(57)【要約】【課題】本発明の課題は、癌細胞の増殖を抑制する方法を提供することである。【解決手段】癌細胞に対して、下記式［Ｉ］【化１】
2004010563.tif 000009
［式中、Ｒ１はＣ３〜Ｃ１０のアルキル基を表し、Ｒ２は水素原子かＣ１〜Ｃ３の分岐していてもよいアルキル基を表す。ｎは、１から４の整数を表す。波線は、それが結合している二重結合についての立体配置が、Ｅ配置もしくはＺ配置、またはそれらの任意の割合の混合物であることを表す。］で表されるシクロペンテノン誘導体を含有する脂質分散液からなる医薬組成物０．５ｍｇ／Ｋｇ／日〜２００ｍｇ／Ｋｇ／日を、０．５時間〜２４時間かけて持続的に投与することを特徴とする癌細胞増殖抑制方法。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌細胞に対して、下記式［Ｉ］
【化１】
2004010563.tif 000007
［式中、Ｒ１はＣ３〜Ｃ１０のアルキル基を表し、Ｒ２は水素原子かＣ１〜Ｃ３の分岐していてもよいアルキル基を表す。ｎは、１から４の整数を表す。波線は、それが結合している二重結合についての立体配置が、Ｅ配置もしくはＺ配置、またはそれらの任意の割合の混合物であることを表す。］
で表されるシクロペンテノン誘導体を含有する脂質分散液からなる医薬組成物０．５ｍｇ／Ｋｇ／日〜２００ｍｇ／Ｋｇ／日を、０．５時間〜２４時間かけて持続的に投与することを特徴とする癌細胞増殖抑制方法。
【請求項２】
下記式［Ｉ］
【化２】
2004010563.tif 000008
［式中、Ｒ１はＣ３〜Ｃ１０のアルキル基を表し、Ｒ２は水素原子かＣ１〜Ｃ３の分岐していてもよいアルキル基を表す。ｎは、１から４の整数を表す。波線は、それが結合している二重結合についての立体配置が、Ｅ配置もしくはＺ配置、またはそれらの任意の割合の混合物であることを表す。］
で表されるシクロペンテノン誘導体を含有する脂質分散液からなる医薬組成物。
【請求項３】
請求項２記載の医薬組成物からなる癌症状進行抑制剤。
【請求項４】
該癌症状進行抑制剤が、非経口剤である請求項３記載の癌症状進行抑制剤。
【請求項５】
該非経口剤が、注射剤である請求項４記載の癌症状進行抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、癌細胞増殖抑制方法、それに用いる医薬組成物、およびそれからなる癌症状進行抑制剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
特開昭５９−１４８７３４号公報には、シクロペンテノン誘導体（「Ｄ７−ＰＧＡ１誘導体」ということがある。）に、ネズミの白血病細胞（Ｌ−１２１０）への増殖抑制効果があることに基づいて、制癌剤としての利用可能性が記載されている。
【０００３】
しかしながら、該公報には、癌細胞増殖抑制における大きな課題である固形癌に対する効果や、有効成分の具体的な投与方法については何ら記載されていない。
【０００４】
また、このようなネズミの白血病細胞で制癌剤としての利用可能性もって、臨床応用における固形癌への有効性の判断を行なうことは種々の問題がある点についても指摘されている［癌と化学療法：第１４巻　第１０号　昭和６２年１０月、２８０９ページ］。
【０００５】
一方、癌の化学療法の領域では、従来は細胞毒性を有する制癌剤による治療が主流を占めていた。しかしながら、そのような細胞毒性を有する制癌剤は、重篤な副作用が生じ易く、更に、そのような副作用によってかかる化学治療の継続が制限されるという問題点を有していた。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明の目標は、従来の制癌剤による重篤な副作用を低減し、化学治療の継続を制限しない方法を提案することを主な目標としたものである。また、そのような方法を提案することができれば癌細胞の増悪を生じること無く、増殖を長期間抑制することができるため、その間に他の種々の治療法を試行することも可能となる。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
すなわち、本発明は癌細胞に対して、下記式［Ｉ］
