(57)【要約】【課題】ミルベマイシン類の精製法【解決手段】ミルベマイシン類を塩基で洗浄することによるミルベマイシン類の精製法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ミルベマイシン類を塩基で洗浄することによるミルベマイシン類の精製法。
【請求項２】
ミルベマイシン類が、ミルベマイシンＡ3、ミルベマイシンＡ4、ミルベマイシンＤ、ミルベマイシンα11又はミルべマイシンα14から選択される物質の一つ又は二つ以上の混合物である、請求項１記載の精製法。
【請求項３】
ミルベマイシン類が、ミルベマイシンＡ3、ミルベマイシンＡ4又はこれらの混合物である、請求項１又は２記載の精製法。
【請求項４】
溶剤中で行うことを特徴とする請求項１乃至３の方法から選ばれるいずれか一項に記載の精製法。
【請求項５】
ミルベマイシン類の酢酸エチル溶液を塩基で洗浄することを特徴とする、請求項１乃至４から選ばれるいずれか一項に記載の精製法。
【請求項６】
塩基が、アミン類の溶液である、請求項１乃至５から選ばれるいずれか一項に記載の精製法。
【請求項７】
塩基が、アンモニア水溶液である、請求項１乃至６から選ばれるいずれか一項に記載の精製法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ミルベマイシン類の工業的スケールでの精製法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
微生物代謝産物から得られる１６員環マクロライド化合物であるミルベマイシン類は、殺虫、殺ダニ活性又は駆虫活性を有することが知られており、例えば下記表１に示される化合物を挙げることが出来る。
【０００３】
【表１】
2004203757.tif 000002
【０００４】
これらの化合物を製造する際、通常すべての微生物代謝産物と同様に、類縁体及び不純物が多く含まれる。従って、工業的にこれらの化合物を製造する場合、工業的製造法として使える方法で精製を行う必要がある。
【０００５】
一般的な上記化合物の精製法としては、発酵培養物から有機溶媒にて上記化合物を抽出した後、シリカゲル、アルミナ、デキストランゲル、イオン交換樹脂、合成吸着剤、分子ふるい、C8H17,C18H37,C6H5などの化学結合型シリカゲルなどの担体を用いたクロマトグラフィーに付し、得られた目的の化合物を含む画分を濃縮乾固する方法が知られている（例えば、特許文献１、特許文献２、特許文献３又は特許文献４参照。）。しかしながら、これらのクロマトグラフィーを用いる方法では、担体の負荷量が低いため、大量のクロマト担体及び有機溶媒等の溶出溶媒を用いねばならず、生産性も低く、得られた精製品は高価なものとなり、工業的には必ずしも満足できる精製法ではない。
【０００６】
【特許文献１】
特開昭５０−２９７４２号公報
【特許文献２】
特開昭５５−１３１３９８号公報
【特許文献３】
特開昭５６−３２４８１号公報
【特許文献４】
特開平１−１９３２７０号公報
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、工業的に煩雑な精製法、例えばクロマトグラフィーを用いずに、簡便に不要物を除去することができるミルベマイシン類の精製法を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、前記した課題の解決のため鋭意努力を重ねた結果、ミルベマイシン類を塩基で洗浄することにより、簡便に不要物を除去できることを見出し、本発明を完成した。
本発明は、
（１）ミルベマイシン類を塩基で洗浄することによるミルベマイシン類の精製法、
（２）ミルベマイシン類が、ミルベマイシンＡ3、ミルベマイシンＡ4、ミルベマイシンＤ、ミルベマイシンα11又はミルべマイシンα14から選択される化合物の一つ又は二つ以上の混合物である（１）記載の精製法、
（３）ミルベマイシン類が、ミルベマイシンＡ3、ミルベマイシンＡ4又はこれらの混合物である（１）又は（２）記載の精製法、
