(57)【要約】【課題】腫瘍の予防及び治療の為の医薬組成物や健康食品の有効成分として有用な焼酎蒸留粕として、一層利用しやすい形態のものを提供すること。【解決手段】焼酎蒸留粕から分離した液状物を乾燥して得た固形分のエタノール抽出残さ；焼酎蒸留粕から分離した液状物を乾燥して得た固形分のエタノール抽出物；水分を含有する焼酎蒸留粕を遠心分離し、その上澄液を凍結乾燥して固形分を得た後、得られた固形分をエタノール抽出してその残さを採取することを含む上記エタノール抽出残さの製造方法；及び腫瘍の予防又は治療用医薬組成物を製造するための上記エタノール抽出残さ又はエタノール抽出物の使用。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
焼酎蒸留粕から分離した液状物を乾燥して得た固形分のエタノール抽出残さ。
【請求項２】
粉状形態にあり、平均粒径が５〜２００μｍである請求項１記載のエタノール抽出残さ。
【請求項３】
水分を含有する焼酎蒸留粕を遠心分離し、その上澄液を凍結乾燥して固形分を得た後、得られた固形分をエタノール抽出してその残さを採取することを特徴とする請求項１又は２記載のエタノール抽出残さの製造方法。
【請求項４】
焼酎蒸留粕が、焼酎を減圧蒸留により製造するときに得られるものである請求項３記載の製造方法。
【請求項５】
エタノールが純度９５重量％以上のものである請求項３又は４記載の製造方法。
【請求項６】
焼酎蒸留粕から分離した液状物を乾燥して得た固形分のエタノール抽出物。
【請求項７】
水分を含有する焼酎蒸留粕を遠心分離し、その上澄液を凍結乾燥して固形分を得た後、得られた固形分をエタノール抽出してそのエタノール抽出物を採取することを特徴とする請求項６記載のエタノール抽出物の製造方法。
【請求項８】
腫瘍の予防又は治療用医薬組成物を製造するための請求項１又は２記載のエタノール抽出残さ又は請求項６記載のエタノール抽出物の使用。
【請求項９】
医薬組成物を製造するための請求項１又は２記載のエタノール抽出残さ又は請求項６記載のエタノール抽出物の使用。
【請求項１０】
健康食品を製造するための請求項１又は２記載のエタノール抽出残さ又は請求項６記載のエタノール抽出物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、腫瘍、例えば、癌、特に胃癌の予防又は治療を可能にする医薬組成物及び健康食品などの有効成分として使用することができる焼酎蒸留粕からのエタノール抽出残さ及びエタノール抽出物及びそれらの製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
焼酎は、世界に誇れる日本国独自の蒸留酒であり、蒸留の方式が連続式であるものを焼酎甲類（ホワイトリカー）、単式であるものを焼酎乙類（本格焼酎）と呼んで区分している。両者とも、焼酎を製造するとき、蒸留終了時に蒸留釜の底部に残さが残り、これを焼酎蒸留粕（焼酎粕や蒸留廃液ともいう）と言い、本格焼酎の場合、クエン酸、蛋白質、脂肪、繊維分、微量の栄養素等を含んでいる。また、焼酎蒸留粕は、不揮発成分が濃縮されており、濾過性が非常に悪いことが特徴である（古澤淑、酒の科学、朝倉書店、１９９５年、６０頁）。
現在、焼酎蒸留粕の処理処分が問題となっている。ロンドン条約（廃棄物投棄による海洋汚染防止に関する条約）により、２００１年から産業廃棄物の海洋投入が禁止され、これまで、一般的に行われてきた焼酎蒸留粕の海洋投入ができなくなりつつある。今後、海洋投入に替わる低コストの処理処分方法が見出せない場合、例えば九州全土だけでも、三百社を超える焼酎メーカーの大半を占める小規模メーカーが、廃業に追い込まれる懸念がある。
