(57)【要約】【課題】本発明は、ベロ毒素の解毒薬、またはベロ毒素検出薬の実現に極めて有効なスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体を提供することである。さらに、従来困難であった、スフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体を必要量、迅速に確保する製造方法を提供するものである。【解決手段】本発明は、一般式［Ｉ］（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｂｎはベンジル基を示す。）で表されることを特徴とするスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体を提供した。さらに、スフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体を必要量、迅速に確保する製造方法を提供した。本発明製造方法の特徴は本発明者らの発明である、高度にフッ素化されたカルボン酸を保護試薬として用い、多段階の製造工程を液−液分配抽出操作で精製でき、簡便かつ迅速にスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体を提供するものである。また本発明は、本発明製造方法における中間体を提供する。【化１】2004099507.tif 000016【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式［Ｉ］
【化１】
2004099507.tif 000009
（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｂｎはベンジル基を示す。）で表されることを特徴とするスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体。
【請求項２】
下記式［ＩＩ］
【化２】
2004099507.tif 000010
（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｂｎはベンジル基を示し、Ｂｚはベンゾイル基を示し、Ｂｆｐは３−［（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデカノイル）―（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデシル）−アミノ］−プロパノイル基を示す。）で表されることを特徴とするスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体の中間体。
【請求項３】
下記式［ＩＩＩ］
【化３】
2004099507.tif 000011
（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｂｚはベンゾイル基を示し、Ｂｆｐは３−［（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデカノイル）―（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデシル）−アミノ］−プロパノイル基を示す。）で表されるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体の中間体。
【請求項４】
下記式［ＩＶ］
【化４】
2004099507.tif 000012
（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｂｆｐは３−［（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデカノイル）―（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデシル）−アミノ］−プロパノイル基を示す。）で表されるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体の中間体。
【請求項５】
下記式［Ｖ］
【化５】
2004099507.tif 000013
（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｐｈはフェニル基を示し、Ｂｆｐは３−［（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデカノイル）―（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデシル）−アミノ］−プロパノイル基を示す。）で表されるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体の中間体。
【請求項６】
下記式［ＶＩ］
【化６】
2004099507.tif 000014
