(57)【要約】【課題】簡便で信頼性の高い慢性アレルギー反応の試験方法、およびそれに基づく、抗アレルギー薬、特に慢性アレルギー疾患治療薬（またはその候補化合物）を選抜または評価するための、簡便で信頼性の高い、慢性アレルギー炎症抑制活性の試験方法を提供する。【解決手段】特定の分子に特異的なＩｇＥ抗体を保有する高ＩｇＥ状態の動物に、当該分子を複数もつことからなる多価抗原を投与することにより第三相のアレルギー反応を誘起し、この抗原投与と比較して時間的に先、同時または後に前記動物に被検化合物を投与し、この被検化合物による前記アレルギー反応の抑制の有無または程度を測定または評価すること、を特徴とする、慢性アレルギー反応抑制活性の試験方法。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
特定の分子に特異的なＩｇＥ抗体を保有する高ＩｇＥ状態の動物に、当該分子を複数もつことからなる多価抗原を投与し、前記抗原投与の結果として生じる第三相のアレルギー反応の有無または程度を測定または評価すること、を特徴とする、慢性アレルギー反応の試験方法。
【請求項２】
特定の分子に特異的なＩｇＥ抗体を保有する高ＩｇＥ状態の動物に、当該分子を複数もつことからなる多価抗原を投与することにより第三相のアレルギー反応を誘起し、この抗原投与と比較して時間的に先、同時または後に前記動物に被検化合物を投与し、この被検化合物による前記アレルギー反応の抑制の有無または程度を測定または評価すること、を特徴とする、被検化合物の慢性アレルギー反応抑制活性の試験方法。
【請求項３】
多価抗原が、５価〜２０価である、請求項１または２記載の方法。
【請求項４】
多価抗原が、５価〜１４価である、請求項３記載の方法。
【請求項５】
多価抗原が、５価〜１１価である、請求項４記載の方法。
【請求項６】
多価抗原の特定の分子が、ＴＮＰ（トリニトロフェニル）基またはＤＮＰ（ジニトロフェニル）基である、請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
高ＩｇＥ状態の動物が、トランスジェニックマウスである、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
アレルギー反応が、三相性耳介肥厚反応である、請求項１〜７のいずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、生理活性化合物の活性を試験するための方法に関する。特に、本発明は、アレルギー反応を抑制する活性を有する化合物の選抜のためのスクリーニング方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
アレルギー疾患には、急性疾患と慢性疾患とがあり、その病理的メカニズムは異なっている。近年、アトピー性疾患等の慢性アレルギーの罹患が増加し、問題となっている。
【０００３】
アレルギー疾患の研究および治療薬の開発等のためのモデル動物は、通常、抗原（例えば卵白アルブミン）とアジュバント（例えば水酸化アルミニウムゲル）とを腹腔内に投与することにより動物を免疫して作製することができる。この動物の例えば皮内に抗原を投与すると、投与後２０分〜１時間をピークとする即時性（第１相）のアレルギー反応と、数時間後〜２４時間後をピークとする遅発性（第２相）のアレルギー反応とが惹起される。
【０００４】
しかし、この動物におけるアレルギー反応の経過は、高々２４時間に過ぎない。このようなアレルギーモデルを用いてスクリーニングされ、一般にアレルギー疾患治療薬として用いられている薬剤であっても、慢性アレルギー疾患について真に有効かどうかは不明である。ある疾患に対して実際には効果のない薬剤を投与することは、患者の健康にとって何ら利益がないだけでなく、むしろ不要な副作用を与える場合もあり、望ましくない。また、社会的医療コストの経済性の面からも、避けるべき損失である。さらに、前記のようなアレルギーモデルを用いた試験において有効性が認められない薬剤であっても、慢性アレルギー疾患に対しては有効である可能性もある。そのような薬剤が見逃されることは、疾患の治療の可能性を制限し、患者にとって重大な不利益である。
【０００５】
したがって、慢性アレルギー疾患治療および／または予防薬のスクリーニングおよび評価のためには、慢性アレルギーのためのモデルの作製および試験方法の開発が課題となっている。
