(57)【要約】【課題】ＩＶ型アレルギー反応が関与する炎症の予防乃至治療用組成物、並びに該組成物を配合してなる皮膚外用剤を提供すること。【解決手段】五環性トリテルペン酸、特に柿葉エタノール抽出物から得られる五環性トリテルペン酸を含有してなる、ＩＶ型アレルギー反応が関与する炎症の予防乃至治療用組成物、並びに該組成物を含有してなる皮膚外用剤。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１：
【化１】
2004010531.tif 000009
で表される五環性トリテルペン酸、その塩又は誘導体を含有することを特徴とする、ＩＶ型アレルギー反応が関与する炎症の予防乃至治療用組成物。
【請求項２】
五環性トリテルペン酸が、式２：
【化２】
2004010531.tif 000010
で表される五環性トリテルペン酸である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
（ｉ）柿葉を、エタノール又は水／エタノール溶媒で抽出する工程、及び（ｉｉ）抽出物を精製し、式１又は式２で表される五環性トリテルペン酸の含有量を高める工程を経て得られる、請求項１又は２のいずれかに記載の組成物。
【請求項４】
水／エタノール溶媒におけるエタノールの混合割合が５０重量％以上１００重量％未満である、請求項１乃至３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれかに記載の組成物を配合してなる皮膚外用剤。
【請求項６】
抗炎症或いは肌荒れ改善作用を有する請求項５に記載の皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ＩＶ型アレルギー反応が関与する炎症の予防乃至治療用組成物、及び該組成物を配合してなる皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
アトピー性皮膚炎は、Ｉ型アレルギー反応とＩＶ型アレルギー反応の両方が関与して起こると考えられており、急性病変部はＩ型アレルギー反応、慢性病変部はＩＶ型アレルギー反応に起因するとされている。
【０００３】
Ｉ型アレルギー反応とは、即時型反応で、肥満細胞と結合しているＩｇＥ抗体に抗原が再結合して、肥満細胞に連鎖反応が起こり、化学伝達物質が放出されて組織障害を起こすタイプのアレルギー反応である。気管支喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎などの一般的アレルギー疾患の大部分がこのＩ型のアレルギー反応が関与して起こる。
【０００４】
これに対し、ＩＶ型アレルギー反応は、抗体は関与せず、Ｔ細胞とマクロファージが主たる作用細胞となる。生体がある抗原で感作されると、感作細胞は様々なサイトカインを産生し、マクロファージとＴ細胞の局所への湿潤が起こる。この反応が完了するのに、１〜２日かかるため、遅延型反応ともいわれる。ツベルクリン反応、結核病変、臓器移植後の拒絶反応、化粧品かぶれ等の接触性皮膚炎などは、ＩＶ型のアレルギー反応が関与して起こるとされる。
【０００５】
Ｉ型アレルギー反応を抑制する作用を有する成分はこれまで多く見つかっているが、ＩＶ型アレルギー反応を抑制する作用を有する成分はあまり知られていなかった。
【０００６】
一方、柿葉抽出物が、抗アレルギー作用、特にＩ型アレルギーに対する抑制作用を有することも、近年、明らかになってきており、その有効成分として、アストラガリン等が報告されている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、柿葉エタノール抽出物から得られる、ＩＶ型アレルギー反応が関与する炎症の予防乃至治療用組成物、並びに、該組成物を配合してなる皮膚外用剤を提供することを主な目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、ＩＶ型アレルギー反応を抑制する作用を有する成分について、鋭意研究した結果、柿葉エタノール抽出物に含まれる、特定の構造を有する五環性トリテルペン酸、特に、バルビネルビン酸（Ｂａｒｂｉｎｅｒｖｉｃ　ａｃｉｄ）が、ＩＶ型アレルギー反応を有意に抑制する作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について、具体的に説明する。
