(57)【要約】      （修正有）【課題】太陽からのＵＶＡおよびＵＶＢ放射による様々な影響を改善するための組成物および方法が提供される。【解決手段】この組成物は、ＭＥＤおよびＭＥＤ未満での放射からの光老化を防止するレチノイドなどの成分と、他の特定の化合物（Ｎ−アセチルシステイン、２−フリルジオキシム、ビタミンＣなど）と、任意に、テトラサイクリンなどの他のＭＭＰ阻害剤および／または、レチノイドのＰ４５０媒介代謝を阻害するケトコナゾールなどの化合物および他のアゾール化合物と、を含んでいる。この方法では、組成物中に使用されている成分に応じて日光への曝露前に組成物を塗布する。塗布は、曝露の７〜４８時間前に施さなければならない。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトの皮膚の光老化を抑制するための組成物であって、ＵＶＡ遮断剤と、ＵＶＢ遮断剤と、ＭＭＰ阻害剤との組み合わせを、局所的に許容可能な担体中に含む組成物。
【請求項２】
ヒトの皮膚の光老化を抑制するための方法であって、請求項１に記載の組成物を毎日皮膚に塗布することを含む方法。
【請求項３】
前記ＭＭＰ阻害剤がレチノイドである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
Ｎ−アセチルシステインと、ＦＤＯと、ビタミンＣと、これらの混合物と殻なる群から選択される化合物をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＵＶＡ遮断剤が、４−ｔ−ブチルー４’−メトキシジベンゾイルメタンまたはその誘導体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記ＵＶＢ遮断剤が、オキシベンゾンまたはメトキシシンナメートである、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
ローション、クリーム、軟膏、水ベースの液体、油ベースの液体またはスプレー可能な液体として組成されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記レチノイドがレチノイン酸またはレチノールである、請求項３に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物が、テトラサイクリンおよびその誘導体と、皮膚科学的に許容可能なトリアゾールおよびその誘導体と、レチノイン酸のシトクロムＰ４５０媒介代謝を抑制する化合物と、これらの相溶混合物と、からなる群から選択される少なくとも１種の化合物を更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
ヒトの皮膚においてＵＶ誘発ＭＭＰ形成の誘発を抑制することによってヒトの皮膚の光老化を抑制するための方法であって、ＮＡＣ、ＦＤＯ、ビタミンＣまたはこれらの混合物からなる群から選択されるＭＭＰ阻害剤と、ＵＶＡ遮断剤と、ＵＶＢ遮断剤との組み合わせを、局所的に許容可能な担体中に含む組成物を、ＵＶ曝露の少なくとも８時間前に前記皮膚に塗布することを含む方法。
【請求項１１】
前記組成物をＵＶ放射への曝露の少なくとも１６時間前に塗布する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＵＶＡ遮断剤が、４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタンまたはその誘導体である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＵＶＢ遮断剤が、オキシベンゾンまたはメトキシシンナメートである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記組成物がレチノイドを更に含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物が、テトラサイクリンおよびその誘導体と、皮膚科学的に許容可能なトリアゾールおよびその誘導体と、レチノイン酸のシトクロムＰ４５０媒介代謝を抑制する化合物と、これらの相溶混合物と、からなる群から選択される少なくとも１種の化合物を更に含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＭＥＤ未満のＵＶによってヒトの皮膚にＭＭＰが誘発されるのを抑制するための組成物であって、レチノイドと、Ｎ−アセチルシステインと、２−フリルジオキシム、ビタミンＣと、これらの混合物と、からなる群から選択される少なくとも１種の化合物を、皮膚科学的に許容可能なキャリア中に有効量で含む、組成物。
【請求項１７】
ＵＶＡ遮断剤およびＵＶＢ遮断剤をさらに含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記ＵＶＡ遮断剤が、４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタンまたはその誘導体である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ＵＶＢ遮断剤が、オキシベンゾンまたはメトキシシンナメートである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物がレチノイドを含み、該レチノイドが、レチノール、レチノイン酸またはこれらの混合物である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２１】
ＭＥＤ未満のＵＶによってヒトの皮膚にＭＭＰが誘発されるのを抑制するための方法であって、レチノイドと、Ｎ−アセチルシステインと、グルタチオンと、２−フリルジオキシムと、ビタミンＣと、これらの混合物と、からなる群から選択される少なくとも１種の成分を有効量で提供し、前記少なくとも１種の成分を、皮膚科学的に許容可能なキャリア中に組成し、この製剤を皮膚に塗布することを含む方法。
【請求項２２】
ＵＶＡ遮断剤およびＵＶＢ遮断剤を提供することをさらに含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＵＶＡ遮断剤が、４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタンまたはその誘導体であり、前記ＵＶＢ遮断剤が、オキシベンゾンまたはメトキシシンナメートである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
製剤を少なくとも１日１回皮膚に塗布する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
ＵＶ放射への曝露前に製剤を塗布する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記製剤が、ローション、クリーム、軟膏、水ベースの液体または油ベースの液体である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
製剤がスプレー可能なものである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
紫外線放射によるヒトの皮膚の間接的な光老化を抑制するための方法であって、レチノイドを有効量で含む皮膚科学的に許容可能な製剤を提供し、紫外線放射原に直接または間接的に、日常的かつ規則的に曝露される皮膚に、前記製剤を少なくとも毎日塗布することを含む方法。
【請求項２９】
前記レチノイドが、レチノールまたはレチノイン酸である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
ヒトの皮膚におけるＵＶ媒介紅斑を抑制するための方法であって、メラトニン、ビタミンＥ、ビタミンＣ、アセチルサリチル酸、２−フリルジオキシムまたはこれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１種の成分を含む皮膚科学的に許容可能な組成物を提供し、ＵＶ放射への曝露前に前記組成物をヒトの皮膚に塗布することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はヒトの皮膚の光防護に関する。特に、本発明は、局所塗布用組成物と、かかる組成物を使用して皮膚の光老化（特に、日々遭遇し得る間接光および／または直接光への曝露によって誘発される光老化）を抑制するための方法に関する。さらに、本発明は、ＵＶ発紅斑（皮膚の赤味）を軽減するための新規な方法および組成物を提供する。
【背景技術】
【０００２】
光老化とは、太陽光線に繰り返し曝露されることによって生じるヒトの皮膚の外観および／または機能の変化、特にシワやその他の皮膚の外観の変化を説明するのに用いられている用語である。
【０００３】
ヒトをはじめとする様々な動物に影響を及ぼすとともにこれらの動物が生活していくのを可能にする、地表に達する太陽放射は、紫外線（ＵＶ）（λ＜４００ｎｍ）、可視光線（４００ｎｍ＜λ＜７００ｎｍ）および赤外線（ＩＲ）（λ＞７００ｎｍ）で構成されている。ＵＶ放射は通常、ＵＶＡ（３２０〜４００ｎｍ）、ＵＶＢ（２９０〜３２０ｎｍ）、ＵＶＣ（＜２９０ｎｍ）に分けられる。ＵＶＣ放射は成層圏のオゾンによって遮断され、地表には届かない。一般に、太陽光線の紫外線（ＵＶ）成分、特にＵＶＢが光老化の主な原因物質であると考えられている。
【０００４】
どの程度のＵＶ曝露で光老化が起こるのかは現時点では明らかになっていないが、ヒトの皮膚に紅斑（一般にサンバーンとして見られる赤味）を発生させるのに必要な量は周知であり、特定のＵＶ源からの「最小紅斑量（ＭＥＤ）」として経験的に定量化されている。紅斑誘発性が最も高いのはＵＶＢ波長２９０〜３００ｎｍである。ＵＶ波長が約３００ｎｍよりも長くなるとＵＶ放射による紅斑発生率は急激に落ちる。波長３２０ｎｍおよび３４０ｎｍで皮膚の赤味が生じる可能性はそれぞれ、波長約２９８ｎｍの場合の１００分の１および１０００分の１である。それにもかかわらず、紅斑や皮膚の変色（ｔａｎｎｉｎｇ）を引き起こすレベルで太陽光線に繰り返し曝露されることと光老化との間には、関連性があるのが普通である。ＵＶＢによる紅斑は被曝強度ではなく全被曝量の関数になると考えられている。Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｋｉｎ（皮膚の生理学、生化学、分子生物学）、第２版、Ｌ．Ａ．Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ編（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：オックスフォード大学出版、１９９１）によれば、ＵＶＡはメラニン形成誘発性かつ紅斑誘発性であり、ＵＶＡに曝露されると、ヒトの皮膚で３２ｋＤａのストレスタンパク質の合成が誘発されるだけでなく、ＵＶＢ曝露後には見られなかった「即時」紅斑が発生する。
【０００５】
ヒトの皮膚の光老化は、臨床的には肌荒れ、シワ、まだらな色素沈着、黄ばみ、たるみ、さらには前ガン性腫瘍、最終的には悪性腫瘍となる症状によって特定される。光老化は一般に、顔、耳、頭皮のはげた部分、首、前腕、手など日常的に太陽光線に曝露される皮膚に発生する。
【０００６】
