(57)【要約】【課題】腫瘍細胞や腫瘍組織に選択的に集積可能な放射性ヨウ素標識化合物及び該化合物を含むシンチグラフィーイメージング剤を提供する。【解決手段】下記一般式（Ｉ）：【化１】2004284959.tif 000009（式中、Ｘはベンゼン環上任意の位置に置換してもよい放射性ヨウ素原子（好ましくは１２３Ｉ又は１２５Ｉなど）を示し、ｎは１から３の整数を示し、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に置換又は無置換のアルキル基を示し、Ｙは炭素原子数１から６個のアルキレン基（好ましくはメチレン基）を示し、Ｍは対イオンを示し、ｍは分子の荷電を中和するのに必要な数を示す）で表される放射性ヨウ素標識化合物。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）：
【化１】
2004284959.tif 000007
（式中、Ｘはベンゼン環上任意の位置に置換してもよい放射性ヨウ素原子を示し、ｎは１から３の整数を示し、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に置換又は無置換のアルキル基を示し、Ｙは炭素原子数１から６個のアルキレン基を示し、Ｍは対イオンを示し、ｍは分子の荷電を中和するのに必要な数を示す）で表される放射性ヨウ素標識化合物
【請求項２】
Ｘが１２３Ｉ又は１２５Ｉである請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１及びＲ２がそれぞれ炭素原子数４個以下の無置換アルキル基である請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｙがメチレン基である請求項１ないし３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
下記放射性ヨウ素標識化合物
【化２】
2004284959.tif 000008
【請求項６】
請求項１ないし５のいずれか１項に記載の放射性ヨウ素標識化合物を含み、腫瘍部位のイメージングに用いるためのシンチグラフィーイメージング剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、新規放射性ヨウ素標識化合物及びシンチグラフィーイメージング剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
疾患の治療においては、生体内での疾患に伴う形態学的、さらには機能的な変化を疾病の早い段階で認知することが重要である。特に癌の治療においては腫瘍の位置や大きさを予め知ることは、その後の治療方針の決定に極めて重要な手段となる。すでに試みられている方法としては穿刺等による生検の他、Ｘ線イメージング、ＭＲＩイメージング、超音波診断等の画像診断法が挙げられる。生検は確定診断としては効果的ではあるが、被験者への負担が大きく、また病変の経時的変化の追跡には不向きである。
【０００３】
疾患部位の生理機能を利用した非侵襲的な画像診断法の一つとして、放射性同位体を含む化合物をシンチグラフィー用イメージング剤として用いて、核医学的方法により画像化する方法が知られている。シンチグラフィーイメージングは従来の形態描出画像診断（ＣＴ、ＭＲＩ、超音波）による腫瘍診断の限界打破、すなわち微小のがん、全身がんの検査、再発がんの発見に有力であると考えられている。
【０００４】
シンチグラフィーイメージング剤には正常部位と腫瘍部位を識別し、腫瘍部位へ選択的に蓄積する性能が求められる。このような腫瘍蓄積性を示す化合物として、例えば光化学治療（ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ  ｔｈｅｒａｐｙ，ＰＤＴ）に用いられているヘマトポルフィリン等のポルフィリン系化合物が挙げられる（他にフォトフィリンやベンゾポルフィリン等が当該化合物群に含まれる：Ｌｉｐｓｐｎ  Ｒ．Ｌ．  ら，  上述、Ｍｅｎｇ  Ｔ．Ｓ．  ら，  ＳＰＩＥ  （１９９２）１６４１，  ９０−９８  、ＷＯ８４／０４６６５等参照）。しかしながらこれらの化合物は本来ＰＤＴにおいて使用されるものであるため、光毒性（ＰＤＴには当該特性が要求される）を有し、従って診断薬としては望ましいものではなかった。また、これらの化合物は腫瘍選択性が十分ではない。
