(57)【要約】【課題】フローサイトメトリーのような高価な装置を用いることなく、簡便に細胞診断等の、物質の細胞に対する作用を調べることが可能であり、かつ、同一の条件下で同時に異なる物質の細胞に対する作用を調べることができる手段を提供すること。【解決手段】支持体ベースと、該支持体ベース上に設けられた複数の領域であって、細胞に対する作用を調査しようとする１又は２以上の物質が固定化された固定化領域とを具備し、固定化された物質が異なる複数の固定化領域を具備する、対細胞作用調査用支持体を提供した。【選択図】　図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
支持体ベースと、該支持体ベース上に設けられた複数の領域であって、細胞に対する作用を調査しようとする１又は２以上の物質が固定化された固定化領域とを具備し、固定化された物質が異なる複数の固定化領域を具備する、対細胞作用調査用支持体。
【請求項２】
前記物質が、タンパク質、糖又は脂質である請求項１記載の支持体。
【請求項３】
前記物質が抗体であり、細胞表面上の抗原との結合性を調べるためのものである請求項１記載の支持体。
【請求項４】
前記抗体が抗ＣＤ抗体であり、前記抗原がリンパ球又は白血球表面上のＣＤ抗原である請求項３記載の支持体。
【請求項５】
前記支持体ベース上の前記固定化領域以外の領域が疎水化処理されている請求項１ないし４のいずれか１項に記載の支持体。
【請求項６】
請求項１ないし５のいずれか１項に記載の支持体の存在下で細胞を培養し、次いで各固定化領域上の細胞を調査することを含む、物質の対細胞作用調査方法。
【請求項７】
前記培養は、細胞浮遊液中に前記支持体を浸漬した状態で行う請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記調査は、各固定化領域上に付着した細胞数の測定、細胞の成長状態又は分化状態の観察を行うことにより行う請求項６又は７記載の方法。
【請求項９】
前記物質が抗体又は接着因子であり、各固定化領域上の細胞の調査は、各固定化領域に結合した細胞数を測定することを含む請求項６ないし８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
培養後の各固定化領域上の細胞に、１種又は２種以上の抗体若しくはその抗原結合性断片を作用させ、前記細胞の表面抗原を調査することをさらに含む請求項６又は７記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体が抗ＣＤ抗体であり、前記抗原がリンパ球又は白血球表面上のＣＤ抗原である請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
前記支持体ベース上の前記固定化領域以外の領域が疎水化処理されている請求項６ないし１１のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、特定の物質の細胞に対する作用を調査するための支持体及び方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、細胞診断法として血球細胞をフローサイトメトリーで分析することが行われている。これは、細胞表面にある抗原に対して、蛍光標識した抗体を反応させ、結合抗体の量をレーザー分光により定量するものである。臓器移植などの際の免疫反応を抑制するための組織適合性を評価する方法の一つとして利用されている。
【０００３】
一方、生体適合性材料の評価法としては、基板ごとに１つの生体適合性材料の固定化を行い、別々に評価する方法がとられている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、フローサイトメトリーは、数千万円もする高価な装置であり、また、操作に熟練を要する。一方、基板ごとに異なる材料を固定化する評価方法では、同時に同じ条件下で細胞応答の評価ができず、絶対的な性能評価を行うことができなかった。
【０００５】
従って、本発明の目的は、フローサイトメトリーのような高価な装置を用いることなく、簡便に細胞診断等の、物質の細胞に対する作用を調べることが可能であり、かつ、同一の条件下で同時に異なる物質の細胞に対する作用を調べることができる手段を提供することである。