皮膚の太陽光線に曝露される部分の光老化の防止には、一般にサンスクリーン剤が用いられる。サンスクリーン剤は、ＵＶ光を吸収、反射および／または散乱させる成分を含有する局所製剤である。サンスクリーン剤の中には不透明な粒子状物質を主成分とするものがあり、一例としては、酸化亜鉛、酸化チタン、クレー、塩化第二鉄が挙げられる。このような製剤は視覚的に識別可能でかつ閉塞性（毛穴などを塞ぐ性質）であるため、こうした不透明組成は化粧用として許容できないものであるとする人が多い。皮膚の上で透明または半透明である、ｐ−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、オキシベンゾン、ジオキシベンゾン、エチルへキシルメトキシシンナメート、オクトクリレン（ｏｃｔｏｃｒｙｌｅｎｅ）、オクチルメトキシシンナメート、ブチルメトキシジベンゾイルメタンなどの化学物質を含有するサンスクリーン剤もある。このようなタイプのサンスクリーン剤は不透明なものより化粧用として許容されやすいが、それでも耐用期間は比較的短く、洗浄や汗によって落ちやすい。
【０００７】
上述したように、一般に認められている皮膚に対する光損傷の病因には、紅斑（サンバーンまたは赤味すなわち、文字通りの意味で皮膚の紅潮）を引き起こすのに十分な太陽光線ヘの曝露が関与しており、十分なＵＶＢ放射が紅斑を引き起こすことが知られている。この見解によれば、光老化を抑制するための本発明による組成物および方法にはＵＶＢを遮断または吸収する化合物を使用することが含まれ、かかる組成物を使用する必要があるのは太陽光線への曝露によって紅斑が生じる尤度が十分にある場合のみであると言える。さらに最近のサンスクリーン剤組成物には、ＵＶＡ放射およびＵＶＢ放射の両方を遮断する化合物を組み合わせたものが含まれている。
【０００８】
太陽のＵＶ放射が皮膚に活性酸素（ＲＯＳ）を誘発するのではないかという意見が出されている。Ｒｉｅｇｅｒ，．Ｍ．Ｍ．著、Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｔｏｉｌｅｔｒｉｅｓ（化粧品）（１９９３）１０８：４３〜５６では、周知の酸化防止剤を皮膚に局所塗布してＲＯＳの存在量を低下させることについて検討されている。
【０００９】
太陽によって損傷を受けた皮膚の外観を改善するための治療時には、レチノイド類が用いられている。米国特許第４，８７７，８０５号には、光老化した皮膚の治療方法について記載されている。この特許では、老化の作用が見られ始めるまではレチノイドを塗布して光損傷を治療することにはほとんど意味がないとされている。いくつかの研究が行われ、全光損傷を受けた皮膚の外観がトランス型レチノイン酸で改善されていた。Ｇ．Ｄ．Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ.、「Ｔｏｐｉｃａｌ  Ｔｒｅｎｔｉｎｏｉｎ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｈｏｔｏｄａｍａｇｅｄ  Ｓｋｉｎ（光損傷皮膚の治療用の局所トレチノイン）」、Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１２７：６５９〜６６５（１９９１年５月）、Ｊ．Ｓ．Ｗｅｉｓｓ  ｅｔ  ａｌ．、「Ｔｏｐｉｃａｌ  Ｔｒｅｎｔｉｎｏｉｎ  Ｉｍｐｒｏｖｅｓ  Ｐｈｏｔｏａｇｅｄ  Ｓｋｉｎ（局所トレチノインによる光老化した皮膚の改善）」Ｊ．Ａｍｅｒ．ＭＥＤ．Ａｓｓｎ．、２５９（４）：５２７〜５３２（１９８８年１月２２／２９）。
【００１０】
マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）は、結合組織、特にコラーゲンの生理学的破壊および病理学的破壊に主な役割を果たす一種の酵素である。この分野では、様々なタイプのコラーゲンおよびコラゲナーゼ（複数のタイプのＭＭＰ）が周知であり、詳しい説明については本願出願人による係属中の米国特許出願第０８／５８８，７７１号（１９９６年１月１９日出願；かかる出願における開示内容全体をあらゆる目的で本明細書に引用したものとする）に見出すことができる。ＭＭＰ発現に影響する、ＭＭＰ阻害剤（すなわち、プロテイナーゼの直接阻害剤）および分子経路阻害剤（すなわち、ＡＰ−１阻害剤）が他の分野で周知であり、同様に上述した出願第５８８，７７１号に記載されている。
【００１１】
要するに、最新の技術では、光損傷は主にＵＶＢ放射によって生じるものであって、光損傷の防止には現在入手可能なサンスクリーン剤で十分であるとみなされている。「Ｃｅｉｌｌｅｙ博士[ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｓｅｉｄｅｎｔ  ｆｏ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ（米国皮膚学会現会長）は、太陽を避けてサンスクリーン剤を使用することで、博士が実際に治療した多くの皮膚ガンだけでなく、博士の患者が気に掛けている早期のシワも防止できたかもしれないと考えている」Ｓｋｉｎ  ＳＡＶＶＹ、Ａｍｅｒ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔ．、ＵＳＡ  Ｔｏｄａｙ別刷、１９９７年５月。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、好ましい一実施の形態において、皮膚の結合組織を分解し、光老化の原因になる可能性のあるＭＭＰが紅斑量未満（ｓｕｂｅｒｙｔｈｅｍａｌ）のＵＶ放射によって誘発されるという本発明者らの発見に基づくものである。すなわち、本発明者らは、ＵＶ放射への曝露は、紅斑を引き起こすには不十分であるが、コラーゲンおよびエラスチンなどの真皮の結合組織を分解するＭＭＰを誘発し、これが光損傷の原因になると考えられることを発見した。すなわち、（ＵＶＡおよび／またはＵＶＢでの）ＵＶ曝露は紅斑を引き起こすには不十分であるが、ＭＭＰを通して光損傷を引き起こすには十分なのである。このこと自体、従来技術における「光損傷」という用語を、紅斑を必要としないものとして定義しなおすべきである。したがって、ＵＶＡおよび／またはＵＶＢ放射の組み合わせによって、皮膚が大幅に損傷を受ける可能性がある。本発明者らによる発明は、広義には、ＵＶＡおよび／またはＵＶＢ放射が原因となる光損傷を防止すること、特に光損傷の臨床徴候が認められる前にこれを防止することを包含するものである。
【００１３】
本発明者らの好ましい実施の形態では、レチノイドを使用して光損傷を防止する。本発明のもう１つの実施の形態では、本発明者らは、ＭＭＰの生成を抑制および／または活性を阻害することによって光損傷を防止する上で他の様々な化合物も有用であることを見出している。これらの化合物の中には、「酸化防止剤」と呼ばれ紅斑を防止できるものもあるが、同時にＵＶ曝露されたヒトの皮膚におけるＭＭＰ濃度を低下させることができる。これとは別に、本発明者らがこのような化合物を試験した結果、紅斑を防止することとＭＭＰのＵＶ媒介増大を抑制することとの間には、何ら相関性はないことが分かっている。
【００１４】
本発明のさらに別の実施の形態では、本発明者らは、ＵＶ曝露が原因で発生したヒトの皮膚表面でのＭＭＰ濃度の増加をレチノイドによって抑制できることを見出した。従来技術では、レチノイド類は光損傷皮膚の治療および修復に有用であると教示されているが、本発明者らは、ＭＭＰレベルＵＶ誘発上昇をレチノイドによって妨害できるため、レチノイド類を予防的に使用して光損傷の発生を防止できることを発見した。
【００１５】
このため、要するに、本発明者らの発明の一実施の形態は、局所的に許容可能な担体中に、ＵＶＡ遮断割とＵＶＢ遮断割とＭＭＰ阻害剤とを含む組成物であって、特に日々使用するためのかかる組成物を含む。
【００１６】
また、通常はむき出しの皮膚（顔、頭、手、額など）に、ＵＶＡ遮断割とＵＶＢ断剤とＭＭＰ阻害割とを含む組成物を局所塗布することによって、間接的なＵＶ曝露が紅斑を発生させない場合に間接的な光損傷を防止するための方法すなわち光損傷の予防も含まれる。
【００１７】
本発明者らの発明のさらに他の実施の形態は、紅斑阻害剤およびＭＭＰ阻害剤を含む組成物、特に光損傷に対して予防的に使用するためのかかる組成物である。
もう１つの実施の形態では、本発明者らの発明は、ＵＶＡ遮断剤およびＵＶＢ遮断剤のコーティングが施されているかまたはこれらが混入されている窓構造体に関するものである。本明細書において、遮断剤とは広義に、特定の光線を吸収反射または無害波長に変調することによって、放射の皮膚に対する直接的な影響をなくす化合物である。
【００１８】
本発明のさらに他の実施の形態では、レチノイドの存在するこれらの組成物において、その組成物は、皮膚におけるレチノイドの崩壊を抑制する化合物をさらに含むと好ましい。このような化合物は、レチノイド類のシトクロムＰ４５０媒介崩壊を抑制するものである。
【００１９】
好ましい実施の形態の詳細な説明
本発明は、皮膚、特にヒトの皮膚の光老化を抑制すること（すなわち、低減または防止）に関する。本発明による処置は、一般に毎日の生活の中で太陽光線に常時曝露される、頭、首、手、腕などの皮膚に施すと好ましい。紅斑の原因となる線量未満のＵＶに繰り返し曝露されると光老化が発生する可能性があるため、本発明はこのような低線量曝露を受けやすい皮膚に対して施すべきものである。
【００２０】
皮膚の白い人々の大半は、皮膚１ｃｍ２あたり３０〜５０ｍＪの範囲のＵＶＢ線量で紅斑を生じる。したがって、本発明では、皮膚の光老化部分がこの範囲未満の線量（一般に約５ｍＪ／ｃｍ２を上回る値であるが、これは太陽光線に数分曝露された状態に相当する）にさらされるのを防止する。太陽が本質的に頭上にあるときに地表に達する太陽光線からは、以下の量すなわちＵＶＢ０．５％、ＵＶＡ６．５％、可視光線３８．９％、ＩＲ５４．０％が放射される。これらのタイプの放射では、以下のようなエネルギ束が得られる。
【００２１】
ＵＶＢで２．１１ｍＪ／ｃｍ２・ｓ（２１．１Ｗ／ｍ２）、ＵＶＡで８．５７Ｍ／ｃｍ２・ｓ（８５．７Ｗ／ｍ２）、可視光線で５３．２ｍＪ／ｃｍ２・ｓ（５３．２Ｗ／ｍ２）、ＩＲで７２．２ｍＪ／ｃｍ２・ｓ（７２２Ｗ／ｍ２）。
【００２２】
特定の理論に拘束されることは望ましくはないが、皮膚の変化を引き起こすいくつかのＵＶ誘発生化学経路の概要を示す図１を参照した以下の実施例から一層よく明らかになろう。図示のように、ＵＶ放射はＭＡＰキナーゼカスケードを誘発し、ここから発生する２つの経路が示されている。一方の経路は、紅斑を引き起こすインターロイキン類を誘発し、他方の経路は、結合組織分解を引き起こすＭＭＰを誘発する。従来技術ではこれらの結果をＵＶＢ放射によるものであるとみなしていたが、本発明者らは、一連の実験において、ＵＶ曝露皮膚に視覚的な痕跡がなかったとしても光損傷ではＵＶＡが決定的な原因物質であることをここに示す。しかしながら、本願に関しては、ＵＶＡおよびＵＶＢの両方が、場合によっては別個にであっても、太陽放射への曝露後のヒトの皮膚におけるＵＶを媒介としてＭＭＰの誘発に関与していることを理解されたい。
【００２３】
上記の従来技術では、一般に最小紅斑量すなわちＭＥＤを基準にしてＵＶ放射ヘの曝露量を測定している。最小紅斑量は、皮膚の赤味を引き起こすのに十分なＵＶ放射への曝露量として定義される。１ＭＥＤは通常、太陽放射約３０ｍＪ／ｃｍ２・ｓに相当する。従来技術の見解として、赤味（サンバーン、紅斑）を引き起こすのに十分な自然の太陽光線に曝露されると光老化がはじまるというものがある。（自然の太陽光線の場合よりもＵＶＡ／ＵＶＢ比を小さくして）ＵＶＡよびＵＶＢ放射の両方を放出する後述のＵＶ源を使用して、本発明者らは、皮膚の赤味が誘発されると、ＭＭＰも誘発されることを確認した。このため、サンスクリーン剤は、赤味を防止して光老化を防止するものであるため、これを使用すべきであるというのが現時点の最新の見解である。
【００２４】