（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｐｈはフェニル基を示す。）で表されるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体の中間体。
【請求項７】
次の各工程（（イ）〜（ヘ））からなることを特徴とする請求項１記載の一般式［Ｉ］の製造方法。
（イ）　一般式［ＶＩＩ］
【化７】
2004099507.tif 000015
（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｐｈはフェニル基を示す。）で表される中間体を有機溶媒中、塩基存在下、トリフェニルメチルクロリドと反応させて請求項６記載の一般式［ＶＩ］で表される中間体を製造する第一工程。
（ロ）一般式［ＶＩ］で表される中間体を有機溶媒中、塩基存在下、３−［（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデカノイル）−（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデシル）−アミノ］−プロピオン酸（Ｂｆｐ−ＯＨ）と反応させて請求項５記載の一般式［Ｖ］で表される中間体を製造する第二工程。
（ハ）一般式［Ｖ］で表される中間体を有機溶媒中、酸処理し、請求項４記載の一般式［ＩＶ］で表される中間体を製造する第三工程。
（ニ）一般式［ＩＶ］で表される中間体を有機溶媒中、塩基存在下、ベンゾイルクロリドと反応させて請求項３記載の一般式［ＩＩＩ］で表される中間体を製造する第四工程。
（ホ）一般式［ＩＩＩ］で表される中間体を有機溶媒中、酸存在下、ガラクトース誘導体と反応させ、請求項２記載の一般式［ＩＩ］で表される中間体を製造する第五工程。
（ヘ）一般式［ＩＩ］で表される中間体を有機溶媒中、塩基処理することにより、一般式［Ｉ］で表されるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体を製造する第六工程。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体に関する。病原性大腸菌Ｏ−１５７の産生するベロ毒素はスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３を認識、接着してその毒性を発現する。スフィンゴ糖脂質Ｇｂ３の構造中で、ベロ毒素が認識する重要な部分構造はスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖部分であるのは周知の事実である。従って、スフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖構造を有し、有機化合物、ポリマー樹脂、無機担体などに修飾可能なスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖の誘導体はベロ毒素の解毒薬、またはベロ毒素検出技術開発のツールとして注目されている。本発明の化合物は以上の医薬品および技術開発に重要である。
【０００２】
【従来の技術】
しかしながら、スフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体の合成は各製造工程においてシリカゲルカラムクロマトグラフィーなどの精製操作を必要とする。この様な状況から、上記したベロ毒素の解毒薬、またはベロ毒素検出薬の実現に必須の合成中間体、スフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体を十分量確保することが出来ず、上記した重要な食品衛生問題への対応が遅れている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、スフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体、及びこれを簡便かつ迅速に製造する手段を提供することである。本発明は、上記したベロ毒素の解毒薬、またはベロ毒素検出薬の実現に極めて有効な合成中間体、スフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体を提供することである。また一つは、従来それが困難であった、スフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体を必要量、迅速に確保する製造方法を提供するものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、前記の事情を解決すべく鋭意検討した結果、本発明に到達した。即ち、上記したベロ毒素の解毒薬、またはベロ毒素検出薬の実現に極めて有効なスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体は大量に容易に製造する方法がなく、社会の要請に応え、本発明スフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体を必要量、迅速に確保する製造方法を提供することが出来なかった。そこで、当該スフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体および、その製造方法の創出を課題とし鋭意検討した。
