(57)【要約】【課題】糖類の吸収を抑制することができ、肥満や糖尿病の治療や症状の緩和に有効な糖類吸収抑制剤及び該糖類吸収抑制剤を含有する食品を提供することにある。【解決手段】フウチョウソウ科（Ｃａｐｐａｒｉｄａｃｅａｅ）フウチョウボク属（Ｃａｐｐａｒｉｓ）に属する植物及び／又はフウチョウソウ科（Ｃａｐｐａｒｉｄａｃｅａｅ）フウチョウボク属（Ｃａｐｐａｒｉｓ）に属する植物の抽出物からなることを特徴とする糖類吸収抑制剤及びアミノ酸、アミノ酸誘導体及びこれらの重合体からなる群から選択される一種以上を含有することを特徴とする糖類吸収抑制剤とする。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
フウチョウソウ科（Ｃａｐｐａｒｉｄａｃｅａｅ）フウチョウボク属（Ｃａｐｐａｒｉｓ）に属する植物及び／又はフウチョウソウ科（Ｃａｐｐａｒｉｄａｃｅａｅ）フウチョウボク属（Ｃａｐｐａｒｉｓ）に属する植物の抽出物からなることを特徴とする糖類吸収抑制剤。
【請求項２】
前記フウチョウソウ科（Ｃａｐｐａｒｉｄａｃｅａｅ）フウチョウボク属（Ｃａｐｐａｒｉｓ）に属する植物がスイビンロウ（Ｃａｐｐａｒｉｓ  ｐｔｅｒｏｃａｒｐａ  Ｃｈｕｎ）及び／又はマビンロウ（Ｃａｐｐａｒｉｓ  ｍａｓａｉｋａｉ  Ｌｅｖｌ．）であることを特徴とする請求項１に記載の糖類吸収抑制剤。
【請求項３】
前記フウチョウソウ科（Ｃａｐｐａｒｉｄａｃｅａｅ）フウチョウボク属（Ｃａｐｐａｒｉｓ）に属する植物の抽出物のアミノ酸及び／又はペプチド含有画分を含むことを特徴とする請求項１又は２に記載の糖類吸収抑制剤。
【請求項４】
アミノ酸、アミノ酸誘導体及びこれらの重合体からなる群から選択される一種以上を含有することを特徴とする糖類吸収抑制剤。
【請求項５】
前記アミノ酸がリン酸化アミノ酸であることを特徴とする請求項４に記載の糖類吸収抑制剤。
【請求項６】
前記糖類吸収抑制剤が血糖値上昇抑制作用を有することを特徴とする請求項１乃至５のいずれかに記載の糖類吸収抑制剤。
【請求項７】
請求項１乃至６のいずれかに記載の糖類吸収抑制剤を含有することを特徴とする食品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は糖類吸収抑制剤及び該糖類吸収抑制剤を含有する食品に関し、その目的は、糖類の吸収を抑制することができ、肥満や糖尿病の治療や症状の緩和に有効な糖類吸収抑制剤及び該糖類吸収抑制剤を含有する食品を提供することにある。
【０００２】
【従来の技術】
日本の肥満人口は男性約１３００万人、女性約１０００万人との報告がなされており、肥満人口は増加傾向にある。
肥満は様々な疾病の原因となることが知られており、特に糖尿病の発症要因として最も重要視されている。糖尿病患者の数も近年増加傾向にある。肥満状態となると、脂肪細胞の肥大が認められ、脂肪細胞のみならず、筋肉細胞や肝細胞などインスリンの標的細胞レベルでインスリン感受性の低下が起り、糖忍容能を悪化させ、最終的に糖尿病を発症する。
【０００３】
このような肥満人口や糖尿病患者数の増加は、食生活の欧米化、日常生活の様々なストレス、交通手段の発達に伴った慢性的な運動不足などがその主要な原因であると考えられている。
このような肥満や糖尿病の原因を短期的に改善することは非常に困難であることから、低カロリー食品、低糖食品、低脂肪食品、ダイエットサプリメント、ダイエット飲料などのダイエット食品が活用されている。
【０００４】
前記したダイエット食品の有効成分として使用可能なものとして、例えばピートサポニンを有効成分とする糖吸収抑制剤（特許文献１参照）、ギムネマイノドラムを有効成分とする糖吸収抑制剤が提案されている（特許文献２，３参照）。
【０００５】
【特許文献１】
特開平８−４０９１２号公報
【特許文献２】
特許第２８５９６６８号公報
【特許文献３】
特許第２８８０４３４号公報
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
上記した従来の糖吸収抑制剤は、糖の吸収を抑制することができるものの、糖吸収を抑制する効果は十分満足することができるものではなかった。また呈味性に劣り、美味しく食することができないといった問題を有していた。