【０００３】
以上のことから、焼酎業界では、焼酎蒸留粕の有効利用、処理法の開発が切望されており、例えば、特開平８−５６５８４号公報には、焼酎蒸留粕から得られる飼料の製造方法が示されている。また、特開平１０−１３０１２１号公報には、焼酎蒸留粕の発酵生成物からなる化粧料が示されている。特開２０００−１９８９８３号公報には、酒類廃棄物を用いた多孔質炭化材の製造方法が示されている。この他、多数の焼酎蒸留粕処理に関する技術開発が、本発明の以前よりなされている。しかし、これまで焼酎蒸留粕の癌予防、治療に関わる研究は皆無であり、これを利用した医薬組成物や健康食品については、従来、全く知られていなかった。
本発明者らは、このような状況下において、焼酎蒸留粕が癌予防・治療に有効であることを見出し、焼酎蒸留粕を有効成分とする腫瘍の予防及び治療の為の医薬組成物及び健康食品について既に特許出願している（特許出願２００１−１１５０８１号）。しかしながら、ここで有効成分として用いる焼酎蒸留粕は、独自の酵母の香りや酸味が強く、そのままでは飲み難いとの問題がある。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の第１の目的は、腫瘍の予防及び治療の為の医薬組成物や健康食品の有効成分として有用な焼酎蒸留粕として、一層利用しやすい形態のものを提供することにある。
本発明の第２の目的は、上記一層利用しやすい形態の有効成分を効率的に製造できる方法を提供することにある。
本発明の第３の目的は、上記一層利用しやすい形態の有効成分を腫瘍の予防及び治療の為の医薬組成物や健康食品の有効成分として使用することを提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明は、水分を含有する焼酎蒸留粕から液状物を分離し、これを乾燥して固形分を得た後、得られた固形分をエタノール抽出して得られるその残さ又は抽出物が、医薬組成物又は健康食品の有効成分として一層利用しやすい形態であることを見出し、これによれば上記課題を解決できるとの知見によりなされたものである。
すなわち、本発明は、焼酎蒸留粕から分離した液状物を乾燥して得た固形分のエタノール抽出残さを提供する。
本発明は、又、水分を含有する焼酎蒸留粕を遠心分離し、その上澄液を凍結乾燥して固形分を得た後、得られた固形分をエタノール抽出してその残さを採取することを特徴とする上記エタノール抽出残さの製造方法を提供する。
本発明は、又、焼酎蒸留粕から分離した液状物を乾燥して得た固形分のエタノール抽出物を提供する。
本発明は、又、水分を含有する焼酎蒸留粕を遠心分離し、その上澄液を凍結乾燥して固形分を得た後、得られた固形分をエタノール抽出してそのエタノール抽出物を採取することを特徴とする上記エタノール抽出物の製造方法を提供する。
本発明は、又、腫瘍の予防又は治療用医薬組成物を製造するための上記エタノール抽出残さ又はエタノール抽出物の使用を提供する。
本発明は、又、医薬組成物を製造するための上記エタノール抽出残さ又はエタノール抽出物の使用を提供する。
本発明は、又、健康食品を製造するための上記エタノール抽出残さ又はエタノール抽出物の使用を提供する。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明でいう焼酎蒸留粕とは、特に限定するものではなく、例えば芋焼酎蒸留粕、米焼酎蒸留粕、甘藷焼酎蒸留粕や麦焼酎蒸留粕というような通常のいずれの焼酎蒸留粕も使用することができる。焼酎の蒸留粕は、例えば図１に示すような焼酎の製造工程より容易に得られるものである。
