(57)【要約】　　　（修正有）【課題】アレルギー症状を軽減させられる、ＣＰＰあるいはホスホセリンを複数有する特定のアミノ酸配列を有するペプチドを含んでなる抗アレルギー材を提供すること。【解決手段】カゼインホスホペプチドまたは下記のアミノ酸配列（Ｉ）からなるペプチドを含んでなる、抗アレルギー材。2004099457.tif 000007［式中、ＳｅｒＰはホスホセリン残基を表し、Ｘは１〜３個の任意のアミノ酸残基を表し，かつＱ１およびＱ２は、いずれか一方もしくは両方が存在しないか，または，それぞれ独立して１〜３個の任意のアミノ酸残基を表す］。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カゼインホスホペプチドまたは下記のアミノ酸配列（Ｉ）からなるペプチドを含んでなる、抗アレルギー材。
【化１】
2004099457.tif 000006
［式中、ＳｅｒＰはホスホセリン残基を表し、Ｘは１〜３個の任意のアミノ酸残基を表し、かつＱ１およびＱ２は、いずれか一方もしくは両方が存在しないか、または、それぞれ独立して１〜３個の任意のアミノ酸残基を表す］。
【請求項２】
Ｘが、１個の任意のアミノ酸残基からなる、請求項１に記載のアミノ酸配列（Ｉ）からなるペプチドを含んでなる、抗アレルギー材。
【請求項３】
Ｘが、ＳｅｒＰまたはＬｅｕ　である、請求項２に記載の抗アレルギー材。
【請求項４】
Ｑ１およびＱ２が、０または１個の任意のアミノ酸残基からなる、請求項１に記載のアミノ酸配列（Ｉ）からなるペプチドを含んでなる、抗アレルギー材。
【請求項５】
Ｑ１およびＱ２が、Ｇｌｕ　またはＳｅｒＰである、請求項４に記載の抗アレルギー材。
【請求項６】
アミノ酸配列（Ｉ）が、配列表の配列番号１〜３からなる群より選択される配列または下記の配列である、請求項１に記載の抗アレルギー材。
ＳｅｒＰ−Ｘ−ＳｅｒＰ
【請求項７】
アミノ酸配列（Ｉ）が、配列表の配列番号４〜６からなる群より選択される配列または下記の配列である、請求項７に記載の抗アレルギー材。
ＳｅｒＰ−Ｌｅｕ−ＳｅｒＰ
ＳｅｒＰ−ＳｅｒＰ−ＳｅｒＰ
【請求項８】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のアミノ酸配列（Ｉ）を、少なくとも２回反復した反復配列として含むペプチドを含んでなる、抗アレルギー材。
【請求項９】
医薬として用いられる、請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗アレルギー材。
【請求項１０】
薬学上許容可能な製剤用添加剤をさらに含んでなる、請求項９に記載の抗アレルギー材。
【請求項１１】
食品として用いられる、請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗アレルギー材。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、カゼインホスホペプチドまたはホスホセリンを複数有する特定のアミノ酸配列を有するペプチドを含んでなる抗アレルギー材に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
カゼインホスホペプチド（以下、「ＣＰＰ」と略す）は牛乳の主要タンパク質であるカゼインが消化酵素の作用を受けて生じるリン酸化セリン残基を含むペプチドである。
ＣＰＰには、小腸で不溶化するカルシウムの可溶化状態を保ち、カルシウムの吸収を促進する作用があることが知られており、既に数々の食品もしくは飼料原料として実用化されている。また、ＣＰＰには、培養細胞系または動物の消化管中で免疫グロブリンＡ（以下、「ＩｇＡ」と略す）の産生を増強する作用があることも知られている（例えば、非特許文献１および非特許文献２参照。）。
さらに、ＣＰＰを添加した錠菓をヒトが摂取した場合に、糞中のＩｇＡレベルを増加させることが示されている（例えば、非特許文献３参照。）。また、ＣＰＰは、小腸におけるミネラル吸収を促進することが開示されている（例えば、特許文献１参照。）。
しかし、ＣＰＰによりアレルギー症状を軽減させること、すなわちＣＰＰを抗アレルギー材として用いることができることは知られていない。
