(57)【要約】【課題】消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進作用を有する剤及び飲食品を提供する。【解決手段】乳蛋白質の加水分解物を有効成分として含有する消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進剤、並びに乳蛋白質の加水分解物を配合したことを特徴とする消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進作用を有する飲食品であり、乳蛋白質の加水分解物の分解率が１０％以上であること、乳蛋白質がカゼイン又は乳清蛋白質であること、乳清蛋白質がα−ラクトアルブミンであること、並びに乳蛋白質の加水分解物が、パンクレアチン、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｏｒｙｚａｅ）由来のプロテアーゼ、及びストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇｒｉｓｅｕｓ）由来のプロテアーゼから成る群から選ばれる１又は２以上のプロテアーゼにより加水分解されたものであることを望ましい態様としている。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳蛋白質の加水分解物を有効成分として含有する消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進剤。
【請求項２】
乳蛋白質の加水分解物の分解率が１０％以上である請求項１に記載の消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進剤。
【請求項３】
乳蛋白質がカゼイン又は乳清蛋白質である請求項１又は請求項２に記載の消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進剤。
【請求項４】
乳清蛋白質がα−ラクトアルブミンである請求項３に記載の消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進剤。
【請求項５】
乳蛋白質の加水分解物が、パンクレアチン、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｏｒｙｚａｅ）由来のプロテアーゼ、及びストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇｒｉｓｅｕｓ）由来のプロテアーゼから成る群から選ばれる１又は２以上のプロテアーゼにより加水分解されたものである請求項１乃至請求項４のいずれかに記載の消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進剤。
【請求項６】
乳蛋白質の加水分解物を配合したことを特徴とする消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進作用を有する飲食品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、糖類の吸収能の未熟な又は低下した乳幼児、老人等の糖類の吸収性を向上する作用を有する消化管ホルモンＧＬＰ−２（グルカゴン様ペプチド−２）を分泌促進する消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進剤及び消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進作用を有する飲食品に関する。
【０００２】
更に詳しくは、本発明は、乳蛋白質の加水分解物を有効成分として含有する消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進剤並びに乳蛋白質の加水分解物を配合したことを特徴とする消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進作用を有する飲食品に関するものである。
【０００３】
【従来の技術】
