(57)【要約】【課題】安定型グリコヘモグロビン（ｓＡ１ｃ）を測定する際に異常ヘモグロビンの存在の可能性を判断して、糖尿病の診断や糖尿病患者の治療経過のモニターにおいて正常な測定結果を得ること。【解決手段】安定型グリコヘモグロビンの被測定対象である全血試料から異常ヘモグロビンを検出する異常ヘモグロビン検出方法において、採血当日の不安定型グリコヘモグロビンを測定する第１の測定工程と、採血当日のグルコース濃度を測定する第２の測定工程と、第１の測定工程によって測定された採血当日の不安定型グリコヘモグロビンの測定値と、第２の測定工程によって測定された採血当日のグルコース濃度と、不安定型グリコヘモグロビンの測定値とグルコース濃度との相関関係に基づいて、全血試料中に異常ヘモグロビンが存在する可能性の有無を判断する判断工程とを含んでいる。【選択図】　　　図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
安定型グリコヘモグロビンの被測定対象である全血試料から異常ヘモグロビンを検出する異常ヘモグロビン検出方法において、
採血当日の不安定型グリコヘモグロビンを測定する第１の測定工程と、
採血当日のグルコース濃度を測定する第２の測定工程と、
前記第１の測定工程によって測定された採血当日の不安定型グリコヘモグロビンの測定値と、前記第２の測定工程によって測定された採血当日のグルコース濃度と、不安定型グリコヘモグロビンの測定値とグルコース濃度との相関関係に基づいて、前記全血試料中に異常ヘモグロビンが存在する可能性の有無を判断する判断工程と、
を含むことを特徴とする異常ヘモグロビン検出方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、採血した血液中の安定型グリコヘモグロビン（ｓＡ１ｃ）を測定するにあたって、異常ヘモグロビンの存在の可能性を検出する異常ヘモグロビン検出方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
医療分野においては、糖尿病の診断や糖尿病患者の治療経過のモニターとして、種々の糖尿病関連項目が種々の方法で測定されている。糖尿病の診断や治療経過モニターの方法としては、尿糖、血糖、グリコヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）、グリコアルブミン、フルクトサミン、１，５−アンヒドログルシトール、Ｃ−ペプチド、インスリン、ケトン体などを測定する方法が一般的に知られている。この中では、特に、血糖値と、約一ヶ月前の血糖値の状態を表すとされているグリコヘモグロビンを測定する方法が日常的に良く用いられている。
【０００３】
グリコヘモグロビンの測定方法としては、液体クロマトグラフィー法や免疫学的測定法などが存在するが、最も一般的に行われている測定方法は、液体クロマトグラフィー法である。
【０００４】
従来の液体クロマトグラフィー法では、ヘモグロビンを分画するために、１０〜１５分という多大な時間を必要としており、より短時間で処理する技術が望まれてきた。近年では１〜２分程度でヘモグロビンの分画および測定可能な技術が確立され、このような測定技術を利用した高速液体クロマトグラフィー装置が医療分野において広く実用に供されるようになっている。
【０００５】
医療分野において、糖尿病の診断や治療経過のモニターの際に測定されるグリコヘモグロビンは、ヘモグロビンのグロビンのポリペプチド鎖のβ鎖Ｎ末端アミノ酸のバリンのアミノ基がグルコースのアルデヒド基と非酵素的に結合（かかるい反応をヘモグロビンの糖化という）したものである。
【０００６】
この糖化反応の反応過程は２段階で行われ、第１段階の反応は、バリンのアミノ基とグルコースのアルデヒド基がＳｃｈｉｆｆ塩基結合し、不安定型グリコヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）を形成するという迅速かつ可逆的な反応である。この不安定型グリコヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）は、血糖濃度に依存して急速に作られるため、採血時の血糖の影響を受けるものである。
【０００７】
一方、第２段階の反応では、Ａｍａｄｏｒｉ転移を経て安定型グリコヘモグロビン（ｓＡ１ｃ）が形成される。この安定型グリコヘモグロビン（ｓＡ１ｃ）は、不安定型グリコヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）と異なり、採血時の血糖の影響を受けないものである。
【０００８】
このようなヘモグロビンの性質から、糖尿病の診断や糖尿病患者の治療経過のモニターの際にヘモグロビン測定を行う場合には、日本糖尿病学会の勧告により、採血した全血試料から不安定型グリコヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）を含まない安定型グリコヘモグロビン（ｓＡ１ｃ）のみを測定する方法が普及している。
【０００９】
図８は、正常な全血試料を東ソー株式会社の高速液体クロマトグラフィー装置であるＨＬＣ−７２３Ｇ７で測定した場合の、代表的なクロマトグラムである。図８からわかるように、全血試料は、Ａ１ａ、Ａ１ｂ、Ｆ、Ｌ−Ａ１ｃ、ｓＡ１ｃ、Ａ０の順に約１．２分で分画されている。図８において、各画分の測定結果は、クロマトグラムの全面積に占めるそれぞれの画分の％（パーセンテージ）で表される。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
