(57)【要約】【課題】神経細胞や心筋細胞などの活動電位の測定を迅速かつ高感度に実施することを可能にする新規な電位感受性色素を提供すること。【解決手段】下記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表されるロダシアニン誘導体またはその塩を含む電位感受性色素。【化１】2004115693.tif 000009（式中、Ｒは置換基を有していてもよいアルキル基又は置換基を有していてもよいアリール基を表す。Ａ及びＢは互いに独立に、少なくとも１つのヘテロ原子を含む５又は６員環あるいはそれらの縮合環を表し、これらは置換基を有していてもよい。Ｌ１及びＬ２は各々独立にメチン基又は置換メチン基を表し、Ｌ１が置換メチン基である場合にはＬ１とＡの一部が結合して５又は６員環を形成してもよい。Ｌ３はメチン基、置換メチン基又は窒素原子を表し、Ｌ３が置換メチン基である場合にはＬ３とＢの一部が結合して５又は６員環を形成してもよい。）【選択図】　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表されるロダシアニン誘導体またはその塩を含む電位感受性色素。
【化１】
2004115693.tif 000008
（式中、Ｒは置換基を有していてもよいアルキル基又は置換基を有していてもよいアリール基を表す。Ａ及びＢは互いに独立に、少なくとも１つのヘテロ原子を含む５又は６員環あるいはそれらの縮合環を表し、これらは置換基を有していてもよい。Ｌ１及びＬ２は各々独立にメチン基又は置換メチン基を表し、Ｌ１が置換メチン基である場合にはＬ１とＡの一部が結合して５又は６員環を形成してもよい。Ｌ３はメチン基、置換メチン基又は窒素原子を表し、Ｌ３が置換メチン基である場合にはＬ３とＢの一部が結合して５又は６員環を形成してもよい。）
【請求項２】
細胞膜電位変化の測定のための試薬として使用する、請求項１に記載の電位感受性色素。
【請求項３】
請求項１に記載の電位感受性色素を用いる、細胞膜電位変化の測定方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ロダシアニン骨格を有する電位感受性色素およびそれを用いた細胞膜電位変化の測定方法に関する。本発明の電位感受性色素は、生体活動を光学的に計測する装置を用いて脳神経系の活動等を観測する場合に有用である。
【０００２】
【従来の技術】
膜電位活動の光学的計測方法は、膜電位に感受性を持つ色素（膜電位感受性色素）で細胞を染色し、電位活動を色素の吸光や蛍光などの光学的シグナルに変換して記録する方法である。この方法を用いることによって、▲１▼微小電極が刺入できないくらい小さい細胞の膜電位や；▲２▼細胞内の異なる部位における電位活動；▲３▼１つの組織標本で多数の分画領域や多数個の細胞斧電位活動を同時に記録することが可能である。細胞を電位感受性色素で染色し、微小電極で活動電位と光学的変化を同時に測定すると両者はほぼ同じ時間経過と形状を示し、近似的に直線関係で対応させることが可能である。膜電位感受性色素は、膜電位変化に対する応答時間の違いにより、ｆａｓｔ−ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｄｙｅｓとｓｌｏｗ−ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｄｙｅｓに分かれるが、神経細胞や心筋細胞名租の活動電位の測定にはｆａｓｔ−ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｄｙｅｓが用いられる。膜電位活動測定用色素としては、▲１▼膜電位変化に対する感受性が大きく、▲２▼応答時間が短く、▲３▼細胞に対する毒性や薬理作用の影響を無視でき、▲４▼光化学的作用がなく、▲５▼退色時間が出来るだけ長いことが必要がある。このような条件を満たす膜電位活動測定用色素を開発することを目的として、各種の色素が検討されている。膜電位活動測定用色素の総説としては、例えば、非特許文献１及び２等が挙げられる。
【０００３】
上記したような膜電位活動の光学的計測方法に用いる計測システムは通常、光源、光学系、検出系、増幅系、コンピュータ、出力系から構成される。検出系にはシリコンフォトダイオードアレイが主に用いられ、ｐａｒａｌｌｅｌ　ｒｅａｄ−ｏｕｔ方式とｓｅｒｉａｌ　ｒｅａｄ−ｏｕｔ方式があり、例えば、富士写真フイルム株式会社からは、ｓｅｒｉａｌ
ｒｅａｄ−ｏｕｔ方式のＨＲ　Ｄｅｌｔａｒｏｎが販売されている。
【０００４】
また、膜電位活動の光学的計測の測定対象は、無脊椎動物、脊椎動物の培養細胞から摘出標本、スライス標本、まるごと動物の大脳皮質などの神経系のほかに、心臓や骨格筋など広い範囲にわたっている。動物の大脳皮質のように光が透過しないものでは蛍光シグナルとして測定する方法が一般的である。