【０００６】
非特許文献１（Ｔａｈａｒａら）は、マウスにジニトロフェニル（ＤＮＰ）特異的ＩｇＥを予め投与し、耳介にジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）を塗布することにより、１時間後、２４時間後および８日後をピークとする三相性の耳介肥厚が生じることを報告している。また、マウスをＤＮＰ−オブアルブミン（ＯＶＡ）で免疫し、耳介にＯＶＡを皮内投与することにより、同様の耳介肥厚が生じることも報告している。しかし、耳介に投与する抗原の価数に関しては記載がない。
【０００７】
非特許文献２（Ｔｏｒｉｇｏｅら）は、マウスＢ細胞株またはラット好塩基球株を用い、細胞内カルシウム濃度と抗原上のハプテン密度との関係について報告している。しかし、慢性アレルギー疾患との関わりについては記載されていない。
【０００８】
非特許文献６には、トリニトロフェニル（ＴＮＰ）特異的ＩｇＥトランスジェニックマウスに多価ＴＮＰ−ＯＶＡ抗原を投与し、三相性耳介肥厚の第三相の反応を抑制するかどうかについて、ヒスタミン拮抗薬および免疫抑制薬の効果を調べること、およびアトピー性皮膚炎に有効なシクロスポリンが第三相の反応を抑制することが記載されている。しかし、この試験に有効なＴＮＰの価数については具体的に記載されていない。
【０００９】
【非特許文献１】
Ｔａｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａ  ｔｈｉｒｄ−ｐｈａｓｅ  ｃｕｔａｎｅｏｕｓ（ｖｅｒｙ  ｌａｔｅ  ｐｈａｓｅ）  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ａｆｔｅｒ  ｅｌｉｃｉｔａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｄｉｎｉｔｒｏｆｌｕｏｒｏｂｅｎｚｅｎｅ  ｉｎ  ｐａｓｓｉｖｅｌｙ  ｏｒ  ａｃｔｉｖｅｌｙ  ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄ  ｍｉｃｅ”  Ａｌｌｅｒｇｏｌｏｇｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（１９９９）４８：２６５−２７３
【非特許文献２】
Ｔｏｒｉｇｏｅ  ａｎｄ  Ｎａｋａｎｉｓｈｉ，“Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｒｅａｌｔｉｍｅ  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｌｃｉｕｍ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ”  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（１９９６）４９：１６９−１７４
【非特許文献３】
Ａｋｅｔａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ａ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＩｇＥ  ｕｓｉｎｇ  ｍａｓｔ  ｃｅｌｌｓ    ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｌｃｉｕｍ”  Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．（２０００）７２：２６５３−２６５８
【非特許文献４】
Ｔａｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｓｙｃｈｏｓｏｃｉａｌ  ｓｔｒｅｓｓ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ＩｇＥ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｔｒｉｐｈａｓｉｃ  ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ：  ａｎｔａｇｏｎｉｓｍｂｙ  Ｙｏｋｕｋａｎ−ｓａｎ（ａ  Ｋａｍｐｏ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ）  ａｎｄ  ｄｉａｚｅｐａｍ”  Ａｌｌｅｒｇｏｌｏｇｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（２００１）５０：２１１−２２２
