(57)【要約】【課題】特に付着性の細胞の効率的な培養を簡易に行う。【解決手段】細胞を容器内面に付着させて培養する細胞培養方法であって、細胞を接触させる前に容器内面を湿潤させる湿潤工程Ｓ１を備える細胞培養方法を提供する。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞を容器内面に付着させて培養する細胞培養方法であって、細胞を接触させる前に容器内面を湿潤させる細胞培養方法。
【請求項２】
前記細胞が、間葉系幹細胞等の接着性細胞である請求項１に記載の細胞培養方法。
【請求項３】
前記容器が熱可塑性プラスチックからなる請求項１または請求項２に記載の細胞培養方法。
【請求項４】
前記容器内面が、天然高分子成分または重合性有機リン化合物を含有する液体により湿潤される請求項１から請求項３のいずれかに記載の細胞培養方法。
【請求項５】
前記容器内面が、リン酸塩を含有する水溶液により湿潤される請求項１から請求項３のいずれかに記載の細胞培養方法。
【請求項６】
湿潤後、細胞の接触前に、容器内面を乾燥させる請求項４または請求項５に記載の細胞培養方法。
【請求項７】
細胞を生体組織補填材に付着させて培養する生体組織補填体の製造方法であって、
細胞を生体組織補填材に接触させる前に、生体組織補填材を湿潤させる生体組織補填体の製造方法。
【請求項８】
生体組織補填材を湿潤させる前に、生体組織補填材を脱気する請求項７に記載の生体組織補填体の製造方法。
【請求項９】
前記細胞が、間葉系幹細胞等の接着性細胞である請求項７または請求項８に記載の生体組織補填体の製造方法。
【請求項１０】
前記生体組織補填材が、天然高分子成分または重合性有機リン化合物を含有する液体により湿潤される請求項７から請求項９のいずれか１項に記載の生体組織補填体の製造方法。
【請求項１１】
前記生体組織補填材が、リン酸塩を含有する水溶液により湿潤される請求項７から請求項９のいずれか１項に記載の生体組織補填体の製造方法。
【請求項１２】
湿潤後、細胞の接触前に、生体組織補填材を乾燥させる請求項１１に記載の生体組織補填体の製造方法。
【請求項１３】
前記生体組織補填材が、ハイドロキシアパタイトまたはリン酸カルシウムからなる請求項７から請求項１２のいずれか１項に記載の生体組織補填体の製造方法。
【請求項１４】
細胞を内面に付着させて培養する容器内に、湿潤液を滴下させる湿潤液滴下手段を備える細胞培養装置。
【請求項１５】
生体組織補填材を収容する容器内に、湿潤液を滴下させる湿潤液滴下手段を備え、湿潤された生体組織補填材に細胞を付着させて培養する生体組織補填体の製造装置。
【請求項１６】
生体組織補填材を脱気する脱気手段を備える請求項１５に記載の生体組織補填体の製造装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、細胞培養方法および生体組織補填体の製造方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
従来、細胞の培養方法としては、インビトロで培養細胞を用いて物質を生産する際に、培養細胞の増殖を促進しうるポリリン酸を含有した細胞増殖促進剤を培地に添加したり、容器に添加あるいは被覆して細胞を培養する方法が知られている（例えば、特許文献１参照。）。
【０００３】
また、多孔質材料表面に細胞表面と親和性を有するタンパク質等を付与することにより、血液等の細胞浮遊液から目的細胞を除去する特異的細胞除去材料は知られている（例えば、特許文献２参照。）。
【０００４】
【特許文献１】
特開２０００−６９９６１号公報（段落０００５，０００６）
【特許文献２】
特開平１１−１５８０７６号公報（段落０００３，０００４）
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
特許文献１に示されたポリリン酸には、以下の働きがあると考えられている。すなわち、細胞はその細胞自体の増殖を促進するために細胞増殖因子を少量分泌するが、ポリリン酸は、その細胞増殖因子を安定化させる働きがある。また、ポリリン酸は、細胞と細胞増殖因子との結合を強固なものにする働きがあると考えられている。
【０００６】
しかしながら、特に接着性の細胞に対しては、単にポリリン酸を添加しただけでは、細胞の成長は促すものの、成長環境を整えることができず、効率的な培養を行うことは必ずしも容易ではない。
一方、特許文献２に示される方法によれば、特に接着性の細胞を効率的に多孔質材料表面に付着させることができるが、本質的に細胞表面と親和性を有するタンパク質やペプチドの存在が必要であるという問題がある。
【０００７】
ハイドロキシアパタイトやリン酸カルシウムのような多孔質の生体組織補填材を作製する場合、８０℃以上の温度環境で生体組織補填材を焼成（または乾燥）するために、最終的には生体組織補填材の多孔質内には空気層が留まるという実験結果が得られている。さらに、生体組織補填材の大きさが大きくなればなるほど、その内部の空気層の容量が大きくなる。このような状態で生体組織補填材に細胞を播種すると、細胞が空気に触れる箇所が多く発生し、細胞の成長が阻害されるという不都合がある。
また、空気層が生体組織補填材内部への培養液の流れを阻止して培養液に流れの方向を作ってしまい、生体組織補填材内部に均一に培養液が染み込まないという実験結果が得られている。このため、生体組織補填材内に培養液が均一に染み込んでいない悪い環境下では、細胞が成長し難いという問題もある。
【０００８】
この発明は、上述した事情に鑑みてなされたものであって、付着性の細胞の効率的な培養を簡易に行うことができる細胞培養方法および生体組織補填体の製造方法を提供することを目的としている。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するために、この発明は、以下の手段を提供する。
請求項１に係る発明は、細胞を容器内面に付着させて培養する細胞培養方法であって、細胞を接触させる前に容器内面を湿潤させる細胞培養方法を提供する。この発明によれば、容器内面が湿潤されることにより容器表面の親水性が高められ、容器表面に沿って細胞が成長する際の流動性が向上する。その結果、容器表面における細胞の成長速度を高め、効率的な培養を行うことが可能となる。
【００１０】
請求項２に係る発明は、請求項１に記載の細胞培養方法において、前記細胞が、間葉系幹細胞等の接着性細胞である細胞培養方法を提供する。
この発明によれば、接着性細胞が成長する際に容器表面に接着しながら成長する。容器表面の疎水性が高いほど細胞が容器表面に接着し易いが、逆に、高い接着性により細胞の成長が拘束されることになる。そこで、細胞を容器内面に接触させる前に容器内面を湿潤させることにより、疎水性を低減して流動性を高め、細胞の効率的な成長を図ることが可能となる。
【００１１】
請求項３に係る発明は、請求項１または請求項２に記載の細胞培養方法において、前記容器が熱可塑性プラスチックからなる細胞培養方法を提供する。
請求項４に係る発明は、請求項１から請求項３のいずれかに記載の細胞培養方法において、前記容器内面が、天然高分子成分または重合性有機リン化合物を含有する液体により湿潤される細胞培養方法を提供する。
また請求項５に係る発明は、請求項１から請求項３のいずれかに記載の細胞培養方法において、前記容器内面が、リン酸塩を含有する水溶液により湿潤される細胞培養方法を提供する。
これらの発明によれば、容器内面を湿潤させることにより、界面活性効果が発揮され、表面張力の低減により、細胞の流動性が高められることになる。
【００１２】
請求項６に係る発明は、請求項４または請求項５に記載の細胞培養方法において、湿潤後、細胞の接触前に、容器内面を乾燥させる。
この発明によれば、乾燥後にも湿潤材の界面活性効果が残るので、付着された細胞の流動性を高め、成長速度を向上することが可能となる。
【００１３】
請求項７に係る発明は、細胞を生体組織補填材に付着させて培養する生体組織補填体の製造方法であって、細胞を生体組織補填材に接触させる前に、生体組織補填材を湿潤させる生体組織補填体の製造方法を提供する。
この発明によれば、生体組織補填材を湿潤させることにより、生体組織補填材の疎水性を低減し、付着された細胞の流動性を高めることが可能となる。したがって、生体組織補填材内に細胞を効率よく浸透させて、迅速に生体組織補填体を製造することが可能となる。
【００１４】
請求項８に係る発明は、請求項７に記載の生体組織補填体の製造方法において、生体組織補填材を湿潤させる前に、生体組織補填材を脱気する生体組織補填体の製造方法を提供する。
この発明によれば、生体組織補填材内の空気層を除去するので、生体組織補填材内への細胞の染み込み速度を向上することが可能となる。
【００１５】
