(57)【要約】【課題】マイコプラズマ・ジェニタリウム（Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ）、マイコプラズマ・ホミニス（Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ）、ウレアプラズマ・パルバム（Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ）及びウレアプラズマ・ウレアリチカム（Ｕ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）の迅速かつ簡便な検出法を提供する。【解決手段】試料から得られるＤＮＡを鋳型とし、マイコプラズマ及びウレアプラズマのＤＮＡをともに高度に増幅できるプライマー対を用いてＰＣＲを行うことにより増幅産物を得、増幅産物に対し、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ、Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ及びＵ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍに特異的な核酸プローブを用いてハイブリダイゼーションを行うことによりハイブリッドの形成を検出し、検出結果に基づいてマイコプラズマ及びウレアプラズマを検出する。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料から得られるＤＮＡを鋳型として用いてＰＣＲを行うことにより増幅産物を得、増幅産物に対し、核酸プローブを用いてハイブリダイゼーションを行うことによりハイブリッドの形成を検出し、検出結果に基づいてマイコプラズマ及びウレアプラズマを検出することを含む、マイコプラズマ及びウレアプラズマの検出方法であって、
ＰＣＲで用いられるプライマー対が、一方のプライマーが、配列番号１に示す塩基配列の塩基番号４９７〜５４７に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチドであり、他方のプライマーが、配列番号１に示す塩基配列の塩基番号１０１２〜１０５１に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド、及び、配列番号４に示す塩基配列の塩基番号９６３〜１０１８に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号９８８〜１００３またはその一部を含む）の混合物であるプライマー対であり、
ハイブリダイゼーションで用いられる核酸プローブが、下記（ａ）〜（ｄ）から選ばれる１つ以上である、前記検出方法。
（ａ）配列番号１に示す塩基配列の塩基番号８０６〜８５５に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８２６及び８３５の少なくとも一方を含む）。
（ｂ）配列番号２に示す塩基配列の塩基番号６１８〜６６０に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号６３８及び６４０の少なくとも一方を含む）。
（ｃ）配列番号３に示す塩基配列の塩基番号７８７〜８３４に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８０７及び８１４の少なくとも一方を含む）。
（ｄ）配列番号４に示す塩基配列の塩基番号７８３〜８３０に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８０３及び８１０の少なくとも一方を含む）。
【請求項２】
プライマー対が、一方のプライマーが、配列番号５に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、他方のプライマーが、配列番号６に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、及び、配列番号７に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドの混合物であるプライマー対である請求項１記載の検出方法。
【請求項３】
核酸プローブが、配列番号８に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、配列番号９に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、配列番号１０に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、及び、配列番号１１に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドである請求項１又は２記載の検出方法。
【請求項４】
核酸プローブがマイクロタイタープレートのウェルに固定化されている請求項１〜３のいずれか１項に記載の検出方法。
【請求項５】
請求項１に記載の検出方法に用いるためのキットであって、
ＰＣＲで用いられるプライマー対として、一方のプライマーが、配列番号１に示す塩基配列の塩基番号４９７〜５４７に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチドであり、他方のプライマーが、配列番号１に示す塩基配列の塩基番号１０１２〜１０５１に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド、及び、配列番号４に示す塩基配列の塩基番号９６３〜１０１８に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号９８８〜１００３またはその一部を含む）の混合物であるプライマー対、
ハイブリダイゼーションで用いられる核酸プローブとして、下記（ａ）〜（ｄ）から選ばれる１つ以上を含む、前記キット。
（ａ）配列番号１に示す塩基配列の塩基番号８０６〜８５５に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８２６及び８３５の少なくとも一方を含む）。
（ｂ）配列番号２に示す塩基配列の塩基番号６１８〜６６０に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号６３８及び６４０の少なくとも一方を含む）。
（ｃ）配列番号３に示す塩基配列の塩基番号７８７〜８３４に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８０７及び８１４の少なくとも一方を含む）。
（ｄ）配列番号４に示す塩基配列の塩基番号７８３〜８３０に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８０３及び８１０の少なくとも一方を含む）。
