明のＩＢＤの改善・治療剤は、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質、あるいはＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現若しくは機能（活性）を抑制する物質を有効成分とするものである。
【０２７２】
当該有効成分となるＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現抑制物質、あるいはＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現若しくは機能（活性）抑制物質は、上記のスクリーニング方法を利用して選別されたもののみならず、選別された物質に関する情報に基づいて常法に従って工業的に製造されたものであってもよい。
【０２７３】
ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかの発現抑制物質、あるいはＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃおよびＴＬＲ２のいずれかの発現若しくは機能（活性）抑制物質は、そのままもしくは自体公知の薬学的に許容される担体（賦形剤、増量剤、結合剤、滑沢剤などが含まれる）や慣用の添加剤などと混合して医薬組成物として調製することができる。当該医薬組成物は、調製する形態（錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤などの経口投与剤；注射剤、点滴剤、外用剤、坐剤などの非経口投与剤）等に応じて経口投与または非経口投与することができる。また投与量は、有効成分の種類、投与経路、投与対象または患者の年齢、体重、症状などによって異なり一概に規定できないが、通常、１日投与用量として、数ｍｇ〜２ｇ程度、好ましくは数十ｍｇ程度を、１日１〜数回にわけて投与することができる。
【０２７４】
また、上記の物質がＤＮＡによりコードされるものであれば、該ＤＮＡを遺伝子治療用ベクターに組み込み、遺伝子治療を行うことも考えられる。更に、上記有効成分物質がＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子のいずれかに対するアンチセンスヌクレオチドの場合は、そのままもしくは遺伝子治療用ベクターにこれを組込むことにより、遺伝子治療を行うこともできる。これらの場合も、遺伝子治療用組成物の投与量、投与方法は患者の体重、年齢、症状などにより変動し、当業者であれば適宜選択することが可能である。
【０２７５】
上記アンチセンスヌクレオチドを利用する遺伝子治療につき詳述すれば、該遺伝子治療は、通常のこの種の遺伝子治療と同様にして、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその化学的修飾体を直接患者の体内に投与することにより目的遺伝子の発現を制御する方法、もしくはアンチセンスＲＮＡを患者の標的細胞に導入することにより該細胞による目的遺伝子の発現を制御する方法により実施できる。
【０２７６】
ここで「アンチセンスヌクレオチド」には、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子またはＴＬＲ２遺伝子の少なくとも８塩基以上の部分に対応するアンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡなどが含まれる。具体的には、配列番号：１〜１４及び２９のいずれかに記載の塩基配列の少なくとも８塩基以上の部分に対応するアンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡなどが含まれる。
【０２７７】
また、その化学修飾体には、例えばホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、アルキルホスホトリエステル、アルキルホスホナート、アルキルホスホアミデートなどの、細胞内への移行性または細胞内での安定性を高め得る誘導体（”Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　ＲＮＡ　ａｎｄ　ＤＮＡ”　ＷＩＬＥＹ−ＬＩＳＳ刊、１９９２年、ｐｐ．１−５０、Ｊ．　Ｍｅｄ．　Ｃｈｅｍ．　３６，　１９２３−１９３７（１９９３））が含まれる。これらは常法に従い合成することができる。
【０２７８】
アンチセンスヌクレオチドまたはその化学的修飾体は、細胞内でセンス鎖ｍＲＮＡに結合して、目的遺伝子の発現、即ちＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子またはＴＬＲ２遺伝子の発現を抑制することができ、かくしてＦｃγＲ　ＩＩＩａ、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ、Ｍｉｇ、ＮＲＧ−２、ヘキソキナーゼ　３、ＨＭ７４、ＲＥＧ　ＩＩＩ、ＬＰＡＰ、Ｍｉｐ−１β、Ｌ−セレクチン、ＥＧＦＬ６、ＩＤＯ、ＩＬ−８、ＣＤ１１ｃまたはＴＬＲ２の機能（活性）を抑制することができる。
【０２７９】
アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその化学的修飾体を直接生体内に投与する方法において、用いられるアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその化学修飾体は、好ましくは５−２００塩基、さらに好ましくは８−２５塩基、最も好ましくは１２−２５塩基の長さを有するものとすればよい。その投与に当たり、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその化学的修飾体は、通常慣用される安定化剤、緩衝液、溶媒などを用いて製剤化され得る。
アンチセンスＲＮＡを患者の標的細胞に導入する方法において、用いられるアンチセンスＲＮＡは、好ましくは１００塩基以上、より好ましくは３００塩基以上、さらに好ましくは５００塩基以上の長さを有するものとすればよい。また、この方法は、生体内の細胞にアンチセンス遺伝子を導入するｉｎ　ｖｉｖｏ法および一旦体外に取り出した細胞にアンチセンス遺伝子を導入し、該細胞を体内に戻すｅｘ　ｖｉｖｏ法を包含する（日経サイエンス，　１９９４年４月号，　２０−４５頁、月刊薬事，　３６　（１），　２３−４８　（１９９４）、実験医学増刊，　１２　（１５），　全頁　（１９９４）など参照）。この内ではｉｎ　ｖｉｖｏ法が好ましく、これには、ウイルス的導入法（組換えウイルスを用いる方法）と非ウイルス的導入法がある（前記各文献参照）。
【０２８０】
上記組換えウイルスを用いる方法としては、例えばレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、ポリオウイルス、シンビスウイルスなどのウイルスゲノムにアンチセンスヌクレオチドを組込んで生体内に導入する方法が挙げられる。この中では、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルスなどを用いる方法が特に好ましい。非ウイルス的導入法としては、リポソーム法、リポフェクチン法などが挙げられ、特にリポソーム法が好ましい。他の非ウイルス的導入法としては、例えばマイクロインジェクション法、リン酸カルシウム法、エレクトロポレーション法なども挙げられる。
【０２８１】
