(57)【要約】      （修正有）【課題】ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を検出するための免疫測定用試薬であって、感度及び特異性に優れた測定試薬を提供すること。【解決手段】ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を検出するための免疫測定用試薬であって、Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒなどのアミノ酸配列であってかつアミノ酸の個数が８〜５０個であるアミノ酸配列を必須構成単位としてなるポリペプチドを含んでなることを特徴とする免疫測定用試薬を用いる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を検出するための免疫測定用試薬であって、Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ（１）、Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ（２）、Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  ＴｈｒＡｌａ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ（３）、Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ（４）、Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ    Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｉｌｅ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（５）、Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ（６）、又はＬｙｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ（７）に含まれる少なくとも１種のアミノ酸配列であってかつアミノ酸の個数が８〜５０個であるアミノ酸配列を必須構成単位としてなるポリペプチドを含んでなることを特徴とする免疫測定用試薬。
【請求項２】
ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を検出するための免疫測定用試薬であって、Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ（１）に含まれる少なくとも１種のアミノ酸配列であって、かつアミノ酸の個数が８〜５０個であるアミノ酸配列を構成単位としてなるポリペプチドと、
Ｌｙｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ（７）に含まれる少なくとも１種のアミノ酸配列であって、かつアミノ酸の個数が８〜５０個であるアミノ酸配列を構成単位としてなるポリペプチドとを含んでなることを特徴とする免疫測定用試薬。
【請求項３】
Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ（２）、ＳｅｒＧｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  ＰｈｅＣｙｓ（３）、Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ（４）、Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ    Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｉｌｅ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（５）、又はＧｌｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ（６）に含まれる少なくとも１種のアミノ酸配列であって、かつアミノ酸個数が８〜２０個であるアミノ酸配列を構成単位としてなるポリペプチドをさらに含んでなる請求項２に記載の試薬。
【請求項４】
ポリペプチドを構成するアミノ酸の個数が、１０〜５０個である請求項１〜３のいずれかに記載の試薬。
【請求項５】
ポリペプチドが水不溶性担体に結合されてなる請求項１〜４のいずれかに記載の試薬。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の試薬と、抗ヒトイムノグロブリン抗体を含有してなる免疫測定用試薬キット。
【請求項７】
抗ヒトイムノグロブリン抗体が標識化合物で標識されてなる請求項６記載の試薬キット。
【請求項８】
標識化合物が酵素である請求項７記載の試薬キット。
【請求項９】
請求項６〜８のいずれかに記載の試薬キットをサンドイッチ法に適用し、抗ヒトイムノグロブリン抗体を定量することにより、検体中のｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体の有無を判断する工程を含むｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体の免疫測定方法。
【請求項１０】
化学発光酵素免疫測定法による請求項９記載の免疫測定方法。
【請求項１１】
検体中のｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体の有無を判断する工程において、検体として血液を用い、この検体に対する抗ヒトイムノグロブリン抗体量と、
複数の健常人の血液に対する抗ヒトイムノグロブリン量から設定される基準値とを比較することを含む請求項９又は１０に記載の免疫測定方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を検出するための免疫測定用試薬、免疫測定用試薬キット及び抗ｐ５３遺伝子産物自己抗体の免疫測定方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
ｐ５３遺伝子は、３９３個のアミノ酸からなる核内リン酸化蛋白質（以下、ｐ５３遺伝子産物）をコードする癌抑制遺伝子であり、種々のヒト癌において高頻度に欠失と点突然変異が認められ（非特許文献１）、変異型ｐ５３遺伝子産物は非常に長い半減期を有することから、癌細胞ではその発現が増加し、蓄積することが知られている（非特許文献２）。一方、乳癌又は肺癌等の癌患者においては、血中にｐ５３遺伝子産物と反応する自己抗体が出現することがウエスタンブロット法及び免疫沈降法等で認められている（非特許文献３）。そして、ｐ５３遺伝子産物の全体（アミノ酸３９３個）又は断片（アミノ酸１００個程度）を固相化した担体を用いるｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体の測定法が知られている（例えば、特許文献１）。
【０００３】
【非特許文献１】サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ），２５０，１２３３頁，１９９０年
【非特許文献２】オンコジーン（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ），６，１６９９頁，１９９１年
【非特許文献３】インターナショナル  ジャーナル  オブ  キャンサー（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ），３０，４０３頁，１９８２年
【特許文献１】
特開平９−２２９９３３号公報
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
従来のｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体の測定法では、自己抗体を保有しない健常人からの検体の測定値と自己抗体を保有する癌患者からの検体の測定値との差が小さく（感度が低い）、また自己抗体を保有しない健常人の検体でも非特異的反応により誤った測定数値となる場合があった。
したがって、本発明の目的は、ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を検出するための免疫測定用試薬であって、感度及び特異性に優れた測定試薬を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するために鋭意研究を行った結果、本発明者らは、ｐ５３遺伝子産物のより小さなペプチド断片（つまりｐ５３遺伝子産物中の特定のアミノ酸配列からなるペプチド）が自己抗体と特異的に結合することを見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明は、ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を検出するための免疫測定用試薬であって、Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ（１）、Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  ＬｅｕＳｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ（２）、Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ（３）、Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ（４）、Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ    Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｉｌｅ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（５）、Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ（６）、又はＬｙｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  ＬｙｓＧｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  ＧｌｎＳｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ（７）に含まれる少なくとも１種のアミノ酸配列であってかつアミノ酸の個数が８〜５０個であるアミノ酸配列を必須構成単位としてなるポリペプチドを含んでなることを特徴とする免疫測定用試薬である。
【０００６】
また、ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を検出するための免疫測定用試薬であって、Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ（１）に含まれる少なくとも１種のアミノ酸配列であって、かつアミノ酸の個数が８〜５０個であるアミノ酸配列を構成単位としてなるポリペプチドと、
Ｌｙｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ（７）に含まれる少なくとも１種のアミノ酸配列であって、かつアミノ酸の個数が８〜５０個であるアミノ酸配列を構成単位としてなるポリペプチドとを含んでなることを特徴とする免疫測定用試薬である。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明の免疫測定用試薬に含まれるポリペプチドとしては、ｐ５３遺伝子産物｛Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｌｅｕ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｌａ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｌｙｓ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｈｉｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｃｙｓ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｎ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｉｌｅ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａ��ｇ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ（６２）｝中に含まれる特定のアミノ酸配列を必須構成単位としてなるポリペプチドである。特定のアミノ酸配列とは、アミノ酸配列（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）又は（７）に含まれる少なくとも１種のアミノ酸配列であってかつアミノ酸の個数が８〜５０個であるアミノ酸配列である。
【０００８】
特定のアミノ酸配列中のアミノ酸の個数は、抗原性及び調製等の観点から、８〜５０が好ましく、さらに好ましくは８〜３０、特に好ましくは８〜２０である。
【０００９】
特定のアミノ酸配列としては、アミノ酸配列（１）に含まれるアミノ酸配列（Ａ）、アミノ酸配列（２）に含まれるアミノ酸配列（Ｂ）、アミノ酸配列（３）に含まれるアミノ酸配列（Ｃ）、アミノ酸配列（４）に含まれるアミノ酸配列（Ｄ）、アミノ酸配列（５）に含まれるアミノ酸配列（Ｅ）、アミノ酸配列（６）に含まれるアミノ酸配列（Ｆ）、及びアミノ酸配列（７）に含まれるアミノ酸配列（Ｇ）が含まれる。
アミノ酸配列（１）に含まれるアミノ酸配列（Ａ）としては、Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ（１）、Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  ＧｌｕＰｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ（８）、Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ（９）、Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ（１０）、Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ（１１）、Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ（１２）、Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ（１３）、Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ（１４）、Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ（１５）、Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  ＭｅｔＡｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ（１６）、Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ（１７）、及びＡｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  （１８）  等が挙げられる。
これらのうち、アミノ酸配列（１７）及び（１８）が好ましい。
【０００１０】
アミノ酸配列（２）に含まれるアミノ酸配列（Ｂ）としては、Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ（２）、Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  ＡｌａＰｒｏ  Ｓｅｒ（１９）、Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ（２０）、Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ（２１）、Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ（２２）、Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  ＳｅｒＳｅｒ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ（２３）、Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  ＡｌａＰｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  （２４）、及びＰｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ（２５）等が挙げられる。
これらのうち、アミノ酸配列（２４）及び（２５）が好ましい。
【００１１】
アミノ酸配列（３）に含まれるアミノ酸配列（Ｃ）としては、Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ（３）、Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ（２６）、Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ（２７）、Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ（２８）、Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ（２９）、及びＡｌａ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ（３０）等が挙げられる。
これらのうち、アミノ酸配列（３０）が好ましい。
【００１２】
アミノ酸配列（４）に含まれるアミノ酸配列（Ｄ）としては、Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ（４）、Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ（３１）、Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ（３２）、Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ（３３）、Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ（３４）、及びＡｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  （３５）等が挙げられる。
これらのうち、アミノ酸配列（３５）が好ましい。
【００１３】