【０００３】
【特許文献１】
国際公開第９６／２９３４０号公報
【非特許文献１】
木原行啓、大谷元，Ｍｉｌｋ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，日本酪農科学会，２０００，Ｖｏｌ．４９，Ｎｏ．２，ｐ．７３−７９
【非特許文献２】
Ｈ．Ｏｔａｎｉ　ｅｔ　ａｌ，　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，　２０００，　１２，　ｐ．１６５−１７３
【非特許文献３】
仲野広一、外６名，「カゼインホスホペプチド錠菓を摂取したヒトの糞便ＩｇＡ　レベル」，日本畜産学会誌第９９回大会講演要旨，２００１，・　１６−９，　ｐ．８２
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
食物によるアレルギー症状は、経口的に摂取されたアレルゲンが腸管から吸収され、血液によりＩｇＥ抗体が存在する組織に運ばれ、ＩｇＥ抗体と結合し、肥満細胞からアレルギーを誘発する物質が放出されることで発現する。しかし、アレルゲンに対するＩｇＡ抗体が腸管に多量に存在すると、アレルゲンはＩｇＡ抗体に捕捉され、糞便として排泄されるため、腸管から吸収されず、アレルギー症状が起こり難くなる。
ところが、体調の変化により、ＩｇＡ抗体の産生が充分に行われていない場合には、腸管のＩｇＡ抗体だけではアレルゲンを捕捉することができないため、アレルゲンが生体内に侵入し、アレルギー症状を引き起こすことになる。
【０００５】
そこで、本発明の目的は、このアレルギー症状を軽減させられる、ＣＰＰあるいはホスホセリンを複数有する特定のアミノ酸配列を有するペプチドを含んでなる抗アレルギー材を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するため、鋭意検討を重ねた結果、ＣＰＰあるいはホスホセリンを複数有する特定のアミノ酸配列からなるペプチドを含んでなる抗アレルギー材を摂取することによって、腸管のＩｇＡを有意に増加させ、そのＩｇＡによりアレルゲンの捕捉を増強させるとともに、血液中のＩｇＥを減少させることにより、アレルギー症状が軽減されることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、ＣＰＰあるいはホスホセリンを複数有する特定のアミノ酸配列からなるペプチドを経口摂取することによって、アレルギー症状が軽減されることを見出して、本発明に到達したのである。
【０００７】
請求項１〜１１に記載したように、本発明の抗アレルギー材は、ＣＰＰあるいは下式（Ｉ）で表される、ホスホセリンを複数有する特定のアミノ酸配列からなるペプチドを含んでなるものである。さらに、本発明は、この抗アレルギー材を含んでなる薬品や食品を提供するものである。
【０００８】
【化２】
2004099457.tif 000002
［式中、ＳｅｒＰはホスホセリン残基を表し、Ｘは１〜３個の任意のアミノ酸残基を表し、かつＱ１およびＱ２は、いずれか一方もしくは両方が存在しないか、または、それぞれ独立して１〜３個の任意のアミノ酸残基を表す］。
【０００９】
食物アレルギーは、主にＩｇＥの抗体と食物の抗原との反応によって引き起こされると考えられている。食物の抗原が経口から生体内に摂取されると、マクロファージがこの抗原を認識し、ヘルパーＴ細胞に抗原提示が行われると、このヘルパーＴ細胞が活性化され、サイトカインが分泌される。このサイトカインの代表的なものとして、インターロイキン（以下、「ＩＬ」と略す）があるが、このＩＬがＢ細胞を活性化すると、Ｂ細胞の分裂が促進され、抗原に特異的な抗体が産生される。
このＢ細胞の一部は形質細胞へと分化し、細胞内でＩｇが産生され、細胞外へ分泌される。このＩｇ中のＩｇＥはＩＬ−４によってＢ細胞で産生され、血液中に放出された後、血液中の肥満細胞と結合する。
このＩｇＥに抗原が結合すると、肥満細胞の中にあるヒスタミンなどのアレルギー誘発物質を放出し、アレルギー症状を引き起こされることになる。
【００１０】