【０００５】
一方、腫瘍ターゲッティング法の一つとして、腫瘍選択性の高い油性イメージング剤であるリピオドールを基剤として用い、この基剤に合成高分子制癌剤（すなわちスチレンマレイン酸の一酸無水物と蛋白性制癌剤ネオカルチノスタチンを反応させて得られる制癌剤）を溶解させて、肝動脈に注入し肝癌を治療する方法も知られている（前田ら；癌と化学療法，第１２巻第３号，ＰＡＲＴ  ＩＩ，７７３−７８１，昭和６０年３月）。また、脂溶性カチオン化合物であるローダミン１２３が腫瘍蓄積性を示すことが見出され（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．，  ７９，  ５２９２−５２９６（１９８２））、それが正常細胞と腫瘍細胞のミトコンドリア膜電位差に由来することが報告されている（Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２６０，  １３８４４−１３８５０（１９８５））。ローダミン１２３はπ電子の非局在化による高い脂溶性を有する１価のカチオン化合物であり、腫瘍細胞におけるミトコンドリア内膜電位の低下による電位差を利用して腫瘍に選択的に集積する一群の化合物はＤＬＣと総称される（π−ｅｌｅｃｔｒｏｎ  ｄｅｌｏｃａｌｉｚｅｄ  ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ  ｃａｔｉｏｎｓ）。
【０００６】
写真科学の分野において用いられる分光増感色素又は染料であるシアニン化合物やロダシアニン化合物もローダミン１２３と同様に脂溶性１価カチオン化合物であり、腫瘍蓄積性を示す化合物がいくつか報告されている（典型的な化合物として、例えばＭＫＴ０７７：１−エチル−２−［［３−エチル−５−（３−メチルベンゾチアゾリン−２−イリデン）−４−オキソチアゾリジン−２−イリデン］メチル］ピリジニウムクロライドがＪ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  ４０，  ３１５１−３１６０（１９９７）に記載されている）。例えば生体組織透過性に優れた近赤外領域に蛍光を発するシアニン系化合物を腫瘍に蓄積させて蛍光イメージング剤として用いる方法や（ＷＯ  ００／１６８１０）、ロダシアニン化合物の制癌剤としての利用（日本特許第２８６４１８８号）が報告されている。該特許は制癌剤として利用するために化合物の水溶性を高めることが課題であり、それゆえに十分な腫瘍蓄積性を有していなかった。これまでに腫瘍集積性の高いカチオン化合物、特にシアニン・ロダシアニン色素系化合物を放射性ヨウ素核種で標識する例は報告されていない。
【０００７】
【非特許文献１】Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  ４０，  ３１５１−３１６０（１９９７）
【０００８】
【発明が解決しようとする課題及び課題を解決するための手段】
本発明は腫瘍を特異的にイメージングすることが可能なシンチレーションイメージング剤を提供することを目的とする。本発明者らは上記の課題を解決すべく、従来ＤＬＣとして知られているＭＫＴ０７７の母核構造を利用して、この化合物の腫瘍集積性を損なうことなく放射性ヨウ素原子を導入するための修飾方法を鋭意研究した。その結果、下記の一般式（Ｉ）で表される化合物が腫瘍細胞に対して極めて高い集積性を有しており、シンチレーションイメージング剤として優れた性質を有していることを見出した。本発明は上記の知見を基にして完成されたものである。
【０００９】
すなわち、本発明により、下記一般式（Ｉ）：
【化３】
2004284959.tif 000002
