(57)【要約】【課題】優れた神経調節作用を発揮することができる神経調節剤を提供する。ローヤルゼリーから容易に製造することができる神経調節剤の製造方法を提供する。優れた神経調節作用を発揮することができる食品製剤及び化粧品製剤を提供する。より優れた神経調節作用を発揮することができる神経調節組成物を提供する。【解決手段】神経調節剤、それを含有する食品製剤及び化粧品製剤は、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸から選択される少なくとも一種を有効成分とするものである。神経調節剤の製造方法は、ローヤルゼリーに緩衝液を混合して抽出される抽出物を分子篩担体等の分離用担体又は樹脂に供し、緩衝液等の分離用溶媒により分取するものである。神経調節組成物は、神経調節剤及びニューロトロフィンを含有するものである。【選択図】　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸（リン酸の数は１〜３）から選択される少なくとも一種を有効成分とする神経調節剤。
【請求項２】
ローヤルゼリーに抽出用溶媒を混合して抽出される抽出物を分離用担体又は樹脂に供し、分離用溶媒により分取される請求項１に記載の神経調節剤の製造方法。
【請求項３】
１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸（リン酸の数は１〜３）から選択される少なくとも一種を有効成分とする食品製剤。
【請求項４】
１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸（リン酸の数は１〜３）から選択される少なくとも一種を有効成分とする化粧品製剤。
【請求項５】
１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸（リン酸の数は１〜３）から選択される少なくとも一種とニューロトロフィンとを含有する神経調節組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、神経調節作用を示し、健康食品、医薬品、化粧品の素材として有用な神経調節剤、その製造方法、食品製剤、化粧品製剤及び神経調節組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
近年、アルツハイマー病や痴呆等の神経疾患を患う人が増加している。痴呆症の治療には、コリンエステラーゼ阻害作用を有するコリンエステラーゼ阻害剤が医薬品として使用されている。このコリンエステラーゼ阻害剤は、脳内のアセチルコリンを増加させ、神経細胞間の伝達機能を活性化させる。しかし、このコリンエステラーゼ阻害剤は、神経細胞の活性化作用を有さないことから、障害を受けた神経細胞の修復には適していない。
【０００３】
一方、ニューロトロフィンとは、神経増殖因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン（ＮＴ）−３及びＮＴ−４／５等の総称である。このニューロトロフィンは神経細胞を成熟させ、障害を受けた神経細胞を活性化させる作用を有している。しかし、神経細胞間の伝達機能を活性化する作用は有さない。
【０００４】
一方、神経調節作用は、神経細胞又はその付随細胞を保護し、活性化させる作用、神経細胞を分化させる作用及び神経細胞の細胞内伝達系を活性化する作用を包括する作用として定義される。また、神経調節剤は、前記の神経調節作用を有する医薬品として定義される。神経疾患に対して神経調節剤、特に、食経験のある天然物由来の神経調節剤が待ち望まれている。
【０００５】
ところで、ローヤルゼリーは、羽化後３〜１５日の雌のミツバチが下咽頭腺及び大腮腺から分泌する分泌物を混合して作るゼリー状の物質である。ローヤルゼリーには、ミツバチの成長と分化を促進する作用がある。
【０００６】
このローヤルゼリーは人間の健康生活にとっても抗菌作用、免疫増強作用、抗腫瘍作用、抗炎症作用、血圧調節作用等の有用な効能、効果を有することから、食品製剤、医薬品製剤及び化粧品製剤として従来から広く利用されている。
【０００７】
なお、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸は、ピルビン酸キナーゼやトランスフェラーゼの基質になることが報告されている（Ｊｅｂｅｌｅａｎｕ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１９７５；１４　（２６）　５５９３−６０１）。また、ワクシニアウイルスの複製を阻害する作用も確認されている（Ｋａｎｅ　Ｍ　ｅｔ　ａｌ　Ｊ　Ｖｉｒｏｌ１９９５；６９（１０）　６３５２−８）。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
ローヤルゼリーは経験的に滋養強壮作用を有することが知られているものの、神経調節作用の関与は僅かであるという問題がある。また、ローヤルゼリーを含む天然物中の神経調節作用を示す物質は微量であることから、得られる神経調節作用は微弱であるという問題がある。
【０００９】
この発明は上記のような従来技術に存在する問題点に着目してなされたものである。その目的とするところは、優れた神経調節作用を発揮することができる神経調節剤を提供することにある。また、ローヤルゼリーから容易に製造することができる神経調節剤の製造方法を提供することにある。さらに、優れた神経調節作用を発揮することができる食品製剤及び化粧品製剤を提供することにある。加えて、より優れた神経調節作用を発揮することができる神経調節組成物を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
