(57)【要約】【課題】タンパク質非酵素的糖化抑制作用を促進し、糖尿病又は糖尿病の合併症を予防・治療するのに有効なタンパク質非酵素的糖化抑制剤を提供する。【解決手段】沙棘由来でタンパク質非酵素的糖化抑制活性を示す物質を有効成分として含有するタンパク質非酵素的糖化抑制剤。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
沙棘由来でタンパク質非酵素的糖化抑制活性を示す物質を有効成分として含有するタンパク質非酵素的糖化抑制剤。
【請求項２】
沙棘葉部の抽出物又はその処理物を有効成分として含有するタンパク質非酵素的糖化抑制剤。
【請求項３】
糖尿病又は糖尿病合併症の治療に用いる請求項１又は２に記載のタンパク質非酵素的糖化抑制剤。
【請求項４】
食品、チューインガム又は飲料に添加するための請求項１〜３のいずれか１項に記載のタンパク質非酵素的糖化抑制剤。
【請求項５】
フラボノイド配糖体を含む請求項１〜４のいずれか１項に記載のタンパク質非酵素的糖化抑制剤。
【請求項６】
沙棘由来でタンパク質非酵素的糖化抑制活性を示す物質を有効成分として含有する糖尿病又は糖尿病合併症予防・治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、沙棘由来の有効成分を含有するタンパク質非酵素的糖化抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
糖尿病による高血糖が原因となり、神経障害、白内障、腎障害、網膜症、関節硬化症、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性壊疽等の種々の合併症を発症することがある。合併症は主に、患者の血液中のタンパク質が糖と結合する非酵素的糖化が原因とされる血管障害と、糖が代謝されるときに生じるソルビトールの蓄積によって細胞が破壊されることが原因とされる神経障害とに分かれるが、特に血管障害の方は、患者の生命に関わる場合や、長期に亘り患者の生活の質を大きく損なう場合が多い。このため、血管障害の予防・治療は糖尿病又は糖尿病合併症治療上の重要な課題であり、非酵素的糖化タンパクと疾病との関係も詳細に研究されている（例えば非特許文献１〜７参照）。
【０００３】
一方、沙棘（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ）は、主に中国黄河流域及びロシア、中東の乾燥地帯に分布するグミ科の植物であり、その果実や葉は、古くから皮膚潰瘍疾病や、胃、肝臓、呼吸器系慢性疾患の民間薬として利用されており、我が国においても、沙棘の抽出液を原料として利用した浴剤組成物や化粧品に特許が付与されている（例えば特許文献１及び２）。
【０００４】
沙棘の主な成分として、これまでに多くのフラボノイド配糖体が得られているが、フラボノイド配糖体と薬理活性との関係については、ほとんど解明されていないのが実情である。
【０００５】
【非特許文献１】
「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ」、第６７巻、１９７５年、ｐ．１０３
【非特許文献２】
「Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、第２５４巻、１９７９年、ｐ．７０２
【非特許文献３】
「Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、米国、第７８巻、１９８２年、ｐ．２３９３
【非特許文献４】
「Ｄｉａｂｅｔｅｓ」、第３１巻、１９８２年、ｐ．２８３
【非特許文献５】
「Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、米国、第７５巻、１９７８年、ｐ．２９１８
【非特許文献６】
「Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ」、第３７巻、１９８４年、ｐ．８４１
【非特許文献７】
「Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、第２１巻、１９８４年、ｐ．２
【特許文献１】
特許第２８１１７１１号公報
【特許文献２】
特許第２５１５５２５号公報
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、沙棘由来のタンパク質非酵素的糖化抑制剤を提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は、以下の発明を包含する。
（１）  沙棘由来でタンパク質非酵素的糖化抑制活性を示す物質を有効成分として含有するタンパク質非酵素的糖化抑制剤。
（２）  沙棘葉部の抽出物又はその処理物を有効成分として含有するタンパク質非酵素的糖化抑制剤。
（３）  糖尿病又は糖尿病合併症の治療に用いる上記（１）又は（２）記載のタンパク質非酵素的糖化抑制剤。
