(57)【要約】【課題】アルブミンやＨＤＬなどの有用物質を極力損失せず、低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンを効率よく吸着し、これらの濃度を低減させた体液を得るための吸着材を提供する。【解決手段】水不溶性多孔質担体にアニリンおよびポリアニオン性化合物を固定化してなる吸着材であって、アニリンの固定化量とポリアニオン性化合物の固定化量のモル比が３〜１０００である吸着材が、体液中の低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンを効率よく吸着できる。【選択図】　無し【特許請求の範囲】
【請求項１】
水不溶性多孔質担体にアニリンおよびポリアニオン性化合物を固定化してなる吸着材であって、アニリン固定化量とポリアニオン性化合物固定化量とのモル比が３以上１０００以下である体液中の低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着材。
【請求項２】
ポリアニオン性化合物がデキストラン硫酸である請求項１記載の体液中の低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着材。
【請求項３】
水不溶性多孔質担体がセルロース担体である請求項１または２記載の体液中の低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着材。
【請求項４】
請求項１から３のいずれかに記載の低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着材を、低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンを含有する体液と接触させることを特徴とする低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着除去方法。
【請求項５】
液の入口および出口を有し、かつ吸着材の容器外への流出防止手段を備えた容器内に、請求項１から３のいずれかに記載の低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着材を充填してなることを特徴とする、体液中の低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着器。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、体液中に存在する低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンを吸着し、これらの濃度を低減させた体液を得るための吸着材、ならびにこの吸着材を利用した体液中の低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着除去方法、およびこの吸着材を利用した体液中の低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着器に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
近年、食生活の欧米化や高齢化に伴い動脈硬化症を発症する患者が増加している。低密度リポ蛋白（ＬＤＬ）や極低密度リポ蛋白（ＶＬＤＬ）はコレステロールを多く含み、動脈硬化の原因となることはよく知られており、高脂血症や高コレステロール血症を有する患者に動脈硬化症の発症率が高いこともまた事実である。一方、高密度リポ蛋白（ＨＤＬ）は動脈硬化の遅延因子であることが知られている。
【０００３】
これらの疾患の治療法としては、食事療法、薬物療法が行われているが、効果が不十分な患者には、血液を体外に導き、血液中から低密度リポ蛋白を吸着除去する治療法が適用される。なかでもデキストラン硫酸固定化セルローズビーズを吸着材とする低密度リポ蛋白吸着の除去療法が広く普及し、治療効果をあげている。
【０００４】
一方、フィブリノーゲンの濃度と冠動脈疾患や脳卒中の発症頻度は相関すると報告されており（非特許文献１を参照）、動脈硬化症に関連するこれらの疾患の発症を防止するためには、低密度リポ蛋白だけでなく、フィブリノーゲンの濃度を低下させることが望まれている。
【０００５】
また、動脈硬化症のなかでも、末梢血管の閉塞をきたす疾患は閉塞性動脈硬化症と呼ばれる。該疾患では末梢の血管が狭小化、閉塞により末梢の血液循環状態が悪くなり、手足の冷感、しびれ感、間歇性跛行、安静時疼痛、潰瘍、壊疽などの症状が出現し、ひいては四肢切断に至る。このような末梢血管病変を有する閉塞性動脈硬化症においては、フィブリノーゲンの濃度が健常人に比べ高値であると報告されており（非特許文献２を参照）、閉塞性動脈硬化症の治療においても低密度リポ蛋白だけでなく、フィブリノーゲンの濃度を低下させることが望まれている。
