(57)【要約】【課題】活性基を有するＰＨＡの微生物による生産性が高く、活性基を有する側鎖のユニット比を制御でき、さらにポリマーとしての応用が制限されないように物性を任意に制御し得るようなＰＨＡ及びその製造方法を提供する。【解決手段】下記化学式（１）に示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットを含むＰＨＡ及びその製造方法。    【化１】2004162045.tif 000110（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式（１）に示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットを含むことを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート。
【化１】
2004162045.tif 000068
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
【請求項２】
前記化学式（１）に示すユニット以外に、化学式（２）及び（３）に示すユニットの少なくとも一つを含む、請求項１記載のポリヒドロキシアルカノエート。
【化２】
2004162045.tif 000069
（ｙ及びｚは化学式（１）で示すユニットと独立して化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る。）
【請求項３】
前記化学式（１）に示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットが、
化学式（６）：
【化３】
2004162045.tif 000070
に示す３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸ユニット、及び
化学式（７）：
【化４】
2004162045.tif 000071
に示す３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸ユニット、
のうちのいずれか一つ以上である、請求項１又は２に記載のポリヒドロキシアルカノエート。
【請求項４】
前記化学式（１）：
【化５】
2004162045.tif 000072
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
に示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットと、
化学式（４）：
【化６】
2004162045.tif 000073
（ｍは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る；Ｒはフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる）
で示すユニット、
もしくは
化学式（５）：
【化７】
2004162045.tif 000074
（式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、ｋは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
に示す３−ヒドロキシ−ω−シクロヘキシルアルカン酸ユニットと
を少なくとも分子中に同時に含む、請求項１乃至３のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエート。
【請求項５】
前記化学式（４）におけるＲ、即ちフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基が、
化学式（８）：
【化８】
2004162045.tif 000075
（式中、Ｒ2は芳香環への置換基を示し、Ｒ2はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＨ＝ＣＨ2基、ＣＯＯＲ3（Ｒ3：Ｈ原子、Ｎａ原子、Ｋ原子のいずれかを表す）、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ2は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（９）：
【化９】
2004162045.tif 000076
（式中、Ｒ4は芳香環への置換基を示し、Ｒ4はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＳＣＨ3基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ4は、異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（１０）：
【化１０】
2004162045.tif 000077
（式中、Ｒ5は芳香環への置換基を示し、Ｒ5はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ5は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（１１）：
【化１１】
2004162045.tif 000078
（式中、Ｒ6は芳香環への置換基を示し、Ｒ6はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ7、ＳＯ2Ｒ8（Ｒ7：Ｈ、Ｎａ、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ8：ＯＨ、ＯＮａ、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す）、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、（ＣＨ3）2−ＣＨ基または（ＣＨ3）3−Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ6は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（１２）：
【化１２】
2004162045.tif 000079
（式中、Ｒ9は芳香環への置換基を示し、Ｒ9はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ10、ＳＯ2Ｒ11（Ｒ10：Ｈ、Ｎａ、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ11：ＯＨ、ＯＮａ、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す）、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、（ＣＨ3）2−ＣＨ基または（ＣＨ3）3−Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ9は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（１３）：
【化１３】
2004162045.tif 000080
で示される残基、
化学式（１４）：
【化１４】
2004162045.tif 000081
で示される残基、
化学式（１５）：
【化１５】
2004162045.tif 000082
で示される残基、
化学式（１６）：
【化１６】
2004162045.tif 000083
（式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14（Ｒ13：Ｈ、Ｎａ、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ14：ＯＨ、ＯＮａ、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す）、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、（ＣＨ3）2−ＣＨ基または（ＣＨ3）3−Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ12は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、及び
化学式（１７）：
【化１７】
2004162045.tif 000084
（式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17（Ｒ16：Ｈ、Ｎａ、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ17：ＯＨ、ＯＮａ、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す）、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、（ＣＨ3）2−ＣＨ基または（ＣＨ3）3−Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ15は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群
からなる群より選択される１つ以上の残基であることを特徴とする請求項４記載のポリヒドロキシアルカノエート。
【請求項６】
数平均分子量が１０００から１００００００の範囲である請求項１乃至５のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエート。
【請求項７】
化学式（１９）：
【化１８】
2004162045.tif 000085
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸を含む条件下で、
前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸を原料として、
化学式（１）：
【化１９】
2004162045.tif 000086
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットを分子中に含むポリヒドロキシアルカノエートを生産する能力を有する微生物により生合成せしめることを特徴とする、
前記化学式（１）：
【化２０】
2004162045.tif 000087
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットを分子中に含むポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項８】
前記化学式（１）で示されるユニットに加えて、下記化学式（２）及び（３）に示されるユニットの少なくとも一つを含む、請求項７記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【化２１】
2004162045.tif 000088
（ｙ及びｚは化学式（１）で示すユニットと独立して化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る。）
【請求項９】
前記化学式（１９）に示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸が、
化学式（２３）：
【化２２】
2004162045.tif 000089
に示す４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸、及び
化学式（２４）：
【化２３】
2004162045.tif 000090
に示す５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸
のうちのいずれか１つ以上である請求項７又は８に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１０】
前記化学式（１９）：
【化２４】
2004162045.tif 000091
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸と、
化学式（２０）：
【化２５】
2004162045.tif 000092
（ｑは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る；Ｒ16はフェニル構造、或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる）
で示す化合物、
もしくは
化学式（２１）：
【化２６】
2004162045.tif 000093
（式中、Ｒ17はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ17はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、また、ｒは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示すω−シクロヘキシルアルカン酸と
を含む条件下で、前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸、及び前記化学式（２０）で示す化合物もしくは前記化学式（２１）で示すω−シクロヘキシルアルカン酸を原料として、
前記化学式（１）：
【化２７】
2004162045.tif 000094
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットと、
化学式（２２）：
【化２８】
2004162045.tif 000095
（ｍは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る；Ｒ18はフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる）
で示すユニット
もしくは
化学式（５）：
【化２９】
2004162045.tif 000096
（式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、また、ｋは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
に示す３−ヒドロキシ−ω−シクロヘキシルアルカン酸ユニットと
を少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエートを生産する能力を有する微生物により生合成せしめることを特徴とする、
前記化学式（１）：
【化３０】
2004162045.tif 000097
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットと、
前記化学式（２２）：
【化３１】
2004162045.tif 000098
（ｍは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る；Ｒ18はフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる）
で示すユニット
もしくは
前記化学式（５）：
【化３２】
2004162045.tif 000099
（式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、また、ｋは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
に示す３−ヒドロキシ−ω−シクロヘキシルアルカン酸ユニットと
を少なくとも分子中に同時に含む、請求項７乃至９のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１１】
前記化学式（２０）におけるＲ16及び前記化学式（２２）におけるＲ18、即ちフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基が、
化学式（２５）：
【化３３】
2004162045.tif 000100
（式中、Ｒ19は芳香環への置換基を示し、Ｒ19はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＨ＝ＣＨ2基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ19は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（９）：
【化３４】
2004162045.tif 000101
（式中、Ｒ4は芳香環への置換基を示し、Ｒ4はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＳＣＨ3基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ4は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（１０）：
【化３５】
2004162045.tif 000102
