(57)【要約】【課題】神経細胞を分化成熟させる組成物、その方法、その方法により得られる神経細胞、ならびにその組成物を探索する方法を提供すること。【解決手段】非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、そして／または神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を有効成分とすることを特徴とする、非神経細胞を神経細胞へ分化し、そして／または神経細胞を成熟し、そして／またはそれにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制する組成物、その方法、その方法により得られる神経細胞、ならびにその組成物を探索する方法。【選択図】　　図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する組成物。
【請求項２】
非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質が３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−補酵素Ａ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）還元酵素阻害剤から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害組成物がアトルバスタチン、イタバスタチン、コンパクチン、シンバスタチン、ジヒドロコンパクチン、ダルバスタチン、ピタバスタチン、フルインドスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、ベルバスタチン、ベロスタチン、メバスタチン、ロスバスタチン、ロバスタチン、およびそれらの光学または幾何異性体、およびそれらのプロドラッグ、ならびに上記化合物又はそれらのプロドラッグの薬学的に許容することのできるそれらの塩ならびにそれらの水和物から選ばれる、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害組成物がアトルバスタチンカルシウム水和物、シンバスタチン、フルバスタチンナトリウム、プラバスタチンナトイウムから選ばれる、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
非神経細胞が骨髄系非神経細胞と神経系非神経細胞から選ばれる、請求項１から請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
骨髄系非神経細胞が骨髄幹細胞、間葉系細胞、骨髄間質細胞から選ばれる、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
神経系非神経細胞が神経幹細胞と神経前駆細胞から選ばれる、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
請求項１から請求項７に記載の組成物を有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、神経細胞に接触させ、該神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する組成物。
【請求項９】
請求項１から請求項７に記載の組成物を有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する組成物。
【請求項１０】
請求項１から請求項７に記載の組成物を有効成分とし、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制することを特徴とする、神経障害疾患を治療または悪性化抑制する組成物。
【請求項１１】
請求項１から請求項７に記載の組成物を、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化することを特徴とする、非神経細胞を神経細胞へ分化する方法。
【請求項１２】
請求項８に記載の組成物を、要すれば活性後に、神経細胞に接触させ、該神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟することを特徴とする、神経細胞を成熟する方法。
【請求項１３】
請求項９に記載の組成物を、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することを特徴とする、非神経細胞を神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する方法。
【請求項１４】
請求項１０に記載の組成物を、要すれば活性化後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制することを特徴とする、神経障害疾患を治療または悪性化抑制する方法。
【請求項１５】
移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞。
【請求項１６】
請求項１２に記載の方法において、癌化神経細胞混入の恐れがない神経細胞を成熟することにより得られる、移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞。
【請求項１７】
請求項１１または請求項１３に記載の方法により得られる、移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞。
【請求項１８】
要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞または神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化、および／または該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、そして／または神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法。
【請求項２０】
請求項１８に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない神経細胞に接触させ、該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法。
【請求項２１】
請求項１８に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化、および該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は、（１）非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する組成物、（２）非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質が３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−補酵素Ａ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）還元酵素阻害剤から選ばれる（１）に記載の組成物、（３）ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害組成物がアトルバスタチン、イタバスタチン、コンパクチン、シンバスタチン、ジヒドロコンパクチン、ダルバスタチン、ピタバスタチン、フルインドスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、ベルバスタチン、ベロスタチン、メバスタチン、ロスバスタチン、ロバスタチン、およびそれらの光学または幾何異性体、およびそれらのプロドラッグ、ならびに上記化合物又はそれらのプロドラッグの薬学的に許容することのできるそれらの塩ならびにそれらの水和物から選ばれる（２）に記載の組成物、（４）ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害組成物がアトルバスタチンカルシウム水和物、シンバスタチン、フルバスタチンナトリウム、プラバスタチンナトイウムから選ばれる（２）に記載の組成物、（５）非神経細胞が骨髄系非神経細胞と神経系非神経細胞から選ばれる（１）から（４）に記載の組成物、（６）骨髄系非神経細胞が骨髄幹細胞、間葉系細胞、骨髄間質細胞から選ばれる（５）に記載の組成物、（７）神経系非神経細胞が神経幹細胞と神経前駆細胞から選ばれる（５）に記載の組成物、（８）（１）から（７）に記載の組成物を有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、神経細胞に接触させ、該神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する組成物、（９）（１）から（７）に記載の組成物を有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する組成物、（１０）（１）から（７）に記載の組成物を有効成分とし、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制することを特徴とする、神経障害疾患を治療または悪性化抑制する組成物、（１１）（１）から（７）に記載の組成物を、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化することを特徴とする、非神経細胞を神経細胞へ分化する方法、（１２）（８）に記載の組成物を、要すれば活性後に、神経細胞に接触させ、該神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟することを特徴とする、神経細胞を成熟する方法、（１３）（９）に記載の組成物を、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することを特徴とする、非神経細胞を神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する方法、（１４）（１０）に記載の組成物を、要すれば活性化後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制することを特徴とする、神経障害疾患を治療または悪性化抑制する方法、（１５）移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞、（１６）（１２）に記載の方法において、癌化神経細胞混入の恐れがない神経細胞を成熟することにより得られる、移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞、（１７）（１１）または（１３）に記載の方法により得られる、移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞、（１８）要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞または神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化、および／または該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、そして／または神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法、（１９）（１８）に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法、（２０）（１８）に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない神経細胞に接触させ、該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法、（２１）（１８）に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化、および該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、脳腫瘍、小脳変性症、交通性水頭症、ハンチントン病、前頭葉への照射、多発性硬化症、正常圧水頭症、パーキンソン病、ピック病、進行性多巣性白質脳症、進行性核上麻痺、拳闘家痴呆、脳外傷、外科手術、脳腫瘍、慢性硬膜下血腫、脳卒中、脳血管性痴呆、ウィルソン病細菌性心内膜炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病、ＨＩＶ関連疾患、神経梅毒、結核性および真菌性髄膜炎、ウイルス性脳炎、無酸素症、Ｂ１２欠乏症、慢性的な薬物−アルコール−栄養性乱用、葉酸欠乏症、副甲状腺機能亢進症に伴う高カルシウム血症、低血糖、甲状腺機能低下症、肝性脳症、肺性脳症、尿毒素性脳症等の臓器系不全、ペラグラ等の神経疾患は繊維化、免疫反応、血管傷害、栄養と酸素欠乏、感染等により、神経細胞が退化、減少、細胞死し、または傷害、除外されることにより、組織や臓器がその機能を失い発症すると考えられている。したがって、これらの疾患を治療または悪化予防の１つの方法として失われた神経細胞を何らかの方法で補充するか再生することが考えられる。
【０００３】
そのため、ＥＳ細胞または神経幹細胞が注目された。ＥＳ細胞または神経幹細胞は未分化の細胞であり、神経細胞が死滅すると、その失われた細胞を補うように分化を始め、生体機能の維持に大きく貢献する可能性があるからであった。近年、機能を失った組織に対してＥＳ細胞や神経幹細胞を移植し、個々の生体機能を発現する細胞へ特異的に分化させることにより、当該病態を改善・治療する試みが行われた。しかし、ＥＳ細胞は胚性幹細胞であり、ヒトの胚を原料に用いるという倫理性の問題と移植抗原性の問題を有する。一方、神経幹細胞の場合も胎児由来の神経幹細胞しか入手が困難であり、胎児由来の神経幹細胞は倫理性の問題と移植抗原性の問題を有する。
【０００４】
従って、ＥＳ細胞、胎児由来の神経幹細胞以外の非神経細胞で神経細胞に分化成熟し得る細胞が注目された。自己の体から容易に入手可能な骨髄間質細胞（骨髄ストロマ細胞ともいう）に細胞分裂誘起物質（マイトジェンともいう）で処理し、次いでレチノイン酸、成長因子、胎児ニューロン細胞またはその組合せから選択される分化剤を処理して得られる神経細胞（特表２００２−５１３５４５）が報告された。しかし、この骨髄細胞由来の神経細胞はその工程に細胞分裂誘起物質処理操作が必須のため、細胞分裂誘起物質を体内投与した場合、他の細胞の異常増殖をもたらし、細胞を癌化させる恐れがあり、また体外投与の場合でも、そういう処理操作で作られた神経細胞に癌化した神経細胞が混入している可能性があり、これをヒトに移植することは問題である。そこで細胞分裂誘起物質処理無しに骨髄間質細胞にメルカプトエタノール、ジブチリルサイクリックＡＭＰ等低分子の分化促進因子や骨形成因子（ＢＭＰ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）等の高分子の分化促進因子や骨形成タンパク質阻害剤ノジン（Ｎｏｇｇｉｎ）と脱メチル化剤５−アザシチジンを作用させることにより神経細胞に分化することが報告されたことから（Ｍ．Ｄｅｚａｗａら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００１年１４巻１７７１頁、Ｗ．Ｄｅｎｇら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２００１年２８２巻１４８頁、Ｄ．Ｗｏｏｄｂｕｒｙら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．２０００年６１巻３６３頁、Ｊ．Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｒａｍｏｓら、Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．２０００年１６４巻２４７頁、Ｊ．Ｋｏｈｙｙａｍａら、Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ、２００１年６８巻２３５頁）、これらを上記疾患の予防・治療に用いることも考えられるが、かかる高分子の分化促進因子も、分子量の大きいペプチドであるため、生体内で容易に分解を受け、また血液脳関門を通過できないことから、投与方法が著しく限定されるという問題があり、またメルカプトエタノール、ジブチリルサイクリックＡＭＰ等の分化促進因子、骨形成タンパク質阻害剤や脱メチル化剤等の低分子は毒性が高く、実用化は困難である。
【０００５】
一方、自家または自家と主要組織適合抗原を実質的に同じくする、神経幹細胞、神経前駆細胞に関しては体外で分化させて神経細胞にし、それを移植するよりも該細胞を分化し得る薬剤をヒトに投与して生体内に内在する神経幹細胞または神経前駆細胞を分化させて神経細胞にすることにより失われた神経の補充を行うことがより容易と考えられる。極最近、ラットの脳動脈を一時的に止めて脳虚血にして海馬の神経細胞に傷害を与えた後に、神経成長因子を注入すると、失われた神経細胞の４割が回復したという報告がある（Ｈ．Ｎａｋａｔｏｍｉら、Ｃｅｌｌ、２００２年１１０巻４２９頁）。研究としては素晴らしいが、神経成長因子というタンパク質を脳内に注入することは問題である。
【０００６】
従って、（１）非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する組成物、（２）非神経細胞が骨髄系非神経細胞と神経系非神経細胞から選ばれる（１）に記載の組成物、（３）骨髄系非神経細胞が骨髄幹細胞、間葉系細胞、骨髄間質細胞から選ばれる（２）に記載の組成物、（４）神経系非神経細胞が神経幹細胞と神経前駆細胞から選ばれる（２）に記載の組成物、（５）（１）から（４）に記載の組成物を有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、神経細胞に接触させ、該神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する組成物、（６）（１）から（４）に記載の組成物を有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する組成物、（７）（１）から（４）に記載の組成物を有効成分とし、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制することを特徴とする、神経障害疾患を治療または悪性化抑制する組成物、（８）（１）から（４）に記載の組成物を、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化することを特徴とする、非神経細胞を神経細胞へ分化する方法、（９）（５）に記載の組成物を、要すれば活性後に、神経細胞に接触させ、該神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟することを特徴とする、神経細胞を成熟する方法、（１０）（６）に記載の組成物を、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することを特徴とする、非神経細胞を神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する方法、（１１）（７）に記載の組成物を、要すれば活性化後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制することを特徴とする、神経障害疾患を治療または悪性化抑制する方法、（１２）移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞、（１３）（９）に記載の方法において、癌化神経細胞混入の恐れがない神経細胞を成熟することにより得られる、移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞、（１４）（８）または（１０）に記載の方法により得られる、移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞、（１５）要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞または神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化、および／または該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、そして／または神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法、（１６）（１５）に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法、（１７）（１５）に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない神経細胞に接触させ、該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法、（１８）（１５）に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化、および該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法の開発が強く望まれている。
【０００７】