（４）溶剤中で行うことを特徴とする（１）乃至（３）から選ばれるいずれか一つに記載の精製法。
（５）ミルベマイシン類の酢酸エチル溶液を塩基で洗浄することを特徴とする、（１）乃至（４）から選ばれるいずれか一つに記載の精製法。
（６）塩基が、アミン類の溶液である、（１）乃至（５）から選ばれるいずれか一つに記載の精製法。
（７）塩基が、アンモニア水溶液である、（１）乃至（６）から選ばれるいずれか一つに記載の精製法である。
【０００９】
本発明における「ミルベマイシン類」としては、例えばミルベマイシンＡ3、ミルベマイシンＡ4、ミルベマイシンＤ、ミルベマイシンα11又はミルベマイシンα14から選択される化合物の１つ又は２つ以上の混合物を挙げることができ、好適には、ミルベマイシンＡ3、ミルベマイシンＡ4又はミルベマイシンＤから選択される化合物の１つ又は２つ以上の混合物を挙げることができ、さらに好適には、ミルベマイシンＡ3、ミルベマイシンＡ4又はこれらの混合物を挙げることが出来る。
【００１０】
本発明における「溶剤」としては、例えば、水；メタノール、エタノールもしくはｔ−ブタノールのようなアルコール類；アセトンもしくはメチルイソブチルケトンのようなケトン類；アセトニトリルのようなニトリル類；酢酸エチルのようなエステル類；塩化メチレン、クロロホルムもしくはジクロルエタンのようなハロゲン化炭化水素類；ジエチルエーテル、テトラヒドロフランもしくはジオキサンのようなエーテル類；ベンゼンもしくはトルエンのような芳香族炭化水素類；ジメチルホルムアミドもしくはジメチルアセトアミドのようなアミド類；ジメチルスルホキシドのようなスルホキシド類又はヘキサンもしくはオクタン等の脂肪族炭化水素類、及びこれらの混合溶媒があげられる。
【００１１】
本発明における「塩基」とは、ミルベマイシン類を分解させるものでなければ特に限定はないが、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムもしくは水酸化リチウム等のようなアルカリ金属水酸化物；水酸化カルシウムもしくは水酸化マグネシウム等のようなアルカリ土類金属水酸化物；炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウムもしくは炭酸セシウム等のようなアルカリ金属炭酸塩又は炭酸カルシウム等のようなアルカリ土類金属炭酸塩のような無機の塩基類、あるいは、アンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリｎ−ブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデセ−７−エン（ＤＢＵ）、ピリジン、コリジン又は４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ピリジンなどのアミン類等が挙げられ、好適には、アミン類が挙げられ、さらに好適には、アンモニアが挙げられる。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明は、ミルベマイシン類を塩基で洗浄することによるミルベマイシン類の精製法である。
ここで、「ミルベマイシン類を塩基で洗浄する」とは、
（Ａ）ミルベマイシン類を溶剤に溶かし、その溶剤に溶けない塩基を加え攪拌等をおこなうこと、
（Ｂ）ミルベマイシン類を溶剤に溶かし、その溶剤と混ざらない溶剤に塩基を溶かし攪拌等をおこなうこと、
（Ｃ）塩基をミルベマイシン類の溶けない溶剤に溶かし、ミルベマイシン類を加え攪拌等をおこなうこと、
（Ｄ）ミルベマイシン類を、洗浄を行う温度で液体である塩基に加え攪拌等をおこなうこと等を示す。
これらのうち、好適には、
（１）上記（Ａ）乃至（Ｃ）があげられ、さらに好適には、
（２）上記（Ａ）又は（Ｂ）が挙げられ、さらにより好適には、
（３）上記（Ａ）又は（Ｂ）において、ミルベマイシン類を溶かす溶剤が酢酸エチルである場合が挙げられ、特に好適には、
（４）上記（Ａ）又は（Ｂ）において、ミルベマイシン類を溶かす溶剤が酢酸エチルで、塩基がアミン類である場合が挙げられ、最も好適には、
