(57)【要約】【課題】有用な化合物を提供すること。【解決手段】一般式Ｉ：【化１】2004331523.tif 000026（式中、Ａｒは無置換または少なくとも１個の置換基を有することができるアリール基であり、Ｒ’は水素、アルキル基、アルキルカルボニル基、またはアルコキシ基である）で示される（１Ｓ，２Ｒ）−２−窒素含有基置換−１−アリール−１，３−プロパンジオール誘導体化合物、その製造方法およびその医薬用途。上記化合物は、内皮分化遺伝子（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｇｅｎｅ：  Ｅｄｇ）受容体に拮抗し、抗循環器系疾患（例えば、抗動脈硬化、抗心臓疾患、抗末梢循環障害）、抗リウマチ、抗癌、抗糖尿病性網膜症、抗呼吸器系疾患や抗くも膜下出血後攣縮を示す医薬用途に有用性を有する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉ：
【化１】
2004331523.tif 000020
（式中、Ａｒは無置換または少なくとも１個の置換基を有することができるアリール基であり、Ｒ’は水素、アルキル基、アルキルカルボニル基、またはアルコキシ基である）で示される（１Ｓ，２Ｒ）−２−窒素含有基置換−１−アリール−１，３−プロパンジオール誘導体化合物。
【請求項２】
アリール基がフェニル基、１−ナフチル基または２−ナフチル基であり、アリール基の置換基がアルキル基、アルキルカルボニル基、アルコキシ基、ニトロ基およびハロゲン基からなる群から選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
一般式ＩＩ：
【化２】
2004331523.tif 000021
（式中、Ｒは水素、低級アルキルまたは低級アルコキシである。）で表される（１Ｓ，２Ｒ）−２−アミノ−１−（４置換−フェニル）−１，３−プロパンジオールまたはその製薬学的に許容できる塩。
【請求項４】
式Ｉ：
【化３】
2004331523.tif 000022
（式中、Ａｒは無置換または少なくとも１個の置換基を有することができるアリール基であり、Ｒ’は水素、アルキル基、アルキルカルボニル基、またはアルコキシ基である）で示される（１Ｓ，２Ｒ）−２−窒素含有基置換−１−アリール−１，３−プロパンジオール誘導体の製造法であって、
式：
【化４】
2004331523.tif 000023
（式中、ＡはＮの保護基であり、ＢおよびＣはアルキル基である）
の（Ｒ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体を、式：
【化５】
Ａｒ−ＭｇＢｒ
のグリニヤール試薬と反応させて式：
【化６】
2004331523.tif 000024
の化合物を得、当該化合物を脱保護基化し、式：
【化７】
2004331523.tif 000025
の化合物を得、必要に応じて２位のアミンの水素をＲ’基で置換させるか、遊離の塩基にするかまたは他の薬学的に許容できる塩にすることを含む（１Ｓ，２Ｒ）−２−窒素含有基置換−１−アリール−１，３−プロパンジオール誘導体化合物の製造法。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物またはその製薬学的に許容できる塩を含有する医薬組成物。
【請求項６】
Ｅｄｇ受容体拮抗剤である請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
循環器系疾患を予防もしくは治療するための請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
循環器系疾患が動脈硬化性疾患、心臓疾患、くも膜下出血後血管攣縮、または末梢循環障害症である請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
リウマチを予防もしくは治療するための請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
癌を予防もしくは治療するための請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
糖尿病性網膜症を予防もしくは治療するための請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
呼吸器系疾患を予防若しくは治療するための請求項６に記載の医薬組成物
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は  （  Ｃ１，  Ｃ２）位置の絶対立体配置の組み合わせが  （  １Ｓ，  ２Ｒ）であることを特徴とする下記一般式Ｉ
【０００２】
【化８】
2004331523.tif 000002
【０００３】
（式中、Ａｒは無置換または少なくとも１個の置換基を有することができるアリール基であり、Ｒ’は水素、アルキル基、アルキルカルボニル基、またはアルコキシ基である）で表わされる新規化合物、当該化合物を含有する  Ｅｄｇ  （  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｇｅｎｅ、血管内皮細胞分化遺伝子）受容体へ拮抗する医薬、具体的には循環器系疾患（動脈硬化、くも膜下出血後血管攣縮や末梢循環障害）、心臓疾患（心筋梗塞、不整脈）、リウマチ、がん、糖尿病性網膜症、呼吸器疾患を予防もしくは治療するための医薬に関する。
【０００４】
【従来の技術】
血清中の  （  ２Ｓ，  ３Ｒ）  ２−アミノ−  ３−ヒドロキシオクタデセン−  １−リン酸  （  ＡＨＯＰ）含有量は、薄層クロマトグラフィーを用いた解析で、  ４００  ｎＭに及ぶとの報告があり  （  非特許文献１を参照）、重量に換算すると  ０．１２  ｍｇ  ／  Ｌに相当し、血清アルブミン量に匹敵する量と考える事ができる。また、血清中の  ＡＨＯＰ含有量を、放射ラベル体  ＡＨＯＰを用いて  ＡＨＯＰ特異的な受容体への結合放射量より推定した岡島らの報告でも、血清中  ＡＨＯＰは数百  ｎＭに及ぶ事が確かめられている（非特許文献２、３を参照）。  しかし、  ＡＨＯＰが生体内で果たしている役割については未だ一致した見解は得られていないものの、損傷部位において活性化を受けた血小板より放出を受ける  ａｌｐｈａ顆粒中には  ＡＤＰ（アデニンヌクレオチドジリン酸）、  ＰＤＧＦ（  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ、血小板由来増殖因子）、  ５ＨＴ（ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ）などと共に、ＡＨＯＰが著量含まれていて、  ＡＨＯＰが生体の恒常性を維持するために何らかの役割を担っているものと考えられる。つまり、  ＡＤＰ、  ＰＤＧＦ、  ５ＨＴはいずれも血小板凝集を惹起するアゴニストとして作用するが、  ＡＨＯＰもこれらアゴニストと同様に血小板凝集を促進するという報告がある（非特許文献４を参照）。即ち、  ＡＨＯＰは損傷部位における止血を促進し生体の恒常性を維持するが、逆に、動脈硬化症では、血小板凝集は病態を進行させるので、過剰の  ＡＨＯＰは動脈硬化症などの循環器系疾患を進行させる可能性を考える事ができる。
【０００５】
