(57)【要約】【解決手段】一般式（１）【化１】2004123539.tif 000038〔式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はＣ１−６アルキル基等であり；Ｒ４は水素原子等であり；Ｒ５及びＲ６は同一又は異なって、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、ハロゲン原子等であり；Ｘは−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ２−等であり；Ｙは−ＮＨ−等であり；Ｚは−ＣＯ−等であり；Ｗは−ＮＨ−等であり；Ａはアリール基、ヘテロアリール基等である〕で示されるピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。【効果】本発明化合物（１）及びその医薬上許容される塩は、Ｅｄｇ−５に特異的に作用することにより、繊維症治療薬として有用である。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）
【化１】
2004123539.tif 000034
〔式中、
Ｒ１はＣ１−６アルキル基、水素原子又は−ＣＯＲ７（ここで、Ｒ７はＣ１−６アルキル基、アリール基、アラルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、アリールオキシ基又はアラルキルオキシ基である）であり；
Ｒ２はＣ１−６アルキル基又はアリール基であり；
Ｒ３は水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、ハロアルキル基、Ｃ３−７シクロアルキル基又はアリール基であり；
Ｒ４は水素原子又はＣ１−６アルキル基であり；
Ｒ５及びＲ６は同一又は異なって、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、カルボキシル基、Ｃ２−６アルキニル基、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、ジＣ１−６アルキルアミノ基、アシル基、水酸基、アリールオキシ基、アラルキルオキシ基又は−ＣＯＮＨＲ８（ここで、Ｒ８はアリール基又はアラルキル基である）、であり；
Ｘは−ＮＲ９−（ここで、Ｒ９は水素原子、Ｃ１−６アルキル基又は−ＮＨＲ１０（ここで、Ｒ１０はカルボキシル基又はＣ１−６アルコキシカルボニル基である）である）、−Ｏ−、−Ｎ＝、−ＣＨ＝又は−ＣＨＲ１１−（ここで、Ｒ１１は水素原子又はＣ１−６アルキル基である）であり；
Ｙは−ＮＲ１２−（ここで、Ｒ１２は水素原子、Ｃ１−６アルキル基、アラルキル基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アラルキルオキシカルボニル基、又は−ＣＯＮＨＲ１３（ここで、Ｒ１３はアリール基又はアラルキル基である）、＝Ｎ−、−Ｎ＝、−ＣＨ２−、＝ＣＨ−、−Ｏ−、−ＣＯ−又は単結合であり；
Ｚは−ＣＯ−、−ＣＳ−、−ＣＨ２−、−Ｏ−又は単結合であり；
Ｗは−ＮＲ１４−（ここで、Ｒ１４は水素原子、Ｃ１−６アルキル基、アラルキルオキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基又はヘテロアリールＣ１−６アルキル基である）、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２−又は単結合であり；
【化２】
2004123539.tif 000035
は、二重結合又は一重結合であり；
Ａはアリール基、ヘテロアリール基又はシクロアルキル基である〕により示されるピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【請求項２】
Ｒ３、Ｒ４、
【化３】
2004123539.tif 000036
のピリジン環上の置換位置が、Ｒ３がｈ位、Ｒ４がｉ位、
【化４】
2004123539.tif 000037
がｊ位である請求項１記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【請求項３】
Ｒ１がＣ１−６アルキル基であり、Ｒ２がＣ１−６アルキル基であり、Ｒ４が水素原子である請求項２記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【請求項４】
Ｙが−ＮＨ−又は＝Ｎ−であり、Ｚが−ＣＯ−であり、Ｗが−ＮＨ−である請求項３記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【請求項５】
環Ａがアリール基である請求項４記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【請求項６】
アリール基がフェニル基である請求項５記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【請求項７】
環Ａがヘテロアリール基である請求項４記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【請求項８】
ヘテロアリール基がピリジル基である請求項７記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【請求項９】
Ｘが−ＮＨ−又は−Ｎ＝である請求項５乃至８記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【請求項１０】
Ｘが−ＣＨ２−である請求項５乃至８記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【請求項１１】
Ｘが−Ｏ−である請求項５乃至８記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【請求項１２】
請求項１乃至１１項記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩と医薬的に許容される担体を含有してなる医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１乃至１１項記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有するスフィンゴシン−１−リン酸受容体拮抗剤。
【請求項１４】
請求項１乃至１１項記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する繊維症治療薬。
【請求項１５】
請求項１乃至１１項記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する肝繊維症治療薬。
【請求項１６】
請求項１乃至１１項記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する肺繊維症治療薬。
【請求項１７】
スフィンゴシン−１−リン酸受容体拮抗作用を有する化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有してなる繊維症治療薬。
【請求項１８】
スフィンゴシン−１−リン酸受容体拮抗作用を有する化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有してなる肝繊維症治療薬。
【請求項１９】
スフィンゴシン−１−リン酸受容体拮抗作用を有する化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有してなる肺繊維症治療薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、スフィンゴシン−１−リン酸（以下「Ｓｐｈ−１−Ｐ」という）受容体拮抗作用を有する新規ピラゾロピリジン化合物及びその医薬用途に関する。より詳しくは、肝臓、腎臓、肺の繊維症および血管平滑筋の肥厚による動脈硬化症治療効果を有する新規化合物及びその医薬用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】
細胞膜を構成する脂質は、グリセロリン脂質、コレステロール、スフィンゴ脂質に分けられる。更にこの中のスフィンゴ脂質は、大きく２種類より構成されている。それは主要リン脂質の一つであるスフィンゴミエリンと、ガングリオシドなどの糖鎖をセラミド骨格に結合した多様な糖脂質である。これらのスフィンゴ脂質は外部からの刺激を受けると、スフィンゴミエリナーゼ又はエンドグリカナーゼの酵素作用によって、細胞膜又はリソソーム中で分解を受けセラミドに変換され、さらにセラミダーゼの作用でスフィンゴシンに代謝される。このスフィンゴシンはスフィンゴシンキナーゼの作用を受けて、Ｃ１の水酸基がリン酸化されＳｐｈ−１−Ｐとなる。このＳｐｈ−１−Ｐも通常細胞内には蓄積せず、直ちにリアーゼによって分解され、ホスホエタノールアミンとパルミトアルデヒドに変えられる。このような、細胞膜スフィンゴ脂質の代謝分解経路で生じる物質が、様々な機能を調節する因子であることが近年注目されてきた。
【０００３】
基本骨格にスフィンゴシンを持つこれらのスフィンゴ脂質の働きは、主に細胞内情報伝達に関与しており、特にセラミドやスフィンゴシンなどは重要なセカンドメッセンジャーとして細胞の増殖・分化・アポトーシスなどの細胞機能に関与していることが以前より知られていた。
