(57)【要約】【課題】生体自体が有するセラミド産生機能を健常に戻すことにより、加齢、紫外線曝露、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎、老人性乾皮症、乾癬などによって減少した角層中のセラミド代謝を回復させて、セラミド量を増加させ、その結果、優れた、保湿機能およびバリア機能を有する皮膚を取り戻すことができるセラミド産生促進剤を提供すること。【解決手段】セラミド産生促進剤が開示されている。本発明のセラミド産生促進剤は、有効成分として以下の式（Ｉ）：【化１】2004161648.tif 000015で表されるゲンクワニンを含有する。本発明に用いられるゲンクワニンは、正常ヒト表皮細胞を活性化させることにより、当該細胞中でのセラミドの合成を促進させる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゲンクワニンを有効成分として含有する、セラミド産生促進剤。
【請求項２】
全量に対し、０．０００００１重量％から５０重量％の前記ゲンクワニンを含有する、請求項１に記載のセラミド産生促進剤。
【請求項３】
皮膚外用剤の剤形に調製してなる、請求項１または２に記載のセラミド産生促進剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、セラミド産生促進剤に関し、より詳細には、表皮細胞でのセラミド産生を促進させることにより、表皮における保湿機能を正常化かつ保持し得る、セラミド産生促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚は、生体の最外層を覆い、外界との境界を形成して外界物質の浸入防止、水分を包含する体内成分の損失防止などの生命維持に必須なバリア機能を有している。角質の細胞間には、セラミド、コレステロールおよび脂肪酸を主成分とする脂質が多重な層板構造、いわゆるラメラ構造が形成されている。この層板構造が水分透過バリアとして重要な役割を果たしている。
【０００３】
特に角質におけるセラミドは、上記バリアの形成に必須な成分であると考えられている。しかし、このセラミドの代謝は、加齢、紫外線曝露、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎、老人性乾皮症、乾癬などによって、健全な状態が損われることがある。その結果、角層中のセラミド量が減少して、例えば、皮膚の保湿能およびバリア能の低下を引き起こすことが数多く報告されている。
【０００４】
このような保湿能またはバリア能の低下を引き起こした皮膚に対し、セラミド合成を促進する物質を投与して細胞内での内的産生を促進させる技術が提案されている。
【０００５】
例えば、フレグランスジャーナル，１９９９年，第１０巻，ｐ．２３−２８は、このようなセラミド合成を促進する物質としてナイアシンアミドを用いることを開示している。また、他の技術としてセラミド自体を外部から直接皮膚細胞に補給する方法も知られている。しかし、いずれの技術においても、長期的な効果を認めることができず、かつ投与または補給された物質の安定性に欠けるという問題が指摘されている。
【０００６】
【非特許文献１】フレグランスジャーナル，１９９９年，第１０巻，ｐ．２３−２８
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記問題の解決を課題とするものであり、その目的とするところは、生体自体が有するセラミド産生機能を健常に戻すことにより、加齢、紫外線曝露、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎、老人性乾皮症、乾癬などによって減少した角層中のセラミド代謝を回復させて、セラミド量を増加させ、その結果、優れた、保湿機能およびバリア機能を有する皮膚を取り戻すことができるセラミド産生促進剤を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明は、ゲンクワニンを有効成分として含有する、セラミド産生促進剤である。
【０００９】
好ましい実施態様では、上記セラミド産生促進剤は、全量に対し、０．０００００１重量％から５０重量％の上記ゲンクワニンを含有する。
【００１０】
好ましい実施態様では、上記セラミド産生促進剤は皮膚外用剤の剤形に調製してなる。
【００１１】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳述する。
【００１２】
本発明のセラミド産生促進剤は、ゲンクワニンを有効成分として含有する。
【００１３】
