(57)【要約】【課題】強力な抗酸化作用を長期間安定的に保持する活性水素溶存水を簡便に製造することのできる、活性水素溶存水の製造方法を提供する。【解決手段】水溶液中の溶存水素を水素吸着・吸蔵金属コロイドによる触媒反応により活性化するステップを備える、活性水素溶存水の製造方法。ここで、この水素吸着・吸蔵金属コロイドは、白金コロイド、パラジウムコロイド、バナジウムコロイド、鉄コロイド、珪酸コロイドからなる群より選ばれる１種以上の水素吸着・吸蔵金属コロイドであることが好ましい。【選択図】        図２５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
水溶液中の溶存水素を水素吸着・吸蔵金属コロイドによる触媒反応により活性化するステップを備える、活性水素溶存水の製造方法。
【請求項２】
前記活性化するステップは、溶存水素を含む水溶液中に水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップを含む、請求項１に記載の活性水素溶存水の製造方法。
【請求項３】
前記活性化するステップは、水素吸着・吸蔵金属コロイドを含む水溶液中に、溶存水素を発生させるステップを含む、請求項１に記載の活性水素溶存水の製造方法。
【請求項４】
前記水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップは、白金コロイド、パラジウムコロイド、バナジウムコロイド、鉄コロイド、珪酸コロイドからなる群より選ばれる１種以上の水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップを含む、請求項２に記載の活性水素溶存水の製造方法。
【請求項５】
前記水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップは、結晶を含む岩石の溶解液に含まれる珪酸コロイドを添加するステップを含む、請求項４に記載の活性水素溶存水の製造方法。
【請求項６】
前記水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップは、平均粒子径が０．３ｎｍ〜１μｍの範囲にある金属微粒子により形成される水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップを含む、請求項２に記載の活性水素溶存水の製造方法。
【請求項７】
前記水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップは、水素吸着・吸蔵金属の質量に換算して０．１μｇ／ｌ〜５００ｍｇ／ｌの範囲の濃度となるように前記水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップを含む、請求項２に記載の活性水素溶存水の製造方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載の活性水素溶存水の製造方法により得られ、哺乳類細胞に対して発癌抑制機能を有する、活性水素溶存水。
【請求項９】
溶存水素を含む水溶液中に水素吸着・吸蔵金属コロイドを含有する発癌抑制剤。
【請求項１０】
前記溶存水素を含む水溶液は、活性水素溶存水である、請求項９に記載の発癌抑制剤。
【請求項１１】
前記水素吸着・吸蔵金属コロイドは、白金コロイド、パラジウムコロイド、バナジウムコロイド、鉄コロイド、珪酸コロイドからなる群より選ばれる１種以上の水素吸着・吸蔵金属コロイドである、請求項９に記載の発癌抑制剤。
【請求項１２】
前記水素吸着・吸蔵金属コロイドは、結晶を含む岩石の溶解液に含まれる珪酸コロイドである、請求項９に記載の発癌抑制剤。
【請求項１３】
前記水素吸着・吸蔵金属コロイドは、平均粒子径が０．３ｎｍ〜１μｍの範囲にある金属微粒子により形成される水素吸着・吸蔵金属コロイドである、請求項９に記載の発癌抑制剤。
【請求項１４】
前記水素吸着・吸蔵金属コロイドの濃度は、水素吸着・吸蔵金属の質量に換算して０．１μｇ／ｌ〜５００ｍｇ／ｌの範囲である、請求項９に記載の発癌抑制剤。
【請求項１５】
前記溶存水素を含む水溶液は、酸化還元電位が−１０００ｍＶ〜−５ｍＶの範囲にある、請求項９に記載の発癌抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、活性水素溶存水の製造方法に関する。より詳細には、本発明は、触媒を用いた活性水素溶存水の製造方法に関する。
【０００２】
また、本発明は、活性水素溶存水に関する。より詳細には、本発明は、上記の活性水素溶存水の製造方法により得られる活性水素溶存水に関する。
【０００３】
また、本発明は、発癌抑制剤に関する。より詳細には、本発明は、正常細胞が形質転換を起こして癌細胞に変異することを抑制する、発癌抑制剤に関する。
【０００４】
【従来の技術】
近年、環境汚染に伴う水道水の品質低化が問題となっている。生体の約２／３は水であり、人間の体は毎日数リッターの新鮮な水を取り入れ、同量の水を体外に排泄している一種の川であると考えることができる。川の流れがよどめば川は腐り、流入する水の水質が低下すれば、川を浄化しようとしても限界がある。逆に、良質の水を大量に流すことにより、川を自然に浄化していくことも可能であると考えられる。
【０００５】
一方、活性酸素が癌、糖尿病、動脈硬化症、肝炎・腎炎、アトピー性皮膚炎、脳機能障害など多くの疾病や老化の原因として注目されている。ここで、活性水素は活性酸素と反応して水となり反応を停止するので活性酸素の理想的な消去剤となる可能性がある。水はＨ＋とＯＨ−に弱く解離しているが、弱い電流により、Ｈ＋は容易に還元されて活性水素Ｈ・になり、ついで水素分子Ｈ２となる。
【０００６】
この反応はＯＨ−から酸素が発生する反応より極めて容易に起こる。我々は水溶液中の活性水素を鋭敏に測定する方法を開発し、従来アルカリイオン水とも呼ばれ、胃腸内不定愁訴に改善効果をもつことが知られている電解還元水が活性水素を安定に含む水であり、活性酸素を消去し、ＤＮＡの酸化損傷を防ぐ機能をもつことを明らかにした（たとえば、非特許文献１参照。）。
【０００７】
また、大分県日田市の地下水やドイツ・ノルデナウ地方の天然水など、病気改善効果を示すと言われている天然水が活性水素反応を示し、活性酸素を消去することを見いだした。
【０００８】
こうした電解還元水や天然還元水中の還元性物質は極めて類似した性質を示し、筋肉細胞や脂肪細胞への糖取込みを促進した。電解還元水の糖取込み促進作用はＰＩ−３キナーゼの特異的阻害剤により完全に阻害されることから、電解還元水はインスリンシグナル伝達系の酸化障害を軽減することにより作用するものと推定された。レプチン受容体に欠損をもつ２型糖尿病モデルマウス（ｄｂ／ｄｂ）に電解還元水を自由飲水させることにより耐糖能障害が改善されることも確認でき、電解還元水は抗糖尿病効果を持つと推定された（たとえば、特許文献１参照。）。
【０００９】
また、電解還元水を癌細胞に作用させると、細胞内の高い酸化ストレスが軽減されるとともに、増殖速度の低下、形態の変化、軟寒天中でのコロニー形成能の低下、テロメアの可逆的短縮、ＭＭＰ−２および９の発現および活性化の低下による転移浸潤の抑制などが観察された。また、担癌マウスに投与すると有意な癌細胞の増殖抑制効果が確認できた。
【００１０】
そこで、癌細胞と同時に正常細胞も攻撃するため、副作用がひどい従来公知の抗癌剤の代わりに、副作用のない発癌抑制剤として、電解還元水を利用することができるのではないかと、医学、薬学、生物学の分野において、電解還元水が非常な注目を集めるに到っている。
【００１１】
さらに、電解還元水の動脈硬化症、アレルギー症、脳細胞のアポトーシスに対する効果についても検討されている。抗酸化作用をもつ電解還元水は様々な生活習慣病の予防や医療への利用が期待できるだけでなく、食品の品質保持や農作物の生産性向上、環境浄化など今後幅広い研究及び産業への利用が期待される。
【００１２】
電解還元水を製造する工程において、隔膜で隔てられた陰極室と陽極室のそれぞれにＮａＯＨなどの電解質を溶解した水を導入して電気分解すると、反応性の大きい原子状水素である活性水素が陰極室に発生する。陰極室に発生した活性水素の豊富な水は一般に電解還元水（陰極水）と呼ばれ、電解還元水は様々な疾病の予防や治療に役立ち、老化の進行を抑制するほか、医療以外の分野でも、食品の保存や半導体の洗浄など、多くの分野で利用が期待されている（たとえば、特許文献２参照。）。
【００１３】
電解還元水のこのような効用は、電解還元水中の活性水素が有する還元性（抗酸化性）によって起こる抗酸化作用によるものである。活性酸素とは、酸素分子に電子が１個入ったもの（Ｏ２・−）、ヒドロキシル基（・ＯＨ）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）および一重項酸素（１Ｏ２）などを指し、活性水素によりつぎの機構で活性酸素は消去され、還元作用および抗酸化作用と呼ばれる。
【００１４】
活性酸素消去作用は，つぎの反応式で示される。
Ｏ２・−＋２Ｈ・→Ｈ２Ｏ２＋ｅ−
・ＯＨ＋Ｈ・→Ｈ２Ｏ
Ｈ２Ｏ２＋２Ｈ・→２Ｈ２Ｏ
また、フリーラジカル消去作用は、つぎの反応式で示される。
【００１５】
Ｒ・＋Ｈ・→ＲＨ
【００１６】
【特許文献１】
特開２０００−２１２７８４号公報
【００１７】
【特許文献２】
特開平１０−１１８６５３号公報
【００１８】
【非特許文献１】
Ｓｈｉｒａｈａｔａ  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  ”Ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｚｅｄ−ｒｅｄｕｃｅｄ  ｗａｔｅｒ  ｓｃａｖｅｎｇｅｓ  ａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ＤＮＡ  ｆｒｏｍ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｄａｍａｇｅ．”  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ．  １９９７，  ２３４：２６９−２７４．
