(57)【要約】【課題】本発明の目的は、細菌−ＣＷＳの有効成分量を測定し、その力価を評価する方法を提供することである。【解決手段】細菌の細胞壁骨格成分（以下細菌−ＣＷＳと称する。）の生物活性を分析する方法であって、以下の工程（１）〜（２）を含むことを特徴とする方法。（１）細菌−ＣＷＳと哺乳動物骨髄由来細胞を接触させる工程、（２）（１）におけるＴＮＦ−α産生誘導活性を測定する工程。【選択図】　なし。【特許請求の範囲】
【請求項１】
細菌の細胞壁骨格成分（以下細菌−ＣＷＳと称する。）の生物活性を分析する方法であって、以下の工程（１）〜（２）を含むことを特徴とする方法。
（１）細菌−ＣＷＳと哺乳動物骨髄由来細胞を接触させる工程、
（２）（１）におけるＴＮＦ−α産生誘導活性を測定する工程。
【請求項２】
（１）の工程が、以下の（ａ）〜（ｂ）の工程を含むことを特徴とする請求項１記載の方法；
（ａ）哺乳動物骨髄由来細胞をプレインキュベーションする工程、
（ｂ）哺乳動物骨髄由来細胞に細菌−ＣＷＳの被験サンプルを添加し、６〜２４時間、培養する工程。
【請求項３】
哺乳動物骨髄由来細胞がマウスＲＡＷ２６４．７細胞であることを特徴とする請求項２記載の方法。
【請求項４】
（ｂ）の工程が、２０℃〜４０℃下で、１２〜１６時間培養することを特徴とする請求項３記載の方法。
【請求項５】
哺乳動物骨髄由来細胞がヒトＴＨＰ−１細胞であることを特徴とする請求項２記載の方法。
【請求項６】
（ｂ）の工程が、２０℃〜４０℃下で、１２〜２４時間培養することを特徴とする請求項５記載の方法。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか記載の方法で分析した、細菌−ＣＷＳのＴＮＦ−α産生誘導活性に基づき、細菌−ＣＷＳの生物活性を評価する方法。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれか記載の方法で分析した、細菌−ＣＷＳの被験サンプルのＴＮＦ−α産生誘導活性と、細菌−ＣＷＳ標準品のＴＮＦ−α産生誘導活性を比較することを特徴とする被験サンプルの力価検定方法。
【請求項９】
細菌−ＣＷＳがＢＣＧ−ＣＷＳであることを特徴とする請求項１〜８のいずれか記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の属する技術分野】
【０００１】
本発明は、細菌細胞壁骨格成分（細菌−ＣＷＳ）の生物活性を分析する方法に関する。さらに詳しくは、マウスＲＡＷ２６４．７等の哺乳動物由来細胞を使用することにより、感度よく、再現性よく細菌−ＣＷＳのＴＮＦ−α産生誘導活性を測定することを特徴とする、細菌−ＣＷＳの力価検定方法等に関する。
【従来の技術】
【０００２】
ミコバクテリア属細菌の細胞壁骨格成分（Ｃｅｌｌ　Ｗａｌｌ　Ｓｋｅｌｅｔｏｎ。以下ＣＷＳと略する。）は、免疫賦活作用を有し、例えばミコバクテリウム属細菌の細胞壁骨格成分は動物モデルを用いた実験的腫瘍系およびヒト癌の免疫療法において、抗腫瘍活性を示すことが知られている。
【０００３】
ミコバクテリウム属やノカルディア属の細菌の細胞壁骨格（Ｃｅｌｌ　Ｗａｌｌ　Ｓｋｅｌｅｔｏｎ；以下ＣＷＳと称する。）成分と、油状物質を用いたエマルション製剤を担癌患者に投与すると、各種腫瘍に対して抗腫瘍効果を発揮することが報告されている（Ｐｒｏ．　Ｊａｐａｎ　Ａｃａｄ．，　７０，　Ｓｅｒ．Ｂ　２０５−２０９　（１９９４）及びＰｒｏ．　Ｊａｐａｎ　Ａｃａｄ．，　７４，　ＳｅｒＢ　２０５５０−２０５５５（１９９８））。特に、免疫機能を維持している患者では優れた治療効果が認められることから、患者の免疫力を高める免疫賦活化療法として認識されるようになり、臨床例は増えつつある。
【０００４】
