(57)【要約】【課題】酵母等の生体種を用いて選択性の高い測定を、特段の実験設備を必要としないで行うことができる、生体種を用いた溶液濃度の測定方法及び装置を提供する。【解決手段】被測定物の濃度により細胞活性・増殖度を変化させる細胞・菌体の形質転換体を用い、その生育の変化を測定することで、間接的に被測定物の濃度を測定する。例えば酵母を、その生存・増殖に必須な条件の一以上を欠く欠損条件を有する環境下に置き、かつこの細胞または菌体が被検物質の存在量に応じて上記欠損条件を遺伝子発現により補償する補償因子を有する形質転換体を使用し、酵母の増殖度の変化を指標として被測定物の濃度を決定する。実施例ではＣｌａｒｋ型酸素電極と、この酸素電極の陰極側に配置した酵母固定化膜とを組み合わせて構成した測定装置を使用した。【選択図】        図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞または菌体からなる生体種を用いて被検物質の溶液中における濃度を測定する方法であって、
前記細胞または菌体は、その生存，増殖に必須な条件の一以上を欠く欠損条件を有する環境下に置かれ、かつ該細胞または菌体が被検物質の存在量に応じて該欠損条件を遺伝子発現により補償する補償因子を有する形質転換体であり、前記細胞または菌体の細胞活性あるいは増殖度の変化を指標として被測定物の濃度を決定することを特徴とする生体種を用いた溶液濃度の測定方法。
【請求項２】
前記欠損条件が栄養要求性によりなされることを特徴とする請求項１に記載の生体種を用いた溶液濃度の測定方法。
【請求項３】
前記細胞または菌体が、リガンド応答性転写因子または該調節因子のリガンド結合領域を少なくとも一部含む部分、あるいはこれらの変異体、これらを用いた融合タンパクをコードする遺伝子および該転写因子の認識配列と転写開始に必要な塩基配列との下流に該補償因子をコードする遺伝子を接続してなる遺伝子により形質転換されてなるものであることを特徴とする請求項１に記載の生体種を用いた溶液濃度の測定方法。
【請求項４】
細胞または菌体からなる生体種を用いて被検物質の溶液中における濃度を測定する方法であって、
前記細胞または菌体は、特定の酵素の発現に対して毒性を呈して該細胞または菌体の生存、増殖を阻害する薬物を添加した薬物添加の環境下に置かれ、かつ該細胞または菌体が被検物質の存在量に応じて該酵素を遺伝子発現により産生する酵素産生因子を有する形質転換体であり、前記細胞または菌体の細胞活性あるいは増殖度の変化を指標として被測定物の濃度を決定することを特徴とする生体種を用いた溶液濃度の測定方法。
【請求項５】
前記細胞または菌体が、リガンド応答性転写因子または該調節因子のリガンド結合領域を少なくとも一部含む部分、あるいはこれらの変異体、これらを用いた融合タンパクをコードする遺伝子および該転写因子の認識配列と転写開始に必要な塩基配列との下流に前記酵素産生因子をコードする遺伝子を接続してなる遺伝子により形質転換されてなるものであることを特徴とする請求項４に記載の生体種を用いた溶液濃度の測定方法。
【請求項６】
前記細胞または菌体として酵母を用いることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の生体種を用いた溶液濃度の測定方法。
【請求項７】
細胞または菌体からなる生体種を用いて被検物質の溶液中における濃度を測定する装置であって、
前記細胞または菌体は、その生存，増殖に必須な条件の一以上を欠く欠損条件を有する環境下に置かれ、かつ該細胞または菌体が被検物質の存在量に応じて該欠損条件を遺伝子発現により補償する補償因子を有する形質転換体であり、前記細胞または菌体の細胞活性あるいは増殖度の変化を指標として被測定物の濃度を決定することよりなり、
前記細胞または菌体は、その活性あるいは増殖度変化の計測を行うセンサー上に固定化され、該センサーの出力変化により被検物質の溶液中における濃度を測定することを特徴とする生体種を用いた溶液濃度の測定装置。
【請求項８】
細胞または菌体からなる生体種を用いて被検物質の溶液中における濃度を測定する装置であって、
前記細胞または菌体は、特定の酵素の発現に対して毒性を呈して該細胞または菌体の生存、増殖を阻害する薬物を添加した薬物添加の環境下に置かれ、かつ該細胞または菌体が被検物質の存在量に応じて該酵素を遺伝子発現により産生する酵素産生因子を有する形質転換体であり、前記細胞または菌体の細胞活性あるいは増殖度の変化を指標として被測定物の濃度を決定することよりなり、
