(57)【要約】　　　（修正有）【課題】中性脂質の蓄積を伴う疾患の診断及び治療に有用な疾患マーカー等を提供する。【解決手段】特定の塩基配列で記載されるいずれかの塩基配列において、連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／又は該ポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチド、並びに特定のアミノ酸配列で記載されるいずれかの配列を有するタンパク質を認識する抗体等からなる、中性脂質の蓄積を伴う疾患の疾患マーカー。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のいずれかに記載の塩基配列において、連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／又は該ポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドからなる、中性脂質の蓄積を伴う疾患の疾患マーカー。
【請求項２】
中性脂質の蓄積を伴う疾患の検出においてプローブ又はプライマーとして使用される請求項１に記載の疾患マーカー。
【請求項３】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、中性脂質の蓄積を伴う疾患の検出方法：
（ａ）被験者の生体試料から調製されたＲＮＡ又はそれから転写された相補的ポリヌクレオチドと、請求項１又は請求項２に記載の疾患マーカーとを結合させる工程、
（ｂ）該疾患マーカーに特異的に結合した生体試料由来のＲＮＡ又は該ＲＮＡから転写された相補的ポリヌクレオチドを、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）上記（ｂ）で得られる被験者の測定結果が、正常な生体試料について得られる結果に比して疾患マーカーへの結合量が増大していることを指標として、中性脂質の蓄積を伴う疾患の罹患を判断する工程。
【請求項４】
配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質を認識する抗体を含有する、中性脂質の蓄積を伴う疾患の疾患マーカー。
【請求項５】
中性脂質の蓄積を伴う疾患の検出においてプローブとして使用される請求項４に記載の疾患マーカー。
【請求項６】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む中性脂質の蓄積を伴う疾患の検出方法：
（ａ）被験者の生体試料から調製されたタンパク質と請求項４又は５に記載の疾患マーカーとを結合させる工程、
（ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試料由来のタンパク質又はその部分ペプチドを、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）上記（ｂ）で得られる被験者の測定結果が、正常な生体試料について得られる結果に比して疾患マーカーへの結合量が増大していることを指標として、中性脂質の蓄積を伴う疾患の罹患を判断する工程。
【請求項７】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現を制御する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質と配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞における配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログの発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応する遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログの発現量を変動させる被験物質を選択する工程。
【請求項８】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの発現を制御する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質と配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞における配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの発現量を測定し、該発現量を、被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応するタンパク質又はそのホモログの発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの発現量を変動させる被験物質を選択する工程。
【請求項９】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、配列番号：２０〜２２のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性を制御する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質を配列番号：２０〜２２のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログに接触させる工程、
（ｂ）上記（ａ）の工程に起因して生じる配列番号：２０〜２２のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性を測定し、該機能又は活性を被験物質を接触させない場合の配列番号：２０〜２２のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、配列番号：２０〜２２のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性の変動をもたらす被験物質を選択する工程。
【請求項１０】
中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤の有効成分を探索するための方法である、請求項７〜９のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項１１】
配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログの発現を制御する物質を有効成分とする、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤。
【請求項１２】
配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログの発現を制御する物質が請求項７に記載のスクリーニング法により得られるものである、請求項１１に記載の中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤。
【請求項１３】
配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの発現量を制御する物質を有効成分とする、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤。
【請求項１４】
配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの発現量、機能又は活性を制御する物質が、請求項８に記載のスクリーニング法により得られるものである、請求項１３記載の、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤。
【請求項１５】
配列番号：２０〜２２のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性を制御する物質を有効成分とする、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤。
【請求項１６】
配列番号：２０〜２２のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性を制御する物質が、請求項９に記載のスクリーニング法により得られるものである、請求項１５に記載の、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は中性脂質の蓄積を伴う疾患の診断に有用な疾患マーカー及びその利用に関する。より詳細には、本発明は、肥満症、脂肪肝、ＩＩ型糖尿病、高脂血症、高血圧、動脈硬化症、又は虚血性心疾患等の中性脂質の蓄積を伴う疾患の診断においてプライマー又は検出プローブとして有効に利用できる疾患マーカー、かかる疾患マーカーを利用した当該疾患の検出方法（診断方法）、当該疾患の改善剤又は治療剤として有効な物質をスクリーニングする方法、並びに該方法によって得られる改善剤又は治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、食生活の西洋化や社会的ストレスの増加等により、肥満症、脂肪肝、ＩＩ型糖尿病、高脂血症、高血圧、動脈硬化症、虚血性心疾患等の生活習慣病患者の増加が著しく、大きな問題となっている。トリグリセリドやコレステロールなどの中性脂質の肝臓等の内臓や血液中におけるレベルの上昇が生活習慣病の主要な原因となることが知られており、中性脂質のレベルを抑制する薬剤が求められている。
中性脂質は脂肪細胞、肝細胞、及びマクロファージ等に細胞内脂質顆粒として蓄積されるが、エネルギーの備蓄という生理的意義を持つ反面、その過剰備蓄が生活習慣病の原因となっている。すなわち、細胞内脂質顆粒の増大を抑制することができれば、生活習慣病の改善につながると期待される。
脂質顆粒は「油滴」であり、脂質顆粒中に含まれるタンパク質については、ＡＤＲＰ（Ａｄｉｐｏｃｙｔｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ）（非特許文献１）等が報告されているものの、ほとんど知られていない。
【０００３】
一方、プロテインキナーゼＣは、細胞の増殖、分化、癌化及びアポトーシス等に関係する酵素であり、神経、免疫系等の情報伝達等で重要な働きをしているタンパク質をリン酸化する。プロテインキナーゼＣ　ミュー（Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　Ｃ　Ｍｕ；配列番号：２０に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質）、プロテインキナーゼＣ　デルタ（Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　Ｃ　ｄｅｌｔａ；配列番号：２１に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質）及びプロテインキナーゼＣ　ニュー（Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　Ｃ　Ｎｕ；配列番号：２２に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質）はプロテインキナーゼＣのアイソフォームであり、このうちプロテインキナーゼＣ　デルタは、脂肪細胞に発現することが知られている（非特許文献２）。
また、Ｐ５３−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ　ｇｅｎｅ　３（以下ＰＲＧ３と略する。；配列番号：２４に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質）はガン抑制蛋白ｐ５３依存的細胞死の際発現誘導され、通常は細胞質に局在している（非特許文献３）。Ｃａｒｇｏ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ＴＩＰ４７（配列番号：２９に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質）はエンドソームからトランスゴルジネットワークへの輸送担体のレセプタータンパク質である。ＮＡＤ（Ｐ）依存性ステロイドデヒドロゲナーゼ；　Ｈ１０５Ｅ３（ＮＡＤ（Ｐ）　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｓｔｅｒｏｉｄ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；　Ｈ１０５Ｅ３）（配列番号：３１に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質）及び１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１１（１７βＨＳＤ１１；配列番号：３８に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質）は、ステロイドの代謝酵素の一種である。グリセロアルデヒド　３−ホスフェ−トデヒドロゲナーゼ（配列番号：３２に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質）は、脂質代謝酵素の一種である。アネクシンＩＩ（ａｎｎｅｘｉｎ　ＩＩ；配列番号：３４に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質）は、ホスホリパーゼＡ２の阻害活性を有する膜蛋白質である。Ｒａｂ　５Ｃ（配列番号：３５に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質）及びＲａｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒａｐ　１Ｂ（配列番号：３７に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質）はＲａｓ　ｆａｍｉｌｙ　ｓｍａｌｌ　ＧＴＰａｓｅの一種である。膜ＩｇＤ結合タンパク質３１（ｍｅｍｂｒａｎｅＩｇＤ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　３１；配列番号：３６に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質）は、Ｂ細胞受容体を構成している膜タンパク質の一つであり、その機能については不明である。
【０００４】
また、ラノステロール合成酵素（配列番号：２６に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質）、アシル−ＣｏＡ合成酵素３（配列番号：２７に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質）、アシル−ＣｏＡ合成酵素４ｖａｒｉａｎｔ１（配列番号：２５に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質）、及びＮＡＤＨ−ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　Ｂ５　還元酵素（配列番号：３３に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質）は脂肪酸の合成に関与する酵素である。
しかしながら、上記のタンパク質が脂質顆粒中に存在すること、及び上記のタンパク質が生活習慣病等の中性脂質の蓄積を伴う疾患に関係することは、全く知られていなかった。
【０００５】
更に、ＫＩＡＡ０７４７で表される配列番号：４に記載の塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：２３に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするＤＮＡ）は、ヒト脳の新規ｃＤＮＡの１種として公知のＤＮＡであり（非特許文献４）、Ｐ６３で表される配列番号：９に記載の塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：２８に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするＤＮＡ）、及びＣＧＩ４９で表される配列番号：１１に記載の塩基配列を有するＤＮＡ（配列番号：３０に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするＤＮＡ）もいずれも公知ＤＮＡであるが、その機能については不明である。
【０００６】
【非特許文献１】
Ｂｒａｓａｅｍｌｅ，　Ｄ．　Ｌ．，　Ｊ．　Ｌｉｐｉｄ　Ｒｅｓ．，　３８，　２２４９−２２６３　（１９９７）
【非特許文献２】
Ｆｒｅｖｅｒｔ　Ｅ．　Ｕ．，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ．　３１６　（　Ｐｔ　３）：８６５−７１　（１９９６）
【非特許文献３】
Ｈｉｒｏ　Ｙ．，　ｅｔ　ａｌ．，　ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ．，　５２４（１−３），　１６３−７１，　（２００２）
【非特許文献４】
Ｎａｇａｓｅ，　Ｔ．，　ｅｔ　ａｌ．，　ＤＮＡ　Ｒｅｓ．　５：２７７−２８６（１９９８）
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、中性脂質の蓄積を伴う疾患の診断及び治療に有用な疾患マーカーを提供することを目的とする。さらに本発明は該疾患マーカーを利用した中性脂質の蓄積を伴う疾患の検出方法（遺伝子診断方法）、該疾患の改善又は治療に有用な薬物をスクリーニングする方法、並びに該疾患の改善又は治療に有用な薬物を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するために、脂質顆粒に含まれるタンパク質の同定を試みた。
本発明者らは、既に、中性脂質の蓄積を伴う疾患における、細胞内脂質顆粒形成のメカニズム解明の一環として、脂質顆粒を蓄積する細胞系を用いて、ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおける細胞レベルでの脂質顆粒の調製方法を確立した。すなわち、自発的に脂質顆粒の蓄積を起すという特徴を有し、中性脂質の蓄積を伴う疾患のモデルと考えられるヒト肝由来培養細胞ＨｕＨ７等を用いて、上記疾患と同様に脂質顆粒が蓄積された状態の細胞を調製した。該細胞を培養後に破砕し、平衡密度勾配遠心分離を行うことで、脂質二重膜からなるオルガネラ、可溶性タンパク質、及び比重が非常に軽い画分（油滴を含む軽比重画分）を分離精製することができる。細胞由来タンパク質のほとんどは高比重画分に含まれるが、前記軽比重画分に、脂質顆粒に局在することが知られているＡＤＲＰが存在し、脂質顆粒画分であることが確認された。
【０００９】
更に、本発明者らは、該脂質顆粒画分に含まれるタンパク質を単離し、構造決定を行った。その結果、従来は中性脂質の蓄積を伴う疾患との関連が明らかではなかった、配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８（配列番号：２０〜３８）のいずれかに記載のアミノ酸配列からなるタンパク質が脂質顆粒に存在していることがわかった。
更に、配列番号：２０、２１、２２、２３、及び２４（配列番号：２０〜２４）のいずれかに記載のアミノ酸配列からなるタンパク質は、ヒト脂肪組織で、特異的に発現していることがわかった。
【００１０】
従って、本発明者らは、中性脂質の蓄積を伴う疾患において、配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質、及びこれらをコードする遺伝子（配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有するポリヌクレオチド）が、優れた疾患マーカーであるとの知見を得た。さらに、これらの遺伝子の発現、又はこれらの遺伝子によりコードされるタンパク質の発現もしくは機能（活性）の制御を指標としたスクリーニング系は、中性脂質の蓄積を伴う疾患の予防、改善又は治療剤の探索に有効であるとの知見を得た。
本発明はかかる知見を基礎にして完成するに至ったものである。
【００１１】
すなわち、本発明は、下記に掲げるものである：
（１）　配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のいずれかに記載の塩基配列において、連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／又は該ポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドからなる、中性脂質の蓄積を伴う疾患の疾患マーカー、
（２）　中性脂質の蓄積を伴う疾患の検出においてプローブ又はプライマーとして使用される請求項１に記載の疾患マーカー、
