(57)【要約】【課題】  ＲＡＮＴＥＳの誘導方法、及びＲＡＮＴＥＳ誘導のための薬剤組成物を提供すること。【解決手段】  オレアン−3β−ヒドロキシ−11−オキソ−12−エン−30酸  ナトリウム等を、火傷患者、ＡＩＤＳ患者、癌患者、脳炎患者、大ケガ・大手術後の個体、若しくはストレスを受けた個体において生じる日和見感染に対する感染抵抗性の低下を治療又は予防するために有効な量において、任意に薬学的に許容されうるキャリアとともにこれらの患者等に投与する。【選択図】  図１
2004149530.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＲＡＮＴＥＳ誘導のための、下記一般式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2004149530.tif 000009
［式中、
Ｒ１は、水素原子、又は下記式（ＩＩ）、若しくは（ＩＩＩ）の基：
【化２】
2004149530.tif 000010
【化３】
2004149530.tif 000011
を表し  {ここで、式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の基は、これらの薬学的に許容される塩であってもよい}；
Ｒ２は、ＣＯＯＨ、若しくは下記式（ＩＶ）の基：
【化４】
2004149530.tif 000012
又は、これらの薬学的に許容される塩
を表し；
Ｘは、Ｃ＝Ｏ、又はＣＨを表し；
点線は、適宜、二重結合を表す］
の使用。
【請求項２】
前記式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、及び（ＩＶ）中の薬学的に許容される塩が、ナトリウム塩、カリウム塩、若しくはアンモニウム塩、又はこれらの組み合わせであることを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記一般式（Ｉ）の化合物が、
オレアン−3β−ヒドロキシ−11−オキソ−12−エン−30酸  ナトリウム；
オレアン−9（11），12−ジエン−3β，30−ジオール−3β，30−Ｏ−ジヘミフタル酸  2ナトリウム；
オレアン−11，13（18）−ジエン−3β，30−ジオール−3β，30−Ｏ−ジヘミフタル酸  2ナトリウム；
オレアン−3β−ヒドロキシ−11，13（18）−ジエン−30酸−3β−Ｏ−ヘミフタル酸  ２ナトリウム；
オレアン−3β−ヒドロキシ−11−オキソ−12−エン−30酸−3β−Ｏ−ヘミフタル酸  2ナトリウム；又は
20β−カルボキシ−11−オキソ−30−ノルオレアン−12−エン−3β−イル−2−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラヌロノシル−β−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸  モノアンモニウムの何れかであることを特徴とする請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項４】
ＲＡＮＴＥＳ誘導剤の製造における、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物をＲＡＮＴＥＳ誘導に有効な量を投与することを特徴とするＲＡＮＴＥＳ誘導方法。
【請求項６】
火傷患者、ＡＩＤＳ患者、癌患者、脳炎患者、大ケガ・大手術後の個体、又はストレスを受けた個体において生じる日和見感染に対する感染抵抗性の低下を治療又は予防するために有効な量の、請求項１に記載の化合物を、任意に薬学的に許容されうるキャリアとともに含むことを特徴とする薬剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＲＡＮＴＥＳ誘導のための、及びＲＡＮＴＥＳ誘導剤の製造における、グリチルリチン及びその誘導体の使用、ＲＡＮＴＥＳの誘導方法、並びにそのための薬剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
サイトカインは、リンパ球等の細胞が産生する蛋白質であり、それに対するレセプターを持つ細胞に働き、細胞の増殖・分化・機能発現を促す。また、サイトカインの中には、ケモタキシス、つまり細胞の移動を促すケモカインと呼ばれる一群のタンパク質がある。このケモカインは、４つのシステイン残基を持つという共通の構造を有し、N末端側の２個のシステイン残基が形成するモチーフによって、ＣＸＣ、ＣＣ等のサブファミリーに分類されている。