【００１９】
【発明が解決しようとする課題】
このような効能が期待される電解還元水であるが、従来の技術では強力な抗酸化作用を長期間安定的に保持する電解還元水は製造できなかった。活性水素自体は非常に不安定な物質であり、すぐに水素イオンまたは水素ガスとなるから、単体として活性水素が存在する時間はきわめて短く、通常の電解還元水の抗酸化作用は不安定だからである。そのため、電解還元水をたとえば癌の治療に用いた場合、多量の電解還元水を長期間にわたり飲用しなければ効果が得られなかった。
【００２０】
上記の現状に基づき、本発明の課題は、強力な抗酸化作用を長期間安定的に保持する活性水素溶存水を簡便に製造することのできる、活性水素溶存水の製造方法を提供することである。
【００２１】
また、本発明の別の課題は、強力な抗酸化作用を長期間安定的に保持する活性水素溶存水を提供することである。
【００２２】
さらに、本発明のもうひとつの課題は、強力な抗酸化作用を長期間安定的に保持し、正常細胞が形質転換を起こして癌細胞に変異することを抑制し、公知の抗癌剤のような副作用のない、発癌抑制剤を提供することである。
【００２３】
【課題を解決するための手段】
水は極めて安定な物質ではあるが、電気分解により容易に分解して水素と酸素を発生させる。そして、電気分解時に陰極側に生成する電解還元水は多量の水素分子を含有し、負の酸化還元電位を示す。発明者は、これまでこの還元水がさまざまな疾病に改善効果を示すという疫学的な報告に注目し、これらの水が実際、細胞内活性酸素を消去し、抗腫瘍効果や抗糖尿病効果など多様な生理機能を有することを明らかにしてきた。発明者は、このような生理機能について還元水中に安定に存在する活性水素（原子状水素）が細胞内活性酸素を直接消去するという活性水素還元水説を提唱している。
【００２４】
本発明者は、この活性水素還元水説の実証をより確かなものとするために、電解還元水の研究を行なう過程において、抗酸化作用により生理活性を有する電解還元水に共通する特徴の一つは、白金を含有していることであり、その電解還元水中の白金の存在状態は微粒子の状態（すなわち金属コロイドを形成している状態）であることを見出した。
【００２５】
すなわち、発明者は、電解還元水中における活性水素供与体本体は、電解還元水中に白金が有意に増加していることや、電解還元水中の白金量依存的に抗酸化性が増加することを見出し、白金が活性水素の供与体として働いていることを見出した。
【００２６】
そこで、本発明者は、白金コロイドを作成し、白金コロイドを含有する電解還元水の抗酸化性について検討した。その結果、本発明者は、電子顕微鏡を用いた測定により、ヘキサクロロ白金酸の還元により生成した安定な白金コロイドは、約２−１０ｎｍの白金コロイドを形成することを見出した。また、白金コロイドを含有する電解還元水についてＥＳＲおよび化学発光法を用いた活性酸素消去実験を行い、白金コロイドを含有する電解還元水はＯ２−、ＯＨ・、およびＨ２Ｏ２などの活性酸素を消去する能力を有することを見出した。
【００２７】
さらに、本発明者は、白金コロイドが安定なラジカルであるＤＰＰＨに対し活性水素供与体として機能することを明らかにした。また、白金コロイド（４．５％／μｇ）を含有する電解還元水の活性酸素消去能はバルクの金属（白金黒）（２０％／ｍｇ）を含有する電解還元水に比較して、白金換算量比で約２００万倍優れていることを見出した。これらの結果から、本発明者は、微量な白金コロイドが電解還元水に含まれる活性水素を安定化させ、電解還元水の強力な抗酸化性を長期間安定に保持する機能を有することを見出した。
【００２８】
そして、本発明者は、白金コロイドは、電解還元水の強力な抗酸化性を長期間安定に保持する機能を有するだけでなく、電解還元水をはじめとする各種の水素溶存水に触媒として作用して、水素溶存水中で活性水素を発生させて活性水素溶存水を生成する機能を有することを見出した。
【００２９】
また、本発明者は、このような強力な抗酸化作用を長期間安定的に保持することのできる白金コロイドを含有する活性水素溶存水に発癌抑制作用があるのではないかと考え、フォーカスアッセイ法により、発癌抑制実験を行った。その結果、本発明者は、白金コロイドを含有する活性水素溶存水には、正常細胞が形質転換を起こして癌細胞に変異することを抑制する作用があることを見出し、本発明を完成した。
【００３０】
すなわち、本発明の活性水素溶存水の製造方法は、水溶液中の溶存水素を水素吸着・吸蔵金属コロイドによる触媒反応により活性化するステップを備える、活性水素溶存水の製造方法である。
【００３１】
ここで、この活性化するステップは、溶存水素を含む水溶液中に水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップを含むことが好ましい。
【００３２】
また、この活性化するステップは、水素吸着・吸蔵金属コロイドを含む水溶液中に、溶存水素を発生させるステップを含むことが望ましい。
【００３３】
そして、この溶存水素を発生させるステップは、電気分解、水素ガスバブリング、ミネラル溶解、超音波処理、磁化処理、物理的生得、マイクロ波原子振動、光照射からなる群より選ばれる１種以上の方法により、水溶液中に溶存水素を発生させるステップを含むことが好ましい。
【００３４】
また、この水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップは、白金コロイド、パラジウムコロイド、バナジウムコロイド、鉄コロイド、珪酸コロイドからなる群より選ばれる１種以上の水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップを含むことが望ましい。
【００３５】
さらに、この水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップは、結晶を含む岩石の溶解液に含まれる珪酸コロイドを添加するステップを含むことが好ましい。
【００３６】
そして、この水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップは、平均粒子径が０．３ｎｍ〜１μｍの範囲にある金属微粒子により形成される水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップを含むことが望ましい。
【００３７】
また、この水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップは、平均粒子径が０．３ｎｍ〜３ｎｍの範囲にある金属微粒子により形成される水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップを含むことがさらに望ましい。
【００３８】
さらに、この水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップは、水素吸着・吸蔵金属の質量に換算して０．１μｇ／ｌ〜５００ｍｇ／ｌの範囲の濃度となるようにこの水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップを含むことが好ましい。
【００３９】
そして、本発明の活性水素溶存水は、上記の活性水素溶存水の製造方法により得られる、活性水素溶存水である。
【００４０】
ここで、本発明の活性水素溶存水は、哺乳類細胞に対して発癌抑制機能を有することが望ましい。
【００４１】
そして、本発明の発癌抑制剤は、溶存水素を含む水溶液中に水素吸着・吸蔵金属コロイドを含有する発癌抑制剤である。
【００４２】
ここで、本発明の発癌抑制剤に用いる溶存水素を含む水溶液は、活性水素溶存水であることが好ましい。
【００４３】
また、本発明の発癌抑制剤に用いる溶存水素を含む水溶液は、電気分解、水素ガスバブリング、ミネラル溶解、超音波処理、磁化処理、物理的生得、マイクロ波原子振動、光照射からなる群より選ばれる１種以上の方法により得られる水素溶存水であることが望ましい。
【００４４】
さらに、本発明の発癌抑制剤に用いる水素吸着・吸蔵金属コロイドは、白金コロイド、パラジウムコロイド、バナジウムコロイド、鉄コロイド、珪酸コロイドからなる群より選ばれる１種以上の水素吸着・吸蔵金属コロイドであることが好ましい。
【００４５】
そして、本発明の発癌抑制剤に用いる水素吸着・吸蔵金属コロイドは、結晶を含む岩石の溶解液に含まれる珪酸コロイドであってもよい。
【００４６】
また、本発明の発癌抑制剤に用いる水素吸着・吸蔵金属コロイドは、平均粒子径が０．３ｎｍ〜１μｍの範囲にある金属微粒子により形成される水素吸着・吸蔵金属コロイドであることが好ましい。
【００４７】
さらに、本発明の発癌抑制剤に用いる水素吸着・吸蔵金属コロイドは、平均粒子径が０．３ｎｍ〜３ｎｍの範囲にある金属微粒子により形成される水素吸着・吸蔵金属コロイドであることがより好ましい。
【００４８】
そして、本発明の発癌抑制剤における水素吸着・吸蔵金属コロイドの濃度は、水素吸着・吸蔵金属の質量に換算して０．１μｇ／ｌ〜５００ｍｇ／ｌの範囲であることが望ましい。
【００４９】
また、本発明の発癌抑制剤に用いる溶存水素を含む水溶液は、酸化還元電位が−１０００ｍＶ〜−５ｍＶの範囲にあることが好ましい。
【００５０】
さらに、本発明の発癌抑制剤に用いる溶存水素を含む水溶液は、ｐＨが７〜１１の範囲であることが望ましい。
【００５１】
【発明の実施の形態】
以下、実施の形態を示して本発明をより詳細に説明する。
【００５２】
＜水素吸着・吸蔵金属コロイド＞
本発明の活性水素溶存水の製造方法は、水溶液中の溶存水素を水素吸着・吸蔵金属コロイドによる触媒反応により活性化するステップを備える、活性水素溶存水の製造方法である。
【００５３】
ここで、この活性化するステップは、溶存水素を含む水溶液中に水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップを含んでいてもよく、水素吸着・吸蔵金属コロイドを含む水溶液中に、溶存水素を発生させるステップを含んでいてもよい。
【００５４】
通常の電解還元水などの溶存水素を含む水溶液中の活性水素は単体では不安定であり、すぐに水素イオンおよび水素ガスになり、抗酸化作用を喪失する傾向がある。しかし、本発明の活性水素溶存水の製造方法のように、溶存水素を含む水溶液が水素吸着・吸蔵金属のコロイドを含んでいると、活性水素は水素吸着・吸蔵金属のコロイドの中に取り込まれ、活性水素の状態で安定に存在する。
【００５５】
また、活性水素は非常に小さな原子であるため、ほとんどすべての金属および金属コロイドに吸着および／または吸蔵されることが知られている。このため、本発明の活性水素溶存水の製造方法においては、水素吸着・吸蔵金属のコロイドが活性水素のキャリアとして機能し、溶存水素を含む水溶液の抗酸化作用を高い状態で、安定に保持することができる。
【００５６】
さらに、このように、白金コロイドをはじめとする水素吸着・吸蔵金属コロイドを電解還元水をはじめとする溶存水素を含む水溶液に添加すると、水素吸着・吸蔵金属コロイドは溶存水素を含む水溶液の抗酸化性を長期間安定に保持するだけでなく、溶存水素を含む水溶液に触媒として作用して、水素溶存水中で活性水素を発生させて活性水素溶存水を生成する。
【００５７】
また、ナノメータスケールの水素吸着・吸蔵金属のコロイドは、金属片や粉末状の金属に比べて表面に存在する原子の割合が大きいために、活性水素吸着および／または吸蔵能が大きい。また、ナノメータスケールの水素吸着・吸蔵金属のコロイドは、均一な分散体を形成する傾向があり、沈殿する傾向も小さいため、飲用にも適する。さらに、水素吸着・吸蔵金属をコロイド状態で用いることにより、金属を溶解して用いる場合に比べて金属を溶存水素を含む水溶液中に多量に配合することができ、濃度のコントロールも容易となる。
【００５８】
本発明に用いる水素吸着・吸蔵金属のコロイドは、水素吸着・吸蔵金属の微粒子が水に分散した、いわゆる分散コロイドである。ここで、水素吸着・吸蔵金属とは、金属結晶の格子間に水素をたやすく吸着、吸蔵して金属水素化物を生成する金属をいう。水素吸着・吸蔵金属には、たとえば白金、パラジウム、バナジウム、マグネシウム、ジルコニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、銀、銅、珪素などのほか、水素吸蔵合金などが含まれる。水素吸蔵合金としては、たとえばＭｇ２Ｎｉ、ＬａＮｉ５、ＴｉＦｅなどがある。
【００５９】
本発明に用いる水素吸着・吸蔵金属は、これらの金属の中でも、溶存水素を含む水溶液中の活性水素を吸蔵しやすく、活性水素の状態で安定に保持できる点で、白金、パラジウムまたはバナジウムなどが好ましい。
【００６０】
また、本発明に用いる水素吸着・吸蔵金属のコロイドは、これらの水素吸着・吸蔵金属のイオンを含むコロイドであってもよい。本明細書において、水素吸着・吸蔵金属のコロイドとは、水素吸着・吸蔵金属のイオンを含むコロイドも意味する概念である。
【００６１】
ここで、本発明に用いる水素吸着・吸蔵金属のコロイドのうち、珪素コロイドとしては、珪酸結晶を含む岩石の溶解液に含まれる珪酸コロイドなどが挙げられる。
【００６２】
また、本発明に用いる水素吸着・吸蔵金属のコロイドとして分散している金属微粒子の平均粒子径（粒子の直径または一辺の長さ）は、表面に存在する原子の割合が大きく、抗酸化作用および分散性が良好な点で、０．３ｎｍ〜１μｍが好ましく、０．３ｎｍ〜３ｎｍがより好ましい。
【００６３】
これらの中でも、本発明の活性水素溶存水の製造方法に用いる溶存水素を含む水溶液中には、活性水素を吸蔵しやすく、活性水素の状態で安定に保持できる点で、白金、パラジウム、バナジウム、珪酸、またはこれらのイオンを含むコロイドを添加することが好ましい。
【００６４】
本発明の溶存水素を含む水溶液中の金属イオンまたは金属コロイドの濃度は、たとえば０．１μｇ〜１０００ｍｇ／ｌであり、好ましくは０．１μｇ／ｌ〜５００ｍｇ／ｌであり、より好ましくは１μｇ／ｌ〜５００ｍｇ／ｌであり、より一層好ましくは１０μｇ／ｌ〜５００ｍｇ／ｌであり、さらに好ましくは１００μｇ／ｌ〜５００ｍｇ／ｌであり、さらに一層好ましくは１ｍｇ／ｌ〜５００ｍｇ／ｌであり、特に好ましくは１ｍｇ／ｌ〜３００ｍｇ／ｌであり、特に一層好ましくは５ｍｇ／ｌ〜２００ｍｇ／ｌであり、最も好ましくは１０ｍｇ／ｌ〜１００ｍｇ／ｌである。
【００６５】
＜溶存水素を含む水溶液＞
本発明の活性水素溶存水の製造方法は、水溶液中の溶存水素を水素吸着・吸蔵金属コロイドによる触媒反応により活性化するステップを備える、活性水素溶存水の製造方法である。
【００６６】
ここで、この活性化するステップは、溶存水素を含む水溶液中に水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップを含んでいてもよく、水素吸着・吸蔵金属コロイドを含む水溶液中に、溶存水素を発生させるステップを含んでいてもよい。
【００６７】
本発明に用いる溶存水素を含む水溶液は、塩素（Ｃｌ２）および次亜塩素酸（ＨＣｌＯ）の含有量が少ないものが好ましい。塩素や次亜塩素酸は生体に有害な作用を及ぼし、水素吸着・吸蔵金属コロイドを含有する溶存水素を含む水溶液の有用な生理学的効果を減ずるからである。具体的には、塩素および次亜塩素酸は、０．１ｍｇ／ｌ以下であることが好ましく、より好ましくは０．０８ｍｇ／ｌ以下であり、特に好ましくは０．０１ｍｇ／ｌ以下である。
【００６８】
また、本発明に用いる溶存水素を含む水溶液における、その他の無機物質、重金属および一般有機化学物質の含有量は、日本国における上水道水の基準を満たすことが好ましい。たとえば、カドミウム０．０１ｍｇ／ｌ以下、水銀０．０００５ｍｇ／ｌ以下、ベンゼン０．０１ｍｇ／ｌ以下、総トリハロメタン０．１ｍｇ／ｌ以下の条件を満たすことが好ましい。
【００６９】
さらに、本発明に用いる溶存水素を含む水溶液の酸化還元電位は、活性水素を吸蔵する能力が大きい点で、１２℃〜１４℃において−５〜−１０００ｍＶが好ましく、より好ましくは−２０〜−１０００ｍＶであり、特に好ましくは−５０ｍＶ〜−１０００ｍＶである。酸化還元電位は、酸化還元電位計（東亜電波工業製）により測定することができる。
【００７０】
そして、本発明に用いる溶存水素を含む水溶液のｐＨは、飲用される点および活性水素の安定性を高める点で、１２℃〜１４℃において７〜１１が好ましく、より好ましくは８〜１１である。ｐＨの調整には、リン酸ナトリウムなどの緩衝剤、電気分解において陽極で得られる酸性水などを好適に使用することができる。
【００７１】
また、本発明に用いる溶存水素を含む水溶液の活性水素は、十分な抗酸化作用を確保し、抗癌（制癌）作用、抗菌作用、あるいは酸化ストレス抑制作用を発揮させる点で、１２℃〜１４℃において０．０１μＭ〜１０ｍＭ（μＭはμｍｏｌ／ｌ、ｍＭはｍｍｏｌ／ｌである）が好ましく、０．０１μＭ〜１０μＭがより好ましく、さらに好ましくは０．１μＭ〜１０μＭ、特に好ましくは１μＭ〜１０μＭである。
【００７２】
ここで、本発明に用いる溶存水素を含む水溶液中に存在する活性水素の定量は、３，５−ジブロモ−４−ニトロソベンゼンスルフォン酸のナトリウム塩（ＤＢＮＢＳ）が活性水素と反応してＤＢＮＢＳアゾ化合物を生成する着色反応を利用して行なうことができる。すなわち、ＤＢＮＢＳアゾ化合物は波長４５０ｎｍに吸収ピークを有するから、吸光度より活性水素量を計算することができる。
【００７３】
ここで、本発明の活性水素溶存水の製造方法は、水溶液中に溶存水素を発生させるステップをさらに備えていてもよい。本発明の活性水素溶存水の製造方法においては、あらかじめ溶存水素を含有する水溶液に水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加してもよいが、溶存水素を含有しないか、または溶存水素を非常に低濃度でしか含有しない水溶液中に溶存水素を発生させるステップを備えていれば、より効率的に溶存水素を水素ラジカルに活性化させることができるからである。
【００７４】
そして、この溶存水素を発生させるステップは、電気分解、水素ガスバブリング、ミネラル溶解、超音波処理、磁化処理、物理的生得、マイクロ波原子振動、光照射からなる群より選ばれる１種以上の方法により、水溶液中に溶存水素を発生させるステップを含むことが好ましい。これらのいずれの方法によっても、水溶液中に溶存水素を発生させることができるからである。これらの方法の中では、コスト面および品質面などから電気分解、水素ガスバブリングなどの方法が特に好ましい。
【００７５】
＜活性水素溶存水の製造方法＞
本発明の活性水素溶存水の製造方法は、水溶液中の溶存水素を水素吸着・吸蔵金属コロイドによる触媒反応により活性化するステップを備える、活性水素溶存水の製造方法である。
【００７６】
ここで、この活性化するステップは、溶存水素を含む水溶液中に水素吸着・吸蔵金属コロイドを添加するステップを含んでいてもよく、水素吸着・吸蔵金属コロイドを含む水溶液中に、溶存水素を発生させるステップを含んでいてもよい。
【００７７】
このように、白金コロイドをはじめとする水素吸着・吸蔵金属コロイドを電解還元水をはじめとする溶存水素を含む水溶液に添加すると、あるいは水素吸着・吸蔵金属コロイドを含む水溶液中に、溶存水素を発生させると、水素吸着・吸蔵金属コロイドは溶存水素を含む水溶液の抗酸化性を長期間安定に保持するだけでなく、溶存水素を含む水溶液に触媒として作用して、水素溶存水中で活性水素を発生させて活性水素溶存水を生成する。
【００７８】
