(57)【要約】【課題】なるべく低コストで短時間にコンドロイチン硫酸Ｎａやコンドロイチン硫酸含有物を製造する。【解決手段】魚類の軟骨を酵素処理してタンパク質を抽出させた溶液を，ろ過した後，ろ液にアルコールを添加してコンドロイチン硫酸Ｎａを析出させる。こうして製造されたコンドロイチン硫酸Ｎａは，例えば医薬品，医薬部外品，医薬品添加物，化粧品，食品添加物の原料素材に利用できる。また，魚類の軟骨を酵素処理してタンパク質を抽出させた溶液を，ろ過した後，ろ液を乾燥させることにより，コンドロイチン硫酸含有物を製造する。こうして製造されたコンドロイチン硫酸含有物は，例えば化粧品，食品素材に利用できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
魚類の軟骨を酵素処理してタンパク質を抽出させた溶液を，ろ過した後，ろ液にアルコールを添加してコンドロイチン硫酸Ｎａを析出させることを特徴とする，コンドロイチン硫酸Ｎａの製造方法。
【請求項２】
酵素処理に際しアルカリを添加することを特徴とする，請求項１に記載のコンドロイチン硫酸Ｎａの製造方法。
【請求項３】
アルコールを添加して析出させたコンドロイチン硫酸Ｎａを，更に精製することを特徴とする，請求項１又は２に記載のコンドロイチン硫酸Ｎａの製造方法。
【請求項４】
請求項１，２又は３の製造方法によって製造されたコンドロイチン硫酸Ｎａ。
【請求項５】
医薬品，医薬部外品，医薬品添加物，化粧品，食品添加物の原料素材のいずれかであることを特徴とする，請求項４に記載のコンドロイチン硫酸Ｎａ。
【請求項６】
魚類の軟骨を酵素処理してタンパク質を抽出させた溶液を，ろ過した後，ろ液を乾燥させることを特徴とする，コンドロイチン硫酸含有物の製造方法。
【請求項７】
魚類の軟骨を酵素処理してタンパク質を抽出させた溶液を，ろ過した後，ろ液にアルコールを添加してコンドロイチン硫酸含有物を析出させ，この析出させたコンドロイチン硫酸含有物を乾燥させることを特徴とする，コンドロイチン硫酸含有物の製造方法。
【請求項８】
酵素処理に際しアルカリを添加することを特徴とする，請求項６又は７に記載のコンドロイチン硫酸含有物の製造方法。
【請求項９】
請求項６，７又は８に記載の製造方法によって製造されたコンドロイチン硫酸含有物。
【請求項１０】
化粧品，食品素材のいずれかであることを特徴とする，請求項９に記載のコンドロイチン硫酸含有物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は，コンドロイチン硫酸Ｎａ，コンドロイチン硫酸含有物及びそれらの製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
例えば鮭の鼻軟骨などといった魚類の軟骨中には，コンドロイチン硫が存在することが，これまでの調査研究で明らかになっている。また最近では，鮭の鼻軟骨由来のコンドロイチン硫酸Ｎａを化粧料や食品などに利用することが検討されている。
【０００３】
従来，鮭の鼻軟骨などからコンドロイチン硫酸Ｎａを製造する方法として，特開２００１−２３１４９７や特開２００１−２４７６０２が開示されている。これら従来の方法では，鮭の鼻軟骨などをマイナス３０〜６０℃で低温粉砕して脱脂した後，アルカリ処理・加熱して，酵素処理し，その消化液をエタノール沈殿・ろ過・遠心分離後，乾燥させさらにイオン交換樹脂による溶解・ろ過後凍結乾燥することによりコンドロイチン硫酸Ｎａを取得するようにしている。
【０００４】
【特許文献１】
特開２００１−２３１４９７号公報
【特許文献２】
特開２００１−２４７６０２号公報
