(57)【要約】【課題】蛋白質阻害活性を有し、かつ高い安定性を有するリベロマイシンＡ誘導体、その製造方法およびそれを有効成分とする蛋白質合成阻害剤の提供を課題とする。【解決手段】下記の一般式（Ｉ）【化１】2004059471.tif 000017（一般式（Ｉ）中、Ｒは炭素数が１〜９のアルコキシ基を示す。）で示される化合物。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式（Ｉ）
【化１】
2004059471.tif 000012
（一般式（Ｉ）中、Ｒは炭素数が１〜９のアルコキシ基を示す。）
で示される化合物。
【請求項２】
下記の構造式（ＩＩ）で示される化合物。
【化２】
2004059471.tif 000013
【請求項３】
下記の構造式（ＩＩＩ）で示される化合物。
【化３】
2004059471.tif 000014
【請求項４】
１）リベロマイシンＡの１８位のヘミサクシニル基を水酸基に加水分解し、
２）１位および２４位のカルボキシル基をエステル化し、
３）５位の水酸基を保護基で保護し、
４）１８位の水酸基をメチル化し、
５）１位および２４位のエステル基を加水分解し、
６）５位の保護基を脱保護する、
ことを特徴とする構造式（ＩＶ）
【化４】
2004059471.tif 000015
で示される化合物の製造方法。
【請求項５】
１）リベロマイシンＡの１８位のヘミサクシニル基を水酸基に加水分解し、
２）１位および２４位のカルボキシル基をエステル化し、
３）５位の水酸基を保護基で保護し、
４）１８位の水酸基をメチルチオメチル化し、
５）１位および２４位のエステル基を選択的に加水分解し、
６）５位の保護基を脱保護する、
ことを特徴とする構造式（Ｖ）
【化５】
2004059471.tif 000016
で示される化合物の製造方法。
【請求項６】
一般式（Ｉ）で示される化合物を有効成分として含有することを特徴とする蛋白質合成阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、リベロマイシンＡ誘導体、およびその製造方法に関する。本発明は、さらに、リベロマイシンＡ誘導体を有効成分として含有する蛋白質合成阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
癌細胞の異常な増殖は、細胞増殖因子伝達系の異常に由来することが多い。例えば、多くの癌細胞では自己増殖を促進する腫瘍増殖因子アルファ　（ＴＧＦ−α）を分泌することが知られている。従ってＴＧＦ−αの作用を選択的に阻害する薬剤は新しい抗腫瘍剤として期待される。ＴＧＦ−αと類似の細胞増殖因子である上皮増殖因子　（ＥＧＦ）　のシグナル伝達阻害剤として、本発明者等によって発見されたのがリベロマイシンＡ（化合物１）、Ｃ（化合物２）、Ｄ（化合物３）および弱い活性を有するリベロマイシンＢ（化合物４）である（Ｔａｋａｈａｓｈｉ，　Ｈ．；　Ｏｓａｄａ，　Ｈ．；　Ｋｏｓｈｉｎｏ，　Ｈ．；　Ｋｕｄｏ，　Ｔ．；　Ａｍａｎｏ，　Ｓ．；　Ｓｈｉｍｉｚｕ，　Ｓ．；　Ｙｏｓｈｉｈａｍａ，　Ｍ．；　Ｉｓｏｎｏ，　Ｋ．　Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．　１９９２，　４５，　１４０９−１４１３）。
【０００３】
【化６】
2004059471.tif 000002
【０００４】
リベロマイシンＡは抗真菌剤としての活性を有し、また原核細胞には作用せず、真核細胞に選択的な蛋白質合成阻害剤としての活性も有している。しかしながら、リベロマイシンＡは、酸性、塩基性両条件下において、不安定な化合物であり、容易に失活してしまう。
従って、上記のような活性を保持し、かつより安定な化合物の開発が望まれている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記の希求に応えるものであり、蛋白質阻害活性を有し、かつ高い安定性を有するリベロマイシンＡ誘導体、その製造方法およびそれを有効成分とする蛋白質合成阻害剤の提供を課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、上記課題の解決のために、鋭意研究を行った。本発明者等は、まずリベロマイシンＡの類縁体を多種合成し、それらの化合物の蛋白質合成阻害活性について検討した。その結果、リベロマイシンＡ誘導体の蛋白質阻害活性の発現には、リベロマイシンＡの構造の２４位カルボキシル基および５位の水酸基が必須であること、また、１８位ヘミサクシニル基は、蛋白質阻害活性の発現には必須でないことが明らかとなった。リベロマイシンＡは塩基性あるいは酸性条件下で１８位のヘミサクシニル基が加水分解を受けやすく不安定であること、および上記の知見に基づいて、本発明者等はリベロマイシンＡの構造の２４位カルボキシル基および５位の水酸基を保持し、１８位のヘミサクシニル基がより安定性の高い置換基に置換されたリベロマイシンＡ誘導体を製造した。本発明はこのようにして完成するに至ったものであり、本発明の要旨は、以下の通りである。（１）　下記の一般式（Ｉ）
【０００７】
【化７】
2004059471.tif 000003
【０００８】
（一般式（Ｉ）中、Ｒは炭素数が１〜９のアルコキシ基を示す。）
で示される化合物。
（２）　下記の構造式（ＩＩ）で示される化合物。
【０００９】
【化８】
2004059471.tif 000004
【００１０】
（３）　下記の構造式（ＩＩＩ）で示される化合物。
【化９】
2004059471.tif 000005
【００１１】
（４）　１）リベロマイシンＡの１８位のヘミサクシニル基を水酸基に加水分解し、
２）１位および２４位のカルボキシル基をエステル化し、
３）５位の水酸基を保護基で保護し、
４）１８位の水酸基をメチル化し、
５）１位および２４位のエステル基を加水分解し、
６）５位の保護基を脱保護する、
ことを特徴とする構造式（ＩＶ）
【００１２】
【化１０】
2004059471.tif 000006
【００１３】
で示される化合物の製造方法。
