(57)【要約】【課題】Ｓ位置換システイン誘導体およびＳ位置換ホモシステイン誘導体の経済的に有利な製造法を提供することを課題とする。【解決手段】発酵培地に微生物を培養するに際して、培地にメルカプト基を有する有機化合物を添加して培養することによって、発酵物および発酵液中に著量の添加したメルカプト基を有する有機化合物に対応するＳ位置換システイン誘導体および／またはＳ位置換ホモシステイン誘導体を蓄積させ、これを採取する発酵法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
炭素源、窒素源、硫黄源その他微生物の生育に必要な栄養素を含む発酵培地に微生物を培養するに際して、発酵培地にメルカプト基（−ＳＨ基）を有する有機化合物を添加することにより、添加したメルカプト基を有する有機化合物に対応するＳ位置換システイン誘導体および／あるいはＳ位置換ホモシステイン誘導体を発酵物および発酵液中に生成・蓄積せしめ、発酵物および発酵液からＳ位置換システイン誘導体および／あるいはＳ位置換ホモシステイン誘導体を採取することを特徴とする発酵法によるＳ位置換システイン誘導体および／あるいはＳ位置換ホモシステイン誘導体の製造法
【請求項２】
使用微生物が大腸菌であることを特徴とする、請求項１記載の製造法
【請求項３】
使用微生物が、生育因子として少なくともメチオニンを要求する変異株であることを特徴とする請求項１記載の製造法
【請求項４】
使用微生物が、シスタチオニン・ベータ・リアーゼ欠損性変異株である請求項１記載の製造法
【請求項５】
発酵培地に添加するメルカプト基を有する有機化合物が、エチルメルカプタン、Ｌ−システイン、ＤＬ−システイン、Ｌ−ホモシステイン、ＤＬ−ホモシステイン、メチルメルカプタン、２−メルカプトエタノール、３−メルカプト−１−プロパノール、メルカプト酢酸、メルカプトベンゼン、２−メルカプトエチルアミン、４−メルカプトフェノール、３−メルカプトプロピオン酸、あるいはメルカプトコハク酸のうちの一つまたはその組み合わせであることを特徴とする、請求項１記載の製造法
【請求項６】
生成するＳ位置換システイン誘導体がＳ−エチル−Ｌ−システイン、Ｓ−（２−アミノ−２−カルボキシエチル）−Ｌ−システイン、Ｓ−（３−アミノ−３−カルボキシエチル）−Ｌ−システイン、Ｓ−メチル−Ｌ−システイン、Ｓ−カルボキシメチル−Ｌ−システイン、Ｓ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−システイン、Ｓ−（３−ヒドロキプロピル）−Ｌ−システイン、Ｓ−ベンジル−Ｌ−システイン、Ｓ−（２アミノエチル）−Ｌ−システイン、Ｓ−４−ヒドロキシベンジル−Ｌ−システイン、あるいはＳ−（２−カルボキシエチル）−Ｌ−システインのうちの一つあるいはその組合せである請求項１記載の製造法
【請求項７】
生成するＳ位置換ホモシステイン誘導体がＳ−エチル−Ｌ−ホモシステイン、Ｓ−（２−アミノ−２−カルボキシエチル）−Ｌ−ホモシステイン、Ｓ−（３−アミノ−３−カルボキシエチル）−Ｌ−ホモシステイン、Ｓ−メチル−Ｌ−ホモシステイン、Ｓ−カルボキシメチル−Ｌ−ホモシステイン、Ｓ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−ホモシステイン、Ｓ−（３−ヒドロキプロピル）−Ｌ−ホモシステイン、Ｓ−ベンジル−Ｌ−ホモシステイン、Ｓ−（２アミノエチル）−Ｌ−ホモシステイン、Ｓ−４−ヒドロキシベンジル−Ｌ−ホモシステイン、あるいはＳ−（２−カルボキシエチル）−Ｌ−ホモシステインのうちの一つあるいはその組合せである請求項１記載の製造法
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は、発酵法によるＳ位置換システイン誘導体および／あるいはＳ位置換ホモシステイン誘導体の製造法に関する。これらは医薬、健康保健薬として用途の期待される物質であり、また医薬品の合成原料としても用途の期待される物質である。
【０００２】
