(57)【要約】      （修正有）【課題】アクチン脱重合因子・コフィリンを脱リン酸化するヒト又はマウス由来の新規な酵素、及びその遺伝子を提供する。【解決手段】本発明に係るヒト又はマウス由来の遺伝子は、哺乳動物由来の特定なアミノ酸配列からなる各タンパク質（ｍＳＳＨ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌ、及びｈＳＳＨ−２Ｌ，−３Ｌ）をコードする。機能解析の結果、ｍＳＳＨ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌは、いずれも細胞内のコフィリンのリン酸化レベルを減少させた。本発明に係るタンパク質は、いずれもコフィリンを脱リン酸化することによってアクチン細胞骨格の制御に関与すると考えられ、医学上および産業上広く利用が期待できるものである。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の（ａ）又は（ｂ）のタンパク質をコードする遺伝子。
（ａ）配列番号６〜１０に示される何れかのアミノ酸配列からなるタンパク質。
（ｂ）配列番号６〜１０に示される何れかのアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加されたアミノ酸配列からなり、かつフォスファターゼ活性を有するタンパク質。
【請求項２】
ヒト又はマウス由来である請求項１記載の遺伝子。
【請求項３】
配列番号１〜５に示される何れかの塩基配列中のオープンリーディングフレーム領域を有する請求項２記載の遺伝子。
【請求項４】
請求項１〜３の何れか１項に記載の遺伝子を含む組換え発現ベクター。
【請求項５】
請求項１〜３の何れか１項に記載の遺伝子が導入された形質転換体。
【請求項６】
請求項１〜３の何れか１項に記載の遺伝子における少なくとも一部の塩基配列またはその相補配列をプローブとして用いた遺伝子検出器具。
【請求項７】
配列番号６〜１０に示される何れかのアミノ酸配列からなるタンパク質。
【請求項８】
配列番号６〜１０に示される何れかのアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加されたアミノ酸配列からなり、かつフォスファターゼ活性を有するタンパク質。
【請求項９】
細胞内のコフィリンのリン酸化レベルを減少させる作用を持つ請求項７または８記載のタンパク質。
【請求項１０】
請求項７〜９の何れか１項に記載のタンパク質に対する抗体。
【請求項１１】
請求項１〜３の何れか１項に記載の遺伝子、または、請求項７〜９の何れか１項に記載のタンパク質を含んでなるアクチン脱重合促進剤。
【請求項１２】
請求項７〜９の何れか１項に記載のタンパク質によるリン酸化コフィリンの脱リン酸化を阻害する物質のスクリーニング方法。
【請求項１３】
請求項１２記載のスクリーニング方法により得られた物質を含んでなるアクチン脱重合抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アクチン脱重合因子・コフィリンを脱リン酸化する酵素とその遺伝子に関する。尚、本明細書では、各遺伝子名を通常用いられるイタリック体ではなく普通の書体で表記する。
【０００２】
【従来の技術】
神経細胞（ニューロン）や上皮細胞の形態調節などは、細胞骨格と呼ばれるタンパク質複合体により調節される。主要な細胞骨格の一つが、アクチン線維である（本明細書において、アクチン線維とは、Ｆ−アクチンまたはアクチンフィラメントの意味である）。アクチン線維は、アクチンモノマーが重合してできる構造体である。
【０００３】
アクチン線維は、線維の伸長・切断・脱重合、さらに線維同士の架橋による束や網目の形成が動的に調節されており、これにより細胞の運動（移動、成長等）・増殖・分化など種々の細胞活動に伴う細胞形態の変化が生じ、広範囲の生命現象が支えられている。例えば、細胞質分裂においては、収縮環の形成、収縮、消失や細胞形態変化などアクチン細胞骨格のダイナミックな再構築が起こる。また、神経細胞の成長円錐の運動性・形態形成と軸索伸長過程は、アクチン線維の動的な変化によって制御されている。
【０００４】
このような細胞内のアクチン線維の動的な変化、換言すればアクチン細胞骨格系の動態は、種々の分子による調節を受けている。例えば、アクチン脱重合因子であるコフィリン（ｃｏｆｉｌｉｎ）は、リン酸化された状態では不活性型であるが、脱リン酸化されると活性型になり、アクチン線維の脱重合（および切断）を促進する。このように、上記コフィリンはアクチン骨格制御の主要因子である。また、リン酸化酵素であるＬＩＭキナーゼ（ＬＩＭＫ）は、このコフィリンを基質としてリン酸化し、そのアクチン脱重合作用を阻害することで、アクチンモノマーの重合を促進する活性を持つことが知られている。
【０００５】
アクチン細胞骨格系は、上記のように種々の細胞活動を支える重要な役割を有しており、上記コフィリンやＬＩＭキナーゼなどアクチン細胞骨格系の動態を制御する物質もまた、こうした種々の細胞活動を支える重要な役割を担っているといえる。したがって、このようなアクチン細胞骨格系の動態を制御する物質、及びその働きを解明することは学術上も重要であり、さらに、その研究により得られた知見は広く医学上および産業上への応用が期待できるものである。
【０００６】
ところで、本発明者らは、以前、ショウジョウバエの突然変異体を用いた研究により、その原因遺伝子ｓｌｉｎｇｓｈｏｔ（ｓｓｈ）を発見すると共に、その野生型タンパク質Ｓｌｉｎｇｓｈｏｔ（ＳＳＨ）がアクチンの過剰な重合を抑制する作用を持つことを見出した（上記ｓｓｈの塩基配列情報等については、下記の非特許文献１参照）。さらに、上記ＳＳＨのヒトホモログを複数同定し機能解析を進めた結果、少なくともその一部が、リン酸化コフィリンを直接の基質とし、これを脱リン酸化させる脱リン酸化酵素であることを見出した（上記ヒトホモログの塩基配列情報等については、例えば下記の非特許文献２参照）。
【０００７】
【非特許文献１】
