(57)【要約】　　　（修正有）【課題】魚介類精巣由来のデオキシリボ核酸又はヌクレオプロテインを人間や動物に与えることにより、老化に伴う脳機能の低下を抑制させることのできることに関するものである。【解決手段】魚介類精巣由来のデオキシリボ核酸又はヌクレオプロテインを有効成分として含有することを特徴とする脳機能低下抑制組成物若しくは脳機能低下抑制剤または脳機能低下抑制食品である。【選択図】　図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
魚介類精巣由来のデオキシリボ核酸又はヌクレオプロテインを有効成分として含有することを特徴とする脳機能低下抑制組成物。
【請求項２】
魚介類精巣由来のデオキシリボ核酸又はヌクレオプロテインを有効成分として含有することを特徴とする脳機能低下抑制剤。
【請求項３】
魚介類精巣由来のデオキシリボ核酸又はヌクレオプロテインを有効成分として含有することを特徴とする脳機能低下抑制食品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、魚介類精巣由来のデオキシリボ核酸（以下ＤＮＡと称する。）又はヌクレオプロテイン（ＤＮＡと蛋白質の複合体）を有効成分として人間や動物に与えることにより、老化に伴う脳機能の低下を抑制させることのできる健康食品や薬剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
人の脳には、百億個以上の神経細胞（ニューロン）が集まっており、それらがお互いに結合し、神経回路網を構成することにより記憶が形成されると考えられている。外部の刺激を五感を通して受けたり、思考等による内部の刺激を受けることにより、神経細胞の結合が新しく作られたり、またすでに作られている結合を強固にする。神経細胞は２０歳を超えると減少するが、新しい神経回路の形成によりその減少を補い、脳機能を保つことが出来る（脳の可塑性）。このような脳の可塑性は年齢が低いほど顕著であり、老化に伴い神経細胞間の結合による記憶に時間がかかったり、それを引き出す時間が遅れることにより、「物忘れ」という症状が出る。
【０００３】
脳の発育や機能を充分に発揮させるには、栄養が大切な役割を果たす。栄養は脳内のエネルギー源、種々の構成成分の素材及び調節因子の素材としての役割を担っており、摂取が不充分であると脳の可塑性の維持が低下し、脳機能も低下する。特に、老齢においてはそれが顕著になる。脳機能維持のための食品（素材）については数多くの研究がなされており、それらを添加した食品、薬品が開発されている。
【０００４】
例えば、脳機能（記憶力）改善剤には次のようなものがある。
（１）２−（７−インデニルオキシメチル）モルホリンまたはその酸付加塩を有効成分とする記憶力増強剤（特開昭５６−１２３９１５号）。
（２）Ｈ−Ｘ−Ｙ−ＯＨ（式中ＸとＹは異なり、ＴｙｒまたはＡｒｇを意味する。）で表せるジペプチド化合物を含有する記憶改善剤（特開昭５８−１７０７１９号）。
（３）ドコサヘキサエン酸誘導体のエステル、アミド、トリグリセリド、リン脂質誘導体のうち少なくとも一種以上を有効成分として含有する脳機能改善組成物や痴呆症治療剤（特許２５２４２１７号）。
（４）乳酸菌醗酵乳、乳酸菌、酵母共生醗酵乳、これらの処理物、またはこれらの混合物を有効成分として含有する脳機能改善、学習能力増強作用を有する機能性商品（特開平９−２３８４８号）。
（５）エゾハリタケ科のキノコの実体又はその処理物を有効成分とする脳機能改善剤（特開２００２−８０３９０）
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
高齢化社会を迎えて、老化に伴う脳機能改善効果を有する食品の開発が多方面で進んでいるが、たくさんの量を摂取しないと効果が現れないものが多く、日常的に摂取する食品として、満足できるものではなかった。特に老人にとって、同じ物を多量に摂取するのは困難なことが考えられ、少量で効果のある物の方が望ましいと考えられる。そこで、少量でも効果の現れる脳機能改善食品・剤の開発を目指した。
【０００６】