上記の目的を達成するために、請求項１に記載の神経調節剤は、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸（リン酸の数は１〜３）から選択される少なくとも一種を有効成分とするものである。
【００１１】
請求項２に記載の神経調節剤の製造方法は、ローヤルゼリーに抽出用溶媒を混合して抽出される抽出物を分離用担体又は樹脂に供し、分離用溶媒により分取されるものである。
【００１２】
請求項３に記載の食品製剤は、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸（リン酸の数は１〜３）から選択される少なくとも一種を有効成分とするものである。
【００１３】
請求項４に記載の化粧品製剤は、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸（リン酸の数は１〜３）から選択される少なくとも一種を有効成分とするものである。
【００１４】
請求項５に記載の神経調節組成物は、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸（リン酸の数は１〜３）から選択される少なくとも一種とニューロトロフィンとを含有するものである。
【００１５】
【発明の実施の形態】
以下、この発明を具体化した実施形態について詳細に説明する。
本実施形態の神経調節剤は、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸（リン酸の数は１〜３）から選択される少なくとも一種を有効成分とするものである。
【００１６】
１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸はいずれもアデノシンの誘導体であり、アデニンの１位の窒素原子にヒドロキシル基が結合した場合、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン（下記に示す式（１））である。１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸は、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシンのリボースの５´位がリン酸化された構造である。５´位に結合するリン酸の数は、１〜３であり、リン酸の数が１の場合、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−モノリン酸（下記に示す式（２））である。リン酸の数が２の場合、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−ジリン酸（下記に示す式（３））である。リン酸の数が３の場合、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−トリリン酸（下記に示す式（４））である。
【００１７】
【化１】
2004051515.tif 000002
【００１８】
【化２】
2004051515.tif 000003
【００１９】
【化３】
2004051515.tif 000004
【００２０】
【化４】
2004051515.tif 000005
なお、リン酸の水酸基は全て水素が結合した形として表示しているが、ｐＨによっては水素が解離してイオン型となる。また、水素の代わりに、ナトリウム、カリウム等の一価の陽イオンと塩を形成する場合がある。
【００２１】
リボースの５´位のリン酸化は、アデノシン−５´−トリリン酸（ＡＴＰ）をリン酸供給源としてリン酸基転移酵素（ホスホトランスフェラーゼ）により行なわれる。従って、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−トリリン酸がまず生成される。
【００２２】
この１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−トリリン酸がリン酸脱離酵素（ホスファターゼ）により、官能基であるリン酸の一つが切断されると、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−ジリン酸が生成される。さらに、リン酸の一つが切断されると、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−モノリン酸が生じる。最後に、全てのリン酸が切断されると、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシンを生じる。
【００２３】
１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸において、神経調節作用の面でリン酸の数による差異は認められない。従って、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−モノリン酸、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−ジリン酸及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−トリリン酸のいずれでも良い。しかし、血中に豊富に存在するリン酸エステル切断酵素（ホスホエステラーゼ）により分解されないことから、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシンがより好ましい。
【００２４】
