(57)【要約】【課題】固相表面に高密度に生体高分子を固定化する方法を提供する。【解決手段】官能基（Ａ）を有する生体高分子と、一分子中に該官能基（Ａ）に対して反応活性を有する官能基（Ｂ）を少なくとも三つもつ多官能化合物とを反応させて、前記生体高分子と前記多官能化合物とを結合させ、かつ未反応の官能基（Ｂ）を該多官能化合物の一分子中に少なくとも一つ残存させ、次いで該多官能化合物中に残存する未反応の官能基（Ｂ）を、官能基（Ｂ）に対して反応活性を有する官能基（Ｃ）をもつ固相表面に反応させることにより、固相表面に生体高分子を固定する。【選択図】          なし。【特許請求の範囲】
【請求項１】
固相表面に生体高分子を固定する方法であって、官能基（Ａ）を有する生体高分子と、一分子中に該官能基（Ａ）に対して反応活性を有する官能基（Ｂ）を少なくとも三つもつ多官能化合物とを反応させて、前記生体高分子と前記多官能化合物とを結合させ、かつ未反応の官能基（Ｂ）を該多官能化合物の一分子中に少なくとも一つ残存させ、次いで該多官能化合物中に残存する未反応の官能基（Ｂ）を、官能基（Ｂ）に対して反応活性を有する官能基（Ｃ）をもつ固相表面に反応させて結合させることを特徴とする生体高分子の固定方法。
【請求項２】
前記官能基（Ａ）がアミノ基である請求項１に記載の生体高分子の固定方法。
【請求項３】
前記官能基（Ａ）が、エポキシ基、ハロホルミル基、イソシアナト基、カルボン酸基、酸無水物、スルホ基、ハロスルホニル基、マレイミド基、およびホルミル基からなる群から選ばれる少なくとも一種の官能基である請求項１に記載の生体高分子の固定方法。
【請求項４】
前記官能基（Ｂ）が、エポキシ基、ハロホルミル基、イソシアナト基、カルボン酸基、酸無水物、マレイミド基、およびホルミル基からなる群から選ばれる少なくとも一種の官能基である請求項２に記載の生体高分子の固定方法。
【請求項５】
前記官能基（Ｂ）がアミノ基である請求項３に記載の生体高分子の固定方法。
【請求項６】
前記官能基（Ｃ）がアミノ基である請求項４に記載の生体高分子の固定方法。
【請求項７】
前記官能基（Ｃ）が、エポキシ基、ハロホルミル基、イソシアナト基、カルボン酸基、酸無水物、マレイミド基、およびホルミル基からなる群から選ばれる少なくとも一種の官能基である請求項５に記載の生体高分子の固定方法。
【請求項８】
前記多官能化合物が分子量１０００〜１０００００の鎖状ポリマーである請求項１に記載の生体高分子の固定方法。
【請求項９】
前記生体高分子がオリゴヌクレオチドである請求項１に記載の生体高分子の固定方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、生体高分子を固相表面へ固定する方法に関する。本発明の生体物質の固定方法は、例えば免疫診断用のイムノアッセイ、ＤＮＡマイクロアレイ、いわゆるプロテインチップなどの用途に使用できる。
【０００２】
【従来の技術】
例えば免疫診断用のイムノアッセイやＤＮＡマイクロアレイなどの用途に使用するために、生体高分子を基板などの固相表面に固定化する方法としては、例えば疎水性表面の固相に生体高分子を触れさせることによって非特異的に表面に吸着させて固定化する方法、マイナスに帯電している物質ならばプラス荷電を持つ表面に対して静電的に固定化する方法、抗原抗体反応のように結合の高い特異性を利用して固定化する方法、例えばホルミル基とアミノ基との反応で形成されるような共有結合を利用し固定化する方法等が知られている。
【０００３】
いずれの固相表面への固定化方法においても、固定化される生体高分子の量を多くするために、固相表面に導入されるアンカーとなる官能基の量を増やすか、または表面を多孔質化する方法やビーズ表面への結合方法の様に、生体高分子が結合する固相の表面積を増大させる方法が採られていた。
【０００４】
