(57)【要約】【課題】エラジタンニンを有効成分として含有する安全で有効な育毛剤を提供する。【解決手段】エラジタンニンを有効成分として含有する育毛剤。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
エラジタンニンを有効成分として含有する育毛剤。
【請求項２】
エラジタンニンと、プロアントシアニジン、パントテン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩、ピリドキシン又はその塩、グリチルリチン酸又はその塩、グリチルレチン酸又はその塩、亜鉛及び酵母エキスからなる群から選ばれる１つ以上とを含有する育毛剤。
【請求項３】
エラジタンニンが分子内に１つのヘキサヒドロキシジフェノイル基を有するエラジタンニンである請求項１又は２記載の育毛剤。
【請求項４】
エラジタンニンがストリクチニン（ｓｔｒｉｃｔｉｎｉｎ）、オイゲニイン（ｅｕｇｅｎｉｉｎ）、サングイイン（ｓａｎｇｕｉｉｎ）Ｈ−１、サングイインＨ−４、２，３−ヘキサヒドロキシジフェノイルグルコース、４，６−ヘキサヒドロキシジフェノイルグルコース、ケブラグ酸（ｃｈｅｂｕｌａｇｉｃ　ａｃｉｄ）、ゲラニイン（ｇｅｒａｎｉｉｎ）、テリマグランジンＩ、テリマグランジンＩＩ、カスアリクチン、ペデュンクラギン、イソターケビン、グラナチンＡ、グラナチンＢ、ケブリン酸、カジュアリニン、ヌファリンＣ、ヌファリンＤ、ヌファリンＦ及びサングイインＨ−１１からなる群から選ばれる１つ又は２つ以上である請求項１又は２記載の育毛剤。
【請求項５】
エラジタンニンがチャ属、キブシ属、モクマオウ属、フウロソウ属、アカメガシワ属、モモタマナ属、ワレモコウ属、コウホネ属、アジサイ属、アデク属、コナラ属、カエデ属、ミズキ属、ザクロ属、バラ属、又はキイチゴ属の植物から得られるエラジタンニンである請求項１又は２記載の育毛剤。
【請求項６】
エラジタンニンがガロイル基→Ｏ→ヘキサヒドロキシジフェノイル基の分子構造を含まないエラジタンニンである請求項１又は２記載の育毛剤。
【請求項７】
エラジタンニンの含量が０．０１重量％以上３０重量％以下である請求項１〜６のいずれか１項に記載の育毛剤。
【請求項８】
エラジタンニンを有効成分として含有する経口育毛剤。
【請求項９】
エラジタンニンと、プロアントシアニジン、アスコルビン酸又はその塩、ビタミンＥ、パントテン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩、ビオチン、亜鉛及び酵母エキスからなる群から選ばれる１つ以上とを含有する経口育毛剤。
【請求項１０】
エラジタンニンが分子内に１つのヘキサヒドロキシジフェノイル基を有するエラジタンニンである請求項８又は９記載の経口育毛剤。
【請求項１１】
エラジタンニンがストリクチニン（ｓｔｒｉｃｔｉｎｉｎ）、オイゲニイン（ｅｕｇｅｎｉｉｎ）、サングイイン（ｓａｎｇｕｉｉｎ）Ｈ−１、サングイインＨ−４、２，３−ヘキサヒドロキシジフェノイルグルコース、４，６−ヘキサヒドロキシジフェノイルグルコース、ケブラグ酸（ｃｈｅｂｕｌａｇｉｃ　ａｃｉｄ）、ゲラニイン（ｇｅｒａｎｉｉｎ）、テリマグランジンＩ、テリマグランジンＩＩ、カスアリクチン、ペデュンクラギン、イソターケビン、グラナチンＡ、グラナチンＢ、ケブリン酸、カジュアリニン、ヌファリンＣ、ヌファリンＤ、ヌファリンＦ及びサングイインＨ−１１からなる群から選ばれる１つ又は２つ以上である請求項８又は９記載の経口育毛剤。
【請求項１２】
エラジタンニンがチャ属、キブシ属、モクマオウ属、フウロソウ属、アカメガシワ属、モモタマナ属、ワレモコウ属、コウホネ属、アジサイ属、アデク属、コナラ属、カエデ属、ミズキ属、ザクロ属、バラ属、又はキイチゴ属の植物から得られるエラジタンニンである請求項８又は９記載の経口育毛剤。
【請求項１３】
エラジタンニンがガロイル基→Ｏ→ヘキサヒドロキシジフェノイル基の分子構造を含まないエラジタンニンである請求項８又は９記載の経口育毛剤。
【請求項１４】
エラジタンニンの含量が０．０１重量％以上３０重量％以下である請求項８〜１３のいずれか１項に記載の経口育毛剤。
【請求項１５】
エラジタンニンと、プロアントシアニジン、パントテン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩、ピリドキシン又はその塩、グリチルリチン酸又はその塩、グリチルレチン酸又はその塩、亜鉛及び酵母エキスからなる群から選ばれる１つ以上とを含有する外用育毛剤。
【請求項１６】
エラジタンニンが分子内に１つのヘキサヒドロキシジフェノイル基を有するエラジタンニンである請求項１５記載の外用育毛剤。
【請求項１７】
エラジタンニンがストリクチニン（ｓｔｒｉｃｔｉｎｉｎ）、オイゲニイン（ｅｕｇｅｎｉｉｎ）、サングイイン（ｓａｎｇｕｉｉｎ）Ｈ−１、サングイインＨ−４、２，３−ヘキサヒドロキシジフェノイルグルコース、４，６−ヘキサヒドロキシジフェノイルグルコース、ケブラグ酸（ｃｈｅｂｕｌａｇｉｃ　ａｃｉｄ）、ゲラニイン（ｇｅｒａｎｉｉｎ）、テリマグランジンＩ、テリマグランジンＩＩ、カスアリクチン、ペデュンクラギン、イソターケビン、グラナチンＡ、グラナチンＢ、ケブリン酸、カジュアリニン、ヌファリンＣ、ヌファリンＤ、ヌファリンＦ及びサングイインＨ−１１からなる群から選ばれる１つ又は２つ以上である請求項１５記載の外用育毛剤。
【請求項１８】
エラジタンニンがチャ属、キブシ属、モクマオウ属、フウロソウ属、アカメガシワ属、モモタマナ属、ワレモコウ属、コウホネ属、アジサイ属、アデク属、コナラ属、カエデ属、ミズキ属、ザクロ属、バラ属、又はキイチゴ属の植物から得られるエラジタンニンである請求項１５記載の外用育毛剤。
【請求項１９】
エラジタンニンがガロイル基→Ｏ→ヘキサヒドロキシジフェノイル基の分子構造を含まないエラジタンニンである請求項１５記載の外用育毛剤。
【請求項２０】
エラジタンニンの含量が０．０１重量％以上１０重量％以下であることを特徴とする請求項１５〜１９のいずれか１項に記載の外用育毛剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、エラジタンニンを含有する育毛剤等に関する。
【０００２】
【従来の技術】
経口育毛剤としては、アマチャヅル、カキの葉、昆布を含む育毛食品（特開昭６０−２５１８６６）、ウーロン茶抽出物を含む抗脱毛症状飲食物および経口抗脱毛症状剤（特開平９−３０９８４０）、プロアントシアニジンを含む育毛食品（特開２０００−２０１６５０）、フィナステライドを含む経口育毛剤（ＷＯ−９７１１７０２）等が知られている。
【０００３】