本発明に用いられるゲンクワニンは、以下の式（Ｉ）：
【００１４】
【化１】
2004161648.tif 000002
【００１５】
で表される化合物である。本発明に用いられるゲンクワニンは、正常ヒト表皮細胞を活性化させ、当該細胞のセラミド産生能を向上させる役割を果たす。その結果、当該細胞中でのセラミドの合成が促進される。
【００１６】
従来、ゲンクワニンは、その構造自体は公知であり、抗菌活性（Ｃｏｔｔｉｇｌｉａ  Ｆ．ら、Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｅｎｅ  ２００１，７月，８（４），ｐ．３０２−３０５）および抗マラリア原虫活性（Ｋｏｈｌｅｒ  Ｉ．ら、Ｚ  Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ［Ｃ］，２００２，３月−４月，５７（３−４），ｐ．２７７−２８１）のような機能を有することが報告されている。しかし、ゲンクワニンが、本発明にて用いられるような正常ヒト表皮細胞に対するセラミド産生能の向上を奏することは知られていなかった。
【００１７】
本発明に用いられるゲンクワニンは、例えば、フナコシ（株）より市販に入手可能である。
【００１８】
あるいは、本発明に用いられるゲンクワニンは特定の植物から抽出かつ単離することにより得ることもできる。ゲンクワニンを含有する植物の例としては、シソ科、ジンチョウゲ科およびキク科の植物が挙げられる。ゲンクワニンを含有する植物のより具体的な例としては、Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ  Ｌ．（ローズマリー）、Ｄａｐｈｎｅ  ｇｅｎｋｗａ（フジモトキ）、Ｓｙｍｐｈｏｐａｐｐｕｓ  ｐｏｌｙｓｔａｃｈｙｕｓ、Ｐｒｕｍｕｓ  ｓｅｒｒａｔａ、およびＰｒｕｍｕｓ  ｐｕｄｄｕｍが挙げられる。上記植物は、通常、乾燥時の全草重量に対して、最大でも０．６重量％のゲンクワニンを含有する。
【００１９】
ここで、本発明に用いられるゲンクワニンを、上記植物から得る方法の一例について説明する。
【００２０】
まず、上記植物は、生のもの（例えば、採取後そのままのもの）、乾燥品のもの（例えば、天日乾燥処理をしたもの）、またはこれらの組合わせのいずれの形態で、好ましくは所望のサイズに裁断または粉砕される。使用される植物は、その植物の全草、葉、茎、根、花弁、またはその他任意の部位から、当業者によって適切に選択されてもよい。
【００２１】
次いで、この植物は適切な溶媒に浸漬され、植物抽出物が抽出される。
【００２２】
上記抽出に使用され得る溶媒は、通常の植物からの抽出に使用されるものであれば特に限定されないが、具体的な例としては、水；メタノール、エタノール、ｎ−ブタノール、ｎ−プロパノールなどのアルコール類；アセトン；酢酸エチルエステルのようなエステル類；ジエチルエーテルまたは石油エーテルのようなエーテル類；塩化メチレンまたはクロロホルムのような塩素系有機溶媒；ならびにこれらの組合せが用いられる。人体に対する安全性を考慮すれば、エタノールまたはエタノールと水との混合溶媒が好ましい。
【００２３】
上記抽出は室温で行うこともできるが、好ましくは、０℃〜１２０℃、より好ましくは０℃〜１００℃、さらにより好ましくは、室温℃〜８０℃にて行われる。抽出時間は、抽出温度によって変化するが、例えば１日〜１０日間、好ましくは１日〜５日で終了する。
【００２４】
抽出終了後、濾過または遠心分離することにより、上記植物と溶媒との混合物から、粗抽出液が分離される。その後、当業者に公知の手段（例えば、酢酸エチル、クロロホルム、アセトンなどの溶媒と、ヘキサン、ヘプタン、オクタンなどの溶媒との混合溶媒を用いるシリカゲルクロマトグラフィー、または分取ＨＰＬＣ）を用いて、濃縮および精製が行われる。
【００２５】
このようにして、本発明に用いられるゲンクワニンを得ることができる。
【００２６】
本発明のセラミド産生促進剤では、上記より精製して得られたゲンクワニンを用いても、または上記工程の途中で得られる（上記ゲンクワニンを含有する）植物抽出物自体を使用してもよい。使用され得る植物抽出物の形態としては、抽出物それ自体、その濃縮物、希釈液、乾燥物などが挙げられる。
【００２７】
本発明に用いられるゲンクワニンは、本発明のセラミド産生促進剤の全量に対して、好ましくは０．０００００１重量％〜５０重量％、より好ましくは０．０００１重量％〜２０重量％の割合で含有されている。本発明のセラミド産生促進剤におけるゲンクワニンの含有量が０．０００００１重量％を下回ると、作用させる細胞に対して適切な活性を提供することができず、その結果、セラミドの合成を満足し得る程度まで促進することができない恐れがある。他方、ゲンクワニンの含有量が５０重量％を上回っても、当該細胞に対する活性に変化は見られず、セラミド産生能はそれ以上向上しない恐れがある。