Ｎｉｗａ  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ：  Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ  ｓｌｉｎｇｓｈｏｔ  ｍＲＮＡ，  ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｃｄｓ，  ２０００．０１．１２  ｓｕｂｍｉｔ，  ＧｅｎＢａｎｋ，  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＡＢ０３６８３４
【０００８】
【非特許文献２】
Ｎｉｗａ  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ：  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ｍＲＮＡ  ｆｏｒ  ｈＳＳＨ−２，  ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｃｄｓ，  ２００１．０９．２９  ｓｕｂｍｉｔ，  ＧｅｎＢａｎｋ，  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＡＢ０７２３５８他
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
上記コフィリン脱リン酸化酵素およびその遺伝子は、アクチン細胞骨格系の動態を制御する物質として広く医学上および産業上へ有効利用できるものであり、例えば、細胞の形態異常に起因する種々の遺伝子疾患の詳細な発症メカニズムの解明、さらにはその診断法や治療法の開発などへの応用が期待できる。
【００１０】
実際、ゲノム創薬に代表される、遺伝子、タンパク質の機能解析等から得られた知見をもとにした新薬開発が現在盛んであるが、このような新薬開発のためには遺伝子組換えマウス、とりわけ遺伝子破壊マウス（ノックアウトマウス）を用いて薬効を評価する等の実験が不可欠であり、そのため、上記コフィリン脱リン酸化酵素およびその遺伝子の機能等に着目した新薬を開発する上においても、そのマウスホモログの存在を明らかにすることは非常に重要である。
【００１１】
また、本発明者らが同定したヒトホモログの中には、触媒領域であるフォスファターゼドメインを持たないものが存在し、同分子とは異なり触媒領域を持つ選択的スプライシング産物が存在する可能性がある。もしこのような選択的スプライシング産物が存在すれば、同分子もまた新薬開発などへの応用が期待できるものである。
【００１２】
本発明は、上記の課題に鑑みなされたものであって、その目的は、アクチン脱重合因子・コフィリンを脱リン酸化するヒト又はマウス由来の新規な酵素、及びその遺伝子を提供することにある。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、マウスＥＳＴクローンの検索、ＰＣＲ法、５’−ＲＡＣＥ法、３’−ＲＡＣＥ法等を用いた解析によりマウスｓｓｈ遺伝子由来の複数の全長ｃＤＮＡのクローニングに成功すると共に、それらの機能解析の結果、いずれのタンパク質にも細胞内のコフィリンのリン酸化レベルを減少させる作用が認められた。さらに、本発明者らが明らかにした上記ＳＳＨのヒトホモログについて、その選択的スプライシング産物の存在を調べたところ、新たに触媒領域を有する２つのヒトホモログを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１４】
第一に、本発明に係る遺伝子は、以下の（ａ）又は（ｂ）のタンパク質をコードする遺伝子である。
（ａ）配列番号６〜１０に示される何れかのアミノ酸配列からなるタンパク質。
（ｂ）配列番号６〜１０に示される何れかのアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加されたアミノ酸配列からなり、かつフォスファターゼ活性を有するタンパク質。
【００１５】
本発明の「遺伝子」には、ＤＮＡおよびＲＮＡが含まれる。ＤＮＡには、例えばクローニングや化学合成技術又はそれらの組み合わせで得られるようなｃＤＮＡやゲノムＤＮＡなどが含まれる。ＤＮＡは二本鎖でも一本鎖でもよく、一本鎖ＤＮＡは、センス鎖となるコードＤＮＡであっても、アンチセンス鎖となるアンチコード鎖であってもよい（アンチセンス鎖は、プローブとして又はアンチセンス薬物として利用できる）。
【００１６】
さらに、本発明の「遺伝子」は、上記（ａ）又は（ｂ）のタンパク質をコードする配列以外に、非翻訳領域（ＵＴＲ）の配列やベクター配列（発現ベクター配列を含む）などの配列を含むものであってもよい。
【００１７】
本発明の遺伝子としては、ヒト又はマウス由来の、配列番号１〜５に示される何れかの塩基配列中のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）領域を有するｃＤＮＡが例示される。
【００１８】
第二に、本発明に係るタンパク質は、上記（ａ）又は（ｂ）のタンパク質、即ち、（ａ）配列番号６〜１０に示される何れかのアミノ酸配列からなるタンパク質、又は、（ｂ）配列番号６〜１０に示される何れかのアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加されたアミノ酸配列からなり、かつフォスファターゼ活性を有するタンパク質、である。
【００１９】
ここで、上記「タンパク質」は、細胞、組織などから単離精製された状態であってもよいし、タンパク質をコードする遺伝子を宿主細胞に導入して、そのタンパク質を細胞内発現させた状態であってもよい。また、本発明に係るタンパク質は、付加的なポリペプチドを含むものであってもよい。このようなポリペプチドが付加される場合としては、例えば、Ｈｉｓ  やＭｙｃ  、ｆｌａｇ等によって本発明のタンパク質がエピトープ標識されるような場合が挙げられる。
【００２０】
また、上記「１個または数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加された」とは、部位特異的突然変異誘発法等の公知の変異タンパク質作製法により置換、欠失、挿入、及び／又は付加できる程度の数（好ましくは１０個以下、より好ましくは７個以下、さらに好ましくは５個以下）のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加されることを意味する。このように、上記（ｂ）のタンパク質は、換言すれば、上記（ａ）のタンパク質の変異タンパク質であり、ここにいう「変異」は、主として公知の変異タンパク質作製法により人為的に導入された変異を意味するが、天然に存在する同様の変異タンパク質を単離精製したものであってもよい。
