(57)【要約】【課題】短期間で細胞を増殖させることができる。【解決手段】まず骨髄液を含む培地を培養容器に入れて静置する。すると、血球系細胞は浮遊性のためそのまま骨髄液に浮遊しているが間葉系幹細胞（ＭＳＣ）は接着依存性のため培養容器の底面に接着する。その後、培地交換を行って浮遊性細胞を除去することにより培養容器の底面に接着したＭＳＣが残るが、ＭＳＣはもともと骨髄液中に含まれる絶対数が少ないため疎な状態で培養容器の底面に接着しているに過ぎない。そこで、ここへ磁性微粒子を投入してＭＳＣに磁性微粒子を保持させることによりＭＳＣを磁性化する。その後、培養容器の底面に磁石を配置することにより磁力の作用によって磁性微粒子を保持したＭＳＣを磁石の近傍へと集める。そして、ＭＳＣが適正な密集度になったあと培養することによりＭＳＣは効率よく増殖する。【選択図】        図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞を培養する細胞培養方法であって、
培養しようとする細胞に磁性微粒子を保持させることにより該細胞を磁性化する磁性化工程と、
前記磁性化工程で磁性化された細胞を磁力によって該細胞が適正に増殖し得る密集度となるように集める集合化工程と、
前記集合化工程で集められた細胞を培養する培養工程と
を含む細胞培養方法。
【請求項２】
前記細胞は接着依存性細胞である、請求項１に記載の細胞培養方法。
【請求項３】
前記接着依存性細胞は間葉系幹細胞（ＭＳＣ）である、請求項２に記載の細胞培養方法。
【請求項４】
前記磁性化工程の前に、骨髄液を含む溶液を播種した容器の底面に接着依存性のＭＳＣが接着したあと培地交換を行って浮遊性細胞を除去することにより培養しようとするＭＳＣを得る前処理工程を実施する、請求項３に記載の細胞培養方法。
【請求項５】
前記密集度は細胞の集まっている部分の細胞密度が１０００〜６０００ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２である、請求項１〜４のいずれかに記載の細胞培養方法。
【請求項６】
前記磁性微粒子は磁性微粒子封入正電荷リポソーム（ＭＰＣＬ）内の磁性微粒子であり、前記磁性化工程では前記培養しようとする細胞に前記ＭＰＣＬを取り込ませることにより該細胞を磁性化する、請求項１〜５のいずれかに記載の細胞培養方法。
【請求項７】
前記磁性化工程では前記ＭＰＣＬを１細胞当り磁性微粒子として１〜１５０ｐｇ使用する、請求項６に記載の細胞培養方法。
【請求項８】
前記磁性化工程では前記培養しようとする細胞と前記ＭＰＣＬとの接触を開始してから０．５〜８時間後に次工程へ進む、請求項６又は７に記載の細胞培養方法。
【請求項９】
前記磁性微粒子は抗体を固定化した磁性微粒子封入リポソーム（ＡＭＬ）内の磁性微粒子であり、前記磁性化工程では前記培養しようとする細胞と該細胞に特異的に結合する抗体を固定化した前記ＡＭＬとを結合させることにより細胞を磁性化する、請求項１〜５のいずれかに記載の細胞培養方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、細胞培養方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
細胞は血球系細胞のような浮遊性細胞と、上皮細胞のような接着依存性細胞の２種に大別される。例えば、骨髄液中には浮遊性細胞として造血幹細胞が、接着依存性細胞として間葉系幹細胞が存在している。間葉系幹細胞（ＭＳＣ，Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ）は、多分化能を有する細胞として注目を浴びており、胚性幹細胞（ＥＳＣ，Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ）と並んで多くの研究がなされている。骨髄液中からＭＳＣを分離する方法としては、ＭＳＣが接着依存性細胞であることと、骨髄液中のその他多くの細胞が浮遊性細胞であることが利用されており、骨髄液を培養容器内で静置することで、容器底面に接着したＭＳＣのみを選別する方法が一般に知られている。また、特許文献１のように、磁力によって細胞を選別する装置も知られている。