具体例を挙げて詳しく説明すると、本発明の活性水素溶存水の製造方法は、たとえば、電解質水溶液に水素吸着・吸蔵金属のコロイドを添加するステップと、隔膜で隔てられた陰極室と陽極室にその水溶液を導入するステップと、水溶液を電気分解するステップと、陰極室で得られた電解還元水を取出すステップと、を備えていてもよい。
【００７９】
あるいは、本発明の活性水素溶存水の製造方法は、電解質水溶液を陰極室と陽極室に導入するステップと、水溶液を電気分解するステップと、陰極室で得られた陰極水を取出すステップと、陰極水に水素吸着・吸蔵金属のコロイドを添加すステップと、を備えていてもよい。
【００８０】
図１は、本発明で使用する電解槽１０の概念図である。電解槽１０は、陰極１１を含む陰極室１２と陽極１３を含む陽極室１４とを備える。陰極室１２と陽極室１４とは隔膜１５により分離されている。陰極室１２には、電気分解により得られる陰極水（電解還元水）を取出す陰極水取出管１６が接続されており、陽極室１４には、電気分解により得られる陽極水（酸性水）を取出す陽極水排水管１７が接続されている。陰極室１２および陽極室１４のそれぞれには、給水管１８が接続されている。
【００８１】
電気分解をする前に、給水管を通して陰極室と陽極室のそれぞれに電解質を含む水溶液を導入する。電解質とは、水に溶けてイオン伝導性を示す物質をいい、ＮａＯＨやＮａＣｌなどがある。
【００８２】
電解質を溶解する水としては、比抵抗１０×１０４Ω・ｃｍ以上の純水を使用することができるが、比抵抗１００×１０４Ω・ｃｍ以上である超純水を使用することが好ましい。純水は、水素型強酸性陽イオン交換樹脂と水酸型強塩基性交換樹脂によるイオン交換脱塩法により製造することができる。超純水は、強酸性陽イオン交換樹脂と強塩基性陰イオン交換樹脂とを混合した混床式ポリシャにより製造することができる。
【００８３】
電解質を含む水溶液を電気分解するステップでは、陰極室に陰極水（電解還元水）が発生し、陽極室に陽極水（酸性水）が発生する。電解質の水溶液を電気分解すると、陰極室には水素イオン（Ｈ＋）が集まり、水素イオンは陰極から供給された電子（ｅ−）と結合し、活性水素（原子状水素Ｈ・）となる。活性水素は反応性が大きいため、電気分解の条件によっては、２つの活性水素が結合して水素ガス（Ｈ２）となる。電解還元水が癌の増殖抑制効果や転移抑制効果などを奏するのは、電解還元水中の活性水素が抗酸化作用を発揮するからである。したがって、抗酸化作用を高めるために、水素ガスになる前の状態、すなわち活性水素の状態で水中に多量に溶存させる必要がある。
【００８４】
電気分解に使用する装置は、活性水素の濃度を高める点で、電解槽を直列に連結した装置や、電解還元水が電解槽を繰り返し何度も通過するようにした装置が好ましい。図２（ａ）に電解槽を２つ直列に連結した装置（日本トリム製ＴＩ−７０００Ｓ）、図２（ｂ）に電解槽を３つ直列に連結した装置（日本トリム製ＴＩ−７０００  ３Ｓ）、図２（ｃ）に電解還元水が循環して３つの電解槽を何度も通過するようにした装置（循環電解還元装置）を示す。
【００８５】
たとえば、図２（ａ）に示す電解槽を２つ直列に連結した装置では、第１の電解槽１において電気分解により得られた陰極水（電解還元水）は、第１の電解槽１の陰極室２４から第２の電解槽２の陰極室２９に導入され、さらに電気分解される。このため、活性水素の濃度の高い陰極水（電解還元水）を製造することができる。電解槽を３つ以上直列に連結した装置においても同様である。図２（ｃ）に示す陰極水（電解還元水）が３つの電解槽を何度も通過するようにした装置においても、各電解槽の陰極室同士が連結され、陽極室同士が連結されているが、第３の電解槽３を通過した後、ただちに排水されることなく、配管に設けているコックを調整することにより、一つの系内を何度も循環するため、さらに活性水素濃度の高い陰極水（電解還元水）を製造することができる。図２（ｃ）には、３つの電解槽を連結した例を示したが、２つの電解槽を連結した場合も、４つ以上の電解槽を連結した場合も同様である。電気分解後、陰極室より陰極水（電解還元水）を取出す。
【００８６】
本発明の活性水素溶存水の製造方法では、水素吸着・吸蔵金属のコロイドは電気分解をする前に電解質水溶液に添加することができる。また電気分解後の陰極水に添加することもできる。水素吸着・吸蔵金属のコロイドを電気分解前に電解質水溶液に添加しておくと、電気分解により発生する寿命の短い活性水素を発生後ただちに水素吸着・吸蔵金属のコロイド内に取り込み安定化することができる。また、水素吸着・吸蔵金属のコロイドを電気分解後の陰極水に添加すると、作業効率を上げることができる。
【００８７】
本発明に用いる水素吸着・吸蔵金属のコロイドのうち白金コロイドは、均一かつ微細なコロイドを形成でき、さらに、活性水素（Ｈ・）が白金コロイドの表面に安定して保持できる点で、ヘキサクロロ白金酸（Ｈ２ＰｔＣｌ６）を還元する方法により製造することが好ましい。たとえば、ヘキサクロロ白金酸水溶液の表面にブンゼンバーナの外炎を当てて還元する方法、ヘキサクロロ白金酸水溶液をヒドラジンまたはエタノールなどで還元する方法が好ましい。その他、純水の中に浸した２本の白金線の間でアークを飛ばす方法によっても白金コロイドを製造することができる。
【００８８】
本発明に用いる水素吸着・吸蔵金属のコロイドのうちパラジウムコロイドは、パラジウムコロイド内に大量に水素を吸蔵することができる点で、塩化パラジウム（ＰｄＣｌ２）を還元する方法により製造することが好ましい。たとえば、塩化パラジウムの水溶液をギ酸ナトリウムと炭酸ナトリウムで還元する方法および水素ガス（Ｈ２）を吹き込み（バブリング）還元する方法が好ましい。
【００８９】
本発明に用いる水素吸着・吸蔵金属のコロイドのうちバナジウムコロイドは、バナジウムコロイド内に大量に水素を吸蔵することができる点で、塩化バナジウム（ＶＣｌ２）を還元する方法により製造することが好ましい。たとえば、塩化バナジウムの水溶液をギ酸ナトリウムと炭酸ナトリウムで還元する方法および水素ガス（Ｈ２）を吹き込み（バブリング）還元する方法が好ましい。
【００９０】
本発明に用いる水素吸着・吸蔵金属のコロイドは、相溶性を高める点で、水系の分散体が好ましい。水素吸着・吸蔵金属のコロイドの添加量は、電解質水溶液全体に対して、たとえば０．１ｐｐｂ〜１０００ｐｐｍであり、０．１ｐｐｂ〜５００ｐｐｍが好ましく、１ｐｐｂ〜５００ｐｐｍがより好ましく、１０ｐｐｂ〜５００ｐｐｍがより一層好ましく、１００ｐｐｂ〜５００ｐｐｍがさらに好ましく、１ｐｐｍ〜５００ｐｐｍがさらに一層好ましく、１ｐｐｍ〜３００ｐｐｍが特に好ましく、５ｐｐｍ〜２００ｐｐｍが特に一層好ましく、１０ｐｐｍ〜１００ｐｐｍが最も好ましい。水素吸着・吸蔵金属のコロイドの添加量が０．１ｐｐｂ未満では吸蔵できる活性水素の量が少なくなり、十分な抗酸化作用が得られない。一方、水素吸着・吸蔵金属のコロイドの添加量が１０００ｐｐｍより多くなると、微細なコロイドの安定した保持が困難になる。
【００９１】
＜活性水素溶存水＞
本発明の活性水素溶存水は、上記の活性水素溶存水の製造方法により得られる、活性水素溶存水である。
【００９２】
ここで、本発明の活性水素溶存水は、哺乳類細胞に対して発癌抑制機能を有することが望ましい。本発明の活性水素溶存水は、水素吸着・吸蔵金属コロイドを含有しているため、活性水素を安定に保持し、あるいはその触媒作用により活性水素を新たに発生させることにより、活性水素の濃度を高い状態で保持することができるため、後述する実施例で示すように、哺乳類細胞に対して優れた発癌抑制機能を有する。
【００９３】
本発明の活性水素溶存水は、溶存水素を含む水溶液中に水素吸着・吸蔵金属コロイドに加えて、他の成分を、発癌抑制機能を損なわない範囲で含有してもよい。
【００９４】
本発明の活性水素溶存水に添加可能な他の成分としては、たとえば、他の発癌抑制作用を有する物質、他の薬効成分、香料、着色料、甘味料、保存料などが挙げられるが、飲用に適するように、食品添加物および／または医薬品として認められる成分であることが好ましい。
【００９５】
＜発癌抑制剤＞
本発明の発癌抑制剤は、溶存水素を含む水溶液中に水素吸着・吸蔵金属コロイドを含有する発癌抑制剤である。すなわち、本発明の発癌抑制剤は、上記の活性水素溶存水の製造方法により得られる、活性水素溶存水を発癌抑制剤として用いるものである。
【００９６】
ここで、この溶存水素を含む水溶液は、活性水素溶存水であることが好ましい。なお、このように、白金コロイドをはじめとする水素吸着・吸蔵金属コロイドを電解還元水をはじめとする溶存水素を含む水溶液に含有されている場合には、水素吸着・吸蔵金属コロイドは溶存水素を含む水溶液の抗酸化性を長期間安定に保持するだけでなく、溶存水素を含む水溶液に触媒として作用して、水素溶存水中で活性水素を発生させて活性水素溶存水を生成するため、この水素溶存水は活性水素溶存水となる。
【００９７】
よって、本発明の発癌抑制剤は、上記の活性水素溶存水の製造方法と同様の製造方法により製造されることが好ましい。
【００９８】
また、本発明の発癌抑制剤に含有される溶存水素を含む水溶液は、上記の本発明の活性水素溶存水の製造方法に用いられる溶存水素を含む水溶液と同様の溶存水素を含む水溶液であることが望ましい。
【００９９】
さらに、本発明の発癌抑制剤に含有される水素吸着・吸蔵金属コロイドは、上記の本発明の活性水素溶存水の製造方法に用いられる水素吸着・吸蔵金属コロイドと同様の水素吸着・吸蔵金属コロイドであることが望ましい。
【０１００】
本発明の発癌抑制剤は、溶存水素を含む水溶液中に水素吸着・吸蔵金属コロイドに加えて、他の成分を、発癌抑制機能を損なわない範囲で含有してもよい。
【０１０１】
本発明の発癌抑制剤に添加可能な他の成分としては、たとえば、他の発癌抑制作用を有する物質、他の薬効成分、香料、着色料、甘味料、保存料などが挙げられるが、飲用に適するように、食品添加物および／または医薬品として認められる成分であることが好ましい。
【０１０２】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【０１０３】
