(57)【要約】【課題】安価な原料から簡単な工程で低コストで製造することができ、しかも食品や飲料等に添加した場合にも消費者に不安を与えるおそれのないβ−クリプトキサンチン成分含有抽出物を製造する方法を提供する。【解決手段】柿の果実、特に果皮を細断し、β−クリプトキサンチン成分をエタノール等の有機溶媒で抽出することにより、柿の果実からβ−クリプトキサンチン成分含有抽出物を製造する。β−クリプトキサンチン成分を有機溶媒で抽出した後に、有機溶媒を減圧下で除去して干し柿臭を除去することが好ましい。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
柿の果実を細断し、β−クリプトキサンチン成分を有機溶媒で抽出することを特徴とする、柿の果実からβ−クリプトキサンチン成分含有抽出物を製造する方法。
【請求項２】
柿の果実として、柿の果皮を使用することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
有機溶媒としてエタノールを使用することを特徴とする請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
β−クリプトキサンチン成分を有機溶媒で抽出した後に、干し柿臭を除去することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
β−クリプトキサンチン成分を有機溶媒で抽出した後に、有機溶媒を除去して干し柿臭を除去することを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
β−クリプトキサンチン成分を有機溶媒で抽出した後に、吸着剤を使用して干し柿臭を除去することを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項７】
β−クリプトキサンチン成分を有機溶媒で抽出した後に、有機溶媒を減圧下で除去することを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
有機溶媒を除去した後に抽出物に有機溶媒を添加し、さらに有機溶媒を除去することを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
β−クリプトキサンチン成分を有機溶媒で抽出した後に、抽出液を加水分解してβ−クリプトキサンチン成分を有機溶媒で回収することを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、柿の果実からβ−クリプトキサンチン成分含有抽出物を製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
カロテノイドの１種であるβ−クリプトキサンチンは、プロビタミンＡの特性を有するとともに、抗発癌プロモーター機能、過剰な活性酸素の消去機能等を有し、細胞内での情報伝達にも関与する抗癌性物質としても注目を集めている。
β−クリプトキサンチンは柑橘類に広く含有することが知られており、ミカン果汁の沈殿物からのβ−クリプトキサンチンを含有する溶剤油出分を加水分解した後に、高速液体クロマトグラフィーを用いて高純度のβ−クリプトキサンチンを製造することが提案されている。（特許文献１参照）
【０００３】
【特許文献１】
特開２０００−１３６１８１号公報
【０００４】
しかしながら、柑橘類に含まれるβ−クリプトキサンチンの量は、例えばバレンシアオレンジ果汁では０．０２ｍｇ／１００ｇときわめて少量であり、β−クリプトキサンチンを工業的に製造するには多量の原料を必要とし、製造工程もコストのかかるものであり、実用的ではない。
また、特許文献１に記載された方法では、加水分解物を一次展開溶媒と共に平均粒子径１０〜８０μｍのシリカ粉末が充填された第１カラムに導入してβ−クリプトキサンチンを含むフラクションを分離した後に、脱溶媒した分離物を二次展開溶媒と共に平均粒子径１０〜８０μｍのオクタデシルシランシリカが充填された第２カラムに導入して、β−クリプトキサンチンを分離しているが、一次展開溶媒としては石油エーテルを主成分とする有機溶媒を、また二次展開溶媒としてはアセトニトリルを主成分とする有機溶媒を使用している。したがって、得られたβ−クリプトキサンチンを食品や飲料に添加する場合には、製品の安全性について消費者に不安を与えるおそれがある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