【０００３】
ＣＸＣサブファミリーに属するケモカインは、Ｎ末端側の最初の２つのシステイン残基同士が１アミノ酸を挟む配列を有していて、In vitroで特に好中球にケモタキシスを誘導する。一方、ＣＣサブファミリーに属するケモカインは、Ｎ末端側の最初の２つのシステイン残基が、その間にアミノ酸を介さずに直接並んだアミノ酸配列を有していて、in vitroで単球、マクロファージ、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好酸球等にケモタキシスを誘導することが知られている。
【０００４】
ＲＡＮＴＥＳは、ＣＣサブファミリーに属するケモカインの一種であり、主に１型Ｔ細胞の遊走や細胞傷害性Ｔ細胞の活性化に関与し、個体の感染抵抗性や抗腫瘍抵抗性において重要な役割を果たしている。従って、ＲＡＮＴＥＳの作用を誘導することが可能となれば、１型Ｔ細胞反応がその防御の主役となる感染症や腫瘍などの疾患に対して治療効果を得られると考えられる。
【非特許文献１】シュラムら（Schrum et al.,）、ザ・ジャーナル・オブ・イミュノロジー（The Journal of Immunology）、１９９６年、pp.3598-3604
【非特許文献２】シービケら（Siveke et al.,）、ザ・ジャーナル・オブ・イミュノロジー（The Journal of Immunology）、１９９８年、pp.550-554
【非特許文献３】コッチら（Cocci et al.,）、サイエンス（Science）、１９９５年、第２７０巻、pp.1811-1814
【非特許文献４】森内ら、細胞工学、２０００年、第１９巻、第５号、pp.732-737
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、現在に至るまでに、ＲＡＮＴＥＳを誘導する有効な手段が報告されていない。そこで、本発明は、ＲＡＮＴＥＳの誘導方法、及びＲＡＮＴＥＳ誘導のための薬剤組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意検討した結果、グリチルリチン（グリチルリチン酸）及びその誘導体に着目した。
【０００７】
グリチルリチン（又はグリチルリチン酸）は、グリチルレチン酸と２分子のグルクロン酸とからなる化合物であり、古くより抗炎症作用を有することが知られ、また、胃液分泌抑制作用、消化器の潰瘍治癒作用、抗アレルギー性を高める作用、免疫抑制活性、肝機能増強作用、解毒作用、ウイルスに対する抵抗力を高める作用等も知られている。特に、肝臓疾患用剤、及びアレルギー用剤としては、広く臨床領域で用いられている化合物である。
【０００８】
グリチルリチンは、近年、ＨＩＶの細胞内増殖抑制作用を有すること、そして、無症状キャリア（ＡＣ）の患者に対してグリチルリチンを毎日１５０乃至２２５ｍｇ（６乃至９錠）投与すると、１０年以上もＡＩＤＳを発症せずに生存させる効果を有することが報告されている。
【０００９】
本発明者らは、グリチルリチン及びその誘導体が、ＲＡＮＴＥＳ誘導作用を有し、更に、敗血症やＭＲＳＡ等の感染症からの防御に有効であることを見出し、本発明を完成した。
即ち、本発明は、ＲＡＮＴＥＳ誘導のためのグリチルリチン及びその誘導体の使用を提供する。
本発明において使用されるグリチルリチン及びその誘導体は、下記一般式（Ｉ）の化合物：
【００１０】
【化１】
2004149530.tif 000003
［式中、
Ｒ１は、水素原子、又は下記式（ＩＩ）、若しくは（ＩＩＩ）の基：
【００１１】
【化２】
2004149530.tif 000004
【００１２】
【化３】
2004149530.tif 000005
を表し  {ここで、式（ＩＩ）、及び（ＩＩＩ）の基は、これらの薬学的に許容される塩であってもよい}；
Ｒ２は、ＣＯＯＨ、若しくは下記式（ＩＶ）の基：
【００１３】
【化４】
2004149530.tif 000006
又は、これらの薬学的に許容される塩
を表し；
Ｘは、Ｃ＝Ｏ、又はＣＨを表し；
点線は、適宜、二重結合を表す］
である。
