(57)【要約】【課題】Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスを正確かつ簡便に調べることができる検査方法並びに該検査方法に用いることができる新規な遺伝子及びその産物を提供すること並びに上記本発明の検査方法に有用な、測定用核酸並びに抗体及び該抗体の生産に有用な、組換えＤＮＡ体、形質転換細胞、生産方法を提供すること。【解決手段】Ｔｈ１細胞あるいはＴｈ２細胞に選択的に機能分子、すなわち、Ｔｈ１及びＴｈ２のいずれか一方において、他方よりも有意に多く発現又は生産されている、Ｔｈ１又はＴｈ２のマーカーとして利用可能な分子が発現していることを見出し、この機能分子をＴｈ１／Ｔｈ２バランスの診断法、治療法ならびに細胞医薬の開発に用いる。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の（ａ）または（ｂ）の核酸。
（ａ）  配列番号１若しくは３で表される塩基配列からなる核酸
（ｂ）  配列番号１若しくは３で表される塩基配列からなる核酸と相補的な配列からなる核酸あるいはストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であり、かつ免疫調節作用を有するタンパク質をコードする塩基配列からなる核酸。
【請求項２】
下記の（ｃ）または（ｄ）のタンパク質。
（ｃ）  配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質
（ｄ）  配列番号２で表されるアミノ酸配列において１もしくは複数のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ免疫調節作用を有するタンパク質。
【請求項３】
前記「複数のアミノ酸」が数個のアミノ酸である請求項２記載のタンパク質。
【請求項４】
下記の（ｅ）または（ｆ）の核酸。
（ｅ）  配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする核酸またはその相補鎖。
（ｆ）  配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする核酸またはその相補鎖に対して少なくとも７０％の相補性を有し、かつ免疫調節作用を有するタンパク質をコードする塩基配列からなる核酸。
【請求項５】
Ｔｈ１ヘルパーＴ細胞又はＴｈ２ヘルパーＴ細胞に発現した機能分子を利用したＴｈ１ヘルパーＴ細胞とＴｈ２ヘルパーＴ細胞のバランスを調べる検査方法。
【請求項６】
Ｔｈ１ヘルパーＴ細胞及びＴｈ２ヘルパーＴ細胞に発現した機能分子を利用したＴｈ１ヘルパーＴ細胞とＴｈ２ヘルパーＴ細胞のバランスを調べる検査方法。
【請求項７】
Ｔｈ１ヘルパーＴ細胞の機能分子が、Ｃ／ＥＢＰα、ＧＡＴＡ−４、Ｎｏｔｃｈ４、ＩＲＳ−４、Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  Ｃａ２＋−Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ＣＤ６、Ｇａｌａｃｔｉｎ−３、ＣＤ９７、ＤＥＣ１、Ｏｎｚｉｎ、ＧＢＰ３、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ２９、ＢＭＰ−１０のうち、少なくとも１つであることを特徴とする請求項５又は６記載の検査方法。
【請求項８】
Ｔｈ１ヘルパーＴ細胞の機能分子が、請求項１ないし４記載の核酸又はタンパク質である請求項５又は６記載の検査方法。
【請求項９】
Ｔｈ２ヘルパーＴ細胞の機能分子が、Ｉｎｔｅｇｒｉｎβ７、ＰＣＳＫ３、ＧＰ４９Ａ、ＣＴＬＡ−２α、ＴＤＡＧ５１、ＣＤ５３、Ｌａｍｉｎｉｎα５、ＰＰＡＲγ、ＥＣＭ１、ＣＲＡＢＰ２、ＣＹＰ１１Ａ  （Ｐ４５０ｓｃｃ）、２０α−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  （２０α−ＨＳＤ）、ＣＣＲ２のうち、少なくとも１つであることを特徴とする請求項５又は６記載の検査方法。
【請求項１０】
ヘルパーＴ細胞の機能分子の遺伝子、遺伝子産物、遺伝子ならびに遺伝子産物の抗体、遺伝子産物の生理活性、遺伝子を導入した細胞の少なくとも１つを指標として用いる請求項５ないし９記載の検査方法。
【請求項１１】
請求項１又は４記載の核酸の連続する１５塩基以上の領域と同一若しくは相補的な配列を有する核酸又はこの核酸の１０％以下の塩基が置換した核酸からなる、請求項１又は４記載の核酸の測定用核酸。
【請求項１２】
プライマー又はプローブである請求項１１記載の測定用核酸。
【請求項１３】
請求項１又は４記載の核酸若しくはその一部と、宿主細胞の中で発現可能なベクターＤＮＡとが機能的に連結してなる組換えＤＮＡ体であって、宿主細胞中で請求項２又は３記載のタンパク質を発現する組換えＤＮＡ体。
【請求項１４】
請求項１０記載の組換えＤＮＡ体により形質転換され、請求項２又は３記載のタンパク質を生産する細胞。
【請求項１５】
請求項１４に記載の細胞を培養し、該細胞により生産された請求項２又は３記載のタンパク質を回収することを含む、請求項２又は３記載のタンパク質の製造法。
【請求項１６】
請求項２若しくは３記載のタンパク質又は請求項１４記載の細胞を特異的に認識する抗体。
【請求項１７】
請求項２又は３記載のタンパク質、Ｃ／ＥＢＰα、ＧＡＴＡ−４、Ｎｏｔｃｈ４、ＩＲＳ−４、Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  Ｃａ２＋−Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ＣＤ６、Ｇａｌａｃｔｉｎ−３、ＣＤ９７、ＤＥＣ１、Ｏｎｚｉｎ、ＧＢＰ３、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ２９、ＢＭＰ−１０、  Ｉｎｔｅｇｒｉｎβ７、ＰＣＳＫ３、ＧＰ４９Ａ、ＣＴＬＡ−２α、ＴＤＡＧ５１、ＣＤ５３、Ｌａｍｉｎｉｎα５、ＰＰＡＲγ、ＥＣＭ１、ＣＲＡＢＰ２、ＣＹＰ１１Ａ  （Ｐ４５０ｓｃｃ）、２０α−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  （２０α−ＨＳＤ）、ＣＣＲ２のうち、少なくとも１つのＴ細胞の機能分子を標的として、ヘルパーＴ細胞を活性化又は抑制する、ヘルパーＴ細胞の加工方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、Ｔｈ１／Ｔｈ２リンパ球による免疫バランスの検査方法及び疾患の診断・治療、さらにはこれに基づく医薬品開発に関するものである。本発明は、特に癌や白血病などの悪性新生物による疾患、糖尿病、肝障害、宿主対移植片反応、多発性硬化症、気道炎症、皮膚炎、動脈硬化等のリンパ球機能分子遺伝子の発現あるいは遺伝子産物であるタンパク質の発現や機能を検査することにより、Ｔｈ１／Ｔｈ２リンパ球による免疫バランスの診断と治療、さらにはこれらリンパ球の発現分子を修飾したり、標的とした化合物により、免疫を制御する医薬品の開発に有用である。
【０００２】
【従来の技術】
Ｔ細胞に関する最近の免疫学研究の進展から、ヘルパーＴ細胞がＴｈ１とＴｈ２という２つのサブタイプに分かれ、これらによって多くの免疫反応がコントロールされていることがマウスで明らかにされた（Ｍｏｓｍａｎｎ，  Ｔ．Ｒ．：  Ａｎｎ．  ＮＹ  Ａｃｄ．  Ｓｃｉ．  ６６４：  ８９，  １９９２）。その後、同様のヘルパーＴ細胞サブセットはヒトでも存在することが明らかとなり、Ｔｈ１とＴｈ２のバランスが、癌、感染症、自己免疫疾患、糖尿病を含む数々の病気の発症や進展に重要な働きを持つと推測されている（ＳｐｒｉｎｇｅｒＳｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．２１（３），  １９９９および最新医学「自己免疫疾患の臨床１９９８」，３２，  １９９８）。それらによれば、Ｔｈ１とＴｈ２は相互に機能的なバランスをとっており、このバランスが保たれている場合には健康な状態であるが、バランスが崩れ、Ｔｈ１に偏向すると、糖尿病、肝障害、気道炎症、宿主対移植片反応、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、動脈硬化、乾癬、腎炎等が、Ｔｈ２に偏向すると癌、免疫不全、喘息、皮膚炎、アレルギー疾患、腎炎、感染症等が発症すると考えられている。
【０００３】
この理論によれば、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスを矯正することが治療につながるため、これらの疾患において、Ｔｈ１とＴｈ２のどちらにどの程度傾いているか（偏向しているか）ということを知ることは、診断や治療に極めて重要である。
【０００４】
このＴｈ１／Ｔｈ２バランスの偏向を診断する方法は、現在、特異的なサイトカインの産生を調べることで行われている。すなわち、ヘルパーＴ細胞を集めてＩＬ−２やＩＦＮ−γ等の産生が優位の場合にはＴｈ１側へ、ＩＬ−４、ＩＬ−５などの産生が優位の場合にはＴｈ２側への偏向しているとされる。しかし、この方法が診断法として確立されているいう検証は行われていない（Ｗｏｎｇ，  Ｃ．Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２５：１７７，  ２００１、Ｌａｓｓｍａｎｎ  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．  ７：１１５，  ２００１）。
【０００５】
実際、十分に説明できない事例が報告されている。例えば、Ｔｈ１細胞誘発マウス肝傷害モデルにおいて、抗ＩＦＮ−γ抗体の投与では肝傷害が抑制されないことから、Ｔｈ１偏向とＩＦＮ−γが関与するという関係が明らかでないこと（Ｏｈｔａ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６５：９５６，  ２０００）、またＴｈ２細胞誘発マウス喘息モデルにおいて、ＩＬ−４欠損マウスから誘導したＴｈ２細胞を用いても気道過敏症が認められることから、Ｔｈ２偏向とＩＬ−４が関与するという関係が明確でないこと（Ｃｏｈｎ，  Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６１：３８１３，  １９９８）などである。このことは、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスをサイトカインでのみでは規定できないことを示唆している。
【０００６】
このＴｈ１／Ｔｈ２バランスに基づく免疫制御法は、副作用が少なく、自然で新たな治療に結びつくと期待されており、最近、遺伝子治療、細胞療法などの形で臨床応用が始まってきているほか、細胞医薬としての応用も試みられだした。これらが実現するためには、簡便で有用なＴｈ１／Ｔｈ２バランスの測定法が必要であるが、現在行われているサイトカイン産生を調べる方法は、一定期間の細胞培養とその後のサイトカインの定量という煩雑で専門的な作業と設備を必要とするため、簡便さと精密さでは問題がある。
【０００７】
これに代わる、よりＴｈ１／Ｔｈ２バランスの指標となる適切な分子の発見とその分析方法が求められているが、未だ確立はしていない。その課題として、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスの偏向の指標となる標的分子が同定されること、さらに標的分子は１つと限られるわけではないため、どの標的分子に着目した治療法がその患者にとって最も有効かという検証が必要とされる。また、患者の病態に合わせた標的分子の特定とそれを修飾して免疫状態を修正する治療法の開発も求められる。これらの背景には次のような現行医療の問題点が挙げられる。
【０００８】
すなわち、従来の疾患治療の多くは、薬効が期待される薬剤で比較的画一的な治療が行われてきた。しかし、同じ疾患でも患者によりその発症機序や程度が異なったり、また同一の患者にあっても、病気の時期により病態像や機序が異なっているため、画一的な薬剤投与で十分な有効性が認められなかったり、逆に薬剤の副作用が問題となるなど、個人差や病態の違いを十分に考慮されていないために確実な治療方法としては不十分なところがある。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
今後求められる治療としては、個々の患者の病態の詳細な診断が実施され、その診断結果に基づいて適切な治療法を施すというテーラーメード・セラピー（パーソナライズド・セラピー）が最も有用な治療法と考えられている。このような治療形態を考えると、多くの疾患がＴｈ１／Ｔｈ２バランスの偏向によって発症すると考えられることから、Ｔｈ１／Ｔｈ２偏向に関する精密で簡便な診断法とそれに基づく治療法の開発が極めて重要である。
【００１０】
したがって、本発明の目的は、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスを正確かつ簡便に調べることができる検査方法並びに該検査方法に用いることができる新規な遺伝子及びその産物を提供することである。また、本発明の目的は、上記本発明の検査方法に有用な、測定用核酸並びに抗体及び該抗体の生産に有用な、組換えＤＮＡ体、形質転換細胞、生産方法を提供することである。さらに、本発明の目的は、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスを変化させることが可能な、ヘルパーＴ細胞を活性化又は抑制するヘルパーＴ細胞の加工方法を提供することである。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、鋭意研究の結果、極めて純粋なマウスＴｈ１細胞及びＴｈ２細胞を主に用いて、Ｔｈ１細胞あるいはＴｈ２細胞に選択的に機能分子が発現していることを見出し、この機能分子をＴｈ１／Ｔｈ２バランスの診断法、治療法ならびに細胞医薬の開発に応用可能であることに想到し、本発明を完成した。
【００１２】