【００２８】
本発明のセラミド産生促進剤は、後述する剤型に応じて、任意のその他成分を含有する。このようなその他成分の例としては、油剤、保湿剤、増粘剤、防腐剤、乳化剤、色剤、粉体、ｐＨ調整剤、当業者に周知の任意の薬効成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、香料、アルコール、および水、ならびにそれらの組合せが挙げられる。本発明のセラミド産生促進剤に含まれる上記その他成分の含有量は、当業者によって任意に選択され得る。
【００２９】
本発明のセラミド産生促進剤の剤型は、特に限定されず、化粧料、医薬部外品、医薬品などの剤型をとることができる。本発明においては、皮膚外用剤の剤形に調製されることが好ましく、特に化粧料の剤型に使用することが好ましい。このような化粧料のより具体的な例としては、洗顔クリーム、化粧水、乳液、ファンデーション、パック、ローション、ゲル、およびスティックが挙げられる。
【００３０】
本発明のセラミド産生促進剤は、例えば、皮膚に直接付与（例えば、塗布またはスプレー）されることにより、有効成分として含有される上記ゲンクワニンが、加齢、紫外線曝露、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎、老人性乾皮症、乾癬などによって減少した正常ヒト表皮細胞中のセラミド代謝を回復させて、細胞内のセラミド量を増加させる役割を果たす。その結果、優れた、保湿機能およびバリア機能を皮膚に提供することができる。本発明のセラミド産生促進剤はまた、上記保湿機能およびバリア機能に代表される皮膚の正常化に加えて、このような機能の低下を予防することもできる。用量は、特に限定されず、使用者の体格、体質などの条件に応じて任意に選択され得る。
【００３１】
あるいは、上記ゲンクワニンを含有する本発明のセラミド産生促進剤は、上記のような外用の用途とは別に、（例えば、液体飲料または食品の形態で）内服しても同様のヒト正常皮膚細胞中のセラミド産生能を向上させることができる。
【００３２】
次に、本発明のセラミド産生促進剤を液体飲料として用いる場合について説明する。
【００３３】
本発明のセラミド産生促進剤を液体飲料として用いる場合、本発明に用いられるゲンクワニンは、上記皮膚外用剤と同様、市販されているものであっても、上記植物から抽出かつ精製されたものであっても、上記植物抽出物をそのまま使用したものであってもよい。
【００３４】
上記液体飲料に使用されるゲンクワニンの下限量は、通常、その全量に対し、０．０００００１重量％以上であり、好ましくは０．００００１％重量以上であり、より好ましくは０．０００１重量％以上である。液体飲料におけるゲンクワニンの含有量が０．０００００１重量％を下回ると、作用させる細胞に対して適切な活性を提供することができず、その結果、セラミドの合成を満足し得る程度まで促進することができない恐れがある。
【００３５】
本発明のセラミド産生促進剤を液体飲料として用いる場合のゲンクワニンの上限量は、特に限定されないが、生産性を高める点から、全量に対し、好ましくは５重量％以下であり、より好ましくは１重量％以下であり、最も好ましくは０．５重量％以下である
【００３６】
上記液体飲料は、上記ゲンクワニン以外に、当業者に公知の他の飲料成分を含有する。このような飲料成分の例としては、水、果汁、甘味料、増粘剤、防腐剤、乳化剤、着色料、ｐＨ調整剤、当業者に周知の任意の薬効成分、抗酸化剤、香料、およびアルコール、ならびにそれらの組合せが挙げられる。この液体飲料に含まれる上記その他飲料成分の含有量は、当業者によって任意に選択され得る。
【００３７】
次に、本発明のセラミド産生促進剤を食品として用いる場合について説明する。
【００３８】
本発明のセラミド産生促進剤を食品として用いる場合、本発明に用いられるゲンクワニンは、上記皮膚外用剤と同様、市販されているものであっても、上記植物から抽出かつ精製されたものであっても、上記植物抽出物をそのまま使用したものであってもよい。
【００３９】
上記食品に使用されるゲンクワニンの下限量は、通常、その全量に対し、０．０００００１重量％以上、好ましくは１重量％以上、より好ましくは３重量％以上である。この食品中のゲンクワニンの含有量が０．０００００１重量％を下回ると、作用させる細胞に対して適切な活性を提供することができず、その結果、セラミドの合成を満足し得る程度まで促進することができない恐れがある。
【００４０】
