(57)【要約】【課題】本発明の目的は、ワレカラの人工的な飼育・繁殖ができるように、これまで実現されなかったワレカラの飼育方法を提供することである。【解決手段】外洋より採取した海水３を表面コーティングされていないガラス容器２に入れ、表面にワレカラがとまることができる凹凸を有する不溶性のシート４を海水３中に入れて、当該海水中でワレカラを飼育するとともに、表面コーティングされていないガラス容器２に入れられた外洋より採取した海水３中で培養された珪藻を餌として与えることによりワレカラの人工的な飼育を実現する。【選択図】図１
2004016049.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
外洋より採取した海水を表面コーティングされていないガラス容器に入れ、表面にワレカラがとまることができる凹凸を有する不溶性のシートを海水中に入れて、当該海水中でワレカラを飼育する方法であって、さらに表面コーティングされていないガラス容器に入れられた外洋より採取した海水中で培養された珪藻を餌として与えることを特徴とするワレカラを飼育する方法。
【請求項２】
表面コーティングされていないガラス容器と、表面にワレカラがとまることができる凹凸を有する不溶性のシートと、ガラス容器内の水の温度を制御する温度制御装置を有することを特徴とするワレカラの飼育装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、海水中に棲息する小型の甲殻類の一種であるワレカラの飼育方法および飼育装置に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ワレカラは甲殻網フクロエビ上目端脚目ワレカラ亜目に属する体長１〜５ｃｍ程度の小型の甲殻類の一群である。浅海域生態系において重要な無脊椎動物であり、ガラモ場生態系のホンダワラ類をはじめ、コケムシ類や養殖筏上に高密度に棲息し、マダイやアイナメやクジメ等の沿岸性魚類の重要な餌となっている。日本近海において１０５種のワレカラ類が報告されているほか、世界各地に広く分布している。ワレカラは浅海域生態系の食物連鎖中で比較的低次の消費者であるが、有機スズ化合物を高濃度で蓄積することが注目されるようになった。浅海域生態系において単細胞藻類の一次消費生物であり、すなわち、食物連鎖における二次生産生物であるワレカラの数が減少すれば、同海域の魚類の棲息に大きな影響をおよぼすことを考慮すると、ワレカラの生態等を研究することは重要である。自然状態のワレカラを調査したり、海中のワレカラを採取して各種試験を行うことが意義の大きいことであることはいうまでもないが、さらに系統的かつ継続的な研究を広く行い、かつ異なる研究者や研究機関同士のデータが比較できるようにするために、ワレカラの飼育が可能となり、均質なワレカラの研究用サンプルが安定して得られるようになることが望まれる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、ワレカラの人工的な飼育・繁殖ができるように、これまで実現されなかったワレカラの飼育方法を提供することである。また、ワレカラを人工的に飼育するための飼育装置を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】上記の課題を解決するために、本発明に係るワレカラの飼育方法は、外洋より採取した海水を表面コーティングされていないガラス容器に入れ、表面にワレカラがとまることができる凹凸を有するテフロン（登録商標）などの不溶性のシートを海水中に入れて、当該海水中でワレカラを飼育する方法であって、さらに表面コーティングされていないガラス容器に入れられた外洋より採取した海水中で培養された珪藻を餌として与えることを特徴とするものである。さらに、本発明に係るワレカラの飼育装置は、表面コーティングされていないガラス容器と、表面にワレカラがとまることができる凹凸を有する不溶性のシートと、ガラス容器内の水の温度を制御する温度制御装置を有することを特徴とするものである。なお、本発明において単に「ワレカラ」という場合は、甲殻網フクロエビ上目端脚目ワレカラ亜目に属する一群の甲殻類であるワレカラ類一般を示す。
【０００５】
