(57)【要約】【課題】体内に摂取された内分泌攪乱化学物質による生体への悪影響を低減化する物質を含む組成物および当該悪影響を低減化する方法の提供。【解決手段】グルクロノラクトンを含む内分泌撹乱化学物質の影響を低減化する組成物。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルクロノラクトンを含む内分泌撹乱化学物質の影響を低減化する組成物。
【請求項２】
添加剤を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
グルクロノラクトンまたは請求項１〜２のいずれか１項に記載の組成物を含有する食品。
【請求項４】
グルクロノラクトンまたは請求項１〜２のいずれか１項に記載の組成物を含有する飼料。
【請求項５】
グルクロノラクトンを用いることを特徴とする内分泌撹乱化学物質の影響を低減化する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は内分泌撹乱化学物質の影響を低減化する組成物および内分泌撹乱化学物質の影響を低減化する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、世界各地で内分泌撹乱化学物質（ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）による生殖能力への悪影響や悪性腫瘍を引き起こす可能性等が指摘されており、内分泌撹乱化学物質の存在は人類を含めた数多くの生物の存続を危うくする大問題と考えられている。内分泌撹乱化学物質は、一般に環境ホルモンと呼ばれる。環境庁が１９９７年に発表した外因性内分泌撹乱化学物質問題に関する研究班中間報告書において、外因性内分泌撹乱化学物質としての疑いがある物質としてダイオキシン類、ポリ塩化ビフェニル類（ＰＣＢ）、ヘキサクロロベンゼン（ＨＣＢ）、ＤＤＴ、ビスフェノールＡ、フタル酸エステル類スチレンの２および３量体等の化学物質が挙げられている。
【０００３】
これらの内分泌撹乱化学物質は、樹脂原料、可塑剤、界面活性剤、農薬等に含まれており、排水、河川、湖沼、海水、土壌、地下水などに広く分布していることが報告されており、深刻な社会問題となっている。このような、内分泌撹乱化学物質を除去するために、これまで様々な提案がなされている。
【０００４】
特開２０００−２０２３０３号公報には、地下水、河川水、上下水道水、工業用廃水等に含まれる人体に有害な内分泌撹乱物質であるフェノールを除去する目的で、ホーランダイト型化合物とフェノールを水中において、溶存酸素の共存のもと、光照射下において接触させることにより、水中の内分泌撹乱物質であるフェノールを内分泌撹乱物質でないギ酸に転化することにより水中から除去することが教示されている。
【０００５】
特開２０００−２０２４７１号公報には、内分泌撹乱物質もしくは発ガン性物質を含有する汚水を物理化学的に処理する方法として、内分泌撹乱物質もしくは発ガン性物質を含有する汚水をオゾン含有気体、またはオゾン含有気体および過酸化水素により処理する第一工程に導入し、ついで（Ａ）紫外線、（Ｂ）紫外線およびオゾン含有気体、（Ｃ）紫外線および過酸化水素、または（Ｄ）紫外線およびオゾン含有気体および過酸化水素により処理する第二工程に導入することを特徴とする、内分泌撹乱物質もしくは発ガン性物質を含有する汚水の処理方法が開示されている。
【０００６】
特開２０００−２０２４９３号公報には、内分泌撹乱物質もしくは発ガン性物質を含有する有機汚水の処理方法として、被処理水に対し、オゾン、過酸化水素、紫外線のいずれかまたは二つ以上を組み合わせて用いる前段の水処理工程により処理し、その処理水をさらに生物処理、凝集処理、濾過処理、活性炭処理の少なくとも一つ、又は二つ以上を組み合わせて行う後段の水処理工程により処理することを特徴とする内分泌撹乱物質もしくは発ガン性物質を含有する有機汚水の処理方法が開示されている。
【０００７】
特開２０００−２１８２７８号公報には、内分泌撹乱性物質を含有する水に、凝集剤および主細孔径が１２オングストローム以上である疎水性材料を添加し固液分離処理することを特徴とする、内分泌撹乱性物質含有水の処理方法が開示されている。
【０００８】
特開２０００−２５４６６６号公報には、内分泌撹乱性物質を含有する水を触媒機能を有する疎水性多孔体と接触させ、内分泌撹乱性物質を該多孔体に吸着させるとともに、内分泌撹乱性物質を酸化剤の添加、還元剤の添加、紫外線の照射又は酸化剤の添加と紫外線の照射のいずれかにより化学的に分解することを特徴とする内分泌撹乱性物質含有水の処理方法が開示されている。
