(57)【要約】      （修正有）【課題】新規なＣＸＣＲ４拮抗作用を有する化合物、及び同化合物を用いたエイズ、慢性リンパ性Ｂ細胞白血病、癌ならびに慢性関節リューマチの予防及び／又は治療薬を提供する。【解決手段】シクロ−（−Ａ１−Ｂ１−Ｂ２−Ａ２−Ｃ−）で示される環状ペプチド、又はその生理学的に許容される塩を医薬組成物の有効成分とする。但し、Ａ１、Ａ２：芳香族アミノ酸、又はアラニン。Ｂ１、Ｂ２：アルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、２，４−ジアミノ酪酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、リジン、オルニチン、アスパラギン酸、グルタミン酸、２−アミノヘキサン−１，６−ジカルボン酸、又はアラニン。Ｃ：グリシン、アラニン、サルコシン、１−アミノシクロペンチル−１−カルボン酸、１−アミノシクロヘキシル−１−カルボン酸、β−アラニン、４−アミノ酪酸、５−アミノペンタン酸、プロリン、又はピペコリン酸、各アミノ酸残基は、修飾されていてもよい。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
シクロ−（−Ａ１−Ｂ１−Ｂ２−Ａ２−Ｃ−）  （Ｉ）：（配列番号１）
［式中、Ａ１及びＡ２は、独立して、側鎖に２０個以下の炭素原子からなる芳香環もしくは複素環を有する芳香族アミノ酸、またはアラニンを表し；
Ｂ１及びＢ２は、独立して、アルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、２，４−ジアミノ酪酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、リジン、オルニチン、これらの誘導体、またはアスパラギン酸、グルタミン酸、２−アミノヘキサン−１、６−ジカルボン酸、これらの側鎖アミド誘導体、またはアラニンを表し；
Ｃは、グリシン、アラニン、サルコシン、１−アミノシクロペンチル−１−カルボン酸、１−アミノシクロヘキシル−１−カルボン酸、β−アラニン、４−アミノ酪酸、５−アミノペンタン酸、プロリン、又はピペコリン酸を表し；
それぞれのアミノ酸残基は、アルファ−アミノ官能基が、１〜１８個の炭素原子を有するアルキル基又はベンジル基で置換されていてもよく；
それぞれのアミノ酸残基はＤ体であってもＬ体であってもよい］で示される環状ペプチド、又はその生理学的に許容される塩。
【請求項２】
式ＩＩ〜ＶＩＩ：
シクロ−（−ＬＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  （ＩＩ）
シクロ−（−ＤＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＤＡ２−Ｃ−）  （ＩＩＩ）
シクロ−（−ＤＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  （ＩＶ）
シクロ−（−ＬＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  （Ｖ）：（配列番号２）
シクロ−（−ＤＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  （ＶＩ）
シクロ−（−ＤＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＤＡ２−Ｃ−）  （ＶＩＩ）
［式中、Ａ１及びＡ２は、独立して、側鎖に２０個以下の炭素原子からなる芳香環もしくは複素環を有する芳香族アミノ酸、またはアラニンを表し；
Ｂ１及びＢ２は、独立して、アルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、２，４−ジアミノ酪酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、リジン、オルニチン、これらの誘導体、またはアスパラギン酸、グルタミン酸、２−アミノヘキサン−１、６−ジカルボン酸、これらの側鎖アミド誘導体、またはアラニンを表し；
Ｃは、グリシン、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラニン、サルコシン、１−アミノシクロペンチル−１−カルボン酸、１−アミノシクロヘキシル−１−カルボン酸、β−アラニン、４−アミノ酪酸、５−アミノペンタン酸、プロリン、又はピペコリン酸を表し；
それぞれのアミノ酸残基は、アルファ−アミノ官能基が、１〜１８個の炭素原子を有するアルキル基又はベンジル基で置換されていてもよく；
ＬはＬ体を表し、ＤはＤ体を表す］で示される環状ペプチド、又はその生理学的に許容される塩。
【請求項３】
式ＶＩＩＩ−ＸＩＩＩ：
シクロ−（−ＬＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  ＶＩＩＩ
シクロ−（−ＤＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＤＡ２−Ｃ−）  ＩＸ
シクロ−（−ＤＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  Ｘ
シクロ−（−ＬＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  ＸＩ：（配列番号３）
シクロ−（−ＤＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  ＸＩＩ
シクロ−（−ＤＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＤＡ２−Ｃ−）  ＸＩＩＩ
［式中、Ａ１はチロシン、ヒドロキシフェニルグリシン、アラニン残基を表し；
Ａ２は、フェニルアラニン、トリプトファン、３−（２−ナフチル）アラニン、３−（１−ナフチル）アラニン、３−（２−ベンゾチエニル）アラニン、アラニン残基を表し、
Ｂ１およびＢ２は、アルギニン、ホモアルギニン、グルタミン酸、アラニン残基を表し、
Ｃは、グリシン、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラニン、β−アラニン、Ｌ−ピペコリン酸、サルコシン残基を表し；
ＬはＬ−体を表し；
ＤはＤ−体を表す］で示される環状ペプチド、およびそれらの生理学的に許容される塩。
【請求項４】
以下の配列１〜６のいずれかで表される環状ペプチドまたはその塩：
（配列１）シクロ−（−ＬＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列４）シクロ−（−ＬＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
：（配列番号４）
（配列５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列６）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列７）シクロ−（−ＤＡｌａ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列８）シクロ−（−ＤＡｌａ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列９）シクロ−（−ＤＭｅＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１０）シクロ−（−ＤＭｅＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１１）シクロ−（−ＤＨｐｇ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１２）シクロ−（−ＤＨｐｇ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｌａ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１４）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｌａ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｌａ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１６）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＭｅＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１７）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１８）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＧｌｕ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１９）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２０）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２１）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＡｌａ−Ｇｌｙ−）
（配列２２）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２４）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−ＬＡｌａ−）
（配列２５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＬＡｌａ−）
（配列２６）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＬＡｌａ−）