【従来の技術】
従来Ｓ位置換システイン誘導体およびＳ位置換ホモシステイン誘導体の製造法としては酵素法（メソッド・イン・エンザイモロジー、１４３巻、２９１−２９７頁、１９８７年）と化学的合成法が知られていた。
【０００３】このうち、酵素法としては、▲１▼各種微生物由来のシステインデスルフヒドラーゼの反応を利用して、β−置換−Ｌ−アラニンと各種チオール類を基質原料としてＬ−システイン誘導体類を合成する方法（特許公報昭５７−２１３１２、同昭５８−１３１５４、同昭５８−１３１５５）、▲２▼同じく各種微生物由来のシステインデスルフヒドラーゼの反応を利用して、アンモニア、ピルビン酸とチオール類の三種の基質原料（特許公報昭５７−１９９１）、アンモニア、有機酸（オキザロ酢酸、乳酸、フマル酸のうちの一つ）とチオール類の三種の基質原料（特許公報昭５６−２４５１５）を用いるＬ−システイン誘導体の合成法、
【０００４】▲３▼各種微生物由来のメチオニナーゼの反応を利用して、含硫アミノ酸（たとえばＬ−メチオニン）と各種硫黄化合物（ジスルフィド、チオール、スルフォン、スルフィドのうちの一つ）の二種の基質原料を用いるＬ−システイン誘導体およびＬ−ホモシステイン誘導体の合成法（特許公開公報昭５１−１５１３９１）、▲４▼同じく各種微生物由来のメチオニナーゼの反応を利用して、Ｏ−アセチル−Ｌ−ホモセリンとチオール類を基質原料としてＬ−ホモシステイン誘導体類を合成する方法（メソッド・イン・エンザイモロジー、１４３巻、２９１−２９７頁、１９８７年）、
【０００５】▲５▼各種微生物由来のトリプトファンシンターゼの作用を利用して、Ｌ−セリンとチオール類を基質原料としてＬ−システイン誘導体を合成する方法が知られていた（特許公報平２−５４０７７、特許公開公報平９−８４５９２）が知られていた。
【０００６】一方、化学合成法としては、例えばＬ−システインまたは２，２−ジメチルチアゾリン−４−カルボン酸とアルコール類あるいはアセテート類をおのおの反応させるＬ−システイン誘導体の合成法が知られていた（特許公開公報平８−１１９８３２）。
【０００７】以上のように、これらの酵素的合成法、化学合成法ではいずれも原料としてメルカプト基を有する有機化合物の加えて、β−置換−Ｌ−アラニン、Ｌ−セリン、Ｌ−メチオニン、Ｌ−システイン、Ｌ−ホモシステイン、Ｏ−アセチルル−Ｌ−ホモセリンのような高価なアミノ酸あるいはその誘導体、有機酸類（オキザロ酢酸、乳酸、フマル酸のうちの一つ）あるいはその他（ジスルフィド、スルフォン、スルフィドのうちの一つ）のどれかを原料として使用しなければならなかった。
【０００８】本発明者らは、このようなＬ−アミノ酸類や有機酸類（オキザロ酢酸、乳酸、フマル酸のうちの一つ）その他（ジスルフィド、スルフォン、スルフィドのうちの一つ）の原料を使用しなくても、通常の発酵培地にメルカプト基を有する有機化合物を添加して好適な微生物を培養すれば、添加したメルカプト基を有する有機化合物に対応する、著量のＳ位置換システイン誘導体および／またはＳ位置換ホモシステイン誘導体が発酵物および発酵液中に著量生成蓄積する発酵法を始めて見出し本発明を完成した。本発明の方法では、高価なＬ−アミノ酸類や有機酸類その他の原料は主原料として使用する必要がなく、このような経済的に有利なＳ位置換システイン誘導体およびＳ位置換ホモシステイン誘導体の製造法はこれまで知られていない。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
