(57)【要約】      （修正有）【課題】骨代謝障害の処置のための薬剤を提供する。【解決手段】式１2004217667.tif 000022（式中、Ｒ1は６〜２４個の炭素原子を有する、アルキル、アルケニル又はアルキニル、ｎは０〜１２、Ｘは酸素又はＮＨである）の化合物、及び、生理学的に安全な、塩、エステル、光学活性形態、ラセマートと生体内で代謝され一般式（Ｉ）の化合物を生じることができるそれらの誘導体、その製造方法、並びに該化合物を含む薬剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
2004217667.tif 000020
（式中、
Ｒ1は、６〜２４個の炭素原子を有する、アルキル、アルケニル又はアルキニルであり、
ｎは、０〜１２であり、
Ｘは、ＮＨである）のリゾホスファチジル酸誘導体、生理学的に許容し得る、塩、エステル、光学活性形態又はラセマートを有効成分として含有する、骨代謝障害の処置のための薬剤。
【請求項２】
式（Ｉ）
【化２】
2004217667.tif 000021
（式中、
Ｒ1は、６〜２４個の炭素原子を有する、アルケニル又はアルキニルであり、
ｎは、０〜１２であり、
Ｘは、ＮＨである）の化合物であるが、
化合物、すなわち、（（全）cis−５，８，１１，１４）−エイコサテトラエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル、cis−９，cis−１２−オクタデカジエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル、（（全）cis−９，１２，１５）−オクタデカトリエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル、cis−９−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル又はエルカ酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステルを除く化合物、並びに生理学的に許容し得る、塩、エステル、光学活性形態及びラセマート。
【請求項３】
一般的な、担体及び補助剤に加えて請求項２記載の式（Ｉ）の化合物の少なくとも１種を含む薬剤。
【請求項４】
請求項２記載の式（Ｉ）の化合物を有効成分として含有する骨代謝障害の処置のための薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式１
【０００２】
【化３】
2004217667.tif 000002
【０００３】
の造骨細胞特異的分裂促進化合物、その調製方法及び該化合物を含む薬剤に関する。
【０００４】
健常個体において、骨内の生成作用及び分解作用は、事実上平衡状態にある、すなわち、造骨細胞と破骨細胞の活性は平衡状態に保れている。しかし、若しこの平衡状態が、破骨細胞で選択的に乱される場合、及び／又は造骨細胞の損失によって乱される場合には、骨質量の減少及び骨の構造と機能に負の変化をもたらすであろう。
【０００５】
今に至るまで、エストロゲン、カルシトニン及びビスホスホナートのような骨吸収阻害剤が、骨代謝障害の処置に主として用いられている。しかし、これらの物質の使用は制限されるうえ、すべての場合で所望の効果を示すわけではない。したがって骨形成への刺激効果を有する化合物、及びすでに減少した骨質量の増加に寄与する化合物が、骨代謝障害の処置において特に重要である。骨粗鬆症治療のための骨同化作用を有する物質が、欧州特許出願ＥＰ−Ａ−６２５，５２２及びＥＰ−Ａ−５２４，０２３に記載されている。
【０００６】
リゾホスファチジル酸（ＬＰＡ）は、種々の組織及び細胞型で細胞内脂質メッセンジャーとしての役割を果たすことが知られている（J. Biol. Chem. 270(22, 12949-52, 1995; Curr. Opin. Cell. Biol. 7(2), 203-10, 1995）。
【０００７】
本発明のリゾホスファチジル酸誘導体が骨形成の刺激効果を有し、したがって骨代謝障害の全般的処置に適していることが、驚いたことに今見出された。特に、それらは骨形成が障害を受けた場合に、極めて満足のいくように用いることができる、すなわち、それらは骨粗鬆症、例えば、骨形成不全症のような骨格系の骨減少症の処置、同じく骨再生と骨誘導の局所的な促進のため、例えば、整形外科適応症と歯科矯正適応症で、骨折治療で、骨接合、偽関節及び結合を生じる骨移植片のために特に適している。
【０００８】
更に、それらの骨代謝への作用によって、活性物質としての本発明のリゾホスファチジル酸誘導体を含む薬剤は、リウマチ、関節炎、変形性関節症及び変性関節症の、局所及び全身処置の主成分の構成要素となる。
【０００９】
本発明は、一般式（Ｉ）
【００１０】
【化４】
2004217667.tif 000003
【００１１】
（式中、
Ｒ1は、６〜２４個の炭素原子を有する、アルキル、アルケニル又はアルキニルであり、
ｎは、０〜１２であり、
Ｘは、酸素又はＮＨである）の化合物であるが、
化合物、すなわち、（（全）cis−５，８，１１，１４）−エイコサテトラエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル、cis−９，cis−１２−オクタデカジエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル、（（全）cis−９，１２，１５）−オクタデカトリエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル又はcis−９−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステルを除き、ただし、Ｘが酸素を表す場合には、−（ＣＨ2)n−ＣＨ3基のｎは、７、９、１１、１３又は１５の数を表さない化合物、並びに生理学的に許容し得る、塩、エステル、光学活性形態、ラセマート及び生体内（in vivo）で代謝され一般式（Ｉ）の化合物をもたらすことができるそれらの誘導体，また薬剤製造における該化合物の使用を指向する。
【００１２】
Ｘが酸素であり、かつｎが１３の−（ＣＨ2)n−ＣＨ3である上記化合物の合成方法は、周知である（例えば、Chem. Ber. 71, 1075 (1938), Hoppe-Seyler's Z. Phisiol. Chem. 347, 94-101 (1966)）。Ｘが酸素であり、かつｎが１５の−（ＣＨ2)n−ＣＨ3である該化合物の合成方法は、周知である（例えば、Chem. Phys. Lipids 1, 317 (1966/67)）。Ｘが酸素であり、かつｎが７の−（ＣＨ2)n−ＣＨ3である該化合物の合成方法は、周知である（例えば、Chem. Phys. Lipids 18, 316 (1977)）。
【００１３】
化合物（（全）cis−５，８，１１，１４）−エイコサテトラエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル、cis−９，cis−１２−オクタデカジエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル及び（（全）cis−９，１２，１５）−オクタデカトリエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステルが、単離したラット大腸の収縮に対する効果を有することが記載されている（J. Pharm. Pharmacol. 43, 774-78 (1991)）。Ｘが酸素であり、かつｎが９、１１、１３、１５の−（ＣＨ2)n−ＣＨ3である化合物、同じくcis−９−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル、cis−９，cis−１２−オクタデカジエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル及び（（全）cis−９，１２，１５）−オクタデカトリエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステルも、血圧への効果が記載されている（Arzneim. Forsch. 35, 587-92 (1985)）。