アミノ酸配列（５）に含まれるアミノ酸配列（Ｅ）としては、Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｉｌｅ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（５）、Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ（３６）、Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｉｌｅ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ（３７）、Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ（３８）、Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（３９）、Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  ＭｅｔＡｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ（４０）、Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｉｌｅ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ（４１）、Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ（４２）、Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（４３）、ＡｓｎＳｅｒ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｉｌｅ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  ＬｅｕＧｌｕ  （４４）、及びＡｓｎ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ（４５）等が挙げられる。
これらのうち、アミノ酸配列（４４）及び（４５）が好ましい。
【００１４】
アミノ酸配列（６）に含まれるアミノ酸配列（Ｆ）としては、Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ（６）、Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ（４６）、Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ（４７）、Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ（４８）、Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ（４９）、Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ（５０）、及びＧｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ（５１）等が挙げられる。
これらのうち、アミノ酸配列（５１）が好ましい。
【００１５】
アミノ酸配列（７）に含まれるアミノ酸配列（Ｇ）としては、Ｌｙｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ（７）、Ｌｙｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ（５２）、Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ（５３）、Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ（５４）、Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ（５５）、Ｌｙｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｌａ（５６）、Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ（５７）、Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ（５８）、Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ（５９）、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  ＡｒｇＡｌａ  Ｈｉｓ（６０）、  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ（６１）等が挙げられる。
これらのうち、アミノ酸配列（６０）及び（６１）が好ましい。
【００１６】
これらの特定のアミノ酸配列のうち、自己抗体との反応性（特異性及び感度）等の観点から、アミノ酸配列（Ａ）及びアミノ酸配列（Ｇ）が好ましく、さらに好ましくはアミノ酸配列（１）、（７）、（１３）、（１６）、（１７）、（１８）、（５２）、（５３）、（５４）（５５）、（５６）、（５８）、（６０）及び（６１）、特に好ましくはアミノ酸配列（１７）、（１８）、（６０）及び（６１）である。
【００１７】
そして、ポリペプチドには、ポリペプチド１分子当たりに、これらの特定のアミノ酸配列の少なくとも１種を含んでいればよく、２種以上を同時に含んでもいてもよい。また、ポリペプチド１分子当たりに、これらの特定のアミノ酸配列の繰り返し配列（重合体）を含んでもよい。
ポリペプチドとしては、アミノ酸配列（１）〜（６１）からなる群より選ばれる少なくとも１種を含んでなるポリペプチド及びこれらの繰り返し配列（重合体）を含んでなるポリペプチド等が含まれる。
これらのうち、アミノ酸配列（１）〜（６１）からなる群より選ばれる少なくとも１種を含んでなるポリペプチドが好ましく、さらに好ましくはアミノ酸配列（１）〜（６１）のいずれか１種を含むポリペプチドである。
【００１８】
ポリペプチドは、これらの特定のアミノ酸配列のみから構成されていてもよく、さらにＮ末端及び／又はＣ末端にビオチン、チオグリコール酸、及び／又はリンカーとして用いるアミノ酸（システイン、リジン、チロシン、グルタミン酸及びアスパラギン酸等）等が含まれていてもよい。また、さらにＮ末端が無水酢酸、Ｎ−アセチルイミダゾール等でアセチル化されていてもよく、Ｃ末端が水溶性カルボジイミド（例えば、１−エチル−３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩）、イソオキサゾリウム（例えば、Ｎ−メチル−５−フェニルイソオキサゾリウムフルオロボレート）等でアミド化されていてもよい。ビオチン又はチオグリコール酸で修飾されていることが好ましく、さらに好ましくはポリペプチドを水不溶性担体と結合する場合の簡便性からビオチンで修飾されていることである。又、これらの修飾は組み合わせて用いることもできる。
Ｎ末端及び／又はＣ末端にアミノ酸を含む場合、このアミノ酸の個数は、Ｎ末端又はＣ末端当たり、１〜５が好ましく、さらに好ましくは１〜３、特に好ましくは１〜２である。
Ｎ末端及び／又はＣ末端にビオチン及び／又はチオグリコール酸を含む場合、ビオチン又はチオグリコール酸の個数はポリペプチド当たり１〜５が好ましく、さらに好ましくは１〜３、特に好ましくは１〜２である。
【００１９】
ポリペプチドを構成するアミノ酸の個数は、１０以上が好ましく、さらに好ましくは１１以上、特に好ましくは１３以上、最も好ましくは１５以上であり、また、５０以下が好ましく、さらに好ましくは４０以下、特に好ましくは３０以下、最も好ましくは２５以下である。
【００２０】
ポリペプチドは、従来公知の遺伝子組み換え法、又はペプチド合成法等で作成できる。
遺伝子組み換え法は、比較的アミノ酸数の多いポリペプチドを容易に作成できるというメリットがあるけれど、宿主由来の狭雑蛋白が存在すること、ポリペプチドが融合蛋白として生産される点で、検体との非特異的反応を生じやすいというデメリットがある。従って、これらの方法のうち、ペプチド合成法が好ましい。
遺伝子組み換え法としては、ＳＶ４０ウイルス、Ｅ１アデノウイルス、Ｅ６パピローマウイルス等をヒト線維芽細胞等の細胞に導入した後、トランスフォーマントから抽出したｍＲＮＡからｃＤＮＡを作製し、これをＰＣＲ法によって増幅した後制限酵素で切断し、断片をベクターに組み込み、得られた発現ベクターで大腸菌等の宿主を形質転換し、必要あれば誘導処理した後、宿主を培養し、菌体溶解物から目的とする融合蛋白質を抽出し、精製する。このようにして、ポリペプチドを含む融合蛋白質を作成できる（例えば、生化学実験法４５「組み換えタンパク質生産法」，学会出版センター社，２００１年）。又、ｐ５３遺伝子配列から目的のポリペプチドに該当する遺伝子配列をＤＮＡ合成機で合成した後、ベクターに組み込むことで、同様にポリペプチドを作成できる。
【００２１】
ペプチド合成法は、溶液中でも、あるいは固体支持体上でも達成できるが固相支持体を用いた固相合成法が好ましく、さらに好ましくは自動ペプチド合成機を用いた固相合成法である。ポリペプチド合成法は、一般に、ｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ基）又は９−フルオレニルメトキシ−カルボニル（Ｆｍｏｃ基）で保護された活性化アミノ酸を使用する。この他、具体的な合成操作、側鎖保護の種類、および切断法等は、例えば、ソリッド  フェーズ  ペプタイド  シンセシス第２版、ピース  ケミカル社、１９８４（Ｓｔｅｗａｒｔ及びＹｏｕｎｇ，“Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，第２版，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９８４）、及びソリッド  フェーズ  ペプタイド  シンセシス、アイ  アール  エル社、１９８９（Ａｔｈｅｒｔｏｎ及びＳｈｅｐｐａｒｄ，“Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９）に詳細に記述されている。
【００２２】
本発明の免疫測定用試薬は、このようなポリペプチドの少なくとも１種を含んでいればよいが、２種以上のポリペプチドを含んでいることが、自己抗体との反応性（特異性及び感度）がより高くなる点で好ましい。さらに好ましくはアミノ酸配列（Ａ）を含むポリペプチドとアミノ酸配列（Ｇ）とを含むポリペプチドを含むことであり、特に好ましくはアミノ酸配列（Ａ）を含むポリペプチド及びアミノ酸配列（Ｇ）を含むポリペプチドに加え、アミノ酸配列（Ｂ）〜（Ｆ）のうち少なくとも１つのアミノ酸配列を含むポリペプチドを含むこと、最も好ましくはアミノ酸配列（Ａ）〜（Ｇ）のいずれかを含むポリペプチドをそれぞれ１個ずつ含むことである。
【００２３】
本発明の免疫測定用試薬の好ましいポリペプチドの組合せ例としては、例えば、次の組合せが例示できる。なお、カッコ内の数字は、アミノ酸配列番号に対応しており、そのアミノ酸配列からなるポリペプチドを表す。すなわち、（１）＋（７）は、アミノ酸配列（１）からなるポリペプチドとアミノ酸配列（７）からなるポリペプチドとの組合せを表す。
（１）＋（７）、（１７）＋（６０）、（１８）＋（６１）、（１７）＋（６１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）、（１）＋（７）＋（２）、（１）＋（７）＋（２４）＋（２５）、（１）＋（７）＋（３）、（１）＋（７）＋（３０）、（１）＋（７）＋（４）、（１）＋（７）＋（３５）、（１）＋（７）＋（５）、（１）＋（７）＋（４４）＋（４５）、（１）＋（７）＋（６）、（１）＋（７）＋（５１）、（１）＋（７）＋（２）＋（３）、（１）＋（７）＋（２）＋（４）、（１）＋（７）＋（２）＋（５）、（１）＋（７）＋（２）＋（６）、（１）＋（７）＋（３）＋（４）、（１）＋（７）＋（３）＋（５）、（１）＋（７）＋（３）＋（６）、（１）＋（７）＋（４）＋（５）、（１）＋（７）＋（４）＋（６）、（１）＋（７）＋（５）＋（６）、（１）＋（７）＋（２）＋（３）＋（４）、（１）＋（７）＋（２）＋（３）＋（５）、（１）＋（７）＋（２）＋（３）＋（６）、（１）＋（７）＋（３）＋（４）＋（５）、（１）＋（７）＋（３）＋（４）＋（６）、（１）＋（７）＋（４）＋（５）＋（６）、（１）＋（７）＋（２）＋（４）＋（５）、（１）＋（７）＋（２）＋（４）＋（６）、（１）＋（７）＋（２）＋（５）＋（６）、（１）＋（７）＋（３）＋（５）＋（６）、（１）＋（７）＋（２）＋（３）＋（４）＋（５）、（１）＋（７）＋（２）＋（３）＋（４）＋（６）、（１）＋（７）＋（３）＋（４）＋（５）＋（６）、（１）＋（７）＋（２）＋（４）＋（５）＋（６）、（１）＋（７）＋（２）＋（３）＋（５）＋（６）、（１）＋（７）＋（２）＋（３）＋（４）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（４）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３）＋（４）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３）＋（５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（４）＋（５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（４）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）＋（４）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）＋（５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３）＋（４）＋（５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３）＋（４）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（４）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（４）＋（５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（４）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）＋（４）＋（５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）＋（４）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３）＋（４）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（４）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）＋（４）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（４４）＋（４５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３０）＋（３５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３０）＋（４４）＋（４５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３０）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３５）＋（４４）＋（４５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（４４）＋（４５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（３５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（４４）＋（４５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３０）＋（３５）＋（４４）＋（４５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３０）＋（３５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３５）＋（４４）＋（４５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３５）＋（４４）＋（４５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（４４）＋（４５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３０）＋（４４）＋（４５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（３５）＋（４４）＋（４５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（３５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３０）＋（３５）＋（４４）＋（４５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３５）＋（４４）＋（４５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（４４）＋（４５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（３５）＋（４４）＋（４５）＋（５１）
これらのうち、（１）＋（７）＋（２）＋（３）＋（４）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）＋（５）＋（６）、及び（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（３５）＋（４４）＋（４５）＋（５１）が好ましく、さらに好ましくは（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（３５）＋（４４）＋（４５）＋（５１）である。
【００２４】
本発明の免疫測定用試薬は、上記のポリペプチドを含めば、試薬の剤型及び構成等に制限はなく、例えば、ポリペプチドが、水不溶性担体及び／又は標識化合物と結合したかたちで試薬に含まれてもよく、ポリペプチド単独で含まれていてもよい。すなわち本発明の試薬は、比朧法、ラテックス凝集法及び比濁法等のホモジニアス免疫測定法にも、水不溶性担体を用いたヘテロジニアス免疫測定法にも適用できる。これらのうち、測定感度の点で、ヘテロジニアス免疫測定法用の試薬が好ましい。すなわち、本発明の免疫測定試薬は、ポリペプチドが水不溶性担体に結合して用いることが好ましい。
【００２５】
水不溶性担体としては、特開平２−２０５７７４号公報に記載の担体等が使用でき、無機物及び有機物等が使用でき、例えば、セルロース、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリオレフィン、ポリウレタン、ニトロセルロース、セルロースアセテート、ポリエステル、エポキシ樹脂、フェノール樹脂、絹、フィブロイン、リグニン、ヘミセルロース、キチン、エボナイト、ゴム、ガラス、石英、シリコン及びセラミックス等が挙げられる。これらのうち、ポリスチレン、ガラス、石英及びシリコンが好ましく、さらに好ましくはポリスチレン及びガラス、特に好ましくはガラスである。
【００２６】
水不溶性担体の形状は、使用する目的に合わせて自由に決定でき、真球状や円盤状のビーズ、板状や棒状のスティック、試験管、及び不織布やフィルターのストリップ（短冊状の細片）、微粒子等が挙げられる。これらのうち、ビーズ及び微粒子が好ましく、さらに好ましくは真球状のビーズである。
【００２７】