（式中、Ｘはベンゼン環上任意の位置に置換してもよい放射性ヨウ素原子を示し、ｎは１から３の整数を示し、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に置換又は無置換のアルキル基を示し、Ｙは炭素原子数１から６個のアルキレン基を示し、Ｍは対イオンを示し、ｍは分子の荷電を中和するのに必要な数を示す）で表される放射性ヨウ素標識化合物が提供される。
【００１０】
この発明の好ましい態様によれば、Ｘが１２３Ｉ又は１２５Ｉである上記の放射性ヨウ素標識化合物；Ｒ１及びＲ２がそれぞれ独立に炭素原子数４個以下の無置換アルキル基である上記の放射性ヨウ素標識化合物；及びＹがメチレン基である上記の放射性ヨウ素標識化合物が提供される。特に好ましい化合物として、下記放射性ヨウ素標識化合物が提供される。
【化４】
2004284959.tif 000003
【００１１】
別の観点からは、上記の放射性ヨウ素標識化合物を含み、腫瘍部位のイメージングに用いるためのシンチグラフィーイメージング剤が本発明により提供される。この発明の好ましい態様によれば、腫瘍細胞又は腫瘍組織のイメージングに用いる上記のシンチグラフィーイメージング剤が提供される。また、上記シンチグラフィーイメージング剤の製造のための上記の放射性ヨウ素標識化合物の使用；シンチグラフィーイメージング法であって、上記の放射性ヨウ素標識化合物を含むシンチグラフィーイメージング剤をヒトを含む哺乳類動物に投与した後に該放射性ヨウ素標識化合物が発生する放射線を検出する工程を含む方法；腫瘍細胞又は腫瘍組織のイメージング方法であって、上記の放射性ヨウ素標識化合物を含むシンチグラフィーイメージング剤をヒトを含む哺乳類動物に投与した後に該放射性ヨウ素標識化合物が発生する放射線を検出する工程を含む方法が本発明により提供される。
【００１２】
【発明の実施の形態】
Ｘはベンゼン環上任意の位置に置換してもよい放射性ヨウ素原子を示す。ヨウ素原子の放射性同位体の種類は特に限定されないが、好ましくは１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、及び１３１Ｉが挙げられる。さらに好ましくは１２３Ｉ及び１２５Ｉである。ベンゼン環上におけるＸの置換位置及び個数（ｎ）は特に限定されないが、ベンゼン環の２，４位に２個の放射性ヨウ素原子を有する化合物が好ましく、ベンゼン環の４位に１個の放射性ヨウ素原子を有する化合物がさらに好ましい。
【００１３】
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に置換又は無置換のアルキル基を示す。本明細書においてアルキル基は直鎖状、分枝鎖状、環状、又はそれらの組み合わせのいずれであってもよい。環状アルキル基にはビシクロアルキル基などの多環性アルキル基を含み、シクロペンタノヒドロフェナントレイン骨格を有するいわゆるステロイド構造も含む。アルキル部分を含む他の置換基のアルキル部分についても同様である。アルキル基上の置換基の種類、個数、及び置換位置は特に限定されない。アルキル基上の置換基の例としては、ハロゲン原子（フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素）、アルケニル基（シクロアルケニル基、ビシクロアルケニル基を含む）、アルキニル基、アリール基、ヘテロ環基、シアノ基、ヒドロキシル基、ニトロ基、カルボキシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、シリルオキシ基、ヘテロ環オキシ基、アシルオキシ基、カルバモイルオキシ基、アルコキシカルボニルオキシ基、アリールオキシカルボニルオキシ基、アミノ基（アニリノ基を含む）、アシルアミノ基、アミノカルボニルアミノ基、アルコキシカルボニルアミノ基、アリールオキシカルボニルアミノ基、スルファモイルアミノ基、アルキル及びアリールスルホニルアミノ基、メルカプト基、アルキルチオ基、アリールチオ基、ヘテロ環チオ基、スルファモイル基、スルホ基、アルキル及びアリールスルフィニル基、アルキル及びアリールスルホニル基、アシル基、アリールオキシカルボニル基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基、アリール及びヘテロ環アゾ基、イミド基、ホスフィノ基、ホスフィニル基、ホスフィニルオキシ基、ホスフィニルアミノ基、シリル基などが挙げられる。Ｒ１及びＲ２として好ましくは炭素数が４以下の無置換アルキル基を用いることができ、Ｒ１及びＲ２がともにエチル基である場合がさらに好ましい。