【請求項６】
プライマー対が、一方のプライマーが、配列番号５に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、他方のプライマーが、配列番号６に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、及び、配列番号７に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドの混合物であるプライマー対である請求項５記載の検出方法。
【請求項７】
核酸プローブが、配列番号８に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、配列番号９に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、配列番号１０に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、及び、配列番号１１に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドである請求項５又は６記載の検出方法。
【請求項８】
核酸プローブがマイクロタイタープレートのウェルに固定化されている請求項５〜７のいずれか１項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ＰＣＲ−ハイブリダイゼーションによるマイコプラズマおよびウレアプラズマの検出方法及びその方法のためのキットに関する。
【０００２】
【従来の技術】
マイコプラズマ・ジェニタリウム（Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ）は、非淋菌性尿道炎（ＮＧＵ）患者から初めて分離され、ＮＧＵの起炎菌の一つとして考えられたが、培養による検出が困難なため、その病原的意義は確立されていなかった。ＰＣＲ法による検出が可能になると、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍは、健常人に比べＮＧＵ患者から高い頻度で検出されることが分かった。霊長類への接種実験では、尿道炎様の症状が惹起され、また抗体価の上昇がみられた。これらの結果から、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍはＮＧＵの起炎菌であることが示唆されている。
【０００３】
ウレアプラズマ・パルバム（Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ）及びウレアプラズマ・ウレアリチカム（Ｕ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）は、１９９８年に分類法が改定されるまで、Ｕ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍの二つの生物型（ｂｉｏｖａｒ）とされていた。ウレアプラズマとＮＧＵの関連を示唆する報告は多いが、一方でこれらは健常人からも高い頻度で検出されることが知られている。
【０００４】
マイコプラズマ・ホミニス（Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ）は、細菌性膣症、骨盤内感染症、産褥熱など特に婦人科領域の感染症との関与が示唆されている。
【０００５】
マイコプラズマ及びウレアプラズマの検出及び菌種同定に関しては、ＰＣＲ法による１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子に基づくマイコプラズマ及びウレアプラズマの検出法、並びに、１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列の系統解析による菌種同定法が報告されている（特開２００１−２９９３５２）。また、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍの検出に関しては、リアルタイムＰＣＲによる定量が報告されている（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，　２００２．　４０：１４５１−１４５５）。
【０００６】
系統解析による菌種同定法（特開２００１−２９９３５２）は、マイコプラズマ及びウレアプラズマの同定に有用な方法である。しかしながら、塩基配列の解読を含むその操作工程は煩雑であり、時間もかかるため、多数の臨床検体を処理するには、なお改善の余地がある。
【０００７】
いくつかの細菌及びウイルスの検出に関しては、ＰＣＲによるＤＮＡ増幅と、マイクロタイタープレート上でのハイブリダイゼーションによる検出とを組み合わせた方法が知られているが、マイコプラズマ及びウレアプラズマに関しては、このような方法は知られていない。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
特開２００１−２９９３５２に記載のマイコプラズマ及びウレアプラズマの検出法を用いて男子ＮＧＵ患者等の尿を検査したところ、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍは、無症候性男子に比べ、ＮＧＵ患者から高い頻度で検出された。また、無症候性男子の尿中に存在するＭ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍの菌量は、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，　２００２．　４０：１４５１−１４５５に記載のリアルタイムＰＣＲによる定量を行った結果、ＮＧＵ患者のそれに比べ非常に少ないものであった。さらに、尿道炎の再発症例では、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍの菌量と臨床症状の相関する例が散見された。これらの結果は、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍがＮＧＵの起炎菌に成り得ることを強く支持するものであった。さらに、尿道炎患者においては、Ｕ．　ｐａｒｖｕｍよりもＵ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍの検出頻度が高く、一方、健常人ではＵ．　ｐａｒｖｕｍが優位であった。ウレアプラズマと尿道炎の関連は種別に検討する必要があると思われた。
【０００９】