本出願人は、従来より魚介類精巣（白子）成分の生理効果に着目して、当該魚介類精巣よりヌクレオプロテインを抽出、精製し、これを利用して耐久力及び生殖能力増強用の栄養補助食品（特公平６−２２４６７号）や耐久力増強用栄養補助食品（特許第１９０１５５８号、第２５６７２３１号）を研究開発した。これらのヌクレオプロテインは、魚介類精巣の外皮を除去し、ｐＨ５〜６の微酸性に調整したうえ、混入している血液ならびに悪臭成分を分離除去する方法で得るものである。このように本発明者は、魚介類精巣を有効に活用することを目的に研究開発を進めた。
【０００７】
その結果、白子成分から精製したＤＮＡ又はヌクレオプロテインには、脳機能低下抑制作用のあることを新たに見出した。
【０００８】
当該ＤＮＡを構成する基本物質は、デオキシリボヌクレオチドであり、当該デオキシリボヌクレオチドはリン酸、デオキシリボース及び核酸塩基との三成分から成る。デオキシリボースに核酸塩基（アデニン、グアニン、チミン及びシトシン）が結合しており、そのデオキシリボースがホスホジエステル結合により直鎖状に結合し、鎖状高分子が構成されている。４つの核酸塩基の配列により、遺伝子情報の保持と伝達が行われる。このようなＤＮＡの構造や遺伝子を解読する研究については盛んに行われているが、このＤＮＡの生理効果については、あまり研究されておらず、解明されていない。
【０００９】
これまで必要なヌクレオチドは体内合成されるため、食品中の核酸（ＤＮＡやリボ核酸（ＲＮＡ））は、栄養的価値はないものと思われてきた。このため、核酸の生理効果の研究については、あまり実施されてこなかった。
【００１０】
ところが、近年の研究によって、食物中の核酸は、ヌクレオシドまで分解された後に吸収され、体内の核酸合成に再利用されることが多いことが判明し、下記のような多くの生理効果のあることも解ってきた。このため核酸は、第七の準栄養素として摂取することが重要であるとされるようになった。
【００１１】
即ち、核酸の構成成分であるヌクレオチド、ヌクレオシドには、次のような生理効果があると考えられる。
（１）コレステロール代謝への影響、離乳期の成長促進、脂肪代謝改善などの栄養改善効果がある。
（２）病気や癌に対する抵抗力増強、細胞活性の低下（老化防止）、リンパ系胸腺の発達促進などの免疫能改善効果がある。
（３）肝の再生、蛋白質の分解抑制、肝虚血時のエネルギー代謝の改善、肝障害に対する修復などの肝エネルギー代謝の賦活及び肝の再生効果がある。
（４）小腸粘膜の保護、下痢後の腸の回復などの腸管の保全効果がある。
（５）保湿効果、ＵＶ吸収の阻害、皮膚賦活などの皮膚に対する保護作用効果がある。
（６）老化に伴う脳機能の低下を抑制する効果がある。
【００１２】
今回着目した脳機能低下抑制作用（６）の効果は、ＲＮＡ由来のヌクレオチド、ヌクレオシドまたはそれらの混合物による効果であり、ＤＮＡ自体の脳機能への効果や機構については試験例がない。そこで、本発明はＤＮＡ自体の脳機能への効果の確認試験を試みた。
【００１３】
試験内容は、ＤＮＡを老化促進マウスに摂食させ、一定期間経過後に行動試験（能動回避試験、受動回避試験）及び脳内形態の観察試験により記憶力の減退を抑制する効果を確認したものである。このように、老化による脳機能の低下に対するＤＮＡの抑制効果を確認することと、ＤＮＡとヌクレオプロテインの効果に違いがあるのかについても確認した。
【００１４】
その結果、学習能力を解析するための２つの行動的試験（能動回避試験、受動回避試験）の結果より、ＤＮＡ摂取群及びヌクレオプロテイン摂取群が対照群よりも学習能力が高いことが示された。このことから、ＤＮＡ及びヌクレオプロテイン摂取により老化に伴う学習能力低下が抑制されることが考えられる。また、脳内形態の観察によると、脳の海馬部位の空胞形成率がＤＮＡ及びヌクレオプロテイン摂取により抑制されることが解った。
【００１５】
前述のように発明者は、自ら行った脳機能に対するＤＮＡ自体の効果についての試験から、ＤＮＡには、それ自体に脳や脳細胞の老化を抑制し、学習能力がより高くなるとの新しい知見を得た。本発明は、この行動的試験及び脳形態観察により得たＤＮＡには、老化に伴う脳機能の低下を抑制する機能があるとの新しい知見に基づいて、脳機能低下抑制組成物や脳機能低下抑制剤や脳機能低下抑制食品の具現化に成功したのである。
【００１６】
【課題を解決するための手段】