遺伝子治療用製剤組成物は、上述したアンチセンスヌクレオチドまたはその化学修飾体、これらを含む組換えウイルスおよびこれらウイルスが導入された感染細胞などを有効成分とするものである。該組成物の患者への投与形態、投与経路などは、治療目的とする疾患、症状などに応じて適宜決定できる。例えば注射剤などの適当な投与形態で、静脈、動脈、皮下、筋肉内などに投与することができ、また患者の疾患対象部位に直接投与、導入することもできる。ｉｎ　ｖｉｖｏ法を採用する場合、遺伝子治療用組成物は、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子またはＴＬＲ２遺伝子のアンチセンスヌクレオチドを含む注射剤などの投与形態の他に、例えばＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子またはＴＬＲ２遺伝子のアンチセンスヌクレオチドを含有するウイルスベクターをリポソームまたは膜融合リポソームに包埋した形態（センダイウイルス（ＨＶＪ）−リポソームなど）とすることができる。これらのリポソーム製剤形態には、懸濁剤、凍結剤、遠心分離濃縮凍結剤などが含まれる。また、遺伝子治療用組成物は、上記ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子またはＴＬＲ２遺伝子のアンチセンスヌクレオチドを含有するベクターを導入されたウイルスで感染された細胞培養液の形態とすることもできる。これら各種形態の製剤中の有効成分の投与量は、治療目的である疾患の程度、患者の年齢、体重などにより適宜調節することができる。通常、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子またはＴＬＲ２遺伝子に対するアンチセンスヌクレオチドの場合は、患者成人１人当たり約０．０００１−１００ｍｇ、好ましくは約０．００１−１０ｍｇが数日ないし数カ月に１回投与される量とすればよい。アンチセンスヌクレオチドを含むレトロウイルスベクターの場合は、レトロウイルス力価として、１日患者体重１ｋｇ当たり約１×１０３ｐｆｕ−１×１０１５ｐｆｕとなる量範囲から選ぶことができる。アンチセンスヌクレオチドを導入した細胞の場合は、１×１０４細胞／ｂｏｄｙ−１×１０１５細胞／ｂｏｄｙ程度を投与すればよい。
【０２８２】
【実施例】
次に、本発明を実施例によりさらに具体的に説明する。しかし、本発明はこれらの実施例になんら限定されるものではない。
【０２８３】
実施例１　　ヒト組織サンプルからトータルＲＮＡの調製
ヒトの正常な結腸組織１１７サンプル、潰瘍性大腸炎患者の結腸病変組織３サンプル、およびクローン病患者の結腸病変組織２サンプルから、それぞれ常法に従いトータル　ＲＮＡ　を調製した。
【０２８４】
さらにヒトの右心房正常組織１５１サンプル、右心室正常組織１４０サンプル、左心房正常組織１３２サンプル、子宮筋層正常組織９０サンプル、子宮頚部正常組織９０サンプル、胸正常組織８４サンプル、肺正常組織７７サンプル、胸腺正常組織６７サンプル、卵巣正常組織６２サンプル、腎臓正常組織６１サンプル、皮膚正常組織５６サンプル、小腸正常組織４８サンプル、直腸正常組織４６サンプル、肝臓正常組織４２サンプル、白血球正常組織３７サンプル、胃正常組織３７サンプル、子宮正常組織３２サンプル、子宮内膜正常組織３１サンプル、筋肉正常組織３０サンプル、前立腺正常組織２８サンプル、脾臓正常組織２６サンプル、脂肪組織正常組織２５サンプル、膵臓正常組織２０サンプル、食道正常組織２０サンプル、十二指腸正常組織１７サンプル、甲状腺正常組織１３サンプル、卵管正常組織１３サンプル、リンパ節正常組織１１サンプル、静脈正常組織８サンプル、軟組織正常組織７サンプル、前頭葉皮質正常組織７サンプル、海馬正常組織６サンプル、網正常組織５サンプル、左心室正常組織５サンプル、喉頭正常組織５サンプル、心臓正常組織５サンプル、側頭葉皮質正常組織５サンプル、骨正常組織５サンプル、副腎正常組織５サンプル、精嚢正常組織４サンプル、小脳正常組織４サンプルおよび膀胱正常組織４サンプルより、それぞれ常法に従いトータル　ＲＮＡ　を調製した。
【０２８５】
実施例２　　ＤＮＡチップ解析
実施例１に示したサンプルより調製したｔｏｔａｌ　ＲＮＡを用いて、ＤＮＡチップ解析を行った。なお、ＤＮＡチップ解析はＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社Ｇｅｎｅ　Ｃｈｉｐ　Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５セットを用いて行った。具体的には、解析は、（１）　ｔｏｔａｌ　ＲＮＡからｃＤＮＡの調製、（２）　該ｃＤＮＡからラベル化ｃＲＮＡの調製、（３）　ラベル化ｃＲＮＡのフラグメント化、（４）　フラグメント化ｃＲＮＡとプローブアレイとのハイブリダイズ、（５）　プローブアレイの染色、（６）　プローブアレイのスキャン、及び（７）　遺伝子発現解析、の手順で行った。
【０２８６】
（１）　ｔｏｔａｌ　ＲＮＡからｃＤＮＡの調製
実施例１で得られた各ｔｏｔａｌ　ＲＮＡ　１０μｇとＴ７−（ｄＴ）２４プライマー（Ａｍｅｒｓｈａｍ社製）１００ｐｍｏｌを含む１１μＬの混合液を、７０℃、１０分間加熱した後、氷上で冷却した。冷却後、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ　Ｃｈｏｉｃｅ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｆｏｒ　ｃＤＮＡ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ社製）に含まれる５×Ｆｉｒｓｔ　Ｓｔｒａｎｄ　ｃＤＮＡ　Ｂｕｆｆｅｒ　４μＬ、該キットに含まれる０．１Ｍ　ＤＴＴ　（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ）２μＬ、該キットに含まれる１０ｍＭ　ｄＮＴＰ　Ｍｉｘ　１μＬを添加し、４２℃で２分間加熱した。更に、該キットに含まれるＳｕｐｅｒ　ＳｃｒｉｐｔＩＩ　ＲＴ　２μＬ（４００Ｕ）を添加し、４２℃で１時間加熱した後、氷上で冷却した。冷却後、ＤＥＰＣ処理水（ナカライテスク社製）滅菌蒸留水９１μＬ、該キットに含まれる５×Ｓｅｃｏｎｄ　Ｓｔｒａｎｄ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ　Ｂｕｆｆｅｒ　３０μＬ、１０ｍＭ　ｄＮＴＰ　Ｍｉｘ　３μＬ、該キットに含まれるＥ．　ｃｏｌｉ　ＤＮＡ　Ｌｉｇａｓｅ　１μＬ（１０Ｕ）、該キットに含まれるＥ．　ｃｏｌｉ　ＤＮＡ　Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　Ｉ　４μＬ（４０Ｕ）、該キットに含まれるＥ．　ｃｏｌｉ　ＲＮａｓｅＨ　１μＬ（２Ｕ）を添加し、１６℃で２時間反応させた。次いで、該キットに含まれるＴ４　ＤＮＡ　Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　２μＬ（１０Ｕ）を加え、１６℃で５分間反応させた後、０．５Ｍ　ＥＤＴＡ　１０μＬを添加した。次いで、フェノール／クロロホルム／イソアミルアルコール溶液（ニッポンジーン社製）１６２μＬを添加し、混合した。該混合液を、予め室温、１４，０００ｒｐｍ、３０秒間遠心分離しておいたＰｈａｓｅ　Ｌｏｃｋ　Ｇｅｌ　Ｌｉｇｈｔ（エッペンドルフ社製）に移し、室温で１４，０００ｒｐｍ、２分間遠心分離した後、１４５μＬの水層をエッペンドルフチューブに移した。得られた溶液に、７．５Ｍ酢酸アンモニウム溶液７２．５μＬ、エタノール３６２．５μＬを加えて混合した後、４℃で１４，０００ｒｐｍ、２０分間遠心分離した。遠心分離後、上清を捨て、作製したｃＤＮＡを含むペレットを得た。その後、該ペレットに８０％エタノール０．５ｍＬを添加し、４℃で１４，０００ｒｐｍ、５分間遠心分離した後、上清を捨てた。再度同様の操作を行った後、該ペレットを乾燥させ、ＤＥＰＣ処理水１２μＬに溶解した。以上の操作により実施例１で調製した各トータル　ＲＮＡから、各ｃＤＮＡを取得した。
【０２８７】
（２）　ｃＤＮＡからラベル化ｃＲＮＡの調製
各ｃＤＮＡ溶液５μＬに、ＤＥＰＣ処理水１７μＬ、ＢｉｏＡｒｒａｙ　Ｈｉｇｈ　Ｙｉｅｌｄ　ＲＮＡ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ　Ｌａｂｅｌｉｎｇ　Ｋｉｔ（ＥＮＺＯ社製）に含まれる１０×ＨＹ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ　Ｂｕｆｆｅｒ　４μＬ、該キットに含まれる１０×Ｂｉｏｔｉｎ　Ｌａｂｅｌｅｄ　Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ　４μＬ、該キットに含まれる１０×ＤＴＴ　４μＬ、該キットに含まれる１０×ＲＮａｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　Ｍｉｘ　４μＬ、該キットに含まれる２０×Ｔ７　ＲＮＡ　Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　２μＬを混合し、３７℃で５時間反応させて、ラベル化ｃＲＮＡを調製した。反応後、該反応液にＤＥＰＣ処理水６０μＬを加えたのち、ＲＮｅａｓｙ　Ｍｉｎｉ　Ｋｉｔ（ＧＩＡＧＥＮ社製）を用いて添付プロトコールに従い、調製したラベル化ｃＲＮＡを精製した。
【０２８８】
（３）　ラベル化ｃＲＮＡのフラグメント化