【非特許文献５】
Ｓａｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｅｆｆｅｃｔｏｆ  ａｎｔｉａｌｌｅｒｇｉｃ  ｄｒｕｇｓ  ｏｎ  ＩｇＥ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｓｓｉｖｅｌｙ  ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄ  ｍｉｃｅ”  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  （２０００）６０：９７−１０４
【非特許文献６】
佐藤英一郎、平原一樹、烏山一、白石明郎著、「アトピー性皮膚疾患モデル遺伝子改変マウス」、臨床免疫３６巻４号、５５２〜５５７頁、２００１年１０月
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、簡便で信頼性の高い慢性アレルギー反応の試験方法、およびそれに基づく、抗アレルギー薬、特に慢性アレルギー疾患治療薬（またはその候補化合物）を選抜または評価するための、簡便で信頼性の高い、慢性アレルギー炎症抑制活性の試験方法を提供することを目的とする。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、特定の分子に特異的なＩｇＥ抗体を高レベルで保有する動物、特に特定の分子に特異的なＩｇＥ抗体を常時発現するＩｇＥトランスジェニックマウスと、対応する当該分子を複数もつことからなる多価抗原とを用い、抗原の価数が慢性アレルギー反応の発現に関与していることを見出した。そして、このような高ＩｇＥ状態の動物に、ＩｇＥ抗体と特異的に結合する分子を複数もつ多価抗原を投与することにより、測定または評価可能なアレルギー反応（例えば炎症反応）が誘起されること、そして、被検化合物がこの反応を抑制するかどうかを判定すれば、高ＩｇＥに起因する慢性アレルギー疾患抑制活性を有する化合物のスクリーニングが可能であることを見出し、本発明を完成した。
【００１２】
本発明の方法は、ひとつの態様において、特定の分子に特異的なＩｇＥ抗体を保有する高ＩｇＥ状態の動物に、当該分子を複数もつことからなる多価抗原を投与し、前記抗原投与の結果として生じる第三相のアレルギー反応の有無または程度を測定または評価すること、を特徴とする慢性アレルギー反応の試験方法である。
【００１３】
また、本発明の方法は、別の態様において、特定の分子に特異的なＩｇＥ抗体を保有する高ＩｇＥ状態の動物に、当該分子を複数もつことからなる多価抗原を投与することにより第三相のアレルギー反応を誘起し、この抗原投与と比較して時間的に先、同時または後に前記動物に被検化合物を投与し、この被検化合物による前記アレルギー反応の抑制の有無または程度を測定または評価すること、を特徴とする被検化合物の慢性アレルギー反応抑制活性の試験方法である。
【００１４】
本発明の前記第一および第二の態様において、多価抗原は、好ましくは５価〜２０価、より好ましくは５〜１４価であり、さらに好ましくは５〜１１価である。さらに、多価抗原の特定の分子は、好ましくはＴＮＰ基またはＤＮＰ基である。
【００１５】
また、本発明の前記第一および第二の態様において、前記高ＩｇＥ状態の動物は、好ましくはトランスジェニックマウスであり、更に、前記アレルギー反応は、好ましくは三相性耳介肥厚反応である。
【００１６】
【発明の実施の形態】
本発明の方法においては、特定の分子に特異的なＩｇＥ抗体を高レベルで有する動物を用いる。特定の分子に特異的なＩｇＥ抗体は、ある特定の分子（免疫原）で複数回免疫することにより、動物において高レベルな状態まで高めることができる。また、特定の分子に特異的なＩｇＥ抗体を高レベルで有する動物は、動物を受動感作することによっても作り出すことができる。この場合、具体的には、例えば正常動物に、特定の分子に特異的なＩｇＥ抗体を静脈内投与する。更に、特定の分子に対して特異的なＩｇＥを常時高レベルで産生するように遺伝的に改変されたトランスジェニック動物を作製することによっても、特定の分子に特異的なＩｇＥ抗体を高レベルで有する動物を得ることができる。トランスジェニック動物の作製は、例えば、特開平１１−２２０９７５号公報に記載されたようにして行うことができる。トランスジェニック動物は、一度作製すれば生まれつき高ＩｇＥ状態となるため、多数の動物を必要とする場合等に作業の労力を軽減するためおよび動物間の差を低減するためには、トランスジェニック動物の使用が好ましい。