【０００９】
特開２００１−４７０４４号公報には、内分泌撹乱性物質含有水を、触媒機能を有する疎水性膜に通水することを特徴とする内分泌撹乱性物質含有水の処理方法が開示されている。
【００１０】
特開２００２−８６１４４号公報には、飲料水中の内分泌撹乱化学物質を吸着剤に吸着させて、水溶液中の内分泌撹乱化学物質を低減させることを特徴とする内分泌撹乱化学物質の除去方法が開示されている。
【００１１】
上記各公報に記載されている技術はいずれも内分泌撹乱化学物質の除去に関するものである。
【００１２】
ジエチルスチルベストロール（ｄｉｅｔｈｙｌｓｔｉｌｂｅｓｔｒｏｌ：ＤＥＳ）は１９５０−１９６０年代にかけ、流産早産防止薬として欧米で多くの妊婦に投与された合成エストロジェンである。１９７０年代の初期には、投与された母親から生まれた女子の膣腺癌の発生や男子生殖器の異常との関連性が指摘され始めた。実験動物におけるＤＥＳの毒性について数多く報告されているが、その多くは胎児への暴露または新生児への暴露である。例えば、出生直後の新生仔マウスにＤＥＳを投与すると、投与された雄マウスは４カ月後、精巣重量の低下、精巣上体における精子数減少、精子運動能の低下が惹起されることが報告されている。したがって、ＤＥＳも強力な内分泌撹乱化学物質といえる。
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】
上述のように、種々の内分泌撹乱化学物質の影響を除去あるいは低減化することが世界的に喫緊の課題となっている。
【００１４】
本発明者らは、従来技術のように服用前の除去処理を行う方法では完全な防御は困難であると考え、服用された場合にも除去可能な新たなアプローチが必要であると考えた。そこで、本発明者らは、これまで成熟雄ラットにおけるＤＥＳの精巣毒性（精巣萎縮、曲精細管萎縮、精子数減少）について検討してきた。
【００１５】
この実験系を用い、グルクロノラクトン（ｇｌｕｃｕｒｏｎｏｌａｃｔｏｎｅ）の併用投与がＤＥＳの精巣毒性に及ぼす影響について鋭意研究を進めた。ＤＥＳを用いたのは、ホルモン様物質の中でも、特に強力な活性を示すためで、ＤＥＳの毒性を抑制することができる物質であれば他の物質に対しても有効性を発揮することができると考えたからである。その結果、グルクロノラクトンが体内に摂取されたＤＥＳの悪影響を低減化できることを見いだし、この知見に基づいて本発明を完成した。
【００１６】
【課題を解決するための手段】
本発明は、グルクロノラクトンを含む内分泌撹乱化学物質の影響を低減化する組成物を提供する。この組成物には、添加剤を含有させることができる。
【００１７】
また、本発明は、グルクロノラクトンまたは上記組成物を含有する食品を提供する。
【００１８】
加えて、本発明は、グルクロノラクトンまたは上記組成物を含有する飼料を提供する。
【００１９】
更に、本発明は、グルクロノラクトンを用いることを特徴とする内分泌撹乱化学物質の影響を低減化する方法を提供する。
【００２０】
【発明の実施の形態】
本発明において対象となる内分泌撹乱化学物質は、内分泌系のどこかの段階に影響を与え、その結果として障害を残すような作用を持つ化学物質を意味する。
【００２１】
本発明の組成物は添加剤を含むことができる。本発明において用いられる添加剤は、医薬の製造および食品の製造において使用されている添加剤であれば特に制限はない。例えば、甘味剤、安定剤、乳化剤、ｐＨ調整剤、崩壊剤などが挙げられる。
【００２２】
また、甘味剤としてはサッカリンナトリウム、カンゾウ抽出物、白糖、ハチミツ、果糖、ブドウ糖果糖液糖など、安定剤としてはカルボキシメチルセルロースナトリウム、ペクチン、アスコルビン酸、トコフェロール、エタノール、安息香酸ナトリウムなど、乳化剤としてはグリセリン脂肪酸エステル、植物レシチン、プロピレングリコール、大豆レシチンなど、ｐＨ調節剤としてはｄｌ−リンゴ酸、乳酸ナトリウム、クエン酸、リン酸など、崩壊剤としては炭酸水素ナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、ショ糖脂肪酸エステルなどが挙げられる。
【００２３】
