(57)【要約】【課題】  ＭＣＰ-１産生抑制のための、グリチルリチン及びその誘導体の使用を提供すること。【解決手段】  単球若しくはＴリンパ球の走化性が亢進しているか、又はＩＬ-１０の産生が亢進していて、当該亢進を抑制することが望まれるほ乳類に対して、当該制御に有効な量のグリチルリチン及びその誘導体（オレアン-11,13（18）-ジエン-30-カルボキシ-３β-イル-（2-Ｏ-β-グルコピラヌロノシル-β-D-グクロピラヌロン酸  ２ナトリウム）等の化合物）を投与することからなる、ＭＣＰ-１の産生抑制方法、及びそのための薬学的組成物。【選択図】  図１
2004149531.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＭＣＰ-１産生抑制のための、下記式（I）の化合物：
【化１】
2004149531.tif 000009
[式中、
R1は、水素、又は下記式（II）、若しくは（III）の基：
【化２】
2004149531.tif 000010
【化３】
2004149531.tif 000011
を表し｛ここで、式（II）、及び（III）の基は、これらの薬学的に許容される塩であってもよい｝；
R２は、COOH、若しくは下記式（IV）の基：
【化４】
2004149531.tif 000012
又はこれらの薬学的に許容される塩
を表し；
Xは、C=O、又はCHを表し；
点線は、適宜、二重結合を表す]
の使用。
【請求項２】
前記式（II）、（III）、及び（IV）中の薬学的に許容される塩が、ナトリウム塩、カリウム塩、若しくはアンモニウム塩、又はこれらの組み合わせであることを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記式（I）の化合物が、
オレアン-11,13（18）-ジエン-30-カルボキシ-３β-イル-（2-Ｏ-β-グルコピラヌロノシル-β-D-グクロピラヌロン酸  ２ナトリウム）；
オレアン-３β-ヒドロキシ-11-オキソ-12-エン-30酸  ナトリウム；
オレアン-９（11）,12-ジエン-３β,３０-ジオール-３β,３０-Ｏ-ジヘミフタル酸  ２ナトリウム；
オレアン-11,13（18）-ジエン-３β,３０-ジオール-３β,30-Ｏ-ジヘミフタル酸  ２ナトリウム；
オレアン-３β-ヒドロキシ-１１,１３（１８）-ジエン-３０酸-３β-Ｏ-ヘミフタル酸  ２ナトリウム；
オレアン-３β-ヒドロキシ-１１-オキソ-１２-エン-３０酸-３β-Ｏ-ヘミフタル酸  ２ナトリウム；又は
２０β-カルボキシ-11-オキソ-３０-ノルオレアン-12-エン-３β-イル-２-Ｏ-β-D-グルコピラヌロノシル-β-D-グルコピラノシドウロン酸  モノアンモニウム
の何れかである、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
単球若しくはTリンパ球の走化性が亢進しているか、又はIL-１０の産生が亢進していて、当該亢進を抑制することが望まれる哺乳類に対して、当該制御に有効な量の、請求項１に記載の化合物を投与することからなる、ＭＣＰ-１の産生抑制方法。
【請求項５】
ＭＣＰ-１の産生を抑制して、ＭＣＰ-１が引き起こす個体の易感染性を制御し、当該個体に感染抵抗性を付与することを特徴とする、感染症制御方法。
【請求項６】
ＭＣＰ-１産生抑制剤の製造における、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項７】
火傷患者、ＡＩＤＳ患者、癌患者、脳炎患者、大ケガ・大手術後の個体、若しくはストレスを受けた個体、又はその他の個体であって、ＭＣＰ-１の産生が惹起されている個体において生じる日和見感染に対する感染抵抗性の低下を治療又は予防するための薬学的組成物であって、
