(57)【要約】［課題］きのこ類から経口投与で有効な生理活性物質を効率よく採取する採取法及びその物質を含む製剤及びその使用法を提供する。［解決手段］きのこ類の熱水抽出物質を低級アルコール水溶液に溶解し、不溶物質を採取し、それにおからペースト、クロレラ、スピルリナ、酵母エキス、粉末ローヤルエキス及び粉末プロポリスから選ばれた少なくとも一つを添加し製剤化し、抗癌剤、抗肝疾患剤または免疫賦活剤として使用する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
きのこ類の熱水抽出物を低級アルコール水溶液に溶解し不溶部を採取することを特徴とするきのこ類から生理活性物質の採取法。
【請求項２】
きのこ類がシイタケ、エノキタケ、ブナシメジ、ヒラタケ、ナメコ、マイタケ、ハタケシメジ、エリンギ、フクロタケ、霊芝、メシバコブ及びマツタケよりなる群から選ばれた少なくとも１種である請求項１記載の採取法。
【請求項３】
低級アルコール水溶液のアルコール濃度が３０〜７０％である請求項１または請求項２に記載の採取法。
【請求項４】
請求項２記載のきのこ類の２種を混合したきのこを使用する請求項１ないし請求項３のいずれか一項に記載の採取法。
【請求項５】
きのこの混合比が重量で３：７〜７：３である請求項４記載の採取法。
【請求項６】
２種のきのこがエノキタケ及びブナシメジである請求項５記載の採取法。
【請求項７】
請求項１ないし６のいずれか一項に記載の採取法により得られた採取物を含む散剤、錠剤、顆粒剤、カプセル剤または液剤よりなる製剤。
【請求項８】
おからペースト、クロレラ、スピルリナ、酵母エキス、粉末状ローヤルゼリ及び粉末状プロポリスよりなる群から選ばれた少なくとも一つを含有してなる請求項７の製剤
【請求項９】
フイルムコート材が大豆ペプチド材及び／または貝殻樹脂材である請求項７または８に記載の錠剤。
【請求項１０】
請求項７ないし９のいずれか一項に記載の剤を抗癌剤、免疫賦活剤または抗肝疾患剤として使用する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の属する技術分野］
本発明は、きのこ類、特にシイタケ［Ｌｅｎｔｉｎｕｓ　ｅｄｏｄｅｓ（Ｂｅｒ．）Ｓｉｎｇ．］，エノキタケ［Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ　ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ（Ｃｕｒｔ．ｅｘＦｒ．）Ｓｉｎｇ．］，ブナシメジ［Ｈｙｐｓｉｚｉｇｕｓ　ｍａｒｍｏｒｅｕｓ］，ヒラタケ［Ｐｈｏｌｉｏｔｕｓ　ｏｓｔｒｅａｔｕｓ（Ｊａｃｑ．ｅｘＦｒ．）Ｑｕｅｌ．］，マイタケ［Ｇｒｉｆｏｌａ　ｆｒｏｎｄｏｓａ］，ナメコ［Ｐｈｏｌｉｏｔａ　ｎａｍｅｋｏ（Ｔ．Ｉｔｏ）Ｓ．Ｉｔｏｅｔ　Ｉｍａ］．ハタケシメジ［Ｌｙｏｐｈｙｌｌｕｍ　ｄｅｃａｓｔｅｓ］，エリンギ［Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ　ｅｒｙｎｇｉｉ］，フクロタケ［Ｖｏｌｖａｒｉｅｌｌａ　ｖｏｌｖａｃｅａ］，マツタケ［Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａｍａｔｓｕｔａｋｅ］，サルノコシカケ類の霊芝［Ｇａｎｏｄｅｒｍａｌｕｃｉｄｕｍ］及びメシバコブ［Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ　ｌｉｎｔｅｕｓ］から選ばれた少なくとも１種のきのこから生理活性物質を効率よく採取する採取法及び該生理活性物質を含んでなる製剤及びそれらの製剤を使用する方法に関するものである。
【０００２】
［従来の技術］
