(57)【要約】【課題】煩雑な装置を必要とせず、郵送にも適する上、酸素の存在下で特定の発色が見られるため、簡易に特定細菌を検出することができる細菌検出用容器を提供すること。【解決手段】一方の端部に開口部を有し、他方の端部が密閉状態である容器本体と、該容器本体の内部に固定された固体支持体とから構成される細菌検出用容器であって、該固体支持体が空洞部を有することを特徴とする細菌検出容器。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
一方の端部に開口部を有し、他方の端部が密閉状態である容器本体と、該容器本体の内部に固定された固体支持体とから構成される細菌検出用容器であって、該固体支持体が空洞部を有することを特徴とする細菌検出用容器。
【請求項２】
容器本体の開口部に脱着自在に取り付けられ、前記容器本体の内部空間を閉塞する蓋部と、該蓋部に保持され、前記容器本体内に形成された固体支持体の空洞部に接触可能なように挿入される細菌採取部とを有する請求項１記載の細菌検出用容器。
【請求項３】
固体支持体が発色に酸素を必要とする基質を含有している請求項１または２記載の細菌検出用容器。
【請求項４】
基質がインドリル系発色基を有する基質である請求項３記載の細菌検出用容器。
【請求項５】
インドキシル系発色基が５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル、５−ブロモ−６−クロロ−３−インドキシル、および５−ブロモ−３−インドキシルから成る群から選択される少なくとも１種である請求項４記載の細菌検出用容器。
【請求項６】
固体支持体が固形培地である請求項１または２記載の細菌検出用容器。
【請求項７】
固形培地が寒天、カラギーナン、およびアガロースから選択される請求項６記載の細菌検出用容器。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、細菌検出用容器に関し、特に試料中に存在する特定菌を正確かつ簡便に検出できる細菌検出用容器に関するものである。
【０００２】
【従来技術】
従来、細菌の培養には、固体支持体を用いた培地や液体培地が用いられている。液体培地で好気性細菌を培養する場合には、一般に液体培地に懸濁した細菌をフラスコ内で振盪する。この場合の振盪は、細菌の成長に必要な酸素を供給するために行われ、これにより気相と液相とのガス交換が円滑に行われる。
【０００３】
これに対し、固体支持体を用いた培養は、シャーレ内の寒天等のゲル化剤中に埋め込まれて行われている。従って、固体支持体を用いた場合には、液体培養と異なり、気相と固体支持体との間のガス交換は、培地表面に限られてしまうため、固体支持体内のガス交換効率は極めて悪いという問題があった。
このため、エアーポンプや酸素ボンベを用いて空気や酸素を供給し、培養容器の固体支持体内のガス交換を行う培養装置が提案されている（例えば、特許文献１参照）。
【０００４】
しかしながら、この培養装置は、酸素を流通させることにより、円滑に固体支持体のガス交換を行えるものの、ガスの通気にエアーポンプやガス混合器を用いなければならず、極めて煩雑な装置であった。
【０００５】
一方、固体支持体中で特定の細菌が放出する酵素に感受性を有する発光基質を分解させて特定波長の紫外線を照射して酵素反応物を発光させる方法が知られている（例えば、特許文献２参照）。
【０００６】
この方法は、特定の細菌が放出する酵素に感受性を有する発光基質として、例えば４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−グルコシドを用いて、大腸菌が特異的に産生する酵素の作用により分解され、特定波長の紫外線を照射して、蛍光の有無によって大腸菌を検出するというものである。
【０００７】
しかしながら、この方法は、特定の細菌の培養を「培養手段」により行い、培養を行ったそのままの位置で「発光手段」を用いて発光させて細菌を検出できるため、比較的簡易であるが、紫外線照射装置、例えば水銀灯などが必要であり、未だ煩雑な方法と言わざるを得ない。
【０００８】
【特許文献１】
特開２００２−１０１８６２号公報
【特許文献２】
特開平１１−１７８５６７号公報
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、このような従来の課題に着目してなされたものであって、煩雑な装置を必要とせず、郵送にも適する上、酸素の存在下で特定の発色が見られるため、簡易に特定細菌を検出することができる細菌検出用容器を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、容器本体の内部に固定された固体支持体中に空洞部を設けて酸素を十分に存在させ、酸素が存在しないと発色しない基質を固体支持体中に含有させることにより、特定細菌を簡易に検出できることを見出し、本発明を完成した。
【００１１】
即ち、本発明は、下記のような構成からなるものである。