【００２１】
後述の実験結果に示すように、本発明に係るタンパク質ｍＳＳＨは、細胞内のコフィリンのリン酸化レベルを減少させる作用を持つことが示された。
【００２２】
本発明に係る組換え発現ベクターは、上記（ａ）又は（ｂ）のタンパク質をコードする遺伝子を含むものである。例えば、配列番号１〜５に示される何れかの塩基配列を有するｃＤＮＡが挿入された組換え発現ベクターが挙げられる。組換え発現ベクターの作製には、プラスミド、ファージ、又はコスミドなどを用いることができるが特に限定されるものではない。
【００２３】
本発明に係る形質転換体は、上記（ａ）又は（ｂ）のタンパク質をコードする遺伝子が導入された形質転換体である。ここで、「遺伝子が導入された」とは、公知の遺伝子工学的手法（遺伝子操作技術）により、対象細胞（宿主細胞）内に発現可能に導入されることを意味する。また、上記「形質転換体」とは、細胞・組織・器官のみならず、動物個体を含む意味である。対象となる動物は、特に限定されるものではないが、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、マウス、ラットなどの哺乳動物が例示される。特に、マウスやラット等の齧歯目動物は、実験動物・病態モデル動物として広く用いられており、なかでも近交系が多数作出されており、受精卵の培養、体外受精等の技術が整っているマウスが実験動物・病態モデル動物として好ましく、ノックアウトマウス等は、上記タンパク質ｍＳＳＨやそのヒトホモログｈＳＳＨの更なる機能解析、これらのタンパク質が関与する病気の診断方法の開発や、その治療方法の開発などに有用である。
【００２４】
本発明に係る遺伝子検出器具は、本発明の上記遺伝子における少なくとも一部の塩基配列またはその相補配列をプローブとして用いている。遺伝子検出器具は、種々の条件下での本発明の遺伝子の発現パターンの検出・測定などに利用できる。本発明の遺伝子検出器具としては、例えば、本発明の遺伝子と特異的にハイブリダイズする上記プローブを基盤（担体）上に固定化したＤＮＡチップ等が挙げられる。
【００２５】
本発明に係る抗体は、上記（ａ）又は（ｂ）のタンパク質、またはその部分ペプチドを抗原として、公知の方法によりポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体として得られる抗体である。
【００２６】
さらに、本発明は、下記（Ａ）〜（Ｃ）の発明を含むものである。
（Ａ）本発明の上記遺伝子、または、本発明の上記タンパク質を含んでなるアクチン脱重合促進剤。
（Ｂ）本発明の上記タンパク質によるリン酸化コフィリンの脱リン酸化を阻害する物質のスクリーニング方法。
（Ｃ）上記（Ｂ）のスクリーニング方法により得られた物質を含んでなるアクチン脱重合抑制剤。
【００２７】
【発明の実施の形態】
本発明の実施の一形態について図面に基づいて説明すれば、以下のとおりである。
【００２８】
（１）本発明に係る遺伝子、及びそのタンパク質の構造
前述したように、本発明者らは、これまでショウジョウバエ由来の遺伝子ｓｌｉｎｇｓｈｏｔ（ｓｓｈ）、さらにそのヒトホモログｈｓｓｈ（詳細には、ｈｓｓｈ−１Ｌ，−１Ｓ，−１Ｂ，  ｈｓｓｈ−２，−２Ａ，  ｈｓｓｈ−３の６つの遺伝子並びにこれらのゲノムＤＮＡ）を同定した。尚、上記ショウジョウバエ由来の遺伝子ｓｓｈ、及びそのタンパク質ＳＳＨの配列上の特徴、機能等については、国際出願（ＰＣＴ／ＪＰ０１／０６４６８）の明細書等に、上記ヒトホモログｈｓｓｈの遺伝子、及びそのタンパク質ｈＳＳＨの配列上の特徴、機能等については、特願２００１−３０５８５３号の明細書等にそれぞれ詳細に記載されている。
【００２９】
本発明者らは、さらに、上記ｓｓｈのマウスホモログの存在について調査検討を進めた結果、マウスホモログとして３つのマウス相同遺伝子ｍｓｓｈ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌが存在することを見出した。また、上記ヒトホモログｈｓｓｈについて、その選択的スプライシング産物の存在を調べたところ、新たに触媒領域を有する２つのヒトホモログｈｓｓｈ−２Ｌ，−３Ｌを見出した。さらに、取得した各ｃＤＮＡ配列をもとに、各タンパク質のアミノ酸配列を決定した。
【００３０】
配列番号１〜５には、それぞれ上記５つの遺伝子ｍｓｓｈ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌ，  ｈｓｓｈ−２Ｌ，−３Ｌの各塩基配列が、そのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）領域によってコードされる各アミノ酸配列と共に示される。また、上記５つの遺伝子によってそれぞれコードされるタンパク質ｍＳＳＨ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌ，  ｈＳＳＨ−２Ｌ，−３Ｌの各アミノ酸配列が、配列番号６〜１０に示される。
【００３１】
図１には、解析の結果明らかになった上記５つのタンパク質ｍＳＳＨ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌ，ｈＳＳＨ−２Ｌ，−３Ｌの模式的構造が示される。比較のため、本発明者らが先に明らかにした上記ヒト由来のタンパク質ｈＳＳＨ−１Ｌの模式的構造も併せて示される。図中、「ａ．ａ．」とはアミノ酸残基の数を示す。
【００３２】
上記マウス由来の３つのタンパク質ｍＳＳＨ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌは、それぞれ上記ヒト由来のタンパク質ｈＳＳＨ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌと相同性を有している。また、これら６つのタンパク質ｍＳＳＨ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌ，  ｈＳＳＨ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌは、いずれも、Ｎ末端側からドメインＡ（Ｄｏｍａｉｎ  Ａ）、ドメインＢ（Ｄｏｍａｉｎ  Ｂ）、及び触媒領域（Ｃａｔａｌｙｔｉｃ  ｄｏｍａｉｎ：換言すれば、フォスファターゼドメイン）の３つのドメインを有している。
