(57)【要約】【課題】日常の食生活において容易に入手および摂取でき、高血糖症、糖尿病性高脂血症、糖尿病性骨粗鬆症等の糖尿病態を改善することができる、副作用の少ない天然物起源の予防・改善剤や、糖尿病態の予防・改善用機能性食品又は食品素材や、飼料を提供すること。【解決手段】ストレプトゾトシン投与によって糖尿病状態を惹起された糖尿病のモデル動物に、海藻アカモク水抽出成分を経口投与することにより、海藻アカモク水抽出成分が抗糖尿病、抗糖尿病性骨粗鬆症作用を発揮する組成物であることを見い出した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アカモク（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｈｏｒｎｅｒｉ）又はその処理物を有効成分として含有することを特徴とする糖尿病態の予防・改善剤。
【請求項２】
アカモクの処理物が、アカモクの抽出物であることを特徴とする請求項１記載の糖尿病態の予防・改善剤。
【請求項３】
糖尿病態が、インスリン依存型糖尿病態であることを特徴とする請求項１又は２記載の糖尿病態の予防・改善剤。
【請求項４】
糖尿病態が、高血糖症であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか記載の糖尿病態の予防・改善剤。
【請求項５】
糖尿病態が、糖尿病性高脂血症であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか記載の糖尿病態の予防・改善剤。
【請求項６】
糖尿病態が、糖尿病性骨粗鬆症であることを特徴とする請求項１〜５のいずれか記載の糖尿病態の予防・改善剤。
【請求項７】
アカモク（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｈｏｒｎｅｒｉ）又はその処理物を有効成分として含有することを特徴とする糖尿病態の予防・改善用機能性食品又は食品素材。
【請求項８】
アカモクの処理物が、アカモクの抽出物であることを特徴とする請求項７記載の糖尿病態の予防・改善用機能性食品又は食品素材。
【請求項９】
アカモク（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｈｏｒｎｅｒｉ）又はその処理物を有効成分として含有することを特徴とする糖尿病態の予防・改善用飼料。
【請求項１０】
アカモクの処理物が、アカモクの抽出物であることを特徴とする請求項９記載の糖尿病態の予防・改善用飼料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、海藻アカモク（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｈｏｒｎｅｒｉ）又はアカモクの抽出物等アカモクの処理物を有効成分として含有する、高血糖症、糖尿病性高脂血症、糖尿病性骨粗鬆症等の糖尿病態の予防・改善剤、糖尿病態の予防・改善用機能性食品又は食品素材、飼料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
わが国において多くの患者数を有する糖尿病は、慢性の高血糖とそれにともなう慢性の全身性代謝障害を主な特徴とする疾患であり、生活習慣病として位置づけられ、２１世紀の高齢化社会における大きな問題として取りあげられている。糖尿病は、インスリン依存性糖尿病（Ｉ型糖尿病）とインスリン非依存性糖尿病（ＩＩ型糖尿病）に分類され、いずれもその発症には、遺伝因子と環境因子が関連している。
【０００３】
糖尿病の治療剤としては、インシュリンの分泌を促すスルフォニウムウレア系製剤、食後の過血糖を抑制するα−グルコシダーゼ阻害剤、あるいは最近ではインシュリン抵抗性を改善するチアゾリジン系製剤が用いられるが、これら医療用合成製剤は、処方箋を必要とするため、簡易には入手できないばかりか、製剤の投与又は服用により種々の副作用を伴うことがある。従って、糖尿病の治療に使用される抗糖尿病剤として、入手が容易でかつ副作用ができるだけ少ない天然物起源のものが求められている。かかる天然物起源の糖尿病態の改善剤としては、小腸からの吸収糖質量を減少させる作用を有する難消化性デキストリンを配合させた食品が知られており、これは「特定保健用食品」としての承認を得ている。また、タラノキ植物（Ａｒａｌｉａ  ｅｌａｔａ、ウコギ科）、紅景天属植物（Ｒｈｏｄｉｏｌａ属、ベンケイソウ科）、及び、サラシア属植物（Ｓａｌａｃｉａ属、ニシキギ科）の三種から成る粉末及び／又は抽出物を有効成分とする抗糖尿病剤（例えば、特許文献１参照。）やエゾハリタケ科のキノコの子実体の処理物を有効成分とする糖尿病予防・改善剤（例えば、特許文献２参照。）等も知られている。