１９９０年に血管内皮細胞よりクローン化されたＥｄｇ（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｇｅｎｅ、血管内皮細胞分化遺伝子、非特許文献５を参照）受容体は  ＧＴＰ（グアニントリフォスフェート）結合タンパク質共役性の７回細胞膜貫通型受容体で、リガンド（作動物質）未同定のオーファン受容体だったが、１９９８年に  ＡＨＯＰが  Ｅｄｇ受容体の特異的リガンドである可能性が指摘された（非特許文献６を参照）。その後、  ＡＨＯＰをリガンドとする  ３種類の亜種  Ｅｄｇ  −  １、  Ｅｄｇ  −  ３、  Ｅｄｇ  −  ５  （  ＡＧＲ  １６  ／  Ｈ  ２１８）  受容体がそれぞれ特異な細胞内情報伝達経路を使って生理作用を発現している可能性が示唆されている。血小板においても  Ｅｄｇ受容体が発現している  （非特許文献７を参照）事より、先に述べた  ＡＨＯＰによる血小板凝集の作用は、  Ｅｄｇ受容体経由なのかもしれない。また、最近、  Ｅｄｇ−６や  Ｅｄｇ−８も  ＡＨＯＰ特異的な受容体であると示された。
【０００６】
一方、血小板  ａｌｐｈａ顆粒より放出される  ＰＤＧＦは収縮型血管平滑筋細胞を合成型に形質転換させ血管平滑筋細胞を増殖させ、また、血管平滑筋細胞を遊走させ、血管を狭窄させる方向に作用する。つまり、  ＰＤＧＦは動脈硬化を進行させると考えられる（  Ｒｏｓｓの仮説）。同様に、  ＡＨＯＰは血管平滑筋細胞の遊走を促進するが、  ＰＤＧＦ存在下で  ＡＨＯＰは  ＰＤＧＦと相乗的に血管平滑筋細胞を遊走させる  （非特許文献８を参照）。従って、  ＡＨＯＰは循環器系疾患を進行させてしまう可能性が考えられる。また、  Ｔａｍａｍａらも  ＡＨＯＰが血管平滑筋細胞の  ＤＮＡ合成を促進し細胞増殖の方向に作用すると示している  （非特許文献９を参照）。
【０００７】
さて、原虫トリパノゾーマ撲滅薬として開発されたスラミンがウサギ大動脈移植によって誘発させた血管内膜肥厚を抑制し、抗動脈硬化的に作用する可能性が指摘されている  （非特許文献１０を参照）。  ｀９９年にスラミンが  Ｅｄｇ  −  ３のアンタゴニスト（拮抗物質、受容体に結合して作用を止める）である事が示された  （非特許文献１１を参照）がスラミンの抗動脈硬化作用が、実は、  Ｅｄｇ受容体への拮抗を機作としていたのかもしれない。
【０００８】
ＡＨＯＰと同様に  Ｅｄｇ  −  ３受容体に作動するスフィンゴシルフォスフォリルコリン  （ｓｐｈｉｎｇｏｓｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｈｏｌｉｎｅ、ＳＰＣ、非特許文献１２を参照）は用量依存的にラット腎毛細血管を収縮させ、この反応が  ＧＴＰ結合タンパク阻害剤パータシストキシン  （ＰＴＸ）感受性である事より、ＳＰＣが  Ｅｄｇ受容体経由で血管を収縮させる可能性が示唆されている（非特許文献１３を参照）。血小板から放出される  ａｌｐｈａ顆粒中の  ５ＨＴも血管を収縮させ末梢循環障害など循環器系疾患を進行させる事より、  ＡＨＯＰや  ＳＰＣなどの  Ｅｄｇ受容体作動物質は血管を収縮させ、循環器系疾患を増悪させてしまう可能性が考えられる。
【０００９】
杉山らは、ラットにＡＨＯＰを尾静脈内投与し血行動態を観察したところ、収縮期血圧、及び左心室内圧の時間微分の２指標が有意に低下し、ＡＨＯＰが  ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて心機能低下の方向に作用している可能性を示した（非特許文献１４を参照）。
【００１０】
Ｅｄｇ  −  ３受容体は  ＧＴＰ結合タンパク質のサブタイプ  Ｇ１３  ／  ｑタイプと共役していて  （非特許文献１５を参照）、Ｅｄｇ  −  ３と  ＡＨＯＰが結合すると  Ｇ１３  ／  ｑタンパク質経由でイノシトール  ３リン酸  （  ＩＰ３）が生成する。一方、心筋においてはアンジオテンシン受容体が  Ｅｄｇ  −  ３と同様に  ＩＰ３を動かすが、アンジオテンシン受容体拮抗薬が心肥大を強く抑制する事より、  Ｅｄｇ受容体拮抗物質が、アンジオテンシン受容体拮抗薬と同様に心肥大に奏効する可能性を考える事ができる。また、  ＡＨＯＰがムスカリン受容体内向き  Ｋ＋整流を活性化し、不整脈を引き起こす可能性が指摘されている  （  非特許文献１６を参照）事より、  Ｅｄｇ受容体拮抗物質が不整脈に奏効する可能性を考える事ができる。
【００１１】
血管内皮細胞に及ぼす  ＡＨＯＰの作用を、血管新生動物モデルを用いて検討した結果、  ＶＥＧＦ（  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ、血管内皮細胞増殖因子）、や  ＦＧＦ  −  ２（  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ、繊維芽細胞増殖因子）などの増殖因子による血管新生を、  ＡＨＯＰが  Ｅｄｇ  −  １、  Ｅｄｇ  −  ３と結合する事によって相乗的に促進させ、  Ｅｄｇがリウマチ、固形がんや糖尿病性網膜症の進行の方向に作用している可能性が指摘されている  （非特許文献１５を参照）。
【００１２】
ＡＨＯＰと  Ｅｄｇ受容体の結合によって引き起こされる過剰な炎症や気道のリモデリングの結果、肺炎、慢性閉塞性気道疾患  （  ＣＯＰＤ：  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ａｉｒｗａｙ  ｄｉｓｅａｓｅ）、呼吸器系高血圧が進行する可能性が指摘されている  （非特許文献１７を参照）。
くも膜下出血後の脳底動脈攣縮は脳虚血による予後悪化を引き起こす重大な問題だが、脳底動脈攣縮のメカニズムにはセロトニンやトロンボキサン、エンドセリンが関与していると言われていたもののはっきりしていない。また、くも膜下出血後血管攣縮の直接的治療法は確立されていない。しかし、  Ｔｏｓａｋａらは  ＡＨＯＰをイヌ小脳延髄槽内投与したところ、  ＡＨＯＰ用量依存的に  ２５  ｎｍｏｌ  ／  ｋｇ（凡そ  ７μｇ  ／  ｋｇ）、  ５０  ｎｍｏｌ  ／  ｋｇ（凡そ  １５μｇ  ／  ｋｇ）と脳底動脈径が縮小し血管攣縮が引き起こされると示した。  ５０  ｎｍｏｌ  ／  ｋｇ群では  ＡＨＯＰ投与２日後までの長期間にわたって、コントロール群の脳底動脈径と比較して  １  ／  ３程度に縮小したままで、  ＡＨＯＰが強い血管攣縮を引き起こした。従って、  Ｅｄｇ受容体への拮抗性を指標にし、かつ上記病気の治療薬として適切であるものを探索する必要がある。
これらの知見を総合すると、  ＡＨＯＰが  Ｅｄｇと結合すると、血小板が活性化を受け炎症性細胞活性化や血管平滑筋細胞増殖、血行動態悪化など動脈硬化促進的に作用し、また、末梢循環障害、血管新生を促進し、リウマチ、固形がん、糖尿病性網膜症の進行の方向に作用する可能性が示されている事になる。また、呼吸器系疾患を進行させると考えられる。更に、不整脈や心筋梗塞を進行させる可能性が考えられる。即ち、  Ｅｄｇに拮抗する物質が、抗血小板性、抗循環器系疾患性（例えば抗動脈硬化性）、抗末梢循環障害性、抗リウマチ性、抗がん性、抗糖尿病性網膜症性、抗心臓疾患性（例えば抗不整脈性、抗心筋梗塞性）、抗くも膜下後出血後血管攣縮性、抗呼吸器系疾患性を示す可能性が考えられる。
【００１３】
【非特許文献１】
｀９７  Ｊ．  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  １２１，  ｐｐ．  ９６９  −  ９７３
