(57)【要約】【課題】腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の産生阻害作用を有する化合物を提供する。【解決手段】次の一般式【化１】2004161662.tif 000020（式中、Ｒ１は水素原子，水酸基，アルキル基，アルコキシ基，アセチルオキシ基，ハロゲン原子，ニトロ基，アミノ基，シアノ基を表し，Ｒ２は水素原子，水酸基，アルキル基，アルコキシ基，ハロゲン原子を表し、Ｒ３は水素原子又は低級アルキル基，ハロゲノアルキル基，ハロゲン原子を表し、Ｒ４は水素原子，水酸基，アルキル基，アルコキシ基，ハロゲン原子を表し、ＸはＣＨ又はＮを表す。ただし、Ｒ１とＲ２は同時に水素原子とはならない。）で示される１Ｈ−イミダゾキノリン誘導体又はその塩は、優れたＴＮＦの産生阻害作用を有し、ＴＮＦに起因する疾患の予防又は治療剤として極めて有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式
【化１】
2004161662.tif 000019
（式中、Ｒ１はハロゲン原子・水酸基・アルコキシカルボニル基から選択される置換基を有してもよいアルコキシ基，水素原子，水酸基，アルキル基，ハロゲノアルキル基，アシルオキシ基，ハロゲン原子，ニトロ基，アミノ基，シアノ基を表し、Ｒ２は水素原子，水酸基，アルキル基，アルコキシ基，ハロゲン原子，ニトロ基を表し、Ｒ３は水素原子，アルキル基，ハロゲノアルキル基，ハロゲン原子を表し、Ｒ４は水素原子，水酸基，アルキル基，アルコキシ基，アラルキルオキシ基，ハロゲン原子を表し、ＸはＣＨで示される基又は窒素原子を表す。ここでＲ１とＲ２が同時に水素原子を表すことはない。ただし、ここでＸがＣＨで示される基を表し、（ａ）Ｒ１及びＲ４が同時に水素原子を表し、Ｒ３がメチル基のとき、Ｒ２はフッ素原子ではなく、（ｂ）Ｒ１及びＲ４が同時に水素原子を表し、Ｒ３が塩素原子のとき、Ｒ２はメチル基，メトキシ基，フッ素原子ではなく、（ｃ）Ｒ１がフッ素原子で、Ｒ３が塩素原子のとき、Ｒ２とＲ４は同時に水素原子を表すことはなく、（ｄ）Ｒ１及びＲ４が同時に水素原子を表し、Ｒ３がトリフルオロメチル基のとき、Ｒ２はメチル基，メトキシ基，フッ素原子，ヨウ素原子ではなく、（ｅ）Ｒ１が水素原子で、Ｒ３がトリフルオロメチル基で、Ｒ４が塩素原子又はメチル基のとき、Ｒ２は水酸基又はメトキシ基ではなく、（ｆ）Ｒ２が水素原子で、Ｒ３がトリフルオロメチル基で、Ｒ４が塩素原子又はメチル基のとき、Ｒ１は水酸基又はメトキシ基ではなく、（ｇ）Ｒ１が水素原子で、Ｒ３がメチル基で、Ｒ４が塩素原子のとき、Ｒ２は水酸基又はメトキシ基ではなく、（ｈ）Ｒ２が水素原子で、Ｒ３がメチル基で、Ｒ４が塩素原子のとき、Ｒ１は水酸基又はメトキシ基ではない。）
で示される１Ｈ−イミダゾキノリン誘導体、又はその塩。
【請求項２】
Ｒ３がアルキル基で、Ｒ４がアルキル基又はフッ素原子である請求項１に記載の化合物、又はその塩。
【請求項３】
Ｒ１が水酸基で、Ｒ４がフッ素原子である請求項１に記載の化合物、又はその塩。
【請求項４】
Ｒ２が水酸基で、Ｒ４がフッ素原子である請求項１に記載の化合物、又はその塩。
【請求項５】
Ｒ２がアルコキシ基で、Ｒ４が塩素原子以外のハロゲン原子である請求項１に記載の化合物、又はその塩。
【請求項６】
Ｒ３がハロゲン原子で、Ｒ４がアルキル基又はハロゲン原子である請求項１に記載の化合物、又はその塩。
【請求項７】
Ｒ３がハロゲノアルキル基で、Ｒ４がフッ素原子である請求項１に記載の化合物、又はその塩。
【請求項８】
以下の（ａ）〜（ｎ）の中から選ばれる化合物、又はその塩。
（ａ）４，７−ジクロロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｂ）４，７−ジクロロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（１−ピペラジニル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｃ）２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｄ）２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（１−ピペラジニル）エチル］−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｅ）７−フルオロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｆ）７−フルオロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（１−ピペラジニル）エチル］−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｇ）２−（２−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｈ）２−（２−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−１−［２−（１−ピペラジニル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｉ）２−（２−ヒドロキシフェニル）−７−メチル−１−［２−（１−ピペラジニル）エチル］−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｊ）７−クロロ−４−メチル−２−（２−ニトロフェニル）−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｋ）４−クロロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−７−メチル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｌ）４−クロロ−７−フルオロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｍ）２−（２−ヒドロキシフェニル）−４，７−ジメチル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｎ）７−フルオロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は強力な腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−αの産生阻害作用を有し、ヒト又は動物におけるＴＮＦ−α介在性疾患の予防又は治療のための医薬として有用である新規な１Ｈ−イミダゾキノリン誘導体、又はその塩に関するものである。
これらＴＮＦ−α介在性疾患としては、例えば、慢性炎症性疾患（例えば、リューマチ性関節炎，変形性関節炎等），アレルギー性鼻炎，アトピー性皮膚炎，接触性皮膚炎，喘息，敗血症，敗血症性ショック，各種自己免疫性疾患［自己免疫血液疾患（例えば、溶血性貧血，再生不良性貧血，特発性血小板減少症等），自己免疫性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎，クローン病等），自己免疫性角膜炎（例えば、乾性角結膜炎，春季結膜炎等），内分泌性眼障害，グレーブス病，サルコイドーシス，多発性硬化症，全身性エリテマトーデス，多発性軟骨炎，強皮症，活動性慢性肝炎，重症筋無力症，乾癬，間隙性肺線維症等］，糖尿病，癌悪液質，エイズ悪液質等が挙げられる。
【０００２】
【従来の技術】
本発明化合物に類似する化合物として、いくつかの１Ｈ−イミダゾキノリン骨格を有する化合物が存在する。例えば、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），１１巻，８７頁（１９６８年）に１−（２−ピペリジノエチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンが、特開昭６０−１２３４８８号公報に抗ウイルス作用を有する化合物として１−イソブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（一般名：ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ，イミキモド）が、又、ハンガリー国公開特許第３４４７９号（特許第１９０１０９号）に鎮痛・抗痙攣作用等を有する化合物として１−（２−ジエチルアミノエチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンが開示されている。