【０００６】
このように、動脈硬化症、なかでも閉塞性動脈硬化症の患者血液中の低密度リポ蛋白、ならびにフィブリノーゲンの濃度を低下させる治療法が望まれているなかで、先述のデキストラン硫酸固定化セルローズビーズを吸着材とする低密度リポ蛋白の吸着除去療法は、低密度リポ蛋白の吸着は優れているが、フィブリノーゲンの低下は十分なものではない。また、二重濾過血漿分離交換法が適用されることがある。確かにこの方法では低密度リポ蛋白、ならびにフィブリノーゲンが除去されるが、補液が必要であること、除去される物質の選択性が小さく、低密度リポ蛋白やフィブリノーゲン以外の有用な物質が除去されてしまうなどの問題点がある。またヘパリン沈殿法という治療法が開発され、低密度リポ蛋白、ならびにフィブリノーゲンが除去されると報告されているが、操作方法が煩雑であるためか、一般的治療法として普及するには至っていない。
【０００７】
一方、疎水性構造と陰性官能基とを有する化合物を表面に有する架橋多孔質材からなる吸着材を用い、フィブリノーゲンと低密度リポ蛋白質とを除去することできることが知られている（特許文献１を参照）。しかしながら該吸着材のフィブリノーゲン吸着能は確かに優れているが、低密度リポ蛋白吸着能は十分なものではない。このような吸着材を使用して臨床上十分と考えられる吸着性能を発揮するには大量の吸着体を使用する必要があることから、治療中に体外に持ち出される血液が増加し、これに伴い治療中に血圧低下が発生する可能性が高まることになる。
【０００８】
以上のように、従来の技術では他の有用な物質を損失することなく、簡便な操作で低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンをともに効率よく除去できる方法が存在せず、該方法の開発が望まれていた。
【０００９】
【特許文献１】特開平７−１３６２５６
【非特許文献１】Ｗ．Ｂ．Ｋａｎｎｅｌら、Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、第２５８巻、１１８３〜１１８６頁、１９８７年
【非特許文献２】Ｐ．Ｐｏｒｅｄｏｓら、Ａｎｇｉｏｌｏｇｙ、第４７巻３号、２５３〜２５９頁、１９９６年
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記課題に対して、アルブミンやＨＤＬなどの有用物質を極力損失せず、低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンを効率よく吸着し、これらの濃度を低減させた体液を得るための吸着材、ならびにこの吸着材を利用した体液中の低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着除去方法、およびこの吸着材を利用した体液中の低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着器を提供するものである。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、アルブミンやＨＤＬなどの有用物質を極力損失せず、低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンを効率よく吸着除去できる吸着体について鋭意研究を行った。その結果、水不溶性多孔質担体にアニリンおよびポリアニオン性化合物を固定化してなる吸着材であって、アニリンの固定化量とポリアニオン性化合物の固定化量のモル比が特定の範囲である吸着材が、体液中の低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンを効率よく吸着できることを見出し、本発明の完成に至った。
【００１２】
即ち、本発明の第１発明は、水不溶性多孔質担体にアニリンおよびポリアニオン性化合物を固定化してなる吸着材であって、アニリン固定化量とポリアニオン性化合物固定化量とのモル比が３以上１０００以下である体液中の低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着材に関する。第２発明は、前記吸着材を低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンを含有する体液と接触させることを特徴とする低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着除去方法に関する。第３発明は液の入口および出口を有し、かつ吸着材の容器外への流出防止手段を備えた容器内に、請求項１から３のいずれかに記載の低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着材を充填してなることを特徴とする、体液中の低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着器に関する。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明における体液とは、血液、または血漿を指す。