しかしながら、固相表面と溶液との反応であるために、固相表面のアンカーとなる官能基の量を増やしても、同じ反応を溶液中で行う反応と比較すると反応効率は低く、その効果が生体高分子の固定量とその密度に反映されにくい。そのため、固定密度の増加には限界があった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明が解決しようとする課題は、固相表面に高密度に生体高分子を固定化する方法を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、多官能化合物に生体高分子を複数個結合させたのち、該多官能化合物を固相表面上に固定化することによって、生体高分子を高密度に固相表面上へ固定化することができること
を見出し本発明を完成するに至った。
【０００７】
即ち、本発明は、固相表面に生体高分子を固定する方法であって、官能基（Ａ）を有する生体高分子と、一分子中に該官能基（Ａ）に対して反応活性を有する官能基（Ｂ）を少なくとも三つもつ多官能化合物とを反応させて、前記生体高分子と前記多官能化合物とを結合させ、かつ未反応の官能基（Ｂ）を該多官能化合物の一分子中に少なくとも一つ残存させ、次いで該多官能化合物中に残存する未反応の官能基（Ｂ）を、官能基（Ｂ）に対して反応活性を有する官能基（Ｃ）をもつ固相表面に反応させて結合させることを特徴とする生体高分子の固定方法を提供する。
【０００８】
【発明の実施の形態】
生体高分子は該分子の固定に関わる官能基（Ａ）を有し、多官能化合物は前記官能基（Ａ）に対して反応活性な官能基（Ｂ）を１分子内に３個以上有し、固相表面は官能基（Ｂ）に対して反応活性を有する官能基（Ｃ）を有する。ここで言う「反応活性な」とは、反応して共有結合することを言う。官能基（Ａ）と官能基（Ｃ）は同じ官能基であっても良い。
【０００９】
これらの官能基及びその組み合わせとしては公知慣用の方法を使用することが可能であるが、生体高分子を扱う反応であるために、マイナス２０℃〜１００℃、好ましくは０℃〜７０℃、さらに好ましくは０℃〜５０℃の温度範囲の中で、効率的に反応する官能基およびその組み合わせが望ましい。また、生体高分子の機能が失活するような溶媒中でしか反応が進行しない官能基及びその組み合わせは好ましくない。生体高分子の機能が失活しないということを考慮すると、水中においても活性を有する官能基およびその組み合わせを用いることが好ましい。そのような組み合わせとしてはアミノ基とアミノ基が反応する官能基との組み合わせが好ましい。
【００１０】
アミノ基が反応する官能基としては、エポキシ基、ハロホルミル基、イソシアナト基、カルボン酸基、酸無水物、マレイミド基、およびホルミル基が好ましく、これらの中で、アミノ基と反応する官能基の反応性、安定性を考慮すると、ホルミル基、とエポキシ基が好ましい。生体高分子が３７℃〜１００℃の範囲で安定に存在するのであるならば、エポキシ基を使用することが好ましい。
【００１１】
上記の条件を満たす好ましい組み合わせとしては、例えば、（１）官能基（Ａ）としてホルミル基、官能基（Ｂ）としてアミノ基、官能基（Ｃ）としてエポキシ基、（２）官能基（Ａ）としてアミノ基、官能基（Ｂ）としてカルボキシル基、官能基（Ｃ）としてアミノ基、（３）官能基（Ａ）としてホルミル基、官能基（Ｂ）としてアミノ基、官能基（Ｃ）として酸無水物等の組み合わせが挙げられる。
【００１２】
官能基（Ａ）を有する生体高分子は任意であり、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ペプチド、タンパク質、糖タンパク質等である。生体高分子に官能基（Ａ）を導入する方法も任意であり、公知慣用の方法を使用できる。例えば、生体高分子がオリゴヌクレオチドである場合、塩基中にあるアミノ基、または５‘または３’末端をアミノ化したオリゴヌクレオチド中の末端アミノ基を介することによって、様々な官能基を官能基（Ａ）をとして導入することが可能である。また例えば、生体高分子がペプチドである場合、アミノ末端とリジン中のアミノ基を介することによって、様々な官能基を官能基（Ａ）として導入することが可能である。さらに官能基（Ａ）を含有するアジド化合物などの光化学反応によりペプチドを修飾することが出来る。