一方、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤はコレステロール合成阻害作用、脂質低下作用、動脈硬化進展抑制作用、外因性コレステロール吸収抑制作用が認められ、かつ長期投与でも毒性が低いため、高コレステロール血症、家族性高コレステロール血症、高脂血症の治療または悪性化抑制に使われている。一方、実用化には至っていないが、特定のＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤とアンジオテンシン２受容体拮抗剤の組み合せ物による心不全の予防若しくは治療（特開２００２−１４５７７０）、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤とアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）抑制剤の組み合せ物による二次心臓発作の危険予防（特開平８−２９１０８２）、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤とインスリン抵抗性改善薬の組み合せ物によるＴＮＡ−ａ抑制（特開２００１−２９４５３７）、同組み合せ物による動脈硬化症予防または治療（特開平９−７１５４０）、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤のスタチンによる造血幹細胞由来細胞から内皮細胞への分化（Ｊ．Ｌｌｅｖａｄｏｔら、Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、２００１年１０８巻３９９頁）スタチンとポリホスホネートの組み合せ物による骨形成促進とアテローム動脈硬化症治療（特開２００１−２５３８２７）、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤とプロスタグランジン・アゴニストの組み合せ物による骨形成増強作用（特開２００２−１７９５９５）、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤による骨吸収阻害（特表２００２−５０６０３０）、スタチンによる骨形成刺激作用（Ｇ．Ｍｕｎｄｙら、ＳＣＩＥＮＣＥ、１９９９年２８６巻１９４６頁）、セリバスタチンナトリウムの慢性ＨＩＶ−１に対する効果（特開２００２−２９９７３）、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤のアンドロゲン活性アンタゴニスト作用による拒食症の処置および予防（特表２００１−５１３５７２）等の報告がある。
【０００８】
また、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤に関し、神経変性病患者がアポリボ蛋白質（ＡｐｏＥ）が低いことを根拠に神経変性病の治療法法として神経変性病患者にＡｐｏＥのレベルを増加させる組成物を投与する方法と神経細胞と検定化合物を接触させ、神経細胞のＡｐｏＥ上昇の有無を測定するＡｐｏＥ上昇化合物の探索法（特表２００１−５１７６１７）、アルツハイマー病を罹病しているヒトの脳の総コレステロール（ＴＣ）とＬＤＬの濃度が健常人より高いことを根拠にアルツハイマー病を罹病しているヒトに血漿トリグリセライドレベル低下剤を投与し、あるいはＬＤＬ−Ｃレベルを低下させ、ＨＤＬレベルを上昇させるために、所望によりコレステロールレベル低下剤を共投与して血漿トリグリセライドレベルを低下させることによるアルツハイマー病の発症防止を憶測し（特表２００２−５０１８８７）、アルツハイマー病の危険のあるコレステロールのレベル上昇を伴う個人に対して、血中コレステロールレベルを減少させる組成物を投与し、アミロイドタンパク質の産生を減少させる方法（特表２００２−５０７５６４）の報告がある。これらの報告はＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤の高脂血症治療に用いられたＡｐｏＥ上昇、コレステロールレベル低下、ＬＤＬレベル低下等の作用を応用すればアルツハイマー病等神経変性病が予防または治療可能と考えているにすぎない。アルツハイマー病等神経変性病により神経細胞が退化、減少、細胞死し、または傷害、除外されることにより、組織や臓器がその機能を失い発症することを直視していない。いくらＡｐｏＥ上昇、コレステロールレベル低下、ＬＤＬレベル低下させても退化、減少、細胞死し、または傷害、除外された神経細胞は再生されない。神経を再生する能力のある、薬学的に許容することのできる毒性しかない低分子物質を有効成分とする組成物の開発が強く望まれる。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、（１）非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する組成物、（２）非神経細胞が骨髄系非神経細胞と神経系非神経細胞から選ばれる（１）に記載の組成物、（３）骨髄系非神経細胞が骨髄幹細胞、間葉系細胞、骨髄間質細胞から選ばれる（２）に記載の組成物、（４）神経系非神経細胞が神経幹細胞と神経前駆細胞から選ばれる（２）に記載の組成物、（５）（１）から（４）に記載の組成物を有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、神経細胞に接触させ、該神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する組成物、（６）（１）から（４）に記載の組成物を有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する組成物、（７）（１）から（４）に記載の組成物を有効成分とし、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制することを特徴とする、神経障害疾患を治療または悪性化抑制する組成物、（８）（１）から（４）に記載の組成物を、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化することを特徴とする、非神経細胞を神経細胞へ分化する方法、（９）（５）に記載の組成物を、要すれば活性後に、神経細胞に接触させ、該神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟することを特徴とする、神経細胞を成熟する方法、（１０）（６）に記載の組成物を、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することを特徴とする、非神経細胞を神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する方法、（１１）（７）に記載の組成物を、要すれば活性化後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制することを特徴とする、神経障害疾患を治療または悪性化抑制する方法、（１２）移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞、（１３）（９）に記載の方法において、癌化神経細胞混入の恐れがない神経細胞を成熟することにより得られる、移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞、（１４）（８）または（１０）に記載の方法により得られる、移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞、（１５）要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞または神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化、および／または該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、そして／または神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法、（１６）（１５）に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法、（１７）（１５）に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない神経細胞に接触させ、該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法、（１８）（１５）に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化、および該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、斯かる実状に鑑み、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を種々探索した結果、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤を有効成分とする組成物に、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する作用と該神経細胞を成熟させる作用があることを見出し、さらに種々研究した結果、（１）非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する組成物、（２）非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質が３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−補酵素Ａ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）還元酵素阻害剤から選ばれる（１）に記載の組成物、（３）ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害組成物がアトルバスタチン、イタバスタチン、コンパクチン、シンバスタチン、ジヒドロコンパクチン、ダルバスタチン、ピタバスタチン、フルインドスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、ベルバスタチン、ベロスタチン、メバスタチン、ロスバスタチン、ロバスタチン、およびそれらの光学または幾何異性体、およびそれらのプロドラッグ、ならびに上記化合物又はそれらのプロドラッグの薬学的に許容することのできるそれらの塩ならびにそれらの水和物から選ばれる（２）に記載の組成物、（４）ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害組成物がアトルバスタチンカルシウム水和物、シンバスタチン、フルバスタチンナトリウム、プラバスタチンナトイウムから選ばれる（２）に記載の組成物、（５）非神経細胞が骨髄系非神経細胞と神経系非神経細胞から