本発明は、マイコプラズマ及びウレアプラズマのうち、特に迅速に検出することが有用と思われるＭ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ、Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ及びＵ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍの迅速かつ簡便な検出法を提供することを課題とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ、Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ及びＵ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍの検出を目的としたオリゴヌクレオチドプローブの設計に成功するとともに、マイコプラズマ及びウレアプラズマのＤＮＡをともに高度に増幅できるプライマー対の設計に成功し、本発明を完成した。
【００１１】
従って、本発明は、以下のものを提供する。
（１）試料から得られるＤＮＡを鋳型として用いてＰＣＲを行うことにより増幅産物を得、増幅産物に対し、核酸プローブを用いてハイブリダイゼーションを行うことによりハイブリッドの形成を検出し、検出結果に基づいてマイコプラズマ及びウレアプラズマを検出することを含む、マイコプラズマ及びウレアプラズマの検出方法であって、
ＰＣＲで用いられるプライマー対が、一方のプライマーが、配列番号１に示す塩基配列の塩基番号４９７〜５４７に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチドであり、他方のプライマーが、配列番号１に示す塩基配列の塩基番号１０１２〜１０５１に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド、及び、配列番号４に示す塩基配列の塩基番号９６３〜１０１８に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号９８８〜１００３またはその一部を含む）の混合物であるプライマー対であり、
ハイブリダイゼーションで用いられる核酸プローブが、下記（ａ）〜（ｄ）から選ばれる１つ以上である、前記検出方法。
【００１２】
（ａ）配列番号１に示す塩基配列の塩基番号８０６〜８５５に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８２６及び８３５の少なくとも一方を含む）。
（ｂ）配列番号２に示す塩基配列の塩基番号６１８〜６６０に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号６３８及び６４０の少なくとも一方を含む）。
（ｃ）配列番号３に示す塩基配列の塩基番号７８７〜８３４に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８０７及び８１４の少なくとも一方を含む）。
（ｄ）配列番号４に示す塩基配列の塩基番号７８３〜８３０に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８０３及び８１０の少なくとも一方を含む）。
【００１３】
（２）プライマー対が、一方のプライマーが、配列番号５に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、他方のプライマーが、配列番号６に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、及び、配列番号７に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドの混合物であるプライマー対である（１）記載の検出方法。
【００１４】
（３）核酸プローブが、配列番号８に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、配列番号９に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、配列番号１０に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、及び、配列番号１１に示すオリゴヌクレオチドである（１）又は（２）記載の検出方法。
【００１５】
（４）核酸プローブがマイクロタイタープレートのウェルに固定化されている（１）〜（３）のいずれか１項に記載の検出方法。
【００１６】
（５）請求項１に記載の検出方法に用いるためのキットであって、
ＰＣＲで用いられるプライマー対として、一方のプライマーが、配列番号１に示す塩基配列の塩基番号４９７〜５４７に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチドであり、他方のプライマーが、配列番号１に示す塩基配列の塩基番号１０１２〜１０５１に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド、及び、配列番号４に示す塩基配列の塩基番号９６３〜１０１８に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号９８８〜１００３またはその一部を含む）の混合物であるプライマー対、
ハイブリダイゼーションで用いられる核酸プローブとして、下記（ａ）〜（ｄ）から選ばれる１つ以上を含む、前記キット。
【００１７】
（ａ）配列番号１に示す塩基配列の塩基番号８０６〜８５５に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８２６及び８３５の少なくとも一方を含む）。
（ｂ）配列番号２に示す塩基配列の塩基番号６１８〜６６０に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号６３８及び６４０の少なくとも一方を含む）。
（ｃ）配列番号３に示す塩基配列の塩基番号７８７〜８３４に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８０７及び８１４の少なくとも一方を含む）。
（ｄ）配列番号４に示す塩基配列の塩基番号７８３〜８３０に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８０３及び８１０の少なくとも一方を含む）。
【００１８】
（６）プライマー対が、一方のプライマーが、配列番号５に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、他方のプライマーが、配列番号６に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、及び、配列番号７に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドの混合物であるプライマー対である（５）記載の検出方法。
【００１９】