従来の酵素法や化学合成法の場合には、基質原料としてメルカプト基を有する有機化合物の他に高価なＬ−アミノ酸類（β−置換−Ｌ−アラニン、Ｌ−セリン、Ｌ−メチオニン、Ｌ−システイン、Ｌ−ホモシステイン、Ｏ−アセチルル−Ｌ−ホモセリン）、有機酸類（オキザロ酢酸、乳酸、フマル酸のうちの一つ）その他（ジスルフィド、スルフォン、スルフィドのうちの一つ）のどれかの原料をあわせて使用しなければならなかった。そして、これらのＬ−アミノ酸類や有機酸類その他の原料を安価に製造することは困難であり、このことがＳ位置換システイン誘導体およびＳ位置換ホモシステイン誘導体の経済的に有利な製造を困難にしていた。本発明者らは、Ｌ−アミノ酸類や有機酸類その他を主原料として用いないＳ位置換システイン誘導体およびＳ位置換ホモシステイン誘導体の製造法につき鋭意研究した結果、新たに発酵法による製造法を見出し本発明を完成した。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明では、安価な糖源、窒素源、硫黄源、その他微量の栄養源を含む通常の発酵培地に好適な微生物を常法により培養するに際して、発酵の最初からあるいはその途中で培地にメルカプト基を有する有機化合物を添加し、発酵物および発酵培地に著量のＳ位置換システイン誘導体および／またはＳ位置換ホモシステイン誘導体を蓄積させる。そして、発酵物および発酵培地からＳ位置換システイン誘導体および／またはＳ位置換ホモシステイン誘導体を採取する発酵法である。高価な上記のＬ−アミノ酸類や有機酸類その他は主原料としては使用しない。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明の方法によれば安価な糖源、窒素源、硫黄源、その他微量の栄養源をほどよく含む通常の発酵培地に好適な微生物を培養するに際して、培地にメルカプト基を有する有機化合物を添加すると、発酵物あるいは発酵培地にＳ位置換システイン誘導体およびＳ位置換ホモシステイン誘導体が著量生成・蓄積する。
【００１２】添加するメルカプト基を有する有機化合物の一般化学式をＲＳＨと表した場合、発酵物および発酵液に生成・蓄積するＳ位置換システイン誘導体の一般化学式はＨＯＯＣＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＳＲで、Ｓ位置換ホモシステイン誘導体の一般化学式はＨＯＯＣＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ２ＳＲで表される。ここに、Ｒは少なくとも炭素を含む化合物であり、炭素以外に他の元素例えば窒素、燐、硫黄、ハロゲンなどを含んでいても良い。
【００１３】本発明で使用する微生物としては、上記の条件でＳ位置換システイン誘導体および／またはＳ位置換ホモシステイン誘導体を生成・蓄積するものであれば細菌類、始原菌類、真菌類のいずれの微生物も利用できる。また、それらは野生株、変異株のいずれでも良く、代表例として大腸菌、コリネバクテリウム・グルタミクム、バチルス属細菌、サッカロミセス・セレビシエー、アスペルギルス属菌類等に属する微生物があげられる。
【００１４】使用微生物としては例えば大腸菌の変異株が好適である。変異株としては、例えば生育に少なくもＬ−メチオニンを要求する変異株が好適である。このＬ−メチオニン要求性はＤＬ−メチオニン、Ｄ−メチオニンによっても満たされことがある。また、これらのメチオニン類の他に、Ｌ−ホモシステイン、ＤＬ−ホモシステイン、Ｌ−ホモシスチン、ＤＬ−ホモシスチン、ホモシステインチオラクトンのどれかによっても満たされることがある。また、その要求性が上記のメチオニン類では満たされるがホモシステイン類やホモシスチン類では満たされないこともある。また、この要求性は漏出型（リーキー型）であってもよい。
【００１５】さらに、本発明に使用する微生物変異株としては、各種の薬剤（例えばアミノ酸の構造類似体、アミノ酸生合成や核酸生合成の中間体の構造類似体、ビタミン類の構造類似体）に耐性または感受性の性質を持つものが使用される。そして、これらの薬剤耐性と薬剤感受性の性質と上記の栄養要求性の性質の両方を合わせてもつ変異株であっても良い。
【００１６】さらに、本発明に使用する微生物変異株としては、セリン−Ｏ−アセチル転移酵素やＯ−アセチルセリンスルフヒドラーゼ等のシステイン生合成経路の酵素類がＬ−システインのフィードバック調節に対して耐性になった変異株あるいはホモセリンサクシニル転移酵素やシスタチオニン・ガンマ・シンターゼのようなメチオニン合成酵素類がＬ−メチオニンあるいはその誘導体のフィードバック調節に対して耐性になった変異株、あるいはその両方の性質の変異株が使用できる。そして、これらのフィードバック調節に対する耐性の性質と、上述の栄養要求性、薬剤耐性あるいは薬剤感受性の性質とを合わせてもつ変異株であっても良い。
