(57)【要約】【課題】ケモカイン遺伝子の発現を抑制し、とくにインターロイキン−８、エオタキシン、ＲＡＮＴＥＳの遺伝子発現を阻害することができる新規化合物を提供する。【解決手段】下記式（１）で表される新規化合物。この化合物はポンツクショウガの抽出物から分離・精製することで得られる。【化１】2004269450.tif 000026【選択図】        図１
2004269450.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で表されることを特徴とする新規化合物。
【化１】
2004269450.tif 000015
【請求項２】
ポンツクショウガの溶媒抽出物を精製して得られることを特徴とする下記式（１）で表される新規化合物の製造方法。
【化２】
2004269450.tif 000016
【請求項３】
下記式（１）で表される新規化合物を含むことを特徴とする皮膚外用剤。
【化３】
2004269450.tif 000017
【請求項４】
下記式（１）で表される新規化合物を有効成分として含有することを特徴とするケモカイン発現阻害剤。
【化４】
2004269450.tif 000018
【請求項５】
下記式（１）で表される新規化合物を有効成分として含有することを特徴とするインターロイキン−８発現阻害剤。
【化５】
2004269450.tif 000019
【請求項６】
下記式（１）で表される新規化合物を有効成分として含有することを特徴とするエオタキシン発現阻害剤。
【化６】
2004269450.tif 000020
【請求項７】
下記式（１）で表される新規化合物を有効成分として含有することを特徴とするエオタキシン発現阻害に基づくアトピー性皮膚炎用外用剤。
【化７】
2004269450.tif 000021
【請求項８】
下記式（１）で表される新規化合物を有効成分として含有することを特徴とするランテス（ＲＡＮＴＥＳ）発現阻害剤。
【化８】
2004269450.tif 000022
【請求項９】
下記式（１）で表される新規化合物を有効成分として含有することを特徴とするランテス（ＲＡＮＴＥＳ）発現阻害に基づく抗アレルギー剤。
【化９】
2004269450.tif 000023
【請求項１０】
下記式（１）で表される新規化合物を有効成分として含有することを特徴とするケモカイン発現阻害に基づく抗炎症剤。
【化１０】
2004269450.tif 000024
【請求項１１】
下記式（１）で表される新規化合物を有効成分として含有することを特徴とするケモカイン発現阻害に基づく肌荒れ改善用皮膚外用剤。
【化１１】
2004269450.tif 000025
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は新規化合物に関し、特に優れたケモカイン（Ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ）発現阻害作用を有する新規化合物に関する。また本発明はこの新規化合物を用いて、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、エオタキシン、ＲＡＮＴＥＳ（Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｕｐｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ、Ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ）の遺伝子発現を阻害し、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、乾癬等、種々の皮膚疾患による肌荒れ症状や炎症、アレルギー症状の他、健常人の肌荒れ、敏感肌、ニキビ肌に対する予防、及び改善に有効なケモカイン（Ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ）発現阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、乾癬などの皮膚疾患による肌荒れや炎症、アレルギー症状、および健常人の肌荒れ、敏感肌、ニキビ肌に対して改善・予防効果を有する皮膚外用剤の有効成分としては、抗炎症・抗アレルギー効果のあるステロイド剤や保湿効果のあるワセリン、尿素、ヘパリン、各種アミノ酸、脂質類が用いられてきた。
しかしながら、ステロイド剤は副作用が強く、また保湿剤はその効果が必ずしも十分ではなく、より安全性の高い優れた有効成分の開発が望まれていた。
【０００３】
そこで、人体への副作用が少ない安全性の高い生薬が注目され、その中でショウガ科ジンギバー属植物であるＺｉｎｇｉｂｅｒ  ｃａｓｓｕｍｕｎａｒ  Ｒｏｘｂ．の抽出物が有効成分として配合された血小板活性化因子拮抗剤が提案されている（例えば、特許文献１参照。）。この治療薬は、種々の炎症性・アレルギー性皮膚疾患や肌荒れの発現に関与している血小板活性化因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ，ＰＡＦ）に対して、優れたＰＡＦ拮抗作用を有しており、肌荒れなどの改善に効果がある。
【０００４】
