(57)【要約】【課題】本発明は、生体に存在する、抗うつ作用を有する糖脂質を提供することを目的とする。【解決手段】種々の薬剤を投与して得られたマウス血清より分離された糖脂質のＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造をｌｅｃｔｉｎ−ＥＬＩＳＡで測定したところ、その反応性は抗うつ作用と同様な時間経過で、すなわちイミプレイン（Ｉｍｉｐｒａｉｎｅ）、マプロチリン（Ｍａｐｒｏｔｉｌｉｎｅ）およびミアンセリン（Ｍｉａｎｓｅｒｉｎ）は、投与後１時間、パロキセチン（Ｐａｒｏｘｅｔｉｎｅ）とトラゾドン（Ｔｒａｚｏｄｏｎｅ）は、投与後６時間で、用量依存的であった。これらの結果から、抗うつ剤の効果は、ＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造を持つ糖脂質が血中に出現することによりその効果が発現する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
マウス強制水泳試験による無動時間を短縮させたＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造を末端に持つことを特徴とする抗うつ作用を有する糖脂質。
【請求項２】
請求項１に記載のＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造を末端に持つ糖脂質を含む誘導体。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造を末端に持つ糖脂質又は誘導体あるいはこれを発現する遺伝子を挿入した発現ベクター、ペプチド、タンパク質、酵素、ストレプトアビジンから成る群から選択される結合分子の結合体を含む医薬または診断薬。
【請求項４】
請求項３に記載の糖脂質、誘導体又は結合体を含むうつ病の治療薬及び軽躁病診断薬。
【請求項５】
請求項１又は２に記載の糖脂質又は誘導体を含むドーパミン神経作用の基礎的研究の試薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、生体に存在する、抗うつ作用を有する糖脂質に関する。
【０００２】
【従来の技術】
うつ病患者は、年々増加しており、その数は米国では２０００万人、日本では２０万人といわれ、潜在患者を含めればこの何倍にも及ぶと考えられる。
うつ病は、抑うつ気分、悲壮感などの感情障害、思考抑止などの思考障害、意欲低下、睡眠障害、抑うつ状態の日内変動などを主症状とする情動性精神障害が原因である。
うつ病は、脳の器質的障害による症候性うつ病、環境や心理的な要因による神経症性うつ病と原因不明の内因性うつ病に分類される。
その発症メカニズムは、セロトニンやノルアドレナリンといった神経伝達物質の脳内の働きが低下することによって起こるといわれている。
治療薬としては、三環系抗うつ薬、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）などが使用されている。
これまで、これらのうつ病治療薬を服用している患者にはしばしば躁転（躁状態に移行すること）がある。
今までに、生体に存在する物質が抗うつ作用を有することは知られていなかった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、生体に存在する、抗うつ作用を有する糖脂質を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明の糖脂質は、強制水泳試験による無動時間を短縮させたマウス血清から分離したＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造を末端に持つ糖脂質である。
本発明の糖脂質は、ヒト軽躁病患者の血清から分離したＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造を末端に持つ糖脂質である。
本発明の誘導体は、ＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造を末端に持つ糖脂質の誘導体である。
本発明は、上記糖脂質又は誘導体を利用したうつ病治療薬及び軽躁病診断薬である。
本発明は、上記ＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造を末端に持つ糖脂質を含む医薬または診断薬である。
【０００５】
【発明の実施の形態】
