(57)【要約】【課題】本発明はサッカロミセス酵母より得られるアレルギー体質改善物質の用途に関する。本発明はサッカロミセス酵母のマンナンの有するＴｈ１／Ｔｈ２バランス改善作用およびＩｇＥ産生抑制作用を利用して、Ｉ型アレルギー疾患の予防・治療に有効なアレルギー体質改善剤、又はアレルギー体質改善機能を持つ食品を提供することを目的とする。【解決手段】本発明は、サッカロミセス酵母の菌体あるいは培養液より得られるマンナンを有効成分とするアレルギー体質改善剤、又はアレルギー体質改善免疫機能を持つ食品を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
サッカロミセス酵母の菌体あるいは培養液より得られるマンナンを有効成分とするアレルギー体質改善剤。
【請求項２】
サッカロミセス酵母の菌体あるいは培養液より得られるマンナンを有効成分とするアレルギー体質改善機能を持つ食品。
【請求項３】
サッカロミセス酵母の菌体あるいは培養液より得られ、マンノース分子が８０％以上を占めるマンナンを有効成分とするアレルギー体質改善剤。
【請求項４】
サッカロミセス酵母の菌体あるいは培養液より得られ、マンノース分子が８０％以上を占めるマンナン有効成分とするアレルギー体質改善機能を持つ食品。
【請求項５】
サッカロミセス酵母の菌体あるいは培養液より得られ、分子量１０００以上の画分が９０％以上を占めるマンナンを有効成分とするアレルギー体質改善剤。
【請求項６】
サッカロミセス酵母の菌体あるいは培養液より得られ、分子量１０００以上の画分が９０％以上を占めるマンナン有効成分とするアレルギー体質改善機能を持つ食品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はサッカロミセス酵母より得られるアレルギー体質改善物質の用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】
戦後の我が国における環境とライフスタイルの変化、すなわち大気汚染の深刻化、脂肪分摂取量の増大、冷暖房器具の普及による家屋の気密化、カーぺットの普及等の要因は、国民のアレルギー疾患罹患率を著しく高めてきた。現在３０００万人から４０００万人の国民が何らかのアレルギー症状を有しているとされ、その治療に費やされる医療費も上昇の一途をたどっている。アレルギー疾患の克服のためには生活習慣を大きく変える必要があり、持続困難な自己規制を強いられることがある。誰もが受け入れられるような簡便なアレルギー改善手段が望まれている。
【０００３】
アレルギー疾患はＩ型からＩＶ型に分類されるが、その中でもＩｇＥ抗体の関与するＩ型アレルギーが、花粉症、ダニアレルギー、食物アレルギー等、社会的に注目度の高いアレルギー疾患において重要な役割を果たしている。人間の体は、異物の体内吸収・侵入に対して特異的な抗体を産生したり、感受性Ｔリンパ球を活性化することで、異物を速やかに排除するための生体防御反応を示す。しかしこの生体防御反応が過剰に起こり、異物に対して「ＩｇＥ」と呼ばれる抗体が過剰に産生されると、疾患に至る。
【０００４】
異物が体内に入ると、マクロファージ、Ｂリンパ球等の抗原提示細胞に捕捉された後、異物分子の一部分が特定のＴリンパ球ポピュレーションに提示され、その後の免疫応答の引き金が引かれる。Ｔリンパ球はインターフェロンγを始めとするＴｈ１系サイトカインと、インターロイキン４を始めとするＴｈ２系サイトカインを産生するが、何らかの理由でＴｈ２系サイトカインが優勢に産生されると、Ｂリンパ球によるＩｇＥ抗体の分泌が誘導されやすくなる。花粉、ダニ、食物抗原等のアレルゲンに特異的なＩｇＥ抗体は、呼吸器系・消化器系の粘膜、皮膚に存在する肥満細胞および血液中に存在する好塩基球の表面にある高親和性ＩｇＥレセプターに結合し、これらの細胞を準活性化する。さらに前述のアレルゲンが体内に吸収されてレセプターに結合したＩｇＥ抗体と反応することにより、肥満細胞や好塩基球が活性化されてヒスタミン等のメデイエータ物質類が放出され、血管や平滑筋に作用して喘息、鼻炎、下痢、皮膚炎、全身ショック等のアレルギー症状を誘発する。
【０００５】
Ｉ型アレルギー疾患の改善・治療に関しては２つのアプローチがある。即ち（１）喘息、皮膚炎と言った目に見える症状そのものを即効的に改善するいわゆる対症療法と、（２）時間をかけて免疫担当細胞の機能に働きかけ、ＩｇＥの産生を抑えるなど、アレルギー体質の改善を図って行く方法である。ＩｇＥの産生はＴｈ２系サイトカインにより促進される一方、Ｔｈ１系サイトカインにより抑制されるため、これらのバランスを改善する、すなわちＴｈ１を高めてＴｈ２を抑えることで、ＩｇＥ指向性の体質を改善することが可能とされる。
