(57)【要約】　　　（修正有）【課題】改良型トランスポゾン含有ＤＮＡの提供、及び、それを用いて生物の任意の遺伝子改変を大規模かつ簡便に行い、同時に当該遺伝子産物の簡便な可視化も行い、それにより新品種生物を作製する事を目的とする。【解決手段】少なくとも、生物に導入される部分に、［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］を含み、その外部に選択的自殺遺伝子と薬剤耐性遺伝子Ａを有し、［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］の内部に薬剤耐性遺伝子Ｂと［二次的な薬剤の添加を必要としない可視化レポーター遺伝子］を含むことを特徴とするプラスミドまたは／およびＤＮＡ断片により構成される遺伝子ツール。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
［生物に導入される部分］に、［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］を含み、その外部に選択的自殺遺伝子と薬剤耐性遺伝子Ａを有し、［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］の内部に薬剤耐性遺伝子Ｂと［二次的な薬剤の添加を必要としない可視化レポーター遺伝子］を含むことを特徴とするプラスミドまたは／およびＤＮＡ断片により構成される遺伝子ツール。
【請求項２】
請求項１で規定された［生物に導入される部分］を導入して作出した生物と、その子孫で請求項１の［生物に導入される部分］を有するもの。
【請求項３】
請求項２の生物を祖先として、薬剤耐性遺伝子Ａと薬剤耐性遺伝子Ｂを用いて、請求項１の［生物に導入される部分］の各要素の全てを含む子孫を増殖または／および再生産する方法。
【請求項４】
請求項１に規定した［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］が、新たに転移または／および挿入または／および離脱した事により改変を受けた遺伝子または／およびその改変された遺伝子を含む子孫。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本願発明は、生物の遺伝子解析と新品種育成の分野における、新規な遺伝子破壊法または／および遺伝子産物可視化法に関する．
【０００２】
【従来の技術】
従来、トランスポゾンを用いて任意の遺伝子を改変する技術としては［ＧＥＮＥＳ＆ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ（１９９５）．ｖｏｌ．９，１７９７−１８１０］のＡｃ／Ｄｓと自殺遺伝子を併用する方法などが知られている。しかしながら従来技術には、化学薬品や放射線を使った場合に比べて一度に処理できる系統数が少ないという処理効率上の欠点があった。さらに、この技術では可視化レポーター遺伝子の産物の検出に二次的な薬剤の添加を必要とする遺伝子を用いており、そのための操作が煩雑であった。また、任意の遺伝子の産物を［二次的な薬剤の付加を必要としない可視化レポーター遺伝子］を用いて可視化する従来の方法としては、［Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ２０００Ｍａｒ２８；９７（７）：３７１８−２３］のｃＤＮＡとＧＦＰ遺伝子のキメラ遺伝子ライブラリーの方法などが知られている。しかしながらこの従来技術には、任意の遺伝子と可視化レポーター遺伝子をいちいち試験管内で結合し、そののちに生体に導入しなければならないと言う処理効率上の重大な欠点があった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは上記の処理効率の問題が改良されたトランスポゾンによる、任意の遺伝子の改変または／および任意の遺伝子産物の簡便な可視化を行う遺伝子ツールまたは／およびそれによって可能となる効率の良い遺伝子改変生物の作製法または／および改変された遺伝子とそれを含む新品種生物を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本願の骨子は、［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］を含み、その外部に選択的自殺遺伝子と薬剤耐性遺伝子Ａを有し、［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］の内部に薬剤耐性遺伝子Ｂと［二次的な薬剤の添加を必要としない可視化レポーター遺伝子］を含むことを特徴とするプラスミドまたは／およびＤＮＡ断片により構成される遺伝子ツールの製造方法と、その使用法、およびその使用成果の改変された任意の遺伝子とそれを含む新生物品種である。これにより上記課題が解決される。