水不溶性担体の大きさは、使用する目的に合わせて自由に決定できるが、通常は内径４〜１０ｍｍ、深さ１０〜２０ｍｍ程度の反応容器に投入できる大きさである（水不溶性担体が試験管の場合を除く。）。真球状ビーズの場合、直径（ｍｍ）は１〜１０が好ましく、さらに好ましくは２〜８、特に好ましくは３〜７である。円盤状ビーズの場合、直径（ｍｍ）は１〜１０が好ましく、さらに好ましくは２〜８、特に好ましくは３〜７であり、厚さは（ｍｍ）は０．１〜５が好ましく、さらに好ましくは０．２〜２、特に好ましくは０．３〜１である。スティックの場合、長さ（ｍｍ）は２〜１０が好ましく、さらに好ましくは３〜８、特に好ましくは４〜７である。また、スティックの断面積（ｍｍ２）は１〜２５が好ましく、さらに好ましくは２〜１６、特に好ましくは３〜９である。なお、断面積とは、長軸方向に対して垂直に切断した際の切断部分の断面積を意味する。試験管の場合、長さ（ｍｍ）は５〜１００が好ましく、さらに好ましくは８〜８０、特に好ましくは１０〜２０である。また、試験管の内径（ｍｍ）は、５〜２０が好ましく、さらに好ましくは６〜１６、特に好ましくは８〜１２である。ストリップの場合、長さ（ｍｍ）は、５〜１００が好ましく、さらに好ましくは１０〜８０、特に好ましくは１０〜５０である。また、ストリップの幅（ｍｍ）は、１〜２０が好ましく、さらに好ましくは２〜１６、特に好ましくは３〜１０である。厚さは（ｍｍ）は０．１〜２が好ましく、さらに好ましくは０．１〜０．５である。不織布やフィルターの平均孔径（μｍ）は、０．１〜１０が好ましく、さらに好ましくは０．３〜５である。微粒子の場合、平均粒子径（μｍ）は０．０１〜２００が好ましく、さらに好ましくは０．１〜５０、特に好ましくは０．２〜１０である。平均粒子径は、透過型電子顕微鏡法、光学顕微鏡による整列測定法等で測定できる。
【００２８】
ポリペプチドを水不溶性担体に結合する方法としては、化学的に結合する方法及び物理吸着による方法の従来公知の方法等で行うことができる。化学的に結合する方法としては、水不溶性担体表面に導入されたアミノ基及び／又はスルフヒドリル基等の官能基と、ポリペプチドのアミノ基及び／又はスルフヒドリル基等の官能基とを結合剤（グルタルアルデヒド、サクシンアルデヒド、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロサクシンイミドエステル及びｏ−フェニレンビスマレイミド等）で架橋する方法（米国特許第４２８０９９２号明細書及び同第３６５２７６１号明細書等）等が挙げられる。物理吸着による方法としては、水不溶性担体がポリスチレンの場合、ポリペプチドの０．００１〜０．０４％（Ｗ／Ｖ）炭酸緩衝水溶液（ｐＨ９．０）に水不溶性担体を適当時間浸漬する方法（バイオシム・バイオフィズ・アクタ、２５１巻、４２７頁、１９７１年）等が挙げられる。この方法は、担体がポリスチレン以外の物質、例えばポリプロピレン、シリコン、ガラス及びセルロース等にも適用できる。また、ポリペプチドを特異的結合物質（例えば、抗原−抗体、アビジン−ビオチン、レクチン−糖鎖、相補的遺伝子鎖等）を利用して間接的に水不溶性担体に結合することもできる。例えば、ポリペプチドをビオチンで修飾し、アビジンを結合した水不溶性担体と反応することで、ポリペプチドを水不溶性担体に結合できる。アビジンとしては、卵白由来アビジン及びストレプトアビジン等が使用でき、ストレプトアビジンが好ましい。これら特異的結合物質のうち抗原−抗体、アビジン−ビオチン、レクチン−糖鎖については例えば、［生化学実験法１１「エンザイムイムノアッセイ」，東京化学同人社，１９８９年］に記載のもの、相補的な遺伝子としては公開特許公報平６−１８６２３２号に記載の相補的な遺伝子、例えばポリデオキシアデニル酸とポリチミジル酸の組み合わせ等が挙げられる。
【００２９】
これらのうち、化学的に結合する方法及び特異的結合物質を用いる方法が好ましく、さらに好ましくは特異的結合物質を用いる方法である。特異的結合物質を用いる方法のうち、アビジン−ビオチン結合を利用した方法である。
【００３０】
ポリペプチドは従来免疫測定に使用される緩衝液等に溶解されていてもよい。緩衝液は例えば、リン酸緩衝液及びグッド（Ｇｏｏｄ）の緩衝液等が使用でき、蛋白、塩及び／又は界面活性剤等を含有していてもよい。蛋白としては、アルブミン（牛血清アルブミン、ウサギ血清アルブミン、マウス血清アルブミン、オバルブミン、コナルブミン及びラクトアルブミン等）、抗体（正常ウサギＩｇＧ及び正常マウスＩｇＧ等のポリペプチドとの結合性がない抗体）及びゼラチン等が挙げられる。塩としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム及び臭化リチウム等が挙げられる。界面活性剤としては、ソルビタンラウリン酸モノエステルエチレンオキシド付加物（商品名：ツイーン２０及びツイーン４０、ＩＣＩアメリカ社）等のノニオン界面活性剤等が挙げられる。また、ポリペプチドが結合した水不溶性担体は、上述の緩衝液に浸漬した状態でもよいが、ポリペプチドを含む水不溶性担体全体を糖類及び蛋白質でコーティングした後乾燥した状態が好ましい。コーティング・乾燥方法としては、例えば糖類と蛋白質とを含有する溶液中に浸漬したのち乾燥させる方法（特開平０９−３１８６２８号公報及び特公平５−４１９４６号公報）等が挙げられる。
【００３１】
本発明の免疫測定用試薬キットは、ポリペプチドを含む免疫測定用試薬と共に、抗ヒトイムノグロブリン抗体を含む試薬を含有していることが好ましい。
抗ヒトイムノグロブリン抗体は、従来公知の方法で作成されたものが使用でる。例えば、ヒトイムノグロブリンを適当な動物（例えば、マウス、ウサギ、ブタ、ヤギ、ウマ等）に免疫し、得られた抗血清から塩析、イオン交換カラム等で抗体を精製して作成できる。抗ヒトイムノグロブリン抗体は、ポリクローナル抗体でもモノクローナル抗体でもよく、また、（Ｆａｂ’）２、Ｆａｂ’等の抗体断片でもよい。尚、ヒトイムノグロブリンとは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ等の全てのイムノグロブリンを含むが、通常はＩｇＧ及びＩｇＭであり、主にＩｇＧである。
【００３２】
抗ヒトイムノグロブリン抗体は、標識化合物で標識されていることが好ましい。標識化合物としては従来公知のものが使用でき、ラジオアイソトープ、蛍光物質、発光物質及び酵素等が用いられる。アイソトープとしては、１２５Ｉ等が挙げられ、蛍光物質としてはユーロピウム錯体等が挙げられ、発光物質としてはＮ−メチルアクリジウムエステル等が挙げられ、酵素としては西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ及びβ−ガラクトシダーゼ等が挙げられる。これらの標識化合物のうち、酵素が好ましく、さらに好ましくは西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ及びβ−ガラクトシダーゼ、特に好ましくは西洋ワサビペルオキシダーゼ及びアルカリホスファターゼである。
【００３３】
標識化合物を抗ヒトイムノグロブリン抗体に標識する方法は従来公知の方法等が適用でき、「続生化学実験講座５  免疫生化学実験法」（日本生化学会編、東京化学同人、１９８６年発行、１０２〜１１２頁に記載の方法等が用いられ、例えば、次の（１）〜（４）の方法等が適用できる。
（１）標識化合物がアイソトープの場合、クロラミンＴを酸化剤として用いて放射性ヨウ素を抗ヒアルロン酸抗体又は配位子のチロシン残基に導入する方法。
（２）標識化合物が蛍光物質の場合、フルオレセインイソチオシアネートを緩衝液中で抗ヒアルロン酸抗体又は配位子に反応させ、抗ヒアルロン酸抗体又は配位子のリシン残基に結合させる方法。
（３）標識物質が発光物質の場合、商品名「アクリジニウム誘導体−Ｉ」（同人化学研究所社製）を緩衝液中で抗ヒアルロン酸抗体又は配位子に反応させ、抗ヒアルロン酸抗体又は配位子のアミノ基に結合させる方法。
（４）標識物質が酵素の場合、酵素の持つアミノ基と抗ヒアルロン酸抗体又は配位子の持つチオール基をＮ−スクシンイミジル−６−マレイドヘキサノエート等のニ架橋性試薬で結合する方法。
【００３４】
本発明の免疫測定用試薬キットには、本発明の免疫測定用試薬を含めば、試薬の剤型及び試薬キットの構成等に制限はなく、例えば、ポリペプチドが、水不溶性担体及び／又は標識化合物と結合したかたちで試薬キットに含まれてもよく、ポリペプチド単独で含まれていてもよい。すなわち本発明の試薬キットは、比朧法、ラテックス凝集法及び比濁法等のホモジニアス免疫測定法にも、不溶性担体を用いたヘテロジニアス免疫測定法にも適用できる。これらのうち、測定感度の点で、標識化合物を標識され抗ヒトイムノグロブリン抗体を含むヘテロジニアスなサンドイッチ免疫測定法用の試薬キットが最も好ましい。すなわち、ペプチドと検体とを反応させるとポリペプチドに対する自己抗体のみが特異的にペプチドと結合する。そこで、抗ヒトイムノグロブン抗体を加えると、該抗体は自己抗体と結合し、免疫複合体「ポリペプチド−自己抗体−抗ヒトイムノグロブリン抗体」を形成する。この免疫複合体中の抗ヒトイムノグロブリン抗体を定量することで自己抗体量を定量できる。抗ヒトイムノグロブリン抗体量は標識化合物の量を測定することにより定量することができる。
【００３５】
標識化合物の測定は、標識化合物の種類により従来公知の方法等で実施できる。標識化合物が蛍光物質の場合、例えば適当な波長の励起光の照射によって生じる蛍光量を光電子増倍管により定量する。標識化合物が化学発光物質の場合、例えばアクリジニウムエステルではアルカリ溶液を加えることにより生じる発光量を光電子増倍管により定量する。
【００３６】
標識化合物が酵素の場合、適当な基質を反応させることにより酵素活性を吸光度（吸光度測定法）、蛍光量（蛍光量測定法）又は発光量（化学発光量測定法）として測定できる。例えば、酵素がペルオキシダーゼの場合、基質としては２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）二アンモニウム（ＡＢＴＳ）（吸光度測定法）及びルミノール／過酸化物（化学発光量測定法）等を選択できる。酵素がアルカリフォスファターゼの場合、基質としてはｐ−ニトロフェニルフォスフェート（吸光度測定法）、４−メチルウンベリフェリルリン酸（４−ＭＵＰ）（蛍光量測定法）及び３−（２’−スピロアダマンタン）−４−メトキシ−４−（３’’ホスホリルオキシ）フェニル−１，２−ジオキセタン・二ナトリウム（ＡＭＰＰＤ）（化学発光量測定法）等を選択できる。吸光度は分光光度計、蛍光量及び化学発光量は光電子増倍管により定量される。これらのうち、化学発光量測定法が好ましく（すなわち、本発明の試薬キットを用いて自己抗体を定量する方法としては化学発光酵素免疫測定法が好ましい。）、さらに好ましくはペルオキシダーゼとルミノール／過酸化物との組合せ又はアルカリフォスファターゼとＡＭＰＰＤとの組み合わせによる化学発光量測定法である。
【００３７】
ルミノールとしては、ルミノール、イソルミノール、Ｎ−アミノヘキシル−Ｎ−エチルイソルミノール（ＡＨＥＩ）、Ｎ−アミノブチル−Ｎ−エチルイソルミノール（ＡＢＥＩ）及びこれらの金属塩等が含まれる。これらの金属塩としては、アルカリ金属（ナトリウム及びカリウム等）塩及びアルカリ土類金属（カルシウム及びマグネシウム等）塩等が使用できる。これらのうち、ルミノール及びルミノールの金属塩が好ましく、さらに好ましくはルミノールの金属塩、特に好ましくはルミノールのナトリウム塩である。過酸化物としては、無機過酸化物及び有機過酸化物のいずれも使用できる。無機過酸化物としては、過酸化水素、過ホウ酸ナトリウム、過ホウ酸カリウム、過酸化酸、過酸化炭酸、過酸化二炭酸、次亜塩素酸、次亜塩素酸カリウム、亜塩素酸、塩素酸、塩素酸ナトリウム、過塩素酸、過臭素酸、ペルオクソ硫酸及びペルオクソリン酸等が挙げられる。有機過酸化物としては、例えば、過酢酸、過プロピオン酸、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、トリエチルアミンオキサイド、メチルジエチルアミンオキサイド及び過酸化フタロイル等が挙げられる。これらのうち、保存安定性等の観点から、無機過酸化物が好ましく、さらに好ましくは過酸化水素である。
【００３８】
本発明の免疫測定用試薬キットには、ポリペプチドを含む試薬（本発明の免疫測定用試薬）、抗ヒトイムノグロブリンを含む試薬に加えて、さらに反応用緩衝液、Ｂ／Ｆ分離用緩衝液及びコントロール試料等を含むことができる。反応用緩衝液及びＢ／Ｆ分離用緩衝液としては従来免疫測定に使用される緩衝液等が使用でき、蛋白、塩及び／又は界面活性剤等を含有するリン酸緩衝液及びグッド（Ｇｏｏｄ）の緩衝液等が使用できる。蛋白としては、アルブミン（牛血清アルブミン、ウサギ血清アルブミン、マウス血清アルブミン、オバルブミン、コナルブミン及びラクトアルブミン等）、抗体（正常ウサギＩｇＧ及び正常マウスＩｇＧ等のｐ５３ポリペプチドとの結合性がない抗体）及びゼラチン等が挙げられる。塩としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム及び臭化リチウム等が挙げられる。界面活性剤としては、ソルビタンラウリン酸モノエステルエチレンオキシド付加物（商品名：ツイーン２０及びツイーン４０、ＩＣＩアメリカ社）等のノニオン界面活性剤等が挙げられる。
【００３９】
コントロール試料は、検体にｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体が存在するかを判断するための比較試料として用いるものであり、通常、自己抗体を含まない試料（陰性コントロール）及び自己抗体を含む試料（陽性コントロール）が用意される。陰性コントロールとしては、免疫反応用緩衝液と同様な蛋白等を含有した緩衝液、ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を保有しないヒトプール血清等が使用できる。陽性コントロールとしては、ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を保有するヒトプール血清、免疫反応用緩衝液と同様な蛋白等を含有した緩衝液でｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を含む血清を添加したもの等が使用できる。
【００４０】
本発明の免疫測定用試薬キットで測定される検体は、ヒト由来の体液であれば特に限定されず、例えば血液、尿、唾液、リンパ液、胆汁、胃液、膵液等が挙げられ、さらに生体から採取された組織のホモジネート抽出液等も用いることができる。このうち好ましいのは血液及び尿であり、より好ましくは、血液（全血、血清、血漿等を含む）である。
【００４１】
本発明の試薬キットを用いたｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を測定する方法（サンドイッチ測定法）の具体例（工程１〜６）を以下に示す。
工程１．検体と、ポリペプチドの結合した水不溶性担体とを反応させて反応混合物（複合体１を含む）を得る。
工程２．工程１の反応混合物から未反応物を除き（Ｂ／Ｆ分離）、複合体１を得る。
工程３．工程２で得られた複合体１と、標識化合物で標識された抗ヒトイムノグロブリン抗体とを反応させて反応混合物（複合体２を含む）を得る。
工程４．工程３反応混合物から未反応物を除き（Ｂ／Ｆ分離）、複合体２を得る。
工程５．複合体２の標識化合物の量を測定する。
工程６．標識化合物の量を用いて、陰性コントロール及び／又は陽性コントロールと比較し、自己抗体の有無を判定する。
【００４２】
検体中のｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体の有無を判断する工程（上述の例では工程６）において、検体である血液での抗ヒトイムノグロブリン抗体量（抗ヒトイムノグロブリンに標識された標識化合物量として測定される）と、複数の健常人の血液での抗ヒトイムノグロブリン量（抗ヒトイムノグロブリンに標識された標識化合物量として測定される）から設定される基準値とを比較するで自己抗体の有無を判定することが好ましい。
基準値の設定方法は、例えば「臨床検査薬ガイド１９９９〜２０００，ｐ６４〜７１、文光堂（１９９９）」、「臨床検査データブック１９９７−１９９８、ｐ８〜１３，医学書院（１９９７）」に記載された方法で行うことができる。すなわち複数の健常人（少なくとも５０人以上、好ましくは１２０人以上）を測定し、標識化合物量を求める（化学発光酵素免疫測定法の場合、発光量となる）。標識化合物量を統計処理｛パラメトリック法、ノンパラメトリック法等［パラメトリック法は母集団が正規分布（べき乗変換しても可）を示す場合に使用し、ノンパラメトリック法は母集団が正規分布しない場合に使用される。］｝し、標本群の９５％を含む範囲を求める基準範囲とし、上限を上限基準値、下限を下限基準値と設定する。従って、上限基準値を越えた検体については自己抗体を有する可能性が高いが、５％の確率で健常人でも越える場合がある。これを防ぐため、通常は上限基準値にさらに係数を乗じ、及び／又は付加したカットオフ値を設定することが行われる。すなわちカットオフ値を超えた検体を自己抗体が有るものとして判定する。カットオフ値の設定は、上限基準値とｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を有する検体の分布下限の値との関係で設定するが、通常は上限基準値の１．５〜３倍程度の値である。
【００４３】
上述の陰性コントロール及び陽性コントロールは、設定したカットオフ値を簡易に再現できるように調製したものである。例えば、陰性コントロールの測定値（標識化合物量）の３倍がカットオフ値となる、陰性コントロールと陽性コントロールの平均値がカットオフ値となる等、の設定が可能である。
【００４４】
【実施例】
以下、実施例により本発明をさらに説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００４５】
＜合成例１＞
１．ポリペプチドの合成
エチレンジアミンで官能化しそれに酸不安定リンカー｛４−（２’，４’−ジメチルオキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）フェノキシ酢酸｝をカップリングさせたペプシンＫポリアミド−キーゼルグアー樹脂（Ｐｅｐｓｙｎ  Ｋ  ｐｏｌｙａｍｉｄｅ−Ｋｅｓｅｌｇｕｈｒ  ｒｅｓｉｎ：Ｍｉｌｌｉｇｅｎ，Ｎｏｖａｔｏ，カリフォルニア）を固相として、表１に示したポリペプチドをテトラへドロンレター（Ｒｉｎｋ，ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．（１９８７）２８：３７８７）に記載された化学合成法により合成した。
【００４６】
なお、▲１▼側鎖のｗ−アミノ基はＢｏｃにより保護し、α−アミノ基はＦｍｏｃで保護した。
▲２▼２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル基によりアルギニンのグアニジノ基を保護した。
▲３▼ヒスチジンのイミダゾリル基をＢｏｃ又はトリチル基で保護し、システインのスルフヒドリル基をトリチル基で保護した。
▲４▼ペプチドの延長反応は、ジイソプロピルカルボジイミドを用いてヒドロキシベンゾトリアゾールエステル形成することによりカップリングを行うアルギニンの場合を除いて、付加するアミノ酸のカルボキシル基を活性化し形成させたＯ−ペンタフルオロフェニルエステル類とペプチドのα−アミノ基をカップリングすることにより実行した。
▲５▼すべてのペプチドのＮ末端を酢酸無水物でＮ−アセチル化した。
▲６▼すべての合成をミリゲン９０５０ペプシンセサイザー（Ｍｉｌｌｉｇｅｎ  ９０５０  ＰｅｐＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ：Ｎｏｖａｔｏ，カリフォルニア）（連続フロー法）を用いて行った。
▲７▼補集剤（アニソール及び１，２−エタンジチオール）の存在下でトリフルオロ酢酸を用いて、固相とポリペプチドとを切断し、ジエチルエーテルで抽出し粗合成ポリペプチドを得た。