上記食品に使用されるゲンクワニンの上限量は、特に限定されないが、生産性を高める点から、全量に対し、好ましくは５重量％以下であり、より好ましくは１重量％以下であり、最も好ましくは０．５重量％以下である。
【００４１】
本発明のセラミド産生促進剤を食品として用いる場合の形態は、特に限定されないが、具体的には、キャンディー、ビスケット、クッキー、キャラメル、チョコレート、ウエハース、パン、ドーナツ、麺類、ドレッシング、またはマヨネーズのような任意の形態が挙げられる。上記食品は、ゲンクワニン以外に、当業者に公知の他の食品添加剤を含有していてもよい。このような食品添加剤の例としては、水、油、果汁、甘味料、増粘剤、防腐剤、乳化剤、着色料、ｐＨ調整剤、当業者に周知の任意の薬効成分、抗酸化剤、および香料、ならびにそれらの組合せが挙げられる。本発明のセラミド産生促進剤を用いた食品に含まれる上記食品添加剤の含有量は、当業者によって任意に選択され得る。
【００４２】
本発明のセラミド産生促進剤を用いる液体飲料および食品は、有効成分として含有されるゲンクワニンが正常ヒト表皮細胞に内的に作用して、加齢、紫外線曝露、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎、老人性乾皮症、乾癬などによって減少した当該細胞中のセラミド代謝を回復させて、当該細胞内のセラミド量を増加させる。その結果、優れた、保湿機能およびバリア機能を皮膚に提供するすることができる。本発明のセラミド産生促進剤を用いる液体飲料および食品はまた、上記保湿機能およびバリア機能に代表される皮膚の正常化に加えて、このような機能の低下を予防することもできる。液体飲料または食品に利用される場合の、本発明のセラミド産生促進剤の用量は、特に限定されず、使用者の体格、体質などの条件に応じて任意に選択され得る。
【００４３】
【実施例】
以下、本発明を具体的に記述するために実施例を記載する。しかし、これによって本発明は特に限定されない。
【００４４】
＜実施例１：正常ヒト表皮細胞のセラミド産生能の測定＞
正常ヒト表皮ケラチノサイトキット（クラボウ社製）に付属の培地を、同キットに添付のマニュアルに従って調製した。この培地を含む６ウエルのディッシュに正常ヒト表皮ケラチノサイト（クラボウ社製）を５０００個／ウエルとなるように播種し、３７℃にてＣＯ２インキュベーターで９０％コンフルエントに達するまで培養した。次いで、培地を細胞分化用培地［０．５μＭ−ハイドロコルチゾン、および被検サンプルとしてゲンクワニン（フナコシ社製）（５μＭ）を含む０．１μＭ−インスリン−１０％容量％ウシ胎児血清−ダルベッコ修正基礎培地：Ｈａｍ’Ｆ１２（３：１）］に交換し、２日毎に新しい培地に交換しながら培養を継続した。培養開始から９日目にディッシュよりケラチノサイトを回収し、クロロホルムとメタノールとの混合溶媒（容量比２：１）で脂質を抽出した。
【００４５】
抽出した脂質を乾固させた後、上記と同様のクロロホルムとメタノールとの混合溶媒２００μｌに溶解し、薄層クロマトグラフィーによりセラミドの定量を行った［展開溶媒／クロロホルム：メタノール：酢酸（容量比１９０：９：１）］。この培養からセラミドの定量までの工程を２回行った。
【００４６】
次いで、上記被検サンプルを用いた条件で得られたセラミド量（平均値）を、後述する比較例１のセラミド量の平均値（コントロール）と比較し、相対比として算出した。得られた結果を表１に示す。
【００４７】
＜比較例１＞
被検サンプルを用いることなく、脂質を得たこと以外は実施例１と同様にしてセラミドの定量を行った。この被検サンプルを用いていない条件での同様の操作（セラミドの定量まで）を２回行った。得られたセラミド量（平均値）をコントロール（１００．０％）とした。これを表１に示す。
【００４８】
【表１】
2004161648.tif 000003
【００４９】
表１に示されるように、ゲンクワニンを５μＭ添加した場合（実施例１）では、ゲンクワニン無添加の場合（比較例１）と比較してセラミド量が３９．１％増加していることがわかる。すなわち、ゲンクワニンは、正常ヒト表皮細胞内でのセラミド産生を促進させる役割を果たし、セラミド産生促進剤として有用であることがわかる。
【００５０】
＜実施例２：洗顔クリームの製造＞
ゲンクワニン（フナコシ社製）を用いて、成分Ａ、成分Ｂ、および成分Ｃの合計が１００重量％となるように、各成分Ａ〜Ｃを以下の割合で処方した。
【００５１】
【表２】
2004161648.tif 000004
【００５２】
【表３】
2004161648.tif 000005
【００５３】
【表４】
2004161648.tif 000006
【００５４】