エラジタンニンを含む外用剤としては、抗炎症作用をもった外用剤（特開昭５８−３８２０９）、収斂作用及び整肌・保護作用をもった皮膚化粧料（特開平５−１１２４４１）、並びにヒアルロニダーゼ阻害作用をもった外用剤および化粧料（特開平９−１２４４９７）が知られているが、エラジタンニンの育毛作用については知られていない。
【０００４】
この他に、タンニン酸を含む頭髪化粧料として、毛髪の表面保護や角質剥離を目的とした配合例（ＵＳ６２７１２４６Ｂ１）が知られているが、これは、毛髪表面や皮膚表面への作用を目的としたものであり、また、縮合型タンニンを含む毛髪保護剤（特公平２−３７８８４）及びプロアントシアニジンを含む育毛剤（ＷＯ９６−００５６１）が知られている。
【０００５】
また、タンニン酸と、界面活性作用を有するアミノ酸類・ラクタム・ペプチド、トコフェロール類、ビオチン又はアスコルビン酸類とを配合する外用育毛剤（特開平９−１７５９４５）が知られている。
さらに、ストリクチニンを有効成分として含むメタロプロテアーゼ阻害剤（特開２０００−３４４６７２）が知られている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、安全で有効な育毛剤を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は、下記の（１）〜（２０）に関する。
（１）エラジタンニンを有効成分として含有する育毛剤。
（２）エラジタンニンと、プロアントシアニジン、パントテン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩、グリチルリチン酸又はその塩、グリチルレチン酸又はその塩、亜鉛及び酵母エキスからなる群から選ばれる１つ以上とを含有する育毛剤。
（３）エラジタンニンが分子内に１つのヘキサヒドロキシジフェノイル基を有するエラジタンニンである前記（１）又は（２）記載の育毛剤。
【０００８】
（４）エラジタンニンがストリクチニン（ｓｔｒｉｃｔｉｎｉｎ）、オイゲニイン（ｅｕｇｅｎｉｉｎ）、サングイイン（ｓａｎｇｕｉｉｎ）Ｈ−１、サングイインＨ−４、２，３−ヘキサヒドロキシジフェノイルグルコース、４，６−ヘキサヒドロキシジフェノイルグルコース、ケブラグ酸（ｃｈｅｂｕｌａｇｉｃ　ａｃｉｄ）、ゲラニイン（ｇｅｒａｎｉｉｎ）、テリマグランジンＩ、テリマグランジンＩＩ、カスアリクチン、ペデュンクラギン、イソターケビン、グラナチンＡ、グラナチンＢ、ケブリン酸、カジュアリニン、ヌファリンＣ、ヌファリンＤ、ヌファリンＦ及びサングイインＨ−１１からなる群から選ばれる１つ又は２つ以上である前記（１）又は（２）記載の育毛剤。
【０００９】
（５）エラジタンニンがチャ属、キブシ属、モクマオウ属、フウロソウ属、アカメガシワ属、モモタマナ属、ワレモコウ属、コウホネ属、アジサイ属、アデク属、コナラ属、カエデ属、ミズキ属、ザクロ属、バラ属、又はキイチゴ属の植物から得られるエラジタンニンである前記（１）又は（２）記載の育毛剤。
【００１０】
（６）エラジタンニンがガロイル基→Ｏ→ヘキサヒドロキシジフェノイル基の分子構造を含まないエラジタンニンである前記（１）又は（２）記載の育毛剤。
（７）エラジタンニンの含量が０．０１重量％以上３０重量％以下である前記（１）〜（６）のいずれかに記載の育毛剤。
（８）エラジタンニンを有効成分として含有する経口育毛剤。
【００１１】
（９）エラジタンニンと、プロアントシアニジン、アスコルビン酸又はその塩、ビタミンＥ、パントテン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩、ビオチン、亜鉛及び酵母エキスからなる群から選ばれる１つ以上とを含有する経口育毛剤。
（１０）エラジタンニンが分子内に１つのヘキサヒドロキシジフェノイル基を有するエラジタンニンである前記（８）又は（９）記載の経口育毛剤。
【００１２】
（１１）エラジタンニンがストリクチニン（ｓｔｒｉｃｔｉｎｉｎ）、オイゲニイン（ｅｕｇｅｎｉｉｎ）、サングイイン（ｓａｎｇｕｉｉｎ）Ｈ−１、サングイインＨ−４、２，３−ヘキサヒドロキシジフェノイルグルコース、４，６−ヘキサヒドロキシジフェノイルグルコース、ケブラグ酸（ｃｈｅｂｕｌａｇｉｃ　ａｃｉｄ）、ゲラニイン（ｇｅｒａｎｉｉｎ）、テリマグランジンＩ、テリマグランジンＩＩ、カスアリクチン、ペデュンクラギン、イソターケビン、グラナチンＡ、グラナチンＢ、ケブリン酸、カジュアリニン、ヌファリンＣ、ヌファリンＤ、ヌファリンＦ及びサングイインＨ−１１からなる群から選ばれる１つ又は２つ以上である前記（８）又は（９）記載の経口育毛剤。
【００１３】
（１２）エラジタンニンがチャ属、キブシ属、モクマオウ属、フウロソウ属、アカメガシワ属、モモタマナ属、ワレモコウ属、コウホネ属、アジサイ属、アデク属、コナラ属、カエデ属、ミズキ属、ザクロ属、バラ属、又はキイチゴ属の植物から得られるエラジタンニンである前記（８）又は（９）記載の経口育毛剤。
【００１４】
（１３）エラジタンニンがガロイル基→Ｏ→ヘキサヒドロキシジフェノイル基の分子構造を含まないエラジタンニンである前記（８）又は（９）記載の経口育毛剤。
（１４）エラジタンニンの含量が０．０１重量％以上３０重量％以下である前記（８）〜（１３）のいずれかに記載の経口育毛剤。
【００１５】
（１５）エラジタンニンと、プロアントシアニジン、パントテン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩、ピリドキシン又はその塩、グリチルリチン酸又はその塩、グリチルレチン酸又はその塩、亜鉛及び酵母エキスからなる群から選ばれる１つ以上とを含有する外用育毛剤。
（１６）エラジタンニンが分子内に１つのヘキサヒドロキシジフェノイル基を有するエラジタンニンである前記（１５）記載の外用育毛剤。
【００１６】
（１７）エラジタンニンがストリクチニン（ｓｔｒｉｃｔｉｎｉｎ）、オイゲニイン（ｅｕｇｅｎｉｉｎ）、サングイイン（ｓａｎｇｕｉｉｎ）Ｈ−１、サングイインＨ−４、２，３−ヘキサヒドロキシジフェノイルグルコース、４，６−ヘキサヒドロキシジフェノイルグルコース、ケブラグ酸（ｃｈｅｂｕｌａｇｉｃ　ａｃｉｄ）、ゲラニイン（ｇｅｒａｎｉｉｎ）、テリマグランジンＩ、テリマグランジンＩＩ、カスアリクチン、ペデュンクラギン、イソターケビン、グラナチンＡ、グラナチンＢ、ケブリン酸、カジュアリニン、ヌファリンＣ、ヌファリンＤ、ヌファリンＦ及びサングイインＨ−１１からなる群から選ばれる１つ又は２つ以上である前記（１５）記載の外用育毛剤。
【００１７】
（１８）エラジタンニンがチャ属、キブシ属、モクマオウ属、フウロソウ属、アカメガシワ属、モモタマナ属、ワレモコウ属、コウホネ属、アジサイ属、アデク属、コナラ属、カエデ属、ミズキ属、ザクロ属、バラ属、又はキイチゴ属の植物から得られるエラジタンニンである前記（１５）記載の外用育毛剤。