【００１４】
Ｙは炭素原子数１から６個のアルキレン基を示す。該アルキレン基は直鎖状又は分枝鎖状のいずれであってもよく、置換基を有していてもよい。置換基を有する場合、置換基としてはアルキル基について説明した置換基を用いることができる。好ましくは無置換のアルキレン基が用いられる。該アルキレン基の炭素原子数は１から３個が好ましく、より好ましくは炭素原子数が１又は２個であり、最も好ましいのはメチレン基である。
【００１５】
Ｍは対イオンを表す。Ｍは陽イオンでも陰イオンでもよく、陽イオンとしてはナトリウムイオン、カリウムイオン、リチウムイオンなどのアルカリ金属イオン、テトラアルキルアンモニウムイオン、ピリジニウムイオンなどの有機イオンが挙げられる。陰イオンは無機陰イオンあるいは有機陰イオンのいずれであってもよく、ハロゲン陰イオン（例えば、フッ素イオン、塩素イオン、臭素イオン、ヨウ素イオンなど）、置換アリールスルホン酸イオン（例えば、ｐ−トルエンスルホン酸イオン、ｐ−クロルベンゼンスルホン酸イオンなど）、アリールジスルホン酸イオン（例えば、１，３−ベンゼンジスルホン酸イオン、１，５−ナフタレンジスルホン酸イオンなど）、アルキル硫酸イオン（例えば、メチル硫酸イオンなど）、硫酸イオン、チオシアン酸イオン、過塩素酸イオン、テトラフルオロホウ酸イオン、ピクリン酸イオン、酢酸イオン、トリフルオロメタンスルホン酸イオンなどが挙げられる。また、Ｍは水素イオンでもよい。Ｍは陰イオンである場合が好ましい。陰イオンとしてはハロゲン陰イオン、置換アリールスルホン酸イオン、酢酸イオンが好ましく、さらに好ましくは塩素イオン又はｐ−トルエンスルホン酸イオンである。
【００１６】
以下に本発明の化合物の具体例をあげるが、本発明の範囲はこれらの例示化合物に限定されるものではない。本発明の好ましい態様としてＹがメチレン基である化合物を示す。
【化５】
2004284959.tif 000004
【００１７】
本発明の化合物は１以上の不斉中心を有する場合があるが、この場合、不斉中心に基づく光学活性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体が存在する。純粋な形態の任意の立体異性体、任意の立体異性体の混合物、ラセミ体などは、いずれも本発明の範囲に包含される。さらに本発明の化合物は水和物又は溶媒和物を形成する場合もあるが、このような場合も本発明の範囲に包含される。
【００１８】
本発明の化合物の製造方法は特に限定されず、適宜の方法により製造できる。一般的に、放射性ヨウ素化合物の合成は、対応する非放射性ヨウ素化合物を合成した後に、Ａｐｐｌ．  Ｒａｄｉａｔ．  Ｉｓｏｔ．，  ３７（８），  ９０７  （１９８６）等に記載されている既知の方法で実施することができる。本発明の代表的化合物の製造方法を以下のスキーム及び実施例に具体的かつ詳細に示したので、当業者はこの製造方法を参照しつつ、原料化合物、反応試薬、及び反応条件などを適宜選択し、必要に応じて該方法に適宜の修飾ないし改変を加えることにより、式（Ｉ）に包含される任意の化合物を容易に製造できる。
【００１９】