【０００５】
【非特許文献１】
Ａ．Ｓ．Ｗａｇｇｏｎａｒ，　Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．，　８，　４７−６８　（１９７９）
【０００６】
【非特許文献２】
Ｌ．Ｍ．Ｌｏｅｗ，　Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ａｎｄ　Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ　Ｐｒｏｂｅｓ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ，　Ｃｈａｐｔｅｒ　Ｅｌｅｖｅｎ，　１５０−１６０　（１９９３）
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
脳の活動を研究する分野では、神経の電位的変化を計測する手法が使われている。その中でも、電位変化を蛍光の発光や吸収の変化として捕らえることのできる電位感受性色素の利用は、この分野の発展に今後ますます重要な意味を持ってくると期待されている。電位変化に基づく光量変化をとらえるため様々なセンサーが利用されており、数十ｍｓ程度のゆっくりした現象ではビデオ用センサーが、早い変化をする現象ではフォトダイオードアレイが利用されている。早い現象を、高解像度（多画素数）でとらえようとする場合は、計測装置の改良と共に、蛍光の発光や吸収の変化が大きい高感度電位感受性色素が必要である。
【０００８】
即ち、本発明は、神経細胞や心筋細胞などの活動電位の測定を迅速かつ高感度に実施することを可能にする新規な電位感受性色素を提供することを解決すべき課題とした。さらに、本発明は、当該電位感受性色素を用いる細胞膜電位変化の測定方法を提供することを解決すべき課題とした。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題を解決することを目的として種々の化合物を探索した結果、従来より知られているスチリル系色素、シアニン系色素以外に新たにロダシアニン色素類が電位感受性の強い蛍光強度変化を持つことを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
即ち、本発明によれば、下記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表されるロダシアニン誘導体またはその塩を含む電位感受性色素が提供される。
【化２】
2004115693.tif 000002
（式中、Ｒは置換基を有していてもよいアルキル基又は置換基を有していてもよいアリール基を表す。Ａ及びＢは互いに独立に、少なくとも１つのヘテロ原子を含む５又は６員環あるいはそれらの縮合環を表し、これらは置換基を有していてもよい。Ｌ１及びＬ２は各々独立にメチン基又は置換メチン基を表し、Ｌ１が置換メチン基である場合にはＬ１とＡの一部が結合して５又は６員環を形成してもよい。Ｌ３はメチン基、置換メチン基又は窒素原子を表し、Ｌ３が置換メチン基である場合にはＬ３とＢの一部が結合して５又は６員環を形成してもよい。）
【００１１】
本発明の電位感受性色素は、細胞膜電位変化の測定のための試薬として使用することができる。
本発明のさらに別の側面によれば、上記した本発明の電位感受性色素を用いる、細胞膜電位変化の測定方法が提供される。
【００１２】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。
本発明の電位感受性色素は、下記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表されるロダシアニン誘導体またはその塩を含むものである。下記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される電位感受性色素を用いることにより細胞膜電位変化を容易かつ高感度に測定することができる。
【００１３】
【化３】
2004115693.tif 000003
【００１４】
式中、Ｒは置換基を有していてもよいアルキル基又は置換基を有していてもよいアリール基を表す。Ａ及びＢは互いに独立に、少なくとも１つのヘテロ原子を含む５又は６員環あるいはそれらの縮合環を表し、これらは置換基を有していてもよい。Ｌ１及びＬ２は各々独立にメチン基又は置換メチン基を表し、Ｌ１が置換メチン基である場合にはＬ１とＡの一部が結合して５又は６員環を形成してもよい。Ｌ３はメチン基、置換メチン基又は窒素原子を表し、Ｌ３が置換メチン基である場合にはＬ３とＢの一部が結合して５又は６員環を形成してもよい。
【００１５】