（３）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、中性脂質の蓄積を伴う疾患の検出方法：
（ａ）被験者の生体試料から調製されたＲＮＡ又はそれから転写された相補的ポリヌクレオチドと、（１）又は（２）に記載の疾患マーカーとを結合させる工程、
（ｂ）該疾患マーカーに特異的に結合した生体試料由来のＲＮＡ又は該ＲＮＡから転写された相補的ポリヌクレオチドを、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）上記（ｂ）で得られる被験者の測定結果が、正常な生体試料について得られる結果に比して疾患マーカーへの結合量が増大していることを指標として、中性脂質の蓄積を伴う疾患の罹患を判断する工程、
（４）　配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質を認識する抗体を含有する、中性脂質の蓄積を伴う疾患の疾患マーカー、
（５）　中性脂質の蓄積を伴う疾患の検出においてプローブとして使用される請求項４に記載の疾患マーカー、
（６）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む中性脂質の蓄積を伴う疾患の検出方法：
（ａ）被験者の生体試料から調製されたタンパク質と（４）又は（５）に記載の疾患マーカーとを結合させる工程、
（ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試料由来のタンパク質又はその部分ペプチドを、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）上記（ｂ）で得られる被験者の測定結果が、正常な生体試料について得られる結果に比して疾患マーカーへの結合量が増大していることを指標として、中性脂質の蓄積を伴う疾患の罹患を判断する工程、
（７）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現を制御する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質と配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞における配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログの発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応する遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログの発現量を変動させる被験物質を選択する工程、
（８）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、配列番号：１、２、３、４、及び５のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現を制御する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質と配列番号：１、２、３、４、及び５のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞における配列番号：１、２、３、４、及び５のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログの発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応する遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、配列番号：１、２、３、４、及び５のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログの発現量を変動させる被験物質を選択する工程、
（９）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの発現を制御する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質と配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞における配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの発現量を測定し、該発現量を、被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応するタンパク質又はそのホモログの発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの発現量を変動させる被験物質を選択する工程、
（１０）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、配列番号：２０、２１、２２、２３、及び２４のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの発現を制御する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質と配列番号：２０、２１、２２、２３、及び２４のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞における配列番号：２０、２１、２２、２３、及び２４のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの発現量を測定し、該発現量を、被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応するタンパク質又はそのホモログの発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、配列番号：２０、２１、２２、２３、及び２４のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの発現量を変動させる被験物質を選択する工程、
（１１）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性を制御する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質を配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログに接触させる工程、
（ｂ）上記（ａ）の工程に起因して生じる配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性を測定し、該機能又は活性を被験物質を接触させない場合の配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性の変動をもたらす被験物質を選択する工程、
（１２）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、配列番号：２０〜２２のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性を制御する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質を配列番号：２０〜２２のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログに接触させる工程、
（ｂ）上記（ａ）の工程に起因して生じる配列番号：２０〜２２のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性を測定し、該機能又は活性を被験物質を接触させない場合の配列番号：２０〜２２のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、配列番号：２０〜２２のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性の変動をもたらす被験物質を選択する工程、
（１３）　中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤の有効成分を探索するための方法である、（７）〜（１２）のいずれかに記載のスクリーニング方法、
（１４）　配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログの発現を制御する物質を有効成分とする、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤、
（１５）　配列番号：１、２、３、４、及び５のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログの発現を制御する物質を有効成分とする、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤、
（１６）　配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログの発現を制御する物質が（７）に記載のスクリーニング法により得られるものである、（１３）に記載の中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤、
（１７）　配列番号：１、２、３、４、及び５のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログの発現を制御する物質が（８）に記載のスクリーニング法により得られるものである、（１４）に記載の中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤、
（１８）　配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの発現量を制御する物質を有効成分とする、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤、
（１９）　配列番号：２０、２１、２２、２３、及び２４のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの発現量を制御する物質を有効成分とする、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤、
（２０）　配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの発現量、機能又は活性を制御する物質が、（９）に記載のスクリーニング法により得られるものである、（１８）に記載の、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤、
（２０）　配列番号：２０、２１、２２、２３、及び２４のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの発現量、機能又は活性を制御する物質が、（１０）に記載のスクリーニング法により得られるものである、（１９）に記載の、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤、
（２１）　配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性を制御する物質を有効成分とする、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤、
（２２）　配列番号：２０〜２２のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性を制御する物質を有効成分とする、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤、
（２３）　配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性を制御する物質が、（１１）に記載のスクリーニング法により得られるものである、（２１）に記載の、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤、及び
（２４）　配列番号：２０〜２２のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログの機能又は活性を制御する物質が、（１２）に記載のスクリーニング法により得られるものである、（２２）に記載の、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤。
【００１２】
【発明の実施の形態】
以下、本明細書において、アミノ酸、（ポリ）ペプチド、（ポリ）ヌクレオチドなどの略号による表示は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢの規定〔ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ，　Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ．，　１３８：　９　（１９８４）〕、「塩基配列又はアミノ酸配列を含む明細書等の作成のためのガイドライン」（日本国特許庁編）、及び当該分野における慣用記号に従う。
【００１３】
本明細書において「遺伝子」又は「ＤＮＡ」とは、２本鎖ＤＮＡのみならず、それを構成するセンス鎖及びアンチセンス鎖といった各１本鎖ＤＮＡを包含する趣旨で用いられる。またその長さによって特に制限されるものではない。従って、本明細書において遺伝子（ＤＮＡ）とは、特に言及しない限り、ヒトゲノムＤＮＡを含む２本鎖ＤＮＡ及びｃＤＮＡを含む１本鎖ＤＮＡ（正鎖）並びに該正鎖と相補的な配列を有する１本鎖ＤＮＡ（相補鎖）、及びこれらの断片のいずれもが含まれる。
【００１４】
また、当該「遺伝子」又は「ＤＮＡ」には、特定の塩基配列で示される「遺伝子」又は「ＤＮＡ」だけでなく、これらによりコードされるタンパク質と生物学的機能が同等であるタンパク質（例えば、同族体、変異体、誘導体など）をコードする「遺伝子」又は「ＤＮＡ」が包含される（本明細書においては、これらを総括して上記特定の塩基配列で示される「遺伝子」又は「ＤＮＡ」の「ホモログ」ともいう。）。かかるホモログとしては、具体的には、後述する（１−１）項に記載のストリンジェントな条件で、前記特定塩基配列で示される「遺伝子」又は「ＤＮＡ」とハイブリダイズするものを挙げることができる。
【００１５】
例えば同族体をコードする遺伝子（ホモログ）としては、ヒト遺伝子に対応するマウスやラットなどの他生物種の遺伝子が例示できる。これらの遺伝子（ホモログ）は、ＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ／）により同定することができる。具体的には、特定ヒト塩基配列をＢＬＡＳＴ（Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，　９０：　５８７３−５８７７，　１９９３、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／）にかけて一致する（Ｓｃｏｒｅが最も高く、Ｅ−ｖａｌｕｅが０でかつＩｄｅｎｔｉｔｙが１００％を示す）配列のアクセッション番号を取得する。そのアクセッション番号をＵｎｉＧｅｎｅ　（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＵｎｉＧｅｎｅ／）に入力して得られたＵｎｉＧｅｎｅ　Ｃｌｕｓｔｅｒ　ＩＤ（Ｈｓ．で示す番号）をＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅに入力する。結果として得られた他生物種遺伝子とヒト遺伝子との遺伝子ホモログの相関を示したリストから、ヒト遺伝子に該当するマウスやラットなどの他生物種の遺伝子を選抜することができる。なお、遺伝子又はＤＮＡは、機能領域の別を問うものではなく、例えば発現制御領域、コード領域、エキソン、又はイントロンを含むことができる。
【００１６】
本明細書において「ポリヌクレオチド」とは、ＲＮＡ及びＤＮＡのいずれをも包含する趣旨で用いられる。なお、上記ＤＮＡには、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡのいずれもが含まれる。また上記ＲＮＡには、ｔｏｔａｌ　ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、及び合成のＲＮＡのいずれもが含まれる。
【００１７】
本明細書において「タンパク質」又は「（ポリ）ペプチド」には、特定の塩基配列で示される「タンパク質」又は「（ポリ）ペプチド」だけでなく、これらと生物学的機能が同等である「タンパク質」又は「（ポリ）ペプチド」（例えば、同族体、変異体、誘導体など）が包含される。なお、本明細書において、これらを上記特定のアミノ酸配列で示される「タンパク質」又は「（ポリ）ペプチド」の「ホモログ」ともいう。例えば、上記同族体（ホモログ）としては、ヒトのタンパク質に該当するマウスやラットなどの他生物種のタンパク質が例示でき、これらはＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ　（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ／）により同定された遺伝子（ホモログ）の塩基配列から演繹的に同定することができる。また、上記変異体には、天然に存在するアレル変異体、天然に存在しない変異体、及び人為的に欠失、置換、付加及び挿入されることによって改変されたアミノ酸配列を有する変異体が包含される。なお、かかる変異体としては、変異のないタンパク質又は（ポリ）ペプチドと、少なくとも７０％、好ましくは８０％、より好ましくは９５％、さらにより好ましくは９７％相同なものを挙げることができる。
【００１８】
本明細書でいう「抗体」には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、又はＦａｂフラグメントやＦａｂ発現ライブラリーによって生成されるフラグメントなどのように抗原結合性を有する上記抗体の一部が包含される。
【００１９】
さらに本明細書において「疾患マーカー」とは、中性脂質の蓄積を伴う疾患の罹患の有無若しくは罹患の程度を診断するために、また、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善、治療などに有用な候補物質をスクリーニングするために、直接又は間接的に利用されるものであり、例えば、中性脂質の蓄積の亢進に関連して生体内での発現が変動する遺伝子又はタンパク質を特異的に認識し、また結合することのできる（ポリ）（オリゴ）ヌクレオチド及び抗体が包含される。これらの（ポリ）（オリゴ）ヌクレオチド及び抗体は、上記性質に基づいて、生体内、特に脂肪組織などで発現した上記遺伝子及びタンパク質を検出するためのプローブとして、また（オリゴ）ヌクレオチドは生体内、特に脂肪組織などで発現した上記遺伝子を増幅するためのプライマーとして有効に利用することができる。
すなわち、本明細書において診断対象となる「生体組織」とは、中性脂質の蓄積を伴う疾患に伴い本発明の遺伝子が発現上昇する組織を指し、具体的には脂肪組織又は血液などを指す。
【００２０】
本発明は、前述するように、配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８（配列番号：２０〜３８）のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質（以下、これらのタンパク質を総称して本タンパク質ともいう。）が、中性脂質の蓄積を伴う疾患のモデルとなり得るＨｕＨ７細胞において特異的に発現が増加していることを見出したこと、及びヒト脂肪組織において他のヒト組織に比べて特異的に発現が増加していることを見出したことに基づくものである。
【００２１】
従って、これらのタンパク質及びそれらをコードする遺伝子（配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び１９（配列番号：１〜１９）のいずれかに記載の塩基配列を有するポリヌクレオチド（以下、これらのポリヌクレオチドを総称して本遺伝子ともいう。）は、中性脂質の蓄積を伴う疾患の解明、診断、予防及び治療に有効に利用することができ、かかる利用によって医学並びに臨床学上、有用な情報や手段を得ることができる。また、本タンパク質及び本遺伝子並びにそれらからの派生物（例えば、抗体など）は、上記中性脂質の蓄積を伴う疾患の治療、並びに該治療に有効に用いられる薬剤の開発に好適に利用することができる。さらに、個体又は脂肪組織における、本タンパク質や本遺伝子の発現の検出、又は該遺伝子の変異又はその発現不全の検出は、中性脂質の蓄積を伴う疾患の解明や診断に有効に利用することができる。
以下、本タンパク質及び本遺伝子について、具体的な用途を説明する。
【００２２】