本発明におけるポリアニオン性化合物とは、分子内に複数のアニオン性官能基を有する化合物をいう。本発明におけるアニオン性官能基とは、カルボキシル基、スルホン酸基、硫酸エステル基、リン酸エステル基など、ｐＨが中性で負に帯電する官能基をいう。このうち、吸着能力の点でカルボキシル基、スルホン酸基、硫酸エステル基が好ましく、中でも吸着能力が優れている点で特に硫酸エステル基が好ましい。
【００１４】
このようなポリアニオン性化合物の代表例としては、ポリアクリル酸、ポリビニルスルホン酸、ポリスチレンスルホン酸、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、ポリメタクリル酸、ポリリン酸、スチレン−マレイン酸共重合体などの合成ポリアニオン性化合物、デキストラン硫酸、カルボキシメチルセルロースなどの合成酸性多糖類、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ケタラン硫酸などの硫酸エステル基を有する生体由来の酸性ムコ多糖類、ヘパリン、ヘパラン硫酸などのＮ−スルホン酸基および硫酸エステル基を有する酸性ムコ多糖類、コンドロイチン、ホスホマンナンなどの生体由来のアニオン性官能基を有する多糖類、ならびにデオキシリボ核酸、リボ核酸などの生体由来の核酸などがあげられるが、これらの代表例に限定されるわけではない。
【００１５】
これらに代表される化合物のなかでも、安価に純度の高い物質がえられる、さらにはアニオン性官能基の導入量をコントロールできるなどの理由から、生体由来の化合物をそのまま用いるよりも、合成化合物を用いるほうがより実用的である。これらの点より、ポリアクリル酸、ポリビニル硫酸、ポリビニルスルホン酸、ポリスチレンスルホン酸、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、ポリメタクリル酸、ポリリン酸、スチレン−マレイン酸共重合体などの合成ポリアニオン性化合物や、デキストラン硫酸、カルボキシメチルセルロースなどの合成酸性多糖類が好ましく用いられる。
【００１６】
ポリアニオン性化合物の分子量は１０００以上、とくに３０００以上であることが、低密度リポ蛋白への親和性やアニリンとの組み合わせによるフィブリノーゲン吸着性能の面で好ましく用いられる。ポリアニオン性化合物の分子量の上限はとくに制限はないが、実用上の面から１００万以下が好ましい。
【００１７】
本発明において、水不溶性多孔質担体にポリアニオン性化合物を固定化する方法は種々あり、いかなる方法でもよいが、代表的な方法としては、（１）ポリアニオン性化合物を、化学的にあるいは放射線や電子線を用いたグラフト法によって水不溶性多孔質担体表面に共有結合する方法、（２）水不溶性多孔質担体の官能基を介して化学的方法によりポリアニオン性化合物を共有結合する方法などがある。
【００１８】
このなかでも、本発明の吸着材がポリアニオン性化合物とアニリンとを固定化してなる吸着材であることを考慮し、官能基を介して化学的にポリアニオン性化合物を共有結合させる方法が、アニリンの固定化が同じ方法でおこなえるため、本発明のおいてはより簡便で好ましい方法といえる。
【００１９】
本発明におけるアニリンの固定化方法は、水不溶性多孔質担体の官能基を介して化学的方法によりポリアニオン性化合物を共有結合する方法が好ましく用いられる。
【００２０】
本発明におけるアニリン固定化量とポリアニオン性化合物固定化量モル比（ＡＮ／ＰＡ比）とは、下式により算出される値をいう。
ＡＮ／ＰＡ比＝担体量（ｍｌ）当たりのアニリン固定化モル数／担体量（ｍｌ）当たりのポリアニオン固定化モル数