（５）　１）リベロマイシンＡの１８位のヘミサクシニル基を水酸基に加水分解し、
２）１位および２４位のカルボキシル基をエステル化し、
３）５位の水酸基を保護基で保護し、
４）１８位の水酸基をメチルチオメチル化し、
５）１位および２４位のエステル基を選択的に加水分解し、
６）５位の保護基を脱保護する、
ことを特徴とする構造式（Ｖ）
【００１４】
【化１１】
2004059471.tif 000007
【００１５】
で示される化合物の製造方法。
（６）　一般式（Ｉ）で示される化合物を有効成分として含有することを特徴とする蛋白質合成阻害剤。
【００１６】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
（１）本発明のリベロマイシンＡ誘導体
本発明のリベロマイシンＡ誘導体は、リベロマイシンＡ誘導体のうち、蛋白質阻害活性を有し、かつ高い安定性を有する化合物である。
すなわち、本発明のリベロマイシンＡ誘導体は、下記の一般式（Ｉ）
【００１７】
【化１２】
2004059471.tif 000008
【００１８】
（一般式（Ｉ）中、Ｒは炭素数が１〜９のアルコキシ基を示す。）
で示される化合物である。
【００１９】
Ｒとしては、メトキシ基、エトキシ基、メトキシメトキシ基、ベンジルオキシ基などのエーテル基、メチルチオメトキシ基などの硫黄原子を含むエーテル基、またはトリエチルシリルオキシ基などの珪素原子を含むエーテル基などが挙げられる。
このうち、メトキシ基、メチルチオメトキシ基などが好ましく挙げられる。
【００２０】
（２）本発明のリベロマイシンＡ誘導体の製造方法
本発明のリベロマイシンＡ誘導体は、限定されないが、例えば、以下のようにして製造することができる。反応における条件、例えば、試薬、触媒、溶媒、反応温度、反応時間などは通常よく知られた有機合成手法に基づいて、適宜変更することができ、このような変更を含む方法も本発明の範囲に属する。
【００２１】
【化１３】
2004059471.tif 000009
【００２２】
本発明の好ましい一形態であって、安定な誘導体であるＣ１８−メトキシ体（化合物１７）は、以下のようにして合成することができる。リベロマイシンＡ（化合物１）を１Ｎ　ＬｉＯＨ、ＮａＯＨ、ＫＯＨなどのアルカリで処理すると、容易にＣ１８−ヒドロキシ体（化合物１４）が得られる。
化合物１４を、ＴＭＳＣＨＮ２（トリメチルシリルジアゾメタン）などのメチル化剤で処理しエステル化した後、ＴＢＳＣｌ（ｔ−ブチルジメチルシリルクロライド）などの保護剤を用いて５位水酸基を保護し、Ｃ５−シリルエーテル（化合物１６）とする。ついで、化合物１６をＴＨＦ（テトラヒドロフラン）などの有機溶媒中、ＮａＨなどの水素化金属、およびＭｅＩ（ヨウ化メチル）などのメチル化剤と反応させると、１８位水酸基のメチル化後、エステルの加水分解が起きる。続いてＴＢＡＦ　（テトラブチルアンモニウムフルオライド）　などの脱保護剤でＴＢＳ基を除去するとＣ１８−メトキシ体（化合物１７）が得られる。
また、本発明の好ましい別の形態であって、安定な誘導体であるＣ１８−ＭＴＭ（メチルチオメチル）エーテル（化合物２０）は、以下のようにして合成することができる。化合物１６を　ＤＭＳＯ−Ａｃ２Ｏ（無水酢酸）で処理すると好収率で　Ｃ１８−ＭＴＭ　エーテル（化合物１９）が生成する。化合物１９をＬｉＯＨなどのアルカリを用いて加水分解すると選択的加水分解反応が進行し、シリル基の脱保護後、ジカルボン酸（化合物２０）およびモノカルボン酸（化合物２１）が得られる。
【００２３】
また、その他のリベロマイシンＡ誘導体は、以下のようにして合成することができる。
リベロマイシンＡ（化合物１）を、４当量のＴＢＳＣｌ、ＴＭＳＣｌ、またはＴＥＳＣｌ（トリエチルシリルクロライド）などのシリル化剤で処理し、５位水酸基および３個のカルボキシル基をシリル化後、メタノールなどで処理すると、シリルエステルのみの加溶媒分解が容易に起こり、Ｃ５−シリルエーテル（化合物５等）が好収率で得られる。
２４位エステルの合成に関しては、化合物１を１ないし２当量のＣＨ２Ｎ２（ジアゾメタン）、ＴＭＳＣＨＮ２などのメチル化剤で処理し、Ｃ２４−エステル（化合物６，　８，　９および１１）、Ｃ２４−カルボン酸（化合物７，　１０および１２）を得ることが出来る。
また、トリエステル（化合物６）を接触還元後、ＨＭＰＡ（ヘキサメチルホスホリックトリアミド）中、　ＬｉＳＰｒ（リチウムプロパンチオレート）と処理すると、好収率で飽和体（化合物１３）を得ることができる。化合物１を直接接触還元しても化合物１３を得ることができる。
【００２４】
Ｃ１８−ヒドロキシ体（化合物１４）は酸に非常に不安定で、ｐ−ＴｓＯＨ（水酸化ｐ−トルエンスルホン酸）あるいはＨＣｌ等の酸で処理することによって容易に異性化し、５，６−スピロアセタール（化合物１５）を得ることができる。
なお、Ｃ５−シリルエーテル体（化合物１６）も、ｐ−ＴｓＯＨやＣＤＣｌ３、ＰＰＴＳ（ピリジニウム−ｐ−トルエンスルホネート）等の弱酸で処理すると、容易にトランスアセタール化反応を起こし５，６−スピロアセタールが生成する。さらにＮａＨなどの水素化金属、およびＭｅＩなどのメチル化剤で処理後、ＴＢＡＦなどの脱保護剤でＴＢＳ基の脱保護を行うと、Ｃ１９−メトキシ体（化合物１８）を得ることができる。
【００２５】
（３）リベロマイシンＡ誘導体の安定性
リベロマイシンＡ（ＲＭ−Ａ）　は、酸性、塩基性両条件下において、加水分解を受けやすく、Ｃ１８−スクシニル基の脱離反応を起こす可能性がある。従って、リベロマイシンＡのＣ１８−ヘミサクシニル基をより安定性の高い置換基に置換することにより、リベロマイシンＡに対して、より安定性の高いリベロマイシンＡ誘導体を得ることができる。例えば、Ｃ１８−メトキシ誘導体（Ｃ１８−ＯＭｅ）　ではＣ１８位の水酸基はメチル化されており、スクシニル基の脱離に比べてこのメチル基の脱離反応は非常に起りにくい。同様に、Ｃ１８−メチルチオメトキシ誘導体（Ｃ１８−ＯＭＴＭ）ではＣ１８位の水酸基はメチルチオメチル化されており、スクシニル基の加水分解に比べてこのメチルチオメチル基の加水分解反応も非常に起りにくい。また、ＲＭ−ＡのＣ１８−スクシニル基の脱離の結果、ＲＭ−Ａの基本骨格である６，６−スピロアセタール構造は、特に酸性条件下において、容易に不活性体であるリベロマイシンＢ（ＲＭ−Ｂ）　型の５，６−スピロアセタール構造に変換される。しかしながら、Ｃ１８−ＯＭｅおよびＣ１８−ＯＭＴＭは、このようなスピロアセタールの異性化反応も起こさない。以上の２点から、Ｃ１８−ＯＭｅおよびＣ１８−ＯＭＴＭは、酸、塩基に対する安定性の面でＲＭ−Ａ　より優れている。