一方、Ｓｐｈ−１−Ｐは、分解酵素であるリアーゼを含まない血小板中に蓄積され、活性化に伴って放出されることが見出されていた。放出されたＳｐｈ−１−Ｐはメラノーマ細胞などの癌細胞や血管平滑筋細胞のＰＤＧＦ依存性の細胞運動を強く阻害する細胞運動制御因子としての機能、或は繊維芽細胞に対する増殖促進作用を有することが解明された。更には、いろいろな複雑な細胞反応の引き金となり、細胞内ストアからのＣａ＋の放出、アクチン重合の調節、細胞死の阻止、ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路の調節を行うことも解明された。
【０００４】
更に、Ｓｐｈ−１−Ｐが細胞外より細胞表面の受容体を介して作用する、いわゆる細胞間メッセンジャーとしての機能が解明されつつある。例えば、Ｓｐｈ−１−Ｐが細胞内のＩＰ３とは異なった部位からカルシウムを動員すること、ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ　ｔｏｘｉｎ感受性Ｇ蛋白質に依存性と非依存性の両方の細胞機構が存在し、それらを通してＭＡＰキナーゼの活性化やＤＮＡ合成の促進をもたらすことなどにより、作用点は細胞内ではなく細胞表面の受容体を介することが見出された。その受容体としては、Ｅｄｇ−１、Ｅｄｇ−３、Ｅｄｇ−５（ＡＧＲ１６／Ｈ２１８）、Ｅｄｇ−６、Ｅｄｇ−８遺伝子が近年クローニングされ、これらが特異的Ｓｐｈ−１−Ｐの受容体であることが報告された。その後の研究からＥｄｇ−５が血管平滑筋、心臓、腎臓、肺、肝臓などに特異的に分布することが明らかになった。さらにはこれらの臓器に対する病態モデルで、病態の進行に伴って、Ｅｄｇ−５のｍＲＮＡレベルでの増加が認められることを我々は見出した。このことによりＥｄｇ−５が夫々の臓器における疾患発現に関係していることが示唆された。
【０００５】
このようにＥｄｇ−５に特異的に作用することにより、動脈硬化症、腎臓、肺、肝臓組織の繊維化を防ぐ優れた治療薬の開発可能性が考えられ、また望まれている。
【０００６】
ところで、本願発明のごときピラゾロピリジン骨格を有する化合物としては、例えば、国際公開番号ＷＯ００／０６５４９に下記化合物が開示されている。
【化５】
2004123539.tif 000002
但し、その使用用途は除草剤である。
また、特開昭６１−１９７５８０号公報には、下記ピラゾロピリジン骨格を有する化合物が開示されている。
【化６】
2004123539.tif 000003
但し、その使用用途は除草剤である。
このように、ピラゾロピリジン骨格を有する化合物が、本願のごときＳｐｈ−１−Ｐ受容体に対して特異的に拮抗作用を有することや、かつそれらが繊維症治療薬として有用であるとの記載は全く無いばかりか、それらを示唆するデータの開示も全くない。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は上記課題に鑑み、スフィンゴシン−１−リン酸受容体（Ｅｄｇ−５）を特異的に阻害することにより、本受容体が関連する疾患を治療することを目的とする。具体的には、スフィンゴシン−１−リン酸受容体（Ｅｄｇ−５）が関連して起こる肝繊維症、肺繊維症、腎繊維症および動脈硬化症等の治療薬を探索すべく鋭意検討を行った。その結果、下記一般式（１）で示されるピラゾロピリジン化合物がスフィンゴシン−１−リン酸受容体（Ｅｄｇ−５）を特異的に拮抗することにより、有用な繊維症治療薬及び動脈硬化症治療薬となることを見出し、本発明を完成するに至った。
より詳しくは、下記（１）〜（１９）に示す通りである。
【０００８】
（１）　一般式（１）
【化７】
2004123539.tif 000004
〔式中、
Ｒ１はＣ１−６アルキル基、水素原子又は−ＣＯＲ７（ここで、Ｒ７はＣ１−６アルキル基、アリール基、アラルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、アリールオキシ基又はアラルキルオキシ基である）であり；
Ｒ２はＣ１−６アルキル基又はアリール基であり；
Ｒ３は水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、ハロアルキル基、Ｃ３−７シクロアルキル基又はアリール基であり；
Ｒ４は水素原子又はＣ１−６アルキル基であり；
Ｒ５及びＲ６は同一又は異なって、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、カルボキシル基、Ｃ２−６アルキニル基、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、ジＣ１−６アルキルアミノ基、アシル基、水酸基、アリールオキシ基、アラルキルオキシ基又は−ＣＯＮＨＲ８（ここで、Ｒ８はアリール基又はアラルキル基である）、であり；
Ｘは−ＮＲ９−（ここで、Ｒ９は水素原子、Ｃ１−６アルキル基又は−ＮＨＲ１０（ここで、Ｒ１０はカルボキシル基又はＣ１−６アルコキシカルボニル基である）である）、−Ｏ−、−Ｎ＝、−ＣＨ＝又は−ＣＨＲ１１−（ここで、Ｒ１１は水素原子又はＣ１−６アルキル基である）であり；
Ｙは−ＮＲ１２−（ここで、Ｒ１２は水素原子、Ｃ１−６アルキル基、アラルキル基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アラルキルオキシカルボニル基、又は−ＣＯＮＨＲ１３（ここで、Ｒ１３はアリール基又はアラルキル基である）、＝Ｎ−、−Ｎ＝、−ＣＨ２−、＝ＣＨ−、−Ｏ−、−ＣＯ−又は単結合であり；
Ｚは−ＣＯ−、−ＣＳ−、−ＣＨ２−、−Ｏ−又は単結合であり；
Ｗは−ＮＲ１４−（ここで、Ｒ１４は水素原子、Ｃ１−６アルキル基、アラルキルオキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基又はヘテロアリールＣ１−６アルキル基である）、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２−又は単結合であり；
【化８】
2004123539.tif 000005
は、二重結合又は一重結合であり；
Ａはアリール基、ヘテロアリール基又はシクロアルキル基である〕により示されるピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【０００９】
（２）Ｒ３、Ｒ４、
【化９】
2004123539.tif 000006
のピリジン環上の置換位置が、Ｒ３がｈ位、Ｒ４がｉ位、
【化１０】
2004123539.tif 000007
がｊ位である（１）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１０】
（３）Ｒ１がＣ１−６アルキル基であり、Ｒ２がＣ１−６アルキル基であり、Ｒ４が水素原子である（２）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１１】
（４）Ｙが−ＮＨ−又は＝Ｎ−であり、Ｚが−ＣＯ−であり、Ｗが−ＮＨ−である（３）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１２】
（５）環Ａがアリール基である（４）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１３】
（６）アリール基がフェニル基である（５）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１４】
（７）環Ａがヘテロアリール基である（４）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１５】
（８）ヘテロアリール基がピリジル基である（７）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１６】
（９）Ｘが−ＮＨ−又は−Ｎ＝である（５）乃至（８）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１７】
（１０）Ｘが−ＣＨ２−である（５）乃至（８）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１８】
（１１）Ｘが−Ｏ−である（５）乃至（８）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１９】
（１２）（１）乃至（１１）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩と医薬的に許容される担体を含有してなる医薬組成物。
【００２０】
（１３）（１）乃至（１１）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有するスフィンゴシン−１−リン酸受容体拮抗剤。
【００２１】
（１４）（１）乃至（１１）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する繊維症治療薬。
【００２２】
（１５）（１）乃至（１１）項記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する肝繊維症治療薬。
【００２３】
（１６）（１）乃至（１１）項記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する肺繊維症治療薬。
【００２４】
（１７）スフィンゴシン−１−リン酸受容体拮抗作用を有する化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有してなる繊維症治療薬。
【００２５】
（１８）スフィンゴシン−１−リン酸受容体拮抗作用を有する化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有してなる肝繊維症治療薬。
