(57)【要約】【課題】生体中で代謝されて、尿中に排泄されるセレン代謝化合物、及びその製造方法を提供するとともに、その化合物のセレン代謝の評価・測定への利用、更には食品栄養素としての利用を提供することにある。【解決手段】本発明は、哺乳類尿中より生理的条件下で尿中に排出される極めて微量しか存在しないセレン代謝物を単離し、該セレン代謝物の絶対構造を決定し、該新規化合物を提供する。本発明の化合物は、２−アセトアミド−１，２−ジデオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシルメチルセレニド及びその誘導体よりなる。更に、本発明においては、該セレン代謝化合物の絶対構造に基いて、該化合物の全合成経路を確立し、該化合物の製造方法を提供する。本発明の化合物は、生体中におけるセレンの代謝を評価・測定する場合の標準物質等として、或いは、必須栄養素としてのセレンの栄養供給源として、利用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式〔１〕で表されるガラクトース型セレン含有糖化合物。
【化１】
2004035451.tif 000009
（式中、Ｒはアルキル基又はＳｅ−Ｓ結合を形成したグルタチオンの置換基を示す。）
【請求項２】
式〔２〕で表されるガラクトース型セレン含有糖化合物。
【化２】
2004035451.tif 000010
（式中、Ｒはアルキル基又はＳｅ−Ｓ結合を形成したグルタチオンの置換基を、Ａｃはアセチル基を示す。）
【請求項３】
式中、Ｒがメチル基であることを特徴とする請求項１又は２記載の化合物。
【請求項４】
請求項２記載の化合物に、ナトリウムアルコキシドを添加し、反応させることを特徴とする請求項１記載のガラクトース型セレン含有糖化合物の製造方法。
【請求項５】
１−α−クロロ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテートを、水素化ホウ素ナトリウムとジアルキルジセレニドの反応溶液に添加し、反応することを特徴とする請求項２記載のガラクトース型セレン含有糖化合物の製造方法。
【請求項６】
ジアルキルジセレニドが、ジメチルジセレニドであることを特徴とする請求項５記載のガラクトース型セレン含有糖化合物の製造方法。
【請求項７】
Ｄ−ガラクトサミン塩酸塩に無水酢酸を添加し、反応させてβ−Ｄ−ガラクトサミンペンタアセテートを得る工程、該β−Ｄ−ガラクトサミンペンタアセテートに四塩化チタンを反応させて１−α−クロロ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテートを得る工程、該１−α−クロロ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテートを、水素化ホウ素ナトリウムとジアルキルジセレニドの反応溶液に添加し、反応させて１−β−アルキルセレノ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテートを得る工程、及び該１−β−アルキルセレノ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテートに、ナトリウムメトキシドを添加し、反応させて、２−アセトアミド−１，２−ジデオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシルアルキルセレニドを得る工程、からなるガラクトース型セレン含有糖化合物の製造方法。
【請求項８】
式〔１〕で表されるガラクトース型セレン含有糖化合物を、生体セレン代謝化合物の標準物質として使用することを特徴とする生体セレン代謝化合物の測定方法。
【化３】
2004035451.tif 000011
（式中、Ｒはアルキル基又はＳｅ−Ｓ結合を形成したグルタチオンの置換基を示す。）
【請求項９】
生体代謝物中の、式〔１〕で表されるガラクトース型セレン含有糖化合物を測定することを特徴とする生体中に投与したセレン含有物質の代謝活性或いは、生体中のセレンの栄養状態の評価方法。
【化４】
2004035451.tif 000012
（式中、Ｒはアルキル基又はＳｅ−Ｓ結合を形成したグルタチオンの置換基を示す。）
【請求項１０】
式〔１〕で表されるガラクトース型セレン含有糖化合物のＲがメチル基であることを特徴とする請求項８記載の生体セレン代謝化合物の測定方法、又は請求項９記載の生体中に投与したセレン含有物質の代謝活性或いは生体中のセレンの栄養状態の評価方法。
【請求項１１】
式〔１〕で表されるガラクトース型セレン含有糖化合物をセレン栄養成分とすることを特徴とする栄養剤。
【化５】
2004035451.tif 000013
