(57)【要約】【課題】ＦＫＢＰ１２と結合する新規な化合物を提供すること。【解決手段】下記式【化３１】2004123555.tif 000033［式中、Ｒ１はＣ１−８アルキルスルホニル基、Ｃ１−８アルキルオギザリル基又は式【化３２】2004123555.tif 000034（式中、Ｒ３はＣ３−８シクロアルキル基であり、Ｒ４は水素原子であるか、又はＲ３及びＲ４は隣接する炭素原子と一緒になってＣ１−３アルキル基の１〜４個で置換されたＣ３−８シクロアルキル基又はＣ３−８シクロアルキル基を形成する基であり、Ｒ５は水素原子又は水酸基である。）で表される基であり、Ｒ２はフェニル基又はピリジル基であり、ｎは１又は２である。］で表されるジフルオロメチルアミン誘導体又はその医薬上許容される塩。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式
【化１】
2004123555.tif 000031
［式中、Ｒ１はＣ１−８アルキルスルホニル基、Ｃ１−８アルキルオギザリル基又は式
【化２】
2004123555.tif 000032
（式中、Ｒ３はＣ３−８シクロアルキル基であり、Ｒ４は水素原子であるか、又はＲ３及びＲ４は隣接する炭素原子と一緒になってＣ１−３アルキル基の１〜４個で置換されたＣ３−８シクロアルキル基又はＣ３−８シクロアルキル基を形成する基であり、Ｒ５は水素原子又は水酸基である。）で表される基であり、Ｒ２はフェニル基又はピリジル基であり、ｎは１又は２である。］で表されるジフルオロメチルアミン誘導体又はその医薬上許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ＦＫＢＰ１２と結合することにより各種医薬として有用な新規ジフルオロメチルアミン誘導体に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、免疫抑制剤のＦＫ５０６（タクロリムス）がＰＣ１２細胞等で強力な神経突起伸長作用を有すること、及びＦＫ５０６やシクロスポリンＡ等の結合タンパク質であるイムノフィリン類が免疫系よりも神経系に多く発現することなどから、イムノフィリンリガンドの神経栄養因子としての作用が注目されている。
ＦＫ５０６結合タンパク質（以下ＦＫＢＰと略す）では、分子量１２ｋＤａのＦＫＢＰ１２が非常に高濃度に細胞質に偏在する主要なＦＫＢＰである。ＦＫ５０６は二つのドメイン（エフェクタードメインとＦＫＢＰ結合ドメイン）を有し、ＦＫＢＰ結合ドメインを介してＦＫＢＰ１２に結合した後、それぞれ異なる機構により免疫抑制作用と神経栄養活性を示す。免疫細胞では、ＦＫ５０６−ＦＫＢＰ１２複合体はエフェクタードメインを介してカルシニューリンに結合し免疫抑制作用を発現する。一方、神経細胞系ではＦＫ５０６はＦＫＢＰ１２に結合するがカルシニューリンを介することなく神経栄養活性を発現する。事実、ＦＫＢＰ結合ドメインよりデザインされた低分子のＦＫＢＰ１２リガンドは、カルシニューリンを阻害することなく神経栄養活性を示す。従って、このような低分子ＦＫＢＰ１２リガンドは、カルシニューリン阻害による免疫抑制を介する副作用を示すことのない各種神経変性疾患治療剤として有用である。
【０００３】
ＦＫＢＰ結合ドメインよりデザインされたＦＫＢＰ１２リガンドが、ＷＯ９２１９５９３、ＷＯ９６４０６３３、ＷＯ９９４５００６、ＷＯ９９６２５１１等に開示されているが、いずれも本発明の化合物と化学構造が異なる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ＦＫＢＰ１２と結合する新規な化合物を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは前記課題を達成するために鋭意研究を進めた結果、ある種のジフルオロメチルアミン誘導体がＦＫＢＰ１２と結合することを見い出し、本発明を完成した。すなわち、本発明の化合物は、下記式
【０００６】
【化３】
2004123555.tif 000002
【０００７】
［式中、Ｒ１はＣ１−８アルキルスルホニル基、Ｃ１−８アルキルオギザリル基又は式
【０００８】
【化４】
2004123555.tif 000003
【０００９】
（式中、Ｒ３はＣ３−８シクロアルキル基であり、Ｒ４は水素原子であるか、又はＲ３及びＲ４は隣接する炭素原子と一緒になってＣ１−３アルキル基の１〜４個で置換されたＣ３−８シクロアルキル基又はＣ３−８シクロアルキル基を形成する基であり、Ｒ５は水素原子又は水酸基である。）で表される基であり、Ｒ２はフェニル基又はピリジル基であり、ｎは１又は２である。］で表されるジフルオロメチルアミン誘導体又はその医薬上許容される塩である。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明において、Ｃｘ−ｙとは炭素原子数をｘ〜ｙ個有することを意味する。