（７）核酸プローブが、配列番号８に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、配列番号９に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、配列番号１０に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、及び、配列番号１１に示すオリゴヌクレオチドである（５）又は（６）記載の検出方法。
【００２０】
（８）核酸プローブがマイクロタイタープレートのウェルに固定化されている（５）〜（７）いずれか１項に記載のキット。
【００２１】
なお、配列番号１に示す塩基配列は、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｍ標準株の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列（ＧｅｎＢａｎｋ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｘ７７３３４）であり、当業者であれば、１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子に変異を有する株であっても、株間等に存在し得る塩基配列の相違を考慮して、配列番号１に示す塩基配列の塩基番号により特定された領域に相当する領域を容易に特定・認識することができる。
【００２２】
また、配列番号２〜４に示す塩基配列は、それぞれ、Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ（１９９８年の分類改定前はＵ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）及びＵ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍの標準株の１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列（それぞれ、ＧｅｎＢａｎｋ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　Ｍ２４４７３，　Ｎｏ．　Ｕ０６０９８及びＮｏ．　ＡＦ０７３４５０）であり、当業者であれば、１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子に変異を有する株であっても、株間等に存在し得る塩基配列の相違を考慮して、それぞれ、配列番号２、３及び４に示す塩基配列の塩基番号により特定された領域に相当する領域を容易に特定・認識することができる。
【００２３】
【発明の実施の形態】
＜１＞本発明検出方法
本発明検出方法は、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ、Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ及びＵ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍの１種以上を迅速かつ特異的に検出することを可能にする方法であり、試料から得られるＤＮＡを鋳型として用いてＰＣＲを行うことにより増幅産物を得、増幅産物に対し、核酸プローブを用いてハイブリダイゼーションを行うことによりハイブリッドの形成を検出し、検出結果に基づいてマイコプラズマ及びウレアプラズマを検出することを含む、マイコプラズマ及びウレアプラズマの検出方法であって、
ＰＣＲで用いられるプライマー対が、一方のプライマーが、配列番号１に示す塩基配列の塩基番号４９７〜５４７に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチドであり、他方のプライマーが、配列番号１に示す塩基配列の塩基番号１０１２〜１０５１に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド、及び、配列番号４に示す塩基配列の塩基番号９６３〜１０１８に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号９８８〜１００３またはその一部を含む）の混合物であるプライマー対であり、
ハイブリダイゼーションで用いられる核酸プローブが、下記（ａ）〜（ｄ）から選ばれる１つ以上であることを特徴とする。
【００２４】
（ａ）配列番号１に示す塩基配列の塩基番号８０６〜８５５に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８２６及び８３５の少なくとも一方を含む）。
（ｂ）配列番号２に示す塩基配列の塩基番号６１８〜６６０に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号６３８及び６４０の少なくとも一方を含む）。
（ｃ）配列番号３に示す塩基配列の塩基番号７８７〜８３４に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８０７及び８１４の少なくとも一方を含む）。
（ｄ）配列番号４に示す塩基配列の塩基番号７８３〜８３０に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８０３及び８１０の少なくとも一方を含む）。
【００２５】
試料は、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ、Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ及びＵ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍの１種以上を含むか又は含む可能性があるものであれば特に限定されないが、例としては、尿、尿道擦過物、子宮頚管擦過物などの尿路性器系材料を挙げることができる。これらの試料から、ＤＮＡの調製のための通常の方法によりＤＮＡを得ることができる。
【００２６】
本発明検出方法におけるＰＣＲは、試料から得られるＤＮＡを鋳型とし、特定のプライマー対を使用する他は、通常のＰＣＲの方法に従って行うことができる。
【００２７】
本発明において用いられるプライマー対は、プライマーの一方が、配列番号１に示す塩基配列の塩基番号１０１２〜１０５１に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド、及び、配列番号４に示す塩基配列の塩基番号９６３〜１０１８に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号９８８〜１００３またはその一部を含む）の混合物である。配列番号１に示す塩基配列の塩基番号１０１２〜１０５１に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチドは、マイコプラズマに共通する塩基配列に基づいて設定されたプライマーであり、一方、配列番号４に示す塩基配列の塩基番号９６３〜１０１８に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号９８８〜１００３またはその一部を含む）は、ウレアプラズマに共通する塩基配列に基づいて設定されたプライマーであるため、これらの混合物を用いることにより、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ、Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ及びＵ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍのいずれのＤＮＡも同一条件で増幅でき、操作が簡便になる。