（１）中性脂質の蓄積を伴う疾患の疾患マーカー及びその応用
（１−１）　ポリヌクレオチド
本発明は、前述するように、配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質が、中性脂質の蓄積を伴う疾患のモデルとなり得るＨｕＨ７細胞において特異的に発現が増加しているという知見、及び配列番号：２０〜２４のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質がヒト脂肪組織において他のヒト組織に比べて特異的に発現が増加しているという知見を発端に、これらをコードする遺伝子（ポリヌクレオチド）の発現の有無や発現の程度を検出することによって上記中性脂質の蓄積を伴う疾患の罹患の有無や罹患の程度が検出でき、該疾患の診断を正確に行うことができるという発想に基づくものである。すなわち、本発明は、被験者における上記遺伝子の発現の有無又はその程度を検出することによって、被験者について中性脂質の蓄積を伴う疾患の罹患の有無又は罹患の程度を診断することのできるツール（疾患マーカー）として有用なポリヌクレオチドを提供するものである。
【００２３】
本発明における配列番号：１〜１９に記載の塩基配列を有する遺伝子は、公知であり、当業者にとって公知の方法で取得することができる。
すなわち配列番号：１に記載の塩基配列からなる遺伝子は、プロテインキナーゼＣ　ミュー（Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　Ｃ　Ｍｕ）として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００２７４２に記載されている。
配列番号：２に記載の塩基配列からなる遺伝子は、プロテインキナーゼＣ　デルタ（Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　Ｃ　ｄｅｌｔａ）として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００６２５４に記載されている。
配列番号：３に記載の塩基配列からなる遺伝子は、プロテインキナーゼＣ　ニュー（Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　Ｃ　Ｎｕ）として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００５８１３に記載されている。
配列番号：４に記載の塩基配列からなる遺伝子は、ヒト脳の新規ｃＤＮＡの１種としてとして公知であり、その取得方法及び配列はＮａｇａｓｅ，　Ｔ．，　ｅｔ　ａｌ．，　ＤＮＡ　Ｒｅｓ．　５：２７７−２８６（１９９８）、又はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿０１５２９２に記載されている。該遺伝子がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質（配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質）は、ラットＧＬＵＴ４　ｖｅｓｉｃｌｅ　ｐｒｏｔｅｉｎのアミノ酸配列と８７．６％のホモロジーを有し、ヒトＧＬＵＴ４　ｖｅｓｉｃｌｅ　ｐｒｏｔｅｉｎであると考えられる。ＧＬＵＴ４　ｖｅｓｉｃｌｅ　ｐｒｏｔｅｉｎはｍｅｍｂｒａｎｅ　ｂｏｕｎｄ　Ｃ２　ｄｏｍａｉｎ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎを有し、カルシウム依存的なリン脂質結合に関与する（Ｍｏｒｒｉｓ，　Ｎ．Ｊ．，　Ｂｉｏｃｈｉｍ．　Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ａｃｔａ　１４３１：５２５−５３０　（１９９９））。
配列番号：５に記載の塩基配列からなる遺伝子は、Ｐ５３−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ　ｇｅｎｅ　３（ＰＲＧ３）として公知であり、その取得方法及び配列は、Ｈｉｒｏ　Ｙ．，　ｅｔ　ａｌ．，　ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ．，　５２４（１−３），　１６３−７１，　（２００２）又はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿０３２７９７に記載されている。
配列番号：６に記載の塩基配列からなる遺伝子は、アシル−ＣｏＡ合成酵素４ｖａｒｉａｎｔ１遺伝子として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００４４５８に記載されている。
配列番号：７に記載の塩基配列からなる遺伝子は、ラノステロール合成酵素遺伝子として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００２３４０に記載されている。
配列番号：８に記載の塩基配列からなる遺伝子は、アシル−ＣｏＡ合成酵素３遺伝子として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００４４５７に記載されている。
配列番号：９に記載の塩基配列からなる遺伝子は、ｐ６３として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００６８２５に記載されている。
配列番号：１０に記載の塩基配列からなる遺伝子は、Ｃａｒｇｏ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ＴＩＰ４７として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００５８１７に記載されている。
配列番号：１１に記載の塩基配列からなる遺伝子は、ＣＧＩ４９として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿０１６００２に記載されている。
配列番号：１２に記載の塩基配列からなる遺伝子は、ＮＡＤ（Ｐ）依存性ステロイドデヒドロゲナーゼ；　Ｈ１０５Ｅ３（ＮＡＤ（Ｐ）　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｓｔｅｒｏｉｄ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；　Ｈ１０５Ｅ３）遺伝子として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿０１５９２２に記載されている。
配列番号：１３に記載の塩基配列からなる遺伝子は、グリセロアルデヒド　３−ホスフェ−トデヒドロゲナーゼ遺伝子として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００２０４６に記載されている。
配列番号：１４に記載の塩基配列からなる遺伝子は、ＮＡＤＨ−ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　Ｂ５　還元酵素として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿０００３９８に記載されている。
配列番号：１５に記載の塩基配列からなる遺伝子は、アネクシンＩＩ（ａｎｎｅｘｉｎ　ＩＩ）遺伝子として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００４０３９に記載されている。
配列番号：１６に記載の塩基配列からなる遺伝子は、Ｒａｓ　ｆａｍｉｌｙ　ｓｍａｌｌ　ＧＴＰａｓｅｒａｂ５Ｃとして公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００４５８３に記載されている。
配列番号：１７に記載の塩基配列からなる遺伝子は、膜ＩｇＤ結合タンパク質遺伝子として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００５７４５に記載されている。
配列番号：１８に記載の塩基配列からなる遺伝子は、Ｒａｓ　ｆａｍｉｌｙ　ｓｍａｌｌ　ＧＴＰａｓｅＲａｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒａｐ　１Ｂ遺伝子として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿０１５６４６に記載されている。
配列番号：１９に記載の塩基配列からなる遺伝子は、１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１１（１７βＨＳＤ１１）遺伝子として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＢＣ０２１６７３に記載されている。
【００２４】
また、本発明のポリヌクレオチドは、後述の（３）項に記載するような中性脂質の蓄積を伴う疾患の予防、改善又は治療に有用な候補物質のスクリーニングにおいて、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現変動を検出するためのスクリーニングツール（疾患マーカー）としても有用である。
【００２５】
本発明の疾患マーカーは、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の１又は複数の塩基配列において、連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／又はそれに相補的なポリヌクレオチドからなることを特徴とする。
【００２６】
ここで相補的なポリヌクレオチド（相補鎖、逆鎖）とは、上記各配列番号に示される塩基配列からなるポリヌクレオチドの全長配列、又は上記各塩基配列において少なくとも連続した１５塩基長の塩基配列を有するその部分配列（ここでは便宜上、これらを「正鎖」ともいう）に対して、Ａ：Ｔ及びＧ：Ｃといった塩基対関係に基づいて、塩基的に相補的な関係にあるポリヌクレオチドを意味するものである。ただし、かかる相補鎖は、対象とする正鎖の塩基配列と完全に相補配列を形成する場合に限らず、対象とする正鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズすることができる程度の相補関係を有するものであってもよい。なお、ここでストリンジェントな条件は、Ｂｅｒｇｅｒ　ａｎｄ　Ｋｉｍｍｅｌ　（１９８７，　Ｇｕｉｄｅ　ｔｏ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，　Ｖｏｌ．　１５２，　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ　ＣＡ）　に示されるように、複合体或いはプローブと結合する核酸の融解温度（Ｔｍ）に基づいて決定することができる。例えばハイブリダイズ後の洗浄条件として、通常「１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、３７℃」程度の条件を挙げることができる。相補鎖はかかる条件で洗浄しても対象とする正鎖とハイブリダイズ状態を維持するものであることが好ましい。特に制限されないが、より厳しいハイブリダイズ条件として「０．５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、４２℃」程度、さらに厳しいハイブリダイズ条件として「０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃」程度の洗浄条件を挙げることができる。具体的には、このような相補鎖として、対象の正鎖の塩基配列と完全に相補的な関係にある塩基配列からなる鎖、並びに該正鎖と少なくとも９０％、好ましくは９５％の相同性を有する塩基配列からなる鎖を例示することができる。
【００２７】
また、正鎖側のポリヌクレオチドには、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列又はその部分配列を有するものだけでなく、上記相補鎖の塩基配列に対してさらに相補的な関係にある塩基配列からなる鎖を含めることができる。
【００２８】
さらに上記正鎖のポリヌクレオチド及び相補鎖（逆鎖）のポリヌクレオチドは、各々一本鎖の形態で疾患マーカーとして使用されても、また二本鎖の形態で疾患マーカーとして使用されてもよい。
【００２９】
本発明の中性脂質の蓄積を伴う疾患の疾患マーカーは、具体的には配列番号：１〜１９のいずれかに記載される塩基配列（全長配列）からなるポリヌクレオチドであってもよいし、その相補配列からなるポリヌクレオチドであってもよい。また、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子もしくは該遺伝子に由来するポリヌクレオチドを選択的に（特異的に）認識するものであれば、上記全長配列若しくはその相補配列の部分配列からなるポリヌクレオチドであってもよい。この場合、部分配列としては、上記全長配列若しくはその相補配列の塩基配列から任意に選択される、少なくとも１５個の連続した塩基長を有するポリヌクレオチドを挙げることができる。
【００３０】
なお、ここで「選択的に（特異的に）認識する」とは、例えばノーザンブロット法においては、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はこれらの遺伝子に由来するポリヌクレオチドが特異的に検出できること、またＲＴ−ＰＣＲ法においては配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はこれらの遺伝子に由来するポリヌクレオチドが特異的に生成されることを意味するが、それに限定されることなく、当業者が上記検出物又は生成物がこれらの遺伝子に由来するものであると判断できるものであればよい。
【００３１】
そのような本発明の疾患マーカーは、検出（認識）する対象の遺伝子（配列番号：１〜１９）に応じて、配列番号：１〜１９のいずれかに示される塩基配列をもとに、例えばｐｒｉｍｅｒ　３（　ＨＹＰＥＲＬＩＮＫ　ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｅ．ｗｉ．ｍｉｔ．ｅｄｕ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｐｒｉｍｅｒ／ｐｒｉｍｅｒ３．ｃｇｉ）あるいはベクターＮＴＩ（Ｉｎｆｏｍａｘ社製）を利用して設計することができる。具体的には配列番号：１〜１９のいずれかに示される塩基配列をｐｒｉｍｅｒ　３又はベクターＮＴＩのソフトウエアにかけて得られる、プライマー又はプローブの候補配列、若しくは少なくとも該配列を一部に含む配列をプライマー又はプローブとして使用することができる。
【００３２】
本発明の疾患マーカーは、上述するように連続する少なくとも１５塩基の長さを有するものであればよいが、具体的にはマーカーの用途に応じて、長さを適宜選択し設定することができる。
【００３３】
（１−２）プローブ又はプライマーとしてのポリヌクレオチド
本発明の疾患マーカーは、上記各遺伝子の発現によって生じたＲＮＡ又はそれに由来するポリヌクレオチドを特異的に認識し増幅するためのプライマーとして、又は該ＲＮＡ又はそれに由来するポリヌクレオチドを特異的に検出するためのプローブとして利用することができる。
【００３４】
上記疾患マーカーを中性脂質の蓄積を伴う疾患の検出（遺伝子診断）においてプライマーとして用いる場合には、通常１５ｂｐ〜１００ｂｐ、好ましくは１５ｂｐ〜５０ｂｐ、より好ましくは１５ｂｐ〜３５ｂｐの塩基長を有するものが例示できる。また検出プローブとして用いる場合には、通常１５ｂｐ〜全配列の塩基数、好ましくは１５ｂｐ〜１ｋｂ、より好ましくは１００ｂｐ〜１ｋｂの塩基長を有するものが例示できる。
【００３５】
本発明の疾患マーカーは、ノーザンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲ法、ｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダーゼーション法などといった、特定遺伝子を特異的に検出する公知の方法において、常法に従ってプライマー又はプローブとして利用することができ、これによって中性脂質の蓄積を伴う疾患に関連する配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現の有無又は発現レベル（発現量）を評価することができる。
【００３６】
測定対象試料としては、使用する検出方法の種類に応じて適宜選択することができる。該試料は、例えば、被験者の生体組織、特に脂肪組織の一部をバイオプシ等で採取し、そこから常法に従って調製したｔｏｔａｌ　ＲＮＡを用いてもよいし、さらに該ＲＮＡをもとにして調製される各種のポリヌクレオチドを用いてもよい。
【００３７】
また、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の生体組織における発現レベルは、ＤＮＡチップを利用して検出あるいは定量することができる。この場合、本発明の疾患マーカーは当該ＤＮＡチップのプローブとして使用することができる（例えば、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社のＧｅｎｅ　Ｃｈｉｐ　Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５　Ａ，　Ｂ，　Ｃ，　Ｄ，　Ｅの場合、２５ｂｐの長さのポリヌクレオチドプローブとして用いられる）。本発明の疾患マーカーをプローブとするＤＮＡチップを、生体組織から採取したＲＮＡをもとに調製される標識ＤＮＡ又はＲＮＡとハイブリダイズさせることにより、本発明の疾患マーカー（プローブ）と標識ＤＮＡ又はＲＮＡとの複合体が形成される。該複合体を該標識ＤＮＡ又はＲＮＡの標識を指標として検出することにより、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列からなる遺伝子の生体組織中での発現の有無又は発現レベル（発現量）が評価できる。
【００３８】
なお、上記ＤＮＡチップは、配列番号：１〜１９のいずれかで示される塩基配列を有する遺伝子と結合し得る１種又は２種以上の本発明疾患マーカーを含んでいればよい。複数の疾患マーカーを含むＤＮＡチップの利用によれば、ひとつの生体試料について、同時に複数の遺伝子の、発現の有無又は発現レベルの評価が可能である。
【００３９】
本発明の疾患マーカーは、中性脂質の蓄積を伴う疾患の診断、検出（罹患の有無や罹患の程度の診断）に有用である。具体的には、該疾患マーカーを利用した中性脂質の蓄積を伴う疾患の診断は、被験者の脂肪組織と正常者の脂肪組織における配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現レベルの違いを判定することによって行うことができる。
【００４０】
この場合、遺伝子発現レベルの違いには、発現のある／なしの違いだけでなく、被験者の脂肪組織と正常者の脂肪組織の両者ともに発現がある場合でも、両者間の発現量の格差が２倍以上、好ましくは３倍以上の場合が含まれる。
【００４１】
例えば、配列番号：１〜１９に記載の塩基配列を有する遺伝子は、中性脂質の蓄積を伴う疾患のモデルとなるＨｕＨ７細胞において、脂質顆粒組織で発現していた。従って、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子が、被験者の脂肪組織で特異的に発現しているか、或いは、該発現量が正常者の脂肪組織の発現量と比べて２倍以上、より好ましくは３倍以上増大していれば、中性脂質の蓄積を伴う疾患の罹患が疑われる。この場合の中性脂質の蓄積を伴う疾患の検出（診断）には、上記遺伝子に対応するいずれかに記載の塩基配列（配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列）において、連続する少なくとも１５塩基長を有するポリヌクレオチド及び／又はそれに相補的なポリヌクレオチドからなる本発明の疾患マーカーが有用である。
【００４２】
中でも、配列番号：１〜５のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子は、正常なヒト組織において、他の組織に比べて脂肪組織における発現量が大きく、これらの遺伝子に対応するいずれかの塩基配列において、連続する少なくとも１５塩基長を有するポリヌクレオチド及び／又はそれに相補的なポリヌクレオチドからなく本発明の疾患マーカーは特に有用である。
【００４３】
本発明において中性脂質の蓄積を伴う疾患の検出（診断）は、被験者の生体組織、特に脂肪組織における配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の少なくとも１つの発現の有無又は発現レベル（発現量）を評価することによって行われる。検出（診断）の精度や正確性を高めるためには、上記遺伝子群の２以上、好ましくは複数個の遺伝子、より好ましくは上記遺伝子群のすべての遺伝子について、その発現の有無又は発現レベル（発現量）を評価することが望ましい。