また、神経増殖因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン（ＮＴ）−３及びＮＴ−４／５から選択される少なくとも一種からなるニューロトロフィンはタンパク質である。これらニューロトロフィンは、熱、酸、アルカリにより変性し、かつ、ペプシンやトリプシン等の消化酵素により分解され、効果を失う。これらニューロトロフィンに対して、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸は、タンパク質ではないことから、熱、酸、アルカリに対し安定であり、前記の消化酵素によっても分解されないという特徴がある。
【００２５】
神経調節作用とは、神経細胞又はその付随細胞を保護し、活性化させる作用、神経細胞を分化させる作用及び神経細胞の細胞内伝達系を活性化する作用をいう。また、障害を受けた神経細胞又はその付随細胞を修復する作用及び神経伝達を活性化又は抑制する作用が含まれる。さらに、神経系全体を正常に調節する修飾作用が含まれる。神経細胞には、中枢性神経細胞及び末梢性神経細胞の両者が含まれる。神経細胞の付随細胞には、ミクログリア、オリゴデンドログリア等のグリア細胞、脳血管を構成する内皮細胞及びシュワン細胞が含まれる。
【００２６】
１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸は神経細胞又はその付随細胞に作用して、神経伝達を行なう神経突起の形成を促進し、神経の軸索輸送を活性化するニューロフィラメントＭの発現を促進させる。さらに、これらは、ニューロトロフィンにより活性化されるタンパク質キナーゼ（マイトージェン活性化タンパク質キナーゼ、略してＭＡＰキナーゼ）を活性化し、細胞の活性化を誘導する。これらの作用が総合的に発現されることにより、神経調節作用が誘導される。加えて、ニューロトロフィン受容体の発現を誘導する作用も有する。
【００２７】
次に、前記の神経調節剤は、医薬品製造に関わる常法に従って医薬品又は医薬部外品として利用される。医薬品としては経口剤又は非経口剤として利用され、医薬部外品としては、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、石鹸、目薬、歯磨き粉等に配合されて利用される。
【００２８】
経口剤としては、錠剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤、ドリンク剤等が挙げられる。前記錠剤及びカプセル剤に混和される場合には、結合剤、賦形剤、膨化剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤等とともに用いることができる。前記錠剤は、シェラック又は砂糖で被覆することもできる。また、カプセル剤の場合には、上記の材料にさらに油脂等の液体担体を含有させることができる。シロップ剤及びドリンク剤の場合には、甘味剤、防腐剤、色素香味剤等を含有させることができる。非経口剤としては、軟膏剤、クリーム剤、水剤等の外用剤の他に、注射剤が挙げられる。
【００２９】
外用剤の基材としては、ワセリン、パラフィン、油脂類、ラノリン、マクロゴールド等が用いられ、通常の方法によって軟膏剤やクリーム剤等とすることができる。注射剤には、液剤があり、その他、凍結乾燥剤があり、これは使用時に生理食塩液又は注射用蒸留水等に無菌的に溶解されて用いられる。
【００３０】
これらの神経調節剤中における１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸の含有量としては、１０〜９０重量％が好ましく、１５〜８５重量％がより好ましく、２０〜７０重量％がさらに好ましい。この含有量が１０重量％未満の場合には、含有量が少なすぎることから作用を十分に発揮することができない。また、９０重量％を越える場合には、神経調節剤の剤形を維持する結合剤、賦形剤等の含有量が低下することから、剤形が保たれない。これらの医薬品製剤は、他の神経調節剤と併用されることができる。
【００３１】
さらに、ニューロトロフィンは、神経細胞上のニューロトロフィン受容体に結合し、効果を発揮する。１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸は前述したように、ニューロトロフィン受容体の発現を誘導する作用があることから、ニューロトロフィンの作用を増強する。従って、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸とニューロトロフィンの併用は好ましい。
【００３２】
前記の神経調節剤は、神経細胞の活性化作用と神経間伝達の活性化作用を有している点から、例えば、抗痴呆剤、アルツハイマー病治療剤、老年性痴呆症治療剤、自律神経失調症治療剤、向精神病薬、抗精神病薬、パーキンソン病治療剤、側索硬化症治療剤等の中枢神経疾患治療剤として用いることができる。また、物理的障害や神経性ストレスによる神経障害に対する治療剤、変性プリオンやウイルスによる脳障害に対する治療剤として用いることができる。さらに、知覚神経障害や運動神経障害等の末梢神経疾患に対する治療剤として用いることができる。加えて、視神経障害に対する治療剤として用いることができる。
【００３３】
次に、前記の神経調節剤の製造方法について説明する。
すなわち、その製造方法は、ローヤルゼリーに抽出用溶媒を混合して抽出される抽出物を分離用担体又は樹脂に供し、分離用溶媒により分取されるものである。
【００３４】
まず、原料となるローヤルゼリーには、ローヤルゼリー原液、ローヤルゼリー原液を乾燥した粉末、ローヤルゼリーを溶媒で抽出した抽出物が用いられる。ローヤルゼリーの産地は、日本、中国等のアジア諸国、ヨーロッパ諸国、南アメリカ諸国及びオセアニア諸国等である。
【００３５】