本発明者らは、自らが現在の見解のうちいくつかと矛盾し、様々なＵＶ曝露および曝露前に塗布する様々な化合物を使用することがヒトの皮膚におよぼす影響を実験によって見出したと考えている。本発明者らの予期しなかった結果の１つは、皮膚の赤味を引き起こすには至らないＵＶ曝露量でも、ヒトの皮膚におけるＭＭＰ活性（よって、光老化）が増大するということである。したがって、従来のサンスクリーン剤は赤味を防止することはできるが、ＵＶ曝露後に光老化部分のＭＭＰ活性増大を防止することはできない。本発明者らは赤味を防止する化合物を確認した。これは、紅斑による痛みおよび不快感を防止するためだけでなく、（光損傷を防ぐからと勧められた組成物を使用した後に紅斑が生じると、その組成物の光老化防止成分には効果がないと考えてしまう患者がいてもおかしくないため）場合によっては光老化を抑制する組成物中に紅斑阻害剤を含ませることで薬剤摂取率を維持する上でも、重要である。
【００２５】
また、他の予期しない発見は、ＵＶＡ放射を遮断することで、ヒトのＵＶ曝露した皮膚におけるＭＭＰ活性の増大およびｃＪＵＮタンパク質濃度の上昇が予防的に抑制されるため、光老化の予防になるということである。紅斑量未満のＵＶ露が光老化を引き起こすという本発明者らの発見と合わせて、本発明者らの発明の一特徴は、光老化の予防薬として毎日使用するＵＶＡ遮断剤を想定したものである。ＵＶＢはＭＭＰも誘発するため、さらに好ましい組成物にはＵＶＡ遮断剤とＵＶＢ遮断剤の両方を含有する。
【００２６】
さらに別の予期しない発見として、レチノイドによる皮膚の前処理によって、ＵＶ曝露後に通常発生するＭＭＰ活性の増大が緩和されるということがある。したがって、本発明者らの発明は、光老化に対する予防薬として、レチノイドを含有しＵＶ曝露前に局所塗布するための組成物を想定している。
【００２７】
本発明者らによる研究のもう１つの予期しない発見として、特定の化合物（中には酸化防止剤としての特性を有すると報告されているものもある）は良好な紅斑防止サンスクリーン作用を呈するにもかかわらず、ＵＶ曝露後にＭＭＰ活性増大を抑制するようには見えないということがある。
【００２８】
以下、図面を参照して本発明を説明する。図示の結果を得た実験の詳細、本発明者らに協力してくれた志願被験者を照射するのに用いた装置、さらに免疫組織学的方法について説明する。志願被験者の被験皮膚領域は、生涯の大半において太陽に曝露されることなく一般に隠れているかまたは物理的に保護されている領域（例えば腎部および尻の皮膚）である。本発明者らによる研究の結果から明らかなように、生体外（ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ）での実験のみを頼りにして、化合物がＭＭＰ阻害剤であるか否か、その化合物が生体内（ｉｎ  ｖｉｖｉｏ）での阻害剤として使用するのにも適しているか否かを判断することはできない。したがって、本明細書に開示するような方法によって、このような化合物を試験し、かかる化合物で所望の治療効果が得られるか否かを判断しなければならない。
【００２９】
図２は、紅斑量未満のＵＶ曝露が、コラゲナーゼ、ストロメライシン−１、９２ｋＤａのゼラチナーゼのＭＭＰを誘発する事実を示している。志願被験者の皮膚の一部を、１ＭＥＤを基準として以下の量すなわち、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１および２の量のＵＶ放射に曝露した。生検およびその後の放射定量法（ラジオアッセイ）から、（棒グラフで定量的に表現した、図面のラジオブロットから明らかなように）ＭＭＰの誘発にはＭＥＤの半分で十分であり、ＭＭＰの産生量を基線（ベースライン）レベルを大きく上回る高さにするには０．１ＭＥＤですら十分であること、さらにはコラゲナーゼを基線レベルを超える高さにするには０．０１ＭＥＤで十分であることが分かる。このように、図２は、紅斑量（ＭＥＤ）未満のＵＶ放射によってＭＭＰの産生が引き起こされることを示している。それにもかかわらず、特に低線量のＵＶ放射への曝露後に、ヒトの皮膚がＭＭＰレベルの高くない基線状態に戻ると仮定できる場合もある。
【００３０】
図３は、紅斑量未満のＵＶ放射に繰り返し曝露されると、ＭＭＰが生成され、これらのレベルが長時間にわたって高い値にとどまるというさらに別の事実を示している。２日ごとにＭＥＤの半量の放射線を人々に照射した場合、ＭＭＰレべルは高いまま維持された。したがって、ＭＥＤ未満のＵＶ放射に繰り返し曝露されることで、コラーゲンは連続的に破壊される。図２に示すように極めて少量のＵＶ線量でＭＭＰが誘発されるという知識と図３とを組み合わせると、ヒトの皮膚では、毎日ＭＥＤ未満であるが慢性的にＵＶ放射に曝露されるとＭＭＰレベルが高くなり、皮膚がＭＥＤ未満のＵＶ曝露による影響から完全に元に戻ることはないことが示唆される。
【００３１】
図４は、フィルタなしの場合と、従来の様々なフィルタ（ＷＧ３２０  １、Ｆ１  ３ｍｍ、ＵＶ３４  ２．５、ＳＦ１２  ２、ＷＧ３６０  ２．５）を用いた場合の照明装置から放出されるスペクトルを示している。様々なフィルタを介して装置から放出されるスペクトルを異なる線種で示してある。ＷＧ３２０  １フィルタは、ＵＶＢ、ＵＶＡ２、ＵＶＡ１のいずれでも太陽に近いとみなすことができ、一方ＷＧ３６０  ２．５フィルタはＵＶＡ１放射しか透過しない。この装置には、ＵＶＢランプ（オハイオ州レークウッドのＵｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｉｎｃ．から入手可能なＰｈｉｌｉｐｓの型番ＴＬ４０Ｗ／１２／ＲＳ）およびＵＶＡランプ（オハイオ州クリーブランドのＱ−ＰａｎｅｌＬａｂ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓから入手可能なＱ−Ｐａｎｅｌ  ＵＶＡ−３５１）の両方が含まれている。
【００３２】
本発明者らは、被験者に一定量のエネルギを照射した場合のコラゲナーゼの誘発を波長の関数として得る試験を行った。図４に示す曲線について考えると、放出波長の関数としての各曲線下の面積の積分比率によって、志願被験者が特定のフィルタからの光線に曝露された相対的な持続時間を求めることができる。このため、たとえ同量のエネルギを被験者に照射したとしても、ＷＧ３６０  ２．５フィルタからの光線に曝露される持続時間の方が、ＷＧ３２０  １フィルタからの光線に曝露される持続時間よりも長かった。図５に示す結果から、ＵＶＢとＵＶＡとの組み合わせによってコラゲナーゼが誘発され（フィルタＷＧ３２０  １）、ＵＶＡ１のみ（フィルタＷＧ３０６  ２．５）でもコラゲナーゼの誘発には十分であろうことが示唆される。太陽が地平線上にある午前中の早い時間と夕方の遅い時間には、ＵＶＡ：ＵＶＢの比は実際に大きくなるため、皮膚は日中よりも多くのＵＶＡ放射に曝露されることになる。したがって、ＵＶＡ１でもＭＭＰを高めるには十分であるという図５に示す結果は、太陽に曝露されても紅斑が発生しない午前中の早い時間と夕方の遅い時間に発生するものであり、紅斑が認められない場合ですら光損傷はこのような時間帯にも起こるというというこを示している。また、平均的な人間が、サンバーン発生の余地はありそうにないため、外で日光にあたっても「安全な」時間帯だと考えていることとは逆で、それでも太陽のＵＶ放射によってＭＭＰは依然として誘発されるため安全ではなのである。
【００３３】
紅斑応答は、少なくとも有意な痛みおよび不快感が発生するため臨床的にみて重要である。医師の処方箋なしで購入可能な様々なサンスクリーン剤も、図７に示すように皮膚を紅斑から皮膚を保護する。これらのサンスクリーン剤には一般にＵＶＢ遮断剤しか含まれていないのにもかかわらず、現状ではその多くに「ＵＶＡ」遮断割という表示がある。市販のＵＶＡ遮断剤であるＰＡＲＳＯＬ  １７８９の遮断スペクトルを図８Ａに示す。右側の縦軸は遮断剤の吸光度特性を示し、左側の縦軸は一般に約３００ｎｍよりも長い波長で紅斑を防止する上での遮断剤の相対的な有効性を示している。このＵＶＡ遮断剤は、本発明者らの標準的な光源からの２ＭＥＤの光線に対していくらかは皮膚を保護する（図８Ｂ）。
【００３４】
紅斑の防止には他の様々な化合物も使用されている。本発明者らは、ＵＶ照射および続く生検の約７時間前に多数の異なる化合物を皮膚に塗布し、ＵＶによって誘発される皮膚の赤味を防止する上での有効性を試験した。メラトニンは約２ＭＥＤを超える照射量での紅斑を防止するように思われる。ビタミンＥはいくらか劣ったが、それでも紅斑の防止には極めて効果的であった。アセチルサリチル酸（ＡＳＡ）およびビタミＣも、曝露の１６時間前に塗布した場合に、１ＭＥＤの光線によって誘発される紅斑から皮膚を保護した。紅斑の防止にはＦＤＯも効果的であった。ＮＡＣは紅斑に対しては明らかに何の効果もなかった。
【００３５】
図９に示す結果に基づくと、本発明者らの発明のうちの１つは、ＵＶ放射に曝露される皮膚に、（ｉ）メラトニンおよび／またはビタミンＥ（あるいはそのいずれかの誘導体）を曝露の少なくとも約７時間前、および／または（ｉｉ）アセチルサリチル酸、ビタミンＣおよび／またはＦＤＯ（あるいはそのいずれかの誘導体）を曝露の少なくとも１６時間前に塗布することによって、紅斑を防止するための方法である。
【００３６】
以上、様々な抗紅斑性化合物について研究および説明（図９）してきたが、これらの化合物を試験し、紅斑の防止がＭＭＰレベルの上昇防止を示しているのか否かを判断した。この結果を図１０に示す。サンバーン防止性は良好であるが、メラトニンおよびビタミンＥ（いずれも前処理）ではいずれも、２ＭＥＤの光線ヘの曝露後に９２ｋＤａのゼラチナーゼおよびコラゲナーゼなどのＭＭＰの誘発は防止されなかった。同様に、サンバーンの防止には有用であるが、コラゲナーゼ活性の上昇防止にはＡＳＡの効果はなかった。予想外にも、紅斑防止には効果のなかったＮＡＣが、２ＭＥＤの光線への曝露後にＭＭＰ活性が増大するのを防止する上で効果的であった。本発明者らは、ＮＡＣを使用してＭＭＰレベル（９２ｋＤａのゼラチナーゼおよびコラゲナーゼなど）の上昇を防止するには、曝露（１ＭＥＤ：図１１Ａおよび図１１Ｂ）の４時間以上前、好ましくは少なくとも約７時間前に、前処理を施しておく必要があることも発見した。
【００３７】
従来を振り返ってみると、紅斑誘発性応答を防止した化合物（メラトニン、ビタミンＣおよびＥ、ＦＤＯ、ＡＳＡ）は、必ずしもコラゲナーゼ活性におけるＵＶ誘発増加の防止に効果があるとは限らなかった（図９および図１０を比較）。
【００３８】
一方、紅斑の防止に明らかに効果のない化合物（例えばＮＡＣ）がＭＭＰのＵＶ媒介増加を防止するのに有用な場合がある。このため、もう１つの発明は、ＮＡＣ、ＦＤＯまたはビタミンＣ（またはこれらの誘導体）を使用し、少なくとも曝露の約７時間前に塗布して９２ｋＤａのゼラチナーゼおよびコラゲナーゼなどのＭＭＰのＵＶ誘発上昇を防止することである。
【００３９】
以上、ＵＶＡ１がＭＭＰレベルを上昇させることを示したが、この上昇の防止にはＵＶＡ１遮断剤も有用である（図１２）。これらの遮断剤は、ｃ−ＪＵＮタンパク質の誘発も防止する（データ図示せず）ため、ＭＭＰレベルおよび／または活性の増大を防止できることがある。
【００４０】
レチノイドは、ＭＭＰのレベルおよび／または活性のＵＶ誘発増大に対する好ましい阻害剤である。レチノイン酸は、曝露の４８時間前に塗布した場合に、ＭＭＰコラゲナーゼ、９２ｋＤａのゼラチナーゼ、ストロメライシン−１のレベルおよび活性の２ＭＥＤのＵＶＢによって媒介される誘発ならびにこれらの物質の転写（ｍＲＮＡとして測定）を減少させる。（図１３Ａ）。Ｉ型コラゲナーゼ活性のＵＶ誘発上昇の防止には、紅斑線量未満であっても、約１０倍濃度のレチノールでレチノイン酸とほぼ同じ程度に効果的である（図１３Ｂ）。
【００４１】
