(57)【要約】【課題】エナンチオマー濃縮３−ヘテロアリール−３−ヒドロキシプロパン酸誘導体の製造する方法。【解決手段】式（Ｉ）ヘテロアリール−ＣＯ−ＣＨ２Ｗ　　　　　　（Ｉ）［式中、ヘテロアリールおよびＷは本明細書中に記載の意味を有する］の化合物を、微生物および／またはそれらの細胞調製物の存在下で、２５℃でｐＨ３〜１１を有する水の存在下で反応させることによって、式（ＩＩ）ヘテロアリール−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２Ｗ　　　（ＩＩ）［式中、ヘテロアリールおよびＷは式（Ｉ）と同様の意味を有する］の化合物を得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
　立体異性体濃縮３−ヘテロアリール−３−ヒドロキシプロパン酸誘導体を製造するための方法において、
式（Ｉ）
ヘテロアリール−ＣＯ−ＣＨ２Ｗ　　　（Ｉ）
［式中、ヘテロアリールは全部で５〜１０個の環原子を有する単環または二環の芳香族基であり、その際、酸素、硫黄および窒素から選択された０個、１個または２個の環原子が、１環当たりに存在していてもよく、かつ、全芳香族基中に１個または２個が存在していてもよく、かつ、単環または二環の芳香族基は、それぞれ互いに独立して、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル、シアノ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭ（Ｍはアルカリ金属イオンまたは半当量のアルカリ土類金属イオンである）、ＣＯＯ−（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）、Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）２、ＮＨ−（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）、ＮＯ２、フッ素、塩素、臭素、Ｃ１〜Ｃ４−フルオロアルキル、ＣＯＮＨ２またはＣＯＮＨ−（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）の基から選択された基によって１個、２個または３個置換されていてもよく、かつ、
ＷはＣ（Ｏ）ＹＲ１ｎであり、その際、Ｙが酸素、かつｎが１であるか、あるいはＹが窒素、かつｎが２であるか、あるいは、
ＷはＣＮであり、かつ、
Ｒ１は、それぞれ互いに独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル、Ｃ４〜Ｃ１０−アリールまたはＣ５〜Ｃ１１−アリールアルキルであるか、あるいはＹが窒素である場合には、２個の基Ｒ１は一緒になってＣ３〜Ｃ５−アルキレンである」の化合物を、
微生物および／またはこれらの細胞調製物の存在下で、
２５℃でｐＨ３〜１１を有する水の存在下で反応させることによって、式（ＩＩ）
ヘテロアリール−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２Ｗ　　　（ＩＩ）
［式中、ヘテロアリールおよびＷは前記の意味を有する］のエナンチオマー濃縮化合物が得られることを特徴とする、立体異性体濃縮３−ヘテロアリール−３−ヒドロキシプロパン酸誘導体の製造方法。
【請求項２】
　式（ＶＩ）
ヘテロアリール−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ２Ｒ３　　　（ＶＩ）
［式中、ヘテロアリールは式（Ｉ）で示された意味を有し、かつ、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ互いに独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル、Ｃ４〜Ｃ１４−アリールまたはＣ５〜Ｃ１５−アリールアルキルであるか、あるいは２個の基Ｒ２およびＲ３は一緒になってＣ３〜Ｃ１２−アルキレンである］のエナンチオマー濃縮化合物を製造するための方法において、
工程ａ）で、
式（Ｉ）の化合物を、請求項１に記載の方法にしたがって式（ＩＩ）
ヘテロアリール−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−ＣＯ−ＣＨ２Ｗ　　　（ＩＩ）
［式中、それぞれの場合において、ヘテロアリールおよびＷは式（Ｉ）の意味を有する］のエナンチオマー濃縮化合物に変換し、かつ、
工程ｂ）で、
ｉ）ＷがＣＯＯＲ１であり、かつ、Ｒ１が水素、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル、Ｃ４〜Ｃ１０−アリールまたはＣ５〜Ｃ１１−アリールアルキルである場合には、
式（ＩＩ）のエナンチオマー濃縮化合物を、式（ＩＩＩ）
ＨＮＲ２Ｒ３　　　（ＩＩＩ）
［式中、Ｒ２およびＲ３は式（ＶＩ）で挙げられた意味を有する］のアミンと反応させ、式（ＩＶ）
ヘテロアリール−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＲ２Ｒ３（ＩＶ）
［式中、ヘテロアリール、Ｒ２およびＲ３は前記に示した意味を有する］のエナンチオマー濃縮化合物が得られ、
ｉｉ）ＷがＣＯＮ（Ｒ１）２であり、かつＲ１基がそれぞれ互いに独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル、Ｃ４〜Ｃ１０−アリールまたはＣ５〜Ｃ１１−アリールアルキルであるか、あるいは２個のＲ１基は一緒になってＣ３〜Ｃ５−アルキレンである場合には、
式（ＩＩ）のエナンチオマー濃縮化合物を、適切な場合には式（ＩＩＩ）のアミンと反応させることによって、式（ＩＶ）のエナンチオマー濃縮化合物に変換し、
ｉｉｉ）ＷがＣＮである場合には、式（ＩＩ）の化合物を直接的に、アミノ分解／加水分解によって式（ＩＶ）の化合物に変換するか、または最初に、加水分解、部分加水分解または混合したアルコール分解／加水分解によって、式（Ｖ）
ヘテロアリール−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−ＣＯ−Ｒ４　　　（Ｖ）
［式中、ヘテロアリールは式（Ｉ）に記載の意味を有し、かつ、Ｒ４はＯＲ１またはＮＨ２であり、その際、Ｒ１は前記の意味を有する］の化合物に変換し、その後に、ｉ）と同様の方法でアミド化するか、または適切な場合には、ｉｉ）と同様の方法で、式（ＩＶ）のエナンチオマー濃縮化合物に変換し、
工程ｃ）で、式（ＩＶ）のエナンチオマー濃縮化合物を、還元によって、前記意味を有する式（ＶＩ）のエナンチオマー濃縮化合物に変換することを特徴とする、式（ＶＩ）のエナンチオマー濃縮化合物を製造するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
