(57)【要約】【課題】酵母を用いて動物の免疫機能を向上させる解決策を提供する。【解決手段】この発明は鶏用飼料添加物に関する。この発明は、鶏の免疫機能を向上させ得る酵母細胞を含む生物学的組成物を作るための方法を提供する。この発明はまた、生物学的組成物を製造するための方法、および生物学的組成物を飼料添加物として用いる方法にも関する。この生物学的組成物は、鶏における感染症の発生率を低下させるため、または群れの健康を最適化するために使用可能である。この発明の方法は、酵母細胞が代謝的に活性となって動物の免疫系を刺激するのに強力となるように、周波数および場強度が規定された一連の電磁場の存在下で酵母細胞を培養するステップを含む。酵母細胞はまた、その性能を向上させるため、調節ステップも受けることもできる。【選択図】　　　　図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的組成物であって、
（ａ）　７７５０〜７７７０ＭＨｚの範囲の周波数および２２〜３２０ｍＶ／ｃｍの場強度を有する１つの電磁場または一連の電磁場において酵母細胞を培養することにより調製される複数の酵母細胞を含む第１の酵母細胞成分、
（ｂ）　６８１５〜６８３５ＭＨｚの範囲の周波数および２５〜３３０ｍＶ／ｃｍの場強度を有する１つの電磁場または一連の電磁場において酵母細胞を培養することにより調製される複数の酵母細胞を含む第２の酵母細胞成分、
（ｃ）　８１９０〜８２１０ＭＨｚの範囲の周波数および２８〜３５０ｍＶ／ｃｍの場強度を有する１つの電磁場または一連の電磁場において酵母細胞を培養することにより調製される複数の酵母細胞を含む第３の酵母細胞成分、および、
（ｄ）　８４００〜８４２０ＭＨｚの範囲の周波数および３０〜３８０ｍＶ／ｃｍの場強度を有する１つの電磁場または一連の電磁場において酵母細胞を培養することにより調製される複数の酵母細胞を含む第４の酵母細胞成分
のうちの少なくとも１つを含む、生物学的組成物。
【請求項２】
（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）の酵母細胞成分を含む、請求項１に記載の生物学的組成物。
【請求項３】
酵母細胞はサッカロミセス、カンジダおよびゲオトリクムの細胞である、請求項１または２に記載の生物学的組成物。
【請求項４】
酵母細胞はサッカロミセス・セレビジエ、カンジダ・ユチリスおよびゲオトリクム・カンジドゥムの細胞である、請求項１または２に記載の生物学的組成物。
【請求項５】
酵母細胞は乾燥される、請求項１または２に記載の生物学的組成物。
【請求項６】
請求項１または２の生物学的組成物および鶏飼料を含む、動物飼料組成物。
【請求項７】
生物学的組成物はゼオライト粉末を、ゼオライト粉末１ｇにつき酵母細胞が約１０９個の比率でさらに含む、請求項６に記載の動物飼料組成物。
【請求項８】
請求項１または２の生物学的組成物は動物飼料組成物の０．５重量％である、請求項７に記載の動物飼料組成物。
【請求項９】
生物学的組成物を調製するための方法であって、７７５０〜７７７０ＭＨｚの範囲の周波数および２２〜３２０ｍＶ／ｃｍの場強度を有する１つの電磁場または一連の電磁場において複数の酵母細胞を培養するステップを含む、生物学的組成物を調製するための方法。
【請求項１０】
前記方法は、複数の酵母細胞を、１つ以上の電磁場において、鶏の胃液、野生サンザシ果汁および野生ナツメ果汁を含む培養培地内で培養するステップをさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
生物学的組成物を調製するための方法であって、６８１５〜６８３５ＭＨｚの範囲の周波数および２５〜３３０ｍＶ／ｃｍの場強度を有する１つの電磁場または一連の電磁場において複数の酵母細胞を培養するステップを含む、生物学的組成物を調製するための方法。
【請求項１２】
前記方法は、複数の酵母細胞を、１つ以上の電磁場において、鶏の胃液、野生サンザシ果汁および野生ナツメ果汁を含む培養培地内で培養するステップをさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
生物学的組成物を調製するための方法であって、８１９０〜８２１０ＭＨｚの範囲の周波数および２８〜３５０ｍＶ／ｃｍの場強度を有する１つの電磁場または一連の電磁場において複数の酵母細胞を培養するステップを含む、生物学的組成物を調製するための方法。
【請求項１４】
前記方法は、複数の酵母細胞を、１つ以上の電磁場において、鶏の胃液、野生ナツメ果汁および野生サンザシ果汁を含む培養培地内で培養するステップをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
生物学的組成物を調製するための方法であって、８４００〜８４２０ＭＨｚの範囲の周波数および３０〜３８０ｍＶ／ｃｍの場強度を有する１つの電磁場または一連の電磁場において複数の酵母細胞を培養するステップを含む、生物学的組成物を調製するための方法。
【請求項１６】
前記方法は、複数の酵母細胞を、１つ以上の電磁場において、鶏の胃液、野生サンザシ果汁および野生ナツメ果汁を含む培養培地内で培養するステップをさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
動物飼料組成物を製造する方法であって、
（ａ）　請求項１の酵母細胞成分の１つ以上を調製するステップと、
（ｂ）　（ａ）の酵母細胞成分を乾燥させるステップと、
（ｃ）　乾燥した酵母細胞をゼオライト粉末および鶏飼料と混合するステップとを含む、動物飼料組成物を製造する方法。
【請求項１８】
乾燥させるステップは、（ａ）酵母細胞が休止状態となるよう、６５℃を超えない温度で或る期間の間乾燥させるステップと、（ｂ）７０℃を超えない温度で或る期間の間乾燥させて含水率を５％未満に低下させるステップとを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
鶏における感染症の発生率を低下させるための方法であって、
（ａ）　７７５０〜７７７０ＭＨｚの範囲の周波数および２２〜３２０ｍＶ／ｃｍの場強度を有する１つの電磁場または一連の電磁場において酵母細胞を培養することにより調製される複数の酵母細胞を含む第１の酵母細胞成分、
（ｂ）　６８１５〜６８３５ＭＨｚの範囲の周波数および２５〜３３０ｍＶ／ｃｍの場強度を有する１つの電磁場または一連の電磁場において酵母細胞を培養することにより調製される複数の酵母細胞を含む第２の酵母細胞成分、
（ｃ）　８１９０〜８２１０ＭＨｚの範囲の周波数および２８〜３５０ｍＶ／ｃｍの場強度を有する１つの電磁場または一連の電磁場において酵母細胞を培養することにより調製される複数の酵母細胞を含む第３の酵母細胞成分、および、
（ｄ）　８４００〜８４２０ＭＨｚの範囲の周波数および３０〜３８０ｍＶ／ｃｍの場強度を有する１つの電磁場または一連の電磁場において酵母細胞を培養することにより調製される複数の酵母細胞を含む第４の酵母細胞成分のうちの少なくとも１つを含む動物飼料組成物を、或る期間の間鶏に給餌するステップを含む、感染症の発生率を低下させるための方法。
【請求項２０】
動物飼料組成物は（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）の酵母細胞成分およびゼオライト粉末を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記酵母細胞はサッカロミセス・セレビジエ、カンジダ・ユチリスおよびゲオトリクム・カンジドゥムの細胞である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
酵母細胞成分およびゼオライト粉末は、動物飼料組成物の０．５重量％を構成する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
第１の酵母細胞成分を調製するのに用いられる複数の酵母細胞はゲオトリクム・カンジドゥム鎖ＡＳ２．６１６の細胞を含み、第２の酵母細胞成分を調製するのに用いられる複数の酵母細胞はカンジダ・ユチリス・ヘネベルグ・ロッデル・エット・クレガー・バン・ライＡＳ２．１１８０の細胞を含み、第３の酵母細胞成分を調製するのに用いられる複数の酵母細胞はサッカロミセス・セレビジエＡＳ２．１６の細胞を含み、第４の酵母細胞成分を調製するのに用いられる複数の酵母細胞はゲオトリクム・カンジドゥム鎖ＡＳ２．３６１の細胞を含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項２４】
第１の酵母細胞成分を調製するのに用いられる複数の酵母細胞はゲオトリクム・カンジドゥム鎖ＡＳ２．６１６の細胞を含み、第２の酵母細胞成分を調製するのに用いられる複数の酵母細胞はカンジダ・ユチリス・ヘネベルグ・ロッデル・エット・クレガー・バン・ライＡＳ２．１１８０の細胞を含み、第３の酵母細胞成分を調製するのに用いられる複数の酵母細胞はサッカロミセス・セレビジエＡＳ２．１６の細胞を含み、第４の酵母細胞成分を調製するのに用いられる複数の酵母細胞はゲオトリクム・カンジドゥム鎖ＡＳ２．３６１の細胞を含む、請求項６に記載の動物飼料組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の分野】
この発明は、動物の免疫機能を向上させ得る酵母細胞を含む生物学的組成物に関する。この発明はまた、その生物学的組成物を製造するための方法、およびその生物学的組成物を動物飼料添加物として用いる方法にも関する。
【０００２】
【発明の背景】
抗生物質は１９４０年代から動物飼料に添加されてきた。２０００年には、米国で販売された抗生物質の１／３以上−年間約１８００万ポンド−が畜産業で使用されるということが報告された。それらは、病気の動物を治療するため、閉じ込められた納屋または小屋に収容された他の動物を感染から保護するため、および動物をより早く成長させるために使用される。量の点では、大抵の抗生物質は初めの２つの理由のために使用される。薬物の６．１パーセントのみが成長促進に用いられる。しかしながら、投与される動物の数の点では、成長促進の役割は多大である。それはなぜなら、農業従事者が抗生物質を少量ではあるが日常的な投与量で群れ全体に与えるためである。抗生物質の規則的な低投与量は、家畜を健康に保つのに役立つだけでなく、栄養素の吸収を向上させ、それは動物が少ない飼料でより早く育つのを助け、そのため特に集約農業経営において利益を増大させる。米国の９２００万匹の豚の７５パーセントが、抗生物質が添加された飼料を日常的に摂取していると推定されている。牛の約６パーセント、鶏の２５パーセント、および七面鳥の半分についても同様である。
【０００３】
動物によって代謝されないものを含む過度の抗生物質および化学物質は体内に留まるかまたは排泄され得る、ということは公知である。第１の場合、それは人間によって消費されるであろう肉（および牝牛または山羊の場合には乳）内に蓄積するかも知れない。このため、これらの抗生物質および化学物質が人間の食品を汚染する可能性がある。第２に、そしてより重要なことに、それは微生物を抗生物質にさらし、微生物の抗生物質耐性菌が発生することを可能にする。排泄される場合、これらの抗生物質および化学物質は自然環境に放出され、そこでそれらは土壌微生物と接触し得る。一般に使用される抗生物質は、抗生物質に対する耐性の発生、および人間において感染を引起す微生物を含む微生物へのそのような耐性の転移のため、或る期間にわたってさまざまな微生物に対し効果が弱まっていくあろうということが仮定されている。
【０００４】
