(57)【要約】【課題】植物の形態変化の制御に関与し、特に、ＴＦＬ１タンパク質に結合する機能を有するタンパク質と、これをコードする遺伝子と、これらの利用方法を提供する。【解決手段】本発明にかかるタンパク質およびその遺伝子は、シロイヌナズナ由来のＴＦＬ１タンパク質に特異的に結合し、その構造中にＰＡＺドメインおよびＰｉｗｉドメインを含むタンパク質である。具体的には、ＡＧＯ４タンパク質に代表されるＡＧＯファミリータンパク質を挙げることができる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シロイヌナズナ由来のＴＦＬ１タンパク質に特異的に結合し、その構造中にＰＡＺドメインおよびＰｉｗｉドメインを含むタンパク質。
【請求項２】
請求項１に記載のタンパク質であって、被子植物由来であり、以下の（ａ）または（ｂ）記載のタンパク質。
（ａ）配列番号２、４、６または８に示される何れかのアミノ酸配列からなるタンパク質。
（ｂ）配列番号２、４、６または８に示される何れかのアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、ＴＦＬ１タンパク質に結合するタンパク質。
【請求項３】
被子植物の花序形成期に発現する請求項１または２に記載のタンパク質。
【請求項４】
シロイヌナズナ由来のＴＦＬ１タンパク質に特異的に結合するタンパク質をコードする遺伝子であって、以下の（ａ）または（ｂ）記載のタンパク質をコードする遺伝子。
（ａ）配列番号２、４、６または８に示される何れかのアミノ酸配列からなるタンパク質。
（ｂ）配列番号２、４、６または８に示される何れかのアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、ＴＦＬ１タンパク質に結合するタンパク質。
【請求項５】
被子植物由来である請求項４に記載の遺伝子。
【請求項６】
配列番号１、３、５または７に示される何れかの塩基配列をオープンリーディングフレーム領域として有する請求項４または５に記載の遺伝子。
【請求項７】
請求項４、５または６に記載の遺伝子を含む組換え発現ベクター。
【請求項８】
請求項４、５または６に記載の遺伝子が導入された形質転換体。
【請求項９】
請求項４、５または６に記載の遺伝子における少なくとも一部の塩基配列またはその相補配列をプローブとして用いた遺伝子検出器具。
【請求項１０】
請求項１、２または３に記載のタンパク質に対する抗体。
【請求項１１】
請求項１、２または３に記載のタンパク質を用いることを特徴とする、ＴＦＬ１ファミリータンパク質のスクリーニング方法。
【請求項１２】
請求項１、２または３に記載のタンパク質、あるいは請求項４、５または６に記載の遺伝子を含む、花序形成を制御する薬剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、植物の形態変化の制御に関与し、特に、ＴＦＬ１タンパク質に結合する機能を有するタンパク質と、これをコードする遺伝子と、これらの利用方法とに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
ＴＦＬ１遺伝子は、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）の花成早化変異であるｔｆｌ１変異から見出され、花成抑制遺伝子の一つであると考えられている（例えば、非特許文献１参照）。ＴＦＬ１遺伝子は、花序分裂組織を維持し、無限花序という花序形態の獲得に関与する遺伝子であると見られてきた（例えば、非特許文献２参照）が、最近では、花成の抑制と花序分裂組織の維持とを統一的に捉える観点から、ＴＦＬ１遺伝子が成長相の制御全般に関与するという見方が提唱されている（例えば、非特許文献３参照）。
【０００３】
また、ＴＦＬ１遺伝子と高い相同性を有する遺伝子として、ＦＴ遺伝子が知られている（例えば、非特許文献４・５参照）。このＦＴ遺伝子は、花成を抑制するＴＦＬ１遺伝子とは反対に、花成を促進する機能を有しており、ＴＦＬ１遺伝子とＦＴ遺伝子とは、花成の制御において拮抗的に作用している可能性が示唆されている。
【０００４】
上記ＴＦＬ１遺伝子にコードされるＴＦＬ１タンパク質と相同性を有するタンパク質は、上記ＦＴ遺伝子にコードされるＦＴタンパク質以外にも、各種の植物から多数見出されている。例えば、イネ（Ｏｒｙｚａ  ｓａｔｉｖａ）由来のＨｄ３ａ遺伝子にコードされるＨｄ３ａタンパク質はＦＴタンパク質と類似しており、ＦＴと同様に花成促進に機能する。他にも、図５に示すように、多くの植物においてＴＦＬ１タンパク質に類似するタンパク質が見出されている。本発明では、このようなＴＦＬ１タンパク質に類似するタンパク質をＴＦＬ１ファミリータンパク質と称し、同様に、ＴＦＬ１ファミリータンパク質をコードする遺伝子をＴＦＬ１ファミリー遺伝子と称する。
【０００５】
さらには、図５に示すように、哺乳動物から同定されたホスファチジルエタノールアミン結合タンパク質（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ，  ＰＥＰＢ）もＴＦＬ１タンパク質と相同性を有している。ＰＥＰＢの生化学的な機能は不明であるが、ヒトやラットにおいては、神経ペプチドの前駆体であることが報告されている（非特許文献６参照）。したがって、ＴＦＬ１ファミリータンパク質は、ペプチド性のシグナル分子の前駆体としても機能する可能性がある。
【０００６】
つまり、ＴＦＬ１ファミリータンパク質は、植物・動物を問わず、幅広い種で保存されていることが示唆される。特に、植物の場合には、花成制御を含む植物の形態変化の制御において中心的な役割を果たしていることから、ＴＦＬ１ファミリータンパク質は、植物だけでなく動物においても生理学的にも重要な機能を有していることが示唆される。
【０００７】
【非特許文献１】
Ｌｅｖｙ，  Ｙ．Ｙ．  ＆  Ｄｅａｎ，  Ｃ．：Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  １０，  １９７３−１９８９  （１９９８）
【０００８】
【非特許文献２】
Ｓｈａｎｎｏｎ，  Ｓ．，  ＆  Ｍｅｅｋｓ−Ｗａｇｎｅｒ，  Ｄ．Ｒ．：Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  ３，  ８７７−８９２  （１９９１）
【０００９】
【非特許文献３】
