(57)【要約】【課題】本発明は、簡易な方法からなるコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法を提供することを目的とする。【解決手段】本発明のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法は、つぎの工程を含む方法である。軟骨をアルカリ処理する工程２、およびアルカリ処理したものを塩析する工程４である。これにより、高分子タンパク質と脂質を分離除去することができる。アルカリは、ＮａＯＨであることが好ましい。アルカリは、０．１〜２Ｎの範囲内にあることが好ましい。ＮａＣｌの共存下でアルカリ処理することが好ましい。ＮａＣｌにより塩析することが好ましい。ＮａＣｌは、３〜５Ｍの範囲内にあることが好ましい。塩析の工程４の後に、ろ液にアルコールを添加してコンドロイチン硫酸ナトリウムを析出することが好ましい。【選択図】        図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
つぎの工程を含むコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
（イ）軟骨をアルカリ処理する工程
（ロ）アルカリ処理したものを塩析する工程
【請求項２】
前記軟骨は、魚類の軟骨である請求項１記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【請求項３】
前記軟骨は、サケの鼻軟骨である請求項１記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【請求項４】
前記アルカリは、ＮａＯＨである請求項１記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【請求項５】
前記アルカリは、０．１〜２Ｎの範囲内にある請求項４記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【請求項６】
前記アルカリ処理は、ＮａＣｌの共存下でアルカリ処理する請求項１記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【請求項７】
前記ＮａＣｌは、１〜２Ｍの範囲内にある請求項６記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【請求項８】
前記塩析は、ＮａＣｌにより塩析する請求項１記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【請求項９】
前記ＮａＣｌは、３〜５Ｍの範囲内にある請求項８記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【請求項１０】
前記塩析の工程の後に、ろ液にアルコールを添加してコンドロイチン硫酸ナトリウムを析出する請求項１記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【請求項１１】
軟骨をアルカリ処理し、これを塩析することにより得られるコンドロイチン硫酸ナトリウム。
【請求項１２】
前記軟骨は、魚類の軟骨である請求項１１記載のコンドロイチン硫酸ナトリウム。
【請求項１３】
前記軟骨は、サケの鼻軟骨である請求項１１記載のコンドロイチン硫酸ナトリウム。
【請求項１４】
前記アルカリは、ＮａＯＨである請求項１１記載のコンドロイチン硫酸ナトリウム。
【請求項１５】
前記塩析は、ＮａＣｌにより塩析する請求項１１記載のコンドロイチン硫酸ナトリウム。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、コンドロイチン硫酸ナトリウムに関する。また、本発明は、コンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
コンドロイチン硫酸ナトリウムは、グルコロン酸とＮ−アセチルガラクトサミンの二糖繰り返し構造を基本とし、そのＮ−アセチルガラクトサミンに硫酸基が結合した構造を有している。現在、コンドロイチン硫酸ナトリウムは、主な原料であるサメのヒレや子牛の鼻中隔軟骨などから生産されている。しかし、サメの資源量が少ないこと、子牛の鼻中隔軟骨は感染症（狂牛病）の危険性など原料の安全性に問題があり、いずれも安価な原料を安定化して確保することが困難な状況にある。そこで、サケの頭部から得られる鼻軟骨が最近注目されている。
【０００３】
コンドロイチン硫酸ナトリウムがインフルエンザウィルスや単純ヘルペスウィルスなど多数のウィルス細胞への感染を阻害することは、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）の出現以前から知られていた。
【０００４】
このように、コンドロイチン硫酸ナトリウムには多様な生理活性や物性が認められることから、抗炎症剤などの医薬品をはじめ、保湿剤として化粧品あるいは目薬として利用されている。
【０００５】
軟骨からのコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法としては、種々の方法が提案されている。以下にそれを示す。
【０００６】
サケ頭部より鼻軟骨を採取し、これを細切りする。鼻軟骨に含まれるタンパク質を分解するために、ＮａＯＨ水溶液中で加熱処理した後、タンパク分解酵素を添加して加熱処理する。冷却後遠心分離して、分解処理で生じた低分子化夾雑物とコンドロイチン硫酸ナトリウムを含む上澄みを得る。この上澄みを連続多段限外ろ過処理してコンドロイチン硫酸ナトリウムの濃縮と精製を同時に行う方法が提案されている（例えば、。特許文献１参照。）
【０００７】
