(57)【要約】【課題】新規なアンジオテンシン変換酵素阻害剤およびその製造法を提供する。【解決手段】イネ科植物の根部または根部抽出物を原料とする、アンジオテンシン変換酵素阻害剤・血圧降下剤・高血圧症の予防または治療剤。（２）イネ科植物の根部を、水または水溶性有機溶媒により抽出することを特徴とする、アンジオテンシン変換酵素阻害剤の製造法。本発明の剤は、飲食品、医薬品に添加して使用できる。また、その活性成分は、イネ科植物の根部（例えば麦根）の水または水溶性有機溶媒抽出液に対し、エタノール等の有機溶媒添加による沈殿法、分子量分画、活性炭ろ過、陽及び陰イオン交換樹脂処理、ポリアミド、オクタデシルシリカ等の吸着材処理、を適宜組み合わせることにより、種々の純度で得られる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
イネ科植物の根部または根部抽出物を原料とする、アンジオテンシン変換酵素阻害剤。
【請求項２】
イネ科植物が大麦及び小麦である請求項１のアンジオテンシン変換酵素阻害剤。
【請求項３】
イネ科植物の根部を、水または水溶性有機溶媒により抽出することを特徴とする、アンジオテンシン変換酵素阻害剤の製造法。
【請求項４】
イネ科植物が大麦及び小麦である、請求項３記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤の製造法。
【請求項５】
イネ科植物の根部または根部抽出物を原料とする、血圧降下剤。
【請求項６】
イネ科植物の根部または根部抽出物を原料とする、高血圧症の予防または治療剤。
【請求項７】
請求項１記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤を含む、飲食品、医薬品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、ビール製造時の産業廃棄物である麦根を水溶性溶媒で抽出して得られるアンジオテンシン変換酵素阻害剤およびその製造法、またそれを含有する健康食品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
アンジオテンシン変換酵素阻害活性を有する化合物（以下「アンジオテンシン変換酵素阻害剤」）は、血圧降下作用を有し、医薬品のみならず近年では健康食品、特定保健用食品等にも広く用いられている。アンジオテンシン変換酵素阻害剤は、血圧降下剤、高血圧症の予防または治療剤として有用である。
アンジオテンシン変換酵素阻害剤のうち、健康食品、特定保健用食品に用いられるものは、食品由来の安全な化合物として各種のペプチドが知られている。例えば酸乳由来のラクトトリペプチド（特開平４−２８２４００）、魚肉由来プチド（特開２００１−１１２４７０）、小麦胚芽由来ペプチド（特開２０００−１９１６８９）等である。この他に植物由来のアンジオテンシン変換酵素阻害性化合物として、ニコチアナミンが知られている。ニコチアナミンはタバコ、イネ、クコ、ブナ等広く植物界に分布し、この植物の葉から取得できること（特開昭６３−８７９９０）、またいんげん豆や大豆にも存在し、これを水または熱水抽出した液から合成樹脂を用いてニコチアナミンを精製する方法が知られている（特開平５−２４６８６５）。
これまで、安定供給が可能で安価な原料である食品産業廃棄物、特に植物性廃棄物から、これらのアンジオテンシン変換酵素阻害物質を取得する実用的方法の検討は、十分に試みられてこなかった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、新規なアンジオテンシン変換酵素阻害剤を、安価な原料から効率的に得ることにある。
【０００４】
【発明が解決しようとする手段】
本発明者らは、各種の食品産業関連廃棄物について検討を重ねた結果、ビール製造時に廃棄される麦根から抽出物を調製し、そこに強いアンジオテンシン変換酵素阻害活性が存することを見出した。一般に植物の胚芽、発芽根には様々な生理活性物質が含まれるが、その意味に於いてビール製造時の麦根は十分に有効利用されていると言い難い。
本発明は、上記知見に基づいて完成されたものであり、以下の剤およびその製造法に関する。
（１）イネ科植物の根部または根部抽出物を原料とする、アンジオテンシン変換酵素阻害剤。
（２）イネ科植物が大麦及び小麦である上記（１）のアンジオテンシン変換酵素阻害剤。