Ｒａｔｃｌｉｆｆｅ，  Ｏ．Ｊ．，  Ａｍａｙａ，  Ｉ．，  Ｖｉｎｃｅｎｔ，  Ｃ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．：Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １２５，  １６０９−１６１５  （１９９８）
【００１０】
【非特許文献４】
Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，  Ｙ．，  Ｋａｙａ，  Ｈ．，  Ｇｏｔｏ，  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．：Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８６，  １９６０−１９６２  （１９９９）
【００１１】
【非特許文献５】
Ｋａｒｄａｉｌｓｋｙ，  Ｉ．，  Ｓｈｕｋｌａ，  Ｖ．，  Ａｈｎ，  Ｊ．−Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．：Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８６，  １９６２−１９６５  （１９９９）
【００１２】
【非特許文献６】
Ｔｏｈｄｏｈ，  Ｎ．，  Ｔｏｊｏ，  Ｓ．，  Ａｇｕｉ，  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．：Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．  Ｍｏｌ．  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．  ３０，  ３８１−３８４  （１９９５）
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、ＴＦＬ１遺伝子・タンパク質の役割については未だ不明な点が多く、ＴＦＬ１遺伝子・タンパク質が関与する花成制御機構や、植物の形態変化制御の機構についても未知の部分が多い。
【００１４】
花序制御機構では、複数の遺伝子が関与して制御カスケードが形成されていると考えられ、その中でも、ＴＦＬ１ファミリー遺伝子が重要な役割を果たしていると考えられる。このような制御カスケードでは、制御の進行には、タンパク質同士の相互作用も含まれると推測される。ところが、ＴＦＬ１タンパク質と直接相互作用するようなタンパク質については従来からほとんど知られていない。
【００１５】
したがって、例えば、ＴＦＬ１タンパク質と特異的に結合するタンパク質を見出せば、花成制御機構の解明に役立てることが可能であるだけでなく、このようなタンパク質は、花序形成等といった植物の形態変化を制御するための薬剤等として応用可能であると考えられる。しかも、ＴＦＬ１ファミリータンパク質は、ＰＥＰＢと相同性を有していることから、ＴＦＬ１タンパク質と特異的に結合するタンパク質を見出せば、植物だけでなく動物からも類似タンパク質を探索することに応用できる可能性が見出される。このような類似タンパク質は、動物の神経系の研究に応用できる可能性があるだけでなく、神経系の疾患の治療薬剤等としての応用も期待できる。
【００１６】
本発明は、上記課題に鑑みなされたものであって、その目的は、花序形成機構の解明だけでなく、花序形成機構を制御するための薬剤や動物への応用の可能性も期待されるＴＦＬ１タンパク質と相互作用するタンパク質と、これをコードする遺伝子とを見出すとともに、産業に利用可能な上記タンパク質・遺伝子の利用方法を提供することにある。
【００１７】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記の課題に鑑み鋭意検討した結果、ＴＦＬ１タンパク質をカラムに固定し、花序形成期の植物から調製される粗タンパク質の抽出液を通すという生化学的な手法によって、ＴＦＬ１タンパク質に結合するタンパク質が得られることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１８】
すなわち、本発明にかかるタンパク質は、シロイヌナズナ由来のＴＦＬ１タンパク質に特異的に結合し、その構造中にＰＡＺドメインおよびＰｉｗｉドメインを含むタンパク質であり、具体的には、上記のタンパク質であって、被子植物由来であり、以下の（ａ）または（ｂ）記載のタンパク質を挙げることができる。（ａ）配列番号２、４、６または８に示される何れかのアミノ酸配列からなるタンパク質。
（ｂ）配列番号２、４、６または８に示される何れかのアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、ＴＦＬ１タンパク質に結合するタンパク質。
【００１９】
また、本発明にかかる上記タンパク質は、被子植物の花序形成期に発現するものであることが好ましく、具体的には、後述する実施例に示すように、例えばＡＧＯ４タンパク質を挙げることができる。
【００２０】
また、本発明にかかる遺伝子は、シロイヌナズナ由来のＴＦＬ１タンパク質に特異的に結合するタンパク質をコードする遺伝子であって、上記の（ａ）または（ｂ）記載のタンパク質をコードする遺伝子であり、花序形成の解明等に利用する場合には、被子植物由来であることが好ましい。より具体的には、例えば、配列番号１、３、５または７に示される何れかの塩基配列をオープンリーディングフレーム領域として有する遺伝子を挙げることができる。
【００２１】
また、本発明には上記遺伝子・タンパク質の利用方法が含まれ、具体的には、例えば、上記遺伝子を含む組換え発現ベクター、上記遺伝子が導入された形質転換体、上記遺伝子における少なくとも一部の塩基配列またはその相補配列をプローブとして用いた遺伝子検出器具、あるいは上記タンパク質に対する抗体、上記タンパク質を用いるＴＦＬ１ファミリータンパク質のスクリーニング方法、上記タンパク質あるいは上記遺伝子を含む、花序形成を制御する薬剤が挙げられる。
【００２２】
上記構成または方法によれば、本発明にかかるタンパク質はＴＦＬ１タンパク質に特異的に結合するタンパク質として初めて見出されたものであり、このタンパク質およびこれをコードする遺伝子は、ＴＦＬ１遺伝子・タンパク質を含む花序形成機構の解明や、花序形成機構を制御するための薬剤や動物への応用の可能性が期待される。