【００１３】
官能基（Ｂ）を分子内に３つ以上有する多官能化合物は任意であり、例えば、ポリアリルアミン、ポリ−Ｌ−リジン、ポリグルタール、ポリカルボン酸等が挙げられる。該多官能化合物は、水溶性であることが好ましい。
【００１４】
前記多官能化合物は官能基（Ｂ）を一分子内に３つ以上有することが必要である。前記多官能化合物が官能基（Ｂ）を２つしか有していなければ、該多官能化合物の一分子は生体高分子を一分子しか固相に固定することが出来ず、従来法の、生体高分子を修飾し固定化する方法と違いが無く、高密度に生体高分子を固定化することができない。また、前記多官能化合物が官能基（Ｂ）を１つしか有していなければ、該官能基（Ｂ）は前記生体高分子の官能基（Ａ）と反応すると、固相が有する官能基（Ｃ）と反応することが出来ない。
【００１５】
前記多官能化合物が一分子内に有する官能基（Ｂ）の数は５以上が好ましく、１０以上が更に好ましく、３０以上が最も好ましい。該官能基数は、多いことそれ自体による不都合はないため、上限を設ける必要はないが、過剰に多いと、該多官能化合物の分子量が過度に高くなりがちであり、後述の鎖状ポリマーの部分で述べるようなデメリットが発生する。
【００１６】
前記多官能化合物は鎖状ポリマーであることが好ましい。鎖状ポリマーとすることによって、前記多官能化合物は多くの官能基（Ｂ）を分子内に有することが出来、また、フレキシブルな主鎖が固相と生体高分子の間のスペーサーとなるため、該生体高分子のアフィニティーなどの機能が高まる。なお、ここで言う鎖状ポリマーとは、架橋ポリマーでないポリマーを言い、直鎖状ポリマー、分岐ポリマー、星形ポリマー等であり得る。
【００１７】
前記鎖状ポリマーの平均分子量は任意であるが、１００００００以下が好ましく、１０００００以下が更に好ましい。前記鎖状ポリマーの分子量が過剰に高いと、ゲル化し易く成ったり、溶解度が低下したり、該多官能化合物によって生体高分子がオフクルードされて表面に出なくなるなどの問題が生じる。
【００１８】
前記鎖状ポリマーの平均分子量の下限は前記のように官能基（Ｂ）を一分子内に３個以上有しさえすればよく、例えば２００程度、或いは５００程度といったオリゴマー領域の分子量であっても良い。鎖状ポリマーにフレキシブルなスペーサーとしての機能を発揮させるためには、平均分子量は１０００以上であることが好ましい。
【００１９】
前記多官能化合物の合成方法も任意であり、官能基（Ｂ）を有するモノマーの重合又は共重合、鎖状の天然ポリマーや合成ポリマーへの官能基（Ｂ）の導入であり得る。
【００２０】
本発明の方法は、前記生体高分子と前記多官能化合物とを反応させることによって、前記生体高分子を多官能化合物と結合させ、かつ未反応の官能基（Ｂ）を該多官能化合物の一分子中に少なくとも一つ残存させる。残存数の上限は、前記多官能化合物が有する官能基（Ｂ）数から２を引いた値である。該残存させる量が過大ならば、生体高分子の固定量が減少し従来法とかわりなくなる上、該生体高分子が該多官能化合物によって包埋される確率が高くなる。該残存させる量１未満即ちゼロであると生体高分子は固相に固定されない。前記多官能化合物中に残存する官能基（Ｂ）の数は、公知慣用の方法、例えばＮＭＲにより測定できる。最適値は使用する反応系において簡単な実験で求めることが出来る。
【００２１】
前記生体高分子を前記多官能化合物と反応させて結合させ、かつ未反応の官能基（Ｂ）を該多官能化合物の一分子中に平均して少なくとも一つ残存させる方法は任意であり、例えば、官能基（Ａ）に対して官能基（Ｂ）が過剰となる条件下で反応させる方法、或いは、官能基（Ａ）に対して官能基（Ｂ）を当モル以下の量だけ仕込んだ場合であっても、反応が完結しない時点で反応を中断させる方法を採ることが出来る。これらのうちで、後者は反応速度に勝るが、前者が、再現性が良く好ましい。