通常、腸管にはＩｇＡが存在するが、生体内のバランスが崩れることにより、このＩｇＡの分泌が減少することがある。本来であれば、このＩｇＡは抗原を捕捉して生体内への侵入を防ぐ作用をもっているが、ＩｇＡの分泌が減少している場合には、充分に抗原を捕捉することができなくなる。そのため、ＩｇＡに捕捉できなかった抗原が腸管粘膜を通して生体内へ侵入し、体内のＩｇＥと結合し、アレルギー症状を引き起こすことになる。
【００１１】
本発明は、このようなアレルギー症状を改善あるいは軽減するものである。すなわち、本発明のＣＰＰあるいはホスホセリンを複数有する特定のアミノ酸配列からなるペプチドを含んでなる抗アレルギー材を経口摂取することにより、腸管中のＴ細胞およびＢ細胞に作用し、ＩｇＡが産生され、そのＩｇＡの腸管からの分泌が増加する。仮に、生体内のバランスを崩してＩｇＡの産生が減少していたとしても、本発明の抗アレルギー材を摂取しておけば、ＩｇＡの分泌を増加されるため、抗原の侵入を防ぐことができる。
さらに、本発明の抗アレルギー材により、腸管中のＴ細胞およびＢ細胞に作用し、ＩｇＥを減少させる。仮に、ＩｇＡで侵入を防ぎきれずに、生体内に抗原が侵入したとしても、ＩｇＥが減少しているため、アレルギー症状は通常のときよりも軽減される。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明の抗アレルギー材の有効成分として含まれるＣＰＰは、ミルクカゼインに酵素を作用させて得られるホスホセリン含量の多いマイクロペプチド（牛乳カゼインホスホペプチド）を用いてもよく、例えば商品名「明治ＣＰＰ−Ｉ」、「明治ＣＰＰ−ＩＩ」、「明治ＣＰＰ−ＩＩＩ　」（いずれも明治製菓株式会社製）を用いることができる。
【００１３】
本発明の抗アレルギー材の有効成分として含まれるホスホセリンを複数有する特定のアミノ酸配列からなるペプチドは、前記のアミノ酸配列（Ｉ）からなるペプチドを含んでなるものである。
かかるアミノ酸配列（Ｉ）からなるペプチドの具体例としては、以下のものを例示することができる。
【００１４】
（１）　Ｘが、１個の任意のアミノ酸残基であるアミノ酸配列（Ｉ）からなるペプチド。
（２）　Ｘが、ＳｅｒＰまたはＬｅｕ　であるアミノ酸配列（Ｉ）からなるペプチド。
（３）　Ｑ１およびＱ２が、０または１個の任意のアミノ酸残基であるアミノ酸配列（Ｉ）からなるペプチド。
（４）　Ｑ１およびＱ２が、Ｇｌｕ　またはＳｅｒＰであるアミノ酸配列（Ｉ）からなるペプチド。
（５）　配列表の配列番号１〜３からなる群より選択される配列または下記の配列であるアミノ酸配列（Ｉ）からなるペプチド。
ＳｅｒＰ−Ｘ−ＳｅｒＰ
（６）　配列表の配列番号４〜６からなる群より選択される配列または下記の配列であるアミノ酸配列（Ｉ）からなるペプチド。
ＳｅｒＰ−Ｌｅｕ−ＳｅｒＰ
ＳｅｒＰ−ＳｅｒＰ−ＳｅｒＰ
（７）　上記（１）〜（６）のいずれかのアミノ酸配列（Ｉ）を、少なくとも２回反復した反復配列として含むペプチド。
【００１５】
本発明において「抗アレルギー材」とは、抗アレルギー作用を有する材のことをいい、その用途は食品に限られず、医薬や飼料等であってもよい。また、「抗アレルギー作用を有する」とは、ヒトを含む動物において、腸管のＩｇＡレベルを増加させることとともに、血中のＩｇＥを減少させることにより、アレルギー症状を改善させる、あるいは軽減されることを意味する。
【００１６】
本発明において、「アミノ酸」とは、光学異性体、すなわちＤ体およびＬ体のいずれをも包含する。また、ここでいうアミノ酸には、天然のタンパク質を構成する２０種のα−アミノ酸のみならず、それら以外のα−アミノ酸、ならびにβ−、γ−、δ−アミノ酸および非天然のアミノ酸等も包含されてもよい。
【００１７】
本発明において、本発明に係るペプチドというときには、該ペプチドの誘導体も包含される意味で用いることがある。ここで、ペプチドの誘導体とは、前記した抗アレルギー作用を有するものであって、かつペプチドにおける前記した基本骨格配列「ＳｅｒＰ−Ｘ−ＳｅｒＰ」以外の部分について、アミノ酸末端（Ｎ末端）のアミノ酸または各アミノ酸の側鎖のアミノ基の一部もしくは全部、および／またはカルボキシル末端（Ｃ末端）のカルボキシル基または各種アミノ酸の側鎖のカルボキシル基の一部もしくは全部、および／または、ペプチドの各アミノ酸の側鎖のアミノ基およびカルボキシル基以外の官能基（例えば、水素基、チオール基、アミド基等）の一部もしくは全部が、適当な他の置換基によって修飾を受けたものをいう。適当な他の置換基による修飾は、例えばペプチド中に存在する官能基の保護、安全性ならびに組織移行性の向上、あるいは作用の増強等を目的として行われることがある。
