(57)【要約】【課題】イオンチャネル内蔵型受容体には、ニコチン性アセチルコリン受容体、グリシン受容体、ＮＭＤＡ（Ｎ−ｍｅｔｈｙｌ−Ｄ−ａｓｐａｒｔａｔｅ）受容体などがあり、受容体分子中に内蔵されるイオンチャネルが、それぞれの神経伝達物質の受容体への結合により開口し、各受容体に比較的特異的イオンの細胞内流入が生じて、その受容体の機能が発揮される。本発明では、ＮＭＤＡ受容体を拮抗させるためのγ−グルタミル−エチルアミドを含有するＮＭＤＡ受容体拮抗剤を提供すると共にＮＭＤＡ受容体拮抗剤の最適投与量を明らかにすることを目的とする。【解決手段】γ−グルタミル−エチルアミドを含有させることで上記課題を解決する。【選択図】        図１
2004189626.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
γ−グルタミル−エチルアミドを含有することを特徴とするＮＭＤＡ受容体拮抗剤
【請求項２】
γ−グルタミル−エチルアミドの投与量が体重ｋｇあたり３ｍｇ〜２００ｍｇであることを特徴とする請求項１記載のＮＭＤＡ受容体拮抗剤
【請求項３】
請求項１または２記載のＮＭＤＡ受容体拮抗剤を含有することを特徴とする飲食品または医薬品
【請求項４】
請求項１または２記載のＮＭＤＡ受容体拮抗剤を含有する飲食品または医薬品の製造方法
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、γ−グルタミル−エチルアミドを含有することを特徴とするＮＭＤＡ受容体拮抗剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
哺乳動物の神経系における情報伝達は二つの方法により行われており、一つは神経線維（軸策）における電気的伝導であり、もう一つは神経細胞間または神経細胞とその標的細胞間シナプスにおける化学的伝達である。シナプスにおける化学的伝達に関与するのが神経伝達物質であり、シナプス前部より放出された神経伝達物質はシナプス間隙中を拡散し、シナプス後部の膜表面に存在する受容体に結合し活性化させる。神経伝達物質受容体は、神経伝達物質を認識し、またそれと結合することにより、生化学的および生理学的変化を誘発する特定の分子構造を有するものと定義されている。その命名と分類は、受容体に結合する神経伝達物質および作用薬〔作動薬（アゴニスト）と拮抗薬（アンタゴニスト）〕により行われている。現在、薬理学的および分子生物学的研究などから、神経伝達物質受容体の分子構造が明らかになり、細胞内情報伝達機構との共軛を含めた受容体機能の解析が進んでいる。神経伝達物質受容体は、その構造的特徴と共軛する細胞内情報伝達系との観点から、Ｇ蛋白質共軛型受容体（代謝調節型受容体ともいう）およびイオンチャネル内蔵型受容体の２型に大別される。
興奮性神経伝達物質であるグルタミン酸に対応するグルタミン酸受容体には、イオンチャネル内蔵型と代謝調節型がある。イオンチャネル内蔵型受容体には、ニコチン性アセチルコリン受容体、グリシン受容体、ＮＭＤＡ（Ｎ−ｍｅｔｈｙｌ−Ｄ−ａｓｐａｒｔａｔｅ）受容体などがあり、受容体分子中に内蔵されるイオンチャネルが、それぞれの神経伝達物質の受容体への結合により開口し、各受容体に比較的特異的イオンの細胞内流入が生じて、その受容体の機能が発揮される。
グルタミン酸は哺乳類脳内での最も重要な興奮性神経伝達物質である。一方、特殊な環境下ではグルタミン酸には神経細胞死を誘発する毒性があって、種々の神経変性疾患の病因物質として深く関与していると考えられている。グルタメート（グルタミン酸塩）作動性神経は脳全体に分布しており、脳の機能に幅広く関わっていると推察されているが、特に記憶の形成に重要な海馬における働きが明らかにされている。グルタメートのＮＭＤＡ型受容体の拮抗薬であるＤ−２−アミノ−５−フォスフォノバレリック酸（Ｄ−ＡＰ−５）を脳脊髄液内や海馬に投与すると、海馬の長期増強が抑制され、また学習も障害される（例えば、非特許文献１および２参照。）。また、新生仔ラットに生後８〜１９日の間ＮＭＤＡ受容体拮抗薬のジゾシルピン（ＭＫ−８０１）を慢性投与し、約１００日間学習能を調べると、学習機能が障害されていることも知られている（例えば、非特許文献３参照。）。