本発明の分泌促進対象であるＧＬＰ−２は、グルカゴン関連の消化管ホルモンの一つである。１９８３年、ハムスターグルカゴン前駆体の全アミノ酸配列が提出され、グルカゴンとアミノ酸配列が類似するＧＬＰ−２の存在が明らかとなった（非特許文献１）。ＧＬＰ−２などのグルカゴン関連ペプチドは、前駆体のプレプログルカゴンとして膵臓あるいは腸管（特に小腸下部）から分泌された後、臓器特異的なプロセッシングを受け、膵Ａ細胞では主にグルカゴンとｇｌｉｃｅｎｔｉｎ−ｒｅｌａｔｅｄ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ｐｅｐｔｉｄｅ、ｍａｊｏｒ　ｐｒｏｇｌｕｃａｇｏｎ　ｆｒａｇｍｅｎｔが生成し、消化管のＬ細胞ではＧＬＰ−１、ＧＬＰ−２、グリセンチン、オキシントモデュリンが生成することが明らかとなっている（非特許文献２）。生理作用については、ＧＬＰ−１では、インスリン、グルカゴン、ソマトスタチン、胃酸の分泌に関与することがすでに知られている（非特許文献２）が、ＧＬＰ−２についても、食事からのグルコース等の糖類の吸収促進効果が最近報告され（非特許文献３）、生理的な意義が認められている。
【０００４】
【非特許文献１】
ベル（Ｇ．Ｉ．Ｂｅｌｌ）ら、「ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）」、１９８３年、第３０４巻、ｐ．３６８
【非特許文献２】
梶沼宏、「ホルモンと臨床」、１９９７年、第４５巻、９２９頁
【非特許文献３】
チーズマン（Ｃ．Ｉ．Ｃｈｅｅｓｅｍａｎ）、「アメリカン・ジャーナル・オブ・フィジオロジー（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ）」、１９９７年、第２７３巻、ｐ．Ｒ１９６５
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
前記従来の技術に開示されているとおり、ＧＬＰ−２について、最近、その有用な生理作用が認められているものの、未だ、これらの生理作用を応用することについての検討は十分になされていない。
【０００６】
本発明は前記現状に鑑みてなされたものであり、ＧＬＰ−２の分泌量を増大させ、糖類の吸収性を向上する等のＧＬＰ−２の有用な生理作用を発揮させる、飲食品にも使用可能な天然物である乳蛋白質由来の加水分解物を有効成分とする新規な消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進作用を有する剤及び飲食品を提供することを課題とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
前記のとおりの状況に鑑み、本発明者らは、天然物中より、消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進作用を有する物質を探索すべく、種々の飲食品にも使用可能な天然物について試験を行なった。
その結果、乳蛋白質の加水分解物が、後記する試験例の結果からも明らかなとおり、ＧＬＰ−２の分泌量を増大させる効果が高いことを見い出し、本発明を完成した。
【０００８】
前記課題を解決する本発明の第一の発明は、乳蛋白質の加水分解物を有効成分として含有する消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進剤である。
また、本発明の第一の発明において、乳蛋白質の加水分解物の分解率が１０％以上であることを望ましい態様としてもいる。
更に、本発明の第一の発明において、乳蛋白質がカゼイン又は乳清蛋白質であることを望ましい態様としてもいる。特に、乳清蛋白質がα−ラクトアルブミンであることを望ましい態様としてもいる。
【０００９】
また、本発明の第一の発明において、乳蛋白質の加水分解物が、パンクレアチン、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｏｒｙｚａｅ）由来のプロテアーゼ、及びストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇｒｉｓｅｕｓ）由来のプロテアーゼから成る群から選ばれる１又は２以上のプロテアーゼにより加水分解されたものであることを望ましい態様としてもいる。
【００１０】
前記課題を解決する本発明の第二の発明は、乳蛋白質の加水分解物を配合したことを特徴とする消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進作用を有する飲食品である。
なお、本発明の第二の発明においても、乳蛋白質の加水分解物の分解率が１０％以上であること、乳蛋白質がカゼイン又は乳清蛋白質であること、特に、乳清蛋白質がα−ラクトアルブミンであること、並びに乳蛋白質の加水分解物が、パンクレアチン、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｏｒｙｚａｅ）由来のプロテアーゼ、及びストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇｒｉｓｅｕｓ）由来のプロテアーゼから成る群から選ばれる１又は２以上のプロテアーゼにより加水分解されたものであることが望ましい。