【００１８】
本発明の好ましい態様によれば、抗アレルギー材に含まれるペプチドのアミノ酸配列（Ｉ）において、Ｘが１個の任意のアミノ酸残基からなる。
前記したアミノ酸配列（Ｉ）におけるＸが１個の任意のアミノ酸残基からなる場合には、Ｘは、Ｌｅｕ　、Ｇｌｕ　、Ｉｌｅ　、Ｔｈｒ　、Ａｌａ　、Ａｒｇ　、Ｌｙｓ　、Ａｓｎ　、Ｈｉｓ　、Ｖａｌ　、およびＳｅｒＰよりなる群から選択されるものであることが好ましく、より好ましくは、ＸはＳｅｒＰまたはＬｅｕ　であり、さらに好ましくは、ＳｅｒＰである。
【００１９】
前記アミノ酸配列（Ｉ）において、Ｑ１が存在する場合には、Ｑ１は１〜３個の任意のアミノ酸残基を表す。
また、Ｑ２が存在する場合には、Ｑ２は１〜３個の任意のアミノ酸残基を表す。
本発明の一つの好ましい態様によれば、Ｑ１およびＱ２が存在する場合、前記アミノ酸配列（Ｉ）において、Ｑ１およびＱ２は、それぞれＧｌｕ　およびＳｅｒＰから選択され、両者は同一であってもよく、異なるものであってもよい。
【００２０】
本発明の別の好ましい態様によれば、前記アミノ酸配列（Ｉ）において、Ｑ１およびＱ２で表されるアミノ酸残基がともに存在しない、すなわち前記アミノ酸配列（Ｉ）が「ＳｅｒＰ−Ｘ−ＳｅｒＰ　」からなるオリゴペプチドである。
本発明のより好ましい態様によれば、前記アミノ酸配列（Ｉ）は、配列表の配列番号１〜３およびＳｅｒＰ−Ｘ−ＳｅｒＰ　からなる群より選択されることが好ましく、より好ましくは、ＳｅｒＰ−Ｘ−ＳｅｒＰ　である。
【００２１】
本発明のさらに好ましい態様によれば、前記アミノ酸配列（Ｉ）は、配列表の配列番号４〜６およびＳｅｒＰ−Ｌｅｕ−ＳｅｒＰ　、ＳｅｒＰ−ＳｅｒＰ−ＳｅｒＰからなる群より選択され、より好ましくは、ＳｅｒＰ−Ｌｅｕ−ＳｅｒＰ　、またはＳｅｒＰ−ＳｅｒＰ−ＳｅｒＰである。
【００２２】
本発明の好ましい態様によれば、本発明に係るペプチドは、前記アミノ酸配列（Ｉ）を少なくとも２回反復した反復配列として含んでなるものである。
本発明によるペプチドにおけるアミノ酸配列（Ｉ）の反復回数は、少なくとも２回であり、好ましくは２〜１０回であり、より好ましくは２〜４回である。前記効果をより顕著に発揮させる観点からは、その反復回数は多いほど好ましい。
【００２３】
本発明の一つの好ましい態様によれば、本発明に係るペプチドが、前記アミノ酸配列（Ｉ）を少なくとも２回反復した反復配列として含んでなるものである場合には、該ペプチドを構成するアミノ酸の数は２２４個以下であることが好ましく、より好ましくは１００個以下であり、さらに好ましくは３０個以下である。
【００２４】
本発明に係るペプチドは、慣用の各種合成法を利用することによって製造したものであっても、天然起源のものであってもよい。このペプチドは、そのアミノ酸配列が決定されていることから、その配列の全てを合成することによって得てもよく、また天然起源のものを一部利用し、それを基にさらに合成を行って得たものであってもよい。
【００２５】
本発明に係るペプチドを、天然起源のものとして得る場合には、例えば下記のような手順により得ることができる。
まず、αｓ１−カゼイン、αｓ２−カゼイン、β−カゼイン、フォスビチンなどのホスホセリンを複数含有するタンパク質を含む牛乳カゼイン、または卵黄タンパク質を用意する。次いで、これを慣用の条件下に所謂トリプシン処理に付して加水分解させた後、得られた上清を分離回収し、これよりＣＰＰを得る。
【００２６】
このようなＣＰＰ調製法のより具体的な例としては、下記のような方法が挙げられる。