当該個体において生じている日和見感染に対する感染抵抗性の低下を治療又は予防するのに有効な量の、請求項１に記載の化合物を、任意に薬学的に許容されうるキャリアとともに含む薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＭＣＰ-１産生抑制のための、及びＭＣＰ-１産生抑制剤の製造における、グリチルリチン及びその誘導体の使用、並びにＭＣＰ-１産生抑制方法、ＭＣＰ-１産生抑制を通じた感染症制御方法、及びそのための薬学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
（ＭＣＰ-１ケモカイン）
サイトカインは、リンパ球等の細胞が産生する蛋白質であり、それに対するレセプターを持つ細胞に働き、細胞の増殖・分化・機能発現を行う蛋白質である。また、サイトカインの中には白血球遊走作用を有し、ケモカインと呼ばれる一群の蛋白質がある。このケモカインは、４つのシステイン残基を持つという共通の構造を有し、Ｎ末端側の２個のシステイン残基が形成するモチーフによって、ＣＸＣ、ＣＣ等のサブファミリーに分類されている。
【０００３】
その中でＣＸＣサブファミリーに属するケモカインは、Ｎ末端側の最初の二つのシステイン残基同士が１のアミノ酸を挟む配列、即ちＣＸＣを有していて、インビトロで特に好中球にケモタキシスを誘導する。一方、ＣＣサブファミリーに属するものは、ＣＸＣサブファミリーに属するものとは異なり、Ｎ末端の最初の二つのシステイン残基同士が、その間に１のアミノ酸を介さずに直接並んだアミノ酸配列を有していて、インビトロで単球、マクロファージ、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好酸球等にケモタキシスを誘導することが知られている。
【０００４】
ＭＣＰ-１（monocyte chemoattractant (chemotactic) protein-1）は、ＣＣケモカインの一つであり、７６アミノ酸からなる、分子量が８，０００乃至１８，０００の蛋白質である。ＭＣＰ-１は、単球、マクロファージ、線維芽細胞、血管内皮細胞等が細菌感染などにより刺激されると、これらの細胞によって産生・分泌されて、感染局所にマクロファージやＴ細胞等が組織浸潤するのを促進すると考えられている。また、ある種の腫瘍細胞においては、ＭＣＰ-１は自律的且つ恒常的に産生されることが観察されている。
【非特許文献１】ビセンチら（Vicenzi et al.,）、ジャーナル・オブ・ルーコサイト・バイオロジー（Journal of Leukocyte Biology）、２０００年、第６８巻、pp.405-412
【非特許文献２】グら（Gu et al.,）、ネーチャー（Nature）、２０００年、第４０４巻、ｐｐ.407-411
【非特許文献３】ソザッニら（Sozzani et al.,）、ジャーナル・オブ・イクスペリメンタル・メディスン（Journal of Experimental Medicine）、１９９８年、第１８７巻、第３号、pp.439-444
【非特許文献４】カープスら（Karpus et al.,）、ジャーナル・オブ・イクスペリメンタル・メディスン（Journal of Experimental Medicine）、１９９８年、第１８７巻、第５号、pp.733-741
【非特許文献５】カープスら（Karpus et al.,）、ザ・ジャーナル・オブ・イミュノロジー（The Journal of Immunology）、１９９７年、第１５８巻、pp.4129-4136
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
２型Ｔ細胞反応が優位になると、色々な感染症に対して感染抵抗性が低下することが知られている。ＭＣＰ-１ノックアウトマウスでは、２型Ｔ細胞が出てこない。つまり、２型Ｔ細胞反応の成立には、ＭＣＰ-１が必要であることが証明されている。ＭＣＰ-１の産生をとめることができれば、個体は２型Ｔ細胞反応優位状態にならずにすみ、感染症に陥らずにすむ。例えばＭＣＰ-１で２型Ｔ細胞反応が優位になった場合、ヘルペス感染症に対して、感染感受性は１００倍、カンジダ感染症に対しては５０倍、感受性が上昇し、ヘルペス脳炎、クリプトコッカス脳炎や、肺炎が悪化する。また、２型Ｔ細胞反応優位状態では、個体の腫瘍に対する抗腫瘍免疫が惹起しないので、腫瘍の更新や担癌個体の日和見感染が起こりやすくなる。