（式中、Ｒ5は芳香環への置換基を示し、Ｒ5はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ5は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（１１）：
【化３６】
2004162045.tif 000103
（式中、Ｒ6は芳香環への置換基を示し、Ｒ6はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ7、ＳＯ2Ｒ8（Ｒ7：Ｈ、Ｎａ、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ8：ＯＨ、ＯＮａ、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す）、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、（ＣＨ3）2−ＣＨ基または（ＣＨ3）3−Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ6は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（１２）：
【化３７】
2004162045.tif 000104
（式中、Ｒ9は芳香環への置換基を示し、Ｒ9はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ10、ＳＯ2Ｒ11（Ｒ10：Ｈ、Ｎａ、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ11：ＯＨ、ＯＮａ、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す）、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、（ＣＨ3）2−ＣＨ基または（ＣＨ3）3−Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ9は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（１３）：
【化３８】
2004162045.tif 000105
で示される残基、
化学式（１４）：
【化３９】
2004162045.tif 000106
で示される残基、
化学式（１５）：
【化４０】
2004162045.tif 000107
で示される残基、
化学式（１６）：
【化４１】
2004162045.tif 000108
（式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14（Ｒ13：Ｈ、Ｎａ、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ14：ＯＨ、ＯＮａ、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す）、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、（ＣＨ3）2−ＣＨ基または（ＣＨ3）3−Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ12は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、及び
化学式（１７）：
【化４２】
2004162045.tif 000109
（式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17（Ｒ16：Ｈ、Ｎａ、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ17：ＯＨ、ＯＮａ、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す）、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、（ＣＨ3）2−ＣＨ基または（ＣＨ3）3−Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ15は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群
からなる群より選択される１つ以上の残基であることを特徴とする請求項１０記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１２】
前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸を含む培地中で前記微生物を培養することを特徴とする、請求項７乃至１１のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１３】
前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸と、前記化学式（２０）で示す化合物もしくは前記化学式（２１）で示すω−シクロヘキシルアルカン酸とを含む培地中で前記微生物を培養することを特徴とする、請求項１０又は１１に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１４】
前記微生物の培養が、前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸に加えて、ペプチド類、酵母エキス、有機酸及びその塩、アミノ酸及びその塩、糖類、並びに、炭素数４から１２の直鎖アルカン酸及びその塩からなる群より選択される少なくとも１種類を含む培地中で、前記微生物を培養することを特徴とする請求項１２または１３に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１５】
前記微生物の培養において、培地中に含有されるペプチド類がポリペプトンであり、また、培地中に含有される有機酸或いはその塩が、ピルビン酸、オキサロ酢酸、クエン酸、イソクエン酸、ケトグルタル酸、コハク酸、フマル酸、リンゴ酸、乳酸、及びこれらの塩からなる群より選択される１つ以上の化合物であり、また、培地中に含有されるアミノ酸或いはその塩が、グルタミン酸、アシパラギン酸、及びこれらの塩からなる群より選択される１つ以上の化合物であり、また、培地中に含有される糖類が、グリセロアルデヒド、エリトロース、アラビノース、キシロース、グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース、グリセロール、エリトリトール、キシリトール、グルコン酸、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マルトース、スクロース、及びラクトースからなる群より選択される１つ以上の化合物であることを特徴とする請求項１４に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１６】
前記微生物の培養が、二段階以上の培養工程を含むことを特徴とする請求項１２乃至１５のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１７】
前記二段階以上の培養工程を含む微生物の培養が、フェド・バッチ培養であることを特徴とする請求項１６記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１８】
前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸を含む培地中で前記微生物を培養し、前記微生物が産生した前記化学式（１）で示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットを少なくとも含むポリヒドロキシアルカノエートを微生物細胞から回収する工程を有することを特徴とする請求項１２乃至１７のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１９】
前記微生物として、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属する微生物を用いることを特徴とする請求項７乃至１８のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項２０】
前記微生物として、シュードモナス・チコリアイ  ＹＮ２株（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｉｃｈｏｒｉｉＹＮ２；ＦＥＲＭＢＰ−７３７５）、シュードモナス・チコリアイＨ４５株（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｉｃｈｏｒｉｉＨ４５；ＦＥＲＭＢＰ−７３７４）、及びシュードモナス・ジェッセニイＰ１６１株（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｊｅｓｓｅｎｉｉＰ１６１；ＦＥＲＭＢＰ−７３７６）のいずれか１つ以上の株を用いることを特徴とする請求項１９記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の属する技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートと、微生物を利用するその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
これまで、多くの微生物が、ポリ−３−ヒドロキシ酪酸（ＰＨＢ）あるいはその他のポリヒドロキシアルカノエート（ＰＨＡ）を生産し、その菌体内に蓄積することが報告されている。これらポリヒドロキシアルカノエートなどの微生物が産生するポリマーは、従来のプラスチックと同様に、溶融加工等により各種製品の生産に利用することができる。さらに、微生物が産生するポリマー、例えば、ポリヒドロキシアルカノエートなどは、生分解性を有しており、自然界の微生物により完全分解されるという利点を有している。従って、例えば、微生物が産生するポリヒドロキシアルカノエートは、廃棄した際、従来の多くの合成高分子化合物のように自然環境にそのまま残留し、汚染を引き起こす要因となることがない。また、微生物が産生するポリヒドロキシアルカノエートは、一般に生体適合性にも優れており、医療用軟質部材等としての応用も期待されている。
【０００３】
この微生物産生ポリヒドロキシアルカノエートは、その生産に用いる微生物の種類、ならびに、培地組成、培養条件等により、様々な組成や構造のものとなり得ることも知られている。これまで、主にポリヒドロキシアルカノエートの物性の改良という観点から、微生物産生ポリヒドロキシアルカノエートの組成や構造の制御を試みる研究がなされてきた。
【０００４】
微生物産生ポリヒドロキシアルカノエートの組成や構造の制御を目的とする研究の一つとして、近年、ユニット中に芳香環を有するポリヒドロキシアルカノエートを微生物に生産させる研究が盛んになされている。
【０００５】
（ａ）フェニル基もしくはその部分置換体を含むもの
・５−フェニル吉草酸を基質として、シュードモナスオレオボランス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ）が３−ヒドロキシ−５−フェニル吉草酸をユニットとして含むポリヒドロキシアルカノエートを生産することが報告されている（Ｍａｋｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９１号、１９９０年、ｐ．１９５７−１９６５（非特許文献１）、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２４号、１９９１年、ｐ．５２５６−５２６０（非特許文献２））
・５−（ｐ−トリル）吉草酸を基質として、シュードモナスオレオボランスが３−ヒドロキシ−５−（ｐ−トリル）吉草酸ユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートを生産することが報告されている（Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２９号、１９９６年、ｐ．１７６２−１７６６（非特許文献３））。
・５−（２，４−ジニトロフェニル）吉草酸を基質として、シュードモナスオレオボランスが３−ヒドロキシ−５−（２，４−ジニトロフェニル）吉草酸ユニット及び３−ヒドロキシ−５−（ｐ−ニトロフェニル）吉草酸ユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートを生産することが報告されている（Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，３２号、１９９９年、ｐ．２８８９−２８９５（非特許文献４））。
【０００６】
（ｂ）フェノキシ基もしくはその部分置換体を含むもの
・１１−フェノキシウンデカン酸を基質として、シュードモナスオレオボランスが３−ヒドロキシ−５−フェノキシ吉草酸ユニットと３−ヒドロキシ−９−フェノキシノナン酸ユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産することが報告されている（Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．，１９５号、１９９４年、ｐ．１６６５−１６７２（非特許文献５））。
【０００７】
３−ヒドロキシ−５−（モノフルオロフェノキシ）ペンタノエート（３Ｈ５（ＭＦＰ）Ｐ）ユニット、あるいは３−ヒドロキシ−５−（ジフルオロフェノキシ）ペンタノエート（３Ｈ５（ＤＦＰ）Ｐ）ユニットからなる単独重合体；少なくとも、３Ｈ５（ＭＦＰ）Ｐユニットあるいは３Ｈ５（ＤＦＰ）Ｐユニットを含有する共重合体；これらのポリマーの産生能を有するシュードモナス・プチダ；シュードモナス属を用いた、前記のポリマーの製造法に関する発明が開示されている。加えて、その発明の効果として、置換基を有する長鎖脂肪酸を資化して、側鎖末端に、１から２個のフッ素原子が置換したフェノキシ基をもつポリマーを合成することができ、また、かかるポリマーは、融点が高い上、良い加工性を保持しつつ、加えて、立体規則性、撥水性を与えることができる点を記載している。（特許第２９８９１７５号公報（特許文献１））。
【０００８】
このユニット中の芳香環上にフッ素置換を有するフッ素置換ＰＨＡ以外に、ユニット中の芳香環上にシアノ基やニトロ基が置換したポリヒドロキシアルカノエートの研究もなされている。
【０００９】
シュードモナスオレオボランスＡＴＣＣ２９３４７株及びシュードモナスプチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄａ）ＫＴ２４４２株を用いて、オクタン酸と６−（ｐ−シアノフェノキシ）ヘキサン酸あるいは６−（ｐ−ニトロフェノキシ）ヘキサン酸を基質として、３−ヒドロキシ−６−（ｐ−シアノフェノキシ）ヘキサン酸あるいは３−ヒドロキシ−６−（ｐ−ニトロフェノキシ）ヘキサン酸をモノマーユニットとして含むポリヒドロキシアルカノエートの生産が報告されている（Ｃａｎ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，４１号、１９９５年、ｐ．３２−４３（非特許文献６）、ＰｏｌｙｍｅｒＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，３９号、１９９６年、ｐ．２０５−２１３（非特許文献７））。
【００１０】
これら環上に置換基を持つ芳香環を有するユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートは、ガラス転移温度が高く、加工性も良いという、芳香環に由来するポリマー性状を維持しつつ、芳香環上に存在している置換基に由来する新たな機能も付与された、多機能のポリヒドロキシアルカノエートとなる。
【００１１】
また、その一方で、ユニット中にブロモ基を有するポリヒドロキシアルカノエートを基に、生産ポリマーに対して、前記ブロモ基を利用する化学変換により任意の官能基をポリマー側鎖に導入し、多機能のポリヒドロキシアルカノエートを得ることを目的とした研究も盛んに行われている。
【００１２】
シュードモナスオレオボランスを用いて、側鎖にブロモ基を有するポリヒドロキシアルカノエートを生産し、アセチル化マルトースのチオール化物を側鎖に修飾し、その溶解性や親水性の異なるポリヒドロキシアルカノエートを合成したことが報告されている（Ｍａｃｒｏｍｏｌ．ＲａｐｉｄＣｏｍｍｕｎ．，２０号、１９９９年、ｐ．９１−９４（非特許文献８））。
【００１３】
シュードモナス・オレオボランス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｏｌｅｏｖｏｌａｎｓ）を用いて側鎖にビニル基を有するポリエステルを生産し、ポリエステル分子内のビニル基を酸化することにより、エポキシ基を側鎖に有するポリエステルを生産したことが報告されている（Ｐｏｌｙｍｅｒ，４１号，２０００年、ｐ．１７０３−１７０９（非特許文献９））。
【００１４】
