(57)【要約】【課題】被験者への負担が少なく、簡便かつ正確で、客観的にトラウマとなる心的障害の有無の判定を行うことができる心理判定方法を提供する。【解決手段】被験者の唾液中のクロモグラニンＡ濃度または総量、また場合により唾液中のタンパク質濃度を測定し、該クロモグラニンＡ濃度が０．５ｐｍｏｌ／ｍＬ以下の場合、該クロモグラニンＡ総量が０．８ｐｍｏｌ以下の場合、および該クロモグラニンＡ濃度を該タンパク質濃度で除した値が１以下の場合に、被験者がトラウマとなる心的障害を有すると判定することを特徴とする心理判定方法。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者の唾液中のクロモグラニンＡ濃度を測定し、該濃度が０．５ｐｍｏｌ／ｍＬ以下の場合に、被験者がトラウマとなる心的障害を有すると判定することを特徴とする心理判定方法。
【請求項２】
被験者の唾液中のクロモグラニンＡ総量を測定し、該総量が０．８ｐｍｏｌ以下の場合に、被験者がトラウマとなる心的障害を有すると判定することを特徴とする心理判定方法。
【請求項３】
被験者の唾液中のクロモグラニンＡ濃度およびタンパク質濃度を測定し、該クロモグラニンＡ濃度を該タンパク質濃度で除した値が１以下の場合に、被験者がトラウマとなる心的障害を有すると判定することを特徴とする心理判定方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、心理判定方法に関する。より詳しくは、唾液中のクロモグラニンＡの濃度または総量に基づいて、被験者がトラウマとなる心的障害を有するか否か判定する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
トラウマ（Ｔｒａｕｍａ）とは、心的外傷とも呼ばれる精神的な外傷であり、震災、交通事故、強姦、児童虐待等のような自らの処理能力を超える強烈な生活体験に起因して生じる。ヒトの心には、そのような強烈な体験に関する記憶、感覚、感情等をひとかたまりにして、心の他の領域に影響を及ぼさないようにする働きがあるけれども、何らかの原因で該体験に関する記憶が後に蘇ると、その記憶は非常に新鮮なまま保存されているために日常生活における著しい障害となる。
【０００３】
しかしながら、トラウマとなる心的障害を有するか否かの判定は、その対象が外部に表出し難い心的内部の現象であるため一般に困難である。例えば、特開２００２−１１２９８１公報には、被験者に画面上のターゲットを定められた順序でポイントさせることにより、精神機能や脳機能を評価する方法が開示されている。また、被験者に質問を行い、その回答内容から心理判定を行うロールシャッハ法およびミネソタモーティブルパーソナリティ法も知られている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、従来の心理判定方法は、特開２００２−１１２９８１公報に開示の方法がごとく被験者に多種の行為を強いるものであったり、またロールシャッハ法およびミネソタモーティブルパーソナリティ法のように問答形式で長時間を要するものであったりした。そのため被験者に対する負担が大きく、また正確な診断が行えない場合があった。
【０００５】
従って本発明の目的は、被験者への負担が少なく、簡便かつ正確で、客観的にトラウマとなる心的障害の有無の判定を行うことができる心理判定方法を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は上記の課題に鑑み鋭意研究を行った結果、被験者の唾液中のクロモグラニンＡの濃度、または唾液中のクロモグラニンＡの総量、または唾液中のクロモグラニンＡの濃度を唾液中のタンパク質の濃度で除した値は、被験者がトラウマとなる心的障害を有するか否かを反映していることを見出した。そしてこれらの値が基準値より少ないと、被験者が該心的障害を有していると判断し得ることを発見して本発明を完成させた。
【０００７】
即ち、本願請求項１に係る心理判定方法は、被験者の唾液中のクロモグラニンＡ濃度を測定し、該濃度が０．５ｐｍｏｌ／ｍＬ以下の場合に、被験者がトラウマとなる心的障害を有すると判定することを特徴とする。
