(57)【要約】【課題】より長期間にわたり角膜上に留まって保水効果を発揮するドライアイ用眼用医薬組成物の提供。【解決手段】本発明は、アセチル化ヒアルロン酸と医薬的に許容される担体とを含有する眼用医薬組成物を提供する。好ましくは、アセチル化ヒアルロン酸の平均分子量は１０，０００〜１，０００，０００であり、アセチル基置換数は２．５〜４．５である。好適な態様において、かかる眼用医薬組成物はドライアイの治療又は予防に利用され、より好適な態様においては、それはドライアイ用点眼剤である。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アセチル化ヒアルロン酸と医薬的に許容される担体とを含有する、眼用医薬組成物。
【請求項２】
前記アセチル化ヒアルロン酸の平均分子量が１０，０００〜１，０００，０００であり、アセチル基置換数が２．５〜４．０である、請求項１記載の眼用医薬組成物。
【請求項３】
ドライアイの治療又は予防に利用される、請求項１又は２記載の眼用医薬組成物。
【請求項４】
ドライアイ点眼剤である、請求項３記載の眼用医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アセチル化ヒアルロン酸を含有する、保水性に優れた眼用医薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
高齢化社会の到来、更にはテレビやワープロ、パソコンなどのＯＡ機器の普及に伴う眼の酷使により、眼の乾き、即ちドライアイの症状を示す患者あるいは擬似患者が益々増加するものと予想される。ドライアイとは、涙液の減少やその成分の質的変化が原因で眼の表面が乾き、傷等の障害が生じる疾患であり、目が痛くなったり、疲れたり、まばたきがふえたり、白目が充血したりする症状が伴う。また、傷から細菌が入り込んで感染したり、傷が深くなって視力が低下するおそれもある。ドライアイの原因は、眼の酷使の他に、シーグレン症候群、スティーブンスジョンソン症候群、目の熱傷および外傷、血圧降下剤、精神安定剤、緑内症治療用点眼剤などの薬による副作用等、様々である。
【０００３】
ドライアイの治療には点眼剤の点眼が有効であり、現在ヒアルロン酸を主成分とするドライアイ治療用眼薬が注目され、よく使用されている。ヒアルロン酸は生体由来の高分子物質であり、高い増粘性、粘弾性、曳糸性等の特異的な物性、及び極めて高い保水性を有し、各種皮膚外用剤等に保湿剤として用いられている。全身が乾燥するといった症状を示すシーグレン症候群におけるドライアイの場合、軽度な症状にはこのヒアルロン酸含有点眼剤の点眼のみで有効であるが、症状が重篤な場合、ヒアルロン酸点眼剤の点眼では十分な効果があげられず、涙道プラグによる涙道閉鎖といった治療を併用する場合がある。また、ヒアルロン酸の角膜上での滞留時間は比較的短く、ヒアルロン酸点眼剤の効果は２〜３時間程度であり、よって患者は頻回に点眼を要し（例えば１日当たり５〜１０回）、面倒である。従って、長期間保水効果を持続し、その結果点眼回数も減らせ、患者のＱＯＬ（クオリティー・オブ・ライフ）を向上させることのできる眼用医薬組成物が望まれる。
【０００４】
特開昭６２−６８４０２号公報はヒアルロン酸の誘導体、詳しくはカルボキシル基の部分エステル化されたヒアルロン酸を開示し、それが眼薬中の薬剤の担体として有効である旨示唆している。しかしながら、このようなカルボキシル基部分エステル化ヒアルロン酸誘導体を担体として含有する眼薬が、長期間の保水効果維持を要するドライアイ用眼用医薬組成物に有効であるかは確認されていない。