ＮＭＤＡ受容体拮抗剤としては従来より、クモの毒性画分を抽出した物質（例えば、特許文献１参照。）、新規なポリアミン化合物（例えば、特許文献２参照。）、ＭＫ−８０１、イフェンプロジル、Ｄ−ＡＰ−５、３−（（Ｒ）−２−カルボキシピペラジン−４−ｙｌ）プロピル−１−フォスフォリック酸（ＣＰＰ）、７−クロロキシニューレニック酸、フェニシリジン（ＰＣＰ）などが知られている。しかしながら、これらの化合物を用いるには多量の毒グモを採集する必要があるだけでなく、複雑な構造であるために、簡便かつ効率的に合成することが困難であったり、試薬・医薬品でしか使用できないなど使用に制限がある。
このように、従来知られているＮＭＤＡ受容体拮抗剤は毒グモなどの希少な生物成分を利用するものであり、一般の食品などからＮＭＤＡ受容体拮抗作用を有するものは認められていない。また、Ｄ−ＡＰ−５やＭＫ−８０１は記憶障害を引き起こしたり、医薬品である酒石酸イフェンプロジルの副作用として、貧血、口渇、口内炎、悪心・嘔吐、下痢、食欲不振、胃腸障害、腹部膨満感、胸やけ、皮膚そう痒感、発疹、立ちくらみ、頻脈、動悸、のぼせ感、頭痛、めまい、眠気、ＧＯＴ・ＧＰＴ上昇、上・下肢のしびれ感や顔面浮腫などの副作用が認められるが、本発明品であるγ−グルタミル−エチルアミドを含有するＮＭＤＡ受容体拮抗剤にはそのような副作用は認められていない。
【０００３】
【特許文献１】
特公平７−９４４１９号公報（２−４頁）
【特許文献２】
特開平２−２５６６５６号公報（１−８頁）
【非特許文献１】
Ｄａｖｉｓ  Ｓ．  外２名，“Ｔｈｅ  ＮＭＤＡ  ｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ｄ−２−ａｍｉｎｏ−５−ｐｈｏｓｐｈｏｎｏｐｅｎｔａｎｏａｔｅ  （Ｄ−ＡＰ５）  ｉｍｐａｉｒｓ  ｓｐａｔｉａｌ  ｌｅａｒｎｉｎｇ  ａｎｄ  ＬＴＰ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｔ  ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｃｏｍｐａｒａｂｌｅ  ｔｏ  ｔｈｏｓｅｔｈａｔ  ｂｌｏｃｋ  ＬＴＰ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ”  （アメリカ）  １９９２，  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，  １２，  ｐ２１−３４
【非特許文献２】
Ｏｌｄｓ  Ｊ．  外１名，“Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｒｅｉｎｆｏｒｃｅｍｅｎｔ  ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｐｔａｌ  ａｒｅａ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｒｅｇｉｏｎｓｏｆ  ｒａｔ  ｂｒａｉｎ”，（オランダ），１９５４，  Ｊ．  Ｃｏｍｐ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈｏｌ，  ４７，  ｐ４１９−４２７
【非特許文献３】
Ｇｏｒｔｅｒ  Ｊ．  外１名，“Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｎｅｏｎａｔａｌＭＫ−８０１  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ  ａｎ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｐａｔｉａｌ  ｌｅａｒｎｉｎｇ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｒａｔｓ  ”，  １９９２，  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ，  ５８０，  ｐ１２−１７