Ｒが示す置換基を有していてもよいアルキル基としては、炭素数１〜２０の直鎖、分枝鎖、環状またはこれらの組み合わせの置換又は未置換のアルキル基が好ましく、具体的にはメチル基、エチル基、ブチル基、オクチル基、ドデシル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル基、ｔ−アミル基、ｔ−オクチル基、シクロヘキシル基、１−メチルシクロヘキシル基などが挙げられる。
る。
【００１６】
Ｒが示す置換基を有していてもよいアリール基としては、炭素数６〜２０の単環又は多環の置換又は未置換のアリール基が好ましく、フェニル基、クレジル基、キシリル基、ナフチル基、４−ｔ−ブチルフェニル基、４−ｔ−オクチルフェニル基、４−アニシジル基、３，５−ジクロロフェニル基などが挙げられる。
【００１７】
Ｒが示すアルキル基またはアリール基上に存在する置換基としては、例えば、ハロゲン原子、アリール基、ヘテロ環基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、ヒドロキシル基、アシルオキシ基、アミノ基、アルコキシカルボニル基、アシル基、アシルアミノ基、オキシカルボニル基、カルバモイル基、スルホニル基、スルファモイル基、スルホンアミド基、ホスホリル基、カルボキシル基などが挙げられる。これらの置換基はこれらの置換基でさらに置換されていてもよい。
【００１８】
Ａ及びＢは互いに独立に、少なくとも１つのヘテロ原子を含む５又は６員環あるいはそれらの縮合環を表し、これらは置換基を有していてもよい。
【００１９】
ヘテロ原子の種類は特に限定されないが、好ましくはＮ、Ｏ、Ｓ又はＳｅ原子の少なくとも一つである。ヘテロ原子を含む５又は６員環あるいはそれらの縮合環の具体例としては、例えばピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルフォリン、チオフェン、フラン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、トリアゾール、トリアジン、インドール、インダゾール、プリン、チアジアゾール、オキサジアゾール、キノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、アクリジン、フェナントロリン、フェナジン、テトラゾール、チアゾール、オキサゾール、ベンズイミダゾール、ベンズオキサゾール、ベンズチアゾール、ベンズセレナゾール、インドレニン、テトラザインデンなどが挙げられる。
【００２０】
Ａ及びＢが示すヘテロ原子を含む５又は６員環あるいはそれらの縮合環は置換基を有していてもよい。置換基の具体例としては、炭素数１〜１０の直鎖または分岐、鎖状または環状のアルキル基（例えば、トリフルオロメチル、メチル、エチル、プロピル、ヘプタフルオロプロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、ｔ−ペンチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、オクチル、２−エチルヘキシル等）、炭素数２〜１０の直鎖または分岐、鎖状または環状のアルケニル基（例えばビニル、１−メチルビニル、シクロヘキセン−１−イル等）、炭素数２〜１０のアルキニル基（例えば、エチニル、１−プロピニル等）、炭素数６〜１４のアリール基（例えば、フェニル、ナフチル等）、炭素数１〜１０のアシルオキシ基（例えば、アセトキシ、ベンゾイルオキシ等）、炭素数２〜１０のアルコキシカルボニルオキシ基（例えば、メトキシカルボニルオキシ基、２−メトキシエトキシカルボニルオキシ基など）、炭素数７〜１４のアリールオキシカルボニルオキシ基（例えばフェノキシカルボニルオキシ基など）炭素数１〜１２のカルバモイルオキシ基（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルオキシ等）、炭素数１〜１２のカルボンアミド基（例えば、ホルムアミド、Ｎ−メチルアセトアミド、アセトアミド、Ｎ−メチルホルムアミド、ベンツアミド等）、炭素数１〜１０のスルホンアミド基（例えば、メタンスルホンアミド、ベンゼンスルホンアミド、ｐ−トルエンスルホンアミド等）、炭素数１〜１０のカルバモイル基（例えば、Ｎ−メチルカルバモイル、Ｎ，Ｎ−ジエチルカルバモイル、Ｎ−メシルカルバモイル等）、炭素数０〜１０のスルファモイル基（例えば、Ｎ−ブチルスルファモイル、Ｎ，Ｎ−ジエチルスルファモイル、Ｎ−メチル−Ｎ−（４−メトキシフェニル）スルファモイル等）、炭素数１〜１０のアルコキシ基（例えば、メトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、オクチルオキシ、ｔ−オクチルオキシ等）、炭素数６〜１４のアリールオキシ基（例えば、フェノキシ、４−メトキシフェノキシ、ナフトキシ等）、炭素数７〜１４のアリールオキシカルボニル基（例えば、フェノキシカルボニル、ナフトキシカルボニル等）、炭素数２〜１０のアルコキシカルボニル基（例えば、メトキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル等）、炭素数１〜１２のＮ−アシルスルファモイル基（例えば、Ｎ−エチルスルファモイル、Ｎ−ベンゾイルスルファモイル等）、炭素数１〜１２のＮ−スルファモイルカルバモイル基（例えばＮ−メタンスルホニルカルバモイル基など）、炭素数１〜１０のアルキルスルホニル基（例えば、メタンスルホニル、オクチルスルホニル、２−メトキシエチルスルホニル等）、炭素数６〜１４のアリールスルホニル基（例えば、ベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル、４−フェニルスルホニル等）、炭素数２〜１０のアルコキシカルボニルアミノ基（例えば、エトキシカルボニルアミノ等）、炭素数７〜１４のアリールオキシカルボニルアミノ基（例えば、フェノキシカルボニルアミノ、ナフトキシカルボニルアミノ等）、炭素数０〜１０のアミノ基（例えばアミノ、メチルアミノ、ジエチルアミノ、ジイソプロピルアミノ、アニリノ、モルホリノ等）、炭素数３〜１２のアンモニオ基（例えば、トリメチルアンモニオ基、ジメチルベンジルアンモニオ基など）シアノ基、ニトロ基、カルボキシル基、ヒドロキシ基、スルホ基、メルカプト基、炭素数１〜１０のアルキルスルフィニル基（例えば、メタンスルフィニル、オクタンスルフィニル等）、炭素数６〜１４のアリールスルフィニル基（例えば、ベンゼンスルフィニル、４−クロロフェニルスルフィニル、ｐ−トルエンスルフィニル等）、炭素数１〜１０のアルキルチオ基（例えば、メチルチオ、オクチルチオ、シクロヘキシルチオ等）、炭素数６〜１４のアリールチオ基（例えば、フェニルチオ、ナフチルチオ等）、炭素数１〜１３のウレイド基（例えば、３−メチルウレイド、３，３−ジメチルウレイド、１，３−ジフェニルウレイド等）、炭素数２〜１５の複素環基（ヘテロ原子としては例えば、窒素、酸素およびイオウ等を少なくとも１個以上含み、３ないし１２員環の単環、縮合環で、例えば、２−フリル、２−ピラニル、２−ピリジル、２−チエニル、２−イミダゾリル、モルホリノ、２−キノリル、２−ベンツイミダゾリル、２−ベンゾチアゾリル、２−ベンゾオキサゾリル等）、複素環オキシ基（例えば、ピリジルオキシ、ピラゾリルオキシ等）、複素環チオ基（例えば、テトラゾリルチオ、１，３，４−チアジアゾリルチオ、１，３，４−オキサジアゾリルチオ、ベンツイミダゾリルチオ等）、炭素数１〜１２のアシル基（例えば、アセチル、ベンゾイル、トリフルオロアセチル等）、炭素数０〜１０のスルファモイルアミノ基（例えば、Ｎ−ブチルスルファモイルアミノ、Ｎ−フェニルスルファモイルアミノ等）、炭素数３〜１２のシリル基（例えば、トリメチルシリル、ジメチル−ｔ−ブチルシリル等）、ハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子等）などが挙げられる。上記の置換基はさらに置換基を有していてもよく、その置換基の例としてはここで挙げた置換基が挙げられる。
【００２１】
Ａは好ましくは以下に示す置換基であり、これらがさらにアルキル基、アルコキシ基、アリール基、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、置換アミノ基、アシルアミノ基、アルキルスルフォニルアミノ基またはアルコキシカルボニル基で置換されていてもよい。Ａ上の置換基が二つ以上あるときは、それらがさらに環を形成していてもよい。
【００２２】
【化４】
2004115693.tif 000004
【００２３】
上記式中、Ｒ１は置換基を有していてもよいアルキル基または置換基を有していてもよいアリール基を示し、星印はＬ１等に対する結合位置を示す。Ｒ１が示す基の具体例としては、Ｒについて前記したものが挙げられる。
【００２４】
Ｂは好ましくは以下に示す置換基であり、これらがさらにアルキル基、アルコキシ基、アリール基、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、置換アミノ基、アシルアミノ基、アルキルスルフォニルアミノ基またはアルコキシカルボニル基で置換されていてもよい。Ｂ上の置換基が二つ以上あるときは、それらがさらに環を形成していてもよい。
【００２５】
【化５】
2004115693.tif 000005
【００２６】
上記式中、Ｒ２は置換基を有していてもよいアルキル基または置換基を有していてもよいアリール基を示し、星印はＬ３に対する結合位置を示す。Ｒ２が示す基の具体例としては、Ｒについて前記したものが挙げられる。
【００２７】