請求項９に係る発明は、請求項７または請求項８に記載の生体組織補填体の製造方法において、前記細胞が、間葉系幹細胞等の接着性細胞である生体組織補填体の製造方法を提供する。
この発明によれば、細胞の接着性による生体組織補填材内部への低い浸透速度を改善し、効率的に生体組織補填体を製造することが可能となる。
【００１６】
請求項１０に係る発明は、請求項７から請求項９のいずれか１項に記載の生体組織補填体の製造方法において、前記生体組織補填材が、天然高分子成分または重合性有機リン化合物を含有する液体により湿潤される生体組織補填体の製造方法を提供する。
また、請求項１１に係る発明は、請求項７から請求項９のいずれか１項に記載の生体組織補填体の製造方法において、前記生体組織補填材が、リン酸塩を含有する水溶液により湿潤される生体組織補填体の製造方法を提供する。
また、請求項１２に係る発明は、請求項１０または請求項１１に記載の生体組織補填体の製造方法において、湿潤後、細胞の接触前に、生体組織補填材を乾燥させる生体組織補填体の製造方法を提供する。
【００１７】
これらの発明によれば、生体組織補填材の表面における細胞の界面活性効果を高めて、細胞の流動性を向上し、さらに迅速に生体組織補填材内部まで細胞を浸透させることが可能となる。
【００１８】
さらに、請求項１３に係る発明は、請求項７から請求項１２のいずれか１項に記載の生体組織補填体の製造方法において、前記生体組織補填材が、ハイドロキシアパタイトまたはリン酸カルシウムからなる生体組織補填体の製造方法を提供する。いずれの場合においても、生体組織補填材の表面状態が改善され、迅速に生体組織補填材を製造することができる。また、細胞の流動性を高めることにより、生体組織補填材の内部の深い位置まで細胞を到達させることもできる。
【００１９】
また、請求項１４に係る発明は、細胞を内面に付着させて培養する容器内に、湿潤液を滴下させる湿潤液滴下手段を備える細胞培養装置を提供する。
また、請求項１５に係る発明は、生体組織補填材を収容する容器内に、湿潤液を滴下させる湿潤液滴下手段を備え、湿潤された生体組織補填材に細胞を付着させて培養する生体組織補填材の製造装置を提供する。
請求項１６に係る発明は、請求項１５に記載の生体組織補填体の製造装置において、生体組織補填材を脱気する脱気手段を備える製造装置を提供する。
これらの発明によれば、湿潤液滴下手段の作動により、細胞の付着に先立って容器内面または生体組織補填材を湿潤させることが可能となり、細胞の培養または生体組織補填材の製造を迅速に行うことができる。
【００２０】
【発明の実施の形態】
この発明の一実施形態に係る細胞培養方法および生体組織補填材の製造方法について、図１を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る細胞培養方法は、接着性細胞、例えば、間葉系幹細胞を容器の底面に付着させた状態で、培養液内において所定の培養条件下に配することにより容器の底面に沿って成長させる方法である。容器は、例えば、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリメチルペンテン、ポリスチレン等の任意の熱可塑性プラスチックにより構成されている。特に、ポリスチレンにより構成することにより、疎水性の高い容器内面を設けることができ、細胞の接着性を高めることができる点で好ましい。
【００２１】
本実施形態に係る細胞培養方法は、図１に示されるように、例えば、間葉系幹細胞のような接着性細胞を、例えば、１×１０２〜１×１０３個含む培養液を容器内に投入する細胞投入工程Ｓ２と、該細胞投入工程Ｓ２に先立って、容器内面を湿潤処理する湿潤工程Ｓ１とを含んでいる。湿潤工程Ｓ１は、さらに、湿潤液を容器内に注入する注入工程Ｓ１１と、注入された湿潤液をアスピレータにより吸引する吸引工程Ｓ１２とを備えている。図中、符号Ｓ３は所定の培養条件、例えば、温度、湿度、炭酸ガス濃度等を維持して細胞を培養する培養工程である。
【００２２】
湿潤液としては、例えば、リン酸緩衝液（Ｐｈｏｓｐａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒｄ  Ｓａｌｉｎｅ：インビトロジェン・コーポレーション社製）が好ましい。
注入工程Ｓ１１において、容器内に湿潤液が注入されると、湿潤液は容器内面、特に容器の底面を覆ってこれを湿潤させる。その後、余分な湿潤液が吸引工程Ｓ１２によって吸引除去されるが、その後も容器内面における湿潤効果が維持されるようになっている。