（配列２７）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−ＤＡｌａ−）
（配列２８）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＤＡｌａ−）
（配列２９）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＤＡｌａ−）
（配列３０）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−βＡｌａ−）
（配列３１）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−βＡｌａ−）
（配列３２）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−βＡｌａ−）
（配列３３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｐｉｃ−）
（配列３４）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｓａｒ−）
（配列３５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｓａｒ−）
［式中、ＬＴｙｒはＬ−チロシン残基を、ＤＴｙｒはＤ−チロシン残基を、ＬＡｒｇはＬ−アルギニン残基を、ＤＡｒｇはＤ−アルギニン残基を、ＬＮａｌはＬ−３−（２−ナフチル）アラニン残基を、ＤＮａｌはＤ−３−（２−ナフチル）アラニン残基を、Ｇｌｙはグリシン残基、ＬＡｌａはＬ−アラニン残基を、ＤＡｌａはＤ−アラニン残基を、β−Ａｌａはβ−アラニン残基を、ＬＭｅＡｒｇはＬ−Ｎ−メチルアルギニン残基を、ＤＭｅＡｒｇはＤ−Ｎ−メチルアルギニン残基を、ＬＧｌｕはＬ−グルタミン酸残基を、ＤＨｐｇはＤ−４−ヒドロキシフェニルグリシン酸残基を、ＬＭｅＮａｌはＬ−Ｎ−メチル−２−ナフチルアラニン残基を、Ｐｉｃはピペコリン酸残基を、Ｓａｒはサルコシン残基を、ＤＭｅＴｙｒはＤ−Ｎ−メチルチロシン残基を、それぞれ示す］。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物を含有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項６】
ＣＸＣＲ４拮抗剤が予防又は治療に有効な疾患に用いられる請求項５に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規環状ペプチド及び同ペプチドを含有する医薬組成物に関する。同ペプチドは、エイズ、慢性リンパ性白血病、癌ならびに慢性関節リューマチの予防及び／又は治療剤として医薬、製薬分野等で有用であると考えられる。
【０００２】
【従来の技術】
多くのホルモンや神経伝達物質は、細胞膜に存在する特異的なレセプターを通じて生体の機能を調節している。これらのレセプターの多くは共役しているグアニンヌクレオチド結合性蛋白質（ｇｕａｎｉｎｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ、以下、Ｇ蛋白質と略称する場合がある）の活性化を通じて細胞内のシグナル伝達を行う。また、これらのレセプターは、７個の細胞膜貫通領域を有する共通した構造をもっていることから、Ｇ蛋白質共役型レセプターあるいは７回膜貫通型レセプター（７ＴＭＲ）と総称される。
【０００３】
このようなＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質の一つとして、ＣＸＣＲ４遺伝子によってコードされるヒト型レセプター蛋白質［非特許文献１］が知られている。
また、上記のＣＸＣＲ４に対するリガンドとして機能する生理活性ペプチドとして、ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１（ｓｔｒｏｍａｌ−ｃｅｌｌ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ−１）［非特許文献２］が知られている。
【０００４】
このリガンドが胎仔の生存、一次リンパ組織でのＢ細胞（Ｂリンパ球）の生成や骨髄球系血液細胞の定着または生成、心室中隔形成など造血や発生現象に必須であること、臓器を栄養する欠陥の形成や神経形成にも必須であることが次々に明らかになった。さらに、最近造血において血液細胞を標的細胞とし、生体におけるリンパ球系、骨髄球系造血の再構成にも必須であることが示された［非特許文献３］。
【０００５】
ＨＩＶ感染の病態生理は、極めて複雑であり、様々なウイルス因子、宿主因子、そして環境因子の影響に左右される。ＨＩＶが細胞に侵入する際にＣＤ４分子以外にいくつかのケモカイン受容体が様々なタイプのＨＩＶの共受容体として働くことが明らかとなった。その一つであるＣＸＣＲ４に対する拮抗剤が、抗ＨＩＶ因子としてＨＩＶの感染およびエイズの進行度に影響を与えることがわかった［非特許文献４］。
【０００６】
癌の転移は患者の余命を左右する重要な要素である。ＣＸＣＲ４は乳癌などにおいてその発現が亢進し、さらに転移先の臓器（リンパ節、肺、肝臓および骨）においてそのリガンドであるＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１の発現が亢進していることから［非特許文献５］、ＣＸＣＲ４−ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１相互作用が癌転移を規定する重要な要因の１つであることが示唆される。
【０００７】
慢性関節リューマチは、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の関節腔液への浸潤がその病状の進展に影響を与える。慢性関節リューマチ患者の関節腔液内のＣＤ４陽性記憶Ｔ細胞においてＣＸＣＲ４遺伝子発現が亢進し、関節滑膜組織においてＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１遺伝子発現が亢進していることから［非特許文献６］ＣＸＣＲ４−ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１相互作用が慢性関節リューマチを規定する重要な要因の１つであることが示唆される。
また、ＣＸＣＲ４の阻害剤が慢性リンパ性Ｂ細胞白血病のＢ細胞の活性化とマイグレーションを阻害することも明らかとなった［非特許文献７］。
【０００８】
以上よりエイズ，慢性リンパ性Ｂ細胞白血病、癌ならびに慢性関節リューマチにおいて、ＣＸＣＲ４−ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１相互作用を阻害する物質は、予防薬および／または治療薬として有用であると想定され、研究が行われた。しかしながら、抗ＣＸＣＬ１２または抗ＣＸＣＲ４中和抗体は、ＣＸＣＲ４に対する阻害活性があるものの高濃度が必要であり、また膨大な治療コストがかかることから実用化に至っていない。
【０００９】
カブトガニの血中に存在する抗菌、抗ウイルス活性物質ｔａｃｈｙｐｌｅｓｉｎとｐｏｌｙｐｈｅｍｕｓｉｎを基盤化合物として合成されたアミノ酸１４個からなるＴ１４０は、強いＣＸＣＲ４阻害活性を示し、そのために必須な残基が、アルギニン２、３−（２−ナフチル）アラニン３、チロシン５およびアルギニン１４であることが明らかとなった［非特許文献８］。また、３−（２−ナフチル）アラニン３は、他の芳香族アミノ酸残基に置換することによっても、同様の生物活性を示すことが明らかとなった［非特許文献９］。しかしながら、高分子であるためアレルギー性副作用のリスクと生体内での不安定さのために実用化に至っていない。
【００１０】
【非特許文献１】
ジャーナルオブバイオロジカルケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），第２７３巻，第４７５４頁（１９９８年）
【非特許文献２】
サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第２６１巻、６００−６０３頁（１９９３年）
【非特許文献３】
サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第２８３巻、８４５頁（１９９９年）
【非特許文献４】
ネイチャー  メデイスン（Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．）、第４巻、７２−７７頁（１９９８年）
【非特許文献５】
ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、第４１０巻、５０−５６頁（２００１年）
【非特許文献６】
ジャーナル  オブ  イムノロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、第１６５巻、６５９０−９８頁（２０００年）
【非特許文献７】
ＩＷＣＣＬ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ  ｏｎ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｂ）要旨，２００２年３月２２〜２４日、米国サンジエゴ
【非特許文献８】
カレント  オピニオン  イン  インベスティゲイショナル  ドラッグス（Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．  Ｄｒｕｇｓ）、第２巻、１１９８頁（２００１年）
【非特許文献９】
バイオオーガニック  アンド  メディシナル  ケミストリー（Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．）、第１０巻、１４１７頁（２００２年）