ＡＮ／ＰＡ比を３以上に制御することにより、アニリン単独あるいはポリアニオン単独を固定化した場合に比べ、ＬＤＬ−コレステロールおよびフィブリノーゲンの低下率が上昇することを見いだした。ＡＮ／ＰＡ比が３よりも小さい場合、フィブリノーゲンの低下の割合がアニリンのみを固定化した場合と同程度となり、アニリンとポリアニオン性化合物とをＡＮ／ＰＡ比３以上１０００以下で固定化したときの明確な効果がみられなくなる。ＡＮ／ＰＡ比の上限は、ポリアニオン性化合物が少しでも固定化されていれば、アニリン単独を固定化した場合に比べてＬＤＬ−コレステロールおよびフィブリノーゲンの低下率が上昇すると考えられるため特に制限はないが、ＡＮ／ＰＡ比があまりに大きくなると、ＬＤＬ−コレステロールおよびフィブリノーゲンの低下の割合がアニリン単独を固定化した場合に徐々に近づくことになり、アニリンとポリアニオン性化合物とを固定化する効果が薄れる。以上より、好ましいＡＮ／ＰＡ比の範囲は３以上１０００以下であり、吸着性能発揮の観点からより好ましくは３．５以上５００以下、最も好ましくは６以上１００以下である。
【００２１】
本発明におけるポリアニオン性化合物の固定化量は、実施例１において具体的方法を示す通り、該ポリアニオン性化合物がトルイジンブルーを吸着する性質を利用した方法により、その固定化量を測定する。
【００２２】
本発明のおけるアニリンの固定化量は、実施例１において具体的方法を示す通り、ジフェニルピクリルヒドラジルを用いたアミンの定量により測定する。
【００２３】
本発明における水不溶性多孔質担体は、常温常圧で固体であり水不溶性であり、かつ適当な大きさの細孔を有する、すなわち多孔構造を有する。水不溶性多孔質担体の形状としては、球状、粒状、平膜状、繊維状、中空糸状等いずれも有効に用いられるが、実用時の体液の流通面より球状または粒状がより好ましく用いられる。
【００２４】
水不溶性多孔質担体が球状または粒状であるばあい、平均粒径は１０μｍから１０００μｍであることが好ましく、吸着効率の点からさらに好ましくは２５〜１０００μｍ、最も好ましくは５０〜６００μｍである。
【００２５】
水不溶性多孔質担体の球状蛋白質の排除限界分子量は５×１０５以上のものが好ましく用いられる。排除限界分子量とは、成書（サイズ排除クロマトグラフィー、森定雄著、共立出版）に述べられているとおり、サイズ排除クロマトグラフィーにおいて種々の分子量を有する試料を流した際に、細孔内に侵入できない（排除される）分子の内最も小さい分子量をもつものの分子量をいう。球状蛋白質の排除限界分子量が５×１０５を下回るとフィブリノーゲンおよび低密度リポ蛋白の吸着能力が小さく、実用に耐えない。また球状蛋白質の排除限界分子量が１×１０８を超えると、ポアサイズが大きくなりすぎ、吸着に寄与する表面積が低下する結果、フィブリノーゲンおよび低密度リポ蛋白の吸着能力が低下する。以上より、本発明における水不溶性多孔質担体の球状蛋白質の排除限界分子量は５×１０５以上、１×１０８以下のものが好ましく、吸着性能発揮の観点からより好ましくは１×１０６以上、１×１０８以下、さらに好ましくは２×１０６以上、１×１０８以下である。
【００２６】
本発明における水不溶性多孔質担体は、ポリアニオン性化合物、およびアニリンを固定化するために、結合に利用しうる官能基を有することが好ましい。このような官能基の代表例としては、アミノ基、アミド基、カルボキシル基、酸無水物基、スクシンイミド基、水酸基、チオール基、アルデヒド基、ハロゲン基、エポキシ基、シラノール基、トレシル基などがあげられるが、これらに限定されるわけではない。また、水不溶性多孔質担体は、たとえばハロゲン化シアン化法、エピクロロヒドリン法、ビスエポキシド法、ブロモアセチルブロミド法などの方法で活性化されていてもよく、このなかで実用上、安全上の観点から、エピクロロヒドリン法がとくに好ましく用いられる。
【００２７】
本発明の水不溶性多孔質担体の強度としては、あまり柔らかいもの、容易に壊れるものは好ましくない。体液を流した場合に、圧密化が生じると充分な体液流量が得られなくなり処置時間の延長さらに処置続行不可能となりうるので、吸着材の圧密を防ぐためには、吸着材は充分な機械的強度を有するもの（硬質）であることが好ましい。ここでいう硬質とは、後記参考例に示すごとく、吸着材を円筒状カラムに均一に充填し、水性液体を流した際の圧力損失と流量の関係が、少なくとも０．３ｋｇｆ／ｃｍ２まで直線関係にあるものをいう。
【００２８】
本発明における水不溶性多孔質担体の材質は特に限定されないが、セルロース、酢酸セルロース、デキストリンなどの多糖類からなる有機担体、ポリスチレン、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体、ポリアクリルアミド、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリアクリル酸エステル、ポリメタクリル酸エステル、ポリビニルアルコールなどの合成高分子などが代表例として挙げられる。これらは、ヒドロキシエチルメタクリレート等のヒドロキシ基を有する高分子材料やポリエチレンオキサイド鎖を有する単量体と他の重合性単量体との共重合のようなグラフト共重合体等のコーティング層を有していてもよい。これらの中でセルロースや、ポリビニルアルコール等からなる合成高分子が、担体表面に活性基を導入しやすいため、実用上好ましく用いられる。