【０００３】
【特許文献１】
特公平７−５７１７７号公報
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
ところで、接着依存性細胞の培養に関しては、播種密度が小さすぎると増殖が著しく遅くなるため、適正な播種密度に調整したうえで培養することが重要である。これは、適正な播種密度で培養することで細胞が産生するサイトカインのパラクライン作用やオートクライン作用によって細胞増殖が活発になると考えられる。
【０００５】
しかしながら、前出のＭＳＣは骨髄液から採取可能な絶対数が少ないため、容器底面にはＭＳＣが疎な状態で接着しているにすぎず、細胞増殖に時間がかかる。これはＭＳＣに限らず、取り出した組織・臓器に含まれる絶対数が少ない細胞に共通の課題である。
【０００６】
このように細胞増殖に時間がかかるのを解消する手法としては、容器底面に低密度で接着した細胞をトリプシン等の酵素で処理することにより容器底面から剥がし、剥がれた細胞を集めて適正な播種密度となるように容器に播種したあと増殖させる手法が考えられ、こうすれば効率よく増殖させることは可能である。しかし、適正な播種密度となるように容器に播種する手間がかかるという問題がある。
【０００７】
本発明は、上述した課題に鑑みなされたものであり、短期間で細胞を増殖させることができる細胞増殖方法を提供することを目的の一つとする。また、手間をかけずに細胞を密集させることができる細胞増殖方法を提供することを目的の一つとする。
【０００８】
【課題を解決するための手段、発明の実施の形態及び発明の効果】
上述した目的の少なくとも一つを達成するために、本発明は以下の手法を採用した。即ち、本発明は、細胞を培養する細胞培養方法であって、
培養しようとする細胞に磁性微粒子を保持させることにより該細胞を磁性化する磁性化工程と、
前記磁性化工程で磁性化された細胞を磁力によって該細胞が適正に増殖し得る密集度となるように集める集合化工程と、
前記集合化工程で集められた細胞を培養する培養工程と
を含むものである。
【０００９】
この細胞培養方法では、集合化工程前には細胞が疎な状態で存在していたとしても集合化工程後には細胞が適正に増殖し得る密集度になるため、比較的短期間で細胞を増殖させることができる。また、集合化工程では磁力によって細胞を密集させるため、手間をかけずに細胞を密集させることができる。
【００１０】
ここで、「細胞が適正に増殖し得る密集度」とは、培養しようとする細胞ごとに該細胞の増殖に適する密集度を予め実験的又は理論的に求めておき、その密集度に基づいて設定された値である。細胞の増殖に適するか否かは、予め設定した基準をクリアするか否かで判定すればよく、例えば所定の細胞数に達するまでの培養時間に基準値を設けてその基準値をクリアするか否かで判定してもよいし、所定の培養時間内で増殖した細胞の数に基準値を設けてその基準値をクリアするか否かで判定してもよい。
【００１１】
本発明の細胞培養方法において、培養しようとする細胞は接着依存性細胞であることが好ましい。接着依存性細胞は、足場依存性細胞とも呼ばれるが、一旦容器の内面に付着したあと伸展しやがて分裂する細胞である。この接着依存性細胞は、疎な状態で容器の内面に付着している場合にはそのまま培養するか、酵素で処理して容器の内面から剥がして集めたあと適正な播種密度となるように播種することが考えられるが、前者では増殖に時間がかかり、後者では手間がかかる。このため、接着依存性細胞に本発明を適用することにより、手間をかけずに細胞を密集させて効率よく増殖させることができる。
【００１２】
