(57)【要約】【構成】ラピリで固定化されたトリコデルマ　アウレオビリディーの分生胞子は約４７〜４８％の水分を含有しており、培養物自体は培養期間の長短にもよるが１０〜１５％の水分を含んでいる。ラピリにより固定化された分生胞子は、このような高い水分含量では、再発芽増殖が行われ、栄養体細胞になってしまうので、菌の保存性を上げるため、分生子の水分を６〜８％にする必要がある。この操作により、トリコデルマアウレオビリディーの分生胞子が急激に休眠状態になり、劣悪な環境下でも高い保存性を維持できる。【効果】本実験で行った方法でラピリをポット資材として用いると、ハクサイの出芽に好適な環境条件を与え、生育促進機能を持つ菌類の担体として有効であることが考えられた。【選択図】　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
軽量でかつ多孔質な火山礫を担体として、微生物を培養することにより得られる微生物の保存方法。
【請求項２】
吸着種菌が培養された、軽量でかつ多孔質な火山礫である植物の生育促進剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、トリコデルマアウレオビリディー（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　　　ａｕｒｅｏｖｉｒｉｄｅ）による植物生育促進効果を最大限安定して発揮させるために、火山礫（ラピリ）を用い、その多孔質体中に、耐久体細胞である厚膜胞子や分生子を形成させ、顕著な植物生育促進効果を有する微生物の保存方法及び植物生育促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
植物生育促進剤としては、既に、発明者らが出願しているトリコデルマ属の菌が知られている（特開平１１−２７９０１５号）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、これらの菌の中には微生物資材として欠くことの出来ない耐久体細胞である厚膜胞子や分生胞子の形成率の悪いものも多く、栄養体細胞のみの施用では、土壌中の他の微生物による静菌作用や競合を受けるため効果が上がらないことが多い。土壌微生物資材としては、その主体を成す微生物は耐久体細胞を持つことが必要条件となる。また、従来の技術では、形成させた耐久体細胞を木炭やゼオライト等の陽イオン交換容量の大きい資材を吸着体として用いているため、土壌中では容易に離脱化が発生し、安定した効果が得られないことが多い。ゼオライトは数〜数十オングストロームの孔隙が蜂の巣のように分布している多孔質体であり、木炭の孔隙はそれよりもわずかに大きいくらいで、トリコデルマ　アウレオビリディーの分生胞子は直径５〜１０ミクロンであるので、ゼオライトや木炭の孔隙には入り込むことが出来ない。
本発明は、斯かる課題を解決すること目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
従前の技術を克服するためには、劣悪な環境下でも生存可能な耐久体細胞を形成させる、いわば、微生物耐久体細胞の住み処を与えることが必要となり、孔隙中に分生子を包合するサイズを持った多孔質体が必要である。ラピリの孔隙は１０〜１００ミクロンであるので、トリコデルマ　アウレオビリディーの胞子が包含できるサイズを有している。
そこで本発明の要旨を、以下に掲げる構成とした。
請求項１記載の発明の要旨は、軽量でかつ多孔質な火山礫（ラピリ）を担体として、微生物を培養することにより得られる微生物の保存方法に存する。
請求項２記載の発明の要旨は、吸着種菌が培養された、軽量でかつ多孔質な火山礫である植物の生育促進剤に存する。
【０００５】
【発明の実施の形態】
すでに発明者らは、発酵米糠中のフェノール化合物がある種の糸状菌の胞子形成を著しく促進する現象を見い出している（実願２００２−１８６３、実用新案出願中）。これら発酵米糠を含む培地に、植物生育促進効果を示すトリコデルマアウレオビリディーの分生胞子をラピリに担体として定着させることにより、ラピリ多孔質内に耐久体細胞を包含する吸着による付着ではないラピリ孔内に包含された安定した微生物資材を供給することが出来る。
【０００６】
上記のごとき構成では、ラピリを担体として、植物生育促進菌であるトリコデルマ　アウレオビリディーの分生胞子を発酵米糠とともに培養することによりラピリ孔隙中で分生胞子を形成することが出来る。