一方、種々の炎症性・アレルギー性皮膚疾患の発症に炎症性細胞の遊走・活性化を支配するケモカインが強く関与していることが明らかにされつつある。例えばアレルギー性皮膚疾患であるアトピー性皮膚炎や接触アレルギー性皮膚炎に対してケモカインが関与していることや、炎症性異常角化性疾患である乾癬ではその皮膚患部にケモカインの一種であるＩＬ−８が多量に存在していることが知られている。同様に、種々の炎症反応において、炎症に関わる様々な細胞の炎症部位への遊走および活性化にケモカインと総称される一群の生理活性蛋白質が中心的に作用していることが判明しており、皮膚の接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎などで炎症部位に好中球や好酸球などの炎症細胞が遊走し、活性化され、炎症の発生・増悪に関与することが知られており、この場合に皮膚の角化細胞、線維芽細胞などの細胞から、炎症細胞の遊走および活性化に関与するケモカインとしてインターロイキン−８、エオタキシン、ランテス（ＲＡＮＴＥＳ）などが産生されることが知られている。インターロイキン−８、エオタキシン、ＲＡＮＴＥＳなどのケモカインの発現阻害剤は、インターロイキン−８、エオタキシン、ＲＡＮＴＥＳなどのケモカインが関与する炎症性あるいはアレルギー性の疾患症状の改善や防止に有効である。
【０００５】
また上記したように、ケモカインとしては、インターロイキン−８、エオタキシン、ランテス（ＲＡＮＴＥＳ）等が知られているが、それぞれの物質が特異的に、あるいは優先的に関与する疾患がある。例えば、エオタキシンについてはアトピー性皮膚疾患に関与し、ランテスについてはアレルギー性皮膚疾患に関与する。したがって、各物質についての発現阻害についての情報が得られれば、より効果的に目的とする疾患を改善することが可能となり、副作用の軽減化等にも寄与できる。
【０００６】
【特許文献１】
特開２００１−１９２３３９号公報
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の目的は、ケモカインの遺伝子発現抑制作用に優れ、ケモカインの生理的作用に基づく炎症性・アレルギー性疾患の改善・予防に優れた効果を奏することが期待されると共に、肌荒れ改善作用に優れ、種々の皮膚疾患、肌荒れ等の改善・予防に優れた効果を有する新規化合物を見出すこと、およびその新規化合物を含む皮膚外用剤、およびケモカイン遺伝子発現抑制剤を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
このような現状に鑑み、本発明者らはケモカイン遺伝子発現抑制物質が様々な炎症性・アレルギー性皮膚疾患や健常人の肌荒れ、荒れ性等の改善に有効であると考え、広く種々の物質についてケモカインの遺伝子発現抑制作用を調べた結果、特定の新規化合物に強いケモカイン遺伝子発現抑制作用があることを見出した。また、この新規化合物は、ケモカインのなかでもインターロイキン−８、エオタキシンおよびランテス（ＲＡＮＴＥＳ）のそれぞれにその発現を抑制することを見出し、本発明に至った。
【０００９】
すなわち本発明は、下記式（１）で表されることを特徴とする新規化合物である。
【化１２】
2004269450.tif 000003
【００１０】
また本発明によれば、ポンツクショウガの溶媒抽出物を精製して得られることを特徴とする上記式（１）で表される新規化合物の製造方法が提供される。
【００１１】
また本発明は、上記式（１）で表される新規化合物を含む皮膚外用剤、および上記式（１）で表される新規化合物を有効成分として配合することを特徴とするケモカイン発現阻害剤およびインターロイキン−８発現阻害剤である。
【００１２】
また本発明は、上記式（１）で表される新規化合物を有効成分として配合することを特徴とするエオタキシン発現阻害剤である。エオタキシン発現阻害作用を有する物質はアトピー性皮膚疾患に有効であることが知られているので、本発明は、上記新規化合物を有効成分として配合するエオタキシン発現阻害に基づくアトピー性皮膚炎用外用剤として用いることができる。
【００１３】
また本発明は、上記式（１）で表される新規化合物を有効成分として配合することを特徴とするランテス（ＲＡＮＴＥＳ）発現阻害剤である。ランテス（ＲＡＮＴＥＳ）発現阻害作用を有する物質は抗アレルギー剤として有効であることが知られているので、本発明は、上記植物抽出物を有効成分として配合するランテス（ＲＡＮＴＥＳ）発現阻害に基づく抗アレルギー剤として用いることができる。
【００１４】
また本発明によれば、上記式（１）で表される新規化合物を有効成分として配合することを特徴とするケモカイン発現阻害に基づく抗炎症剤および肌荒れ改善用皮膚外用剤が提供される。
【００１５】
本発明にかかる新規化合物はポンツクショウガの抽出物から分離・精製して製造することができる。ポンツクショウガの抽出に用いる部位としては特に限定されず、例えば、根、根茎、茎、葉、花、果実、全草等が挙げられるが、好ましくは根又は根茎である。具体例を挙げると、ポンツクショウガの根又は根茎の粉砕物を抽出溶媒に室温〜加温下で浸漬して抽出し、この抽出物をカラム分離精製、再結晶等により精製して新規化合物（１）を得ることができる。
【００１６】
抽出溶媒としては特に限定されず、例えば、水、メタノール、エタノール等の一級アルコール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等の多価アルコール、酢酸エチル等の低級アルキルエステル、ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素、エチルエーテル、アセトン等が挙げられ、これらを２種以上組み合わせて用いることもできる。好ましい抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、１，３−ブチレングリコール又はこれらの混合溶媒が挙げられる。