サケの鼻軟骨を粉砕する。これを、タンパク質を分解するために、ＮａＯＨ水溶液中で加熱処理した後、タンパク質分解酵素を添加して加熱処理する。消化液を遠心分離し、上澄みをろ過する。ろ液にアルコールを加え、沈殿物を回収する。沈殿物を脱イオン水に溶かし、これを陽イオン交換樹脂処理し、さらに透析を行う方法が提案されている（例えば、特許文献２、特許文献３参照。）。
【０００８】
【特許文献１】
特開２０００−２７３１０２号公報
【特許文献２】
特開２００１−２３１４９７号公報
【特許文献３】
特開２００１−２４７６０２号公報
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、上述した従来のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法では、コンドロイチン硫酸ナトリウムを精製するために、連続多段限外ろ過処理を行うか、または陽イオン交換樹脂処理し、さらに透析を行う必要があった。これらの方法は、高価な設備が必要であったり、煩雑な工程を経るために長時間を要するといった問題がある。
【００１０】
本発明は、このような課題に鑑みてなされたものであり、簡易な方法からなるコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法、およびその製造方法により得られるコンドロイチン硫酸ナトリウムを提供することを目的とする。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法は、つぎの工程を含む方法である。軟骨をアルカリ処理する工程、およびアルカリ処理したものを塩析する工程である。これにより、高分子タンパク質と脂質を分離除去することができる。
【００１２】
ここで、軟骨は、魚類の軟骨であることが好ましい。また軟骨は、サケの鼻軟骨であることが好ましい。アルカリは、ＮａＯＨであることが好ましい。アルカリは、０．１〜２Ｎの範囲内にあることが好ましい。ＮａＣｌの共存下でアルカリ処理することが好ましい。ＮａＣｌは、１〜２Ｍの範囲内にあることが好ましい。ＮａＣｌにより塩析することが好ましい。ＮａＣｌは、３〜５Ｍの範囲内にあることが好ましい。塩析の工程の後に、ろ液にアルコールを添加してコンドロイチン硫酸ナトリウムを析出することが好ましい。
【００１３】
本発明のコンドロイチン硫酸ナトリウムは、軟骨をアルカリ処理し、これを塩析することにより得られるものである。これにより、高分子タンパク質と脂質が除去され、高純度のコンドロイチン硫酸ナトリウムが得られる。
【００１４】
ここで、軟骨は、魚類の軟骨であることが好ましい。また軟骨は、サケの鼻軟骨であることが好ましい。アルカリは、ＮａＯＨであることが好ましい。ＮａＣｌにより塩析することが好ましい。
【００１５】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施の形態について説明する。
まず、コンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法について説明する。
【００１６】
図１は、本発明のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法の工程を示すフロー図である。各ブロックに付した番号は、工程の番号である。工程の順に沿って説明する。
【００１７】
第１の工程では、原料である軟骨を粉砕する。
原料である軟骨としては、サケの鼻軟骨を使用する。軟骨は、このサケの鼻軟骨に限定されない。このほか、サメのヒレ、サメの背骨軟骨、エイのヒレ、エイの頭部軟骨などの全ての魚類の軟骨、その他子牛の鼻中隔軟骨、コンドロイチン硫酸を含有するすべての軟骨を採用することができる。
【００１８】
サケの鼻軟骨は、肉挽機により粉砕する。鼻軟骨の粉砕は、肉挽機によるものに限定されない。粉砕方法としては、このほか、抽出釜の中での撹拌磨砕などを採用することができる。
【００１９】
鼻軟骨は粉砕することにより、１〜１０ｍｍの範囲の大きさにすることが好ましい。大きさが１ｍｍ以上であると、溶液が良くなるという利点がある。大きさが１０ｍｍ以下であると、抽出時間が早くなるという利点がある。
【００２０】
第２の工程では、粉砕した軟骨をアルカリ処理する。粉砕した軟骨を、アルカリと食塩の混合水溶液中で撹拌し、所定時間加熱処理する。
【００２１】
アルカリとしては、苛性ソーダ（ＮａＯＨ）を使用する。アルカリはＮａＯＨに限定されない。このほか、苛性カリウムなどを採用することができる。
【００２２】
アルカリの濃度は、０．１〜２Ｎの範囲内にあることが好ましい。アルカリの濃度が０．１Ｎ以上であると、コンドロイチン硫酸とタンパク質の共有結合がβ−脱離反応により切断されるという利点がある。アルカリ濃度が２Ｎ以下であると、タンパク質の過度の分解を防ぎ、コンドロイチン硫酸ナトリウムとタンパク質を切断することができる。
【００２３】
アルカリの濃度は、０．１〜１Ｎの範囲内にあることがさらに好ましい。アルカリの濃度がこの範囲内にあると、上述の効果をより顕著に発揮することができる。
【００２４】
アルカリ処理においては、ＮａＯＨとともに食塩（ＮａＣｌ）を共存させる。ＮａＣｌの濃度は、１〜２Ｍの範囲内にあることが好ましい。ＮａＣｌの濃度が１Ｍ以上であると、コンドロイチン硫酸とタンパク質の切断を早くするという利点がある。ＮａＣｌの濃度が２Ｍ以下であると、タンパク質の分解を温和にするという利点がある。
【００２５】
ＮａＣｌの濃度は、２Ｍであることがさらに好ましい。ＮａＣｌの濃度がこの値であると、上述の効果をより顕著に発揮することができる。
【００２６】
アルカリ処理の温度は、１０〜５０℃の範囲内にあることが好ましい。温度が１０℃以上であると、アルカリの濃度を高くし処理時間を短時間にできるという利点がある。温度が５０℃以下であると、アルカリ濃度を低くし処理時間を長くできるという利点がある。