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ＣＸＣＲ４拮抗作用を有する化合物を用いた新規なエイズ、慢性リンパ性Ｂ細胞白血病、癌ならびに慢性関節リューマチの予防及び／又は治療手段の提供を目的とする。また、本発明はエイズ、慢性リンパ性Ｂ細胞白血病、癌ならびに慢性関節リューマチの予防及び／又は治療活性を有する新規化合物、特に共通の構造を有する種々のオリゴペプチドを提供する。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討した結果、ＣＸＣＲ４拮抗作用を有し、低分子で生体内で安定な、エイズ、慢性リンパ性Ｂ細胞白血病、転移を含む癌ならびに慢性関節リューマチの予防及び／又は治療に対する有効性が期待される化合物を見出し、さらに研究を行った結果、本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち、本発明は、以下のとおりである。
（１）式Ｉ：
シクロ−（−Ａ１−Ｂ１−Ｂ２−Ａ２−Ｃ−）  （Ｉ）：（配列番号１）
［式中、Ａ１及びＡ２は、独立して、側鎖に２０個以下の炭素原子からなる芳香環もしくは複素環を有する芳香族アミノ酸、またはアラニンを表し；
Ｂ１及びＢ２は、独立して、アルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、２，４−ジアミノ酪酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、リジン、オルニチン、これらの誘導体、またはアスパラギン酸、グルタミン酸、２−アミノヘキサン−１、６−ジカルボン酸、これらの側鎖アミド誘導体、またはアラニンを表し；
Ｃは、グリシン、アラニン、サルコシン、１−アミノシクロペンチル−１−カルボン酸、１−アミノシクロヘキシル−１−カルボン酸、β−アラニン、４−アミノ酪酸、５−アミノペンタン酸、プロリン、又はピペコリン酸を表し；
それぞれのアミノ酸残基は、アルファ−アミノ官能基が、１〜１８個の炭素原子を有するアルキル基又はベンジル基で置換されていてもよく；
それぞれのアミノ酸残基はＤ体であってもＬ体であってもよい］で示される環状ペプチド、又はその生理学的に許容される塩。
（２）式ＩＩ〜ＶＩＩ：
シクロ−（−ＬＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  （ＩＩ）
シクロ−（−ＤＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＤＡ２−Ｃ−）  （ＩＩＩ）
シクロ−（−ＤＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  （ＩＶ）
シクロ−（−ＬＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  （Ｖ）：（配列番号２）
シクロ−（−ＤＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  （ＶＩ）
シクロ−（−ＤＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＤＡ２−Ｃ−）  （ＶＩＩ）
［式中、Ａ１及びＡ２は、独立して、側鎖に２０個以下の炭素原子からなる芳香環もしくは複素環を有する芳香族アミノ酸、またはアラニンを表し；
Ｂ１及びＢ２は、独立して、アルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、２，４−ジアミノ酪酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、リジン、もしくはオルニチン、又はこれらの誘導体、またはアスパラギン酸、グルタミン酸、２−アミノヘキサン−１、６−ジカルボン酸、これらの側鎖アミド誘導体、またはアラニンを表し；
Ｃは、グリシン、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラニン、サルコシン、１−アミノシクロペンチル−１−カルボン酸、１−アミノシクロヘキシル−１−カルボン酸、β−アラニン、４−アミノ酪酸、５−アミノペンタン酸、プロリン、又はピペコリン酸を表し；
それぞれのアミノ酸残基は、アルファ−アミノ官能基が、１〜１８個の炭素原子を有するアルキル基又はベンジル基で置換されていてもよく；
ＬはＬ体を表し、ＤはＤ体を表す］で示される環状ペプチド、又はその生理学的に許容される塩。
（３）式ＶＩＩＩ−ＸＩＩＩ：
シクロ−（−ＬＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  ＶＩＩＩ
シクロ−（−ＤＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＤＡ２−Ｃ−）  ＩＸ
シクロ−（−ＤＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  Ｘ
シクロ−（−ＬＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  ＸＩ：（配列番号３）
シクロ−（−ＤＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  ＸＩＩ
シクロ−（−ＤＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＤＡ２−Ｃ−）  ＸＩＩＩ
［式中、Ａ１はチロシン、ヒドロキシフェニルグリシン、アラニン残基を表し；
Ａ２は、フェニルアラニン、トリプトファン、３−（２−ナフチル）アラニン、３−（１−ナフチル）アラニン、３−（２−ベンゾチエニル）アラニン、アラニン残基を表し、
Ｂ１およびＢ２は、アルギニン、ホモアルギニン、グルタミン酸、アラニン残基を表し、
Ｃは、グリシン、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラニン、β−アラニン、Ｌ−ピペコリン酸、サルコシン残基を表し；
ＬはＬ−体を表し；
ＤはＤ−体を表す］で示される環状ペプチド、およびそれらの生理学的に許容される塩。
（４）以下の配列１〜６のいずれかで表される環状ペプチドまたはその塩：
（配列１）シクロ−（−ＬＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列４）シクロ−（−ＬＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
：（配列番号４）
（配列５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列６）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列７）シクロ−（−ＤＡｌａ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列８）シクロ−（−ＤＡｌａ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列９）シクロ−（−ＤＭｅＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１０）シクロ−（−ＤＭｅＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１１）シクロ−（−ＤＨｐｇ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１２）シクロ−（−ＤＨｐｇ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｌａ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１４）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｌａ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｌａ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１６）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＭｅＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１７）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１８）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＧｌｕ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１９）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２０）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２１）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＡｌａ−Ｇｌｙ−）
（配列２２）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２４）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−ＬＡｌａ−）
（配列２５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＬＡｌａ−）
（配列２６）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＬＡｌａ−）
（配列２７）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−ＤＡｌａ−）
（配列２８）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＤＡｌａ−）
（配列２９）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＤＡｌａ−）
（配列３０）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−βＡｌａ−）
