(57)【要約】【解決課題】スポットの切り出しの必要性が無く蛋白質同定に要する時間を短縮できる、高速で連続的にオンライン作業を可能とする、ハイスル−プットな蛋白質同定方法及び蛋白質同定装置を提供することを目的とする。【解決手段】多種類の蛋白質をゲルによらない分離精製方法を用いて分離精製し、分離精製物についてアミノ酸配列分析を行うことによって蛋白質を同定する蛋白質同定方法であって、分離精製工程が少なくとも二段の分離精製工程からなり、第一段目の分離精製工程をフリーフロー電気泳動法によって行なう。【選択図】　　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
多種類の蛋白質をゲルによらない分離精製方法を用いて分離精製し、分離精製物についてアミノ酸配列分析を行うことによって蛋白質を同定する蛋白質同定方法であって、分離精製工程が少なくとも二段の分離精製工程からなり、第一段目の分離精製工程をフリーフロー電気泳動法によって行なう、蛋白質同定方法。
【請求項２】
第二の段目の分離精製工程を、液体クロマトグラフ法もしくはキャピラリー電気泳動法によって行なう、請求項１に記載した蛋白質同定方法。
【請求項３】
前記アミノ酸配列の分析を、質量分析装置もしくはペプチドシークエンサーを用いてを行なう、請求項１または２に記載した蛋白質同定方法。
【請求項４】
前記第一段目の分離精製工程の前工程において、脱塩工程を行う、請求項１乃至３のいずれかに記載の蛋白質同定方法。
【請求項５】
前記第一段目の分離精製工程と前記第二段目の分離精製工程の間で脱気工程を行なう、請求項１乃至４のいずれかに記載の蛋白質同定方法。
【請求項６】
前記第一段目の分離精製工程と前記第二段目の分離精製工程の間で濃縮工程を行なう、請求項１乃至５のいずれかに記載の蛋白質同定方法。
【請求項７】
前記第一段目の分離精製工程のフリーフロー電気泳動法を、１００μｍ以下の厚みの電気泳動室にて行なう、請求項１乃至６のいずれかに記載の蛋白質同定方法。
【請求項８】
多種類の蛋白質を分離精製するためのゲルによらない分離精製手段、該分離精製手段からの分離精製物についてアミノ酸配列分析を行うアミノ酸分析手段とを含む、蛋白質同定装置であって、前記分離精製手段が少なくとも二段の分離精製手段からなり、第一段目の分離精製手段がフリーフロー電気泳動手段である、蛋白質同定装置。
【請求項９】
第二の段目の分離精製手段が、液体クロマトグラフィ手段もしくはキャピラリー電気泳動手段である、請求項８に記載した蛋白質同定装置。
【請求項１０】
前記アミノ酸配列分析手段が、質量分析装置もしくはペプチドシークエンサーである、請求項８または９に記載した蛋白質同定装置。
【請求項１１】
前記第一段目の分離精製手段の上流に、脱塩手段を有する、請求項８乃至１０のいずれかに記載の蛋白質同定装置。
【請求項１２】
前記第一段目の分離精製手段と前記第二段目の分離精製手段との間に脱気手段を設けた、請求項８乃至１１のいずれかに記載の蛋白質同定装置。
【請求項１３】
前記第一段目の分離精製手段と前記第二段目の分離精製手段との間に濃縮手段を設けた、請求項８乃至１２のいずれかに記載の蛋白質同定装置。
【請求項１４】
前記第一の分離精製手段であるフリーフロー電気泳動手段が、１００μｍ以下の厚みの電気泳動室を有する、請求項８乃至１３のいずれかに記載の蛋白質同定装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、多種類の蛋白質を分離精製してアミノ酸配列分析を行う蛋白質同定方法並びに蛋白質同定装置に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