【非特許文献２】
｀００  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｊ．，  ３５２，  ｐｐ  ８０９  −  ８１５、
【非特許文献３】
｀００年生化学会要旨集  ｐ．  ７４４、  １  Ｐ  −  ２２２
【非特許文献４】
｀９７  ＪＢＣ．  ２７２，  ８，  ｐｐ．  ５２９１  −  ５２９７
【非特許文献５】
｀９０  ＪＢＣ，  ２６５，  ｐ．  ９３０８
【非特許文献６】
｀９８  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２７９，  ｐｐ．  １５５２  −  １５５５
【非特許文献７】
｀００  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒ，  ４６８，  ｐｐ．  １８９−１９３
【非特許文献８】
｀０１  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２９１，  ｐｐ．  １８００  −  １８０３
【非特許文献９】
｀０１  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｊ．  ３５３，  ｐｐ  １３９  −  １４６
【非特許文献１０】
｀９４  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｅｓ．，  ２８，  ｐ．  １１６６
【非特許文献１１】
｀９９  ＪＢＣ，  ２７４，  ２７，  ｐ．  １８９９７
【非特許文献１２】
｀９９，  ＢＢＲＣ，  ２６０，  ｐ．  ２０３
【非特許文献１３】
｀００  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，  １３０，  ｐｐ．  １８７１  −  １８７７
【非特許文献１４】
｀００  Ｊｐｎ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ８２，  ３３８−３４２
【非特許文献１５】
｀９９  Ｃｅｌｌ，  ｐｐ．  ３０１  −  ３１２
【非特許文献１６】
｀９９  Ｐｆｕｇｅｒｓ  Ａｒｃｈ  −  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈｉｓｉｏｌ，  ４３８，  ｐｐ．  ６４２  −  ６４８
【非特許文献１７】
｀００  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ２０００，  １３，  ｐ．  ９９
【００１４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、Ｅｄｇ拮抗活性を有する有用な新規含窒素化合物、その製造法及びその利用方法を提供することにある。さらに詳細には、本発明は、新規な（１Ｓ，２Ｒ）−２−窒素含有基置換−１−アリール−１，３−プロパンジオール誘導体、当該誘導体の製造方法、及び当該誘導体を含有する医薬組成物を提供することにある。
【００１５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、鋭意研究を行なった結果、  （  Ｃ  １、  Ｃ２）位置が  （  １Ｓ、  ２Ｒ）である事を特徴とする下記式Ｉ：
【００１６】
【化９】
2004331523.tif 000003
【００１７】
（式中、Ａｒは無置換または少なくとも１個の置換基を有することができるアリール基であり、Ｒ’は水素、アルキル基、アルキルカルボニル基、またはアルコキシ基である）で表わされる新規化合物が  Ｅｄｇ受容体に拮抗する事を見い出し、本発明を完成した。なお、  Ａｒの結合した炭素を  Ｃ１、その隣の炭素を  Ｃ２として表記した。
【００１８】
すなわち、本発明は、一般式Ｉ：
【００１９】
【化１０】
2004331523.tif 000004
【００２０】
（式中、Ａｒは無置換または少なくとも１個の置換基を有することができるアリール基であり、Ｒ’は水素、アルキル基、アルキルカルボニル基、またはアルコキシ基である）で示される新規（１Ｓ，２Ｒ）−２−窒素含有基置換−１−アリール−１，３−プロパンジオール誘導体化合物にある。
【００２１】
さらに、本発明は、式Ｉ：
【００２２】
【化１１】
2004331523.tif 000005
【００２３】
（式中、Ａｒは無置換または少なくとも１個の置換基を有することができるアリール基であり、Ｒ’は水素、アルキル基、アルキルカルボニル基、またはアルコキシ基である）で示される（１Ｓ，２Ｒ）−２−窒素含有基置換−１−アリール−１，３−プロパンジオール誘導体の製造法であって、
式：
【００２４】
【化１２】
2004331523.tif 000006
【００２５】
（式中、ＡはＮの保護基であり、ＢおよびＣはアルキル基である）
の（Ｒ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体を、式：
【００２６】
【化１３】
Ａｒ−ＭｇＢｒ
のグリニヤール試薬と反応させて式：
【００２７】
【化１４】
2004331523.tif 000007
【００２８】
の化合物を得、当該化合物を脱保護基化し、式：
【００２９】
【化１５】
2004331523.tif 000008
【００３０】
の化合物を得、必要に応じて２位のアミンの水素をＲ’基で置換させるか、遊離の塩基にするかまたは他の薬学的に許容できる塩にすることを含む（１Ｓ，２Ｒ）−２−窒素含有基置換−１−アリール−１，３−プロパンジオール誘導体化合物の製造法にある。
【００３１】
また、本発明は、式Ｉ：
【００３２】
【化１６】
2004331523.tif 000009
【００３３】
（式中、Ａｒは無置換または少なくとも１個の置換基を有することができるアリール基であり、Ｒ’は水素、アルキル基、アルキルカルボニル基、またはアルコキシ基である）で示される（１Ｓ，２Ｒ）−２−窒素含有基置換−１−アリール−１，３−プロパンジオール誘導体またはその製薬学的に許容できる塩を含有する医薬組成物、特に、Ｅｄｇ受容体拮抗剤にある。
【００３４】
【発明の実施の形態】
本発明は  （  Ｃ１、  Ｃ２）位置の絶対立体配置の組み合せが  （  １Ｓ、  ２Ｒ）である事を特徴とする、一般式Ｉ：
【００３５】
【化１７】
2004331523.tif 000010
【００３６】
（式中、Ａｒは無置換または少なくとも１個の置換基を有することができるアリール基であり、Ｒ’は水素、アルキル基、アルキルカルボニル基、またはアルコキシ基である）で示される、含窒素化合物またはこれらの製薬学的に許容される塩に関する。
【００３７】
また、本発明は上記一般式Ｉで表わされる新規含窒素化合物またはこれらの製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する  Ｅｄｇ受容体に拮抗する医薬に関する。
【００３８】
前記式Ｉにおける置換基について説明する。
「アリール基」の具体例としては、フェニル基、  １  −  ナフチル基および  ２  −  ナフチル基などがあげられる。
置換することのできるアリール基の置換基には、例えば、アルキル基、ニトロ基、アルコキシ基、ハロゲン原子等があり、アリール基は少なくも１個の置換基を有することができる。置換位置はパラ位が好ましい。
