(57)【要約】  【課題】胆汁酸吸着能力を有するかつお節酵素分解物を提供する。  【解決手段】微生物に由来するエンド・エキソ型のプロテアーゼ２種でかつお節の粉末を酵素分解する。酵素分解したかつお節の粉末を含む溶液とする。水溶液を濾過して濾液を水溶性分画とし濾渣を不溶性分画とする。不溶性分画の投与により血中コレステロール濃度および血中トリグリセリド濃度が低下する。不溶性分画は胆汁酸吸着能力を有する。  【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
微生物に由来するプロテアーゼによる魚節の酵素分解にて生成され、
胆汁酸吸着能力を有する
ことを特徴とした蛋白分解物質。
【請求項２】
酵素分解された魚節を含む溶液を濾過した濾渣により生成された
ことを特徴とした請求項１記載の蛋白分解物質。
【請求項３】
濾渣を乾燥して生成された
ことを特徴とした請求項２記載の蛋白分解物質。
【請求項４】
請求項１ないし３いずれか記載の蛋白分解物質と、
魚節に含まれている脂質と
を具備したことを特徴とした蛋白脂質複合体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
特に魚節を原料として製造される蛋白分解物質およびおよび蛋白脂質複合体に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、血中コレステロール濃度の上昇による高脂血症が原因の一つと考えられている虚血症心疾患は、脂質摂取量や摂取カロリの増加により今後ますます増えることが予測される。一方、予防医学の観点から高脂血症に対し改善作用の期待される物質の研究や代謝経路の解明が進んでおり、大豆蛋白、食物繊維、タウリン、レシチンあるいは多価不飽和脂肪酸などが注目を集めている。
【０００３】
さらに、このような注目は、魚肉に対しても同様の効果が報告されており、日本の伝統的発酵食品であり蛋白質を豊富に含んでいる魚節、例えばかつお節についても何らかの作用を有することが推測される。
【０００４】
そこで、従来、この種の蛋白分解物質としてのコレステロール低下剤は、魚節、特にかつお節をスライス状あるいは粉状にしたものに、水とサーモリシンなどの酵素とを加えて、このスライス状あるいは粉状の魚節を加水分解させて発酵させた分解物を含有している。そして、この分解物を含有したコレステロール低下剤を服用することにより、血中コレステロール濃度や、血中トリグリセリド濃度が低下する(例えば、特許文献１参照。)。
【特許文献１】特開２０００−２６４８４５号公報（第２−３頁）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上述したように、上記コレステロール低下剤では、魚節、特にかつお節に関しては、蛋白質を豊富に含んでいる上、焙乾工程における長時間の加熱工程や発酵工程などの製造工程中に有用な整理活性物質が生成されている可能性がある。ところが、このコレステロール低下剤については、血中コレステロール濃度や血中トリグリセリド濃度を低下させる効果が知られているに過ぎず、魚節を原料としたコレステロール低下剤が胆汁酸吸着能力を有するか否かについては不明であるという問題を有している。
【０００６】
本発明はこのような点に鑑みなされたもので、胆汁酸吸着能力を有する蛋白分解物質および蛋白脂質複合体を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
請求項１記載の蛋白分解物質は、微生物に由来するプロテアーゼによる魚節の酵素分解にて生成され、胆汁酸吸着能力を有するものである。
【０００８】
そして、微生物に由来するプロテアーゼにて魚節を酵素分解させることにより生成された蛋白分解物質が、血中コレステロール濃度や血中トリグリセリド濃度を低下させるとともに、胆汁酸吸着能力を有する。
【０００９】
請求項２記載の蛋白分解物質は、請求項１記載の蛋白分解物質において、酵素分解された魚節を含む溶液を濾過した濾渣により生成されたものである。