【００２６】
（４）リベロマイシンＡ誘導体の蛋白質合成阻害活性
本発明のリベロマイシンＡ誘導体は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ蛋白質合成阻害活性を有する。ｉｎ　ｖｉｔｒｏ蛋白質合成阻害活性は、ＩｌｅＲＳ　（イソロイシン−ｔＲＮＡ合成酵素）阻害活性に基づく活性なので両活性はほぼパラレルである。
ＩｌｅＲＳ阻害活性の測定は、例えば、出芽酵母などのＩｌｅＲＳを含む酵素を調製し、この酵素と、さらにＡＴＰ、ラジオアイソトープなどでラベルしたＬ−イソロイシン、未ラベルＬ−イソロイシン、酵母由来のｔＲＮＡなどを含む酵素反応溶液を調製し、リベロマイシン誘導体を添加した場合、および添加しない場合（コントロール）について反応を行い、反応産物であるＬ−イソロイシルｔＲＮＡの放射活性などを測定し、両活性を比較することによって行うことができる。
【００２７】
ｉｎ　ｖｉｔｒｏ蛋白質合成阻害活性の測定は、例えば、ＴＮＴ　Ｔ７　Ｑｕｉｃｋ　ｃｏｕｐｌｅｄ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ／Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ　社）などのＩｎ　ｖｉｔｒｏ転写・翻訳システムなどを用いて測定を行うことができる。具体的には、赤血球ライゼートを調製し、鋳型ＤＮＡ、Ｔ７ポリメラーゼ、アミノ酸混合液、ラジオアイソトープなどでラベルしたアミノ酸混合液、ＲＮａｓｅインヒビター、ヌクレアーゼフリー水などを含む反応溶液を調製し、リベロマイシン誘導体を添加した場合、および添加しない場合（コントロール）について反応を行い、Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ蛋白質合成によって生じるラジオアイソトープなどでラベルしたアミノ酸を含む蛋白質バンドの有無を検出することによって行うことができる。
【００２８】
（５）本発明の蛋白質合成阻害剤
上記リベロマイシンＡ誘導体は、常法により薬学的に許容された担体と組合わせて錠剤、散剤、カプセル剤、注射剤、吸入剤または外用剤等の製剤とすることができ、経口または非経口投与により蛋白質合成阻害剤として臨床に供される。投与量は治療すべき症状及び投与方法により左右されるが、成人１日あたり１ｍｇ〜１，０００ｍｇである。尚、抗生物質リベロマイシンＡ誘導体のマウス急性毒性値は１００ｍｇ／ｋｇ以上（静注）である。なお、本発明の蛋白質合成阻害剤は、本発明のリベロマイシンＡ誘導体を有効成分として含有する以外は、通常の方法を採用し、調製、投与などをすることが可能である。
【００２９】
【実施例】
以下に実施例および試験例をあげて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。なお、実施例および試験例において、前記リベロマイシンＡ誘導体の合成スキームを参照のこと。
【００３０】
【実施例１】リベロマイシンＡ　　Ｃ１８−メトキシ誘導体の合成
リベロマイシンＡ（化合物１）のエステル化
リベロマイシンＡ　　（１９．８　ｍｇ，　３０μｍｏｌ）　のベンゼン−ＭｅＯＨ（メタノール）　（４　：１，３　ｍｌ）　溶液にＴＭＳＣＨＮ２　（０．５〜１．５　ｅｑｕｉｖ．）　を加えて室温で１０〜１５分攪拌した。溶媒を減圧留去後残渣をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン　：　ＡｃＯＥｔ（酢酸エチル）　：　ＡｃＯＨ（酢酸）　＝　５０　：　５０　：　１）　にて精製して、エステル（化合物６−１２）を得た。
化合物１０：　１Ｈ　ＮＭＲ　（５００　ＭＨｚ，　ＣＤＣｌ３）　δ　＝　０．７７　（ｄ，　Ｊ　＝　６．４　Ｈｚ，　３Ｈ），　０．８３　（ｔ，　Ｊ　＝　６．９　Ｈｚ，　３Ｈ），　１．０９　（ｄ，　Ｊ　＝　６．９　Ｈｚ，　３Ｈ），　１．７０　（ｓ，　３Ｈ），　２．２２　（ｂｒｓ，　３Ｈ），　３．４２　（ｍ，　１Ｈ），　３．７４　（ｓ，　３Ｈ），　４．１３　（ｄｄ，　Ｊ　＝　６．４，　６．０　Ｈｚ，　１Ｈ），　４．６８　（ｄ，Ｊ　＝　７．８　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．４７　（ｄｄ，　Ｊ　＝　６．０，　５．０　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．４９　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　７．３　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．８５　（ｂｒｓ，　１Ｈ），　５．８８　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．２０　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．３７　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．４０　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　７．８　Ｈｚ，　１Ｈ），　７．０１　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　７．３　Ｈｚ，　１Ｈ）．
