(57)【要約】【課題】新たに簡便な冠攣縮型狭心症の識別方法を提供する。【解決手段】血漿試料、全血試料、血清試料、または血小板試料中のセロトニン濃度を測定することにより、冠動脈攣縮型狭心症を識別する。また血漿試料中のセロトニン濃度と、全血試料、血清試料または血小板試料中のセロトニン濃度とを測定し、血漿試料中のセロトニン濃度と、全血試料、血清試料、または血小板試料中のセロトニン濃度との比を求めることにより、冠動脈攣縮型狭心症を識別する。【選択図】    図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
血漿試料中のセロトニン濃度を測定することを特徴とする、冠動脈攣縮型狭心症の識別方法。
【請求項２】
全血試料、血清試料、または血小板試料中のセロトニン濃度を測定することを特徴とする、冠動脈攣縮型狭心症の識別方法。
【請求項３】
血漿試料中のセロトニン濃度と、全血試料、血清試料または血小板試料中のセロトニン濃度とを測定し、血漿試料中のセロトニン濃度と、全血試料、血清試料、または血小板試料中のセロトニン濃度との比を求めることを特徴とする、冠動脈攣縮型狭心症の識別方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本願発明は、冠動脈の攣縮を病因とする狭心症、即ち冠動脈攣縮型狭心症の識別方法に関するものであり、換言すれば、特に冠攣縮の関与が大きい冠攣縮性狭心症患者の病態の把握や治療効果の状況を正確に反映する指標であるセロトニン値の測定に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
本発明者らは、血小板をほとんど含まない血漿（ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｐｏｏｒｐｌａｓｍａ、以下、単に血漿と記載する）中のセロトニン濃度を測定する方法を確立し、動脈硬化性疾患である虚血性心疾患患者で健常人に比べ高値であることを証明した。また、血漿および全血試料中のセロトニン濃度と血小板数を測定し、これらの値から求めた血漿／全血中の濃度比率と血小板中濃度指標も同様に虚血性心疾患患者で健常人に比べ高値であることを証明した（特許文献１参照）。
【０００３】
虚血性心疾患患者の中には、冠動脈造影検査（ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ；ＣＡＧ）により狭窄を見出し得ない患者が存在するが、このような患者については、一過性に冠動脈内腔の狭小化に伴い心筋虚血を起こす、いわゆる冠攣縮が病因であると考えられている。冠攣縮について、以下説明する。血流は血管内皮細胞が関与する血管拡張作用と、血管平滑筋細胞が関与する血管収縮反応のバランスにより調節されており、これを血管トーヌスと言う。この血管トーヌスの異常な亢進が冠攣縮である。セロトニンは血管トーヌスの調節に関与する物質であり、血管平滑筋細胞のセロトニン２Ａ型受容体に作用して、収縮反応をもたらし、血管内皮細胞のセロトニン１型受容体に作用して一酸化窒素（ＮＯ）の産生を促し、隣接する血管平滑筋細胞を弛緩させる（例えば非特許文献１参照）。
【０００４】
この冠攣縮が主たる原因である狭心症は特に日本人で頻度が高いことが知られており、日本人の虚血性心疾患の診断・治療において、冠攣縮を念頭におくことは重要である。冠攣縮の診断は、ＣＡＧの際に、エルゴノビン、セロトニン、アセチルコリンなどを冠動脈内に投与し、冠攣縮を確認する誘発試験により行われる。また、このことからも明らかなようにセロトニンが冠攣縮を誘発する。
【０００５】
以上に述べた誘発試験は観血的検査であり、患者は苦痛を伴い、合併症の危険性も少なくない。また、この方法においても冠攣縮が確認されない患者がおり、これは、ＣＡＧにより確認できない冠微小血管の攣縮によると考えられている（例えば非特許文献２参照）。
【０００６】
【特許文献１】
特開２００２−２７７４６１号公報
【非特許文献１】
Ｖａｎｈｏｕｔｔｅ  ＰＭ．：  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ  ｖｅｓｓｅｌ  ｗａｌｌ．  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ３：１３５９−１３６９，  １９８１