この問題は、本発明の一つ当該スフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体の製造方法の創出により解決された。この製造方法の特徴は、多段階の工程を組み合わせ当該スフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体を効率的に製造することにある。また、この多段階の工程を組み合わせた製造工程には、本発明者らが発明した高度にフッ素化されたカルボン酸を保護試薬として用いることが必要である。本発明の製造方法は、多段階の工程を組み合わせた製造工程と、高度にフッ素化されたカルボン酸を保護試薬として用いることの、二つを組み合わせて初めて実現した。この多段階の工程の組み合わせ、併せて、高度にフッ素化されたカルボン酸を保護試薬としてここに用いることは、容易に着想することの出来ない発明である。
上記した高度にフッ素化されたカルボン酸とは、３−［（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデカノイル）−（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデシル）−アミノ］−プロピオン酸（略称Ｂｆｐ−ＯＨ；特願２００２−６３９８５、Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　誌、３巻、３９４７頁、２００１年参照）である。この高度にフッ素化されたカルボン酸を保護試薬として用い、多段階の製造工程をパーフルオロカーボンと有機溶媒との液−液分配抽出操作で精製でき、簡便かつ迅速にスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体を提供することが出来る。
【０００５】
すなわち、本発明は以下のような構成からなる。
（１）下記式［Ｉ］
【化８】
2004099507.tif 000002
（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｂｎはベンジル基を示す。）で表されることを特徴とするスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体。
【０００６】
（２）下記式［ＩＩ］
【化９】
2004099507.tif 000003
（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｂｎはベンジル基を示し、Ｂｚはベンゾイル基を示し、Ｂｆｐは３−［（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデカノイル）―（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデシル）−アミノ］−プロパノイル基を示す。）で表されることを特徴とするスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体の中間体。
【０００７】
（３）下記式［ＩＩＩ］
【化１０】
2004099507.tif 000004
（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｂｚはベンゾイル基を示し、Ｂｆｐは３−［（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデカノイル）―（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデシル）−アミノ］−プロパノイル基を示す。）で表されるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体の中間体。
【０００８】
（４）下記式［ＩＶ］
【化１１】
2004099507.tif 000005
（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｂｆｐは３−［（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデカノイル）―（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデシル）−アミノ］−プロパノイル基を示す。）で表されるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体の中間体。
【０００９】
（５）下記式［Ｖ］
【化１２】
2004099507.tif 000006