前記細胞または菌体は、その活性あるいは増殖度変化の計測を行うセンサー上に固定化され、該センサーの出力変化により被検物質の溶液中における濃度を測定することを特徴とする生体種を用いた溶液濃度の測定装置。
【請求項９】
前記細胞または菌体として酵母を用いることを特徴とする請求項７または請求項８に記載の生体種を用いた溶液濃度の測定装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、生体種を用いた化学物質濃度の測定方法及び装置に関し、さらに詳しくは、被測定物の濃度により細胞活性・増殖度を変化させる細胞・菌体の形質転換体を用い、被測定物の濃度を該細胞・菌体の細胞活性・増殖度に変換して測定する、生体種を用いた溶液濃度の測定方法及びその装置に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
環境試料等の測定において、菌体・細胞等の示す生体反応を用いるいわゆるバイオアセイ法は、機器分析等を用いる分析化学的な手法に比して、生体への影響を直接的・複合的に測定でき、生体物質の有する特異性を利用することで測定系の簡易化が図られる等の利点を有し、これには幾つかの実用例がある。例えば水質の栄養量の指標としてＪＩＳ  Ｋ０４００−２１−１０に規格化されたＢＯＤ法（生物化学的酸素要求量）は、特定バクテリアの有機物分解に伴い消費される酸素量を同定することで水質の評価を行う一種のバイオアセイ法である。
【０００３】
菌体あるいは細胞を用いたこのようなバイオアセイ法では、更に生体の有する高い特異性を利用した測定法が知られている。このような細胞・菌体を用いた選択的なバイオアセイ法では、細胞内での特定の酵素の発現を指標とした測定が通常行われる。例えば非特許文献１には、Ｈｅｐａ１ｃ１ｃ７細胞を用い、ダイオキシン類と結合したアリルハイドロカーボンレセプタ（ＡｈＲ）−アリルハイドロカーボンニュークリアトランスロケータ（Ａｒｎｔ）複合体が、レポータジーンとして細胞に導入された応答配列に異物応答配列（ＸＲＥ）を有するＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ遺伝子の転写を活性化することで生じたＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ量からダイオキシン濃度を見積る手法について開示されている。
【０００４】
また同様の手法を用い、出芽酵母サッカロミセスセレビジアを該酵母中で転写活性を有するプロモータの下流にヒトエストロゲンレセプタ遺伝子を配置した遺伝子及びエストロゲン応答配列の下流にレポータジーンとしてβ−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ遺伝子を配置した遺伝子を用いて形質転換したもののβ−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ発現量がエストラジオールの濃度依存的に変化することが示されている。
【０００５】
これらのレポータジーンアセイ法は、その測定法として発現した酵素量を基質反応を用いて検出するため、生体種中のタンパクを溶出させるための遠心沈降、ディタージェント添加、凍結融解等の工程を必要とするのが常である。また通常基質反応の測定には発光法、蛍光法、吸光法等を用いることが多く、このため専用の測定器を必要とするのが常である。このためこのようなバイオアセイ法は設備を備えた場所を必要とし、例えばポータブルでの測定等を行うのは容易ではない。
【０００６】
一方、このような問題点を解決する手法として、電極を用いた測定法が知られている。例えばＢＯＤの測定において固定化微生物膜と溶存酸素測定用電極を組み合わせるなどしてセンサチップ化した、ＪＩＳ  Ｋ３６０２に基く手法が知られている。また例えばＪＩＳ  Ｋ０７０１に定められるような、生体種から酵素のみを抽出し、その特異的触媒反応を利用して構築される酵素グルコースオキシダーゼを利用したグルコース計測装置等が知られている。
【０００７】
【非特許文献１】