【００２６】
（１９）スフィンゴシン−１−リン酸受容体拮抗作用を有する化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有してなる肺繊維症治療薬。
【００２７】
本明細書において使用する各置換基の定義は次の通りである。
「ハロゲン原子」とは、塩素原子、臭素原子、フッ素原子等である。Ｒ５及びＲ６において好ましくは塩素原子又は臭素原子である。
【００２８】
「Ｃ１−６アルキル基」とは、炭素数１乃至６個の直鎖又は分枝してもよいアルキル基であり、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基又はヘキシル基等であり、好ましくは炭素数１乃至４個の直鎖又は分枝してもよいアルキル基である。特に好ましくはメチル基、エチル基、又はイソプロピル基である。Ｒ１において好ましくはメチル基であり、Ｒ２において好ましくはメチル基であり、Ｒ３において好ましくはメチル基、エチル基又はイソプロピル基であり、Ｒ４において好ましくはメチル基であり、Ｒ５及びＲ６において好ましくはメチル基又はエチル基であり、Ｒ７において好ましくはメチル基又はエチル基であり、Ｒ９において好ましくはメチル基であり、Ｒ１１において好ましくはメチル基であり、Ｒ１２において好ましくはメチル基であり、Ｒ１４において好ましくはメチル基である。
【００２９】
「Ｃ１−６アルコキシ基」とは、炭素数１乃至６個の直鎖又は分枝鎖アルコキシ基を表し、例えばメトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ペンチルオキシ基、ｔｅｒｔ−ペンチルオキシ基又はヘキシルオキシ基であり、好ましくは炭素数１乃至４個のメトキシ基、エトキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基である。特に好ましくはメトキシ基又はエトキシ基である。Ｒ３において好ましくはメトキシ基であり、Ｒ５及びＲ６において好ましくはメトキシ基又はエトキシ基であり、Ｒ７において好ましくはメトキシ基である。
【００３０】
「Ｃ１−６アルコキシカルボニル基」とは、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、ブトキシカルボニル基、イソブトキシカルボニル基又はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基等のアルキル部が炭素数１乃至５個であるアルコキシカルボニル基を表す。好ましくはメトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基又はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基である。Ｒ３、Ｒ５及びＲ６において好ましくはメトキシカルボニル基であり、Ｒ１０において好ましくはメトキシカルボニル基又はエトキシカルボニル基であり、Ｒ１２において好ましくはメトキシカルボニル基又はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基である。
【００３１】
「ハロアルキル基」とは、上記Ｃ１−６アルキル基が上記ハロゲン原子で置換されたものであり、例えばクロロメチル基、ブロモメチル基、フルオロメチル基、トリフルオロメチル基、トリクロロメチル基、トリブロモメチル基、トリクロロエチル基、ペンタフルオロプロピル基又はクロロブチル基等であり、好ましくはクロロメチル基、ブロモメチル基、フルオロメチル基、トリフルオロメチル基又はトリクロロメチル基である。特に好ましくは、トリフルオロメチル基である。Ｒ３、Ｒ５及びＲ６において好ましくは、トリフルオロメチル基である。
【００３２】
「Ｃ２−６アルキニル基」とは、炭素数２乃至６個の直鎖又は分枝してもよい基であり、例えばエチニル基、プロピニル基、ブチニル基、２−ペンチニル、３−ペンチニル、２−ヘキシニル基、３−ヘキシニル基等であり、好ましくは炭素数２乃至４個の直鎖又は分枝してもよいアルキニル基である。Ｒ５及びＲ６において好ましくは、エチニル基である。
【００３３】
「Ｃ１−６アルキルアミノ基」とは、炭素数１〜６個のアルキル基で一置換されたアミノ基を表し、例えばメチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、ブチルアミノ基等である。好ましくはメチルアミノ基又はエチルアミノ基等である。Ｒ５及びＲ６において好ましくは、メチルアミノ基又はエチルアミノ基である。
【００３４】
「ジＣ１−６アルキルアミノ基」とは、炭素数１〜６個のアルキル基で二置換されたアミノ基を表し、例えばジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基、ジブチルアミノ基等であり、好ましくはジメチルアミノ基又はジエチルアミノ基等である。Ｒ５及びＲ６において好ましくは、ジメチルアミノ基又はジエチルアミノ基である。
【００３５】
「アシル基」とは、炭素数１のホルミル基；炭素数２乃至６個のアセチル基、プロピオニル基、ブチリル基若しくはピバロイル基等のアルカノイル基；又はアリール基上に１乃至３個の置換基を有してもよいベンゾイル基等のアロイル基である。好ましくは、ホルミル基、アセチル基、ピバロイル基又はベンゾイル基である。Ｒ５及びＲ６において好ましくは、アセチル基である。
【００３６】
「アリール基」とは、フェニル基、ナフチル基、ビフェニル基等であり、好ましくはフェニル基である。ここで該アリール基は、１乃至３個の置換基により置換されてもよい。
ここで「１乃至３個の置換基により置換されてもよい」とは、該置換基は同一又は異なってもよく、また、置換基の位置は任意であって、特に制限されるものではない。具体的には、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等のＣ１−６アルキル基；水酸基；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基等のＣ１−６アルコキシ基；フッ素、塩素、臭素等のハロゲン原子；ニトロ基；シアノ基；ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基等のアシル基；ホルミルオキシ基、アセチルオキシ基、プロピオニルオキシ基等のアシルオキシ基；メルカプト基；メチルチオ基、エチルチオ基、プロピルチオ基、ブチルチオ基、イソブチルチオ基等のＣ１−６アルキルチオ基；アミノ基；メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、ブチルアミノ基等のＣ１−６アルキルアミノ基；ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基、ジブチルアミノ基等のジＣ１−６アルキルアミノ基；カルボキシ基；メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基等のＣ１−６アルコキシカルボニル基；アミド基；トリフルオロメチル基；メチルスルホニル基、エチルスルホニル基等のＣ１−６アルキルスルホニル基；アミノスルホニル基；シクロペンチル基、シクロヘキシル基等のＣ３−７シクロアルキル基；フェニル基；アセトアミド基、プロピオニルアミド基等のアシルアミド基等であり、好ましくは水酸基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、メルカプト基、Ｃ１−６アルキルチオ基、ハロゲン原子、トリフルオロメチル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、アシルアミド基である。
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３において好ましくは、フェニル基であり、Ｒ８において好ましくは、フェニル基又はハロゲン原子で置換されたフェニル基であり、Ｒ１３において好ましくは、フェニル基又はハロゲン原子で置換されたフェニル基であり、環Ａにおいて好ましくは、フェニル基である。
【００３７】
「アラルキル基」とは、アリール基がフェニル基（ここで該フェニル基は上記アリール基で述べた、１乃至３個の置換基により置換されてもよい）を意味し、かつアルキル部が炭素数１〜６個のアルキル基であるアリールアルキル基であって、ベンジル基、フェニルエチル基、フェニルプロピル基、フェニルブチル基又はフェニルヘキシル基等が挙げられ、好ましくはベンジル基又はフェニルエチル基である。Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１２及びＲ１４において好ましくは、ベンジル基である。
【００３８】
「アリールオキシ基」とは、フェノキシ基、ナフチルオキシ基等（ここで該フェニル基またはナフチル基は上記アリール基で述べた、１乃至３個の置換基により置換されてもよい）であり、好ましくは、フェノキシ基である。Ｒ５、Ｒ６及びＲ７において好ましくは、フェノキシ基である。
【００３９】
「アラルキルオキシ基」とは、ベンジルオキシ基、フェネチルオキシ基、フェニルプロピルオキシ基、フェニルブチルオキシ基等（ここで該フェニル基は上記アリール基で述べた、１乃至３個の置換基により置換されてもよい）のアルコキシ部が炭素数１〜４個であるアラルキルオキシ基であり、好ましくは、ベンジルオキシ基である。Ｒ５、Ｒ６及びＲ７において好ましくは、ベンジルオキシ基である。
【００４０】