　本発明は、エナンチオマー濃縮３−ヘテロアリール−３−ヒドロキプロパン酸誘導体および３−ヘテロアリール−１−アミノプロパン−３−オールの製造方法およびその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
　３−ヘテロアリール−３−ヒドロキシプロパン酸誘導体および３−ヘテロアリール−１−アミノプロパン−３−オールは、特に医薬製造のための中間体としての工業的重要性を有する。したがって、いくつかの３−ヘテロアリール−３−ヒドロキシプロパン酸誘導体および３−ヘテロアリール−１−アミノプロパン−３−オールは、たとえば、セロトニンまたはノルアドレナリン取り込みのインヒビターを製造するための前駆体として使用される。これらのインヒビターのいくつかの場合において、特定のエナンチオマーは不活性であるかまたは低い活性を有するばかりでなく、望ましくない副作用を示す可能性があることが示唆されている（ＵＳ−Ａ５１０４８９９）。
【０００３】
　エナンチオマー−濃縮（１Ｓ）−３−（メチルアミノ）−１−（２−チオフェン−イル）−１−プロパノールを、１−（２−チオフェニル）−３−クロロプロパン−１−オンから製造するための方法は、Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ　２０００、１２、２６−２９で記載されている。ラセミ体３−クロロ−１−（２−チエニル）−１−プロパノールに還元した後に、ラセミ体を酵素的に分解し、かつ（Ｓ）エナンチオマーをさらにＮａＩおよびメチルアミンと反応させることによって、（Ｓ）−３−（メチルアミノ）−１−（２−チオフェニル）プロパン−１−オールが得られた。この方法は、原理として、ラセミ体を酵素的に分解した場合に、望ましいエナンチオマーが単に５０％得られるにすぎず、したがって全収率については経済的に許容されるものではないという欠点を有する。
【０００４】
　すでに知られているように、微生物、たとえば、酵母または菌類は、３−オキソカルボン酸誘導体をエナンチオ選択的に還元するために使用することができ、これによって、相当するエナンチオマー濃縮３−ヒドロキシカルボン酸誘導体を得ることができる（Sybesma et al., Biocatalysis and Biotransformation, 1998, Vol. 16, 95-134; Dahl et al., Tetrahedron: Asymmetry 10, 1999, 551-559, Dehli et al., Tetrahedron: Asymmetry 11, 2000, 3693-3700, Hayakawa et al, Tetrahedron Letters, 1998, Vol. 39, 67-70, Cabon et al., Tetrahedron: Asymmetry 6, 1995, 2199-2210 and Smallridge et al., Tetrahedron Letters, 1998, Vol. 39, 5121-5124）。
【０００５】
　さらに、ＥＰ−Ａ４４７９３８では、種々の生物を用いて、２−ハロ−３−オキソ−３−フェニルプロパン酸エステルを還元するための、エナンチオ選択的な２−ハロ−３−ヒドロキシ−３−フェニルプロパン酸エステルの合成が記載されている。
【０００６】
　さらに、Ｃｈｅｎｅｖｅｒｔら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　１９９２、Ｖｏｌ．４８、６７６９−６７７６は、抗うつ剤フルオキセチン（Ｎ−メチル−３−（４−トリフルオロメチルフェノキシ）−３−フェニルプロピルアミン塩酸塩）の双方のエナンチオマーの不斉合成が開示されている。多段階合成における重要な工程は、微生物の使用によるものであり、これによりエチル３−オキソ−３−フェニルプロパノエートのエナンチオ選択的還元が生じる。
【０００７】
　抗うつ剤として作用する（Ｒ）−トモキセチンを製造するための類似の合成は、Ｋｕｍａｒ　Ａ．ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９１，Ｖｏｌ．３２，１９０１−１９０４中で記載されている。エチル３−ヒドロキシ−３−フェニルプロパノーエートを得るためのエチル３−オキソ−３−フェニルプロパノエートのエナンチオ選択的還元は、同様にこの合成における重要な工程である。
【０００８】
　しかしながら、ヘテロアリールケトンのエナンチオ選択的還元は、従来的には記載されていなかった。
【特許文献１】ＵＳ−Ａ５１０４８９９
【特許文献２】ＥＰ−Ａ４４７９３８
【非特許文献１】Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ　２０００、１２、２６−２９
【非特許文献２】Ｓｙｂｅｓｍａら、Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ、１９９８、Ｖｏｌ．１６、９５−１３４、
【非特許文献３】Ｄｅｈｌｉら、Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ１０、１９９９、５５１−５５９
【非特許文献４】Ｄｅｈｌｉら、Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ１１、２０００、３６９３−３７００
【非特許文献５】Ｈａｙａｋａｗａら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９９８、Ｖｏｌ３９、６７−７０
【非特許文献６】Ｃａｒｂｏｎら、Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ６、１９９５、２１９９−２２１０
【非特許文献７】Ｓｍａｌｌｒｉｄｇｅら、Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９９８、Ｖｏｌ．３９、５１２１−５１２４
【非特許文献８】Ｃｈｅｎｅｖｅｒｔら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　１９９２、Ｖｏｌ．４８、６７６９−６７７６
【非特許文献９】Ｋｕｍａｒ　Ａ．ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９１，Ｖｏｌ．３２，１９０１−１９０４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
　したがって、エナンチオマー濃縮３−ヘテロアリール−３−ヒドロキシプロパン酸誘導体の製造を可能にする方法がなおも必要とされた。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
　立体異性体−濃縮３−ヘテロアリール−３−ヒドロキシプロパン酸誘導体を製造するための方法が見出され、この場合、この方法は、
式（Ｉ）