シュードモナス・オレオボランス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｏｌｅｏｖｏｌａｎｓ）を用いて側鎖にビニル基を有するポリエステルを生産し、ビニル基をエポキシ化することにより、エポキシ基を側鎖に有するポリエステルを生産したことが報告されている（Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，３１号，１９９８年、ｐ．１４８０−１４８６（非特許文献１０））。
【００１５】
ポリエステル側鎖のビニル基を利用し、ポリエステル分子内の架橋反応を行い、ポリエステルの物性を改良したことが報告されている（Ｐｏｌｙｍｅｒ，３５号，１９９４年、ｐ．２０９０−２０９７（非特許文献１１））。
【００１６】
ユニット中に活性基を有するＰＨＡの物性を変化させ、ポリマーとして実際に利用していくために、活性基を有するユニット以外のユニットを含むＰＨＡ共重合体を微生物合成することが検討されており、シュードモナスオレオボランス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ）を用いて、１１−ブロモウンデカン酸、８−ブロモオクタン酸、６−ブロモヘキサン酸といったω−ブロモアルカン酸とｎ−ノナン酸の共存下で３−ヒドロキシ−ω−ブロモアルカン酸ユニットと直鎖アルカン酸ユニットを含むＰＨＡ共重合体を生産した例が報告されている（Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２５号、１９９２年、ｐ．１８５２−１８５７（非特許文献１２））。
【００１７】
このように、ユニット中にブロモ基やビニル基のような反応性が高い活性基を有するＰＨＡでは、様々な官能基の導入や、化学的変換を施すことが可能であり、また、ポリマーの架橋点ともなり得るため、活性基を有するＰＨＡは、ＰＨＡの多機能化を図る上で非常に有効な方法であると言える。
【特許文献１】特許第２９８９１７５号公報
【非特許文献１】Ｍａｋｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９１号、１９９０年、ｐ．１９５７−１９６５
【非特許文献２】Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２４号、１９９１年、ｐ．５２５６−５２６０
【非特許文献３】Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２９号、１９９６年、ｐ．１７６２−１７６６
【非特許文献４】Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，３２号、１９９９年、ｐ．２８８９−２８９５
【非特許文献５】Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．，１９５号、１９９４年、ｐ．１６６５−１６７２
【非特許文献６】Ｃａｎ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，４１号、１９９５年、ｐ．３２−４３
【非特許文献７】ＰｏｌｙｍｅｒＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，３９号、１９９６年、ｐ．２０５−２１３
【非特許文献８】Ｍａｃｒｏｍｏｌ．ＲａｐｉｄＣｏｍｍｕｎ．，２０号、１９９９年、ｐ．９１−９４
【非特許文献９】Ｐｏｌｙｍｅｒ，４１号，２０００年、ｐ．１７０３−１７０９
【非特許文献１０】Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，３１号，１９９８年、ｐ．１４８０−１４８６
【非特許文献１１】Ｐｏｌｙｍｅｒ，３５号，１９９４年、ｐ．２０９０−２０９７
【非特許文献１２】Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２５号、１９９２年、ｐ．１８５２−１８５７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
しかしながら、ブロモ基を活性基とするＰＨＡを微生物合成する場合は、得られるＰＨＡの生産性が低く、ＰＨＡ共重合体を微生物合成した場合は、ブロモ基のユニット比を高くすることや、ユニット比を制御することが困難であった。
【００１９】
また、ビニル基を活性基とするＰＨＡの場合も、アルキル鎖の先端にビニル基がある場合には、ガラス転移温度や融点が低く、ポリマーの加工上及び使用上好ましい物性とは言えなかった。
【００２０】
以上の点から、活性基を有するＰＨＡの微生物による生産性が高く、活性基を有する側鎖のユニット比を制御でき、さらにポリマーとしての応用が制限されないように物性を任意に制御し得るようなＰＨＡ及びその製造方法が求められていた。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意研究の結果、反応性の高い（フェニルメチル）オキシ構造を活性基として有するユニットを含むＰＨＡを微生物合成する方法を見出し、本発明に至った。即ち、本発明は、化学式（１）：
【００２２】
【化１】
2004162045.tif 000002
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
に示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートである。
【００２３】
また本発明は、化学式（１９）：
【００２４】
【化２】
2004162045.tif 000003
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸を含む条件下で、
前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸を原料として、
化学式（１）：
【００２５】
【化３】
2004162045.tif 000004
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートを生産する能力を有する微生物により生合成せしめることを特徴とする、
前記化学式（１）：
【００２６】
【化４】
2004162045.tif 000005
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットを分子中に含むポリヒドロキシアルカノエートの製造方法である。
【発明の効果】
【００２７】
本発明により、新規ポリヒドロキシアルカノエート共重合体である、側鎖に［（フェニルメチル）オキシ］構造を有するユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート及び、側鎖に［（フェニルメチル）オキシ］構造を有するユニットと、側鎖にフェニル構造、チエニル構造、シクロヘキシル構造のいずれかを有する残基を含むユニットとを分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエートが提供された。
【００２８】
また、ＰＨＡの生産性が高く、［（フェニルメチル）オキシ］構造を有する側鎖のユニット比を制御でき、さらに生産されるＰＨＡの物性を制御し得るＰＨＡの製造方法が提供された。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
本発明のポリヒドロキシアルカノエート（ＰＨＡ）は、化学式（１）に示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットを含むことを特徴とするポリヒドロキシアルカノエートである。
【００３０】
【化５】
2004162045.tif 000006
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
また、前記化学式（１）に示すユニット以外に、化学式（２）及び（３）に示すユニットの少なくとも一つを含むポリヒドロキシアルカノエートである。
【００３１】
【化６】
2004162045.tif 000007
（ｙ及びｚは化学式（１）で示すユニットと独立して化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る。）
さらに、前記化学式（１）に示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットが、
化学式（６）：
【００３２】
【化７】
2004162045.tif 000008
に示す３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸ユニット、及び
化学式（７）：
【００３３】
【化８】
2004162045.tif 000009
に示す３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸ユニット、
のうちのいずれか一つ以上であるポリヒドロキシアルカノエートである。
【００３４】
特に、前記化学式（１）：
【００３５】
【化９】
2004162045.tif 000010
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
に示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットと、
化学式（４）：
【００３６】
【化１０】
2004162045.tif 000011
（ｍは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る；Ｒはフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる）
で示すユニット、
もしくは
化学式（５）：
【００３７】
【化１１】
2004162045.tif 000012
（式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、ｋは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
に示す３−ヒドロキシ−ω−シクロヘキシルアルカン酸ユニットと
を少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエートである。
【００３８】
また、前記化学式（４）におけるＲ、即ちフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基が、
化学式（８）：
【００３９】
【化１２】
2004162045.tif 000013
（式中、Ｒ2は芳香環への置換基を示し、Ｒ2はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＨ＝ＣＨ2基、ＣＯＯＲ3（Ｒ3：Ｈ原子、Ｎａ原子、Ｋ原子のいずれかを表す）、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ2は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（９）：
【００４０】
【化１３】
2004162045.tif 000014
（式中、Ｒ4は芳香環への置換基を示し、Ｒ4はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＳＣＨ3基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ4は、異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（１０）：
【００４１】
【化１４】
2004162045.tif 000015
（式中、Ｒ5は芳香環への置換基を示し、Ｒ5はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ5は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（１１）：
【００４２】
【化１５】
2004162045.tif 000016
（式中、Ｒ6は芳香環への置換基を示し、Ｒ6はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ7、ＳＯ2Ｒ8（Ｒ7：Ｈ、Ｎａ、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ8：ＯＨ、ＯＮａ、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す）、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、（ＣＨ3）2−ＣＨ基または（ＣＨ3）3−Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ6は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（１２）：
【００４３】
【化１６】
2004162045.tif 000017
（式中、Ｒ9は芳香環への置換基を示し、Ｒ9はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ10、ＳＯ2Ｒ11（Ｒ10：Ｈ、Ｎａ、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ11：ＯＨ、ＯＮａ、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す）、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、（ＣＨ3）2−ＣＨ基または（ＣＨ3）3−Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ9は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（１３）：
【００４４】
【化１７】
2004162045.tif 000018
で示される残基、
化学式（１４）：
【００４５】
【化１８】
2004162045.tif 000019
で示される残基、
化学式（１５）：
【００４６】
【化１９】
2004162045.tif 000020
で示される残基、
化学式（１６）：
【００４７】
【化２０】
2004162045.tif 000021
（式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14（Ｒ13：Ｈ、Ｎａ、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ14：ＯＨ、ＯＮａ、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す）、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、（ＣＨ3）2−ＣＨ基または（ＣＨ3）3−Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ12は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、及び
化学式（１７）：
【００４８】
【化２１】
2004162045.tif 000022
（式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17（Ｒ16：Ｈ、Ｎａ、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ17：ＯＨ、ＯＮａ、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す）、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、（ＣＨ3）2−ＣＨ基または（ＣＨ3）3−Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ15は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群
からなる群より選択される１つ以上の残基であるポリヒドロキシアルカノエートである。
【００４９】
特に、数平均分子量が１０００から１００００００の範囲であるポリヒドロキシアルカノエートである。
【００５０】
本発明のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法は、
化学式（１９）：
【００５１】
【化２２】
2004162045.tif 000023
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸を含む条件下で、
前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸を原料として、
化学式（１）：
【００５２】
【化２３】
2004162045.tif 000024
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットを分子中に含むポリヒドロキシアルカノエートを生産する能力を有する微生物により生合成せしめることを特徴とする、