（配列３１）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−βＡｌａ−）
（配列３２）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−βＡｌａ−）
（配列３３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｐｉｃ−）
（配列３４）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｓａｒ−）
（配列３５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｓａｒ−）
［式中、ＬＴｙｒはＬ−チロシン残基を、ＤＴｙｒはＤ−チロシン残基を、ＬＡｒｇはＬ−アルギニン残基を、ＤＡｒｇはＤ−アルギニン残基を、ＬＮａｌはＬ−３−（２−ナフチル）アラニン残基を、ＤＮａｌはＤ−３−（２−ナフチル）アラニン残基を、Ｇｌｙはグリシン残基を、ＬＡｌａはＬ−アラニン残基を、ＤＡｌａはＤ−アラニン残基を、β−Ａｌａはβ−アラニン残基を、ＬＭｅＡｒｇはＬ−Ｎ−メチルアルギニン残基を、ＤＭｅＡｒｇはＤ−Ｎ−メチルアルギニン残基を、ＬＧｌｕはＬ−グルタミン酸残基を、ＤＨｐｇはＤ−４−ヒドロキシフェニルグリシン酸残基を、ＬＭｅＮａｌはＬ−Ｎ−メチル−２−ナフチルアラニン残基を、Ｐｉｃはピペコリン酸残基を、Ｓａｒはサルコシン残基を、ＤＭｅＴｙｒはＤ−Ｎ−メチルチロシン残基をそれぞれ示す］。
（５）（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物を含有することを特徴とする医薬組成物。
（６）ＣＸＣＲ４拮抗剤が予防又は治療に有効な疾患に用いられる（５）に記載の医薬組成物。
【００１４】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
本明細書に記載されるペプチドは、ペプチド標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端がＣ末端（カルボキシル末端）である。
本明細書において、アミノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  による略号あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体が存在する場合は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。
【００１５】
Ｇｌｙ  ：グリシン
Ａｌａ  ：アラニン
Ａｒｇ  ：アルギニン
Ｔｙｒ  ：チロシン
Ｎａｌ  ：３−（２−ナフチル）アラニン
Ｇｌｕ  ：グルタミン酸
Ｈｐｇ  ：ヒドロキシフェニルグリシン酸
Ｐｉｃ  ：ピペコリン酸
Ｓａｒ  ：サルコシン
【００１６】
また、本明細書中で繁用される置換基、保護基および試薬を下記の記号で表記する。
Ｂｏｃ：ｔ−ブチルオキシカルボニル
Ｂｒ−Ｚ：２−ブロモベンジルオキシカルボニル
Ｂｚｌ：ベンジル
Ｃｌ２−Ｂｚｌ：２，６−ジクロロベンジル
ＤＮＰ：２，４−ジニトロフェニル
Ｆｍｏｃ：Ｎ−９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール
ＨＯＯＢｔ：３−ヒドロキシ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，３−ベンズトリアゾール
Ｍｅ：メチル
Ｐｂｆ：２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル
ｔ−Ｂｕ：ターシャリーブチル
Ｔｒｔ：トリチル
Ｚ：ベンジルオキシカルボニル
【００１７】
本発明は、ＣＸＣＲ４拮抗作用を有する化合物を提供する。また、本発明は、同化合物を含有する医薬組成物、例えばエイズ、慢性リンパ性Ｂ細胞白血病、癌ならびに慢性関節リューマチの予防及び／又は治療剤を提供する。
【００１８】
本発明のＣＸＣＲ４拮抗作用を有する化合物は、具体的には下記式Ｉで表される環状ペプチド又はその生理学的に許容される塩（以下、「本発明のペプチド」又は「本発明の環状ペプチド」と総称する場合もある）である。
シクロ−（−Ａ１−Ｂ１−Ｂ２−Ａ２−Ｃ−）  （Ｉ）：（配列番号１）
［式中、Ａ１及びＡ２は、独立して、側鎖に２０個以下の炭素原子からなる芳香環もしくは複素環を有する芳香族アミノ酸、またはアラニンを表し；
Ｂ１及びＢ２は、独立して、アルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、２，４−ジアミノ酪酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、リジン、オルニチン、これらの誘導体、またはアスパラギン酸、グルタミン酸、２−アミノヘキサン−１、６−ジカルボン酸、これらの側鎖アミド誘導体、またはアラニンを表し；
Ｃは、グリシン、アラニン、サルコシン、１−アミノシクロペンチル−１−カルボン酸、１−アミノシクロヘキシル−１−カルボン酸、β−アラニン、４−アミノ酪酸、５−アミノペンタン酸、プロリン、又はピペコリン酸を表し；
それぞれのアミノ酸残基は、アルファ−アミノ官能基が、１〜１８個の炭素原子を有するアルキル基又はベンジル基で置換されていてもよく；
それぞれのアミノ酸残基はＤ体であってもＬ体であってもよい］。
【００１９】
上記式Ｉで示されるＡ１は、側鎖に２０個以下、好ましくは１４個以下の炭素原子からなる芳香環もしくは複素環を有する芳香族アミノ酸残基（例えば、チロシン、ヒドロキシフェニルグリシン、フェニルアラニン、トリプトファン、３−（２−ナフチル）アラニン）、またはアラニン（それぞれＬ体であってもＤ体であってもよい）を表し、好ましくは、チロシン、ヒドロキシフェニルグリシン、アラニンを表す。
【００２０】
上記式Ｉで示されるＡ２は、側鎖に２０個以下、好ましくは１４個以下の炭素原子からなる芳香環もしくは複素環を有する芳香族アミノ酸残基（例えば、フェニルアラニン、トリプトファン、３−（２−ナフチル）アラニン）、またはアラニン（それぞれＬ体であってもＤ体であってもよい）を表し、好ましくは、フェニルアラニン、トリプトファン、３−（２−ナフチル）アラニン、アラニンを表す。前記Ａ１及びＡ２は、それぞれ同じアミノ酸残基であってもよく、異なるアミノ酸残基であってもよい。
【００２１】
上記式Ｉで示されるＢ１およびＢ２は、独立して、アルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、２，４−ジアミノ酪酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、リジン、オルニチン残基、これらの誘導体、またはアスパラギン酸、グルタミン酸、２−アミノヘキサン−１、６−ジカルボン酸、これらの側鎖アミド誘導体、またはアラニン（それぞれＬ体であってもＤ体であってもよい）を表し、好ましくは、アルギニン、ホモアルギニン、グルタミン酸、アラニン残基を表す。「誘導体」としては、好ましくは前記アミノ酸残基の側鎖が修飾されたものが挙げられる。アミノ酸残基の側鎖が修飾されたものとしては、例えば、アルキル基、たとえば、Ｎ−メチル基、Ｎ，Ｎ−ジメチル基、エチル基、イソプロピル基；ホルミル基；アシル基、例えば、アセチル基、プロピオニル基；カルバモイル基、例えば、メチルオキシカルボニル基、イソブチルオキシカルボニル基；グアニジノ基、例えば、グアニジノ基、テトラメチルグアニジノ基；アミジノ基などで修飾されているもの等が挙げられるが、これらに限定されない。前記側鎖アミド誘導体としては、グルタミン、アスパラギン等が挙げられる。前記Ｂ１及びＢ２は、それぞれ同じアミノ酸残基であってもよく、異なるアミノ酸残基であってもよい。
【００２２】
Ａ１、Ａ２、Ｂ１、Ｂ２、及びＣの各アミノ酸残基は、各々のアルファ−アミノ官能基が１〜１８個の炭素原子を有するアルキル基、好ましくは１〜７個の炭素原子を有するアルキル基、又はベンジル基で置換されていてもよい。
【００２３】
前記式Ｉにおいて、各々のアミノ酸残基は、ペプチド結合によって連結されている。
【００２４】
本発明のペプチドの塩としては、酸または塩基との生理学的に許容される塩が挙げられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、乳酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸）との塩などが挙げられる。
【００２５】
本発明のペプチドの具体例として、下記式ＩＩ−ＶＩＩ
シクロ−（−ＬＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  ＩＩ
シクロ−（−ＤＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＤＡ２−Ｃ−）  ＩＩＩ
シクロ−（−ＤＡ１−ＤＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  ＩＶ
シクロ−（−ＬＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  Ｖ：（配列番号２）
シクロ−（−ＤＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＬＡ２−Ｃ−）  ＶＩ
シクロ−（−ＤＡ１−ＬＢ１−ＬＢ２−ＤＡ２−Ｃ−）  ＶＩＩ
［式中、Ａ１及びＡ２は、独立して、側鎖に２０個以下の炭素原子からなる芳香環もしくは複素環を有する芳香族アミノ酸、またはアラニンを表し；
Ｂ１及びＢ２は、独立して、アルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、２，４−ジアミノ酪酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、リジン、オルニチン、これらの誘導体、またはアスパラギン酸、グルタミン酸、２−アミノヘキサン−１、６−ジカルボン酸、これらの側鎖アミド誘導体、またはアラニンを表し；
