(57)【要約】【課題】ヒアルロン酸合成酵素の活性を促進して、ヒアルロン酸の生合成を促進する薬剤を提供する。【解決手段】ヒアルロン酸合成促進剤の有効成分として下記式１で表されるＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン含有糖ベンジル誘導体を使用する。【化１】2004051579.tif 000006式中Ａｃはアセチル基を示し、Ｒ１はＨ、単糖残基又は多糖残基を示し、ＸはＯ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ２を示し、Ｒ２はＨ又はベンゼン環の置換基（ハロゲン原子、ヒドロキシル基、ニトロ基、硫酸基、アルキル基、アシル基）を示す。【選択図】　　　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式１で表される化合物を有効成分として含有することを特徴とするヒアルロン酸合成促進剤。
【化１】
2004051579.tif 000005
式中Ａｃはアセチル基を示し、Ｒ１はＨ、単糖残基又は糖鎖残基を示し、ＸはＯ、Ｓ、ＮＨ、又はＣＨ２を示し、Ｒ２はＨ、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、ニトロ基、硫酸基、アルキル基、又はアシル基を示す。
【請求項２】
Ｒ１がＨ又はＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン残基であることを特徴とする請求項１記載のヒアルロン酸合成促進剤。
【請求項３】
ＸがＯであることを特徴とする請求項１又は２記載のヒアルロン酸合成促進剤。
【請求項４】
Ｒ２がＨであることを特徴とする請求項１乃至３何れか一項記載のヒアルロン酸合成促進剤。
【請求項５】
ヒアルロン酸合成酵素の活性を増強することを特徴とする請求項１乃至４何れか一項記載のヒアルロン酸合成促進剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、「Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン残基又はそれを含む糖鎖のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン残基」に「置換基を有することもあるベンジル基」が結合した、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン含有糖ベンジルグリコシド誘導体を使用したヒアルロン酸合成促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
本明細書中で表記する糖及び糖残基は、特記しない限り全てＤ体である光学異性体を示すものとする。
【０００３】
ヒアルロン酸はグリコサミノグリカンの一種であり、グルクロン酸（以下「ＧｌｃＵＡ」とも記載する）とＮ−アセチルグルコサミン（以下「ＧｌｃＮＡｃ」とも記載する）とが１，３グリコシド結合で結合した二糖を繰り返し単位とし、これが１，４グリコシド結合で連なった基本骨格を有する。ヒアルロン酸は、保水性に極めて優れ、その水溶液は粘弾性を有する。その様な特殊な性質を生かし、関節炎のための医薬品や癒着防止材などの医療用具としてヒアルロン酸は応用されている。従って、ヒアルロン酸の合成を促進する物質は、生体のヒアルロン酸量を増加させたり、微生物によるヒアルロン酸合成を促進するために極めて有用である。
【０００４】
