(57)【要約】  【課題】  本発明は、優れた降圧作用、心保護作用、抗動脈硬化作用又は腎障害改善作用を有し、高血圧症又は腎障害の治療薬又は予防薬として有用な、光学活性なジヒドロピリジン誘導体、その薬理上許容し得る塩、及び、それらを含有する高血圧症又は腎障害の治療薬又は予防薬を提供する。  【解決手段】  当該光学活性なジヒドロピリジン誘導体は、（Ｒ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル  ５−イソプロピルエステル又はその薬理上許容し得る塩である。  【選択図】  なし。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｒ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル  ５−イソプロピルエステル又はその薬理上許容し得る塩。
【請求項２】
（Ｒ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル  ５−イソプロピルエステル。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、優れた降圧作用、心保護作用、抗動脈硬化作用又は腎障害改善作用を有する、光学活性なジヒドロピリジン誘導体又はその薬理上許容し得る塩、及び、それらを含有する高血圧症、心疾患、動脈硬化又は腎障害の治療薬又は予防薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
ジヒドロピリジン系カルシウム拮抗剤である（±）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル  ５−イソプロピルエステル（以下、化合物(I)ともいう。）は、カルシウム拮抗作用、抗高血圧作用、血管拡張作用、心保護作用、抗動脈硬化作用、利尿作用、腎障害抑制作用及び過酸化脂質生成阻害作用等の薬理活性を有し、しかも毒性が低いので、高血圧症、狭心症又は動脈硬化症等の循環器系疾病を治療する医薬として有用であることが知られている（例えば、  特公平３−３１７１５号公報  （米国特許第４７７２５９６号明細書）参照。）。
【特許文献１】特公平３−３１７１５号公報  （米国特許第４７７２５９６号明細書）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明者等は、優れた循環器系疾病を治療又は予防薬の開発を目指し、種々のジヒドロピリジン系カルシウム拮抗剤の薬理活性について、長年に亘り、鋭意研究を行った結果、ラセミ体である（±）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル  ５−イソプロピルエステルの、一方の光学異性体である（Ｒ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル  ５−イソプロピルエステルが、特に優れたカルシウム拮抗作用、抗高血圧作用、血管拡張作用、心保護作用、抗動脈硬化作用、利尿作用、腎障害抑制作用、及び過酸化脂質生成阻害作用等の薬理活性を示し、高血圧症、狭心症又は動脈硬化症等の循環器系疾患（特に、高血圧症）の予防薬又は治療薬（特に治療薬）として有用であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明の（Ｒ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル  ５−イソプロピルエステルは、以下の構造式
【０００５】
【化１】
2004217635.tif 000002
【０００６】
を有する化合物である。
【０００７】
また、本発明の高血圧症、狭心症等の循環器系疾患の予防薬又は治療薬が含有する有効成分は、（Ｒ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル  ５−イソプロピルエステルである。
【０００８】
本発明の（Ｒ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル  ５−イソプロピルエステルは、所望に応じて、常法に従って塩にすることができる。例えば、そのような塩は、化合物(I)を、溶媒中（例えば、エーテル類、エステル類又はアルコール類であり得、好適にはエーテル類）、相当する酸と室温で５分間乃至３０分間処理し、析出した結晶を濾取するか又は減圧下で溶媒を留去することにより得ることができる。そのような塩としては弗化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、沃化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩又は燐酸塩等の鉱酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩又はｐ−トルエンスルホン酸塩のようなスルホン酸塩；フマ−ル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、蓚酸塩又はマレイン酸塩のようなカルボン酸塩；又は、グルタミン酸塩若しくはアスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩を挙げることができる。
【０００９】
本発明の（Ｒ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル  ５−イソプロピルエステル又はその薬理上許容される塩は、各々水和物として存在することができるが、その各々或はそれらの混合物のいずれも本発明に包含される。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の（Ｒ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル  ５−イソプロピルエステル又はその薬理上許容される塩は、特に優れたカルシウム拮抗作用、抗高血圧作用、血管拡張作用、心保護作用、抗動脈硬化作用、利尿作用、腎障害抑制作用、及び過酸化脂質生成阻害作用等の薬理活性を示し、高血圧症、狭心症又は動脈硬化症等の循環器系疾患（特に、高血圧症）の予防薬又は治療薬（特に治療薬）として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明の（Ｒ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル  ５−イソプロピルエステルは、特公平３−３１７１５号公報（米国特許第４７７２５９６号明細書）に記載の方法に従い製造される（±）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル  ５−イソプロピルエステルを、光学分割することにより製造することができる。
