(57)【要約】　　　（修正有）【課題】高血圧症又は蛋白尿関連疾患に対する易罹患性の判定方法の提供。【解決手段】被検者の高血圧症への易罹患性を判定する方法であって、以下の工程：　（ａ）　当該被検者から、ゲノムＤＮＡを含有する生体試料を採取する工程、（ｂ）　工程（ａ）において得られた生体試料中のゲノムＤＮＡ上に存在するヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子のプロモーター領域を含む特定の塩基配列の第２１３９番目の塩基に相当する位置の塩基の種類を決定する工程、及び　（ｃ）　工程（ｂ）において得られた結果に基づいて、当該被検者の高血圧症又は蛋白尿関連疾患への易罹患性を判定する工程、を包含することを特徴とする前記高血圧症への被検者の易罹患性判定方法。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検者の高血圧症への易罹患性を判定する方法であって、以下の工程：
（ａ）　当該被検者から、ゲノムＤＮＡを含有する生体試料を採取する工程、
（ｂ）　工程（ａ）において得られた生体試料中のゲノムＤＮＡ上に存在するヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子のプロモーター領域を含む配列番号１で表される塩基配列の第２１３９番目の塩基に相当する位置の塩基の種類を決定する工程、及び
（ｃ）　工程（ｂ）において得られた結果に基づいて、当該被検者の高血圧症への易罹患性を判定する工程、
を包含することを特徴とする前記高血圧症への被検者の易罹患性判定方法。
【請求項２】
被検者の高血圧症への易罹患性の判定を、ヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子の配列番号１の塩基配列で表される第２１３９番目の塩基の種類がＧＡ型又はＧＧ型である場合には、当該被検者は高血圧症に罹患し易いと判定し、当該塩基の種類がＡＡ型である場合には、当該被検者は高血圧症に罹患し難いと判定する判定基準に基づいて行なうことを特徴とする請求項１記載の高血圧症への被検者の易罹患性判定方法。
【請求項３】
配列番号２５の塩基配列を含むプライマー、配列番号２６の塩基配列を含むプライマー、配列番号２７の塩基配列を含むＡ型検出用蛍光標識プローブ及び配列番号２８の塩基配列を含むＧ型検出用蛍光標識プローブを主要構成要素として含有してなる、ヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子のプロモーター領域を含む配列番号１で表される塩基配列の第２１３９番目の位置の一塩基多型タイピング用キット。
【請求項４】
被検者の蛋白尿関連疾患への易罹患性を判定する方法であって、以下の工程：
（ａ）　当該被検者から、ゲノムＤＮＡを含有する生体試料を採取する工程、
（ｂ）　工程（ａ）において得られた生体試料中のゲノムＤＮＡ上に存在するヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子のプロモーター領域を含む配列番号１で表される塩基配列の第２１３９番目の塩基に相当する位置の塩基の種類を決定する工程、及び
（ｃ）　工程（ｂ）において得られた結果に基づいて、当該被検者の蛋白尿関連疾患への易罹患性を判定する工程、
を包含することを特徴とする前記蛋白尿関連疾患への被検者の易罹患性判定方法。
【請求項５】