従って、Ｃ１−３のアルキル基とは、炭素原子数１〜３の直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基を示し、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、などが挙げられる。Ｃ１−８アルキル基とは、炭素原子数１〜８の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基を含むアルキル基を示し、例えば、前記の他ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、シクロプロピルメチル基、ペンチル基、イソペンチル基、シクロブチルメチル基、１，１−ジメチルプロピル基、１−エチルプロピル基、ヘキシル基、イソヘキシル基、シクロペンチルメチル基、シクロヘキシルメチル基、１−エチルブチル基、ヘプチル基、オクチル基などが挙げられる。Ｃ３−８シクロアルキル基とは炭素原子数３〜８のシクロアルキル基を示し、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基などが挙げられる。
【００１１】
また、本発明において医薬上許容される塩としては、例えば硫酸、塩酸、燐酸などの鉱酸との塩、酢酸、シュウ酸、乳酸、酒石酸、フマール酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸などの有機酸との塩、トリメチルアミン、メチルアミンなどのアミンとの塩、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオンなどの金属イオンとの塩などが挙げられる。
本発明の化合物は単一の光学活性体であっても、あるいは立体異性体の混合物であってもよい。
【００１２】
本発明の化合物は、例えば下記に示す方法に従って製造することができる。
以下、本明細書中では、ＷＳＣ・ＨＣｌは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、ＨＯＢｔは１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、ローソン試薬は２，４−ビス（４−メトキシフェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジホスフェタン−２，４−ジスルフィド、ＤＡＳＴはジエチルアミノサルファー　トリフルオライド、ＴＭＳＩはヨウ化トリメチルシランをそれぞれ表わす。
【００１３】
本発明の化合物（１）は、下記式１に示したように化合物（２）と対応するスルホニルクロライドあるいはカルボン酸と縮合することにより合成できる。
【００１４】
【化５】
2004123555.tif 000004
【００１５】
カルボン酸との縮合では、ＷＳＣ・ＨＣｌなどの縮合剤を用いるか、あるいは酸クロライドを経由する方法を用いることができる。
【００１６】
また、化合物（２）は、下記式２に示した方法により合成することができる。
【００１７】
【化６】
2004123555.tif 000005
【００１８】
すなわち、アミド化合物（３）をローソン試薬によりチオアミド化合物（４）へ変換し、ＤＡＳＴによりジフルオロ化した後、脱保護することにより目的の化合物（２）を得る。
【００１９】
一方、ジフルオロ酢酸誘導体（６−１，６−２）は、下記式３で示されるように、対応するケトンあるいはアルデヒドと亜鉛存在下ブロモジフルオロ酢酸エチルとレホマツスキー反応を行った後、エステルを加水分解することにより合成することができる（式中、Ｒ６及びＲ７は、Ｒ６がシクロヘキシル基のときＲ７は水素原子であるか、又は隣接する炭素原子と一緒になってメチル基の１〜４個で置換されたシクロヘキサン又はシクロヘキサンを形成する基を示す。）。
【００２０】
【化７】
2004123555.tif 000006
【００２１】
さらに、（２−シクロヘキシル）ジフルオロ酢酸（６−３）は、下記式４で示されるように、３−ブロモシクロヘキセンへ亜鉛及びシアン化銅存在下ブロモジフルオロ酢酸エチルと反応させた後、加水分解し水素添加することにより得ることができる。
【００２２】
【化８】
2004123555.tif 000007
【００２３】
以上の反応での試薬、時間、温度及び溶媒等の反応条件は、通常用いられる条件で行うことができる。
【００２４】
【実施例】