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究を行ったところ、ある植物の抽出物が糖類吸収抑制作用を有することを、さらにはアミノ酸やアミノ酸誘導体等が糖類吸収抑制作用を有することを見出し、本発明の完成に至った。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
即ち、請求項１に係る発明は、フウチョウソウ科（Ｃａｐｐａｒｉｄａｃｅａｅ）フウチョウボク属（Ｃａｐｐａｒｉｓ）に属する植物及び／又はフウチョウソウ科（Ｃａｐｐａｒｉｄａｃｅａｅ）フウチョウボク属（Ｃａｐｐａｒｉｓ）に属する植物の抽出物からなることを特徴とする糖類吸収抑制剤に関する。
請求項２に係る発明は、前記フウチョウソウ科（Ｃａｐｐａｒｉｄａｃｅａｅ）フウチョウボク属（Ｃａｐｐａｒｉｓ）に属する植物がスイビンロウ（Ｃａｐｐａｒｉｓ  ｐｔｅｒｏｃａｒｐａ  Ｃｈｕｎ）及び／又はマビンロウ（Ｃａｐｐａｒｉｓ  ｍａｓａｉｋａｉ  Ｌｅｖｌ．）であることを特徴とする請求項１に記載の糖類吸収抑制剤に関する。
請求項３に係る発明は、前記フウチョウソウ科（Ｃａｐｐａｒｉｄａｃｅａｅ）フウチョウボク属（Ｃａｐｐａｒｉｓ）に属する植物の抽出物のアミノ酸及び／又はペプチド含有画分を含むことを特徴とする請求項１又は２に記載の糖類吸収抑制剤に関する。
請求項４に係る発明は、アミノ酸、アミノ酸誘導体及びこれらの重合体からなる群から選択される一種以上を含有することを特徴とする糖類吸収抑制剤に関する。
請求項５に係る発明は、前記アミノ酸がリン酸化アミノ酸であることを特徴とする請求項４に記載の糖類吸収抑制剤に関する。
請求項６に係る発明は、前記糖類吸収抑制剤が血糖値上昇抑制作用を有することを特徴とする請求項１乃至５のいずれかに記載の糖類吸収抑制剤に関する。
請求項７に係る発明は、請求項１乃至６のいずれかに記載の糖類吸収抑制剤を含有することを特徴とする食品に関する。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明に係る糖類吸収抑制剤は、フウチョウソウ科（Ｃａｐｐａｒｉｄａｃｅａｅ）フウチョウボク属（Ｃａｐｐａｒｉｓ）に属する植物、好ましくはこの植物の抽出物を有効成分とする。また本発明に係る糖類吸収抑制剤は、アミノ酸、アミノ酸誘導体及びこれらの重合体からなる群から選択される一種以上を有効成分とする。
【０００９】
フウチョウソウ科に属する植物は特には限定されないが、フウチョウソウ科フウチョウボク属（Ｃａｐｐａｒｉｓ）に属する植物を例示することができ、具体的には、スイビンロウ（Ｃａｐｐａｒｉｓ  ｐｔｅｒｏｃａｒｐａ  Ｃｈｕｎ）やマビンロウ（Ｃａｐｐａｒｉｓ  ｍａｓａｉｋａｉ  Ｌｅｖｌ．）を例示することができる。
【００１０】
スイビンロウ（Ｃａｐｐａｒｉｓ  ｐｔｅｒｏｃａｒｐａ  Ｃｈｕｎ）は中国の広東、広西、雲南等に分布するフウチョウソウ科フウチョウボク属に属する植物である。つる性の低木で高さ３ｍ以上になる。種子の乾燥物は現地少数民族の伝統な食品として用いられている。
本発明においては、葉部、幹部、根部、種子等の各部位を単独で又は適宜混合して用いることができる。尚、本発明では種子部を用いることが好ましい。
【００１１】
マビンロウ（Ｃａｐｐａｒｉｓ  ｍａｓａｉｋａｉ  Ｌｅｖｌ．）は中国の広東、広西、雲南、貴州等に分布するフウチョウソウ科フウチョウボク属に属する植物である。種子の乾燥物は食用とされる。
本発明においては、葉部、幹部、根部、種子等の各部位を単独で又は適宜混合して用いることができる。尚、本発明では種子部を用いることが好ましい。
【００１２】