【００４４】
（１−３）抗体
本発明は、中性脂質の蓄積を伴う疾患の疾患マーカーとして、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現産物（タンパク質）を特異的に認識することのできる抗体を提供する。
【００４５】
なお、配列番号：１に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：２０で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：２に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：２１で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：３に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：２２で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：４に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：２３で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：５に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：２４で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：６に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：２５で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：７に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：２６で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：８に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：２７で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：９に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：２８で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：１０に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：２９で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：１１に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：３０で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：１２に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：３１で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：１３に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：３２で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：１４に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：３３で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：１５に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：３４で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：１６に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：３５で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：１７に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：３６で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：１８に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：３７で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号：１９に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号：３８で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、例示することができる。
【００４６】
本発明における配列番号：２０〜３８に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、公知であり、当業者にとって公知の方法で取得することができる。
すなわち配列番号：２０に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、プロテインキナーゼＣ　ミュー（Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　Ｃ　Ｍｕ）として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００２７４２に記載されている。
配列番号：２１に記載のアミノ酸配列からなる遺伝子タンパク質は、プロテインキナーゼＣ　デルタ（Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　Ｃ　ｄｅｌｔａ）として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００６２５４に記載されている。
。
配列番号：２２に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、プロテインキナーゼＣ　ニュー（Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　Ｃ　Ｎｕ）として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００５８１３に記載されている。
配列番号：２３に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、ヒト脳の新規ｃＤＮＡによってコードされるタンパク質として公知で有り、その取得方法及び配列はＮａｇａｓｅ，　Ｔ．，　ｅｔ　ａｌ．，　ＤＮＡ　Ｒｅｓ．　５：２７７−２８６（１９９８）、又はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿０１５２９２に記載されている。該タンパク質は、ラットＧＬＵＴ４　ｖｅｓｉｃｌｅ　ｐｒｏｔｅｉｎのアミノ酸配列と８７．６％のホモロジーを有し、ヒトＧＬＵＴ４　ｖｅｓｉｃｌｅ　ｐｒｏｔｅｉｎであると考えられる。ＧＬＵＴ４　ｖｅｓｉｃｌｅ　ｐｒｏｔｅｉｎはｍｅｍｂｒａｎｅ　ｂｏｕｎｄ　Ｃ２　ｄｏｍａｉｎ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎを有し、カルシウム依存的なリン脂質結合に関与する（Ｍｏｒｒｉｓ，　Ｎ．Ｊ．，　Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ａｃｔａ　１４３１：５２５−５３０　（１９９９））。
配列番号：２４に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、Ｐ５３−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ　ｇｅｎｅ　３（ＰＲＧ３）として公知であり、その取得方法及び配列は、Ｈｉｒｏ　Ｙ．，　ｅｔ　ａｌ．，　ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ．，　５２４（１−３），　１６３−７１，　（２００２）、又はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿０３２７９７に記載されている。
配列番号：２５に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、アシル−ＣｏＡ合成酵素４ｖａｒｉａｎｔ１として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００４４５８に記載されている。
配列番号：２６に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、ラノステロール合成酵素として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００２３４０に記載されている。
配列番号：２７に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、アシル−ＣｏＡ合成酵素３として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００４４５７に記載されている。
配列番号：２８に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、ｐ６３として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００６８２５に記載されている。
配列番号：２９に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、Ｃａｒｇｏ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ＴＩＰ４７として公知でありその配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００５８１７に記載されている。
配列番号：３０に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、ＣＧＩ４９として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００１６００２に記載されている。
配列番号：３１に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、ＮＡＤ（Ｐ）依存性ステロイドデヒドロゲナーゼ；　Ｈ１０５Ｅ３（ＮＡＤ（Ｐ）　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｓｔｅｒｏｉｄ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；　Ｈ１０５Ｅ３）として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿０１５９２２に記載されている。
配列番号：３２に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、グリセロアルデヒド　３−ホスフェ−トデヒドロゲナーゼとして公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００２０４６に記載されている。
配列番号：３３に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、ＮＡＤＨ−ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＢ５　還元酵素として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿０００３９８に記載されている。
配列番号：３４に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、アネクシンＩＩ（ａｎｎｅｘｉｎ　ＩＩ）として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００４０３９に記載されている。
配列番号：３５に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、Ｒａｓ　ｆａｍｉｌｙ　ｓｍａｌｌＧＴＰａｓｅの一種であるｒａｂ５Ｃとして公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００４５８３に記載されている。
配列番号：３６に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、膜ＩｇＤ結合タンパク質３１（ｍｅｍｂｒａｎｅ　ＩｇＤ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　３１）として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿００５７４５に記載されている
配列番号：３７に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、Ｒａｓ　ｆａｍｉｌｙ　ｓｍａｌｌＧＴＰａｓｅの一種であるＲａｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒａｐ　１Ｂとして公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：ＮＭ＿０１５６４６に記載されている。
配列番号：３８に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質は、１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１１（１７βＨＳＤ１１）として公知であり、その配列はＧｅｎｂａｎｋ　Ａｃｃ．　Ｎｏ．：　ＢＣ０２１６７３に記載されている。
【００４７】
本発明の抗体は、その形態に特に制限はなく、上記タンパク質を免疫抗原とするポリクローナル抗体であっても、またそのモノクローナル抗体であってもよい。さらに、当該タンパク質を構成するアミノ酸配列のうち少なくとも連続する、通常８アミノ酸、好ましくは１５アミノ酸、更に好ましくは２０アミノ酸からなるポリペプチドに対して抗原結合性を有する抗体も、本発明の抗体に含まれる。
【００４８】
これらの抗体の製造方法は、すでに周知であり、本発明の抗体もこれらの常法に従って製造することができる（Ｃｕｒｒｅｎｔ　ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｅｄｉｔ．　Ａｕｓｕｂｅｌ　ｅｔ　ａｌ．　（１９８７）　Ｐｕｂｌｉｓｈ．　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　Ｓｏｎｓ．　Ｓｅｃｔｉｏｎ　１１．１２〜１１．１３）。具体的には、本発明の抗体がポリクローナル抗体の場合には、常法に従って大腸菌等で発現し精製した上記タンパク質を用いて、あるいは常法に従って当該タンパク質の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドを合成して、家兎等の非ヒト動物に免疫し、該免疫動物の血清から常法に従って得ることが可能である。一方、モノクローナル抗体の場合には、常法に従って大腸菌等で発現し精製した上記タンパク質、あるいはこれらタンパク質の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドをマウス等の非ヒト動物に免疫し、得られた脾臓細胞と骨髄腫細胞とを細胞融合させて調製したハイブリドーマ細胞の中から得ることができる（Ｃｕｒｒｅｎｔ　ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｅｄｉｔ．　Ａｕｓｕｂｅｌ　ｅｔ　ａｌ．　（１９８７）　Ｐｕｂｌｉｓｈ．　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　Ｓｏｎｓ．　Ｓｅｃｔｉｏｎ　１１．４〜１１．１１）。
【００４９】
抗体の作製に免疫抗原として使用される配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質は、本発明により提供される遺伝子の配列情報（配列番号：１〜１９）に基づいて、ＤＮＡクローニング、各プラスミドの構築、宿主へのトランスフェクション、形質転換体の培養及び培養物からのタンパク質の回収の操作により得ることができる。これらの操作は、当業者に既知の方法、あるいは文献記載の方法（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ　ｅｔ　ａｌ．，　ＣＳＨ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　（１９８３），　ＤＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　ＤＭ．　Ｇｌｏｖｅｒ，　ＩＲＬ　ＰＲＥＳＳ　（１９８５））などに準じて行うことができる。
【００５０】
具体的には、配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質をコードする遺伝子が所望の宿主細胞中で発現できる組み換えＤＮＡ（発現ベクター）を作製し、これを宿主細胞に導入して形質転換し、該形質転換体を培養して、得られる培養物から、目的タンパク質を回収することによって、本発明抗体の製造のための免疫抗原としてのタンパク質を得ることができる。また、これら配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質の部分ペプチドは、本発明により提供されるアミノ酸配列の情報（配列番号：２０〜３８）に従って、一般的な化学合成法（ペプチド合成）によって製造することもできる。
【００５１】
なお、本発明の配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質には、配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列に関わるタンパク質のみならず、その相同物も包含される。該相同物としては、上記配列番号２０〜３８のいずれかで示されるアミノ酸配列において、１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列からなり、且つ改変前の元のタンパク質と免疫学的に同等の活性を有するタンパク質を挙げることができる。
【００５２】
なお、ここで配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子によりコードされるタンパク質（配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質）の機能と同等の生物学的機能を有するタンパク質としては、各々対応するタンパク質と生化学的又は薬理学的機能において同等の機能を有するタンパク質を挙げることができる。また配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子によりコードされるタンパク質（配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質）と免疫学的活性において同等の活性を有するタンパク質としては、適当な動物あるいはその細胞において特定の免疫反応を誘発し、かつ各対応するタンパク質に対する抗体と特異的に結合する能力を有するタンパク質を挙げることができる。
【００５３】