（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｐｈはフェニル基を示し、Ｂｆｐは３−［（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデカノイル）―（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデシル）−アミノ］−プロパノイル基を示す。）で表されるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体の中間体。
【００１０】
（６）下記式［ＶＩ］
【化１３】
2004099507.tif 000007
（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｐｈはフェニル基を示す。）で表されるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体の中間体。
【００１１】
（７）次の各工程（（イ）〜（ヘ））からなることを特徴とする（１）記載の一般式［Ｉ］の製造方法。
（イ）一般式［ＶＩＩ］
【化１４】
2004099507.tif 000008
（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｐｈはフェニル基を示す。）で表される中間体を有機溶媒中、塩基存在下、トリフェニルメチルクロリドと反応させて（６）記載の一般式［ＶＩ］で表される中間体を製造する第一工程。
（ロ）一般式［ＶＩ］で表される中間体で表される中間体を有機溶媒中、塩基存在下、３−［（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデカノイル）−（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデシル）−アミノ］−プロピオン酸（Ｂｆｐ−ＯＨ）と反応させて（５）記載の一般式［Ｖ］で表される中間体を製造する第二工程。
（ハ）一般式［Ｖ］で表される中間体を有機溶媒中、酸処理し、（４）記載の一般式［ＩＶ］で表される中間体を製造する第三工程。
（ニ）一般式［ＩＶ］で表される中間体を有機溶媒中、塩基存在下、ベンゾイルクロリドと反応させて（３）記載の一般式［ＩＩＩ］で表される中間体を製造する第四工程。
（ホ）一般式［ＩＩＩ］で表される中間体を有機溶媒中、酸存在下、ガラクトース誘導体と反応させ、（２）記載の一般式［ＩＩ］で表される中間体を製造する第五工程。
（ヘ）一般式［ＩＩ］で表される中間体を有機溶媒中、塩基処理することにより、一般式［Ｉ］で表されるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体を製造する第六工程。
なお、一般式［Ｉ］の当該製造方法において、それを実施する工程の順序は、順次第一工程から第六工程である。
【００１２】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
まず、一般式［ＶＩ］（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｐｈはフェニル基を示す。）で表されるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体の中間体の製造法を説明する。（（イ）第一工程）
【００１３】
有機溶媒中、塩基存在下、トリフェニルメチルクロリドを一般式［ＶＩＩ］（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｐｈはフェニル基を示す。）で表される中間体と反応させ、一般式［ＶＩ］で表される中間体を製造する。
【００１４】
反応に用いる有機溶媒は、周知の溶媒を使用できる。ジクロロメタン、クロロホルム、ピリジン、ヘキサン、ベンゼン、トルエン、テトラヒドロフラン、エーテル、Ｎ，　Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，　Ｎ−ジメチルアセトアミド、アセトニトリル、プロピオニトリル、酢酸エチル、ジメチルスルホキシド、メチルエチルケトン、フロリナートＴＭＦＣ７７、ノベックＴＭＨＦＥ７１００、ＨＦＥ７２００、トリフルオロメチルベンゼンなどを挙げることができる。また、これらの混合物や含水物、あるいは、不均一系での反応ができることは言うまでもない。
【００１５】
塩基としては、何ら制限はない。たとえば、４−ジメチルアミノピリジン、ピリジン、トリエチルアミン、トリブチルアミン、Ｎ，　Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］−７−ウンデセン、ナトリウムメトキシドなどの有機塩基、炭酸カリウム、炭酸セシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどの無機塩基あるいは、ブチルリチウム、フェニルリチウムなどの有機金属化合物を挙げることができる。
【００１６】
反応時間、反応温度にも何ら制限はない。いずれも個々の誘導体によって異なり、また、塩基や溶媒によっても異なるが、通常、−２０℃から溶媒の沸点までの範囲で、１時間から７日間の範囲である。