生体組織または培養細胞でヒアルロン酸の合成を促進する物質の例としては、ＧｌｃＮＡｃ（特開２００１−２５５１）や　Ｎ−Ｍｅｔｈｙｌ−Ｌ−Ｓｅｒｉｎｅ　（Ｓａｋａｉ　Ｓ．，　Ｓａｙｏ　Ｔ．，　Ｋｏｄａｍａ　Ｓ．，　Ｉｎｏｕｅ　Ｓ．，　Ｓｋｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ａｐｐｌ　Ｓｋｉｎ　Ｐｈｙｓｉｏｌ　１９９９；１２：２７６−２８３）　が知られている。一方、ヒアルロン酸の生体内での合成は種々のサイトカイン類により促進され、生体内でも特にヒアルロン酸含量が多い軟骨細胞や皮膚の繊維芽細胞でヒアルロン酸合成酵素（以下「ＨＡＳ」とも記載する：ＨＡＳには３種類のアイソザイムが存在することが知られており、各々ＨＡＳ１、ＨＡＳ２、及びＨＡＳ３と呼ばれている）によって合成がなされていることが知られている（Ｎｉｓｈｉｄａ　Ｙ．，　Ｄ’Ｓｏｕｚａ　ＡＬ．，　Ｔｈｏｎａｒ　ＥＪＭ．，　Ｋｎｕｄｓｏｎ　Ｗ，　Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　＆　Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，ｖｏｌ．４３．，　ｎｏ．６，　Ｊｕｎｅ，　２０００，：酒井、佐用　ＦＲＡＧＲＡＮＣＥ　ＪＯＵＲＮＡＬ　臨時増刊　　ｎｏ．１７　ｐｐ４８−５５　２０００　）。しかし、このような生体由来物質以外の物質でヒアルロン酸の合成を大幅に促進する物質は知られていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
ヒアルロン酸の合成を促進する物質は、上述のような用途を有するヒアルロン酸を効率よく製造するために有用であり、またそのようなヒアルロン酸合成を促進する物質を使用したヒアルロン酸合成促進剤を生体内に投与して所望の効果が得られれば、外的にヒアルロン酸の投与を行わなくても、患者の自然治癒力を生かした治療が可能となる。従って、そのような新たなヒアルロン酸合成促進剤が期待されていた。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は上記課題を解決するために、鋭意検討を行なった結果、驚くべきことにグリコシダーゼ基質として公知であった「『ＧｌｃＮＡｃ又はそれを含む糖鎖』と『置換基を有することもあるベンジル基』とがグリコシド結合で結合した、ＧｌｃＮＡｃ含有糖ベンジルグリコシド誘導体」が、ヒアルロン酸の合成を有意に促進することを見い出し、これをヒアルロン酸合成促進剤の有効成分として応用することにより本発明を完成した。
【０００７】
すなわち本発明は以下の通りである。
（１）　下記式１で表される化合物を有効成分として含有することを特徴とするヒアルロン酸合成促進剤。
【０００８】
【化２】
2004051579.tif 000002
【０００９】
式中Ａｃはアセチル基を示し、Ｒ１はＨ、単糖残基又は糖鎖残基を示し、ＸはＯ、Ｓ、ＮＨ、又はＣＨ２を示し、Ｒ２はＨ、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、ニトロ基、硫酸基、アルキル基、又はアシル基を示す。
（２）　Ｒ１がＨ又はＮ−アセチルグルコサミン残基であることを特徴とする（１）記載のヒアルロン酸合成促進剤。
（３）　ＸがＯであることを特徴とする（１）又は（２）記載のヒアルロン酸合成促進剤。
（４）　Ｒ２がＨであることを特徴とする（１）乃至（３）何れか記載のヒアルロン酸合成促進剤。
（５）　ヒアルロン酸合成酵素の活性を増強することを特徴とする（１）乃至（４）何れか記載のヒアルロン酸合成促進剤。
【００１０】
【発明の実施の形態】
以下本発明を発明の実施の形態により詳説する。
本発明促進剤は、下記式１で表されるＧｌｃＮＡｃ含有糖ベンジルグリコシド誘導体を有効成分として含有することを特徴とするヒアルロン酸合成促進剤である。
【００１１】
【化３】
2004051579.tif 000003
【００１２】
上記式中Ａｃはアセチル基を示し、Ｒ１はＨ、単糖残基又は糖鎖残基を示し、ＸはＯ、Ｓ、ＮＨ、又はＣＨ２を示し、Ｒ２はＨ、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、ニトロ基、硫酸基、アルキル基、又はアシル基を示す。
【００１３】