【０００６】
【非特許文献１】Ｂｉｏｃｏｎｊ．　Ｃｈｅｍ．，　９，　２７７（１９９８）
【非特許文献２】Ｌａｎｇｍｕｉｒ，　１４，　６６１０（１９９８）
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本願発明者は、鋭意研究の結果、細胞に対する作用を調査しようとする１又は２以上の物質がそれぞれ固定化された複数の固定化領域を支持体上に設け、この支持体の存在下で細胞を培養することにより、簡便に、かつ、同一の条件下で同時に異なる物質の細胞に対する作用を調べることができることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明は、支持体ベースと、該支持体ベース上に設けられた複数の領域であって、細胞に対する作用を調査しようとする１又は２以上の物質が固定化された固定化領域とを具備し、固定化された物質が異なる複数の固定化領域を具備する、対細胞作用調査用支持体を提供する。また、本発明は、上記本発明の支持体の存在下で細胞を培養し、次いで各固定化領域上の細胞を調査することを含む、物質の対細胞作用調査方法を提供する。
【０００９】
【発明の実施の形態】
上記の通り、本発明の対細胞作用調査用支持体は、支持体ベースと、該支持体ベース上に設けられた複数の領域であって、細胞に対する作用を調査しようとする１又は２以上の物質が固定化された固定化領域とを具備し、固定化された物質が異なる複数の固定化領域を具備するものである。
【００１０】
支持体ベースは、その上に後で詳述する固定化領域が形成されるベースとなるものである。支持体ベースの形状は、通常、板状又はシート状であるが、これらに限定されるものではない。また、支持体ベースに、固定化領域を設けるための複数の凹部や溝等を設けてもよい。支持体ベースの材質は限定されるものではなく、非特異吸着を抑制する観点から、従来よりマイクロプレートの材質として用いられているポリスチレンや、ガラス等が好ましい。支持体ベースの大きさも何ら限定されるものではないが、長方形の場合、通常、長さ７０〜８０ｍｍ、幅２０〜３０ｍｍ程度が適当である。
【００１１】
支持体ベース上には、細胞に対する作用を調査しようとする１又は２以上の物質が固定化された固定化領域が形成される。本明細書にいう、「細胞に対する作用」とは、細胞に結合若しくは接着する、細胞の成長若しくは増殖を促進若しくは阻害する、又は細胞の分化を促進若しくは阻害する等、細胞に対する何らかの作用を意味する。細胞に対する作用を調査しようとする物質（以下、便宜的に「作用調査物質」と言うことがある）は、細胞に対する作用を調査したい物質であれば何でもよい。通常、タンパク質（糖タンパク質やリポプロテイン等を包含する）、ペプチド、糖又は脂質（糖脂質等を包含する）等の生体高分子である場合が多いが、これらに限定されるものではなく、低分子有機化合物や無機化合物であってもよい。
【００１２】
作用調査物質の例としては、抗体、接着因子、成長因子、成長阻害因子、分化誘導因子、分化阻害因子等を挙げることができるがこれらに限定されるものではない。これらの作用調査物質うち、特に有用なものとして抗体を挙げることができる。抗体を固定化領域に固定化し、固定化領域に結合する細胞数を調査することにより、細胞表面上の抗原を検出又は定量することができる。従って、この方法により、高価なフローサイトメトリーを用いることなく従来の細胞診断を行うことができる。例えば、作用調査物質として、抗ＨＬＡモノクローナル抗体を用い、細胞としてリンパ球を用いることにより、ＨＬＡ型判別を行うことが可能になる。あるいは、作用調査物質として、抗ＣＤ抗体（例えば抗ＣＤ４５抗体等）を用い、細胞としてリンパ球又は白血球を用いることにより、リンパ球又は白血球表面上のＣＤ抗原の有無を調査することができる。さらに、培養後の各固定化領域上の細胞に、１種又は２種以上の抗体若しくはその抗原結合性断片を作用させ、前記細胞の表面抗原を調査することもできる。この方法によれば、複数の表面抗原を同時に測定することができる。
【００１３】
