(57)【要約】【課題】有効なアトピー性皮膚炎治療薬評価法を確立する。【解決手段】モデル動物に治療薬候補及びハプテンを同時ではなく任意の順で適用し、そのモデル動物の皮膚組織の浮腫反応に従って該治療薬候補の可否を判定するステップ、卵白アルブミンに感作したモデル動物に、治療薬候補及び卵白アルブミンを同時ではなく任意の順で適用し、そのモデル動物の皮膚組織の好酸球浸潤反応に従って該治療薬候補の可否を判定するステップ、及びモデル動物に治療薬候補及びレチノイン酸を同時ではなく任意の順で適用し、そのモデル動物の皮膚組織の肥満細胞増多反応に従って該治療薬候補の可否を判定するステップ、を含む、アトピー性皮膚炎治療薬を評価する方法。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
モデル動物に治療薬候補及びハプテンを同時ではなく任意の順で適用し、そのモデル動物の皮膚組織の浮腫反応に従って該治療薬候補の可否を判定するステップ、
卵白アルブミンに感作したモデル動物に、治療薬候補及び卵白アルブミンを同時ではなく任意の順で適用し、そのモデル動物の皮膚組織の好酸球浸潤反応に従って該治療薬候補の可否を判定するステップ、及び
モデル動物に治療薬候補及びレチノイン酸を同時ではなく任意の順で適用し、そのモデル動物の皮膚組織の肥満細胞増多反応に従って該治療薬候補の可否を判定するステップ、
を含む、アトピー性皮膚炎治療薬を評価する方法。
【請求項２】
上記モデル動物がいずれもマウスである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
上記ハプテンが２，４−ジニトロフルオロベンゼン、塩化ピクリル、ジニトロクロロベンゼン、オキサゾロン及びトルエンジイソシアネートから選ばれる１種以上である、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、アトピー性皮膚炎治療薬評価法に関する。より具体的には、アトピー性皮膚炎の特徴をつかんだ３つの動物モデルを組み合わせたことを特徴とする、アトピー性皮膚炎治療薬評価法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
アトピー性皮膚炎の発症機序
アトピー性皮膚炎の急性病変の発症は次のとおりと考えられている。即ち、皮膚バリア機能の低下した皮膚からダニ等の抗原が侵入すると、肥満細胞を中心としたＩ型アレルギー反応が惹起される。この即時相の炎症反応は、肥満細胞より放出されるヒスタミンやロイコトリエンなどのケミカルメディエータにより誘発され、湿疹病変が形成される。
さらに引き続く遅発相反応においては、皮内に多くの好酸球が浸潤し、これにより、さらに皮膚炎が増悪化する。
また、この急性期の炎症は慢性病変へとシフトしていく。慢性の苔癬化病変では、免疫学的に急性病変であるＩ型アレルギー反応とは全く逆のＩＶ型アレルギー反応の様相を示す。病理学的には表皮の肥厚、肥満細胞の増多反応が見られ、かゆみの閾値の低下等を引き起こし、慢性病変を形成する。
このように、以前は、アトピー性皮膚炎は、ヘルパーＴ細胞のＴｈ２細胞優位の疾患、即ち、花粉症のような単なるＩ型アレルギー疾患であると考えられていたが、近年、アトピー性皮膚炎の病態の解明が進んだ結果、アトピー性皮膚炎の慢性病変においては、Ｉ型アレルギーとは免疫学的に全く異なるＩＶ型アレルギーの発症が病態形成に重要であることが明らかになってきた。従って、アトピー性皮膚炎は様々な病態が複雑に絡み合った複合病態であり、１つの動物モデルのみでアトピー性皮膚炎の病態や性質を表現するのは困難と考えられる。
非特許文献１には、マウスの耳介に２，４−ジニトロフルオロベンゼンを塗布し、生じたアレルギー性の皮膚炎症反応の程度をマウスの耳介の厚みを計測することによって評価する方法が記載されている。