【０００８】
【化３】
2004010563.tif 000002
【０００９】
［式中、Ｒ１はＣ３〜Ｃ１０のアルキル基を表し、Ｒ２は水素原子かＣ１〜Ｃ３の分岐していてもよいアルキル基を表す。ｎは、１から４の整数を表す。波線は、それが結合している二重結合についての立体配置が、Ｅ配置もしくはＺ配置、またはそれらの任意の割合の混合物であることを表す。］
で表されるシクロペンテノン誘導体を含有する脂質分散液からなる医薬組成物０．５ｍｇ／Ｋｇ／日〜２００ｍｇ／Ｋｇ／日を、０．５時間〜２４時間かけて持続的に投与することを特徴とする癌細胞増殖抑制方法、
下記式［Ｉ］
【００１０】
【化４】
2004010563.tif 000003
【００１１】
［式中、Ｒ１はＣ３〜Ｃ１０のアルキル基を表し、Ｒ２は水素原子かＣ１〜Ｃ３の分岐していてもよいアルキル基を表す。ｎは、１から４の整数を表す。波線は、それが結合している二重結合についての立体配置が、Ｅ配置もしくはＺ配置、またはそれらの任意の割合の混合物であることを表す。］
で表されるシクロペンテノン誘導体を含有する脂質分散液からなる医薬組成物、およびそれからなる癌症状進行抑制剤である。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明で用いられるシクロペンテノン誘導体は、上記式［Ｉ］で表されるものである。式［Ｉ］中、Ｒ１はＣ３〜Ｃ１０の分岐していてもよいアルキル基を表す。このアルキル基の例としては、ｎ−プロピル基、ｉｓｏ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−へプチル基、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基を挙げることができる。なかでもＣ６〜Ｃ８のアルキル基が好ましく、ｎ−オクチル基が特に好ましい。
【００１３】
上記式［Ｉ］において、式中、Ｒ２は水素原子またはＣ１〜Ｃ４のアルキル基を表す。このアルキル基の例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉｓｏ−プロピル基などを挙げることができる。このなかでも特にメチル基が好ましい。
【００１４】
上記式［Ｉ］において、ｎは１から４の整数を表すが、ｎは３であることが好ましい。
【００１５】
上記式［Ｉ］で表されるシクロペンテノン誘導体において、波線は、それが結合している二重結合の立体配置が、Ｅ配置もしくはＺ配置、またはそれらの任意、の割合の混合物であることを表す。
【００１６】
上記式［Ｉ］で表されるシクロペンテノン誘導体のシクロペンテノン骨格の４位の炭素は不斉炭素であるが、この立体配置はＲ配置もしくはＳ配置のいずれの立体配置でもよい。本発明のシクロペンテノン誘導体は、この不斉炭素に由来する単一の立体異性体、またはそれら立体異性体の任意の割合の混合物である。
【００１７】
上記式［Ｉ］で表されるシクロペンテノン誘導体の好ましい具体例としては、例えば以下に示した化合物（１）〜（９）のものが挙げられ、その中でも特に化合物（１）の化合物が好ましい。
（１）（７Ｅ）−［（５Ｓ）−２−オキソ−５−オクチル−３−エンシクロペンチリデン−１−イル］ヘキサン酸メチルエステル
（２）（７Ｅ）−［（５Ｒ）−２−オキソ−５−オクチル−３−エンシクロペンチリデン−１−イル］ヘキサン酸メチルエステル
（３）（７Ｚ）−［（５Ｓ）−２−オキソ−５−オクチル−３−エンシクロペンチリデン−１−イル］ヘキサン酸メチルエステル
（４）（７Ｚ）−［（５Ｒ）−２−オキソ−５−オクチル−３−エンシクロペンチリデン−１−イル］ヘキサン酸メチルエステル
（５）化合物（１）〜（４）いずれか一つのカルボン酸体
（６）（７Ｅ）−［（５Ｓ）−２−オキソ−５−ヘキシル−３−エンシクロペンチリデン−１−イル］ヘキサン酸メチルエステル
（７）（７Ｅ）−［（５Ｓ）−２−オキソ−５−ヘプチル−３−エンシクロペンチリデン−１−イル］ヘキサン酸メチルエステル
（８）（７Ｅ）−［（５Ｓ）−２−オキソ−５−オクチル−３−エンシクロペンチリデン−１−イル］ペンタン酸
（９）（７Ｅ）−［（５Ｓ）−２−オキソ−５−ヘキシル−３−エンシクロペンチリデン−１−イル］ペンタン酸