すなわち、本発明は、下記の（ａ）または（ｂ）の核酸を提供する。
（ａ）  配列番号１若しくは３で表される塩基配列からなる核酸
（ｂ）  配列番号１若しくは３で表される塩基配列からなる核酸と相補的な配列からなる核酸あるいはストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であり、かつ免疫調節作用を有するタンパク質をコードする塩基配列からなる核酸。
【００１３】
また、本発明は、下記の（ｃ）または（ｄ）のタンパク質を提供する。
（ｃ）  配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質
（ｄ）  配列番号２で表されるアミノ酸配列において１もしくは複数のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ免疫調節作用を有するタンパク質。
【００１４】
さらに、本発明は、下記の（ｅ）または（ｆ）の核酸を提供する。
（ｅ）  配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする核酸またはその相補鎖。
（ｆ）  配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする核酸またはその相補鎖に対して少なくとも７０％の相補性を有し、かつ免疫調節作用を有するタンパク質をコードする塩基配列からなる核酸。
【００１５】
さらに、本発明は、Ｔｈ１ヘルパーＴ細胞及び／又はＴｈ２ヘルパーＴ細胞に発現した機能分子を利用したＴｈ１ヘルパーＴ細胞とＴｈ２ヘルパーＴ細胞のバランスを調べる検査方法を提供する。さらに本発明は、上記本発明の核酸の連続する１５塩基以上の領域と同一若しくは相補的な配列を有する核酸又はこの核酸の１０％以下の塩基が置換した核酸からなる、上記本発明の核酸の測定用核酸を提供する。さらに、本発明は、上記本発明の核酸又はその一部と、宿主細胞の中で発現可能なベクターＤＮＡとが機能的に連結してなる組換えＤＮＡ体であって、宿主細胞中で上記本発明のタンパク質を発現する組換えＤＮＡ体を提供する。さらに、本発明は、該組換えＤＮＡ体により形質転換され、上記本発明のタンパク質を生産する細胞を提供する。さらに本発明は、この細胞を培養し、該細胞により生産された上記本発明のタンパク質を回収することを含む、上記本発明のタンパク質の製造法を提供する。さらに本発明は、上記本発明のタンパク質又は細胞を特異的に認識する抗体を提供する。さらに、本発明は、上記本発明のタンパク質、Ｃ／ＥＢＰα、ＧＡＴＡ−４、Ｎｏｔｃｈ４、ＩＲＳ−４、Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  Ｃａ２＋−Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ＣＤ６、Ｇａｌａｃｔｉｎ−３、ＣＤ９７、ＤＥＣ１、Ｏｎｚｉｎ、ＧＢＰ３、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ２９、ＢＭＰ−１０、  Ｉｎｔｅｇｒｉｎβ７、ＰＣＳＫ３、ＧＰ４９Ａ、ＣＴＬＡ−２α、ＴＤＡＧ５１、ＣＤ５３、Ｌａｍｉｎｉｎα５、ＰＰＡＲγ、ＥＣＭ１、ＣＲＡＢＰ２、ＣＹＰ１１Ａ  （Ｐ４５０ｓｃｃ）、２０α−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  （２０α−ＨＳＤ）、ＣＣＲ２のうち、少なくとも１つのＴ細胞の機能分子を標的として、ヘルパーＴ細胞を活性化又は抑制する、ヘルパーＴ細胞の加工方法を提供する。
【００１６】
【発明の実施の形態】
上記の通り、本発明の検査方法は、Ｔｈ１ヘルパーＴ細胞（本明細書において、単に「Ｔｈ１」又は「Ｔｈ１細胞」ということがある）及び／又はＴｈ２ヘルパーＴ細胞（本明細書において、単に「Ｔｈ２」又は「Ｔｈ２細胞」ということがある）に発現した機能分子を利用したＴｈ１とＴｈ２のバランスを調べることを含む。ここで、「機能分子」とは、Ｔｈ１及びＴｈ２のいずれか一方において、他方よりも有意に多く発現又は生産されている、Ｔｈ１又はＴｈ２のマーカーとして利用可能な分子を意味する。このような分子は、臨床検査分野において通常「マーカー」と呼ばれているものの範疇に入るものであるが、本発明で利用する分子の多くは、それ自体が免疫調節作用を有しているので、本明細書では、「機能分子」と命名した。本発明でいう「機能分子」には、マーカーとして利用可能なポリペプチドのみならず、該ポリペプチドをコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡやそれを鋳型として得られるｃＤＮＡ）、及びポリペプチドをコードしていない又はコードしているか否かが不明であるが、マーカーとして利用可能な核酸も包含される。
【００１７】
本発明で用いられる、Ｔｈ１の機能分子としては、本発明によって全塩基配列とアミノ酸配列が見出された配列番号１又は３で示される塩基配列から成る核酸、配列番号２に示されるアミノ酸配列から成るポリペプチド、さらには、Ｃ／ＥＢＰα、ＧＡＴＡ−４、Ｎｏｔｃｈ４、ＩＲＳ−４、Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  Ｃａ２＋−Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ＣＤ６、Ｇａｌａｃｔｉｎ−３、ＣＤ９７、ＤＥＣ１、Ｏｎｚｉｎ、ＧＢＰ３、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ２９及びＢＭＰ−１０並びにこれらをコードする核酸である。またＴｈ２細胞の機能分子は、Ｉｎｔｅｇｒｉｎβ７、ＰＣＳＫ３、ＧＰ４９Ａ、ＣＴＬＡ−２α、ＴＤＡＧ５１、ＣＤ５３、Ｌａｍｉｎｉｎα５、ＰＰＡＲγ、ＥＣＭ１、ＣＲＡＢＰ２、ＣＹＰ１１Ａ  （Ｐ４５０ｓｃｃ）、２０α−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  （２０α−ＨＳＤ）及びＣＣＲ２並びにこれらをコードする核酸である。これらの機能分子は、単独でも組み合わせても本発明の検査方法に利用することができる。
【００１８】
これらの機能分子のいくつかについて、具体的に説明する。ここではマウスを例にとるが、実質的にヒトで対応する機能分子も本発明に含まれ、臨床上の検査・診断や治療法の開発、医薬組成物にあってはヒトの機能分子が対象となる。
【００１９】
配列番号１ならびに配列番号２は、Ｍｍ．２８９１３と関連する遺伝子として本発明により同定された。Ｍｍ２８９１３は、米国Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  （ＮＣＢＩ）のＵｎｉＧｅｎｅデータベースにおいてアクセスＮｏ．ＡＡ３８９１４３として登録されているＥＳＴ（新規遺伝子）であり、塩基配列は配列番号１ならびにアミノ酸配列は配列番号２のとおりである。ＡＡ３８９１４３はｃＤＮＡ  断片で、その機能は不明であったが、以下に示すように、本発明によって配列番号１の核酸は、Ｍｍ２８９１３の関連遺伝子として新たに本発明によって、Ｔｈ１細胞で刺激後に発現の増加する新規遺伝子としてクローニングされ、同定された。
【００２０】
すなわち、ＡＡ３８９１４３は、ＵｎｉＧｅｎｅデータベースにおいてＭｍ．２８９１３として登録されており、ＡＡ３８９１４３は、マウスリンパ節から分離された４９３ｂｐのＥＳＴ（ｃＤＮＡ断片）クローンである。このＤＮＡ断片を結合させたＤＮＡチップを用いて、抗ＣＤ３抗体刺激前後のＴｈ１細胞ならびにＴｈ２細胞のｍＲＮＡ中の遺伝子発現量を調べた。この結果、この遺伝子は抗ＣＤ３抗体刺激後のＴｈ１細胞で発現が多く、Ｔｈ２細胞で発現が少ないことがわかった。
【００２１】
本発明でプラスミドにクローン化されたｃＤＮＡ断片をプローブにして、マウスの脾臓由来のｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングし、１５８２ｂｐのｃＤＮＡをクローン化し、塩基配列を決定した。
【００２２】
ここで新たにクローン化されたｃＤＮＡ配列は少なくとも２９７アミノ酸残基をコードし、ＮＣＢＩのＵｎｉＧｅｎｅデータベースにおいてＭｍ．２８９１３と相同配列として登録されているヒトのＮＭ＿００７０４５のＦＧＦＲ１  ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｐａｒｔｎｅｒ  （ＦＯＰ）とはホモロジーがなかった。一方、９８．６％のホモロジーがある認められたＡＫ０１２０３３は、ｃＤＮＡの塩基配列のみが決定されており、この遺伝子の生理機能について不明である。また、ＡＫ０１２０３３では１９２アミノ酸残基しかコードされていないことから、ＡＡ３８９１４３とは機能的に異なる遺伝子と考えられる。
【００２３】
以上のことから、配列番号１の核酸は、Ｔｈ１細胞で刺激後に発現の増加する新規遺伝子であるとして同定され、免疫調節作用を有する分子と考えられた。
【００２４】
配列番号３は、Ｍｍ．２００２１と関連する遺伝子として本発明により同定された。Ｍｍ．９００２１は、米国ＮＣＢＩのＵｎｉＧｅｎｅデータベースにおいてアクセスＮｏ．ＡＡ２６６７８２として登録されているＥＳＴ（新規遺伝子）であり、塩基配列は配列番号３のとおりである。この遺伝子は本発明において、ヘルパーＴ細胞に発現されることが初めて見出された。
【００２５】
ＡＡ２６６７８２は、ＮＣＢＩのＵｎｉＧｅｎｅデータベースにおいてＭｍ．９００２１として登録されており、マウスリンパ節から分離された５４０ｂｐのＥＳＴ（ｃＤＮＡ断片）クローンである。このＤＮＡ断片を結合させたＤＮＡチップを用いて、抗ＣＤ３抗体刺激前後のＴｈ１細胞ならびにＴｈ２細胞のｍＲＮＡ中の遺伝子発現量を調べた。この結果、配列番号３の核酸は、Ｍｍ．９００２１の関連遺伝子として新たに本発明によってＴｈ１細胞で強く発現し、Ｔｈ２細胞で発現が少ないことがわかった。
【００２６】
ＡＡ２６６７８２はｃＤＮＡ断片であり、ＮＣＢＩの遺伝子データベースをホモロジー検索（ＢＬＡＳＴサーチ）ではタンパク質をコードする配列領域は検出されず、マウスのＡｑｕａｐｏｒｉｎ２遺伝子ともホモロジーを持たず、また、ＵｎｉＧｅｎｅのＭｍ．９００２１には、ＡＡ２６６７８２のほかに１０種類のＥＳＴが登録されているものの、いずれも既知の遺伝子とはホモロジーを有せず、遺伝子産物の機能も全く不明であった。
【００２７】
以上のことから、配列番号３の核酸は、Ｔｈ１細胞で刺激後に発現の増加する新規遺伝子であるとして同定され、免疫調節作用を有する分子と考えられた。
【００２８】
本発明によってその機能が明らかにされた配列番号１と配列番号３は、好ましくはＴｈ１細胞に発現されるが、他の細胞にも発現され、その遺伝子、遺伝子産物、またそれらに対する抗体の利用に関してはＴｈ１細胞にのみ限定されるものではない。これらの分子は、その利用の用途として、その遺伝子あるいはアンチセンスを細胞内に組み込むことによる遺伝子治療、その発現タンパク質自体あるいは発現タンパク質の修飾体を有効成分あるいは標的分子とする医薬や検査・診断薬の開発に利用することができる。
【００２９】
配列番号１あるいは３のいずれかで表される塩基配列からなる核酸と相補性をもつ核酸は、配列番号１あるいは３と類似の有用性をもつと考えられ、すなわち、配列番号１あるいは３のいずれかで表される塩基配列からなる核酸と相補的な配列からなる核酸あるいはストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であり、かつ免疫調節作用を有するタンパク質をコードする塩基配列からなる核酸も本発明に含まれる。なお、ここで、「ストリンジェント」な条件とは、５  ｘ  Ｄｅｎｈａｒｄｔ’ｓ  ｒｅａｇｅｎｔ，  ６  ｘ  ＳＳＣ，０．５％  ＳＤＳ又は０．１％  ＳＤＳといった一般的なハイブリダイゼーション溶液を用いて５０〜６５℃で反応を行なう条件を意味する。
【００３０】
また、配列番号１の３−８９３の塩基配列に対応する配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする核酸と７０％以上の相補性を有する核酸であって、かつ免疫調節作用を有するタンパク質をコードする塩基配列からなる核酸も本発明に含まれる。相補性は、好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上である。なお、核酸の塩基配列やポリペプチドのアミノ酸配列の相同性は、ＦＡＳＴＡのような周知のコンピューターソフトを用いて容易に算出することができ、このようなソフトはインターネットによっても利用に供されている。さらに配列番号２で表されるアミノ酸配列において１もしくは複数のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からるタンパク質は、配列番号２と類似の有用性をもつ免疫調節作用を有するタンパク質と考えられ、本発明に含まれる。なお、ここで、「複数」は、数個以下であることが好ましい。また、アミノ酸配列の相同性が、８０％以上のものが好ましく、さらに好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上である。
【００３１】
Ｃ／ＥＢＰαは、Ｃ／ＥＢＰ  （ＣＣＡＡＴ／ｅｎｈａｎｃｅｒ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ）ファミリーの１つで、遺伝子の発現を制御する転写因子である。標的遺伝子配列は、Ｔ（Ｔ／Ｃ）ＮＮＧＮＡＡ（Ｔ／Ｇ）で、Ｃ端にＢ−Ｚｉｐ構造を持つことが知られている（Ｃｈｒｉｓｔｙ，Ｒ．Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８８：  ２５９３，  １９９１）。マウスＣ／ＥＢＰαの塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  Ｍ６２３６２のとおりであり、またアミノ酸配列はこの塩基配列の５１６−１７００に対応する配列番号４のとおりである。この分子の機能は肝細胞の増殖、脂質代謝、好中球の分化などに重要であることが報告されている（Ｍｉｓｃｈｏｕｌｏｎ，  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  １２：２５５３，  １９９２，    Ｍｅｔｚｇｅｒ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６５：９９７８，  １９９０，    Ｓｍｉｔｈ，  Ｌ．Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｌｏｏｄ．  ８８：１２３４，  １９９６）。しかしながら、この分子の医療応用上の有用性はまだ明確には見出されてはいない。