Ｌ１及びＬ２は各々独立にメチン基又は置換メチン基を表す。Ｌ３はメチン基、置換メチン基又は窒素原子を表す。メチン基上に存在する置換基の種類は特に限定されず、例えば、Ａ及びＢが示すヘテロ原子を含む５又は６員環あるいはそれらの縮合環上に存在する置換基の具体例として本明細書中上記した基などが挙げられる。
【００２８】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表されるロダシアニン誘導体は塩の形態で存在する場合もある。塩の種類は特に限定されないが、例えば、酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、又は有機アミン付加塩等が包含される。酸付加塩としては、ＣｌＯ４−付加塩、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、又はクエン酸塩等の有機酸塩が挙げられる。金属塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、又は亜鉛塩等が挙げられ、アンモニウム塩としては、アンモニウム又はテトラメチルアンモニウム等の塩が挙げられ、有機アミン付加塩としては、モルホリン又はピペリジン等の付加塩が挙げられる。
【００２９】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表されるロダシアニン誘導体またはその塩のうちで本発明で用いるのに特に好ましい具体例としては、以下の化合物１から９が挙げられる。
【００３０】
【化６】
2004115693.tif 000006
【００３１】
化合物１から９を含む式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表されるロダシアニン誘導体またはその塩はいずれも定法にしたがって合成可能であるか、或いは市販品として購入可能であり、例えば、英国特許第４８７，０５１号及び４８９，３３５号、米国特許第２，５３６，９８６号、２，４５４，６２９号、２，９６１，３１８号、２，３８８，９６３号及び２，５０４，４６８号、特願平４−２１４４０８（特開平６−１７２３３０）に開示された方法に従い公知の出発原料から製造することができ、該開示内容は本明細書の開示の一部として本明細書中に含まれるものとする。
【００３２】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表されるロダシアニン誘導体またはその塩を含む電位感受性色素は、細胞膜電位変化の測定のための試薬として使用することができる。本発明の試薬の形態は特に限定されず、溶液、懸濁液又は粉末など任意の形態をとることができるが、好ましくは、溶液である。式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表されるロダシアニン誘導体またはその塩は適当な溶媒（例えば、メタノール等の低級アルコール）に溶解することにより溶液を調製することができる。また、本発明の試薬には、適当な緩衝剤や保存剤などを含有していてもよい。
【００３３】
また、本発明によれば、式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表されるロダシアニン誘導体またはその塩を含む電位感受性色素を用いる、細胞膜電位変化の測定方法が提供される。
本発明の測定方法の一例を以下に説明する。本発明の電位感受性色素で処理した生体組織又は細胞に刺激を付与し、当該刺激に応答して生体組織又は細胞から発せられる蛍光を測定することにより細胞膜の電位変化を測定することができる。
【００３４】
本発明の測定方法を実施するための装置の構成は特に限定されず、各種の装置を目的に応じて選択して使用することができる。かかる装置の一例としては、本発明の電位感受性色素で染色した生体組織又は細胞を保持する手段と、該生体組織または細胞を刺激する信号を入力するために該生体組織又は細胞に接触させて使用される一以上の接触子を所定の配列で配置した刺激信号入力手段と、前記刺激信号に応答し前記生体組織から発せられる蛍光を測定する蛍光測定手段とを少なくとも有するものである。さらに、本発明で用いる測定装置は、前記刺激信号入力手段の複数の接触子のうちの１または複数の接触子に任意に刺激信号を印加すると共に、該印加した刺激信号に対応する前記蛍光測定手段で測定される蛍光強度パターンを記録するための制御手段を備えていてもよい。
【００３５】
本発明の方法で分析の対象となる生体組織または細胞の種類は特に限定されず、任意のものを適宜選択して用いることができる。典型的には、神経組織や神経細胞または心筋組織や心筋細胞などを用いることができる。
【００３６】