Ｃは、グリシン、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラニン、サルコシン、１−アミノシクロペンチル−１−カルボン酸、１−アミノシクロヘキシル−１−カルボン酸、β−アラニン、４−アミノ酪酸、５−アミノペンタン酸、プロリン、又はピペコリン酸を表し；
それぞれのアミノ酸残基は、アルファ−アミノ官能基が、１〜１８個の炭素原子を有するアルキル基又はベンジル基で置換されていてもよく；
ＬはＬ体を表し、ＤはＤ体を表す］で示される環状ペプチド、およびそれらの生理学的に許容される塩が挙げられる。
【００２６】
上記式ＩＩ−ＶＩＩ中のＡ１、Ａ２、Ｂ１、及びＢ２の意味及びそれぞれの好ましい態様は、前記と同様である。すなわち、これらのペプチドは、前記式Ｉで表されるペプチドにおいて、構成するアミノ酸残基を特定の光学異性体に限定したものである。
【００２７】
本発明の新規ペプチドとして、好ましくは以下の配列１〜６のアミノ酸配列を有する環状ペプチドが例示される。
（配列１）シクロ−（−ＬＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列４）シクロ−（−ＬＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
：（配列番号４）
（配列５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列６）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列７）シクロ−（−ＤＡｌａ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列８）シクロ−（−ＤＡｌａ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列９）シクロ−（−ＤＭｅＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１０）シクロ−（−ＤＭｅＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１１）シクロ−（−ＤＨｐｇ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１２）シクロ−（−ＤＨｐｇ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｌａ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１４）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｌａ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｌａ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１６）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＭｅＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１７）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１８）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＧｌｕ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列１９）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２０）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２１）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＡｌａ−Ｇｌｙ−）
（配列２２）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＮａｌ−Ｇｌｙ−）
（配列２４）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−ＬＡｌａ−）
（配列２５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＬＡｌａ−）
（配列２６）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＬＡｌａ−）
（配列２７）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−ＤＡｌａ−）
（配列２８）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＤＡｌａ−）
（配列２９）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−ＤＡｌａ−）
（配列３０）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−βＡｌａ−）
（配列３１）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−βＡｌａ−）
（配列３２）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−βＡｌａ−）
（配列３３）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｐｉｃ−）
（配列３４）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｓａｒ−）
（配列３５）シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｓａｒ−）
【００２８】
配列１〜３５に示されるアミノ酸配列を有する環状ペプチドをはじめとする本発明の環状ペプチドは、それ自体公知のペプチドの合成法に従って製造することができる。ペプチドの合成法としては、例えば、固相合成法、液相合成法のいずれによっても良い。すなわち、ペプチドを構成し得る部分ペプチド又はアミノ酸と残余部分とを縮合させ、生成物が保護基を有する場合は保護基を脱離することにより、目的の環状ペプチドを製造することができる。公知の縮合方法や保護基の脱離としては、例えば、以下の（ｉ）〜（ｉｉ）に記載された方法が挙げられる。
【００２９】
（ｉ）  Ｍ．  Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ  および  Ｍ．Ａ．  Ｏｎｄｅｔｔｉ、ペプチド  シンセシス（Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）、Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９６６年）
（ｉｉ）  ＳｃｈｒｏｅｄｅｒおよびＬｕｅｂｋｅ、ザ  ペプチド（Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ）、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９６５年）
（ｉｉｉ）泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、  丸善（１９７５年）
（ｉｖ）  矢島治明  および榊原俊平、生化学実験講座１、蛋白質の化学ＩＶ、２０５、（１９７７年）
（ｖ）  矢島治明監修、続医薬品の開発  第１４巻  ペプチド合成  広川書店
【００３０】
具体的なペプチド合成法として、例えば、以下の方法が挙げられる。
通常、市販のポリペプチド合成用樹脂を用いることができる。そのような樹脂としては、例えば、２−クロロトリチル樹脂などを挙げることができる。このような樹脂を用い、α−アミノ基と側鎖官能基を適当に保護したアミノ酸を、目的とするポリペプチドの配列通りに、それ自体公知の各種縮合方法に従い、樹脂上で縮合させる。反応の最後に樹脂からポリペプチドを切り出し、さらに高希釈溶液中で分子内ペプチド結合形成反応を実施し、最後に各種保護基を除去し、目的の環状ペプチドを取得する。上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、ポリペプチド合成に使用できる各種活性化試薬を用いることができるが、特に、カルボジイミド類がよい。カルボジイミド類としては、例えば、ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロリル）カルボジイミドなどが用いられる。これらによる活性化には、ラセミ化抑制添加剤（例えば、ＨＯＢｔ、ＨＯＯＢｔ、ＨＯＮＢ）とともに保護アミノ酸を直接樹脂に添加するか、または、対称酸無水物またはＨＯＢｔエステルあるいはＨＯＯＢｔあるいはＨＯＮＢエステルとしてあらかじめ保護アミノ酸の活性化を行なった後に樹脂に添加することができる。
【００３１】
保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用いられる溶媒としては、ポリペプチド縮合反応に使用しうることが知られている溶媒から適宜選択されうる。例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどの酸アミド類、塩化メチレン、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類、トリフルオロエタノールなどのアルコール類、ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類、ピリジン，ジオキサン，テトラヒドロフランなどのエーテル類、アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類、酢酸メチル、酢酸エチルなどのエステル類あるいはこれらの適宜の混合物などが用いられる。反応温度はポリペプチド結合形成反応に使用され得ることが知られている範囲から適宜選択され、通常約−２０℃〜５０℃の範囲から適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体は通常１．５〜４倍過剰で用いられる。ニンヒドリン反応を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合には保護基の脱離を行うことなく縮合反応を繰り返すことにより十分な縮合を行なうことができる。反応を繰り返しても十分な縮合が得られないときには、無水酢酸またはアセチルイミダゾールを用いて未反応アミノ酸をアセチル化することができる。