【００３２】
ＧＡＴＡ−４は、ＧＡＴＡファミリーの１つで、遺伝子の発現を制御する転写因子である。標的遺伝子配列は、（Ａ／Ｔ）ＧＡＴＡ（Ａ／Ｇ）で、Ｚｎフィンガー構造を持つことが知られている。マウスＧＡＴＡ−４の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＡＦ１７９４２４のとおりであり、またアミノ酸配列はこの塩基配列の２９−１３５１に対応する配列番号５のとおりである。この分子は、体内臓器特に心臓に多く発現しており、細胞の遊走に関与することが示唆されている（Ｋｕｏ，Ｃ．Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．  １１：１０４８，  １９９７、Ｍｏｌｋｅｎｔｉｎ，Ｊ．Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．  １１：１０６１，  １９９７）。しかしながら、この分子の免疫学上の意義および医療応用上の意義はまだ見出されてはいない。
【００３３】
Ｎｏｔｃｈファミリーは、発生過程における細胞間相互作用にかかわる細胞膜レセプター型タンパク質であり、その機能は多岐にわたることが知られている（Ａｒｔａｖａｎｉｓ−Ｔｓａｋｏｎａｓ，Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８４：７７０，  １９９９）。その中でＮｏｔｃｈ４は、血管内皮細胞に発現するプロトオンコジーンとして見出されたが、その後いくつかの癌にもその発現が見出されている（Ｕｙｔｔｅｎｄａｅｌｅ，Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １２２：２２５１，  １９９６、Ｉｍａｔａｎｉ，Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９：２２３，  ２０００）。マウスＮｏｔｃｈ４の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  Ｕ４３６９１のとおりであり、またアミノ酸配列はこの塩基配列の３４７−６２３８に対応する配列番号６のとおりである。しかしながら、Ｎｏｔｃｈ４の免疫学上の意義および医療応用上の意義は見出されてはいない。
【００３４】
ＩＲＳ−４は、インシュリンレセプター基質（Ｉｎｓｕｌｉｎｅ−Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ：ＩＲＳ）ファミリーの１つであり、インシュリンの糖代謝作用や細胞増殖作用等の多機能な作用を伝えうるタンパク質である。その中でも、ＩＲＳ−４は、最近見出されたものであり、ＩＲＳファミリーの他のものと同様に糖代謝作用や細胞増殖にも関与していることが知られている（Ｆａｎｔｉｎ，Ｖ．Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １４０：１３２９，  １９９９、Ｆａｎｔｉｎ，  Ｖ．Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｕｏｌ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  Ｍｅｔａｂ．  ２７８：Ｅ１２７，  ２０００、Ｑｕ，Ｂ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７４：３１１７９，  １９９９）。マウスＩＲＳ−４の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＡＦ０８７７９７のとおりであり、またアミノ酸配列はこの塩基配列の２１７−３８６４に対応する配列番号７のとおりである。また、ＩＬ−４による造血細胞の増殖に関与しているという報告もあるが（Ｆａｎｔｉｎ，  Ｖ．Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  ２６０：７１８，  １９９９）、臨床応用上の意義は見出されていない。本発明においては、ＩＬ−４が増殖分化に必要なＴｈ２細胞には発現しておらずに、ＩＬ−４を必要としていないＴｈ１細胞に発現していることを明らかにした。
【００３５】
Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  Ｃａ２＋  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎは、胎盤にて見出されたカルシウム結合タンパク質である。マウスＰｌａｃｅｎｔａｌ  Ｃａ２＋  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎの塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  Ｘ０５８３５のとおりであり、またアミノ酸配列はこの塩基配列の１０−３１２に対応する配列番号８のとおりである。カルシウムイオンは重要な細胞内情報伝達分子であり、細胞の分化や活性化など様々な細胞機能に関与している。Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  Ｃａ２＋  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎは、Ｓ１００タンパク質ファミリーの１つであるが胎盤での機能に関しては十分な報告がない（Ｊａｃｋｓｏｎ−Ｇｒｕｓｂｙ，Ｌ．Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １５：６６７７，  １９８７）。また免疫系での関与も解明されておらず、その臨床応用上の意義も見出されていない。
【００３６】
ＣＤ６は、Ｔ細胞やＢ細胞の一部、神経細胞の一部などに発現している糖タンパク質である（Ｐａｌ，Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｌｅｔｔ．  ４９：１３３，  １９９６）。マウスＣＤ６の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  Ｕ３５３７０のとおりであり、またアミノ酸配列はこの塩基配列の１１９−１９９６に対応する配列番号９のとおりである。ＣＤ６は、Ｔ細胞における副刺激分子として知られ、Ｔ細胞の分化や活性化、細胞増殖に関与していることが知られている（Ａｒｕｆｆｏ，Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｔｏｄａｙ    １８：４９８，  １９９７）。しかしながら、免疫疾患との関係や、臨床応用上の意義は定かではない。
【００３７】
Ｇａｌｅｃｔｉｎ−３は、Ｇａｌｅｃｔｉｎファミリーの１つであり、β−ガラクトース特異的レクチンであり、相補的糖タンパク質と結合することにより、細胞間相互作用など様々な生理作用に関与することが知られている（Ｋａｓａｉ，Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １１９：１，  １９９６）。マウスＧａｌｅｃｔｉｎ−３の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  Ｘ１６８３４のとおりであり、またアミノ酸配列はこの塩基配列の４４−８３５に対応する配列番号１０のとおりである。機能としては、嗅細胞の形態形成やマクロファージなどの接着、糖化タンパク質のレセプターなどが知られてはいるが、必ずしも明確ではない（Ｐｕｃｈｅ，Ａ．Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．  １７９：２７４，  １９９６、Ｈｕｇｈｅｓ，Ｒ．Ｃ．  Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  ４：５，  １９９４、Ｐｒｉｃｃｉ，Ｆ．  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．  Ｓｕｐｐｌ．  ７７：Ｓ３１，  ２０００）。また、臨床応用上の意義も見出されていない。
【００３８】
ＣＤ９７は、ＥＧＦ様構造を持つ７回膜貫通型レセプターファミリーの１つであり、クラスＩＩ型Ｇタンパク質と共益していることが知られている。マウスＣＤ９７の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＡＦ１４６３４４のとおりであり、またアミノ酸配列はこの塩基配列の４６−２２１７に対応する配列番号１１のとおりである。またＣＤ９７のリガンドは、ＣＤ５５（Ｄｅｃａｙ−ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ）ということが知られている。ＣＤ９７は、活性化リンパ球などに発現していることが知られているが、その詳細な機能や役割及び臨床応用上の意義は、明確ではない（Ｈａｍａｎｎ，Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎ：  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＶＩ．  Ｅｄｉｔｏｒｓ：  Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．  ｐ５２７，  １９９７、Ｑｉａｎ，Ｙ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９８：３０３，  １９９９）。
【００３９】
ＤＥＣ１は、塩基性ｈｅｌｉｘ−ｌｏｏｐ−ｈｅｌｉｘタンパク質の１つで、発見された経緯からＳｔｒａ１３，  Ｓｈａｒｐ２，  ＢＨＬＨＢ２  とも呼ばれている転写因子として知られている。マウスＤＥＣ１の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＡＦ０１３０５のとおりであり、またアミノ酸配列はこの塩基配列の２１７−１４４９に対応する配列番号１２のとおりである。ＤＥＣ１は、神経細胞や線維芽細胞、軟骨細胞などいろいろな細胞に発現しており、細胞の増殖、分化、活性化に関与していることが報告されている（Ｂｏｕｄｊｅｌａｌ，Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．  １１：２０５２，  １９９７、Ｓｈｅｎ，Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ８０：３２９，  ２００１）。しかしながら、免疫疾患との関係や、臨床応用上の意義は見出されていない。
【００４０】
Ｏｎｚｉｎは、２０００年にアメリカのＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｍａｔｉｏｎ）のＧｅｎＢａｎｋに、ＬＩＦ（Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ）により制御を受ける遺伝子として登録されている（アクセスＮｏ．：ＡＦ２６３４５８）。マウスＯｎｚｉｎの塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＡＦ２６３４５８のとおりであり、またアミノ酸配列はこの塩基配列の７９−４１４に対応する配列番号１３のとおりである。現在のところ、Ｏｎｚｉｎに関する報告は、これ以外にはなく、免疫学的な知見や免疫疾患との関連、臨床応用上の意義は見出されていない。
【００４１】
ＧＢＰ３は、グアニル酸結合タンパク（ｇｕａｎｙｌａｔｅ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）の１つであり、細胞の分化、増殖、活性化に関与しているシグナル伝達物質である。マウスＧＢＰ３の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  Ｕ４４７３１のとおりであり、またアミノ酸配列はこの塩基配列の１０９−１９６８に対応する配列番号１４のとおりである。赤芽球やマクロファージなど種々の細胞に発現されていることが知られ、インターフェロン−γで発現が誘導されることが報告されている（Ｓｔｒｅｈｌｏｗ，Ｉ．  Ｇｅｎｅ  １４４：２９５，１９９４、Ｈａｎ，Ｂ．Ｈ．  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ  １３８４：３７８，  １９９８、Ｈａｎ，Ｂ．Ｈ．  Ａｒｃｈ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．  ２２：１３０，  １９９９）。しかしながら、免疫疾患との関係や、臨床応用上の意義は定かではない。
【００４２】