蛋白質の同定には、通常、ペプチドマスフィンガープリンティング法（ＰＭＦ法）が用いられる。ＰＭＦ法とは、二次元電気泳動（２−ＤＥ）で分離した蛋白質をゲル中でプロテアーゼ分解し、分解物を質量分析装置で分析し、その結果得られた質量スペクトル（ペプチドマスフィンガープリント）をＤＮＡの塩基配列に対応するアミノ酸配列から計算される質量スペクトルと比較することにより、タンパク質やそれをコードする遺伝子を同定する方法である。２−ＤＥは蛋白質の分離精製を行う手法であり、第一段目の分離手段（一次元目の電気泳動）として等電点ゲル電気泳動で蛋白質を等電点のグループ毎に分離し、第二段目の分離手段（二次元目の電気泳動）としてＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）で分子量分離する。２−ＤＥは非常に分離能が高いものの、一次元目の電気泳動に約１７時間、二次元目の電気泳動に数時間、合計約２０時間もの時間を要する問題がある。
【０００３】
上記問題の解決法としては、例えば、一次元目の電気泳動としてフリーフロー電気泳動を用いた報告がなされている（例えば、［非特許文献１］を参照）。フリーフロー電気泳動を用いることで、一次元目の電気泳動に要する時間を１．５時間に短縮した。ここに、フリ−フロー電気泳動とは、２枚の板に挟まれて構成された液体流路に一定流速で支持液を流して流出口への液の流れを作り、該流路への液体注入口近傍に設けた試料注入口から試料を注入し、流路の両端に設けた電極に電圧を印加することによって試料に含まれる物質が電気泳動の原理によって正負いずれかの電極側に泳動分離しながら流出口に流出する原理を利用した電気泳動法である。支持液として両性電解質のキャリアアンフォライトを用いれば等電点電気泳動も可能である。ゲル電気泳動とは異なり、ゲルを用いない無担体電気泳動であるため、高速で分離と分取が実現できる。
【０００４】
【非特許文献１】Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ　２００１、１、８０７−８１８
【０００５】
しかしながら、上記先行例は二次元目の電気泳動にＳＤＳ−ＰＡＧＥを利用しているため、質量分析装置で分析する際にゲルからのスポットの切り出しが必要となる。ゲルからのスポットの切り出しは人間の手作業か、もしくはロボットアームによる作業となり、オンライン作業でないため、ハイスループットな分析システムを構築できないという問題点がある。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
したがって本発明は、上記問題を解決すべくなされたもので、スポットの切り出しの必要性が無く蛋白質同定に要する時間を短縮できる、高速で連続的にオンライン作業を可能とする、ハイスル−プットな蛋白質同定方法及び蛋白質同定装置を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決手段】
本発明の第１の視点は、多種類の蛋白質をゲルによらない分離精製方法を用いて分離精製し、分離精製物についてアミノ酸配列分析を行うことによって蛋白質を同定する蛋白質同定方法であって、分離精製工程が少なくとも二段の分離精製工程からなり、第一段目の分離精製工程をフリーフロー電気泳動法によって行なう、蛋白質同定方法に関する。
【０００８】
本発明の蛋白質同定方法によれば、多種類の蛋白質をゲルによらない分離精製方法を用いて分離精製するので、分離・分取によって連続的にサンプルを得ることが可能となり、従来技術のように質量分析の場合のスポット切り出し作業の必要が無く、蛋白質同定に要する時間が短縮できる。また、第一段目の分離精製工程を無担体電気泳動式のフリーフロー電気泳動法によって行なうので、より高速な分離・分取が可能となる。
【０００９】
以下に、本発明の蛋白質同定方法の好ましい実施態様を挙げる。（１）−（６）を任意に組合わせた態様も本発明の蛋白質同定方法の好ましい実施態様である。