選ばれる（１）から（４）に記載の組成物、（６）骨髄系非神経細胞が骨髄幹細胞、間葉系細胞、骨髄間質細胞から選ばれる（５）に記載の組成物、（７）神経系非神経細胞が神経幹細胞と神経前駆細胞から選ばれる（５）に記載の組成物、（８）（１）から（７）に記載の組成物を有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、神経細胞に接触させ、該神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する組成物、（９）（１）から（７）に記載の組成物を有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する組成物、（１０）（１）から（７）に記載の組成物を有効成分とし、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制することを特徴とする、神経障害疾患を治療または悪性化抑制する組成物、（１１）（１）から（７）に記載の組成物を、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化することを特徴とする、非神経細胞を神経細胞へ分化する方法、（１２）（８）に記載の組成物を、要すれば活性後に、神経細胞に接触させ、該神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟することを特徴とする、神経細胞を成熟する方法、（１３）（９）に記載の組成物を、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することを特徴とする、非神経細胞を神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する方法、（１４）（１０）に記載の組成物を、要すれば活性化後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制することを特徴とする、神経障害疾患を治療または悪性化抑制する方法、（１５）移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞、（１６）（１２）に記載の方法において、癌化神経細胞混入の恐れがない神経細胞を成熟することにより得られる、移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞、（１７）（１１）または（１３）に記載の方法により得られる、移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞、（１８）要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞または神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化、および／または該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、そして／または神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法、（１９）（１８）に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法、（２０）（１８）に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない神経細胞に接触させ、該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法、（２１）（１８）に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化、および該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法を開発し、本発明を完成した。
【００１１】
すなわち、本発明は、（１）非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する組成物、（２）非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質が３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−補酵素Ａ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）還元酵素阻害剤から選ばれる（１）に記載の組成物、（３）ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害組成物がアトルバスタチン、イタバスタチン、コンパクチン、シンバスタチン、ジヒドロコンパクチン、ダルバスタチン、ピタバスタチン、フルインドスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、ベルバスタチン、ベロスタチン、メバスタチン、ロスバスタチン、ロバスタチン、およびそれらの光学または幾何異性体、およびそれらのプロドラッグ、ならびに上記化合物又はそれらのプロドラッグの薬学的に許容することのできるそれらの塩ならびにそれらの水和物から選ばれる（２）に記載の組成物、（４）ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害組成物がアトルバスタチンカルシウム水和物、シンバスタチン、フルバスタチンナトリウム、プラバスタチンナトイウムから選ばれる（２）に記載の組成物、（５）非神経細胞が骨髄系非神経細胞と神経系非神経細胞から選ばれる（１）から（４）に記載の組成物、（６）骨髄系非神経細胞が骨髄幹細胞、間葉系細胞、骨髄間質細胞から選ばれる（５）に記載の組成物、（７）神経系非神経細胞が神経幹細胞と神経前駆細胞から選ばれる（５）に記載の組成物、（８）（１）から（７）に記載の組成物を有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、神経細胞に接触させ、該神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する組成物、（９）（１）から（７）に記載の組成物を有効成分とすることを特徴とする、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する組成物、（１０）（１）から（７）に記載の組成物を有効成分とし、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制することを特徴とする、神経障害疾患を治療または悪性化抑制する組成物、（１１）（１）から（７）に記載の組成物を、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化することを特徴とする、非神経細胞を神経細胞へ分化する方法、（１２）（８）に記載の組成物を、要すれば活性後に、神経細胞に接触させ、該神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟することを特徴とする、神経細胞を成熟する方法、（１３）（９）に記載の組成物を、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することを特徴とする、非神経細胞を神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する方法、（１４）（１０）に記載の組成物を、要すれば活性化後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制することを特徴とする、神経障害疾患を治療または悪性化抑制する方法、（１５）移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞、（１６）（１２）に記載の方法において、癌化神経細胞混入の恐れがない神経細胞を成熟することにより得られる、移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞、（１７）（１１）または（１３）に記載の方法により得られる、移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞、（１８）要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞または神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化、および／または該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、そして／または神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法、（１９）（１８）に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法、（２０）（１８）に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない神経細胞に接触させ、該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法、（２１）（１８）に記載の方法において、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化、および該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とする、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法を提供するものである。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明の組成物、すなわち、（１）要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する組成物、（２）要すれば活性後に、神経細胞に接触させ、該神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する組成物、（３）要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する組成物、（４）要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制する組成物は非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを有効成分とすることを特徴とする。本発明の組成物の有効成分は、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグであればよく、将来合成されるものでも差し支えない。薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質とは、毒性が薬学的に許容できる範囲内である低分子物質を意味する。ここで用いる毒性には、急性毒性、亜急性毒性、慢性毒性、催奇形成等本来の意味の毒性の他、薬学的許容範囲外の重篤かつ高頻度の副作用も含まれる。低分子物質とは、タンパク質や高分子のペプチドなど高分子でない物質で、抗原性がなく、血液脳関門を通過可能な程度に低分子の物質である。本発明の組成物は本発明の方法と本発明の神経細胞を得るためにも用いる。本発明の探索する方法によって得られる非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、そして／または神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグは本発明の組成物に属する。