また本願請求項２に係る心理判定方法は、被験者の唾液中のクロモグラニンＡ総量を測定し、該総量が０．８ｐｍｏｌ以下の場合に、被験者がトラウマとなる心的障害を有すると判定することを特徴とする。
さらに本願請求項３に係る心理判定方法は、被験者の唾液中のクロモグラニンＡ濃度およびタンパク質濃度を測定し、該クロモグラニンＡ濃度を該タンパク質濃度で除した値が１以下の場合に、被験者がトラウマとなる心的障害を有すると判定することを特徴とする。
【０００８】
【発明の実施の形態】
クロモグラニンＡ（ＣｇＡ）は、可溶性の酸性タンパク質であるクロモグラニン類の一種であり、クロム親和性細胞中に見出すことができる。またＣｇＡはカテコールアミンおよびペプチドホルモンを分泌する様々なニューロンおよびパラニューロン中の分泌腺細胞中にも貯蔵されており、内臓への刺激に応答してアドレナリンおよびノルアドレナリンと共に放出される。さらに、激しい運動が血漿中のＣｇＡ濃度を増加させることも知られている。ＣｇＡが生体中で果たす機能の詳細については未だ不明であるけれども、本発明者等は、唾液中のＣｇＡが被験者のトラウマとなる心的障害の有無を反映し、唾液中のＣｇＡがある基準より少ない場合に被験者は該心的障害を有すると評価できることを見出した。
【０００９】
ＣｇＡ濃度または総量の測定方法は特に限定されないけれども、特開平１１−１５３５９８号公報に記載の免疫学的測定方法が好ましい。該方法は、ヒトＣｇＡのアミノ酸配列のうちの一部、具体的には３４４〜３７４残基に相当する以下のアミノ酸配列（Ｉ）
ＥＥＥＥＤ　ＮＲＤＳＳ　ＭＫＬＳＦ　ＲＡＲＡＹ
ＧＦＲＧＰ　ＧＰＱＬＲ　Ｒ　　　　　　　　　　　（Ｉ）
を有するペプチドを抗原としてヒトを除く温血動物に免疫し、産出したヒトＣｇＡに特異的な反応を有する抗体を用いたイムノアッセイからなる。この方法により、ヒトの組織、血液、尿、骨髄液等の中に存在するＣｇＡおよびその関連ペプチドを有効に測定でき、また唾液中のＣｇＡ濃度を測定することもできる。
【００１０】
さらにこの方法に基づき、測定プレート、抗原、抗体、試薬等の前処理および調剤方法を最適化した以下の要素：
ａ）抗ＩｇＧ抗体を固定化した複数のウェルを有する測定プレートと、
ｂ）アミノ酸配列（Ｉ）
ＥＥＥＥＤ　ＮＲＤＳＳ　ＭＫＬＳＦ　ＲＡＲＡＹ
ＧＦＲＧＰ　ＧＰＱＬＲ　Ｒ　　　　　　　　　　　（Ｉ）
を有するペプチドを緩衝液に溶解し、そしてこれを凍結乾燥して得られる標準抗原と、
ｃ）アミノ酸配列（Ｉ）のＮ末端側にビオチニル基および二つのグリシン残基が結合したアミノ酸配列を有するペプチドを緩衝液に溶解し、そしてこれを凍結乾燥して得られるビオチン標識抗原と、
ｄ）前記アミノ酸配列（Ｉ）を有するペプチドを温血動物に免疫して得られる抗血清からＩｇＧ抗体を精製し、該ＩｇＧ抗体画分を緩衝液に溶解し、そしてこれを凍結乾燥して得られる特異抗体と、
ｅ）ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼを緩衝液に溶解し、そしてペルオキシダーゼ共役安定保存液で希釈して得られるストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ溶液と、
ｆ）発色剤と、
ｇ）反応停止液と、
ｈ）緩衝液
からなる測定キットを用いたＣｇＡ濃度の測定は、操作が簡単かつ高感度であり、また測定キットの長期間保存も可能であることから非常に好ましい。
【００１１】
被験者からの唾液検体の採取は、例えばサリベット（ザールステット社製）を用いて行う。実際には、先ずサリベットから滅菌済みの円筒スポンジを取り出し、被験者に該スポンジを約４５秒程度噛ませ、その後、円筒スポンジをサリベット本体に戻し遠心分離を行うことによって０．５〜１．５ｍＬの唾液検体を得ることができる。
【００１２】
上記のようにして測定した被験者の唾液中のＣｇＡ濃度に、採取した唾液検体の体積を乗ずることにより、唾液中のＣｇＡ総量を得ることができる。
また、唾液中のタンパク質濃度の測定は既に知られている方法に基づいて行うことができ、例えばＬｏｗｒｅｙ法や、バイオラッド社製のタンパク質測定キットを用いて測定することができる。
【００１３】