（４）  食品、チューインガム又は飲料に添加するための上記（１）〜（３）のいずれかに記載のタンパク質非酵素的糖化抑制剤。
（５）  フラボノイド配糖体を含む上記（１）〜（４）のいずれかに記載のタンパク質非酵素的糖化抑制剤。
（６）  沙棘由来でタンパク質非酵素的糖化抑制活性を示す物質を有効成分として含有する糖尿病又は糖尿病合併症予防・治療剤。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明は、沙棘由来でタンパク質非酵素的糖化抑制活性を示す物質を有効成分として含有するタンパク質非酵素的糖化抑制剤に関する。
【０００９】
沙棘（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ）は、主に中国黄河流域に分布するグミ科の植物である。沙棘としては、従来より民間薬等に使用されているものを用いることができる。本発明では、特に、沙棘の葉部を用いることが好ましい。
【００１０】
本発明のタンパク質非酵素的糖化抑制剤は、沙棘由来でタンパク質非酵素的糖化抑制活性を示す物質を含有すればよい。沙棘は、破砕、粉砕等により粉末化処理したものを用いてもよいが、抽出物又はその処理物として用いることが好ましい。
【００１１】
抽出溶媒としては、水；低級アルコール類、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール；エーテル類、例えばエチルエーテル、ジオキサン；ケトン類、例えばアセトン等が挙げられるが、水、エタノール、又は水−エタノール混合溶媒が好ましい。
通常、沙棘１ｋｇ当り抽出溶媒５〜２５Ｌを使用する。
【００１２】
抽出温度は、特に制限はなく、溶媒の融点ないし溶媒の沸点の範囲内であり、超臨界抽出をしてもよい。超臨界抽出は、好ましくは炭酸ガスを主溶媒とし、エントレーナーとしてメタノール、エタノール等のアルコール類を添加して行われる。また、抽出は、通常常圧下で行うが、加圧下又は減圧下で行ってもよい。抽出時間は、抽出温度等により異なり、通常５分間〜１日間である。
【００１３】
前記のようにして得られた抽出液を、布、ステンレスフィルター、濾紙等で濾過して不純物等を取り除くことで、目的の抽出液を得ることができる。また、濾過後の抽出液に、スプレードライ処理、フリーズドライ処理、超臨界処理等の処理を施してもよい。
【００１４】
このようにして得られる抽出物は、そのまま本発明のタンパク質非酵素的糖化抑制剤の有効成分として用いることができる。また、当該抽出物をイオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、透析等の各種精製手段により処理し、さらに活性を高めた処理物として用いてもよい。
【００１５】
本発明者らは、さらに、沙棘抽出物を精製することにより、トリテルペンであるウルソール酸（ＶＩＩＩ）、並びに以下に示す式Ｉ、Ｖ、ＶＩ及びＶＩＩで表される既知の化合物及び式ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶで表される３種の新規化合物を含むフラボノイド配糖体を単離・構造決定し、式ＩＩ、ＩＩＩ又はＶＩで表される新規化合物を含む、式Ｉ〜ＶＩＩで表される化合物が非酵素的糖化抑制活性を有することを明らかにした。
【００１６】
式Ｉ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ及びＶＩＩＩ（既知の化合物）：
【化１】
2004217544.tif 000002
【００１７】
式ＩＩ又はＩＶ（新規化合物）：
【化２】
2004217544.tif 000003
【００１８】
式ＩＩＩ（新規化合物）：
【化３】
2004217544.tif 000004
【００１９】
また、本発明のタンパク質非酵素的糖化抑制剤は、沙棘葉部の抽出物・処理物を公知の医薬用担体と組合せて製剤化することができる。投与形態としては、特に制限はなく、必要に応じ適宜選択されるが、一般には錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤等の経口剤、又は注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、貼付剤、軟膏剤等の非経口剤として使用される。
【００２０】
本発明のタンパク質非酵素的糖化抑制剤の投与量は、患者の年令、体重、疾患の程度、投与経路により異なるが、経口投与では、沙棘葉部の抽出物乾燥粉末として、通常１日１０〜３０００ｍｇであり、投与回数は、通常、経口投与では１日１〜３回である。
経口剤は、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩類等の賦形剤を用いて常法に従って製造される。
【００２１】
この種の製剤には、適宜前記賦形剤の他に、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を使用することができる。