このようにミコバクテリウム属細菌のＣＷＳ成分を有効成分とする癌免疫療法用製剤の有用性が次第に明らかとなってきたが、その品質評価法を確立し、一般化するには次のような課題が存在した。
通常の医薬品では、低分子化合物の単一有効成分であり、更に有機溶媒・水に溶解するので、有効成分の量を化学分析により測定することにより、その品質を評価することができるため、常に一定の品質を有する医薬品を製造し、その品質を保証することが容易である。
しかしながら、細菌のＣＷＳは、高級脂肪酸であるミコール酸、糖鎖、ペプチドグリカンからなる３層構造を有する生体高分子であり、水や有機溶媒に不溶である。そのため、ＨＰＬＣ、ＧＣ等の通常当業者に用いられる分析方法で分析することができない。そのため、ミコバクテリウム属細菌のＣＷＳ、もしくはこれを有効成分として含有する医薬品において、その力価を定量的に測定する方法は、全く知られていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
医薬品は、これを製造するにあたり、生産物を同定し、品質を一定に保つ必要があるが、細菌のＣＷＳを有効成分とする医薬品については、原料となる菌体成分の力価を定量的に測定する方法は知られていない。そのため、該菌体成分の品質を評価し、医薬品として有効成分の同一性を確認する方法が求められていた。本発明が解決しようとする課題は、細菌のＣＷＳを有効成分とする医薬品の原料となる細菌のＣＷＳの力価を定量的に測定する方法を確立することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
発明者らは、細菌−ＣＷＳの有効成分量の分析を、生物活性を指標として行うべく、ＴＮＦ−α産生誘導活性に着目して、鋭意検討を行った。その結果、細菌−ＣＷＳを添加したマウスＲＡＷ２６４．７細胞等の哺乳動物骨髄由来細胞を用いて、細胞培養液中のＴＮＦ−α産生量を測定することによって、細菌−ＣＷＳの濃度とＴＮＦ−α産生誘導活性が、相関係数Ｒ２が０．９以上で比例関係となり、細菌−ＣＷＳの生物活性、すなわち力価を感度よく定量的に評価できることがわかった。
本発明は、上記の知見を基に完成するに至ったものである。すなわち本発明は、
［１］　細菌の細胞壁骨格成分（以下細菌−ＣＷＳと称する。）の生物活性を分析する方法であって、以下の工程（１）〜（２）を含むことを特徴とする方法。
（１）細菌−ＣＷＳと哺乳動物骨髄由来細胞を接触させる工程、
（２）（１）におけるＴＮＦ−α産生誘導活性を測定する工程、
［２］　（１）の工程が、以下の（ａ）〜（ｂ）の工程を含むことを特徴とする［１］記載の方法；
（ａ）哺乳動物骨髄由来細胞をプレインキュベーションする工程、
（ｂ）哺乳動物骨髄由来細胞に細菌−ＣＷＳの被験サンプルを添加し、６〜２４時間、培養する工程、
［３］　哺乳動物骨髄由来細胞がマウスＲＡＷ２６４．７細胞であることを特徴とする［２］記載の方法、
［４］　（ｂ）の工程が、２０℃〜４０℃下で、１２〜１６時間培養することを特徴とする［３］記載の方法、
［５］　哺乳動物骨髄由来細胞がヒトＴＨＰ−１細胞であることを特徴とする［２］記載の方法、
［６］　（ｂ）の工程が、２０℃〜４０℃下で、１２〜２４時間培養することを特徴とする［５］記載の方法、
［７］　［１］〜［６］のいずれか記載の方法で分析した、細菌−ＣＷＳのＴＮＦ−α産生誘導活性に基づき、細菌−ＣＷＳの生物活性を評価する方法、
［８］　［１］〜［６］のいずれか記載の方法で分析した、細菌−ＣＷＳの被験サンプルのＴＮＦ−α産生誘導活性と、細菌−ＣＷＳ標準品のＴＮＦ−α産生誘導活性を比較することを特徴とする被験サンプルの力価検定方法、
［９］　細菌−ＣＷＳがＢＣＧ−ＣＷＳであることを特徴とする［１］〜［８］のいずれか記載の方法、
に関する。
【発明の実施の形態】
【０００７】
以下本発明の実施の態様について詳細に説明する。
