(57)【要約】【課題】ラン類種子繁殖品種作出に必要な純系植物を提供する。【解決手段】ラン類未受粉花にオーキシン水溶液を滴下して単為発生に基く種子を形成し、該種子を発芽させて育成したラン類植物から半数体植物を判別し、半数体植物と判別された発芽した種子を育成して染色体の倍化した純系植物となしてラン類の種子繁殖品種とする。【選択図】　　　　図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラン類未受粉花にオーキシン水溶液を滴下して単為発生に基く種子を形成し、該種子を発芽させて生育して半数体植物のラン類を得ることを特徴とするラン類の半数体作出方法。
【請求項２】
ラン類の開花日から開花３０日後までの間の期間にラン類未受粉花へのオーキシン水溶液の滴下を行うことを特徴とする請求項１に記載のラン類の半数体作出方法。
【請求項３】
オーキシン溶液は未受粉花のずい柱又はずい柱を含む部位に滴下することを特徴とする請求項１に記載のラン類の半数体作出方法。
【請求項４】
オーキシン溶液の濃度を０．１％〜５．０％である請求項１に記載のラン類の半数体作出方法。
【請求項５】
オーキシン水溶液は、インドール酢酸（ＩＡＡ）、４−クロロインドール酢酸、フェニル酢酸、２，４ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）、α−ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、２，６ジクロロ安息香酸、インドール酪酸（ＩＢＡ）、４−クロロフェノキシ酢酸、５−クロロインタゾール酢酸エチル及び２，４，５−トリクロロフェノキシ酢酸からなる群より選択される水溶液である請求項１に記載のラン類の半数体作出方法。
【請求項６】
ラン類未受粉花にオーキシン水溶液を滴下して単為発生に基く種子を形成し、該種子を発芽させて育成したラン類植物から半数体植物を判別し、半数体植物と判別された発芽した種子を育成してラン類の種子繁殖品種とするラン類の種子繁殖品種生産方法。
【請求項７】
半数体植物の判別は、発芽後１〜５ヶ月の期間において採取した試料のＤＮＡ含量又は染色体数を測定することにより行うことを特徴とする請求項６に記載のラン類の種子繁殖品種とするラン類の種子繁殖品種生産方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術的分野】
本発明は、ラン類の未受粉花にオーキシンを処理することにより、半数体を作出する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
観賞用の花としてラン類の人気は常に高く、近年ではその需要に応じて大量の栽培が行われている。この高い人気を支えている要因として、消費者の嗜好に合致し、大量の栽培に耐えうる経済性の高いラン類品種が開発され続けていることがあげられる。これらの品種は伝統的な交雑育種によって開発されたものであり、この交雑育種とは交配によって得られた実生集団から優良な個体を選抜するというものである。得られた優良個体は大量消費に順ずるレベルまで繁殖することが必要であり、大量繁殖法として組織培養によるクローン増殖が利用されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする問題】
組織培養によるクローン増殖の技術はいまだ不安定であり、品種による難易、組織培養中の突然変異などの問題がある。これらの問題を回避する為に、品種毎の試験増殖を行う、増殖率を低く抑えるなどの策が採られているが、いずれの方法も突然変異の発生を完全に抑えられるものではなく、組織培養によるクローン増殖ラン類では奇形花の発生が確認されている。
【０００４】
この突然変異は、組織培養中に行われる自然状態では考えられない細胞増殖などで引き起こされるものである。これに対し、過去に行われていた植物の自然な増殖による株分け法などでは、突然変異の発生は非常に少ない。しかしながら、株分け法では増殖率が非常に低く、近年の大量消費に対応することは困難である。
【０００５】
一般的には種子を繁殖に利用することにより、突然変異などの問題が無く、高い増殖率が得られる繁殖が行われているが、ラン類植物は雑種性が高いため、種子繁殖集団の均一性に著しい問題が見られる。この種子繁殖集団の均一性を高める一つの方法として、半数体植物を利用した方法がある。
【０００６】
