(57)【要約】      （修正有）【課題】安全で、長期に服用しても副作用などの心配の少ない天然由来の抗高血圧用の医薬または食品組成物を提供する。【解決手段】シルクの外層部のセリシンを除去したシルクプロテイン、特に体内への吸収性のよいフィブロイン加水分解物を含むことを特徴とする血圧低下作用を有する組成物、および該組成物に桑葉、特に桑葉末、桑葉抽出液及び桑葉エキス末をソルクプロテイン１重量部に対して桑葉を原生薬換算量で０．５〜５０重量部さらに添加した、血圧低下作用を有する組成物、食品、医薬品。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シルクプロテインを含むことを特徴とする血圧低下作用を有する組成物。
【請求項２】
更に、桑葉を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
桑葉が、桑葉末、桑葉抽出液および桑葉エキス末からなる群より選択される、請求項２の組成物。
【請求項４】
シルクプロテイン１重量部に対して、桑葉を原生薬換算量で０．５〜５０重量部添加した、請求項２または３記載記載の組成物。
【請求項５】
シクロプロテインが、フィブロイン加水分解産物を主成分とする、請求項１〜４のいずれか一項記載の組成物。
【請求項６】
食品である、請求項１〜５のいずれか一項記載の組成物。
【請求項７】
医薬である、請求項１〜５のいずれか一項記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、シルクプロテイン、場合により桑葉を含む血圧低下作用を有する組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
高血圧症は、心臓や血管の病変を促し、心臓病や脳卒中などにおいて最も重視すべき危険因子と考えられている。高血圧症の治療法としては、食事療法、適度な運動といった非薬物療法、および降圧利尿剤やβ遮断薬といった薬物療法が行われてきた。しかし、食事制限、運動療法では高血圧を改善できない場合も多く、降圧剤の効果も症例によって一様ではない。さらに、降圧療法は原則として長期にわたって継続する必要があるので、副作用の恐れのない、安全な療法が望まれてきた。
そのような状況下で、天然由来の血圧低下成分に注目が集まってきた。
【０００３】
例えば、特許文献１には、抗高血圧効果を示す食品成分としては、γ−アミノ酪酸があり、γ−アミノ酪酸を含有する素材として桑葉が挙げられている。
【０００４】
特許文献２には、絹フィブロインが、飲食品、化粧品、医薬品など広い分野で有用であることが記載されている。しかし、絹フィブロインの血圧に対する作用についてはなんら記載されていない。
【０００５】
【特許文献１】
特開２００２−２０４６７０号公報
【特許文献２】
特開２００１−０５７８５１号公報
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、安全で、長期に服用しても副作用などの心配の少ない、血圧低下作用を有する組成物、および該組成物の医薬または食品としての用途を提供する。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、鋭意研究を重ねた結果、シルクプロテインに血圧低下作用があること、そしてさらにシルクプロテインに桑葉を添加すると、著しく血圧低下作用が増強されることを見出し、本発明を完成させた。
【０００８】
すなわち、本発明は、シルクプロテインを含むことを特徴とする血圧低下作用を有する組成物、およびさらに該組成物に桑葉を添加したことを特徴とする血圧低下作用を有する組成物に関する。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明の実施形態として、シルクプロテインを含むことを特徴とする血圧低下作用を有する組成物が挙げられる。
【００１０】
本発明において、シルクプロテインは、蚕繭由来のセリシンまたはフィブロインなどのタンパク質；該タンパク質を酸または酵素により加水分解して得ることができる、ポリペプチドもしくはオリゴペプチドなどのペプチドまたはセリンもしくはグリシンなどのアミノ酸；あるいはこれらタンパク質、ペプチドまたはアミノ酸を２種類以上含む混合物のことをいう。