【００２７】
アルカリ処理の温度は、２０〜５０℃の範囲内にあることがさらに好ましい。温度がこの範囲内にあると、上述の効果をより顕著に発揮することができる。
【００２８】
アルカリ処理の時間は、０．５〜２時間の範囲内にあることが好ましい。０．５時間以上であると、アルカリの濃度を高くし温度は低く設定できるという利点がある。２時間以下であると、アルカリの濃度を低くし温度を高く設定できるという利点がある。
【００２９】
アルカリ処理の時間は、１〜２時間の範囲内にあることがさらに好ましい。時間がこの範囲内にあると、上述の効果をより顕著に発揮することができる。
【００３０】
上述のアルカリ処理の工程では、高濃度の食塩とアルカリ（ＮａＯＨなど）を併用している。これにより、軟骨中に含まれるコンドロイチン硫酸ナトリウムとタンパク質との共有結合が切断されるが、タンパク質自体の分解は抑制される。タンパク質が分解してペプチドまたはアミノ酸になることが抑制され、タンパク質は高分子の状態のままで残っている。
【００３１】
第３の工程では、中和を行う。アルカリ処理したものに、酸を撹拌しながら添加して中和する。酸としては酢酸を用いる。
【００３２】
酸は、酢酸に限定されない。このほか、クエン酸等の有機酸及び塩酸などの無機酸などを採用することができる。
【００３３】
中和後の水溶液のｐＨは、５．５〜７．５の範囲内にあることが好ましい。ｐＨが５．５以上であると、溶解しているタンパク質が析出するという利点がある。ｐＨが７．５以下であると、溶解しているタンパク質を塩析しやすいという利点がある。
【００３４】
第４の工程では、アルカリ処理したものを塩析する。タンパク質が分解しないで高分子のままの状態であるアルカリ処理液から、撹拌しながらＮａＣｌ濃度を高くすることにより、高分子タンパク質を析出させる。
【００３５】
塩析に用いる塩はＮａＣｌに限定されない。このほか、硫安などを用いることができる。
【００３６】
塩の濃度は、３〜５Ｍの範囲内にあることが好ましい。塩の濃度が３Ｍ以上であると、タンパク質の析出を良くするという利点がある。塩の濃度が５Ｍ以下であると、ＮａＣｌが飽和溶液でタンパク質を完全に析出させるという利点がある。
【００３７】
第５の工程では、吸着を行う。塩析したものに撹拌しながら吸着剤を添加することにより、析出したタンパク質と脂質を吸着剤に吸着させる。脂質は、ＮａＯＨにより鹸化され吸着剤に吸着しやすくなる。なお、この第５の工程は、省略してつぎの工程に進むことができる。その理由は、次の工程で吸着剤を使用するためである。
【００３８】
吸着剤としては、活性白土を使用することができる。吸着剤は活性白土に限定されない。このほか、活性炭などを採用することができる。
【００３９】
第６の工程では、ろ過を行う。第４または５の工程で得られたものに、ろ過助剤を加えてろ過することにより、高分子タンパク質および脂質などが分離除去される。得られたろ液は、透明でコンドロイチン硫酸ナトリウムと食塩を含有している水溶液である。
【００４０】
ろ過は、フィルタープレス法により行う。ろ過方法は、このフィルタープレス法に限定されない。このほか、減圧ろ過、遠心分離などを採用することができる。
【００４１】
ろ過助剤は、珪藻土を用いる。その理由は、安価で手に入りやすいためである。
【００４２】
ろ過助剤は、珪藻土に限定されない。このほか、紙パルプなどを採用することができる。
【００４３】
第７の工程では、析出を行う。ろ液を撹拌しながら、これにエチルアルコールを添加してコンドロイチン硫酸ナトリウムを析出させる。
【００４４】
析出には、エチルアルコールを用いるが、これに限定されない。このほか、メチルアルコールなどを採用することができる。
【００４５】
析出する際の、エチルアルコールの濃度は、３０〜７０質量％の範囲内にあることが好ましい。エチルアルコールの濃度が３０質量％以上であると、コンドロイチン硫酸ナトリウムが析出を始めるという利点がある。エチルアルコールの濃度が７０質量％以下であると、コンドロイチン硫酸ナトリウムが完全に析出されるという利点がある。
【００４６】
第８の工程では、デカンタと遠心分離を行う。析出を行ったものを静置すると、コンドロイチン硫酸ナトリウムが沈殿し、沈殿層と上澄み層の２層に分離する。デカンタにより上澄み液を除去する。沈殿層の沈殿物を遠心分離機に導入し遠心分離する。溶液を分離除去することにより、粗コンドロイチン硫酸ナトリウムを得ることができる。
【００４７】
遠心分離機は、上排型遠心分離機を用いるが、これに限定されない。このほか、スキミング型遠心分離機、減圧ろ過機などを採用することができる。
【００４８】
第９の工程では、溶解を行う。遠心分離により得られたウェットの粗コンドロイチン硫酸ナトリウムの結晶を、所定量の温水に溶解させる。
【００４９】
ウエットの結晶にはＮａＣｌが含まれている。このＮａＣｌを除去する必要がある。必要な水の質量は次のように求める。アルカリ処理（工程２）および塩析（工程４）において添加したＮａＣｌの質量と、軟骨に含まれる水分量およびアルカリ処理（工程２）で加えられた水の質量から、ＮａＣｌの濃度を求める。ろ過（工程６）における、ろ液の質量から、ろ液中のＮａＣｌの質量を求める。デカンタ・遠心分離（工程８）により除去された液量とその液の塩分濃度から、除去されたＮａＣｌの質量を求める。ろ液中のＮａＣｌの質量から、除去されたＮａＣｌの質量を差し引くことにより、ウェットの結晶中のＮａＣｌの質量が求まる。
【００５０】
