(57)【要約】【課題】血管新生誘導効果に優れる血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤を得る。【解決手段】シイタケ，エチナシ，プルーン，モヤシ，アマチャヅルの各抽出物から選択した１種又は２種以上を、基剤又は担体に含有させ、安定性及び安全性が良好で、血管新生誘導効果に優れる血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤を得る。本発明に係る血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤は、特に、創傷治癒促進剤，育毛・養毛剤等として応用され得るものである。【選択図】　　　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シイタケ，エチナシ，プルーン，モヤシ，アマチャヅルの各抽出物から選択した１種又は２種以上を含有して成る、血管内皮細胞増殖因子産生促進剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の産生を促進し得る血管内皮細胞増殖因子産生促進剤に関する。本発明に係るＶＥＧＦ産生促進剤は、特に、創傷治癒促進剤，育毛・養毛剤等として応用され得るものである。
【０００２】
【従来の技術】
従来、創傷の治癒促進剤、育毛，養毛剤においては、血行を促進したり、皮膚の新陳代謝を活性化したりする作用を有する成分が用いられてきた。かかる血行促進剤としては、センブリ抽出物（スウェルチノーゲン），セファランティン，ビタミンＥ及びその誘導体，γ−オリザノール等が挙げられ、皮膚の新陳代謝を促進する物質としては、ワサビ抽出物（特開昭６２−２１５１１６），炭素数１８〜２２の不飽和結合を２以上含有する脂肪酸又はその塩等（特開平７−１９６４６５），ヒドロキシサリチル酸又はそのエステルの配糖体（特開平８−２６８８７０）などが開示されている。
【０００３】
また、創傷治癒促進効果を有する物質としては、アスコルビン酸，アラントイン，アズレン化合物，パントテン酸又はその塩，ビタミンＢ群化合物などが知られており、その他、単球走化性活性化因子（特開平７−８２１６９），ヒオウギ抽出物（特開平７−１３８１７９），フラボノイド配糖体（特開平７−１８８０３１），アデノシン−３’，５’−環状リン酸誘導体（特開平９−１９４３７９，同９−１９４３８０）などが開示されている。
【０００４】
しかしながら、上記した成分等は、必ずしも創傷部位，毛包において特異的に作用するとは限らず、期待した作用効果が十分得られなかったり、好ましくない副作用の生じるものがあるという問題があった。
【０００５】
ところで、創傷治癒過程や毛包周囲において血管新生が誘導され、その結果、創傷治癒や毛包の成長期への移行が促進される可能性が示唆されている。近年、かかる血管新生を誘導する因子として、ＶＥＧＦが見い出されている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明においては、創傷治癒剤、育毛・養毛剤に特に有効に応用し得るような、創傷部位あるいは毛包周辺の血管新生誘導効果に優れるＶＥＧＦ産生促進剤を得ることを目的とした。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
上記課題を解決するべく種々検討した結果、シイタケ，エチナシ，プルーン，モヤシ，アマチャヅルの抽出物に優れたＶＥＧＦ産生促進作用を見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明において用いるシイタケ（Ｌｅｎｔｉｎｕｓ　ｅｄｏｄｅｓ　（Ｂｅｒｋ．）　Ｓｉｎｇｅｒ　；　Ｃｏｒｔｉｎｅｌｌｕｓ　ｓｈｉｉｔａｋｅ　Ｐ．　Ｈｅｎｎ）は、キシメジ科（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａｔａｃｅａｅ）オウジ属（Ｌｅｎｔｉｎｕｓ）に属する担子菌類であり、全体を用いることができるが、子実体，菌糸体等を用いることが好ましい。
【０００９】
本発明において用いるエチナシ（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ　ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ　ＤＣ．；Ｅｃｈｉｎａｃｅａ　ｐｕｒｐｕｒｅａ　Ｍｏｅｎｃｈ）は、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）エチナシ属（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ　Ｍｏｅｎｃｈ）に属する多年草で、葉，茎，花，根等の各部位及び全草を用いることができるが、葉を用いることが好ましい。
【００１０】
本発明において用いるプルーン（Ｐｒｕｎｕｓ　ｄｏｍｅｓｔｉｃａ　Ｌｉｎｄｌ．）は、バラ科（Ｒｏｓａａｃｅａ）サクラ属（Ｐｒｕｎｕｓ）に属する植物で、花、花穂、果皮、果実、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根茎、根皮、根、種子等を用いることができるが、特に果実を用いることが好ましい。
【００１１】