（１）一方の端部に開口部を有し、他方の端部が密閉状態である容器本体と、該容器本体の内部に固定された固体支持体とから構成される細菌検出用容器であって、該固体支持体が空洞部を有することを特徴とする細菌検出用容器。
（２）容器本体の開口部に脱着自在に取り付けられ、前記容器本体の内部空間を閉塞する蓋部と、該蓋部に保持され、前記容器本体内に形成された固体支持体の空洞部に接触可能ように挿入される細菌採取部とを有する（１）記載の細菌検出用容器。
（３）固体支持体が発色に酸素を必要とする基質を含有している（１）または（２）記載の細菌検出用容器。
（４）基質がインドリル系発色基を有する基質である（３）記載の細菌検出用容器。
（５）インドキシル系発色基を有する基質が５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル、５−ブロモ−６−クロロ−３−インドキシル、および５−ブロモ−３−インドキシルから成る群から選択される少なくとも１種である（４）記載の細菌検出用容器。
（６）固体支持体が固形培地である（１）または（２）記載の細菌検出用容器。
（７）固形培地が寒天、カラギーナン、およびアガロースから選択される（６）記載の細菌検出用容器。
【００１２】
【発明の実施の形態】
以下、図面に基づき本発明の実施の形態について説明する。
図１は、本発明の実施の形態に係る細菌検出用容器を示す断面図である。図１に示すように、本発明の細菌検出用容器は、密閉可能な容器本体１と、空洞部３を有し、かつ容器本体１の内部に固定化された固体支持体２とから構成されている。
【００１３】
容器本体１は、一方の端部に開口部を有し、他方の端部が密閉状態である限り、その形状や大きさは、特に問わない。この容器本体１の形状としては、例えば略円筒状や角筒状のものが挙げられるが、強度や製造のし易さの点から略円筒状とすることが好ましい。
容器本体１の大きさも、特に制限されないが、定型郵便物として送付および／または返送し得るように、容器本体の最大径を１０ｍｍ以下とすることが好ましい。容器本体１の材質としては、公知の透明なプラスチックの中から適宜選択すれば良いが、中でも、ポリエチレンやポリプロピレンが好ましい。
【００１４】
固体支持体２としては、検出すべき細菌の種類に応じて適宜選択することが可能であり、例えば、固形培地が挙げられる。固形培地としては、寒天、カラギーナン、およびアガロースが挙げられるが、中でも寒天が好ましい。この固体支持体２には、検出すべき細菌の栄養源を適宜選択して含有させることができる。
【００１５】
容器本体１の開口部４は、例えばアルミ箔などのシール部材によって閉塞されても良いが、蓋部５が容器本体１の内部空間を閉塞するように脱着自在に開口部４の端部に装着されていることが好ましい。
【００１６】
この蓋部５には、菌採取具６を介して細菌採取部７が保持されている。本発明の細菌検出用容器の使用にあたっては、予め菌採取具６に接続された細菌採取部７によって細菌を採取した後、菌採取具６を容器本体１の内部空間に挿入する。この際、細菌採取部７を容器本体１内に形成された固体支持体２の空洞部３に接触可能ように挿入する（図２参照）。この空洞部３の内部には、酸素が十分に存在するため、好気性の細菌の培養に適している。
【００１７】
本発明の細菌検出用容器の最大の特徴は、容器本体１内に形成された固体支持体２が発色に酸素を必要とする基質を含有している点にある。
このような基質としては、公知のものの中から適宜選択できるが、特にインドリル系発色基を有する基質が好ましい。
インドリル系発色基を有する基質は、酸素が存在しないと発色しない基質であり、シャーレを用いた平板培地で、表面に基質を分解できる細菌を塗布したときにはコロニーに色がつくが、混釈培養したり、試験管などで培地を高層に固めて細菌を穿刺培養する場合には、培地の内部に発育した細菌に発色が見られない。
【００１８】
これに対して、本発明においては、インドリル系発色基を有する基質を含有した固体支持体２に形成された空洞部３に酸素が存在するため、菌の発育に伴って固体支持体２内で発色が見られる。
このようなインドリル系発色基を有する基質は、公知のものの中から適宜選択して使用することができる。その具体例としては、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル、５−ブロモ−６−クロロ−３−インドキシル、および５−ブロモ−３−インドキシルから成る群から選択される少なくとも１種が挙げられる。
【００１９】
このインドリル系発色基を有する基質を分解して発色する酵素を持った細菌も、公知のものの中から適宜選択すれば良い。このような細菌の具体例としては、例えば、大腸菌や腸炎ビブリオが挙げられる。
【００２０】
本発明の細菌検出用容器の作製に際しては、まず、図１に示した容器本体１に、インドリル系発色基を有する基質を添加した培地成分を高圧滅菌して溶解したものを適当量分注する。次に、培地が固化する前に細菌採取部７が接続されている菌採取具６を培地中に挿入する。培地が固化した後、菌採取具６を抜き取り空洞部３を作製する。この際、空洞部は、一個設けても良く、複数個設けても良い。