【特許文献１】
特開平２−１６４８２９号
【特許文献２】
特開昭６２−６８４０２号
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、より長期間にわたり角膜上に留まって保水効果を発揮するドライアイ用眼用医薬組成物の提供を課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
驚くべきことに本発明者は、ヒアルロン酸のアセチル化誘導体を眼用医薬組成物として用いると、その誘導体は動物角膜上皮のモデルであるソフトコンタクレンズ上でヒアルロン酸よりも長く滞留することがわかった。よって、アセチル化ヒアルロン酸含有眼用医薬組成物はヒアルロン酸含有眼用医薬組成物と比べ、一層長期間にわたり保湿効果を示すことができることがわかった。
【０００７】
従って、本発明は、アセチル化ヒアルロン酸と医薬的に許容される担体とを含有する眼用医薬組成物を提供する。好ましくはアセチル化ヒアルロン酸の平均分子量は１０，０００〜１，０００，０００であり、アセチル基置換数は２．５〜４．５であり、特に好ましくは、アセチル化ヒアルロン酸の平均分子量は約１００，０００であり、アセチル基置換数は約３．５である。好適な態様において、かかる眼用医薬組成物はドライアイの治療又は予防に利用され、より好適な態様においては、それはドライアイ用点眼剤である。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明に係るアセチル化ヒアルロン酸含有眼用医薬組成物は、眼に適用したとき、ヒアルロン酸含有眼用医薬組成物と比べて優れた保水性を発揮する。眼の角膜上皮は約５層の細胞層からなり、皮膚の角層と類似しているところがあるが、角膜最上層の細胞表面は全くの親水性ではなく、若干の疎水性を呈していると考えられている。この疎水性は、涙膜が最上層の油膜、中間層の水層、及び角膜上皮と接する最下層たる粘液層の３層構造を有するが、その最下層に多糖類を主成分とする粘液成分たるムチンが存在することからも予測できる。アセチル化ヒアルロン酸は、その水酸基のアセチル化によりヒアルロン酸と比べ、高い疎水性を示す。従って、特に理論に拘束されるわけではないが、ヒアルロン酸と比較してのアセチル化ヒアルロン酸の保水性の良さ、即ち、角膜上でアセチル化ヒアルロン酸がヒアルロン酸よりも長く滞留できる理由は、角膜層と同様に、アセチル化ヒアルロン酸も若干の疎水性を呈しているからであると考えられる。また、ヒアルロン酸はその親水性の高さ故、角膜上皮組織から水分を吸収しているおそれもある。その点、アセチル化ヒアルロン酸はヒアルロン酸よりも親水性の観点で若干劣るため、角膜上皮組織からの水分の吸収力は弱いものと考えられる。
【０００９】
本発明におけるアセチル化ヒアルロン酸はヒアルロン酸の水酸基をアセチル化した誘導体であり、詳しくは下記の構造式を有する。
【化１】
2004262777.tif 000002
【００１０】
アセチル化ヒアルロン酸は当業者に周知の方法で製造でき、その方法は例えば特開平６−６７０７号公報や特開平８−５３５０１号公報に開示されている。
好ましくは、本発明におけるアセチル化ヒアルロン酸は粉末状ヒアルロン酸を無水酢酸溶媒に懸濁し、さらに濃硫酸を加えてアセチル化することにより得ることができる。この方法においては、無水酢酸溶媒に酢酸を混合し、酢酸：無水酸酸の混合比を１：４〜１：１とすれば、アセチル化率の高い高度アセチル化ヒアルロン酸を得ることが可能である。また、無水酢酸溶媒に酢酸を混合し、酢酸：無水酸酸の混合比を２：１〜４：１とすれば、アセチル化の進行が緩和となり、アセチル化率の微調整が容易となる。また、溶媒に対し濃硫酸は２〜７容量％添加させることが好適である。