本発明者らによって、きのこ類の抗癌作用について詳しく研究が行われ、その研究が発端になって我が国で広くきのこ類の研究が成されてきた。
【０００３】
その結果、ある種のきのこ類が生理活性、例えば、抗癌作用、免疫賦活作用、抗酸化作用、血圧及び血糖低下作用などを有することが知られるようになったが、きのこ類であれば良いと言うものではなく、ある種のきのこは、活性がないか、非常に弱いにも係わらず、また毒性を示すことが知られており、経口投与によって有効で安全性が高い生理活性物質または健康補助食品が求められている。
【０００４】
本発明者らは、きのこ類の抗癌作用が、含まれる多糖類にあることを発見し、各種のグルカンについて研究した。しかし純粋な単純多糖類、特に高分子物質は、注射によってのみ活性を示すが、経口では効果を示さなかった。
【０００５】
その後、経口投与によって腫瘍に有効な生理活性物質を求めてきのこ菌糸体をスクリーニングした結果、エノキタケ菌糸体よりプロフラミンを分離した（池川ら、Ｊａｐａｎｅｓｅ　Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．（ＧＡＮＮ），７６６，１４２−１４８（１９８５））。また本発明者の発見したエノキタケ子実体のＥＡ６もまた強い抗癌活性を持っていた（池川ら、「きのこ抗腫瘍研究２０年」長野県農村工業研究所、平成元年３月発行）。しかし食用きのこを含めた他のきのこについて、経口投与によって腫瘍に有効な物質の採取を検討した結果、特開平１１−１５２２３０号記載の方法を提案した。
【０００６】
しかしながら、特開平１１−１５２２３０号記載の方法による組成物は、尚活性が弱く吸湿性が強いので、使用に特殊の工夫を必要とする欠点を有している。
【０００７】
［発明が解決しょうとする課題］
本発明者らは、活性本体を追求することによって、さらに活性の高い物質を得ることができると考え、いろいろなきのこ類の子実体及び菌糸体について経口投与によって抗癌作用、免疫賦活作用を発揮する物質を検定して、特定のきのこを選別し、その活性本体を究明することを行った。
【０００８】
その結果、きのこ類、特に我が国で食用に供されているきのこ類に強い生理活性が認められた。即ち、本願発明は、きのこ類、特に食用きのこ類から、生理活性作用、即ち、抗癌活性作用、免疫賦活作用及び抗肝疾患作用、を有する組成物の採取法及び該組成物を含んでなる剤及び該剤の使用法を提供することを課題としている。
【０００９】
［課題を解決するための手段］
本発明に用いるきのこ類は、子実体でも菌糸体でも良く、菌糸体の場合は、培地や培養条件によって菌糸体の収率が異なるけれども、収率に関係なく本願方法が使用できる。きのこ類が原料として使用されるが、シイタケ、エノキタケ、ブナシメジ、ヒラタケ、ナメコ、マイタケ、ハタケシメジ、エリンギ、フクロタケ、霊芝及びメシバコブの群から選ばれた少なくとも一つのきのこの使用が好ましく、またこれらのきのこ類の任意の２種の混合物を原料として使用すると、得られた活性物質の生理活性が、それぞれのきのこからの活性物質の生理活性より活性が相乗的に増加される。特にエノキタケ及びブナシメジとの混合物の使用が好ましく、その混合割合は、特に限定されないが、好ましくはエノキタケ：ブナシメジが重量で３：７〜７：３の範囲にあることは、本発明者らの特開平１１−１５２２３０号に記載と同様である。
【００１０】