（式中、Ｒはアルキル基又はＳｅ−Ｓ結合を形成したグルタチオンの置換基を示す。）
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規セレン含有生体代謝物及びその製造方法、更にはその利用に関する。
【０００２】
【従来の技術】
セレン（Ｓｅ）は、生体にとって必須な元素であるが、吸収から排泄に至るまでの詳細な代謝機構については明らかになっていない点が多い。セレンは、セレノタンパク質であるグルタチオンペルオキシダーゼ、５’−ヨードチロニン脱ヨード酵素及びチオレドキシンレダクターゼなどの酸化還元酵素の活性中心として機能することが知られている（Ｂｉｏｆａｃｔｏｒｓ　７，　３１１，　１９９８；ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ．　４４２，　１０５，　１９９９；Ｐａｔｈｏｌ．　Ｔｏｘｉｃｏｌ．　Ｏｎｃｏｌ．　１７，　２３３，　１９９８；Ｔｈｙｒｏｉｄ　７，　６５５，　１９９７）。銅や亜鉛など他の必須金属とは異なり、セレンはリガンドとしてタンパク質には結合せず、セレノシステイン（ＳｅＣｙｓ）の形で、セレノタンパク質中に取りこまれる。無機セレン化合物と有機セレン化合物はともに、動物用の栄養として利用でき（Ｊ．　Ｎｕｔｒ．　１１６，　１７１１，　１９８６；Ｊ．　Ｉｎｏｒｇ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ．　３３，　３１，　１９８８；Ｊ．　Ｎｕｔｒ．　１２０，　７５１，　１９９０；Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２０，　４４９２，　１９８１）、両化合物とも、共通の代謝仲介物質であるセレニド（ＨＳｅ−）及びセレノホスフェート（ｓｅｌｅｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）を介して、セレノシステイン残基としてセレノタンパク質に取りこまれる（Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．　２７０，　２１６５９，　１９９５．；Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ　８９，　２９７５，　１９９２）。
【０００３】
すなわち、無機セレン化合物、亜セレン酸塩、及びセレン酸塩は、それぞれ赤血球及び肝臓において、単にＨＳｅ−に還元される（Ｊ．　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．　Ｂ　４６０，　７３，２００１；Ａｎａｌｙｓｔ　１２４，　１２３７，　１９９９；Ｊ．　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．　Ｂ　７１０，　４９，　１９９８；Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ａｐｐｌ．　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．　１５２，　３０９，　１９９８；Ａｎａｌｙｓｔ　１２３，　６３，　１９９８；Ｊ．　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．　Ｂ　６９２，　１５，　１９９７、Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ　１０３，　１５７，　１９９５）。有機セレン化合物のセレノシステイン、セレノメチオニン、及びその誘導体はセレノシステインに変換され、その後β−リアーゼによって、セレノシステインからＨＳｅ−が排出される（Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．　２５７，　４３８６，　１９８２）。ＨＳｅ−はＡＴＰとともにセレノホスフェートを形成し、次いでセレノシステイニル（ｓｅｌｅｎｏｃｙｓｔｅｉｎｙｌ）−ｔＲＮＡを通じて、セレノール基が遺伝子産物としてセレノタンパク質まで運ばれる（Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．　２６４，　９６９６，　１９８９；Ｍｏｌ．　Ｃｅｌｌ．　Ｂｉｏｌ．　１０，　１９４０，　１９９０）。
【０００４】