【００２８】
プライマー対は、プライマー間の領域がＰＣＲにより増幅されるように設定され、一方のプライマーがセンスプライマーであり、他方のプライマーがアンチセンスプライマーとなるように設定される。このようなプライマー対の例としては、一方のプライマーが、配列番号５に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、他方のプライマーが、配列番号６に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、及び、配列番号７に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドの混合物であるプライマー対が挙げられる。
【００２９】
混合物であるプライマーにおける２種のオリゴヌクレオチドの混合比率（モル比）は、通常には、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ及びＭ．　ｈｏｍｉｎｉｓのＤＮＡと、Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ及びＵ．ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍのＤＮＡとがほぼ同等に増幅されるように選択される。
【００３０】
本発明で用いられる（ａ）〜（ｄ）のプローブは、それぞれ、１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子においてＭ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ、Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ及びＵ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍに特異的である塩基配列を有する。従って、検出対象の菌種にあわせて、選択すればよい。
【００３１】
（ａ）〜（ｄ）のプローブは、それぞれ、配列番号１〜４の特定の領域に相当する領域の塩基配列に基づいて（必要により、特定の塩基配列を有するように）設定される。ここで「配列番号１〜４の特定の領域に相当する領域の塩基配列に基づいて」とは、配列番号１〜４における特定の領域の塩基配列にかならずしも完全に重複している必要はなく、株間の塩基配列の相違や、ハイブリダイゼーションの特異性の向上のために、配列番号１〜４における塩基配列と相違していてもよい。また、配列番号１〜４の塩基配列に相補的な塩基配列を有するプローブを設定することも含まれる。
【００３２】
（ａ）〜（ｄ）のプローブの具体例としては、それぞれ、以下のものが挙げられる。
【００３３】
（ａ）配列番号８に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド
（ｂ）配列番号９に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド
（ｃ）配列番号１０に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド
（ｄ）配列番号１１に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド
【００３４】
なお、配列番号９に示す塩基配列では、特異性を高めるために５’末端から３番目の塩基が改変（Ｔ→Ｃ）されている。また、配列番号１０に示す塩基配列でも、特異性を高めるために、５’末端から４番目の塩基が改変（Ｇ→Ｔ）されている。
【００３５】
上記の特定の領域におけるプローブ及びプライマー対の設定は、それぞれ、ハイブリダイゼーションおよびＰＣＲに用いる条件を考慮して当業者に公知の方法に従って行えばよい。プローブ及びプライマー対の設定は、コンピューター検索に基づいて行うことでより効率的となる。
【００３６】
プライマーは、センスプライマー及びアンチセンスプライマーの一方又は両方について（オリゴヌクレオチドの混合物であるプライマーについてはそれらの一方又は両方について）、複数のプライマーを混合したミックスプライマーとして設定してもよい。プライマー設定部分に塩基の変異が存在する場合には、ミックスプライマーを用いることで検出効率を上げることができる。
【００３７】
ハイブリダイゼーションの方法は、プローブが特異的にＰＣＲ産物にハイブリダイズする限り、特に限定されず、溶液ハイブリダイゼーション、フィルターハイブリダイゼーションなどの公知の方法を採用することができるが、プローブをマイクロタイタープレートのウェルに固定化して用いるマイクロタイタープレートハイブリダイゼーション法が、迅速に検出を行えるため、好ましい。ハイブリッドの形成の検出ための標識方法も、通常の方法を採用することができる。
【００３８】
プローブを固定化する方法は、通常の核酸固定化方法に従って行うことができる。プローブを固定化するためのマイクロタイタープレートは市販品としても入手可能である。
【００３９】
本発明検出方法によれば、検出感度が高く、培養を経ずに例えば尿等の臨床材料から直接にＤＮＡ増幅を行うことが可能であり、さらに、マイクロタイタープレートハイブリダイゼーション法を利用した検出が可能であり、従って迅速な検出が可能となる。また、試料に複数の菌種が含まれている場合に、少量で含まれている菌種の検出も可能である。
【００４０】
また、本発明の検出方法においては、ＰＣＲの反応液に、用いるプライマー対で増幅され得る内部標準物質（ＤＮＡ）を添加し、内部標準物質に特異的なプローブを用いるハイブリダイゼーションを行うことにより、ＰＣＲ反応の成否を把握することが可能である。内部標準物質は、検出対象であるマイコプラズマ及びウレアプラズマのＤＮＡとＰＣＲ反応において競合する。従って、内部標準物質は、検出対象ＤＮＡの増幅を、ハイブリダイゼーションによる検出ができない程度にまで妨げないような量でＰＣＲ反応液に添加される。
【００４１】
