(57)【要約】【課題】多孔性膜の着脱が容易で、他種類の試料を同時に固相可能なタンパク固相用チップを提供すること。【解決手段】多孔性膜をその間に挟持するための平坦面をそれぞれ有する第１および第２テンプレートを備え、第１テンプレートはその平坦面に凹部と複数の第１貫通孔とを有し、第２テンプレートはその平坦面に前記凹部に圧入可能な凸部と第１貫通孔に対応する複数の第２貫通孔とを有し、第１および第２テンプレートを重ねて凹部に凸部を圧入するとき、対応する第１および第２貫通孔は互いに同軸になり、かつ、第１および第２テンプレートが離脱可能に固着される。【選択図】　図８
2004020437.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
多孔性膜をその間に挟持するための平坦面をそれぞれ有する第１および第２テンプレートを備え、第１テンプレートはその平坦面に凹部と複数の第１貫通孔とを有し、第２テンプレートはその平坦面に前記凹部に圧入可能な凸部と第１貫通孔に対応する複数の第２貫通孔とを有し、第１および第２テンプレートを重ねて凹部に凸部を圧入するとき、対応する第１および第２貫通孔は互いに同軸になり、かつ、第１および第２テンプレートが離脱可能に固着されるタンパク固相用チップ。
【請求項２】
第１および第２テンプレートは多孔性膜と接触する接触領域をそれぞれ有し、凹部と凸部は各接触領域を取り囲むように形成され、複数の第１および第２貫通孔は各接触領域内に穿孔されてなる請求項１記載のタンパク固相用チップ。
【請求項３】
凸部と凹部は、抜き取り分解可能なしまりばめのはめあい公差を有する請求項１記載のタンパク固相用チップ。
【請求項４】
請求項１記載のタンパク固相用チップを組立てる組立装置であって、第１および第２テンプレートを重ねて凹部と凸部とが対向するように収容する収容部材と、収容された第１および第２テンプレートを加圧して凹部に凸部を圧入して両テンプレートを互いに固着させる加圧部材からなるチップ組立装置。
【請求項５】
請求項１記載のタンパク固相用チップを分解する分解装置であって、第１テンプレートを支持する支持部材と、支持された第１テンプレートから第２テンプレートを引き離す方向に第２テンプレートを加圧する加圧部材とを備えるチップ分解装置。
【請求項６】
多孔性膜を装填した請求項１記載のタンパク固相用チップを第１テンプレートを上にして水平に収容するチップ収容部と、第２テンプレートの下側から第１貫通孔と多孔性膜と第２貫通孔を介して吸気する吸引口とを備え、タンパク質含有液が第１貫通孔に収容されるとき、吸引口からの吸引によりタンパク質を多孔性膜上に固相させる固相試料調製装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、タンパク固相用チップ，チップ組立装置，チップ分解装置及び試料調製装置に関し、とくに、試料中に含まれる微量のタンパク質を検出する装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】
臨床標本や疾患部位の切除サンプルには種々のタンパク質が混在している。そのサンプル中に微量に含まれる特定のタンパク質を検出する代表的な方法として、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ法）がある。