ここで、「接着依存性細胞」としては、例えば、ヒト、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、サル等の温血動物から採取された種々の細胞が挙げられる。この温血動物の細胞としては、例えば、角化細胞、脾細胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、メサンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、線維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞若しくは間質細胞、又はこれらの細胞の前駆細胞のほか、胚性幹細胞（ＥＳＣ）や間葉系幹細胞（ＭＳＣ）などの幹細胞や接着依存性のガン細胞が挙げられる。このうち、ＥＳＣやＭＳＣが好ましく、ＭＳＣが特に好ましい。なお、培養しようとする接着依存性細胞が底面に接着している場合には、トリプシン等の酵素で処理して剥がしたあと磁力によって密集させてもよいし、接着力よりも磁力が勝るのであれば酵素で処理せずに磁力によって密集させてもよいし、通常の酵素使用量よりも低量の酵素を用いて接着力が磁力よりも弱くなるように処理したあと磁力によって細胞を密集させてもよい。
【００１３】
本発明の細胞培養方法において、培養しようとする細胞がＭＳＣの場合には、磁性化工程の前に、骨髄液を含む溶液を播種した容器の底面に接着依存性のＭＳＣが接着したあと培地交換を行って浮遊性細胞を除去することにより培養しようとするＭＳＣを得る前処理工程を実施することが好ましい。具体的には、例えば、図１に示す手順にしたがって培養してもよい。即ち、まず骨髄液を含む培地を培養容器に入れて静置する（図１（ａ）参照）。すると、血球系細胞は浮遊性のためそのまま骨髄液に浮遊しているがＭＳＣは接着依存性のため培養容器の底面に接着する（図１（ｂ）参照）。その後、培地交換を行って浮遊性細胞を除去することにより培養容器の底面に接着したＭＳＣが残るが、ＭＳＣはもともと骨髄液中に含まれる絶対数が少ないため疎な状態で培養容器の底面に接着しているに過ぎない（図１（ｃ）参照）。その後、必要に応じてトリプシン等の酵素で処理を行ったあと、磁性微粒子を投入してＭＳＣに磁性微粒子を保持させることによりＭＳＣを磁性化する（図１（ｄ）参照）。その後、培養容器の底面に磁石を配置することにより磁力の作用によって磁性微粒子を保持したＭＳＣを磁石の近傍へと集める（図１（ｅ）参照）。このとき、予め実験によって求めたＭＳＣの適正な密集度となるように磁石の磁力や大きさ（寸法）を選定しておく。そして、ＭＳＣが適正な密集度になったあと培養することによりＭＳＣは効率よく増殖する。
【００１４】
本発明の細胞培養方法において、前記密集度は細胞の集まっている部分の細胞密度が１０００ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２以上であることが好ましく、４０００〜６０００ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２であることが特に好ましい。この範囲であれば、細胞（特にＭＳＣのような接着依存性細胞）が産生するサイトカインの作用によって細胞が増殖しやすい。なお、単に「細胞密度」と表現せずに「細胞の集まっている部分の細胞密度」と表現したのは、単に「細胞密度」と表現した場合にはある面積の全体に所定数の細胞が分布している場合と同面積の一部に同数の細胞が密集している場合とを数値上区別できないため、「細胞の集まっている部分の細胞密度」と表現することにより両者を区別できるようにしたのである。
【００１５】