次いで、細菌採取部７で細菌を採取し、空洞部３に挿入し、培養する。発色基質を分解できる酵素を持つ細菌が存在すると、培地内に発色が見られる。
【００２１】
【発明の効果】
本発明の細菌検出用容器は、容器本体内に形成された固体支持体に空洞部を有するため、酸素を十分に存在させることができ、好気性の細菌の培養に適している。
また、本発明に係る容器本体内に形成された固形支持体に発色に酸素を必要とする基質を含有させることにより、特定細菌を簡易に検出することができる。従って、本発明によれば、煩雑な装置を必要としない上、郵送にも適した細菌検出用容器を提供することができる。
【００２２】
【実施例】
以下、実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれによって限定されるものではない。
【００２３】
実施例１．腸炎ビブリオ用発色培地
表１に示した培地成分を精製水１０００ｍＬに溶解し、１２１℃で２０分間滅菌後、シードスワブ１号‘栄研’（栄研化学（株）の商品名）用容器に５ｍＬ分注し、蓋に直角にに固定された直径５ｍｍの滅菌した棒をを培地の中央部に挿入し培地を固化させた後、棒を抜いて空洞部を形成した。
培地中央部に形成された空洞部に蓋に直角に固定された綿棒で腸炎ビブリオを採取して挿入し、３７℃で１０時間培養した。その結果を表２に示す。表２に示すように、従来のシードスワブでは、培地に発色が見られないが、発色基質を含有した本発明品では発色が見られた。
【００２４】
表１　腸炎ビブリオ用培地
──────────────────────
ペプトン　　　　　　　　　　　　１０．０ｇ
酵母エキス　　　　　　　　　　　１．０ｇ
チオ硫酸ナトリウム　　　　　　　１２．０ｇ
クエン酸ナトリウム　　　　　　　１０．０ｇ
塩化ナトリウム　　　　　　　　　１５．０ｇ
胆汁末　　　　　　　　　　　　　６．０ｇ
白糖　　　　　　　　　　　　　　２０．０ｇ
セトリマイド　　　　　　　　　　０．１ｇ
寒天　　　　　　　　　　　　　　１３．０ｇ
ｘ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ　　　　　　　　０．１ｇ
ｍａｇｅｎｔａ−ｇａｌ　　　　　　　　　　　０．１ｇ
ｐＨ　　　　　　　　　　　　　　８．８
──────────────────────
尚、ｘ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅは、５−Ｂｒｏｍｅ−４−ｃｈｌｏｒｏ−３−ｉｎｄｏｘｙｌ−ｂｅｔａ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅを示し、ｍａｇｅｎｔａ−ｇａｌは、５−Ｂｒｏｍｅ−６−ｃｈｌｏｒｏ−３−ｉｎｄｏｘｙｌ−ｂｅｔａ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅを示す。
【００２５】
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2004097037.tif 000004
【００２６】
実施例２．大腸菌用発色培地
表３に示した培地成分を用い、腸炎ビブリオに代えて大腸菌を用いた他は、実施例１と全く同様な方法で培地の発色を調べた。その結果を表４に示す。表４に示すように、従来のシードスワブでは、培地に発色が見られないが、発色基質を含有した本発明品では発色が見られた。
【００２７】
表３　大腸菌用培地
──────────────────────
ペプトン　　　　　　　　　　　　１０．０ｇ
酵母エキス　　　　　　　　　　　１．０ｇ
塩化ナトリウム　　　　　　　　　５．０ｇ
硝酸カリウム　　　　　　　　　　１．０ｇ
デソキシコール酸ナトリウム　　　１．０ｇ
リン酸２ナトリウム　　　　　　　１．５ｇ
寒天　　　　　　　　　　　　　　１４．０ｇ
ｘ−ｇｌｕｃｒｏｎｉｄｅ　　　　　　　　　　　　　０．１ｇ
ＩＰＴＧ　　　　　　　　　　　　　　０．１ｇ
ｐＨ　　　　　　　　　　　　　　７．２
──────────────────────
尚、ｘ−ｇｌｕｃｒｏｎｉｄｅ　は、５−Ｂｒｏｍｅ−４−ｃｈｌｏｒｏ−ｉｎｄｏｘｙｌ−ｂｅｔａ−Ｄ−ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄを示す。
【００２８】
2004097037.tif 000005
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の実施の形態に係る細菌検出用容器を示す断面図である。
【図２】本発明の細菌検出用容器を用いて細菌を採取し、空洞部に菌採取具を挿入した状態図である。
【符号の説明】
１　　　容器本体
２　　　固体支持体
３　　　空洞部
４　　　開口部
５　　　蓋部
６　　　菌採取具
７　　　細菌採取部
【図１】
2004097037.tif 000006
【図２】
2004097037.tif 000007