本発明促進剤の有効成分である「式１で示されるＧｌｃＮＡｃ含有糖ベンジルグリコシド誘導体」を構成する糖残基又は糖鎖残基部分（上記式中「単糖残基又は糖鎖残基部分」と示した部分）は、ＧｌｃＮＡｃ残基自体又はそれを含む糖鎖残基である。この糖鎖残基はＧｌｃＮＡｃ残基が含まれている限りに於いて特に限定はされないが、２糖から６糖の残基であることが好ましく、特に２糖の残基であることが好ましい（すなわちＲ１が単糖残基であることが好ましい）。そして最も好ましい糖鎖残基はＲ１がＧｌｃＮＡｃであるキトビオース（以下「（ＧｌｃＮＡｃ）２」とも記載する）である。式１における「単糖残基又は糖鎖残基部分」がキトビオースであるＧｌｃＮＡｃ含有糖ベンジルグリコシド誘導体を使用した場合には、「単糖残基又は糖鎖残基部分」が他の糖鎖である糖ベンジルグリコシド誘導体を使用する場合に比して、より優れたヒアルロン酸合成促進作用を発揮する点で好ましい。
【００１４】
さらに、より顕著なヒアルロン酸合成促進効果を発揮させるためには、上記式１中の「単糖残基又は糖鎖残基部分」は糖鎖残基よりも単糖残基の方が好ましい。すなわち、上記式中Ｒ１はＨ（水素原子）であることが最も好ましい。
上記式中Ｒ２の例としてはヒドロキシル基、ハロゲン原子、ニトロ基、硫酸基、アルキル基、アシル基、ケトン基、及びＨ（水素原子）が例示され、その中でも特にＨ（水素原子）が好ましい。Ｒ２がヒドロキシル基、ハロゲン原子、ニトロ基、硫酸基、アルキル基、アシル基、又はケトン基であるＮ−アセチルグルコサミン含有糖ベンジルグリコシド誘導体は、Ｒ２がＨであるＮ−アセチルグルコサミン含有糖ベンジルグリコシド誘導体のベンジル基のＨを常法に従ってヒドロキシル基、ハロゲン原子、ニトロ基、硫酸基、アルキル基、アシル基、又はケトン基に置換することで得ることが可能である。
【００１５】
上記式１における、「単糖残基又は糖鎖残基部分」と「非置換又は置換ベンジル基部分」との結合は、「単糖残基又は糖鎖残基部分」のＧｌｃＮＡｃ残基の１位炭素原子を介したグリコシド結合であり、これはα−グリコシド結合であってもβ−グリコシド結合であっても良く、何れにも限定はされない。また、グリコシド結合には例えば通常のグリコサミノグリカンの基本骨格に存在するＯ−グリコシド結合の他、Ｏ（酸素原子）部分がＳ（硫黄原子）、ＮＨ（イミノ基）、又はＣＨ２（メチレン基）に各々置換したＳ−グリコシド結合、Ｎ−グリコシド結合、及びＣ−グリコシド結合も存在する。グリコシド結合はこれらの中でも特にＯ−グリコシド結合であることが好ましい。ヒアルロン酸の基本骨格中でのグリコシド結合はＯ−グリコシド結合であり、Ｏ−グリコシド結合を有するＮ−アセチルグルコサミン含有糖ベンジルグリコシド誘導体は顕著にヒアルロン酸合成を促進するからである。すなわち、上記式中、ＸはＯ、Ｓ、ＮＨ及びＣＨ２が例示されるが、最も好ましくはＯである。
従って、最も好ましい糖ベンジルグリコシド誘導体は、下記式２で示される物質である。
【００１６】
【化４】
2004051579.tif 000004
【００１７】
式中、Ａｃはアセチル基を示す。なお、波線部がα−Ｏ−グリコシド結合である上記物質を以下「ＧｌｃＮＡｃ−α−ｏＢｎ」とも記載し、β−Ｏ−グリコシド結合である上記物質を以下「ＧｌｃＮＡｃ−β−ｏＢｎ」とも記載する。
【００１８】
本発明促進剤のヒアルロン酸合成促進活性は、本発明促進剤非共存下でのヒアルロン酸合成と比して単位時間あたりのヒアルロン酸合成量を増加させるものである限りにおいて特に限定はされないが、その中でも特に本明細書中の実施例１に記載された方法によってそのヒアルロン酸合成促進活性を測定した際に、対照と比して単位時間あたり２０％以上のヒアルロン酸の合成量を増加させるものであることが好ましい。
【００１９】
本発明促進剤の作用機序は特に限定はされないが、ヒアルロン酸合成酵素の活性を増強することによってヒアルロン酸合成を促進することが好ましい。本発明促進剤が活性を増強する酵素は特にＨＡＳであることが好ましく、ＨＡＳ２であることが最も好ましいがこれに限定はされない。また本発明促進剤が活性を増強するＨＡＳの由来は特定されず、例えばヒト、マウス、ラットなどほ乳類由来のＨＡＳが好ましい例として挙げられるが、ヒアルロン酸を合成する酵素である限りにおいて原核生物由来のＨＡＳであっても良い。