１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸は熱に安定であることから、２０〜９０℃で製造される。また、これらの化合物は、水溶性が高いという特性がある。さらに、前記のローヤルゼリーを７０〜９０℃の温度で、３〜１０分間加熱することは、タンパク質が変性して沈殿するため、除去されやすくなる点から、好ましい。
【００３６】
抽出用溶媒としては、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸は水溶性が高い点から、水、ｐＨを調節した緩衝液又は低級アルコールを含有する水溶液が好ましい。抽出用溶媒の量は、抽出効率の点からローヤルゼリーに対して２〜１０倍量が好ましく、３〜６倍量がより好ましい。抽出用溶媒を原料に混和して混合液が得られる。
【００３７】
前記の混合液を固液分離することにより目的とする抽出物が得られる。この固液分離には、濾紙又は珪藻土を用いた自然濾過又は吸引濾過、あるいは、遠心分離機による遠心分離が用いられる。収率を上げる目的で、濾過と遠心分離操作を組み合わせることは好ましい。製造コストを下げる目的で、得られた残渣をさらに抽出することが好ましい。さらに、収率を上げる目的で、この操作を２〜５回繰り返すことがより好ましい。得られた抽出液を集めて減圧蒸留装置又は真空凍結乾燥機を用い、濃縮又は乾燥して抽出物を濃縮液又は粉末として得る。
【００３８】
前記の抽出物は分離用担体又は樹脂により分離され、分取されることにより神経調節剤が得られる。この分離操作では分離用担体又は樹脂が用いられる。分離用担体又は樹脂としては、表面が後述のようにコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。０．１〜３００μｍの粒度を有するものが好ましく、粒度が細かい程、精度の高い分離が行なわれるが、分離時間が長い欠点がある。
【００３９】
例えば、逆相担体又は樹脂として表面が疎水性化合物でコーティングされたものは、逆相担体又は樹脂と物質との間で疎水結合が形成されるため、疎水性の高い物質の分離に利用される。ＱＡＥセファデックスＡ−２５（アマシャムファルマシア社製）、ＸＡＤ−２又はＸＡＤ−４（ロームアンドハース社製）等のイオン交換担体又は樹脂は、イオン性の物質の分離に適している。陽イオン物質でコーティングされたものは陰イオン性に荷電した物質の分離に適している。また、陰イオン物質でコーティングされたものは陽イオン性に荷電した物質の分離に適している。
【００４０】
アフィニティ担体又は樹脂は、抗原抗体反応等の特異的な結合を利用して分離を行なう。抗体をコーティングした場合には、抗原となる物質のみを分離するアフィニティ担体又は樹脂として利用される。このうち、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸に対する抗体を結合させたアフィニティ担体又は樹脂は、前記の有効成分を収率良く分離できる点から好ましい。
【００４１】
分配性担体又は樹脂は、シリカゲル等のように、物質と分離用溶媒の間の分配係数に差異がある場合、その物質の単離に利用される。分子篩用担体又は樹脂は、セファデックスＧ−２５（アマシャムファルマシア社製）等のように、物質の分子の大きさに依存して分離するものである。ダイヤイオン（三菱化学（株）社製）等の吸着性担体又は樹脂は、物質の吸着性を利用して分離するものである。
【００４２】
これらのうち、水溶性の高い芳香族化合物の分離に適し、製造コストを低くすることができる点から、イオン交換担体又は樹脂、分子篩用担体又は樹脂及び逆相担体又は樹脂が好ましい。
【００４３】
ヌクレオチドの分離に適し、医薬品製造又は食品製造に利用される担体又は樹脂は好ましい。これらの点から分子篩用担体としてセファデクスＧ−２５、イオン交換担体としてＱＡＥ−セファデックス、逆相担体としてＤＭ１０２０Ｔ（富士シリシア社製）がより好ましい。
【００４４】
得られた抽出物は、分離前に分離用担体又は樹脂を膨潤化させるための溶媒に溶解される。その量は、分離効率の点から抽出物の重量に対して１〜５０倍量が好ましく、３〜２０倍量がより好ましい。
【００４５】
分離用溶媒としては、水、ｐＨを調節した緩衝液及び水を含有する低級アルコールが好ましい。低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールが用いられるが、食用として利用されているエタノールが好ましい。分取には、フラクションコレクター等の自動分取装置を用いることが好ましい。以上の操作に、低速クロマトグラムシステム、精製用クロマトグラムシステム、膜分離クロマトグラムシステム、高速液体クロマトグラムシステム等のシステム化された装置を用いることが好ましい。
【００４６】
加えて、同一あるいは異なる分離用担体又は樹脂を用い、かつ、同一又は異なる分離用溶媒を用い、分離操作を繰返し行なうことが好ましい。
さらに、製剤化を容易にする目的で、得られた神経調節剤を乾燥することが好ましい。乾燥には減圧蒸留装置、真空乾燥機等が用いられる。物質の安定性の点から乾燥の温度は、２０〜５０℃が好ましく、３０〜４０℃がより好ましい。また、真空乾燥機の温度は、２０〜６０℃が好ましく、２５〜４０℃がより好ましい。このようにして１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸から選択される少なくとも一種を有効成分とする神経調節剤が得られる。
【００４７】
なお、神経調節剤を製造する原料としてローヤルゼリーの他に、経験的に滋養強壮作用が知られているサケ又はタラの白子抽出物を用いることができる。
次に、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸（リン酸の数は１〜３）から選択される少なくとも一種を有効成分とする食品製剤を調製することができる。その場合、種々の食品素材又は飲料品素材に添加することによって、粉末状、錠剤状、液状（ドリンク剤等）、カプセル状等の形状の食品製剤とすることができる。また、基材、賦形剤、添加剤、副素材、増量剤を添加してもよい。