【００１１】
【発明の実施の形態】
次に、本発明について詳細に説明する。
本発明の消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進作用を有する剤及び飲食品の有効成分である乳蛋白質の加水分解物の調製方法は、次のとおりである。
【００１２】
（蛋白質分解物の調製方法）
原料蛋白質は、乳由来蛋白質であって、カゼイン若しくは乳清蛋白質、又はそれぞれを更に精製分離した蛋白質成分（乳清蛋白質濃縮物（ＷＰＣ）、乳清蛋白質分離物（ＷＰＩ）、α−ラクトアルブミン等）のいずれでもよい。特に市販品を使用できること、及び後記する試験例の結果からも明らかなとおり、消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進作用に優れることから、カゼイン又は乳清蛋白質、特にα−ラクトアルブミンであることが好ましい。また、上記のような乳由来蛋白質は、牛乳、脱脂乳、全脂粉乳、脱脂粉乳、チーズホエーから常法により精製することもできる。
【００１３】
上記のような乳蛋白質を加水分解する方法は、得られる加水分解物がＧＬＰ−２分泌促進作用を有する限り特に制限されないが、例えば、蛋白質を加水分解するプロテアーゼ（蛋白質分解酵素）を用いる方法が挙げられる。
【００１４】
プロテアーゼとしては、例えば、パンクレアチン（例えばパンクレアチンＦ（天野エンザイム社製））、ペプシン、トリプシン、キモトリプシン、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｏｒｙｚａｅ）由来のプロテアーゼ（例えばプロテアーゼＡ「アマノ」（天野エンザイム社製）、スミチームＬＰ（新日本科学社製））、ストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇｒｉｓｅｕｓ）由来のプロテアーゼ（例えばアクチナーゼＡＳ（科研ファルマ社製））等が挙げられ、これらの酵素のいずれか１種又は２種類以上を組み合わせて使用することができるが、後記する試験例の結果からも明らかなとおり、特にパンクレアチン、プロテアーゼＡ「アマノ」が好ましい。また、エンド型プロテアーゼを、エキソ型プロテアーゼと組み合わせて使用することも可能である。これらの酵素を単独あるいは組み合わせて使用し、好ましくは分解率が１０％以上の分解物を調製する。
【００１５】
次に、乳由来蛋白質をプロテアーゼで加水分解する方法を説明する。前記のような原料蛋白質を水又は温湯に分散し、溶解する。該溶解液の濃度は格別の制限はないが、通常、蛋白質換算で５〜１５％前後の濃度範囲にするのが効率性及び操作性の点から望ましい。
【００１６】
前記原料蛋白質を含有する溶液を７０〜９０℃で１５秒間〜１０分間程度加熱殺菌すること、または、膜を用いたマイクロフィルトレーションにより除菌することが、雑菌汚染による変敗防止の点から望ましい。
次いで、前記原料蛋白質を含有する溶液にアルカリ剤又は酸剤を添加し、ｐＨを使用するプロテアーゼの至適ｐＨ又はその付近に調整することが好ましい。本発明の方法に使用するアルカリ剤又は酸剤は、食品又は医薬品に許容されるものであれば如何なるアルカリ剤又は酸剤であってもよい。具体的には、アルカリ剤としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム等を、酸剤としては、塩酸、クエン酸、リン酸、酢酸等を例示することができる。
【００１７】
次いで、前記原料蛋白質溶液にプロテアーゼ溶液を添加する。本発明において用いるプロテアーゼは１種でもよく、２種以上用いてもよい。２種以上の酵素を用いる場合は、それぞれの酵素反応は同時に行ってもよく、別々に行ってもよい。使用するプロテアーゼの量は、反応温度、反応時間を考慮して適宜調整する。
【００１８】
プロテアーゼを添加した溶液を、プロテアーゼの種類に応じて適当な温度、例えば３０〜６０℃、望ましくは４５〜５５℃に保持して乳由来蛋白質の加水分解を開始する。加水分解反応時間は、酵素反応の分解率をモニターしながら、好ましい分解率に達するまで反応を続ける。本発明のＧＬＰ−２分泌促進剤の有効成分である乳由来蛋白質の加水分解物を得るためには、分解率は好ましくは１０％以上、より好ましくは１５％以上、特に好ましくは２０％以上であることが望ましい。また、分解率は、好ましくは４５％以下、より好ましくは４０％以下、特に好ましくは３５％以下であることが望ましい。