【００１１】
本発明のシルクプロテインは、蚕繭または生糸から慣用の方法、例えば、特開平２−１７７８６４号公報に記載の方法などに従い得ることができる。例えば、原料の繭玉、屑繭、絹糸などを、場合によりシルク外層部のセリシンを除去してから、常法に従い加水分解処理するか、あるいはこの加水分解処理物をさらに、必要に応じて中和・濃縮・乾燥・殺菌工程のいずれか一つ以上の工程に付すことにより、本発明のシルクプロテインを得ることができる。
【００１２】
上記の蚕繭は、特に限定されないが、例えば、天蚕（ヤママユガ、Ａｎｔｈｅｒａｅａ  ｙａｍａｍａｉ）、柞蚕（Ａｎｔｈｅｒａｅａ  ｐｅｒｎｙｉ）、ムガ蚕（Ａｎｔｈｒａｅａ  ｍｙｌｉｔｔａ）、クリキュラ（Ｃｒｉｃｕｌａ  ｔｒｉｆｅｎｅｓｔｒａｔａ）、与那国蚕（Ａｔｔａｃｕｓ  ａｔｌａｓ）およびエリ蚕（Ｓａｍｉａ  ｃｙｎｔｈｉａ  ｒｉｃｉｎｉ）などの幼虫の作る蚕繭などが挙げられる。
【００１３】
本発明のシルクプロテインのタンパク質として、フィブロインが好ましく、また、体内への吸収の点から、加水分解処理されたものが好ましい。さらに、繭玉などを０．５％Ｎａ２ＣＯ３水溶液または沸騰水に浸漬することにより、絹糸外層部のセリシンを除去してから加水分解することがより好ましい。
【００１４】
上記の加水分解処理として、塩酸などによる酸加水分解処理；水酸化ナトリウムなどによるアルカリ加水分解処理；およびプロテアーゼ（ぺプチターゼ）による酵素分解処理などが挙げられるが、酸またはアルカリ加水分解処理は、その後中和工程、脱塩工程が必要となるため、酵素による加水分解処理が好ましい。これら処理は、慣用の方法で行うことができ、またこれら処理を単独で行うこともできるし、２種類以上を併用して行うこともできる。
【００１５】
上記のプロテアーゼとして、ペプシン、キモトリプシン、カルボキシペプチターゼ、アミノペプチターゼ、プロリターゼ、パパイン、エラスターゼ、パンクレアチンおよびサモアーゼなどが挙げられる。酸性プロテアーゼまたはアルカリプロテアーゼは、上述した酸・アルカリ加水分解の場合と同様に、中和・脱塩工程が必要となるため、中性領域で活性を有するプロテアーゼが好ましい。例えば、パパイン、エラスターゼ、パンクレアチンおよびサモアーゼなどが好ましい。また、これらプロテアーゼを単独で使用することもできるし、２種類以上を併用することもできる。
加水分解の程度は、特に制限されないが、一般に加水分解産物の平均分子量が３００〜２０，０００の範囲、特に６００〜１１，０００の範囲、とりわけ１，０００〜２，０００の範囲になるように加水分解するのが好ましい。加水分解産物中の遊離アミノ酸の割合を減らして、良好な吸収性を得るために、加水分解産物の平均分子量は３００以上、特に６００以上、とりわけ１，０００以上が好ましく、また、良好な消化性・吸収性を得るために、加水分解産物の平均分子量は２０，０００以下、特に１１，０００以下、とりわけ２，０００以下が好ましいからである。
【００１６】
本発明の実施形態には、上記の組成物に、さらに桑葉を添加した組成物も含まれる。ここで、桑葉とは、クワ科（Ｍｏｒａｃｅａｅ）の植物、例えばＭｏｒｕｓ  ａｌｂａ  Ｌ．またはその同属若しくは近縁の植物の葉のことをいう。
【００１７】
本発明の桑葉として、桑葉の細片、粉末（桑葉末）およびこれらの懸濁液：ならびに桑葉抽出液、桑葉濃縮抽出液および桑葉エキス末などの抽出物を、単独で使用することもできるし、２種類以上を併用することもできる。本発明の組成物には、これら桑葉を、単独で添加してもよく、２種類以上を添加してもよい。
【００１８】
上記の桑葉末は、桑葉を慣用の方法、例えば粉砕機にて粉砕し、粗粉末として得るか、あるいはさらに、該粗粉末を粉砕し、微粉末として得ることもできる。
【００１９】