家畜に広く使用されている抗生物質が人間の感染症、特に食物媒介病原体によって引起されるものを治療する重要な抗生物質の力を減少させていることを示唆する、高まりつつある証拠がある。低レベルの抗生物質で処置されている家畜は薬物耐性形態の細菌を発生させている。一例では、１９９０年代になってやっとシナーシド（Ｓｙｎｅｒｃｉｄ）の人間への使用が承認されたものの、バージニアマイシンと呼ばれる密接に関係した薬物は１９７４年から家畜に使用されている。実際、１９９０年以降、人間に感染を引起す動物原性感染症病原体の増殖薬物耐性菌の発生が多くの先進国で劇的に増加している。特に注目すべきはネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）ＤＴ１０４のＭＲ菌の流行拡大であり、それは現在、ほぼ全世界的に分布するようである。ＤＴ１０４菌の中で、耐性範囲の増加はかなりの懸念事項である。世界の多くの地域で、シプロフロキサシンへの感受性低下の発生率が増加している。カンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒｓ）種については、シプロフロキサシン耐性有機体の発生率は同様に増加しており、そのような分離株の報告が世界中の多くの国から寄せられている。スレルフォール（Ｔｈｒｅｌｌｆａｌｌ）Ｅ．Ｊ．他、Ａｃｔａ　Ｖｅｔ　Ｓｃａｎｄ　Ｓｕｐｐｌ　２０００年、９３：６３−８；ウェーゲナー（Ｗｅｇｅｎｅｒ）Ｈ．Ｃ．他、Ｎ　Ｅｎｇｌ　Ｊ　Ｍｅｄ．１９９９年５月２０日、３４０（２０）：１５２５−３２；スミス（Ｓｍｉｔｈ）Ｋ．Ｅ．他、Ｎ　Ｅｎｇｌ　Ｊ　Ｍｅｄ．１９９９年５月２０日、３４０（２０）：１５８１−２；ウェーゲナー　Ｈ．Ｃ．他、Ａｃｔａ　Ｖｅｔ　Ｓｃａｎｄ　Ｓｕｐｐｌ．　１９９９年、９２：５１−７を参照されたい。
【０００５】
人間の病気を引起す微生物における薬物耐性の発生に対する懸念のため、米国および欧州連合の規制機関は、或る抗生物質を動物飼料に成長促進物質として使用することを禁止し、または禁止を提案してきた。弁護のため、農業従事者および製薬製造業者は、抗生物質の使用を削減することは罹患率および死亡率の増加につながり、動物が理想的な屠殺体重になるまでにかかる時間量が増加することによって肉がより高価になると論じた。抗生物質は動物がより早くより太るのに役立つ。なぜならそれらは病気と戦うエネルギを浪費しないためである。健康に最大の危険を呈し得るのは成長促進物質に対する禁止であるということが論じられてきた。それらの保護なしでは、動物はより深刻な病気に直面し得るであろう。その結果、獣医師は高投与量の治療用抗生物質に頼らざるを得なくなるであろう。たとえば、スウェーデンで抗生物質の使用が禁止された翌年に、５万匹もの豚が一種の下痢で死亡した。
【０００６】
畜産業において抗生物質を予防薬として使用することが禁止または削減されている一方で、家畜における感染症の発生率を低下させる代替的な手段に対する緊急の必要性が出現している。この発明は、酵母を用いて動物の免疫機能を向上させる解決策を提供する。
【０００７】
真菌細胞または真菌発酵生成物を動物飼料に含めることは、時折用いられてきた。一般に共生または直接給餌微生物として言及される或る細菌、酵母および黴調製物が、経口投与されるかまたは動物飼料に添加されて、さまざまな利点をもたらす。しかしながら、そのような調製物の作用のメカニズムは正しく理解されていないが、それらは動物の消化管微小植物相／微生物相を変えることによって作用すると考えられており、それにより腸管内壁の健康を向上させ、栄養吸収の向上を可能にする。反芻動物の場合、調製物は第１胃での発酵をよくするかも知れず、それはガスの浪費的な発生をもたらす。
【０００８】
動物飼料における真菌細胞および生成物の使用の例としては、ミラーパブリシングカンパニー（Ｍｉｌｌｅｒ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ）（ミネソタ（Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）州ミネトンカ（Ｍｉｎｎｅｔｏｎｋａ））発行の「飼料添加物要約年報（ａｎｎｕａｌ　Ｆｅｅｄ　Ａｄｄｉｔｉｖｅ　Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ）」、または以下の特許文献を参照されたい。
【０００９】
米国特許第３，９０３，３０７号は、カンジダ・ユチリス（Ｃａｎｄｉｄａ　ｕｔｉｌｉｓ）およびトリコデルマ・ベリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｖｅｒｉｄｅ）などの酵母による廃糖蜜またはバガスの発酵に基づいた動物飼料を作るためのプロセスを開示している。
【００１０】
米国特許第４，０５５，６６７号は、水性アルコール媒体における使用済醸造用酵母のコロイド状の混合物を含む液体動物飼料補給食品を開示している。
【００１１】
米国特許第４，５８２，７０８号は、発酵活動を有する生酵母細胞（サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）種）と、粉砕された粉、粉砕された豆またはそれらの混合物を含むテキスチャライジング成分と、ミネラル混合物と、液体結合剤と、ビタミン混合物と、粉砕されたモンモリロナイトとを含む動物飼料補給食品を開示している。
【００１２】
米国特許第５，６２４，６８６号は、或る細菌または酵母種（サッカロミセス・セレビジエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、カンジダ・ユチリスなど）を培養し、細胞の代謝物質が動物に効率よく利用可能となるよう微生物細胞を破壊することによって調製される動物飼料添加物を開示している。
【００１３】
米国特許第６，２１４，３３７号は、さまざまな酵母種（サッカロミセス・セレビジエ、カンジダ・ユチリスなど）の細胞壁に由来する酵母グルカンを含む動物飼料を開示している。
【００１４】
ここにおける文献の引用は、ここに引用された文献のいずれもが関連先行技術であると容認するものとして、または引用された文献がこの出願の特許請求の範囲の特許性に対し考慮される材料であると容認するものとして意図されてはいない。これらの文献の日付に関する供述または内容に関する表現はすべて、出願人が利用可能な情報に基づいており、これらの文献の日付または内容の正確さに関するいかなる容認も構成しない。
【００１５】
【特許文献１】
米国特許第３，９０３，３０７号明細書
【００１６】
【特許文献２】
米国特許第４，０５５，６６７号明細書
【００１７】
【特許文献３】
米国特許第４，５８２，７０８号明細書
【００１８】
【特許文献４】
米国特許第５，６２４，６８６号明細書
【００１９】
【特許文献５】
米国特許第６，２１４，３３７号明細書
【００２０】
【発明の概要】
この発明は、たとえば鶏などの家禽における感染症の発生率を低下させるために動物飼料に添加可能である生物学的組成物に関する。
【００２１】
一実施形態では、この発明は、摂取された場合に鶏などの反芻動物の免疫機能を向上させ得る複数の生酵母細胞を含む生物学的組成物を提供する。この生物学的組成物は、鶏における感染症の発生率を低下させるため、または群れの健康を最適化するために使用可能である。
【００２２】
別の実施形態では、この発明は生物学的組成物を作る方法を提供する。特に、この発明の方法は、酵母細胞が代謝的に活性となって動物の免疫系を刺激するのに強力となるように、周波数および場強度が規定された一連の電磁場の存在下で酵母細胞を培養するステップを含む。酵母細胞の最大４つの異なる成分を用いて生物学的組成物が形成できる。酵母細胞はまた、その性能を向上させるため、調節ステップも受けることもできる。調節ステップは、動物の胃液、野生サンザシ果汁およびナツメ果汁を含む培養培地内で酵母細胞を培養するステップを含む。酵母細胞を活性化条件下で培養するステップと、この発明のさまざまな酵母細胞培養物を混合するステップと、次に続く酵母細胞を乾燥させるステップと、最終生成物を梱包するステップとを含む生物学的組成物を製造するための方法が包含されている。好ましい実施形態では、開始酵母細胞は商業的に公に利用可能および／または入手可能であり、サッカロミセス・セレビジエなどが挙げられるがこれに限定されない。
【００２３】
この発明の生物学的組成物は、動物に直接給餌されるかまたは通常の動物飼料に取込まれる添加物として使用することが可能である。この発明の活性化した酵母細胞およびゼオライト粉末などの材料を含む動物飼料組成物が、この発明によって包含されている。
【００２４】
［詳細な説明］
この発明は、動物の免疫機能を向上させ、および／または感染症の発生率を低下させることが可能な生物学的組成物に関する。この発明は、生物学的組成物を製造するための方法、および生物学的組成物を動物飼料添加物として使用するための方法を提供する。
【００２５】
この発明の生物学的組成物は酵母を含む。飼料の成分としての酵母の従来の使用とは異なり、この発明の酵母細胞は動物用の栄養素の主要源ではない。この発明の酵母細胞は、現在日常的に家畜飼料に添加されている抗生物質を置き換えるまたは削減させる補給食品として役割を果たす。経口投与される場合または動物によって飼料と共に摂取される場合、この酵母細胞は生きている。動物の胃腸管内にある間、酵母細胞は免疫系を刺激して動物の免疫機能を向上させることが可能であり、それにより感染症の発生率を低下させる。この発明の生物学的組成物の使用は、畜産業において動物の健康を維持するコスト全体を下げ、飼料における抗生物質の最小限の使用または排除を実行可能にすることができる。
【００２６】
以下の用語は当該技術分野において良く定義された意味を有すると考えられるが、用語をここで用いられるように定義し、この発明の説明を容易にするため、以下の事項を述べる。
【００２７】
ここで用いられているように、「飼料」という用語は、動物に栄養を与えるため、および、生まれたばかりの動物と若く成長過程にある動物とを含む動物の平常のまたは加速された成長を維持するために使用される、液体または固体のあらゆる種類の材料に幅広く言及する。好ましくは、飼料は鶏の飼料である。
【００２８】
ここで用いられるような「動物」という用語は、家畜の鳥、家禽および特に鶏に言及し、卵、肉および装飾用に飼育される全品種の鶏を含む。
【００２９】
ここで用いられるような「免疫機能」という用語は、動物の特定のおよび特定されない免疫反応を幅広く包含し、体液性および細胞媒介性の防護メカニズムの双方を含む。動物の免疫機能は、動物が細菌、ウイルス、真菌、原虫類、蠕虫および他の寄生虫などの病原体による感染から生き残るおよび／または回復することができるようにする。動物の免疫機能はまた、感染、特に動物が病原体に初めてさらされた後での同じ病原体による将来の感染を防止することもできる。多くの種類の免疫細胞が免疫機能の提供に関わっており、リンパ球のさまざまなサブセット（Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）、異なる種類の白血球（マクロファージ、好中球、好酸球、好塩基球）、抗原提示細胞（樹状細胞、内皮細胞）および免疫活動を有する専門器官ならびに組織（骨髄、リンパ節、胸腺、嚢、パイエル板）に見られる細胞を含む。家禽の免疫系の詳細は、Ｗ．Ｔ．ウェーバー（Ｗｅｂｅｒ）による「鳥類免疫学（Ａｖｉａｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」、ジョン・ワイリー＆サンズ（ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ）、１９９０年１１月に記載されており、ここにその全体を引用により援用する。