【００２２】
本発明における生体高分子を固定する固相の形状は任意であり、例えば板状、シート状、マイクロウェルの内面、エッペンドルフチューブの内面、ビーズ状、多孔質体であってよい。また固相表面の形状も任意であり、平滑面、凹凸面、多孔質形状であってもよい。
【００２３】
本発明の固相への官能基（Ｃ）の導入方法も任意であり、公知慣用の方法を使用できる。例えば、官能基（Ｃ）を有するシランカップリング剤による表面処理、官能基（Ｃ）を有するモノマーの重合または共重合、官能基（Ｃ）を有するアジド化合物などの光反応による導入などを挙げることができる。
【００２４】
【実施例】
以下、実施例及び比較例を用いて本発明を更に詳しく説明するが、本発明は、以下の実施例の範囲に限定されるものではない。なお、以下の実施例及び比較例における「部」は「質量部」である。
【００２５】
［エネルギー線照射装置］
エネルギー線照射装置としてアイグラフィックス株式会社製のＵＥ０３１型露光装置を使用し、その光源としてＭＯＳ−Ｌ３１型ランプを用いた。紫外線強度は、記載の無い限り５０ｍｗ／ｃｍ２である。
【００２６】
［蛍光強度測定方法］
ライカ株式会社製の共焦点レーザー顕微鏡ＴＣＳ−ＮＴを用いて測定した。測定条件はＰＭＴ感度４４９Ｖ、ピンホール０．６５である。
【００２７】
［実施例１］
〔エネルギー線硬化性組成物（ｉ）の調製〕
活性エネルギー線架橋重合性化合物として、平均分子量約２０００の３官能ウレタンアクリレートオリゴマー（大日本インキ化学工業株式会社製の「ユニディックＶ−４２６３」）を８０部、及び１，６−ヘキサンジオールジアクリレート（第一工業製薬株式会社製の「ニューフロンティアＨＤＤＡ」）を２０部、光重合開始剤として１−ヒドロキシシクロヘキシルフェニルケトン（チバガイギー社製の「イルガキュア１８４」）を５部を均一に混合して組成物（ｉ）を調製した。
【００２８】
〔エネルギー線硬化性組成物（ｉｉ）の調製〕
活性エネルギー線架橋重合性化合物として、平均分子量約２０００の３官能ウレタンアクリレートオリゴマー（大日本インキ化学工業株式会社製の「ユニディックＶ−４２６３」）を６０部、及び１，６−ヘキサンジオールジアクリレート（第一工業製薬株式会社製の「ニューフロンティアＨＤＤＡ」）を３０部、メタクリル酸グリシジル（和光純薬工業株式会社製）を１０部、及び光重合開始剤として１−ヒドロキシシクロヘキシルフェニルケトン（チバガイギー社製の「イルガキュア１８４」）５部を均一に混合して組成物（ｉｉ）を調製した。
【００２９】
〔生体高分子固定用固相の作製〕
基材（１）としてポリアクリレート（三菱レイヨン社製の「アクリライトＬ  ０００番」）製の板を用い、これに２０００ｒｐｍ、５０秒条件のスピンコーターを用いて組成物（ｉ）を塗布し、５０ｍｗ／ｃｍ２の紫外線を窒素雰囲気中で３秒間照射して、塗膜（２）を半硬化させた。
【００３０】
この半硬化状態の塗膜（２）の上に、２０００ｒｐｍ、５０秒条件のスピンコーターを用いて組成物（ｉｉ）を塗布し、５０ｍｗ／ｃｍ２の紫外線を窒素雰囲気中で６０秒間照射して、塗膜（２）を硬化させ
、生体高分子固定用固相（Ａ）とした。
【００３１】
〔生体高分子の調製〕
５‘末端にアミノ基を、３’末端にＦＩＴＣ（フルオレセインイソチオシアネート）修飾した遺伝子鎖Ａ（５’−ＧＴＴＣＧＡＣＧＴＣＡＴＣＧＴＣＴＣＧＡＴＣＴＣＧ−３’）を１μｌ、該遺伝子鎖Ａの遺伝子配列に相補的な遺伝子鎖Ｂ（５’−ＣＧＡＧＡＴＣＧＡＧＡＣＧＡＴＧＡＣＧＴＣＧＡＡＣ−３’）を１μｌ、ＰＣＲ用１０Ｘ緩衝液（宝酒造株式会社製の１０Ｘ  Ｅｘ  Ｔａｑ  Ｂｕｆｆｅｒ）を１μｌ、滅菌水を７μｌ加えたＰＣＲ用反応チューブを、ＰＣＲ反応用サーマルサイクラーを用いて９５℃２分、８０℃２分、７０℃２分、６０℃２分、５０℃２分、４０℃２分、３０℃２分、４℃２分の温度変化を与えることにより、遺伝子鎖ＡとＢをハイブリダイゼーションさせ、生体高分子溶液（ｉｉｉ）を調製した。