【０００６】
パン酵母やビール酵母は「サッカロミセス属」に含まれ、古くから食品の製造や酒類の醸造に用いられてきた。サッカロミセス酵母は、食品・酒類の発酵・醸造に使用された後も有効活用され、その乾燥粉末、抽出エキス、細胞壁は調味料、食品の賦型剤、ビタミン・ミネラル・核酸成分の原料、培地、飼料微生物等に広く用いられている。近年食物繊維が栄養素として注目されているが、酵母はマンノースやグルコースから構成される難消化性の多糖類を含有しており、特に細胞壁中の含有量が高い。酵母の細胞壁は内層をグルカンを主体とする不溶性多糖類が、外層（表層）をマンナンを主体とする多糖類が占めており、水・溶媒抽出等により酵母菌体からマンナンを採取することが可能である（例えば特許文献１、特許文献２参照）。酵母マンナンは水溶性であり、不溶性の酵母菌体、細胞壁、細胞壁中のグルカン画分と比較して食品等の製造に使いやすい特長を持つ。
【０００７】
微生物由来の多糖類には古くから様々な免疫機能性があることが知られており、抗腫瘍、感染防御、抗アレルギー作用等に関する研究がなされてきた。サッカロミセス酵母の抗アレルギー作用の研究も幾つかなされており、マンナンについては、静脈内投与によるＩ型アレルギー性皮膚炎の改善が報告されている（例えば特許文献３参照）。またマンナンではないものの、サッカロミセス酵母細胞壁の不溶性画分を長期間経ロ摂取させることで、ＩｇＥ抗体の産生が抑えられ、アレルギー性皮膚炎が改善したことが報告されている（例えば特許文献４参照）。しかし前者の研究ではマンナンは経口投与されておらず、またＩｇＥ産生に関する検討がなされていない。さらに後者では酵母細胞壁の不溶性画分が使われており、細胞壁中の有効成分が特定されていない。すなわち現時点で、サッカロミセス酵母由来のマンナンによるＩｇＥ抗体の産生抑制、もしくはＴｈ１／Ｔｈ２バランスの改善、すなわちアレルギー体質の改善に関する報告はない。
【０００８】
【特許文献１】特開平２−２８６０５７号公報
【特許文献２】特開平４−５８８９３号公報
【特許文献３】特公平６−７０２号公報
【特許文献４】特開２００１−５５３３８号公報
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
以上のように社会問題となっているアレルギー疾患を予防・治療するにあたり、食品または食品に準ずるものから有効成分を見いだす必要がある。本発明はサッカロミセス酵母のマンナンの有するＴｈ１／Ｔｈ２バランス改善作用およびＩｇＥ産生抑制作用を利用して、Ｉ型アレルギー疾患の予防・治療に有効なアレルギー体質改善剤、又はアレルギー体質改善機能を持つ食品を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明は上記目的を達成するためになされたもので、サッカロミセス酵母の菌体あるいは培養液より得られるマンナンが、これまで知られていなかったような生理活性を有することを動物実験により確認して本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は、サッカロミセス酵母の菌体あるいは培養液より得られるマンナンを有効成分とするアレルギー体質改善剤、又はアレルギー体質改善免疫機能を持つ食品を提供する。
【００１１】
【発明の実施の形態】
マンナンは、酵母の菌体から抽出しても培養上清から回収しても良い。酵母の菌体から抽出する場合には、サッカロミセス属の酵母菌体を原料として使用し、生菌か死菌か、水分を含んでいるか乾燥されているかは問わない。また酵母から調製した酵母エキスや細胞壁からマンナンを調製しても良い。この場合、酵母エキスや細胞壁には市販品を用いても構わない。サッカロミセス属の代表的な酵母としてはパン酵母やビール酵母があげられるが、使用する酵母はこれらに限定しない。
【００１２】
サッカロミセス酵母の菌体からマンナンを抽出する際には、水または有機溶媒等が用いられ、これらを混合したものを用いても差し支えない。好ましい抽出溶媒は酸性あるいはアルカリ性の水である。抽出は、室温抽出、加熱抽出さらには加圧抽出（オートクレーブ等の処理）等にて行われる。一般的には室温〜１２１℃で行われる。抽出処理後、遠心分離等により固形分と液体を分離して液体部のみを得る。この溶液から塩類をはじめとする不要な低分子成分を除くため、膜処理により低分子画分を除いたり、エタノール等を添加して可溶性糖質を沈殿させ、回収する。膜処理等により不要画分を除いた場合には、必要に応じて減圧濃縮等で濃縮するか、さらに、真空乾燥、凍結乾燥等により粉末化することもできる。粉末化に際して、適当な賦形剤を加えても差し支えない。またエタノール添加等により沈殿させた場合には、含水エタノール等で沈殿を洗浄し、そのまま乾燥・粉末化するか、エタノール等を除去して溶液状態にしても良い。以上の方法により得られたマンナンは一般に８０％以上をマンノース残基が占め、分子量１０００以上の画分が９０％以上を占める。