【００１０】
そして、微生物に由来するプロテアーゼにて酵素分解された魚節を含む溶液を濾過した濾渣により蛋白分解物質を生成することにより、この蛋白分解物質が有する胆汁酸吸着能力や、血中コレステロール濃度および血中トリグリセリド濃度の低下がより向上する。
【００１１】
請求項３記載の蛋白分解物質は、請求項２記載の蛋白分解物質において、濾渣を乾燥して生成されたものである。
【００１２】
そして、微生物に由来するプロテアーゼにて酵素分解された魚節の溶液の濾渣を乾燥させて蛋白分解物質を生成することにより、この蛋白分解物質が固形分となるから、この蛋白分解物質の取り扱いが容易になる。
【００１３】
請求項４記載の蛋白脂質複合体は、請求項１ないし３いずれか記載の蛋白分解物質と、魚節に含まれている脂質とを具備したものである。
【００１４】
そして、請求項１ないし３いずれか記載の蛋白分解物質と、魚節に含まれている脂質との相乗効果によって、より強い胆汁酸吸着能力を有するから、血中コレステロール濃度をより低下できる。
【発明の効果】
【００１５】
請求項１記載の蛋白分解物質によれば、微生物に由来するプロテアーゼにて魚節を酵素分解させることにより生成された蛋白分解物質は、血中コレステロール濃度や血中トリグリセリド濃度を低下させることができるとともに、胆汁酸吸着能力を有する。
【００１６】
請求項２記載の蛋白分解物質によれば、微生物に由来するプロテアーゼにて酵素分解された魚節を含む溶液を濾過した濾渣により蛋白分解物質を生成することにより、この蛋白分解物質が有する胆汁酸吸着能力や、血中コレステロール濃度および血中トリグリセリド濃度の低下をより向上できる。
【００１７】
請求項３記載の蛋白分解物質によれば、微生物に由来するプロテアーゼにて酵素分解された魚節の溶液の濾渣を乾燥させて蛋白分解物質を生成することにより、この蛋白分解物質を固形分にできるから、この蛋白分解物質の取り扱いを容易にできる。
【００１８】
請求項４記載の蛋白脂質複合体によれば、請求項１ないし３いずれか記載の蛋白分解物質と脂質との相乗効果によって、より強い胆汁酸吸着能力を有するから、血中コレステロール濃度をより低下できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
次に、本発明の蛋白分解物質の一の実施の形態を図１および図４を参照して説明する。
【００２０】
魚節の製造方法は、図２に示すように、まず、節用原料魚として、冷凍され脂肪の少ないかつお、さば、まぐろ、いわし、あじなどを一晩掛けて流水解凍する(ステップ１)。ここで、魚節とは、魚の身を節どりして蒸した後、火に焙ってから干し固めたものである。
【００２１】
そして、このステップ１にて解凍させた節用原料魚を裁断する(ステップ２)。このとき、魚体が大型の場合には頭や内臓を除去して３枚下ろしとしたり、この３枚下ろしにしたものを合断したりして身卸しする(ステップ３)。なお、小型原料魚は裁断せずにそのまま用いることもできる。
【００２２】
そして、例えば５５℃以上９５℃以下とされた水に、ステップ２にて裁断された節用原料魚を入れて３０分以上２時間以下加熱させて煮蒸する(ステップ４)。
【００２３】
この後、このステップ４にて煮蒸された節用原料魚を熱水から引き上げて水切りして骨抜きする(ステップ５)。
【００２４】
そして、このステップ５にて水切りされた節用原料魚を焙乾する(ステップ６)。このとき、この水切り後の節用原料魚を約半日程度、煙で燻してスモークする。
【００２５】
次いで、このステップ６にてスモークされた節用原料魚を夜間火を止めてあん蒸する(ステップ７)。このとき、節用原料魚内の水分を拡散させて均一化させる。
【００２６】
ここで、このあん蒸された節用原料魚の水分を限界近くまでとばすため、この節用原料魚に対してステップ６およびステップ７を９回ずつ、計１０回程度繰り返して荒節とする(ステップ８)。この荒節は、主にだし取り用の花がつおとされる。