被検者の蛋白尿関連疾患への易罹患性の判定を、ヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子の配列番号１の塩基配列で表される第２１３９番目の塩基の種類がＧＡ型又はＧＧ型である場合には、当該被検者は蛋白尿関連疾患に罹患し易いと判定し、当該塩基の種類がＡＡ型である場合には、当該被検者は蛋白尿関連疾患に罹患し難いと判定する判定基準に基づいて行なうことを特徴とする請求項４記載の蛋白尿関連疾患への被検者の易罹患性判定方法。
【請求項６】
蛋白尿関連疾患が、腎臓病である請求項４又は５記載の蛋白尿関連疾患への被検者の易罹患性判定方法。
【請求項７】
腎臓病が、腎炎、ネフローゼ症候群、腎硬化症、糸球体腎炎、膜性腎症又は腎腫瘍である請求項６記載の蛋白尿関連疾患への被検者の易罹患性判定方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、被検者の遺伝子多型を解析し、解析結果に基づいて、被検者の高血圧症又は蛋白尿関連疾患に対する易罹患性を判定する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
高血圧症患者に著効を示す降圧剤が開発され、従来血圧コントロールが困難であった悪性高血圧などの重症高血圧の治療が比較的容易にできるようになった。ところが、本態性高血圧等では降圧剤の使用を中止すると、直ちに元の血圧に戻ってしまい、一般に他の病気に対する治療剤のような治癒効果を有するものではない。一方で、高血圧患者は食塩の摂取量を減らすことが血圧を下げる上で極めて有効であることが広く知られており、減塩食事療法が降圧剤の使用と併用されることも多い。特に、軽症の高血圧症の場合には、薬物療法によらず減塩食事療法のみによっていることが多い。いくつかの治療試験によれば、軽度の食塩制限によっても有効な降圧効果をもたらすことが確認されている。このため、高血圧症の場合には食塩の摂取量を制限するような食事をすることが常識となっている。
【０００３】
ただ、減塩食の効果については、減塩をうける患者側の食塩感受性の問題があり、例えば食塩量１日０．５ｇ以下という厳しい減塩療法においても、約２／３の患者では有効であっても、残りの１／３の患者では降圧が認められなかったという報告もある。同じ本態性高血圧症の患者のなかにも、血圧が食塩摂取量の変化に影響されやすい人とそうでない人がいる。影響されやすい人では、腎臓のナトリウム排泄能力が低下していたり、あるいは腎臓におけるナトリウム再吸収能力が高いため、食塩負荷により体内にナトリウムが貯留する結果、血圧が上昇すると考えられている。これらナトリウム排泄・再吸収能力の差異は、その全貌が明らかとなったわけではないが、究極的には各人の遺伝子多型（各人のゲノムを構成する塩基配列の微小な違い）に基づいてかなりの部分を説明できるものと考えられる。
【０００４】
前記遺伝子多型は、最近の急速なゲノム解析進歩に伴って明らかとなったものである。遺伝子多型には、２〜数個の塩基がまとまって挿入又は欠失しているタイプや、さらに長鎖のＤＮＡ断片が挿入又は欠失しているタイプのものがあるが、最近特に注目されているものは、一つの塩基が別の塩基への置換されておこる、いわゆる一塩基多型（ＳＮＰ）と呼ばれるタイプである。ヒトのゲノム上には、約３００万のＳＮＰが存在すると言われている。ＳＮＰの中には、既に疾患感受性との関連が指摘されたものもあり、ＳＮＰは、各人に最適の医療（テーラーメイド医療）実現のための診断指標として重要視されてきている。例えば、高血圧症関連では、アンジオテンシノーゲン（ＡＧＴ）遺伝子の第二エクソンに存在するＭｅｔ２３５Ｔｈｒ多型は、６９論文のメタアナリシスでＡＧＴのＴｈｒ／Ｔｈｒホモは、Ｍｅｔ／Ｍｅｔホモよりも３１％高血圧になり易く［Ｓｔａｅｓｓｅｎ　Ｊ．　Ａ．　ｅｔ　ａｌ．：Ｊ．　Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．　１７：９−１７（１９９９）］、その強弱が食塩摂取量に依存していることが報告されている。従って、Ｔｈｒ／Ｔｈｒホモ多型の高血圧患者に対しては、減塩療法が有効であると考えられる。しかし、高血圧等の生活習慣病は多因子疾患であり、一つの遺伝子多型で説明できるものではない。今後、高血圧のテーラーメイド医療実現のためにも、高血圧発症の遺伝的素因となっている遺伝子多型の全貌を明らかにすることが極めて重要である。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子の多型を解析し、解析結果に基づいて、被検者の高血圧症又は蛋白尿関連疾患に対する易罹患性を判定する方法を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究を行った結果、ヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子に存在する特定の多型が、血圧及び尿のタンパク量に影響を与えていることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、以下の（１）〜（３）である。
（１）　被検者の高血圧症への易罹患性を判定する方法であって、以下の工程：
（ａ）　当該被検者から、ゲノムＤＮＡを含有する生体試料を採取する工程、
（ｂ）　工程（ａ）において得られた生体試料中のゲノムＤＮＡ上に存在するヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子のプロモーター領域を含む配列番号１で表される塩基配列の第２１３９番目の塩基に相当する位置の塩基の種類を決定する工程、及び
（ｃ）　工程（ｂ）において得られた結果に基づいて、当該被検者の高血圧症への易罹患性を判定する工程、
を包含することを特徴とする前記高血圧症への被検者の易罹患性判定方法。
（２）　被検者の高血圧症への易罹患性の判定を、ヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子の配列番号１の塩基配列で表される第２１３９番目の塩基の種類がＧＡ型又はＧＧ型である場合には、当該被検者は高血圧症に罹患し易いと判定し、当該塩基の種類がＡＡ型である場合には、当該被検者は高血圧症に罹患し難いと判定する判定基準に基づいて行なうことを特徴とする上記（１）の高血圧症への被検者の易罹患性判定方法。
（３）　配列番号２５の塩基配列を含むプライマー、配列番号２６の塩基配列を含むプライマー、配列番号２７の塩基配列を含むＡ型検出用蛍光標識プローブ及び配列番号２８の塩基配列を含むＧ型検出用蛍光標識プローブを主要構成要素として含有してなる、ヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子のプロモーター領域を含む配列番号１で表される塩基配列の第２１３９番目の位置の一塩基多型タイピング用キット。
【０００７】
（４）　被検者の蛋白尿関連疾患への易罹患性を判定する方法であって、以下の工程：
（ａ）　当該被検者から、ゲノムＤＮＡを含有する生体試料を採取する工程、
（ｂ）　工程（ａ）において得られた生体試料中のゲノムＤＮＡ上に存在するヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子のプロモーター領域を含む配列番号１で表される塩基配列の第２１３９番目の塩基に相当する位置の塩基の種類を決定する工程、及び
（ｃ）　工程（ｂ）において得られた結果に基づいて、当該被検者の蛋白尿関連疾患への易罹患性を判定する工程、
