(57)【要約】【課題】腸内環境改善効果に優れ、かつ安全性及び安定性が高く、人体に適用可能な腸内環境改善剤を提供することを目的とした。【解決手段】分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖を有効成分とする腸内環境改善剤。酸性キシロオリゴ糖が、キシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であり、平均重合度が２．０〜１５．０であると効果が高く、ウロン酸はグルクロン酸もしくは４−Ｏ−メチル−グルクロン酸が好ましい。この酸性オリゴ糖はリグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで該複合体を酸加水分解処理する工程から得ることが経済的である。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
キシロオリゴ糖分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖を有効成分とする腸内環境改善剤。
【請求項２】
該酸性キシロオリゴ糖が、キシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であり、平均重合度が２．０〜１５．０であることを特徴とする請求項１に記載の腸内環境改善剤。
【請求項３】
前記酸性キシロオリゴ糖が、「リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離して得たもの」であることを特徴とする請求項１又は請求項２に記載の腸内環境改善剤。
【請求項４】
ウロン酸がグルクロン酸もしくは４−Ｏ−メチル−グルクロン酸であることを特徴とする請求項１〜請求項３のいずれかに記載の腸内環境改善剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、食品及び医薬品分野に於いて使用される新規な腸内環境改善剤に関する。より詳細には、優れた生理活性を有し、しかも安全性の高い腸内環境改善剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、オリゴ糖は経口摂取により腸内環境を改善し、便秘改善及び大腸発がんリスク低減等の整腸作用をもたらすプレバイオティクスとして注目を集めている。
【０００３】
難消化性のオリゴ糖は、胃や小腸で分泌される消化液で分解されにくい為、大腸まで到達する。腸内善玉菌（ビフィズス菌や乳酸菌等）はオリゴ糖の資化力が強く、逆に、腸内悪玉菌（大腸菌やクロストリジウム属の細菌）は弱い為、腸内に届いたオリゴ糖により選択的に腸内善玉菌の増殖が亢進される。その結果、大腸内細菌叢における善玉菌と悪玉菌のバランスは、善玉菌優位の状態にシフトする（非特許文献１参照）。
【０００４】
腸内善玉菌により生成された各種の有機酸は、大腸内における多くの環境改善、すなわち、大腸の蠕動運動活発化による大腸内容物排泄促進（便秘改善）、腸管粘膜細胞の正常な状態の維持、腸内ｐＨ低下による強力な大腸発がん物質（ニトロソアミン等）の生成阻害等をもたらす（非特許文献２、３、４参照）。また、腸内善玉菌自身の細胞壁は、腸管を介して免疫細胞に作用し、免疫力を亢進する（非特許文献５参照）。
【０００５】
一方、腸内悪玉菌が生成するβ−グルクロニダーゼは、大腸内で胆汁酸より生成される発がん物質の腸管からの吸収促進に関与する為、オリゴ糖摂取による腸内悪玉菌の減少は、β−グルクロニダーゼ活性の低下、すなわち大腸発がんリスクの低減に繋がることも推定される。
【０００６】
整腸作用（便秘改善及び大腸発がんリスク低減等）をもつオリゴ糖としては、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、ラクトスクロース及びラフィノース等が挙げられるが、何れも十分な効果がない。作用の強さという点ではキシロオリゴ糖が特に有効であるが、特に長鎖における水溶性の問題がある。しかし、他のオリゴ糖と比較して、キシロオリゴ糖は耐酸性と耐熱性に優れている為、胃酸や体温で分解されにくく、確実に大腸にまで達し、その生理作用を発揮しやすい（特許文献１参照）。