（１９）エラジタンニンがガロイル基→Ｏ→ヘキサヒドロキシジフェノイル基の分子構造を含まないエラジタンニンである前記（１５）記載の外用育毛剤。
（２０）エラジタンニンの含量が０．０１重量％以上１０重量％以下であることを特徴とする前記（１５）〜（１９）のいずれかに記載の外用育毛剤。
【００１８】
【発明の実施の形態】
エラジタンニンは植物界に広く存在し、強い抗酸化作用を有することが知られている物質である。
本発明に用いられるエラジタンニンとしては、例えば少なくとも分子内に１つのヘキサヒドロキシジフェノイル基：
【００１９】
【化１】
2004091390.tif 000002
を有し、加水分解によりエラグ酸を与えることのできる化合物及びその塩等があげられ、より具体的にはストリクチニン（ｓｔｒｉｃｔｉｎｉｎ）、オイゲニイン（ｅｕｇｅｎｉｉｎ）、サングイイン（ｓａｎｇｕｉｉｎ）Ｈ−１、サングイインＨ−４、２，３−ヘキサヒドロキシジフェノイルグルコース、４，６−ヘキサヒドロキシジフェノイルグルコース、ケブラグ酸（ｃｈｅｂｕｌａｇｉｃ　ａｃｉｄ）、ゲラニイン（ｇｅｒａｎｉｉｎ）、テリマグランジンＩ、テリマグランジンＩＩ、カスアリクチン、ペデュンクラギン、イソターケビン、グラナチンＡ、グラナチンＢ、ケブリン酸、カジュアリニン、ヌファリンＣ、ヌファリンＤ、ヌファリンＦ、サングイインＨ−１１等があげられる。
好ましくは、式（Ｉ）：
【００２０】
【化２】
2004091390.tif 000003
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、ガロイル基、又は水素原子を表す。）で表される化合物、
式（ＩＩ）：
【００２１】
【化３】
2004091390.tif 000004
（式中、Ｒ４及びＲ５は、同一又は異なって、ガロイル基又は水素原子を表す。）で表される化合物、
式（ＩＩＩ）：
【００２２】
【化４】
2004091390.tif 000005
で表されるゲラニイン、
式（ＩＶ）：
【００２３】
【化５】
2004091390.tif 000006
で表されるケブラグ酸等があげられる。
なお、本明細書においてガロイル基とは下記の基を意味する。
【００２４】
【化６】
2004091390.tif 000007
上記式（Ｉ）で表される化合物の具体例としては、例えば、以下の表１に記載の化合物があげられる。
【００２５】
【表１】
2004091390.tif 000008
【００２６】
式（ＩＩ）で表される化合物の具体例としては、例えば、以下の表２に記載の化合物があげられる。
【００２７】
【表２】
2004091390.tif 000009
【００２８】
また、本発明ではエラジタンニンとしてガロイル基→Ｏ→ヘキサヒドロキシジフェノイル基の分子構造、すなわち下記構造：
【００２９】
【化７】
2004091390.tif 000010
を含まないエラジタンニンを用いてもよい。
【００３０】
本発明で用いられるエラジタンニンには、公知の化学合成法により得られるものの他、その他にエラジタンニンを主成分とする植物抽出物又はその精製物等のいかなるものも包含され、該植物抽出物は、例えばチャ属、キブシ属、モクマオウ属、フウロソウ属、アカメガシワ属、モモタマナ属、ワレモコウ属、コウホネ属、アジサイ属、アデク属、コナラ属、カエデ属、ミズキ属、ザクロ属、バラ属、又はキイチゴ属等の各種の植物から抽出精製して得られる。
【００３１】
植物からの抽出精製は、例えば、次のような公知の方法で行うことができる。
原料である植物の果実、種子、葉、茎、根、根茎等を、適当な時期に採取した後、そのままか、通常空気乾燥等の乾燥工程に付し、抽出原料とする。
【００３２】
上記の乾燥した植物体からエラジタンニンの抽出を行う場合は、公知の方法［バイオケミカル　アンド　バイオフィジカル　リサーチ　コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ），　２８０，　５３−６０　（２００１）、ジャーナル　オブ　ケミカル　ソシエティー　パーキン　トランスアクション　Ｉ　（Ｊ．　Ｃｈｅｍ．　Ｓｏｃ．　Ｐｅｒｋｉｎ　　Ｔｒａｎｓ．　Ｉ），　１７６５−１７７２　（１９８３）等］　を参考にして行うことができる。すなわち、原料を粉砕もしくは細切した後、溶媒を用いて抽出を行う。抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール等のアルコール類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類等の親水性又は親油性の溶媒を単独で、又は２種以上混合して混合溶媒として用いることができる。抽出温度は、通常０〜１００℃、好ましくは５〜５０℃である。抽出時間は、１時間〜１０日間程度であり、溶媒量は、乾燥原料あたり通常１〜３０倍重量、好ましくは５〜１０倍重量である。抽出操作は、攪拌によっても浸漬放置によってもよい。抽出操作は、必要に応じて２〜３回繰り返してもよい。
【００３３】
上記の操作で得られた粗抽出液から不溶性残渣を濾過若しくは遠心分離により取り除いた抽出液、又は植物の搾汁液や樹液からのエラジタンニンの精製方法は、公知の生薬の分離精製方法であればどのようなものでもよいが、二相溶媒分配法、カラムクロマトグラフィー法、分取高速液体クロマトグラフィー法等を単独で又は組み合わせて用いることが好ましい。例えば二相溶媒分配法としては、前記の抽出液等から油溶性成分や色素をクロロホルム、エチルエーテル、ｎ−ヘキサン、石油エーテル等により抽出除去する方法、該抽出液等から酢酸エチル、ｎ−ブタノール、メチルエチルケトン等の溶媒と水との分配により、溶媒相へエラジタンニンを回収する方法等があげられる。カラムクロマトグラフィー法としては、担体として順相系シリカゲル、逆相系シリカゲル、ダイヤイオンＨＰ−２０、セパビーズＳＰ−２０７等を用いる吸着カラムクロマトグラフィー法、担体としてセファデックスＬＨ−２０等を用いるゲル濾過法等があげられ、これらを単独で又は組み合わせて反復して使用することができる。分取高速液体クロマトグラフィー法としては、オクタデシルシリカ等を用いる逆相系のカラムを用いる方法、シリカゲル等を用いる順相系のカラムを用いる方法等があげられる。
【００３４】
上記精製方法により、塩類等水溶性のイオン性物質、糖類、多糖類等の非イオン性物質、油分、色素等が前記抽出液等から除去され、精製されたエラジタンニンを得ることができる。
【００３５】