したがって、本発明はこれら従来技術の問題点を解消して、安価な原料から簡単な工程で低コストで製造することができ、しかも食品や飲料等に添加した場合にも消費者に不安を与えるおそれのないβ−クリプトキサンチン成分含有抽出物を製造する方法を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は鋭意検討した結果、柿の果実、特に果皮中に多量のβ−クリプトキサンチン成分が含有されていることを発見し、これを原料とすることにより本発明を完成したものである。
【０００７】
すなわち、本発明はつぎのような構成をとるものである。
１．柿の果実を細断し、β−クリプトキサンチン成分を有機溶媒で抽出することを特徴とする、柿の果実からβ−クリプトキサンチン成分含有抽出物を製造する方法。
２．柿の果実として、柿の果皮を使用することを特徴とする１に記載の方法。
３．有機溶媒としてエタノールを使用することを特徴とする１又は２に記載の方法。
４．β−クリプトキサンチン成分を有機溶媒で抽出した後に、干し柿臭を除去することを特徴とする１〜３のいずれかに記載の方法。
５．β−クリプトキサンチン成分を有機溶媒で抽出した後に、有機溶媒を除去して干し柿臭を除去することを特徴とする４に記載の方法。
６．β−クリプトキサンチン成分を有機溶媒で抽出した後に、吸着剤を使用して干し柿臭を除去することを特徴とする４に記載の方法。
７．β−クリプトキサンチン成分を有機溶媒で抽出した後に、有機溶媒を減圧下で除去することを特徴とする１〜６のいずれかに記載の方法。
８．有機溶媒を除去した後に抽出物に有機溶媒を添加し、さらに有機溶媒を除去することを特徴とする１〜７のいずれかに記載の方法。
９．β−クリプトキサンチン成分を有機溶媒で抽出した後に、抽出液を加水分解してβ−クリプトキサンチン成分を有機溶媒で回収することを特徴とする１〜８のいずれかに記載の方法。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明では、柿の果実、好ましくは果皮からβ−クリプトキサンチン成分含有抽出物を製造する。柿はｐＨが中性付近であり、容器詰飲料・食品とするには加熱することが必要であるが、柿を加熱した場合には独特の香味が失われるために、容器詰飲料・食品としては殆ど利用されていない。柿は国内で豊富に生産されるが、収穫されず、木に残ったまま腐るものも多く、有効に利用されていないのが現状である。本発明者等は柿の有効利用を検討中に、柿の果実、特に果皮にβ−クリプトキサンチンが多量に含まれることを発見し、本発明を完成した。
【０００９】
本発明で、β−クリプトキサンチン成分含有抽出物を製造する原料として使用する柿の種類には特に制限は無く、甘柿、渋柿のいずれをも使用することができる。
原料として使用する甘柿品種としては、例えば、富有、次郎、甘百日、御所、花御所、晩御所、天神御所、藤原御所、徳田御所、三ヶ谷御所、禅寺丸、藤八、水島、正月等が挙げられる。また、渋柿品種としては、例えば、横野、平核無、富士、西条、堂上蜂屋、会津身不知、衣紋、祇園坊、四ツ溝、大四ツ溝、愛宕、葉隠、川端、田倉、作州身不知等が挙げられる。
【００１０】
柿の果実中には、例えば富有では、果皮に８．３６ｍｇ／１００ｇのβ−クリプトキサンチンが含有され、果肉には０．９７ｍｇ／１００ｇのβ−クリプトキサンチンが含有される（後記の実施例１、２参照）。したがって、本発明によりβ−クリプトキサンチン成分含有抽出物を製造する原料としては、柿の果皮を使用することが好ましいが、果肉を原料とすることもできる。
以下、柿の果皮を原料として、本発明により柿の果実からβ−クリプトキサンチン成分含有抽出物を製造する方法の１例について説明する。
【００１１】
柿の果皮をナイフ等で剥皮後細かく切断し、有機溶媒の存在下でアジテーター等で粉砕後、ろ過する。ろ液を減圧下で濃縮して有機溶媒を除去し、有機溶媒で洗浄後、減圧下で干し柿臭が無くなるまで濃縮を繰り返してβ−クリプトキサンチン成分含有抽出物を得る。得られた抽出物は、必要に応じて有機溶媒を加えて定容し、保存する。この場合、冷凍保存が好ましい。
２度の減圧濃縮によって、干し柿臭が飛散するので、飲料や食品に添加した際に、風味を損わない安定な抽出物を得ることができる。
【００１２】