前記化学式（１）：
【００５３】
【化２４】
2004162045.tif 000025
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットを分子中に含むポリヒドロキシアルカノエートの製造方法である。
【００５４】
また、前記化学式（１）で示されるユニットに加えて、下記化学式（２）及び（３）に示されるユニットの少なくとも一つを含むポリヒドロキシアルカノエートの製造方法である。
【００５５】
【化２５】
2004162045.tif 000026
（ｙ及びｚは化学式（１）で示すユニットと独立して化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る。）
さらに、前記化学式（１９）に示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸が、
化学式（２３）：
【００５６】
【化２６】
2004162045.tif 000027
に示す４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸、及び
化学式（２４）：
【００５７】
【化２７】
2004162045.tif 000028
に示す５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸
のうちのいずれか１つ以上であるポリヒドロキシアルカノエートの製造方法である。
【００５８】
特に、前記化学式（１９）：
【００５９】
【化２８】
2004162045.tif 000029
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸と、
化学式（２０）：
【００６０】
【化２９】
2004162045.tif 000030
（ｑは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る；Ｒ16はフェニル構造、或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる）
で示す化合物、
もしくは
化学式（２１）：
【００６１】
【化３０】
2004162045.tif 000031
（式中、Ｒ17はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ17はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、また、ｒは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示すω−シクロヘキシルアルカン酸と
を含む条件下で、
前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸、及び前記化学式（２０）で示す化合物もしくは前記化学式（２１）で示すω−シクロヘキシルアルカン酸を原料として、
前記化学式（１）：
【００６２】
【化３１】
2004162045.tif 000032
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットと、
化学式（２２）：
【００６３】
【化３２】
2004162045.tif 000033
（ｍは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る；Ｒ18はフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる）
で示すユニット
もしくは
化学式（５）：
【００６４】
【化３３】
2004162045.tif 000034
（式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、また、ｋは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
に示す３−ヒドロキシ−ω−シクロヘキシルアルカン酸ユニットと
を少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエートを生産する能力を有する微生物により生合成せしめることを特徴とする、
前記化学式（１）：
【００６５】
【化３４】
2004162045.tif 000035
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットと、
前記化学式（２２）：
【００６６】
【化３５】
2004162045.tif 000036
（ｍは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る；Ｒ18はフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる）
で示すユニット
もしくは
前記化学式（５）：
【００６７】
【化３６】
2004162045.tif 000037
（式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、また、ｋは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
に示す３−ヒドロキシ−ω−シクロヘキシルアルカン酸ユニットと
を少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエートの製造方法である。
【００６８】
また、前記化学式（２０）におけるＲ16及び前記化学式（２２）におけるＲ18、即ちフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基が、
化学式（２５）：
【００６９】
【化３７】
2004162045.tif 000038
（式中、Ｒ19は芳香環への置換基を示し、Ｒ19はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＨ＝ＣＨ2基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ19は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（９）：
【００７０】
【化３８】
2004162045.tif 000039
（式中、Ｒ4は芳香環への置換基を示し、Ｒ4はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＳＣＨ3基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ4は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（１０）：
【００７１】
【化３９】
2004162045.tif 000040
（式中、Ｒ5は芳香環への置換基を示し、Ｒ5はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ5は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（１１）：
【００７２】
【化４０】
2004162045.tif 000041
（式中、Ｒ6は芳香環への置換基を示し、Ｒ6はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ7、ＳＯ2Ｒ8（Ｒ7：Ｈ、Ｎａ、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ8：ＯＨ、ＯＮａ、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す）、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、（ＣＨ3）2−ＣＨ基または（ＣＨ3）3−Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ6は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（１２）：
【００７３】
【化４１】
2004162045.tif 000042
（式中、Ｒ9は芳香環への置換基を示し、Ｒ9はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ10、ＳＯ2Ｒ11（Ｒ10：Ｈ、Ｎａ、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ11：ＯＨ、ＯＮａ、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す）、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、（ＣＨ3）2−ＣＨ基または（ＣＨ3）3−Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ9は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、
化学式（１３）：
【００７４】
【化４２】
2004162045.tif 000043
で示される残基、
化学式（１４）：
【００７５】
【化４３】
2004162045.tif 000044
で示される残基、
化学式（１５）：
【００７６】
【化４４】
2004162045.tif 000045
で示される残基、
化学式（１６）：
【００７７】
【化４５】
2004162045.tif 000046
（式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14（Ｒ13：Ｈ、Ｎａ、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ14：ＯＨ、ＯＮａ、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す）、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、（ＣＨ3）2−ＣＨ基または（ＣＨ3）3−Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ12は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群、及び
化学式（１７）：
【００７８】
【化４６】
2004162045.tif 000047
（式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17（Ｒ16：Ｈ、Ｎａ、Ｋ、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5のいずれかを表し、Ｒ17：ＯＨ、ＯＮａ、ＯＫ、ハロゲン原子、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5のいずれかを表す）、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、（ＣＨ3）2−ＣＨ基または（ＣＨ3）3−Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、Ｒ15は、ユニット毎に異なっていてもよい。）
で示される残基群
からなる群より選択される１つ以上の残基であるポリヒドロキシアルカノエートの製造方法である。
【００７９】
なお、前述した化学式の有するｘ、ｙ、ｚ、ｍ、ｑ、ｒ、ｋ、Ｒ及びＲ１〜１９は、これらをそれぞれ含むモノマーユニット又はモノマーの２種以上が用いられている場合に、各モノマーユニット又はモノマーごとに独立して上記の意味を表す。
【００８０】
本発明のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法は、前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸に加えて、ペプチド類、酵母エキス、有機酸及びその塩、アミノ酸及びその塩、糖類、並びに、炭素数４から１２の直鎖アルカン酸及びその塩からなる群より選択される少なくとも１種類を含む培地中で、前記微生物を培養することを特徴とするポリヒドロキシアルカノエートの製造方法とすることができる。さらに、前記微生物の培養において、培地中に含有されるペプチド類がポリペプトンであり、また、培地中に含有される有機酸或いはその塩が、ピルビン酸、オキサロ酢酸、クエン酸、イソクエン酸、ケトグルタル酸、コハク酸、フマル酸、リンゴ酸、乳酸、及びこれらの塩からなる群より選択される１つ以上の化合物であり、また、培地中に含有されるアミノ酸或いはその塩が、グルタミン酸、アシパラギン酸、及びこれらの塩からなる群より選択される１つ以上の化合物であり、また、培地中に含有される糖類が、グリセロアルデヒド、エリトロース、アラビノース、キシロース、グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース、グリセロール、エリトリトール、キシリトール、グルコン酸、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マルトース、スクロース、及びラクトースからなる群より選択される１つ以上の化合物とすることができる。
【００８１】
本発明のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法における微生物の培養条件の詳細は、以下のとおりである。
【００８２】
リン酸緩衝液及びアンモニウム塩或いは硝酸塩を基本とした無機塩培地に、以下に示すように種々の必要基質及び栄養素を加える。
【００８３】
目的とする前記化学式（１）で示す３−ヒドロキシ−ω−（フェニルメチル）アルカン酸ユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートを生産するための基質として、前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸を含むことが好ましく、より好ましくは、培地あたり０．０１％から１％（ｗ／ｖ）、更に好ましくは０．０２％から０．２％の割合で含有していることが望ましい。
【００８４】
また、３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットに加えて、前記化学式（２２）に示すユニットもしくは前記化学式（５）に示す３−ヒドロキシ−ω−シクロヘキシルアルカン酸ユニットとを少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエートを生産するためには、基質として前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸、及び前記化学式（２０）で示す化合物もしくは前記化学式（２１）で示すω−シクロヘキシルアルカン酸を含むことが好ましく、より好ましくは、培地あたりそれぞれ０．０１％から１％（ｗ／ｖ）、更に好ましくは０．０２％から０．２％の割合で含有していることが望ましい。
【００８５】
微生物増殖のための炭素源及び窒素源、ポリヒドロキシアルカノエート生産のためのエネルギー供給源として加える上記の共存基質濃度は、通常培地あたり０．１％から５％（ｗ／ｖ）、更に好ましくは０．２％から２％の割合で含有していることが望ましい。
【００８６】
本発明で用いる培地としては、リン酸塩及びアンモニウム塩或いは硝酸塩等の窒素源を含む無機塩培地ならいかなる培地でも良いが、窒素源の濃度を調節することでＰＨＡの生産性を向上せしめることが可能である。
【００８７】
培養温度としては菌株が良好に増殖可能な温度であれば良く、１５℃から３７℃、更に好ましくは２０℃から３０℃程度が適当である。
【００８８】
培養方法としては、微生物が増殖し、ＰＨＡを生産する方法であればいかなるものでも良く、液体培養、固体培養等を問わない。また、通常のバッチ培養などの一段階培養の他に、一段階培養によって得られた菌体を一度回収し、それを新たに別の培地に添加し、再び培養を行うような二段階培養を用いることができる。また、この二段階培養をより簡便に行うため、菌体を回収せずに培養液にそのまま新たな培地を添加するフェド・バッチ培養を用いることも可能である。さらに連続培養を用いることもできる。
【００８９】
培養形態としても、フラスコ等の培養容器を振盪する方法、ファーメンターによる方法等、いかなるものを用いても良い。
【００９０】
微生物にＰＨＡを生産・蓄積せしめる方法としては、上に示した方法の他に、一旦十分に増殖させて後に、塩化アンモニウムのような窒素源を制限した培地へ菌体を移し、目的ユニットの基質となる化合物を加えた状態で更に培養すると生産性が向上する場合がある。
【００９１】
更に、上記のような条件下で微生物を培養し、微生物が産生した前記化学式（１）で示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートを微生物細胞から回収する工程を有することができる。
【００９２】