【００１７】
本発明において「動物」という場合は、ヒトを含まない。すなわち、本発明において使用される動物は、ヒト以外の動物であって、ＩｇＥを介してアレルギー反応を生じ得るものであればよい。繁殖・維持・作業の容易さ・コスト等の点からは、通常は小動物が好ましく、特に実験動物として一般に多く用いられるもの、例えばウサギ、ラット、マウス等が好ましい。マウスは特に好ましい。
【００１８】
本発明において「高ＩｇＥ状態」とは、動物が血清中に実質的に高レベルのＩｇＥを保有する状態を意味する。具体的には、高ＩｇＥ状態の動物の血清中ＩｇＥレベルは、１μｇ／ｍｌ以上、一般に５μｇ／ｍｌ以上、好ましくは１０〜５０μｇ／ｍｌである。血清中ＩｇＥ濃度は、ＥＬＩＳＡ法等の、当該技術分野において周知または公知の方法によって容易に測定することができる。
【００１９】
抗原としては、特に限定されないが、特にＩｇＥと特異的に結合することができる任意の分子（「特定の分子」）を含むものが使用される。抗原は、本発明において使用される動物が通常は産生しない物質であり、天然物由来であっても人工的な物質であってもよい。例えば、花粉、真菌、ダニ、ハウスダスト、動物の皮膚・糞・体毛等、昆虫、食品、寄生虫等に由来する各種のアレルゲン、抗原性を有する薬品・化学物質等、２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）等のＴＮＰ基を有する物質等の、種々の公知のアレルゲン、ハプテンを含む抗原を用いることができる。本発明において使用される抗原に含まれる特定の分子は、好適にはハプテンであり、より好適にはＴＮＰ基またはＤＮＰ基のようなハプテン分子である。
【００２０】
本発明においては、抗原は多価である。「多価」とは、抗原１分子あたりの前記のような特定の分子の数が２以上であることをいう。本発明において使用される抗原は、一般に５価以上が好適であり、好ましくは５〜２０価、より好ましくは５〜１４価、最も好ましくは５〜１１価である。
【００２１】
本発明において「第三相のアレルギー反応」とは、例えば特定の分子に対して特異的なＩｇＥ抗体を予め投与しておいた動物の皮膚に、対応する当該分子を含む抗原を投与した場合に、時間の早い順に第一相（即時相）、第二相（遅発相）および第三相の炎症反応が起こるが、この第三相の反応のように、抗原投与後に非常に遅れて起こるアレルギー反応を意味する。第三相のアレルギー反応は、皮膚に限らず、他の組織または細胞において生じるものであってもよい。反応の有無の判定、程度の測定・評価の容易さの点からは、皮膚において生じ、視覚的に判定可能な反応が好ましい。このような反応の例としては、耳介肥厚などが挙げられる。
【００２２】
第三相のアレルギー反応について、その有無、程度の測定・評価は、公知のいずれの手段によって行ってもよい。例えば、皮膚において認められる反応を、肉眼によって判定してもよく、腫脹の範囲や程度を器具によって測定してもよく、あるいは組織切片を作製し、それについて顕微鏡観察や各種の測定を行ってもよい。
【００２３】
本発明の第二の態様においては、被検化合物について慢性アレルギー反応抑制活性の有無および／またはその強さを試験することができる。例えば、公知の抗アレルギー薬について、慢性アレルギーに対する効果を確認することができ、あるいは、抗慢性アレルギー薬としての開発候補化合物について可能性が高いものをスクリーニングすることができる。被検化合物は、本発明の方法に使用する動物を第三相のアレルギー反応について判定不能にしない限りにおいて、いかなる種類および濃度のものであってもよく、合成由来であるか、天然物由来であるかを問わない。また、本発明において被検化合物は、単離された化合物のほか、混合物も含む。例えば、抗ヒスタミン薬、免疫抑制剤、ステロイド、酵素阻害剤のような一般に抗アレルギー作用があることが公知の化合物、植物エキスのような天然物由来の混合物等であることができる。本発明においては、被検化合物として、前記のような物質を、一種単独で投与してもよく、あるいは二種以上の組み合わせで投与してもよい。