内部標準物質の例としては、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍの塩基配列の一部（配列番号１の塩基番号７６９〜９３０）を、配列番号１３に示す塩基配列で置換し、この置換領域を含む配列番号１の塩基番号２９３〜１０６３に相当する領域をｐＴ７Ｂｌｕｅ　Ｔ−ｖｅｃｔｏｒ（Ｎｏｖａｇｅｎ，　Ｉｎｃ．）に挿入して得られるプラスミドが挙げられる。また、この内部標準物質検出用プローブの例としては、配列番号１２に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドが挙げられる。
【００４２】
さらに、検出用プローブとして、１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子に共通する配列に基づいて設定されたプローブを追加してもよい。ＰＣＲでは、最終的な検出対象である４菌種以外のマイコプラズマＤＮＡが増幅されることもあるが、このプローブを用いることにより、これが検出可能になる。
【００４３】
このような１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子検出用プローブの例としては、配列番号１４に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドが挙げられる。
【００４４】
以下、図３を参照して説明する。図３は、測定結果の模式図及び判定例を示す。模式図に示すように、４種の菌種特異的プローブ（Ｍｇｅｎ−Ｐ３−Ａｍ，　Ｍｈｏｍ−Ｐ１０−Ａｍ，Ｕｐａｒ−Ｐ６−Ａｍ，　Ｕｕｒｅ−Ｐ４−Ａｍ）、内部標準物質検出用プローブ（ＩＣ−Ｐ４−Ａｍ）、及び、１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子検出用プローブ（Ｍｙｃｏ−Ｐ２−Ａｍ）がマイクロタイタープレートのウェルに固定化される。サンプル１〜４には、内部標準物質（ＩＣ）が添加されている。
【００４５】
サンプル１は、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍを含む試料の例であり、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ検出用プローブ（Ｍｇｅｎ−Ｐ３−Ａｍ）が固定化されたウェルと、１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子検出用プローブ（Ｍｙｃｏ−Ｐ２−Ａｍ）が固定されたウェルとが陽性となる。ＩＣは、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍのＤＮＡとの競合により増幅される場合も増幅されない場合もあるため、ＩＣ検出用プローブ（ＩＣ−Ｐ４−Ａｍ）が固定化されたウェルは、陽性にも陰性にもなり得る（図では陰性の場合を示す）。
【００４６】
サンプル２は、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ、Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ及びＵ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍを含めたマイコプラズマ及びウレアプラズマが含まれない試料の例であり、ＩＣ検出用プローブ（ＩＣ−Ｐ４−Ａｍ）を固定化したウェルが陽性となり、増幅反応が正常であることが確認できる。
【００４７】
サンプル３は、４菌種以外のマイコプラズマを含む試料の例であり、１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子検出用プローブ（Ｍｙｃｏ−Ｐ２−Ａｍ）が固定されたウェルのみが陽性となる。サンプル１と同様の理由により、ＩＣ検出用プローブ（ＩＣ−Ｐ４−Ａｍ）が固定化されたウェルは、陽性にも陰性にもなり得る（図では陰性の場合を示す）。
【００４８】
サンプル４は、増幅反応が不良である例であり、全てのウェルが陰性となる。この場合、増幅反応が正常でなかったために判定は不可能であることが分かる。
【００４９】
＜２＞本発明キット
本発明キットは、本発明検出方法に用いることのできるキットであり、
ＰＣＲで用いられるプライマー対として、一方のプライマーが、配列番号１に示す塩基配列の塩基番号４９７〜５４７に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチドであり、他方のプライマーが、配列番号１に示す塩基配列の塩基番号１０１２〜１０５１に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド、及び、配列番号４に示す塩基配列の塩基番号９６３〜１０１８に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号９８８〜１００３またはその一部を含む）の混合物であるプライマー対、
ハイブリダイゼーションで用いられる核酸プローブとして、下記（ａ）〜（ｄ）から選ばれる１つ以上を含むことを特徴とする。
【００５０】
（ａ）配列番号１に示す塩基配列の塩基番号８０６〜８５５に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８２６及び８３５の少なくとも一方を含む）。
（ｂ）配列番号２に示す塩基配列の塩基番号６１８〜６６０に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号６３８及び６４０の少なくとも一方を含む）。
（ｃ）配列番号３に示す塩基配列の塩基番号７８７〜８３４に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８０７及び８１４の少なくとも一方を含む）。
（ｄ）配列番号４に示す塩基配列の塩基番号７８３〜８３０に相当する領域に基づいて設定された長さが１５〜３０塩基のオリゴヌクレオチド（但し、塩基番号８０３及び８１０の少なくとも一方を含む）。
【００５１】
プローブ及びプライマー対については、本発明検出方法に関し、上記に説明した通りである。
【００５２】
プローブは、マイクロタイタープレートのウェルに固定化されていることが好ましい。ウェルへの固定化は上記に説明したように通常の方法によって行うことができる。
【００５３】
本発明キットにおいてプライマー対は、混合物とされていてもよいし、別個に収容されていてもよい。
【００５４】
本発明キットは、プローブ及びプライマー対の他に、ＰＣＲ及び／またはハイブリダイゼーションを行うのに必要とされる試薬類をさらに含んでいてもよい。
【００５５】
【実施例】
次に、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、下記実施例は本発明について具体的な認識を得る一助としてのみ挙げたものであり、これによって本発明の範囲が何ら限定されるものではない。
【００５６】
【実施例１】
（１）試料及び核酸の抽出