【０００７】
このように、ラピリで固定化されたトリコデルマ　アウレオビリディーの分生胞子は約４７〜４８％の水分を含有しており、培養物自体は培養期間の長短にもよるが１０〜１５％の水分を含んでいる。ラピリにより固定化された分生胞子は、このような高い水分含量では、再発芽増殖が行われ、栄養体細胞になってしまうので、菌の保存性を上げるため、分生子の水分を６〜８％にする必要がある。この操作により、トリコデルマ　アウレオビリディーの分生胞子が急激に休眠状態になり、劣悪な環境下でも高い保存性を維持できる。
【０００８】
また、ラピリで固定したトリコデルマ　アウレオビリディーの分生胞子の特徴は、低温乾燥した場合、水分の放出速度はゼオライトに固定化（吸着）させた分生胞子の区に比較して吸湿速度は速い。また、その処理後、室温にて１２０時間放置しても、ラピリはゼオライトに比べて少ない吸湿で水分平衡に達する。つまり、ラピリで固定化された分生胞子に比較して水分を放出しやすく吸湿しにくい状態、いわゆる低い水分含量で外部との水分含平衡に達することが出来る。一般にラピリの特徴としては多量の水分を与えた時の高い吸水率が言われているが、微生物の生存に必要な微量の水分に関しては、吸湿が遅く、蒸発が低温状態で早いことが明らかになった。この特徴は、トリコデルマ　アウレオビリディーのみならず多くの胞子を形成する微生物に対して応用の効く方法といえる。その実証例を以下に示す。
【０００９】
【表１】
多種多孔質資材を培養基材として用いた製造直後の水分減少量
2004016122.tif 000002
【００１０】
次に図面について説明する。
図１〜図３は、多種多孔質資材を微生物固定化担体として用いた場合の耐久体細胞の様子を示す図である。図１はラピリ孔隙内に植物生育促進糸状菌（「ＰＧＰＦ」と称する。）であるトリコデルマ　アウレオビリディーの耐久体細胞（分生胞子）が孔内で固定化されている様子を示す。図２はゼオライト孔隙間にＰＧＰＦ（植物生育促進糸状菌）であるトリコデルマ　アウレオビリディーの耐久体細胞（分生胞子）が孔外に吸着化されている様子（ゼオライトの孔径が分生子より小さい）を示す。図３は、木炭孔隙間にＰＧＰＦ（植物生育促進糸状菌）であるトリコデルマ　アウレオビリディーの耐久体細胞（分生胞子）が孔外に吸着化されている様子（ゼオライトの孔径よりさらに細く、分生子は吸着されているのみ）を示す。
【００１１】
図４は、土壌微生物およびラピリを含む各ポット資材におけるハクサイ苗の生育を示す図である。各鉢は上段が左から、山砂区、ラピリＰＧＰＦ培土区、下段が左からラピリ拮抗菌Ｔ培土区、ラピリ培土区で、いずれも病原菌の接種後、２５℃の人工気象器で１７日間栽培した。
【００１２】
図５〜１０は、菌糸の付着状態を示す顕微鏡写真である。
図５および図６は、ゼオライトの様子を示し、図５を参照すると、粒子表面付近に菌糸が増殖していることがわかる。また、図６を参照すると、孔径が小さく穴の内部には菌糸の伸長はみられず表面付近にほとんどの菌糸が増殖伸長していることがわかる。
図７および図８は、木炭の様子を示し、図７を参照すると、胞子は木炭に吸着しているのみで木炭孔中に入り込んでいないことがわかる。また、図８を参照すると、菌糸の増殖伸長はラピリほどよくないことがわかる。
図９および図１０は、ラピリの様子を示し、図９を参照すると、粒子表面付近全体に菌糸が増殖伸長している様子から、ゼオライトに比較してきわめて菌体増殖が良好で全体がマユ状になっていることがわかる。また、図１０を参照すると、ゼオライトの孔径より大きく孔穴の中に胞子、菌糸が入り込みラピリ内部にも密に菌体増殖が認められる。
【００１３】
（実施例）
植物生育促進菌（トリコデルマ　アウレオビリディー）
