(57)【要約】【課題】呼吸器疾患治療効果及びムチン産生抑制効果を有し、かつ、重篤な副作用を示さない治療薬を提供する。【解決手段】本発明は、グリチルリチンを有効成分とする呼吸器疾患治療薬及びムチン産生抑制剤を提供することができる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリチルリチンを有効成分とする呼吸器疾患治療薬。
【請求項２】
グリチルリチンを有効成分とするムチン産生抑制剤。
【請求項３】
グリチルリチンとグルココルチコイドを有効成分とする呼吸器患治療薬。
【請求項４】
グリチルリチンとグルココルチコイドを有効成分とするムチン産生抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、粘液物質であるムチンの過剰産生が関与する呼吸器疾患治療薬及びムチン産生抑制剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
気管支喘息、慢性気管支炎や慢性閉塞性呼吸器疾患（以下適宜「ＣＯＰＤ」という。）等の慢性呼吸器疾患の治療には長期投与が可能で副作用の少ない薬物が求められる。従来、慢性呼吸器疾患の治療薬としては、過去に急性呼吸器疾患の治療を目的として開発されたステロイド性抗炎症薬、抗生物質、去痰薬並びに気管支拡張剤が知られている（先行技術文献に該当するものなし）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、ステロイド性抗炎症薬は、長期投与によって免疫不全症の発生等の無視できない副作用の問題がある。また、抗生物質は慢性呼吸器疾患に対しては耐性菌の出現や日和見感染の問題がある。一方、多くの慢性呼吸器疾患では、気道粘液即ち喀出し難い粘稠な痰が共通の症状となり、病態の重篤さ、並びに増悪と密接な関係にある。この気道粘液の過剰産生の治療を目的に去痰薬が広く用いられているが、現行の去痰薬の有効性は患者と医師の双方が満足するにはほど遠いのが現状である。また、気管支拡張剤も治療目的に投与されているが、去痰薬と同様に満足する治療効果は得られていない。
即ち、効果が確実で副作用が少ないことを治療薬の理想とするならば、ステロイド性抗炎症薬や抗生物質は副作用の点で、一方、現行の去痰薬や気管支拡張剤は有効性の点で、慢性呼吸器疾患の治療薬として十分とは言い難い。
【０００４】
従って本発明は、かかる事情に鑑み、薬効が高く、かつ、副作用の少ない慢性呼吸器疾患に対する治療薬を提供することを目的とするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
気管支喘息、慢性気管支炎およびＣＯＰＤ等の慢性呼吸器疾患の患者では、気道の粘膜下腺や杯細胞から分泌されるムチン、特にＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ５Ｂ、ＭＵＣ２等の分泌型ムチンの過剰産生が起こり、気道分泌液全体の粘性が高まっている。この結果、粘液繊毛の輸送能が低下し、病態が増悪する一要因となっていることが解明されている｛玉置  淳，最新医学，５７，２３７３（２００２）、  Ｍ．Ｃ．  Ｒｏｓｅ，  Ｔ．Ｊ．  Ｎｉｃｋｏｌａ  ａｎｄ  Ｊ．Ａ．  Ｖｏｙｎｏｗ，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｅｌｌ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２５，  ５３３（２００１）｝。また、ＭＵＣ５ＡＣやＭＵＣ２等のムチンの産生過剰が消化器疾患や消化器癌の発症に深く関係していると報告されている｛Ｍ．Ｃ．  Ｃｏｐｉｎ，  Ｍ．Ｐ．  Ｂｕｉｓｉｎｅ，  Ｌ．  Ｄｅｖｉｓｍｅ，  Ｘ．  Ｌｅｒｏｙ，  Ｆ．  Ｅｓｃａｎｄｅ，  Ｂ．  Ｇｏｓｓｅｌｉｎ，  Ｊ．Ｐ．  Ａｕｂｅｒｔ  ａｎｄ  Ｎ．  Ｐｏｒｃｈｅｔ，  Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉ．，  ６，  Ｄ１２６４（２００１）、  Ｙ．  Ａｊｉｏｋａ，  Ｌ．Ｊ．  Ａｌｌｉｓｏｎ  ａｎｄ  Ｊ．Ｒ．  Ｊａｓｓ，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐａｔｈｏｌ．，  ４９，  ５６０（１９９６）｝。