【非特許文献２】
平川洋次他、呼と循、５０号、ｐ５５７−５６１（２００２）
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本願発明の目的は、新たに簡便な冠攣縮型狭心症の識別方法を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題に関し鋭意検討した結果、本発明に到達した。即ち本発明は、血漿試料中のセロトニン濃度を測定することを特徴とする、冠動脈攣縮型狭心症の識別方法である。また本発明は、全血試料、血清試料、または血小板試料中のセロトニン濃度を測定することを特徴とする、冠動脈攣縮型狭心症の識別方法である。更に本発明は、血漿試料中のセロトニン濃度と、全血試料、血清試料または血小板試料中のセロトニン濃度値とを測定し、血漿試料中のセロトニン濃度と、全血試料、血清試料、または血小板試料中のセロトニン濃度との比を求めることを特徴とする、冠動脈攣縮型狭心症の識別方法である。以下に本発明を更に詳細に説明する。
【０００９】
本発明においては、血漿試料、全血試料、血清試料、または血小板試料中のセロトニン濃度を測定するが、その測定方法には特に限定はなく、公知の方法を適宜採用することができる。そして、その測定値やそれらの比を健常人の値と比較することにより、冠動脈攣縮型狭心症を識別することができ、また冠動脈攣縮型狭心症の病態の程度を識別することができる。
【００１０】
例えば、本発明者らはこれまでＣＡＧにより冠動脈に有意狭窄が認められた虚血性心疾患について血漿中セロトニン測定値の検討を行ってきたが、今回、ＣＡＧにより冠動脈に有意狭窄が認めらない狭心症患者の中でエルゴノビン投与により９９％以上の冠動脈狭細化反応の冠攣縮が確認された患者と、９９％以下の冠動脈狭細化反応の冠攣縮が確認されかつ心電図異常が確認された患者（以下、ＶＳＡ）において、その全血および血漿中のセロトニン濃度を測定したところ、健常人（以下、Ｎ）に比べ全血中のセロトニン濃度が低く、血漿中のセロトニン濃度は高く、また血漿試料中のセロトニン濃度／全血試料中のセロトニン濃度の比率については高値になることを確認した。
【００１１】
また、患者の症状から冠攣縮性狭心症が疑われるものの、ＣＡＧにより冠動脈に有意狭窄が確認できず、エルゴノビン投与試験においても５０％以下の冠動脈狭細化反応しか確認できなかった患者（以下、ＶＳＡ  ｓ／ｏ）についても検討した。その結果、全血中のセロトニン濃度はＮ＞ＶＳＡ  ｓ／ｏ＞ＶＳＡの順に低くなり、血漿中のセロトニン濃度はＶＳＡ  ｓ／ｏとＶＳＡとではほぼ同等であり、両者ともＮより高くなり、血漿試料中のセロトニン濃度／全血試料中のセロトニン濃度については、Ｎ＜ＶＳＡ  ｓ／ｏ＜ＶＳＡの順に高くなることが判明した。このことは、これら測定指標が、冠攣縮の関与する狭心症の病態を把握することを示し、これらをモニターすることにより治療効果を判断する指標となることを示唆している。
【００１２】
これらの結果と病態の関係を考えると、次のように考えられる。冠攣縮を引き起こす基礎病変が最も進展しているのが誘発試験で陽性であったＶＳＡ群であり、次が誘発試験は陰性であったが冠攣縮が完全には否定できないＶＳＡ  ｓ／ｏ群である。
【００１３】
セロトニンは、クロム親和性細胞で産生され、血中に放出されたセロトニンを血小板が積極的に取り込んで濃縮している。血管病変が進行すると血小板が活性化されることが知られているが、血小板が活性化するとセロトニンを放出し、セロトニンはモノアミン酸化酵素（ＭＡＯ）により直ちに分解され、セロトニンの交替速度が速まる。したがって、病態の進行した群では全血中のセロトニン濃度が減少するものと考えられる。他方、血漿中のセロトニン濃度は病態の進行とともに増加する。したがって、両者の比（血漿／全血）は病態の進展とともにより大きく増加するものと考えられ、指標として最も優れている。
【００１４】
なお、血液中のセロトニンは、そのほとんどが血小板中に存在し、一部分が血漿中に存在しているわけであるが、血液凝固の際に血小板中のセロトニンは血清中へ放出されるので、全血中のセロトニン濃度の代わりに、血清中のセロトニン濃度を用いることも出来る（西條清史、日本臨床、５３、ｐ５２７（１９９５年増刊号））。また、全血中のセロトニンのそのほとんどは血小板に含まれることから、全血中のセロトニン濃度の代わりに血小板中のセロトニン濃度を用いることが出来る。
