(57)【要約】【課題】使用者の望むタイミングで、微生物農薬中の微生物を失活もしくは生菌数を減じることができる、簡便、確実、かつ安全で、２次公害問題のない方法の開発。【解決手段】キトサンの水溶性誘導体を有効成分として含有することを特徴とする微生物農薬の生菌数減少剤、および微生物農薬の懸濁液に、キトサンの水溶性誘導体を添加することを特徴とする微生物農薬の処理方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
キトサンの水溶性誘導体を有効成分として含有することを特徴とする農業生産用微生物資材の生菌数減少剤。
【請求項２】
キトサンの水溶性誘導体が、キトサンと酸の塩、ヒドロキシアルキルキトサン、ヒドロキシアルキルキトサンと酸の塩、あるいはカルボキシメチルキトサンとアルカリの塩である請求項１に記載の生菌数減少剤。
【請求項３】
キトサンが、脱アセチル化度が７０〜１００％であり、重量平均分子量が５万〜１００万のキトサンである請求項１に記載の生菌数減少剤。
【請求項４】
キトサンあるいはヒドロキシアルキルキトサンと塩を形成する酸が、酢酸、乳酸およびクエン酸などの水溶性有機酸である請求項２に記載の生菌数減少剤。
【請求項５】
キトサンの水溶性誘導体が、水もしくは希酸水溶液中に０．５質量％〜２０質量％の濃度で溶解されている請求項１に記載の生菌数減少剤。
【請求項６】
農業生産用資材として有効な微生物が、カビ類もしくは細菌類である請求項１に記載の生菌数減少剤。
【請求項７】
カビ類が、糸状菌である請求項６に記載の生菌数減少剤。
【請求項８】
糸状菌が、トリコデルマ属菌である請求項７に記載の生菌数減少剤。
【請求項９】
細菌類が、バチルス属である請求項６に記載の生菌数減少剤。
【請求項１０】
農業生産用資材として有効な微生物を含有する懸濁液に、キトサンの水溶性誘導体を添加することを特徴とする農業生産用微生物資材の処理方法。
【請求項１１】
農業生産用資材として有効な微生物を含有する懸濁液に、キトサンの水溶性誘導体およびアルギン酸の水溶性誘導体の何れか一方を先に、かつ他方を次に添加する請求項１０に記載の処理方法。
【請求項１２】
アルギン酸の水溶性誘導体が、アルギン酸のナトリウム塩またはアンモニウム塩、あるいはこれらのヒドロキシプロピル化物である請求項１１に記載の処理方法。
【請求項１３】
アルギン酸の水溶性誘導体が、重量平均分子量が５千〜１００万である請求項１１に記載の処理方法。
【請求項１４】
キトサンの水溶性誘導体中のアミノ基とアルギン酸の水溶性誘導体中のカルボキシル基のモル比が、１：０．８〜１．２となるように添加する請求項１１に記載の処理方法。
【請求項１５】
処理前の懸濁液の生菌数を、希釈平板法Ｉ（組成  ＫＨ２ＰＯ４：０．１質量％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ：０．０５質量％、ペプトン：０．５質量％、ブドウ糖：１質量％、ローズベンガル：０．００３質量％、寒天：２質量％、ｐＨ６．８の寒天平板培地を使用し、２７℃で４８時間培養を行い、コロニーを形成させ、コロニー形成数から生菌数を推定する希釈平板法。）もしくは希釈平板法  ＩＩ  （普通寒天培地（日水製薬社製）を培地として２７℃で４８時間培養を行い、コロニーを形成させ、コロニー形成数から生菌数を推定する希釈平板法。）で評価した時、処理によって、処理前の懸濁液の生菌数の１／１０以下とする請求項１０に記載の処理方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、農業生産用微生物資材（以下単に「微生物農薬」という場合がある）の生菌数減少剤および農業生産用微生物資材の処理方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
農業における生産用資材、特に農薬は農作物の生産安定に欠くべからざるものであり、特に自然界に存在する有用微生物を利用する農業生産用資材としての微生物農薬は人畜だけでなく、環境にも優しい農薬として脚光を浴びている（特許文献１〜４）。
【０００３】