【００３２】
原料アミノ酸のアミノ基の保護基としては、例えば、Ｚ、Ｂｏｃ、ターシャリーペンチルオキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、Ｃｌ−Ｚ、Ｂｒ−Ｚ、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホルミル、２−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホスフィノチオイル、Ｆｍｏｃなどが用いられる。カルボキシル基は、例えば、アルキルエステル化（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ターシャリーブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、２−アダマンチルなどの直鎖状、分枝状もしくは環状アルキルエステル化）、アラルキルエステル化（例えば、ベンジルエステル、４−ニトロベンジルエステル、４−メトキシベンジルエステル、４−クロロベンジルエステル、ベンズヒドリルエステル化）、フェナシルエステル化、ベンジルオキシカルボニルヒドラジド化、ターシャリーブトキシカルボニルヒドラジド化、トリチルヒドラジド化などによって保護することができる。セリンの水酸基は、例えば、エステル化またはエーテル化によって保護することができる。このエステル化に適する基としては、例えば、アセチル基などの低級アルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイル基、ベンジルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基などの炭酸から誘導される基などが用いられる。また、エーテル化に適する基としては、例えば、ベンジル基、テトラヒドロピラニル基、ｔ−ブチル基などである。チロシンのフェノール性水酸基の保護基としては、例えば、ベンジル、Ｃｌ２−Ｂｚｌ、２−ニトロベンジル、Ｂｒ−Ｚ、ターシャリーブチルなどが用いられる。ヒスチジンのイミダゾールの保護基としては、例えば、Ｔｏｓ、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル、ＤＮＰ、ベンジルオキシメチル、Ｂｏｍ、Ｂｏｃ、Ｔｒｔ、Ｆｍｏｃなどが用いられる。
【００３３】
原料アミノ酸のカルボキシル基の活性化されたものとしては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エステル［アルコール（例えば、ペンタクロロフェノール、２，４，５−トリメチルベンゼンスルホニルトリクロロフェノール、２，４−ジニトロフェノール、シアノメチルアルコール、パラニトロフェノール、ＨＯＮＢ、Ｎ−ヒドロキシスクシミド、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、ＨＯＢｔ）とのエステル］などが用いられる。原料アミノ酸のアミノ基の活性化されたものとしては、例えば、対応するリン酸アミドが用いられる。
【００３４】
保護基の除去（脱離）方法としては、例えば、Ｐｄ−黒あるいはＰｄ−炭素などの触媒の存在下での水素気流中での接触還元や、また、無水フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸あるいはこれらの混合液などによる酸処理や、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピペリジン、ピペラジンなどによる塩基処理、また液体アンモニア中ナトリウムによる還元なども用いられる。上記酸処理による脱離反応は、一般に約−２０℃〜４０℃の温度で行なわれるが、酸処理においては、例えば、アニソール、フェノール、チオアニソール、メタクレゾール、パラクレゾール、ジメチルスルフィド、１，４−ブタンジチオール、１，２−エタンジチオールなどのようなカチオン捕捉剤の添加が有効である。また、ヒスチジンのイミダゾール保護基として用いられる２，４−ジニトロフェニル基はチオフェノール処理により除去され、トリプトファンのインドール保護基として用いられるホルミル基は上記の１，２−エタンジチオール、１，４−ブタンジチオールなどの存在下の酸処理による脱保護以外に、希水酸化ナトリウム溶液、希アンモニアなどによるアルカリ処理によっても除去される。
【００３５】
原料の反応に関与すべきでない官能基の保護ならびに保護基、およびその保護基の脱離、反応に関与する官能基の活性化などは公知の基または公知の手段から適宜選択しうる。
【００３６】
環状ペプチドを得る別の方法としては、例えば、まず、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基をアルコール類と縮合しアミノ酸エステルとして保護した後、アミノ基側にペプチド鎖を所望の鎖長まで延ばした後、該ペプチド鎖のＮ末端のα−アミノ基およびカルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基の保護基を除いたポリペプチドを製造し、このポリペプチドに上記したような高希釈溶液中で分子内ペプチド結合形成反応を実施する。縮合反応の詳細については上記と同様である。縮合により得られた保護ポリペプチドを精製した後、上記方法によりすべての保護基を除去し、所望の粗環状ペプチドを得ることができる。この粗環状ペプチドは既知の各種精製手段を駆使して精製し、主要画分を凍結乾燥することで所望の環状ポリペプチド得ることができる。
【００３７】
反応後は、通常の精製法、たとえば、溶媒抽出・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー・再結晶などを組み合わせて本発明のペプチドを精製単離することができる。上記方法で得られるペプチドが遊離体である場合は、公知の方法によって適当な塩に変換することができるし、逆に塩で得られた場合は、公知の方法によって遊離体に変換することができる。
【００３８】
本発明の環状ペプチドは、ＣＸＣＲ４とその生理的リガンドであるＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１との結合を拮抗的に阻害する作用を有している。また、後述するように、抗ＨＩＶ活性を有することが実験的に確認されている。したがって、ＣＸＣＲ４拮抗剤が治療に有効な疾患に対する治療又は予防のための医薬組成物の有効成分として使用することができる。前記疾患としては、エイズ、慢性リンパ性Ｂ細胞白血病、ＣＸＣＲ４を発現している癌種、例えば、口腔癌、咽頭癌、口唇癌、舌癌、歯肉癌、鼻咽頭癌、食道癌、胃癌、小腸癌、結腸癌を含む大腸癌、肝臓癌、胆のう癌、膵臓癌、鼻腔癌、肺癌、骨肉腫、軟部組織癌、皮膚癌、黒色腫、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、陰茎癌、膀胱癌、腎臓癌、脳腫瘍、甲状腺癌、リンパ腫、及び慢性関節リューマチ等が挙げられる。
【００３９】
本発明の環状ペプチドを医薬または動物薬として使用する場合は、常套手段に従って医薬組成物の調製を実施すればよい。例えば、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、本発明の環状ペプチドを生理学的に認められる担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化することができる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。
【００４０】
錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えばゼラチン、コーンスターチ、トラガントガム、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、前記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施にしたがって処方することができる。
【００４１】
注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムなど）などが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えばアルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤（例えばポリソルベート８０（商標）、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。注射用の油性液としてはゴマ油、大豆油などがあげられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに無菌的に充填される。
【００４２】
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えばヒトや哺乳動物（例えば、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サル、マントヒヒ、チンパンジーなど）に対して投与することができる。