かかる実情において、グリチルリチン（以下適宜「ＧＬ」という。）が慢性肝疾患の治療薬として現在使用されているが、重篤な副作用を示さしてないこと、また、ＭＵＣ５ＡＣやＭＵＣ２等のムチン産生に関与している遺伝子発現を抑制することによって気道の粘膜下腺や杯細胞等からのムチンの分泌を抑制し、その結果、気管支喘息、慢性気管支炎、ＣＯＰＤならびにその他、消化器疾患等のムチン分泌の産生過剰が関与する疾患の治療薬として有効であることを見出した。
さらに、グリチルリチンをグルココルチコイドと併用した場合に、グルココルチコイド作用を増強して前述したムチン産生に関与する遺伝子発現を強く抑制することを見出し、本発明を完成した。
【０００６】
即ち本発明の第１の発明は、グリチルリチンを有効成分とする呼吸器疾患治療薬である。
【０００７】
即ち本発明の第２の発明は、グリチルリチンを有効成分とするムチン産生抑制剤である。
【０００８】
即ち本発明の第３の発明は、グリチルリチンとグルココルチコイドを有効成分とする呼吸器疾患治療薬である。
【０００９】
また本発明の第４の発明は、グリチルリチンとグルココルチコイドを有効成分とするムチン産生抑制剤である。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明に係る呼吸器疾患治療薬及びムチン産生抑制剤は、グリチルリチン、グルココルチコイド及びその他の成分から構成される。
【００１１】
本発明において粘液遺伝子とは、喀出しにくい粘稠な痰等の気道粘液中のＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ２のムチン産生をコ−ドする遺伝子をいう。かかる粘液を産生しうる細胞としては、例えば気道における粘液下腺や杯細胞ならびに消化管の上皮細胞等がある。本発明のグリチルリチンは、かかるＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ２等の粘液産生に関与する遺伝子発現を有効に抑制し、呼吸器疾患及びムチンの過剰産生が関与する疾患に対して治療効果を発揮することができる。
【００１２】
グリチルリチンは、グルココルチコイドの有するＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ２等の粘液産生に関与する遺伝子発現抑制効果を増強することができる。グルココルチコイドとは、副腎皮質から分泌されるステロイドホルモン、即ち副腎皮質ホルモンの中で糖質代謝に関係するステロイドならびに同様の作用を持つ合成物質を合わせたものをいう。グルココルチコイドの一つであるデキサメタゾンは、最も強力な作用を持つ合成ステロイドである。
【００１３】
本発明で使用するグリチルリチンは通常入手できるものであればよく、例えば、生薬である甘草から抽出されたものでもよい。また、市販のグリチルリチンとしては、株式会社ミノファ−ゲン製薬社やＳｉｇｍａ社のものが使用できる。
【００１４】
本発明で使用するグルココルチコイドは通常入手できるものであればよく、天然物から抽出されたものであっても、人工的に合成されたものでもよい。また、本発明で使用するデキサメタゾンは、例えばＳｉｇｍａ社のものが使用できる。
【００１５】
本発明における呼吸器疾患治療薬の１日当たりの投与量は、年齢、性別、体重、病状等によっても異なるが、概ね次の通りである。グリチルリチン単独で使用する呼吸器疾患治療薬の場合、グリチルリチンとして、好ましくは２５〜１０００ｍｇ／人、より好ましくは１５０〜２２５ｍｇ／人である。
グリチルリチンとグルココルチコイドを併用する呼吸器疾患治療薬の場合、グリチルリチンとして、好ましくは２５〜１０００ｍｇ／人、より好ましくは１５０〜２２５ｍｇ／人であり、グルココルチコイドとしてデキサメタゾンを用いる場合には、好ましくは０．１〜８ｍｇ／人、より好ましくは０．２〜３ｍｇ／人である。
【００１６】
本発明におけるムチン産生抑制剤の１日当たりの投与量は、年齢、性別、体重、病状等によっても異なるが、概ね次の通りである。グリチルリチン単独で使用するムチン産生抑制剤の場合、グリチルリチンとして、好ましくは２５〜１０００ｍｇ／人、より好ましくは１５０〜２２５ｍｇ／人である。
グリチルリチンとグルココルチコイドを併用するムチン産生抑制剤の場合、グリチルリチンとして、好ましくは２５〜１０００ｍｇ／人、より好ましくは１５０〜２２５ｍｇ／人であり、グルココルチコイドとしてデキサメタゾンを用いる場合には、好ましくは０．１〜８ｍｇ／人、より好ましくは０．２〜３ｍｇ／人である。
【００１７】
