(57)【要約】【課題】カンショ及びバレイショの各種病害（細菌病、放線菌病、糸状菌病）に対して拮抗能を有し、根面への定着が可能である拮抗菌を利用した病害防除法及び、その拮抗菌の利用方法及び培養方法の提供を課題とする。【解決手段】カンショ及びバレイショの根面への定着性を有し、各種病原菌（植物病原細菌、植物病原放線菌、植物病原糸状菌）に対して拮抗能を有する拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）の利用方法、増殖方法、防除効果について明らかにしたことから、Ｂ１−３５株の培養物を土壌混和処理するかあるいは胞子懸濁液を種苗へ浸漬処理することにより、カンショ及びバレイショの各種病原菌（植物病原細菌、植物病原放線菌、植物病原糸状菌）による被害を回避することは可能である。【選択図】      図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
根面定着性を有し、カンショ及びバレイショの各種病原菌（細菌病、放線菌病、糸状菌病）に対して防除効果を有する拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）。
【請求項２】
請求項１に記載の拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）の培養物を植溝に混和処理することを特徴とするカンショおよびバレイショの各種病害の防除方法。
【請求項３】
請求項１に記載の拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）の胞子懸濁液に種苗を浸漬処理することを特徴とするカンショおよびバレイショの各種病害の防除方法。
【請求項４】
請求項１に記載の拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）の胞子懸濁液に種苗の根部を浸漬処理することにより、根面に拮抗菌を定着させることを特徴とする拮抗菌の根面への定着方法。
【請求項５】
請求項１に記載の拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）をふすま、または籾殻培地により増殖させることを特徴とする大量培養方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は根面定着性を有する拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）を用いたカンショ及びバレイショの各種病害（細菌病、放線菌病、糸状菌病）の防除法でＢ１−３５株の利用方法及び培養方法また、その防除方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
沖縄県のカンショ、バレイショ生産地域では、各種病害（細菌病、放線菌病、糸状菌病）が慢性的に発生し、その被害が問題となっている。特に、カンショでは、病原放線菌であるＳｔｅｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｉｐｏｍｏｅａｅによる立枯病や病原糸状菌であるＣｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｓ  ｆｉｍｂｌｉａｔａ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｏｌａｎｉ、Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ  ｐｈａｓｅｏｌｉｎａによる貯蔵病害が、さらに、バレイショにおいては、病原細菌であるＲａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍによる青枯病や病原放線菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属菌）による青枯病が発生し、圃場によっては、それら病害で収穫皆無あるいは商品化率低下に陥ることがしばしば見うけられる。
【０００３】
一般的にこれらの防除には化学薬剤による土壌消毒が行われているが、これら薬剤は人畜並びに周辺環境に与える影響が大きいため、環境に負荷を与えない持続的防除技術の開発が望まれている。
【０００４】
拮抗菌を利用した病害防除法は、環境に対する負荷は極めて少ないと考えられるため、持続的病害防除技術の資材として利用できる可能性を有している。
【０００５】
拮抗菌を利用した植物病害防除法に関する試験例は少ない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、カンショ及びバレイショに発生する各種病害（細菌病、放線菌病、糸状菌病）の環境保全型防除技術の確立を目的とするものであり、根面定着性を有する拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）を用いたカンショ及びバレイショの各種病害（細菌病、放線菌病、糸状菌病）の防除法で拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）の利用方法と培養方法及びその防除方法を実現することを課題とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
上記の課題を解決するために、本発明者らはカンショを収穫・洗浄後、室温で１ヶ月間放置し、腐敗を示さなかったカンショ表面から分離した糸状菌からカンショの各種病原菌（植物病原放線菌、植物病原糸状菌）に対する拮抗性および根面定着性を有する糸状菌を探索した結果、拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）がカンショ及びバレイショの各種病害（細菌病、放線菌病、糸状菌病）に対して有効な防除作用があることを見出し、その効果的な利用方法を開発し、本発明を完成させたものである。
【０００８】
拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）の培養物を土壌に混和処理するか、あるいはＢ１−３５株の胞子懸濁液を種苗に浸漬処理することにより、カンショ及びバレイショの各種病原菌（細菌病、放線菌病、糸状菌病）による被害を回避できる効果が得られるものである。
【０００９】
また、拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）の胞子懸濁液に根部を浸漬させることにより、種苗へ拮抗菌を定着させるものである。
【００１０】
