(57)【要約】【課題】感染症を引き起こす菌を死滅させるのではなく、感染症を引き起こす菌が産生する蛋白質毒素を中和解毒する因子を見出すこと。特にＲＮＡ  Ｎ−グリコシダーゼ作用を持つ蛋白質毒素の効果的な中和因子が見出すこと。【解決手段】ポリフェノールを有効成分として含有する細菌毒素中和剤であって、ポリフェノールがブドウ種子、果皮又は果実の搾汁液、リンゴ果実、又は未熟果の搾汁液、柿果実、柿の搾汁液、又は柿渋である細菌毒素中和剤。かつ細菌毒素がベロ毒素である前記細菌毒素中和剤。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリフェノールを有効成分として含有する細菌毒素中和剤。
【請求項２】
ポリフェノールがブドウ種子、果皮又は果実の搾汁液に由来するポリフェノールである請求項１記載の細菌毒素中和剤。
【請求項３】
ポリフェノールがリンゴ果実、又は未熟果の搾汁液に由来するポリフェノールである請求項１記載の細菌毒素中和剤。
【請求項４】
ポリフェノールが柿果実、柿の搾汁液、又は柿渋に由来するポリフェノールである請求項１記載の細菌毒素中和剤。
【請求項５】
ポリフェノールがブドウ種子、果皮又は果実の搾汁液に由来するポリフェノールであり、かつ細菌毒素がベロ毒素である請求項１記載の細菌毒素中和剤。
【請求項６】
ポリフェノールがリンゴ果実、又は未熟果の搾汁液に由来するポリフェノールであり、かつ細菌毒素がベロ毒素である請求項１記載の細菌毒素中和剤。
【請求項７】
ポリフェノールが柿果実、柿の搾汁液、又は柿渋に由来するポリフェノールであり、かつ細菌毒素がベロ毒素である請求項１記載の細菌毒素中和剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、ポリフェノール、とくにブドウまたはリンゴまたは柿に由来するポリフェノールを有効成分として含有する細菌毒素中和剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ＷＨＯの報告によると、感染症による死者は全世界で年間２０００万人にも達するとされ、２０世紀における医療技術の大きな進展にもかかわらず、人類に対する最大の脅威のひとつとなっている。
【０００３】
感染症の中でも、赤痢、ベロ毒素産生性大腸菌（ＶＴＥＣ）による出血性大腸炎などは、各々の病因菌がＲＮＡ  Ｎ−グリコシダーゼ作用を有する菌体外毒素を産生し、それらの菌体外毒素が生体内の機能性蛋白質を修飾することによりその本来の機能を失わせ、病態を発現させることが知られている。すなわち、赤痢菌が産生する志賀毒素、ＶＴＥＣが産生するベロ毒素（あるいは志賀様毒素とも称される）などは、ＲＮＡ  Ｎ−グリコシダーゼ作用を有する蛋白質毒素（ＲＮＡ  Ｎ−グリコシル化毒素）である。
【０００４】
ＲＮＡ  Ｎ−グリコシダーゼ作用とは、ＲＮＡのＮ−グリコシド結合を酵素的に加水分解する作用であり、この作用を持つ蛋白質毒素は、細胞の持つ蛋白質合成装置であるリボゾーム中のリボゾーマルＲＮＡを修飾し、不可逆的に不活化することによって細胞の蛋白質合成を停止させ、毒性を発現することが知られている。例えば、志賀毒素、ベロ毒素などは２８Ｓ  リボゾーマルＲＮＡの５’末端から４３２４番目のアデノシンのＮ−グリコシド結合を特異的に加水分解する。
【０００５】
ＲＮＡ  Ｎ−グリコシル化毒素を病原因子とする感染症の中でも、ＶＴＥＣによる感染症は近年先進国、発展途上国を問わず世界的に頻発しており、特にベロ毒素が血中に移行してしまった場合には、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）や脳症を発症し、死亡あるいは後遺症が残る場合もある、恐ろしい感染症である。日本でも、１９９６年に大阪府で６，０００名を超える感染者を出す空前の食中毒事件が起こった事は記憶に新しい。
【０００６】