【００２４】
高ＩｇＥ状態の動物に対する被検化合物の投与は、抗原投与と比較して時間的に先、同時または後のいずれであってもよい。先に投与する場合、例えば、高ＩｇＥ状態の動物に多価抗原を投与する数日前〜前日までの間または当日に、１回または２回以上投与することができる。あるいは、高ＩｇＥ状態の動物として使用される動物がトランスジェニック動物ではない場合には、動物を高ＩｇＥ状態にする前に被検化合物を投与してもよい。また、後に投与する場合、抗原投与の直後〜第三相のアレルギー反応が起こった後の間のいずれかの時点で１回または２回以上投与することができる。
【００２５】
２回以上投与する場合においては、投与が、抗原投与の前および後、前および同時、同時および後、あるいは前、同時および後にわたってもよい。更に、二種以上の被検化合物を組み合わせて投与する場合、それらを一緒に同じ時点で１回または２回以上投与してもよく、あるいはそれぞれ単独で別個の時点に投与してもよい。本発明の方法においては、被検化合物の投与時期を適宜選択することによって、慢性アレルギーに対する予防的効果・治療的効果のいずれか一方または両方について調べることができる。投与経路は、経口、静脈内、外用（塗布）等の、公知の任意の経路であることができ、被検化合物の種類・量等に応じて当業者が適宜選択することができる。
【００２６】
被検化合物の慢性アレルギー反応抑制活性の判定は、本発明の第一の態様について説明したのと同様の手段で行うことができる。通常は、被検化合物を投与しないこと以外は同じ条件である動物における第三相のアレルギー反応の程度と比較する。
【００２７】
【実施例】
実施例および試験例により、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２８】
１．抗原価数の選択
種々の価数のＴＮＰ‐ＯＶＡを用いて、慢性アレルギー抑制活性の試験について最適な価数を決定した。
【００２９】
（１）ＴＮＰ‐ＯＶＡ
３３．３ｍｇ／ｍｌのＯＶＡ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ）水溶液１．５ｍｌに、０．１Ｍ  Ｎａ２ＢＯ３（和光純薬工業株式会社）緩衝液（ｐＨ９．３）２．５ｍｌ、ＴＮＢＳ（ナカライテスク株式会社）水溶液１ｍｌおよび１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３水溶液１０ｍｌを加えた後、遮光、室温下で一晩放置した。ＴＮＢＳ溶液の濃度は、ＯＶＡ：ＴＮＢＳのモル比が１：１０あるいは１：２となるよう調整した。反応物をＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５カラム（ＰＤ−１０、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分画し、分光光度計にてＡ２８０およびＡ３４０を測定し、ＯＶＡ１分子あたりのＴＮＰの価数を算出した。価数は１０（ＴＮＰ１０−ＯＶＡ）および２（ＴＮＰ２−ＯＶＡ）であった。
【００３０】
また、１１、８または５個のＴＮＰ分子が結合したＯＶＡ（ＴＮＰ１１−、ＴＮＰ８−、ＴＮＰ５−ＯＶＡ）はＢｉｏｓｅａｒｃｈ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．より購入した。
【００３１】
（２）慢性アレルギー反応の誘発
ＩｇＥトランスジェニックマウスは、特開平１１−２２０９７５号公報に記載されたようにして作製し、維持した。動物（ＩｇＥトランスジェニックマウス）をジエチルエーテルで軽麻酔し、右耳皮内に生理食塩水に溶解した前記の各ＴＮＰ−ＯＶＡ（０．１ｍｇ／ｍｌ）を、左耳皮内に陰性対照として同様に調製したＯＶＡ溶液を、それぞれ１０μｌずつ投与した。投与後、投与部位の厚みをダイヤルシックネスゲージ（株式会社尾崎製作所）を用いて経時的に測定した。試験は一群４匹で行った。
【００３２】
（３）結果