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記問題を解決したＮＭＤＡ受容体拮抗剤を提供するものである。より詳しくは、ＮＭＤＡ受容体を拮抗させるためのγ−グルタミル−エチルアミドを含有するＮＭＤＡ受容体拮抗剤を提供すると共にＮＭＤＡ受容体拮抗剤の最適投与量を明らかにしたものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、ＮＭＤＡ受容体に拮抗する物質について検討した結果、通常飲用している緑茶に多く含まれているアミノ酸の一種、γ−グルタミル−エチルアミドが上記課題の解決に有効であること、更にその有効投与量が体重ｋｇ当たり３ｍｇ〜２００ｍｇでＮＭＤＡ受容体に対し拮抗作用を示すことを見出し本発明を完成するに至った。以下、本発明について詳述する。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明に用いられるγ−グルタミル−エチルアミドとは、茶の葉に含まれているグルタミン酸誘導体で、Ｌ−グルタミン酸−γエチルアミドなどである。γ−グルタミル−エチルアミドは、茶の旨味の主成分であって、呈味を用途とする食品添加物として使用されている。本発明に用いられるγ−グルタミル−エチルアミドの製造法としては、茶葉から抽出する方法、有機合成反応によりγ−グルタミル−エチルアミドを得る方法（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，１９（７）１３０１−１３０７（１９７１））、グルタミンとエチルアミンの混合物にグルタミナーゼを作用させてγ−グルタミル−エチルアミドを得る方法（特公平７−５５１５４号）、エチルアミンを含有する培地で茶の培養細胞群を培養し、培養細胞群中のγ−グルタミル−エチルアミド蓄積量を増加させつつ培養細胞群の増殖促進を図る方法（特開平５−１２３１６６号）、また、特公平７−５５１５４号、特開平５−１２３１６６号におけるエチルアミンをエチルアミン塩酸塩などのエチルアミン誘導体に置き換えてγ−グルタミル−エチルアミドを得る方法、茶葉から抽出する方法等がありいずれの方法でも良い。ここでいう茶葉とは、緑茶、ウーロン茶、紅茶等があげられる。このような方法により得られたγ−グルタミル−エチルアミドは、Ｌ−体、Ｄ−体、ＤＬ−体いずれも使用可能であるが、中でもＬ−体は、食品添加物にも認められており、経済的にも利用しやすいため、本発明においては、Ｌ−体が好ましい。
【０００７】
本発明におけるＮＭＤＡ受容体とは、興奮性神経伝達物質であるグルタミン酸に対応するグルタミン酸受容体のイオンチャネル内蔵型として分類され、他にＡＭＰＡ  （α−ａｍｉｎｏ−３−ｈｙｄｒｏｘｙ−５−ｍｅｔｈｙｌ−４−ｉｓｏｘａｚｏｌ−ｐｒｏｐｏｉｏｎｉｃ−ａｃｉｄ）およびカイニン酸受容体がある。ＮＭＤＡ受容体は５個のサブユニットからなる５量体であり、この受容体に内蔵されるイオンチャネルはＮａ＋とＣａ２＋に対する透過性を有しており、この機能は膜電位が−３０ｍＶ以下ではＭｇ２＋により阻害されるという電位依存性阻害を受ける特性がある。またこの受容体はアロステリック部位としてグリシン結合部位を持ち、数μＭのグリシンによりＣａ２＋の細胞内流入が増強される。なお、このグリシン結合部位はストリキニーネに対し非感受性である。
【０００８】
グルタミン酸は、通常は脳細胞において興奮性神経伝達物質としてグルタミン酸受容体に作用し記憶や学習に関与する反面、過剰に存在した場合には神経細胞の過剰な興奮をもたらし神経細胞に対する毒性を発揮することが知られている。グルタミン酸受容体の一種であるＮＭＤＡ受容体にγ−グルタミル−エチルアミドが拮抗すればグルタミン酸の毒性を軽減しえることが期待できる。