以下、実施例及び試験例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。
参考例１
窒素置換下、（２Ｓ）−２−（３−フェニル−プロピルカルバモイル）−ピロリジン−１−カルボン酸ベンジル　（８．０５ｇ，２２．０ｍｍｏｌ）及びローソン試薬（５．３３ｇ，１３．２ｍｍｏｌ）のトルエン溶液を１２時間加熱還流した。反応後酢酸エチルを加え、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下溶媒留去し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル−ヘキサン）で精製し（２Ｓ）−２−（３−フェニル−プロピルチオカルバモイル）−ピロリジン−１−カルボン酸ベンジル　（化合物４−１）の白色固体（８．７４ｇ）を得た。
【００２５】
【化９】
2004123555.tif 000008
【００２６】
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
１．６８−２．８６（６Ｈ，ｍ），２．６２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），３．４０−３．７７（４Ｈ，ｍ），４．６３−４．８２（１Ｈ，ｍ），４．９９−５．２８（２Ｈ，ｍ），７．０７−７．４４（１０Ｈ，ｍ）
【００２７】
同様の方法により化合物４−２〜４−４を得た。
化合物４−２
【００２８】
【化１０】
2004123555.tif 000009
【００２９】
ＭＳ　ｍ／ｚ：４０６（Ｍ＋Ｎａ）＋；３８２（Ｍ−Ｈ）−
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
１．６５−２．７９（６Ｈ，ｍ），２．５９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），３．４４−３．８６（４Ｈ，ｍ），４．６４−４．８７（１Ｈ，ｍ），４．９９−５．３２（２Ｈ，ｍ），７．１３−７．５８（７Ｈ，ｍ），８．３４−８．５６（２Ｈ，ｍ）
【００３０】
化合物４−３
【００３１】
【化１１】
2004123555.tif 000010
【００３２】
ＭＳ　ｍ／ｚ：４１９（Ｍ＋Ｎａ）＋；３９５（Ｍ−Ｈ）−
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
１．２１−１．７９（６Ｈ，ｍ），１．８１−２．０２（２Ｈ，ｍ），２．４６−２．９３（３Ｈ，ｍ），３．５０−３．８４（２Ｈ，ｍ），４．００−４．２１（１Ｈ，ｍ），４．８８−５．０２（１Ｈ，ｍ）５．０８−５．２７（２Ｈ，ｍ），７．０８−７．４５（１０Ｈ，ｍ），７．６３−８．０１（１Ｈ，ｂｒ）
【００３３】
化合物４−４
【００３４】
【化１２】
2004123555.tif 000011
【００３５】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４２０（Ｍ＋Ｎａ）＋；３９６（Ｍ−Ｈ）−
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
１．３２−２．０３（８Ｈ，ｍ），２．６２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），２．６７−２．９３（１Ｈ，ｍ），３．５５−３．８４（２Ｈ，ｍ），４．０２−４．２１（１Ｈ，ｍ），４．８９−５．０４（１Ｈ，ｍ）５．０８−５．２７（２Ｈ，ｍ），７．０９−７．４０（６Ｈ，ｍ），７．４３−７．５３（１Ｈ，ｍ），７．７９−８．０４（１Ｈ，ｂｒ），８．３８−８．５３（２Ｈ，ｍ）
【００３６】
参考例２
窒素置換下、参考例１で得られた化合物４−１（５．５３ｇ，１４．５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２５ｍｌ）溶液に、ジエチルアミノサルファートリフルオライド（５．１３ｇ，３１．８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２５ｍｌ）溶液を１０分かけて滴下し、室温下一晩攪拌した。反応後ジクロロメタンと氷水の混合物に反応物を少しずつ注ぎ、クロロホルムで抽出した後、飽和食塩水で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下溶媒留去し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（５０％酢酸エチル−ヘキサン）で精製し、（２Ｓ）−２−（ジフルオロ−（３−フェニルプロピルアミノ）メチル）−ピロリジン−１−カルボン酸ベンジル　（化合物５−１）の茶褐色油状物（３．５３ｇ）を得た。
