(57)【要約】【課題】副作用が少なく、かつ高い抗腫瘍活性を有する免疫活性化剤を提供する。【解決手段】本発明は、免疫系を介した抗腫瘍作用を有し、有効成分として落花生の渋皮またはその抽出物を含む免疫活性化剤、およびその製造方法に関する。本発明の免疫活性化剤は、ＩＬ−１２産生誘導活性およびＩＡＰ低減活性を有し、腫瘍性疾患などの治療に有効に用いることができる。また、本免疫活性化剤は食品添加剤の製造に使用することもできる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分として落花生の渋皮またはその抽出物を含む、免疫系を介した抗腫瘍作用を有する免疫活性化剤。
【請求項２】
インターロイキン−１２産生誘導活性および／または免疫抑制産生タンパク低減活性を有する、請求項１に記載の免疫活性化剤。
【請求項３】
落花生の渋皮を粉体に粉砕するか、または落花生の渋皮を抽出することにより得られる、請求項１または２に記載の免疫活性化剤。
【請求項４】
剤型が、粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤またはドリンク剤である、請求項１〜３のいずれかに記載の免疫活性化剤。
【請求項５】
落花生の渋皮を粉体に粉砕する工程または落花生の渋皮を抽出する工程を含む、免疫系を介した抗腫瘍作用を有する免疫活性化剤の製造方法。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれかに記載の免疫活性化剤を含有する、腫瘍性疾患の治療または予防のための医薬。
【請求項７】
請求項１〜３のいずれかに記載の免疫活性化剤の、食品添加剤の製造への使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、抗腫瘍作用を有する免疫活性化剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
腫瘍は、正常細胞が癌化し、無制限な増殖を繰返すことにより生じる疾患であり、近年常に死亡原因の上位を占めている。腫瘍の内科治療には、従来化学療法剤が使用されてきたが、このクラスの薬剤は、腫瘍細胞ばかりでなく正常細胞の増殖をも抑える作用があるため、特に腸管粘膜、骨髄、免疫系など細胞分裂の盛んな組織に対し重篤な副作用を伴うものであった。
このような化学療法に対し、生体の免疫機能を活性化することにより腫瘍を治療しようとするアプローチが注目されている。
【０００３】
生体は、本来、細菌やウイルスなどの非自己の侵入に対し自身を防御する機構を備えている。この代表的なものが免疫系である。しかし、免疫系は、前記のような外来の非自己を排除するだけでなく、腫瘍細胞などの内因性の非自己をも認識して、これを排除するように働く。従って、体内に腫瘍が生じても、それが小規模であれば、生体本来の抗腫瘍活性としての免疫応答により、腫瘍は破壊、処理される。
【０００４】
免疫応答は、１型ヘルパーＴ細胞によるＴｈ１応答（細胞性免疫）と２型ヘルパーＴ細胞によるＴｈ２応答（液性免疫）とに大別されるが、抗腫瘍免疫はＴｈ１応答に属する。免疫応答は各種サイトカインによって制御されており、Ｔｈ１応答は、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）やインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）などのＴｈ１型サイトカインによって誘導される。具体的には、これらのサイトカインによりキラーＴ（ＫＴ）細胞およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞などが活性化し、これらの細胞がグランザイム、パーフォリンなどを放出することにより、腫瘍細胞をアポトーシスに導く。また、ＫＴ細胞は、腫瘍細胞表面のＦＡＳリセプター（Ｒ）をＫＴ細胞のＦＡＳリガンド（Ｌ）という特別な接着因子で接着することによっても、腫瘍細胞のアポトーシスを惹起する。従って、Ｔｈ１応答を増強することにより、従来の化学療法剤でのような副作用を伴うことなく、生体本来の抗腫瘍活性を高めることができる（非特許文献１参照）。
