(57)【要約】【課題】肺及び/又は肝臓への血小板の集積、及び/又は当該血小板の脱顆粒を抑制するための薬学的組成物を提供すること。【解決手段】肺及び/又は肝臓への血小板の集積、及び/又は当該血小板の脱顆粒を抑制するために有効な量のグリチルリチン又はグリチルレチン酸を、任意に薬学的に許容されうるキャリアとともに含める。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
肺及び/又は肝臓への血小板の集積、並びに当該血小板の脱顆粒を抑制するための薬学的組成物であって、
当該集積及び/又は当該脱顆粒を抑制するのに有効な量のグリチルリチン又はグリチルレチン酸を、任意に薬学的に許容されうるキャリアとともに含む薬学的組成物。
【請求項２】
肺及び/又は肝臓への血小板の集積、並びに当該血小板の脱顆粒を抑制する薬学的組成物の製造方法であって、グリチルリチン又はグリチルレチン酸を配合することを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、肺及び/又は肝臓への血小板の集積、並びに当該血小板の脱顆粒を抑制するための薬学的組成物、及びその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明者らは、グラム陰性菌の膜成分であるリポ多糖（ＬＰＳ；エンドトキシンとも呼ばれる）や、菌体（グラム陰性菌、グラム陽性菌、及び真菌などの加熱死菌）そのものをマウスに静脈注射すると、即時性血小板反応が生じることを見出し、すでに文献に報告している（Endo Y. & Nakamura M., Br. J. Pharmacol., 1992, 105: 613）。
【０００４】
【非特許文献１】
エンド（Endo）、ナカムラ（Nakamura）、「ザ  エフェクト  オブ  リポポリサッカリド、インターロイキン-1、アンド  チュモア  ネクローシス  ファクタ  オン  ザ  ヘパティック  アキュームレーション  オブ  5-ヒドイロキシトリプタミン  アンド  プレートレット  イン  ザ  マウス」（The effect of lipopolysaccharide, interleukin-1, and tumor necrosis factor on the hepatic accumulation of 5-hydroxytryptaine and platelets in the mouse）、「ブリティッシュ  ジャーナル  オブ  ファーマコロジー」（“British Journal of Pharmacology”）、（英国）、１９９２年、１０５巻、ｐ６１３。
【非特許文献２】
クロース（Kroes）、ボーケルマン（Boekelman）、バン・デン・バーグ（van den Berg）、ウォルビンク（Wolbink）、バン・ディジク（van Dijk）、ラバディエ（Labadie）、「インヒビション  オブ  ヒューマン  コンプレメント  バイ  ベータ-グリチルレチニック  アシッド」（“Inhibition of human complement by b-glycyrrhetinic acid”）、「イミュノロジー」（“Immunology”）、（英国）、１９９７年、９０巻、ｐ１１５-１２０。
【非特許文献３】
シバザキ（Shibazaki）、カワバタ（Kawabata）、ヨコチ（Yokochi）、ニシダ（Nishida）、タカダ（Takada）、エンド（Endo）、「コンプレメント-デペンデント  アキュームレーション  アンド  デグラデーション  オブ  プレートレット  イン  ザ  ラング  アンド  リバー  インデュースト  フォロイングインジェクション  オブ  リポポリサッカリド」（“Complement-dependent accumulation and degradation of platelets in the lung and liver induced following injection of lipopolysaccharides”）、「インフェクション  アンド  イミュノロジー」（“Infection and Immunology”）、（米国）、１９９９年、６７巻、ｐ５１８６-５１９１。
【非特許文献４】