【００１２】
本発明の（Ｒ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル  ５−イソプロピルエステル又はその薬理上許容される塩を、上記疾患の予防薬又は治療薬として使用する場合には、それ自体或いは適宜の薬理学的に許容される、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、乳化剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤等の添加剤を用いて周知の方法に従い製造される、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤若しくはシロップ剤等による経口的又は注射剤若しくは坐剤等による非経口的に投与することができる。
【００１３】
使用される「賦形剤」としては、例えば、乳糖、白糖、葡萄糖、マンニトール若しくはソルビトールのような糖誘導体；トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、α−澱粉若しくはデキストリンのような澱粉誘導体；結晶セルロースのようなセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；又はプルランのような有機系賦形剤；或いは、軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、珪酸カルシウム若しくはメタ珪酸アルミン酸マグネシウムのような珪酸塩誘導体；燐酸水素カルシウムのような燐酸塩；炭酸カルシウムのような炭酸塩；又は、硫酸カルシウムのような硫酸塩等の無機系賦形剤を挙げることができる。
【００１４】
使用される「滑沢剤」としては、例えば、ステアリン酸；ステアリン酸カルシウム若しくはステアリン酸マグネシウムのようなステアリン酸金属塩；タルク；コロイドシリカ；ビーズワックス若しくはゲイ蝋のようなワックス類；硼酸；アジピン酸；硫酸ナトリウムのような硫酸塩；グリコール；フマル酸；安息香酸ナトリウム；Ｄ，Ｌ−ロイシン；ラウリル硫酸ナトリウム若しくはラウリル硫酸マグネシウムのようなラウリル硫酸塩；無水珪酸若しくは珪酸水和物のような珪酸類；又は、上記澱粉誘導体を挙げることができる。
【００１５】
使用される「結合剤」としては、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール、又は、前記賦形剤と同様の化合物を挙げることができる。
【００１６】
使用される「崩壊剤」としては、例えば、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム若しくは内部架橋カルボキシメチルセルロースナトリウムのようなセルロース誘導体；架橋ポリビニルピロリドン；又は、カルボキシメチルスターチ若しくはカルボキシメチルスターチナトリウムのような化学修飾されたデンプン・セルロース類を挙げることができる。
【００１７】
使用される「乳化剤」としては、例えば、ベントナイト若しくはビーガムのようなコロイド性粘土；水酸化マグネシウム若しくは水酸化アルミニウムのような金属水酸化物；ラウリル硫酸ナトリウム若しくはステアリン酸カルシウムのような陰イオン界面活性剤；塩化ベンザルコニウムのような陽イオン界面活性剤；又は、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル若しくはショ糖脂肪酸エステルのような非イオン界面活性剤を挙げることができる。
【００１８】
使用される「安定剤」としては、例えば、メチルパラベン若しくはプロピルパラベンのようなパラヒドロキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール若しくはフェニルエチルアルコールのようなアルコール類；塩化ベンザルコニウム；フェノール若しくはクレゾールのようなフェノール類；チメロサール；デヒドロ酢酸；又は、ソルビン酸を挙げることができる。
【００１９】
使用される「矯味矯臭剤」としては、例えば、サッカリンナトリウム若しくはアスパルテームのような甘味料；クエン酸、リンゴ酸若しくは酒石酸のような酸味料；又は、メントール、レモンエキス若しくはオレンジエキスのような香料を挙げることができる。
【００２０】
使用される「希釈剤」としては、例えば、ラクトース、マンニトール、グルコース、スクロース、硫酸カルシウム、リン酸カルシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶性セルロース、水、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセロール、デンプン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム又はこれらの混合物のような、通常、希釈剤として用いられるものを挙げることができる。
【００２１】
本発明の（Ｒ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル  ５−イソプロピルエステル又はその薬理上許容される塩の投与量は、患者の症状、年齢、体重等の種々の条件により変化し得るが、経口投与の場合には、各々、１回当たり下限 0.1mg（好適には 0.5mg）、上限 100mg（好適には 50mg）を、非経口的投与の場合には、１回当たり下限 0.01mg（好適には 0.05mg）、上限 100mg（好適には 50mg）を、成人に対して１日当たり１乃至６回、症状に応じて投与することができる。
【００２２】
以下に実施例、試験例及び製剤例を示し、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の範囲は、これらに限定されるものではない。
【実施例】
【００２３】
(実施例１)（Ｒ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル５−イソプロピルエステルの製造
(a)（±）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル５−イソプロピルエステルの製造