非特許文献２には、卵白アルブミン溶液及び水酸化アルミニウムゲル（アラム）を実験第１、５、１４、２１日にマウスの腹腔内投与するとともに、実験第２２日から第２９日まで毎日、卵白アルブミン溶液をマイクロピペットを用いてマウスの鼻腔に滴下してマウスを感作した後、実験第３１日に卵白アルブミン溶液をマウスの鼻腔に滴下することにより鼻アレルギー反応の誘発を行い、その直後１０分間のマウスのくしゃみの回数を数えて抗原惹起症状を判定する方法が記載されている。
非特許文献３には、レチノイン酸がｉｎ  ｖｉｖｏで皮膚のｍａｓｔ  ｃｅｌｌを増加させることが記載されている。
非特許文献４には、４週齢のメスのＮＣ／Ｎｇａマウスに、ステロイドの一種であるクロベタゾールプロピオネートを経皮投与した後、ハプテンである２，４，６−トリニトロクロロベンゼンを用いて皮膚炎症反応を誘発させ、常法に従い、その病理組織のヘマトキシリン−エオシン染色試料を作成して、組織病理学的に観察したことが記載されている。
【０００３】
【非特許文献１】
ＮＡＧＡＩ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＰＥＴ  ２８８：４３−５０，１９９９
【非特許文献２】
ＯＧＡＳＡＷＡＲＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ａｒｃｈ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９９；１１８：３７−４３
【非特許文献３】
ＫＡＴＡＹＡＭＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ９  （１９９５）  ２７−３５
【非特許文献４】
2004163245.tif 000002
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、アトピー性皮膚炎に対して有効な薬剤を選択するために、アトピー性皮膚炎治療薬評価法を確立することを課題としてなされたものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、アトピー性皮膚炎の特徴をつかんだ３つの動物モデル、即ち、
第１のモデルとしてハプテンを使用する、モデル動物ハプテン適用浮腫モデル、
第２のモデルとして卵白アルブミン（ＯＶＡ）惹起モデル動物皮膚好酸球浸潤モデル、
第３のモデルとしてレチノイン酸誘導によるモデル動物肥満細胞増多モデル、を組み合わせることで、アトピー性皮膚炎治療薬評価法を確立したのである。
【０００６】
ハプテン適用浮腫誘発動物モデル
第１のモデルであるハプテン適用浮腫誘発動物モデルは、アトピー性皮膚炎における湿疹病変、浮腫反応を再現するモデルである。
このモデルを用いたスクリーニングは、モデル動物に治療薬候補及びハプテンを同時ではなく任意の順で適用し、そのモデル動物の皮膚組織の浮腫反応に従って該治療薬候補の可否を判定することにより行う。
本発明において、治療薬候補とは、本発明に係る評価法に供する単独の化合物又は複数の化合物の混合物をいう。該混合物には、有効成分以外の成分が含まれていてもよい（例、天然産物のエキス、生薬）。
モデル動物に対する治療薬候補の適用は、例えば、経口投与によって行うことができる。治療薬候補の適用量は、例えば、モデル動物体重（ｋｇ）当たり０．１から１，０００ｍｇ程度である。治療薬候補は１回だけでなく複数回適用することもできる。治療薬候補を複数回適用する場合の時間間隔は、例えば、６〜２４時間であり、回数は２〜５回程度であるが、これらに限定されるものではない。
ハプテンとは、それ自身は抗原ではないが、より大きな抗原分子（通常はタンパク）と接合すると、特異性のある抗体と反応することができ、そのような抗体の形成を誘発することができる低分子をいう。
ハプテンには、２，４−ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ），塩化ピクリルなどが含まれる。
