(57)【要約】【解決手段】ソウハクヒ、ニンジン、キュウリ及びオウバクより選ばれる植物若しくはクロレラ又はそれらの抽出物からなるアロマターゼ活性化剤。【効果】人体に対する安全性が高く、エストロゲン欠乏に起因する各種病変の予防、改善又は治療を目的とした医薬又は化粧料として有用。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ソウハクヒ、ニンジン、キュウリ及びオウバクより選ばれる植物若しくはクロレラ又はそれらの抽出物からなるアロマターゼ活性化剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アンドロゲンからエストロゲンを生合成する酵素であるアロマターゼの活性を増強するアロマターゼ活性化剤に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
女性ホルモンとして知られているエストロゲンは、ヒトにおいては、主として卵巣によって生成され、１７β−エストラジオール、エストロン、エストリオール等が知られている。
【０００３】
エストロゲンは、子宮内膜の増殖、性機能の調節、骨代謝の調節、脂質代謝の調節等様々な生理機能に関与することから、加齢や卵巣機能の低下に伴って、体内のエストロゲンが欠乏すると、更年期障害、性機能低下、自律神経失調症、脂質代謝異常、血管運動障害、骨粗鬆症等の症状が現れる。
【０００４】
一方、エストロゲン又はエストロゲン様物質は環境ホルモン作用を有することことから、斯かる諸症状の予防や改善に対して、これらを直接投与することは妥当ではない。
【０００５】
本発明は、安全性が高く、体内のエストロゲン生成を促進させることにより、上記エストロゲン欠乏に起因する各種症状の予防、改善又は治療に有用な医薬又は化粧料を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、エストロゲンがアンドロゲンからアロマターゼによって生合成されることに着目し、当該アロマターゼの活性を増強する天然物質について検討したところ、特定の植物又は藻類にアロマターゼを活性化する作用があることを見出した。
【０００７】
すなわち本発明は、ソウハクヒ、ニンジン、キュウリ及びオウバクより選ばれる植物若しくはクロレラ又はそれらの抽出物からなるアロマターゼ活性化剤を提供するものである。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明のアロマターゼ活性化剤において、ソウハクヒとはクワ科のクワＭｏｒｕｓ  ａｌｂａ  Ｌ．を、ニンジンとはウコギ科のオタネニンジンＰａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ  Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒを、キュウリとはウリ科のＣｕｃｕｍｉｓ  ｓａｔｉｖｕｓを、オウバクとはミカン科のキハダＰｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ  ａｍｕｒｅｎｓｅ  Ｒｕｐｒｅｃｈｔを意味する。また、クロレラとは、オオシスティス科（Ｏｏｃｙｓｔａｃｅａｅ）  クロレラ属（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ）  に分類される直径３〜１０ミクロンのほぼ球形の単細胞緑藻をいい、その種は特に限定されないが、例えばクロレラ・ブルガリス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）、クロレラ・ピレノイドサ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｐｙｒｅｎｏｉｄｏｓａ）、クロレラ・レギュラリス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｒｅｇｕｌａｒｉｓ  ）等が挙げられ、中でもクロレラ・ブルガリスが好ましい。
【０００９】
上記植物は、その植物の全草、葉、樹皮、枝、果実又は根等をそのまま又は粉砕して用いることができるが、ソウハクヒについては根皮、ニンジンについては根、キュウリについては未熟果実、オウバクについては樹皮を使用するのが好ましい。