一般式［ＶＩＩ］（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｐｈはフェニル基を示す。）で表される中間体は既知の方法（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．　Ｒｅｓ．誌、２６４巻、１５５頁、１９９４年参照）により製造でき、その製造法になんら制限はない。
【００１７】
次に、一般式［Ｖ］（式中、ｎは１〜３の整数を示し、Ｐｈはフェニル基を示し、Ｂｆｐは３−［（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデカノイル）―（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１−ヘプタデカフルオロウンデシル）−アミノ］−プロパノイル基を示す。）で表されるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体の中間体の製造法を説明する。（（ロ）第二工程）
有機溶媒中、塩基存在下、Ｂｆｐ−ＯＨで表される高度にフッ素化されたカルボン酸を一般式［ＶＩ］で表される中間体に縮合させ、一般式［Ｖ］で表される中間体を製造する。Ｂｆｐ−ＯＨで表される高度にフッ素化されたカルボン酸は我々の発明した方法［特願２００２−６３９８５］で製造できる。
【００１８】
Ｂｆｐ−ＯＨで示される高度にフッ素化されたカルボン酸を一般式［ＶＩ］で表される中間体と反応させる方法についても何ら制限はない。Ｂｆｐ−ＯＨで示される高度にフッ素化されたカルボン酸を予め、酸ハロゲン化物、混合酸無水物、対称酸無水物、活性エステルに変換させて反応させる方法や、Ｎ，　Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）などの縮合試薬と直接反応させる方法が挙げられる。いずれの誘導体も周知の誘導体を利用できる。具体的には、酸塩化物、酸臭化物、ピバル酸混合酸無水物、ペンタフルオロフェニルエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、コハク酸イミドエステルなど周知の誘導体を例示できる。また、縮合試薬としては前述のＤＣＣ、ＰｙＢＯＰＴＭ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウム　ヘキサフルオロホスフェート）、ＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム　ヘキサフルオロホスフェート）等を挙げることができる。
【００１９】
一般式［Ｖ］で表される中間体は有機溶媒とパーフルオロカーボンによる分配抽出により、パーフルオロカーボン層に分配され、容易に精製できる。また、シリカゲルカラムクロマトグラフィーなどの通常の精製手段でも精製できる。反応に用いる有機溶媒としては、周知の溶媒を使用できる。ジクロロメタン、クロロホルム、ヘキサン、ベンゼン、トルエン、テトラヒドロフラン、エーテル、Ｎ，　Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，　Ｎ−ジメチルアセトアミド、アセトニトリル、プロピオニトリル、酢酸エチル、ジメチルスルホキシド、メチルエチルケトン、フロリナートＴＭＦＣ７７、ノベックＴＭＨＦＥ７１００、ＨＦＥ７２００、トリフルオロメチルベンゼンなどを挙げることができる。また、これらの混合物や含水物、あるいは、不均一系での反応ができることは言うまでもない。
抽出に用いるパーフルオロカーボンとしては、周知のパーフルオロカーボン溶媒を使用できる。たとえば、パーフルオロヘキサン、パーフルオロヘプタン、パーフルオロオクタン、フロリナートＴＭＦＣ７２、フロリナートＴＭＦＣ７７、フロリナートＴＭＦＣ８７、フロリナートＴＭＦＣ８４、パーフルオロメチルシクロヘキサンなどを挙げることができる。特にフロリナートＴＭＦＣ７２とパーフルオロメチルシクロヘキサンが望ましい。
【００２０】
前述したＢｆｐ−ＯＨで表される高度にフッ素化されたカルボン酸と一般式［ＶＩ］で表される誘導体、そして塩基の当量数には何ら制限はない。いずれか１成分か２成分を過剰に用いることもできる。塩基は一般式［ＶＩ］で表される中間体に対し１当量〜１５当量の範囲量が好ましい。一般式［Ｖ］で表される中間体を製造する際に用いる、塩基、反応時間、反応温度については、何ら制限はなく、具体的には、一般式［ＶＩ］で表される中間体の製造について述べた例と同じである。
【００２１】
次に、一般式［ＩＶ］（式中、ｎは１〜３の整数を示す。）で表されるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体の中間体の製造法を説明する。（（ハ）第三工程）
有機溶媒中、一般式［Ｖ］で表される中間体を、酸処理し、一般式［ＩＶ］で表される中間体を製造する。