各ラベル化ｃＲＮＡ　２０μｇを含む溶液に、５×Ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ　Ｂｕｆｆｅｒ（２００ｍＭトリス−酢酸　ｐＨ８．１（Ｓｉｇｍａ社製）、　５００ｍＭ酢酸カリウム（Ｓｉｇｍａ社製）、１５０ｍＭ酢酸マグネシウム（Ｓｉｇｍａ社製））８μＬを加えた反応液４０μＬを、９４℃で３５分間加熱した後、氷中に置いた。これによって、ラベル化ｃＲＮＡをフラグメント化した。
【０２８９】
（４）　フラグメント化ｃＲＮＡとプローブアレイとのハイブリダイズ
各フラグメント化ｃＲＮＡ　４０μＬに、５ｎＭ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　Ｏｌｉｇｏ　Ｂ２（Ａｍｅｒｓｈａｍ社製）４μＬ、１００×Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｃＲＮＡ　Ｃｏｃｋｔａｉｌ　４μＬ、Ｈｅｒｒｉｎｇ　ｓｐｅｒｍ　ＤＮＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）４０μｇ、Ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ　ＢＳＡ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ社製）２００μｇ、２×ＭＥＳ　Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　Ｂｕｆｆｅｒ（２００ｍＭ　ＭＥＳ、２Ｍ　［Ｎａ＋］，　４０ｍＭ　ＥＤＴＡ、０．０２％　Ｔｗｅｅｎ２０　（Ｐｉｅｒｃｅ社製）、ｐＨ６．５〜６．７）　２００μＬ、及びＤＥＰＣ処理水１４４μＬを混合し、４００μＬのハイブリカクテルを得た。得られた各ハイブリカクテルを９９℃で５分間加熱し、更に４５℃で５分間加熱した。加熱後、室温で１４，０００ｒｐｍ、５分間遠心分離し、ハイブリカクテル上清を得た。
【０２９０】
一方、１×ＭＥＳハイブリダイゼーションバッファーで満たしたＨｕｍａｎ　ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５プローブアレイ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）を、ハイブリオーブン内で、４５℃、６０ｒｐｍで１０分間回転させた後、１×ＭＥＳハイブリダイゼーションバッファーを除去してプローブアレイを調製した。上記で得られたハイブリカクテル上清２００μＬを該プローブアレイにそれぞれ添加し、ハイブリオーブン内で４５℃、６０ｒｐｍで１６時間回転させ、フラグメント化ｃＲＮＡとハイブリダイズしたプローブアレイを得た。
【０２９１】
（５）　プローブアレイの染色
上記で得られたハイブリダイズ済みプローブアレイそれぞれからハイブリカクテルを回収除去した後、Ｎｏｎ−Ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ　Ｗａｓｈ　Ｂｕｆｆｅｒ（６×ＳＳＰＥ（２０×ＳＳＰＥ（ナカライテスク社製）を希釈）、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％Ａｎｔｉｆｏａｍ０−３０（Ｓｉｇｍａ社製））で満たした。次にＮｏｎ−Ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ　Ｗａｓｈ　ＢｕｆｆｅｒおよびＳｔｒｉｎｇｅｎｔ　Ｗａｓｈ　Ｂｕｆｆｅｒ（１００ｍＭ　ＭＥＳ、０．１Ｍ　ＮａＣｌ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）をセットしたＧｅｎｅＣｈｉｐ　Ｆｌｕｉｄｉｃｓ　Ｓｔａｔｉｏｎ　４００（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）の所定の位置にフラグメント化ｃＲＮＡとハイブリダイズしたプローブアレイを装着した。その後染色プロトコールＥｕＫＧＥ−ＷＳ２に従って、１次染色液（１０μｇ／ｍＬ　Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ　Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ　（ＳＡＰＥ）（ＭｏｌｅｃμＬａｒ　Ｐｒｏｂｅ社製）、２ｍｇ／ｍＬ　Ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ　ＢＳＡ、１００ｍＭ　ＭＥＳ、１Ｍ　ＮａＣｌ（Ａｍｂｉｏｎ社製）、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％Ａｎｔｉｆｏａｍ０−３０）、　２次染色液（１００μｇ／ｍＬ　Ｇｏａｔ　ＩｇＧ　（Ｓｉｇｍａ社製）、３μｇ／ｍＬ　Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ　Ａｎｔｉ−Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　（Ｖｅｃｔｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）、２ｍｇ／ｍＬ　Ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ　ＢＳＡ、１００ｍＭ　ＭＥＳ、１Ｍ　ＮａＣｌ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％Ａｎｔｉｆｏａｍ０−３０）により染色した。
【０２９２】
（６）　プローブアレイのスキャン、及び　（７）　遺伝子発現量解析
染色した各プローブアレイをＨＰ　ＧｅｎｅＡｒｒａｙ　Ｓｃａｎｎｅｒ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）に供し、染色パターンを読み取った。染色パターンをもとにＧｅｎｅＣｈｉｐ　Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）によってプローブアレイ上の遺伝子の発現を解析した。次に、解析プロトコールに従ってＮｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎを行ったのち、各サンプルにおける各プローブ（各遺伝子）の発現量（ａｖｅｒａｇｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）を算出した。同一のプローブにつき、サンプルの種類ごとに遺伝子発現量の平均値を求め、さらに各サンプル種類間における発現量の変化率を求めた。
【０２９３】
実施例３　　発現変動解析
潰瘍性大腸炎患者およびクローン病患者の結腸病変組織にて発現増加している遺伝子を、以下のようにして選択した。
【０２９４】
実施例２で行ったＤＮＡチップ解析による遺伝子発現の解析結果から、結腸正常組織に比べて潰瘍性大腸炎患者の結腸病変組織で発現が増加しているプローブセットのうち、最も変化率の大きいプローブから４００番目までを選択した。また、結腸正常組織に比べてクローン病患者の結腸病変組織で発現が増加しているプローブセットについても変化率の大きいものから４００番目までを選択した。両グループで共通に選抜したプローブにつき解析し、共通に発現増加するプローブとして１４２プローブを選択した。
【０２９５】
次にこれら１４２プローブの中から、より病態との関連性の高いプローブを選択する目的で、ＩＢＤ病変関連組織（大腸を含む消化管）およびＩＢＤの発症機構に関与する免疫系組織以外の組織において発現量の低いプローブを選択した。すなわち、これら１４２プローブについて、結腸正常組織を含む４３種類の正常組織における発現量をＤＮＡチップの結果より解析し、消化管もしくは免疫系組織以外の組織において発現量の低いプローブを選択した。次に、これら選択されたプローブの対応遺伝子を調べ、これらの遺伝子の中から、さらに薬剤ターゲットとなる機能を有する遺伝子を選別した。
その結果、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子、及びＴＬＲ２遺伝子の、計１５遺伝子が選択された。
【０２９６】
【表１】
2004065120.tif 000002
【０２９７】