更に、本出願人の先の発明により、本発明化合物と同様のＴＮＦ−α又はＩＬ−１β等のサイトカイン阻害作用を有する化合物として、特開２０００−１１９２７１号公報には、４−クロロ−２−フェニル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン等が、特開２００２−１６１０９５号公報には、１−［２−（２−モルホリニル）エチル］−２−（２−ピロリル）−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン等が、特願２００１−２４８４６８号には、７−クロロ−４−メチル−２−フェニル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン等がそれぞれ開示されているが、それら化合物の作用にはまだ改善の余地が残されていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、上述の１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体よりも、更に優れた特徴、薬理活性を有し、医薬として有用である新規な化合物を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、これらの課題を解決すべく鋭意研究した結果、先に出願した１Ｈ−イミダゾキノリン誘導体より更に優れたＴＮＦ−α産生阻害作用を有する新規な１Ｈ−イミダゾキノリン誘導体を見出し、本発明を完成させた。
【０００５】
即ち、本発明は次の一般式（Ｉ）
【化２】
2004161662.tif 000002
（式中、Ｒ１はハロゲン原子・水酸基・アルコキシカルボニル基から選択される置換基を有してもよいアルコキシ基，水素原子，水酸基，アルキル基，ハロゲノアルキル基，アシルオキシ基，ハロゲン原子，ニトロ基，アミノ基，シアノ基を表し、Ｒ２は水素原子，水酸基，アルキル基，アルコキシ基，ハロゲン原子，ニトロ基を表し、Ｒ３は水素原子，アルキル基，ハロゲノアルキル基，ハロゲン原子を表し、Ｒ４は水素原子，水酸基，アルキル基，アルコキシ基，アラルキルオキシ基，ハロゲン原子を表し、ＸはＣＨで示される基又は窒素原子を表す。ここでＲ１とＲ２が同時に水素原子を表すことはない。ただし、ここでＸがＣＨで示される基を表し、（ａ）Ｒ１及びＲ４が同時に水素原子を表し、Ｒ３がメチル基のとき、Ｒ２はフッ素原子ではなく、（ｂ）Ｒ１及びＲ４が同時に水素原子を表し、Ｒ３が塩素原子のとき、Ｒ２はメチル基，メトキシ基，フッ素原子ではなく、（ｃ）Ｒ１がフッ素原子で、Ｒ３が塩素原子のとき、Ｒ２とＲ４は同時に水素原子を表すことはなく、（ｄ）Ｒ１及びＲ４が同時に水素原子を表し、Ｒ３がトリフルオロメチル基のとき、Ｒ２はメチル基，メトキシ基，フッ素原子，ヨウ素原子ではなく、（ｅ）Ｒ１が水素原子で、Ｒ３がトリフルオロメチル基で、Ｒ４が塩素原子又はメチル基のとき、Ｒ２は水酸基又はメトキシ基ではなく、（ｆ）Ｒ２が水素原子で、Ｒ３がトリフルオロメチル基で、Ｒ４が塩素原子又はメチル基のとき、Ｒ１は水酸基又はメトキシ基ではなく、（ｇ）Ｒ１が水素原子で、Ｒ３がメチル基で、Ｒ４が塩素原子のとき、Ｒ２は水酸基又はメトキシ基ではなく、（ｈ）Ｒ２が水素原子で、Ｒ３がメチル基で、Ｒ４が塩素原子のとき、Ｒ１は水酸基又はメトキシ基ではない。）
で示される新規な１Ｈ−イミダゾキノリン誘導体、又はその塩に関するものである。
【０００６】
本発明の第二の態様によれば、前記一般式（Ｉ）で示される化合物中、
（１）  Ｒ３がアルキル基で、Ｒ４がアルキル基又はフッ素原子である化合物、又はその塩
（２）  Ｒ１が水酸基で、Ｒ４がフッ素原子である化合物、又はその塩
（３）  Ｒ２が水酸基で、Ｒ４がフッ素原子である化合物、又はその塩
（４）  Ｒ２がアルコキシ基で、Ｒ４が塩素原子以外のハロゲン原子である化合物、又はその塩
（５）  Ｒ３がハロゲン原子で、Ｒ４がアルキル基又はハロゲン原子である化合物、又はその塩
（６）  Ｒ３がハロゲノアルキル基で、Ｒ４がフッ素原子である化合物、又はその塩が提供される。
【０００７】
更に、本発明の好ましい態様によれば、以下の（ａ）〜（ｎ）の中から選ばれる化合物又はその塩が提供される。
（ａ）４，７−ジクロロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｂ）４，７−ジクロロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（１−ピペラジニル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｃ）２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｄ）２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（１−ピペラジニル）エチル］−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｅ）７−フルオロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｆ）７−フルオロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（１−ピペラジニル）エチル］−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｇ）２−（２−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｈ）２−（２−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−１−［２−（１−ピペラジニル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｉ）２−（２−ヒドロキシフェニル）−７−メチル−１−［２−（１−ピペラジニル）エチル］−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｊ）７−クロロ−４−メチル−２−（２−ニトロフェニル）−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｋ）４−クロロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−７−メチル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｌ）４−クロロ−７−フルオロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｍ）２−（２−ヒドロキシフェニル）−４，７−ジメチル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（ｎ）７−フルオロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
【０００８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の前記一般式（Ｉ）で示される化合物について具体的に説明する。
本発明の前記一般式（Ｉ）中、Ｒ１で示されるハロゲン原子・水酸基・アルコキシカルボニル基から選択される置換基を有してもよいアルコキシ基における置換基において、置換基の個数，種類及び置換位置は特に限定されず、２個以上の置換基が存在する場合には、それらは互いに同一でも異なっていてもよい。置換可能なハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子，塩素原子，臭素原子，ヨウ素原子が挙げられ、アルコキシカルボニル基としては、例えば、メトキシカルボニル基，エトキシカルボニル基，ｎ−プロポキシカルボニル基，ｎ−ブトキシカルボニル基等が挙げられる。
【０００９】
前記一般式（Ｉ）において、Ｒ１，Ｒ２及びＲ４で示されるアルコキシ基としては、例えば、メトキシ基，エトキシ基，ｎ−プロポキシ基，イソプロポキシ基，ｎ−ブトキシ基，イソブトキシ基，ｓｅｃ−ブトキシ基，ｔｅｒｔ−ブトキシ基等が挙げられ、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３及びＲ４で示されるアルキル基としては、例えば、メチル基，エチル基，ｎ−プロピル基，イソプロピル基，ｎ−ブチル基，イソブチル基，ｓｅｃ−ブチル基，ｔｅｒｔ−ブチル基，ｎ−ペンチル基，イソペンチル基，ネオペンチル基，ｎ−ヘキシル基等が挙げられる。
【００１０】
前記一般式（Ｉ）において、Ｒ１及びＲ３で示されるハロゲノアルキル基としては、例えばトリフルオロメチル基，トリクロロメチル基，トリブロモメチル基，ペンタフルオロエチル基，ペンタクロロエチル基，ペンタブロモエチル基等が挙げられ、Ｒ１で示されるアシルオキシ基としては、アセチルオキシ基，プロピオニルオキシ基等が挙げられ、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３及びＲ４で示されるハロゲン原子としては、フッ素原子，塩素原子，臭素原子，ヨウ素原子が挙げられ、Ｒ４で示されるアラルキルオキシ基としては、例えば、ベンジルオキシ基，フェネチルオキシ基等が挙げられる。
【００１１】