【０００７】
キシロオリゴ糖には、コーンコブやバガスから酵素処理により製造されるものや、リグノセルロースから酵素処理及びＮＦ膜濃縮により製造されるものがあり、何れも整腸作用については既に開示されている（特許文献２及び３参照）。しかし、リグノセルロース材料より酵素処理及び陰イオン交換樹脂を用いて得られる
酸性キシロオリゴ糖の経口摂取における生理効果の開示は、全くなされていない。なお、酸性キシロオリゴ糖はウロン酸残基を有している為、他のオリゴ糖やキシロオリゴ糖と比較して、長鎖であっても水溶性が非常に高いという特徴がある。
【０００８】
酸性キシロオリゴ糖の生理効果に関しては、水耕栽培に於けるスギ挿穂の発根促進効果の記載（非特許文献７参照）があるが、腸内環境改善剤に関する開示はなされていない。
【０００９】
【非特許文献１】
光岡知足  編；腸内細菌学
【非特許文献２】
Ｂａｕｅｒ，Ｈ．Ｇら；Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，４１，２５１８−２５２３（１９８１）．
【非特許文献３】
印南  敏ら；食物繊維．，ｐ３１３−３１４．（第一出版（株）刊，１９９５年５月発行）
【非特許文献４】
印南  敏ら；食物繊維．，ｐ９５−９８，ｐ２２６．（第一出版（株）刊，１９９５年５月発行）
【非特許文献５】
光岡知足  編著；ビフィズス菌の研究．，ｐ１３０−１４２．（（財）日本ビフィズス菌センター刊，１９９８年８月発行）
【非特許文献６】
セルラーゼ研究会報第１６巻、２００１年６月１４日、Ｐ１７−２６
【特許文献１】
特許２５４９６３８
【特許文献２】
特許２６４３３６８
【特許文献３】
特開２０００−３３３６９２
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明に於いては、腸内環境改善効果に優れ、かつ安全性及び安定性が高く、人体に適用可能な腸内環境改善剤を提供することを目的とした。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
前記課題を解決する為、酸性キシロオリゴ糖組成物を添加した食餌を一定期間ラットに投与し、試験期間終了後に解剖を行い腸内環境改善度を測定した。その結果、ウロン酸残基が付加した酸性キシロオリゴ糖組成物が優れた腸内環境改善効果を有することを見出し、安全性及び安定性も優れることより、本発明を完成するに至った。
【００１２】
本発明は以下の構成を採用する。即ち、本発明の第１は、「キシロオリゴ糖分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖を有効成分とする腸内環境改善剤」である。
【００１３】
本発明の第２は、前記第１発明において、該酸性キシロオリゴ糖は「キシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であり、平均重合度が２．０〜１５．０であることを特徴とする腸内環境改善剤」である。
【００１４】
本発明の第３は、前記第１または第２の発明において、前記酸性キシロオリゴ糖が、「リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離して得たもの」であることを特徴とするで腸内環境改善剤ある。
【００１５】
本発明の第４は、前記第１〜第３の発明において、ウロン酸がグルクロン酸もしくは４−Ｏ−メチル−グルクロン酸であることを特徴とする腸内環境改善剤である。
【００１６】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の構成について詳述する。キシロオリゴ糖とは、キシロースの２量体であるキシロビオース、３量体であるキシロトリオース、あるいは４量体〜１５量体程度のキシロースの重合体を言う。本発明で使用する酸性キシロオリゴ糖とは、キシロオリゴ糖１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を有するものを言う。
