(57)【要約】【課題】新しい概念に基づく，難聴疾患，特に内耳性難聴の予防又は治療剤を提供することを課題とする。【解決手段】カリジノゲナーゼ，例えば，ブタ膵由来カリジノゲナーゼを有効成分とする難聴疾患，特に内耳性難聴の予防又は治療剤とした。【特許請求の範囲】
【請求項１】
カリジノゲナーゼを有効成分とする難聴疾患の予防又は治療剤。
【請求項２】
カリジノゲナーゼがブタ膵由来カリジノゲナーゼである，請求項１記載の難聴疾患の予防又は治療剤。
【請求項３】
難聴疾患が内耳性難聴である，請求項１又は２に記載の予防又は治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は医薬品の分野に属するもので，難聴疾患の予防又は治療剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
音が外耳道を通り鼓膜を振動させ，その振動が耳小骨を経由して内耳に達するまでは，そのエネルギーは物理的な振動という形での伝達である（伝音器：外耳，中耳）。音の振動は内耳の有毛細胞で神経の興奮に置き換えられ，それより先，聴神経，脳幹部，　中脳を経て神経のインパルスとして伝えられ，大脳皮質で音として感覚される（感音器）。この経路のいずれかに病的状態が生じて，大脳皮質に生ずる音の感覚が正常状態に比べて変化した時，それを聴覚障害といい，その障害がとくに正常と比べて情報量の減少である場合，それを難聴疾患という。
【０００３】
難聴疾患の中でその原因が内耳にあって，音のエネルギーが物理的振動から神経の興奮に置き換わる部分での障害によるものを内耳性難聴という。聴神経かそれ以後に原因があって，神経の興奮伝達の障害であるとき，それを後迷路性難聴という。
【０００４】
内耳性難聴の原因としては，▲１▼薬剤中毒▲２▼強大音響▲３▼頭部外傷▲４▼遺伝▲５▼加齢などがあり，この他に，局所または全身疾患の部分症や合併症として起こる場合がある。また，その治療には，主として薬物療法が用いられる。薬剤としては，ステロイドホルモン，ビタミンＢ１２，ＡＴＰ，血管拡張剤などが主なものであるが，緩徐に発生し進行するものに対しては，その治療効果は疑問視されている。また回復不能の難聴に対しては，補聴器が用いられる。
【０００５】
これまでの研究から，内耳から脳幹，聴覚野へと至る聴覚系の求心性神経伝達には，主としてグルタミン酸受容体が関与することが明らかとなっている。蝸牛におけるグルタミン酸受容体（ＡＭＰＡ型ＧｌｕＲ）は，内有毛細胞直下のシナプス後膜に高密度に発現し，内耳虚血，音響負荷後の病態生理と密接に関連する。ＮＭＤＡ型ＧｌｕＲもＩ型ラセン神経節細胞に発現を認め，強大音圧時の聴覚伝達，求心性シナプス損傷後の可塑性変化に関与すると推察されている（Ｎｉｐｐｏｎ　Ｊｉｂｉｉｎｋｏｋａ　ＧａｋｋａｉＫａｉｈｏ　１０１巻　１０４８頁−１０５１頁，１９９８年）。
【０００６】
前記▲１▼の薬剤中毒の一つとしてカナマイシンによる難聴がある。カナマイシン投与期間中に通常は耳鳴が生じ，ついで難聴が高音部から始まる。カナマイシン投与を中止すると若干改善することもあるが，多くは改善も悪化もせずにそのまま固定する。カナマイシン投与を続けると難聴は低音部へと進行する。その治療としては，ステロイドホルモン，ビタミンＢ１２の投与などを行うが，効果はあまり期待できない。また，その病変は内耳有毛細胞およびラセン神経節細胞の変性が主体と考えられている。カナマイシン誘発のラット難聴モデルでは，有毛細胞およびラセン神経節細胞の変性はグルタミン酸毒性により生じ，これにより難聴に至ることが知られ，当該モデルは，ヒトの難聴に近いモデルと推察される。
【０００７】
一方，カリジノゲナーゼは，高血圧症，閉塞性血栓血管炎，更年期障害，網脈絡膜の循環障害に適用を持ち，今日臨床の場で広く使用されている。耳鼻科領域ではメニエール症候群に適用を持ち，内耳血流を増加させめまい症状を改善することが知られている（基礎と臨床　２２巻　９２３頁−９２８頁，１９８８年）。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