半数体植物はコルヒチン処理などによって遺伝子を倍化させることが可能である。この遺伝子を倍化された植物は純系植物であり、これらの純系植物を自家交配させることにより、均一な種子繁殖集団が得られる。また、純系植物間の交配で得られた雑種第一代（Ｆ１植物）には、個体間での遺伝的な差が無く、均一な後代を得ることが可能であることから、この雑種第一代からも均一な種子繁殖集団が得られる。
【０００７】
これらの種子繁殖集団は均一であることもさることながら、組織培養によるクローン増殖を経てない為に突然変異の危険性が低く、雑種第一代から得られた種子繁殖集団では雑種強勢などの好ましい付加的特性も期待される。また、組織培養によるクローン増殖においては、同一培養組織から大量の増殖を行うと培養期間が長くなる為、突然変異の危険性も高くなるが、種子繁殖集団では短期間で大量の繁殖が可能となる。
【０００８】
半数体作出法としては、特定植物にしか有効ではないが、葯培養法と種間交雑法が一応確立している。葯培養を利用した半数体作出はタバコ、イネ、コムギなどの育種に利用され、種間交雑法による半数体作出はジャガイモ、大麦などでの育種に利用されているが（小林　仁．１９８７．「新しい植物育種技術」．養賢堂．１１０−１１２．）、ラン類植物においては、その半数体の作出方法は知られていなかった。
【０００９】
一方、オーキシンは植物成長調節物質（植物ホルモン）の一種であり、その作用の一つに着果および果実の肥大成長があげられる。オーキシンを処理すると受精しなくても果実が肥大成長する単為結果を起こし、生育を続けることは知られている（倉石晋．１９８８．「植物ホルモン」（第２版）．東京大学出版会．４５−４６．）。この作用はトマト栽培に利用され、トマト未受精花にオーキシンを処理することにより、受粉が行われなくても果実の着生、肥大が行われる。これはオーキシンの作用により、単為発生が誘発され、未受精の子房が発育したものである。しかし、高濃度のオーキシンはエチレン発生を誘導、果実の離脱を促してしまい、適度な処理濃度でないと、未受精子房は落下し、種子を得ることは出来ない。
【００１０】
ランの一種であるシランにエビネ類やシンビジューム類の花粉を交配すると容易に多量の種子が得られる。しかしこれらの種子を播種してみると、その発芽、苗の性状より見て単為生殖の可能性が極めて大きい。これは花粉のホルモンの刺激によって子房が発達し、卵細胞の倍数性単為生殖によるものかあるいは胎座などの母体の栄養組織から胚が由来する無配生殖によって種子を形成するものと考えられている（伊藤五彦・唐沢耕司．１９６９．「エビネとその仲間」．誠文堂新光社．２０６−２０７．）。
【００１１】
また、ランの一種であるジゴペタラムの柱頭へオーキシンの一種であるナフタレン酢酸を与えることにで、単為生殖を誘導できたと報告されている（森源次郎・山岡浩一・今西英雄．１９８９．「数種のランにおける単為生殖による種子について」　園芸学会雑誌、第５８巻別冊２、森源次郎・山岡浩一・今西英雄．１９９１．「Ｚｙｇｏｐｅｔａｌｕｍ　ｍａｃｋａｙｉ　の単為生殖による種子形成について」、園芸学会雑誌、第６０巻別冊２、４６６−４６７）。
【００１２】
本発明は、ラン類の未受精花へのオーキシン処理により、単為発生に基づく種子形成を行わせ、この種子から半数体植物および純系植物を得ることを目的としている。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
まず、未受精花での種子形成を実現する為に、オーキシン処理を行う。開花日から開花３０日後までの間に処理を行うのが適当である。
【００１４】
処理部位として、ずい柱もしくはずい柱を含む部分にオーキシン水溶液をスプレー、塗布もしくは滴下する。なお、図１に一般的なランの花の形態図を示す（内田一仁．１９８２．洋蘭　Ｔｈｅ　Ｏｒｃｈｉｄ．講談社．９９．より）。
【００１５】
ラン類の種類や開花状況によっては花が下を向いていることがあり、オーキシン水溶液が重力によって落下してしまうのを防ぐ為に、寒天やでんぷんなどを水溶液に混入し加熱により粘性を高めること、あるいはラノリン懸濁しペースト化することなどにより、処理部位にオーキシンが留まるようにすることも有効である。
【００１６】
オーキシン水溶液のオーキシン濃度は０．１〜５．０％とする。
【００１７】
オーキシンとして、インドール酢酸（ＩＡＡ）、４−クロロインドール酢酸、フェニル酢酸、２，４ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）、α−ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、２，６ジクロロ安息香酸、インドール酪酸（ＩＢＡ）、４−クロロフェノキシ酢酸、５−クロロインタゾール酢酸エチル、２，４，５−トリクロロフェノキシ酢酸を利用可能である。