なお、タンパク質におけるアミノ酸の変異数や変異部位は、その生物学的機能及び／又は免疫学的活性が保持される限り制限はない。生物学的機能や免疫学的活性を喪失することなくアミノ酸残基が、どのように、何個置換、挿入あるいは欠失されればよいかを決定する指標は、当業者に周知のコンピュータプログラム、例えばＤＮＡ　Ｓｔａｒ　ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて見出すことができる。例えば変異数は、典型的には、全アミノ酸の１０％以内であり、好ましくは全アミノ酸の５％以内であり、さらに好ましくは全アミノ酸の１％以内である。また置換されるアミノ酸は、置換後に得られるタンパク質が、置換前のタンパク質（配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子によりコードされるタンパク質（配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質）の生物学的機能及び／又は免疫学的活性を保持している限り、特に制限されないが、タンパク質の構造保持の観点から、残基の極性、電荷、可溶性、疎水性、親水性並びに両親媒性など、置換前のアミノ酸と似た性質を有するアミノ酸であることが好ましい。例えば、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ及びＴｒｐは互いに非極性アミノ酸に分類されるアミノ酸であり、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、Ａｓｎ及びＧｌｎは互いに非荷電性アミノ酸に分類されるアミノ酸であり、Ａｓｐ及びＧｌｕは互いに酸性アミノ酸に分類されるアミノ酸であり、またＬｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓは互いに塩基性アミノ酸に分類されるアミノ酸である。ゆえに、これらを指標として同群に属するアミノ酸を適宜選択することができる。
【００５４】
また本発明の抗体は、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子によりコードされるタンパク質（配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質）（又は当該タンパク質の相同物）の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドを用いて調製されるものであってもよい。かかる抗体誘導のために用いられるオリゴペプチドは、機能的な生物活性を有することは要しないが、各々対応する上記のタンパク質と同様な免疫原特性を有するものであることが望ましい。好ましくはかかる特性を有し、配列番号：１〜１９のいずれかで示される塩基配列を有する遺伝子によりコードされるタンパク質のアミノ酸配列（配列番号：２０〜３８のいずれかに示されるアミノ酸配列）において少なくとも連続する８アミノ酸、好ましくは１５アミノ酸、より好ましくは２０アミノ酸からなるポリペプチドを例示することができる。
【００５５】
かかるポリペプチドに対する抗体の生成は、宿主に応じて種々のアジュバントを用いて免疫学的反応を高めることによって行うこともできる。限定はされないが、そのようなアジュバントには、フロイントアジュバント、水酸化アルミニウムのようなミネラルゲル、並びにリゾレシチン、プルロニックポリオル、ポリアニオン、ペプチド、油乳剤、キーホールリンペットヘモシアニン及びジニトロフェノールのような表面活性物質、ＢＣＧ（カルメット−ゲラン桿菌）やコリネバクテリウム−パルヴムなどのヒトアジュバントなどがある。
【００５６】
本発明の抗体は配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子によりコードされるタンパク質（配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質）（又は当該タンパク質の相同物）に特異的に結合する性質を有することから、該抗体を利用することによって、被験者の組織内に発現した上記タンパク質（その相同物を含む）を特異的に検出することができる。すなわち、当該抗体は被験者の組織内における上記タンパク質（その相同物を含む）発現の有無を検出するためのプローブとして有用である。
上記抗体は、従って、被験者における上記タンパク質の発現の有無又はその程度を検出することによって、該被験者が中性脂質の蓄積を伴う疾患に罹患しているか否か又はその疾患の程度を診断することのできるツール（疾患マーカー）として有用である。
また上記抗体は、後述の（３−２）項に記載するような中性脂質の蓄積を伴う疾患の予防、改善又は治療に有用な候補物質のスクリーニングにおいて、配列番号：２０〜３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質のいずれかの発現変動を検出するためのスクリーニングツール（疾患マーカー）としても有用である。
【００５７】
具体的には、患者の生体組織、特に脂肪組織の一部をバイオプシ等で採取し、そこから常法に従ってタンパク質を調製して、例えばウェスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ法など公知の検出方法において、上記抗体を常法に従ってプローブとして使用することによって、上記タンパク質を検出することができる。
【００５８】
中性脂質の蓄積を伴う疾患の診断に際しては、被験者の脂肪組織における配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子によりコードされるタンパク質（配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質）のいずれか少なくとも１つの量と、正常な脂肪組織における当該タンパク質の量との違いを判定すればよい。この場合、タンパク量の違いには、タンパク質のある／なし、あるいはタンパク量の違いが２倍以上、好ましくは３倍以上の場合が含まれる。
【００５９】
具体的には、配列番号：２０〜３８に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質は中性脂質の蓄積を伴う疾患のモデルとなり得るＨｕＨ７細胞において発現誘導（増大）を示したので、被験者の脂肪組織における該遺伝子の発現産物（配列番号：１〜１９のいずれかに示される塩基配列を有する遺伝子によってコードされるタンパク質（配列番号：２０〜３８のいずれかで示されるアミノ酸配列を有するタンパク質））の量が正常な脂肪組織の発現産物量と比べて２倍以上、好ましくは３倍以上多いことが判定されれば、中性脂質の蓄積を伴う疾患の罹患が疑われる。
更に、配列番号：２０〜２４に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子（配列番号：１〜５に記載の塩基配列を有する遺伝子）は、ヒト脂肪組織において他の組織に比べて特異的に発現しており、疾患マーカーとしてより好ましい。
【００６０】
（２）中性脂肪の蓄積を伴う疾患の検出方法（診断方法）
本発明は、前述した本発明疾患マーカーを利用した中性脂肪の蓄積を伴う疾患の検出方法（診断方法）を提供するものである。
【００６１】
具体的には、本発明の検出方法は、被験者の生体組織、特に脂肪組織の一部をバイオプシなどで採取し、そこに含まれる中性脂質の蓄積を伴う疾患に関連する配列番号：１〜１９のいずれかで示される塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現レベル（発現量）、又はこれらの遺伝子に由来するタンパク質を検出し、その発現量又はそのタンパク質量を測定することにより、中性脂質の蓄積を伴う疾患の罹患の有無又はその程度を検出（診断）するものである。また本発明の検出（診断）方法は、例えば中性脂質の蓄積を伴う疾患患者において、該疾患の改善のために治療剤を投与した場合における、該疾患の改善の有無又はその程度を検出（診断）することもできる。
【００６２】
本発明の診断方法は次の（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の工程を含むものである：
（ａ）　被験者の生体試料と本発明の疾患マーカーを接触させる工程、
（ｂ）　生体試料中の配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現レベル、又は配列番号：１〜１９のいずれかに示される塩基配列を有する遺伝子によってコードされるタンパク質の量、具体的には配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質の量を、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）　（ｂ）の結果をもとに、中性脂質の蓄積を伴う疾患の罹患を判断する工程。
【００６３】
ここで用いられる生体試料は、被験者の生体組織、特に海馬組織、該組織から調製されるＲＮＡ若しくはそれからさらに調製されるポリヌクレオチド、又は上記組織から調製されるタンパク質である。かかるＲＮＡ、ポリヌクレオチド又はタンパク質は、被験者の生体組織、特に海馬組織の一部をバイオプシ等で採取し、そこから常法に従って調製することができる。
【００６４】
本発明の診断方法は、測定対象として用いる生体試料の種類に応じて、具体的には下記のようにして実施される。
【００６５】
（２−１）　測定対象の生体試料としてＲＮＡを利用する場合
診断に用いる生体試料としてＲＮＡを利用する場合は、本発明の検出方法（診断方法）は該ＲＮＡ中の配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現レベルを検出し、測定することによって実施される。
【００６６】
この場合、本発明の検出方法は次の（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の工程を含むものである：
（ａ）　被験者の生体試料と本発明の疾患マーカーを接触させる工程、
（ｂ）　上記工程によって本発明の疾患マーカーに特異的に結合した生体試料由来のＲＮＡ又はそれから転写された相補的なポリヌクレオチドを上記疾患マーカーを指標として測定する工程、及び
（ｃ）　（ｂ）の結果をもとに、中性脂質の蓄積を伴う疾患の罹患を判断する工程。
【００６７】
本発明の中性脂質の蓄積を伴う疾患の検出方法（診断方法）は、特に測定対象の生体試料としてＲＮＡを利用して、該ＲＮＡ中の配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現レベルを検出し、測定することによって実施される。具体的には、上記検出する遺伝子の塩基配列に応じて、前述する本発明の疾患マーカー（配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列において連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／又はその相補的なポリヌクレオチド）をプライマー又はプローブとして用いて、ノーザンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲ法、ＤＮＡチップ解析法、ｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダイゼーション解析法などの公知の方法を行うことにより実施できる。
【００６８】
ノーザンブロット法を利用する場合は、本発明の上記疾患マーカーをプローブとして用いることによって、ＲＮＡ中の配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現の有無やその発現レベルを検出、測定することができる。具体的には、本発明の疾患マーカー（相補鎖）を放射性同位元素（３２Ｐ、３３Ｐなど：ＲＩ）や蛍光物質などで標識し、それを、常法に従ってナイロンメンブレン等にトランスファーした被験者の生体組織由来のＲＮＡとハイブリダイズさせた後、形成された標識疾患マーカー（ＤＮＡ）とＲＮＡとの二重鎖について、該疾患マーカーの標識物（ＲＩ若しくは蛍光物質など）に由来するシグナルを放射線検出器（ＢＡＳ−１８００ＩＩ、富士フィルム社製）又は蛍光検出器で検出、測定する方法を例示することができる。また、ＡｌｋＰｈｏｓ　Ｄｉｒｅｃｔ　Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ　ａｎｄ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）を用いて、該プロトコールに従って疾患マーカー（プローブＤＮＡ）を標識し、被験者の生体組織由来のＲＮＡとハイブリダイズさせた後、疾患マーカーの標識物に由来するシグナルをマルチバイオイメージャーＳＴＯＲＭ８６０（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）で検出、測定する方法を使用することもできる。
【００６９】
ＲＴ−ＰＣＲ法を利用する場合は、本発明の上記疾患マーカーをプライマーとして用いることによって、ＲＮＡ中の配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現の有無や発現レベルを検出、測定することができる。具体的には、被験者の生体組織由来のＲＮＡから常法に従ってｃＤＮＡを調製し、これを鋳型として標的の遺伝子の領域が増幅できるように、本発明の疾患マーカーから調製した一対のプライマー（上記ｃＤＮＡ（−鎖）に結合する正鎖、＋鎖に結合する逆鎖）をこれとハイブリダイズさせて、常法に従ってＰＣＲ法を行い、得られた増幅二本鎖ＤＮＡを検出する方法を例示することができる。なお、増幅された二本鎖ＤＮＡの検出は、予めＲＩや蛍光物質などで標識しておいたプライマーを用いて上記ＰＣＲを行うことによって産生される標識二本鎖ＤＮＡを検出する方法、産生された二本鎖ＤＮＡを常法に従ってナイロンメンブレン等にトランスファーさせて、標識した疾患マーカーをプローブとして使用してこれとハイブリダイズさせて検出する方法などを用いることができる。なお、生成された標識二本鎖ＤＮＡ産物はアジレント２１００バイオアナライザ（横河アナリティカルシステムズ社製）などで測定することができる。また、ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　ＲＴ−ＰＣＲ　Ｒｅａｇｅｎｔｓ　（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　社製）で該プロトコールに従ってＲＴ−ＰＣＲ反応液を調製し、ＡＢＩ　ＰＲＩＭＥ　７７００　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　社製）で反応させて、該反応物を検出することもできる。
【００７０】
また、ＤＮＡチップ解析を利用する場合は、本発明の上記疾患マーカーをＤＮＡプローブ（１本鎖又は２本鎖）として貼り付けたＤＮＡチップを用意し、これに被験者の生体組織由来のＲＮＡから常法によって調製されたｃＲＮＡをハイブリダイズさせて、形成されたＤＮＡとｃＲＮＡとの二本鎖を、本発明の疾患マーカーから調製される標識プローブと結合させて検出する方法を挙げることができる。また、上記ＤＮＡチップとして、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現レベルの検出、測定が可能なＤＮＡチップを用いることもできる。かかる遺伝子の発現レベルを検出、測定することができるＤＮＡチップとしては、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社のＧｅｎｅ　Ｃｈｉｐ　Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５　Ａ，　Ｂ，Ｃ，　Ｄ，　Ｅを挙げることができる。かかるＤＮＡチップを用いた、被験者ＲＮＡ中の配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現レベルの検出、測定については、実施例において詳細に説明する。
【００７１】
（２−２）　測定対象物としてタンパク質を用いる場合
測定対象物としてタンパク質を用いる場合は、本発明の検出方法（診断方法）は生体試料中に存在する、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子によってコードされるタンパク質（配列番号：２０〜３８のいずれかに示されるアミノ酸配列を有するタンパク質）を検出し、その量（レベル）を測定することによって実施される。より詳しくは、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子によってコードされるタンパク質（配列番号：２０〜３８のいずれかに示されるアミノ酸配列を有するタンパク質）を認識する抗体を疾患マーカーとして用いて、ウェスタンブロット法などの公知方法で、上記タンパク質を検出、定量する方法を挙げることができる。
【００７２】
ウェスタンブロット法は、一次抗体として上記の抗体を用いた後、二次抗体として１２５Ｉなどの放射性同位元素や蛍光物質などで標識した標識抗体（一次抗体に結合する標識抗体）を用いて、標識し、該放射性同位元素若しくは蛍光物質などに由来するシグナルを放射線測定器（ＢＡＳ−１８００ＩＩ：富士フィルム社製など）若しくは蛍光検出器で検出し、測定することによって実施できる。また、一次抗体として本発明の上記疾患マーカーを用いた後、ＥＣＬ　Ｐｌｕｓ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔｔｉｎｇ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ　社製）を用いて、該プロトコールに従って検出し、マルチバイオイメージャーＳＴＯＲＭ８６０（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ　社製）で測定することもできる。
【００７３】
なお、上記において測定対象とする配列番号：２０〜２２に記載のアミノ酸配列を含むタンパク質は、キナーゼとして公知であり、該タンパク質の量と機能乃至活性とは一定の相関関係を有している。従って、上記タンパク質の量の測定に代えて、該タンパク質のキナーゼとしての機能又は活性の測定を行うことによっても、本発明の中性脂肪の蓄積を伴う疾患の検出（診断）を実施することができる。すなわち本発明は、配列番号：２０〜２２に記載のアミノ酸配列を含むタンパク質の公知の機能又は活性を指標として、これを公知の方法（具体的には後述の（３−３）項を参照）に従って測定、評価することからなる、中性脂肪の蓄積を伴う疾患の検出（診断）方法をも包含する。
【００７４】
（２−３）中性脂肪の蓄積を伴う疾患の診断
中性脂質の蓄積を伴う疾患の診断は、具体的には、被験者の生体組織、特に脂肪組織における配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現レベル、又は配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現産物であるタンパク質の量（レベル）を、上記と対応する正常な生体組織（特に、正常な脂肪組織における当該遺伝子発現レベル又は当該タンパク質の量（レベル）と比較し、両者の違いを判定することによって行うことができる。
【００７５】
この場合、正常な生体組織、特に脂肪組織から採取調製した生体試料（ＲＮＡ又はタンパク質）が必要であるが、これらは中性脂質の蓄積を伴う疾患に罹患していない人の生体組織、特に脂肪組織をバイオプシ等で採取することによって取得することができる。なお、ここでいう「中性脂質の蓄積を伴う疾患に罹患していない人」とは、例えば、肥満指数（ＢＭＩ：Ｂｏｄｙ　ｍａｓｓ　ｉｎｄｅｘ）が２５未満である、肥満ではないと診断された人をいう。なお、当該「中性脂質の蓄積を伴う疾患に罹患していない人」を以下、本明細書では単に正常者という場合もある。以下、具体的な診断方法について、脂肪組織から採取調製した生体試料を例として記載する。
【００７６】
被験者の脂肪組織と正常な脂肪組織（中性脂質の蓄積を伴う疾患に罹患していない人の脂肪組織）との遺伝子発現レベル又はその発現産物（タンパク質）量（レベル）の比較は、被験者の生体試料と正常者の生体試料を対象とした測定を並行して行うことで実施できる。並行して行わない場合は、複数（少なくとも２つ、好ましくは３以上、より好ましくは５以上）の正常な海馬組織を用いて均一な測定条件で測定して得られた上記遺伝子の遺伝子発現レベル、若しくはこれらの遺伝子の発現産物であるタンパク質の量（レベル）の平均値又は統計的中間値を予め求めておき、これを正常者の遺伝子発現レベル又はその発現産物（タンパク質）の量（正常値）として、これらを被験者における測定レベル又は測定値と比較することができる。
【００７７】
被験者が、中性脂質の蓄積を伴う疾患に罹患しているかどうかの判断は、該被験者の脂肪組織における配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現レベル、又はその発現産物（タンパク質）の量（レベル）、より具体的には配列番号：２０〜３８のいずれかで示されるアミノ酸配列を有するタンパク質の量（レベル）が、正常者のそれらと比較して２倍以上、好ましくは３倍以上の変動があるか（多いか又は少ないか）否かを指標として行うことができる。
【００７８】
具体的には、被験者において、上記遺伝子のうち配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現レベル、又はその発現産物（タンパク質）の量（レベル）が、正常者の上記に対応する遺伝子の遺伝子発現レベル又は発現産物の量（レベル）に比べて多い場合には、該被験者について中性脂質の蓄積を伴う疾患への罹患が疑われる。
【００７９】