本発明でいうエラジタンニンは、その塩も含む意味であり、そのような塩としては、例えば、酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩、アミノ酸付加塩等があげられる。酸付加塩としては、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、乳酸塩等の有機酸塩があげられ、金属塩としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等があげられ、アンモニウム塩としては、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム等の塩があげられ、有機アミン付加塩としては、モルホリン、ピペリジン等の付加塩があげられ、アミノ酸付加塩としては、グリシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン等の付加塩等あげられる。
【００３６】
本発明で用いられるエラジタンニンは、育毛剤、経口育毛剤又は外用育毛剤の成分として、一種で又は二種以上混合して用いられる。本発明で用いられるエラジタンニンの具体的な例としては、チャ抽出エラジタンニン、キブシ抽出エラジタンニン、モクマオウ抽出エラジタンニン、ゲンノショウコ抽出エラジタンニン、アカメガシワ抽出エラジタンニン、ミロバラン抽出エラジタンニン、ワレモコウ抽出エラジタンニン等があげられる。
【００３７】
本発明の育毛剤としては、エラジタンニンを有効成分として含有するものであればいかなるものも包含されるが、エラジタンニンと、プロアントシアニジン、パントテン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩、ピリドキシン又はその塩、グリチルリチン酸又はその塩、グリチルレチン酸又はその塩、亜鉛および酵母エキスからなる群から選ばれる１つ以上とを含有する育毛剤が好ましい。
【００３８】
本発明の経口育毛剤としては、エラジタンニンを有効成分として含有するものであればいかなるものも包含されるが、エラジタンニンと、プロアントシアニジン、アスコルビン酸又はその塩、ビタミンＥ、パントテン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩、ビオチン、亜鉛および酵母エキスからなる群から選ばれる１つ以上とを含有する経口育毛剤が好ましい。
【００３９】
本発明の外用育毛剤としては、エラジタンニンと、プロアントシアニジン、パントテン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩、ピリドキシン又はその塩、グリチルリチン酸又はその塩、グリチルレチン酸又はその塩、亜鉛および酵母エキスからなる群から選ばれる１つ以上とを含有する外用育毛剤であれば、いかなるものも包含される。
【００４０】
ビタミンＥ、アスコルビン酸又はその塩、パントテン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩、ビオチン、亜鉛、酵母エキス、ピリドキシン又はその塩、グリチルリチン酸又はその塩、及びグリチルレチン酸又はその塩としてはそれぞれ、市販品を用いることができる。
本発明で用いられるプロアントシアニジンは、下記構造式（Ｖ）：
【００４１】
【化８】
2004091390.tif 000011
（式中、Ｒ６及びＲ７は、同一又は異なって水素原子又は水酸基を表す。）等で表されるフラバン−７−オール誘導体を構成単位として重合した化学構造を含む化合物群をいう。
【００４２】
フラバン−７−オール誘導体の具体例としては、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン、エピガロカテキン、アフゼレチン、エピアフゼレチン等があげられ、これらの光学異性体もすべて含まれるが、本発明では、エピカテキンまたはカテキンを構成単位とするプロアントシアニジンがより好ましく用いられる。
【００４３】
式（Ｖ）で表されるフラバン−７−オール誘導体の構成単位どうしの結合様式としては、いかなるものも含まれるが、例えばフラバン−７−オール誘導体が２個重合した２量体としては、下記式（ＶＩ）：
【００４４】
【化９】
2004091390.tif 000012
（式中、Ｒ８及びＲ９並びにＲ８ａ及びＲ９ａは、それぞれ前記Ｒ６及びＲ７と同義である。）で表される結合様式をとるものがあげられ、３量体以上の重合体としては、同一又は異なるこれらの結合様式の組合せによるものがあげられる。
【００４５】
本発明に用いられるプロアントシアニジンは、フラバン−７−オール誘導体の２量体以上であればよいが、好ましくは２〜１０量体、より好ましくは２〜５量体、さらに好ましくは２〜３量体である。フラバン−７−オール誘導体の２量体としては、例えばエピカテキン−（４β→８）−カテキン等のエピカテキンとカテキンとの結合体、エピカテキン−（４β→８）−エピカテキン等のエピカテキンの２量体、カテキン−（４α→８）−カテキン等のカテキンの２量体等があげられ、フラバン−７−オール誘導体の３量体としては、例えばエピカテキン−（４β→８）−エピカテキン−（４β→８）−エピカテキン等のエピカテキンの３量体、カテキン−（４α→８）−カテキン−（４α→８）−カテキン等のカテキンの３量体、エピカテキン−（４β→８）−エピカテキン−（４β→８）−カテキン等のエピカテキンとカテキンとの混合３量体等があげられる。
また、これらプロアントシアニジンに没食子酸やグルコース、ラムノース等の糖類が付加した化合物も本発明に用いられるプロアントシアニジンに含まれる。
【００４６】
プロアントシアニジンは、ブドウ属、リンゴ属、オオムギ属、カキ属、ココヤシ属、カカオ属、マツ属、インゲン属、ナンキンマメ属等に属するブドウ、リンゴ、オオムギ、カキ、ヤシ、カカオ、マツ、アズキ、ピーナッツ等の各種の植物から抽出精製して得られる他、化学合成によっても得ることができる。
例えば、プロアントシアニジンの植物からの抽出精製は、次のような公知の方法で行うことができる。
【００４７】
原料である植物の果実、種子、葉、茎、根、根茎等を適当な時期に採取した後、そのままあるいは通常空気乾燥等の乾燥工程に付し、抽出原料とする。乾燥した植物体からプロアントシアニジンの抽出を行う場合は、公知の方法［ケミカルアンド　ファーマシューティカル　ブリテン（Ｃｈｅｍｉｃａｌ　＆　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｂｕｌｌｅｔｉｎ），　３，　３２１８　（１９９０）および同，　４０，　８８９−８９８　（１９９２）］に準じて行うことができる。
【００４８】
すなわち、原料を粉砕もしくは細切した後、溶媒を用いて抽出を行う。抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール等のアルコール類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類等の親水性又は親油性の溶媒を、単独で又は混合溶媒として用いることができる。抽出温度は、通常０〜１００℃、好ましくは５〜５０℃である。抽出時間は、１時間〜１０日間程度であり、溶媒量は、乾燥原料に対して通常１〜３０倍重量、好ましくは５〜１０倍重量である。抽出操作は、攪拌または浸漬放置により行い、必要に応じて２〜３回繰り返す。