なお、蛋白質の分解率の算出方法は次のとおりである。
【００１９】
（蛋白質の分解率の算出方法）
ケルダール法（日本食品工業会編、「食品分析法」、第１０２頁、株式会社光琳、昭和５９年）により試料の全窒素量を測定し、ホルモール滴定法（満田他編、「食品工学実験書」、上巻、第５４７頁、養賢堂、１９７０年）により試料のホルモール態窒素量を測定し、これらの測定値から分解率を次式により算出する。
【００２０】
【数１】
分解率（％）＝（ホルモール態窒素量／全窒素量）×１００
【００２１】
なお、本発明に使用される乳蛋白質及びその加水分解物の蛋白質相当量については、前記ケルダール法により求められる乳蛋白質及びその加水分解物の全窒素量より、次式により算出した。
【００２２】
【数２】
蛋白質相当量＝全窒素量×６．３８（乳類の窒素−蛋白質換算係数）
【００２３】
前記乳類の窒素−蛋白質換算係数は、文献（香川監修、「五訂食品成分表２００１」、第１４頁、女子栄養大学出版部、平成１３年４月）に記載の値を使用した。
【００２４】
酵素反応の停止は、加水分解液中のプロテアーゼの失活により行われ、常法による加熱失活処理により実施することができる。加熱失活処理の加熱温度と保持時間は、使用したプロテアーゼの熱安定性を考慮し、十分に失活できる条件を適宜設定することができるが、例えば、８０〜１３０℃の温度範囲で２秒間〜３０分間の保持時間で行うことができる。
【００２５】
本発明で使用する乳蛋白質原料及びその製造方法は、食品用として通常広く用いられているものである。したがって、調製した分解物の安全性及び毒性のレベルは、市販の食品用の蛋白質分解物と同等である。
【００２６】
従って、本発明の有効成分である乳蛋白質の加水分解物は、毒性が極めて低く、ヒト又は動物に対して安全に、かつ副作用が極めて少ない状態で使用することができ、飲食品に配合して使用することもできると考えられる。
【００２７】
上記のようにして得られる乳由来蛋白質の加水分解物は、ＧＬＰ−２分泌促進作用を有する。したがって、ＧＬＰ−２分泌促進作用を指標として、乳由来蛋白質の加水分解物を製造する際の条件は、適宜設定することができる。尚、本発明において「ＧＬＰ−２分泌促進」とは、ＧＬＰ−２を分泌する細胞のＧＬＰ−２分泌を促進することを意味する。
【００２８】
得られた乳由来蛋白質の加水分解物を含有する溶液は、本発明のＧＬＰ−２分泌促進作用を有する剤及び飲食品の製造にそのまま使用することも可能であり、また、必要に応じて、この溶液を公知の方法により濃縮した濃縮液、更に、この濃縮液を公知の方法により乾燥した粉末、として使用することもできる。さらに、乳由来蛋白質の加水分解物から、ＧＬＰ−２分泌促進作用を有するペプチドを単離、精製して使用することもできる。
【００２９】
本発明の消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進剤は、投与方法として、例えば、経口、経管、及び経腸によりヒト又は動物に投与することができ、これらの投与方法及び治療目的に応じて、一般的な医薬製剤の形態である各種の剤形が選択可能である。その代表的なものとして錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤等を例示することができる。
【００３０】
また、本発明の第二の発明の消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進作用を有する飲食品としては、乳蛋白質の加水分解物を配合でき、糖類の吸収能の未熟な又は低下した乳幼児、老人等に使用可能な、調製粉乳等の粉末状の栄養組成物、流動食、各種栄養素の強化に用いられる母乳添加用粉末、スポーツ飲料等を例示することができる。
【００３１】
本発明の有効投与量は、経口投与の場合（飲食品の経口給与の場合も同じ。）、ラットによる試験結果から、乳蛋白質の加水分解物からなる有効成分の量（蛋白質相当量）を基準として少なくとも０．５ｇ／体重ｋｇ／１日である。
【００３２】
なお、以下に示す試験例において、ＧＬＰ−２分泌促進活性の測定は、次の方法により行なった。本発明のＧＬＰ−２分泌促進剤又はその有効成分である乳蛋白質の加水分解物についても、下記方法又は類似の方法によりＧＬＰ−２分泌促進活性の測定を行うことができる。
【００３３】
（ＧＬＰ−２分泌促進活性の測定）