抽出物を得る際に用いられる抽出溶媒としては、水、有機溶媒又はこれらの混合物を例示することができる。有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、１‐ブタノール、２−ブタノール、イソブタノール、３−メチル‐１‐ブタノール、２‐メチル‐１‐ブタノール、１−ペンタノール、２‐メトキシエタノール等の低級一価アルコール；エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、１，４−ブタンジオール、グリセリンなどの多価アルコール；メチルセロソルブ、エチルセロソルブなどのセロソルブ類；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンなどのケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、酢酸アミル、ギ酸メチル、酢酸イソブチル等のエステル類；ヘプタン、ヘキサン、シクロヘキサン、ペンタン、イソオクタン、ｎ‐ペンタン、トルエン、ベンゼン、キシレン等の炭化水素類；クロロホルム、クロロベンゼン、ジクロロメタン、塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；その他、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ‐ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ‐ジメチルホルムアミド、１，４‐ジオキサン、Ｎ‐メチル‐２‐ピロリジノン、ピリジン、テトラヒドロフラン、ホルムアミド、アニソール、石油エーテル、リグロイン等を例示することができる。また塩酸、硫酸等の無機酸；酢酸、クエン酸等の有機酸又はその水溶液；水酸化ナトリウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液等のアルカリ；塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム等の塩類の水溶液；リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液等の緩衝液を使用することもできる。
好ましい抽出溶媒としては、水、低級一価アルコールなどを例示することができ、より好ましい抽出溶媒としては、水、エタノールを例示することができる。
また本発明では、前記した抽出溶媒の混合溶媒も好適に用いることができ、水と低級一価アルコールの混合溶媒が好ましく用いられ、水とエタノールの混合溶媒がより好ましく用いられる。
【００１３】
上記抽出工程で得られた抽出液から抽出溶媒を除去することにより得られる抽出物を糖類吸収抑制剤として用いることもできるが、カラムクロマトグラフィーやＨＰＬＣなどにより精製処理することにより得られる抽出物を糖類吸収抑制剤とすることもできる。
【００１４】
カラムクロマトグラフィーによる精製処理としては、充填材として合成樹脂吸着剤、ゲル、陰イオン交換樹脂、陽イオン交換樹脂等を使用したカラムクロマトグラフィーを例示することができる。
合成樹脂吸着剤を用いて精製処理する方法は、常法に従えばよく、上記植物の抽出液を合成樹脂吸着剤に接触させる。次いで、合成樹脂吸着剤に吸着した画分を溶出して所要数の画分に分画する。
【００１５】
本発明で用いられる合成樹脂吸着剤としては、親水性合成樹脂吸着剤、疎水性合成樹脂吸着剤のいずれも使用することができるが、疎水性合成樹脂吸着剤が好ましく用いられる。
疏水性合成樹脂吸着剤としては、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体、スチレン−アクリル酸アミド共重合体、フェノール樹脂などを骨格とする疎水性合成樹脂吸着剤を例示することができる。
親水性合成樹脂吸着剤としては、メタクリル酸エステル重合体を骨格とする親水性合成樹脂吸着剤を例示することができる。
好ましい合成樹脂吸着剤は疎水性合成樹脂吸着剤であり、より好ましくはスチレン−ジビニルベンゼン共重合体を骨格とする疎水性合成樹脂吸着剤である。
合成樹脂吸着剤は表面積の大きな多孔性の合成樹脂吸着剤が好ましく、合成樹脂吸着剤の比表面積は、例えば１００〜１０００ｍ２／ｇ、好ましくは２５０〜８００ｍ２／ｇ程度である。
【００１６】
本発明で用いられる合成樹脂吸着剤としては、ダイヤイオンＨＰ−２０、ダイヤイオンＨＰ−２１、ダイヤイオンＨＰ−２ＭＧ、セパビーズＳＰ−８２５、セパビーズＳＰ−８５０、セパビーズＳＰ−７０、セパビーズＳＰ−７００、セパビーズＳＰ−２０７（以上、三菱化学社製）、アンバーライトＸＡＤ−２、アンバーライトＸＡＤ−４、アンバーライトＸＡＤ−７、アンバーライトＸＡＤ−８（以上ロームアンドハース社製）等を例示することができる。