軽躁状態にあるヒトに対する体液中に存在する特定の糖脂質は、マウス強制水泳試験による無動時間を短縮させたが、その有効な糖脂質は末端部にＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造を持つ糖脂質であることが判明した。
一方、うつ病患者や健常人からの血清には本作用を起こす糖脂質は存在しなかった。
したがって、ＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造を末端に持つ糖脂質及びその誘導体はうつ病の治療薬及び軽躁病診断薬として有効である。
【０００６】
【実施例】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。
【０００７】
動物：体重２０−２５ｇの８週齢の雄のｄｄＹマウス（ＳＬＣ社、東京、日本）を使用した。
マウスは５群に分けて、プラスチックケージ（３３８×１４０×２２５ｍｍ）内で自由飲食にて飼育した。
飼育室は、湿度５０−６０％、室温２１−２５℃に保たれており、７：００から１９：００まで点灯した。
実験の２４時間前に論文［Ｍａｓｕｄａ  Ｙ．他，Ｅｘｐ．Ａｎｉｍａｌ，５０，３３１−３３５，２００１］で記述された方法で、マウスに６分間の強制水泳を行った。
【０００８】
抗うつ効果の測定法：行動の抗うつ様作用を測定する装置と実験過程は以前に発表された論文［Ｐｏｒｓｏｌｔ  Ｒ．Ｄ．他、Ａｒｃｈ．  Ｉｎｔ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２２９，３２７−３３６，１９７７］に記載されている。
手短に言うと、マウスを１０ｃｍの高さまで２５℃の水をはったシリンダー（直径１０ｃｍ、高さ２０ｃｍ）に入れてから６分間そのままにした。
残りの３分間でシリンダーの壁をよじ登るまでの時間を、抗うつ効果のインデックスとした。
この「よじ登り行動」の測定は、１５：００から１７：００までの時間帯に実行された。
【０００９】
ヒト血清の調製：情動的にも精神的にも異常の見られない７人（４人の女性と３人の男性、年齢２３−５２歳）の健康なボランティアから採血して血清１０ｍｌを得た。
一方、軽躁病のみを持つ、精神病の症状のない７人の患者（３人の女性と４人の男性、年齢３４−６３歳）から、医療行為の前に告知に基づく同意の下に１０ｍｌの血清を採取した。
これらの患者には、他の病気はなかった。
【００１０】
マウス血清の調製：抗うつ剤投与のマウスの血清は「強制水泳試験」終了後に採取した。
【００１１】
論文［Ｍａｓｕｄａ  Ｙ．他，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｆｉｎｄ．Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２２，６６７−６７０，２０００］で記載された方法で糖脂質を調製した。
ヒト血清０．８ｍｌにメタノール２ｍｌとクロロホルム１ｍｌを加えた後、この溶液を２分間振盪し、室温（ＲＴ）で１０分間放置した。
次に、この溶液にクロロホルム１ｍｌを追加して、３０秒間再び振盪した。
最後に、この溶液に水１ｍｌを加えて、３０秒間振盪した。
そして、この溶液を室温にて５分間１５０ｘｇで遠心した。
次に、糖脂質を含む下層のクロロホルム層を集め、蒸発乾燥した。
得られた糖脂質を０．８ｍｌの水に溶解した。
【００１２】
一方、マウス糖脂質は、ヒト血清の場合の８分の１量のマウス血清を用いて、同様な方法で調製した。
【００１３】
各分画のＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ−脂質に対する反応性：論文［Ｍａｓｕｄａ  Ｙ．他，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｆｉｎｄ．Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２２，６６７−６７０，２０００］で記載された方法に従った。
５０％メタノール溶液中では糖脂質のみが特異的にプラスティックプレートに吸着されるｌｅｃｔｉｎ−ＥＬＩＳＡ（Ｂｌａｃｈｂｕｒｎ  他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６１，２８７３−２８８１，１９８８）の測定には住友ベークライト製の９６穴プラスティックプレートを用いた。
糖脂質を吸着した各穴は５％牛血清アルブミンでブロックした後、ＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造を末端に持つ糖脂質を特異的に認識するビオチン化ドリコス  ビフロルス  レクチン（ｂｉｏｔｉｎ化Ｄｏｌｉｃｈｏｓ  ｂｉｆｌｏｒｕｓ  ｌｅｃｔｉｎ）（生化学工業、東京）と反応させた（Ｂａｃｋｅｒ  他、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２２，２７４１−２７５０，１９８３）。