【００３７】
【化１３】
2004123555.tif 000012
【００３８】
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
１．５４−２．７８（８Ｈ，ｍ），３．１０−３．７６（４Ｈ，ｍ），４．２３−４．４４（１Ｈ，ｍ），５．００−５．３６（２Ｈ，ｍ），５．７９−５．９９，６．６３−６．８８（ｔｏｔａｌ　１Ｈ，ｍ），７．０７−７．５９（１０Ｈ，ｍ）
【００３９】
同様の方法により化合物５−２〜５−４を得た。
化合物５−２
【００４０】
【化１４】
2004123555.tif 000013
【００４１】
ＭＳ　ｍ／ｚ：３９０（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
１．５３−２．７６（８Ｈ，ｍ），３．０８−３．３７（２Ｈ，ｍ），３．３８−３．６５（２Ｈ，ｍ），４．２１−４．４２（１Ｈ，ｍ），４．９５−５．３３（２Ｈ，ｍ），５．８７−６．０４，６．６７−６．９８（ｔｏｔａｌ　１Ｈ，ｍ），７．０６−７．５６（７Ｈ，ｍ），８．２８−８．５２（２Ｈ，ｍ）
【００４２】
化合物５−３
【００４３】
【化１５】
2004123555.tif 000014
【００４４】
ＭＳ　ｍ／Ｚ：４０３（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
１．２５−１．９３（７Ｈ，ｍ），２．１８−２．４２（１Ｈ，ｍ），２．６１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），２．７２−２．９６（１Ｈ，ｍ），３．１２−３．４３（２Ｈ，ｍ），４．０１−４．２８（１Ｈ，ｍ），４．７２−４．８５（１Ｈ，ｍ），５．０７−５．２８（２Ｈ，ｍ），５．７５−６．１９（１Ｈ，ｂｒ），７．０８−７．４５（１０Ｈ，ｍ）
【００４５】
化合物５−４
【００４６】
【化１６】
2004123555.tif 000015
【００４７】
ＭＳ　ｍ／ｚ：４０４（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
１．３１−２．０３（７Ｈ，ｍ），２．２０−２．４５（１Ｈ，ｍ），２．５９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），２．７２−３．００（１Ｈ，ｍ），３．２８（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．３Ｈｚ），４．０３−４．２８（１，ｍ），４．７３−４．８８（１Ｈ，ｍ），５．０５−５．３１（２Ｈ，ｍ），５．８５−６．２７（１Ｈ，ｂｒ），７．１５−７．４２（６Ｈ，ｍ），７．４３−７．５７（１Ｈ，ｍ），８．３７−８．５１（２Ｈ，ｍ）
【００４８】
参考例３
参考例２で得られた化合物５−１（１．０２ｇ，２．６３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４ｍｌ）溶液にヨウ化トリメチルシラン（１．５９ｇ，７．８９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍｌ）溶液を加え、室温下２時間攪拌した。反応後メタノールを加え、減圧下溶媒留去し、残留物をＳＣＸ樹脂（イオン交換樹脂、バリアン社製）で精製し、（２Ｓ）−２−（ジフルオロ−（３−フェニルプロピルアミノ）メチル）ピロリジン（化合物２−１）の茶色油状物（０．６６ｇ）を得た。
【００４９】
【化１７】
2004123555.tif 000016
【００５０】
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
１．５１−２．２５（６Ｈ，ｍ），２．６５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），２．７７−３．０９（２Ｈ，ｍ），３．２８（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．３Ｈｚ），３．７２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０，１０．０Ｈｚ），７．０５−７．３７（５Ｈ，ｍ），７．５０−７．７８（１Ｈ，ｂｒ）
【００５１】
同様の方法により化合物２−２〜２−４を得た。
化合物２−２
【００５２】
【化１８】
2004123555.tif 000017
【００５３】
ＭＳ　ｍ／ｚ：２５６（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