【００１７】さらに、これらの酵素類が遺伝子工学的手法で増強あるいは欠損せしめた組換え株であってもよい。
【００１８】本発明に使用する微生物の代表例として大腸菌に属し、生育に少なくともＬ−メチオニンまたはＬ−ホモシステイン（またはＬ−ホモシスチン）を要求する変異株ＦＥＲＭＰ−１８８９１をあげることができる。
【００１９】本菌株は、次の実験例のように、Ｌ−メチオニン、ＤＬ−メチオニン、Ｄ−メチオニンまたはＤＬ−ホモシステインまたはＬ−ホモシステインのうちのどれか一つを生育に必要とする変異株であり、独立行政法人産業技術総合研究所に保管されて公知である。
【００２０】
大腸菌変異株ＦＥＲＭＰ−１８８９１と大腸菌野生株Ｋ−１２を、ブイヨン寒天培地にそれぞれ接種し３７℃で一夜培養した。生育した菌体の一部を採取して、殺菌水２ｍｌに懸濁し、１ｍｌあたり約１０８個の細胞を含む細胞懸濁液をそれぞれ調製した。これらの細胞懸濁液０．１ｍｌづつを、それぞれの菌株について４枚づつの最少寒天培地｛グルコース  １％、硫酸アンモニウム  ０．２％、  ＫＨ２ＰＯ４  ０．１５％、  Ｋ２ＨＰＯ４  ０．０５％、  ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  ０．０５％、  ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  ０．０１％、  ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏ  ０．００７％、  ＮａＣｌ  ０．０１％、  無機塩類混液（１Ｌ中にＣａＣｌ２・Ｈ２Ｏ  ５．３ｇ、  ＣｏＣｌ２  ４０ｍｇ、  ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ  ４０ｍｇ、  Ｈ３Ｂｏ３  ３０ｍｇ、Ｎａ２ＭｏＯ４  ４７ｍｇ、  ＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  ２００ｍｇを含む）を１ｍｌ／Ｌおよび寒天２％を含む培地、ｐＨ７｝３０ｍｌを含む平板培地の片隅に、シリンダーカップを置き、それぞれのカップの中にＬ−メチオニン（２．５ｍｇ／ｍｌ）溶液、Ｄ−メチオニン（２．５ｍｇ／ｍｌ）溶液、ＤＬ−ホモシステイン（２．５ｍｇ／ｍｌ）溶液または殺菌水（対照）をそれぞれ０．０２ｍｌづつ注入して、３０℃で４８時間静置培養した。その結果は表１に示すように、野生株では４つのどの条件でも平板の表面全体に良好な生育が認められた。
【００２１】一方変異株では、Ｌ−メチオニン、Ｄ−メチオニンまたはＤＬ−ホモシステインを与えたシリンダーカップの周辺にのみ生育ゾーンが認められ、殺菌水（対照）を与えたカップの周辺またはカップから離れた領域ではまったく生育が認められなかった。
【００２２】
【表１】
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＊＋印は試薬を注入したシリンダーカップの周辺に生育が認められたことを示し、−印は生育が認められなかったことを示す。
【００２３】本発明に使用する発酵培地としては、炭素源、窒素源、硫黄源、無機塩類その他の栄養物を程良く含有しかつメルカプト基を有する有機化合物を含む培地ならば合成培地、天然培地のいずれでも使用できる。