ところで、ヘモグロビンの中には、ヘモグロビン合成の遺伝的異常として、次のような異常ヘモグロビンが存在することが知られている。第１の異常ヘモグロビンは、一つのポリペプタイドの１つのアミノ酸が取り違えられたものであり、このような異常ヘモグロビンとしてヘモグロビンＳやヘモグロビンＣなどがある。第２の異常ヘモグロビンは、一個または数個のポリペプタイドが欠損しているもの、あるいはその産生の減少を特徴としたものである。第３の異常ヘモグロビンは、遺伝的な変異によって、グロビン鎖のアミノ酸が一個または数個欠損したり、グロビン鎖に遺伝的に余計な物質が存在したり、あるいはグロビン分子の長さが大事な部分で延長したものである。
【００１１】
このような異常ヘモグロビンが存在すると、図８に示した画分のパターン内に異常ヘモグロビンのパターンが重なって出現したり、Ａ０画分にまとめて溶出されてしまうことがある。このため、試料として用いる血液中に異常ヘモグロビンが存在すると、安定型グリコヘモグロビン（ｓＡ１ｃ）の測定結果に誤差が発生することになり、この結果、測定された安定型グリコヘモグロビン（ｓＡ１ｃ）の値が大きく外れてしまい、糖尿病診断や治療経過モニターの指標とならず、患者への適切な処置が行えなくなってしまうという問題がある。
【００１２】
この発明は上記に鑑みてなされたもので、安定型グリコヘモグロビン（ｓＡ１ｃ）を測定する際に異常ヘモグロビンの存在の可能性を検出して、安定型グリコヘモグロビン（ｓＡ１ｃ）を測定する際に異常ヘモグロビンの存在の可能性を判断して、糖尿病の診断や糖尿病患者の治療経過のモニターにおいて正常な測定結果を得ることができる異常ヘモグロビン検出方法を得ることを目的とする。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するため、請求項１にかかる発明は、安定型グリコヘモグロビンの被測定対象である全血試料から異常ヘモグロビンを検出する異常ヘモグロビン検出方法において、採血当日の不安定型グリコヘモグロビンを測定する第１の測定工程と、採血当日のグルコース濃度を測定する第２の測定工程と、前記第１の測定工程によって測定された採血当日の不安定型グリコヘモグロビンの測定値と、前記第２の測定工程によって測定された採血当日のグルコース濃度と、不安定型グリコヘモグロビンの測定値とグルコース濃度との相関関係に基づいて、前記全血試料中に異常ヘモグロビンが存在する可能性の有無を判断する判断工程と、を含むことを特徴とする。
【００１４】
この請求項１にかかる発明によれば、第１の測定工程によって採血当日の不安定型グリコヘモグロビンの測定し、第２の測定工程によって採血当日のグルコース濃度を測定し、判断工程によって、測定された採血当日の不安定型グリコヘモグロビンの測定値と、測定された採血当日のグルコース濃度と、不安定型グリコヘモグロビンの測定値とグルコース濃度との相関関係とに基づいて、全血試料中に異常ヘモグロビンが存在する可能性の有無を判断しているので、不安定型グリコヘモグロビンの測定値とグルコース濃度との相関関係において試料中の異常ヘモグロビンが存在する可能性のある範囲を予め特定しておけば、異常ヘモグロビンが存在する可能性を示すことができ、安定型ヘモグロビンを糖尿病診断や治療経過モニターの適切な指標とすることができる。
【００１５】
【発明の実施の形態】
以下に添付図面を参照して、この発明にかかる異常ヘモグロビン検出方法の好適な実施の形態を詳細に説明する。本実施の形態の異常ヘモグロビン検出方法は、液体クロマトグラフィ法（ＨＰＬＣ）によって安定型ヘモグロビン（ｓＡ１ｃ）の測定を行う際に行われる。
【００１６】
図１は、この発明の実施の形態である異常ヘモグロビン検出方法の検出工程を示す工程図である。まず、液体クロマトグラフィ法（ＨＰＬＣ）によって安定型ヘモグロビン（ｓＡ１ｃ）を測定する際に、採血当日の全血試料から分画された不安定型ヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）の量（全血試料中の割合）を測定する（ステップＳ１０１）。次に、採血当日の試料中のグルコース濃度を測定する（ステップＳ１０２）。そして、ステップＳ１０１で測定された採血当日の不安定型ヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）の測定値（割合）と、ステップＳ１０２で測定されたグルコース濃度の測定値と、不安定型ヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）とグルコース濃度の相関関係を示す相関図または度数分布表（相関データ）とから試料中に異常ヘモグロビンが存在する可能性の有無について判断する（ステップＳ１０３）。
【００１７】
ここで、不安定型ヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）とは、ヘモグロビンＡ（ＨｂＡ）にグルコースが結合しているが、グルコースとの結合が外れやすいものをいう。安定型ヘモグロビン（ｓＡ１ｃ）とは、ヘモグロビンＡ（ＨｂＡ）にグルコースが結合した状態で日数が経過して別の化学反応が起こり、グルコースとの結合が安定した状態になったものをいう。
【００１８】
次に、ステップＳ１０３における不安定型ヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）とグルコース濃度の相関関係について説明する。安定型ヘモグロビン（ｓＡ１ｃ）を液体クロマトグラフィ法によって測定するに当たり、３０３５件の全血試料に対して、採血当日のグルコース濃度に大きく左右される不安定型ヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）とグルコース濃度を測定したところ、互いに相関関係を有することがわかった。図２は、不安定型ヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）とグルコース濃度の相関関係を示す相関図である。