を包含することを特徴とする前記蛋白尿関連疾患への被検者の易罹患性判定方法。
（５）　被検者の蛋白尿関連疾患への易罹患性の判定を、ヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子の配列番号１の塩基配列で表される第２１３９番目の塩基の種類がＧＡ型又はＧＧ型である場合には、当該被検者は蛋白尿関連疾患に罹患し易いと判定し、当該塩基の種類がＡＡ型である場合には、当該被検者は蛋白尿関連疾患に罹患し難いと判定する判定基準に基づいて行なうことを特徴とする上記（４）の蛋白尿関連疾患への被検者の易罹患性判定方法。
（６）　蛋白尿関連疾患が、腎臓病である上記（４）又は（５）の蛋白尿関連疾患への被検者の易罹患性判定方法。
（７）　腎臓病が、腎炎、ネフローゼ症候群、腎硬化症、糸球体腎炎、膜性腎症又は腎腫瘍である上記（６）の蛋白尿関連疾患への被検者の易罹患性判定方法。
以下、本発明を詳細に説明する。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明の検出法は、ヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子の特定の多型を解析し、解析結果に基づいて被検者の高血圧症又は蛋白尿関連疾患ヘの易罹患性を判定することを特徴とする。ここで、「ヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子」とは、アミロライド感受性上皮ナトリウムチャネルのαサブユニットをコードし、ヒト第１２番染色体の１３．３の位置にマップされ、ＧｅｎＢａｎｋアクセッションナンバーＡＦ０６０９１０として登録されている塩基配列を含む遺伝子をいう。「蛋白尿関連疾患」とは、その疾患に罹患した場合に、尿中に異常と判定される程度の量の蛋白が出る疾患（例えば、腎炎、ネフローゼ症候群、腎硬化症、糸球体腎炎、膜性腎症等の腎腫瘍腎臓病）をいう。「易罹患性」とは、それぞれの疾患への罹り易さをいう。
【０００９】
本発明において、高血圧症又は蛋白尿関連疾患ヘの易罹患性判定の基準となる多型は、ＳＣＮＮ１Ａ遺伝子のプロモーター領域を含む配列番号１で表される塩基配列の第２１３９番目の塩基に相当する位置の一塩基多型（第２１３９番塩基Ｇ／Ａ多型ともいう）である。なお、ＳＣＮＮ１Ａ遺伝子における第２１３９番塩基Ｇ／Ａ多型の存在部位を図１に模式的に示した。図１に示したように第２１３９番塩基Ｇ／Ａ多型は、ＳＣＮＮ１Ａ遺伝子のプロモーター領域に存在する。この部位の塩基は、現在のところ、アデニン（Ａ）又はグアニン（Ｇ）であることが確認されている。ヒト染色体ＤＮＡは、両親から由来する各一対が存在するので、被検者の第２１３９番塩基Ｇ／Ａ多型には、両染色体のＳＣＮＮ１Ａ遺伝子ともアデニンであるＡＡ型（Ａのホモ接合型）、一方の染色体はアデニンでもう一方の染色体はグアニンであるＡＧ型（ＡとＧのヘテロ接合型）、そして両染色体ともグアニンであるＧＧ型（Ｇのホモ接合型）の３つのタイプが存在する。ＳＣＮＮ１Ａ遺伝子の第２１３９番目の塩基がアデニンである場合の全長配列を配列番号１に示した。
【００１０】