【００２７】
そして、ステップ６による焙乾とステップ７によるあん蒸とのそれぞれが計１０回ずつされた荒節の表面を削って、荒節の表面に付着したタール分などを取り除くとともに成形して裸節とする(ステップ９)。
【００２８】
この後、この裸節を、温度が２０℃以上４０℃以下、湿度が７０％以上９０％以下のかび付け庫内に入れて２週間程度放置して、この裸節に自然発生的にかび付けをするとともに(ステップ１０)、このかび付け後の裸節を天日干し(ステップ１１)、これらかび付けおよび天日干しを２回以上４回以内程度繰り返して枯れ節として魚節を得る(ステップ１２)。これによって、この裸節の水分や脂肪がさらに減少する。
【００２９】
次に、蛋白分解物質としてのかつお節酵素分解物の製造方法について説明する。
【００３０】
まず、図１に示すように、各種魚類の煮干しや、ステップ８で得られた荒節あるいはステップ１２で得られた魚節を削って粉末にする。
【００３１】
この後、この粉末を、微生物に由来するプロテアーゼ(protease)、より具体的には、エンド・エキソ型のプロテアーゼ２種により、温度が１０℃以上６０℃以下でありｐＨが３以上１１以下の雰囲気において、１時間以上２０時間以下程度、酵素分解させる。
【００３２】
そして、この酵素分解された魚節の分解物を含む溶液を濾過して濾液である水溶液分画と濾渣である不溶性分画とに分離する。
【００３３】
まお、この濾過により生成された水溶性分画は、かつお節酵素分解エキスとして使用される。また、この濾過により生成された不溶性分画は、乾燥された後、蛋白分解物質とされる。
【実施例１】
【００３４】
次に、上記かつお節酵素分解物の実施例について詳細に説明する。
【００３５】
まず、年々、増加する虚血性心疾患の原因とされている血中コレステロール濃度の上昇を抑制する物質を探索する目的で、蛋白質を多く含む上、賠乾工程における長期間の加熱工程や発酵工程などの製造工程中に有用な整理活性物質が生成されている可能性があるかつお節に着目し、脂質代謝に与える影響について試験した。
【００３６】
具体的には、卵巣を摘出した後に回復した６ヶ月齢のWister系の雌ラットに、水溶性分画や不溶性分画を経口投与して、これら水溶性分画や不溶性分画によるラットへの影響を調べた。
【００３７】
より詳細には、コントロール群(Ｃ群)とされる７匹のラットへの飼料としては、蛋白源としてガゼインを２０％与えた。また、第１の試験食群(ＤＢ群)とされる７匹のラットへの飼料としては、カゼインに代えて、かつお節の粉末を与えた。
【００３８】
ここで、かつお節の栄養分組成としては、蛋白質の含量が７７．１％と非常に高い一方、脂肪の含量が２．９％であるので、かつお節は高蛋白・低脂肪な食品である。また、かつお節に含まれている蛋白質の構成アミノ酸としては、ロイシン、グルタミン酸、アルギニン、リジンおよびヒスチジンなどである。
【００３９】
さらに、第２の試験食群(ＤＢＥＳ群)とされる７匹のラットへの飼料としては、水溶性分画を乾燥させる際にデキストリンを加えて凍結乾燥させたものを蛋白源として与えた。また、第３の試験食群(ＤＢＥＩ群)とされる７匹のラットへの飼料としては、乾燥させた不溶性分画を蛋白源として与えた。
【００４０】
【表１】
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【００４１】
このとき、Ｃ群、ＤＢ群、ＤＢＥＳ群およびＤＢＥＩ群のそれぞれに与えられる飼料は、蛋白含量を換算しながら配合して、蛋白含量とデキストリン含量とが同じになるように調整されている。
【００４２】
そして、３週間、すなわち２１日間、Ｃ群、ＤＢ群、ＤＢＥＳ群およびＤＢＥＩ群のラットに対して各群のそれぞれに応じた飼料と水とを自然摂取にて与えた。
【００４３】
この後、試験期間終了の３日前から、各群のラットの糞をそれぞれ採取して、これらラットの糞に含まれる胆汁酸含量を測定した。
【００４４】