なお、上記方法のうち、（２−１）生体試料としてＲＮＡを利用して中性脂質の蓄積を伴う疾患を検出（診断）する場合、すなわち遺伝子の発現の有無又は遺伝子発現レベル（発現量）から中性脂質の蓄積を伴う疾患を検出（診断）する場合は、検出（診断）の精度や正確性を高めるために、配列番号：１〜１９に示される遺伝子のうち２以上、好ましくは複数個の遺伝子、より好ましくは上記遺伝子群のすべてについて、発現の有無又は発現のレベル（発現量）を評価し、その結果から中性脂質の蓄積を伴う疾患を検出（診断）することが望ましい。
【００８０】
また、前記（２−２）測定対象物としてタンパク質を利用して中性脂質の蓄積を伴う疾患を検出（診断）する場合も、上記と同様に、生体試料について、配列番号：１〜１９に示される遺伝子によりコードされるアミノ酸配列を有するタンパク質（具体的には配列番号：２０〜３８のいずれかで示されるアミノ酸配列を有するタンパク質）のうちの２以上、好ましくは複数個のレベルを評価し、その結果から中性脂質の蓄積を伴う疾患を検出（診断）することが望ましい。
【００８１】
複数個の遺伝子又はタンパク質について評価を行う場合には、個々の遺伝子又はタンパク質での評価をスコア化し、総合的に中性脂質の蓄積を伴う疾患を診断することが可能である。すなわち、上記の遺伝子又はタンパク質４個の遺伝子又はタンパク質について評価を行い、うち２個以上の遺伝子又はタンパク質について上記基準に基づいて中性脂質の蓄積を伴う疾患の病態が疑われると評価される場合は、該疾患である可能性が高いと診断できる。なお、この場合、評価する遺伝子又はタンパク質の数、スコアあるいは診断基準は限定されない。
【００８２】
（３）候補薬のスクリーニング方法
（３−１）遺伝子の発現を指標とするスクリーニング方法
本発明は、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現を制御する物質をスクリーニングする方法を提供する。
【００８３】
本発明のスクリーニング方法は次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた細胞について、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログの遺伝子発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞の上記対応する遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）　上記の比較結果に基づいて、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログの遺伝子発現量を変動させる被験物質を選択する工程。
【００８４】
かかるスクリーニングに用いられる細胞としては、内在性及び外来性を問わず、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子を発現し得る細胞を挙げることができる。かかる細胞としては、具体的には、ヒトＨｕＨ７細胞、マウスマクロファージ細胞株（Ｊ７７４）、マウス３Ｔ３Ｌ１細胞、又はマウスＮＩＨ３Ｔ３細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　　ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ＳｅａｒｃｈＣａｔａｌｏｇｓ／ＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ．ｃｆｍ　から入手可能）などを挙げることができる。好ましくはヒトＨｕＨ７細胞である。また、かかる細胞としては、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子のホモログ、すなわち当該遺伝子のヒト以外の生物種における同族体又は変異体をコードする遺伝子を発現し得る細胞を用いることもできる。例えば、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有するヒト遺伝子に対応するラットホモログ（遺伝子）やマウスホモログ（遺伝子）を内在的に発現している細胞を用いることができる。また、かかる細胞は、変性ＬＤＬ（アセチル化処理）など、マクロファージの泡沫化の亢進を惹起しうる物質を添加したマクロファージ細胞株の形でスクリーニングに用いることもできる。さらに本発明のスクリーニングに用いられる細胞の範疇には、細胞の集合体である組織も含まれる。
また、細胞として、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子を導入した遺伝子導入細胞を用いることもできる。該遺伝子導入に用いられる宿主細胞、すなわちＣＯＰ、Ｌ、Ｃ１２７、Ｓｐ２／０、ＮＳ−１、ＮＩＨ３Ｔ３、ＳＴ２等のマウス由来細胞、ラット由来細胞、ＢＨＫ、ＣＨＯ等のハムスター由来細胞、ＣＯＳ１、ＣＯＳ３、ＣＯＳ７、ＣＶ１、Ｖｅｒｏ等のサル由来細胞、ＨｅＬａ、２９３等のヒト由来細胞、及びＳｆ９、Ｓｆ２１、Ｈｉｇｈ　Ｆｉｖｅ等の昆虫由来細胞などが例示される。
【００８５】
候補物質となりえるものとしては、制限されないが、核酸（配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む）、ペプチド、タンパク質、有機化合物、無機化合物などであり、スクリーニングは、具体的にはこれらの候補物質となり得る被験物質を含む試料（被験試料）を上記組織及び／又は細胞と接触させて行うことができる。かかる被験試料としては、被験物質を含む、細胞抽出液、遺伝子ライブラリーの発現産物、合成低分子化合物、合成ペプチド、天然化合物、及びこれらの混合物などが挙げられるが、これに制限されない。
【００８６】
本発明スクリーニングに際して、被験物質と細胞とを接触させる条件は、特に制限されないが、該細胞が死滅せず且つ所望遺伝子を発現できる培養条件（温度、ｐＨ、培地組成など）を選択するのが好ましい。
【００８７】
実施例に示すように、中性脂質の蓄積を伴う疾患のモデルとなり得るＨｕＨ７細胞では、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子が、脂質顆粒に発現している。この知見から、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現レベルの上昇（遺伝子発現の誘導・増大）は、中性脂質の蓄積を伴う疾患と関連していると考えられる。本発明のスクリーニング方法には、これら遺伝子の発現レベルの上昇（遺伝子発現の誘導・増大）を指標として、当該遺伝子の発現を制御する物質（発現量を変動させる物質）を探索する方法が包含される。このスクリーニング方法によって、中性脂質の蓄積を伴う疾患の予防、改善ないし治療剤の有効成分となる候補物質が提供できる。
【００８８】
すなわち、本発明スクリーニング方法は、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現レベルの上昇（発現誘導）が、中性脂質の蓄積を伴う疾患と関連することを利用するものである。よって、該中性脂質の蓄積を伴う疾患の緩和／抑制作用を有する（中性脂質の蓄積を伴う疾患に対して改善／治療効果を発揮する）物質の探索には、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現レベルの変動が指標とされる。
【００８９】
以上のように、本発明のスクリーニング方法は、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現レベルを制御（発現誘導・抑制）する物質を探索するものであり、斯くして得られる物質を中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善剤又は治療剤の有効成分となる候補化合物として提供するものである。
【００９０】
本発明スクリーニング方法に従う候補物質の選別は、具体的には配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログを発現している細胞を用いる場合は、被験物質（候補物質）を添加した細胞における上記各遺伝子の発現レベルが被験物質（候補物質）を添加しない細胞における同遺伝子の発現レベルに比して低くなること／高くなることをもって、行うことができる。また、本遺伝子又はそのホモログの発現に発現誘導物質［例えば変性ＬＤＬ（アセチル処理）等］を刺激剤として必要とする細胞を用いる場合は、発現誘導物質によって誘導される発現が候補物質の存在によって制御されること、すなわち発現誘導物質存在下で候補物質を接触させた細胞の遺伝子発現が、発現誘導物質存在下で候補物質を接触させない対照細胞（正のコントロール）に比して低くなること／高くなることをもって行うことができる。
【００９１】
上記いずれかの遺伝子の発現を制御する物質のうち、発現を抑制（発現レベルの減少、発現誘導の抑制）するように制御する物質の探索は、具体的には被験物質を添加した細胞の配列番号：１〜１９のいずれかの塩基配列を含む遺伝子の発現レベルが、被験物質を添加しない細胞のそのレベルに比して低くなることを指標にして行うことができる。また、これら配列番号：１〜１９のいずれかの塩基配列を含む遺伝子遺伝子のいずれかの発現に発現誘導物質を必要とする細胞を用いる場合は、発現誘導物質の存在下で被験物質を接触させた細胞の遺伝子発現が、発現誘導物質存在下で被験物質を接触させなかった対照細胞（正のコントロール）に比して低くなることを指標として、当該被験物質を候補物質として選別することができる。
【００９２】
また、上記いずれかの遺伝子の発現を制御する物質のうち、発現を上昇（発現レベルの増加、発現誘導の亢進）するように制御する物質の探索は、具体的には被験物質を添加した細胞の配列番号：１〜１９のいずれかの塩基配列を含む遺伝子の発現レベルが、被験物質を添加しない細胞のそのレベルに比して高くなることをもって、行うことができる。また、これら配列番号：１〜１９のいずれかの塩基配列を含む遺伝子遺伝子のいずれかの発現に発現誘導物質を必要とする細胞を用いる場合は、発現誘導物質の存在下で被験物質を接触させた細胞の遺伝子発現が、発現誘導物質存在下で被験物質を接触させなかった対照細胞（正のコントロール）に比して高くなることを指標として、当該被験物質を候補物質として選別することができる。
【００９３】
このような遺伝子の発現レベルの検出及び定量は、前述した細胞から調製したＲＮＡ又はそれから転写された相補的なポリヌクレオチドと本発明疾患マーカーとを用いて、前記（２−１）項に記述したように、ノーザンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲ法など公知の方法や、ＤＮＡチップなどを利用して実施できる。指標とする遺伝子発現レベルの変動（発現の抑制・減少又は誘導・増大）の程度としては、被験物質（候補物質）を添加した細胞における本遺伝子又はこれらのホモログの発現が、被験物質（候補物質）を添加しない対照細胞での発現量と比較して１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％以上の変動（減少又は増大）を例示することができる。
【００９４】
また、本遺伝子又はこれらのホモログの、発現レベルの検出及び定量は、各遺伝子の発現を制御する遺伝子領域（発現制御領域）に、例えばルシフェラーゼ遺伝子などのマーカー遺伝子をつないだ融合遺伝子を導入した細胞株を用いて、マーカー遺伝子由来のタンパク質の活性を測定することによっても実施できる。本遺伝子の発現制御物質のスクリーニング方法には、かかるマーカー遺伝子の発現量を指標として標的物質を探索する方法も包含される。この意味において、本発明でいう配列番号：１〜１９のいずれかで示される塩基配列を有する遺伝子又はそのホモログの概念には、該遺伝子の発現制御領域とマーカー遺伝子との融合遺伝子が含まれる。
【００９５】
上記マーカー遺伝子としては、発光反応や呈色反応を触媒する酵素の構造遺伝子が好ましい。具体的には、上記のルシフェラーゼ遺伝子のほか、クロラムフェニコール・アセチルトランスフェラーゼ遺伝子、βグルクロニダーゼ遺伝子、βガラクトシダーゼ遺伝子、及びエクオリン遺伝子などのレポーター遺伝子を例示できる。ここで遺伝子又は又はそのホモログ遺伝子の発現制御領域としては、例えば該遺伝子の転写開始部位上流約１ｋｂ、好ましくは約２ｋｂを用いることができる。融合遺伝子の作成、及びマーカー遺伝子由来の活性測定は公知の方法で行うことができる。
【００９６】
本発明のスクリーニング方法において、スクリーニングの精度や正確性を高めるためには、前記特定遺伝子の２以上、好ましくは複数個の遺伝子、より好ましくは上記遺伝子群のすべての遺伝子について被験物質による遺伝子発現レベルを評価し、候補物質を選別することが望ましい。複数個の遺伝子について評価する場合には、個々の遺伝子での評価をスコア化し、総合的に候補物質を選別することが可能である。例えば、一つの被験物質を用いて、上記の遺伝子のすべての遺伝子について評価を行い、該被験物質がそのうちの２個以上の遺伝子に関して中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善剤又は治療剤の有効成分となる候補化合物であると上記基準から評価される場合、該被験物質は候補化合物である可能性が高いと判断できる。この場合、評価する遺伝子数、スコアあるいは判断基準は限定されない。
【００９７】
以上のスクリーニング方法により、被験物質から選別される物質は、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の遺伝子発現制御剤として位置づけることができる。これらの物質は、生体内において配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現を制御することによって、脂質顆粒の蓄積の亢進を抑制し、中性脂質の蓄積を伴う疾患を緩和、抑制（改善、治療）し得ると考えられる。よって、これらの物質は、中性脂質の蓄積を伴う疾患を緩和、抑制（改善、治療）する薬物の有力な候補物質となる。
【００９８】
斯くして選抜取得される被験物質は、中性脂質の蓄積を伴う疾患を緩和、抑制（改善、治療）する薬物の有力な候補物質となる。
【００９９】
上記に記載する本発明のスクリーニング方法によって選別された候補物質は、さらに中性脂質の蓄積を伴う疾患モデル動物を用いた薬効試験、モデル動物及び正常動物を用いた安全性／体内動態試験、さらに中性脂質の蓄積を伴う疾患患者への臨床試験に供してもよく、これらの試験を実施することによって、より実用的な中性脂質の蓄積を伴う疾患改善又は治療剤を選別することができる。このようにして選別された物質は、さらにその構造解析結果に基づいて、化学的合成、生物学的合成（発酵）又は遺伝子学的操作によって、工業的に製造することができる。
【０１００】
（３−２）タンパク質の発現量を指標とするスクリーニング方法
本発明は、配列番号：２０〜３８のいずれか記載のアミノ酸配列を有するタンパク質の発現を制御する（減少させる／増大させる）物質をスクリーニングする方法を提供する。
本発明スクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
【０１０１】
（ａ）被験物質と配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質のいずれかを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞における配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質のいずれかの発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応するタンパク質の発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質のいずれかの発現量を変動させる被験物質を選択する工程。
【０１０２】
本発明スクリーニングに用いられる細胞は、内在性及び外来性を問わず、配列番号：１〜１９のいずれかの塩基配列を含む遺伝子のいずれかを発現し、発現産物としての配列番号：２０〜３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質を有する培養細胞全般を挙げることができる。ここで配列番号：２０〜３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質の発現は、遺伝子産物であるタンパク質を公知のウエスタン法にて検出することにより、容易に確認することができる。該細胞としては、具体的には、前記（３−１）項の（１）〜（３）に記載したような、ＨｕＨ７細胞等の脂質顆粒を含む細胞や、種々の刺激剤で処理したマクロファージ系細胞、又は本遺伝子のいずれかを導入した株化細胞などが挙げられる。また当該細胞の範疇には、その細胞膜画分、細胞質画分、細胞核画分なども含まれる。
【０１０３】
本発明スクリーニング方法によってスクリーニングされる被験物質（候補物質）は、制限されないが、核酸（本発明遺伝子のアンチセンスヌクレオチドを含む）、ペプチド、タンパク質、有機化合物、無機化合物などであり、本発明スクリーニングは、具体的にはこれらの被験物質又はこれらを含む試料（被験試料）を上記細胞や細胞膜画分と接触させることにより行われる。かかる被験試料としては、被験物質を含む細胞抽出液、遺伝子ライブラリーの発現産物、合成低分子化合物、合成ペプチド、天然化合物などが挙げられるが、これらに制限されない。
【０１０４】
実施例に示すように、中性脂質の蓄積を伴う疾患のモデルとなり得るＨｕＨ７細胞において、特異的に配列番号：２０〜３８のいずれかのアミノ酸配列を含む遺伝子が発現上昇している。この知見から、これら本遺伝子及び本タンパク質の発現亢進は中性脂質の蓄積を伴う疾患と関連していると考えられる。よって本発明のスクリーニング方法には、これら配列番号：２０〜３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質の発現レベルを指標として、その発現量を変動させる物質を探索する方法が包含される。このスクリーニング方法によって、中性脂質の蓄積を伴う疾患の緩和／抑制作用を有する（中性脂質の蓄積を伴う疾患に対して改善／治療効果を発揮する）候補物質を提供することができる。
【０１０５】
すなわち本発明のスクリーニング方法は、配列番号：２０〜３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質のいずれかの発現量を変動させる物質を探索することによって、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善剤又は治療剤の有効成分となる候補物質を提供するものである。
【０１０６】
候補物質の選別は、具体的には配列番号：２０〜３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質を発現産生している細胞を用いる場合は、被験物質（候補物質）を添加した細胞における前記本発明タンパク質のタンパク量（レベル）が、被験物質（候補物質）を添加しない細胞のその量（レベル）に比して変動する（低くなる／高くなる）ことを指標として、行うことができる。また、これら配列番号：２０〜３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質の発現・産生に発現誘導物質を必要とする細胞を用いる場合は、発現誘導物質［例えばインシュリン、デキサメタゾン、３−イソブチル−１−メチルキサンチン、プロスタグランジンＪ２活性を有する物質等］によって誘導される当該タンパクの産生が被験物質の存在によって制御されること、すなわち発現誘導物質の存在下で被験物質を接触させた細胞の遺伝子発現が、発現誘導物質存在下で被験物質を接触させなかった対照細胞（正のコントロール）に比して変動する（低くなる／高くなる）ことを指標として、当該被験物質を候補物質として選別することができる。
【０１０７】
用いられる細胞としては、例えば結腸由来細胞であるＣａｃｏ−２細胞、ＨＴ−２９細胞又はＣＯＬＯ　２０５　細胞等が挙げられる。
【０１０８】
上記いずれかのタンパク質の発現を制御する物質のうち、発現を低下（発現レベルの減少、発現誘導の抑制）するように制御する候補物質の選別は、具体的には配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質を発現産生している細胞を用いる場合は、被験物質（候補物質）を添加した細胞における、配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質の蛋白量（レベル）が、被験物質（候補物質）を添加しない細胞のその量（レベル）に比して低くなることを指標として、行うことができる。また、これら配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質のいずれかの発現に発現誘導物質を必要とする細胞を用いる場合は、発現誘導物質の存在下で被験物質を接触させた細胞のタンパク質の発現が、発現誘導物質存在下で被験物質を接触させなかった対照細胞（正のコントロール）に比して低くなることを指標として、当該被験物質を候補物質として選別することができる。