生体中でのセレン化合物の代謝について、有機或いは無機セレンからセレノタンパク質に至るまでのセレン化合物の取りこみと利用の基盤となる機構は、これまでにかなり立証されているものの、上記セレンの化学的な形態を含めて、セレンの排出及び排出を導く化学反応の基盤となる機構は不明である。しかしながら、吸収されたセレン化合物が、生体中で代謝されて、尿中に排泄されるセレン代謝物は、天然の栄養食品源となるいかなる化学形のセレン化合物を摂取しても、生理濃度以下の摂取であれば、主要な代謝物が検出されることが、本発明者の研究で明らかになっている。
【０００５】
毒性を発揮する量のセレン化合物を哺乳類に投与した場合に、２、３のメチル化セレンが代謝物となることが知られている。セレンを過剰投与すると、トリメチルセレノニウム（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｅｌｅｎｏｎｉｕｍ）（ＴＭＳｅ）とジメチルセレニドが代謝物として、それぞれ尿と呼気に排出される（Ａｒｃｈ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｂｉｏｐｈｙｓ．　２５４，５３４，　１９８７；Ｂｉｏｃｈｉｍ．　Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ａｃｔａ　４９７，　２０５，　１９７７）。本発明者らの最近の論文では、モノメチルセレノール（ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌｓｅｌｅｎｏｌ）（ＭＭＳｅ）が、生理学的条件下のラットにおける主要な尿中代謝物と特定された（Ａｒｃｈ．　Ｔｏｘｉｃｏｌ．　７１，　４６１，　１９９７）。しかし、ＭＭＳｅは、その化学的性質から判断して、代謝物としてセレンの適切な形態とはいえなかった。
【０００６】
上記のように、尿中のセレン代謝物の同定については、毒性量のセレンを摂取したときには、トリメチルセレノニウムのようなセレン化合物が排泄されることが明らかとなっているが、生理条件下で排泄される主要なセレン代謝物についてはこれまで同定されていなかった。そのため、セレンの生体内における代謝の状況を正確に測定、把握することができなかった。例えば、長期中心静脈栄養施行患者のセレンの栄養状態を正確に把握する必要があっても、それを測定することは困難であった。
【０００７】
近年、本発明者はラットの尿代謝物から、セレン含有糖代謝物を同定し、報告した（Ｊ．　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ　７６７，３０１−３１２，２００２）。すなわち、ラットにおけるセレニウム（Ｓｅ）の主な尿代謝物を、ＨＰＬＣ−誘導結合アルゴンプラズマ質量分析法（ＩＣＰ−ＭＳ）及びＨＰＬＣ−エレクトロスプレータンデム質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ）で同定した。そして、Ｓｅアイソトープ比に対応するシグナル群が、陽イオンモードと陰イオンモードの両方で、８０Ｓｅについてｍ／ｚ３００（［Ｍ＋Ｈ］＋）と３５８（［Ｍ＋ＣＨ３ＣＯＯ］−）で、それぞれ検出され、こうした結果から、Ｓｅ代謝物の分子量が、８０Ｓｅについては２９９Ｄａであったことがわかった。Ｓｅ代謝物は、１つのメチルセレニル（ｍｅｔｈｙｌｓｅｌｅｎｙｌ）基、１つのアセチル基、及び少なくとも２つの水酸基を含んでいることが、フラグメント・イオンの質量スペクトルから推定された。Ｓｅ代謝物のスペクトルは、合成した２−アセトアミド−１，２−ジデオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル（ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）メチルセレニドのスペクトルと完全に同一であった。しかし、Ｓｅ代謝物のカラムクロマトグラフでの挙動は、合成セレノ糖のものとは少々異なっていた。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
セレンは生体にとって必須な元素であるが、吸収から排泄に至るまでの詳細な代謝機構については明らかになっていない点が多い。しかしながら、セレン化合物の生体中での代謝の状況を正確に把握・評価するには、排泄されるセレン代謝化合物を同定する必要がある。吸収されたセレン化合物が、生体中で代謝されて、尿中に排泄され場合、セレン代謝物は、天然の栄養食品源となるいかなる化学形のセレン化合物を摂取しても、生理濃度以下の摂取であれば、主要な代謝物が検出されることが、本発明者の研究で明らかになっている。