第１図は、本願発明の遺伝子ツールを示すもので、第２図は、実施例１の遺伝子ツールの概要と塩基配列及びその使用法を示す物である。
【０００５】
【詳細な内容】
本発明の骨子は次の通りである。
（１）　［生物に導入される部分］に、［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］を含み、その外部に選択的自殺遺伝子と薬剤耐性遺伝子Ａを有し、［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］の内部に薬剤耐性遺伝子Ｂと［二次的な薬剤の添加を必要としない可視化レポーター遺伝子］を含むことを特徴とするプラスミドまたは／およびＤＮＡ断片により構成される遺伝子ツール。
（２）　請求項１で規定された［生物に導入される部分］を導入して作出した生物と、その子孫で請求項１の［生物に導入される部分］を有するもの。
（３）　請求項２の生物を祖先として、薬剤耐性遺伝子Ａと薬剤耐性遺伝子Ｂを用いて、請求項１の［生物に導入される部分］の各要素の全てを含む子孫を増殖または／および再生産する方法。
（４）　請求項１に規定した［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］が、新たに転移または／および挿入または／および離脱した事により改変を受けた遺伝子または／およびその改変された遺伝子を含む子孫。
本発明の内容を詳しく説明すると次の通りである。
【０００６】
トランスポゾンとは、生物のゲノムに内在している転移性の遺伝因子である。「その他の転移因子」とは、レトロトランスポゾンなどのトランスポゾン類似の遺伝因子である。これらの転移には、転位酵素の働きと、転位酵素によって認識される特徴的な配列が［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］の両末端に存在することの両方が、必須条件である。その特徴的な配列は、［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］によって異なる。その特徴的な配列に挟まれた領域をトランスポゾンの内部と呼称する。また、内部に転位酵素遺伝子を有する自律型と他から転位酵素の供給を受けて初めて転移可能な非自律型に分けられる。多くのトランスポゾンの転移能は、異なる生物種の中でも機能する。例えば、単子葉植物であるトウモロコシのトランスポゾンＡｃ／Ｄｓは、双子葉植物のタバコやシロイヌナズナでも転移する。転移頻度（「転移が起こった細胞由来の子孫／全子孫」の割合）は一世代あたり最大１０％程度である。代表的なトランスポゾンとしては、Ａｃ／Ｄｓ、Ｅｍ／Ｓｐｍ、Ｔａｇ１などが挙げられる。特にＡｃ／Ｄｓは、最も良く解析が進んでおり、その特性が理解されている点で優れている。
【０００７】
トランスポゾンはゲノム内のほぼランダムな部位に転移する。その際に、転移先に何らかの遺伝子が存在していた場合には、トランスポゾンの転移・挿入によりその遺伝子の塩基配列が改変される。トランスポゾンが再転移・離脱した場合も、被挿入遺伝子は復帰しないことが多い。この性質を利用して任意の遺伝子を改変ことができる。天然の、あるいは人為的に改造したトランスポゾンを生物のゲノム内に導入し、非自律型の場合にはさらに転移酵素を作用させることで転移を誘発して使用する。また転移したトランスポゾンの配列を用いて被挿入領域の解析を行うことができる。その為、任意の遺伝子が改変された集団の中から、特定の遺伝子が改変された個体を判別することもできる。
【０００８】
また、トランスポゾンの内部に薬剤耐性遺伝子や可視化レポーター遺伝子などを組み込むと、被挿入遺伝子座を薬剤耐性標識したり、被挿入遺伝子座の発現パターンを可視化したり、被挿入遺伝子産物を可視化したりすることが出来る。
【０００９】