そして、ＥＬＩＳＡ法を簡単にし迅速性をもたせたものとして、イムノコンセントレーション法が知られている。この方法は、予め表面に固相化抗体を固定した多孔性膜（メンブレン）に検体を滴下して膜上で抗原抗体反応を生じさせ、さらに検出試薬を滴下して呈色反応を生じさせて、次に洗浄液を滴下して呈色を明瞭化するというものである（例えば、特開平１−２２３３５２１号公報、特開２０００−３２９７６６号公報参照）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、抗体を予め固定した多孔性膜を準備することは、多項目の測定を実施する場合には、項目数だけの種類の多孔性膜あるいは固相プレートを準備する必要があり、測定の効率が低下するという問題がある。
この発明はこのような事情を考慮してなされたもので、１枚の多孔性膜に複数種類の試料を同時に固相形成し、同一試料の多項目のタンパク定量や、多試料の同一項目のタンパク定量を効率的に測定できるタンパク固相用チップ，チップ組立装置，チップ分解装置および試料調製装置を提供するものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
この発明は、多孔性膜をその間に挟持するための平坦面をそれぞれ有する第１および第２テンプレートを備え、第１テンプレートはその平坦面に凹部と複数の第１貫通孔とを有し、第２テンプレートはその平坦面に前記凹部に圧入可能な凸部と第１貫通孔に対応する複数の第２貫通孔とを有し、第１および第２テンプレートを重ねて凹部に凸部を圧入するとき、対応する第１および第２貫通孔は互いに同軸になり、かつ、第１および第２テンプレートが離脱可能に固着されるタンパク固相用チップを提供するものである。
【０００５】
【発明の実施の形態】
この発明のタンパク固相用チップにおいて、第１および第２テンプレートは多孔性膜と接触する接触領域をそれぞれ有し、凹部と凸部は各接触領域を取り囲むように形成され、複数の第１および第２貫通孔は各接触領域内に穿孔されることが好ましい。これによって、多孔性膜が平坦面に一様に加圧され、複数の第１又は第２貫通孔により良好なウェルが形成される。
【０００６】
複数の第１および第２貫通孔は円形よりも長円形であることが好ましい。これによって、第１および第２貫通孔の配列密度を円形よりも高くすることができる。
第１および第２貫通孔はマトリックス状に配列されることが好ましい。
これによって、第１又は第２貫通孔により形成されるウェルへの試料の自動分注が容易になる。
凸部と凹部は、抜き取り分解可能なしまりばめ、例えばｐ６／Ｈ７のはめあい公差を有することが好ましい。
これによって凹部へ凸部を離脱可能に圧入することができる。
【０００７】
また、この発明は、上記タンパク固相用チップを組立てる組立装置であって、第１および第２テンプレートを重ねて凹部と凸部とが対向するように収容する収容部材と、収容された第１および第２テンプレートを加圧して凹部に凸部を圧入して両テンプレートを互いに固着させる加圧部材からなるチップ組立装置を提供するものである。
【０００８】
さらに、この発明は、上記タンパク固相用チップを分解する分解装置であって、第１テンプレートを支持する支持部材と、支持された第１テンプレートから第２テンプレートを引き離す方向に第２テンプレートを加圧する加圧部材とを備えるチップ分解装置を提供するものである。
【０００９】
また、この発明は、多孔性膜を装填した上記のタンパク固相用チップを第１テンプレートを上にして水平に収容するチップ収容部と、第２テンプレートの下側から第１貫通孔と多孔性膜と第２貫通孔を介して吸気する吸引口とを備え、タンパク質含有液が第１貫通孔に収容されるとき、吸引口からの吸引によりタンパク質を多孔性膜上に固相させる固相試料調製装置を提供するものである。
【００１０】
第１および第２テンプレートの間に挟持して使用する疎水性の多孔性膜としては、タンパクと疎水結合することができるもの、具体的には、ＰＶＤＦ（ポリビニリデンフロライド）疎水性メンブレン、ナイロン（荷電処理済み）メンブレン、ニトロセルロース等が挙げられる。