本発明の環状ペプチドの投与量は、適応症、症状などにより差異はあるが、経口投与する場合、体重６０ｋｇに対して一回につき通常約０．１から１０００ｍｇ、好ましくは約１．０から５００ｍｇ、より好ましくは約１．０から２００ｍｇである。非経口的に投与する場合は、体重６０ｋｇに対してその一回の投与量は投与対象、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば注射剤の形では一回につき通常約０．０１から３００ｍｇ程度、好ましくは約０．１から２００ｍｇ程度、より好ましくは約０．１から１００ｍｇ程度を静脈注射により投与すればよい。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００４３】
本発明の環状ペプチドは、他の薬物と併用して投与してもよい。本発明のペプチドと併用薬物との併用に際しては、本発明のペプチドと併用薬物の投与時期は限定されず、本発明の環状ペプチドと併用薬物とを、投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよい。併用薬物の投与量は、臨床上用いられている投与量に準ずればよく、投与対象、投与ルート、疾患、組み合わせ等により適宜選択することができる。
【００４４】
本発明の環状ペプチドと併用薬物との投与形態は、特に限定されず、本発明のポリペプチド又はその塩と併用薬物とが、同時又は時間差をおいて組み合わされていればよい。このような投与形態としては、例えば、（１）本発明の環状ペプチドと併用薬物とを同時に製剤化して得られる単一の製剤の投与、（２）本発明の環状ペプチドと併用薬物とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での同時投与、（３）本発明の環状ペプチドと併用薬物とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での時間差をおいての投与、（４）本発明の環状ペプチドと併用薬物とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での同時投与、（５）本発明の環状ペプチドと併用薬物とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での時間差をおいての投与（例えば、本発明の環状ペプチド→併用薬物の順序での投与、あるいは逆の順序での投与）などが挙げられる。以下、これらの投与形態をまとめて、本発明の併用剤と略記する。
【００４５】
適当な併用薬剤を用いた本発明の併用剤は、毒性が低く、例えば、本発明の環状ペプチド及び／又は上記併用薬物を自体公知の方法に従って、薬理学的に許容される担体と混合して医薬組成物、例えば錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、散剤、顆粒剤、カプセル剤、（ソフトカプセルを含む）、液剤、注射剤、坐剤、徐放剤等として、経口的又は非経口的（例、局所、直腸、静脈投与等）に安全に投与することができる。注射剤は、静脈内、筋肉内、皮下、臓器内、鼻腔内、皮内、点眼、脳内、直腸内、膣内および腹腔内、腫瘍内部、腫瘍の近位などへの投与あるいは直接病巣に投与することができる。
【００４６】
本発明の併用剤の製造に用いられてもよい薬理学的に許容される担体としては、前記した本発明の医薬組成物に使用されるものと同様のものを使用することができる。
本発明の併用剤における本発明の環状ペプチドと併用薬物との配合比は、投与対象、投与ルート、疾患等により適宜選択することができる。
本発明の併用剤における併用薬物の含有量は、製剤の形態によって相違するが、通常製剤全体に対して約０．０１ないし１００重量％、好ましくは約０．１ないし５０重量％、さらに好ましくは約０．５ないし２０重量％程度である。
本発明の併用剤における担体等の添加剤の含有量は、製剤の形態によって相違するが、通常製剤全体に対して約１ないし９９．９９重量％、好ましくは約１０ないし９０重量％程度である。
【００４７】
【実施例】
以下に実施例を示して、本発明をより具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
【００４８】
【実施例１】環状ペプチド（配列１）の製造
シクロ−（−ＬＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
＜１＞保護ポリペプチド樹脂の合成
パラニトロフェニルカルボナートワング樹脂に対し、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）中抱水ヒドラジン（１０当量）処理することにより、ヒドラジンリンカーを有するワング樹脂を得た。本樹脂上で、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（５当量）を加え、ＤＭＦ中、ＤＩＰＣＤＩ（ジイソプロピルカルボジイミド）−ＨＯＢｔ法により縮合反応を行った。縮合反応の進行の程度は、Ｋａｉｓｅｒ，  Ｅ．ら［アナリティカル  バイオケミストリー（Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、第３４巻、５９５頁（１９７０年）］のニンヒドリン試験により調べた。反応の完結を確認後、Ｆｍｏｃ基を２０％ピペリジン／ＤＭＦで除去した。
【００４９】
＜２＞各アミノ酸の導入
以下同様にして、順次、ＬＮａｌ、ＬＡｒｇ（Ｐｂｆ）、ＤＡｒｇ（Ｐｂｆ）、ＬＴｙｒ（ｔ−Ｂｕ）残基を樹脂に導入し、保護基保護化ポリペプチド樹脂を得た。
【００５０】
＜３＞脱保護基および樹脂からの鎖状ペプチドの分離
保護基保護化ポリペプチド樹脂に対してＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）で２５℃、１．５時間反応させた。反応混合物から樹脂を濾別し、ＴＦＡで２回洗浄し、瀘液、洗液を合わせたものを減圧濃縮した。残渣を１Ｎ酢酸に溶解し、蒸留水で希釈した。本水溶液を大量分取型ＨＰＬＣ（コスモジール５Ｃ１８  ＡＲ−ＩＩカラム：アセトニトリル−水）により精製し、鎖状保護ペプチドヒドラジドを得た。
【００５１】
＜４＞アジド法による環化および精製
上述の鎖状ペプチドヒドラジドのＤＭＦ溶液に、−２５℃で４Ｍ  ＨＣｌのＤＭＦ溶液（３当量）および亜硝酸イソアミル（６当量）を加え、−２０℃、３０分反応させた。あらかじめ冷却したＤＭＦで希釈後、ＤＩＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）（５０当量）にて塩基性にし、−２０℃、２４時間反応させた。反応混合物を減圧濃縮後、１Ｎ酢酸に溶解し、蒸留水で希釈した。本水溶液を大量分取型ＨＰＬＣ（コスモジール５Ｃ１８  ＡＲ−ＩＩカラム：アセトニトリル−水）により精製し、単一ピークの環状ペプチドを得、凍結乾燥した。純度は、ＨＰＬＣにより確認した。
【００５２】
【実施例２】環状ペプチド（配列２）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＤＮａｌ−Ｇｌｙ−）
＜１＞保護ポリペプチド樹脂の合成
最初のグリシンを導入した２−クロロトリチル樹脂Ｈ−Ｇｌｙ−２ＣｌＴｒｔ樹脂に、Ｆｍｏｃ−ＤＮａｌ−ＯＨ（５当量）を加え、ＤＭＦ中、ＤＩＰＣＤＩ−ＨＯＢｔ法により縮合反応を行った。縮合反応の進行の程度は、Ｋａｉｓｅｒ，  Ｅ．ら［アナリティカル  バイオケミストリー（Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、第３４巻、５９５頁（１９７０年）］のニンヒドリン試験により調べた。反応の完結を確認後、Ｆｍｏｃ基を２０％ピペリジン／ＤＭＦで除去した。
【００５３】
＜２＞各アミノ酸の導入
以下同様にして、順次、ＬＡｒｇ（Ｐｂｆ）、ＤＡｒｇ（Ｐｂｆ）、ＤＴｙｒ（ｔ−Ｂｕ）残基を樹脂に導入し保護基保護化ポリペプチド樹脂を得た。
【００５４】
＜３＞樹脂からの鎖状ペプチドの分離
保護基保護化ポリペプチド樹脂に対して酢酸／ＴＦＥ（トリフルオロエタノール）／ＤＣＭ（ジクロロメタン）（１：１：３）で２５℃、２時間反応させた。反応混合物から樹脂を濾別し、酢酸／ＴＦＥ／ＤＣＭ（１：１：３）で２回洗浄し、瀘液、洗液を合わせたものを減圧濃縮した。
【００５５】
＜４＞ＤＰＰＡ（ジフェニルリン酸アジド）−ＮａＨＣＯ３による環化
上述の鎖状ペプチドおよびＮａＨＣＯ３（６．８当量）の高希釈ＤＭＦ溶液に、−４０℃でＤＰＰＡ（４．１当量）を加え、２５℃、３６時間反応させた。反応混合物からＮａＨＣＯ３を濾別し、ＤＭＦで２回洗浄し、瀘液、洗液を合わせたものを減圧濃縮した。残さをＣＨＣｌ３−メタノール（９：１）に溶解し、塩基性アルミナにより固相抽出処理を行うことにより無機塩を除去後、減圧濃縮し保護基保護化環状ペプチドを得た。
【００５６】
＜５＞脱保護基および精製
保護基保護化環状ペプチドに対して、９５％ＴＦＡ水溶液で２５℃、２時間反応させた。減圧濃縮後、１Ｎ酢酸に溶解し、蒸留水で希釈した。本水溶液を大量分取型ＨＰＬＣ（コスモジール５Ｃ１８  ＡＲ−ＩＩカラム：アセトニトリル−水）により精製し、単一ピークの環状ペプチドを得、凍結乾燥した。純度は、ＨＰＬＣにより確認した。
【００５７】
【実施例３】環状ペプチド（配列３）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
製造例２と同様の方法により導入するアミノ酸を変更することで、以上に示した環状ペプチド（配列３）を製造することができる。
【００５８】
【実施例４】環状ペプチド（配列５）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
＜１＞保護ポリペプチド樹脂の合成
パラニトロフェニルカルボナートワング樹脂に対し、ＤＭＦ中抱水ヒドラジン（１０当量）処理することにより、ヒドラジンリンカーを有するワング樹脂を得た。本樹脂上で、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（５当量）を加えＤＭＦ中、ＤＩＰＣＤＩ−ＨＯＢｔ法により縮合反応を行った。縮合反応の進行の程度は、Ｋａｉｓｅｒ，  Ｅ．ら［アナリティカル  バイオケミストリー（Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、第３４巻、５９５頁（１９７０年）］のニンヒドリン試験により調べた。反応の完結を確認後、Ｆｍｏｃ基を２０％ピペリジン／ＤＭＦで除去した。