薬剤耐性遺伝子とは、抗生物質や除草剤などの化学薬剤に対して、本来抵抗性のない生物に抵抗性を付与する遺伝子であり、請求項１で規定された薬剤耐性遺伝子Ａと薬剤耐性遺伝子Ｂは、相互に同一でない任意の薬剤抵抗性遺伝子を指す。薬剤耐性遺伝子としては、ハイグロマイシン耐性遺伝子（Ｈｙｇｒ）、カナマイシン耐性遺伝子（Ｋａｎｒ）、バスタ耐性遺伝子（ｂａｒ）、ラウンドアップ耐性遺伝子などが挙げられる。
【００１０】
選択的自殺遺伝子とは、特定の化学薬品に対して本来抵抗性を有する生物に感受性を付与する遺伝子である。インドール３アセトアミドヒドロラーゼ遺伝子（ＩＡＡＨ）とナフタレンアセトアミド（ＮＡＭ）の組み合わせや，シトシンデアミナーゼ遺伝（ＣｏｄＡ）と５フルオロシトシン（５ＦＣ）の組み合わせなどが挙げられる。後者の方が、感受性個体と非感受性個体の違いがはっきり区別できる点で優れている。
【００１１】
可視化レポーター遺伝子とは、任意の遺伝子に挿入された場合に、被挿入遺伝子産物と融合タンパク質を形成しまたは／および融合タンパク質を形成せずに被挿入遺伝子の発現調節領域の制御下で発現し、着色・蛍光・発光などにより、被挿入遺伝子の発現状況を可視化する能力を有する遺伝子である。βグルクロニダーゼ（ＧＵＳ）遺伝子、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）遺伝子、ルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）遺伝子、色素沈着を引き起こす転写制御因子遺伝子などが挙げられる。ＧＵＳは従来よく使われているが、発色のために二次的な薬剤の添加を必要とし、さらに多くの場合は対象となる生物組織を殺さなければならないと言う欠点がある。Ｌｕｃも二次的な薬剤の添加を必要とする。［二次的な薬剤の添加を必要としない可視化レポーター遺伝子］とは、ＧＦＰ遺伝子または／および転写制御因子遺伝子を指し、特に、その発現が生物に重大な影響を及ぼさず、簡便かつ非破壊的に生体組織を観察できるＧＦＰが優れている。
【００１２】
遺伝子ツールとは、生物の遺伝子解析と新品種育成の分野において、生物の遺伝的性質に改変または／および変更を加える道具として利用できる遺伝子または／および化学物質の総称である。
【００１３】
請求項１に規定される構成の遺伝子ツールを製作する過程の、ＤＮＡ断片の加工やＤＮＡ断片相互の結合、ＤＮＡ断片のクローニング、ＤＮＡ配列の確認、大腸菌等の処理（形質転換、培養、プラスミドの抽出等）、生物への形質転換などの一般的操作の手順は、特に記述しない限り、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　２ｎｄｅｄ．，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ等に記載されている方法に従って行う。
【００１４】
「請求項１で規定された［生物に導入される部分］を導入して作出した生物」とは、任意の生物に、アグロバクテリウム感染法やマイクロインジェクション法、パーティクルガン法などの、どの様な遺伝子導入法によろうとも、請求項１で規定された［生物に導入される部分］を導入した生物である。
【００１５】
請求項２の生物の子孫を薬剤耐性遺伝子Ａと薬剤耐性遺伝子Ｂの両方を用いて選抜すると、［生物に導入される部分］から［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］が離脱していない、すなわち［生物に導入される部分］の各要素の全てを含む子孫を優勢に増殖または／および再生産することになる。
【００１６】
請求項２の生物の子孫を、薬剤耐性遺伝子Ｂと、選択的自殺遺伝子によって選抜することにより［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］が［生物に導入される部分］の外へ転移し、かつ遺伝的に分離したことにより、［生物に導入される部分］のうちの［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］だけを有する子孫を優勢に生育させることができる（ＧＥＮＥＳ＆ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ（１９９５）．ｖｏｌ．９，１７９７−１８１０）。これにより、［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］が新たに転移または／および挿入したことにより改変を受けた遺伝子を含む子孫を濃縮し、効率よく取り扱うことが可能となる。
