(57)【要約】【課題】Ｚ型ＤＮＡをより効果的に安定化し得る新規なモノマーユニットと、該モノマーユニットをオリゴヌクレオチドに組み込むための試薬、並びに該試薬を用いたＺ型ＤＮＡの安定化方法の提供。【解決手段】下記一般式［１］【化１】2004262791.tif 000006（式中、Ｒ１はアシル基を表し、Ｒ２は低級アルキル基を表し、Ｒ３はトリ置換シリルオキシ基又はテトラヒドロピラニルオキシ基を表し、Ｒ４はシアノエチル基又はアリル基を表す。）で示されるグアノシン誘導体及び該グアノシン誘導体を含んでなるＺ型ＤＮＡを安定化するための試薬、並びに該グアノシン誘導体を用いる、Ｚ型ＤＮＡの安定化方法。更には、該グアノシン誘導体を用いる、８位に低級アルキル基を有するグアノシンのオリゴヌクレオチドへの導入方法、並びに８位に低級アルキル基を有するグアノシンを導入してなるオリゴヌクレオチド。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式［１］
【化１】
2004262791.tif 000005
（式中、Ｒ１はアシル基を表し、Ｒ２は低級アルキル基を表し、Ｒ３はトリ置換シリルオキシ基又はテトラヒドロピラニルオキシ基を表し、Ｒ４はシアノエチル基又はアリル基を表す。また、ＤＭＴｒはジメトキシトリチル基を表す。）で示されるグアノシン誘導体。
【請求項２】
一般式［１］において、Ｒ２がメチル基である請求項１に記載のグアノシン誘導体。
【請求項３】
一般式［１］において、Ｒ１がイソブチリル基であり、Ｒ２がメチル基であり、Ｒ３がｔ−ブチルジメチルシリルオキシ基であり、Ｒ４がシアノエチル基である請求項１に記載のグアノシン誘導体。
【請求項４】
請求項１〜３の何れかに記載のグアノシン誘導体を含んでなる、Ｚ型ＤＮＡを安定化するための試薬。
【請求項５】
請求項１〜３の何れかに記載のグアノシン誘導体を用いることを特徴とする、Ｚ型ＤＮＡの安定化方法。
【請求項６】
請求項１〜３の何れかに記載のグアノシン誘導体を用いることを特徴とする、８位に低級アルキル基を有するグアノシンのオリゴヌクレオチドへの導入方法。
【請求項７】
８位に低級アルキル基を有するグアノシンを導入してなるオリゴヌクレオチド。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、例えば、Ｚ型ＤＮＡを安定化するための試薬等として有用な新規なグアノシン誘導体と、これを用いたＺ型ＤＮＡの安定化方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
Ｚ型ＤＮＡは約３０年前に発見された左巻きのＤＮＡ構造を有するヌクレオチドであるが、その生物学的な役割は未だ不明である。その理由は、溶液中で安定に左巻きを取らせることが、研究用に用いる６−２０量体程度の長さでは難しいためにある。従って、Ｚ型ＤＮＡを研究するためにはＺ型ＤＮＡを安定化するモノマーユニットの開発が必要である。
本発明者らは、先にデオキシ型の８−メチルグアノシン（ＭｅＧ）によって、Ｚ型ＤＮＡが安定化されることを見出し、文献等により報告している（例えば、非特許文献１参照。）。また、このデオキシ型の８−メチルグアノシンを用いてこれまで種々の研究を行ってきた（例えば、非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４等参照。）。
この８−メチルデオキシグアノシンの使用により、これまで極めて困難であったＺ型ＤＮＡの安定化が取り敢えず可能になった。しかしながら、未だ充分と言うまでには到っておらず、Ｚ型ＤＮＡをより効果的に安定化するモノマーユニットを探索する、更なる検討が待たれている現状にある。
【０００３】
【非特許文献１】
Ｓｕｉｙａｍａ，Ｈ．；Ｋａｗａｉ，Ｋ．；Ｍａｔｓｕｎａｇａ，Ａ，；Ｆｕｊｉｍｏｔｏ，Ｋ．；Ｓａｉｔｏ，Ｉ．；
Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｈ．；Ｗａｎｇ，Ａ．Ｈ．−Ｊ．，”Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍ
ｉｃ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ８−Ｍｅｔｈｙｌｇｕａｎｉｎｅ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ
Ｚ−ＤＮＡ  ｕｎｄｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓａｌｔ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．”；  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ
．，１９９６，２４，１２７２．
【非特許文献２】
Ｋａｗａｉ，Ｋ．；Ｓａｉｔｏ，Ｉ．；Ｓｕｇｉｙａｍａ，Ｈ．，”Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｐｈｏｔｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ５−Ｈａｌｏｕｒａｃｉｌ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ＤＮＡ：Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｃｉｆｉｃ  ２’α−
Ｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｓｅ  ｉｎ  Ｚ−ｆｏｒｍ  ＤＮＡ．”；Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．
１９９９，１２１，１３９１−１３９２．
【非特許文献３】
Ｋａｗａｉ，Ｋ．；Ｓａｉｔｏ，Ｉ．；Ｋａｗａｓｈｉｍａ，Ｅ．；Ｉｓｈｉｄｏ，Ｙ．；Ｓｕｇｉｙａｍａ，Ｈ．，”Ｉｎｔｒａｓ
ｔｒａｎｄ  ２’β−  Ｈｙｄｒｏｇｅｎ  Ａｂｓｔｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ５’−Ａｄｊａｃｅｎｔ  Ｄｅｏｘｙ  ｇｕａｎｏｓ
ｉｎｅ  ｂｙ  Ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎ−５−ｙｌ  ｉｎ  Ｚ−ｆｏｒｍ  ＤＮＡ．”；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ
１９９９，４０，２５８９−２５９２．
【非特許文献４】
Ｏｙｏｓｈｉ，Ｔ．；Ｋａｗａｉ，Ｋ．；Ｓｕｇｉｙａｍａ  Ｈ．，”Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ｃ２’α−Ｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｉ
ｏｎ  ｏｆ  Ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｓｅ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｚ−Ｆｏｒｍ  ＤＮＡ．”；Ｊ．  Ａｍ．
Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，２００３，１２５，１５２６−１５３１．
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記した如き現状に鑑みなされたもので、Ｚ型ＤＮＡをより効果的に安定化し得る新規なモノマーユニットと、該モノマーユニットをオリゴヌクレオチドに組み込むための試薬、並びに該試薬を用いたＺ型ＤＮＡの安定化方法を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明は、下記一般式［１］
【化２】
2004262791.tif 000002
（式中、Ｒ１はアシル基を表し、Ｒ２は低級アルキル基を表し、Ｒ３はトリ置換シリルオキシ基又はテトラヒドロピラニルオキシ基を表し、Ｒ４はシアノエチル基又はアリル基を表す。）で示されるグアノシン誘導体に関する
【０００６】
また、本発明は、上記グアノシン誘導体を含んでなる、Ｚ型ＤＮＡを安定化するための試薬に関する。
【０００７】
更に、本発明は、上記グアノシン誘導体を用いることを特徴とする、Ｚ型ＤＮＡの安定化方法に関する。
【０００８】
更にまた、本発明は、上記グアノシン誘導体を用いることを特徴とする、８位に低級アルキル基を有するグアノシンのオリゴヌクレオチドへの導入方法に関する。
【０００９】
また、本発明は、８位に低級アルキル基を有するグアノシンを導入してなるオリゴヌクレオチドに関する。
【００１０】
即ち、本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、グアノシンの８位にメチル基を導入した８−メチルグアノシンが、前記８−メチルデオキシグアノシン（ＭｅＧ）に比べ、数倍強力にＺ型ＤＮＡを安定化することを見出し本発明を完成するに到った。