したがって、本発明の課題は、生体中で代謝されて、尿中に排泄されるセレン代謝化合物を同定し、かつその製造方法を構築して、該化合物及びその製造方法を提供するとともに、その化合物のセレン代謝の評価・測定への利用、更には食品栄養素としての利用を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意研究した結果、哺乳類尿中より生理的条件下で尿中に排出される極めて微量しか存在しないセレン代謝物を単離し、該セレン代謝物の絶対構造を、誘導結合プラズマ質量分析装置、エレクトロスプレーイオン化質量分析装置（ＥＳＩ−ＭＳ）及び核磁気共鳴装置等を用いて決定した。更に、該セレン代謝化合物の絶対構造に基いて、該化合物の全合成経路を確立し、該化合物を製造した。該合成した化合物と前記のように尿中より単離し、構造を決定したセレン代謝物とを、各種分析手法により比較した結果、両者は完全に一致することが確認された。
【００１０】
本発明の化合物は、セレンの代謝過程で生じる生合成上重要な化合物であり、「２位のアセチルアミノ糖であり、１位のβ位にセレン原子を有し、ガラクトース型をとるセレン含有糖」の構造を持つ、全く新規な化合物であることが確認された。本発明の化合物は、生体中におけるセレンの代謝を評価・測定する場合の標準物質として、及び該生体中におけるセレンの代謝を評価・測定する場合の評価・測定対象化合物として利用することができる。更に、本発明の化合物は、必須栄養素としてのセレンの栄養供給源として利用することができる。
【００１１】
すなわち本発明は、式〔１〕で表されるガラクトース型セレン含有糖化合物（請求項１）や、式〔２〕で表されるガラクトース型セレン含有糖化合物（請求項２）や、式中、Ｒがメチル基であることを特徴とする請求項１又は２記載の化合物（請求項３）からなる。
【００１２】
また本発明は、請求項２記載の化合物に、ナトリウムアルコキシドを添加し、反応させることを特徴とする請求項１記載のガラクトース型セレン含有糖化合物の製造方法（請求項４）や、１−α−クロロ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテートを、水素化ホウ素ナトリウムとジアルキルジセレニドの反応溶液に添加し、反応することを特徴とする請求項２記載のガラクトース型セレン含有糖化合物の製造方法（請求項５）や、ジアルキルジセレニドが、ジメチルジセレニドであることを特徴とする請求項５記載のガラクトース型セレン含有糖化合物の製造方法（請求項６）や、Ｄ−ガラクトサミン塩酸塩に無水酢酸を添加し、反応させてβ−Ｄ−ガラクトサミンペンタアセテートを得る工程、該β−Ｄ−ガラクトサミンペンタアセテートに四塩化チタンを反応させて１−α−クロロ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテートを得る工程、該１−α−クロロ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテートを、水素化ホウ素ナトリウムとジアルキルジセレニドの反応溶液に添加し、反応させて１−β−アルキルセレノ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテートを得る工程、及び該１−β−アルキルセレノ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテートに、ナトリウムメトキシドを添加し、反応させて、２−アセトアミド−１，２−ジデオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシルアルキルセレニドを得る工程、からなるガラクトース型セレン含有糖化合物の製造方法（請求項７）からなる。
【００１３】
更に本発明は、式〔１〕で表されるガラクトース型セレン含有糖化合物を、生体セレン代謝化合物の標準物質として使用することを特徴とする生体セレン代謝化合物の測定方法（請求項８）や、生体代謝物中の、式〔１〕で表されるガラクトース型セレン含有糖化合物を測定することを特徴とする生体中に投与したセレン含有物質の代謝活性或いは、生体中のセレンの栄養状態の評価方法（請求項９）や、式〔１〕で表されるガラクトース型セレン含有糖化合物のＲがメチル基であることを特徴とする請求項８記載の生体セレン代謝化合物の測定方法、又は請求項９記載の生体中に投与したセレン含有物質の代謝活性或いは生体中のセレンの栄養状態の評価方法（請求項１０）や、式〔１〕で表されるガラクトース型セレン含有糖化合物をセレン栄養成分とすることを特徴とする栄養剤（請求項１１）からなる。
【００１４】
【発明の実施の形態】
本発明の化合物は、式〔１〕で表されるガラクトース型セレン含有糖化合物であり、「２位がアセチルアミノ糖であり、１位のβ位にセレン原子を有し、ガラクトース型をとるセレン含有糖」の構造を持つ、新規な化合物である。
【化６】
2004035451.tif 000002
（式中、Ｒはアルキル基又はＳｅ−Ｓ結合を形成したグルタチオンの置換基を示す。）