本明細書において、「細菌」としては、グラム陽性棹菌のミコバクテリウム属細菌及びコリネバクテリウム属細菌、ロドコッカス属細菌、ノカルディア属細菌、ゴルドナ属細菌などが挙げられる。「ミコバクテリア属細菌」とは、抗酸菌のミコバクテリウム属の細菌を表し、具体的には、結核菌群細菌のＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（結核菌）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｂｏｖｉｓ（ウシ型結核菌、ＢＣＧ菌を含む）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｆｒｉｃａｎｕｍ（アフリカ菌）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｍｉｃｒｏｔｉ（ネズミ型結核菌）があり、この他、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｌｅｐｒａｅ（ライ菌）、非結核性抗酸菌群であるＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｖｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｐｈｌｅｉ等が挙げられる。
「細胞壁骨格成分（ＣＷＳ）」とは、細菌を物理的に粉砕した後、除核酸、除蛋白、脱脂などの精製工程を経て、不溶性残渣として得られるものを表し、その製法は公知である（Ｊ．　Ｎａｔ．　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．，　５２，　９５−１０１　（１９７４））。
本明細書において、「力価」とは、一定重量、または一定容量の、ミコバクテリア属細菌のＣＷＳもしくは該ＣＷＳを含有する医薬品の生物活性の強さを表す。
該医薬品としては、細菌−ＣＷＳを含む医薬品であれば特に限定されないが、例えば、細菌−ＣＷＳの溶媒懸濁液；鉱物油、スクワラン、もしくはスクワレン等の油状物との混合物；該混合物を含有するエマルション溶液；または、前記水懸濁液もしくはエマルション溶液を凍結乾燥して得られるもの等が挙げられる。
また、該生物活性とは、ミコバクテリア属細菌のＣＷＳの免疫賦活活性、および／または抗腫瘍活性を表し、当業者に公知の、ｉｎ　ｖｉｖｏおよびｉｎ　ｖｉｔｒｏの任意の活性が挙げられる。具体的には、インターフェロンγ産生誘導活性、もしくはＴＮＦ−α産生誘導活性等のサイトカイン産生誘導活性、免疫アジュバント活性、およびこれらに基づく抗腫瘍活性等が挙げられる。
【０００８】
本明細書において、「哺乳動物骨髄由来細胞」としては、ヒト等の霊長類、マウスもしくはラット等のげっ歯類を含む哺乳動物から樹立または分離された骨髄由来細胞を表し、単球、またはリンパ球が挙げられる。好ましくは単球が挙げられる。具体的には、マウス由来のＲＡＷ２６４．７細胞、マウス由来のＰ３８８Ｄ細胞、マウス由来のＪ７７４−１細胞、ヒト由来のＴＨＰ−１細胞、ヒト由来のＨＬ−６０細胞、ヒト由来のＵ９３７細胞等の細胞株、脾マクロファージ、腹腔マクロファージ、ランゲルハンス細胞、樹状細胞、骨髄由来マクロファージ、骨髄由来樹状細胞、末梢血単球等を例示することができる。特に好ましくは、マウス由来ＲＡＷ２６４．７細胞を挙げることができる。なお、ＴＨＰ−１細胞を使用する場合は、好ましくはホルボール１２−ミリスタート１３−アセタート等による前処理を行なう。
ＴＮＦ−α産生誘導活性を測定する方法としては、当業者にとって公知の任意の方法が挙げられる。具体的には、市販のＥＬＩＳＡやＴＮＦ−α感受性細胞株を用いたバイオアッセイ、ＴＮＦ−αに特異的にハイブリダイズする核酸による細胞ＲＮＡのノザンハイブリダイゼーション、ＴＮＦ−αを特異的に増幅できるプライマーによる細胞ＲＮＡの定量／半定量的ＲＴ−ＰＣＲ法、ＴＮＦ−αに特異的に結合する抗体による細胞内サイトカイン染色法等があげられる。