【００２２】
結合剤の具体例としては、結晶セルロース、結晶セルロース・カルメロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、カルメロースナトリウム、エチルセルロース、カルボキシメチルエチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、デキストリン、アルファー化デンプン、部分アルファー化デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、プルラン、ポリビニルピロリドン、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＲＳ、メタクリル酸コポリマーＬ、メタクリル酸コポリマー、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、ポリビニルアルコール、アラビアゴム、アラビアゴム末、寒天、ゼラチン、白色セラック、トラガント、精製白糖、マクロゴールが挙げられる。
【００２３】
崩壊剤の具体例としては、結晶セルロース、メチルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロース、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、部分アルファー化デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルスターチナトリウム、トラガントが挙げられる。
【００２４】
界面活性剤の具体例としては、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸ポリオキシル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、セスキオレイン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、モノステアリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、ポリソルベート、モノステアリン酸グリセリン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウロマクロゴールが挙げられる。
【００２５】
滑沢剤の具体例としては、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、含水二酸化ケイ素、軽質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、乾燥水酸化アルミニウムゲル、タルク、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、リン酸水素カルシウム、無水リン酸水素カルシウム、ショ糖脂肪酸エステル、ロウ類、水素添加植物油、ポリエチレングリコールが挙げられる。
【００２６】
流動性促進剤の具体例としては、含水二酸化ケイ素、軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウムが挙げられる。
【００２７】
また、本発明のタンパク質非酵素的糖化抑制剤は、液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤として投与する場合には、矯味矯臭剤、着色剤を含有してもよい。
【００２８】
本発明のタンパク質非酵素的糖化抑制剤は、食品、チューインガム、飲料等に添加して、いわゆる特定保健用食品（例えば、糖尿病・糖尿病合併症予防食品）等とすることもできる。
【００２９】
本発明のタンパク質非酵素的糖化抑制剤の製造原料である沙棘は現在までに民間薬、化粧品等に供されており、安全性は確立されている。
【００３０】
【実施例】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３１】
（実施例１）沙棘葉部抽出物のタンパク質非酵素的糖化抑制作用の測定
沙棘葉部抽出物の調製
中国甘粛省より入手した沙棘葉部２ｋｇを粉砕後、超音波条件下、エタノール２３Ｌを用いて３０分間抽出を行った。グラスフィルターにより抽出液をろ過した後、ろ液を減圧濃縮してエタノール抽出物１４３ｇを得た。
【００３２】
このエタノール抽出物１４３ｇを、ＨＰ−２０カラムクロマトグラフィーに付し、４０％メタノール、６０％メタノール、７０％メタノール、１００％メタノール、アセトンにて順次溶出し画分１〜７に分画した（図１）。
【００３３】
タンパク質非酵素的糖化抑制作用の検討
実施例１で得られた画分１〜７について、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（和光純薬社製０１３−０７４９２）の非酵素的糖化後期反応生成物（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ：ＡＧＥｓ）形成に対する阻害率を測定し、沙棘葉部抽出物のタンパク質非酵素的糖化反応に対する阻害を検討した。