ＣＤ４９ｂは、別名インテグリンα２と呼ばれ、インテグリンβ１（ＣＤ２９）とヘテロ２量体を形成し、ＶＬＡ−２という接着分子を形成している。マウスＣＤ４９ｂの塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００８３９６のとおりであり、またアミノ酸配列はこの塩基配列の１１３−３６４６に対応する配列番号１５のとおりである。ＶＬＡ−２は細胞外基質のコラーゲンやラミニンと結合し、細胞の分化、活性化、進展などに重要とされている（Ｗｕ，Ｊ．Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｅｖ．  Ｄｙｎ．  １９９：２９２，  １９９４、Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｊ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  ＣｅｌｌＡｄｈｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．  ２：１３１，  １９９４、Ｍｉｙａｋｅ，Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２４：２０００，  １９９４）。Ｔ細胞でも発現しており、活性化や細胞浸潤への関与が報告されているが、Ｔｈ１細胞やＴｈ２細胞に関しては報告されていない。また、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランスに関する臨床応用上の意義も報告されていない。
【００４３】
ＣＤ２９は、別名インテグリンβ１と呼ばれ、インテグリンα鎖とヘテロ２量体を形成し、ＶＬＡファミリーという接着分子を形成している。マウスＣＤ２９の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  Ｙ００７６９のとおりであり、またアミノ酸配列はこの塩基配列の９５−２４８８に対応する配列番号１６のとおりである。ＶＬＡファミリーは細胞外基質のコラーゲン、ラミニン、ファイブロネクチンやＶＣＡＭ−１、ＭａｄＣＡＭ−１といった分子と結合し、細胞の分化、活性化、進展などに重要とされている（Ｈｅｍｌｅｒ，Ｍ．Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｈｅｍａｔｏｌ．  ２：６１，  １９９５、Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ，Ｓ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５４：２１２５，  １９９５）。Ｔ細胞でも発現されており、活性化や細胞浸潤への関与が報告されているが、Ｔｈ１細胞やＴｈ２細胞に関しては報告されていない。また、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランスに関する臨床応用上の意義も報告されていない。
【００４４】
ＢＭＰ（Ｂｏｎｅ  Ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）は、骨形成タンパク質であり、異所性に骨組織の形成を誘導するタンパク質として発見された。その後，ＢＭＰ遺伝子がクローニングされ，そのアミノ酸配列からＴｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  β（ＴＧＦ−β）に構造が類似していることが明らかになっている。現在、ＢＭＰはＢＭＰ  −１からＢＭＰ−１５までの存在が知られており，ＢＭＰ−１を除く他のＢＭＰはすべてＴＧＦ−βスーパーファミリーに属している。ＢＭＰは、本来異所性の骨形成を誘導する因子として発見されたが、その後、骨形成ばかりでなく初期発生やさまざまな臓器の形成に重要な役割を果たしていることがわかってきている。ＢＭＰ−１０に関しては、心臓に発現しており、心臓の形態・機能形成に重要な役割をしているという報告のみで（Ｎｅｕｈａｕｓ，Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｅｃｈ．  Ｄｅｖ．  ８０：１８１，  １９９９）、免疫疾患との関係や、臨床応用上の意義は見出されていない。マウスＢＭＰ−１０の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００９７５６のとおりであり、またアミノ酸配列はこの塩基配列の１−１２６０に対応する配列番号１７のとおりである。
【００４５】
Ｉｎｔｅｇｒｉｎβ７は、Ｉｎｔｅｇｒｉｎα４もしくはＩｎｔｅｇｒｉｎαＩＥＬとヘテロ２量体を形成する細胞接着分子である（Ｈｕ，Ｍ．Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８９：８２５４，  １９９２、Ｓｔｒａｕｃｈ，Ｕ．Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ６：２６３，  １９９４）。マウスＩｎｔｅｇｒｉｎβ７の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  Ｍ９５６３３のとおりであり、アミノ酸配列はこの塩基配列の３３−２４５０に対応する配列番号１８のとおりである。細胞接着分子は、細胞同士のあるいは細胞外基質との接着に重要であり、組織構築や細胞の組織へのホーミングに重要である。Ｉｎｔｅｇｒｉｎβ７は、Ｔ細胞サブセット、Ｂ細胞、好酸球、ＮＫ細胞などに発現していることが知られており、特にＴ細胞ではパイエル板の血管内皮細胞上のＭＡｄＣＡＭ−１との接着を介してＴ細胞の消化管への再循環に関与するホーミング分子として知られている（Ｓｈａｗ，Ｓ．Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ７：３３５，  １９９５）。大腸炎などの消化管炎症に免疫系の関与が報告されており、Ｉｎｔｅｇｒｉｎβ７もその関与が示唆されているが（Ｎｉ，Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｕｔ  ３９：２３４，  １９９６）、必ずしも明確ではなく、またその臨床応用上の意義も定かではない。
【００４６】
ＰＣＳＫ３（ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ  ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ／ｋｅｘｉｎ  ｔｙｐｅ  ３）は、セリンプロテアーゼの一種である（Ｃｒｅｅｍｅｒｓ，Ｊ．Ｊ．Ｗ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  １１：１２７，  １９９２、ｖａｎ  Ｄｕｉｊｎｈｏｖｅｎ，Ｈ．Ｈ．Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １１：７１，  １９９２）。マウスＰＣＳＫ３の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿０１１０４６のとおりであり、アミノ酸配列はこの塩基配列の３９２−２７７０に対応する配列番号１９のとおりである。その機能として、種々の前駆タンパク質からタンパク質を生成することが知られているが、まだその詳細は解明されておらず、またその臨床応用上の意義も見出されていない。
【００４７】
ＧＰ４９Ａは、免疫グロブリンスーパーファミリーの一種で肥満細胞やＮＫ細胞に発現していることが知られているがＴ細胞に発現していることは知られていない。マウスＧＰ４９Ａの塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００８１４７のとおりであり、アミノ酸配列はこの塩基配列の４２−９５０に対応する配列番号２０のとおりである。その機能は、自然免疫に関与し細胞の活性化もしくは抑制性のシグナルを伝えているのではないかと予想されているが、まだ十分に明らかにされていない（Ａｒｍ，ＪＰ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６６：１５９６６，  １９９１、Ｌｅｅ，ＫＨ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６５：４９７０，  ２０００）。免疫細胞の活性化もしくは抑制に関与しているらしいことより、臨床応用上の意義が存在するが、まだその応用は行われていない。
【００４８】
ＣＴＬＡ−２αは、細胞傷害性Ｔ細胞に発現している抗原として見出された。その後肥満細胞などにも発現していることが報告されているが、その機能についてはまだ解明されていない（Ｄｅｎｉｚｚｏｔ，Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １９：６３１，  １９８９、Ｄｅｌａｒｉａ，Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６９：２５１７２，  １９９４）。マウスＣＴＬＡ−２αの塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００７７９６のとおりであり、アミノ酸配列はこの塩基配列の７−４１４に対応する配列番号２１のとおりである。免疫細胞に発現していることより免疫疾患への応用が期待されているが、まだその意義は見出されていない。
【００４９】
ＴＤＡＧ５１は、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｇｅｎｅ  ５１の略であり、Ｔ細胞は活性化を受けた後アポトーシスを起こすが、その際に誘導されるタンパク質である。マウスＴＤＡＧ５１の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００９３４４のとおりであり、アミノ酸配列はこの塩基配列の５５２−１３３４に対応する配列番号２２のとおりである。最近の報告では必ずしも細胞の死と関係あるわけではないとの報告もあり、まだ機能は十分に解明されているわけではない（Ｐａｒｋ，Ｃ．Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４：５８３，  １９９６、Ｒｈｏ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１：８３６５，  ２００１）。また免疫疾患への応用が期待されているが、まだその意義は見出されていない。
【００５０】
ＣＤ５３は、白血球に発現している抗原として知られている。マウスＣＤ５３の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００７６５１のとおりであり、アミノ酸配列はこの塩基配列の１−６５７に対応する配列番号２３のとおりである。細胞の活性化あるいは細胞の死との関係を示唆する報告もあるが、その機能はまだ定かではない（Ｗｒｉｇｈｔ，Ｍ．Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ５：２０９，  １９９３、Ｖｏｅｈｒｉｎｇｅｒ，Ｄ．Ｗ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９７：２６８０，  ２０００、Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｔｏｒｒｅｓ，Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７６：３５４０５，  ２００１）。また臨床応用上の意義も見出されてはいない。
【００５１】
Ｌａｍｉｎｉｎα５は、ラミニンという基底膜を構成する高分子糖タンパク質を構成する分子の１つである。マウスｌａｍｉｎｉｎα５の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  Ｕ３７５０１のとおりであり、アミノ酸配列はこの塩基配列の１−１０９０５に対応する配列番号２４のとおりである。ラミニンの生理活性は、細胞の接着、進展、増殖、分化、細胞間シグナル伝達など多岐に関与していることが知られている（Ｍｉｎｅｒ，Ｊ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０：２８５２３，  １９９５、Ｓａｓａｋｉ，Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒ  ５０９：１８１，  ２００１）。Ｔ細胞が発現するラミニンの意義や生物学的役割などは報告がなく、また臨床応用上の意義も見出されてはいない。
【００５２】
ＰＰＡＲγは、脂質代謝系酵素発現の制御に関与しているタンパク質の１つとして見出された。マウスＰＰＡＲγの塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  Ｕ０１８４１のとおりであり、アミノ酸配列はこの塩基配列の４１９−１９１５に対応する配列番号２５のとおりである。機能としては、脂肪細胞の増殖や分化やプロスタグランディンＪ２のレセプターであることが知られている。プロスタグランディンＪ２のレセプターはＴ細胞にも発現していることが報告され、サイトカイン等の産生に関与していることも報告されている（Ｚｈｕ，Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６８：２６８１７，  １９９３、Ｔｏｎｔｏｎｏｚ，Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｄｅｖ．  ８：１２２４，  １９９４、Ｈａｒｒｉｓ，Ｓ．Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６８：１３７２，  ２００２）。臨床応用上の意義は、糖尿病、肥満、高脂血症などへの関与や抗炎症作用におけるマーカーとして期待されているが、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランスに関する報告はなく、その応用が期待される。
【００５３】