【００２３】
【発明の実施の形態】
本発明の実施の一形態について説明すれば、以下の通りである。なお、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２４】
本発明は、シロイヌナズナ由来のＴＦＬ１タンパク質に特異的に結合するタンパク質とこれをコードする遺伝子とを見出すとともに、これら遺伝子およびタンパク質の機能を解析し、これらの利用方法を提案するものである。
【００２５】
（１）本発明のタンパク質、およびその遺伝子の構造
本発明者は、植物の花序形成の鍵となるＴＦＬ１遺伝子・タンパク質において、当該ＴＦＬ１遺伝子・タンパク質が関与する情報伝達機構を明らかにする目的で調査検討を進めた結果、ＴＦＬ１タンパク質に特異的に結合し、その構造中にＰＡＺドメインおよびＰｉｗｉドメインを含むタンパク質を同定した。
【００２６】
具体的には、本発明にかかるタンパク質の非常に好ましい一例としては、被子植物由来であり、以下の（ａ）または（ｂ）記載のタンパク質を挙げることができる。
（ａ）配列番号２、４、６または８に示される何れかのアミノ酸配列からなるタンパク質。
（ｂ）配列番号２、４、６または８に示される何れかのアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、ＴＦＬ１タンパク質に結合するタンパク質。
【００２７】
配列番号２、４、６または８のアミノ酸配列を有するタンパク質は、それぞれ、ＡＧＯ４タンパク質、ＡＧＯ９タンパク質、ＡＧＯ８タンパク質、またはＡＧＯ６タンパク質である。本発明では、これら４種類のタンパク質を総称してＡＧＯファミリータンパク質と称し、これらＡＧＯファミリータンパク質をコードする遺伝子をＡＧＯファミリー遺伝子と称する。
【００２８】
ＡＧＯファミリータンパク質は、その構造中に、ＰＡＺドメインおよびＰｉｗｉドメインを含む。上記ＰＡＺドメインは、ショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）のＰｉｗｉタンパク質、Ａｒｇｏｎａｕｔｅタンパク質、Ｚｗｉｌｌｅタンパク質に共通して含まれる約１１０アミノ酸からなるドメインであり、Ｄｉｃｅｒファミリータンパク質にも見られる。このＰＡＺドメインは、Ｐｉｗｉタンパク質、Ｄｉｃｅｒファミリータンパク質とヘテロ二量体に必要とされる可能性も示唆されている。また、Ｐｉｗｉドメインは、当初、ショウジョウバエのＰｉｗｉタンパク質およびＳｔｉｎｇタンパク質における４０から８０アミノ酸前後のボックスとして見出されたが、現在３００アミノ酸をカバーするドメインとして定義されている。
【００２９】
上記Ｐｉｗｉタンパク質およびこれをコードするＰｉｗｉ遺伝子はショウジョウバエの生殖細胞の維持に関与することが知られており、近年、植物から見出されたそのホモログが植物の茎頂分裂組織の形成維持に関与することが見出された。また、Ａｒｇｏｎａｕｔｅ，ＺｗｉｌｌｅおよびＤｉｃｅｒ遺伝子は、何れも、ショウジョウバエ等において、ＲＮＡｉ（ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ）機構の一部をコードする遺伝子であることが知られている。ＲＮＡｉは、真核生物に２本鎖ＲＮＡを投与したときに、相同な配列を有するｍＲＮＡの分解が生じる現象で、線虫（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ）の研究では、生殖系列の細胞にのみＲＮＡｉ活性の欠損が見られることが知られている。また、植物では、人為的に遺伝子を導入した場合に期待される発現が生じず、逆に相同な内在遺伝子も含めて発現量が低下するジーンサイレンシングという現象が知られている。このジーンサイレンシングのうち、ＰＴＧＳ（ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｇｅｎｅ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ）は、ＲＮＡｉと類似する機構であると考えられている。
【００３０】
このようにＡＧＯファミリータンパク質は、ＰＡＺドメインおよびＰｉｗｉドメインを有しており、植物では、動物における生殖に対応するような茎頂分裂組織の維持に関与することが知られており、さらに、ＲＮＡｉにも関与することが知られているが、ＴＦＬ１タンパク質に結合して相互作用することについては全く知られていなかった。
【００３１】
シロイヌナズナでは、ゲノム解析の結果から、ＡＧＯファミリー遺伝子・タンパク質として１０コピーの存在が確認されている。具体的には、図１に示すように、ＡＧＯファミリー遺伝子・タンパク質としては、上述したＡＧＯ４，ＡＧＯ６，ＡＧＯ８およびＡＧＯ９の４種類に加えて、さらに、ＡＧＯ１，ＰＮＨ（ＰＩＮＨＥＡＤ／ＺＷＩＬＬＷ），ＡＧＯ５，ＡＧＯ２，ＡＧＯ３およびＡＧＯ７の６種類が知られている。これら遺伝子・タンパク質は、その相同性から、ＡＧＯ１，ＰＮＨ，ＡＧＯ５，ＡＧＯ２，ＡＧＯ３およびＡＧＯ７からなるグループ１と、ＡＧＯ９，ＡＧＯ４，ＡＧＯ８およびＡＧＯ６からなるグループ２とに分けられる。
【００３２】
しかしながら、これらのうち、現在までに解析されているのは、グループ１に属するＡＧＯ１遺伝子・タンパク質およびＰＮＨ遺伝子・タンパク質の２種類のみである。しかも、これらＡＧＯファミリー遺伝子・タンパク質については、ＴＦＬ１遺伝子・タンパク質と相互作用することについては知られていなかった。
【００３３】
本発明者は、実施例にて述べるような生化学的な手法により、ＴＦＬ１タンパク質と結合するタンパク質を探索したところ、ＡＧＯファミリータンパク質のうち、少なくとも上記グループ２に属するタンパク質の一つが、ＴＦＬ１タンパク質と顕著に結合することを独自に見出し、新規な機能を有するタンパク質を同定することに成功して、本発明を完成させるに至った。
【００３４】
本発明にかかるタンパク質は、少なくとも、上記グループ２に属するＡＧＯファミリータンパク質であればよいが、本発明はこれに限定されるものではなく、ＰＡＺドメインおよびＰｉｗｉドメインを有し、ＴＦＬ１タンパク質に特異的に結合するタンパク質であればよい。したがって、グループ１に属するＡＧＯファミリータンパク質であってもよいし、ＡＧＯファミリー以外のタンパク質であってもよい。
【００３５】