さらに、試験期間最終日に、各群のラットの血液を採取し、これらラットの血中脂質濃度、具体的には血中コレステロール濃度および血中トリグリセリド(ＴＧ)濃度を測定した。
【００４５】
【表２】
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【００４６】
この結果、飼料効率、ラットの飼料摂取量および体重増加量に関しては、Ｃ群、ＤＢＥＳ群およびＤＢＥＩ群の間で差はなかったが、ＤＢ群でのみ飼料摂取量が増加する傾向があった。
【００４７】
また、血中コレステロール濃度は、図４および表２に示すように、Ｃ群に比べＤＢ群では２４．９％、ＤＢＥＳ群では１４．１％、ＤＢＥＩ群では３３．７％それぞれ低下した。同時に、血中トリグリセリド濃度は、Ｃ群に比べＤＢ群では２７．８％、ＤＢＥＳ群では１５．８％、ＤＢＥＩ群では３６．７％それぞれ低下した。
【００４８】
したがって、血中コレステロール濃度および血中トリグリセリド濃度のそれぞれは、Ｃ群に比べＤＢ群およびＤＢＥＩ群で有意に低下し、ＤＢＥＳ群でも低下する傾向あった。
【００４９】
さらに、胆汁酸排泄量は、図３および表２に示すように、Ｃ群に比べＤＢ群では３７０．９％、ＤＢＥＳ群では７３．５％、ＤＢＥＩ群では４７１．４％それぞれ増加した。したがって、胆汁酸排泄量は、血中脂質濃度に関する結果と負の相関があった。具体的には、Ｃ群に比べＤＢ群、ＤＢＥＳ群およびＤＢＥＩ群のそれぞれにおいて胆汁酸排泄量が増加する傾向があった。この結果、ＤＢＥＳ群およびＤＢＥＩ群で飼料とされた水溶性分画および不溶性分画には、胆汁酸を吸着する能力を有することが判明した。
【００５０】
上述したように、上記一実施例では、エンド・エキソ型のプロテアーゼ２種によりかつお節を酵素分解させることにより生成されたかつお節酵素分解物の生理作用としては、胆汁酸の排泄量を増やしつつ、コレステロールの異化を促進し、血中コレステロール濃度および血中トリグリセリド濃度のそれぞれを低下させるという効果が推測される。
【００５１】
また、かつお節粉未およびかつお節酵素分解物には、ラットにおいて血中コレステロール濃度および血中トリグリセリド濃度のそれぞれの上昇抑制作用が確認されるとともに、胆汁酸排泄量が増加することによる胆汁酸吸着能力を有することが確認できた。
【００５２】
特に、これら血中コレステロール濃度および血中トリグリセリド濃度それぞれの上昇抑制作用と、胆汁酸吸着能力とのそれぞれの効果は、かつお節酵素分解物の不溶性分画を投与したラットにおいて最も強かった。このとき、ラットの胆汁酸排泄量が増加していたことにより、コレステロールの異化が促進され、血中コレステロール濃度が低下した可能性が強いとともに、便秘を改善させる効果も期待できる。
【００５３】
ここで、実験途中にラットの糞を採取し、糞中に含まれる胆汁酸の量を測定したところ、Ｃ群に比べＤＢ群、ＤＢＥＳ群およびＤＢＥＩ群のいずれの群においても多く排泄されていた。胆汁酸は、コレステロールから生成される物質であり、かつお節やかつお節酵素分解物が胆汁酸の排泄量を増加させ、結果として血中のコレステロール濃度を低下させたと予測できる。
【００５４】
したがって、近年、食生活の欧米化や、脂肪摂取量の増加に伴い血中脂質濃度の上昇が原因と考えられる虚血性心疾患が増えているが、かつお節やかつお節酵素分解物の水溶性分画あるいは不溶性分画の服用により症状の改善や、予防に役立つことが期待できる。このとき、このかつお節酵素分解物の不溶性分画は、かつお節酵素分解エキスを削成した際の残渣として、現在有料での廃棄が必要であるが、この残渣を利用できるので、資源の有効活用にもつなげることができる。
【００５５】
さらに、かつお節酵素分解物の不溶性分画をラットに投与する際に乾燥させたことにより、この不溶性分画が固形分となるから、この不溶性分画によるラットへの投与や取り扱いを容易にできる。
【実施例２】
【００５６】
次に、上記かつお節酵素分解物中の蛋白と、このかつお節酵素分解物に少量(例えば、１８％程度)含まれている脂質との相乗効果について試験した。