これまでに難聴疾患，特に内耳性難聴に有効な治療薬は知られていない。本発明は，新しい概念に基づく，難聴疾患，特に内耳性難聴の予防又は治療剤を提供することを課題とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは，若齢ラットを用いてカナマイシン誘発の難聴動物モデルを作製した。本モデルは，薬剤の臨床的治療効果をみたり，グルタミン酸受容体変化の生理学的意義の研究において有用であると考えられる。従って，本発明者らは，この実験モデルを用いて，カリジノゲナーゼが難聴疾患，特に内耳性難聴の予防又は治療効果を有することを実証した。即ち，本発明は，カリジノゲナーゼを有効成分とする難聴疾患，特に内耳性難聴の予防又は治療剤に関するものである。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明は，カリジノゲナーゼを有効成分とする難聴疾患，特に内耳性難聴の予防又は治療剤である。カリジノゲナーゼとしては，ブタ膵から製したカリジノゲナーゼ等が例示される。他に，カリジノゲナーゼは，動物の尿や膵臓等から，当該分野公知の方法で抽出・精製することができる。カリジノゲナーゼの分離精製は多くの研究者によって検討され，代表的精製法として，ブタ膵臓からＤＥＡＥ−セルロース，ＨｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅおよびセファデックスＧ−１００を用いて精製する方法（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　１８巻　５４９頁−５５２頁，１９６９年）が知られている。また，製剤化のためには，カリジノゲナーゼと腸溶性基材，更に乳糖等の一般的な賦形剤を使用して錠剤とすることができる。なお，カリジノゲナーゼ製剤としては，カルナクリンが代表的な製剤として上市場されており，カルナクリン錠２５（カリジノゲナーゼ２５単位含有），カルナクリン錠５０（カリジノゲナーゼ５０単位含有），カルナクリンカプセル２５（カリジノゲナーゼ２５単位含有）を使用することができる。これらカリジノゲナーゼ製剤は，カリジノゲナーゼとして，通常，成人１日１５〜１５００単位，好ましくは７５〜３００単位を，例えば１日３回分割経口投与することができる。
【００１１】
【実施例】
［試験例１］
カナマイシン誘発のラット難聴モデルにおける聴覚閾値に対するカリジノゲナーゼの作用
【００１２】
（１）方法
１−１）難聴モデルの作製
ＳＤ系雄性ラット（６週齢，約２００ｇ，日本エスエルシー供給）を用いて，カナマイシン（４００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ，皮下投与）を２週間連続投与して，難聴ラットを作製した。
【００１３】
１−２）使用薬物と投与方法
被検物質はラット尿由来カリジノゲナーゼを使用した。カリジノゲナーゼは，ラット尿を採取し，原尿を濃縮後，イオン交換クロマトグラフィー，アプロチニン固定化カラムおよびゲルろ過クロマトグラフィーを用いて精製した。
精製したカリジノゲナーゼは生理的食塩水で用時溶解し，前記ラットの尾静脈より投与（１．４μｇ／ｂｏｄｙ／ｄａｙ）した。投与スケジュールは，カナマイシンと同時投与による２週間連続投与とした。また，対照の薬物無投与群には生理的食塩水を投与した。
【００１４】
１−３）難聴動物モデルの聴覚閾値
聴覚閾値は，聴性脳幹反応（ＡＢＲ）により決定され，薬物投与終了後０週目，１週目および２週目までの間でＡＢＲ記録を行った。
【００１５】
（２）結果
図に示す如く，カナマイシン（４００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）の２週間連続全身投与により，聴覚閾値は１０１．７±５．３　ｄＢ　（ｎ＝７）と上昇し，また閾値は２週間にわたりほぼ一定であり，難聴動物モデルの作製が可能であった。これに対して，カリジノゲナーゼ（１．４μｇ／ｂｏｄｙ／ｄａｙ）の同時投与では，聴覚閾値は８０．３±３．７ｄＢ　（ｎ＝７）と改善し，０週，１週，２週のいずれの時点でも，両群の聴覚閾値には有意差が認められた。
【００１６】
（３）考察