化合物１１：　１Ｈ　ＮＭＲ　（５００　ＭＨｚ，　ＣＤＣｌ３）　δ　＝　０．７７　（ｄ，　Ｊ　＝　６．４　Ｈｚ，　３Ｈ），　０．８３　（ｔ，　Ｊ　＝　６．９　Ｈｚ，　３Ｈ），　１．０９　（ｄ，　Ｊ　＝　６．９　Ｈｚ，　３Ｈ），　１．７０　（ｓ，　３Ｈ），　２．２５　（ｂｒｓ，　３Ｈ），　３．４２　（ｍ，　１Ｈ），　３．７３　（ｓ，　３Ｈ），　４．１３　（ｄｄ，　Ｊ　＝　６．４，　６．０　Ｈｚ，　１Ｈ），　４．５９　（ｄ，Ｊ　＝　８．３　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．５１　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　７．４　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．５５　（ｄｄ，　Ｊ　＝　７．４，　７．４　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．８３　（ｂｒｓ，　１Ｈ），　５．８５　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．２２　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．３３　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．３７　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　８．３　Ｈｚ，　１Ｈ），　７．０５　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　７．４　Ｈｚ，　１Ｈ）．
化合物１２：　１Ｈ　ＮＭＲ　（５００　ＭＨｚ，　ＣＤＣｌ３）　δ　＝　０．７７　（ｄ，　Ｊ　＝　６．４　Ｈｚ，　３Ｈ），　０．８２　（ｔ，　Ｊ　＝　６．９　Ｈｚ，　３Ｈ），　１．１０　（ｄ，　Ｊ　＝　６．９　Ｈｚ，　３Ｈ），　１．７１　（ｓ，　３Ｈ），　２．２１　（ｂｒｓ，　３Ｈ），　３．４２　（ｍ，　１Ｈ），　３．７０　（ｓ，　３Ｈ），　４．１３　（ｄｄ，　Ｊ　＝　６．４，　６．０　Ｈｚ，　１Ｈ），　４．６０　（ｄ，Ｊ　＝　８．２　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．４５　（ｄｄ，　Ｊ　＝　６．４，　６．４　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．５０　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　７．３　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．８６　（ｂｒｓ，　１Ｈ），　５．８８　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．１９　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．３７　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．４１　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　８．２　Ｈｚ，　１Ｈ），　７．０９　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　７．８　Ｈｚ，　１Ｈ）．
【００３１】
Ｃ１８−ヒドロキシ体（化合物１４）の合成
リベロマイシンＡ（４．２　ｍｇ，　６．４μｍｏｌ）　に１Ｎ　ＬｉＯＨ　（０．５　ｍｌ）　を加えて室温で一昼夜攪拌した。この反応溶液に０　℃で１Ｎ　ＨＣｌを加え酸性とした後、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、ＭｇＳＯ４で乾燥し溶媒を留去して、Ｃ１８−ヒドロキシ体（化合物１４）　（黄色油状物　：　３．７　ｍｇ，　８２％）　を得た。
化合物１４：　１Ｈ　ＮＭＲ　（５００　ＭＨｚ，　ＣＤ３ＯＤ）　δ　＝　０．８０　（ｄ，　Ｊ　＝　６．４　Ｈｚ，　３Ｈ），　０．８６　（ｔ，　Ｊ　＝　７．０　Ｈｚ，　３Ｈ），　１．０８　（ｄ，　Ｊ　＝　６．７　Ｈｚ，　３Ｈ），　１．７６　（ｓ，　３Ｈ），　２．２６　（ｄ，　Ｊ　＝１．２　Ｈｚ，　３Ｈ），　３．５４　（ｍ，　１Ｈ），　４．０１　（ｄ，　Ｊ　＝　７．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　４．０７　（ｂｒｔ，　１Ｈ），　５．５３　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　７．３　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．６１　（ｄｄ，　１Ｈ），　５．８１　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．９，　１．５　Ｈｚ，　１Ｈ）　，　５．８３　（ｓ，　１Ｈ），　６．２５　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．３８　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．３　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．４４　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　９．２　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．９８　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．９，　７．９　Ｈｚ，　１Ｈ）．
【００３２】
Ｃ５−シリルエーテル（化合物１６）の合成