【００１１】
本発明にかかるアセチル化ヒアルロン酸のアセチル基置換数は、特に限定されないが、好ましくは２．５〜４．０、より好ましくは２．８〜３．８、さらに好ましくは３．０〜３．８である。最も好ましくは、本発明に係るアセチル化ヒアルロン酸のアセチル基置換数は約３．５である。アセチル基置換数が高すぎるとヒアルロン酸が本来もつ親水性に基づく保水効果が損なわれ、アセチル基置換数が低すぎると、角膜の疎水性との関係で予想されるアセチル化ヒアルロン酸のもつ疎水性に由来する保水効果が損なわれるものと考えられる。なお、ヒアルロン酸には前記化学式１に示す通り繰り返し単位中４個のアルコール性水酸基が存在するが、これらのうち何個がアセチル基で置換されたかを「アセチル基置換数」は意味する。
【００１２】
上記アセチル化ヒアルロン酸は、粗アセチル化ヒアルロン酸をアセトン水溶液に添加し、乳酸ナトリウムを加えて溶解させ、さらに高濃度アセトンを加えることで、高純度アセチル化ヒアルロン酸へと精製することができる。なお、前記乳酸ナトリウムはアセトン水溶液に対し、１〜３重量％添加されることが好適である。
【００１３】
本発明において、ヒアルロン酸とは、ヒアルロン酸及びヒアルロン酸塩を意味し、各種分子量のものを用いることができる。特に限定しないが、本発明に係るアセチル化ヒアルロン酸は平均分子量１，０００〜１０，０００，０００、好ましくは１０，０００〜１，０００，０００である。最も好ましくは、平均分子量は約１００，０００である。
【００１４】
本発明の眼用医薬組成物中のアセチル化ヒアルロン酸の含量は、当該医薬組成物の総容積（又は総重量）を基準に、０．０１〜１０重量／容積（重量）％、好ましく０．０５〜５重量／容積（重量）％、より好ましくは０．１〜１重量／容積（重量）％である。なお、アセチル化ヒアルロン酸濃度は、液状の眼洗浄剤及び点眼剤の場合には重量／容積（ｗ／ｖ）％を意味し、固状の眼軟膏剤の場合には重量／重量（ｗ／ｗ）％を意味する。尚、ヒアルロン酸、その分子量にも依存するが、通常３％以上の水溶液ではその粘度が高すぎて点眼剤には利用できないが、アセチル化ヒアルロン酸の水溶液は１０％程度の水溶液に調製することが十分に可能である。
【００１５】
本発明の眼用医薬組成物のｐＨは中性付近が好ましく、通常ｐＨ６．５〜７．５とする。浸透圧は、０．５〜４．０圧比程度に調整するのが好ましく、１．０〜１．５圧比がより好ましい。ｐＨや浸透圧の調節には眼用医薬組成物に慣用されている手段が利用される。
【００１６】
本発明に係る眼用医薬組成物は眼の乾きの症状、特にドライアイの治療、予防に有効である。ドライアイは、眼の酷使、シーグレン症候群、スティーブンスジョンソン症候群、目の熱傷および外傷、血圧降下剤、精神安定剤、緑内症治療用点眼剤などの薬による副作用等、様々要因によるものであり得る。本発明の眼用医薬組成物は、点眼剤、眼洗浄剤、眼軟膏剤等の剤型として使用される。
【００１７】
本発明の眼用医薬組成物は、その剤形に依存して慣用の医薬的に許容される担体を併用することができる。点眼剤及び眼洗浄剤の担体としては慣用の点眼剤及び眼洗浄剤に使用されるものであれよく、精製水が好ましい。
【００１８】