【０００５】
このような免疫力を増強するための薬剤としては、既に各種化合物が開発され、腫瘍を含む各種疾患の治療に用いられている。しかし、これらの剤の多くは重篤な副作用を伴ったり、顕著な免疫活性化効果が得られないためにその治療効果も不充分であるなどの欠点を有している。
【０００６】
一方、ポリフェノールの一種であるレスベラトロールが、心臓病予防改善効果、ケラチノサイト増殖抑制・分化促進効果および抗酸化活性などのほか、癌予防効果を有しており、この物質が、赤ワインや落花生、特にその渋皮に多く含まれていることが知られている（特許文献１、非特許文献２、非特許文献３参照）。また、落花生渋皮の抽出物が骨髄細胞増殖作用を有すること（特許文献２参照）、抗ＨＩＶ活性を有すること（特許文献３参照）、抗炎症作用、コラゲナーゼ活性阻害活性、ヒアルロニダーゼ活性阻害活性、美白作用、保湿作用を有すること（特許文献４参照）、さらに、抽出物に含まれるプロアントシアニジンＡがヒアルロニダーゼ阻害活性およびラジカル消去活性を有しており、抗アレルギー剤や抗炎症剤などの活性成分として有用であることも知られている（特許文献５参照）。
しかし、落花生の渋皮の癌予防機序は解明されておらず、また、その免疫系への作用も上記の抗炎症作用や抗酸化作用程度しか知られていなかったため、その使用範囲も限られたものであった。
以上のことから、重篤な副作用を伴わない、新規な免疫活性化剤の開発は、未だ十分になされていないという現状にある。
【０００７】
【特許文献１】
特表２００１−５１０７７７号公報
【特許文献２】
特開平１０−１２０５８８号公報
【特許文献３】
特開平１１−２４６４３１号公報
【特許文献４】
特開２００２−１４５７５７号公報
【特許文献５】
特開平１１−２４６５６２号公報
【非特許文献１】
八木田旭邦著、「新免疫療法でガンを治す」、講談社、１９９９年１２月１０日、ｐ．８０〜８５
【非特許文献２】
「発掘！あるある大辞典第２０９回Ｔｏｐ  ｐａｇｅ」、［ｏｎｌｉｎｅ］、平成１３年、関西テレビ放送株式会社、［平成１４年１０月１日検索］、インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｋｔｖ．ｃｏ．ｊｐ／ＡＲＵＡＲＵ／ｓｅａｒｃｈ／ａｒｕｐｅａｎｕｔｓ／ｐｅａｎｕｔｓ１．ｈｔｍｌ＞
【非特許文献３】
「発掘！あるある大辞典第２０９回２  ｐａｇｅ」、［ｏｎｌｉｎｅ］、平成１３年、関西テレビ放送株式会社、［平成１４年１０月１日検索］、インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｋｔｖ．ｃｏ．ｊｐ／ＡＲＵＡＲＵ／ｓｅａｒｃｈ／ａｒｕｐｅａｎｕｔｓ／ｐｅａｎｕｔｓ２．ｈｔｍｌ＞
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の課題は、副作用が少なく、かつ高い抗腫瘍作用を有する免疫活性化剤を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記知見にもとづき落花生の渋皮の抗腫瘍活性について鋭意研究を重ねる中で、該渋皮が、顕著なＩＬ−１２産生誘導活性、および、免疫抑制酸性タンパク（ＩＡＰ）低減活性を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、有効成分として落花生の渋皮またはその抽出物を含む、免疫系を介した抗腫瘍作用を有する免疫活性化剤に関する。
また、本発明は、インターロイキン−１２産生誘導活性および／または免疫抑制産生タンパク低減活性を有する、前記免疫活性化剤に関する。
【００１０】
本発明はさらに、落花生の渋皮を粉体に粉砕するか、または落花生の渋皮を抽出することにより得られる、前記免疫活性化剤に関する。
