(57)【要約】      （修正有）【課題】すい臓炎を治療および予防し、さらに肝臓の再生機能を誘導するための新規な医薬の提供。【解決手段】スペルミジンの類似体を有効成分とする医薬。上記スペルミジン自体は一般式（Ｉ）で示される。該医薬に用いる好ましい化合物の具体例を挙げると１−メチルスペルミジンである。2004189714.tif 000020［ａ，ｂおよびｃは１〜約６を，ｎは０又は１を，Ｒ１〜Ｒ１２は水素原子又はアルキル基を，但し，ｎ＝０の場合，Ｒ３〜Ｒ８から選ばれる少なくとも１つはＣ１〜約Ｃ６のアルキル基を，ｎ＝１の場合，Ｒ３〜Ｒ８から選ばれる少なくとも１つはＣ１〜約Ｃ６のアルキル基を表わす］【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）で表される化合物を包含する、すい臓炎を治療または予防するための薬剤。
【化１】
2004189714.tif 000010
（式中、
ａ、ｂおよびｃはそれぞれ１〜約６の整数であり、
ｎは０または１の整数であり、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11およびＲ12は各々独立して水素原子または炭素数１〜約６のアルキル基を表し、
但し、ｎが０の場合、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8から選ばれる少なくとも１つは炭素数１〜約６のアルキル基を表し、ｎが１の場合、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8から選ばれる少なくとも１つは炭素数１〜約６のアルキル基を表す。）
【請求項２】
式（Ｉ）中のａが３であり、ｂが４であり、ｎが０であることを特徴とする、請求項１に記載の薬剤。
【請求項３】
式（Ｉ）中のＲ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6が各々独立して水素原子またはメチル基を表すことを特徴とする、請求項２に記載の薬剤。
【請求項４】
式（Ｉ）の化合物が下記式で表されることを特徴とする、請求項３に記載の薬剤。
【化２】
2004189714.tif 000011
【請求項５】
上記式中のＲ1、Ｒ2、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11がそれぞれ水素原子を表すことを特徴とする、請求項４に記載の薬剤。
【請求項６】
式（Ｉ）の化合物が下記式で表されることを特徴とする、請求項５に記載の薬剤。
【化３】
2004189714.tif 000012
【請求項７】
式（Ｉ）の化合物が下記式で表されることを特徴とする、請求項５に記載の薬剤。
【化４】
2004189714.tif 000013
【請求項８】
式（Ｉ）のａが３であり、ｂが４であり、ｃが３であり、ｎが１であることを特徴とする、請求項１に記載の薬剤。
【請求項９】
式（Ｉ）中のＲ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8が各々独立して水素原子またはメチル基を表すことを特徴とする、請求項７に記載の薬剤。
【請求項１０】
式（Ｉ）の化合物が下記式で表されることを特徴とする、請求項７に記載の薬剤。
【化５】
2004189714.tif 000014
【請求項１１】
上記式中のＲ1、Ｒ2、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11およびＲ12がそれぞれ水素原子を表すことを特徴とする、請求項９に記載の薬剤。
【請求項１２】
代謝安定性を有するスペルミジンの類似体を包含する、すい臓炎を治療または予防するための薬剤。
【請求項１３】
下記式（Ｉ）で表される化合物を包含する、肝臓再生機能の誘導のための薬剤。
【化６】
2004189714.tif 000015
（式中、
ａ、ｂおよびｃはそれぞれ１〜約６の整数であり、
ｎは０または１の整数であり、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11およびＲ12は各々独立して水素原子または炭素数１〜約６のアルキル基を表し、
但し、ｎが０の場合、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8から選ばれる少なくとも１つは炭素数１〜約６のアルキル基を表し、ｎが１の場合、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8から選ばれる少なくとも１つは炭素数１〜約６のアルキル基を表す。）
【請求項１４】
式（Ｉ）中のａが３であり、ｂが４であり、ｎが０であることを特徴とする、請求項１３に記載の薬剤。
【請求項１５】
式（Ｉ）中のＲ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6が各々独立して水素原子またはメチル基を表すことを特徴とする、請求項１４に記載の薬剤。
【請求項１６】
式（Ｉ）の化合物が下記式で表されることを特徴とする、請求項１５に記載の薬剤。
【化７】
2004189714.tif 000016
【請求項１７】
上記式中のＲ1、Ｒ2、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11がそれぞれ水素原子を表すことを特徴とする、請求項１６に記載の薬剤。
【請求項１８】
式（Ｉ）の化合物が下記式で表されることを特徴とする、請求項１７に記載の薬剤。
【化８】
2004189714.tif 000017
【請求項１９】
式（Ｉ）の化合物が下記式で表されることを特徴とする、請求項１７に記載の薬剤。
【化９】
2004189714.tif 000018
【請求項２０】
式（Ｉ）のａが３であり、ｂが４であり、ｃが３であり、ｎが１であることを特徴とする、請求項１３に記載の薬剤。
【請求項２１】
式（Ｉ）中のＲ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8が各々独立して水素原子またはメチル基を表すことを特徴とする、請求項２０に記載の薬剤。
【請求項２２】
式（Ｉ）の化合物が下記式で表されることを特徴とする、請求項２０に記載の薬剤。
【化１０】
2004189714.tif 000019
【請求項２３】
上記式中のＲ1、Ｒ2、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11およびＲ12がそれぞれ水素原子を表すことを特徴とする、請求項２２に記載の薬剤。
【請求項２４】
代謝安定性を有するスペルミジンの類似体を包含する、肝臓再生機能の誘導のための薬剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
技術分野
本発明は、すい臓炎を治療および予防するための新規な薬剤に関する。また、本発明は、肝臓の再生機能を誘導するための新規な薬剤に関する。さらに詳細には、本発明は、代謝的に安定なポリアミン化合物類を包含する、すい臓炎を治療および予防し、且つ肝臓の再生機能を誘導するための新規な薬剤に関する。
【０００２】
発明の背景