好ましくは、ＥＬＩＳＡを用いて測定する方法が挙げられる。
【０００９】
本発明の、第１の実施の態様は、細菌の細胞壁骨格成分（細菌−ＣＷＳと称する。）を分析する方法であって、以下の工程（１）〜（３）を含むことを特徴とする方法である；
（１）細菌のＣＷＳと哺乳動物骨髄由来細胞を接触させる工程、
（２）（１）におけるＴＮＦ−α産生誘導活性を測定する工程。
以下それぞれの工程について具体的に述べる。
【００１０】
（１）細菌のＣＷＳと哺乳動物骨髄由来細胞を接触させる工程
哺乳動物由来細胞は、市販品を用いたり、実験動物から得ることができる。実験動物としては、具体的には、マウス、ラット等が挙げられ、例えば、ＲＡＷ２６４．７、Ｐ３８８Ｄ、およびＪ７７４−１はＡｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　（ＡＴＣＣ）または理研細胞バンクより購入可能である。
本工程では、前記細胞の懸濁液を用いることができる。該細胞懸濁液は、通常は、まず一定時間培養（プレインキュベーション）してから用いる。具体的には、０．５〜８時間、５％〜１０％二酸化炭素の存在下に湿条件で培養することができる。培養液としては特に限定されず、当業者の常識の範囲で選択することができるが、例えばＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ　Ｍｅｄｉｕｍ　（１０％　ウシ胎仔血清）、ＲＰＭＩ−１６４０　（１０％　ウシ胎児血清）等が挙げられる。培養温度は、２０℃〜４０℃が好ましい。細胞の濃度は、特に限定されないが、血球計算盤で細胞濃度を求め、液体培地を用いて１×１０４〜５×１０７　ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製するのが好ましい。
前記細胞懸濁液に、細菌−ＣＷＳを添加する。通常は、生理食塩水懸濁液を一定の濃度に調製する。添加の時期は、培養開始後０．５時間〜８時間が好ましい。
細菌−ＣＷＳの濃度としては、０．０１〜１０００μｇ／ｍＬに設定することができる。細菌−ＣＷＳを添加した後、さらに６時間〜２４時間、好ましくは１２〜２４時間培養を行う。該培養液の培養上清または細胞を次工程に用いることができる。
【００１１】
（２）（１）におけるＴＮＦ−α産生誘導活性を測定する工程、
前記（１）でえられた培養上清または細胞中のＴＮＦ−α量を定量する。測定方法は、当業者に公知の任意の方法を用いることができるが、具体的には、例えば、抗ＴＮＦ−α抗体を用いるＥＬＩＳＡ、ＴＮＦ−α感受性の細胞株（例えばＬ９２９、ＷＥＨＩ−１６４）に対する細胞増殖の抑制作用を指標としたバイオアッセイ、ＴＮＦ−αのｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズする核酸による細胞ＲＮＡのノザンハイブリダイゼーション、ＴＮＦ−α　ｍＲＮＡを特異的に増幅できるプライマーを用いたＲＴ−ＰＣＲ法、抗ＴＮＦ−α抗体を用いた細胞内サイトカイン染色法等が挙げられる。好ましくは、ＥＬＩＳＡで測定することができる。ＥＬＩＳＡの検出感度は１〜１００ｐｇ／ｍｌ程度であり、このようなＥＬＩＳＡのキットは市販されている。例えば、ＡＮ’ＡＬＹＺＡ（登録商標）　Ｍｏｕｓｅ　ＴＮＦ−ａ　Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（Ｇｅｎｚｙｍｅ／Ｔｅｃｈｎｅ）が例示される。
【００１２】
本発明の、第２の実施の態様は、前記の分析方法で分析した、細菌−ＣＷＳのＴＮＦ−α産生誘導活性に基づき、細菌−ＣＷＳの生物活性を評価する方法に関する。例えば、被験サンプル、すなわち評価対象の細菌−ＣＷＳにおける前記（２）の値と、基準となる該細菌−ＣＷＳの標準品における（２）の値を比較することにより、被験サンプルの生物活性（力価）を評価することができる。