また、拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）をふすま培地及び籾殻培地を用いて大量培養させるものである。
【発明実施の形態】
次に本発明の実施形態について詳細に説明する。
【００１１】
病原放線菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）は主に、カンショやバレイショに被害をもたらし、イモ表面にかいよう、かさぶた状の病班を形成し、商品価値を著しく損なわせる病害である。また、カンショの貯蔵病原菌（Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｓ  ｆｉｍｂｌｉａｔａ、Ｆｕｓａｉｕｍ  ｓｏｌａｎｉ、Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ  ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ）はカンショの貯蔵中に被害を及ぼし、カンショの周年出荷を妨げる大きな要因となる病害である。また、病原細菌であるＲａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍによる青枯病は、バレイショ、トマト、ナス、ニガウリ等のウリ科、ナス科作物他様々な作物を犯す多犯性の病害で、植物体を委ちょう・枯死させ、降雨により畑全面に広がり、甚大な被害をもたらす病害である。これら病害は、土壌病原菌で、特に、青枯病と放線菌病は難防除土壌病害と位置づけられ、日本及び世界各地でその被害が問題となっており、その解決法を確立することは非常に重要である。また、近年、環境保全型農業が切望されていることからも、環境に優しい方法による防除方法を開発する必要がある。そこで、本発明ではまずカンショの各種病害に対して、拮抗能を有する拮抗菌の探索を行った。
【００１２】
カンショ（宮農３６号：４７２個，備瀬：４２８個）を収穫・洗浄後、室温で１ヶ月間放置し、腐敗を示さなかったカンショ（宮農３６号：２７個，備瀬：１５個）表面から定法に従って分離した糸状菌５００菌株をＰＤＡ培地上でＣｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｓ  ｆｉｍｂｌｉａｔａ、Ｆｕｓａｉｕｍ  ｓｏｌａｎｉ、Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ  ｐｈａｓｅｏｌｉｎａとアルブミン培地上でＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｉｐｏｍｏｅａｅと対峙培養し、拮抗作用を示す菌株を選抜した結果、１２菌株が得られ、これら菌株のカンショ根への定着性を検討した結果、５菌株が高い定着性を有することを見い出した（図１）。
【００１３】
次に、カンショ苗の生育初期におけるこれら拮抗菌５菌株の立枯病（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｉｐｏｍｏｅａｅ）に対する防除効果をポットレベルで検討した結果、Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）を処理したカンショの生育はコントロール区と比較して、地上部及び地下部とも良好であり、防除価が６０．１という高い数値を示し、さらに、カンショの根からは拮抗菌が９７．５％という高い割合で分離されたことから、Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）が有望であることを見出した（図２、図３、図４）。
【００１４】
次に、拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）の胞子懸濁液（１．６×１０９個／ｍｌ）にカンショ苗を浸漬処理することにより、Ｂ１−３５株が根面に定着できるか否かを検討した結果、胞子懸濁液に１０分〜２４時間浸漬処理することで、Ｂ１−３５株の根面への定着が確認され、胞子懸濁液利用によるカンショ苗へのＢ１−３５株の定着が可能であることを見い出した（図５）。
【００１５】
次に、カンショ表面から分離された拮抗菌１２菌株をＰＤＡ培地（１０ｍｌ）において室温で２週間培養した培養寒天の７０％エタノール抽出物（１ｍｌ分）を含有するジャガイモ半合成培地上におけるジャガイモ青枯病菌（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）の生育を検討した結果、Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）のみが青枯病菌に対する抗菌活性物質を生産することが確認され、Ｂ１−３５株がジャガイモ青枯病の防除に有望であることを見い出した（図６）。
【００１６】
次に、拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）をジャガイモそうか病菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｃａｂｉｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｔｕｒｇｉｄｉｓｃａｂｉｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｃｉｄｉｓｃａｂｉｅｓ）と黒あざ病菌（Ｒｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ）とを培地上で対岐培養を行い、拮抗能を有するか否かを検討した結果、Ｂ１−３５株の黒あざ病菌に対する拮抗性はみられなかったが、各種ジャガイモそうか病菌に対する拮抗作用は確認され、Ｂ１−３５株がジャガイモそうか病の防除に有望であることを見い出した（図７）。
【００１７】
次に、拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）は種芋伝染で問題となるジャガイモ黒あざ病菌に拮抗性を有しないことから、Ｂ１−３５株の胞子懸濁液利用による種芋浸漬処理を用いて、Ｂ１−３５株を馬鈴薯根面へ定着させる技術を実用化する場合においては、種芋消毒剤との併用が必須となるため、黒あざ病対策で利用されている数種種芋消毒剤〔成分名：メプロニル（７５．０％）、バリダマイシンＡ（５．０％）、トリクロホスメチル（５０．０％）、ベノミル（５０．０％）］に対する感受性を検討した結果、バリダマイシンＡ（５．０％）を含有するジャガイモ皮（２％）煮汁培地上においてＢ１−３５株の菌糸伸長と胞子形成能は他の薬剤に比べて優れていたことから、本薬剤がＢ１−３５株の胞子懸濁液と混合できること見い出した（図８）
