(57)【要約】【課題】植物成分であって、抗腫瘍活性が高く、副作用が少ない抗腫瘍剤を提供すること。【解決手段】ヒガンバナ科植物又はアジサイ科植物の葉、花、茎、皮又球根の乾燥粉砕物、若しくはその水又は酢酸エチル、四塩化炭素、クロロフォルム、ジクルロメタン、メタノール、エタノール、（イソ）プロピルアルコール、ブタノール、アセトン又はＤＭＳＯなどの有機溶剤での抽出物を含有する抗腫瘍剤。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒガンバナ科植物、アジサイ科植物又はそれらの抽出物を含有することを特徴とする抗腫瘍剤。
【請求項２】
ヒガンバナ科植物又はアジサイ科植物の抽出物が、これらの植物の葉、花、茎、皮又球根の水性抽出物である請求項１記載の抗腫瘍剤。
【請求項３】
ヒガンバナ科植物又はアジサイ科植物の抽出物が、これらの植物の葉、花、茎、皮又球根の有機溶剤抽出物である請求項１記載の抗腫瘍剤。
【請求項４】
有機溶剤が、酢酸エチル、四塩化炭素、クロロフォルム、ジクルロメタン、メタノール、エタノール、（イソ）プロピルアルコール、ブタノール、アセトン又はＤＭＳＯである請求項３記載の抗腫瘍剤。
【請求項５】
ヒガンバナ科植物が、スイセン、ショウキズイセン及びヒガンバナからなる群から選ばれる請求項１〜４のいずれか１項記載の抗腫瘍剤。
【請求項６】
アジサイ科植物が、シマコンテリギ又はリュウキュウコンテリギである請求項１〜４のいずれか１項記載の抗腫瘍剤。
【請求項７】
大腸癌、胃癌又は肺癌を治療するための請求項１〜６のいずれか１項記載の抗腫瘍剤。
【請求項８】
抗腫瘍剤を調製するためのヒガンバナ科植物、アジサイ科植物又はそれらの抽出物の使用。
【請求項９】
ヒガンバナ科植物、アジサイ科植物又はそれらの抽出物を含有する食品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、抗腫瘍剤、特に、植物由来の成分を含有し、ヒトの大腸癌、胃癌及び肺癌に対して優れた効果を有する抗腫瘍剤、及び食品に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
医療技術が進歩し、高齢化が更新されている現在において、癌は依然として重大な病気として存在している。もちろん、癌の治療技術も大いに進歩し、合成医薬、漢方、天然物からの抽出物などをベースとする数多くの医薬が開発されている。合成医薬に対して、天然物からの抽出物は副作用の点で優れており、例えば、西洋イチイからタキソールが発見され、抗癌剤の有効成分として用いられている（特開昭６３−３０４７８号公報や特開平７−２３３０６４号公報など）が、その副作用は依然として大きいものである。
【特許文献１】
特開昭６３−３０４７８号公報
【特許文献２】
特開平７−２３３０６４号公報
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、植物成分であって、抗腫瘍活性が高く、副作用が少ない抗腫瘍剤を提供することを目的とする。
本発明は、又、植物成分を含有する食品を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明は、植物成分における抗癌物質を探索している過程で、ヒガンバナ科植物及びアジサイ科植物成分が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで癌細胞を強く殺傷すること、特に、ヒトの大腸癌、胃癌及び肺癌細胞を殺傷し、かつこれらの植物の抽出物が高い希釈においても癌細胞を殺傷するとの知見に基づいてなされたのである。
すなわち、本発明は、ヒガンバナ科植物、アジサイ科植物又はそれらの抽出物を含有することを特徴とする抗腫瘍剤を提供する。