【００４９】
上記の操作で得られた粗抽出液から不溶性残渣を濾過もしくは遠心分離により取り除いた抽出液、又は植物の搾汁液や樹液からのプロアントシアニジンの精製方法は、公知の分離精製方法であればどのようなものでもよいが、二相溶媒分配法、カラムクロマトグラフィー法、分取高速液体クロマトグラフィー法等を単独で又は組み合わせて用いることが好ましい。例えば二相溶媒分配法としては、前記の抽出液から油溶性成分や色素をｎ−ヘキサン、石油エーテル等により抽出除去する方法、該抽出液からｎ−ブタノール、メチルエチルケトン等の溶媒と水との分配により、溶媒相へプロアントシアニジンを回収する方法等があげられる。カラムクロマトグラフィー法としては、順相系シリカゲルを用いる方法、逆相系シリカゲルを用いる方法、担体としてダイヤイオンＨＰ−２０、セパビーズＳＰ−２０７等を用いる吸着カラムクロマトグラフィー法、担体としてセファデックスＬＨ−２０等を用いるゲル濾過法等があげられ、これらを単独で又は組み合わせて用い、反復して使用することもできる。分取高速液体クロマトグラフィー法としては、オクタデシルシリカ等を用いる逆相系のカラムを用いる方法、シリカゲル等を用いる順相系のカラムを用いる方法等があげられる。
【００５０】
上記精製方法により、前記の抽出液から塩類等水溶性のイオン性物質、糖類・多糖類等の非イオン性物質、油分、色素等を除去し、プロアントシアニジンを精製することができる。
【００５１】
また、ブドウ由来プロアントシアニジンは、アクタ　デルマト　ベネレオロジカ（Ａｃｔａ　Ｄｅｒｍａｔｏ　Ｖｅｎｅｒｅｏｌｏｇｉｃａ），　７８，　４２８−４３２　（１９９８）に記載の方法又はその方法に準じて、プロシアニジンＢ−１［エピカテキン−（４β→８）−カテキン］、プロシアニジンＢ−２［エピカテキン−（４β→８）−エピカテキン］、プロシアニジンＢ−３［カテキン−（４α→８）−カテキン］、プロシアニジンＣ−１［エピカテキン−（４β→８）−エピカテキン−（４β→８）−エピカテキン］及びプロシアニジンＣ−２［カテキン−（４α→８）−カテキン−（４α→８）−カテキン］は、ジャーナル　オブ　インヴェスティゲイティブ　デルマトロジー（Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ　Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ），　１１２，　３１０−３１６　（１９９９）に記載の方法又はその方法に準じてそれぞれ抽出精製することができる。
【００５２】
プロアントシアニジンの化学合成による製造は、エピカテキン又はカテキンの２量体の製造方法が記載されているジャーナル　オブ　ケミカル　ソサエティー　パーキン　トランサクション　Ｉ　（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｓｏｃｉｅｔｙ，　Ｐｅｒｋｉｎ　Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎ　Ｉ），　１５３５−１５４３　（１９８３）又はフィトケミストリー（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），　２５，　１２０９−１２１５　（１９８６）に記載の方法あるいはそれらに準じた方法により行うことができる。
【００５３】
プロアントシアニジンを本発明の有効成分として用いる場合、プロアントシアニジンは、一種又は二種以上混合してもよく、具体的な例としては、ブドウ種子由来プロアントシアニジン、リンゴ由来プロアントシアニジン、大麦由来プロアントシアニジン、マツ由来プロアントシアニジン、精製プロシアニジンオリゴマー、プロシアニジンＢ−１、プロシアニジンＢ−２、プロシアニジンＢ−３、プロシアニジンＣ−１、プロシアニジンＣ−２等から選ばれる一種又は二種以上があげられ、中でもプロシアニジンＢ−１、プロシアニジンＢ−２、プロシアニジンＢ−３、プロシアニジンＣ−１及びプロシアニジンＣ−２から選ばれる一種又は二種以上が好ましく用いられる。
【００５４】
本発明で用いられるパントテン酸の誘導体としては、例えば、Ｄ−パントテニルアルコール、ＤＬ−パントテニルアルコール、パントテニルエチルエーテル等があげられる。
【００５５】
また、アスコルビン酸、パントテン酸若しくはその誘導体、ピリドキシン、グリチルリチン酸及びグリチルレチン酸の塩としては、酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩、アミノ酸付加塩等があげられる。酸付加塩としては、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、乳酸塩等の有機酸塩があげられ、金属塩としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等があげられ、アンモニウム塩としては、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム等の塩があげられ、有機アミン付加塩としては、モルホリン、ピペリジン等の付加塩があげられ、アミノ酸付加塩としては、グリシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン等の付加塩等あげられる。
本発明の育毛剤は、経口育毛剤、外用育毛剤等として使用することができるが、投与方法はこれらに限定されるものではない。
【００５６】
本発明の育毛剤中のエラジタンニンの含有量は、エラジタンニンの種類や物性に由来する経皮吸収性によって大きく異なるが、単独で又は混合物として通常０．０１重量％（以下、単に％という）以上、好ましくは０．０１〜３０％、より好ましくは０．１〜２０％である。
【００５７】