粉砕したきのこを水で加温抽出し、抽出液を減圧下に濃縮乾固し抽出物を得る。抽出に使用する水量は、適宜使用できるが、一般には、きのこに対し重量で３〜７倍を使用する。得られた抽出物は、引き続き低級アルコールまたはアセトンを含む水溶液で抽出され、低級アルコールまたはアセトン水溶液に不溶の物質を採取し、目的の生理活性物質をえる。使用する低級アルコールまたはアセトン水溶液の低級アルコールまたはアセトンの濃度は、３０〜７０％溶液で、水抽出物の重量に対し適宜の量使用される。勿論、乾固した水抽出物を得る代わりに水抽出液を減圧濃縮し、所定の量まで濃縮後、低級アルコールまたはアセトンをそれに添加し、所定の低級アルコールまたはアセトン水溶液濃度に調整し、冷却して不溶物質を採取することもできる。得られた生理活性物質は、本発明者らが確立してきた「宿主仲介性抗癌試験」を行って検定したところ、活性が濃縮されていることが確認された。
【００１１】
得られた採取物は、吸湿性を持つので、それをソフトカプセル剤にすることはできるが、散剤、錠剤、顆粒剤にするときは、従来の賦形剤、例えばデキストリンなどでは効率よく成形できない。勿論、サイクロデキストリンなどを用いる方法もあるが、本発明者らは、いろいろな実験を重ねた結果、おからペースト、クロレラ及びスピルリナを一定の比率で採取物に添加することによって散剤、錠剤、顆粒剤に加工することができる。例えば、エノキタケの場合、採取物に対し約半量のおからペースト、クロレラ、スピルリナのいずれか一種またはそれらの混合物を添加することにより可能になる。採取物に対する添加物の量は、採取物の半量以下で十分であり、その量は適宜選択できる。
【００１２】
フイルムコート剤作成のフイルムコート剤は、大豆ペプタイド、ヘミローフ及び貝殻樹脂が好ましく、これ以外のコート剤の使用は、変色を生じ使用できない。
【００１３】
本発明によって得られた剤は、免疫賦活作用を持っており、それゆえ抗癌活性を示すものである。特に本剤投与によるリンパ球を分析すると、リンパ球のＣＤ４／ＣＤ８の比率を上昇させる免疫賦活作用を有している。これはエイズ患者などでヘルパーＴ細胞の活性が極端に低下した場合に、その免疫賦活するための健康補助食品になると考えられる。そのような作用に基づき、また本剤は、肝疾患改善作用を有していることも特徴である。
【００１４】
［発明の実施の形態］
以下に実施例を示して本願発明を具体的に説明する。
【００１５】
［実施例１］
エノキタケ１０００グラムを５リットル熱水で還流しながら抽出し、抽出液を減圧下過熱濃縮して、粘性固形物に濃縮された時に、５００ミリリットルのエタノールを加えて良く撹拌し均一化して、沈殿した抽出物を遠心分離によって分離し、それをさらに３００ミリリットルのエタノールでよく撹拌して洗浄し乾燥すると、生理活性物質２４グラムを得た。乾燥して得られた活性物質を水に溶解して、固体成分比２対１の「おからペースト」を均一になるように撹拌してから、乾燥して粉末とした。その粉末を打錠して製剤化した。
【００１６】
［実施例２］
ブナシメジ１０００グラムを細かく粉砕した後、５リットルの水で加熱抽出し、抽出液を減圧下濃縮し、約５００ミリリットルになったところで、同量のエタノールを加えて撹拌し、それを遠沈して生理活性物質２７グラムを得た。この活性物質は、固体成分比２対１となるようクロレラ固体粉末を添加して粉末として打錠し、錠剤とした。
【００１７】
［実施例３］
シイタケ１０００グラムに５リットル水を加えて還流下熱水抽出し、抽出液を減圧下加熱濃縮して、約５００ミリリットルに濃縮された時に、５００ミリリットルのエタノールを加えて撹拌し、冷後沈殿した抽出物を遠心分離によって分離し、それをさらに３００ミリリットルのエタノールで撹拌して洗浄、乾燥し生理活性物質２９グラムを得た。乾燥して得られた活性物質を水に溶解して、固体比２対１になるようビール酵母を均一になるように撹拌してから、乾燥して粉末とし、粉剤化した。
【００１８】
［実施例４］
ナメコ１０００グラムを、５リットルの水で加熱抽出し、減圧下濃縮し、約５００ミリリットルになったところで、同量のエタノールを加えて撹拌し、それを遠沈して生理活性物質２５グラムを得た。この活性物質は、固体比２対１となるようスピルリナ固体粉末を添加して粉末として、顆粒剤とした。