上記桑葉の抽出物は、慣用の方法に従って得ることができる。例えば、桑葉の全葉、細片または粉末あるいはこれらの混合物に、抽出用溶媒を加え懸濁して、桑葉懸濁液を得る。該懸濁液を、場合により攪拌しながら、一定の温度で一定時間加熱および／または超音波処理により抽出を行ってから、ろ過（例えば、１５０メッシュのフィルターを使用する）または遠心分離して、桑葉抽出液を得ることができる。場合により、このろ過または遠心分離操作で残った残渣に、抽出用溶媒を加え、上記の抽出操作を再び繰り返して、桑葉抽出液を得てもよい。この繰り返しの回数は特に制限されないが、抽出効率と抽出工程の簡便化の点から、１回の繰り返しが好ましい。次に、該抽出液を、場合により減圧濃縮（例えば、６０〜８０℃、固形分１９〜２０％になるまで）して、桑葉濃縮抽出液を得ることもできる。さらに、該抽出液または該濃縮抽出液から、慣用の方法に従い、例えばスプレードライして篩過（例えば６０メッシュの篩）することにより桑葉エキス末を得ることができる。
【００２０】
上記の抽出用溶媒は、生薬類の抽出に慣用される溶媒であれば、特に限定されないが、例えば、水および有機溶媒が挙げられる。該有機溶媒として、メタノール、エタノールおよびイソプロピルアルコールなどのアルコール、エーテルならびにアセトンなどが挙げられる。好ましい抽出用溶媒は、水またはエタノールである。上記の抽出用溶媒は、単独で使用することもできるし、２種類以上の混合溶媒として使用することもできる。また、抽出用溶媒による抽出回数を２回以上設けた場合、抽出工程ごとに、それぞれ異なる抽出用溶媒を使用することもできる。
【００２１】
上記の抽出時の加熱温度は特に限定されないが、通常、室温〜８０℃の温度、好ましくは８０℃である。また、上記の抽出は、必要に応じて還流下で行ってもよい。抽出時間も特に限定されないが、抽出効率および抽出工程の簡便化から、好ましくは数時間、より好ましくは３時間である。
【００２２】
さらに、安全面の点から、桑葉の細片、粉末（桑葉末）およびこれらの懸濁液：ならびに桑葉抽出液、桑葉濃縮抽出液および桑葉エキス末などの調製において、さらに殺菌工程（例えば８０℃、１時間）を設けることが好ましい。
【００２３】
本発明における、桑葉の添加量は特に限定されないが、好適な血圧低下作用を得るために、シルクプロテイン１重量部に対し、桑葉は、原生薬換算量で０．５〜５０重量部、特に２．５〜２５重量部、とりわけ５重量部添加することが望ましい。ここで、原生薬換算量とは、桑葉の全葉、細片および粉末においては、その重量部；これらの懸濁液においては、該懸濁液中に懸濁されている桑葉の全葉、細片および粉末の重量部；桑葉抽出液、桑葉濃縮抽出液および桑葉エキス末においては、これらの１重量部を得るのに必要とされる、桑葉の全葉、細片および粉末の重量部をいう。例えば、桑葉末１０重量部から桑葉エキス末２重量部が得られた場合の、該桑葉エキス末の原生薬換算量は５重量部である。なお、上記重量部は、乾燥重量を表す。
【００２４】
本発明に係る組成物は、食品として、特に高血圧の予防などの目的で健康食品、機能性食品、健康補助食品、特定保健用食品として使用することができる。これら食品は、例えばお茶、ジュースといった飲料水；ゼリー、あめ、チョコレート、チューインガムなどの形態であってもよい。また、本発明に係る食品は、栄養補助食品（サプリメント）として、液剤、粉剤、粒剤、カプセル剤、錠剤の形で製造されてもよい。
【００２５】
また、本発明に係る組成物は、医薬として、例えば、高血圧の予防用または治療用に使用することができる。これら医薬品は、例えば錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬若しくは軟ゼラチンカプセル剤、液剤、乳濁剤又は懸濁剤の形態で経口的に投与することができるが、例えば座剤の形態で直腸的に；例えば軟膏、クリーム剤、ゲル剤又は液剤の形態で局部的又は経皮的に；例えば注射用液剤として非経口的に投与することもできる。
【００２６】
医薬として、本発明に係る組成物の投与量は、特に制限されないが、投与経路、剤型、患者の年齢、体重および症状に応じて適宜選択することができる。例えば、経口投与の場合には、成人１日当り有効成分量として２００〜２，０００ｍｇの投与が望ましい。また、投与期間は、年齢、症状に応じて任意に定めることができる。
【００２７】
【実施例】
以下に、本発明の実施例を示すが、本発明はこれら実施例により限定されるものではない。
【００２８】
調製例１
