(57)【要約】【課題】優れたシクロオキシゲナーゼ阻害活性及び５−リポキシゲナーゼ阻害活性を示し、消炎鎮痛作用、解熱作用、抗アレルギー作用等が期待できる酵素阻害剤又は医薬を提供すること。【解決手段】本発明のシクロオキシゲナーゼ阻害剤又は５−リポキシゲナーゼ阻害剤は、式（１）で示される化合物を有効成分として含み、本発明の医薬は、これら酵素阻害剤を含む消炎鎮痛剤、解熱剤又は抗アレルギー剤としての医薬である。【化１】2004231587.tif 000007（Ｒは、独立にＨ、Ｃ１〜１０のアルキル基又はアシル基を示す。）【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）で示される化合物を有効成分として含むシクロオキシゲナーゼ阻害剤。
【化１】
2004231587.tif 000006
（式中Ｒは、それぞれ独立に水素原子、炭素数１〜１０のアルキル基又はアシル基を示す。）
【請求項２】
式（１）で示される化合物を有効成分として含む５−リポキシゲナーゼ阻害剤。
【請求項３】
請求項１記載のシクロオキシゲナーゼ阻害剤及び／又は請求項２記載の５−リポキシゲナーゼ阻害剤を含むことを特徴とする、消炎鎮痛剤、解熱剤又は抗アレルギー剤としての医薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、各種消炎鎮痛剤、解熱剤、各種抗アレルギー剤等に利用可能なシクロオキシゲナーゼ阻害剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤及びこれらを用いた医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
シクロオキシゲナーゼ（プロスタグランジン・エンドペルオキシド合成酵素）は、生体内においてアラキドン酸を基質として強い生理活性を有するプロスタグランジンＨ２を産生する酵素で、更にプロスタグランジンＤ２、Ｅ２、Ｆ２やトロンボキサンＡ２、Ｂ２等の強い生理活性を有する代謝物の生成に関与している。
該シクロオキシゲナーゼは、炎症反応に関連することは良く知られ、アスピリン、インドメタシンやイブプロフェンを初めとしたシクロオキシゲナーゼ阻害剤が抗炎症剤として既に広く使用されている。更に、シクロオキシゲナーゼが虚血性疾患、老人性痴呆症、ガン、喘息、動脈硬化症、各種炎症性疾患等の疾患に深く関与することが明らかにされ、シクロオキシゲナーゼを阻害する薬剤がこれら疾病の治療薬となる可能性が示唆されている（例えば、非特許文献１参照）。
また、５−リポキシゲナーゼの作用により、生体内においてアラキドン酸から５−ヒドロペルオキシエイコサテトラエン酸が生成され、該化合物を中間体として各種ロイコトリエン類が生合成されることが知られている。そして、該５−リポキシゲナーゼの阻害剤が、ロイコトリエン類等のリポキシゲナーゼ代謝産物に起因する種々の疾患、例えば、各種炎症や、気管支喘息、鼻アレルギー、眼炎症、アトピー性皮膚炎等のアレルギー性疾患の予防、及び治療効果が期待されている（例えば、非特許文献２及び３参照）。
【０００３】
ところで、クワ科植物であるアルトカルパス属植物から抽出精製しうることが知られた式（２）で示されるアルトカルピンは、従来、抗菌作用やテストステロン−５α−リダクターゼ阻害活性を有することが知られている。しかし、該アルトカルピン及びその誘導体等がシクロオキシゲナーゼや５−リポキシゲナーゼに対して阻害作用を有することについては知られていない。
【化２】
2004231587.tif 000002
【０００４】
【非特許文献１】
Ｇ．  Ｃｉｒｉｎｏ，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ５５：（ｐ１０５−１１１，１９９８）
【非特許文献２】
「蛋白、核酸、酵素」第３３巻２号、（ｐ１３６〜１４９，１９８８）
【非特許文献３】
Ｈ．Ｍａｓａｍｕｎｅ  ＆  Ｌ．Ｓ．Ｍｅｌｖｉｎ，Ｓｒ．，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２４（１９８９）（ｐｐ７１−８０，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、優れたシクロオキシゲナーゼ阻害活性及び５−リポキシゲナーゼ阻害活性を示し、消炎鎮痛作用、解熱作用、抗アレルギー作用等が期待できるシクロオキシゲナーゼ阻害剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤又は医薬を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明によれば、式（１）で示される化合物を有効成分として含むシクロオキシゲナーゼ阻害剤又は５−リポキシゲナーゼ阻害剤が提供される。