モデル動物に対するハプテンの適用は、例えば、塗布によって行うことができる。塗布は、適当な時間間隔で適当な回数繰り返し行ってもよい。ハプテンの適用量は、例えば、ハプテンの０．１％溶液なら２５μｌ／ｓｉｔｅ程度である。ハプテンの適用の時間間隔は、例えば、１週間に１回程度であり、繰り返し回数は５回程度であるが、これらに限定されるものではない。ハプテンをモデル動物の耳介に塗布して耳浮腫を引き起こすことが好ましい。シックネスゲージを使用して耳介の厚みを測定することにより、浮腫反応の評価を容易かつ客観的に行うことができるからである。測定は、例えば、浮腫反応惹起前から惹起後３６時間後までとすることができ、その時間間隔は、例えば、１〜６時間程度である。
治療薬候補の適用とハプテンの適用の順序は任意に決定することができる。
治療薬候補の可否を判定する方法は、合理的な判断力を有する者が浮腫の状態を観察し、一定の蓋然性をもって治療薬候補の可否を決定できる方法であれば、特に制限されない。皮膚症状の観察は、例えば、肉眼による炎症スコアー、病理組織学的な所見、血清生化学的な検査、皮膚バリア機能の測定により行うことができる。具体例としては、判定すべき浮腫の状態を標準的な浮腫の状態の写真と比べ合わせて合否を決める方法や判定すべき浮腫の状態を等級に分けた標準的な浮腫の状態の写真と比べ合わせて等級付けを行い、一定等級以上を合格とする方法などが採用できる。また、ハプテンをモデル動物の耳介に塗布して耳浮腫を引き起こす場合には、シックネスゲージを使用して耳介の厚みを測定することにより、浮腫反応の評価を一層容易かつ客観的に行うことができる。
モデル動物としてはマウス、ラット、モルモットが好ましい。特に好ましくはマウスがよい。
【０００７】
ＯＶＡ惹起皮膚好酸球浸潤動物モデル
第２のモデルである卵白アルブミン（ＯＶＡ）惹起皮膚好酸球浸潤動物モデルは、肥満細胞が強く関与して発症するＩ型アレルギーの遅発相反応に誘発される、皮膚の好酸球浸潤反応を再現するものである。好酸球は、アトピー性皮膚炎の急性期（遅発相反応）の炎症反応において増悪化に関与する細胞である。
このモデルを用いたスクリーニングは、卵白アルブミンで感作したモデル動物に、治療薬候補及び卵白アルブミンを同時ではなく任意の順で適用し、そのモデル動物の皮膚組織の好酸球浸潤反応に従って該治療薬候補の可否を判定することにより行う。
卵白アルブミン感作動物モデルの作成は、モデル動物に卵白アルブミン−アラムを適当な回数投与することにより行うことができる。卵白アルブミン−アラムはモデル動物の腹腔内に投与するのが好ましい。投与回数は４回前後が適当であるが、これに限定されるわけではない。適用量は、例えば、卵白アルブミン−アラム溶液（卵白アルブミン５μｇ／アラム５ｍｇ／ｍＬ）なら２００μｌ程度である。
モデル動物に対する治療薬候補の適用は、例えば、経口投与によって行うことができる。治療薬候補の適用量は、例えば、モデル動物の体重（ｋｇ）当たり０．１から１，０００ｍｇ程度である。治療薬候補は１回だけでなく複数回適用することもできる。治療薬候補を複数回適用する場合の時間間隔は、例えば、１〜２４時間であり、回数は２〜１０回程度であるが、これらに限定されるものではない。
好酸球浸潤反応の惹起は、例えば、最終感作の数日後（例えば５〜１０日後）に、モデル動物の背部皮膚に卵白アルブミンを皮内注射することで行うことができる。
治療薬候補の適用と卵白アルブミンの適用の順序は任意に決定することができる。
適用量は、例えば、卵白アルブミンが１〜１００μｌ／ｍｌなら５０μｌ／ｓｉｔｅ程度である。
治療薬候補の可否を判定する方法は、上記ハプテン適用浮腫誘発動物モデルの項において述べた方法と同様である。病理組織の観察のため、好酸球を特異的に染色することが好ましい（例えば、Ｌｕｎａ染色）。皮膚の単位表面積又は断面積当たりの好酸球を計数することにより、好酸球浸潤反応の評価を容易かつ客観的に行うことができるからである。
モデル動物としてはマウス、ラット、モルモットが好ましい。特に好ましくはマウスがよい。
【０００８】