【００１４】
各アルキルは、直鎖又は分岐のＣ6−Ｃ18アルキル基、例えば、ヘキシル、イソヘキシル、２，２−ジメチルヘキシル、５−メチルヘキシル、ヘプチル、イソヘプチル、６−メチルヘプチル、オクチル、イソオクチル、ノニル、イソノニル、デシル、イソデシル、ウンデシル、イソウンデシル、ドデシル、イソドデシル、トリデシル、イソトリデシル、テトラデシル、イソテトラデシル、ペンタデシル、イソペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、イソヘプタデシル又はオクタデシル、特にヘプチル、デシル及びドデシルを示すと理解される。
【００１５】
各アルケニルは、６〜２０個の炭素原子及び１個以上の不飽和を有する、場合により置換された残基、例えば、Δ1−ヘキセニル、Δ1−オクテニル、Δ9−ノネニル、Δ1−デセニル、Δ10−デセニル、Δ1,4−デカジエニル、Δ1,4,7−デカトリエニル、Δ1,4,7,10−ヘキサデカテトラエニル、Δ1−ドデセニル、Δ5−ドデセニル、Δ1,4−ウンデカンジエニル、Δ14−テトラデセニル、特にΔ1−デセニル、Δ1,4−デカジエニル、Δ1,4,7−デカトリエニルである（ここで、２重結合はcis又はtransであることができ、また複数の不飽和を有する化合物ではあらゆる組み合わせが可能である）を示す。
【００１６】
各アルキニルは、６〜２０個の炭素原子及び１個以上の不飽和を有する、場合により置換された残基、例えば、Δ1−デシニル、Δ1−ノニニル、Δ1,3−テトラデカジイニル、Δ1,3−ヘキサデカジイニル、Δ1,3−オクタデカジイニル、特にΔ1−デシニルを示す。
【００１７】
ＸがＮＨを示す化合物が、特に好ましい。
【００１８】
式１の化合物の生理学的に使用し得る塩の例は、生理学的に許容し得る鉱酸の塩、例えば、塩酸、硫酸、亜硫酸若しくはリン酸の塩、又は有機酸の塩、例えば、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、酒石酸、コハク酸若しくはサリチル酸の塩である。遊離のカルボキシル基を有する一般式１の化合物は、生理学的に許容し得る塩基で塩を形成することもできる。これらの塩の例は、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩及びアルキルアンモニウム塩、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩又はテトラメチルアンモニウム塩である。
【００１９】
一般式（Ｉ）の化合物は、少なくとも１個の不斉炭素原子を含む、そしてそれゆえ、本願は、一般式（Ｉ）の光学活性化合物も指向する。
【００２０】
Ｘが酸素である一般式（Ｉ）の化合物の純粋なエナンチオマーは、購入するか、又は、例えば、光学活性な酸を用いる塩形成による伝統的なラセマート分割による方法のような周知の方法によって調製することができる、光学活性なアルコールを用いることによって得る。
【００２１】
ＸがＮＨである一般式（Ｉ）の化合物の純粋なエナンチオマーは、購入するか、又は、例えば、光学活性な酸を用いる塩形成による伝統的なラセマート分割による方法若しくは光学活性なアミノ酸の還元による方法のような周知の方法によって調製することができる、光学活性なアミノアルコールを用いることによって得る。
【００２２】
Ｘが酸素である一般式（Ｉ）の化合物を、一般式（II）
【００２３】
【化５】
2004217667.tif 000004
【００２４】
（式中、
Ｒ2は、ヒドロキシル基に常用する保護基を示す）
の化合物から保護基Ｒ2を除去することによる、それ自体が既知の方法にしたがって調製する。
【００２５】
一般式（II）の化合物は、好ましくは一般式（III）
【００２６】
【化６】
2004217667.tif 000005
【００２７】
（式中、
Ｒ3及びＲ4は、ヒドロキシル基に常用する保護基を示し、１，２−ジオールのための保護基、例えば、環状アセタール及び環状ケタールが好ましい）
のアルコールと、一般式（IV）
【００２８】
【化７】
2004217667.tif 000006
【００２９】
（式中、
Ｒ1及びｎは上記と同義であり、及びＹはヒドロキシ又は活性化基であることができ、またＹがヒドロキシを表す場合にはカルボキシル基の活性化をカルボジイミド法によって達成でき、またＹが活性化基を表す場合には、混合無水物、特に炭酸低級アルキルエステル、例えば、エチル若しくはイソブチルエステル又は活性エステル、特にｐ−ニトロフェニル、２，４，５−トリクロロフェニル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド若しくは１−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステルがこの目的のために可能である）
のカルボン酸誘導体を反応させることによって、一般式（Ｖ）
【００３０】
【化８】
2004217667.tif 000007
【００３１】
の化合物を得る。
【００３２】
一般式（III）の化合物は、好ましくは、グリセロールへ保護基を導入することによるそれ自体が既知の方法によって調製するか、又は購入することができる。
【００３３】
一般式（IV）の化合物は、一般式（VI）
【００３４】
【化９】
2004217667.tif 000008
【００３５】
（式中、
Ｒ1及びｎは、上記と同義である）
の化合物から出発する周知の方法にしたがって調製する。
【００３６】
一般式（VI）の化合物は、周知の鎖伸長又はカルボン酸合成方法にしたがって、調製するか又は購入することができる。
【００３７】
保護基Ｒ3及びＲ4を除去することによって、一般式（Ｖ）の化合物を、化合物（VII）
【００３８】
【化１０】
2004217667.tif 000009
【００３９】
に変換する。
【００４０】
一般式（VII）の化合物では、一般的なヒドロキシル保護基であるＲ2及びＲ6を導入することによって、好ましくは、第１のヒドロキシル官能基にトリチル基（Ｒ6）、及び第２のヒドロキシル基にベンゾアート保護基又はシリル保護基、例えば、tert−ブチルジフェニルシリル（Ｒ2）を導入することによって、オルトゴナル（orthogonal）形態で、２個のヒドロキシル基を保護し、一般式（VIII）
【００４１】
【化１１】
2004217667.tif 000010
【００４２】
の化合物を得る。
【００４３】
まず、一般式（VIII）の化合物をそれ自体が既知の方法によって選択的に脱保護し、次いでオキシ塩化リンと反応させることによって一般式（II）の化合物に変換する。
【００４４】
ＸがＮＨである一般式（Ｉ）の化合物を、一般式（IX）
【００４５】
【化１２】
2004217667.tif 000011
【００４６】
（式中、
Ｒ2は、ヒドロキシル基に常用する保護基を示す）
の化合物から保護基Ｒ2を除去することによるそれ自体が既知の方法によって調製する。
【００４７】
一般式（IX）の化合物は、好ましくは一般式（Ｘ）
【００４８】
【化１３】
2004217667.tif 000012
【００４９】
（式中、
Ｒ7及びＲ8は、独立して水素又はヒドロキシル基に常用する保護基を示すことができ、１，２−ジオールの保護基、例えば、環状アセタール及び環状ケタールが好ましい）
のアミンを、一般式（IV）
【００５０】
【化１４】
2004217667.tif 000013
【００５１】
（式中、
Ｒ1、ｎ及びＹは上記と同義である）
のカルボン酸誘導体と反応させることによって、一般式（XI）
【００５２】