「アリールオキシカルボニル基」とは、フェノキシカルボニル基、ナフチルオキシカルボニル基等（ここで該フェニル基またはナフチル基は上記アリール基で述べた、１乃至３個の置換基により置換されてもよい）であり、好ましくは、フェノキシカルボニル基である。Ｒ１２及びＲ１４において好ましくは、フェノキシカルボニル基である。
【００４１】
「アラルキルオキシカルボニル基」とは、ベンジルオキシカルボニル基、フェネチルオキシカルボニル基、フェニルプロピルオキシカルボニル基、フェニルブチルオキシカルボニル基等（ここで該フェニル基は上記アリール基で述べた、１乃至３個の置換基により置換されてもよい）のアルコキシ部が炭素数１〜４個であるアラルキルオキシカルボニル基であり、好ましくは、ベンジルオキシカルボニル基である。Ｒ１２及びＲ１４において好ましくは、ベンジルオキシカルボニル基である。
【００４２】
「Ｃ３−７シクロアルキル基」とは炭素数３乃至７個のシクロアルキル基を意味し、具体的にはシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、１−メチルシクロヘキシル、シクロヘプチル基である。好ましくは炭素数３乃至６個のシクロアルキル基であり、具体的にはシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基である。特に好ましくはシクロプロピル基又はシクロヘキシル基である。
Ｒ３において好ましくは、シクロプロピル基である。環Ａにおいて好ましくは、シクロヘキシル基である。
【００４３】
「ヘテロアリール基」とは、環を構成する原子として炭素原子以外に窒素原子、酸素原子、硫黄原子から選ばれる１乃至３個の複素原子を含む５乃至６員の芳香族複素環、飽和複素環、飽和複素環又はこれらの複素環とベンゼン環が縮合した縮合複素環を意味し、具体的には、チオフェン−２−イル基、チオフェン−３−イル基、フラン−２−イル基、フラン−３−イル基、ピロール−１−イル基、ピロール−２−イル基、ピロール−３−イル基、イミダゾール−１−イル基、イミダゾール−２−イル基、イミダゾール−４−イル基、ピラゾール−１−イル基、ピラゾール−３−イル基、ピラゾール−４−イル基、チアゾール−２−イル基、チアゾール−４−イル基、チアゾール−５−イル基、オキサゾール−２−イル基、オキサゾール−４−イル基、オキサゾール−５−イル基、イソオキサゾール−３−イル基、イソオキサゾール−４−イル基、イソオキサゾール−５−イル基、ピリミジン−２−イル基、ピリミジン−４−イル基、ピリミジン−５−イル基、ピリジン−２−イル基、ピリジン−３−イル基、ピリジン−４−イル基、ベンゾチオフェン−２−イル基、ベンゾチオフェン−３−イル基、ベンゾフラン−２−イル基、ベンゾフラン−３−イル基、インドール−２−イル基、インドール−３−イル基、ベンゾイミダゾール−１−イル基、ベンゾイミダゾール−２−イル基、ベンゾチアゾール−２−イル基、ベンゾオキサゾールゾール−２−イル基、キノリン−２−イル基、キノリン−３−イル基、キノリン−４−イル基、イソキノリン−１−イル基、イソキノリン−３−イル基、イソキノリン−４−イル基、１，３，４−チアジアゾール−２−基、モルホリン−４−イル基等である。
環Ａにおいて好ましくはピリジン−２−イル基、ピリジン−３−イル基、ピリジン−４−イル基、ベンゾオキサゾール−２−イル基、モルホリン−４−イル基等であり、特に好ましくは、ピリジン−３−イル基又はピリジン−４−イル基である。
【００４４】
「ヘテロアリールＣ１−６アルキル基」とは、ヘテロアリール基が上記ヘテロアリール基を意味し、かつアルキル部が炭素数１〜６個のアルキル基であるヘテロアリールアルキル基であって、例えば、ピリジニルメチル基（２−ピリジニルメチル基、３−ピリジニルメチル基、４−ピリジニルメチル基）、キノリニルメチル基（２−キノリニルメチル基等）、インドリルメチル基（２−インドリルメチル基、３−インドリルメチル基等）、チオフェン−２−イルメチル基、チオフェン−３−イルメチル基、２−フラニルメチル基、３−フラニルメチル基、１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルメチル基、ベンゾチアゾール−２−イルメチル基、、２−（チオフェン−２−イル）エチル基、２−（フラン−２−イル）エチル基等である。好ましくは、２−ピリジニルメチル基、３−ピリジニルメチル基、４−ピリジニルメチル基、３−ピリジニルエチル基、４−ピリジニルエチル基等である。Ｒ１４において好ましくは、３−ピリジニルエチル基である。
【００４５】
「プロドラッグ」とは、薬物分子を化学的に修飾した誘導体でそれ自体は生理活性を示さず、投与後体内で、もとの薬物分子に復元薬効を示すものをいう。
【００４６】
「製薬上許容される塩」とは、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩又は硝酸塩等の各種無機酸付加塩；酢酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、グリコール酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、シュウ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩又はアスコルビン酸塩等の各種有機酸付加塩；アスパラギン酸塩、又はグルタミン酸塩等の各種アミノ酸との塩が含まれるが、これらに限定されるものではない。また、場合によっては含水物、水和物あるいは溶媒和物であってもよい。
【００４７】
次に各種置換基又は置換位置についてより詳しく述べると以下の通りである。
Ｒ１において好ましくは、Ｃ１−６アルキル基であり、特に好ましくはメチル基である。
Ｒ２において好ましくは、Ｃ１−６アルキル基であり、特に好ましくはメチル基である。
Ｒ３において好ましくは、Ｃ１−６アルキル基、ハロアルキル基又はシクロアルキル基であり、特に好ましくはＣ１−６アルキル基である。
Ｒ４において好ましくは、水素原子である。
Ｒ３、Ｒ４、
【化１１】
2004123539.tif 000008
のピリジン環上の置換位置の好ましい例としては、Ｒ３がｈ位、Ｒ４がｉ位、
【化１２】
2004123539.tif 000009
がｊ位である。
Ｒ５及びＲ６において好ましくは、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルキニル基、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、ジＣ１−６アルキルアミノ基、アシル基、アリールオキシ基又はアラルキルオキシ基ある。
Ｘにおいて好ましくは、−ＮＲ９−（ここで、Ｒ９の好ましい例としては、水素原子又はＣ１−４アルキルであり、特に好ましくは水素原子である）、−Ｏ−、−Ｎ＝又は−ＣＨＲ１１−（ここで、Ｒ１１の好ましい例としては、水素原子又はＣ１−４アルキル基であり、特に好ましくは水素原子である）であり、特に好ましくは、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｎ＝又は−ＣＨ２−である。
Ｙにおいて好ましくは、−ＮＲ１２−（ここで、Ｒ１２の好ましい例としては、水素原子又はＣ１−６アルキル基であり、特に好ましくは水素原子である）、＝Ｎ−、−Ｎ＝、−ＣＨ２−、＝ＣＨ−、−Ｏ−又は−ＣＯ−であり、特に好ましくは、−ＮＨ−又は＝Ｎ−である。
Ｚにおいて好ましくは、−ＣＯ−、−ＣＳ−、−ＣＨ２−、−Ｏ−、＝ＣＲ１４−（ここで、Ｒ１４の好ましい例としては、水素原子である）であり、特に好ましくは、−ＣＯ−である。
Ｗにおいて好ましくは、−ＮＲ１５−（ここで、Ｒ１５の好ましい例としては、水素原子又はＣ１−６アルキル基であり、特に好ましくは、水素原子である）又は単結合であり、特に好ましくは、−ＮＨ−である。
環Ａにおいて好ましくは、アリール基又はヘテロアリール基であり、特に好ましくは、フェニル基、ピリジル基（ピリジン−２−イル基、ピリジン−３−イル基又はピリジン−４−イル基）である。
【００４８】
ここで本発明化合物は、場合によっては水和物又は溶媒和物であってもよく、またそのプロドラック化合物及び代謝物についても包含されるものである。
【００４９】
本発明を肝繊維症等の治療薬として用いる場合、全身的或いは局所的に、経口若しくは非経口で投与される。投与量は年齢、体重、症状、治療効果等により異なるが、通常成人一人当たり、１回に１０ｍｇ乃至１ｇの範囲で、１日１回乃至数回が投与される。
本発明化合物は、経口投与のための個体組成物及び液体組成物、若しくは非経口投与のための注射剤等の製剤とするために適当な希釈剤、分散剤、吸着剤、溶解剤等を混合することができる。
また、本発明化合物はヒトはもちろんのこと、ヒト以外の動物、特に哺乳類の治療及び予防にも用いることができる。
【００５０】
【発明の実施の形態】
次に、化合物（１）で表わされるピラゾロピリジン化合物の製造方法の一例を説明するが、本発明の製造方法はこれに限定されるものではない。
また、後述の反応を行う際に、当該部位以外の官能基については必要に応じてあらかじめ保護しておき、適当な段階においてこれを脱保護してもよい。
更に、各工程において、反応は通常行われる方法で行えばよく、単離精製は結晶化、再結晶化、カラムクロマトグラフィー、分取ＨＰＬＣ等の慣用される方法を適宜選択し、または組み合わせて行えばよい。
【００５１】
製造方法１乃至３
【化１３】
2004123539.tif 000010
【００５２】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＡは前記と同じであり、Ｘ１はハロゲン原子である）
【００５３】
製造方法１