【００１５】
上記本発明の化合物は、哺乳類尿中より生理的条件下で尿中に排出される極めて微量しか存在しないセレン代謝物から単離されたもので、本発明においては、該セレン代謝物の絶対構造を、誘導結合プラズマ質量分析装置、エレクトロスプレーイオン化質量分析装置（ＥＳＩ−ＭＳ）及び核磁気共鳴装置等を用いて、決定した。更に、本発明においては、該セレン代謝化合物の絶対構造に基いて、該化合物の全合成経路を確立し、該化合物を製造し、該合成した化合物と前記のように尿中より単離し、構造を決定したセレン代謝物とを、各種分析手法により比較した結果、両者は完全に一致することを確認した。生体中のセレン代謝物として確認されるものは、式〔１〕中、Ｒがメチルの構造を持つもの及びＲがグルタチオン−Ｓ−抱合体となっているものである。前記のようにこの本発明の化合物は、Ｄ−ガラクトサミン塩酸塩から化学合成によって製造することができる。
【００１６】
また、本発明の化合物は、式〔２〕で表されるガラクトース型セレン含有糖化合物、すなわち、１−β−メチルセレノ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテートからなる。
【化７】
2004035451.tif 000003
（式中、Ｒはアルキル基又はＳｅ−Ｓ結合を形成したグルタチオンの置換基を、Ａｃは、アセチル基を示す。）
該化合物は、前記式〔１〕の化合物を、Ｄ−ガラクトサミン塩酸塩から化学合成する場合の中間生成物として製造される。
【００１７】
本発明のガラクトース型セレン含有糖化合物の製造は、下記化学式〔３〕で示されるように、Ｄ−ガラクトサミン塩酸塩から、化学合成によって製造することができる。
【００１８】
【化８】
2004035451.tif 000004
【００１９】
すなわち、Ｄ−ガラクトサミン塩酸塩（１）に無水酢酸を添加し、反応させてβ−Ｄ−ガラクトサミンペンタアセテート（２）を得る工程、該β−Ｄ−ガラクトサミンペンタアセテートに四塩化チタンを反応させて１−α−クロロ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテート（３）を得る工程、該１−α−クロロ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテートを、水素化ホウ素ナトリウムとジアルキルジセレニドの反応溶液に添加し、反応させて１−β−アルキルセレノ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテート（４）を得る工程、及び該１−β−アルキルセレノ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテートに、ナトリウムメトキシドを添加し、反応させて２−アセトアミド−１，２−ジデオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシルアルキルセレニド（５）を得る工程、からなる製造工程を結合して製造することができる。
【００２０】
本発明のガラクトース型セレン含有糖化合物は、生体セレン代謝化合物の測定に際して、生体セレン代謝化合物の標準物質として使用することができる。セレン化合物の生体中での代謝の状況を正確に把握・評価するには、排泄されるセレン代謝化合物を同定する必要がある。吸収されたセレン化合物が、生体中で代謝されて、尿中に排泄され場合、セレン代謝物は、天然の栄養食品源となるいかなる化学形のセレン化合物を摂取しても、生理濃度以下の摂取であれば、主要な代謝物が検出されることが明らかになっている。したがって、生体中で代謝されて、尿中に排泄されるセレン代謝化合物として同定されている本発明の化合物を標準物質として使用すれば、セレン代謝化合物の正確な測定を可能とすることができる。
【００２１】
また、本発明において、セレン化合の生理濃度以下の摂取での排泄されるセレン代謝化合物が本発明のガラクトース型セレン含有糖化合物と同定されたことにより、本発明のガラクトース型セレン含有糖化合物を測定すれば、該セレン代謝物の正確な測定が可能となった。したがって、本発明の方法により、生体内に投与された或いは生体内に摂取されたセレン化合物の代謝の状況を把握することができ、生体に投与した又は生体内に摂取されたセレン含有物質の代謝活性或いは生体中のセレンの栄養状態の評価を行うことが可能となった。このため、例えば長期中心静脈栄養施行患者のセレン栄養状態を正確に把握することも可能となった。
【００２２】