後述する析出（工程１２）では、エチルアルコール３０〜７０質量％水溶液により析出をする。この範囲内でエチルアルコールの濃度を設定する。そこで、ウェットの結晶中に含まれるＮａＣｌを溶解するのに必要なエチルアルコール水溶液（設定濃度）の質量を、溶解度曲線（化学便覧）より求める。この求めた質量から最低限必要な水の質量を求める。このように、最低限必要な水の質量を算出することにより、析出（工程１２）で使用するエチルアルコールの質量を少なくすることができる。
【００５１】
溶解の工程９で必要な水の質量は、この最低限必要な水の質量に限定されない。溶解に必要な水の質量は、最低限必要な水の質量の１〜２倍の範囲内であることが好ましい。最低限必要な水の質量の１倍以上であれば、ＮａＣｌを完全に溶解することができる。最低限必要な水の質量の２倍以下であると、ＮａＣｌを完全に溶解除去できるという利点がある。
【００５２】
溶解に際しては、５０〜１００℃に加熱することが好ましい。温度が５０℃以上であると、粗コンドロイチン硫酸ナトリウムの溶解が早くできるという利点がある。温度が１００℃以下であると、溶解がより短時間でできるという利点がある。
【００５３】
第１０の工程では、吸着を行う。溶解したものに撹拌しながら吸着剤を添加することにより、脂質および残存する高分子タンパク質などを吸着剤に吸着させる。
吸着剤としては、活性白土を使用することができる。吸着剤は活性白土に限定されないことは、工程５の説明と同様である。
【００５４】
第１１の工程では、ろ過を行う。吸着の工程で得られたものに、ろ過助剤を加えてろ過することにより、脂質および高分子タンパク質などが分離除去される。無色透明なコンドロイチン硫酸ナトリウムの水溶液が得られる。
【００５５】
ろ過は、フィルタープレス法により行う。ろ過助剤は、珪藻土を用いる。ろ過方法がフィルタープレス法に限定されないこと、およびろ過助剤が珪藻土に限定されないことは、工程６の説明と同様である。
【００５６】
第１２の工程では、析出を行う。ろ液を撹拌しながら、エチルアルコールを所定量添加してコンドロイチン硫酸ナトリウムを析出させる。この工程において、溶液中に溶解していたＮａＣｌは、析出することなく溶存状態で保持される。
【００５７】
添加するエチルアルコールの質量は、工程９で設定したエチルアルコール濃度と、工程９で算出した溶解に必要な水の質量とから求める。設定するエチルアルコールの濃度は、３０〜７０質量％の範囲内にあることが好ましい。これは、析出の工程７で説明した理由によるものである。
【００５８】
第１３の工程では、デカンタを行う。析出を行ったものを静置すると、コンドロイチン硫酸ナトリウムが沈殿し、沈殿層と上澄み層の２層に分離する。デカンタにより上澄み液を除去する。
【００５９】
第１４の工程では、仮脱水を行う。デカンタにより得られた沈殿物の質量を測り、濃度が８０質量％になるようにエチルアルコールを添加し撹拌する。この工程により、沈殿物中の水分とＮａＣｌが、エチルアルコール水溶液に希釈される。
【００６０】
エチルアルコールの濃度は８０質量％に限定されない。エチルアルコールの濃度は、７５〜８５質量％の範囲内にあることが好ましい。濃度が７５質量％以上であると、コンドロイチン硫酸ナトリウムのウェットの沈殿物が撹拌により粉末化されるという利点がある。濃度が８５質量％以下であると、ＮａＣｌが析出しないという利点がある。
【００６１】
第１５の工程では遠心分離を行う。仮脱水したものを遠心分離機に導入し遠心分離する。さらに、仮脱水の工程１４で用いたと同じ濃度のエチルアルコール水溶液により洗い、残存するＮａＣｌを除去する。この工程により、コンドロイチン硫酸ナトリウムの結晶を得ることができる。
【００６２】
第１６の工程では、脱水を行う。コンドロイチン硫酸ナトリウムの結晶に、９９質量％のエチルアルコールを、濃度が９５質量％以上になるまで撹拌しながら添加し脱水する。エチルアルコールの濃度が９５質量％以上であると、コンドロイチン硫酸ナトリウム中の水分が除去され粉末化されるという利点がある。
【００６３】
第１７の工程では遠心分離を行う。脱水したものを遠心分離機に導入し遠心分離する。この工程により、水分の少ないコンドロイチン硫酸ナトリウムの結晶を得ることができる。
【００６４】
工程１８では、乾燥を行う。遠心分離で得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムの結晶を乾燥機に入れ、減圧下５０〜８０℃の温度で乾燥する。温度が５０℃以上であると、乾燥が始まるという利点がある。温度が８０℃以下であると、コンドロイチン硫酸ナトリウムの経時変化をさせないという利点がある。
【００６５】
以上、コンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法を、工程１〜１８により説明した。コンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法は、この工程１〜１８に限定されない。
【００６６】
工程８〜１８は、析出７の工程で得られた粗コンドロイチン硫酸ナトリウムの精製の工程である。この工程８〜１８に代えて、工程８〜１１を実施後透析により脱塩し乾燥をスプレードライによる方法を採用することができる。
【００６７】
析出の工程７において、要求される純度のコンドロイチン硫酸ナトリウムが得られる場合は、工程８〜１２を省略することができる。
【００６８】
つぎに、上述の方法により製造されたコンドロイチン硫酸ナトリウムについて説明する。
【００６９】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムは白色の結晶である。
元素分析の結果、窒素は２．６〜２．８質量％の範囲内にあり、硫黄は６．１〜６．４質量％の範囲内にある。タンパク質の含有量は１質量％以下である。これらの値から、得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムは高純度であることが確認された。