上記の化合物においては、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、及び（ＩＶ）中の薬学的に許容される塩として、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アルミニウム塩、アンモニウム塩や、種々の有機アミン塩等が挙げられるが、その中でもナトリウム塩、カリウム塩、若しくはアンモニウム塩、又はこれらの組み合わせが好ましい。
【００１４】
上記一般式（Ｉ）に含まれる化合物としては、以下のもの：
・オレアン−3β−ヒドロキシ−11−オキソ−12−エン−30酸  ナトリウム；
・オレアン−9（11），12−ジエン−3β，30−ジオール−3β，30−Ｏ−ジヘミフタル酸  2ナトリウム；
・オレアン−11，13（18）−ジエン−3β，30−ジオール−3β，30−Ｏ−ジヘミフタル酸  2ナトリウム；
・オレアン−3β−ヒドロキシ−11，13（18）−ジエン−30酸−3β−Ｏ−ヘミフタル酸  ２ナトリウム；
・オレアン−3β−ヒドロキシ−11−オキソ−12−エン−30酸−3β−Ｏ−ヘミフタル酸  2ナトリウム；及び
・20β−カルボキシ−11−オキソ−30ノルオレアン−12−エン−3β−イル−2−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラヌロノシル−β−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸  モノアンモニウム
が含まれる。
【００１５】
本発明は、ＲＡＮＴＥＳ誘導剤の製造における、上記化合物の使用を提供する。
【００１６】
本発明のＲＡＮＴＥＳ誘導方法は、上記化合物をＲＡＮＴＥＳ誘導に有効な量投与することを特徴とする。
【００１７】
本発明の薬剤組成物は、火傷患者、ＡＩＤＳ患者、癌患者、脳炎患者、大ケガ・大手術後の個体、若しくはストレスを受けた個体において生じる日和見感染に対する感染抵抗性の低下を治療又は予防するために有効な量の、上記化合物を、任意に薬学的に許容されうるキャリアとともに含むことを特徴とする。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によれば、グリチルリチン及びその誘導体を使用することによって、ＲＡＮＴＥＳを誘導することができる。
本発明のＲＡＮＴＥＳの誘導方法によれば、ＲＡＮＴＥＳを効率良く誘導することができる。
本発明の薬剤組成物は効率良くＲＡＮＴＥＳを誘導することができるので、１型Ｔ細胞の遊走や１型Ｔ細胞反応におけるエフェクター細胞を活性化し、感染や腫瘍の局所における１型Ｔ細胞反応を高め、感染症や癌の治療に好適に用いることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
本発明においてＲＡＮＴＥＳ誘導のために使用されるグリチルリチン及びその誘導体は、例えば、ミノファーゲン製薬（株）より入手することができるものを挙げることができる。あるいは、グリチルリチンの誘導体としては、例えば、Chem．Pharm．Bull，34，897(1986)、Jpn．J．Pharmcol．，71，281(1996)等に記載されているものである。
【００２０】
オレアン−3β−ヒドロキシ−11−オキソ−12−エン−30酸−3β−Ｏ−ヘミフタル酸  2ナトリウムは、以下のようにして合成することができる。
オレアン−3β−ヒドロキシ−11−オキソ−12−エン−30酸−3β−Ｏ−ヘミフタル酸  2ナトリウムの合成方法
１０ｇのオレアン−11，13（18）−ジエン−3−ヒドロキシ−30酸−3−O−ヘミフタル酸に対し、３００ｍｌのメタノールと、３０ｍｌの１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加して攪拌・溶解した。攪拌中の反応液のｐＨが１０．０〜１０．４の範囲に収まるようにして、水酸化ナトリウム水溶液を添加した。反応液の調製後、溶液をメンブレンフィルターを利用して濾過した。濾過後、反応液を容量が約半分になるまで濃縮し、２００ｍｌのアセトンを添加して析出してくる白色結晶を回収して乾燥させた。本発明において使用される一化合物である上記の化合物が９．３ｇ得られた。融点２８３〜２８７℃、質量分析値（ｍ／ｚ）：６０１（Ｍ−１）。
【００２１】
オレアン−11，13（18）−ジエン−3−ヒドロキシ−30酸−3−O−ヘミフタル酸の合成方法