ＥＣＭ１は、基底膜を構成する高分子糖タンパク質の１つである。マウスＥＣＭ１の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００７８９９のとおりであり、アミノ酸配列はこの塩基配列の１２１−１７９７に対応する配列番号２６のとおりである。ＥＣＭ１の生理活性は、細胞の接着、進展、増殖、分化、や血管新生に関与していることが示唆されている（Ｂｈａｌｅｒａｏ，Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０：１６３８５，  １９９５、Ｈａｎ，Ｚ．  ｅｔ  ａｌ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．  １５：９８８，２００１）。Ｔ細胞が発現するＥＣＭ１の意義や生物学的役割などは報告がなく、また臨床応用上の意義も見出されてはいない。
【００５４】
ＣＲＡＢＰ２は、ビタミンＡの活性本体であるレチノイン酸の細胞内結合タンパク質の１つであり、細胞内のレチノイン酸濃度を規定している。マウスＣＲＡＢＰ２の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  Ｍ３５５２３のとおりであり、アミノ酸配列はこの塩基配列の１１６−５２９に対応する配列番号２７のとおりである。ＣＲＡＢＰ２は、細胞の分化や活性化に関与する分子であることが報告されているが、その意義や役割については十分に解明されていない（Ｇｉｇｕｅｒｅ，Ｖ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８７：６２３３，  １９９０、Ｌａｍｐｒｏｎ，Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １２１：５３９，  １９９５、Ｆａｗｃｅｔｔ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １２１：５３９，  １９９５）。また臨床応用への試みも行われていない。
【００５５】
ＣＹＰ１１Ａは、別名  Ｐ４５０  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｓｉｄｅ−ｃｈａｉｎ  ｃｌｅａｖａｇｅ  （Ｐ４５０ｓｃｃ）  とも呼ばれ、コレステロールに側鎖開裂を引き起こし、プレグネノロンを生合成する酵素である。マウスＣＹＰ１１Ａの塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿０１９７７９のとおりであり、アミノ酸配列はこの塩基配列の２３−１６００に対応する配列番号２８のとおりである。このプレグネノロンは、３β−ヒドロキシ−Δ５−ステロイドデヒドロゲナーゼあるいはステロイドΔ−イソメラーゼの作用によりプロゲステロンと代謝される。プロゲステロンは、さらに代謝され、種々のステロイドホルモンが生成されることが知られている。（「細胞機能と代謝マップ  Ｉ．細胞の代謝・物質の動態」（株）東京化学同人，１９９７）。プロゲステロンは、妊娠中に増加するホルモンであり、妊娠の維持に深く関わっていることが知られている。また、ステロイドホルモンはその抗炎症作用や免疫抑制作用も知られ医薬品としても用いられている。プロゲステロンも、抗炎症作用や免疫抑制作用を有することが報告されているが（Ｋｏｖａｌｏｖｓｋｙ  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．  １０９：２３，  ２０００、Ｍｏｒｏ  Ｍ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６６：７４０４，  ２００１）、プロゲステロン生成におけるＴ細胞の関与については報告されていない。
【００５６】
２０α−ヒドロキシステロイドデキドロゲナーゼ（２０α−ＨＳＤ）は、プロゲステロンを代謝し２０α−ヒドロキシプロゲステロンを生成する酵素である。マウス２０α−ＨＳＤの塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＡＢ０５９５６５のとおりであり、アミノ酸配列はこの塩基配列の３４−１００２に対応する配列番号２９のとおりである。２０α−ＨＳＤにより、プロゲステロンが代謝されることにより、プロゲステロンの作用が失われることも知られている。またプロゲステロンは、他の酵素により代謝され、種々のステロイドホルモンが生成されることが知られている（「細胞機能と代謝マップ  Ｉ．細胞の代謝・物質の動態」（株）東京化学同人、１９９７）。プロゲステロンは、妊娠中に増加するホルモンであり、妊娠の維持に深く関わっているホルモンである。また、ステロイドホルモンにはその抗炎症作用や免疫抑制作用も知られ、医薬品としても用いられている。プロゲステロンも、抗炎症作用や免疫抑制作用があることも報告されているが（Ｋｏｖａｌｏｖｓｋｙ  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．  １０９：２３，  ２０００、Ｍｏｒｏ  Ｍ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６６：７４０４，  ２００１）、プロゲステロンの代謝におけるＴ細胞の関与については報告されていない。
【００５７】
ＣＣＲ２は、Ｇタンパク質共役型７回膜貫通型のケモカインレセプターである。発現はマクロファージや平滑筋細胞、繊維芽細胞、一部のＴ細胞などに認められることが報告されている。マウスＣＣＲ２の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００９９１５のとおりであり、アミノ酸配列はこの塩基配列の１３４−１２５２に対応する配列番号３０のとおりである。そのリガンドであるケモカインは、ＭＣＰ−１，ＭＣＰ−２，ＭＣＰ−３，ＭＣＰ−４，ＭＣＰ−５が知られている（Ｂｏｒｉｎｇ，Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７１：７５５１，  １９９６）。医学的には動脈硬化に関与しているという報告があるが（Ｂｏｒｉｎｇ，  Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  ３９４：８９４，  １９９８）、Ｔ細胞における役割は解明されておらず、臨床応用上の意義も見出されていない。
【００５８】
本発明の検査方法は、ヘルパーＴ細胞における、上記した機能分子の発現量を測定することにより、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスがＴｈ１偏向かＴｈ２偏向かを検査する方法である。好ましい例として、患者もしくは疾患モデルのリンパ球から、公知の方法にてＲＮＡを抽出し、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を精製後、例えばＲＴ−ＰＣＲ法などにより機能分子のｍＲＮＡ発現量を調べることにより、患者もしくは疾患モデル動物のＴｈ１／Ｔｈ２バランスがＴｈ１偏向かＴｈ２偏向かを検査する方法を挙げることができる。たとえば、１０個以上のリンパ球、好ましくは１０６個以上のリンパ球から、たとえばＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社製）などを用いて、トータルＲＮＡを抽出し、オリゴｄＴプライマーを用いて、０．１μｇ以上の、好ましくは１．０μｇ以上のトータルＲＮＡから逆転写して得られたｃＤＮＡを用いて、サーマルサイクラー（たとえばアプライドバイオシステムズジャパン（株）製  ＧｅｎｅＡｍｐ９７００）にてＰＣＲを行う。増幅したＤＮＡ断片は電気泳動（たとえばコスモバイオ社製  ｉ−Ｍｕｐｉｄ  Ｊ）を行い、特異的に増幅されたバンドをデンシトグラフ（たとえばアトー社製ＡＥ−６９２０）にて測定する。あるいは、ＮＡＳＢＡ法等により、ｍＲＮＡを直接増幅して、その増幅産物を測定することもできる。Ｔｈ１とＴｈ２の比は、好ましくは１．５倍以上、さらに好ましくは５倍以上のものとする。検査する方法はこれに限らず、あるいは、好ましくは、患者もしくは疾患モデルのリンパ球のタンパク質を、機能分子に対する抗体を用いて、酵素免疫学的測定法やウェスターンブロット法、フローサイトメトリー法などにて機能分子のタンパク質発現量や細胞数を調べることにより、患者もしくは疾患モデルのＴｈ１／Ｔｈ２バランスがＴｈ１偏向かＴｈ２偏向かを検査する方法である。さらには、好ましくは、患者もしくは疾患モデルのリンパ球から、タンパク質を抽出し、その機能を各機能分子に適切な方法たとえばゲルシフトアッセイやタンパク質のリン酸化などで調べることにより、患者もしくは疾患モデルのＴｈ１／Ｔｈ２バランスがＴｈ１偏向かＴｈ２偏向かを検査する方法である。また、好ましくは、患者もしくは疾患モデル動物のリンパ球からＴｈ１やＴｈ２の細胞を誘導するときに、あるいは誘導したＴｈ１やＴｈ２の細胞を例えば抗ＣＤ３抗体などで刺激したときに、発現誘導される機能分子のＲＮＡ量やタンパク質量を指標にしてＴｈ１／Ｔｈ２バランスを診断する方法である。
【００５９】
また、ヘルパーＴ細胞の機能分子の遺伝子産物が、細胞の活性に影響をもつ場合、これを利用した細胞医薬品の加工に応用する方法である。具体例としては、ヘルパーＴ細胞群をプロゲステロン処理することにより、Ｔｈ１ヘルパー細胞を抑制し、Ｔｈ２ヘルパーＴ細胞群を選択的に回収することができる方法が挙げられる。さらに、機能分子に作用するような医薬品であるプロゲステロンを、たとえばＴｈ１細胞側に偏向した生体に投与することにより、生体のＴｈ１／Ｔｈ２バランスを整えたり偏向させる治療に応用することができる。このような、細胞処理と加工や生体のＴｈ１／Ｔｈ２バランス調整を行うためには、機能分子の遺伝子産物と作用し得る適切なステロイド類、抗炎症剤、酵素阻害剤、代謝阻害剤等が用いられる。
【００６０】
本発明で用いる患者もしくは疾患モデルの材料は、好ましくはリンパ球であるが、リンパ球を含む組織あるいはリンパ系組織など、本発明で規定される機能分子が含まれる材料であればいずれであってもかまわない。また採取した材料はそのまま検査しても良いが、試験管や培養プレートなどを用いてインビトロで培養を行った後でもよい。また、培養の際に、プロテインキナーゼ活性化剤、カルシウムイオノフォア、ヌクレオチド、サイトカイン誘導物質、マイトージェン、抗体、抗原、癌特異的ペプチドや腫瘍細胞などの適当な刺激物質で刺激してもかまわない。
【００６１】
ここで用いる機能分子の発現量の測定方法は、上記に限らず他の方法でもかまわない。また、測定するものも上記に限らず、ＤＮＡであっても良い。また測定対象が発現量ではなく、ＤＮＡやＲＮＡの遺伝子配列、タンパク質のアミノ酸配列であっても良い。さらには測定が発現量や構成（核酸やアミノ酸の量や配列）ではなく、機能分子を発現した細胞自体や機能分子を発現した組織さらには生物活性や生理機能などの機能分子の表現機能であってもかまわない。
【００６２】
上記の通り、本発明は、Ｔｈ１の機能分子として用いられる、配列番号１〜３で表される配列又はこれらに類似する配列を有する核酸及びポリペプチドを新たに提供したが、本発明は、さらに、これらの本発明の核酸の測定に有用な測定用核酸をも提供する。すなわち、本発明は、上記本発明の核酸の連続する１５塩基以上の領域と同一若しくは相補的な配列を有する核酸又はこの核酸の１０％以下の塩基が置換した核酸からなる、上記本発明の核酸の測定用核酸をも提供する。このような測定用核酸は、通常、核酸増幅法のプライマー又は核酸プローブとして用いられるものである。ＰＣＲ法やＮＡＳＢＡ法のような核酸増幅法自体はこの分野において周知であり、プライマーの塩基配列さえ設定すれば、市販のキット及び装置を用いて容易に実施することができる。核酸増幅法により検査を行う場合、鋳型となるのは、通常、ｍＲＮＡ又は該ｍＲＮＡを鋳型として生成されるｃＤＮＡである。また、核酸プローブを用いた検査方法としては、ノーザンブロット法やサザンブロット法を挙げることができる。核酸プローブとしては、蛍光標識、ビオチン標識、放射標識、酵素標識などで標識した標識プローブを用いることもできるし、固相に不動化して、標的核酸をハイブリダイゼーションにより固相にトラップするための固相プローブとして用いることもできる。核酸の標識化や、固相への不動化は周知の方法により行うことができる。プライマーとして用いる場合、核酸のサイズは、１５塩基以上５０塩基以下が好ましく、２０塩基以上４０塩基以下程度が好ましい。また、プローブとして用いる場合には、サイズは１５塩基以上、鋳型核酸の全長以下である。
【００６３】
本発明によって提供される機能分子と病態との関連を調べることにより、診断への応用のみならず、該機能分子を標的としたり、あるいは該機能分子の機能を修飾する物質を医薬として開発することができる。その場合、機能分子自体を発現する細胞や組織、動物、さらには機能分子の遺伝子を導入した細胞あるいは遺伝子を導入した動物を研究材料として用いてもよい。また、機能分子の遺伝子やタンパク質を欠失させたり、遺伝子の突然変異体を導入したり、人工的に合成した遺伝子を付加したり、遺伝子配列の一部を改変したものを導入した形質転換した細胞もしくは動物を用いてもかまわない。このようにして得られるＴｈ１／Ｔｈ２バランスを制御しうる医薬用途の物質は、患者の病態に合わせたテーラーメード・セラピー（パーソナライズド・セラピー）として利用することができる。
【００６４】
具体的には、ヘルパーＴ細胞の機能分子の遺伝子、遺伝子発現、遺伝子産物、遺伝子産物の生理活性、遺伝子を導入した細胞の少なくとも１つを指標として、検出手段が、電気泳動、抗体、可視光、蛍光、光の偏向や屈折や散乱、電気伝導度の変化等を検出手段とし、核酸やタンパク質を結合したフィルターやメンブラン、粒子、アレイや固体素子等の不溶化物のうち、少なくとも１つを用いることができる。これにより、免疫バランスの偏向した疾患の診断が可能となり、それに基づいて、治療のための医薬や治療法の開発が可能となる。医薬や治療法の開発には、少なくとも１種類の遺伝子の発現あるいは遺伝子産物を標的とし、その機能を修飾する方法が用いられる。
【００６５】
機能を修飾する有効成分としては、遺伝子自体、アンチセンス、アプタマー、デコイ型核酸、遺伝子発現調節物質、遺伝子産物、遺伝子産物抗体あるいは遺伝子産物合成阻害物等が挙げられる。
【００６６】
【実施例】
以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。
【００６７】