（１）　第二の段目の分離精製工程を、液体クロマトグラフ法もしくはキャピラリー電気泳動法によって行なう。本構成により、第二の分離精製工程から得た分取液を直接液体クロマトグラフ工程もしくはキャピラリー電気泳動工程に繋げることが可能となり、ハイスループットな蛋白質同定が実現できる。
【００１０】
（２）　前記アミノ酸配列の分析を、質量分析装置もしくはペプチドシークエンサーを用いてを行なう。本構成により、第二の分離精製工程から得た分取液を直接アミノ酸配列分析工程に繋げることが可能となり、ハイスループットな蛋白質同定が実現できる。
【００１１】
（３）　第一段目の分離精製工程の前工程において、脱塩工程を行う。被分離精製試料中に多くの塩が含まれると、第一段目の分離精製工程のフリーフロー電気泳動工程は分離能力に影響がでる。本構成により、フリーフロー電気泳動工程での分離分取を安定することができ、安定性の高いハイスループットな蛋白質同定が実現できる。
【００１２】
（４）　第一段目の分離精製工程と第二段目の分離精製工程の間で脱気工程を行なう。第二の分離精製工程は気泡が含有されると正確な分離の妨げになる。第二の分離精製工程に繋げるにあたり、分取液を脱気することによりその精度を上げることができる。本構成により、安定性の高いハイスループットな蛋白質同定装置が実現できる。
【００１３】
（５）　第一段目の分離精製工程と第二段目の分離精製工程の間で濃縮工程を行なう。第一段目の分離精製工程のフリーフロー電気泳動工程において、分離分取後のサンプルは希釈された状態となる。第二の分離精製工程に繋げるにあたり、分取液を濃縮することにより第２分離精製工程の感度を上げることができる。本構成により、フリーフロー電気泳動工程で希釈されたサンプルを濃縮することができ、感度の高いハイスループットな蛋白質同定が実現できる。
【００１４】
（６）　第一の分離精製工程のフリーフロー電気泳動法を、１００μｍ以下の厚みの電気泳動室にて行なう。第一の分離精製工程であるフリーフロー電気泳動は大型の分離室を用いた装置が多く、微量サンプルの取り扱いが難しい。本発明の蛋白質同定方法において、第二の分離精製工程は微量サンプルを扱うことが可能な工程であるため、第一の分離精製工程においても微量サンプルが扱えると全工程を微量化することが可能となり、微量サンプルによるハイスループットな蛋白質同定が実現できる。本実施態様は、この要請に合致するものである。
【００１５】
本発明の第二の視点は、多種類の蛋白質を分離精製するためのゲルによらない分離精製手段、該分離精製手段からの分離精製物についてアミノ酸配列分析を行うアミノ酸分析手段とを含む、蛋白質同定装置であって、前記分離精製手段が少なくとも二段の分離精製手段からなり、第一段目の分離精製手段がフリーフロー電気泳動手段である、蛋白質同定装置に関する。本蛋白質同定装置については、上述の蛋白質同定装置で記載したと同様な作用効果が得られるので、冗長な繰り返しを避けるためその作用効果の記載は省略する。以下の本発明の蛋白質同定装置の好ましい実施態様についても同様。
【００１６】
本発明の蛋白質同定装置の好ましい実施態様を以下に挙げる。（１）−（６）を任意に組合わせた態様も本発明の蛋白質同定装置の好ましい実施態様である。
【００１７】
（１）　第二の段目の分離精製手段が、液体クロマトグラフィ手段もしくはキャピラリー電気泳動手段である。
（２）前記アミノ酸配列分析手段が、質量分析装置もしくはペプチドシークエンサーである。
【００１８】
（３）　第一段目の分離精製手段の上流に、脱塩手段を有する。
（４）　第一段目の分離精製手段と第二段目の分離精製手段との間に脱気手段を設ける。
【００１９】
（５）　第一段目の分離精製手段と第二段目の分離精製手段との間に濃縮手段を設ける。