「アルキル基」は、例えば、低級アルキル基であり、その具体例としては、メチル基、エチル基、  ｎ  −  プロピル基、イソプロピル基、ｎ  −  ブチル基、イソブチル基、  ｔｅｒｔ  −  ブチル基、  ｓｅｃ  −  ブチル基、  ｎ  −  ペンチル基、  ３，  ３  −  ジメチルブチル基、  ２  −  エチルブチル基などの直鎖または分岐鎖または分岐鎖状のアルキル基等があげられる。
「アルキルカルボニル基」は、例えば、炭素数  ２〜５のアルキルカルボニルであり、その具体例としては、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル基およびピバロイル基などがあげられる。
【００３９】
「アルコキシ基」は、例えば、炭素数  １〜５のアルコキシであり、その具体例としては、メトキシ基、エトキシ基、  ｎ  −  プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ｎ  −  ブトキシ基、イソブトキシ基、  ｔｅｒｔ  −  ブトキシ基、  ｓｅｃ  −  ブトキシ基、  ｎ  −  ペントキシ基、  ３，  ３  −  ジメチルブトキシ基、  ２  −  エチルブトキシ基などの直鎖または分岐鎖または分岐鎖状のアルコキシ基等があげられる。
【００４０】
Ｒ’の好ましい例はメチル基、エチル基、アセチル基である。
本発明の化合物のうち、特に、下記一般式ＩＩ
【００４１】
【化１８】
2004331523.tif 000011
【００４２】
（式中、Ｒは水素、低級アルキル、例えば、メチル、エチル、プロピル等、または低級アルコキシ、例えば、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ等である。）で表される（１Ｓ，２Ｒ）−２−アミノ−１−（４置換−フェニル）−１，３−プロパンジオールが好ましい。
【００４３】
本発明の化合物は目的に応じて塩を形成でき、例えば、本発明の化合物を医薬用途に用いる場合、製薬学的に許容されるものであれば特に制限されず、例えば、フッ素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩などのハロゲン化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、炭酸塩などの無機酸塩、メタンスルホン酸塩などの低級アルキルスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、  ｐ  −  トルエンスルホン酸塩などのアリールスルホン酸塩、酢酸塩、フマル酸塩、グリシン塩、アラニン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩等のアミノ酸塩などがあげられる。本発明の化合物の溶媒和物も本発明に包含されるものであり、溶媒和物としてはアセトン、  ２  −  ブタノール、  ２  −  プロパノール、エタノール、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテルなどとの溶媒和物があげられる。
【００４４】
本発明の式Ｉ化合物は、例えば、以下のチャートに示すような製造方法によって製造する事ができる。
【００４５】
【化１９】
2004331523.tif 000012
【００４６】
反応原料の下記式
【００４７】
【化２０】
2004331523.tif 000013
【００４８】
（式中、ＡはＮの保護基であり、ＢおよびＣはアルキル基、例えば、メチル基である）の  Ｎ−保護（Ｒ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体は公知の方法、例えば、（Ｒ）  −  セリンから森らの方法  （Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９８５、  ４１、  ２３７９  −  ２３８６）によって合成する事ができる。
【００４９】
ここで、  Ｎの保護基  Ａとしては、例えば、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、  ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、  ｔ−アミノオキシカルボニル（Ａｏｃ）、イソボニルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−クロル−ベンジルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホルミル、  ｏ  −  ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルスルフェノチオイルなどの基が挙げられる。好ましくは、  Ｂｏｃが用いられる。
【００５０】
次に、この原料Ｎ−保護（Ｒ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体を、式：
【００５１】
【化２１】
Ａｒ−ＭｇＢｒ
のグリニヤール試薬と反応を実施するのに適当な溶媒、例えば、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル等のエーテル系溶媒中で、適当な反応温度、例えば、−８０℃〜室温（２５℃）、好ましくは、−１５℃〜１０℃で反応させて式：
【００５２】
【化２２】
2004331523.tif 000014
【００５３】
の化合物を得、当該化合物を塩化水素または塩化アセチルなどの塩化水素発生剤と水またはメタノールなどの低級アルコールとの混液で  ０℃〜  ２０℃、好ましくは  ２０℃で処理する事により脱保護基化し、式：
【００５４】
【化２３】
2004331523.tif 000015
【００５５】
の化合物を得、必要に応じて２位のアミンの水素をハロゲン化アルキル  Ｒ’Ｘ（Ｘはハロゲン）とＤＭＦ中反応させ、Ｒ’基で置換させて式Ｉの化合物を得る。また、必要に応じて、公知の方法により遊離の塩基にするかまたは他の製薬学的に許容できる塩にする。
本発明の式Ｉ化合物は  Ｅｄｇ受容体拮抗性を示した。従って、本発明は、本発明の式Ｉ化合物を有効成分として含有する医薬組成物、特に、内皮分化遺伝子（Ｅｄｇ）受容体に拮抗する医薬組成物を提供する。
ここで、  Ｅｄｇ受容体に拮抗する医薬組成物とは、  Ｅｄｇ受容体が関与する様々な疾患、例えば  ＡＨＯＰが  Ｅｄｇ受容体に反応する事によって生じる疾患を、この反応に拮抗することによって、予防または治療しうる医薬組成物をいう。Ｅｄｇ受容体が関与する様々な疾患とは、例えば、循環器系疾患（動脈硬化、末梢循環障害など）、心臓疾患（心筋梗塞、不整脈など）、呼吸器系疾患（喘息など）、リウマチ、がん、糖尿病性網膜症、くも膜下出血後血管攣縮の予防、若しくは治療があげられる。
本発明における各化合物は経口、または非経口（注射剤、外用剤、坐剤など）で投与する事ができる。その投与量は約  ０．０００１〜約  １  ｇ  ／  ｋｇ体重  ／  日を１日１回または複数回の範囲が好適であるが、この投与量は疾患の種類、患者の年齢、体重、症状により適宜増減する事ができる。
【００５６】