２ＭＥＤのＵＶに１回曝露されるとＭＭＰレベルが増大するが、このレベルは一般に曝露約２４時間後に最大になる（図１４Ａ〜図１４Ａ、本発明者らの係属中の出願第５８８，７７１号の図２ａ−図２ｄと同一）。紅斑またはＵＶ誘発ＭＭＰ活性に対して効果的であると思われる様々な化合物での場合と同様に、レチノイドを用いる場合も前処理を施すのが好ましく、曝露のできるだけ前に前処理を施す方が良い（図１５Ａ）。処理時間が長ければ長いほど、おそらくＭＭＰレベルの上昇を招くと思われるｃ−Ｊｕｎタンパク質レベルのＵＶ媒介増加が経時的に防止される。事実、曝露の約４８時間前ににレチノイドを用いた場合、ｃ−ＪＵＮタンパク質レベルの上昇は大幅に抑えられるように見える。（図１５Ｂ）。
【００４２】
ｃ−ＪＵＮタンパク質レベルの時間変化はＵＶ曝露によって誘発されるこれらのＭＭＰのレベルの時間変化を反映したものであると予測する人がいるかもしれないが、レチノイドをＭＭＰ阻害剤として用いた場合、これらのレベルは一定のまま維持され、わずかに上昇しただけであった（基線と比較；ただし、このレベルは未処理の保護していない皮膚で誘発されるレベルよりもかなり低い）。ｃ−Ｊｕｎタンパク質のレベル低下することからレチノイドは検討対象とした時間変化全体にわたってＵＶ媒介皮膚反応のキネティクスを変化させるのではなく、ＭＭＰの産生を減らしているのだということが分かる。
【００４３】
本発明は、皮膚の光老化を防止するための方法として、ＭＭＰ阻害剤およびＵＶＡ／Ｂ遮断剤の両方を含有する組成物を毎日局所塗布することを含む。本明細書にて示し、かつ、当該医学分野の従来技術の現在の見解とは逆に、紅斑量未満のＵＶ曝露によって破壊的なプローテイナーゼの生成が引き起こされる。大半の人は１日のうち何時聞かを日光の下で過ごし（大の散歩や仕事に行く時）、これは従来にいう「日光浴」ではないため、毎日紅斑量未満の太陽光線に曝露されることで、ＵＶ媒介によるＭＭＰ活性の上昇が生じることが一因となって光損傷が生じるとは考えられていなかったであろう。ヒトの皮膚がなぜ紅斑量未満のＵＶに曝露されるとＭＭＰを生成するよう機能するのかについて古生物学的な説明がなされているかもしれないが、少なくともこのタイプの光老化を防止あるいは少なくとも抑制する本発明者らによる方法は、（ｉ）ＵＶＡ／Ｂ遮断剤（すなわち、広義には、光線を吸収、反射または無害波長に変調することによって、ＵＶＡ／ＵＶＢ放射の皮膚に対する直接的な影響を遮断する１種またはそれ以上の化合物）、（ｉｉ）ＵＶ誘発ＭＭＰ活性増大を抑制または低減するための予防的にみて効果的な化合物および／またはＭＭＰの直接的な阻害剤および（ｉｉｉ）これらの成分の１種またはそれ以上の相溶混合物を毎日局所塗布することによって達成可能である。これらの実験に鑑みて、本発明者らの発明の好ましい実施の形態は、ＭＭＰ阻害剤、好ましくはレチノイドと、ＵＶＡ遮断剤およびＵＶＢ遮断剤の両方とをさらに含む改良されたサンスクリーン剤組成物である。
【００４４】
本明細書において、ＭＭＰの「阻害剤」は、ＭＭＰ産生につながる自然な生理学的経路における１つまたはそれ以上のステップを阻害および／またはこれらのプロテイナーゼ１種またはそれ以上を直接的に阻害する。このように、ＭＭＰ阻害剤は様々なシグナル伝達化合物および／またはＭＭＰの自然産生原因である転写因子（例えばｃＪＵＮおよびｃＦＯＳ；両方でＭＭＰを産生する）１種またはそれ以上を阻害することができる。
【００４５】
レチノイドは一種のＭＭＰ阻害剤である。ＭＭＰの阻害剤は、ＭＭＰおよび／またはＭＭＰの自然産生原因である転写因子ＡＰ−１およＮＦ−κＢに直接作用することができる。ＮＦ−κＢの活性化を抑制するものとしては、Ｅ５５１０が挙げられている（Ｆｕｊｉｍｏｒｉ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（１９９１）５５（１）：８１〜９１）。米国特許第４，８７７，８０５号に開示されているようなレチノイドおよびＡＰ−１括抗作用に特異的な解離レチノイド（Ｆａｎｊｕｌ  ｅｔ  ａｌ．によってＮａｔｕｒｅ（１９９４）３７２：１０４〜１１０に記載されているものなど）、グルココルチコイドおよびビタミンＤ３はＡＰ−１を標的にする。ビタミンＤ３による治療効果を高めるための化合物がビタミンＤ３のＭＭＰ阻害効果も高めることがあるが、これは係属中の出願第０８／８３２，８６５（Ｊ．Ｖｏｏｒｈｅｅｓ  ｅｔ  ａｌ．、「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ  １，２５（ＯＨ）２Ｄ３  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  Ｓｋｉｎ  ａｎｄ  ｆｏｒ  Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  ｏｆ  １，２５（ＯＨ）２Ｄ３（皮膚における１，２５（ＯＨ）２Ｄ３の活性をアッセイし、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３の治療的な用途を増すための方法））、１９９７年４月４日出願（かかる出願における開示内容を本明細書に引用したものとする）に記載されている。レチノール以外の他のレチノイドとしては、ビタミンＡ（レチノール）、ビタミンＡアルデヒド（レチナール）、ビタミンＡ酸（全トランス型レチノイン酸、９−シス型レチノイン酸、１３−シス型レチノイン酸をはじめとするレチノイン酸（ＲＡ））、エトレチナートの他、欧州特許出願公開第ＥＰ−Ａ２−０  ３７９３６７号、米国特許第４，８８７，８０５号および同第４，８８８，３４２号（かかる特許における開示内容全体を本明細書に引用したものとする）に記載されているものなどの天然物および合成の類似物が挙げられる。本発明においては、レチノイド活性を生体内にて呈する限り、レチノイド活性を有する様々な合成レチノイドおよび化合物が有用であると思われる。これについては、記載上Ａｌｌｅｒｅｇａｎ  Ｉｎｃ．に譲渡された様々な特許に記載されている。その一例として、以下の番号の米国特許が挙げられる：５，５１４，８２５、５，５９８，７００、５，６９６，１６２、５，６８８，９５７、５，６７７，４５１、５，６７７，３２３、５，６７７，３２０、５，６７５，０３３、５，６７５，０２４、５，６７２，７１０、５，６８８，１７５、５，６６３，３６７、５，６６３，３５７、５，６６３，３４７、５，６４８，５１４、５，６４８，５０３、５，６１８，９４３、５，６１８，９３１、５，６１８，８３６、５，６０５，９１５、５，６０２，１３０。レチノイド活性を有すると説明されているさらに他の化合物が以下の番号の別の米国特許に記載されている：５，６４８，５６３、５，６４８，３８５、５，６１８，８３９、５，５５９，２４８、５，６１６，７１２、５，６１６，５９７、５，６０２，１３５、５，５９９，８１９、５，５５６，９９６、５，５３４，５１６、５，５１６，９０４、５，４９８，７５５、５，４７０，９９��、５，４６８，８７９、５，４５５，２６５、５，４５１，６０５、５，３４３，１７３、５，４２６，１１８、５，４１４，００７、５，４０７，９３７、５，３９９，５８６、５，３９９，５６１、５，３９１，７５３など（上記および下記の特許および参考文献の開示内容全体を本明細書に引用したものとする）。
【００４６】
ＭＭＰは、ＢＢ２２８４（Ｇｅａｒｉｎｇ，Ａ．Ｊ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．によってＮａｔｕｒｅ（１９９４）３７０：５５５〜５５７に記載）、ＧＩＩ２９４７１（ＭｃＧｅｅｈａｎ  Ｇ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．によってＮａｔｕｒｅ（１９９４）３７０：５５８〜５６１に記載）およびＴＩＭＰ（脊椎動物のコラゲナーゼを阻害するメタロプロテアーゼの組織阻害割ならびに、ゼラチナーゼおよびストロメライシンをはじめとする他のメタロプロテアーゼ）によっても阻害される。本発明に有用なさらに他の化合物としては、Ｇａｌａｒｄｉｎ、Ｂａｔｉｍａｓｔａｔ、Ｍａｒｉｍａｓｔａｔなどのヒドロキサム酸塩（ｈｙｄｒｏｘａｍａｔｅ）およびヒドロキシ尿素誘導体、（様々な病因の中でも特に、皮膚潰瘍、皮膚癌、表皮水泡症の治療においてＭＭＰの阻害に有用であるとして）欧州特許出願公開第ＥＰ−Ａ１−０  ５５８６３５号および同第ＥＰ−Ａ１−０  ５５８６４８号に開示されているものが挙げられる。レチノイドは、転写調節を示すＴＩＭＰ  ｍＲＮＡの定常レベルを高めることが、Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ，Ｌ．Ａ．によって報告されている（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｋｉｎ（皮膚の生理学、生化学、分子生物学）、第２版、（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：オックスフォード大学出版、１９９１）第１７章）。それにもかかわらず、本発明者らは自らの発見に基づき、これが生体内すなわちヒトの皮膚においては誤りであることを見出した。
【００４７】
他のＭＭＰ阻害剤としては、ゲニステインおよびケルセチン（米国特許第５６３７７０３号、同第５６６５３６７号およびフランス特許出願公開第ＦＲ−Ａ−２，６７１，７２４号に記載されいているものなどであり、かかる特許および公開公報の開示内容を本明細書に引用したものとする）および関連の化合物ならびに、ＮＡＣ（Ｎ−アセチルシステイン）などの他の酸化防止剤が挙げられる。
【００４８】
本発明に有用な一種の化合物としてのレチノイドに加え、レチノイン酸を代謝するシトクロムＰ４５０酵素を阻害する薬剤であればどのような薬剤であっても、本発明を実施するにあたって有用なものとなり得る。皮膚では、レチノイドは活性型としてレチノイン酸（ＲＡ）に変換される。皮膚において機能する天然のレチノイドは全トランス型であるか、あるいは代謝によって全トランス型になるものである。レチノイン酸（ＲＡ、全トランス）は、ヒドロキシル化によって（ＲＡ  ４−水酸化酵素を経由して）失活するまで代謝され、４−ヒドロキシ−ＲＡなるが、次いでこれがシトクロムＰ４５０依存性モノオキシゲナーゼ系によって媒介される反応によって酸化する。（Ｓ．Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、「Ｌｉａｒｏｚｏｌｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｈｕｍａｎ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｒｅｔｉｎｏｉｃ  Ａｃｉｄ  ４−Ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  Ａｕｇｍｅｎｔｓ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｋｉｎ ｒｅｓｐｏｎｅｓｅ  ｔｏ  Ｒｅｔｉｎｏｉｃ  Ａｃｉｄ  ａｎｄ  Ｒｅｔｉｎｏｌ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ（生体内でのリアロゾール（ｌｉａｒｏｚｏｌｅ）によるヒト表皮レチノイン酸４−水酸化酵素活性の阻害とヒトの皮膚のレチノイン酸およびレチノールに対する応答の差動的増大）」、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１０７：１８３−１８７（１９９６年８月）、Ｅ．Ａ．Ｄｕｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．