本発明における拮抗剤とはアンタゴニストとも呼ばれる。神経伝達物質は受容体と鍵と鍵穴のように適合する。神経伝達物質と類似の構造を持つ生体外部由来の化学物質が同じ受容体に結合することがある。その外来性の化合物が受容体に結合しても受容体を活性化しない物質を拮抗剤という。
【０００９】
本発明に用いられるγ−グルタミル−エチルアミドの安全性は高く、たとえば、マウスを用いた急性毒性試験において５ｇ／ｋｇ経口投与で死亡例がなく、一般状態および体重等に異常は認められない。また、特にγ−グルタミル−エチルアミドは茶のうまみ成分として知られているものであり、呈味を用途とする食品添加物としても使用され、食品衛生法上、その添加量に制限はない。しかも、従来の薬物と異なり、γ−グルタミル−エチルアミドによる副作用は全く認められないので、本発明の組成物によれば、安全かつ効果的にＮＭＤＡ受容体拮抗剤として使用できる。
【００１０】
本発明におけるγ−グルタミル−エチルアミドの投与量は３ｍｇ／ｋｇ体重から２００ｍｇ／ｋｇ体重であり、好ましくは５ｍｇ／ｋｇ体重から２００ｍｇ／ｋｇ体重であり、更に好ましくは５ｍｇ／ｋｇ体重から４０ｍｇ／ｋｇ体重である。該範囲よりγ−グルタミル−エチルアミドの投与量は体重ｋｇあたり４００ｍｇ以上の量でも、また１ｍｇ以下の量でもＮＭＤＡ受容体拮抗剤としての充分な効果は認められなくなる。
【００１１】
本発明におけるＮＭＤＡ受容体拮抗剤は様々な疾病に対しての治療や症状改善効果が期待される。その例としては学習・記憶や動機づけなどの知能の向上、恐怖などに対する不安の解消、蓄尿機能や排出機能などの排尿機能改善、偏頭痛、群発頭痛や緊張性頭痛などの頭痛軽減・解消、パーキンソン病、ハンチントン病、アルツハイマー病、てんかん、精神分裂病やそううつ病などの気分障害、脳血管障害などの治療および症状改善、海藻などに含まれるカイニン酸、ムラサキ貝に含まれるドモイック酸、イタチササゲに含まれるβ−Ｎ−オキシルアミノ−Ｌ−アラニンやシカスアーシナリスＬに含まれるβ−Ｎ−メチルアミノ−Ｌ−アラニンなどのグルタミン酸受容体に作用する神経毒などの解毒作用などがあげられるがこれらに限定されるものではない。
【００１２】
また、本発明に用いるγ−グルタミル−エチルアミドは精製品（９８％以上）、粗製製品（５０〜９８％）、抽出エキス（１０〜５０％）等でいずれの形状でも良い。本発明品であるＮＭＤＡ受容体拮抗剤を食品として摂取するにはγ−グルタミル−エチルアミドをそのまま、または、γ−グルタミル−エチルアミドを含有する乾燥食品、サプリメント、また、清涼飲料やミネラルウォーター、嗜好飲料、アルコール飲料などの液状食品、錠剤、カプセル、粉末剤、顆粒剤、ドリンク剤等の剤形を示す。
【００１３】
ここであげられる飲料としては、特に限定されるものではないが、緑茶、ウーロン茶、紅茶、ハーブティー等の茶類、濃縮果汁、濃縮還元ジュース、ストレートジュース、果実ミックスジュース、果粒入り果実ジュース、果汁入り飲料、果実・野菜ミックスジュース、野菜ジュース、炭酸飲料、清涼飲料、乳飲料、日本酒、ビール、ワイン、カクテル、焼酎、ウイスキー等があげられる。
【００１４】
また、本発明のＮＭＤＡ受容体拮抗剤に生薬、ハーブ、アミノ酸、ビタミン、ミネラル、その他食品に許容される素材・原料を併用することができる。ここにおいて、使用する生薬とは特に限定されるものではないが、カノコソウ、当帰、芍薬、牡丹、高麗人参などがあげられる。
ハーブとは特に限定されるものではないが、アニス、キャロットシード、クローブ、コリアンダー、サイプレス、シナモン、ジュニパー、ジンジャー、スイートオレンジ、パインニードル、バジル、パチュリ、ビターオレンジ、フェンネル、ブラックペッパー、ベイ、ペパーミント、ベルガモット、マンダリン、ミルラ、レモングラス、ローズマリー、グレープフルーツ、シダーウッド、シトロネラ、セージ、タイム、ティートゥリー、バイオレットリーフ、バニラ、ヒソップ、ユーカリ、ライム、レモン、イランイラン、カルダモン、クラリセージ、ジャスミン、ゼラニウム、カモミール、ブルガリアローズ、ローズ、オリバナム、ラベンダー、カミツレ、ゼラニウム、サンダルウッドネロリ、バーベナ、プチグレン、ベチバー、マージョラム、メリッサ、ローズウッド、オトギリソウ、セイントジョーンズワート、カワカワなどがあげられ、好ましくは、セイントジョーンズワート、カワカワなどがよい。これらのハーブの性状としては抽出エキス、精油、ハーブティーなどで特に限定されるものではない。