【００１７】
「請求項１に規定した［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］が、新たに転移または／および挿入または／および離脱した事により改変を受けた遺伝子」とは、［生物に導入される部分］から［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］が新たな遺伝子座に転移または／および挿入することにより改変された遺伝子、または／および、その遺伝子からさらに［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］が離脱したにもかかわらず改変の影響が残っている遺伝子を指す。
【００１８】
【実施例】
以下の実施例により、本発明を更に詳細に説明する。しかし、本実施例により、本発明の有効性が，限定解釈されるものではない。
【００１９】
実施例１．
請求項１で規定された［生物に導入される部分］の実施例として、バイナリーベクターｐＳＭＡＢ７０４上に以下の構成の遺伝子ツールを作成した。トランスポゾンとしてはＤｓ［ＧＥＮＥＳ＆ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ（１９９５）．ｖｏｌ．９，１７９７−１８１０］を、選択的自殺遺伝子としてはＣｏｄＡ［ＪｐｎＪ．Ｇｅｎｅｔ．（１９９５）７０，ｐｐ．４０９−４２２］を、薬剤耐性遺伝子Ａとしてはｂａｒを、薬剤耐性遺伝子ＢとしてはＨｙｇｒ［Ｐｌａｎｔ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１５（４），２２７−２３０（１９９８）］を、［二次的な薬剤の添加を必要としない可視化レポーター遺伝子］としてはプロモーターを持たない強蛍光ＧＦＰ（ｓＧＦＰ）伝子［Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ６，３２５−３３０，１９９６］をそれぞれ使用し、第２図のように接続した。ｓＧＦＰ遺伝子以外の遺伝子には、適切なプロモーターとターミネーターを接続した。ｓＧＦＰ遺伝子には、被挿入遺伝子の発現調節領域の制御下で被挿入遺伝子産物との融合蛋白質を形成しまたは／および融合蛋白質を形成せずに発現し易いように、スプライスドナーとアクセプター［ＧＥＮＥＳ　＆　ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ（１９９５）．ｖｏｌ．９，１７９７−１８１０］、及びターミネーターを接続した。このうち、［生物に導入される部分］をＴ−ＧＴＩＩ、プラスミド全体をｐＧＴＩＩ、薬剤耐性遺伝子Ｂと可視化レポーター遺伝子を含むトランスポゾンＤｓをトランスポゾン部、トランスポゾン部以外の［生物に導入される部分］をベース部と便宜上命名する。第２図−１には、実施例１の概要を、第２図−２にはその塩基配列を示す。
【００２０】
実施例１の使用例
実施例１をシロイヌナズナに導入して実際に使用した。シロイヌナズナは自家受粉は自動的に行われるが、系統間の交配は人為的に行わなければならない。実施例１は、転移酵素を含まないため、第２図−３に示すように転移酵素の供給源となるＡｃを含む系統と人為交配した。第２図−３において、横の線はゲノム上の任意の位置を示し、四角は遺伝子を示す。人為交配によってＡｃとＴ−ＧＴＩＩを共に含むＦ１世代が生まれ、その自家受粉によって生まれたＦ２以降の世代を、請求項３に規定するように薬剤耐性遺伝子Ａと薬剤耐性遺伝子ＢすなわちＴ−ＧＴＩＩの場合にはハイグロマイシンとバスタによって選抜すると、トランスポゾン部が転移していないＴ−ＧＴＩＩを含む子孫が主として生存し、さらにその種子約１００万粒を得た。このとき、カナマイシン耐性遺伝子が隣接しているＡｃを含む系統を親株として使用したので、Ｆ２以降の世代の選抜にカナマイシンも同時に使用し、Ｆ１と同様、ＡｃとＴ−ＧＴＩＩを共に含む個体が生き残り、その中では転移酵素が供給されて約３％の確率でトランスポゾン部が転移していた。このようにして選抜・増殖した請求項２に相当する多数のシロイヌナズナから、こんどはハイグロマイシンと５−ＦＣで選抜を行った。その結果、請求項４に相当する、トランスポゾン部が転移した個体が約３万系統得られ、選抜の効率は約３％であった。従って、煩雑な初発の親株の人為交配がたった１回、１０の花で済んだにも関わらず、薬剤による選抜を繰り返すことで、有用な遺伝子改変系統を簡便に数万株作出出来た点で優れていた。また、その中には、青色励起光の照射下で、様々な組織でＧＦＰによる緑色蛍光が観察される個体が含まれており、任意の被挿入遺伝子産物の［二次的な薬剤の添加を必要としない可視化レポーター遺伝子］による可視化も上手く行われていることを示していた。