【００１５】
【実施例】
実施例１
健常人（Ｎ）  ３０例、ＶＳＡ  ｓ／ｏ  １９例、ＶＳＡ  ３４例について、抗凝固剤エチレンジアミン４酢酸２カリウム２水和物の３ｍｇ入った１ｍＬ採血量の真空採血管を用い、採血した。その他の測定条件は、前述の特許文献１実施例４と同様に行った。なお、以下の実施例２〜４においても同様の測定条件とした。表１にそれぞれの群のセロトニン濃度および標準偏差（Ｓ．Ｄ．）を示す。表１中の数値は平均±Ｓ．Ｄ．で表記した。
【００１６】
また、それぞれの群における平均値の差の検定は分散分析（ＡＮＯＶＡ）にて行い、その中の２群間の平均値の比較ではＳｔｕｄｅｎｔ−Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ  ｔｅｓｔを用いた。その結果を表２〜４に示す。差が有意（危険率が５％以下）であったのは、表２の全血中のセロトニン濃度比較では、Ｎ対ＶＳＡとＮ対ＶＳＡ  ｓ／ｏであった。表３の血漿中のセロトニン濃度の比較では、ＡＮＯＶＡによる３群間比較の危険率は０．１％以下で差の傾向を示したが、いずれも２群間比較では有意差がでなかった。一方、表４の血漿中のセロトニン濃度／全血中のセロトニン濃度の比（％）では、Ｎ対ＶＳＡ  ｓ／ｏとＮ対ＶＳＡにおいて有意差が確認された。しかしＶＳＡ  ｓ／ｏ対ＶＳＡでは、平均値に差はあるものの、有意差は確認されなかった。これらのことは、冠攣縮の病態は、現在、通常行われるエルゴノビンによる誘発試験だけでは把握できない可能性を示している。
【００１７】
【表１】
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【表２】
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【表３】
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【表４】
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実施例２
健常人（Ｎ）４２例、ＣＡＧにより冠動脈に有意狭窄が認められない狭心症患者の中でエルゴノビン投与試験においても５０％以下の冠動脈狭細化反応しか確認できなかった患者群（ＶＳＡｎｅｇ）１３例、ＣＡＧにより冠動脈に有意狭窄が認められない狭心症患者の中でエルゴノビン投与試験においても９０〜９８％の冠動脈狭細化反応の冠攣縮が確認された患者群（ＶＳＡｐｏｓ９０）１７例、ＣＡＧにより冠動脈に有意狭窄が認められない狭心症患者の中でエルゴノビン投与試験においても９９％以上の冠動脈狭細化反応の冠攣縮が確認された患者群（ＶＳＡｐｏｓ９９）９例について、全血中セロトニン濃度、血漿中セロトニン濃度、血漿中セロトニン濃度／全血中セロトニン濃度の比率について検討した。結果を表５に示す。
【００１８】
【表５】
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血管内皮障害の病態としては、Ｎ、ＶＳＡｎｅｇ、ＶＳＡｐｏｓ９０、ＶＳＡｐｏｓ９９の順に悪化することが推定される。全血中セロトニン濃度は、Ｎ、ＶＳＡｎｅｇ、ＶＳＡｐｏｓ９０、ＶＳＡｐｏｓ９９の順に低くなり、血漿中セロトニン濃度は、Ｎ、ＶＳＡｎｅｇ、ＶＳＡｐｏｓ９０、ＶＳＡｐｏｓ９９の順に高くなっている。血漿中セロトニン濃度／全血中セロトニン濃度の比率については、血漿中セロトニンに同じくＮ、ＶＳＡｎｅｇ、ＶＳＡｐｏｓ９０、ＶＳＡｐｏｓ９９の順に高くなっている。
【００１９】
一方、各患者群間での各種数値の比較を行い、有意差の有無を検討し、その結果を表６（年齢）、表７（全血中セロトニン濃度）、表８（血漿中セロトニン濃度）、表９（血漿中セロトニン濃度／全血中セロトニン濃度）にまとめた。
【００２０】
【表６】
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【表７】
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【表８】
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【表９】