具体的には、原料として、さつま芋、甘藷、麦（大麦、小麦など）、そば、米などの穀物類を蒸して砕き、これに別途調製した１次もろみを加えて２次もろみを調製し、これを常温などで醗酵させた後、蒸留し、留出分を製品である焼酎として採取し、蒸留釜の底部に溜まったものが蒸留粕、つまり焼酎蒸留粕である。尚、１次もろみは、麹に焼酎酵母と水を添加して調製した後、常温などで醗酵させたものである。
【０００７】
従って、蒸留粕、つまり焼酎蒸留粕には、エタノール以外の原料に起因するさつま芋などの穀物類から由来する繊維質、たんぱく質、灰分、脂肪、一部醗酵せずに残る糖分、醗酵生成物、麹菌や酵母菌の菌体やそれらが生成したクエン酸を主体とする有機酸、アミノ酸、ビタミンなどや、醗酵中や加熱中に変性や重合又は開裂して生成した各種成分が含まれている。例えば、甘藷焼酎蒸留粕には、乾燥固形分が約５．４５重量％程度含まれ、これらは、全糖約１．４６重量％、直糖約０．１９重量％、粗脂肪約０．２１重量％、粗蛋白約１．１５重量％、粗繊維約０．４２重量％、有機物約５．００重量％、アルコール約０．２重量％、粗灰分約０．４５重量％、Ｎａ約１４０ｐｐｍ、Ｋ約２２５０ｐｐｍ、Ｃａ約２２０ｐｐｍ、Ｍｇ約１２０ｐｐｍ、Ｆｅ約１０ｐｐｍなどが含まれており、ＴＯＣは約２０６０００〜約２３７０００、ＴＮは約１７００〜約２３０００、ＢＯＤは約４８９００、ＣＯＤは約３０１００である。又、その甘藷焼酎蒸留粕の遠心分離による上澄液には、乾燥固形分が約２．４３〜約２．７４重量％含まれ、これらは、全糖約０．７７重量％、直糖約１．２３重量％、粗蛋白約０．４４重量％、有機物約２．２７重量％、アルコール約０．２重量％、粗灰分約０．３５〜約０．４７重量％、Ｎａ約１５０ｐｐｍ、Ｋ約２３８０ｐｐｍ、Ｃａ約６．３ｐｐｍ、Ｍｇ約１０３ｐｐｍ、Ｆｅ約３．２ｐｐｍなどが含まれており、ＴＯＣは約１１１００〜約１１７００、ＴＮは約６４０〜約１０００、ＢＯＤは約３０１００、ＣＯＤは約１７６００である（“醸造物の成分”　日本醸造協会　平成１１年１２月発行第１３９頁〜第１４１頁第ＩＸ章“蒸留廃液成分”の項）。又、麦焼酎蒸留粕の組成は、特開平１０−２２９８２５号公報の第４頁に記載されている。
【０００８】
本発明では、このような焼酎蒸留粕から液状物を分離する。分離は任意の方法でよいが、遠心分離により上澄液として分離するのが好ましい。遠心分離は、常法により行うことができる。
本発明では、次で、遠心分離による上澄液を乾燥する。ここで、乾燥前に、上澄液中の固形分を完全に除去するためにろ過するのが好ましい。乾燥の方法は、通常知られるいかなる乾燥方法であって良いが、好ましくはスプレードライや凍結乾燥などの工業的に利用可能な方法が用いられる。
本発明では、次で、乾燥により得られた固形分をエタノール抽出し、その残さ（固形分）又はエタノール抽出液を採取する。ここで使用するエタノールとしては、純度の高いものが好ましく、例えば、純度９５重量％以上のものが好ましく、さらに９９．５重量％以上のものが好ましい。抽出温度は特に限定されないが、室温〜５０℃程度であるのが好ましく、特に４０℃近辺で行うのが好ましい。
【０００９】
このようにして得られるエタノール抽出残さは、次で乾燥してエタノール分を出来だけ除去するのが好ましい。このようにして得られたものは、薄く黄色に着色した白色粉状形態にあり、平均粒径が５〜２００μｍであるのが好ましく、より好ましくは３０〜１５０μｍである。このエタノール抽出残さは、酵母の香りと酸味が弱い上に、水に容易に溶解するとの利点があり、医薬組成物や健康食品の成分として使用するのに好適である。