疎水性多孔性膜の孔は、０．１〜１０μｍ、好ましくは０．１〜０．５μｍである。
【００１１】
タンパクを疎水性多孔性膜上に固相形成させる場合、疎水性多孔性膜の孔がタンパクより大きくても、タンパクは膜との間の疎水性結合などにより保持されるので、タンパクは疎水性多孔性膜を通過しない。
なお、該疎水性多孔性膜は、メタノールへ浸漬するなどの初期化処理を行ったものを用いるのが好ましい。
第１および第２テンプレートは、塩化ビニール樹脂やポリエチレン樹脂のような耐薬品性樹脂を用いて形成されることが好ましい。
【００１２】
実施例
以下、図面に示す実施例に基づいてこの発明を詳述する。これによってこの発明が限定されるものではない。
タンパク固相用チップ
図１はこの発明のタンパク固相用チップを構成する上テンプレートの上面図、図２は図１のＡ−Ａ矢視断面図、図３は上テンプレートの下面図、図４は図１のＢ−Ｂ矢視断面図である。
【００１３】
これらの図に示すように、長方形の板状（７０ｍｍ×５０ｍｍ×厚さ７ｍｍ）の上テンプレート１には、マトリックス状に４行１０列に配列された４０個の長円形の貫通孔２が穿孔されている。１つの貫通孔２は約１３ｍｍ２の断面積を有する。上テンプレート１の下面には４０個の貫通孔２の周囲を１周する幅４ｍｍ、深さ４ｍｍの溝（凹部）４が形成されている。溝４によりその内側に長方形の多孔性膜接触領域３が区画される。また、溝４の底には８つの治具貫通孔５が穿孔されている。
【００１４】
図５はこの発明のタンパク固相用チップを構成する下テンプレートの上面図、図６は図５のＣ−Ｃ矢視断面図、図７は図５のＤ−Ｄ矢視断面図である。
これらの図に示すように、長方形の板状（７０ｍｍ×５０ｍｍ×厚さ３ｍｍ）の下テンプレート１１には、上テンプレート１の貫通孔２に対応する位置にそれぞれマトリックス状に４行１０列に配列された４０個の長円形の貫通孔１２が形成されている。貫通孔１２は貫通孔２（図１）と同じ形状と断面積を有する。
【００１５】
下テンプレート１１の上面には４０個の貫通孔１２の周囲を１周する高さ４ｍｍ、幅４ｍｍの畝状の凸部１４が溝４（図１）に対応する位置に形成される。
凸部１４によりその内側に長方形の多孔性膜設置領域１３が区画される。また、下テンプレート１１の周縁には６つの切り欠き部１５が形成されている。上テンプレート１と下テンプレート１１は塩化ビニール樹脂製である。
【００１６】
図８は、この発明のタンパク固相用チップ２１を示す断面図である。上テンプレート１と下テンプレート１１とは図８のように重ねられ溝４に凸部１４が離脱可能に圧入される。それにより各貫通孔２と各貫通孔１２とが互いに同軸となる。なお、凸部１４の内周面と溝４の対応接触面とは、ｐ６／Ｈ７のはめあい公差を有する。
【００１７】
そして、使用時には、多孔性膜設置領域３と１３との間に長方形状の疎水性多孔性膜２２が装填され凸部１４の溝４への圧入により均一に圧縮される。それによって、多孔性膜２２が各貫通孔２により水密的に区画され、貫通孔２の数だけのウェル（液溜め）Ｗが形成される。
【００１８】
固相試料調製装置
図９はこの発明に係る固相試料調製装置の上面図、図１０は図９のＥ−Ｅ矢視断面図である。
これらの図に示すように装置本体３１はアルミニウム製のブロックからなり、上面に長方形の第１凹部３２と第１凹部３２の底部に長方形の第２凹部３３とを備える。第１凹部３２の底面には第２凹部３３の周縁に長方形の枠状のゴム製弾性ガスケット３７が設けられる。
【００１９】
第２凹部３３は底部に、十字形の溝３４と、底部中心に吸引口３５とを備え、溝３４の溝底は第２凹部の周縁から中心に向かって深くなるように傾斜している。吸引口３５は外部の吸引ポンプ（図示しない）へ接続するために設けられたニップル３６と連通している。