また、本発明の組成物は、活性酸素ラジカルスカベンジャーを更に含むことができる。活性酸素ラジカルは、生体へ悪影響を及ぼすばかりでなく、食品その他における品質劣化の引き金となったり加速したりすることは、著名な事実として知られているところである。本発明において使用することのできる活性酸素ラジカルスカベンジャーは特に限定されないが、例えば、カテキン類、タンニン・ポリフェノール類、アントシアニン類、フラボノイド類およびサポニン類から選ばれる１種または２種以上の物質である。
【００２４】
カテキン類としては、カテキン、カテキンガレート、エピカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキン、エピガロカテキンガレート、ガロカテキン、ガロカテキンガレート、カテキン類の加水分解でＢ環部分が遊離した没食子酸などが例示される。
【００２５】
タンニン・ポリフェノール類としては、カシ・ヌルデの虫こぶより得られる没食子、五倍子のタンニン、フラバン−３−オール骨格を持ったカテキン類が縮重合（多くはおよそ数分子〜数十分子）したもの等が例示される。
【００２６】
アントシアニン類としては、シアニジン配糖体（シアニン、シソニン、クリサンテミン他）、デルフィニジン配糖体（ナスニン、ヒアシン、ベリラミン他）、ベラルゴニジン配糖体（ベラルゴニン、フラガリン他）、マルビジン配糖体（オエニン、ネグレチン他）等が挙げられる。
【００２７】
フラボノイド類としては、フラボン系（ルテオリン、アビゲニン他）、イソフラボン系（ゲニスチン、ダイゼイン他）、フラバノン系（ヘスペリジン、ナリンゲニン、シトロネチン他）、フラボノール系（ルチン、ケルセチン、ミリセチン、ケンフェロール他）、フラバナール系（ジヒドロケルセチン他）などが挙げられる。
【００２８】
サポニン類としては、トリテルペノイド系サポニン、ステロイド系サポニンが挙げられる。
【００２９】
グルクロノラクトンまたは本発明の組成物は食品あるいは飼料に添加することができる。対象となる食品および飼料は特に制限されない。また、保健機能食品であってもよい。なお、保健機能食品には、特定保健用食品および栄養機能食品が含まれる。対象となる食品としては、乳製品、清涼飲料水、菓子類、即席食品類、調味料、油脂製品などが挙げられる。また、対象となる飼料は、家畜用飼料、ペット用飼料、養殖動物用飼料のすべてである。添加割合は、グルクロノラクトンに換算して、食品１００ｇ当たり０．０１ｇ〜１０ｇ、飼料１００ｇ当たり０．０１ｇ〜１０ｇの範囲で適宜選択することができる。
【００３０】
【実施例】
以下に、グルクロノラクトンの併用投与がＤＥＳの精巣毒性に及ぼす影響について行った実施例およびその結果を記載する。
【００３１】
１．供試動物：Ｗｉｓｔｅｒ系ラット、雄、９週齢（８週齢で購入、１週間馴化）
２．投与期間：４週間（隔日投与）
３．投与方法：
１）ＤＥＳ：オリーブ油に溶解し、５００μｌを強制経口投与した。
２）グルクロノラクトン：蒸留水に溶解し、自由飲水とした。
４．投与物質および投与量
表１に示すように、８群に分け、各群５匹のラットを使用した。
【００３２】
【表１】
2004155671.tif 000002
【００３３】
５．測定
次の１）〜５）の測定を行った。
１）精巣の肉眼所見
精巣の萎縮の程度、血管の走行などの肉眼的観察を行った。
２）精巣の相対重量
各個体の体重当たりの精巣重量を算出した。
【００３４】
３）精巣の病理所見
４％パラホルムアルデヒドで固定した精巣組織を、パラフィンで包埋、薄切の後、組織切片を作成した。この切片をヘマトキシリン・エオジンにより染色を行った。その後、曲精細管、ラディッヒ細胞、セルトリ細胞、精原細胞および精子などを観察した。
【００３５】
４）精巣の曲精細管直径
上記と同様に組織切片を作成の後、基底膜の構成成分であるラミニンを免疫組織染色した。１検体あたり１００個の曲精細管の直径を測定し、その平均値より各群の曲精細管の直径を比較した。
【００３６】
結果を図１〜図７に示す。
図１は、ＤＥＳの慢性毒性に対するグルクロノラクトンの影響（精巣相対重量％）を示すグラフである。図１から明らかなように、中濃度（０．１ｍｇ／匹）ＤＥＳ投与群において、グルクロノラクトン投与によりわずかな精巣相対重量の増加が確認された。
【００３７】
図２は、ＤＥＳの慢性毒性に対するグルクロノラクトンの影響（精巣肉眼所見）を示す写真である。図２から明らかなように、中濃度（０．１ｍｇ／匹）ＤＥＳ投与群において、ＤＥＳ投与による精巣萎縮（精巣重量の低下）がグルクロノラクトンの投与により軽減された。
【００３８】