１．６１−２．２９（６Ｈ，ｍ），２．６４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），２．８１−３．１５（２Ｈ，ｍ），３．２９（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．３，９．０Ｈｚ），７．１２−７．３８（１Ｈ，ｍ），７．４２−７．６０（１Ｈ，ｍ），７．６１−７．８８（１Ｈ，ｂｒ），８．３６−８．５９（２Ｈ，ｍ）
【００５４】
化合物２−３
【００５５】
【化１９】
2004123555.tif 000018
【００５６】
ＭＳ　ｍ／ｚ：２６９（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
１．１９−１．６７（４Ｈ，ｍ），１．６９−２．０８（４Ｈ，ｍ），２．５４−２．７７（３Ｈ，ｍ），２．９２−３．０８（１Ｈ，ｍ），３．０８−３．２２（１Ｈ，ｍ），３．３０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），６．６２−６．８８（１Ｈ，ｂｒ），７．０７−７．３６（５Ｈ，ｍ）
【００５７】
化合物２−４
【００５８】
【化２０】
2004123555.tif 000019
【００５９】
ＭＳ　ｍ／ｚ：２７０（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
１．１７−２．０８（８Ｈ，ｍ），２．５４−２．７９（３Ｈ，ｍ），２．９３−３．１０（１Ｈ，ｍ），３．１３−３．３９（３Ｈ，ｍ），６．７４−６．９９（１Ｈ，ｂｒ），７．１５−７．３０（１Ｈ，ｍ），７．４６−７．５８（１Ｈ，ｍ），８．３８−８．５３（２Ｈ，ｍ）
【００６０】
参考例４
窒素置換下、亜鉛末（１．７０ｇ，２６ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２０ｍｌ）溶液に１，２−ジブロモエタン及び塩化トリメチルシラン（各数滴）を加え、数分間加熱還流し活性化した。次いで加熱還流下、３，３，５，５−テトラメチルシクロヘキサノン（３．０９ｇ，２０ｍｍｏｌ）及びブロモジフルオロ酢酸エチル（４．４７ｇ，２２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２０ｍｌ）溶液を５分間で滴下し、１時間加熱還流した。反応後、酢酸エチルを加え飽和塩化アンモニウム水溶液及び飽和食塩水で洗浄し硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下溶媒留去し、（１−ヒドロキシ−３，３，５，５−テトラメチルシクロヘキシル）−ジフルオロ酢酸エチルの黄色油状物（５．７８ｇ）を得た。
【００６１】
ここで得られた化合物（５．７８ｇ）のメタノール（２０ｍｌ）溶液に１０％水酸化ナトリウム水溶液（２０ｍｌ）を加え、室温下一晩攪拌した。反応溶液をヘキサンで洗浄後、水層に１Ｎ塩酸を加え中和し酢酸エチルで抽出、飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下溶媒留去し、残留物をエーテル−ヘキサンより再結晶し、下記に構造を示した（１−ヒドロキシ−３，３，５，５−テトラメチルシクロヘキシル）−ジフルオロ酢酸（化合物６−１）の無色結晶（３．５６ｇ）を得た。
【００６２】
【化２１】
2004123555.tif 000020
【００６３】
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
０．９７（６Ｈ，ｓ），１．０８−１．７３（６Ｈ，ｍ），１．２３（６Ｈ，ｓ），４．６３−５．１５（１Ｈ，ｂｒ）
【００６４】
同様の方法により以下の化合物６−２を得た。
化合物６−２
【００６５】
【化２２】
2004123555.tif 000021
【００６６】
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
０．８１−２．１５（１１Ｈ，ｍ），２．９０−３．６０（１Ｈ，ｂｒ），３．７４−３．９８（１Ｈ，ｍ）
【００６７】
参考例５