なお、上記グループ１のタンパク質のうち、ＡＧＯ１タンパク質のアミノ酸配列を配列番号１０に示し、ＰＮＨタンパク質のアミノ酸配列を配列番号１２に示し、ＡＧＯ５タンパク質のアミノ酸配列を配列番号１４に示し、ＡＧＯ２タンパク質のアミノ酸配列を配列番号１６に示し、ＡＧＯ３タンパク質のアミノ酸配列を配列番号１８に示し、ＡＧＯ７タンパク質のアミノ酸配列を配列番号２０に示す。
【００３６】
さらに、本発明にかかるタンパク質としては、上記グループ２の４種類の分子か、さらに上記グループ１の６種類も含めた１０種類の分子の一部が改変された変異タンパク質であってもよい。すなわち、本発明にかかるタンパク質は、上記（ａ）のタンパク質のみならず、（ｂ）のタンパク質も含まれる。
【００３７】
ここで、（ｂ）のタンパク質において、上記「１個または数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／または付加された」とは、部位特異的突然変異誘発法等の公知の変異タンパク質作製法により置換、欠失、挿入、および／または付加できる程度の数（好ましくは１０個以下、より好ましくは７個以下、さらに好ましくは５個以下）のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／または付加されることを意味する。このように、上記（ｂ）のタンパク質は、上記（ａ）のタンパク質の変異タンパク質であり、ここにいう「変異」は、主として公知の変異タンパク質作製法により人為的に導入された変異を意味するが、天然に存在する同様の変異タンパク質を単離精製したものであってもよい。
【００３８】
また、本発明にかかるタンパク質は、付加的なポリペプチドを含むものであってもよい。このようなポリペプチドが付加される場合としては、例えば、Ｈｉｓ  やＭｙｃ  、Ｆｌａｇ等によって本発明のタンパク質がエピトープ標識されるような場合が挙げられる。
【００３９】
本発明にかかる遺伝子は、シロイヌナズナ由来のＴＦＬ１タンパク質に特異的に結合するタンパク質をコードする遺伝子であって、上記（ａ）または（ｂ）記載のタンパク質をコードする遺伝子であればよい。
【００４０】
より具体的には、配列番号１、３、５または７に示される何れかの塩基配列をオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）領域として有する遺伝子を挙げることができる。配列番号１に示される塩基配列をＯＲＦ領域として有する遺伝子がＡＧＯ４遺伝子であり、配列番号３に示される塩基配列をＯＲＦ領域として有する遺伝子がＡＧＯ９遺伝子であり、配列番号５に示される塩基配列をＯＲＦ領域として有する遺伝子がＡＧＯ８遺伝子であり、配列番号７に示される塩基配列をＯＲＦ領域として有する遺伝子がＡＧＯ６遺伝子である。すなわち、これら遺伝子は、上記グループ２のタンパク質をコードする４種類の遺伝子である。
【００４１】
また、上記グループ１のタンパク質をコードする６種類の遺伝子も本発明にかかる遺伝子に含まれる。具体的には、配列番号９、１１、１３、１５、１７または１９に示される何れかの塩基配列をＯＲＦ領域として有する遺伝子である。なお、配列番号９に示される遺伝子がＡＧＯ１遺伝子であり、配列番号１１に示される遺伝子がＰＮＨ遺伝子であり、配列番号１３に示される遺伝子がＡＧＯ５遺伝子であり、配列番号１５に示される遺伝子がＡＧＯ２遺伝子であり、配列番号１７に示される遺伝子がＡＧＯ３遺伝子であり、配列番号１９に示される遺伝子がＡＧＯ７遺伝子である。
【００４２】
さらに、本発明にかかる遺伝子は、上記配列番号１、３、５または７に示される何れかの塩基配列、さらには配列番号９、１１、１３、１５、１７または１９に示される何れかの塩基配列をＯＲＦ領域として有する遺伝子の塩基配列の一部を改変した改変遺伝子も含まれる。また、本発明における「遺伝子」には、ＤＮＡおよびＲＮＡが含まれる。ＤＮＡには、例えばクローニングや化学合成技術またはそれらの組み合わせで得られるようなｃＤＮＡやゲノムＤＮＡなどが含まれる。ＤＮＡは二本鎖でも一本鎖でもよく、一本鎖ＤＮＡは、センス鎖となるコードＤＮＡであっても、アンチセンス鎖となるアンチコード鎖であってもよい（アンチセンス鎖は、プローブとしてまたはアンチセンス薬物として利用できる）。
【００４３】
さらに、本発明における「遺伝子」は、上記（ａ）または（ｂ）のタンパク質をコードする配列以外に、非翻訳領域（ＵＴＲ）の配列やベクター配列（発現ベクター配列を含む）などの配列が含まれていてもよい。
【００４４】
（２）本発明のタンパク質、およびその遺伝子の利用方法（有用性）
前述したように、ＴＦＬ１ファミリー遺伝子・タンパク質は、植物の花序制御を含む植物の形態変化において中心的な役割を果たしていることから、本発明にかかる遺伝子・タンパク質は、まず、植物の形態変化の解明や制御に利用することが可能である。したがって、本発明には、上述した本発明にかかるタンパク質または遺伝子を含む、花序形成を制御する薬剤も含まれる。
【００４５】
それゆえ、本発明にかかる遺伝子・タンパク質の由来となる生物は特に限定されるものではないが、花序形成機構の解明や、花序形成機構を制御するための薬剤を開発するために利用する場合には、花をつける種子植物由来であることが好ましく、中でも被子植物由来であることがより好ましい。
【００４６】
また、ＴＦＬ１遺伝子が欠損したｔｆｌ１突然変異体のシロイヌナズナでは、茎頂の先端に花をつけて生育を停止する。このことからＴＦＬ１遺伝子は花序分裂組織の維持に働いていると推測される。つまり、ＴＦＬ１遺伝子は花序形成期に多く発現していると考えられるので、ＴＦＬ１タンパク質と相互作用する本発明にかかるタンパク質も花序形成期に発現しているものが含まれる。したがって、本発明にかかるタンパク質は、被子植物の花序形成期に発現するものであることが好ましい。
【００４７】
上記被子植物としては特に限定されるものではなく、ＴＦＬ１遺伝子・タンパク質と同様に、シロイヌナズナであってもよいし、他の植物であってもよい。後述する実施例では、比較的大きなスケールにてＴＦＬ１タンパク質と結合するタンパク質を探索しているため、花序形成期の細胞を多く含む植物としてカリフラワーを用いている。
【００４８】
また、ＴＦＬ１ファミリータンパク質は、植物・動物を問わず、幅広い種で保存されていることが示唆されているため、本発明にかかる遺伝子・タンパク質は、植物だけでなく動物においても、生理学的な機能の解明等に利用することが可能である。それゆえ、本発明にかかる遺伝子・タンパク質の動物におけるホモログは、モデル動物を用いた生理学的な機能の解明等の実験等に有用であり、このような動物ホモログも本発明に含まれる。