＜発癌抑制剤についての実施例＞
本発明の発癌抑制剤が、正常細胞が形質転換を起こして癌細胞に変異することを抑制し、優れた発癌抑制作用を有することを実証するために、フォーカスアッセイ法による二段階発癌抑制の検出方法を用いて、以下の実施例を行った。
【０１０４】
＜発癌抑制剤の調製＞
まず、超純水８６ｍｌを密閉容器に入れ、ウォーターバスで６０℃まで昇温した。次いで、還元剤として９９％エタノール１０ｍｌを加え、界面活性剤（和光純薬工業株式会社製、Ｔｗｅｅｎ８０）１００μｌを加え、攪拌を続けながら、７０℃まで昇温し、ヘキサクロロ白金酸１０６ｍｇを加え、０．２ｇのＮａＨＣＯ３を超純水に溶解して４ｍｌとしたものを緩衝剤として混合した。
【０１０５】
続いて、温度を７０℃に維持し、ヘキサクロロ白金酸が白金に還元されて黒色になった時点で加温および攪拌を停止した。そして、１２時間静置した後、超純水５００ｍｌを加えながら分画分子量１００００の濾過膜を使い限外濾過し、洗浄と濃縮を行なった。
【０１０６】
限外濾過後、超純水５０ｍｌを加えた。透過型電子顕微鏡で観察したところ、図３に示すように、１ｎｍ〜５ｎｍの微粒子が多数認められた。これらの微粒子が白金コロイドであることが電顕元素分析法により確認された。
【０１０７】
また、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）で測定したところ、波長２２０ｎｍに吸収ピークがあった。ヘキサクロロ白金酸のイオンは２２０ｎｍに吸収を持たないが、ヘキサクロロ白金酸が還元されて白金コロイドになると２２０ｎｍに吸収を持つようになることから、図３に示した微粒子は、白金コロイドであることが確認できた。
【０１０８】
これらを確認した後、超純水中に、電解質（ＮａＯＨ）を溶解して、５ｍＭのＮａＯＨ水溶液を得た。この水溶液１０００ｍｌに前述の白金コロイドを２ｐｐｍとなるように添加した。図２（ｃ）に示す陰極水が３つの電解槽を何度も通過するようにした装置（（株）日本トリム製、電解還元装置ＴＩ２００）に入れて、０．１３Ａ／ｃｍ２で６０分間電気分解し、陰極室から電解還元水中に白金コロイドを含有する発癌抑制剤を取出した。
【０１０９】
＜フォーカスアッセイ＞
フォーカスとは、癌ウイルスを培養細胞に感染させた場合、またウイルスや細胞性の癌遺伝子を含むＤＮＡ断片、あるいはその組換えＤＮＡを細胞にトランスフェクションした時に形成される高密度の細胞コロニーを意味する。
【０１１０】
このようなフォーカスは、トランスフォーメーションを起こした細胞が接触阻止による抑制から脱して増殖し、正常細胞からなる単層の上に多層部分を形成することによって生ずる。
【０１１１】
そして、細胞を染色すると、フォーカスは濃染され数えられるので、フォーカスアッセイは癌ウイルスの定量に好適に用いられる公知の技術である。なお、本実施例では、フォーカスアッセイのために、以下の参考文献を用いた。
参考文献１：Ｐ．Ｐｅｒｃｃｏ  ｅｔ．ａｌ，  ”Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｖｉｔａｍｉｎ  Ｅ  ａｎｄ  α−ｎａｐｈｔｈｏｆｌａｖｏｎｅ  ｏｎ  β−ｃａｒｏｔｉｎｅ−ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂａｌｂ／ｃ  ３Ｔ３  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｂｅｎｚｏ（ａ）ｐｙｒｅｎｅ  ａｎｄ  ｃｉｇａｒｅｔｔｅ−ｓｍｏｋｅ  ｃｏｎｄｅｎｓａｔｅ”，  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  Ｒｅｃｅａｒｃｈ，  （２０００），  ４６５，  ｐ．１５１−１５８
参考文献２：石館  基  監修、祖父尼  俊雄  編集，「医薬品の変異原性・遺伝毒性」の培養細胞を用いる形質転換試験の章，廣川書店発行，平成３年６月２５日初版発行，ｐ．２３７〜２５６
ここで、後述の実施例で用いるマウス全胎仔由来細胞であるＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞は、継代を続けられてディッシュに一杯になった時点で低い細胞密度を保ち、増殖がとまる現象が観察されている（図４）。
【０１１２】
そして、このような接触阻止現象を示す細胞は、ウイルス、放射線、化学物質による処理、さらには遺伝子導入により、周囲の単層の石畳状を示す細胞とは明らかに異なった形質転換巣を形成することが分かっている。
【０１１３】
すなわち、後述の実施例で用いる化学物質を用いるフォーカスアッセイ法は、細胞播種、化学物質処理、長期培養、染色した形質転換巣の判定、という一連の過程で成立っている（図５）。
【０１１４】
今回、形質転換巣を抑制するため、電解還元水ＥＲＷ（日本トリム社製電解還元水作製装置ＴＩ２００により作製）と白金（Ｐｔ）コロイドを処理し、発ガン化学物質による二段階変異抑制の検出を試みた。
【０１１５】
＜実施例１＞
ＴＩ２００によるフォーカス形成抑制検出の予備的検討
本実施例では、ＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞の形質転換巣を抑制するため、上述の製造方法により得られた、白金コロイドと、電解還元水と、を含有する発癌抑制剤により、図５の実験計画図に示す処理手順に従ってＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞を処理することとした。
【０１１６】
本実施例における実験計画においては、図５のａがイニシエーター物質を処理する１日目からプロモーター物質の処理が終わる３週間目の１日目まで、ｂはイニシエーターを処理する１日目からプロモーター物質を処理する８日目まで、ｃはイニシエーターを処理する８日目から３週間目の１日目まで、ＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞を、白金コロイドと、電解還元水と、を含有する発癌抑制剤により処理することとする。
【０１１７】
さらに、本実施例における実験計画においては、図５において、ａ，ｂ，ｃ，ｄについてそれぞれＰＭＡ（正式名称：ｐｈｏｒｂｏｌ  １２−ｍｙｒｉｓｔａｔｅ  １３−ａｃｅｔａｔｅ）５０ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ、３００ｎｇ／ｍｌ含有培地で処理したもの、およびＰＭＡを含まないバリエーションを調製することとした。また、上記（ａ−１）〜（ｄ−４）の他、（ｅ）ＭＣＡ（３−ｍｅｔｈｙｌ  ｃｈｏｌａｎｔｒｅｎｅ）処理およびＰＭＡ処理を行わないバリエーション、（ｆ）電解還元装置（（株）日本トリム製、ＴＩ２００）により製造された電解還元水を用いないバリエーションをコントロールとして作成することとした。
【０１１８】
また、本実施例における実験計画においては、実験に用いるイニシエーターであるＭＣＡは終濃度１μｇ／ｍｌのみ、プロモーターであるＰＭＡは終濃度５０ｎｇ／ｍｌ（０．０８１μＭ）、１００ｎｇ／ｍｌ（０．１６２μＭ）、３００ｎｇ／ｍｌ（０．４８６μＭ）のバリエーションを調製することとした。
【０１１９】
さらに、本実施例における実験計画においては、コントロールとして（ｅ）ＭＣＡ処理およびＰＭＡ処理を行わないバリエーション、（ｆ）ＴＩ２００により製造された電解還元水を用いないバリエーションを加え、最終的に１８組のバリエーションサンプルを作成することとした。表１は、各バリエーションサンプルでのＭＣＡ使用の有無とＰＭＡの濃度、およびＴＩ２００により製造された電解還元水による処理の一覧を表わす表である。この表に示した他にも、多数の条件設定により、予備的な検討を行った。
【０１２０】
【表１】
2004330146.tif 000003
【０１２１】
表１に示す実験の結果はデータとしては示さないが、このような予備的な検討の結果、イニシエーター処理期間のみ、プロモーター処理期間のみに、ＥＲＷと白金コロイド１０ｐｐｍを処理したサンプルを作製し、どの期間での処理が最も有効かを検出した。ＥＲＷと白金コロイド１０ｐｐｍを処理したサンプルにおいて、全期間及び後期処理したサンプルで有為な形質転換巣の抑制が見られた。
【０１２２】
＜実施例２＞
白金コロイドおよびＴＩ２００含有培地でのフォーカス形成抑制検出
本実施例では、実施例１に示した予備的検討の結果に基づき、より詳細な実験を行なうこととした。具体的には、形質転換巣を抑制するため、電解還元水ＥＲＷおよび濃度を変えた白金コロイドを処理した。処理期間はイニシエーター物質を処理する１日目からプロモーター物質の処理が終わる３週間目の１日目までとした。
【０１２３】
まず、電解還元水中に白金コロイドを含有する発癌抑制剤のフォーカス形成抑制効果を調べるため、表３の（ｏ−１）〜（ｒ−４）のようなバリエーションを持ったサンプルを作成した。実験に先立って、白金コロイドを１０ｐｐｍ、３ｐｐｍ、１ｐｐｍ、０．３ｐｐｍ、０．１ｐｐｍ含有する培地でｂａｌｂ／３Ｔ３細胞を培養し、細胞毒性を調査したところ、ほとんど毒性は見られなかった。表２は、白金コロイドと、電解還元水と、を含有する発癌抑制剤による検定系のバリエーションを示す表である。
【０１２４】
【表２】
2004330146.tif 000004
【０１２５】
表２の（ｏ−１）〜（ｒ−４）のようなバリエーションを持ったサンプルを用いて、実施例１と同様の方法で図６に示す実験計画図に基づいて、フォーカスアッセイを行った。図６に示すように、ｏ，ｐ，ｑについてはそれぞれＥＲＷ処理したｏ−１，ｐ−１，ｑ−１と、ＥＲＷ処理しないｏ−２，ｐ−２，ｑ−２を作製した。ｏ，ｐ，ｑはそれぞれＰｔ１ｐｐｍ、３ｐｐｍ、１０ｐｐｍのサンプルである。これに、コントロールとして、ＭＣＡ、ＰＭＡのみ処理したｒ−３、ＭＣＡ、ＰＭＡ処理を行わないｒ−４を加え、最終的に８組作成した。
【０１２６】