【００１７】
充填剤としてゲルを用いて精製処理する方法は、常法に従えばよく、上記特定植物等の抽出液をゲルに接触させる。次いで、溶出溶媒によって溶出して所要数の画分に分画する。
用いられるゲルとしては、セファデックス  ＬＨ−２０（ファルマシアバイオテック社製）などを例示することができる。
【００１８】
充填剤として合成樹脂吸着剤やゲルを用いる精製方法において、溶出に用いられる溶媒（溶出溶媒）としては、水；メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール等の低級一価アルコール；水と前記低級一価アルコールとの混合溶媒；リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液等の緩衝液；無機酸や有機酸等の酸性溶媒；水酸化ナトリウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液等のアルカリ性溶媒等を例示することができる。
特に本発明では、水やエタノール、或いは水とエタノールの混合溶媒を使用することが好ましい。水とエタノールの混合溶媒を使用する場合は、３０〜７０％程度のエタノール水溶液を使用することが好ましい。
【００１９】
各画分に分画した後に、溶出溶媒を除去することにより、本発明に係る糖類吸収抑制剤を得ることができる。
溶出溶媒を除去する方法は特に限定されず、減圧留去、凍結乾燥、スプレードライ等を例示することができる。
【００２０】
特に本発明ではフウチョウソウ科フウチョウボク属に属する植物の抽出物として、アミノ酸及び／又はペプチド含有画分を利用することが好ましく、アミノ酸、アミノ酸誘導体、又はこれらの重合体を利用することがより好ましい。
フウチョウソウ科フウチョウボク属に属する植物の抽出物のアミノ酸／ペプチド含有画分には、タンパク質構成アミノ酸に加えて、オルニチン、γ−アミノ酪酸、シスタチオニン、リン酸化アミノ酸、或いは前記したようなアミノ酸の重合体などが含まれている。本発明者らは、これらタンパク質構成アミノ酸やオルニチン、γ−アミノ酪酸、シスタチオニン、リン酸化アミノ酸などの非タンパク質構成アミノ酸、或いはこれらの重合体が高い糖吸収抑制能を有することを見出した。
【００２１】
即ち、本発明に係る糖類吸収抑制剤の別の実施形態では、アミノ酸、アミノ酸誘導体及びこれらの重合体からなる群から選択される一種以上を糖類吸収抑制剤の有効成分とする。
アミノ酸は、一分子中にアミノ基とカルボキシル基とを有する化合物であれば特に限定されず、例えば、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン等のタンパク質構成アミノ酸；オルニチン、γ−アミノ酪酸、シスタチオニン、リン酸化アミノ酸、ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリジン、チロキシン等の非タンパク質構成アミノ酸等を例示することができる。
【００２２】
前記したタンパク質構成アミノ酸は、いずれも好ましく用いることができるが、アラニン、ロイシン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、チロシン、トリプトファン、メチオニン、アルギニンが他のタンパク質構成アミノ酸に比べてより高い糖吸収抑制能を有するためにより好ましく用いられる。
前記した非タンパク質構成アミノ酸は、いずれも好ましく用いることができるが、シスタチオニン、オルニチン、リン酸化アミノ酸が他の非タンパク質構成アミノ酸に比べてより高い糖吸収抑制能を有するためにより好ましく用いられる。
【００２３】
特にアミノ酸側鎖の水酸基がリン酸化されたリン酸化アミノ酸は、リン酸化されていないアミノ酸に比べて、より高い糖類吸収抑制作用を有する。リン酸化アミノ酸としては、次式１（化１）で示されるリン酸化セリン、次式２（化２）で示されるリン酸化スレオニン、次式３（化３）で示されるリン酸化チロシンを例示することができる。
【００２４】
【化１】