レチノイン酸誘導による肥満細胞増多動物モデル
レチノイン酸誘導による肥満細胞増多動物モデルは、アトピー性皮膚炎の苔癬化病変等の慢性病変における肥満細胞の増多を再現するモデルである。皮膚における肥満細胞の増多は、皮膚炎発症を容易にするばかりでなく、かゆみの閾値の低下をも引き起こしてしまう。
このモデルを用いたスクリーニングは、モデル動物に治療薬候補及びレチノイン酸を同時ではなく任意の順で適用し、そのモデル動物の皮膚組織の肥満細胞増多反応に従って該治療薬候補の可否を判定することにより行う。
モデル動物に対する治療薬候補の適用は、例えば、経口投与によって行うことができる。治療薬候補の適用量は、例えば、モデル動物の体重（ｋｇ）当たり０．１から１，０００ｍｇ程度である。治療薬候補は１回だけでなく複数回適用することもできる。治療薬候補を複数回適用する場合の時間間隔は、例えば、１〜２４時間であり、回数は２〜１４回程度であるが、これらに限定されるものではない。
モデル動物に適用するレチノイン酸の濃度は通常０．０５％程度であるが、これに限定されるものではない。レチノイン酸はモデル動物耳介に塗布することが好ましい。レチノイン酸の塗布回数は１回でもよいが、好ましくは数回、より好ましくは５回程度である。レチノイン酸の塗布は連続で行ってもよく、断続的に行ってもよい。最も好ましくは、レチノイン酸をモデル動物に連続５日間塗布する。
治療薬候補の可否を判定する方法は、上記モデル動物ハプテン適用浮腫モデルの項において述べた方法と同様である。病理組織の観察のため、肥満細胞を特異的に染色することが好ましい（例えば、トルイジンブルー染色）。皮膚の単位表面積又は断面積当たりの肥満細胞を計数することにより、肥満細胞の増多の評価を容易かつ客観的に行うことができるからである。また、肥満細胞の計数に代え、又は肥満細胞の計数と共に、肥満細胞の増殖因子であるステム・セル・ファクター（ＳＣＦ）を免疫染色法により検出することもできる。
モデル動物としてはマウス、ラット、モルモットが好ましい。特に好ましくはマウスがよい。
【０００９】
本発明の評価法を１次スクリーニング系として生薬等の素材のスクリーニングを行うことも可能である。また、個々のモデルにおいて有効性を示す素材を探索し、薬理学的に作用点を明確化した素材を組み合わせることで、処方設計を行うことも可能である。得られた処方は（ヒト）アトピー性皮膚炎様の皮膚炎を発症する第４のモデルであるＮＣ／Ｎｇａモデル動物塩化ピクリル塗布惹起皮膚炎モデルにて評価することも可能である。
【００１０】
ＮＣ／Ｎｇａマウス ハプテン塗布惹起皮膚炎モデル
ＮＣ／Ｎｇａマウス  ハプテン塗布惹起皮膚炎モデルは、本発明の１次スクリーニング系で見出された治療薬の高次評価系として設定されるものである。
ハプテンには、塩化ピクリル、２，４−ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）などが含まれる。
このモデルによる評価は、ハプテンで感作したモデル動物に、治療薬候補及びハプテンを同時ではなく任意の順で適用し、誘発した皮膚炎の症状を観察し、該治療薬候補の可否を判定することにより行う。
ハプテンのモデル動物への塗布感作は、腹部に行うのが好ましい。
モデル動物に対する治療薬候補の適用は、例えば、経口投与によって行うことができる。治療薬候補の適用量は、例えば、モデル動物の体重（ｋｇ）当たり０．１〜１，０００ｍｇ程度である。治療薬候補は１回だけでなく複数回適用することもできる。治療薬候補を複数回適用する場合の時間間隔は、例えば、１時間〜１週間であり、回数は２〜５０回程度であるが、これらに限定されるものではない。
モデル動物に対するハプテンの適用は、例えば、塗布によって行うことができる。塗布は、モデル動物の背部及び／又は耳介へハプテンを塗布することにより行うことが好ましい。塗布の回数は特に限定されないが、５回程度が好ましい。その場合、塗布は、ハプテン感作モデル動物に対し、感作後、例えば、４、１１、１８、２５、３２日目に行うことができる。