なお、実験に用いるイニシエーターであるＭＣＡ（３−ｍｅｔｈｙｌ  ｃｈｏｌａｎｔｒｅｎｅ）は終濃度１μｇ／ｍｌ、プロモーターであるＰＭＡ（ｐｈｏｒｂｏｌ  １２−ｍｙｒｉｓｔａｔｅ  １３−ａｃｅｔａｔｅ）は終濃度３００ｎｇ／ｍｌ（０．４８６μＭ）処理した。ここで、イニシエーターは細胞のＤＮＡに損傷を与えてガン化させる物質である。また、ＰＭＡはガン研究の分野ではＤＮＡに損傷を受けた細胞のガン化を促進するプロモーター物質として良く使われる物質である。
【０１２７】
作業手順および観察結果
細胞播種（０日目）
形質転換用の細胞は６０ｍｍディッシュに１０４ｃｅｌｌｓ／ｄｉｓｈ播種した。播種後、直ちにトレイを前後左右に静かに数回ずつ振って、細胞を均一にディッシュに広げた。分散をしっかりやっておかないと、細胞が一箇所に集まり実験結果に影響を与えることになるので十分に分散させた。
【０１２８】
イニシエーター処理（１日目）
細胞を播種して２０〜２４時間後に、１０００倍濃度のＭＣＡを用いて１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地を終濃度１μｇ／ｍｌＭＣＡ含有培地に調整した。７２時間培養後、培地を吸い取り、新しい培地を５ｍｌずつ加えた。さらに４日間培養した。
【０１２９】
プロモーター処理（８日目）
処理条件をできるだけ均一にするため、ディッシュに分注した培地にＰＭＡを添加するのではなく、培地瓶にＰＭＡ添加培地を作製し、培地交換した。ＰＭＡ（ｐｈｏｒｂｏｌ−１２−ｍｙｒｉｓｔａｔｅ  ａｃｅｔａｔｅ）はガン研究の分野ではＤＮＡに損傷を受けた細胞のガン化を促進するプロモーター物質として有名であるが、同時にプロテインキナーゼＣのシグナル誘導物質として低濃度で使用されることで有名である。また、主に免疫細胞を使用した実験系で終濃度１００ｎｇ／ｍｌ前後で使用され、活性酸素を発生させることでも知られている。
【０１３０】
８日目の時点で、ディッシュ中の細胞は飽和密度状態になっていた。そこで、ここから固定するまでの培地交換は、吸引ピペットの先をディッシュの底に触れないように行った。ディッシュに接触すると、ピペットが単層状態の細胞を押しつぶし、形質転換巣と見間違えることがあるらしいので十分に注意して作業を行った。この際、少し培地を残すように注意して培地交換を続けた。
【０１３１】
長期培養
培地交換は始めの４週間は週に２回、後の２週間は週に１回行った。培地交換をする時は、形質転換巣が飛び散らないように必ず口先の広いピペットを使い、ディッシュに近づけ、円を描くように全体に培地を静かに分注した。カビなどによるコンタミを防ぐため、インキュベーターは隅々まで分解してＳＤＳとアルコールを用いて丁寧に滅菌した。また、プレートを長期間換えないため、手袋を使用し、手からの細菌汚染に極力配慮して作業を行った。
【０１３２】
固定と染色
観察を予定していたそれぞれの培養日数において培地を吸い取り、洗浄瓶でメタノールを２ｍｌ添加し、５分以上放置した。形質転換巣ははがれやすくなっているので、形質転換巣に向かって勢いよく分注するのは避けるように注意して作業した。
【０１３３】
ここで、ＰＢＳで洗ってからメタノール固定を行わないと、培地中の血清タンパクは白く凝固するが、メタノールを除去後、乾燥しないうちにギムザ染色液を加えれば問題はない。手間を省くため、およびＰＢＳで洗うことによる形質転換巣の剥離を避けるため、すぐメタノール固定するように注意して作業した。ただし、一度乾燥してしまうと血清タンパク質は固定されてしまい、形質転換巣の判定がしにくくなるため乾燥させないように注意して作業した。
【０１３４】
メタノールを除去後、乾燥しないうちにギムザ染色液を洗浄瓶で２ｍｌずつ分注し、１５分以上放置した。数時間放置すると濃く染まりすぎるため、形質転換巣の細胞の形態が分かりにくくなり、また、単層部分の色も濃くなるため、形質転換巣がバックと明瞭に区別しにくくなるのであまり長時間は放置しないように注意して作業した。
【０１３５】
次いで、ギムザ溶液を捨てて、水ですすいだ。水は各ディッシュに３ｍｌ分注し、ギムザ溶液を取り除いた。このとき、あまり強く流水を当てると形質転換巣がはげてしまうことがあるので注意して作業した。
【０１３６】
続けて、ディッシュをひっくり返して自然乾燥させた。ディッシュ表面がぬれている時に触れると細胞がはげてしまうので、完全に乾燥するまでは細胞表面は触らないよう注意して作業した。一度乾燥した細胞は長期間保存可能なので、ダンボール箱に入れ、お互いが混ざらないように気をつけて保存した。
【０１３７】
ちなみに、図６では最大６週間培養する実験計画予定していたが、細胞の状態によっては２５日程度でコロニーを観察できる例も少なくなく、必ずしも６週間培養しなくてもよい。本実施例では、６週間を待たずしてコロニーの観察が可能となったため、６週間を待たずしてコロニーを回収して観察した。
【０１３８】
目視観察による判定
各プレートの形質転換巣の数を形質転換巣の直径ごとに目視にて判定し、集計した。結果を図７〜図１６に示す。
【０１３９】
観察結果（培養２２日目）
培養２２日目（３週間と１日）の時点で図５の実験計画図の２８日目に採取して培養したサンプルに肉眼で判別できるコロニーの形成が確認できた。ｒ−４のコントロールのプレートではコロニーが確認できなかったため、この時点でのバックグラウンドはゼロに近いと思われる。ｒ−３、ｏ−２、ｐ−２、ｑ−２、ｑ−１のそれぞれのディッシュで一桁台のコロニーが確認できた。大きさは大きなもので３ｍｍ程度と思われる。ｏ−１、ｐ−１ではコロニーが１つか２つで、ｒ−３、ｏ−２、ｐ−２、ｑ−２、ｑ−１と比較するとコロニー形成が抑制されているのではないかと思われる。また、ポジティブコントロールのｒ−３に比べると白金のみ処理したｏ−２、ｐ−２、ｑ−２におけるコロニー形成が少し多いようだった。
【０１４０】
観察結果（培養２９日目）
培養２９日目（４週間と１日）の時点で、図５の実験計画図の２８日目に採取して培養したサンプルを回収し、染色した。ＭＣＡとＰＭＡ処理のみを施したサンプルｒ−３において、肉眼ではっきりと判別できるほどコロニーが観察できた。それに対し、ＥＲＷと白金１ｐｐｍ処理を施したサンプルｏ−１においてコロニーの抑制が見られ、さらにＥＲＷと白金３ｐｐｍのｐ−１、ＥＲＷと白金１０ｐｐｍを施したｑ−１において、ほとんどコロニーが出ないほどの変異抑制が観察された。ただし、白金のみを処理したサンプルにおいてはｒ−３と比較してコロニー数が若干増え、大きなコロニーが観察される傾向が見られた。これらの培養２９日目の観察結果を、実施例２のフォーカスアッセイの結果を集計したグラフ図である図１３および図１４にまとめる。
【０１４１】
また、実施例２のフォーカスアッセイにおける直径６ｍｍ以上のコロニーの比較を示すグラフ図として図１５を、実施例２のフォーカスアッセイにおける直径４〜５ｍｍのコロニーの比較を示すグラフ図として図１６を、実施例２のフォーカスアッセイにおける直径２〜３ｍｍのコロニーの比較を示すグラフ図として図１７を、表示してこれらの観察結果をまとめる。
【０１４２】
繰返し実験
上述の実験の再現性を確認するために、さらに２回、同一の条件で実験を繰返した。ただし、コロニーの成長具合が早かったため、２回目と３回目の実験では、３週間半（２４日目）で固定、染色、観察、判定を行った。これらの２回目と３回目の観察結果を、実施例２のフォーカスアッセイの結果を集計したグラフ図である図１８〜図２３にまとめる。
【０１４３】
図１３〜図２３の結果より、全体的にＥＲＷと白金を組み合わせたサンプルにおいて、ＭＣＡとＰＭＡのみ処理したコントロールと比較して顕著な発ガンコロニーフォーカス形成の抑制傾向が見られた。特に、二回目のＥＲＷとＰｔ１ｐｐｍ、３ｐｐｍおよびＰｔ１０ｐｐｍ処理したサンプルにおいて、ＭＣＡとＰＭＡのみ処理したコントロールとの間でＰ＜０．０５の有意差が（図１９）、三回目のＥＲＷとＰｔ１０ｐｐｍ処理したサンプルでＰ＜０．０００５の有意差が見られた（図２２）。また、比較的大きなコロニーの数が減少していることから、ＥＲＷと白金の組み合わせはコロニーを縮小する作用があることがうかがえる（図１５、図１６、図２２、図２３）。
【０１４４】
また、白金のみを濃度を変えて処理したサンプルにおいてはフォーカス形成抑制傾向は見られなかったことから、白金とＥＲＷの相互作用によりフォーカス形成の抑制が行われていると考えられる。
【０１４５】
今回、フォーカスアッセイの発ガンプロモーターとして用いられたＰＭＡはプロテインキナーゼＣの活性化剤として知られているが、一方で、細胞内でＨ２Ｏ２やＯ２−などの活性酸素を誘導することも知られている。白金とＥＲＷの相互作用によりフォーカス形成の抑制が行われた原因として、白金がＥＲＷに含まれる水素をトラップし、還元作用を持った状態で細胞に取り込まれることで、Ｈ２Ｏ２やＯ２−などの活性酸素を還元し、フォーカスの形成を抑制したのではないかと考えられる。
【０１４６】
また、二回目のフォーカスアッセイ（図２０）では何も処理していないサンプルよりもＥＲＷと白金コロイド１０ｐｐｍを処理したサンプルのフォーカス形成効率が落ちていたことから、ＥＲＷと白金コロイドを同時に処理することで、自然突然変異を誘起する活性酸素によるＤＮＡ損傷を抑制しているか、ＤＮＡの修復が促進される、あるいはガン細胞特異的にアポトーシスを起させている、発ガン性物質細胞への取り込みを抑制している、という４つの可能性が考えられる。
【０１４７】
＜実施例３＞
本実施例においては、まず、ＥＲＷ、白金コロイドのＴ２−２００Ｓ細胞の増殖曲線に与える影響を調べるため、表３および表４に示す条件で、Ｔ２−２００Ｓ細胞の増殖曲線の比較を行った。
【０１４８】
【表３】
2004330146.tif 000005
【０１４９】
本実施例においては、次いで、ＥＲＷ、白金コロイドのヒト白血病細胞であるＫＵ−８１２細胞の増殖曲線に与える影響を調べるため、表３および表４に示す条件で、ＫＵ−８１２細胞の増殖曲線の比較を行った。
【０１５０】
【表４】
2004330146.tif 000006