【００４８】
前記の食品製剤は、１日数回に分けて経口摂取される。１日の摂取量は０．１〜１０ｇが好ましく、０．３〜８ｇがより好ましく、０．５〜５ｇがさらに好ましい。１日の摂取量が、０．１ｇを下回る場合、ストレス改善、更年期の不定愁訴改善効果や脱疲労感効果が発揮されないおそれがある。１日の摂取量が、１０ｇを越える場合、コストが高くなるおそれがある。上記の他に、飴、せんべい、クッキー、飲料の形態で使用することができる。これらの食品製剤は、更年期症状の改善が必要な人や疲労感のある人に対して使用される。
【００４９】
次に、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸（リン酸の数は１〜３）から選択される少なくとも一種を有効成分とする化粧品製剤を調製することができる。その場合、日焼け痛、しびれや麻痺等の局所的な神経疾患を予防する目的として、常法に従って油分、界面活性剤、ビタミン剤、紫外線吸収剤、増粘剤、保湿剤等とともに用いることができる。化粧水、クリーム、軟膏、ローション、乳液、パック、オイル、石鹸、洗顔料、香料、オーディコロン、浴用剤、シャンプー、リンスの形態とすることができる。化粧品製剤の形態は任意であり、溶液状、クリーム状、ペースト状、ゲル状、ジェル状、固形状又は粉末状として用いることができる。
【００５０】
化粧品製剤として皮膚に１日数回に分けて塗布される。１日の塗布量は０．０１〜５ｇが好ましく、０．０５〜３ｇがより好ましく、０．１〜１ｇがさらに好ましい。１日の塗布量が、０．０１ｇを下回る場合、皮膚の炎症や日焼けによる痛み防止等の効果が発揮されないおそれがある。１日の塗布量が、５ｇを越える場合、コストが高くなるおそれがある。
【００５１】
神経調節剤における１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸から選択される少なくとも一種の含有量としては、１０〜９０重量％が好ましく、２０〜８０重量％がより好ましく、３０〜７０重量％がさらに好ましい。これらの含有量が１０重量％を下回る場合、日焼け痛防止効果が発揮されないおそれがある。これらの含有量が９０重量％を上回る場合、化粧品製剤として剤形が保たれないおそれがある。
【００５２】
次に、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸（リン酸の数は１〜３）から選択される少なくとも一種とニューロトロフィンとを含有する神経調節組成物について説明する。
【００５３】
１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸は、ニューロトロフィンとともに用いることにより、神経調節作用が増強される。前述したように、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸は、ニューロトロフィン受容体の発現を誘導することにより相乗的な効果を発揮する。その後、ホスファチジルリン酸キナーゼ並びにアミノ酸であるセリン及びトリオニンをリン酸化するプロテインキナーゼの一種であるプロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ）を介して、ＭＡＰキナーゼを活性化するものである。これらの因子は、神経調節作用の指標として用いられている。
【００５４】
一方、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸の作用は、ニューロトロフィンとは異なり、ホスファチジルリン酸キナーゼ及びＡｋｔを介さず、細胞接着に作用する細胞外マトリックスのインテグリンを介する反応である。このインテグリンが活性化されるとニューロトロフィン受容体の発現及びそれ以下の細胞内情報伝達系を刺激するものと考えられる。このような点から、前記の神経調節組成物は、前述した相乗効果に加え、種々の原因により発症する神経疾患に対し、異なった作用を示すことから、好ましい。用いるニューロトロフィンは、市販されているもの、食用動物の組織及び血液から抽出されたものの、又はこれらの混合物のいずれでも良い。
【００５５】
１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸の含有量は、ニューロトロフィンの１重量部に対して０．１〜９重量部が好ましく、０．３〜８重量部がより好ましく、０．５〜５重量部がさらに好ましい。１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸の含有量が０．１重量部を下回る場合、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸の作用は十分に発揮されないおそれがある。また、９重量部を上回る場合は、ニューロトロフィンの作用は十分に発揮されないおそれがある。
【００５６】
１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸から選択される少なくとも一種とニューロトロフィンとを含有する神経調節組成物の製造においては、両者を混合機により混合することにより得られる。得られた神経調節組成物は、医薬品、医薬部外品、食品製剤及び化粧品製剤の素材として利用される。
【００５７】
さらに、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸は、更年期障害等の自律神経失調状態を改善する。これは、自律神経細胞の神経間の伝達作用を活性化する作用に基づいている。この作用に基づき、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸は、自律神経調節剤又は更年期障害改善剤として用いられる。