【特許文献１】
特開平８−１７５９１９号公報
【特許文献２】
特開平１１−２５３１５１号公報
【特許文献３】
特開昭５５−１４５５０９号公報
【特許文献４】
特開平１−１２８７８２号公報
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
上記微生物農薬に使用される微生物は、自然界に存在する安全性の高いものが選択されているのは当然のことであるが、商品化にあたっては、さらに農薬取締法において厳密かつ十分な安全性テストが行われ、人畜は勿論、環境汚染のないことが確認されている。
【０００５】
このように高い安全性を特徴とする微生物農薬であるが、使用後の残渣水溶液、例えば、微生物農薬を水に分散して、これに各種植物の種子を浸漬して消毒した場合の残渣水溶液を河川などに放流するにあたっては、さらなる安全性の確保のために、残渣水溶液中の生菌数を失活もしくは減じておくことが望ましい。
【０００６】
このための１つの方法は、残渣水溶液を加熱する方法であるが、裸火での加熱には危険を伴い、加熱を安全に行うためには設備が必要となり、個々の農家などでのこの方法の使用は多大な設備投資を必要とするので現実的でない。また、殺菌剤の使用によっても微生物を失活させることはできるが、微生物農薬を使用する本来の意味がなくなってしまう。
【０００７】
そこで、使用者の望むタイミングで、微生物農薬中の微生物を失活もしくは生菌数を減じることができる、簡便、確実、かつ安全で、２次公害問題のない方法の開発が要望されている。従って本発明の目的は、該要望を充分に満たすことにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
上記目的は以下の本発明によって達成される。すなわち、本発明は、キトサンの水溶性誘導体を有効成分として含有することを特徴とする微生物農薬の生菌数減少剤を提供する。
【０００９】
また、本発明は、微生物農薬の懸濁液に、キトサンの水溶性誘導体を添加することを特徴とする微生物農薬の処理方法を提供する。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明の生菌数減少剤は、キトサンの水溶性誘導体を有効成分として含有してなるものである。現在、キトサンは、甲殻類の甲殻、細菌の細胞壁など、自然界に広く分布する多糖であるキチンを脱アセチル化して工業的に製造されているが、キトサンそれ自体も、自然界に存在することが知られている多糖であり、自然界に存在するキトサンと同様に、甲殻類の甲殻からキチンを経て工業生産されたキトサンもエコロジーのサイクルの中でリニューアブルである点は環境保護の点で有用である。
【００１１】
本発明においても、例えば、ケカビの細胞壁に存在するキトサンを分離もしくは分離精製せずに利用することも可能であるが、現段階では、これらキトサンそのものを含有する生物よりも、エビやカニの甲殻の方が入手しやすく、コスト的にもメリットがある。そのために甲殻より、Ｈａｃｋｍａｎの方法を基本に工業的に一旦キチンを製造し、このキチンを濃水酸化ナトリウム中で脱アセチル化してキトサンを製造している。この工業的に製造されたキトサンを使用するのがコスト的に有利であるが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００１２】
本発明で使用するキトサンとしては、希酸水溶液に可溶なものであればよく、その起源、製法、脱アセチル化度、分子量、純度に特別な制約はない。希酸水溶液に対する溶解性のよさ、製造の容易さ、抗菌性の点からは脱アセチル化度７０〜１００％が好適である。また、農薬中の微生物の凝集性の面からは重量平均分子量５０万〜８０万、抗菌性の点では重量平均分子量５万〜２０万のキトサンが有利であり、従って重量平均分子量５万〜１００万のキトサンをバランスよく使用することが有効である。
【００１３】