本発明の細胞培養方法において、前記磁性微粒子は磁性微粒子封入正電荷リポソーム（ＭＰＣＬ，Ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｃａｔｉｏｎｉｃ  ｌｉｐｏｓｏｍｅ）内の磁性微粒子であり、前記磁性化工程では前記培養しようとする細胞に前記ＭＰＣＬを取り込ませることにより該細胞を磁性化することが好ましい。ＭＰＣＬは、図２に一例を示すようにマグネタイト等の磁性微粒子をリポソームで封入しリポソーム間に正電荷脂質を備えた構造を持つ。多くの細胞は負電荷を有しているため正電荷を持つＭＰＣＬと結合しやすく、またＭＰＣＬはリポソームを有しているため細胞内に取り込まれやすい。このため、本発明において磁性微粒子としてＭＰＣＬを採用すれば、種々の細胞の培養に適用することができる。なお、ＭＰＣＬは、例えばＪｐｎ．Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．第８７巻第１１７９〜１１８３頁（１９９６年）に記載されたマグネタイト封入正電荷リポソーム（ＭＣＬ，Ｍａｇｎｅｔｉｔｅ  ｃａｔｉｏｎｉｃ  ｌｉｐｓｏｍｅ）の製造方法を参照して調製すればよい。このように磁性化工程でＭＰＣＬを採用するときには、ＭＰＣＬを１細胞当り磁性微粒子として１〜１５０ｐｇ、特に２０〜１５０ｐｇ使用することが好ましく、また、磁性化工程では培養しようとする細胞とＭＰＣＬとの接触を開始してから０．５〜８時間後、特に３〜５時間後に次工程へ進むことが好ましい。とりわけ、培養しようとする細胞がＭＳＣのときに、これらの数値範囲を適用することが好ましい。ＭＰＣＬの使用量が１細胞当り磁性微粒子として１ｐｇ未満では磁力によって集合させるのに十分な量のＭＰＣＬを細胞に保持させることが難しいため好ましくなく、１５０ｐｇ超では保持されないＭＰＣＬが増えて経済的でないため好ましくない。なお、使用量としては特に２０〜１５０ｐｇが好ましい。また、細胞とＭＰＣＬとの接触を開始してから０．５〜８時間後に細胞がＭＰＣＬを取り込む量がピークとなるため、この０．５〜８時間後に次工程へ進むのが好ましい。なお、ピーク範囲としては特に３〜５時間後が好ましい。
【００１６】
本発明の細胞培養方法において、前記磁性微粒子は抗体を固定化した磁性微粒子封入リポソーム（ＡＭＬ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  ｍａｇｎｅｔｏｌｉｐｏｓｏｍｅ）内の磁性微粒子であり、前記磁性化工程では前記培養しようとする細胞と該細胞に特異的に結合する抗体を固定化したＡＭＬとを結合させることにより細胞を磁性化することも好ましい。ＡＭＬは、図３に一例を示すように、マグネタイト等の磁性微粒子をリポソームで封入しリポソーム間に抗体を備えた構造を持つ。抗体としては培養しようとする特定の細胞に特異的に結合するものを選択する。こうすれば、多数の細胞の中から特定の細胞を選別して集合させることができる。例えば、培養しようとする細胞がＭＳＣ、磁性微粒子がＡＭＬの場合、図４に示す手順にしたがって培養してもよい。即ち、まず、骨髄液を含む溶液を培養容器に入れ、ここへＡＭＬを添加する（図４（ａ）参照）。骨髄液には微量のＭＳＣのほかに多量の浮遊性細胞が含まれるが、ＡＭＬの抗体にはＭＳＣ以外の細胞は結合しないためＭＳＣのみがＡＭＬの抗体と結合して選択的に磁性化される（図４（ｂ）参照）。なお、ＭＳＣはＡＭＬの抗体と結合したあとリポソームの存在によりＡＭＬを細胞内に取り込む。続いて、培養容器の底面に磁石を配置することにより磁力の作用によって磁性微粒子を保持したＭＳＣを磁石の近傍へと集める（図４（ｃ）参照）。このとき、予め実験によって求めたＭＳＣの適正な密集度となるように磁石の磁力や大きさ（寸法）を選定しておく。続いて、磁性化したＭＳＣを磁力により密集させたまま培地交換を行って浮遊性細胞を除去する（図４（ｄ）参照）。その後、ＭＳＣを培養する。このとき、ＭＳＣは適正な密集度になっているため効率よく増殖する。なお、ＭＳＣと特異的に結合する抗体としては、例えばＣＤ１０５，ＣＤ７３，ＣＤ２９，ＣＤ４４などが挙げられる。また、この方法では、培養しようとする細胞が接着依存性細胞のときでも細胞が接着する前に集合化工程を行うことができるため、トリプシン等の酵素を用いる処理を省略でき、細胞のダメージを軽減化できる。
【００１７】