３０ｇのオレアン−11，13（18）−ジエン−3−ヒドロキシ−30酸、６０ｇの無水フタル酸、２ｇの4−ジメチルアミノピリジンの混合物を３００ｍｌのクロロホルムに添加し、８０℃で２４時間攪拌還流した。反応終了後、溶媒を留去し、残渣に２４０ｍｌのエタノールを加えて、９０℃で加熱溶解させた後、２４０ｍｌの水を添加して、更に１５分間加熱攪拌した。冷却後、析出した白色結晶を回収し、この結晶に２００ｍｌの５０％エタノールを添加して加熱・攪拌を３０分間続けた。冷却後、溶解しなかった白色結晶を濾過して回収し、これを５０％エタノール水で洗浄し乾燥させて、３７．６ｇのオレアン−11，13（18）−ジエン−3−ヒドロキシ−30酸−3−O−ヘミフタル酸を得た。
【００２２】
オレアン−11，13（18）−ジエン−3−ヒドロキシ−30酸の合成方法
４７．１ｇの１８α−グリチルレチン酸を５００ｍｌのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶解させ、８０℃で５００ｍｌの１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液と、５００ｍｌのＴＨＦとの混合物に７５．６ｇの水素化ホウ素ナトリウムを溶解させた溶液を滴下し、同温度で２４時間反応させた。反応終了後、室温に戻し、６００ｍｌのアセトンを添加して攪拌し、２Ｎの塩酸を用いて溶液を中和させた。反応液中のＴＨＦを留去させ、析出してきた白色結晶（１１α−ヒドロキシ−グリチルレチン酸、及び１１β−ヒドロキシ−グリチルレチン酸の混合物）を濾過して回収した。この結晶を１０００ｍｌのＴＨＦに溶解させ、乾燥させた後、溶媒を留去し、残渣に４００ｍｌのクロロホルムを加えて、不溶性の結晶を濾過して回収し、乾燥させ、１１α−ヒドロキシ−グリチルレチン酸と１１β−ヒドロキシ−グリチルレチン酸との混合物４０ｇを得た。この混合物を４０００ｍｌのＴＨＦに溶解させ、１６００ｍｌの１０％塩酸を加えて、室温で３時間攪拌した。析出してきた白色結晶を濾過して回収し、水洗後乾燥させ、３５．８ｇのオレアン−11，13（18）−ジエン−3−ヒドロキシ−30酸を得た。
【００２３】
また、本発明において使用されるグリチルリチン及びその誘導体としては、グリチルリチンを成分とするカンゾウ（甘草）、若しくはカンゾウから得られるカンゾウ末、カンゾウエキス、カンゾウ粗エキス等のように、自然に存在する資源から得ることもできる。
【００２４】
後段の実施例において詳細に説明するが、グリチルリチン及びその誘導体は、末梢単核細胞、Ｔ細胞、単球等に作用してＲＡＮＴＥＳ産生を誘導する、ＲＡＮＴＥＳ誘起能を有することが判明した。従って、ＲＡＮＴＥＳを誘導するために、グリチルリチン及びその誘導体を使用することは有効な手段であり、グリチルリチン及びその誘導体をＲＡＮＴＥＳ誘導剤の有効成分として用いることができる。
【００２５】
本発明のＲＡＮＴＥＳ誘導方法は、グリチルリチン及びその誘導体によるＲＡＮＴＥＳ誘起能を利用したものであって、ＲＡＮＴＥＳ誘導に有効な量のグリチルリチン及びその誘導体を投与する。ここで、ＲＡＮＴＥＳ誘導に有効な量とは、１型Ｔ細胞の遊走や細胞傷害性Ｔ細胞等の活性化を引き起こすのに十分な量のＲＡＮＴＥＳを産生し、且つ、グリチルリチン及びその誘導体の過多の投与による不都合（副作用）や経済的にロスとならないようなグリチルリチン及びその誘導体の量をいう。
このように、グリチルリチン及びその誘導体のＲＡＮＴＥＳ誘導に有効な量を適宜決定して、これを投与することによってＲＡＮＴＥＳを効率的に誘導することができる。
【００２６】
本発明のＲＡＮＴＥＳ誘導方法において、グリチルリチン又はその誘導体は、本願発明の薬剤組成物の形態、即ち本願において意図する対象疾患又は対象状態の治療・予防（又は当該疾患もしくは状態の原因となる作用機序の制御、例えば１型Ｔ細胞の走化性の促進）に有効な量のグリチルリチン又はその誘導体と、任意の薬学的に許容されうるキャリアとを含む形態で使用されることが好ましい。
【００２７】
以上説明したように、本発明のＲＡＮＴＥＳの誘導方法によれば、ＲＡＮＴＥＳを効率的に誘導・産生させることができるため、１型Ｔ細胞の遊走や、細胞傷害性Ｔ細胞、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞などの１型Ｔ細胞反応におけるエフェクター細胞の機能が促進され、個体の細菌感染に対する抵抗性を上昇させることができる。