【００４９】
さらに、本発明にかかるタンパク質は、ＴＦＬ１タンパク質のホモログ（ＴＦＬ１ファミリータンパク質）のスクリーニングに有用である。すなわち、本発明にかかるタンパク質は、ＴＦＬ１タンパク質に特異的に結合するため、本発明にかかるタンパク質を用いることで、種々の生物からＴＦＬ１タンパク質のホモログをスクリーニングすることが可能となる。
【００５０】
本発明におけるスクリーニング方法の一例としては、例えば、後述する実施例に示すカラムを用いた手法を応用する例が挙げられる。具体的には、後述する実施例では、ＴＦＬ１タンパク質を担体に結合させて固定相を作製したが、これとは逆に、本発明にかかるタンパク質を担体に結合させてなる固定相を充填したカラムを用いればよい。そして、ＴＦＬ１ファミリータンパク質を含む混合物を溶媒に溶解してなるタンパク質含有液を調製し、上記タンパク質含有液を上記カラムに流通させる。これによって、ＴＦＬ１ファミリータンパク質をスクリーニングすることが可能になる。
【００５１】
このとき、本発明にかかるタンパク質を固定する担体としては特に限定されるものではなく、本発明にかかるタンパク質を担体に固定する方法も特に限定されるものではない。具体的には、後述する実施例と同様に、グルタチオンを結合させた樹脂を担体として用い、本発明にかかるタンパク質をグルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）に融合させた融合タンパク質を上記担体に結合させればよい。これによって、過剰のグルタチオンを加えることで、ＧＳＴとの融合タンパク質を容易に解離させることができる。また、ＧＳＴと本発明にかかるタンパク質との融合部位には、プロテアーゼの血液凝固因子（Ｘａ）またはトロンビンの認識部位等を組み込むことで、得られたＴＦＬ１ファミリータンパク質のみを容易に切り出して精製すこともできる。
【００５２】
上記ＴＦＬ１ファミリータンパク質を含むタンパク質含有液を調製する方法は特に限定されるものではなく、ＴＦＬ１ファミリータンパク質を含むと考えられる生物から粗タンパク質の抽出液を調製して用いればよい。具体的には、例えば、ＴＦＬ１ファミリータンパク質を探索したい生物の細胞を公知の方法で破砕する等して、細胞内のタンパク質を含む抽出液を調製すればよい。また、このとき用いられる溶媒も特に限定されるものではなく、タンパク質の抽出や精製に有用な公知の溶媒を用いればよい。
【００５３】
上記カラムを用いた方法は、スケールが大きいため、タンパク質含有液を大量に調製し易い場合に特に有用であり、目的のＴＦＬ１ファミリータンパク質を大量に取得することが可能である。もちろん、本発明にかかるスクリーニング方法はこれに限定されるものではなく、公知のより小さいスケールの方法で実施することも可能である。
【００５４】
さらに、本発明にかかる遺伝子・タンパク質は、ＴＦＬ１遺伝子・タンパク質が関与する植物の形態形成を制御する薬剤の候補分子のスクリーニングに有用である。具体的には、ＴＦＬ１タンパク質と本発明にかかるタンパク質との間の作用を調節する物質のスクリーニング方法等に利用可能である。ここで、ＴＦＬ１タンパク質と本発明にかかるタンパク質との間の作用を調節する物質とは、例えば、ＴＦＬ１タンパク質と本発明にかかるタンパク質との結合を阻害することで、花序形成を制御する物質が挙げられる。
【００５５】
本発明にかかるスクリーニング方法としては、物質間の結合の有無や解離の有無を調べる従来公知の種々の方法を適用することができ、特に限定されるものではない。例えば、試験管内反応系（ｃｅｌｌ−ｆｒｅｅ  ｓｙｓｔｅｍ）において、本発明にかかるタンパク質またはその改変体とＴＦＬ１タンパク質またはＴＦＬ１ファミリータンパク質あるいはこれらの改変体とを発現させ、両分子の結合を阻害する分子等を候補分子の中からＥＬＩＳＡ法等によって検出するスクリーニング方法などが挙げられる。
【００５６】
上記「（タンパク質の）改変体」とは、当該タンパク質の１個または数個（好ましくは７個以下、より好ましくは５個以下、さらに好ましくは３個以下）のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／または付加された改変体をいい、当該タンパク質がＨｉｓ  やＭｙｃ  等のタグによって標識される場合や、当該タンパク質を蛍光タンパク質（ＧＦＰ・ルシフェラーゼ等）または他のタンパク質と融合させる場合、当該タンパク質にリン酸化や糖鎖結合等により修飾を施す場合などをも含む意味で用いている。
【００５７】
もちろん、本発明のスクリーニング方法は、上記の方法に限定されるものではなく、ｃｅｌｌ−ｆｒｅｅ  ｓｙｓｔｅｍでのスクリーニングではなく、培養細胞等を用いて細胞内でスクリーニングを行ってもよい。その他、上述したカラムを用いた方法や、免疫沈降−免疫ブロット法を用いて上記各タンパク質の結合を阻害する物質を検索する方法など、物質間の結合の有無や解離の有無を調べる従来公知の種々の方法を本発明のスクリーニング方法に適用可能である。
【００５８】
（３）本発明の組換え発現ベクター等
本発明にかかる組換え発現ベクターは、前記（ａ）または（ｂ）のタンパク質をコードする本発明の遺伝子を含むものであり、例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７または１９に示される何れかの塩基配列を有するｃＤＮＡが挿入された組換え発現ベクターが挙げられる。組換え発現ベクターの作製には、プラスミド、ファージ、またはコスミドなどを用いることができるが特に限定されるものではない。
【００５９】
本発明にかかる形質転換体は、前記（ａ）または（ｂ）のタンパク質をコードする本発明にかかる遺伝子が導入された形質転換体である。ここで、「遺伝子が導入された」とは、公知の遺伝子工学的手法（遺伝子操作技術）により、対象となるホスト（宿主細胞・ホスト細胞）内に発現可能に導入されることを意味する。また、上記「形質転換体」に用いられるホストとしては各種植物の細胞、さらにはカルスや植物個体を好ましく用いることができる。さらに、上記ホストとしては、動物の細胞や組織や器官を用いてもよいし、動物個体の個体を用いてもよい。
【００６０】