【００７０】
上述したように、本実施の形態のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法は、つぎの工程を含む方法である。軟骨をアルカリ処理する工程、およびアルカリ処理したものを塩析する工程である。これにより、高分子タンパク質と脂質を分離除去することができる。
【００７１】
本実施の形態のコンドロイチン硫酸ナトリウムは、軟骨をアルカリ処理し、これを塩析することにより得られるものである。これにより、高分子タンパク質と脂質の含有量が少ないコンドロイチン硫酸ナトリウムが得られる。
【００７２】
以上のことから、本実施の形態によれば、軟骨をアルカリ処理する工程およびアルカリ処理したものを塩析する工程を含む、簡易な方法により、コンドロイチン硫酸ナトリウムを得ることができる。
【００７３】
なお、本発明は上述の実施の形態に限らず本発明の要旨を逸脱することなくその他種々の構成を採り得ることはもちろんである。
【００７４】
【実施例】
つぎに、本発明にかかる実施例について具体的に説明する。ただし、本発明はこれら実施例に限定されるものではないことはもちろんである。
【００７５】
実施例１
サケ頭部より鼻軟骨を採取し、−２０℃にて凍結保存する。凍結した鼻軟骨１ｋｇを一夜室温で放置し解凍する。鼻軟骨中に含まれる水分は８５０ｇである。解凍した鼻軟骨を肉挽機にて粉砕し、水５００ｍｌを加えて撹拌分散する。つぎに、最終濃度が２Ｍの食塩（ＮａＣｌ）水溶液かつ０．１Ｎの苛性ソーダ（ＮａＯＨ）水溶液になるように、食塩１７５．５ｇと４質量％苛性ソーダ（ＮａＯＨ）水溶液１５０ｇを加えて温度５０±２℃で２時間アルカリ処理する。アルカリ処理の終了後、酢酸でｐＨ６に調整する。つぎに、ＮａＣｌ濃度が４Ｍになるように、ＮａＣｌを１７５．５ｇ添加し溶解させると、高分子タンパク質が塩析される。吸着のために、活性白土１０ｇを添加した後、珪藻土を加えてろ過することにより、透明なろ液１５００ｍｌを得た。このろ液１５００ｍｌにエチルアルコール２２５０ｍｌを加えて５５質量％のアルコール水溶液として、コンドロイチン硫酸ナトリウムを分別沈殿させる。デカンタした後に、沈殿を遠心分離して集め、粗コンドロイチン硫酸ナトリウム１５０ｇを得た。得られた粗コンドロイチン硫酸ナトリウム中には、食塩と微量の油分などが含有しているので、脱食塩と微量の油分除去のため７０℃の温水５００ｍｌに溶解させ、活性白土１０ｇと珪藻土を加えてろ過すると無色透明なコンドロイチン硫酸ナトリウムの水溶液５５０ｍｌを得た。つぎに、この水溶液にエチルアルコール７００ｍｌを加えて５０質量％のエチルアルコール水溶液として、コンドロイチン硫酸ナトリウムを分別沈殿させる。５０質量％エチルアルコール水溶液中にＮａＣｌが溶けて脱塩される。デカンタにより沈殿物を集め、８０質量％エチルアルコールで洗浄し遠心分離する。
さらに９９質量％エチルアルコールを、濃度９５質量％になるまで撹拌しながら添加しで脱水洗浄する。遠心分離して得られた沈殿物を温度６０〜７０℃にて減圧乾燥するとコンドロイチン硫酸ナトリウム３０ｇが得られる。
【００７６】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムについて、タンパク質、窒素、および硫黄の定量分析を行った。タンパク質の定量分析は、ピコーレット法により行った。この分析法の検出限界は、１質量％である。
【００７７】
窒素および硫黄の定量分析は、窒素がケールダール法、硫黄が硫酸バリウム定量法により行った。
【００７８】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムが、高純度品であるか否かの判断はつぎの基準により行った。
【００７９】
タンパク質の含有量は１質量％以下であることを基準とした。その理由は、タンパク質の確認試験でほぼ完全に除去できているためである。
【００８０】
窒素の含有量は２．６〜２．８質量％の範囲内にあり、硫黄の含有量は６．１〜６．４質量％の範囲内にあることを基準とした。コンドロイチン硫酸ナトリウムの構造式より分子量を計算し、窒素と硫黄の１００質量％の理論値を求め、９０〜１００質量％含有するものを高純度品とした。
【００８１】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムの分析結果はつぎのとおりであった。タンパク質の含有量は検出限界以下であった。窒素は２．７質量％てあり、硫黄は６．３質量％であった。これらの分析結果から、本実施例により得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムは、高純度品であることが判明した。
【００８２】
実施例２
サケ頭部より鼻軟骨を採取し、−２０℃にて凍結保存する。凍結した鼻軟骨１ｋｇを一夜室温で放置し解凍する。解凍した鼻軟骨を肉挽機にて粉砕する。鼻軟骨中に含まれる水分は８５０ｇである。最終濃度が２Ｍの食塩（ＮａＣｌ）水溶液かつ０．２Ｎの苛性ソーダ（ＮａＯＨ）水溶液となるように、食塩１１７ｇと苛性ソーダ（ＮａＯＨ）８ｇを水１５０ｍｌに溶解して加え、温度４０±２℃で２時間アルカリ処理する。これにより液量が１０００ｍｌとなり、後に使用するエチルアルコールの量を減らすことができ、製造コストを下げることができる。アルカリ処理の終了後、酢酸でｐＨ６に調整する。つぎに、ＮａＣｌ濃度が４Ｍになるように、ＮａＣｌを１１７ｇ添加し溶解させると、高分子タンパク質が塩析される。吸着のために、活性白土１０ｇを添加した後、珪藻土を加えてろ過することにより、透明なろ液１０００ｍｌを得た。このろ液１０００ｍｌにエチルアルコール１５００ｍｌを加えて５５質量％のアルコール水溶液として、コンドロイチン硫酸ナトリウムを分別沈殿させる。