【００２８】
次に、本発明の薬剤組成物について説明する。
本発明の薬剤組成物は、ＲＡＮＴＥＳを誘導するために有効な量のグリチルリチン又はその誘導体を含有するものであって、当該薬剤組成物中には、グリチルリチン若しくはその誘導体を単独で、又は任意の薬学的に許容されうるキャリアと混合して含ませることが可能である。また、本発明の薬剤組成物は、常法にしたがって種々の形態に調製することが可能であり、その形態には例えば錠剤、注射剤、カプセル剤、スプレー剤、トローチ、粉末等が含まれる。なお、「薬学的に許容されうるキャリア」とは、当該組成物中の有効成分の機能を、実質的に阻害しないものを意味し、具体的には固形の希釈剤や充填剤、無菌の水性媒体、及び種々の無毒性有機溶媒等が含まれる。
【００２９】
本発明により得られるＲＡＮＴＥＳ誘導剤又は薬剤組成物は、経口的、経腸的、局所的、経皮的、及び血管内、筋肉内投与方法などにより投与することができるが、治療又は予防する患者の体重や健康状態、治療する疾患の状態に応じて、適宜、臨床医により選択されるものである。用量としては、例えば、体重１ｋｇあたり０．１〜１００ｍｇを１日に１回から複数回に分けて投与することができる。
【００３０】
本発明の薬剤組成物によれば、ＲＡＮＴＥＳを効率的に誘導することができるので、１型Ｔ細胞の遊走や、１型Ｔ細胞反応のエフェクター細胞を活性化させることができ、１型Ｔ細胞反応がその防御の主役となる感染症や腫瘍などの疾患に対して治療効果を得ることが期待できる。
【００３１】
特に、火傷患者、ＡＩＤＳ患者、癌患者、脳炎患者、大ケガ・大手術後の個体、又はストレスを受けた個体において生じる日和見感染に対する感染抵抗性の低下を治療又は予防するのに好適である。
【実施例１】
【００３２】
〈グリチルリチン及びその誘導体によるＲＡＮＴＥＳ誘起能〉
健常人より末梢血を採血し、Ficoll-Hypaque にて末梢単核細胞を分離した。培養には、１０％ＦＣＳと抗生物質（ペニシリン及びストレプトマイシン）とを含有するＲＰＭＩ１６４０培地を使用した。1 x 106 cells/ml の末梢単核細胞を100μｇ/ｍｌ量のオレアン−3β−ヒドロキシ−11−オキソ−12−エン−30酸  ナトリウム；オレアン−9（11），12−ジエン−3β，30−ジオール−3β，30−Ｏ−ジヘミフタル酸  2ナトリウム；オレアン−11，13（18）−ジエン−3β，30−ジオール−3β，30−Ｏ−ジヘミフタル酸  2ナトリウム；オレアン−3β−ヒドロキシ−11，13（18）−ジエン−30酸−3β−Ｏ−ヘミフタル酸  ２ナトリウム；オレアン−3β−ヒドロキシ−11−オキソ−12−エン−30酸−3β−Ｏ−ヘミフタル酸  2ナトリウム、又はグリチルリチン酸  モノアンモニウムで２４時間刺激した後、培養上清中RANTES量をhuman RANTES/CCL5 Quantikine Immunoassay kit (R&D Systems) にて測定した。なお、図中コントロールは、末梢単核細胞を培地にて処理した際の培養上清中RANTES量を示す。その結果を図１に示す。
図１から明らかなように、コントロールでは、RANTESがほとんど検出されないのに対し、グリチルリチン酸  モノアンモニウムにより刺激された培養上清では、３ｎｇ/ｍｌの RANTESが誘起され、ほぼ同量のRANTESがオレアン−11，13（18）−ジエン3β，30−ジオール−3β，30−Ｏ−ジヘミフタル酸  2ナトリウムにより誘起された。
また、上記以外の化合物により刺激された培養上清では、より多くのRANTESが誘起されていることから、これらの化合物は、末梢単核細胞に対してより強いRANTES誘起能を持つことが判明した。
【実施例２】
【００３３】
健常人より末梢血を採血し、Ficoll-Hypaque にて末梢単核細胞を分離した。1 x 106 cells/ml の末梢単核細胞を100μｇ/ｍｌ量のグリチルリチン酸  モノアンモニウム（以下、グリチルリチン酸  モノアンモニウムをグリチルリチンと記載する）で刺激した。グリチルリチン添加時を０時間として、１２、２４、４８、７２時間後の培養上清中の RANTES 量を human RANTES/CCL5 Quantikine Immunoassay kit (R&D Systems) にて測定した。その結果を図２に示す。なお、図中コントロールは、グリチルリチン非処理単核細胞の培養上清中のRANTES量を示す。