【００１７】
本発明の皮膚外用剤においては、新規化合物（１）の他、これを有効成分として含む抽出物を用いることもできる。このような抽出物としては、上記抽出溶媒で抽出された一次抽出物、及びこの一次抽出物をシリカゲルクロマトグラフィー等で粗精製して得られる粗画分が挙げられる。
【００１８】
本発明の新規化合物（１）を外用剤として用いる時の配合量は、外用剤全量中、０．０００１〜２０質量％、好ましくは０．００１〜１０質量％である。０．０００１質量％未満であると、本発明でいう効果が十分に発揮されず、２０質量％を超えて配合しても効果の更なる増加は実質上望めないし、各剤への配合も難しくなる傾向にある。
【００１９】
本発明の皮膚外用剤には、上記必須成分以外に、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば美白剤、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール等、粉末成分、色剤、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００２０】
本発明の皮膚外用剤には、更にエデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖剤、クエン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、亜硫酸ナトリウム、カフェイン、タンニン、パントテン酸およびその誘導体、ニコチン酸およびその誘導体、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、マロニエ、エスシン等の各種植物抽出物、ビタミンＥおよび酢酸トコフェロール等のビタミンＥ誘導体、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、胎盤抽出液、アスコルビン酸およびアスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド等のアスコルビン酸誘導体、アルブチン、コウジ酸、エラグ酸、カミツレ油、４−ｎ−ブチルレゾルシノール等の美白剤、ビタミンＡおよびレチノール等のビタミンＡ誘導体、グルコース、フルクトース、キシリトール、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類、ワセリン、グリセリン、尿素、ヘパリン等の保湿剤、セリン、アルギニン等の各種アミノ酸、セラミド、コレステロール等の脂質なども適宜配合することができる。
【００２１】
本発明の皮膚外用剤には、医薬品、医薬部外品、化粧品を指し、例えば軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤等、従来皮膚外用剤組成物とされているものであればいずれでもよく、剤型は特に問わない。
【００２２】
【実施例】
次に実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。なお、本発明はこれにより限定されるものではない。配合量は質量％である。
【００２３】
１．新規化合物の製造
Ｚｉｎｇｉｂｅｒ  ｐｕｒｐｕｒｅｕｍ  Ｒｏｓｃ．の根茎５０９．７ｇを粉砕し、室温で１週間、２．５Ｌのメタノール中に浸漬し、抽出を行った。抽出液を濾過し濃縮した後、減圧乾燥し、５０．６ｇのエキス固形分を得た。
このうち約３８ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ−ヘキサンと酢酸エチルの混合系）にかけ、粗画分を約１．２ｇ得た。次いでこの租画分約２００ｍｇを逆相系ＨＰＬＣ分取（１回目／移動相：５０％アセトニトリル、カラム：株式会社資生堂製ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ１２０Å、カラムサイズ：２０ｍｍφ×２５０ｍｍ、検出：ＵＶ２１０ｎｍ、２回目／移動相：５０％アセトニトリル、カラム：株式会社資生堂製ＳＵＰＥＲＩＯＲＥＸ  ＯＤＳ、カラムサイズ：１０ｍｍφ×２５０ｍｍ、検出：ＵＶ２１０ｎｍ）を２度行い、最終的に新規化合物（１）を４．６ｍｇ単離した。
【００２４】
新規化合物（１）の１３Ｃ−ＮＭＲケミカルシフト値および１Ｈ−ＮＭＲケミカルシフト値を下記表１に示す。測定溶媒は重アセトン、測定温度は３０℃である。化学式（１Ａ）には表１の炭素位置番号に対応した化学構造式を示す。
【００２５】
【化１３】
2004269450.tif 000004
【００２６】
【表１】
2004269450.tif 000005
【００２７】
次に、新規化合物（１）のＦＡＢ−ＭＳ測定を行った。測定条件は次のとおりである。測定結果を表２に示す。
【００２８】
測定質量範囲：ｍ／ｚ  １００〜１０００  （５ｓｅｃ／ｄｅｃａｄｅ）
分解能：１０００
イオン化法：ＦＡＢ−ＮＥＧ  Ｃｓ  ２０ｋＶ
加速電圧：５ｋＶ
マトリックス：Ｔｈｉｏｇｌｙｃｅｒｏｌ
【００２９】
【表２】
2004269450.tif 000006