微生物細胞から目的のＰＨＡを回収する方法としては、通常行なわれている方法を適用することができる。例えば、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、アセトンなどの有機溶媒による抽出が最も簡便ではあるが、それ以外にジオキサン、テトラヒドロフラン、アセトニトリルが用いられる場合もある。また、有機溶媒が使用しにくい環境中においては、ＳＤＳ等の界面活性剤による処理、リゾチーム等の酵素による処理、次亜塩素酸塩、アンモニア、ＥＤＴＡ等の薬剤による処理、或いは超音波破砕法、ホモジナイザー法、圧力破砕法、ビーズ衝撃法、摩砕法、擂潰法、凍結融解法のいずれかの方法を用いて微生物細胞を物理的に破砕することによって、ＰＨＡ以外の菌体成分を除去して、ＰＨＡを回収する方法を用いることもできる。
【００９３】
本発明の製造方法で用いる微生物としては、前記条件を満たす能力を有する微生物であれば如何なる微生物でも良いが、その中でも特にシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属する微生物が望ましく、更に詳しくはシュードモナスチコリアイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｉｃｈｏｒｉｉ）、シュードモナスプチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄａ）、シュードモナスフルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｆｌｕｏｒｅｃｅｎｓｅ）、シュードモナスオレオボランス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ）、シュードモナスアルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、シュードモナススツッツェリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｔｕｔｚｅｒｉ）、シュードモナスジェッセニイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｊｅｓｓｅｎｉｉ）等が望ましい。更に詳しくは、シュードモナスチコリアイＹＮ２株（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｉｃｈｏｒｉｉＹＮ２；ＦＥＲＭＢＰ−７３７５）、シュードモナスチコリアイＨ４５株（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｉｃｈｏｒｉｉＨ４５、ＦＥＲＭＢＰ−７３７４）、シュードモナスジェッセニイＰ１６１株（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｊｅｓｓｅｎｉｉＰ１６１、ＦＥＲＭＢＰ−７３７６）が挙げられる。これら３種の微生物は独立行政法人産業技術総合研究所（旧通商産業省工業技術院）生命工学工業技術研究所特許微生物寄託センターに寄託されており、特開２００２−８０５７１号公報に記載されている微生物である。
【００９４】
なお、本発明の微生物の培養、本発明の微生物によるＰＨＡの生産と菌体への蓄積、並びに、本発明における菌体からのＰＨＡの回収は、上記の方法に限定されるものではない。
【００９５】
本発明の一方法に用いた無機塩培地（Ｍ９培地）の組成を以下に示す。
【００９６】
〔Ｍ９培地〕
Ｎａ2ＨＰＯ4：６．３ｇ／Ｌ
ＫＨ2ＰＯ4：３．０ｇ／Ｌ
ＮＨ4Ｃｌ：１．０ｇ／Ｌ
ＮａＣｌ：０．５ｇ／Ｌ、ｐＨ＝７．０
更に、良好な増殖及びＰＨＡの生産のためには、上記の無機塩培地に以下に示す微量成分溶液を０．３％（ｖ／ｖ）程度添加する必要がある。
【００９７】
〔微量成分溶液〕
ニトリロ三酢酸：１．５；ＭｇＳＯ4：３．０；ＭｎＳＯ4：０．５；ＮａＣｌ：１．０；ＦｅＳＯ4：０．１；ＣａＣｌ2：０．１；ＣｏＣｌ2：０．１；ＺｎＳＯ4：０．１；ＣｕＳＯ4：０．１；ＡｌＫ（ＳＯ4）2：０．１；Ｈ3ＢＯ3：０．１Ｎａ2ＭｏＯ4：０．１；ＮｉＣｌ2：０．１（単位：ｇ／Ｌ）
【実施例】
【００９８】
実施例中の「％」は「％（ｗ／ｖ）」を示す。
【００９９】
［実施例１］
Ｄ−グルコース０．５％、ポリペプトン０．１％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、Ｄ−グルコース０．５％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸０．１％を含むＭ９培地２００ｍＬに再懸濁して、更に、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１００】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを３３ｍｇ得た。
【０１０１】
得られたＰＨＡは、以下の条件でＮＭＲ分析を行った。
＜測定機器＞
ＦＴ−ＮＭＲ：ＢｒｕｋｅｒＤＰＸ４００
共鳴周波数：1Ｈ＝４００ＭＨｚ
＜測定機器＞
測定核種：1Ｈ
使用溶媒：ＣＤＣｌ3
測定温度：室温
1Ｈ−ＮＭＲスペクトルチャートを図１に、その同定結果を表１にそれぞれ示す。
【０１０２】
【表１】
2004162045.tif 000048
表１に示す通り、当該ＰＨＡは、以下の化学式（２６）で表される３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸をモノマーユニットとして含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含む、ＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを９４．９ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１０３】
【化４７】
2004162045.tif 000049
また、得られたＰＨＡの分子量をゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ−８２２０、カラム；東ソーＴＳＫ−ＧＥＬＳｕｐｅｒＨＭ−Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算）により評価した結果、Ｍｎ＝１２３０００、Ｍｗ＝２９３０００であった。
【０１０４】
［実施例２］
Ｄ−グルコース０．５％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、Ｄ−グルコース０．５％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸０．１％を含む、窒素源（ＮＨ4Ｃｌ）を含まないＭ９培地２００ｍＬに再懸濁して、更に、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１０５】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを３０ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、化学式（２６）で表される３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸をモノマーユニットとして含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含む、ＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを９２．６ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１０６】
［実施例３］
Ｄ−グルコース０．５％、ポリペプトン０．１％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・チコリアイ・Ｈ４５株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、Ｄ−グルコース０．５％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸０．１％を含むＭ９培地２００ｍＬに再懸濁して、更に、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１０７】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを３１ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、化学式（２６）で表される３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含む、ＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを９１．６ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１０８】
［実施例４］
Ｄ−グルコース０．５％、ポリペプトン０．１％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・ジェッセニイ・Ｐ１６１株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、Ｄ−グルコース０．５％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸０．１％を含むＭ９培地２００ｍＬに再懸濁して、更に、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１０９】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを２９ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、化学式（２６）で表される３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含む、ＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを９０．８ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１１０】
［実施例５］
Ｄ−グルコース０．５％、ポリペプトン０．１％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、Ｄ−グルコース５％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸１％を含む水溶液２０ｍＬを添加して更に３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１１１】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを２５ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、化学式（２６）で表される３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含む、ＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを７９．７ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１１２】
［実施例６］
ポリペプトン０．５％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、ピルビン酸０．５％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸０．１％を含む、窒素源（ＮＨ4Ｃｌ）を含まないＭ９培地２００ｍＬに再懸濁して、更に、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１１３】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを２４ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、化学式（２６）で表される３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含む、ＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを７７．８ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１１４】
［実施例７］
ポリペプトン０．５％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１１５】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを２０ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、化学式（２６）で表される３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含む、ＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを７４．２ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１１６】
［実施例８］
酵母エキス０．５％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・チコリアイ・Ｈ４５株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１１７】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを１６ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、化学式（２６）で表される３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含む、ＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを７５．９ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１１８】
［実施例９］
グルコース０．５％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・ジェッセニイ・Ｐ１６１株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１１９】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを１７ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、化学式（２６）で表される３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含む、ＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを８１．５ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１２０】
［実施例１０］
ピルビン酸０．５％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１２１】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを１０ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、化学式（２６）で表される３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含む、ＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを８８．５ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１２２】
［実施例１１］
グルタミン酸ナトリウム０．５％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・チコリアイ・Ｈ４５株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１２３】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを１２ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、化学式（２６）で表される３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含む、ＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを８６．３ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１２４】
