(57)【要約】【課題】天然物由来の素材を原料に用いて、特に優れた免疫賦活作用を備えた、機能性組成物を提供すること。【解決手段】鹿角霊芝等のキノコ及び／又はその抽出物と、乳酸菌とを含有することを特徴とする健康機能組成物、特に優れた免疫賦活作用を有する健康機能組成物。前記乳酸菌としては、ナリネ菌が好ましく、ナリネのような乳酸菌発酵産物も本発明の乳酸菌の範ちゅうに含まれる概念である。また、健康機能組成物の代表的な形態は健康機能飲料等の健康機能食品である。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
キノコ及び／又はその抽出物と、乳酸菌とを含有することを特徴とする健康機能組成物。
【請求項２】
キノコが、鹿角霊芝である請求項１記載の健康機能組成物。
【請求項３】
乳酸菌が、ラクトバクテリウム　アシドフィリウムｎ．ｖ．３１７／４０２である請求項１又は２記載の健康機能組成物。
【請求項４】
免疫賦活作用を有する健康機能組成物である請求項１乃至３のいずれか一項に記載の健康機能組成物。
【請求項５】
健康機能食品である請求項１乃至４のいずれか一項に記載の健康機能組成物。
【請求項６】
健康機能飲料である請求項１乃至５のいずれか一項に記載の健康機能組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、健康機能組成物に関する。さらに詳しくは、健康維持と病気予防に役立つ、特に免疫賦活作用を有する組成物、特に飲料等の食品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
天然物抽出物を用いた健康機能食品は従来から多く知られている。例えば、鹿角霊芝から得られる活性物質を含む組成物（特開２００１−１３１０８３号公報）、乳酸菌を含む組成物（特開昭６３−２３８０９５号公報）等がある。これらの組成物は、それぞれ鹿角霊芝が血糖低下作用、免疫増強作用及び抗癌作用、血圧低下作用、メラニン生成抑制作用等（特開２００１−１３１０８３号公報）、乳酸菌が免疫増強作用（特開昭６３−２３８０９５号公報）等の効果が発揮される組成物として技術開示されている。
【０００３】
しかしながら、これらの組成物の機能は必ずしも充分でなく、特に免疫賦活作用については満足されるものはない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は上記事情に鑑みてなされたもので、その目的は、天然物由来の素材を原料に用いて、特に優れた免疫賦活作用を備えた、機能性組成物を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究を行った結果、鹿角霊芝等のキノコ由来の成分と乳酸菌とを混合して配合することにより、それぞれが有している免疫賦活作用を相乗的に発揮し、上記課題が解決されることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は、キノコ及び／又はその抽出物と、乳酸菌とを含有することを特徴とする健康機能組成物である。
【０００７】
前記キノコとしては、鹿角霊芝であることが好ましい。また、乳酸菌としては、ラクトバクテリウム　アシドフィリウムｎ．ｖ．３１７／４０２であるあることが好ましい。
【０００８】
本発明においては、免疫賦活作用を有する健康機能組成物であることができる。
【０００９】
本発明において、健康機能組成物としては、特に健康機能飲料などの健康機能食品を好適な組成物として挙げることができる。
【００１０】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施形態について詳述する。
【００１１】
本発明においては、キノコ及び／又はその抽出物が配合される。キノコとしては、例えば、鹿角霊芝、チャーガ、メシマコブ、ヤマブシタケ、マイタケ、アガリクス、シイタケ等が挙げられる。本発明においては、キノコの中でも特に鹿角霊芝が好ましく用いられる。
【００１２】
鹿角霊芝は茸類に属する霊芝の１種であり、鹿の角のような形状を有する、傘をもたないで枝状に伸びたものである。霊芝（万年茸）は、サルノコシカケ科に属する担子菌である。鹿角霊芝は一般の傘つき霊芝と比べ、β−Ｄ−グルカン含有量が安定的に高い上、その他の物質も常に安定した値で含まれている。鹿角霊芝は、例えば特公昭５７−３９６０５号公報、特開平２００１−２６９１６４号公報に記載されている方法にしたがって、栽培することもできるが、市販されているのでそれを用いることができる。
【００１３】
本発明において用いられるキノコは、粉砕物の形態で用いることが好ましい。粉砕物は、一般的には乾燥したキノコを粉砕して調製されるが、これに限定されるものではない。