【００５９】
＜２＞各アミノ酸の導入
以下同様にして、順次、ＬＮａｌ、ＬＡｒｇ（Ｐｂｆ）、ＬＡｒｇ（Ｐｂｆ）、ＤＴｙｒ（ｔ−Ｂｕ）残基を樹脂に導入し、保護基保護化ポリペプチド樹脂を得た。
【００６０】
＜３＞樹脂からの鎖状ペプチドの分離
保護基保護化ポリペプチド樹脂に対してＴＦＡ／ＤＣＭ（１：９）で２５℃、１．５時間反応させた。反応混合物から樹脂を濾別し、ＴＦＡ／ＤＣＭ（１：９）で２回洗浄し、瀘液、洗液を合わせたものを減圧濃縮した。
【００６１】
＜４＞アジド法による環化
上述の鎖状ペプチドのＤＭＦ溶液に、−２５℃で４Ｍ  ＨＣｌのＤＭＦ溶液（３当量）および亜硝酸イソアミル（６当量）を加え、−１０℃、２０分反応させた。あらかじめ冷却したＤＭＦで希釈後、ＤＩＥＡ（５０当量）にて塩基性にし、−２０℃、２４時間反応させた。反応混合物を減圧濃縮し、保護基保護化環状ペプチドを得た。
【００６２】
＜５＞脱保護基および精製
保護基保護化環状ペプチドに対して、９５％ＴＦＡ水溶液で２５℃、２時間反応させた。減圧濃縮後、１Ｎ酢酸に溶解し、蒸留水で希釈した。本水溶液を大量分取型ＨＰＬＣ（コスモジール５Ｃ１８  ＡＲ−ＩＩカラム：アセトニトリル−水）により精製し、単一ピークの環状ペプチドを得、凍結乾燥した。純度は、ＨＰＬＣにより確認した。
【００６３】
【実施例５】環状ペプチド（配列９，１０）の製造
シクロ−（−ＤＭｅＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
シクロ−（−ＤＭｅＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
Ｌ−２−ナフチルアラニンを導入した２−クロロトリチル樹脂Ｈ−ＬＮａｌ−２ＣｌＴｒｔ樹脂に、Ｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ（Ｌ−Ａｒｇ）、およびＴｙｒ（ｔ−Ｂｕ）を順次、縮合した。Ｆｍｏｃ基を除去した後、Ｎ−メチル基の導入とＧｌｙの縮合のために以下の操作を行った。ＤＣＭ中で２５℃、２時間、塩化ｏ−ニトロベンゼンスルホニル（３当量）、コリジン（６当量）と反応させた。樹脂を洗浄後、ＴＨＦ中で２５℃、２時間、ＭｅＯＨ（５当量）、トリフェニルホスフィン（５当量）、アゾジカルボン酸ジエチルエステル（５当量）と反応させた。続いて、樹脂を洗浄した後、ＤＭＦ中で２５℃、１．５時間、１，８−ジアザビシクロ−「５，４，０」−７−ウンデセン（５当量）、メルカプトエタノール（１０当量）と反応させた。以上の処理後の樹脂に対して、Ｇｌｙを、ヘキサフルオロリン酸ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム塩（４．９当量）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾ−ル（５当量）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１０当量）で２５℃、１．５時間反応させることにより導入した。環化、精製等は実施例２と同様にして行った。
【００６４】
【実施例６】環状ペプチド（配列１６，１７）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＭｅＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
実施例２に従って合成したが、Ｎ−メチル基の導入と続くＤＴｙｒ（ｔ−Ｂｕ）の縮合は実施例５と同様にして行った。
【００６５】
【実施例７】環状ペプチド（配列１８）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＧｌｕ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
実施例４と同様にして合成した。
【００６６】
【実施例８】環状ペプチド（配列１９，２０）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｇｌｙ−）
実施例２に従って合成したが、Ｎ−メチル基の導入と続くＤＡｒｇ（Ｐｂｆ）もしくはＬＡｒｇ（Ｐｂｆ）の縮合は実施例５と同様にして行った。
【００６７】
【実施例９】環状ペプチド（配列２２，２３）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＮａｌ−Ｇｌｙ−）
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＭｅＮａｌ−Ｇｌｙ−）
実施例２に従って合成したが、Ｎ−メチル基の導入と続くＬＡｒｇ（Ｐｂｆ）の縮合は実施例５と同様にして行った。
【００６８】
【実施例１０】環状ペプチド（配列３３）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｐｉｃ−）
実施例２に従って合成したが、最初にＤ−アルギニンを導入した２−クロロトリチル樹脂Ｈ−ＤＡｒｇ（Ｐｂｆ）−２ＣｌＴｒｔ樹脂を用い、順次アミノ酸を縮合させた後、最後にＬＡｒｇ（Ｐｂｆ）を縮合した。
【００６９】
【実施例１１】環状ペプチド（配列３４，３５）の製造
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＤＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｓａｒ−）
シクロ−（−ＤＴｙｒ−ＬＡｒｇ−ＬＡｒｇ−ＬＮａｌ−Ｓａｒ−）
実施例２に従って合成したが、最初にＤ−チロシンを導入した２−クロロトリチル樹脂Ｈ−ＤＴｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−２ＣｌＴｒｔ樹脂を用い、順次アミノ酸を縮合させた後、最後にＤＡｒｇもしくはＬＡｒｇを縮合した。また、Ｎ−メチル基の導入と続くＬＮａｌの縮合は実施例５に従って行った。
【００７０】
その他の配列は、実施例２と同様にして合成した。
【００７１】
【試験例１】［１２５Ｉ］−ＳＤＦ−１のＣＸＣＲ４受容体への結合に対する、本発明の環状ペプチドの阻害活性
恒常的にＣＸＣＲ４受容体を発現するＣＨＯ細胞（チャイニーズ・ハムスター卵巣細胞：Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ３１３，  １１８１−１１９３  （２００１）に記載の方法に準じて調製した。）を培養した９６穴マイクロタイタープレートの各ウェルに、それぞれ０．０１、０．１、１、１０μＭの環状ペプチド存在下、１５０ｐＭの［１２５Ｉ］−ＳＤＦ−１（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅから入手）を加え、４℃、１時間結合反応を行った。反応後、反応溶液を遠心分離し、非結合の［１２５Ｉ］−ＳＤＦ−１を除去し、各ウェルの放射活性を測定した。被検化合物を添加しない場合の放射活性を１００％として、各被検化合物のＣＸＣＲ４とＳＤＦ−１との結合を阻害する活性を求めた。結果を以下の表１に示す。尚、表１中、「Ｔ１４０」は、アミノ酸１４個のＣＸＣＲ４拮抗剤［バイオケミカル  バイオフィジカル  リサーチ  コミュニケーション（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．）第２５３巻、８７７−８８２頁（１９９８年）］である。
【００７２】
【表１】
2004196769.tif 000002
【００７３】
表１の結果から、本化合物は強いＣＸＣＲ４拮抗活性を有することが示された。
【００７４】
【試験例２】ＣＸＣＲ４受容体を介するＨＩＶ−１ＩＩＩＢの感染に対する、本発明の環状ペプチドの抗ウイルス活性
９６穴マイクロタイタープレート上、それぞれ５００μｇ／ｍＬから８段階にわたって５倍希釈した環状ペプチド存在下、ＨＩＶ−１ＩＩＩＢ感染ＭＴ−４細胞（Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ，  ２０，  ３０９−３２１  （１９８８）に記載の方法に準じて調製した）（２５０００／ｗｅｌｌ、ＭＯＩ：０．０１）を、感染直後に加え、３７℃、５日間培養した。ＭＴＴ（３’−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）法により生存細胞数を測定し、抗ウイルス活性を、ＨＩＶ感染による細胞障害を５０％抑制する濃度とした。結果を以下の表２に示す。
【００７５】
【表２】
2004196769.tif 000003
【００７６】
表２の結果から、本発明の環状ペプチドは強い抗ＨＩＶ活性を有することが示された。
【００７７】
【試験例３】本発明の環状ペプチドと血清および肝ホモジネート中での安定性
マウス血清１００μＬまたはラット肝ホモジネート（２０％リン酸緩衝液）１００μＬと、本発明の環状ペプチド（配列５）１００ｎｍｏｌ（１００μＬ）を混合し、３７℃でインキュベートして経時的サンプリングを行い、残存する本発明の環状ペプチドの量をＨＰＬＣで定量した。
【００７８】
【表３】
2004196769.tif 000004
【００７９】
表３の結果から、本化合物は血清および肝臓ホモジネート中で非常に安定であることが示された。
【００８０】
【発明の効果】
本発明のペプチドは、ＣＸＣＲ４とＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１との結合を阻害することから、エイズ、慢性リンパ性Ｂ細胞白血病の予防及び／又は治療薬、およびＣＸＣＲ４を発現している癌種予防及び／又は治療薬、並びに慢性関節リューマチの予防及び／又は治療薬として有用である。
【００８１】
【配列表】
2004196769.tif 000005
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2004196769.tif 000007
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