【００１５】
使用するアミノ酸においても特に限定されるものではないが、例えば、グルタミン、グルタミン酸、イノシン酸、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、スレオニン、セリン、γ―アミノ酪酸、タウリン、チオタウリン、ヒポタウリンなどがあげられる。
使用するビタミンにおいてはビタミンＡ、ビタミンＢ１  、ビタミンＢ２  、ビタミンＢ６  、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、葉酸、ニコチン酸、リポ酸、パントテン酸、ビオチン、ユビキノン、プロスタグランジンなどがあげられ、これらビタミンの誘導体も含まれるがこれらのみに限定されるものではない。
【００１６】
使用するミネラルにおいては、カルシウム、鉄、マグネシウム、銅、亜鉛、セレン、カリウムなどがあげられるが、これらに限定されるものではない。
また、その他、アロエ、ローヤルゼリー、メラトニン、プラセンタ、プロポリス、イソフラボン、大豆レシチン、卵黄レシチン、卵黄油、コンドロイチン、カカオマス、コラーゲン、酢、クロレラ、スピルリナ、イチョウ葉、緑茶、杜仲茶、黄妃茶、ウーロン茶、桑の葉、甜茶、バナバ茶、不飽和脂肪酸、糖アルコールやオリゴ糖などの糖類、ビフィズス菌や紅麹などの菌類、アガリクス茸、姫マツタケ、霊芝、マイタケ等のキノコ類、ブルーベリー、プルーン、ブドウ、オリーブ、うめや柑橘類等の果実類、落花生、アーモンド、ゴマや胡椒等の種実類、ピーマン、唐辛子、ネギ、カボチャ、ウリ、人参、ゴボウ、モロヘイヤ、ニンニク、シソ、ワサビ、トマト、らっきょ、葉菜、芋や豆等の野菜類、ワカメ等の海草類、魚介類、獣鳥鯨肉類、穀類などが使用でき、さらにこれらの抽出物、乾燥品、粗精製品、精製品、加工品、醸造品等も使用できる。
【００１７】
また、医薬品としての剤形は、内服薬、注射薬、貼付薬、座薬、吸入薬として使用される。内服薬は、従来使用されている錠剤、カプセル、粉末剤、顆粒剤、ドリンク剤などによって摂取される。注射薬は、筋肉注射、皮内注射、皮下注射、静脈注射などによって体内に注入される。また、貼付薬は従来使用されてる軟膏に混合することにより体内に吸収させる。座薬は、従来使用されるカカオ脂、グリセロゼラチン、ステアリン酸ナトリウム、プロピレングリコールモノステアレートなどと混合することにより体内に吸収させる。吸入薬は、従来の方法により吸入させるものであって、例えば、水蒸気または空気の中に発明品を加えることにより鼻孔または口腔より体内に吸収される。
【００１８】
本発明のＮＭＤＡ受容体拮抗剤の製法は特に限定されるものではなく、γ−グルタミル−エチルアミドと他の原材料を粉体混合する製法、溶媒中にγ−グルタミル−エチルアミドと他の原材料を溶かし混合溶液とする製法、またその混合溶液を凍結乾燥する製法、噴霧乾燥する製法、など一般的な食品、医薬品の製法が適用される。
本発明の製品形態としては溶液、懸濁物、粉末、固体成形物等経口摂取可能な形態であれば良く特に限定するものではない。より具体的には、練り製品、大豆加工品、調味料、ムース、ゼリー、冷菓、飴、チョコレート、ガム、クラッカー、ケーキ、パン、スープ、コーヒー、ココア、紅茶、緑茶、ジュース、乳飲料、乳製品、酒、錠剤、カプセル、医薬品等が例示される。
以下、実施例および試験例により本発明をより詳細に説明するが、本発明は当該実施例および試験例に限定するものではない。
【００１９】
【実施例】
実施例１  酵素法によるγ−グルタミル−エチルアミドの製造