▲８▼これらの粗合成ポリペプチドをＣ１８−逆相クロマトグラフィーカラム（ＹＭＣ−Ｈｙｄｏｒｏｓｐｈｅｒｅ  Ｃ１８  ２０×１５０、ワイエムシィ社製で精製｛溶出液はＡ：水／ＴＦＡ（体積比：１００／０．１）とＢ：アセトニトリル／ＴＦＡ（体積比：１００／０．１）のグラジュエント（Ｂの割合として０〜４０体積％）、流速１．０ｍＬ／ｍＬ、温度３７℃、検出は２２０ｎｍの波長を使用。｝後、凍結乾燥して、表１の合成ポリペプチドＰ１〜Ｐ１１を得た。
【００４７】
【表１】
2004231535.tif 000002
【００４８】
２．合成ポリペプチドへのビオチンによる修飾
合成ポリペプチチドＰ１の１重量部とビオチン残基導入試薬（商品名［Ｂｉｏｔｉｎ  Ｓｕｌｆｏ−ＯＳｕ］、株式会社同仁化学研究所）１重量部を炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）１０００重量部に溶解し、３０℃で２時間、静置反応した。反応溶液をＣ１８−逆相クロマトグラフィーで精製し、ビオチン結合ポリペプチドＰ１（ＰＢ−１）を作成した。Ｐ２〜Ｐ１１についても同様にしてビオチン結合ポリペプチド（ＰＢ−２〜ＰＢ−１１）を作成した。
【００４９】
＜実施例１＞
１．合成ポリペプチド結合ビーズの作成
（１）アビジン結合ビーズの作成
ストレプトアビジン（ロシュダイアグノティクス株式会社より購入）をｐＨ９の０．１Ｍ炭酸緩衝液に２０μｇ／ｍｌの濃度で溶解した。この溶液２０ｍｌに、直径３．２ｍｍのポリスチレンビーズ（イムノケミカル社製）１０００個を加え、２〜１０℃で４８時間静置させて、ポリスチレンビーズにストレプトアビジンを物理吸着させた。その後、溶液をアスピレーターで吸引除去し、２０ｍＬの０．１重量％牛血清アルブミン含有リン酸緩衝液（ｐＨ７．２）でビーズを２回洗浄し、アビジン結合ビーズを調製した。このアビジン結合ビーズを再度５０ｍＬの０．１％牛血清アルブミン含有リン酸緩衝液に浸漬し、浸漬状態で冷蔵（２〜１０℃）保存した。
【００５０】
（２）ｐ５３ポリペプチド結合ビーズ（ＰＢビーズ）の作成
浸漬液をアスピレーターで除いたアビジン結合ビーズ１０００個を、合成ポリペプチドＰＢ１を２μｇ／ｍＬの濃度で含むリン酸緩衝水溶液（０．０２Ｍ，ｐＨ７．０）２０ｍＬに加え、４〜１０℃で２４時間反応（２時間に１回転倒攪拌）した。その後、緩衝水溶液をアスピレーターで吸引除去し、２０ｍＬの０．１重量％牛血清アルブミン含有リン酸緩衝液（ｐＨ７．２）でビーズを２回洗浄した後、１０重量％のショ糖を含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）に３０分間浸漬後、リン酸緩衝液をアスピレーターで除き、ビーズをろ紙上に撒き室温（約２５℃）で風乾し、合成ポリペプチド結合ビーズ（ＰＢ１ビーズ）を調整し、乾燥剤（シリカゲル）を入れた密閉容器中で冷蔵保存した。
【００５１】
２．免疫反応用緩衝液の作成
０．０２Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）に、カゼインを３ｇ／Ｌ及び塩化ナトリウムを８．５ｇ／Ｌの濃度になるように添加し、免疫反応用緩衝液を作成した。使用時まで冷蔵保存した。
【００５２】
３．ペルオキシダーゼ標識抗ヒトイムノグロブリン抗体の作成
抗ヒトイムノグロブリンポリクローナル抗体（ダコジャパン（株）製）及び西洋ワサビ由来ペルオキシダーゼ（東洋紡（株）製）を用い、文献［エス・ヨシタケ、エム・イマガワ、イー・イシカワ、エトール；ジェイ．バイオケム，Ｖｏｌ．９２（１９８２）１４１３−１４２４］に記載の方法でペルオキシダーゼ標識抗β２−マイクログロブリンポリクローナル抗体を調製し、冷凍（−３０℃）保存した。
【００５３】
４．酵素標識抗体液の作成
上記で作成した免疫反応緩衝液及びペルオキシダーゼ標識抗ヒトイムノグロブリン抗体を用いて次の通り酵素標識抗体液を作成した。すなわち、免疫反応用緩衝液１００ｍＬにペルオキシダーゼ標識抗ヒトイムノグロブリン抗体を蛋白量で１００μｇ添加し、攪拌混合し、これを酵素標識抗体液とした。
【００５４】
５．過酸化水素液の調製
２００μｌの３５％過酸化水素水を脱イオン水１リットルに溶解し、過酸化水素水とした。使用するまで冷蔵保存した。
【００５５】
６．基質液の調製
ルミノール（東京化成製）０．１８ｇ及び４−（シアノメチルチオ）フェノール０．１ｇ（三新化学製）を０．１Ｍ（モル／Ｌ）、ｐＨ８．５のトリス／塩酸緩衝液１リットルに溶解した。使用するまで遮光、冷蔵保存した。
【００５６】
＜実施例２〜１８＞
１．合成ポリペプチド結合ビーズの作成
実施例１と同様にして、表２及び３に示した実施例２〜１８の合成ポリペプチド結合ビーズを調整し、乾燥剤（シリカゲル）を入れた密閉容器中で冷蔵保存した。
尚、複数の合成ポリペプチドを組み合わせて使用する場合（実施例１２〜１８）、各合成ポリペプチドの量は同じとし、総量が２μｇ／ｍＬになるようにした。
【００５７】
また、免疫反応用緩衝液、ペルオキシダーゼ標識抗ヒトイムノグロブリン抗体、酵素標識抗体液、過酸化水素液及び基質液は、実施例１で作成したものを用いた。
【００５８】
＜比較例１＞ＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質の作製
特開平９−２２９９３３号公報に記載の方法に準じて、４種類の蛋白質、すなわち、ｐ５３遺伝子のＮ末端からのアミノ酸配列が１−１１２のペプチド、１０８−３１０ペプチド、３０６−３９３ペプチド、１−３９３ペプチドとＧＳＴ（グルタチオンＳトランスフェラーゼ）との各融合蛋白質を以下の通り作製した。
【００５９】
１．ｐ５３遺伝子の調製
ヒト線維芽細胞ＷＩ−３８のＳＶ４０トランスフォーマントであるＷＩ−３８ＶＡ１３よりＲＮＡを抽出した。抽出は、ＡＧＰＣ法を用いて、次のようにして行った。
【００６０】
（ＡＧＰＣ法試薬の調製）
（１）１Ｍ  クエン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）の調製
クエン酸三ナトリウムの２９．４ｇを蒸留水８０ｍｌに溶解した後、クエン酸を加えて、ｐＨ７．０にあわせた後、水を加えて１００ｍｌとした。そして、オートクレーブ（１２０℃、２０分）してから使用した。
（２）Ｄ液の調製
ＧＴＣ（グアニジウムチオシアネート）２３６．３ｇ（４Ｍ）、ザルコシル  ２．５ｇ（０．８重量％）、１Ｍ  クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）  １２．５ｍｌ（２５ｍＭ）及び蒸留水２５０ｍｌを８５℃で加温溶解した後、室温に戻し、水で４９６ｍｌにあわせた。細孔径０．４５μｍボトルトップフィルターで濾過して保存した。使用時にこの保存溶液５０ｍｌに対して２−メルカプトエタノール３６０μｌ（０．１Ｍ）を加え、Ｄ液とした。
（３）２Ｍ  酢酸ナトリウム（ｐＨ４．０）の調製
酢酸ナトリウム  トリハイドレート  ２７．２ｇを蒸留水１０ｍｌに溶解させた後、酢酸を用いてｐＨ４．０にあわせ、蒸留水を加えて１００ｍｌとした。細孔径０．４５μｍボトルトップフィルターで濾過して使用した。
【００６１】
（ＡＧＰＣ法の操作）
（１）チューブにＤ液０．５ｍｌを加え、ＷＩ−３８ＶＡ１３細胞（大日本製薬株式会社より購入）を分散し、細胞を破壊した。
（２）さらに、２Ｍ  酢酸ナトリウム  ５０μｌ、フェノール  ０．５ｍｌ及びクロロホルム／イソアミルアルコール（体積比４９／ｌ）  １００μｌを順次加え、１種類いれるごとに、チューブを２〜３回振り、混ぜた。
（３）１０秒間激しく混ぜた後、１５分間氷冷した。
（４）遠心加速度１０，０００Ｇで１０℃、２０分間遠心した後、下部に分離した水層を、ＤＮＡを含む中間層が混入しないように、別のチューブに分取した。
（５）分取した水層に、イソプロパノール０．５ｍｌを加え、−２０℃で１時間冷やした。次に、１０分間遠心（１０，０００Ｇ、０℃）し、ＲＮＡを沈殿させた。
（６）沈殿したＲＮＡを０．５ｍｌのＤ液に再び溶解し、イソプロパノール０．５ｍｌを加え、−２０℃で１時間置く。
（７）遠心してＲＮＡを沈殿させ、沈殿を８０重量％エタノール水溶液１ｍＬで洗い、乾燥させた後、水に溶解する。
【００６２】
このようにして抽出したｍＲＮＡから、次の反応条件にて、ＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（ＲＴ）反応によりｃＤＮＡを作成した。ＲＴ反応は、ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬのＲｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（商品名  Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ）を使用した。反応組成は次のとおりである。５０ｍＭ  トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン／塩酸緩衝液（ｐＨ８．３）、７５ｍＭ塩化カリウム水溶液、３ｍＭ塩化マグネシウム水溶液、１０ｍＭ  ｄＮＴＰ（デオキシリボヌクレオシド  ５’−トリフォスフェート混合物）、７．５μｇ／ｍｌのランダムノナマー（シグマ社から購入）、ＲＮａｓｉｎ（プロメガ社、ＲＮａｓｅインヒビター）を１０００Ｕ／ｍｌ、ＲＮａｓｅＨ−（リバース  トランスクリプターゼ）を２００，０００Ｕ／ｍｌ。
【００６３】
２．組み換え遺伝子の作成及び発現
作成したｃＤＮＡを制限酵素ＢａｍＨＩの認識配列を５´末端に有するＰＣＲｐｒｉｍｅｒにて増幅後、ＢａｍＨＩにて消化し、ｐＧＥＸ−５Ｘ−２ベクターのＢａｍＨＩ部位に組み込んだ。シークエンス法にてインサートが正しく組み込まれていることを確認した後、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３），ＬｙｓＳ（Ｎｏｖａｇｅｎ社）にトランスフォーム後、０．１ｍＭのイソプロピルチオベータガラクトシド（ＩＰＴＧ）にて３７℃、２時間あるいは２５℃、６時間誘導をかけた。大腸菌の細胞ライゼイトより目的の融合蛋白質をグルタチオンセファロースを用いたアフィニティークロマトグラフィー法にて抽出、精製し、ＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質（ＧＳＴ１［アミノ酸配列１−１１２を含む］、ＧＳＴ２［アミノ酸配列１０８−３１０を含む］、ＧＳＴ３［アミノ酸配列３０６−３９３を含む］、ＧＳＴ４［アミノ酸配列１−３９３を含む］を得た。
【００６４】
１，ＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズ（ＧＳＴビーズ）の作成
実施例１のアビジン結合ビーズの作成に準じて作成した。すなわち、ＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質ＧＳＴ１をｐＨ９の０．１Ｍ炭酸緩衝液に２０μｇ／ｍｌの濃度で溶解した。直径３．２ｍｍのポリスチレンビーズ（イムノケミカル社製）１０００個をこの溶液２０ｍｌに加え、２〜１０℃で４８時間静置させて、ポリスチレンビーズにＧＳＴ１を物理吸着させた。その後、溶液をアスピレーターで吸引除去し、２０ｍＬの０．１重量％牛血清アルブミン含有リン酸緩衝液（ｐＨ７．２）でビーズを２回洗浄した後、２０ｍＬの０．１重量％牛血清アルブミン含有リン酸緩衝液（ｐＨ７．２）に浸漬して２４時間冷蔵で放置した。浸漬液をアスピレーターで吸引除去し、２０ｍＬの０．１重量％牛血清アルブミン含有リン酸緩衝液（ｐＨ７．２）でビーズを２回洗浄した後、１０重量％のショ糖を含むリン酸緩衝液に浸漬後、液をアスピレーターで除き、ビーズをろ紙上に撒き室温で風乾し、ＧＳＴ１結合ビーズ（ＧＳＴ１ビーズ）とし、乾燥剤（シリカゲル）を入れた密閉容器中で冷蔵保存した。
【００６５】
＜比較例２〜５＞
１．ＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズの作成
比較例１と同様にして、表３に示した比較例２〜５のＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズを調整し、乾燥剤（シリカゲル）を入れた密閉容器中で冷蔵保存した。
尚、複数のＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質を組み合わせて使用する場合（比較例５）、各ＧＳＴの量は同じとし、総量が２０μｇ／ｍＬになるようにした。
２．その他試薬の作成
免疫反応用緩衝液、酵素標識抗体液、過酸化水素液及び基質液、は実施例１で作成したものを用いた。
【００６６】
＜実施例１９＞
健常人プール血清及び癌患者血清を測定した例である。
１．検体
当社ボランティア５０名から採取した血清を各０．２ｍＬずつ混合し、健常人プール血清１０ｍＬを作成し、又、癌患者から得た血清（患者１〜３）を各１０ｍＬを用意し検体として用いた。
【００６７】
２．免疫反応操作
１２×７５ｍｍ試験管中に、免疫測定用緩衝液３００μＬ、検体（健常人プール血清又は癌患者血清）１０μＬ、及びＰＢビーズ又ＧＳＴビーズ１個を加え、３７℃で、１０分間反応させた。反応液をアスピレータで除去した後、生理食塩水２ｍＬを加てビーズを洗浄し、洗浄液をアスピレーターで除去した。さらに生理食塩水２ｍＬを加え同様に洗浄した。次に、酵素標識抗体液３００μＬを、洗浄後のビーズに加え３７℃、１０分反応させた。反応液をアスピレーターで除去し、生理食塩水２ｍＬを加えビーズを洗浄し、洗浄液をアスピレーターで除去した。さらに生理食塩水２ｍＬを加え同様に２回洗浄した。洗浄後のビーズについて、酵素活性の測定を行った。
【００６８】
３．酵素活性測定操作
洗浄後のビーズが入った試験管（１２×７５ｍｍ）をアロカ社製ルミネッセンスリーダーＢＬＲ−２０１型のサンプルホルダーにセットし、基質液２００μＬ及び過酸化水素水２００μＬを加え化学発光反応を開始した。発光反応開始４０秒後から１０秒間の発光量を積算計測し、これを酵素活性を示す発光量とした。なお、表２及び３中の数値は、上段が発光量を示し、下段は健常人プール血清の発光量を１．０としたときの各発光量の相対値である。
【００６９】
【表２】
2004231535.tif 000003
【表３】
2004231535.tif 000004
【００７０】
４．測定結果
結果を表２及び３に示した。実施例では比較例に比べ、健常人プール血清の発光量が低く、発光量比（表中下段の数値で、各測定発光量を健常人プール血清の測定発光量で除した値）が大きいことが判る。又、患者血清では個別のＰＢに対して反応性が低い場合があっても、複数のＰＢを組み合わせることにより感度が向上することが判る。
【００７１】
＜実施例２０＞
複数の健常人血清を測定して基準値を求め、カットオフ値を設定し、癌患者１０名からの血清を測定し、ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体の有無を判断した例である。
【００７２】
１．検体の測定
実施例１８で調整した合成ポリペプチド結合ビーズ（固相化ＰＢ１，ＰＢ２，ＰＢ１０，ＰＢ１１，ＰＢ３，ＰＢ４，ＰＢ５，ＰＢ６，ＰＢ７，ＰＢ８，ＰＢ９）及び比較例５で作成したＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズ（固相化ＧＳＴ１，ＧＳＴ２，ＧＳＴ３）を用いて、実施例１９の方法で、健常人ボランティア１２０名からの血清検体及び実施例１９の健常人プール血清を測定した。
健常人ボランティア１２０名の測定値（発光量）の分布を図１（実施例１８）及び２（比較例５）に示した。図１の通り実施例１８の合成ポリペプチド結合ビーズでは発光量が低く、分布の範囲も狭いが、比較例５のＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズ（図２）では発光量が高く、分布の範囲も広いことが判った。なお、図の横軸は発光量（ｃｐｓ）であり、点は検体の分布（１点が１検体に対応）を示す。
【００７３】
２．カットオフ値の設定
健常人の測定値（発光量）を統計処理ソフト「ＳＴＡＴＦＬＥＸ  ｖ．４．１」（アーテック社製）を用いて分布型を解析した結果、実施例１８の合成ポリペプチド結合ビーズについての発光量分布は、歪度１．４９、尖度４．９０であるのに対して、比較例５のＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズについての発光量分布は、歪度１．９８、尖度７．２４であった。なお、いずれの分布も正規分布していなかった。ノンパラメトリック法で９５％の信頼区間を求めたところ、実施例１８の合成ポリペプチド結合ビーズについての基準値は、発光量１２４５〜９３９７であったのに対して、比較例５のＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズについての基準値は、発光量３７７１〜１７５３０であった。ここで上限発光量の１．５倍の発光量をカットオフ値と設定すると、実施例１８について発光量１４０９５、比較例５について発光量２６２９４であった。この時、実施例１８についての健常人プール血清の発光量は２４０６であり、カットオフ値の１／５．８６であり、比較例５についての健常人プール血清の発光量は６２４６であり、カットオフ値の１／４．２１であった。従って、健常人プール血清を、陰性コントロールとして測定した場合、実施例１８の合成ポリペプチド結合ビーズではカットオフ値＝「健常人プール血清測定発光量」×５．８６と設定され、一方、比較例５のＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズではカットオフ値＝「健常人プール血清測定発光量」×４．２１と設定された。
【００７４】
３．検体の測定
表４記載の癌患者１０名（患者４〜１３）から採取した血清検体及び陰性コントロールとして実施例１９で作成した健常人プール血清を測定した。測定は、実施例１８の合成ポリペプチド結合ビーズ、及び比較例５のＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズを用いて実施例１９と同様にして行った。
４．判定結果
健常人プール血清を陰性コントロールとし、実施例２０で設定し係数でカットオフ値（「健常人プール血清測定発光量」×係数）を求めた。カットオフ値以上（カットオフ比１．０以上）の測定値を自己抗体陽性、カットオフ値未満（カットオフ比１．０未満）の測定値を自己抗体陰性と判断した。結果を表４に示した。
【００７５】
【表４】
2004231535.tif 000005
表４から、比較例５のＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズではカットオフ値が高く、相対的に癌患者の発光量が低くなる（カットオフ比が小さくなる）ため、陰性と判定され頻度が高くなった。これは、健常人検体の測定値が、非特異吸着等の原因で、その分布が広いことに起因している。
これに対して、実施例１８の合成ポリペプチド結合ビーズではカットオフ値と癌患者検体の発光量差が大きく（カットオフ比が大きく）、自己抗体陰性と判断される頻度が小さかった。
【００７６】
【発明の効果】
本発明のｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を検出するための免疫測定用試薬は、非特異的反応が少なく、感度及び特異性に極めて優れている。すなわち、自己抗体を保有しない健常人からの検体の測定値と自己抗体を保有する癌患者からの検体の測定値との差が充分に大きく（高感度）、また自己抗体を保有しない健常人の検体に対して非特異的反応が極めて少ないので高精度の測定ができる。従って、本発明の測定試薬、測定試薬キット及び測定法によると、癌の極めて正確な診断が可能となる。
【００７７】
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１８の免疫測定用試薬を用いて、健常人ボランティア１２０名の測定値（発光量）の分布を示したグラフである（実施例２０）。
【図２】比較例５の免疫測定用試薬を用いて、健常人ボランティア１２０名の測定値（発光量）の分布を示したグラフである（実施例２０）。
【００７８】
【配列表】
2004231535.tif 000006