【００２３】
ここで、湿潤液が生体組織補填材の内部に注入されるが、十分に生体組織補填材の内部の空気層が除去されていないので、湿潤液に浸された生体組織補填材周囲を低圧にして、生体組織補填材の内部の空気層を除去する。例えば、シリンダ直径の大きな注射器や真空容器や真空デシケータなどを使って、湿潤液に浸された生体組織補填材を低圧にして内部の空気層を除去（脱気）するようにしている。なお、生体組織補填材の大きさが５ｍｍ未満の大きさである場合には、脱気することなく湿潤液を注入するだけでよい。
【００２４】
本実施形態に係る細胞培養方法によれば、湿潤工程Ｓ１により、容器内面が湿潤液によって湿潤された後に細胞を含む培養液が投入されるので、容器内面に接触させられる細胞の流動性が湿潤液の湿潤作用によって高められることになる。その結果、容器内面が高い疎水性を呈していても、容器内面から接着性細胞が受ける拘束力が低減される。したがって、接着性細胞は、容器内面に付着するという細胞にとって快適な成長環境を維持されつつ、容器内面に沿う成長の進行を阻害されることなく迅速に広がるように成長することができる。
【００２５】
その結果、接着性細胞は容器底面上に迅速かつ均一に広がることができ、顕微鏡により容易にコンフルエントであると判断することが可能となった。これにより、従来と同じ細胞培養期間を確保すれば、細胞培養の収率を向上させることができるとともに、細胞活性を向上させ、健全に成長した細胞を得ることができるという利点がある。
【００２６】
図２に、本実施形態に係る細胞培養方法の実施に使用する細胞培養装置１を示す。この細胞培養装置１は、細胞を培養する培養容器２（容器）を載置する容器架台３と、該容器架台３を傾斜駆動する制御装置４と、湿潤液を貯留する湿潤液容器５と、該湿潤液容器５と前記容器架台３上の培養容器２との間で水平方向および鉛直方向に移動可能な分注アーム６（湿潤液滴下手段）と、前記培養容器２上方において鉛直方向および水平方向に移動可能な吸引アーム７とを備えている。これら分注アーム６および吸引アーム７の駆動機構は任意でよい。
【００２７】
分注アーム６には、その先端に使い捨て可能なピペット６ａが取り付けられ、その後端にシリンジ８（湿潤液滴下手段）が取り付けられている。シリンジ８の作動によりピペット６ａ内に湿潤液を吸引し、またはピペット６ａ外へ湿潤液を排出することができるようになっている。また、吸引アーム７の先端にも使い捨て可能なピペット７ａが取り付けられ、その後端に吸引ポンプ９が取り付けられている。吸引ポンプ９の作動により、吸引アーム７のピペット７ａ内に湿潤液等を吸引することができるようになっている。
【００２８】
このように構成された本実施形態に係る細胞培養装置１の作用について、以下に説明する。この細胞培養装置１により、細胞を培養するには、まず、分注アーム６を湿潤液容器５内に移動させ、シリンジ８の作動によりピペット６ａ内に湿潤液を吸引する。次いで、分注アーム６を鉛直方向に移動させた後、培養容器２の上方に配置し、シリンジ８を作動させることによりピペット６ａ内の湿潤液を培養容器２内に滴下する。そして、培養容器２内に滴下され、培養容器２内面を湿潤させた湿潤液の余りは、吸引ポンプ９を作動させることにより吸引アーム７に吸引され、廃棄される。
【００２９】
この場合において、培養容器２が容器架台３上に配置されているので制御装置４の作動により、容器架台３を傾斜させることができる。これにより、湿潤液を培養容器２内に均一に広げて、湿潤効果を高めることが可能となる。また、吸引アーム７による吸引時に培養容器２を傾斜させ、図３に示されるように、培養容器２内の低い位置から吸引することにより、残り少ない湿潤液を効率的に吸引することが可能となる。
このようにして、湿潤液により均一に湿潤された培養容器２の内面に細胞を付着させることにより、接着性細胞を容器２底面上に迅速かつ均一に広げることができる。
【００３０】
次に、この発明の一実施形態に係る生体組織補填体の製造方法について、図４を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る生体組織補填体の製造方法は、接着性細胞、例えば、間葉系幹細胞を生体組織補填材の表面に付着させた状態で、培養液内において所定の培養条件下に配することにより生体組織補填体を製造する方法である。生体組織補填材は、例えば、ハイドロキシアパタイトまたはβリン酸三カルシウム多孔体である。