本発明の前記一般式（Ｉ）で示される化合物は必要に応じて塩、好ましくは薬理学的に許容しうる塩に変換することも、又は生成した塩から遊離塩基に変換することもできる。本発明化合物の塩としては、酸付加塩が挙げられ、例えば、塩酸，臭化水素酸，ヨウ化水素酸，硫酸，硝酸，燐酸等の鉱酸塩、あるいはギ酸，酢酸，プロピオン酸，酪酸，イソ酪酸，吉草酸，イソ吉草酸，ピバル酸，トリフルオロ酢酸，アクリル酸，オレイン酸，マレイン酸，フマル酸，クエン酸，シュウ酸，コハク酸，酒石酸，リンゴ酸，マロン酸，乳酸，グルタル酸，セバシン酸，グルコン酸，エナント酸，カプリル酸，ノナン酸，カプリン酸，ラウリン酸，パルミチン酸，ミリスチン酸，ステアリン酸，ヘプタデカン酸，ウンデカン酸，マンデル酸，グリコール酸，ソルビン酸，メタンスルホン酸，エタンスルホン酸，ベンゼンスルホン酸，安息香酸，フタル酸，テレフタル酸，ケイ皮酸，ｐ−トルエンスルホン酸，ニコチン酸，ピクリン酸，アジピン酸，アスパラギン酸，グルタミン酸，１０−カンファースルホン酸及びこれらの光学活性体等の有機酸塩が挙げられる。
【００１２】
本発明の前記一般式（Ｉ）で示される化合物中、１個又は２個以上の不斉炭素を有する化合物には光学異性体，ジアステレオ異性体が存在し得るが、本発明にはこれら光学活性体及びその混合物，ラセミ体並びにそれらの塩も包含される。
【００１３】
本発明の前記一般式（Ｉ）で示される化合物又はその塩は、製造条件により任意の結晶形として存在することができ、又、任意の水和物又は溶媒和物として存在することができるが、これらの結晶形や水和物又は溶媒和物及びそれらの混合物も本発明の範囲に包含される。
【００１４】
本発明の好ましい化合物としては、例えば、以下の化合物及びそれらの塩を挙げることができるが、本発明はこれらの例に限定されることはない。
（１）  ４，７−ジクロロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（２）  ４，７−ジクロロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（１−ピペラジニル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（３）  ２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（４）  ２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（１−ピペラジニル）エチル］−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（５）  ７−フルオロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（６）  ７−フルオロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（１−ピペラジニル）エチル］−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（７）  ２−（２−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（８）  ２−（２−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−１−［２−（１−ピペラジニル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（９）  ２−（２−ヒドロキシフェニル）−７−メチル−１−［２−（１−ピペラジニル）エチル］−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（１０）  ７−クロロ−４−メチル−２−（２−ニトロフェニル）−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（１１）  ４−クロロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−７−メチル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（１２）  ４−クロロ−７−フルオロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（１３）  ２−（２−ヒドロキシフェニル）−４，７−ジメチル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
（１４）  ７−フルオロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
【００１５】
本発明の前記一般式（Ｉ）で示される新規な１Ｈ−イミダゾキノリン誘導体は、例えば以下の方法により製造することができるが、本発明化合物の製造方法はこれらの方法に限定されるわけではない。
【００１６】
本発明化合物の第一の製造方法として、前記一般式（Ｉ）で示される化合物は、以下の様にして製造することができる。
【化３】
2004161662.tif 000003
（式中、Ｂｏｃはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基を表し、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４及びＸは前述と同意義を表す。）
【００１７】
即ち、工程１においては、一般式（ＩＩ）の化合物と次の一般式（ＩＶ）
【化４】
2004161662.tif 000004
（式中、Ｒ１及びＲ２は前述と同意義を表す。）
で示される化合物を、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンの存在下、アセトニトリル，１，４−ジオキサン，テトラヒドロフラン，１，２−ジクロロエタン，トルエン等の溶媒中、０℃から溶媒の還流温度の間で反応することにより、一般式（ＩＩＩ）の化合物を得ることができる。
【００１８】
次に工程２においては、一般式（ＩＩＩ）の化合物を、酢酸エチル，塩化メチレン，１，２−ジクロロエタン，１，４−ジオキサン，メタノール，エタノール，ｎ−プロパノール，Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド，テトラヒドロフラン，水，又はこれらの混合溶媒等の溶媒中で、例えば、塩酸，塩化水素酢酸エチル溶液，塩化水素エタノール溶液，硫酸，臭化水素酸，トリフルオロ酢酸，ｐ−トルエンスルホン酸，メタンスルホン酸等の酸を用いて、０℃から溶媒の還流温度の間で反応することにより、前記一般式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【００１９】
本発明化合物の第二の製造方法として、一般式（Ｉ）の化合物の内、Ｒ１としてアミノ基を有する化合物は、Ｒ１がニトロ基である前記一般式（ＩＩＩ）の化合物を適当な還元法、例えば、白金，ラネーニッケル，パラジウム炭素等の金属触媒を用いた接触還元法、塩化ニッケルと水素化ホウ素ナトリウムを用いた還元法、鉄粉と塩酸を用いた還元法等を用いて、水，メタノール，エタノール，テトラヒドロフラン等の溶媒又はこれらの混合溶媒中、０℃から溶媒の還流温度の間で還元反応を行なって、Ｒ１がアミノ基である前記一般式（ＩＩＩ）の化合物へと変換した後、第一の製造方法の工程２と同様の脱保護反応を行うことにより得ることができる。
【００２０】
本発明化合物の第三の製造方法として、一般式（Ｉ）の化合物の内、Ｒ１として置換基を有してもよいアルコキシ基又はアシルオキシ基を有する化合物は、Ｒ１が水酸基である前記一般式（Ｉ）の化合物を、ハロゲン化アルキル，クロロ酢酸エチル，２−クロロエタノール，２−ブロモエタノール等の適当なアルキル化試薬や塩化アセチル，無水酢酸等の適当なアシル化試薬を用いて、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド，塩化メチレン，テトラヒドロフラン，トルエン，ピリジン，ニトロベンゼン，１，２−ジクロロエタン，１，４−ジオキサン，メタノール，エタノール，ｎ−プロパノール又はこれらの混合溶媒等の溶媒の存在下又は非存在下、トリエチルアミン，炭酸カリウム等の塩基の存在下又は非存在下に、０℃から２００℃の間で反応を行うことにより得ることができる。あるいは、Ｒ１が水酸基である前記一般式（ＩＩＩ）の化合物を同様に処理した後、更に第一の製造方法の工程２と同様の反応を行うことにより、Ｒ１が置換基を有してもよいアルコキシ基又はアシルオキシ基である一般式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【００２１】
本発明化合物の第四の製造方法として、一般式（Ｉ）の化合物の内、Ｒ４として水酸基を有する化合物は、Ｒ４がベンジルオキシ基である前記一般式（ＩＩＩ）の化合物を、白金，パラジウム炭素，ラネーニッケル，パールマンズ試薬等の金属触媒を用いて、水，メタノール，エタノール，ｎ−プロパノール，酢酸，又はこれらの混合溶媒中、塩酸等の酸の存在下又は非存在下、室温から溶媒の還流温度の間で、水素源として水素ガス，シクロヘキセン，シクロヘキサジエン，ギ酸，ギ酸アンモニウム，２−プロパノール等を用いて，常圧から２００Ｐａの水素圧で、水素化分解反応を行い、更に第一の製造方法の工程２と同様の脱保護反応を行うことにより得ることができる。
