(57)【要約】      （修正有）【課題】  骨疾患の予防または治療に有用なリポソームならびにその原料となる脂質を提供する。【解決手段】  水酸基を少なくとも一つ有するシリル基で修飾された、式Ｉで示されるリン脂質。当該リン脂質を含有するリポソーム。2004203862.tif 000009（Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は保護されていてもよい水酸基、Ｒ４およびＲ５は、Ｃ７〜３０であってその一部が芳香環を形成してもよい直鎖状または分岐鎖状の炭化水素基、Ｘはスペーサー、ｍおよびｎは、０または１〜３の整数である。）【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
水酸基を少なくとも一つ有するシリル基で修飾されたリン脂質。
【請求項２】
式Ｉ
【化１】
2004203862.tif 000008
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は同一または異なって保護されていてもよい水酸基を、Ｒ４およびＲ５は同一または異なって炭素数７〜３０であってその一部が芳香環を形成してもよい直鎖状または分岐鎖状の炭化水素基を、Ｘはスペーサーを、ｍおよびｎは０または１〜３の整数を表す）で示される化合物であることを特徴とする請求項１記載のリン脂質。
【請求項３】
Ｒ４およびＲ５が炭素数１０〜３０の炭化水素基であることを特徴とする請求項２記載のリン脂質。
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が水酸基であり、Ｒ４およびＲ５が炭素数９〜１９の炭化水素基であることを特徴とする請求項２記載のリン脂質。
【請求項５】
Ｒ４およびＲ５が炭素数１０〜１８の炭化水素基であることを特徴とする請求項４記載のリン脂質。
【請求項６】
ｍが１であり、ｎが１であることを特徴とする請求項２〜５のいずれかに記載のリン脂質。
【請求項７】
Ｘが、−（ＣＨ２）３−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）２−であることを特徴とする請求項２〜６のいずれかに記載のリン脂質。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載のリン脂質を構成要素として含有することを特徴とするリポソーム。
【請求項９】
さらに生理活性成分を担持することを特徴とする請求項８に記載のリポソーム。
【請求項１０】
生理活性成分が骨疾患に対する予防または治療薬であることを特徴とする請求項８または９に記載のリポソーム。
【請求項１１】
骨疾患が骨髄癌であることを特徴とする請求項１０に記載のリポソーム。
【請求項１２】
請求項８〜１１のいずれかに記載のリポソームを含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１０または１１に記載のリポソームを含む医薬組成物を投与することを特徴とする骨疾患の予防または治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規且つ有用なリン脂質およびリポソームに関する。  
【背景技術】
【０００２】
生体由来の脂質あるいは類似の構造を持つ人工の脂質を水中に分散させるだけで細胞類似の構造を持った微小球が形成される。この脂質微小球はリポソームと呼ばれ、水溶性あるいは脂溶性の薬物をリポソームに担持させて生体内の特定の場所に薬物を搬送するための担体として利用しようとする試みが広く行われている（非特許文献１）。さらに最近ではリポソームは遺伝子治療の際の遺伝子の運搬体としての応用も盛んに研究されている。既にリポソームに担持させた抗ガン剤等がリポソーム製剤として市販されている（非特許文献２）。
【０００３】
ところが、リポソームは生体適合性の脂質で構成されてはいるものの、わずかな衝撃を受けても壊れてしまうという大きな欠点があり、実用的な分子素材としては強度が不十分であった。薬剤を担持したリポソームが生体内を循環して病巣にたどり着くまでの間十分な時間安定であることが望まれる。特に、骨は生体内に埋没していて、骨疾患の予防または治療は必ずしも容易でない場合があり、リポソーム自体が骨と親和性を有していて骨疾患の予防または治療薬を担持することができれば理想的であるが、従来そのようなリポソームは存在しなかった。
【０００４】
【非特許文献１】グレゴリアディス（Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ）ら、アナル・オフ・ザ・ニューヨーク・アカデミー・オフ・サイエンセス（Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、１９８５年、第４４６巻、ｐ．３１９
【非特許文献２】トロイ・オー・ハラシム（Ｔｒｏｙ  Ｏ．  Ｈａｒａｓｙｍ）、外２名、クリアランス・プロパティーズ・オフ・リポソームス・インボルビング・コンジュゲイテッド・プロテインズ・フォー・ターゲッティング（Ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｏｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）、アドバンスド・ドラッグ・デリバリー・レビューズ（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ）、１９９８年、第３２巻、ｐ．９９−１１８．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
骨疾患の予防または治療に有用なリポソームならびにその原料となるリン脂質を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意検討した結果、リポソームを構成する脂質分子の設計につき、脂質の親水基にセラミックスの構造を持たせてリポソームにセラミックスの強靭さを付与することを着想し、種々検討をおこなった結果、水酸基を少なくとも一つ有するシリル基を、介在基を介しまたは介せずにリン酸基に導入したリン脂質の創製に成功し、このリン脂質が上記問題点を一挙に解決し得ることを見出してさらに検討を重ねて本発明を完成させるに至った。  
【０００７】
すなわち、本発明は、
（１）水酸基を少なくとも一つ有するシリル基で修飾されたリン脂質、
（２）式Ｉ
【化１】
2004203862.tif 000002
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は同一または異なって保護されていてもよい水酸基を、Ｒ４およびＲ５は同一または異なって炭素数７〜３０であってその一部が芳香環を形成してもよい直鎖状または分岐鎖状の炭化水素基を、Ｘはスペーサーを、ｍおよびｎは０または１〜３の整数を表す）で示される化合物であることを特徴とする上記（１）記載のリン脂質、
（３）Ｒ４およびＲ５が炭素数１０〜３０の炭化水素基であることを特徴とする上記（２）記載のリン脂質、
（４）Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が水酸基であり、Ｒ４およびＲ５が炭素数９〜１９の炭化水素基であることを特徴とする上記（２）記載のリン脂質、
（５）Ｒ４およびＲ５が炭素数１０〜１８の炭化水素基であることを特徴とする上記（４）記載のリン脂質、
（６）  ｍが１であり、ｎが１であることを特徴とする上記（２）〜（５）のいずれかに記載のリン脂質、
（７）Ｘが、−（ＣＨ２）３−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）２−であることを特徴とする上記（２）〜（６）のいずれかに記載のリン脂質、
（８）上記（１）〜（７）のいずれかに記載のリン脂質を構成要素として含有することを特徴とするリポソーム、
（９）さらに生理活性成分を担持することを特徴とする上記（８）に記載のリポソーム、
（１０）生理活性成分が骨疾患に対する予防または治療薬であることを特徴とする上記（８）または（９）に記載のリポソーム、
（１１）骨疾患が骨髄癌であることを特徴とする上記（１０）に記載のリポソーム、
（１２）上記（８）〜（１１）のいずれかに記載のリポソームを含むことを特徴とする医薬組成物、および
（１３）上記（１０）または（１１）に記載のリポソームを含む医薬組成物を投与することを特徴とする骨疾患の予防または治療方法、
に関する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、安定性に優れ骨に親和性を有するリポソームならびにその原料となる脂質を提供することができる。また、医薬を提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
通常、リポソームとは、膜状に集合した脂質及び内部の水相から構成される閉鎖小胞を意味するが（Ｄ．Ｄ．Ｌａｓｉｃ、“ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：ｆｒｏｍ  ｂａｓｉｃ  ｔｏ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、ｐ．１−１７１（１９９３年）参照。）、本発明においては、特に内水相の存在を必須とせず、リン脂質が集合化した微粒子でありさえすればどのようなものでもよい。また、本発明のリポソームの構造も特に限定されず、二以上の多重層リポソームであってもよいし、一枚膜リポソームであってもよい。
本発明のリポソームの大きさは特に限定されないが、通常は体積平均粒子径が約５０〜１００００ｎｍ程度、好ましくは約６０〜７０００ｎｍ、さらに好ましくは約７０〜５０００ｎｍ、より好ましくは約１００〜１０００ｎｍ程度である。リポソームの体積平均粒子径は、動的光散乱法等の原理に基づき求めることができる（Ｄ．Ｄ．Ｌａｓｉｃ、“Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：ｆｒｏｍ  ｂａｓｉｃ  ｔｏ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、ｐ．１−１７１（１９９３年）参照）。
【００１０】