【０１５１】
図２４は、表３に示す実験結果におけるコントロール群（左上）、ＥＲＷ群（右上）、窒素注入ＲＷ群（左下）、水素注入ＭＱ群（右下）の細胞数の変化を示すグラフ図である。
【０１５２】
図２５は、表４に示す実験結果におけるコントロール群（左上）、ＥＲＷ群（右上）、ＮａＯＨ群（左下）の細胞数の変化を示すグラフ図である。
【０１５３】
さらに、本実施例においては、ＥＲＷ、白金コロイドのＢａｌｂ／３Ｔ３細胞（マウス全胎仔由来細胞）の増殖曲線に与える影響を調べるため、細胞を１．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌの密度で播き、無処理のコントロール、ＥＲＷ含有培地、１０ｐｐｍのＰｔコロイド含有培地、ＥＲＷと１０ｐｐｍのＰｔコロイド含有培地により培養されたサンプル間での増殖曲線の比較を９日間にわたって行った。
【０１５４】
図２６および図２７は、９日間にわたる実験結果におけるコントロール群、ＥＲＷ群、Ｐｔ群、ＥＲＷ＋Ｐｔ群の細胞数の変化を示すグラフ図である。
【０１５５】
表３、表４、図２４〜図２６の結果より、Ｐｔ＋ＥＲＷ処理を行ったサンプルの増殖抑制が顕著に優れていることがわかる。また、増殖抑制能はＰｔ濃度依存的であることもわかる。特に図２６の結果においては、ＥＲＷにおける増殖増強が示唆された。また、白金濃度を１０ｐｐｍと高めに設定したため、コントロールに比べてＰｔ処理、Ｐｔ＋ＥＲＷ処理を行ったサンプルの増殖抑制が顕著に示された。
【０１５６】
今回開示された実施の形態および実施例はすべての点で例示であって制限的なものではないと考えられるべきである。本発明の範囲は上記した説明ではなくて特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲と均等の意味および範囲内でのすべての変更が含まれることが意図される。
【０１５７】
＜活性水素溶存水の製造方法についての実施例＞
本発明の活性水素溶存水の製造方法の効果を実証するために、白金コロイドを電気分解または水素ガスバブリングなどにより得られる溶存水素を含む水溶液に添加すると、白金コロイドは溶存水素を含む水溶液の抗酸化性を長期間安定に保持するだけでなく、溶存水素を含む水溶液に触媒として作用して、水素溶存水中で活性水素を発生させて活性水素溶存水を生成すること示すデータを得る実験を行った。
【０１５８】
＜実施例４＞
本発明者は、本実施例において、超純水にＮａＯＨを電解質として電解還元装置（（株）日本トリム製、ＴＩ２００）により作製した電解還元水中の白金を電子顕微鏡により観察した。電子顕微鏡による観察結果を図２８に示す。
【０１５９】
図２８に示すように、電解還元水中の白金は、白金の微粒子、白金ナノコロイドの状態で存在していることがわかる。
【０１６０】
また、この電解還元水中の白金の含有量を、コントロールの超純水のデータとともに、表５に示す。
【０１６１】
【表５】
2004330146.tif 000007
【０１６２】
このように、超微粒子である白金ナノコロイドなどの水素吸着・吸蔵金属コロイドは、金属でありながら溶液中に均一に分散することができることが明らかとなった。そして、その粒子サイズがナノメーターサイズの金属ナノコロイドは極めて強い触媒活性を有する。さらに、白金などの水素吸着・吸蔵金属は、活性水素に対して吸着能を有する。しかし、白金コロイドなどの水素吸着・吸蔵金属コロイドの生理活性については未知の点も多いため、本実施例では、電解還元水中に存在する活性水素供与体および／または活性水素生成触媒としての白金コロイドの機能および活性酸素消去能について実験を行った。
【０１６３】
白金コロイドの作製
エタノール還元によって白金コロイドを作製した。具体的には、ヘキサクロロ白金酸水素を、それぞれ終濃度として、０．５％Ｔｗｅｅｎ、１０％エタノール、４０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）と混合して、６０℃で１０〜１５時間インキュベートして白金ナノコロイドを作製した。
【０１６４】
その結果、図２９に示すような平均粒径２ナノメートルの白金が得られた。この白金ナノコロイドを用いて以下の実験を行った。
【０１６５】
活性水素供与体としての機能
白金ナノコロイドの活性水素供与体としての機能について、ＤＰＰＨ（１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル）を用いて実験を行った。ＤＰＰＨは安定なラジカルとして知られており、水素の供与によりそのラジカル性を消失することが知られている。そこで、白金ナノコロイドでＤＰＰＨを処理することにより白金ナノコロイドが活性水素供与体として機能するかどうかの実験をＥＳＲによる測定により行った。ＥＳＲの測定結果を図３０に示す。
【０１６６】
図３０の結果から、白金ナノコロイドでＤＰＰＨを処理することによりＤＰＰＨのラジカル性が消失していることがわかる。
【０１６７】
ここで、白金ナノコロイドは強力な触媒能を有している。そのため、白金ナノコロイドがＤＰＰＨそのものを触媒作用により分解させてしまった結果、ＤＰＰＨのＥＳＲシグナルが減少した可能性がある。そこで、白金ナノコロイドによってＤＰＰＨが分解されていないことを示すために、ＴＬＣを用いて確認した。ＴＬＣの結果を図３１に示す。
【０１６８】
図３１に示したように、ＵＶ照射によりＤＰＰＨは幾つかのスポットに分解されたのに対し、白金コロイドはＡＳＡと同様に活性水素補足ＤＰＰＨの単一スポットを示したので、白金ナノコロイドによってＤＰＰＨは分解していないことが分かった。
【０１６９】
さらにこのＤＰＰＨラジカル補足活性の結果から推測される白金ナノコロイドの活性水素供与能力を算出した。その結果、白金ナノコロイド１ｐｐｍあたり約５０μモルの水素を供与していると推測された。算出した白金ナノコロイドの活性水素供与能力のグラフを図３２に示す。
【０１７０】
以上の結果から、水溶液中に遊離の水素分子の存在がない状態でも、白金ナノコロイドは単独で活性水素を供与することができると推測される。すなわち、白金ナノコロイドは活性水素による還元、たとえばエタノール由来の活性水素によってヘキサクロロ白金酸水素などが還元されることにより生成するため、その際に白金ナノコロイドは飽和濃度の活性水素を吸着することにより、単独で活性水素供与体として機能する能力を有することとなることが考えられる。
【０１７１】
もう一つの可能性として、白金ナノコロイドは、水素ガスなどの還元性物質が存在した場合に、水素ガスに対して触媒として作用して活性水素を生成し、活性水素を供与する可能性が考えられる。いずれにしても、白金ナノコロイドが活性水素供与体および／または活性水素生成触媒として働いていることは間違いないと考えられる。
【０１７２】
白金ナノコロイドの活性酸素消去能
白金ナノコロイドの活性酸素消去能について、スーパーオキシドラジカルを用いて実験を行った。
【０１７３】
具体的には、ヒポキサンチンおよびキサンチンオキシダーゼにより発生させたスーパーオキシドラジカルはスピントラップ剤であるＤＭＰＯにラジカルをトラップし、ＤＭＰＯＯＨとなり、このラジカルをＥＳＲにより検出した。この際、白金ナノコロイドでスーパーオキシドラジカルを処理した場合に、ＥＳＲの信号強度が減少するかどうかの検討を行った。結果を図３３に示す。
【０１７４】
図３３に示したように、約１０ｐｐｍの白金ナノコロイドによる処理により、ほぼ完全にスーパーオキシドラジカルは消去され、ＥＳＲのＤＭＰＯＯＨ信号は減少した。また、図３４に示すように、白金ナノコロイドのスーパーオキシド補足能力（活性酸素消去能）は白金ナノコロイド濃度依存的に増加した。この酵素反応では尿酸生成を伴うが、白金ナノコロイドの尿酸生成に及ぼす影響を別途検討し、酵素反応には影響していないことを確認している。
【０１７５】
これらの結果から他の抗酸化物質と比較、評価をするために、白金ナノコロイドの平均粒子径２ｎｍから算出されるモル濃度を計算し、阻害率５０％から算出される白金コロイドの２次反応速度定数を求めた。結果を表６に示す。
【０１７６】
【表６】
2004330146.tif 000008
【０１７７】
表６に示すように、白金ナノコロイドの２次反応速度定数は１．０×１０８（Ｍ−１ｓ−１）となり、他の抗酸化物質と比較した中でも高い活性を有する物質であることがわかった。
【０１７８】
ヒドロキシラジカルの消去能
次に、白金ナノコロイドのヒドロキシラジカル消去能について、フェントン反応により発生したヒドロキシラジカルを用いて実験を行った。
【０１７９】
具体的には、フェントン反応により発生したヒドロキシラジカルはスピントラップ剤であるＤＭＰＯにラジカルをトラップし、ＤＭＰＯＯＨとなり、このラジカルをＥＳＲにより検出した。この際、白金ナノコロイドでヒドロキシラジカルを処理した場合に、ＥＳＲの信号強度が減少するかどうかの検討を行った。結果を図３５に示す。
【０１８０】
図３５に示したように、約５ｐｐｍの白金ナノコロイドによる処理により、ほぼ完全にヒドロキシラジカルは消去され、ＥＳＲのＤＭＰＯＯＨ信号は減少した。また、図３６に示すように、白金ナノコロイドのヒドロキシラジカル補足能力（活性酸素消去能）は白金ナノコロイド濃度依存的に増加した。
【０１８１】
過酸化水素の消去能
次に、白金ナノコロイドの過酸化水素消去能について、市販の過酸化水素を用いて実験を行った。
【０１８２】
具体的には、過酸化水素を白金ナノコロイドと５分間反応させ、その後の残存過酸化水素量についてＡＢＴＳ−ＰＯＤ法を用いて測定した。その結果、図３７に示すように、白金コロイドは、濃度依存的に過酸化水素消去能を有することがわかった。
【０１８３】
以上の結果から、エタノール還元により合成された白金ナノコロイドはスーパーオキシド、ヒドロキシラジカル、過酸化水素に対し、高い消去活性を有することが明らかとなった。
【０１８４】