ザオ（Zhao）、オータキ（Ohtaki）、ヤマグチ（Yamaguchi）、マツシタ（Matsushita）、フジタ（Fujita）、ヨコチ（Yokochi）、タカダ（Takada）、エンド（Endo）、「エル・ピー・エス-インデュスト  プレートレットレスポンス  アンド  ラピッド  ショック  イン  マイス：コントリビューション  オブ  オー-アンティジェン  リージョン  オブ  エル・ピー・エス  アンド  インボルブメント  オブ  ザ  レクチン  パスウェイ  オブ  ザ  コンプレメントシステム」（“LPS-induced platelet response and rapid shock in mice: contribution of O-antigen region of LPS and involvement of the lectin pathway of the complement system”）、「ブラッド」（“Blood”）、（米国）、２００２年、１００巻、ｐ3233-3239。
【０００５】
ＬＰＳをマウスに静脈投与すると、
（１）ＬＰＳ投与後２乃至３分以内に肺と肝臓に血小板が集積し、特に肺に大量の血小板が集積し、
（２）ＬＰＳ投与後５乃至１０分後には、血小板の血流への復帰が始まり、
（３）ＬＰＳの用量が高い場合には、肝臓に集積した血小板が脱顆粒を起こし、これに伴ってアナフィラキシー様のショックが生じ、
（４）ＬＰＳ投与１０分後以降には、脾臓への血小板集積が生じ、肝臓への血小板の集積は、１乃至３時間後に比較的緩やかに生じる。
これらの反応のうち、（１）及び（２）の反応は「即時性血小板反応」と呼ばれており、本願においてもこの意味において使用する。即ち、ＬＰＳ投与後、１０分以内に生体内において生じる反応をこのように呼ぶ。
【０００６】
本発明者らは、即時性血小板反応により、肺や肝臓へ血小板が集積している状態を電子顕微鏡により確認しており、更には、即時性血小板反応が、補体系レクチン経路の活性化により誘導されることを明らかにしている（Shibazaki et Al., Infect. Immun., 1999, 67:5186-5191）。
【０００７】
本発明者らは、グリチルリチン（ＧＬ）、及びＧＬから糖鎖を取り除いたグリチルレチン酸が、in vitroで抗補体作用を示すという報告（Kroes et al., Immunology, 1997, 90:115-120; Zhao et al., Blood, 2002, 100:3233-3239）に着目した。本発明は、肺や肝臓への血小板の集積、当該血小板の脱顆粒を抑制するための薬学的組成物、及びその製造方法を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記の研究成果を基に更に鋭意研究した結果、グリチルリチン及びグリチルレチン酸が、抗血小板作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
即ち本発明は、肺及び/又は肝臓への血小板の集積、並びに当該血小板の脱顆粒を抑制するための薬学的組成物であって、当該集積及び/又は当該脱顆粒を抑制するのに有効な量のグリチルリチン又はグリチルレチン酸を、任意に薬学的に許容されうるキャリアとともに含む薬学的組成物を提供する。
【００１０】
本発明は更に、肺及び/又は肝臓への血小板の集積、並びに当該血小板の脱顆粒を抑制する薬学的組成物の製造方法であって、グリチルリチン又はグリチルレチン酸を配合することを特徴とする方法も提供する。
【００１１】
グリチルリチン（又はグリチルリチン酸）は、グリチルレチン酸と２分子のグルクロン酸とからなる化合物であり、古くより抗炎症作用を有することが知られ、また、胃液分泌抑制作用、消化器の潰瘍の治癒作用、抗アレルギー性を高める作用、免疫抑制活性、肝機能増強作用、解毒作用、ウイルスに対する抵抗力を高める作用等も知られている。特に、肝臓疾患用剤、及びアレルギー用剤としては、広く臨床領域で用いられている化合物である。
【００１２】