そして、図８に示すように組立てられたタンパク固相用チップ２１は、固相試料調製装置の本体３１の凹部３２の底面ガスケット３７を介して水平に装填される。タンパク固相用チップ２１の各ウェルＷにタンパク含有試料液が注入又は滴下された後、ニップル３６に接続された図示しない吸引ポンプが作動する。
【００２０】
それによって、チップ２１が凹部３２の底面へガスケット３７を介して気密的に吸着されると共に、各ウェルＷ内の試料液が多孔性膜２２を介して吸引され、測定目的のタンパクが膜２２に固相形成される。この場合、チップ２１を凹部３２の底面へ押し付けて固定する固定部材を本体３１に設けてもよい。
【００２１】
次に、各ウェルＷに標識化された抗体が注入され、特定のタンパクと結合した後、洗浄処理が行われる。それによって検出対象タンパクと標識物質の免疫複合体が多孔性膜２２上に調製される。次にチップ２１が分解され、多孔性膜２２が取り出され、多孔性膜２２の上に固相された試料が光学的に測定され、目的とするタンパクの量が算出される。
【００２２】
チップ組立て装置
図１１、図１２はこの発明のチップ組立装置を構成する組立て部材５１と加圧部材４１をそれぞれ示す斜視図である。図１１に示すように、組立て部材５１はアルミニウム製の平板の上面に上テンプレート１（図１）と下テンプレート（図５）を収容して組立てるための長方形の凹部５２を有する。凹部５２は平坦な底５４を備える。組立て部材５１は裏面に位置決め用の２組の凹部５３ａ，５３ｂを備える。
【００２３】
図１２に示すように加圧部材４１は固定板４２の上に、対称に設置された２つの加圧クランプ４３と、平行に設置された２つのガイド板４５とを備える。２つのガイド板４５からそれぞれ位置決めピン４５ａ，４５ｂが垂直に突出している。なお、この実施例では加圧クランプ４３には市販のもの（（株）ミスミ製ＨＨ４５０型）を使用している。加圧クランプ４３はトグル機構４４を備え、ハンドル４６を矢印Ｆの方向へ押さえることにより、アーム４７が矢印Ｇ方向に回転し、ゴム製のヘッド４８が所定位置で保持されるようになっている。
【００２４】
このような構成において、図８に示すチップ２１を組立てる手順を説明する。まず、下テンプレート１１（図５）の多孔性膜設置領域１３に所望の疎水性多孔性膜２２（図８）を設置した後、下テンプレート１１を図１３に示すように組立て部材５１の凹部５２に挿入し、底５４に水平に設置する。
【００２５】
次に、図１４に示すように上テンプレート１（図１）を溝４を下にして凹部５２に水平に挿入し、下テンプレート１１の上に重ねる。次に、図１５に示すように長方形の平板状の押さえ板５４を凹部５２に挿入して上チップ１の上に重ねる。
【００２６】
次に組立て部材５１を図１２に示す加圧部材４１の２枚のガイド板４５の上にはめ込む。このとき、組立て部材５１の裏面の２組の凹部５３ａ，５３ｂにそれぞれ２組の位置決めピン４５ａ，４５ｂを挿入する。
【００２７】
次に図１２に示す２つの加圧クランプ４３の各ハンドル４６を矢印Ｆの方向へ押さえると、各ヘッド４８が矢印Ｇ方向に回転し、図１６に示すように押さえ板５４を加圧し、その加圧状態が保持される。それによって下テンプレート１１の凸部１４が上テンプレート１の溝４に圧入される。それに伴って、多孔性膜２２が上テンプレート１と下テンプレート１１との間に一様な圧力で挟持される。このようにして図８に示すタンパク固相用チップ２１が完成する。
【００２８】
チップ分解装置
図１７と図１８はこの発明のチップ分解装置を構成するチップ支持部材６１と、押さえ板６２とを示す斜視図である。