ＳＣＮＮ１Ａ遺伝子多型の解析方法は、上記の多型の判別ができる限り、特に限定されず、公知の様々な遺伝子多型解析方法を採用することができる。例えば、被検者から採取した血液細胞及び口腔内粘膜細胞等の試料から、染色体ＤＮＡを抽出し、これを鋳型として、目的の多型を含む部分を増幅できるように設計したプライマーを用いてＰＣＲを行い、得られたＰＣＲ産物の塩基配列を解析する方法や、その他、ＰＣＲプライマーの３’末端にミスマッチがあるとプライマーとして機能しないため増幅が起きないことを利用したアレル特異的ＰＣＲ法［Ｗｕ，Ｄ．Ｙ．，　ｅｔ　ａｌ．：　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ．，　８６：　２７５７−２７６０（１９８９）］、蛍光標識したアレル特異的オリゴとＴａｑＤＮＡポリメラーゼによるＰＣＲ反応とを利用したＴａｑＭａｎ　ＰＣＲ法等によって、遺伝子多型解析を行なうことができる。
【００１１】
例えば、アレル特異的ＰＣＲを用いて、ＳＣＮＮ１Ａ遺伝子の多型解析を行う場合を以下に説明する。本方法は、より詳細にはプライマーの３’末端に一塩基のミスマッチがあるとプライマーのアニーリングが良好に起こらなくなり、結果としてＰＣＲによる増幅が生じないことを利用した方法である。この方法の成否に大きな影響を及ぼすのは、プライマーの３’末端のミスマッチである。そこで、プライマーを３’末端に変異がくるように設計することで、アレルの型により増幅の可否が決定されるため、アレル特異的ＰＣＲによれば増幅産物の有無によりアレルの型が確認できる。アレル特異的ＰＣＲにおけるこのようなプライマーの設計は、ヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子の公知の塩基配列に基づいて行うことができる。ヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子の第２１３９番目の塩基が、アデニン及びグアニンのいずれであるのかタイピングする場合のプローブ及びプライマーの例としては、５’−ｃａｇｃｇｃｔｇｇｃｃａｃａｔｃｃｔｃｃｃｔｇｃａ−３’（配列番号２）及び５’−ｃａｇｃｇｃｔｇｇｃｃａｃａｔｃｃｔｃｃｃｔｇｃｇ−３’（配列番号３）に示す塩基配列を有するものが挙げられる。配列番号２及び配列番号３に示す塩基配列を有するプライマーはその３’末端の塩基が相違している。これらのプライマーと、適宜選択した逆方向のプライマー、例えば、５’−ｃｔｇｇｔｃｃｃｔｃｃｔｃｔｔｔｃｃｔｇｃｔｇａｔ−３’（配列番号４）に示す塩基配列を有するプライマーとを組合わせてＰＣＲを行い、配列番号２及び配列番号４のプライマーでＰＣＲを行った場合のみ３００ｂｐの増幅産物が確認された場合はＡＡ型、配列番号３及び配列番号４のプライマーでＰＣＲを行った場合のみ３００ｂｐの増幅産物が確認された場合はＧＧ型、両方の場合で増幅産物が確認された場合はＡＧ型と判定することができる。
【００１２】
また、ＴａｑＭａｎ　ＰＣＲ法の原理を図２に示した。ＴａｑＭａｎ　ＰＣＲ法は蛍光標識したアレル特異的オリゴ（ＴａｑＭａｎプローブともいう）とＴａｑ　ＤＮＡポリメラーゼによるＰＣＲ反応とを利用した方法である。ＴａｑＭａｎ　ＰＣＲ法で用いるアレル特異的オリゴは約２０塩基程度の長さであり、５’末端はＦＡＭやＴＥＴやＶＩＣ等の蛍光レポーター色素（Ｒ）によって標識され、一方３’末端はクエンチャー（Ｑ）によって標識されている。この状態ではクエンチャーが蛍光エネルギーを吸収するため蛍光は検出できない。本法ではＰＣＲ反応を同時に行なうが、ＴａｑＭａｎプローブの３’末端はリン酸化されているためＴａｑＭａｎプローブからのＤＮＡ鎖伸長は起こらない。しかし、このＴａｑＭａｎプローブをＳＮＰを含む領域を増幅するように設計したプライマーとＴａｑＤＮＡポリメラーゼとともにＰＣＲ反応を行なうと、まずＴａｑＭａｎプローブが鋳型ＤＮＡの特異的な配列にハイブリダイゼーションし、同時にＰＣＲプライマーから伸長反応が起こる。しかしこの際、ＴａｑＤＮＡポリメラーゼは５’ヌクレアーゼ活性を有しているため、ＰＣＲプライマーの伸長反応が進む際にハイブリダイゼーションをしたＴａｑＭａｎプローブを切断する。ＴａｑＭａｎプローブが切断されると蛍光色素がクエンチャーの影響を受けなくなり蛍光を検出できるようになる。