授乳期のＳＤラット２週齢雄を母獣から隔離し１晩絶食後、経口ゾンデを用いて試験水溶液を一定量（０．５ｍｌ〜２．０ｍｌ）胃腔内投与した。１〜２時間後、エーテル麻酔下血液を採取し血清を得た。ラット抗ＧＬＰ−２抗体（矢内原研究所製試薬）を用いたＥＬＩＳＡ法により、血清ＧＬＰ−２濃度を測定した。ＥＬＩＳＡ法において、ＧＬＰ−２の標準品として、市販品（矢内原研究所製試薬）を用いた。なお、ラット抗ＧＬＰ−２抗体は、感度が製品ロット間でバラツキがあるものと考えられることから、同一ロットのものを一連の試験に使用する必要があることが好ましい。
次に試験例を示して本発明を詳細に説明する。
【００３４】
〔試験例１〕
この試験は、乳蛋白質の加水分解物がＧＬＰ−２の分泌量（血中濃度）を高める効果を有することを明らかにするために行なった。
【００３５】
（１）試料の調製
試料１：カゼインを実施例１と同一の方法により１０質量％濃度で溶解した未分解のカゼイン水溶液。
【００３６】
試料２：カゼイン溶液を塩酸によりｐＨ３に調整後、蛋白質分解酵素として、ペプシン（天野エンザイム社製）を蛋白質１ｇあたり２００活性単位使用し、４時間の加水分解反応を行なったことを除き、本発明の実施例１と同一の方法により得た分解率１２．５％のカゼイン加水分解物を１０質量％濃度で溶解したカゼイン加水分解物水溶液。
【００３７】
試料３：蛋白質分解酵素として、パンクレアチン（パンクレアチンＦ（天野エンザイム社製））を蛋白質１ｇあたり３５活性単位使用し、４時間の加水分解反応を行なったことを除き、本発明の実施例１と同一の方法により得た分解率１１％のカゼイン加水分解物を１０質量％濃度で溶解したカゼイン加水分解物水溶液。
【００３８】
（２）試験方法
哺乳期のＳＤラット雄を、２週齢の時点で体重の偏りが生じないように１群６匹に群分け後、母獣から隔離して１晩絶食した。次いで、試料１〜３の試料溶液１．５ｍｌをゾンデで胃内投与した。２時間後、採血し、得られた血清のＧＬＰ−２濃度を前記のＥＬＩＳＡ法で測定し、各試料群毎の血中ＧＬＰ−２の平均濃度（ｎｇ／ｍｌ）を求めた。
【００３９】
（３）試験結果
この試験の結果は、表１に示すとおりである。表１から明らかなとおり、血中ＧＬＰ−２濃度は、未分解のカゼイン（試料１）を投与した群に比較し、カゼインのペプシン加水分解物（試料２）を投与した群ではより高値を示し、カゼインのパンクレアチン加水分解物（試料３）を投与した群ではさらに高値を示した。
【００４０】
また、カゼインを乳清蛋白質に変更して試験したが、乳清蛋白質のペプシン加水分解物及びパンクレアチン加水分解物においても同様の結果が得られた。
即ち、乳蛋白質の加水分解物により、ＧＬＰ−２の分泌量が増大することが判明した。
【００４１】
【表１】
2004051623.tif 000002
【００４２】
〔試験例２〕
この試験は、乳蛋白質の加水分解物がＧＬＰ−２の分泌量（血中濃度）を高める効果を有することを一層明らかにするために行なった。
【００４３】
（１）試料の調製
試料４：精製水（ＭｉｌｌｉＱ水）
【００４４】
試料５：カゼインを実施例１と同一の方法により１０質量％濃度で溶解した未分解のカゼイン水溶液。
【００４５】
試料６：蛋白質分解酵素として、パンクレアチン（パンクレアチンＦ（天野エンザイム社製））を蛋白質１ｇあたり７８０活性単位使用し、１８時間の加水分解反応を行なったことを除き、本発明の実施例１と同一の方法により得た分解率２７　％のカゼイン加水分解物を１０質量％濃度で溶解したカゼイン加水分解物水溶液。
【００４６】
試料７：乳清蛋白質分離物（ＷＰＩ）を実施例４の方法により１０質量％濃度で溶解した未分解のＷＰＩ水溶液。
【００４７】
試料８：蛋白質分解酵素として、パンクレアチン（パンクレアチンＦ（天野エンザイム社製））を蛋白質１　ｇあたり７８０活性単位使用し、１８時間の加水分解反応を行なった、本発明の実施例４と同一の方法により得た分解率３０　％のＷＰＩ加水分解物を１０質量％濃度で溶解したＷＰＩ加水分解物水溶液。
【００４８】
（２）試験方法
哺乳期のＳＤラット雄を、２週齢の時点で体重の偏りが生じないように１群５匹に群分け後、母獣から隔離して１晩絶食した。次いで、試料４〜８の試料溶液１．５　ｍｌをゾンデで胃内投与した。２時間後、採血し、得られた血清のＧＬＰ−２濃度を前記のＥＬＩＳＡ法で測定し、各試料群毎の血中ＧＬＰ−２の平均濃度（ｎｇ／ｍｌ）を求めた。
【００４９】
（３）試験結果