デカンタした後に、沈殿を遠心分離して集め、粗コンドロイチン硫酸ナトリウム１３５ｇを得た。得られた粗コンドロイチン硫酸ナトリウム中には、食塩と微量の油分などが含有しているので、脱食塩と微量の油分除去のため７０℃の温水５００ｍｌに溶解させ、活性白土１０ｇと珪藻土を加えてろ過すると無色透明なコンドロイチン硫酸ナトリウムの水溶液５３０ｍｌを得た。つぎに、この水溶液にエチルアルコール６５０ｍｌを加えて５０質量％のエチルアルコール水溶液として、コンドロイチン硫酸ナトリウムを分別沈殿させる。５０質量％エチルアルコール水溶液中にＮａＣｌが溶けて脱塩される。デカンタにより沈殿物を集め、８０質量％エチルアルコールで洗浄し遠心分離する。さらに９９質量％エチルアルコールを、濃度９５質量％になるまで撹拌しながら添加しで脱水洗浄する。遠心分離して得られた沈殿物を温度６０〜７０℃にて減圧乾燥するとコンドロイチン硫酸ナトリウム２８ｇが得られる。
【００８３】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムについて、タンパク質、窒素、および硫黄の定量分析を行った。タンパク質の定量分析と、窒素および硫黄の定量分析は、実施例１と同様とした。
【００８４】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムが、高純度品であるか否かの判断は、実施例１と同様とした。
【００８５】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムの分析結果はつぎのとおりであった。タンパク質の含有量は検出限界以下であった。窒素は２．７質量％てあり、硫黄は６．３質量％であった。これらの分析結果から、本実施例により得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムは、高純度品であることが判明した。
【００８６】
実施例３
サケ頭部より鼻軟骨を採取し、−２０℃にて凍結保存する。凍結した鼻軟骨１ｋｇを一夜室温で放置し解凍する。解凍した鼻軟骨を肉挽機にて粉砕する。鼻軟骨中に含まれる水分は８５０ｇである。最終濃度が２Ｍの食塩（ＮａＣｌ）水溶液かつ１Ｎの苛性ソーダ（ＮａＯＨ）水溶液になるように、食塩１１７ｇと苛性ソーダ（ＮａＯＨ）４０ｇを水１５０ｍｌに溶解して加え、温度２０±２℃で１時間アルカリ処理する。アルカリ処理の終了後、酢酸でｐＨ６に調整する。つぎに、ＮａＣｌ濃度が４Ｍになるように、ＮａＣｌを１１７ｇ添加し溶解させると、高分子タンパク質が塩析される。吸着のために、活性白土１０ｇを添加した後、珪藻土を加えてろ過することにより、透明なろ液１０００ｍｌを得た。このろ液１０００ｍｌにエチルアルコール１５００ｍｌを加えて５５質量％のアルコール水溶液として、コンドロイチン硫酸ナトリウムを分別沈殿させる。デカンタした後に、沈殿を遠心分離して集め、粗コンドロイチン硫酸ナトリウム１４０ｇを得た。得られた粗コンドロイチン硫酸ナトリウム中には、食塩と微量の油分などが含有しているので、脱食塩と微量の油分除去のため７０℃の温水５００ｍｌに溶解させ、活性白土１０ｇと珪藻土を加えてろ過すると無色透明なコンドロイチン硫酸ナトリウムの水溶液５５０ｍｌを得た。つぎに、この水溶液にエチルアルコール７００ｍｌを加えて５０質量％のエチルアルコール水溶液として、コンドロイチン硫酸ナトリウムを分別沈殿させる。５０質量％エチルアルコール水溶液中にＮａＣｌが溶けて脱塩される。デカンタにより沈殿物を集め、８０質量％エチルアルコールで洗浄し遠心分離する。さらに９９質量％エチルアルコールを、濃度９５質量％になるまで撹拌しながら添加しで脱水洗浄する。遠心分離して得られた沈殿物を温度６０〜７０℃にて減圧乾燥するとコンドロイチン硫酸ナトリウム２５ｇが得られる。
【００８７】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムについて、タンパク質、窒素、および硫黄の定量分析を行った。タンパク質の定量分析と、窒素および硫黄の定量分析は、実施例１と同様とした。
【００８８】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムが、高純度品であるか否かの判断は、実施例１と同様とした。
【００８９】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムの分析結果はつぎのとおりであった。タンパク質の含有量は検出限界以下であった。窒素は２．７質量％てあり、硫黄は６．２質量％であった。これらの分析結果から、本実施例により得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムは、高純度品であることが判明した。
【００９０】
実施例４
サメの背骨より軟骨を採取し、−２０℃にて凍結保存する。凍結した背骨軟骨１ｋｇを一夜室温で放置し解凍する。解凍した鼻軟骨を肉挽機にて粉砕する。背骨軟骨中に含まれる水分は８５０ｇである。最終濃度が２Ｍの食塩（ＮａＣｌ）水溶液かつ０．２Ｎの苛性ソーダ（ＮａＯＨ）水溶液になるように、食塩１１７ｇと苛性ソーダ（ＮａＯＨ）８ｇを水１５０ｍｌに溶解して加え、温度４０±２℃で２時間アルカリ処理する。アルカリ処理の終了後、酢酸でｐＨ６に調整する。つぎに、ＮａＣｌ濃度が４Ｍになるように、ＮａＣｌを１１７ｇ添加し溶解させると、高分子タンパク質が塩析される。吸着のために、活性白土１０ｇを添加した後、珪藻土を加えてろ過することにより、透明なろ液１０００ｍｌを得た。このろ液１０００ｍｌにエチルアルコール１５００ｍｌを加えて５５質量％のアルコール水溶液として、コンドロイチン硫酸ナトリウムを分別沈殿させる。デカンタした後に、沈殿を遠心分離して集め、粗コンドロイチン硫酸ナトリウム１５０ｇを得た。得られた粗コンドロイチン硫酸ナトリウム中には、食塩と微量の油分などが含有しているので、脱食塩と微量の油分除去のため７０℃の温水５００ｍｌに溶解させ、活性白土１０ｇと珪藻土を加えてろ過すると無色透明なコンドロイチン硫酸ナトリウムの水溶液５５０ｍｌを得た。つぎに、この水溶液にエチルアルコール７００ｍｌを加えて５０質量％のエチルアルコール水溶液として、コンドロイチン硫酸ナトリウムを分別沈殿させる。５０質量％エチルアルコール水溶液中にＮａＣｌが溶けて脱塩される。デカンタにより沈殿物を集め、８０質量％エチルアルコールで洗浄し遠心分離する。さらに９９質量％エチルアルコールを、濃度９５質量％になるまで撹拌しながら添加しで脱水洗浄する。遠心分離して得られた沈殿物を温度６０〜７０℃にて減圧乾燥するとコンドロイチン硫酸ナトリウム１５ｇが得られる。