ポリアミン類であるスペルミジンおよびスペルミン、ならびにそれらの前駆体であるプトレシンは、哺乳類の細胞の成長および分化に密接に関係する小さい脂肪族カチオンであるが、それらの細胞内での正確な機能は未だ解明されていない(Janne, J., Alhonen, L., および Leinonen, P. (1991) Ann. Med. 23, 241-259)。ポリアミン類の生理的な役割を解明することを目的として、ポリアミン代謝能を遺伝的に変化させた多くのトランスジェニックマウスおよびトランスジェニックラットの系統が作成されている。オルニチンデカルボキシラーゼ(ODC)の過剰発現によるポリアミン生合成の活性化は、オスの生殖不能症(Halmekyto, M., Hyttinen, J.-M., Sinervirta, R., Utriainen, M., Myohanen, S., Voipio, H.-M., Wahlfors, J., Syrjanen, S., Syrjanen, K., Alhonen, L., および Janne, J. (1991) J. Biol. Chem. 266, 19746-19751; Hakovirta, H., Keiski, A., Toppari, J., Halmekyto, M., Alhonen, L., Janne, J., および Parvinen, M. (1993) Mol. Endocrinol. 7, 1430-1436)といった多くの興味深い表現型の変化を引き起こすが、いずれの研究も、ODCの過剰発現が組織のプトレシンプールを拡大するばかりでこのジアミンがスペルミジンやスペルミンへさらに変換されることはないという事実を伴っている(Halmekyto, M., Alhonen, L., Alakuijala,L., および Janne, J. (1993) Biochem. J. 291, 505-508; Suppola, S., Heikkinen, S., Parkkinen, J. J., Uusi-Oukari, M., Korhonen, V. P., Keinanen,T., Alhonen, L., および Janne, J. (2001) Biochem J. 358, 343-348)。
【０００３】
組織のポリアミンプールに重度の変調を生じる方法としては、スペルミジン／スペルミンＮ１アセチルトランスフェラーゼ(SSAT)の過剰発現によってポリアミンの異化作用を活性化する方法がトランスジェニックマウスおよびラットにおいて達成されている。この酵素は、スペルミジンおよびスペルミンの異化作用の律速反応に触媒作用を及ぼす。アセチル化されたスペルミジンはプトレシンへ、またアセチル化されたスペルミンはスペルミジンへとポリアミンオキシダーゼ(PAO)の作用によって変換される(Casero, R. A., および Pegg, A. E. (1993) FASEBJ. 7, 653-661)。トランスジェニックマウスおよびラットにおけるSSATの過剰発現は、大量のプトレシンの蓄積、Ｎ１−アセチルスペルミジンの出現、およびスペルミジンおよび／またはスペルミンプールの減少などの、組織のポリアミンプールに大きな変化をもたらす(Pietila, M., Alhonen, L., Halmekyto, M., Kanter, P., Janne, J., および Porter, C. W. (1997) J. Biol. Chem. 272, 18746-18751)。ポリアミンのホメオスタシスの変化は次のような雑多な表現型の変化を伴う：早期および永久的な脱毛、加齢に伴い皮膚に多量に発生するしわ、皮下脂肪の欠乏(Pietila, M., Alhonen, L., Halmekyto, M., Kanter, P., Janne,J., および Porter, C. W. (1997) J. Biol. Chem. 272, 18746-18751) 及び寿命の短縮(Suppola, S., Heikkinen, S., Parkkinen, J. J., Uusi-Oukari, M., Korhonen, V. P., Keinanen, T., Alhonen, L., および Janne, J. (2001) Biochem J. 358, 343-348)。SSATの発現が重金属誘導性のマウスメタロチオネインＩプロモーターによって促進されるトランスジェニックラットが作成されている(Alhonen, L., Parkkinen, J. J., Keinanen, T., Sinervirta, R., Herzig, K. H., and Janne, J. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 97, 8290-8295)。メタロチオネインプロモーターは、主として肝臓およびすい臓において、重金属によって誘導されるSSATの発現に関与する。トランスジェニックラットを毒性を示さない量の亜鉛にさらすと、すい臓における大量のSSAT活性の誘導、すい臓スペルミジンおよびスペルミンのプールの顕著な減少および急性すい臓炎が生じる(Alhonen, L., Parkkinen, J. J., Keinanen, T., Sinervirta, R., Herzig, K.H., および Janne, J. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 97, 8290-8295)。過酸化水素および反応性アルデヒドを生成するPAOの阻害によってすい臓炎が予防できないことは、この組織の炎症はスペルミジンおよびスペルミンの顕著な減少と因果関係があると考えられる(Alhonen, L., Parkkinen, J. J., Keinanen, T., Sinervirta, R., Herzig, K. H., および Janne, J. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 97, 8290-8295)。
【０００４】
急性すい臓炎はに特に有効な治療法が解明されていないため、臨床問題として広く認知されている(Leach S D, Gorelick S, Modlin I M: New perspectives on acute pancreatitis. Scan J Gastroenterol 27 Suppl 192:29-38, 1992)。米国の病院においては、毎年、急性すい臓炎による入院が２１０，０００件を越え、更に慢性すい臓炎による入院が１５０，０００件ある。すい臓炎は、アルコール中毒症または胆道病によって発症することが最も多い。あまり一般的ではないが、高脂肪血症、上皮小体機能亢進症、腹部外傷、血管炎または尿毒症とも関係する。急性すい臓炎患者の平均的な入院期間は１２．４日であるが、顕著な数の患者は急性すい臓炎に付随する合併症のためにより長い期間入院している。
【０００５】
急性すい臓炎による総死亡率は６〜１８％の間で変動し、劇症すい臓炎では、死亡率が５０％程度まで上昇する場合がある(Steinberg W, Tenner S: Acute pancreatitis. N Eng J Med 330:1198-1220, 1994; Imrie C W, Whyte A S: A prospective study of acute pancreatitis. Br J Surg 62:490-494, 1975; JacobsM L, Daggett W M, ら: Acute pancreatitis: Analysis of factors influencing survival. Ann Surg 185:43-51, 1977)。興味深いことに、この病気の予後は局部的なすい臓の炎症の程度よりも、その全身的な症状および合併症に依存すると考えられる(ImrieおよびWhyte, 1975; Jacobsら, 1977)。実際に、急性すい臓炎の発症から１週間以内の死亡原因の６０％程度が成人性呼吸困難症候群(ARDS)であり、敗血症連合ARDSと区別することができない(SteinbergおよびTenner, 1994; Jacobsら, 1977)。
【０００６】