この試験の結果は、表２に示すとおりである。表２から明らかなとおり、血中ＧＬＰ−２濃度は、未分解のカゼイン（試料５）を投与した群に比較し、カゼインのパンクレアチン加水分解物（試料６）を投与した群では高値を示した。また、乳清蛋白質についても、未分解のＷＰＩ（試料７）を投与した群に比較し、ＷＰＩのパンクレアチン加水分解物（試料８）を投与した群では高値を示した。それぞれの値についてＳＡＳ　ｉｎｓｔｉｔｕｅの統計解析ソフトウェアＳｔａｔ　Ｖｉｅｗを使用して解析したところ、分散分析のｐｏｓｔ　ｈｏｃテストの一つであるＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ（Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ　ＰｒｏｔｅｃｔｅｄＬｅａｓｔ　Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）において、試料５と６、試料７と８の間で、危険率５　％で有意差が認められた。
【００５０】
即ち、乳蛋白質の加水分解物により、ＧＬＰ−２の分泌量が増大することが一層明らかとなった。
【００５１】
なお、前記試験例１の試料１と本試験例２の試料５は同一であるにもかかわらず、血中ＧＬＰ−２の平均濃度（ｎｇ／ｍｌ）に若干の相違が認められた。これは、血清ＧＬＰ−２濃度の測定に使用されたラット抗ＧＬＰ−２抗体の製品ロット間の感度のバラツキ等によるものであるものと考えられる。しかしながら、乳蛋白質の未分解物に比べて加水分解物が有意に血中ＧＬＰ−２の平均濃度が高いという点では一致しており、本発明の結論に影響を及ぼすものでないことは明らかである。
【００５２】
一連の試験には、精製水（ＭｉｌｌｉＱ水）を対照とし、かつ同一ロットのラット抗ＧＬＰ−２抗体を使用する必要があると考えられる。
【００５３】
【表２】
2004051623.tif 000003
【００５４】
〔試験例３〕
この試験は、乳清蛋白質から精製分離した蛋白質成分であるα−ラクトアルブミンの加水分解物がＧＬＰ−２の分泌量（血中濃度）を高める効果を有することを明らかにするために行なった。
【００５５】
（１）試料の調製
試料９：精製水（ＭｉｌｌｉＱ水）
【００５６】
試料１０：蛋白質分解酵素として、パンクレアチンであるパンクレアチンＦ（天野エンザイム社製）を蛋白質１ｇあたり７８０活性単位使用し、１８時間の加水分解反応を行なったことを除き、本発明の実施例１と同一の方法により得た分解率２７
％のカゼイン加水分解物を１０質量％濃度で溶解したカゼイン加水分解物水溶液。
【００５７】
試料１１：α−ラクトアルブミン（Ｄａｖｉｓｃｏ社製）溶液を、蛋白質分解酵素として、プロテアーゼＡ「アマノ」（天野エンザイム社製）を蛋白質１ｇあたり３００活性単位使用し、１８時間の加水分解反応を行なった、本発明の実施例５と同一の方法により得た分解率３４％のα−ラクトアルブミン加水分解物を１０質量％濃度で溶解したα−ラクトアルブミン加水分解物水溶液。
【００５８】
試料１２：　α−ラクトアルブミン（Ｄａｖｉｓｃｏ社製）を実施例５の方法により１０質量％濃度で溶解した未分解のα−ラクトアルブミン水溶液。
【００５９】
（２）試験方法
哺乳期のＳＤラット雄を、２週齢の時点で体重の偏りが生じないように１群８匹に群分け後、母獣から隔離して１晩絶食した。次いで、試料９〜１２の試料溶液１．５　ｍｌをゾンデで胃内投与した。２時間後、採血し、得られた血清のＧＬＰ−２濃度を前記のＥＬＩＳＡ法で測定し、各試料群毎の血中ＧＬＰ−２の平均濃度（ｎｇ／ｍｌ）を求めた。
【００６０】
（３）試験結果
この試験の結果は、表３に示すとおりである。表３から明らかなとおり、血中ＧＬＰ−２濃度は、カゼインのパンクレアチン分解物（試料１０）を投与した群に比較し、α−ラクトアルブミンのプロテアーゼＡ「アマノ」加水分解物（試料１１）を投与した群では一層高値を示した。また、未分解のα−ラクトアルブミン（試料１２）を投与した群に比較し、α−ラクトアルブミンのプロテアーゼＡ「アマノ」加水分解物（試料１１）を投与した群では高値を示した。それぞれの値についてＳＡＳ　ｉｎｓｔｉｔｕｅの統計解析ソフトウェアＳｔａｔ　Ｖｉｅｗを使用して解析したところ、分散分析のｐｏｓｔ　ｈｏｃテストの一つであるＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ（Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ　Ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ　Ｌｅａｓｔ　Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）において、試料１０と１１、試料１２と１１の間で、危険率５　％で有意差が認められた。