キトサンの水溶性誘導体とは、キトサンと酸の塩、ヒドロキシエチルキトサン、ヒドロキシプロピルキトサンなどのヒドロキシアルキルキトサン、ヒドロキシアルキルキトサンと酸の塩、あるいはカルボキシメチルキトサンとアルカリの塩などが挙げられる。キトサンの水溶性誘導体の中でも、キトサンと酸の塩は、アルカリによって中和することによって、容易に元のキトサンに再生させることができ、再生されたキトサンおよび酸の両方とも、天然物もしくは天然物同等物として、生分解性にも優れ、エコロジーのサイクルの中でリニューアブルである点において本発明の目的に最適である。
【００１４】
キトサンの誘導体であるヒドロキシエチルキトサン、ヒドロキシプロピルキトサンなどのヒドロキシアルキルキトサン、ヒドロキシアルキルキトサンと酸の塩、あるいはカルボキシメチルキトサンとアルカリの塩は、単純なキトサンの酸塩と比べ、生分解性では劣るものの、十分な生菌数低減効果を示す。これら誘導体はキトサンを出発物質として常法によって調製してもよく、また、キチンを出発物質として常法によってヒドロキシアルキルキチン、あるいはカルボキシメチルキチンを調製した後、脱アセチル化してもよい。得られる誘導体は水溶性であればよく、水溶性が保たれる範囲であれば置換度や分子量に限定はない。
【００１５】
キトサンもしくはキトサン誘導体と塩を形成する酸としては、キトサンとの塩が水溶性となる酸であればよく、塩酸などの無機酸も使用できるが、取り扱いの容易さの点から水溶性有機酸が好ましい。水溶性有機酸の中でも、エコロジーのサイクルの中でリニューアブルである点から、酢酸、乳酸およびクエン酸などの天然に存在することが知られている水溶性有機酸が本発明の目的に最適である。
【００１６】
キトサンもしくはキトサン誘導体と酸との塩において、キトサンもしくはキトサン誘導体中のアミノ基と酸とのモル比は１：０．８〜１．２が望ましい。酸量がアミノ基の０．８モル未満では十分な水溶性が得られない場合がある。また、１．２を超える酸を加えると経済性が悪い。
【００１７】
水にキトサンもしくはキトサン誘導体と酸を添加し、必要に応じて攪拌すると、キトサンもしくはキトサン誘導体と酸が造塩して溶解する。この水溶液を、微生物農薬の懸濁液に必要量添加するのが最も作業性およびコストの点でバランスがよい。
【００１８】
上記以外にも、キトサンもしくはキトサン誘導体と酸との塩は、含水アルコール中でキトサンと酸とを混合して塩を形成させた後、分離乾燥するか、あるいは水にキトサンもしくはキトサン誘導体と酸を加え、溶解した後、スプレードライなどによって乾燥して得られる上記の塩の乾燥物として準備しておき、必要に応じて、水に再溶解あるいは微生物農薬の懸濁液に直接添加して使用してもよい。また、微生物農薬の懸濁液に直接キトサンもしくはキトサン誘導体と酸を添加して、両者による造塩と懸濁液の処理を同時に行ってもよい。
【００１９】
水もしくは希酸水溶液中のキトサンの水溶性誘導体の濃度は、０．５質量％〜２０質量％、さらには５質量％〜１０質量％が好適である。キトサン水溶性誘導体の濃度が０．５質量％未満では濃度が低すぎるため、微生物農薬の懸濁液に必要量添加するのに大量を必要とし、また、２０質量％を超えると水溶液の粘度が高くなり過ぎ、水溶液の流動性に欠ける。
【００２０】
微生物農薬の懸濁液中のキトサンの水溶性誘導体の濃度は懸濁液中の微生物、その他の懸濁粒子量に依存するので一概に言えないが、通常は５〜２００ｐｐｍを目安としてキトサンの水溶性誘導体を添加し、必要に応じて攪拌することによって、懸濁液中の生菌数を添加前の生菌数の１／１０以下に減じることができる。
【００２１】
次に上記本発明の微生物農薬の処理方法を説明する。本発明の上記方法は、微生物農薬の懸濁液に、キトサンの水溶性誘導体を添加することを特徴とする。本発明者らは、前記課題を解決するために、微生物農薬の有効成分である微生物の懸濁液に、キトサンの水溶性誘導体の水溶液を添加した後、その処理前後の懸濁液の生菌数を希釈平板法で評価した時、上記の水溶性誘導体の水溶液を添加混合するのみの簡単な処理によって、生菌数が添加前の生菌数の１／１０以下に減少することを見出した。
【００２２】