【００１３】
非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質としては、これに制限されるわけではないが好ましくは、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−補酵素Ａ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）還元酵素阻害剤等が挙げられる。ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤とはコレステロール生合成の重要な律速酵素であるＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素によりコレステロールをはじめとする各種ステロイドやテルペン生合成の前駆体で，ケトン体代謝の中間体であるＨＭＧ−ＣｏＡをメバロン酸に変換する反応を阻害する物質である。ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤としてはＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素の作用を阻害する物質で薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質であればよい。ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤としては、これに限定されるわけではないが好ましくは、アトルバスタチン、イタバスタチン（別名ＮＫ−１０４）、コンパクチン、シンバスタチン、ジヒドロコンパクチン、ダルバスタチン、ピタバスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、ベルバスタチン、ベロスタチン、メバスタチン、ロスバスタチン、ロバスタチン等、およびそれらの光学または幾何異性体、およびそれらのプロドラッグ、ならびに上記化合物又はそれらのプロドラッグの薬学的に許容することのできるそれらの塩ならびにそれらの水和物等が挙げられる。その中でも、アトルバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン、プラバスタチンとその薬学的に許容することのできるそれらの塩ならびにそれらの水和物等は高脂血症の治療薬として長年使用されて、その安全性が確認されているという意味でより好ましく、具体的にはアトルバスタチンカルシウム水和物、シンバスタチン、フルバスタチンナトリウム、プラバスタチンナトイウム等がこれに限定されるというわけではないが特に好ましいものとして挙げられる。
【００１４】
ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤は薬学的に許容することのできる限り、どのような製法でつくられても差し支えない。これに限定するわけではないが、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤の製法を例示すると、アトルバスタチンは米国特許第４，６８１，８９３号および特開平３−５８９６７号（ＵＳＰ５２７３９９５）に開示された方法により、イタバスタチン（別名ＮＫ−１０４）は米国特許第５，１０２，８８８号に開示された方法により、コンパクチンは米国特許第４，８０４，７７０号に開示された方法により、シンバスタチンは特開昭５６−１２２３７５号（ＵＳＰ４４４４７８４）に開示された方法により、ジヒドロコンパクチンは米国特許第４，４５０，１７１号に開示された方法により、ダルバスタチンはヨーロッパ特許出願ＥＰ７３８５１０に開示された方法により、ピタバスタチンは特開平１−２７９８６６号（ＵＳＰ５８５４２５９及びＵＳＰ５８５６３３６）に開示された方法により、フルインドスタチンはヨーロッパ特許出願公開第３６３，９３４Ａ１中に開示された方法により、フルバスタチンは特表昭６０−５０００１５号（ＵＳＰ４７３９０７３）またはヨーロッパ特許出願ＥＰ３６３９３４に開示された方法により、プラバスタチンは特開昭５７−２２４０号（ＵＳＰ４３４６２２７）に開示された方法により、ベルバスタチンは米国特許第５，０８２，８５９号に開示された方法により、ベロスタチンは米国特許第４，４４８，７８４号および米国特許第４，４５０，１７１号に開示された方法により、メバスタチンは米国特許第３，９８３，１４０号に開示された方法により、ロスバスタチンは特開平５−１７８８４１号（ＵＳＰ５２６０４４０）に開示された方法により、ロバスタチンは特開昭５７−１６３３７４号（ＵＳＰ４２３１９３８）に開示された方法により調製することができる。
【００１５】
本発明の組成物は、（１）要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する、（２）要すれば活性後に、神経細胞に接触させ、該神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する、（３）要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する、または（４）要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制する。したがって、本発明の組成物は、該組成物を体外的に非神経細胞または未熟の神経細胞に接触させ、該細胞を分化し、かつ／または成熟することにより、移植用の神経細胞を得るために有用である。また本発明の組成物は、非神経細胞または未熟の神経細胞を体内に注入した後に該組成物を経口投与又は非経口投与することにより体内において該細胞に接触させ、体内において該細胞を分化し、かつ／または成熟することにより、または外部から非神経細胞または未熟の神経細胞を体内に注入することなく、該組成物を経口投与又は非経口投与することにより体内において内在する非神経細胞または未熟の神経細胞に接触させ、体内において該細胞を分化し、かつ／または成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制するために有用である。すなわち、これを含有する医薬は各種組織や細胞の細胞の退行・減少又は細胞死に起因する疾患の予防及び治療薬として有用である。本発明の組成物は、低分子であることから、体外投与は勿論、経口投与又は非経口投与（筋肉内、皮下、静脈内、坐薬など）のいずれでも投与できる。体外投与の場合は本発明の組成物中にプロドラッグが含まれているときは、適宜の方法で活性化してから用いた方がより大きな効果を得るので好ましい。プロドラッグが含まれていないときはそのまま用いてよい。体内投与の場合は多くの場合体内でプロドラッグが活性化するので、プロドラッグを予め活性化しておく必要は少ない。
【００１６】
経口用製剤を調製する場合、賦形剤、さらに必要に応じて、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤などを加えた後、常法により、錠剤、被服錠剤、顆粒剤、カプセル剤、溶液剤、シロップ剤、エリキシル剤、油性又は水性の懸濁液剤などとする。賦形剤としては、例えば、乳糖、コーンスターチ、白糖、ブドウ糖、ソルビット、結晶セルーロスなどが挙げられる。結合剤としては、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、エチルセルロース、メチルセルロース、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、シェラック、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。
【００１７】
崩壊剤としては、例えば、デンプン、寒天、ゼラチン未、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸カルシウム、デキストラン、ペクチンなどが挙げられる。滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油などが挙げられる。着色剤としては、医薬品に添加することが許可されているものが使用できる。矯味矯臭剤としては、ココア末、ハッカ脳、芳香酸、ハッカ油、竜脳、桂皮末などが使用できる。これらの錠剤は、顆粒剤には、糖衣、ゼラチン衣、その他必要により適宜コーティングしてもよい。
【００１８】
注射剤を調製する場合、必要により、ｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤、保存剤などを添加し、常法により、皮下、筋肉内、静脈内注射剤とする。注射剤は、溶液を容器に収納後、凍結乾燥などによって、固形製剤として、用事調製の製剤としてもよい。また、一投与量を容器に収納してもよく、また、多投与量を同一の容器に収納してもよい。
【００１９】
本発明組成物の試薬としての使用濃度は通常０．０１から１０００マイクロモル、好ましくは、０．１〜１００マイクロモルで使用し、医薬としての投与量は、ヒトの場合、成人１日当たり通常０．０１〜１０００ミリグラム、好ましくは、０．１〜１００ミリグラムの範囲で、１日量を１日１回、あるいは２〜４回に分けて投与する。なお、年齢、症状により適宜増減する。
【００２０】
本発明に用いる非神経細胞とは神経細胞以外の細胞で、本発明の組成物により神経細胞に分化し得る細胞を意味する。本発明の組成物により神経細胞に分化し得る細胞としては、これに限定されるわけではないが好ましくは、ＥＳ細胞、神経幹細胞、神経前駆細胞、骨髄幹細胞、間葉系細胞、骨髄間質細胞等が挙げられる。ＥＳ細胞、神経幹細胞、神経前駆細胞、骨髄幹細胞、間葉系細胞、骨髄間質細胞等のうち、非胎児性神経幹細胞、神経前駆細胞、骨髄幹細胞、間葉系細胞、骨髄間質細胞等はＥＳ細胞、胎児由来の神経幹細胞との比較において倫理性で問題が少なく、より好ましい。非胎児性神経幹細胞、神経前駆細胞、骨髄幹細胞、間葉系細胞、骨髄間質細胞等のうち、骨髄幹細胞、間葉系細胞、骨髄間質細胞等は容易に入手し易く、移植用の神経細胞に分化させる細胞としてはより好ましく、特に自家または自家と主要組織適合抗原を実質的に同じくするまたは非常に類似する、骨髄幹細胞、間葉系細胞、骨髄間質細胞は移植用の神経細胞に分化する細胞として、または体内に注入して体内で神経細胞に分化する細胞としてより好ましい。一方、神経細胞の移植や非神経細胞等の体内注入なしに、本発明の組成物を投与して体内に内在する神経細胞の再生を行うことを目的にする場合は、内在する神経幹細胞、神経前駆細胞、骨髄幹細胞、間葉系細胞、骨髄間質細胞等が分化して神経細胞になる。したがって、目的に応じて本発明に用いる非神経細胞を選ぶことがより好ましい。