【００１３】
得られたマンナンは、経口の製品として医薬品として用いることができ、また食品素材と混合して飲食品とすることができる。性状としては固体状または液体状を呈し、医薬品としては経口剤として錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤等の剤型をとる。医薬品として人体に投与するときは、１回あたり１〜１０００ｍｇ（乾燥重量）／ｋｇ体重の量、好ましくは１〜１０００ｍｇ（乾燥重量）／ｋｇ体重の量を、１日に１ないし数回経口投与する。
【００１４】
飲食品とする場合、これと混合する食品素材は固形物（粉状、薄片状、塊状など）、半固形物（ゼリー状、水飴状など）、もしくは液状物等のいずれであっても良い。飲食品１ｇあたりの含有量は、１〜３００ｍｇ（乾燥重量）であることが望ましい。
【００１５】
本発明の酵母のマンナンを含有する医薬品及び飲食品は、アレルギー体質を改善するので、アレルギー疾患の予防及び治療上有効なものである。
【００１６】
【実施例】
以下、本発明を実施例によってさらに具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００１７】
実施例１（サッカロミセス酵母からマンナンの調製）
市販のビール酵母細胞壁（アサヒフード＆へルスケア社）１００ｇを少量の蒸留水に懸濁し、さらに蒸留水を追加して１Ｌの懸濁液とした。水酸化ナトリウムを添加してｐＨ９．０に調整した後、１００℃で４時間煮沸した。室温まで冷却した後、５０００Ｇで１５分間遠心分離を行い上清を回収した。上清を分画分子量１万の透析チューブに入れて透析を行い、チューブ内に残存した溶液を回収した。この溶液を３０〜４０℃において１００〜２００ｍｍＨｇの減圧下で濃縮した後、凍結乾燥により１５ｇの可溶性糖質粉末を得た。硫酸加水分解・高速液体クロマトグラフ法により分析した結果、可溶性糖質に占めるマンノースの割合は９４％（ｗ／ｗ）であった。またゲル浸透クロマトグラフにより分析した示差屈折計のチャートは図１に示した通りであり、分子量１１，６００〜２３，３００の間にマンナン分子の大部分が分布した。
【００１８】
実施例２（錠剤、カプセル剤）
実施例１で調製した粉末                      １０．０ｇ
乳糖                                        ７５．０ｇ
ステアリン酸マグネシウム                    １５．０ｇ
合計                                      １００．０ｇ
上記の各重量部を均一に混合し、常法に従って錠剤、カプセル剤とした。
【００１９】
実施例３（散剤、顆粒剤）
実施例１で調製した粉末                      ２０．０ｇ
澱粉                                        ３０．０ｇ
乳糖                                        ５０．０ｇ．
合計                                      １００．０ｇ
上記の各重量部を均一に混合し、常法に従って散剤、顆粒剤とした。
【００２０】
実施例４（飴）
ショ糖                                      ２０．０ｇ
水飴（７５％固形分）                        ７０．０ｇ
水                                            ９．５ｇ
着色料                                        ０．４５ｇ
香料                                          ０．０４５ｇ
実施例１で調製した粉末                        ０．００５ｇ
合  計                                      １００．０ｇ
上記の各重量部の各成分を用い、常法に従って飴とした。
【００２１】