【００１９】
従って、このような図２に示す不安定型ヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）とグルコース濃度の相関関係を示す相関図を予め求めておき、この相関関係から大きく外れる測定結果が得られた試料については、試料中に異常ヘモグロビン等が存在して、安定型ヘモグロビン（ｓＡ１ｃ）の測定結果に大きな誤差を与えていると考えることができる。
【００２０】
図３は、不安定型ヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）とグルコース濃度の相関図から作成した度数分布表を示す説明図である。図３に示すように、度数分布表から分布が集中している範囲を、チェック設定域３０１として設定し、試料の不安定型ヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）とグルコース濃度の測定値が当該チェック設定域３０１の範囲内にある場合には、試料中に異常ヘモグロビンが存在する可能性は低いと判断する。一方、図３に示す試料１、試料２および試料３のように、試料の不安定型ヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）とグルコース濃度の測定値がチェック設定域３０１の範囲外にある場合には、試料中に異常ヘモグロビンが存在する可能性が高いと判断する。
【００２１】
このように本実施の形態にかかる異常ヘモグロビン検出方法では、採血当日の不安定型グリコヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）の測定し、採血当日のグルコース濃度を測定し、測定された採血当日の不安定型グリコヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）の測定値と、測定された採血当日のグルコース濃度と、不安定型グリコヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）の測定値とグルコース濃度との相関関係とに基づいて、全血試料中に異常ヘモグロビンが存在する可能性の有無を判断しているので、異常ヘモグロビンが存在する可能性を示すことができ、安定型ヘモグロビンを糖尿病診断や治療経過モニターの適切な指標とすることができる。
【００２２】
【実施例】
特許第２８２８６０９号公報に記載されている方法によって、３０３５検体について、不安定型グリコヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）とグルコースの相関関係を求め、図３に示す度数分布表を作成した。そして、この度数分布表において、一定の分布数のある範囲を定め、当該範囲を平滑化して、臨床的にほぼ正常である、すなわち異常ヘモグロビンが存在する可能性が低いと考えられるチェック設定域３０１を設定した。
【００２３】
図３に示すチェック設定域３０１の範囲外の試料１、試料２、試料３の検体について、高分解モードでクロマトグラムを取り、実際に異常ヘモグロビンが検出されるかどうかを検証した。一方、図７は、異常ヘモグロビンを含まない試料の代表的なクロマトグラムである。
【００２４】
図４は試料１のクロマトグラム、図５は試料２のクロマトグラム、図６は試料３のクロマトグラムである。図４〜６に示すように、試料１、試料２、試料３には異常ヘモグロビンの画分が検出された。
【００２５】
従って、不安定型グリコヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）とグルコースの相関関係に基づいた図３の度数分布表のチェック設定域３０１範囲外の試料には、異常ヘモグロビンが存在する可能性が高いことがわかる。
【００２６】
【発明の効果】
以上説明したように、請求項１にかかる発明によれば、不安定型グリコヘモグロビンの測定値とグルコース濃度との相関関係において試料中の異常ヘモグロビンが存在する可能性のある範囲を予め特定しておけば、異常ヘモグロビンが存在する可能性を示すことができ、安定型ヘモグロビンを糖尿病診断や治療経過モニターの適切な指標とすることができるという効果を奏する。また、請求項１にかかる発明によれば、異常ヘモグロビンの存在の可能性を検出することによって、他の糖尿病関連物質（グリコアルブミン、フルクトサミン、１，５−アンヒドログルシトールなど）を測定することによって患者に適切な処置を採ることができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【図１】本実施の形態にかかる異常ヘモグロビン検出方法の検出工程を示す工程図である。
【図２】不安定型ヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）とグルコース濃度の相関関係を示す相関図である。
【図３】不安定型ヘモグロビン（Ｌ−Ａ１ｃ）とグルコース濃度の相関図から作成した度数分布表を示す説明図である。
【図４】図３における試料１のクロマトグラムである。
【図５】図３における試料２のクロマトグラムである。
【図６】図３における試料３のクロマトグラムである。
【図７】異常ヘモグロビンを含まない試料の代表的なクロマトグラムである。
【図８】正常な全血試料を高速液体クロマトグラフィー装置測定した場合の、代表的なクロマトグラムである。
【符号の説明】
３０１　チェック設定域
【図１】
2004061461.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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