慢性すい臓炎は、すい臓炎の最初の発作後も飲酒を続けた患者や、理由は不明であるがすい臓に胆石のたまった患者に発症する。急性すい臓炎の繰り返される発作は、再発のたびにその程度は軽減し、命を脅かす危険性も低下する。典型的な慢性すい臓炎の患者は、しかしながら、残りの人生の間、１年におよそ１回か２回は入院する必要がある。これらの患者は、彼らの同年代の者と比べて寿命が短い(ImrieおよびWhyte, 1975; SteinbergおよびTenner, 1994)。病態の程度が軽減されているにも関わらず、慢性すい臓炎は患者を衰弱させる慢性的な痛みを伴い、多くの入院および生産性の喪失を引き起こす。このような患者は鎮静剤に依存するか、または慢性的に炎症を起こしているすい臓の一部を除去または切除することを目的とした外科的な処置を必要とするほどの慢性的な痛みをしばしば患っている。
【０００７】
慢性的なアルコールの濫用は、西洋諸国における急性および慢性すい臓炎の最も一般的な原因であるが、その病態生理学については、未だに解明されている部分に乏しい(SteinbergおよびTenner, 1994)。このような一般的な疾患の重傷度、罹患期間、合併症併発率または死亡率を低下させるのに効果的な治療法や治療剤は現在わずかしか存在しない。すい臓炎の患者に対する対応は、その病因に関係なく未だに維持療法であり、主として十分な循環血液量の維持、腎臓系および呼吸器系の機能の保持および適切な栄養物の提供に着目したものである。このように特に有効な治療法の欠如が、この病気の進行および重症度を軽減するための方法を見いだすという目的のもと、過去２０年の間に数多くの期待できる試みの実施を促進した。今までのところ、特に有効な治療法は見つかっていないので、新しい、より効果的な物理療法のための探索が必要である。
【０００８】
近年、すい臓炎の治療に使用および／または提案されている有効な治療法は、ブラジキニンアンタゴニストの使用、インターロイキン−１変換酵素(ICE)アンタゴニストなどのＩＬ−１１、ＩＬ−１遮断薬（IL-11, IL-1 block）の使用、およびインシュリン増感物質の使用を包含する。
【０００９】
トランスジェニックラットのSSAT発現をマウスメタロチオネインＩ型プロモーターによって促進し、続いて部分肝切除を行うと、SSAT活性の著しい促進が見られ、これは術後２４時間で肝臓スペルミジンプールが急激に減少することと関連していた(Alhonen, L., Rasanen, T. L., Sinervirta, R., Parkkinen, J. J., Korhonen, V. P., Pietila, M., および Janne, J. (2002) Biochem. J. 362, 149-153)。細胞増殖活性が検出されないことと臓器重量の増加がないことから判断して、このような条件下において、トランスジェニックラットは肝臓再生を開始しなかった。肝臓再生機能は、スペルミジン濃度を手術前のレベルに戻した後にのみ回復し、これはおそらくODC活性の上昇のためであると考えられる(Alhonen, L., Rasanen, T. L., Sinervirta, R., Parkkinen, J. J., Korhonen, V. P., Pietila, M.,およびJanne, J. (2002) Biochem. J. 362, 149-153)。
【００１０】
従って、本発明は、他の重要な目的の中でも特にポリアミン類似体および／またはポリアミン類似体を包含するすい臓炎の治療と予防のための新規な薬剤及びポリアミン類似体および／またはポリアミン類似体を包含する肝臓再生を促進するための薬剤に関する。
【００１１】
発明の概要
本発明の一部分は、すい臓炎を治療または予防するための新規な薬剤および肝臓再生機能を誘導するための新規な薬剤に関する。具体的には、本発明の１つの態様においては、式（Ｉ）で表される化合物を包含するすい臓炎を治療または予防するための新規な薬剤を提供する。
【化１１】
2004189714.tif 000002
（式中、
ａ、ｂおよびｃはそれぞれ１〜約６の整数であり、
ｎは０または１の整数であり、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11およびＲ12は各々独立して水素原子または炭素数１〜約６のアルキル基を表し、
但し、ｎが０の場合、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8から選ばれる少なくとも１つは炭素数１〜約６のアルキル基を表し、ｎが１の場合、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8から選ばれる少なくとも１つは炭素数１〜約６のアルキル基を表す。）
【００１２】
本発明の他の１つの態様においては、代謝的に安定なスペルミジンの類似体を包含する、すい臓炎を治療または予防するための薬剤を提供する。
【００１３】
本発明の更に他の１つの態様においては、式（Ｉ）で表される化合物を包含する、肝臓再生機能を誘導するための薬剤を提供する。
【化１２】
2004189714.tif 000003
（式中、
ａ、ｂおよびｃはそれぞれ１〜約６の整数であり、
ｎは０または１の整数であり、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11およびＲ12は各々独立して水素原子または炭素数１〜約６のアルキル基を表し、
但し、ｎが０の場合、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8から選ばれる少なくとも１つは炭素数１〜約６のアルキル基を表し、ｎが１の場合、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8から選ばれる少なくとも１つは炭素数１〜約６のアルキル基を表す。）
【００１４】
本発明の更に他の１つの態様においては、代謝的に安定なスペルミジンの類似体を包含する、肝臓再生機能を誘導するための薬剤を提供する。
【００１５】
発明の実例に関する詳細な説明
特に記載がない限り、上記および本願明細書全般にわたって使用されている以下の用語の定義は、次の通りである。
【００１６】
「アルキル基」とは、直鎖、分岐鎖または環状の、炭素数１〜約１０の脂肪族炭化水素基であり、炭素原子数の範囲内およびその中の特定の数値のすべての組み合わせおよび部分的な組み合わせによって表されるものを意味する。「分岐鎖」とは、メチル基、エチル基またはプロピル基といった低級のアルキル基が直鎖状のアルキル鎖に結合しているアルキル基を意味する。アルキル基の具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基およびデシル基が挙げられる。
【００１７】
「有効な量」とは、本願明細書に記載の化合物によって特定の容態または疾患の症状を治療または予防するために治療上有効な量を意味する。そのような容態または疾患としては、すい臓炎に関連した病態および／または肝臓再生機能の誘導が必要な容態が挙げられるが、これらに制限されることはない。治療に有効な活性は、たとえば細胞、組織および／またはレセプターを本発明の化合物と接触させることによって達成することができる。
【００１８】
「薬学的に許容される」ものとは、正当な医学的な判断に基づく範囲内で、ヒトおよび動物の組織と接触させることが適切であり、過剰の毒性、炎症、アレルギー反応やその他の問題のある合併症を引き起こすことがなく、利益／危険率が妥当である化合物、材料、組成物および／または投与形態を意味する。
【００１９】