【００２９】
なかでもセルロースからなる担体が最も好ましく用いられる。セルロースからなる担体は、（１）機械的強度が比較的高く、強靱であるため破壊されたり微粒子を生じたりすることが少なく、カラムに充填した場合に血液を高流速で流しても圧密化しにくいため高流速で体液を流すことが可能となる、（２）安全性が合成高分子担体に比べて高いなどの優れた点を有しており、本発明における水不溶性多孔質担体として最も好適に用いることができる。
【００３０】
本発明の吸着器を用いた体外循環治療の抗凝固剤としては、ヘパリン、低分子量ヘパリン、メシル酸ナファモスタット、メシル酸ガベキサート、アルガトロバン、アシッド・シトレート・デキストロース液（ＡＣＤ液）やシトレート・フォスフェート・デキストロース液（ＣＰＤ液）などのクエン酸含有抗凝固剤などいずれを用いてもよい。なかでもヘパリンは一般的に最も好ましく用いられる抗凝固剤としてあげることができる。
【００３１】
本発明の吸着材を用いて、体液から低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンを吸着除去する方法には種々ある。代表的な方法としては、体液を取り出してバッグなどに貯留し、これに吸着材を混合して低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンを除去した後、吸着材を濾別して低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンが除去された体液を得る方法；体液の流入口および流出口を有し、体液は通過するが吸着材は通過しないフィルターを流出口に装着した容器へ吸着材を充填し、これに体液を流す方法などがある。いずれの方法を用いても良いが、後者の方法は操作も簡単であり、また体外循環回路に組み込むことにより、患者の体液から効率よくオンラインで低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンを除去することが可能であり、本発明の吸着材を用いた低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着除去方法として最も好ましい。
【００３２】
つぎに、本発明の吸着器を、一実施例の概略断面図である図１にもとづき説明する。
【００３３】
図１中、１は体液の流入口、２は体液の流出口、３は低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着材、４および５はメッシュ、６はカラム、７は低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着器である。しかしながら本発明における低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着器はこのような具体例に限定されるものではなく、液の入口および出口を有し、かつ吸着材の容器外への流出を防止する手段を備えた容器内に、低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着材を充填したものであれば、形状は特に限定されない。
【００３４】
【実施例】
以下、本発明の方法を実施例に基づいて具体的に説明する。
【００３５】
（参考例）
両端に孔径１５μｍのフィルターを装着したガラス製円筒カラム（内径９ｍｍ、カラム長１５０ｍｍ）にアガロース材料（バイオラッド（Ｂｉｏ−ｒａｄ）社製のＢｉｏｇｅｌＡ−５ｍ、粒径５０〜１００メッシュ）、ビニル系高分子材料（東ソー（株）製のトヨパールＨＷ−６５、粒径５０〜１００μｍ）およびセルロース材料（チッソ（株）製のセルロファインＧＣ−７００ｍ、粒径４５〜１０５μｍ）をそれぞれ均一に充填し、ペリスタティックポンプにより水を流し、流量と圧力損失ΔＰとの関係を求めた。その結果を図２に示す。
【００３６】
図２に示すごとく、トヨパールＨＷ−６５およびセルロファインＧＣ−７００ｍが圧力の増加にほぼ比例して流量が増加するのに対し、ＢｉｏｇｅｌＡ−５ｍは圧密化を引き起こし、圧力を増加させても流量が増加しないことがわかる。本発明においては前者のごとく、圧力損失ΔＰと流量の関係が０．３ｋｇ／ｃｍ２までの直線関係にあるものを硬質という。
【００３７】
（実施例１）