（６）　第一の分離精製手段であるフリーフロー電気泳動手段が、１００μｍ以下の厚みの電気泳動室を有する。
【００２０】
【発明の実施の態様】
以下に、本発明を詳細に説明する。
（１）被分離精製多種類蛋白質
本発明で分離精製の対象とする多種類蛋白質は、細胞あるいは細胞内小胞体由来の蛋白質であり、従来行なわれている前処理を行なったものである。即ち、細胞等を粉砕後、遠心分離し、溶剤に溶解・懸濁させたものを被分離精製試料として用いる。該試料はそのまま用いてもよく、あるいはペプチド断片化処理した試料を用いることもできる。
【００２１】
（２）ゲルによらない分離精製等
「ゲルによらない分離精製」とは、生化学分野で主に用いられているゲル担体を用た電気泳動分離でない分離手段をいい、フリーフロー電気泳動法、液体クロマトグラフ法、キャピラリー電気泳動法などがある。フリーフロー電気泳動法は無担体電気泳動法として研究がなされている技術である。液体クロマトグラフ法もしくはキャピラリー電気泳動法は、分離分析分野において既に確立された技術であり、近年、質量分析装置と一体化された装置も開発されている。
【００２２】
フリーフロー電気泳動
フリーフロー電気泳動装置の要部を図１に示す。図中、１はフリーフロー電気泳動素子を示し、１ａはガラス基板、２は２枚のガラス基板１ａ，１ａの間に形成された泳動分離室、３は泳動分離室上流端部に設けた複数の支持液注入口、４は支持液注入口の下流中央に設けたサンプル注入口である。泳動分離室の両側には一対の電極５が設けられ、下流端部には分離液排出口６が設けられている。
【００２３】
フリーフロー電気泳動は、粗分離（グルーピング：グループ分け）をするために行なうが、グルーピングの目的により、以下の分類を行なうことができる。
▲１▼フリーフローゾーン電気泳動
分子量と電荷に基づいて、被分離精製蛋白質をグルーピングするもので、分子の実効移動度によるグルーピングを行うことができる。分離能は高くはないが、単一バッファーにて実施できる利点がある。
▲２▼フリーフロー等電点電気泳動
物質の等電点に基づいて、被分離精製蛋白質をグルーピングするもので、分子の等電点によるグルーピングを行うことができる。等電点に基づいて収束分離するため、分離能は高い。しかし、バッファーに両性電解質を添加する必要があり、分取液に両性電解質が混合する、ランニングコストが高い等のデメリットがある。
▲３▼フリーフロー等速電気泳動
フリーフローゾーン電気泳動と同様に、分子の移動度に基づいて被分離精製蛋白質をグルーピングするものである。本手法では、泳動方向に対して、試料よりも先行して試料よりも移動度の速い溶質を含んだバッファーを、試料の後ろに試料よりも移動度の遅い溶質を含んだバッファーを泳動させることで、試料は先行イオンと終末イオンの間に挟まれて分離しながら収束する。このためフリーフローゾーン電気泳動よりも分離能は高いが、複数のバッファーを用いる、条件出しが困難などのデメリットがある。
上記方法の中から適当な手法を選択して実施する。分離能が高い分離が欲しい場合は▲２▼または▲３▼を用いる。条件設定がしやすい点で▲２▼が優れているが、バッファー中に両性電解質が混在した状態で回収されるため、後の処理が複雑となる場合がある。▲１▼は分離能は低くとも簡便な条件設定での分離が可能であるという利点がある。
なお、液体クロマトグラフ法もしくはキャピラリー電気泳動法は、ともに当該技術では周知の技術であるので、説明は省略する。
【００２４】
本発明の蛋白質同定方法では、分離精製工程が少なくとも二段の分離精製工程からなるので、一段目の上流側のフリーフロー電気泳動と二段目のゲルによらない下流側分離精製工程との二段の分離工程としてもよいし、さらに追加のゲルによらない分離工程を一段目のフリーフロー電気泳動工程の上流で、あるいは第一段目と第２段目の分離工程の間で、あるいは第２段目の分離精製工程の下流で行なうこともできる。