【００２１】
【比較例】
実施例１の［生物に導入される部分］のかわりに、薬剤耐性遺伝子Ａという要素を含まず、可視化レポーター遺伝子に二次的な薬剤の添加を必要とするＧＵＳを用いた従来の遺伝子ツール［ＧＥＮＥＳ　＆　ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ（１９９５）．ｖｏｌ．９，１７９７−１８１０］を用いたところ、トランスポゾン部が転移した個体を多数得るためには、それとほぼ同じ回数の親株の掛け合わせが必要となり、非常に煩雑であった。そればかりか、得られた転移系統の中で被挿入遺伝子の発現を観察するためには、その個体またはその一部を殺して染色する必要があり、その後の生育を観察できないなどの点でも劣っていた。
【００２２】
【変更可能な範囲】
なお、本発明には、次の各構成を発明の内容として、含むものである。
Ａ、請求項１において［トランスポゾンまたは／およびその他の転移性因子］を、同様の目的に使える全ての転移性因子とすること。
Ｂ、請求項１において、薬剤耐性遺伝子を同様の目的で使用できる全ての遺伝子とすること。例えば、乾燥耐性遺伝子や高温耐性遺伝子などの条件耐性遺伝子などである。
Ｃ、請求項１において、選択的自殺遺伝子を、同様の目的に使える全ての遺伝子とすること。例えば、優性の温度感受性遺伝子などの条件感受性遺伝子などである。
Ｄ、請求項１において、［二次的な薬剤の添加を必要としない可視化レポーター遺伝子］を同様の目的で使える全ての遺伝子とすること。例えば、転写制御遺伝子や自殺遺伝子などの直接または／および間接に表現型を有する遺伝子である。また、［二次的な薬剤の添加を必要としない可視化レポーター遺伝子］に改変を加え、または／および、他の遺伝子と複合した遺伝子も含む。例えば、ＧＦＰの蛍光色が赤色に変わった物や、ＧＦＰ遺伝子と転写制御因子遺伝子を複合した遺伝子などである。
Ｅ、請求項１において、「遺伝子ツール」を［請求項１の各構成に加えて、他の遺伝子も含むもの］とすること。たとえば、トランスポゾン転移酵素遺伝子を付加することなどである。
【００２３】
【発明の効果】
請求項１の構成の時
【効果Ａ】大量の挿入変異ライブラリーを従来法より簡便かつ迅速に作製することができるようになった。
【効果Ｂ】２次的な薬剤の添加を必要としない、非破壊的な被挿入遺伝子産物の発現・蓄積・局在の観察が可能となった。
【効果Ｃ】希望する組織または／および特定の刺激で発現が誘導される遺伝子の探索が、生体レベルではじめて可能となった。
【００２４】
【変更可能な用途】
トランスポゾンの転移と減数分裂が起こり、遺伝子導入が可能な全ての生物における、任意の遺伝子改変生物の作成、任意の遺伝子産物の発現・蓄積・局在の解析等に好ましく用いられる。また、［二次的な薬剤の添加を必要としない可視化レポーター遺伝子］と転写制御因子遺伝子の複合タンパク質遺伝子を請求項１の遺伝子ツールの構成に用いて任意の発現パターンを持つ遺伝子を見つけ出した場合に、遺伝子ツールの構成に用いた転写制御因子遺伝子の制御下で人為的に導入した他の遺伝子を発現させることによる育種・医療・研究等にも用いられる。
【図面の簡単な説明】
【第１図】は本願発明の請求項１に規定された遺伝子ツールの模式図である。四角は遺伝子を表し、太い矢印はトランスポゾンの末端配列を表す。それらを繋ぐ線は、ベクター等のＤＮＡである。
【第２図−１】は実施例１のｐＧＴＩＩの構造である。四角は遺伝子を表し、太い矢印はトランスポゾンの末端配列を表す。小さな四角は、アグロバクテリウム法で植物へＴ−ＧＴＩＩを導入するためのシグナル配列で、Ｔ−ＤＮＡの右端配列（ＲＢ）と左端配列（ＬＢ）という配列である。
【第２図−２】は、実施例１で作成したｐＧＴＩＩのＬＢからＲＢまでの塩基配列を示す。