【０１０９】
上記いずれかのタンパク質の発現を制御する物質のうち、発現を上昇（発現レベルの増加、発現誘導の亢進）するように制御する候補物質の選別は、具体的には配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質を発現産生している細胞を用いる場合は、被験物質（候補物質）を添加した細胞における、配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質の蛋白量（レベル）が、被験物質（候補物質）を添加しない細胞のその量（レベル）に比して高くなることを指標として、行うことができる。また、これら配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、及び３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質のいずれかの発現に発現誘導物質を必要とする細胞を用いる場合は、発現誘導物質の存在下で被験物質を接触させた細胞のタンパク質の発現が、発現誘導物質存在下で被験物質を接触させなかった対照細胞（正のコントロール）に比して高くなることを指標として、当該被験物質を候補物質として選別することができる。
【０１１０】
本発明のスクリーニング方法にかかる配列番号：２０〜３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質の産生量は、前述したように、例えば抗体に関する本発明疾患マーカー（例えば配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質又はそのホモログを認識する抗体）を用いたウェスタンブロット法などの公知方法に従って定量できる。ウェスタンブロット法は、一次抗体として本発明疾患マーカーを用いた後、二次抗体として１２５Ｉなどの放射性同位元素、蛍光物質、ホースラディッシュペルオキシターゼ（ＨＲＰ）などの酵素等で標識した一次抗体に結合する抗体を用いて標識し、これら標識物質由来のシグナルを放射線測定器（ＢＡＳ−１８００ＩＩ：富士フィルム社製など）、蛍光検出器などで測定することによって実施できる。また、一次抗体として本発明疾患マーカーを用いた後、ＥＣＬ　Ｐｌｕｓ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔｔｉｎｇ　Ｄｅｔｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　（アマシャム　ファルマシアバイオテク社製）を利用して、該プロトコールに従って検出し、マルチバイオイメージャーＳＴＯＲＭ８６０（アマシャム　ファルマシアバイオテク社製）で測定することもできる。
【０１１１】
（３−３）　タンパク質の機能（活性）を指標とするスクリーニング方法
本発明は、配列番号：２０〜３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質の機能（活性）をスクリーニングする方法を提供する。
本発明のスクリーニング方法は次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
【０１１２】
（ａ）被験物質を　配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むタンパク質に接触させる工程、
（ｂ）上記（ａ）の工程に起因して生じる配列番号：２０〜３８に記載のアミノ酸配列を含むタンパク質の機能又は活性を測定し、該機能又は活性を被験物質を接触させない場合の配列番号：２０〜３８に記載のアミノ酸配列を含むタンパク質の機能又は活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、配列番号：２０〜３８に記載のアミノ酸配列を含むタンパク質の機能又は活性の変動をもたらす被験物質を選択する工程。
【０１１３】
本発明のスクリーニング方法おいては、配列番号：２０〜３８に記載のアミノ酸配列を含むタンパク質の公知の機能・活性に基づく如何なる機能・活性測定方法をも利用することができる。すなわち、配列番号：２０〜３８に記載のアミノ酸配列を含むタンパク質の公知の機能・活性測定系に被験物質を添加し、当該配列番号：２０〜３８に記載のアミノ酸配列を含むタンパク質の公知の機能・活性を制御（亢進・抑制・促進・阻害）する被験物質を、中性脂質の蓄積を伴う疾患に対して改善／治療効果を有する候補物質として選択するスクリーニング方法であれば、本発明のスクリーニング方法の範疇に含まれる。
【０１１４】
前記本発明のスクリーニングは、配列番号：２０〜３８に記載のアミノ酸配列を含むタンパク質を含む水溶液、細胞又は該細胞から調製した細胞画分と、被験物質とを接触させることにより行うことができる。すなわち、配列番号：２０〜３８に記載のアミノ酸配列を含むタンパク質を含む水溶液としては、通常の水溶液の他、これらのタンパク質を含む細胞溶解液、細胞破砕液、核抽出液あるいは細胞の培養上清などを例示することができる。
【０１１５】
また、本発明のスクリーニング方法に用いられる細胞としては、内在性及び外来性を問わず、配列番号：２０〜３８に記載のタンパク質を発現し得る細胞を挙げることができる。該細胞としては、ＨｕＨ７細胞、又は配列番号：２０〜３８に記載の遺伝子を導入した株化細胞などを用いることができる。
また本発明のスクリーニング方法に用いられる細胞画分とは、上記細胞に由来する各種の画分を意味し、これには、例えば細胞膜画分、細胞質画分、細胞核画分などが含まれる。
前記スクリーニングにおいて用いられる配列番号：２０〜３８に記載のタンパク質は公知のタンパク質であり、前記（１−３）に記述したように、本発明により提供される遺伝子の配列情報（配列番号１）に基づいて、ＤＮＡクローニング、各プラスミドの構築、宿主へのトランスフェクション、形質転換細胞の培養、及び必要に応じて培養物からのタンパク質の回収の操作により得ることができる。これらの操作は、当業者に既知の方法、あるいは文献記載の方法（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ　ｅｔ　ａｌ．，　ＣＳＨ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　（１９８３），　ＤＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　ＤＭ．　Ｇｌｏｖｅｒ，　ＩＲＬ　ＰＲＥＳＳ　（１９８５））などに準じて行うことができる。
【０１１６】
実施例に示すように、中性脂質の蓄積を伴う疾患のモデルであるＨｕＨ７細胞中の脂肪顆粒で、特異的に配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むタンパク質が発現上昇している。この知見から、本タンパク質の機能（活性）亢進は、中性脂質の蓄積を伴う疾患と関連していると考えられる。よって本発明のスクリーニング方法には、これら配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質の機能（活性）を指標として、該タンパク質の機能（活性）を制御する物質を探索する方法が包含される。本発明スクリーニング方法によれば、配列番号：２０〜３８のいずれか記載のアミノ酸配列を含むタンパク質の機能又は活性を制御する物質を探索でき、かくして中性脂質の蓄積を伴う疾患の緩和／抑制作用を有する（中性脂質の蓄積を伴う疾患に対して改善／治療効果を発揮する）候補物質が提供される。
【０１１７】
本発明タンパク質の機能（活性）制御の１つの態様として、該タンパク質の機能（活性）を抑制（低下）させる方向に制御する物質の探索は、例えば配列番号：１〜１９のいずれかの塩基配列を含む遺伝子を含む水溶液、細胞又は該細胞から調製した細胞画分に被験物質を接触させた場合に得られる上記の少なくとも１つのタンパク質の機能（活性）が、被験物質を添加しない対照の水溶液、細胞又は細胞画分の上記対応するタンパク質の機能（活性）に比して低くなることを指標として行うことができる。
【０１１８】
また本発明タンパク質の機能（活性）制御のもう１つの態様として、該タンパク質の機能（活性）を亢進（上昇、増加）させる方向に制御する物質の探索は、例えば配列番号：２０〜３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質を含む水溶液、細胞又は該細胞から調製した細胞画分に被験物質を接触させた場合に得られる上記の少なくとも１つのタンパク質の機能（活性）が、被験物質を添加しない対照の水溶液、細胞又は細胞画分の上記対応するタンパク質の機能（活性）に比して高くなることを指標として行うことができる。
すなわち本発明のスクリーニング方法は、配列番号：２０〜３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質の機能又は活性を制御する物質を探索することによって、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善剤又は治療剤の有効成分となる候補物質を提供するものである。
本発明スクリーニング方法によってスクリーニングされる被験物質（候補物質）は、制限されないが、核酸、ペプチド、タンパク質（配列番号：２０〜３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質に対する抗体を含む）、有機化合物、無機化合物などであり、本発明スクリーニングは、具体的にはこれらの被験物質又はこれらを含む試料（被験試料）を上記水溶液、細胞又は細胞画分と接触させることにより行われる。被験試料としては、被験物質を含む、細胞抽出液、遺伝子ライブラリーの発現産物、合成低分子化合物、合成ペプチド、天然化合物などが挙げられるが、これらに制限されない。
【０１１９】
配列番号：２１に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質は、プロテインキナーゼＣ　ミュー（ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　Ｃ　Ｍｕ）であり、その活性は公知である。配列番号：２２に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質は、プロテインキナーゼＣ　デルタ（ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　ｄｅｌｔａ）であり、その活性は公知である。配列番号：２３に記載のタンパク質は、プロテインキナーゼＣ　ニュー（ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　Ｃ　Ｎｕ）であり、その活性は公知である。従って、配列番号：２０〜２２のいずれかに記載のアミノ酸配列からなるタンパク質の機能（活性）の測定方法としては、プロテインキナーゼＣ活性を測定する方法が挙げられる。
【０１２０】
配列番号：２０〜２２に記載のタンパク質の機能又は活性に基づくスクリーニング方法としては、以下の方法が例示される。
【０１２１】
すなわち、プロテインキナーゼＣによる、［γ−３２Ｐ］ＡＴＰから基質タンパク質への放射性リン酸の転移活性を測定することができる。基質としては、通常ヒストンタンパク質を用い、プロテインキナーゼＣと反応後、カルシウム−リン脂質依存性に増加するリン酸転移活性を、基質タンパク質に取り込まれた３２Ｐの放射活性を測定することにより求め、これをプロテインキナーゼＣの活性とする。表１に標準的な反応液の組成例を示す。
【表１】
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【０１２２】
プロテインキナーゼＣは自己リン酸化能をもつためＡＴＰとプロテインキナーゼＣは、反応中以外は共存させず、いずれか一方を加えることで酵素反応を開始させる。反応は、３０℃でおこない、一定時間後２０％トリクロロ酢酸１ｍｌを加えて反応を停止させる。遠心操作で酸不溶性タンパク質をチューブの底に固着させ、１Ｎ水酸化ナトリウム２ｍｌにて可溶化し、チェフレンコ効果を利用して放射能を測定する。ヒストンタンパク質の代わりに合成ペプチドを基質として用いる場合は、上記の反応組成の容量を全て１／４に縮小した実験系にすればよく、この場合、反応の停止は、３００ｍＭのリン酸で行い、全量を直径２ｃｍのホスホセルロースディスクに吸着させ、７５ｍＭのリン酸溶液にて洗浄後、風乾し、放射能を測定する。
被験物質のプロテインキナーゼＣ阻害活性を測定する場合には、反応液中に阻害物質を加え、一定時間反応後、酵素反応により基質に取り込まれた放射活性を、被験物質を加えない場合と比較することにより、被験物質のプロテインキナーゼＣ阻害活性を測定することができる。
上記アッセイに用いられる基質としては、前記ヒストンタンパク質のほかに、プロタミン、グリコーゲンホスホリラーゼキナーゼ、フィブリノーゲン、リボソームタンパク質Ｓ６、トロポニン、ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ　ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ２、ビンキュリン、フィラミン、ホスホランバン、又はミオシンＬ鎖キナーゼ等が挙げられる。
【０１２３】
かくして選抜取得される被験物質は、中性脂質の蓄積を伴う疾患を緩和、抑制（改善、治療）する薬物の有力な候補となる。
【０１２４】
なお、上記（３−１）〜（３−３）に記載するスクリーニング方法は、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤の候補物質を選別するのみならず、中性脂質の蓄積を伴う疾患の既存の若しくは新規な改善又は治療剤（候補薬）が、配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を含む遺伝子のいずれかの発現を制御するか否か、あるいは配列番号：２０〜３８に記載のいずれかのアミノ酸配列を含むタンパク質のいずれかの発現若しくは機能・活性を制御するか否かを評価、確認するためにも用いることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法の範疇には、候補物質の探索のみならず、このような評価あるいは確認を目的とするものも含まれる。
【０１２５】
また、本発明のスクリーニング方法を実施する前に、上記に掲げる各本発明タンパク質をコードする遺伝子について、あらかじめ実験により、該遺伝子の発現を抑制する物質が中性脂肪の蓄積を伴う疾患の改善剤又は治療剤の有効成分（候補物質）として有用なのか、また発現を誘導する物質が中性脂肪の蓄積を伴う疾患の改善剤又は治療剤の有効成分（候補物質）として有用なのかを判断することは可能であり、その具体的な方法については前述の通りである。当該実験によって本発明遺伝子の発現抑制物質が候補物質になる可能性が高いと判断された場合は、当該遺伝子がコードする本発明タンパク質の機能（活性）の抑制を指標としてスクリーニングを行うことにより、より高い精度で候補物質を選別することができ、また当該実験によって本発明遺伝子の発現誘導物質が候補物質になる可能性が高いと判断された場合は、当該遺伝子がコードする本発明タンパク質の機能（活性）の亢進を指標としてスクリーニングを行うことにより、より高い精度で候補物質を選別することができる。
【０１２６】
上記（３−１）又は（３−２）に記載する本発明のスクリーニング方法によって選択された制御物質又は候補物質は、さらに中性脂質の蓄積を伴う疾患の動物モデルとして周知である動物モデルなどを用いた薬効試験、安全性試験、さらに中性脂肪の蓄積を伴う疾患に罹患した患者への臨床試験に供してもよく、これらの試験を実施することによって、より実用的な中性脂肪の蓄積を伴う疾患の改善又は治療剤を取得することができる。このようにして選別された物質は、さらにその構造解析結果に基づいて、化学的合成、生物学的合成（発酵）又は遺伝子学的操作によって、工業的に製造することができる。
【０１２７】
（４）中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善・治療剤
本発明は、中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善・治療剤を提供するものである。
【０１２８】
本発明は配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子がコードするタンパク質（配列番号：２０〜３８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するタンパク質）の発現が中性脂質の蓄積を伴う疾患と関連しているという新たな知見から、（１）配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現を変動させる物質が、上記疾患の改善又は治療に有効であるという考えに基づくものである。すなわち、本発明の中性脂質の蓄積を伴う疾患の改善・治療剤は配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現を変動させる物質を有効成分とするものである。
【０１２９】
当該有効成分となる配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子の発現制御物質は、上記のスクリーニング方法を利用して選別されたもののみならず、選別された物質に関する情報に基づいて常法に従って化学・生化学的手法により、若しくは工業的に製造されたものであってもよい。
【０１３０】
かかる発現制御物質（発現抑制（減少）物質、あるいは発現誘導（増大）物質）は、そのままもしくは自体公知の薬学的に許容される担体（賦形剤、増量剤、結合剤、滑沢剤などが含まれる）や慣用の添加剤などと混合して医薬組成物として調製することができる。当該医薬組成物は、調製する形態（錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤などの経口投与剤；注射剤、点滴剤、外用剤、点鼻剤、点眼剤、吸入剤、坐剤などの非経口投与剤）等に応じて経口投与又は非経口投与することができる。また投与量は、有効成分の種類、投与経路、投与対象又は患者の年齢、体重、症状などによって異なり一概に規定できないが、１日投与用量として、数ｍｇ〜２ｇ、好ましくは数十ｍｇ程度を、１日１回ないし数回に分けて投与することができる。
【０１３１】
上記有効成分とする物質がＤＮＡによりコードされるものの場合、該ＤＮＡを遺伝子治療用ベクターに組み込み、遺伝子治療を行うことも考えられる。更に、上記有効成分が配列番号：１〜１９のいずれかに記載の塩基配列を有する遺伝子のアンチセンスオリゴヌクレオチドの場合は、そのままもしくは遺伝子治療用ベクターにこれを組み込むことにより、遺伝子治療を行うこともできる。これらの場合も、投与量、投与方法は患者の体重や年齢、症状などにより変動するが、当業者であれば適宜選択することが可能である。
【０１３２】
【実施例】
次に、本発明を実施例によりさらに具体的に説明する。しかし、本発明はこれらの実施例になんら限定されるものではない。
【０１３３】
実施例１　　プロテオーム解析
（１）脂質顆粒画分の調製及びＳＤＳ−ＰＡＧＥ
ＨｕＨ７は、自発的な脂質顆粒蓄積をおこす細胞株である。ＨｕＨ７細胞の培養は１０％ＦＣＳ（血清）を添加したＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ　ｍｅｄｉｕｍ　培地を用いて３７℃でおこない、培地を３−５日ごとに交換した。脂質顆粒を単離するために、細胞を６０ｍｍのディシュ２０枚を用いて１ディシュあたり１，０００，０００個の細胞をまいて７日間培養した。Ｏｉｌ　ｒｅｄ　Ｏ　及びヘマトキシリンにて染色した結果を図１に示した。図１より、ＨｕＨ７細胞が脂肪顆粒を蓄積していることがわかる。細胞をトリプシンではがし、１０００ｇで遠心することにより細胞を集めて脂質顆粒を単離した。
１．７３　ｍｌのＨｕＨ７細胞に８．５５％　ショ糖含有の可溶化バッファー（２０μｇ／ｍｌ　になるようにＰＭＳＦを添加）を細胞と同量加えてホモゲナイザーでホモゲナイズした。ホモゲナイズ後、１０００ｇで２回遠心して脱核した溶液（３．３４ｍｌ）に７０％　ショ糖含有の可溶化バッファーを１．５ｍｌ加え、ショ糖の終濃度を２６％に調整した。１６ＰＡチューブ（日立）に３５％、４３％、５１％　ショ糖含有の可溶化バッファー（１０μｇ／ｍｌ　になるようにロイペプチン、ペプスタチン、キモスタチン、アンチパインを添加）を段階的に重層し、その上にショ糖濃度を２６％に調整した脱核後上清を重層した。さらに、その上に２％、１０％、１８％　ショ糖含有の可溶化バッファーを段階的に重層した。液量は２％　ショ糖含有の可溶化バッファーが３．６　ｍｌ、１０％、１８％、３５％、４３ショ糖含有の可溶化バッファーが１．６　ｍｌ、５１％　ショ糖含有の可溶化バッファーが１．０　ｍｌ、脱核後上清（２６％　ショ糖含有）は４．８５　ｍｌであった。重層した試料を超遠心機６５Ｐ−７（日立）、ローターＲＰＳ−２８ＳＡ−１（日立）を用いて２℃で２４０００ｒｐｍ　、３時間　超遠心し、遠心後にチューブの溶液を上から０．８ｍｌずつ、１９のフラクションに分けて回収した。