［実施例１２］
ノナン酸０．１％、５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・ジェッセニイ・Ｐ１６１株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１２５】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを９ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、化学式（２６）で表される３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを含み、且つそれ以外のモノマーユニットが３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含む、ＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸のモノマーユニットを２４．５ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１２６】
［実施例１３］
Ｄ−グルコース０．５％、ポリペプトン０．１％、４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、Ｄ−グルコース０．５％、４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸０．１％を含むＭ９培地２００ｍＬに再懸濁して、更に、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１２７】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを３０ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを９２．４ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１２８】
また、得られたＰＨＡの分子量をゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ−８２２０、カラム；東ソーＴＳＫ−ＧＥＬＳｕｐｅｒＨＭ−Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算）により評価した結果、Ｍｎ＝１３８０００、Ｍｗ＝２９４０００であった。
【０１２９】
［実施例１４］
Ｄ−グルコース０．５％、４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、Ｄ−グルコース０．５％、４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸０．１％を含む、窒素源（ＮＨ4Ｃｌ）を含まないＭ９培地２００ｍＬに再懸濁して、更に、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１３０】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを２６ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸をモノマーユニットとして含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを９０．５ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１３１】
［実施例１５］
Ｄ−グルコース０．５％、ポリペプトン０．１％、４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、Ｄ−グルコース５％、４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸１％を含む水溶液２０ｍＬを添加して更に３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１３２】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを２０ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを７６．８ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１３３】
［実施例１６］
ポリペプトン０．５％、４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、ピルビン酸０．５％、４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸０．１％を含む、窒素源（ＮＨ4Ｃｌ）を含まないＭ９培地２００ｍＬに再懸濁して、更に、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１３４】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを１９ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを７３．２ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１３５】
［実施例１７］
ポリペプトン０．５％、４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１３６】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを１５ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを７６．７ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１３７】
［実施例１８］
酵母エキス０．５％、４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・チコリアイ・Ｈ４５株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１３８】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを１４ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを７５．５ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１３９】
［実施例１９］
グルコース０．５％、４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・ジェッセニイ・Ｐ１６１株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１４０】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを１１ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを８５．９ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１４１】
［実施例２０］
ピルビン酸０．５％、４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１４２】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを８ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを９０．４ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１４３】
［実施例２１］
グルタミン酸ナトリウム０．５％、４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・チコリアイ・Ｈ４５株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１４４】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを１０ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを含み、且つ３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを８４．３ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１４５】
［実施例２２］
ノナン酸０．１％、４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸０．１％とを含むＭ９培地２００ｍＬに、シュードモナス・ジェッセニイ・Ｐ１６１株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１４６】
この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回収して真空乾燥してＰＨＡを７ｍｇ得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果、得られたＰＨＡは、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを含み、且つそれ以外のモノマーユニットが３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡであることが確認された。また、得られたＰＨＡは、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル積分比より、３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸のモノマーユニットを２１．９ｍｏｌ％含むことがわかった。
【０１４７】
［実施例２３］
０．５％のグルコース、６ｍＭの５−フェノキシ吉草酸、及び３ｍＭの５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸を前記Ｍ９培地１００ｍｌに溶解し、２００ｍｌ容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後、室温まで冷却した。調製した培地中に、予め０．５％のポリペプトンを含むＭ９培地で３０℃、８時間振とう培養したシュードモナス・チコリアイＹＮ２株の培養液を２ｍｌ加え、３０℃、４８時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を回収し、その菌体を再び上記と同じ培地１００ｍｌに懸濁し、２００ｍｌ容振とうフラスコで３０℃、４２時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を回収し、メタノールで洗浄した後乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、３５℃で７２時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。実施例１と同様の条件でＮＭＲ分析を行った結果を図２に示す。得られたＰＨＡは、以下の化学式（２７）にＡ及びＢで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：その他（３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸ユニット）＝６３：３７：０）であることが確認された。また、13Ｃ−ＮＭＲ（＜測定機器＞ＦＴ−ＮＭＲ：ＢｒｕｋｅｒＤＰＸ４００、共鳴周波数：13Ｃ＝１００ＭＨｚ、測定核種：13Ｃ、使用溶媒：ＣＤＣｌ3、測定温度：室温）により測定を行ったところ、Ｂのユニット即ち３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸ユニットが含まれていることが確認された。
【０１４８】
【化４８】
2004162045.tif 000050
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）により測定した（東ソーＨＬＣ−８２２０ＧＰＣ、カラム：東ソーＴＳＫ−ＧＥＬＳｕｐｅｒＨＭ−Ｈ、溶媒：クロロホルム、ポリスチレン換算）。
【０１４９】
また、得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．１７ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は９３，０００であった。
【０１５０】
［実施例２４］
０．５％のグルコース、０．１％のポリペプトン、６ｍＭの５−フェノキシ吉草酸、及び３ｍＭの５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸を前記Ｍ９培地１００ｍｌに溶解し、２００ｍｌ容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後、室温まで冷却した。調製した培地中に、予め０．５％のポリペプトンを含むＭ９培地で３０℃、８時間振とう培養したシュードモナス・チコリアイＹＮ２株の培養液を２ｍｌ加え、３０℃、４２時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を回収し、メタノールで洗浄した後乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、３５℃で７２時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０１５１】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ−ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式（２７）にＡ及びＢで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：その他（３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸ユニット）＝３８：３３：２９）であることが確認された。また、実施例２３と同様に13Ｃ−ＮＭＲ測定を行ったところ、Ｂのユニット即ち３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸ユニットが含まれていることが確認された。
【０１５２】
【化４９】
2004162045.tif 000051
ポリマーの分子量は実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１５３】
得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．０６ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は９４，０００であった。
【０１５４】
［実施例２５］
実施例２４で用いたＹＮ２株をシュードモナスチコリアイＨ４５株に、実施例２４で用いたグルコース及びポリペプトンを０.５％の酵母エキスに変更した以外は実施例２４と同様の方法で、目的とするポリマーを得た。
【０１５５】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ−ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式（２７）にＡ及びＢで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：その他（３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸ユニット）＝４２：３３：２５）であることが確認された。また、実施例２３と同様に13Ｃ−ＮＭＲ測定を行ったところ、Ｂのユニット即ち３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸ユニットが含まれていることが確認された。
【０１５６】
【化５０】
2004162045.tif 000052
ポリマーの分子量は実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１５７】
得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．０５ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は９１，０００であった。
【０１５８】
［実施例２６］
実施例２４で用いたＹＮ２株をシュードモナスチコリアイＨ４５株に、実施例２４で用いたグルコース及びポリペプトンを０．５％のピルビン酸ナトリウムに変更した以外は実施例２４と同様の方法で、目的とするポリマーを得た。