【００１１】
【発明の実施の形態】
上記一般式［１］において、Ｒ１で表されるアシル基としては、アミノ基の修飾基としてこの分野で通常使用されているアシル基であればどのようなものでもよいが、例えば、イソブチリル基、ベンゾイル基、４−（ｔ−ブチル）ベンゾイル基等、嵩高いアシル基が好ましいものとして挙げられる。
また、Ｒ２で表される低級アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基等、炭素数１〜４の低級アルキル基が好ましいものとして挙げられるが、合成のし易さ等の点から、メチル基が特に好ましい。
上記一般式［１］において、Ｒ３で表されるトリ置換シリルオキシ基としては、例えば、ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ基、トリイソプロピルシリルオキシ基、トリフェニルシリルオキシ基等、嵩高いトリ置換シリルオキシ基が好ましいものとして挙げられる。
【００１２】
上記一般式［１］で示される本発明のグアノシン誘導体は、Ｚ型ＤＮＡを安定化するモノマーユニットとして極めて有用である。
即ち、上記一般式［１］で示される本発明のグアノシン誘導体を用いることにより、Ｚ型ＤＮＡを強力に安定化することが出来る。
より詳しくは、本発明のグアノシン誘導体を用いて、ＤＮＡ固相合成法により、８位に低級アルキル基を有するグアノシンをＤＮＡへ導入することにより、Ｚ型ＤＮＡを安定化させることが出来る。
因みに、一般式［１］において、Ｒ１がイソブチリル基であり、Ｒ２がメチル基であり、Ｒ３がｔ−ブチルジメチルシリルオキシ基であり、Ｒ４がシアノエチル基である本発明のグアノシン誘導体を用いて、８−メチルグアノシンを各種オリゴヌクレオチドに導入したものは、同様の手法で８−メチルデオキシグアノシンを各種オリゴヌクレオチドに導入したものと比べて、Ｂ−Ｚ転位中点が著しく低下し、数倍〜数十倍も安定化効果があることが判った。
【００１３】
本発明のグアノシン誘導体の製造法を一般式［１］において、Ｒ１がイソブチリル基であり、Ｒ２がメチル基であり、Ｒ３がｔ−ブチルジメチルシリルオキシ基であり、Ｒ４がシアノエチル基であるグアノシン誘導体の場合を例にして、反応スキームで示すと以下のようになる。
【００１４】
【化３】
2004262791.tif 000003
【００１５】
上記反応スキーム中、
ａ）の工程は、ピリジン中、トリメチルシリルクロライド、次いで、無水イソ酪酸を作用させる。
ｂ）の工程は、水溶媒中、Ｈ２ＳＯ４、ＦｅＳＯ４、ｔ−ブチルハイドロパーオキサイドを作用させる。
ｃ）の工程は、ピリジン中、ジメトキシトリチルクロライド、トリエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジンを作用させる。
ｄ）の工程は、ジクロロメタン中、イミダゾールと２’−ｔ−ブチルジメチルシリルクロライドを作用させる。
ｅ）の工程は、ジクロロメタン中、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミンと２−シアノエチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルフォスフォロアミダイトを作用させる。
なお、詳細は、後記実施例の項参照。
【００１６】
なお、上記ｂ）の工程はグアノシンの８位のメチル化の工程であるが、ここでは、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ３０，２６７７−２６８２（１９７４）に記載の方法を採用しているが、グアノシンの８位のアルキル化は、メチル化を含め、以下の方法によっても可能である。即ち、リボースの水酸基を例えばｔ−ブチルジメチルシリル基等で保護した後、リチウム  ジイソプロピルアミン（ＬＤＡ）で８位をリチオ化し、次いで、これを適当なアルキルハライドと反応させれば選択的にアルキル基が導入できる。従って、他のアルキル基を導入する場合はこの方法で行えばよい［Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．３５，７２−７９（１９８７）参照。］。勿論、メチル基を導入する場合もこちらの方法で行ってもよい。
【００１７】
本発明のグアノシン誘導体を用いて、８位に低級アルキル基を有するグアノシンをオリゴヌクレオチドへ組み込む方法としては、市販のＤＮＡ合成機を使用したＤＮＡオリゴマーの固相合成法が挙げられる。操作手順等はそれぞれのＤＮＡ合成機に添付されているプロトコールに従ってこれを行うことで足りる。