【００３０】
２．新規化合物のケモカイン遺伝子発現阻害作用の試験方法およびその結果
（１）試験方法
ヒト皮膚線維芽細胞を直径６ｃｍの培養皿で、１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培地（ダルベッコ変法イーグル培地）でコンフルエントになるまで培養し実験に供した。なお、ヒト皮膚線維芽細胞は市販されており、例えばクラボウ（倉敷紡績株式会社）から入手可能である。
【００３１】
ケモカイン遺伝子の発現には、上記ヒト皮膚線維芽細胞にＴＮＦ−α（１ｎｇ／ｍＬ）を添加し、同時に新規化合物（１）を添加して３７℃で２４時間培養した。試料は１０μｇ／ｍｌのエタノール溶液（ａ）として用いた。
【００３２】
また、以下の薬剤を添加して同様に培養した。
（ｂ）ハイドロコルチゾン（１０−８Ｍ）
（ｃ）ポンツクショウガメタノール抽出物（含有濃度１０μｇ／ｍｌ）
（ｄ）ポンツクショウガメタノール抽出物（含有濃度１００μｇ／ｍｌ）
【００３３】
次に常法に従って、細胞からＲＮＡを単離し、ｃＤＮＡを合成したのち、定量的ＰＣＲ法（ＴａｑＭａｎ  ＰＣＲ法）により、エオタキシン、及びＲＡＮＴＥＳ遺伝子の発現量を測定した。内部標準遺伝子としてＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３リン酸脱水素酸素）を用い得られたデータを補正した。
【００３４】
（２）試験結果
上記試験方法で試験した時のＲＡＮＴＥＳ遺伝子の発現量の試験結果を図１に、エオタキシン遺伝子の発現量の試験結果を図２に示す。
なお、図１および図２においては、薬剤無添加で、ＴＮＦ−α（１ｎｇ／ｍＬ）を添加した時と添加しない時のＲＡＮＴＥＳおよびエオタキシンの遺伝子発現量をｖｅｈｉｃｌｅとして同時に示した。
【００３５】
図１において、新規化合物（１）は優れたＲＡＮＴＥＳの遺伝子発現抑制効果が認められ、１０倍濃度のポンツクショウガエキスよりもＲＡＮＴＥＳの遺伝子発現抑制効果が優れていた。
【００３６】
図２において、新規化合物（１）は優れたエオタキシンの遺伝子発現抑制効果が認められ、１０倍濃度のポンツクショウガエキスと同程度のエオタキシン遺伝子発現抑制効果を有していた。
【００３７】
このように、本発明の新規化合物（１）を用いれば、ＲＡＮＴＥＳの遺伝子発現抑制とエオタキシンの遺伝子発現抑制に対して、より少量で目的とする疾患の予防・改善が可能になる。
【００３８】
以下に、本発明の新規化合物を種々の剤型に適用した時の処方例を実施例として説明する。なお実施例中、新規化合物（１）についてはいずれも乾燥固形分に換算した質量である。
【００３９】
実施例１  クリーム
処方                                        質量％
ステアリン酸                                ５．０
ステアリルアルコール                        ４．０
イソプロピルミリステート                  １８．０
グリセリンモノステアリン酸エステル          ３．０
プロピレングリコール                      １０．０
新規化合物（１）                            ０．０１
苛性カリ                                    ０．２
亜硫酸水素ナトリウム                        ０．０１
防腐剤                                      適量
香料                                        適量
イオン交換水                                残余
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールと新規化合物（１）と苛性カリを加え溶解し、加熱して７０℃に保つ（水相）。水相に油相を徐々に加え、全部加え終わってからしばらくその温度に保ち反応を起こさせる。その後、ホモミキサーで均一に乳化し、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００４０】
実施例２  クリーム
2004269450.tif 000007
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールを加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を加え予備乳化を行い、ホモミキサーで均一に乳化した後、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００４１】
実施例３  クリーム
2004269450.tif 000008
（製法）
イオン交換水に石けん粉末と硼砂を加え、加熱溶解して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相をかきまぜながら徐々に加え反応を行う。反応終了後、ホモミキサーで均一に乳化し、乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００４２】
実施例４  乳液
2004269450.tif 000009
（製法）