【００２２】
本発明化合物の第五の製造方法として、一般式（Ｉ）の化合物の内、Ｒ４としてアルコキシ基又はアラルキルオキシ基を有する化合物は、Ｒ４が水酸基である前記一般式（ＩＩＩ）の化合物を、ハロゲン化アルキル，ハロゲン化ベンジル等の適当なアルキル化試薬を用いて、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド，塩化メチレン，テトラヒドロフラン，トルエン，ピリジン，ニトロベンゼン，１，２−ジクロロエタン，１，４−ジオキサン，メタノール，エタノール，ｎ−プロパノール又はこれらの混合溶媒等の溶媒の存在下又は非存在下、トリエチルアミン，炭酸カリウム等の塩基の存在下又は非存在下に、０℃から２００℃の間で反応を行うことにより、Ｒ４がアルコキシ基又はアラルキルオキシ基である前記一般式（ＩＩＩ）の化合物へと変換し、更に第一の製造方法の工程２と同様の脱保護反応を行うことにより得ることができる。
【００２３】
本発明化合物の製造方法において、一般式（ＩＩ）で示される化合物は、例えば、特開２０００−１１９２７１号公報、特開２００２−１６１０９５号公報、特願２００１−２４８４６８号に開示されており、これらの文献に記載の方法に従って製造できる。尚、一部新規の化合物については、その製造方法を参考例として記載した。
【００２４】
この様にして製造される前記一般式（Ｉ）で示される新規な１Ｈ−イミダゾキノリン誘導体、又はその塩を有効成分とする医薬は、通常、カプセル剤，錠剤，細粒剤，顆粒剤，散剤，シロップ剤，ドライシロップ剤，液剤等の経口投与製剤、あるいは注射剤，坐剤，点眼剤，眼軟膏剤，点耳剤，点鼻剤，外皮用剤，吸入剤等の非経口投与製剤として投与される。
【００２５】
これらの製剤は、本発明の前記一般式（Ｉ）で示される化合物、及びその塩、並びにそれらの水和物，溶媒和物からなる群から選ばれる１種又は２種以上の化合物と、薬理学的，製剤学的に許容しうる添加物の１種又は２種以上を加え、常法により製造できる。例えば、経口投与製剤及び坐剤にあっては、賦形剤（乳糖，Ｄ−マンニトール，トウモロコシデンプン，結晶セルロース等），崩壊剤（カルボキシメチルセルロース，カルボキシメチルセルロースカルシウム，部分アルファー化デンプン，クロスカルメロースナトリウム，クロスポビドン等），結合剤（ヒドロキシプロピルセルロース，ヒドロキシプロピルメチルセルロース，ポリビニルピロリドン等），滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム，タルク，硬化油，ジメチルポリシロキサン，含水二酸化ケイ素，軽質無水ケイ酸，カルナウバロウ等），コーティング剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロース，白糖，酸化チタン等），可塑剤（クエン酸トリエチル，ポリエチレングリコール，グリセリン脂肪酸エステル等），基剤（ポリエチレングリコール，ハードファット等）等の製剤用成分が、注射剤あるいは点眼剤，点耳剤等にあっては水性あるいは用時溶解型剤型を構成しうる溶解剤ないし溶解補助剤（注射用水，生理食塩水，プロピレングリコール等），ｐＨ調節剤（無機又は有機の酸あるいは塩基），等張化剤（塩化ナトリウム，ブドウ糖，グリセリン等），安定化剤（安息香酸，クエン酸，亜硫酸水素ナトリウム等）等の製剤用成分が、又、眼軟膏剤，外皮用剤にあっては、軟膏剤，クリーム剤，貼付剤として適切な製剤用成分（白色ワセリン，マクロゴール，グリセリン，流動パラフィン，グリセリン脂肪酸エステル，ポリエチレングリコール脂肪酸エステル，カルボキシビニルポリマー，アクリル系粘着剤，ゴム系粘着剤，シリコン樹脂，綿布等）が、吸入剤にあっては噴射剤（二酸化炭素，プロパン，窒素等），溶解補助剤（エタノール，プロピレングリコール等），界面活性剤（トリオレイン酸ソルビタン等），賦形剤（乳糖等）が使用される。
【００２６】
本発明化合物又はその塩のヒトに対する投与量は、例えば、通常成人の場合、一日量として、経口投与で０．１〜１０００ｍｇ程度、非経口投与で０．０１〜５００ｍｇ程度を１日１回又は数回に分けて投与することができる。もっとも、その投与量は治療又は予防の目的、疾患の部位や種類、投与経路・剤形、患者の年齢や症状などに応じて、適宜増減することが望ましい。
【００２７】
【実施例】
以下、本発明を参考例及び実施例によって説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。
尚、例における略語はそれぞれ次の意味を表す。Ｂｏｃ：  ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル，Ｍｅ：メチル，Ｅｔ：エチル，ｎ−Ｐｒ：ｎ−プロピル，ｉｓｏ−Ｐｒ：イソプロピル，Ｂｎ：ベンジル，Ａｃ：アセチル，ＤＭＳＯ−ｄ６：ジメチルスルホキシド−ｄ６，ａｑ．：水性，ＡＴＲ：全反射測定法
【００２８】
参考例１
４’−フルオロ−２−ニトロ−２’−（ペンタフルオロプロピオンアミド）アセトフェノン
２’−アミノ−４’−フルオロ−２−ニトロアセトフェノン５．００ｇのテトラヒドロフラン３０ｍｌ溶液に、氷冷下ペンタフルオロプロピオン酸無水物５．２ｍｌを滴下し、１時間室温で攪拌した。反応混合物に水を加え、析出結晶を濾取して、水及びジイソプロピルエーテルとｎ−ヘプタンの混液で順次洗浄し、７．６５ｇの淡黄色結晶を得た。酢酸エチルとジイソプロピルエーテルの混液から再結晶して、融点１４３．５〜１４４℃の無色結晶を得た。
元素分析値  Ｃ１１Ｈ６Ｆ６Ｎ２Ｏ４
理論値（％）Ｃ，３８．３９；  Ｈ，１．７６；  Ｎ，８．１４
実験値（％）Ｃ，３８．１０；  Ｈ，１．９６；  Ｎ，７．８４
【００２９】
参考例２
７−フルオロ−３−ニトロ−２−ペンタフルオロエチル−４−キノリノール
４’−フルオロ−２−ニトロ−２’−（ペンタフルオロプロピオンアミド）アセトフェノン７．５０ｇのテトラヒドロフラン７５ｍｌ溶液に、４−（ジメチルアミノ）ピリジン３．２０ｇを加えて１時間還流した。反応混合物を氷水に注ぎ、濃塩酸を加えてｐＨ２に調整後、ジイソプロピルエーテルを加え、析出した結晶を濾取し、水とジイソプロピルエーテルで順次洗浄して４．００ｇの褐色結晶を得た。酢酸エチルとメタノールの混液から再結晶して、淡褐色結晶を得た。
ＮＭＲスペクトル  δ（ＤＭＳＯ−ｄ６）ｐｐｍ：７．４６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１０，９，２．５Ｈｚ），７．６３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０，２．５Ｈｚ），８．３４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９，６．５Ｈｚ）
ＩＲスペクトル  ν（ＡＴＲ）ｃｍ−１：１５４８，１３６７
マススペクトルｍ／ｚ：３２５（Ｍ＋−１）
【００３０】
参考例３
７−メチル−３−ニトロ−４−キノリノール
２’−アミノ−４’−メチル−２−ニトロアセトフェノン８．００ｇのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド３０ｍｌ溶液に、氷冷下Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール１６．４ｍｌを加えて室温で１４時間攪拌した。反応混合物に水を加え、１０％塩酸を加えてｐＨ２に調整後、析出した結晶を濾取し、水とジエチルエーテルで順次洗浄して８．３６ｇの淡褐色結晶を得た。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドと水の混液から再結晶して、融点３００℃以上の淡褐色結晶を得た。
元素分析値  Ｃ１０Ｈ８Ｎ２Ｏ３
理論値（％）Ｃ，５８．８２；  Ｈ，３．９５；  Ｎ，１３．７２
実験値（％）Ｃ，５８．６０；  Ｈ，３．９７；  Ｎ，１３．５７
【００３１】
参考例４
７−ベンジルオキシ−３−ニトロ−２−トリフルオロメチル−４−キノリノール
６０％水素化ナトリウム１．４５ｇのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド６０ｍｌ懸濁液中に、室温攪拌下、ベンジルアルコール３．８０ｍｌを滴下後、７−フルオロ−３−ニトロ−２−トリフルオロメチル−４−キノリノール５．００ｇを少量ずつ加え、混合物を６０℃で４時間攪拌した。反応混合物に氷水を加え、１０％塩酸を加えて酸性にして、析出した結晶を濾取し、水とジイソプロピルエーテルで順次洗浄して５．６０ｇの淡黄褐色結晶を得た。酢酸エチルから再結晶して、融点２７５〜２７７℃（分解）の淡黄色板状晶を得た。
元素分析値  Ｃ１７Ｈ１１Ｆ３Ｎ２Ｏ４