【００５７】
まず、蛋白と脂質とを含んだかつお節酵素分解物である蛋白脂質複合体の栄養成分組成を調べた。
【００５８】
【表３】
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【００５９】
このとき、この蛋白脂質複合体中の脂肪分は、原料に由来しているため、原料によって最終商品の脂肪含量も異なる。さらに、この蛋白脂質複合体中の蛋白は、プロテアーゼの作用、すなわち消化酵素の影響を受けにくい難消化性蛋白質であるレジスタントプロテインである可能性が高い。
【００６０】
具体的には、卵巣を摘出した後に回復した６ヶ月齢のWister系の雌ラットを、蛋白源としてガゼインを与えるコントロール群(Ｃ群)と、蛋白源のうち４０％を蛋白脂質複合体に置き換えた飼料を与える第１の試験食群(ＤＢＥＩ群)と、蛋白源のうち４０％をペプシンで酵素分解した蛋白脂質複合体に置き換えた飼料を与える第２の試験食群(ＤＢＥＩ−Ｐ群)と、蛋白源のうち４０％を脱脂した蛋白脂質複合体に置き換えた第３の試験食群(ＤＢＥＩ−Ｄ群)に分けた。
【００６１】
そして、これらＣ群、ＤＢＥＩ群、ＤＢＥＩ−Ｐ群およびＤＢＥＩ−Ｄ群のそれぞれを４週間(２８日間)飼育してから、これら各群のラットの飼料効率、血中脂質(コレステロール、アポタンパク、トリグリセリド)濃度、および肝臓中脂質(コレステロール、トリグリセリド)濃度を測定して比較した。
【００６２】
ここで、飼料組成のベースは、表４に示すように、ＡＩＮ９３Ｍに基づき、蛋白含量、脂肪含量は全ての群で等しくなるように調整した。
【００６３】
【表４】
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【００６４】
この結果、図５に示すように、Ｃ群に比べ、ＤＢＥＩ群およびＤＢＥＩ−Ｐ群では有意に血中コレステロール濃度が低下した。特に、このＤＢＥＩ群では、悪玉コレステロールとして動脈効果の原因ともなるＬＤＬコレステロールが低下していた。また、ＤＢＥＩ−Ｄ群では、血中コレステロール濃度の低下がＤＢＥＩ群に比べて半減した。
【００６５】
これらの結果、血中コレステロール濃度の低下作用は、蛋白脂質複合体に含まれる蛋白と脂質との相乗効果によるものと考えられる。ここで、図６に示すように、胆汁酸の吸着試験では、蛋白と脂質とが複合状態であることにより、胆汁酸の吸着量に相乗効果が示された。したがって、蛋白脂質複合体が、多くの胆汁酸を吸着して排泄することによる腸管循環の阻害が、血中コレステロール濃度の低下に結びついているものと考えられる。
【００６６】
なお、胆汁酸はコレステロールから作られるため、胆汁酸を多く排泄する蛋白脂質複合体を摂取すると、体内のコレステロール濃度が低下するものと考えられる。したがって、蛋白と脂質との結合体ある蛋白脂質複合体が、かつお節酵素分解物中の蛋白よりも、さらに高い胆汁酸吸着能力を有し、強い血中コレステロール濃度低下作用を有することが判った。
【００６７】
次いで、Ｃ群、ＤＢＥＩ群、ＤＢＥＩ−Ｐ群およびＤＢＥＩ−Ｄ群それぞれの血中アポタンパク濃度について測定したところ、図７に示すように、ＤＢＥＩ群およびＤＢＥＩ−Ｐ群において、Ａｐｏ−Ｅの濃度が低下する傾向があることが判った。
【００６８】
また、これらＣ群、ＤＢＥＩ群、ＤＢＥＩ−Ｐ群およびＤＢＥＩ−Ｄ群それぞれの血中トリグリセリド濃度について測定したところ、図８に示すように、ＤＢＥＩ群およびＤＢＥＩ−Ｐ群およびＤＢＥＩ−Ｄ群それぞれにおいて有意に血中トリグリセリド濃度が低下した。
【００６９】
さらに、これらＣ群、ＤＢＥＩ群、ＤＢＥＩ−Ｐ群およびＤＢＥＩ−Ｄ群それぞれの肝臓中のコレステロール濃度について測定したところ、図９に示すように、ＤＢＥＩ群およびＤＢＥＩ−Ｐ群およびＤＢＥＩ−Ｄ群それぞれにおいてフリーのコレステロールが増加しており、肝臓でのコレステロールのプール量が増大した。これは、蛋白脂質複合体の摂取による胆汁酸排泄量の増加によって引き起こされたものであると考えられる。