【００３４】
陽性コントロールとしてはクエルセチン（ＳＩＧＭＡ社製Ｑ１２５）を用いて実験を行った。
【００３５】
まず、ＢＳＡをリン酸緩衝液（ＳＩＧＭＡ社製Ｄ−１４０８）にて５０ｍｇ／ｍｌの濃度に調製し，これをＡ液とした。次にＤ（−）リボース（ＳＩＧＭＡ社製Ｒ７５００）をリン酸緩衝液にて０．５Ｍに調製し，これをＢ液とした。このＡ液とＢ液を等量ずつ混和した液（Ｃ液）を調製しておいた。次に９６穴プレートに１０ｍＭ、１ｍＭ、０．１ｍＭに調製した各サンプル１ｍＬを注入し，それぞれに上記Ｃ液１５０ｍＬを添加した。添加後、直ちに蛍光Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ  ＥＺＳ−ＦＬ（旭テクノグラス社製）を用いて、各混合液の吸光度を励起波長３５５ｎｍ、測定波長４５０ｎｍにて測定し、測定値を０時間反応液の吸光度とした。
【００３６】
次に、この９６穴プレートをモイストチャンバー内にて３７℃で４日間インキュベートした。インキュベート後に生成された蛍光物質の吸光度を励起波長３５５ｎｍ、測定波長４５０ｎｍにて測定し、測定値をサンプルの反応液の吸光度とした。なお、各サンプルは、終濃度６６μＭ、６．６μＭ、０．６μＭとなるようにジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。
【００３７】
各サンプルの測定値より、下記式を用いて各サンプルのＡＧＥｓ形成に対する阻害率を算出した。
阻害率（％）＝［１−（サンプルの反応液の吸光度−０時間反応液の吸光度）／（コントロール−ブランク）］×１００
式中、コントロールはサンプルを含まないＤＭＳＯのインキュベート後の吸光度であり、ブランクはサンプルを含まないＤＭＳＯの０時間反応時の吸光度である。
【００３８】
各サンプルの阻害率を図２に示す。画分１〜７のいずれも、ＡＧＥｓ形成に対する阻害を示したことから、沙棘葉部の抽出物がタンパク質非酵素的糖化抑制作用を有していることがわかった。
【００３９】
（実施例２）化合物Ｉ〜ＶＩＩＩの精製
以下のカラムを用いて、実施例１で得られた画分１〜７をさらに逆相高速液体クロマトグラフィー（ｒｐＨＰＬＣ）に付した。
Ａ：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ  ２０Φ  ｘ  ２５０  ｍｍ
Ｂ：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＭＧ  ２０Φ  ｘ  ２５０  ｍｍ
Ｃ：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｐｈ  １０Φ  ｘ  ２５０  ｍｍ
Ｄ：Ｄｅｖｅｒｏｓｉｌ  Ｒｐａｑｕｅｏｕｓ  １０Φ  ｘ  ２５０  ｍｍ
Ｅ：Ｋａｓｅｉｓｏｒｂ  ＬＣ  ＯＤＳ−Ｐｈ  １０Φ  ｘ  ２５０  ｍｍ
Ｆ：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＭＧ  １０Φ  ｘ  ２５０  ｍｍ
【００４０】
画分４（３．８ｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＢ、５０％メタノール）により画分８〜１１に分画し、画分８（５４８ｍｇ）をさらに、ｒｐＨＰＬＣ（カラムＣ、２２％アセトニトリル）により画分１２〜１６に分画した。画分１３（６２ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＤ、２０％アセトニトリル）により精製し、化合物Ｉ（１９ｍｇ）を得た。画分１５（８７ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＣ、２１％アセトニトリル）により精製し、化合物ＩＩ（５２ｍｇ）を得た。また、画分１６（５５ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＥ、４４％メタノール）により精製し、化合物ＩＩＩ（１２ｍｇ）を得た。さらに、画分１７（８５ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＥ、１９％アセトニトリル）により精製し、化合物ＩＶ（１２ｍｇ）を得た。画分９（８３８ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＣ、２５％アセトニトリル）により精製し、化合物Ｖ（５９ｍｇ）を得た。画分１０（２４７ｍｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＦ、２９％アセトニトリル）及びｒｐＨＰＬＣ（カラムＥ、２３％アセトニトリル）により精製し、化合物ＶＩ（４６ｍｇ）及び化合物ＶＩＩ（２１ｍｇ）を得た。