ヘテロアリール−ＣＯ−ＣＨ２Ｗ　　　　　　（Ｉ）
［式中、ヘテロアリールは、全部で５〜１０環原子を有する単環または二環の芳香族基であり、その際、酸素、硫黄および窒素から選択された環原子が、１環当たりに０個、１個または２個存在していてもよく、かつ、全芳香族基中で１個または２個存在していてもよく、かつ、単環または二環の芳香族基は、それぞれ互いに独立して、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル、シアノ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭ（Ｍはアルカリ金属イオンであるかまたは半当量のアルカリ土類金属イオンである）、ＣＯＯ−（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）２、ＮＨ−（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）２、ＮＨ−（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）、フッ素、ＮＯ２、塩素、臭素、Ｃ１〜Ｃ４−フルオロアルキル、ＣＯＮＨ２またはＣＯＮＨ−（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）から選択された基によって、場合によっては１個、２個または３個が置換されていてもよく、
ＷはＣ（Ｏ）ＹＲ１ｎであり、この場合、Ｙは酸素であり、かつｎは１であるか、あるいはＹは窒素であり、かつｎは２であるか、あるいは
ＷはＣＮであり、かつ、
Ｒ１はそれぞれ互いに独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル、Ｃ４〜Ｃ１０−アリールまたはＣ５〜Ｃ１１−アリールアルキルであるか、あるいはＹが窒素である場合には、２個の基Ｒ１は一緒になってＣ３〜Ｃ５−アルキレンである］の化合物を、微生物および／またはそれらの細胞調製物の存在下で、２５℃の場合にｐＨ３〜１１を有する水の存在下で反応させ、かつ、この場合において、式（ＩＩ）
ヘテロアリール−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２Ｗ　　　（ＩＩ）
［式中、ヘテロアリールおよびＷは前記の意味を有する］の化合物が得られる。
【００１１】
　本発明の範囲内において、一般的であるかまたは好ましい範囲で挙げられ、かつ前記に示されたかまたは以降に記載されているすべての基の定義、パラメータおよび例は、その中で、すなわち、典型的な範囲と好ましい範囲との間で、任意に組み合わされてもよい。
【００１２】
　本発明の範囲内において、用語「エナンチオマー濃縮（enantiomer-enriched）」は、特にエナンチオ的に純粋な化合物、または一つのエナンチオマーが他のエナンチオマーよりも大きい割合で存在し、好ましくは、６０〜１００モル％の相対量、特に好ましくは８０〜１００モル％の相対量、極めて好ましくは９０〜１００モル％の相対量で存在する、エナンチオマーの任意の混合物を包含する。
【００１３】
　本発明の内容において、アルキルは、それぞれの場合において独立して、直鎖または環状、分枝または非分枝の、さらにＣ１〜Ｃ４−アルコキシ基によって置換されていてもよいアルキル基である。同様のことは、アルキル基の非芳香族部分にも適用される。
【００１４】
　たとえば、本発明の内容において、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルはメチル、エチル、２−エトキシエチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルであり、その一方でＣ１〜Ｃ８−アルキルは、これに加えて、たとえばｎ−ペンチル、シクロヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチルまたはイソオクチルである。
【００１５】
　フルオロアルキルは、それぞれの場合において独立して、直鎖、環状、分枝または非分枝のアルキル基であり、この場合、これらは１個、１個以上かまたは完全にフッ素原子によって置換されていてもよい。
【００１６】
　たとえば、Ｃ１〜Ｃ４−フルオロアルキルはトリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、ペンタフルオロエチル、ノナフルオロブチルおよびヘプタフルオロイソプロピルである。
【００１７】
　本発明の範囲内において、アリールは、好ましくは、たとえば、炭素環式芳香族基またはヘテロ芳香族基であり、この場合、これらは、０個、１個または２個のヘテロ原子を含有するが、しかしながら全ヘテロ環式基で少なくとも１個のヘテロ原子を含有し、この場合、１個または複数個のヘテロ原子は、窒素、硫黄および酸素から選択される。
【００１８】
　さらに、炭素環式芳香族基またはヘテロ芳香族基は、１環当たり、１個または２個の置換基によって置換されていてもよく、この場合、この置換基は、それぞれ互いに独立して、好ましくは、たとえばヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、シアノ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭ（Ｍはアルカリ金属イオンまたは半当量のアルカリ土類金属イオンの半当量である）、ＣＯＯ−（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）、Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）２、ＮＨ−（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）、フッ素、塩素、臭素、Ｃ１〜Ｃ４−フルオロアルキル、ＣＯＮＨ２またはＣＯＮＨ−（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）である。これは同様に、アリールアルキル基のアリール部分にも適用される。
【００１９】
　式（Ｉ）および（ＩＩ）において、ヘテロアリールは、好ましくは、全部で５または６環原子を有する単環芳香族基であり、その際、１個または２個の環原子は、酸素、硫黄および窒素の群から選択され、かつ、単環芳香族基は、それぞれ互いに独立して、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、シアノ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＮａ、ＣＯＯＫ、ＣＯＯ−メチル、ＣＯＯ−エチル、ＣＯＯ−ｔｅｒｔ−ブチル、ＣＯＯ−フェニル、メトキシ、エトキシ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルアミノ、エチルアミノ、フッ素、塩素、ＮＯ２、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、ヘプタフルオロイソプロピル、ＣＯＮＨ２およびＣＯＮＨ−メチルの群から選択された０個、１個または２個の基を含有する。