本発明のガラクトース型セレン含有糖化合物は、微量必須栄養成分であるセレンの栄養素として利用することができる。近年、栄養補助剤としてセレンが販売されているが、セレンの生体による利用効率や安全性は化学形に依存している。現在セレン剤として利用されているセレンの化学形はセレノメチオニンをはじめとするセレノアミノ酸誘導体であるが、これらは無機の亜セレン酸やセレン酸に比べて安全性は高いものの、セレノメチオニンはメチオニンと区別なくポリペプチド鎖に取り込まれるなど利用効率の点で、不利な面を持っている。これに対して、本発明による化合物（通称、セレン糖）は、化学的な観点からも生体にとって傷害作用はなく、また利用効率についてもポリペプチド鎖に取り込まれることがないため、セレノアミノ酸よりも高いことが期待できる。
このように本発明の化合物は、微量必須栄養成分であるセレンの栄養素として利用するに際して、優れた性質を有している。本発明の化合物を、栄養素として摂取するには、常法により、栄養剤として製剤化し摂取することも可能であるが、適宜、添加剤として食品等に添加して摂取することもできる。
【００２３】
【実施例】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
実施例１［２−アセトアミド−１，２−ジデオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシルメチルセレニドの合成］
本化合物は、式〔４〕で示される下記の工程に従って合成される。
【００２４】
【化９】
2004035451.tif 000005
【００２５】
Ｄ−ガラクトサミン塩酸塩５．０ｇ（１）を無水ピリジン３７．５ｍｌに溶解し、２５ｍｌの無水酢酸を添加して室温で一昼夜反応させ、通常の後処理の後、得られた残渣に少量の無水エタノールを添加することにより結晶化し、β−Ｄ−ガラクトサミンペンタアセテート（２）（収率４７．６％）を得た。
【００２６】
０．５ｇのβ−Ｄ−ガラクトサミンペンタアセテートを２０ｍｌのジクロロメタンに懸濁し、０．４ｍｌの四塩化チタンと３時間還流し、反応を行った後、反応液の溶媒を除去し、クロロホルムに溶解して、シリカゲルカラムにより１−α−クロロ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテート（３）（収率５５．９％）を得た。
【００２７】
０．７ｍｌの乾燥アセトニトリル中で、水素化ホウ素ナトリウム５４．５７ｍｇと１３６．４μｌのジメチルジセレニドを４０分間加熱還流を行った。室温に戻した反応溶液に乾燥アセトニトリル２．５ｍｌに懸濁した２６２．５ｍｇの１−α−クロロ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテートを添加し、室温で１時間反応を行った。シリカゲルカラムで分離後、酢酸エチルで結晶化し、１−β−メチルセレノ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテート（４）（収率７３．２％）を得た。
【００２８】
２ｍｌの乾燥メタノールに溶解した１００ｍｇの１−β−メチルセレノ−Ｄ−ガラクトサミンテトラアセテートに少量のナトリウムメトキシドを添加し、室温で反応させた後、１０％水−９０％メタノールにより結晶化し、目的物質である２−アセトアミド−１，２−ジデオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシルメチルセレニド（５）（収率８７．９％）を得た。
【００２９】
実施例２［尿中セレン代謝物との比較］
上記合成した２−アセトアミド−１，２−ジデオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシルメチルセレニドと尿中セレン代謝物を以下の各種分析手法により比較を行った。以下の比較例に示される如く、両者は完全に一致し、本発明により合成した物質が尿中セレン代謝物の標準品として利用可能であることが示された。
（核磁気共鳴装置による比較）
尿中のセレン代謝物及び本発明により合成した標準品をプロトン核磁気共鳴装置を用いて測定した結果、得られたスペクトルが両者間でほぼ一致した（表１）。
【００３０】
【表１】
2004035451.tif 000006
【００３１】
（エレクトロスプレーイオン化質量分析装置による比較）
尿中のセレン代謝物及び本発明により合成した標準品をエレクトロスプレーイオン化質量分析装置（ＥＳＩ−ＭＳ）により測定した。その結果、タンデムマス法により検出されるフラグメントイオンのマススペクトルが両者間で完全に一致した（表２）。
【００３２】
【表２】
2004035451.tif 000007
【００３３】
（高速液体クロマトグラフィー誘導結合プラズマ質量分析装置による比較）