【００４１】
画分５（２４．４ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム：メタノール＝１００：１、２０：１、９：１、クロロホルム：メタノール：水＝８：２：０．１、６：４：０．５、メタノールを用いて順次溶出し、画分１７〜２５に分画した。画分１８（６．１ｇ）をｒｐＨＰＬＣ（カラムＡ、９５％メタノール）により精製し、化合物ＶＩＩＩ（９３７ｍｇ）を得た（以上、図１参照）。
【００４２】
以上の精製により、上述の式Ｉ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ及びＶＩＩＩで表される既知の化合物と、式ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶで表される新規化合物が得られた。
【００４３】
新規化合物ＩＩ〜ＩＶのそれぞれの物性値を以下に示す。
化合物ＩＩ
非晶質粉末
ｎｅｇａｔｉｖｅ  ＨＲ−ＦＡＢＭＳ  ｍ／ｚ；  ９６１．２６１３［Ｍ−Ｈ］−  （９６１．２６１２  Ｃａｌｃｄ．  ｆｏｒ  Ｃ４４Ｈ４９Ｏ２４）
［α］Ｄ    ６５．０°（ｃ＝１．０，  ＭｅＯＨ）
ＵＶ  λｍａｘ  （ＭｅＯＨ）  ２４５ｎｍ  （ε  １５７００），  ２６８ｎｍ  （ε  １２７００），  ３３２ｎｍ  （ε  １７９００）
１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  δ  ｉｎ  Ｐｙ−ｄ５）；  １．６３  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ６．１  Ｈｚ，  Ｈ−６’’’’’），  ３．７８  （６Ｈ，  ｓ，  −ＯＣＨ３  ｘ  ２），  ４．９７−５．０６  （２Ｈ，  ｍ，  Ｈ−６’’’），  ５．６４  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  Ｈ−１’’’），  ６．２３  （１Ｈ，  ｂｒ  ｓ，  Ｈ−１’’’’’），  ６．４８  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １５．５  Ｈｚ，  Ｈ−８’’’’），  ６．５６  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  Ｈ−１’’），  ６．６９  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ２．１  Ｈｚ，  Ｈ−６），  ６．８２  （３Ｈ，  ｍ，  Ｈ−８，  ２’’’’，  ６’’’’），  ７．３６  （２Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ９．０  Ｈｚ，  Ｈ−３’，  ５’），  ７．７９  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １５．５  Ｈｚ，  Ｈ−７’’’’），  ８．４８  （２Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ９．０  Ｈｚ，  Ｈ−２’，  ６’），  １３．３  （１Ｈ，  ｂｒ  ｓ，  ５−ＯＨ）
１３Ｃ−ＮＭＲ  （１２５  ＭＨｚ，  δ  ｉｎ  Ｐｙ−ｄ５）；  １８．７  （Ｃ−６’’’’’），  ５６．３  （−ＯＣＨ３  ｘ  ２），  ６２．３  （Ｃ−６’’），  ６４．３  （Ｃ−６’’’），  ７１．２  （Ｃ−４’’，  ４’’’），  ７１．４  （Ｃ−５’’’’’），  ７１．６  （Ｃ−２’’’’’），  ７２．４  （Ｃ−３’’’’’），  ７３．６  （Ｃ−４’’’’），  ７５．８  （Ｃ−５’’’），  ７６．２  （Ｃ−２’’’），  ７８．２  （Ｃ−３’’’），  ７８．３  （Ｃ−３’’），  ７８．９  （Ｃ−５’’），  ８４．１  （Ｃ−２’’），  ９４．５  （Ｃ−８），  １００．０  （Ｃ−１’’），  １００．１  （Ｃ−１’’’’’），  １００．３  （Ｃ−６），  １０６．１  （Ｃ−１’’’），  １０６．４  （Ｃ−１０），  １０６．６  （Ｃ−６’’’’），  １１５．３  （Ｃ−８’’’’），  １１６．３  （Ｃ−２’，  ５’），  １２２．０  （Ｃ−１’），  １２５．１  （Ｃ−１’’’’），  １３２．１  （Ｃ−２’，  ６’），  １３４．８  （Ｃ−３），  １４０．４  （Ｃ−４’’’’），  １４５．９  （Ｃ−７’’’’），  １４９．９  （Ｃ−２’’’’，  ５’’’’），  １５６．７  （Ｃ−９），  １５７．０  （Ｃ−２），  １６１．８  （Ｃ−４’），  １６２．４  （Ｃ−５），  １６２．６  （Ｃ−７），  １６７．５  （Ｃ−９’’’’），  １７８．９  （Ｃ−４）