【００２０】
自然界では動物及び微生物においてヒアルロン酸の合成はＨＡＳが担っており、産業的には動物及び微生物により生産されるヒアルロン酸が利用されている。従ってこの活性を増強することでより効率的にヒアルロン酸を生産させることができ、またヒトを初めとする動物の生体へ投与することでヒアルロン酸の合成促進による各種の有益な効果を得ることができるからである。
【００２１】
本発明促進剤がＨＡＳの活性を増強していることは、ヒアルロン酸合成をほとんど行わない培養細胞に対してＨＡＳ遺伝子を組み込み、その組換体におけるヒアルロン酸合成の変化を、本発明促進剤を添加して観察することで明らかとすることが可能である。そのような方法としては例えば本明細書中における実施例１及び２に記載した方法が挙げられる。
【００２２】
ｉｎ　ｖｉｔｒｏでヒアルロン酸を合成させる場合の本発明促進剤の使用方法は、例えば培養細胞、微生物等の培養の際、その培地に本発明促進剤を添加する方法が挙げられる。このような場合においては、本発明促進剤を例えば１００ｎＭ乃至１０００ｍＭ、好ましくは１ｍＭ乃至５００ｍＭ、最も好ましくは１０ｍＭ乃至１００ｍＭで培地に添加する方法が挙げられる。このような濃度の範囲内においては本発明促進剤のヒアルロン酸合成促進効果が極めて顕著だからである。また、本発明促進剤は無細胞系でのヒアルロン酸合成の促進のためにも使用することも可能である。
【００２３】
また本発明促進剤には、上述した式１のＧｌｃＮＡｃ含有糖ベンジルグリコシド誘導体の他に、緩衝剤、水、薬学的に許容されうる補助剤（担体、賦形剤、希釈剤、ｐＨ調節剤、緩衝剤、張度調節剤、湿潤剤、安定化剤、無機塩類、界面活性剤、消泡剤、糖類、糖アルコールなど）、または他の薬効を有する薬剤、成長因子などと混合して複合的な作用を示す医薬組成物として、温血動物（ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、サル、チンパンジー、ウサギ、ラット、ハムスター、マウス等、好ましくはヒト、サル、チンパンジー、最も好ましくはヒト）へ、非経口的又は経口的に投与することが可能である。この場合においては、本発明促進剤を例えば１０ｎｇ／ｋｇ乃至１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは５０ｎｇ／ｋｇ乃至８０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは１００ｎｇ／ｋｇ乃至５０ｍｇ／ｋｇで血中に吸収される程度の量を投与することができる。
【００２４】
非経口で本発明促進剤を投与する場合には、例えば本発明促進剤の溶液を注射剤として関節へ投与する方法が例示される。すなわち、関節中にはヒアルロン酸を豊富に含んだ関節液が存在するが、関節液中のヒアルロン酸が減少することで関節炎が起こると考えられている（文献：Ｂａｌａｚｓ　ＥＡ．，　Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｋｎｅｅ　（Ｈｅｌｆｅｔ　ＡＪ．）　ｐｐ　６１−７４　Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，　１９８２　；　Ｎａｋａｙａｍａ　Ｙ．，　Ｓｈｉｒａｉ　Ｙ．，　Ｙｏｓｈｉｈａｒａ　Ｋ．，　Ｕｅｓａｋａ　Ｓ．，　ｊ　Ｎｉｐｐｏｎ　Ｍｅｄ　Ｓｃｈ．，　６７（２）　ｐｐ　９２−９５，　２０００）。そこで、現在は関節内にヒアルロン酸溶液を注射により投与して関節炎の緩和をする治療がなされているが、本発明促進剤を関節中に投与すると、患者自身の自然治癒力を増強して症状の緩和を図ることが可能となると考えられる。このような医薬として使用する場合の剤形としては、上記ＧｌｃＮＡｃ含有糖ベンジルグリコシド誘導体を医薬品に慣用される水性溶媒（例えば注射用蒸留水、緩衝液、生理食塩水、水性有機溶媒を含む水などが挙げられ、注射用蒸留水又は緩衝液が好ましい）に溶解した注射剤などが挙げられ、また錠剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、軟膏剤などが挙げられるが、目的の用途で使用可能である限り特に限定はされない。