また、キシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物であっても良い。一般的には、天然物から製造するために、このような組成物として得られることが多く、以下、主として酸性キシロオリゴ糖組成物について説明する。
該組成物は、平均重合度で示す数値は正規分布をとる酸性キシロオリゴ糖のキシロース鎖長の平均値で、２．０〜１５．０が好ましく、２．０〜１１．０がより好ましい。キシロース鎖長の上限と下限との差は１０以下が好ましく、２以下がより好ましい。ウロン酸は天然では、ペクチン、ペクチン酸、アルギン酸、ヒアルロン酸、ヘパリン、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸等の種々の生理活性を持つ多糖の構成成分として知られている。本発明におけるウロン酸としては特に限定されないが、グルクロン酸もしくは４−Ｏ−メチル−グルクロン酸が好ましい。
【００１７】
上記のような酸性キシロオリゴ糖組成物を得ることが出来れば、その製法は特に限定されないが、（１）木材からキシランを抽出し、それを酵素的に分解する方法（セルラーゼ研究会発行、セルラーゼ研究会報第１６巻、２００１年６月１４日発行、Ｐ１７−２６）と、（２）リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離する方法が挙げられる。
特に、（２）の方法が５〜１５量体のように比較的高い重合度のものを大量に安価に製造することが可能である点で好ましく、以下にその概要を示す。
【００１８】
酸性キシロオリゴ糖組成物は、化学パルプ由来のリグノセルロース材料を原料とし、加水分解工程、濃縮工程、希酸処理工程、精製工程を経て得ることができる。加水分解工程では、希酸処理、高温高圧の水蒸気（蒸煮・爆砕）処理もしくは、ヘミセルラーゼによってリグノセルロース中のキシランを選択的に加水分解し、キシロオリゴ糖とリグニンからなる高分子量の複合体を中間体として得る。濃縮工程では逆浸透膜等により、キシロオリゴ糖−リグニン様物質複合体が濃縮され、低重合度のオリゴ糖や低分子の夾雑物などを除去することができる。濃縮工程は逆浸透膜を用いることが好ましいが、限外濾過膜、塩析、透析などでも可能である。得られた濃縮液の希酸処理工程により、複合体からリグニン様物質が遊離し、酸性キシロオリゴ糖と中性キシロオリゴ糖を含む希酸処理液を得ることができる。この時、複合体から切り離されたリグニン様物質は酸性下で縮合し沈殿するのでセラミックフィルターや濾紙などを用いたろ過等により除去することができる。希酸処理工程では、酸による加水分解を用いることが好ましいが、リグニン分解酵素などを用いた酵素分解などでも可能である。
【００１９】
精製工程は、限外濾過工程、脱色工程、吸着工程からなる。一部のリグニン様物質は可溶性高分子として溶液中に残存するが、限外濾過工程で除去され、着色物質等の夾雑物は活性炭を用いた脱色工程によってそのほとんどが取り除かれる。限外濾過工程は限外濾過膜を用いることが好ましいが、逆浸透膜、塩析、透析などでも可能である。こうして得られた糖液中には酸性キシロオリゴ糖と中性キシロオリゴ糖が溶解している。イオン交換樹脂を用いた吸着工程により、この糖液から酸性キシロオリゴ糖のみを取り出すことができる。糖液をまず強陽イオン交換樹脂にて処理し、糖液中の金属イオンを除去する。ついで強陰イオン交換樹脂を用いて糖液中の硫酸イオンなどを除去する。この工程では、硫酸イオンの除去と同時に弱酸である有機酸の一部と着色成分の除去も同時に行っている。強陰イオン交換樹脂で処理された糖液はもう一度強陽イオン交換樹脂で処理し更に金属イオンを除去する。最後に弱陰イオン交換樹脂で処理し、酸性キシロオリゴ糖を樹脂に吸着させる。
【００２０】
樹脂に吸着した酸性オリゴ糖を、低濃度の塩（ＮａＣｌ、ＣａＣｌ２、ＫＣｌ、ＭｇＣｌ２など）によって溶出させることにより、夾雑物を含まない酸性キシロオリゴ糖溶液を得ることができる。この溶液を、例えば、スプレードライや凍結乾燥処理により、白色の酸性キシロオリゴ糖組成物の粉末を得ることができる。
【００２１】