現在、ＲＮＡ  Ｎ−グリコシル化毒素を病原因子とする感染症の治療には、病原菌に対する抗菌作用を持つ抗生物質が一般に用いられているが、抗生物質の投与によりその抗生物質に耐性の、より強力な病原菌が出現することが実際の医療現場では大きな問題となっており、抗生物質を用いない新たな治療法の開発が求められている。特にＶＴＥＣによる感染症の場合、抗生物質の投与によりむしろ大量のベロ毒素がＶＴＥＣによって生産され、症状をより重篤化させる（Ｍａｔｓｕｓｈｉｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，  １８１，  ２２５７−２２６０  （１９９９））とも言われており、抗生物質の投与に対する否定的な意見も多い。すなわち、抗生物質など、菌を死滅させる物質を用いない新たな医療方法の確立が早急に求められているのが実情である。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、これらの現状に鑑み、感染症を引き起こす菌を死滅させるのではなく、感染症を引き起こす菌が産生する蛋白質毒素を中和解毒する因子を見出すことにより、問題を解決することを試みた。もしも蛋白質毒素の効果的な中和因子、特にＲＮＡ  Ｎ−グリコシダーゼ作用を持つ蛋白質毒素の効果的な中和因子が見出されれば、その医学、産業上の意義には測り知れないものがある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、鋭意検討の結果、植物中に存在するポリフェノールの一種、特にブドウ、リンゴ、柿に含まれるポリフェノールが、ＲＮＡ  Ｎ−グリコシダーゼ作用を持つ蛋白質毒素を効果的に無毒化することを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
ここでいうポリフェノールとは、縮合型ポリフェノールの一種であり、フラバン−３−オールまたはフラバン−３，４−ジオールを構成単位として、４−６位や４−８位などで縮合もしくは重合により結合した化合物群であり、各種植物体に存在する縮合型ポリフェノールである。これらは酸処理によりシアニジン、デルフィニジン、ペラルゴニジン等のアントシアニジンを生成することから、プロアントシアニジン類とも称される。そして上記構成単位の２量体、３量体、４量体さらに１０〜３０量体以上の高分子のプロシアニジン、プロデルフィニジン、プロペラルゴニジン等のプロアントシアニジンおよびそれらの異性体等を含むものである。さらにこれらの３位、５位、７位にガロイル基がエステル結合している場合もある。さらに、ガロイル基の他に３位、５位、７位に糖を結合する配糖体の形をとることもある。
【００１０】
すなわち、本発明は、植物体に含まれるポリフェノール、特にブドウ、リンゴ、柿に含まれるポリフェノールを有効成分として含有する蛋白質毒素中和剤に関する。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明の細菌毒素中和剤に用いられるポリフェノールの原料としてはブドウ、柿、リンゴなどの植物体だけでなく、ワイン、果実酒、果実ジュースなど加工食品由来のものなども特に問題なく用いることができる。
【００１２】
その方法としては原材料を水、熱水、アルコール水溶液などで抽出し、必要であればポリフェノールに親和性の高い吸着樹脂カラムを用いてポリフェノールを精製する方法が挙げられる。
【００１３】
ポリフェノールを主成分とする製品は市販もされており、例えばぶどう種子を原料とする「グラヴィノール」（キッコーマン（株））、りんご未熟果を原料とする「アップルフェノン」（ニッカウヰスキー（株））、柿を原料とする「柿渋」（（株）トミヤマ）、海岸松の樹皮を原料とする「ピクノジェノール」（ホーファーリサーチ社（スイス））等である。これらは特に問題なく細菌毒素中和剤として利用することができる。また、これらをさらに精製、加工して細菌毒素中和剤とすることもできる。
【００１４】
これらの細菌毒素中和剤は、一般に使用される担体、助剤、添加剤等とともに製剤化することができ、常法に従って経口、非経口の製品として医薬品として用いることができ、また食品素材と混合して飲食品とすることができる。
【００１５】
医薬品は経口剤として錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シラップ剤などが、非経口剤として軟膏剤、クリーム、水剤などの外用剤、無菌溶液剤や懸濁剤などの注射剤などがある。これらの製品を医薬として人体に投与するときは、２ｍｇ〜５００ｍｇを１日に１ないしは数回、すなわち２ｍｇ〜１０００ｍｇの全日量で投与し、十分にその効果を奏しうるものである。
【００１６】