【００９１】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムについて、タンパク質、窒素、および硫黄の定量分析を行った。タンパク質の定量分析と、窒素および硫黄の定量分析は、実施例１と同様とした。
【００９２】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムが、高純度品であるか否かの判断は、実施例１と同様とした。
【００９３】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムの分析結果はつぎのとおりであった。タンパク質の含有量は検出限界以下であった。窒素は２．６質量％てあり、硫黄は６．３質量％であった。これらの分析結果から、本実施例により得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムは、高純度品であることが判明した。
【００９４】
実施例５
サケ頭部より鼻軟骨を採取し、−２０℃にて凍結保存する。凍結した鼻軟骨１ｋｇを一夜室温で放置し解凍する。解凍した鼻軟骨を肉挽機にて粉砕する。鼻軟骨中に含まれる水分は８５０ｇである。最終濃度が２Ｍの食塩（ＮａＣｌ）水溶液かつ０．２Ｎの苛性ソーダ（ＮａＯＨ）水溶液になるように、食塩１１７ｇと苛性ソーダ（ＮａＯＨ）８ｇを水１５０ｍｌに溶解して加え、温度４０±２℃で２時間アルカリ処理する。アルカリ処理の終了後、酢酸でｐＨ６に調整する。つぎに、ＮａＣｌ濃度が３Ｍになるように、ＮａＣｌを５８．５ｇ添加し溶解させると、高分子タンパク質が塩析される。吸着のために、活性白土１０ｇを添加した後、珪藻土を加えてろ過することにより、透明なろ液１０００ｍｌを得た。このろ液１０００ｍｌにエチルアルコール１５００ｍｌを加えて５５質量％のアルコール水溶液として、コンドロイチン硫酸ナトリウムを分別沈殿させる。デカンタした後に、沈殿を遠心分離して集め、粗コンドロイチン硫酸ナトリウム９０ｇを得た。得られた粗コンドロイチン硫酸ナトリウム中には、食塩と微量の油分などが含有しているので、脱食塩と微量の油分除去のため７０℃の温水４００ｍｌに溶解させ、活性白土１０ｇと珪藻土を加えてろ過すると無色透明なコンドロイチン硫酸ナトリウムの水溶液４２０ｍｌを得た。つぎに、この水溶液にエチルアルコール５３０ｍｌを加えて５０質量％のエチルアルコール水溶液として、コンドロイチン硫酸ナトリウムを分別沈殿させる。５０質量％エチルアルコール水溶液中にＮａＣｌが溶けて脱塩される。デカンタにより沈殿物を集め、８０質量％エチルアルコールで洗浄し遠心分離する。さらに９９質量％エチルアルコールを、濃度９５質量％になるまで撹拌しながら添加しで脱水洗浄する。遠心分離して得られた沈殿物を温度６０〜７０℃にて減圧乾燥するとコンドロイチン硫酸ナトリウム２８ｇが得られる。
【００９５】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムについて、タンパク質、窒素、および硫黄の定量分析を行った。タンパク質の定量分析と、窒素および硫黄の定量分析は、実施例１と同様とした。
【００９６】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムが、高純度品であるか否かの判断は、実施例１と同様とした。
【００９７】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムの分析結果はつぎのとおりであった。タンパク質の含有量は１質量％であった。窒素は２．８質量％てあり、硫黄は６．２質量％であった。これらの分析結果から、本実施例により得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムは、高純度品であることが判明した。
【００９８】
実施例６
サケ頭部より鼻軟骨を採取し、−２０℃にて凍結保存する。凍結した鼻軟骨１ｋｇを一夜室温で放置し解凍する。解凍した鼻軟骨を肉挽機にて粉砕する。鼻軟骨中に含まれる水分は８５０ｇである。最終濃度が２Ｍの食塩（ＮａＣｌ）水溶液かつ０．２Ｎの苛性ソーダ（ＮａＯＨ）水溶液になるように、食塩１１７ｇと苛性ソーダ（ＮａＯＨ）８ｇを水１５０ｍｌに溶解して加え、温度４０±２℃で２時間アルカリ処理する。アルカリ処理の終了後、酢酸でｐＨ６に調整する。つぎに、ＮａＣｌ濃度が５Ｍになるように、ＮａＣｌを１７５．５ｇ添加し溶解させると、高分子タンパク質が塩析される。吸着のために、活性白土１０ｇを添加した後、珪藻土を加えてろ過することにより、透明なろ液１０００ｍｌを得た。このろ液１０００ｍｌにエチルアルコール１５００ｍｌを加えて５５質量％のアルコール水溶液として、コンドロイチン硫酸ナトリウムを分別沈殿させる。デカンタした後に、沈殿を遠心分離して集め、粗コンドロイチン硫酸ナトリウム２０５ｇを得た。得られた粗コンドロイチン硫酸ナトリウム中には、食塩と微量の油分などが含有しているので、脱食塩と微量の油分除去のため７０℃の温水７００ｍｌに溶解させ、活性白土１０ｇと珪藻土を加えてろ過すると無色透明なコンドロイチン硫酸ナトリウムの水溶液８００ｍｌを得た。つぎに、この水溶液にエチルアルコール１０００ｍｌを加えて５０質量％のエチルアルコール水溶液として、コンドロイチン硫酸ナトリウムを分別沈殿させる。５０質量％エチルアルコール水溶液中にＮａＣｌが溶けて脱塩される。デカンタにより沈殿物を集め、８０質量％エチルアルコールで洗浄し遠心分離する。さらに９９質量％エチルアルコールを、濃度９５質量％になるまで撹拌しながら添加しで脱水洗浄する。遠心分離して得られた沈殿物を温度６０〜７０℃にて減圧乾燥するとコンドロイチン硫酸ナトリウム２７ｇが得られる。