有機溶媒としては、特に制限は無く、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノール等のアルコール；ジメチルエーテル、ジエチルエーテル、メチルエチルエーテル、メチルブチルエーテル等のエーテル類；アセトン、メチルエチルケトン、ジエチルケトン等のケトン類；ｎ−ヘキサン、ｎ−ヘプタン等の飽和炭化水素等が挙げられる。
得られるβ−クリプトキサンチン成分含有抽出物を、飲料や食品、経口医薬品等の経口摂取される製品に添加する場合には、有機溶媒としては、エタノールのように人体に健康上の問題を生じるおそれのない有機溶媒を使用することが好ましい。
【００１３】
β−クリプトキサンチンは、植物中ではエステル体として存在し、例えば有機溶媒としてエタノールを使用して上記の工程で製造した抽出物中には、エステル体として含有される。このβ−クリプトキサンチンのエステル体を含有する抽出物を、飲料や食品等に添加して経口摂取した場合には、エステル体は人体内で代謝分解され、有効なβ−クリプトキサンチンとして機能するものと考えられる。したがって、このような用途に使用されるβ−クリプトキサンチン成分含有抽出物としては、エタノールのように人体に無害の有機溶媒を使用して、上記の工程で製造される抽出物を使用することが好ましい。
【００１４】
飲料や食品等の経口摂取される製品に添加するβ−クリプトキサンチン成分含有抽出物を製造する際には、β−クリプトキサンチン成分をエタノール等の人体に無害の有機溶媒で抽出した後に、抽出物を濃縮しエタノール等を除去するとともに干し柿臭を飛散させることが好ましい。
エタノール等を除去するには、ロータリーエバポレーター等を使用し、減圧下で濃縮することが好ましい。減圧下で濃縮することによって、有機溶媒の沸点を低下させ、濃縮処理温度を低下させることができる。濃縮処理温度が１００℃以上の場合には、得られる抽出物が茶色に着色するので、濃縮処理温度は６５℃以下、特に４０℃以下とすることが好ましい。
【００１５】
干し柿臭の無い抽出物を製造するには、エタノール等を減圧下で揮発除去して抽出物を濃縮した後に、再度エタノール等を抽出物に添加して減圧下で濃縮しエタノール等を飛散させ除去することが好ましい。β−クリプトキサンチン成分を抽出した後に、単に抽出物を濃縮しエタノール等を除去しただけでは抽出物から完全に干し柿臭をとることは困難である。これに対して、エタノール等を除去し抽出物を濃縮した後に、再度エタノール等で希釈し濃縮する操作を行った場合には、干し柿臭の無い抽出物を得ることができる。この濃縮、希釈、濃縮の操作は、必要に応じて２回以上繰り返してもよい。
また、上記のエタノール等の除去は、必ずしも抽出物からエタノール等を完全に除去する必要はなく、干し柿臭が無くなるまでエタノール等を減少させれば足りる。
なお、干し柿臭の無い抽出物を製造する他の方法としては、吸着剤を使用する方法等が挙げられ、例えば、エタノール等による抽出液を活性炭等の吸着剤を充填したカラム内を通過させて、干し柿臭を除去することができる。
【００１６】
一方、β−クリプトキサンチン成分含有抽出物は、クリーム、乳液、ジェル、貼付剤等の形態の化粧品、皮膚外用剤等にも配合することができる。
抽出物をこのような用途に使用する場合には、抽出物を製造する際に使用する有機溶媒としては、エタノール以外の他の有機溶媒を使用することができる。これらの有機溶媒は、必要に応じて濃縮等の操作により除去するか、またはエタノールのような人体に無害な溶媒により置換される。
【００１７】
また、抽出物をこのような用途に使用する場合には、柿の果皮又は果肉からβ−クリプトキサンチン成分を有機溶媒で抽出した後に、油出液に例えば、アルカリ金属水酸化物とアルコールを添加して加水分解し、加水分解されたβ−クリプトキサンチン成分を有機溶媒で回収することにより、抽出物を製造してもよい。
このような工程によりβ−クリプトキサンチン成分含有抽出物を製造した場合には、β−クリプトキサンチン自体を含有する抽出物を得ることができ、またβ−クリプトキサンチンの収率も向上させることが可能となる。
【００１８】
【実施例】
次に、実施例により本発明をさらに説明するが、以下の具体例は本発明を限定するものではない。
（β−クリプトキサンチンの定量）
本発明において、試料中のβ−クリプトキサンチンの定量は、以下の方法により行った。