例えば、原料１Ｃに代えて適宜のアルキルヨードベンゼン誘導体を用いることによっても同様に反応が進行すること、及びそのようなアルキルヨードベンゼン誘導体のアルキル基の任意の位置に脱離基として臭素原子やトシル基などの官能基を適宜導入できることは当業者に容易に理解されることである。アルキルヨードベンゼン誘導体のアルキル基は、容易に入手可能な原料化合物から例えば、Ｗｉｔｔｉｇ反応やＢａｒｂｉｅｒ−Ｗｉｅｌａｎｄ分解、Ａｒｎｄｔ−Ｅｉｓｔｅｒｔ合成、アセチリドを用いる方法（例えば、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．  ３５，  ９５０１  （１９９４）に記載の方法に準拠）、クロロ蟻酸エステルを用いる方法（例えば、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ４２７  （１９８６）に記載）、マロン酸ジエチルを用いる方法（例えば、Ａｒｃｈ．  Ｐｈａｒｍ．  （Ｗｅｉｎｈｅｉｍ）  ３２８，  ２７１  （１９９５）に記載）などにより適宜の長さのアルキル基に変換できる。また、アルキルヨードベンゼン誘導体のベンゼン環上のヨウ素原子は、例えば、Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｃ．  Ｌａｒｏｃｋ著、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（ＶＣＨ）  に記載の方法によりベンゼン誘導体を原料として導入することができる。
【００２０】
【化６】
2004284959.tif 000005
【００２１】
上記の一般式（Ｉ）で表される化合物は腫瘍細胞に集積する性質を有しており、該化合物を有効成分として含むシンチグラフィーイメージング剤は、腫瘍細胞又は腫瘍組織を選択的にイメージングできる。いかなる特定の理論に拘泥するわけではないが、腫瘍細胞においては一般的にミトコンドリア内膜電位が正常細胞に比べて低下しており、本発明の化合物はこの電位差に基づいて腫瘍細胞に選択的に集積する性質を有している。本発明のイメージング剤は好ましくは非経口的に投与することができ、より好ましくは静脈内投与することができるが、経口的に投与できる場合もある。一般的に、本発明のイメージング剤は、当業界で通常使用されているシンチグラフィーイメージング剤に準じて、注射剤、好ましくは静脈内投与用の注射剤として提供することができる。注射剤は凍結乾燥形態の粉末状組成物として提供され、用時に水又は他の適当な媒体（例えば生理食塩水、ブドウ等輸液、緩衝液など）に溶解して使用するものであってもよい。本発明のイメージング剤の投与量は特に限定されず、イメージング対象となる腫瘍細胞又は腫瘍組織の種類や病変部の大きさ、患者の年齢、体重などに応じて、病変部において放出される放射線を体外から検出できるように選択すればよい。
【００２２】
【実施例】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例により限定されることはない。下記の実施例における化合物番号は上記のスキーム中の化合物番号に対応させてある。
例１：本発明の化合物の合成
（１）化合物１Ｂの合成
２−ピコリン（化合物１Ａ）０．４６ｇとパラトルエンスルホン酸エチル１．００ｇを１４０℃にて２．５時間反応させた。反応液を９０℃まで冷却後、アセトン２ｍｌを加え、さらに室温まで冷却した。生じた白色沈殿を吸引ろ過したのち、アセトンから再結晶して化合物１Ｂを収率５３．９％で得た。化合物１Ｂは精製することなく次の反応に用いた。
【００２３】
（２）化合物１Ｄの合成
ｐ−ヨードトルエン（化合物１Ｃ）２５ｇとＮ−ブロモスクシンイミド２３．５ｇ、過酸化ベンゾイル３７５ｍｇを四塩化炭素３７５ｍｌに加え、光照射を行いながら７時間加熱還流した。さらに室温にて一晩攪拌した後不溶物をろ過により除去し、ろ液を減圧濃縮した。濃縮残渣を酢酸エチル、ヘキサンで再結晶して化合物１Ｄを収率６０．３％で得た。
ＮＭＲケミカルシフト  ＣＤＣｌ３  ＴＭＳ標準
δ  ７．７２  （ｄ，２Ｈ），  ７．１４  （ｄ，２Ｈ），  ４．３９  （ｓ，２Ｈ）
【００２４】
（３）化合物１Ｅの合成
化合物１Ｄ；６．１４ｇとシルバートシレート６．０８ｇを脱水アセトニトリル３００ｍｌに溶解し、５０℃にて５時間攪拌した。沈殿した臭化銀をろ過により除去し、ろ液を減圧濃縮した後残渣をエーテルにて抽出した。エーテル層を減圧濃縮した後、残渣をエーテルにて再結晶して化合物１Ｅを収率４０．８％で得た。