Ｏｒｇａｎｏｈａｌｏｇｅｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  Ｖｏｌ．４０（１９９９），  ｐｐ．２７−３０
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、従来技術の上記事情に鑑みなされたもので、その目的は、細胞等の生体種を用いて選択性の高い測定を、比較的簡易な装置および方法で行うことができる、生体種を用いた溶液濃度の測定方法及びその装置を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
すなわち、請求項１に係る発明は、細胞または菌体からなる生体種を用いて被検物質の溶液中における濃度を測定する方法であって、前記細胞または菌体は、その生存，増殖に必須な条件の一以上を欠く欠損条件を有する環境下に置かれ、かつ該細胞または菌体が被検物質の存在量に応じて該欠損条件を遺伝子発現により補償する補償因子を有する形質転換体であり、前記細胞または菌体の細胞活性あるいは増殖度の変化を指標として被測定物の濃度を決定することを特徴とする生体種を用いた溶液濃度の測定方法である。
【００１０】
請求項２に係る発明は、請求項１において、前記欠損条件が栄養要求性によりなされることを特徴とする生体種を用いた溶液濃度の測定方法である。
【００１１】
請求項３に係る発明は、請求項１において、前記細胞または菌体が、リガンド応答性転写因子または該調節因子のリガンド結合領域を少なくとも一部含む部分、あるいはこれらの変異体、これらを用いた融合タンパクをコードする遺伝子および該転写因子の認識配列と転写開始に必要な塩基配列との下流に該補償因子をコードする遺伝子を接続してなる遺伝子により形質転換されてなるものであることを特徴とする生体種を用いた溶液濃度の測定方法である。
【００１２】
請求項４に係る発明は、細胞または菌体からなる生体種を用いて被検物質の溶液中における濃度を測定する方法であって、前記細胞または菌体は、特定の酵素の発現に対して毒性を呈して該細胞または菌体の生存、増殖を阻害する薬物を添加した薬物添加の環境下に置かれ、かつ該細胞または菌体が被検物質の存在量に応じて該酵素を遺伝子発現により産生する酵素産生因子を有する形質転換体であり、前記細胞または菌体の細胞活性あるいは増殖度の変化を指標として被測定物の濃度を決定することを特徴とする生体種を用いた溶液濃度の測定方法である。
【００１３】
請求項５に係る発明は、請求項４において、前記細胞または菌体が、リガンド応答性転写因子または該調節因子のリガンド結合領域を少なくとも一部含む部分、あるいはこれらの変異体、これらを用いた融合タンパクをコードする遺伝子および該転写因子の認識配列と転写開始に必要な塩基配列との下流に前記酵素産生因子をコードする遺伝子を接続してなる遺伝子により形質転換されてなるものであることを特徴とする記載の生体種を用いた溶液濃度の測定方法である。
【００１４】
請求項６に係る発明は、請求項１〜５のいずれかにおいて、前記細胞または菌体として酵母を用いることを特徴とする生体種を用いた溶液濃度の測定方法である。
【００１５】
請求項７に係る発明は、細胞または菌体からなる生体種を用いて被検物質の溶液中における濃度を測定する装置であって、前記細胞または菌体は、その生存，増殖に必須な条件の一以上を欠く欠損条件を有する環境下に置かれ、かつ該細胞または菌体が被検物質の存在量に応じて該欠損条件を遺伝子発現により補償する補償因子を有する形質転換体であり、前記細胞または菌体の細胞活性あるいは増殖度の変化を指標として被測定物の濃度を決定することよりなり、前記細胞または菌体は、その活性あるいは増殖度変化の計測を行うセンサー上に固定化され、該センサーの出力変化により被検物質の溶液中における濃度を測定することを特徴とする生体種を用いた溶液濃度の測定装置である。
【００１６】
請求項８に係る発明は、細胞または菌体からなる生体種を用いて被検物質の溶液中における濃度を測定する装置であって、前記細胞または菌体は、特定の酵素の発現に対して毒性を呈して該細胞または菌体の生存、増殖を阻害する薬物を添加した薬物添加の環境下に置かれ、かつ該細胞または菌体が被検物質の存在量に応じて該酵素を遺伝子発現により産生する酵素産生因子を有する形質転換体であり、前記細胞または菌体の細胞活性あるいは増殖度の変化を指標として被測定物の濃度を決定することよりなり、前記細胞または菌体は、その活性あるいは増殖度変化の計測を行うセンサー上に固定化され、該センサーの出力変化により被検物質の溶液中における濃度を測定することを特徴とする生体種を用いた溶液濃度の測定装置である。