【００３３】
同図に示すように、今回明らかにした２つのヒトホモログｈＳＳＨ−２Ｌ，−３Ｌは、触媒領域からＣ末端側に長く伸びる領域を有している。本発明者らが以前明らかにしたヒトホモログ（前記ｈＳＳＨ−２，−３）は、ｈＳＳＨ−１Ｌ  と比べ、触媒領域からＣ末端側に長く伸びる領域を有していなかったが、今回の解析結果は、当該領域を有するタンパク質ｈＳＳＨ−２Ｌ，−３Ｌをコードする成熟ｍＲＮＡ（ｓｐｌｉｃｅ  ｖａｒｉａｎｔｓ）の存在を示すものである。尚、解析は主としてデータベースに登録されている配列データを用いて行い、上記ｈＳＳＨ−２Ｌについては、本発明者らが以前明らかにした配列（アクセッション番号：ＡＢ０７２３５８）と、検索の結果得られた配列（アクセッション番号：ＸＭ＿０３０８４６）とを連結させることによりその配列を決定した。上記ｈＳＳＨ−３Ｌについては、本発明者らが以前明らかにした配列（アクセッション番号：ＡＢ０７２３６０）と、検索の結果得られた配列（アクセッション番号：ＢＩ８２４２７８）とをベースにして、さらに他の配列（アクセッション番号：ＢＭ０４７６１１、ＢＧ６７９９８１、ＢＥ８９８５１４）とも比較してその配列を決定した。尚、この方法でも決定できない部位は他の多数のＥＳＴと比較してその塩基を決定した。
【００３４】
上記のように、６つのタンパク質ｍＳＳＨ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌ，  ｈＳＳＨ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌは、いずれも、ドメインＡ、ドメインＢ、及び触媒領域を有しているが、触媒領域からＣ末端側の領域では、ｍＳＳＨ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌの間で相同性は殆ど認められなかった（同様に、ｈＳＳＨ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌ間での相同性も殆ど認められなかった）。ただし、図１に示すように、ｍＳＳＨ−１ＬとｍＳＳＨ−２Ｌとの間（及びｈＳＳＨ−１ＬとｈＳＳＨ−２Ｌとの間）で、約６０残基の相同な領域（ドメインＤ：Ｄｏｍａｉｎ  Ｄ）が見出された。図２には、ｍＳＳＨ−１Ｌ、ｍＳＳＨ−２Ｌ、ｈＳＳＨ−１Ｌ、ｈＳＳＨ−２Ｌの間での当該ドメインＤのアミノ酸配列が比較して示される。
【００３５】
上記ｍＳＳＨ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌ，  ｈＳＳＨ−２Ｌ，−３Ｌは、ｈＳＳＨ−１Ｌと同様に触媒領域を有しており、そのアミノ酸配列からコフィリンに対するフォスファターゼ活性を持つことが予測されるが、本発明者らは、特に上記ｍＳＳＨ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌについて、その機能や発現分布、細胞内局在などを調査した。以下では、その実験結果（実施例）について説明する。尚、以下の説明では、上記ｍＳＳＨ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌをそれぞれ「ｍＳＳＨ−１」「ｍＳＳＨ−２」「ｍＳＳＨ−３」と、上記ｍｓｓｈ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌをそれぞれ「ｍｓｓｈ−１」「ｍｓｓｈ−２」「ｍｓｓｈ−３」と略記する。
【００３６】
（２）成体マウスでのノーザンブロット（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  ｂｌｏｔ）解析
上記ｍｓｓｈ−１，−２，−３について、ノーザンブロット解析によりこれらの遺伝子が成体マウスのどこの組織で発現しているか調べた。その結果を図３に示す。同図に示すように、上記ｍｓｓｈ−１，−２，−３は、いずれも、調べた全ての組織（脳、胸腺、心臓、肝臓、脾臓、腎臓、小腸、骨格筋、精巣）で発現が見られたが、ｍｓｓｈ−１は脳、腎臓、ｍｓｓｈ−２は胸腺、心臓、精巣、ｍｓｓｈ−３は小腸、精巣において特に強い発現が認められた。図中、最下段のＧＡＰＤＨは各レーンのＲＮＡ量がほぼ同量であることを示す。
【００３７】
（３）マウスＥ１４胚での発現
次に、上記ｍｓｓｈ−１，−２，−３について、ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ解析によりマウスＥ１４（胎生１４日）胚での発現を調べた。その結果を図４に示す。図中、ａ，ｄ，ｇの切片は、ｍｓｓｈ−１の発現を調べた結果であり、ｂ，ｅ，ｈの切片は、ｍｓｓｈ−２の発現を調べた結果であり、ｃ，ｆ，ｉの切片は、ｍｓｓｈ−３の発現を調べた結果である。また、ｄ’は、ｄの切片中、大脳皮質、中脳、延髄がどの領域に相当するかを拡大して示すものである。
【００３８】
同図ａ，ｃの切片に示すように、ｍｓｓｈ−１，−３は、漿液腺（ｓｅｒｏｕｓ  ｇｌａｎｄ：図中「ＳＧ」で示す）での発現が観察された。また、ｄ，ｅ，ｆの切片に示すように、ｍｓｓｈ−１，−２，−３はいずれも、大脳皮質、中脳、延髄で発現していた。ｍｓｓｈ−１については、非神経系での発現も観察された。
【００３９】
図５のａ，ｂ，ｃは、図４の切片ｇ，ｈ，ｉ中、脊髄  （ＳＰ）  および後根神経節（ＤＲＧ）を含む領域を拡大して示すものであり、ｍｓｓｈ−１，−２，−３はいずれも、脊髄  （ＳＰ）  と後根神経節  （ＤＲＧ）  とに発現していた。ただし、ｍｓｓｈ−２は脊髄全体で発現しているのに対し、ｍｓｓｈ−１，−３は運動神経のサブセットでの発現が高かった。また、後根神経節での発現も均一ではなかった。
【００４０】
図５のｄは、精巣におけるｍｓｓｈ−１の発現を調べた結果であるが、ｍｓｓｈ−１は精巣でも発現が観察された。ｍｓｓｈ−１を発現している領域は、将来精子を生み出す組織になるものである。
【００４１】
（４）成体脳での発現