少量のイオン交換水にカルボキシビニルポリマーを溶解する（Ａ相）。残りのイオン交換水にポリエチレングリコール１５００とトリエタノールアミンを加え、加熱溶解して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を加え予備乳化を行い、Ａ相を加えホモミキサーで均一に乳化し、乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００４３】
実施例５  乳液
2004269450.tif 000010
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールを加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し、加熱融解して７０℃に保つ（油相）。油相をかきまぜながらこれに水相を徐々に加え、ホモミキサーで均一に乳化する。乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００４４】
実施例６  ゼリー
2004269450.tif 000011
（製法）
イオン交換水にカーボポール９４０を均一に溶解し、一方、９５％エタノールに新規化合物（１）、ポリオキシエチレン（５０モル）オレインアルコールエーテルを溶解し、水相に添加する。次いで、その他の成分を加えたのち苛性ソーダ、Ｌ−アルギニンで中和させ増粘する。
【００４５】
実施例７  美容液
2004269450.tif 000012
（製法）
Ａ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ｃ相にＡ相を加えて可溶化する。次いでＢ相を加えたのち充填を行う。
【００４６】
実施例８  パック
2004269450.tif 000013
（製法）
Ａ相、Ｂ相及びＣ相をそれぞれ均一に溶解し、Ａ相にＢ相を加えて可溶化する。次いでこれをＣ相に加えたのち充填を行う。
【００４７】
実施例９  固形ファンデーション
処方                                        質量％
タルク                                    ４３．１
カオリン                                  １５．０
セリサイト                                １０．０
亜鉛華                                      ７．０
二酸化チタン                                ３．８
黄色酸化鉄                                  ２．９
黒色酸化鉄                                  ０．２
スクワラン                                  ８．０
イソステアリン酸                            ４．０
モノオレイン酸ＰＯＥソルビタン              ３．０
オクタン酸イソセチル                        ２．０
新規化合物（１）                            ０．５
防腐剤                                      適量
香料                                        適量
（製法）
タルク〜黒色酸化鉄の粉末成分をブレンダーで十分混合し、これにスクワラン〜オクタン酸イソセチルの油性成分、新規化合物（１）、防腐剤、香料を加えよく混練した後、容器に充填、成型する。
【００４８】
実施例１０  乳化型ファンデーション（クリームタイプ）
2004269450.tif 000014
（製法）
水相を加熱攪拌後、十分に混合粉砕した粉体部を添加してホモミキサー処理する。更に加熱混合した油相を加えてホモミキサー処理した後、攪拌しながら香料を添加して室温まで冷却する。
【００４９】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明の新規化合物は、ケモカイン発現阻害作用を有する有用な化合物である。
また本発明のケモカイン発現阻害剤はケモカイン遺伝子の発現を抑制し、とくにインターロイキン−８、エオタキシン、ＲＡＮＴＥＳの遺伝子発現を阻害することができる。このため、上記の各ケモカイン遺伝子の発現によって特異的に惹起される種々の皮膚疾患を適格に予防・改善することが可能となる。また的をはずれた適用によって生じる副作用を回避することができると共に、より少量で目的とする皮膚疾患の予防、及び改善ができる。
かくして本発明のケモカイン発現阻害剤は、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、乾癬等、種々の皮膚疾患による肌荒れ症状や炎症、アレルギー症状の他、健常人の肌荒れ、敏感肌、ニキビ肌に対する予防、及び改善に対し、それぞれの疾患に応じて最適な成分の適用が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明による新規化合物のＲＡＮＴＥＳ遺伝子の発現量の試験結果を示す図である。
【図２】本発明による新規化合物のエオタキシン遺伝子の発現量の試験結果を示す図である。
【図１】
2004269450.tif 000027
【図２】
2004269450.tif 000028