(57)【要約】【課題】腹水又は胸水の滲出の予防又は治療法については、満足な効果が得られていない。【解決手段】ＡＭＦの作用を抑制する物質を有効成分とする新規な腹水又は胸水の滲出の予防又は治療剤を見出した。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＭＦの作用を抑制する物質を有効成分とする腹水又は胸水の滲出の予防又は治療剤
【請求項２】
有効成分がＡＭＦの中和抗体である請求項１記載の腹水又は胸水の滲出の予防又は治療剤
【請求項３】
腹水又は胸水が癌性腹膜炎又は癌性胸膜炎に由来する腹水又は胸水である請求項１又は２に記載の腹水又は胸水の滲出の予防又は治療剤
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ＡＭＦ（Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ　Ｍｏｔｉｌｉｔｙ　Ｆａｃｔｏｒ：自己分泌（型）運動（性）因子）の作用を抑制することを特徴とする腹水又は胸水の滲出の予防又は治療剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
腹腔内に貯留した体液である腹水は、性状の違いにより漏出液（ｔｒａｎｓｕｄａｔｅ）と滲出液（ｅｘｕｄａｔｅ）に分けられる。漏出液の成因は水分の排除に関わる機械的なものであり、門脈圧の上昇、血漿膠質性浸透圧の低下、腎での排泄能の低下や再吸収亢進等がある。
【０００３】
一方、滲出液は結核等による腹膜の炎症や癌の腹膜転移等を原因とする。腹腔内に広く播種した癌が発育し、腹水貯留の症状をおこすが、多くは進行癌の末期あるいは術後再発の一形態として起こる。滲出液による腹水はその性状がしばしば血性であり、播種した癌による場合、腸管運動障害により消化管は亜イレウス状態を呈する状態となり、更に進行すれば真のイレウス（閉塞）となる。それに伴う悪液質の進行により全身状態が悪化する。
【０００４】
胸腔は、通常は少量の空気が存在する、肺臓を覆う胸膜と胸壁側の胸膜に囲まれた閉鎖空間であり、呼吸における胸郭の運動は陰圧や陽圧という圧力を介して肺胞の膨張や収縮に関与している。この胸腔に体液が貯留した状態が胸水である。胸水は大量になると肺の拡張領域を占領することになり、結果として肺を押し縮めて呼吸困難を招く。
【０００５】
漏出性胸水は血管から蛋白を含んだ水分が漏出する場合や外傷による胸膜損傷等が原因になるが、疾患としてはうっ血性心不全、ネフローゼ症候群、糸球体腎炎、粘液水腫、肝硬変等による。
一方、滲出性胸水は結核や肺炎等の炎症が胸膜に及んだ胸膜炎が原因になるが、癌に起因する癌性胸膜炎もこの原因に含まれる。原因疾患としては悪性胸膜中皮腫、悪性リンパ腫、白血病、肺癌、乳がん等の腫瘍、感染性結核菌等の細菌、ウイルス、真菌、寄生虫、マイコプラズマ等の感染症、肺塞栓症、全身性エリテマトーデス、Ｗｅｇｅｎｅｒ肉芽腫等の自己免疫疾患等が挙げられる。
【０００６】
これらの滲出液の貯留は、リンパ網の閉塞による腔内のリンパ吸収障害とリンパ液の産生増加や、炎症や癌により産生される血管新生因子によって微小血管の血管壁透過性の亢進が起きて腔内への体液の滲出が生じることによって引き起こされる。癌が産生する血管新生因子には、ＶＥＧＦ、アンジオポエチン、ＨＧＦ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＰＩＧＦ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、ＥＧＦ、ＩＧＦ−１、ＰＤＧＦ、ＰＤＥＣＧＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−８、プロスタグランジンＥ２等が挙げられる（非特許文献１）。非特許文献２には、ＶＥＧＦ（Ｖａｓｃｕｌａｒ　Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ：血管内皮成長因子）は血管透過性の亢進作用を有することと、癌による腹水貯留の１つの原因因子として報告されている。又、同文献にはＶＥＧＦを産生している癌を移植した動物モデルにおいて、ＶＥＧＦの中和抗体の投与によって腹水貯留が抑制できることを報告している。
【０００７】