【００９９】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムについて、タンパク質、窒素、および硫黄の定量分析を行った。タンパク質の定量分析と、窒素および硫黄の定量分析は、実施例１と同様とした。
【０１００】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムが、高純度品であるか否かの判断は、実施例１と同様とした。
【０１０１】
得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムの分析結果はつぎのとおりであった。タンパク質の含有量は検出限界以下であった。窒素は２．６質量％てあり、硫黄は６．３質量％であった。これらの分析結果から、本実施例により得られたコンドロイチン硫酸ナトリウムは、高純度品であることが判明した。
【０１０２】
以上のことから、本実施例によれば、つぎのようになる。
従来の、コンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法では、軟骨をアルカリ処理した後にタンパク分解酵素を使用し、タンパク質をペプチドまたはアミノ酸まで低分子化していた。そして、粗コンドロイチン硫酸ナトリウムを調整後、陽イオン交換樹脂処理・透析処理をするか、連続多段限外ろ過処理を行い、ペプチド、アミノ酸、および低分子のタンパクの除去を行い精製していた。このように、従来の方法は、製造工程中の後半で煩雑な工程により精製していた。
【０１０３】
これに対して、本実施例では、製造工程の前半で精製することができる。そのため、陽イオン交換樹脂処理・透析処理、連続多段限外ろ過処理などの煩雑な操作も不要でそのための高価な装置も不要である。
【０１０４】
【発明の効果】
本発明は、以下に記載されるような効果を奏する。
軟骨をアルカリ処理する工程およびアルカリ処理したものを塩析する工程を含む、簡易な方法により、コンドロイチン硫酸ナトリウムを得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法の工程を示すフロー図である。
【図１】
2004189825.tif 000003
【手続補正書】
【提出日】平成15年4月10日(2003.4.10)
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
つぎの工程を含むコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
（イ）軟骨をアルカリ処理する工程
（ロ）アルカリ処理したものを塩析する工程
【請求項２】
前記軟骨は、魚類の軟骨である請求項１記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【請求項３】
前記軟骨は、サケの鼻軟骨である請求項１記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【請求項４】
前記アルカリは、ＮａＯＨである請求項１記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【請求項５】
前記アルカリは、０．１〜２Ｎの範囲内にある請求項４記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【請求項６】
前記アルカリ処理は、ＮａＣｌの共存下でアルカリ処理する請求項１記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【請求項７】
前記ＮａＣｌは、１〜２Ｍの範囲内にある請求項６記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【請求項８】
前記塩析は、ＮａＣｌにより塩析する請求項１記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【請求項９】
前記ＮａＣｌは、３〜５Ｍの範囲内にある請求項８記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【請求項１０】
前記塩析の工程の後に、ろ液にアルコールを添加してコンドロイチン硫酸ナトリウムを析出する請求項１記載のコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、コンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法に関する。


【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本発明は、このような課題に鑑みてなされたものであり、簡易な方法からなるコンドロイチン硫酸ナトリウムの製造方法を提供することを目的とする。


【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】削除
【補正の内容】