表中、Ｈｕｍａｎ　Ｕ９５プローブ名は　Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５　Ｃｈｉｐ　におけるプローブ名を示す。また表中　Ａｃｃ　Ｎｏは、ＧｅｎＢａｎｋデータベースにおけるアクセッション番号を示す。また表中、変動倍率は、Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５　Ｃｈｉｐで解析した結腸正常組織の遺伝子発現量を１とした場合における潰瘍性大腸炎患者若しくはクローン病患者の結腸病変組織での遺伝子発現量を示す。また各遺伝子の塩基配列およびアミノ酸配列を示す後記配列表の配列番号も合わせて示す。
【０２９８】
選択された遺伝子の中には、既にＩＢＤの治療薬開発のターゲットとなっているインターロイキン１β、マトリックスプロテアーゼ１、マトリックスプロテアーゼ９などが含まれており、上記の選抜方法で確かにＩＢＤ患者特異的に発現が増加し、かつ治療薬のターゲットとなる遺伝子が選抜されていることが明らかとなった。選択された遺伝子の中からこれら公知のターゲット遺伝子を除外したものが、表１に記載の１５遺伝子である。
【０２９９】
以上のように、選別された前記１５個の遺伝子は、正常な結腸組織と比較して　ＩＢＤ患者の結腸組織で特異的に発現上昇しており、また病態との関連性の高い遺伝子であった。従ってこれら１５遺伝子およびその発現産物（タンパク質）は、ＩＢＤに関する疾患マーカーとして応用可能であると考えられた。また、これらの遺伝子またはその発現産物（タンパク質）を用いることによって、ＩＢＤを緩和、抑制する治療薬の候補薬をスクリーニングすることが可能であると考えられた。
【０３００】
実施例４　ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子、および／またはＴＬＲ２遺伝子発現抑制剤のスクリーニング
【０３０１】
Ｃａｃｏ−２細胞（ヒト結腸腺癌由来、ＡＴＴＣ株番号ＨＴＢ−３７、大日本製薬株式会社）、ＨＴ−２９細胞（ヒト結腸腺癌由来、ＡＴＴＣ株番号ＨＴＢ−３８、大日本製薬株式会社）、またはＣＯＬＯ　２０５　細胞（ヒト結腸腺癌由来、ＡＴＴＣ株番号ＣＣＬ−２２２、大日本製薬株式会社）を、１０％　不活性化牛胎児血清、２ｍＭグルタミン、５０ＩＵ／ｍｌペニシリン、５０ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン含有Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ培地を用い、３７℃、ＣＯ２濃度５％の条件下で培養する。計数したＣａｃｏ−２細胞、ＨＴ−２９細胞またはＣＯＬＯ　２０５　細胞を２４穴組織培養プレートに０．６−１．２ｘ１０５　ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２で播種し、３７℃、ＣＯ２濃度５％で培養する。これらの細胞に対して刺激剤（ホルボール１２−ミリステート１３アセテート、サイトカイン（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎγ、Ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ−α、Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１、Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６等）あるいはＢｕｔｙｒａｔｅ）の存在下で被験物質含有溶液（１００　μＭ、１０　μＭ、および　１　μＭの各濃度の被験物質を含む溶液）を添加する。ここで対照実験として、被験物質無添加の細胞についても同様の培養を行う（コントロール）。これらの各培養細胞より抽出したＲＮＡを用いて実施例２に記載された方法で、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子、および／またはＴＬＲ２遺伝子の発現量を調べる。その発現量からコントロールと比べて、ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子、および／またはＴＬＲ２遺伝子の発現量が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上低下している培養系に添加した被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３０２】
実施例５　　ＦｃγＲ　ＩＩＩａの機能（活性）抑制剤のスクリーニング
Ｃａｓｓａｔｅｌｌａ，　Ｍ．　Ａ．　ら、Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　１６９，　５４９−５６７，　１９８９に記述されている方法を参考にＦｃγＲ　ＩＩＩａによる細胞内カルシウム濃度増加活性を測定することができ、この測定系を用いてＦｃγＲ　ＩＩＩａの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
１　ｍＭ　ＣａＣｌ２、５．６　ｍＭ　ｇｌｕｃｏｓｅ、２０　ｍＭ　Ｈｅｐｅｓ、０．０２５％　ＢＳＡ　含有ｐＨ　７．４　のＨＢＳＳ（ギブコ社）溶液に、ヒト末梢血単核球細胞より精製したＮＫ細胞を５ｘ１０６　ｃｅｌｌｓ／ｍｌ　の濃度にて懸濁し、添加後濃度　２　μＭ　の　ｆｕｒａ−２／ＡＭ　（カルビオケム社）を添加し、１５分間、３７℃にて振盪しながらインキュベートする。ＢＳＡ、ｆｕｒａ−２／ＡＭを含まない上記緩衝液（以降標準緩衝液と記述）にて５倍希釈した後、さらに３０分間インキュベートする。細胞を洗浄し、３ｘ１０６　ｃｅｌｌｓ／ｍｌ　にて再懸濁する。被験物質を添加し、５　μｇ／ｍｌ　の３Ｇ８　（ＭＢＬ社）を添加した後、細胞内カルシウム濃度の変化を励起波長　３４０　ｎｍ、蛍光波長　５０５　ｎｍ　にて測定する。
細胞内カルシウム濃度の増加が被験物質無添加群に比して１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３０３】
実施例６　ＦｃγＲ　ＩＩＩｂの機能（活性）抑制剤のスクリーニング
細胞表面にＦｃγＲ　ＩＩＩｂを発現している細胞がＩｇＧを貪食する作用を利用することにより、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
ＦＩＴＣで標識した酵母を抗酵母抗体（Ｌｅｗ，　Ｄ．　Ｐ．　ら、Ｎａｔｕｒｅ，　３１５，　５０９−５１１，　１９８５　およびＨｅｄ，　Ｊ．　ら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，　４５，　７２７−７３６，　１９８２）とともにインキュベートしてＦＩＴＣ−ＩｇＧ粒子を作製する。他方、ヒトから採血して精製した好中球（５×１０６）とＦＩＴＣ−ＩｇＧ粒子（２．５×１０７）とを２．９　ｍｌの緩衝液（組成　１３８　ｍＭ　ＮａＣｌ，　６ｍＭ　ＫＣｌ，　１　ｍＭ　ＭｇＳＯ４，　１．１　ｍＭ　ＣａＣｌ２，　５　ｍＭ　ＮａＨＣＯ３，　１００　ｕＭ　ＥＧＴＡ，　５．５　ｍＭ　ｇｌｕｃｏｓｅ，　２０　ｍＭ　ＨＥＰＥＳ，　ｐＨ　７．４）にて３７℃、１０　分間インキュベートする。細胞外のＦＩＴＣ−ＩｇＧ粒子はトリパンブルーでクエンチングし、細胞内に取り込まれたＦＩＴＣの蛍光をモニターする（Ｌｅｗ，　Ｄ．　Ｐ．　ら、Ｎａｔｕｒｅ，　３１５，　５０９−５１１，　１９８５　およびＨｅｄ，Ｊ．　ら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，　４５，　７２７−７３６，　１９８２）。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない細胞に比して被験物質を添加した細胞の、細胞内に取り込まれたＦＩＴＣの蛍光量が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％以上減少していた系に添加した被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３０４】
実施例７　Ｍｉｇの機能（活性）抑制剤のスクリーニング
Ｗｅｎｇ，　Ｙ．　ら、Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２７３，　１８２８８−１８２９１，　１９９８およびＤｅＭａｒｔｉｎｏ，　Ｊ．Ａ．ら、Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２６９，　１４４４６−１４４５０，　１９９４を参考にＭｉｇによる細胞内カルシウム濃度増加活性を測定することができ、この測定系を用いてＭｉｇの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