蚕繭を、５０倍重量の０．５％Ｎａ２ＣＯ３水溶液に浸漬し、その後、１２０分間煮沸し、水洗（５倍重量で２回）、脱水・凍結乾燥して粗製フィブロインを得た。該粗製フィブロインに１０倍重量の４５％（Ｗ／Ｗ）ＣａＣｌ２水溶液を加え、１２０分間煮沸、吸引ろ過した。得られたろ液を、透析により脱塩、凍結乾燥して精製フィブロイン粉末を得た。該精製フィブロイン粉末５ｇを緩衝液（０．０５Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７．０）２００ｍｌに溶解し、さらにサモアーゼを５００ｍｇ／Ｌになるように添加して、６５℃、６時間反応させた。該反応液を、殺菌（１００℃、１０分間）し、凍結乾燥してシルクプロテインを得た。
得られたシクロプロテインに含まれる加水分解産物の平均分子量は１，０５０であった。また、得られたシクロプロテインのアミノ酸の組成を表１に示す。
【００２９】
【表１】
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【００３０】
調製例２
枝付で１ｍ程度に刈り取った桑葉を、枯葉や異物を除去した後、水洗し、泥や汚れを落とした。次に、該桑葉を重曹−食塩（１：１）各０．０２５％水溶液に浸漬した。次に、該桑葉に９５〜１２０℃の蒸気を５分間吹き付け、続いて、８０℃の熱風で、水分が５％以下になるまで乾燥し、枝を取り除いた。次に、該桑葉を、蒸気（約１８０℃、数秒間）により殺菌してから、粉砕機に投入して粗粉砕し、得られた粗粉末を、再び粉砕機に投入して微粉砕して桑葉末（７５メッシュパス９５％以上）を得た。
【００３１】
調製例３
枝付で１ｍ程度に刈り取った桑葉を、枯葉や異物を除去した後、水洗し、泥や汚れを落とした。次に、８０℃の熱風で、水分が５％以下になるまで乾燥し、枝を取り除いた。該桑葉を１ｋｇに精製水１５Ｌを加え、約８０℃、３時間加熱した。次に、上清を取り出し、残渣に精製水１５Ｌを加えて上記と同様に加熱し上清を得た。これらの得られた上清を一緒にし、ろ過（１５０メッシュ）、減圧濃縮（６０〜８０℃、固形分１９〜２０％になるまで）、殺菌（８０℃、１時間）、スプレードライ、篩過（６０メッシュ）し、桑葉エキス末を得た。
【００３２】
実施例１
調製例１に従って得られるシルクプロテインを精製水に溶解させ、１０％（Ｗ／Ｖ）溶液を調製した。
【００３３】
実施例２
調製例３に従って得られる桑葉エキス末（商品名：桑葉エキス末ＭＣ、ミナト製薬株式会社製）を精製水に溶解させ、１０％（Ｗ／Ｖ）溶液を調製し、該溶液に実施例１の１０％（Ｗ／Ｖ）シルクプロテイン溶液を等容量加えて、混合液を調製した。
【００３４】
比較例１
調製例３に従って得られる桑葉エキス末を精製水に溶解させ、１０％（Ｗ／Ｖ）溶液を調製した。
【００３５】
比較例２
調製例２に従って得られる桑葉末（商品名：桑葉末ＫＣ、ミナト製薬株式会社製）を精製水に懸濁させ、１０％（Ｗ／Ｖ）懸濁液を調製した。
【００３６】
実験動物および飼育条件
ＳＨＲラット（自然発生性高血圧ラット）は日本チャールスリバーから７週齢のオスラット１０匹を購入し、２週間の予備飼育後、体重測定と血圧測定を週１回測定し、２回の測定で、高血圧状態の確認を行った後投与実験を実施した。飼育期間中の飼料は、ＭＦ固形飼料（オリエンタル酵母）を与え、摂水は水道水を給水瓶で与え、自由摂取させた。
【００３７】
血圧低下作用の検討
血圧は尾動脈圧血圧測定装置（夏目製作所）を使用し、各測定時間の１５分前に固定器にラットを入れ、４０℃の保温プレートで保温した後、１回の測定につき５回以上繰り返し測定し、明らかな異常値を除いた平均値を測定値とした。
血圧が２００ｍｍＨｇ程度まで上昇したことを確認した１０週齢のＳＨＲラット１０匹を、投与実験前日より約１８時間絶食させ、投与実験の５日前に測った血圧値に差がない様に５群に群分けした（１群２匹）。次に、ラットに強制的に胃ゾンデで、上記実施例１、実施例２、比較例１または比較例２にて調製された溶液または懸濁液を、５００ｍｇ／５ｍｌ／ｋｇＢＷの用量で、単回経口投与した。残り１群は対照群として、精製水を５ｍｌ／ｋｇＢＷ投与した。投与方法は、強制的に胃ゾンデによりＳＨＲラットに５００ｍｇ／５ｍｌ／ｋｇＢＷを、単回で経口投与した。