一般式（１）で表される化合物が、Ｘが−ＮＨ−、−Ｎ＝；Ｙが−ＮＨ−；Ｚが−ＣＯ−；Ｗが−ＮＨ−、−ＣＯＮＨ−、−ＣＨ２−、−Ｏ−又は単結合等である場合について以下に例示する。
工程１−１
文献（Ｊ．　Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌ．　Ｃｈｅｍ．　１１，　４２３（１９７４）と同様の方法で、一般式（２）で表される化合物と一般式（３）で表される化合物をメタノール、エタノール、イソプロパノール等のアルコール系溶媒中で、加熱還流することにより、一般式（４）で表される化合物を得ることができる。
また、Ｈｅｌｖ．　Ｃｈｉｍ．　Ａｃｔａ　１６，　３０６（１９５８）、　Ａｎｇｅｗ．　Ｃｈｅｍ．　８６，　２３７（１９７４）、又は特開平５−１４０１１３号公報に開示された方法によっても同様に得ることができる。
なお、得られた化合物は単離することなく、次工程に用いることができる。
【００５４】
工程１−２
一般式（４）で表される化合物と一般式（５）で表される化合物を、硫酸、塩酸、蟻酸、酢酸、プロピオン酸、トシル酸又はメタンスルホン酸等の酸性触媒の存在下、加熱還流下で反応させることによって一般式（６）で表される化合物を得ることができる。
ここで、一般式（６）で表される化合物を一般式Ｘ１ＣＨ２ＣＯＯＭｅで表されるハロゲノ酢酸誘導体と反応させた後、更にメトキシ基を脱保護し、一般式（１８）
【化１４】
2004123539.tif 000011
と反応させることにより、Ｘ＝−Ｏ−、Ｙ＝−ＣＨ２−、Ｚ＝−ＣＯ−、Ｗ＝−ＮＨ−である化合物を得ることができる。
更に、
【化１５】
2004123539.tif 000012
がｈ位の化合物を所望の場合は、一般式（６）で表される化合物に、一般式（５）で表される化合物（但し、Ｒ３がアルコキシ基の場合）を反応させ、一般式
【化１６】
2004123539.tif 000013
で表される化合物とし、更にこの化合物を還元することにより、一般式
【化１７】
2004123539.tif 000014
で表される化合物を得ることができる。この化合物を後述の製造方法２−２乃至２−４と同様な反応に付すことにより、目的化合物を得ることができる。
【００５５】
工程１−３
一般式（６）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン、アニソール、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の非プロトン性溶媒中で、ベンゼン、トルエン、アニソール等のラジカルスカベンジャーの存在下又は非存在下、オキシ塩化リン、オキシ臭化リン等のオキシハロゲン化リン又は三塩化リン、五臭化リン等のハロゲン化リンと反応させることによって、一般式（７）で表される化合物を得ることができる。
ここで、一般式（７）で表される化合物を後述の製造方法４−１と同様の反応（但し、ジアミン化合物の代わりにアクリル酸誘導体を反応させる）に付した後、脱保護反応を行い、更に一般式（１８）で表される化合物と反応させることにより、Ｘが−ＣＨ＝で、Ｙが＝ＣＨ−の化合物を得ることができる。またこの化合物を還元することにより、Ｘが−ＣＨ２−で、Ｙが−ＣＨ２−の化合物を得ることができる
【００５６】
工程１−４
一般式（７）で表される化合物をメタノール、エタノール、イソプロパノール、ジメチルスルホキシド等の極性溶媒中で、ヒドラジン等のヒドラジン化合物と、加熱還流下に反応させることにより、一般式（８）で表される化合物を得ることができる。
【００５７】
工程１−５
一般式（９）で表される化合物を酢酸エチル、クロロホルム、アセトニトリル等の非プロトン系溶媒中、トリエチルアミン、ピリジン等の塩基の存在下、ジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）、水素化ナトリウム等のアジド化剤と反応させることにより、一般式（１０）で表される化合物を得ることができる。
また、一般式（９）で表される化合物を酸無水物または酸ハライドに導いた後、アジド化剤を作用させることによっても得ることができる。更に、一般式（９）で表される化合物をヒドラジドに導いた後、ジアゾ化することによっても得ることができる。
【００５８】
工程１−６
一般式（１０）で表される化合物を酢酸エチル、クロロホルム、ベンゼン、トルエン等の非プロトン性溶媒中、加熱し、クルチウス転位を起こすことにより、一般式（１１）で表される化合物を得ることができる。
なお、一般式（１１）で表される化合物は単離することなく、次工程に用いることができる。
また、一般式（１１）で表される化合物は、一般式（１８）で表される化合物に、ホスゲン、ジホスゲン等のホスゲン誘導体を作用させても得ることができる。
【００５９】
工程１−７
一般式（８）で表される化合物をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の非プロトン性溶媒中、一般式（１１）で表される化合物と反応させることにより、目的化合物の一つである一般式（１−１）で表される化合物を得ることができる。
また、一般式（１）におけるＷが単結合の化合物で環Ａがピリジル基の化合物を所望の場合は、一般式（８）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の非プロトン性溶媒中、一般式（１０）で表される化合物と反応させることにより、目的化合物を得ることができる。
また、一般式（１）におけるＷが単結合の化合物で環Ａがフェニル基の化合物を所望の場合は、一般式（８）で表される化合物をピリジン、トリエチルアミン等の塩基の存在下、テトラヒドロフラン、ベンゼン、クロロホルム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の非プロトン性溶媒中、一般式
【化１８】
2004123539.tif 000015
で表される化合物と反応させることにより、目的化合物を得ることができる。
更に、一般式（１）におけるＷが−ＣＯＮＨ−の化合物を所望の場合は、一般式（８）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン、メタノール等の溶媒中、水酸化ナトリウム、水酸化リチウム、水素化ナトリウム、水素化リチウム、ナトリウムメチラート等の塩基の存在下、一般式
【化１９】
2004123539.tif 000016
で表される化合物と反応させることにより、目的化合物の一つであるＷが−ＣＯＮＨ−の化合物を得ることができる。
また、一般式（１）におけるＷが−ＣＨ２−の化合物を所望の場合は、一般式
【化２０】
2004123539.tif 000017
を、Ｗが−Ｏ−の化合物を所望の場合は、一般式
【化２１】
2004123539.tif 000018
を反応させることにより目的化合物を得ることができる。
また、Ｚ及びＷが単結合化合物を所望の場合は、反応性の高いヘテロアリールハライド（例えば２−ハロゲノベンズイミダゾール）を反応させることにより、目的化合物を得ることができる。
更に、Ｘが−Ｎ＝であり、Ｙが＝Ｎ−で表される化合物を所望の場合は、一般式（１−１）で表される化合物にピリジン、水酸化ナトリウム等の塩基の存在下、非水又は含水溶媒中でＮ−ブロモスクシンイミド、臭素等の酸化剤を作用させることにより得ることができる。
【００６０】
製造方法２
一般式（１）で表される化合物が、Ｘが−ＣＨ２−；Ｙが−ＮＨ−；Ｚが−ＣＯ−；Ｚが−ＮＨ−等である場合について以下に例示する。
工程２−１
一般式（７）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ジエチルエーテル、ヘキサン等の非プロトン性溶媒中、ｎ−ブチルリチウム、ｔｅｒｔ−ブチルリチウム、ｓｅｃ−ブチルリチウム等の強塩基、または、金属リチウム等のアルカリ金属を作用させ、ジメチルホルムアミド、ホルミルピペリジン、ヘキサメチレンテトラミン等のホルミル化剤によりホルミル化することにより、　一般式（１２）で表される化合物を得ることができる。
ここで更に、一般式（１２）で表される化合物をソジウム、ボロヒドリドのような還元剤で還元した後、一般式（１１）で表される化合物を反応させれば、Ｘが−ＣＨ２−、Ｙが−Ｏ−、Ｚが−ＣＯ−、Ｗが−ＮＨ−である化合物を得ることができる。
【００６１】
工程２−２
一般式（１２）で表される化合物をメタノール、エタノール、イソプロパノール、１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン等の極性溶媒中、又はこれらと水との混合溶媒中、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、ピリジン等の塩基の存在下に、ヒドロキシルアミン塩酸塩等のヒドロキシルアミン類化合物と反応させることにより、　一般式（１３）で表される化合物を得ることができる。
ここで更に、一般式（１３）で表される化合物にピリジン、トリエチルアミン等の塩基の存在下、アシルハライド又は一般式（１１）で表される化合物を反応させることにより、Ｘが−ＣＨ＝、Ｙが＝Ｎ−、Ｚが−Ｏ−、Ｗが−ＣＯ−或は−ＮＨＣＯ−である化合物を得ることができる。
【００６２】
工程２−３
一般式（１３）で表される化合物を酢酸等の酸溶媒中、亜鉛、鉄等の還元剤により還元、または、メタノール、エタノール等のアルコール性溶媒中、金属ナトリウム、酸化白金等で還元、或はアルコール性溶媒中、クロロホルムの存在下で酸化白金等で還元することにより、一般式（１４）で表される化合物を得ることができる。
【００６３】
工程２−４