【０００６】
従って、ＭＣＰ-１の作用を抑制することが可能となれば、これらの疾患等において、好ましい効果が得られると考えられる。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意研究した結果、グリチルリチン（グリチルリチン酸）及びその誘導体に着目した。
【０００８】
グリチルリチン（又はグリチルリチン酸）は、グリチルレチン酸と２分子のグルクロン酸とからなる化合物であり、古くより抗炎症作用を有することが知られ、また、胃液分泌抑制作用、消化器の潰瘍の治癒作用、抗アレルギー性を高める作用、免疫抑制活性、肝機能増強作用、解毒作用、ウイルスに対する抵抗力を高める作用等も知られている。特に、肝臓疾患用剤、及びアレルギー用剤としては、広く臨床領域で用いられている化合物である。
【０００９】
グリチルリチンは、近年、ＨＩＶの細胞内増殖抑制作用を有すること、そして、無症状キャリア（ＡＣ）の患者に対してグリチルリチンを毎日１５０乃至２２５mg（６乃至９錠）投与すると、１０年以上もＡＩＤＳを発症せずに生存させる効果を有することが報告されている。
【００１０】
そして本発明者らは、グリチルリチン及びその誘導体が、ＭＣＰ-１産生抑制作用を有することを発見し、本発明を完成するに至った。
【００１１】
本発明は、ＭＣＰ-１産生抑制のための、グリチルリチン及びその誘導体の使用を提供する。
【００１２】
本発明において使用するグリチルリチン及びその誘導体は、下記式（I）の化合物：
【００１３】
【化１】
2004149531.tif 000003
[式中、
R1は、水素、又は下記式（II）、若しくは（III）の基：
【００１４】
【化２】
2004149531.tif 000004
【００１５】
【化３】
2004149531.tif 000005
又はこれらの基の薬学的に許容される塩を表し；
R２は、COOH、若しくは下記式（IV）の基：
【００１６】
【化４】
2004149531.tif 000006
又はこれらの薬学的に許容される塩
を表し；
Xは、C=O、又はCHを表し；
点線は、適宜、二重結合を表す]
である。
上記の化合物においては、式（II）、（III）、及び（IV）の薬学的に許容される塩として、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アルミニウム塩、アンモニウム塩や、種々の有機アミン塩等が挙げられるが、その中でもナトリウム塩、カリウム塩、若しくはアンモニウム塩、又はこれらの組み合わせが好ましい。
【００１７】
上記の式（Ｉ）に含まれる具体的な化合物としては、以下のもの：
・オレアン-11,13（18）-ジエン-30-カルボキシ-３β-イル-（2-Ｏ-β-グルコピラヌロノシル-β-D-グクロピラヌロン酸  ２ナトリウム）；
・オレアン-３β-ヒドロキシ-11-オキソ-12-エン-30酸  ナトリウム；
・オレアン-９（11）,12-ジエン-３β,３０-ジオール-３β,３０-Ｏ-ジヘミフタル酸  ２ナトリウム；
・オレアン-11,13（18）-ジエン-３β,３０-ジオール-３β,30-Ｏ-ジヘミフタル酸  ２ナトリウム；
・オレアン-３β-ヒドロキシ-１１,１３（１８）-ジエン-３０酸-３β-Ｏ-ヘミフタル酸  ２ナトリウム；
・オレアン-３β-ヒドロキシ-１１-オキソ-１２-エン-３０酸-３β-Ｏ-ヘミフタル酸  ２ナトリウム；及び
・２０β-カルボキシ-11-オキソ-３０ノルオレアン-12-エン-３β-イル-２-Ｏ-β-D-グルコピラヌロノシル-β-D-グルコピラノシドウロン酸  モノアンモニウム
が含まれる。
【００１８】