窒素置換下、亜鉛末（２．７５ｇ，４２．０ｍｍｏｌ）のトリグリム（トリエチレングリコールジメチルエーテル）（２０ｍｌ）溶液に塩化トリメチルシラン（各数滴）を加え活性化させた。次いでブロモジフルオロ酢酸エチル（１０．２ｇ，５０．４ｍｍｏｌ）のトリグリム（２０ｍｌ）溶液を加え、室温下３０分間攪拌した。シアン化銅（Ｉ）（３．７６ｇ，４２．０ｍｍｏｌ）を加えた後、更に室温で３０分間攪拌した。ここで３−ブロモシクロヘキセン（４．８３ｇ，３０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（４０ｍｌ）溶液を加え、室温下一晩攪拌した。反応後、ジエチルエーテルを加え飽和塩化アンモニウム水溶液で洗浄後、多量の飽和食塩水で更に洗浄し硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下溶媒留去し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（５０％酢酸エチル−ヘキサン）で精製し、（２−シクロヘキセニル）ジフルオロ酢酸エチルの無色油状物（４．２８ｇ）を得た。
【００６８】
ここで得られた化合物（４．２８ｇ）のメタノール（２０ｍｌ）溶液に１０％水酸化ナトリウム水溶液（２０ｍｌ）を加え、室温下一晩攪拌した。反応溶液をヘキサンで洗浄後、水層に１Ｎ塩酸を加え中和し酢酸エチルで抽出、飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下溶媒留去し、（２−シクロヘキセニル）ジフルオロ酢酸の橙色油状物（３．４９ｇ）を得た。
【００６９】
ここで得られた化合物（２．００ｇ，１１．４ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（２０ｍｌ）に１０％パラジウム−活性炭素（１．０ｇ，０．９４ｍｍｏｌ）を加え、水素置換下室温にて一晩攪拌した。反応溶液をセライトろ過後、減圧下溶媒留去し（シクロヘキシル）ジフルオロ酢酸（化合物６−３）の橙色油状物（１．３８ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
１．０９−１．６３（５Ｈ，ｍ），１．６３−２．２９（６Ｈ，ｍ），７．０７−７．５３（１Ｈ，ｂｒ）
【００７０】
実施例１
参考例３で得られた化合物２−１（０．１８ｇ，０．７０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．１６ｇ，２．００ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１ｍｌ）に、シクロヘキシルメチルスルホニルクロライド（０．１５ｇ，０．７７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍｌ）を滴下し、室温下一晩攪拌した。反応後酢酸エチルを加え飽和塩化アンモニウム水溶液及び飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で順次洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下溶媒留去し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製し、（２Ｓ）−１−シクロヘキシルメタンスルホニル−２−（ジフルオロ−（３−フェニルプロピルアミノ）メチル）ピロリジンの黄色油状物（０．３４ｇ）を得た。
【００７１】
【化２３】
2004123555.tif 000022
【００７２】
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
０．８９−１．４５（５Ｈ，ｍ），１．４８−２．２０（１１Ｈ，ｍ），２．２８−２．４８（１Ｈ，ｍ），２．６６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），２．８０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．１３−３．５８（４Ｈ，ｍ），４．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．８，９．０Ｈｚ），６．６８−６．８４（１Ｈ，ｍ），７．１２−７．３８（５Ｈ，ｍ）
【００７３】
同様の方法により実施例２〜４の化合物を得た。
実施例２
【００７４】
【化２４】
2004123555.tif 000023
【００７５】
ＭＳ　ｍ／ｚ：４１６（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
０．９３−１．４９（５Ｈ，ｍ），１．５５−２．２１（１１Ｈ，ｍ），２．２５−２．５０（１Ｈ，ｍ），２．５４−２．９４（３Ｈ，ｍ），３．１２−３．６２（３Ｈ，ｍ），４．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．８Ｈｚ），６．７２−６．９３（１Ｈ，ｍ），７．１３−７．３７（１Ｈ，ｍ），７．４５−７．６２（１Ｈ，ｍ），８．３６−８．６０（２Ｈ，ｍ）
【００７６】
実施例３