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【化２】
2004262904.tif 000003
【化３】
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【００２５】
本発明では前記したタンパク質構成アミノ酸や非タンパク質構成アミノ酸の重合体も好ましく用いることができる。
さらに本発明では、上述したアミノ酸中のカルボキシル基、アミノ基、側鎖の原子団が他の原子又は原子団によって置換、付加されたアミノ酸誘導体、或いはこのアミノ酸誘導体の重合体を用いることもできる。
尚、上述したアミノ酸、アミノ酸誘導体或いはペプチド等の重合体は、化学合成由来のもの、或いは動植物等の天然物由来のものも好適に用いることができる。また動植物等の天然物由来のタンパク質を加水分解することにより得られるアミノ酸、アミノ酸誘導体、或いはペプチドなどの重合体も好適に用いることができる。
また上述したアミノ酸、アミノ酸誘導体は、Ｌ体でもＤ体でもよく、或いはＤ体とＬ体の混合物でも構わない。
【００２６】
本発明に係る糖類吸収抑制剤は、飲食品或いは医薬品、医薬部外品として利用可能である。
本発明に係る糖類吸収抑制剤を食品に配合して利用する場合、糖類吸収抑制剤とともに、通常の食品に配合される成分を適宜任意に配合することができる。
配合される成分は特に限定されないが、乳脂、牛脂等の動物油、オリーブ油、カカオ油、ゴマ油、大豆油、トウモロコシ油、綿実油等の植物油、ショ糖、果糖、ブドウ糖、パラチノース、フラクトオリゴ糖、デキストリン、アスパルテーム、糖アルコール等の甘味料、安息香酸、ソルビン酸、パラオキシ安息香酸、プロピオン酸等の保存料、オルトフェニルフェノール、チアベンダゾール等の防カビ剤、アスコルビン酸、エチレンジアミン四酢酸カルシウム二ナトリウム、クエン酸イソプロピル、ジブチルヒドロキシトルエン等の酸化防止剤或いはデンプン、増粘剤、ゲル化剤、糊料、食物繊維、旨味調味料、着色料、ビタミン類、食塩、食酢、醤油、香辛料、酵素、着色料等を例示することができる。
【００２７】
配合できる食品は特に限定されず、例えば、果汁入り飲料、乳酸菌飲料、茶、コーヒー飲料、炭酸飲料、豆乳飲料などの飲料、アイスクリーム、ラクトアイス、シャーベットなどの冷菓類、プリン、ゼリー、ヨーグルトなどのデザート類、キャンディー、ガムなどの菓子類、ドレッシング、ケチャップ、たれ、ソースなどのソース類、或いはインスタント食品、レトルト食品などを例示することができる。
【００２８】
本発明に係る糖類吸収抑制剤の配合量は特に限定されず、食品の種類に応じて適宜任意に設定されるものであり、一般的には食品中に０．５〜１００重量％、好ましくは０．７〜３０重量％、より好ましくは１．０〜１５重量％程度配合すればよい。
【００２９】
【実施例】
以下、本発明を実施例に基づき説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。
１．試料の調製
マビンロウの種子を軽く粉砕し、仁のみを回収後、５０％エタノールを加え、８５℃で４時間抽出した。抽出液をＮｏ．２濾紙を用いて吸引濾過した後、残渣に再度５０％エタノールを加え、同様に抽出、濾過した。
両濾液を混合した後、減圧下で濃縮することにより５０％エタノール抽出物（１．５ｋｇ）を得た。これを実施例１の試料とした。
次いで、この抽出物（実施例１）に蒸留水を加えて懸濁させ、５倍量のエタノールを加えることにより、上清部（１５０ｇ）と沈殿部（１．３ｋｇ）に分画した。上清部を実施例２の試料とした。
上清部（実施例２）についてはヘキサンで分液した。有機相及び水相のそれぞれを減圧濃縮して有機相画分（７．５ｇ）及び水相画分（１４０ｇ）を得た。水相画分を実施例３の試料とした。
水相画分（実施例３）については、カラムに充填したダイヤイオンＨＰ−２０（日本練水社製）に吸着させて、水、２５％メタノール水溶液、５０％メタノール水溶液、１００％メタノールの順で通液して、水画分（１３５ｇ）、２５％メタノール画分（１．８ｇ）、５０％メタノール画分（２．５ｇ）、メタノール画分（２．１ｇ）の４つに分画した。２５％メタノール画分を実施例４の試料とした。