図１７に示すようにチップ支持部材６１は長方形の貫通窓６５を有し、裏面に２組の位置決め用凹部６４ａ，６４ｂを備える。貫通窓６５は内壁から水平に突出する６つの係止爪６３を備える。また、押さえ板６２は表面に垂直に立設する８本の押出しピン６４を備える。
【００２９】
このような構成においてチップを分解する手順を説明する。図８に示すように組立てられたチップ２１の上テンプレート１の６つの治具貫通孔５のそれぞれに押さえ板６２の押出しピン６４が挿入されるように、チップ２１の上に押さえ板６２を重ね、チップ２１を押さえ板６２で保持する。
【００３０】
そして、チップ支持部材６１の貫通窓６５へ押さえ板６２を図１９に示すようにチップ２１を下にして水平に挿入する。この時、６つの係止爪６３は下テンプレート１１の切り欠き部１５を通過して上テンプレート１の下面の周縁に係止する。
【００３１】
次に、チップ支持部材６１を図１２に示す加圧部材４１の２枚のガイド板４５の上にはめ込む。このときチップ支持部材６１の裏面の２組の凹部６４ａ，６４ｂにそれぞれ２組の位置決めピン４５ａ，４５ｂを挿入する。
【００３２】
次に図１２に示す２つの加圧クランプ４３の各ハンドルを矢印Ｆの方向へ押さえると、各ヘッド４８が矢印Ｇ方向に回転し、押さえ板６２を加圧し、その加圧状態が保持される。同時に、下テンプレート１１の凸部１４が８本の押し出しピン６４によって上テンプレート１の溝４から押し出される。それによって下テンプレート１１が上テンプレート１から分離され、下方へ落下する。そして、落下した下テンプレート１１から多孔性膜２２が取り出される。
【００３３】
タンパクの測定
この発明を用いたタンパクの測定例を以下に詳述する。
なお、この測定例では、１つのタンパク固相用チップ２１（図８）を用いて１０検体にそれぞれ含まれるＣＤＫ１（Ｃｙｃｌｉｎ　Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｋｉｎａｓｅ　１）の発現量の定量を行っている。
なお、ＣＤＫ１とは、細胞周期の進行を制御する酵素タンパクである。
【００３４】
（ａ）試薬の調製
まず、次のような試薬と検体を用意する。
（１）　ローディングバッファー
ＴＢＳ（：Ｔｒｉｓ　Ｂｕｆｆｅｒ　Ｓａｌｉｎｅ）
（組成：２５ｍＭトリス（ｐＨ７．４）と１５０ｍＭ塩化ナトリウム水溶液）
（２）　スタンダード試薬
リコビナントＣＤＫ１抗原を０．００５％ＮＰ−４０（界面活性剤）と２．５μｇ／５０μＬ　ＢＳＡを含むＴＢＳ溶液で希釈し、ＣＤＫ１抗原濃度が５０ｎｇ／ｍＬ，１２５ｎｇ／ｍＬ，　２５０ｎｇ／ｍＬ，３９０ｎｇ／ｍＬ，５００ｎｇ／ｍＬの５段階の濃度のものを用意する。
（３）　検体（１０検体）
細胞や組織から採取された検体をホモジナイズ（均質化）した後の生成物で、０．００５％以下のＮｏｎｉｄｅｔ　Ｐ−４０（界面活性剤）を含むＴＢＳ溶液で総タンパク量が２．５μｇ／５０μＬになるように調製済みのもの。
（４）　コントロール検体（２検体）
白血病由来の培養細胞ＨＬ６０とＪｕｒｋａｔを使用して、０．００５％以下のＮＰ−４０（界面活性剤）を含むＴＢＳ溶液で総タンパク量が２．５μｇ／５０μＬになるように調製したもの。
（５）　バックグラウンド溶液
ＣＤＫ１で濃度が０．０μｇ／５０μＬのもの（０．００５％以下のＮＰ−４０（界面活性剤）と２．５μｇ／５０μＬのＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）を含むＴＢＳ溶液で希釈したもの）
（６）　洗浄液
ＴＢＳ（：Ｔｒｉｓ　Ｂｕｆｆｅｒ　Ｓａｌｉｎｅ）
（組成：２５ｍＭトリス（ｐＨ７．４）と１５０ｍＭ塩化ナトリウム水溶液）
（７）　ブロッキング試薬