【化１５】
2004217667.tif 000014
【００５３】
の化合物を得る、それ自体が既知の方法によって調製する。
【００５４】
Ｒ7及びＲ8が水素を示す場合には、一般式（VII）の化合物のさらなる反応でＸが酸素である化合物を用いることによって、一般式（XI）の化合物を上記方法と同様に得る。
【００５５】
Ｒ7及びＲ8がオルトゴナル保護基ではない場合には、保護基を常法にしたがって最初に除去し、後続の手順はＲ7及びＲ8が水素の場合と同様である。
【００５６】
もしＲ7及びＲ8がオルトゴナル保護基であれば、第１のヒドロキシル基を選択的に脱保護し、それからオキシ塩化リンと反応させ、Ｒ2がＲ7である一般式（IX）の化合物を得る。
【００５７】
一般式（Ｉ）の化合物の調製においてオキシ塩化リンを用いる代わりに、一般式（XII）
【００５８】
【化１６】
2004217667.tif 000015
【００５９】
（式中、
一般的な保護基、特に、メチル、エチル又はアリルを、Ｒ9及びＲ10に用いる）
の一般式の適切に保護されたクロロフォスファートを、一般式（XIII）
【００６０】
【化１７】
2004217667.tif 000016
【００６１】
（式中、
Ｒ2は、ヒドロキシル保護基、好ましくは、ベンゾアート保護基又はシリル保護基を示す）
の化合物と反応させることができる。一般式（XII）の化合物は、商業的に入手するか、又は文献（Houben-Weyl）で周知の方法にしたがって調製することができる。
【００６２】
一般式（Ｉ）の化合物は、周知の方法にしたがって保護基Ｒ9及びＲ10を除去することによって得る。
【００６３】
原則として、保護基すなわちＲ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8，Ｒ9及びＲ10のようなヒドロキシル基に適切な、あらゆるそれらの周知の保護基は、Th. Greene, P. Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis”, 2nd Edn., 1991, J. Wiley & Sons に記載されているように実行できる。導入及び除去は、そこに記載されている常法にしたがって実施する。
【００６４】
式（Ｉ）の化合物は、すべての一般的かつ無毒な薬学的に許容し得る、担体、補助剤及び添加剤中で、経口、経腸、非経口、局所、経鼻、経肺又は経直腸経路によって、液体若しくは固体形態、又はエーロゾルとして投与することができる。式（Ｉ）の化合物を、骨上／骨内で局所的に、場合により外科手術でも適用できる。用語“非経口の”は、皮下、静脈内及び筋肉内への、供給又は注入を含む。経口投与形態は、例えば、錠剤、カプセル、被覆錠剤、シロップ、液体、サスペンション、エマルション、エリキシル等であることができ、これらは、以下の、例えば、香味剤、甘味剤、着色剤及び防腐剤の群の添加剤の１種以上を含むことができる。経口投与形態は、錠剤、カプセル、被覆錠剤等を製造するのに適した無毒の薬学的に許容し得る担体、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム又はリン酸ナトリウム、スターチ、マニトール、メチルセルロース、タルク、高度に分散したケイ酸、高分子量脂肪酸（例えば、ステアリン酸）、ピーナッツ油、オリーブ油、パラフィン、Miglyol、ゼラチン、寒天、ステアリン酸マグネシウム、蜜蝋、セチルアルコール、レクチン、グリセロール、動物性脂肪と植物性脂肪、固体高分子量ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）と一緒に活性成分を含む。胃において所望しない副作用を予防するためか、又は消化管における遅延吸収の結果として延長された活性をもたらすために、錠剤、カプセル、被覆錠剤等に、適切な被覆、例えば、モノステアリン酸グリセリン又はジステアリン酸グリセリンを備えることができる。滅菌注射用水性又は油性の、溶液又はサスペンションを、好ましくは、一般的添加剤、例えば、安定剤及び溶解剤を含む注射媒体として用いる。該添加物は、例えば、水、等張生理食塩液溶液、１，３−ブタンジオール、脂肪酸（例えば、オレイン酸）モノ及びジグリセリド、又はMiglyolであることができる。直腸投与には、あらゆる適切な非刺激性添加剤を用いることができる、これらは常温では固体であり、また直腸温では液体である、例えば、ココアバター及びポリエチレングリコールである。エーロゾル投与には、薬学的に一般的な担体を用いる。外用には、薬学的に一般的な添加剤と共にクリーム、チンキ、ゲル、溶液又はサスペンション等を用いる。
【００６５】
用量は種々の要因、例えば、適用形態、種、年齢、及び／又は個体の状態によって決められる。毎日又は間隔を置いて投与すべき用量は、およそ１〜１０００mg／人、好ましくは、約１０〜２５０mg／人であり、また一回、又は数回に渡り分散して摂取させることができる。
【００６６】
式（Ｉ）の化合物を、骨上／骨内で局所的に、場合により外科手術で適用できる。骨上／骨内への、場合により外科手術での、直接的な適用は、局所的にか又は担体に結合させた、注入又は注射によって、溶液中か又はサスペンション中のいずれかで、好都合に実施できる。例えば、式（Ｉ）の担体結合化合物を、ゲル、ペースト、固体又は移植片への被覆として適用できる。
【００６７】
担体として、生物適合性、及び好ましくは生物分解性材料を用いる。好ましくは、材料それ自身が、損傷回復又は骨形成を付加的に誘導するものである。
【００６８】
局所的な適用のためには、式（Ｉ）の化合物をポリマーゲル又はフィルムに包埋し、これらの固定化によって、骨の処置すべき領域にこれらの調製品を直接的に適用することが好ましい。これらのポリマーベースゲル又はフィルムは、例えば、グリセロール、メチルセルロース、ヒアルロン酸、ポリエチレンオキサイド及び／又はポリオキサマーからなる。コラーゲン、ゼラチン及びアルギニンもまた適切であり、これは、例えば、ＷＯ９３／０００５０及びＷＯ９３／２０８５９に記載されている。他のポリマーは、ポリ乳酸（ＰＬＡ）及び乳酸とグリコール酸の共重合体（ＰＬＰＧ）（Hollinger et al., J. Biomed. Mater. Res. 17, 71-82 (1983)）、また“脱塩骨マトリックス”（ＤＢＭ）骨誘導体（Guterman et al., Kollagen Rel. Res. 8, 419-4319 (1988)）である。例えば、ＴＧＦβ吸収のため用いるようなポリマーもまた適切であり、これはＥＰ−Ａ０，６１６，８１４及びＥＰ−Ａ０，５６７，３９１、同じくＷＯ９１／１８５５８によれば合成骨マトリックスが記載されている。
【００６９】
骨代用品又は他の治療的に活性な物質を移植するときに常用する材料も、式（Ｉ）の化合物の担体として適切である。上記担体も、例えば、硫酸カルシウム、リン酸３カルシウム、ヒドロキシアパタイトとその生分解性誘導体及びポリ無水物に基づく。これらの生分解性担体とは別に、生物分解性ではないが生物適合性である担体もまた適切である。例えば、これらの担体は、焼結ハイドロキシアパタイト、バイオガラス、アルミナート又は他のセラミック材料（例えば、カルシウムアルミネートリン酸塩）である。これらの材料は、好ましくは、該生物分解性材料、例えば、特に、ポリ乳酸、ヒドロキシアパタイト、コラーゲン又はリン酸３カルシウムと組み合わせて用いる。他の非分解性ポリマーは、例えば、米国特許４，１６４，５６０に記載されている。
【００７０】
特に好ましいのは、活性部位で式（Ｉ）の化合物を持続的に放出する担体の使用である。この目的に特に適したものは、例えば、Innovative Research of America, Toledo, Ohio, USAの“徐放ペレット（slow release pellets）”である。特に好ましいのは、一日当たり１〜１０mg/kgの日用量で、数日間、好ましくは、１００日まで式（Ｉ）の化合物を放出するペレットの使用である。