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ＶＳＡｎｅｇとＶＳＡｐｏｓ９０、ＶＳＡｎｅｇとＶＳＡｐｏｓ９９の各数値の比較を見てみると全血中セロトニンと血漿中セロトニンについては有意差がないが、血漿中セロトニン濃度／全血中セロトニン濃度の比率については有意差が出ていることから、この比率が冠攣縮患者の病態を把握する目的に一番有用であることがわかる（表７−９）。
【００２１】
なお、年齢について、Ｎ群と患者３群に有意差があったが、全血中セロトニンと血漿中セロトニンについてはＮ群とＶＳＡｎｅｇ群では有意差は出ておらず、血漿中セロトニン濃度／全血中セロトニン濃度の比率については、年齢で有意差のないＶＳＡｎｅｇとＶＳＡｐｏｓ９０、ＶＳＡｎｅｇとＶＳＡｐｏｓ９９についても有意差がでていることから、これらセロトニンの挙動は年齢によるものではなく、冠攣縮患者の血管内皮障害に起因することがわかる（表６−９）。
【００２２】
実施例３
２ヶ月前より夜間に胸痛があり３日間の検査入院をした６０歳男性の経過観察を行った。入院時の全血中セロトニン濃度（Ｂ−５ＨＴ）は６２１ｎｍｏｌ／ｌ、血漿中セロトニン濃度（Ｐ−５ＨＴ）は２１ｎｍｏｌ／ｌ、血漿中セロトニン濃度／全血中セロトニン濃度の比率（Ｐ／Ｂ％）は３．４％であった。その他の検査データとしては、総コレステロール２２４ｍｇ／ｄｌ、中性脂肪６５ｍｇ／ｄｌ、ＨＤＬコレステロール８８ｍｇ／ｄｌ、ＬＤＬコレステロール１２６ｍｇ／ｄｌ、アスパルテートアミノトランスフェラーゼ２２Ｕ／ｌ、アラニンアミノトランスフェラーゼ２１Ｕ／ｌ、Ｃ反応性蛋白１３μｇ／ｄｌであった。エルゴノビン投与試験において９９％以上の冠動脈狭細化反応の冠攣縮が確認された。
【００２３】
治療として、高脂血症改善薬リピトール（ファイザー製薬）と血圧降下剤ヘルベッサーＲ１００（田辺製薬）の２剤が処方された。結果を図１に示す。図からも明らかなように、治療後、血漿中セロトニン濃度（白丸）、血漿中セロトニン濃度／全血中セロトニン濃度の比率（四角）は低下し、正常者と同等の値となった。全血中セロトニン濃度（黒丸）は大きな変化は確認されなかった。
【００２４】
実施例４
午前８時２０分に胸痛を訴えニトログリセリン投与された後に入院した５３歳男性の経過観察を行った。入院時は胸痛も完全には治まっておらず、心電図にも異常が認められたが午後９時４０分には胸痛も心電図異常も消失した。エルゴノビン投与試験において９９％以上の冠動脈狭細化反応の冠攣縮が確認された。入院時の全血中セロトニン濃度（Ｂ−５ＨＴ）は７２５ｎｍｏｌ／ｌ、血漿中セロトニン濃度（Ｐ−５ＨＴ）は５７ｎｍｏｌ／ｌ、血漿中セロトニン濃度／全血中セロトニン濃度の比率（Ｐ／Ｂ％）は７．８％であった。その他の検査データとしては、総コレステロール１７３ｍｇ／ｄｌ、中性脂肪３７ｍｇ／ｄｌ、ＨＤＬコレステロール４５ｍｇ／ｄｌ、ＬＤＬコレステロール１１８ｍｇ／ｄｌ、アスパルテートアミノトランスフェラーゼ２４Ｕ／ｌ、アラニンアミノトランスフェラーゼ４２Ｕ／ｌ、Ｃ反応性蛋白５４μｇ／ｄｌであった。
【００２５】
治療として、抗血小板剤バイアスピリン（バイエル）の１剤を処方した。結果を図２に示す。図からも明らかなように、治療後、血漿中セロトニン濃度（白丸）、血漿中セロトニン濃度／全血中セロトニン濃度の比率（四角）は低下し、正常者と同等の値となった。全血中セロトニン濃度（黒丸）は大きな変化は確認されなかった。
【００２６】
実施例３，４の経過観察データでは、治療前異常値であった血漿中セロトニン濃度と血漿中セロトニン濃度／全血中セロトニン濃度の比率が、治療により正常値まで低下している。これら結果から、これらデータが冠攣縮患者の血管内皮障害を反映していることが確認され、病態を把握する良好なマーカーであることが言える。
【００２７】
【発明の効果】
本発明により、冠動脈攣縮型狭心症を識別することができ、これは患者の病態の把握および治療効果を判断するために有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例３における、治療期間と各種濃度との関係を示す図である。
【図２】実施例４における、治療期間と各種濃度との関係を示す図である。
【図１】
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【図２】
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