【００１３】
例えば、図２のように、ＳＮＰ部位がアデニン（Ａ）のアレル１とグアニン（Ｇ）のアレル２が存在する場合、アレル１に特異的なＴａｑＭａｎプローブはＦＡＭ（Ｒ１）で、アレル２に特異的なＴａｑＭａｎプローブはＴＥＴ（Ｒ２）で標識する。この２種類のアレル特異的オリゴをＰＣＲ試薬に同時に添加し、タイピングの対象となる鋳型とＴａｑＭａｎＰＣＲ反応を行なう。その後、蛍光検出器にてＦＡＭ及びＴＥＴの蛍光強度を測定する。その結果、鋳型がアレル１のホモ接合型ならばＦＡＭの強い蛍光強度が検出され、ＴＥＴの蛍光は殆ど検出されない。アレル１とアレル２のヘテロ接合体ならば、ＦＡＭとＴＥＴ両者の蛍光が検出される。アレル２のホモ接合型ならばＴＥＴの強い蛍光強度が検出でき、ＦＡＭの蛍光は殆ど検出されない。このようにして対象サンプルのＳＮＰタイピングをすることができる。
【００１４】
解析の結果、ヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子中の配列番号１の塩基配列で表される第２１３９番目の塩基の種類がＡＧ型又はＧＧ型である場合には、当該被検者は高血圧症又は
蛋白尿関連疾患に罹患し易いと判定することができ、当該塩基の種類がＡＡ型である場合には、当該被検者は高血圧症又は蛋白尿関連疾患に罹患し難いと判定することができる。腎臓に障害が加わった場合（慢性糸球体腎炎など）、食塩感受性が高いと考えられるＡＧ型又はＧＧ型のヒトでは、糸球体内圧が上昇しやすく、結果として、蛋白尿に代表される腎機能障害が顕在化しやすいといえる。また、ＡＧ型又はＧＧ型のヒトでは利尿薬による降圧効果、あるいは減塩による降圧効果があると考えられ、一方、ＡＡ型のヒトに利尿剤を投与すると脱水や電解質異常などの副作用が出やすいといえる。
【００１５】
上記のヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子のプロモーター領域の前記第２１３９番塩基Ｇ／Ａ多型をタイピングするためのプライマー及び蛍光標識プライマーを主要構成要素として含むキットも本発明の好ましい実施態様である。以下に、多型タイピング用キットの具体的構成例を示した。
〔第２１３９番塩基Ｇ／Ａ多型タイピング用キット〕
▲１▼　配列番号２５の塩基配列を含むプライマー
▲２▼　配列番号２６の塩基配列を含むプライマー
▲３▼　配列番号２７の塩基配列を含むＡ型検出用蛍光標識プローブ
▲４▼　配列番号２８の塩基配列を含むＧ型検出用蛍光標識プローブ
以上の構成要素には、さらに必要に応じて、各ヌクレオチド混液、酵素反応停止溶液、希釈溶液等を追加補充することができる。
【００１６】
【実施例】
以下に、本発明の実施例を示して具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。
〔実施例１〕　ヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子中の多型の検出
白血球由来のＤＮＡは、１９９６年５月から１９９８年２月までの間に国立循環器病センターを訪れたヒトから集めた血液から抽出した。ここで、血液を提供したヒトは全て日本人であり、アミロライド感受性ナトリウムチャネル遺伝子の遺伝子解析に書面で同意した（インフォームドコンセントを得た）ヒトのみについて以下の解析を行った。
【００１７】