【００７１】
用量は種々の要因、例えば、適用形態、種、年齢、及び／又は個体の状態によって決めることができる。毎日投与すべき活性物質の用量は、０．０１〜約１００mg/kg体重、好ましくは０．１〜１０mg/kg体重であり、一回に又は数回に分散して適用できる。
【００７２】
実施例に記載した化合物及び請求項に記載した置換基の意味すること全てを組み合わせることによって得られる化合物以外に、下記のリゾホスファチジル酸誘導体、同じくそれらのナトリウム及びカリウム塩が本発明の趣旨に好ましい：
【００７３】
好ましい化合物（ＰＣ）：
（１）オクタン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（２）７−メチルオクタン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（３）７，７−ジメチルオクタン酸２−ヒトロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（４）ノナン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（５）４−メチルノナン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（６）８−メチルノナン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（７）ウンデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（８）１０−メチルウンデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（９）１１−メチルウンデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（１０）トリデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（１１）１２−メチルトリデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（１２）１３−メチルテトラデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（１３）ペンタデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（１４）１４−メチルペンタデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（１５）１５−メチルヘキサデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（１６）ヘプタデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（１７）１６−メチルヘプタデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（１８）１７−メチルオクタデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（１９）ノナデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（２０）１８−メチルノナデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（２１）エイコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（２２）１９−メチルエイコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（２３）１９−メチルエイコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシ−プロピルエステル
（２４）ヘンエイコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（２５）ドコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（２６）トリコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（２７）テトラコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（２８）ヘプタコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（２９）オクタコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（３０）トリアコンタン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（３１）６−ヘプテン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（３２）trans−９−ヘキサデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（３３）（（全）cis−１１，１４，１７）−エイコサトリエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（３４）cis−１０−ヘプタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（３５）cis−１０−ノナデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（３６）cis−３，cis−６−ノナジエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（３７）cis−１０−ペンタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（３８）cis−１２−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（３９）cis−１３−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（４０）cis−７−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（４１）cis−８−エイコセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（４２）trans−９−テトラデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（４３）trans−９−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（４４）（（全）trans−９，１１，１３，１５）−オクタデカテトラエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（４５）（（全）cis−９，１１，１３，１５）−オクタデカテトラエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（４６）cis−１１−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（４７）（（全）cis−１３，１６，１９）−ドコサトリエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（４８）（（全）cis−１３，１６，１９）−ドコサトリエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（４９）（（全）cis−８，１１，１４）−エイコサトリエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（５０）trans−１１−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（５１）trans−１３−ドコセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（５２）trans−９，trans−１２−オクタデカジエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（５３）cis−９−テトラデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（５４）cis−９−ヘキサデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（５５）１０−ウンデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（５６）cis−１１、cis−１４−エイコサジエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（５７）cis−１１−エイコセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（５８）cis−１５−テトラコセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（５９）１１−ドデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（６０）９−デセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（６１）１６−ヘプタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（６２）（（全）cis−１１，１４，１７）−エイコサトリエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（６３）cis−１３−エイコセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（６４）（（全）cis−７，１０，１３，１６）ドコサテトラエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（６５）２２−トリコセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（６６）９−テトラデシン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（６７）１３−エイコシン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（６８）１０，１２−ノナコサジイン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（６９）１０，１２−オクタデカジイン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（７０）９−オクタデシン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（７１）１０−ウンデシン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（７２）１０，１２−トリコサジイン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（７３）１０，１２−ペンタコサジイン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（７４）１０，１２−ヘプタコサジイン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
（７５）オクタン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（７６）７−メチルオクタン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（７７）７，７−ジメチルオクタン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（７８）ノナン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（７９）４−メチルノナン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（８０）８−メチルノナン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（８１）デカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（８２）ウンデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（８３）１０−メチルウンデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（８４）ドデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（８５）１１−メチルドデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（８６）トリデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（８７）１２−メチルトリデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（８８）テトラデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（８９）１３−メチルテトラデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（９０）ペンタデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（９１）１４−メチルペンタデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（９２）ヘキサデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（９３）１５−メチルヘキサデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（９４）ヘプタデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（９５）１６−メチルヘプタデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（９６）オクタデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（９７）１７−メチルオクタデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（９８）ノナデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（９９）１８−メチルノナデカン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１００）エイコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１０１）１９−メチルエイコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１０２）１９−メチルエイコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１０３）ヘンエイコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１０４）ドコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１０５）トリコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１０６）テトラコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１０７）ヘプタコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１０８）オクタコサン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１０９）トリアコタン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１１０）６−ヘプテン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１１１）trans−９−ヘキサデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１１２）（（全）cis−１１，１４，１７）−エイコサトリエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１１３）（（全）cis−５，８，１１，１４）−エイコサテトラエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１１４）cis−１０−ヘプタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１１５）cis−１０−ノナデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１１６）cis−３，cis−６ノナジエン２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１１７）cis−１０−ペンタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１１８）cis−１２−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１１９）cis−１３−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１２０）cis−７−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１２１）cis−８−エイコセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１２２）trans−９−テトラデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１２３）cis−９，cis−１２オクタデカジエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１２４）trans−９−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１２５）cis−９−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１２６）（（全）trans−９，１１，１３，１５）−オクタデカテトラエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１２７）（（全）cis−９，１１，１３，１５）オクタデカテトラエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１２８）cis−１１−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１２９）（（全）cis−１３，１６，１９）−ドコサトリエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１３０）（（全）cis−１３，１６，１９）−ドコサトリエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１３１）（（全）cis−９，１２，１５）−オクタデカトリエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１３２）（（全）cis−８，１１，１４）−エイコサトリエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１３３）trans−１１−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１３４）trans−１３−ドコセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１３５）trans−９，trans−１２−オクタデカジエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１３６）cis−９−テトラデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１３７）cis−９−ヘキサデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１３８）１０−ウンデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１３９）cis−１１，cis−１４−エイコサジエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１４０）cis−１１−エイコセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１４１）cis−１５−テトラコセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１４２）１１−ドデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１４３）９−デセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１４４）１６−ヘプタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１４５）（（全）cis−１１，１４，１７）−エイコサトリエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１４６）cis−１３−エイコセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１４７）cis−１３，cis−１３−ドコサジエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１４８）（（全）cis−７，１０，１３，１６）−ドコサテトラエン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１４９）２２−トリコセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１５０）９−テトラデシン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１５１）１３−エイコシン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１５２）１０，１２−ノナコサジイン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１５３）１０，１２−オクタデカジイン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１５４）９−オクタデシン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１５５）１０−ウンデシン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１５６）１０，１２−トリコサジイン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１５７）１０，１２−ペンタコサジイン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