本発明の経口育毛剤の形態としては、錠剤、カプセル剤、粉末、丸剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、シロップ剤、トローチ剤等があげられる。エラジタンニンの純品、精製物、粗精製物等、又はこれらとプロアントシアニジン、アスコルビン酸又はその塩、ビタミンＥ、パントテン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩、ビオチン、亜鉛及び酵母エキスからなる群から選ばれる１つ以上との組合わせをそのまま投与してもよいが、薬理的に許容される賦形剤とともに、錠剤、カプセル剤、粉末、丸剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、シロップ剤、トローチ剤等の形態で投与してもよい。賦形剤としては、ソルビトール、ラクトース、グルコース、乳糖等の糖類、デキストリン、澱粉、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム等の無機物、結晶セルロース、蒸留水、ゴマ油、トウモロコシ油、オリーブ油、綿実油等、一般に使用されているものであればいずれも用いることができる。製剤化する際には、結合剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤等の添加剤を用いることもできる。
【００５８】
本発明の経口育毛剤中のエラジタンニンの含有量は、通常０．０１％以上、好ましくは０．０１〜３０％、より好ましくは０．１〜３０％、特に好ましくは１〜２０％である。プロアントシアニジンの含有量は、精製度によって異なるが、好ましくは０．１〜５０％、より好ましくは１〜２０％である。アスコルビン酸又はその塩の含有量は、好ましくは０．１〜５０％、より好ましくは１〜２０％である。ビタミンＥの含有量は、好ましくは０．０１〜２０％、より好ましくは０．１〜１０％である。パントテン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩の含有量は、好ましくは０．１〜５０％、より好ましくは１〜２０％である。ビオチンの含有量は、好ましくは０．００１〜１％、より好ましくは０．０１〜０．１％である。亜鉛の含有量は、好ましくは０．００１〜１０％、より好ましくは０．０１〜１％である。酵母エキスの含有量は、好ましくは１〜９５％、より好ましくは５〜５０％である。
【００５９】
エラジタンニンの経口投与量は、疾患の症状、患者の年齢等により異なるが、通常成人一日あたり１００〜１００００　ｍｇ、好ましくは１００〜２０００　ｍｇ、さらに好ましくは２００〜５００　ｍｇである。
【００６０】
本発明の外用育毛剤の剤型としては、エラジタンニン、又は、エラジタンニンと、プロアントシアニジン、パントテン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩、ピリドキシン若しくはその塩、グリチルリチン酸若しくはその塩、グリチルレチン酸若しくはその塩、酵母エキスからなる群から選ばれる一つ以上とを配合しうる剤型であればどのような剤型を用いることもできる。例えば、適当な医薬基剤と配合して液状又は固形状の育毛剤として用いることができる。
【００６１】
液状又は固形状の育毛剤型としては、ヘヤーリキッド、ヘヤートニック、ヘヤーローション等の液状剤型、軟膏、ヘヤークリーム等の固形状剤型があげられ、各々好適な基剤に本発明に用いられるエラジタンニン、又は、エラジタンニンと、プロアントシアニジン、パントテン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩、ピリドキシン若しくはその塩、グリチルリチン酸若しくはその塩、グリチルレチン酸若しくはその塩、酵母エキスからなる群から選ばれる一つ以上とを添加し、常法により製造することができる。
【００６２】
本発明の外用育毛剤中のエラジタンニンの含有量は、エラジタンニンの種類や物性に由来する経皮吸収性によって大きく異なるが、単独で又は混合物として通常０．０１〜１０．０％、好ましくは０．０１〜３．０％、より好ましくは、０．１〜１．０％である。プロアントシアニジンの含有量は、精製度によって異なるが、通常０．０１〜１０．０％、好ましくは０．１〜５．０％、より好ましくは０．３〜２．０％である。パントテン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩の含有量は、通常０．０１〜２％、好ましくは０．０５〜１％、より好ましくは０．１〜０．５％である。ピリドキシン又はその塩の含有量は、通常０．０１〜２％、好ましくは０．０５〜１％、より好ましくは０．１〜０．５％である。グリチルリチン酸又はその塩の含有量は、通常０．０１〜２％、好ましくは０．０５〜１％、より好ましくは０．１〜０．５％である。グリチルレチン酸又はその塩の含有量は、通常０．０１〜２％、好ましくは０．０５〜１％、より好ましくは０．１〜０．５％である。酵母エキスの含有量は、通常０．０１〜２％、好ましくは０．０５〜１％、より好ましくは０．１〜０．５％である。
【００６３】
液状剤型に好適な基剤としては、外用育毛剤に通常使用されているもの、例えば精製水、エチルアルコール、多価アルコール類があげられ、必要により添加剤を添加してもよい。
多価アルコールとしては、グリセロール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等があげられる。
【００６４】
本発明の外用育毛剤は当技術分野で通常使用される添加剤を含んでいてもよく、該添加剤の具体例としては、界面活性剤、ビタミン類、消炎剤、殺菌剤、ホルモン剤、生薬エキス、チンキ類、清涼剤、保湿剤、酸化防止剤、金属イオン封鎖剤、香料等があげられる。
【００６５】
界面活性剤としては、ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレン（８）オレイルエーテル、ポリオキシエチレン（１０）オレイルエーテル、モノオレイン酸ポリオキシエチレン（１０）、ポリオキシエチレン（３０）グリセリルモノステアレート、モノステアリン酸ソルビタン、モノステアリン酸ポリオキシエチレン（３０）グリセリル、モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン、ショ糖脂肪酸エステル、モノオレイン酸ヘキサグリセリン、モノラウリン酸ヘキサグリセリン、ポリオキシエチレン還元ラノリン、ポリオキシエチレン（２０）ラノリンアルコール、ポリオキシエチレン（２５）グリセリルピログルタミン酸イソステアリン酸ジエステル、Ｎ−アセチルグルタミンイソステアリルエステル等があげられる。
【００６６】
ビタミン類としては、ニコチン酸ベンジル、ニコチン酸アミド、リボフラビン等があげられる。
消炎剤としては、アラントイン、塩酸ジフェンヒドラミン、グアイアズレン、ｌ−メントール等があげられる。
【００６７】
殺菌剤としては、トリクロロヒドロキシジフェニルエーテル、ヒノキチオール、トリクロサン、クロルヘキシジングルコン酸塩、フェノキシエタノール、レゾルシン、イソプロピルメチルフェノール、アズレン、サリチル酸、ジンクピリチオン、塩化ベンザルコニウム、感光素３０１号、モノニトログアヤコールナトリウム等があげられる。
【００６８】
ホルモン剤としては、エチニルエストラジオール、エストロン、エストラジオール等があげられる。