「薬学的に許容される塩」とは、本願明細書に開示される化合物の誘導体であり、親化合物をその酸性または塩基性の塩にすることで修飾したものを意味する。薬学的に許容できる塩としては、アミン類などの塩基性残基の無機塩または有機酸塩、カルボン酸類などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩などが挙げられるが、それらに限定されるものではない。薬学的に許容される塩としては、親化合物の公知の非毒性の塩や４級アンモニウム塩が挙げられ、これらは、例えば、非毒性の無機酸または有機酸を用いて得られるものである。このような公知の非毒性の塩としては、たとえば、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機酸から誘導されるもの、および酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸（pamoic acid）、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸などの有機酸から調製される塩が挙げられる。酸性化合物または塩基性化合物である本発明の化合物は、双極性イオンとして存在してもよい。遊離の酸、遊離の塩基および双極性イオンを含むすべての形態をとる化合物が、本発明の範囲に包含される。
【００２０】
本願明細書および請求の範囲に記載されている化学式においては、ある記号が特定の化学式または置換基中に表れる場合、該記号の定義はそれぞれ独立したものである。
【００２１】
「患者」とは、哺乳類を含む動物を意味し、好ましくはヒトである。
【００２２】
「代謝的に」とは、生体の成長および修復過程に関与する、同化作用や異化作用を含む化学変化と関連した事柄を意味する。
【００２３】
ある態様において、本発明はすい臓炎を治療または予防するための新規な薬剤に関する。すい臓炎は、すい臓の炎症性の自己消化過程によって特徴付けられる。異なる種類のすい臓炎を、本発明の薬剤を使用して治療および／または予防することができる。本薬剤は、壊死を伴わないすい臓炎と同様に、壊死を伴うすい臓炎の治療および／または予防にも適している。「壊死を伴うすい臓炎」は、酵素による進行的な分解作用によって起こる細胞死によって特徴付けられる。「壊死を伴わないすい臓炎」は、すい臓の顕著な壊死を含まないすい臓の炎症によって特徴付けられる。
【００２４】
作用に関するいかなる理論にも縛られるものではないが、すい臓炎は、生体内ポリアミン、特にスペルミンおよびスペルミジン、の減少に起因する可能性があると考えられる。
【００２５】
本発明の薬剤は肝臓再生機能を誘導するために使用することもできる。作用に関するいかなる理論にも縛られるものではないが、肝臓再生機能は、ポリアミン、特にスペルミンおよびスペルミジン、の臨界的生体内濃度に依存していると考えられる。
【００２６】
ある態様において、本発明はポリアミン類似体に関する。本発明の態様において使用することが可能なポリアミン類似体には、Nagarajan & Ganem, J. Org. Chem. (1986) 51, 4856-4861 および Nagarajanら、Biochem. J. (1988) 254, 373-378のそれぞれに記載のポリアミン類似体が含まれるが、それに制限されることはない。上記の文献の内容は、上記記載によって本明細書に組み込まれたものとする。好ましい形態において、本発明の薬剤は代謝的に安定なスペルミジンの類似体である化合物を含む。本発明の他の１つの態様において、本発明の薬剤はスペルミンの誘導体を含んでいてもよい。
【００２７】
本発明で用いる「スペルミジン」とは、次式で表される化合物を意味する：
H2N CH(CH3) (CH2)2 NH(CH2)4 NH2      。
本発明で用いる「代謝的に安定なスペルミジンの類似体」とは、スペルミジンと関連した構造であるが、生体内では実質的に代謝されない化合物を意味する。このような代謝的に安定な類似体は、ポリアミンを代謝する酵素の影響を実質的に受けないスペルミジンの類似体も含まれる。
【００２８】
このように、代謝的に安定なスペルミジンの類似体は、たとえば、ポリアミン炭化水素化合物（すなわち、２個以上の置換または非置換アミノ基を含む炭化水素化合物）を含む。代謝的に安定なスペルミジンの類似体は、好ましくはアルキル化されたスペルミジンの類似体（すなわち、スペルミジンおよび関連した構造の化合物で、１個以上のアルキル基で置換された化合物）である。好ましい形態において、本薬剤で使用するポリアミン化合物は、下記式（Ｉ）で表される：
【化１３】
2004189714.tif 000004
（式中、
ａ、ｂおよびｃはそれぞれ１〜約６の整数であり、
ｎは０または１の整数であり、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11およびＲ12は各々独立して水素原子または炭素数１〜約６のアルキル基を表し、
但し、ｎが０の場合、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8から選ばれる少なくとも１つは炭素数１〜約６のアルキル基を表し、ｎが１の場合、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8から選ばれる少なくとも１つは炭素数１〜約６のアルキル基を表す。）
【００２９】
前述の式（Ｉ）の化合物において、好ましくは、ａは３であり、ｂは４であり、ｎは０である。さらに好ましくは、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6は各々独立して水素原子またはメチル基を表す。さらに好ましくは、式（Ｉ）の化合物は次式で表される。
【化１４】
2004189714.tif 000005
特に好ましい態様において、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11はそれぞれ水素原子を表す（即ち１−メチルスペルミジンである）。ある態様において、式（Ｉ）の化合物は次式で表される。
【化１５】
2004189714.tif 000006
また、他の態様において、式（Ｉ）の化合物は次式で表される。
【化１６】
2004189714.tif 000007
【００３０】
一方、別の態様においては、本発明の化合物を表す前述の式（Ｉ）において、ａは３であり、ｂは４であり、ｃは３であり、ｎは１である。好ましくは、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8は各々独立して水素原子またはメチル基を表す。さらに好ましくは、式（Ｉ）の化合物は次式で表される。
【化１７】
2004189714.tif 000008
【００３１】
上記式において、好ましくは、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11およびＲ12はそれぞれ水素原子である。
【００３２】
本発明の薬剤に使用する化合物はプロドラッグの形態で存在してもよい。ここで使用されるように、「プロドラッグ」とは、式（Ｉ）または他の式で表される化合物、あるいは本発明の薬剤に含まれる化合物である有効な親ドラッグに共有結合したいかなる担体も包含するものであり、このようなプロドラッグを哺乳類に投与した場合、生体内で親ドラッグを放出するものである。プロドラッグは薬剤として望ましい多くの特性（たとえば、溶解性、生体内利用効率、製造性など）を高めることが知られているので、本薬剤に使用される化合物は、所望であれば、プロドラッグの形態で送達されてもよい。このように、本発明においては送達性プロドラッグである薬剤についても検討した。本発明で使用する化合物のプロドラッグは、たとえば、該化合物中に存在する官能基を修飾し、修飾した部分が慣例的な操作または生体内で開裂して親化合物になるようにしてもよい。
【００３３】