本発明のリポソームを構成するリン脂質としては、水酸基を少なくとも一つ有するシリル基で修飾されたリン脂質であることを特徴とする。このシリル基は、適当な介在基（スペーサー）を介しまたは介せずリン脂質に結合されている。ここで水酸基は保護されていても、保護されていなくてもよい。水酸基の保護基としては、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等の低級アルキル基（好ましくは炭素数１〜６）；例えばトリメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基等の低級アルキルシリル基（好ましくは炭素数３〜９）；例えばメトキシメチル基、２−メトキシエトキシメチル基等の低級アルコキシメチル基（好ましくは炭素数２〜６）；例えばテトラヒドロピラニル基；例えばトリメチルシリルエトキシメチル基；例えばベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、２，３−ジメトキシベンジル基、ｏ−ニトロベンジル基、ｐ−ニトロベンジル基、トリチル基等のアラルキル基（好ましくは炭素数７〜１２）；例えばホルミル基、アセチル基等のアシル基（好ましくは炭素数１〜１０）等が挙げられ、中でも、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基もしくはｔｅｒｔ−ブチル基等の低級アルキル基（好ましくは炭素数１〜６）、または例えばメトキシメチル基もしくは２−メトキシエトキシメチル基等の低級アルコキシメチル基（好ましくは炭素数２〜６）が好適である。シリル基は珪素を含む基であればなんでもよい。
【００１１】
リン脂質は特に限定されず、公知のリン脂質であってよい。  すなわち、前記リン脂質としては、例えばホスファチジルコリン（大豆ホスファチジルコリン、卵黄ホスファチジルコリン、ジラウロイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリンもしくはジステアロイルホスファチジルコリン等）、ホスファチジルエタノールアミン（ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンもしくはジステアロイルホスファチジルエタノールアミン等）、ホスファチジルセリン（ジラウロイルホスファチジルセリン、ジミリストイルホスファチジルセリン、ジパルミトイルホスファチジルセリンもしくはジステアロイルホスファチジルセリン等）、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール（ジラウロイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロールもしくはジステアロイルホスファチジルグリセロール等）、ホスファチジルイノシトール（ジラウロイルホスファチジルイノシトール、ジミリストイルホスファチジルイノシトール、ジパルミトイルホスファチジルイノシトールもしくはジステアロイルホスファチジルイノシトール等）、リゾホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、卵黄レシチン、大豆レシチンまたは水素添加リン脂質等の天然または合成のリン脂質等が挙げられる。
【００１２】
本発明の水酸基を少なくとも一つ有するシリル基で修飾されたリン脂質の好ましい態様は、式Ｉ    
【化２】
2004203862.tif 000003
で示される。式中Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は同一または異なって保護されていてもよい水酸基を表し、水酸基の保護基としては上記のとおりである。Ｒ４およびＲ５は同一または異なって通常炭素数約７〜３０、好ましくは炭素数約９〜３０、より好ましくは炭素数約１０〜３０、さらに好ましくは炭素数約９〜１９、最も好ましくは炭素数約１０〜１８の炭化水素基である。Ｒ４およびＲ５で示される炭化水素基は、直鎖状または分岐鎖状（環状を含む）であってよく、その一部が芳香環を形成していてもよい。また、Ｒ４およびＲ５は飽和炭化水素であってよく、不飽和炭化水素であってもよい。その具体例としては、５−メチルヘキシル、ヘプチル、オクチル、１−メチルヘプチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル、イコシル、エイコシル、オクタコシル、ノナコシル、トリアンコチル等が挙げられる。
【００１３】
上記した炭素数が１０〜３０の炭化水素基であるＲ４およびＲ５の一部が芳香環を形成している例としては、例えば式
【化３】
2004203862.tif 000004
（式中、ｐ１とｑ１は式８≦ｐ１＋ｑ１≦２８を満足する整数を表す）で示される基、式
【化４】
2004203862.tif 000005
（式中、ｐ２とｑ２は式７≦ｐ２＋ｑ２≦２７を満足する整数を表す）で示される基、式
【化５】
2004203862.tif 000006
（式中、ｐ３とｑ３は式６≦ｐ３＋ｑ３≦２６を満足する整数を表す）で示される基を挙げることができる。
尚、上記例としてベンゼン環で示した芳香環は、例えばナフタレン環等の縮合多環式炭化水素や、例えばチオフェン環、フラン環、ピリジン環等の５〜６員複素環であってよい。また上記の炭化水素基は、例えばアルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ等）、水酸基、カルボキシル、アミノ等通常医薬分野で常用される置換基で置換されていてもよいことは言うまでもない。