作用調査物質は、各固定化領域において、単一の物質であってもよいし、複数の物質であってもよい。複数の物質が固定化されている場合には、これらの物質の組み合わせの、細胞に対する作用を調べることができる。
【００１４】
支持体ベース上には、固定化された作用調査物質が異なる複数の固定化領域が設けられる。なお、本発明の支持体では、作用調査物質が異なる複数の固定化領域を設けることが必要であるが、調査の精度向上のために、同一の作用調査物質が固定化された固定化領域をそれぞれ複数ずつ設けてもよい。
【００１５】
各固定化領域の大きさは特に限定されるものではなく、通常、数十平方マイクロメートルないし数百平方マイクロメートルが好ましい。また、支持体ベース上に形成する固定化領域の数も特に限定されないが、通常、数十ないし数百が好ましい。また、個々の固定化領域に固定化される作用調査物質の量は、特に限定されるものではなく、調査の目的に応じて適宜設定されるが、１つの固定化領域当たりの作用調査物質の固定量（複数の作用調査物質が固定化される場合にはその合計量）は、通常、数マイクログラムから数十マイクログラム程度である。また、複数の固定化領域は、整列させて（アレイ状に）配置することが好ましい。固定化領域を整列させて配置することにより、固定化領域のパターンと細胞の応答パターンの相関から、容易に細胞の特性をより詳細に調査することができる。
【００１６】
作用調査物質の固定化は、それ自体公知の方法により行うことができる。タンパク質等の生体高分子は、ポリスチレンのような疎水性のポリマーに物理吸着されて結合することが知られており、マイクロプレートへの抗体の結合等において広く用いられている。この方法では、単に、作用調査物質の溶液を支持体ベース上にスポットし、乾燥させるだけでよく、簡単に行うことができる。もっとも、本発明の支持体の好ましい一使用態様では、支持体が培養液中に数日間又はそれ以上の長期にわたって浸漬されるので、その間に作用調査物質が固定化領域から離脱することがないようにするために、より堅固に作用調査物質を固定化することが好ましい。このための方法として、支持体ベース上に光反応性高分子をスポットし、その上に作用調査物質を固定化することができる。このような光反応性高分子としては、ポリビニル系ポリマー、特にポリアクリル系やポリアリル系ポリマーに、アジドアニリンやアジド安息香酸のような芳香族アジドを反応させたものを挙げることができる。このような光反応性高分子自体及びその製造方法は公知であり、例えば、Ｌａｎｇｍｕｉｒ，　１４，　６６１０（１９９８）及びＢｉｏｃｏｎｊ．　Ｃｈｅｍ．，　９，　２７７（１９９８）に記載されているし、下記実施例にも詳細に記載されている。このような光反応性高分子を用いて作用調査物質の固定化を行う場合、まず、光反応性高分子溶液を、固定化領域となる支持体ベース上の領域にスポットし、乾燥後、作用調査物質の溶液を光反応高分子が塗布された領域上にスポットし、乾燥後、紫外線を照射する。これによって、作用調査物質が光反応性高分子のアジド基に共有結合され、固定化される。このように、光反応性高分子を用いることにより、簡便に作用調査物質を固定化することができる。もっとも、作用調査物質の固定化方法は、上記した方法に限定されるものではなく、作用調査物質の生物学的作用を喪失することなく固定化できるいずれの方法をも採用することができる。例えば、ポリスチレンにアミノ基を付与した支持体ベースに架橋剤を用いて作用調査物質を共有結合させるような周知の方法を用いることもできる。
【００１７】
前記支持体ベース上の前記固定化領域以外の領域は、疎水化処理されていることが好ましい。疎水化処理を行うことにより、細胞の支持体ベースへの非特異吸着を防止又は減少させることができ、培養液中で支持体ベースを揺らすといった簡便な処理により、支持体ベースに非特異的に付着している細胞を除去することが可能になる。疎水化処理は、例えば、炭素数１０以上のアルキル基等の疎水性基で支持体ベースを被覆することにより行うことができる。疎水性基によるコーティングは、共有結合によっても物理吸着によってもよい。例えば、ガラス基板のシラノール基にオクタデシルトリエトキシシラン等を反応させることによりオクタデシル基をガラス基板に結合させることができる。このようなオクタデシル基被覆ガラスは市販もされており、容易に入手できる。