具体的にはＰＧＰＦを滅菌化された発酵米糠に接種し、３週間３０℃にて静置培養を行った。発酵米糠は、雑食性酵母であるＨａｎｓｅｎｕｌａ　　　　　　ａｎｏｍａｌａを増殖させたものである。発酵米糠は乾熱殺菌後に１０％以下に水分を調整し、６０％水道水を拡散したものを培地とし、オートクレープ後、無菌的に接種された。３週間後のＰＧＰＦのＣＦＵ値（コロニー形成率）は１．７×１０７／ｇであった。発酵米糠を用いることにより多量の　　　　　　　　　Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ａｕｒｅｏｖｉｒｉｄｅの分生胞子を確認した。この種菌１に対してラピリを容積比２で混合し、ラピリの中での分生胞子の形成を行った。さらに、２週間の培養によりラピリ１ｇ中にはＰＧＰＦ８．３×１０５／ｇを確認した。これらのラピリに固定化されたＰＧＰＦは、水分７％で１８０日の室内保管においてその水分は変動はほとんどなく、その発芽率は９７．８％と極めて高く維持した。ラピリを固定体担体とすることによりその保存性は向上した。一方、前述の発酵米糠培養されたＰＧＰＦ種菌は培土で用いる目的で、種菌：ラピリ：培土の比を０．５：０．５：１（容量比）で混合し、ＰＧＰＦラピリ培土とした。本培土中にはＰＧＰＦが３．０×１０５／ｇ存在した。
【００１４】
これらを用いて以下の栽培試験を実施した。
【００１５】
植物の生育に有用であるＰＧＰＦを吸着したラピリと培土を混合したポット資材でハクサイを栽培し、土壌病害抑止効果と生育促進効果を検討した。方法は、ハクサイ苗立枯病菌Ｐｙｔｈｉｕｍ　ｕｌｔｉｍｕｍを殺菌山砂６４ｇにＶ８ジュース溶液２４ｍｌ（Ｖ８ジュース２００ｍｌ，炭酸カルシウム３ｇ，ブドウ糖２０ｇ，蒸留水８００ｍｌ）で３日間（２５℃）培養し、生育した菌体を含む培地全体を接種源とした。試験に供した培土は、黒土を用い、ラピリにＰＧＰＦを吸着されたものを用いた。また、培土のみの区および山砂区（いずれも　　　　Ｐｙｔｈｉｕｍ接種区と無接種区）を設け、対照とした。
【００１６】
病原菌と土壌糸状菌の混和は、病原菌：各種培土あるいは山砂＝１：１２（Ｗ／Ｗ）とし、病原菌と各種培土を混和してポリエチレン袋にいれて密封し、４日間室温に保ったのち、ハクサイを播種し栽培した。
【００１７】
ハクサイの栽培と発病程度の調査は、供試土壌をプラスチック製の鉢（４号鉢，直径５５ｍｍ，高さ１１０ｍｍ）につめ、１鉢あたり３０粒ずつハクサイ（品種：春蒔極早生　タキイ）を播種し２７℃で１２ｈｒ照明（照度）の人工気象器で栽培した。
【００１８】
各区について４ポットずつもちいた。子葉が表面から離れているものを出芽とみなし、播種後、３，６，１７日目に出芽と出芽後の立枯れ数を調査した。
【００１９】
播種から３日後には、ラピリＰＧＰＦ培土区のハクサイ出芽率は、ラピリを含まない区よりもいずれもかなり高率となった（表２）。ラピリはハクサイの出芽に好適な環境を与えているものと推察される。６日後にはラピリを含まない区でも高率となったため、差は見られなくなった。
【００２０】
【表２】
各種培土におけるハクサイの出芽率
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【００２１】
ハクサイの生育は区による違いが見られた。すなわち播種から１週間後ころからラピリＰＧＰＦ培土区の生育が他の区と比べて良好となり、１７日後には顕著な差となった（図４の上段、右）。この生育の差は、加えた菌の影響によるものと考えられる。また、培土の生育も、山砂区およびＰＧＰＦと同種の農業用拮抗糸状菌として知られるトリコデルマ　ビリディをラピリに吸着させた区（ラピリ拮抗菌Ｔ培土区）及びラピリ培土区と比べるとやや良好であった。
【００２２】
【発明の効果】
以上のことから、本実験で行った方法でラピリをポット資材として用いると、ハクサイの出芽に好適な環境条件を与え、生育促進機能を持つ菌類の担体として有効であることが考えられた。
【図面の簡単な説明】
【図１】多種多孔質素材へのＰＧＰＦ（植物育成促進糸状菌）胞子の固定化を示す、走査型電子顕微鏡写真概念図である。
【図２】多種多孔質素材へのＰＧＰＦ（植物育成促進糸状菌）胞子の固定化を示す、走査型電子顕微鏡写真概念図である。
【図３】多種多孔質素材へのＰＧＰＦ（植物育成促進糸状菌）胞子の固定化を示す、走査型電子顕微鏡写真概念図である。
【図４】土壌微生物およびラピリを含む各ポット資材における白菜苗の生育を示す図である。
【図５】菌糸の付着状態を示す顕微鏡写真である。
【図６】菌糸の付着状態を示す顕微鏡写真である。
【図７】菌糸の付着状態を示す顕微鏡写真である。
【図８】菌糸の付着状態を示す顕微鏡写真である。
【図９】菌糸の付着状態を示す顕微鏡写真である。
【図１０】菌糸の付着状態を示す顕微鏡写真である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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