また、クロレラは、クロレラ藻体（全藻）を使用するのが好ましい。
【００１０】
本発明における抽出物とは、上記植物又はクロレラを常温又は加温下にて抽出するか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得られる各種溶媒抽出液、その希釈液、その濃縮液又はその乾燥末を意味するものである。
【００１１】
本発明の植物又はクロレラ抽出物を得るために用いられる抽出溶剤としては、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができる。例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；スクワラン、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；トルエン等の芳香族炭化水素類；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；及び二酸化炭素等が挙げられ、これらは混合物として用いることができる。
【００１２】
上記の植物又はクロレラ抽出物は、そのまま用いることもできるが、当該抽出物を希釈、濃縮若しくは凍結乾燥した後、粉末又はペースト状に調製して用いることもできる。
また、上記の植物又はクロレラ抽出物は、クロマトグラフィー液々分配等の分離技術により、上記抽出物から不活性な夾雑物を除去して用いることもできる。
【００１３】
尚、本発明の植物若しくはクロレラ又はそれらの抽出物は、２種以上を混合して用いてもよい。
【００１４】
これらの植物若しくはクロレラ又はそれらの抽出物は、後記実施例に示すようにアロマターゼ遺伝子の発現を増加させることから、アロマターゼを活性化する作用を有するといえる。従って、当該植物若しくはクロレラ又はそれらの抽出物からなるアロマターゼ活性化剤を医薬品や化粧品等に配合してヒトに投与することにより、生体内のエストロゲン生成が促進され、エストロゲンに起因する以下のような作用効果が期待できる（からだの科学  Ｎｏ２１９  ２００１  日本評論社）。
【００１５】
１）骨代謝に関する作用：副甲状腺ホルモンの働きを抑えて、骨吸収を抑制し、また腎臓でのビタミンＤの活性化を促進し、骨粗鬆化を抑制する。
【００１６】
２）高脂血症に関する作用：エストロゲンの濃度低下によりＬＰＬ（リポタンパクリパーゼ）活性が亢進されてＬＤＬ受容体数が減少し、血中にＬＤＬが蓄積して粥状硬化に進展することを防ぐ；血管内皮に存在するｍＲＮＡの発現を増加させ、ＮＯ産生を亢進する；抗酸化作用、血管拡張作用を促進し、動脈硬化に対して抑制的に作用する。
【００１７】
３）脳機能に関する作用：記憶、認知機能、脳血流の変化等の脳機能を改善し、感情や情緒にも影響を与え、うつ病との関連も報告されている。特に、アルツハイマー病に関し、▲１▼神経細胞に作用し、Ａｃｈ（アセチルコリン）合成酵素（コリンアセチルトランスフェラーゼ）の活性を増加する、▲２▼コリン作動性ニューロンでの神経成長因子（ＮＧＦ）や脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）の受容体などの発現を刺激する、▲３▼海馬においてシナプスを増加する、▲４▼アミロイド前駆タンパク（ＡＰＰ）に作用して、β−アミロイドの蓄積を減少させて神経細胞の損傷を軽減する、▲５▼脳内の糖輸送と糖利用を高める。
【００１８】
４）更年期障害に関する作用：エストロゲンの減少により視床下部−下垂体−卵巣系でのネガティブフィードバックが作動せず、視床下部、下垂体が機能亢進状態になること、すなわちＬＨ（黄体化ホルモン）、ＦＳＨ（卵胞刺激ホルモン）が増加することにより引き起こされる自律神経失調症状を改善する。
【００１９】
５）眼に関する作用：更年期以降の女性に多発する黄斑変性や白内障の発症を抑制する。また、涙腺機能を改善し、ドライアイを抑制する。
【００２０】
本発明のアロマターゼ活性化剤を医薬として配合する場合には、錠剤、カプセル剤等の内服剤、軟膏、水剤、エキス剤、ローション剤、乳剤等の外用剤、注射剤とすることができる。
【００２１】