窒素雰囲気下、Ｃ１８−ヒドロキシ体（化合物１４）　（３３．１　ｍｇ，　５９．０μｍｏｌ）　のｂｅｎｚｅｎｅ　：　ＭｅＯＨ　＝　４　：　１　（５００　μｌ）　混合溶液に、室温でＴＭＳＣＨＮ２　（１６．９　ｍｇ，　０．１４８　ｍｍｏｌ）　を加え、１０分間攪拌した。溶媒を留去しジエステルを得た。ジエステルのＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）（５００μｌ）　溶液に、室温でイミダゾール（１２．１　ｍｇ，　０．１８　ｍｍｏｌ）　、ＴＢＳＣｌ　（１３．４　ｍｇ，　０．０８９　ｍｍｏｌ）　を加えて同温で一昼夜攪拌した。ＡｃＯＥｔで希釈し、有機層をＨ２Ｏ、飽和食塩水で順次洗浄後、ＭｇＳＯ４で乾燥し溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ　（ｎ−ｈｅｘａｎｅ　：　ＡｃＯＥｔ　＝　２　：　１）　にて精製して、Ｃ５−シリルエーテル（化合物１６）　（黄色油状物　：　１２．４　ｍｇ，　３０％）
を得た。
化合物１６：　１Ｈ　ＮＭＲ　（５００　ＭＨｚ，　ＣＤ３ＯＤ）　δ　＝　０．７６　（ｄ，　Ｊ　＝　６．４　Ｈｚ，　３Ｈ），　０．８４　（ｔ，　Ｊ　＝　６．４　Ｈｚ，　３Ｈ），　０．８７　（ｓ，　９Ｈ），　１．０１　（ｄ，　Ｊ　＝　６．９　Ｈｚ，　３Ｈ），　１．６９　（ｓ，　３Ｈ），　２．２７　（ｓ，　３Ｈ），　３．４３　（ｄｄｄ，　Ｊ　＝　９．６，　５．０，　５．０　Ｈｚ，　１Ｈ），　３．７０　（ｓ，　３Ｈ），　３．７０（ｓ，　３Ｈ），　３．９５　（ｄ，　Ｊ　＝　８．７　Ｈｚ，　１Ｈ），　４．０７　（ｄｄ，　Ｊ　＝　６．９，　６．４　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．４１（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　６．９　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．５１　（ｔ，　Ｊ　＝　６．４　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．７８　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６Ｈｚ，　１Ｈ），　５．８１　（ｂｒｓ，　１Ｈ），　６．１１　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．２９　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．３８　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　８．７　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．９８　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　７．３　Ｈｚ，　１Ｈ）．
１３Ｃ　ＮＭＲ　（１２５　ＭＨｚ，　ＣＤ３ＯＤ）　δ　＝　１２．８，　１４．０，　１４．２，　１４．３，　１８．２，　１７．６，　２３．９，　２３．９，　２５．
９，　２７．５，　２７．６，　３１．７，　３２．２，　３３．３，　３５．１，　３７．３，　４３．８，　５１．１，　５１．４，　７０．８，　７４．８，　７６．９，　８２．５，　９６．１，　１１９．５，　１２０．６，　１２７．２，　１２７．９，　１３３．９，　１３４．２，　１３６．０，　１３７．０，　１５１．６，　１５１．９，　１６７．２，　１６７．３．
【００３３】
Ｃ１８−メトキシ体（化合物１７）の合成
窒素雰囲気下、Ｃ５−シリルエーテル（化合物１６）　（１２．４　ｍｇ，　１７．７　μｍｏｌ）　のＴＨＦ　（５００μｌ）　溶液に、室温でＮａＨ　（１．１　ｍｇ，　２６．６μｍｏｌ）　およびＭｅＩ　（３．３μｌ，　５３．０μｍｏｌ）　を加え同温で一昼夜攪拌した。溶媒を留去後ＡｃＯＥｔで希釈し２Ｎ−Ｎａ２ＣＯ３で抽出した。水層に０　℃で２Ｎ−ＨＣｌを加え酸性　（ｐＨ　３　〜　１）　とした後ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を留去して無色油状物を得た。この無色油状物のＤＭＦ　（２００μｌ）　溶液にＴＢＡＦ　（ｃａ．　７．８　ｍｇ）　を加えて、３日間攪拌した。反応溶液をＡｃＯＥｔで希釈した後有機層を１Ｎ　ＨＣｌ　、飽和食塩水で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥し溶媒を留去後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー　（ｎ−ｈｅｘａｎｅ　：　ＡｃＯＥｔ　＝　２０　：　１）　にて精製して、Ｃ１８−メトキシ体（化合物１７）　（黄色油状物　：　３．５　ｍｇ，　３４％）　を得た。
化合物１７：　１Ｈ　ＮＭＲ　（５００　ＭＨｚ，　ＣＤ３ＯＤ）　δ　＝　０．８１　（ｄ，　Ｊ　＝　６．４　Ｈｚ，　３Ｈ），　１．１２　（ｄ，　Ｊ　＝　６．９　Ｈｚ，　３Ｈ），　１．７９　（ｓ，　３　Ｈ），　２．３０　（ｄ，　Ｊ　＝　１．０　Ｈｚ，　３Ｈ），　３．２３　（ｓ，　３Ｈ），　３．４９　（ｍ，　１Ｈ），　４．１１　（ｄｄ，　Ｊ　＝　７．３，　６．４　Ｈｚ，　１Ｈ），　４．１９　（ｄ，　Ｊ　＝　９．２　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．５７　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　７．３　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．６２　（ｔ，　Ｊ　＝　５．５　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．８５　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１．４，　１Ｈ），　５．９０　（ｂｒｓ，　１Ｈ），　６．２８　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．４４　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．５２　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　９．２　Ｈｚ，　１Ｈ），　７．０２　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　７．０　Ｈｚ，　１Ｈ）．