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2004231535.tif 000026
【図１】
2004231535.tif 000027
【図２】
2004231535.tif 000028
【手続補正書】
【提出日】平成15年2月14日(2003.2.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を検出するための免疫測定用試薬であって、Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ（１）、Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ（２）、Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  ＴｈｒＡｌａ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ（３）、Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ（４）、Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ    Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｉｌｅ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（５）、Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ（６）、又はＬｙｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ（７）に含まれる少なくとも１種のアミノ酸配列であってかつアミノ酸の個数が８〜５０個であるアミノ酸配列を必須構成単位としてなるポリペプチドを含んでなることを特徴とする免疫測定用試薬。
【請求項２】ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を検出するための免疫測定用試薬であって、Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ（１）に含まれる少なくとも１種のアミノ酸配列であって、かつアミノ酸の個数が８〜５０個であるアミノ酸配列を構成単位としてなるポリペプチドと、
Ｌｙｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ（７）に含まれる少なくとも１種のアミノ酸配列であって、かつアミノ酸の個数が８〜５０個であるアミノ酸配列を構成単位としてなるポリペプチドとを含んでなることを特徴とする免疫測定用試薬。
【請求項３】Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ（２）、ＳｅｒＧｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  ＰｈｅＣｙｓ（３）、Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ（４）、Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ    Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｉｌｅ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（５）、又はＧｌｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ（６）に含まれる少なくとも１種のアミノ酸配列であって、かつアミノ酸個数が８〜２０個であるアミノ酸配列を構成単位としてなるポリペプチドをさらに含んでなる請求項２に記載の試薬。
【請求項４】ポリペプチドを構成するアミノ酸の個数が、１０〜５０個である請求項１〜３のいずれかに記載の試薬。
【請求項５】ポリペプチドが水不溶性担体に結合されてなる請求項１〜４のいずれかに記載の試薬。
【請求項６】請求項１〜５のいずれかに記載の試薬と、抗ヒトイムノグロブリン抗体を含有してなる免疫測定用試薬キット。
【請求項７】抗ヒトイムノグロブリン抗体が標識化合物で標識されてなる請求項６記載の試薬キット。
【請求項８】標識化合物が酵素である請求項７記載の試薬キット。
【請求項９】請求項６〜８のいずれかに記載の試薬キットをサンドイッチ法に適用し、抗ヒトイムノグロブリン抗体を定量することにより、検体中のｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体の有無を判断する工程を含むｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体の免疫測定方法。
【請求項１０】化学発光酵素免疫測定法による請求項９記載の免疫測定方法。
【請求項１１】検体中のｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体の有無を判断する工程において、検体として血液を用い、この検体に対する抗ヒトイムノグロブリン抗体量と、
複数の健常人の血液に対する抗ヒトイムノグロブリン量から設定される基準値とを比較することを含む請求項９又は１０に記載の免疫測定方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を検出するための免疫測定用試薬、免疫測定用試薬キット及び抗ｐ５３遺伝子産物自己抗体の免疫測定方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
ｐ５３遺伝子は、３９３個のアミノ酸からなる核内リン酸化蛋白質（以下、ｐ５３遺伝子産物）をコードする癌抑制遺伝子であり、種々のヒト癌において高頻度に欠失と点突然変異が認められ（非特許文献１）、変異型ｐ５３遺伝子産物は非常に長い半減期を有することから、癌細胞ではその発現が増加し、蓄積することが知られている（非特許文献２）。一方、乳癌又は肺癌等の癌患者においては、血中にｐ５３遺伝子産物と反応する自己抗体が出現することがウエスタンブロット法及び免疫沈降法等で認められている（非特許文献３）。そして、ｐ５３遺伝子産物の全体（アミノ酸３９３個）又は断片（アミノ酸１００個程度）を固相化した担体を用いるｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体の測定法が知られている（例えば、特許文献１）。
【０００３】
【非特許文献１】サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ），２５０，１２３３頁，１９９０年
【非特許文献２】オンコジーン（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ），６，１６９９頁，１９９１年
【非特許文献３】インターナショナル  ジャーナル  オブ  キャンサー（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ），３０，４０３頁，１９８２年
【特許文献１】
特開平９−２２９９３３号公報
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
従来のｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体の測定法では、自己抗体を保有しない健常人からの検体の測定値と自己抗体を保有する癌患者からの検体の測定値との差が小さく（感度が低い）、また自己抗体を保有しない健常人の検体でも非特異的反応により誤った測定数値となる場合があった。
したがって、本発明の目的は、ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を検出するための免疫測定用試薬であって、感度及び特異性に優れた測定試薬を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するために鋭意研究を行った結果、本発明者らは、ｐ５３遺伝子産物のより小さなペプチド断片（つまりｐ５３遺伝子産物中の特定のアミノ酸配列からなるペプチド）が自己抗体と特異的に結合することを見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明は、ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を検出するための免疫測定用試薬であって、Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ（１）、Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  ＬｅｕＳｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ（２）、Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ（３）、Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ（４）、Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ    Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｉｌｅ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（５）、Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ（６）、又はＬｙｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  ＬｙｓＧｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  ＧｌｎＳｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ（７）に含まれる少なくとも１種のアミノ酸配列であってかつアミノ酸の個数が８〜５０個であるアミノ酸配列を必須構成単位としてなるポリペプチドを含んでなることを特徴とする免疫測定用試薬である。
【０００６】
また、ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を検出するための免疫測定用試薬であって、Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ（１）に含まれる少なくとも１種のアミノ酸配列であって、かつアミノ酸の個数が８〜５０個であるアミノ酸配列を構成単位としてなるポリペプチドと、
Ｌｙｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ（７）に含まれる少なくとも１種のアミノ酸配列であって、かつアミノ酸の個数が８〜５０個であるアミノ酸配列を構成単位としてなるポリペプチドとを含んでなることを特徴とする免疫測定用試薬である。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明の免疫測定用試薬に含まれるポリペプチドとしては、ｐ５３遺伝子産物｛Ｍｅｔ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｌｅｕ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｌａ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｌｙｓ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｈｉｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｃｙｓ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｎ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｉｌｅ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａ��ｇ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ（６２）｝中に含まれる特定のアミノ酸配列を必須構成単位としてなるポリペプチドである。特定のアミノ酸配列とは、アミノ酸配列（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）又は（７）に含まれる少なくとも１種のアミノ酸配列であってかつアミノ酸の個数が８〜５０個であるアミノ酸配列である。
【０００８】
特定のアミノ酸配列中のアミノ酸の個数は、抗原性及び調製等の観点から、８〜５０が好ましく、さらに好ましくは８〜３０、特に好ましくは８〜２０である。
【０００９】
特定のアミノ酸配列としては、アミノ酸配列（１）に含まれるアミノ酸配列（Ａ）、アミノ酸配列（２）に含まれるアミノ酸配列（Ｂ）、アミノ酸配列（３）に含まれるアミノ酸配列（Ｃ）、アミノ酸配列（４）に含まれるアミノ酸配列（Ｄ）、アミノ酸配列（５）に含まれるアミノ酸配列（Ｅ）、アミノ酸配列（６）に含まれるアミノ酸配列（Ｆ）、及びアミノ酸配列（７）に含まれるアミノ酸配列（Ｇ）が含まれる。
アミノ酸配列（１）に含まれるアミノ酸配列（Ａ）としては、Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ（１）、Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  ＧｌｕＰｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ（８）、Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ（９）、Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ（１０）、Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ（１１）、Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ（１２）、Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ（１３）、Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ（１４）、Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ（１５）、Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  ＭｅｔＡｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ（１６）、Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｔｒｐ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ（１７）、及びＡｓｐ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ  （１８）  等が挙げられる。
これらのうち、アミノ酸配列（１７）及び（１８）が好ましい。
【０００１０】
アミノ酸配列（２）に含まれるアミノ酸配列（Ｂ）としては、Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ（２）、Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  ＡｌａＰｒｏ  Ｓｅｒ（１９）、Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ（２０）、Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ（２１）、Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ（２２）、Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  ＳｅｒＳｅｒ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ（２３）、Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  ＡｌａＰｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  （２４）、及びＰｒｏ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ（２５）等が挙げられる。
これらのうち、アミノ酸配列（２４）及び（２５）が好ましい。
【００１１】
アミノ酸配列（３）に含まれるアミノ酸配列（Ｃ）としては、Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ（３）、Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ（２６）、Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ（２７）、Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ（２８）、Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ（２９）、及びＡｌａ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ（３０）等が挙げられる。
これらのうち、アミノ酸配列（３０）が好ましい。
【００１２】
アミノ酸配列（４）に含まれるアミノ酸配列（Ｄ）としては、Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ（４）、Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ（３１）、Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ（３２）、Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ（３３）、Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ（３４）、及びＡｓｐ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  （３５）等が挙げられる。
これらのうち、アミノ酸配列（３５）が好ましい。
【００１３】