また、本発明は、剤型が、粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤またはドリンク剤である、前記免疫活性化剤に関する。
さらに、本発明は、落花生の渋皮を粉体に粉砕する工程または落花生の渋皮を抽出する工程を含む、免疫系を介した抗腫瘍作用を有する免疫活性化剤の製造方法に関する。
本発明は、さらにまた、有効成分として前記抽出物を含む、腫瘍性疾患の治療または予防のための医薬に関する。
また、本発明は、前記免疫活性化剤の食品添加剤の製造への使用にも関する。
【００１１】
ＩＬ−１２は、ナチュラルキラー細胞刺激因子または細胞障害性リンパ球成熟因子などとも呼ばれ、単球やマクロファージから産生される分子量約７０，０００の糖タンパクである。その生物活性としては、ＫＴ細胞およびＮＫＴ細胞の活性化、ＮＫＴ細胞からのＩＮＦγの産生誘導、ナイーブＴ細胞からのＴｈ１細胞の分化促進などが知られており、Ｔｈ１応答を誘導・増強する方向に働く。Ｔｈ１応答は、上述のとおり抗腫瘍効果を有する。
一方、腫瘍免疫に抑制的に働くＴｈ２応答ではＩＡＰが産生される。ＩＡＰは、患者のＱＯＬを低下させるいわゆる悪液質の原因物質の１つである。ＩＡＰの産生により、Ｔｈ１系の抗腫瘍作用は抑制される。従って、ＩＡＰの産生を減少させることができれば、抗腫瘍免疫の抑制がなくなり、免疫系が有効に作用できるようになり、腫瘍の消退および悪液質の改善が期待できる。
【００１２】
本発明により、落花生の渋皮がＩＬ−１２産生誘導活性およびＩＡＰ低減活性を有しており、その抗腫瘍活性が免疫系を介したものであることが明らかとなった。
また、本発明による免疫活性化剤は、そのＩＬ−１２産生誘導活性によりＴｈ１応答を増強するため、例えば、Ｔｈ１応答がＴｈ２応答に比べて低下することが原因の１つとして考えられているアトピー性皮膚炎などのアレルギー疾患や自己免疫疾患の治療に使用することもできる。また、Ｔｈ１応答の増強が、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の発症予防にも有用であることが示唆されている。
【００１３】
ところで、ピーナッツの製造過程で生じる渋皮は、その１割程度が家畜用の餌として利用されているに過ぎず、残りの９割近くは産業廃棄物として焼却処理などに付されている。従って、このような渋皮を前記のとおりの極めて有用な医薬として有効利用してなる本発明は、単なる原料コストの圧縮および廃棄物のリサイクルといった観点からだけでなく、医療・健康といった観点を含めた社会経済的な意義は極めて大きいといえる。
【００１４】
【発明の実施の形態】
本発明の免疫活性化剤は、１日あたり１００ｍｇ／ｋｇの投与で効果が得られる。従って、１日あたり１００ｍｇ／ｋｇ以上の量を投与することが好ましい。本発明の免疫活性化剤は、落花生の渋皮を原料の１つとする。該渋皮として、ピーナッツ製造工場で、落花生の豆から剥離されたものを用いてもよい。
本発明において、落花生の渋皮は粉体またはエキスに加工することができる。粉体に加工する場合、２〜３ｍｍの落花生の渋皮を、粉砕機により、０．１μｍ〜１０００μｍの粒度分布を有する粉体に粉砕する。粉砕機としては、気流型粉砕機、ハンマー型、ピン型、ロット型、カッター型などのモーター駆動式の回転型粉砕機、ボールまたはロットによるポット型粉砕機、臼型、杵型粉砕機などの従来の技術を使用することができる（例えば、食品設備・機器事典編集委員会編、「食品設備・機械事典−食品流通・加工技術・環境衛生−」、初版、産業調査会事典出版センター、２００２年７月２０日、１８〜３７頁参照）。
【００１５】
ピーナッツ製造工場由来の渋皮を利用する場合は、該渋皮に豆の部分が残っているので、粉砕工程の前に除去することが望ましい。除去方法としては、例えば、乾式での、気流、網および振動を利用した方法が挙げられる（例えば、同４６〜５３頁参照）。