一般式［ＩＶ］で表される中間体は有機溶媒とパーフルオロカーボンによる分配抽出により、パーフルオロカーボン層に分配され、容易に精製できる。また、シリカゲルカラムクロマトグラフィーなどの通常の精製手段でも精製できる。一般式［ＩＶ］で表される中間体を製造する際に用いる、有機溶媒、パーフルオロカーボン、反応時間、反応温度については、何ら制限はなく、具体的には、一般式［Ｖ］で表される中間体の製造（第二工程）、または一般式［ＶＩ］で表される中間体の製造（第一工程）について述べた例と同じである。
【００２２】
酸としては、何ら制限はない。たとえば、カンファースルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸などの有機酸、塩酸、硫酸、過塩素酸などの無機酸、トリフルオロメタンスルホネート、トリフルオロボラン、テトラクロロチタンなどのルイス酸を挙げることができ、特にカンファースルホン酸または塩酸が望ましい。
【００２３】
次に、一般式［ＩＩＩ］（式中、ｎは１〜３の整数を示す。）で表される中間体の製造法を説明する。（（二）第四工程）
有機溶媒中、塩基存在下、ベンゾイルクロリドと一般式［ＩＶ］で表される中間体を縮合させ、一般式［ＩＩＩ］で表される中間体を製造する。
一般式［ＩＩＩ］で表される中間体は有機溶媒とパーフルオロカーボンによる分配抽出により、パーフルオロカーボン層に分配され、容易に精製できる。また、シリカゲルカラムクロマトグラフィーなどの通常の精製手段でも精製できる。
一般式［ＩＩＩ］で表される中間体を製造する際に用いる、有機溶媒、塩基、パーフルオロカーボン、反応時間、反応温度については、何ら制限はなく、具体的には、一般式［Ｖ］で表される中間体の製造（第二工程）、または一般式［ＶＩ］で表される中間体の製造（第一工程）について述べた例と同じである。
【００２４】
次に、一般式［ＩＩ］（式中、ｎは１〜３の整数を示す。）で表されることを特徴とするスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体の中間体の製造法を説明する。（（ホ）第五工程）
有機溶媒中、酸存在下、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−ガラクトピラノシルトリクロロアセトイミデートと一般式［ＩＩＩ］で表される中間体をカップリングさせ、一般式［ＩＩ］で表される中間体を製造する。
一般式［ＩＩ］で表される中間体は有機溶媒とパーフルオロカーボンによる分配抽出により、パーフルオロカーボン層に分配され、容易に精製できる。また、シリカゲルカラムクロマトグラフィーなどの通常の精製手段でも精製できる。
【００２５】
一般式［ＩＩ］で表される中間体を製造する際に用いる、有機溶媒、酸、パーフルオロカーボン、反応時間、反応温度については、何ら制限はなく、具体的には、一般式［Ｖ］で表される中間体の製造（第二工程）、または一般式［ＶＩ］で表される中間体の製造（第一工程）について述べた例と同じである。但し、酸としてはトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネートが望ましい。２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−ガラクトピラノシルトリクロロアセトイミデートは既知の方法（Ｌｉｅｂｉｇｓ　Ａｎｎ．　Ｃｈｅｍ．誌、１３４３頁、１９８４年参照）により製造でき、その製造法になんら制限はない。
【００２６】
次に、本発明化合物である一般式［Ｉ］（式中、ｎは１〜３の整数を示す。）で表されることを特徴とするスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体の製造法を説明する。（（ヘ）第六工程）
有機溶媒中、一般式［ＩＩ］で表される中間体を塩基処理し、一般式［Ｉ］（式中、ｎは１〜３の整数を示す。）で示されるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体を製造する。
一般式［Ｉ］（式中、ｎは１〜３の整数を示す。）で示されるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体は有機溶媒とパーフルオロカーボンによる分配抽出により、有機層に分配され、容易に精製できる。また、シリカゲルカラムクロマトグラフィーなどの通常の精製手段でも精製できる。
一般式［Ｉ］（式中、ｎは１〜３の整数を示す。）で示されるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体を製造する際に用いる、有機溶媒、塩基、パーフルオロカーボン、反応時間、反応温度については、何ら制限はなく、具体的には、一般式［Ｖ］で表される中間体の製造（第二工程）、または一般式［ＶＩ］で表される中間体の製造（第一工程）について述べた例と同じである。
【００２７】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、その要旨を超えない限り、何ら制限を受けるものではない。
【００２８】
【実施例１】