【００３０】
一実施形態では、この発明は、少なくとも１つの酵母細胞成分を含む生物学的組成物を提供する。各酵母細胞成分は、酵母細胞が動物の免疫機能を向上可能であるよう、特定の一組の条件下で培養された生酵母細胞の集団を含む。好ましい実施形態では、この発明の生物学的組成物は最大４つの酵母細胞成分を含む。
【００３１】
この発明によれば、或る特定の培養条件下で、酵母は、酵母を摂取した動物の免疫機能を刺激し向上させるのに有効となるよう、代謝的に活性にされ得る。発明者は、いかなる理論または機構に縛られることなく、その培養条件が、酵母細胞が動物の免疫系を刺激するのに非常に強力となるよう、酵母細胞内の遺伝子または１組の遺伝子の発現を活性化させるおよび／または増幅させると考えている。酵母細胞が以下に記載する条件の下で培養された後で、或る酵母遺伝子生成物と動物の免疫系の要素との間の相互作用が、高レベルのこれらの酵母遺伝子生成物によって非常に高められる、ということが想像される。これらの相互作用は、免疫細胞を循環させるだけでなく、胃腸管、リンパ節の内側を覆う免疫細胞に関与すると考えられている。これらの相互作用の結果、感染への反応性および感染からの回復、病気への耐性などの動物の免疫機能が向上する。動物は、細菌、ウイルス、真菌、原虫類、蠕虫などによって引起されるがそれらに限定されない寄生虫症を含む多くの種類の感染症から保護される。生物学的組成物を使用する利点を、感染症への耐性または感染症からの急速な回復を示す動物から得られた実験結果によって実証する。
【００３２】
一実施形態では、この発明の生物学的組成物は動物に直接給餌され得る。別の実施形態では、生物学的組成物は飼料に添加可能である。当業者には公知であるように、多くの方法および用具を用いてこの発明の生物学的組成物を飼料と混合してもよい。特定の一実施形態では、この発明の酵母の培養液の混合物は、動物に給餌する直前に飼料に直接添加される。酵母の乾燥粉末も、動物に給餌する直前に飼料に直接添加可能である。この発明のさらに別の実施形態では、酵母細胞は、酵母細胞が物理的に取り込まれる飼料の生の構成要素と混合される。生物学的組成物は、自動化されてもよい任意の機械化された手段によって飼料に加えられ、および／または混合されてもよい。
【００３３】
使用される生物学的組成物の量は、給餌規則および飼料の種類に一部依存し、実験的に判断可能である。たとえば、動物飼料への生物学的組成物の有用な比率は、乾燥重量で０．１％〜１％、好ましくは０．３〜０．８％、最も好ましくは約０．５％である。必要ではないが、この発明の生物学的組成物はまた、ビタミン、ミネラルおよびワクチンなどが挙げられるがこれらに限定されない他の種類の補給食品とともに、またはそれらと交代で使用することもできる。
【００３４】
以下の第１節および第２節において、この発明の４つの酵母細胞成分およびそれらの調製方法を説明する。第３節は、４つの酵母細胞成分のうちの少なくとも１つを含むこの発明の生物学的組成物の製造を説明する。
【００３５】
１．酵母細胞培養物の調製
この発明は、酵母細胞を摂取した動物の免疫機能を向上させ得る酵母細胞を提供する。最大４つの異なる酵母細胞成分を組合せて生物学的組成物を作ることができる。
【００３６】
生物学的組成物の酵母細胞成分は、複数の酵母細胞を、適切な培養培地内で、１つの交互電磁場または多数の一連の交互電磁場の存在下で或る時間にわたって培養することによって生成される。この培養プロセスは、酵母胞子が発芽し、酵母細胞が成長して分裂するようにし、バッチプロセスまたは連続プロセスとして実行可能である。ここで用いられるように、「交互電磁場」、「電磁場」または「ＥＭ場」という用語は同義語である。この発明において有用な電磁場は、当該技術分野において周知のさまざまな手段によって発生可能である。例示的なセットアップの概略図を図１にそれぞれ示す。所望の周波数および所望の場強度の電磁場が、電磁波、好ましくは正弦波を好ましくは１５００ＭＨｚ−１５０００ＭＨｚの周波数範囲で発生可能な１つ以上の信号発生器を含む電磁波源（３）によって発生される。そのような信号発生器は当該技術分野で周知である。より狭い周波数範囲で信号を発生可能な信号発生器も使用できる。望ましい場合、信号増幅器も使用して出力信号を増大させ、したがってＥＭ場の強度を高めることもできる。
【００３７】
電磁場は、電磁波源に接続された信号エミッタの近傍に酵母細胞を置くことを含むさまざまな手段によって、培養物に印加可能である。一実施形態では、電磁場は、酵母細胞の培養物（１）内に浸漬された電極の形をした信号エミッタによって印加される。好ましい一実施形態では、電極のうちの一方は非導電性容器（２）の底に置かれた金属板であり、他方の電極は、電磁場のエネルギが培養物内で均一に分布され得るように容器内部に構成された複数のワイヤまたはチューブを含む。縦型の培養容器では、ワイヤまたはチューブの先端は容器の底から３〜３０ｃｍ（つまり容器の高さの底から約２〜１０％）内に置かれる。使用される電極ワイヤの数は、培養物の体積およびワイヤの直径の双方に依存する。たとえば、体積が１０リットルまたはそれ未満の培養物については、直径が０．５〜２．０ｍｍの２つまたは３つの電極ワイヤが使用できる。培養体積が１０リットル〜１００リットルの培養物については、電極ワイヤまたはチューブは３．０〜５．０ｍｍの直径を有し得る。１００リットル〜１０００リットルの培養体積については、電極ワイヤまたはチューブは６．０〜１５．０ｍｍの直径を有し得る。１０００リットルよりも大きい体積を有する培養物については、電極ワイヤまたはチューブは２０．０〜２５．０ｍｍの直径を有し得る。
【００３８】
さまざまな実施形態では、サッカロミセス、カンジダ、クレブロテシウム（Ｃｒｅｂｒｏｔｈｅｃｉｕｍ）、ゲオトリクム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ）、ハンゼヌラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）、クロエッケラ（Ｋｌｏｅｃｋｅｒａ）、リポミセス（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ）、ピチア（Ｐｉｃｈｉａ）、ロドスポリジウム（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、ロドトルラ・トルロプシス（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ）、トリコスポロン（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ）およびウィッカーハミア（Ｗｉｃｋｅｒｈａｍｉａ）の属の酵母がこの発明で使用可能である。
【００３９】
酵母菌の非限定的な例は以下を含む。サッカロミセス・セレビジエ・ハンセン（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　Ｈａｎｓｅｎ）、ＡＣＣＣ２０３４、ＡＣＣＣ２０３５、ＡＣＣＣ２０３６、ＡＣＣＣ２０３７、ＡＣＣＣ２０３８、ＡＣＣＣ２０３９、ＡＣＣＣ２０４０、ＡＣＣＣ２０４１、ＡＣＣＣ２０４２、ＡＳ２．１、ＡＳ２．４、ＡＳ２．１１、ＡＳ２．１４、ＡＳ２．１６、ＡＳ２．５６、ＡＳ２．６９、ＡＳ２．７０、ＡＳ２．９３、ＡＳ２．９８、ＡＳ２．１０１、ＡＳ２．１０９、ＡＳ２．１１０、ＡＳ２．１１２、ＡＳ２．１３９、ＡＳ２．１７３、ＡＳ２．１７４、ＡＳ２．１８２、ＡＳ２．１９６、ＡＳ２．２４２、ＡＳ２．３３６、ＡＳ２．３４６、ＡＳ２．３６９、ＡＳ２．３７４、ＡＳ２．３７５、ＡＳ２．３７９、ＡＳ２．３８０、ＡＳ２．３８２、ＡＳ２．３９０、ＡＳ２．３９３、ＡＳ２．３９５、ＡＳ２．３９６、ＡＳ２．３９７、ＡＳ２．３９８、ＡＳ２．３９９、ＡＳ２．４００、ＡＳ２．４０６、ＡＳ２．４０８、ＡＳ２．４０９、ＡＳ２．４１３、ＡＳ２．４１４、ＡＳ２．４１５、ＡＳ２．４１６、ＡＳ２．４２２、ＡＳ２．４２３、ＡＳ２．４３０、ＡＳ２．４３１、ＡＳ２．４３２、ＡＳ２．４５１、ＡＳ２．４５２、ＡＳ２．４５３、ＡＳ２．４５８、ＡＳ２．４６０、ＡＳ２．４６３、ＡＳ２．４６７、ＡＳ２．４８６、ＡＳ２．５０１、ＡＳ２．５０２、ＡＳ２．５０３、ＡＳ２．５０４、ＡＳ２．５１６、ＡＳ２．５３５、ＡＳ２．５３６、ＡＳ２．５５８、ＡＳ２．５６０、ＡＳ２．５６１、ＡＳ２．５６２、ＡＳ２．５７６、ＡＳ２．５９３、ＡＳ２．５９４、ＡＳ２．６１４、ＡＳ２．６２０、ＡＳ２．６２８、ＡＳ２．６３１、ＡＳ２．６６６、ＡＳ２．９８２、ＡＳ２．１１９０、ＡＳ２．１３６４、ＡＳ２．１３９６、ＩＦＦＩ１００１、ＩＦＦＩ１００２、ＩＦＦＩ１００５、ＩＦＦＩ１００６、ＩＦＦＩ１００８、ＩＦＦＩ１００９、ＩＦＦＩ１０１０、ＩＦＦＩ１０１２、ＩＦＦＩ１０２１、ＩＦＦＩ１０２７、ＩＦＦＩ１０３７、ＩＦＦＩ１０４２、ＩＦＦＩ１０４３、ＩＦＦＩ１０４５、ＩＦＦＩ１０４８、ＩＦＦＩ１０４９、ＩＦＦＩ１０５０、ＩＦＦＩ１０５２、ＩＦＦＩ１０５９、ＩＦＦＩ１０６０、ＩＦＦＩ１０６３、ＩＦＦＩ１２０２、ＩＦＦＩ１２０３、ＩＦＦＩ１２０６、ＩＦＦＩ１２０９、ＩＦＦＩ１２１０、ＩＦＦＩ１２１１、ＩＦＦＩ１２１２、ＩＦＦＩ１２１３、ＩＦＦＩ１２１５、ＩＦＦＩ１２２０、ＩＦＦＩ１２２１、ＩＦＦＩ１２２４、ＩＦＦＩ１２４７、ＩＦＦＩ１２４８、ＩＦＦＩ１２５１、ＩＦＦＩ１２７０、ＩＦＦＩ１２７７、ＩＦＦＩ１２８７、ＩＦＦＩ１２８９、ＩＦＦＩ１２９０、ＩＦＦＩ１２９１、ＩＦＦＩ１２９２、ＩＦＦＩ１２９３、ＩＦＦＩ１２９７、ＩＦＦＩ１３００、ＩＦＦＩ１３０１、ＩＦＦＩ１３０２、ＩＦＦＩ１３０７、ＩＦＦＩ１３０８、ＩＦＦＩ１３０９、ＩＦＦＩ１３１０、ＩＦＦＩ１３１１、ＩＦＦＩ１３３１、ＩＦＦＩ１３３５、ＩＦＦＩ１３３６、ＩＦＦＩ１３３７、ＩＦＦＩ１３３８、ＩＦＦＩ１３３９、ＩＦＦＩ１３４０、ＩＦＦＩ１３４５、ＩＦＦＩ１３４８、ＩＦＦＩ１３９６、ＩＦＦＩ１３９７、ＩＦＦＩ１３９９、ＩＦＦＩ１４１１、ＩＦＦＩ１４１３；サッカロミセス・セレビジエ・ハンセン変種エリプソイデウス（ハンセン）デッカー（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　Ｈａｎｓｅｎ　Ｖａｒ．　ｅｌｌｉｐｓｏｉｄｅｕｓ　（Ｈａｎｓｅｎ）　Ｄｅｋｋｅｒ）、ＡＣＣＣ２０４３、ＡＳ２．２、ＡＳ２．３、ＡＳ２．８、ＡＳ２．５３、ＡＳ２．１６３、ＡＳ２．１６８、ＡＳ２．４８３、ＡＳ２．５４１、ＡＳ２．５５９、ＡＳ２．６０６、ＡＳ２．６０７、ＡＳ２．６１１、ＡＳ２．６１２；サッカロミセス・ケバリエリ・ギラモンド（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｈｅｖａｌｉｅｒｉ　Ｇｕｉｌｌｅｒｍｏｎｄ）、ＡＳ２．１３１、ＡＳ２．２１３；サッカロミセス・デルブリュッキー（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ＡＳ２．２８５；サッカロミセス・デルブリュッキー・リンドナー変種モンゴリクス・ロッデル・エット・バン・ライ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　Ｌｉｎｄｎｅｒ　ｖａｒ．　ｍｏｎｇｏｌｉｃｕｓ　Ｌｏｄｄｅｒ　ｅｔ　ｖａｎ　Ｒｉｊ）、ＡＳ２．２０９、ＡＳ２．１１５７；サッカロミセス・イグジギュアス・ハンセン（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｅｘｉｇｕｏｕｓ　Ｈａｎｓｅｎ）、ＡＳ２．３４９、ＡＳ２．１１５８；サッカロミセス・フェルメンタチ（サイトウ）ロッデル・エット・バン・ライ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉ　（Ｓａｉｔｏ）　Ｌｏｄｄｅｒ　ｅｔ　ｖａｎ　Ｒｉｊ）、ＡＳ２．