、「Ｈｕｍａｎ  Ｓｋｉｎ  Ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  Ｒｅｔｉｎｏｉｃ  Ａｃｉｄ  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｃｈｅｒｏｍｅ  Ｐ−４５０−ｄｅｒｉｖｅｄ  ４−Ｈｙｄｒｏｘｙｒｅｔｉｏｎｏｉｃ  Ａｃｉｄ  ａｆｔｅｒ  Ｔｏｐｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｔｉｎｏｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｔｏ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  Ｒｅｑｕｉｒｅｅｄ  ｔｏ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｅ  Ｒｅｔｉｎｏｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ（レチノイン酸受容体媒介転写をｉｎ  Ｖｉｔｒｏにて刺激するのに必要な濃度と比較した、レチノイン酸を生体内にて局所塗布した後のレチノイン酸およびシトクロムＰ４５０由来の４−ヒドロキシレチノイン酸のヒトの皮膚中濃度）」Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、Ｓｋｉｎ  Ｒｅｔｉｎｏｉｄ  Ｌｅｖｅｌｓ  ａｎｄ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ（レチノイドの皮膚中濃度およびレポーター遣伝子の活性）、９０：１２６９〜１２７４（１９９２年１０月）、Ｅ．Ａ．Ｄｅｕｌｌ  ｅｔ  ａｌ．、「Ｒｅｔｉｎｏｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｉｓｏｍｅｒｓ  Ａｐｐｌｉｅｄ  ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｋｉｎ  ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｅａｃｈ  Ｉｎｄｕｃｅ  ａ  ４−Ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ  Ｔｈａｔ  Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｓ  Ｏｎｌｙ  Ｔｒａｎｓ  Ｒｅｔｉｎｏｉｃ  Ａｃｉｄ（生体内すなわちヒトの皮膚に塗布した各レチノイン酸異性体による、トランス型レチノイン酸のみを失活させる４−水酸化酵素の誘発）」、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１０６：３１６〜３２０（１９９６年２月）、これらの開示内容を本明細書に引用したものとする）。したがって、全トランスＲＡの排出代謝を妨害する化合物すなわち、９−シスＲＡおよび１��−シスＲＡなどの局所的に塗布されるレチノイドの活性代謝物には、皮膚におけるＲＡ−の量を増加させるという利点がある。このため、天然（全トランス型）ＲＡの皮膚における分解を防止することで、その濃度が効率的に高まり、本明細書に記載の利点が得られる。皮膚科学的に許容可能かつ、Ｐ４５０媒介分解に対して阻害性を有するまたは阻害性を持ちやすい化合物の一例としては、特にチアゾール類などのアゾール類が挙げられ、例えば、ケトコナゾール（米国特許第４，１４４，３４６号および同第４，２２３，０３６号）、フルコナゾール（米国特許第４，４０４，２１６号）、イトラコナゾール（米国特許第４，２６７，１７９号）、リアロゾール、イルテマゾール（ｉｒｔｅｍａｚｏｌｅ）などの他がこれに含まれる。上記の物質に関連し、同じく有用である化合物としては、例えば、フルシトシンなどのジアジン類が挙げられる。また、このようなシトクロームＰ４５０阻害剤をこれより少ない量のレチノイドと併用すると有益である。Ｐ４５０阻害剤はレチノイドの代謝性排出量を減少させるため、同じ結果を達成するのに必要なレチノイドの量は少なくてすむ。さらに、特定の化合物を塗布し、ＣＲＡＢＰ（細胞質レチノイン酸結合タンパク質）の変化を試験で確認することによってこの化合物がＲＡの分解を抑制するか否かを判断する分析方法を利用できる。これは、被験化合物の局所塗布によってＲＡのレベルも上昇した場合に、レベルが高くなるものである。
【００４９】
局所塗布可能であって請求の範囲に記載の発明の実施に有用なさらに他のＭＭＰ阻害剤としては、ミノサイクリン、ロリテラサイクリン（ｒｏｌｉｔｅｒａｃｙｃｌｉｎｅ）、クロルテトラサイクリン、メタサイクリン、オキシテトラサイクリン、ドキシサイクリン、デメクロサイクリンおよびこれらの様々な塩などの、テトラサイクリンおよびその誘導体が挙げられる。アレルギー反応または感作反応が生じる可能性があるため、このような有害反応の有無についてテトラサイクリンの局所投与を慎重に観察すべきである。
【００５０】
「酸化防止剤」と呼ばれる様々な化合物もＭＭＰ阻害剤として有用である。特定の動作理論に拘束されることは望ましくはないが、これらの化合物は、例えばＭＡＰキナーゼカスケードを経由してＭＭＰ誘発を開始またはこれを誘導する場合がある遊離ラジカルおよび反応性酸素種を、失括またはそれ以外の場合は低減することができる。これらの化合物としては、米国特許第５，２９６，５００（かかる開示内容を本明細書に引用したものとする）号に記載されているように、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）またはグルタチオンエチルエステルなど、さらに広義にはＮ−ＣＨ３（ＣＨ２）ｎＣＯシステイン（式中、ｎは０〜８、さらに好ましくは４以下の整数）および関連化合物ならびにその誘導体などのグルタチオンおよびその先駆物質が挙げられる。これらの他のＭＭＰ阻害割としては、ビタミンＣおよびＮＡＣなどの水溶性化合物ならびにＦＤＯが挙げられる。ＭＭＰ阻害剤として作用し得る他の様々な化合物としては、Ｐ−カロテンおよびその誘導体または他のカロテノイド類などの脂質可溶性化合物、グルタチオンおよびその（またはＮＡＣの）誘導体、α−リポ酸（１，２−ジチオラン−３−ペンタン酸）、エプセレン（２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾル３（２Ｈ）−オン）などのセレン化合物、ゲニステイン（イソフラボン）、ケルセチン（フラボン−３−オール）、ピクノゲノール（フラバン−３−オール）などのイソフラボン類、エルゴチオネイン、サボニン（例えば、Ｐｏｌｙｐｏｄｉｕｍ  ｌｅｕｃｏｔｏｍｏｓから得たものなど）、イチョウ葉エキス（フラボングリコシドおよびテルペンラクトン）およびナツシロギク（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ  ｐａｒｔｈｅｎｉｕｍ）エキス（セスキテルペンラクトン）が挙げられる。
【００５１】
塗料および染料業界では、車、住居、衣類の顔料の劣化または変色を防止する様々なＵＶ遮断剤が周知である。ヒトの皮膚に用いるのに特に好ましいＵＶＡ１／２遮断剤はＰＡＲＳＯＬ（Ｒ）１７８９（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）ならびにこのＵＶＡ遮断剤の調製について記載した上述の米国特許第４，３８７，０８９行に開示されているものである。本発明者らは、真のＵＶＡ遮断剤はｃＪＵＮ  ｍＲＮＡおよびコラゲナーゼならびにゼラチナーゼの誘発を阻害するということを見出した。
【００５２】
本発明の組成物は、化粧用として適した任意の形で提供可能である。好ましくはローションまたはクリームであるが、軟膏中または油ベースの液体ならびにスプレー可能な液体の形（例えば、髪および頭皮をＵＶによる損傷から保護する「へア」スプレーであり、ローションや軟膏を髪に塗布した場合に生じるような見た目に油っぽくならず化粧用として許容可能な方法で乾燥するベース中に溶解）であってもよい。さらに、本発明で想定している組成物は、１種またはそれ以上の相溶性かつ化粧用として許容可能な、着色料、香料、皮膚軟化剤、湿潤剤などの一般に用いられているアジュバントや、アロエ、カモリール（ｃｈａｍｏｌｉｌｅ）などの植物性薬品を含有してもよい。局所的に使用する場合、レチノイドは約０．０５％〜約５％、さらに好ましくは０．１％〜１％の濃度で用いるのが好ましい。上述したレチノイドおよび様々な酸化防止剤は、また、好ましくは経口投与によって全身投与することも可能である。経口服用の場合、レチノイドは、全用量で有毒量未満として約０．１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約１ｍｇ／ｋｇまたはこれ以上の量で摂取するのが好ましい。酸化防止剤は、好ましくは「メガ量」（例えば、ビタミンＣで少なくとも１ｇ／ｄ、少なくとも１種またはそれ以上のトコフェノールで１０００Ｉ．Ｕ．）で摂取するのが好ましい。
【００５３】
要するに、本発明者らの発明は、広義には、ＵＶ曝露後にサンバーンを防止することからＭＭＰ活性の増大を防止することまで含めて、「光老化」を防止するという概念に再度的を合わせたものであるとみなされる。本発明者らの発明は、ＵＶＡ／Ｂ遮断用サンスクリーン剤を使用することで、皮膚レベルでＵＶＡ／Ｂ放射を遮断；酸化防止剤を局所塗布することで、ＭＡＰキナーゼカスケードおよびＭＭＰ誘発を開始させるＵＶ放射による反応性酸素種の皮膚中での生成を遮断；レチノイドまたは（本明細書において広義に定義したような）ＭＭＰ阻害剤を局所塗布することで，ＵＶ曝露後におけるＭＭＰ活性増大につながる転写因子の誘発を遮断；ＭＭＰの阻害剤を局所塗布することで、その活性を直接的に阻害および／または窓構造体中またはかかる構造体表面のコーティング中にＵＶＡ遮断剤を提供することで、かかる構造体を介してヒトの皮膚にＵＶＡ放射が伝達されるのを遮断する形態のうち、１つまたはそれ以上の形態で光老化に対する予防法を提供する。
【００５４】
本発明者らによる発見に鑑みると、紅斑量（ＭＥＤ）未満のＵＶ放射によって皮膚が損傷を受けることは明らかである。このため、医師の指示のもとに使用する眼鏡およびほとんどのサングラスには、ＵＶ反射性または吸収性の材料またはコーティングが含まれているが、本発明者らの発明のもう１つの態様は、特に、医師の指示のもとに使用する眼鏡およびサングラスだけでなく、住居、オフィスおよび自動車の窓用など、あらゆるタイプのガラス表面でＵＶＡの伝達を防止するＵＶコーティングを提供することにある。さらに、ジェット航空機は大気中の非常に高いところを飛行するため、窓の近くにいる乗客はＵＶＡおよびＵＶＢ放射に曝露される場合があるだけでなく、これよりも危険なＵＶＣ放射にも曝露されることがある。本発明者らの発明についての本記載があれば、窓のコーティングに関する技術分野の当業者は、ＵＶＡ遮断剤を識別し、これを膜形成可能または硬化可能（ペイント状など）コーティングに取り入れて、窓構造体に接合または積層することが容易にできるであろう。このように、もう１つの実施の形態では、本発明は、ＵＶ反射性および／または吸収性のコーティング（特にＵＶＡ遮断剤）および／または化合物を内部に有する透明または半透明のポリマー構造体を含む。このような構造体としては、ベビーカーのプラスチック製の日除けや、太陽が低い位置にある時に店舗の窓に掛けられるプラスチック製のシェード（一般に着色されているかまたは薄い色が付けられている）など、窓状の装置および窓を覆う装置が挙げられる。繰り返すが、このようなタイプの構造体を製造する技術分野の当業者であれば、ＵＶＡ遮断剤を提供し、膜形成ポリマー材料（例えば、可塑化ポリビニルアクリレート）に取り入れ、ＵＶＡ放射の伝達を遮断する透明または半透明の窓構造体を提供することが容易にできよう。ＵＶＡを遮断する窓に関連して、上述したようにＵＶＡおよびＵＶＢの相対量は空にある太陽の高さの関数として変化する。太陽の高さが低い場合（すなわち、天頂角０°の「日中の」太陽との対比で、朝または夕方の太陽）、ＵＶＡ：ＵＶＢの相対量は他の時間帯（例えば正午）よりも大きくなる。このように高さが低い時は、ＵＶＡ対ＵＶＢの相対量は２倍を上回ることもある。このため、日中の太陽が最も大きな損傷を与えるという現在の仮説（天頂が高ければ高いほどＵＶＢ光線の量が多くなり、ひどいサンバーンを引き起こしやすいため、この仮説はもっともらしいものである）とは逆に、紅斑量未満のＵＶＢとＵＶＡ放射とが組み合わさることで光損傷が発生するという本発明者らの発見から、他の時間常にも光損傷から保護することの重要性が分かる。このため、午前中および／または夕方の時間に仕事に行くおよび／または仕事から帰る運転手を保護するには、広いスペクトルのＵＶＡ／Ｂ窓コーティングが有用であろう。