１つの具体例を挙げると、農業生産用資材として有効な微生物であるトリコデルマ・アトロビリデＳＫＴ−１を培養して得られた胞子を、水道水１００ｍｌに１×１０６ｃｆｕ／ｍｌになるように懸濁した。この胞子懸濁液を５等分し、その１つには、脱アセチル化度８５％、重量平均分子量８０万のキトサンを使用し、キトサン濃度１質量％および酢酸濃度１質量％に調製したキトサン酢酸水溶液を、胞子懸濁液中のキトサン濃度が１０ｐｐｍになるように添加し、その他の３つに、それぞれＮ−アセチルグルコサミン、キトサン粉末およびキチン粉末をそれぞれ１０ｐｐｍになるように添加し、残り１つは無添加として、同じように攪拌後、室温で３時間放置した懸濁液の生菌数をＫＨ２ＰＯ４：０．１質量％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ：０．０５質量％、ペプトン：０．５質量％、ブドウ糖：１質量％、ローズベンガル：０．００３質量％、寒天：２質量％、ｐＨ６．８の寒天平板培地を使用し、２７℃で４８時間培養を行い、コロニーを形成させ、コロニー形成数から生菌数を推定する希釈平板法で評価した。その結果、キトサン酢酸水溶液を添加した懸濁液の生菌数が添加前の生菌数の１／１，０００以下に減少していたのに対し、キトサン酢酸水溶液を添加しない例では顕著な減少は見られなかった。また、ヒドロキシエチルキトサンおよびヒドロキシプロピルキトサンの酢酸塩を使用した同様の実験でも、懸濁液の生菌数が添加前の生菌数の１／１００近く減少していた。
【００２３】
他の具体例として、トリコデルマ・アトロビリデＳＫＴ−１をバチルス・ｓｐＤ７４７に代え、キトサン酢酸水溶液を脱アセチル化度９８％、重量平均分子量６万のキトサンを使用し、キトサン濃度１０質量％およびクエン酸濃度１０質量％に調製したキトサンクエン酸水溶液と、該水溶液中のキトサンクエン酸を、Ｎ−アセチルグルコサミンをグルコサミン塩酸塩に代えた水溶液を用いて、前記と同様の操作を行い、普通寒天培地（日水製薬社製）を培地として２７℃で４８時間培養を行い、コロニーを形成させ、コロニー形成数から生菌数を推定する希釈平板法で評価したところ、キトサンクエン酸水溶液のみに顕著な生菌数の低減効果があった。
【００２４】
なお、微生物農薬の懸濁液中に、前記のキトサンの水溶性誘導体以外の水不溶性キトサン粉末、キチン粉末、キトサンの構成糖である水溶性のグルコサミン塩酸塩、キチンの構成糖である水溶性のアセチルグルコサミンをキトサンの水溶性誘導体の濃度と同じ濃度で添加し、同様に処理しても懸濁液中の生菌数を添加前の生菌数の１／１０以下に減じることはできなかった。以上のことから、キトサンの水溶性誘導体を微生物農薬の懸濁液に添加混合するという簡単な方法で、懸濁液の生菌数を添加前の生菌数から著しく低減できることがわかる。
【００２５】
本発明方法は、キトサンの水溶性誘導体の添加混合以外に、特別な攪拌は必要ないが、間欠攪拌もしくは緩速攪拌をする方がより効率的である。処理温度は常温でも加熱下でもよく、特別な冷却も必要ない。キトサンの希酸水溶液を添加後、３時間ほどで懸濁液中の生菌数は添加前の生菌数の１／１０以下になるが、その後も経時的に生菌数が低下する傾向にあるので、そのまま８時間以上放置することがより効果的である。また、微生物農薬の懸濁液は、通常ｐＨ８以下であるものが多く、この場合は特にｐＨを調整する必要はないが、ｐＨが８以上の場合はキトサンの水溶性誘導体を添加する以前に懸濁液のｐＨを７以下に調整しておくことが望ましい。
【００２６】
生菌数の低減という意味からは、上記の工程で処理を終ってもよいが、最終的に懸濁液をアルカリを使ってｐＨを７以上、好ましくは７〜８に調整すると、添加したキトサンにより生成した微生物凝集フロックが一層強固になるため、濾別しやすくなるばかりでなく、濾液をそのまま外部に放流することができる点でさらに有利である。ここで使用するアルカリに限定はないが、安全性や取り扱いの手軽さから、炭酸ナトリウムや炭酸水素ナトリウムが好適である。
【００２７】