本発明の化合物を医薬組成物として用いるためには、固体組成物、液体組成物、およびその他の組成物等のいずれの形態でもよく、必要に応じて最適のものが選択される。医薬組成物は本発明の化合物を常用の賦形剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、ｐＨ調整剤、溶解剤、などを添加し、常用の製剤技術によって、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、粉剤、液剤、乳剤、懸濁剤、注射剤、などに調製する事ができる。賦形剤、増量剤としては、たとえば、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、オリーブ油、カカオバター、エチレングリコールなどやその他常用されるものをあげる事ができる。
【００５７】
【実施例】
本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、これは本発明の技術範囲を限定するものではない。
【００５８】
（実施例１）（１Ｓ，  ２Ｒ）−２−アミノ−１−フェニル−１，３−プロパンジオール塩酸塩（化合物Ｉ）の合成
【００５９】
【化２４】
2004331523.tif 000016
【００６０】
アルゴン気流下、マグネシウム  （  ５．６２  ｇ，  ２３１  ｍｍｏｌ）とヨウ素（触媒量）の混合物中にブロモベンゼン（  ３７．７  ｇ，  ２０８  ｍｍｏｌ）の  ＴＨＦ  （  ４００  ｍＬ）溶液をゆっくりと加え、  Ｇｒｉｇｎａｒｄ試薬を調製した。アルゴン気流下、  （Ｒ）−型の  Ｇａｒｎｅｒのアルデヒド  （  ２０．０  ｇ，  ７７．１  ｍｍｏｌ）の  ＴＨＦ  （  ２００  ｍＬ）溶液に  −７８℃下で先に調製した  Ｇｒｉｇｎａｒｄ試薬をゆっくりと加えた。  ０℃下で  ２時間撹拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。エーテルで抽出し、有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。減圧濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー  （  ４００  ｇ，  ヘキサン／酢酸エチル  ＝  ２０  ：  １）により精製し、  ｔｅｒｔ  −  ブチル  （  ４Ｒ）  −  ２，  ２  −  ジメチル  −  ４  −  ヒドロキシフェニルメチル  −  ３  −  オキサゾリジンカルボキシレートをジアステレオマー混合物として無色油状で得た  （  １７．９  ｇ，  ７０％）。この化合物はそれ以上精製せずに次の反応に用いた。
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ５００  ＭＨｚ）：δ  ＝  １．４１  （  ｂｒ．  ｓ，  １Ｈ，  Ｏ  −  Ｈ），  １．４９，  １．５０，  １．５４，  ［  ｅａｃｈ  ｓ，  １５Ｈ，  ｔ−Ｂｕ，  Ｃ（ＣＨ３）２］，  ３．６０  −  ３．９３  （  ｍ，  １Ｈ，  ＣＨ  −  Ｎ），  ３．９４  −  ４．３１  （  ｍ，  ２Ｈ，  ＣＨ２  −  Ｏ），  ４．７４  −  ５．２７  （  ｍ，  １Ｈ，  ＣＨ  −  Ｏ），  ７．２２  −  ７．４７  （  ｍ，  ５Ｈ，  Ｐｈ）。
【００６１】
Ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｒ）−２，  ２−ジメチル−４−ヒドロキシフェニルメチル−３−オキサゾリジンカルボキシレート（３２．４  ｇ，  １０５  ｍｍｏｌ）のメタノール  （  ３００  ｍＬ）溶液に  ０℃下で塩化アセチル（１２．０  ｍＬ，  １６９  ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。室温下で  ２４時間撹拌した後、減圧濃縮した。得られた残さに対して  ＥｔＯＨ  −エーテルで２回再結晶操作を行うことにより、目的とする化合物を無色針状結晶として  ３．６４ｇ（１７％，２ステップ）得た。
ｍ．ｐ．：１６０．０  −  １６５．０℃
［α］Ｄ２６  ＝  ＋４６．５  （ｃ  ＝  １．０７，  ＭｅＯＨ）
ＩＲ  （ヌジョール）：  ｖ  ＝  ３２７５  （  ｂｒ．  ｓ，  Ｏ  −  Ｈ，  Ｎ  −  Ｈ），  １５９０  （ｍ），  １１００  （ｍ．  Ｃ  −  Ｏ），  ７５５  （ｍ），  ７００  （ｍ）  ｃｍ−１
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤ３ＯＤ，  ５００  ＭＨｚ）：δ  ＝  ３．４４  （  ｄｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ９．０，  ４．３，  ３．７  Ｈｚ，  ２  −  Ｈ），  ３．５４  （  ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．５，  ３．７  Ｈｚ，  ３  −  Ｈａ），  ３．６７  （  ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．５，  ９．０  Ｈｚ，  ３  −  Ｈｂ），  ４．９８  （  ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ４．３  Ｈｚ，  １  −  Ｈ），  ７．２７  −  ７．５０  （  ｍ，  ５Ｈ，  Ｐｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ  （ＣＤ３ＯＤ，  １２６  ＭＨｚ）：δ＝  ５８．８，  ５９．４，  ７２．０，  １２７．２，  １２９．２，  １２９．７，  １４１．１．
Ｃ９Ｈ１４ＣｌＮＯ２  （  ２０３．７）：  計算値：  Ｃ  ５３．０８，  Ｈ  ６．９３，  Ｎ  ６．８８；  実測値：  Ｃ  ５２．８５，  ６．７０，  ６．７７。
【００６２】
（実施例  ２）  （１Ｓ，  ２Ｒ）  −  ２  −  アミノ  −  １  −  （  ４  −メチルフェニル）  −  １，  ３  −  プロパンジオール塩酸塩（化合物ＩＩ）の合成
【００６３】
【化２５】
2004331523.tif 000017
【００６４】
アルゴン気流下、マグネシウム（７３０  ｍｇ，  ３０．０  ｍｍｏｌ）とヨウ素（触媒量）の混合物中にパラブロモトルエン（４．０２  ｇ，  ２３．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ  （４０ｍＬ）溶液をゆっくりと加え、  Ｇｒｉｇｎａｒｄ試薬を調製した。アルゴン気流下、（Ｒ）−型の  Ｇａｒｎｅｒのアルデヒド（２．１０  ｇ，  ９．１６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（３０ｍＬ）に  −７８℃以下で先に調製したＧｒｉｇｎａｒｄ試薬をゆっくりと加えた。−５〜−１℃で２時間撹拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。エーテルで抽出し、有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。減圧濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（４０  ｇ，  ヘキサン／酢酸エチル＝１０  ：  １）により精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｒ）−２，  ２  −ジメチル−４−ヒドロキシ（  ４  −  メチル）フェニルメチル−３−オキサゾリジンカルボキシレートをジアステレオマー混合物として無色油状で得た（１．７８ｇ，５．５５ｍｍｏｌ）。この化合物はそれ以上精製せずに次ぎの反応に用いた。