ホストとして植物を用いる場合、対象となる具体的な種は特に限定されるものではないが、例えば、トウモロコシ、トマト、コムギ、イネ、エンドウ、タバコ、ペチュニア、アサガオ、キンギョソウ、シロイヌナズナ等、実験植物として一般的に用いられている各種植物を挙げることができるが、中でもシロイヌナズナをより好ましく用いることができる。シロイヌナズナは小型の実験植物として有用で全ゲノム配列が解析されているだけでなく、ＴＦＬ１遺伝子・タンパク質の由来でもあるため好ましい。したがって、シロイヌナズナのノックアウト変異体等は、本発明にかかる遺伝子・タンパク質やそのホモログのさらなる機能解析、これらのタンパク質が関与する植物の形態形成を制御する方法や薬剤の開発等に有用である。
【００６１】
本発明にかかる遺伝子をホストに導入する形質転換方法は特に限定されるものではなく、プロトプラスト／スフェロプラスト法、電気穿孔法、リン酸カルシウム法、リボソーム、ＤＥＡＥデキストラン法等の従来公知の方法を好適に用いることができる。
【００６２】
本発明にかかる遺伝子がホスト細胞に導入されたか否か、さらにはホスト細胞中で確実に発現しているか否かを確認するために、各種マーカーを用いてもよい。例えば、ホスト細胞中で欠失している遺伝子をマーカーとして用い、このマーカーと本発明の遺伝子とを含むプラスミド等を発現ベクターとしてホスト細胞に導入する。これによってマーカー遺伝子の発現から本発明の遺伝子の導入を確認することができる。あるいは、本発明にかかるタンパク質を融合タンパク質として発現させてもよく、例えば、オワンクラゲ由来の緑色蛍光タンパク質ＧＦＰ（Ｇｒｅｅｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）をマーカーとして用い、本発明にかかるタンパク質をＧＦＰ融合タンパク質として発現させてもよい。
【００６３】
本発明にかかる遺伝子検出器具は、本発明にかかる上記遺伝子における少なくとも一部の塩基配列またはその相補配列をプローブとして用いている。遺伝子検出器具は、種々の条件下での本発明にかかる遺伝子の発現パターンの検出・測定などに利用できる。本発明にかかる遺伝子検出器具としては、例えば、本発明にかかる遺伝子と特異的にハイブリダイズする上記プローブを基盤（担体）上に固定化したＤＮＡチップ等が挙げられる。
【００６４】
ここで上記「ＤＮＡチップ」とは、主として、合成したオリゴヌクレオチドをプローブに用いる合成型ＤＮＡチップを意味するが、ＰＣＲ産物などのｃＤＮＡをプローブに用いる貼り付け型ＤＮＡマイクロアレイをも包含するものとする。
【００６５】
プローブとして用いる配列は、ｃＤＮＡ配列の中から特徴的な配列を特定する従来公知の方法によって決定することができ、例えば、ＳＡＧＥ：Ｓｅｒｉａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ法（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７６：１２６８，１９９７；Ｃｅｌｌ  ８８：２４３，１９９７；Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７０：４８４，１９９５；Ｎａｔｕｒｅ  ３８９：３００，１９９７；米国特許第５，６９５，９３７号）等を挙げることができる。
【００６６】
なお、ＤＮＡチップの製造には、公知の方法を採用すればよい。例えば、オリゴヌクレオチドとして合成オリゴヌクレオチドを使用する場合には、フォトリソグラフィー技術と固相法ＤＮＡ合成技術との組み合わせにより、基盤上で該オリゴヌクレオチドを合成すればよい。一方、オリゴヌクレオチドとしてｃＤＮＡを用いる場合には、アレイ機を用いて基盤上に貼り付ければよい。
【００６７】
また、一般的なＤＮＡチップと同様、パーフェクトマッチプローブ（オリゴヌクレオチド）と、該パーフェクトマッチプローブにおいて一塩基置換されたミスマッチプローブとを配置して遺伝子の検出精度をより向上させてもよい。さらに、異なる遺伝子を平行して検出するために、複数種のオリゴヌクレオチドを同一の基盤上に固定してＤＮＡチップを構成してもよい。
【００６８】
本発明にかかる抗体は、前記（ａ）または（ｂ）のタンパク質、またはその部分ペプチドを抗原として、公知の方法によりポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体として得られる抗体である。本発明の抗体は、本発明のタンパク質の検出・測定などに利用でき、その他、診断用・治療用などに利用できる可能性がある。公知の方法としては、例えば、Ｈａｒｌｏｗらの「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８））や、岩崎らの「単クローン抗体  ハイブリドーマとＥＬＩＳＡ，講談社（１９９１）」に記載の方法が挙げられる。本発明にかかる抗体は、本発明にかかるタンパク質の検出に有効である。
【００６９】
（４）本発明にかかる遺伝子、タンパク質の取得方法
本発明にかかる遺伝子を取得する方法は、特に限定されるものではなく、前述の開示された配列情報等に基づいて種々の方法により、上記各遺伝子配列を含むＤＮＡ断片を単離し、クローニングすることができる。
【００７０】
例えば、上記各ｃＤＮＡ配列の一部配列と特異的にハイブリダイズするプローブを調製し、シロイヌナズナ等各種植物のゲノムＤＮＡライブラリーやｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングすればよい。このようなプローブとしては、上記各ｃＤＮＡ配列またはその相補配列の少なくとも一部に特異的にハイブリダイズするプローブであれば、いずれの配列・長さのものを用いてもよい。また、上記スクリーニングにおける各ステップについては、通常用いられる条件の下で行えばよい。
【００７１】
上記スクリーニングによって得られたクローンは、制限酵素地図の作成およびその塩基配列決定（シークエンシング）によって、さらに詳しく解析することができる。これらの解析によって、本発明にかかる遺伝子配列を含むＤＮＡ断片を取得したか容易に確認することができる。
【００７２】
また、上記プローブの配列を、ＡＧＯファミリー遺伝子の間で良好に保存されている領域の中から選択し、各種植物や動物のゲノムＤＮＡ（またはｃＤＮＡ）ライブラリーをスクリーニングすれば、上記ＡＧＯファミリータンパク質と同様の機能を有する相同分子や類縁分子をコードする遺伝子を単離しクローニングできる可能性が高い。
【００７３】