すなわち、例えば、（１）結晶トリプシンでβ−カゼインを加水分解して、ＣＰＰを生成させ、次いでｐＨ４．７で未反応カゼインと一部の不純物を沈殿除去した後、上清部に塩化バリウムとエタノール（終濃度５０％（ｖ／ｖ））を加えてＣＰＰを沈殿として回収する方法（例えば、Ｒ．Ｆ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，　Ｌ．Ｗ．Ｎｏｒｍａｎ　ａｎｄ　Ｔ．Ｌ．ＭｃＭｅｅｋｉｎ，　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｓｏｃｉｅｔｙ，　８０，　ｐｐ９５−９９（１９５８））、（２）結晶トリプシンでβ−カゼインを加水分解して、ＣＰＰを生成させ、次いでトリクロロ酢酸で処理して不溶物を除去後、水酸化ナトリウムにより中和（ｐＨ５．０）し、その後、ゲル濾過カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−２５Ｒ　，　Ｐｈａｒｍａｃｉａ　社）により粗分画し、さらにイオン交換カラム（Ｄｏｗｅｘ　５０ｘ２Ｒ　，　Ｄｏｗ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ．）にいったん吸着させピリジン−酢酸緩衝液（０．２規定、ｐＨ２．５）で溶出させてＣＰＰを精製して得る方法（Ｈ．Ｎａｉｔｏ　ａｎｄ　Ｈ．Ｓｕｚｕｋｉ，　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　３８，　ｐｐ１５４３−１５４５（１９７４））、および（３）カゼインをトリプシンにより所定の温度およびｐＨ等の条件（例えばｐＨ７．０−８．５、５０℃）下に加水分解し、ＣＰＰを生成させ、次いでｐＨ５前後で未反応カゼインと一部の不純物を沈殿除去した後、上清部にカルシウム塩もしくは酢酸カルシウムとエタノールなどの有機溶媒とを加えて、ＣＰＰを沈殿させて回収する方法（特公平２−７６１６号公報）などが挙げられる。
【００２７】
次いで、トリプシン、キモトリプシン等のエンドプロテアーゼと、アミノペプチターゼ、カルボキシペプチターゼのような種々のペプチターゼとを必要により組み合わせて、上記のようにして得られたＣＰＰを処理することによって、用途に応じて好ましい長さを有する本発明に係るペプチドを得ることができる。
したがって、本発明に係るペプチドは、前記した製造方法によって得ることができる。すなわち、カゼインを用意し、該カゼインをトリプシン処理した後、カルシウム塩とエタノール等による沈殿処理によって、ホスホペプチドを得、次いで得られたホスホペプチドに、アミノペプチターゼ、カルボキシペプチターゼ、およびそれらの組合せからなる群より選択された酵素を作用させることによって、前記ペプチドを得ることができる。
【００２８】
また、本発明に係るペプチドを、慣用の各種合成法を利用することによって得る場合は、例えば下記のような手順により得ることができる。
すなわち、本発明によるペプチドは、慣用の方法、例えばＰａｑｕｅｔ等による方法（Ａ．　Ｐａｑｕｅｔ　ａｎｄ　Ｍ．　Ｊｏｈｎｓ，　Ｉｎｔ．　Ｊ．　Ｐｅｐｔ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ．，　３６（２），　ｐｐ９７−１０３，（１９９０））に従い、通常のペプチド合成を応用することにより調製することができる。
具体例を挙げて示すと、まずアミノ酸をｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）などで保護したホスホセリンと各種アミノ酸とをペプチド合成の常法である活性化エステル法や縮合法を用いて、段階的に鎖長を延ばすことにより、任意の位置にホスホセリン基を含有するホスホペプチドを調製することができる。この方法は、液相法でも固相法であっても実施可能である。
【００２９】
本発明の抗アレルギー材は、そのまま摂取できるが、食品製造で一般的に用いられる食品素材、調味料および食品添加物等と混合して摂取したり、他の食品に配合して摂取することもできる。よって、食品として用いる場合には、ガム、ビスケット、チョコレート、キャンディー、ゼリー、錠菓、粉乳、飲料などの形で提供することができる。
【００３０】