（１５８）１０，１２−ヘプタコサジイン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
【００７４】
本発明に記載の化合物の合成に用いることができるいくつかの変法を以下の実施例に示す、ただし、実施例は本発明の主題を制限するものとして解釈すべきでない。化合物の構造を1Ｈ、31Ｐ及び場合により13Ｃ−ＮＭＲスペクトロスコピーを用いて確定した。物質の純度を、Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｐ分析及び薄層クロマトグラフィーを用いて測定した。
【実施例】
【００７５】
実施例１
cis−９−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
cis−９−オクタデセン酸２，３−Ｏ−イソプロピリデンプロピルエステル（１）
ピリジン１００ml中の２，２−ジメチル−４−ヒドロキシメチルジオキソラン１５．４ｇ（１１６mmol）の溶液に、室温で８５％塩化オレイン酸４１．２ｇ（１１６mmol）を滴下して加えた。室温で１２時間後、ピリジンを除去し、残査にトルエン２×５０mlを加え、蒸発によって濃縮した。残査をジエチルエーテル２００mlに溶かし、１N ＨＣｌ  ５０ml及び飽和ＮａＣｌ溶液５０mlで２度抽出した。エーテル層をＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、そして濃縮した。残査をヘプタン／エチルアセタート（９：１）を用いるシリカゲルフラッシュカラムで精製した。収率：２６．３ｇ（６１％）。
【００７６】
cis−９−オクタデセン酸２，３−ジヒドロキシプロピルエステル（２）
上記（１）２４ｇ（６０．５mmol）をＴＨＦ／水（６：１）の混合物中に溶かし、そして０℃まで冷却した。次に、トリフルオロ酢酸（２４ml）を滴下して加え、そして混合物を０℃で更に３時間攪拌し、室温まで暖めた。１２時間後、０℃まで冷却し、そして濃縮アンモニアで中和した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、そして乾燥した。残査をヘプタン／エチルアセタート（１：１）を用いるシリカゲルカラムで精製した。収率：無色油状物について６８％。
【００７７】
cis−９−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−トリフェニルメトキシプロピルエステル（３）
ジクロロメタン／ピリジン（１：１）８０ml中の上記（２）の溶液を塩化トリフェニルメチル（２７mmol）に滴下して加え、室温で４８時間攪拌した。溶媒を除去し、残査にトルエン５０mlを２回加え、そして濃縮した。残査を水１００mlで希釈し、ジクロロメタン５０mlで３回抽出した。合わせた有機層を、冷却５％ＨＣｌ  ５０ml、次いで飽和ＮａＣｌ  ５０ml溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、そして濃縮した。残査をヘプタン／エチルアセタート（５：１）を用いるシリカゲル上のクロマトグラフィーによって精製した。収率：無色油状物について８８％。
【００７８】
cis−９−オクタデセン酸２−tert−ブチルジフェニルシリルオキシ−３−トリフェニルメトキシプロピルエステル（４）
ＤＭＦ３０ml中の上記（３）（５mmol）の溶液に０℃でイミダゾール（２０mmol）を加えた。次いで、この混合物にtert−ブチルジフェニルシリルクロリドを滴下して加えた。混合物を室温までゆっくりと暖めた。室温で６時間後、これを氷水に注ぎ、次いでエチルアセタートで抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、そして濃縮した。残査をイソヘキサン／エチルアセタート（９：１）を用いるシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。収率：無色油状物について９５％。
【００７９】
cis−９−オクタデセン酸２tert−ブチルジフェニルシリルオキシ−３−ヒドロキシプロピルエステル（５）
ジクロロメタン５０ml中の上記（４）（４．６５mmol）の溶液中に、トリフルオロ酢酸４mlを、室温でゆっくりと滴下した。３時間後、これを水及び飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、そして濃縮した。残査をイソヘキサン／エチルアセタート（７：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーによりシリカゲル上で精製した。収率：無色油状物について５４％。
【００８０】
cis−９−オクタデセン酸２−tert−ブチルジフェニルシリルオキシ−３−ホスホノプロピルエステル（６）
テトラヒドロフラン５ml中のオキシ塩化リン（３mmol）の溶液を窒素下０℃まで冷却し、そして上記（５）の溶液（２．７５mmol）及びテトラヒドロフラン１５ml中のピリジン（９．３mmol）を滴下して加えた。混合物を０℃で３０分間攪拌した。次いで、水３mlを加え、室温で２０時間攪拌した。これを続いて１N  ＨＣｌの滴下により酸性にし、エチルアセタート２５mlで３回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、そして濃縮した。残査をエチルアセタート、それからメタノールを用いたクロマトグラフィーによってシリカゲル上で精製した。収率：無色油状物について７１％。
【００８１】
cis−９−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルエステル
上記（６）（１mmol）をジクロロメタン１０mlに溶かし、１％メタノール（methanolic）ＮａＯＨ溶液２５mlを加えた。これを室温で２０時間後に濃縮し、そして残査を１N ＨＣｌで酸性にした。混合物をエチルアセタートで抽出した。合わせた有機層をＨ2Ｏ２０mlで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、そして濃縮した。残査をメタノールで処理した。収率：無色結晶について７８％。
【００８２】
実施例２
cis−９−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド
cis−９−オクタデセン酸スクシンイミド（８）
ＴＨＦに溶かしたジシクロヘキシルカルボジイミド（２４．１ｇ、１１７mmol）をＴＨＦ１５０ml中のオレイン酸（３０ｇ、１０６．２mmol）溶液に０℃で加えた。２０分後、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１３．５ｇ、１１７mmol）を混合物に加えた。混合物をゆっくりと室温まで暖めた。室温で１８時間後、０℃まで冷却し、沈殿を吸引ろ過した。ろ液を濃縮し、そしてエチルアセタート／ヘプタン（１：３）を用いるシリカゲルカラムで精製した。収率：無色蝋状物質について８３％。