具体的には、特定の濃度の、ミコバクテリア属細菌−ＣＷＳの標準品における（２）の値：Ｖｓｔｄを、該標準品と同一濃度の被験サンプルにおける（２）の値：Ｖｓａｍと比較することにより、被験サンプルの力価を、標準品に対して、下式（％）：
Ｖｓａｍ／Ｖｓｔｄ×１００　（％）
で表すことができる。ここで、ＶｓａｍおよびＶｓｔｄについては、複数回測定して平均値を用いることもできる。また、複数の濃度で、標準品の（２）の値と被験サンプル（２）の値を比較して、被験サンプルの力価を評価することもできる。
また、標準品における（２）の値を、複数の濃度で測定し、標準品の濃度と、ＴＮＦ−α産生量の相関関係を表す検量線を作成し、該検量線に被験サンプルにおけるＴＮＦ−α産生量の測定値（すなわち（２）の値）を当てはめることにより、被験サンプルにおける有効成分量、すなわち力価を逆算することができる。
また、基準となる細菌−ＣＷＳの標準品と複数の被験サンプルについて上記（２）の値を測定し、共分散分析等の統計的な手法で解析することにより、被験サンプルと基準となる標準品の同等性を調べることもできる。該共分散分析は、当業者に公知の方法で、市販のソフトウェア（ＳＡＳ）等を用いて行うことができる。具体的には、「ＳＡＳによる実験データの解説」（高橋・大橋・芳賀著、東京大学出版会　１９８９年）等に記載された方法を用いればよい。
【００１３】
以下実施例により、具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら限定されるものではない。
【実施例】
実施例１
ＲＡＷ２６４．７細胞を用いたＢＣＧ−ＣＷＳのＴＮＦ−α産生誘導活性（検量線の作成）
ミコバクテリウム　カルメッテ　ゲランの細胞壁骨格（ＢＣＧ−ＣＷＳ）を文献記載の方法（Ｔｈｏｍａｓ　Ｊ．　Ｍｅｙｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．　５２：１０３−１１１，１９７４）に基づいて調製した。
ＲＡＷ２６４．７細胞を液体培地（１０％ＦＣＳ，　２　ｍＭ　Ｌ−ｇｌｕｔａｍｉｎｅ，　５０　Ｕ／ｍｌ　Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ，５０μｇ／ｍｌ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎを含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ　Ｍｅｄｉｕｍ）に懸濁する。血球計算盤で細胞濃度を求め、液体培地を用いて５　ｘ　１０５　ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製した。これを平底９６穴マイクロプレートに０．１ｍＬずつ分注した。
ＢＣＧ−ＣＷＳの生理食塩水懸濁液を３、９、３０、９０および３００　μｇ／ｍＬの濃度になるように液体培地で希釈した。細胞播種後３７℃、５％二酸化炭素、湿条件で５時間培養し、前記濃度のＢＣＧ−ＣＷＳ懸濁液を１ウェルあたり５０　μＬずつ添加して、さらに１４時間培養した。培養はｎ＝３で行った。培養後、培養上清を１００μＬずつ回収し、速やかにＴＮＦ−ａを測定した。
回収した培養上清を液体培地で適宜希釈し、ＡＮ’ＡＬＹＺＡ（登録商標）　Ｍｏｕｓｅ　ＴＮＦ−ａ　Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ付属の添付書に従い、４５０　ｎｍの吸光度を測定することによってＴＮＦ−ａ　濃度を測定した。なお、ＴＮＦ−ａ　濃度の算出にはＳＯＦＴＭａｘ（登録商標）ｆｏｒ　Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ（登録商標）　（ｖｅｒｓｉｏｎ　２．３５、　ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＤＥＶＩＣＥ　ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ）を用い、４パラメーター法により求めた。個々の培養ウェルのＴＮＦ−ａ　濃度は、ＥＬＩＳＡの２ウェルの平均値とし、各処理条件でのＴＮＦ−ａ　濃度は３培養ウェルの平均値とした。