実施例１  Ｍｍ．２８９１３（アクセスＮｏ．ＡＡ３８９１４３）の新規遺伝子として配列番号１の同定
ＡＡ３８９１４３は、マウスリンパ節から分離された４９３ｂｐのＥＳＴ（ｃＤＮＡ断片）クローンであり、このＤＮＡ断片を結合させたマイクロアレイ（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ社のＧＥＭマイクロアレイ）を用いて、抗ＣＤ３抗体刺激前後のＴｈ１細胞ならびにＴｈ２細胞のｍＲＮＡ中の遺伝子発現量を調べた結果、この遺伝子は抗ＣＤ３抗体刺激後のＴｈ１細胞で発現が多く、Ｔｈ２細胞で発現が少ないことがわかった。
【００６８】
ＡＡ３８９１４３をもとにＮＣＢＩのデータベースを用いてマウスＥＳＴ配列のホモロジー検索を行うと、同じ遺伝子のｃＤＮＡ断片と考えられるＡＡ９８９７５４の配列を見出すことができた。次にＡＡ９８９７５４内の塩基配列ｔｇｔｃｔｇｃｇｔａｃａｔｃｃｃｔｔｃａと、ＡＡ３８９１４３内のｔｇｔｃｔａａａｇｇａｇｇａｇｇｇｃａｇｔの２つのオリゴヌクレオチドを合成し（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）、これらの２つのＥＳＴ配列にまたがるｃＤＮＡ断片を増幅するためのプライマーとした。プライマーは、この配列に限定されるわけではなく、二つのＥＳＴ配列にまたがる適切な配列を用いてかまわない。次に、抗ＣＤ３抗体刺激前後のＴｈ１細胞ならびにＴｈ２細胞のＲＮＡを、オリゴｄＴをプライマーとしてＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ  ＲＮａｓｅＨ−  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅにより逆転写し、上記のプライマーを用いて、サーマルサイクラー（アプライドバイオシステムズジャパン（株）製  ＧｅｎｅＡｍｐ９７００）にてＲＴ−ＰＣＲを行った。このＰＣＲ産物を用いてアガロースゲル電気泳動を行い、ＰＣＲ産物のバンドの強度をＬａｎｅ  ＆  ｓｐｏｔ  ａｎａｌｙｚｅｒ（アトー株式会社デンシトグラフシステム）を用いて定量した結果、刺激後のＴｈ１細胞では、刺激前のＴｈ１細胞やＴｈ２細胞に比べて発現量が約２倍に増えていることが判明した。Ｔｈ１細胞からのＲＴ−ＰＣＲで増幅された４８９ｂｐのＤＮＡ断片を、ｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙ  ｖｅｃｔｏｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）にクローン化し、ＢｉｇＤｙｅ  ＴｅｒｍｉｎａｔｏｒおよびＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ３１０  ｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）により塩基配列を決定して、正しくクローン化されていることを確認し、このプラスミドクローンからｃＤＮＡ部分を増幅して、新たにＤＮＡアレイフィルターを作製し、Ｔｈ１およびＴｈ２細胞のＲＮＡを用いて発現量を検討した。すなわち、増幅したｃＤＮＡ断片１０ｎｇをナイロンメンブレンにスポットしてアレイを作製し、プローブはｔｏｔａｌ  ＲＮＡからＭａｇＥｘｔｒａｃｔｏｒ（ＴＯＹＯＢＯ社）を用いて精製したｐｏｌｙ（Ａ）＋ｍＲＮＡ  ５μｇを元にｃＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＴＯＹＯＢＯ社）を用いて作製し、検出はＩｍａｇｉｎｇ  Ｈｉｇｈ  Ｃｈｅｍｉｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｋｉｔ（ＴＯＹＯＢＯ社）を用い、Ｆｌｕｏ−Ｓ  ＭｕｌｔｉＩｍａｇｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）により画像化した。画像化した遺伝子発現はβ−ａｃｔｉｎ、ＧＡＰＤＨを基準としてＩｍａｇｅｎｅ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＢｉｏＤｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｉｎｃ．）を用いて定量数値化した。この結果ＡＡ３８９１４３は、抗ＣＤ３抗体刺激後のＴｈ１細胞で強く発現していることが再確認できた。プラスミドにクローン化されたｃＤＮＡ断片をプローブにして、マウスの脾臓由来のｃＤＮＡライブラリー（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社）をスクリーニングすると、１５８２ｂｐのｃＤＮＡをクローン化し、塩基配列を決定した。
【００６９】
ＡＡ３８９１４３およびＡＡ９８９７５４は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）のＵｎｉｇｅｎｅデータベースにおいてＭｍ．２８９１３として登録されている。このデータベースでは、ヒトの相同配列としてＮＭ＿００７０４５のＦＧＦＲ１  ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｐａｒｔｎｅｒ（ＦＯＰ）が登録されているが、ここでクローン化したｃＤＮＡはＦＯＰとはホモロジーがない。ここで新たにクローン化されたｃＤＮＡ配列は少なくとも２９７アミノ酸残基をコードし、この配列をもとにホモロジー検索すると、ＡＫ０１２０３３配列が検出され、９８．６％のホモロジーが認められた。ただし、ＡＫ０１２０３３は、ｃＤＮＡの塩基配列のみが決定されており、この遺伝子の生理的機能については不明である。また、ＡＫ０１２０３３では、１９２アミノ酸残基しかコードされていないことから、ＡＡ３８９１４３とは機能的に異なる遺伝子と考えられる。
【００７０】
以上のことから、ＡＡ３８９１４３は新たに配列番号１としてＴｈ１細胞で刺激後に発現の増加する新規遺伝子であると考えられた。また、その遺伝子産物は配列番号１の３−８９３の塩基配列に対応する配列番号２のアミノ酸配列で示されるタンパク質であり、免疫調節作用を有すると考えられる。
【００７１】
実施例２  Ｍｍ．９００２１（アクセスＮｏ．ＡＡ２６６７８２）の新規遺伝子として配列番号３の同定
ＡＡ２６６７８２内の塩基配列ｇｇｔａｃｔｃａｇｃｃｃａａａｔｇｃａｇおよびｃｃａｔｃａｔｇｃａａｃａｇｃａｇａａｃのオリゴヌクレオチドを合成し（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）、ＲＴ−ＰＣＲのプライマーとして用いた。次に、抗ＣＤ３抗体刺激前後のＴｈ１細胞ならびにＴｈ２細胞のＲＮＡを、オリゴｄＴをプライマーとしてＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ  ＲＮａｓｅＨ−  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅにより逆転写し、上記のプライマーを用いてサーマルサイクラー（アプライドバイオシステムズジャパン（株）製  ＧｅｎｅＡｍｐ９７００）にてＲＴ−ＰＣＲを行った。このＰＣＲ産物を用いてアガロースゲル電気泳動を行い、ＰＣＲ産物のバンドの強度をＬａｎｅ  ＆  ｓｐｏｔ  ａｎａｌｙｚｅｒ（アトー株式会社デンシトグラフシステム）を用いて定量した結果、この遺伝子が刺激前後ともにＴｈ１細胞に特異的に発現しており、刺激後の発現量の増加は、刺激前に比べ２倍以上であった。さらに、Ｔｈ１細胞からのＲＴ−ＰＣＲで増幅された４７１ｂｐのＤＮＡ断片をｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙ  ｖｅｃｔｏｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）にクローン化し、ＢｉｇＤｙｅ  ＴｅｒｍｉｎａｔｏｒおよびＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ３１０  ｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）により塩基配列を決定して、正しくクローン化されていることを確認し、このプラスミドクローンからｃＤＮＡ部分を増幅して、新たにＤＮＡアレイフィルターを作製し、Ｔｈ１およびＴｈ２細胞のＲＮＡを用いて発現量を検討した。すなわち、増幅したｃＤＮＡ断片１０ｎｇをナイロンメンブレンにスポットしてアレイを作製し、プローブはｔｏｔａｌ  ＲＮＡからＭａｇＥｘｔｒａｃｔｏｒ（ＴＯＹＯＢＯ社）を用いて精製したｐｏｌｙ（Ａ）＋ｍＲＮＡ  ５μｇを元にｃＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＴＯＹＯＢＯ社）を用いて作製した。検出はＩｍａｇｉｎｇ  Ｈｉｇｈ  Ｃｈｅｍｉｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｋｉｔ（ＴＯＹＯＢＯ社）を用い、Ｆｌｕｏ−Ｓ  ＭｕｌｔｉＩｍａｇｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）により画像化する。画像化した遺伝子発現はβ−ａｃｔｉｎ、ＧＡＰＤＨを基準としてＩｍａｇｅｎｅ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＢｉｏＤｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｉｎｃ．社）を用いて定量数値化した。この結果、ＡＡ２６６７８２はＴｈ１細胞で高く発現していることを再確認できた。
【００７２】
Ｍｍ．９００２１は、米国ＮＣＢＩのＵｎｉＧｅｎｅデータベースにおいてアクセスＮｏ．ＡＡ２６６７８２として登録されているＥＳＴ（新規遺伝子）である。ＡＡ２６６７８２をもとにして、ＮＣＢＩの遺伝子データベースをホモロジー検索（ＢＬＡＳＴサーチ）すると、Ｓ６８５８６のｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ  ｄｕｓｔ  ｗａｔｅｒ  ｃｈａｎｎｅｌ  ５’  ｒｅｇｉｏｎ、ならびにＮＭ＿０１２９０９のＡｑｕａｐｏｒｉｎ２遺伝子との部分的ホモロジーが検出される。しかし、これらのホモロジーは一部分だけのもので、しかもタンパク質をコードしない領域のみに限定されていた。また、ＡＡ２６６７８２は、マウスのＡｑｕａｐｏｒｉｎ２遺伝子ともホモロジーを持たなかった。また、ＵｎｉｇｅｎｅのＭｍ．９００２１には、ＡＡ２６６７８２のほかに１０種類のＥＳＴが登録されているが、これらのいずれも既知の遺伝子とはホモロジーを有しなかった。
【００７３】
以上のことから、ＡＡ２６６７８２は、Ｔｈ１細胞で強く発現する配列番号３で示された新規の遺伝子と考えられた。
【００７４】
実施例３    Ｔｈ１細胞およびＴｈ２細胞の誘導
既報（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １９０：６１７，  １９９９）のとおりにＴｈ１細胞およびＴｈ２細胞を誘導した。すなわち、ＯＶＡ３２３−３３９−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｉ−Ａｄ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄＴＣＲ−ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  マウス（ＤＯ１１．１０）の脾細胞より、ＣＤ４陽性ＣＤ４５ＲＢ陽性ナイーブＴ細胞をＦＡＣＳ  ＶａｎｔａｇｅＴＭ  （ＢＤ社）を用いて単離した。このＣＤ４陽性ＣＤ４５ＲＢ陽性ナイーブＴ細胞（５ｘ１０４  ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）と、マイトマイシンＣ（協和発酵）で処理したＢＡＬＢ／ｃマウスの脾細胞（２．５ｘ１０５  ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）を１０％ウシ胎児血清（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ社）を含んだＲＰＭＩ１６４０培地（ＳＩＧＭＡ社）に顕濁し、１２穴プレートに播種し、ＯＶＡ（１０μｇ／ｍＬ）を添加して培養を行った。Ｔｈ１細胞の誘導の際にはこの培養系に、ＩＬ−１２（２０Ｕ／ｍＬ），  ＩＦＮ−γ（１ｎｇ／ｍＬ），  ＩＬ−２（２０Ｕ／ｍＬ），  抗ＩＬ−４抗体（５０μｇ／ｍＬ）  を加えた。一方Ｔｈ２細胞の誘導には、ＩＬ−４（１ｎｇ／ｍＬ），  ＩＬ−２（２０Ｕ／ｍＬ），  抗ＩＦＮ−γ抗体（５０μｇ／ｍＬ），  抗ＩＬ−１２抗体（５０μｇ／ｍＬ）  を加えた。４８時間ごとに、上記と同様の抗原およびサイトカイン、抗体を加えて１０日間培養した。細胞が増加するに従い、培養器具はスケールアップし、２５ｃｍ２のフラスコ、７５ｃｍ２のフラスコに変えて培養を行った。得られたＴｈ１細胞およびＴｈ２細胞を、ガラスピペットを用い、撹拌しながら遠心管に集め、遠心することにより回収した。
【００７５】
実施例４    固相化抗ＣＤ３抗体によるＴｈ１細胞およびＴｈ２細胞の刺激
回収したＴｈ１細胞およびＴｈ２細胞を、予め１０ｃｍシャーレに固相化した抗ＣＤ３抗体（２μｇ／ｍＬ）にて２時間刺激し、上記と同様に回収した。
【００７６】
実施例５    ＲＴ−ＰＣＲ法によるＣ／ＥＢＰα、ＧＡＴＡ−４、Ｎｏｔｃｈ４、ＩＲＳ−４、Ｍｍ．２８９１３、Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  Ｃａ２＋−Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ＣＤ６、Ｇａｌａｃｔｉｎ−３、ＣＤ９７、ＤＥＣ１、Ｏｎｚｉｎ、ＧＢＰ３、Ｍｍ．９００２１、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ２９、ＢＭＰ−１０のｍＲＮＡの測定