【００２４】炭素源としては、使用菌の利用可能なものであればいずれを用いてもよい。例えば、グルコース、フラクトース、しょ糖、乳糖、マンノース、マルトース、廃糖蜜、でんぷん加水分解物等の炭水化物、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、キシリトール等の糖アルコール、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、シスチン、システイン、アラニン、プロリン、グリシン、トリプトファン、セリン、ホモセリン、スレオニン等のアミノ酸類、乳酸、ピルビン酸、酢酸、リンゴ酸、ギ酸、コハク酸、フマール酸、クエン酸、各種脂肪酸等の有機酸類、エタノール、プロパノール、ブタノール、メタノール等のアルコール類を単独あるいは組み合わせて使用できる。
【００２５】窒素源としては、硫酸アンモニウム、亜硫酸アンモニウム、硫化アンモニウム、チオ硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、燐酸アンモニウム、炭酸アンモニウム等の無機アンモニウム塩、各種の有機酸アンモニウム塩、各種の硝酸塩類、アンモニア水、尿素等が単独あるいは組み合わせて使用できる。
【００２６】硫黄源としては、硫酸アンモニウム、硫酸カリウム、硫酸ナトリウム等の硫酸塩、亜硫酸アンモニウム、亜硫酸カリウム、亜硫酸ナトリウム等の亜硫酸塩、硫化アンモニウム、硫化カリウム、硫化ナトリウム、硫化水素等の硫化物、チオ硫酸塩類、メルカプタン、シテイン（シスチン）等のメルカプト化合物、その他の有機無機硫黄化合物が使用できる。
【００２７】要求物質であるメチオニンおよびホモシステインは、Ｌ−型、Ｄ−型、ＤＬ−型のいずれでも、使用菌の利用できるものであれば単独あるいは組み合わせて利用できる。またこれらを含む天然または合成物質や、容易にこれらに変化しうる物質たとえばメチオニンのヒダントイン、ホモシスチン、ホモシステインチオラクトン等も使用できる。これらの要求物質の使用量は、培地の組成やその他の培養条件によって異なるが、用いた培養条件下で、それらを充分量添加した場合の最大生育量に対して、５０￣９０％程度の生育量が得られるように制限して供給することが望ましい。
以上の物質は、培養の初期、あるいは培養の途中で分割あるいは一括して添加する事が出来る。
【００２８】培養は振とう培養や通気撹拌培養等の好気的条件下で行われる。培養中培養液のｐＨは５￣９に維持されるのが好適である。中和剤としては、アンモニア水、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、炭酸カルシウム、燐酸マグネシウム、水酸化カリウム、尿素等が用いられる。
【００２９】培養期間は通常３￣７日間で、主として培養液中に著量のＳ位置換システイン誘導体および／またはＳ位置換ホモシステイン誘導体が蓄積する。
【００３０】生成・蓄積するＳ位置換システイン誘導体および／またはＳ位置換ホモシステイン誘導体は、培地に添加するメルカプト基を有する有機化合物の種類によって異なるが、添加するメルカプト基を有する有機化合物の一般化学式をＲＳＨと表した場合に生成・蓄積するＳ位置換システイン誘導体はＨＯＯＣＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＳＲ、Ｓ位置換ホモシステイン誘導体はＨＯＯＣＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ２ＳＲで表すことが出来る。
【００３１】培地に添加するメルカプト基を有する有機化合物と生成・蓄積するＳ位置換システイン誘導体およびＳ位置換ホモシステイン誘導体の例は表２に示すとうりであるがこれに限定するものではない。
【００３２】
【表２】
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【００３３】培養液からのシステイン誘導体及び／またはホモシステイン誘導体の単離は常法により溶媒抽出、各種クロマトグラフィーによって行われる。
【００３４】以下にメルカプト基を有する有機化合物として２−メルカプトエタノールを培地に添加し、Ｓ位置換システイン誘導体としてＳ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−システインが、Ｓ位置換ホモシステイン誘導体としてＳ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−ホモシステインが同時に蓄積した場合の実施例を示す。