本発明はまた、単球若しくはTリンパ球の走化性が亢進しているか、又はIL-１０の産生が亢進していて、当該亢進を抑制することが望まれる哺乳類に対して、当該制御に有効な量の、請求項１又は２に記載の化合物を投与することからなる、ＭＣＰ-１の産生抑制方法を提供するものである。
【００１９】
本発明は更に、ＭＣＰ-１の産生を抑制して、ＭＣＰ-１が引き起こす個体の易感染性を制御し、当該個体に感染抵抗性を付与することを特徴とする、感染症制御方法をも提供する。
【００２０】
本発明はまた、ＭＣＰ-１産生抑制剤の製造における上記のグリチルリチン及びその誘導体の使用を提供する。
【００２１】
本発明は更に、火傷患者、ＡＩＤＳ患者、癌患者、脳炎患者、大ケガ・大手術後の個体、若しくはストレスを受けた個体、又はその他の個体であって、ＭＣＰ-１の産生が惹起されている個体において生じる日和見感染に対する感染抵抗性の低下を治療又は予防するための薬学的組成物であって、
当該個体において生じている日和見感染に対する感染抵抗性の抵抗を治療又は予防するのに有効な量の、請求項１又は２に記載の化合物を、任意に薬学的に許容されうるキャリアとともに含む薬学的組成物を提供する。
【発明の効果】
【００２２】
本発明により、ＭＣＰ-１の産生を抑制することが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
本発明においてＭＣＰ-１産生抑制のために使用するグリチルリチン及びその誘導体は、例えばミノファーゲン製薬より入手できるものを使用することができる。あるいは、グリチルリチンの誘導体は、例えば特開昭63-2959号公報；Chem. Pharm. Bull,34, 897(1986)；Jpn. J. Pharmacol., 71, 281 (1996)等に記載されているものである。
【００２４】
オレアン-３β-ヒドロキシ-１１-オキソ-１２-エン-３０酸-３β-Ｏ-ヘミフタル酸  ２ナトリウムは、以下のようにして合成することができる。
オレアン-３β-ヒドロキシ-１１-オキソ-１２-エン-３０酸-３β-Ｏ-ヘミフタル酸  ２ナトリウムの合成方法
１０ｇのオレアン-11,13(18)-ジエン-3-ヒドロキシ-30酸-3-Ｏ-ヘミフタル酸に対し、３００ｍｌのメタノール、３０ｍｌの１N水酸化ナトリウム水溶液を添加して、攪拌溶解した。攪拌中の反応液のｐHが、１０．０-１０．４の範囲に収まるようにして水酸化ナトリウム水溶液を添加した。反応液の調整後、溶液をメンブレンフィルターを利用して濾過した。濾過後、反応液を、容量が約半分になるまで濃縮し、２００ｍｌのアセトンを添加して析出してくる白色結晶を回収して乾燥させた。本発明において使用される一化合物である上記の化合物が９．３ｇ得られた。融点２８３-２８７℃；質量分析値（ｍ/ｚ）：６０１（M-1）
【００２５】
オレアン-11,13(18)-ジエン-3-ヒドロキシ-30酸-3-Ｏ-ヘミフタル酸の合成方法
３０ｇのオレアン-11,13(18)-ジエン3-ヒドロキシ-３０酸、６０ｇの無水フタル酸、２ｇの４-ジメチルアミノピリジンの混合物を３００ｍｌのクロロホルムに添加し、８０℃で２４時間攪拌還流した。反応終了後、溶媒を留去し、残渣に２４０ｍｌのエタノールを加えて、９０度で加熱溶解させた後、２４０ｍｌの水を添加して、更に１５分間加熱攪拌した。冷却後、析出した白色結晶を回収し、この結晶に２００ｍｌの５０％エタノールを添加して過熱攪拌を３０分間続けた。冷却後、溶解しなかった白色結晶を濾過して回収し、これを５０％エタノール水で洗浄し、乾燥させて３７．６ｇのオレアン-11,13(18)-ジエン-3-ヒドロキシ-30酸-3-Ｏ-ヘミフタル酸を得た。
【００２６】
オレアン-11,13(18)-ジエン-3-ヒドロキシ-３０酸の合成方法