【００１４】
Ｘはスペーサーを表し、スペーサーとしては二価の基で、直鎖状、分岐鎖状および環状のいずれでもよい。分子量が約１４〜５００程度であり、構成原子は炭素、窒素、酸素、およびイオウから選ばれる。スペーサーの具体的な例としては、−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＳ−ＮＨ−、−（ＣＨ２）３−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）２、−（ＣＨ２）３−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＣＨ２−等が挙げられ、この中で−（ＣＨ２）３−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）２−が好ましい。
ｍおよびｎは０または１〜３の整数を表し、好ましくはｍが１であり、ｎが１である。
【００１５】
本発明のリン脂質は、スペーサーを介しまたは介せずにリン脂質の水酸基に例えばエステル結合やエーテル結合による公知の技術を用いて上記のシリル基を導入することにより容易に製造することができる。リン脂質にこのようなシリル基を導入するための手段は従来十分に確立されており、本発明においてもそれに従ってよい。このようにして製造された水酸基を少なくとも一つ有するシリル基で修飾されたリン脂質を構成脂質として用いてリポソームを製造する方法としては、特に限定されず、公知の方法を用いてよい。例えば、上記リン脂質および水相を使用し、薄膜法、逆相蒸発法、エタノール注入法、エーテル注入法、脱水−再水和法等により、リポソームを製造することができる。中でもエーテル注入法が好ましい。超音波照射法、凍結融解後の超音波照射法、エクストルージョン法、フレンチプレス法、ホモジナイゼーション法等の方法により、体積平均粒子径を調節することができる（Ｄ．Ｄ．Ｌａｓｉｃ、“Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：  ｆｒｏｍ  ｂａｓｉｃ  ｔｏ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、ｐ．１−１７１（１９９３年）参照。）。ここで、水相には、水、水溶液が含まれリポソーム内部を構成する水溶液でもあり得る。本技術分野において通常使用されるものであれば特に制限はないが、塩化ナトリウム水溶液、リン酸緩衝液もしくは酢酸緩衝液等の緩衝液、グルコース水溶液、トレハロース等の糖水溶液またはこれらの混合水溶液が好適である。一般に、生体内に投与されたリポソームの構造を安定に保つため、リポソームの製造に使用される水相は、リポソーム外、すなわち、体液に対して等張に近く、リポソーム内外にかかる浸透圧が小さいことが好ましい。
【００１６】
本発明におけるリン脂質が、本発明のリポソームを形成するメカニズムを次のように考えている。上記したリン脂質は２本の炭化水素鎖を持つ分子の頭部にセラミックス構造、つまり骨に親和性を有する上記シリル基を有している。この頭部の構造は、溶液からセラミックスをつくりだす公知の技術であるゾル-ゲル法に基づいてケイ素原子と酸素原子が交互につながる石英と同様の構造を室温で形成することができる。本発明によるリポソームの製造をこの原理を利用しておこなうことができる。すなわち上記のリン脂質に含まれる上記シリル基の保護基、例えばアルコキシドが加水分解されて親水的なシラノール基になり、同時に自己組織的に分子が集合して、例えば二分子膜を形成する。さらに、形成された二分子膜の表面でシラノール基同士が反応して石英と同様の化学結合（式III）が発達して、すなわちシロキサンネットワークが二分子膜の表面に形成されて上記したようにわずかな衝撃でも壊れてしまうという従来の大きな欠点を克服した強靭なリポソームが得られる。
【化６】
2004203862.tif 000007
【００１７】
本発明のリポソームは、好ましくは生理活性成分を担持させて使用する。生理活性成分の担持形態は特に限定されない。例えば、生理活性成分はリポソーム内に封入されていてもよいし、リポソームの表面に吸着もしくは結合していてもよい。前記生理活性成分としては、動物、好ましくはヒトに投与できる任意の化合物あるいは物質組成物であれば、特に限定されない。例えば前記生理活性成分としては、体内で生理活性を発揮し、疾患の予防または治療に有効な化合物または組成物、例えば造影剤等の診断に用いる化合物または組成物、さらに遺伝子治療に有用な遺伝子等も含まれる。