また、本発明の抗アレルギー材は、顆粒剤、カプセル剤、錠剤、粉剤、液剤などの製剤としても摂取することができる。製剤に加工する場合は、通常用いられている賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤化剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、防腐剤、矯味矯臭剤、無痛化剤、安定化剤等の薬学上許容可能な製剤用添加剤や食品添加物を用いて常法により製造することができる。すなわち、本発明に係る抗アレルギー材は、薬学上許容可能な製剤用添加剤や食品添加物をさらに含んでなることができる。
【００３１】
使用可能な上記添加剤や食品添加物としては、例えば乳糖、果糖、ブドウ糖、ゼラチン、炭酸マグネシウム、合成ケイ酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、メチルセルロース、またはその塩、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、シロップ、ワセリン、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、クエン酸、塩化ナトリウム、亜硫酸ソーダ、リン酸ナトリウム等が挙げられる。
【００３２】
本発明の抗アレルギー材の摂取量は、目的に応じて適宜決定すればよいが、通常１日あたりＣＰＰであれば、２〜１２ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは４〜６ｍｇ／ｋｇ体重である。摂取の回数については、１日１回または数回にわけて摂取することができる。
【００３３】
本発明の抗アレルギー材は、腸管のＩｇＡを増加させ、さらに血中のＩｇＥを減少させることにより、生体内からアレルゲンを排出することができるものであるから、事前に本発明の抗アレルギー材を経口により摂取することでアレルギー症状の予防あるいは軽減を図ることができ、有用である。
【００３４】
【実施例】
次に、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、これらの例によって本発明の範囲は何ら限定されるものではない。
実施例１
評価試験
卵アレルギーの原因物質である卵白オボアルブミン（以下、「ＯＶＡ」と略す）を２５重量％添加した飼料（無添加群）、およびこのＯＶＡを添加した飼料の０．１％を市販ＣＰＰ標品（ＣＰＰ−ＩＩＩ　，明治製菓（株）製）に置き換えた飼料（ＣＰＰとして０．０９重量％含有：ＣＰＰ添加群）を用い、ＮＣマウス４週齢雄５匹を１群として２つの群にそれぞれの飼料を摂取させた。なお、水および飼料は自由にＮＣマウスに摂取させた。
ここで、ＮＣマウスはアレルギー体質のマウスであり、自然飼育においても加齢とともにアレルギー症状を発現する。本実施例ではアレルギー症状の発現を促進するためとアレルギーに深く関係するＩｇＥ抗体量を指標とするために、飼料中のタンパク質源には卵アレルギーの原因物質の一つと言われている卵白ＯＶＡを用いた。
【００３５】
上記２群のＮＣマウスを１７週齢まで飼育し、その間、１週間毎にアレルギー症状の測定を行った。アレルギー症状の程度を０〜３の点数で表し、各群５匹の点数の合計によるスコアで評価した。また、ＮＣマウスから１週間毎に糞便を、２週間毎に血清を採取し、最終日に腸管および脾臓を摘出した。糞便、血清および腸管中の各種免疫グロブリンレベルをＥＬＩＳＡ　法（Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ｊ．Ｌ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈ．，　２４（１９９０），　ｐｐ２６７−２８３）により測定した。脾臓細胞による各種サイトカインの産生を確認するために、抗体の産生に関係するＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６などのサイトカインを市販のＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙ　Ｋｉｔ　（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社製、　カルフォルニア９３０１２、米国）を用いて測定を行った。