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら，従来の製造方法では，連続多段限外ろ過処理，または脱イオン水での溶解・ろ過を必要とすることから設備投資多大な費用を必要とし，製造コストが高くなり，コンドロイチン硫酸Ｎａが相当に高額となってしまう。また，エタノール沈殿・ろ過・遠心分離を数回行うために製造に要する時間が長くなってしまう。
【０００６】
従って本発明の目的は，なるべく低コストで短時間にコンドロイチン硫酸Ｎａやコンドロイチン硫酸含有物を製造することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明によれば，魚類の軟骨を酵素処理してタンパク質を抽出させた溶液を，ろ過した後，ろ液にアルコールを添加してコンドロイチン硫酸Ｎａを析出させることを特徴とする，コンドロイチン硫酸Ｎａの製造方法が提供される。
【０００８】
また，本発明によれば，魚類の軟骨を酵素処理してタンパク質を抽出させた溶液を，ろ過した後，ろ液を乾燥させることを特徴とする，コンドロイチン硫酸含有物の製造方法が提供される。
【０００９】
こうして製造されたコンドロイチン硫酸Ｎａは，例えば医薬品，医薬部外品，医薬品添加物，化粧品，食品添加物の原料素材に利用できる。また，こうして製造されたコンドロイチン硫酸含有物は，例えば化粧品，食品素材に利用できる。
【００１０】
【発明の実施の形態】
以下，本発明の好ましい実施の形態を説明する。先ず，コンドロイチン硫酸Ｎａの製造方法を説明する。先ず，鮭鼻軟骨を４０℃〜５０℃で１時間〜２時間温水洗浄する。この場合，塩酸で洗浄してもよい。なお，軟骨には骨及び魚肉が付着していてもよい
【００１１】
次に，鼻軟骨に鼻軟骨と同量の水及び鼻軟骨に対して固形分濃度０．１〜１．０重量％のタンパク分解酵素（例えばアロアーゼ）を入れ，５０℃〜６０℃で３時間〜４時間攪拌する。タンパク分解酵素を用いた酵素処理（抽出）をすることにより，タンパク質を抽出して溶解させた抽出溶液を得る。なお，タンパク分解酵素としてアロアーゼ，プロティアーゼ等を用いた場合は，比較的タンパク質を低分子化することができるため，酵素処理で得られた抽出溶液には，タンパク質が比較的低分子化した状態で含まれている。
【００１２】
その後，抽出溶液を９０〜９５℃で５〜１０分間加熱し，酵素失活させる。更に，活性炭を抽出溶液に対して０．３〜１．０％の重量で添加し５０℃〜６０℃で１時間〜２時間攪拌し，脱脂・脱臭・脱色を行う。
【００１３】
次いで，抽出溶液にアルカリ（例えば苛性ソーダ）を加え，ｐＨを５〜６に調整する。
【００１４】
次いで，ろ過助剤を加えフィルタプレスでろ過する（脱脂）。ろ過後の抽出溶液（ろ液）は，比較的低分子化されたタンパク質を含有している。
【００１５】
ろ過された抽出溶液に，５０％以上のアルコール（例えばエタノール）を加え，コンドロイチン硫酸Ｎａを析出させ，沈殿させる。冷却後，沈殿した結晶を回収する。
【００１６】
次いで，回収した結晶を２倍に水溶解する。結晶を水溶解して得た抽出溶液を，陽イオン交換樹脂を通して精製し，水溶液中からタンパク質を除去する。抽出溶液を濃縮後，スプレー乾燥する。このように，抽出溶液をスプレー乾燥してコンドロイチン硫酸Ｎａを得ることができるので，大量生産が可能となる。従って，低コストを図ることができる。
【００１７】
なお，ろ過された抽出溶液に加えるアルコールの濃度を上げながら，除タンパクを繰り返すことにより，及び，ろ過された抽出溶液を再度メンブランフィルター等でろ過することにより，より高品質（医薬品グレード）のコンドロイチン硫酸Ｎａを製造することが可能となる。
【００１８】