【００３２】
〔固定化用生体高分子の調製〕
調製した生体高分子溶液（ｉｉｉ）に、２５％グルタルアルデヒド溶液（和光純薬工業製の２５％グルタルアルデヒド溶液）をリン酸緩衝液（和光純薬製の）にて１０倍希釈して作製した２．５％グルタルアルデヒド溶液を２μｌ加え、３７℃水槽中にて２時間反応させ、これに１００％エタノールを加えて遺伝子鎖を沈殿させることによって、遺伝子鎖中のアミノ基をアルデヒド修飾した遺伝子鎖を得た。これに、１０％ポリアリルアミン溶液（日東紡製のＰＡＡ−１０Ｃ）をリン酸緩衝液（和光純薬工業製の「りん酸緩衝剤粉末」を１リットルの滅菌水に溶かしたもの）にて２倍希釈して作製した５％ポリアリルアミン溶液を４μｌ加え、３７℃水槽中にて２時間反応させ、ポリアリルアミンにアルデヒド修飾した遺伝子鎖が結合した固定化用生体高分子（α）を調製した。
【００３３】
［生体高分子の固定化］
調製した固定化用生体高分子にマイクロスポッティングソリューション（アレイット社製）を４μｌ加えたものを生体高分子固定用固相（Ａ）に約０．５μｌずつスポットした後、湿度１００％、温度５０℃にて１２時間保持した。
【００３４】
［固定化した生体高分子の洗浄］
１２時間保持した該固相Ａを０．２ＸＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）溶液にて室温で５分間洗浄した後、０．２ＸＳＳＣ溶液にて室温で５分間洗浄することを３回繰り返し、測定用サンプルとした。
【００３５】
［比較例１］
〔生体高分子固定用固相の作製〕
基材（１）としてポリアクリレート（三菱レイヨン社製の「アクリライトＬ  ０００番」）製の板を用い、これに２０００ｒｐｍ、５０秒条件のスピンコーターを用いて組成物（ｉ）を塗布し、５０ｍｗ／ｃｍ２の紫外線を窒素雰囲気中で３秒間照射して、塗膜（２）を半硬化させた。
【００３６】
この半硬化状態の塗膜（２）の上に、２０００ｒｐｍ、５０秒条件のスピンコーターを用いて組成物（ｉｉ）を塗布し、５０ｍｗ／ｃｍ２の紫外線を窒素雰囲気中で６０秒間照射して、塗膜（２）を硬化させた。硬化した固相を、１０％ポリアリルアミン溶液（日東紡製のＰＡＡ−１０Ｃ）をリン酸緩衝液（和光純薬工業製の「りん酸緩衝剤粉末」を１リットルの滅菌水に溶かしたもの）にて２倍希釈して作製した５％ポリアリルアミン溶液中に浸し、３７℃水槽中にて２時間反応させ、表面にポリアリルアミンが結合した生体高分子固定用固相（Ｂ）を作製した。
【００３７】
〔固定化用生体高分子の調製〕
調製した生体高分子溶液（ｉｉｉ）に、２５％グルタルアルデヒド溶液（和光純薬工業製の２５％グルタルアルデヒド溶液）をリン酸緩衝液（和光純薬工業製の「りん酸緩衝剤粉末」を１リットルの滅菌水に溶かしたもの）にて１０倍希釈して作製した２．５％グルタルアルデヒド溶液を２μｌ加え、３７℃水槽中にて２時間反応させ、これに１００％エタノールを加えて遺伝子鎖を沈殿させることによって、遺伝子鎖中のアミノ基をアルデヒド修飾した遺伝子鎖を得た。これに、リン酸緩衝液（和光純薬工業製の「りん酸緩衝剤粉末」を１リットルの滅菌水に溶かしたもの）を４μｌ加え、３７℃水槽中にて２時間反応させ、ポリアリルアミンにアルデヒド修飾した遺伝子鎖が結合した固定化用生体高分子（β）を調製した。
【００３８】
［生体高分子の固定化］
調製した固定化用生体高分子（β）にマイクロスポッティングソリューション（アレイット社製）を４μｌ加えたものを生体高分子固定用固相（Ｂ）に約０．５μｌずつスポットした後、湿度１００％、温度５０℃にて１２時間保持した。
【００３９】
［固定化した生体高分子の洗浄］