【００８３】
cis−９−オクタデセン酸２，３−ジヒドロキシプロピルアミド（９）
Ｈ2Ｏ中の１−アミノ−２，３−プロパンジオール（４．４ｇ、４８．２mmol）５０mlをアセトニトリル中のcis−９−オクタデセン酸スクシンイミド（１８．３ｇ、４８．２mmol）溶液５０mlに加えた。室温で１２時間攪拌後、アセトニトリルを留去し、そして、残査をエチルアセタートで抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ溶液で抽出した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、そして濃縮した。残査をイソヘキサンから結晶化した。収率：無色粉末について８７％。
【００８４】
cis−９−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−トリフェニルメトキシプロピルアミド（１０）
ジクロロメタン／ピリジン（１：１）８０ml中の上記（９）の溶液（２８mmol）にトリフェニルメチルクロリド（３６mmol）を滴下して加え、室温で４８時間攪拌した。溶媒を除去し、残査にトルエン５０mlを２回加え、濃縮した。残査をＨ2Ｏ１００mlで希釈し、ジクロロメタン５０mlで３回抽出した。合わせた有機層を、冷却５％ＨＣｌ  ５０ml、次いで飽和ＮａＣｌ溶液５０mlで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、そして濃縮した。残査をヘプタン／エチルアセタート（２：１）を用いるシリカゲルクロマトグラフィーで精製した。収率：無色油状物について８１％。
【００８５】
cis−９−オクタデセン酸２−ベンゾイルオキシ−３−トリフェニルメトキシプロピルアミド（１１）
ジクロロメタン／ピリジン（１：１）８０ml中の上記（１０）の溶液（２７．３mmol）に塩化ベンゾイル（３０mmol）を０℃で滴下して加えた。室温までゆっくりと暖め、室温で更に４時間攪拌し続けた。次に混合物を濃縮し、トルエン５０mlを２回加え、次いで濃縮した。残査にＨ2Ｏ１００mlを加え、ジクロロメタン１００mlで３回抽出した。合わせた有機層を、冷却の５％ＨＣｌ  ５０ml、次いで飽和ＮａＣｌ溶液５０mlで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、そして濃縮した。残査をヘプタン／エチルアセタート（３：１）を用いたシリカゲルクロマトグラフィーで精製した。収率：無色油状物について８７％。
【００８６】
cis−９−オクタデセン酸２−ベンゾイルオキシ−３−ホスホノオキシプロピル−アミド（１２）
ＴＨＦ１０ml（２２mmol）中のオキシ塩化リン溶液（７．１mmol）をテトラヒドロフラン３０ml中の上記（１１）の溶液に窒素下で、滴下により加えた。混合物を０℃で３０分間攪拌した。次に、水５mlを加え、そして室温で２０時間攪拌した。混合物に１N ＨＣｌを滴下して加え酸性にし、そしてエチルアセタート５０mlで３回抽出した；合わせた有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、そして濃縮した。残査を最初にエチルアセタート次いでメタノールを用いたシリカゲルクロマトグラフィーに付した。収率：無色油状物について５４％。
【００８７】
cis−９−オクタデセン酸２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシプロピルアミド（１３）
上記（１２）（１．７６mmol）をジクロロメタン２０mlに溶かし、そして１％メタノールＮａＯＨ溶液５０mlを加えた。室温で２０時間後、これを濃縮し、そして残査を１N ＨＣｌで酸性にした。混合物をエチルアセタート抽出した。合わせた有機層をＨ2Ｏ５０mlで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、そして濃縮した。残査をメタノールで処理した。収率：無色結晶について８２％。
【００８８】
実施例３
式（Ｉ）の化合物を、ＤＮＡ合成試験法を用いる胎児ラット頭頂骨からの造骨細胞の初代培養で試験した。この実験は、Pfeilschifter et al., Endocrinology 126, 703 (1990)にしたがって実施した。
【００８９】
試験明細：ＢｒｄＵ法
増殖の代用パラメーターとしてのＤＮＡ合成能力を、Boehringer Mannheim, Mannheim, Germany製の細胞増殖ＥＬＩＳＡ、ＢｒｄＵ（比色分析）を用いて測定した。
【００９０】
胎児ラット頭頂骨からコラゲナーゼを用いる順次消化により、初代造骨細胞を回収し、こうして５個の細胞フラクションを得た。細胞フラクション３〜５のプールを生体外（in vitro）で培養した。細胞を相対湿度９５％、ＣＯ2含量５％、及び温度３７℃で培養した。試験物質を１、２又は３回目の細胞継代の培養で試験した。
【００９１】
試験では、試験物質適用の少なくとも９６時間前までに平底マイクロウェルプレート（ＭＷＰ）に７×１０3細胞（培養液１００μl中）／ウェルの密度で、細胞を播種した。このために、５％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）及びペニシリン（１００Ｕ／ml）／ストレプトマイシン（０．１mg/ml）を加えたMEM Dulbecco（グルコース４．５ｇ/ｌ添加、ＮａＨＣＯ３３．７ｇ添加、グルタミン無し）を、培養液として用いた。
【００９２】
培養細胞に試験物質を添加する直前に、培養液を、ＦＣＳの代わりにウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）１mg/mlを含む培地１００μlと交換した。ＢＳＡ含有培養液に試験物質を所望の濃度で加えた。０．１〜０．２ng/mlの濃度のＴＧＦβ1（形質転換成長因子β1）を陽性対照として含んだ。各（陽性）対照及び試験物質濃度それぞれについて３回の測定を実施した。
【００９３】
試験物質を含む培養細胞を２４時間に渡ってインキュベートし、最後の３時間は、ＢｒｄＵプローブ（１００μM  ５−ブロモ−２′−デオキシウリジン溶液  １０μlの添加）を加えてインキュベートした。
【００９４】
培養期間の終わりに、細胞叢をFixDenat（登録商標）溶液２００μlを用いて室温で３０分間固定し、同時にＤＮＡを変成させた。続いて、固定した細胞叢を抗−ＢｒｄＵ−ＰＯＤ溶液１００μlで覆い、室温で９０分間インキュベートした。ＰＢＳ溶液２００μlで３回洗浄後、ＭＷＰウェルに基質溶液１００μl（ＴＭＢ＝テトラメチルベンジジン）を加え、室温で５分間インキュベートした。
【００９５】
光学密度をSLT Company製のATTC 340 MTP Readerを用いて測定した（ここで測定ビーム波長は３７０nm、参照ビーム波長は４９２ｎｍであった）。原データの記録及び処理は、SLT Company製のソフトウェア“easyWINbasic”を用いて実施した。
【００９６】
ＢＳＡ含有培養液のみを与えた細胞培養を評価の対照（１００％）として用いた。
【００９７】
【表１】
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【００９８】
式（Ｉ）の化合物を、Ｂａｌｂ／ｃマウスを用いる生体内（in viro）試験モデルでの骨形成刺激作用についても試験した。実験は、Mackie and Trechsel：形質転換増殖因子βによる生体内（in vivo）骨形成の刺激作用：インドメタシンによる、繊維性骨の再構築及び阻害の欠如、Bone 11, 295-300, 1990にしたがって実施した。
【００９９】
【表２】
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【０１００】
【表３】
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