未刺激のＴｈ１細胞、Ｔｈ２細胞および抗ＣＤ３抗体で刺激したＴｈ１細胞、Ｔｈ２細胞より、公知の手法により、ＲＴ−ＰＣＲ法にて各遺伝子の  ｍＲＮＡ発現量を比較した（”ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”    Ｉｎｎｉｓ，  Ｍ．  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．    ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  １９９０）。すなわち、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社）を用いて、各細胞よりｔｏｔａｌ  ＲＮＡを抽出し、ｏｌｉｇｏ  ｄＴ  プライマーを用いて１μｇのｔｏｔａｌ  ＲＮＡから逆転写して得られたｃＤＮＡでＰＣＲを行った。ＰＣＲの条件は、９４℃で２分３０秒加熱後、９４℃３０秒・６０℃３０秒・７２℃１分のサイクルを２５回から２８回行い、さらに伸長反応を７２℃７分間行った。用いたプライマーの配列を表１に示す。増幅したＤＮＡ断片は１．２％アガロースゲルで電気泳動を行い、特異的に増幅されたバンドを検出した。検出されたバンドのデンシトメトリーによる解析の結果を表２に示す。
【００７７】
【表１】
表１  用いたプライマーの配列表
2004147534.tif 000003
【００７８】
【表２】
表２  Ｔｈ１細胞有意に発現している遺伝子のデンシトグラフによる解析値
2004147534.tif 000004
【００７９】
その結果、活性化したＴｈ１細胞のみにＣ／ＥＢＰα、ＧＡＴＡ−４、Ｎｏｔｃｈ４、ＩＲＳ−４、Ｍｍ．２８９１３、Ｐｌａｃｅｎｔａｌ  Ｃａ２＋−Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ＣＤ６、Ｇａｌａｃｔｉｎ−３、ＣＤ９７、ＤＥＣ１、Ｏｎｚｉｎ、ＧＢＰ３、Ｍｍ．９００２１、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ２９、ＢＭＰ−１０の発現が、他の細胞よりも明らかに強く認められた。
【００８０】
このように、上記の機能分子が活性化したＴｈ１細胞に発現していることが判明し、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスのＴｈ１への偏向を検出できることが明らかとなった。
【００８１】
実施例６  ＲＴ−ＰＣＲ法による  Ｉｎｔｅｇｒｉｎβ７、ＰＣＳＫ３、ＧＰ４９Ａ、ＣＴＬＡ−２α、ＴＤＡＧ５１、ＣＤ５３、Ｌａｍｉｎｉｎα５、ＰＰＡＲγ、ＥＣＭ１、ＣＲＡＢＰ２、ＣＹＰ１１Ａ  （Ｐ４５０ｓｃｃ）、２０α−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  （２０α−ＨＳＤ）、ＣＣＲ２  のｍＲＮＡの測定
未刺激のＴｈ１細胞、Ｔｈ２細胞および抗ＣＤ３抗体で刺激したＴｈ１細胞、Ｔｈ２細胞より、公知の手法により、ＲＴ−ＰＣＲ法にて  各遺伝子の  ｍＲＮＡ発現量を比較した（”ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”    Ｉｎｎｉｓ，  Ｍ．  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  １９９０）。すなわち、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社）を用いて、各細胞よりｔｏｔａｌ  ＲＮＡを抽出し、ｏｌｉｇｏ  ｄＴ  プライマーを用いて１μｇのｔｏｔａｌ  ＲＮＡから逆転写して得られたｃＤＮＡでＰＣＲを行った。ＰＣＲの条件は、９４℃で２分３０秒加熱後、９４℃３０秒・６０℃３０秒・７２℃１分のサイクルを２５回から２８回行い、さらに伸長反応を７２℃７分間行った。用いたプライマーの配列を表３に示す。増幅したＤＮＡ断片は１．２％アガロースゲルで電気泳動を行い、特異的に増幅されたバンドを検出した。検出されたバンドのデンシトメトリーによる解析の結果を表４に示す。
【００８２】
【表３】
表３  用いたプライマーの配列
2004147534.tif 000005
【００８３】
【表４】
表４  Ｔｈ２細胞有意に発現している遺伝子のデンシトグラフによる解析値
2004147534.tif 000006
【００８４】
その結果、活性化Ｔｈ２細胞のみに  Ｉｎｔｅｇｒｉｎβ７、ＰＣＳＫ３、ＧＰ４９Ａ、ＣＴＬＡ−２α、ＴＤＡＧ５１、ＣＤ５３、Ｌａｍｉｎｉｎα５、ＰＰＡＲγ、ＥＣＭ１、ＣＲＡＢＰ２、ＣＹＰ１１Ａ  （Ｐ４５０ｓｃｃ）、２０α−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  （２０α−ＨＳＤ）、ＣＣＲ２の発現が他の細胞よりも明らかに強く認められた。
【００８５】
このように、上記の機能分子が活性化したＴｈ２細胞に発現していることが判明し、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスのＴｈ２への偏向が検出できることが明らかとなった。
【００８６】
実施例７  プロゲステロンのＴｈ１細胞に対する毒性とＴｈ２細胞の耐性
実施例１のように誘導したＴｈ１細胞およびＴｈ２細胞（５ｘ１０６  ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）をＩＬ−２（２００Ｕ／ｍＬ）とプロゲステロン（１０μｍｏｌ／Ｌ）（ＳＩＧＭＡ社）を添加し、５％  ＣＯ２下３７℃で１３時間培養した。プロゲステロンの細胞毒性を確認するため、アネキシンＶ染色によるアポトーシス検出キット（ＭＢＬ社）で、培養後の細胞を染色し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ社）にてアポトーシスを起こした死細胞を測定した。
【００８７】
その結果、Ｔｈ１細胞では１９％の細胞がアポトーシスを起こしたのに対し、Ｔｈ２細胞では１％の細胞しかアポトーシスは起こっていなかった。一方、プロゲステロンを代謝する２０α−ＨＳＤは表４のとおりＴｈ２細胞にしか誘導されていない。このことは、プロゲステロンがＴｈ２細胞に対しては発現された２０α−ＨＳＤによって代謝されて毒性を示さないのに対し、２０α−ＨＳＤを誘導できないＴｈ１細胞には毒性を有することを示している。すなわち、プロゲステロンでのアポトーシス誘導の程度によって、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスの偏向の程度を評価できることや、プロゲステロンによりＴｈ１／Ｔｈ２バランスをＴｈ２へ偏向させることができることを示している。このように、Ｔｈ細胞に誘導される遺伝子産物の機能を指標にして、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスの偏向の程度を調べることや、Ｔｈ細胞に誘導される遺伝子産物の機能を利用して人為的にＴｈ１／Ｔｈ２バランスを偏向ができる。
【００８８】
実施例８  Ｔｈ２細胞によるプロゲステロンの無毒効果
胸腺細胞（５ｘ１０６  ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）に、コンカナバリンＡ（２．５μｇ／ｍＬ）を添加後、５％  ＣＯ２下３７℃で４８時間培養し、細胞増殖を調べる試験系において、１）プロゲステロン（１０００ｎｍｏｌ／Ｌ）、２）実施例１と同様に誘導したＴｈ１細胞とプロゲステロン（１０００ｎｍｏｌ／Ｌ）を４時間培養した上清、３）実施例１と同様に誘導したＴｈ２細胞とプロゲステロン（１０００ｎｍｏｌ／Ｌ）を４時間培養した上清、を５０％添加し、その影響を検討した。細胞増殖は、３Ｈ−チミジンの取り込みにて測定した。
【００８９】
結果を表５に示す。表５に示されるように、胸腺細胞の増殖はプロゲステロンの添加により抑制されたが、プロゲステロンの存在下でＴｈ２細胞を培養した上清を添加しても細胞増殖の抑制は認められなかった。プロゲステロンの存在下でＴｈ１細胞を培養した上清の添加では、プロゲステロンの添加と同様に細胞増殖抑制が認められた。この結果は、Ｔｈ２細胞によりプロゲステロンが代謝され無毒化した結果と考えられる。
【００９０】
【表５】
表５    Ｔｈ２細胞によるプロゲステロンの無毒効果
2004147534.tif 000007
【００９１】
このように、プロゲステロンの代謝を指標としてＴｈ１／Ｔｈ２バランスのＴｈ２への偏向の程度を検出できることが明らかとなった。また、プロゲステロンがＴｈ１細胞に対し毒性を示し、Ｔｈ２細胞では代謝され無毒化されるという機序を見出したことにより、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスをステロイド剤の処理により、Ｔｈ２へ偏向できることが明らかとなった。この結果はヘルパーＴ細胞群から選択的にＴｈ２細胞を取り出すヘルパーＴ細胞の加工方法を提供し、さらにＴｈ細胞を細胞医薬品とした新たな医薬品を提供することや薬剤や化合物などによるＴｈ１／Ｔｈ２バランスの人為的な制御方法を提供できる。
【００９２】
実施例９  Ｔｈ２細胞による２２Ｒ−ヒドロキシコレステロールからプログネノロンの生合成
実施例１のように誘導したＴｈ１細胞およびＴｈ２細胞（２ｘ１０６  ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）に２２Ｒ−ヒドロキシコレステロール（ＳＩＧＭＡ社）を２０μｍｏｌ／Ｌの濃度で添加し、５％  ＣＯ２下３７℃で２４時間培養し、培養液中のプレグネノロン濃度をラジオイムノアッセイ（ＩＣＮ社）で測定した。
【００９３】
結果を表６に示す。表６に示されるように、プログネノロンはプグノネロン合成酵素であるＣＹＰ１１Ａを発現し得るＴｈ２細胞に２２Ｒ−ヒドロキシコレステロールを添加した時のみに生成し、ＣＹＰ１１Ａを有しないＴｈ１細胞では生成が認められないことが明らかとなった。このように、Ｔｈ細胞に誘導される遺伝子産物の機能を指標にして、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスの偏向の程度を調べることができる。
【００９４】
【表６】
表６    Ｔｈ２細胞によるプレグネノロンの生成
2004147534.tif 000008
【００９５】
実施例１０  胸腺ナース細胞によるプログネノロンからプロゲステロンの生合成
胸腺ナース細胞（２ｘ１０６  ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）に、プレグネノロン（１μｇ／ｍＬ）（ＳＩＧＭＡ社）を添加し、５％  ＣＯ２下３７℃で４時間培養後、培養液中のプロゲステロン濃度をラジオイムノアッセイ（ＩＣＮ社）で測定した。
【００９６】
その結果、培養液中に１．６ｎｇ／ｍＬのプロゲステロンが認められた。プレグネノロンは実施例９のとおり、Ｔｈ２細胞などにより生成されることがわかっており、これがさらに胸腺ナース細胞によりプロゲステロンに変換されることが明らかとなった。生成されたプロゲステロンは、実施例７のとおり、Ｔｈ１細胞に毒性を発揮することがわかっており、結果としてＴｈ２細胞は自身の発現する遺伝子産物の作用により、さらにＴｈ１／Ｔｈ２バランスをＴｈ２へ偏向させることが示唆された。
【００９７】
このように、生体において、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスを偏向させる機構が働いていることが示唆され、本発明におけるＴｈヘルパーＴ細胞の機能分子の有用性が示された。
【００９８】
参考例１
ヒトＢ型肝炎ウィルス抗原（ＨＢｓＡｇ）特異的マウスＴｈ１細胞を、上記のＴｈ１細胞誘導の方法と同様に誘導した。すなわちＨＢｓＡｇで免疫したマウスの脾細胞を、抗原提示細胞（マウス脾細胞）とともに、  ＨＢｓＡｇ（２０μｇ／ｍＬ）、ＩＬ−１２  （２０Ｕ／ｍＬ）、ＩＦＮ−γ（１ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−２  （２０Ｕ／ｍＬ）、抗ＩＬ−４抗体（５０μｇ／ｍＬ）、ウシ胎児血清（１０％）を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地で培養し、ＨＢｓＡｇ特異的Ｔｈ１細胞を誘導した。ＨＢｓＡｇを静脈内投与したマウスに、誘導したＨＢｓＡｇ特異的Ｔｈ１細胞（２  ｘ  １０７  ｃｅｌｌｓ）を移入した。その結果、マウスに肝細胞傷害の指標である血清トランスアミナーゼの上昇（Ａｓｐａｒｔａｔｅ  ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ；ＡＳＴ＝約２５００ＩＵ／Ｌ、Ａｌａｎｉｎｅ  ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ；ＡＬＴ＝約３０００ＩＵ／Ｌ）が認められた。この結果は、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスがＴｈ１に偏向すると、Ｔｈ１細胞誘発の細胞傷害性免疫反応（この場合は、肝細胞傷害）が発症することを示している。
【００９９】
参考例２
実施例１で回収されたＴｈ２細胞（２ｘ１０７）を静脈内投与により無処置ＢＡＬＢ／ｃマウスに細胞移入を行った。細胞移入の４日後より３日間、１００ｍｇ／ｍｌ  ＯＶＡを３０分間吸入させて抗原曝露を行った。抗原吸入終了後、２４時間目にメサコリン（Ｍｃｈ）吸入に対する気道過敏性（Ｐｅｎｈ）をＢａｘｃｏ社製無拘束呼吸機能測定装置で測定し、気道過敏性を評価した。その結果、抗原の吸入によりＰｅｎｈの上昇が認められた（図１）。このことは、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスがＴｈ２に偏向すると、Ｔｈ２細胞誘発の炎症性免疫反応（この場合は、アレルギー症状）が発症することを示している。
【０１００】
【発明の効果】