２５％メタノール画分（実施例４）については、さらにＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０（ファルマシアバイオテック社製）を充填したカラムクロマトグラフィーによって、フラクション１（０．３ｇ）、フラクション２（１．３ｇ）、フラクション３（０．５ｇ）に分画した。フラクション１を実施例５の試料とした。
フラクション１（実施例５）については、さらに分取用薄層クロマトグラフィーにより実施例６〜９の４つの画分に分画した。
【００３０】
（試験例１；腸管灌流試験）
（１）供試動物
Ｗｉｓｔｅｒ系雄性ラット（日本チャールズリバー社より購入）１０〜１５週齢を用いた。ラットは２３℃の室温条件下で１２時間明条件、１２時間暗条件で固形飼料を用いて飼育した。また検定前後から１８時間絶食、飲料水は自由摂取したものを試験に供した。
【００３１】
（２）検定方法
ラットをネンブタール麻酔下で開腹後、空腸の十二指腸側を結紮した。その付近にカニューレを挿入し、ペリスターポンプに接続した。
また回腸接合部付近を結紮し、もう一方のリザーバーに接続したカニューレを挿入した後、灌流を行った。
カニューレ挿入部位間での腸管の長さは約３５ｃｍとした。各溶液の温度は３７℃、流速は６ｍＬ／ｍｉｎで展開した。また洗浄液にはリンゲル液（ｐＨ７．６）を用い、５ｍＭのグルコースを含むリンゲル液を灌流液とした。
まず、１０分間リンゲル液で洗浄後、灌流液を流し、これをコントロールとした。その後２０分間リンゲル液で洗浄後、供試試料を含む灌流液を流し、この溶液を試料溶液とした。各測定中は、リザーバー内の液量は２０ｍＬとし、測定液は各溶液１００μＬを１０分おきに３０分間、経時的に採取した。採取した測定液は、グルコースＢテストワコー（和光純薬社製）でグルコース量を測定した。
【００３２】
実施例１のマビンロウ抽出物を用いて、５ｍｇ／ｍＬの濃度で上記した腸管灌流試験を行った。結果を図１に記載する。図１のグラフに示されるとおり、灌流３０分後のグルコース吸収率は、コントロール処理区では４３％であったのに対して、実施例１処理区では３０％であり、実施例１のマビンロウ抽出物はグルコース吸収を抑制した。
【００３３】
実施例２のマビンロウ抽出物を用いて、５ｍｇ／ｍＬの濃度で上記した腸管灌流試験を行った。結果を図２に記載する。図２のグラフに示されるとおり、灌流３０分後のグルコース吸収率は、コントロール処理区では３５％であったのに対して、実施例２処理区では２２％であり、実施例２のマビンロウ抽出物はグルコース吸収を抑制した。
【００３４】
実施例３のマビンロウ抽出物を用いて、２ｍｇ／ｍＬの濃度で上記した腸管灌流試験を行った。結果を図３に記載する。図３のグラフに示されるとおり、灌流３０分後のグルコース吸収率は、コントロール処理区では３８％であったのに対して、実施例３処理区では１９％であり、実施例３のマビンロウ抽出物はグルコース吸収を抑制した。
【００３５】
実施例４のマビンロウ抽出物を用いて、１ｍｇ／ｍＬの濃度で上記した腸管灌流試験を行った。結果を図４に記載する。図４のグラフに示されるとおり、灌流３０分後のグルコース吸収率は、コントロール処理区では３８％であったのに対して、実施例４処理区では２７％であり、実施例４のマビンロウ抽出物はグルコース吸収を抑制した。
【００３６】
実施例５のマビンロウ抽出物を用いて、０．５ｍｇ／ｍＬの濃度で上記した腸管灌流試験を行った。結果を図５に記載する。図５のグラフに示されるとおり、灌流３０分後のグルコース吸収率は、コントロール処理区では３４％であったのに対して、実施例５処理区では２２％であり、実施例５のマビンロウ抽出物はグルコース吸収を抑制した。
【００３７】
（試験例２；Ｃａｃｏ−２  培養細胞による糖吸収抑制試験）
（１）細胞培養
１％ペニシリンストレプトマイシン、１０％ＦＢＳ（牛血清）を含むＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ）を培地として使用し、Ｃａｃｏ−２（ヒト結腸癌由来腸管上皮細胞、理化学研究所細胞バンクより入手）の培養を行った。本試験の継代培養では、主にＴフラスコ（２５ｍＬ）を用い、５ｍＬのＤＭＥＭ培地中でＣｏｃａ−２を培養した。フラスコを５％ＣＯ２、９５％空気、１００％相対湿度、３７℃の条件下のＣＯ２インキュベーター内に置き、１週間に３回培地を交換した。１週間おきに細胞を以下の継代操作ではぎとり、新しく２個のＴフラスコに分注した。