本発明は、又、抗腫瘍剤を調製するためのヒガンバナ科植物、アジサイ科植物又はそれらの抽出物の使用を提供する。
本発明は、又、ヒガンバナ科植物、アジサイ科植物又はそれらの抽出物を含有する食品を提供する。
【０００５】
【発明の実施の形態】
本発明で用いるヒガンバナ科植物（Ａｍａｒｙｌｌｉｄａｃｅａｅ）は、ヒガンバナ目（Ａｍａｒｙｌｌｉｄａｌｅｓ）に属する植物であり、ネギ・ニラ（Ａｇａｐａｎｔｈｕｓ，  Ａｌｌｉｕｍ）、ユキノハナ（Ｇａｌａｎｔｈｕｓ）、ハマオトモ（Ａｍａｒｙｌｉｌｉｓ  Ｃｒｉｎｕｍ）、タマスダレ（Ｚｅｐｈｙｒａｎｔｈｅｓ）、マユハケオモト（Ｈａｅｍａｎｔｈｕｓ）、ヒガンバナ・ショウキラン（Ｈｙｍｅｎｏｃａｌｌｉｓ，  Ｌｙｃｏｒｉｓ）、アマリリス（Ｈｉｐｐｅａｓｔｒｕｍ）及びスイセン（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ）があげられる。より具体的には、スイセン（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ  ｔａｚｅｔｔａ  Ｌ．）、ショウキズイセン（Ｌｙｃｏｒｉｓ  ｔｒａｕｂｉｉ  Ｈａｙｗａｒｄ）、ヒガンバナ（Ｌｙｃｏｒｉｓ  ｒａｄｉａｔａ  Ｈｅｒｂ．）、サクヤカニユリ（Ｈｙｍｅｎｏｃａｌｌｉｓ  ａｍｅｒｉｃａｎａ  Ｒｏｅｍ．）、タマスダレ（Ｚｅｐｈｙｒａｎｔｈｅｓ  ｃａｎｄｉｄａ  Ｈｅｒｂ．）、シロスジアマリリス（Ｈｉｐｐｅａｓｔｒｕｍ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ  Ｈｅｒｂ．  ｖａｒ  ｓｔｒｉａｔｉｆｏｌｉｕｍ  Ｈｅｒｂ．）、アマリリス（Ｈｉｐｐｅａｓｔｒｕｍ  ｈｙｂｒｉｄｕｍ  Ｈｏｒｔ．）、オオマンネンラン（Ｆｕｒｃｒａｅａ  ｇｉｇａｎｔｅａ  Ｖｅｎｔ．）、フィリオオマンネンラン（Ｆｕｒｃｒａｅａ  ｇｉｇａｎｔｅａ  Ｖｅｎｔ．）、エンレイハマオモト（Ｃｒｉｎｕｍ  ａｍａｂｉｌｅ  Ｄｏｎｎｅ）、チュベローズ（Ｐｏｌｉａｎｔｈｅｓ  ｔｕｂｅｒｏｓａ  Ｌ．）、ハツミドリ（Ａｇａｖｅ  ａｔｔｅｎｕａｔａ  Ｓａｌｍ−Ｄｙｃｋ）、ホリダリュウゼツラン（Ａｇａｖｅ  ｈｏｒｒｉｄａ  Ｌａｍ．）、フィリウスバリュウゼツラン（Ａｇａｖｅ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ  Ｈａｗ．  ｃｖ．  Ｍａｒｇｉｎａｔａ）、フタバナリュウゼツラン（Ａｇａｖｅ  ｇｅｍｉｎｉｆｌｏｒａ  Ｋｅｒ−Ｇａｕｌ）、アオノリュウゼツラン（Ａｇａｖｅ  ａｍｅｒｉｃａｎａ  Ｌ．）などがあげられる。これらのうち、スイセン（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ  ｔａｚｅｔｔａ  Ｌ．）、ショウキズイセン（Ｌｙｃｏｒｉｓ  ｔｒａｕｂｉｉ  Ｈａｙｗａｒｄ）及びヒガンバナ（Ｌｙｃｏｒｉｓ  ｒａｄｉａｔａ  Ｈｅｒｂ．）が好ましい。
【０００６】
又、アジサイ科植物（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ）は、バラ目（Ｒｏｓａｌｅｓ）に属する植物であり、ズイナ（Ｉｔｅａ）、アジサイ・ノリウツギ（Ｅｓｃａｌｌｏｎｉａ，  Ｈｙｄｒａｎｇｅａ）、イワガラミ（Ｓｃｈｉｚｏｐｈｒａｇｍａ）、ギンバイソウ（Ｄｅｉｎａｎｔｈｅ）、キレンゲショウマ（Ｋｉｒｅｎｇｅｓｈｏｍａ）、ウツギ（Ｄｅｕｔｚｉａ）、バイカウツギ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｕｓ）及びスグリ（Ｒｉｂｅｓ）があげられる。これらのうち、シマコンテリギ（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ  ｙａｙｅｙａｍａ  ｋｏｉｄｚ：別名ヤエヤマコンテリギ）とリュウキュウコンテリギ（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ  ｌｉｕｋｉｕｅｎｓｉｓ  Ｎａｋａｉ）が好ましい。