内耳性難聴の実験的モデルとして，カナマイシン誘発モデルは，蝸牛有毛細胞およびラセン神経節細胞でのグルタミン酸毒性により難聴に至ることが知られている（Ａｄｖ　Ｏｔｏｒｈｉｎｏｌａｒｙｎｇｏｌ　５７巻　７頁−１１頁，２０００年）。また生直後の幼弱ラットにカナマイシン（８００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を２週間連続投与して作製した難聴モデルのラセン神経節細胞において，求心性神経伝達に直接関与するイオンチャンネル型のグルタミン酸受容体（ＧｌｕＲ１，ＧｌｕＲ２，ＮＲ１）に，聾直後より発現量の変化（ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）が生じていることが報告されている（Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ　１１巻　２５１５頁−２５１９頁，２０００年）。
【００１７】
今回我々は，若齢ラットを用いてカナマイシン誘発の難聴動物モデルを作製した。本モデルは，薬剤の臨床的治療効果をみたり，グルタミン酸受容体変化の生理学的意義の研究において有用であると考えられる。実験の結果，カナマイシンにより誘発される聴覚閾値の上昇に対して，カリジノゲナーゼはこれを軽減し，聴力を改善させる作用を有することが明らかとなった。
【００１８】
これまでに眼科領域の研究では，柏井らが，培養アマクリン細胞を用いたｉｎ　ｖｉｔｒｏの試験系で，少量のＮＯはＮＭＤＡ受容体を抑制してＣａ２＋の細胞内流入を阻止し，網膜神経細胞保護的に働くが，逆に，多量に生じたＮＯはＯ２−（スーパーオキシド）と反応してＯＮＯＯ−（ペリオキシ亜硝酸）を生じ，周囲の神経細胞に障害性を発揮することを報告（Ｊｐｎ　Ｊ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　６１巻　３７５頁−３７７頁，１９９３年）した。
【００１９】
一方，耳鼻科領域のｉｎ　ｖｉｖｏの試験系では，ＮＯのグルタミン酸毒性に対する影響は明らかにされていないが，聴覚閾値の上昇に対するカリジノゲナーゼの改善作用の機序について，我々は次のように考えている。
１）カナマイシン投与により作製される難聴動物モデルでは，蝸牛ラセン神経節細胞におけるグルタミン酸受容体（ＧｌｕＲ１，ＧｌｕＲ２，ＮＲ１）にｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎがおこる。
２）グルタミン酸受容体のｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎにより，細胞内への過剰なＣａ２＋流入が惹起され，ラセン神経節細胞にアポトーシスが起こる。
３）カリジノゲナーゼにより内耳で産生されるＮＯはＮＭＤＡ受容体を抑制し，細胞内へのＣａ２＋流入を阻止する。
４）ＮＯは，同時に，ミトコンドリア内へのＣａ２＋流入を抑制する。
５）３）４）の結果として，カリジノゲナーゼはラセン神経節細胞のアポトーシスを抑制する。
６）カリジノゲナーゼにより内耳で産生されるＮＯは，蝸牛軸動脈，コイル状細動脈，血管条などの血管内皮細胞に作用して，血管拡張・血流改善を促し，有毛細胞等において低酸素状態からの回復を促す。
【００２０】
以上のことより，カリジノゲナーゼは難聴疾患，特に内耳性難聴の予防又は治療効果を期待できる薬剤である。
【００２１】
【発明の効果】
本発明は，カリジノゲナーゼが今までに難聴の治療剤において提唱されていない新しい機序で難聴疾患，特に，内耳性難聴の予防又は治療剤になるというもので，カリジノゲナーゼ製剤の新たな適用拡大の基礎的裏付けとなる。
【図面の簡単な説明】
【図１】カナマイシンの２週間連続投与（４００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）により難聴を惹起させるラット難聴モデルにおいて，カリジノゲナーゼ投与群と対照群（生理的食塩水投与）の聴覚閾値（ＡＢＲ）の測定結果を示すグラフである。なお，図中の記号＊は，危険率ｐが　ｐ＜０．０５であることを示す。
【図１】
2004099537.tif 000002