【００５８】
加えて、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸は、末梢神経細胞の再生を促進する機能を有するため、末梢神経障害の改善に用いられる。特に、糖尿病性末梢神経障害において障害を受けた場合、しびれ、疼痛や麻痺が生じる。１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸は、しびれや疼痛を改善する神経保護剤として用いられる。
【００５９】
１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸は、細胞内情報伝達系を活性化する作用を有することから、疲労回復剤として用いることができる。これらは、疲労により細胞機能の低下した筋肉細胞に作用し、筋肉細胞を活性化する機序に基づいている。
【００６０】
１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸は、ＭＡＰキナーゼを介した細胞活性化作用を有することから、臓器移植された組織の再生を促進する。また、移植前の臓器を活性化する。この作用より、再生医療に利用される。
【００６１】
次に、ＰＣ−１２細胞を用いた神経調節作用の評価方法について説明する。ＰＣ−１２細胞は、ラット副腎髄質褐色細胞腫であり、神経調節作用に汎用されている。神経調節作用は、ＰＣ−１２細胞の増殖性、神経突起の発現量、ニューロフィラメントＭの発現量及び活性化に関わるＭＡＰキナーゼの発現を指標として評価される。これらの実験系は神経調節作用の評価に汎用され、実験例が豊富である。
【００６２】
以上詳述した本実施形態によれば次のような効果が発揮される。
・　本実施形態における神経調節剤によれば、優れた神経調節作用を発揮することができる。
・　本実施形態における神経調節剤の製造方法によれば、容易に神経調節剤を製造することができる。
・　本実施形態における食品製剤によれば、優れた更年期症状改善効果を発揮することができる。
・　本実施形態における化粧品製剤によれば、優れた日焼け痛防止効果を発揮することができる。
・　本実施形態における神経調節剤とニューロトロフィンとを含有する組成物によれば、より優れた神経調節作用を発揮することができる。
・　本実施形態における神経調節剤によれば、例えば、抗痴呆剤、自律神経調節剤、更年期障害改善剤、末梢神経細胞の機能改善剤とすることができる。
・　本実施形態における１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸を含有する疲労回復剤によれば、筋肉細胞を活性化することにより、優れた疲労回復剤が得られる。
・　本実施形態における１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸は、ＭＡＰキナーゼ活性化を介した細胞活性化作用を有することから、臓器移植された組織の再生を促進する。また、移植前の臓器を活性化する製剤である。この作用より、再生医療に利用される。特に、神経細胞の移植に対して優れた製剤である。
・　本実施形態における神経調節剤の製造方法によれば、サケ又はタラの白子抽出物から容易に製造することができる。
【００６３】
【実施例】
以下に実施例、比較例及び試験例を挙げて本実施形態を更に詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００６４】
（製造例１）
中国産生ローヤルゼリー５０ｇにリン酸緩衝液２００ｍｌを加えて２４時間攪拌し、１５０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。この上清を減圧濃縮して抽出物を得た。
【００６５】
（実施例１）
ローヤルゼリー４８ｇに２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）の１９２ｍｌを添加し、２５℃で２４時間混合した。２４時間後、この混合液を遠心分離し、上清を採取した。得られた上清をＱＡＥセファデックスＡ−２５に供し、０ｍＭ〜３５０ｍＭ塩化ナトリウムを含有した前記の緩衝液からなるグラジエント溶液で分画した。フラクションコレクター（島津製作所（株）製）を用いて分取した。後述する試験例２の方法により神経調節作用を確認し、その作用を有する画分を得た。得られた溶液を凍結乾燥した。
【００６６】
さらに、この試料をリン酸生理食塩液（ＰＢＳ）に溶解し、セファデックスＧ−２５ファインに供した。ＰＢＳを分離用溶媒として分画した。フラクションコレクターを用いて分取した。後述する試験例２の方法により神経調節作用を確認し、その作用を有する画分を得た。得られた溶液を凍結乾燥した。得られた試料をＰＢＳに溶解した。
【００６７】
これをアサヒパック（旭化成（株）製）を装着した高速液体クロマトグラフ（島津製作所（株）製）に供した。０．０３重量％トリフルオロ酢酸水溶液を分離用溶媒として保持時間５０分の画分を分取した。フラクションコレクターを用いて分取した。後述する試験例２の方法により神経調節作用を確認し、その作用を有する画分を得た。得られた溶液を凍結乾燥し、神経調節剤とした。１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−モノリン酸、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−ジリン酸及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−ジリン酸の回収率は、それぞれ３．７％、４．５％、３．９％及び２．３％であった。