特公平３−３１７１５号に従い、２−（３−ニトロベンジリデン）アセト酢酸  イソプロピルエステル（1.39g）とアミジノ酢酸  （１−ベンズヒドリル−３−アゼチジニル）エステル酢酸塩（1.62g）のイソプロピルアルコール溶液（80ml）に、ナトリウムメトキシド（0.27g）を加え、４時間加熱還流させた。反応液を冷却した後、不要物を除去し、減圧下溶媒を留去した。得られた残渣を酢酸エチルに溶解させ、水洗した後、無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥させた。減圧下、溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝３：１）に付すことにより、淡黄色の（±）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル５−イソプロピルエステル（2.17g、74%）を得た。
【００２４】
融点 : 95 - 98℃;
IRスペクトル(KBr,λmaxcm-1): 3450, 3310, 1675;
マススペクトル(CI, m/z) = 583 (M++1);
1H NMR (CDCl3)δppm : 1.08, 1.26 (6H, 2xd, J=6Hz), 2.35 (3H, s), 2.63, 3.06, 3.50, 3.62 (4H, 4xt, J=8Hz), 4.26 (1H, s), 4.9-5.0 (3H, m), 6.04 (1H, br.s), 6.11 (2H, br.s), 7.1-8.2 (14H, m).
(b)（Ｒ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル５−イソプロピルエステル  （Ｒ体）の製造
上記で得られた（±）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル５−イソプロピルエステル（ラセミ体）を、下記条件下で、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に付し、（Ｒ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル５−イソプロピルエステル（以下、Ｒ体と省略する。）及び（Ｓ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル５−イソプロピルエステル（以下、Ｓ体と省略する。）を、各々分離した。また、分離した各々の光学異性体は、下記分析条件で光学純度を測定した。
【００２５】
分取HPLCの条件
カラム： SUMICHIRAL OA-2000 (15μm), 5.0cmφ X 30cm
移動相： ヘキサン／１，２−ジクロロエタン／エタノール (68/29/3)(V/V/V)
流速： 40ml/min
検出器： UV(254nm)
カラム温度： 25℃
試料濃度： ラセミ体1g／(クロロホルム:移動相(3:1)(V/V)) 混合液10ml
試料注入量： 2ml
分析HPLCの条件
カラム： SUMICHIRAL OA-2000 (5μm), 4.6mmφ X 25cm
移動相： ヘキサン／１，２−ジクロロエタン／エタノール  (20/10/1)(V/V/V)
流速： 1.0ml/min
検出器： UV(254nm)
カラム温度： 25℃
上記分析条件での保持時間: 9.1min
性状: 黄色結晶
融点: 118.5℃
[α]D20： -68.4°(c=1.00, エタノール)
マススペクトル(CI,m/z)： 583 (M++1), 167.
NMRスペクトル(CDCl3, δ): 1.07 (3H, d, J=5.9Hz), 1.25 (3H, d, J=5.9Hz), 2.35 (3H, s), 2.67-2.84 (1H, br), 3.13-3.27 (1H, br), 3.57-3.68 (1H, br), 3.68-3.83 (1H, br), 4.32-4.44 (1H, br), 4.86-5.12 (3H, m), 6.08-6.36 (3H, br), 7.12-7.55 (11H, m), 7.60 (1H, d, J=8.1Hz), 8.04 (1H, d, J=8.1Hz), 8.17 (1H, s).
ＩＲスペクトル(KBr,λmaxcm-1)： 3447, 3319, 1678.
（Ｓ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル５−イソプロピルエステル  （Ｓ体）
上記分析条件での保持時間: 10.8min
性状: 黄色結晶
融点: 118.9℃
[α]D20: +68.9° (c=1.00, エタノール)
NMRスペクトル(CDCl3,δppm): 1.07 (3H, d, J=5.9Hz), 1.25 (3H, d, J=5.9Hz), 2.36 (3H, s), 2.63-2.77 (1H, br), 3.05-3.24 (1H, br), 3.52-3.64 (1H, br), 3.64-3.78 (1H, br), 4.29-4.41 (1H, br), 4.88-5.09 (3H, m), 6.04-6.29 (3H, br), 7.11-7.49 (11H, m), 7.61 (1H, d, J=7.3Hz), 8.04 (1H, d, J=8.1Hz), 8.16 (1H, s).
IRスペクトル(KBr,λmaxcm-1): 3446, 3320, 1678.
(試験例１)  ブタ心筋ミクロソームを用いた受容体結合実験
Ｌ型カルシウムチャネルのソースとしてブタ心臓ミクロソームを、またＬ型カルシウムチャネルのリガンドとして３Ｈ−ニトレンジピンを用いた。HEPES（50 mM、pH 7.4）緩衝液中でミクロソーム（0.2 mg蛋白／ml）、３Ｈ−ニトレンジピン（0.1 nM）および被験薬物（ラセミ体、Ｒ体又はＳ体）を室温で30分間反応させ、ミクロソーム膜画分に結合した３Ｈ−ニトレンジピンを液体シンチレーションカウンターで測定した。10 μMの非標識ニトレンジピン存在下でのカウント（非特異的結合量）を引き、特異的結合量を求めた。各被験薬物について、特異的結合の濃度−阻害率の関係をロジスティック曲線に近似させ、IC50（特異的的結合の50％阻害濃度）を求めた。別にScatchardプロットから求めたニトレンジピンのKd（解離定数）を用い、
Ki = IC50 / (1 + [L] / Kd)   （ [L]は３Ｈ−ニトレンジピンの濃度）
の式から各被験薬物のKi（阻害定数）を求めた。結果（２回の実験の平均値）を表１に示す。
（表１）