特許を受けようとする第１発明は、魚介類精巣由来のＤＮＡ又はヌクレオプロテインを有効成分として含有することを特徴とする脳機能低下抑制組成物である。
【００１７】
特許を受けようとする第２発明は、魚介類精巣由来のＤＮＡ又はヌクレオプロテインを有効成分として含有することを特徴とする脳機能低下抑制剤である。
【００１８】
特許を受けようとする第３発明は、魚介類精巣由来のＤＮＡ又はヌクレオプロテインを有効成分として含有することを特徴とする脳機能低下抑制食品である。
【００１９】
【実施例】
以下本発明を実施例に基づいて詳細に説明する。
本発明の老化による脳機能の低下に対するＤＮＡ又はヌクレオプロテインの抑制効果を確認するため、下記の試験を行った。
【００２０】
＜試験例＞
試験の方法は、次の通りである。
ａ）試験動物：６ケ月齢の老化促進マウス（ＳＡＭＰ８）を用いた。ＳＡＭ（Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ　Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ　Ｍｏｕｓｅ）は、自発的老化の研究のために遺伝学的マウスモデルとして作製されたマウスであり、寿命が約１２ケ月と短く、早期から様々な老化現象が現れる。その中でもＳＡＭＰ８は、特に学習能力及び記憶力の減退が早いマウスとして単離されたものである。
【００２１】
ｂ）試験サンプル：ＤＮＡとヌクレオプロテイン（ＮＰ）を使用した。その成分は、表１の通りである。
【００２２】
【表１】
表１　：　デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）及びヌクレオプロテイン（ＮＰ）の成分表
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【００２３】
ｃ）群構成：対照群（精製飼料のみ）、０．２％ＤＮＡ添加精製飼料投与群（０．２％ＤＮＡ群）、０．５％ＤＮＡ添加精製飼料投与群（０．５％ＤＮＡ投与群）、０．８％ＮＰ添加精製飼料投与群（０．８％ＮＰ群）を設定した。なお、ＮＰの添加量はＤＮＡ含量が、０．５％ＤＮＡ添加飼料と同じになるように設定した。また窒素含量をグリシンで調整し、更に総重量を炭水化物で調整した。一群当たり、雌雄１０匹づつとした。
【００２４】
ｄ）試験内容：
＜老化度合観察試験＞
６ケ月齢の老化促進マウス（ＳＡＭＰ８）雄雌各１０匹／群に対し、試験飼料摂取を１６週続けた後、老化に関する臨床的な症状及び重大な病変の項目について、マウスの体表状態を観察して基準表に従い５段階で評価点数をつけ（点が高い程老化が進行している）、その合計で老化度合いを判断した。観察項目は次の通り。
【００２５】
行動：　反応性、受動性
体表状態：　色艶、毛の粗さ、脱毛度、潰瘍
目：　眼周囲炎症
背骨：　湾曲度合い
【００２６】
その結果は、図１（Ａ）（Ｂ）に示した通り、老化度合い評価点数グラフである。（Ａ）は、雄マウスの場合であり、（Ｂ）は、雌マウスの場合である。
各群の評価点数の合計結果に示した通り、雄雌ともに０．２％ＤＮＡ群、０．５％ＤＮＡ群、及び０．８％ＮＰ群が対照群と比べて有意に点数が低いことが判った。特に脱毛度で大きな差が認められた。これより、ＤＮＡ及びＮＰ摂取により老化の進行が抑制されることがわかった。
【００２７】
脳機能行動的試験：脳機能について能動的回避試験と受動的回避試験との２種類の行動的試験を行なった。
【００２８】
＜能動的回避試験＞
開閉仕切りが付いている壁で隔てられた２つの箱を用いる。マウスを片方の箱に入れて慣らした後に、条件反応を起こす刺激（音、赤・黄・緑色の光）を与える。マウスがその刺激を与えられている間に他の部屋に移動（能動回避）しない場合、床から無条件反応を起こす刺激（電気ショック）が与えられる。この試験を２０回繰り返し、電気ショックが与えられるまで部屋を移動しなかった回数を測定した。この試験を４日連続して行った。
【００２９】
当該能動的回避試験の結果は、図２（Ａ）（Ｂ）に示す通りである。２日目以降対照群と比べて、０．２％ＤＮＡ群、０．５％ＤＮＡ群及び０．８％ＮＰ群の回避失敗回数が有意に減少した。０．２％ＤＮＡ群、０．５％ＤＮＡ群、０．８％ＮＰ群の間に有意な差は認められなかった。また雄マウスと雌マウスとの間に大きな差は認められなかった。