ヒトＴ細胞もしくはＣＸＣＲ３（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃ．Ｎｏ．ＮＭ＿００１５０４）を発現させたＣＨＯ細胞（ＡＴＣＣ　Ｎｏ．　ＣＣＬ−６１、大日本製薬）２ｘ１０６　ｃｅｌｌｓ／ｍｌ　に対し１．２５　μｇ／ｍｌ　の　Ｉｎｄｏ−１　を添加、１０　ｍＭ　Ｈｅｐｅｓ、５％　ＦＣＳを含むＲＰＭＩ　中にて４５　分３７　℃でインキュベートする。細胞を回収、洗浄し、再び１．２５　μｇ／ｍｌ　の　Ｉｎｄｏ−１を含む上記組成培地にてさらに４５　分インキュベートする。細胞を回収し、２．５ｘ１０６　ｃｅｌｌｓ／ｍｌ　の濃度にて１０　ｍＭ　Ｈｅｐｅｓ、０．１％　ＢＳＡを含むＲＰＭＩ　中に懸濁し３７℃に温めておく。被験物質を添加し、細胞内カルシウム濃度の変化を励起波長　３６５　ｎｍ、蛍光波長　４０５　ｎｍおよび４８８　ｎｍ　にて測定する。
候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない細胞に比して被験物質を添加した細胞の細胞内カルシウム濃度の増加が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３０５】
実施例８　ＮＲＧ−２の機能（活性）抑制剤のスクリーニング
Ｐｉｇｎａｔｅｌｌｉ，　Ｍ．ら、Ｊ．　Ｃｅｌｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，　１１４，　４１１７−４１２６，　２００１の方法を参考にニューレグリンのＥＲＢＢ発現細胞増殖活性を測定することができ、この測定系を用いてＮＲＧ−２の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。ＭＣＦ−７細胞（大日本製薬もしくはＡＴＣＣより入手可能、ＡＴＣＣ　Ｎｕｍｂｅｒ　ＨＴＢ−２２）を９６ウェルプレートに１ウェルあたり７０００細胞シードする。ＲＰＭＩ培地（１０％　ＦＣＳ、１０００　ＩＵ　ペニシリン−ストレプトマイシン、２　ｍＭ　グルタミン含有）で２４時間培養した後、無血清培地に交換し、被験物質とＮＲＧ−２（３０　ｎＭ）を添加し、２４時間培養する。　［３Ｈ］チミジン（０．５　μＣｉ）を加え、さらに２４時間培養する。細胞をハーベストし、洗浄後、［３Ｈ］チミジンの取り込み量を固体シンチレーションカウンターにて測定する。ＮＲＧ−２はＣａｒｒａｗａｙらの方法（Ｎａｔｕｒｅ，　３８７，　５１２−５１６）にて調製する。すなわちＮＲＧ−２のＥＧＦ様ドメイン（アミノ酸配列２４６−３１４）とグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼの融合蛋白質を、Ｈｉｇｈ　Ｆｉｖｅ細胞（昆虫細胞）にて発現させ、グルタチオン親和性カラムにて回収する。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない細胞に比して被験物質を添加した細胞の［３Ｈ］チミジンの取り込みが１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３０６】
実施例９　ヘキソキナーゼ　３の機能（活性）抑制剤のスクリーニング
Ｄ−グルコース６−リン酸生成をグルコース−６−リン酸デヒドロデナーゼ、ＮＡＤＰ共存下での３４０　ｎｍ　吸光度の増加で測定することによって、ヘキソキナーゼ３の酵素活性を測定することができ（生化学実験講座１２　エネルギー代謝と生体酸化　上１０４−１０８）、この測定系を用いてヘキソキナーゼ３の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
ヒト溶血上清液５０　μｌ、１．０　Ｍ　Ｔｒｉｓ−塩酸緩衝液（ｐＨ　８．０）１００　μｌ、０．１　Ｍ　ＭｇＣｌ２　２０　μｌ、２　ｍＭ　ＮＡＤＰ　１００　μｌ、２０　ｍＭグルコース１００　μｌ、２０　ｍＭ　ＡＴＰ　１００　μｌを混合し、被験物質存在下および非存在下で２０分間３７℃にて保温し、３４０　ｎｍの吸光度の増加を測定する。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない場合の吸光度に比して被験物質を添加した場合の吸光度の増加が、１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３０７】
実施例１０　ＨＭ７４の機能（活性）抑制剤のスクリーニング
ＨＭ７４の活性測定は、Ｇ蛋白共役型受容体がＧＤＰ存在下でＧＴＰアナログであるＧＴＰγＳを結合する性質を利用して、以下のように行うことが出来る。
ＨＭ７４の遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃ．Ｎｏ．Ｄ１０９２３）発現ベクターを作製し、ＣＨＯ−Ｋ１細胞またはＨＥＫ２９３細胞に過剰発現させる。超遠心により細胞の膜画分を調製し、−８０℃で保存する。１ｍＭ　ＤＴＴ，　１ｍＭ　ＭｇＣｌ２，　１ｍＭ　ＥＧＴＡ，　１００ｍＭ　ＮａＣｌ，　１００μＭ　ＧＤＰを含む５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−Ｃｌ（ｐＨ．７．４）バッファーに１０μｇの膜蛋白及び被験物質を混合して最終容量５００μｌとし、３０℃で３０分間インキュベートする。５０μｌの［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳを終濃度０．２５ｎＭになるよう混合し、さらに３０℃で３０分間インキュベートする。結合反応はグラスフィルター（ＷｈａｔｍａｎＧＦ／Ｂグレード）上で氷冷バッファー（５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−Ｃｌ，１ｍＭ　ＭｇＣＬ２，　ｐＨ．７．４）にて５回洗浄することにより終了する。液体シンチレーションカウンターにてフィルター上の放射能をカウントし、５０μＭの放射能標識されていないＧＴＰγＳをサンプルとしたときの値をバックグラウンドとして特異的結合値を算出する。
候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない結合値に比して被験物質を添加した結合値が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上低下している被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３０８】
実施例１１　ＲＥＧ　ＩＩＩの機能（活性）抑制剤のスクリーニング
Ｍａｌｋａ，　Ｄら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，　１１４，　８０８−８１６，　１９９８およびＭａｌｋａ，　Ｄら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，　１１９，　８１６−８２８，　２０００の方法を参考にＲＥＧ　ＩＩＩのアポトーシス抑制活性を測定することができ、この測定系を用いてＲＥＧ　ＩＩＩの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
ＡＲ４−２Ｊ細胞（ラット膵臓腺房細胞）を調製し、ＰＡＰ（ＲＥＧ　ＩＩＩ）　遺伝子を導入する。７Ｘ１０５細胞を６ウェルマイクロプレートに播種し、２４時間培養する。無血清培地に交換し、被験物質添加後、さらに過酸化水素を０．１５　ｍＭ　になるように添加し、１時間反応させる。１０％血清を含む培地に交換し、さらに１６時間培養する。最終濃度が３１７　μｇ／ｍｌ　になるよう３−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−５−（３−ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−（４−ｓｕｌｆｏｐｈｅｎｙｌ）−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ　ｉｎｎｅｒ　ｓａｌｔ（ＭＴＳ）を添加し、２時間さらに培養した後、４９０　ｎｍの吸光度（リファレンス波長は６３０　ｎｍ）にて生存細胞を測定する。ベクターのみを導入したＡＲ４−２Ｊを０％アポトーシス抑制活性、ＲＥＧ　３　遺伝子を導入し、被験物質を添加しなかったＡＲ４−２Ｊを１００％アポトーシス抑制活性を示すコントロールとして用い、候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない細胞系に比して被験物質を添加した細胞系のアポトーシス抑制活性が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３０９】