各フラクションに含まれている蛋白をＳＤＳ−ＰＡＧＥ（９．５％　アクリルアミドゲル）を用いて分離し、クマシーブルー染色により検出した。泳動サンプルの調製は、各フラクション３μｌにＳＤＳ−ＰＡＧＥ用　サンプル処理バッファー　５μｌとＤＤＷ　５μｌを混合し、７５℃　で２０　ｍｉｎ熱処理することによりおこなった。
また、各フラクション中のトリアシルグリセロール含量を薄層クロマトグラフィーにより解析した。ショ糖密度勾配遠心の各画分７．５μｌをエーテル、クロロホルムで抽出し、ＴＬＣ　プレート　（Ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　６０、ＭＥＲＣＫ）　にスポットし、ヘキサン／クロロホルム／酢酸　＝　８０／２０／１にて展開した。展開後、風乾したＴＬＣ　プレートを３％　Ｃｕ（ＣＨ３ＣＯ２）２、８％　リン酸で染色し、１３０℃で加熱してトリアシルグリセロールのスポットを検出した。結果を図２に示した。脂質二重膜からなるオルガネラや可溶性蛋白は、中性脂質に富む脂質顆粒に比べ重いため、チューブの底に沈み、脂質顆粒は最上部から回収される（図２中フラクション１）。ショ糖密度勾配遠心分画によって得られた１９個のフラクションのうち、最も比重の小さいフラクション１にのみ顕著な白濁が見られた。また、トリアシルグリセロールはフラクション１にのみ検出され、フラクション１が細胞内脂質顆粒画分であることを支持していた。大量に細胞内脂質顆粒画分を調製し、回収されたＨｕＨ７細胞株脂肪顆粒画分１５０μｇを用いＳＤＳ−ＰＡＧＥをおこない、クマ−シーブルーでタンパク質染色をおこなった。レーン１に細胞の総抽出液をレーン２に精製した脂肪顆粒画分をアプライした。結果を図３に示した。
【０１３４】
（２）タンパク質バンドのトリプシン消化
次に、脂肪顆粒画分をアプライしたＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルから目的とするタンパク質バンドを切り出し、エッペンドルフチューブに移し、５０％アセトニトリル／５０ｍＭ炭酸水素アンモニア溶液で洗浄後、スピードバックで乾燥させた。乾燥後、１０ｍＭ　ＤＴＴ／５０ｍＭ炭酸水素アンモニア溶液を添加し、５６℃で１時間反応後、５０ｍＭヨウ化アセトアミド／５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム溶液を加え、３０分間室温で反応させることにより、還元アルキル化をおこなった。次に、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム溶液とアセトニトリルで交互に数回ゲルの洗浄をおこない、スピードバックで乾燥させた。乾燥させたゲルに１２．５ｎｇ／μｌのトリプシン／２５ｍＭ炭酸水素アンモニウム溶液を添加し、３７℃、ｏｖｅｒｎｉｇｈｔで酵素消化を実施した。酵素消化後、２５ｍＭ炭酸水素アンモニウム溶液とアセトニトリルでゲルからペプチドを抽出し、スピードバックで乾燥後、１０μｌの０．１％ＴＦＡで再溶解した。再溶解後、サンプルは分析するまで、−２０℃で凍結保存した。
（３）マススペクトロメーターによるタンパク質の同定
サンプルの分析は、イオントラップ型ＬＣ−ＭＳ（ＬＣＱ；サーモクエスト）でおこなった。上記サンプルを全量、ＨＰＬＣ（ＨＰ１１００；アジレント）にアプライし、ＰｅｐＭａｐＣ１８（内径７５μｍ、長さ１５ｃｍ；ＬＣパッキング）で分離しながら、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ解析をおこないＭＳ／ＭＳスペクトルを取得した。ＨＰＬＣの条件は、流速０．２μｌ／ｍｉｎ、Ａ液；０．１％酢酸、Ｂ液；０．１％酢酸／エタノールでおこなった。
ＭＳ／ＭＳスペクトルからのタンパク質同定には、検索ソフトとしてＭａｓｃｏｔ（マトリクスサイエンス）を用い、ＮＣＢＩのデータベースに対し検索をおこうことにより実施した。
（４）脂肪顆粒に細胞内局在を持つ蛋白の抽出
３７のタンパク質バンドのＭＳ解析をおこない、蛋白を同定した。同定された蛋白についてＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴ等の公共のデータベースを使い細胞内局在を調べた。その結果、これまで脂質顆粒に存在することが報告されていなかったタンパク質（配列番号：２０〜３８で表される配列からなるタンパク質）を同定することができた。
同定したタンパク質のリストを以下に示した。
【表２】
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【０１３５】
実施例２　　ヒト組織サンプルからトータルＲＮＡの調製
ヒトの正常な脂肪組織１サンプル、及び正常な肝組織１サンプルから、それぞれ常法に従いトータル　ＲＮＡ　を調製し、得られたｔｏｔａｌ　ＲＮＡを用いてＤＮＡチップ解析を行った。ＤＮＡチップ解析はＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社Ｇｅｎｅ　Ｃｈｉｐ　Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅを用いて行った。具体的には、解析は、（１）　ｔｏｔａｌ　ＲＮＡからｃＤＮＡの調製、（２）　該ｃＤＮＡからラベル化ｃＲＮＡの調製、（３）　ラベル化ｃＲＮＡのフラグメント化、（４）　フラグメント化ｃＲＮＡとプローブアレイとのハイブリダイズ、（５）　プローブアレイの染色、（６）　プローブアレイのスキャン、及び（７）　遺伝子発現解析、の手順で行った。
【０１３６】
（１）　ｔｏｔａｌ　ＲＮＡからｃＤＮＡの調製
ヒトの正常な脂肪組織１サンプル、及び正常な肝組織１サンプルから常法に従って調製した各ｔｏｔａｌ　ＲＮＡ　１０μｇとＴ７−（ｄＴ）２４プライマー（Ａｍｅｒｓｈａｍ社製）　１００ｐｍｏｌを含む１１μＬの混合液を、７０℃、１０分間加熱した後、氷上で冷却した。冷却後、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ　Ｃｈｏｉｃｅ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｆｏｒ　ｃＤＮＡ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ社製）に含まれる５×Ｆｉｒｓｔ　Ｓｔｒａｎｄ　ｃＤＮＡ　Ｂｕｆｆｅｒ　４μＬ、該キットに含まれる０．１Ｍ　ＤＴＴ（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ）２μＬ、該キットに含まれる１０ｍＭ　ｄＮＴＰ　Ｍｉｘ　１μＬを添加し、４２℃で２分間加熱した。更に、該キットに含まれるＳｕｐｅｒ　ＳｃｒｉｐｔＩＩ　ＲＴ　２μＬ（４００Ｕ）を添加し、４２℃で１時間加熱した後、氷上で冷却した。冷却後、ＤＥＰＣ処理水（ナカライテスク社製、滅菌蒸留水）９１μＬ、該キットに含まれる５×Ｓｅｃｏｎｄ　Ｓｔｒａｎｄ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ　Ｂｕｆｆｅｒ　３０μＬ、１０ｍＭ　ｄＮＴＰ　Ｍｉｘ　３μＬ、該キットに含まれるＥ．　ｃｏｌｉ　ＤＮＡ　Ｌｉｇａｓｅ　１μＬ（１０Ｕ）、該キットに含まれるＥ．　ｃｏｌｉ　ＤＮＡ　Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　Ｉ　４μＬ（４０Ｕ）、及び該キットに含まれるＥ．　ｃｏｌｉ　ＲＮａｓｅＨ　１μＬ（２Ｕ）を添加し、１６℃で２時間反応させた。次いで、該キットに含まれるＴ４　ＤＮＡ　Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　２μＬ（１０Ｕ）を加え、１６℃で５分間反応させた後、０．５Ｍ　ＥＤＴＡ　１０μＬを添加した。次いで、フェノール／クロロホルム／イソアミルアルコール溶液（ニッポンジーン社製）１６２μＬを添加し、混合した。該混合液を、予め室温、１４，０００ｒｐｍ、３０秒間遠心分離しておいたＰｈａｓｅ　Ｌｏｃｋ　Ｇｅｌ　Ｌｉｇｈｔ（エッペンドルフ社製）に移し、室温で１４，０００ｒｐｍ、２分間遠心分離した後、１４５μＬの水層をエッペンドルフチューブに移した。得られた溶液に、７．５Ｍ酢酸アンモニウム溶液７２．５μＬ、エタノール３６２．５μＬを加えて混合した後、４℃で１４，０００ｒｐｍ、２０分間遠心分離した。遠心分離後、上清を捨て、作製したｃＤＮＡを含むペレットを得た。
【０１３７】
その後、該ペレットに８０％エタノール０．５ｍＬを添加し、４℃で１４，０００ｒｐｍ、５分間遠心分離した後、上清を捨てた。再度同様の操作を行った後、該ペレットを乾燥させ、ＤＥＰＣ処理水１２μＬに溶解した。
【０１３８】
以上の操作によって、ヒトの正常な脂肪組織１サンプル、及び正常な肝組織１サンプルから調製した各ｔｏｔａｌ　ＲＮＡから、各ｃＤＮＡを取得した。
【０１３９】
（２）　ｃＤＮＡからラベル化ｃＲＮＡの調製
各ｃＤＮＡ溶液５μＬに、ＤＥＰＣ処理水１７μＬ、ＢｉｏＡｒｒａｙ　Ｈｉｇｈ　Ｙｉｅｌｄ　ＲＮＡ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ　Ｌａｂｅｌｉｎｇ　Ｋｉｔ（ＥＮＺＯ社製）に含まれる１０×ＨＹ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ　Ｂｕｆｆｅｒ　４μＬ、該キットに含まれる１０×Ｂｉｏｔｉｎ　Ｌａｂｅｌｅｄ　Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ　４μＬ、該キットに含まれる１０×ＤＴＴ　４μＬ、該キットに含まれる１０×ＲＮａｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　Ｍｉｘ　４μＬ、及び該キットに含まれる２０×Ｔ７　ＲＮＡ　Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　２μＬを混合し、３７℃で５時間反応させて、ラベル化ｃＲＮＡを調製した。反応後、該反応液にＤＥＰＣ処理水６０μＬを加えたのち、ＲＮｅａｓｙ　Ｍｉｎｉ　Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いて添付プロトコールに従い、調製したラベル化ｃＲＮＡを精製した。
【０１４０】
（３）　ラベル化ｃＲＮＡのフラグメント化
各ラベル化ｃＲＮＡ　２０μｇを含む溶液に、５×Ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ　Ｂｕｆｆｅｒ（２００ｍＭトリス−酢酸　ｐＨ８．１（Ｓｉｇｍａ社製）、　５００ｍＭ酢酸カリウム（Ｓｉｇｍａ社製）、１５０ｍＭ酢酸マグネシウム（Ｓｉｇｍａ社製））８μＬを加えた反応液４０μＬを、９４℃で３５分間加熱した後、氷中に置いた。これによって、ラベル化ｃＲＮＡをフラグメント化した。
【０１４１】
（４）　フラグメント化ｃＲＮＡとプローブアレイとのハイブリダイズ
各フラグメント化ｃＲＮＡ　４０μＬに、５ｎＭ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　Ｏｌｉｇｏ　Ｂ２（Ａｍｅｒｓｈａｍ社製）４μＬ、１００×Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｃＲＮＡ　Ｃｏｃｋｔａｉｌ　４μＬ、Ｈｅｒｒｉｎｇ　ｓｐｅｒｍ　ＤＮＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）４０μｇ、Ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ　ＢＳＡ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ社製）２００μｇ、２×ＭＥＳ　Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　Ｂｕｆｆｅｒ（２００ｍＭ　ＭＥＳ、２Ｍ　［Ｎａ＋］，　４０ｍＭ　ＥＤＴＡ、０．０２％　Ｔｗｅｅｎ２０　（Ｐｉｅｒｃｅ社製）、ｐＨ６．５〜６．７）　２００μＬ、及びＤＥＰＣ処理水１４４μＬを混合し、４００μＬのハイブリカクテルを得た。得られた各ハイブリカクテルを９９℃で５分間加熱し、更に４５℃で５分間加熱した。加熱後、室温で１４，０００ｒｐｍ、５分間遠心分離し、ハイブリカクテル上清を得た。
【０１４２】
一方、１×ＭＥＳハイブリダイゼーションバッファーで満たしたＨｕｍａｎ　ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５プローブアレイ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）を、ハイブリオーブン内で、４５℃、６０ｒｐｍで１０分間回転させた後、１×ＭＥＳハイブリダイゼーションバッファーを除去してプローブアレイを調製した。上記で得られたハイブリカクテル上清２００μＬを該プローブアレイにそれぞれ添加し、ハイブリオーブン内で４５℃、６０ｒｐｍで１６時間回転させ、フラグメント化ｃＲＮＡとハイブリダイズしたプローブアレイを得た。
【０１４３】
（５）　プローブアレイの染色
上記で得られたハイブリダイズ済みプローブアレイそれぞれからハイブリカクテルを回収除去した後、Ｎｏｎ−Ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ　Ｗａｓｈ　Ｂｕｆｆｅｒ（６×ＳＳＰＥ（２０×ＳＳＰＥ（ナカライテスク社製）を希釈）、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％Ａｎｔｉｆｏａｍ０−３０（Ｓｉｇｍａ社製））で満たした。次にＮｏｎ−Ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ　Ｗａｓｈ　Ｂｕｆｆｅｒ及びＳｔｒｉｎｇｅｎｔ　Ｗａｓｈ　Ｂｕｆｆｅｒ（１００ｍＭ　ＭＥＳ、０．１Ｍ　ＮａＣｌ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）をセットしたＧｅｎｅＣｈｉｐ　Ｆｌｕｉｄｉｃｓ　Ｓｔａｔｉｏｎ　４００（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）の所定の位置にフラグメント化ｃＲＮＡとハイブリダイズしたプローブアレイを装着した。その後染色プロトコールＥｕＫＧＥ−ＷＳ２に従って、１次染色液（１０μｇ／ｍＬ　Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ　Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ　（ＳＡＰＥ）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｐｒｏｂｅ社製）、２ｍｇ／ｍＬ　Ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ　ＢＳＡ、１００ｍＭ　ＭＥＳ、１Ｍ　ＮａＣｌ（Ａｍｂｉｏｎ社製）、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％Ａｎｔｉｆｏａｍ０−３０）、　２次染色液（１００μｇ／ｍＬ　Ｇｏａｔ　ＩｇＧ　（Ｓｉｇｍａ社製）、３μｇ／ｍＬ　Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ　Ａｎｔｉ−Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　（Ｖｅｃｔｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）、２ｍｇ／ｍＬ　Ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ　ＢＳＡ、１００ｍＭ　ＭＥＳ、１Ｍ　ＮａＣｌ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％Ａｎｔｉｆｏａｍ０−３０）により染色した。
【０１４４】
（６）　プローブアレイのスキャン、　及び　（７）　遺伝子発現解析
染色した各プローブアレイをＨＰ　ＧｅｎｅＡｒｒａｙ　Ｓｃａｎｎｅｒ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）に供し、染色パターンを読み取った。染色パターンをもとにＧｅｎｅＣｈｉｐ　Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）によってプローブアレイ上の遺伝子の発現を解析した。次に、解析プロトコールに従ってＮｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ、遺伝子発現の比較解析を行った。
【０１４５】
実施例３　脂肪組織特異的に発現している遺伝子の解析
実施例２で行ったＤＮＡチップ解析による遺伝子発現の比較解析結果から、ヒトの正常な脂肪組織において、正常な肝組織に比べて４倍以上の発現増大を示したプローブを選抜した。さらにこの結果を実施例１の結果と比較し、脂肪組織特異的に発現しており、かつＨｕＨ７細胞の脂質顆粒で特異的に発言が認められたプローブ（配列番号：２０、２１、２２、２３、及び２４のいずれか記載のアミノ酸配列を有する、計５タンパク質）を選抜した結果を表３に示した。
【０１４６】
【表３】
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【０１４７】
表中、Ｈｕｍａｎ　Ｕ９５プローブ名は　Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５　Ｃｈｉｐ　におけるプローブ名を示す。また表中　Ａｃｃ　Ｎｏは、ＧｅｎＢａｎｋデータベースにおけるアクセッション番号を示す。また表中、変動倍率は、Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５　Ｃｈｉｐで解析した正常肝組織の遺伝子発現量を１とした場合における脂肪組織における遺伝子発現量を示す。また各遺伝子の塩基配列及びアミノ酸配列を示す後記配列表の配列番号も合わせて示す。
【０１４８】
【発明の効果】
本発明によって、中性脂肪の蓄積を伴う疾患のモデルであるＨｕＨ７細胞の脂肪顆粒に特異的に存在しているタンパク質（配列番号：２０〜３８のアミノ酸配列を有するタンパク質）が明らかになった。かかるタンパク質・及びこれをコードする遺伝子は動脈硬化症、肥満、脂肪肝等の中性脂肪の蓄積を伴う疾患の遺伝子診断に用いられるマーカー遺伝子（プローブ、プライマー）として有用である。かかるマーカー遺伝子によれば前記疾患に罹患しているかどうか、及びその罹患の原因を明らかにすることができ（診断精度が向上）、これによってより適切な治療を施すことが可能となる。すなわち、本発明のマーカー遺伝子は中性脂肪の蓄積を伴う疾患の適切な治療のためのツールとして利用することができる。
【０１４９】
また、上記遺伝子の発現増大と上記疾患との関連性から、該遺伝子の発現を抑制／誘導する物質は、上記中性脂質の蓄積を伴う疾患の治療剤として有用であると考えられる。従って、本発明の遺伝子によれば、その発現の抑制／誘導を指標とすることによって、中性脂質の蓄積を伴う疾患の予防、改善ないし治療剤となり得る候補薬をスクリーニングし選別することが可能である。すなわち、本発明は、中性脂質の蓄積を伴う疾患の治療剤などの開発技術をも提供する。
【０１５０】
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
【図１】ＨｕＨ７細胞の脂質顆粒を観察した図である。ヒト肝臓細胞株ＨｕＨ７をオイルレッドＯ試薬及びヘマトキシリン染色試薬による染色し、顕微鏡下で観察した。脂質顆粒は赤く染色され、核は青く染色された。
【図２】シュークロースグラジェント分画法による脂質顆粒タンパク質の精製結果を示した図である。上図：各精製画分についてＳＤＳ−電気泳動法により精製し、タンパク質をクーマシーブルー試薬でタンパク質染色した。下図：各精製画分についてＳＤＳ−電気泳動法により精製し、ＡＤＲＰタンパク質に対する抗体を用いて免疫染色法により分析した。ＡＤＲＰタンパク質はＦｒ．１に検出された。
各精製画分についてＴＬＣ法によりトリアシルグリセロール及びコレステロールを検出した。いずれもＦｒ．１に検出された。
【図３】脂質顆粒タンパク質のＳＤＳ−電気泳動法による分析結果を示した。
１．シュークロースグラジェント分画法による精製前のタンパク質の分析結果である。左に分子量を示した。
２．シュークロースグラジェント分画法による精製後のタンパク質の分析結果。右に本発明のタンパク質をコードする遺伝子の配列番号を記載した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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