(57)【要約】【課題】有用性が認められているハナビラタケについて商業規模で供給可能なハナビラタケ含有生理活性組成物を提供する。【解決手段】ナビラタケ（Ｓｐａｒａｓｓｉｓ  ｃｒｉｓｐａ）  子実体（ユニチカ製）を凍結乾燥した粉末に水を加え、これにセルラーゼオノヅカ（ヤクルト本社製）を添加して混合し、酵素反応させ、ついで、１００℃まで昇温し、５分間保って酵素を失活させ、残渣を濾別し、抽出液を凍結乾燥することによって得られたハナビラタケの酵素処理物を有効成分とする生理活性組成物であって、好ましくは生理活性が、抗腫瘍性活性、血糖調節性活性、抗高脂血症性活性、抗アレルギー性活性又は抗高血圧性活性である。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハナビラタケを酵素処理して得られるハナビラタケの酵素処理物を有効成分とする生理活性組成物。
【請求項２】
生理活性が、抗腫瘍性活性である請求項１記載の組成物。
【請求項３】
生理活性が、血糖調節性活性である請求項１記載の組成物。
【請求項４】
生理活性が、抗高脂血症性活性である請求項１記載の組成物。
【請求項５】
生理活性が、抗アレルギー性活性である請求項１記載の組成物。
【請求項６】
生理活性が、抗高血圧性活性である請求項１記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ハナビラタケの酵素処理物を有効成分とする抗腫瘍性活性、血糖調節性活性、抗高脂血症性活性、抗アレルギー性活性、抗高血圧性活性などの生理活性を有する組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
きのこ類は古くから食用として利用されているが、最近その成分の生理活性が明らかにされ、クレスチン、レンチナン、シゾフィラン（いずれも商品名）などは、医薬品としてその有用性が認められおり、アガリクス、メシマコブ、霊芝などは抗腫瘍作用を期待して、子実体や菌糸体の乾燥物や抽出物を健康食品素材として利用することが試みられている。例えば、マンネンダケは、子実体またはその抽出物を健康食品の原料として利用することが報告されている（例えば、特許文献１参照）。さらに培養で得られる菌糸体の利用も知られている（例えば、特許文献２参照）。
【０００３】
これらのきのこの主要有効成分はβ−グルカンであることが知られており、従来からβ−グルカン等の多糖をこれらのきのこから抽出する方法が提案されている（例えば、特許文献３参照）。
【０００４】
このようなきのこ類に属するハナビラタケは、カラマツに生えるきのこであって、非常に僅少なきのこである。歯ごたえがよく、その純白の色合いと葉牡丹のような形態が特徴である食用きのこである。これまで、このハナビラタケは成長が遅く人工栽培は非常に困難であるとされてきたが、最近になって、比較的短期間で栽培可能な新しい栽培法が確立され、商業規模での供給が可能となってきている。
このハナビラタケについても溶媒でβ‐グルカンを抽出する方法が提案され、その抽出物について医薬品分野での用途が提案されている（例えば、特許文献４、５参照）。
【０００５】
【特許文献１】
特公昭５８−３６９４６号公報
【特許文献２】
特公昭５８−１５１０８号公報
【特許文献３】
特開平１−６７１９号公報
【特許文献４】
特開２０００−２１７５４３号公報
【特許文献５】
特開２００２−１２５４６０号公報
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、ハナビラタケからの溶媒による抽出方法ではβ−グルカンの収量が極めて低く、商業規模で医薬品用途に供給するには有効な方法であるとは言いがたかった。
本発明は、有用性が認められているハナビラタケについて商業規模で供給可能なハナビラタケ含有生理活性組成物を提供することを目的とするものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、ハナビラタケの子実体、菌糸体およびこれらの混合物を酵素処理することによって目的の有用成分を効率良く抽出することが可能となることを見出し、さらに得られた酵素処理物に溶媒抽出物よりも優れる抗腫瘍性活性を見出し、発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち本発明は、ハナビラタケを酵素処理して得られるハナビラタケの酵素処理物を有効成分とする生理活性組成物を要旨とするものであり、好ましくは生理活性が、抗腫瘍性活性、血糖調節性活性、抗高脂血症性活性、抗アレルギー性活性又は抗高血圧性活性であるものである。
【０００９】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明で使用するハナビラタケの子実体は天然のものでもよいし、あるいは人工栽培により得られたものであってもよい。人工栽培は、人工栽培用の菌床を作成することにより行うことができる（例えば、特開平１１−５６０９８号公報、特開２００２−３６９６２１号公報、特開２００２−１２５４６０号公報参照）。
【００１０】