本発明にかかる遺伝子を取得する方法は、上記スクリーニング法以外にも、ＰＣＲ等の増幅手段を用いる方法がある。例えば、上記各ｃＤＮＡ配列のうち、５’側および３’側の配列（またはその相補配列）の中からそれぞれプライマーを調製し、これらプライマーを用いて各種植物のゲノムＤＮＡ（またはｃＤＮＡ）等を鋳型にしてＰＣＲ等を行い、両プライマー間に挟まれるＤＮＡ領域を増幅することで、本発明にかかる遺伝子を含むＤＮＡ断片を大量に取得できる。
【００７４】
本発明にかかるタンパク質を取得する方法についても、特に限定されるものではないが、本発明では、実施例にて説明するような、ＴＦＬ１タンパク質を担体に結合させてなる固定相を充填したカラムを用いる方法で本発明にかかるタンパク質を取得することができる。その具体的な方法は、前記ＴＦＬ１ファミリータンパク質のスクリーニング方法で説明したように、ＴＦＬ１タンパク質を結合させてなる固定相を充填したカラムを作製し、本発明にかかるタンパク質を含む混合物を溶媒に溶解してなるタンパク質含有液を調製し、上記タンパク質含有液を上記カラムに流通させればよい。
【００７５】
上記ＴＦＬ１タンパク質を固定する担体や、この担体にＴＦＬ１タンパク質を固定する方法も特に限定されるものではなく、例えば、グルタチオンを結合させた樹脂を担体として用い、ＴＦＬ１タンパク質をＧＳＴに融合させた融合タンパク質を上記担体に結合させる方法を用いることができる。
【００７６】
上記タンパク質含有液としては、本発明にかかるタンパク質を含むと想定される生物からの粗タンパク質の抽出液を調製して用いればよい。具体的には、例えば、本発明にかかるタンパク質を探索したい生物の細胞を公知の方法で破砕する等して、細胞内のタンパク質を含む抽出液を調製すればよい。また、このとき用いられる溶媒も特に限定されるものではなく、タンパク質の抽出や精製に有用な公知の溶媒を用いればよい。
【００７７】
本発明では、動物・植物・微生物等に限らず、どのような生物からタンパク質を含む抽出液を調製してもよいが、後述の実施例では、カリフラワーの粗タンパク質の抽出液を用いている。
【００７８】
本発明にかかるタンパク質が結合する標的であるＴＦＬ１タンパク質は、特に花序形成期に発現するため、本発明にかかるタンパク質も花序形成期に発現しているものが多いと推測される。そこで、本発明者は、花序形成期にある被子植物としてカリフラワーを選択した。カリフラワーは、花になろうとする細胞が花にならずに無限増殖している部分を多く含む。そのため、花序形成期に発現するタンパク質を大量に調製することが可能であるという利点がある。また、カリフラワーは、シロイヌナズナと分類学上比較的近縁な種であるので、本発明にかかるタンパク質を最初に取得するには適切な植物となっている。
【００７９】
もちろん、本発明にかかるタンパク質を取得する方法はこれに限定されるものではなく、上記のようなカラムを用いる方法であっても、花序形成期の植物に限らず様々な生物の細胞を用いることができる。これによって、様々な生物から本発明にかかるタンパク質を取得（生産）することが可能となる。
【００８０】
また、後述の実施例では、カラムに担持する担体には、ＴＦＬ１タンパク質を結合させているが、本発明はこれに限定されるものではなく、ＴＦＬ１ファミリータンパク質を結合させた担体を用いてカラムを作製してもよい。
【００８１】
さらに、本発明では、例えば、上記各ｃＤＮＡ配列を導入した組換え発現ベクターを作製し、周知の方法により大腸菌や酵母等の微生物または動物細胞などに組み入れて形質転換体として、そのｃＤＮＡがコードするタンパク質を発現させ精製してもよい。これによっても、本発明にかかるタンパク質を容易に取得することができる。
【００８２】
なお、このように宿主に外来遺伝子を導入する場合、外来遺伝子の発現のため宿主内で機能するプロモーターを組み入れた発現ベクターおよび宿主には様々なものが存在するので、目的に応じたものを選択すればよい。産生されたタンパク質を取り出す方法は、用いた宿主、タンパク質の性質によって異なるが、タグの利用等によって比較的容易に目的のタンパク質を精製することが可能である。
【００８３】
変異タンパク質を作製する方法についても、特に限定されるものではなく、例えば、部位特異的突然変異誘発法（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ−Ｇｏｔｏｈ，  Ｇｅｎｅ  １５２，２７１−２７５  （１９９５）  他）、ＰＣＲ法を利用して塩基配列に点変異を導入し変異タンパク質を作製する方法、あるいはトランスポゾンの挿入による突然変異株作製法などの周知の変異タンパク質作製法を用いて、上記各ｃＤＮＡの塩基配列において、１またはそれ以上の塩基が置換、欠失、挿入、および／または付加されるように改変を加えることによって作製することができる。また、変異タンパク質の作製には、市販のキット（例えば、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ  Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｋｉｔ  ストラタジーン社製）を利用してもよい。
【００８４】
【実施例】
以下、本発明にかかるタンパク質の一例であるＡＧＯ４タンパク質の取得方法とその機能解析の結果について、図面を参照しながら説明する。
【００８５】
〔実施例１：粗タンパク質からの結合タンパク質の分離〕
前述したように、本実施例では、まず、カリフラワーから粗タンパク質の抽出液を調製した。
【００８６】
まず、ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）を５０ｍＭ、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を５ｍＭ、β−メルカプトエタノールを５ｍＭとなるようにそれぞれ添加するとともに、プロテアーゼ阻害剤を加えることで、バッファーＡを調製した。
【００８７】
次に、図２に示すように、カリフラワーの頭状花序の粉末に上記バッファーＡを加え超音波破砕したものを２００００×ｇ、４℃で２０分遠心した。得られた上清を０〜３５％飽和硫安で塩析し、２００００×ｇ、４℃で３０分遠心した。得られた沈殿を上記バッファーＡに再溶解し、透析して脱塩した。さらにその後、１０００００×ｇ、４℃で１時間遠心し、得られた上清を粗タンパク質の抽出液とした。なお、この粗たんぱく質の抽出液をＡＳ３５フラクションと称する。