上記（３）と同様に、ｍｓｓｈ−１，−２，−３について、ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ解析によりマウス成体脳での発現を調べた。その結果を図６に示す。同図に示すように、ｍｓｓｈ−１，−２，−３はいずれも、海馬、小脳、そして嗅球で発現していた。
【００４２】
（５）ｍＳＳＨ−１，−２，−３発現による細胞内コフィリンのリン酸化レベルの減少
ｍＳＳＨ−１，−２，−３を細胞内発現させることによって、細胞内のコフィリンのリン酸化レベルが減少するかどうかをウエスタンブロット法により検討した。実験にはＣＯＳ７細胞を使用し、細胞にプラスミドをトランスフェクションして、ｍｙｃタグ付き各種  ｍＳＳＨ  を発現させた。その後、細胞を溶解し、各細胞内のコフィリンのリン酸化レベルをウエスタンブロット法により検討した。
【００４３】
上記実験結果を図７に示す。図中左側から順に、それぞれｍＳＳＨ−１（ｗｔ），  ｍＳＳＨ−１（ＣＳ），  ｍＳＳＨ−２（ｗｔ），  ｍＳＳＨ−２（ＣＳ），  ｍＳＳＨ−３（ｗｔ），  ｍＳＳＨ−３（ＣＳ）を発現させたものである（「ｗｔ」は野生型タンパク質を、「ＣＳ」は予想活性部位に変異を入れた変異タンパク質を意味する。以下同じ）。最も右側のレーンｍｏｃｋは、対照用で細胞に何も発現させなかったものである。また、上段は、リン酸化されたコフィリン（Ｐ−ｃｏｆｉｌｉｎ）  のみに結合できる抗体（ａｎｔｉ−Ｐ−ｃｏｆｉｌｉｎ）を用いたブロット結果である。中段は、リン酸化型及び非リン酸化型のいずれのコフィリン（ｃｏｆｉｌｉｎ）  にも結合できる抗体（ａｎｔｉ−ｃｏｆｉｌｉｎ）を用いたブロット結果である。このブロット結果は、各レーンのサンプル中に、ほぼ等量のコフィリンが含まれていることを示すものである。下段は、ｍｙｃタグに対する抗体（ａｎｔｉ−ｍｙｃ）でブロットした結果である。このブロット結果は、それぞれのｍＳＳＨタンパク質について、野生型  （ｗｔ）  と変異型  （ＣＳ）  とが、ほぼ等量発現していることを示すものである。尚、ｍＳＳＨ−２は大量に免沈沈降しないと、発現が確認できなかった（図中、最下段）。
【００４４】
図７の上段に示すように、ＣＯＳ７細胞に野生型のｍＳＳＨ−１，−２，−３を発現させると、内在のコフィリンのリン酸化レベルが減少する（ｗｔレーンとＣＳレーンとの比較）。ｍＳＳＨ−３については、ｍＳＳＨ−１，−２に比べて活性が低いという結果が得られた。
【００４５】
以上の実験結果は、野生型のｍＳＳＨ−１，−２，−３がリン酸化コフィリンを脱リン酸化させる活性を持つことを示すものである。
【００４６】
（６）ｍＳＳＨ−１，−２，−３の細胞内局在
ｍＳＳＨ−１，−２，−３の細胞内局在を免疫染色法により検討した。その結果を図８〜図１０に示す。
【００４７】
実験にはＨｅＬａ細胞を使用し、ｍｙｃタグで標識したｍＳＳＨ−１（ｗｔ），  ｍＳＳＨ−１（ＣＳ），  ｍＳＳＨ−２（ｗｔ），  ｍＳＳＨ−２（ＣＳ），  ｍＳＳＨ−３（ｗｔ），  ｍＳＳＨ−３（ＣＳ）をそれぞれ細胞内発現させた。図８〜図１０は、それぞれｍＳＳＨ−１，−２，−３を発現させ、抗ｍｙｃ抗体（ａｎｔｉ−ｍｙｃ）で染色した結果を示す（各図中央）。各図上段は野生型のｍＳＳＨを発現させた場合であり、下段は変異型のｍＳＳＨを発現させた場合である。また、各図左側はファロイジン染色の結果を示すものであり、右側はこのファロイジン染色の結果と中央のａｎｔｉ−ｍｙｃ染色の結果とを重ね合わせたものである。尚、ファロイジンはＦアクチンに特異的に結合するため、細胞内のアクチン線維を検出するために用いられる。
【００４８】
上記実験の結果、ｍＳＳＨ−１，−２は細胞全体のアクチン線維と共局在を示したが（図８、図９参照）、ｍＳＳＨ−３は細胞膜付近のアクチン線維および核に局在が見られた（図１０参照）。
【００４９】
ｍＳＳＨ−１，−２，−３は、いずれも細胞内のコフィリンのリン酸化レベルを減少させたが、ノーザンブロット解析およびｉｎ  ｓｉｔｕ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ解析では発現パターンに相違が見られ、細胞内局在においても相違が認められた。これらの実験結果から、ｍＳＳＨ−１，−２，−３は、いずれもコフィリンを脱リン酸化することによってアクチン細胞骨格の制御に関与するが、細胞内では互いに異なった役割を担っている可能性が示された。
【００５０】
（７）本発明の遺伝子、タンパク質の利用方法（有用性）
以上のように、本発明のタンパク質（ｍＳＳＨ−１，−２，−３、さらに前記ヒト由来のｈＳＳＨ−２Ｌ，−３Ｌ）は、脱リン酸化酵素であり、リン酸化コフィリンを脱リン酸化することによって、コフィリンを非活性型から活性型に変え、そのアクチン脱重合を促進する作用（換言すれば、アクチンの重合を抑制する作用）を持つものと考えられる。よって、本発明の遺伝子、タンパク質は、以下に掲げるような種々の医学上および産業上の利用性（有用性）を有するものである。
【００５１】
Ａ）  アクチン細胞骨格系は、前述のように種々の細胞活動を支える重要な役割を有しており、アクチン脱重合因子・コフィリンの脱リン酸化酵素である本発明の遺伝子、タンパク質もまた、アクチン細胞骨格系の動態を制御する物質の一つとして種々の細胞活動を支える重要な役割を担っている。
【００５２】
それゆえ、本発明の遺伝子、タンパク質は、細胞活動に伴うアクチン細胞骨格系の制御機構の解明に資するものであり、さらに、この制御機構に関わる種々の遺伝子疾患の病態解析やその診断法・治療法の開発などに有効利用できる可能性がある。具体的には、以下の各分野での利用が考えられる。
【００５３】
▲１▼  上記コフィリンのリン酸化・脱リン酸化は、神経回路形成において重要な役割を担うことが示されている。具体的には、反発因子セマフォリン３Ａによる、後根神経節の神経成長円錐の崩壊  （ｇｒｏｗｔｈ  ｃｏｎｅ  ｃｏｌｌａｐｓｅ）  に、  前記ＬＩＭキナーゼ（ＬＩＭＫ１）によるコフィリンのリン酸化が必要なことや（Ａｉｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ４，  ３６７−３７３，  ２００１）、ＬＩＭＫ１ノックアウトマウスにおいて、海馬ニューロンのスパインの形態が異常になり長期増強  （ｌｏｎｇ  ｔｅｒｍ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ，  ＬＴＰ）  が昂進することが挙げられる（Ｍｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｅｕｒｏｎ  ３５，  １２１−１３３，  ２００２）。また、ＬＩＭＫ１遺伝子座のヘテロ接合が、ウィリアムズ症候群と呼ばれるヒト遺伝病の症状の中の、視空間構成認知障害（視覚は正常であるものの、見たものの部分を全体に正しく統合できない）と連鎖することも報告されている（総説：Ｍｏｒｒｉｓ  ａｎｄ  Ｍｅｒｖｉｓ，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅｔ．  １，  ４６１−４８４，  ２０００）。