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ＝１．４３（ｂｒ．  ｓ，  １Ｈ，  Ｏ  −  Ｈ），  １．４９，  １．５０，  １．５４，  １．５７  ［  ｅａｃｈ  ｓ，  １５Ｈ，  ｔ  −  Ｂｕ，  Ｃ（ＣＨ３）２］，  ２．３４  （  ｓ，  ３Ｈ，  ＣＨ３），  ３．５７  −  ３．９５  （  ｍ，  １Ｈ，  ＣＨ  −  Ｎ），  ３．９６  −  ４．３１  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣＨ２  −  Ｏ），  ４．９６  −  ５．２５  （  ｍ，  １Ｈ，  ＣＨ  −  Ｏ），  ７．１６  （  ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．８  Ｈｚ，  Ｐｈ），  ７．２６  （  ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．８  Ｈｚ，  Ｐｈ）。
【００６５】
ｔｅｒｔ  −  ブチル  （４Ｒ）−２，  ２−ジメチル−４−ヒドロキシ（４−メチル）フェニルメチル−３−オキサゾリジンカルボキシレート（１．７８  ｇ，５．５５ｍｍｏｌ）のメタノール（２５ｍＬ）溶液に、０℃下で塩化アセチル（０．６ｍＬ，８．４３ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。室温下で２４時間撹拌した後、減圧濃縮した。得られた残さに対してメタノールで再結晶操作を行なう事により、目的とする（１Ｓ，  ２Ｒ）  −  ２  −  アミノ  −  １  −  （  ４  −  メチルフェニル）  −  １，  ３  −  プロパンジオール塩酸塩を無色針状結晶として４４９  ｍｇ（２．０６ｍｍｏｌ，  ３７％）を得た。
ｍ．ｐ．：  １６３．５  −  １６８．０℃
［α］Ｄ２６  ＝  ＋４２．２  （ｃ＝１．１０，ＭｅＯＨ）
ＩＲ  （ヌジョール）：  ｖ  ＝  ３３７５  （  ｂｒ．  Ｗ，  Ｎ  −  Ｈ），  ３２５５  （ｂｒ．  ｍ，  Ｏ  −  Ｈ），  １６２０  （ｗ），  １６００  （ｗ），  １５２５  （ｗ），  １２０５  （ｗ），  １０６５  （ｍ）．  １０２０  （ｍ）  ｃｍ−１
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤ３ＯＤ，  ４００  ＭＨｚ）：δ＝  ２．３３  （  ｓ，  ３Ｈ，  ＣＨ３），  ３．４１  （ｄｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．８，  ４．４，  ３．９  Ｈｚ，  ２  −  Ｈ），  ３．５６  （  ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．５，  ３．９  Ｈｚ，  ３  −  Ｈａ），  ３．６７  （  ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．４，  ８．８  Ｈｚ，  ３  −  Ｈｂ），  ４．９６  （  ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ４．４  Ｈｚ，  １  −  Ｈ），  ７．２１  （  ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．８  Ｈｚ，  Ｐｈ），  ７．２９  （  ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．８  Ｈｚ，  Ｐｈ）
１３Ｃ  ＮＭＲ  （  ＣＤ３ＯＤ，  １００  ＭＨｚ）：δ＝  ２１．２，  ５８．９，  ５９．４，  ７１．８，  １２７．１，  １３０．３，  １３８．１，  １３９．１．
Ｃ１０Ｈ１６ＣｌＮＯ２  （２１７．７）：  計算値：  Ｃ５５．１７，  Ｈ７．４１，  Ｎ  ６．４３；  実測値：  Ｃ  ５４．８４，  Ｈ  ７．１４，  Ｎ  ６．２２。
【００６６】
（実施例３）（１Ｓ，２Ｒ）−２−アミノ−１−（  ４  −  メトキシフェニル）−１，３−プロパンジオール（化合物ＩＩＩ）の合成
【００６７】
【化２６】
2004331523.tif 000018
【００６８】
マグネシウム（１．２７ｇ，  ５２．４ｍｍｏｌ）、４−ブロモアニソール  （９．８ｇ，５２．４ｍｍｏｌ），  ヨウ素（触媒量）をＴＨＦ（６０ｍｌ）中で２時間加熱還流し、Ｇｒｉｇｎａｒｄ試薬を調製した。アルドリッチから購入した  （Ｒ）−型の  ｇａｒｎｅｒのアルデヒド（ｔ−ブチル  （Ｒ）−４−ホルミル−２，２−ジメチル−３−オキサゾリジンカルボキシラート、３ｇ，１３．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６０ｍｌ）溶液に先程作ったＧｒｉｇｎａｒｄ試薬（２０ｍｌ）を−７８℃で１時間かけて滴下した。ドライアイスバスを一晩かけてゆっくり室温まで昇温させた。翌日反応を０℃下で水を加えて止めた。２Ｎ  塩酸（８ｍｌ）を加えて中和した。飽和塩化アンモン溶液（１００ｍｌ）を加え、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）で抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥後、濾過、濃縮した。粗生成物（黄色油状物，収量５ｇ）をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｒ）−２，２−ジメチル−４−ヒドロキシ−４−（ｐ−メトキシフェニル）−３−オキサゾリジンカルボキシラート  とそのジァステレオ異性体混合物（３．６ｇ，  ８２％収率，無色油状物）  が得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，  ２７０ＭＨｚ）：  δ  ７．３５（ｍ，  ２Ｈ），  ６．９（ｄ，  ２Ｈ），  ５．０５（ｂｓ，  １Ｈ），  ４．３５−３．８５（ｍ，  ２Ｈ），  ３．８（ｓ，  ３Ｈ），  ３．８−３．５５（ｍ，  １Ｈ），  １．５（ｍ，  １５Ｈ）。
【００６９】
ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｒ）−２，２−ジメチル−４−ヒドロキシ−４−（ｐ−メトキシフェニル）−３−オキサゾリジンカルボキシラート  （３．６ｇ，１０．７ｍｍｏｌ）  のジオキサン（５０ｍｌ）溶液に４Ｎ  塩酸Ｄｉｏｘａｎｅ  （２７ｍｌ）を室温で１０分かけて滴下した。室温で１２時間攪拌後、溶媒を減圧留去した。粗生成物のＮＭＲで２種類の化合物を確認した。比率は約６対４。ＬＣＭＳ分析で二つの化合物は同じ分子量を持つことがわかった。シリカゲルカラムクロマトで精製し２つのフラクションを得た。収量は、フラクション１が１ｇ、フラクション２が６６０ｍｇだった。フラクションＦｒ２をＭｅＯＨ／Ｅｔ２Ｏから再結晶し、目的の（１Ｓ，２Ｒ）−２−アミノ−１−（  ４  −  メトキシフェニル）−１，３−プロパンジオール（白色粉末，  ３５０ｍｇ収量，  収率１７％）が得られた。純度は８９Ｍｏｌ％、９６Ｗｔ％（不純物はエーテル）だった。