１３Ｃ　ＮＭＲ　（１２５　ＭＨｚ，　ＣＤ３ＯＤ）　δ　＝　１３．９，　１４．３，　１４．７，　１５．２，　１８．０，　２３．９，　２４．０，　２４．４，　２６．
４，　２８．８，　３０．７，　３２．６，　３３．１，　３４．８，　３４．０，　３７．１，　４４．２，　５８．９，　７６．１，　７６．９，　７６．２，　８０．８，　９７．０，　１２０．５，　１２１．２，　１２７．９，　１２９．５，　１３５．３，　１３５．４，　１３７．８，　１３８．６，　１５２．９，　１５２．９，　１７０．１，　１７０．４．
【００３４】
【実施例２】リベロマイシンＡ　　Ｃ１８−メチルチオメトキシ誘導体の合成
Ｃ１８−ＭＴＭ　エーテル（化合物２０および２１）の合成
窒素雰囲気下、上記実施例１で得られたＣ１８−ヒドロキシ体（化合物１６）　（１４．９　ｍｇ，　２０．０　μｍｏｌ）　のＡｃ２Ｏ　（３００μｌ）−ＤＭＦ　（３００μｌ）　溶液を室温で３日間攪拌した。０　°Ｃに冷却、脱気後２Ｎ−Ｎａ２ＣＯ３−ＡｃＯＥｔを加えた。有機層を飽和食塩水で洗浄後ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を留去後得られる粗Ｃ１８−ＯＭＴＭ体（化合物１９）　　（無色油状物：　１５．７　ｍｇ）　にＴＨＦ（３　ｍｌ）−ＭｅＯＨ（９　ｍｌ）−１ＮＬｉＯＨ（１　ｍｌ）　を加え、室温で２日間攪拌した。反応溶媒を減圧留去後、氷−ＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を飽和食塩水で洗浄後ＭｇＳＯ４で乾燥した。　溶媒を留去後残渣（無色油状物　：　１４．７　ｍｇ）　をＤＭＦ（０．５ｍｌ）　に溶かしＴＢＡＦ　（２６．１　ｍｇ，　１００．０　μｍｏｌ）　を加え、室温で２日間攪拌した。反応混合物に氷−ＥｔＯＡｃを加え、有機層を順次１ＮＨＣｌ，　Ｈ２Ｏ，　飽和食塩水で洗浄した。　ＭｇＳＯ４で乾燥し溶媒を留去後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー　（ｎ−ｈｅｘａｎｅ　：　ＡｃＯＥｔ　：　ＡｃＯＨ　＝　５０　：　５０　：　１）　にて精製して、Ｃ１８−ＭＴＭ　エーテル（化合物２０）　（無色油状物　：　６．２　ｍｇ，　５０％）およびＣ１８−ＭＴＭ　エーテル（化合物２１）（無色油状物　：　２．２　ｍｇ，　１６％）　を得た。
化合物２０：　１Ｈ　ＮＭＲ　（５００　ＭＨｚ，　ＣＤ３ＯＤ）　δ　＝　０．８１　（ｄ，　Ｊ　＝　６．４　Ｈｚ，　３Ｈ），　１．１２　（ｄ，　Ｊ　＝　６．９　Ｈｚ，　３Ｈ），　１．７９　（ｓ，　３　Ｈ），　２．３０　（ｄ，　Ｊ　＝　１．０　Ｈｚ，　３Ｈ），　３．２３　（ｓ，　３Ｈ），　３．４９　（ｍ，　１Ｈ），　４．１１　（ｄｄ，　Ｊ　＝　７．３，　６．４　Ｈｚ，　１Ｈ），　４．１９　（ｄ，　Ｊ　＝　９．２　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．５７　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　７．３　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．６２　（ｔ，　Ｊ　＝　５．５　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．８５　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１．４，　１Ｈ），　５．９０　（ｂｒｓ，　１Ｈ），　６．２８　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．４４　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．５２　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　９．２　Ｈｚ，　１Ｈ），　７．０２　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　７．０　Ｈｚ，　１Ｈ）．
１３Ｃ　ＮＭＲ　（１２５　ＭＨｚ，　ＣＤ３ＯＤ）　δ　＝　１３．９，　１４．３，　１４．７，　１５．２，　１８．０，　２３．９，　２４．０，　２４．４，　２６．
４，　２８．８，　３０．７，　３２．６，　３３．１，　３４．８，　３４．０，　３７．１，　４４．２，　５８．９，　７６．１，　７６．９，　７６．２，　８０．８，　９７．０，　１２０．５，　１２１．２，　１２７．９，　１２９．５，　１３５．３，　１３５．４，　１３７．８，　１３８．６，　１５２．９，　１５２．９，　１７０．１，　１７０．４．
化合物２１：　１Ｈ　ＮＭＲ　（５００　ＭＨｚ，　ＣＤ３ＯＤ）　δ　＝　０．８１　（ｄ，　Ｊ　＝　６．４　Ｈｚ，　３Ｈ），　１．１２　（ｄ，　Ｊ　＝　６．９　Ｈｚ，　３Ｈ），　１．７９　（ｓ，　３　Ｈ），　２．３０　（ｄ，　Ｊ　＝　１．０　Ｈｚ，　３Ｈ），　３．２３　（ｓ，　３Ｈ），　３．４９　（ｍ，　１Ｈ），　４．１１　（ｄｄ，　Ｊ　＝　７．３，　６．４　Ｈｚ，　１Ｈ），　４．１９　（ｄ，　Ｊ　＝　９．２　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．５７　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　７．３　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．６２　（ｔ，　Ｊ　＝　５．５　Ｈｚ，　１Ｈ），　５．８５　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１．４，　１Ｈ），　５．９０　（ｂｒｓ，　１Ｈ），　６．２８　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．４４　（ｄ，　Ｊ　＝　１５．６　Ｈｚ，　１Ｈ），　６．５２　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　９．２　Ｈｚ，　１Ｈ），　７．０２　（ｄｄ，　Ｊ　＝　１５．６，　７．０　Ｈｚ，　１Ｈ）．