０．３Ｍグルタミン及び１．５Ｍ塩酸エチルアミンを０．０５Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ１１）中、０．３Ｕグルタミナーゼ（市販品）存在下にて３０℃  ２２時間反応させ２２５ｎｍｏｌのγ−グルタミル−エチルアミドを得た。次いで、反応液をＤｏｗｅｘ  ５０×８、Ｄｏｗｅｘ  １×２カラムクロマトグラフィー（共に室町化学工業（株）製）にかけ、これをエタノール処理することにより、反応液から目的物質を単離した。
【００２０】
当該物質のγ−グルタミル−エチルアミドの確認は、この単離物質をアミノ酸アナライザー（日立製作所（株）製）、ペーパークロマトグラフィーにかけ、標準物質と同じ挙動を示すことにより確認した。塩酸またはグルタミナーゼで加水分解処理を行うと、１：１の割合で、グルタミン酸とエチルアミンを生じた。このように、単離物質がグルタミナーゼによって加水分解されたことから、エチルアミンがグルタミン酸のγ位に結合していたことが示される。また、加水分解で生じたグルタミン酸がＬ−体であることも、グルタミン酸デヒドロゲナーゼにより確認した。以上より８．５ｇのγ−グルタミル−エチルアミドが得られた。
【００２１】
実施例２  γ−グルタミル−エチルアミドの茶葉からの抽出
茶（Ｃａｍｅｌｌｉａ    ｓｉｎｅｎｓｉｓ）葉１０ｋｇを熱水で抽出後、カチオン交換樹脂（室町化学工業（株）製    Ｄｏｗｅｘ    ＨＣＲ    Ｗ−２）に通し、１Ｎ    ＮａＯＨにより溶出した。溶出画分を活性炭（二村化学工業（株）製太閤活性炭    ＳＧ）に通し、１５％エタノールによる溶出画分をＲＯ膜（日東電工（株）製    ＮＴＲ    ７２９    ＨＦ）を用いて濃縮し、カラムクロマトグラフィーにて精製し、更に再結晶を行い、γ−グルタミル−エチルアミド２４．８ｇを製造した。
なお、以下においてγ−グルタミル−エチルアミドは東京化成工業（株）製のものを用いた。
【００２２】
比較例１
ＮＭＤＡ受容体拮抗剤の比較品としてジゾシルピン（ＭＫ−８０１；シグマ社製）を用いた。
【００２３】
試験例１  ＮＭＤＡ誘発痙攣試験
ＩＣＲ系マウス（雄：体重約２５ｇ）にγ−グルタミル−エチルアミドおよび比較例１のＭＫ−８０１をリン酸生理食塩液（ｐＨ７．２）に溶解し腹腔内投与した。腹腔内投与から１５分後に、マウス尾静脈よりシリンジポンプを用い、ＮＭＤＡ受容体作動薬であるＮＭＤＡ（シグマ社製）を流速０．２３ｍｌ／ｍｉｎで持続注入し、間代性または強直性痙攣が発現するまでの時間を測定し、痙攣が誘発されるのに必要なマウスｋｇ当たりのＮＭＤＡの投与量をｍｇとして痙攣閾値として算出した。コントロールとしてリン酸生理食塩液（ｐＨ７．２）を投与した。
試験はγ−グルタミル−エチルアミドの投与量を１ｍｇ／ｋｇ〜１６００ｍｇ／ｋｇの高用量と０．０１ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの低用量の２段階で実施した。
【００２４】
γ−グルタミル−エチルアミド１ｍｇ／ｋｇ〜１６００ｍｇ／ｋｇおよびＭＫ−８０１  ０．２ｍｇ／ｋｇ投与量における痙攣閾値のグラフを図１（高用量）に示した。括弧中の数字は試験に用いたマウスの匹数を示す。
コントロールに比べγ−グルタミル−エチルアミド  ５ｍｇ／ｋｇにおいて有意に痙攣閾値が増加し、４００ｍｇ／ｋｇ以上においてコントロールとの差がなくなった。
γ−グルタミル−エチルアミド０．０１ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇおよびＭＫ−８０１  ０．１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ投与量における痙攣閾値のグラフを図２（低用量）に示した。括弧中の数字は試験に用いたマウスの匹数を示す。コントロールに比べγ−グルタミル−エチルアミド  ３ｍｇ／ｋｇにおいて有意に痙攣閾値が増加した。
【００２５】
以上のように、ＮＭＤＡ誘発痙攣試験においてγ−グルタミル−エチルアミド１〜１０ｍｇ／ｋｇにより用量依存的かつ有意な痙攣閾値の上昇が認められたが、さらにγ−グルタミル−エチルアミドの用量を増加することによりＮＭＤＡ誘発痙攣閾値の上昇が認められなくなった。この結果から、低用量のγ−グルタミル−エチルアミドにおいて選択的にＮＭＤＡ誘発痙攣閾値上昇作用が発現したが、高用量のγ−グルタミル−エチルアミド処理においてこの痙攣閾値の上昇を打ち消すような作用が起こったため痙攣閾値の上昇作用が消失したものと考えられた。このことから、ＮＭＤＡ受容体拮抗剤としてのγ−グルタミル−エチルアミドの用量には最適な範囲があることが見出された。