本発明では、これらの植物の葉、花、茎及び球根を用いることができる。植物自体を抗腫瘍剤の有効成分として使用する場合には、これらを乾燥した後、微細に粉砕して用いるのが好ましい。
【０００７】
本発明では、ヒガンバナ科植物及びアジサイ科植物の葉、花、茎及び球根を、例えば、乾燥し、粉砕した後、又は未乾燥の生の状態で、水、例えば、蒸留水やイオン交換水で、又は親水性若しくは疎水性有機溶媒で抽出した液自体又はその乾燥物を用いることができる。ここで用いる有機溶媒としては、酢酸エチル、四塩化炭素、クロロフォルム、ジクルロメタン、メタノール、エタノール、（イソ）プロピルアルコール、ブタノール、アセトン又はＤＭＳＯがあげらる。ここで親水性溶媒は、含水形態で用いることもできる。使用する水や溶媒の量は任意とすることができるが、５分の１〜５倍量で用いるのがよく、特に約等量で用いるのが好ましい。又、抽出は、６０℃以下であるのがよく、さらに室温で行うのが好ましく、特に、ミキサーなどで攪拌しながら行うのがよい。
水又は溶媒抽出物は、そのままの液体状態で使用することもできるが、乾燥し、粉末、顆粒などの固形状で用いることもできる。
【０００８】
尚、ヒガンバナ科植物、アジサイ科植物又はこれらの抽出物を含有する抗腫瘍剤とする場合、これらに加えて、医薬上許容される各種の製剤用物質、例えば、賦形剤、希釈剤、崩壊剤、結合剤、被覆剤、潤滑剤、滑走剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、可溶化剤等を補助剤として含むことができる。具体的には、炭酸マグネシウム、二酸化チタン、ラクトース、マンニトール及びその他の糖類、タルク、ミルク蛋白、ゼラチン、澱粉、セルロース及びその誘導体、動物及び植物油、ポリエチレングリコール、グリセロールなどがあげられる。
【０００９】
本発明の抗腫瘍剤は、経口投与によるのが好ましいが、これに限定されるものではない。本発明の抗腫瘍剤は、体重１Ｋｇ当たり、０．２５〜２ｇ程度の量で用いるのがよい。
又、ヒガンバナ科植物、アジサイ科植物又はこれらの抽出物を含有する食品とする場合、健康食品や抗腫瘍活性を有する機能食品とすることができる。食品中のヒガンバナ科植物、アジサイ科植物又はその抽出物は、特に限定されないが、０．０１〜５質量％程度含有させるのがよい。
【００１０】
【発明の効果】
本発明によれば、ヒガンバナ科植物、アジサイ科植物又はこれらの抽出物を有効成分として含有することにより、抗腫瘍活性が高く、副作用が少ない抗腫瘍剤が提供される。これらの抽出粗画成分は高い希釈においても大腸癌細胞を殺傷し、その力価は対照に用いた抗癌剤のマイトマイシンＣと同等又はそれ以上であることが示された。一方、抗癌物質の探索に用いたヒトの胃癌および肺癌細胞に対し、本成分は対照に用いたマイトマイシンとほぼ同じ抗癌作用を有することも示された。
このように本発明によれば、各種腫瘍、特に、大腸癌、胃癌および肺癌に対して優れた抗腫瘍剤が提供される。
次に本発明を実施例により詳細に説明する。
【００１１】
【実施例】
実施例１
植物成分の抽出