【００６１】
以上の結果から、α−ラクトアルブミンの加水分解物が、消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進作用において優れていることが判明した。
【００６２】
【表３】
表３
──────────────────────
試料番号　　　血中ＧＬＰ−２の平均濃度（ｎｇ／ｍｌ）
──────────────────────
９　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．５５
１０　　　　　　　　　　　　　　　　　　８．３７
１１　　　　　　　　　　　　　　　　　１２．７７
１２　　　　　　　　　　　　　　　　　　６．６３
──────────────────────
【００６３】
【実施例】
次に実施例を示して本発明を更に具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００６４】
【実施例１】
市販の牛乳カゼイン１．２ｋｇ（ニュー・ジーランド・ミルク・プロダクツ社製。蛋白質相当量として１ｋｇ）をイオン交換水８．８ｋｇに分散し、１０質量％水酸化ナトリウム水溶液を使用して、ｐＨを７．０に調整し、カゼインを完全に溶解し、蛋白質濃度約１０質量％のカゼイン水溶液約１０ｋｇを調製した。次いで、該カゼイン水溶液を８５℃で１０分間加熱殺菌し、液温を５０℃に調整し、蛋白質分解酵素として、パンクレアチンＦ（天野エンザイム社製）を蛋白質１ｇあたり５０活性単位の割合で添加し、蛋白質加水分解反応を開始した。５時間後、分解率が１３．５％となった時点で、９０℃で１５分間加熱して酵素を失活させ、酵素反応を停止し１０℃に冷却後凍結乾燥によりカゼイン加水分解物の粉末約１．２ｋｇ（蛋白質相当量として９９０ｇ）を得た。
【００６５】
得られたカゼイン加水分解物６００ｇを有効成分として使用して、これを日本薬局方１号ゼラチンカプセル（アリメント工業社製）に３００ｍｇずつ充填し、カプセルのキャップとボディーの接合部をゼラチンを用いてシールし、カゼイン加水分解物を有効成分として含有する消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進用カプセル剤１９００個を製造した。
【００６６】
【実施例２】
前記実施例１と同一の方法で得られた分解率１３．５％のカゼイン加水分解物８００ｇを使用し、これに酸味料としてクエン酸（三栄源エフ・エフ・アイ社製）１５０ｇ、甘味料としてショ糖（日本甜菜製糖社製）３０ｇ、及び香料（高砂香料社製）適量を配合し、均一に混合し、消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進作用を有する栄養組成物粉末約９００ｇを調製した。
【００６７】
【実施例３】
市販の牛乳乳清蛋白質濃縮物１．３ｋｇ（アーラフーズ社製。蛋白質相当量として１ｋｇ）をイオン交換水１１．７ｋｇに溶解し、蛋白質濃度約１０質量％の乳清蛋白質水溶液１３ｋｇを調製した。次いで、該乳清蛋白質水溶液をプレート式熱交換器を使用して７２℃で４５秒間殺菌し、液温を５５℃に調整し、１０質量％水酸化ナトリウム水溶液及び２０質量％炭酸カリウム水溶液を使用して、ｐＨ９．２に調整し、蛋白質分解酵素として、パンクレアチンＦ（天野エンザイム社製）及びトリプシンＰＴＮ６．０Ｓ（ノボザイムズ・ジャパン社製）をそれぞれ蛋白質１ｇ当たり１２５０活性単位及び５００活性単位の割合で添加し、蛋白質加水分解反応を開始した。１０時間後、分解率が２２．３％となった時点で、プレート式熱交換器を使用して１２０℃で１５秒間加熱して酵素を失活させ、酵素反応を停止し、１０℃に冷却した。
【００６８】
この加水分解液を、分画分子量１０，０００の限外ろ過膜（旭化成社製）によりろ過し、ろ液を噴霧乾燥し、粉末状の蛋白質加水分解物約９５０ｇ（蛋白質相当量として７４０ｇ）を得た。
【００６９】
得られた乳清蛋白質加水分解物５０ｇを使用し、これにデキストリン（昭和産業社製）４５ｇ、ビタミン混合物（田辺製薬社製）５ｇ、及びミネラル混合物（富田製薬社調製）５ｇを添加し配合し、均一化することにより、消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進作用を有する母乳添加用粉末約１００ｇを調製した。