下表に結果を示した。
【表１】
2004065046.tif 000002
表１は、ＢＣＧ−ＣＷＳ各濃度におけるＴＮＦ−α産生量を示す。また、図１は表１をプロットしたグラフを表す。これらの結果から、上記条件を選択することにより、対数変換したＢＣＧ−ＣＷＳ量とＴＮＦ−α産生量が正確に正比例の関係を示し、ＢＣＧ−ＣＷＳの力価の検定に使用可能であることがわかった。
【００１４】
実施例２
ＴＨＰ−１細胞を用いたＢＣＧ−ＣＷＳのＴＮＦ−α産生誘導活性（検量線の作成）
ＴＨＰ−１（大日本製薬株式会社）に１００　ｎＭのホルボール１２−ミリスタート１３−アセタート（ＰＭＡと略す。Ｓｉｇｍａ製）を添加した後、３７℃、５％ＣＯ２下で２０時間培養した。ＰＭＡを添加したＴＨＰ−１はセルスクレイパーを用いて細胞を培養基材より剥離しピペッティングにより細胞を回収した。ＰＭＡを添加していないＴＨＰ−１はピペッティングにより細胞を回収した。細胞を遠心（１，２００回転／分、５分、４℃）した後、液体培地（ＲＰＭＩ１６４０に以下の試薬を含む。５０　Ｕ／ｍＬのペニシリン、５０μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、１　ｍＭのピルビン酸ナトリウム、５５μＭの２−メルカプトエタノール、１０％ウシ胎児血清。インビトロジェン製）に再浮遊し、０．１　ｍＬ／ｗｅｌｌずつ９６穴平底プレート（住友ベークライト製）に播種した（２×１０５個／ｗｅｌｌ）。液体培地で希釈したＢＣＧ−ＣＷＳを０．１　ｍＬ／ｗｅｌｌずつ添加した。液体培地を０．１　ｍＬ／ｗｅｌｌ添加する条件を対照群として用意した。１条件についてｎ　＝　３で実施した。ＢＣＧ−ＣＷＳを添加した後、３７℃、５％ＣＯ２下で２０時間培養し、培養上清を回収した。ＡＮ’ＡＬＹＺＡ（登録商標）　Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ　ｓｙｓｔｅｍ　ｈｕｍａｎ　ＴＮＦ−α　（Ｇｅｎｚｙｍｅ／Ｔｅｃｈｎｅ）を用いて、培養上清中のＴＮＦ−α量を測定した。
【表２】
2004065046.tif 000003
表２は、ＢＣＧ−ＣＷＳ各濃度におけるＴＮＦ−α産生量を示す。また、図２は表２をプロットしたグラフを表す。表２に示すとおり、上記条件で、ＰＭＡ存在下に分析を行うことにより、対数変換したＢＣＧ−ＣＷＳ量とＴＮＦ−α産生量が正確に正比例の関係を示し、ＢＣＧ−ＣＷＳの力価の検定に使用可能であることがわかった。
【００１５】
【発明の効果】
本発明により、細菌のＣＷＳのＴＮＦ−α産生誘導活性を指標として、該細菌−ＣＷＳの力価を容易に、正確に評価することが可能となった。このことにより、細菌のＣＷＳ及びそれを有効成分とする医薬品の品質を一定に保ち、細菌のＣＷＳを含有する医薬品を提供することが可能になった。
【００１６】
【図面の簡単な説明】
【図１】ＲＡＷ２６４．７細胞を用いて測定した、各種濃度におけるＢＣＧ−ＣＷＳ標準品とＴＮＦα産生活性の相関関係を示す図である。
【図２】ＴＨＰ−１細胞を用いて測定した、各種濃度におけるＢＣＧ−ＣＷＳ標準品とＴＮＦ−α産生活性の相関関係を示す図である。
【図１】
2004065046.tif 000004
【図２】
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