またＩｏｖａｎｎａ，　Ｊ，　ら、Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，　２６６，　２４６６４−２４６６９，　１９９１の方法を参考に、ＲＥＧ　ＩＩＩの細菌凝集活性を測定することができ、この測定系を用いてＲＥＧ　ＩＩＩの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
大腸菌ＪＭ１０９株を定常状態に達するまで振盪培養する（Ｌ−ｂｒｏｔｈ、３７℃）。菌体を回収、洗浄後、マイクロプレート１ウェルあたり５Ｘ１０７　細胞を　２００　μｌ　の０．５ｍＭ　ＣａＣｌ２　を含むＰＢＳ溶液に懸濁して添加する。被験物質添加後、５０　μｇ／ｍｌ　のＰＡＰ　（ＲＥＧ　ＩＩＩ）を添加し、２５℃にて３　時間反応させた後、凝集の程度を　６００　ｎｍ　の吸光度にて測定する。ネガティブコントロールとして、アルブミン（５０　μｇ／ｍｌ）、ポジティブコントロールとしてコンカナバリンＡ（５０　μｇ／ｍｌ）を用いる。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない凝集に比して被験物質を添加した凝集が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３１０】
実施例１２　ＬＰＡＰの機能（活性）抑制剤のスクリーニング
Ｓｃｈｒａｖｅｎ，　Ｂ．，ら、Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２６９，　２９１０２−２９１１１，　１９９４に記載の方法を参考にＣＤ４５との結合活性を測定することができ、この測定系を用いてＬＰＡＰの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
Ｊｕｒｋａｔ　Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ細胞株（ヒト白血病Ｔリンパ腫由来、ＡＴＴＣ株番号ＴＩＢ−１５２、大日本製薬株式会社）１．０×１０９細胞を、氷冷ＴＢＳ（Ｔｒｉｓ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ　ｓａｌｉｎｅ）にて２回洗浄し、溶解バッファー（２０　ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，　ｐＨ７．５，　１５０　ｍＭ　ＮａＣｌ，　２　μｇ／ｍｌ　ａｐｒｏｔｉｎｉｎ，　２　μｇ／ｍｌ　ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ，　１０　ｍＭ　ＮａＦ，　１　ｍＭ　ｓｏｄｉｕｍ　ｏｒｔｈｏ　ｖａｎａｄａｔｅ，　１％　Ｂｒｉｊｉ　５８）３０　ｍｌ　にて溶解する。これをＣＤ４５　モノークローナル抗体を結合させたＣＮＢｒ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅビーズ　３　ｍｌと混合し、細胞溶解液中のＬＰＡＰ、ＣＤ４５複合体をビーズに結合させる。さらに溶解バッファーにて３回洗浄した後、３　ｍｌの溶解バッファーを加えて懸濁し、２００　μｌをマイクロプレートに分注する。５０　μｌの被験物質を含む、もしくは含まない溶解バッファーを加えて２０分間室温にて反応後、遊離する蛋白質を（好ましくは遊離するＬＰＡＰを抗ＬＰＡＰ抗体を用いて）測定する。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない反応系に比して被験物質を添加した反応系の遊離蛋白質が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上増加した系に添加していた被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３１１】
実施例１３　Ｍｉｐ−１βの機能（活性）抑制剤のスクリーニング
Ｌａｕｒｅｎｃｅ，　Ｊ．　Ｓ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　３９，　３４０１−３４０９，　２０００に記載の方法を参考にＣＣＲ５との結合活性を測定することができ、この測定系を用いてＭｉｐ−１βの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
［１２５Ｉ］Ｍｉｐ−１β（２２００　Ｃｉ／ｍｍｏｌ，　ＮＥＮ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）０．０８　ｎＭと、ＣＣＲ５遺伝子を導入したＣＨＯ（Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｈａｍｓｔｅｒ　ｏｖａｒｙ）細胞４０，０００　ｃｅｌｌｓを、０．１　ｍｌのＢｉｎｄｉｎｇ　緩衝液（５０　ｍＭ　ＨＥＰＥＳ，　ｐＨ　７．４，　１　ｍＭ　ＣａＣｌ２，　５　ｍＭ　ＭｇＣｌ２，　０．５％　ＢＳＡ）中にて２７℃、被験物質存在下および非存在下で９０分間インキュベートする。結合した［１２５Ｉ］Ｍｉｐ−１βを１％　ＢＳＡで予浸したＧＦ／Ｃフィルター（Ｗｈａｔｍａｎ）でろ過することによって選別する。β−シンチレーションカウンターにてフィルターの放射活性を測定する。被験物質無添加群に比して結合したＭｉｐ−１βが１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３１２】
またＬａｕｒｅｎｃｅ，　Ｊ．　Ｓ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　３９，　３４０１−３４０９，　２０００およびＳｔａｂｌｅｓ，Ｊ．ら、Ａｎａｌ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ．，　２５２，　１１５−１２６，　１９９７に記載の方法を参考にＣＣＲ５のカルシウム放出活性（ＧＰＣＲの反応）を測定することができ、この測定系を用いてＭｉｐ−１βの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
ＣＣＲ５遺伝子を導入したＣＨＯ細胞に、ａｐｏａｅｑｕｏｒｉｎ遺伝子、Ｇα１６（Ｇ−蛋白質αサブユニットの一種）遺伝子をコードするプラスミドをさらに導入し、ＤＭＥＭ培地に５×１０６　ｃｅｌｌｓ／ｍｌで懸濁する。５　μＭのｃｏｅｌｅｎｔｅｒａｚｉｎｅ　Ｈ　（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｐｒｏｂｅｓ）存在下、暗所で２時間インキュベートする。細胞を７．５倍希釈し、５０　μｌの懸濁液（３，３０００　ｃｅｌｌｓ）に、被験物質をＤＭＥＭ培地に溶かした溶液　５０　μｌを加える。さらに１分後に１ｎＭのＭｉｐ−１β（Ｒ＆Ｄ　Ｓｙｓｔｅｍｓ）を添加し、ａｅｑｕｏｒｉｎの蛍光（４６９　ｎｍ）を１分間測定する。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない細胞に比して被験物質を添加した細胞のカルシウムの放出が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３１３】
実施例１４　Ｌ−セレクチンの機能（活性）抑制剤のスクリーニング
特開平１１−２３６３９４に記載の方法を参考にＳＬｅＸとの結合活性を測定することができ、この測定系を用いてＬ−セレクチンの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
まずＬ−セレクチン／Ｉｇキメラタンパクの構築を行う。