ｍ．ｐ．：９４．６−１０１．２℃
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，  ２７０ＭＨｚ）：  δ  ７．３（ｄ，  ２Ｈ），  ６．９３（ｄ，  ２Ｈ），  ４．５３（ｄ，  １Ｈ），  ３．８３（ｓ，  ３Ｈ），  ３．８−３．６（ｍ，  ２Ｈ），  ３．０２（ｍ，１Ｈ）
［α］Ｄ２０＝１４．０（Ｃ＝１．０１５，  ＭｅＯＨ）
【００７０】
（実施例４）Ｅｄｇ受容体応答性試験
Ｅｄｇ受容体を細胞表面に発現している前骨髄芽腫細胞株  ＨＬ  ６０を用いて、被験物質の細胞応答性を検討した。細胞応答の指標として、細胞内  Ｃａ２＋濃度の上昇を測定した。なお、  ＨＬ  ６０細胞表面上の  Ｅｄｇ受容体は、  ＡＨＯＰと結合すると、  ＧＴＰ結合タンパク質をリン酸化し、イノシトール  ３リン酸  （  ＩＰ  ３）キナーゼを活性化した後に細胞内  Ｃａ２＋濃度が上昇する事が報告されている  （ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒ  ’９６，  ３７９，  ｐ．  ２６０；  ＢＢＲＣ  ’９８，  ２５３，  ｐ．  ２５３）。また、血清存在下、長期間培養する事で、  ＨＬ  ６０細胞表面に  Ｅｄｇ受容体が発現する様になる事が報告されている。
【００７１】
Ｃａ２＋キレート試薬  Ｆｕｒａ  ２−ＡＭを  ＨＬ  ６０細胞に取り込ませた。
石英製セル内に細胞懸濁液  １．２  ｍｌを充填し蛍光光度計（パーキンエルマー製、細胞測定用）に装着し、  ０．５ミリ秒毎に励起波長を  ３４０  ｎｍ（  Ｃａ２＋をキレートした  Ｆｕｒａ  −  ２を励起）と  ３８０  ｎｍ（未反応  Ｆｕｒａ  −  ２を励起）に交互に切り替え  ５１０  ｎｍの蛍光光度を測定した。
【００７２】
被験物質をそれぞれ  ３０  μＭ終濃度で、マイクロシリンジを用いて加えた後蛍光光度を追跡して  Ｃａ２＋が増加するかどうか検討した。また、被験物質添加後に  ＡＨＯＰ（終濃度  １μＭ）を追加した際、Ｃａ２＋が増加するかどうか確認し、各物質の  ＡＨＯＰ拮抗性について検討した。
【００７３】
化合物Ｉ、化合物ＩＩ、或いは化合物ＩＩＩを添加した後、ＡＨＯＰ追加による細胞内Ｃａ２＋濃度増加が阻止された事より、これら三物質が  Ｅｄｇ拮抗性である可能性が示唆された。
【００７４】
次に、拮抗の可能性が示唆された三物質による細胞内Ｃａ２＋増加阻止作用の用量依存性を検討した。
その結果、化合物Ｉ、化合物ＩＩ、或いは化合物ＩＩＩは何れも用量依存的にＡＨＯＰによる  ＨＬ  ６０細胞内Ｃａ２＋濃度増加を阻止した。化合物Ｉ、化合物ＩＩ、或いは化合物ＩＩＩの５０％抑制点ＩＣ５０はそれぞれ  １２±３  ｎＭ、６４±０  ｎＭ、或いは  ０．２±０．０  μＭだった。
【００７５】
（実施例  ５）３Ｈ  −  ＡＨＯＰを用いた競合実験
細胞を遠心分離によって回収後  Ｆ−１２培地（  Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）（  ４℃保存、  １０  ｍｌ）に懸濁し、ＲＩ実験室に搬入した。細胞懸濁液  ２００  μｌ（  １×１０６  ｃｅｌｌｓ／ｍｌ  Ｆ−  １２）に、終濃度  １  ｎＭの  ３Ｈ−ＡＨＯＰ（１０ｍＣｉ／１ｍＭ）と終濃度１００ｎＭの非標識化合物を加え、４℃にて３０分間（時々撹拌して）結合試験を行った。１２，０００ｒｐｍにて７分間遠心分離後、上澄を素速く細胞ペレットを傷付けない様に）マイクロピペッターを用いて捨て去り、沈澱した細胞ペレットをレディソルブ（ベックマン）  １．５  ｍｌで懸濁してバイアルに移し液体シンチレーションカウンターＬ  ２１００（ベックマン）で放射活性を測定した。細胞に結合した３Ｈ−ＡＨＯＰを定量した。
【００７６】
その結果、表１に示すように、  ＡＨＯＰと同様、化合物Ｉ、化合物ＩＩ、或いは化合物ＩＩＩが、３Ｈ  −  ＡＨＯＰに競合した事より、これら三物質が  Ｅｄｇ受容体と特異的に結合していると考えられた。
【００７７】
【表１】
2004331523.tif 000019
【００７８】
（実施例  ６）疑似血管モデルを用いた抗炎症試験
（１）疑似血管モデルを用いた  ＡＨＯＰの炎症惹起作用
トランスウェル底面の孔膜上に一層のウシ内皮細胞を培養し、トランスウェル上室に蛍光標識したラット好中球浮遊液を加え、下室に  ＡＨＯＰを終濃度  ０．１〜１０μＭとなるように懸濁した。即ち、トランスウェルの上室と下室は内皮層を隔てて隔離され、上室が血管内部、下室が血管外の炎症部に対応する疑似血管ｉｎ  ｖｉｔｒｏ炎症モデルとなっている。上室から内皮層を潜り抜けて下室へ透過した好中球数、及び、内皮層に粘着した好中球数を測定したところ、  ＡＨＯＰ  １０  μＭにて、有意に好中球の内皮層透過、及び、粘着が促進を受けた。つまり、  ＡＨＯＰが炎症惹起物質として作用していると考えられた。
（２）炎症細胞  −  血管内皮細胞相互作用に及ぼす  Ｅｄｇ拮抗物質の作用
ＡＨＯＰを炎症惹起物質とし、Ｅｄｇ拮抗性を示す化合物Ｉが疑似血管  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ炎
症モデルに及ぼす影響を検討した。即ち、トランスウェル下室に化合物Ｉを  ０．３〜３  μＭで添加し、  ＡＨＯＰ  １０μＭを下室に入れて炎症を惹起した。内皮層に粘着した好中球数、或いは内皮層を抜け下室へ透過した好中球数を測定した結果、化合物Ｉ０．３〜  ３  μＭにて、濃度依存的に好中球透過、及び粘着が抑制を受けた（図１）。
【００７９】
体内の損傷部位で、露出を受けたコラーゲン（細胞外マトリックス）が損傷シグナルとして標的になり、血小板が凝集してくるが、凝集して活性化した血小板から放出される  ＰＤＧＦなどの炎症性サイトカインが炎症を進行させる。しかし、重度の炎症は循環器の恒常性を破綻させ、動脈硬化を進行させると考えられている。今回、疑似血管  ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルに於て、  ＰＤＧＦを炎症惹起剤として用いた訳ではないが、少なくとも  ＡＨＯＰを炎症惹起剤として用いた場合、化合物Ｉは抗炎症的に作用する事より、化合物Ｉは循環器の恒常性を維持し、病態を改善する方向に作用する可能性が考えられる。
【００８０】
（実施例  ７）合成型血管平滑筋細胞増殖試験
動脈硬化症の進行に伴って血管平滑筋細胞が収縮型から合成型に形質転換し、炎症性サイトカインを分泌しながら血管平滑筋細胞が増殖し動脈硬化巣が進展すると考えられている（ロスの仮説）。血管平滑筋細胞の表面には  Ｅｄｇ受容体が発現している事が報告されており（  Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ’００，  ５８，  ４４９）、ＡＨＯＰが血管平滑筋細胞を増殖させる事が報じられている（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｊ．  ’０１  ３５３，  ｐｐ  １３９−１４６）。今回、化合物Ｉによる血管平滑筋細胞増殖への作用を検討した。