すなわち、透過型電子顕微鏡による解析の結果、電解還元水中に白金ナノコロイドが存在することが明らかとなった。また合成白金ナノコロイドはＤＰＰＨラジカル補足能を示したことから、活性水素供与体および／または活性水素生成触媒として機能することがわかった。また白金ナノコロイドはスーパーオキシドラジカル、ヒドロキシラジカル、過酸化水素などの活性酸素を消去した。以上の結果から、白金ナノコロイドは活性水素供与体および／または活性水素生成触媒として機能し、こうして得られた活性水素が種々の生理活性機能を発揮するという活性水素還元水説が強く支持される。
【０１８５】
【発明の効果】
上記の結果より、水素吸着・吸蔵金属コロイドを電気分解または水素ガスバブリングなどにより得られる溶存水素を含む水溶液に添加すると、水素吸着・吸蔵金属コロイドは溶存水素を含む水溶液の抗酸化性を長期間安定に保持するだけでなく、溶存水素を含む水溶液に触媒として作用して、水素溶存水中で活性水素を発生させて活性水素溶存水を生成することがわかる。
【０１８６】
よって、本発明の活性水素溶存水の製造方法は、強力な抗酸化作用を長期間安定的に保持する活性水素溶存水を簡便に製造することのできる、活性水素溶存水の製造方法である。また、本発明の活性水素溶存水は、本発明の活性水素溶存水の製造方法により得られるため、強力な抗酸化作用を長期間安定的に保持する活性水素溶存水である。
【０１８７】
さらに、上記のフォーカスアッセイより、本発明の活性水素溶存水の製造方法により得られる活性水素溶存水は、強力な抗酸化作用を長期間安定的に保持するため、マウス、ヒトをはじめとする哺乳類動物の正常細胞が形質転換を起こして癌細胞に変異することを抑制し、優れた発癌抑制作用を有することがわかる。
【０１８８】
よって、本発明の発癌抑制剤は、本発明の活性水素溶存水を含有しているため、強力な抗酸化作用を長期間安定的に保持し、マウス、ヒトをはじめとする哺乳類動物の正常細胞が形質転換を起こして癌細胞に変異することを抑制し、さらに公知の抗癌剤のような副作用のない、発癌抑制剤である。
【図面の簡単な説明】
【図１】白金コロイドと、電解還元水と、を含有する発癌抑制剤を製造するために用いる、電解槽の概要を示す模式図である。
【図２】白金コロイドと、電解還元水と、を含有する発癌抑制剤を製造するために用いる、電気分解の効率を高めた電解槽の概要を示す模式図であり、（ａ）は、電解槽を２つ直列に連結した装置（日本トリム製ＴＩ−７０００Ｓ）、（ｂ）は、電解槽を３つ直列に連結した装置（日本トリム製ＴＩ−７０００  ３Ｓ）、また、（ｃ）は、電解還元水が循環して３つの電解槽を何度も通過するようにした装置（循環電解還元装置）を示す。
【図３】透過型電子顕微鏡による実施例１〜４で用いられる白金コロイドの表面状態を表す図である。
【図４】ＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞の正常細胞（左上）と形質転換細胞（右下）の顕微鏡写真を示す図である。
【図５】実施例１で行なう化学物質を用いるフォーカスアッセイ法の一例を説明する実験計画図である。
【図６】実施例２で行なう化学物質を用いるフォーカスアッセイ法の一例を説明する実験計画図である。
【図７】実施例２におけるコントロールｒ−４（左２枚）とＭＣＡ＋ＰＭＡのみ処理したプレートｒ−３（中央２枚）とＥＲＷ＋Ｐｔ１ｐｐｍを処理したプレートｏ−１（右２枚）との比較を示す図である。
【図８】実施例２におけるコントロールｒ−４（左２枚）とＭＣＡ＋ＰＭＡのみ処理したプレートｒ−３（中央２枚）とＥＲＷ＋Ｐｔ３ｐｐｍを処理したプレートｐ−１（右２枚）との比較を示す図である。
【図９】実施例２におけるコントロールｒ−４（左２枚）とＭＣＡ＋ＰＭＡのみ処理したプレートｒ−３（中央２枚）とＥＲＷ＋Ｐｔ１０ｐｐｍを処理したプレートｑ−１（右２枚）との比較を示す図である。
【図１０】実施例２におけるコントロールｒ−４（左２枚）とＭＣＡ＋ＰＭＡのみ処理したプレートｒ−３（中央２枚）とＰｔ１ｐｐｍを処理したプレートｏ−２（右２枚）との比較を示す図である。
【図１１】実施例２におけるコントロールｒ−４（左２枚）とＭＣＡ＋ＰＭＡのみ処理したプレートｒ−３（中央２枚）とＰｔ３ｐｐｍを処理したプレートｐ−２（右２枚）との比較を示す図である。
【図１２】実施例２におけるコントロールｒ−４（左２枚）とＭＣＡ＋ＰＭＡのみ処理したプレートｒ−３（中央２枚）とＰｔ１０ｐｐｍを処理したプレートｑ−２（右２枚）との比較を示す図である。
【図１３】実施例２の１回目のフォーカスアッセイの結果を集計したグラフ図である。
【図１４】実施例２の１回目のフォーカスアッセイの結果を集計したグラフ図である。
【図１５】実施例２の１回目のフォーカスアッセイにおける直径６ｍｍ以上のコロニーの比較を示すグラフ図である。
【図１６】実施例２の１回目のフォーカスアッセイにおける直径４〜５ｍｍのコロニーの比較を示すグラフ図である。
【図１７】実施例２の１回目のフォーカスアッセイにおける直径２〜３ｍｍのコロニーの比較を示すグラフ図である。
【図１８】実施例２の２回目のフォーカスアッセイの結果を集計したグラフ図である。
【図１９】実施例２の２回目のフォーカスアッセイの結果を集計したグラフ図である。
【図２０】実施例２の２回目のフォーカスアッセイにおける直径２〜３ｍｍのコロニーの比較を示すグラフ図である。
【図２１】実施例３の２回目のフォーカスアッセイの結果を集計したグラフ図である。
【図２２】実施例２の３回目のフォーカスアッセイの結果を集計したグラフ図である。
【図２３】実施例２の３回目のフォーカスアッセイにおける直径２〜３ｍｍのコロニーの比較を示すグラフ図である。
【図２４】表４に示す実験結果におけるコントロール群（左上）、ＥＲＷ群（右上）、窒素注入ＲＷ群（左下）、水素注入ＭＱ群（右下）の細胞数の変化を示すグラフ図である。
【図２５】表５に示す実験結果におけるコントロール群（左上）、ＥＲＷ群（右上）、ＮａＯＨ群（左下）の細胞数の変化を示すグラフ図である。
【図２６】９日間にわたる実験結果におけるコントロール群、ＥＲＷ群、Ｐｔ群、ＥＲＷ＋Ｐｔ群の細胞数の変化を示すグラフ図である。
【図２７】９日間にわたる実験結果におけるコントロール群、ＥＲＷ群、Ｐｔ群、ＥＲＷ＋Ｐｔ群の細胞数の変化を示すグラフ図である。
【図２８】白金ナノコロイドの電子顕微鏡写真を示す図である。
【図２９】白金ナノコロイドの電子顕微鏡写真を示す図である。
【図３０】白金ナノコロイドでＤＰＰＨを処理した場合のＥＳＲによる測定結果を示す図である。
【図３１】白金ナノコロイドでＤＰＰＨを処理した場合のＴＬＣの結果を示す図である。
【図３２】ＥＳＲの測定結果から算出した白金ナノコロイドの活性水素供与能力を示すグラフ図である。
【図３３】白金ナノコロイドでスーパーオキシドラジカルを処理した場合のＥＳＲによる測定結果を示す図である。
【図３４】ＥＳＲの測定結果から算出した白金ナノコロイドのスーパーオキシドラジカル消去能を示すグラフ図である。
【図３５】白金ナノコロイドでヒドロキシラジカルを処理した場合のＥＳＲによる測定結果を示す図である。
【図３６】ＥＳＲの測定結果から算出した白金ナノコロイドのヒドロキシラジカル消去能を示すグラフ図である。
【図３７】ＡＢＴＳ−ＰＯＤ法による測定結果から算出した白金ナノコロイドの過酸化水素消去能を示すグラフ図である。
【符号の説明】
１  第１の電解槽、２  第２の電解槽、３  第３の電解槽、１０  電解層、１１  陰極、１２  陰極室、１３  陽極、１４  陽極室、１５  隔膜。
【図１】
2004330146.tif 000009
【図２】
2004330146.tif 000010
【図３】
2004330146.tif 000011
【図４】
2004330146.tif 000012
【図５】
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【図６】
2004330146.tif 000014
【図７】
2004330146.tif 000015
【図８】
2004330146.tif 000016
【図９】
2004330146.tif 000017
【図１０】
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【図１１】
2004330146.tif 000019
【図１２】
2004330146.tif 000020
【図１３】
2004330146.tif 000021
【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
2004330146.tif 000024
【図１７】
2004330146.tif 000025
【図１８】
2004330146.tif 000026
【図１９】
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【図２０】
2004330146.tif 000028
【図２１】
2004330146.tif 000029
【図２２】
2004330146.tif 000030
【図２３】
2004330146.tif 000031
【図２４】
2004330146.tif 000032
【図２５】
2004330146.tif 000033
【図２６】
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【図２７】
2004330146.tif 000035
【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
2004330146.tif 000041
【図３４】
2004330146.tif 000042
【図３５】
2004330146.tif 000043
【図３６】
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【図３７】
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