【００３１】
本実施形態に係る製造方法は、図４に示されるように、生体組織補填材の表面に、例えば、間葉系幹細胞を１×１０６個含む培養液を滴下する播種工程Ｓ５と、該播種工程Ｓ５に先立って、生体組織補填材を湿潤処理する湿潤工程Ｓ４とを含んでいる。湿潤工程Ｓ４は、さらに、湿潤液を滴下させる滴下工程Ｓ４１と、生体組織補填材に滴下された余分の湿潤液を吸引除去する吸引工程Ｓ４２とを含んでいる。図中、Ｓ３は培養工程である。
【００３２】
湿潤液は、上述したリン酸緩衝液である。滴下工程Ｓ４１において、生体組織補填材の表面に湿潤液が滴下されると、湿潤液は生体組織補填材に備えられた多数の気孔に流入し、気孔内の生体組織補填材表面を湿潤させることになる。それでも生体組織補填材の内部の空気層が除去されていないので、図１と同様に、シリンダ直径の大きな注射器や真空容器や真空デシケータなどを使って、湿潤液に浸された生体組織補填材を低圧にして内部の空気層を除去（脱気）するようにしている。なお、生体組織補填材の大きさが５ｍｍ未満の大きさである場合には、脱気することなく湿潤液を注入するだけでよい。
【００３３】
その後、余分な湿潤液が吸引工程Ｓ４２によって吸引除去されるが、吸引後も生体組織補填材表面における湿潤効果が維持されるようになっている。
吸引工程Ｓ４２は、例えば、吸い取り紙によって生体組織補填材を包むことにより、あるいはアスピレータによって吸引することにより行われる。
【００３４】
本実施形態に係る生体組織補填体の製造方法によれば、湿潤工程Ｓ４により、生体組織補填材の表面が湿潤液によって湿潤された後に細胞を含む培養液が滴下されるので、生体組織補填材の表面に接触させられる細胞の流動性が湿潤液の湿潤作用によって高められることになる。その結果、生体組織補填材表面が疎水性を呈していても、生体組織補填材の気孔内に細胞が流入しやすくなる。したがって、接着性細胞が生体組織補填材の内部まで浸透し、生体組織補填材の全体にわたって成長した生体組織補填体が製造されることになる。
【００３５】
また、細胞を含有した培養液が生体組織補填材の内部に迅速に浸透することができるので、早期に生体組織補填材の全体にわたって細胞を成長させることができるという利点もある。
【００３６】
なお、本実施形態に係る生体組織補填体の製造方法の実施に使用する製造装置は、図２に示した細胞培養装置１と同様のものでよい。この場合に、湿潤液を滴下する分注アーム６は、生体組織補填材を培養容器２内に収容した状態で、生体組織補填材上に湿潤液を滴下するように設けられる。このような製造装置によれば、培養容器２を傾けて培養容器２の底部に余った湿潤液を吸引アーム７で吸引し、液残りを少なくすることができる。また、培養容器２の上方から近接可能なシリンジ等の脱気手段（図示略）を設けておき、湿潤液を滴下する前に、生体組織補填材内の空気を吸引することにしてもよい。
【００３７】
【実施例】
（実施例１）
１０ｍｍ角のβリン酸三カルシウムからなる生体組織補填材に湿潤液を７００μｌ滴下した後に、１×１０６個の間葉系幹細胞を含有する所定量の培養液を滴下した。湿潤液を滴下することなく同量の培養液を滴下した場合と比較して、培養液が滴下されてから生体組織補填材の内部に浸透し終わるまでに経過する時間が２秒以上早いことが確認された。
【００３８】
（実施例２）
１０ｍｍ角のβリン酸三カルシウムからなる生体組織補填材に湿潤液を７００μｌ滴下した後に、アスピレータにて湿潤液を吸引し、その後、１×１０６個の間葉系幹細胞を含有する所定量の培養液を滴下した。湿潤液を滴下することなく同量の培養液を滴下した場合と比較して、培養液が滴下されてから生体組織補填材の内部に浸透し終わるまでに経過する時間が２秒以上早いことが確認された。
【００３９】
（実施例３）
気孔率７５％前後のβリン酸三カルシウムからなり、大きさの異なる複数の生体組織補填材を２組用意した。１組の生体組織補填材に対しては、リン酸緩衝液内に浸漬することにより湿潤させ、他の１組の生体組織補填材に対しては湿潤工程を施さなかった。その後、湿潤させた生体組織補填材に対しては、吸い取り紙により余分なリン酸緩衝液を除去してから、略８０℃に加熱して水分を十分に除去した。
【００４０】
さらに、その後、両方の組の生体組織補填材を８００℃に加熱して、生体組織補填材に付着している油分を十分に除去し、室温まで冷却した。