２８６、ＡＳ２．３４３；サッカロミセス・ロゴス・バン・ラール・エット・デナムール・エクス・ヨルゲンセン（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｌｏｇｏｓ　ｖａｎ　ｌａｅｒ　ｅｔ　Ｄｅｎａｍｕｒ　ｅｘ　Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ）、ＡＳ２．１５６、ＡＳ２．３２７、ＡＳ２．３３５；サッカロミセス・メリス・ロッデル・エット・クレガー・バン・ライ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｍｅｌｌｉｓ　Ｌｏｄｄｅｒ　ｅｔ　Ｋｒｅｇｅｒ　Ｖａｎ　Ｒｉｊ）、ＡＳ２．１９５；サッカロミセス・ミクロエリプソイデス・オステルワルダー（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｍｉｃｒｏｅｌｌｉｐｓｏｉｄｅｓ　Ｏｓｔｅｒｗａｌｄｅｒ）、ＡＳ２．６９９；サッカロミセス・オビフォルミス・オステルワルダー（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｏｖｉｆｏｒｍｉｓ　Ｏｓｔｅｒｗａｌｄｅｒ）、ＡＳ２．１００；サッカロミセス・ロゼイ（ギラモンド）ロッデル・エット・クレガー・バン・ライ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｒｏｓｅｉ　（Ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄ）　Ｌｏｄｄｅｒ　ｅｔ　ｋｒｅｇｅｒ　ｖａｎ　Ｒｉｊ）、ＡＳ２．２８７；サッカロミセス・ルーキシー・ブートロー（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｒｏｕｘｉｉ　Ｂｏｕｔｒｏｕｘ）、ＡＳ２．１７８、ＡＳ２．１８０、ＡＳ２．３７０、ＡＳ２．３７１；サッカロミセス・サケ・ヤベ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｓａｋｅ　Ｙａｂｅ）、ＡＣＣＣ２０４５；カンジダ・アルボレア（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｒｂｏｒｅａ）、ＡＳ２．５６６；カンジダ・クルセイ（カステラーニ）バークホウト（Ｃａｎｄｉｄａ　Ｋｒｕｓｅｉ　（Ｃａｓｔｅｌｌａｎｉ）　Ｂｅｒｋｈｏｕｔ）、ＡＳ２．１０４５；カンジダ・ランビカ（リンドナー・エット・ジュヌー）変種ユーデン・エット・バックリー（Ｃａｎｄｉｄａ　ｌａｍｂｉｃａ　（Ｌｉｎｄｎｅｒ　ｅｔ　Ｇｅｎｏｕｄ）　ｖａｎ．　Ｕｄｅｎ　ｅｔ　Ｂｕｃｋｌｅｙ）、ＡＳ２．１１８２；カンジダ・リポリチカ（ハリソン）ディデンズ・エット・ロッデル（Ｃａｎｄｉｄａ　ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ　（Ｈａｒｒｉｓｏｎ）　Ｄｉｄｄｅｎｓ　ｅｔ　Ｌｏｄｄｅｒ）、ＡＳ２．１２０７、ＡＳ２．１２１６、ＡＳ２．１２２０、ＡＳ２．１３７９、ＡＳ２．１３９８、ＡＳ２．１３９９、ＡＳ２．１４００；カンジダ・パラプシロシス（アッシュフォード）ランゲロン・エット・タリス（Ｃａｎｄｉｄａ　ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ　（Ａｓｈｆｏｒｄ）　Ｌａｎｇｅｒｏｎ　ｅｔ　Ｔａｌｉｃｅ）、ＡＳ２．５９０；カンジダ・パラプシロシス（アッシュフォード）エット・タリス変種インターメディア・バン・ライ・エット・ベロナ（Ｃａｎｄｉｄａ　ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ　（Ａｓｈｆｏｒｄ）　ｅｔ　Ｔａｌｉｃｅ　Ｖａｒ．　ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ　Ｖａｎ　Ｒｉｊ　ｅｔ　Ｖｅｒｏｎａ）、ＡＳ２．４９１；カンジダ・プルチェリマン（リンドナー）ビンディッシュ（Ｃａｎｄｉｄａ　ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａｎ　（Ｌｉｎｄｎｅｒ）　Ｗｉｎｄｉｓｃｈ）、ＡＳ２．４９２；カンジダ・ルゴウサ（アンダーソン）ディデンズ・エット・ロッデル（Ｃａｎｄｉｄａ　ｒｕｇｏｕｓａ　（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）Ｄｉｄｄｅｎｓ　ｅｔ　Ｌｏｄｄｅｅｒ）、ＡＳ２．５１１、ＡＳ２．１３６７、ＡＳ２．１３６９、ＡＳ２．１３７２、ＡＳ２．１３７３、ＡＳ２．１３７７、ＡＳ２．１３７８、ＡＳ２．１３８４；カンジダ・トロピカリス（カステラーニ）バークアウト（Ｃａｎｄｉｄａ　ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ　（Ｃａｓｔｅｌｌａｎｉ）　Ｂｅｒｋｏｕｔ）、ＡＣＣＣ２００４、ＡＣＣＣ２００５、ＡＣＣＣ２００６、ＡＳ２．１６４、ＡＳ２．４０２、ＡＳ２．５６４、ＡＳ２．５６５、ＡＳ２．５６７、ＡＳ２．５６８、ＡＳ２．６１７、ＡＳ２．１３８７；カンジダ・ユチリス・ヘネベルグ・ロッデル・エット・クレガー・バン・ライ（Ｃａｎｄｉｄａ　ｕｔｉｌｉｓ　Ｈｅｎｎｅｂｅｒｇ　Ｌｏｄｄｅｒ　ｅｔ　Ｋｒｅｇｅｒ　Ｖａｎ　Ｒｉｊ）、ＡＳ２．１２０、ＡＳ２．２８１、ＡＳ２．１１８０；クレブロテシウム・アッシュビー（ギラモンド）ローテイン（Ｃｒｅｂｒｏｔｈｅｃｉｕｍ　ａｓｈｂｙｉｉ　（Ｇｕｉｌｌｅｒｍｏｎｄ）　Ｒｏｕｔｅｉｎ）、ＡＳ２．４８１、ＡＳ２．４８２、ＡＳ２．１１９７；ゲオトリクム・カンジドゥム鎖（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ　ｃａｎｄｉｄｕｍ　Ｌｉｎｋ）、ＡＣＣＣ２０１６、ＡＳ２．３６１、ＡＳ２．４９８、ＡＳ２．６１６、ＡＳ２．１０３５、ＡＳ２．１０６２、ＡＳ２．１０８０、ＡＳ２．１１３２、ＡＳ２．１１７５、ＡＳ２．１１８３；ハンゼヌラ・アノマラ（ハンセン）Ｈ・エット・Ｐ・シドー（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　ａｎｏｍａｌａ　（Ｈａｎｓｅｎ）　Ｈ　ｅｔ　Ｐ　ｓｙｄｏｗ）、ＡＣＣＣ２０１８、ＡＳ２．２９４、ＡＳ２．２９５、ＡＳ２．２９６、ＡＳ２．２９７、ＡＳ２．２９８、ＡＳ２．２９９、ＡＳ２．３００、ＡＳ２．３０２、ＡＳ２．３３８、ＡＳ２．３３９、ＡＳ２．３４０、ＡＳ２．３４１、ＡＳ２．４７０、ＡＳ２．５９２、ＡＳ２．６４１、ＡＳ２．６４２、ＡＳ２．６３５、ＡＳ２．７８２、ＡＳ２．７９４；ハンゼヌラ・アラビトルゲンス・ファング（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　ａｒａｂｉｔｏｌｇｅｎｓ　Ｆａｎｇ）、ＡＳ２．８８７；ハンゼヌラ・ヤディニ・ウィッカーハム（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　ｊａｄｉｎｉｉ　Ｗｉｃｋｅｒｈａｍ）、ＡＣＣＣ２０１９；ハンゼヌラ・サトゥルヌス（クロッカー）Ｈ・エット・Ｐ・シドー（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　ｓａｔｕｒｎｕｓ　（Ｋｌｏｃｋｅｒ）　Ｈ　ｅｔ　Ｐ　ｓｙｄｏｗ）、ＡＣＣＣ２０２０；ハンゼヌラ・シェネッギー（ウェーバー）デッカー（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　ｓｃｈｎｅｇｇｉｉ　（Ｗｅｂｅｒ）　Ｄｅｋｋｅｒ）、ＡＳ２．３０４；ハンゼヌラ・サブペリクロサ・ベッドフォード（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　ｓｕｂｐｅｌｌｉｃｕｌｏｓａ　Ｂｅｄｆｏｒｄ）、ＡＳ２．７３８、ＡＳ２．７４０、ＡＳ２．７６０、ＡＳ２．７６１、ＡＳ２．７７０、ＡＳ２．７８３、ＡＳ２．７９０、ＡＳ２．７９８、ＡＳ２．８６６；クロエッケラ・アピクラタ（リーゼメンド・クロッカー）ヤンケ（Ｋｌｏｅｃｋｅｒａ　ａｐｉｃｕｌａｔａ　（Ｒｅｅｓｓｅｍｅｎｄ．　Ｋｌｏｃｋｅｒ）　Ｊａｎｋｅ）、ＡＣＣＣ２０２１、ＡＣＣＣ２０２２、ＡＣＣＣ２０２３、ＡＳ２．１９７、ＡＳ２．４９６、ＡＳ２．７１１、ＡＳ２．７１４；リポミセス・スターキー・ロッデル・エット・バン・ライ（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ　ｓｔａｒｋｅｙｉ　Ｌｏｄｄｅｒ　ｅｔ　ｖａｎ　Ｒｉｊ）、ＡＣＣＣ２０２４、ＡＳ２．１３９０；ピチア・ファリノサ（リンドナー）ハンセン（Ｐｉｃｈｉａ　ｆａｒｉｎｏｓａ　（Ｌｉｎｄｎｅｒ）　Ｈａｎｓｅｎ）、ＡＣＣＣ２０２５、ＡＣＣＣ２０２６，ＡＳ２．８６、ＡＳ２．８７、ＡＳ２．７０５、ＡＳ２．８０３；ピチア・メンブレナファシエンス・ハンセン（Ｐｉｃｈｉａ　ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ　Ｈａｎｓｅｎ）、ＡＣＣＣ２０２７、ＡＳ２．８９、ＡＳ２．６６１、ＡＳ２．１０３９；ロドスポリジウム・トルロイデス・バンノ（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ　ｔｏｒｕｌｏｉｄｅｓ　Ｂａｎｎｏ）、ＡＣＣＣ２０２８；ロドトルラ・グルチニス（フレセニウス）ハリソン（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｇｌｕｔｉｎｉｓ　（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ）　Ｈａｒｒｉｓｏｎ）、ＡＣＣＣ２０２９、ＡＳ２．２８０、ＡＣＣＣ２０３０、ＡＳ２．１０２、ＡＳ２．１０７、ＡＳ２．２７８、ＡＳ２．４９９、ＡＳ２．６９４、ＡＳ２．７０３、ＡＳ２．７０４、ＡＳ２．１１４６；ロドトルラ・ミヌタ（サイトウ）ハリソン（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｍｉｎｕｔａ　（Ｓａｉｔｏ）　Ｈａｒｒｉｓｏｎ）、ＡＳ２．２７７；ロドトルラ・ルーバー（デンム）ロッデル（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｒｕｂａｒ　（Ｄｅｍｍｅ）　Ｌｏｄｄｅｒ）、ＡＣＣＣ２０３１、ＡＳ２．２１、ＡＳ２．２２、ＡＳ２．１０３、ＡＳ２．１０５、ＡＳ２．１０８、ＡＳ２．１４０、ＡＳ２．１６６、ＡＳ２．１６７、ＡＳ２．２７２、ＡＳ２．２７９、ＡＳ２．２８２；サッカロミセス・カールスベルゲンシス・ハンセン（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ　Ｈａｎｓｅｎ）、ＡＳ２．１１３、ＡＣＣＣ２０３２、ＡＣＣＣ２０３３、ＡＳ２．３１２、ＡＳ２．１１６、ＡＳ２．１１８、ＡＳ２．１２１、ＡＳ２．１３２、ＡＳ２．１６２、ＡＳ２．１８９、ＡＳ２．２００、ＡＳ２．２１６、ＡＳ２．２６５、ＡＳ２．３７７、ＡＳ２．４１７、ＡＳ２．４２０、ＡＳ２．４４０、ＡＳ２．４４１、ＡＳ２．４４３、ＡＳ２．４４４、ＡＳ２．４５９、ＡＳ２．５９５、ＡＳ２．６０５、ＡＳ２．６３８、ＡＳ２．７４２、ＡＳ２．７４５、ＡＳ２．７４８、ＡＳ２．