ＡＭＦは様々な癌において５０ｐｇ／ｍｌ程度の極低濃度で癌細胞への運動刺激性を示し、又、癌細胞からは同程度のわずかな量が分泌されることが知られている。渡辺等はこのタンパクを精製し、アミノ酸配列からリンホカインの１種であるニューロロイキンと同一のタンパク質であると報告している（特許文献１）。
【０００８】
更にこのタンパク質は、生物の代謝経路である解糖系で重要な酵素であるヘキソース−６−リン酸イソメラーゼ（ＰＨＩ）と極めて高い相同性を示し、精製したタンパク質（ＡＭＦ）にＰＨＩ活性があることを報告している（特許文献１）。現在までのところ、正常な細胞からＡＭＦが分泌されるという報告はなく、この分子には分泌シグナルペプチドが存在せず、又、ゴルジ体を介した分泌機構ではないと報告されており（非特許文献３）、どのように癌細胞から分泌されるのか、その機構は不明である。
船坂等は、ＡＭＦＲ（ＡＭＦレセプター）が血管内皮細胞に発現しており、ＡＭＦは血管新生を誘導することを見出した。さらにマウスのリコンビナントＡＭＦをラットの皮内に局所投与すると血管透過性が亢進することを報告している（非特許文献４）。しかしながら、ＡＭＦが腹水又は胸水の滲出に関与することは知られていない。
又、特許文献２にはＡＭＦ抗体を用いた癌転移の抑制について記載がある。
【非特許文献１】
Ｊ．Ａ．Ｎａｇｙ等、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９５年１月１５日、５５巻、ｐ．３６０−３６８
【非特許文献２】
Ｊ．Ｃ．Ｌｕｏ等、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９８年６月１５日、５８巻、ｐ．２５９４−２６００
【非特許文献３】
Ｙ．Ｎｉｉｎａｋａ等、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９８年６月１５日、５８巻、ｐ．２６６７‐２６７４
【非特許文献４】
Ｔ．Ｆｎａｓａｋａ等、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、２００１年７月６日、２８５巻、ｐ１１８‐１２８
【特許文献１】
特開平８−２４５３９７号公報
【特許文献２】
特表平４−５０２１４３号公報
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
胸水や腹水の貯留に対する対処療法は、利尿剤の投与や穿刺による腹水あるいは胸水の排出等がある。又、炎症が原因の場合は抗生物質の投与及びステロイド等の抗炎症剤を投与する方法もあるが、満足できるものではない。癌が原因の場合は、化学療法、免疫療法や温熱療法等を施行するが、治療に難渋することが多く予後が極めて悪い。癌性腹膜炎を伴う腹水の治療としては全身的あるいは腹腔内への抗癌剤の投与が行われ、「ＭＴＸ（メソトレキセート）＋５−ＦＵ（５−フルオロウラシル）療法」を行って腹水の軽減、イレウス症状の軽快等を図るが治療効果が充分でない場合が多い。従って、より効果的な治療法の開発が望まれている。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本願発明者等は、上記課題を解決するため鋭意研究を続け本発明を完成した。
即ち、本願発明は、
（１）ＡＭＦの作用を抑制する物質を有効成分とする腹水又は胸水の滲出の予防又は治療剤；
（２）有効成分がＡＭＦの中和抗体である上記（１）記載の腹水又は胸水の滲出の予防又は治療剤；
【００１１】
（３）腹水又は胸水が癌性腹膜炎又は癌性胸膜炎に由来する腹水又は胸水である上記（１）又は（２）に記載の腹水又は胸水の滲出の予防又は治療剤；
に関する。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明はＡＭＦの作用を抑制する物質を有効成分とする腹水又は胸水の滲出の予防又は治療剤である。本発明においてＡＭＦの作用を抑制する為に使用される物質としては、ＡＭＦの中和抗体、ヘキソース−６−リン酸イソメラーゼの阻害剤、ＡＭＦ受容体アンタゴニスト等が挙げられるが、ＡＭＦの中和抗体が好ましい。ＡＭＦの中和抗体としては特に限定されず、ポリクローナル抗体でもモノクローナル抗体でもよく、通常知られた抗体の作成方法に従って調製されたものを用い得る。中和抗体を作製する際に使用するＡＭＦは、ＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）　ｄａｔａ　ｂａｓｅにＮＭ＿０００１７５（ヒト）、ＮＭ＿００８１５５（マウス）として公知であるアミノ酸配列に従い化学合成により得ることも可能であり、又、同ｄａｔａ　ｂａｓｅに公知のＡＭＦをコードする塩基配列に従い製造される塩基配列を、通常の方法に従い発現させることによっても可能であり、又、例えば特許文献２の方法によっても得ることができる。当然ながらＡＭＦを発現させる際には、上記塩基配列の組換え体を用いてもよい。