【００１８】
本発明の方法では、上記した本発明の支持体を用いて、固定化領域に固定化された作用調査物質の細胞に対する作用を調べる。これは、支持体の存在下で細胞を培養し、次いで各固定化領域上の細胞を調査することにより行うことができる。この場合の培養方法は、調査の目的に応じて適宜選択できる。専ら細胞の分化や増殖状態を調べる場合には、固定化領域上で細胞を固相培養してもよいし、作用調査物質と細胞との結合若しくは接着、又はこれらに加えてさらに細胞の成長や分化も調査する場合には、支持体を浸漬した培養液中で細胞を液体培養してもよい。培養液の組成や培養条件自体は、その細胞に適した周知の培養液及び培養条件を採用することができる。
【００１９】
培養後、各固定化領域の細胞を調べる。これは、例えば、各固定化領域を顕微鏡で観察することにより行うことができる。また、固定化領域に結合又は接着した細胞数を調べる場合には、検鏡下で、あるいは顕微鏡写真を撮影し、細胞を計数する方法や、細胞を常法により染色し、レーザースキャンで細胞数を測定する方法等を採用することができる。あるいは、上記の通り、培養後の各固定化領域上の細胞に、１種又は２種以上の抗体若しくはその抗原結合性断片を作用させ、前記細胞の表面抗原を調査することもできる。この方法によれば、複数の表面抗原を同時に測定することができる。
【００２０】
本発明によれば、多数の作用調査物質を単一の支持体に固定化することにより、多数の作用調査物質の細胞に対する作用を、同一の条件下で同時に調査することができる。従って、試験に用いた細胞の培養に適した成長促進剤等のスクリーニング等を短時間で簡便に行うことができる。また、作用調査物質として、多数の抗体を固定化した場合には、多数の抗体のそれぞれと、細胞表面上の抗原との抗原抗体反応の調査（各抗体と抗原抗体反応する細胞表面上の抗原の検出又は定量）を同一の条件下で同時に行うことができる。従って、例えば、作用調査物質として、各ＨＬＡ型に特異的な抗ＨＬＡモノクローナル抗体を用い、細胞としてリンパ球を用いることにより、フローサイトメトリーのような高価な装置を用いることなくＨＬＡ型の判別を行うことができる。あるいは、上記の通り、作用調査物質として、抗ＣＤ抗体（例えば抗ＣＤ４５抗体等）を用い、細胞としてリンパ球又は白血球を用いることにより、リンパ球又は白血球表面上のＣＤ抗原の有無を調査することができる。この場合、さらに、培養後の各固定化領域上の細胞に、１種又は２種以上の他の種類のＣＤに対する抗体若しくはその抗原結合性断片を作用させ、前記細胞表面の各種ＣＤ抗原を調査することもできる。この方法によれば、複数のＣＤ抗原を同時に測定することができる。なお、固定化抗体を用いる免疫測定方法は周知であるが、支持体上に固定化された抗体を、全細胞の表面上の抗原と反応させて細胞を支持体に結合させる免疫測定方法はこれまでに知られておらず、このような形式の免疫測定は本願発明者の独創によるものである。
【００２１】
【実施例】
以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
【００２２】
実施例１
１．　光反応性高分子の製造
（１）　光反応性ポリアリルアミン
光反応性ポリアリルアミン（以下、「ＡｚＰｈＰＡＡｍ」ということがある）は、Ｂｉｏｃｏｎｊ．　Ｃｈｅｍ．，　９，　２７７（１９９８）に記載された方法により製造した。すなわち、ポリアリルアミン（日東紡製、分子量６０，０００）３０ｍｇを１０ｍｌの燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、これを、Ｎ−（４−（アジドベンゾイル）オキシスクシイミド）（２５．８ｍｇ）を溶解した２０ｍｌのジメチルホルムアミドに加え、氷上で攪拌した。４℃で２４時間攪拌した後、市販の透析膜（ミリポア社のモルカットＩＩ）を用いた透析により未反応物を除いた。
【００２３】
（２）　光反応性ポリアクリル酸