さらに、微生物農薬の懸濁液に、キトサンの水溶性誘導体を添加した後、アルギン酸の水溶性誘導体を添加すると、同じように懸濁液中の生菌数を添加前の生菌数の１／１０以下に減じることができるうえ、処理後の懸濁液のｐＨをアルカリを使って７〜８に調整した場合以上に強固なフロックを形成し、フロックの濾過が一層容易になることが分かった。そのうえ、キトサンの水溶性誘導体を単独使用する場合は、微生物農薬の懸濁液中の微生物量または微生物以外の夾雑物およびその量によって、キトサンの水溶性誘導体の添加量をある程度厳密に規定しないと、生菌数の低減効果にバラツキがみられるが、アルギン酸の水溶性誘導体を併用すると、キトサンの水溶性誘導体の単独使用の場合程の厳密さが必要なくなることが判明した。
【００２８】
ここでアルギン酸の水溶性誘導体としては、アルギン酸ナトリウムの他に、例えば、アルギン酸アンモニウム、ヒドロキシプロピルアルギン酸ナトリウムを使用しても同様な効果が得られ、アルギン酸の水溶性誘導体であればよいことがわかった。アルギン酸の水溶性誘導体は水溶液として、微生物農薬の懸濁液に、キトサンの水溶性誘導体を添加後、もしくは添加前に加えることができる。両者を添加後、３時間以上保持した後、希釈平板法で懸濁液の生菌数を評価すると、両者を添加する前の状態の生菌数が１／１０以下に減少していた。この場合も攪拌は必須ではないが、間欠攪拌もしくは緩速攪拌する方がより効率的である。処理温度は常温でも加温でもよく、特別な冷却も必要ない。また、生成したフロックは１００メッシュの網で容易に濾別することができた。
【００２９】
アルギン酸も、キトサンと同様に天然に存在する多糖で、工業的にはジャイアントケルプなどの海草から単離され、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸アンモニウム、ヒドロキシプロピルアルギン酸ナトリウムなどとして大量に販売されている。エコロジーのサイクルの中でリニューアブルである点もキトサンと変わらない。本発明で使用するアルギン酸の水溶性誘導体は水溶性であればよく、その起源、製法、カルボキシル基量、分子量、純度に特別な制約はない。これらのアルギン酸の水溶性誘導体の重量平均分子量は５千以上であることが望ましく、水に対する溶解性の良さ、製造の容易さの点から、より好適には重量平均分子量が１０〜８０万のものである。
【００３０】
アルギン酸の水溶性誘導体の水溶液中のアルギン酸の水溶性誘導体の濃度は０．５質量％〜４０質量％、さらに好適には５質量％〜２０質量％である。アルギン酸の水溶性誘導体の濃度が０．５質量％未満では濃度が低すぎるため、微生物農薬の懸濁液に必要量添加するのに大量を必要とし、また、４０質量％を超えると、水溶液の粘度が高くなり過ぎ、水溶液の流動性に欠ける。
【００３１】
キトサンの水溶性誘導体とアルギン酸の水溶性誘導体とを併用する場合、何れを先に使用してもよく、また、ほぼ同時に使用してもよいが、キトサンの水溶性誘導体中のアミノ基とアルギン酸の水溶性誘導体のカルボキシル基のモル比が１：０．８〜１．２になるように、微生物農薬の懸濁液に添加することが望ましい。このモル比以外でも生菌数低減効果には影響しないが、上記のモル比以外ではどちらかが過剰となり不経済である。
【００３２】
微生物農薬の懸濁液中のキトサンの水溶性誘導体およびアルギン酸の水溶性誘導体の濃度は、懸濁液中の微生物、その他の懸濁粒子量に依存するので一概に言えないが、通常は両者それぞれ０．５〜１００ｐｐｍを目安とする。
【００３３】
処理によって生じる濾別物は基本的に安全無害な微生物および多糖類のみが主成分であり、これを焼却処分することも可能であるが、肥料などとして田畑に還元することもできる。濾別物のいずれもが生分解性で、エコロジーのサイクルの中に取り込まれ、環境に同化する。このことも本発明で多糖類を使用していることの大きなメリットである。
【００３４】
本発明の方法は、特にトリコデルマ・アトロビリデＳＫＴ−１が属するトリコデルマ属菌を含む糸状菌、あるいはバチルス・ｓｐ  Ｄ７４７が属するバチルス属を含む細菌類の微生物農薬を懸濁液として使用する場合の生菌数低減処理に有効である。
【００３５】