化学パルプ由来のリグノセルロースを原料とし、キシロオリゴ糖とリグニンからなる高分子量の複合体を中間体とした酸性キシロオリゴ糖組成物の上記製造法のメリットは、経済性とキシロースの平均重合度の高い酸性キシロオリゴ糖組成物が容易に得られる点にある。平均重合度は、例えば、希酸処理条件を調節するか、再度ヘミセルラーゼで処理することによって変えることが可能である。また、弱陰イオン交換樹脂溶出時に用いる溶出液の塩濃度を変化させることによって、１分子あたりに結合するウロン酸残基の数が異なる酸性キシロオリゴ糖組成物を得ることもできる。さらに、適当なキシラナーゼ、ヘミセルラーゼを作用させることによってウロン酸結合部位が末端に限定された酸性キシロオリゴ糖組成物を得ることも可能である。
【００２２】
このようにして得られた酸性キシロオリゴ糖組成物は、水に溶解させたりまたはスプレードライヤーで乾燥し粉体に加工後、腸内環境改善剤とすることができる。また、経口摂取に支障のない材質を用いてマイクロカプセル化したりリポソームに内含させて添加してもよい。腸内環境改善剤に於ける酸性キロオリゴ糖または、酸性キシロオリゴ糖組成物の含有率としては、０．００１〜２０％（以下全て質量％）の範囲で使用することができるが、０．０１〜１０％がより好ましい。
【００２３】
本発明の酸性キシロオリゴ糖組成物を配合した腸内環境改善剤の形態としては、酸性キシロオリゴ糖自身を直接摂取することもできるが、飲料に添加したり食品にも添加することが可能である。また更に、直接摂取する場合は粉体化しても良いし打錠により錠剤化してもよい、さらには酸性キシロオリゴ糖の精製後の水溶液のまま摂取しても良い。
【００２４】
本発明に於いては、酸性キシロオリゴ糖は他の経腸栄養剤や他の栄養成分、医薬品らと混合して使用することができ、単なる腸内環境改善剤としてだけではなく医療用食品や医薬品として提供することも出来る。
【００２５】
【実施例】
以下、本発明について実施例により詳説する。本発明はこれにより限定されるものではない。まず、各測定法の概要、本発明で有効成分として含有させた酸性キシロオリゴ糖組成物ＵＸ１０及びＵＸ２の調製例を示す。
＜測定法の概要＞
（１）  全糖量の定量：
全糖量は検量線をＤ−キシロース（和光純薬工業（株）製）を用いて作製し、フェノール硫酸法（還元糖の定量法、学会出版センター発行）にて定量した。
（２）  還元糖量の定量：
還元糖量は検量線をＤ−キシロース（和光純薬工業（株）製）を用いて作製、ソモジ−ネルソン法（還元糖の定量法、学会出版センター発行）にて定量した。
（３）  ウロン酸量の定量：
ウロン酸は検量線をＤ−グルクロン酸（和光純薬工業（株）製）を用いて作製、カルバゾール硫酸法（還元糖の定量法、学会出版センター発行）にて定量した。
（４）  平均重合度の決定法：
サンプル糖液を５０℃に保ち１５０００ｒｐｍにて１５分遠心分離し不溶物を除去し上清液の全糖量を還元糖量（共にキシロース換算）で割って平均重合度を求めた。
（５）  酸性キシロオリゴ糖の分析方法：
オリゴ糖鎖の分布はイオンクロマトグラフ（ダイオネクス社製、分析用カラム：Ｃａｒｂｏ  Ｐａｃ  ＰＡ−１０）を用いて分析した。分離溶媒には１００ｍＭ  ＮａＯＨ溶液を用い、溶出溶媒には前述の分離溶媒に酢酸ナトリウムを５００ｍＭとなるように添加し、溶液比で、分離溶媒：溶出溶媒＝１０：０〜４：６となるような直線勾配を組み分離した。得られたクロマトグラムより、キシロース鎖長の上限と下限との差を求めた。
（６）  オリゴ糖１分子あたりのウロン酸残基数の決定法
サンプル糖液を５０℃に保ち１５０００ｒｐｍにて１５分遠心分離し不溶物を除去し上清液のウロン酸量（Ｄ−グルクロン酸換算）を還元糖量（キシロース換算）で割ってオリゴ糖１分子あたりのウロン酸残基数を求めた。
（７）  酵素力価の定義：
酵素として用いたキシラナーゼの活性測定にはカバキシラン（シグマ社製）を用いた。酵素力価の定義はキシラナーゼがキシランを分解することで得られる還元糖の還元力をＤＮＳ法（還元糖の定量法、学会出版センター発行）を用いて測定し、１分間に１マイクロモルのキシロースに相当する還元力を生成させる酵素量を１ユニットとした。
【００２６】
＜調整例：酸性キシロオリゴ糖組成物ＵＸ１０及びＵＸ２の調整例＞