本発明の眼用医薬組成物には、任意的に、アセチル化ヒアルロン酸以外の糖質、電解質、アミノ酸、ビタミン、脂質、医薬品添加物、医薬品等の各種成分が配合されていてよい。そのような成分の例には、例えば、糖類、例えばグルコース、マルトース等、オリゴ糖、マンニトール、糖アルコール類、例えばソルビトール等；電解質、例えば塩化ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム等；アミノ酸、例えばグリシン、アラニン等；ビタミン類、例えば塩酸チアミン、リン酸リボフラビンナトリウム、塩酸ピリドキシン、ニコチン酸アミド、葉酸、ビオチン、ビタミンＡ、Ｌ−アスコルビン酸、α−グリコシルアスコルビン酸等及びそれらの誘導体が挙げられ、必要に応じてこれらを適宜組合せて配合してよい。
【００１９】
更に、本発明の保水効果が損なわれない限りにおいて、通常の眼用製剤に使用される添加剤、例えば保存剤、例えばパラオキシ安息香酸メチル、デヒドロ酢酸ナトリウム、塩化ベンザルコニウム等；安定化剤、例えばエデト酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム等；緩衝剤、例えば硼砂、硼酸、炭酸水素ナトリウム等；増粘剤、例えばメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、コンドロイチン硫酸、ポリビニルアルコール、プルラン等；溶解補助剤、例えばポリソルべート８０等；を配合してよい。
【００２０】
本発明の眼用医薬組成物が眼軟膏剤である場合、慣用の医薬的に許容される軟膏担体を使用でき、具体的には、眼用白色ワセリン、プラスチベース等を例示できる。添加剤としては、流動パラフィン等を使用してよい。さらに、本発明の眼用医薬組成物には、必要に応じて、メチルプレドニゾロン等のステロイドホルモン、テトラサイクリン等の抗炎症剤、ペニシリンＧ等の抗生物質、サイクロスポリン等の免疫抑制剤、免疫調節剤、鎮痛剤、自己血清、ヒアルロン酸等の医薬品を適宜組合せて配合してもよい。
【００２１】
本発明の眼用医薬組成物の用法・用量は、患者の症状により適宜調整することができる。点眼剤の場合には、通常、１回数滴、例えば１〜３、４滴（１滴は約０．０５ｍｌ程度と想定）程度を、１日１回〜数回、例えば１〜５回、好ましくは１〜３回程度点眼すればよい。眼洗浄剤の場合には、眼洗浄専用容器や洗瓶などを使用して適用で１日１回〜数回、例えば１〜５回、好ましくは１〜３回程度洗浄すればよい。眼軟膏剤の場合には１日１〜３回程度適量を結膜嚢内に塗布して使用すればよい。
【００２２】
以下に本発明の限定でない実施例を提供する。
【００２３】
【実施例】
本研究では、アセチル化ヒアルロン酸（以下「ＡｃＨＡ」）のドライアイ治療用の眼用医薬組成物への応用をめざして、人あるいは動物角膜の代用としてソフトコンタクトレンズ（ＳＣＬ）を用い、ＡｃＨＡの水分蒸発抑制効果を調べた。
【００２４】
実験材料と実験方法
角膜の代用として用いたＳＣＬは、チバビジョン（東京）のフォーカスデーリーズ（１日用；直径１３．８ｍｍ）とした。
実験にもちいたＳＣＬは、生体適合性が高く手術縫合糸や人工血管に使われている医療用材料（ポリビニール・アルコール、ＰＶＡ）をベースにしたハイドロジェルであるｎｅｌｆｉｌｃｏｎ  Ａ（ネルフィルコン  Ａ）から作られている。このＳＣＬは高い含水量（６９％）を保持し、充分な酸素透過量を示す。このため、このＳＣＬは生体適合性が高く、角膜と親和性が良いため、本研究のような物性研究（水分蒸発量の測定等）に用いる代用角膜として適当である。