ＮＭＲケミカルシフト  ＣＤＣｌ３  ＴＭＳ標準
δ  ７．７５  （ｄ，２Ｈ），  ７．５１  （ｄ，２Ｈ），  ７．３５  （ｄ，２Ｈ），  ７．１５  （ｄ，２Ｈ），  ５．０８  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．３０  （ｓ，３Ｈ）
【００２５】
（４）化合物１Ｇの合成
化合物１Ｅ；１．００ｇと２−メチルチオベンゾチアゾール０．３１１ｇ及びアニソール０．４３５ｍｌを１３５℃にて４時間攪拌した（１Ｆの生成）。室温まで冷却した後３−エチルローダミン０．２７７ｇとアセトニトリル６．２ｍｌを加え、反応液を１５℃に保ちながらトリエチルアミン０．２８ｇを滴下して１０℃にて４時間攪拌した。反応液に析出した黄色結晶を吸引ろ過で濾取し、結晶をアセトニトリルとメタノールで洗浄した。得られた粗結晶をアセトン３００ｍｌに懸濁させて１５分間加熱還流した後に熱時ろ過し、さらにメタノールで結晶を洗浄して化合物１Ｇを収率６５％で得た。
ＮＭＲケミカルシフト  ＣＤＣｌ３  ＴＭＳ標準
δ  ７．９３  （ｄ，１Ｈ），  ７．７８  （ｄ，１Ｈ），  ７．６６  （ｄ，２Ｈ），  ７．５２  （ｔ，１Ｈ），  ７．３５  （ｔ，１Ｈ），  ７．１４  （ｄ，２Ｈ），  ４．８３  （ｓ，２Ｈ），  ４．１０  （ｑ，２Ｈ），  １．２０  （ｓ，３Ｈ）
【００２６】
（５）化合物１Ｈの合成
化合物１Ｇ；１．００ｇとパラトルエンスルホン酸メチル２．２４ｇをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１ｍｌに加え１４０℃にて２．５時間攪拌した。反応液を９５℃まで冷却した後アセトン８．８ｍｌを加え、１０℃まで冷却しながら攪拌した。析出した黄色結晶を濾取した後、アセトンで１５分間熱洗浄して化合物１Ｈを収率６４．２％で得た。
ＮＭＲケミカルシフト  ＣＤＣｌ３  ＴＭＳ標準
δ  ８．１８  （ｄ，１Ｈ），  ８．００  （ｄ，１Ｈ），  ７．７０  （ｄｄ，１Ｈ），  ７．６６  （ｄ，２Ｈ），  ７．５２  （ｄｄ，１Ｈ），  ７．４６  （ｄ，２Ｈ），  ７．１４  （ｄ，２Ｈ），  ７．１０  （ｄ，２Ｈ），  ４．８３  （ｓ，２Ｈ），  ４．１７  （ｑ，２Ｈ），  ３．０５  （ｓ，３Ｈ），  ２．２７  （ｓ，３Ｈ），  １．３３  （ｔ，３Ｈ）
【００２７】
（６）化合物１の合成
化合物１Ｈ；１．００ｇと化合物１Ｂ；０．４２９ｇをアセトニトリル７．３ｍｌに加えて７０℃に昇温し、トリエチルアミン０．４４３ｇを添加してそのまま１．５時間攪拌した。反応液に酢酸エチル７．３ｍｌを滴下して３０℃まで冷却し、生成した結晶を濾取した。粗結晶をメタノール４．７ｍｌに溶解し、酢酸エチル１４．６ｍｌを加えて５０℃にて３時間攪拌後、室温に冷却して橙色結晶を濾取した。さらに該結晶をメタノール１ｍｌに溶解し、３０００ｒｐｍにて１０分間遠心分離して上清を減圧濃縮することにより化合物１を収率３２．１％で得た。
融点：２６８−２７０℃
λｍａｘ  （ＭｅＯＨ）  ［ｎｍ］（ε）：４９４（４．８２×１０４）
ＮＭＲケミカルシフト  ＣＤＣｌ３  ＴＭＳ標準
δ  ８．７０  （ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），  ８．２６  （ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），  ８．０６  （ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），  ７．８８  （ｄｄ，Ｊ＝８．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ），  ７．６６  （ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），  ７．６１  （ｄｄ，Ｊ＝８．