ヒトからの分離が報告されているマイコプラズマ属１３菌種（Ｍ．　ｂｕｃｃａｌｅ，　Ｍ．　ｆａｕｃｉｕｍ，　Ｍ．　ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ，　Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ，　Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ，　Ｍ．　ｌｉｐｏｐｈｉｌｕｍ，　Ｍ．　ｏｒａｌｅ，　Ｍ．　ｐｅｎｅｔｒａｎｓ，　Ｍ．　ｐｉｒｕｍ，　Ｍ．　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，　Ｍ．　ｐｒｉｍａｔｕｍ，　Ｍ．　ｓａｌｉｖａｒｉｕｍ，　Ｍ．ｓｐｅｒｍａｔｏｐｈｉｌｕｍ）、およびウレアプラズマ属２菌種（Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ，　Ｕ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）を標準株として準備した。また、男性尿道炎患者及び無症候性男子から初尿を採取して臨床検体とした。
【００５７】
尿からの核酸抽出は、文献（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，　２００２．　４０：１０５−１１０）に記載された方法に従って行った。標準株の培養菌液からの核酸抽出については、培養菌液に３分間の煮沸処理をして、遠心上清を抽出液とした。
【００５８】
（２）ＰＣＲ
（１）で得られた核酸溶液をテンプレート試料として、以下の条件でＰＣＲを行った。
【００５９】
１．プライマー
マイコプラズマおよびウレアプラズマの１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の約５２０ｂｐのフラグメントを増幅するため、以下の３つのプライマーを使用した。アンチセンスプライマーは、２つのプライマーの混合物（モル比で１：１）を使用した。
【００６０】
センスプライマー
Ｍｙ−ｉｎｓ　（５’−ＧＴＡＡＴＡＣＡＴＡＧＧＴＣＧＣＡＡＧＣＧＴＴＡＴＣ−３’（配列番号５））
アンチセンスプライマー（５’末端をビオチン（Ｂｉｏｔｉｎ）で標識））
ＭＧＳＯ−２−Ｂｉ（５’−Ｂｉｏｔｉｎ−ＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＡＣＴＣＴＧＴＴＡＡＣＣＴＣ−３’（配列番号６））
ＵＧＳＯ−Ｂｉ（５’−Ｂｉｏｔｉｎ−ＣＡＣＣＡＣＣＴＧＴＣＡＴＡＴＴＧＴＴＡＡＣＣＴＣ−３’（配列番号７））
【００６１】
２．反応条件
上記プライマーを含む増幅反応液４０μｌに核酸溶液１０μｌを添加して、ＧｅｎｅＡｍｐ　ＰＣＲ　Ｓｙｓｔｅｍ　９６００（ＰＥＲＫＩＮ　ＥＬＭＥＲ）を使用し、以下の条件で行った。
９５℃、１０分＋（９４℃、３０秒／５５℃、３０秒／７２℃、１分）×５０サイクル＋７２℃、７分
【００６２】
この結果、１５菌種の標準株から調製した核酸溶液の全てから、ＰＣＲによって増幅産物が得られた。
【００６３】
（３）マイクロタイタープレートハイブリダイゼーション
（２）で得られた各ＰＣＲ産物を用いて、液相ハイブリダイゼーションをベースにした、マイクロタイタープレートアッセイを行った。マイクロタイタープレートの各ウェルには、以下に示した種特異オリゴヌクレオチドプローブを固定化した。
【００６４】
Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ検出用プローブ
Ｍｇｅｎ−Ｐ３−Ａｍ（５’−ＴＣＧＧＡＧＣＧＡＴＣＣＣＴＴＣＧＧＴ−３’（配列番号８））
Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ検出用プローブ
Ｍｈｏｍ−Ｐ−１０−Ａｍ（５’−ＧＡＣＡＣＴＡＧＣＡＡＡＣＴＡＧＡＧＴＴＡＧ−３’（配列番号９））
Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ検出用プローブ
Ｕｐａｒ−Ｐ６−Ａｍ（５’−ＧＴＣＴＧＣＣＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＧＴ−３’（配列番号１０））
Ｕ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ検出用プローブ
Ｕｕｒｅ−Ｐ４−Ａｍ（５’−ＧＧＣＴＣＧＡＡＣＧＡＧＴＣＧＧＴＧＴ−３’（配列番号１１））
【００６５】
固定化は、各プローブをＣ６リンカーを介して、５’末端をアミノ基で修飾し、マイクロタイタープレート（ＤＮＡ−ＢＩＮＤ　１ｘ８　Ｓｔｒｉｐｗｅｌｌ　ｐｌａｔｅｓ、Ｃｏｒｎｉｎｇ）を用い、このプレートに付属のプロトコールに従って行った。
【００６６】
ハイブリダイゼーションの詳細は以下の通りであった。各ＰＣＲ産物を９５℃で５分処理した後、氷中にて急冷した。プローブを固定化したマイクロタイタープレートにハイブリダイゼーションバッファー（５ｘ　ＳＳＣ，　０．０２％　ＳＤＳ）を１００μｌ／ウェル添加した後、熱変性ＰＣＲ産物を５μｌウェルに加えた。３７℃で９０分インキュベートした後、ウォッシュバッファーＩ（０．２ｘ　ＳＳＣ，　０．１％　ＳＤＳ）でウェルを２回洗浄した。ストレプトアビジン−ＰＯＤ　コンジュゲート溶液を１００μｌ／ウェル添加し、３７℃で１５分インキュベートした。ウォッシュバッファーＩＩ（ＰＢＳ中０．１％　Ｔｗｅｅｎ）でウェルを２回洗浄した後、ＴＭＢ（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）溶液１００μｌ／ウェル添加し、暗所に１０分静置した。希硫酸を１００μｌ／ウェル加えた後、マイクロプレートリーダーでＯＤ　４５０ｎｍを測定した。カットオフ値は０．３００とし、測定値が０．３００以上の場合に陽性と判定し、０．３００未満の場合は陰性と判定した。
【００６７】
結果を図１に示す。図中、１〜１６は、１：　Ｍ．　ｂｕｃｃａｌｅ，　２　：Ｍ．　ｆａｕｃｉｕｍ，　３：　Ｍ．　ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ，　４：　Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ，　５：　Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ，　６：　Ｍ．　ｌｉｐｏｐｈｉｌｕｍ，　７：　Ｍ．　ｏｒａｌｅ，　８：　Ｍ．　ｐｅｎｅｔｒａｎｓ，　９：　Ｍ．　ｐｉｒｕｍ，　１０：　Ｍ．　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，　１１：　Ｍ．　ｐｒｉｍａｔｕｍ，　１２：Ｍ．　ｓａｌｉｖａｒｉｕｍ，　１３：　Ｍ．　ｓｐｅｒｍａｔｏｐｈｉｌｕｍ，　１４：　Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ，　１５：　Ｕ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ，　１６：ブランクを示す。図１から明らかなように、Ｍｇｅｎ−Ｐ３−Ａｍ、Ｍｈｏｍ−Ｐ１０−Ａｍ、Ｕｐａｒ−Ｐ４−Ａｍ及びＵｕｒｅ−Ｐ４−Ａｍによれば、それぞれ検出対象菌種のＤＮＡのみが検出され、それ以外のヒトマイコプラズマまたはウレアプラズマのＤＮＡは検出されず（ＯＤ値がカットオフ値未満）、４種のプローブは交差反応しないことが判明した。