試料中に含まれるβ−クリプトキサンチン単体を正確に定量するために、抽出液中にメチルブチルエーテルを添加して、試料から抽出したβ−クリプトキサンチン成分をメチルブチルエーテル層に分配し、水酸化カリウム・メタノール溶液によりケン化処理後、水を加えて不ケン化物をメチルブチルエーテル層に分配し、飽和食塩水を加えてアルカリを除去した後に減圧下でメチルブチルエーテル層を濃縮後、メチルブチルエーテルで定容して高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）供試液を調製する。
この供試液を、以下の分析条件で可視部吸収検出器を有するＨＰＬＣにより定量した。
【００１９】
（分析条件）
カラム：ＹＭＣ社製  Ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ  ５μ  Ｃ３０（４．６ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）
高速液体クロマトグラフ：島津製作所（株）製  ＨＰＬＣ−６Ａ
検出器：島津製作所（株）製  ＳＰＤ−６ＡＶ
移動層：（Ａ）  メタノール：メチルブチルエーテル：水：酢酸アンモニウム＝８１：１５：４：０．１
（Ｂ）  メタノール：メチルブチルエーテル：酢酸アンモニウム＝１０：９０：０．１
タイムプログラム：９０分でＡ１００％からＢ１００％
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
オーブン温度：３２℃
検出波長：４５０ｎｍ
注入量：２０μ１
【００２０】
（検量線の作成）
市販のβ−クリプトキサンチンの標準品は、製品毎に濃度が異なるので、検量線を作成する際に標準品の濃度を測定することが必要である。
アルドリッチ社製のβ−クリプトキサンチン標準品（１ｍｇ入り）を、全量ｎ−ヘキサンに溶解して５０ｍｌに定容し、標準原液（約２０μｇ／ｍｌ）を調製した。この標準原液５ｍｌにｎ−ヘキサンを加えて５０ｍｌに定容し、４５１ｎｍの吸光度を測定した。β−クリプトキサンチンの吸光度係数の文献値（Ｅ１％１ｃｍ＝２４６０）を用い、標準溶液中のβ−クリプトキサンチン濃度を次式より求めた。
Ａ＝Ｅ×ｃ（％）×１ｃｍ
上式において、各符号は、Ａ：吸光度、Ｅ：比吸光度、Ｃ：物質のモル濃度、Ｉ：溶液層の厚さ、を表す。
【００２１】
次に標準原液のｎ−ヘキサンを減圧濃縮後、メチルブチルエーテル溶媒で同じ濃度に戻した後、メチルブチルエーテルで２、２０、２００倍に希釈して、それらの２０μｌをＨＰＬＣに供し、各ピーク面積から検量線を作成した。また、市販の標準品はわずかにα−クリプトキサンチンを含んでいるため、（β−クリプトキサンチンのピーク面積）／（β−クリプトキサンチンのピーク面積＋α−クリプトキサンチンのピーク面積）により補正した。
【００２２】
（実施例１）
甘柿である富有の果皮をナイフで剥皮後、細断し、その５ｇを乳鉢に入れ、０．１％ブチルヒドロキシトルエン入りエタノール１５ｍｌおよびケイ砂を１ｇ加えて、よくすり潰し、ガラスフィルターを用い、吸引ろ過した。残渣を集め、色がなくなるまでブチルヒドロキシトルエン入りエタノールで洗浄抽出した。ろ液を分液漏斗に移し、等量のメチルブチルエーテル、飽和食塩水を添加後、振盪してβ−クリプトキサンチン成分をメチルブチルエーテル層に分配した。このメチルブチルエーテル層に再度、飽和食塩水を加え、振盪しβ−クリプトキサンチン成分をメチルブチルエーテル層に分配した。そして、メチルブチルエーテル層を減圧下で濃縮後に、メチルブチルエーテルで２０ｍｌに定容し抽出物を得た。
【００２３】
つぎにこの抽出液１０ｍｌと１０％水酸化カリウム・メタノール溶液１０ｍｌを分液漏斗にとり、窒素雰囲気下で振盪後、室温で１時間静置した。このようにケン化処理した溶液に１０ｍｌの水を加え、メチルブチルエーテル層に不ケン化物を分画後、メチルブチルエーテル層に飽和食塩水を１０ｍｌ加え、アルカリを除去した。メチルブチルエーテル層を減圧下で濃縮後、メチルブチルエーテルで１０ｍｌに定容した。０．２μｍメンブランフィルターでろ過後、ＨＰＬＣ供試液とした。
ＨＰＬＣ分析の結果、富有の果皮にはβ−クリプトキサンチンが８．３６ｍｇ／１００ｇの濃度で含まれていることが判明した。
【００２４】
（実施例２）
富有の果皮５ｇに代えて、富有の果肉１０ｇを使用した以外は、実施例１と同様にして抽出物を得、β−クリプトキサンチンの含有量を定量したところ、富有の果肉にはβ−クリプトキサンチンが０．９７ｍｇ／１００ｇの濃度で含まれていることが判明した。
【００２５】
（実施例３）