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ），  ７．４９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），  ７．４７  （ｄｄ，Ｊ＝８．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ），  ７．２８  （ｄｄ，Ｊ＝８．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ），  ７．１４  （ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），  ７．１１  （ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），  ５．９８  （ｓ，３Ｈ），  ４．８３  （ｓ，２Ｈ），  ４．６０  （ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），  ４．１１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），  ２．２８  （ｓ，３Ｈ），  １．４３  （ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），  １．２４  （ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）
【００２８】
（７）本発明の化合物の合成
化合物１を０．１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液に加え、酢酸エチルで抽出し減圧濃縮した。濃縮物０．１ｍｇを１００μｌのメタノールに溶解し、４ｍＭ硫酸銅水溶液５．０μｌ、０．１５Ｍ硫酸アンモニウム水溶液２．０μｌ及び１２５Ｉ−ＮａＩアルカリ溶液を加え、閉鎖系により油浴上１２０℃で６時間反応させた。反応液から下記ＨＰＬＣ条件にて本発明の化合物を分取した。
カラム：Ｃｈｅｍｃｏ  Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ  ７．５×３００ｍｍ
検出波長：２５４ｎｍ
流量：３．０ｍｌ  ／  ｍｉｎ
カラム温度：３０℃
溶離液：メタノール／水＝７／３
収率：５０％、
Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐｕｒｉｔｙ：＞９５％
【００２９】
例２：腫瘍細胞集積性
（１）使用培地
▲１▼ＬＳ１８０（ヒト大腸癌細胞）、ＳＨＩＮ−ＩＩＩ（ヒト卵巣癌細胞）、Ｕ８７ＭＧ（グリオーマ）
５００ｍｌの超純水中に市販のＲＰＭＩ１６４０培地（ニッスイ）５．１ｇを溶解し、オートクレーブ処理した後、クリーンベンチ内でＬ−グルタミン０．１５ｇ、メイロン（７％炭酸水素ナトリウム水溶液、注射用製剤）１４ｍｌ、ＦＢＳ５５ｍｌを加えて調製した培地で培養した。
▲２▼ＮＩＨ３Ｔ３（繊維芽細胞：コントロール）
５００ｍｌの超純水中に市販のＤＭＥＭ培地（ニッスイ）を溶解し、オートクレーブ処理した後、クリーンベンチ内でＬ−グルタミン０．１５ｇ、メイロン（７％炭酸水素ナトリウム水溶液、注射用製剤）１４ｍｌ、及びＦＢＳ  ５５ｍｌを加えて調製した培地で培養した。
【００３０】
（２）培養方法
（ａ）凍結保存細胞の解凍
１０％ＤＭＳＯ入りメディウム中で冷凍保存していた細胞を解凍し、１５ｍｌファルコンチューブに移し、ＰＢＳを加え５ｍｌとして１３００ｒｐｍ、５分で遠心分離を行った。上清を吸引除去し、沈殿をＰＢＳ５ｍｌに懸濁し再度１３００ｒｐｍ、５分間遠心分離を行った。上清を吸引除去し、沈殿をメディウム１０ｍｌに懸濁させ、１０ｃｍ  ディッシュに播種して３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内に静置した。
（ｂ）植え替え時期
▲１▼ＬＳ１８０、ＳＨＩＮ−ＩＩＩ、Ｕ８７ＭＧ