【００１０】
ＩＶ型アレルギー反応が関与する炎症の予防乃至治療用組成物
本発明のＩＶ型アレルギー反応が関与する炎症の予防乃至治療用組成物には、有効成分として、下記
式１：
【００１１】
【化３】
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【００１２】
で表される五環性トリテルペン酸が含有される。
【００１３】
五環性トリテルペン酸は、塩又はその誘導体の形で含有されていてもよい。
【００１４】
塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、有機アミン塩などが挙げられる。
【００１５】
又、誘導体としては、例えば、水酸基がアセチル化されたアセチル誘導体などが挙げられる。
【００１６】
式１で表される五環性トリテルペン酸は、例えば、柿葉、リョウブ、クロガネモチなどを、エタノール又は水／エタノール溶媒で抽出して得られる抽出物などに含有される。
【００１７】
式１で表される五環性トリテルペン酸としては、バルビネルビン酸（Ｂａｒｂｉｎｅｒｖｉｃ　ａｃｉｄ）や、ロツンジン酸（Ｒｏｔｕｎｄｉｃ　ａｃｉｄ）、ロツンゲニン酸（Ｒｏｔｕｎｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ）などが挙げられる。
【００１８】
この中で、特に、
式２：
【００１９】
【化４】
2004010531.tif 000004
【００２０】
で表される化合物である、バルビネルビン酸が、より優れたＩＶ型アレルギー反応抑制作用を奏する点で好適である。
【００２１】
式１又は式２で表される五環性トリテルペン酸は、例えば、以下のように、柿葉をエタノール又は水／エタノール溶媒で抽出することによって得られる。
【００２２】
柿葉を、採取した後、そのまま抽出するために用いてもよいが、通常、慣用されている方法に従って前処理した後に抽出に供する。例えば、採取した後水洗し、適当な大きさ（通常３ｍｍ幅程度）に切断した後、蒸籠で蒸して乾燥することができる。採取した直後に切断し、常法に従って乾燥してもよい。或いは、通常の緑茶と同様に、蒸葉、撚稔、焙煎などの各工程を経たものであってもよい。また柿葉を水抽出した後の残渣を用いてもよい。　抽出溶媒としては、エタノール又は水／エタノール溶媒を用いる。特に、水／エタノール溶媒におけるエタノールの混合割合が、５０重量％以上１００重量％未満、更には、７０重量％以上９０重量％以下である溶媒を用いることが、より優れたＩＶ型アレルギー反応抑制作用を有する抽出物が得られる点で好ましい。
【００２３】
抽出温度は、特に限定されるものではないが、３０℃〜沸点程度が好ましく、６０〜８０℃程度がより好ましい。
【００２４】
抽出時間は、エタノールの含量や抽出温度に応じて適宜設定することができるが、通常、２０分〜２４時間程度であり、２５分〜４時間程度であることが好ましく、３０分〜２時間程度であることがより好ましい。
【００２５】
柿葉と抽出溶媒の割合についても、特に限定されず適宜設定することができるが、柿葉１重量部に対して、溶媒３〜３０重量部程度が好ましく、５〜２０重量部程度がより好ましく、５〜１０重量部程度がさらに好ましい。
【００２６】
上記のような抽出法により得られた抽出液（エキス）は、ろ過、遠心などの常法に従って柿葉と分離することができる。抽出液は、そのまま用いてもよいし、濃縮して用いてもよい。濃縮は、常法に従って行うことができ、例えば３０〜４０ｍｍＨｇ程度の減圧下で、３０〜５０℃程度で行うことができる。また、濃縮後、凍結乾燥、噴霧乾燥、造粒乾燥などの通常用いられている手段によりエキス末を得ることができる。
【００２７】
更に、抽出液、エキス末は、種々の溶媒を用いた液−液分配等の分配、再結晶、ゲル濾過、クロマトグラフィー等の慣用的な分離分画手法により、式１又は式２で示された五環性トリテルペン酸の含有量を高めた柿葉エタノール抽出精製物とすることができる。更に、上記操作を繰り返すことにより、バルビネルビン酸を単離することもできる。
【００２８】