従って、プロドラッグは、たとえば本願明細書に記載したように、水酸基、チオール基、アミノ基またはカルボキシル基が本願化合物のいずれかの基に結合しており、哺乳類の患者に投与すると、プロドラッグが開裂してそれぞれ遊離の水酸基、チオール、遊離のアミノまたはカルボン酸を形成するものを含んでいる。そのような化合物に特に限定はないが、例えば、アルコール、チオールおよびアミン官能基のアセトキシアルキル類、酢酸塩、ギ酸塩および安息香酸塩の誘導体；ならびにメチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、イソプロピルエステル、ブチルエステル、イソブチルエステル、ｓｅｃ−ブチルエステル、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、シクロプロピルエステル、フェニルエステル、ベンジルエステルおよびフェネチルエステルといったアルキルエステル、炭素環式エステル、アリルエステルおよびアルキルアリルエステルなどが挙げられる。
【００３４】
本発明の薬剤に使用する化合物は、当業者によく知られた多くの方法で調製することが可能である。化合物は、たとえばNagarajan & Ganem, J. Org. Chem. (1986) 51, 4856-4861 および Nagarajanら、Biochem. J. (1988) 254, 373-378に記載の方法で合成することが可能であり、上記の文献の内容は、上記記載によって本明細書に組み込まれたものとする。また、当業者に認められているそれらを応用した方法で合成することも可能である。本発明に関連して開示されるすべての製造方法は、ミリグラム、グラム、マルチグラム、キログラム、マルチキログラムまたは工業的規模のどのような規模で実施することも考えられる。
【００３５】
詳細に前述したとおり、本薬剤に使用する化合物は１個以上の不斉に置換された炭素原子を含んでいてもよく、光学活性体またはラセミ体として単離されてもよい。従って、特定の立体化学的構造または異性体を特に示さない限り、該化合物はキラル体、偏左右異性体、ラセミ体および幾何学異性体の全てを包含するものとする。このような光学活性体を調製および単離する方法は、当業界ではよく知られている。たとえば、立体異性体の混合物は標準的な方法で分離することができ、これらに限定されるものではないが、ラセミ体の分割、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーおよびキラルクロマトグラフィー、優先塩形成法、再結晶法などで分離することができる。また、キラル出発物質を用いたキラル合成や、標的キラル中心の計画的合成によるキラル合成によって分離してもよい。
【００３６】
容易に理解されるように、該化合物に存在する官能基は、合成過程で導入される保護基を含んでもよい。保護基そのものは官能基群から選択的に追加または除去することが可能な化学官能基であり、たとえば水酸基およびカルボキシル基が挙げられる。これらの保護基は、化合物がさらされる化学反応条件に対して不活性化するための官能基を付与する。どのような種類の保護基も本発明で使用することができる。本発明で使用することのできる保護基としてはGreene, T.W. および Wuts, P.G.M., Protective Groups in Organic Synthesis 2d. Ed., Wiley
& Sons, 1991に記載のものが挙げられる。
【００３７】
本発明の薬剤に使用する化合物は、有効な薬剤を患者の体内の目的部位と接触させることのできるどのような方法で投与してもよい。化合物は、一般的に薬物に関連して使用することが可能な従来のどのような方法で投与してもよく、単独の治療剤または他の治療剤と組み合わせて投与することができる。たとえば、該化合物のみを有効成分として含有する医薬組成物として投与してもよいし、他の治療に有効な成分と組み合わせて使用することも可能である。
【００３８】
該化合物は、選択した投与ルートや標準的な製薬の実施形態に基づき、医薬担体と組み合わせてもよい。投与ルートや標準的な製薬の実施形態は、たとえば、Remington’s Pharmaceutical Sciences (ペンシルバニア州、イーストン、MackPub. Co., 1980)に記載されている。上記の文献の内容は全て、上記記載によって本明細書に組み込まれたものとする。
【００３９】
本発明の化合物は、選択した投与ルート、たとえば、経口または非経口投与、に適合したさまざまな形態で哺乳類の宿主に投与することができる。ここでいう非経口投与とは、次のようなルートによる投与が挙げられる：静脈、筋肉、皮下、直腸、眼球内、滑液嚢内、経皮を含む経上皮、眼、舌下、および頬、ならびに、経眼、経皮、経眼球、経直腸、およびエアロゾール吸入法を介した経鼻吸入を含む局所的投与。有効な化合物は経口投与してもよく、たとえば、不活性な希釈剤または吸収性の可食担体を用いたり、ハードまたはソフトなゼラチンカプセルに詰めたり、加圧してタブレットにしてもよく、または治療食に直接混ぜてもよい。治療のために経口投与する場合には、有効な化合物は賦形剤と共に薬剤とし、内服用タブレット、頬側用タブレット、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ剤、カシェ剤などの形態で使用することができる。そのような組成物および製剤は、少なくとも約０．１％の有効な化合物を含有することが好ましい。組成物および製剤の投与量は当然変更してもよく、好ましくは、たとえば単位重量あたり約２〜約６％である。このような治療上有効な組成物に含まれる有効な化合物の量は、適切な投薬量が得られる量が好ましい。本発明の好ましい組成物または製剤においては、治療に有効な化合物の経口摂取単位は約０．１〜約１，０００ｍｇであり、この範囲内およびその中の特定量のすべての組み合わせおよび部分的な組み合わせも用いることができる。
【００４０】
タブレット、トローチ、丸剤、カプセルなどは下記の原料を１個以上含んでいてもよい：トラガカントガム、アラビアゴム、コーンスターチ、ゼラチンなどの結合剤；リン酸ジカルシウムなどの賦形剤；コーンスターチ、ポテトスターチ、アルギン酸などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの滑剤；ショ糖、乳糖、サッカリンなどの甘味料；およびペパーミント、冬緑油、チェリー香料などの香料剤。薬剤の投薬単位がカプセルの場合、上記の原料に加えて、液状の担体を含んでいてもよい。上記以外の種々の材料が、コーティング、または投与担体の物理的形態を修飾するために存在してもよい。たとえば、タブレット、丸剤またはカプセルはシェラック、砂糖またはその両方でコーティングしてもよい。シロップまたはエリキシル剤は有効な化合物の他に、甘味料としてのショ糖、保存料としてのメチルパラベンおよびプロピルパラベン、染色および香料としてのチェリーまたはオレンジフレーバーを含んでいてもよい。当然のことであるが、どのような投薬形態の薬剤の調製に用いる原料も、使用する量において、製薬上純粋で、実質的に非毒性であることが好ましい。さらに、有効な化合物は徐放性の製剤や薬剤に組み込まれてもよい。
【００４１】
有効な化合物は非経口的に投与してもよいし、腹膜組織内に投与してもよい。遊離の塩基または薬学的に許容できる塩としての有効な化合物の溶液は、たとえばヒドロキシプロピルセルロースといった界面活性剤を適宜水に混ぜて調製することが可能である。有効な化合物の懸濁液も、グリセロール、液状のポリエチレングリコールおよびそれらの混合物、ならびに油で調製することが可能である。通常の保存条件下および使用条件下において、これらの製剤は、微生物の生育を妨げるために保存料を含んでいてもよい。
【００４２】