【００６８】
（実施例２）
前記の実施例１で得られた神経調節剤０．１ｇに、ヒト血清より精製・単離したニューロトロフィン０．１ｇを添加した。これを混合機により１時間混合した。これにより、神経調節組成物０．１７ｇを得た。
【００６９】
以下に、神経調節剤の構造解析について説明する。
（試験例１）
まず、実施例１で得られた試料をＤ２Ｏ、ＣＤ３ＯＤ及びＣＨ３ＣＮに溶解し、１Ｈ−ＮＭＲ（ジョエル社製、ＪＮＭ　ＥＸ−４００、４００ＭＨｚ）により解析した。その結果、５炭糖と塩基と考えられる構造が観察された。さらに、１３Ｃ−ＮＭＲにより詳細に検討した結果、塩基はアデニンで、１位の窒素が水酸化されていることが判明した。さらに、５炭糖が含まれており、１Ｈ−ＮＭＲの結果から、低磁場へのシフトがみられることから、５´ヌクレオチドと判定された。また、アデニン環由来のシグナルの低磁場へのシフトからアデニン環への水酸基又はメチル基の修飾が考えられた。しかし、メチル基のシグナルは見られず、水酸基の修飾と判定した。
【００７０】
次に、前記の試料をキャピラリー（内径０．０５ｍｍ、外径０．３７５ｍｍ）を装着したキャピラリー電気泳動（Ｊａｓｃｏ社製）を用いて解析した。その結果、アデニノシンに結合しているリン酸の数は、１〜３と判定された。
【００７１】
さらに、前記の試料を高速液体クロマトグラムを装着した質量分析装置（ヒューレッドパッカー製、１１００型）に供し、電子放射イオン化質量分析（ＥＳＩ−ＭＡＳＳ）法により分子量を推定した。分子イオンピークは、３６２であり、アデニン環の水酸化が確認された。また、３６２、１５０及び１３３に観察されたフラグメントからそれぞれ分子イオン、グリコシド結合及び水分子とれたものが確認された。
【００７２】
以上の結果、実施例１に含有される有効成分は、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン（下記に示す式（１））及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−モノリン酸（下記に示す式（２））と同定された。また、１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−ジリン酸（下記に示す式（３））及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−トリリン酸（下記に示す式（４））と同定された。
【００７３】
【化５】
2004051515.tif 000006
【００７４】
【化６】
2004051515.tif 000007
【００７５】
【化７】
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【００７６】
【化８】
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以下に、ＰＣ−１２細胞を用いた神経調節作用の評価方法について説明する。
【００７７】
（試験例２）
前記の実施例１、実施例２及び比較例１の試料について、ＰＣ−１２細胞を用いた神経突起形成作用の評価を行った。１０％ウマ血清、５％牛胎児血清、１００単位／ｍｌのペニシリン及び０．１ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含むダルベッコ改良イーグル（ＤＭＥＭ）培地（シグマ社製）を培養液とした。ＰＣ−１２細胞を前記の培養液で３７℃、５％二酸化炭素／９５％空気下で、継代培養を行った。コラーゲンを塗布したシャーレに前記の培養液に懸濁したＰＣ−１２細胞を播種した。試料をＤＭＥＭ培地に溶解し、９５℃で１０分間処理後、遠心分離した上清を検体溶液として用いた。添加後、７日目に、神経突起を有する細胞数を計数した。神経突起は、細胞体の２倍以上の長さのものとした。なお、実験は５例で実施し、結果は、平均値及び標準誤差で示した。溶媒対照群との間でｔ−検定を行い、危険率５％未満を有意差あり（＊印）とした。
【００７８】
【表１】
2004051515.tif 000010
表１に示すように、実施例１及び２では、神経突起形成作用が認められ、神経調節作用が確認された。また、神経細胞の障害は認められず、実施例１及び２に副作用は認められなかった。
【００７９】
（試験例３）
ラット大脳皮質ニューロンを用いた神経調節作用の評価について説明する。妊娠１８日目のウイスター系ラットから無菌的に胎児を取り出し、実体顕微鏡下で大脳皮質ニューロンを摘出した。組織を０．２５％トリプシンと０．０１％デオキシリボヌクレアーゼを含有する溶液で３７℃で、１５分間処理した後、前記の培地に細胞を懸濁した。ポリオルニチンをコートした培養用プレートに前記の細胞５×１０５個を播種した。試料を９５℃で１０分間処理し、遠心分離した上清を検体として添加した。添加１０分後に、細胞を可溶化し、電気泳動を行なった。これを抗ホスホチロシン抗体で染色した。ホスホチロシンの発現を判定した。染色されない場合、陰性（−）、染色された場合、陽性（＋）とした。
【００８０】
【表２】
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表２に示すように、実施例１では、ホスホチロシンの染色が認められた。ホスホチロシンは、神経調節作用の作用機序の一つである。従って、実施例１はホスホチロシンの形成を介して神経調節作用を発揮するものと考えられた。この場合、神経細胞に障害は認められず、実施例１に副作用は認められなかった。
【００８１】
（試験例４）