前記生理活性成分としては、例えば、カルシウム剤、活性型ビタミンＤ３（例、１α−ヒドロキシビタミンＤ3、１α−２，５−ジヒドロキシビタミンＤ3、フロカルシトリオール、セカルシフェロール等）、カルシトニンおよびその誘導体、ペプチド類、（インターロイキン−１β変換酵素、カテプシンＢ、カテプシンＬ等）、非ペプチド性軟骨形成促進物質、ベンゾチオピラン、ベンゾチエビン誘導体等の軟骨形成促進作用または骨形成促進作用を有する物質（例、特開平３−２３２８８０号公報、特開平４−３６４１７９号公報、特開平８−２３１５６９号公報、特開平２０００−７２６７８号公報等に記載の化合物またはその塩）、β−アラニル−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、キサンチン誘導体、トロンボモデュリン、１７β−エストラジオール、ノルエチンドロン等のステロイド系ホルモン、ポリフェノール化合物、プロスタグランジン類、インターフェロン等の公知の骨疾患または関節疾患の予防・治療剤；例えばモルフィン、コデイン、ペンタゾシン等の中枢性鎮痛剤；プレドニゾロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン等のステロイド剤、アスピリン、インドメタシン、ロキソプロフェン、ジクロフェナクナトリウム等の非ステロイド性抗炎症剤、ブロメルシン、リゾチーム、プロクターゼ等の消炎酵素剤等の消炎鎮痛剤；金チオリンゴ酸ナトリウム、オーラノフィン、Ｄ‐ペニシラミン、ブシラミン、ロベンザリット、アクタリット、サラゾスルファピリジン等の抗リウマチ薬；メトトレキサート、サイクロフォスファミド、アザチオプリン、ミゾリビン等の免疫抑制剤；アシクロビル、ジドブディン（zidovudin）、インターフェロン類等の抗ウイルス剤；アミノグリコシド、セファロスポリン、テトラサイクリン等の抗菌剤；ポリエン系抗生物質；イミダゾール、トリアゾール等の抗真菌剤；コレステロール等のステロール；例えば糖やデンプン等の炭水化物；細胞受容体蛋白質、免疫グロブリン、酵素、ホルモン、神経伝達物質、糖蛋白質、ペプチド、蛋白質；色素；放射性同位体、放射性同位体標識化合物等の放射線標識；放射線不透過性化合物；蛍光性化合物；気管支拡張剤；局所麻酔薬等が挙げられる。
【００１８】
本発明においては、中でも生理活性成分として抗腫瘍剤を用いることが好ましい。前記抗腫瘍剤としては、特に限定されないが、例えば、アルキル化剤、各種代謝拮抗剤、抗腫瘍性抗生物質、その他抗腫瘍剤、抗腫瘍性植物成分、ＢＲＭ（生物学的応答性制御物質）、血管新生阻害剤、細胞接着阻害剤、マトリックス・メタロプロテアーゼ阻害剤またはホルモン等が挙げられる。
【００１９】
より具体的には、アルキル化剤として、例えば、ナイトロジェンマスタード、ナイトロジェンマスタードＮ−オキシド、イホスファミド、メルファラン、シクロホスファミド、クロラムブシル等のクロロエチルアミン系アルキル化剤、；例えば、カルボコン、チオテパ等のアジリジン系アルキル化剤；例えば、ディブロモマンニトール、ディブロモダルシトール等のエポキシド系アルキル化剤；例えば、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ニムスチンハイドロクロライド、クロロゾトシン、ラニムスチン等のニトロソウレア系アルキル化剤；ブスルファン、トシル酸インプロスルファン、ピポスルファン等のスルホン酸エステル類；ダカルバジン；プロカルバジン等が挙げられる。
各種代謝拮抗剤としては、例えば、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、６−チオグアニン、チオイノシン等のプリン代謝拮抗剤；フルオロウラシル、テガフール、テガフール・ウラシル、カルモフール、ドキシフルリジン、ブロクスウリジン、シタラビン、エノシタビン等のピリミジン代謝拮抗剤；メトトレキサート、トリメトレキサート等の葉酸代謝拮抗剤等、および、その塩もしくは複合体が挙げられる。
【００２０】
抗腫瘍性抗生物質としては、例えば、ダウノルビシン、アクラルビシン、ドキソルビシン、ピラルビシン、エピルビシン等のアントラサイクリン系；アクチノマイシンＤ等のアクチノマイシン系；クロモマイシンＡ3等のクロモマイシン系；マイトマイシンＣ等のマイトマイシン系；ブレオマイシン、ペプロマイシン等のブレオマイシン系等；および、それらの塩もしくは複合体が挙げられる。その他の抗腫瘍剤としては、例えば、シスプラチン、カルボプラチン、タモキシフェン、Ｌ−アスパラギナーゼ、アセブラトン、シゾフィラン、ピシバニール、ウベニメクス、クレスチン等、および、それらの塩もしくは複合体が挙げられる。
【００２１】
抗腫瘍性植物成分としては、例えば、カンプトテシン、ビンデシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン等の植物アルカロイド類；エトポシド、テニポシド等のエピポドフィロトキシン類；および、その塩もしくは複合体が挙げられる。また、ピポブロマン、ネオカルチノスタチン、ヒドロキシウレア等も挙げることができる。ＢＲＭとしては、例えば、腫瘍壊死因子、インドメタシン等、および、その塩もしくは複合体が挙げられる。血管新生阻害剤としては、例えばフマギロール誘導体、および、その塩もしくは複合体が挙げられる。細胞接着阻害剤としては、例えば、ＲＧＤ配列を有する物質、および、その塩もしくは複合体が挙げられる。マトリックス・メタロプロテアーゼ阻害剤としては、例えば、マリマスタット、バチマスタット等、および、その塩もしくは複合体が挙げられる。ホルモンとしては、例えばヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プラステロン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、オキシメトロン、ナンドロロン、メテノロン、ホスフェストロール、エチニルエストラジオール、クロルマジノン、メドロキシプロゲステロン等、および、その塩もしくは複合体が挙げられる。