継代操作はまず、５ｍＬのＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒ  ｓａｌｉｎｅ）溶液で細胞を洗浄し、１ｍＬの０．２５％トリプシンのＰＢＳ溶液を３７℃で約３０分作用させ、ＤＭＥＭ培地で１０ｍＬになるように希釈し、ピペッティングで一様に懸濁させ分注した。それぞれのＴフラスコにＤＭＥＭ培地を５ｍＬずつ加え、全量を５ｍＬとした。
透過試験で用いたＣａｃｏ−２細胞層は以下の手順で調製した。図８を参照しつつ説明する。まず、上記継代操作の手順で細胞をはがし、１．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度となるようにＤＭＥＭ培地で希釈して、ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（０．３３ｃｍ２）に２００μＬずつ撒いた（１．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｃｕｐ（約４．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２））このとき、底面側には０．８ｍＬの培地を入れた。以降、１週間に３回培地を交換した。このとき、上面側には０．２ｍＬ、底面側には０．８ｍＬの培地を用いた。細胞は上記ＣＯ２インキュベーター中にて２０日から２２日間カップ培養した。透過実験を行う一日前にＭｉｌｌｃｅｌｌ−ＥＲＳ（ミリポア社製）を用いて、カップで培養した細胞膜を隔てた電気抵抗を測定し、細胞のみの抵抗値で７００Ωｃｍ２以上を示していることを確認した後、透過実験に用いた。本試験においては継代数４〜１５の細胞のみを使用した。
【００３８】
（２）糖吸収抑制試験
ｔｒａｎｓｗｅｌｌ上でＣａｃｏ−２細胞を２０日から２２日間培養したカップからサクションで培地を除き、ＰＢＳ溶液で洗浄し、予め底面側には０．８ｍＬのＰＢＳ溶液を入れておき、上面側にはＰＢＳ溶液に溶解した供試化合物の溶液を０．２ｍＬ加えた。上面側に溶液を加えた時間を実験開始時間とし、実験開始から３０分後に底面側から２００μＬをサンプリングした。透過実験中、プレートは３７℃のＣＯ２インキュベーター内に静置した。
尚、ＰＢＳ溶液に溶解しにくい化合物については、ＤＭＳＯに溶解した後、ＰＢＳ溶液に溶解した。上面側溶液のＤＭＳＯ濃度が２％までは細胞透過に影響がないことを確認し、全ての透過実験において、ＤＭＳＯ濃度２％以下の供試化合物溶液を用いた。採取した測定液は、グルコースＢテストワコーでグルコース量を測定し、抑制率を求めた。
【００３９】
実施例６〜９のマビンロウ抽出物を用いて、５ｍｇ／ｍＬの濃度で上記したＣａｃｏ−２細胞を使用した糖吸収抑制試験を行った。結果を図６に記載する。図６のグラフに示されるとおり、実施例９の試料では６０分後のグルコース吸収阻害率が５２％であり、最も高い阻害活性を示した。
【００４０】
（試験例３；経口ブドウ糖負荷試験）
（１）供試動物
Ｗｉｓｔｅｒ系雄性ラット８〜１２週齢を用いた。ラットは２２℃の室温条件下で一日のうち１２時間を明条件、１２時間を暗条件で固形飼料を用いて飼育した。
【００４１】
（２）血糖値の測定
ラットの尾静脈を剃刀で切開して出血させた後採血した。グルコースオキシダーゼ法によりデキスターＺ（バイエルメディカル社製）を用いて毛中グルコース量を測定した。
【００４２】
（３）投与方法
供試試料を蒸留水に溶解して、胃ゾンデによる経口投与法によりラット体内に２．５ｍＬ／ｋｇ投与した。尚、調製に用いた溶媒のみを２．５ｍＬ／ｋｇ投与した試験区をコントロールとした。
経口ブドウ糖負荷試験は１８時間絶食、飲料水は自由摂取させたラットを用いて、各試料を投与３０分後にそれぞれ４０％グルコース溶液を２ｇ／ｋｇ投与した。グルコース投与直前の時間を０分とし、０分、３０分、６０分、９０分、１２０分後に上記手法にて血糖値を測定した。
【００４３】