次に，コンドロイチン硫酸Ｎａの製造方法にかかる本発明の別の実施形態を説明する。先ず，鮭の鼻軟骨を４０℃〜５０℃で１時間〜２時間温水洗浄する。この場合，塩酸で洗浄してもよい。軟骨には骨及び魚肉が付着していてもよい。
【００１９】
次いで，２５％濃度のアルカリ（例えば苛性ソーダ）を軟骨量に対し０．１〜２．０重量％加えると共に，タンパク分解酵素（例えば固形分濃度０．２％のパンクレアチン）を入れ，この水溶液を５０℃〜６０℃で３時間〜４時間攪拌する。こうして，タンパク分解酵素を用いた酵素処理（抽出）をすることにより，コンドロイチン硫酸Ｎａとタンパク質を切断し，コンドロイチン硫酸Ｎａとタンパク質を抽出して溶解させた抽出溶液を得る。なお，パンクレアチンには，食塩が配合されている。また，キュウイ酵素（アクチニジン）等をタンパク分解酵素に用いた場合は，比較的タンパク質を低分子化させず，コンドロイチン硫酸Ｎａとそれ以外の物質に分離することができる。タンパク分解酵素としてパンクレアチン等を用いて得られた抽出溶液には，タンパク質が比較的高分子の状態のままで含まれている。
【００２０】
その後，９０〜９５℃で５〜１０分間加熱し，酵素失活させる。
【００２１】
更に，活性炭を抽出溶液に対して０．３〜２．０％の重量で添加し，５０〜６０℃で１時間〜２時間攪拌し，脱脂・脱臭・脱色する。
【００２２】
次いで，アルカリ性となっている抽出溶液に酢酸を加え，ｐＨを５〜６に調整する。
【００２３】
ろ過助剤を加え，フィルタプレスでろ過する。
【００２４】
ろ過された抽出溶液（ろ液）に，５０％以上のアルコール（例えばエタノール）を加え，コンドロイチン硫酸Ｎａを析出させ，沈殿させる。冷却後，沈殿した結晶を回収する。
【００２５】
次いで，沈殿した結晶を再度高濃度のアルコールで攪拌脱水し，冷却沈殿後，結晶回収又は遠心分離にて結晶を回収する。
【００２６】
上述したように，タンパク分解酵素としてパンクレアチン等を用いると，タンパク質が比較的高分子の状態のまま抽出されるので，陽イオン交換樹脂を通して精製する必要が無く，減圧乾燥ができる。この場合，イオン交換樹脂や大型のスプレードライ等高額の設備投資が不要である。従って，低コストにコンドロイチン硫酸Ｎａを製造できる。
【００２７】
こうして製造されたコンドロイチン硫酸Ｎａは，特に医薬品，医薬部外品，医薬品添加物，化粧品，食品添加物として利用できる。
【００２８】
次に，コンドロイチン硫酸含有物の製造方法にかかる本発明の実施の形態を説明する。先ず，鮭の軟骨を４０〜５０℃の温水で１〜２時間洗浄する。この軟骨に同量の水を加えて得た水溶液にタンパク分解酵素（例えば固形分濃度０．１〜１．０％のアロアーゼ）を入れ，５０〜６０℃で３〜４時間攪拌して，酵素処理し，タンパク質を抽出させた抽出溶液を得る。
【００２９】
その後，９０〜９５℃で５〜１０分間加熱し，酵素失活させる。
【００３０】
更に，活性炭を抽出溶液に対して０．３％〜１．０の重量で添加し，５０〜６０℃で１〜２時間攪拌し，脱脂・脱臭・脱色する。
【００３１】
そして，アルカリ（例えば苛性ソーダ）を加えてｐＨを５〜６に調整した後，ろ過助剤を加えフィルタプレスでろ過する。
【００３２】
更に，ろ過した抽出溶液をスプレードライで乾燥させ，コンドロイチン硫酸含有物を得る。
【００３３】
このコンドロイチン硫酸含有物の製造方法において，酵素処理する際に２５％濃度のアルカリ（例えば苛性ソーダ）を軟骨量に対し１〜５重量％添加しても良い。
【００３４】
また，ろ過した後，ろ液にアルコールを添加してコンドロイチン硫酸含有物を析出させ，その析出させたコンドロイチン硫酸含有物を乾燥させても良い。
【００３５】