【００３５】
【実施例】
実施例  １として、グルコース１０ｇ／ｌ、ポリペプトン１０ｇ／ｌ、酵母エキス５ｇ／ｌ、尿素３ｇ／ｌの組成からなるｐＨ７の種培地１０ｍｌを３００ｍｌ容三角フラスコに入れて１２０℃で１０分間オートクレーブ殺菌する。これに大腸菌変異株ＦＥＲＭＰ−１８８９１を接種し、往復振とう培養機上で１３０ｒｐｍの振とう速度で３０℃の温度下で２４時間振とう培養する。得られた培養液を下記の基本組成の殺菌した発酵培地７ｍｌを含む３００ｍｌ容三角フラスコに０．７ｍｌ宛接種し、さらに別に殺菌したＬ−メチオニンの培地中の最終濃度が表３のようになるように０￣５００μｇ／ｍｌに変えて各フラスコに添加し、種培養と同様に振とう培養した。
【００３６】発酵培地の基本組成（培地１Ｌあたり）は次のとうりであった。フラクトース  ３０ｇ、（ＮＨ４）２ＳＯ４  １０ｇ、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  ０．０１ｇ、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏ  ０．００７ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  ０．５ｇ、ＫＨ２ＰＯ４  １．５ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４  ０．５ｇ、ＮａＣｌ  ０．１ｇ、酵母エキス１ｇ、ウラシル  ０．１ｇ、ＣａＣＯ３  ２０ｇ。ただし、（ＮＨ４）２ＳＯ４  とＣａＣＯ３  は他の培地組成とは別に殺菌して加えた。また、培地のｐＨをアンモニア水で７に補正した後、１２０℃で１０分間オートクレーブ殺菌した。
【００３７】培養１８時間目に殺菌した１８％フラクトース溶液を０．７ｍｌづつ各フラスコ添加し、同時にフィルター除菌した２０ｍｇ／ｍｌの２−メルカプトエタノールを０．７ｍｌづつ添加して培養を続行して合計４０時間培養した。その結果、各培養条件下の菌の生育量と培養液中のＳ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−システインおよびＳ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−ホモシステインの蓄積量は表３のとうりであった。
【００３８】
【表３】
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＊）生育度は東京光電社製光電比色計モデルＡＮＡ−７Ａで、光路径２ｃｍの比色セルを用いて測定した。
【００３９】別に、Ｌ−メチオニン１２５μｇ／ｍｌ添加の条件で上記と同様の培養を繰り返して発酵液を集めて４５０ｍｌとし、−２０℃で凍結し、それを解凍後８，０００ｒｐｍ、４℃の条件で遠心分離して得た上澄液の中には、Ｓ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−システインおよびＳ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−ホモシステインがそれぞれ７６０ｍｇおよび１１２０ｍｇ含まれていた。この液を内径２．５ｃｍ、長さ３０ｃｍのＨ＋  タイプの陽イオン交換樹脂ダイアイオンＳＫ＃１Ｂのカラムに、１時間当たり１５３ｍｌの速度で通塔して、Ｓ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−システインおよびＳ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−ホモシステインを吸着させた。
【００４０】カラムに２５９ｍｌの水を同様に通塔して水洗後、順次おのおの２９５ｍｌづつの０．５Ｎ、１Ｎ、２Ｎ  ＮＨ４ＯＨで同様に溶出し、７７ｍｌづつのフラクションを集めた。