まず、ヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子中の多型の検出を試みた。インフォームドコンセントを得た３２人（高血圧の２４人と高血圧ではない８人）の白血球から常法に従ってＤＮＡを採取した。得られたＤＮＡサンプルを鋳型とし、表１のプライマーを用いて各領域をＰＣＲにより増幅した。
【表１】
2004024125.tif 000002
【００１８】
得られた増幅産物は、モデルＡＢＩ３７００遺伝子アナライザーにより、塩基配列の決定を行った。その結果、表２に記載の多型が検出された。
【表２】
2004024125.tif 000003
【００１９】
表２において、アレル頻度は３２人分のシークエンスに基づいて計算したものである。表２に示したように、ＳＣＣＮ１Ａ遺伝子のプロモーター領域に４つの多型、エクソン領域に３つの多型、イントロンに１つの多型が見出された。Ｇ２１３９アレルは、３２人分のシークエンスによれば、Ｇ２７６５アレルと完全に一致しており、連鎖不平衡していることが判明した。また、Ｇ（２１３９）Ａ多型はＧ（３０９１）Ａ多型と強い連鎖不均衡していることも判明した。また、第１エクソンのＧ（３０９１）Ａ多型はｍＲＮＡの５’非コード化領域にあり、第１イントロンのＧ（３１３４）Ａ多型は第１エクソンのスプライスドナー部位から５ｂｐ離れた位置に存在していた。
【００２０】
〔実施例２〕　アソシエーションスタディー
インフォームドコンセントを得た男女３０歳〜７９歳の３９８９人から採取した血液由来のＤＮＡサンプルを用いて、実施例１において検出された多型のうち、プロモーター領域に存在する第１１４４番塩基Ａ／Ｇ多型及び第２１３９番塩基Ｇ／Ａ多型、第１エクソン上に存在する第３０９１番塩基Ｇ／Ａ多型、第１イントロン上に存在する第３１３４番塩基Ｇ／Ｃ多型、第６エクソン上に存在する第１１９３番塩基Ｇ／Ａ多型、及び第１３エクソン上に存在する第１５２９番塩基Ｇ／Ａ多型のＳＮＰタイピングを行った。なお、ＳＮＰタイピングは、表３に記載のプローブセット及びプライマーセットを用い、ＴａｑＭａｎシステム（ＰＥアプライドバイオシステムズ社）を用いて行った。
【表３】
2004024125.tif 000004
【００２１】
一方、各被検者の生理生化学的パラメーターは以下のようにして求めた。まず、血圧は座位で最低１０分間休息後測定した。収縮期、拡張期の血圧値は二人の医師による測定結果の平均とした（３分の間隔を空けた）。尿蛋白の検出限界は３０ｍｇ／ｄｌであった。「高血圧である」とは、収縮期血圧が１４０ｍｍＨｇ以上又は拡張期血圧が９０ｍｍＨｇ以上、あるいは抗高血圧薬を服用していることと定義した。また、「糖尿病である」とは、空腹時血糖が１４０ｍｇ／ｄｌ以上、あるいは血糖降下薬を服用していることと定義した。表４に全被験者の生理生化学的パラメーターを示した。
【表４】
2004024125.tif 000005
【００２２】
ＢＭＩ、年齢、アルコール消費量を独立変数として含む被験者のデータを多重算定解析した。その結果、Ｇ（１１４４）Ａ、Ｇ（３１３４）Ｃ、Ｇ（１１９３）ＡおよびＧ（１５２９）Ａ多型の血圧への明らかな影響はなかった。しかしながら、Ｇ（２１３９）ＡとＧ（３０９１）Ａ多型は明らかに血圧に影響を及ぼしていた。血圧とＧ（３０９１）Ａ多型の関係は、Ｇ（２１３９）ＡとＧ（３０９１）Ａ多型間にある強い連鎖不均衡に由来するものと推測される。従って、被験者全員のＧ（２１３９）Ａ多型を調べた。
【００２３】