【００３０】
＜受動的回避試験＞
オープンドアーで繋がれている明暗の２つの箱を用いる。最初ドアを仕切りで閉じておき、マウスを明の部屋に入れる。一定時間後に仕切りを外すと暗い所を好む習性によりマウスは暗の部屋に移動するが、マウスが暗の部屋に入ると再び仕切りが降り、床から電気ショックが与えられる。１，２，３日後に再試験をして（このときは電気ショックが与えられない）、明の部屋に滞留している状態を受動回避しているもの（暗の部屋に行くと電気ショックが与えられることを学習した）とみなし、滞留している時間を測定した。
【００３１】
当該受動的回避試験の結果は、図３（Ａ）（Ｂ）に示す通りである。対照群と比べて、０．２％ＤＮＡ群、０．５％ＤＮＡ群、０．８％ＮＰ群で回避するまでの時間が長くなる傾向が見られた。また、２４時間目の試験では有意差が認められた。０．２％ＤＮＡ群、０．５％ＤＮＡ群、０．８％ＮＰ群の間に有意な差は認められなかった。また雄マウスと雌マウスとの間に大きな差は認められなかった。
【００３２】
＜脳形態観察試験＞
脳の海馬部位の空胞形成率（スポンジ形成率）の測定結果を図４に示す。対照群と比べ、０．２％ＤＮＡ群、０．５％ＤＮＡ群、０．８％ＮＰ群で有意に空胞形成率が低いことが認められた。０．２％ＤＮＡ群、０．５％ＤＮＡ群、０．８％ＮＰ群の間に有意な差は認められなかった。
【００３３】
脳の海馬部位のリポフスチン含有細胞存在率の測定結果を図５に示す。対照群と比べ、０．２％ＤＮＡ群、０．５％ＤＮＡ群、０．８％ＮＰ群で有意にリポフスチン含有細胞存在率が低いことが認められた。０．２％ＤＮＡ群、０．５％ＤＮＡ群、０．８％ＮＰ群の間に有意な差は認められなかった。
【００３４】
【効果】
以上のような老化による脳機能の低下に対するＤＮＡの抑制効果を確認する試験の結果、ＤＮＡ摂取群及びＮＰ摂取群が対照群よりも学習能力や記憶力が高いことが示された。また、０．２％ＤＮＡ群、０．５％ＤＮＡ群、０．８％ＮＰ群の間に有意な差は認められなかったことにより、０．２％程度のＤＮＡの摂取で充分な効果があることがわかった。
【００３５】
また、脳の海馬部位の空胞形成率（スポンジ形成率）が、ＤＮＡ摂取群、ＮＰ摂取群が対照群と比べ、有意に低いことが認められたことから、ＤＮＡ及びＮＰ摂取により空胞形成が抑制され、学習能力が対照群より高くなったと考えられる。
【００３６】
また、脳の海馬部位のリポフスチン含有細胞存在率は、ＤＮＡ摂取群、ＮＰ摂取群の方が、対照群と比べ、有意に低いことが認められた。リポフスチンの蓄積は分裂停止細胞における老化に関与していることが多く報告されていることから、ＤＮＡまたはＮＰにより脳／脳細胞の老化が抑制され、学習能力が対照群よりも改善されたと考えられる。
【００３７】
尚、本発明に係る脳機能低下抑制組成物は、魚介類精巣由来のＤＮＡを有効成分として含有するものであるが、これは、ＤＮＡ又はヌクレオプロテインを乾燥して粉末状にした製品、それをタブレット状に加工成形した製品にしたものが脳機能低下抑制剤となり、当該ＤＮＡが水溶性であるため、飲料や各種食品などにも利用することができ、これが脳機能低下抑制食品である。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＤＮＡ又はＮＰを投与したときの老化度合い評価点数を示すグラフであり、その（Ａ）は雄マウスの場合の老化度合い評価点数グラフであり、（Ｂ）は雌マウスの場合の老化度合い評価点数グラフである。
【図２】能動的回避試験における回避失敗回数の比較を示すグラフであり、（Ａ）は雄マウスの場合を示し、（Ｂ）は雌マウスの場合を示すグラフである。
【図３】受動的回避試験における回避までの時間の比較を示すグラフであり、（Ａ）は雄マウスの場合を示し、（Ｂ）は雌マウスの場合を示すグラフである。
【図４】脳の海馬部位の空胞形成率（スポンジ形成率）の測定結果を図４に示すグラフでありる。
【図５】脳の海馬部位のリポフスチン含有細胞存在率の測定結果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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