【００２６】
試験例２  安全性の確認
ＩＣＲ系マウス（雄：体重約２５ｇ）６匹に、γ−グルタミル−エチルアミドをリン酸生理食塩液（ｐＨ７．２）に溶解し体重ｋｇ当たり３０００ｍｇ腹腔内投与した。γ−グルタミル−エチルアミドにはＮＭＤＡ受容体拮抗剤の大量投与において引き起こされる死亡例は認められなかった。
【００２７】
実施例３  γ−グルタミル−エチルアミド配合錠剤の製造
γ−グルタミル−エチルアミド配合ＮＭＤＡ受容体拮抗剤の１例として、次に示す原料を混合後打錠し、γ−グルタミル−エチルアミド配合錠剤を製造した。
フロストシュガー              ７１．６７重量％  （０．５３７５ｇ）
トレハロース                  １０重量％          （０．０７５ｇ）
γ−グルタミル−エチルアミド  １３．３３重量％        （０．１ｇ）
ショ糖脂肪酸エステル            １重量％        （０．００７５ｇ）
香料（レモンフレーバー）        ４重量％            （０．０３ｇ）
合計                        １００重量％            （０．７５ｇ）
すなわち、上記配合に従って各原料を混合し、造粒後に、１粒０．７５ｇとなるように打錠した。
【００２８】
実施例４  γ−グルタミル−エチルアミド配合キャンディーの製造
γ−グルタミル−エチルアミド配合ＮＭＤＡ受容体拮抗剤の１例として、次に示す原料を用いてγ−グルタミル−エチルアミド配合キャンディーを製造した。
グラニュー糖                            ６４ｋｇ
水飴                                    ２３ｋｇ
γ−グルタミル−エチルアミド            １０ｋｇ
香料（レモンフレーバー）                  ０．０５ｋｇ
５０％酒石酸                              １ｋｇ
水                                      ３０ｋｇ
グラニュー糖を水２０ｋｇに溶解しながら１１０℃まで加熱し、γ−グルタミル−エチルアミドを溶解した残りの水１０ｋｇと水飴を加えて、１４５℃まで温度を上げた。火を止め、５０％酒石酸を添加し混合した。７５〜８０℃まで冷却し、成形ローラーで成形し、γ−グルタミル−エチルアミド配合キャンディーを調製した。
なお、キャンディー中のγ−グルタミル−エチルアミドの含量を測定した結果、含量はキャンディー１個あたり平均１．２ｇで８９．６ｍｇ／ｇであった。
【００２９】
実施例５  γ−グルタミル−エチルアミド配合ブルーベリー飲料の製造
γ−グルタミル−エチルアミド配合ＮＭＤＡ受容体拮抗剤の１例として、次に示す原料を用いてγ−グルタミル−エチルアミド配合飲料を製造した。
果糖ブドウ糖                            １２ｋｇ
ブルーベリー濃縮果汁                      １ｋｇ
１／５透明レモン果汁                      ０．４ｋｇ
クエン酸Ｎａ                              ０．０５ｋｇ
５０％クエン酸Ｎａ（結晶）                ｐＨ調整用
γ−グルタミル−エチルアミド              ０．１ｋｇ
香料（ブルーベリーフレーバー）            ０．０５ｋｇ
水                                        適量
全量                                  １００ｋｇ