（３）イネ科植物の根部を、水または水溶性有機溶媒により抽出することを特徴とする、アンジオテンシン変換酵素阻害剤の製造法。
（４）イネ科植物が大麦及び小麦である、上記（３）記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤の製造法。
（５）イネ科植物の根部または根部抽出物を原料とする、血圧降下剤。
（６）イネ科植物の根部または根部抽出物を原料とする、高血圧症の予防または治療剤。
（７）請求項１記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤を含む、飲食品、医薬品。
【発明の実施の形態】
本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤は、イネ科植物の根部または根部抽出物を原料とすることを特徴とする。イネ科植物とは、イネ、ムギ（例えば大麦、小麦）等である。
ムギの根部（以下「麦根」）は本発明の原料として有用である。特に、大麦や小麦等ビール製造時に使用される麦由来の麦根は、大量入手が可能であり、原料として好適である。ビール製造においては、大麦あるいは小麦は発芽処理の後、仕込みに際して麦根が除去されている。
本発明では、イネ科植物の根部そのもの、根部の乾燥物、あるいは乾燥物を粉砕したものをアンジオテンシン変換酵素阻害剤としてもよい。ただし、アンジオテンシン変換酵素阻害活性成分（以下「活性成分」）の有効量を容易に摂取するためには、根部の抽出物を原料とすることが好ましい。
根部の抽出物は、根部を溶媒（例えば水や適当な濃度の水溶性有機溶媒）と接触させて活性成分を抽出し、抽出液を濃縮することにより得られる。例えば、麦根中の活性成分は水溶性なので、麦根をそのまま乾燥した後、熱水抽出し、得られた煎じ汁を本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤としてもよい。
より活性成分を高純度に含む根部の抽出物としては、例えば、根部の水抽出物に、水溶性有機溶媒を添加して不純物を沈殿除去した後、上清を濃縮したものが挙げられる。この場合、根部とは好ましくは麦根であり、水溶性有機溶媒とは、好ましくはメタノール、エタノール、アセトン等水に親和性のある溶媒である。
根部より活性成分を抽出、濃縮し、更には乾燥、粉末化することで、様々な形状の飲食品・医薬品への応用が容易になる。
〔本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤の製造法〕
本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤の製造法は、イネ科植物の根部を水溶性溶媒により抽出することを特徴とする。具体的な方法を以下に例示する。
まず、イネ、ムギ等のイネ科植物の根部またはその乾燥物を、１〜２０重量倍の水または熱水を５分以上、好ましくは１〜２０時間接触させて活性成分を含む抽出液を得る。この抽出液をそのまま乾燥粉末化することも考えられるが、水抽出液には種々の物質が溶解しているため活性成分の純度が低くなること、粉末化しにくいこと、きれいな粉末が得られないこと等の不具合がある。そこでさらに活性成分を濃縮することが好ましい。
活性成分を濃縮する場合は抽出液に溶解している蛋白質等の高分子を除去することが好ましい。高分子の除去は、例えば抽出液のｐＨを調整して等電沈殿により行えば良い。或いは分画分子量１，０００程度の限外濾過またはサイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量１，０００以下の分画を回収すればよい。
この抽出液に更にイオン交換樹脂による吸脱着、活性炭ろ過等を適宜組み合わせた処理を行うことにより、不純物を低減する事が出来る。例えば麦根の活性成分は両性イオン化合物であるため、陽イオン交換樹脂と陰イオン交換樹脂の何れもが好適に使用できる。
また麦根由来の活性成分は極性が高く、活性炭との相互作用が弱いため、活性炭ろ過によっても不純物を除去することが出来る。比較的極性の低い有機物を除去する方法として、オクタデシルシリカや合成吸着剤（例：三菱化学製ダイヤイオンＨＰ−２０）等に通過させても良い。
以上のイオン交換樹脂処理、活性炭ろ過、吸着剤処理、分子量分画を適宜組み合わせることにより、高純度の活性成分を得ることが出来る。加えて電気透析等の手法により、脱塩操作を行っても良い。この様に必要に応じて、目的とする純度まで活性成分を濃縮することが出来る。