理論値（％）Ｃ，５６．０５；  Ｈ，３．０４；  Ｎ，７．６９
実験値（％）Ｃ，５５．８６；  Ｈ，３．１６；  Ｎ，７．６０
【００３２】
参考例５
４−クロロ−７−フルオロ−３−ニトロ−２−ペンタフルオロエチルキノリン７−フルオロ−３−ニトロ−２−ペンタフルオロエチル−４−キノリノール３．８４ｇとオキシ塩化リン１１ｍｌの混合物を５時間還流した。放冷後、反応混合物を少量ずつ氷水中に注いで攪拌し、トルエンで抽出した。トルエン層を水洗し、脱水後、溶媒を留去して２．５０ｇの褐色結晶を得た。
ＮＭＲスペクトル  δ（ＣＤＣｌ３）ｐｐｍ：７．７３（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝９，８．５，２．５Ｈｚ），７．９６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．５Ｈｚ），８．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９，５．５Ｈｚ）
ＩＲスペクトル  ν（ＫＢｒ）ｃｍ−１：１５５０，１３２１
【００３３】
参考例５の方法に従って、参考例６の化合物を得た。
【００３４】
参考例６
４−クロロ−７−メチル−３−ニトロキノリン
性状  淡褐色結晶
融点  １００〜１０２．５℃
ＮＭＲスペクトル  δ（ＣＤＣｌ３）ｐｐｍ：２．６４（３Ｈ，ｓ），７．６４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．５，１Ｈｚ），７．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ），８．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），９．２４（１Ｈ，ｓ）
ＩＲスペクトル  ν（ＡＴＲ）ｃｍ−１：１５１４，１３３８
マススペクトルｍ／ｚ：２２３，２２５（Ｍ＋＋１，３：１）
【００３５】
参考例７
２，４，７−トリクロロ−３−ニトロキノリン
７−クロロ−４−ヒドロキシ−３−ニトロキノリン−２（１Ｈ）−オン７．４５ｇと二塩化フェニルホスホリル１７．３ｍｌの混合物を１４０℃で１．５時間攪拌した。反応混合物を水中に注ぎ、析出した結晶を濾取し、水で洗浄して８．４０ｇの淡褐色結晶を得た。酢酸エチルから再結晶して、融点１１９．５〜１２０．５℃の無色結晶を得た。
元素分析値  Ｃ９Ｈ３Ｃｌ３Ｎ２Ｏ２・１／８Ｈ２Ｏ
理論値（％）Ｃ，３８．６４；  Ｈ，１．１７；  Ｎ，１０．０１
実験値（％）Ｃ，３９．０２；  Ｈ，１．２７；  Ｎ，９．６４
【００３６】
参考例８
４−［２−［（２，７−ジクロロ−３−ニトロキノリン−４−イル）アミノ］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
２，４，７−トリクロロ−３−ニトロキノリン２．００ｇ，トリエチルアミン１．２ｍｌ及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド６ｍｌの混合物に、室温攪拌下、４−（２−アミノエチル）−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル２．１０ｇのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２ｍｌ溶液を滴下し、室温で３０分間攪拌した。反応混合物に氷水を加えて酢酸エチルで抽出した。抽出液を水及び飽和食塩水で順次洗浄後、脱水し、溶媒を留去した。残渣をジイソプロピルエーテルで洗浄して、２．８８ｇの黄色結晶を得た。酢酸エチルから再結晶して、融点１９４〜１９５℃の黄色板状晶を得た。
元素分析値  Ｃ２１Ｈ２６Ｃｌ２Ｎ４Ｏ４・１／８Ｈ２Ｏ
理論値（％）Ｃ，５３．４８；  Ｈ，５．６１；  Ｎ，１１．８８
実験値（％）Ｃ，５３．７７；  Ｈ，５．６４；  Ｎ，１１．５０
【００３７】
参考例８の方法に従って、参考例９〜１２の化合物を得た。
【００３８】
参考例９
４−［２−［（７−フルオロ−３−ニトロ−２−ペンタフルオロエチルキノリン−４−イル）アミノ］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
性状  黄色結晶（再結晶溶媒：ＭｅＯＨ）
融点  １６８〜１６９℃
元素分析値  Ｃ２３Ｈ２６Ｆ６Ｎ４Ｏ４
理論値（％）Ｃ，５１．４９；  Ｈ，４．８９；  Ｎ，１０．４４
実験値（％）Ｃ，５１．２９；  Ｈ，４．８９；  Ｎ，１０．２３
【００３９】
参考例１０
４−［２−［（７−メチル−３−ニトロキノリン−４−イル）アミノ］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
性状  黄色針状晶（再結晶溶媒：ＭｅＯＨ）
融点  １５０〜１５１℃
元素分析値  Ｃ２２Ｈ３０Ｎ４Ｏ４
理論値（％）Ｃ，６３．７５；  Ｈ，７．３０；  Ｎ，１３．５２
実験値（％）Ｃ，６３．６４；  Ｈ，７．２４；  Ｎ，１３．４６
【００４０】
参考例１１
４−［２−［（７−ベンジルオキシ−３−ニトロ−２−トリフルオロメチルキノリン−４−イル）アミノ］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル性状  黄色板状晶（再結晶溶媒：ＡｃＯＥｔ−ｉｓｏ−Ｐｒ２Ｏ）
融点  １９５〜１９６℃
元素分析値  Ｃ２９Ｈ３３Ｆ３Ｎ４Ｏ５
理論値（％）Ｃ，６０．６２；  Ｈ，５．７９；  Ｎ，９．７５
実験値（％）Ｃ，６０．５０；  Ｈ，５．７６；  Ｎ，９．５５
【００４１】
参考例１２
４−［２−［（７−フルオロ−３−ニトロ−２−トリフルオロメチルキノリン−４−イル）アミノ］エチル］−１−ピペラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
性状  黄色液体
ＮＭＲスペクトル  δ（ＤＭＳＯ−ｄ６）ｐｐｍ：１．３９（９Ｈ，ｓ），２．３６（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ），２．６３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ），３．２５（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ），３．４３（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６Ｈｚ），７．７０（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１０，９，２．５Ｈｚ），７．８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０，２．５Ｈｚ），７．８５（１Ｈ，ｂｒｓ），８．５４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９，６Ｈｚ）
ＩＲスペクトル  ν（ＡＴＲ）ｃｍ−１：１６８９
マススペクトルｍ／ｚ：４８６（Ｍ＋−１）
【００４２】
参考例１３
４−［２−［（３−アミノ−２，７−ジクロロキノリン−４−イル）アミノ］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
塩化ニッケル・６水和物０．７１ｇのメタノール１５ｍｌ溶液中に氷冷攪拌下、水素化ホウ素ナトリウム０．１２ｇを添加した後、内温５℃以下で４−［２−［（２，７−ジクロロ−３−ニトロキノリン−４−イル）アミノ］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル２．７８ｇのメタノール６０ｍｌとテトラヒドロフラン２０ｍｌの懸濁液を加えた。続いて、内温５℃以下で水素化ホウ素ナトリウム０．６７ｇを少量ずつ添加し、室温で１時間攪拌した。反応混合物の不溶物を濾去し、濾液を濃縮した後、残渣に１０％塩化アンモニウム水溶液を加えて酢酸エチルで抽出した。抽出液は水と飽和食塩水で順次洗浄後、脱水し、溶媒を留去した。得られた暗褐色液体を酢酸エチル−ｎ−ヘプタン（１：３→２：５）を溶出溶媒としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した後、ジイソプロピルエーテルで洗浄して１．８１ｇの淡黄色結晶を得た。酢酸エチルから再結晶して、融点１５２〜１５３℃の淡黄色針状晶を得た。
元素分析値  Ｃ２１Ｈ２８Ｃｌ２Ｎ４Ｏ２
理論値（％）Ｃ，５７．４０；  Ｈ，６．４２；  Ｎ，１２．７５
実験値（％）Ｃ，５７．３４；  Ｈ，６．４０；  Ｎ，１２．６９
【００４３】
参考例１３の方法に従って、参考例１４〜１７の化合物を得た。
【００４４】
参考例１４
４−［２−［（３−アミノ−７−フルオロ−２−ペンタフルオロエチルキノリン−４−イル）アミノ］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
性状  黄色結晶（再結晶溶媒：ＡｃＯＥｔ−ｉｓｏ−Ｐｒ２Ｏ）
融点  １２２〜１２３℃