４７．１ｇの１８α-グリチルレチン酸と５００ｍｌのテトラヒドロフラン（THF）に溶解させ、８０℃で５００ｍｌの１N水酸化ナトリウム水溶液と５００ｍｌのTHFの混合物に７５．６ｇの水素化ホウ素ナトリウムを溶解させた溶液を滴下し、同温度で２４時間反応させた。反応終了後、室温に戻し、６００ｍｌのアセトンを添加して攪拌し、2Nの塩酸を用いて溶液を中和させた。反応液中のTHFを留去させ、析出してきた白色結晶（１１α-ヒドロキシ-グリチルレチン酸、及び１１β-ヒドロキシ-グリチルレチン酸の混合物）を濾過して回収した。この結晶を１０００ｍｌのTHFに溶解させ、乾燥させた後、溶媒を留去し、残渣に４００ｍｌのクロロホルムを加えて不溶性の結晶を濾過して回収し、乾燥させ、１１α-ヒドロキシ-グリチルレチン酸と１１β-ヒドロキシ-グリチルレチン酸との混合物４０ｇを得た。この混合物を、４０００ｍｌのTHFに溶解させ、１６００ｍｌの１０％塩酸を加えて室温で３時間攪拌した。析出してきた白色結晶を濾過して回収し、水洗後乾燥させ、３５．８ｇのオレアン-11,13(18)-ジエン-3-ヒドロキシ-３０酸を得た。
【００２７】
また、本発明において使用されるグリチルリチン及びその誘導体は、グリチルリチンを成分とするカンゾウ（甘草）、若しくはカンゾウから得られるカンゾウ末、カンゾウエキス、カンゾウ粗エキス等のように、自然に存在する資源から得ることもできる。
【００２８】
本発明は、単球若しくはTリンパ球の走化性が亢進しているか、又はIL-１０の産生が亢進していて、当該亢進を抑制することが望まれる哺乳類に対して、当該制御に有効な量の、上記のグリチルリチン及びその誘導体を投与することからなる、ＭＣＰ-１の産生抑制方法を提供するものであるが、斯かる方法は、より具体的には、単球又はTリンパ球の走化性が亢進していて、単球又はTリンパ球の浸潤による炎症が生じている場合に適用することが可能である。
【００２９】
２型T細胞反応が優位になると、色々な感染症に対して感染抵抗性が低下することが知られている。ＭＣＰ-１ノックアウトマウスでは、２型T細胞が出てこない。つまり、２型T細胞反応の成立には、ＭＣＰ-１が必要であることが証明されている。ＭＣＰ-１の産生をとめることができれば、個体が２型T細胞反応優位な状態にならずにすみ、感染症に陥らずにすむことになる。例えば、ＭＣＰ-１で２型T細胞反応が優位となった場合、ヘルペス感染に対しては１００倍、カンジダ感染に対しては５０倍、感受性が上昇し、ヘルペス脳炎、クプトコッカス脳炎や肺炎が悪化する。また、２型T細胞反応が優位な状態では、個体の腫瘍に対する抗腫瘍免疫が起動しないので、腫瘍の亢進や、担癌個体の日和見感染が起こりやすくなる。従って、火傷患者、AIDS患者、癌患者、脳炎患者、大ケガ・大手術後の個体、又はストレスを受けた個体、その他、ＭＣＰ-１の産生が惹起される個体において生じる日和見感染症に対する感染抵抗性の低下の治療又は予防に、本願発明の制御方法を適用することが可能である。
【００３０】
従って本発明は、ＭＣＰ-１の産生を抑制して、ＭＣＰ-１が引き起こす個体の易感染性を制御し、当該個体に感染抵抗性を付与することを特徴とするものであり、感染症制御方法も提供する。斯かる方法は、ＭＣＰ-１により２型T細胞反応が優位になり易感染性となった場合、これを改善することができる点において有用である。即ち、細菌などが個体内に侵入した場合、１型T細胞反応が作動するとこれらの細菌の全身への広がりを阻止することができるが、２型T細胞反応が誘導されて、２型T細胞の産生するIL-４やIL-１０により、１型T細胞の誘導や、１型T細胞反応のエフェクタ細胞（マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、細胞傷害性T細胞）の機能が抑制されると個体は細菌を排除できずに感染が悪化する。ＭＣＰ-１は、２型T細胞を起動させるものなので、ＭＣＰ-１の産生を抑制する方法は、個体の細菌感染に対する抵抗性を上昇させることが望まれる場合に適用することができる。また、２型T細胞は、ウイルスやカビによる感染に対する個体の抵抗性を低下させるので、個体のウイルスやカビによる感染抵抗性を上昇させることが望まれる場合に適用できる。
【００３１】