グリチルリチンは、近年、ＨＩＶの細胞内増殖抑制作用を有すること、そして、無症状キャリア（ＡＣ）の患者に対してグリチルリチンを毎日１５０乃至２２５mg投与すると、１０年以上もＡＩＤＳを発症せずに生存させる効果を有することが報告されている。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明において使用するグリチルリチン及びグリチルレチン酸は、例えばミノファーゲン製薬より入手できるものを使用することができる。また、本発明において使用するグリチルリチン及びグリチルレチン酸は、甘草より抽出することによっても得ることができる。グリチルリチン及びグリチルレチン酸の、薬理学的に許容される塩もまた、使用することが可能であるが、その塩の例としては、グリチルリチンを無機又は有機の塩基と一定のモル比で作用させて得られるグリチルリチンアンモニウム塩、グリチルリチンアルカリ金属塩、又はグリチルレチンコリン塩などを挙げることができる。本発明においては、グリチルリチン又はその塩の１種類を用いることができ、また、任意の２種類の塩の混合物も用いることが可能であるが、投与量を正確に調整するためには、グリチルリチン又はその塩の１種類を用いることが好ましい。
【００１４】
本発明のグリチルリチン及びグリチルレチン酸を含む薬学的組成物の使用に当たっては、グリチルリチン及びグリチルレチン酸を、有効成分として適宜、薬学的に許容されるキャリア等に配合することにより製剤化した薬学的組成物を調製すればよく、調製に当たっては、当該技術分野において既知の方法に従えばよい。本発明においては、このような薬学的組成物を好適に用いることができる。
【００１５】
前記薬学的組成物は、常法にしたがって種々の形態に調製することが可能である。その剤型は特に限定されないが、薬学的に許容される１種又は２種以上のベヒクル、担体、賦型剤、結合剤、崩壊剤、分散剤、滑沢剤、被覆剤、防腐剤、安定剤、矯味・矯臭剤、着色剤などと共に混和して、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、水薬等の内服剤、及び無菌溶液剤、懸濁液剤などの注射剤とすることができる。これらは、公知の技術を用いて製造することができる。
【００１６】
剤型に関しては、例えばグリチルリチン又はその薬理学的に許容される塩、及びコーンスターチ、ゼラチンなどの結合剤、微結晶セルロース等の賦型剤、アルギン酸ナトリウムなどの膨化剤、乳糖、ショ糖などの甘味料等を配剤することにより、適宜、散剤、錠剤、顆粒剤、カプセル剤とすることができる。これらの剤型は、経口投与に用いられる。また、注射剤とする場合には、溶液は注射用蒸留水、又はポリエチレングリコール等が使用され、または、これに分散剤、緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤などを必要に応じて添加することもできる。更にグリチルリチン又はその薬理学的に許容される塩と、吸収促進剤、ｐH調整剤、そして必要に応じてウルソデソキシコール酸等を配合し、直腸製剤とすることもできる。
【００１７】
本発明において使用する薬学的組成物の具体的な適用対象としては、細菌感染（グラム陰性菌、グラム陽性菌、及び真菌によって生じるもの）による敗血症に伴って生じる、成人性呼吸不全症等の、ほ乳類の疾患が含まれる。また、エンドトキシンが循環器を循環することによって生じる疾患のみならず、皮膚における感染などの局所的細菌感染における炎症においても、血小板が関与することから、そのような炎症の場合にも適用することが可能である。また、感染による炎症一般にも適用することが可能である。
【００１８】
本願発明において使用される前記薬学的組成物は、経口的、経腸的、局所的、経皮的、及び血管内、筋肉内投与方法などにより、ほ乳類に投与することができるが、投与方法は、治療又は予防する患者の体重や健康状態、治療する疾患の状態に応じて、適宜、臨床医により選択されるものである。
【００１９】
本願発明の利用に当たって抗血小板剤を適用対象に投与する場合には、体重１ｋｇ当たり、１日当たり、０．１乃至１００ｍｇの投薬量で投与されることが通常である。
【００２０】
【実施例】
実施例１：即時性血小板反応にグリチルリチン及びグリチルレチン酸が与える影響