【００１７】
請求項９に係る発明は、請求項７または請求項８において、前記細胞または菌体として酵母を用いることを特徴とする生体種を用いた溶液濃度の測定装置である。
【００１８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施の形態について説明する。
本発明は、被測定物の濃度により細胞活性・増殖度を変化させる細胞・菌体の形質転換体を用い、その生育の変化を測定することで、間接的に被測定物の濃度を測定しようとするものである。
【００１９】
本発明では、被測定物による転写活性化の機構は特定しないが、例えばＤＮＡ上のオペロン部位及びオペロン結合タンパクとリガンド応答性転写調節因子の融合タンパク、ＤＮＡ上の異物応答配列及びアリルハイドロカーボンレセプタ、ＤＮＡ上のエストロジェン応答配列およびエストロジェンレセプタなどにそれらの関連タンパクを組合わせた系、あるいは他にもアンドロゲン、グルココルチコイド等のステロイドホルモン、甲状腺ホルモン、脂溶性ビタミン、プロスタノイド等の核内ホルモンレセプター等を用いた系など、あらゆる測定対象物に応答して転写を正または負方向へ調整する機構を用いることが出来る。
【００２０】
本発明において遺伝子発現により補償される環境条件としては特段の規定をするものではないが、アデニン等の核酸とその合成酵素、ヒスチジン、ウラシル、トリプトファン、ロイシン等の必須アミノ酸とその合成酵素、アンピシリン、カナマイシン等の抗生物質類とその分解酵素等が挙げられる。
【００２１】
また、遺伝子発現により酵素を産生して毒性を呈する環境条件としては特段の規定をするものではないが、産生された酵素が添加薬物を毒性物質に変化させるものが挙げられ、例えば５−フルオロオロチン酸とウラシル合成酵素、α−アミノアジピン酸とリジン合成酵素など、あらゆる組合わせを用いることが出来る。
【００２２】
用いる細胞・菌体としては形質転換体を作製することが出来ればいずれの生体種も用いることが可能であり、ヒト細胞、マウス細胞、酵母、線虫、大腸菌等が使用できるが、酵母のように形質転換体を安定して作製し培養することの出来るものが特に好適に用いられる。
【００２３】
本発明において細胞活性・増殖度の測定を行う手法としては測定が可能であればいずれの手法も適用可能である。迅速かつ高い再現性を有する手法が望ましく、例えば濁度測定、酸素消費量測定、レポータジーン産生量測定（レポータジーンアセイ）等を用いることが出来るが、これに限るものではなく、重量変化測定、総タンパク量計測、カウント法、糖度変化測定、アミノ酸濃度変化測定、アルコール濃度測定等の手法を用いることが可能である。
【００２４】
特に酸素消費量により測定を行う場合においては、該生体種を用いれば公知の溶存酸素測定法がいずれも使用でき、生物化学的酸素要求量の測定に用いられる測定法をいずれも好適に用いることが出来る。
【００２５】
また本測定はセンサーを用いて行うこともできる。すなわち測定に用いられる細胞・菌体の活性または増殖度変化の測定を行うことの出来るセンサー上に該生物種を固定化して測定を行うことにより被測定物の濃度を同定することが可能である。この場合、所望の目的を達するものであれば公知のいずれのセンサーも適用することが可能であるが、溶存酸素濃度、過酸化水素濃度、二酸化炭素濃度、糖度、アルコール濃度、アミノ酸濃度、水晶振動子等を用いた微小重量測定などを好適に用いることができる。この場合においては該センサ表面に、測定に用いる細胞または菌体を固定化した固定化膜を形成することが望ましい。
【００２６】
前記の細胞または菌体の固定化において用いられる担体としては、例えばニトロセルロース、ポリアクリロニトリル、光硬化性樹脂、ポリウレタン等を用いることができ、従来公知の技術を使用して固定化される。
【００２７】
【実施例】
以下、本発明を実施例により更に具体的に説明するが、下記の実施例は本発明についての具体的認識を得る一助とみなすべきものであり、本発明の範囲は下記の実施例により何ら制限されるものではない。
【００２８】
（実施例１）