注射に適した薬学的な形態は、たとえば、滅菌した水溶液または懸濁液、および注射可能な滅菌した溶液または懸濁液を即座に調製することのできる滅菌した粉末を含む。すべての場合において、薬剤は滅菌されており、容易に注射に用いることのできる流動性があることが好ましい。更に、製造条件下および保存条件下で安定であることが好ましく、且つ細菌や真菌といった微生物による汚染に対して保存性が高いことが好ましい。担体は、たとえば、水、エタノール、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコール、液状のポリエチレングリコールなど）、それらの適当な混合物および植物油を含む溶媒または分散媒でもよい。適当な流動性は、たとえば、レクチンなどの被覆剤の使用、分散媒の場合は必要な粒子サイズの維持、および界面活性剤の使用によって保つことが可能である。微生物による汚染の防止は、たとえばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどの種々の抗菌剤および抗真菌剤によって達成してもよい。多くの場合、たとえば砂糖または塩化ナトリウムなどの等張剤を含むことが好ましい。注射可能な組成物の吸収の遅延は、たとえばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンといった吸収遅延剤の使用によって達成してもよい。
【００４３】
滅菌した注射液は、所望の量の有効な化合物を適当な溶媒に、所望であれば上記した種々のその他の成分と共に加え、濾過滅菌して調製することができる。一般的に、分散媒は滅菌した有効成分を塩基性の分散媒を含む滅菌した賦形剤および上述した成分から選択した所望のその他の成分に加えて調製することができる。滅菌済の注射溶液の調製に用いるための滅菌済の粉末の好ましい調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥技術を包含し、あらかじめ滅菌濾過した溶液から、有効成分と所望の付加的な成分を含む粉末を製造することができる。
【００４４】
本発明の治療用化合物は、単独または薬学的に許容できる担体と組み合わせて患者に投与してもよい。上記したように、有効成分と担体の相対的な量は、たとえば化合物の溶解度および化学物性、選択した投与ルートならびに標準的な薬学的慣例に基づいて決定してもよい。
【００４５】
本発明の化合物の最も適した投与量は、投与の形態、選択した特定の化合物および治療を受ける特定の患者の生理的な特徴によって変化する。
【００４６】
実施例
以下の実施例により本発明をさらに説明する。以下の実施例はあくまでも例である。これらの実施例は本発明を具体的に説明するためのものであり、本発明はこれらになんら限定されるものではない。
【００４７】
材料と方法
トランスジェニックラットの作製
メタロチオネイン-SSAT融合遺伝子(Suppola, S., Pietila, M., Parkkinen, J. J., Korhonen, V. P., Alhonen, L., Halmekyto, M., Porter, C. W., およびJanne, J. (1999) Biochem. J. 338, 311-316)を有するトランスジェニックウィスターラットの作成方法はすでに報告されている(Alhonen, L., Parkkinen, J. J., Keinanen, T., Sinervirta, R., Herzig, K. H., および Janne, J. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 97, 8290-8295; Lukkarinen, J., Grohn,O., Sinervirta, R., Jarvinen, A., Kauppinen, R. A., Janne, J., および Alhonen, L. (1997) Stroke 28, 639-645)。部分肝切除は、Higgins および Andersonの原法に従って実施した(Higgins, G. H., および Anderson, R. M. (1931)Arch. Pathol. 12, 186-202)。クオピオ大学および地方政府による動物保護および使用に関する委員会（The Institutional Animal Care and Use Committee of the University of Kuopio and by Provisional Goverment）によって動物実験は認可されている。
【００４８】
化学薬品
１-メチルスペルミジンは、すでに報告されている方法(Khomutov, A. R., Vepsalainen, J. J., Shvetsov, A. S., Hyvonen, T., Keinanen, T., Pustobaev, V. N., Eloranta, T. O., および Khomutov, R. M. (1996) Tetrahedron 52, 13751-13766)に従って３−アミノブタノールから合成し、生理食塩水に加えて投与した。亜鉛は、蒸留水に溶解した硫酸亜鉛を用いて投与した。
【００４９】
分析方法
ポリアミン類およびそれらの類似体は、高速液体クロマトグラフィーを使用し、Hyvonenらの記載に従って分析した(Hyvonen, T., Keinanen, T. A., Khomutov, A. R., Khomutov, R. M., および Eloranta, T. O. (1992) J. Chromatogr. 574, 17-21)。SSAT活性は、Bernackiらに従って測定した(Bernacki, R. J., Bergeron, R. J., および Porter, C. W. (1992) Cancer Res. 52, 2424-2430)。α−アミラーゼ活性は、ヘパリンで凝血を防止した血漿からMicrolab 200分析システム（ドイツ国、ダルムシュタット、E. Merck社製）を使用して測定した。
【００５０】
すい臓標本の組織学的分析
ホルマリンで固定したすい臓の標本をパラフィンに包埋し、５ミクロメーターの厚みにスライスし、ヘマトキシリン／エオシンで染色した。染色した切片に番号をつけ、参加している胃腸病学者(K.-H.H.)によってNiederau らの方法 (Niederau, C., Liddle, R. A., Ferrell, L. D., および Grendell, J. H. (1986) J. Clin. Invest. 78, 1056-1063)に従って無作為に評価した。組織学的スコアの詳細を表１に示す。
【００５１】
増殖性細胞核抗原（PCNA）の免疫組織化学
すでに詳細に報告されている方法(Alhonen, L., Rasanen, T. L., Sinervirta, R., Parkkinen, J. J., Korhonen, V. P., Pietila, M., および Janne, J. (2002) Biochem. J. 362, 149-15)に従って、ホルマリン固定パラフィン包埋組織切片からPCNAを検出した。
【００５２】
統計分析
データは平均±ＳＤ（標準偏差）で表した。GraphPad Prism 3.0（カルフォルニア州、サンディエゴ、GraphPad Software社製)を使用し、複合比較用ダンネットの事後テスト（Dunnett´s post hoc test for multiple comparisons）による一元配置分散分析（One-way analysis of variance (ANOVA)）で統計分析を行った。
【００５３】
実施例１
亜鉛によるすい臓ポリアミン類の減少