３日後、１０ｃｍ  ディッシュに８０〜９０％に増殖したところで１５ｃｍ  ディッシュに植え替えた。
▲２▼ＮＩＨ３Ｔ３
一週間後、１０ｃｍ  ディッシュに８０〜９０％に増殖したところで１５ｃｍ  ディッシュに植え替えた。
【００３１】
（ｃ）植え替え
１０ｃｍ  ディッシュをインキュベーターから取り出し、上清を吸引除去した。ＰＢＳで３回洗浄した後トリプシン−ＥＤＴＡ（０．０５％トリプシン、０．５３ｍＭ  ＥＤＴＡ４ナトリウム塩）１ｍｌとＰＢＳ１ｍｌを加え、ＣＯ２インキュベーター内に１０分静置した。インキュベーターから取り出し、細胞が剥離したことを確認後、１５ｍｌファルコンチューブに移した。ＰＢＳを添加して５ｍｌにして１３００ｒｐｍ、５分間遠心分離を行い、上清を吸引除去した。沈殿をＰＢＳ５ｍｌに懸濁させ、再度１３００ｒｐｍ、５分間遠心分離して上清を吸引除去した。沈殿を８ｍｌのメディウムに懸濁し、あらかじめメディウム１６ｍｌ加えておいた１５ｃｍ  ディッシュ二枚に４ｍｌずつ播種して３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内に静置した。
【００３２】
（ｄ）保存
ＬＳ１８０、ＳＨＩＮ−ＩＩＩ、Ｕ８７ＭＧは３日後、ＮＩＨ３Ｔ３は１週間後、１５ｃｍ  ディッシュに８０〜９０％増殖したところでインキュベーターから取り出し、上清を吸引除去した。ＰＢＳで３回洗浄した後、トリプシンーＥＤＴＡ３ｍｌ、ＰＢＳ３ｍｌを加え、ＣＯ２インキュベーター内に１０分間静置した。インキュベーターから取り出し、細胞が剥離したのを確認後、５０ｍｌファルコンチューブに移した。ＰＢＳで１５ｍｌとして、１３００ｒｐｍ、５分間遠心分離、上清を吸引除去し沈殿をＰＢＳ１５ｍｌに懸濁し、再度１３００ｒｐｍ、５分間遠心分離した。上清を吸引除去し、沈殿を８ｍｌの１０％ＤＭＳＯ入りメディウムに懸濁。２ｍｌのクライオジェニックチューブ４本に分注し、−８０℃ディープフリーザー内で保存した。
【００３３】
（ｅ）取り込み実験
取り込み実験実施二日前に２４穴プレートに細胞を播種した（細胞懸濁メディウム５００ｍｌ／ｗｅｌｌ、細胞１種につき５ｗｅｌｌ／ｐｌａｔｅ）。播種した５ｗｅｌｌ中４ｗｅｌｌ内のメディウムを例１で得た化合物：０．５μＣｉを含むメディウム５００ｍｌに置き換え、インキュベートした。取り込み時間（３０分、１時間、３時間）終了後の全てのｗｅｌｌの上清を吸引除去した。本発明の化合物を加えた４ｗｅｌｌは０．２Ｎ  ＮａＯＨで細胞を剥離し放射能を測定した。残り１ｗｅｌｌはトリプシン−ＥＤＴＡを加えて剥離させた後、血球計数板にて細胞数をカウントした。細胞数、放射能より細胞１００，０００個あたりに換算した％ｄｏｓｅおよに正常細胞（ＮＩＨ３Ｔ３）との比を算出した。結果を表１に示す。表１より明らかなように、本発明の化合物は正常細胞に比べＬＳ１８０（ヒト大腸癌細胞）では約３倍、ＳＨＩＮ−ＩＩＩ（ヒト卵巣癌細胞）では約７倍、Ｕ８７ＭＧ（グリオーマ）では約２倍の取り込みが認められた。
【００３４】
【表１】
2004284959.tif 000006
【００３５】
例３：体内分布実験
ヌードマウス（雄性、５週齢）の大腿部皮下にＳＨＩＮ−ＩＩＩヒト卵巣癌細胞を１．０×１０６個植え付けた。１７日後、本発明の化合物（１８．５ｋＢｑ）を５％ＤＭＳＯを含む生理食塩水溶液１００μｌに溶解し、尾静脈より投与した。５分、１０分、３０分後に屠殺し、各臓器の重量、放射能を測定した。腫瘍組織と筋肉組織の集積比を図１に示した。図１から明らかなように、ＳＨＩＮ−ＩＩＩを移植したヌードマウスを用いたｉｎ  ｖｉｖｏの系において本発明の化合物は筋肉よりも腫瘍組織に多く集積することがわかる。
【００３６】
【発明の効果】
本発明の化合物は良好な腫瘍集積性を有しており、放射性ヨウ素標識シンチグラフィーイメージング剤として腫瘍の診断に有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】ヌードマウスにおける本発明の化合物の腫瘍組織と筋肉組織の集積比を示した図である。
【図１】
2004284959.tif 000010