１０４２；サッカロミセス・ユバルム・ベイエル（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｕｖａｒｕｍ　Ｂｅｉｊｅｒ）、ＩＦＦＩ１０２３、ＩＦＦＩ１０３２、ＩＦＦＩ１０３６、ＩＦＦＩ１０４４、ＩＦＦＩ１０７２、ＩＦＦＩ１２０５、ＩＦＦＩ１２０７；サッカロミセス・ウィリアヌス・サッカルド（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｗｉｌｌｉａｎｕｓ　Ｓａｃｃａｒｄｏ）、ＡＳ２．５、ＡＳ２．７、ＡＳ２．１１９、ＡＳ２．１５２、ＡＳ２．２９３、ＡＳ２．３８１、ＡＳ２．３９２、ＡＳ２．４３４、ＡＳ２．６１４、ＡＳ２．１１８９；サッカロミセス種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．）、ＡＳ２．３１１；サッカロミセス・ルドゥイギ・ハンセン（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｌｕｄｗｉｇｉｉ　Ｈａｎｓｅｎ）、ＡＣＣＣ２０４４、ＡＳ２．２４３、ＡＳ２．５０８；サッカロミセス・シネンセス・ユエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｓｉｎｅｎｓｅｓ　Ｙｕｅ）、ＡＳ２．１３９５；スキゾサッカロミセス・オクトスポルス・ベイエリンク（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｏｃｔｏｓｐｏｒｕｓ　Ｂｅｉｊｅｒｉｎｃｋ）、ＡＣＣＣ２０４６、ＡＳ２．１１４８；スキゾサッカロミセス・ポンベ・ランデール（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｐｏｍｂｅ　Ｌｉｎｄｅｒ）、ＡＣＣＣ２０４７、ＡＣＣＣ２０４８、ＡＳ２．２４８、ＡＳ２．２４９、ＡＳ２．２５５、ＡＳ２．２５７、ＡＳ２．２５９、ＡＳ２．２６０、ＡＳ２．２７４、ＡＳ２．９９４、ＡＳ２．１０４３、ＡＳ２．１１４９、ＡＳ２．１１７８、ＩＦＦＩ１０５６；スポロボロミセス・ロゼウス・クライベル・エット・バン・ニエル（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ　ｒｏｓｅｕｓ　Ｋｌｕｙｖｅｒ　ｅｔ　ｖａｎ　Ｎｉｅｌ）、ＡＣＣＣ２０４９、ＡＣＣＣ２０５０、ＡＳ２．６１９、ＡＳ２．９６２、ＡＳ２．１０３６、ＡＣＣＣ２０５１、ＡＳ２．２６１、ＡＳ２．２６２；トルロプシス・カンジダ（サイトウ）ロッデル（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ　ｃａｎｄｉｄａ　（Ｓａｉｔｏ）　Ｌｏｄｄｅｒ）、ＡＣＣＣ２０５２、ＡＳ２．２７０；トルロプシス・ファムタ（ハリソン）ロッデル・エット・バン・ライ（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ　ｆａｍｔａ　（Ｈａｒｒｉｓｏｎ）　Ｌｏｄｄｅｒ　ｅｔ　ｖａｎ　Ｒｉｊ）、ＡＣＣＣ２０５３、ＡＳ２．６８５；トルロプシス・グロボサ（オルソン・エット・ハマー）ロッデル・エット・バン・ライ（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ　ｇｌｏｂｏｓａ　（Ｏｌｓｏｎ　ｅｔ　Ｈａｍｍｅｒ）　Ｌｏｄｄｅｒ　ｅｔ　ｖａｎ　Ｒｉｊ）、ＡＣＣＣ２０５４、ＡＳ２．２０２；トルロプシス・インコンスピクア・ロッデル・エット・バン・ライ（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ　ｉｎｃｏｎｓｐｉｃｕａＬｏｄｄｅｒ　ｅｔ　ｖａｎ　Ｒｉｊ）、ＡＳ２．７５；トリコスポロン・ベーレンディ・ロッデル・エット・クレガー・バン・ライ（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ　ｂｅｈｒｅｎｄｉｉ　Ｌｏｄｄｅｒ　ｅｔ　Ｋｒｅｇｅｒ　ｖａｎ　Ｒｉｊ）、ＡＣＣＣ２０５５、ＡＳ２．１１９３；トリコスポロン・カピタツム・ディデンズ・エット・ロッデル（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ　ｃａｐｉｔａｔｕｍ　Ｄｉｄｄｅｎｓ　ｅｔ　Ｌｏｄｄｅｒ）、ＡＣＣＣ２０５６、ＡＳ２．１３８５；トリコスポロン・クタネウム（デ・ベウルム他）オータ（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ　ｃｕｔａｎｅｕｍ　（ｄｅ　Ｂｅｕｒｍ　ｅｔ　ａｌ．）　Ｏｔａ）ＡＣＣＣ２０５７、ＡＳ２．２５、ＡＳ２．５７０、ＡＳ２．５７１、ＡＳ２．１３７４；ウィッカーハミア・フルオレセンス（ソネダ）ソネダ（Ｗｉｃｋｅｒｈａｍｉａ　ｆｌｕｏｒｅｓｅｎｓ　（Ｓｏｎｅｄａ）　Ｓｏｎｅｄａ）、ＡＣＣＣ２０５８、ＡＳ２．１３８８。サッカロミセス属の酵母が一般に好ましい。サッカロミセスセレビジエの菌のうち、サッカロミセスセレビジエハンセンが好ましい菌である。
【００４０】
一般に、この発明に有用な酵母菌は、米国　２０１１０−２２０９、バージニア（ＶＡ）州マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）、１０８０１　ユニバーシティブールバード（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ）、アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）；および中国　１０００８０、北京、私書箱２７１４、ハイジャン（Ｈａｉｄｉａｎ）、中国科学院（Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、微生物学会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）、中国微生物培養物収集委員会（Ｃｈｉｎａ　Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ　ｆｏｒ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ）、中国微生物培養物収集総合センター（Ｃｈｉｎａ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　Ｃｅｎｔｅｒ：ＣＧＭＣＣ）など、私的または公的な実験培養物、もしくは公的に入手可能な培養物沈殿物から得ることができる。
【００４１】
好ましくはあるが、この発明の酵母細胞成分の調製は、酵母の純粋な菌で開始することに限定されない。各酵母細胞成分は、異なる種または菌の酵母細胞の混合物を培養することによって生成されてもよい。酵母細胞成分の構成要素は、当該技術分野において周知の標準酵母識別手法によって判定可能である。
【００４２】
この発明のさまざまな実施形態では、酵母を取扱い、移動させ、保存するための標準的な手法が用いられる。必要ではないが、この発明の製造プロセスを実行する場合、殺菌条件または清潔な環境が望ましい。動物の血液および免疫細胞を取扱うための、および動物の免疫機能を研究するための標準的な手法も用いられる。そのような手法の詳細は、「実験方法の進歩：一般血液学（Ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍｅｔｈｏｄｓ：　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ）」、２０００年、アッセンデルフト（Ａｓｓｅｎｄｅｌｆｔ）他（編）、アーノルド、エドワード（Ａｒｎｏｌｄ，　Ｅｄｗａｒｄ）（発行者）；「脊椎動物免疫学のハンドブック（Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」、１９９８年、パストレット（Ｐａｓｔｏｒｅｔ）他（編）、アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）；および「免疫学における現在のプロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ　ＰｒｏｔｏｃｏｌＩｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」、１９９１年、コリダン（Ｃｏｌｉｄａｎ）他（編）、ジョン・ワイリー＆サンズ社に記載されており、それらの内容をともにここに引用により援用する。
【００４３】
一実施形態では、第１の酵母細胞成分の酵母細胞が、７７５０ＭＨｚ〜７７８０ＭＨｚ、好ましくは７７５０〜７７７０ＭＨｚの範囲の周波数を有する少なくとも１つの交互電磁（ＥＭ）場の存在下で培養される。単一のＥＭ場または一連のＥＭ場が印加可能であり、各々は述べられた範囲内の異なる周波数、または述べられた範囲内の異なる場強度、もしくは述べられた範囲内の異なる周波数および場強度を有する。いかなる実用的な数のＥＭ場も一連内で使用可能であるが、酵母培養物が一連内で合計２、３、４、５、６、７、８、９または１０の異なるＥＭ場にさらされることが好ましい。ＥＭ場は当該技術分野で公知の任意の手段によって印加可能であり、各々、７７５０、７７５１、７７５２、７７５３、７７５４、７７５５、７７５６、７７５７、７７５８、７７５９、７７６０、７７６１、７７６２、７７６３、７７６４、７７６５、７７６６、７７６７、７７６８、７７６９または７７７０ＭＨｚの周波数を有し得る。
【００４４】
ＥＭ場の場強度は２２〜３２０ｍＶ／ｃｍの範囲にある。好ましい一実施形態では、場強度が漸進的に増加するＥＭ場に酵母細胞培養物がさらされるよう、一連の初めのＥＭ場は後の方のＥＭ場よりも低いＥＭ場強度を有する。したがって酵母細胞は、より低いＥＭ場強度（たとえば１３０〜２５０ｍＶ／ｃｍ）で２４〜６４時間培養され、次により高いＥＭ場強度（たとえば２５０−３２０ｍＶ／ｃｍ）でさらに１０〜４０時間培養され得る。あるＥＭ場から別のＥＭ場へ切換わる際、酵母培養物は同じ容器内に留まって、同じ組の電磁波発生器およびエミッタを使用することができる。
【００４５】
培養プロセスは、１００ｍｌの培地に、細胞密度が約１０５細胞数／ｍｌの選択された酵母菌の接種物１ｍｌを接種することによって開始可能である。開始培養物は３５℃〜３７℃で２４〜４８時間保たれ、次にＥＭ場にさらされる。培養プロセスは好ましくは、溶解された酸素の濃度が０．０２５〜０．０８モル／ｍ３、好ましくは０．０４モル／ｍ３である条件下で行なわれてもよい。酸素レベルは、攪拌および／または泡立てを含むがこれらに限定されない当該技術分野において公知の任意の従来の手段によって調節可能である。
【００４６】
培養は、最も好ましくは、酵母細胞によって同化可能な動物血清および栄養素源を含有する液体培地内で実行される。表１は、この発明の第１の酵母細胞成分を培養するための例示的な培地を提供する。
【００４７】
【表１】
2004065253.tif 000003
【００４８】
一般に、たとえばスクロース、グルコース、果糖、ブドウ糖、麦芽糖、キシロースなどの砂糖およびでんぷんなどの炭水化物は、単独でまたは組合せて、同化可能な炭素の源として培養培地内で使用可能である。培地内で利用される炭水化物源の正確な量は培地の他の材料に一部依存するが、一般に、炭水化物の量は通常、重量比で培地の約０．１％〜５％間、好ましくは約０．５％〜２％間を変動し、最も好ましくは約０．８％である。これらの炭素源は個々に使用可能であり、またはいくつかのそのような炭素源が培地内で組合されてもよい。培養培地内に取込み可能な無機塩の中には、ナトリウム、カルシウム、リン酸塩、硫酸塩、炭酸塩および同様のイオンを産出可能な通例の塩がある。栄養無機塩の非限定的な例は、（ＮＨ４）２ＨＰＯ４、ＣａＣＯ３、ＭｇＳＯ４、ＮａＣｌおよびＣａＳＯ４である。
【００４９】