【００３６】
皮膚アレルギー症状を肉眼観察したが、その際の写真を図１（ａ）〜（ｄ）に示し、その症状の程度を表したスコアを図２に示す。
図１は各群の１６週齢時ＮＣマウスの顔面および背面を撮影したものである。無添加群では、顔面（ａ）のはれや背中（ｂ）の毛の脱落といった症状が認められたのに対し、ＣＰＰ添加群では、顔面（ｃ）および背面（ｄ）のいずれも無添加群よりも症状は比較的軽かった。また、図２から明らかなように、スコアもＣＰＰ添加群の方が低いことが確認された。
【００３７】
ＮＣマウスの脾臓切片をヘマトキシリン−エオシン染色により細胞核を青色に染めた結果、無添加群よりもＣＰＰ添加群の方が濃い青色に染まっていることが確認された。より染色されていることは、分裂中の細胞が多く見られることを意味するから、ＣＰＰ添加群ではマウスの免疫機能が亢進することが示唆された。
【００３８】
糞便中の総ＩｇＡレベルおよびＯＶＡ特異ＩｇＡレベル並びに腸管の総ＩｇＡレベルおよび抗ＯＶＡＩｇＡレベルの測定結果を図３（ａ）および（ｂ）に示す。図中、白棒は無添加群を、黒棒はＣＰＰ添加群を示す。また、＊は有意水準５％未満（Ｐ＜０．０５）、＊＊は有意水準１％未満（Ｐ＜０．０１）、＊＊＊は有意水準０．１％未満（Ｐ＜０．００１）であることを表す。
図から明らかなように、無添加群と比べてＣＰＰ添加群で糞便中の総および抗ＯＶＡＩｇＡレベルが有意に増加した。
【００３９】
次に、血清中の抗ＯＶＡＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＥレベルを測定した結果を図４に示す。図中、＊＊＊は有意水準０．１％未満（Ｐ＜０．００１）であることを表す。
抗ＯＶＡＩｇＧレベルにＣＰＰ添加による変化は見られなかったが、抗ＯＶＡＩｇＡレベルはＣＰＰの添加により増加する傾向があり、さらに、抗ＯＶＡＩｇＥレベルはＣＰＰの添加により有意に減少した。
【００４０】
さらに、抗体産生に影響を及ぼすＩＬについて、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６およびＩＬ−１０の生産性を測定した。その結果を図５に示す。図中、＊＊＊は有意水準０．１％未満（Ｐ＜０．００１）であることを表す。
図から明らかなように、ＩＬ−４はＣＰＰ添加群では減少し、ＩＬ−６はＣＰＰ添加群では有意に増加した。
ＩＬ−４はＢリンパ球からのＩｇＥの産生を誘導し、ＩＬ−６はＩｇＧやＩｇＭの産生に影響を及ぼすことなくＩｇＡの産生を促進するサイトカインであることから、ＣＰＰ添加群での血清ＩｇＥの減少はＩＬ−４の減少を、また、腸管ＩｇＡの増加はＩＬ−６の増加により誘導されることを示唆している。
【００４１】
【発明の効果】
本発明のＣＰＰまたは特定のアミノ酸配列からなるペプチドを含有する抗アレルギー材は、経口摂取することによって、腸管のＩｇＡを有意に増加させ、ＩｇＡによるアレルゲンの捕捉を増強させるとともに血液中のＩｇＥを減少させることにより、アレルギー症状を軽減することができる。
【００４２】
【配列表】
2004099457.tif 000003
2004099457.tif 000004
2004099457.tif 000005
【図面の簡単な説明】
【図１】（ａ）〜（ｄ）は　皮膚アレルギー症状の状態を示す写真である。
【図２】皮膚アレルギー症状の程度を表したスコアを示すグラフである（数字が大きい程、アレルギー症状が高いことを示す。）。
【図３】（ａ）は糞便中の総および抗ＯＶＡＩｇＡレベルの、（ｂ）は腸管の総および抗ＯＶＡＩｇＡレベルの、測定結果を示すグラフである。
【図４】血清中の抗ＯＶＡＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＥレベルを測定した結果を示すグラフである。
【図５】抗体産生に影響を及ぼすインターロイキンの生産性を測定した結果を示すグラフである。
【図１】
2004099457.tif 000008
【図２】
2004099457.tif 000009
【図３】
2004099457.tif 000010
【図４】
2004099457.tif 000011
【図５】
2004099457.tif 000012