本発明のＭＣＰ-１産生抑制方法の具体的な適用対象としては、単球若しくはＴリンパ球の走化性が亢進しているか、又はIL-１０の産生が亢進していている状態にあるほ乳類の疾患が含まれるが、具体的には、例えば、炎症、感染抵抗性低下等が含まれる。
また、ＭＣＰ-１の産生が惹起されている個体である、火傷患者、AIDS患者、癌患者、脳炎患者、大ケガ・大手術を受けた個体、ストレスを受けた個体、なども適用対象とすることができる。
【００３２】
本発明のＭＣＰ-１産生抑制方法において、グリチルリチン又はその誘導体は、本願発明の薬学的組成物の形態、即ち本願において意図する対象疾患又は対象状態の治療・予防（又は当該疾患もしくは状態の原因となる作用機序の制御、例えば単球走化性の亢進の制御）に有効な量のグリチルリチン、及び任意の薬学的に許容されうるキャリアを含む形態で使用することが好ましい。
【００３３】
本発明の薬学的組成物中には、グリチルリチン若しくはその誘導体を単独で、又は任意の薬学的に許容されうるキャリアと混合して含ませることが可能である。また、本発明の薬学的組成物は、常法にしたがって種々の形態に調製することが可能であり、その形態には例えば錠剤、注射剤、カプセル剤、スプレー剤、トローチ、粉末等が含まれる。
本願発明の薬学的組成物中に任意に含まれる「薬学的に許容されうるキャリア」とは、当該組成物中の有効成分の機能を、実質的に阻害しないものを意味し、具体的には固形の希釈剤や充填剤、無菌の水性媒体、及び種々の無毒性有機溶媒等が含まれる。
【００３４】
本願発明により得られるＭＣＰ-１産生抑制剤又は単球走化性亢進の制御用の薬学的組成物は、経口的、経腸的、局所的、経皮的、及び血管内、筋肉内投与方法などにより、ほ乳類に投与することができるが、投与方法は、治療又は予防する患者の体重や健康状態、治療する疾患の状態に応じて、適宜、臨床医により選択されるものである。
【００３５】
本願発明のＭＣＰ-１産生抑制剤を、投与する場合には、体重１ｋｇ当たり、１日当たり、０．１乃至１００ｍｇの投薬量で投与されることが通常である。
【実施例１】
【００３６】
グリチルリチン及びその誘導体によるＭＣＰ-１産生の抑制効果
実験方法
健常人より末梢血を採血し、Ficoll-Hypaqueを利用して末梢単球細胞（ＰＢＭＣ）を含む画分を分離した。
９６穴の平底マイクロタイタープレートの各ウェルに、１Ｘ１０6細胞/ｍｌの濃度で単球をまいた。培養には、１０％ＦＣＳと抗生物質（ペニシリン、及びストレプトマイシン）とを含有するＲＰＭＩ  １６４０培地を使用した。細胞は、３７度、５％ＣＯ２濃度に維持されたインキュベータを使用して培養した。
各ウェルに、２０ｎｇ/ｍｌのＩＬ-１０（入手先：PeproTech社）を添加して細胞を刺激し、対照以外のウェルに、１００μｇ/ｍｌとなるようにグリチルリチン又はその誘導体の溶液を添加して、２４時間培養を続けた。
グリチルリチン添加後の培養上清を回収し、上清中のＭＣＰ-１の量をＥＬＩＳＡにより、定量した。ＥＬＩＳＡは、市販されるキット（商品名：Human  ＭＣＰ-１BD  OptEIA  ELISAキット）を使用した。
【００３７】
結果
結果を図１に示す。ＩＬ-１０を添加したサンプルでは、ＭＣＰ-１の産生が増加するが、グリチルリチン（グリチルリチン酸モノアンモニウム；図２-図４においてもグリチルリチン酸モノアンモニウムを、グリチルリチンと記載してある）及びその誘導体は、IL-１０によるＭＣＰ-１の産生を抑制する効果を有することがわかる。
【実施例２】
【００３８】
グリチルリチンによる、火傷患者由来末梢単核細胞からのＭＣＰ-１抑制
実験方法
火傷患者 (体表面積の 45~78%、３度の火傷) より末梢血を採血し、Ficoll-Hypaque にて末梢単核細胞を分離した。 １Ｘ１０6細胞 /ｍｌ の末梢単核細胞を １００μｇ/ｍｌ 量のグリチルリチン２４時間刺激した。尚、対照として、健常人由来の単核細胞を同じ条件で培養した。培養上清中のＭＣＰ-１量は Human  ＭＣＰ-１BD  OptEIA  ELISAキットにて測定した。