１２時間保持した該固相Ｂを０．２ＸＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）溶液にて室温で５分間洗浄した後、０．２ＸＳＳＣ溶液にて室温で５分間洗浄することを３回繰り返し、測定用サンプルとした。
【００４０】
［比較例２］
〔生体高分子固定用固相の作製〕
基材（１）としてポリアクリレート（三菱レイヨン社製の「アクリライトＬ  ０００番」）製の板を用い、これに２０００ｒｐｍ、５０秒条件のスピンコーターを用いて組成物（ｉ）を塗布し、５０ｍｗ／ｃｍ２の紫外線を窒素雰囲気中で３秒間照射して、塗膜（２）を半硬化させた。
【００４１】
この半硬化状態の塗膜（２）の上に、２０００ｒｐｍ、５０秒条件のスピンコーターを用いて組成物（ｉｉ）を塗布し、５０ｍｗ／ｃｍ２の紫外線を窒素雰囲気中で６０秒間照射して、塗膜（２）を硬化させた。硬化した固相を、１０％ポリアリルアミン溶液（日東紡製のＰＡＡ−１０Ｃ）をリン酸緩衝液（和光純薬工業製の「りん酸緩衝剤粉末」を１リットルの滅菌水に溶かしたもの）にて２倍希釈して作製した５％ポリアリルアミン溶液中に浸し、３７℃水槽中にて２時間反応させ、さらに２５％グルタルアルデヒド溶液（和光純薬工業製の２５％グルタルアルデヒド溶液）をリン酸緩衝液（和光純薬工業製の「りん酸緩衝剤粉末」を１リットルの滅菌水に溶かしたもの）にて１０倍希釈して作製した２．５％グルタルアルデヒド溶液中に浸し、３７℃水槽中にて２時間反応させ、表面にグルタルアルデヒドが結合した生体高分子固定用固相（Ｃ）を作製した。
【００４２】
〔固定化用生体高分子の調製〕
調製した生体高分子溶液（ｉｉｉ）に１００％エタノールを加えて遺伝子鎖を沈殿させ、これに、リン酸緩衝液（和光純薬工業製の「りん酸緩衝剤粉末」を１リットルの滅菌水に溶かしたもの）を４μｌ加えて３７℃水槽中にて２時間保持することによって、固定化用生体高分子（γ）を調製した。
【００４３】
［生体高分子の固定化］
調製した固定化用生体高分子（γ）にマイクロスポッティングソリューション（アレイット社製）を４μｌ加えたものを生体高分子固定用固相（Ｃ）に約０．５μｌずつスポットした後、湿度１００％、温度５０℃にて１２時間保持した。
【００４４】
［固定化した生体高分子の洗浄］
１２時間保持した該固相Ｃを０．２ＸＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）溶液にて室温で５分間洗浄した後、０．２ＸＳＳＣ溶液にて室温で５分間洗浄することを３回繰り返し、測定用サンプルとした。
【００４５】
これらの結果、実施例では十分に観測可能であったが、比較例１，２では観測することができなかった。
【００４６】
【発明の効果】
本発明の生体高分子の固相表面への固定化方法は、目的とする生体高分子を壁面上の官能基へ直接固定する従来の方法よりも、生体高分子を高密度に固定することができる。そのため、より高感度に生体高分子を検出することを可能とする。また、サンプル量が非常に少量である場合、または固定化の効率が低いサンプルである場合において、この高密度に固定化する方法を用いることによって、従来の固定方法よりもより高感度に検出することが可能となる。本発明方法を用いることによって、ＤＮＡマイクロアレイや、マイクロタイタープレートを使用するエライザ法などの生体高分子を固定化する実験においてより高感度に検出することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１、比較例１及び２で使用した生体高分子固定用固相（Ａ），（Ｂ）及び（Ｃ）の断面方向の模式図である。
【符号の説明】
１  基材（ポリアクリレート板）
２  塗膜、樹脂層、エネルギー線硬化性組成物（ｉ）
３  塗膜、樹脂層、エネルギー線硬化性組成物（ｉｉ）
４  ポリアリルアミン層
５  グルタルアルデヒド層
【図１】
2004177378.tif 000002