白血球を含む血液の一部である動物血清は、密度勾配遠心分離法などの当該技術分野で公知の標準的な方法によって、全血（１０−２０ｍｌ）から調製可能である。赤血球は分離されて廃棄される。血清は９０〜１８０ｍｌの２回蒸留水で希釈されてもよい。培地がオートクレーブ処理され約４５℃に冷却された後で、血清が培養培地に添加される。鶏の血清が好ましい。
【００５０】
なお、表１に提供された培地の組成物は限定的であるとは意図されてはいない。プロセスは必要に応じて規模を拡大または縮小可能である。培養培地のさまざまな変更は、培養物の規模および培地成分の局所供給などの実用的および経済的考慮に鑑みて、当業者によりなされてもよい。
【００５１】
酵母細胞はＥＭ場の存在下での培養の数時間後でさえ活性となるが、酵母細胞はＥＭ場の存在下で延長された時間の間（たとえば１週間または数週間）培養可能である。培養プロセスの終わりに、この発明の第１の酵母細胞成分を構成する酵母は、当該技術分野で公知のさまざまな方法によって培養物から回復され、約０℃〜４℃未満の温度で保存されてもよい。回復された酵母細胞はまた、乾燥されて粉末形状で保存されてもよい。
【００５２】
この発明の第１の酵母細胞成分をゲオトリクム・カンジドゥム鎖菌ＡＳ２．６１６で作る非限定的な実施例を、以下に提供する。
【００５３】
別の実施形態では、第２の酵母細胞成分の酵母細胞が、６８１５ＭＨｚ〜６８５０ＭＨｚ、好ましくは６８１５〜６８３５ＭＨｚの範囲の周波数を有する少なくとも１つの交互電磁（ＥＭ）場の存在下で培養される。単一のＥＭ場または一連のＥＭ場が印加可能であり、各々は述べられた範囲内の異なる周波数、または述べられた範囲内の異なる場強度、もしくは述べられた範囲内の異なる周波数および場強度を有する。いかなる実用的な数のＥＭも一連内で使用可能であるが、酵母培養物が一連内で合計２、３、４、５、６、７、８、９または１０の異なるＥＭ場にさらされることが好ましい。ＥＭ場は当該技術分野で公知の任意の手段によって印加可能であり、各々、６８１５、６８１６、６８１７、６８１８、６８１９、６８２０、６８２１、６８２２、６８２３、６８２４、６８２５、６８２６、６８２７、６８２８、６８２９、６８３０、６８３１、６８３２、６８３３、６８３４または６８３５ＭＨｚの周波数を有し得る。
【００５４】
ＥＭ場の場強度は２５〜３３０ｍＶ／ｃｍの範囲にある。好ましい一実施形態では、場強度が漸進的に増加するＥＭ場に酵母細胞培養物がさらされるよう、一連の初めのＥＭ場は後の方のＥＭ場よりも低いＥＭ場強度を有する。したがって酵母細胞は、より低いＥＭ場強度（たとえば１７０−２６０ｍＶ／ｃｍ）で２４〜６８時間培養され、次により高いＥＭ場強度（たとえば２６０−３３０ｍＶ／ｃｍ）でさらに２４〜６８時間培養され得る。あるＥＭ場から別のＥＭ場へ切換わる際、酵母培養物は同じ容器内に留まって、同じ組の電磁波発生器およびエミッタを使用することができる。
【００５５】
培養プロセスは、１００ｍｌの培地に、細胞密度が約１０５細胞数／ｍｌの選択された酵母菌の接種物１ｍｌを接種することによって開始可能である。開始培養物は３５℃〜３７℃で２４〜４８時間保たれ、次にＥＭ場にさらされる。培養プロセスは好ましくは、溶解された酸素の濃度が０．０２５〜０．０８モル／ｍ３、好ましくは０．０４モル／ｍ３である条件下で行なわれてもよい。酸素レベルは、攪拌および／または泡立てを含むがこれらに限定されない当該技術分野において公知の任意の従来の手段によって調節可能である。
【００５６】
培養は、最も好ましくは、酵母細胞によって同化可能な動物血清および栄養素源を含有する液体培地内で実行される。表２は、この発明の第２の酵母細胞成分を培養するための例示的な培地を提供する。
【００５７】
【表２】
2004065253.tif 000004
【００５８】
一般に、たとえばスクロース、グルコース、果糖、ブドウ糖、麦芽糖、キシロースなどの砂糖およびでんぷんなどの炭水化物は、単独でまたは組合せて、同化可能な炭素の源として培養培地内で使用可能である。培地内で利用される炭水化物源の正確な量は培地の他の材料に一部依存するが、一般に、炭水化物の量は通常、重量比で培地の約０．１％〜５％間、好ましくは約０．５％〜２％間を変動し、最も好ましくは約０．８％である。これらの炭素源は個々に使用可能であり、またはいくつかのそのような炭素源が培地内で組合されてもよい。培養培地内に取込み可能な無機塩の中には、ナトリウム、カルシウム、リン酸塩、硫酸塩、炭酸塩および同様のイオンを産出可能な通例の塩がある。栄養無機塩の非限定的な例は、（ＮＨ４）２ＨＰＯ４、ＣａＣＯ３、ＭｇＳＯ４、ＮａＣｌおよびＣａＳＯ４である。
【００５９】
白血球を含む血液の一部である動物血清は、密度勾配遠心分離法などの当該技術分野で公知の標準的な方法によって、全血（１０−２０ｍｌ）から調製可能である。赤血球は分離されて廃棄される。血清は９０〜１８０ｍｌの２回蒸留水で希釈されてもよく、好ましくは１０２〜１０３個／ｍｌのＴ細胞を含有する。培地がオートクレーブ処理され約４５℃に冷却された後で、血清が培養培地に添加される。鶏の血清が好ましい。
【００６０】
なお、表２に提供された培地の組成物は限定的であるとは意図されてはいない。プロセスは必要に応じて規模を拡大または縮小可能である。培養培地のさまざまな変更は、培養物の規模および培地成分の局所供給などの実用的および経済的考慮に鑑みて、当業者によりなされてもよい。
【００６１】
酵母細胞はＥＭ場の存在下での培養の数時間後でさえ活性となるが、酵母細胞はＥＭ場の存在下で延長された時間の間（たとえば１週間または数週間）培養可能である。培養プロセスの終わりに、この発明の第２の酵母細胞成分を構成する酵母は、当該技術分野で公知のさまざまな方法によって培養物から回復され、約０℃〜４℃未満の温度で保存されてもよい。回復された酵母細胞はまた、乾燥されて粉末形状で保存されてもよい。
【００６２】
この発明の第２の酵母細胞成分をカンジダ・ユチリス・ヘネベルグ・ロッデル・エット・クレガー・バン・ライ菌ＡＳ２．１１８０で作る非限定的な実施例を、以下に提供する。
【００６３】
さらに別の実施形態では、第３の酵母細胞成分の酵母細胞が、８１８０ＭＨｚ〜８２１０ＭＨｚ、好ましくは８１９０〜８２１０ＭＨｚの範囲の周波数を有する少なくとも１つの交互電磁（ＥＭ）場の存在下で培養される。単一のＥＭ場または一連のＥＭ場が印加可能であり、各々は述べられた範囲内の異なる周波数、または述べられた範囲内の異なる場強度、もしくは述べられた範囲内の異なる周波数および場強度を有する。いかなる実用的な数のＥＭ場も一連内で使用可能であるが、酵母培養物が一連内で合計２、３、４、５、６、７、８、９または１０の異なるＥＭ場にさらされることが好ましい。ＥＭ場は当該技術分野で公知の任意の手段によって印加可能であり、各々、８１９０、８１９１、８１９２、８１９３、８１９４、８１９５、８１９６、８１９７、８１９８、８１９９、８２００、８２０１、８２０２、８２０３、８２０４、８２０５、８２０６、８２０７、８２０８、８２０９または８２１０ＭＨｚの周波数を有し得る。
【００６４】
ＥＭ場の場強度は２８〜３５０ｍＶ／ｃｍの範囲にある。好ましい一実施形態では、場強度が漸進的に増加するＥＭ場に酵母細胞培養物がさらされるよう、一連の初めのＥＭ場は後の方のＥＭ場よりも低いＥＭ場強度を有する。したがって酵母細胞は、より低いＥＭ場強度（たとえば１６０−２６０ｍＶ／ｃｍ）で１０〜６８時間培養され、次により高いＥＭ場強度（たとえば２６０−３５０ｍＶ／ｃｍ）でさらに１２〜４８時間培養され得る。あるＥＭ場から別のＥＭ場へ切換わる際、酵母培養物は同じ容器内に留まって、同じ組の電磁波発生器およびエミッタを使用することができる。
【００６５】
培養プロセスは、１００ｍｌの培地に、細胞密度が約１０５細胞数／ｍｌの選択された酵母菌の接種物１ｍｌを接種することによって開始可能である。開始培養物は３５℃〜３７℃で２４〜４８時間保たれ、次にＥＭ場にさらされる。培養プロセスは好ましくは、溶解された酸素の濃度が０．０２５〜０．０８モル／ｍ３、好ましくは０．０４モル／ｍ３である条件下で行なわれてもよい。酸素レベルは、攪拌および／または泡立てを含むがこれらに限定されない当該技術分野において公知の任意の従来の手段によって調節可能である。
【００６６】
培養は、最も好ましくは、酵母細胞によって同化可能な動物血清および栄養素源を含有する液体培地内で実行される。表３は、この発明の第３の酵母細胞成分を培養するための例示的な培地を提供する。
【００６７】
【表３】
2004065253.tif 000005
【００６８】
一般に、たとえばスクロース、グルコース、果糖、ブドウ糖、麦芽糖、キシロースなどの砂糖およびでんぷんなどの炭水化物は、単独でまたは組合せて、同化可能な炭素の源として培養培地内で使用可能である。培地内で利用される炭水化物源の正確な量は培地の他の材料に一部依存するが、一般に、炭水化物の量は通常、重量比で培地の約０．１％〜５％間、好ましくは約０．５％〜２％間を変動し、最も好ましくは約０．８％である。これらの炭素源は個々に使用可能であり、またはいくつかのそのような炭素源が培地内で組合されてもよい。培養培地内に取込み可能な無機塩の中には、ナトリウム、カルシウム、リン酸塩、硫酸塩、炭酸塩および同様のイオンを産出可能な通例の塩がある。栄養無機塩の非限定的な例は、（ＮＨ４）２ＨＰＯ４、ＣａＣＯ３、ＭｇＳＯ４、ＮａＣｌおよびＣａＳＯ４である。
【００６９】
白血球を含む血液の一部である動物血清は、密度勾配遠心分離法などの当該技術分野で公知の標準的な方法によって、全血（１０−２０ｍｌ）から調製可能である。赤血球は分離されて廃棄される。血清は９０〜１８０ｍｌの２回蒸留水で希釈されてもよい。培地がオートクレーブ処理され約４５℃に冷却された後で、血清が培養培地に添加される。鶏の血清が好ましい。
【００７０】
なお、表３に提供された培地の組成物は限定的であるとは意図されてはいない。プロセスは必要に応じて規模を拡大または縮小可能である。培養培地のさまざまな変更は、培養物の規模および培地成分の局所供給などの実用的および経済的考慮に鑑みて、当業者によりなされてもよい。
【００７１】
酵母細胞はＥＭ場の存在下での培養の数時間後でさえ活性となるが、酵母細胞はＥＭ場の存在下で延長された時間の間（たとえば１週間または数週間）培養可能である。培養プロセスの終わりに、この発明の第３の酵母細胞成分を構成する酵母は、当該技術分野で公知のさまざまな方法によって培養物から回復され、約０℃〜４℃未満の温度で保存されてもよい。回復された酵母細胞はまた、乾燥されて粉末形状で保存されてもよい。
【００７２】
この発明の第３の酵母細胞成分をサッカロミセス・セレビジエ菌ＡＳ２．１６で作る非限定的な実施例を、以下に提供する。
【００７３】
さらに別の実施形態では、第４の酵母細胞成分の酵母細胞が、８４００ＭＨｚ〜８４３０ＭＨｚ、好ましくは８４００〜８４２０ＭＨｚの範囲の周波数を有する少なくとも１つの交互電磁（ＥＭ）場の存在下で培養される。単一のＥＭ場または一連のＥＭ場が印加可能であり、各々は述べられた範囲内の異なる周波数、または述べられた範囲内の異なる場強度、もしくは述べられた範囲内の異なる周波数および場強度を有する。いかなる実用的な数のＥＭ場も一連内で使用可能であるが、酵母培養物が一連内で合計２、３、４、５、６、７、８、９または１０の異なるＥＭ場にさらされることが好ましい。ＥＭ場は当該技術分野で公知の任意の手段によって印加可能であり、各々、８４００、８４０１、８４０２、８４０３、８４０４、８４０５、８４０６、８４０７、８４０８、８４０９、８４１０、８４１１、８４１２、８４１３、８４１４、８４１５、８４１６、８４１７、８４１８、８４１９または８４２０ＭＨｚの周波数を有し得る。
【００７４】