平均粒径約２６０μｍ、球状蛋白質の排除限界分子量が５×１０７の多孔質セルロースビーズ５５０ｍｌに水２３０ｍｌ、２Ｎ　ＮａＯＨ水溶液２２０ｍｌおよびエピクロロヒドリン７５ｍｌを加え、４０℃で２時間攪拌して反応させた。反応後ビーズを水で十分洗浄してエポキシ化セルロースビーズを得た。エポキシ化セルロースビーズのエポキシ基量は１５．３μｍｏｌ／ｍｌ（湿潤体積）であった。
【００３８】
デキストラン硫酸（硫黄含量約１８％、分子量約４０００）２１０ｇを３００ｍｌの水に溶解したデキストラン硫酸水溶液を調製し、エポキシ化セルロースビーズ４５０ｍｌおよび水４０ｍｌを加え、ＮａＯＨ水溶液でアルカリ性とした後、４５℃で２時間反応させた。反応後、ビーズを水および食塩水で十分洗浄した後、水を加えて全体を９００ｍｌとし、これにアニリン２．５ｍｌを加え、６５℃で６時間反応させた。その後、ビーズを水および食塩水で十分洗浄してデキストラン硫酸およびアニリン固定化セルロースビーズ（Ａ）を得た。
【００３９】
このＡを０．４ｍｌはかり取り、これにヘパリン加健常人血漿２．４ｍｌを加え、３７℃で２時間振盪し、上澄み血漿中のＬＤＬ−コレステロール、フィブリノーゲン、ＨＤＬ−コレステロール、およびアルブミン濃度を測定した。その結果、ＬＤＬ−コレステロールが７９ｍｇ／ｄｌから１７ｍｇ／ｄｌに、フィブリノーゲンが１６５ｍｇ／ｄｌから９６ｍｇ／ｄｌに低下したが、ＨＤＬ−コレステロールは１０１ｍｇ／ｄｌから８９ｍｇ／ｄｌへ、アルブミンは４．５ｇ／ｄｌから４．２ｇ／ｄｌへ低下するに留まった。
【００４０】
なお、Ａのアニリン固定化量は、ジフェニルピクリルヒドラジルがアミノ基の水素原子を引き抜き、ジフェニルピクリルヒドラジンに変化することを利用して測定した。すなわち１ｍｌのＡをメタノールで置換した後、１ｍｏｌ／ｌの酢酸緩衝液（ｐＨ約２．５）を１ｍｌ、および約１．６ｍｇ／ｌに調整したジフェニルピクリルヒドラジル（東京化成）のメタノール溶液を４ｍｌ加え、６０℃で１時間静置した後、上清のジフェニルピクリルヒドラジルを５１５ｎｍにおける吸光度により定量し、その減少量から求めた（検量線の作成にはアニリノエタノール（アルドリッチ）を使用した）。その結果、Ａのアニリン固定化量は２．７６μｍｏｌ／ｍｌであった。
【００４１】
また、Ａのデキストラン硫酸固定化量は、デキストラン硫酸とトルイジンブルーが親和性を有することを利用して測定した、すなわち１ｍｌのＡに対し、約９０ｍｇ／ｌに調整したベーシック・ブルー１７（東京化成）水溶液を１００ｍｌ程度加え、１０分間攪拌、静置後、上清のベーシック・ブルーを６３０ｎｍにおける吸光度により定量し、その減少量から求めた。その結果、Ａのデキストラン硫酸固定化量は０．２０μｍｏｌ／ｍｌであり、ＡＮ／ＰＡ比は１３．８であった。
【００４２】
（実施例２）
デキストラン硫酸の反応時間を２時間から４時間にかえたほかは実施例１と同様にしてデキストラン硫酸およびアニリン固定化セルロースビーズ（Ｂ）を得た。このＢのアニリン固定化量は２．４６μｍｏｌ／ｍｌ、デキストラン硫酸固定化量は０．４０μｍｏｌ／ｍｌ、ＡＮ／ＰＡ比は６．２であった。
このＢの吸着性能を実施例１と同様にして求めた。その結果、ＬＤＬ−コレステロールが７９ｍｇ／ｄｌから１７ｍｇ／ｄｌに、フィブリノーゲンが１６５ｍｇ／ｄｌから９６ｍｇ／ｄｌに低下したが、ＨＤＬ−コレステロールは１０１ｍｇ／ｄｌから９０ｍｇ／ｄｌへ、アルブミンは４．５ｇ／ｄｌから４．２ｇ／ｄｌへ低下するに留まった。
【００４３】
（実施例３）
デキストラン硫酸の反応時間を２時間から８時間にかえたほかは実施例１と同様にしてデキストラン硫酸およびアニリン固定化セルロースビーズ（Ｃ）を得た。このＣのアニリン固定化量は２．２８μｍｏｌ／ｍｌ、デキストラン硫酸固定化量は０．６０μｍｏｌ／ｍｌ、ＡＮ／ＰＡ比は３．８であった。
このＣの吸着性能を実施例１と同様にして求めた。その結果、ＬＤＬ−コレステロールが７９ｍｇ／ｄｌから１９ｍｇ／ｄｌに、フィブリノーゲンが１６５ｍｇ／ｄｌから１１９ｍｇ／ｄｌに低下したが、ＨＤＬ−コレステロールは１０１ｍｇ／ｄｌから９０ｍｇ／ｄｌへ、アルブミンは４．５ｇ／ｄｌから４．２ｇ／ｄｌへ低下するに留まった。
【００４４】
（実施例４）
デキストラン硫酸の反応時間を２時間から１２時間にかえたほかは実施例１と同様にしてデキストラン硫酸およびアニリン固定化セルロースビーズ（Ｄ）を得た。このＤのアニリン固定化量は２．０４μｍｏｌ／ｍｌ、デキストラン硫酸固定化量は０．６８μｍｏｌ／ｍｌ、ＡＮ／ＰＡ比は３．０であった。
このＤの吸着性能を実施例１と同様にして求めた。その結果、ＬＤＬ−コレステロールが７９ｍｇ／ｄｌから１８ｍｇ／ｄｌに、フィブリノーゲンが１６５ｍｇ／ｄｌから１１２ｍｇ／ｄｌに低下したが、ＨＤＬ−コレステロールは１０１ｍｇ／ｄｌから８９ｍｇ／ｄｌへ、アルブミンは４．５ｇ／ｄｌから４．０ｇ／ｄｌへ低下するに留まった。