また、本発明においては、ハナビラタケの菌糸体も用いることができる。菌糸体は液体培養法によって得ることが出来る。培地に使用する炭素源としては、グルコースなどの単糖の他、デキストリン、グリセロールなど通常用いられる炭素源が使用できる。また、窒素源としては無機または有機窒素源が使用できるが、生育速度の観点からは有機窒素源を用いるほうが好ましい。また、必要に応じて微量元素やビタミン等の生育因子を添加することは通常の培養と何ら変わりはない。培養温度は１５℃〜３０℃、好ましくは１８℃〜２８℃、２０℃〜２５℃が最も好ましい。ｐＨは２．５〜８．０、好ましくは３．０〜７．０、３．５〜５．０が最も好ましい。培地成分には不溶成分を添加することが均一に生育させることができることから好ましい。培養期間は菌株により、数日から数週間程度に設定されうる。
【００１１】
本発明における酵素処理に際しては、ハナビラタケをあらかじめ細断して小塊ないし粉末としておくことが望ましい。細断後の大きさについては特に限定はないが、より小さくしておくことが処理効率がよいので好ましい。
【００１２】
ハナビラタケの菌糸体は、β−グルカンのほか、キシランやマンナン、アラビナン等が結合して長鎖繊維を構成している。本発明においては、これに酵素を作用させ、ヘミセルロースが段階的に加水分解して結合鎖を切り、高分子多糖を経て活性多糖（β−Ｄ−グルカン）を得る。本発明において使用する酵素としては、エンド−１，４−グルカナーゼ、キシラナーゼおよびエンド−１，３−グルカナーゼを含有する酵素剤を使用することが出来る。例えばトリコデルマ・ビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ）由来の酵素類を含有する製剤（商品名「ファンセラーゼ」、「セルラーゼオノヅカ」ヤクルト本社製など）が挙げられる。
その他にも、ヘミセルラーゼなどの市販の酵素剤、セルラーゼ、マンナーゼ、アラバナーゼ、キシラナーゼ、ペクチナーゼなどの酵素群も利用することが出来る。
【００１３】
酵素処理条件は従来から知られている条件が好ましい。すなわちハナビラタケに対する添加割合は「セルラーゼオノヅカ」を例にとると、０．０１〜５％、好ましくは０．０５〜１％であり、０．１〜０．５％が最も好ましい。処理液のｐＨは２．０〜９．０、好ましくは３．０〜８．０であり、４．０〜７．０が最も好ましい。酵素作用温度は２０℃〜７０℃、好ましくは３０℃〜６５℃であり、４０℃〜６０℃が最も好ましい。また、酵素処理時間は、工程の都合により数分から数時間程度に設定され得る。
【００１４】
酵素処理後、処理液を加熱して酵素反応を停止させる。通常、８０℃〜１００℃で約１０分間加熱して酵素を失活させる。その後、残渣を濾別せずに処理液を凍結乾燥やスプレードライなどの乾燥手段を施して粉末などの乾燥物としてもよいし、残渣を濾別した濾液を濃縮してエキスとしてもよい。本発明のハナビラダケの酵素処理物は、これらの乾燥物や濃縮エキスを包含するものである。
【００１５】
本発明の生理活性組成物は、上記のようにして得られたハナビラタケの酵素処理物を有効成分とするものである。乾燥粉末品としたハナビラタケの酵素処理物を治療目的に応じて、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤等に製剤化すればよい。
【００１６】
ここで用いられる製剤担体としては、通常の薬剤に汎用される各種のもの、例えば充填剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤等の希釈剤ないし賦形剤等を例示できる。
錠剤の形態に成形するに際しては、担体として例えば、乳糖、白糖、還元麦芽糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤、水、エタノール、単シロツプ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラツク、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン酸、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤、第４級アンモニウム塩、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩等の滑沢剤等を使用できる。更に錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠、二重錠、多層錠等とすることができる。
【００１７】
丸剤の形態に成形するに際しては、担体として例えば、ブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン等の結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等を使用できる。カプセル剤は本発明の有効成分であるハナビラタケを上記で例示した各種の担体と混合し、硬質ゼラチンカプセル、軟質カプセル等に充填して調製される。更に上記各組成物には必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を配合してもよい。
【００１８】
本発明の生理活性組成物中に含まれるハナビラタケの量は特に限定されず、適宜選択すればよいが、組成物中、乾燥質量換算で、好ましくは１〜８０質量％、さらに好ましくは５〜５０質量％程度とするのがよい。
【００１９】
本発明の生理活性組成物は、経口投与するのが好ましい。投与方法は、各種組成物の製剤形態、患者の年齢、性別、患者の症状の程度、その他の条件に応じて決定される。例えば、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤及びカプセル剤は経口投与される。