また、本発明で用いる刺激信号は、特に限定されず、電気信号、熱信号、または光信号などを使用することができるが、制御が容易であるという観点から、電気信号が好ましい。また、本発明の好ましい態様によれば、複数の接触子それぞれは独立して刺激信号を印加できる構成とされる。これにより、生体組織または細胞の複数個所に並列に刺激信号を与えることができ、生体組織にパターン状の刺激信号を入力することが可能になるからである。
【００３７】
また、本発明で用いる蛍光測定手段は、例えば蛍光顕微鏡とこれに直接若しくは間接的に接続され複数の画素で構成されるセンサーたとえばフォトダイオードアレイ或はＣＣＤアレイとを具えたもので構成することができる。
さらに本発明で用いることができる制御手段は典型的には電子回路であり、一般的なコンピュータを用いて構成することができる。
【００３８】
上記したような測定装置を使用することにより、式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表されるロダシアニン誘導体またはその塩を含む電位感受性色素を用いて細胞膜の電位変化を測定することができる。
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。
【００３９】
【実施例】
ｉｎ　ｖｉｔｒｏで膜電位変化を容易に測定する方法として、脂質二重膜リポソームを用いた例が多く報告されている（大橋、軽部、民谷、特開昭６４−５７１５２；Ｌ．Ｍ．Ｌｏｅｗ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　２４，　５７４９−５７５５（１９８５）；Ｌ．Ｍ．Ｌｏｅｗ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　２８，　４５３６−４５３９　（１９８９）；Ｌ．Ｍ．Ｌｏｅｗ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．　Ｍｅｍｂｒａｎｅ　Ｂｉｏｌ．，　１３０，１−１０（１９９２））。本実施例では、これらの方法に基づいて膜電位変化を蛍光強度変化として測定し、電位感受性ロダシアニン色素を見出した。
【００４０】
測定例１：脂質２分子膜（リポソーム）を用いた化合物１〜９の電位感受性測定
（１）リポソーム溶液の調製
卵黄レシチン２０ｍｇを１．０ｍｌのエタノールに溶解し、ロータリーエバポレーターで濃縮乾固する。これに１００ｍＭ　Ｋ２ＳＯ４ＨＥＰＥＳ−Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．０）を１．０ｍｌ加えＶｏｒｔｅｘ　Ｍｉｘｅｒで縣濁液とした後、Ｅｘｔｒｕｄｅｒ（フィルター径　０．４μｍ）を通し均一なリポソーム溶液とした。
【００４１】
（２）色素溶液の調製
色素（本明細書中上記した化合物１〜９）の０．１ｍＭ／ｌメタノール溶液５０μｌを、１ｍＭ　Ｋ２ＳＯ４，３００ｍＭ　ショ糖含有ＨＥＰＥＳ−Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．０）９．９５ｍｌに溶解する。
【００４２】
（３）蛍光測定
４．０ｍｌの色素溶液に４０μｌのリポソーム溶液を添加し、蛍光測定用キュベットに入れる。これに濃度０．８ｍｇ／ｍｌ　のｖａｌｉｎｏｍｙｃｉｎ（Ｓｉｇｍａ）エタノール溶液１０μｌ加え、ｖａｌｉｎｏｍｙｃｉｎ添加により生起するリポソーム膜内外の静電ポテンシャル基づく蛍光強度変化を、ｖａｌｉｎｏｍｙｃｉｎ添加の０、２、４、６、８、１０、２０分後に測定する。強度変化ＩΔ＝（Ｉｎｔｖ−Ｉｎｔ０）／Ｉｎｔ０＝０．１２
化合物１〜９の電位感受性測定の結果を表１、及び図１から図３に示す。
【００４３】
【表１】
2004115693.tif 000007
【００４４】
表１、及び図１から図３に示す結果から分かるように、本発明の電位感受性色素を用いることによる細胞膜内外に生じた電位差に対応して蛍光強度の変化を迅速に測定することができる。
【００４５】
【発明の効果】
本発明の電位感受性色素を用い、かつ高速度蛍光測定装置を組み合わせることにより、神経細胞や心筋細胞などの活動電位の測定を迅速かつ高感度に実施することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、脂質２分子膜（リポソーム）を用いた化合物１及び２の電位感受性測定の結果を示す図である。
【図２】図２は、脂質２分子膜（リポソーム）を用いた化合物３〜６の電位感受性測定の結果を示す図である。
【図３】図３は、脂質２分子膜（リポソーム）を用いた化合物７〜９の電位感受性測定の結果を示す図である。
【図１】
2004115693.tif 000010
【図２】
2004115693.tif 000011
【図３】
2004115693.tif 000012