この製造方法によれば，コンドロイチン硫酸，コラーゲン等を，複合体として同時に抽出できる。組成としては，コンドロイチン硫酸，コラーゲン，アミノ酸，ヒアルロン酸，グルコサミンがある。原料の種類，使用する酵素の種類，酵素処理の方法をそれぞれ選択することにより，含有物の組成を，コンドロイチン硫酸５％〜６０％，コラーゲン５％〜４０％に調節することができる。こうして製造されたコンドロイチン硫酸含有物は，特に化粧品，食品添加物の原料素材，食品素材として利用できる。
【００３６】
なお，タンパク質を抽出させるタンパク分解酵素を選択することにより，含有物の組成が変わる。
【００３７】
また，原料として用いる鮭の軟骨は，例えば，鮭頭部の下あごと目の後をカットした，軟骨を含む部分（ハーフカット）を用いる。なお，鮭軟骨，鮭頭部をそのまま使用することも可能である。原料は，鮭頭部，ハーフカット，鮭軟骨の順に，手間がかかり，価格が上昇するが，コンドロイチン硫酸含有量が多くなる。従って，原料を選択することにより，コンドロイチン硫酸含有量の低い低価格品から，コンドロイチン硫酸含有量の高い高価格品まで対応して製造することができる。
【００３８】
【実施例】
（実施例１）
先ず，鮭の軟骨を４５℃の温水で２時間洗浄し，脱脂・脱臭した。この軟骨に同量の水を加え，水溶液を得た。固形分濃度０．１％のタンパク分解酵素（アロアーゼ）を入れ５５℃で３時間攪拌して酵素処理し，抽出溶液を得た。その後，９５℃で５分間加熱し，酵素失活させた。更に，活性炭を抽出溶液に対して０．３％の重量で添加し，５５℃で１時間攪拌し，脱脂・脱臭・脱色を行った。そして，苛性ソーダを加えｐＨを６に調整した後，ろ過助剤を加えフィルタプレスでろ過（脱脂）した。得られた抽出溶液を，６０％のエタノールに沈殿させ，冷却後，結晶を回収した。この結晶を２倍容量の水に溶解し，得られた抽出溶液を陽イオン交換樹脂を通して精製し，３０％に濃縮後，スプレー乾燥し，コンドロイチン硫酸Ｎａを得た。
【００３９】
（実施例２）
鮭の軟骨を４５℃の温水で２時間洗浄し，脱脂・脱臭した。そして，軟骨量に対し２５％濃度のアルカリ（苛性ソーダ）を２重量％，固形分濃度０．２％のタンパク分解酵素（パンクレアチン）を入れた水溶液を得た。これを５５℃で３時間攪拌して酵素処理し，抽出溶液を得た。その後，９５℃で５分間加熱し酵素失活させた。更に，活性炭を抽出溶液に対して０．３％の重量で添加し，５５℃で１時間攪拌し，脱脂・脱臭・脱色を行った。酢酸を加えｐＨを６に調整した後，ろ過助剤を加えフィルタプレスでろ過（脱脂）した。得られた抽出溶液を，６０％のエタノールに沈殿させ，冷却後結晶を回収した。結晶を再度，高濃度（９０％）のアルコールで攪拌し，その後，遠心分離にて結晶を回収し，減圧乾燥させてコンドロイチン硫酸Ｎａを得た。
【００４０】
（実施例３）
先ず，鮭の軟骨を４５℃の温水で２時間洗浄し，脱脂・脱臭した。この軟骨に同量の水を加え，水溶液を得た。固形分濃度０．１〜１．０％のタンパク分解酵素（アロアーゼ）を入れ５５℃で３時間攪拌して酵素処理し，抽出溶液を得た。その後，９５℃で５分間加熱し，酵素失活させた。更に，活性炭を抽出溶液に対して０．３％の重量で添加し，５５℃で１時間攪拌し，脱脂・脱臭・脱色を行った。そして，苛性ソーダを加えｐＨを６に調整した後，ろ過助剤を加えフィルタプレスでろ過（脱脂）した。更に，スプレードライで乾燥させ，コンドロイチン硫酸含有物を得た。このコンドロイチン硫酸含有物は，コンドロイチン硫酸４０％，コラーゲン２０％を含み，その他，アミノ酸，ヒアルロン酸，グルコサミン等を含んでいた。
【００４１】
（実施例４）