【００２１】
本発明の方法に用いる非神経細胞または神経細胞の入手先は使用目的によって限定の度合いが異なるが、適合する限りどこから入手しても良い。使用目的がヒトを対象としない場合には限定が少ないが、ヒトに対して移植する神経細胞を得る目的の場合または体内に注入して体内で分化して神経細胞にする、または体内で神経細胞を成熟する場合は、ＥＳ細胞はヒトの胎児胚より、神経幹細胞と神経前駆細胞はヒトの胎児の脳より、骨髄幹細胞、間葉系細胞、骨髄間質細胞等は移植されるヒトまたはそのヒトと主要組織適合抗原が実質的に同じ、または非常に類似するヒトの骨髄より無菌的に採取するのが好ましい。神経細胞の移植や非神経細胞等の体内注入なしに、本発明の組成物を投与して体内に内在する神経細胞の再生を行うことを目的にする場合は、用いる非神経細胞は内在非神経細胞に限られる。非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、そして／または神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質および／またはそのプロドラッグを探索する方法に用いる非神経細胞または神経細胞の入手先に限定はない。
【００２２】
本発明に用いる神経細胞とは成熟した神経細胞以外の神経細胞で、本発明の組成物により成熟し得る神経細胞を意味する。本発明の組成物により成熟し得る神経細胞は、非神経細胞を本発明の方法により分化して得られる神経細胞に限定されない．非神経細胞を本発明の方法以外の方法により分化して得られる神経細胞や神経幹細胞・神経前駆細胞から自然に分化した神経細胞も用いることができる．これら神経細胞のうち、非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく分化させることにより、移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞が好ましい。該細胞は内在する神経細胞または本発明の非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する方法で得られる。
【００２３】
本発明の神経細胞は移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞に限定される。本発明の移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞は、本発明の方法、すなわち（１）本発明の組成物を、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する方法、（２）本発明の組成物を、要すれば活性後に、神経細胞に接触させ、該神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する方法、（３）本発明の組成物を、要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する方法により得られる。
【００２４】
本発明の神経細胞は自然に分化した神経細胞または自然に分化成熟した神経細胞に限りなく近い神経細胞である．これに限定されるわけではないが、移植用神経細胞としては最適である．本発明の神経細胞は、脳に移植の場合は中枢神経系に移植するのに適切であるように様々な方法で投与されうる。これに限定されるわけではないが、非経口投与、くも膜下腔投与、脳室内投与および黒質内投与等が挙げられる。
【００２５】
本発明の方法、すなわち、（１）非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する方法、（２）神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する方法、（３）該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する方法、（４）該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制する方法は、本発明の組成物を、要すれば活性後に、非神経細胞または神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく、該非神経細胞または神経細胞に接触させることを特徴とする。本発明の特徴以外の操作や工程は公知の操作や工程でよく、それらは例えば前述の文献（特表２００２−５１３５４５、Ｍ．Ｄｅｚａｗａら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００１年１４巻１７７１頁、Ｗ．Ｄｅｎｇら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２００１年２８２巻１４８頁、Ｄ．Ｗｏｏｄｂｕｒｙら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．２０００年６１巻３６３頁、Ｊ．Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｒａｍｏｓら、Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．２０００年１６４巻２４７頁、Ｊ．Ｋｏｈｙｙａｍａら、Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ、２００１年６８巻２３５頁、Ｈ．Ｎａｋａｔｏｍｉら，Ｃｅｌｌ、２００２年１１０巻４２９頁、特表２００１−５１７６１７）および他の文献（Ｊ．Ｋｕｎｌｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２００１年９８巻４７１０頁）に開示されている。また、すでに本発明の組成物の項で説明したように、本発明の組成物を非神経細胞または未熟の神経細胞に接触させる方法としては、（１）本発明の組成物を体外的に非神経細胞または未熟の神経細胞に接触させる方法、（２）非神経細胞または未熟の神経細胞を体内に注入した後に本発明の組成物を経口投与又は非経口投与することにより体内において該細胞に接触させさせる方法、（３）外部から非神経細胞または未熟の神経細胞を体内に注入することなく、本発明の組成物を経口投与又は非経口投与することにより体内において内在する非神経細胞または未熟の神経細胞に接触させる方法等がある。目的に応じて適宜選択すればよい。これらの工程も本発明の特徴以外は前述の文献に開示されている。
【００２６】
本発明の探索方法、すなわち（１）非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく分化させて神経細胞にする能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を探索する方法、（２）神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を探索する方法、（３）非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく分化成熟させて神経細胞にする能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を探索する方法は、要すれば活性後に、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を、細胞分裂誘起物質で処理していない非神経細胞または神経細胞に接触させ、該非神経細胞の神経細胞への分化の有無、または神経細胞の成熟の有無または神経細胞への分化と該神経細胞の成熟の有無を調べることを特徴とる。すなわち、細胞分裂誘起物質で処理しない非神経細胞または神経細胞を用いることと薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を探索の対象とすることが特徴で、この特徴以外の工程は前述の文献に開示されている。
【００２７】
【実施例】
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、操作や工程のうち、公知部分の詳細は以下の文献にも開示されている。Ｄ．Ｓｔｏｋｅｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１９９８年９５巻３９０８頁、Ｒ．Ｊ．Ｇｅｒｓｏｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．１９８９年８７巻２８Ｓ頁、Ｐ．Ａ．Ｔｏｄｄら、Ｄｒｕｇｓ、１９９０年４０巻５８３頁、Ｐ．Ｈｏｆｓｔｅｔｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２００２年９９巻２１９９頁、Ｅ．Ｚｅａ−Ｌｏｎｇａら、Ｓｔｒｏｋｅ、１９８９年２０巻８４年、メルクマニュアル１７版日本版。
【００２８】
実施例１．インビトロ分化：骨髄は、１０週齢の雌ＳＤラットの大腿骨と脛骨またはヒト骨髄吸引物から得た。ヒト骨髄を、ダルベッコ修飾イーグル最少必須培地（ＤＭＥＭ）（低濃度グルコース）（ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ）および１０％胎児血清（ＦＢＳ）（ＨＹＣＬＯＮＥ）、１００単位／ミリリットルペニシリン、１００マイクログラム／ミリリットルストレプトマイシン（ＳＩＧＭＡ）で１：１に希釈し、密度勾配で、５分間８００グラムで遠心分離した。上清および界面を合せ、１０％胎児血清を含む
ＭＥＭで約２０ミリリットルに希釈し、ポリエチレンイミンでコートされたプラスチック製フラスコにプレートした。ラット骨髄を、１０ミリリットルＰＢＳおよび５％アルブミンに入れた。細胞を、この培地中で洗浄し、８００ｒｐｍで５分間遠心分離した。細胞を、２ｍＭグルタミン、１０％血清（ＦＢＳ）、１００単位／ミリリットルペニシリン、１００マイクログラム／ミリリットルストレプトマイシン（ＳＩＧＭＡ）を加えたＤＭＥＭ（低濃度グルコース）からなる増殖培地中に再懸濁した。細胞を、フラスコ中で１日間培養し、非接着細胞を除去した。その後、毎３日間培養し、培地を交換した。培養物が、コンフルエンシーにほとんど達した後、トリプシン（０．２５％）処理を行い、細胞を剥がした。細胞を８００ｒｐｍで５分間遠心分離して集めた。細胞を上記培地に懸濁し、上記プラスチック製フラスコに植え、上記培地で培養した。この操作を４回繰返した。この操作に通常行う上皮成長因子（ＥＧＦ）または血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）のようなマイトジェン添加はしなかった。