治療薬候補の適用と塩化ピクリルの適用の順序は任意に決定することができる。
皮膚症状の観察は、上記モデル動物ハプテン適用浮腫モデルの項において述べた方法と同様、例えば、肉眼による炎症スコアー、病理組織学的な所見、血清生化学的な検査、皮膚バリア機能の測定により行うことができる。
【００１１】
【実施例】
以下に例を挙げるが、それらは本発明の説明を目的とするものであって、本発明をこれらの態様に限定することを意図するものではない。
【００１２】
試験例１：マウス耳介ＤＮＦＢ繰り返し塗布耳浮腫反応
１．動物
ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、５週齢）を１週間の予備飼育後に実験に供した。
２．試薬及び被験薬物
試薬（ハプテン）として２，４−ジニトロフルオロベンゼン（２，４−ｄｉｎｉｔｒｏｆｌｕｏｒｏｂｅｎｚｅｎｅ，ＤＮＦＢ）を、被験薬物（治療薬候補）としてオウゴン及びシャクヤクを使用した。
３．塗布による浮腫反応惹起及び耳の厚み測定
浮腫反応の惹起は０．１％ＤＮＦＢ（０．１％ＤＮＦＢ／ａｃｅｔｏｎｅ：ｏｌｉｖｅ  ｏｉｌ（３：１））を１週間に１回、５週にわたりマウスの耳介に２５μｌ／ｓｉｔｅの割合で塗布することにより行った。耳の厚みは、浮腫反応惹起のために塗布するごとに、塗布前並びに塗布後４時間目及び２４時間目にシックネスゲージ（Ｇ−１Ａ  ｔｙｐｅ，Ｐｅａｃｏｃｋ（登録商標）：株式会社  尾崎製作所（ＯＺＡＫＩ  ＭＦＧ．ＣＯ．，ＬＴＤ．）で測定した。
４．被験薬物の調製法と投与方法
オウゴン、シャクヤクは０．５％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）溶液に懸濁し、浮腫反応惹起前１時間と浮腫反応惹起後６、２４、４８時間に経口投与した。薬物の評価は５回目の惹起後２４時間の耳介厚みの増加量（惹起後２４時間の耳の厚み−惹起前の耳の厚み）に対して行った。実験結果は平均値±標準誤差で示した。対照群と試験群の２群間の平均値の検定にはＳｔｕｄｅｎｔ’ｓｔ−ｔｅｓｔを用いた。
５．実験結果
ＤＮＦＢ繰り返し塗布による耳浮腫反応に対する薬物の影響
図１ａ、ｂに示すように、オウゴン、シャクヤクを５００ｍｇ／ｋｇの割合で、ＤＮＦＢ塗布惹起前１時間と浮腫反応惹起後６、２４、４８時間にマウスに経口投与することで、ＤＮＦＢの５回目の塗布惹起における耳浮腫反応は有意に抑制された。本浮腫反応はヒトアトピー性皮膚炎と同様にＩ型アレルギーとＩＶ型アレルギー反応が関与する炎症反応である。従って、オウゴン、シャクヤクは耳介浮腫反応を有意に抑制したことから、これら生薬がアトピー性皮膚炎に対して有効な治療薬となることを発見した。
【００１３】
試験例２：ＯＶＡ惹起マウス皮膚好酸球浸潤反応試験
１．動物
ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、５週齢）を１週間の予備飼育後に実験に供した。
２．試薬及び被験動物
試薬としてＯＶＡ及び硫酸カリウム・アルミニウムを、被験薬物（治療薬候補）としてチョウジ及びセキショウブを使用した。
３．抗原感作
３．１．Ａｌｕｍの作成
１０％硫酸カリウム・アルミニウム水溶液（ストック溶液）６０．８ｍＬを純水６００ｍＬに添加し、ｐＨ７．０に調整して水酸化アルミニウム懸濁液を作成した。この懸濁液をリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）（大日本製薬）を使用して遠心操作（２０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）することで、３回洗浄した。洗浄した水酸化アルミニウムの沈殿物をＰＢＳにより最終２００ｍＬにメスアップして再懸濁する事で、Ａｌｕｍ溶液（５ｍｇ／ｍＬ）を作成した。
３．２．感作