富有の果皮５ｇに代えて、渋柿である愛宕の果皮５ｇを使用した以外は、実施例１と同様にして抽出物を得、β−クリプトキサンチンの含有量を定量したところ、愛宕の果皮にはβ−クリプトキサンチンが８．８０ｍｇ／１００ｇの濃度で含まれていることが判明した。
【００２６】
（実施例４）
愛宕の果皮５ｇに代えて、愛宕の果肉１０ｇを使用した以外は、実施例３と同様にして抽出物を得、β−クリプトキサンチンの含有量を定量したところ、愛宕の果肉にはβ−クリプトキサンチンが０．８０ｍｇ／１００ｇの濃度で含まれていることが判明した。
【００２７】
（実施例５）
本実施例では、飲料や食品等の経口摂取される製品用のβ−クリプトキサンチン成分含有抽出物を次のようにして製造した。
β−クリプトキサンチンを、果皮１００ｇ当たり８．８０ｍｇ含有する、愛宕の果皮をナイフで剥皮後、さらに細断した２３．２ｇを、アジテーターでエタノール５０ｍｌと共に粉砕した。そのろ液および粉砕物をエタノールで共洗いした液１５０ｍｌをナスフラスコに入れ、エバポレーターに取り付けた。３０ｍｍＨｇの減圧下で、ナスフラスコを４０℃に加温しながら濃縮した。減圧濃縮により一度揮発したエタノールは、冷却され別の容器に回収され、濃縮物にエタノールは殆ど残っていない。この濃縮段階では、干し柿のような匂いがした。
【００２８】
濃縮物をエタノール２００ｍｌで洗浄するように集めて、別のナスフラスコに移し、再び、洗浄液を３０ｍｍＨｇの減圧下で濃縮した。この時も、減圧濃縮により一度揮発したエタノールは冷却され別の容器に回収されるので、濃縮物にエタノールは殆ど残っていない。この２回目の濃縮段階では、干し柿のような匂いは飛散した。ナスフラスコの底に付着した濃縮物をエタノールで洗うようにしながら、定容フラスコに移し、エタノールを添加して２００ｍｌに定容したものを、愛宕の果皮からのβ−クリプトキサンチ成分含有抽出物とした。エタノールで定容することによって抽出物の取り扱いが容易となり、性状も安定したものとなる。エタノールの添加量は適宜増減することができ、またエタノールを添加しない状態で抽出物を飲料、食品等に配合してもよい。
【００２９】
エタノールで定容した抽出物中のβ−クリプトキサンチンを上記の方法で定量したところ、β−クリプトキサンチン濃度は０．４３ｍｇ／１００ｍｌであった。よって、０．８６ｍｇ／２００ｍｌとなり、果皮２３．２ｇよりβ−クリプトキサンチンが０．８６ｍｇ抽出できた。果皮１００ｇ当たりに換算すると３．７１ｍｇ／１００ｇとなり、収率は４２．２％であった。
【００３０】
（実施例６）
愛宕の果皮の使用量を２００７ｇ、抽出に使用するエタノールの量を５０００ｍｌとし、その後のエタノールの使用量を適宜増量した以外は、実施例５と同じ手順でβ−クリプトキサンチン成分を含有する濃縮物を得た。２回目の濃縮後の濃縮物に、エタノール１００ｇを加えてβ−クリプトキサンチン７８．４ｍｇを含むエタノール抽出物１００ｇを得た。
【００３１】
（製品例１：β−クリプトキサンチン成分配合機能性飲料）
上記の方法で、バレンシアオレンジ果汁に含まれるβ−クリプトキサンチン成分を定量したところ、その濃度は０．０２ｍｇ／１００ｇであり、β−クリプトキサンチン成分は殆んど含まれていないことが判明した。
実施例６で得られた愛宕の果皮からのβ−クリプトキサンチン成分含有抽出物１ｇをバレンシアオレンジ果汁９９ｇに添加し、β−クリプトキサンチン濃度が０．８０ｍｇ／１００ｇの果汁１００ｇを得た。この果汁を９０℃で５分間加熱後、β−クリプトキサンチンの濃度を定量したところ、０．６３ｍｇ／１００ｇであり、加熱後の残存率は７８．８％であった。これに対して、抽出物を配合していないバレンシアオレンジ果汁の９０℃で５分間加熱後のβ−クリプトキサンチンの含有量は０．０１ｍｇ／１００ｍｇであり、加熱後の残存率は５０％であった。したがって、バレンシアオレンジ果汁に柿の果皮からのβ−クリプトキサンチン成分含有抽出物を配合することによって、加熱後にもβ−クリプトキサンチンが充分に残存した機能性飲料を得ることができる。
この柿の果皮からのエタノール抽出物を添加したバレンシアオレンジ果汁を官能評価したところ、無添加の果汁と比較して違和感はなかった。
【００３２】
【発明の効果】
本発明によれば、抗癌性機能を有し、機能性飲料・食品等の原料として有用な、β−クリプトキサンチン成分含有抽出物を、安価な柿の果実から簡単な工程で、低コストで製造することができる。本発明は、また、未使用で廃棄されていた柿の果実の有効利用の道をも拓くものであり、実用的価値のきわめて高い発明である。