出芽酵母サッカロミセスセレビジアの野生株に、酢酸リチウム法により下記（ａ）、（ｂ）および（ｃ）のプラスミドを導入した。具体的には、対数増殖期の酵母を遠心沈降し、上清を廃棄したのち酢酸リチウム−トリス緩衝溶液に懸濁し、変性サケ精子ＤＮＡ及び下記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）で示すＤＮＡと混合し、ポリエチレングリコールを加えて４２℃で処理した後にＤｉｆｃｏ社製Ｙｅａｓｔ  Ｎｉｔｒｏｇｅｎ  ｂａｓｅを用い必須アミノ酸類の一部及び炭素源としてグルコースを添加し作製した、ヒスチジン、ロイシンおよびトリプトファンを含まない寒天培地に塗布し、形質転換された酵母株１を得た。
【００２９】
またコントロールとして同様の手法を用いて作製された下記（ａ）、（ｂ）および（ｄ）により形質転換された酵母株２を得た。
【００３０】
（ａ）ＡｈＲ発現プラスミドの作製
ＡｈＲをコードするＤＮＡは、例えば、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｏｋ他著、モレキュラークローニング第２版等に準じて作製することが出来る。具体的には、まずヒトＨｅｐＧ２細胞を塩酸グアニジンを含む溶液中でホモジナイズし、フェノール、クロロホルムを加え遠心分離を行い上清画分を回収することでタンパク分を除去する。この後ＳＤＳ−フェノール法により全ＲＮＡを抽出する。得られた全ＲＮＡを鋳型としてオリゴｄＴプライマと逆転写酵素を用いて一本鎖ｃＤＮＡを合成する。
【００３１】
更に得られた一本鎖ｃＤＮＡを鋳型とし、次に示すオリゴヌクレオチドをプライマとしてＰＣＲを行いＡｈＲの二本鎖ＤＮＡ断片を得た。これを公知のヒスチジンマーカー、およびセントロメアを有し，出芽酵母で利用可能なプラスミドであるｐＲＳ３１３のクローニングサイトにアルコールデヒドロゲナーゼの転写活性化領域およびターミネータを通常の遺伝子工学的手法に準じてつなぎ合わせて挿入した間に更に挿入することで、酵母中でＡｈＲを発現するプラスミドを作製した。
【００３２】
（ｂ）Ａｒｎｔ発現プラスミドの作製
ＡｈＲと同様にしてＡｒｎｔの二本鎖ＤＮＡ断片を得，これを公知の、ロイシンマーカー、およびセントロメアを有し、出芽酵母で利用可能なプラスミドであるｐＲＳ３１５のクローニングサイトにアルコールデヒドロゲナーゼの転写活性化領域およびターミネータを通常の遺伝子工学的手法に準じてつなぎ合わせて挿入した間に更に挿入することで、酵母中でＡｒｎｔを発現するプラスミドを作製した。
【００３３】
（ｃ）ウラシル発現プラスミドの作製
トリプトファンマーカー及びセントロメアを有し、出芽酵母で利用可能なプラスミドであるｐＲＳ３１４のクローニングサイトに、ＡｈＲ−Ａｒｎｔ複合体の認識するヒト異物応答配列（ＸＲＥ）および酵母中で機能可能なｔｋコアプロモータ配列を、更にこの下流にウラシルマーカー及びセントロメアを有し、出芽酵母で利用可能なプラスミドであるｐＲＳ３１６より切り出されたウラシル合成酵素をコーディングする領域を、いずれも通常の遺伝子工学的手法に準じて組み込み作製した。
【００３４】
（ｄ）ウラシル発現プラスミドのコントロールの作製
トリプトファンマーカー及びセントロメアを有し、出芽酵母で利用可能なプラスミドであるｐＲＳ３１４のクローニングサイトに、ＡｈＲ−Ａｒｎｔ複合体の認識するヒト異物応答配列（ＸＲＥ）および酵母中で機能可能なｔｋコアプロモータ配列のみを組み込み作製した。
【００３５】
これらの細胞株を、マーカーであるヒスチジン，ロイシン，トリプトファンを欠損した液体培地で対数増殖期まで培養し、培地をヒスチジン、ロイシン、トリプトファン及びウラシルを欠損した液体培地に置換したのち、更に１時間培養し、これを同一の培地を用いて濁度（Ｏ．Ｄ．６００ｎｍ）を０．２に調整した後、９６穴プレートに１００マイクロリットルずつ分注し、それぞれにＡｈＲのリガンドであるベータナフトフラボンを各濃度で添加し、２０時間、３０℃に静置し培養を行った。
【００３６】
この後プレートの各ウェルの吸光度（波長６００ｎｍ）を測定し、酵母株１における濁度から酵母株２における濁度を減じたものを各ベータナフトフラボンに対する応答として記録した。この結果、図１に示すようにリガンド濃度に応じた濁度変化を観察することが出来た。