【００４５】
（比較例１）
デキストラン硫酸の反応時間を２時間から２４時間にかえたほかは実施例１と同様にしてデキストラン硫酸およびアニリン固定化セルロースビーズ（Ｅ）を得た。このＥのアニリン固定化量は１．４４μｍｏｌ／ｍｌ、デキストラン硫酸固定化量は０．７５μｍｏｌ／ｍｌ、ＡＮ／ＰＡ比は１．９であった。
このＥの吸着性能を実施例１と同様にして求めた。その結果、その結果、ＬＤＬ−コレステロールが７９ｍｇ／ｄｌから２５ｍｇ／ｄｌに、フィブリノーゲンが１６５ｍｇ／ｄｌから１３０ｍｇ／ｄｌに、ＨＤＬ−コレステロールは１０１ｍｇ／ｄｌから８９ｍｇ／ｄｌに、アルブミンは４．５ｇ／ｄｌから３．９ｇ／ｄｌへ低下した。
【００４６】
（比較例２）
実施例１と同様にして得たエポキシ化セルロースビーズ４５０ｍｌに、デキストラン硫酸２１０ｇを３００ｍｌの水に溶解したデキストラン硫酸水溶液、および水４０ｍｌを加え、ＮａＯＨ水溶液でアルカリ性とした後、４５℃で８時間反応させた。反応後、ビーズを水および食塩水で十分洗浄し、デキストラン硫酸固定化セルロースビーズ（Ｆ）を得た。このＦのデキストラン硫酸固定化量は０．６０μｍｏｌ／ｍｌ、ＡＮ／ＰＡ比は０であった。
このＦの吸着性能を実施例１と同様にして求めた。その結果、ＬＤＬ−コレステロールが７９ｍｇ／ｄｌから２０ｍｇ／ｄｌに、フィブリノーゲンが１６５ｍｇ／ｄｌから１４７ｍｇ／ｄｌに、ＨＤＬ−コレステロールは１０１ｍｇ／ｄｌから８９ｍｇ／ｄｌへ、アルブミンは４．５ｇ／ｄｌから４．２ｇ／ｄｌに低下した。
【００４７】
（比較例３）
実施例１と同様にして得たエポキシ化セルロースビーズ５０ｍｌに、アニリン０．２７ｍｌおよび水７５ｍｌを加え、６５℃で６時間静置した。その後、ビーズを水で十分洗浄してアニリン固定化セルロースビーズ（Ｇ）を得た。このＧのアニリン固定化量は３．０６μｍｏｌ／ｍｌであった。
このＧの吸着性能を実施例１と同様にして求めた。その結果、ＬＤＬ−コレステロールが７９ｍｇ／ｄｌから２６ｍｇ／ｄｌに、フィブリノーゲンが１６５ｍｇ／ｄｌから１０６ｍｇ／ｄｌに、ＨＤＬ−コレステロールは１０１ｍｇ／ｄｌから８８ｍｇ／ｄｌへ、アルブミンは４．５ｇ／ｄｌから４．２ｇ／ｄｌに低下した。
【００４８】
（比較例４）
実施例１と同様にして得たエポキシ化セルロースビーズ５０ｍｌに、特開平７−１３６２５６で開示されているリガンド化合物であるＬ−トリプトファン（半井化学薬品）０．６１ｇを５０℃に加温した水２０ｍｌに溶解し、２Ｎ　ＮａＯＨ水溶液でアルカリ性にし、これを６０℃で６時間振盪した。反応後、水で洗浄し、トリプトファン固定化セルロースビーズ（Ｈ）を得た。
このＨの吸着性能を実施例１と同様にして求めた。その結果、フィブリノーゲンが１６５ｍｇ／ｄｌから８２ｍｇ／ｄｌに低下したが、ＬＤＬ−コレステロールが７９ｍｇ／ｄｌから４４ｍｇ／ｄｌへの低下に留まった。またＨＤＬ−コレステロールは１０１ｍｇ／ｄｌから８９ｍｇ／ｄｌに、アルブミンは４．５ｇ／ｄｌから４．１ｇ／ｄｌに低下した。
【００４９】
なお、実施例１〜４、ならびに比較例１〜４の吸着性能を評価した結果を表１に示した。
【００５０】
【表１】
2004129975.tif 000002
（実施例５）
平均粒径約２６０μｍの多孔質セルロースビーズを平均粒径約４４０μｍの多孔質セルロースビーズ（球状蛋白質の排除限界分子量が５×１０７）に、またデキストラン硫酸の反応時間を２時間から１時間にかえたほかは実施例１と同様にしてデキストラン硫酸およびアニリン固定化セルロースビーズ（Ｉ）を得た。このＩのアニリン固定化量は５．２０μｍｏｌ／ｍｌ、デキストラン硫酸固定化量は０．１４μｍｏｌ／ｍｌ、ＡＮ／ＰＡ比は３７．１であった。
このＩの吸着性能を実施例１と同様にして求めた。その結果、ＬＤＬ−コレステロールが６９ｍｇ／ｄｌから２３ｍｇ／ｄｌに、フィブリノーゲンが２１７ｍｇ／ｄｌから１６３ｍｇ／ｄｌに低下したが、ＨＤＬ−コレステロールは５１ｍｇ／ｄｌから４７ｍｇ／ｄｌへ、アルブミンは４．８ｇ／ｄｌから４．５ｇ／ｄｌへ低下するに留まった。
【００５１】
（実施例６）
デキストラン硫酸の反応時間を１時間から２時間にかえたほかは実施例５と同様にしてデキストラン硫酸およびアニリン固定化セルロースビーズ（Ｊ）を得た。このＪのアニリン固定化量は３．１８μｍｏｌ／ｍｌ、デキストラン硫酸固定化量は０．１７μｍｏｌ／ｍｌ、ＡＮ／ＰＡ比は１８．７であった。