【００２９】
骨髄間質細胞のニューロン様細胞への分化は、次の工程で行った。まだコンフルエンシーに達していない骨髄間質細胞を上記プラスチック製フラスコ底から剥がし、１０，０００細胞数／平方センチメートルの濃度で０．０５ミリグラム／ミリリットルポリ−Ｄ−リジン（ＳＩＧＭＡ）でコートした２４穴の培地プレートの１０％胎児血清（ＦＢＳ）、１００単位／ミリリットルペニシリン、１００マイクログラム／ミリリットルストレプトマイシンを加えたＤＭＥＭ（低濃度グルコース）に植えた。このとき、前もって４ミリグラムのシンバスタチンのプロドラッグを１００マイクロリットルのエタノールに溶かし、０．１ＮのＮａＯＨを加え摂氏５０度で２時間反応させ、ＨＣＬでｐＨを７．０に調整し、４ミリグラム／ミリリットルの濃度にし、摂氏４度で保存しておいた活性化シンバスタチンを２．５マイクロモル、５マイクロモル、１０マイクロモル添加して７２時間培養した。通常添加する脳由来成長因子（ＢＤＮＦ）、グリア由来神経栄養因子（ＧＤＮＥ）および神経成長因子（ＮＧＦ）などのニューロン成長因子は一切加えなかった。
【００３０】
培養した細胞を４％（ｗｔ／ｖｏｌ）パラホルムアルデヒド固定０．１モルリン酸緩衝液ｐＨ７．４で３０分固定した。神経細胞特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）とニューロン特異的核抗原（ＮｅｕＮ）染色のため、洗浄後、細胞を０．２５％トリトンＸ−１００と５％正常のヒツジ血清（ＰＢＳＴＳ）を含有するＰＢＳで１時間室温でブロックした。次に細胞をＰＢＳＴＳで希釈した第１次抗体液中摂氏４度で一晩培養した。ＰＢＳで３回洗浄した後、室温でアビジンービオチン複合体を１時間室温で接触させた。ＰＢＳで３回洗浄した。ＭＡＰ２とタウ染色のためには、洗浄後、細胞を０．２５％トリトンＸ−１００と５％正常のヒツジ血清（ＰＢＳＴＳ）を含有するＰＢＳで１時間室温でブロックした。次に細胞をＰＢＳＴＳで希釈した第１次抗体液中摂氏４度で一晩培養した。ＰＢＳで３回洗浄した後、細胞をＰＢＳＴＳで希釈した第２次抗体液中摂氏４度で１時間暗所で培養した。洗浄後、細胞をグリセロール／ＰＢＳ（１：１）で包埋し、蛍光顕微鏡で観察した。第１次抗体はラットＮＳＥに対するウサギモノクローナル抗体を１：２００、ラットＮｅｕＮに対するマウスモノクローナル抗体を１：２００、ＭＡＰ２に対するマウスマウスモノクローナル抗体を５マイクログラム／ミリリットル、タウに対するウサギモノクローナル抗体を１：２００に希釈して用いた。第２次抗体はウサギＩｇＧに対するビオチン化ヒツジ抗体を１０マイクログラム／ミリリットル、ラットＩｇＧに対するマウスＩｇＧに対するビオチン化ウマ抗体を１０マイクログラム／ミリリットルに希釈して用いた。ＭＡＰ２はマウスＣｙ−３に対するヒツジ抗体（５マイクログラム／ミリリットル）で可視化し、タウはウサギＣｙ２に対するヒツジ抗体で可視化した。
【００３１】
ラット骨髄から得られた骨髄間質細胞を分離し、プラスチックプレート上増殖を４回繰返した。大きな平らな細胞と比較的引伸ばされた紡錘体状細胞の２種類に分かれた。これに対し、０．２５マイクロモル、５マイクロモルと１０マイクロモルの活性化したシンバスタチンが接触した骨髄間質細胞は驚くべきことに２４時間後に形態を変化した。形態変化した細胞は丸みを帯びた細胞体と屈折を示し、単純な２極性の細胞や非常に枝分かれした複雑な多極性の細胞等神経様細胞の性格を示し、シナプス様の形態形成も見られた（図１）。４８時間後には神経様細胞のシナプス形態も明確になった（図２）。活性化したシンバスタチンを接触させた神経細胞様の細胞を２４時間、４８時間、７２時間培養後に固定し、神経マーカーのＮＳＥ用に染色した。シンバスタチンを接触させなかった平板状の骨髄間質細胞は非常に低くしか染色されなかった。しかし、ＮＳＥタンパク質のレベルは検知可能であった。これに対し、活性化したシンバスタチンを接触させた神経細胞様の細胞はＮＳＥを顕著に発現させた。我々は次にＮｅｕＮの存在につぃて調べた。シンバスタチンを接触させなかった平板状の骨髄間質細胞にＮｅｕＮが検出できなかったのに対し、活性化したシンバスタチンを接触させた神経細胞様の細胞はＮｅｕＮを発現した形態を示した。活性化したシンバスタチンを接触させた神経細胞様の細胞は細胞体中にＭＡＰ２とタウを発現していた（図３と図４）。これに対し、シンバスタチンを接触させなかった平板状の骨髄間質細胞は細胞体中にＭＡＰ２とタウを発現しなかった。
【００３２】
活性化シンバスタチンを接触させたままＮＥＳ陽性、ＮｅｕＮ陽性、ＭＡＰ２陽性、タウ陽性の形態学的にも神経細胞様の細胞を培養続けた。細胞から樹状突起が複雑に伸び、周りの多くの細胞とシナプスを形成し、神経細胞が成長したことが確認された。したがって、シンバスタチン接触２４時間後に出現した神経様細胞は神経細胞そのものであることが確認された。非神経細胞から神経細胞へ２４時間以内に分化した報告は未だなく、本実施例が初めてである。
【００３３】
実施例２．実施例１においてシンバスタチンの代わりに、アトルバスタチン、イタバスタチン、コンパクチン、ジヒドロコンパクチン、ダルバスタチン、ピタバスタチン、フルインドスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、ベルバスタチン、ベロスタチン、メバスタチン、ロスバスタチン、ロバスタチンを別々に用いて同様にラットの骨髄間質細胞をマイトジェン処理無しに神経細胞に分化させ、その分化させた神経細胞を成熟させた。
【００３４】
実施例３．実施例１においてシンバスタチンの代わりに、アトルバスタチンとフルバスタチンの混合物を用いて同様にラットの骨髄間質細胞をマイトジェン処理無しに神経細胞に分化させ、その分化させた神経細胞を成熟させた。
【００３５】
実施例４．インビボ分化：骨髄を１０週齢の雌ＳＤラットの大腿骨と脛骨またはヒト骨髄吸引物から得た。ヒト骨髄を、ダルベッコ修飾イーグル最少必須培地（ＤＭＥＭ）（低濃度グルコース）（ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ）および１０％胎児血清（ＦＢＳ）（ＨＹＣＬＯＮＥ）、１００単位／ミリリットルペニシリン、１００マイクログラム／ミリリットルストレプトマイシン（ＳＩＧＭＡ）で１：１に希釈し、密度勾配で、５分間８００ｇで遠心分離した。上清および界面を合せ、１０％胎児血清を含むＭＥＭで約２０ミリリットルに希釈し、ポリエチレンイミンでコートされたプラスチック製フラスコにプレートした。ラット骨髄を、１０ミリリットルＰＢＳおよび５％アルブミンに入れた。細胞を、この培地中で洗浄し、８００ｒｐｍで５分間遠心分離した。細胞を、２ミリモルグルタミン、１０％血清（ＦＢＳ）、１００単位／ミリリットルペニシリン、１００マイクログラム／ミリリットルストレプトマイシン（ＳＩＧＭＡ）を加えたＤＭＥＭ（低濃度グルコース）からなる増殖培地中に再懸濁した。細胞を、フラスコ中で１日間培養し、非接着細胞を除去した。その後、毎３日間培養し、培地を交換した。培養物が、コンフルエンシーにほとんど達した後、トリプシン（０．２５％）処理を行い、細胞を剥がした。細胞を８００ｒｐｍで５分間遠心分離して集めた。細胞を上記培地に懸濁し、上記プラスチック製フラスコに植え、上記培地で培養した。この操作を４回繰返した。この操作に通常行う上皮成長因子（ＥＧＦ）または血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）のようなマイトジェン添加はしなかった。
【００３６】
ＬＸＳＮベクター（ＣＬＯＮＴＥＣＨ）を用いて発現マーカーとして緑蛍光タンパク質をコードし、ネオマイシン（Ｇ４１８）選択性マーカーとしてアミノグリコシドポスホトランスフェラーゼをコードしたレトロウイルス性のプラスミドをつくった。カルシウムリン酸沈殿を用いてフェニックスアンホトロピックパッケェジした細胞（ＡＴＣＣ）にＬＸＳＮ−ＧＦＰプラスミドを感染させた。感染後４８時間後にウイルス性の上清を集め、穴の大きさが０．４５−マイクロメートルのフィルターで濾した。使うまで摂氏マイナス８０度で保存した。ウイルスを採取した時にフェニックスアンホトロピックパッケェジした細胞のＧＦＰの発現を解析して確認した。約１００，０００個の骨髄間質細胞を２０％加熱不活化したＦＣＳを含む完全培地の入った２１．０平方センチメートルのプレートに蒔き、一晩培養した。翌日２．５ミリリットルの２０％加熱不活化したＦＣＳを含む完全培地中で該細胞を５００マイクロリットルのウイルス上清液と８マイクログラム／ミリリットルのポリブレン（Ｓｉｇｍａ）と混合して感染させた。ウイルス感染した日を第１日とした。第２日にウイルス感染操作を繰返した。第３日に培養液を２０％の非加熱ＦＢＳを含む新しい完全培地と交換した。第４日に細胞を２００マイクログラム／ミリリットルのＧ４１８（Ｓｉｇｍａ）を含む完全培地の入った５５．０平方センチメートルのプレートに１：３の割合で分け、２１日間選択した。ＧＦＰプラスミドが遺伝子に入り込んだ骨髄間質細胞を得た。この細胞の増殖を３回繰返して増やした。
【００３７】
雄のＳＤラットに１３７Ｃｓを９．０（９００ｒａｄｓ）の強度っで照射した。照射２４時間後にこのラットの尾っぽの静脈にＧＦＰプラスミドが遺伝子に入り込んだ骨髄間質細胞約５，０００，０００個１ミリリットルを注入した。骨髄間質細胞移植ラットを８週間飼育した。
【００３８】
骨髄間質細胞移植ラットを４％イソフルラン、６６％Ｎ２Ｏ、３０％酸素の混合ガスで麻酔し、１．５％のイソフルラン、６８．５％Ｎ２Ｏ、３０％酸素の混合ガスで麻酔を維持した。血圧、血液冲のガス分圧、血糖値を左の大腿骨動脈でモニターした。直腸温度、中大脳動脈閉塞の反対側の側頭筋温度、を常時モニターして、加熱パッドで摂氏３７．０−３７．５度に維持した。Ｅ．Ｚｅａ−Ｌｏｎｇａ等の方法に従い、縫合糸による管内中大脳動脈閉塞によってラットに虚血を起した。すなわち、左外頚動脈を６−０絹縫合糸で結び、遠位を切開し、左内頚動脈を分離し、迷走神経から離した。左内頚動脈の頭蓋外枝をその枝分れの根元のところで、６−０絹縫合糸で結んだ。円形チップの付いた３−０外科用単層ナイロン縫合糸を外頚動脈断片を通して左内頚動脈に導き、その頚動脈の枝分れ部分より２０ミリメートル過ぎたところで、９０分間結び、その後直ぐ解いた。
【００３９】
縫合糸による閉塞による中大脳動脈閉塞を起したラット１０匹に対して、即日より殺す日まで毎日２０ミリグラム／キログラムの割合でシンバスタチンを経口投与した。対照として中大脳動脈閉塞を起した別のラット１０匹に対してシンバスタチンを投与しなかった。
【００４０】