ＥＭ場の場強度は３０〜３８０ｍＶ／ｃｍの範囲にある。好ましい一実施形態では、場強度が漸進的に増加するＥＭ場に酵母細胞培養物がさらされるよう、一連の初めのＥＭ場は後の方のＥＭ場よりも低いＥＭ場強度を有する。したがって酵母細胞は、より低いＥＭ場強度（たとえば１６０−３００ｍＶ／ｃｍ）で１０〜７２時間培養され、次により高いＥＭ場強度（たとえば３００−３８０ｍＶ／ｃｍ）でさらに１０〜３６時間培養され得る。あるＥＭ場から別のＥＭ場へ切換わる際、酵母培養物は同じ容器内に留まって、同じ組の電磁波発生器およびエミッタを使用することができる。
【００７５】
培養プロセスは、１００ｍｌの培地に、細胞密度が約１０５細胞数／ｍｌの選択された酵母菌の接種物１ｍｌを接種することによって開始可能である。開始培養物は３５℃〜３７℃で２４〜４８時間保たれ、次にＥＭ場にさらされる。培養プロセスは好ましくは、溶解された酸素の濃度が０．０２５〜０．０８モル／ｍ３、好ましくは０．０４モル／ｍ３である条件下で行なわれてもよい。酸素レベルは、攪拌および／または泡立てを含むがこれらに限定されない当該技術分野において公知の任意の従来の手段によって調節可能である。
【００７６】
培養は、最も好ましくは、酵母細胞によって同化可能な動物血清および栄養素源を含有する液体培地内で実行される。表４は、この発明の第４の酵母細胞成分を培養するための例示的な培地を提供する。
【００７７】
【表４】
2004065253.tif 000006
【００７８】
一般に、たとえばスクロース、グルコース、果糖、ブドウ糖、麦芽糖、キシロースなどの砂糖およびでんぷんなどの炭水化物は、単独でまたは組合せて、同化可能な炭素の源として培養培地内で使用可能である。培地内で利用される炭水化物源の正確な量は培地の他の材料に一部依存するが、一般に、炭水化物の量は通常、重量比で培地の約０．１％〜５％間、好ましくは約０．５％〜２％間を変動し、最も好ましくは約０．８％である。これらの炭素源は個々に使用可能であり、またはいくつかのそのような炭素源が培地内で組合されてもよい。培養培地内に取込み可能な無機塩の中には、ナトリウム、カルシウム、リン酸塩、硫酸塩、炭酸塩および同様のイオンを産出可能な通例の塩がある。栄養無機塩の非限定的な例は、（ＮＨ４）２ＨＰＯ４、ＣａＣＯ３、ＭｇＳＯ４、ＮａＣｌおよびＣａＳＯ４である。
【００７９】
白血球を含む血液の一部である動物血清は、密度勾配遠心分離法などの当該技術分野で公知の標準的な方法によって、全血（１０−２０ｍｌ）から調製可能である。赤血球は分離されて廃棄される。血清は９０〜１８０ｍｌの２回蒸留水で希釈されてもよい。培地がオートクレーブ処理され約４５℃に冷却された後で、血清が培養培地に添加される。鶏の血清が好ましい。
【００８０】
なお、表４に提供された培地の組成物は限定的であるとは意図されてはいない。プロセスは必要に応じて規模を拡大または縮小可能である。培養培地のさまざまな変更は、培養物の規模および培地成分の局所供給などの実用的および経済的考慮に鑑みて、当業者によりなされてもよい。
【００８１】
酵母細胞はＥＭ場の存在下での培養の数時間後でさえ活性となるが、酵母細胞はＥＭ場の存在下で延長された時間の間（たとえば１週間または数週間）培養可能である。培養プロセスの終わりに、この発明の第４の酵母細胞成分を構成する酵母は、当該技術分野で公知のさまざまな方法によって培養物から回復され、約０℃〜４℃未満の温度で保存されてもよい。回復された酵母細胞はまた、乾燥されて粉末形状で保存されてもよい。
【００８２】
この発明の第４の酵母細胞成分をゲオトリクム・カンジドゥム鎖菌ＡＳ２．３６１で作る非限定的な実施例を、以下に提供する。
【００８３】
２．酵母細胞の調節
この発明の別の局面では、活性化した酵母細胞を、生物学的組成物が給餌される動物の種類の胃腸管から採取した物質の存在下で培養することによって、活性化した酵母細胞の性能が最適化され得る。この調節プロセスを含むことにより、活性化した酵母細胞は動物の胃の酸性環境に適合し、耐えるようになる。
【００８４】
この発明によれば、第１節で説明したように調製された活性化した酵母細胞は、表５に示すような組成物を有する培地内でさらに培養可能である。
【００８５】
【表５】
2004065253.tif 000007
【００８６】
プロセスは必要に応じて規模が拡大または縮小され得る。
鶏の胃液は、屠殺したての動物の胃の内容物約５００〜１０００ｇを１０００−２０００ｍｌの水と混合し、殺菌条件下でろ過することによって調製可能であり、使用前に４℃で保存可能な透明の流体が得られる。
【００８７】
野生ナツメ果汁は、押し潰された野生ナツメ１ｇにつき５ｍｌの水を混合することによって調製された、野生ナツメ果実のろ過された抽出物である。野生サンザシ果汁は、押し潰された野生サンザシ１ｇにつき５ｍｌの水を混合することよって調製された、野生サンザシ果実のろ過された抽出物である。
【００８８】
酵母細胞の混合物は約４８〜９６時間、一連の電磁場の存在下で培養される。各電磁場は、含まれる酵母の菌に依存して、第１節に記載した周波数の４つの範囲のうちの１つに対応する周波数を有する。４つの酵母成分がすべて存在する場合、以下の４つの周波数帯域、つまり７７５０−７７８０ＭＨｚ、６８１５−６８５０ＭＨｚ、８１８０−８２１０ＭＨｚ、８４００−８４２０ＭＨｚの組合せが使用可能である。ＥＭ場は順次または同時に印加可能である。一般に、このプロセスでは、酵母細胞は８５ｍＶ／ｃｍ〜３２０ｍＶ／ｃｍの範囲のＥＭ場強度を受ける。
【００８９】
酵母細胞培養物がＥＭ場にさらされている間、培養物は、約５℃〜約３８℃間を循環する温度でインキュベートされる。たとえば、典型的な一周期では、培養物の温度は約３７℃で始まり、徐々に約５℃まで下げられ、次に別の周期に備えて徐々に約３８℃へ上げられてもよい。完全な各周期は約３時間続く。周期の終わりに、活性化し調節された酵母細胞は約３５００ｒｐｍでの遠心分離法によって回復され、４℃未満で保存され得る。
【００９０】
３．生物学的組成物の製造
この発明はさらに、この発明の酵母細胞を含む生物学的組成物を製造するための方法を提供する。好ましくは、この発明の生物学的組成物は、第１節に記載した方法によって活性化し、第２節に記載した方法によって調節を受けた酵母細胞を含む。最も好ましくは、生物学的組成物は４つの酵母細胞成分すべてを含む。
【００９１】
この発明の生物学的組成物を大量生産するには、培養プロセスの規模をそれに応じて拡大し、培養プロセスを、第１節において調製され、好ましくは第２節に記載したように調節された活性化した酵母細胞培養物で開始する。規模が拡大されたプロセスを示すため、１０００ｋｇの生物学的組成物を生成するための方法を以下に説明する。
【００９２】
４つの活性化した酵母細胞成分の各々の貯蔵培養物を、２５０リットルの水に１００ｋｇのデンプンを含む培養培地に添加する。次に、活性化した酵母細胞を３５℃〜３８℃で、それぞれの周波数および１２０〜４５０ｍＶ／ｃｍ内の場強度のＥＭ場の存在下で培養する。培養プロセスは約４８〜９６時間、または酵母細胞数が約２×１０１０／ｍｌに達するまで実行される。この時点では、活性化した酵母細胞を約０℃〜４℃で保存しなければならず、直ちに使用しない場合には２４時間以内に保存用に乾燥させなければならない。このプロセスは４つの酵母細胞成分の各々について繰返される。４つの酵母細胞成分すべてを含む生物学的組成物を作るには、４つの活性化した酵母細胞成分の各々の培養培地を２５０リットルずつ（つまり計１０００リットル）混合し、６００ｋｇのデンプンと組合せる。
【００９３】
活性化した酵母細胞および生物学的組成物は必ずしも直ちに使用されるとは限らないため、調製された酵母細胞および生物学的組成物は２段階乾燥プロセスで乾燥可能である。第１の乾燥段階中、酵母細胞は第１の乾燥機内で、６５℃を超えない温度で１０分を超えない時間乾燥され、そのため酵母細胞は急速に休止状態になる。次に、酵母細胞は第２の乾燥機へ送られ、７０℃を超えない温度で３０分を超えない時間乾燥され、さらに水分が除去される。２段階の後、含水量は５％よりも低くなるべきである。酵母細胞がそれらの生命力および機能を失わないよう、温度および乾燥時間が双方の乾燥段階に準拠することが好ましい。乾燥された酵母細胞は次に室温に冷却される。乾燥された酵母細胞はまた、好ましい大きさの粒子が選択されるよう、分離器でふるいにかけられてもよい。乾燥された細胞は次にバルクバッグ充填器へ送られて梱包され得る。
【００９４】
【実施例】
以下の実施例は、動物飼料添加物として使用可能な生物学的組成物の製造を説明する。
【００９５】
生物学的組成物は、以下の４つの酵母成分、つまり、ゲオトリクム・カンジドゥム鎖ＡＳ２．６１６、カンジダ・ユチリス・ヘネベルグ・ロッデル・エット・クレガー・バン・ライＡＳ２．１１８０、サッカロミセス・セレビジエＡＳ２．１６およびゲオトリクム・カンジドゥム鎖ＡＳ２．３６１を含む。酵母の各成分はアスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）による感染の発生を阻害し、感染した鶏の死亡率を低下させ得ることが示されている。４つの酵母細胞成分を、以下のように別個に調製し、試験する。
【００９６】
約１０５細胞数／ｍｌのＡＳ２．６１６を含有する開始培養物を、表１に示すような組成物を有する培地を含有する、図１に示すような容器（２）内に置く。初めに、酵母細胞をＥＭ場なしで約２４時間、３６±１℃で培養する。次に、酵母細胞を同じ培地内で３６±１℃で、述べられる順番で印加される一連の８つのＥＭ場の存在下で、つまり、７７５２ＭＨｚ、１３２ｍＶ／ｃｍで１０時間；７７５８ＭＨｚ、１３２ｍＶ／ｃｍで１０時間；７７６３ＭＨｚ、１３２ｍＶ／ｃｍで２２時間；７７６６ＭＨｚ、１３２ｍＶ／ｃｍで２２時間；７７５２ＭＨｚ、３２０ｍＶ／ｃｍで１０時間；７７５８ＭＨｚ、３２０ｍＶ／ｃｍで１０時間；７７６３ＭＨｚ、３２０ｍＶ／ｃｍで１０時間；および７７６６ＭＨｚ、３２０ｍＶ／ｃｍで１０時間、培養する。酵母細胞を第２節に記載したような鶏の胃液およびサンザシ果汁内で、一連の２つのＥＭ場の存在下で、つまり、７７６３ＭＨｚ、３２０ｍＶ／ｃｍで１０時間、および７７６６ＭＨｚ、３２０ｍＶ／ｃｍで１０時間、さらに培養することによって調節した。最後の培養期間の後、酵母細胞を２４時間以内に使用して生物学的組成物を作るか、または第３節に記載したように保存用に乾燥する。
【００９７】
鳥に対する酵母細胞のこの第１の成分の有利な効果を以下のように試験した。すべて生後約２週間で体重が≦１１％以内（平均からの分布が１１％以内）の１８００羽の鶏（卵用に飼育される中国品種の鶏、北品種（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　ｂｒｅｅｄ）ＮＯ．６）で試験を行なった。鳥を各々４５０羽ずつの４グループに分け、各グループの総重量は≦８％以内（平均からの分布が８％以内）であった。４グループの各々の鳥をさらに１５０羽ずつの３つのサブグループに分けた。各グループでの実験を三重にした。アスペルギルス症を引起すアスペルギルス・フミガーツスを５×１０７含有する溶液５ｍｌの皮下注射によって、各鳥を感染させた。鳥の第１のグループ（グループＡ）には、表６に示すような抗生物質の混合物を含む食餌を給餌した。
【００９８】
【表６】
2004065253.tif 000008
【００９９】
グループＢの鳥には、活性化したＡＳ２．６１６酵母細胞を含む食餌を給餌した。活性化した酵母細胞は、乾燥した細胞とゼオライト粉末（２００メッシュ未満）とを、ゼオライト粉末１ｇにつき酵母細胞が約１０９個の比率で混合することにより調製された添加物内に存在した。基本飼料９９５ｋｇごとに５ｋｇの飼料添加物を添加し、重量比で０．５％の添加物または５×１０１２個の酵母細胞を含む改良された飼料を産出した。鳥の第３のグループ（グループＣ）には、ＡＳ２．６１６酵母細胞が活性化していない点以外はグループＢに使用したものと同一に調製された添加物を含有する食餌を給餌した。グループＤの鳥には、抗生物質も酵母添加物も含まない基本食餌を給餌した。５週間後のさまざまなグループの鳥の健康状態を以下の表７に示す。