本発明において用いるモヤシは、マメ科（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ）に属する一年生及び越年性の草本植物、例えば、大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅ　ｍａｘ　（Ｌ．）　Ｍｅｒｒｉｌｌ），小豆（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ　ａｎｇｕｌａｒｉｓ　（Ｗｉｌｌｄ．）　Ｗｉｇｈｔ），緑豆（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ　ｒａｄｉａｔｕｓ　Ｌ．）の種子を発芽させたものである。緑豆から得られるモヤシから、頭部を除去したものが好ましく用いられる。
【００１２】
本発明において用いるアマチャヅル（Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ　ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ　（Ｔｈｕｎｂ．）　Ｍａｋｉｎｏ）は、ウリ科（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ）アマチャヅル属（Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ　Ｂｌ．）に属する多年草で、葉，茎，花，根等の各部位及び全草を用いることができるが、葉を用いることが好ましい。
【００１３】
上記植物は、生のまま抽出に供してもよいが、抽出効率を考えると、細切，乾燥，粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。抽出は、抽出溶媒に浸漬して行う。抽出効率を上げるため撹拌を行ったり、抽出溶媒中でホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、４時間〜１４日間程度とするのが適切である。
【００１４】
抽出溶媒としては、水のほか、メタノール，エタノール，プロパノール，イソプロパノール等の低級アルコール、１，３−ブチレングリコール，プロピレングリコール，ジプロピレングリコール，グリセリン等の多価アルコール、エチルエーテル，プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸エチル，酢酸ブチル等のエステル類、アセトン，エチルメチルケトン等のケトン類などの極性有機溶媒を用いることができ、これらから１種又は２種以上を選択して用いる。また、生理食塩水，リン酸緩衝液，リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。
【００１５】
上述した植物の上記溶媒による抽出物は、そのままでも本発明に係るＶＥＧＦ産生促進剤に含有させることができるが、濃縮，乾固したものを水若しくは極性溶媒に再度溶解したり、あるいはこれらの生理作用を損なわない範囲で脱色，脱臭，脱塩等の精製処理を行ったり、カラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００１６】
本発明においては、上記各植物の抽出物から１種又は２種以上を選択して用いる。これら抽出物はそのままでもＶＥＧＦ産生促進剤として用いることができるが、各種基剤又は担体に含有させて、ＶＥＧＦ産生促進剤としてもよい。ＶＥＧＦ産生促進剤全量に対する添加量としては、用いる植物の種類，抽出溶媒及び抽出条件，抽出後の処理などにより異なるが、植物を粉砕処理後抽出溶媒に浸漬して抽出して得られる上清の状態で、０．０１〜５．０重量％程度とするのが適切である。
【００１７】
本発明に係るＶＥＧＦ産生促進剤は、液剤，乳剤，ゲル剤，クリーム剤，軟膏剤，粉剤，顆粒剤，丸剤等、種々の剤型で提供することができる。また、本発明に係るＶＥＧＦ産生促進剤には、ＶＥＧＦ産生促進作用を損なわない範囲で、油性成分，界面活性剤，保湿剤，賦形剤，紫外線吸収剤，抗酸化剤，香料，防菌防黴剤等の一般的な医薬品及び化粧料用添加剤を含有させることができる。
【００１８】
【実施例】
更に、本発明の特徴について、実施例により詳細に説明する。
【００１９】
［実施例１〜実施例５］
シイタケの子実体，エチナシの葉，プルーンの果実，緑豆モヤシから頭部を除去した部分，アマチャヅルの葉、それぞれの乾燥物各１００ｇをミルで粉砕し、それぞれ５０容量％エタノール水溶液１リットル中に室温にて７日間浸漬して抽出を行った。各抽出物をろ過してろ液を回収し、それぞれ実施例１〜実施例５とした。
【００２０】
上記実施例１〜実施例５について、ＶＥＧＦ産生促進効果を評価した。ＶＥＧＦ産生促進効果の評価は、間葉系細胞であるヒト線維芽細胞を用いて行った。すなわち、５容量％の牛胎仔血清を含有するダルベッコ修正基礎培地（ＤＭＥＭ）にて維持した正常ヒト線維芽細胞を、９６穴プレートに２．０×１０４個／ウェルとなるように播種し、各実施例をそれぞれ２００μｇ／ｍＬ含有する０．５容量％の牛胎仔血清を含有するＤＭＥＭにて、３７℃で２４時間培養した後、培養上清中のＶＥＧＦ量をＥｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）により定量した。その際、試料を添加しない０．５容量％牛胎仔血清含有ＤＭＥＭにて培養した系を対照とした。ＶＥＧＦの定量と同時に細胞数を測定して１細胞当たりのＶＥＧＦ量を算出し、対照における１細胞当たりのＶＥＧＦ量を１００とした場合のＶＥＧＦ量を求め、ＶＥＧＦ産生促進率（％）として、表１に示した。
【００２１】
【表１】
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【００２２】