実施例５（ジュース）
濃縮ミカン果汁                              １５．０ｇ
果糖                                          ５．０ｇ
クエン酸                                      ０．２ｇ
香料                                          ０．１ｇ
色素                                        ０．１５ｇ
アスコルビン酸ナトリウム                      ０．０４８ｇ
実施例１で調製した粉末                        ０．００２ｇ
水                                          ７９．５ｇ
合  計                                    １００．０ｇ
上記の各重量部の各成分を用い、常法に従ってジュースとした。
【００２２】
実施例６（クッキー）
薄力粉                                      ３２．０ｇ．
全卵                                        １６．０ｇ
バター                                      １６．０ｇ
砂糖                                        ２５．０ｇ
水                                          １０．８ｇ
べーキングパウダー                            ０．１９８ｇ
実施例１で調製した粉末                        ０．００２ｇ
合  計                                    １００．０ｇ
上記の各重量部の各成分を用い、常法に従ってクッキーとした。
【００２３】
実施例７（マンナンのＩｇＥ抑制、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランス改善作用）
６週齢の雄性ＢＡＬＢ／ｃ系マウス（日本エスエルシー社）を１群６匹から成る３試験群に分け、それぞれに精製飼料（ＡＩＮ−９３Ｇ）、実施例１で調製した粉末０．３％添加した精製飼料、および実施例１で調製した粉末を１％添加した精製飼料を１４日間自由摂取させた（以降これらの飼料を総称して試験飼料と呼ぶ）。各マウスに１Ｏμｇの卵自アルブミンと４．５ｍｇの水酸化アルミニウムを背中皮下投与して免疫した後、試験飼料による飼育を１４日間継続し、再度同じ方法で免疫した。さらに試験飼料による飼育を１４日間行った後マウスから血液と脾細胞を採取した。対照として免疫を施していないＢＡＬＢ／ｃマウス（以降非免疫マウスと呼ぶ）を使用した。血液は直ちに遠心分離により血漿と血球に分離し、血漿を回収して以降の分析まで凍結保存した。
【００２４】
２×１０６の脾細胞を４８穴ウェルプレートに入れ、５０μｇ／ｍＬの卵白アルブミンを含む培地中で４８時間培養した。培養液から遠心分離により培養上清のみを採取し、以降の分析まで凍結保存した。
【００２５】
血漿中のＩｇＥ濃度、および培養上清中のインターフェロンγとインターロイキン４の濃度を市販のＥＬＩＳＡキット（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社）により測定した。
【００２６】
表１が示す通り、マンナンの投与により血漿中のＩｇＥ濃度と、ＩｇＥ産生を高めるとされるインターロイキン４（Ｔｈ２）の産生が用量依存的に抑制された（表２）。その一方でインターロイキン４を抑えるとされるインターフェロンγ（Ｔｈ１）の産生が増強され、結果としてＴｈ１／Ｔｈ２のバランスが改善された（表３）
【００２７】
2004224772.tif 000002
【００２８】
2004224772.tif 000003
【００２９】
2004224772.tif 000004
【００３０】
【発明の効果】
本発明によれば、サッカロミセス酵母のマンナンを原料として、アレルギー体質改善作用を有する物質を得ることができた。更にこれを、医薬品や飲食品の材料として容易に利用することができた。
【図面の簡単な説明】
【図１】マンナンのゲル浸透クロマトグラフ・チャート。図中のマーカー（○）は、左から分子量２７３，０００、１１，６００、５０４、１８０である。
【図１】
2004224772.tif 000005