【００２２】
本発明の実施態様として、生理活性成分が骨疾患に対する予防または治療薬であることが好ましい。本発明によるリポソームは上記した様に、その表面が石英と同様な化学結合をした無機物であり、そのために、わずかな衝撃では壊れない強靭性を有するのみならず人体の骨を構成する有機−無機複合体中の無機物の主成分であるヒドロキシアパタイトと大きな親和性を有する。したがって、本発明によるリポソームは、例えば種々の骨疾患に対して、その患部で薬剤を除放できる担体として有効的に機能する。骨疾患としては、例えば感染性疾患、関節リウマチ、慢性関節疾患および骨壊死症、骨・軟部腫瘍および腫瘍類似疾患、骨髄腫、骨系統疾患、代謝性骨疾患、致死性骨異形成症、軟骨無形成症、軟骨低形成症、偽性軟骨無形成症、多発性骨端異形成症、Ｋｎｉｅｓｔ骨異形成症、Ｓｔｉｃｋｌｅｒ骨異形成症、先天性脊椎骨端異形成症、遅発性脊椎骨端異形成症、Ｌａｒｓｅｎ症候群、点状軟骨異形成（症）、Ｅｌｌｉｓ-ｖａｎ Ｃｒｅｖｅｌｄ骨異形成症、骨幹端異形成（症）、低フォスファターゼ症、毛髪・鼻・指節異形成症、鎖骨・頭蓋異形成症、ムコ多糖症型（Ｈｕｒｌｅｒ症候群）、ムコ多糖症型（Ｈｕｎｔｅｒ症候群）、ムコ多糖症型（Ｍｏｒｑｕｉｏ症候群）、骨形成不全症、Ｍａｒｆａｎ症候群、多発性軟骨性外骨腫症、Ｏｌｌｉｅｒ病、ＭｃＣｕｎｅ-Ａｌｂｒｉｇｈｔ症候群、大理石骨病、濃化異骨症、Ｅｎｇｅｌｍａｎｎ病、メロレオストーシス、骨斑紋症、Ａｐｅｒｔ症候群、Ｐｏｌａｎｄ症候群、Ｄｏｗｎ症、くる病、骨軟化症、骨粗鬆症、腎性骨ジストロフィー、骨Ｐａｇｅｔ病、筋・神経疾患、末梢循環障害、壊死性疾患、肩甲帯の疾患、上腕の疾患、肘関節の疾患、前腕の疾患、手関節の疾患、手の疾患、脊椎・脊髄の疾患、頚椎部の疾患、胸椎部・胸郭の疾患、脊柱変形、腰仙椎部の疾患、骨盤の疾患、股関節の疾患、下肢全体の問題、大腿の疾患、膝関節の疾患、下腿の疾患、足関節・足部の疾患等が挙げられる。本発明の実施態様として、骨の疾患が骨髄腫であることが好ましい。
また、歯科領域においても、歯周病の治療、歯周疾患における歯周組織欠損の修復、人工歯根の安定化、顎堤形成および口蓋裂の修復等にも応用が期待できる。
【００２３】
リポソームに上記医薬等の生理活性成分を担持させる方法は従来充分に確立されているので、本発明においてもそれに従ってよい。例えば、上記リン脂質からリポソームを形成する際において、使用する水相に生理活性成分を溶解させておけば、生理活性成分を担持もしくは取り込んだリポソームが製造される。
【００２４】
本発明のリポソームを含む医薬組成物は、上記生理活性成分を担持しているリポソーム分散液をそのまま用いてもよく、あるいは糖類、多価アルコール、水溶性高分子、非イオン界面活性剤、抗酸化剤、ｐＨ調節剤、水和促進剤などの添加物を添加してもよい。
また、リポソーム分散液または前記添加物を添加したリポソーム分散液を乾燥（例、凍結乾燥、噴霧乾燥等）することにより、乾燥リポソーム製剤としてもよい。これらの乾燥リポソーム製剤も本発明のリポソームを含む医薬組成物に含まれる。リポソーム分散液の乾燥の方法として、例えば、リポソーム分散液に糖等を加え、通常の製剤の凍結乾燥に用いられる一般的な条件で凍結乾燥する方法があげられる。乾燥リポソーム製剤は、水、生理食塩水、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液などの緩衝液を加えてリポソーム分散液とすることにより、注射剤等の液剤として用いることができる。こうして、得られたリポソーム分散液は、そのまま用いてもよく、あるいは前記添加剤や薬理学的に許容される賦形剤を添加して用いてもよい。リポソーム分散液中の添加物は、生理的浸透圧になる濃度に調整されるように添加されることが好ましい。また。乾燥リポソーム製剤はそのまま、あるいは薬理学的に許容される賦形剤と共に顆粒剤、錠剤などの固形剤として使用してもよい。
【００２５】
本発明のリポソームを含む医薬組成物は、通常、該リポソームと薬理学的に許容される賦形剤とを自体公知の方法［製剤技術分野において慣用の方法、例えば日本薬局方（例えば第１３改正）に記載の方法等］にしたがって混合することによって製造される。薬学的に許容される賦形剤としては、製剤素材として慣用の各種有機あるいは無機賦形剤物質が用いられ、固形製剤における滑沢剤、結合剤、崩壊剤；液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤等が挙げられる。また必要に応じて、界面活性剤、発泡剤、色素、酸味剤、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤、矯味剤等の製剤添加物を用いることもできる。
【００２６】
薬学的に許容される賦形剤として、より具体的には、クエン酸カルシウム、リン酸カルシウム等の無機塩の賦形剤；例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、軽質無水ケイ酸、含水二酸化珪素等の滑沢剤；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、α化デンプン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、アラビアゴム末、ゼラチンまたはプルラン等の結合剤；低置換度ヒドロキシプロピルセルロースや結晶セルロース等のセルロース類、トウモロコシデンプン、部分アルファ化デンプンやヒドロキシプロピルスターチ等の各種デンプンもしくはデンプン誘導体、クロスポビドンまたはベントナイト等の崩壊剤等が挙げられる。