【００７７】
【化２５】
2004123555.tif 000024
【００７８】
ＭＳ　ｍ／ｚ：４２９（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
０．９６−２．１５（１８Ｈ，ｍ），２．２６−２．４９（１Ｈ，ｍ），２．６５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），２．８７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），２．９２−３．１７（１Ｈ，ｍ），３．３２（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．３Ｈｚ），３．７０−３．８８（１Ｈ，ｍ），４．３４−４．４７（１Ｈ，ｍ），６．４０−６．６４（１Ｈ，ｍ），７．０７−７．３６（５Ｈ，ｍ）
【００７９】
実施例４
【００８０】
【化２６】
2004123555.tif 000025
【００８１】
ＭＳ　ｍ／ｚ：４３０（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
０．９６−２．１３（１８Ｈ，ｍ），２．３２−２．５２（１Ｈ，ｍ），２．６５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），２．８８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），２．９２−３．１４（１Ｈ，ｍ），３．３２（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），３．６９−３．８８（１Ｈ，ｍ），４．３５−４．４７（１Ｈ，ｍ），６．５４−６．７１（１Ｈ，ｍ），７．１３−７．３１（１Ｈ，ｍ），７．４５−７．５８（１Ｈ，ｍ），８．３７−８．５３（２Ｈ，ｍ）
【００８２】
実施例５
参考例３で得られた化合物２−１（０．２５ｇ，１．００ｍｍｏｌ）、参考例４で得られた化合物６−１（０．２６ｇ，１．０５ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（０．１９ｇ，１．４０ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（４ｍｌ）溶液に、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．２７ｇ，１．０４ｍｍｏｌ）を加え、室温下一晩攪拌した。反応後酢酸エチルを加え飽和塩化アンモニウム水溶液及び飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で順次洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下溶媒留去し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（５０％酢酸エチル−ヘキサン）で精製し、（２Ｓ）−１−（ジフルオロ−（１−ヒドロキシ−３，３，５，５−テトラメチルシクロヘキシル）アセチル）−２−（ジフルオロ−（３−フェニルプロピルアミノ）メチル）ピロリジンの無色油状物（０．２８ｇ）を得た。
【００８３】
【化２７】
2004123555.tif 000026
【００８４】
ＭＳ　ｍ／ｚ：４８７（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
０．８８（３Ｈ，ｓ），０．９１（３Ｈ，ｓ），０．９９−１．４７（３Ｈ，ｍ），１．２２（６Ｈ，ｓ），１．５２−２．２２（９Ｈ，ｍ），２．６４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），２．９２−３．１７（１Ｈ，ｍ），３．１３−３．４４（２Ｈ，ｍ），３．５５−３．８８，３．９２−４．０９（ｔｏｔａｌ３Ｈ，ｍ），４．４８−４．６０，４．７０−４．８３（ｔｏｔａｌ１Ｈ，ｍ），６．０７−６．２６（１Ｈ，ｍ），７．１１−７．３７（５Ｈ，ｍ）
【００８５】
同様の方法により実施例６〜８の化合物を得た。
実施例６
【００８６】
【化２８】
2004123555.tif 000027
【００８７】
ＭＳ　ｍ／ｚ：４４５（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