【００２５】
（３）アミノ酸配列分析
アミノ酸配列分析は、分離精製工程終了後、分離精製物に対してペプチド断片化処理を行なった後に行なうことができ、また被分離精製試料に対してペプチド断片化処理をおこない分離精製処理の後アミン酸配列分析を行なってもよい。また、アミノ酸配列分析を質量分析装置で行なう際には、ペプチド断片化処理自体行なわなくともよい場合もある。ペプチド断片化処理は、例えば、適当なプロテアーゼを用いて行なうが、ペプチド断片化処理自体は周知の技術であり説明は省略する。
【００２６】
アミノ酸配列分析は、質量分析による方法、ペプチドシークエンサーによる方法、アミノ酸組成分析による方法によって決定することができる。これらの中で、本発明の蛋白質分析方法及び装置では、微量の蛋白質での分析が可能で、且つ直接アミノ酸配列分析工程に繋げることができるので、質量分析による方法、及びペプチドシークエンサーによる方法を好適に用いることができる。
【００２７】
（４）脱塩
脱塩工程は、ゲル濾過法、イオン交換膜を介したバッファー置換法、電気透析法等によって行うことができる。この中で、本発明の蛋白質分析方法及び装置では、連続的脱塩を可能な電気透析法が好適に用いることができる。
（５）脱気
脱気工程は、液の入った容器を減圧して脱気する方法、液体クロマトグラフ法で用いられる脱気装置による方法等によって行うことができる。この中で、本発明の蛋白質分析方法及び装置では、連続的脱気が可能な液体クロマトグラフ法で用いられる脱気装置が好適に用いることができる。
（６）濃縮
濃縮工程は、加熱による方法、イオン交換膜を介してバッファー量を減らす方法、濃縮カラムによる方法等によって行うことができる。この中で、本発明の蛋白質分析方法及び装置では、濃縮カラムによる方法が好適に用いることができる。
（７）蛋白質、それをコードする遺伝子の同定
アミノ酸配列の分析結果から得られたアミノ酸配列情報をＤＮＡの塩基配列に対応するアミノ酸配列から計算されるアミノ酸配列情報と比較しタンパク質やそれをコードする遺伝子を同定計算する。このような同定計算方法は、既知であるので説明は省く。以下に、質量分析法の場合、ペプチドシークエンス法の場合について述べる。
▲１▼　質量分析の場合
質量分析装置の分析結果から得られた質量スペクトルをＤＮＡの塩基配列に対応するアミノ酸配列から計算される質量スペクトルと比較しタンパク質やそれをコードする遺伝子を同定計算する。
▲２▼　ペプチドシークエンス法の場合
ペプチドシークエンサーの分析結果から得られたアミノ酸配列分析データをＤＮＡの塩基配列に対応するアミノ酸配列から計算されるアミノ酸配列分析データと比較しタンパク質やそれをコードする遺伝子を同定計算する。
【００２８】
以下に本発明の蛋白質同定方法の実施態様を具体的に説明する。これらの実施態様は単に本発明の例示的実施態様であって、本発明はこれらのものに限定されるものではない。本発明は、いかに述べる実施態様の他、種々の実施態様を採用できることは言うまでもない。また、以下の実施態様中、「・・・工程」を「・・・手段」とすることにより、本発明の蛋白質同定装置となることに留意。
（１）第１の実施態様
図１に、第１の実施態様をブロック図を用いて模式的に説明する。即ち、本実施態様は、
第一工程：フリーフロー電気泳動法による分離精製工程、
第二工程：液体クロマトグラフ法による分離精製工程、
第三工程：質量分析装置によるアミノ酸配列分析工程、
第四工程：量分析装置の分析結果から得られた質量スペクトルをＤＮＡの塩基配列に対応するアミノ酸配列から計算される質量スペクトルと比較しタンパク質やそれをコードする遺伝子を同定する計算工程からなる、蛋白質同定方法及び装置。
【００２９】
（２）第２の実施態様
図１に、第１の実施態様をブロック図を用いて模式的に説明する。即ち、本実施態様は、