【０１００】
【表７】
2004065253.tif 000009
【０１０１】
第２の成分を調製するため、約１０５細胞数／ｍｌのＡＳ２．１１８０を含有する開始培養物を、表２に示すような組成物を有する培地を含有する、図１に示すような容器（２）内に置く。初めに、酵母細胞をＥＭ場なしで約２２時間、３６±１℃で培養する。次に、酵母細胞を同じ培地内で３６±１℃で、述べられる順番で印加される一連の８つのＥＭ場の存在下で、つまり、６８２５ＭＨｚ、１８０ｍＶ／ｃｍで２４時間；６８２７ＭＨｚ、１８０ｍＶ／ｃｍで２４時間；６８３２ＭＨｚ、１８０ｍＶ／ｃｍで１０時間；６８３５ＭＨｚ、１８０ｍＶ／ｃｍで１０時間；６８２５ＭＨｚ、３３０ｍＶ／ｃｍで２４時間；６８２７ＭＨｚ、３３０ｍＶ／ｃｍで２４時間；６８３２ＭＨｚ、３３０ｍＶ／ｃｍで１０時間；および６８３５ＭＨｚ、３３０ｍＶ／ｃｍで１０時間、培養する。酵母細胞を第２節に記載したような鶏の胃液およびサンザシ果汁内で、一連の２つのＥＭ場の存在下で、つまり、６８２５ＭＨｚ、３３０ｍＶ／ｃｍで２４時間、および６８２７ＭＨｚ、３３０ｍＶ／ｃｍで２４時間、さらに培養することによって調節した。最後の培養期間の後、酵母細胞を２４時間以内に使用して生物学的組成物を作るか、または第３節に記載したように保存用に乾燥する。
【０１０２】
鳥に対する酵母細胞のこの第２の成分の有利な効果を以下のように試験した。すべて生後約２週間で体重が≦１１％以内（平均からの分布が１１％以内）の１８００羽の鶏（卵用に飼育される中国品種の鶏、北品種ＮＯ．６）で試験を行なった。鳥を各々４５０羽ずつの４グループに分け、各グループの総重量は≦８％以内（平均からの分布が８％以内）であった。４グループの各々の鳥をさらに１５０羽ずつの３つのサブグループに分けた。各グループでの実験を三重にした。アスペルギルス症を引起すアスペルギルス・フミガーツスを５×１０７含有する溶液５ｍｌの皮下注射によって、各鳥を感染させた。鳥の第１のグループ（グループＡ）には、表８に示すような抗生物質の混合物を含む食餌を給餌した。
【０１０３】
【表８】
2004065253.tif 000010
【０１０４】
グループＢの鳥には、活性化したＡＳ２．１１８０酵母細胞を含む食餌を給餌した。活性化した酵母細胞は、乾燥した細胞とゼオライト粉末（２００メッシュ未満）とを、ゼオライト粉末１ｇにつき酵母細胞が約１×１０９個の比率で混合することにより調製された添加物内に存在した。基本飼料９９５ｋｇごとに５ｋｇの飼料添加物を添加し、重量比で０．５％の添加物を含む改良された飼料を産出した。鳥の第３のグループ（グループＣ）には、ＡＳ２．１１８０酵母細胞が活性化していない点以外はグループＢに使用したものと同一に調製された添加物を含有する食餌を給餌した。グループＤの鳥には、抗生物質も酵母添加物も含まない基本食餌を給餌した。５週間後のさまざまなグループの鳥の健康状態を以下の表９に示す。
【０１０５】
【表９】
2004065253.tif 000011
【０１０６】
第３の酵母細胞成分については、約１０５細胞数／ｍｌのＡＳ２．１６を含有する開始培養物を、表３に示すような組成物を有する培地を含有する、図１に示すような容器（２）内に置く。初めに、酵母細胞をＥＭ場なしで約３３時間、３６±１℃で培養する。次に、酵母細胞を同じ培地内で３６±１℃で、述べられる順番で印加される一連の８つのＥＭ場の存在下で、つまり、８１９２ＭＨｚ、１６９ｍＶ／ｃｍで１０時間；８２００ＭＨｚ、１６９ｍＶ／ｃｍで１０時間；８２０３ＭＨｚ、１６９ｍＶ／ｃｍで２４時間；８２０７ＭＨｚ、１６９ｍＶ／ｃｍで２４時間；８１９２ＭＨｚ、２８９ｍＶ／ｃｍで１２時間；８２００ＭＨｚ、２８９ｍＶ／ｃｍで１２時間；８２０３ＭＨｚ、２８９ｍＶ／ｃｍで１２時間；および８２０７ＭＨｚ、２８９ｍＶ／ｃｍで１２時間、培養する。酵母細胞を第２節に記載したような鶏の胃液およびサンザシ果汁内で、一連の２つのＥＭ場の存在下で、つまり、８２０３ＭＨｚ、２８９ｍＶ／ｃｍで１２時間、および８２０７ＭＨｚ、２８９ｍＶ／ｃｍで１２時間、さらに培養することによって調節した。最後の培養期間の後、酵母細胞を２４時間以内に使用して生物学的組成物を作るか、または第３節に記載したように保存用に乾燥する。
【０１０７】
鳥に対する酵母細胞のこの第３の成分の有利な効果を以下のように試験した。すべて生後約２週間で体重が≦１１％以内（平均からの分布が１１％以内）の１８００羽の鶏（卵用に飼育される中国品種の鶏、北品種ＮＯ．６）で試験を行なった。鳥を各々４５０羽ずつの４グループに分け、各グループの総重量は≦８％以内（平均からの分布が８％以内）であった。４グループの各々の鳥をさらに１５０羽ずつの３つのサブグループに分けた。各グループでの実験を三重にした。アスペルギルス症を引起すアスペルギルス・フミガーツスを５×１０７含有する溶液５ｍｌの皮下注射によって、各鳥を感染させた。鳥の第１のグループ（グループＡ）には、表１０に示すような抗生物質の混合物を含む食餌を給餌した。
【０１０８】
【表１０】
2004065253.tif 000012
【０１０９】
グループＢの鳥には、活性化したＡＳ２．１６酵母細胞を含む食餌を給餌した。活性化した酵母細胞は、乾燥した細胞とゼオライト粉末（２００メッシュ未満）とを、ゼオライト粉末１ｇにつき酵母細胞が約１×１０９個の比率で混合することにより調製された添加物内に存在した。基本飼料９９５ｋｇごとに５ｋｇの飼料添加物を添加し、重量比で０．５％の添加物を含む改良された飼料を産出した。鳥の第３のグループ（グループＣ）には、ＡＳ２．１６酵母細胞が活性化していない点以外はグループＢに使用したものと同一に調製された添加物を含有する食餌を給餌した。グループＤの鳥には、抗生物質も酵母添加物も含まない基本食餌を給餌した。５週間後のさまざまなグループの鳥の健康状態を以下の表１１に示す。
【０１１０】
【表１１】
2004065253.tif 000013
【０１１１】
第４の成分を調製するため、約１０５細胞数／ｍｌのＡＳ２．３６１を含有する開始培養物を、表４に示すような組成物を有する培地を含有する、図１に示すような容器（２）内に置く。初めに、酵母細胞をＥＭ場なしで約３５時間、３６±１℃で培養する。次に、酵母細胞を同じ培地内で３６±１℃で、述べられる順番で印加される一連の８つのＥＭ場の存在下で、つまり、８４０２ＭＨｚ、１６５ｍＶ／ｃｍで１０時間；８４０８ＭＨｚ、１６５ｍＶ／ｃｍで１０時間；８４１１ＭＨｚ、１６５ｍＶ／ｃｍで２６時間；８４２０ＭＨｚ、１６５ｍＶ／ｃｍで２６時間；８４０２ＭＨｚ、３３６ｍＶ／ｃｍで９時間；８４０８ＭＨｚ、３３６ｍＶ／ｃｍで９時間；８４１１ＭＨｚ、３３６ｍＶ／ｃｍで９時間；および８４２０ＭＨｚ、３３６ｍＶ／ｃｍで９時間、培養する。酵母細胞を第２節に記載したような鶏の胃液およびサンザシ果汁内で、一連の２つのＥＭ場の存在下で、つまり、８４１１ＭＨｚ、３３６ｍＶ／ｃｍで９時間、および８４２０ＭＨｚ、３３６ｍＶ／ｃｍで９時間、さらに培養することによって調節した。最後の培養期間の後、酵母細胞を２４時間以内に使用して生物学的組成物を作るか、または第３節に記載したように保存用に乾燥する。
【０１１２】
鳥に対する酵母細胞のこの第４の成分の有利な効果を以下のように試験した。すべて生後約２週間で体重が≦１１％以内（平均からの分布が１１％以内）の１８００羽の鶏（卵用に飼育される中国品種の鶏、北品種ＮＯ．６）で試験を行なった。鳥を各々４５０羽ずつの４グループに分け、各グループの総重量は≦８％以内（平均からの分布が８％以内）であった。４グループの各々の鳥をさらに１５０羽ずつの３つのサブグループに分けた。各グループでの実験を三重にした。アスペルギルス症を引起すアスペルギルス・フミガーツスを５×１０７含有する溶液５ｍｌの皮下注射によって、各鳥を感染させた。鳥の第１のグループ（グループＡ）には、表１２に示すような抗生物質の混合物を含む食餌を給餌した。
【０１１３】
【表１２】
2004065253.tif 000014
【０１１４】
グループＢの鳥には、活性化したＡＳ２．３６１酵母細胞を含む食餌を給餌した。活性化した酵母細胞は、乾燥した細胞とゼオライト粉末（２００メッシュ未満）とを、ゼオライト粉末１ｇにつき酵母細胞が約１×１０９個の比率で混合することにより調製された添加物内に存在した。基本飼料９９５ｋｇごとに５ｋｇの飼料添加物を添加し、重量比で０．５％の添加物を含む改良された飼料を産出した。鳥の第３のグループ（グループＣ）には、ＡＳ２．３６１酵母細胞が活性化していない点以外はグループＢに使用したものと同一に調製された添加物を含有する食餌を給餌した。グループＤの鳥には、抗生物質も酵母添加物も含まない基本食餌を給餌した。５週間後のさまざまなグループの鳥の健康状態を以下の表１３に示す。
【０１１５】
【表１３】
2004065253.tif 000015
【０１１６】
４つの酵母細胞成分すべてを含む生物学的飼料添加物を、各成分の乾燥した細胞とゼオライト粉末（２００メッシュ未満）とを、ゼオライト粉末１ｇにつき酵母細胞が１×１０９個の比率で混合することによって調製した。基本飼料９９５ｋｇごとに酵母およびゼオライト粉末の混合物５ｋｇを添加し、重量比で０．５％の酵母およびゼオライト粉末を含む添加物を産出した。すべて生後約２週間で体重が≦１１％以内（平均からの分布が１１％以内）の１８００羽の鶏（卵用に飼育される中国品種の鶏、北品種ＮＯ．６）で試験を行なった。鳥を各々４５０羽ずつの４グループに分け、各グループの総重量は≦８％以内（平均からの分布が８％以内）であった。４グループの各々の鳥をさらに１５０羽ずつの３つのサブグループに分けた。各グループでの実験を三重にした。アスペルギルス症を引起すアスペルギルス・フミガーツスを５×１０７含有する溶液５ｍｌの皮下注射によって、各鳥を感染させた。鳥の第１のグループ（グループＡ）には、表１４に示すような抗生物質の混合物を含む食餌を給餌した。
【０１１７】
【表１４】
2004065253.tif 000016
【０１１８】
グループＢの鳥には、上述したように調製された生物学的飼料を含む食餌を給餌した。鳥の第３のグループ（グループＣ）には、酵母細胞が活性化していない点以外はグループＢに使用したものと同一に調製された添加物を含有する食餌を給餌した。グループＤの鳥には、抗生物質も生物学的飼料添加物も含まない基本食餌を給餌した。５週間後のさまざまなグループの鳥の健康状態を以下の表１５に示す。
【０１１９】
【表１５】
2004065253.tif 000017
【０１２０】
上の結果は、この発明の生物学的組成物が、動物の健康を維持し、動物が感染から回復するのを助けるために使用され得る有益な動物飼料添加物であることを示している。
【０１２１】
この発明は、この発明の個々の局面の単なる例示として意図された記載された特定の実施形態によって範囲を限定されるべきではなく、機能的に等価な方法および成分はこの発明の範囲内にある。実際、この発明のさまざまな変更は、ここに示され記載されたものに加え、前述の説明および添付図面から当業者には明らかであろう。そのような変更は特許請求の範囲内に収まることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【図１】酵母細胞の活性化および調節を示す図である。
【符号の説明】
１　酵母細胞培養物、２　容器、３　電磁場源、４　電極。
【図１】
2004065253.tif 000018