このＪの吸着性能を実施例１と同様にして求めた。その結果、ＬＤＬ−コレステロールが６９ｍｇ／ｄｌから２２ｍｇ／ｄｌに、フィブリノーゲンが２１７ｍｇ／ｄｌから１６１ｍｇ／ｄｌに低下したが、ＨＤＬ−コレステロールは５１ｍｇ／ｄｌから４７ｍｇ／ｄｌへ、アルブミンは４．８ｇ／ｄｌから４．５ｇ／ｄｌへ低下するに留まった。
【００５２】
（実施例７）
デキストラン硫酸の反応時間を１時間から４時間にかえたほかは実施例５と同様にしてデキストラン硫酸およびアニリン固定化セルロースビーズ（Ｋ）を得た。このＫのアニリン固定化量は２．９４μｍｏｌ／ｍｌ、デキストラン硫酸固定化量は０．２４μｍｏｌ／ｍｌ、ＡＮ／ＰＡ比は１２．３であった。
このＫの吸着性能を実施例１と同様にして求めた。その結果、ＬＤＬ−コレステロールが６９ｍｇ／ｄｌから２４ｍｇ／ｄｌに、フィブリノーゲンが２１７ｍｇ／ｄｌから１６４ｍｇ／ｄｌに低下したが、ＨＤＬ−コレステロールは５１ｍｇ／ｄｌから４６ｍｇ／ｄｌへ、アルブミンは４．８ｇ／ｄｌから４．５ｇ／ｄｌへ低下するに留まった。
【００５３】
（比較例５）
平均粒径約２６０μｍの多孔質セルロースビーズを平均粒径約４４０μｍの多孔質セルロースビーズに、またデキストラン硫酸の反応時間を８時間から４時間にかえたほかは比較例２と同様にしてデキストラン硫酸固定化セルロースビーズ（Ｌ）を得た。このＬのデキストラン硫酸固定化量は０．２４μｍｏｌ／ｍｌ、ＡＮ／ＰＡ比は０であった。
このＬの吸着性能を実施例１と同様にして求めた。その結果、ＬＤＬ−コレステロールが６９ｍｇ／ｄｌから３５ｍｇ／ｄｌに低下したが、フィブリノーゲンが２１７ｍｇ／ｄｌから２０１ｍｇ／ｄｌに低下するに留まった。またＨＤＬ−コレステロールは５１ｍｇ／ｄｌから４７ｍｇ／ｄｌへ、アルブミンは４．８ｇ／ｄｌから４．５ｇ／ｄｌへ低下した。
【００５４】
（比較例６）
デキストラン硫酸の反応時間を４時間から２４時間にかえたほかは比較例５と同様にしてデキストラン硫酸固定化セルロースビーズ（Ｍ）を得た。このＭのデキストラン硫酸固定化量は０．６０μｍｏｌ／ｍｌ、ＡＮ／ＰＡ比は０であった。
このＭの吸着性能を実施例１と同様にして求めた。その結果、ＬＤＬ−コレステロールが６９ｍｇ／ｄｌから３３ｍｇ／ｄｌに低下したが、フィブリノーゲンが２１７ｍｇ／ｄｌから１９０ｍｇ／ｄｌに低下するに留まった。またＨＤＬ−コレステロールは５１ｍｇ／ｄｌから４７ｍｇ／ｄｌへ、アルブミンは４．８ｇ／ｄｌから４．５ｇ／ｄｌへ低下した。
【００５５】
（比較例７）
平均粒径約２６０μｍの多孔質セルロースビーズを平均粒径約４４０μｍの多孔質セルロースビーズにかえたほかは比較例３と同様にしてアニリン固定化セルロースビーズ（Ｎ）を得た。このＮのアニリン固定化量は５．４６μｍｏｌ／ｍｌであった。
このＮの吸着性能を実施例１と同様にして求めた。その結果、ＬＤＬ−コレステロールが６９ｍｇ／ｄｌから３４ｍｇ／ｄｌに、フィブリノーゲンが２１７ｍｇ／ｄｌから１７６ｍｇ／ｄｌに低下するに留まった。またＨＤＬ−コレステロールは５１ｍｇ／ｄｌから４６ｍｇ／ｄｌへ、アルブミンは４．８ｇ／ｄｌから４．５ｇ／ｄｌへ低下した。
【００５６】
なお、実施例５〜７、ならびに比較例５〜７の吸着性能を評価した結果を表２に示した。
【００５７】
【表２】
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【００５８】
【発明の効果】
本発明により、アルブミンやＨＤＬなどの有用物質を極力損失せず、低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンを効率よく吸着除去し、該濃度を低下させた体液を得ることができる。本発明は、動脈硬化症、特に閉塞性動脈硬化症の患者の血液から、低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの濃度を低下させる方法として有効である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明吸着器の１実施例の概略断面図を示す。
【符号の説明】
１　　　　　　　　体液流入口
２　　　　　　　　体液流出口
３　　　　　　　　低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着材
４、５　　　　　メッシュ（吸着材流出防止手段）
６　　　　　　　　カラム
７　　　　　　　　低密度リポ蛋白およびフィブリノーゲンの吸着器
【図２】３種類のゲルを用いた場合の、流速と圧力損失との関係を示す。
【図１】
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【図２】
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