アミノ酸配列（５）に含まれるアミノ酸配列（Ｅ）としては、Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｉｌｅ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（５）、Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ（３６）、Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｉｌｅ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ（３７）、Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ（３８）、Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（３９）、Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  ＭｅｔＡｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ（４０）、Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｉｌｅ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ（４１）、Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ（４２）、Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（４３）、ＡｓｎＳｅｒ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｉｌｅ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  ＬｅｕＧｌｕ  （４４）、及びＡｓｎ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ（４５）等が挙げられる。
これらのうち、アミノ酸配列（４４）及び（４５）が好ましい。
【００１４】
アミノ酸配列（６）に含まれるアミノ酸配列（Ｆ）としては、Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ（６）、Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ（４６）、Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ（４７）、Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ（４８）、Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ（４９）、Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ（５０）、及びＧｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ  Ｈｉｓ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ（５１）等が挙げられる。
これらのうち、アミノ酸配列（５１）が好ましい。
【００１５】
アミノ酸配列（７）に含まれるアミノ酸配列（Ｇ）としては、Ｌｙｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ（７）、Ｌｙｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ（５２）、Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ（５３）、Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ（５４）、Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ（５５）、Ｌｙｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｌａ（５６）、Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ（５７）、Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ（５８）、Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ（５９）、Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  ＡｒｇＡｌａ  Ｈｉｓ（６０）、  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ（６１）等が挙げられる。
これらのうち、アミノ酸配列（６０）及び（６１）が好ましい。
【００１６】
これらの特定のアミノ酸配列のうち、自己抗体との反応性（特異性及び感度）等の観点から、アミノ酸配列（Ａ）及びアミノ酸配列（Ｇ）が好ましく、さらに好ましくはアミノ酸配列（１）、（７）、（１３）、（１６）、（１７）、（１８）、（５２）、（５３）、（５４）（５５）、（５６）、（５８）、（６０）及び（６１）、特に好ましくはアミノ酸配列（１７）、（１８）、（６０）及び（６１）である。
【００１７】
そして、ポリペプチドには、ポリペプチド１分子当たりに、これらの特定のアミノ酸配列の少なくとも１種を含んでいればよく、２種以上を同時に含んでもいてもよい。また、ポリペプチド１分子当たりに、これらの特定のアミノ酸配列の繰り返し配列（重合体）を含んでもよい。
ポリペプチドとしては、アミノ酸配列（１）〜（６１）からなる群より選ばれる少なくとも１種を含んでなるポリペプチド及びこれらの繰り返し配列（重合体）を含んでなるポリペプチド等が含まれる。
これらのうち、アミノ酸配列（１）〜（６１）からなる群より選ばれる少なくとも１種を含んでなるポリペプチドが好ましく、さらに好ましくはアミノ酸配列（１）〜（６１）のいずれか１種を含むポリペプチドである。
【００１８】
ポリペプチドは、これらの特定のアミノ酸配列のみから構成されていてもよく、さらにＮ末端及び／又はＣ末端にビオチン、チオグリコール酸、及び／又はリンカーとして用いるアミノ酸（システイン、リジン、チロシン、グルタミン酸及びアスパラギン酸等）等が含まれていてもよい。また、さらにＮ末端が無水酢酸、Ｎ−アセチルイミダゾール等でアセチル化されていてもよく、Ｃ末端が水溶性カルボジイミド（例えば、１−エチル−３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩）、イソオキサゾリウム（例えば、Ｎ−メチル−５−フェニルイソオキサゾリウムフルオロボレート）等でアミド化されていてもよい。ビオチン又はチオグリコール酸で修飾されていることが好ましく、さらに好ましくはポリペプチドを水不溶性担体と結合する場合の簡便性からビオチンで修飾されていることである。又、これらの修飾は組み合わせて用いることもできる。
Ｎ末端及び／又はＣ末端にアミノ酸を含む場合、このアミノ酸の個数は、Ｎ末端又はＣ末端当たり、１〜５が好ましく、さらに好ましくは１〜３、特に好ましくは１〜２である。
Ｎ末端及び／又はＣ末端にビオチン及び／又はチオグリコール酸を含む場合、ビオチン又はチオグリコール酸の個数はポリペプチド当たり１〜５が好ましく、さらに好ましくは１〜３、特に好ましくは１〜２である。
【００１９】
ポリペプチドを構成するアミノ酸の個数は、１０以上が好ましく、さらに好ましくは１１以上、特に好ましくは１３以上、最も好ましくは１５以上であり、また、５０以下が好ましく、さらに好ましくは４０以下、特に好ましくは３０以下、最も好ましくは２５以下である。
【００２０】
ポリペプチドは、従来公知の遺伝子組み換え法、又はペプチド合成法等で作成できる。
遺伝子組み換え法は、比較的アミノ酸数の多いポリペプチドを容易に作成できるというメリットがあるけれど、宿主由来の狭雑蛋白が存在すること、ポリペプチドが融合蛋白として生産される点で、検体との非特異的反応を生じやすいというデメリットがある。従って、これらの方法のうち、ペプチド合成法が好ましい。
遺伝子組み換え法としては、ＳＶ４０ウイルス、Ｅ１アデノウイルス、Ｅ６パピローマウイルス等をヒト線維芽細胞等の細胞に導入した後、トランスフォーマントから抽出したｍＲＮＡからｃＤＮＡを作製し、これをＰＣＲ法によって増幅した後制限酵素で切断し、断片をベクターに組み込み、得られた発現ベクターで大腸菌等の宿主を形質転換し、必要あれば誘導処理した後、宿主を培養し、菌体溶解物から目的とする融合蛋白質を抽出し、精製する。このようにして、ポリペプチドを含む融合蛋白質を作成できる（例えば、生化学実験法４５「組み換えタンパク質生産法」，学会出版センター社，２００１年）。又、ｐ５３遺伝子配列から目的のポリペプチドに該当する遺伝子配列をＤＮＡ合成機で合成した後、ベクターに組み込むことで、同様にポリペプチドを作成できる。
【００２１】
ペプチド合成法は、溶液中でも、あるいは固体支持体上でも達成できるが固相支持体を用いた固相合成法が好ましく、さらに好ましくは自動ペプチド合成機を用いた固相合成法である。ポリペプチド合成法は、一般に、ｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ基）又は９−フルオレニルメトキシ−カルボニル（Ｆｍｏｃ基）で保護された活性化アミノ酸を使用する。この他、具体的な合成操作、側鎖保護の種類、および切断法等は、例えば、ソリッド  フェーズ  ペプタイド  シンセシス第２版、ピース  ケミカル社、１９８４（Ｓｔｅｗａｒｔ及びＹｏｕｎｇ，“Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，第２版，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９８４）、及びソリッド  フェーズ  ペプタイド  シンセシス、アイ  アール  エル社、１９８９（Ａｔｈｅｒｔｏｎ及びＳｈｅｐｐａｒｄ，“Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９）に詳細に記述されている。
【００２２】
本発明の免疫測定用試薬は、このようなポリペプチドの少なくとも１種を含んでいればよいが、２種以上のポリペプチドを含んでいることが、自己抗体との反応性（特異性及び感度）がより高くなる点で好ましい。さらに好ましくはアミノ酸配列（Ａ）を含むポリペプチドとアミノ酸配列（Ｇ）とを含むポリペプチドを含むことであり、特に好ましくはアミノ酸配列（Ａ）を含むポリペプチド及びアミノ酸配列（Ｇ）を含むポリペプチドに加え、アミノ酸配列（Ｂ）〜（Ｆ）のうち少なくとも１つのアミノ酸配列を含むポリペプチドを含むこと、最も好ましくはアミノ酸配列（Ａ）〜（Ｇ）のいずれかを含むポリペプチドをそれぞれ１個ずつ含むことである。
【００２３】
本発明の免疫測定用試薬の好ましいポリペプチドの組合せ例としては、例えば、次の組合せが例示できる。なお、カッコ内の数字は、アミノ酸配列番号に対応しており、そのアミノ酸配列からなるポリペプチドを表す。すなわち、（１）＋（７）は、アミノ酸配列（１）からなるポリペプチドとアミノ酸配列（７）からなるポリペプチドとの組合せを表す。
（１）＋（７）、（１７）＋（６０）、（１８）＋（６１）、（１７）＋（６１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）、（１）＋（７）＋（２）、（１）＋（７）＋（２４）＋（２５）、（１）＋（７）＋（３）、（１）＋（７）＋（３０）、（１）＋（７）＋（４）、（１）＋（７）＋（３５）、（１）＋（７）＋（５）、（１）＋（７）＋（４４）＋（４５）、（１）＋（７）＋（６）、（１）＋（７）＋（５１）、（１）＋（７）＋（２）＋（３）、（１）＋（７）＋（２）＋（４）、（１）＋（７）＋（２）＋（５）、（１）＋（７）＋（２）＋（６）、（１）＋（７）＋（３）＋（４）、（１）＋（７）＋（３）＋（５）、（１）＋（７）＋（３）＋（６）、（１）＋（７）＋（４）＋（５）、（１）＋（７）＋（４）＋（６）、（１）＋（７）＋（５）＋（６）、（１）＋（７）＋（２）＋（３）＋（４）、（１）＋（７）＋（２）＋（３）＋（５）、（１）＋（７）＋（２）＋（３）＋（６）、（１）＋（７）＋（３）＋（４）＋（５）、（１）＋（７）＋（３）＋（４）＋（６）、（１）＋（７）＋（４）＋（５）＋（６）、（１）＋（７）＋（２）＋（４）＋（５）、（１）＋（７）＋（２）＋（４）＋（６）、（１）＋（７）＋（２）＋（５）＋（６）、（１）＋（７）＋（３）＋（５）＋（６）、（１）＋（７）＋（２）＋（３）＋（４）＋（５）、（１）＋（７）＋（２）＋（３）＋（４）＋（６）、（１）＋（７）＋（３）＋（４）＋（５）＋（６）、（１）＋（７）＋（２）＋（４）＋（５）＋（６）、（１）＋（７）＋（２）＋（３）＋（５）＋（６）、（１）＋（７）＋（２）＋（３）＋（４）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（４）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３）＋（４）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３）＋（５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（４）＋（５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（４）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）＋（４）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）＋（５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３）＋（４）＋（５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３）＋（４）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（４）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（４）＋（５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（４）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）＋（４）＋（５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）＋（４）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３）＋（４）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（４）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）＋（４）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（４４）＋（４５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３０）＋（３５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３０）＋（４４）＋（４５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３０）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３５）＋（４４）＋（４５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（４４）＋（４５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（３５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（４４）＋（４５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３０）＋（３５）＋（４４）＋（４５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３０）＋（３５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３５）＋（４４）＋（４５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３５）＋（４４）＋（４５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（４４）＋（４５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３０）＋（４４）＋（４５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（３５）＋（４４）＋（４５）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（３５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（３０）＋（３５）＋（４４）＋（４５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３５）＋（４４）＋（４５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（４４）＋（４５）＋（５１）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（３５）＋（４４）＋（４５）＋（５１）
これらのうち、（１）＋（７）＋（２）＋（３）＋（４）＋（５）＋（６）、（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２）＋（３）＋（５）＋（６）、及び（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（３５）＋（４４）＋（４５）＋（５１）が好ましく、さらに好ましくは（１７）＋（１８）＋（６０）＋（６１）＋（２４）＋（２５）＋（３０）＋（３５）＋（４４）＋（４５）＋（５１）である。
【００２４】
本発明の免疫測定用試薬は、上記のポリペプチドを含めば、試薬の剤型及び構成等に制限はなく、例えば、ポリペプチドが、水不溶性担体及び／又は標識化合物と結合したかたちで試薬に含まれてもよく、ポリペプチド単独で含まれていてもよい。すなわち本発明の試薬は、比朧法、ラテックス凝集法及び比濁法等のホモジニアス免疫測定法にも、水不溶性担体を用いたヘテロジニアス免疫測定法にも適用できる。これらのうち、測定感度の点で、ヘテロジニアス免疫測定法用の試薬が好ましい。すなわち、本発明の免疫測定試薬は、ポリペプチドが水不溶性担体に結合して用いることが好ましい。
【００２５】
水不溶性担体としては、特開平２−２０５７７４号公報に記載の担体等が使用でき、無機物及び有機物等が使用でき、例えば、セルロース、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリオレフィン、ポリウレタン、ニトロセルロース、セルロースアセテート、ポリエステル、エポキシ樹脂、フェノール樹脂、絹、フィブロイン、リグニン、ヘミセルロース、キチン、エボナイト、ゴム、ガラス、石英、シリコン及びセラミックス等が挙げられる。これらのうち、ポリスチレン、ガラス、石英及びシリコンが好ましく、さらに好ましくはポリスチレン及びガラス、特に好ましくはガラスである。
【００２６】
水不溶性担体の形状は、使用する目的に合わせて自由に決定でき、真球状や円盤状のビーズ、板状や棒状のスティック、試験管、及び不織布やフィルターのストリップ（短冊状の細片）、微粒子等が挙げられる。これらのうち、ビーズ及び微粒子が好ましく、さらに好ましくは真球状のビーズである。
【００２７】