一方、エタノール抽出液は、酵母の香りが強いものの茶褐色の油状であり、天然油脂などの油状成分に容易に混合でき、油状成分などを含有する医薬組成物や健康食品中に容易に配合することができる。
本発明では、特にエタノール抽出残さを用いるのが好ましい。
【００１０】
本発明のエタノール抽出残さ及びエタノール抽出液は、そのまま或いは滅菌などの加工処理をへて医薬組成物や健康食品に配合することにより、腫瘍などの細胞増殖性疾患の予防または治療に対して有効に働く。また従来公知の医薬組成物や健康食品に必須成分として含まれて提供されることによっても、腫瘍などの細胞増殖性疾患の予防または治療に対して有効に働く。
ここで、腫瘍とは、例えば急性白血病、慢性白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、マクログロブリン血症などの造血器癌や、脳腫瘍、頭頸部癌、乳癌、肺癌、食道癌、胃癌、大腸癌、肝癌、胆嚢・胆管癌、膵癌、膵島細胞癌、腎細胞癌、副腎皮質癌、膀胱癌、前立腺癌、睾丸腫瘍、卵巣癌、子宮癌、絨毛癌、甲状腺癌、悪性カルチノイド腫瘍、皮膚癌、悪性黒色腫、骨肉腫、軟部組織肉腫、神経芽細胞腫、ウィルムス腫瘍、胎児性横紋筋肉腫、網膜芽細胞腫などの固形腫瘍を形成する腫瘍、またはそれらに由来・関連する癌疾患である。本発明で用いるエタノール抽出残さ及びエタノール抽出液が、有効成分として働くことにより予防・治療できる腫瘍は、前記癌に限定されるものではないが、この有効成分を含む医薬組成物や健康食品が経口的に使用される場合、対象となる腫瘍疾患が、胃癌、肺線癌及ぶ悪性黒色腫であるときに予防・治療上、特に効果がある。又、有効成分としてエタノール抽出残さを用いると、対象となる腫瘍疾患が肝臓癌であるときに予防・治療上、特に効果がある。
【００１１】
本発明のエタノール抽出残さ及びエタノール抽出液は、それ自体公知の薬理的に許容される担体、賦形剤、崩壊剤、矯正剤、増量剤、希釈剤、溶解補助剤などと混合し、公知の方法に従って医薬組成物とすることができる。但し、経口投与する場合、該エタノール抽出残さ及びエタノール抽出液を医薬組成物全体に対して２重量％以上、好ましくは５重量％以上、特に５〜２０重量％となるように配合するのがよい。
本発明の医薬組成物は、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉末剤、丸剤、溶剤、ドリンク剤、注射剤、点滴剤、座剤などの形態に製剤化することができる。このような製剤は経口的もしくは非経口的に投与することができる。
【００１２】
本発明の医薬組成物を腫瘍の予防・治療等に使用する場合の投与量は、投与対象、投与経路、症状などによっても異なるが、通常、経口的に投与する場合、成人の場合、１日の投与量が５０ｍｇ／日〜５００ｇ／日となるよう、１日１〜３回程度投与するのがよい。これにより、腫瘍、特に胃癌などに対し、顕著な予防・治療効果が得られる。
また、医薬組成物が、注射剤または点滴剤として非経口的に投与されるとき、場合によっては、本発明のエタノール抽出残さ又はエタノール抽出液を適宜処理して分子集合体に含有させて投与せしめることもできる。こららを含有させる分子集合体の例としては、脂肪乳剤、高分子ミセル、アルブミンなどのタンパクとの複合体、リポソームなどが挙げられるが、安全性などの点からリポソームが最も好ましものとして挙げられる。
【００１３】