【００１８】
次に、拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）の胞子懸濁液（２．０×１０９個／ｍｌ）およびバリダマイシンＡ（５．０％）が２００倍になるように調整したＢ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）の胞子懸濁液（２．０×１０９個／ｍｌ）にバレイショ種芋（品種：デジマ）を５分間浸漬処理後、風乾させた種芋を土壌に植え付け、３週間後種芋を根ごと掘り取り、それら根にＢ１−３５株が定着しているか否かを検討した結果、両処理区において根片からＢ１−３５株が９６％以上の割合で分離されたことから、Ｂ１−３５株の胞子懸濁液にバリダシン液剤を添加しても、バレイショ根面へのＢ１−３５株の定着は可能であることを見出した（図９）。
【００１９】
次に、拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）を大量増殖する培地を胞子形成量とほぐしやすさを指標に、複数の培地（ふすま培地〔ふすま：水＝１：１〕、ふすま・籾殻培地〔ふすま：籾殻：水＝１：１：２〕、ふすま・バーミュキュライト培地〔ふすま：バーミュキュライト：水＝１：１：３〕、籾殻培地〔籾殻：水＝１：１〕、バーミュキュライト培地〔バーミュキュライト：水＝１：１〕）を用いて検討した結果、ふすま・籾殻培地で胞子形成量が２．８×１０１２個／ｇと最も多く、また、ほぐしやすさの面でも優れていることが確認されたことから、Ｂ１−３５株の大量増殖にはふすま・籾殻培地が有望であることを見い出した（図８）。
【実  施  例】
次に本発明を実施例を用いて詳細に説明するが、本発明はこれらにより制限されるものではない。
【００２０】
拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）のふすま培養物を植溝に混和処理した後、カンショ苗（品種：宮農３６号）を植え付け、圃場における各種病害に対する防除効果を収穫物を用いて検討した結果、立枯病罹病イモ率はコントロール区の半分程度に抑えられ、防除価およびＢ１−３５株の定着率は６０．２、７０．０％と高い数値を示し、さらに、貯蔵病原菌による腐敗を抑制したことから、カンショの各種病害の防除にＢ１−３５株が有効であることを見い出した。（図９）。
【００２１】
拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）のふすま培養物を植溝に混和処理した後、バレイショ種芋（品種：デジマ）を植え付け、圃場における青枯病に対する防除効果を検討した結果、青枯病発病株率はコントロール区と比較して、低い割合で推移し、５４．８の防除価が得られ、また、罹病塊茎率はコントロール区と比較して、半分程度に抑えられ、さらにジャガイモ根片からは拮抗菌が９４．０％の割合で分離されたことから、ジャガイモ青枯病の防除にＢ１−３５株が有効であることを見い出した（図１０）。
【００２２】
【発明の効果】
以上、詳細に説明した本発明はカンショ及びバレイショの根面への定着性を有し、各種病原菌（植物病原細菌、植物病原放線菌、植物病原糸状菌）に対して拮抗能を有する拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属菌）の利用方法、増殖方法、防除効果について明らかにしたことから、Ｂ１−３５株の培養物を土壌混和処理するかあるいは胞子懸濁液を種苗へ浸漬処理することにより、カンショ及びバレイショの各種病原菌（植物病原細菌、植物病原放線菌、植物病原糸状菌）による被害を回避することは可能である。
【００２３】
したがって、化学薬剤を用いない環境保全型の病害防除が可能となり、天然バイオマスを利用した新たな産業創出に大きく貢献できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】スクリーニングの結果得られた拮抗菌１２菌株のカンショの各種病原菌に対する拮抗能とカンショ根への定着率の表を示した図である。
【図２】選抜された拮抗菌５菌株がカンショの生育に及ぼす影響と拮抗菌の立枯病防除効果および定着率を示した表の図である。
【図３】拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）のふすま培養物を立枯病汚染土壌に混和処理して得られた立枯病防除効果を示す図である。
【図４】拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）のふすま培養物を混和処理した立枯病汚染土壌に植え付けたカンショ苗の根片から分離されたＢ１−３５株と分離されたＢ１−３５株の立枯病菌に対する拮抗能を示す図である。
【図５】拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）の胞子懸濁液へのカンショ苗浸漬処理による定着性の検討の表を示した図である。
【図６】カンショ表皮から分離された拮抗菌１２菌株のジャガイモ青枯病菌に対する拮抗能の表を示した図である。
【図７】拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）の各種ジャガイモそうか病菌に対する拮抗能の表を示した図である。
【図８】拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）の各種薬剤に対する感受性の表を示した図である。
【図９】拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）の胞子懸濁液へのバレイショ種芋浸漬処理による拮抗性定着性の検討の表を示した図である。
【図１０】拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）の大量増殖培地の検討の表を示した図である。
【図１１】拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）の圃場レベルでのカンショ病害の防除効果の表を示した図である。
【図１２】拮抗菌Ｂ１−３５株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）の圃場レベルでのジャガイモ青枯病の防除効果の表を示した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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