こうして測定した唾液中のＣｇＡ濃度、唾液中のＣｇＡ総量、または唾液中のＣｇＡ濃度を唾液中のタンパク質濃度で除した値に関して、ＣｇＡ濃度が０．５ｐｍｏｌ／ｍＬ以下、ＣｇＡ総量が０．８ｐｍｏｌ以下、そしてＣｇＡ濃度をタンパク質濃度で除した値が１以下である場合、被験者はトラウマとなる心的障害を有していると判定される。一方で、ＣｇＡ濃度が１．０ｐｍｏｌ／ｍＬ以上、ＣｇＡ総量が１．５ｐｍｏｌ以上、そしてＣｇＡ濃度をタンパク質濃度で除した値が２以上である場合、被験者はトラウマとなるような心的障害は有していないと判定することができる。
【００１４】
ところで、ＣｇＡ濃度が０．５〜１．０ｐｍｏｌ／ｍＬ、ＣｇＡ総量が０．８〜１．５ｐｍｏｌ、そしてＣｇＡ濃度をタンパク質濃度で除した値が１〜２である場合には、被験者はトラウマとなる心的障害を有している可能性があると判定される。このように心的障害を有していると判定し得る基準値と、心的障害を有していないと判定し得る基準値の間にグレーゾーンとも言うべき一定の範囲が存在するのは、トラウマの存在が心的内部現象であることに起因する判定の困難さ、個人差等を考慮して、より確実に心理判定を行うためである。
【００１５】
ＣｇＡ濃度、ＣｇＡ総量、またはＣｇＡ濃度をタンパク質濃度で除した値のいずれかを用いた判定の結果が、基準値に近かったりまた前記グレーゾーンに含まれたりして、一種の判定方法では被験者のトラウマとなる心的障害の有無が決定し難い場合であっても、複数の値を利用して二種以上の判定方法を組み合わせて用いることによりより正確な判定を行なうことができる。
【００１６】
【実施例】
以下の実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されることはない。
【００１７】
実施例１：クロモグラニンＡの測定
１）準備
以下のようにして測定に用いる各要素を調製した。
ａ）測定プレートの調製
９６ウェルプレート（ＭａｘｉＳｏｒｐ　Ｎｕｎｃ社製）の各ウェルに０．０１Ｍリン酸緩衝液で２００倍に希釈したヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体（ＩＣＮ／ＣＡＰＰＥＬ社製）を１００μＬずつ分注した。２５℃で２０時間静置した後、上清を捨て、蒸留水で４倍に希釈したブロッキング剤（商品名：ブロックエース、大日本製薬株式会社製）を各ウェルに３５０μＬずつ分注した。４℃で２日間静置した後、上清を捨て、３％スクロース含有緩衝液を各ウェルに２００μＬずつ分注した。４℃で２日間静置した後、上清を捨て、プレートを転倒させて３日間乾燥させた。
ｂ）標準抗原溶液の調製
ヒトＣｇＡの３４４〜３７４残基に相当するアミノ酸配列（前記アミノ酸配列（Ｉ））を有するペプチドを合成し、該合成ペプチドをリン酸緩衝液に溶解して４μｍｏｌ／ｍＬの溶液を調製し、該溶液を２５μＬずつ分注して凍結乾燥した。凍結乾燥後、０．５％のウシ血清アルブミン、０．０２５ＭのＥＤＴＡおよび０．１５ＭのＮａＣｌを含有する０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）１ｍＬに再溶解した。
ｃ）ビオチン標識抗原溶液の調製
ヒトＣｇＡの３４４〜３７４残基に相当するアミノ酸配列（前記アミノ酸配列（Ｉ））のＮ末端側にビオチニル基および二つのグリシン残基が結合したアミノ酸配列を有するペプチドを合成し、該合成ペプチドをリン酸緩衝液に溶解して３０ｎｇ／ｍＬの溶液を調製し、該溶液を１ｍＬずつ分注して凍結乾燥した。凍結乾燥後、蒸留水６ｍＬに再溶解した。
ｄ）特異抗体溶液の調製
ヒトＣｇＡの３４４〜３７４残基に相当するアミノ酸配列（前記アミノ酸配列（Ｉ））を有するペプチドを合成し、該合成ペプチドを抗原としてウサギに免疫して得られた血清（ウサギ抗ヒトＣｇＡ（３４４〜３７４）血清ＲＹ７６、株式会社矢内原研究所製）を、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ由来のプロテインＡを結合させた多孔性セルロースゲル（商品名：プロテインＡ−セルロファイン、チッソ株式会社製）を充填したカラムに通して精製し、ＩｇＧ抗体をセルロースゲルに吸着させた。次いで該カラムに０．１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ４．０）を通し、ＩｇＧ抗体を溶離させ、得られたＩｇＧ抗体画分を限外濾過により濃縮して精製前と等量とし、その後リン酸緩衝液で４倍に希釈した。得られたＩｇＧ抗体画分を３ｍＬずつ分注して凍結乾燥し、凍結乾燥後、蒸留水１２ｍＬに再溶解した。