【００２０】
　ヘテロアリールは、特に好ましくは、２−または３−チオフェニル、２−または３−フラニル、２−または３−ピロリル、３−または４−ピラゾリル、１−、２−または４−チアゾリル、１−、２−または４−オキサゾリル、２−、４−または５−イミダゾリル、２−、３−または４−ピリジル、２−または３−ピラジニル、２−、４−または５−ピリミジル、３−、４−、５−または６−ピリダジニル、２−または３−インドリル、３−インダゾリル、インダゾリル、２−または３−ベンゾフラニル、２−または３−ベンゾチオフェニル、２−，３−または４−キノリニルまたはイソキノリニルであり、その際、これらの基はそれぞれ、０個、１個または２個、および好ましくは０個の、それぞれ互いに独立して、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソロピル、シアノ、メトキシ、エトキシ、フッ素、塩素、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチルおよびヘプタフルオロイソプロピルの群から選択された置換基を含有している。
【００２１】
　ヘテロアリールは、特に好ましくは２−チオフェニルである。
【００２２】
　Ｒ１は好ましくはＣＮまたはＣＯＯＲ１であり、その際、Ｒ１は水素またはメチルまたはエチルである。
【００２３】
　式（Ｉ）の好ましい化合物は、メチル３−オキソ−３−（２−チオフェニル）−プロパノエート、エチル３−オキソ−３−（２−チオフェニル）プロパノエート、メチル３−オキソ−３−（３−チオフェニル）−プロパノエート、エチル３−オキソ−３−（３−チオフェニル）プロパノエート、メチル３−オキソ−３−（２−フラニル）−プロパノエート、エチル３−オキソ−３−（２−フラニル）プロパノエート、メチル３−オキソ−３−（３−フラニル）−プロパノエート、エチル３−オキソ−３−（３−フラニル）プロパノエート、メチル３−オキソ−３−（２−ピリジニル）−プロパノエート、エチル３−オキソ−３−（２−ピリジニル）プロパノエート、メチル３−オキソ−３−（３−ピリジニル）−プロパノエート、エチル３−オキソ−３−（３−ピリジニル）プロパノエート、メチル３−オキソ−３−（４−ピリジニル）−プロパノエート、エチル３−オキソ−３−（４−ピリジニル）プロパノエート、３−オキソ−３−（２−チオフェニル）プロパノエート、３−オキソ−３−（３−チオフェニル）プロパノニトリル、３−オキソ−３−（２−フラニル）プロパノニトリル、３−オキソ−３−（３−フラニル）プロパノニトリル、３−オキソ−３−（２−ピリジニル）プロパノニトリル、３−オキソ−３−（３−ピリジニル）プロパノニトリル、３−オキソ−３−（４−ピリジニル）プロパノニトリルおよびＮ−（メチル）−３−オキソ−３−（２−チオフェニル）プロパンアミドである。
【００２４】
　好ましくは使用される微生物は、細菌、酵母または菌類であり、その際、野生型株および形質転換株の双方が含まれる。
【００２５】
　特に好ましい微生物は、酵母および菌類であり、極めて好ましこれらのものは、サッカロミセス属、ゲオトリクム属、カンジタ属、ピチア属、ハンゼヌラ属、ヨロビア属（Yorrowia）、リゾプス属、モルティエラ属、ムコール属、スポロトリクム属、ロドトルラ属、トリコデルア属、アスペルギルス属、ペニシリン属、プラリア属（Pullaria）、クンニングアメラ属およびクルブラリア属である。
【００２６】
　さらに好ましい生物は、サッカロミセスセレビジエ（Saccharomyces cereviseae）およびゲオトリクムカンジドウム（Geotrichum candidum）である。
【００２７】
　細胞調製物は、湿性状態でかまたは乾燥状態で使用することができる、精製されたかまたは未精製の溶解細胞であると理解され、たとえば、凍結乾燥物である。
【００２８】
　好ましくは、微生物を使用する。
【００２９】
　好ましい実施態様において、微生物は、式（Ｉ）の化合物の反応前に、複合栄養媒体または無機栄養媒体上で、前記微生物を成長させるための自体公知の培養方法を用いて、たとえば、振とうフラスコ中で、バッチ発酵、流加発酵または連続発酵で、波長６００ｎｍ（ＯＤ６００）で測定し、１〜８００、好ましくは５〜３００の光学密度までに培養することによって成長させ、かつ、好ましい場合には成長させた後に濃縮する。
【００３０】
　微生物は、たとえば、１０〜６０℃、好ましくは２０〜４０℃の温度で成長することができる。
【００３１】
　さらに、微生物が成長するｐＨは、たとえばｐＨ３〜ｐＨ９、好ましくはｐＨ４〜ｐＨ８、特に好ましくはｐＨ５〜ｐＨ７．５である。これに関連して、ｐＨ値は、本発明の範囲内において、それぞれ２５℃を基準とするものである。
【００３２】
　微生物は、好気性条件下または嫌気性条件下で成長させることができ、これらは好ましくは好気性条件下で成長する。
【００３３】
　反応のために、式（Ｉ）の化合物は、好ましい実施態様において、成長培地中に存在するか、または好ましい場合には前沈殿の後に等張液中に懸濁された微生物に添加される。
【００３４】
　これに関連して、等張液は、無機塩溶液または微生物のための栄養培地であってもよい。
【００３５】
　混合物は、好ましくは、たとえば、振とうまたは撹拌されてもよく、かつ好ましい場合には通気されてもよい。
【００３６】
　本発明による方法は、ｐＨ３〜ｐＨ１１、好ましくはｐＨ４〜ｐＨ１０および特に好ましくはｐＨ６〜ｐＨ８で実施されてもよい。
【００３７】
　さらに本発明による方法は、通常、１０〜６０℃、好ましくは１８〜４５℃の温度で実施される。
【００３８】
　反応の継続時間は、１０分〜９６時間、好ましくは６０分〜７２時間、および特に好ましくは２〜４８時間であってもよい。
【００３９】
　本発明による方法は、式（Ｉ）の化合物を１回、数回または連続的に添加する程度に実施することができる。
【００４０】
　細胞懸濁液中の式（Ｉ）および式（ＩＩ）の化合物の濃度の合計は、１〜９００ｍＭ、好ましくは２〜５００ｍＭ、特に好ましくは３〜２５０ｍＭである。
【００４１】
　反応媒体中での出発化合物の溶解性を増加させるために、好ましい実施態様において、補助物質、たとえば極性の水混和性の溶剤、たとえばグリセロール、ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシド、または他の補助物質、たとえばシクロデキストリンを添加することができる。
【００４２】
　さらに、本発明による方法は、有機溶剤の存在下で、たとえば、多相系、特に２相系中で実施することができる。
【００４３】