上記粉体から、さらに顆粒を製造することができる。この場合、粉砕によって得られた粉体を、流動、攪拌転動による造粒および乾燥に付し、１μｍ〜１０ｍｍの顆粒に加工する。
得られた粉体品または顆粒品には、蒸気およびマイクロ波などにより殺菌、滅菌処理を施す（例えば、同１５７〜１５９頁および３２２〜３２７頁参照）。これらの粉体または顆粒をカプセル化し、または、打錠により錠剤に加工することもできる。
【００１６】
エキスに加工する場合は、まず、落花生の渋皮を水または熱水により抽出し、遠心分離、フィルタープレスなどにより分離する。分離した濾過液はドリンク剤として製剤化してもよく、また、濾過液を濃縮機などにより濃縮後、乾燥に付し、慣用の方法で粉末または顆粒に加工してもよい。顆粒は、例えば、攪拌造粒機や流動層造粒機を使用し、または、上記濃縮濾過液をスプレードライヤーなどにデンプンなどを加え、造粒乾燥して得ることができる。得られた粉末または顆粒を、慣用の方法でカプセル剤または錠剤に加工することもできる。
従って、本発明の免疫活性化剤の投与の形態としては、粉剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤およびドリンク剤などの経口投与が可能である。
また、本発明の免疫活性化剤は、食品添加剤の製造に有利に使用することができる。この場合、好ましくは、落花生の渋皮を粉体または顆粒の形態に加工し、または、落花生の渋皮の抽出物をエキス、粉体または顆粒の形態に加工して使用する。本発明の免疫活性化剤を食品に添加することにより、上記の免疫活性作用に加え、食品に独特の風味と色を与えるというさらに有用な作用を発揮することができる。
以下に、実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の態様はこれらに限定されるものではない。
【００１７】
【実施例】
実施例１ 錠剤
下記の所定量の成分を攪拌型混合機を用いて均一に混合混和後、圧縮成形して、直径１０ｍｍ、重量３４０ｍｇの錠剤とした。
落花生渋皮粉末        １７０．０ｍｇ
乳糖                    ６８．０ｍｇ
結晶セルロース          ９１．８ｍｇ
ショ糖脂肪酸エステル    １０．２ｍｇ
【００１８】
実施例２ エキス顆粒
下記の所定量の成分を攪拌造粒機にて均一に混合し、乾燥後篩い分けをし、顆粒を製造した。
ピーナッツ渋皮エキス粉末  ８ｇ
デンプン                  ２ｇ
水                        ２ｇ
【００１９】
実施例３ 腫瘍増殖抑制効果
固形腫瘍細胞Ｓａｒｃｏｍａ−１８０を移植したマウスを用いて、落花生渋皮の腫瘍増殖抑制効果を評価した。
試験方法
１．処置群
▲１▼担癌対照群：水を投与（ｎ＝６）
▲２▼渋皮投与群：落花生渋皮粉末懸濁液を投与（ｎ＝６）
２．試験スケジュール
ＩＣＲマウス（雄）の腋下部皮下に１×１０６個の腫瘍細胞Ｓａｒｃｏｍａ−１８０を移植し、次の日より落花生渋皮粉末懸濁液（渋皮粉末：水＝１：１０）または水を１０００ｍｇ／ｋｇの量で、マウスに連日経口投与した。腫瘍細胞移植後２５日目に腫瘍重量を測定し、対照群および投与群の平均腫瘍重量から腫瘍増殖抑制率を産出した。
【００２０】
結果
投与群の平均腫瘍重量は、対照群の５０％以下であり、落花生渋皮粉末が顕著な腫瘍増殖抑制効果を有することが示された（表１）。
【表１】
2004149431.tif 000002
【００２１】
実施例４ ＩＬ−１２産生誘導活性およびＩＡＰ低減活性
ルイス肺癌（Ｌｅｗｉｓ  Ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ＝ＬＬＣ）細胞を移植したマウスを用いて、落花生渋皮のＩＬ−１２産生誘導活性およびＩＡＰ低減活性を評価した。
試験方法
１．処置群
処置群Ａ：試験開始後９日目にサンプリング
▲１▼健常対照群：水を投与（ｎ＝６）
▲２▼担癌対照群：５×１０４個の腫瘍細胞を移植、水を投与（ｎ＝６）
▲３▼渋皮投与群：５×１０４個の腫瘍細胞を移植、落花生渋皮粉末懸濁液を投与（ｎ＝６）