【００１９】
［実施例５］
エノキタケ子実体５キログラムとブナシメジ子実体５キログラムとを粉砕して、水を５０リットルで加熱抽出した後、固体物質をろ過して除き、減圧下濃縮する。液量が５リットルになるまで濃縮されたころで、１０リットルのエタノールを加えてよく撹拌する。生じた沈殿抽出物を遠心分離によって分離して、固形活性物質を水１リットルに溶解して、「おからペースト」１００グラムを加えて撹拌した後乾燥して固形粉末として、生理活性物質３００グラムを得た。それを打錠して錠剤化した。
【００２０】
［実施例６］
実施例１〜５によって得られた物質を錠剤に作成した後、大豆ペプタイド、ヘミローフ（不二製油社製）によってフイルムコーティングした。フイルムコーティング処理を行っていない錠剤とフイルムコーティングした錠剤とを室温（摂氏１５−２５度）に５０日間放置した。前者は、水分を吸って褐色から黒褐色に変化色し、重量は１．５−２．５％増加した。しかし後者は、重量の変化もなく、色彩も変わらなかった。
【００２１】
［実施例７］
実施例１〜５によって得られた物質を錠剤に作成した後、貝殻樹脂、セラミック（日本セラミック社製）によってフイルムコーティングした。フイルムコーティング処理を行った錠剤と、行っていない錠剤とについて、室温（摂氏１５−２５度）に５０日間放置すると、前者には、重量の変化も色彩の変化も全く認められなかった。しかし後者、即ちフイルムコーティングしていな錠剤は、徐々に水分を吸って褐色から黒褐色へ変色した。そのときの重量変化は、１．５−２．５％であった。
【００２２】
［実施例８］
実施例１〜４で得た試料について下記のような制癌試験を行った。
サルコーマ１８０の生細胞をスイスアルビノ雌マウスの皮下に移植して、翌日より上記の試料を１日１回２５９ｍｇ／ｋｇ、精製水に懸濁して、１日おきに１週間３回、３週間経口投与した。その後、固形癌を摘出して腫瘍重量を測定した結果を表１に示した。
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【００２３】
［実施例９］
実施例５で得られた薬剤を雌のＢＡＬＢ／ｃマウスに、１０日間３００ｍｇ／ｋｇを経口投与し、対照群の同種のマウスには精製水を投与した後、それぞれのマウスの血液を採取して溶血して赤血球を除き、螢光標識されたＣＤ４とＣＤ８の抗体で処理してＦＡＣＳによりＣＤ４／ＣＤ８の比率を測定すると、実施例５で得た薬剤投与群で、対照群と比べてＣＤ４／ＣＤ８の比率が２３％増加しており、これはヘルパーＴ細胞がポピュレーションが増加し免疫活性が上昇したものと考えることができる。
【００２４】
［実施例１０］
雌のＩＣＲ１２匹を体重をそろえて、２群に分け、処置群には、実施例５でえた本願発明物質を１日１回１００ｍｇ／ｋｇになるように、サンプルを精製水に懸濁し１０日間ゾンデを用いて経口投与する。対照群には同量の蒸留水を同様に経口投与する。両群とも、投与開始後、６日目より１日１回５日間オリーブ油に１０％の４塩化炭素を混和した薬剤０．１ｍｌを腹腔内に投与して実験肝疾患を惹起させる。その投与終了後、２４時間に両群のマウスの血清を採取して生化学的検査を行った。その結果を表２にしめした。このように本発明物質によってい実験肝疾患の改善が認められた。
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【００２５】
［発明の効果］
きのこ類から本願方法により、生理活性、即ち、抗癌活性、免疫賦活活性及び抗肝疾患活性を有する物質が簡単に効率よく得られ、それら活性物質におからペースト、クロレラ、その他を混合し、特殊なコウティング剤でコートすることにより安定な製剤がえられ、抗癌剤、免疫賦活剤及び抗肝疾患剤として使用できる。