果糖ブドウ糖、ブルーベリー濃縮果汁、１／５透明レモン果汁、クエン酸Ｎａおよびγ−グルタミル−エチルアミドを水に加え攪拌溶解した。５０％クエン酸Ｎａ（結晶）を用いｐＨ３．１に調整し９５℃まで昇温後香料を加えて１００ｍｌに充填して冷却し、γ−グルタミル−エチルアミド配合ブルーベリー飲料を製造した。なお、ブルーベリージュース中のγ−グルタミル−エチルアミドを定量した結果、含量は９８．３ｍｇ／１００ｍｌであった。
【００３０】
実施例６  γ−グルタミル−エチルアミド配合グレープフルーツ飲料の製造
γ−グルタミル−エチルアミド配合ＮＭＤＡ受容体拮抗剤の１例として、次に示す原料を用いてγ−グルタミル−エチルアミド配合飲料を製造した。
果糖ブドウ糖液                                  ６ｋｇ
γ−グルタミル−エチルアミド                    ０．１ｋｇ
ピロリン酸第二鉄                                ０．０６ｋｇ
プラセンタエキス                                ０．０１ｋｇ
グレープフルーツ果汁１００％                  ３０ｋｇ
クエン酸Ｎａ                                  ｐＨ調整用
香料（グレープフルーツフレーバー）              ０．０５ｋｇ
水                                            適量
全量                                        １００ｋｇ
果糖ブドウ糖液、γ−グルタミル−エチルアミド、ピロリン酸第二鉄、プラセンタエキスおよびグレープフルーツ果汁１００％を水に加え攪拌溶解した。クエン酸Ｎａを用いｐＨ３．１に調整し９５℃まで昇温後香料を加えて、１００ｍｌづつ充填して冷却し、γ−グルタミル−エチルアミド配合グレープフルーツ飲料を製造した。なお、グレープフルーツジュース中のγ−グルタミル−エチルアミドを定量した結果、含量は９６．４ｍｇ／１００ｍｌであった。
【００３１】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明品は、グルタミン酸レセプターであるＮＭＤＡ受容体に拮抗するため、グルタミン酸に起因する興奮を抑えることが可能である。このような発明品は、ＮＭＤＡ受容体拮抗剤として多大な効果があり、本発明品の効果を発揮するためには体重ｋｇあたり３〜２００ｍｇ投与すれば効果を発揮できることから、例えばヒトにおいて体重５０ｋｇとした場合γ−グルタミル−エチルアミドを１５０ｍｇ〜１０００ｍｇ摂取することが望ましい。高級緑茶葉にはγ−グルタミル−エチルアミドが約２％含まれており、１５０ｍｇを摂取するには茶葉７．５ｇを用いれば摂取可能となる。茶は飲用の歴史が長く安全性に関しても実証されている。ＮＭＤＡ受容体拮抗剤として知られているイフェンプロジルの毒性はＬＤ５０値として雄マウスにおいて経口投与で２７５ｍｇ／ｋｇ、静脈注射で１７ｍｇ／ｋｇ、腹腔内投与で１２０ｍｇ／ｋｇである。一方、γ−グルタミル−エチルアミドは有益な薬理作用が発現する容量の１０００倍量の３０００ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与しても副作用は発現しないことが確認された。本発明品を用いることは効果、安全性の点をも考え併せて極めて有益である。
【００３２】
【図面の簡単な説明】
【図１】γ−グルタミル−エチルアミド１ｍｇ／ｋｇ〜１６００ｍｇ／ｋｇおよびＭＫ−８０１  ０．２ｍｇ／ｋｇ投与量における痙攣閾値を表したグラフの図である。
【図２】γ−グルタミル−エチルアミド０．０１ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇおよびＭＫ−８０１  ０．１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ投与量における痙攣閾値を表したグラフの図である。
【図１】
2004189626.tif 000003
【図２】
2004189626.tif 000004