上述したＡＭＬは、例えばＪ．  Ｃｈｅｍ．  Ｅｎｇ．  Ｊｐｎ．第３４巻第６６〜７２頁（２００１年）に記載された方法を参照して調製すればよい。このように磁性化工程でＡＭＬを採用するときには、ＡＭＬを１細胞当り磁性微粒子として１〜１５０ｐｇ、特に２０〜１５０ｐｇ使用することが好ましく、また、磁性化工程では培養しようとする細胞とＡＭＬとの接触を開始してから０．５〜８時間後、特に３〜５時間後に次工程へ進むことが好ましい。ＡＭＬの使用量が１細胞当り磁性微粒子として１ｐｇ未満では磁力によって集合させるのに十分な量のＡＭＬを細胞に保持させることが難しいため好ましくなく、１５０ｐｇ超では保持されないＡＭＬが増えて経済的でないため好ましくない。なお、使用量としては特に２０〜１５０ｐｇが好ましい。また、細胞とＡＭＬとの接触を開始してから０．５〜８時間後に細胞がＭＰＣＬを取り込む量がピークとなるため、この０．５〜８時間後に次工程へ進むのが好ましい。なお、ピーク範囲としては特に３〜５時間後が好ましい。
【００１８】
本発明は、骨髄、組織、血液等から細胞を分離・培養する際に適用することができる。特に、磁性微粒子としてＡＭＬを採用する場合には血液等から細胞を分離・培養するのに有効である。また、磁性微粒子としては、細胞にくっつく（保持される）ものであれば特にＭＰＣＬやＡＭＬに限定されるものではなく、例えば第一化学製品社のＭＡＣＳ（Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｓｏｔｉｎｇ  ａｎｄ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）に用いられる磁性マイクロビーズや、ベリタス社の磁性ナノパーティクル（商品名ＥａｓｙＳｅｐ）などを採用してもよい。これらの磁性微粒子のうち、ＭＰＣＬやＡＭＬのようにリポソームを含む磁性微粒子は、リポソームの存在によって細胞内に取り込まれるので一つの細胞が多くの磁性微粒子を取り込むことができ、磁力によって密集可能な程度の磁気を容易に持つことができるため、好ましい。
【００１９】
【実施例】
［実施例１］
（１）使用細胞及び培養条件
ヒト間葉系幹細胞（ＭＳＣ）はＢｉｏ  Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ社製のものを用いた。実験には、培地としてＭＳＣ増殖用培地ＭＳＣＧＭ（Ｂｉｏ  Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ社）を用い、培養容器として１００ｍｍの組織培養皿（ｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｄｉｓｈ，旭テクノグラス社）を使用し、３７℃、５％ＣＯ２を含む加湿空気環境下にて培養した。
【００２０】
（２）マグネタイト封入正電荷リポソーム（ＭＣＬ，Ｍａｇｎｅｔｉｔｅ  ｃａｔｉｏｎｉｃ  ｌｉｐｓｏｍｅ）の調製
ＭＣＬは、Ｊｐｎ．  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．第８７巻第１１７９〜１１８３頁（１９９６年）に記載された方法により調製した。具体的には、まず３種類のリン脂質、即ちＮ−（α−トリメチルアンモニオアセチル）ジドデシル−Ｄ−グルタメート  クロリド（相互薬工社製）、ジラウロイルホスファチジルクロリド（シグマケミカル社製）、ジオレイルホスファチジルエタノールアミン（シグマケミカル社製）をモル比１：２：２で含むリポソーム膜を作成し、続いて１ｍＬのコロイド状マグネタイト（マグネタイト量２０ｍｇ、マグネタイトは戸田工業社製）を添加して、周知のボルテックス法にてＭＣＬを作成した。マグネタイト濃度はチオシアン酸カリウム法で測定したところ、１８ｍｇ／ｍｌであった。
【００２１】
（３）ＭＳＣにおけるＭＣＬの取り込み
組織培養皿で対数増殖期にあるＭＳＣの培地をＭＣＬが入ったＭＳＣＧＭに交換することで、ＭＣＬをＭＳＣに取り込ませた。ＭＣＬ濃度は、ＭＳＣの細胞数に対して１細胞当りマグネタイトとして１００ｐｇになるように添加した。
【００２２】
（４）磁石を用いた細胞培養方法