【００６８】
（４）検出感度
Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ、Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ及びＵ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍの１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の一部をそれぞれ挿入した組換えプラスミドを作製した。反応（核酸溶液１０μｌ）あたり１０３〜１０−１コピーとなるような量のプラスミドを含む溶液をテンプレート試料として、上記（２）及び（３）に従って、ＰＣＲ−マイクロタイタープレートハイブリダイゼーションを行った。結果を図２に示す。図２中、１〜６は、１：　１０３コピー、２：　１０２コピー、３：　１０１コピー、４：　１００コピー、５：　１０−１コピー、６：　ブランクを示す。図２から明らかなように、本測定系は、１０１コピー／反応を下限に４菌種のＤＮＡを検出可能であった。
【００６９】
アンチセンスプライマーとしてＭＧＳＯ−２−Ｂｉのみを用いた場合、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ及びＭ．　ｈｏｍｉｎｉｓのＤＮＡは、反応あたり１０コピーまで検出可能であったが、Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ及びＵ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍのＤＮＡは、１００〜１０００コピー程度までしか検出できなかった。この原因は、ＭＧＳＯ−２−Ｂｉとウレアプラズマの塩基配列にミスマッチが多いためと思われる。上記のようにアンチセンスプライマーとして、ＭＧＳＯ−２−ＢｉとＵＧＳＯ−Ｂｉの混合物を用いることによって、Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ、Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ及びＵ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍの全てが、反応あたり１０コピーまで検出可能になり、より多数の菌種を同時に高感度で同定することが可能になった。
【００７０】
（５）相関
上記（２）に従って得られた尿由来のＰＣＲ産物の塩基配列をダイレクトシーケンス法により解読し、特開２００１−２９９３５２に従って系統解析により菌種を同定した。この方法でＭ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ、Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ及びＵ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍと同定された試料のＰＣＲ産物に関し、上記（３）に従ってマイクロタイタープレートハイブリダイゼーションを行った。結果を表１に示す。表１から明らかなように、系統解析により同定された菌種が、上記ハイブリダイゼーションによっても検出された。さらに、いくつかの試料からは、上記ハイブリダイゼーションで複数の菌種が検出された。従って、上記ハイブリダイゼーションによる方法は、複数菌種のＤＮＡが混在している場合、低比率で存在しているＤＮＡを検出する能力がダイレクトシークエンス法を用いる方法よりも高いと推測される。
【００７１】
【表１】
2004024206.tif 000002
【００７２】
上記推測を確かめるため、上記（４）で作製した組換えプラスミドを、下記の比率（モル比）で混合し、混合したプラスミド（総ＤＮＡ量は、反応あたり１０５コピー）をテンプレートにして、上記（２）及び（３）に従いＰＣＲ−マイクロタイタープレートハイブリダイゼーションを行った。
【００７３】
組み合わせ：Ｍ．　ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ／Ｕ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ、Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ／Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ
混合比率：１００：０，　９９：１，　９５：５，　９０：１０，　７０：３０，　５０：５０，　３０：７０，　１０：９０，　５：９５，　１：９９，　０：１００
【００７４】
結果を表２及び表３に示す。これらの表から明らかなように、上記ＰＣＲ−マイクロタイタープレートハイブリダイゼーションは、１％の低比率で混在しているＤＮＡを検出可能であり、上記推測が支持された。
【００７５】
【表２】
2004024206.tif 000003
【００７６】
【表３】
2004024206.tif 000004
【００７７】
【発明の効果】
本発明によれば、臨床サンプル中のＭ．　ｇｅｎｉｔａｌｕｍ、Ｍ．　ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｕ．　ｐａｒｖｕｍ及びＵ．　ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍを迅速に、かつ高感度で検出することが可能である。性感染症をはじめとした、尿路泌尿器系の疾患の検査等において、本発明の方法は極めて有用である。
【００７８】
【配列表】
2004024206.tif 000005
2004024206.tif 000006
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2004024206.tif 000013
【図面の簡単な説明】
【図１】各オリゴヌクレオチドプローブの特異性を検討した結果を示す。
【図２】検出感度を検討した結果を示す。
【図３】測定結果の模式図及び判定例を示す。
【図１】
2004024206.tif 000014
【図２】
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【図３】
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