　この目的のための適した有機溶剤は、たとえば、水と不混和性であるかまたは多くとも１０体積％混和性の有機溶剤、たとえば脂肪族または芳香族の、好ましい場合には塩素化された溶剤、たとえば石油エーテル、ヘキサン、オクタン、ヘプタン、トルエン、キシレン異性体、クロロベンゼン、ジクロロメタンおよびシリコンオイルである。しばしば、出発化合物はそれ自体を有機相として使用することができる。
【００４４】
　式（ＩＩ）の化合物は、自体公知の方法で、たとえば、有機溶剤で抽出することによって単離されるか、あるいは、多相系が使用される場合には、有機相を分離除去することによって単離され、好ましい場合にはさらなる有機溶剤での抽出、その後の除去をおこなう。
【００４５】
　この目的に関して、好ましくは、溶剤、たとえばトルエン、酢酸エチル、ジクロロメタン、イソブチルケトン、シクロヘキサンおよびメチルシクロヘキサンを使用し、好ましくは酢酸エチルを使用する。抽出は、この場合において、連続的にかまたは非連続的に、抽出剤を供給することによっておこなわれてもよい。簡単な方法において、精製は、振とうしながら、前記に示された抽出剤を用いて抽出することによっておこなわれる。
【００４６】
　好ましい場合には、さらなる精製は、蒸留によっておこなわれてもよいか、あるいは、式（Ｉ）の化合物が室温で固体である場合には、再晶出によっておこなわれてもよい。
【００４７】
　本発明による方法は、多相で実施することができ、さらに生成物は、直接的に有機相を分別蒸留することによって単離されてもよい。
【００４８】
　本発明による方法において、式（ＩＩ）のエナンチオマー濃縮化合物が得られ、その際、ヘテロアリール基およびヒドロキシル基を有する立体異性炭素原子は、通常は（Ｓ）配置を示す。
【００４９】
　本発明による方法は、特に、メチル（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（２−チオフェニル）プロパノエート、エチル（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（２−チオフェニル）−プロパノエート、メチル（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（３−チオフェニル）プロパノエート、エチル（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（３−チオフェニル）プロパノエート、メチル（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（２−フラニル）プロパノエート、エチル（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（２−フラニル）プロパノエート、メチル（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（３−フラニル）プロパノエート、エチル（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（３−フラニル）プロパノエート、メチル（Ｓ）３−ヒドロキシ−３−（２−ピリジニル）プロパノエート、エチル（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（２−ピリジニル）プロパノエート、メチル（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（３−ピリジニル）プロパノエート、エチル（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（３−ピリジニル）プロパノエート、メチル（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（４−ピリジニル）プロパノエート、エチル（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（４−ピリジニル）プロパノエート、（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（２−チオフェニル）プロパノニトリル、（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（３−チオフェニル）プロパノニトリル、（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（２−フラニル）プロパノニトリル、（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（３−フラニル）プロパノニトリル、（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（２−ピリジニル）プロパノニトリル、（Ｓ）３−ヒドロキシ−３−（３−ピリジニル）プロパノニトリル、（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（４−ピリジニル）プロパノニトリルおよびＮ（メチル）−（Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（２−チオフェニル）プロパンアミドを製造するために特に適している。
【００５０】
　また、本発明による方法は、特に、式（ＶＩ）
ヘテロアリール−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ２Ｒ３　　　（ＶＩ）
［式中、ヘテロアリールは、式（Ｉ）で示された意味を有し、かつ
Ｒ２およびＲ３は、互いに独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル、Ｃ４〜Ｃ１４−アリールまたはＣ５〜Ｃ１５−アリールアルキルであるか、あるいは２個の基Ｒ２およびＲ３が一緒になってＣ３〜Ｃ１２−アルキレンである］のエナンチオマー濃縮化合物を製造するための方法において、特に工程ａ）として適しており、この場合、この方法は、
工程ａ）で、式（Ｉ）の化合物を、前記に示したように、式（ＩＩ）
ヘテロアリール−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−ＣＯ−ＣＨ２Ｗ　　　（ＩＩ）
［式中、それぞれの場合において、ヘテロアリールおよびＷは式（Ｉ）に示した意味を有する］のエナンチオマー濃縮化合物に変換し、かつ、
工程ｂ）で、
ｉ）ＷがＣＯＯＲ１であり、かつＲ１が水素、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル、Ｃ４〜Ｃ１０−アリールまたはＣ５〜Ｃ１１−アリールアルキルである場合には、式（ＩＩ）のエナンチオマー濃縮化合物を、式（ＩＩＩ）
ＮＨＲ２Ｒ３　　　（ＩＩＩ）
［式中、Ｒ２およびＲ３は式（ＶＩ）に示した意味を有する］のアミンと反応させることによって、式（ＩＶ）