【００５４】
このように、コフィリンのリン酸化・脱リン酸化は神経回路形成に深く関わっており、上記の実験結果からもマウスｓｓｈ遺伝子が、後根神経節や海馬で発現していることが観察された。したがって、本発明を神経疾患の診断・治療などに利用できる可能性がある。例えば、上記のようなアクチン細胞骨格系の制御機構を調べる基礎研究を通じて、神経再生医療、遺伝子治療に直接役立つ知見が得られる可能性があり、これを利用し、各種神経疾患（上記ウィリアムズ症候群のほか、例えば、痴呆、パーキンソン病、アルツハイマー病などのような神経変性疾患、あるいは脊髄損傷や顔面神経麻痺などの神経麻痺）に対して、新たな神経再生技術の開発、新たな遺伝子治療法の開発、各種神経疾患の病態機序の研究、その治療薬の開発、さらには、新たな神経細胞・神経組織の人為的生産技術の開発、といった種々の応用面・臨床面での利用が期待できる。
【００５５】
▲２▼  細胞外からの刺激によって、上記コフィリンの脱リン酸化が誘導される例が報告されている。しかも、このコフィリンの脱リン酸化を介して、細胞は大きく変形し、それぞれの生理機能を果たすと考えられている。例えば、血小板はトロンビン刺激により凝集反応を起こし、止血において重要な役割を果たす。この際、コフィリンの脱リン酸化が誘導され、この凝集反応での血小板の変形に必要だと推測されている（Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ａｎｄ  Ｈａｓｌａｍ，  １９９４：  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．  ３０１，  ４１−４７）。また、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）を受容した甲状腺細胞は、細胞形態を大きく変え、甲状腺ホルモンを合成し分泌する。この細胞の変形は、甲状腺ホルモンの合成に必要な材料を、効率良く取り込むためだと推測されている。この細胞形態の変化においても、コフィリンは脱リン酸化される（Ｓａｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４：  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ２１２，  ４９−６１）。
【００５６】
以上のような細胞応答において、コフィリンを脱リン酸化するフォスファターゼの実体は不明であった。本発明に係るフォスファターゼはこの脱リン酸化に中心的な役割を果たすと考えられるため、当該フォスファターゼを活性化あるいは阻害する薬剤の開発に本発明を利用することにより、迅速な止血や甲状腺ホルモンの合成の調節などが実現可能である。
【００５７】
▲３▼  ヒトの細胞においてアクチン細胞骨格系の再編成を伴う構造体は多種類ある。その一例が、内耳の有毛細胞が構築する不動毛である（「ニューロンの生物学」トッパン  ２７０−２７３頁の特に図１２−４  Ｂ参照）。本発明に係るタンパク質ＳＳＨがこの不動毛の形成に重要な役割を果たしている可能性があり、具体的には、ヒトのｈｓｓｈ遺伝子に突然変異が生ずれば、難聴などの遺伝子疾患の原因となる可能性が考えられる。もしそうであれば、本発明に係る遺伝子ｈｓｓｈ、及びそのタンパク質ｈＳＳＨは、難聴の治療法を開発する研究を進めるための研究材料として非常に有用であり、マウス由来の遺伝子ｍｓｓｈ、及びそのタンパク質ｍＳＳＨについても、マウスをモデル系とした研究に非常に有用である。
【００５８】
▲４▼  前述のように、細胞の運動（移動、成長等）・増殖・分化など種々の細胞活動においてアクチン細胞骨格は制御されている。そのため、本発明に係る遺伝子、タンパク質は、細胞の運動・増殖・分化のメカニズムを研究解析するための研究材料としても有用であり、さらに、こうした研究を通じて、幹細胞の分化を誘導したり、分化した細胞の増殖を促すといった新たな技術の開発などにも有用である。
【００５９】
Ｂ）  本発明に係るフォスファターゼは、コフィリンを脱リン酸化することによって、コフィリンを非活性型から活性型に変え、そのアクチン脱重合を促進する作用（換言すれば、アクチンの重合を抑制する作用）を持つものである。したがって、本発明に係る遺伝子、及びタンパク質は、アクチン脱重合促進剤（またはアクチン重合抑制剤）として利用することができる。この場合、アクチン脱重合促進剤（またはアクチン重合抑制剤）は、本発明に係る遺伝子またはそのタンパク質を含むものであればよく、その他リポソーム等の運搬体や適当な溶液などを含むものであってもよい。
【００６０】
また、本発明に係るフォスファターゼは、コフィリンを脱リン酸化することから、この脱リン酸化を阻害する物質のスクリーニング方法に利用することができる。スクリーニング方法は、試験管内反応系（ｃｅｌｌ−ｆｒｅｅ  ｓｙｓｔｅｍ）または細胞内のいずれで行ってもよく、▲１▼本発明に係るフォスファターゼとコフィリンとの結合を阻害する物質のスクリーニング方法や、▲２▼細胞外から上記フォスファターゼへのシグナルカスケードを阻害することによって、上記フォスファターゼによるコフィリンの脱リン酸化を阻害する物質のスクリーニング方法、などが例示される。
【００６１】
上記スクリーニング方法により得られた物質は、アクチン脱重合抑制剤（またはアクチン重合促進剤）として利用することができる。また、薬剤の候補分子となるものである。
【００６２】
Ｃ）  さらに、本発明に係る遺伝子、タンパク質は、前述した組換え発現ベクター、形質転換体、遺伝子検出器具、抗体の作製に有用である。
【００６３】
（８）本発明に係る遺伝子、タンパク質等の取得方法