【００２０】
本発明の生理活性組成物の投与量は、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度、その他の条件により適宜選択できる。通常、ハナビラタケの酵素処理物（乾燥質量換算）を０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ／日程度、好ましくは５〜１００ｍｇ／ｋｇ／日程度、さらに好ましくは１〜６０ｍｇ／ｋｇ／日程度の範囲となる量を目安とするのがよい。これら本発明の組成物は１日に１回又は２〜４回程度に分けて投与することができる。
【００２１】
ハナビラタケの酵素処理物が有している生理活性としては、抗腫瘍活性、血糖調節活性、抗高脂血症活性、抗アレルギー活性、抗高血圧活性などが挙げられる。
【００２２】
本発明の抗腫瘍活性を有する生理活性組成物、とりわけ抗悪性腫瘍剤が有効に治療できる悪性腫瘍としては、特に制限はないが、例えば、食道癌、胃癌、肝臓癌、胆のう・胆管癌、膵臓癌、結腸癌、直腸癌、頭頚部癌、肺癌、乳癌、子宮頚癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、睾丸腫瘍、骨・軟部肉腫、皮膚癌、悪性リンパ腫、急性白血病、エイズ、脳腫瘍等が挙げられる。
【００２３】
ナチュラルキラー細胞（以下、ＮＫ細胞という。）は、抗体の介在なしに直接癌細胞やウイルスに感染した細胞を攻撃することが知られているが、ハナビラタケの酵素処理物は、ＮＫ細胞を増殖させ、ＮＫ細胞活性増強を主たる作用機序として、患者に重篤な副作用を伴うことなく、このＮＫ細胞の腫瘍細胞へのアポトーシスによって腫瘍増殖抑制効果を発現するものと考えられる。
【００２４】
【実施例】
以下、本発明を実施例により具体的に説明する。
実施例１
ハナビラタケ（Ｓｐａｒａｓｓｉｓ  ｃｒｉｓｐａ）  子実体（ユニチカ製）を凍結乾燥した粉末１ｋｇに２Ｌの水を加え、これに４ｇのセルラーゼオノヅカ（ヤクルト本社製）を添加して混合し、６０℃で３時間酵素反応させた。ついで、１００℃まで昇温し、５分間保って酵素を失活させた。残渣を濾別し、抽出液２．５Ｌを得た。これを凍結乾燥することによってハナビラタケの酵素処理物９９０ｇを得た。
このハナビラタケの酵素処理物中のβ−グルカン含量は３９．０％であり、ハナビラタケ粉末からのβ−グルカンの収量は、（９９０×０．３９）／１０００×１００＝３８．６％であった。
【００２５】
上記で得られた酵素処理物をそのまま本発明の生理活性組成物として抗腫瘍効果を評価した。その結果を図１に示す。
図１は、マウスを用いたサルコーマ１８０固形皮下腫瘍に対する抗腫瘍効果を示す。本発明の生理活性物質の投与量は１日、体重１ｋｇあたり１０ｍｇおよび１００ｍｇとし、腫瘍移植後５日目から１０日間経口投与した。その結果、腫瘍重量は１０ｍｇ投与群で５１％抑制、１００ｍｇ投与群で６７％抑制となり本発明の生理活性物質の抗腫瘍効果が明らかになった。
【００２６】
実施例２
〔ＮＫ細胞活性〕
▲１▼エフェクター細胞の調整
ヘパリン加抹消血を比重遠心分離法（Ｃｏｎｒａｙ−Ｆｉｃｏｌｌ：ｄ＝１．０７７）にてエフェクター細胞を分離した。細胞をＰＢＳ（−）にて２回洗浄した。ここに１０％ＦＣＳを加えたＲＰＭＩ  １６４０メディウムを添加し、細胞数を１×１０６個／ｍＬになるように調整した。
▲２▼標的細胞の調整（５１Ｃｒ標識）：Ｋ−５６２
継代培養細胞（Ｋ−５６２）を遠心分離によって集め、５０〜１００μＣｉの５１Ｃｒを添加した。これを３７℃で１時間培養し、ＰＢＳ（−）にて３回細胞洗浄した。１０％ＦＢＳ加ＲＰＭＩ  １６４０メディウムを添加し、細胞数を１×１０６個／ｍＬになるように調整した。
▲３▼培養
マイクロプレートの各ウェルに標的細胞を分注した。最大解離群には１Ｎ−ＨＣｌを分注し、自然解離群（コントロール）には１０％ＦＢＳ加ＲＰＭＩ  １６４０メディウムを分注した。実験解離群にはエフェクター細胞を分注し、エフェクター細胞数／標的細胞数＝２０となるようにした。これをプレート遠心機にて８００ｒｐｍ、５分間遠心後、５％ＣＯ２培養器にて３．５時間培養した。
▲４▼測定
培養したプレートより、各ウェルの培養上清を採取し、シンチレーションカウンタにて測定し、以下の式にてＮＫ活性を算出した。
2004292414.tif 000002
【００２７】
【表１】
2004292414.tif 000003
【００２８】
表１の結果から、本発明の生理活性組成物の投与によりＮＫ細胞活性が上昇することが明らかになった。
【００２９】
【発明の効果】
本発明によれば、経口投与が可能であり、患者に負担がなくかつ副作用が全くない、若しくは極めて少ない生理活性組成物が得られる。また本発明の生理活性組成物は、ＮＫ細胞の活性を増強することにより、ＮＫ細胞がターゲットとする、たとえば、悪性腫瘍やエイズなどの免疫性疾患、肝炎などのウイルス感染症、慢性疲労症候群などの治療分野における、画期的な治療組成物として有用である。とりわけ、初期癌から末期癌にまで有効であり、長期連続投与が可能で、副作用もないことからＱＯＬの高い治療手段を提供するものである。その性状から、既存の抗癌療法や他の薬剤との併用も多くの場合可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の生理活性組成物の抗腫瘍効果を示す図である。
【図１】
2004292414.tif 000004