【００７０】
さらに、これらＣ群、ＤＢＥＩ群、ＤＢＥＩ−Ｐ群およびＤＢＥＩ−Ｄ群のそれぞれの実験終了前３日間の糞を採取した。この結果、図１０および図１１に示すように、Ｃ群に比べ、ＤＢＥＩ群、ＤＢＥＩ−Ｐ群およびＤＢＥＩ−Ｄ群それぞれの糞の排泄量および糞中の胆汁酸排泄量が増加しているから、蛋白脂質複合体による便秘に対しての効果も期待できる。
【００７１】
また、ガスクロマトグラフ測定法にて胆汁酸の組成を調べた結果、蛋白脂質複合体に含まれる脂肪酸は、表５に示すように、飽和脂肪酸を４５％、多価不飽和脂肪酸を２０％、および一価不飽和脂肪酸を２２％含んでいる。したがって、単独でも血中コレステロール濃度を低下させる効果のある不飽和脂肪酸が多く含まれていることが判った。
【００７２】
【表５】
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【００７３】
ここで、かつお節酵素分解物中の蛋白と脂質とを組み合わせることによって、魚蛋白の一部や不飽和脂肪酸の一部が有する血中コレステロール濃度を低下させる作用よりも、より高い血中コレステロール濃度低下作用を有することが判った。さらに、このかつお節酵素分解物を製造することによって、このかつお節酵素分解物から蛋白および脂質を含んだ蛋白脂質複合体を容易に得ることができる。
【００７４】
これらの結果から、蛋白質の一部をかつお節酵素分解物に置き換えることによって、血中コレステロール濃度の低下が期待できる。また、得られた酵素分解物の不溶性画分は、消化酵素による分解を受けにくい難消化性蛋白である可能性が高い。さらに、この難溶解性蛋白と脂質との複合体である蛋白脂質複合体は、強い胆汁酸結合能力を有する。
【００７５】
なお、上記各実施例では、主としてかつおを原料としたかつお節から生成されるかつお節酵素分解物について説明したが、かつお以外の魚、例えばさば、まぐろ、いわし、あじなどの魚節であっても対応させて用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００７６】
【図１】本発明の一実施の形態の蛋白分解物質を魚節から製造するまでを示す工程図である。
【図２】同上魚節を製造するまでを示す工程図である。
【図３】同上蛋白分解物質を投与したラットの糞中の胆汁酸排泄量および糞の排泄量を示すグラフである。
【図４】同上蛋白分解物質を投与したラットの血中脂質濃度を示すグラフである。（実施例１）
【図５】同上蛋白分解物質を含む蛋白脂質複合体を投与したラットの血中コレステロール濃度を示すグラフである。（実施例２）
【図６】同上蛋白脂質複合体１ｇ当りの胆汁酸吸着量を示すグラフである。（実施例２）
【図７】同上蛋白脂質複合体を投与したラットの血中アポタンパク濃度を示すグラフである。（実施例２）
【図８】同上蛋白脂質複合体を投与したラットの血中トリグリセリド濃度を示すグラフである。（実施例２）
【図９】同上蛋白脂質複合体を投与したラットの肝臓中コレステロール濃度を示すグラフである。（実施例２）
【図１０】同上蛋白脂質複合体を投与したラットの糞の排泄量を示すグラフである。（実施例２）
【図１１】同上蛋白脂質複合体を投与したラットの糞中の胆汁酸排泄量を示すグラフである。（実施例２）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2004203859.tif 000014
【図８】
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【図９】
2004203859.tif 000016
【図１０】
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【図１１】
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