【０１５９】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ−ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式（２７）にＡ及びＢで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：その他（３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸ユニット）＝５８：２４：１８）であることが確認された。また、実施例２３と同様に13Ｃ−ＮＭＲ測定を行ったところ、Ｂのユニット即ち３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸ユニットが含まれていることが確認された。
【０１６０】
【化５１】
2004162045.tif 000053
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１６１】
得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．０３ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は１０２，０００であった。
【０１６２】
［実施例２７］
実施例２４で用いたＹＮ２株をシュードモナスジェッセニイＰ１６１株に、グルコース及びポリペプトンを０．５％グルタミン酸ナトリウムに変更した以外は実施例２４と同様の方法で、目的とするポリマーを得た。
【０１６３】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ−ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式（２７）にＡ及びＢで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：その他（３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸ユニット）＝４０：３５：２５）であることが確認された。また、実施例２３と同様に13Ｃ−ＮＭＲ測定を行ったところ、Ｂのユニット即ち３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸ユニットが含まれていることが確認された。
【０１６４】
【化５２】
2004162045.tif 000054
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１６５】
得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．０８ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は８９，０００であった。
【０１６６】
［実施例２８］
実施例２４で用いたＹＮ２株をシュードモナスジェッセニイＰ１６１株に、グルコース及びポリペプトンを０．１％のノナン酸に変更した以外は実施例２４と同様の方法で、目的とするポリマーを得た。
【０１６７】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ−ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式（２７）にＡ及びＢで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：その他＝４０：３５：２５）であることが確認された。また、実施例２３と同様に13Ｃ−ＮＭＲ測定を行ったところ、Ｂのユニット即ち３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸ユニットが含まれていることが確認された。
【０１６８】
【化５３】
2004162045.tif 000055
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１６９】
得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．０４ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は９８，０００であった。
【０１７０】
［実施例２９］
実施例２４で用いた５−フェノキシ吉草酸を４−フェノキシ酪酸に変更した以外は実施例２４と同様の方法で目的とするポリマーを得た。
【０１７１】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ−ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式（２８）にＡ及びＢで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：その他（３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸ユニット）＝２１：４３：３６）であることが確認された。また、実施例２３と同様に13Ｃ−ＮＭＲ測定を行ったところ、Ｂのユニット即ち３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸ユニットが含まれていることが確認された。
【０１７２】
【化５４】
2004162045.tif 000056
ポリマーの分子量は実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．０２ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は９２，０００であった。
【０１７３】
［実施例３０］
実施例２４で用いた５−フェノキシ吉草酸を５−フェニル吉草酸に変更した以外は実施例２４と同様の方法で目的とするポリマーを得た。
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ−ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式（２９）にＡ及びＢで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：その他（３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸ユニット）＝５６：２５：１９）であることが確認された。
【０１７４】
【化５５】
2004162045.tif 000057
ポリマーの分子量は実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１７５】
得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．１３ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は９８，０００であった。
【０１７６】
［実施例３１］
実施例２４で用いた５−フェノキシ吉草酸を５−(４−ビニルフェニル)吉草酸に変更した以外は実施例２４と同様の方法で目的とするポリマーを得た。
【０１７７】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ−ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式（３０）にＡ及びＢで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：その他（３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸ユニット）＝４２：３４：２４）であることが確認された。
【０１７８】
【化５６】
2004162045.tif 000058
ポリマーの分子量は実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１７９】
得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．０３ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は８７，０００であった。
【０１８０】
［実施例３２］
実施例２４で用いた５−フェノキシ吉草酸を５−ベンゾイル吉草酸に変更した以外は実施例２４と同様の方法で目的とするポリマーを得た。
【０１８１】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ−ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式（３１）にＡ及びＢで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：その他（３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸ユニット）＝４８：２７：２５）であることが確認された。
【０１８２】
【化５７】
2004162045.tif 000059
ポリマーの分子量は実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１８３】
得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．０２ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は１６０，０００であった。
【０１８４】
［実施例３３］
実施例２４で用いた５−フェノキシ吉草酸を５−（フェニルスルファニル）吉草酸に変更した以外は実施例２４と同様の方法で目的とするポリマーを得た。
【０１８５】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ−ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式（３２）にＡ及びＢで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：その他（３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸ユニット）＝５６：２２：２２）であることが確認された。
【０１８６】
【化５８】
2004162045.tif 000060
ポリマーの分子量は実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１８７】
得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．１１ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は８９，０００であった。
【０１８８】
［実施例３４］
実施例２４で用いた５−フェノキシ吉草酸を５−[(フェニルメチル)スルファニル]吉草酸に変更した以外は実施例２４と同様の方法で目的とするポリマーを得た。
【０１８９】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ−ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式（３３）にＡ及びＢで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：その他（３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸ユニット）＝４６：３１：２４）であることが確認された。
【０１９０】
【化５９】
2004162045.tif 000061
ポリマーの分子量は実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１９１】
得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．０４ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は８４，０００であった。
【０１９２】
［実施例３５］
実施例２４で用いた５−フェノキシ吉草酸を５−（２−チエニル）吉草酸に変更した以外は実施例２４と同様の方法で目的とするポリマーを得た。
【０１９３】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ−ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式（３４）にＡ及びＢで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：その他（３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸ユニット）＝５１：２６：２３）であることが確認された。
【０１９４】
【化６０】
2004162045.tif 000062
ポリマーの分子量は実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１９５】
得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．０９ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は８６，０００であった。
【０１９６】
［実施例３６］
実施例２４で用いた５−フェノキシ吉草酸を５−(２−チエニルスルファニル)吉草酸に変更した以外は実施例２４と同様の方法で目的とするポリマーを得た。
【０１９７】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ−ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式（３５）にＡ及びＢで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：その他（３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸ユニット）＝４９：４０：１１）であることが確認された。
【０１９８】
【化６１】
2004162045.tif 000063
ポリマーの分子量は実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１９９】
得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．１０ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は８１，０００であった。
【０２００】
［実施例３７］
実施例２４で用いた５−フェノキシ吉草酸を５−(２−チエニルカルボニル)吉草酸に変更した以外は実施例２４と同様の方法で目的とするポリマーを得た。
【０２０１】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ−ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式（３６）にＡ及びＢで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：その他（３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸ユニット）＝４１：４０：１９）であることが確認された。
【０２０２】
【化６２】
2004162045.tif 000064
ポリマーの分子量は実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０２０３】
得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．０２ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は８９，０００であった。
【０２０４】
［実施例３８］
実施例２４で用いた５−フェノキシ吉草酸を５−シクロヘキシル吉草酸に変更した以外は実施例２４と同様の方法で目的とするポリマーを得た。
【０２０５】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ−ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式（３７）にＡ及びＢで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：その他（３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸ユニット）＝４６：２８：２６）であることが確認された。
【０２０６】
【化６３】
2004162045.tif 000065
ポリマーの分子量は実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０２０７】