【実施例】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら限定されるものではない。
【００１８】
実施例１  ８−メチル−Ｎ−イソブチリル−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−ｔ−ブチルジメチルシリル−グアノシン−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルフォスフォロアミダイト（化合物５）（一般式［１］において、Ｒ１がイソブチリル基、Ｒ２がメチル基、Ｒ３がｔ−ブチルジメチルシリルオキシ基、Ｒ４がシアノエチル基であるグアノシン誘導体）の合成
（１）Ｎ−イソブチリル−グアノシン（化合物１）の合成
グアノシン（７ｇ，２５ｍｍｏｌ）を、ピリジンで３回乾燥させ、ピリジン（１４０ｍＬ）中で、１７．５ｍＬ（１２５ｍｍｏｌ）のトリメチルシリルクロライドを加えて、２時間撹拌した後、２１ｍＬ（１２５ｍｍｏｌ）の無水イソ酪酸を加えて室温で４時間撹拌反応させた。反応後、氷冷しながら、水（３５ｍＬ）を加えて１５分間撹拌した後、２９％アンモニア水（３５ｍＬ）を加えて１０分間撹拌した。減圧濃縮して溶媒を溜去した後、２００ｍＬのジクロロメタンで抽出し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：メタノール／ジクロロメタン＝２／８）で精製し、化合物１を３．６ｇ得た（収率３９％）。
得られた化合物のスペクトルデータを以下に示す。
１Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ８．２４  （ｓ，  １Ｈ，  Ｈ−８），  ５．８０  （ｍ，  １Ｈ，  １’），  ４．４２  （ｍ，  １Ｈ，  ２’），  ３．８８  （ｍ  ４’），  ４．０８  （ｍ，  １Ｈ，  ３’），  ３．３３  （ｍ，  ２Ｈ，  ５’），  ２．７７  （  ｍ，  １Ｈ，  ｉｓｏｂｕｔｙｒｙｌ  ＣＨ  ），  １．１２  （ｄ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７Ｈｚ，  ２ＣＨ３）ｐｐｍ。
【００１９】
（２）８−メチル−Ｎ−イソブチリル−グアノシン（化合物２）の合成
（１）で得られた化合物１（１ｇ，２．６ｍｍｏｌ）とＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ（６．７ｇ，２４．１ｍｍｏｌ）を含むＨ２ＳＯ４（１Ｎ）溶液１６０ｍＬに７０％ｔ−ブチルハイドロパーオキサイド（９．５ｍｍｏｌ）を含む１００ｍＬ水溶液を５分間で滴下し、０℃で１時間反応後、ＫＯＨ飽和水溶液で中和した。遠心分離により得られた上澄み液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：メタノール／ジクロロメタン＝１／９）で精製し、化合物２を０．４ｇ得た（収率４１％）。
得られた化合物のスペクトルデータを以下に示す。
１Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ５．８１  （ｍ，  １Ｈ，  １’），  ４．３２  （ｍ，  １Ｈ，  ２’），  ３．８６  （ｍ  ４’），  ４．１２  （ｍ，  １Ｈ，  ３’），  ３．２９  （ｍ，  ２Ｈ，  ５’），  ２．７８  （  ｍ，  １Ｈ，  ｉｓｏｂｕｔｙｒｙｌ  ＣＨ  ），  ２．４７（ｓ、３Ｈ、−８ＣＨ３）１．１１  （ｄ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７Ｈｚ，  ２ＣＨ３）ｐｐｍ。
【００２０】
（３）８−メチル−Ｎ−イソブチリル−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−グアノシン（化合物３）の合成