４％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）のＴＢＳ溶液
（８）　一次抗体試薬
４μｇ／ｍＬのウサギ抗体ＣＤＫ１抗体（８０％ブロッキング剤（ブロックエース　大日本製薬）で希釈したもの）
（９）　二次抗体試薬
４μｇ／ｍＬのビオチン化抗ウサギ抗体（１％ＢＳＡとＴＢＳ溶液で調整したもの）
（１０）　ＦＩＴＣ標識試薬
１０μｇ／ｍＬの　ＦＩＴＣ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）標識ストレプトアビジン　と１％ＢＳＡとＴＢＳ溶液で希釈したもの）
（１１）　すすぎ試薬
２０％メタノール
【００３５】
（ｂ）測定手順
次の手順で測定を行う。
［１］　疎水性多孔性膜２２として１枚のＰＶＤＦメンブレンを準備し、それをメタノールへ浸す。
［２］　（１）のローディングバッファーへ［１］のメンブレンを浸す。
［３］　下テンプレート１１１へ［１］のメンブレンをセットし、上テンプレート１をその上に置く。
［４］　チップ組立装置を用いて、メンブレンをはさみ込んだチップ２１を組み立てる。
［５］　チップ２１を固相試料調製装置３１（図９）へセットする。ここで、チップ２１の４０個のウェルＷを、図２０に示すように、スタンダート系列グループＧｓ，バックグラウンドグループＧｂ，コントロール検体グループＧｊ，Ｇｈ，および検体グループＧ１〜Ｇ１０の各グループに予め組分けする。
［６］　５段階の濃度をもつ（２）のスタンダード試薬の各々をグループＧｓの各２個のウェルＷへ、１ウェル当たり５０μＬずつ分注する。
［７］　（３）の１０種類の検体の各々をグループＧ１〜Ｇ１０の各２個のウェルＷへ１ウェル当たり５０μＬずつ分注する。
［８］　（４）の２種類のコントロール検体をグループＧｊ，Ｇｈの各２個のウェルＷへ１ウェル当たり５０μＬずつ分注する。
［９］　（５）のバックグラウンド溶液をグループＧｂの各ウェルＷへ５０μＬずつ分注する。
［１０］　分注終了後、吸引口３５から陰圧２５０ｍｍＨｇで約３０秒吸引し、それによって、メンブレンへタンパクを固相化する。
［１１］　チップ２１の全てのウェルＷへ洗浄液（６）を５０μＬずつ分注し、陰圧５００ｍｍＨｇで約１５秒吸引し、洗浄する。
［１２］　チップ２１の全てのウェルＷへブロッキング液（７）を５０μＬずつ分注し、約１５分静置する。
［１３］　陰圧５００ｍｍＨｇで約１５秒吸引する。
［１４］　チップ２１の全てのウェルＷへ一次抗体試薬（８）を５０μＬずつ分注し、約３０分静置する。
［１５］　陰圧５００ｍｍＨｇで約１５秒吸引する。
［１６］　チップ２１の全てのウェルＷへ洗浄液（６）を５０μＬずつ分注し、陰圧５００ｍｍＨｇで約１５秒吸引し、洗浄する。これを５回繰返す。
［１７］　チップ２１の全てのウェルＷへ二次抗体試薬（９）を５０μＬずつ分注し、約３０分静置する。
［１８］　陰圧５００ｍｍＨｇで約１５秒吸引する。
［１９］　チップ２１の全てのウェルＷへ洗浄液（６）を５０μＬずつ分注し、陰圧５００ｍｍＨｇで約１５秒吸引し、洗浄する。これを３回繰返す。
［２０］　チップ２１の全てのウェルＷへＦＩＴＣ標識試薬（１０）を５０μＬずつ分注し、約３０分静置する。
［２１］　陰圧５００ｍｍＨｇで約１５秒吸引する。
［２２］　チップ２１の全てのウェルＷへ洗浄液（６）を５０μＬずつ分注し、陰圧５００ｍｍＨｇで約１５秒吸引し、洗浄する。これを５回繰返す。
［２３］　チップ２１を装置３１から取り出す。
［２４］　チップ２１をチップ分解装置によって分解し、メンブレンを取り出す。
［２５］　取り出したメンブレンをすすぎ試薬（１１）で軽くすすぐ。
［２６］　２０分間温室で乾燥し、