第一工程：フリーフロー電気泳動法による分離精製工程、
第二工程：キャピラリー電気泳動法による分離精製工程、
第三工程：質量分析装置によるアミノ酸配列分析工程、
第四工程：量分析装置の分析結果から得られた質量スペクトルをＤＮＡの塩基配列に対応するアミノ酸配列から計算される質量スペクトルと比較しタンパク質やそれをコードする遺伝子を同定する計算工程からなる、蛋白質同定方法及び装置。
【００３０】
（３）第３の実施態様
第一工程：フリーフロー電気泳動法による分離精製工程、
第二工程：液体クロマトグラフ法による分離精製工程、
第三工程：ペプチドシークエンサーによるアミノ酸配列分析工程、
第四工程：ペプチドシークエンサーの分析結果から得られたアミノ酸配列分析データをＤＮＡの塩基配列に対応するアミノ酸配列から計算されるアミノ酸配列分析データと比較しタンパク質やそれをコードする遺伝子を同定する計算工程とからなる、蛋白質同定方法及び装置。
【００３１】
（４）第４の実施態様
第一工程：脱塩工程、
第二工程：フリーフロー電気泳動法による分離精製工程、
第三工程：液体クロマトグラフ法による分離精製工程、
第四工程：質量分析装置によるアミノ酸配列分析工程、
第五工程：量分析装置の分析結果から得られた質量スペクトルをＤＮＡの塩基配列に対応するアミノ酸配列から計算される質量スペクトルと比較しタンパク質やそれをコードする遺伝子を同定する計算工程とからなる、蛋白質同定方法及び装置。
【００３２】
（５）　第５の実施態様
第一工程：脱塩工程、
第二工程：フリーフロー電気泳動法による分離精製工程、
第三工程：脱気工程、
第四工程：液体クロマトグラフ法による分離精製工程、
第五工程：質量分析装置によるアミノ酸配列分析工程、
第六工程：量分析装置の分析結果から得られた質量スペクトルをＤＮＡの塩基配列に対応するアミノ酸配列から計算される質量スペクトルと比較しタンパク質やそれをコードする遺伝子を同定する計算工程とからなる、蛋白質同定方法及び装置。
【００３３】
（６）第６の実施態様
第一工程：脱塩工程、
第二工程：フリーフロー電気泳動法による分離精製工程、
第三工程：濃縮工程、
第四工程：脱気工程、
第五工程：液体クロマトグラフ法による分離精製工程、
第六工程：質量分析装置によるアミノ酸配列分析工程、
第七工程に量分析装置の分析結果から得られた質量スペクトルをＤＮＡの塩基配列に対応するアミノ酸配列から計算される質量スペクトルと比較しタンパク質やそれをコードする遺伝子を同定する計算工程とからなる、蛋白質同定方法及び装置。
【００３４】
（７）第７の実施態様
第一工程：１００μｍ以下の厚みの電気泳動槽にて行われるフリーフロー電気泳動法による分離精製工程、
第二工程：液体クロマトグラフ法による分離精製工程、
第三工程：質量分析装置によるアミノ酸配列分析工程、
第四工程に量分析装置の分析結果から得られた質量スペクトルをＤＮＡの塩基配列に対応するアミノ酸配列から計算される質量スペクトルと比較しタンパク質やそれをコードする遺伝子を同定する計算工程とからなる、蛋白質同定方法及び装置。
【００３５】
【発明の効果】
本願請求項１及び請求項８に係る発明では、多種類の蛋白質をゲルによらない分離精製方法，手段を用いて分離精製するので、分離・分取によって連続的にサンプルを得ることが可能となり、従来技術のように質量分析の場合のスポット切り出し作業の必要が無く、蛋白質同定に要する時間が短縮できる。また、第一段目の分離精製工程を無担体電気泳動式のフリーフロー電気泳動法によって行なうので、より高速な分離・分取が可能となる。
【００３６】
本願請求項２、９に係る発明では、第二の段目の分離精製工程を、液体クロマトグラフ法、手段もしくはキャピラリー電気泳動法、手段によって行なうので、第二の分離精製工程、手段から得た分取液を直接液体クロマトグラフ工程もしくはキャピラリー電気泳動工程、手段に繋げることが可能となり、ハイスループットな蛋白質同定が実現できる。