本発明によるＴｈ１／Ｔｈ２バランスを規定する方法は、Ｔｈ１細胞ならびにＴｈ２細胞に特徴的な機能分子を調べることにより、Ｔｈ１／Ｔｈ２の偏向を検査・診断できるほか、さらに機能分子を標的としたり修飾して免疫を制御する新たな治療法および医薬の開発に応用できる。上述してきたとおり、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスの偏向は種々の疾患の発病や病態に関与していることから、本発明によって疾患の要因、症状の推移を的確に把握することが可能となり、治療方法の選択や医薬品の開発に有用な情報を提供することができる。
【０１０１】
【配列表】
2004147534.tif 000009
【０１０２】
2004147534.tif 000010
2004147534.tif 000011
【０１０３】
2004147534.tif 000012
2004147534.tif 000013
【０１０４】
2004147534.tif 000014
【０１０５】
2004147534.tif 000015
2004147534.tif 000016
【０１０６】
2004147534.tif 000017
2004147534.tif 000018
2004147534.tif 000019
【０１０７】
2004147534.tif 000020
2004147534.tif 000021
2004147534.tif 000022
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【０１０８】
2004147534.tif 000029
2004147534.tif 000030
2004147534.tif 000031
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2004147534.tif 000033
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【０１０９】
2004147534.tif 000035
【０１１０】
2004147534.tif 000036
2004147534.tif 000037
2004147534.tif 000038
【０１１１】
2004147534.tif 000039
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【０１１２】
2004147534.tif 000041
2004147534.tif 000042
2004147534.tif 000043
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【０１１３】
2004147534.tif 000045
2004147534.tif 000046
【０１１４】
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【０１１５】
2004147534.tif 000048
2004147534.tif 000049
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【０１１６】
2004147534.tif 000051
2004147534.tif 000052
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2004147534.tif 000055
2004147534.tif 000056
【０１１７】
2004147534.tif 000057
2004147534.tif 000058
2004147534.tif 000059
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【０１１８】
2004147534.tif 000061
2004147534.tif 000062
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【０１１９】
2004147534.tif 000064
2004147534.tif 000065
2004147534.tif 000066
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【０１２０】
2004147534.tif 000068
2004147534.tif 000069
2004147534.tif 000070
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【０１２１】
2004147534.tif 000072
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【０１２２】
2004147534.tif 000074
【０１２３】
2004147534.tif 000075
2004147534.tif 000076
【０１２４】
2004147534.tif 000077
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【０１２５】
2004147534.tif 000079
2004147534.tif 000080
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2004147534.tif 000089
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【０１２６】
2004147534.tif 000095
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【０１２７】
2004147534.tif 000098
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【０１２８】
2004147534.tif 000101
【０１２９】
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【０１３０】
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【０１３１】
2004147534.tif 000107
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【０１３２】
2004147534.tif 000109
【０１３３】
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【０１３４】
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【０１３５】
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【０１３６】
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【０１３７】
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【０１３８】
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【０１３９】
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【０１４０】
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【０１４１】
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【０１４２】
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【０１４３】
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【０１４４】
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【０１４５】
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【０１４６】
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【０１４７】
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【０１４８】
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【０１４９】
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【０１５０】
2004147534.tif 000127
【０１５１】
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【０１５２】
2004147534.tif 000129
【０１５３】
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【０１５４】
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【０１５５】
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【０１５６】
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【０１５７】
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【０１５８】
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【０１５９】
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【０１６０】
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【０１６１】
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【０１６２】
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【０１６３】
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【０１６４】
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【０１６５】
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【０１６６】
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【０１６７】
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【０１６８】
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【０１６９】
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【０１７０】
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【０１７１】
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【０１７３】
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【０１７４】
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【０１７７】
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【０１７８】
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【０１７９】
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【０１８０】
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【０１８１】
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【０１８２】
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【０１８３】
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【０１８４】
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【０１８５】
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【０１８６】
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【０１８７】
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【０１８８】
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【０１８９】
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【図面の簡単な説明】
【図１】ＢＡＬＢ／ｃマウスにＴｈ２細胞を移入し、ＯＶＡ抗原に暴露した後の気道過敏性を示す図である。
【図１】
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