１３Ｃ　ＮＭＲ　（１２５　ＭＨｚ，　ＣＤ３ＯＤ）　δ　＝　１３．９，　１４．３，　１４．７，　１５．２，　１８．０，　２３．９，　２４．０，　２４．４，　２６．
４，　２８．８，　３０．７，　３２．６，　３３．１，　３４．８，　３４．０，　３７．１，　４４．２，　５８．９，　７６．１，　７６．９，　７６．２，　８０．８，　９７．０，　１２０．５，　１２１．２，　１２７．９，　１２９．５，　１３５．３，　１３５．４，　１３７．８，　１３８．６，　１５２．９，　１５２．９，　１７０．１，　１７０．４．
【００３５】
本発明のリベロマイシンＡ誘導体の活性を以下の方法に従って測定した。
【試験例】本発明のリベロマイシンＡ誘導体のｉｎ　ｖｉｔｒｏ蛋白質合成阻害活性およびＩｌｅＲＳ阻害活性
各リベロマイシンＡ誘導体のＩｌｅＲＳ阻害活性をＭｉｙａｍｏｔｏ，　Ｙ．等の文献（Ｍｉｙａｍｏｔｏ，　Ｙ．，　Ｍａｃｈｉｄａ，　Ｋ．，　Ｍｉｚｕｎｕｍａ，　Ｍ．，　Ｓａｔｏ　Ｎ，　Ｍｉｙａｈａｒａ，　Ｋ．，Ｈｉｒａｔａ，　Ｄ．，　Ｕｓｕｉ，Ｔ．，　Ｔａｋａｈａｓｈｉ，　Ｈ．，　Ｏｓａｄａ，　Ｈ．，　ａｎｄ　Ｍｉｙａｋａｗａ，　Ｔ．　Ｉｄｅｎｔｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　Ｉｓｏｌｅｕｃｙｌ−ｔＲＮＡ　ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ　ａｓ　ａ　ｔａｒｇｅｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｇ１−ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　Ｒｅｖｅｒｏｍｙｃｉｎ　Ａ．　　（２００２）　Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．　ｉｎ　ｐｒｅｓｓ．）に従って測定した。具体的には、以下のようにして測定した。
【００３６】
イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素（ｉｓｏｌｅｕｃｙｌ−ｔＲＮＡ　ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ）の活性測定
（出芽酵母（Ｓ．　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）由来の粗酵素調整）
Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　Ｗ３０３−１Ａ（ａ）　Δｙｒｓ１：：ＨＩＳ３　Δｙｒｒ１：：ＴＲＰ１　Δｐｄｒ１：：ｈｉｓＧ−ＵＲＡ３−ｈｉｓＧ−Δｐｄｒ３：：ｈｉｓＧ−ＵＲＡ３−ｈｉｓＧ　株を５００　ｍｌ　のＹＰＤ培地（１％　イーストエキストラクト，　２％　ポリペプトン，　２％　グルコース）で一晩培養した。培養液を５０００　ｇ、１０分遠心して細胞を回収し、１００ｍＭ　トリス塩酸バッファー　（ｐＨ　８．０），　１０　ｍＭ　ＭｇＣｌ２，　１　ｍＭ　ジチオスレイトールを用いて洗浄した。同バッファーを用いて、細胞を（１　ｍｇ／　ｇ湿細胞）になるように再懸濁し、氷上に１０分放置した。細胞懸濁液に、１　ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオライド、グラスビーズ（４２５−６００　ｍｍ，　直径，　Ｓｉｇｍａ社）を入れて３０秒間激しく撹拌することを１０回繰り返した。得られた細胞破砕液を、４度で１００００　ｇ　、１５分遠心して上清を得た。得られた上清の蛋白量をＰｒｏｔｅｉｎ　Ａｓｓａｙ　（ＢｉｏＲａｄ　社）を用いて測定した後、１０　ｍｇ／ｍｌに調整してマイナス８０度で凍結保存した。
【００３７】
（出芽酵母のＩｌｅＲＳ（ｉｓｏｌｅｕｃｙｌ−ｔＲＮＡ　ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ）の大腸菌発現および組換え大腸菌由来ＩｌｅＲＳ酵素調整）
出芽酵母のＩｌｅＲＳ遺伝子の翻訳領域を含むＤＮＡ断片を、大腸菌発現用プラスミドｐＥＴ２１−ｂ（Ｎｏｖａｇｅｎ　　社）にＢａｍＨＩ／ＨｉｎｄＩＩＩサイトで組みこんだ。ｐＥＴ２１−ｂ　ＩｌｅＲＳを大腸菌株　ＢＬ２１（ＤＥ３）に形質転換した。得られた形質転換体を１０　ｍｌ　のＬＢ培地（１　％　ＮａＣｌ，　０．５　％　イーストエキストラクト，　１　％　トリプトン，　アンピシリン　５０　　μｇ／ｍｌ）中、２８度で２時間培養後、イソプロピル−チオ−β−ガラクトピラノシドを０．２　ｍＭ添加して、さらに４時間培養した。６０００　ｇ、１５分の遠心で菌体を回収後、５０　ｍＭ　トリス塩酸バッファー　（ｐＨ８．０），　１　ｍＭ　ＥＧＴＡ，　２５　％　シュークロース，　０．５　ｍＭ　フェニルメチルスルホニルフルオライド，０．５　ｍＭ　ジチオスレイトールに懸濁した。菌体懸濁液を５　秒間ソニケーションすることを３回繰り返して、菌体を破砕した。菌体破砕液を、４度で１５０００　ｇ、１５分遠心して上清を得た。得られた上清を、ＩｌｅＲＳ画分として使用した。ＩｌｅＲＳ画分は、１０　ｍｇ／ｍｌ、終濃度５０　％グリセロールになるように調整して、マイナス２０度で保存した。
【００３８】
（イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素反応の測定）