ヘテロアリール−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＲ２Ｒ３　　　（ＩＶ）
［式中、ヘテロアリール、Ｒ２およびＲ３は前記に示した意味を有する］のエナンチオマー濃縮化合物を生じるか、あるいは、
ｉｉ）ＷがＣＯＮ（Ｒ１）２であり、かつＲ１がそれぞれ互いに独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル、Ｃ４〜Ｃ１０−アリールまたはＣ５〜Ｃ１１−アリールアルキルであるか、あるいは２個のＲ１基は一緒になってＣ３〜Ｃ５−アルキレンである場合には、式（ＩＩ）のエナンチオマー濃縮化合物を、好ましい場合には式（ＩＩＩ）のアミンと反応させることによって、式（ＩＶ）のエナンチオマー濃縮化合物に変換し、かつ、
ｉｉｉ）ＷがＣＮである場合には、式（ＩＩ）の化合物を直接的に、アミノ分解／加水分解によって、式（ＩＶ）の化合物に変換するか、あるいは、最初に、加水分解、部分加水分解または混合されたアルコール分解／加水分解によって、式（Ｖ）
ヘテロアリール−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−ＣＯ−Ｒ４　　　（Ｖ）
［式中、ヘテロアリールは式（Ｉ）に示した意味を有し、かつ、
Ｒ４はＯＲ１またはＮＨ２であり、その際、Ｒ１は前記に示した意味を有する］
の化合物に変換し、その後に、ｉ）と同様にアミド化によってか、または適切な場合にはｉｉ）と同様に、式（ＩＶ）のエナンチオマー濃縮化合物に変換し、
工程ｃ）で、
式（ＩＶ）のエナンチオマー濃縮化合物を、還元によって、前記意味を有する式（ＶＩ）エナンチオマー濃縮化合物に変換する。
【００５１】
　式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）および（ＶＩ）において、Ｒ２およびＲ３は、特に好ましくは、それぞれ互いに独立して、水素、メチル、エチル、イソプロピル、フェニルまたはベンジルである。
【００５２】
　式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）および（ＶＩ）において、ＮＲ１Ｒ２は、その全体で、殊に好ましくはメチルアミノ、エチルアミノおよびイソプロピルアミノである。
【００５３】
　式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）および（ＶＩ）において、ＮＲ１Ｒ２は、その全体で、特に好ましくはメチルアミノである。
【００５４】
　工程ａ）、ｂ）およびｃ）を含む本発明による方法のために使用することができる式（Ｉ）の化合物は文献から公知であるか、あるいは文献と同様にして製造することができる。
【００５５】
　ＷがＣＮでない式（Ｉ）の化合物は、好ましくは、式（ＶＩＩ）
ヘテロアリール−ＣＯ−ＣＨ３　　　（ＶＩＩ）
［式中、ヘテロアリールは式（Ｉ）に挙げられた意味および好ましい範囲を示す］の化合物と、
式（ＶＩＩＩ）
Ｒ１−Ｏ−Ｗ　　　（ＶＩＩＩ）
［式中、Ｒ１およびＷは、式（Ｉ）で示された意味を有し、その際、Ｗは塩基の存在下でＣＮではない］とを反応させることによって得られる。
【００５６】
　２−アセチルチオフェンと、ジメチルカルボネート、ジエチルカルボネート、ジフェニルカルボネートまたはジベンジルカルボネート、メチルＮ−メチルカルバメート、エチルＮ−メチルカルバメート、メチルＮ，Ｎ−ジメチルカルバメートまたはエチルＮ，Ｎ−ジメチルカルバメートとの反応が、例として挙げられてもよい。
【００５７】
　このような反応は、たとえば、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ．１９９８、３９、４９９５中で記載されており、かつ、たとえば、２−アセチルチオフェンとメチルＮ−メチルカルバメートまたはエチルＮ−メチルカルバメートとの反応によってＮ−（メチル）−３−オキソ−３−（２−チオフェニル）プロパンアミドを得るのと同様の方法を適用することができる。
【００５８】
　さらに、式（Ｉａ）
ヘテロアリール−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨＲ２　　　（Ｉａ）
の化合物は、式（ＶＩＩ）の化合物と式（ＩＸ）
Ｒ２−ＮＣＯ　　　（ＩＸ）
の化合物とを、塩基の存在下で反応させることによって得ることが可能である。
【００５９】
　本発明による方法の工程ｂ）において、式（ＩＩ）のエナンチオマー濃縮化合物を、ｉ）、ｉｉ）またはｉｉｉ）による自体公知の方法で、式（ＩＶ）のエナンチオマー濃縮化合物に変換する。
【００６０】
　Ｈｏｕｂｅｎ　Ｗｅｙｌ“Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｒ　Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉｅ［Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｏｒｇａｎｉｃ　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ］”、第４版、第Ｅ５巻、９４１−１０１０”では、カルボン酸、カルボン酸エステルまたは他のカルボキサミドからのカルボキサミドの製造方法が記載されている。
【００６１】
　式（ＩＩＩ）の液体または気体アミンが室温で使用される場合には、好ましくは、アミンの溶液が使用される。たとえば、メチルアミンの場合には、有利には、水、メタノールまたはエタノール中のメチルアミンから成る溶液を、ＷがＣＯＯＲ１である式（ＩＩ）の化合物の反応のために使用する。カップリング剤、たとえば２−ハロピリジニウム塩または２−ハロ−１，３−トリアゾリウム塩の存在下、または酸カチオンエンハンサーの存在下での式（ＩＩ）のアミンの反応は、たとえば、式（ＩＩ）の遊離カルボン酸の式（ＩＶ）のアミンへの変換のために適している。
【００６２】
　工程ｂ）にしたがって、式（ＩＶ）のエナンチオマー濃縮化合物を、その後に、式（ＩＩ）のエナンチオマー濃縮化合物から得る。
【００６３】
　その後に、式（ＩＶ）の化合物を還元し、式（ＶＩ）の化合物を得る。相当するアミンを生じるカルボキサミドの還元は公知であり、かつ、Ｈｏｕｂｅｎ　Ｗｅｙｌ“Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｒ　Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉｅ”、第４版、第Ｅ１６ｄ巻、第９８７頁〜第１００３頁に記載されている。
【００６４】
　式（ＶＩ）の化合物と、水素化硼素または水素化アルミニウムの錯体、たとえば、水素化リチウムアルミニウム、Ｒｅｄ−Ａｌ（Ｒ）（ナトリウム　ビス（２−メトキシエトキシ）ジヒドロアルミネート）またはナトリウムボロヒドリドとの反応が好ましい。