元素分析値  Ｃ２３Ｈ２８Ｆ６Ｎ４Ｏ２
理論値（％）Ｃ，５４．５４；  Ｈ，５．５７；  Ｎ，１１．０６
実験値（％）Ｃ，５４．３５；  Ｈ，５．４８；  Ｎ，１０．７８
【００４５】
参考例１５
４−［２−［（３−アミノ−７−メチルキノリン−４−イル）アミノ］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
性状  黄褐色結晶（再結晶溶媒：ＡｃＯＥｔ−ｉｓｏ−Ｐｒ２Ｏ）
融点  １４２．５〜１４４．５℃
元素分析値  Ｃ２２Ｈ３２Ｎ４Ｏ２・１／４Ｈ２Ｏ
理論値（％）Ｃ，６７．９２；  Ｈ，８．４２；  Ｎ，１４．４０
実験値（％）Ｃ，６８．３２；  Ｈ，８．３８；  Ｎ，１４．０２
【００４６】
参考例１６
４−［２−［（３−アミノ−７−ベンジルオキシ−２−トリフルオロメチルキノリン−４−イル）アミノ］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
性状  淡黄色液体
ＮＭＲスペクトル  δ（ＤＭＳＯ−ｄ６）ｐｐｍ：０．９１−１．０３（２Ｈ，ｍ），１．３８（９Ｈ，ｓ），１．４６−１．６３（５Ｈ，ｍ），２．５８−２．７０（２Ｈ，ｍ），３．３１（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ），３．８１−３．９２（２Ｈ，ｍ），４．７１（２Ｈ，ｓ），５．２３（２Ｈ，ｓ），５．２９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），７．２３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９，２．５Ｈｚ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），７．３３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．４０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．４９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），８．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ）
ＩＲスペクトル  ν（ＡＴＲ）ｃｍ−１：１６８２
マススペクトルｍ／ｚ：５４３（Ｍ＋−１）
【００４７】
参考例１７
４−［２−［（３−アミノ−７−フルオロ−２−トリフルオロメチルキノリン−４−イル）アミノ］エチル］−１−ピペラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
性状  黄色液体
ＮＭＲスペクトル  δ（ＤＭＳＯ−ｄ６）ｐｐｍ：１．３９（９Ｈ，ｓ），２．３２（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ），２．４７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ），３．２４（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ），３．３５（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６Ｈｚ），５．１３（２Ｈ，ｓ），５．４３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ），７．４３（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１０．５，１０，３Ｈｚ），７．５３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．５，３Ｈｚ），８．２１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０，６Ｈｚ）
ＩＲスペクトル  ν（ＡＴＲ）ｃｍ−１：１６９０
マススペクトルｍ／ｚ：４５８（Ｍ＋＋１）
【００４８】
参考例１８
４−［２−［４，７−ジクロロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
４−［２−［（３−アミノ−２，７−ジクロロキノリン−４−イル）アミノ］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル１．７１ｇ，サリチルアルデヒド０．６２ｇ及び２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン０．１９ｇのテトラヒドロフラン１７ｍｌ溶液を室温で５日間攪拌した。反応混合物に水及び炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて酢酸エチルで抽出した。抽出液を炭酸水素ナトリウム水溶液，水，飽和食塩水で順次洗浄後、脱水し、溶媒を留去した。得られた液体を、酢酸エチル−ｎ−ヘプタン（１：３→３：５）を溶出溶媒としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、淡黄褐色液体０．６２ｇを得た。
ＮＭＲスペクトル  δ（ＤＭＳＯ−ｄ６）ｐｐｍ：０．７４−０．８８（２Ｈ，ｍ），１．１７−１．３１（３Ｈ，ｍ），１．３６（９Ｈ，ｓ），１．６７（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ），２．４１−２．５８（２Ｈ，ｍ），３．６７−３．７８（２Ｈ，ｍ），４．５７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．０４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．４７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．７９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９，２Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ），８．４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ），１０．１４（１Ｈ，ｓ）
ＩＲスペクトル  ν（ＡＴＲ）ｃｍ−１：１６８９
マススペクトルｍ／ｚ：５３９，５４１，５４３（Ｍ＋−１；９：６：１）
【００４９】
参考例１８の方法に従って、参考例１９〜４９の化合物を得た。
【００５０】
【表１】
2004161662.tif 000005
【００５１】
【表２】
2004161662.tif 000006
【００５２】
【表３】
2004161662.tif 000007
【００５３】
【表４】
2004161662.tif 000008
【００５４】
【表５】
2004161662.tif 000009
【００５５】
【表６】
2004161662.tif 000010
【００５６】
参考例５０
４−［２−［７−メチル−２−（２−イソプロポキシフェニル）−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
４−［２−［２−（２−ヒドロキシフェニル）−７−メチル−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル０．５０ｇ，炭酸カリウム０．２３ｇのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２．５ｍｌ懸濁液に、ヨウ化イソプロピル０．３４ｇのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド０．５ｍｌ溶液を滴下し、室温で２４時間攪拌した。反応混合物に水を加えて、析出した結晶を濾取し、水で洗浄して無色結晶０．５４ｇを得た。酢酸エチルとジイソプロピルエーテルの混液から再結晶して融点１１９〜１２０℃の無色結晶を得た。
元素分析値  Ｃ３３Ｈ３９Ｆ３Ｎ４Ｏ３
理論値（％）Ｃ，６６．４３；  Ｈ，６．５９；  Ｎ，９．３９
実験値（％）Ｃ，６６．１０；  Ｈ，６．５６；  Ｎ，９．１７
【００５７】
参考例５０の方法に従って、参考例５１〜５４の化合物を得た。
【表７】
2004161662.tif 000011
【００５８】
参考例５５
４−［２−［２−（２−アセチルオキシフェニル）−７−ベンジルオキシ−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
氷冷下、４−［２−［７−ベンジルオキシ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル６．８２ｇとトリエチルアミン２．２ｍｌのテトラヒドロフラン６０ｍｌ溶液に、塩化アセチル０．８３ｍｌを滴下し、室温で３０分間攪拌した。反応混合物に氷水を加えて、酢酸エチルで抽出し、抽出液を水と飽和食塩水で順次洗浄後、脱水し、溶媒を留去して、淡黄色液体７．４２ｇを得た。