【００２７】
また、塩溶液、ブドウ糖溶液または塩溶液とブドウ糖溶液の混合物等の溶剤；例えば、デキストラン、ポリビニルピロリドン、安息香酸ナトリウム、エチレンジアミン、サリチル酸アミド、ニコチン酸アミド、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油誘導体等の溶解補助剤；例えば、ホウ酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、酒石酸緩衝剤、酢酸緩衝剤等の緩衝剤；例えばアルブミン、グリセリン、プロピレングリコール等の多価アルコール、リドカイン塩酸塩、ベンジルアルコール等の無痛化剤等が挙げられる。
【００２８】
さらには、例えば、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、リン脂質、グリセリン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ショ糖脂肪酸エステル等の界面活性剤；例えば、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カルシウム等の発泡剤；例えばクエン酸、酒石酸、リンゴ酸等の酸味剤；例えば、三二酸化鉄、黄色三二酸化鉄、タール系色素等の色素；例えば、レモン、レモンライム、オレンジ、パイン、ミント、メントール等の香料；例えば、サッカリンナトリウム、グリチルリチン二カリウム、アスパルテーム、ステビア、ソーマチン等の甘味剤；例えば、クエン酸、クエン酸ナトリウム、コハク酸、酒石酸、フマル酸、グルタミン酸等の矯味剤等が挙げられる。
【００２９】
さらに、安定化剤としては、例えば糖類や亜硫酸ナトリウム等が挙げられる。糖類としては、グルコース、フルクトース、キシリトール、フコース、ガラクトース等の単糖類；マルトース、シュクロース、ラクトース、ラクツトース、メリビオース等の二糖類；フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、ラクトオリゴ糖等のオリゴ糖類；デキストラン等の多糖類等が挙げられる。保存剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸エステル、ベンジルアルコール、クロロクレゾール、フェネチルアルコール、塩化ベンゼトニウム等が挙げられる。キレート剤としては、例えば、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。抗酸化剤としては、例えば、亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム等が挙げられる。
【００３０】
本発明に係る医薬の剤形としては、例えば錠剤、カプセル剤（ソフトカプセル、マイクロカプセル、腸溶性カプセルを含む）、散剤、顆粒剤、シロップ剤等の経口剤；および注射剤（例、皮下注射剤、静脈内注射剤、筋肉内注射剤、腹腔内注射剤等）、外用剤（例、経鼻投与製剤、経皮製剤、軟膏剤等）、坐剤（例、直腸坐剤、膣坐剤等）、ペレット、点滴剤、徐放性製剤（例、徐放性マイクロカプセル等）等の非経口剤が挙げられる。本発明に係る医薬は、注射剤の剤形を有していることが特に好ましい。
本発明にかかる医薬の投与量は、リポソームが有する生理活性物質の種類、医薬の剤型、治療すべき病態の種類、症状および疾患の重篤度、患者の年齢、性別もしくは体重、投与方法等により異なるので、一概には言えないが、医師が上記の状況を総合的に判断して決定することができる。
本発明にかかる医薬の投与経路は、特に限定されず、上述のような本発明にかかる医薬の形態により、経口投与してもよいし、非経口投与してもよい。
本発明の好ましい実施態様は非経口投与である。例えば、本発明にかかる医薬が注射剤の場合、例えば、関節内注射、静脈内注射、皮下注射、皮内注射、筋肉内注射あるいは腹腔内注射のような医療上適当な投与形態が例示できる。
【００３１】
本発明を、実施例を用いて説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
なお、実施例において使用される略号は以下を示す。
Ｅｔ:エチル基
ＴＬＣ：ＴＬＣアルミニウムシートシリカゲル  ６０Ｆ２５４ＭＥＲＣＫ
ＤＰＰＥ：ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン
（ＥｔＯ）３ＳｉＣ３ＵＤＰＰＥ：尿素（Ｕｒｅａ）結合でＤＰＰＥに（ＥｔＯ）３ＳｉＣ３を導入したことを意味する。
ＤＬＰＥ：ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン
（ＥｔＯ）３ＳｉＣ３ＵＤＬＰＥ：尿素（Ｕｒｅａ）結合でＤＬＰＥに（ＥｔＯ）３ＳｉＣ３を導入したことを意味する。
【実施例１】
【００３２】
（ＥｔＯ）３ＳｉＣ３ＵＤＰＰＥの合成；