生薬エキスとしては、センブリエキス、ニンニクエキス、ニンジンエキス、アロエエキス、キナエキス、冬虫夏草エキス、サフランエキス等があげられる。
【００６９】
チンキ類として、トウガラシチンキ、ショウキョウチンキ、カンタリスチンキ等があげられる。
清涼剤としては、トウガラシチンキ、ｌ−メントール、カンフル等があげられる。
【００７０】
保湿剤としては、Ｌ−ピロリドンカルボン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、コンドロイチン硫酸等があげられる。
酸化防止剤としては、ブチルヒドロキシアニソール、イソプロピルガレート、エリソルビン酸等があげられる。
【００７１】
金属イオン封鎖剤としては、エチレンジアミンテトラアセテート又はその塩等があげられる。
香料としては、オレンジ油、レモン油、ベルガモット油、ライム油、レモングラス油、ラベンダー油等の天然香料およびメントール、ローズオキサイド、リナロール、シトラール、酢酸リナリル等の合成香料があげられる。
【００７２】
上記の液状剤型を噴霧剤として用いるときは、可燃ガス、不燃ガス等を用いることができる。可燃ガスとしては、ＬＰＧ（液化石油ガス）、ジメチルエーテル等があげられ、不燃ガスとしては、窒素ガス、炭酸ガス等があげられる。
【００７３】
固体状剤型の基剤としては、ワセリン、固形パラフィン、植物油、鉱物油、ラノリン、ろう類、マクロゴール等があげられ、必要により前記の添加剤、エチルアルコール、イソプロピルアルコール等の低級アルコール等を添加してもよい。
【００７４】
本発明の外用育毛剤の投与量は年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、成人一人当たり、一回にエラジタンニンとして０．１〜２５０ｍｇ、好ましくは１ｍｇ〜１００ｍｇが一日一回から数回、経皮投与される。
【００７５】
【実施例】
次に、実施例により本発明を詳細に説明する。
参考例１　緑茶からのストリクチニンの精製方法
緑茶２０ｋｇをミキサーで粉砕し、沸騰させた蒸留水　２００　Ｌで１５分間抽出した。この抽出液を水で平衡化したダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学社製）を充填したカラム（２０　ｃｍφ　ｘ　８０ｃｍ）に通塔し、５０　Ｌの５０％（ｖ／ｖ）メタノール水溶液で目的物を溶出させた。溶出液を乾固して、１５２０　ｇの乾固物を得た。この乾固物を熱水２０　Ｌに溶解し、クロロホルムで２４時間抽出した。次にその水層部分をエチルエーテルで５０時間抽出し、最後にその水層を酢酸エチルで２４時間抽出した。この酢酸エチル層を乾固して、１５５ｇの乾固物を得た。この乾固物を分取高速液体クロマトグラフィー［１５　ｃｍφｘ　１００　ｃｍ：　ＯＤＳカラム、８％（ｖ／ｖ）アセトニトリル］で分離した。このようにして、４．１　ｇのストリクチニン（純度９０％以上）を得た。
本物質について１Ｈ　ＮＭＲ分析を行い、ファイトケミストリー（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，），　２３：　１７５３−１７５５，　１９８４記載の分析値と一致したことより、ストリクチニンであることを確認した。
【００７６】
実施例１　育毛ドリンク剤
参考例１で得られたストリクチニンを用いて下記の組成のように配合し、精製水を加えて全量を１０００　ｍｌとして、育毛ドリンク剤を調製した。
ストリクチニン（参考例１）　　　　　　　　　　　１．０　ｇ
安息香酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　１．０　ｇ
果糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０　ｇ
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
色素　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
【００７７】
実施例２　　育毛錠剤
参考例１で得られたストリクチニンを用いて下記の組成のように配合し、単発式打錠機で打錠して、直径７　ｍｍ、重量２５０　ｍｇの錠剤を製造した。
ストリクチニン（参考例１）　　　　　　　　　　　１．０　ｇ
乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　９．０　ｇ
乾燥コーンスターチ　　　　　　　　　　　　　　　　０．２　ｇ
タルク　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１８　ｇ
ステアリン酸カルシウム　　　　　　　　　　　　　　０．０２　ｇ
【００７８】
実施例３　　育毛トニック
参考例１で得られたストリクチニンを用いて下記の組成のように配合し、精製水を加えて全量を１００　ｇとして、育毛トニックを調製した。
ストリクチニン（参考例１）　　　　　　　　　　　０．１　ｇ
プロアントシアニジン　　　　　　　　　　　　　　０．１　ｇ
パントテン酸エチルエーテル　　　　　　　　　　　０．１　ｇ
塩酸ピリドキシン　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム　　　　　　　　　　　０．１　ｇ
酵母エキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１　ｇ
エチルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　６０．０　ｇ
１，３−ブチレングリコール　　　　　　　　　　　　３．０　ｇ
ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油　　　　　　　　０．６　ｇ
【００７９】
実施例４　　育毛錠剤
参考例１で得られたストリクチニンを用いて下記の組成のように配合し、単発式打錠機で打錠して、直径７ｍｍ、２５０ｍｍの錠剤を製造した。
ストリクチニン（参考例１）　　　　　　　　　　　１．０　ｇ
プロアントシアニジン　　　　　　　　　　　　　　１．０　ｇ
アスコルビン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０　ｇ
ビタミンＥ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１　ｇ
パントテン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０　ｇ
ビオチン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０１　ｇ
亜鉛　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０　ｇ