図３は、ＤＥＳの慢性毒性に対するグルクロノラクトンの影響（精巣病理組織所見）を示す顕微鏡写真である。図３から明らかなように、ＤＥＳ投与により惹起された曲精細管萎縮がグルクロノラクトン投与により軽減された。
【００３９】
図４は、ＤＥＳの慢性毒性に対するグルクロノラクトンの影響（精巣病理組織所見）を示す顕微鏡写真である。図４から明らかなように、高濃度（１ｍｇ／匹）および中濃度（０．１ｍｇ／匹）のＤＥＳ投与により惹起された精子の合成阻害および曲精細管萎縮がグルクロノラクトン投与により軽減された。
【００４０】
図５は、ＤＥＳの慢性毒性に対するグルクロノラクトンの影響（曲精細管基底膜の免疫染色）を示す顕微鏡写真である。曲精細管の萎縮の程度（直径）を観察するために、曲精細管の基底膜のみを染色した。図５から明らかなように、ＤＥＳのすべての濃度において、グルクロノラクトン投与による精細管萎縮の抑制が認められた。
【００４１】
図６は、ＤＥＳの慢性毒性に対するグルクロノラクトンの影響（１視野あたりの曲精細管数）を示すグラフである。１視野あたりの曲精細管数は曲精細管の直径を反映している。図６から明らかなように、中濃度（０．１ｍｇ／匹）のＤＥＳ投与による曲精細管の萎縮がグルクロノラクトン投与により軽減された。
【００４２】
図７は、ＤＥＳの慢性毒性に対するグルクロノラクトンの影響（曲精細管の直径）を示すグラフである。図７から明らかなように、高濃度（１ｍｇ／匹）および中濃度（０．１ｍｇ／匹）のＤＥＳ投与による曲精細管の萎縮がグルクロノラクトン投与により軽減された。
【００４３】
６．考察
本発明者らはこれまでに、ＤＥＳが成熟雄ラットに対して精巣および曲精細管の萎縮、精子の合成阻害などの毒性、またその毒性発現メカニズムについて検討した上記実施例により次のことが確認できた。
【００４４】
１）成雄ラットにＤＥＳを投与することで精巣相対重量の減少が確認された（図１）。
２）ＤＥＳ（０．１ｍｇ／匹）を投与した群において、グルクロノラクトンを併用投与することで、統計的に有意な差はなかったが、わずかな精巣相対重量減少の抑制傾向が認められた。
【００４５】
３）精巣の病理組織所見において、ＤＥＳとグルクロノラクトンを併用したすべての群において、曲精細管の萎縮の抑制が認められた（図３−５、６、７）。
４）ＤＥＳ投与による精子数減少（ＤＥＳ：１ｍｇ／匹を投与した群では精子が消失していた）も抑制された（図４）。
【００４６】
【発明の効果】
本発明によるグルクロノラクトンを含む組成物は、体内に摂取された内分泌撹乱化学物質の生体への悪影響を低減するものであり、食品、飼料を始め種々の分野において幅広い応用が期待される。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＤＥＳの慢性毒性に対するグルクロノラクトンの影響（精巣相対重量％）を示すグラフである。
【図２】ＤＥＳの慢性毒性に対するグルクロノラクトンの影響（精巣肉眼所見）を示す写真である。
【図３】ＤＥＳの慢性毒性に対するグルクロノラクトンの影響（精巣病理組織所見）を示す顕微鏡写真である。
【図４】ＤＥＳの慢性毒性に対するグルクロノラクトンの影響（精巣病理組織所見）を示す顕微鏡写真である。
【図５】ＤＥＳの慢性毒性に対するグルクロノラクトンの影響（曲精細管基底膜の免疫染色）を示す顕微鏡写真である。
【図６】ＤＥＳの慢性毒性に対するグルクロノラクトンの影響（１視野あたりの曲精細管数）を示すグラフである。
【図７】ＤＥＳの慢性毒性に対するグルクロノラクトンの影響（曲精細管の直径）を示すグラフである。
【図１】
2004155671.tif 000003
【図２】
2004155671.tif 000004
【図３】
2004155671.tif 000005
【図４】
2004155671.tif 000006
【図５】
2004155671.tif 000007
【図６】
2004155671.tif 000008
【図７】
2004155671.tif 000009
【手続補正書】
【提出日】平成15年1月8日(2003.1.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
2004155671.tif 000010
【図２】
2004155671.tif 000011
【図３】
2004155671.tif 000012
【図４】
2004155671.tif 000013
【図５】
2004155671.tif 000014
【図６】
2004155671.tif 000015
【図７】
2004155671.tif 000016