ＤＰＰＥ（１０２ｍｇ、１．４７×１０−４ｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍＬ）に混合し、トリエチルアミン（２９．２ｍｇ、２．８９×１０−４ｍｏｌ）を加えた後、３−イソシアナートプロピルトリエトキシシラン（４２．９ｍｇ、１．７３×１０−４ｍｏｌ）を加え、室温で撹拌した。１６０時間後、ＴＬＣにより（ＥｔＯ）３ＳｉＣ３ＵＤＰＰＥ由来のスポットの出現とＤＰＰＥ由来のスポットの消失を確認し、溶媒を減圧下で留去して減圧乾燥を行い白色固体を得た。これをカラムクロマトグラフ法〔シリカゲル６０Ｎ（関東化学株式会社）、クロロホルム：エタノール（２：１ｖ／ｖ）〕により精製を行い、５０℃で８時間３０分減圧乾燥を行い白色の固体を得た。この白色の固体の収量（収率）は４７．０ｍｇ（３４．０％）であった。元素分析の結果、Ｃ４７Ｈ９５Ｎ２Ｏ１２ＰＳｉ・１．５Ｈ２Ｏとして、理論値；  Ｃ：５８．４２、Ｈ：１０．２２、Ｎ：２．９０、実測値；  Ｃ：５８．４４、Ｈ：１０．３１、Ｎ：３．０６となり、理論値とほぼ等しい値が得られた。
ＴＬＣ（Ｒｆ値）：０．５１  
【実施例２】
【００３３】
リポソームの調製；
１０ｍＬのサンプル管に（ＥｔＯ）３ＳｉＣ３ＵＤＰＰＥ（１．４１ｍｇ、１．５０×１０−６ｍｏｌ）を入れ、超純水５．０ｍＬを加えた（脂質濃度０．３ｍＭ）。この溶液を７０℃の温浴で温めつつ１０分間Ｖｏｒｔｅｘ  ｍｉｘｅｒにより振とうした。さらにガラスビーズを加え５０分間  Ｖｏｒｔｅｘ  ｍｉｘｅｒにより振とうし、所望のリポソームを得た。サンプル管の壁面に脂質の凝集は見られなかった。ここでＤＬＳ（動的光散乱法）を利用して得られたリポソームの粒径等を測定したところ、流体力学的直径は４５５ｎｍ、多分散指数は７．２８×１０−２であった。
【実施例３】
【００３４】
（ＥｔＯ）３ＳｉＣ３ＵＤＬＰＥの合成；
ジクロロメタン（５０ｍＬ）、トリエチルアミン（３４．９ｍｇ、３．４５×１０−４ｍｏｌ）、ＤＬＰＥ（１００．７ｍｇ、１．７４×１０−４ｍｏｌ）、３−イソシアナートプロピルトリエトキシシラン（５０．８ｍｇ、２．０６×１０−４ｍｏｌ）を混合して還流・攪拌を行った。反応開始から２時間後、ＴＬＣ（展開溶媒；クロロホルム：エタノール＝１：１ｖ／ｖ）により（ＥｔＯ）３ＳｉＣ３ＵＤＬＰＥ由来のスポットの出現とＤＬＰＥ由来のスポットの消失を確認し、反応を中止した。溶媒を減圧下で留去して減圧乾燥を行い、無色透明油状物１５６．２ｍｇを得た。これをカラムクロマトグラフ法〔Ｗａｋｏｇｅｌ  Ｃ−２００（和光純薬工業株式会社）、クロロホルム：エタノール（１：１ｖ／ｖ）〕により精製を行い、４０℃で８時間減圧乾燥を行うことで白色の固体を得た。この白色の固体の収量（収率）は５６．２ｍｇ（収率３９．１％）であった。得られた固体について１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの測定を行い、（ＥｔＯ）３ＳｉＣ３ＵＤＬＰＥであることを確認した。
ＴＬＣ（Ｒｆ値）：０．５２
【実施例４】
【００３５】
リポソームの調製；
１０ｍＬのサンプル管に（ＥｔＯ）３ＳｉＣ３ＵＤＬＰＥ（４．０１ｍｇ、４．８５×１０−６ｍｏｌ）を入れ、ここにガラスビーズと８０℃に加熱した生理食塩水４ｍＬを加えた（脂質濃度１．２１ｍＭ）。この溶液に対して３０秒間のＶｏｒｔｅｘ  ｍｉｘｅｒによる攪拌と、３０秒間の温浴（８０℃）という操作を１０回繰り返した。次にこの溶液に対してバスタイプソニケーターによる超音波処理を５０℃に加熱しながら１時間行い、所望のリポソームを得た。ここでＤＬＳ（動的光散乱法）を利用して得られたリポソームの粒径等を測定したところ、流体力学的直径は１５６．８ｎｍ、多分散指数は５．９９×１０−２であった。
【産業上の利用可能性】
【００３６】
本発明のリン脂質は、安定性に優れ骨に親和性を有するリポソームに利用できる。また、本発明のリン脂質を用いたリポソームは、特に骨疾患、例えば関節リウマチ、慢性関節疾患および骨壊死症、骨・軟部腫瘍および腫瘍類似疾患、骨髄腫、骨系統疾患、代謝性骨疾患、致死性骨異形成症、軟骨無形成症、軟骨低形成症、偽性軟骨無形成症、多発性骨端異形成症、Ｋｎｉｅｓｔ骨異形成症、Ｓｔｉｃｋｌｅｒ骨異形成症、先天性脊椎骨端異形成症、遅発性脊椎骨端異形成症、Ｌａｒｓｅｎ症候群、点状軟骨異形成（症）、Ｅｌｌｉｓ-ｖａｎ Ｃｒｅｖｅｌｄ骨異形成症、骨幹端異形成（症）、低フォスファターゼ症、毛髪・鼻・指節異形成症、鎖骨・頭蓋異形成症、ムコ多糖症型（Ｈｕｒｌｅｒ症候群）、ムコ多糖症型（Ｈｕｎｔｅｒ症候群）、ムコ多糖症型（Ｍｏｒｑｕｉｏ症候群）、骨形成不全症、Ｍａｒｆａｎ症候群、多発性軟骨性外骨腫症、Ｏｌｌｉｅｒ病、ＭｃＣｕｎｅ-Ａｌｂｒｉｇｈｔ症候群、大理石骨病、濃化異骨症、Ｅｎｇｅｌｍａｎｎ病、メロレオストーシス、骨斑紋症、Ａｐｅｒｔ症候群、Ｐｏｌａｎｄ症候群、Ｄｏｗｎ症、くる病、骨軟化症、骨粗鬆症、腎性骨ジストロフィー、骨Ｐａｇｅｔ病、筋・神経疾患、末梢循環障害、壊死性疾患、肩甲帯の疾患、上腕の疾患、肘関節の疾患、前腕の疾患、手関節の疾患、手の疾患、脊椎・脊髄の疾患、頚椎部の疾患、胸椎部・胸郭の疾患、脊柱変形、腰仙椎部の疾患、骨盤の疾患、股関節の疾患、下肢全体の問題、大腿の疾患、膝関節の疾患、下腿の疾患、足関節・足部等の骨疾患の予防、治療用の医薬として利用できる。