沖縄県名護市郊外で自生しているヒガンバナ科（Ａｍａｒｙｌｌｉｄａｃｅａｅ）のスイセン（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ  ｔａｚｅｔｔａ  Ｌ．）、ショウキズイセン（Ｌｙｃｏｒｉｓ  ｔｒａｕｂｉｉ  Ｈａｙｗａｒｄ）及びヒガンバナ（Ｌｙｃｏｒｉｓ  ｒａｄｉａｔａ  Ｈｅｒｂ．）の葉、花、茎並びに球根を無乾燥の生の状態で秤量し、包丁でほぼ数ミリ程度の幅になるよう細切した。同様にアジサイ科（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ）のリュウキュウコンテリギ（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ  ｌｉｕｋｉｕｅｎｓｉｓ  Ｎａｋａｉ）とシマコンテリギ（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ  ｙａｙｅｙａｍａ  ｋｏｉｄｚ）を無乾燥の状態で細切処理した。これに等重量の蒸留水を加えた上で市販の大型ミキサーを用いて毎分１０，０００回転で１０分間処理した。この混合物を１５〜５０ｍｌ容量のプラスチック遠心管に分注し、ベックマンの遠心機（ＧＳ−１５Ｒ）を用いて毎分５，０００回転で６０分間遠心した。これを粗画総成分として、さらにザルトリウスのミニザルト（０．４５μｍ）で濾過滅菌後試験に供した。蒸留水による成分抽出に加え、クロロフォルム、イソプロピルアルコール、酢酸エチル、エタノール、メタノール、ジクロロメタンの溶媒等も抽出実験に使用した。
【００１２】
比較対照
すでに抗癌剤として広く使用されている市販のマイトマイシンＣ（協和発酵）を１ｍｌ当たり１ｍｇになるよう−ＰＢＳに溶解させたものを、比較対照として検査に供した。
細胞と培養
ヒトの大腸癌細胞（ＨＴ−２９）、胃癌細胞（ＭＫＮ１）及び肺癌細胞（Ａ５４９）は（財）癌研究会癌化学療法センター分子薬理部の矢守隆夫博士から分与を受け、それぞれの細胞を、５％ウシ胎児血清を含む市販のＲＰＭＩ−１６４０（ＧＩＢＣＯ）の培地を用い２５ｃｍ２フラスコ（イワキ）中で継代維持した。
【００１３】
評価用細胞の培養
直径１００ｍｍプラスチックシャーレ（イワキ）に上記ＨＴ−２９、ＭＫＮ１及びＡ５４９細胞を、５％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培地で培養し、２日後に細胞をマイナス燐酸緩衝食塩水（−ＰＢＳ）で洗滌、これにトリプシン−ＥＤＴＡ（ＧＩＢＣＯ）を加えて細胞を分散、次いで５％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ−１６４０に浮遊させ細胞数を算定した。上記３種の細胞濃度は１０５／ｍｌと定め、９６穴（ウェル）の細胞培養用プラスチックプレート（イワキ）の１ウェルにつき０．１ｍｌずつ分注した。例えば、各プレートのＡ列とＨ列、番号プレート１列と２列には培地のみ、２番から１１番、Ｂ列からＧ列までに各試験用細胞を分注して、３７℃で２４時間培養した。
【００１４】
評価方法
抽出したそれぞれの植物成分と比較対照のマイトマイシンＣを血清の入っていないＧＩＢＣＯのＭｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）で１０−１から１０−８、あるいは、１０−１から１０−４まで希釈し、各ウェルに１００μｌずつ分注した。各検体につき２列のウェルを用意し、Ｂ、Ｃ列の１１番から８番目に被検体の１０−１、１０−２、１０−３、１０−４希釈液を、さらに２番、３番、４番、５番ウェルに１０−５、１０−６、１０−７、１０−８希釈液を添加、６番と７番目のウェルには培地のみを分注してそれぞれの被検体の対照とした。同様な手順に沿って、ＤとＥ列、ＦとＧ列に被検体の希釈液シリーズを配した。被検体を分注して２日間培養後、各ウェルに５０％のトリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を５０μｌ加えて４℃で１時間静置した。次に水道水を２００μｌ加えて５回洗滌してプレートを乾燥、それぞれのウェルにスルフォローダミン染色液を５０μｌ加えて１０分間静置、続いて１％酢酸を１００μｌずつ加えて５回洗滌してプレートを乾燥させた。最後に、各プレートに１０ｍＭのトリス（Ｔｒｉｓ［ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ］ａｍｉｎｏｍｅｔｈａｎｅ）液１５０μｌを加えて毎分７５０回転で５分間振り、５２５ｎｍの波長で吸光度を測定した。細胞の生存率は次のように算定した。