トリコデルマ・アトロビリデＳＫＴ−１の懸濁液の生菌数は希釈平板法Ｉ（組成  ＫＨ２ＰＯ４：０．１質量％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ：０．０５質量％、ペプトン：０．５質量％、ブドウ糖：１質量％、ローズベンガル：０．００３質量％、寒天：２質量％、ｐＨ６．８の寒天平板培地を使用し、２７℃で４８時間培養を行い、コロニーを形成させ、コロニー形成数から生菌数を推定する希釈平板法。）、もしくはバチルス・ｓｐ  Ｄ７４７の懸濁液の生菌数は、希釈平板法ＩＩ（普通寒天培地（日水製薬社製）を培地として２７℃で４８時間培養を行い、コロニーを形成させ、コロニー形成数から生菌数を推定する希釈平板法。）で評価する。
【００３６】
本発明における作用機構を考えるうえで、微生物農薬の農薬としての作用機構が参考になる。微生物農薬の作用機構は種々考えられるが、その中で重要かつ代表的なものは微生物農薬中の微生物による病害微生物の溶菌作用である。この溶菌作用を司っているのはキチナーゼ、キトサナーゼ、リゾチームなどの溶菌酵素であり、微生物農薬の有効成分である微生物は、この溶菌酵素活性の高いものが多い。これらの微生物農薬の有効成分である微生物もしくは溶菌酵素は、病害微生物細胞壁に存在するキチン、キトサンと特異なアフィニティを持ち、これにより溶菌酵素がキチン、キトサンと接触して細胞壁が分解し、結果として病害微生物が溶菌する。
【００３７】
従って、微生物農薬の懸濁液に、キトサンの水溶性誘導体を添加すると、病害微生物の場合と同様に、微生物農薬の有効成分である微生物の持つ特異なキチン、キトサンに対するアフィニティで、添加したキチン、キトサンあるいはそれらの誘導体に微生物農薬の有効成分である微生物が吸着することが考えられる。このアフィニティは、一般の合成高分子凝集剤にはないキチン、キトサン特有の凝集力である。実際に、このアフィニティを利用して、キチン、キトサン粉末を充填したカラムが酵素分離用のアフィニティクロマトとして利用されている。アフィニティクロマト以外にも、キトサンは実際に高分子凝集剤としてし尿処理などに使用されており、キトサンが微生物に対しても凝集能を持つことも公知である。さらに、キトサンが抗菌性を有することも公知である。
【００３８】
しかし、キチンやキトサンの粉末を使用した場合には、本発明の方法による如く、生菌数低減効果が見られなかったことから、このキチンやキトサンの持つ特異なアフィニティおよびキトサンの抗菌力のみでは本発明の生菌数低減機構は説明できない。また、キトサンの水溶性誘導体を添加後、３時間よりも８時間後、２４時間後と生菌数が低減すること、特にキトサンの水溶性誘導体およびアルギン酸の水溶性誘導体の両方を加えた後においても、同様の経過をたどることから考えても、単なる凝集と言うことだけでも片付けられない。本発明の効果はキトサンの持つ得意なアフィニティがドライビングフォースとなって、これら機能の複合化した結果と考えられる。さらに、アルギン酸の水溶性誘導体の併用によって、処理によって生成する凝集フロックの強度向上、およびキトサンの水溶性誘導体とアルギン酸の水溶性誘導体の添加量の許容範囲の拡大を計ることができる。
【００３９】
また、以上の機能とは別に、生菌数の低減には機能しないが、キトサンの水溶性誘導体およびアルギン酸の水溶性誘導体は生分解され、自然界で再生されるという機能も有する。本発明はこれら機能の複合化であり、これまでに、キトサンの水溶性誘導体およびアルギン酸の水溶性誘導体の持つ機能を効果的に複合化して、農業生産用資材、特に微生物農薬の処理に使用した例はない。なお、本発明の方法においては必要に応じて適切な防腐剤、アルコール類、粘性改良目的の界面活性剤などの添加剤を加えることができる。
【００４０】
以上の本発明の実施の形態を要約すれば以下の通りである。
（１）生菌数減少剤については、キトサンの水溶性誘導体が、キトサンと酸の塩、ヒドロキシアルキルキトサン、ヒドロキシアルキルキトサンと酸の塩、あるいはカルボキシメチルキトサンとアルカリの塩であること；キトサンが、脱アセチル化度が７０〜１００％であり、重量平均分子量が５万〜１００万のキトサンであること；キトサンあるいはヒドロキシアルキルキトサンと塩を形成する酸が、酢酸、乳酸およびクエン酸などの水溶性有機酸であること；キトサンの水溶性誘導体が、水もしくは希酸水溶液中に０．５質量％〜２０質量％の濃度で溶解されていること；微生物農薬として有効な微生物が、カビ類もしくは細菌類であること；カビ類が糸状菌であること；糸状菌がトリコデルマ属菌であこと；および細菌類がバチルス属であることなどが挙げられる。