Ｌ−セレクチンと免疫グロブリン（Ｉｇ）タンパクからなるキメラタンパクを以下のように構築する。セレクチン分子としては、ヒトＬ−セレクチン（Ｌａｓｋｉ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｅｌｌ，　５６，　１０４５−１０５５　（１９８９））のＤＮＡ配列をもとに、それぞれのＮ末端から糖との結合に必要とされるレクチンドメイン、ＥＧＦドメイン，第１、第２ＣＲ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ　　Ｒｅｇｕｒａｔｏｒｙ）ドメインまでを用いる。一方ヒトＩｇタンパクとしては、ヒトＩｇＧ２（Ｅｌｉｓｏｎ　ａｎｄ　Ｈｏｏｄ，　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．，　７９，　１９８４−１９８８　（１９８２））のＤＮＡ配列をもとに、Ｈｉｎｇｅ領域からＣＨ２，ＣＨ３領域までを用いる。それぞれのセレクチンとＩｇの領域を含むＤＮＡ断片は、Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　Ｃｈａｉｎ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ法（Ｋｒｉｅｇｌｅｒ　，Ｇｅｎｅ　Ｔｒａｎｓｆｅｒ　ａｎｄ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ，　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，　１９９０）を用いてそれぞれ増幅し、その後結合することにより、目的とするＬセレクチン／ＩｇキメラおよびＰセレクチン／Ｉｇキメラのタンパクをコードするキメラ遺伝子を作成する。それぞれのキメラ遺伝子は哺乳動物細胞の発現ベクターであるｐＣＤＮＡ−１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製）に組み込む。これらのプラスミドをｐＣＶ２−ｎｅｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社製）とともにヒト腎由来細胞株２９３細胞にリン酸カルシウム法によりコトランスフェクションし、ネオマイシンンによる選択後、目的とするキメラタンパクを発現、分泌する細胞を選別し、細胞株として樹立する。これら樹立細胞を大量培養しその培養上清を回収後、プロテインＡカラム（ファルマシア社製）を用いてセレクチンキメラタンパクを精製する。こうして得られたＬセレクチン／Ｉｇキメラのタンパクを阻害活性試験に供する。
次いで結合阻害活性試験を行う。
【０３１４】
ナフトアミドＳＬｅＸポリマー　１　ｍｇ／ｍｌの水溶液を調製し、ストック液として、−２０℃で凍結して保存する。これを使用時に融解し、５０％のメタノール水溶液で１．５　μｇ／ｍｌに希釈する。希釈した溶液をプレートに５０　μｌ／ｗｅｌｌで分注し、室温放置により風乾する。８連マルチチャンネルピペットを用いて　ＤＰＢＳ２００　μｌ／ｗｅｌｌで３回洗浄した後、５％　ＢＳＡ／ＤＰＢＳを２００　μｌ／ｗｅｌｌ加え室温で２時間放置してブロッキングを行う。その後、ＤＰＢＳ２００　μｌ／ｗｅｌｌで３回洗浄する。　以降の洗浄操作においても全て８連マルチチャンネルピペットを使用する。ブロッキングを行っている間にキメラコンプレックスを用意する。希釈は全て１％　ＢＳＡ／ＤＰＢＳで行う。Ｌ−セレクチン／Ｉｇキメラを二次抗体と合わせ室温で３０分間放置して、コンプレックスを形成させる。被験化合物またはグリチルリチンを加える時には、ＤＰＢＳで５倍濃度に調製した阻害剤５０　μｌにコンプレックス２００　μｌを加え、更に３０分間室温放置する。コントロール群はコンプレックス液にその１／４量のＤＰＢＳを添加して調製する。キメラコンプレックスをプレートに各ウェル５０　μｌ加え、室温で１時間放置する。２００　μｌ／ｗｅｌｌのＤＰＢＳで７回プレートの洗浄を行う。室温に戻した基質を１００　μｌ／ｗｅｌｌ加え、２０−３０分放置し適当な発色が得られたら１Ｎリン酸５０　μｌ／ｗｅｌｌで反応を止める。各ウェルの４５０　ｎｍにおける吸光度を測定し、コントロール群における値を１００％とし、被験化合物またはグリチルリチンを含むウェルにおける接着量を％コントロールで算出する。
【０３１５】
なお、用いる実験材料は以下のとおりである。
プレート　［ヌンク社製　マキシソープ　ルーズ　ヌンクーイムノ　モジュ　ールプレート］；
ナフトアミドＳＬｅＸポリマー　（Ｍｉｙａｕｃｈｉら，　Ｂｉｏｏｒｇ．　Ｍｅｄ．　Ｃｈｅｍ．　Ｌｅｔｔ．，７，　９８５　（１９９７）　に記載の方法で合成する　）；
グリチルリチン　（和光純薬）；
二次抗体　［カルタグ社製　ヤギ　Ｆ（ａｂ’）　抗ヒト　ＩｇＧ抗体（Ｆｃ，　Ｓｐ）］；
基質　［ギブコ社製　ＴＭＢ（３，３’，５，５’−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｉｄｉｎｅ）溶液］；
反応停止液　［１Ｎ　Ｈ３ＰＯ４］；
ＤＰＢＳ　（ダルベッコ　フォスフェート　バッファード　セライン）（ギブコ社製）；
ＢＳＡ　（仔ウシ血清アルブミン）。
候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない反応系に比して被験物質を添加した反応系の接着量が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３１６】
実施例１５　ＥＧＦＬ６の機能（活性）抑制剤のスクリーニング
特開平７−１９６５２７に記載の方法を参考にＥＧＦＬ６の細胞増殖活性を測定することができ、この測定系を用いてＥＧＦＬ６の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
マウス線維芽細胞Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３またはラット小腸上皮細胞ＩＥＣ１８（共にＡｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから購入）を９６穴カルチャ−プレ−トに１穴当たり５０００個ずつ蒔き、１０％牛胎児血清を含むダルベッコ変法イ−グル培養液（日水製薬社製。以下ＦＢＳ−ＤＭＥＭと略記する）で細胞がコンフルエント（細胞密度が増し細胞どうしが接触することで増殖がほぼ停止することを意味する）になるまで培養する（培養液は、１穴当たり０．１ｍｌ使用する）。培養液を０．２％ＦＢＳ−ＤＭＥＭと交換し、さらに１日培養し、細胞を静止期に導入する。被験物質存在下および非存在下、０．２％ＦＢＳ−ＤＭＥＭ（５０　μｌ）にて０．５時間培養する。さらに２０ｎｇ／ｍｌのＥＧＦＬ６を含む０．２％ＦＢＳ−ＤＭＥＭを５０　μｌ添加し、１７時間培養する。次に、培養液を３Ｈ−チミジン（ＩＣＮバイオメディカル社製。１μＣｉ／ｍｌ）を含む０．２％ＦＢＳ−ＤＭＥＭ（０．１ｍｌ）と交換し、さらに２時間培養する。培養液を除き、０．１％ラウリル硫酸ナトリウム水溶液を１穴当たり０．１ｍｌ加え細胞を溶解する。セルハ−ベスタ−（Ｓｋａｔｒｏｎ　ＩＮＣ社製）によりＤＮＡをフィルタ−（Ｓｋａｔｒｏｎ　　ＩＮＣ社製）上に回収し、ＤＮＡに取り込まれた３Ｈ−チミジン量を液体シンチレイションカウンタ−（ＬＫＢ社製）で測定する。
候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない細胞に比して被験物質を添加した細胞の増殖が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３１７】
実施例１６　ＩＤＯの機能（活性）抑制剤のスクリーニング
Ｃａｒｌｉｎ，　Ｊ．　Ｍ．ら、Ｊ．　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　Ｒｅｓ．　９　３２９−３３７　１９８９に記載の方法を参考にＩＤＯのトリプトファン分解活性を測定することができ、この測定系を用いてＩＤＯの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
２４穴プレート１ウェルあたり約２×１０５細胞の単球細胞をＰｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ　ｃｅｌｌ　より調製し、１０−１４日培養してマクロファージとして成熟させる。さらに最終濃度　２０　ｎｇ　／　ｍｌ　のＩＦＮ−γに４８時間暴露し、ＩＤＯを誘導しておく。培地を抜いた後、２５　μＭ　トリプトファン、１　μＣｉ　／ｍｌ　（比活性　２０　Ｃｉ／ｍｍｏｌ）　［５−３Ｈ］トリプトファンを含むＨＢＳＳ（Ｈａｎｋ’ｓ　ｂａｌａｎｃｅｄ　ｓａｌｔ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ）０．４　ｍｌを、被験物質存在下および非存在下にて添加する。４時間インキュベートした後の培養上清（−２０℃にて保存可能）について、トリプトファンの分解の程度を調べる。上清よりＣ１８カラムを用いた逆相ＨＰＬＣにてＬ−トリプトファン、分解物であるＮ−フォルミルキヌレニンもしくはキヌレニンを分画し、各画分の放射活性をシンチレーションカウンターにて計測する。自然分解量を細胞非存在下の上清より同様に測定して差し引き、細胞によるトリプトファンの分解量をＩＤＯ活性として算出する。