工程１−７と同様にして、一般式（１４）で表される化合物と一般式（１１）で表される化合物を反応させることにより、目的化合物の一つである一般式（１−２）で表される化合物を得ることができる。
【００６４】
製造方法３
一般式（１）で表される化合物が、Ｘが−Ｏ−、Ｙが−ＮＨ−、Ｚが−ＣＯ−、Ｚが−ＮＨ−である場合について以下に例示する。
工程３−１
一般式（７）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン、メタノール、ジメチルホルムアミド等の極性溶媒中、ｔｅｒｔ−ブトキシカリウム、ナトリウムメトキシド、水酸化ナトリウム、水酸化リチウム、水素化ナトリウム、水素化リチウム、ｎ−ブチルリチウム等の強塩基の存在下、Ｎ−ヒドロキシアセチミデート等のＮ保護ヒドロキシアミン化合物と反応させることにより、　一般式（１５）で表される化合物を得ることができる。
【００６５】
工程３−２
一般式（１５）で表される化合物をメタノール、エタノール、テトラヒドロフラン等の極性溶媒、又は水との混合溶媒中、塩酸、硫酸、リン酸等の酸を用いて、加水分解することにより、　一般式（１６）で表される化合物を得ることができる。
【００６６】
工程３−３
工程１−７と同様にして、一般式（１６）で表される化合物と一般式（１１）で表される化合物を反応させることにより、目的化合物の一つである一般式（１−３）で表される化合物を得ることができる。
【００６７】
製造方法４乃至７
【化２２】
2004123539.tif 000019
【００６８】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ａ及びＸ１は前記と同じであり、Ｐｈはフェニル基であり、Ｒ１２’はＣ１−６のアルコキシカルボニル基、アラルキルオキシカルボニル基又はアリールオキシカルボニル基であり、Ｒ１４”はＣ１−６のアラルキルオキシカルボニル基又はアリールオキシカルボニル基である）
【００６９】
製造方法４
一般式（１）で表される化合物が、Ｘが−ＮＨ−；Ｙが−ＣＨ２−又は単結合；Ｚが−ＣＨ２−又は単結合；Ｗが−ＮＨ−又は単結合である場合について以下に例示する。
工程４−１
文献（Ｊ．Ｏｒｇ．　Ｃｈｅｍ．　６１，　７２４０（１９９６））と同様の方法で一般式（７）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン、ジメトキシエタン等の非プロトン性溶媒中、触媒として、パラジウム金属錯体及び２，２−ビス（ジフェニルフォスヒィノ）−１，１’−ビナフチル等の配位子及び過剰のｔｅｒｔ−ブトキシナトリウム等の強塩基の存在下、エチレンジアミン等のジアミン化合物と反応させることにより、　一般式（１７）で表される化合物を得ることができる。
【００７０】
工程４−２
一般式（１７）で表される化合物を工程４−１と同様の方法で一般式（１８）で表される化合物を反応することにより、目的化合物の一つである　一般式（１−４）で表される化合物を得ることができる。
【００７１】
製造方法５
一般式（１）で表される化合物が、Ｘが−ＣＨ２−、Ｙが−ＮＨ−、Ｚが−ＣＯ−、Ｗが−ＮＲ１４’−（ここで、Ｒ１４’はＣ１−６アルキル基である）で場合について以下に例示する。
工程５
一般式（１４）で表される化合物を文献（Ｓｙｎｔｈ．　Ｃｏｍｍｕｎ．　２６，　３３１（１９９６））と同様の方法で得られた一般式（１９）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の非プロトン性溶媒中で反応させることにより、目的化合物の一つである　一般式（１−５）で表される化合物を得ることができる。尚、この反応においては、一般式（１９）で表される化合物の代わりに、例えば一般式（２２）
【化２３】
2004123539.tif 000020
（ここで、Ｒ１４’はＣ１−６アルキル基である）で表されるカルボニルハライド等価体を用いることもできる。
【００７２】
製造方法６
一般式（１）で表される化合物が、Ｘが−ＣＨ２−、Ｙが−ＮＲ１２’　（ここで、Ｒ１２’はアルキルオキシカルボニル基、アラルキルオキシカルボニル基又はアリールオキシカルボニル基である）−、Ｚが−ＣＯ−、Ｗが−ＮＨ−である場合について以下に例示する。
工程６−１
一般式（１−２）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン等の非プロトン性溶媒中、ｎ−ブチルリチウム、ｓｅｃ−ブチルリチウム、ｔｅｒｔ−ブチルリチウム等の塩基と反応させた後、アシル化剤である一般式（２０）で表される化合物を反応させることにより、目的化合物の一つである一般式（１−６）で表される化合物を得ることができる。
【００７３】
製造方法７
一般式（１）で表される化合物が、Ｘが−ＣＨ２−；Ｙが−ＮＲ１４”−（ここで、Ｒ１４”はアラルキルオキシカルボニル基又はアリールオキシカルボニル基である）または−ＮＨ−；Ｚが−ＣＯ−；Ｗが−ＮＲ１４”−（ここで、Ｒ１４”はアラルキルオキシカルボニル基又はアリールオキシカルボニル基である）である場合について以下に例示する。
工程７−１
一般式（１−２）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン等の非プロトン性溶媒中、リチウムテトラメチルジシラジド等の強塩基と反応させ、アシル化剤である一般式（２１）で表される化合物と反応させることにより、　一般式（１−７）、（１−７’）で表される化合物を得ることができる。
【００７４】
【実施例】
実施例１
Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）アミノ−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素
ａ）５−アミノ−１，３−ジメチルピラゾール
β―アミノクロトノニトリル（２５３．２８ｇ）及びメチルヒドラジン（１４２．１０ｇ）をイソプロパノール（０．９Ｌ）に溶解し、この溶液を４時間窒素気流下で穏やかに加熱還流した。反応溶液を濃縮し、さらにトルエンでイソプロパノールを共沸し粗精製物（３１０ｇ）を得た。これにトルエン（１Ｌ）を加え、加熱溶解した後、活性炭（３１．１ｇ）で処理することにより５−アミノ−１，３−ジメチルピラゾール（２６８．７４ｇ）を淡褐色結晶として得た。この結晶をさらに精製することなく、次の反応に用いた。
【００７５】
ｂ）１Ｈ−６−ヒドロキシ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン
エチルイソブチリルアセテート（３８２．５０ｇ）のプロピオン酸（３６２ｍＬ）溶液に実施例１のａ）で得られた５−アミノ−１，３−ジメチルピラゾール（２６８．７４ｇ）を溶解し、２３時間加熱還流した。放冷後、酢酸エチル（１．３Ｌ）を加え、１時間加熱還流した。徐冷後、析出した結晶を濾取し酢酸エチルで洗浄し、減圧乾燥することにより、１Ｈ−６−ヒドロキシ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（９１．３６ｇ）を白色結晶として得た。
【００７６】
ｃ）１Ｈ−６−ブロモ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン
オキシ臭化リン（１００ｇ）のアニソール（２５０ｍＬ）溶液に、実施例１のｂ）で得られた１Ｈ−６−ヒドロキシ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（４８．６７ｇ）を溶解し、１３０℃の油浴下で、３時間攪拌した。放冷後、トルエン（４００ｍＬ）を加え、氷冷下、水で過剰のオキシ臭化リンを反応させた。有機層を１Ｎ炭酸カリウム及び飽和食塩水で、洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮することにより、１Ｈ−６−ブロモ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（１１８．６６ｇ）をオイルとして得た。この粗精製物を精製することなく、次の反応に用いた。
【００７７】
ｄ）１Ｈ−６−ヒドラジノ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン
ヒドラジン（１１３ｍＬ）のエタノール（２３０ｍＬ）溶液に実施例１のｃ）で得られた１Ｈ−６−ブロモ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの粗精製物（１１８．６６ｇ）を溶解し、１１０℃の油浴下で、２３時間加熱攪拌した。放冷後、氷浴下で４時間攪拌し、析出した１Ｈ−６−ヒドラジノ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンを濾取した。５０％エタノール水溶液で、洗浄後、６０℃で減圧乾燥することにより、１Ｈ−６−ヒドラジノ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（３９．４５ｇ）を白色結晶として得た。
【００７８】
ｅ）２，６−ジクロロピリジン−４−カルボニルアジド
２，６−ジクロロイソニコチン酸（４０．４５ｇ）とトリエチルアミン（３８ｍＬ）を酢酸エチル（４００ｍＬ）に溶解し、この溶液にＤＰＰＡ（５０ｍＬ）を氷冷下滴下し、室温で２０時間攪拌した。酢酸エチルを加え、希釈した後、水及び飽和食塩水で洗浄した。これを硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮し、２，６−ジクロロピリジン−４−カルボニルアジドの粗精製物（７０．８０ｇ）を得た。この粗結晶を酢酸エチルに溶解し、活性炭で処理することにより、２，６−ジクロロピリジン−４−カルボニルアジド（４５．６７ｇ）を結晶として得た。