肺への血小板の集積は、血小板に大量に含まれているセロトニン（５HT）を指標にして測定した。（LPSに対する血小板反応は室温に依存するため）実験は、室温（２６-２８℃）で行った。BALB/ｃマウスに対して、生理食塩水で調製したグリチルリチン（２００ｍｇ/ｋｇ）、又は生理食塩水をそれぞれ静脈注射した。注射の１０分後にマウスに対し、KlebsiellaＯ３菌（ＫＯ３）由来のＬＰＳ（２ｍｇ/ｋｇ）を静脈注射した。ＬＰＳ投与、４分後、及び１０分後の各時点で、マウスを断頭し、それぞれのマウスから流出する血液を、最初、血小板数測定用（２-３滴）として、次に、セロトニン測定用（１-２滴）として別々に採取した。血液採取後、直ちに肺を摘出し、セロトニンを測定するまでドライアイスと共に保存した。血小板数は、自動血球分析装置により測定した。血液及び肺のセロトニンの濃度は、セロトニンを過塩素酸で抽出後、イオン交換体を用いたカラムクロマトグラフィーにより分離し、蛍光法により測定した。血液中のセロトニンは不安定であるため、血液採取後速やかに測定を行った。測定方法は、既報（Yoshida A. et al., Br. J. Pharmacol. 2002; 137:146-152）に記載の方法に従って行った。ショックの程度は、LPS投与後５-１０分まで観察される以下のスコアにより示した。それぞれの測定値は、平均値+/-SD（ｎ＝4）で示した。なお、図１に示した実験においては、合計２０匹のマウスを使用した。尚、本実験に先立ち、グリチルリチン自体（２００ｍｇ/ｋｇ）のマウス血小板に及ぼす効果を調べたが、有意な差異は見られなかった。
ショックの程度を示すスコア：
０：症状なし
１：歩行困難
２：腹ばい
３：弱い痙攣
４：強い痙攣。
【００２１】
結果
結果を図１及び表１に示す。図１（ａ）は、血中の血小板数を示すグラフであるが、ＬＰＳ投与後、４分後には、生理食塩水投与の対照群のマウスでは、血小板数が激減していることがわかる。一方、グリチルリチンを投与した処理群のマウスでは、対照群と同様に血小板数が減少してはいるが、その程度は対照群に比べて小さいことがわかる。ＬＰＳ投与後１０分後には、処理群、対象群のマウスはともに、血中の血小板数が回復しているものの、回復の程度（グラフにおける直線の傾き）は、グリチルリチンを投与した処理群のほうが大きいことがわかる。また、ＬＰＳ投与後４分、及び１０分の両方の時点における、血中の血小板数は、処理群と対照群とでは統計的に有意な差が存在している（ｐ＜０．０５）
【００２２】
図１（ｂ）は、血中におけるセロトニンの濃度を比較したものであるが、血小板の数に関しての実験結果に対応する結果が得られた、即ち、ＬＰＳ投与後４分後には、セロトニンの血中濃度は、処理群及び対照群ともに減少しているが、処理群の方が減少の度合が低く、ＬＰＳ投与１０分後には、セロトニン濃度に回復が見られた。
【００２３】
図１（ｃ）は、肺におけるセロトニン濃度を測定した結果であるが、血液中におけるセロトニン濃度変化とは対照的に、ＬＰＳ投与後４分で、肺におけるセロトニン濃度は上昇した。上昇の度合は、対照群の方が大きく、グリチルリチンを投与した処理群のマウスにおいては、セロトニンの濃度の上昇は、対照群のものよりも低くなっている。ＬＰＳ投与後１０分の時点では、肺におけるセロトニン濃度の上昇が抑えられ、回復の傾向がみられた。ＬＰＳ投与後４分及び１０分の両方の時点におけるセロトニン濃度は、処理群と対照群との間では、統計的に有意な差があった（ｐ＜０．０５）。
【００２４】
表１は、ＬＰＳ投与後のマウスのショックの程度を処理群と対照群との間で比較した結果を示すものである。示されているとおり、処理群のマウスのショックの平均スコアは、２．００+/-０．４（平均値+/-ＳＤ）であるのに対し、対照群のマウスのショックの平均スコアは、３．７５+/-０．５（同上）であり、これらは有意な差であった。
【００２５】
【表１】
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【００２６】
【発明の効果】
本発明においては、グリチルリチン及びグリチルレチン酸を利用して、肺及び/又は肝臓への血小板の集積、及び/又は当該血小板の脱顆粒を抑制することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】この図は、グリチルリチンの投与による抗血小板作用を示すグラフである。
【図１】
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