安定同位体で標識した尿中セレン代謝物と本発明により合成した標準品２０μｌとを混合して高速液体クロマトグラフィーカラムＳｈｏｄｅｘ　Ａｓａｈｉｐａｋ　ＧＳ−３２０カラム（昭和電工社製）に入れ、溶出バッファーとして１０ｍＭ酢酸アンモニウム（ｐＨ７．４）を用いて流速１．０ｍｌ／分の条件下で溶出した。溶出物を高速液体クロマトグラフィー誘導結合プラズマ質量分析装置に導入し、ｍ／ｚ７７及び８２でセレンをモニターした。その結果、両者の保持時間は完全に一致した（図１）。
【００３４】
実施例３［２−アセトアミド−１，２−ジデオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシルセレニド　グルタチオン−Ｓ−抱合体の構造と同定］
（２−アセトアミド−１，２−ジデオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシルセレニド　グルタチオン−Ｓ−抱合体の構造）
ラット肝臓中より分離したガラクトース型セレン含有糖化合物の１つは、式〔５〕で表される構造であることを確認した。
【００３５】
【化１０】
2004035451.tif 000008
【００３６】
（２−アセトアミド−１，２−ジデオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシルセレニド　グルタチオン−Ｓ−抱合体の同定）
２−アセトアミド−１，２−ジデオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシルセレニド　グルタチオン−Ｓ−抱合体の構造の同定のために、ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳによるマススペクトラム分析を行った。該マススペクトラム分析による結果を、図２及び図３に示す。該マススペクトラム分析の結果から、本発明の化合物が２−アセトアミド−１，２−ジデオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシルセレニド　グルタチオン−Ｓ−抱合体であると同定した。
【００３７】
【発明の効果】
本発明により、生体中において代謝され、尿中に排出されたセレン代謝物が同定され、かつ該セレン代謝化合物の化学合成に成功した結果、該化合物を生体から排出されるセレン代謝物の測定に際しての標準物質として用いることにより、或いは該化合物を生体から排出されるセレン代謝物の測定のための対象物質として測定することにより、セレン代謝物の正確な測定が可能となった。その結果、セレン含有物質の代謝活性や生体中のセレンの栄養状態の正確な評価が可能となった。このような評価方法は、例えば、医療のような分野において利用することができる。
【００３８】
例を挙げれば、現在高齢化社会の到来に伴い、中心静脈栄養を施行されている患者数は増加傾向にある。セレンは、必須栄養素であるが、必須所要量と毒性用量との範囲が狭く、適正所要量を維持することが困難な必須栄養素の１つである。従って、これらの患者のＱＯＬ（Ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ）の向上には、該栄養素についての万全の栄養管理が必要である。本発明により、セレン代謝物の代謝の状況が正確に把握することが可能となったことにより、セレンの栄養状態が簡便かつ正確に把握することが可能となり、患者の万全の健康管理ができることとなった。
また、本発明のセレン含有糖化合物は、それ自体栄養素としても重要な化合物であり、更にセレンの薬理効果として発ガン抑制効果を期待することも報告されていることから、本発明の化合物は医学、薬学及び栄養学的に幅広く応用することが期待される。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の実施例において、高速液体クロマトグラフィー誘導結合プラズマ質量分析装置による、尿中セレン代謝物及び標準品中に含まれるセレンの溶出の比較結果を示す図である。
【図２】本発明の実施例において、本発明の化合物を同定するためのＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳによるマススペクトラム分析（フラグメント化に要した電圧：２０ｅＶ）の結果を示す図である。
【図３】本発明の実施例において、本発明の化合物を同定するためのＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳによるマススペクトラム分析（フラグメント化に要した電圧：４０ｅＶ）の結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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