一般式［ＶＩＩ］（但し、ｎは１を示す。）で表される中間体（３０７ｍｇ、　０．６５ｍｍｏｌ）の無水ジメチルホルムアミド　（６ｍＬ）　溶液にトリエチルアミン　（１６４μＬ、　１．２ｍｍｏｌ）、トリフェニルメチルクロリド（２００ｍｇ、　０．７２ｍｍｏｌ）、４ージメチルアミノピリジン　（８ｍｇ、　０．０７ｍｍｏｌ）　を順次加え、室温で２４時間撹拌した。反応液を水中に加え、酢酸エチルで３回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮した。濃縮残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー　（ＣＨＣｌ３　：　ＭｅＯＨ　＝　２０　：　１）　にて精製し、一般式［ＶＩ］（但し、ｎは１を示す。）で表される中間体（３６１ｍｇ、　７７％）を得た。（白色粉末）：［α］２３Ｄ　＝　−２５．６°　（ｃ　＝１．０４　ｉｎ　ＣＨＣｌ３）；　１Ｈ−ＮＭＲ　（ＣＤＣｌ３）：δ１．８８　（１Ｈ、　ｂｒｓ）、　２．５５　（１Ｈ、　ｂｒｓ）、　２．７５　（１Ｈ、　ｂｒｓ）、　３．２９　（１Ｈ、　ｄｄ、　Ｊ＝１０．５、　４．４　Ｈｚ）、　３．３７　（２Ｈ、　ｂｒｓ）、　３．５１　（２Ｈ、　ｍ）、　３．６２　（３Ｈ、　ｍ）、　３．７５　（１Ｈ、　ｔ、　Ｊ＝９．５　Ｈｚ）、　４．００　（１Ｈ、　ｄｄ、１２．７、　１．７　Ｈｚ）、　４．１０　（１Ｈ、　ｄ、　Ｊ＝２．９　Ｈｚ）、　４．１６　（１Ｈ、　ｄ、　Ｊ＝７．８　Ｈｚ）、　４．２３　（１Ｈ、　ｄｄ、　Ｊ＝１２．７、　６．３　Ｈｚ）、　４．２６　（１Ｈ、　ｄ、　Ｊ＝１１．５　Ｈｚ）、　４．３３　（１Ｈ、　ｂｒｓ）、　４．４１　（１Ｈ、　ｄ、　Ｊ＝７．６　Ｈｚ）、　４．４５　（１Ｈ、　ｄｄ、　Ｊ＝１２．５、　５．４　Ｈｚ）、　５．２６　（１Ｈ、　ｄｄ、　Ｊ＝１０．５、　１．５　Ｈｚ）、　５．３８　（１Ｈ、　ｄｄ、　Ｊ＝１７．３、　１．５　Ｈｚ）、　５．４８　（１Ｈ、　ｓ）、　６．０３　（１Ｈ、　ｍ）、　７．３０　（１１Ｈ、　ｍ）、　７．４７　（９Ｈ、　ｍ）；　１３Ｃ−ＮＭＲ　（ＣＤＣｌ３）：δ　６２．４、　６６．６、　６８．６、　７０．０、　７１．０、　７２．３、　７３．５、　７３．８、　７４．６、　７４．７、　７９．７、　８６．４、　１０１．０、　１０２．６、　１１７．８、　１２６．０、　１２６．８、　１２７．５、　１２８．０、　１２８．４、　１２９．０、　１３３．５、　１３６．９、　１４３．４．；　　ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ：　Ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ４１Ｈ４４Ｏ１１Ｎａ　（Ｍ＋Ｎａ＋）：　７３５．３、　Ｆｏｕｎｄ：　７３５．１．
【００２９】
【実施例２】
一般式［ＶＩ］（但し、ｎは１を示す。）で表される中間体（２５６ｍｇ、　０．３６ｍｍｏｌ）とＢｆｐ−ＯＨで表される高度にフッ素化されたカルボン酸（１．５１ｇ、　１．４７ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン　（４０ｍＬ）　溶液に４−ジメチルアミノピリジン　（３０７ｍｇ、　２．５１ｍｍｏｌ）　と　ＤＣＣ　（７４１ｍｇ、　３．５９ｍｍｏｌ）　を順次加え、室温で１８時間撹拌した。反応液を濃縮し、トルエンとパーフルオロカーボン（フロリナートＴＭＦＣ−７２）で分配抽出し、パーフルオロカーボン層を減圧濃縮して一般式［Ｖ］（但し、ｎは１を示す。）で表される中間体（１．７０ｇ）　を得た。（無色油状）：　ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ：　Ｃａｌｃｄ　ｆｏｒＣ１４１Ｈ９６Ｆ１３６Ｎ４ＮａＯ１９　（Ｍ＋Ｎａ＋）：　４７５５．４、　Ｆｏｕｎｄ：　４７５３．６．
【００３０】
【実施例３】
一般式［Ｖ］（但し、ｎは１を示す。）で表される中間体　（５９７ｍｇ、　０．１２６ｍｍｏｌ）　のＥｔＯＣ４Ｆ９　（６ｍＬ）溶液に氷冷下で４Ｍ　ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ　（４ｍＬ）、水（０．５ｍＬ）を加える。１時間撹拌後、トルエンとパーフルオロカーボン（フロリナートＴＭＦＣ−７２　）で分配抽出し、パーフルオロカーボン層を減圧濃縮して一般式［ＩＶ］（但し、ｎは１を示す。）で表される中間体（５４９ｍｇ）　を得た。（無色油状）：　ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ：　Ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ１１５Ｈ７８Ｆ１３６Ｎ４ＮａＯ１９　（Ｍ＋Ｎａ＋）：　４４２５．３、　Ｆｏｕｎｄ：　４４２３．２．
【００３１】
【実施例４】