中大脳動脈閉塞後第１，３，７，１４日にこれらのラット２匹ずつをキシラジン１０ミリグラム／キログラムとケタミン８０ミリグラム／キログラムで麻酔して殺した。直ちに、生理的食塩水で還流し、続いて４％パラフォルムアルデヒドで還流した。脳組織を２ミリメートル間隔で７等分の環状ブロックに切断した。前頭面で」各切断ブロックから６マイクロメートルの厚さの切片をつくり、実施例１と同様にＧＦＰとＮｅｕＮに対する二重免疫標識した。シンバスタチンを投与したラットは中大脳動脈閉塞後第３日に殺した群からＧＦＰとＮｅｕＮの二重陽性が認められ、日数に比例して二重陽性が強くなった。シンバスタチンを投与しなかったラットは中大脳動脈閉塞後１４日になってもＧＦＰとＮｅｕＮの二重陽性は確認できなかった。このことから、移植した骨髄間質細胞が脳血管の関門を通って、脳内に浸潤し、シンバスタチンによって神経細胞へ分化したことが確認された。
【００４１】
殺さなかったラットは３ヶ月間シンバスタチンを投与した。対照ラットにシンバスタチンを投与しなかった。このラットについて高架式十字迷路試験を行った。高架式十字迷路試験とは高架式の十字形の細長い平板の一方にラットの餌を置き、他方の一つにラットを放すと、ラットは最初は試行錯誤で十字路の一方の行き止まりまで行き、そこに餌が無いことを知って、十字路にもどり、別の道を行く、そうこうしているうちにラットが餌の置いてある端にたどりつく。もう一度実験をすると記憶力のあるラットは迷うことなく、餌がおいてある道を進み餌にありつく。しかし、記憶力の悪いラットは１回目と同様に試行錯誤を繰返す。この試験によりラットの記憶力が測定できる。シンバスタチンを投与しなかったラットは餌にたどり着くまでに多くの時間を要し、記憶力が極度に低下していた。これに対し、シンバスタチンを投与したラットは餌にたどり着くまでの時間が短く、ある程度の記憶力を回復しており、シンバスタチンにより再生した神経細胞は機能性があることを示唆した。
【００４２】
実施例５．実施例４においてシンバスタチンの代わりに、アトルバスタチン、イタバスタチン、コンパクチン、ジヒドロコンパクチン、ダルバスタチン、ピタバスタチン、フルインドスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、ベルバスタチン、ベロスタチン、メバスタチン、ロスバスタチン、ロバスタチンを別々に投与して同様の操作をし、移植骨髄間質細胞が人工的に脳虚血を起させたラットの脳内で神経細胞へ分化し、かつ神経細胞機能的に再生させたことを確認した。
【００４３】
実施例６．実施例４においてシンバスタチンの代わりに、アトルバスタチンとフルバスタチンの混合物を投与して同様の操作をし、同様の効果を得た。
【００４４】
実施例７．アルツハイマー病に対する薬効評価。日本語で読み書きができ、自分の意志を医者に伝えることが可能であるがアルツハイマー病の可能性ありという臨床診断を受けている患者８人で、プラバスタチンナトリウム等ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤に過敏症の既往歴がなく、腎機能と肝代謝が低下している疑いがなく、かつ妊娠または妊娠している可能性のある人および授乳婦以外の人に対して、下記ミニメンタルステート試験を行う。なお、患者は重症度の指標が２５以下であることを確認し、重症度の指標が２５以上の患者はいる場合は、重症度の指標が２５以下である患者と入れ替える。また、測定前４ヶ月以内に治験薬を使用していた患者は除外する。また、シメチジン、プロプラノロール等親油性６遮断剤やクロニジン、抗コリン作動薬、および抗コリン活性を有する抗うつ剤、神経弛緩剤、推定認識力増強物質および中枢神経刺激物質、または半減期が長いベンゾジアゼピンは投与を禁止する。
【００４５】
ミニメンタルステート試験の内容：見当識（１．今の年は？１点、季節は？１点、曜日は？１点、日付は？１点、月は？１点、２．私たちが今いる県の名前は？１点、郡の名前は？１点、市／町の名前は？１点、階数は？１点、は？１点、住所／建物の名前は？１点）、記銘力（３．医師が３つの物の名前を書く秒かけて言う。医師が言った後で次に患者に３つ全部の名前を尋ねる。患者が３つ全てを正しく言えるまで答えを繰返させる。３点）、注意と計算（４．１００から続けて７を引かせる。正しい答え１つにつき１点与える。５回答えたところで終える。５点）、想起（５．質問３で覚えた３つの物の名前を尋ねる。正しい答え１つにつき１点与える。３点）、言語（６．医師が鉛筆と時計を指す。患者に医師が指した物の名前を言わせる。２点、７．患者に「いいえ、もし、そして、しかし」と言わせる。１点、８．患者に３段階の命令を与え、それに従ってもらう。「右手で紙をつまみ上げてください。紙を半分に折ってください。紙を机の上に置いてください。」３点、９．患者に次の指示を読ませ、それに従ってもらう。「目を閉じてください。」１点、１０．患者に自由に１つの文章を書いてもらう。文章には守護つと目的語１つを含み、しかも意味をなしている必要がある。得点には書字の誤りは考慮しない。１点、１１．１辺が約５センチメートルの２つの五角形が１頂点だけ重なった図形を見せ、患者に書き写させる。全ての角および角度が保たれており、しかも交わった領域が四角形をなしていれば１点をあたえる。１点）、合計３０点。
【００４６】
医師の管理下に被験者に市販の医療用プラバスタチンナトリウム１０ミリグラム錠を１日２回、６ヶ月間投与する。６ヵ月後にミニメンタルステート試験を行う。ミニメンタルステート試験によりプラバスタチンナトリウム投与による見当識、記銘力、注意と計算、想起、言語の改善を確認できる。
【００４７】
【発明の効果】
本発明の組成物は、（１）要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する能力、または（２）要すれば活性後に、神経細胞に接触させ、該神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力、または（３）要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する能力、または（４）要すれば活性後に、非神経細胞に接触させ、該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制する能力を有する。したがって、本発明組成物を体外投与することにより、移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞をつくるために有用であり、また非神経細胞または移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞を体内に注入した後、または注入せずに、本発明組成物を体内投与することにより、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、脳腫瘍、小脳変性症、交通性水頭症、ハンチントン病、前頭葉への照射、多発性硬化症、正常圧水頭症、パーキンソン病、ピック病、進行性多巣性白質脳症、進行性核上麻痺、拳闘家痴呆、脳外傷、外科手術、脳腫瘍、慢性硬膜下血腫、脳卒中、脳血管性痴呆、ウィルソン病細菌性心内膜炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病、ＨＩＶ関連疾患、神経梅毒、結核性および真菌性髄膜炎、ウイルス性脳炎、無酸素症、Ｂ１２欠乏症、慢性的な薬物−アルコール−栄養性乱用、葉酸欠乏症、副甲状腺機能亢進症に伴う高カルシウム血症、低血糖、甲状腺機能低下症、肝性脳症、肺性脳症、尿毒素性脳症等の臓器系不全、ペラグラ等由来の神経障害疾患の治療または悪性化抑制薬として有用である。
【００４８】
本発明の方法は、（１）非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化する方法、（２）神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する方法、（３）該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟する方法、（４）該非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく神経細胞へ分化し、かつ該神経細胞を成熟することにより神経障害疾患を治療または悪性化抑制する方法である。したがって、本発明方法は移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞をつくる方法として有用であり、また前述の神経障害疾患を治療または悪性化抑制する方法として有用である。
【００４９】
本発明の神経細胞は移植拒絶反応を起す高分子と癌化神経細胞の混入の恐れがない神経細胞である。したがって、自然に分化した神経細胞または自然に分化成熟した神経細胞に限りなく、研究用または治療用として有用である。
【００５０】
本発明の探索方法は、（１）非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく分化させて神経細胞にする能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を探索する方法、（２）神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく成熟する能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を探索する方法、（３）非神経細胞を細胞分裂誘起物質で処理することなく分化成熟させて神経細胞にする能力を有する、薬学的許容範囲の毒性しかない低分子物質を探索する方法である。これらの方法により有用な医薬品や試薬を創出する可能性があるので有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】５マイクロモルの活性化シンバスタチン２４時間接触による骨髄間質細胞の神経細胞への分化。普通光顕微鏡写真。倍率１００倍。スケールバーの長さ：５０マイクロメーター（実施例１）
【図２】５マイクロモルの活性化シンバスタチン４８時間接触による骨髄間質細胞の神経細胞への分化。普通光顕微鏡写真。倍率１００倍。スケールバーの長さ：５０マイクロメーター（実施例１）
【図３】５マイクロモルの活性化シンバスタチン２４時間接触による骨髄間質細胞の神経細胞への分化。ＭＡＰ２（緑色）とタウ（赤色）の二重免疫標識標本の蛍光光顕微鏡写真。倍率１００倍。スケールバーの長さ：５０マイクロメーター（実施例１）
【図４】５マイクロモルの活性化シンバスタチン４８時間接触による骨髄間質細胞の神経細胞への分化。ＭＡＰ２（緑色）とタウ（赤色）の二重免疫標識標本の蛍光顕微鏡写真。倍率１００倍。スケールバーの長さ：５０マイクロメーター（実施例１）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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