【００６５】
　式（ＶＩ）の化合物と水素化リチウムアルミニウムとの反応が特に好ましい。
【００６６】
　還元は、好ましくは、室温〜１５０℃の温度で、特に好ましくは５０〜１１０℃の温度で実施される。還元は通常は、溶剤としてのエーテル、好ましくは環状エーテル、たとえばテトラヒドロフランまたはジオキサン中で実施されるのと同様に、Ｒｅｄ−Ａｌ（Ｒ）を用いての反応もまた、溶剤としてのトルエン中で実施することができる。
【００６７】
　式（ＶＩ）のエナンチオマー濃縮化合物は、本発明による方法で得られる。
【００６８】
　以下に、式（ＶＩ）の好ましい化合物を挙げることができる：
（１Ｓ）−３−（メチルアミノ）−１−（２−チオフェニル）−１−プロパノール、（１Ｒ）−３−（メチルアミノ）−１−（２−チオ−フェニル）−１−プロパノール、（１Ｓ）−３−（ジメチルアミノ）−１−（２−チオフェニル）−１−プロパノールおよび（１Ｒ）−３−（ジメチルアミノ）−１−（２−チオフェニル）−１−プロパノール、特に好ましくは、（１Ｓ）−３−（メチルアミノ）−１−（２−チオフェニル）−１−プロパノールである。
【００６９】
　本発明によって製造することができる式（ＶＩ）のエナンチオマー濃縮化合物は、特に、式（Ｘ）
ヘテロアリール−ＣＨ（ＯＲ６）−ＣＨ２−ＣＨ２ＮＲ２Ｒ３　　　（Ｘ）
［式中、ヘテロアリール、Ｒ２およびＲ３は、式（Ｉ）で示された意味を有し、
Ｒ６は、全部ではないが、それぞれ互いに独立して、シアノ、ＣＯ−（Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル）、Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル）、（Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル）、フッ素、塩素、臭素またはＣ１〜Ｃ１２−フルオロアルキルの群から選択された１個またはそれ以上の置換基によって置換されていてもよいフェニルまたはナフチルである］のエナンチオマー濃縮化合物の製造に適しており、この場合、好ましくはＲ６はナフチルである。
【００７０】
　式（Ｘ）の好ましい化合物は、
（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（１−ナフタレニルオキシ）−３−（２−チエニル）プロピルアミンおよび（Ｒ）−Ｎ−メチル−３−（１−ナフタレニルオキシ）−３−（２−チエニル）プロピルアミンおよびそのアンモニウム塩である。
【００７１】
　したがって、本発明は、
工程ｄ）として、塩基の存在下で、式（ＶＩ）のエナンチオマー濃縮化合物と、式（ＸＩ）の化合物とを反応させることによって、式（Ｘ）のエナンチオマー濃縮化合物を得る方法を包含する。
式（ＸＩ）
Ｒ６−Ｈａｌ　　　（ＸＩ）
において、
Ｒ６は、式（Ｘ）で示された意味を有し、かつ
Ｈａｌはフッ素、塩素、臭素またはヨウ素であり、好ましくはフッ素である。
【００７２】
　１−フルオロナフタレンおよび４−クロロベンゾトリフルオリドは、好ましくは式（ＸＩ）の化合物として使用される。
【００７３】
　使用することができる塩基は、アルコール官能基で、式（ＶＩ）の化合物を少なくとも部分的に脱プロトン化することができる塩基である。
【００７４】
　これらの塩基は、たとえば、アルカリ金属土類またはアルカリ金属水素化物、水酸化物、アミド、アルコレートまたはカルボネート、たとえば、水素化ナトリウム、ナトリウムアミド、リチウムジエチルアミド、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、ナトリウムヒドロキシドおよびカリウムヒドロキシドを含む。
【００７５】
　本発明によって製造することができる化合物は、特に、医薬での活性化合物として、たとえば特には、セロトニンまたはノルアドレナリン取り込みのインヒビターとしてか、またはこれらの中間体としての使用に特に適している。
【００７６】
　本発明による方法は、エナンチマー濃縮３−ヘテロアリール−３−ヒドロキシプロパン酸誘導体および３−ヘテロアリール−１−アミノプロパン−３−オール、さらにはその二次生成物を、工業的規模で高い全収率で、高いエナンチオマー過剰率で、かつ高い純度で合成するために、簡単に入手可能な出発化合物を使用することができることが特に有利である。
【実施例】
【００７７】
　例１および２：
種々のｂａｋｅｒ’ｓ酵母菌　サッカロミセス　セレビジエの菌株を用いてのメチル−３−オキソ−（２−チオフェニル）プロパノエートの還元
　酵母菌株（Saccharomyces cereviseae NG247, Uniferm GmbH & Co KG, Monheim; Saccharomyces cereviseae Y 278, Deutsche Hefe Werke［German Yeast Works］GmbH & Co oHG, Hamburg）を、一晩に亘って、２８℃で、振とうさせながら（２００ｒｐｍ）、２５ｍｌのＹＭ媒体（イーストエクストラクト　３．０ｇ／ｌ、マルトエクストラクト　３．０ｇ／ｌ、ペプトン　５．０ｇ／ｌ；グルコース　１０．０ｇ／ｌ）を含有する１００ｍｌのエルレンマイヤーフラスコ中で成長させた。
【００７８】
　それぞれ２個の酵母菌株を、２８℃で振とうさせながら（２００ｒｐｍ）、１２ｍｌのプレカルチャーによって予め接種された２００ｍｌのＹＭ培地を含む３個の１ｌのエルレンマイヤーフラスコ中でインキュベートした。その成長を、６００ｎｍ（ＯＤ６００）での光学密度を測定することによってモニタリングした。６〜７時間後に、培養は　ＯＤ６００　３に到達したカルチャーを、遠心分離（１５分、８０００×ｇ）によってハーベストし、冷蔵庫で４℃で保存した。反応のために、１Ｍリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７）　２５０μｌおよび１Ｍメチル３−オキソ−（２−チオフェニル）プロパノエート　２５０μｌを５ｍｌの細胞ペレットに添加し、その全てについて１３ｍｌのスクリューキャップガラスチューブ中で振とうさせた。反応混合物　３００μｌを規則的なインターバルで除去し、かつ酢酸エチルまたはトルエン　３００μｌで抽出した。相の分離のための連続的な遠心分離（５分、５０００×ｇ）の後に、有機相をキラルガスクロマトグラフィーによって分析した。結果を第１表に示した。
【００７９】
【表１】
2004113245.tif 000002
【００８０】
　例３：
サッカロミセス　セレビジエＹ２７８を用いての３−（２−チオフェニル）−３−オキソプロパノ−１−ニトリルの還元
　酵母細胞を成長させ、かつ例１および２で示したように反応させた。結果を第２表に示した。
【００８１】
【表２】
2004113245.tif 000003
【００８２】
　例４および５：