ｅ）ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ溶液の調製
ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ社製）を１ｍＬのリン酸緩衝液に溶解させ、さらにペルオキシダーゼ共役安定保存液（商品名：Ｇｕａｒｄｉａｎ、Ｐｉｅｒｃｅ社製）で５，０００倍に希釈した。
ｆ）発色剤の調製
０．０１５％の過酸化水素水を含む０．１Ｍリン酸ナトリウム−クエン酸緩衝液１３ｍＬに、１０ｍｇのｏ−フェニレンジアミンを溶解した。
ｇ）反応停止液の調製
反応停止液として２Ｎ硫酸を調製した。
【００１８】
２）クロモグラニンＡの測定
２．１）希釈標準抗原溶液の調製
標準抗原溶液ｂ）０．１ｍＬと標準抗原溶液ｂ）の調製に用いた０．０１Ｍリン酸緩衝液０．２ｍＬとを混合し、３３．３３ｐｍｏｌ／ｍＬの希釈標準抗原溶液を得た。さらにこの溶液について同様の３倍希釈の操作を６回行い、１１．１１、３．７０、１．２３、０．４１、０．１４および０．０５ｐｍｏｌ／ｍＬの希釈標準抗原溶液を得た。また０ｐｍｏｌ／ｍＬの希釈標準抗原溶液として、該０．０１Ｍリン酸緩衝液をそのまま用いた。
２．２）抗体反応
測定プレートａ）を０．０５％のＴｗｅｅｎ２０および０．９％のＮａＣｌを含有する生理食塩水で３回洗浄した。洗浄後、測定プレートの各ウェルに、標準抗原溶液ｂ）の調製に用いた０．０１Ｍリン酸緩衝液５０μＬ、希釈標準抗原溶液２５μＬまたは測定検体２５μＬ、ビオチン標識抗原溶液ｃ）５０μＬ、および特異抗体溶液ｄ）１００μＬを順に分注し、２５℃で一晩（１６〜２０時間）静置した。
２．３）定量
抗体反応の終了後、測定プレートａ）を前記生理食塩水で３回洗浄し、次いでストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ溶液ｅ）１００μＬを各ウェルに分注し、室温で２時間プレート振盪機を用いて混和した。その後、測定プレートａ）を前記生理食塩水で４回洗浄し、発色剤ｆ）１００μＬを各ウェルに分注し、室温で３０分間静置した。３０分経過後、反応停止液ｇ）１００μＬを各ウェルに分注した。こうして処理した測定プレートについてプレートリーダーにより波長４９２ｎｍでの吸光度を測定した。希釈標準抗原溶液についての測定値より検量線を作成し、そして該検量線に基づいて測定検体中のクロモグラニンＡ濃度を決定した。
【００１９】
実施例２：心理判定
ある精神クリニックに来院した１２人の患者について、唾液中のクロモグラニンＡを測定して心理判定を行った。
先ず、唾液採取具：サリベット（ザールステット社製）を用い、被験者にサリベットの円筒スポンジを噛ませて各被験者より唾液を採取し、各唾液を３，０００ｒｐｍで５分間遠心分離して測定検体とした。クロモグラニンＡの測定前に、各測定検体の体積をメスシリンダーで計量した。
得られた測定検体について、実施例１の方法に従ってクロモグラニンＡ濃度を測定し、またタンパク質測定キット（バイオラッド社製）を用いてタンパク質濃度を測定した。
患者の性別および年齢、得られたクロモグラニンＡ濃度、クロモグラニンＡ総量およびクロモグラニンＡ濃度をタンパク質濃度で除した値、並びに臨床諮問によるトラウマの有無の判定結果を表１に図示する。
【００２０】
【表１】
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臨床諮問の結果、Ａは幼児期に父親から暴行を受けており、Ｂは勤務中に自らの不注意で同僚に重傷を負わせており、ＥおよびＦは共に強姦を受けており、Ｉは電車事故に遭遇しかけており、そしてＬは幼少期に父親から近親相姦を受けていたことが判った。そして本発明の心理判定方法は、従来の臨床諮問による判定の結果と同じ結果を導いた。
【００２１】
【発明の効果】
本発明によれば、唾液中のクロモグラニンＡの濃度、総量、またはクロモグラニンＡ濃度をタンパク質濃度で除した値を測定し、測定結果に基づいて被験者のトラウマとなる心的障害の有無を判断することにより、簡単、迅速かつ客観的に該心的障害の判定を行なうことができる。