図２から明らかなように、グリチルリチンにより刺激された単核細胞によるRANTES産生は、培養時間の経過と共に増大した。
【実施例３】
【００３４】
健常人より末梢血を採血し、Ficoll-Hypaque にて末梢単核細胞を分離した。 1 x 106 cells/mlの末梢単核細胞を 0.1 〜100 μg/ml 量のグリチルリチンで 24 時間刺激した。培養上清中のRANTES量は、human RANTES/CCL5 Quantikine Immunoassay kit (R&D Systems) にて測定した。その結果を図３に示す。
グリチルリチンは1〜100μg/ml の間で用量依存的にRANTESを誘起した。なお、以上の結果はヒトばかりではなく、マウスの脾臓由来単核細胞を用いた実験でも確認出来た。
【実施例４】
【００３５】
AIDS患者3人 (CD4 count, 215~418 cells/ｍl; viral load, 80,000~370,000 copies/ml) より末梢血を採血し、Ficoll-Hypaque にて末梢単核細胞を分離した。1 x 106 cells/ml の末梢単核細胞を 100 μg/ml 量のグリチルリチンで 24時間刺激した。培養上清中のRANTES量はhuman RANTES/CCL5 Quantikine Immunoassay kit (R&D Systems) にて測定した。なお、図中コントロールは、グリチルリチン非処理単核細胞の培養上清中RANTES量を示す。その結果を図４に示す。
健常人由来の末梢単核細胞と同様に、AIDS患者由来の末梢単核細胞をグリチルリチンで刺激するとRANTESが誘起された。
【実施例５】
【００３６】
〈Ｔｈ１細胞誘導作用〉
健常人より末梢血を採血し、Ficoll-Hypaque にて末梢単核細胞を分離した。 1 x 106 cells/ml の末梢単核細胞を 100μg/ml 量のグリチルリチンあるいはグリチルリチンと 抗RANTES単一抗体 (10 μg/ml) の存在下、IL-2 (10 U/ml) と 抗IFN-γ単一抗体 (10 μg/ml) を添加した培地にて７日間培養した。培養後、細胞よりＲＮＡを抽出し、Th1 細胞のマーカーである IL-12Rβ2 mRNAの発現をRT-PCRにて測定した。なお、グリチルリチンは、IFN-γ 産生を誘起することがわかっているので、IFN-γが関与していないことを示すために、抗IFN-γ単一抗体 の存在下で実験を行った。つまり この試験はIFN-γが関与していない反応である。なお、図中コントロールは、グリチルリチンを添加せず培養したときの単核細胞における IL-12Rβ2 mRNAの発現の度合いを示す。その結果を図５に示す。
グリチルリチンで刺激された細胞は、IL-12Rβ2 mRNAの発現が増加するが、抗RANTES単一抗体 と共に培養した細胞ではその発現が消失したことから、グリチルリチンの Th1誘導作用は、RANTES誘起を介していることが示された。
【実施例６】
【００３７】
〈感染防御効果〉
グリチルリチンは、上述したように、IFN-γ産生を誘起することがわかっているので、IFN-γが関与していないことを示すために IFN-γノックアウトマウスを用いて実験を行った。
IFN-γノックアウトマウスに、20 mg/kg 量のグリチルリチンを腹腔内投与した2 時間後、cecal ligation and puncture (CLP) 法にて敗血症を誘発させた。尚、対照群には生理食塩水を投与した2 時間後、同様の方法にて敗血症を誘発させた。敗血症感染後、７日間までのIFN-γノックアウトマウスの生存率（％）を図６に示す。
【実施例７】
【００３８】
IFN-γノックアウトマウスに、20 mg/kg 量のグリチルリチンを腹腔内投与した2 時間後、CLP法にて敗血症を誘発させた。グリチルリチンを投与する 2 時間前と、12 および 24 時間後に、10 μg/ml 量の 抗RANTES単一抗体を、その対照群には同量の Ig を皮下投与した。敗血症感染後、７日間までのIFN-γノックアウトマウスの生存率（％）を図７に示す。