まず、成分Ａでなる混合物を加熱溶解して、８０℃に保持した。次いで、別途８０℃で加熱溶解した成分Ｂを成分Ａに添加して、充分撹拌した。その後、撹拌しながら冷却を行い、５０℃にて成分Ｃを加え、洗顔クリームを得た。
【００５５】
＜実施例３：化粧水の製造＞
ゲンクワニン（フナコシ社製）を用いて、合計が１００重量％となるように以下の成分を処方した。
【００５６】
【表５】
2004161648.tif 000007
【００５７】
上記の全ての成分を室温にて混合および撹拌して均一な溶液とし、ｐＨを５．５に調整して、化粧水を得た。
【００５８】
＜実施例４：乳液の製造＞
ゲンクワニン（フナコシ社製）を用いて、成分Ｄ、成分Ｅ、および成分Ｆの合計が１００重量％となるように、各成分Ｄ〜Ｆを以下の割合で処方した。
【００５９】
【表６】
2004161648.tif 000008
【００６０】
【表７】
2004161648.tif 000009
【００６１】
【表８】
2004161648.tif 000010
【００６２】
まず、成分Ｄでなる混合物を加熱溶解して、８０℃に保持した。次いで、別途８０℃で加熱溶解した成分Ｅを成分Ｄに添加して、充分撹拌した。その後、撹拌しながら冷却を行い、５０℃にて成分Ｆを加え、乳液を得た。
【００６３】
＜実施例５＞
実施例３で製造された化粧水を、健常な被験者１２名の目尻に、１日１回適量づつ塗布し、これを８週間にわたって繰り返し行った。塗布前（０週間）、塗布を開始してから４週間経過後、および塗布を開始してから８週間経過後に、各被験者の目尻における経皮水分蒸散量を、２チャンネル水分蒸散モニター（ＡＳ−ＴＷ２）（（有）アサヒバイオメッド製）を用い、プローブ先端のカプセルを測定部位に漏気のないように固定し、測定部位上の空気を吸引してその中に含まれる水分を測定し、（単位；ｇ／（ｍ２・時間））バリア機能の目安とした。得られた測定結果の平均値（被験者の平均値）を表９に示す。
【００６４】
【表９】
2004161648.tif 000011
【００６５】
表９に示されるように、ゲンクワニンを含有させた化粧水を目尻に継続して塗布することにより、目尻の経皮水分蒸散量が著しく低下することがわかる。このことから、本発明のセラミド産生促進剤は、皮膚のバリア機能を向上させることがわかる。
【００６６】
＜実施例６＞
実施例５と同様にして、実施例３で製造された化粧水を、健常な被験者１２名の目尻に、１日１回適量づつ塗布し、これを８週間にわたって繰り返し行った。塗布前（０週間）、塗布を開始してから４週間経過後、および塗布を開始してから８週間経過後に、各被験者の目尻における水分量をコルネオメーターＣＭ８２５  （Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  ＧｍｂＨ）を用いて、測定して、保湿機能の改善状況を分析するための目安とした。０週目の結果を１００％として、４週間経過後および８週間経過後の結果を相対比として算出した。得られた算出結果の平均値（被験者の平均値）を表１０に示す。
【００６７】
【表１０】
2004161648.tif 000012
【００６８】
表１０に示されるように、ゲンクワニンを含有させた化粧水を目尻に継続して塗布することにより、目尻の水分量が著しく増加することがわかる。このことから、本発明のセラミド産生促進剤は、皮膚の保湿機能をも向上させることがわかる。
【００６９】
＜実施例７：ジュースの製造＞
合計が１００重量％となるように以下の成分を処方する。
【００７０】
【表１１】
2004161648.tif 000013
【００７１】
上記の全ての成分を室温にて混合および撹拌して均一な溶液として、ジュースを作製する。
【００７２】
＜実施例８：キャンディーの製造＞
合計が１００重量％となるように以下の成分を処方する。
【００７３】
【表１２】
2004161648.tif 000014
【００７４】
上記の全ての成分を７０℃にて混合および撹拌し、適切な型に入れて、室温まで冷却してキャンデーを作製する。
【００７５】
【発明の効果】
本発明によれば、有効成分として含有される上記ゲンクワニンが、加齢、紫外線曝露、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎、老人性乾皮症、乾癬などによって減少した表皮細胞中のセラミド代謝を回復させて、細胞内のセラミド量を増加させる役割を果たす。その結果、優れた、保湿機能およびバリア機能を皮膚に提供することができる。本発明のセラミド産生促進剤はまた、上記保湿機能およびバリア機能に代表される皮膚の正常化に加えて、このような機能の低下を予防することもできる。