【化３】
2004231587.tif 000003
（式中Ｒは、それぞれ独立に水素原子、炭素数１〜１０のアルキル基又はアシル基を示す。）
また本発明によれば、前記シクロオキシゲナーゼ阻害剤及び／又は５−リポキシゲナーゼ阻害剤を含むことを特徴とする、消炎鎮痛剤、解熱剤又は抗アレルギー剤としての医薬が提供される。
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下本発明を更に詳細に説明する。
本発明のシクロオキシゲナーゼ阻害剤及び５−リポキシゲナーゼ阻害剤は、前記式（１）で示される化合物を有効成分として含む。式（１）で示される化合物としての前記式（２）のアルトカルピン（ａｒｔｏｃａｒｐｉｎ）は、後述する実施例から明らかなとおり、シクロオキシゲナーゼ阻害作用及び５−リポキシゲナーゼ阻害作用の両方を示す。
【０００８】
前記式（１）において、Ｒはそれぞれ独立に水素原子や、メチル基、エチル基、プロピル基等の炭素数１〜１０のアルキル基、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基等の炭素数１〜１０のアシル基を示す。式（１）で示される化合物としては、Ｒを適宜選択したものであれば特に限定されず、例えば、前記式（２）で示されるアルトカルピンが好ましく挙げられる。
前記アルトカルピンは、クワ科植物（Ｍｏｒａｃｅａｅ）であるアルトカルパス属（Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓ）植物から公知の方法で抽出精製することができる。アルトカルパス属（Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓ）植物は、熱帯地方原産の常緑高木で、原産地ではその実を生又は加熱調理して食されている。アルトカルピン以外の化合物については、該アルトカルピン等から誘導して公知の合成技術により製造することができる。
【０００９】
本発明のシクロオキシゲナーゼ阻害剤及び５−リポキシゲナーゼ阻害剤は、薬理学的、製剤学的に許容される製造助剤等を用いて常法に従って製造することができる。
本発明の医薬は、従来、シクロオキシゲナーゼ阻害剤及び／又は５−リポキシゲナーゼ阻害剤に期待される各種消炎鎮痛剤、解熱剤又は各種抗アレルギー剤であって、前記本発明のシクロオキシゲナーゼ阻害剤及び／又は５−リポキシゲナーゼ阻害剤を適量含んでいれば良い。
【００１０】
本発明のシクロオキシゲナーゼ阻害剤及び５−リポキシゲナーゼ阻害剤、並びに医薬の投与方法は、例えば、錠剤やカプセル剤等による内服、坐薬による投与、皮下への注射、外用剤としての塗布等が好ましく挙げられる。
前記錠剤とするには、例えば、乳糖、白糖、リン酸カルシウム等の賦形剤；ゼラチン、ポリビニルピロリドン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース等の結合剤；デンプン、カンテン、ゼラチン末等の崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム等の滑択剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。前記カプセル剤とするには、例えば、ゼラチン、精製水、単シロップ、アラビアゴム等の製剤用成分を用いて製造することができる。前記坐薬とするには、例えば、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチン、ポリエチレングリコール等の製剤用成分を用いて製造することができる。
前記注射剤とするには、例えば、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール等の溶解剤や溶解補助剤；ｐＨ調整剤；安定剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。また、外用剤とするには、例えば、アルコール、脂肪酸エステル等の溶解剤や溶解助剤；カルボキシビニルポリマー、多糖類等の粘着剤；乳化剤；安定剤等の製剤用成分を用いて製造することができる。
【００１１】
本発明のシクロオキシゲナーゼ阻害剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤及び医薬の投与量は、投与方法、治療対象、患者の年齢、性別、様態等に応じて適宜選択することができ、例えば、有効成分としての式（１）で示される化合物換算で、通常、１日あたり０．０１ｍｇ／ｋｇ以上が好ましい。