【００７９】
ｆ）Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）アミノ−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素実施例１のｅ）で得られた２，６−ジクロロピリジン−４−カルボニルアジド（４２．４１ｇ）をトルエン（４１０ｍＬ）に溶解し、この溶液を１００℃で４時間攪拌した。放冷後、実施例１のｄ）で得られた１Ｈ−６−ヒドラジノ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（３９．４５ｇ）のＴＨＦ（４１０ｍＬ）溶液を加え、室温で１８時間攪拌した後、濃縮し、粗精製物（１２９．５９ｇ）を得た。これを酢酸エチル−ＴＨＦ（５：１）に溶解し、活性炭で処理後、酢酸エチルで再結晶することにより、Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）アミノ−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素（４２．７４ｇ）を白色結晶として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，δｐｐｍ，ＣＤＣｌ３）
１．３３（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．６２（３Ｈ，ｓ），３．５４（１Ｈ，ｓｅｐｔｅｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），３．９１（３Ｈ，ｓ），６．４３（１Ｈ，ｓ），６．４５（１Ｈ，ｓ），６．５７（１Ｈ，ｓ），７．５０（２Ｈ，ｓ），８．１０（１Ｈ，ｓ）
ＦＡＢ（＋）ＭＳ（低分解能、ｍ／ｚ）　４０８
ｍ．ｐ．　２２２−２２５℃
【００８０】
実施例１−２〜１−９５
実施例１と同様にして実施例１−２〜１−９４の化合物を得た。得られた化合物を表１〜６に示した。
【００８１】
【表１】
2004123539.tif 000021
【００８２】
【表２】
2004123539.tif 000022
【００８３】
【表３】
2004123539.tif 000023
【００８４】
【表４】
2004123539.tif 000024
【００８５】
【表５】
2004123539.tif 000025
【００８６】
【表６】
2004123539.tif 000026
【００８７】
実施例２
Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）アミノ−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素　メタンスルホン酸塩
実施例１で得られたＮ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）アミノ−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素（３８６ｍｇ）をアセトン（２ｍＬ）に熱時溶解し室温まで冷却後、メタンスルホン酸（６５μＬ）を加え、室温で１日放置した。生じた結晶を濾取し、減圧乾燥することによって、Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）アミノ−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素　メタンスルホン酸塩（３７６ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，δｐｐｍ，ＤＭＳＯ）
１．２６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．３９（３Ｈ，ｓ），２．４９（３Ｈ，ｓ），２．５０（３Ｈ，ｓ），３．４４（１Ｈ，ｓｅｐｔｅｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），６．３９（１Ｈ，ｓ），６．９６（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），　７．８１（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），８．８７（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）
ｍ．ｐ．　１７８−１７９℃
【００８８】
実施例２−２〜２−７
実施例２と同様にして実施例２−２〜２−７の化合物を得た。得られた化合物を表７に示した。
【００８９】
【表７】
2004123539.tif 000027
【００９０】
実施例３
Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）メチル−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素
ａ）１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イルアルデヒド
１Ｈ−６−ブロモ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（１０．９１ｇ）をＴＨＦ（１６０ｍＬ）に溶解し、この溶液にドライアイス−エタノ−ル浴下で、ｎ−ブチルリチウムのｎヘキサン溶液（３２．５ｍＬ）を滴下した。滴下５分後、ジメチルホルムアミド（４．７ｍＬ）を加え、ドライアイス−エタノ−ル浴下で２．５時間攪拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、室温で攪拌した。得られた有機層を、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で洗浄した。これを硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して濃褐色のオイル（８．８５ｇ）を得た。さらにシリカゲルカラム精製することにより、１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イルアルデヒド（３．６５ｇ）を得た。
【００９１】
ｂ）１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イルアルドキシム
実施例３のａ）で得られた１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イルアルデヒド（３．６５ｇ）とヒドロキシルアミン塩酸塩（２．４１ｇ）及び炭酸カリウム（２．４４ｇ）をエタノール（７０ｍＬ）、水（３５ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、これを室温で３日間攪拌した。これに酢酸エチルを加え、水、飽和食塩水で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮して得られた粗結晶をイソプロピルエーテルで再結晶することにより、１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イルアルドキシム（２．４７ｇ）を得た。
【００９２】
ｃ）１Ｈ−６−アミノメチル−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン
実施例３のｂ）で得られた１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イルアルドキシム（２．４８ｇ）を亜鉛（６．９８ｇ）の存在下に、酢酸（８５ｍＬ）に溶解し、このけん濁液を水浴下で１時間攪拌した。亜鉛をハイフロスーパーセルを用いて濾去し、濾液を濃縮した。濃縮液を酢酸エチルで希釈し、１Ｎ炭酸カリウム及び飽和重曹水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮することにより、１Ｈ−６−アミノメチル−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（０．７９ｇ）を淡黄色オイルとして得た。
【００９３】
ｄ）Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）メチル−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素
１Ｈ−６−ヒドラジノ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの代わりに、実施例３のｃ）で得られた１Ｈ−６−アミノメチル−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンを用い、実施例１のｆ）と同様の方法でＮ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）メチル−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，δｐｐｍ，ＣＤＣｌ３）
１．３６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．６８（３Ｈ，ｓ），３．６０（１Ｈ，ｓｅｐｔｅｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），３．９４（３Ｈ，ｓ），４．６５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），６．３０（１Ｈ，ｓ），６．８９（１Ｈ，ｓ），　７．４２（２Ｈ，ｓ），８．１０（１Ｈ，ｓ）