この状態で、各組の生体組織補填材の表面に接着性細胞を含有する所定量の培養液を滴下し、培養液が滴下されてから生体組織補填材の内部に浸透し終わるまでに経過する時間を計測した。
【００４１】
その結果、図５に示されるように、湿潤液に浸漬せずに生体組織補填材に同種同量の培養液を滴下した場合と比較して、湿潤液に浸漬した生体組織補填材に対しては、その大きさが変化してもほぼ同等の時間で培養液が浸透することが確認された。
【００４２】
（実施例４）
上記各実施例ではブロック状の生体組織補填材を用いたが、顆粒状の生体組織補填材についても実験を行った。０．５ｃｃ程度の顆粒状の生体組織補填材に湿潤液を１００μｌ滴下した。湿潤液を滴下することなく前記と同量の培養液を滴下する場合と比較して、培養液が滴下されて生体組織補填材に浸透し終わる迄に経過する時間が３０秒以上早いことが確認された。
【００４３】
なお、上記実施形態においては、湿潤液としてリン酸緩衝液を例示して説明したが、これに代えて、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンのような重合性有機リン化合物の０．５重量％水溶液（Ｌｉｐｉｄｕｒｅ：日本油脂社製）、ヒアルロン酸ナトリウムのような天然高分子成分の０．５重量％水溶液（東京化成社製）、ポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル（ＧＯ−４：ＮＩＫＫＯＬ社製）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（ＢＴ−３：ＮＩＫＫＯＬ社製）のようなＨＬＢ（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｅ  Ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ  Ｂａｌａｎｃｅ）の値が６〜１２で湿潤性を示す界面活性剤の０．０５重量％水溶液等を採用してもよい。また、アルコール系非イオン界面活性剤、オキシエチレン系非イオン界面活性剤のようなＨＬＢ６〜１２の湿潤性を示す界面活性剤を採用してもよい。さらに具体的には、ソルビタン脂肪酸エステル、デカグリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリコール脂肪酸エステルや他の界面活性剤との混合物が挙げられる。また、使用濃度範囲は０．０２〜２重量％でよい。また、天然高分子成分としては蛋白溶液（アルブミン水溶液）を用いてもよい。
【００４４】
また、実施例３においては、生体組織補填材に付着している油分を除去するために８００℃に加熱する処理を行ったが、この工程を除いてもよい。
【００４５】
【発明の効果】
以上説明したように、この発明に係る細胞培養方法によれば、容器内における細胞の流動性を向上して容器表面における細胞の迅速な成長を促し、特に、付着性の細胞の効率的な培養を簡易に行うことができるという効果を奏する。また、この発明に係る生体組織補填体の製造方法によれば、生体組織補填材の表面における細胞の流動性を向上して、生体組織補填材の内部への細胞の浸透性を高め、生体組織補填材の全体において細胞を成長させて効率的に生体組織補填体を製造することができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【図１】この発明の一実施形態に係る細胞培養方法を示すフローチャートである。
【図２】図１の細胞培養方法を実施する細胞培養装置を部分的に示す模式図である。
【図３】図２の細胞培養装置の容器架台を傾斜させた状態を示す模式図である。
【図４】この発明の一実施形態に係る生体組織補填体の製造方法を示すフローチャートである。
【図５】実施例３の計測結果を示すグラフである。
【符号の説明】
Ｓ１，Ｓ４  湿潤工程
Ｓ２  細胞投入工程
Ｓ３  培養工程
Ｓ４１  滴下工程
Ｓ５  播種工程
Ｓ１１  注入工程
Ｓ１２，Ｓ４２  吸引工程
１  細胞培養装置
２  培養容器（容器）
６  分注アーム（湿潤液滴下手段）
８  シリンジ（湿潤液滴下手段）
【図１】
2004254516.tif 000003
【図２】
2004254516.tif 000004
【図３】
2004254516.tif 000005
【図４】
2004254516.tif 000006
【図５】
2004254516.tif 000007