【００１２】
【発明の効果】
本発明のシクロオキシゲナーゼ阻害剤及び５−リポキシゲナーゼ阻害剤は、有効成分として上記式（１）で示される化合物を含み、これらの酵素反応を有効に抑制又は阻害するので、各種消炎鎮痛剤、解熱剤又は各種抗アレルギー剤等の医薬への利用が期待できる。
【００１３】
【実施例】
以下実施例により更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例１
５０ｍＭのトリプトファン５μｌ、１００μＭのヘマチン２．５μｌ、及び０．１Ｎ水酸化ナトリウムに溶解した５ｍＭのフェニル水銀水酸化物２．５μｌを混合し溶液（Ａ）を調製した。
エタノールに溶解した［１４Ｃ］アラキドン酸２μｌ及び所定の濃度でエタノールに溶解した前記式（２）で示されるアルトカルピン１０μｌをガラスチューブに入れ、窒素でエタノールを留去させた後、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー３５μｌと前記溶液（Ａ）１０μｌとを加え、ボルテックスで撹拌した。続いて、シクロオキシゲナーゼ溶液５μｌを前記ガラスチューブに入れ、ボルテックスで撹拌した後、直ちに３７℃インキュベーターに斜めに入れた。１分間反応させた後、ジエチルエーテル：メタノール：１Ｍのクエン酸（３０：４：１）からなる混合溶液２５０μｌを加え、ボルテックスで撹拌して反応を停止させ、生成物を抽出した。次いで、得られた生成物にＮａ２ＳＯ４を添加して脱水した後、有機層のうちの５０μｌを薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）にチャージし、更に、ヘキサン：ジエチルエーテル：酢酸（３０：２０：１）で展開した。得られたＴＬＣ板をラップに包み、ＢＡＳ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｐｌａｔｅ（富士フィルム社製）にカセット中で当て、２時間暗所で放置した。次いで、ＢＡＳで放射活性を測定し、アラキドン酸の生成物への変換量から活性を算出し、ＩＣ５０を求めた。結果を表１に示す。
また、対照として、アルトカルピンの代わりに市販のインドメタシン及びノルジヒドログアイアレチン酸についても同様な試験を行った。結果を表１に示す。
【００１４】
【表１】
2004231587.tif 000004
【００１５】
実施例２
約４．０×１０７ｃｅｌｌのＲＢＬ細胞を、直径１５ｃｍのシャーレ４枚で培養し、トリプシン処理後、ＰＢＳ，ｐＨ６．８、１０ｍＭ  ＢＥＳ、１０ｍＭ  ＰＩＰＥＳ、及び１ｍＭ  ＥＤＴＡからなる抽出バッファー５ｍｌをそれぞれ添加した。次いで、１０分間超音波処理を行い、１５０００ｇで１０分間遠心処理し、上清１ｍｌづつをチューブに取り−８０℃で保存した。
エタノールに溶解した［１４Ｃ］アラキドン酸２μｌ及び所定の濃度でエタノールに溶解した前記式（２）で示されるアルトカルピン１０μｌをガラスチューブに入れ、窒素でエタノールを留去させた後、反応バッファー（１０ｍＭ  ＢＥＳ、１０ｍＭ  ＰＩＰＥＳ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．７ｍＭＣａＣｌ２、ｐＨ６．８）１００μｌと、前記上清１０μｌとを加え、ボルテックスで撹拌した。続いて、５−リポキシゲナーゼ溶液５０μｌを前記ガラスチューブに入れ、ボルテックスで撹拌した後、直ちに３７℃インキュベーターに斜めに入れた。正確に２分間反応させた後、ジエチルエーテル：メタノール：１Ｍのクエン酸（３０：４：１）からなる混合溶液２５０μｌを加え、ボルテックスで撹拌して反応を停止させ、生成物を抽出した。次いで、得られた生成物を含む有機層のうちの５０μｌをＴＬＣにチャージし、更に、ヘキサン：ジエチルエーテル：酢酸（３０：２０：１）で展開した。続いて、プロスタグランジンＢ２、プロスタグランジンＥ２、プロスタグランジンＤ２を入れてＲｆ値を確認した。次に、得られたＴＬＣ板をラップに包み、ＢＡＳ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｐｌａｔｅ（富士フィルム社製）にカセット中で当て、２時間暗所で放置した。次いで、ＢＡＳで放射活性を測定し、アラキドン酸の生成物への変換量から活性を算出し、ＩＣ５０を求めた。結果を表２に示す。
また、対照として、アルトカルピンの代わりに市販のインドメタシン及びノルジヒドログアイアレチン酸についても同様な試験を行った。結果を表２に示す。
【００１６】
【表２】
2004231587.tif 000005