表４から明らかなように、Ｇ（２１３９）Ａ多型（ＡＡ＝１、ＧＡ＋ＧＧ＝２）は、肥満指数（ＢＭＩ）、ウエスト／ヒップ比（Ｗ／Ｈ）、降圧剤の治療を受けている人の割合（ＡＨＴ）、収縮期及び拡張期血圧に影響を与えることが判明した。すなわち、Ｇ（２１３９）ＡのＧ／Ａ多型（第２１３９番塩基Ｇ／Ａ多型）がＡＧ型又はＧＧ型の人は、ＡＡ型の人に比べて、ＡＨＴが高値を示した。さらに、第２１３９番塩基Ｇ／Ａ多型は尿蛋白と密接に関わっていることが分かった。すなわち、第２１３９番塩基Ｇ／Ａ多型がＡＧ型又はＧＧ型の人は、ＡＡ型の人に比べて、蛋白尿が出やすいことが判明した。
【００２４】
一般的に、高齢層の表現型は環境因子に強く影響を受け、遺伝的影響は若年層の方が明らかであることから、若年層についての遺伝子型の影響を解析した。表５は、年齢６０歳未満の被験者の生理生化学的パラメーターを第２１３９番塩基Ｇ／Ａ多型の各型ごとに示したものである。
【表５】
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【００２５】
表５から明らかなように、第２１３９番塩基Ｇ／Ａ多型は、収縮期及び拡張期血圧に影響を及ぼしていることが判明した。すなわち、第２１３９番塩基Ｇ／Ａ多型が、ＡＧ型又はＧＧ型の人は、ＡＡ型の人よりも、収縮期及び拡張期血圧が高いことが判明した。特に、年齢、性別、Ｇ（２１３９）ＡのＡ／Ｇ多型を独立変数として含む多重算定解析によると、Ｇ（２１３９）ＡのＡ／Ｇ多型がＡＧ型又はＧＧ型である被検者の高血圧についてのオッズ比は２．１５であった。これは、Ｇ（２１３９）ＡのＡ／Ｇ多型がＡＧ型又はＧＧ型である人は、ＡＡ型である人に比べて２．１５倍高血圧症に罹患し易いことを意味している。また、前記のように、第２１３９番塩基Ｇ／Ａ多型は蛋白尿と強い相関が見られた（Ｐ＜０．０００１）。以上より、第２１３９番塩基Ｇ／Ａ多型を指標として、高血圧症及び蛋白尿関連疾患への易罹患性を判定することが可能であることが判明した。
【００２６】
【発明の効果】
本発明により、高血圧症又は蛋白尿関連疾患に対する易罹患性の判定方法が提供される。本判定方法は、生活習慣病発症の予防に有用である。
【００２７】
【配列表】
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【００２８】
【配列表フリーテキスト】
配列番号２：合成ＤＮＡ
配列番号３：合成ＤＮＡ
配列番号４：合成ＤＮＡ
配列番号５：合成ＤＮＡ
配列番号６：合成ＤＮＡ
配列番号７：合成ＤＮＡ
配列番号８：合成ＤＮＡ
配列番号９：合成ＤＮＡ
配列番号１０：合成ＤＮＡ
配列番号１１：合成ＤＮＡ
配列番号１２：合成ＤＮＡ
配列番号１３：合成ＤＮＡ
配列番号１４：合成ＤＮＡ
配列番号１５：合成ＤＮＡ
配列番号１６：合成ＤＮＡ
配列番号１７：合成ＤＮＡ
配列番号１８：合成ＤＮＡ
配列番号１９：合成ＤＮＡ
配列番号２０：合成ＤＮＡ
配列番号２１：合成ＤＮＡ
配列番号２２：合成ＤＮＡ
配列番号２３：合成ＤＮＡ
配列番号２４：合成ＤＮＡ
配列番号２５：合成ＤＮＡ
配列番号２６：合成ＤＮＡ
配列番号２７：合成ＤＮＡ
配列番号２８：合成ＤＮＡ
配列番号２９：合成ＤＮＡ
配列番号３０：合成ＤＮＡ
配列番号３１：合成ＤＮＡ
配列番号３２：合成ＤＮＡ
配列番号３３：合成ＤＮＡ
配列番号３４：合成ＤＮＡ
配列番号３５：合成ＤＮＡ
配列番号３６：合成ＤＮＡ
配列番号３７：合成ＤＮＡ
配列番号３８：合成ＤＮＡ
配列番号３９：合成ＤＮＡ
配列番号４０：合成ＤＮＡ
配列番号４１：合成ＤＮＡ
配列番号４２：合成ＤＮＡ
配列番号４３：合成ＤＮＡ
配列番号４４：合成ＤＮＡ
【図面の簡単な説明】
【図１】ヒトＳＣＮＮ１Ａ遺伝子における第２１３９番塩基Ｇ／Ａ多型の位置を示した模式図である。
【図２】ＴａｑＭａｎＰＣＲによるＳＮＰタイピングの原理を示した図である。
【図１】
2004024125.tif 000025
【図２】
2004024125.tif 000026