【００５５】
以下の実施例では、４つのＦ３６Ｔ１２  ＥＲＥ−ＶＨＯ  ＵＶ球を使用して、ヒトの皮膚を照射した。すべての時間について、電球の４ｃｍ前方にＫｏｄｏｃｅｌ  ＴＡ４０１／４０７フィルタを装着し、ＵＶＣ放射（＜２９０ｎｍ）を除去した。ＩＬ４４３光線療法用放射計およびＳＥＤ２４０／ＵＶＢ／Ｗ光検出器（マサチューセッツ州ニューべリーのＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｉｇｈｔ社）を用いて放射強度を観察した。Ｏｐｔｒｏｎｉｃ  Ｌａｂｒｏａｔｏｒｉｅｓ  ＯＬ７５４システムを用いて分光放射測定を行った。４つの電球の光源から約４３ｃｍ（１７インチ）での全照射量（２９０〜８００ｎｍ）は約１．５ｍＪ／ｃｍ２・ｓ（１．４９×１０−３Ｗ／ｃｍ２）であった。この電球からの放射出力を分光放射測定によって求めたところ、ＵＶＢ約４７％およびＵＶＡ約２７％（約９％がＵＶＡ１（３４０〜４００ｎｍ）および約１８％がＵＶＡ２（３２０〜３４０ｎｍ））、残りが可視光線とＩＲ放射であった。この４つの電球のセットでの約１６０秒の曝露が１ＭＥＤでの曝露に相当する。従って、ＵＶＢが０．５％でＵＶＡが６．５％の自然の太陽光線と比較すると、この実験で用いた４つの電球のセットで得られるＵＶＡ放射量は、同じＵＶＢ量の日光に曝露された場合よりも極めて少ないことが分かるであろう。
【００５６】
以下の実施例では、エタノール７０％（保存剤として０．０５％ＢＨＴを含む）中にＰＥＧ（ポリエチレングリコール）３０％を含有する「標準的なビヒクル」を使用した。可溶性架橋テロペプチドの放射免疫検査（アッセイ）によって皮層コラーゲンのＵＶ誘発された分解を評価した。それぞれノーザン分析およびウェスタン分析によって、ＭＭＰおよびいずれかの内在性阻害剤（ＴＩＭＰ）のｍＲＮＡおよびタンパク質レベルを求めた。Ｉ［３Ｈ］型コラゲナーゼの分解によって、コラゲナーゼ活性を測定した。酵素電気泳動法によってＭＭＰ活性を測定した。
【実施例】
【００５７】
実施例１−−ＡＰ−１の紅斑量未満の誘発
コーカサス人の成人９名の尻領域（すなわち、通常は太陽光線の曝露されることのない皮膚）を、様々な時間で上述した電球セットからのＵＶ放射に曝露した後、組織試料を採取して分析した。図２および図３に示されるように、かつ１ＭＥＤとして上述した２分４０秒（１６０秒）の時間を使用して、志願被験者の皮膚の様々な部分を、電球からの０、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１および２ＭＥＤの放射に曝露した。曝露された（および０ＭＥＤの未曝露の）皮膚から得た真皮の生検組織試料を、ＡＰ−１の有無およびＡＰ−１をコードするＤＮＡへの結合が何倍になるかについてアッセイした。Ａｎｇｅｌ，Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｅｌｌ（１９８７）４９：７２９〜７３９およびＳａｔｏ，Ｈ．およびＳｅｉｋｉ，Ｍ．、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（１９９３）８：３９５〜４０５に記載されているように、特定のＭＭＰの産生は転写因子ＡＰ−１によって媒介される。
【００５８】
これらの図面に示される生検結果は驚くべきものである。少なくとも０．０１ＭＥＤ程度までの紅斑量未満の線量では、未曝露皮膚の場合に存在するレベルよりも明らかに高いレベルでＡＰ−１が誘発される。これらの予期しない結果から、本発明者らは、ヒトの皮膚に対する光損傷が、ＵＶＢおよびＵＶＡを含む紅斑量未満のＭＥＤ放射線量によって誘発される場合があるため、少なくともＵＶＡおよび任意にＵＶＢを遮断するサンスクリーン剤を毎日塗布することによって、どこにいる人でも光老化が起こらないように保護することができると考えるに至っている。
【００５９】
実施例２−−紅斑量未満のコラゲナーゼ誘発のレチノイド予防法
本発明者らの係属中の出願第５８８，７７１号（上述したものであり、その開示内容を本明細書に引用したものとする）に記載されているように、レチノイドは紅斑量の放射の後にコラゲナーゼをはじめとする様々なＭＭＰの誘発を阻害することが明らかになっている。
【００６０】
志願被験者１０名の尻の皮膚を使用して、上述したものと同一の一般的な手順に従って、彼ら志願被験者各人について、標準的なビヒクルのみ、０．１％のレチノイン酸（ＲＡ）または１％のレチノール（ＲＯＬ）を用いて予め処理した。志願被験者から得た組織試料を、前処理後、曝露しなかった後、４つの電球セットからの光線０．５ＭＥＤに曝露した後にそれぞれ生検した。
【００６１】
これらの生検の結果を図１３Ｂに示す。この図は、１０名の志願被験者についての生体内におけるＩ型での倍増値（ｆｏｌｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅ）に対する前処理レジメ（ｒｅｇｉｍｅ）および曝露レジメを示したものである。図中の結果に示されるように、ヒトの皮膚をレチノイドで前処理すると紅斑量未満のＵＶによって誘発されるコラゲナーゼ活性を阻害することができる。図２に示す結果と矛盾することなく、紅斑量未満のＵＶへの曝露によってコラゲナーゼ活性は有意に増大する。
【００６２】
実施例１および２の結果は本発明者らにとって予想外かつ好奇心をそそられるものであり、本発明者らは皮膚の保護および太陽によって誘発される皮膚の損傷についての現在の見解に対する疑いに駆られた。エリザべス女王時代の英国および東洋の多くの文化（例えば日本や韓国など）などの、黒く焼けた「屋外派の」肌が審美的に魅力的ではないと考えられている様々な文化の中においては、いつにあっても、太陽による皮膚への損傷を防止および／または「保護性の」皮膚の色（ｔａｎ）を誘発するために様々な化合物および組成物が試されてきた。本発明者らは、様々な化合物および組成物を古からあるものと新規なものの両方について、ＵＶ曝露した皮膚に対する生体内での効果が本当にあるのか否かを試験することにした。
【００６３】
実施例３−−局所的な前処理後のＵＶ曝露による影響Ｉ
メラトニンは、昼夜の明暗サイクルによって媒介されると見られているホルモンである。最近になって、メラトニンを酸化防止割として作用させ得るという見解が出された。
【００６４】
本発明者らは、６名の志願被験者を評価し、上述したものと同一の一般的な手順を使用して、局所的なメラトニンがＵＶ誘発紅斑に何らかの影響をおよぼす場合にそれがどのようなものかを判断した。５分間の曝露後の様々なＵＶ線量での曝露結果および志願被験者各々の紅斑応答を図９に示す。志願被験者のそれまで光線曝露されていない皮膚を、標準的なビヒクルのみまたは５％のメラトニンで前処理した。図９に示す結果から、２ＭＥＤの光線への曝露後、ビヒクル処理した皮膚に紅斑が誘発され、メラトニン処理した皮膚では誘発されなかったということが分かる。メラトニン処理した皮膚に紅斑が誘発された場合でも、ビヒクル処理してＵＶを照射した皮膚の場合に比べるとかなり軽度で存在していた。それにもかかわらず、上記にて示したように、紅斑が存在しないことと光損傷がないこととは必ずしも関連しているとは限らないことに留意すべきである。
【００６５】
もう一組の実験では、志願被験者にはビヒクルのみまたは５％のメラトニンまたは５％のビタミンＥで曝露の約７時間前に前処理した皮膚領域があった。次に、これらの領域を約２ＭＥＤのＵＶ放射に曝露した後、クロマメータの目盛を記録して紅斑の度合いを判断し、生検試料を採取してＩ型コラゲナーゼおよび９２ｋＤａ（７）ゼラチナーゼの活性を判断した。図９に示す結果から、ビヒクル処理後にＵＶ曝露した皮膚と比較して、メラトニンおよびビタミンＥはいずれも紅斑を大幅に減少させたということが分かる。したがって、メラトニンおよびビタミンＥは酸化防止剤であるとされることがあるが、本発明者らは、これらの物質によって良好な抗サンバーン性サンスクリーン効果が得られることを見出した。また、図１０に示す結果から分かるように、メラトニンおよびビタミンＥは、ヒトのＵＶ曝露皮膚においてＭＭＰ活性の増大を抑制するようには機能しなかった。
【００６６】
実施例４−−局所的な前処理後のＵＶ曝露による影響ＩＩ
ＵＶ放射は遊離ラジカルを生成することが知られているため、光損傷の原因についてのもう１つの理論は反応性酸素種（ＲＯＳ）および他の遊離ラジカルのＵＶ放射による生成に関するものである。従って、本発明者らは、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）および２−フリルジオキシム（ＦＤＯ）ならびにアスピリン（アセチルサリチル酸、ＡＳＡ）などの「酸化防止剤」がＭＭＰ誘発による紅斑または光損傷に何らかの影響をおよぼすか否かについて研究を行った。
【００６７】
曝露の１６時間前に志願被験者を前処理した。曝露および生検は上記の実施例において説明したように実施した。１つの実験では、志願被験者の皮膚をビヒクルのみまたは５％のＡＳＡまたは３．５％のビタミンＣで前処理し、紅斑についてはクロマメータを用いて試験し、コラゲナーゼ活性については酵素電気泳法によって試験した。１ＭＥＤでの曝露後、図９は、アスピリンまたはビタミンＣでの前処置によって、１ＭＥＤでの曝露時のＵＶ誘発紅斑が、未処理（ビヒクルのみで処理）の皮膚の場合よりも減少し、アスピリンを用いると紅斑が約３０減少するのに対して、ビタミンＣでは未処理の皮膚よりも約３０％低かった。しかしながら、生検討料のコラゲナーゼ活性を評価した場合、結果は図１０に示すようになる。すなわち、アスピリン処理した皮膚では未処理の皮膚よりもコラゲナーゼ活性が高く、ビタミンＣでは未処理の皮膚と比べてコラゲナーゼ活性が約２５％低下した。繰り返すが、これらの驚くべき結果から、紅斑とＭＭＰによって媒介され、ＵＶによって誘発されるヒトの皮膚の光損傷とを相関させることはできないということが分かる。事実、紅斑のみに注目するとアスピリンを使用したくなるかもしれないが、これらの結果から、アスピリンにはＩ型コラゲナーゼが媒介する皮膚の光分解に対する保護効果がないことが分かる。
【００６８】
ビヒクルのみかまたは２０％のＮＡＣ、または５％のＦＤＯを用いて、２ＭＥＤでの曝露で上記と同じ一般的な実験プロトコルを繰り返した。これらの化合物は同様に曝露前に志願被験者に塗布しておいた。図９は、これらの化合物について紅斑を分析した結果を示しており、ＦＤＯは紅斑を完全に阻害したが、ＮＡＣには全く効果がなかった（すなわち、ビヒクル処理した皮膚と同じ）ことが分かる。しかしながら、ここでも驚くべきことに、図１０に示すように同じ曝露レベルでＩ型コラゲナーゼ活性を分析したところ、ＮＡＣではコラゲナーゼ活性に対して有意な保護性が得られたが、ＦＤＯではＭＭＰ誘発に対していくらか保護されただけであった。
【００６９】
実施例５−−前処理時間依存性
特定の化合物がＵＶ放射ヘの曝露後に紅斑および／または皮膚のＭＭＰ媒介分解を抑制するか否かの判断という一般には予測できないことに加え、本発明者らは、保護性には時間依存の効果がある可能性があることを発見した。
【００７０】