【００２５】
また更に、ヒアルロン酸が分娩時の子宮頚管熟化に関与していることが知られているが（文献：Ｍａｒａｄｙ　Ｅ．，　Ｋａｎａｙａｍａ　Ｎ．，　Ｋｏｂａｙａｓｈｉ　Ｈ．，　Ｈｏｓｓａｉｎ　Ｂ．，　ＫｈａｔｕｎＳ．，　Ｌｉｐｉｎｇ　Ｓ．，　Ｋｏｂａｙａｓｈｉ　Ｔ．，　Ｔｅｒａｏ　Ｔ．，　Ｈｕｍ　Ｒｅｐｒｏｄ．，　１９９７　Ｍａｙ　１２（５）　ｐｐ１０８０−１０８８）、例えば座剤として本発明促進剤を子宮頚管に投与することで、ヒアルロン酸合成を促進することができると考えられ、これによって分娩時の妊婦の負担軽減に役立てることも可能だと考えられる。
【００２６】
本発明促進剤中のＧｌｃＮＡｃ含有糖ベンジルグリコシド誘導体の配合量及び投与量は、その製剤の投与方法、剤形、患者の具体的症状、及び患者の体重に応じて適宜個別的に決定されるべき事項であり、特に限定はされない。なお、上記製剤の投与回数は１日１回程度でも可能であり、１日２〜４回、又はそれ以上の回数に分けて投与することも可能である。
【００２７】
【実施例】
以下実施例により、本発明をより具体的に説明する。
調製例
ＨＡＳのｃＤＮＡ（Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２７１（１９９６），　３８，　２２９４５−２２９４８記載の方法で調製した）を組み込んだ組換体はＪ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２７４（１９９９），　２５０８５−２５０９２に記載された方法に従って、ラット由来の線維芽細胞株３Ｙ１に導入して調製した。組換体におけるＨＡＳとＦＬＡＧとの融合タンパク質の発現は、抗ＦＬＡＧペプチド抗体（Ｍ５：イーストマンコダック社製）を用いて常法により確認した。
【００２８】
上記組換体の培養にはダルベッコの調整イーグル培地（以下「ＤＭＥＭ」）（１０％牛胎児血清、０．５ｍｇ／ｍＬ　Ｇ−４１８二流酸塩）を用い、５％ＣＯ２／空気、３７℃条件下でコンフルエントになるまで培養して実験に使用した。
実施例１
ラット由来線維芽細胞株３Ｙ１をダルベッコの調整イーグル培地（以下「ＤＭＥＭ」）（１０％牛胎児血清）を用い、５％ＣＯ２／空気、３７℃条件下でコンフルエントになるまで培養し、培地を、０．１ｍＭ〜１０ｍＭのＧｌｃＮＡｃ−α−ｏＢｎ（トロント・リサ−チ・ケミカルズ　社）、ＧｌｃＮＡｃ−β−ｏＢｎ（シグマ社）、又は（ＧｌｃＮＡｃ）２−α−ｏＢｎ（（ＧｌｃＮＡｃ）２（キトビオース）にベンジルアルコールがα−ｏ−グリコシド結合したキトビオース含有糖ベンジルグリコシド誘導体）（ともにトロント・リサ−チ・ケミカルズ　社）を含むＤＭＥＭ（１０％牛胎児血清）に交換して５％　ＣＯ２／空気、３７℃条件下で３日間培養した。その後、培地中のヒアルロン酸量をビオチン結合ヒアルロン酸結合タンパク質とストレプトアビジン結合西洋ワサビペルオキシダーゼを用いた固層染色法によって測定した。細胞数はＭＴＴ法に基づく市販キット試薬（例えばプロメガ社　Ｃｅｌｌ　ＴｉｔｅｒＴＭ　９６　ＡＱｕｅｏｕｓ）によって測定した。細胞数と培地中のヒアルロン酸量とを各々比較した（図１）。
【００２９】
その結果、ＧｌｃＮＡｃ−α−ｏＢｎ、ＧｌｃＮＡｃ−β−ｏＢｎ、及び１０ｍＭで（ＧｌｃＮＡｃ）２−α−ｏＢｎの試料において、培地中のヒアルロン酸量の顕著な増加が観察された。一方、ＭＴＴ法で測定した細胞数には大きな変化は見られず各々の物質については１０ｍＭ濃度までの細胞毒性は見られなかった。
【００３０】
実施例２