水不溶性担体の大きさは、使用する目的に合わせて自由に決定できるが、通常は内径４〜１０ｍｍ、深さ１０〜２０ｍｍ程度の反応容器に投入できる大きさである（水不溶性担体が試験管の場合を除く。）。真球状ビーズの場合、直径（ｍｍ）は１〜１０が好ましく、さらに好ましくは２〜８、特に好ましくは３〜７である。円盤状ビーズの場合、直径（ｍｍ）は１〜１０が好ましく、さらに好ましくは２〜８、特に好ましくは３〜７であり、厚さは（ｍｍ）は０．１〜５が好ましく、さらに好ましくは０．２〜２、特に好ましくは０．３〜１である。スティックの場合、長さ（ｍｍ）は２〜１０が好ましく、さらに好ましくは３〜８、特に好ましくは４〜７である。また、スティックの断面積（ｍｍ２）は１〜２５が好ましく、さらに好ましくは２〜１６、特に好ましくは３〜９である。なお、断面積とは、長軸方向に対して垂直に切断した際の切断部分の断面積を意味する。試験管の場合、長さ（ｍｍ）は５〜１００が好ましく、さらに好ましくは８〜８０、特に好ましくは１０〜２０である。また、試験管の内径（ｍｍ）は、５〜２０が好ましく、さらに好ましくは６〜１６、特に好ましくは８〜１２である。ストリップの場合、長さ（ｍｍ）は、５〜１００が好ましく、さらに好ましくは１０〜８０、特に好ましくは１０〜５０である。また、ストリップの幅（ｍｍ）は、１〜２０が好ましく、さらに好ましくは２〜１６、特に好ましくは３〜１０である。厚さは（ｍｍ）は０．１〜２が好ましく、さらに好ましくは０．１〜０．５である。不織布やフィルターの平均孔径（μｍ）は、０．１〜１０が好ましく、さらに好ましくは０．３〜５である。微粒子の場合、平均粒子径（μｍ）は０．０１〜２００が好ましく、さらに好ましくは０．１〜５０、特に好ましくは０．２〜１０である。平均粒子径は、透過型電子顕微鏡法、光学顕微鏡による整列測定法等で測定できる。
【００２８】
ポリペプチドを水不溶性担体に結合する方法としては、化学的に結合する方法及び物理吸着による方法の従来公知の方法等で行うことができる。化学的に結合する方法としては、水不溶性担体表面に導入されたアミノ基及び／又はスルフヒドリル基等の官能基と、ポリペプチドのアミノ基及び／又はスルフヒドリル基等の官能基とを結合剤（グルタルアルデヒド、サクシンアルデヒド、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロサクシンイミドエステル及びｏ−フェニレンビスマレイミド等）で架橋する方法（米国特許第４２８０９９２号明細書及び同第３６５２７６１号明細書等）等が挙げられる。物理吸着による方法としては、水不溶性担体がポリスチレンの場合、ポリペプチドの０．００１〜０．０４％（Ｗ／Ｖ）炭酸緩衝水溶液（ｐＨ９．０）に水不溶性担体を適当時間浸漬する方法（バイオシム・バイオフィズ・アクタ、２５１巻、４２７頁、１９７１年）等が挙げられる。この方法は、担体がポリスチレン以外の物質、例えばポリプロピレン、シリコン、ガラス及びセルロース等にも適用できる。また、ポリペプチドを特異的結合物質（例えば、抗原−抗体、アビジン−ビオチン、レクチン−糖鎖、相補的遺伝子鎖等）を利用して間接的に水不溶性担体に結合することもできる。例えば、ポリペプチドをビオチンで修飾し、アビジンを結合した水不溶性担体と反応することで、ポリペプチドを水不溶性担体に結合できる。アビジンとしては、卵白由来アビジン及びストレプトアビジン等が使用でき、ストレプトアビジンが好ましい。これら特異的結合物質のうち抗原−抗体、アビジン−ビオチン、レクチン−糖鎖については例えば、［生化学実験法１１「エンザイムイムノアッセイ」，東京化学同人社，１９８９年］に記載のもの、相補的な遺伝子としては公開特許公報平６−１８６２３２号に記載の相補的な遺伝子、例えばポリデオキシアデニル酸とポリチミジル酸の組み合わせ等が挙げられる。
【００２９】
これらのうち、化学的に結合する方法及び特異的結合物質を用いる方法が好ましく、さらに好ましくは特異的結合物質を用いる方法である。特異的結合物質を用いる方法のうち、アビジン−ビオチン結合を利用した方法である。
【００３０】
ポリペプチドは従来免疫測定に使用される緩衝液等に溶解されていてもよい。緩衝液は例えば、リン酸緩衝液及びグッド（Ｇｏｏｄ）の緩衝液等が使用でき、蛋白、塩及び／又は界面活性剤等を含有していてもよい。蛋白としては、アルブミン（牛血清アルブミン、ウサギ血清アルブミン、マウス血清アルブミン、オバルブミン、コナルブミン及びラクトアルブミン等）、抗体（正常ウサギＩｇＧ及び正常マウスＩｇＧ等のポリペプチドとの結合性がない抗体）及びゼラチン等が挙げられる。塩としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム及び臭化リチウム等が挙げられる。界面活性剤としては、ソルビタンラウリン酸モノエステルエチレンオキシド付加物（商品名：ツイーン２０及びツイーン４０、ＩＣＩアメリカ社）等のノニオン界面活性剤等が挙げられる。また、ポリペプチドが結合した水不溶性担体は、上述の緩衝液に浸漬した状態でもよいが、ポリペプチドを含む水不溶性担体全体を糖類及び蛋白質でコーティングした後乾燥した状態が好ましい。コーティング・乾燥方法としては、例えば糖類と蛋白質とを含有する溶液中に浸漬したのち乾燥させる方法（特開平０９−３１８６２８号公報及び特公平５−４１９４６号公報）等が挙げられる。
【００３１】
本発明の免疫測定用試薬キットは、ポリペプチドを含む免疫測定用試薬と共に、抗ヒトイムノグロブリン抗体を含む試薬を含有していることが好ましい。
抗ヒトイムノグロブリン抗体は、従来公知の方法で作成されたものが使用でる。例えば、ヒトイムノグロブリンを適当な動物（例えば、マウス、ウサギ、ブタ、ヤギ、ウマ等）に免疫し、得られた抗血清から塩析、イオン交換カラム等で抗体を精製して作成できる。抗ヒトイムノグロブリン抗体は、ポリクローナル抗体でもモノクローナル抗体でもよく、また、（Ｆａｂ’）２、Ｆａｂ’等の抗体断片でもよい。尚、ヒトイムノグロブリンとは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ等の全てのイムノグロブリンを含むが、通常はＩｇＧ及びＩｇＭであり、主にＩｇＧである。
【００３２】
抗ヒトイムノグロブリン抗体は、標識化合物で標識されていることが好ましい。標識化合物としては従来公知のものが使用でき、ラジオアイソトープ、蛍光物質、発光物質及び酵素等が用いられる。アイソトープとしては、１２５Ｉ等が挙げられ、蛍光物質としてはユーロピウム錯体等が挙げられ、発光物質としてはＮ−メチルアクリジウムエステル等が挙げられ、酵素としては西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ及びβ−ガラクトシダーゼ等が挙げられる。これらの標識化合物のうち、酵素が好ましく、さらに好ましくは西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ及びβ−ガラクトシダーゼ、特に好ましくは西洋ワサビペルオキシダーゼ及びアルカリホスファターゼである。
【００３３】
標識化合物を抗ヒトイムノグロブリン抗体に標識する方法は従来公知の方法等が適用でき、「続生化学実験講座５  免疫生化学実験法」（日本生化学会編、東京化学同人、１９８６年発行、１０２〜１１２頁に記載の方法等が用いられ、例えば、次の（１）〜（４）の方法等が適用できる。
（１）標識化合物がアイソトープの場合、クロラミンＴを酸化剤として用いて放射性ヨウ素を抗ヒアルロン酸抗体又は配位子のチロシン残基に導入する方法。
（２）標識化合物が蛍光物質の場合、フルオレセインイソチオシアネートを緩衝液中で抗ヒアルロン酸抗体又は配位子に反応させ、抗ヒアルロン酸抗体又は配位子のリシン残基に結合させる方法。
（３）標識物質が発光物質の場合、商品名「アクリジニウム誘導体−Ｉ」（同人化学研究所社製）を緩衝液中で抗ヒアルロン酸抗体又は配位子に反応させ、抗ヒアルロン酸抗体又は配位子のアミノ基に結合させる方法。
（４）標識物質が酵素の場合、酵素の持つアミノ基と抗ヒアルロン酸抗体又は配位子の持つチオール基をＮ−スクシンイミジル−６−マレイドヘキサノエート等のニ架橋性試薬で結合する方法。
【００３４】
本発明の免疫測定用試薬キットには、本発明の免疫測定用試薬を含めば、試薬の剤型及び試薬キットの構成等に制限はなく、例えば、ポリペプチドが、水不溶性担体及び／又は標識化合物と結合したかたちで試薬キットに含まれてもよく、ポリペプチド単独で含まれていてもよい。すなわち本発明の試薬キットは、比朧法、ラテックス凝集法及び比濁法等のホモジニアス免疫測定法にも、不溶性担体を用いたヘテロジニアス免疫測定法にも適用できる。これらのうち、測定感度の点で、標識化合物を標識され抗ヒトイムノグロブリン抗体を含むヘテロジニアスなサンドイッチ免疫測定法用の試薬キットが最も好ましい。すなわち、ペプチドと検体とを反応させるとポリペプチドに対する自己抗体のみが特異的にペプチドと結合する。そこで、抗ヒトイムノグロブン抗体を加えると、該抗体は自己抗体と結合し、免疫複合体「ポリペプチド−自己抗体−抗ヒトイムノグロブリン抗体」を形成する。この免疫複合体中の抗ヒトイムノグロブリン抗体を定量することで自己抗体量を定量できる。抗ヒトイムノグロブリン抗体量は標識化合物の量を測定することにより定量することができる。
【００３５】
標識化合物の測定は、標識化合物の種類により従来公知の方法等で実施できる。標識化合物が蛍光物質の場合、例えば適当な波長の励起光の照射によって生じる蛍光量を光電子増倍管により定量する。標識化合物が化学発光物質の場合、例えばアクリジニウムエステルではアルカリ溶液を加えることにより生じる発光量を光電子増倍管により定量する。
【００３６】
標識化合物が酵素の場合、適当な基質を反応させることにより酵素活性を吸光度（吸光度測定法）、蛍光量（蛍光量測定法）又は発光量（化学発光量測定法）として測定できる。例えば、酵素がペルオキシダーゼの場合、基質としては２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）二アンモニウム（ＡＢＴＳ）（吸光度測定法）及びルミノール／過酸化物（化学発光量測定法）等を選択できる。酵素がアルカリフォスファターゼの場合、基質としてはｐ−ニトロフェニルフォスフェート（吸光度測定法）、４−メチルウンベリフェリルリン酸（４−ＭＵＰ）（蛍光量測定法）及び３−（２’−スピロアダマンタン）−４−メトキシ−４−（３’’ホスホリルオキシ）フェニル−１，２−ジオキセタン・二ナトリウム（ＡＭＰＰＤ）（化学発光量測定法）等を選択できる。吸光度は分光光度計、蛍光量及び化学発光量は光電子増倍管により定量される。これらのうち、化学発光量測定法が好ましく（すなわち、本発明の試薬キットを用いて自己抗体を定量する方法としては化学発光酵素免疫測定法が好ましい。）、さらに好ましくはペルオキシダーゼとルミノール／過酸化物との組合せ又はアルカリフォスファターゼとＡＭＰＰＤとの組み合わせによる化学発光量測定法である。
【００３７】
ルミノールとしては、ルミノール、イソルミノール、Ｎ−アミノヘキシル−Ｎ−エチルイソルミノール（ＡＨＥＩ）、Ｎ−アミノブチル−Ｎ−エチルイソルミノール（ＡＢＥＩ）及びこれらの金属塩等が含まれる。これらの金属塩としては、アルカリ金属（ナトリウム及びカリウム等）塩及びアルカリ土類金属（カルシウム及びマグネシウム等）塩等が使用できる。これらのうち、ルミノール及びルミノールの金属塩が好ましく、さらに好ましくはルミノールの金属塩、特に好ましくはルミノールのナトリウム塩である。過酸化物としては、無機過酸化物及び有機過酸化物のいずれも使用できる。無機過酸化物としては、過酸化水素、過ホウ酸ナトリウム、過ホウ酸カリウム、過酸化酸、過酸化炭酸、過酸化二炭酸、次亜塩素酸、次亜塩素酸カリウム、亜塩素酸、塩素酸、塩素酸ナトリウム、過塩素酸、過臭素酸、ペルオクソ硫酸及びペルオクソリン酸等が挙げられる。有機過酸化物としては、例えば、過酢酸、過プロピオン酸、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、トリエチルアミンオキサイド、メチルジエチルアミンオキサイド及び過酸化フタロイル等が挙げられる。これらのうち、保存安定性等の観点から、無機過酸化物が好ましく、さらに好ましくは過酸化水素である。
【００３８】
本発明の免疫測定用試薬キットには、ポリペプチドを含む試薬（本発明の免疫測定用試薬）、抗ヒトイムノグロブリンを含む試薬に加えて、さらに反応用緩衝液、Ｂ／Ｆ分離用緩衝液及びコントロール試料等を含むことができる。反応用緩衝液及びＢ／Ｆ分離用緩衝液としては従来免疫測定に使用される緩衝液等が使用でき、蛋白、塩及び／又は界面活性剤等を含有するリン酸緩衝液及びグッド（Ｇｏｏｄ）の緩衝液等が使用できる。蛋白としては、アルブミン（牛血清アルブミン、ウサギ血清アルブミン、マウス血清アルブミン、オバルブミン、コナルブミン及びラクトアルブミン等）、抗体（正常ウサギＩｇＧ及び正常マウスＩｇＧ等のｐ５３ポリペプチドとの結合性がない抗体）及びゼラチン等が挙げられる。塩としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム及び臭化リチウム等が挙げられる。界面活性剤としては、ソルビタンラウリン酸モノエステルエチレンオキシド付加物（商品名：ツイーン２０及びツイーン４０、ＩＣＩアメリカ社）等のノニオン界面活性剤等が挙げられる。
【００３９】
コントロール試料は、検体にｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体が存在するかを判断するための比較試料として用いるものであり、通常、自己抗体を含まない試料（陰性コントロール）及び自己抗体を含む試料（陽性コントロール）が用意される。陰性コントロールとしては、免疫反応用緩衝液と同様な蛋白等を含有した緩衝液、ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を保有しないヒトプール血清等が使用できる。陽性コントロールとしては、ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を保有するヒトプール血清、免疫反応用緩衝液と同様な蛋白等を含有した緩衝液でｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を含む血清を添加したもの等が使用できる。
【００４０】
本発明の免疫測定用試薬キットで測定される検体は、ヒト由来の体液であれば特に限定されず、例えば血液、尿、唾液、リンパ液、胆汁、胃液、膵液等が挙げられ、さらに生体から採取された組織のホモジネート抽出液等も用いることができる。このうち好ましいのは血液及び尿であり、より好ましくは、血液（全血、血清、血漿等を含む）である。
【００４１】
本発明の試薬キットを用いたｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を測定する方法（サンドイッチ測定法）の具体例（工程１〜６）を以下に示す。
工程１．検体と、ポリペプチドの結合した水不溶性担体とを反応させて反応混合物（複合体１を含む）を得る。
工程２．工程１の反応混合物から未反応物を除き（Ｂ／Ｆ分離）、複合体１を得る。
工程３．工程２で得られた複合体１と、標識化合物で標識された抗ヒトイムノグロブリン抗体とを反応させて反応混合物（複合体２を含む）を得る。
工程４．工程３反応混合物から未反応物を除き（Ｂ／Ｆ分離）、複合体２を得る。
工程５．複合体２の標識化合物の量を測定する。
工程６．標識化合物の量を用いて、陰性コントロール及び／又は陽性コントロールと比較し、自己抗体の有無を判定する。
【００４２】
検体中のｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体の有無を判断する工程（上述の例では工程６）において、検体である血液での抗ヒトイムノグロブリン抗体量（抗ヒトイムノグロブリンに標識された標識化合物量として測定される）と、複数の健常人の血液での抗ヒトイムノグロブリン量（抗ヒトイムノグロブリンに標識された標識化合物量として測定される）から設定される基準値とを比較するで自己抗体の有無を判定することが好ましい。
基準値の設定方法は、例えば「臨床検査薬ガイド１９９９〜２０００，ｐ６４〜７１、文光堂（１９９９）」、「臨床検査データブック１９９７−１９９８、ｐ８〜１３，医学書院（１９９７）」に記載された方法で行うことができる。すなわち複数の健常人（少なくとも５０人以上、好ましくは１２０人以上）を測定し、標識化合物量を求める（化学発光酵素免疫測定法の場合、発光量となる）。標識化合物量を統計処理｛パラメトリック法、ノンパラメトリック法等［パラメトリック法は母集団が正規分布（べき乗変換しても可）を示す場合に使用し、ノンパラメトリック法は母集団が正規分布しない場合に使用される。］｝し、標本群の９５％を含む範囲を求める基準範囲とし、上限を上限基準値、下限を下限基準値と設定する。従って、上限基準値を越えた検体については自己抗体を有する可能性が高いが、５％の確率で健常人でも越える場合がある。これを防ぐため、通常は上限基準値にさらに係数を乗じ、及び／又は付加したカットオフ値を設定することが行われる。すなわちカットオフ値を超えた検体を自己抗体が有るものとして判定する。カットオフ値の設定は、上限基準値とｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を有する検体の分布下限の値との関係で設定するが、通常は上限基準値の１．５〜３倍程度の値である。
【００４３】
上述の陰性コントロール及び陽性コントロールは、設定したカットオフ値を簡易に再現できるように調製したものである。例えば、陰性コントロールの測定値（標識化合物量）の３倍がカットオフ値となる、陰性コントロールと陽性コントロールの平均値がカットオフ値となる等、の設定が可能である。
【００４４】
【実施例】
以下、実施例により本発明をさらに説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００４５】
＜合成例１＞
１．ポリペプチドの合成
エチレンジアミンで官能化しそれに酸不安定リンカー｛４−（２’，４’−ジメチルオキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）フェノキシ酢酸｝をカップリングさせたペプシンＫポリアミド−キーゼルグアー樹脂（Ｐｅｐｓｙｎ  Ｋ  ｐｏｌｙａｍｉｄｅ−Ｋｅｓｅｌｇｕｈｒ  ｒｅｓｉｎ：Ｍｉｌｌｉｇｅｎ，Ｎｏｖａｔｏ，カリフォルニア）を固相として、表１に示したポリペプチドをテトラへドロンレター（Ｒｉｎｋ，ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．（１９８７）２８：３７８７）に記載された化学合成法により合成した。
【００４６】
なお、▲１▼側鎖のｗ−アミノ基はＢｏｃにより保護し、α−アミノ基はＦｍｏｃで保護した。
▲２▼２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル基によりアルギニンのグアニジノ基を保護した。
▲３▼ヒスチジンのイミダゾリル基をＢｏｃ又はトリチル基で保護し、システインのスルフヒドリル基をトリチル基で保護した。
▲４▼ペプチドの延長反応は、ジイソプロピルカルボジイミドを用いてヒドロキシベンゾトリアゾールエステル形成することによりカップリングを行うアルギニンの場合を除いて、付加するアミノ酸のカルボキシル基を活性化し形成させたＯ−ペンタフルオロフェニルエステル類とペプチドのα−アミノ基をカップリングすることにより実行した。
▲５▼すべてのペプチドのＮ末端を酢酸無水物でＮ−アセチル化した。
▲６▼すべての合成をミリゲン９０５０ペプシンセサイザー（Ｍｉｌｌｉｇｅｎ  ９０５０  ＰｅｐＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ：Ｎｏｖａｔｏ，カリフォルニア）（連続フロー法）を用いて行った。
▲７▼補集剤（アニソール及び１，２−エタンジチオール）の存在下でトリフルオロ酢酸を用いて、固相とポリペプチドとを切断し、ジエチルエーテルで抽出し粗合成ポリペプチドを得た。
▲８▼これらの粗合成ポリペプチドをＣ１８−逆相クロマトグラフィーカラム（ＹＭＣ−Ｈｙｄｏｒｏｓｐｈｅｒｅ  Ｃ１８  ２０×１５０、ワイエムシィ社製で精製｛溶出液はＡ：水／ＴＦＡ（体積比：１００／０．１）とＢ：アセトニトリル／ＴＦＡ（体積比：１００／０．１）のグラジュエント（Ｂの割合として０〜４０体積％）、流速１．０ｍＬ／ｍＬ、温度３７℃、検出は２２０ｎｍの波長を使用。｝後、凍結乾燥して、表１の合成ポリペプチドＰ１〜Ｐ１１を得た。