ＮＭＲスペクトル  δ（ＤＭＳＯ−ｄ６）ｐｐｍ：０．８０−０．９２（２Ｈ，ｍ），１．２５−１．３６（３Ｈ，ｍ），１．３６（９Ｈ，ｓ），１．７０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ），２．０２（３Ｈ，ｓ），２．４３−２．６０（２Ｈ，ｍ），３．７２−３．８１（２Ｈ，ｍ），４．５８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），５．３８，（２Ｈ，ｓ），７．３６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．４３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．５４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．５４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．６４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９，２．５Ｈｚ），７．７２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），８．４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ）
ＩＲスペクトル  ν（ＡＴＲ）ｃｍ−１：１７６９，１６８４
マススペクトルｍ／ｚ：６８９（Ｍ＋＋１）
【００５９】
参考例５５の方法に従って、参考例５６の化合物を得た。
【００６０】
参考例５６
４−［２−［２−（２−アセチルオキシフェニル）−７−クロロ−４−メチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
性状：無色液体
ＮＭＲスペクトル  δ（ＣＤＣｌ３）ｐｐｍ：０．９８−１．１０（２Ｈ，ｍ），１．３０−１．５０（３Ｈ，ｍ），１．４４（９Ｈ，ｓ），１．８０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝８Ｈｚ），２．０４（３Ｈ，ｓ），２．５２−２．６５（２Ｈ，ｍ），３．０２（３Ｈ，ｓ），３．９２−４．１０（２Ｈ，ｍ），４．４６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．４５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．５５−７．６５（３Ｈ，ｍ），８．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），８．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ）
ＩＲスペクトル  ν（ＡＴＲ）ｃｍ−１：１７７２，１６９２
マススペクトルｍ／ｚ：５６３，５６５（Ｍ＋＋１；３：１）
【００６１】
参考例５７
４−［２−［２−（２−アセチルオキシフェニル）−７−ヒドロキシ−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
４−［２−［２−（２−アセチルオキシフェニル）−７−ベンジルオキシ−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル０．３０ｇとシクロヘキセン０．１４ｍｌのエタノール９ｍｌ溶液に、パールマンズ試薬３０ｍｇを加えて、１時間還流した。触媒を濾去し、濾液を濃縮後、残渣を酢酸エチル−ｎ−ヘプタン（１：４→１：１）を溶出溶媒としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、無色液体０．２６ｇを得た。
ＮＭＲスペクトル  δ（ＤＭＳＯ−ｄ６）ｐｐｍ：０．７９−０．９１（２Ｈ，ｍ），１．２４−１．３６（３Ｈ，ｍ），１．３６（９Ｈ，ｓ），１．６９（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ），２．０２（３Ｈ，ｓ），２．４４−２．６１（２Ｈ，ｍ），３．７０−３．８１（２Ｈ，ｍ），４．５５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．４４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８，１Ｈｚ），７．４６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９，２．５Ｈｚ），７．５３（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝８，１Ｈｚ），７．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），７．７１（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝８，１Ｈｚ），７．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８，１Ｈｚ），８．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ），１０．２５（１Ｈ，ｓ）
ＩＲスペクトル  ν（ＡＴＲ）ｃｍ−１：１７６９，１６８６
マススペクトルｍ／ｚ：５９９（Ｍ＋＋１）
【００６２】
参考例５８
４−［２−［２−（２−ヒドロキシフェニル）−７−メトキシ−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
４−［２−［２−（２−アセチルオキシフェニル）−７−ヒドロキシ−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル０．６０ｇと炭酸カリウム０．１７ｇのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド６ｍｌ懸濁液に、氷冷攪拌下、ヨウ化メチル０．１３ｍｌを滴下し、室温で２．５時間攪拌した。反応混合物に１０％水酸化ナトリウム水溶液１．５ｍｌを加えて、室温で２．５時間攪拌した後、水を加え酢酸エチルで抽出した。抽出液を水と飽和食塩水で順次洗浄し、脱水後、溶媒を留去した。残渣を酢酸エチル−ｎ−ヘプタン（１：４→１：１）を溶出溶媒としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、無色液体０．２３ｇを得た。
ＮＭＲスペクトル  δ（ＤＭＳＯ−ｄ６）ｐｐｍ：０．７５−０．８７（２Ｈ，ｍ），１．２０−１．３６（３Ｈ，ｍ），１．３６（９Ｈ，ｓ），１．６６（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ），２．４３−２．５８（２Ｈ，ｍ），３．６９−３．７９（２Ｈ，ｍ），３．８３（３Ｈ，ｓ），４．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．１８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．４４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９，２．５Ｈｚ），７．５４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８，１．５Ｈｚ），７．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），７．６４（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝８，１．５Ｈｚ），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ），１０．２１（１Ｈ，ｓ）
ＩＲスペクトル  ν（ＡＴＲ）ｃｍ−１：１６８７
マススペクトルｍ／ｚ：５６９（Ｍ＋−１）
【００６３】
参考例５９
４−［２−［２−（２−アミノフェニル）−７−クロロ−４−メチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
氷冷攪拌下、塩化ニッケル・６水和物０．２５ｇのメタノール２５ｍｌ溶液中に、水素化ホウ素ナトリウム０．０４ｇを添加した後、４−［２−［７−クロロ−４−メチル−２−（２−ニトロフェニル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル１．１７ｇのメタノール１０ｍｌ溶液を加えた。続いて、水素化ホウ素ナトリウム０．２０ｇを少量ずつ添加し、室温で３０分間攪拌した。反応混合物中の不溶物を濾去し、濾液を濃縮した後、残渣に１０％塩化アンモニウム水溶液を加えて酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄後、脱水し、溶媒を留去した。得られた残渣を酢酸エチルとジイソプロピルエーテルの混液で洗浄して１．００ｇの淡褐色結晶を得た。２−プロパノールから再結晶して、融点１８２〜１８３℃の無色結晶を得た。