前記の試験例１で試料を処理されたＰＣ−１２細胞を細胞破砕用緩衝液（ＲＩＰＡ）緩衝液に分散した。これを遠心分離し、得られた上清を電気泳動に供した。電気泳動膜をポリビリニデンジフルオライド（ＰＶＤＦ）膜に転写した。このＰＶＤＦ膜をブロック液で処理し、一次抗体と反応させた。一次抗体としては、抗ＭＡＰキナーゼ抗体、リン酸化ＭＡＰキナーゼ抗体、抗Ａｋｔ抗体、リン酸化Ａｋｔキナーゼ抗体、抗ニューロフィラメントＭ抗体とした。さらに、アルカリホスファターゼ標識二次抗体と反応させた。ニトラブルーテトラゾリウムと５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルリン酸ｐ−トルイジン塩で発色させた。陰性（−）、軽度（＋）、中等度（＋＋）及び著明（＋＋＋）に分けて判定した。
【００８２】
【表３】
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表３に示すように、実施例１及び２で、神経調節作用に関連した因子の発現が認められた。さらに、実施例２では、その発現は相乗的に増強されており、神経調節剤とニューロトロフィンとの相乗的な作用が認められた。
【００８３】
（実施例３）
実施例１で得られた神経調節剤０．２ｇ、プロポリスのエタノール抽出物０．１ｇ、異性化糖３ｇ、食用セルロース１．８ｇ、アスコルビン酸０．０１ｇ及び食用香料０．１ｇの比率で混合した。これを常法により打錠し、直径１０ｍｍ、重量０．３ｇの食品製剤として三角型錠剤を得た。
【００８４】
（試験例５）
実施例３で得られた錠剤を使用して、健常人を対象に、更年期障害の不定愁訴に対する改善試験を行なった。すなわち、年齢５０〜６０才の更年期女性３例を対象に、前記の錠剤を１日６錠、７日間摂取させた。摂取前及び摂取後の精神状態を聴取した。その結果、摂取前に比し、摂取後では、イライラ感、のぼせ感、脱力感等からなる不定愁訴が減少した。また、使用感においても特に苦情は聞かれなかった。さらに、尿検査値、血液検査値及び血液生化学的検査値に異常は認められなかった。
【００８５】
（実施例４）
モノステアリン酸ポリエチレングリコール１ｇ、親油型モノステアリン酸グリセリン１ｇ、馬油エステル２ｇ及びオレイン酸３ｇを加熱し、溶解した。得られた溶液に、実施例１で得られた神経調節剤０．２ｇ、プロポリスのエタノール抽出物０．１ｇ、プロピレングリコール２ｇ、グリチルリチン酸ジカリウム０．１ｇ、α−トコフェロール０．１ｇ及び精製水７０ｇを添加した。これらを溶解した後、冷却して化粧品製剤としての乳液を得た。
【００８６】
（試験例６）
実施例４で得られた乳液を使用して、健常人を対象に、日焼けによる痛みに対する改善試験を行なった。すなわち、路上作業を行なう年齢２０〜４０才の男性３例を対象に、前記の乳液を１日当たり０．５ｇずつ、７日間、左側前腕皮膚に塗布させた。右側前腕皮膚には、乳液基材のみを１日当たり０．５ｇずつ７日間、塗布させた。両腕を露出して路上作業を５日間させた。７日後に、日焼けによる痛みを聴取した。その結果、右側前腕皮膚の痛みに比して乳液を塗布された左側前腕皮膚の痛みは軽度であった。また、使用感においても特に苦情は聞かれなかった。
【００８７】
なお、前記実施形態を次のように変更して構成することもできる。
・　前記記載の神経調節剤にＡＴＰを添加しても良い。ＡＴＰは、エネルギー源となり、神経細胞を活性化する。この作用により、神経調節作用が増強される。
・　前記記載の製造方法においてローヤルゼリーを加熱処理しても良い。ローヤルゼリー中には、タンパク質が大量に含有されているため、加熱処理により変性させ、沈殿をして除去することにより、収率が向上する。
・　前記記載の神経調節剤をプロポリスとともに用い、プロポリス組成物としても良い。プロポリスは強い抗酸化作用を有する成分を含有する。プロポリスは神経細胞の障害時に生じる過酸化物を消去することにより、神経調節作用を増強する。
【００８８】
次に、前記実施形態から把握できる技術的思想について以下に記載する。
・　ローヤルゼリーは加熱処理されたものである請求項２に記載の神経調節剤の製造方法。このように構成した場合には、除タンパク質ができ、より容易に神経調節剤を得ることができる。
・　請求項１に記載の神経調節剤とプロポリスとを含有するプロポリス組成物。このように構成した場合には、神経調節作用を増強させることができる。
・　１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸（リン酸の数は１〜３）から選択される少なくとも一種を有効成分とする疲労回復剤。このように構成した場合には、疲労回復作用を有する製剤を提供することができる。
・　請求項２に記載の分離用担体又は樹脂は１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン及び１−Ｎ−ヒドロキシアデノシン−５´−リン酸に対する抗体を結合させたアフィニティ担体又は樹脂である請求項２に記載の神経調節剤の製造方法。このように構成した場合には、特異性を有する抗原抗体反応を利用し、収率良く神経調節剤を得ることができる。
・　請求項２に記載の原料はサケ又はタラの白子抽出物である神経調節剤の製造方法。このように構成した場合には、神経調節剤を容易に製造することができる。
【００８９】
【発明の効果】
この発明は、以上のように構成されているため、次のような効果を奏する。
請求項１に記載の神経調節剤によれば、医薬品として優れた神経調節作用を発揮することができる。
【００９０】
請求項２に記載の神経調節剤の製造方法によれば、神経調節剤を容易に製造することができる。
請求項３に記載の食品製剤によれば、優れた更年期症状改善効果を発揮することができる。
【００９１】
請求項４に記載の化粧品製剤によれば、優れた日焼け痛防止効果を発揮することができる。
請求項５に記載の神経調節組成物によれば、より優れた神経調節作用を発揮することができる。