そそれぞれのフラクションを薄層クロマトグラフィーで試験した結果、０．５Ｎ  ＮＨ４ＯＨで溶出した３番目と４番目のフラクションにＳ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−ホモシステインが１ＮＮＨ４ＯＨで溶出した１番目と２番目のフラクションにＳ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−システインが主として含まれることが分かった。
【００４１】それぞれのフラクションを集めて減圧下で濃縮し、デシケータの中で乾燥させ、Ｓ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−システインおよびＳ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−ホモシステインの粗製品をそれぞれ２６０ｍｇおよび５２０ｍｇ得た。それぞれの製品の一部を５ｍｇ／ｍｌになるように溶解し、ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＣ３０−ＵＧ５（野村化学社製品）の分取用カラムを用いて高速液体クロマトグラフィーを行い、Ｓ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−システインおよびＳ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−ホモシステインそれぞれを分取し、減圧下で濃縮後デシケータ中で乾燥して、それぞれの純製品を得た。
それらを、ＮＭＲで解析した結果、それぞれのデータはＳ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−システインおよびＳ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−ホモシステインと一致した。また、ＬＣ−ＭＳ解析の結果、分子量はそれぞれの理論量と一致した。
【００４２】
実施例  ２として、メルカプト基を有する有機化合物として、２−メルカプトエタノールに代えてエチルメルカプタン、メチルメルカプタン、３−メルカプト−１−プロパノール、メルカプト酢酸、メルカプトベンゼン、２−メルカプトエチルアミン、４−メルカプトフェノール、３−メルカプトプロピオン酸、またはメルカプトコハク酸をおのおの２５ｍＭの最終濃度になるように培地に添加した他は実施例１と同様に実施した結果、表４に示すＳ位置換システイン誘導体とＳ位置換ホモシステイン誘導体が同時に蓄積した。
【００４３】
【表４】
2004222518.tif 000005
【００４４】
実施例３として、メルカプト基を有する有機化合物として、２−メルカプトエタノールに代えてＬ−システインを最終濃度が表５のようになるように培地に添加した他は実施例１と同様に実施した結果、表５に示すＳ位置換システイン誘導体［Ｓ−（２−アミノ−２−カルボキシ）−Ｌ−システイン］、Ｓ位置換ホモシステイン誘導体［Ｓ−（２−アミノ−２−カルボキシ）−Ｌ−ホモシステイン］が同時に蓄積した。
【００４５】
【表５】
2004222518.tif 000006
【００４６】
実施例４として、メルカプト基を有する有機化合物として、２−メルカプトエタノールに代えてＬ−ホモシステインを最終濃度が表６のようになるように培地に添加した他は実施例１と同様に実施した結果、表６に示すＳ位置換システイン誘導体［Ｓ−（３−アミノ−３−カルボキシ）−Ｌ−システイン］とＳ位置換ホモシステイン誘導体［Ｓ−（３−アミノ−３−カルボキシ）−Ｌ−ホモシステイン］が同時に蓄積した。
【００４７】
【表６】
2004222518.tif 000007
【００４８】
【発明の効果】
発酵法によって、Ｓ位置換Ｌ−システイン誘導体およびＳ位置換Ｌ−ホモシステイン誘導体を経済的に有利に生産できる。