調製例によって調製した組換体を直径１５ｃｍの培養皿４枚でコンフルエントになるまで培養した。培地を除去し、５ｍＬのリン酸緩衝生理的食塩水（以下「ＰＢＳ」と記載する）で細胞を２回洗浄し、その後ＨＥＰＥＳ緩衝液（０．２５Ｍショ糖、０．５ｍＭジチオスレイトール（以下「ＤＴＴ」と記載する）を含む）１ｍＬを加え、氷上でセルスクレーパーで細胞を掻き取った。掻き取った細胞をあわせ、氷冷しながら超音波で破砕した。破砕した細胞を４℃で１０５，０００×ｇの超遠心分離を１時間行なった。超遠心分離をした後、上清を除去した。
【００３１】
得られた沈殿に２５ｍＭ　ＨＥＰＥＳ緩衝液（５ｍＭ　ＤＴＴ、１５ｍＭ　ＭｇＣｌ２を含む）を５５０μＬ添加し、ピペットを使用して懸濁した。懸濁液をバイアルに４５μＬずつ分注し、そこに５ｍＬの１０倍濃度の被検物質の水溶液又は陰性対照の溶媒を添加した。
さらに２．５μＣｉのＵＤＰ（ウリジン二リン酸）−［１４Ｃ］ＧｌｃＵＡ、２ｍＭのＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ、及び０．１ｍＭのＵＤＰ−ＧｌｃＵＡ（何れもＡｍｅｒｓｈａｍ　ＬＩＦＥ　ＳＣＩＥＮＣＥ社製）を含む基質水溶液３１０μＬを２５μＬずつ各バイアルに分注した。このバイアルを３７℃で２時間インキュベートした。
反応後、展開液として６５％エタノール／３５％１Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ５．５）を用いたペーパークロマトグラフィーを常法に従って行ない、試料をスポットした部分を切り出し、液体シンチレーターで１４Ｃの放射能を測定した。
【００３２】
その結果、被検物質として５ｍＭのＧｌｃＮＡｃ−α−ｏＢｎを添加した実験群及び５ｍＭ及び１ｍＭのＧｌｃＮＡｃ−β−ｏＢｎを添加した実験群において顕著にヒアルロン酸合成を促進する活性が観察された（図２）。それに対し、０．５ｍＭで４メチルウンベリフェロン（４ＭＵ）を添加した陰性対照群ではヒアルロン酸合成が強く阻害された。
この結果から、ＧｌｃＮＡｃ−α−ｏＢｎ及びＧｌｃＮＡｃ−β−ｏＢｎはヒアルロン酸合成酵素の活性を促進していることが示唆された。
【００３３】
また、ＧｌｃＮＡｃ−β−ｏＢｎの構成成分であるＧｌｃＮＡｃ及びベンジルアルコールの各々のヒアルロン酸合成活性を、各々の物質が５ｍＭとなる条件下で同様に測定した（図３）。その結果、ＧｌｃＮＡｃ及びベンジルアルコールにはヒアルロン酸合成促進活性が観察されず、ＧｌｃＮＡｃ−β−ｏＢｎにのみヒアルロン酸合成促進活性が観察された。
【００３４】
また更に、ＧｌｃＮＡｃ−α−ｏＢｎ、ＧｌｃＮＡｃ−β−ｏＢｎの代わりに、キトビオースの還元末端のＧｌｃＮＡｃにベンジルアルコールがグリコシド結合で結合したキトビオースベンジルグリコシド誘導体、Ｎ−アセチルガラクトサミンにベンジルアルコールがグリコシド結合で結合したＮ−アセチルガラクトサミンベンジルグリコシド誘導体、ＧｌｃＮＡｃ又はＧｌｃＵＡに４ＭＵがグリコシド結合した４ＭＵ−ＧｌｃＮＡｃ誘導体及び４ＭＵ−ＧｌｃＵＡ誘導体（本発明促進剤の有効成分であるＧｌｃＮＡｃベンジルグリコシド誘導体と同様にグリコシダーゼの基質となる）を使用して同様の実験を行ったところ、ヒアルロン酸合成促進活性は観察されなかった。
【００３５】
【発明の効果】
本発明により、新規なヒアルロン酸合成促進剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明促進剤が培養細胞のヒアルロン酸合成量に与える影響を観察した結果を示す図である。
【図２】本発明促進剤が細胞膜画分のヒアルロン酸合成量に与える影響を、放射性同位体取り込み量で測定した結果を示す図である。タンパク質量で補正した結果である。
【図３】本発明促進剤、ＧｌｃＮＡｃ、及びベンジルアルコールがヒアルロン酸合成量に与える影響を、細胞膜画分の放射性同位体取り込み量を測定した結果を示す図である。タンパク質量で補正した結果である。
【図１】
2004051579.tif 000007
【図２】
2004051579.tif 000008
【図３】
2004051579.tif 000009