【発明の実施の形態】本発明に係るワレカラの飼育方法およびワレカラの飼育装置の実施の形態について図１を用いて説明する。図１はワレカラの飼育装置の例を示す断面図である。ワレカラの飼育装置１は温度管理された部屋に収められている。ガラス容器２は表面コーティングされていないものである。通常市販されているガラス容器のほとんどは何らかの表面コーティンがなされているが、表面コーティンされたガラス容器を使用するとコーティング剤がワレカラの飼育に悪影響をおよぼすことが判明した。したがって、本発明の飼育方法および飼育装置においては、表面コーティングされていないガラス容器を指定してしようする必要がある。このガラス容器２の大きさは任意であり、飼育を行う規模に合せて、シャーレのような小型のものから大型の水槽まで適宜選択できる。ガラス容器２の中にワレカラを飼育するための海水３を入れる。ここで、海水３は汚染のされていないものを用いなければならない。汚染されていない海水を得るために、フィルターや各種イオン交換膜等により不純物を除去することができる。本例においては外洋で採取した海水を使用した。すなわち、海岸より３〜２０ｋｍの距離の海域で、海面より１０ｍの深さより採取したものを０．４７μｍのガラス繊維フィルターで濾過して用いた。ワレカラは自然状態では沿岸に棲息するので、海岸から近い海域の海水が飼育に適しているようにも見えるが、本発明者は沿岸部および外洋の海水の水質調査を繰り返し、沿岸部の水はＴＢＴ（トリブチルスズ）等の有機スズ化合物が含まれていること、およびその濃度が時間的に大きく変動することを見出した。これらの汚染物質は従来の分析方法で検出できる最低レベルかそれ以下であったためさほど問題視されていなかったが、これらの汚染物質はワレカラの飼育に悪影響をおよぼすとともに、その濃度の時間的変動により均質なワレカラのサンプルを得ることができなくなることがわかった。一方、外洋においてはこれらの汚染物質は見られず、当然にその濃度の時間変動などは問題にならないため、ワレカラの飼育に適することも判明した。海水３の中にはテフロン（登録商標）などの不溶性のシート４を入れる。ワラカラはホンダワラ等の海藻の群生帯に棲息し、海藻の表面につかまっていることが多いが、不溶性の材料よりなるシートで表面に凹凸を有するものを置くことで、ワレカラはこれにつかまって休むことができる。このことがワレカラのストレスを減少させ、ワレカラの飼育によい影響を与えることがわかった。
【０００６】ガラス容器２の中の海水の温度を制御するために、温度制御装置５が設けられている。温度制御装置５としては海水中にヒーターを設けたものでもよいが、ヒーターより流出する化学物質等の影響をさけるためにも、ガラス容器２の外に制御手段を設けて、間接的に温度調整をすることがより好ましい。本例においては水温が２０℃程度になるように制御されている。なお、水温を変えることによりワレカラの１世代の期間や寿命が変わることがわかっており、たとえば２０℃ではホソワレカラ（Ｃａｐｒｅｌｌａ　ｄａｎｉｌｅｖｓｋｉｉ　Ｃｚｅｒｎｉａｖｓｋｉ，　１８６８）の世代期間（卵のふ化および幼生の成熟期間）が２５．６日であり、雌は成熟後に平均５．６回産卵することがわかっている。また、一方、１２℃では世代期間は５３．２日となる。
【０００７】海水中にトゲワレカラ（Ｃａｐｒｅｌｌａ　ｓｃａｕｒａ　Ｔｅｍｐｌｅｔｏｎ，　１８３６）やホソワレカラを適当な数入れて飼育を行う。海水３は毎日、５０％の量を交換する。また、ガラス容器２と不溶性のシート４は２日おきに交換した。そして、エサとして珪藻を与えた。この珪藻も外洋で採取した海水を表面コーティングされていないガラス容器に入れた中で育成したものである。
【０００８】
【実施例】次に、本発明に係るワレカラの飼育方法の実施例について説明する。海水は大槌湾の外で深さ１０ｍのところから採取した。この地点の深さ０．５ｍおよび１０ｍでの海水中のＴＢＴ濃度は検出可能な水準以下である。この海水を２０リットルのポリタンクに入れて保管する。海水は０．４７μｍのガラス繊維フィルターで濾過した。本発明のワレカラの飼育方法に用いる海水としてはこの状態でも使用できるのであるが、本実施例ではＴＢＴＣＬ（塩化トリブチルスズ）を含む海水との比較を行うために、ＴＢＴＣＬを海水に溶かすための溶媒であるアセトンを５ｎｌ／ｌ（海水）の濃度になるよう加えた。比較用の海水として海水１リットル当たりのＴＢＴＣＬがそれぞれ１０ｎｇ／ｌ、１００ｎｇ／ｌ、１０００ｎｇ／ｌ、１００００ｎｇ／ｌの４種類の濃度のものを作った。
【０００９】ホソワレカラは房総半島内浦湾の岩場から採取した。このワレカラを雄と雌に分別し、未成熟の雌が成熟したときに雄と交尾させる。交尾後に雌が卵を育胞へ放出したことを確認したら、この雌を別のペトリ皿に移す。ここでペトリ皿は、ＴＢＴＣＬがそれぞれ１０ｎｇ／ｌ、１００ｎｇ、１０００ｎｇ／ｌ、１００００ｎｇ／ｌを含んだ海水を入れたものおよびアセトンのみを含んだ海水を入れたものを用意する。このそれぞれに卵を有する雌ワレカラを入れ、１２時間毎に照明をつけたり消したりを繰り返して５日間おく。外洋で採取した海水を表面コーティングされていないガラス容器に入れた中で育成した珪藻を餌として１日１度与える。海水３は毎日、５０％の量を交換し、ガラス容器２と不溶性のシート４は２日おきに交換した。この状態で、卵を有する雌ワレカラおよび育胞中の卵の様子を毎日観察した。育胞から幼生ワレカラが出ると、この幼生ワレカラをさらに別のペトリ皿に移し、ＴＢＴＣＬもアセトンも含まない海水中で飼育する。毎日、生存しているワレカラの数を記録した。また、４回か５回脱皮をしたところでワレカラの性別が判断できるようになるので、性別を判定し、雌雄の比率を求めた。