本発明においては、必要に応じて種々の添加剤を加えることができる。添加剤としては、散剤等の固形剤に対しては、賦形剤、崩壊剤、結合剤、湿潤剤、滑沢剤、可塑剤、矯味剤、着色剤、香料等を使用することができる。賦形剤としては、乳糖、ブドウ糖、Ｄ−マンニト−ル、果糖、デキストリン、食塩、炭酸水素ナトリウム、デンプン、無水ケイ酸、カオリン等が挙げられる。崩壊剤としては、デンプン、カンテン、カルメロ−スカルシウム、カルメロ−ス、結晶セルロ−ス等が挙げられる。結合剤としては、水飴、甘草エキス、トラガント、単シロップ、ゼラチン等が挙げられる。湿潤剤としては、アラビアゴム、ポリビニルピロリドン、メチルセルロ−ス、カルメロ−スナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロ−ス等が挙げられる。滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、タルク、トウモロコシデンプン、マクロゴ−ル等が挙げられる。可塑剤としては、ポリエチレングリコ−ル、プロピレングリコ−ル、グリセリン類、トリアセチン、中鎖脂肪酸トリグリセリド、アセチルグリセリン脂肪酸エステル、クエン酸トリエチル等が挙げられる。矯味剤としては、白糖、ハチミツ、サッカリンナトリウム、ハッカ、ユ−カリ油、ケイヒ油等が挙げられる。着色剤としては、酸化鉄、β−カロチン、クロロフィル、水溶性食用夕−ル色素等が挙げられる。香料としては、レモン油、オレンジ油、ｄｌ−又はｌ−メント−ル等が挙げられる。
一方、注射剤等に対しては、添加剤としては、溶剤、安定化剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、緩衝剤、保存剤、等張化剤、無痛化剤、賦形剤等を使用することができる。溶剤としては、生理的食塩水、リンゲル液、オリ−プ油、ゴマ油、ダイズ油、エタノ−ル、プロピレングリコ−ル等が挙げられる。安定化剤としては、アスコルビン酸、亜硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、トコフェロ−ル等が挙げられる。溶解補助剤としては、ナトリウム塩、塩酸塩、ニコチン酸アミド、安息香酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、クエン酸等が挙げられる。懸濁化剤としては、カルメロ−ルナトリウム、モノステアリン酸アルミニウム、アルギン酸ナトリウム等が挙げられる。乳化剤としては、一般の界面活性剤等が挙げられる。緩衝剤としては、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩等が挙げられる。保存剤としては、バラオキシ安息香酸メチル、バラオキシ安息香酸エチル、フェノ−ル、クレゾ−ル等が挙げられる。等張化剤としては、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が挙げられる。無痛化剤としては、塩酸プロカイン、リドカイン、ペンジルアルコ−ル等が挙げられる。賦形剤としては、アミノ酸類、糖類等が挙げられる。
【００１８】
本発明に係る呼吸器疾患治療薬及びムチン産生抑制剤の剤形としては、特に制限はないが、散剤、顆粒剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤、舌下剤、吸入剤、噴霧剤、注射剤、座剤等が挙げられる。
【００１９】
本発明に係る呼吸器疾患治療薬及びムチン産生抑制剤の製造方法は、特に制限されないが、一般公知の方法により製造することができる。例えば、グリチルリチンとグルココルチコイド、そして必要に応じて添加剤を添加した後、混合することにより製造するか、あるいは水又は有機溶媒に添加し、必要に応じて溶媒を除去する方法等によって製造することができる。
【００２０】
本発明に係る呼吸器疾患治療薬及びムチン産生抑制剤の投与方法は、特に制限されないが、一般公知の方法により投与することができる。例えば、固形剤であれば、１日１〜３回の割合で経口投与することができ、吸入剤であれば、１日１〜３回の割合で吸入投与することができる。また、注射剤であれば、数日に１回の割合で注射により投与することができる。
【００２１】
【実施例】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
基本的には、ヒト気管上皮細胞Ａ５４９やヒト気管上皮細胞ＮＣＩ−Ｈ２９２をグリチルリチン及び／又はデキサメタゾンで処理し、当該細胞内の粘液遺伝子のｍＲＮＡの発現量をノ−ザン・ブロット法及び定量的ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ法（以下「定量的ＲＴ−ＰＣＲ法」という。）により測定した。