本酵素反応の測定は、基質にＡＴＰ、ラジオアイソトープでラベルされたＬ−イソロイシン、ラジオアイソトープでラベルされていないＬ−イソロイシン、酵母ｔＲＮＡを用いて、反応生成物であるイソロイシル−ｔＲＮＡに含まれる放射活性を測定することで行った。
酵素反応溶液：
１サンプルあたり５０　μｌで反応を行った。
反応液の組成は、２０　ｍＭ　イミダゾール塩酸　（ｐＨ　７．５），　７５　ｍＭ　ＫＣｌ，　５　ｍＭ　ＭｇＣｌ２，　０．５　ｍＭ　ジチオスレイトール，　４　ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン，　３０　μＭ　冷Ｌ−イソロイシン、３　ｍＭ　ＡＴＰ、３．５　ｍｇ／ｍｌイーストトータルｔＲＮＡ（Ｒｏｃｈｅ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ社）、　　１　μ　ＣｉラジオアイソトープＬ−イソロイシン＊、酵母抽出液　１００　ｍｇｐｒｏｔｅｉｎ　／ｍｌ＊＊になるように調整した。リベロマイシンＡ、ＢまたはリベロマイシンＡ誘導体を添加する場合は、１〜１，０００　ｎｇ／ｍｌ＊＊＊　となるように添加した。
＊ラジオアイソトープは、Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ　社から、［３Ｈ］−Ｌ−イソロイシン　（６６　Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を購入して使用した。
＊＊大腸菌発現ＩｌｅＲＳを酵素源とした場合には、ＩｌｅＲＳ画分を１０　ｍｇ／ｍｌになるように添加して反応を行った。
＊＊＊リベロマイシンＡ、Ｂまたは評価したいリベロマイシンＡ誘導体を添加した。リベロマイシンＡ誘導体の種類についてはリベロマイシンＡ誘導体の合成スキーム中に示した化合物番号として表１に示す。
【００３９】
酵素反応溶液を２５度で２０分間インキュベートした後、５　％　トリクロロ酢酸を１　ｍｌ　添加して、反応を停止後、４度で一晩放置して反応したイソロイシル−ｔＲＮＡを完全に沈殿させた。沈殿をグラスフィルターで濾過して、氷冷した５　％　トリクロロ酢酸で３回洗浄した。洗浄したグラスフィルターを液体シンチレーションカウンター（ＴＲＩＣＡＲＢ　２０００，　ＰＡＣＫＡＲＤ社）で測定した。
リベロマイシンＡ、ＢまたはリベロマイシンＡ誘導体を添加しない場合（コントロール）の放射活性に対する、リベロマイシンまたはリベロマイシンＡ誘導体を添加した場合の放射活性阻害率５０％の時の酵素反応溶液中のリベロマイシンＡ、ＢまたはリベロマイシンＡ誘導体の濃度をＩＣ５０とする。
結果を表２に示す。
【００４０】
ｉｎ　ｖｉｔｒｏ蛋白質合成阻害活性の測定
ＴＮＴ　Ｔ７　Ｑｕｉｃｋ　ｃｏｕｐｌｅｄ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ／Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ　社）のキットを用いて、ウサギ網状赤血球ライゼート中の蛋白合成能に対するリベロマイシンＡ誘導体の影響を検討した。
【００４１】
【表１】
2004059471.tif 000010
【００４２】
リベロマイシンＡ、ＢおよびリベロマイシンＡ誘導体を添加する場合は、リベロマイシンＡ、ＢまたはリベロマイシンＡ誘導体を１，０００　ｎｇ／ｍｌの濃度で反応液に添加し、氷上で２０分インキュベートした。（薬剤は、ＤＭＳＯに溶解したものをＤＭＳＯ終濃度１％になるように添加した。）
蛋白質合成反応は、反応液にラジオアイソトープラベルされた３５Ｓアミノ酸（Ｍｅｔ，Ｃｙｓ）、＊Ｐｒｏ−ｍｉｘ（１，０００　Ｃｉ／ｍｍｏｌ）をサンプルあたり１　μｌ（約　１　μＣｉ）添加して反応を開始し、３０度で９０分間反応を続けた。
【００４３】
２×サンプルバッファー（０．２５　ｍＭ　トリス−塩酸，　ｐＨ　６．８，　１０％　２−メルカプトエタノール，　４％　ＳＤＳ，　１０％　シュークロース，　０．００４％　ブロモフェノールブルー）を反応液に２５　μｌ加えて、１００度で３分間加熱して反応を停止した。それぞれのサンプルは、１０％　アクリルアミドゲルでＳＤＳＰＡＧＥを行い、オートラジオグラフィーを行った。
【００４４】
Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ蛋白質合成により生じたラジオアイソトープラベルされたアミノ酸を含む蛋白質バンドを検出した。リベロマイシンＡ、ＢまたはリベロマイシンＡ誘導体を添加しない場合（コントロール）に検出されるＩｎ　ｖｉｔｒｏ蛋白質合成により生じる蛋白質バンドが薬剤処理により完全に消失した場合に、活性有り（＋）とみなした。
結果を表２に示す。
【００４５】
【表２】
2004059471.tif 000011
【００４６】
リベロマイシンＡ（化合物１）より誘導したＣ５−シリルエーテル（化合物５）、トリエステル（化合物６）、ジエステル（化合物７−９），飽和体（化合物１３），　Ｃ１８−ＯＭＴＭ−Ｃ２４−エステル（化合物２１）および５，６−スピロアセタール（化合物１５および１８）には全く活性は見られなかった。モノエステル（化合物１０−１２）はＩｌｅＲＳ阻害活性を示したがＣ２４−エステル（化合物１１）の活性は非常に弱い。リベロマイシンＡ（化合物１）の１８位ヘミサクシニル基を化学修飾したＣ１８−サクシネート（化合物１２）、Ｃ１８−ヒドロキシ体（化合物１４）、Ｃ１８−メトキシ体（化合物１７）およびＣ１８−ＭＴＭエーテル（化合物２０）は活性を示した。
特にＣ１８−メトキシ体（化合物１７）はより安定な化合物であり、活性も強いことから注目すべきである。以上のことより、２４位カルボキシル基および５位の水酸基はリベロマイシンＡおよびその誘導体の活性発現に必須であり、また１８−ヘミサクシニル基は活性発現に必須でないことが判明した。
【００４７】
【発明の効果】
本発明により、蛋白質合成阻害活性を有し、かつ高い安定性を有するリベロマイシンＡ誘導体、その製造方法およびそれを有効成分とする蛋白質合成阻害剤が提供される。