【００１４】
本発明において用いられるキノコの抽出物は、水を含む溶媒によって抽出され調製される。具体的には、前記溶媒を用いて抽出液を得、次いで溶媒を除去して抽出物を得る。抽出に用いられる溶媒は、通常菌類、植物等の抽出に用いられる溶媒でよく、例えば、メタノール、エタノール等のアルコール、アセトン、酢酸エチル等の有機溶媒、水単独あるいは水と好ましくはエタノール等の他の溶媒との組み合わせ等を用いることができる。抽出方法は、特に限定されず、一般に公知の種々の方法が用いられる。抽出物の調製については、例えば、キノコを粉砕し、抽出溶媒中に浸漬するかまたは抽出溶媒で加熱還流し、次いでろ過、遠心分離等により不溶物を除去して抽出液を得る。これらの抽出液は、凍結乾燥、またはスプレードライにより、抽出物とされる。
【００１５】
また、キノコの水抽出物は、キノコを粉砕し、それを水に加えて煮沸して煮詰めることにより調製することができる。また、キノコを蒸留水に加えて放置すること、キノコを蒸留水に加え煮立たせた後放置することによっても製造することができる。これらの処理物は、次いで、ろ過、遠心分離等により不純物を除去して抽出液を得る。これらの抽出液は、凍結乾燥、またはスプレードライにより、抽出物とされる。
【００１６】
本発明において、キノコの抽出物を健康機能組成物に配合するに当たっては、抽出物のみならず、抽出液をそのまま、あるいは濃縮した抽出液を配合しても構わない。
【００１７】
本発明においては、抽出物の一つの実施態様としてキノコの抽出物に含まれている活性物質を単離して用いることができる。したがって、この活性物質も本発明の抽出物の範ちゅうに含まれる。この活性物質は、キノコの抽出物から、ゲルろ過カラムクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィーのような、公知の分離精製手段を用いて取得することができる。
【００１８】
以下、本発明におけるキノコ抽出物の製造例について述べる。鹿角霊芝は、いずれも「王角」（商標（以下、記載省略）、株式会社坂本バイオ製）を用いた。
【００１９】
製造例１
鹿角霊芝１０ｇを刻んで、２００ｍｌの水に加え、約３時間撹拌しながら煮沸し、その後３０ｇ（３０ｍｌ）になるまで濃縮した。その後、フィルターろ過し、残査を取り除き、活性物質を含有する鹿角霊芝抽出液を得た。
【００２０】
製造例２
鹿角霊芝１０ｇを刻んで、２００ｍｌの水に加え、約３時間撹拌しながら煮沸し、その後３０ｇ（３０ｍｌ）になるまで濃縮した。その後、フィルターろ過し、残査を取り除き、活性物質を含有する鹿角霊芝抽出液を得た。得られた鹿角霊芝抽出液を凍結乾燥して水分を除去し、活性物質を含有する粉末（抽出物）を得た。
【００２１】
製造例３
鹿角霊芝１０ｇを刻んで、２００ｍｌの３０％エタノールを加え、３０分間放置した。この溶液を遠心分離し（４０００ｒｐｍ、２０分間）、上澄みをろ紙でろ過し残査を取り除き、活性物質を含有する鹿角霊芝抽出液を得た。
【００２２】
製造例４
上記製造例１〜３の最終物として得た鹿角霊芝抽出液、抽出物（粉末）に２００ｍｌの３０重量％エタノールを加え、ゲルろ過カラムクロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーにより分離精製を行なって、活性物質をそれぞれ得た。
【００２３】
本発明においては、乳酸菌が配合される。乳酸菌としては、特に限定されないが、例えば、ラクトバクテリウム　アシドフィリウム（Ｌａｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｃｉｄｏｐｈｉｌｌｕｍ）、ストレプトコッカス　ラクチス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｌａｃｔｉｓ）、ストレプトコッカス　クレモリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ストレプトコッカス　ジアセチルアクチス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｄｉａｃｅｔｉｌａｃｔｉｓ）、レウコノコッカス　クレモリス（Ｌｅｕｃｏｎｏｃｏｃｃｕｓ　ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトバチルス　プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス　カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス　ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ストレプトコッカス　サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｔｈｅｌｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス　ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｇａｓｓｅｒｉ）、ビフィドバクテリウム　ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｌｏｎｇｕｍ）、ラクトバチルス　アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ビフィドバクテリウム　ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｂｒｅｖｅ）、ビフィドバクテリウム　ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｂｉｆｉｄｕｍ）等が挙げられる。本発明においては、乳酸菌のうち、ラクトバクテリウム　アシドフィリウム（Ｌａｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｃｉｄｏｐｈｉｌｌｕｍ）が好ましく、特にインターフェロン生産を促進する効果が高いことが知られているラクトバクテリウム　アシドフィリウムｎ．ｖ．３１７／４０２（ナリネ菌）が好ましい。
【００２４】
本発明においては、純化された乳酸菌を配合しても構わないが、乳酸菌含有組成物、乳酸菌発酵産物でも構わない。したがって、これらの乳酸菌含有組成物、乳酸菌発酵産物も本発明の乳酸菌の範ちゅうに含まれる概念である。乳酸菌発酵産物としては、例えば、牛乳に乳酸菌を接種し、発酵させたものが挙げられる。乳酸菌発酵産物としてはナリネが最も好ましい。
【００２５】
乳酸菌発酵産物を得る方法は、従来公知及び将来開発されるであろういかなる方法をも用いることができる。例えば、以下のナリネの製造方法が挙げられる。脂肪含有３〜４％の全脂牛乳を１．５気圧で２０分間高圧蒸気滅菌するか、９０〜９５℃で短期間殺菌するかした後、３９℃まで放冷し、牛乳中の雑菌を死滅させる。最終接種濃度が２〜３％となるように乳酸菌の純粋培養したものを接種する。次に、３７℃で牛乳が凝固するまで３〜３．５時間発酵させ製造し、５〜６℃で保存される。
【００２６】
また、乳質原料があれば天然培地、合成培地のいずれの培地においても自由に製造できる。天然培地の場合は、例えば均質化した殺菌牛乳、脱脂乳、コーンスチープリカー等が用いられ、合成培地の場合は、例えば、ペプトン、酵母エキス、肉エキス、マルトエキス、ブドウ糖、乳糖、無機質等からなる培養液を用いることができる。
【００２７】
これら培地に乳酸菌を接種し、培養した後、培養液を濃縮するか、培地を遠心分離し、分離した菌体は、水で洗浄した後、凍結乾燥し凍結乾燥乳酸菌が得られる。この凍結乾燥乳酸菌をそのまま、または破砕して乳糖等の賦形剤にて希釈混合して用いる。また、凍結乾燥前に必要な賦形剤を加えた後凍結乾燥してそのまま製品としてもよい。適当濃度に濃縮した培養液は、そのまま用いてもよく、また、賦形剤に吸着させた後低温で乾燥し、そのまま、または粉末化して用いることができる。
【００２８】
本発明におけるキノコ及び／又はその抽出物、及び乳酸菌の含有量は任意に設定することができるが、例えば１日の投与量で示した場合、キノコ及び／又はその抽出物は、抽出物の量として１０〜５００ｍｇ摂取する量が好ましく、さらに好ましくは、１０〜１５０ｍｇである。抽出物以外の態様での実施の場合は、それぞれを抽出物に換算したとき前記範囲に入る量で配合される。また、乳酸菌は、乳酸菌量として５０〜３００００ｍｇ摂取する量が好ましく、さらに好ましくは、５０〜３０００ｍｇである。乳酸菌の場合も、乳酸菌以外の態様で実施する場合は、キノコと同様換算したとき前記範囲に入る量で配合される。
【００２９】
本発明の健康機能組成物には、本発明の効果を損なわない範囲で通常食品等に用いられる水等の他の成分をさらに配合することができる。
【００３０】
任意配合成分としては、例えば、ビタミン類、甘味料、調味料、酸味料、保存料、香料、着色剤、賦形剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、吸収促進剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、稀釈剤、担体等の種々の添加成分が挙げられる。
【００３１】