光反応性ポリアクリル酸（以下、「ＡｚＰｈＰＡＡｃ」と言うことがある）は、Ｌａｎｇｍｕｉｒ，　１４，　６６１０（１９９８）に記載された方法により製造した。すなわち、ポリアクリル酸（和光純薬製、分子量）２００ｍｇに水溶性カルボジイミド（１−エチルー３−（３−（ジメチルアミノ）プロピル）カルボジイミド）（２ｍｇ／ｍｌ）とアジドアニリン（２５０ｍｇ）を０．１Ｍ　２−モルホリノエタンスルホン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、４℃で４８時間反応させた。反応後、市販の透析膜（ミリポア社のモルカットＩＩ）を用いた透析により未反応の水溶性カルボジイミドとアジドアニリンを除去した。
【００２４】
２．　支持体の作製
支持体は、図１に模式的に示す工程により作製した。すなわち、上記の通り製造した光反応性高分子の０．１重量％水溶液を、支持体ベースであるポリスチレン板上に１μｌずつ滴下し、大気中でそのまま乾燥した。次に、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ゼラチン又はこれらの混合物の水溶液（濃度は、各タンパク質について０．１重量％）の水溶液を、光反応性水溶液を滴下したのと同じ位置に滴下し、再度大気中で乾燥した。次に、支持体全体に紫外線を照射した（２００Ｗハロゲンランプから６ｃｍ離し、４０秒間）。最後に７０％エタノールで支持体を滅菌した後、滅菌蒸留水で洗浄し、培養に用いた。
【００２５】
３．　細胞の培養及び細胞増殖の調査
継代培養したマウス繊維芽細胞細胞ＳＴＯを、ダルベッコ変法イーグル最小必須培地に懸濁させ（細胞密度１０４個／ｍｌ）、その中に上記の通りに作製した支持体を浸漬し、３７℃で８日間液体培養した。培養開始２日後、４日後、６日後及び８日後に支持体を取り出し、位相差顕微鏡により細胞の様子を観察した。
【００２６】
その結果、培養開始６日後から、固定化領域と非固定化領域で細胞分布に差が生じるようになった。また、ＡｚＰｈＰＡＡｃ−ＥＧＦ上では、あまり細胞の成長が見られなかった（３００個／ｍｍ２）が、ＡｚＰｈＰＡＡｃとＡｚＰｈＰＡＡｃ＋ゼラチンの固定化領域で高い増殖（各々６００個／ｍｍ２と５００個／ｍｍ２）が観察された。ＡｚＰｈＰＡＡｃ＋ゼラチン＋ＥＧＦの固定化領域では、細胞増殖が特に旺盛（８００個／ｍｍ２）で、固定化領域周辺でも細胞成長の促進が観察された。尚、非固定化領域の細胞数は、５０個／ｍｍ２であった。
【００２７】
実施例２
１．　支持体ベースの疎水化処理
支持体ベースとして用いるカバーガラスをピランハ（硫酸：過酸化水素水＝７：３）で洗浄した。このカバーガラスの表面にオクタデシルトリエトキシシランをコーティングし、表面を疎水化した。この疎水化処理は、より詳細には次のようにして行った。すなわち、カバーガラスをピランハ溶液に浸し、室温で１０分間ソニケーション後、１時間静置し、ＭｉｌｌｉＱ水（商品名）でリンスし、８０度で４時間乾燥、１０ｍＭ　ＯＤＳ（無水トルエン）で室温一晩静置し、トルエンにて洗浄後、８０度で乾燥した。
【００２８】
２．　疎水化処理カバーガラスへの抗体の結合
ＦＩＴＣ−標識ＩｇＧ溶液（２００μｇ／ｍＬ、ＩＣＮ社製）を炭酸緩衝液（ｐＨ９．６）で１．６〜２００μｇ／ｍＬの濃度に希釈し、市販のアレイヤー（ピン先径６００μｍ、スリット付き）で２列ｘ８個（合計１６個）のＩｇＧスポットを作製した。乾燥後、ＰＢＳで洗浄した。蛍光顕微鏡にて、洗浄前後のスポット部分の単位面積当りの蛍光強度を測定した。
【００２９】
その結果、抗体量で約３００　ｐｇ／ｍｍ２までは抗体溶液の濃度依存的に固定化抗体量を増加させることができ、疎水化処理したガラス基板であっても約３００　ｐｇ／ｍｍ２の抗体を固定化できることが明らかになった。
【００３０】
３．　抗ＣＤ４５抗体の固定化
１で作製したカバーガラス上に、直径３ｍｍのシリコン枠を９個置き、　シリコン枠内の各スポットに８０　ｎｇ／ｍＬ〜１６７μｇ／ｍＬの種々の濃度の抗ＣＤ４５抗体（ベックマン・コールター社製）溶液又は対照のＩｇＧ溶液を５μＬずつ添加した。溶液を乾燥させ、洗浄した。
【００３１】
４．　細胞の培養
ヒト急性リンパ性白血病細胞株ＣＣＲＦ−ＨＳＢ−２細胞を２　ｘ　１０６細胞／ｍＬで２％　ＢＳＡ入りＰＢＳに分散させ、１０００μＬずつ添加し、室温で９０分間静置した。洗浄後、各スポットを観察した。
【００３２】
５．結果