ＦＡＢ（＋）ＭＳ（低分解能、ｍ／ｚ）　４０７
ｍ．ｐ．　２３３−２３６℃
【００９４】
実施例３−２〜３−３３
実施例３と同様にして実施例３−２〜３−３３の化合物を得た。得られた化合物を表８、９に示した。
【００９５】
【表８】
2004123539.tif 000028
【００９６】
【表９】
2004123539.tif 000029
【００９７】
実施例４
Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）オキシ−Ｎ’−３，５−ジクロロフェニル　尿素
ａ）エチル　Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）オキシアセチミデート
エチル　Ｎ−ヒドロキシアセチミデート（１．２６ｇ）をジメチルホルムアミド（３５ｍＬ）に溶解し、氷冷下、ｔｅｒｔ−ブトキシカリウム（１．３６ｇ）を加え、２．５時間氷冷で攪拌した。この溶液に１Ｈ−６−ブロモ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（１．２０ｇ）のジメチルホルムアミド（２５ｍＬ）溶液を氷冷下加え、室温で１９時間攪拌した。これに水を加えた後、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮することにより、エチル　Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）オキシアセチミデート（１．２７ｇ）を得た。
【００９８】
ｂ）Ｏ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）ヒドロキシルアミン
実施例４のａ）で得られたエチル　Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）オキシアセチミデート（１．０６ｇ）をメタノール（９ｍＬ）に溶解し、この溶液に２０．５Ｎ硫酸（０．９ｍＬ）を加え、室温で２．５時間攪拌した。１Ｎ炭酸ナトリウムで中和後、酢酸エチルで抽出した。有機層を重曹水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮することにより、Ｏ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）ヒドロキシルアミン（７８１ｍｇ）を得た。
【００９９】
ｃ）Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）オキシ−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素１Ｈ−６−ヒドラジノ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの代わりに、実施例４のｂ）で得られたＯ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）ヒドロキシルアミンを用い、実施例１のｆ）と同様の方法でＮ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）オキシ−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，δｐｐｍ，ＣＤＣｌ３）
１．３６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．６４（３Ｈ，ｓ），３．５７（１Ｈ，ｓｅｐｔｅｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），３．９５（３Ｈ，ｓ），６．６２（１Ｈ，ｓ），７．５１（２Ｈ，ｓ），７．８２（１Ｈ，ｓ），８．８５（１Ｈ，ｓ）
ＦＡＢ（＋）ＭＳ（低分解能、ｍ／ｚ）　４０９
アモルファス
【０１００】
実施例４−２〜４−２２
実施例４と同様にして実施例４−２〜４−２２の化合物を得た。得られた化合物を表１０、１１に示した。
【０１０１】
【表１０】
2004123539.tif 000030
【０１０２】
【表１１】
2004123539.tif 000031
【０１０３】
薬理試験
試験例（１）
ｈＡＧＲ１６発現ＣＨＯ膜に対する３Ｈ−Ｓｈｐ−１−Ｐ結合抑制試験
ｈＡＧＲ１６発現ＣＨＯ細胞をダルベッコ改変イーグルＭＥＭ（低グルコース、　１０％　ウシ胎児血清、　１０μｇ／ｍｌ　ピューロマイシン）培地中で培養し、細胞が密になった時に無血清培地（０．３％　牛血清アルブミン、　ダルベッコ改変イーグルＭＥＭ、低グルコース）に交換し、一晩培養した。その後細胞をはがし、テフロンホモジナイザーで破砕した後、１００，０００Ｇで１時間×２回超遠心を行った。得られた膜画分を凍結保存し、以下の実験に用いた。
被検物質（最終ＤＭＳＯ（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ　ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）濃度は１．０％）１２５μｌを２４穴プレートに添加した後、３Ｈ標識Ｓｈｐ−１−Ｐ　（最終濃度２ｎＭ）を１２５μｌ添加した。最後に、ｈＡＧＲ１６膜（最終濃度１００μｇ／ｗｅｌｌ）を２５０μｌ添加した。２時間４℃で攪拌後、ハーベスター（ＰＡＣＫＡＲＤ）でＧＦ／Ｂ　フィルターにトラップした。これを乾燥後、マイクロシンチを添加し、Ｔｏｐ　Ｃｏｕｎｔ（ＰＡＣＫＡＲＤ）で放射活性を測定した。化合物無添加（Ｔｏｔａｌ　ｂｉｎｄｉｎｇ）および化合物の代わりに最終濃度１０μＭの非標識　Ｓｈｐ−１−Ｐ添加（Ｎｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｂｉｎｄｉｎｇ）との差を１００％とし、被検物質の活性は、放射活性の抑制率からＩＣ５０を求めた。
【０１０４】
試験例（２）
ｒＡＧＲ１６およびｈＥｄｇ３発現ＣＨＯ膜に対する３Ｈ−Ｓ１Ｐ結合抑制試験
膜画分の調製、被検物質の評価方法は（１）と同じとした。
【０１０５】
試験例（３）
Ｓｈｐ−１−Ｐ刺激ヒト正常肺線維芽細胞（ＨＬＦ）増殖抑制試験
ＨＬＦ（２０００ｃｅｌｌｓ／２００μｌ／ｗｅｌｌ）を９６穴プレートに捲き込み、ＲＰＭＩ１６４０　１０％ウシ胎児血清培地を用い　２日間３７℃で培養した。その後ＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　Ｂｕｆｆｅｒｄ　Ｓａｌｉｎｅ）で細胞を洗浄後、ウシ胎児血清を含まないＲＰＭＩ培地に交換し、１日培養した。さらに、被検物質（最終濃度１０−３Ｍ〜１０−５Ｍ，最終ＤＭＳＯ濃度は０．１％）８μｌを添加した後、Ｓｈｐ−１−Ｐ　（最終濃度１μＭ）を５０μｌ添加した。１８時間後に３Ｈ標識チミジンを添加し、さらに６時間後、ハーベスター（ＰＡＣＫＡＲＤ）でＧＦ／Ｂ　フィルターにトラップした。これを乾燥後、マイクロシンチを５０μｌ添加し、Ｔｏｐ　Ｃｏｕｎｔ（ＰＡＣＫＡＲＤ）で放射活性を測定した。被検物質の活性は、化合物非添加群に対して５０％の放射活性を示す値をＩＣ５０として評価した。
上記試験例（１）〜（３）の試験結果を表１２に示した。
【０１０６】
【表１２】
2004123539.tif 000032
【０１０７】
試験例（４）
ＤＭＮ肝炎試験
ＳＤラット（ＳＬＣ　雄６Ｗ）に、ＤＭＮ（Ｎ−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ　ｎｉｔｒｏｓｏａｍｉｎｅ）を１２μｌ／ｍｌとなるように生食で希釈したものを０、１、２、７、８、９日目に腹腔内投与（１ｍｌ／ｋｇ）した。被検化合物は３、１０、３０　ｍｇ／ｋｇで１日２回経口投与、またポジティブコントロールとして抗ＴＧＦ−β抗体５ｍｇ／ｋｇを０、３、７、１０日目に静脈内投与し、１４日目に解剖した。肝臓を摘出してＯＨ−Ｐｒｏｌｉｎｅ定量用に約１００ｍｇの切片を切り分け、残りをホルマリン中に保存した。
ＯＨ−Ｐｒｏｌｉｎｅ量測定は以下のようにして行った。アセトン中で２日間以上脱脂・脱水を行い、真空デシケーター内で乾燥させて乾重量を測定した肝切片を、テフロンライナーキャップ付ガラス試験管に入れ、５ｍｌの６ＮＨＣｌを添加して１１８℃で２４時間加水分解した。６５℃で加温しながら窒素ガスを吹き付けてＨＣｌを蒸発・乾固した後、１ｍＬの純水に溶解してＯＨ−Ｐｒｏｌｉｎｅ定量用サンプルとした。０．５ｍｌのサンプル溶液に３ｍｌのクエン酸−リン酸緩衝溶液、０．５ｍｌの過ヨウ素酸溶液を加えて混和し、さらに１．７５ｍｌのトルエン抽出液を加えて室温で１時間振盪した後、１５００　ｒｐｍ、１０分間遠心した。有機層０．６ｍｌを試験管に分取してエールリッヒ試薬０．１５ｍｌを添加し、室温で４５分間放置した後、５６５　ｎｍの吸光度を測定した。ＯＨ−Ｐｒｏｌｉｎｅ量は、組織サンプルの乾燥重量で補正した値で示した。
上記試験例（４）の試験結果を表１３に示した。
【０１０８】
【表１３】
2004123539.tif 000033
【０１０９】
【発明の効果】
上記試験から明らかなとおり、本発明の新規化合物及びその製薬上許容される塩は、Ｅｄｇ５レセプターに対して選択的に作用する。また、Ｓｐｈ−１−Ｐ刺激ヒト正常肺繊維芽細胞の増殖を有意に抑制した。さらに、ＤＭＮ肝炎モデルにおいても、コラーゲン（繊維症の主な原因）に含有されるヒドロキシプロリン（ＯＨ−Ｐｒｏｌｉｎｅ）の量を有意に抑制した。よって本願発明化合物は、Ｅｄｇ−５レセプターが特異的に存在する血管平滑筋、腎臓、肺、肝臓組織に関する治療薬、特にこれらの組織の繊維化を防ぐ優れた治療薬として有用である。