表１から明らかなように、本発明の実施例１〜実施例５を添加した系においては、ＶＥＧＦの産生は対照の約１．４倍〜２．７倍と、有意に増加していた。特に、実施例１及び実施例３については、高いＶＥＧＦ産生促進効果が認められていた。
【００２３】
つづいて、本発明の他の実施例について示す。
【００２４】
［実施例６］　粉末状ＶＥＧＦ産生促進剤
プルーンの果実２５０ｇを乾燥，粉砕し、精製水１．５リットル中に入れ、２０℃にて１０日間撹拌しながら抽出した。抽出物をろ過してろ液を回収し、減圧下に濃縮乾固した後凍結乾燥し、標記実施例とした。
【００２５】
［実施例７］　液状ＶＥＧＦ産生促進剤
アマチャヅルの葉３００ｇを乾燥，粉砕し、精製水２リットル中に入れ、１５℃にて１４日間撹拌しながら抽出した。抽出物をろ過してろ液を回収し、減圧下に濃縮乾固した後凍結乾燥した。凍結乾燥物１ｇを次の液状基剤に溶解して１００ｍＬとし、標記実施例とした。
【００２６】
［液状基剤］
（１）エタノール　　　　　　　　　　　　　　　　２０．０（重量％）
（２）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油　　　１．０
（３）ジプロピレングリコール　　　　　　　　　　　５．０
（４）１，３−ブチレングリコール　　　　　　　　　　１０．０
（５）パラオキシ安息香酸メチル　　　　　　　　　　０．１
（６）精製水　　　　　　　　　　　　全体を１００とする量
製法：（１）〜（５）を（６）に順次添加して溶解する。
【００２７】
［実施例８］　乳剤状ＶＥＧＦ産生促進剤
シイタケの菌糸体２５０ｇを乾燥，粉砕し、１，３−ブチレングリコール１．５リットル中に浸漬して、２０℃で１０日間抽出した。抽出物をろ過してろ液を回収し、次に示す処方により乳剤を調製して、標記実施例とした。
【００２８】
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製法：（１）〜（７）の油相成分を混合し、加熱溶解して７５℃とする。一方、（８）〜（１１）の水相成分を混合，溶解して７５℃とする。これに前記油相を加えて予備乳化した後、（１２）を添加してホモミキサーにて均一に乳化し、次いで（１３）を加えて増粘させた後冷却し、４０℃で（１４）を添加，混合する。
【００２９】
［実施例９］　ゲル状ＶＥＧＦ産生促進剤
エチナシの地上部２６０ｇを乾燥，粉砕し、グリセリン１．５リットル中に入れ、１５℃で１４日間撹拌抽出した。抽出物をろ過してろ液を回収し、次の処方によりゲル剤を調製して、標記実施例とした。
【００３０】
（１）ジプロピレングリコール　　　　　　　　　　１０．０（重量％）
（２）カルボキシビニルポリマー　　　　　　　　　　０．５
（３）水酸化カリウム（１０．０重量％水溶液）　　　１．０
（４）パラオキシ安息香酸メチル　　　　　　　　　　０．１
（５）上記エチナシ抽出物　　　　　　　　　　　　　２．５
（６）精製水　　　　　　　　　　　　全体を１００とする量
製法：（６）に（２）を均一に溶解した後、（１）に（４），（５）を溶解して添加し、次いで（３）を加えて増粘させる。
【００３１】
［実施例１０］　水中油型クリーム状ＶＥＧＦ産生促進剤
緑豆モヤシの全草を乾燥，粉砕し、３００ｇを精製水１リットル中に浸漬して２５℃で７日間抽出した。抽出物をろ過してろ液を回収し、次の処方により水中油型クリーム剤を調製して、標記実施例とした。
【００３２】
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製法：（１）〜（７）の油相成分を混合，溶解して７５℃とする。一方、（８）〜（１１）を混合，溶解し、７５℃に加熱する。次いで、この水相成分に前記油相成分を添加して予備乳化した後ホモミキサーにて均一に乳化し、冷却する。
【００３３】
上記実施例６〜実施例１０について、モルモットの創傷部位における血管新生促進効果を評価した。その際、実施例６〜実施例１０において、用いた各植物の抽出物の替わりに、センブリ（Ｓｗｅｒｔｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｍａｋｉｎｏ）の全草を同量用いて同様に調製して得た抽出物を含有させたものをそれぞれ比較例１〜比較例５として、同時に評価を行った。血管新生促進効果は、背部を剃毛し、人工的に創傷を形成したモルモット５匹を１群とし、各群の創傷部位に実施例及び比較例のそれぞれを０．２ｇずつ１日２回塗布し、３日後の組織切片を作成して、血管新生の様子を観察して評価した。なお、実施例６及び比較例１は、５０容量％エタノール水溶液に１．０（ｗ／ｖ）％となるように溶解して塗布した。また、５０容量％エタノール水溶液を塗布した群を対照とした。結果は、明確な血管新生を認めたモルモット数にて表２に示した。
【００３４】
【表２】
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【００３５】
表２から明らかなように、本発明の実施例６〜実施例１０塗布群では、４例以上のモルモットにて明確な血管新生を認めていた。これに対し比較例塗布群では、明確な血管新生を認めたモルモットは２例以下で、対照群と比べて有意な差は認められなかった。
【００３６】
なお、本発明の実施例１〜実施例１０について上記評価を行った際、細胞毒性や、モルモット皮膚に対する皮膚刺激性反応等は、全く認められなかった。また、これらを２５℃で６カ月間保存した後において、問題となるＶＥＧＦ産生促進効果の低下や状態の変化は見られなかった。
【００３７】
【発明の効果】
以上詳述したように、本発明により、安定性及び安全性が良好で、血管新生誘導効果に優れるＶＥＧＦ産生促進剤を得ることができた。