例えば、該エタノール抽出残さ又はエタノール抽出液を含有するリポソーム溶液は、公知のいかなる方法によって形成してもよい。例えば薄膜法、逆相蒸発法、凍結融解法、エタノール注入法、高圧乳化法、超音波分散法、透析法、エクストルージョン法など、公知の製造方法を適宜利用することができ、更には特開平９−８７１６８号公報に記載される方法などを利用してもよい。
このようにして得られるリポソーム溶液は、限外濾過、遠心分離、ゲル濾過等の方法によって精製してよく、また濃縮や希釈等の操作を自由に行ってもよく、注射剤や点滴剤として調製され医薬組成物として用いることができる。
注射剤や点滴剤のような形態で、本発明の医薬組成物を血中に投与する場合、一回量として該エタノール抽出残さ又はエタノール抽出液を１×１０−１〜１×１０−６Ｍの濃度で含む溶液を０．０１〜１００ｍｌ／ｋｇ体重、好ましくは該エタノール抽出残さ又はエタノール抽出液を５×１０−２〜５×１０−４Ｍの濃度で含む溶液を１〜５０ｍｌ／ｋｇ体重で１日１〜３回程度投与するのがよい。
【００１４】
本発明のエタノール抽出残さ又はエタノール抽出液は、それ自体公知の食品的に許容される食材、防腐剤、増粘剤、着色料、酸化防止剤、添加剤、調味料等の素材と混合し、公知の方法に従って健康食品とすることができる。本発明でいう健康食品とは、好ましくは従来公知の食品または健康食品に、本発明のエタノール抽出残さ又はエタノール抽出液を配合してなるものである。但し、本発明のエタノール抽出残さ又はエタノール抽出液を健康食品全体に対して２重量％以上、好ましくは５重量％以上、特に５〜１０重量％となるよう配合するのがよい。
【００１５】
健康食品は、通常の方法により、例えば錠剤、ソフトカプセル剤、ハードカプセル剤、顆粒剤、固形剤、散剤、粉末剤、丸剤、溶剤、チュアブル剤、ドリンク剤、ドレッシング類、菓子類などの形態に製造することができる。また、これらの形態にとらわれることなく、本発明の健康食品は、広く一般の食品形態に加工・配合して提供しても良い。このような健康食品は、例えば、天ぷら、お好み焼き、たこ焼き、焼きイモ、大学イモ、加工肉、おでん、ハンバーガー、肉まん、ギョウザ、ホットドック、サンドイッチ、カレー、ハヤシライス、海苔、漬物、キムチ等の通常の食品はもちろん、お茶、コーヒー、ココア、野菜ジュース、青汁、味噌汁、スープ等の液状飲食品や、本発明のエタノール抽出残さ又はエタノール抽出液を添加・配合できるものであれば、うどん、焼きそば、そば、ラーメンなどの麺類や、パン、ビスケット、パスタ、マカロニ、加工米、加工豆、せんべい等の澱粉系食品、あるいはキャンデー、ガム、チョコレート、ケーキ、ショートクリーム、アイスクリーム、和菓子等の甘味菓子類、加工牛乳、ヨーグルト等の乳製品や醤油、ソース、食酢、ラー油、タバスコ、洋風ドレッシング、和風ドレッシング、青じそドレッシング、味噌、ニョクマム、マヨネーズ等の調味料などのいかなる飲食品にも用いることができる。
【００１６】
本発明のエタノール抽出残さ又はエタノール抽出液は、各食品、飲食品の特性、目的に応じ、適当な製造工程の段階で、適宜配合すればよい。本発明の健康食品を提供する場合、かかる食品、飲食品全体に対して本発明のエタノール抽出残さ又はエタノール抽出液を２重量％以上、好ましくは１０重量％以上配合して提供されるのが、癌の予防・治療の点から好ましい。