【００７０】
【実施例４】
市販の乳清蛋白質分離物（ＷＰＩ）粉末１．２ｋｇ（ミライ社製。蛋白質相当量として１．０８ｋｇ）をイオン交換水８．８ｋｇに完全に溶解し、蛋白質濃度約１０質量％のＷＰＩ水溶液約１０ｋｇを調製した。次いで、該ＷＰＩ水溶液を０．２２　μｍ口径の膜を用いたマイクロフィルトレーションで除菌し、液温を５０℃に調整し、蛋白質分解酵素として、パンクレアチンＦ（天野エンザイム社製）を蛋白質１ｇあたり７８０活性単位の割合で添加し、蛋白質加水分解反応を開始した。１８時間後、分解率が３０％となった時点で、９０℃で１５分間加熱して酵素を失活させ、酵素反応を停止し１０℃に冷却後凍結乾燥によりＷＰＩ加水分解物の粉末約１．１ｋｇ（蛋白質相当量として９９０　ｇ）を得た。
【００７１】
得られたＷＰＩ加水分解物６００ｇを有効成分として使用して、これを日本薬局方１号ゼラチンカプセル（アリメント工業社製）に３００ｍｇずつ充填し、カプセルのキャップとボディーの接合部をゼラチンを用いてシールし、カゼイン加水分解物を有効成分として含有する消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進用カプセル剤１９００個を製造した。
【００７２】
【実施例５】
市販のα−ラクトアルブミン粉末１．２ｋｇ（Ｄａｖｉｓｃｏ社製。α−ラクトアルブミン含有量として１．１４ｋｇ：純度９５％）をイオン交換水８．８ｋｇに完全に溶解し、蛋白質濃度約１０質量％のα−ラクトアルブミン水溶液約１０ｋｇを調製した。次いで、該α−ラクトアルブミン水溶液を０．２２　μｍ口径の膜を用いたマイクロフィルトレーションで除菌し、液温を５０℃に調整し、蛋白質分解酵素として、プロテアーゼＡ「アマノ」（天野エンザイム社製）を蛋白質１ｇあたり３００活性単位の割合で添加し、蛋白質加水分解反応を開始した。１８時間後、分解率が３４％となった時点で、９０℃で１５分間加熱して酵素を失活させ、酵素反応を停止し１０℃に冷却後凍結乾燥によりα−ラクトアルブミン加水分解物の粉末約１．２ｋｇ（蛋白質相当量として１．１０　ｋｇ）を得た。
【００７３】
得られたα−ラクトアルブミン加水分解物６００ｇを有効成分として使用して、これを日本薬局方１号ゼラチンカプセル（アリメント工業社製）に３００ｍｇずつ充填し、カプセルのキャップとボディーの接合部をゼラチンを用いてシールし、カゼイン加水分解物を有効成分として含有する消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進用カプセル剤１９００個を製造した。
【００７４】
【実施例６】
市販の牛乳カゼイン１．２ｋｇ（ニュー・ジーランド・ミルク・プロダクツ社製。蛋白質相当量として１ｋｇ）をイオン交換水８．８ｋｇに分散し、１０質量％水酸化ナトリウム水溶液を使用して、ｐＨを７．０に調整し、カゼインを完全に溶解し、蛋白質濃度約１０質量％のカゼイン水溶液約１０ｋｇを調製した。次いで、該カゼイン水溶液を８５℃で１０分間加熱殺菌し、液温を５０℃に調整し、蛋白質分解酵素として、アクチナーゼＡＳ（科研ファルマ社製）を蛋白質１ｇあたり１５，０００活性単位の割合で添加し、蛋白質加水分解反応を開始した。１８時間後、分解率が３０．５％となった時点で、９０℃で１５分間加熱して酵素を失活させ、酵素反応を停止し１０℃に冷却後凍結乾燥によりカゼイン加水分解物の粉末約１．２ｋｇ（蛋白質相当量として９９０ｇ）を得た。
【００７５】
得られたカゼイン加水分解物６００ｇを有効成分として使用して、これを日本薬局方１号ゼラチンカプセル（アリメント工業社製）に３００ｍｇずつ充填し、カプセルのキャップとボディーの接合部をゼラチンを用いてシールし、カゼイン加水分解物を有効成分として含有する消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進用カプセル剤を製造する。
【００７６】
【発明の効果】
以上詳記したとおり、本発明は、消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進作用を有する剤及び飲食品に関するものであり、本発明により奏せられる効果は次のとおりである。
（１）本発明の消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進作用を有する剤及び飲食品は、ＧＬＰ−２の分泌量を増大させ、糖類の吸収性を向上する。
（２）本発明の消化管ホルモンＧＬＰ−２分泌促進作用を有する剤及び飲食品は糖類の吸収能の未熟な又は低下した乳幼児、老人等に有用である。