【００２２】
本発明において使用したヒト気管上皮細胞ＮＣＩ−Ｈ２９２は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｔｙｐｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ細胞バンクの推奨する培養条件下で培養した。なお、薬理学的試験時には、Ｃｈａｒｃｏａｌ−ｄｅｘｔｒａｎ（Ｓｉｇｍａ社）処理によって脱ホルモン化したウシ胎児血清を使用した。
【００２３】
本発明においては、グリチルリチンはミノファ−ゲン製薬社より供与されたもの、若しくはＳｉｇｍａ社より購入したものを使用した。デキサメタゾン（以下適宜「ＤＥＸ」という。）はＳｉｇｍａ社のものを使用した。
【００２４】
コンフルエントカルチャーを形成したＮＣＩ−Ｈ２９２細胞の培養上清を除去し、洗浄後、ＧＬ及び／又はＤＥＸあるいはコントロールとしての１％  ジメチルスルホキシド及び１％  エタノールを含む血清不含培養液に置換し、その後、３７℃で、さらに２４時間培養した。なお、ＧＬ及びＤＥＸはそれぞれ目的の最終濃度の１００  倍溶液をジメチルスルホキシド及びエタノールにて調整し、培養液にて希釈後加えた。
【００２５】
［ノ−ザン・ブロット法による粘液遺伝子ｍＲＮＡの発現の測定］
ＧＬ及び／又はＤＥＸで処理したヒト気管上皮細胞ＮＣＩ−Ｈ２９２から抽出した全ＲＮＡから、ＱｕｉｃｋＰｒｅｐＴＭ  ｍｉｃｒｏ  ｍＲＮＡ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｋｉｔ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社の登録商標）を用いてポリＲＮＡを精製した。ポリＲＮＡ３μｇを１％アガロ−スゲルで電気泳動し、ナイロンメンブレンに転写、これを３２Ｐ−標識したＭＵＣ２、ＭＵＣ５ＡＣ及びコントロ−ルとしてのβアクチンのｃＤＮＡプロ−プとハイブリダイズし、洗浄後、バイオイメ−ジアナライザーＢＡＳ−１８００（フジフィルム社）を用いて解析した。粘液遺伝子ＭＵＣ２、ＭＵＣ５ＡＣ及びβアクチンのｍＲＮＡの発現の結果を図１に示す。
【００２６】
［定量的ＲＴ−ＰＣＲによるｍＲＮＡ量の測定］
上述のようにＧＬ、ＤＥＸ又はこれらの併用によって処理したヒト気管上皮細胞ＮＣＩ−Ｈ２９２から全ＲＮＡを抽出した。定量的ＲＴ−ＰＣＲにはアプライドバイオシステムズ社の測定装置ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７０００を用いた。本システムのソフトウェアを用いてｈｕｍａｎ  ＭＵＣ５ＡＣのｃＤＮＡ塩基配列よりプライマ−及びＴａｑｍａｎプロ−ブを決定、合成した。粘液遺伝子ＭＵＣ５ＡＣのｍＲＮＡの発現の結果を図２に示す。
【００２７】
図１より、本実施例においては、ＧＬは単独で粘液遺伝子ＭＵＣ２及びＭＵＣ５ＡＣのｍＲＮＡ発現を濃度依存的に抑制したことがわかる。また、ＧＬとＤＥＸの併用では、抑制作用はより顕著であった。さらに、ＤＥＸも単独でｍＲＮＡ発現の抑制作用を示した。０．０１ｍＭのＧＬをＤＥＸ（１ｎＭ）と併用するとＭＵＣ２及びＭＵＣ５ＡＣの両ｍＲＮＡのバンドはほぼ完全に消失した。
図２より、本実施例においては、ＧＬは単独で粘液遺伝子ＭＵＣ５ＡＣのｍＲＮＡ発現を濃度依存的に抑制し、０．１ｍＭ以上の濃度では、ｍＲＮＡはコントロ−ルの約１／２まで減少したことがわかる。また、ＧＬとＤＥＸの併用では、ＭＵＣ５ＡＣのｍＲＮＡはほぼ完全に消失し、抑制作用はより顕著であった。さらに、ＤＥＸも単独でｍＲＮＡ発現の抑制作用を示した。
【００２８】
【発明の効果】
本発明における呼吸器疾患治療薬及びムチン産生抑制剤は有効成分としてグリチルリチンを含有することにより、呼吸器疾患治療及びムチン産生抑制効果を示す。また、本発明の呼吸器疾患治療薬及びムチン産生抑制剤は、重篤な副作用を示すものではない。
【図面の簡単な説明】
【図１】ノ−ザン・ブロット法による粘液遺伝子のｍＲＮＡ発現に対するＧＬの作用の一例を示す図である。
【図２】定量的ＲＴ−ＰＣＲ法による粘液遺伝子のｍＲＮＡ発現に対するＧＬの作用の一例を示す図である。
【図１】
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【図２】
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