４つの電球セットを用いて志願被験者の皮膚を１ＭＥＤの光線に曝露し、ビヒクルのみかまたは２０％のＮＡＣで、曝露の４時間（ＨＲＳ）または７時間前に前処理した。曝露後、上述したようにしてクロマメータおよび酵素電気泳動法による分析を実施した。
【００７１】
ＮＡＣには、前処理の時間数とは関係なくＵＶ曝露皮膚の赤味を防ぐ効果はなかった。図１１Ａおよび１１Ｂは、図９の結果との比較で、ＮＡＣで前処理して１ＭＥＤの光線に曝露した後のI型コラゲナーゼに対する予期しない影響を示している。ＮＡＣで７時間前処理した場合、（コラゲナーゼ活性の１５０％増大が認められた）未処理の皮膚と比較して、９２ｋＤａのゼラチナーゼ（図１１Ａ）およびコラゲナーゼ（図１１Ｂ）活性のＵＶ誘発増大に対する阻害効果が得られたが、４時間の前処理では効果はなかった。
【００７２】
実施例６−−市販のサンスクリーン剤の効果
本発明者らは、市販されているサンスクリーン剤のＵＶ誘発紅斑およびコラゲナーゼ活性に対する影響についても評価した。志願被験者の皮膚を標準的なビヒクルおよび（皮膚の異なる領域で）３種類のサンスクリーン剤すなわち、エチルへキシルｐ−メトキシシンナメートおよびオキシベンゾンを含有するＳＰＦ（サンプロテクト指数）１５の組成物、パッケージにＵＶＡおよびＵＶＢ保護性があると記載され、オクトクリレン（１０％）、オクチルメトキシシンナメート（７．５％）、オキシベンゾン（６％）を含有するＳＰＦ３０の組成物、パッケージにＵＶＡおよびＵＶＢ保護性があると記載され、ＳＰＦ３０の組成物と同一の成分を高含有量で含有するSＰＦ５０の組成物で前処理した。
【００７３】
ビヒクルおよびサンスクリーン剤で皮膚の異なる領域を前処理し、次いで２ＭＥＤの光線に曝露した後、志願被験者の皮膚の紅斑を評価した。図７の結果から分かるように、市販のサンスクリーン剤ではいずれも、ＵＶ誘発紅斑に対しては優れた保護性が得られ、未処理の皮膚と比較して本質的に赤味は全くなかった。
【００７４】
実施例７−−紅斑量未満のＵＶに規則的に曝露されることによる生理学的な影響
本発明者らは、生体内にて紅斑量未満のＵＶ線量に繰り返し曝露されることによるＭＭＰ誘発、特にＩ型コラゲナーゼおよび９２ｋＤａのゼラチナーゼの誘発に対する影響について検討した。０．５ＭＥＤの光線を志願被験者の４つの別々の部位に照射し、各部位を曝露間隔４８時間で１回、２回、３回、４回ＵＶに曝露した。最後の曝露から２４時間後に、（対照例として用いた）未照射領域から得た皮膚も含め、各志願被験者から得た皮膚を生検し、ＭＭＰ活性を分析した。図３に示すように、１回のＵＶ曝露後にコラゲナーゼ活性およびゼラチナーゼ活性はそれぞれ２．２倍および４．４倍に増大し、４日間にわたって１日おきに曝露を繰り返した時ですらも本質的にこれと同じレベルで増大し続けた。
【００７５】
本発明者らはレチノイド（特にトランス型レチノイン酸、ｔＲＡ）がＵＶ曝露後に皮膚でのＭＭＰ活性を低下させることを明らかにしたが、曝露前にｔＲＡで前処理することによる影響についても研究した。皮膚をｔＲＡで処理しても、コラゲナーゼ、９２ｋＤａのゼラチナーゼまたはストロメライシンの低い基底レベルには変化は見られなかった。ＵＶを引き続いて照射することで、レチノイドで前処理した皮膚におけるＭＭＰのレベルが未処理の皮膚と比べて実質的に低下する。０．０１〜２ＭＥＤの範囲の様々なＵＶ線量で志願被験者を光線に曝露し、これらの領域と未曝露領域から生検試料を取得した。図２、図３および図１４Ａ〜図１４Ｄにおいて示されるように、極めて低い紅斑量未満の曝露レベルで、曝露後８時間以内にストロメライシン−１が誘発された。この誘発は、明らかに０．１ＭＥＤでのものであった。これらの曝露の後、０．１％のｔＲＡを曝露領域に３日間毎日塗布し、同じく生検討料を採取した。図１３Ｂに示されるように、ｔＲＡはストロメライシン−１タンパク質が有意に減少する要因ではなかった。
【００７６】
実施例８−−ＵＶ波長のＭＭＰ誘発におよぼす影響
本発明者らは、周知のＵＶＡ遮断剤で皮膚を前処理することで、２ＭＥＤのＵＶ放射への曝露後に紅斑およびＭＭＰ活性の両方にどのような影響がおよぶかについて研究した。特に、本発明者らは、米国特許第４，３８７，０８９（かかる開示内容を本明細書に引用したものとする）に記載されている、ＰＡＲＳＯＬ（Ｒ）１７８９（ＰＡＲＳＯＬ  Ａとしても知られている）ブランドの４−ｔ−ブチル−４'−メトキシジべンゾイルメタンを使用した。（ＰＡＲＳＯＬ  ＭＣＸは、市販のサンスクリーン剤に一般に用いられているＵＶＢ遮断剤である２−エチルへキシルｐ−メトキシシンナメートの商標名であり、米国特許第４，７１３，４７３号に開示されている。かかる開示内容を本明細書に引用したものとする）。ＵＶＡ１、ＵＶＡ２およびＵＶＢ波長でのＰＡＲＳＯＬ（Ｒ）１７８９の吸光度特性を図８Ａに点線で示す。同図において示されるように、この化合物は、ＵＶＡ２放射の遮断時に特に有用であり、ＵＶＡ１放射の遮断でもいくらか効果的である。影付きの線は自然の紅斑誘発性ＵＶ放射の波長を示す。図示のように、紅斑は主にＵＶＢ放射によって発生する。
【００７７】
一組の実験で、志願被験者には、ビヒクルのみかまたは５％のＰＡＲＳＯＬ（Ｒ）１７８９ＵＶＡ遮断剤で前処理した未曝露領域があった。これらの前処理領域をＵＶ放射約２ＭＥＤに曝露し、後に、紅斑を試験して生検し、９２ｋＤａのゼラチナーゼの活性とｃＪＵＮタンパク質の有無を試験した。
【００７８】
図８Ｂは、サンバーンについての曝露後の試験の結果を示している。この試験では、ＰＡＲＳＯＬ（Ｒ）１７８９で前処理した皮膚をＵＶ曝露によって誘発されるサンバーンに対して保護しなかった。ＰＡＲＳＯＬ（Ｒ）１７８９がＵＶＡ放射を有意に遮断することを根拠として、これらの結果からＵＶＢ放射がサンバーンにおける主な原因物質であるという裏付けが得られる。
【００７９】
図１２は、志願被験者の皮膚におけるゼラチナーゼの生体内での活性検査の結果を示している。この活性は、ビヒクルで処理した皮膚をＵＶに曝露した場合に比ベて、ＰＡＲＳＯＬ（Ｒ）１７８９で処理した皮膚をＵＶに曝露した場合の方が大幅に低くなった。事実、ＵＶＡ遮断剤で処理した皮膚におけるゼラチナーゼ活性は、ビヒクルで処理した未曝露の皮膚での場合とそれほど大きくは違わなかった。これらの結果から、ＵＶ曝露皮膚でのＵＶ媒介ＭＭＰ誘発の一因は明らかにＵＶＡであることが分かる。したがって、皮膚の光老化および光分解を引き起こす傾向のある放射は特定波長のＵＶ放射のみである。よって、本発明者らの発明は、ＵＶＡ遮断性のサンスクリーン剤を使用することで、光老化を防止することを含む。
【００８０】
実施例９
上記にて示した通り、活性成分を皮膚に塗布してからそれがＭＭＰまたはその先駆物質を生体内にて阻害する機能が発揮されるまでの間には時間差がある場合がある。図１５Ａに示されているのは、ＲＡを局所塗布する時間変化と、ＵＶ放射への曝露時に、これがコラゲナーゼやゼラチナーゼ、ｃＪＵＮタンパク質の阻害におよぼす影響についての研究の結果である。
【００８１】
皮膚を２ＭＥＤのＵＶ放射に曝露する７時間（ｈ）前、１６時間前、２４時間前および４８時間前に、志願被験者をビヒクルのみかまたはビヒクルプラス０．１％のＲＡで前処理し、曝露の２４時間後に志願被験者の皮膚の曝露部分から生検試料を採取した。図１８Ａに示されるように、曝露の２４時間前にビヒクルのみで前処理した場合、コラゲナーゼおよびゼラチナーゼの活性は基線レベルになる。曝露の７時間前にＲＡで前処理した場合、コラゲナーゼまたはゼラチナーゼの活性はビヒクル単独の場合と比べてさほど大きく違わなかった。１６時間前に処理を施すと、コラゲナーゼ活性はビヒクル単独−Ａ前処理した場合とほとんど変わらないが、ゼラチナーゼ活性は明らかに低下する。２４時間前に前処理を施すと、コラゲナーゼ活性およびゼラチナーゼ活性はいずれもビヒクルを使用した場合よりも有意に低くなる。４８時間前に前処理を施すと、コラゲナーゼ活性およびゼラチナーゼ活性はさらに低下する。
【００８２】
また、（１）曝露の４８時間前に（Ａ）ビヒクルのみまたは（Ｂ）ビヒクル中にＲＡを含有するもので皮膚を前処理および（２）曝露の８時間前にＲＡを分散させたビヒクルで前処理することで、ＵＶ放射に曝露された皮膚におけるｃＪＵＮタンパク質の量が変化するか否かを判断するための研究を行った。図１５Ｂから明らかなように、ＲＡで曝露の８時間前に前処理を施した場合は、ビヒクルのみで前処理（曝露の４８時間前）した場合と比べて、皮膚でのｃＪＵＮタンパク質の量に変化は起こらなかった。一方、曝露の４８時間前にＲＡで前処理を施した場合、皮膚におけるｃＪＵＮタンパク質の量が有意に減少した。図１に示す経路に鑑みると、皮膚におけるｃＪＵＮ量の増加によってＡＰ−１濃度が上昇し、必然的に組織分解を伴ってＭＭＰが増加するのであろうと考えられる。
【００８３】
これらの結果に鑑みると、光老化を抑制するための活性成分としてレチノイドを使用する場合、ＵＶ放射への曝露の８時間以上前に皮膚にレチノイドを塗布すると好ましく、さらに好ましくは少なくとも１６時間前、一層好ましくは少なくとも２４時間前、さらに最長で４８時間前までに塗布すると好ましい。本発明者らの先の出願第５８８，７７１号に示されているように、ＵＶ放射ヘの曝露後にコラゲナーゼおよびゼラチナーゼの活性が基底レベルから増大するには、最長４８時間という相当な時間がかかる場合がある。この実施例に示す結果はまた、局所塗布後のレチノイドがＭＭＰ経路を下方制御するには、決して短くはない時間がかかる可能性があることも示している。このため、光老化を抑制するための好ましい方法は保護が必要な日の前日に本組成物を使用することであり、最も好ましくは、（特に、本発明者らが示したように、間接的な紅斑量未満のＵＶ線量によってＭＭＰ活性が上方制御される場合には）本組成物を毎日使用し、光老化が常に抑制されるようにすることである。
【００８４】
実施例で使用する方法
このセクションで参照する内容について、これを言及することで本明細書に援用する。
【００８５】
生化学的な分析用の皮膚上清の調整
液体窒素下にて皮膚試料を乳鉢および乳棒で粉砕し、１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、５ｍＭ  ＥＧＴＡ、１０ｍＭ  ＭｇＣ１２、５０ｍＭ  グリセロリン酸、５ｍＭ  ＮａＶＯ４、２ｍＭ  ＤＴＴ、０．５ｍＭ  ＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌのアプロチニン、１０μｇ／ｍｌのロイぺプチン、１０μｇ／ｍｌのペプスタチン、０．５％のＮＰ−４０を含有する緩衝液中で、Ｄｏｕｎｃｅ組織摩砕機にて均質化した。ホモジネートを１４，０００gで１５分間遠心分離し、上清を回収して本明細書にて説明するような生化学的判断用に用いた。
【００８６】
マトリックスメタプロテイナーゼアッセイ
生検後すみやかに組織片を液体窒素中にて冷凍し、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌ（ｐＨ７．６）プラス５ｍＭ  ＣａＣ１２中にて均質化し、さらに３０００×ｇで１０分間遠心分離して、粒子状物質を除去した。３Ｈ標識した原線維Ｉ型コラーゲン（Ｆｉｓｈｅｒ，Ｇ．Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．による、Ｎａｔｕｒｅ、３７９、３３５〜３３９（１９９６）およびＨｕ，Ｃ−Ｌ  ｅｔ  ａｌ．、Ａｎａｌｙｔｉｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ、８８、６３８〜６４３（１９７８）に記載）から可溶性の放射性フラグメントを放出する能力を膠原溶解性活性の測定基準として利用した。組織抽出物を１ｍＭ  アミノフェニル酢酸第二水銀（ＡＰＭＡ）と共に３時間保温培養し、不活性型のマトリックスメタロプロテイナーゼを活性型に転化きせた。引き続いて、コラーゲン基剤（マサチューセッツ州ボストンのＮＥＮ−Ｄｕｐｏｎｔ社）０．２μＣｉを組織抽出物５０μｌと共に２４時間保温培養した。２４時間の保温培養時間の終了時に、試料を１２，０００×ｇで１０分間遠心分離し、無傷タンパク質をペレット化した。次に、上清液の残留放射能を測定し、この測定値から加水分解された基剤の比率を求めた。