得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．０８ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は９２，０００であった。
【０２０８】
［実施例３９］
実施例２４で用いた５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸を４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸に変更した以外は実施例２４と同様の方法で目的とするポリマーを得た。
【０２０９】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ−ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式（３８）にＡ及びＢで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：その他（３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸ユニット）＝４９：２４：２７）であることが確認された。また、実施例２３と同様に13Ｃ−ＮＭＲ測定を行ったところ、Ｂのユニット即ち３−ヒドロキシ−４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸ユニットが含まれていることが確認された。
【０２１０】
【化６４】
2004162045.tif 000066
ポリマーの分子量は実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０２１１】
得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．０２ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は９１，０００であった。
【０２１２】
［実施例４０］
実施例２４で用いた６ｍＭの５−フェノキシ吉草酸を３ｍＭの５−フェノキシ吉草酸と３ｍＭの５−シクロヘキシル吉草酸に変更した以外は実施例２４と同様の方法で目的とするポリマーを得た。
【０２１３】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ−ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式（３９）にＡ〜Ｃで示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体（Ａ：Ｂ：Ｃ：その他（３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ吉草酸などの炭素数４から１２までの飽和、不飽和脂肪酸である３−ヒドロキシアルカン酸または３−ヒドロキシアルケン酸ユニット）＝３１：２８：２１：２０）であることが確認された。また、実施例２３と同様に13Ｃ−ＮＭＲ測定を行ったところ、Ｃのユニット即ち３−ヒドロキシ−５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸ユニットが含まれていることが確認された。
【０２１４】
【化６５】
2004162045.tif 000067
ポリマーの分子量は実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０２１５】
得られたポリマーの重量（ＰＤＷ）は０．０９ｇ／ｌ、得られたポリマーの数平均分子量は９３，０００であった。
【図面の簡単な説明】
【０２１６】
【図１】実施例１におけるポリヒドロキシアルカノエートの1Ｈ−ＮＭＲスペクトルチャートを示す。
【図２】実施例２３で取得されたポリエステルの1Ｈ−ＮＭＲスペクトルチャートを示す。
【図１】
2004162045.tif 000111
【図２】
2004162045.tif 000112
【手続補正書】
【提出日】平成15年11月28日(2003.11.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式（１）に示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットを含むことを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート。
【化１】
2004162045.tif 000113
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
【請求項２】
前記化学式（１）に示すユニット以外に、化学式（２）及び（３）に示すユニットの少なくとも一つを含む、請求項１記載のポリヒドロキシアルカノエート。
【化２】
2004162045.tif 000114
（ｙ及びｚは化学式（１）で示すユニットと独立して化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る。）
【請求項３】
前記化学式（１）：
【化５】
2004162045.tif 000115
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
に示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットと、
化学式（４）：
【化６】
2004162045.tif 000116
（ｍは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る；Ｒはフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる）
で示すユニット、
もしくは
化学式（５）：
【化７】
2004162045.tif 000117
（式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、ｋは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
に示す３−ヒドロキシ−ω−シクロヘキシルアルカン酸ユニットと
を少なくとも分子中に同時に含む、請求項１又は２に記載のポリヒドロキシアルカノエート。
【請求項４】
数平均分子量が１０００から１００００００の範囲である請求項１乃至３のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエート。
【請求項５】
化学式（１９）：
【化１８】
2004162045.tif 000118
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸を含む条件下で、
前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸を原料として、
化学式（１）：
【化１９】
2004162045.tif 000119
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットを分子中に含むポリヒドロキシアルカノエートを生産する能力を有する微生物により生合成せしめることを特徴とする、
前記化学式（１）：
【化２０】
2004162045.tif 000120
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットを分子中に含むポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項６】
前記化学式（１）で示されるユニットに加えて、下記化学式（２）及び（３）に示されるユニットの少なくとも一つを含む、請求項５記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【化２１】
2004162045.tif 000121
（ｙ及びｚは化学式（１）で示すユニットと独立して化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る。）
【請求項７】
前記化学式（１９）に示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸が、
化学式（２３）：
【化２２】
2004162045.tif 000122
に示す４−［（フェニルメチル）オキシ］酪酸、及び
化学式（２４）：
【化２３】
2004162045.tif 000123
に示す５−［（フェニルメチル）オキシ］吉草酸
のうちのいずれか１つ以上である請求項５又は６に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項８】
前記化学式（１９）：
【化２４】
2004162045.tif 000124
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸と、
化学式（２０）：
【化２５】
2004162045.tif 000125
（ｑは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る；Ｒ16はフェニル構造、或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる）
で示す化合物、
もしくは
化学式（２１）：
【化２６】
2004162045.tif 000126
（式中、Ｒ17はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ17はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、また、ｒは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示すω−シクロヘキシルアルカン酸と
を含む条件下で、前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸、及び前記化学式（２０）で示す化合物もしくは前記化学式（２１）で示すω−シクロヘキシルアルカン酸を原料として、
前記化学式（１）：
【化２７】
2004162045.tif 000127
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットと、
化学式（２２）：
【化２８】
2004162045.tif 000128
（ｍは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る；Ｒ18はフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる）
で示すユニット
もしくは
化学式（５）：
【化２９】
2004162045.tif 000129
（式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、また、ｋは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
に示す３−ヒドロキシ−ω−シクロヘキシルアルカン酸ユニットと
を少なくとも分子中に同時に含むポリヒドロキシアルカノエートを生産する能力を有する微生物により生合成せしめることを特徴とする、
前記化学式（１）：
【化３０】
2004162045.tif 000130
（ｘは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
で示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットと、
前記化学式（２２）：
【化３１】
2004162045.tif 000131
（ｍは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る；Ｒ18はフェニル構造或いはチエニル構造のいずれかの構造を有する残基を含んでいる）
で示すユニット
もしくは
前記化学式（５）：
【化３２】
2004162045.tif 000132
（式中、Ｒ1はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、また、ｋは化学式中に示した範囲内で任意の一つ以上の整数値をとり得る）
に示す３−ヒドロキシ−ω−シクロヘキシルアルカン酸ユニットと
を少なくとも分子中に同時に含む、請求項５乃至７のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項９】
前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸を含む培地中で前記微生物を培養することを特徴とする、請求項５乃至８のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１０】
前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸と、前記化学式（２０）で示す化合物もしくは前記化学式（２１）で示すω−シクロヘキシルアルカン酸とを含む培地中で前記微生物を培養することを特徴とする、請求項８に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１１】
前記微生物の培養が、前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸に加えて、ペプチド類、酵母エキス、有機酸及びその塩、アミノ酸及びその塩、糖類、並びに、炭素数４から１２の直鎖アルカン酸及びその塩からなる群より選択される少なくとも１種類を含む培地中で、前記微生物を培養することを特徴とする請求項９または１０に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１２】
前記微生物の培養において、培地中に含有されるペプチド類がポリペプトンであり、また、培地中に含有される有機酸或いはその塩が、ピルビン酸、オキサロ酢酸、クエン酸、イソクエン酸、ケトグルタル酸、コハク酸、フマル酸、リンゴ酸、乳酸、及びこれらの塩からなる群より選択される１つ以上の化合物であり、また、培地中に含有されるアミノ酸或いはその塩が、グルタミン酸、アシパラギン酸、及びこれらの塩からなる群より選択される１つ以上の化合物であり、また、培地中に含有される糖類が、グリセロアルデヒド、エリトロース、アラビノース、キシロース、グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース、グリセロール、エリトリトール、キシリトール、グルコン酸、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マルトース、スクロース、及びラクトースからなる群より選択される１つ以上の化合物であることを特徴とする請求項１１に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１３】
前記微生物の培養が、二段階以上の培養工程を含むことを特徴とする請求項９乃至１２のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１４】
前記二段階以上の培養工程を含む微生物の培養が、フェド・バッチ培養であることを特徴とする請求項１３記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１５】
前記化学式（１９）で示すω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸を含む培地中で前記微生物を培養し、前記微生物が産生した前記化学式（１）で示す３−ヒドロキシ−ω−［（フェニルメチル）オキシ］アルカン酸ユニットを少なくとも含むポリヒドロキシアルカノエートを微生物細胞から回収する工程を有することを特徴とする請求項９乃至１４のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１６】
前記微生物として、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属する微生物を用いることを特徴とする請求項５乃至１５のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１７】
前記微生物として、シュードモナス・チコリアイ  ＹＮ２株（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｉｃｈｏｒｉｉＹＮ２；ＦＥＲＭＢＰ−７３７５）、シュードモナス・チコリアイＨ４５株（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｉｃｈｏｒｉｉＨ４５；ＦＥＲＭＢＰ−７３７４）、及びシュードモナス・ジェッセニイＰ１６１株（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｊｅｓｓｅｎｉｉＰ１６１；ＦＥＲＭＢＰ−７３７６）のいずれか１つ以上の株を用いることを特徴とする請求項１６記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。