【００１８】
処理直後から花被片のしおれが見られるようになり、１週間程度で子房の肥大が確認される。
【００１９】
子房の発育および種子形成はラン類植物の種類によって異なるが、処理後２ヶ月から６ヶ月で種子の熟成が観察される。この間、種子の落下に十分注意する必要がある。また、通常の交配、結実に比べ、１ヶ月から２ヶ月ほど早めに種子が熟することもある。
【００２０】
熟した種子を採取し、無菌状態で播種を行う。播種は慣行法に則り行う。種子の発芽率は通常の交配種子に比べ低くなる。
【００２１】
発芽が見られ、一定の大きさに生育したら、速やかに半数体植物であるかどうかを確認する。半数体植物であることの確認は、発芽個体の組織の一部を取り出し、染色体の数もしくはＤＮＡ含量を測定し、これらの値を自家受粉由来植物と比較することにより行う。発芽から一定の期間を経過した後では、半数体植物の染色体数が自然に倍化している可能性がある為、半数体植物の確認は発芽から１〜〜５ヶ月以内に行う必要がある。
【００２２】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施の形態として一実施例を説明する。
【００２３】
実施例としてシランＢｌｅｔｉｌｌａ．Ｂｒｉｇａｎｔｅｓ　‘Ｈ５−１１’を用いた。供試株は慣行法で育成されたものである。開花を確認し花粉を取り除き、α−ナフタレン酢酸を２％含む温めたラノリンペーストをスポイトを用いて１０μｌずい柱に滴下処理した。同一個体に複数の花が着生する為、上記の処理を各個体について５反復以上行った。
【００２４】
子房が肥大したものは完全に熟してから（処理から６〜７ヶ月後）採取し、０．５％次亜塩素酸容液で５分間表面殺菌をし、無菌容器中に播種し発芽を促した。
【００２５】
播種後、播種した種子数および有胚種子数を観察したところ、全播種種子数７，０３７に対して、有胚種子１１個を確認した。
【００２６】
表１に播種に使用した培地組成を示す。
【００２７】
【表１】
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【００２８】
播種から２週間後、これらの有胚種子からオーキシン処理由来植物８個体の発芽が確認された。
【００２９】
オーキシン処理由来植物がサンプリングに適当な大きさに生育した後（発芽から１〜２ヶ月後）、フローサイトメーターを用いてこれらオーキシン処理由来植物のＤＮＡ含量を測定し、同時に染色体を観察して染色体数を調査した。
【００３０】
調査は実生苗の幼葉を採取して行い、本発明によるα−ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）処理したものと、比較のため自家受粉由来の植物について実施した。図２はフローサイトメーターによる分析結果を示し、図３は顕微鏡による染色体の観察結果を示す。図２に示すように、フローサイトメトリー機器を用いたＤＮＡ含量調査においては、自家受粉由来植物で見られたピークに対して、オーキシン処理由来植物では約半分の位置にピークが見られた。
【００３１】
染色体の観察においては、図３に示すように、オーキシン処理由来植物の染色体が１６本であることが観察され、これはシランの染色体数３２本の半分であることが確認された。
【００３２】
発芽から５〜６ヶ月後、オーキシン処理由来植物のＤＮＡ含量を再度フローサイトメーターで測定したところ、そのピークは自家受粉由来植物とほぼ同じ位置に確認されたため、発芽２〜５ヶ月後の間にオーキシン由来植物の染色体数が自然に倍化していることが確認された。
【００３３】
これらの観察結果から、オーキシン処理由来植物が半数体であることが確認された。また、これらのオーキシン処理由来植物はその後の時間経過に従い、染色体数が自然に倍化することが同時に観察され、発芽から２ヶ月以内に染色体数を確認することが必要であることが確認された。
【発明の効果】
すでに述べたように、本発明によるラン類の半数体育成は、ラン類の種子繁殖品種作出に必要な純系植物の提供を可能とするものであり、このことにより、突然変異などの危険性の低い、安定した優良品種の提供が長期にわたり可能となる。
【図面の簡単な説明】
【図１】一般的なランの花の形態を示す図である。
【図２】フローサイトメーターによる分析結果を示す図である。
【図３】顕微鏡による染色体の観察結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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