【０００５】
上記の抽出液またはその濃縮液は、水溶性有機溶媒による添加操作により更に濃縮できる。水溶性有機溶媒とはメタノール、エタノール、アセトン等水に親和性のある溶媒であり、とくにエタノールが好ましい。有機溶媒の添加量は水抽出液の濃縮の度合いによっても異なるが、水抽出液の有機溶媒濃度が好ましくは５０％以上、８０％未満となるように添加する。こうすることにより抽出液中に沈殿物が生ずるので、これを適宜の方法、例えば遠心分離等により除去する。麦根由来の活性成分は上清に存在するので、溶媒を留去、濃縮することで更に活性成分の純度を高めることが出来る。
【０００６】
この濃縮物を更に真空、あるいは凍結乾燥、スプレードライ等により乾燥粉末化してアンジオテンシン変換酵素阻害剤とする事ができる。
実施例に示す通り、イネ科植物の根部または根部抽出物は、アンジオテンシン変換酵素を阻害するので、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、血圧降下剤、高血圧症の予防または治療剤として有用である。
本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤は人および人以外の動物（ペット、家畜）用として使用できる。　ヒトが本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤を摂取する場合、その摂取量は、性別・体重、予防あるいは治療しようとする疾患の種類や症状により適宜設定する。例えば、成人一人あたり一日に０．１〜１０００　ｍｇ　程度摂取できるよう服用すればよい。なお、イネ科植物の根部または根部抽出物を、血圧降下剤、高血圧症の予防または治療剤として摂取する場合も同様である。
本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤を飲食品または医薬品に添加することにより、これらに生理活性（例えば、血圧降下作用、高血圧症の予防または治療作用）を付与することができる。
食品に添加する場合は、アンジオテンシン変換酵素阻害剤を通常の賦形剤と混合、打錠して健康食品錠剤としたり、各種の飲食品、例えばパン、ケーキ、ビスケット、クッキー等のパン、菓子類や、そば、うどん、中華麺等の麺類や、天ぷら、フライ等の惣菜類や、豆腐、納豆等の大豆加工食品や、ジュース、コーヒー、ココア、ウーロン茶、緑茶、健康飲料等の飲料類等に添加することにより血圧降下作用等を有する機能性飲食品とすることができる。
医薬品とする場合は、通常の賦形剤を用いてカプセル剤、錠剤、顆粒剤、液剤等に製剤化すればよい。
【実施例】
実施例では、大麦由来の麦根よりアンジオテンシン変換酵素阻害剤を抽出した。
〔アンジオテンシン変換酵素阻害活性の測定法〕
本発明測定法は、日胸疾会誌１８（５），　１９８０，　２９７−３０２記載の方法に従った。
（１）試薬
基質溶液：１Ｍ　ＮａＣｌ含有１００ｍＭホウ酸緩衝液（ｐＨ　８．３）に、合成基質ヒプリルヒスチジルロイシン（Ｈｉｐ−Ｈｕｓ−Ｌｅｕ、シグマ社製）を１２．５ｍＭとなるよう溶解し、基質溶液とした。
酵素溶液：ウサギ肺由来アンジオテンシン変換酵素（シグマ社製）を５０ｍＭ　ホウ酸緩衝液（ｐＨ　８．３）に３３３ｍＵ／ｍｌとなるよう溶解し、酵素溶液とした。
（２）実験法
試験管中で上記基質溶液１００μｌに試料溶液１４０μｌを混合し、３７℃で５分間プレインキュベートする。次に酵素溶液１０μｌを添加し、３７℃で３０分反応させる。１ＮＨＣｌ　２５０μｌを添加し反応を停止後、予め氷冷しておいた酢酸エチル１．５ｍＬ　を添加し、１５秒間良く攪拌する。遠心分離（４℃、３０００回転５分）に供したのち、上層１ｍｌを別の試験管に移す。これを遠心濃縮乾燥機に供して、酢酸エチルを蒸発させる。１ｍｌの超純水に再溶解し、２２８ｎｍの吸光度を測定する。コントロール（サンプルの代わりに超純水）に対するサンプル添加時の吸光度の減少率を以てアンジオテンシン変換酵素阻害活性とした。
【０００７】
〔実施例１〕
粉砕した乾燥麦根４００グラムに水５リットルを添加し、ｐＨ９に調製した後、２５℃で９０分間浸漬した後麦根を除去し、水抽出液４．７リットルを得た。ついで、上清のｐＨを４．５に調製し、遠心分離（７５００Ｇ、３０分）し、生じた沈殿を分離除去し、４．５リットルの上清を得た。この水抽出液に、エタノールを添加してエタノール濃度８０％の溶液とし、これを４℃で遠心分離（　７５００Ｇ、３０分）して得られた上清を濃縮乾固してアンジオテンシン変換酵素阻害性組成物の粗精製粉末６０ｇを得た。この粉末のアンジオテンシン変換酵素阻害活性のＩＣ５０　は、８００μｇ／ｍｌであった。