【００１０】図２は育胞中に卵を有する成熟した雌のワレカラを各種試験海水中で飼育した期間中における育胞中の卵の観察結果を示すものである。正常な個体数、育胞からの卵の脱落を確認した個体数および死亡した個体数を数えて、その比を表示している。これより、海水中のＴＢＴＣＬが１０ｎｇ／ｌあるだけでも育胞からの卵の脱落が生じ、ＴＢＴＣＬ濃度が上がるに従って正常な個体数が減っていくことがわかる。一方、ＴＢＴＣＬを添加していない海水においては全数が正常である。
【００１１】図３は、育胞中に卵が放出された日からの生存する個体数の変化を示す。初めの５日間をＴＢＴＣＬが１０ｎｇ／ｌ含まれた海水中で飼育された幼生は、ＴＢＴＣＬを添加していない海水に移された後も死亡を続け、５０日経過した時点では４０％しか生存していない。初めの５日間の海水中のＴＢＴＣＬ濃度が上がるに従って、５０日経過した時点での生存率は低くなる。一方、ＴＢＴＣＬを添加していない海水において初めの５日間を過ごしたワレカラは全個体が５０日生存し、成熟をむかえた。
【００１２】図３は、雌雄の比率を示す。ＴＢＴＣＬを添加していない海水において初めの５日間を過ごしたワレカラでは雄１６に対し雌９となっているが、これは自然界でのホソワレカラの性比とほぼ一致する。一方、初めの５日間をＴＢＴＣＬが１０ｎｇ／ｌ含まれた海水中で飼育されたものでは、雌の割合が５５．６％と大きく増加し、ＴＢＴＣＬ濃度が１００ｎｇ／ｌおよび１０００ｎｇ／ｌにおいては８０％に達する。
【００１３】以上より、海水中に１０ｎｇ／ｌでもＴＢＴＣＬが含まれている場合には育胞からの卵の脱落、生存率の低下、性比の異常が生じるのに対して、汚染されていない外洋の海水を用いた場合には、これらの問題が一切生じることなく良好な飼育結果がえられることがわかった。特に、育胞中で卵が発現する期間は重要であり、この期間に汚染された海水を使用すると、その後に汚染されていない海水中に移されても飼育中の死亡や性比の異常等が発生する。
【００１４】本実施例により本発明に係るワレカラの飼育方法及び飼育装置が有効であることが確認できたが、実施例の結果はまた本実施例が環境評価の手法として使用できることを示す。濃度１０ｎｇ／ｌ程度のＴＢＴＣＬ等は従来の分析手段では検出困難であり、試料を濃縮していくことによって検出可能であっても、高濃度に汚染物質が濃縮された試験対象水はそれ自体危険である。一方、実施例に示すワレカラを用いた試験において、濃度１０ｎｇ／ｌ程度のＴＢＴＣＬに対してもワレカラ生存率や性比は顕著に変化する。また、この試験は危険がなく、実施も容易である。従って、ワレカラを用いた試験は水質の評価手段としてきわめて効果的である。淡水中の環境ホルモンの評価方法としてはメダカを用いた方法が提案されているが、海水を評価できる標準的な手法は確立されていない。ワレカラは一世代の期間が短く、寿命の長い生物に比べて短期間で評価できるメリットがある。ホソワレカラやトゲワレカラは日本近海に多く棲息しており、我が国の海水の評価手段として有効である。また、世界的にもワレカラ類は広く分布している。また、分析的手法による評価では汚染物質の濃度を数値として得ることはできても、それによってその物質が生態系にどのような影響を及ぼすかを知ることはできない。一方、ワレカラを用いた評価では、生存率や性比のデータより浅海生態系において生じる影響を直接的に評価できる利点もある。特に、性比のデータは環境モルモンと呼ばれる内分泌撹乱物質の評価に効果的である。
【００１５】
【発明の効果】以上、本発明に係るワレカラの飼育方法および飼育装置は、ワレカラの人工飼育を実現できるという効果がある。これにより、均質なワレカラな試験用試料が提供できることとなる。また、人工的に管理飼育することにより同じ種のワレカラにおいても異なる性質を示す複数の血統グループを純血種として得ることができるようになり、ワレカラの基礎研究に資するものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明のワレカラの飼育装置の例を示す断面図である。
【図２】雌ワレカラの育胞内の卵の観察結果を示すグラフである。
【図３】飼育中のワレカラの生存する個体数の時間変化を示すグラフである。
【図４】飼育された新世代のワレカラの性比を示すグラフである。
【符号の説明】
１．ワレカラの飼育装置
２．ガラス容器
３．海水
４．不溶性のシート
５．温度制御装置
【図１】
2004016049.tif 000003
【図２】
2004016049.tif 000004
【図３】
2004016049.tif 000005
【図４】
2004016049.tif 000006