〔８−１：遺伝子の取得方法〕
本発明に係る遺伝子を取得する方法は、特に限定されるものではなく、前述の開示された配列情報等に基づいて種々の方法により、上記各遺伝子配列を含むＤＮＡ断片を単離し、クローニングすることができる。
【００６４】
例えば、上記各ｃＤＮＡ配列の一部配列と特異的にハイブリダイズするプローブを調製し、ヒト又はマウスのゲノムＤＮＡライブラリーやｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングすればよい。このようなプローブとしては、上記各ｃＤＮＡ配列またはその相補配列の少なくとも一部に特異的にハイブリダイズするプローブであれば、いずれの配列・長さのものを用いてもよい。また、上記スクリーニングにおける各ステップについては、通常用いられる条件の下で行えばよい。
【００６５】
上記スクリーニングによって得られたクローンは、制限酵素地図の作成およびその塩基配列決定（シークエンシング）によって、さらに詳しく解析することができる。これらの解析によって、本発明に係る遺伝子配列を含むＤＮＡ断片を取得したか容易に確認することができる。
【００６６】
また、上記プローブの配列を、ヒト又はマウスのＳＳＨタンパク質の間で良好に保存されている領域（例えば、図１に示されるドメインＡ・Ｂ及び触媒領域、またはドメインＤ）の中から選択し、ヒトやマウス、その他の生物のゲノムＤＮＡ（またはｃＤＮＡ）ライブラリーをスクリーニングすれば、上記ＳＳＨタンパク質と同様の機能を有する相同分子や類縁分子をコードする遺伝子を単離しクローニングできる可能性が高い。
【００６７】
本発明に係る遺伝子を取得する方法は、上記スクリーニング法以外にも、ＰＣＲ等の増幅手段を用いる方法がある。例えば、上記各ｃＤＮＡ配列のうち、５’側および３’側の非翻訳領域の配列（またはその相補配列）の中からそれぞれプライマーを調製し、これらプライマーを用いてヒト又はマウスのゲノムＤＮＡ（またはｃＤＮＡ）等を鋳型にしてＰＣＲ等を行い、両プライマー間に挟まれるＤＮＡ領域を増幅することで、本発明に係る遺伝子を含むＤＮＡ断片を大量に取得できる。
【００６８】
〔８−２：タンパク質の取得方法〕
本発明に係るタンパク質の取得する方法についても、特に限定されるものではなく、例えば、上記各ｃＤＮＡ配列を導入した組換え発現ベクターを作製し、周知の方法により大腸菌や酵母等の微生物又は動物細胞などに組み入れて形質転換体として、そのｃＤＮＡがコードするタンパク質を発現させ精製することで、本発明に係るタンパク質を容易に取得することができる。
【００６９】
尚、このように宿主に外来遺伝子を導入する場合、外来遺伝子の発現のため宿主内で機能するプロモーターを組み入れた発現ベクター及び宿主には様々なものが存在するので、目的に応じたものを選択すればよい。産生されたタンパク質を取り出す方法は、用いた宿主、タンパク質の性質によって異なるが、タグの利用等によって比較的容易に目的のタンパク質を精製することが可能である。
【００７０】
変異タンパク質を作製する方法についても、特に限定されるものではなく、例えば、部位特異的突然変異誘発法（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ−Ｇｏｔｏｈ，Ｇｅｎｅ  １５２，２７１−２７５（１９９５）他）、ＰＣＲ法を利用して塩基配列に点変異を導入し変異タンパク質を作製する方法、あるいはトランスポゾンの挿入による突然変異株作製法などの周知の変異タンパク質作製法を用いて、上記各ｃＤＮＡの塩基配列において、１またはそれ以上の塩基が置換、欠失、挿入、及び／又は付加されるように改変を加えることによって作製することができる。また、変異タンパク質の作製には、市販のキット（例えば、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ  Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｋｉｔ  ストラタジーン社製）を利用してもよい。
【００７１】
上記のように作製された変異タンパク質が、野生型と同様の活性・機能を有する例は既に多数知られており、一方、その活性・機能に異常を来すように変異を導入し変異タンパク質を作製することも既に多く行われている。例えば、フォスファターゼ活性について、触媒領域（図１参照）に変異を生じさせることにより、酵素活性を向上した変異体、酵素活性が弱まった変異体、あるいは酵素活性が失われた変異体が得られる可能性がある一方、触媒領域以外の領域に変異を生じさせることにより、野生型ＳＳＨと同様のフォスファターゼ活性を持つ変異体が得られる可能性がある。また、進化的によく保存されたドメイン（即ち、図１に示されるドメインＡ・Ｂ等）に変異を生じさせることにより野生型の本来の機能を著しく向上し、あるいは反対にその機能を全く欠失した変異タンパク質が得られる可能性がある。
【００７２】
〔８−３：遺伝子検出器具〕
遺伝子検出器具は、本発明の遺伝子における一部の塩基配列又はその相補配列をプローブとして用いたものである。例えば、基盤（担体）上にオリゴヌクレオチド（プローブ）を固定化してなるＤＮＡチップが挙げられる。ここで「ＤＮＡチップ」とは、主として、合成したオリゴヌクレオチドをプローブに用いる合成型ＤＮＡチップを意味するが、ＰＣＲ産物などのｃＤＮＡをプローブに用いる貼り付け型ＤＮＡマイクロアレイをも包含するものとする。
【００７３】
プローブとして用いる配列は、調製したｃＤＮＡのそれぞれについて、個々を識別することが可能な特徴的な配列を特定する従来公知の方法によって決定することができ、例えば、ＳＡＧＥ：Ｓｅｒｉａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ法（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７６：１２６８，  １９９７；  Ｃｅｌｌ  ８８：２４３，  １９９７；  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７０：４８４，  １９９５；  Ｎａｔｕｒｅ  ３８９：３００，  １９９７；  米国特許第５，６９５，９３７  号）などを挙げることができる。
【００７４】