【００８７】
ゼラチン酵素電気泳動法（Ｖａｒａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．、前掲引用書中）を使用してＭＭＰ−２（７２ｋＤのゼラチナーゼすなわちゼラチナーゼＡ）およびＭＭＰ９（９２ｋＤのゼラテチナーゼすなわちゼラチナーゼＢ）の活性を評価した。ゼラチン１ｍＭｇ／ｍｌを含有する８．５％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル中にて組織抽出物を電気泳動した。電気泳動後、１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００中にて３回連続して洗浄してＳＤＳを除去した。最初の２回の洗浄はそれぞれ２０分間、最後の１回は一晩行った。レーザーデンシトメトリーによって加水分解ゾーンの幅の定量化を行った。
【００８８】
ｃ−Ｊｕｎキナーゼ活性アッセイ
（例えば、Ｍ．Ｈｉｂｉ  ｅｔ  ａｌ．、「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ＵＶ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ｔｈａｔ  ｂｉｎｄｓ  ａｎｄ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｃ−Ｊｕｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｄｏｍａｉｎ（ｃ−Ｊｕｎ活性化ドメインを結合および増強する腫瘍性タンパク質およびＵＶ応答性タンパク質キナーゼの同定）」、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．、７：２１３５〜２１４８（１９９３）に記載されているような）固相キナーゼアッセイによって、皮膚上清におけるｃ−Ｊｕｎ活性を求めた。
【００８９】
ＲＮＡのノーザン分析
（Ｇ．Ｊ．Ｆｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、「Ｃｅｌｌｕｌａｒ，  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ａｎｄ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｏｐｉｃａｌ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ−ｔｒｅａｔｅｄ  ｈｕｍａｎ  ｓｋｉｎ（レチノイン酸で局所処理したヒトの皮膚の細胞的、免疫的および生化学的な性質決定）」、Ｊ，Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、９６：６９９〜７０７（１９９１）に記載されているような）塩酸グアニジニウム溶解および超遠心分離によって、皮膚試料から全ＲＮＡ（例えば、ｃ−Ｊｕｎについて）を単離した。Ｇ．Ｊ．Ｆｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．によって（「Ａｌｌ  ｔｒａｎｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｒｅｔｉｎｏｌ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｋｉｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏt（生体内すなわちヒトの皮膚における細胞性レチノール結合タンパク質の全トランス型レチノイン酸による誘発）」Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１０５：８０〜８６（１９９５）にて）説明されているようにして、試験対象となる特定のｍＲＮＡに対するランダムに初回抗原刺激を与えた３２Ｐ標識ｃＤＮＡプローブを用いて、全ＲＮＡ（４０μｇ／レーン）のノーザン分析を実施した。
【００９０】
タンパク質のウェスタン分析
Ｇ．Ｊ．Ｆｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．によって（「Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎｄ  ｒｅｔｉｎｏｉｄ  Ｘ  ｒｅｃｅｐｔｅｒ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｋｉｎ（ヒトの皮膚におけるれチノイン酸およびレチノイドＸ受容体タンパク質の免疫学的同定および機能定量）」Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６９：２０６２９〜２０６３５（１９９４）において）記載されているようにして、ヒトの皮膚から得られた原子核抽出物中にてウェスタン分析によってＪｕｎタンパク質を検出した。免疫反応性タンパク質を拡張化学ルミネッセンス検出によって可視化し、レーザ濃度計（デンシトメトリー）によって定量化するか、あるいは拡張化学蛍光検出によって可視化し、ストーム（Ｓｔｏｒｍ）画像形成装置（カリフォルニア州パロアルトのＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ）によって定量化した。
【００９１】
クロマメータ
市販のＭｉｎｏｌｔａクロマメータ（クロマメータＣＲ２００、型番９４４０１０８５）を用いて、曝露の２４時間後に紅斑（皮膚の赤味）を測定した。
【００９２】
上記の説明は、本発明の一例を示すためだけのものであり、これを限定することは意図していない。様々な変更、修正および追加が可能であることは、本明細書を熟読した当業者であれば理解できると思われ、これらは請求の範囲に規定する本発明の趣旨および範囲に包含されるものとする。
【図面の簡単な説明】
【００９３】
【図１】図１は、本発明者らの発見に基づいて、ＵＶ曝露が原因の皮膚損傷の一般的な経路であると思われることを示している。
【図２】図２は、紅斑量未満のＵＶＢ／ＵＶＡ放射が、コラゲナーゼ、ストロメライシン−１、９２ｋＤａのゼラチナーゼ（いずれもＭＭＰ）を誘発する事実を示している。棒グラフは、これらのタンパク質各々についてのラジオブロット試験結果の定量的な表現である。
【図３】図３は、ヒトの皮膚が紅斑量未満のＵＶＢ／ＵＶＡに規則的かつ繰り返し曝露されると、９２ｋＤａのゼラチナーゼおよびコラゲナーゼのＭＭＰレベルが一貫して高い値になるという事実を示している。
【図４】図４は、フィルタなしと５枚の異なるフィルタを通して測定して図５に示す結果を得た場合の照明装置によって放出されるスペクトルを示している。
【図５】図５は、放出されるエネルギ量が一定である場合に、ヒトの皮膚におけるコラゲナーゼの誘発を（図４に示す様々なフィルタを通した）ＵＶ波長の関数として示したものである。
【図６】図６は、本明細書に記載の実験（図５に示す結果を得た実験を除く）に用いた照明装置によって放出されるスペクトルを示している。
【図７】図７は、局所塗布用の市販のサンスクリーン剤が、ヒトの皮膚に２ＭＥＤのＵＶＢ／ＵＶＡを曝露した後に紅斑を誘発したという結果を示している。
【図８−Ａ】図８Ａは、ＵＶＡ遮断剤のＵＶ吸光度と、ヒトのＵＶ曝露皮膚をこのような遮断割によって前処理した場合の紅斑に対する影響を示したものである。
【図８−Ｂ】図８Ｂは、ＵＶＡ遮断剤のＵＶ吸光度と、ヒトのＵＶ曝露皮膚をこのような遮断割によって前処理した場合の紅斑に対する影響を示したものである。
【図９】図９は、ヒトの皮膚において、２ＭＥＤの放射への曝露による紅斑を防止することに対して、メラトニン、ビタミンＥ、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）、２−フリルジオキシム（ＦＤＯ）がおよぼす影響と、１ＭＥＤの放射への曝露による紅斑を防止することに対して、アセチルサリチル酸（ＡＳＡ）およびビタミンＣがおよぼす影響を示している。
【図１０】図１０は、ヒトの皮膚において、２ＭＥＤの放射への曝露によるコラゲナーゼ活性の上昇を防止することに対して、メラトニン、ビタミンＥ、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）、２−フリルジオキシム（ＦＤＯ）がおよぼす影響と、１ＭＥＤの放射への曝露によるコラゲナーゼ活性の上昇を防止することに対して、アセチルサリチル酸（ＡＳＡ）およびビタミンＣがおよぼす影響を示している。
【図１１−Ａ】図１１Ａは、ＮＡＣによる皮膚の前処理時間が、ＮＡＣのＵＶ誘発コラゲナーゼおよびゼラチナーゼを阻害する効力におよぼす影響を示している。
【図１１−Ｂ】図１１Ｂは、ＮＡＣによる皮膚の前処理時間が、ＮＡＣのＵＶ誘発コラゲナーゼおよびゼラチナーゼを阻害する効力におよぼす影響を示している。
【図１２】図１２は、ヒトの皮膚でＵＶ誘発された９２ｋＤａのゼラチナーゼを阻害する上での特定のＵＶＡ遮断剤の有効性を示している。
【図１３−Ａ】図１３Ａは、レチノイドでの前処理が、２ＭＥＤの放射ヘ曝露時に、ヒトの皮膚において、コラゲナーゼ、９２ｋＤａのゼラチナーゼ、ストロメライシン−１のＵＶ誘発上昇の阻害におよぼす影響を示している。
【図１３−Ｂ】図１３Ｂは、２種類のレチノイドが、ＭＥＤ未満のＵＶで誘発されるＩ型コラゲナーゼ活性の増大におよぼす影響を示している。
【図１４】図１４Ａ乃至図１４Ｄは、ＵＶ放射への曝露後のヒトの皮膚における様々なＭＭＰ（それぞれ、コラゲナーゼ、ストロメライシン、９２ｋＤａのゼラチナーゼ、７２ｋＤａのゼラチナーゼ）の上昇の時間変化を示している。
【図１５−Ａ】図１５Ａは、前処理時間が、ＵＶ誘発されたコラゲナーゼおよび９２ｋＤａのゼラチナーゼ、ｃ−ＪＵＮタンパク質を阻害するレチノイドの有効性におよぼす影響を示している。
【図１５−Ｂ】図１５Ｂは、前処理時間が、ＵＶ誘発されたコラゲナーゼおよび９２ｋＤａのゼラチナーゼ、ｃ−ＪＵＮタンパク質を阻害するレチノイドの有効性におよぼす影響を示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８−Ａ】
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【図８−Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１−Ａ】
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【図１１−Ｂ】
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【図１２】
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【図１３−Ａ】
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【図１３−Ｂ】
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【図１４】
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【図１５−Ａ】
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【図１５−Ｂ】
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