酵母エキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０　ｇ
乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　９０．０　ｇ
乾燥コーンスターチ　　　　　　　　　　　　　　　　２．０　ｇ
タルク　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．８　ｇ
ステアリン酸カルシウム　　　　　　　　　　　　　　０．２　ｇ
次に、本発明の育毛剤の作用について、試験例により具体的に示す。
【００８０】
試験例１　　マウスの発毛に対する効果
ストリクチニン（参考例１で作製）を蒸留水に溶解して２　ｍｇ／ｍＬとし、これを６週令の雌性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（一群６匹）に対し、隔日に２００　ｍＬずつ計４回経口投与した。対照群には、蒸留水のみを経口投与した。その後、両群ともに４週間飼育した。この間、一週間ごとに尾静脈より採血を行った。試験開始後４０日目にデジタルカメラを用いて写真撮影を行った後、パーソナルコンピューターを用いて画像解析処理により背部皮膚全面積に対する脱毛部の面積の百分率を求めた。
投与サンプル、投与量および試験結果を表３に示す。
【００８１】
【表３】
2004091390.tif 000013
【００８２】
表３に示すように、本発明のエラジタンニン投与試験区では、著しいマウスの毛成長促進効果が認められた。
試験例２：マウス毛包上皮細胞培養に対する促進効果
毛包上皮細胞の分離および培養はＴａｎｉｇａｋｉらの方法［アーカイヴズ　オブ　デルマトロジカル　リサーチ（Ａｒｃｈｉｖｅｓ　ｏｆ　Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ），　２８４，　２９０−２９６　（１９９２）］を改変して行った。
【００８３】
すなわち、４日令のＣ３Ｈマウス（日本チャールスリバー）の背部皮膚を採取し、５００単位／ｍｌのディスパーゼ（合同酒清）および５％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含むＭＥＭ培地（Ｅａｇｌｅ’ｓ　Ｍｉｎｉｍｕｍ　Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　Ｍｅｄｉｕｍ）で４℃、１６時間処理した。
【００８４】
得られた皮膚切片から表皮を剥離し、真皮層を０．２５％コラゲナーゼＮ−２（新田ゼラチン）および１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭ培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ　Ｍｅｄｉｕｍ）で３７℃、１時間処理し真皮懸濁液を得た。真皮懸濁液を２１２ミクロンのナイロンメッシュ（日本理化学機械）で濾過後、濾液を１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、毛包組織を含むペレットを得た。ペレットに、カルシウム・マグネシウムフリーＰＢＳ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−Ｂｕｆｆｅｒｅｄ　Ｓａｌｉｎｅ）溶液を加え、ピペットを用いて懸濁後、１５分間静置することにより毛組織を沈降させた。得られた毛組織を用いて、上記ペレットで行った、カルシウム・マグネシウムフリーＰＢＳ溶液の添加、ピペットによる懸濁、１５分間静置・沈降操作と同様の操作を３回繰り返した。
【００８５】
得られた毛組織に０．１％エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）−０．２５％トリプシン液（ギブコ社製）を加え、３７℃で５分間処理後、１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭ培地を加え、３×１０５／ｍｌの細胞濃度の毛組織細胞液を調製した。毛組織細胞液を２４穴コラーゲンコートプレート（イワキガラス社製）へ１ｍｌ／ウェルずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養を行った。
【００８６】
培養後、ＭＣＤＢ１５３培地（極東製薬社製）にウシインシュリン（シグマ社製）５ｍｇ／Ｌ；マウス上皮増殖因子（ＥＧＦ）（宝酒造社製）５μｇ／Ｌ；ウシ下垂体抽出物（極東製薬社製）４０ｍｇ／Ｌ；ヒトトランスフェリン（シグマ社製）１０ｍｇ／Ｌ；ハイドロコーチゾン（シグマ社製）０．４ｍｇ／Ｌ；プロゲステロン（コラボラティブ　リサーチ社製）０．６３μｇ／Ｌ；Ｏ−ホスホエタノールアミン（シグマ社製）１４ｍｇ／Ｌ；エタノールアミン（シグマ社製）６．１ｍｇ／Ｌ；ペニシリン（和光社製）５０Ｕ／ｍｌ；ストレプトマイシン（和光社製）５０μｇ／ｍｌ；参考例１で得られたストリクチニン水溶液（０．０３、０．１、０．３及び１０　μｇ／ｍｌ）を添加した培地へ培地交換し、さらに、３７℃、５％ＣＯ２存在下で５日間培養を行った。培地は一日おきに交換した。
なお、上記培地において、ストリクチニン水溶液の代わりに精製水のみを１／１００体積量加えた培地で培養したものを対照群とした。
【００８７】
細胞増殖度の測定は、ＭＴＴ［３−（４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ　ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ　ｂｒｏｍｉｄｅ］を用いた方法で行った［実験医学別冊　バイオマニュアルＵＰシリーズ　分子生物学研究のための培養細胞実験法、８９−９２頁、羊土社（１９９５年）］。
【００８８】
２４穴マイクロプレート（２ｃｍ２／ウェル）の各ウェルに培養液１ｍｌに対し１／１０体積のＭＴＴのＰＢＳ溶液（５ｍｇ／ｍｌ）を加え、揺らして均一にし、３７℃、５％ＣＯ２存在下で４時間培養した。４時間後培養液を吸引し、各々のプレートに１ｍｌの０．０４ｍｏｌ／Ｌ　ＨＣｌイソプロピルアルコール溶液を加え、ウェル中に生成したフォルマザンが完全に溶けるまで混和した。
６５０ｎｍを対照とし、５７０ｎｍにおける吸光度を測定し、細胞の増殖度を測定した。
本発明における化合物の増殖促進活性を表４に示す。
【００８９】
【表４】
2004091390.tif 000014
【００９０】
表４に示すように、ストリクチニンは著しいマウス毛包上皮細胞増殖活性を示した。
【００９１】
【発明の効果】
本発明により、エラジタンニンを有効成分として含有する安全で有効な経口育毛剤及び外用育毛剤を提供することができる。