上記式［Ｉ］で表されるシクロペンテノン誘導体の合成方法は、特開昭５９−１４８７３４号公報記載の合成方法に従って製造することができる。
【００１８】
上記式［Ｉ］で表されるシクロペンテノン誘導体は、脂質分散液と混合して医薬組成物として用いることができる。脂質分散液としては、脂肪乳剤、リポソーム等が挙げられるが、脂肪乳剤を用いることが好ましい。ここで、本発明のシクロペンテノン誘導体を含有する脂質分散液の作成方法を脂肪乳剤を例に挙げて説明する。例えば、任意の量の精製大豆油に任意の量のシクロペンテノン誘導体を混合溶解し、１．２ｇの精製卵黄レシチンおよびグリセリン２．５ｇを注射用蒸留水８５ｇに分散させた分散液に、マイクロフルイダイザーのような高圧ホモジェナイザーを用いて乳化することによって得られる。かくして得られた脂肪乳剤は、５ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの濃度のシクロペンテノン誘導体を含有し、癌細胞への投与時には、必要に応じて５％グルコース溶液で希釈して投与することができる。
【００１９】
本発明のシクロペンテノン誘導体の癌細胞への投与量は、投与される癌細胞の状態等により異なるが、本発明においては通常０．５ｍｇ／Ｋｇ／日〜２００ｍｇ／Ｋｇ／日を、０．５時間〜２４時間、好ましくは１時間〜２４時間かけて持続的に投与する。このように一日当りのシクロペンテノン誘導体の投与量を、極少量とし、脂質分散液と混合した医薬組成物を、長時間、持続的に癌細胞に投与することにより、副作用を発現すること無くその増殖を抑制することが可能となったものである。ここで「持続的に」とは、投与される癌細胞の状態等により異なるが、一日以上、好ましくは二日以上であり、癌細胞の増殖が抑制され、投与の必要がなくなるまでをいう。
【００２０】
本発明のシクロペンテノン誘導体を含有する脂質分散液からなる医薬組成物は、上記の通り、癌細胞の増殖を抑制することができることから癌症状進行抑制剤として用いることができる。この癌症状進行抑制剤は、癌患者の直腸内、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内等へ非経口剤として用いることができる。ここで、非経口剤としては、直腸内投与を行なうための座薬が挙げられる。また、直腸内投与以外の非経口剤としては、例えば、皮下、筋肉内、静脈内への注射用剤が挙げられる。本発明の癌症状進行抑制剤としては、非経口剤として用いることが好ましく、更に注射剤として用いることが特に好ましい。注射剤としては、無菌の水性もしくは非水性溶液剤、懸濁剤、乳濁剤等として用いることができる。ここで、非水性溶液、懸濁剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油、もしくはオレイン酸エチル等の有機エステルが用いられる。また、このような製剤には、防腐剤、乳化剤、分散剤、安定剤等を含有させることができる。また、これら注射用製剤は、バクテリア保留フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合、照射等の処理を適宜行うことにより無菌化することができる。
【００２１】
以下、具体的な実施例で本発明をより詳細に説明する。
【００２２】
【実施例】
［実施例１］
（７Ｅ）−［（５Ｓ）−２−オキソ−５−オクチル−３−エンシクロペンチリデン−１−イル］ヘキサン酸メチルエステル（化合物（１））の合成
特開昭５９−１４８７３４号公報記載の合成方法に従って合成した。
【００２３】
［実施例２］
脂肪乳剤の調製
グリセリン２．５ｇと精製卵黄レシチン１．２ｇを、注射用水８５ｇに分散・溶解し、高圧ホモジェナイザーであるマイクロフルイダイザーに投入し、運転圧力４０００ｐｓｉ〜７０００ｐｓｉで循環した。この循環液中に、実施例１で合成した０．５ｇの化合物（１）を、９．５ｇの精製大豆油に混合溶解した油溶液を約５分間かけて注入し、粗乳化液を調製した。その後、運転圧力を２００００ｐｓｉに上昇させ、パス回数１０回で本乳化した。なお、マイクロフルイダイザーの循環部および乳化部を氷水中に設置し、本乳化１パス終了ごとに、４０００ｐｓｉでの循環を行って、乳化液の温度を低下させることで、調製中の温度制御を行った。調製された脂肪乳剤の粒子径を動的光散乱法で測定し、１８０ｎｍ〜２００ｎｍであることを確認した。また、調製された製剤は使用時まで４℃で暗所で保存した。