本発明の健康食品の形態は、これらの態様に限定されず、製造方法も限定されないが、しいて具体例を挙げるとすれば、本発明のエタノール抽出残さ又はエタノール抽出液を５〜３０重量部（以下、部と略称する）、食用精製魚油を５〜３０部、醸造酢５〜２５部、果糖ぶどう糖液糖５〜１５部、食塩０．５〜５部、砂糖０．２〜３部、キサンタンガム０．１〜２部、グルタミン酸ソーダ０．１〜２部、香辛料０．０５〜３部、バランスとして水を２０〜５０部を原料として加え常法に従って混合しドレッシングとすることができる。また、本発明のエタノール抽出残さ又はエタノール抽出液を５〜１５０部、カカオマスを２０〜６０部、カカオバター２０〜６０部、砂糖７０〜１１０部、牛乳１〜５部、ショートニング３〜２０部を原料として加え常法に従ってチョコレートとすることができる。また、本発明のエタノール抽出残さ又はエタノール抽出液を１０〜５００部、小麦粉１００〜６００部、砂糖５０〜３５０部、マーガリン５０〜３００部、全卵粉２０〜１００部、バニラエッセンス０．５〜８部、水７０〜２５０部を原料として加え常法に従ってクッキーとすることができる。また本発明のエタノール抽出残さ又はエタノール抽出液０．１〜８部、ココアパウダー０．５〜８部、砂糖０．５〜８部、脱脂粉乳０．１〜３部、乳化剤０．０５〜２部、食塩０．０１〜０．５部、バニラフレーバー０．０１〜０．５部、処理水７０〜１５０部を原料として加え、常法に従ってココア飲料とすることができる。
【００１７】
本発明における健康食品は、人体に対して無毒性であるから、その摂取量に特に制限はないが、実際に健康食品として摂取する場合には、成人の場合、１日の摂取量が１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重／日となるよう、１日１〜３回程度摂取するのがよい。これにより、癌、特に胃癌などに対し、顕著な予防・治療効果が得られる。
【発明の効果】
本発明のエタノール抽出残さは、酵母の香りと酸味が弱い上に、水に容易に溶解するとの利点があり、医薬組成物や健康食品の成分として使用するのに好適である。又、エタノール抽出液は、酵母の香りが強いものの茶褐色の油状であり、天然油脂などの油状成分に容易に混合でき、油状成分などを含有する医薬組成物や健康食品中に容易に配合することができるとの利点がある。従って、本発明のエタノール抽出残さ及びエタノール抽出液は、医薬組成物および健康食品の有効成分として好適に用いることができ、この有効成分を配合してなる医薬組成物および健康食品は、副作用もなく、安全であり、腫瘍、特に胃癌の予防または治療に極めて有効である。
特に、エタノール抽出残さは、粉末であるため原料の保存が容易で、水に溶けやすいため、健康食品への適用に好適である。さらに、エタノール抽出残さには、焼酎粕特有の臭みや味も無いので、食品の味覚や香りを損ねることがないか若しくは少ない点でも好ましい。
【００１８】
【実施例】
以下に実施例に基づいて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例１
＜本発明のエタノール抽出液と抽出残さの調製＞
峰の露酒造株式会社より入手した米焼酎蒸留粕（減圧蒸留粕）１ｋｇを４℃で２０分間遠心分離し（回転数８０００ｒｐｍ）、上澄み液約９００ｇと沈殿物約１００ｇとに分離した。上澄み液をメンブレンフィルター（０．４５μｍ）でろ過し、ろ液約８００ｇを得た。このろ液を凍結乾燥して水分を除去し、固形分約４０ｇを得た。
このようにして得た固形分４０ｇに特級品のエタノール（純度９９．５％）を８００ｍｌ添加して、１時間ずつ２回温浸し（４０℃）、エタノール抽出液と抽出残さとを得た。これらを減圧乾燥（４０℃）してエタノールを除去し、エタノールに溶解する成分（抽出物）約２３ｇとエタノールに溶解しない成分（抽出残さ）約１７ｇを得た。