一般式［ＩＶ］（但し、ｎは１を示す。）で表される中間体（５２３ｍｇ、　１１９μｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）−無水ＥｔＯＣ４Ｆ９　（１０ｍＬ）溶液に−２０℃でトリエチルアミン（０．５ｍＬ、　３．５６ｍｍｏｌ）　とベンゾイルクロリド（２２．３ｍｇ、　０．９８ｍｍｏｌ）を順次加え、７時間撹拌した。メタノール　（５ｍＬ）　を加え、さらに３０分撹拌後、反応液をメタノールとパーフルオロカーボン（フロリナートＴＭＦＣ−７２　）で分配抽出し、パーフルオロカーボン層を減圧濃縮して一般式［ＩＩＩ］（但し、ｎは１を示す。）で表される中間体（５４０ｍｇ）　を得た。　（白色粉末）：　ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ：　Ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ１２９Ｈ８６Ｆ１３６Ｎ４Ｏ２１Ｎａ　（Ｍ＋Ｎａ＋）：　４６３３．４、　Ｆｏｕｎｄ：　４６３２．５．
【００３２】
【実施例５】
一般式［ＩＩＩ］（但し、ｎは１を示す。）で表される中間体（４３５ｍｇ、　９４μｍｏｌ）の無水ＥｔＯＣ４Ｆ９　（５ｍＬ）溶液にアルゴン雰囲気下、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−ガラクトピラノシルトリクロロアセトイミデート　（３２３ｍｇ、　４７２μｍｏｌ）の無水エーテル　（５ｍＬ）溶液とモレキュラーシブス４Ａ粉末（２ｇ）　を加え、室温で１時間撹拌した。次に氷冷下、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルフォネート（５１μＬ、　２８３μｍｏｌ）　を加え、２０分撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１ｍＬ）を加え、セライトろ過し、酢酸エチルでよく洗浄した。ろ液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、得られた酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。濃縮残渣をメタノールとパーフルオロカーボン（フロリナートＴＭＦＣ−７２　）で分配抽出し、パーフルオロカーボン層を減圧濃縮して一般式［ＩＩ］（但し、ｎは１を示す。）で表される中間体　（４６２ｍｇ）　を得た。（無色油状）：　ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ：　Ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ１６３Ｈ１２０Ｆ１３６Ｎ４ＮａＯ２６　（Ｍ＋Ｎａ＋）：　５１５５．６、　Ｆｏｕｎｄ：　５１５７．５．
【００３３】
【実施例６】
一般式［ＩＩ］（但し、ｎは１、Ｂｚはベンゾイル基を示す。）で表される中間体（４６２ｍｇ、　９０μｍｏｌ）のエーテル（９ｍＬ）−メタノール（６ｍＬ）溶液に２８％　ＮａＯＭｅ　（６０μＬ）　を加え、室温で１時間撹拌した。アンバーライト（ＩＲ−１２０；　Ｈ＋　ｆｏｒｍ）　を加えて中和し、ろ過した。ろ液の減圧濃縮残渣をメタノールとパーフルオロカーボン（フロリナートＴＭＦＣ−７２　）で分配抽出し、パーフルオロカーボン層を減圧濃縮してＢｆｐ−ＯＭｅ　（３５１ｍｇ）　を回収した。つぎに、メタノール層を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー　（ＣＨＣｌ３　：　ＭｅＯＨ　＝　１５　：　１）　にて精製し、一般式［Ｉ］（但し、ｎは１を示す。）で表されるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖誘導体（２９．３ｍｇ、　全５工程で３６％）を得た。（白色粉末）：　［α］２３Ｄ　＝　２５．０°　（ｃ　＝　１．５３ｉｎ　ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ　＝　１：１）；　１３Ｃ−ＮＭＲ　（ＣＤＣｌ３）：δ　６１．３、　６１．７、　６９．５、　７０．７、　７１．３、　７２．０、　７３．１、　７３．７、　７３．９、　７４．１、　７４．７、　７４．９、　７５．１、　７５．２、　７５．４、　７６．５、　７９．０、　８０．７、　８１．３、　１００．９、　１０２．２、　１０４．６、　１１７．７、　１２７．８、１２７．９６、　１２８．０６、　１２８．１４、　１２８．３３、　１２８．５３、　１２８．５５、　１２８．５７、　１２８．６９、１２８．７１、　１２８．７６、　１３４．２、　１３７．８２、　１３７．８８、　１３８．３５、　１３８．５０．；　　ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ：　Ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ４９Ｈ６０Ｏ１６Ｎａ　（Ｍ＋Ｎａ＋）：　９２７．４、　Ｆｏｕｎｄ：　９２７．１．
【００３４】
【発明の効果】
本発明化合物であるスフィンゴ糖脂質Ｇｂ３糖鎖の誘導体はベロ毒素の解毒薬、ベロ毒素検出技術の開発のツールとして利用でき、工業的価値やその波及効果は極めて大である。