【００２４】
［実施例３、比較例３−１および比較例３−２］
Ｃｏｌｏｎ　２６担癌マウスでの制癌効果の検討
５週齢の雄性ＣＤＦ１マウスの脇腹皮下に、１ｘ１０６個のＣｏｌｏｎ２６癌細胞を移植した（ｄａｙ　０）。移植後、１０日目に、腫瘍サイズの平均とバラツキが同じになるように、マウスを群分けし、実施例２で得られた脂肪乳剤の投与を開始した。投与ルートは、１日１回ｂｏｌｕｓ　ｉ．ｖ．　投与（比較例３−２）および、１日４回−１回５分間頻回持続ｉ．ｖ．投与（実施例３）で比較した。投与期間はｄａｙ１０よりｄａｙ１４までの５日間とした。腫瘍サイズ（ｍｍ３）と体重を毎日測定した。その結果を表１に示した（８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、ｎ＝３）。
【００２５】
【表１】
2004010563.tif 000004
【００２６】
化合物（１）を含まないコントロール製剤投与群（比較例３−１）および、１日１回ｂｏｌｕｓ　ｉｖ投与群（比較例３−２）では、未治療群と比較し、腫瘍の増殖は抑制されなかった。これに対し、１日４回１回５分頻回ｉｖ投与群（実施例３）では、投与期間に渡り、腫瘍の増殖は有意差を持って抑制された。なお未治療群と投与群では顕著な体重変動の差は認められなかった。
【００２７】
［実施例４、比較例４−１および比較例４−２］
Ｗａｌｋｅｒ担癌ラットでの制癌効果の検討
Ｗｉｓｔａｒｔ系雄性ラットの皮下にＷａｌｋｅｒ癌細胞を移植し、移植後４日後にフリームービング装置を装着し、持続注入可能な担癌モデルを作成した。実施例２で得られた脂肪乳剤を１６０　ｍｇ／ｋｇの投与量で１日１回Ｂｏｌｕｓ　ｉｖ投与（比較例４−２）および２４時間持続ｉｖ投与（実施例４）を５日間（ｄａｙ４〜ｄａｙ８）行い、腫瘍サイズ（ｍｍ３）を測定した。その結果を表２に示す。
【００２８】
【表２】
2004010563.tif 000005
【００２９】
Ｂｏｌｕｓ　ｉｖ群（比較例４−２）と２４時間ｉｖ持続投与群（実施例４）を比較すると、１日１回Ｂｏｌｕｓ　ｉｖ群では５日目（最終投与から１日後）で１０倍まで増殖（未治療群（比較例４−１）とほぼ同等の値）しているのに対し、２４時間ｉｖ持続投与群では、５日目（最終投与直後）で２．７倍しか増殖していない。
【００３０】
［実施例５−１、実施例５−２、比較例５−１、比較例５−２および比較例５−３］
毒性試験
４週齢Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラットを用い、実施例２で得られた脂肪乳剤を、３００ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で、ｂｏｌｕｓ　ｉｖ、１５分持続ｉｖ、３０分持続ｉｖ、および６０分持続ｉｖ投与し、生存数を測定した。その結果を表３に示す。
【００３１】
【表３】
2004010563.tif 000006
【００３２】
Ｂｏｌｕｓ　ｉｖ投与（比較例５−２）および１５分持続ｉｖ投与（比較例５−３）では５例全例死亡したのに対し、３０分持続ｉｖ投与（実施例５−１）では５例中２例が生存し、６０分持続ｉｖ投与（実施例５−２）では５例全例生存した。すなわち、化合物１の脂肪乳剤の急性毒性は、持続投与時間を長くするほど弱くなった。致死量は６０分持続注入の場合３００ｍｇ／ｋｇ以上と判断された。
【００３３】
［実施例６］
ラット単回静脈内投与毒性試験
実施例２で得られた化合物（１）の脂肪乳剤の最小致死量（単回、Ｂｏｌｕｓ，ｉｖ）は２００ｍｇ〜２５０ｍｇ／ｋｇであった。
【００３４】
【発明の効果】
上記実施例１〜６、特に持続静脈内投与を行なった実施例４と持続静脈内投与を行わなかった比較例４−２（特開昭５９−１４８７３４号公報記載の方法）との比較から、シクロペンテノン誘導体を含有する脂質分散液からなる医薬組成物を持続的に癌細胞に投与する本発明の方法が、癌細胞の増殖を抑制するために極めて有効であることが明らかとなった。