いずれの動物も、ＯＶＡ溶液を投与した左耳には投与前と比較して有意な耳厚の変化は見られなかった。ＴＮＰ−ＯＶＡ溶液を投与した右耳についての測定値を、平均値±標準誤差で表した。結果を図１および図２に示す。ＴＮＰ１１−、ＴＮＰ１０−またはＴＮＰ８−ＯＶＡを投与した場合には、２０分後をピークとした即時性のアレルギー反応、８時間後をピークとした遅発性のアレルギー反応に続き、４日後をピークとした第三相のアレルギー反応が顕著に誘発された。また、ＴＮＰ５−ＯＶＡを投与した場合も、わずかではあるが第三相のアレルギー反応が認められた。ＴＮＰ２−ＯＶＡを投与した場合には、即時相および遅発相が誘発されたが、第三相はほとんど見られなかった。
【００３３】
なお、１価のＴＮＰ−ＯＶＡは第三相のアレルギー反応をまったく誘起しなかった（データは示していない）。また、前記と同様の実験において１μｇのＴＮＰ２−ＯＶＡを投与した場合には反応がほとんど見られないのに対し、０．１μｇのＴＮＰ１１−ＯＶＡを投与した場合の反応は非常に顕著であることも判明した（データは示していない）。
【００３４】
したがって、第三相のアレルギー反応の誘起には、惹起に用いた特定の分子の量（ＴＮＰ基の総数）自体が重要なのではなく、当該特定の分子が多価抗原となっていることが必要であること、そして、第三相のアレルギー反応は投与した多価抗原の価数に依存して発現し、５価以上、好ましくは５〜１４価、最も好ましくは５〜１１価の抗原が慢性アレルギーのモデル状態を誘起するのに最適であることがわかった。
【００３５】
２．慢性アレルギー抑制活性の試験
既に抗アレルギー薬として臨床使用中または開発中の薬剤について、本発明の方法により慢性アレルギー反応に対する抑制効果を調べた。具体的には、ＴＮＰ特異的ＩｇＥを常時高発現（血清中ＩｇＥ量１０〜３０μｇ／ｍｌ）するトランスジェニックマウスに、抗原投与の前日から、表１に示す各薬剤を１日１回（外用は２回）投与した。対照として、薬剤を投与しないこと以外は全く同様に維持した動物も用意した。
【００３６】
抗原投与は、動物をジエチルエーテルによって軽麻酔し、右耳皮内に生理食塩水に溶解したＴＮＰ１１−ＯＶＡ溶液（０．１ｍｇ／ｍｌ）を、左耳皮内にＯＶＡ溶液を（対照）、それぞれ１０μｌずつ投与することによって行った。投与部位の耳の厚みをダイヤルシックネスゲージで経時的に測定した。試験は一群４匹で行った。いずれの動物も、ＯＶＡ溶液を投与した左耳には投与前と比較して有意な耳厚の変化は見られなかった。右耳については、薬剤を投与しなかった動物と比較して各薬剤を投与した動物の抗原投与４日後の右耳厚の変化率を抑制率として示した。すなわち、抑制率（％）＝〔１−（投与群の右耳厚−投与群の左耳厚）／（対照群の右耳厚−対照群の左耳厚）〕×１００である。
【００３７】
結果を表１に示す。
【００３８】
【表１】
2004198156.tif 000002
【００３９】
以上のデータから、強力な抗炎症剤である吉草酸ベタメタゾンは、第三相のアレルギー反応の抑制においても非常に効果的であったが、抗アレルギー薬として汎用されるクロモグリク酸ナトリウムおよび強力な抗ヒスタミン剤であるフマル酸ケトチフェンはほとんど効果を示さなかったことがわかる。したがって、慢性アレルギーの抑制には従来のアレルギーモデルによって模倣され得るものとは異なるメカニズムが働いている場合があり、本発明の方法によれば、慢性アレルギーの治療および予防に従来のものよりも効果的な薬を選抜することができる。
【００４０】
【発明の効果】
本発明によれば、簡便で信頼性の高い慢性アレルギー反応の試験方法、およびそれに基づく、抗アレルギー薬、特に慢性アレルギー疾患治療薬（またはその候補化合物）を選抜または評価するための、簡便で信頼性の高い、慢性アレルギー炎症抑制活性の試験方法が提供される。
【００４１】
本発明の方法によれば、従来の抗アレルギー薬スクリーニング方法を用いる場合に起こり得る、慢性アレルギー疾患について真に有効でない薬剤を投与することによる患者の健康に対する不利益や社会的医療コストの損失を回避し、かつ、慢性アレルギー疾患に対しては有効である薬剤の見落としを防ぎ、慢性アレルギーの治療および予防に真に効果的な薬を選抜することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】多価抗原による第三相のアレルギー反応の誘発を示す図である。
【図２】抗原の価数による４日目における耳の厚みの比較を示す図である。
【図１】
2004198156.tif 000003
【図２】
2004198156.tif 000004