本発明の細菌毒素中和剤を含有する医薬品は、生理的に認めうるベヒクル、担体、賦形剤、統合剤、安定剤、香味剤などとともに要求される単位容量形態をとることができる。錠剤、カプセル剤に混和される佐薬は次のようなものである。トラガント、アラビアゴム、コーンスターチ、ゼラチンのような結合剤、微晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、全ゼラチン化澱粉、アルギン酸のような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤、ショ糖、乳糖、サッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油、チェリーのような香味剤など。また、カプセル剤の場合は上記の材料に更に油脂のような液体担体を含有することができ、また、他の材料は被覆剤として、または製剤の物理的形態を別な方法で変化させることができる。例えば、錠剤はシェラック、砂糖で被覆することができる。シロップまたはエリキシル剤は、甘味剤としてショ糖、防腐剤としてメチルまたはプロピルパラベン、色素およびチェリーまたはオレンジ香味のような香味剤を含有することができる。
【００１７】
注射剤のための無菌組成物は、注射用水のようなベヒクル中の活性物質、ゴマ油、ヤシ油、落花生油、綿実油のような天然産出植物油、またはエチルオレートのような合成脂肪ベヒクルを溶解または懸濁させる通常の方法によって処方することができる。また、緩衝剤、防腐剤、酸化防止剤などを必要に応じて配合することができる。外用剤としては基材としてワセリン、パラフィン、油脂類、ラノリン、マクロゴールなどを用い、通常の方法によって軟膏剤、クリーム剤などとすることができる。
【００１８】
本発明の細菌毒素中和剤を含有した飲食品は、上記製剤の形態でもよいが、あめ、せんべい、クッキー、飲料などの形態でそれぞれの食品原料に所要量を加えて、一般の製造法により加工製造することもできる。健康食品、機能性食品としての摂取は、病気予防、健康維持に用いられるので、経口摂取として１日数回に分けて、全日量として５ｍｇ〜５００ｍｇを含む加工品として摂取される。
【００１９】
これらの飲食品に細菌毒素中和剤を添加する際には、細菌毒素中和剤を粉末のまま添加してもよいが、好ましくは細菌毒素中和剤を１〜２％の水溶液またはアルコール水溶液の溶液あるいはアルコール溶液とし、飲食品に対し最終濃度が１０〜５０００ｐｐｍ、好ましくは１００〜１０００ｐｐｍとなるように添加することが望ましい。
【００２０】
【実施例】
以下、実施例を示すが本発明はこれに限定されるものではない。
【００２１】
実施例１（錠剤、カプセル剤）
市販ブドウ種子ポリフェノール  １０．０ｇ
乳糖                          ７５．０ｇ
ステアリン酸マグネシウム      １５．０ｇ
合  計                      １００．０ｇ
上記の各重量部を均一に混合し、常法に従って錠剤、カプセル剤とした。なお市販ブドウ種子ポリフェノールの代わりに、それぞれ市販リンゴ未熟果ポリフェノール、市販柿渋凍結の乾燥品を添加した錠剤、カプセル剤も同様に得た。
【００２２】
実施例２（散剤、顆粒剤）
市販ブドウ種子ポリフェノール  ２０．０ｇ
澱粉                          ３０．０ｇ
乳糖                          ５０．０ｇ
合  計                      １００．０ｇ
上記の各重量部を均一に混合し、常法に従って散剤、顆粒剤とした。なお市販ブドウ種子ポリフェノールの代わりに、それぞれ市販リンゴ未熟果ポリフェノール、市販柿渋凍結の乾燥品を添加した散剤、顆粒剤も同様に得た。
【００２３】
実施例３（注射剤）
市販ブドウ種子ポリフェノール    １．０ｇ
界面活性剤                      ９．０ｇ
生理食塩水                    ９０．０ｇ
合  計                      １００．０ｇ
上記の各重量部を加熱混合、滅菌して注射剤とした。なお市販ブドウ種子ポリフェノールの代わりに、それぞれ市販リンゴ未熟果ポリフェノール、市販柿渋凍結の乾燥品を添加した注射剤も同様に得た。
【００２４】
実施例４（飴）
ショ糖                        ２０．０ｇ
水飴（７５％固形分）            ７０．０ｇ