【００８８】
また、上記０〜３５％で塩析して得られた上清を３５〜７５％飽和硫安で塩析し、２００００×ｇ、４℃で３０分遠心した。得られた沈殿を上記バッファーに再溶解し、透析して脱塩した。さらにその後、１０００００×ｇ、４℃で１時間遠心し、得られた上清を粗タンパク質の抽出液とした。なお、この粗たんぱく質の抽出液をＡＳ７５フラクションと称する。
【００８９】
次に、本発明にかかるタンパク質を担体に結合させてなる固定相を有するカラムを作製した。担体としては、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂビーズ（アマシャムバイオサイエンス社製）を用いた。ＴＦＬ１タンパク質は、ＧＳＴ融合型ＴＦＬ１タンパク質として大腸菌に発現させて調製した。そして、図３に示すように、上記担体を充填したカラムに上記ＧＳＴ融合型ＴＦＬ１タンパク質を含む粗タンパク質溶液をアプライして、カラムにＴＦＬ１タンパク質（ＧＳＴ融合型、図中ＧＳＴ＋ＴＦＬ１で記載）を固定した。
【００９０】
作製された上記カラムに対して、上記ＡＳ３５フラクションおよびＡＳ７５フラクションをそれぞれアプライした。この状態では、目的タンパク質（本発明にかかるタンパク質）以外の非吸着タンパク質もＧＳＴ融合型ＴＦＬ１タンパク質に付着しているので、バッファーＡによりカラムを洗浄して非吸着タンパク質を洗い流した。その後、バッファーＡに含まれるイオン強度を上昇させるとともに還元型グルタチオンを用いることにより、結合タンパク質を溶出させた。
【００９１】
溶出させたタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動により分離し、銀染色法またはＳＹＰＲＯ  Ｒｕｂｙ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社製）により染色した。その結果を図４（ａ）・（ｂ）に示す。図４（ａ）・（ｂ）から明らかなように、コントロールには見られないＡ〜Ｅの５つのバンドが検出された。
【００９２】
〔実施例２：結合タンパク質の同定〕
実施例１で確認された５つのバンドについて、トリプシン消化を行い、断片化して回収した。得られたトリプシン消化物をＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより解析し得られたイオンピークを用いて、データベース検索を行い、ＴＦＬ１タンパク質に特異的に結合するタンパク質の同定を行った。
【００９３】
解析の結果、バンドＡ（図４（ａ）参照）のタンパク質は、ｇｒｆ１０またはｇｒｆ４タンパク質であった。これらタンパク質は、シロイヌナズナではそれぞれ２５４または２６７アミノ酸残基からなり、約２９，０００または３０，０００の分子量を有する。このうちｇｒｆ１０タンパク質は、酵母ｔｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ法により獲得されたクローンと同一であり、ＴＦＬ１タンパク質の相同タンパク質であるｔｏｍａｔｏ  ＳＰタンパク質（図５参照）に対する相互作用タンパク質と高い相同性を示すため、本実施例の有効性が確認された。
【００９４】
バンドＢおよびＣ（図４（ａ）参照）のタンパク質は、それぞれ非特異的吸着タンパク質と考えられたので、ＴＦＬ１タンパク質の候補から除外した。
【００９５】
バンドＤおよびＥ（図４（ｂ）参照）のタンパク質は、９２４アミノ酸残基からなり、約１０３，０００の分子量を有するタンパク質であり、ＡＧＯ４タンパク質であることが同定された。なお、バンドＤおよびＥのタンパク質は互いに分子量が異なるものの、同一のイオンピークが検出された。そのため、実施例１で用いたタンパク質抽出液には、ＡＧＯ４タンパク質が分子量の異なる２種類のタンパク質として存在することが推定される。
【００９６】
このＡＧＯ４タンパク質は、配列番号２に示すアミノ酸配列を有しており、これをコードするＡＧＯ４遺伝子は、配列番号１に示す塩基配列をＯＲＦ領域として有している。また、ＡＧＯ４タンパク質では、配列番号１の塩基配列において８７１〜１２９３番目、すなわち配列番号２のアミノ酸配列において２９１〜４３１番目の配列がＰＡＺドメインとなっていた。また、配列番号１の塩基配列において１７２９〜２６５５番目、すなわち配列番号２のアミノ酸配列において５７７〜８８５番目の配列がＰｉｗｉドメインとなっていた。
【００９７】
【発明の効果】
以上のように、本発明にかかるタンパク質は、ＴＦＬ１タンパク質と特異的に結合するものであり、ＴＦＬ１タンパク質と相互作用するタンパク質であると考えられ、植物の形態変化の制御に関わる重要なファクターであると推測される。それゆえ、本発明にかかる遺伝子・タンパク質は、植物の形態変化の分子機構を解明することに役立つだけでなく、植物の形態変化の制御にも利用できると期待される。また、植物以外に動物からもホモログが存在すると考えられ、生殖細胞の分化等に関与しているという報告も見られることから、本発明にかかる遺伝子・タンパク質は、植物以外の生物に対しても研究用試薬や薬剤等として利用できると期待される。
【００９８】
それゆえ、本発明にかかる遺伝子・タンパク質およびその利用方法は、植物を利用した各種バイオ産業や種苗産業に応用可能であるだけでなく、動物を利用したバイオ産業や医薬品産業等についても応用の可能性が見出されるという効果を奏する。
【００９９】
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
【図１】本発明にかかるタンパク質の一例であるＡＧＯファミリータンパク質の系統樹を示す図である。
【図２】本発明にかかるタンパク質を取得するために用いられる、カリフラワーの粗タンパク質の抽出液を調製する方法を示す概略工程図である。
【図３】図２に示す粗タンパク質の抽出液を用いて本発明にかかるタンパク質を取得する方法の一例を示す概略工程図である。
【図４】図３の方法によりカラムから得られた溶出液をＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動にアプライした結果を示す電気泳動図である。
【図５】ＴＦＬ１ファミリータンパク質の系統樹を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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