エタノールに溶解する成分（抽出物）は、茶褐色の油状であり、エタノールに溶解しない成分（抽出残さ）は、薄く黄色に着色した白色粉末であった。このエタノール抽出残さは、酵母の香りと酸味が弱い上に、水に容易に溶解した。
【００１９】
＜培養腫瘍細胞に対するｉｎ　ｖｉｔｒｏでの細胞増殖抑制試験＞
１−１．使用細胞・培養培地の説明
ヒト肺腺がん細胞（ＲＥＲＦ−ＬＣ−ＯＫ）は、国立衛生試験所より購入したものを用いた。ヒト胃がん細胞（ＧＴ３ＴＫＢ）およびヒト肝臓がん細胞（Ｈｅｐ−Ｇ２）は、理化学研究所・細胞開発銀行より購入したものを用いた。マウス由来悪性黒色腫細胞（Ｂ１６−ｍｅｌａｎｏｍａ）は、大日本製薬より購入したものを用いた。培養培地としては、ヒト肺腺がん細胞（ＲＥＲＦ−ＬＣ−ＯＫ）には、ＲＰＭＩ−１６４０（＋１０％ＦＢＳ）を、ヒト胃がん細胞（ＧＴ３ＴＫＢ）、ヒト肝臓がん細胞（Ｈｅｐ−Ｇ２）およびマウス由来悪性黒色腫細胞（Ｂ１６−ｍｅｌａｎｏｍａ）には、ＤＭＥ−Ｍ（＋１０％ＦＢＳ）を培養培地として使用し、増殖抑制試験に用いた。
【００２０】
１−２．試験サンプル
上記の方法で製造したエタノール抽出物及びエタノール抽出残さ、及びその製造原料として用いた上澄み液、つまり、米焼酎蒸留粕（減圧蒸留粕）１ｋｇを４℃で２０分間遠心分離（回転数８０００ｒｐｍ）して得た上澄み液をメンブレンフィルター（０．４５μｍ）でろ過して得たろ液をそれぞれ試験サンプルとして用いた。
【００２１】
１−３．増殖抑制試験
増殖抑制試験は、酵素活性測定法であるＷＳＴ−１　ａｓｓａｙ法により行った。テトラゾリウム塩ＷＳＴ−１を用いたＷＳＴ−１　ａｓｓａｙ法は、細胞のＷＳＴ−１代謝物による発色によって細胞増殖活性を測定する方法である。原理は、ＷＳＴ−１が細胞内ミトコンドリアの脱水素酵素のよい基質であり、生存能の高い細胞ほど分解されるＷＳＴ−１量が多く、その結果生じるホルマザン量が生存細胞数とよく対応することに基づいている。
１−１に示した各細胞について、初期細胞数を１．０×１０４Ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調製した細胞懸濁液１００μｌ／ｗｅｌｌを、９６ｗｅｌｌマルチプレートに播種し、２４時間プレインキュベーション後に、１−２で得た試験サンプルを１０μｌ／ｗｅｌｌ添加した。３７℃、ＣＯ２濃度５％、湿度９５％の条件下で４８時間または７２時間培養後、ＷＳＴ−１溶液を１０μｌ／ｗｅｌｌ添加した。更に３時間培養後、分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｄｅｖｉｃｅ）を用いて、４５０ｎｍの吸光度を測定した。細胞増殖抑制効果は、陰性対照としてＰＢＳ（−）を添加した場合の吸光度（ＡＣｏｎｔｒｏｌ）および試験サンプルを添加した場合の吸光度（ＡＭｅａｎ）の比（ＡＭｅａｎ／ＡＣｏｎｔｒｏｌ）を算出し、評価を行った。
【００２２】
１−４．結果
結果を図２に示す。この結果から明らかなように、エタノール抽出物に対して、エタノール残さの方が優れた腫瘍細胞増殖抑制効果を示した。特に、エタノール残さは、胃がん細胞、肺線がん細胞及び悪性黒色腫細胞に対して焼酎粕上澄み液と同等の効果を示し、かつ肝臓がん細胞に対しては、焼酎粕上澄み液よりも優れた効果を示すことがわかる。
【図面の簡単な説明】
【図１】焼酎の製造工程を示す図である。
【図２】本発明のエタノール抽出物及び抽出残さの種々の腫瘍細胞に対する増殖抑制効果を示す図である。
【図１】
2004049177.tif 000002
【図２】
2004049177.tif 000003