【００３９】
結果
結果を図２に示した。図より明らかな通り、健常人由来の単核細胞はＭＣＰ-１を産生しないのに対し、火傷患者由来の単核細胞は顕著にＭＣＰ-１を産生した。グリチルリチンは火傷患者由来単核細胞のＭＣＰ-１産生を効果的に抑制した。
【実施例３】
【００４０】
グリチルリチンによるＡＩＤＳ患者由来末梢単核細胞からのＭＣＰ-１産生抑制
実験方法
ＡＩＤＳ患者より末梢血を採血し、Ficoll-Hypaqueを利用して末梢単球細胞を含む画分を分離した。９６穴の平底マイクロタイタープレートの各ウェルに、１Ｘ１０6細胞/ｍｌの濃度で単核細胞をまいた。培地は、実施例1で使用したものと同じである。細胞は、３７度、５％ＣＯ２濃度に維持されたインキュベータを使用して培養した。
各ウェルに、対照以外のウェルに、最終濃度が０．１乃至１００μｇ/ｍｌとなるようにグリチルリチンの溶液を添加して、２４時間培養した。
グリチルリチン添加後の培養上清を回収し、上清中のＭＣＰ-１の量をＥＬＩＳＡにより定量した。ＥＬＩＳＡは、市販されるキット（商品名：Human  ＭＣＰ-１BD  OptEIA  ELISAキット）を使用した。
【００４１】
結果
結果を図３に示す。この図からは、ＡＩＤＳ患者由来の単核細胞は、ＭＣＰ-１産生が亢進していることがわかる。また、グリチルリチンを０．１乃至１００μｇ/ｍｌの量の範囲でＡＩＤＳ患者由来の単核細胞に添加して培養すると、ＭＣＰ-１の産生が抑制されることがわかる。
【実施例４】
【００４２】
グリチルリチンの単純１型ヘルペスウイルス感染に対する効果
実験方法
正常マウス、及びＭＣＰ-１ノックアウトマウスに、体表面積の１５％、３度の火傷を負わせた１日後、１Ｘ１０1乃至１Ｘ１０6pfu/ｋｇ量のHSV-１を腹腔内感染させた。対照としては、正常マウスに同じ条件でＨＳＶ-１を感染させた。また、ＭＣＰ-１（50ｎｇ/マウス）は、感染の２時間前と１２時間及び２４時間後の正常マウスに皮下投与した。抗-ＭＣＰ-１単一抗体（１０μｇ/マウス）は、感染2時間前と１２及び２４時間後の火傷マウスに皮下投与した。
【００４３】
結果
結果を図４に示す。この図からは、火傷マウスやＭＣＰ-１投与マウスのHSV-１感染に対する感染感受性は、正常マウスの感染感受性と比較して、１００倍高いことがわかる。一方、抗-ＭＣＰ-１単一抗体やグリチルリチンを投与した火傷マウスの場合には、HSV-１感染に対する感染感受性は、正常マウスのレベルにまで回復したことがわかる。また、ＭＣＰ-１の産生をブロックしたノックアウトマウスにおいては、ＨＳＶ-１に対する感染感受性は、正常マウスと比べ変化は認められなかった。
【００４４】
本願発明において合成された化合物群は、以下のものである。
【００４５】
【化５】
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【００４６】
【表１】
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【産業上の利用可能性】
【００４７】
本発明により、ＭＣＰ-１の産生を抑制することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】この図は、ＩＬ-１０で刺激した末梢単核細胞のＭＣＰ-１産生へのグリチルリチンの影響を示すグラフである。
【図２】この図は、火傷患者由来の末梢単核細胞によるＭＣＰ-１産生に与える、グリチルリチンの抑制効果を示すグラフである。
【図３】この図は、ＡＩＤＳ患者由来の末梢血単核細胞による、ＭＣＰ-１産生に与えるグリチルリチンの抑制効果を示すグラフである。
【図４】この図は、グリチルリチン投与が、火傷マウスにおけるHSV-1感染感受性上昇に与える影響を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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