水                            ９．５ｇ
着色料                          ０．４５ｇ
香  料                          ０．０４５ｇ
市販ブドウ種子ポリフェノール    ０．００５ｇ
合  計                      １００．０ｇ
上記の各重量部の各成分を用い、常法に従って飴とした。なお市販ブドウ種子ポリフェノールの代わりに、それぞれ市販リンゴ未熟果ポリフェノール、市販柿渋凍結の乾燥品を添加した飴も同様に得た。
【００２５】
実施例５（ジュース）
濃縮ミカン果汁              １５．０ｇ
果  糖                          ５．０ｇ
クエン酸                        ０．２ｇ
香  料                          ０．１ｇ
色  素                          ０．１５ｇ
アスコルビン酸ナトリウム        ０．０４８ｇ
市販ブドウ種子ポリフェノール    ０．００２ｇ
水                          ７９．５ｇ
合  計                      １００．０ｇ
上記の各重量部の各成分を用い、常法に従ってジュースとした。なお市販ブドウ種子ポリフェノールの代わりに、それぞれ市販リンゴ未熟果ポリフェノール、市販柿渋凍結の乾燥品を添加したジュースも同様に得た。
【００２６】
実施例６（クッキー）
薄力粉                          ３２．０ｇ
全  卵                          １６．０ｇ
バター                          １６．０ｇ
砂  糖                          ２５．０ｇ
水                            １０．８ｇ
ベーキングパウダー                ０．１９８ｇ
市販ブドウ種子ポリフェノール      ０．００２  ｇ
合  計                        １００．０ｇ
上記の各重量部の各成分を用い、常法に従ってクッキーとした。なお市販ブドウ種子ポリフェノールの代わりに、それぞれ市販リンゴ未熟果ポリフェノール、市販柿渋凍結の乾燥品を添加したクッキーも同様に得た。
【００２７】
実施例７  ウサギ腸管におけるベロ毒素の液体貯留毒性の中和効果
生後１１〜１３週齢、体重約２ｋｇの雄日本白色ウサギを麻酔下開腹し、その回腸部約１０ｃｍを結紮し、袋状のループを作成した。ループ中に、一定量（１００ｎｇ）のベロ毒素と一定量（２００μｇ）の市販ブドウ種子ポリフェノールまたは市販リンゴ未熟果ポリフェノールまたは市販柿渋の凍結乾燥品を含有するＰＢＳ溶液１ミリリットルずつを注入した。ウサギを閉腹し、１昼夜安静に保ったのち、安楽死させ、ループ中に貯留した液体の体積とループ長さを測定した。ループ長さ当たりの液体の重量（ｍｌ／ｃｍ）を算出し、ベロ毒素による毒性の指標とした。結果を図１に示す。市販ブドウ種子ポリフェノールおよび市販リンゴ未熟果ポリフェノールおよび市販柿渋の凍結乾燥品はウサギ腸管ループにおけるベロ毒素の液体貯留毒性を中和した。
【００２８】
【発明の効果】
本発明の細菌毒素中和剤は、ポリフェノールを有効性分として含有し、ＲＮＡＮ−グリコシダーゼ作用を持つ細菌毒素を中和することにより、ＲＮＡ  Ｎ−グリコシダーゼ産生菌による感染症の予防／治療に優れた効果を表す。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例７の結果を表すグラフ。縦軸はループ長さ当たりの液体の重量（ｍｌ／ｃｍ）を示す。横軸の「毒素なし」はループ中にＰＢＳのみを加えたもの、「対照」はループ中にべロ毒素のみを１００ｎｇ  加えたもの、「ブドウ」はべロ毒素１００ｎｇと市販ブドウ種子ポリフェノール２００μｇを加えたもの、「リンゴ」はべロ毒素１００ｎｇと市販リンゴ未熟果ポリフェノール２００μｇを加えたもの、、「柿」は、べロ毒素１００ｎｇと市販柿渋の凍結乾燥品を２００μｇずつ加えたものの実験結果を示す。縦軸は数値は各々実験値（ｎ＝３）の平均値であり、エラーバーはその標準誤差を示す。
【図１】
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