【００４７】
【表１】
2004231535.tif 000029
【００４８】
２．合成ポリペプチドへのビオチンによる修飾
合成ポリペプチチドＰ１の１重量部とビオチン残基導入試薬（商品名［Ｂｉｏｔｉｎ  Ｓｕｌｆｏ−ＯＳｕ］、株式会社同仁化学研究所）１重量部を炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）１０００重量部に溶解し、３０℃で２時間、静置反応した。反応溶液をＣ１８−逆相クロマトグラフィーで精製し、ビオチン結合ポリペプチドＰ１（ＰＢ−１）を作成した。Ｐ２〜Ｐ１１についても同様にしてビオチン結合ポリペプチド（ＰＢ−２〜ＰＢ−１１）を作成した。
【００４９】
＜実施例１＞
１．合成ポリペプチド結合ビーズの作成
（１）アビジン結合ビーズの作成
ストレプトアビジン（ロシュダイアグノティクス株式会社より購入）をｐＨ９の０．１Ｍ炭酸緩衝液に２０μｇ／ｍｌの濃度で溶解した。この溶液２０ｍｌに、直径３．２ｍｍのポリスチレンビーズ（イムノケミカル社製）１０００個を加え、２〜１０℃で４８時間静置させて、ポリスチレンビーズにストレプトアビジンを物理吸着させた。その後、溶液をアスピレーターで吸引除去し、２０ｍＬの０．１重量％牛血清アルブミン含有リン酸緩衝液（ｐＨ７．２）でビーズを２回洗浄し、アビジン結合ビーズを調製した。このアビジン結合ビーズを再度５０ｍＬの０．１％牛血清アルブミン含有リン酸緩衝液に浸漬し、浸漬状態で冷蔵（２〜１０℃）保存した。
【００５０】
（２）ｐ５３ポリペプチド結合ビーズ（ＰＢビーズ）の作成
浸漬液をアスピレーターで除いたアビジン結合ビーズ１０００個を、合成ポリペプチドＰＢ１を２μｇ／ｍＬの濃度で含むリン酸緩衝水溶液（０．０２Ｍ，ｐＨ７．０）２０ｍＬに加え、４〜１０℃で２４時間反応（２時間に１回転倒攪拌）した。その後、緩衝水溶液をアスピレーターで吸引除去し、２０ｍＬの０．１重量％牛血清アルブミン含有リン酸緩衝液（ｐＨ７．２）でビーズを２回洗浄した後、１０重量％のショ糖を含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）に３０分間浸漬後、リン酸緩衝液をアスピレーターで除き、ビーズをろ紙上に撒き室温（約２５℃）で風乾し、合成ポリペプチド結合ビーズ（ＰＢ１ビーズ）を調整し、乾燥剤（シリカゲル）を入れた密閉容器中で冷蔵保存した。
【００５１】
２．免疫反応用緩衝液の作成
０．０２Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）に、カゼインを３ｇ／Ｌ及び塩化ナトリウムを８．５ｇ／Ｌの濃度になるように添加し、免疫反応用緩衝液を作成した。使用時まで冷蔵保存した。
【００５２】
３．ペルオキシダーゼ標識抗ヒトイムノグロブリン抗体の作成
抗ヒトイムノグロブリンポリクローナル抗体（ダコジャパン（株）製）及び西洋ワサビ由来ペルオキシダーゼ（東洋紡（株）製）を用い、文献［エス・ヨシタケ、エム・イマガワ、イー・イシカワ、エトール；ジェイ．バイオケム，Ｖｏｌ．９２（１９８２）１４１３−１４２４］に記載の方法でペルオキシダーゼ標識抗β２−マイクログロブリンポリクローナル抗体を調製し、冷凍（−３０℃）保存した。
【００５３】
４．酵素標識抗体液の作成
上記で作成した免疫反応緩衝液及びペルオキシダーゼ標識抗ヒトイムノグロブリン抗体を用いて次の通り酵素標識抗体液を作成した。すなわち、免疫反応用緩衝液１００ｍＬにペルオキシダーゼ標識抗ヒトイムノグロブリン抗体を蛋白量で１００μｇ添加し、攪拌混合し、これを酵素標識抗体液とした。
【００５４】
５．過酸化水素液の調製
２００μｌの３５％過酸化水素水を脱イオン水１リットルに溶解し、過酸化水素水とした。使用するまで冷蔵保存した。
【００５５】
６．基質液の調製
ルミノール（東京化成製）０．１８ｇ及び４−（シアノメチルチオ）フェノール０．１ｇ（三新化学製）を０．１Ｍ（モル／Ｌ）、ｐＨ８．５のトリス／塩酸緩衝液１リットルに溶解した。使用するまで遮光、冷蔵保存した。
【００５６】
＜実施例２〜１８＞
１．合成ポリペプチド結合ビーズの作成
実施例１と同様にして、表２及び３に示した実施例２〜１８の合成ポリペプチド結合ビーズを調整し、乾燥剤（シリカゲル）を入れた密閉容器中で冷蔵保存した。
尚、複数の合成ポリペプチドを組み合わせて使用する場合（実施例１２〜１８）、各合成ポリペプチドの量は同じとし、総量が２μｇ／ｍＬになるようにした。
【００５７】
また、免疫反応用緩衝液、ペルオキシダーゼ標識抗ヒトイムノグロブリン抗体、酵素標識抗体液、過酸化水素液及び基質液は、実施例１で作成したものを用いた。
【００５８】
＜比較例１＞ＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質の作製
特開平９−２２９９３３号公報に記載の方法に準じて、４種類の蛋白質、すなわち、ｐ５３遺伝子のＮ末端からのアミノ酸配列が１−１１２のペプチド、１０８−３１０ペプチド、３０６−３９３ペプチド、１−３９３ペプチドとＧＳＴ（グルタチオンＳトランスフェラーゼ）との各融合蛋白質を以下の通り作製した。
【００５９】
１．ｐ５３遺伝子の調製
ヒト線維芽細胞ＷＩ−３８のＳＶ４０トランスフォーマントであるＷＩ−３８ＶＡ１３よりＲＮＡを抽出した。抽出は、ＡＧＰＣ法を用いて、次のようにして行った。
【００６０】
（ＡＧＰＣ法試薬の調製）
（１）１Ｍ  クエン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）の調製
クエン酸三ナトリウムの２９．４ｇを蒸留水８０ｍｌに溶解した後、クエン酸を加えて、ｐＨ７．０にあわせた後、水を加えて１００ｍｌとした。そして、オートクレーブ（１２０℃、２０分）してから使用した。
（２）Ｄ液の調製
ＧＴＣ（グアニジウムチオシアネート）２３６．３ｇ（４Ｍ）、ザルコシル  ２．５ｇ（０．８重量％）、１Ｍ  クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）  １２．５ｍｌ（２５ｍＭ）及び蒸留水２５０ｍｌを８５℃で加温溶解した後、室温に戻し、水で４９６ｍｌにあわせた。細孔径０．４５μｍボトルトップフィルターで濾過して保存した。使用時にこの保存溶液５０ｍｌに対して２−メルカプトエタノール３６０μｌ（０．１Ｍ）を加え、Ｄ液とした。
（３）２Ｍ  酢酸ナトリウム（ｐＨ４．０）の調製
酢酸ナトリウム  トリハイドレート  ２７．２ｇを蒸留水１０ｍｌに溶解させた後、酢酸を用いてｐＨ４．０にあわせ、蒸留水を加えて１００ｍｌとした。細孔径０．４５μｍボトルトップフィルターで濾過して使用した。
【００６１】
（ＡＧＰＣ法の操作）
（１）チューブにＤ液０．５ｍｌを加え、ＷＩ−３８ＶＡ１３細胞（大日本製薬株式会社より購入）を分散し、細胞を破壊した。
（２）さらに、２Ｍ  酢酸ナトリウム  ５０μｌ、フェノール  ０．５ｍｌ及びクロロホルム／イソアミルアルコール（体積比４９／ｌ）  １００μｌを順次加え、１種類いれるごとに、チューブを２〜３回振り、混ぜた。
（３）１０秒間激しく混ぜた後、１５分間氷冷した。
（４）遠心加速度１０，０００Ｇで１０℃、２０分間遠心した後、下部に分離した水層を、ＤＮＡを含む中間層が混入しないように、別のチューブに分取した。
（５）分取した水層に、イソプロパノール０．５ｍｌを加え、−２０℃で１時間冷やした。次に、１０分間遠心（１０，０００Ｇ、０℃）し、ＲＮＡを沈殿させた。
（６）沈殿したＲＮＡを０．５ｍｌのＤ液に再び溶解し、イソプロパノール０．５ｍｌを加え、−２０℃で１時間置く。
（７）遠心してＲＮＡを沈殿させ、沈殿を８０重量％エタノール水溶液１ｍＬで洗い、乾燥させた後、水に溶解する。
【００６２】
このようにして抽出したｍＲＮＡから、次の反応条件にて、ＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（ＲＴ）反応によりｃＤＮＡを作成した。ＲＴ反応は、ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬのＲｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（商品名  Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ）を使用した。反応組成は次のとおりである。５０ｍＭ  トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン／塩酸緩衝液（ｐＨ８．３）、７５ｍＭ塩化カリウム水溶液、３ｍＭ塩化マグネシウム水溶液、１０ｍＭ  ｄＮＴＰ（デオキシリボヌクレオシド  ５’−トリフォスフェート混合物）、７．５μｇ／ｍｌのランダムノナマー（シグマ社から購入）、ＲＮａｓｉｎ（プロメガ社、ＲＮａｓｅインヒビター）を１０００Ｕ／ｍｌ、ＲＮａｓｅＨ−（リバース  トランスクリプターゼ）を２００，０００Ｕ／ｍｌ。
【００６３】
２．組み換え遺伝子の作成及び発現
作成したｃＤＮＡを制限酵素ＢａｍＨＩの認識配列を５´末端に有するＰＣＲｐｒｉｍｅｒにて増幅後、ＢａｍＨＩにて消化し、ｐＧＥＸ−５Ｘ−２ベクターのＢａｍＨＩ部位に組み込んだ。シークエンス法にてインサートが正しく組み込まれていることを確認した後、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３），ＬｙｓＳ（Ｎｏｖａｇｅｎ社）にトランスフォーム後、０．１ｍＭのイソプロピルチオベータガラクトシド（ＩＰＴＧ）にて３７℃、２時間あるいは２５℃、６時間誘導をかけた。大腸菌の細胞ライゼイトより目的の融合蛋白質をグルタチオンセファロースを用いたアフィニティークロマトグラフィー法にて抽出、精製し、ＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質（ＧＳＴ１［アミノ酸配列１−１１２を含む］、ＧＳＴ２［アミノ酸配列１０８−３１０を含む］、ＧＳＴ３［アミノ酸配列３０６−３９３を含む］、ＧＳＴ４［アミノ酸配列１−３９３を含む］を得た。
【００６４】
１，ＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズ（ＧＳＴビーズ）の作成
実施例１のアビジン結合ビーズの作成に準じて作成した。すなわち、ＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質ＧＳＴ１をｐＨ９の０．１Ｍ炭酸緩衝液に２０μｇ／ｍｌの濃度で溶解した。直径３．２ｍｍのポリスチレンビーズ（イムノケミカル社製）１０００個をこの溶液２０ｍｌに加え、２〜１０℃で４８時間静置させて、ポリスチレンビーズにＧＳＴ１を物理吸着させた。その後、溶液をアスピレーターで吸引除去し、２０ｍＬの０．１重量％牛血清アルブミン含有リン酸緩衝液（ｐＨ７．２）でビーズを２回洗浄した後、２０ｍＬの０．１重量％牛血清アルブミン含有リン酸緩衝液（ｐＨ７．２）に浸漬して２４時間冷蔵で放置した。浸漬液をアスピレーターで吸引除去し、２０ｍＬの０．１重量％牛血清アルブミン含有リン酸緩衝液（ｐＨ７．２）でビーズを２回洗浄した後、１０重量％のショ糖を含むリン酸緩衝液に浸漬後、液をアスピレーターで除き、ビーズをろ紙上に撒き室温で風乾し、ＧＳＴ１結合ビーズ（ＧＳＴ１ビーズ）とし、乾燥剤（シリカゲル）を入れた密閉容器中で冷蔵保存した。
【００６５】
＜比較例２〜５＞
１．ＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズの作成
比較例１と同様にして、表３に示した比較例２〜５のＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズを調整し、乾燥剤（シリカゲル）を入れた密閉容器中で冷蔵保存した。
尚、複数のＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質を組み合わせて使用する場合（比較例５）、各ＧＳＴの量は同じとし、総量が２０μｇ／ｍＬになるようにした。
２．その他試薬の作成
免疫反応用緩衝液、酵素標識抗体液、過酸化水素液及び基質液、は実施例１で作成したものを用いた。
【００６６】
＜実施例１９＞
健常人プール血清及び癌患者血清を測定した例である。
１．検体
当社ボランティア５０名から採取した血清を各０．２ｍＬずつ混合し、健常人プール血清１０ｍＬを作成し、又、癌患者から得た血清（患者１〜３）を各１０ｍＬを用意し検体として用いた。
【００６７】
２．免疫反応操作
１２×７５ｍｍ試験管中に、免疫測定用緩衝液３００μＬ、検体（健常人プール血清又は癌患者血清）１０μＬ、及びＰＢビーズ又ＧＳＴビーズ１個を加え、３７℃で、１０分間反応させた。反応液をアスピレータで除去した後、生理食塩水２ｍＬを加てビーズを洗浄し、洗浄液をアスピレーターで除去した。さらに生理食塩水２ｍＬを加え同様に洗浄した。次に、酵素標識抗体液３００μＬを、洗浄後のビーズに加え３７℃、１０分反応させた。反応液をアスピレーターで除去し、生理食塩水２ｍＬを加えビーズを洗浄し、洗浄液をアスピレーターで除去した。さらに生理食塩水２ｍＬを加え同様に２回洗浄した。洗浄後のビーズについて、酵素活性の測定を行った。
【００６８】
３．酵素活性測定操作
洗浄後のビーズが入った試験管（１２×７５ｍｍ）をアロカ社製ルミネッセンスリーダーＢＬＲ−２０１型のサンプルホルダーにセットし、基質液２００μＬ及び過酸化水素水２００μＬを加え化学発光反応を開始した。発光反応開始４０秒後から１０秒間の発光量を積算計測し、これを酵素活性を示す発光量とした。なお、表２及び３中の数値は、上段が発光量を示し、下段は健常人プール血清の発光量を１．０としたときの各発光量の相対値である。
【００６９】
【表２】
2004231535.tif 000030
【表３】
2004231535.tif 000031
【００７０】
４．測定結果
結果を表２及び３に示した。実施例では比較例に比べ、健常人プール血清の発光量が低く、発光量比（表中下段の数値で、各測定発光量を健常人プール血清の測定発光量で除した値）が大きいことが判る。又、患者血清では個別のＰＢに対して反応性が低い場合があっても、複数のＰＢを組み合わせることにより感度が向上することが判る。
【００７１】
＜実施例２０＞
複数の健常人血清を測定して基準値を求め、カットオフ値を設定し、癌患者１０名からの血清を測定し、ｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体の有無を判断した例である。
【００７２】
１．検体の測定
実施例１８で調整した合成ポリペプチド結合ビーズ（固相化ＰＢ１，ＰＢ２，ＰＢ１０，ＰＢ１１，ＰＢ３，ＰＢ４，ＰＢ５，ＰＢ６，ＰＢ７，ＰＢ８，ＰＢ９）及び比較例５で作成したＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズ（固相化ＧＳＴ１，ＧＳＴ２，ＧＳＴ３）を用いて、実施例１９の方法で、健常人ボランティア１２０名からの血清検体及び実施例１９の健常人プール血清を測定した。
健常人ボランティア１２０名の測定値（発光量）の分布を図１（実施例１８）及び２（比較例５）に示した。図１の通り実施例１８の合成ポリペプチド結合ビーズでは発光量が低く、分布の範囲も狭いが、比較例５のＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズ（図２）では発光量が高く、分布の範囲も広いことが判った。なお、図の横軸は発光量（ｃｐｓ）であり、点は検体の分布（１点が１検体に対応）を示す。
【００７３】
２．カットオフ値の設定
健常人の測定値（発光量）を統計処理ソフト「ＳＴＡＴＦＬＥＸ  ｖ．４．１」（アーテック社製）を用いて分布型を解析した結果、実施例１８の合成ポリペプチド結合ビーズについての発光量分布は、歪度１．４９、尖度４．９０であるのに対して、比較例５のＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズについての発光量分布は、歪度１．９８、尖度７．２４であった。なお、いずれの分布も正規分布していなかった。ノンパラメトリック法で９５％の信頼区間を求めたところ、実施例１８の合成ポリペプチド結合ビーズについての基準値は、発光量１２４５〜９３９７であったのに対して、比較例５のＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズについての基準値は、発光量３７７１〜１７５３０であった。ここで上限発光量の１．５倍の発光量をカットオフ値と設定すると、実施例１８について発光量１４０９５、比較例５について発光量２６２９４であった。この時、実施例１８についての健常人プール血清の発光量は２４０６であり、カットオフ値の１／５．８６であり、比較例５についての健常人プール血清の発光量は６２４６であり、カットオフ値の１／４．２１であった。従って、健常人プール血清を、陰性コントロールとして測定した場合、実施例１８の合成ポリペプチド結合ビーズではカットオフ値＝「健常人プール血清測定発光量」×５．８６と設定され、一方、比較例５のＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズではカットオフ値＝「健常人プール血清測定発光量」×４．２１と設定された。
【００７４】
３．検体の測定
表４記載の癌患者１０名（患者４〜１３）から採取した血清検体及び陰性コントロールとして実施例１９で作成した健常人プール血清を測定した。測定は、実施例１８の合成ポリペプチド結合ビーズ、及び比較例５のＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズを用いて実施例１９と同様にして行った。
４．判定結果
健常人プール血清を陰性コントロールとし、実施例２０で設定し係数でカットオフ値（「健常人プール血清測定発光量」×係数）を求めた。カットオフ値以上（カットオフ比１．０以上）の測定値を自己抗体陽性、カットオフ値未満（カットオフ比１．０未満）の測定値を自己抗体陰性と判断した。結果を表４に示した。
【００７５】
【表４】
2004231535.tif 000032
表４から、比較例５のＧＳＴ融合ｐ５３蛋白質結合ビーズではカットオフ値が高く、相対的に癌患者の発光量が低くなる（カットオフ比が小さくなる）ため、陰性と判定され頻度が高くなった。これは、健常人検体の測定値が、非特異吸着等の原因で、その分布が広いことに起因している。
これに対して、実施例１８の合成ポリペプチド結合ビーズではカットオフ値と癌患者検体の発光量差が大きく（カットオフ比が大きく）、自己抗体陰性と判断される頻度が小さかった。
【００７６】
【発明の効果】
本発明のｐ５３遺伝子産物に対する自己抗体を検出するための免疫測定用試薬は、非特異的反応が少なく、感度及び特異性に極めて優れている。すなわち、自己抗体を保有しない健常人からの検体の測定値と自己抗体を保有する癌患者からの検体の測定値との差が充分に大きく（高感度）、また自己抗体を保有しない健常人の検体に対して非特異的反応が極めて少ないので高精度の測定ができる。従って、本発明の測定試薬、測定試薬キット及び測定法によると、癌の極めて正確な診断が可能となる。
【００７７】
【配列表】
2004231535.tif 000033
2004231535.tif 000034
2004231535.tif 000035
2004231535.tif 000036
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2004231535.tif 000052
2004231535.tif 000053
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１８の免疫測定用試薬を用いて、健常人ボランティア１２０名の測定値（発光量）の分布を示したグラフである（実施例２０）。
【図２】比較例５の免疫測定用試薬を用いて、健常人ボランティア１２０名の測定値（発光量）の分布を示したグラフである（実施例２０）。