ゲオトリクムカンジドウムを用いてのメチル３−（２−チオフェニル）−３−オキソプロパノエートの還元
　ＹＭ培地　２００ｍｌを、１ｌのエルレンマイヤーフラスコ中で、かつ第１プレカルチャーとして、菌株ゲオトリクム　カンジドウム　ＡＴＣＣ３４６１４で接種し、かつフラスコを、２８℃で１８時間に亘って撹拌しながらインキュベートした。第２プレカルチャーとして、それぞれ２００ｍｌのＧＣ培地（ＫＨ２ＰＯ４　１１．１８ｇ／ｌ；Ｋ２ＨＰＯ４　３．１２ｇ／ｌ；グリセロール　３０．０ｇ／ｌ；イーストエクストラクト　１０．０ｇ／ｌ；ポリペプトン　５．０ｇ／ｌ）を含む２個の１ｌエルレンマイヤーフラスコを、それぞれ１０ｍｌの第１プレカルチャーで接種し、同様に２８℃で１８時間に亘って振とうさせた。
【００８３】
　メインカルチャーとして、１０ｌの発酵物を４．６ｌのＧＣ培地で装填し、かつ、４００ｍｌの第２プレカルチャーで接種した。カルチャーを、２８℃で、１０ｌ／分の通気速度で、８００ｒｐｍの撹拌速度で成長させた。１０時間の後に、発酵物をハーベストした。細胞を、１５分間に亘って６０００×ｇでの遠心分離によって沈殿させ、１００ｍＭリン酸カリウムバッファーｐＨ６．４中に入れ、かつ冷蔵庫中で、４℃で保存した。
【００８４】
　グルコース　１．８ｇ、１Ｍ　ＰＰバッファー（ｐＨ７．３）　９ｍｌおよびメチル３−（２−チオフェニル）−３−オキソ−プロパノエート　７１μｌ（最終濃度２０ｍＭ）または１４３μｌ（最終濃度４０ｍＭ）を、１６ｇの湿性バイオマス中に添加し、かつ、この全部を、マグネットステーラーを用いて、２５ｍｌのショットボトル中で攪拌した。３００μｌの反応混合物を、規則正しいインターバルで除去し、かつ、３００μｌの酢酸エチルまたはトルエンで抽出し、かつ有機相をガスクロマトグラフィーによって分析した。結果を第３表に示した。
【００８５】
【表３】
2004113245.tif 000004
【００８６】
　例６〜１２
サッカロミセス　セレビジエを用いての種々のβ−ケトエステルの還元
　菌株サッカロミセス　セレビジエ　ＮＧ２４７の第１プレカルチャーを、２８℃で一晩に亘って、振とうしながら、１ｌのエルレンマイヤーフラスコ中の１００ｍｌのＹＭ培地中で成長させた。メインカルチャーとして、２００ｍｌのＹＭ培地を装填した、３個の１ｌエルレンマイヤーフラスコを、それぞれ１０ｍｌのプレカルチャーで接種し、かつ２８℃で振とうさせた。６時間の後に、カルチャーは、６００ｎｍ（ＯＤ６００）で測定して７〜８の光学密度に達した。細胞を、遠心分離によってハーベストし（１５分、６０００×ｇ）、かつ、１０倍濃縮された細胞懸濁液として、１００ｍＭ　ＰＰバッファー（ｐＨ７）＋３％（ｗ／ｖ）グルコース中に懸濁した。試験物質の１Ｍエタノール溶液を調製した。反応混合物中で、細胞懸濁液を、それぞれ、試験物質に対して２０ｍＭに調製し、かつ振とうしながら３０℃でインキュベートした、反応混合物　３００μｌを規則的なインターバルで抜き出し、かつ酢酸エチルまたはトルエン　３００μｌで抽出し、かつ有機相をガスクロマトグラフィーによって分析した。結果は第４表に示した。
【００８７】
【表４】
2004113245.tif 000005
【００８８】
　例１３
メチル１−オキソ−（２−チオフェニル）プロパノエートの製造
　ジメチルカルボネート　５１０ｍｌおよびトルエン　１５００ｍｌを、２ｌフラスコ中で１００℃に加熱し、かつ、５１０ｍｌのジメチルカルボネート中の２−アセチルチオフェン　２５７ｇの溶液を、その後に４時間に亘って滴加した。反応中で形成されたメタノールを、共沸混合物として留去した。１２０ｍｌの濃硫酸を、氷９００ｇ中で、４ｌのフラスコに装入し、かつ冷却された反応混合物を、４０℃を超えない程度に添加した。その後に混合物を撹拌し、かつｐＨ１に調製した。相を分離し、かつ有機相を硫酸ナトリウム水溶液で振とうすることによって３回に亘って抽出し、その後に真空下で濃縮した。粗生成物を真空蒸留し、透明で、かすかに黄色がかった液体として、メチル３−オキソ−（２−チオフェニル）プロパノエート　２７８ｇが得られた（ＧＣによる純度９８％、理論値の７４％）。
【００８９】
　例１４
Ｎ−メチル−（３Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（２−チエニル）プロパンアミドの製造
　例１中に記載された試験からの、メチル（３Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（２−チエニル）プロパノエート　２３ｇおよび（欠損）を、予め装入し、かつ、２モルのメチルアミンメタノール溶液　１３０ｍｌを添加した。この混合物を、６０℃で４時間に亘って撹拌し、冷却し、その後に真空下で濃縮した。この方法で２４ｇ（純度８７％、理論値の９０％）が得られた。粗生成物は、次の工程のために使用されるか、あるいは塩化メチレンおよびヘキサンから再晶出された。これによって、白色の結晶の形で、Ｎ−メチル−（３Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（２−チエニル）プロパンアミド　１８ｇ（理論値の７５％）が得られた。
【００９０】
　例１５
（１Ｓ）−３−（メチルアミノ）−１−（２−チエニル）−１−プロパノールの製造
　乾燥テトラヒドロフラン　３５０ｍｌを、水素化リチウムアルミニウム　１０ｇと一緒に装入し、かつ還流しながら加熱した。同時に、テトラヒドロフラン　１５０ｇ中に溶解された、例１４からのＮ−メチル−（３Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（２−チエニル）プロパンアミド　１７ｇの滴加を開始した。この滴加が完了した後に、混合物を引き続いて一晩に亘って還流下で撹拌した。その後に混合物を室温に冷却し、水２００ｍｌを注意深く滴加した。１０％水素化ナトリウム溶液　１３５ｍｌを滴加し、溶液を濾過した。溶剤を真空下で除去した。３７０ｍｌの１Ｎ水素化ナトリウム溶液を、粗溶液に添加し、かつ全部を３回に亘って、それぞれ３７０ｍｌのトルエンで抽出した。有機相を組み合わせて、揮発性成分を真空下で除去し、これによって、７６ｇが得られた（純度８４％、理論値の７０％）。
【００９１】
　例１６
（１Ｓ）−３−（メチルアミノ）−１−（２−チエニル）−１−プロパノールの精製
　例１５からの生成物　１５ｇを、水１５０ｍｌ中で沸騰させ溶解し、その後に、５ｇの活性炭を添加し、混合物を、還流下でさらに１時間に亘って撹拌した。懸濁液を加熱下で濾過した。濾液をそれぞれ１００ｍｌのジクロロメタンで３回に亘って抽出した。組み合わせた有機相を蒸発させ、かつ残留物を、沸騰させることで、５０ｍｌのシクロヘキサン中に溶解し、その後に、冷却しながら、６００ｍｌの石油エーテルを用いて晶出させた。結晶を濾別し、少量の石油エーテルで洗浄し、かつ乾燥させた。これによって、（１Ｓ）−３−（メチルアミノ）−１−（２−チエニル）−１−プロパノール　１２ｇが得られた（純度９８％、収率９３％）。