中和抗体を作製するために免疫する動物は、通常使用される哺乳類が挙げられるが、例えばマウス、ウサギ、馬、羊等が挙げられる。免疫する際にはアジュバントを使用してもよく、例えばフロイントの完全又は不完全アジュバント、水酸化アルミニウム等が挙げられる。中和抗体をヒトに投与する場合には、通常の方法により抗体をヒト型にして投与することが好ましい。
【００１３】
具体的には、例えば５μｇのリコンビナントヒトＡＭＦをフロイントの完全アジュバントに混合して、ニュージーランドホワイトラビットの皮下に３週間ごとに３回投与し、３回目の投与後３日目に採取した血液から血清を調製する。その血清中のＩｇＧをプロテインＡセファロースによって精製することにより抗ＡＭＦ抗体が得られる。
なお、抗ＡＭＦ抗体はｉｎ　ｖｉｔｒｏで１００ｐＭの濃度ではエーリッヒ腫瘍細胞の増殖阻害は示さない。
【００１４】
本発明においてＡＭＦの作用を抑制する物質を有効成分とする腹水又は胸水の貯留予防剤又は治療剤における貯留原因は特に限定されないが、特に癌に起因する腹水又は胸水が挙げられ、腹水貯留を引き起こす癌性腹膜炎の原因の癌としては例えば胃癌、大腸癌、卵巣癌、胆道癌、膵癌等が、胸水貯留を引き起こす癌性胸膜炎の原因の癌としては例えば肺癌、乳癌、悪性胸膜中皮腫等が挙げられる。本発明に使用されるＡＭＦの中和抗体の量は、腹水又は胸水の原因や患者の病状・年齢等により異なるが、およそ０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇ程度である。
例えば癌に罹患した初期の患者では腹水又は胸水の貯留は通常認められないが、病状が進展するにつれて腹水又は胸水の貯留が高頻度で発生してくる。本発明における予防剤とは、腹水又は胸水の貯留を抑制するため、腹水又は胸水の貯留が発生していない癌に罹患した患者に予め投与するＡＭＦの中和抗体を意味する。ＡＭＦの中和抗体を予防剤として用いる際の投与量は、前記の治療剤としてＡＭＦの中和抗体を使用する場合と同様である。
【００１５】
【実施例】
本実施例を以下に示すが、本願発明は本実施例に限定されない。
【００１６】
実施例１
５μｇのリコンビナントヒトＡＭＦをフロイントの完全アジュバントに混合しニュージーランドホワイトラビットの皮下に３週間ごとに３回投与した。３回目の免疫後３日目に血液を採取し、血清を調製した。血清中のＩｇＧをプロテインＡセファロースによって精製し、抗ＡＭＦ抗体を作成した。
ＢＡＬＢ／ｃマウス（９週齢、オス）に５Ｘ１０６個／０．２ｍｌＰＢＳ（９．５７ｍＭリン酸緩衝生理食塩水：ｐＨ７．５）のエーリッヒ細胞を移植し、その６日後から１００μｇの抗ＡＭＦ抗体の０．２ｍｌＰＢＳ（９．５７ｍＭリン酸緩衝生理食塩水：ｐＨ７．５）溶液を１日１回８日間連続的に投与した。対照群には０．２ｍｌのＰＢＳを投与した。一群５匹で実験し、マウスの腹水液量を求めた。
図１に○は抗ＡＭＦ抗体投与群、□は対照群として示すように、腹水の貯留は有意に抑制されており、エーリッヒ細胞移植後１４日における腹水液容量は対照群が１０．７２±０．４４１ｍｌ／マウスであるのに対し、抗ＡＭＦ抗体投与群では８．２７±０．４６４ｍｌ／マウスであった（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ　ｔ　ｔｅｓｔでＰ＜０．００１）。以上の如く抗ＡＭＦ抗体の投与によって腹水の貯留は有効に抑制されることが示された。
【００１７】
【発明の効果】
本発明により、血管透過性を亢進する作用を有するＡＭＦの作用を抑制することによる腹水又は胸水の滲出抑制が為された。即ち、癌性腹膜炎及び癌性胸膜炎や結核や肺炎等による腹膜炎及び胸膜炎による滲出液が貯留する疾患の腹腔や胸腔への滲出液の貯留を予防あるいは治療することが可能となった。特に抗ＡＭＦ中和抗体が前記の滲出液の貯留の予防あるいは治療に有効であることを見出した。
【図面の簡単な説明】
【図１】腹水滲出に対する抗ＡＭＦ抗体の抑制効果を示す。○は抗ＡＭＦ抗体投与群、□は対照群を示す。
【図１】
2004143100.tif 000002