混合広葉樹チップ（国内産広葉樹７０％、ユーカリ３０％）を原料として、クラフト蒸解及び酸素脱リグニン工程により、酸素脱リグニンパルプスラリー（カッパー価９．６、パルプ粘度２５．１ｃｐｓ）を得た。スラリーからパルプを濾別、洗浄した後、パルプ濃度１０％、ｐＨ８に調製したパルプスラリーを用いて以下のキシラナーゼによる酵素処理を行った。
【００２７】
バチルスｓｐ．Ｓ−２１１３株（独立行政法人産業技術総合研究所特許微生物寄託センター、寄託菌株ＦＥＲＭ  ＢＰ−５２６４）の生産するキシラナーゼを１単位／パルプｇとなるように添加した後、６０℃で１２０分間処理した。その後、ろ過によりパルプ残渣を除去し、酵素処理液１０５０Ｌを得た。
【００２８】
次に、得られた酵素処理液を濃縮工程、希酸処理工程、精製工程の順に供した。
濃縮工程では、逆浸透膜（日東電工（株）製、ＲＯ  ＮＴＲ−７４１０）を用いて濃縮液（４０倍濃縮）を調製した。希酸処理工程では、得られた濃縮液のｐＨを３．５に調整した後、１２１℃で６０分間加熱処理し、リグニンなどの高分子夾雑物の沈殿を形成させた。さらに、この沈殿をセラミックフィルターろ過で取り除くことにより、希酸処理溶液を得た。
【００２９】
精製工程では、限外濾過・脱色工程、吸着工程の順に供した。限外濾過・脱色工程では、希酸処理溶液を限外濾過膜（オスモニクス社製、分画分子量８０００）を通過させた後、活性炭（和光純薬（株）製）７７０ｇの添加及びセラミックフィルターろ過により脱色処理液を得た。吸着工程では、脱色処理液を強陽イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＰＫ２１８）、強陰イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＰＡ４０８）、強陽イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＰＫ２１８）各１００ｋｇを充填したカラムに順次通過させた後、弱陰イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＷＡ３０）１００ｋｇを充填したカラムに供した。この弱陰イオン交換樹脂充填カラムから７５ｍＭ  ＮａＣｌ溶液によって溶出した溶液をスプレードライ処理することによって、酸性キシロオリゴ糖組成物の粉末（全糖量３５３ｇ、回収率１３．１％）を得た。以下、この酸性キシロオリゴ糖組成物をＵＸ１０とする。前述の測定方法により、ＵＸ１０は平均重合度１０．３、キシロース鎖長の上限と下限との差は１０、酸性キシロオリゴ糖１分子あたりウロン酸残基を１つ含む糖組成化合物であった。
【００３０】
得られたＵＸ１０の１０％水溶液１００ｍｌに、スミチームＸ（新日本化学工業（株）製のキシラナーゼ）５０ｍｇを添加し、６０℃、２０時間反応後、弱アニオン交換樹脂（ＷＡ３０）１０ｇを充填したカラムに供した。カラムを水洗した後、７５ｍＭ  ＮａＣｌ溶液によって溶出した溶液を凍結乾燥することによって、酸性キシロオリゴ糖組成物粉末（全糖量２．１ｇ、回収率２１％）を得た。以下、この酸性キシロオリゴ糖組成物をＵＸ２とする。前述の測定方法により、ＵＸ２は平均重合度２．３、キシロース鎖長の上限と下限との差は２、酸性キシロオリゴ糖１分子あたりウロン酸残基を１つ含む糖組成化合物であった。
【００３１】
次に、得られた酸性キシロオリゴ糖組成物を用いた腸内環境改善試験の概要と結果を実施例１（ｐＨ）、実施例２（ビフィズス菌数）及び実施例３（β−グルクロニダーゼ活性）に示す。
【００３２】
＜実施例１：ｐＨ＞
日本チャールズリバーより４週齡のＳＤ系雄性ラットを購入し、温度２３±１℃、湿度５５％±５％に設定した飼育室において、金属性ケージ内で個別飼育した。１週間の予備飼育後、ＵＸ２を１％含む合成飼料投与群（ＵＸ２添加食群）、ＵＸ−１０を１％含む合成飼料投与群（ＵＸ１０添加食群）、オリゴ糖無添加合成飼料投与群（無添加食群）の３群（各群６匹）に分け、各試験食を自由摂取させた。試験食摂取４週間後に、頚椎脱臼法で屠殺・解剖し、盲腸内容物を得た。なお、試験期間中のラットの死亡例は無く、また、異常な体重増減を示した個体も見られなかった。これはＵＸ２及びＵＸ−１０の安全性の高さを示す。各群の試験食の組成を表１に示す。