【０００８】
〔実施例２〕
実施例１と同様に調製した麦根抽出液４．５リットルに対し、活性炭（武田薬品工業製精製白鷺）１５０ｇを添加し、室温で３時間攪拌し、不純物を吸着させた。これに珪藻土ろ過助剤（ラジオライト５００）１５０ｇを混和し、Ｎｏ．２ろ紙上で吸引ろ過し、ろ液を得た。このろ液を分画分子量１，０００の中空糸型限外濾過モジュールで処理し、透過液を凍結乾燥して白色の粉末２０ｇを得た。この粉末のアンジオテンシン変換酵素阻害活性のＩＣ５０　は、２５０μｇ／ｍｌであった。
【０００９】
実施例３〔実施例〕
実施例２で得られた粉末を蒸留水２００ｍｌで再溶解し、ここにエタノールを添加しエタノール濃度８０％の溶液とした。これを４℃で遠心分離（　７５００Ｇ、３０分）して得られた上清を、溶媒留去後凍結乾燥して白色粉末１０ｇを得た。この粉末のアンジオテンシン変換酵素阻害活性のＩＣ５０は、１２０μｇ／ｍｌであった。
【００１０】
実施例４〔実施例〕
実施例２で得られる限外濾過液を、陰イオン交換樹脂（三菱化学製ダイヤイオンＰＡ３１８）カラム（容積１リットル。ＯＨ型）に供し、蒸留水２リットルで洗浄、更に０．５規定塩酸２リットルで溶出した。続いてこれを陽イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０Ｗ　×２）カラム（容積１リットル。Ｈ型）に供し、蒸留水２リットルで洗浄、更に０．５％アンモニア水溶液で溶出した。２リットル目から３リットル目までを分取し、ロータリーエバポレーターを用いて１００ミリリットルまで濃縮した。最終的にこれを凍結乾燥し白色粉末０．４ｇを得た。この粉末のアンジオテンシン変換酵素阻害活性のＩＣ５０は５μｇ／ｍｌであった。
【００１１】
実施例５〔実施例〕
実施例４で得られた粉末を少量の水に溶解し、予め１００％エタノールで平衡化したポリアミドＣ−２００（和光純薬製）カラム（容積０．５リットル）に供し、１００％エタノール、９０％エタノール、８０％エタノール、７０％エタノール、６０％エタノール、５０％エタノールをそれぞれ１リットルずつ用いて、順次溶出させた。７０％エタノール、６０％エタノール、５０％エタノールの溶出画分を濃縮後、ろ過して凍結乾燥したところ、白色粉末５０ｍｇを得た。この粉末のアンジオテンシン変換酵素阻害活性のＩＣ５０は０．７μｇ／ｍｌであった。
【００１２】
実施例６〔実施例〕
実施例１で得られた粉末と乳糖、結晶セルロース、タルク、及びカルボキシメチルセルロース（結合剤）を下記の組成で均一に混合し、顆粒状とした後、常法により打錠し、５００ｍｇ／錠の錠剤を製造した。
実施例１で得られた粉末　　　　３００ｇ
乳糖　　　　　　　　　　　　　　１００ｇ
結晶セルロース　　　　　　　　　　９３ｇ
タルク　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５ｇ
カルボキシメチルセルロース　　　　　　　２ｇ
【００１３】
〔実施例７〕
実施例１で得られた粉末を下記配合でケーキ原料に配合し、常法によりケーキを製造した。得られたケーキは、通常品に比べて、内相、外観とも差がなく、食感、風味も良好であった。
小麦粉　　　　　　　　　　　　　１００重量部
卵　　　　　　　　　　　　　　　１００重量部
砂糖　　　　　　　　　　　　　　１００重量部
実施例１で得られた粗精製粉末　　　３重量部
水　　　　　　　　　　　　　　　　４０重量部
【００１４】
〔実施例８〕
実施例１で得られた粗精製粉末を、市販の炭酸飲料に１％添加したところ、速やかに溶解し、得られた飲料は風味が全く変わらず良好であった。
【００１５】
【本発明の効果】
イネ科植物の根部または根部抽出物は、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、血圧降下剤、高血圧症の予防または治療剤として使用可能である。活性成分は、イネ科植物の根部、特にビール製造時の副産物である麦根から、効率よく製造することができる。上記の剤をそのまま、もしくは各種食品に添加した場合、血圧降下作用等を有する健康食品が得られ、これらを摂取することにより、高血圧症の症状の改善及び予防が出来る。