【００３７】
本願請求項３，１０に係る発明では、前記アミノ酸配列の分析を、質量分析装置もしくはペプチドシークエンサーを用いてを行なうので、第二の分離精製工程、手段から得た分取液を直接アミノ酸配列分析工程、手段に繋げることが可能となり、ハイスループットな蛋白質同定が実現できる。
【００３８】
本願請求項４，１１に係る発明では、第一段目の分離精製工程、手段の前工程、手段において、脱塩を行う。被分離精製試料中に多くの塩が含まれると、第一段目の分離精製工程、手段のフリーフロー電気泳動工程、手段は分離能力に影響がでる。本構成により、フリーフロー電気泳動工程での分離分取を安定することができ、安定性の高いハイスループットな蛋白質同定が実現できる。
【００３９】
本願請求項５，１２に係る発明では、第一段目の分離精製工程、手段と第二段目の分離精製工程、手段の間で脱気工程、手段を設けたので、第二の分離精製工程、手段は気泡が含有されると正確な分離の妨げになる。第二の分離精製工程、手段に繋げるにあたり、分取液を脱気することによりその精度を上げることができる。本構成により、安定性の高いハイスループットな蛋白質同定装置が実現できる。
【００４０】
本願請求項６，１３に係る発明では、第一段目の分離精製工程、手段と第二段目の分離精製工程、手段の間で濃縮を行なう。第一段目の分離精製工程、手段のフリーフロー電気泳動工程、手段において、分離分取後のサンプルは希釈された状態となる。第二の分離精製工程、手段に繋げるにあたり、分取液を濃縮することにより第２分離精製工程、手段の感度を上げることができる。本構成により、フリーフロー電気泳動工程、手段で希釈されたサンプルを濃縮することができ、感度の高いハイスループットな蛋白質同定が実現できる。
【００４１】
本願請求項７，１４に係る発明では、第一の分離精製工程、手段のフリーフロー電気泳動法、手段を、１００μｍ以下の厚みの電気泳動室にて行なう。第一の分離精製工程、手段でのフリーフロー電気泳動は大型の分離室を用いた装置が多く、微量サンプルの取り扱いが難しい。本発明の蛋白質同定方法、装置において、第二の分離精製工程、手段は微量サンプルを扱うことが可能な工程、手段であるため、第一の分離精製工程、手段においても微量サンプルが扱えると全工程を微量化することが可能となり、微量サンプルによるハイスループットな蛋白質同定が実現できる。本実施態様は、この要請に合致するものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の蛋白質同定方法及び装置において用いることができるフリーフロー電気泳動装置の要部を示す平面図である。
【図２】本発明の第１の実施態様をブロック図を用いて模式的に示す。
【図３】本発明の第２の実施態様をブロック図を用いて模式的に示す。
【図４】本発明の第３の実施態様をブロック図を用いて模式的に示す。
【図５】本発明の第４の実施態様をブロック図を用いて模式的に示す。
【図６】本発明の第５の実施態様をブロック図を用いて模式的に示す。
【図７】本発明の第６の実施態様をブロック図を用いて模式的に示す。
【図８】本発明の第７の実施態様をブロック図を用いて模式的に示す。
【符号の説明】
１・・・フリーフロー電気泳動素子、１ａ・・・ガラス基板、２・・・泳動分離室、３・・・支持液注入口、４・・・サンプル注入口、・・・電極、６・・・分離液排出口６
【図１】
2004113079.tif 000002
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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