また、化粧料として配合する場合は、種々の形態、例えば、油中水型又は水中油型の乳化化粧料、クリーム、ローション、ジェル、フォーム、エッセンス、ファンデーション、パック、スティック、パウダー等とすることができ、本発明の植物又はその抽出物の他に、化粧料成分として一般に使用されている油分、界面活性剤、紫外線吸収剤、アルコール類、キレート剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、増粘剤、色素類、香料、各種皮膚栄養剤等を任意に組合せて配合することができる。
【００２２】
医薬又は化粧料における本発明の植物若しくはクロレラ又はそれら抽出物の配合量は、乾燥物として通常全組成の０．００００１〜１重量％、特に０．０００１〜０．１重量％が好ましい。
【００２３】
【実施例】
以下、実施例により本発明を具体的に説明する。
製造例１  ソウハクヒ抽出物の製造
ソウハクヒ１０ｇに対し、５０ｖ／ｖ％エタノール水溶液、２５ｍＬで約７日間室温で抽出した。その後、ろ過してエキスを得た。エキス収量１１ｍＬ、蒸発残分１１．６ｗ／ｖ％。
【００２４】
製造例２
製造例１に準じて下記表１に示す各植物抽出物及びクロレラ抽出物を調製した。
【００２５】
【表１】
2004189609.tif 000002
【００２６】
参考例１  レポータージーンアッセイ系の構築
ヒト正常ケラチノサイトより抽出したゲノムＤＮＡより、ヒトアロマターゼ遺伝子エクソン１ｃの転写調節領域とエクソン１ｃの一部を含む部分を、以下のプライマーを用いてＰＣＲを行って増幅した。
ｕｐｐｅｒ  ｐｒｉｍｅｒ  ５’−  ＧＡＣＴＡＧＴＡＡＡＣＡＡＣＣＡＣＡＡＡＡＣＴＧＣＴＣ  −３’（配列番号１）
ｌｏｗｅｒ  ｐｒｉｍｅｒ  ５’−  ＡＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＧＴＣＡＡＡＡＣＡＡＧＧＡＡＧＣ  −３’（配列番号２）
得られたＰＣＲ産物を制限酵素ＳｐｅＩとＰｓｔＩで処理し、シーパンジーｎｕｌｌコントロールベクター（東洋インキ製造株式会社）のＳｐｅＩサイトとＰｓｔＩサイトに組み込み、これをＥｘ１ｃ−ｌｕｃプラスミドとして、後述のルシフェラーゼアッセイに用いた。
【００２７】
実施例１  アロマターゼ遺伝子エクソン１ｃ発現増加作用
（１）材料・方法
▲１▼使用細胞：
ケラチノサイト由来不死化細胞（ＨａＣａＴ細胞）
▲２▼使用プラスミド：
アロマターゼ遺伝子エクソン１ｃの転写調節領域、約１ｋｂをルシフェラーゼ遺伝子の上流に組み込んだＥｘｌｃ−ｌｕｃ。
▲３▼細胞へのトランスフェクション：
ＨａＣａＴ細胞を１００ｍｍ  ｄｉｓｈ中でサブコンフルエントの状態まで増殖させ、Ｅｘｌｃ−ｌｕｃをリポフェクトアミン試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて導入した。プロトコールは試薬に添付された説明書の記載に従った。ＤＮＡの量は１ｄｉｓｈ当たり８μｇ用いた。コントロールとして１つのｄｉｓｈに対しては、ＤＮＡを加えずに同様の操作を行った。
▲４▼ルシフェラーゼアッセイ：
トランスフェクションを行った細胞を１晩培養した後、９６穴細胞培養プレートに１ウェル当たり約３万個になるように播種した。この際培養液の総量は２００μＬとなるようにした。翌日、製造例１及び２で調製した植物又はクロレラ抽出物を加え（１％、０．１％）、２０時間培養した。アラマー・ブルー（ＢＩＯＳＯＵＲＣＥ）２０μＬ加え、２時間培養した後、蛍光強度（励起光５４４ｎｍ、蛍光５９０ｎｍ）を測定した。また、ピッカジーンデュアル・シーパンジールミネッセンスキット（ニッポンジーン）を用いてルシフェラーゼ活性を測定した。細胞の溶解は５×細胞溶解液を１×濃度に調整し、各ウェルに２５μＬ加えて細胞を溶解した。
【００２８】
（２）結果
結果を下記表２に示す。
【００２９】
【表２】
2004189609.tif 000003
【００３０】
これより、各抽出液はアロマターゼ発現を活性化する能力があることがわかった。特に、ニンジンはコントロールに比べ、２倍以上の高い活性を有することがわかった。
【００３１】
【発明の効果】
本発明のアロマターゼ活性化剤は、体内のエストロゲン生成を促進させ、且つ人体に対する安全性が高いことから、エストロゲン欠乏に起因する各種病変の予防、改善又は治療を目的とした医薬又は化粧料として有用である。
【００３２】
【配列表】
2004189609.tif 000004