（５）上記（Ｂ）において、ミルベマイシン類を溶かす溶剤が酢酸エチルで、塩基がアンモニアでその溶剤が水である場合が挙げられる。
【００１３】
ミルベマイシン類は、前記したようにいずれも殺虫、殺ダニ活性又は駆虫活性を有することが知られている公知の化合物であり、ミルベマイシンＡ3及びミルベマイシンＡ4は特開昭５５−１３１３９８号公報に、ミルベマイシンＤは特開昭５６−３２４８１号公報に、ミルベマイシンα11及びミルベマイシンα14は特開平１−１９３２７０号公報にそれぞれ記載されている方法により、製造することが出来る。
【００１４】
ミルベマイシン類を塩基で洗浄する際の時間は、特に限定はないが、通常１５分乃至２日間であり、好適には３０分乃至３時間である。その際の温度は、通常０乃至８０℃であり、好適には２０乃至４０℃である。
【００１５】
使用される塩基の使用量は、ミルベマイシン類の純度により大巾に変わりうるが、通常、ミルベマイシン類に対して重量比で２０％乃至１０倍量であり、好適には５０％乃至５倍量である。
【００１６】
洗浄工程終了後は、上記
（Ａ）の場合は、常法に従い塩基をろ過後、ろ液を、必要に応じて、例えば硫酸水溶液等の酸性の溶液で洗浄後、減圧下又は常圧で濃縮することにより、純度の改善されたミルベマイシン類を得ることができ、
（Ｂ）の場合は、ミルベマイシン類の溶けている溶液を抽出し、必要に応じて、例えば硫酸水溶液等の酸性の溶液で洗浄後、減圧下又は常圧で濃縮することにより、純度の改善されたミルベマイシン類を得ることができ、
（Ｃ）及び（Ｄ）の場合は、ミルベマイシン類をろ過し、適当な溶剤で洗浄することにより、純度の改善されたミルベマイシン類を得ることができる。
【００１７】
さらに必要に応じて、より高い純度の化合物を必要とする場合には、再結晶化法や液−液分配法、誘導化法などの方法を組み合わせることもできる。
【００１８】
【実施例】
本発明をさらに具体的に説明するために、以下に実施例等を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。
（実施例１）
ミルベマイシンA3とミルベマイシンA4の発酵培養液由来のケーキから酢酸エチル溶液を調製した。一部を減圧下で濃縮した結果、その濃縮残渣の純度は28%（ミルベマイシンA3:4.2％；ミルベマイシンA4:23.8％）であった。当該酢酸エチル溶液（130ml）を、5%アンモニア水63ml、5%硫酸水溶液39mlで順次洗浄した。この酢酸エチル溶液を濃縮して得られた残渣にメタノール300mlと水300mlを順次添加し、その後、アイソパーE（エクソンモービル社製炭化水素系溶媒：オクタン60-70%、ノナン30-40%混合物）で抽出した。得られたアイソパーE溶液を減圧下で濃縮することにより再結晶化、ついで濾取を行うことにより、ミルベマイシンA3とミルベマイシンA4の結晶3.06g (収率75%)を得た。その純度は95%（ミルベマイシンA3:15.2％；ミルベマイシンA4:79.8％）であった。
【００１９】
ミルベマイシンA3とミルベマイシンA4の含有量、純度は下記の条件で高速液体クロマトグラフィーを用いて決定した。参考例１においても同様に決定した。
高速液体クロマトグラフィー条件
カラム：Wakosil-II  5C18  HG  φ4.6×250mm
溶媒：アセトニトリル/水＝80/20
流速：1.0ml/min
検出：UV240nm
（参考例１）
ミルベマイシンA3とミルベマイシンA4の発酵培養液由来のケーキより調製したメタノール溶液１Lを濃縮し、得られた残渣をシリカゲル（ワコーゲルC-100、４００g使用）カラムクロマトグラフィーに付した。酢酸エチル-ヘキサン混合溶媒で展開し、得られたミルベマイシンA3とミルベマイシンA4含有画分を濃縮した。得られた残渣を再結晶に付した後、濾取することによりミルベメクチンの結晶２.６９g（収率78％）を得た。その純度は95%（ミルベマイシンA3:14.3％；ミルベマイシンA4:80.7％）であった。
【００２０】
【発明の効果】
本発明により、クロマトグラフィーを用いない簡便、安価、かつ精製効果の高いミルベマイシン類の精製法が提供される。