実施例９のマビンロウ抽出物を用いて、１００ｍｇ／ｋｇで上記した経口ブドウ糖負荷試験を行った。結果を図７に記載する。図７のグラフに示されるとおり、３０分後のコントロールの血糖値が１８３ｍｇ／ｄＬであったのに対して、実施例９の試料では、３０分後の血糖値は１３１ｍｇ／ｄＬであり、実施例９の試料は顕著に血糖値の上昇を抑制した。
【００４４】
（試験例４；活性成分の分析）
最も高い活性を有している実施例９の試料について、活性成分の分析を行った。
実施例９の試料はニンヒドリンを加えると赤紫に発色したことから、アミノ酸が主成分であると考えた。
実施例９の試料をアミノ酸自動分析器により分析したところ、２０種のタンパク質構成アミノ酸とともに、オルニチン、γ−アミノ酪酸、シスタチオニン、リン酸化セリン等の非タンパク質構成アミノ酸を含有していた。
また実施例９（１０ｍｇ）に２５％塩酸（１００ｍＬ）を加えて、１００℃で１２時間攪拌しながら反応させた。水酸化ナトリウムで中和した後、中和した溶液をアミノ酸自動分析器で分析した。その結果、アミノ酸の含有率が顕著に変化したアミノ酸を確認することができた。アミノ酸含有率が顕著に増加したアミノ酸としては、スレオニン、セリン、グリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、チロシンなどであった。
アミノ酸含有率が加水分解前と加水分解後で変化したアミノ酸が確認できたことから、実施例９にはペプチドが含まれていることが示唆された。
【００４５】
（試験例５；アミノ酸の糖吸収抑制試験）
上記実施例９の試料中に含まれていたオルニチン、γ−アミノ酪酸、シスタチオニン、リン酸化セリンに加えて、タンパク質構成アミノ酸（全てＬ体を使用）を用いて、１０ｍＭの濃度で上記したＣａｃｏ−２細胞を使用した糖吸収抑制試験を行った。結果を表１に記載する。
【００４６】
【表１】
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【００４７】
表１の結果に示されるように、タンパク質構成アミノ酸及び非タンパク質構成アミノ酸のいずれも糖吸収抑制作用を有していた。
またオルニチン、γ−アミノ酪酸、シスタチオニン、リン酸化セリンは高い糖吸収抑制作用を有していた。
特にリン酸セリンについては、４６％という高い吸収抑制率を示し、セリンの約９倍の吸収抑制率を示した。
【００４８】
【発明の効果】
以上詳述した如く、本発明に係る糖類吸収抑制剤は、フウチョウソウ科フウチョウボク属に属する植物からなるから、ブドウ糖やショ糖等の糖類の吸収を抑制して血糖値の上昇を抑制することができ、医薬品や食品などの有効成分として好適に用いることができる。
本発明に係る糖類吸収抑制剤はアミノ酸やアミノ酸重合体を含有するから、優れた糖類吸収抑制作用を発揮して血糖値の上昇を抑制することができ、食品などの有効成分として好適に用いることができる。
本発明に係る食品は、上記した糖類吸収抑制剤を含有するものであるから、糖類の吸収を抑制して血糖値の上昇を抑制することができ、健康に気遣う人が食する日頃食する健康食品として、或いは糖尿病患者用の飲食品として好適に用いることができる。またマビンロウは適度な甘味を有するので、美味しく食することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】試験例１において、実施例１の試料を用いた腸管灌流試験の結果を示すグラフである。
【図２】試験例１において、実施例２の試料を用いた腸管灌流試験の結果を示すグラフである。
【図３】試験例１において、実施例３の試料を用いた腸管灌流試験の結果を示すグラフである。
【図４】試験例１において、実施例４の試料を用いた腸管灌流試験の結果を示すグラフである。
【図５】試験例１において、実施例５の試料を用いた腸管灌流試験の結果を示すグラフである。
【図６】試験例２のＣａｃｏ−２  培養細胞による糖吸収抑制試験の結果を示すグラフである。
【図７】試験例３の経口ブドウ糖負荷試験の結果を示すグラフである。
【図８】試験例３で使用した試験装置の概略を示す模式図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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