尚、ＤＮＡチップの製造には、公知の方法を採用すればよい。例えば、オリゴヌクレオチドとして合成オリゴヌクレオチドを使用する場合には、フォトリソグラフィー技術と固相法ＤＮＡ合成技術との組み合わせにより、基盤上で該オリゴヌクレオチドを合成すればよい。一方、オリゴヌクレオチドとしてｃＤＮＡを用いる場合には、アレイ機を用いて基盤上に貼り付ければよい。
【００７５】
また、一般的なＤＮＡチップと同様、パーフェクトマッチプローブ（オリゴヌクレオチド）と、該パーフェクトマッチプローブにおいて一塩基置換されたミスマッチプローブとを配置して遺伝子の検出精度をより向上させてもよい。さらに、異なる遺伝子を並行して検出するために、複数種のオリゴヌクレオチドを同一の基盤上に固定してＤＮＡチップを構成してもよい。
【００７６】
〔８−４：組換え発現ベクター及び形質転換体〕
組換え発現ベクターは、本発明の遺伝子を含むものである。ベクターの具体的な種類は特に限定されるものではなく、ホスト細胞中で発現可能なベクターを適宜選択すればよい。すなわち、ホスト細胞の種類に応じて、確実に遺伝子を発現させるために適宜プロモーター配列を選択し、これと本発明に係る遺伝子を各種プラスミド等に組み込んだものを発現ベクターとして用いればよい。
【００７７】
本発明の遺伝子がホスト細胞に導入されたか否か、さらにはホスト細胞中で確実に発現しているか否かを確認するために、各種マーカーを用いてもよい。例えば、ホスト細胞中で欠失している遺伝子をマーカーとして用い、このマーカーと本発明の遺伝子とを含むプラスミド等を発現ベクターとしてホスト細胞に導入する。これによってマーカー遺伝子の発現から本発明の遺伝子の導入を確認することができる。あるいは、本発明に係るタンパク質を融合タンパク質として発現させてもよく、例えば、オワンクラゲ由来の緑色蛍光タンパク質ＧＦＰ（Ｇｒｅｅｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）をマーカーとして用い、本発明に係るタンパク質をＧＦＰ融合タンパク質として発現させてもよい。
【００７８】
上記ホスト細胞は、特に限定されるものではなく、従来公知の各種細胞を好適に用いることができる。具体的には、ヒト又はマウス由来の細胞をはじめとして、例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）等の細菌、酵母（出芽酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅや分裂酵母Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）、線虫Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ、アフリカツメガエル（Ｘｅｎｏｐａｓ  ｌａｅｖｉｓ）の卵母細胞、各種哺乳動物（ラット、ウサギ、ブタ、サル等）の培養細胞、あるいは、キイロショウジョウバエ、カイコガ等の昆虫の培養細胞等を挙げることができるが、特に限定されるものではない。
【００７９】
上記発現ベクターをホスト細胞に導入する方法、すなわち形質転換方法も特に限定されるものではなく、電気穿孔法、リン酸カルシウム法、リポソーム法、ＤＥＡＥデキストラン法等の従来公知の方法を好適に用いることができる。
【００８０】
〔８−５：抗体〕
抗体は、本発明のタンパク質、またはその部分ペプチドを抗原として、公知の方法によりポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体として得られる抗体である。公知の方法としては、例えば、文献（Ｈａｒｌｏｗらの「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ：  Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８））、岩崎らの「単クローン抗体  ハイブリドーマとＥＬＩＳＡ，講談社（１９９１）」」に記載の方法が挙げられる。こうして作製した抗体は、本発明のタンパク質の検出に有効である。
【００８１】
【発明の効果】
以上のように、本発明は、アクチン脱重合因子・コフィリンを脱リン酸化する酵素とその遺伝子に関するものであり、前述したとおり、遺伝子疾患の治療や新薬開発などに利用できるほか種々の有用性を有するものである。
【００８２】
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
【図１】本発明に係るタンパク質ｍＳＳＨ（ｍＳＳＨ−１Ｌ，−２Ｌ，−３Ｌ）及びｈＳＳＨ（ｈＳＳＨ−２Ｌ，−３Ｌ）の構造を、ｈＳＳＨ−１Ｌと共に模式的に示す図である。
【図２】ｍＳＳＨ−１Ｌ、ｍＳＳＨ−２Ｌ、ｈＳＳＨ−１Ｌ、ｈＳＳＨ−２Ｌの間でのドメインＤのアミノ酸配列を比較して示す図である。
【図３】ｍｓｓｈ−１，−２，−３について、成体マウスでのノーザンブロット解析の結果を示す図である。
【図４】ｍｓｓｈ−１，−２，−３について、ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ解析によりマウスＥ１４胚での発現を調べた結果を示す図である。
【図５】ｍｓｓｈ−１，−２，−３について、ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ解析によりマウスＥ１４胚での発現を調べた結果を示す図である。
【図６】ｍｓｓｈ−１，−２，−３について、ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ解析によりマウス成体脳での発現を調べた結果を示す図である。
【図７】ｍＳＳＨ−１，−２，−３の発現により、細胞内のコフィリンのリン酸化レベルが減少するかどうかをウエスタンブロット法により検討した結果を示す図である。
【図８】ｍＳＳＨ−１の細胞内局在を免疫染色法により検討した結果を示す図である。
【図９】ｍＳＳＨ−２の細胞内局在を免疫染色法により検討した結果を示す図である。
【図１０】ｍＳＳＨ−３の細胞内局在を免疫染色法により検討した結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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