化合物            IC50（nM）                Ki (nM)

ラセミ体              3.1                     2.1
Ｒ体                  1.3                     0.88
Ｓ体                700                     460

Ｒ体のＬ型カルシウムチャネルの阻害活性は、Ｓ体に比べ約500倍強力であり、またラセミ体に比べても２倍以上強力であることが見出された。
（試験例２）高血圧ラットにおける降圧作用
25〜29週齢の雄性高血圧自然発症ラットの股動脈の血圧測定用、股静脈に薬物投与用のカニューレを挿入し、麻酔下で化合物を静脈内投与し、120分間にわたり経時的に血圧を測定した。
【００２６】
ラセミ体（20μg/kg）とＲ体（10μg/kg）を比較した結果を表２に、別のシリーズの実験で、Ｒ体（３μg/kg、10μg/kg）とＳ体（1000μg/kg）を比較した結果を表３に示す。
（表２）

化合物            ラセミ体                  Ｒ体
投与量            20μg/kg                10μg/kg
（例数）          （４）                    （５）

血圧変化(mmHg)
0分                0±0                      0±0
10分             -21±2                    -17±4
30分             -35±4                    -28±5
60分             -42±6                    -43±7
90分             -45±6                    -45±7
120分            -48±7                    -47±6

平均値±標準誤差
（表３）

化合物              Ｒ体        Ｒ体        Ｓ体
投与量             3μg/kg    10μg/kg    1000μg/kg
（例数）          （３）        （３）      （３）

血圧変化(mmHg)
0分                0±0         0±0         0±0
10分              -3±3       -23±5        -5±1
30分             -14±3       -36±6       -18±6
60分             -28±3       -49±11      -29±10
90分             -34±5       -54±8       -36±7
120分            -34±10      -61±6       -35±4

平均値±標準誤差
上記より、Ｒ体は、ラセミ体に比べ約２倍強力な、またＳ体に比べて約300倍強力な降圧活性を示すことが見出された。
（製剤例１）
カプセル剤
Ｒ体                                        50.0 mg 
乳糖                                      128.7
トウモロコシデンプン                        70.0
ステアリン酸マグネシウム                    1.3

250   mg 
上記処方の粉末を混合し、60メッシュのふるいを通した後、この粉末を250mgの３号ゼラチンカプセルに入れ、カプセル剤とする。
（製剤例２）
錠剤
Ｒ体                                        50.0 mg 
乳糖                                      124.0
トウモロコシデンプン                        25.0
ステアリン酸マグネシウム                    1.0  

200   mg 
上記処方の粉末を混合し、打錠機により打錠して、１錠200mgの錠剤とする。  この錠剤は必要に応じて糖衣を施すことができる。
【産業上の利用可能性】
【００２７】
本発明の（Ｒ）−２−アミノ−１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３，５−ピリジンジカルボン酸  ３−（１−ジフェニルメチルアゼチジン−３−イル）エステル  ５−イソプロピルエステル又はその薬理上許容される塩は、特に優れたカルシウム拮抗作用、抗高血圧作用、血管拡張作用、心保護作用、抗動脈硬化作用、利尿作用、腎障害抑制作用及び過酸化脂質生成阻害作用等の薬理活性を示し、毒性も弱いので、高血圧症、狭心症又は動脈硬化症等の循環器系疾患（特に、高血圧症）の予防薬又は治療薬（特に治療薬）として有用である。