細胞の生存率  ＝  １００×（各希釈点の被検体の平均吸光度−各希点に対応する培地対照の平均の吸光度）／（細胞対照の平均吸光度−各希釈点に対応する培地対照の平均の吸光度）
植物抽出成分の大腸癌（ＨＴ−２９）、胃癌（ＭＫＮ１）及び肺癌（Ａ５４９）細胞に対する殺傷効果についての結果をまとめて表−１に示す。
【００１５】
表１．  ヒガンバナ科及びアジサイ科植物成分の抗癌細胞活性
2004300082.tif 000002
【００１６】
表１．  ヒガンバナ科及びアジサイ科植物成分の抗癌細胞活性（続き）
2004300082.tif 000003
【００１７】
表−１から、スイセンは１０−１の希釈において大腸癌に強い殺傷効果を示し、葉の成分で１７％の生存率、さらに球根についても優るとも劣らない細胞死をもたらしていることが明らかとなった。細胞の生存率から逆算したところ、スイセンの葉の成分は１０−３の希釈においても５０％以上の細胞死を見せた。その結果、葉と球根から抽出した成分の大腸癌細胞に対する５０％細胞致死率は１０３．９９及び１０３．５７と算定された。両成分の胃癌と肺癌細胞に対する殺傷効果も本実験で確認され、スイセンの葉と球根の抽出物は胃癌細胞に対して１０３．５及び１０２．８の５０％致死率に達していることが分かった。同様に、スイセンの葉と球根から抽出した成分は肺癌細胞にも作用し、陽性対照に用いたマイトマイシンよりも有意義に高い細胞殺傷効果を示し、その値はマイトマイシンの５０％細胞致死率が１０２．９４の時、両成分のそれは１０３．４９及び１０３．２９に達していることが明らかとなった。
【００１８】
同様な手法でショウキズイセンについても評価したが、この植物の葉と球根の成分は大腸癌、胃癌及び肺癌細胞に対して明確な殺傷効果を見せ、両成分の大腸癌細胞に対する５０％細胞致死率は１０３．９７及び１０３．８３であり、スイセンのそれらよりも幾分高くなっていた。同様の傾向が胃癌と肺癌においても観察され、ショウキズイセンの葉と球根の成分の胃癌細胞に対する５０％細胞致死率は１０３．５８及び１０３．３２、あるいは肺癌細胞に対しても１０３．５８と１０３．７６という比較的高い細胞致死率を示した。
また、ヒガンバナの抽出成分も大腸癌、胃癌及び肺癌細胞に対しても細胞毒性を示し、葉と球根にもほぼ同じ程度の活性が認められた。例えば、算定された５０％細胞致死率は、大腸癌細胞に対して葉の成分が１０３．６６の時、球根のそれは１０３．５５の値が得られた。一方、胃癌細胞に対する毒性は大腸癌細胞それよりも僅かに劣る傾向を示し、同植物の葉と球根の成分は同癌細胞に１０２．７２及び１０２．８１の値を見せた。これに比べて、肺癌細胞に対する殺傷効果はやや強く、ヒガンバナの葉と球根の同癌細胞に対する５０％細胞致死率はそれぞれ１０２．９２と１０３．６５と算定された。
【００１９】
又、表−１の結果から、アジサイ科に属し、亜熱帯の沖縄に分布しているシマコンテリギとリュウキュウコンテリギについても、その葉と皮の成分に癌細胞に対する殺傷効果が含まれていることがわかる。
以上のことから、ヒガンバナ科植物又はアジサイ科植物の葉、花、茎、皮又球根には大腸癌、胃癌または肺癌細胞を致死させる成分が含まれることが明らかである。従って、これらの植物又はその抽出物を含有させることにより、癌の予防と治療に必要な健康食品、健康飲料、健康菓子類等を提供することができ、又、注射剤や錠剤などの形態の抗癌剤として用いることができる。