【００３３】
【表１】
2004182609.tif 000002
【００３４】
盲腸内容物のｐＨは、ビフィズス菌等により生成される有機酸量を反映する。各ラットの盲腸内容物を蒸留水１５ｍｌに懸濁した後、ｐＨメーターにて測定した結果を、図１に示す。
【００３５】
ＵＸ２及びＵＸ１０添加食群では、オリゴ糖無添加食群と比較して、盲腸内容物のｐＨが有意に低下していた。これは酸性キシロオリゴ糖を腸内細菌が資化して有機酸を生成した為と考えられる。
【００３６】
＜実施例２：ビフィズス菌数＞
実施例１のｐＨ測定に用いたラット盲腸内容物懸濁液中のビフィズス菌数を、以下のようにして測定した。ＣＰＬＸ培地に適宜希釈した盲腸内容物希釈液を播種し、無酸素条件下で培養した（４８時間、３７℃）。５ｍｍ以上のコロニーのみをビフィズス菌としてカウントした。なお、５ｍｍ以上のコロニーを無作為に５個選び、アプライドバイオシステム社製１６ＳｒＤＮＡ解析キット（Ｃａｔ．ｎｏ  ４０３０８５）にてコロニーの菌種を解析したところ、５個全てがビフィドバクテリウムアニマリスであった。盲腸内容物１ｇ中のビフィズス菌数の測定結果を図２に示す。
【００３７】
ＵＸ２及びＵＸ１０添加食群では、オリゴ糖無添加食群と比較して、盲腸内容物中のビフィズス菌数が有意に増加していることが判明した。これは酸性キシロオリゴ糖をビフィズス菌が資化して選択的に増殖した為である。
【００３８】
＜実施例３：β−グルクロニダーゼ活性＞
実施例１で得たラット盲腸内容物中のβ−グルクロニダーゼ活性を以下のようにして測定した。シグマ社製４−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌ−ｕｍｂｅｒｉｆｅｒｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ（Ｃａｔ．ｎｏ  Ｍ−９１３０）を１００ｍＭリン酸バッファーを用いて２ｍＭに調製し、基質溶液とした。測定サンプルとしては、実施例１でｐＨ測定に用いたラット盲腸内容物懸濁液１ｍｌを遠心処理後（１５，０００ｒｐｍ）の上清を用いた。まず、基質溶液１０μｌに測定サンプル１０μｌを加え、攪拌後、３７℃にて３０分間、反応させた。次に、５００ｍＭグリシン−ＮａＯＨバッファー１００μｌを反応液に加え、酵素反応を停止させた後、β−グルクロニダーゼにより生成した４−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌ−ｕｍｂｅｒｉｆｅｒｏｎｅ量を測定した（励起波長３５５ｎｍ、測定波長４５０ｎｍ）。β−グルクロニダーゼ活性は、１分間に１ｎＭの４−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌ−ｕｍｂｅｒｉｆｅｒｏｎｅを生成する酵素活性を１ユニット（Ｕ）として、予め、作成した検量線から求めた。盲腸内容物中１ｇ当たりの酵素活性の測定結果を図３に示す。
【００３９】
ＵＸ２及びＵＸ１０添加食群では、オリゴ糖無添加食群と比較して、盲腸内容物中のβ−グルクロニダーゼ活性が有意に低下していることが判明した。これは、酸性キシロオリゴ糖によりビフィズス菌等が選択的に増殖した為、β−グルクロニダーゼを産生する大腸菌等の増殖が相対的に抑えられたことによると考えられる。β−グルクロニダーゼ活性の低下は、大腸における発がんリスクの低減効果を示唆している。
【００４０】
【発明の効果】
本発明で得られる酸性キシロオリゴ糖組成物を含有した製剤は、優れた生理活性を有しており、便秘改善や大腸発がんリスク低減等の整腸作用を目的とした腸内環境改善剤として利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】盲腸内容物ｐＨに対するキシロオリゴ糖摂取の影響を示す図。
【図２】盲腸内容物中のビフィズス菌数に対するキシロオリゴ糖摂取の影響を示す図。
【図３】盲腸内容物βグルクロニダーゼ活性に対するキシロオリゴ糖摂取の影響を示す図。
【図１】
2004182609.tif 000003
【図２】
2004182609.tif 000004
【図３】
2004182609.tif 000005