血圧測定は、上記の方法に従い、投与前、３時間後、６時間後、２４時間後の４回測定した。ラットに対して、投与６時間後の血圧測定時まで給餌は行わず、投与６時間後の血圧測定終了直後に給餌を行った。その後、給餌制限は行わず、投与２４時間後の血圧測定を行った。
その後、１週間後に再び同様の投与実験を実施し、２回の投与実験を合わせ、１群のｎ数を４として解析を行った。測定した結果は、各群の実測値で表すと共に、投与前の値を０とした投与後の変化量の計算値も表し、その値について解析を行った。
【００３８】
統計処理
平均値と標準偏差で表された測定値について、一元の分散分析を行った。危険率（ｐ）が５％以下の場合を有意差ありとした。
【００３９】
結果
結果を表２および図１に示した。図１において、ａ、ａｂおよびｂは、それぞれの間に危険率（ｐ）が５％以下で有意差があることを示している。
【００４０】
【表２】
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【００４１】
各実施例および比較例の投与後の血圧値の変動は、投与３時間後は水の投与群を含めすべての投与群で血圧が低下し、投与６時間後には、比較例１投与群以外は血圧が上昇した。その後、投与２４時間後には、すべての投与群で血圧が上昇し、ほぼ投与前の値への回復がみられた。分散分析で比較すると、投与６時間後の血圧値は、対照群に対し、比較例２投与群は有意な差はみられなかったが、比較例１投与群、実施例１投与群および実施例２投与群では有意に血圧が低下した。
図１に示したように、投与前を０とした場合の血圧値の変化量では、投与３時間後は、実施例２投与群で血圧が２８．５ｍｍＨｇ低下し、実施例１投与群では２３．１ｍｍＨｇ低下した。他の投与群は１８ｍｍＨｇ前後の低下にとどまり、対照群とほぼ同じ値であった。投与６時間後の変化量は、対照群に対し、実施例２投与群で有意に低下し、他の投与群には有意な差はみられなかった。
【００４２】
考察
以上から、比較例１と実施例１の単回経口投与により血圧が低下し、対照群に対し、有意な差がみられた。さらに、実施例２では、比較例１と実施例１よりいっそう血圧の低下が示された。実施例１の投与では、投与３時間後の血圧の低下が他の実施例や比較例よりも著しくみられ、その後、６時間後に血圧は上昇し、２４時間後にはほぼ元の値へ回復した。それに対し、比較例１の投与では、投与３時間後は、対照群とほぼ同様の血圧の変化しかみられなかった。しかし、他の投与群では投与３時間後から６時間後にかけて血圧が上昇していることに対し、比較例１投与群では、投与６時間後に投与３時間後の値よりもやや血圧が低下し、血圧の上昇を抑制している傾向がみられ、他の投与群とは異なった変動が認められた。  以上の結果から、シルクプロテインは早い時間での血圧低下作用が認められ、桑葉エキス末は緩やかな血圧低下作用の維持効果が認められ、二つのサンプルを混合して投与することにより、よりいっそう血圧の低下がみられ、血圧低下作用の相乗効果が認められた。さらに、実施例２投与群では、投与２４時間後でも他の投与群よりもやや血圧が低く、血圧の上昇抑制効果の維持傾向が認められた。比較例１投与群では血圧の低下効果が認められたが、比較例２投与群では、あまり効果が認められなかった。
【００４３】
結論
桑葉エキス末およびシルクプロテインをＳＨＲラットに単回傾向投与し、血圧に及ぼす影響を検討した。その結果、桑葉エキス末およびシルクプロテインを体重ｋｇあたり５００ｍｇ投与すると、投与６時間後には水の投与に対し有意に血圧が低下し、血圧低下効果が認められた。さらに、桑葉エキス末およびシルクプロテインの混合物を投与すると、血圧の低下がより増大し、相乗効果が認められた。
【００４４】
【発明の効果】
以上のように、本発明によれば、シルクプロテイン、またはさらに桑葉を添加することにより、安全で、長期に服用しても副作用などの心配の少ない血圧低下作用を有する組成物を得ることができる。かかる組成物は、血圧低下用の新たな食品または医薬品を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】単回投与後のＳＨＲラットの血圧値（投与前の血圧を０とした場合の変化量）を示す図である。
【図１】
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