［２７］　蛍光読み取り装置によって蛍光強度を測定する。
【００３６】
（ｃ）結果
図２０のグループＧｂで固相されたバックグラウンド溶液の平均蛍光強度を補正用のバックグラウンド蛍光強度Ｉｂとし、また標準偏差の４倍の値をこの測定の検出下限Ｉｍｉｎとすると、実測値から
Ｉｂ＝１７６．３（カウント／ｍｍ２）
Ｉｍｉｎ＝３５．４（カウント／ｍｍ２）
となる。
そこで、スタンダード系列グループＧｓで固相されたスタンダード試薬の蛍光強度ＩｓからＩｂを差し引いて、正味の蛍光強度Ｉｓｏを算出し、図２２に示す検量線を作成する。ここで、スタンダート試薬（２）の１ｎｇ／５０μＬが、検体の含有するＣＤＫ１を認識できる量を１Ｕ／５０μＬとする。
１０検体と２つのコントロール検体について、それぞれ２ウェル毎の平均蛍光強度を算出し、Ｉｂを差し引いて正味の蛍光強度を算出する。その算出結果から図２２の検量線を用いて、各検体のＣＤＫ１含有濃度を算出する。その算出結果を図２１に示す。
なお、Ｉｍｉｎ以下の正味蛍光強度のものは、図２１においてＮ・Ｄ（測定不可）としている。また、コントロール検体において、ＨＬ６０は１５０〜２５０カウント／ｍｍ２，Ｊｕｒｋａｔは３８０〜５５０カウント／ｍｍ２であることが既知であり、図２１でのＨＬ６０やＪｕｒｋａｔはその範囲内にあるので、この測定は正しく行われたものと判断される。
【００３７】
【発明の効果】
この発明によれば、凹部に凸部を圧入するだけで疎水性の多孔性膜が第１および第２テンプレートの間に離脱可能に挟持され複数のウェルを形成できるので、多孔性膜の交換が容易で、かつ、多種類の試料を同時に固相可能なタンパク固相用チップを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】この発明のタンパク固相用チップの上テンプレートの上面図である。
【図２】図１のＡ−Ａ矢視断面図である。
【図３】図１に示す上テンプレートの下面図である。
【図４】図１のＢ−Ｂ矢視断面図である。
【図５】この発明のタンパク固相用チップの下テンプレートの上面図である。
【図６】図５のＣ−Ｃ矢視断面図である。
【図７】図５のＤ−Ｄ矢視断面図である。
【図８】この発明のタンパク固相用チップの組立断面図である。
【図９】この発明の試料調製装置の上面図である。
【図１０】図９のＥ−Ｅ矢視断面図である。
【図１１】この発明のチップ組立装置の要部斜視図である。
【図１２】この発明のチップ組立分解装置の要部斜視図である。
【図１３】この発明のチップの組立手順を示す説明図である。
【図１４】この発明のチップの組立手順を示す説明図である。
【図１５】この発明のチップの組立手順を示す説明図である。
【図１６】この発明のチップの組立手順を示す説明図である。
【図１７】この発明のチップ分解装置の要部斜視図である。
【図１８】この発明のチップ分解装置の要部斜視図である。
【図１９】この発明のチップ分解装置の動作説明図である。
【図２０】この発明を用いたタンパクの測定例におけるチップのウェルのグループ分けを説明する説明図である。
【図２１】
この発明を用いたタンパクの測定結果を示す説明図である。
【図２２】
この発明を用いたタンパクの測定における検量線を示す説明図である。
【符号の説明】
１　上テンプレート
２　貫通孔
３　多孔性膜接触領域
４　溝
５　貫通孔
１１　下テンプレート
１２　貫通孔
１３　多孔性膜接触領域
１４　凸部
２２　多孔性膜
Ｗ　ウェル
【図１】
2004020437.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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