処置群Ｂ：試験開始後１８日目にサンプリング
▲１▼健常対照群：水を投与（ｎ＝６）
▲２▼担癌対照群：５×１０５個の腫瘍細胞を移植、水を投与（ｎ＝６）
▲３▼渋皮投与群：５×１０５個の腫瘍細胞を移植、落花生渋皮粉末懸濁液を投与（ｎ＝６）
【００２２】
２．試験スケジュール
Ｃ５７ＢＬ／１０マウス（雄）の尾静脈より、５×１０４個または５×１０５個のＬＬＣ細胞を移植し、次の日より実施例１と同様の落花生渋皮粉末懸濁液または水を１０００ｍｇ／ｋｇの量で、マウスに連日経口投与した。腫瘍細胞移植後９日目（処置群Ａ）または１８日目（処置群Ｂ）にマウスを採血し、血清中のＩＬ−１２およびＩＡＰを測定した。
３．測定方法
血清ＩＬ−１２レベルはＥＬＩＳＡキットにて、血清ＩＡＰレベルはイムノプレート法にて、それぞれ測定した。
【００２３】
結果
１．処置群Ａ
担癌対照群では、健常対照群に比べＩＬ−１２レベルが増加しているが、これは腫瘍細胞の移植により、抗腫瘍免疫が活性化されたためと考えられる。渋皮投与群のＩＬ−１２レベルの平均値は２１０４ｐｇ／ｍｌと、両対照群に比べ極めて高くなっており、落花生渋皮の投与によりＩＬ−１２産生が増強されたことを示している。一方、ＩＡＰレベルは、担癌対照群では腫瘍細胞の影響により顕著に上昇しているのに対し、渋皮投与群では担癌対照群に比べ有意に低くなっている（表２）。
【表２】
2004149431.tif 000003
【００２４】
２．処置群Ｂ
担癌対照群では、健常対照群に比べＩＡＰレベルが大幅に上昇しており、一方ＩＬ−１２レベルは減少している。これは、腫瘍細胞の産生するＩＡＰなどの免疫抑制効果により、免疫力が低下したためと考えられる。これに対し渋皮投与群では、担癌対照群に比べ、ＩＬ−１２レベルは高く、ＩＡＰレベルは低くなっている（表３）。
【表３】
2004149431.tif 000004
【００２５】
比較例 アガリクスおよび十全大補湯のＩＬ−１２産生誘導活性
担癌マウスにおける、抗癌剤作用を有することが知られているアガリクス茸、および漢方薬の十全大補湯のＩＬ−１２産生誘導活性を評価した。
試験方法
１．処置群
▲１▼アガリクス投与群（ｎ＝１０）
▲２▼十全大補湯投与群（ｎ＝１０）
【００２６】
２．試験スケジュール
Ｃ５７ＢＬ／１０マウスの皮下に２×２０６個のルイス肺癌細胞を移植し、次の日からアガリクスまたは十全大補湯を１日あたり１０００ｍｇ／体重の量で、連日経口投与した。試験開始後１４日目にマウスを採血し、血中ＩＬ−１２レベルを測定した。
３．測定方法
血清ＩＬ−１２レベルはＥＬＩＳＡキットにて測定した。
【００２７】
結果
アガリクス投与群、十全大補湯投与群とも、実施例４処置群Ａの渋皮投与群に比べ低いＩＬ−１２レベルを示した。（表４）。
【表４】
2004149431.tif 000005
【００２８】
以上の結果から、落花生の渋皮が腫瘍増殖抑制効果を有し、その作用がＩＬ−１２の産生誘導およびＩＡＰの低減を介した抗腫瘍免疫の活性増強によるものであることが明らかになった。また、落花生の渋皮は、アガリクス茸や十全大補湯などの従来の抗腫瘍性物質に比べても強力なＩＬ−１２産生誘導活性を有することが示された。
【００２９】
【発明の効果】
本発明の免疫活性化剤は、ＩＬ−１２産生誘導活性およびＩＡＰ低減活性による腫瘍増殖抑制効果を有しているので、腫瘍性疾患の治療に有効に用いることができる。該剤はまた、優れたＩＬ−１２産生誘導活性を有しているため、Ｔｈ１応答の増強が効果的なアトピー性皮膚炎などのアレルギー疾患、および自己免疫疾患などにも用いることができる。また該剤は、食品添加物の成分として、健康食品などの製造に用いることもできる。
さらに、ピーナッツの製造工程などで廃棄されている渋皮を、前記のとおりの極めて有用な医薬として有効利用してなる本発明は、単なる原料コストの圧縮および廃棄物のリサイクルといった観点からだけでなく、医療・健康といった観点を含めた社会経済的な意義は極めて大きい。