図１において、横軸はモル濃度で表した基質濃度（ベータナフトフラボン濃度）の対数であり、縦軸は吸光度（相対値）である。
【００３７】
（実施例２）
実施例１で作製した酵母株１及び酵母株２を用いて、以下の測定を行った。
細胞株を、マーカーを欠損した液体培地で対数増殖期まで培養し、培地をヒスチジン、ロイシン、トリプトファンを欠損し、さらに５−フルオロオロチン酸を１ｍｇ／Ｌ含有した液体培地に置換したのち、更に１時間培養し、これを同一の培地を用いて濁度（Ｏ．Ｄ．６００ｎｍ）を０．２に調整した後、９６穴プレートに１００マイクロリットルずつ分注し、それぞれにＡｈＲのリガンドであるベータナフトフラボンを各濃度で添加し、２０時間、３０℃に静置し培養を行った。
【００３８】
この後プレートの各ウェルの吸光度（波長６００ｎｍ）を測定し、酵母株１における濁度から酵母株２における濁度を減じたものを各ベータナフトフラボンに対する応答として記録した。この結果、図２に示すように、リガンド濃度に応じた濁度変化を観察することが出来た。
図２において、横軸はモル濃度で表した基質濃度（ベータナフトフラボン濃度）の対数であり、縦軸は吸光度（相対値）である。
【００３９】
（実施例３）
本実施例では、増殖度変化の計測を行うセンサー上に酵母を固定化し、このセンサーの出力変化によりベータナフトフラボンの溶液中における濃度を測定した例を示す。
図３は本実施例に用いられる測定装置である。この測定装置は市販のＣｌａｒｋ型酸素電極と、該酸素電極の陰極側に配置された酵母固定化膜との組合わせにより構成されている。図３において、符号１はセンサーで、これは上記酸素電極２と上記酵母固定膜３とからなる。符号４は試料溶液、符号５は攪拌子、符号６は測定器である。
【００４０】
酵母固定膜は以下のように作製した。細胞株１を、マーカーを欠損した液体培地で対数増殖期まで培養し、培地をヒスチジン、ロイシン、トリプトファン及びウラシルを欠損した液体培地に置換したのち、更に１時間培養し、これを遠心し、沈殿およそ５０マイクロリットルをポアサイズ０．４マイクロメートルのニトロセルロース膜に滴下し吸引ろ過を行い、同じニトロセルロール膜で挟み固定した。
【００４１】
こののち酸素電極に電解液を注入し、酸素電極を電源に接続する。次いで測定部側に溶液（試料溶液）を注入した。注入する溶液は、ｐＨ７．５に調整し、滅菌を行った０．５Ｍ  Ｔｒｉｓ緩衝液とヒスチジン、ロイシン、トリプトファン及びウラシルを欠損した液体培地を１：９の割合で混合したものである。
【００４２】
記録装置の電流値が安定化した後、測定部側溶液にジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解したベータナフトフラボンを各濃度でＤＭＳＯの最終濃度が０．１％となるように添加し、６時間後の測定値の変化を記録した。これをＤＭＳＯのみを添加した場合と比較したところ、図４に示すように濃度に応じた応答値変化を観察することが出来た。
【００４３】
【発明の効果】
以上詳述したように、本発明によれば、酵母等の生体種を用いて選択性の高い測定を、特段の実験設備を必要としないで行うことができる、生体種を用いた溶液濃度の測定方法及びその装置を提供するものであり、特に、多くの測定対象物を同一のシステムにおいて、比較的簡易な装置と操作による測定を可能とするものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の実施例１で得られた、試料液のベータナフトフラボン濃度（基質濃度）と濁度変化（吸光度変化）との関係を示すグラフである。
【図２】本発明の実施例２で得られた、試料液のベータナフトフラボン濃度（基質濃度）と濁度変化（吸光度変化）との関係を示すグラフである。
【図３】本発明の実施例３で使用した測定装置の説明図である。
【図４】本発明の実施例３で得られた、試料液のベータナフトフラボン濃度（基質濃度）と電流変化量との関係を示すグラフである。
【符号の説明】
１…センサー、２…酸素電極、３…酵母固定膜、４…試料溶液、５…攪拌子、６…測定器。
【図１】
2004357544.tif 000003
【図２】
2004357544.tif 000004
【図３】
2004357544.tif 000005
【図４】
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