本発明の健康機能組成物は、本発明の必須成分と上記任意配合成分の１種または２種以上とを混合して、常法により調製することができる。また、特に好適な実施形態である健康機能食品の取り得る形態としては、飲料（ドリンク）、タブレット等が挙げられる。
【００３２】
本発明の健康機能組成物は、後の実験で明らかにするように、相乗的な免疫賦活作用を示し、相乗的な抗癌作用が期待される。
【００３３】
【実施例】
以下実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。
【００３４】
［試験例］
（検体）
（Ａ）鹿角霊芝抽出物
（Ｂ）乳酸菌（ナリネ菌）
（Ｃ）鹿角霊芝抽出物と乳酸菌（ナリネ菌）の混合物
（Ｄ）ピシバニール（抗悪性腫瘍剤）
（Ｅ）培地（ネガティブコントロール）
【００３５】
（試料の調製）
（１）鹿角霊芝抽出物
製造例２で得られた鹿角霊芝抽出物をマクロファージ培養培地（ＲＰＭＩ１６４０＋５％ＦＢＳ、１％Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）にて２ｍｇ／ｍＬに調整した。
【００３６】
（２）乳酸菌
乳酸菌であるラクトバクテリウム　アシドフィリウムｎ．ｖ．３１７／４０２の乾燥菌体粉末を１０ｍｇ／ｍｌになるよう培地にて溶解した。
【００３７】
（３）鹿角霊芝抽出物と乳酸菌（ナリネ菌）の混合物
１．５ｍＬの蒸留水に、製造例２で得られた鹿角霊芝抽出物３２．２５ｍｇ、１１０ｍｇの乳酸菌乾燥菌体粉末を溶かし、マクロファージ培養液で１０倍に稀釈したものを使用した。
【００３８】
（４）ピシバニール（抗悪性腫瘍剤）
ポジティブコントロールとしてピシバニール（抗悪性腫瘍剤）を１００μｇ／ｍＬに培地で調製して使用した。
【００３９】
（５）培地（ネガティブコントロール）
ネガティブコントロールは培地のみとする。
【００４０】
（免疫賦活作用）
前記調製した試料について、ラット（ウィスター種）由来のマクロファージを用いて免疫賦活作用を試験した。マクロファージの免疫反応の１つとして、抗癌作用を有する物質であるＴＮＦαの生成がある。そこで、産生されるＴＮＦαをＴＮＦα濃度として免疫賦活作用の指標とした。
【００４１】
（ＴＮＦα産生の誘導）
ラット大腿骨よりマクロファージを取り出し、２日間ＲＰＭＩ１６４０培地（５％ＦＢＳ／１％Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）にて培養した後、５×１０５細胞／ｍＬに調製し、９６穴細胞培養用マルチプレートに１００μＬずつ蒔いた。２時間インキュベート（５％ＣＯ２、３７℃）した後、上清を除去し、検体として試料含有培地を１００μＬずつ加えた。また、ポジティブコントロール、ネガティブコントロールも添加した。
【００４２】
（ＴＮＦα活性の測定）
検体の添加後、マクロファージを６時間培養し、それぞれの検体添加マクロファージの培養上清をサンプリングし、ＴＮＦα測定キットにて（ａｍｅｒｓｈａｍ　ｐｈａｒｍａｃｉａ　ｂｉｏｔｅｃｈ）測定した。測定方法は、添付されたプロトコールに従い行った。
【００４３】
（結果）
試験結果を表１に示した。鹿角霊芝抽出物、乳酸菌はマクロファージを活性化し、ＴＮＦαの産生を誘導した。産生されたＴＮＦα濃度は、それぞれ、１０８．６ｐｇ／ｍｌ（鹿角霊芝抽出物）、３１７．６ｐｇ／ｍｌ（乳酸菌）であった。さらに、前記２種類（鹿角霊芝抽出物と乳酸菌）混合物のＴＮＦα濃度は９３４．１ｐｇ／ｍｌであり、混合によりＴＮＦαの産生増強が見られた。これら、ＴＮＦαの産生増強は、鹿角霊芝抽出物、乳酸菌それぞれのＴＮＦα産生を合わせたものより高く、免疫賦活作用について相乗効果があるものと考えられる。これらＴＮＦα産生に関して鹿角霊芝抽出物と乳酸菌が免疫賦活作用に関して相乗効果があることから、抗癌作用についても相乗効果があると考えられる。
【００４４】
【表１】
2004051504.tif 000002
【００４５】
以下、本発明健康機能組成物を実施例として示す。健康機能組成物は各処方の各成分を混合機で混合して製造した。なお、上記の効果試験をこれらにおいて行ったところ、いずれも優れた免疫賦活作用を有していた。
【００４６】
2004051504.tif 000003
【００４７】
2004051504.tif 000004
【００４８】
2004051504.tif 000005
【００４９】
2004051504.tif 000006
【００５０】
2004051504.tif 000007
【００５１】
2004051504.tif 000008
【００５２】
【発明の効果】
以上、詳述したように本発明によれば、天然物由来の素材であるキノコと乳酸菌を複合させることにより、それぞれが有する免疫賦活作用が相乗的に発揮される優れた免疫賦活作用を有する健康機能組成物が得られる。