【００４１】
（２）処理方法については、微生物農薬の懸濁液に、キトサンの水溶性誘導体およびアルギン酸の水溶性誘導体の何れか一方を先に、かつ他方を次に添加すること；アルギン酸の水溶性誘導体が、アルギン酸のナトリウム塩またはアンモニウム塩、あるいはこれらのヒドロキシプロピル化物であること；アルギン酸の水溶性誘導体が、重量平均分子量が５千〜１００万であること；キトサンの水溶性誘導体中のアミノ基とアルギン酸の水溶性誘導体中のカルボキシル基のモル比が、１：０．８〜１．２となるように添加すること；および処理前後の懸濁液の生菌数を希釈平板法Ｉ（組成  ＫＨ２ＰＯ４：０．１質量％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ：０．０５質量％、ペプトン：０．５質量％、ブドウ糖：１質量％、ローズベンガル：０．００３質量％、寒天：２質量％、ｐＨ６．８の寒天平板培地を使用し、２７℃で４８時間培養を行い、コロニーを形成させ、コロニー形成数から生菌数を推定する希釈平板法。）もしくは希釈平板法  ＩＩ  （普通寒天培地（日水製薬社製）を培地として２７℃で４８時間培養を行い、コロニーを形成させ、コロニー形成数から生菌数を推定する希釈平板法。）で評価した時、処理によって、処理前の懸濁液の生菌数の１／１０以下とすることなどが挙げられる。
【００４２】
【実施例】
次に実施例および比較例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの例によって何ら限定されるものではない。なお、実施例および比較例で使用するトリコデルマ・アトロビリデＳＫＴ−１およびバチルス・ｓｐ  Ｄ７４７は通商産業省工業技術院微生物工業研究所にＦＥＲＭ−１６５１０およびＦＥＲＭ−１８１２８として寄託されている。
【００４３】
製造例１
脱アセチル化度８５％、重量平均分子量８０万のキトサンを使用し、キトサン濃度１質量％、酢酸濃度１質量％となるよう水道水を使用してキトサン水溶液（Ａ）を調製した。また、脱アセチル化度９８％、重量平均分子量６万のキトサンを使用し、キトサン濃度１０質量％、クエン酸濃度１０質量％となるよう地下水を使用してキトサン水溶液（Ｂ）を調製した。
【００４４】
実施例１
トリコデルマ・アトロビリデＳＫＴ−１を培養して得られた胞子を水道水１００ｍｌに１×１０６ｃｆｕ／ｍｌになるように懸濁した。これにキトサン水溶液（Ａ）を最終濃度１０ｐｐｍになるように添加し、室温で３時間放置した。
【００４５】
比較例１
トリコデルマ・アトロビリデＳＫＴ−１を培養して得られた胞子を水道水１００ｍｌに１×１０６ｃｆｕ／ｍｌになるように懸濁した。これにキトサン粉末を最終濃度１０ｐｐｍになるように添加し、室温で３時間放置した。
【００４６】
比較例２
トリコデルマ・アトロビリデＳＫＴ−１を培養して得られた胞子を水道水１００ｍｌに１×１０６ｃｆｕ／ｍｌになるように懸濁した。これにキチン粉末を最終濃度１０ｐｐｍになるように添加し、室温で３時間放置した。
【００４７】
比較例３
トリコデルマ・アトロビリデＳＫＴ−１を培養して得られた胞子を水道水１００ｍｌに１×１０６ｃｆｕ／ｍｌになるように懸濁した。これにＮ−アセチルグルコサミンを最終濃度１０ｐｐｍになるように添加し、室温で３時間放置した。
【００４８】
試験方法１
実施例１および比較例１〜３の懸濁液を軽く撹拌し、処理前の生菌数と処理後の生菌数との比較を以下に示す方法で計数した。
ＫＨ２ＰＯ４：０．１質量％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ：０．０５質量％、ペプトン：０．５質量％、ブドウ糖：１質量％、ローズベンガル：０．００３質量％、寒天：２質量％、ｐＨ６．８の組成を培地として希釈平板法Ｉにて生菌数を測定した。寒天平板培地は２７℃で４８時間培養を行い、コロニーを形成させ、コロニー形成数から生菌数を推定した。これをコロニー形成ユニット（ｃｆｕ）とし、懸濁液１ｍｌ当たりの生菌数をｃｆｕ／ｍｌとして表示した。結果を表１に示した。