【第２図−３】は、実施例１の使用法の模式図である。
上段には、Ａｃが導入された植物（左）とＴ−ＧＴＩＩを導入した植物（右）各々のゲノム上の、Ａｃが導入された領域と、Ｔ−ＧＴＩＩが導入された領域、そして任意の標的遺伝子の領域が図式化して示してある。２本ずつ書いてあるのは、２倍体として減数分裂時の挙動を考えやすくするためである。中段には、交雑Ｆ１世代または／およびその子孫でＦ１と同様の遺伝子構成を有する物を示してある。下段左には、トランスポゾン部が標的遺伝子に転移し、なおかつベース部が有性生殖の過程で遺伝しなかった物が選抜されることを示している。下段右は、トランスポゾン部の転位の如何に関わらず、ベース部が遺伝した子孫はバックグラウンドとして全て排除されることを示している。
【図１】
2004097194.tif 000003
【図２−１】
2004097194.tif 000004
【図２−２】
2004097194.tif 000005
【図２−３】
2004097194.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】平成14年12月13日(2002.12.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
【図面の簡単な説明】
【第１図】は本願発明の請求項１に規定された遺伝子ツールの模式図である。四角は遺伝子を表し、太い矢印はトランスポゾンの末端配列を表す。それらを繋ぐ線は、ベクター等のＤＮＡである。
【第２図−１】は実施例１のｐＧＴＩＩの構造である。四角は遺伝子を表し、太い矢印はトランスポゾンの末端配列を表す。小さな四角は、アグロバクテリウム法で植物へＴ−ＧＴＩＩを導入するためのシグナル配列で、Ｔ−ＤＮＡの右端配列（ＲＢ）と左端配列（ＬＢ）という配列である。
【第２図−２−１】は、実施例１で作成したｐＧＴＩＩのＬＢからＲＢまでの内、１番目から１８６０番目までの塩基配列を示す。
【第２図−２−２】は、実施例１で作成したｐＧＴＩＩのＬＢからＲＢまでの内、１８６１番目から３７８０番目までの塩基配列を示す。
【第２図−２−３】は、実施例１で作成したｐＧＴＩＩのＬＢからＲＢまでの内、３７８１番目から５７００番目までの塩基配列を示す。
【第２図−２−４】は、実施例１で作成したｐＧＴＩＩのＬＢからＲＢまでの内、５７０１番目から７６２０番目までの塩基配列を示す。
【第２図−２−５】は、実施例１で作成したｐＧＴＩＩのＬＢからＲＢまでの内、７６２１番目から９５４０番目までの塩基配列を示す。
【第２図−２−６】は、実施例１で作成したｐＧＴＩＩのＬＢからＲＢまでの内、９５４１番目から１１０４６番目までの塩基配列を示す。
【第２図−３】は、実施例１の使用法の模式図である。
上段には、Ａｃが導入された植物（左）とＴ−ＧＴＩＩを導入した植物（右）各々のゲノム上の、Ａｃが導入された領域と、Ｔ−ＧＴＩＩが導入された領域、そして任意の標的遺伝子の領域が図式化して示してある。２本ずつ書いてあるのは、２倍体として減数分裂時の挙動を考えやすくするためである。中段には、交雑Ｆ１世代または／およびその子孫でＦ１と同様の遺伝子構成を有する物を示してある。下段左には、トランスポゾン部が標的遺伝子に転移し、なおかつベース部が有性生殖の過程で遺伝しなかった物が選抜されることを示している。下段右は、トランスポゾン部の転位の如何に関わらず、ベース部が遺伝した子孫はバックグラウンドとして全て排除されることを示している。


【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
2004097194.tif 000007
【図２−１】
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【図２−２−１】
2004097194.tif 000009
【図２−２−２】
2004097194.tif 000010
【図２−２−３】
2004097194.tif 000011
【図２−２−４】
2004097194.tif 000012
【図２−２−５】
2004097194.tif 000013
【図２−２−６】
2004097194.tif 000014
【図２−３】
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