鮭の軟骨を４５℃の温水で２時間洗浄し，脱脂・脱臭した。その軟骨の半分の水を加え，水溶液を得た。タンパク分解酵素（パンクレアチン）を０．１％，入れ，５０℃で２時間攪拌して酵素処理し，抽出溶液を得た。９５℃以上で５分間加熱し，酵素失活させた。酢酸でｐＨを６に調整した後，ろ過助剤を加え，脱臭後フィルタープレスでろ過（脱脂）した。更に，５０％濃度のアルコールを抽出溶液を攪拌しながら加え，沈殿物を回収した。回収した沈殿物を減圧乾燥し，コンドロイチン硫酸含有物を得た。得られたコンドロイチン硫酸含有物は，コンドロイチン硫酸６０％，コラーゲン１０％を含み，その他，アミノ酸，ヒアルロン酸，グルコサミン等を含んでいた。
【００４２】
（実施例５）
鮭の軟骨を４５℃の温水で２時間洗浄し，脱脂・脱臭した。そして，軟骨量に対し２５％濃度のアルカリ（苛性ソーダ）を２％入れた水溶液を得た。５５℃で４時間攪拌して抽出処理し，抽出溶液を得た。次に，酢酸でｐＨを６に調整し，更に，活性炭を抽出溶液に対して０．３％の重量で添加し，５５℃で１時間攪拌し，酵素失活と脱脂・脱色を行った。更に，ろ過助剤を加え，フィルタプレスでろ過（脱脂）した。その後，スプレードライで乾燥し，コンドロイチン硫酸含有物を得た。得られたコンドロイチン硫酸含有物は，コンドロイチン硫酸２８％，コラーゲン２８％を含み，その他，アミノ酸，ヒアルロン酸，グルコサミン等を含んでいた。
【００４３】
（実施例６）
先ず，鮭の軟骨を４５℃の温水で２時間洗浄し，脱脂・脱臭した。この軟骨に同量の水を加え，水溶液を得た。固形分濃度０．２５％のタンパク分解酵素（パパイン酵素）を入れ５５℃で３時間攪拌して酵素処理し，抽出溶液を得た。その後，９５℃で５分間加熱し，酵素失活させた。更に，活性炭を抽出溶液に対して０．３％の重量で添加し，５５℃で１時間攪拌し，脱脂・脱臭・脱色を行った。そして，苛性ソーダを加えｐＨを６に調整した後，ろ過助剤を加えフィルタプレスでろ過（脱脂）した。更に，スプレードライで乾燥させ，コンドロイチン硫酸含有物を得た。このコンドロイチン硫酸含有物は，コンドロイチン硫酸２０％，コラーゲン２０％を含み，その他，アミノ酸，ヒアルロン酸，グルコサミン等を含んでいた。
【００４４】
（実施例７）
先ず，鮭の軟骨を４５℃の温水で２時間洗浄し，脱脂・脱臭した。この軟骨に同量の水を加え，水溶液を得た。固形分濃度０．１５％のタンパク分解酵素（キュウイ酵素）を入れ５５℃で３時間攪拌して酵素処理し，抽出溶液を得た。その後，９５℃で５分間加熱し，酵素失活させた。更に，活性炭を抽出溶液に対して０．３％の重量で添加し，５５℃で１時間攪拌し，脱脂・脱臭・脱色を行った。そして，苛性ソーダを加えｐＨを６に調整した後，ろ過助剤を加えフィルタプレスでろ過（脱脂）した。更に，スプレードライで乾燥させ，コンドロイチン硫酸含有物を得た。このコンドロイチン硫酸含有物は，コンドロイチン硫酸４０％，コラーゲン１５％を含み，その他，アミノ酸，ヒアルロン酸，グルコサミン等を含んでいた。
【００４５】
（実施例８）
先ず，鮭の軟骨を含むハーフカットの血抜きをし，４５℃の温水で２時間洗浄し，脱脂・脱臭した。この軟骨に同量の水を加え，水溶液を得た。固形分濃度０．１％のタンパク分解酵素（アロアーゼ）を入れ５５℃で３時間攪拌して酵素処理し，抽出溶液を得た。その後，９５℃で５分間加熱し，酵素失活させた。更に，活性炭を抽出溶液に対して０．３％の重量で添加し，５５℃で１時間攪拌し，脱脂・脱臭・脱色を行った。そして，苛性ソーダを加えｐＨを６に調整した後，ろ過助剤を加えフィルタプレスでろ過（脱脂）した。更に，スプレードライで乾燥させ，コンドロイチン硫酸含有物を得た。このコンドロイチン硫酸含有物は，コンドロイチン硫酸２８％，コラーゲン２８％を含み，その他，アミノ酸，ヒアルロン酸，グルコサミン等を含んでいた。
【００４６】
【発明の効果】
本発明によれば，低コストで短時間にコンドロイチン硫酸Ｎａやコンドロイチン硫酸含有物を製造することができる。