【００４９】
2004231551.tif 000002
【００５０】
実施例２
バチルス・ｓｐ  Ｄ７４７を培養して得られた胞子を水道水１００ｍｌに１×１０８ｃｆｕ／ｍｌになるように懸濁した。これにキトサン水溶液（Ｂ）を最終濃度１０ｐｐｍになるように添加し、室温で３時間放置した。
【００５１】
比較例４
バチルス・ｓｐ  Ｄ７４７を培養して得られた胞子を水道水１００ｍｌに１×１０８ｃｆｕ／ｍｌになるように懸濁した。これにキトサン粉末を最終濃度１０ｐｐｍになるように添加し、室温で３時間放置した。
【００５２】
比較例５
バチルス・ｓｐ  Ｄ７４７を培養して得られた胞子を水道水１００ｍｌに１×１０８ｃｆｕ／ｍｌになるように懸濁した。これにキチン粉末を最終濃度１０ｐｐｍになるように添加し、室温で３時間放置した。
【００５３】
比較例６
バチルス・ｓｐ  Ｄ７４７を培養して得られた胞子を水道水１００ｍｌに１×１０８ｃｆｕ／ｍｌになるように懸濁した。これにグルコサミン塩酸塩を最終濃度１０ｐｐｍになるように添加し、室温で３時間放置した。
【００５４】
試験方法２
実施例２および比較例４〜６の懸濁液を軽く撹拌し、処理前の生菌数と処理後の生菌数の比較を以下に示す方法で計数した。普通寒天培地（日水製薬社製）を培地として希釈平板法ＩＩにて生菌数を測定した。寒天平板培地は２７℃で４８時間培養を行い、コロニーを形成させ、コロニー形成数から生菌数を推定した。これをコロニー形成ユニット（ｃｆｕ）とし、懸濁液１ｍｌ当たりの生菌数をｃｆｕ／ｍｌとして表示した。結果を表２に示した。
【００５５】
2004231551.tif 000003
【００５６】
以下の試験のスケールは、全て２．５Ｋｇの乾籾に５リットルの微生物農薬の有効成分であるトリコデルマ・アトロビリデＳＫＴ−１の胞子を入れ、１５℃で２４時間浸漬を行った後、籾を取り出し、残った液部分を廃液として以下の試験に供試した。
【００５７】
実施例３
・使用籾：２００２年度産コシヒカリ
・使用キトサン乳酸水溶液：重量平均分子量２３万のキトサンを使用し、キトサン濃度１質量％、乳酸濃度１質量％の水溶液を調製した。
・使用アルギン酸ナトリウム水溶液：重量平均分子量４５万のアルギン酸ナトリウムを使用し、アルギン酸ナトリウム濃度１質量％の水溶液を調製した。上記廃液に表３の濃度になるようにキトサン酢酸水溶液を添加し、３０分攪拌した後、さらに表３の濃度になるようにアルギン酸ナトリウム溶液を加え、２時間攪拌した後、１時間静置し、上澄み液を採取し、希釈平板法Ｉで生菌数を測定した。結果を表３に示す。
【００５８】
2004231551.tif 000004
【００５９】
実施例４
前記の試験方法１と同様にして、廃液中の最終キトサン濃度が２０ｐｐｍになるようにキトサン酢酸水溶液を、また、最終濃度２４ｐｐｍになるようにアルギン酸ナトリウム溶液を添加した。その後、廃液を１７時間緩速攪拌した後、１時間静置し、上澄み液を採取し、希釈平板法Ｉで生菌数を測定した。結果を表４に示す。キトサン・アルギン酸ナトリウム添加後は生菌数が約１／３００に減少していた。
【００６０】
2004231551.tif 000005
【００６１】
実施例５
・使用籾：２００２年度産コシヒカリ
・使用ヒドロキシエチルキトサン酢酸水溶液：重量平均分子量８万のヒドロキシエチルキトサンを使用し、ヒドロキシエチルキトサン濃度５質量％、酢酸濃度６質量％のヒドロキシエチルキトサン酢酸水溶液（Ｃ）を調製した。上記廃液に表５の濃度になるように溶液（Ｃ）を添加し、３０分攪拌し、さらに１０時間攪拌後、１時間静置し、上澄み液を採取し、希釈平板法Ｉで生菌数を測定した。結果を表５に示す。
【００６２】
2004231551.tif 000006
【００６３】
【発明の効果】
以上の如き本発明によれば、使用者の望むタイミングで、微生物農薬中の微生物を失活もしくは生菌数を減じることができる、簡便、確実、かつ安全で、２次公害問題のない、微生物農薬の生菌数減少剤および微生物農薬の処理方法が提供される。