（２）で得られた化合物２（５００ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を、ピリジンで３回乾燥させ、ピリジン（１５ｍＬ）中で、７００ｍｇ（３．７ｍｍｏｌ）のジメトキシトリチルクロライド（ＤＭＴｒＣｌ）、０．３ｍＬ（２．１ｍｍｏｌ）のトリエチルアミン、４．２ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）の４−ジメチルアミノピリジンを加えて室温で一晩撹拌反応させた。反応後、反応液に５％のＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍｌ）を氷冷しながら加えた後、６０ｍＬのジクロロメタンで抽出し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：メタノール／ジクロロメタン＝３／９７）で精製して化合物３を０．５ｇ得た（収率６０％）。
得られた化合物のスペクトルデータを以下に示す。
１Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ５．８１  （ｍ，  １Ｈ，  １’），  ４．３２  （ｍ，  １Ｈ，  ２’），  ３．８６  （ｍ  ４’），  ４．１２  （ｍ，  １Ｈ，  ３’），  ３．２９  （ｍ，  ２Ｈ，  ５’），  ２．７８  （  ｍ，  １Ｈ，  ｉｓｏｂｕｔｙｒｙｌ  ＣＨ  ），  ２．４７（ｓ、３Ｈ、−８ＣＨ３）１．１１  （ｄ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７Ｈｚ，  ２ＣＨ３）ｐｐｍ。
【００２１】
（４）８−メチル−Ｎ−イソブチリル−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−ｔ−ブチルジメチルシリル−グアノシン（化合物４）の合成
（３）で得られた化合物３（１ｇ、１．４ｍｍｏｌ）とイミダゾール（２３８ｇ，３．５ｍｍｏｌ）を含むジクロロメタン溶液２５ｍＬに２’−ｔ−ブチルジメチルシリルクロライド（２５２ｍｇ）を加えて２０℃で１６時間撹拌反応させた。  反応後、反応液に１０％ＮａＨＣＯ３水溶液３０ｍｌを加えた後、４０ｍＬのジクロロメタンで抽出し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル＝５／１）で精製して化合物４を０．３ｇ得た（収率３０％）。
得られた化合物のスペクトルデータを以下に示す。
１Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ７．２０−７．３９  （ｍ，  ９Ｈ，  ｐｈ），  ６．８９  （ｄ，  ４Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．５Ｈｚ，  ｐｈ），  ４．９６  （ｍ，  １Ｈ，  １’），  ４．１６  （ｍ，  １Ｈ，  ３’），  ３．７４  （ｓ，  ６Ｈ，  ２ＣＨ３），  ３．１８  （ｍ，  ２Ｈ，  ５’），  ３．０２  （ｍ，  １Ｈ  ６’），  ２．７７  （ｍ，  １Ｈ，  ｉｓｏｂｕｔｙｒｙｌ  ＣＨ），  ２．１４  （ｍ，  １Ｈ，  ２’），  ２．０５  （ｍ，  ２Ｈ，  ２’’  ａｎｄ  ４’），  １．８８  （ｓ，  ３Ｈ，  −８ＣＨ３），  １．６２  （ｍ，  １Ｈ，  ６’’），  １．１０  （ｄ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ７Ｈｚ，  ２ＣＨ３）ｐｐｍ。
【００２２】
（５）８−メチル−Ｎ−イソブチリル−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−ｔ−ブチルジメチルシリル−グアノシン−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルフォスフォロアミダイト（化合物５）の合成
（４）で得られた化合物４（３００ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）をゴムシールドボトルに入れ、密封した後乾燥アセトニトリル３ｍＬを加え、針を通じて減圧しアセトニトリルを蒸発させ水を共沸させた。乾燥ジクロロメタン３ｍＬをシリンジで注入し、乾燥Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．４５ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）と２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルフォスフォロアミダイト（０．２５ｍＬ、１ｍｍｏｌ）を加えて室温で一晩撹拌反応させた。反応後、反応液に１０％ＮａＨＣＯ３水溶液１０ｍｌを加えた後、２０ｍＬのジクロロメタンで抽出し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、シリカゲルカラムクロマトグフィー（展開溶媒：ヘキサン／アセトン／トリエチルアミン＝４９／４９／２）で精製して化合物５を２４０ｍｇ得た（収率６０％）。