【００４４】
化合物ＩＩＩ
非晶質粉末
ｎｅｇａｔｉｖｅ  ＨＲ−ＦＡＢＭＳ  ｍ／ｚ；  ９３１．２５０５［Ｍ−Ｈ］−  （９６１．２５０７  Ｃａｌｃｄ．  ｆｏｒ  Ｃ４３Ｈ４７Ｏ２３）
［α］Ｄ    ８７．９°（ｃ＝１．０，  ＭｅＯＨ）
ＵＶ  λｍａｘ  （ＭｅＯＨ）  ２４６ｎｍ  （ε  １６９００），  ２６８ｎｍ  （ε  １８１００），  ３２７ｎｍ  （ε  ２１９００）
１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  δ  ｉｎ  Ｐｙ−ｄ５）；  １．６３  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ６．１  Ｈｚ，  Ｈ−６’’’’’），  ３．７４  （３Ｈ，  ｓ，  −ＯＣＨ３），  ５．００  （２Ｈ，  ｍ，  Ｈ−６’’’），  ５．６４  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  Ｈ−１’’’），  ６．２１  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １．２  Ｈｚ，  Ｈ−１’’’’’），  ６．４６  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １５．５  Ｈｚ，  Ｈ−８’’’’），  ６．５６  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  Ｈ−１’’），  ６．６９  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ２．１  Ｈｚ，  Ｈ−６），  ６．８４  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ２．１  Ｈｚ，  Ｈ−８），  ７．００−７．１２  （３Ｈ，  ｍ，  Ｈ−２’’’’，  ５’’’’，  ６’’’’），  ７．３７  （２Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．８  Ｈｚ，  Ｈ−３’，  ５’），  ７．７９  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １５．５  Ｈｚ，  Ｈ−７’’’’），  ８．４９  （２Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．９  Ｈｚ，  Ｈ−２’，  ６’），  １３．３  （１Ｈ，  ｂｒ  ｓ，  ５−ＯＨ）
１３Ｃ−ＮＭＲ  （１２５  ＭＨｚ，  δ  ｉｎ  Ｐｙ−ｄ５）；  １８．７  （Ｃ−６’’’’’），  ５５．８  （−ＯＣＨ３），  ６２．３  （Ｃ−６’’），  ６４．３  （Ｃ−６’’’），  ７１．２  （Ｃ−４’’，  ４’’’），  ７１．４  （Ｃ−５’’’’’），  ７１．６  （Ｃ−２’’’’’），  ７２．４  （Ｃ−３’’’’’），  ７３．６  （Ｃ−４’’’’’），  ７５．８  （Ｃ−５’’’），  ７６．２  （Ｃ−２’’’），  ７８．２  （Ｃ−３’’’），  ７８．３  （Ｃ−３’’），  ７８．９  （Ｃ−５’’），  ８４．１  （Ｃ−２’’），  ９４．６  （Ｃ−８），  １００．０  （Ｃ−１’’，  １’’’’’），  １００．３  （Ｃ−５，  ６），  １０６．２  （Ｃ−１’’’），  １０６．９  （Ｃ−１０），  １１１．２  （Ｃ−２’’’’），  １１５．０  （Ｃ−８’’’’），  １１６．４  （Ｃ−３’，  ５’），  １１６．６  （Ｃ−５’’’’），  １２２．０  （Ｃ−１’），  １２３．７  （Ｃ−６’’’’），  １２６．４  （Ｃ−１’’’’），  １３２．１  （Ｃ−２’，  ６’），  １３４．８  （Ｃ−３），  １４５．５  （Ｃ−７’’’’），  １４８．８  （Ｃ−３’’’’），  １５０．９  （Ｃ−４’’’’），  １５６．８  （Ｃ−９），  １５７．０  （Ｃ−２），  （Ｃ−５），  １６１．８  （Ｃ−４’），  １６２．６  （Ｃ−７），  １６７．６  （Ｃ−９’’’’），  １７８．９  （Ｃ−４）
【００４５】
化合物ＩＶ
非晶質粉末
ｎｅｇａｔｉｖｅ  ＨＲ−ＦＡＢＭＳ  ｍ／ｚ；  ９７７．２５７０［Ｍ−Ｈ］−  （９６１．２５６１  Ｃａｌｃｄ．  ｆｏｒ  Ｃ４４Ｈ４９Ｏ２５）
［α］Ｄ    １０９．６°（ｃ＝０．５，  Ｈ２Ｏ）
ＵＶ  λｍａｘ  （ＭｅＯＨ）  ２０４ｎｍ  （ε  ５２７００），  ２６２ｎｍ  （ε  ２５２００），  ３４３ｎｍ  （ε  １９２００）