亜鉛の単独投与(10 mg/kg)またはメチルスペルミジン(50 mg/kg)と亜鉛との投与は、シンジェニックラットのSSAT活性に影響を与えなかったが、トランスジェニックラットにおいては、SSAT活性は亜鉛の投与に応答して36 ± 7.1 pmol/mg/10 分から4270 ± 560 pmol/mg/10 分へ増加した。亜鉛と共に類似体を投与した場合には、亜鉛を単独で投与したときのSSAT活性よりも少し高いだけであまり変わらなかった。亜鉛およびメチルスペルミジンの投与に対する応答によって生じるすい臓ポリアミンプールの変化を図１に示す。ポリアミンの異化作用の本質的な活性化を生じるような処置を行わなくとも、トランスジェニックラットは概して非常に高いプトレシンプールを示したが、非トランスジェニックラットにおいては、プトレシンプール（図１ａ）は処置に関わらず低いままだった。種々の処置を試みたが、いずれもすい臓のプトレシンプールをわずかに変えるに留まった（図１ａ）。すい臓のスペルミジンプールは、亜鉛を単独または類似体と共に投与した後に、シンジェニックラットにおいては実質的には変わらなかった（図１ｂ）が、トランスジェニックラットにおいては亜鉛の投与に応答して劇的に減少した（９０％も減少した）。メチルスペルミジンの投与は、亜鉛が誘導するスペルミジンの減少にほとんど影響を与えない（図１ｂ）。亜鉛を単独またはメチルスペルミジンと組み合わせて投与した場合、シンジェニックラットにおいてもすい臓スペルミンプールを減少させるようだが、トランスジェニックラットにおける亜鉛の単独またはメチルスペルミジンと組み合わせた投与の影響はより著しく、スペルミンプールの減少率は８０％を越えていた（図１ｃ）。図１ｄは、メチルスペルミジンを１回または２回投与した後のすい臓における類似体の蓄積の様子を示す。図に示すように、類似体はすい臓に効果的に蓄積され、明らかにそれ以上代謝されていない。
【００５４】
実施例２
メチルスペルミジンが亜鉛誘導性すい臓炎に与える影響
図２は、亜鉛を単独または類似体と組み合わせて１回投与した後の、血漿α−アミラーゼ活性を示す。アミラーゼ活性は、シンジェニックラットでは処置に関わらず低いままであり、トランスジェニックラットでは亜鉛を投与すると有意に増加してすい臓炎を発症したが、メチルスペルミジンを１回投与するとその値は減少し、メチルスペルミジンを２回投与すると完全にもとの状態に戻った。図３は、トランスジェニックラットのすい臓の組織構造を示すものであり、生理食塩水の投与後（図３ａ）、亜鉛を単独で投与した後（図３ｂ）、亜鉛と類似体を１回投与した後（図３ｃ）、ならびに亜鉛と類似体を２回投与した後（図３ｄ）を示す。亜鉛もメチルスペルミジンも投与しないトランスジェニックラットの細葉構造は完全に正常である（図３ａ）が、亜鉛は５０％を超える細葉細胞が壊死する明らかなすい臓炎を誘導した（図３ｂ）。亜鉛を注射する前にメチルスペルミジンを投与しておくとこの状態は劇的に改善され、この類似体を１回投与すると壊死はほとんど見られず（図３ｃ）、２回投与すると壊死はまったく見られなかった（図３ｄ）。表１はすべての実験動物のすい臓標本の組織学的スコアをまとめたものである。表１に示したように、トランスジェニックラットに亜鉛を投与すると、細葉細胞の壊死を突出した特徴とする急性すい臓炎を発症したが、その一方で、シンジェニックラットにおいては、すい臓の組織構造は処置によってわずかに影響をうけるに留まった。亜鉛を投与する前に類似体を１回投与することでも壊死の範囲は減少したが、類似体を２回繰り返して投与すると壊死はほとんど見られなくなり、壊死がある場合でもごくわずかだった（表１）。
【００５５】
【表１】
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【００５６】
スペルミン誘導体によるラットの処置(25 mg/kg, １〜２回注射（i.p.）)もまたポリアミンプールが減少したラットのすい臓炎を予防した（データは示さない）。
【００５７】
実施例３
部分肝切除がシンジェニックラットおよびトランスジェニックラットの肝臓ポリアミンプールに与える影響
部分肝切除は、非トランスジェニックラットにおける低い肝臓SSAT活性には影響を与えなかったが、トランスジェニックラットにおいては、SSAT活性を術前の12.7 ± 6.0 pmol/mg/10 分から術後２４時間の4500 ± 1040 pmol/mg/10 分に増加させた。手術を行う３時間前にメチルスペルミジンを投与すると、SSAT活性は術後２４時間で7520 ± 3000 pmol/mg/10 分にさらに増加した。図４は、シンジェニックラットおよびトランスジェニックラットの部分肝切除後２４時間のポリアミン類の濃度を示す。プトレシンプール（図４ａ）は、シンジェニックラットにおいては手術に応答して明らかに増加した。トランスジェニックラットは、手術前にすでに高いプトレシン濃度を示しており、手術による影響を受けないものの、類似体の投与に応答して著しく増加した。これはおそらくSSAT活性の増加を反映している。スペルミジンプール（図４ｂ）は、シンジェニックラットにおいては手術に応答して概して増加したが、トランスジェニックラットにおいては術後２４時間でスペルミジンレベルが劇的に低下した。肝臓スペルミンプール（図４ｃ）もまた、シンジェニックラットにおいては部分肝切除後に概ね減少した。トランスジェニックラットにおいては、低いスペルミジンプールは手術に応答してさらに減少した（図４ｃ）。メチルスペルミジンは肝臓スペルミジン濃度および肝臓スペルミン濃度にほとんど影響を与えなかった。図４ｄは、類似体は正常な肝臓およびトランスジェニックラットの肝臓に効果的に蓄積されることを示す。
【００５８】
実施例４
部分肝切除およびメチルスペルミジンが肝臓重量の増加および増殖活性に与える影響
図５は、部分肝切除したシンジェニックラットおよびトランスジェニックラットにおける肝臓重量の増加（図５ａ）と増殖性細胞核抗原(PCNA)陽性細胞数（図５ｂ）を示し、それぞれ部分肝切除前にメチルスペルミジンを投与した場合と未投与の場合に関する結果である。体内に残した肝臓の重量は、シンジェニックラットでは術後２４時間で有意に増加したが、トランスジェニックラットでは有意には増加しなかった（図５ａ）。メチルスペルミジンは非トランスジェニックラットにおける肝臓重量の増加に影響を与えなかったが、トランスジェニックラットの肝臓重量を有意に増加させた（図５ａ）。PCNAは肝臓再生が起こっている間の増殖活性の指標として用いた。PCNAの免疫組織化学的検出は、種々の組織の増殖活性を評価するための簡便で一般的な手法である。PCNAの発現は細胞周期のＳ期と密接な相関関係がある(17)。図５ｂは、部分肝切除前のシンジェニックラットおよびトランスジェニックラット、ならびにメチルスペルミジンを投与または未投与のシンジェニックラットおよびトランスジェニックラットの部分肝切除後２４時間のPCNA陽性細胞数を示す図である。休止状態の肝臓においては、約１％たらずの肝細胞がPCNA陽性だった。トランスジェニックラットでは、PCNA陽性細胞数は術後２４時間の時点では手術前の低いレベルのままであったのに対し、シンジェニックラットでは、PCNA陽性細胞数は３０％以上に急激に増加した（図５ｂ）。類似体の投与によって、シンジェニックラットの肝臓におけるPCNA陽性の細胞数は変化しなかったが、トランスジェニックラットの肝臓においては、PCNA陽性細胞数は約１％から４０％へと劇的に増加した。ここで使用した以外のシンジェニックラットおよびトランスジェニックラットを使用し、この実験を繰り返し行った。この実験においては、シンジェニックラットの休止状態の肝臓に存在するPCNA陽性肝細胞数は0.5 ± 0.1%だった。PCNA陽性肝細胞数は、術後２４時間で、類似体未投与群では10.7 ± 3.5%に増加し（ｐ＜０．００１）、類似体投与群では9.8 ± 1.5%に増加した（ｐ＜０．００１）。トランスジェニックラットにおける対応する数値は、手術前は0.20 ± 0.0であり、術後２４時間のメチルスペルミジン未投与群では0.42 ± 0.24%であり、メチルスペルミジン投与群では25.9 ± 4.9%（ｐ＜０．００１）だった。このように、類似体はトランスジェニックラットの肝臓増殖機能の遮断を完全に打ち消したと考えられる。