対照点眼剤として等張化リン酸緩衝液（ＰＢＳ）（ダルベッコＰＢＳ（−）粉末「ニッスイ」より調製、日水製薬（東京））を、ヒアルロン酸（ＨＡ）点眼剤としてヒアレイン０．１（ヒアルロン酸ナトリウム０．１重量／容積％含有；ヒアルロン酸の平均分子量：６００，０００〜１，２００，０００；参天製薬（大阪））を用いた。ＡｃＨＡ点眼剤はＡｃＨＡ（推定平均分子量約１００，０００、アセチル化置換数約３．５）をＰＢＳに最終濃度０．１重量／容積％となるように溶解させて調製した。
【００２５】
ＡｃＨＡは次の通りにして調製した。
３００ｍｌ容のガラス製三角コルベンに２０ｍｌの市販の特級酢酸及び８０ｍｌの無水酢酸を入れ、６ｇのヒアルロン酸（平均分子量約１，２００ｋｄのヒアルロン酸，資生堂（株）製）の微細粉末を攪拌しながら少しずつ加えた。続いて、４ｍｌの濃硫酸をゆっくり加え、室温で１時間攪拌してアセチル化反応を行なわせた。反応液は粘稠な白色液体となった。
３ｌのガラス製ビーカーに、あらかじめ２ｌの精製水を入れておき、攪拌しながら上記反応液を糸状となるようにゆっくり加えた。生じたアセチル化ヒアルロン酸の沈殿を分取し、沈殿はさらに２ｌの精製水で２回同様に洗浄した。上記沈殿を１ｌのガラス製ビーカーに移し、８０％（ｖ／ｖ）アセトン水溶液２５０ｍｌ及び５０％乳酸ナトリウム水溶液９ｇを加え、攪拌しながら沈殿を完全に溶解させた。続いて、アセトン４００ｍｌをゆっくり加え、アセチル化ヒアルロン酸のゲル状沈殿を再沈殿させた。上記沈殿を分取した後、ホモジナイザーを併用しエタノール１００ｍｌを用いて１００００ｒｐｍの速度で１０分間の洗浄を２回行なった。次に、減圧濾過により沈殿を分取した後、減圧乾燥し、アセチル化ヒアルロン酸の白色粉末を得た。
【００２６】
測定方法
ＳＣＬの重量測定にはメトラートレド社のＡＧ６４天秤を使用し、重量データはパーソナルコンピューターに転送・保存した。データの統計学的検定には、データーの分布に影響されないノンパラメトリック検定法を用いた。
実験（点眼、放置、測定）は湿度５０％、温度２５℃の恒温・恒湿室で行った。等張リン酸緩衝液に保存された状態で包装されているＳＣＬをそれぞれの包装より歯科用ピンセットで取り出し、予め重量測定を行っているプラスチックペトリ皿のふた（直径３０ｍｍ）にＳＣＬの凸部を上にしておき、ＳＣＬを含むペトリ皿の重量を測定し、その後直ちにＳＣＬの中心部に２０μｌのサンプル点眼剤を滴下した。その後、２０分経過後、ＳＣＬを含むペトリ皿の重量を測定し、その後直ちにＳＣＬの中心部に２０μｌのサンプル点眼剤を再度滴下した。この測定とサンプル滴下を２０分間隔で合計４回繰り返した。最終サンプル滴下後、２０分間隔で、実験開始後１２０分までＳＣＬ重量を測定した。
【００２７】
実験結果
下記表１に示すように、実験開始後１２０分でのＡｃＨＡ点眼剤群のＳＣＬは、対照点眼剤群に対しても、ＨＡ点眼剤群に対しても、有意にその水分蒸発量が抑制された。
【表１】
2004262777.tif 000003
【００２８】
結論
０．１％ＡｃＨＡ点眼剤はＳＣＬからの水分蒸発を有意に抑制することができた。このことから、ＡｃＨＡ点眼剤はドライアイ治療用の点眼剤として応用される可能を持っていることが明らかとなった。
【００２９】
2004262777.tif 000004
【００３０】
尚、この処方では，ＡｃＨＡは０．１から１０ｇくらいまで入れることができ。ＡｃＨＡは高分子量（約１０万）であるため、高濃度にしても点眼剤の浸透圧比に影響を与えないものと考えられる。
【００３１】
【発明の効果】
アセチル化ヒアルロン酸を使用することで、ヒアルロン酸含有のものと比べ、より長期間にわたり角膜上に留まって保水効果を発揮するドライアイ用眼用医薬組成物の提供が可能となる。