感作はＢＡＬＢ／ｃマウスにＯＶＡ−Ａｌｕｍ溶液（ＯＶＡ  ５μｇ／Ａｌｕｍ  ５ｍｇ／ｍＬ）を２００μＬ腹腔内投与する事で行った。感作は初回感作（第０日）及び追加感作（第４、１３、２６日）の４回行った。
４．抗原惹起、被験薬物の調製及び投与方法並びに評価
抗原惹起は最終感作６日後にＯＶＡ（１０μｇ／ｍｌ、５０μｌ）を皮内投与することで行った。被験薬物はチョウジ、セキショウブのそれぞれ１０００ｍｇ／ｋｇを用いた。また、コントロール群は０．５％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）溶液を用いた。チョウジ１０００ｍｇ／ｋｇ群はマウスｎ＝８、セキショウブ１０００ｍｇ／ｋｇ群はｎ＝８、コントロール群はｎ＝１０であった。被験薬物の投与は０．５％ＣＭＣ溶液に溶解又は懸濁し、初回惹起１日前及び１時間前、惹起６時間後に経口投与により行った。惹起２４時間後に惹起部位の皮膚を回収し、ホルマリン固定後、定法に従ってＬｕｎａ染色した。各値は皮膚病理切片の１ｃｍ当たりの好酸球数を平均値±標準誤差で示した。対照群と試験群の２群間の平均値の検定にはｔ−ｔｅｓｔ検定法を用いた。
５．結果
結果を図２に示した。チョウジ及びセキショウブは、皮膚好酸球浸潤反応を対照に対して有意に抑制した。
従って、チョウジ及びセキショウブから選ばれる１種または２種を有効成分とするアレルギー疾患治療剤は、アトピー性皮膚炎の増悪因子である好酸球を強力に抑制しアトピー性皮膚炎の治療に有効であることが示された。
【００１４】
試験例３：レチノイン酸誘導マウス肥満細胞増多モデル
１．動物
ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、５週齢）を２週間の予備飼育後に実験に供した。
２．試薬及び被験動物
試薬としてレチノイン酸（ＳＩＧＭＡ）を、被験薬物（治療薬候補）としてオウゴン抽出エキスを使用した。
３．肥満細胞増多反応の誘発
０．０５％のレチノイン酸溶液をアセトンとオリーブオイル（３：１）の混合溶媒で調製した。本０．０５％レチノイン酸溶液はマウス耳介に２５μｌ／ｓｉｔｅの割合で塗布し、同様の操作を１日１回、５日間連続で行った。被験薬物のオウゴンは０．５％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）溶液で懸濁して５００ｍｇ／ｋｇの投与量にて経口投与した。コントロール群は０．５％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）溶液を経口投与した。また、投与期間は初回惹起日より１２日間連続投与した。肥満細胞増多反応の判定は、マウスを初回惹起より１４日目に屠殺後、耳介を回収し、ホルマリン固定後、定法に従ってトルイジンブルー染色を施し肥満細胞数をカウントすることで行った。各値は耳介皮膚病理切片の１ｃｍ当たりの肥満細胞数を平均値±標準誤差で示した。対照群と試験群の２群間の平均値の検定にはｔ−ｔｅｓｔ検定法を用いた。
４．結果
結果を図３に示した。オウゴンは、マウス耳介における肥満細胞増多反応を、対照に対して有意に抑制した。
従って、オウゴンを有効成分とするアトピー性皮膚炎治療薬は、アトピー性皮膚炎の病態形成及び増悪化に重要である肥満細胞の増殖を強力に抑制することで、アトピー性皮膚炎の治療に有効であることが示された。
【００１５】
【発明の効果】
本発明によって、有効なアトピー性皮膚炎治療薬評価法が確立された。
【図面の簡単な説明】
【図１】オウゴン、シャクヤクの経口投与の効果を、ＤＮＦＢを塗布したマウス耳介の厚み変動によって示した図である。
【図２】チョウジ、セキショウブの経口投与の効果を、被験マウスの皮膚病理切片の１ｃｍ当たりの好酸球数で示した図である。
【図３】オウゴンの経口投与の効果を、被験マウスの耳介皮膚病理切片の１ｃｍ当たりの肥満細胞数で示した図である。
【図１】
2004163245.tif 000003
【図２】
2004163245.tif 000004
【図３】
2004163245.tif 000005