ＭＣＬを添加してから４時間後、ＭＣＬを取り込んだＭＳＣは組織培養皿の底面に接着していたためトリプシンで処理することにより底面から剥がし、細胞数が１０００個になるように１０ｍｌのＭＳＣＧＭ中に調製し、１００ｍｍの組織培養皿に播種した。その際に、細胞を播種するために振盪器を用いて６０ｒｐｍで１０分間、８の字に振盪した。この際に、１００ｍｍ組織培養皿の底面にネオジ磁石（外形２．２ｃｍφ、表面磁束密度０．４５Ｔ）を組織培養皿の底面の中央に設置した。対照例として、ネオジ磁石を設置せずに同様にして振盪した。ＭＣＬを取り込んだＭＳＣ（細胞数１０００個）は、ネオジ磁石を設置した場合には組織培養皿の底面の中央で２．２ｃｍφの円内に密集したのに対して、ネオジ磁石を設置しなかった場合には組織培養皿の底面全域に疎な状態で分布していた。なお、ネオジ磁石を設置した場合、磁石の縁の方（磁束密度の高い部分）に細胞が集まり、そのように細胞の集まっている部分の面積は１ｃｍ２であった。したがって、細胞が集まっている部分の細胞密度（密集度）は１０００ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２である。
【００２３】
（５）細胞数の測定
培養７日後の細胞数はＷＳＴ−８を発色基質としたセルカウンティングキット−８（Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（同人化学社製））を用いて測定した。測定方法は、セルカウンティングキット−８の取扱説明書に従った。
【００２４】
（６）実験結果
実験結果を図５に示す。図５は培養７日後のＭＳＣの細胞数であり、左側が対照例（磁石なし）、右側が本実施例（磁石あり）を示す。図５から明らかなように、ＭＣＬを取り込んだＭＳＣを磁石で密集させることで、ＭＳＣの細胞数は対照実験と比べて約４倍となった。
【００２５】
［実施例２］
イヌＭＳＣに対するＭＣＬの毒性を調べるために、ＭＣＬ入りの培地とＭＣＬなしの培地を使用する以外は同じ条件でイヌＭＳＣを培養し、時間に対する細胞数の推移をグラフ化した。その結果を図６に示す。図６から明らかなように、ＭＣＬを１細胞当りマグネタイトとして１００ｐｇとなるように加えた培地を使用した場合と、ＭＣＬを加えない培地を使用した場合とでは格別な差は見られなかった。このことから、ＭＣＬは１細胞当りマグネタイトとして１００ｐｇの濃度ではＭＳＣの細胞増殖阻害を示さないことがわかった。
【００２６】
［実施例３］
イヌＭＳＣがＭＣＬを取り込む量を調べるために、ＭＣＬを１細胞当りマグネタイトとして１００ｐｇとなるように加えた培地を使用して培養し、時間に対する１細胞当たりのＭＣＬ量の推移をグラフ化した。その結果を図７に示す。図７から明らかなように、ＭＣＬを添加してから約４時間後に１細胞当たりのＭＣＬのマグネタイト量がピークを示した。このピーク時において、１細胞当たりマグネタイトとして１００ｐｇとなるように加えられたうちの３０ｐｇがイヌＭＳＣに取り込まれた。
【００２７】
なお、本発明は上記実施例に何等限定されるものではなく、本発明の技術的範囲を逸脱しない範囲内において、種々なる形態で実施し得ることは勿論である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の細胞培養方法の一実施形態を表す説明図である。
【図２】磁性微粒子封入正電荷リポソーム（ＭＰＣＬ）の一例の模式図である。
【図３】抗体が固定化された磁性微粒子封入リポソーム（ＡＭＬ）の一例の模式図である。
【図４】本発明の細胞培養方法の一実施形態を表す説明図である。
【図５】培養７日後のＭＳＣの細胞数を表すグラフである。
【図６】イヌＭＳＣに対するＭＣＬの毒性試験結果を表すグラフである。
【図７】時間に対する１細胞当たりのＭＣＬ取り込み量を表すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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