本発明の組成物を得る方法は、式１又は式２で表される五環性トリテルペン酸が含有されるものである限り、特に限定されないが（ｉ）柿葉をエタノール又は水／エタノール溶媒で抽出する工程、及び、（ｉｉ）抽出物を精製し、式１又は式２で表される五環性トリテルペン酸の含有量を高める工程を経て得られるものが、より優れたＩＶ型アレルギー反応抑制作用を有する組成物が得られる点で好ましい。
【００２９】
（ｉｉ）の工程において、五環性トリテルペン酸の含有量を高める程度は、抽出物全量に対して１０重量％程度以上であり、好ましくは、２０重量％以上、より好ましくは４０重量％以上である。　また、１００重量％となるまで行い、五環性トリテルペン酸を単離して、用いても良い。
【００３０】
皮膚外用剤
本発明の皮膚外用剤は、上述した組成物を配合してなり、例えば、組成物を適当な担体と混合することによって得られる。
【００３１】
皮膚外用剤における、式１又は式２で表される五環性トリテルペン酸の含有量は、所期の効果が得られる限り特に制限されないが、好ましくは、０．００１〜５重量％程度、特に好ましくは、０．０１〜３重量％程度である。
【００３２】
担体としては、例えば、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、吸収促進剤、保湿剤、吸着剤、滑沢剤、充填剤、増量剤、付湿剤等の希釈剤又は賦形剤などが挙げられる。
【００３３】
皮膚外用剤の形態は、目的に応じて適宜選択することができ、代表的なものとしては、パウダー等の粉体製剤、液剤、懸濁剤、乳剤、ローション剤、エアゾール剤、軟膏剤等のクリーム状の製剤、パップ剤等が挙げられる。
【００３４】
本発明の皮膚外用剤は、上述の組成物を配合してなることから、ＩＶ型アレルギー反応が関与する炎症の抑制作用、具体的には、抗炎症或いは肌荒れ改善作用を有している。ＩＶ型アレルギー反応が関与する炎症としては、例えば、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接性触皮膚炎、蕁麻疹等が挙げられる。
【００３５】
これらの作用から、本発明の皮膚外用剤は、ＩＶ型アレルギー反応が関与する炎症の予防乃至治療用、具体的には、抗炎症又は肌荒れ改善用として、好適に用いることができる。
【００３６】
【実施例】
本発明を実施例及び処方例により説明するが、本発明は、これらに限定されるものでない。また、特に記載されていない限り、「％」は「重量％」を表す。
【００３７】
ＩＶ型アレルギー反応の抑制作用を調べるための測定方法
７週令のＢａｌｂ／ｃ系雌性マウスを日本エスエルシー（株）より購入した。飼育条件は室温２３℃±３℃、湿度５５±１５％、明暗サイクル１２時間（明期７：００〜１９：００）とし、飼料は固形飼料（ラボＭＲストック、日本農産工業（株））を、飲水は水道水を自由に摂取させた。予備飼育後、３匹／群に分け、オキサゾロンの１．０％アセトン／オリーブオイル（４：１）溶液を、毛刈したマウスの腹部に２５μｌ塗布して感作した。５日後に０．２５％オキサゾロンのアセトン／オリーブオイル（４：１）溶液を２５μｌマウスの両耳介に塗布してアレルギー反応を惹起した。評価サンプルは惹起１時間前に１回のみ３０μｌ塗布した。アレルギー反応の強度を判定するため、惹起後２４時間の耳介の厚みと惹起前の耳介の厚みをデジタルダイヤルゲージＤＧ−２０５（（株）尾崎製作所）で測定し、耳介浮腫率より被検物質の耳介浮腫抑制率を求めた。評価サンプルはエタノールで５％に調整して用いたが、図２の実験ではエタノールで０．５％、図４の実験ではエタノールで３％に調整して用いた。測定値は平均値と標準誤差で表した。各群間の統計学的解析はｔ−検定を用い、５％以下の危険率を有意とした。
【００３８】
耳介浮腫率（％）＝
［惹起後の耳介の厚さ−惹起前の耳介の厚さ／惹起前の耳介の厚さ］×１００
被検物質の耳介浮腫抑制率（％）＝
［被検物質塗布群の平均浮腫率−溶媒塗布群の平均浮腫率／被検物質塗布群の平均浮腫率］×１００
実施例１
柿の乾燥葉３００ｇにエタノール６Ｌを加え、加熱環流による抽出を２回行い、抽出液を得、次いでこの抽出液を濃縮乾固し、柿葉エタノール抽出物を２９．２ｇ得た。柿葉エタノール抽出物１ｇに対し、シリカゲルカラム（クロマトレックス−ＯＤＳ）を用い、２０％から１００％までメタノールと蒸留水の比率を変え、分画、濃縮乾固し、分画１（２０％エタノール溶出部）を２４８ｍｇ、分画２（４０％エタノール抽出部）を１８４ｍｇ、分画３（６０％エタノール溶出部）を８７ｍｇ、分画４（８０％エタノール溶出部）を１５３ｍｇ、及び分画５（１００％エタノール溶出部）を２６３ｍｇ得た。各分画物に対し、ＩＶ型アレルギー反応抑制作用に関する評価を上述の方法で行った。未処置（溶媒塗布群）の耳介厚み増加量が０．１６８±０．０３０２ｍｍであったのに対し、柿葉エタノール抽出物塗布群の耳介厚み増加量は０．０９３８±０．０２５１ｍｍであり、エタノール抽出物塗布群の耳介浮腫抑制率は４３．１％であった。柿葉エタノール抽出物はアレルギー反応惹起前の塗布により、有意に耳介浮腫を抑制した。各分画物のうち分画物分画４塗布群の耳介厚み増加量は０．０３８３±０．０１３７ｍｍであり、耳介浮腫抑制率は７６．６％であった。分画４が、もっとも高い抑制効果を示した（図１参照）。
【００３９】
実施例２
シリカゲルカラム処理、再結晶により、実施例１における分画４を単離精製し、有効成分と考えられる化合物を得た。この化合物を公知の方法に従い、メチルエステル体へと誘導し、１Ｈ−ＮＭＲの物性値から化合物の構造を決定した。表１に示したように、リョウブ（Ｃｌｅｔｈｒａ　Ｂａｒｂｉｎｅｒｖｉｓ　Ｓｉｅｂ．ｅｔ　Ｚｕｃｃ．）に含まれる五環性トリテルペン酸バルビネルビン酸の値（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２５（５），１９７７，ｐ．９８１−ｐ．９８５）と一致したことから、ＩＶ型アレルギー反応の抑制効果を示す有効成分を、バルビネルビン酸であると同定した。
【００４０】
【表１】
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【００４１】
実施例３
バルビネルビン酸及び構造類似化合物のＩＶ型アレルギー反応の抑制作用に関する評価を上述の測定方法にて行った。バルビネルビン酸塗布群の耳介厚み増加量は０．０６４１±０．０１７ｍｍであり、コントロールと比較し、有意に耳介浮腫を抑制した。一方、類似骨格を有する代表的な化合物は耳介浮腫を抑制したが、効果は低かった（図２参照）。また、グリチルリチン酸塗布群においても耳介浮腫の抑制効果は低かった（図３参照）。
【００４２】
参考例１
柿葉熱水抽出物（柿葉を熱水で抽出した物）及び柿葉エタノール抽出物のＩＶ型アレルギー反応抑制作用に関する評価を、上述の測定方法にて行った。柿葉エタノール抽出物塗布群は、有意に、耳介浮腫を抑制した。一方、柿葉熱水抽出物は、耳介浮腫をあまり抑制しなかった（図４参照）。
【００４３】
以下に本発明の処方例を、処方例１〜５に示す。これらは常法に従って製造できる。
【００４４】
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2004010531.tif 000008
【００４５】
【発明の効果】
式１又は式２で表される五環性トリテルペン酸を含有する本発明の組成物は、ＩＶ型アレルギー反応を有意に抑制する作用を有し、ＩＶ型アレルギー反応が関与する炎症の予防乃至治療用組成物として有効に利用することができる。
【００４６】
また、上記組成物を配合してなる、本発明の皮膚外用剤は、ＩＶ型アレルギー反応抑制作用、更には、抗炎症又は肌荒れ改善作用を有し、ＩＶ型アレルギー反応が関与する炎症の予防乃至治療用、更には、抗炎症又は肌荒れ改善用として、有用に利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、柿の葉エタノール抽出物及び分画物のＩＶ型アレルギー反応抑制作用の測定結果を示す図面である。
【図２】図２は、バルビネルビン酸及び構造類似化合物のＩＶ型アレルギー反応抑制作用の測定結果を示す図面である。
【図３】図３は、バルビネルビン酸とグリチルリチン酸のＩＶ型アレルギー反応抑制作用をそれぞれコントロールと比較した結果を示す図面である。
【図４】図４は、柿の葉熱水抽出物と柿の葉エタノール抽出物のＩＶ型アレルギー反応抑制作用を比較した結果を示す図面である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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