元素分析値  Ｃ２９Ｈ３４ＣｌＮ５Ｏ２
理論値（％）Ｃ，６６．９７；  Ｈ，６．５９；  Ｎ，１３．４７
実験値（％）Ｃ，６６．８０；  Ｈ，６．５１；  Ｎ，１３．４６
【００６４】
実施例１
４，７−ジクロロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン・７／２フマル酸塩４−［２−（４，７−ジクロロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）エチル］−１−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル０．５８ｇとトリフルオロ酢酸１．５ｍｌの１，２−ジクロロエタン３ｍｌ溶液を、室温で３０分間攪拌した。反応混合物を濃縮し、残渣に２−プロパノールを加えて、析出した結晶を濾取し、０．４５ｇのトリフルオロ酢酸塩を得た。得られた塩に水を加え水酸化ナトリウム水溶液でアルカリ性とした後に、酢酸エチルと２−プロパノールの混液で抽出した。抽出液を脱水後、溶媒を留去して、酢酸エチルとジイソプロピルエーテルの混液で洗浄して、０．３６ｇの遊離塩基を得た。更に、常法によりフマル酸塩とし、エタノールから再結晶して、融点２１５〜２１８℃（分解）の淡褐色針状晶を得た。
元素分析値  Ｃ２３Ｈ２２Ｃｌ２Ｎ４Ｏ・７／２Ｃ４Ｈ４Ｏ４・２Ｈ２Ｏ
理論値（％）Ｃ，５０．２９；  Ｈ，４．５６；  Ｎ，６．３４
実験値（％）Ｃ，５０．３３；  Ｈ，４．２３；  Ｎ，６．０３
【００６５】
実施例１の方法に従って、実施例２〜４１の化合物を得た。
【００６６】
【表８】
2004161662.tif 000012
【００６７】
【表９】
2004161662.tif 000013
【００６８】
【表１０】
2004161662.tif 000014
【００６９】
【表１１】
2004161662.tif 000015
【００７０】
【表１２】
2004161662.tif 000016
【００７１】
【表１３】
2004161662.tif 000017
【００７２】
実施例４２
７−クロロ−２−［２−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル］−４−メチル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
７−クロロ−２−（２−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン０．５８ｇとトリエチルアミン０．２３ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２．５ｍｌ溶液を５０℃で攪拌しながら、２−ブロモエタノール０．１２ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド０．５ｍｌ溶液を滴下後、５０℃で５時間攪拌した。反応混合物に水を加え、析出した結晶を濾取し、水で洗浄して、０．２８ｇの無色結晶を得た。メタノールから再結晶して、融点１１１〜１１２℃の無色結晶を得た。
元素分析値  Ｃ２６Ｈ２９ＣｌＮ４Ｏ２・５／２Ｈ２Ｏ
理論値（％）Ｃ，６１．２３；  Ｈ，６．７２；  Ｎ，１０．９９
実験値（％）Ｃ，６１．１３；  Ｈ，６．３２；  Ｎ，１１．０５
【００７３】
以下、本発明化合物の優れた効果の一例として、ヒト細胞におけるＴＮＦ−αの産生阻害作用の試験結果を示す。尚、対照化合物としては、特開２０００−１１９２７１号公報に開示されている４−クロロ−２−フェニル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン（対照化合物Ａ）、特開２００２−１６１０９５号公報に開示されている１−［２−（２−モルホリニル）エチル］−２−（２−ピロリル）−４−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン（対照化合物Ｂ）、特願２００１−２４８４６８号に開示されている７−クロロ−４−メチル−２−フェニル−１−［２−（４−ピペリジル）エチル］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン（対照化合物Ｃ）を用いた。
【００７４】
１．培養用の血液細胞の調製
健康な成人志願者に静脈穿刺して、ノボ・ヘパリン注  １０００  （ノボ・ノルディスク  社製）を１７０μｌ  含有するプラスチック試験管中へ全血を約５０ｍｌ採取した。これから末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ：Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｃｅｌｌ  ）をＬｅｕｃｏＰＲＥＰＴＭ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）細胞分離管によって調製し、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  社製）、２．５Ｕ／ｍｌペニシリン−２．５μｇ／ｍｌストレプトマイシン溶液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を含有し、１０％牛胎児血清（Ｉｎｔｅｒｇｅｎ  Ｃｏｍｐａｎｙ社製）を添加したＲＰＭＩ−１６４０  培地（日水製薬株式会社製）中で、細胞密度１×１０６個／ｍｌとなるように培養した。
２．被験化合物の調製
被験化合物は滅菌超純水やジメチルスルホキシドあるいは０．１Ｍ塩酸で可能なかぎり２０μＭとなるよう溶解してから生理食塩水で系列希釈して用いた。化合物は１０−１１Ｍ〜１０−５Ｍの濃度範囲で試験した。
３．細胞の薬物処置
予め１０μｌの被験化合物を添加した９６穴（平底）Ｍｉｃｒｏ  Ｔｅｓｔ  ＩＩＩＴＭ  ｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｐｌａｔｅ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）細胞培養用プレートに、先に調製した培地中のＰＢＭＣ１８０μｌを添加した。その３０分後更に、２０μｇ／ｍｌのリポポリサッカライド（ＬＰＳ）１０μｌを添加し、プレートにプラスチック製の蓋をして、５％二酸化炭素雰囲気において３７℃で１６時間インキュベートした。
【００７５】
４．ヒトＴＮＦ−αの定量
サンドイッチ法によるエンザイムイムノアッセイ法を構築して培養上清中のヒトＴＮＦ−αを定量した。９６ウェルのマイクロタイタープレートに希釈した抗サイトカイン抗体（捕捉抗体、又は一次抗体）を入れ、コーティングとした。ウェルの洗浄後、培養上清を適宜希釈してウェルに入れインキュベーションした。その後、サイトカインに対する検出抗体（又は二次抗体）、検出抗体に対するＨＲＰ（西洋わさびペルオキシターゼ；ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）抱合抗体（又は三次抗体）を、洗浄工程を挟みながら順次入れた。最終洗浄後、各ウェルにテトラメチルベンジジン溶液（ＤＡＫＯ社製）を入れ発色反応を開始した。０．５Ｍ硫酸で発色反応を停止した後、各ウェルの４５０ｎｍでの吸光度をＭ−Ｖｍａｘ  ＴＭマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社製）で測定した。サイトカインの濃度は定量ソフトウェアＳｏｆｔｍａｘ  ＴＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社製）で組換えサイトカインを標準品として使った検量線と比較して決定した。ヒトＴＮＦ−αの定量にはモノクローナル抗ヒトＴＮＦ−α（ＥＮＤＯＧＥＮ社製）、ポリクローナルウサギ抗ヒトＴＮＦ−α（Ｐｈａｒｍａ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ  Ｈａｎｎｏｖｅｒ社製）、ペルオキシダーゼ抱合ロバ抗ウサギＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓ．  Ｌａｂｓ社製）、組換えヒトＴＮＦ−α（ＩＮＴＥＲＧＥＮ社製）をそれぞれ、捕捉、検出、ＨＲＰ抱合抗体及び検量線用の標準品に用いた。
各被験化合物の活性は、ＬＰＳと被験化合物で処理したときのヒトＴＮＦ−αの誘導量を、５０％抑制する濃度ＩＣ５０値（ｎＭ）で表した。結果を表１４に示す。
【００７６】
【表１４】
2004161662.tif 000018
【００７７】
これらの結果から、本発明化合物は優れたＴＮＦ−αの産生阻害作用を示すことが明らかである。
【００７８】
【発明の効果】
本発明化合物は優れたＴＮＦ−αの産生阻害作用を示し、ＴＮＦ−αに起因する疾患の予防又は治療剤として極めて有用である。