【００８１】
ラット頚動脈内膜をバルーニングによって擦過し、２週間後にエクスプラント法  （  Ｅｘｐｌａｎｔ  ｃｕｌｔｕｒｅ）によって調製した血管平滑筋細胞を１０％牛胎児血清を含んだＤＭＥＭ培地  （Ｇｉｂｃｏ）にて培養し、数回経代し安定させた後、５×１０３  ｃｅｌｌｓ  ／  ｃｍ２の細胞密度に蒔種し実験に用いた。増殖因子ＡＨＯＰ（１μＭ）と併せて化合物Ｉを上述細胞に添加した２４時間後、  ＢｒｄＵアッセイ  （  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ’８２，  ２１８，  ｐ．  ４７４；  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  ’８５，６，ｐ．５８４）によって細胞密度を測定した。
【００８２】
その結果、化合物Ｉは  ０．１〜１μＭ濃度において、ある程度濃度依存的に血管平滑筋細胞増殖を抑制した（図２参照）。
【００８３】
（実施例  ８）ｅｘ  ｖｉｖｏ血小板活性〔静脈経路〕
化合物Ｉのｉｎ  ｖｉｖｏ作用を検討する目的で、ｅｘ  ｖｉｖｏ血小板活性を検討した。
【００８４】
実験では、化合物Ｉ  １０ｍｇ／ｋｇをモルモット耳介静脈内に注射した１０分後に採血し血小板を調製し、ｃｏｌｌａｇｅｎ（  ０．５〜１μｇ／ｍｌ）、或いはＡＤＰ（０．３〜３μＭ）で凝集を惹起して血小板活性を測定した。その結果、コラーゲンで惹起した場合は何ら作用を観察できなかったものの、  ＡＤＰで惹起した場合には化合物Ｉによって凝集が抑制を受けた（図３参照）。
【００８５】
次に、  ｅｘ  ｖｉｖｏ血小板試験を、ラットを用いて実施した。ラット尾静脈内に化合物Ｉを注射した１時間後の血小板活性を、コラーゲン  （  ０．７〜５μｇ  ／  ｍｌ）  、或いは  ＡＤＰ  （  ０．３〜３μＭ）によって惹起して検討した。その結果、化合物Ｉは  ０．３〜１  ｍｇ／ｋｇの用量にてある程度用量依存的にコラーゲン血小板凝集を抑制したが、  ３〜５μｇ／ｍｌの高濃度コラーゲンによる強い惹起に対しても抑制の作用を示した。一方、ＡＤＰ血小板凝集に対しても化合物Ｉは  ０．１〜１ｍｇ／ｋｇである程度用量依存的に抑制した（図４、図５参照）。
【００８６】
（実施例  ９）  ｅｘ  ｖｉｖｏ血小板凝集（経口経路）
実験では、ラット口腔内に化合物Ｉ  （  １０、  ３、及び  １  ｍｇ／ｋｇ）を投与した  ２時間後の血小板凝集を  ＡＤＰ、及びコラーゲンで惹起させ試験した。
【００８７】
その結果、ＡＤＰ  （０．３〜３μＭ）惹起血小板に対し化合物Ｉは用量依存的  （  １〜１０  ｍｇ／ｋｇ）に凝集を抑制した。陽性対照チクロピジンと作用を比較すると、化合物Ｉはチクロピジンの  １／１０の用量でチクロピジンと同等に凝集を抑制すると考えられた〔図６〕。
【００８８】
一方、コラーゲン（０．７〜３μｇ／ｍｌ）  惹起血小板に対し化合物Ｉは  ３、１０  ｍｇ／ｋｇの用量で凝集を抑制した。しかし、陽性対照チクロピジンは１００ｍｇ／ｋｇの用量でコラーゲン惹起血小板には作用しなかった（図７）。
【００８９】
（実施例  １０）イヌ脳底動脈マグヌス試験
くも膜下出血後血管攣縮への適応の可能性を探る目的でイヌ脳底動脈血管収縮  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験を行った。
【００９０】
１３  ｋｇのビーグル犬より脳底動脈を摘出し、  ４  ｍｍの環状標本を作成し、マグヌス管につるした。  Ｋｒｅｂｓ−ｒｉｎｇｅｒ栄養液を交換しながら  １時間平衡化した後、  ６０ｍＭ  ＫＣｌで非特異的収縮を惹起し各環状標本の収縮力の基準とした。再度、栄養液を交換して平衡化した後、  ＡＨＯＰを  ０．３〜１０μＭまで累積投与し収縮力を計測した。その結果、  ＡＨＯＰ濃度依存的に血管収縮が観察され、  １０μＭ  ＡＨＯＰによって  ＫＣｌ比  ８１．８％と強い血管収縮が  １時間以上継続した。
【００９１】
一方、化合物Ｉ、或いはＩＩを前処理（１０〜２０分間）した後に  ＡＨＯＰを  ０．３〜１０  Ｍまで累積投与し収縮力を計測した結果、いずれの化合物も  ＡＨＯＰ収縮を抑制した（図８、図９）。
【００９２】
（実施例  １１）ラウリン酸誘発末梢循環障害モデル
ウイスター系雄性ラット（８週齢）に化合物Ｉを経口投与した  ２時間後にラット右大腿動脈内にラウリン酸（１０ｍｇ／ｍｌを１５０μｌ）処置し、その後  １日  ２回経口経路で化合物Ｉを投与した。ラウリン酸処置  ３日、７日、  １０日、および１４日目に脚壊死をスコア評価した。スコア  １は黒変が爪先に限られ、スコア  ２は黒変が指部に及ぶ、スコア  ３は指部の壊死、そしてスコア  ４は指の脱落と評価し、各指のスコアを相加した。その結果、化合物Ｉは３０、１００ｍｇ／ｋｇで用量依存的に脚壊死を抑制する傾向を示した（図１０）。
【００９３】
【発明の効果】
本発明の目的化合物である一般式Ｉで表される（１Ｓ，２Ｒ）−２−窒素含有基置換−１−アリール−１，３−プロパンジオール誘導体化合物は、優れたＥｄｇ受容体拮抗作用を示し、抗循環器系疾患（例えば、抗動脈硬化、抗心臓疾患、抗末梢循環障害）、抗リウマチ、抗癌、抗糖尿病性網膜症、抗呼吸器系疾患や抗くも膜下出血後攣縮を示す医薬用途に有用性を有する新規化学物質を提供することができた。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、本発明の化合物Ｉが０．３〜３μＭ濃度において、濃度依存的に炎症を抑制することを示す図表である。
【図２】図２は、本発明の化合物Ｉが０．１〜１μＭ濃度において、濃度依存的に血管平滑細胞増殖を抑制することを示す図表である。
【図３】図３は、モルモットを用いたｅｘ  ｖｉｖｏ試験においてＡＤＰで凝集を惹起した場合、本発明の化合物Ｉが血小板凝集を抑制することを示す図表である。
【図４】図４は、ラットを用いたｅｘ  ｖｉｖｏ試験〔静脈内投与〕においてコラーゲンで凝集を惹起した場合、本発明の化合物Ｉが血小板凝集を抑制することを示す図表である。
【図５】図５は、ラットを用いたｅｘ  ｖｉｖｏ試験〔静脈内投与〕においてＡＤＰで凝集を惹起した場合、本発明の化合物Ｉが血小板凝集を抑制することを示す図表である。
【図６】図６は、ラットを用いたｅｘ  ｖｉｖｏ試験（経口投与）においてＡＤＰで凝集を惹起した場合、本発明の化合物Ｉが血小板凝集を抑制することを示す図表である。
【図７】図７は、ラットを用いたｅｘ  ｖｉｖｏ試験（経口投与）においてコラーゲンで凝集を惹起した場合、本発明の化合物Ｉが血小板凝集を抑制することを示す図表である。
【図８】図８は、イヌ脳底動脈マグヌス試験において  ＡＨＯＰで収縮を惹起した場合、本発明の化合物Ｉが収縮を抑制することを示す図表である。
【図９】図９は、イヌ脳底動脈マグヌス試験において  ＡＨＯＰで収縮を惹起した場合、本発明の化合物Ｉが収縮を抑制することを示す図表である。
【図１０】図１０は、ラウリン酸誘発末梢循環障害ラットにおいて本発明の化合物Ｉが脚壊死の進行を抑制することを示す図表である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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