候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない細胞に比して被験物質を添加した細胞のＩＤＯ活性が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３１８】
実施例１７　ＩＬ−８の機能（活性）抑制剤のスクリーニング
［１２５Ｉ］ＩＬ−８を用いた結合試験により、被験物質の受容体に対する親和性を測定することができる。ＴＨＰ−１細胞を１０％ＦＣＳ又はＦＢＳを含む　ＲＰＭＩ−１６４０培地にて継代し、その対数増殖期細胞　５×１０６ｃｅｌｌ／４００　μｌ　を０．１　％ウシ血清アルブミンを含む　ＲＰＭＩ−１６４０培地に懸濁する。この懸濁液に［１２５Ｉ］ＩＬ−８　（最終濃度　０．０６　ｍＭ　　比活性２２００ｃｉ／ｍｍｏｌ）と、被験物質のＰＢＳあるいはＤＭＳＯ溶液　４μｌ（最終濃度　１００μＭ）とを混合する。氷中２時間反応させ遠心後、　１ｍｌのＰＢＳ　で５回洗浄する。最終的にＰＢＳ　１ｍｌに懸濁し、細胞の総放射活性を測定する。ＴＨＰ−１細胞に対する［１２５Ｉ］ＩＬ−８の非特異的結合量（ＴＨＰ−１細胞のＩＬ−８受容体以外に結合した［１２５Ｉ］ＩＬ−８）　は上記操作の被験物質の代りに　１ｍｇ／ｍｌ　ＩＬ−８　２μｌ　をＴＨＰ−１　細胞懸濁液に加え求める。ＴＨＰ−１　細胞に対する［１２５Ｉ］ＩＬ−８の特異的結合量は、全結合量（被験物質非存在下での［１２５Ｉ］ＩＬ−８の結合量）から非特異的結合量を差し引いて求める。すなわち、次式にて被験物質の　１００μＭ　用量でのＴＨＰ−１　細胞とＩＬ−８の特異的結合に対する阻害率　（％）　を求める。
阻害率　（％）　＝〔　（全結合量−非特異的結合量）　−（被験物質添加時結合量−非特異的結合量）〕÷　（全結合量−非特異的結合量）　×１００
候補物質のスクリーニングは、阻害率が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％以上を示した被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３１９】
実施例１８　ＣＤ１１ｃの機能（活性）抑制剤のスクリーニング
Ｓｔａｃｋｅｒ，　Ｓ．Ａ．　ら、Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　１４６，　６４８−６５５　（１９９１）の方法を参考にＣＤ１１ｃの内皮細胞接着活性を測定することができ、この測定系を用いてＣＤ１１ｃの機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
すなわち、
１．プレートにＣＤ１１ｃをコートしたのち、洗浄する、
２．被験物質存在下および非存在下にて内皮細胞懸濁液を添加し、反応させる、３．非接着細胞を除去後、細胞接着の度合いを調べる、
を行う。
【０３２０】
ＨＵＶＥＣ（内皮細胞・ｈｕｍａｎ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｖｅｉｎ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ）はフィブロネクチンコートディッシュにて、２０％ＦＢＳ，５　ｍＭ　Ｌ−ｇｌｕｔａｍｉｎｅ，　５０　μｇ／ｍｌ　ｇｅｎｔａｍｉｃｉｍ，　１００　μｇ／ｍｌ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ　（バイオメディカルテクノロジー社），１００　μｇ／ｍｌ　ｈｅｐａｒｉｎ　を含むＭ１９９培地にて培養する。使用前に５　Ｕ／ｍｌ　のヒトｒＩＬ−１β（ベーリンガーマンハイム社）もしくは、５　ｎｇ／ｍｌ　ＬＰＳ　（シグマ社）を加え、１８−２４時間刺激しておく。回収後、アッセイバッファー（ＰＢＳ／５％　ＦＢＳ／２ｍＭ　ＭｇＣｌ２）で２回洗浄し、１００　μＣｉのＮａ２５１ＣｒＯ４（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ）とともに３７℃で１　時間インキュベートして標識し、アッセイバッファーにて３回洗浄した懸濁液をアッセイに用いる。一方５０　μｇ／ｍｌのＣＤ１１ｃ／ＰＢＳ溶液を浮遊細胞用９６ウエルのプレート（ＳＵＭＩＬＯＮ）に、５０μｌ／ｗｅｌｌで分注して、３７℃で２時間反応させ、ＰＢＳでウエルを洗浄する。被験物質存在下および非存在下にてＨＵＶＥＣ　５ｘ１０４細胞を各ウェルに添加し、５　ｇ　ｘ　３　ｍｉｎ　の遠心によって細胞を底面に集め、３７℃で２０分間インキュベートする。アッセイバッファーにて３回洗浄した後、１００　μｌ　の０．１　Ｍ　ＮａＯＨ／０．１％　ＴＸ−１００　にて結合した細胞を溶解し、γ線量を測定する。γ線量と、ウエル当たりの細胞数（スタンダードとして段階希釈した細胞）をグラフにプロットして、スタンダードカーブを一次直線として作成する。このスタンダードカーブを用い、蛍光強度からウエル当たりの細胞数を算出する。得られた細胞数を蒔いた細胞数で割ることで、細胞接着の割合を得る。
候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない細胞に比して被験物質を添加した細胞の接着が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３２１】
実施例１９　ＴＬＲ２の機能（活性）抑制剤のスクリーニング
特開２００２−４５０８６に記載の方法を参考にＴＬＲ２のマクロファージ活性化作用を測定することができ、この測定系を用いてＴＬＲ２の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
合成グラム陰性菌由来リポペプチドＪＢＴ３００２の調製に関してはＤｏｎｇ，　Ｚ．Ｊ．ら、Ｌｅｕｋｏｃ．　Ｂｉｏｌ．，　６３，　７６６−７７４　（１９９８）　に記載され、また、合成マイコプラズマ由来リポペプチドＭＡＬＰ−２の調製に関してはＭｕｈｌｒａｄｔ，　Ｐ．　Ｆ．ら、Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　１８５，　１９５１−１９５８　（１９９７）　に記載されている。マウスの腹腔マクロファージ（５×１０４ｃｅｌｌｓ）を、被験物質存在下および非存在下にて５　μｇ／ｍｌのＪＢＴ３００２又はＭＡＬＰ−２といっしょに２４時間培養し刺激する。培養後、培養上清中のＴＮＦ−α（ＴＮＦα）及びＮＯ２−（ＮＯ）の産生量を測定する。ＴＮＦαの濃度をＥＬＳＩＡにより、ＮＯ２−はＮＯ２／ＮＯ３アッセイキット（同仁科学研究所社製）を使用し、Ｇｒｅｉｓｓ法により測定する。
候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない細胞に比して被験物質を添加した細胞のＴＮＦαもしくはＮＯ２−が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、ＩＢＤを緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０３２２】
【発明の効果】
本発明によって、ＩＢＤ患者（潰瘍性大腸炎及びクローン病）の結腸病変組織において、結腸正常組織と比較して特異的に発現増大している遺伝子（ＦｃγＲ　ＩＩＩａ遺伝子、ＦｃγＲ　ＩＩＩｂ遺伝子、Ｍｉｇ遺伝子、ＮＲＧ−２遺伝子、ヘキソキナーゼ　３遺伝子、ＨＭ７４遺伝子、ＲＥＧ　ＩＩＩ遺伝子、ＬＰＡＰ遺伝子、Ｍｉｐ−１β遺伝子、Ｌ−セレクチン遺伝子、ＥＧＦＬ６遺伝子、ＩＤＯ遺伝子、ＩＬ−８遺伝子、ＣＤ１１ｃ遺伝子およびＴＬＲ２遺伝子）が明らかになった。かかる遺伝子はＩＢＤの遺伝子診断に用いられるマーカー遺伝子（プローブ、プライマー）として有用である。かかるマーカー遺伝子によればＩＢＤであるかどうかを明らかにすることができ（診断精度が向上）、これによりより適切な治療を施すことが可能となる。すなわち、ＩＢＤの適切な治療のためのツールとして利用することができる。
【０３２３】
また、上記遺伝子の発現増加とＩＢＤとの関連性から、該遺伝子の発現を抑制する化合物は、ＩＢＤの治療薬として有用と考えられる。従って、これら遺伝子の発現の抑制または減少、または当該遺伝子がコードするタンパク質の発現や機能（活性）の抑制または減少を指標とすることによって、ＩＢＤの治療薬となり得る候補薬をスクリーニングし選別することが可能である。本発明は、このようなＩＢＤ治療薬の開発技術をも提供する。
【０３２４】
【配列表】
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