【００５９】
活性化ポリアミン異化作用を有するトランスジェニックラットを使用した実験によると、亜鉛誘導性すい臓炎は、１−メチルスペルミジン（スペルミジンの細胞性機能の大部分を有すると考えられる、代謝的に安定なスペルミジンの類似体）を処置前の投与によって予防することができた。同様に、この類似体は、トランスジェニックラットにおける、初期肝臓再生時のスペルミジンの減少によって引き起こされる肝臓増殖機能の遮断を緩和する。このように、スペルミジンはすい臓の完全性の維持および肝臓再生機能の開始に特に関連があると考えられる。代謝的に安定なスペルミジンの類似体、たとえば１−メチルスペルミジンは肝臓再生機能の誘導と同様に、すい臓炎の治療および／または予防のために投与することができる。
【００６０】
補助的な考察として、Rasanen TL, Alhonen L, Sinervirta R, Keinanen T, Herzig KH, Suppola S, Khomutov AR, Vepsalainen J, Janne J., ”A polyamineanalogue prevents acute pancreatitis and restores early liver regeneration in transgenic rats with activated polyamine catabolism”（「ポリアミン類似体は、活性化ポリアミン異化作用を有するトランスジェニックラットの急性すい臓炎を予防し、初期肝臓再生機能を回復させる」）, J Biol Chem (2002)Oct 18; 277(42):39867-72を参照されたい。上記の文献の内容は、上記記載によって本明細書に組み込まれたものとする。
【００６１】
さらに、代謝的に安定なスペルミジンの類似体、たとえば１−メチルスペルミジンは上記以外の原因により発症するすい臓炎を治療および／または予防するために投与することもできる。
【００６２】
実施例５
メチルスペルミジンがアルギニン誘導性すい臓炎に与える影響
大量のアルギニンの投与はラットにおいて急性壊死性すい臓炎を発症させることが知られている。予備実験の結果は、アルギニンがすい臓におけるポリアミン異化作用を活性化することを示した。図６は、アルギニン投与(250-500 mg/kg)後のラットの血漿α−アミラーゼ活性を示す。アミラーゼ活性はアルギニン処置ラットで有意に上昇し、すい臓炎の発症を示した。メチルスペルミジン(50 mg/kg)を１回投与すると、すい臓炎に付随して起こる血漿アミラーゼ活性の増加が著しく低下した。メチルスペルミジンを２回投与すると、血漿アミラーゼレベルは完全に正常化した。メチルスペルミジンの投与は、アルギニン誘導性すい臓炎に付随して起こるすい臓の組織病理学上の変化も予防した（データは示さない）。
【００６３】
実施例６
メチルスペルミジンがセルレイン誘導性すい臓炎に与える影響
セルレインの投与は、トランスジェニックマウスおよびラットにおける非壊死性すい臓炎を誘導する。セルレイン誘導性すい臓炎は血漿／血清アミラーゼ活性の顕著な増加によって特徴付けられる。メチルスペルミジンの投与は、この動物モデルのアミラーゼ活性を正常なレベルに戻すことはなかった（データは示さない）。図７は、メチルスペルミジン(50 mg/kg)を１回投与すると、セルレイン誘導性すい臓炎を発症している動物のすい臓炎に付随して起こる浮腫が減少することを示す。
【００６４】
本願明細書で引用したかまたは説明した特許、特許出願および刊行物の記載内容は、それらの記載によって本明細書に組み込まれたものとする。
【００６５】
本明細書に記載した以外の本発明の種々の改良は、前述の記載から当業者には明らかである。このような改良発明もまた本願にかかる請求の範囲に含まれるものとする。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、亜鉛単独または亜鉛とメチルスペルミジンとを投与したシンジェニックラットおよびトランスジェニックラットのすい臓ポリアミンプールを示す。屠殺２４時間前にシンジェニックラットおよびトランスジェニックラットに亜鉛(10 mg/kg)を投与した。シンジェニックラットおよびトランスジェニックラットの１群には、亜鉛投与の４時間前にメチルスペルミジン(50 mg/kg)を１回で投与し、他の１群には亜鉛投与の２０時間および４時間前にメチルスペルミジンを２回投与した。メチルスペルミジンを投与しない１群も設けた。各群の動物数は３〜５匹とした。Me-spdはメチルスペルミジンを表す。
【図２】図２は、亜鉛単独、または亜鉛とメチルスペルミジンとを投与したシンジェニックラットおよびトランスジェニックラットの血漿α−アミラーゼ活性を示す。シンジェニックラットおよびトランスジェニックラットは図１の記述と同様に処置した。各群の動物数は６〜８匹とした。*は亜鉛処置したトランスジェニックラットと比較して、ｐ＜０．０５で有意に差があることを示し、***は亜鉛もメチルスペルミジンも投与しないトランスジェニックラットと比較して、ｐ＜０．００１で有意に差があることを示す。Me-spdはメチルスペルミジンを表す。
【図３】図３は、亜鉛およびメチルスペルミジンを投与した後のトランスジェニックラットのすい臓の組織構造である。トランスジェニックラットは図１の記述と同様に処置した。倍率は１２５倍である。
【図４】図４は、部分肝切除とメチルスペルミジン投与を行ったシンジェニックラットおよびトランスジェニックラットの肝臓ポリアミンプールを示す。部分肝切除を行う３時間前にメチルスペルミジン(50 mg/kg)を１回投与した。各群の動物数は３〜５匹とした。Me-spdはメチルスペルミジンを表す。
【図５】図５は、部分肝切除とメチルスペルミジン投与を行ったシンジェニックラットおよびトランスジェニックラットにおける、肝臓重量の増加（ａ）と増殖性細胞核抗原(PCNA)陽性細胞数（ｂ）を示す。各群の動物数は３〜５匹とした。*は部分肝切除前の測定値と比較して、ｐ＜０．０５で有意に差があることを示し、***は部分肝切除前の測定値と比較して、ｐ＜０．００１で有意に差があることを示す。Me-spdはメチルスペルミジンを表す。
【図６】図６は、メチルスペルミジン投与後のアルギニン誘導性すい臓炎のラットの血漿α−アミラーゼ活性を示す。屠殺２４時間前にシンジェニックラットおよびトランスジェニックラットにアルギニン(250-500 mg/kg)を投与した。シンジェニックラットおよびトランスジェニックラットの１群には、アルギニン投与の４時間前にメチルスペルミジン(50 mg/kg)を１回投与し、他の１群にはアルギニン投与の２０時間前および４時間前にメチルスペルミジンを２回投与した。メチルスペルミジンを投与しない１群も設けた。各群の動物数は３〜５匹とした。Argはアルギニンを表し、Me-spdはメチルスペルミジンを表す。
【図７】図７は、セルレイン誘導性すい臓炎のラットにおける、すい臓炎に付随して起こる浮腫に対するメチルスペルミジンの影響を示す。屠殺２４時間前にシンジェニックラットおよびトランスジェニックラットにセルレイン(50 mg/kg)を投与した。シンジェニックラットおよびトランスジェニックラットの１群には、セルレイン投与の４時間前にメチルスペルミジン(50 mg/kg)を１回投与した。メチルスペルミジンを投与しない１群も設けた。各群の動物数は３〜５匹とした。Me-spdはメチルスペルミジンを表す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【外国語明細書】
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