次に、ワサビ  パーオキシダーゼ結合アビジン（ｈｏｒｓｅ−ｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ａｖｉｄｉｎ）（生化学工業）を添加した後、その反応性は分光光度計で４５５／６００ｎｍの波長で吸光度を測定して求めた。
【００１４】
各分画の「よじ登り行動」に対する効果：それぞれを一群５匹のマウスに抗うつ剤、イミプラミン（Ｉｍｉｐｒａｍｉｎｅ）、選択的ノルアドレナリン再吸収阻害剤マプロチリン（Ｍａｐｒｏｔｉｌｉｎｅ）、選択的セロトニン再吸収阻害剤パロキセチン（Ｐａｒｏｘｅｔｉｎｅ）、トラゾドン（Ｔｒａｚｏｄｏｎｅ）、およびミアンセリン（Ｍｉａｎｓｅｒｉｎ）を５％カーボキシメチルセルロース（Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）（ＣＭＣ）に０．４，２，１０ｍｇ／ｋｇになるように溶解し、これを腹腔内に注射した。
陽性反応として、グロボペンタオシルセラミド（Ｇｌｏｂｏｐｅｎｔａｏｓｙｌｃｅｒａｍｉｄｅ）を用いた。
注射４０分後、先に記述したような方法で「よじ登り行動」に対する効果を測定した。
【表１】
2004224765.tif 000002
【００１５】
結果：表１は抗うつ作用を示した。
イミプレイン（Ｉｍｉｐｒａｉｎｅ）、マプロチリン（Ｍａｐｒｏｔｉｌｉｎｅ）およびミアンセリン（Ｍｉａｎｓｅｒｉｎ）による抗うつ作用は、用量依存性に投与後１時間で最大の効果を示した。
また、パロキセチン（Ｐａｒｏｘｅｔｉｎｅ）とトラゾドン（Ｔｒａｚｏｄｏｎｅ）は、投与後６時間後に最大の効果を示した。
一方、コントロールとして用いたグロボペンタオシルセラミド（Ｇｌｏｂｏｐｅｎｔａｏｓｙｌｃｅｒａｍｉｄｅ）は、投与後１５分で最大となった。
【表２】
2004224765.tif 000003
【００１６】
種々の薬剤を投与して得られたマウス血清より分離された糖脂質のＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造をｌｅｃｔｉｎ−ＥＬＩＳＡで測定したところ、その反応性は抗うつ作用と同様な時間経過で、すなわちイミプレイン（Ｉｍｉｐｒａｉｎｅ）、マプロチリン（Ｍａｐｒｏｔｉｌｉｎｅ）およびミアンセリン（Ｍｉａｎｓｅｒｉｎ）は、投与後１時間、パロキセチン（Ｐａｒｏｘｅｔｉｎｅ）とトラゾドン（Ｔｒａｚｏｄｏｎｅ）は、投与後６時間で、用量依存的であった（表２）。
これらの結果から、抗うつ剤の効果は、ＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造を持つ糖脂質が血中に出現することによりその効果が発現する。
【表３】
2004224765.tif 000004
【００１７】
表３は、異なる情動のヒトの体液の糖脂質に存在するＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造をｌｅｃｔｉｎ−ＥＬＩＳＡで測定した。
うつ病患者や情緒障害のないボランティアの血清に比べて、この糖脂質は軽躁病患者の血清において著しく増大していた。
【００１８】
末端にＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造を持っている糖脂質は、うつ病モデルとして用いられるマウス強制水泳試験の「よじ登り行動」を増大させた。
抗うつ薬は、しばしば患者に軽躁状態を引き起こすがこの薬剤はＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造を末端に持つ糖脂質を増加させる。
一方、抗躁剤のリチウムは、マウスにおいて糖脂質を減少させる。
うつ病患者や情緒障害のないボランティアの血清に比べて、ＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造を末端に持つ糖脂質は軽躁病患者の血清において著しく増大していた。
これらの結果は、体液中の糖脂質が軽躁病患者の活動を盛んにするが、うつ病患者の活動の減少には関連しなかったことを強く示唆する。
【００１９】
【発明の効果】
本発明のＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃ構造を末端に持つ糖脂質は、新規なうつ病治療薬及び軽躁病の診断薬として医療に新しい貢献ができる。