１．０３−１．４８（５Ｈ，ｍ），１．５３−２．４３（１２Ｈ，ｍ），２．６３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），３．２６（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），３．５０−４．１３（３Ｈ，ｍ），４．４２−４．６０，４．７３−４．８５（ｔｏｔａｌ１Ｈ，ｍ），５．６６−６．５１（ｔｏｔａｌ　１Ｈ，ｍ），７．０４−７．３８（５Ｈ，ｍ）
【００８８】
実施例７
【００８９】
【化２９】
2004123555.tif 000028
【００９０】
ＭＳ　ｍ／ｚ：４１５（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
１．０４−１．４６（５Ｈ，ｍ），１．５９−２．４５（１２Ｈ，ｍ），２．６２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），３．２６（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．３Ｈｚ），３．５８−３．８８（２Ｈ，ｍ），４．４８−４．７５（１Ｈ，ｍ），５．６３−５．７８，６．５０−６．７５（ｔｏｔａｌ　１Ｈ，ｍ），７．０６−７．３９（５Ｈ，ｍ）
【００９１】
実施例８
【００９２】
【化３０】
2004123555.tif 000029
【００９３】
ＭＳ　ｍ／ｚ：３８１（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：
０．８７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），１．２１（６Ｈ，ｓ），１．５８−２．２０（７Ｈ，ｍ），２．２７−２．５２（１Ｈ，ｍ），２．６４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），３．２７（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），３．３７−３．７５（ｔｏｔａｌ　１Ｈ，ｍ），４．１９−４．２７，４．５０−４．６１（ｔｏｔａｌ１Ｈ，ｍ），６．１０−６．２１，６．７４−６．９１（ｔｏｔａｌ　１Ｈ，ｍ），７．１２−７．３６（５Ｈ，ｍ）
【００９４】
試験例「ＦＫＢＰ１２のロータマーゼ活性に対する阻害試験」
（酵素源）
ＦＫ−ＢＩＮＤＩＮＧ　ＰＲＯＴＥＩＮ（Ｈｕｍａｎ，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　Ｅ．ｃｏｌｉ）、ＳＩＧＭＡ社、Ｆ−５３９８をＦＫＢＰ−１２として使用した。
（反応基質）
Ｓｕｃ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡ（ＢＡＣＨＥＭ社、Ｌ−１６０５）を０．５Ｍ　ＬｉＣｌ／トリフルオロエタノール溶液として用いた。本ペプチドはこの溶液中でシス型とトランス型の平衡状態をとる。
（試験方法）
ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．８、１ｍｌ、氷温）に４４ｎＭ　ＦＫＢＰ−１２と０．４ｍｇ／ｍｌ　α−キモトリプシン、もしくは０．４ｍｇ／ｍｌα−キモトリプシンのみを添加した後、２４ｍＭ　Ｓｕｃ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡ溶液を２μｌ添加して反応を開始させる。その後速やかに反応液を分光光度計のセル内へ移し、反応液の吸光度（３９０ｎｍ）の経時変化を測定した。
【００９５】
測定された吸光度の増加速度は、トランス型のＳｕｃ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡからα−キモトリプシンによって遊離するｐ−ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｎｅの増加速度を示し、本系のようにα−キモトリプシン活性が十分高い条件ではトランス型のＳｕｃ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡの生成速度、すなわちこのペプチドの異性化速度に比例する。この異性化は自発的に起こるため、ＦＫＢＰ１２を添加した場合の吸光度増加速度からＦＫＢＰ１２を添加しない場合の吸光度増加速度を引いた値をＦＫＢＰ１２が有するロータマーゼ活性（異性化促進活性）として評価した。
本活性に対する検体の作用を調べるためには、１μｌのＤＭＳＯ溶液として反応液中に添加（ＤＭＳＯの最終濃度は０．１％）して評価を行った。
その結果を表に示す。
【００９６】
【表１】
2004123555.tif 000030
【００９７】
【発明の効果】
本発明の化合物は、ＦＫＢＰ１２と結合することにより神経栄養活性を発現することから、臨床上有用である。