得られた化合物のスペクトルデータを以下に示す。
ＥＳＩＭＳ（ｍ／ｅ）Ｃ５２Ｈ７５Ｎ７０９ＰＳｉとして：計算値（Ｍ＋Ｈ）１０００．５。実測値１０００．８。（ＰＥ  ＳＣＩＥＸ  ＡＰＩ  １６５を用いて測定）
【００２３】
実施例２  ＤＮＡオリゴマーの固相合成
実施例１で得られた化合物５（２００ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）をゴムシールドボトルに入れ、乾燥アセトニトリル２ｍＬを加え減圧して蒸発させた後、０．３ｍＬの乾燥アセトニトリを加えて溶解し、ＯＬＩＧＯ  １０００  ＤＮＡ合成機（ベックマン社製）に取り付け、オリゴヌクレオチドｄ（ＣＧＣＭｅｒＧＣＧ）、ｄ（ＣＭｅｒＧＣＡＣＭｅｒＧＣＧ）及びｄ（ＣＭｅｒＧＣＡＴＭｅｒＧＴＧ）  をＤＮＡ合成機に添付されたプロトコールに従って合成した。
合成したオリゴヌクレオチドの組成と濃度は、酵素分解によってモノヌクレオシドに加水分解することによって確認した。
なお、上記オリゴヌクレオチドの式中、ＭｅｒＧは８−メチルグアノシンを表す。
【００２４】
実施例３  円二色性分光実験（Ｃｉｒｃｕｌａｒ  Ｄｉｃｈｒｏｉｓｍ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ）
実施例２で得られた３種のオリゴヌクレオチドについて、円二色性スペクトル解析を円二色性分光計ＡＶＩＶ  ＭＯＤＥＬ６２  ＤＳ／２０２  ＣＤ  ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（アビブ社製）を用いて測定した。オリゴヌクレオチド（濃度：０．１５ｍＭベース濃度、５ｍＭ  カコジル酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ  ７．０）のＣＤ（円二色性分光）スペクトルは種々のＮａＣｌ濃度において１ｃｍの長さセルを使用して測定した。結果を図１に示す。
図１の（ａ）は、オリゴヌクレオチド５’−ＣＧＣＭｅｒＧＣＧ−３’についてのＣＤスペクトルの結果を、（ｂ）は、オリゴヌクレオチド５’−ＣＭｅｒＧＣＡＣＭｅｒＧＣＧ−３’についてのＣＤスペクトルの結果を、（ｃ）は、オリゴヌクレオチド５’−ＣＭｅｒＧＣＡＴＭｅｒＧＴＧ−３’についてのＣＤスペクトルの結果をそれぞれ示す。
【００２５】
また、塩濃度を変化させ、ＣＤスペクトルを測定してＢ−Ｚ転移の中点のＮａＣｌ濃度を求めた。結果を表１に示す、また、比較のため、８−メチルグアノシン（ＭｅｒＧ）の代りに８−メチルデオキシグアノシン（ＭｅＧ）が導入されたオリゴヌクレオチドについて同様に測定した結果も表１に併せて示す。
なお、表１中、ＭｅＧは８−メチルデオキシグアノシンを表し、ＭｅｒＧは８−メチルグアノシンを表す。
【００２６】
【表１】
2004262791.tif 000004
【００２７】
表１から明らかなように、各種オリゴヌクレオチドに８−メチルグアノシンを組み込むことにより、何れの場合も、転移中点が著しく低下し、非常に低い塩濃度でもＺ型ＤＮＡを安定化することが判る。その理由としては、グアノシンの８位にメチル基を導入すると、その塩基がｓｙｎの配向をとり易くなり、更に、糖の２’位に水酸基を導入することにより親水性が高まり、糖のパッカリングがＣ３’ｅｎｄｏコンホメーションをとることによって更に安定化するためであると考えられる。
【００２８】
【発明の効果】
本発明は、Ｚ型ＤＮＡをより効果的に安定化し得る新規なモノマーユニットである８−メチルグアノシンと、これをオリゴヌクレオチドに組み込むための試薬である一般式［１］で示されるグアノシン誘導体と、これを用いたＺ型ＤＮＡの安定化方法を提供するものであり、本発明に係るグアノシンの８位にメチル基を導入した８−メチルグアノシンは、従前から知られている８−メチルデオキシグアノシン（ＭｅＧ）に比べ、数倍強力にＺ型ＤＮＡを安定化することが出来るので、Ｚ型ＤＮＡを研究する上で画期的なツールとなることが予想される。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、実施例３で得られた、本発明に係る３種のオリゴヌクレオチドについての円二色性分光（ＣＤ）スペクトルである。
【図１】
2004262791.tif 000007