図６の結果から明らかなように、敗血症感染後４日で80%の IFN-γノックアウトマウスが死亡したのに対し、グリチルリチンを投与したIFN-γノックアウトマウスは、全体の 80%が死を免れ生存した。しかし、図７の結果より、抗RANTES単一抗体をグリチルリチンと共に投与すると、対照群と同レベルまで死亡率が上昇したことから、グリチルリチンの抗敗血症効果は、RANTES誘起を介して発現していることが示された。
【実施例８】
【００３９】
IFN-γノックアウトマウス由来脾単核細胞 (5 x 106 cells/ml) をSCIDbgMN マウス（マクロファージ及び好中球機能欠損 SCID-beige マウス）に移入した。細胞移入後直ちに20mg/kg用量のグリチルリチンを腹腔内投与した。その 2 時間後 5 LD50 量のメチシリン耐性黄色ブドウ球菌 (MRSA) を尾静脈より感染させた。尚、対照群には生理食塩水を投与した後、同量のMRSAを感染させた。MRSA感染後、１０日間までのSCIDbgMNマウスの生存率（％）を図８に示す。
【実施例９】
【００４０】
IFN-γノックアウトマウス由来脾単核細胞 (5 x 106 cells/ml) をSCIDbgMN マウスに移入した。細胞移入後直ちに20mg/kg用量のグリチルリチンを腹腔内投与した。その 2 時間後 5 LD50 量のMRSAを尾静脈より感染させた。グリチルリチンを投与する 2 時間前と、12 および 24 時間後に、10 μg/ml 量の抗RANTES単一抗体を、その対照群には同量の Ig を皮下投与した。MRSA感染後、１０日間までのSCIDbgMNマウスの生存率（％）を図９に示す。
図８から明らかなように、MRSA感染後、3.5日で100%の生理食塩水投与群が死亡したのに対し、グリチルリチン投与群は全体の75%が死を免れて生存した。しかし、図９の結果より、抗RANTES単一抗体 をグリチルリチンと共に投与すると、対照群と同レベルまで死亡率が上昇したことから、グリチルリチンの MRSA 感染に対する防御効果は、RANTES誘起を介して発現していることが示された。
【００４１】
本発明において合成された化合物群は、以下のものである。
【００４２】
【化５】
2004149530.tif 000007
【００４３】
【表１】
2004149530.tif 000008
【産業上の利用可能性】
【００４４】
本発明によれば、グリチルリチン及びその誘導体を使用することによって、ＲＡＮＴＥＳを誘導することができる。
本発明のＲＡＮＴＥＳの誘導方法によれば、ＲＡＮＴＥＳを効率良く誘導することができる。
本発明の薬剤組成物は効率良くＲＡＮＴＥＳを誘導することができるので、１型Ｔ細胞の遊走や１型Ｔ細胞反応におけるエフェクター細胞を活性化し、感染や腫瘍の局所における１型Ｔ細胞反応を高め、感染症や癌の治療に好適に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】末梢単核細胞をグリチルリチン及びその誘導体にて２４時間刺激した後のＲＡＮＴＥＳ産生量を示す。
【図２】末梢単核細胞をグリチルリチンにて刺激した後の経時的ＲＡＮＴＥＳ産生量を示す。
【図３】末梢単核細胞に作用させるグリチルリチン量と、ＲＡＮＴＥＳ産生量との相関関係を示す。
【図４】ＡＩＤＳ患者由来末梢単核細胞をグリチルリチンにて２４時間刺激した後のＲＡＮＴＥＳ産生量を示す。
【図５】グリチルリチンによるＴｈ１細胞誘導作用（IL-12Rβ2 mRNA発現の度合い）を示す。
【図６】敗血症モデルにおける、グリチルリチンによる感染防御効果を示す。
【図７】敗血症感染モデルにおける、グリチルリチンによる感染防御効果に及ぼすＲＡＮＴＥＳの影響を示す。
【図８】ＭＲＳＡ感染に対するグリチルリチンによる感染防御効果を示す。
【図９】ＭＲＳＡ感染に対するグリチルリチンによる感染防御効果におけるＲＡＮＴＥＳの影響を示す。
【図１】
2004149530.tif 000013
【図２】
2004149530.tif 000014
【図３】
2004149530.tif 000015
【図４】
2004149530.tif 000016
【図５】
2004149530.tif 000017
【図６】
2004149530.tif 000018
【図７】
2004149530.tif 000019
【図８】
2004149530.tif 000020
【図９】
2004149530.tif 000021