その結果、抗ＣＤ抗体濃度が数μｇ／ｍＬ以下になると細胞接着性が低下した。抗ＣＤ４５抗体量が１００　ｐｇ／ｍｍ２以上の場合に細胞の接着が起き、それ未満の場合には、細胞の接着は見られなかった。また、対照のＩｇＧスポットでは、細胞の接着は全く見られなかった。
【００３３】
また、比較のため、市販のフローサイトメーター（ベックマンコールター社製Ｃｙｔｏｍｉｃｓ　ＦＣ５００）を用い、上記と同じ抗体及び細胞を用いてフローサイトメトリーを行ったところ、抗ＣＤ４５抗体濃度が０．５μｇ／ｍＬ以上にならないと細胞が陽性とはならなかった。従って、本発明の支持体を用いた場合、市販のフローサイトメーターと概ね同程度の感度で表面抗原の測定が可能であることがわかった。
【００３４】
実施例３
１．　抗ＣＤ抗体固定化支持体の作製
実施例２の１と同様にして作製した疎水化処理カバーガラスに、実施例２の２と同様にして抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体若しくは抗ＣＤ５６抗体又は対照ＩｇＧ溶液（各５００μｇ／ｍＬ）をスポットし、乾燥、洗浄して本発明の支持体を得た。
【００３５】
２．　細胞の分離及び培養
末梢血からフィコールを用いて単核球を分離し、１０％　ＦＢＳ入りＲＰＭＩ１６４０培地に１．９　ｘ　１０６細胞／ｍＬの濃度に分散させた。１で作製した支持体上に、５　ｘ　１０５細胞／ｍＬの濃度で細胞を撒き、３７℃、９０分間培養した。培養容器を揺らして非接着細胞をガラス表面からはがして、カバーガラスを回収した。
【００３６】
３．　細胞の蛍光染色
各スポット上に接着した細胞にＦＩＴＣ標識抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体又は抗ＣＤ８抗体のいずれかの溶液（濃度：市販のＦＡＣＳ用ＦＩＴＣ標識抗体を５ｍｇ／ｍｌ　ウシ血清アルブミンを含むリン酸緩衝液で５倍希釈）を加え、４℃で３０分間インキュベートして細胞を染色した。
【００３７】
４．　結果
抗体アレイに接着した細胞数は、抗ＣＤ３≒抗ＣＤ４≒抗ＣＤ８＞抗ＣＤ５６≧コントロールであった。ＣＤ３、４、８の間で大きな違いは見られず、培養細胞株とは異なりコントロールの抗体部分に若干の細胞の接着が見られた。抗ＣＤ５６抗体やコントロールのスポット部分に接着した細胞は、蛍光標識抗体の添加で若干の染色が見られた。末梢血から回収した細胞の中には、スポットされた交代の種類によらずに非特異的に接着する細胞群があると見られた。また、固定化されている抗体と同じ種類の抗体で蛍光染色した場合、細胞が染色されにくい傾向があった（ＣＤ３、４）。上記以外の抗体アレイでは、スポットした抗体の種類に対応した蛍光染色画像を得ることができた。従って、本発明の支持体上に接着された細胞に多重染色を行うことで複数の表面抗原解析が可能であることが明らかになった。
【００３８】
実施例４　　ＨＬＡ型判別
実施例１に記載した支持体の作製方法において、ゼラチンやＥＧＦに代えてＨＬＡ特異性モノクローナル抗体（ｃｌａｓｓ　Ｉ　Ａ，　ｃｌａｓｓ　Ｉ　Ｂ，　ｃｌａｓｓ　Ｉ　Ｃ，　ｃｌａｓｓ　ＩＩ　ＤＲＢＩ）をマイクロアレイ状に固定化する。この基板を、リンパ球液（採血したヒト血液から遠心分離により調製）に浸漬し、各スポットへのリンパ球の吸着数を顕微鏡あるいは、蛍光染色後、レザースキャナーで読みとることにより組織適合性を評価する。
【００３９】
【発明の効果】
本発明により、フローサイトメトリーのような高価な装置を用いることなく、簡便に細胞診断等の、物質の細胞に対する作用を調べることが可能であり、かつ、同一の条件下で同時に異なる物質の細胞に対する作用を調べることができる支持体及びそれを用いた物質の細胞に対する作用の調査方法が提供された。本発明の方法によれば、多数の異なる物質の細胞に対する作用を同一条件下で同時に調べることができ、簡便であるのみならず調査の信頼性が高い。また、作用調査物質として抗体を用いた場合には、多数の抗体と細胞表面上の抗原との抗原抗体反応を同時に簡便に調べることができ、細胞表面の抗原分布等を簡便に調べることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例で作製した、本発明の支持体の作製工程を模式的に示す図である。
【図１】
2004125781.tif 000003