１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  δ  ｉｎ  Ｐｙ−ｄ５）；  １．６３  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ６．１  Ｈｚ，  Ｈ−６’’’’’），  ３．７８  （３Ｈ，  ｓ，  −ＯＣＨ３），  ５．００−５．１３  （２Ｈ，  ｍ，  Ｈ−６’’’），  ５．６６  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  Ｈ−１’’’），  ６．１９  （１Ｈ，  ｂｒ  ｓ，  Ｈ−１’’’’’），  ６．４８  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １５．９  Ｈｚ，  Ｈ−８’’’’），  ６．６３（１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  Ｈ−１’’），  ６．６７  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ２．１  Ｈｚ，  Ｈ−６），  ６．６５  （１Ｈ，  ｄ，Ｊ  ＝  ２．１  Ｈｚ，  Ｈ−８），  ６．８４  （２Ｈ，  ｓ，  Ｈ−２’’’’，  ６’’’’），  ７．４４  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  Ｈ−５’），  ７．７７  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １５．９  Ｈｚ，  Ｈ−７’’’’），  ８．２４  （２Ｈ，  ｍ，  Ｈ−２’，  ６’），  １３．３  （１Ｈ，  ｂｒ  ｓ，  ５−ＯＨ）
１３Ｃ−ＮＭＲ  （１２５  ＭＨｚ，  δ  ｉｎ  Ｐｙ−ｄ５）；  １８．７  （Ｃ−６’’’’’），  ５６．３  （−ＯＣＨ３  ｘ  ２），  ６２．３  （Ｃ−６’’），  ６４．３  （Ｃ−６’’’），  ７１．２  （Ｃ−４’’，  ４’’’），  ７１．４  （Ｃ−５’’’’’），  ７１．６  （Ｃ−２’’’’’），  ７２．４  （Ｃ−３’’’’’），  ７３．７  （Ｃ−４’’’’’），  ７５．８  （Ｃ−５’’’），  ７６．３  （Ｃ−２’’’），  ７８．２  （Ｃ−３’’），  ７８．３  （Ｃ−３’’’），  ７８．８  （Ｃ−５’’），  ８４．７  （Ｃ−２’’），  ９４．３  （Ｃ−８），  ９９．９  （Ｃ−１’’），  １００．０  （Ｃ−１’’’’’），  １００．２  （Ｃ−６），  １０６．３  （Ｃ−１’’’），  １０６．６  （Ｃ−２’’’’，  ６’’’’），  １０６．９  （Ｃ−１０），  １１５．３  （Ｃ−８’’’’），  １１６．５  （Ｃ−５’），  １１７．５  （Ｃ−２’），  １２３．０（Ｃ−１’），  １２５．２  （Ｃ−１’’’’），  １３５．０  （Ｃ−３），  １３５．５  （Ｃ−６’），  １４０．４  （Ｃ−４’’’’），  １４５．８  （Ｃ−７’’’’），  １４７．０  （Ｃ−３’），  １４９．１  （Ｃ−３’’’’，  ５’’’’），  １５６．７  （Ｃ−９），  １５７．０  （Ｃ−２），  １５０．６  （Ｃ−４’），  １６２．３  （Ｃ−５），  １６２．５  （Ｃ−７），  １６７．５  （Ｃ−９’’’’），  １７８．９  （Ｃ−４）
【００４６】
（実施例３）化合物Ｉ〜ＶＩＩのタンパク質非酵素的糖化抑制作用の検討
化合物Ｉ〜ＶＩＩについて、実施例１と同様の方法により、ＡＧＥｓ形成に対する阻害率を測定し、化合物Ｉ〜ＶＩＩのタンパク質非酵素的糖化反応に対する阻害を検討した。
【００４７】
陽性コントロールとしてはクエルセチン（ＳＩＧＭＡ社製Ｑ１２５）及びケンフェロール（東京化成社）を用いて実験を行い、実施例１で用いた式により各サンプルのＡＧＥｓ形成に対する阻害率を算出した。
【００４８】
各サンプルの阻害率を図３に示す。新規化合物ＩＩ〜ＩＶを含む化合物Ｉ〜ＶＩＩのいずれも、ＡＧＥｓ形成に対する阻害を示した。特に新規化合物ＩＩは、サンプル濃度６６μＭ及び６．６μＭにおいては、検討した化合物中最も高い阻害率を示した。この結果より、化合物Ｉ〜ＶＩＩがタンパク質非酵素的糖化抑制作用を有していることがわかった。
【００４９】
【発明の効果】
本発明のタンパク質非酵素的糖化抑制剤は、タンパク質非酵素的糖化抑制作用を促進するため、糖尿病又は糖尿病合併症を予防・治療するのに有効である。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、沙棘抽出物の画分を示す。
【図２】図２は、ＡＧＥｓ形成に対する画分１〜７の阻害率を示す。
【図３】図３は、ＡＧＥｓ形成に対する化合物Ｉ〜ＶＩＩの阻害率を示す。
【図１】
2004217544.tif 000005
【図２】
2004217544.tif 000006
【図３】
2004217544.tif 000007