【０００４】
また、高齢化に伴って惹起される骨粗鬆症疾患数は現在１０００万人を超え、その医療費は高価になっており、社会的に多くの関心が持たれている。その中で、糖尿病疾患の合併症として、糖尿病性骨粗鬆症が医療の面から重要な課題として注目されている。この糖尿病性骨粗鬆症の治療と予防はきわめて重要であるが適当な手段がないのが現状である。かかる糖尿病性骨粗鬆症に関与する因子としてインスリン欠乏状態、高血糖状態、それに動脈硬化や神経障害、腎障害といった糖尿病に伴う合併症が挙げられ、絶対的および相対的インスリン欠乏が、骨芽細胞の機能や数を低下させ、さらに高血糖状態の持続で骨芽細胞内にソルビトールが蓄積することで骨芽細胞機能の低下が招来され、糖尿病初期には、尿糖排泄に伴う尿中カルシウム排泄の増加で、二次的に副甲状腺ホルモンの分泌が増加し骨吸収促進が起こるものの、長期的には副甲状腺の副甲状腺ホルモン分泌能が低下し、最終像は低回転型骨粗鬆症を呈するとされている（例えば、非特許文献１参照。）。
【０００５】
一方、海藻類のアカモクは各地の浅海に多産する褐藻類ヒバマタ目ホンダワラ属の海藻として知られているが、該アカモクの熱水抽出物が抗ウイルス作用を有することが報告されている（例えば、非特許文献２、３参照。）。また、アカモク等特定の褐藻類及び紅藻類から水抽出される成分を含有する薬剤が、魚類の養殖場における細菌感染症による斃死を軽減することが知られ（例えば、特許文献３参照。）、さらに、材料として人参、キウイフルーツ、トマト、林檎、バナナ、柑橘類（グレープフルーツ）、牛乳、蜂蜜、西瓜、梨、桃、葡萄、柿、プルーン、さくらんぼ、枇杷、パイナップル、苺、その他青菜類、キャベツ、海藻、大豆（キナ粉）、卵を用いた病気の治療の為のジュースを１ヶ月以上飲み続けると癌、糖尿病、心臓病、脳梗塞等の血管の病気、花粉症等のアレルギー、骨折、目の病気、骨粗鬆症、皮膚病、喘息、中毒等のほとんどの病気に効くことも知られている（例えば、特許文献４参照。）。また、本発明者らは海藻アカモクから抽出した成分が骨量増進作用を発揮し、骨粗鬆症の予防に有用であることを明らかにしている（例えば、非特許文献４〜７参照。）。しかしながら、海藻アカモクの成分が糖尿病や糖尿病性骨粗鬆症に及ぼす修復効果については知られていない。また、海藻アカモクの成分以外にも糖尿病性骨粗鬆症を予防・修復する物質についてほとんど知られていない。
【０００６】
【特許文献１】
特開２００２−３１６９３８号公報
【特許文献２】
特開２００２−１８７８５１号公報
【特許文献３】
特開平０６−２３４６５１号公報
【特許文献４】
特開２００２−３３８４８５号公報
【非特許文献１】
ＣＬＩＮＩＣＡＬ  ＣＡＬＣＩＵＭ２０００年１０月号（Ｖｏｌ．１０  Ｎｏ．１０）ｐ９（１１８９）〜ｐ１６（１１９６）
【非特許文献２】
Ｐｒｅｅｐｒａｍｅ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｌ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ．  ２１（７）：７３０−７３４，  １９９８
【非特許文献３】
Ｈｏｓｈｉｎｏ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ．  ４９（４）：４８４−４８５，  ２００１．
【非特許文献４】
Ｙａｍａｇｕｃｈｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ４７（６）  ５３３−５３８，  ２００１
【非特許文献５】
Ｙａｍａｇｕｃｈｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ４８（２）  １４８−１５３，  ２００２
【非特許文献６】
Ｙａｍａｇｕｃｈｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ４８（２）  １５４−１６０，  ２００２
【非特許文献７】
Ｙａｍａｇｕｃｈｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ４８（４）  ３２５−３３０，  ２００２
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、日常の食生活において容易に入手および摂取でき、高血糖症、糖尿病性高脂血症、糖尿病性骨粗鬆症等の糖尿病態を改善することができる、副作用の少ない天然物起源の予防・改善剤や、糖尿病態の予防・改善用機能性食品又は食品素材や、飼料を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、海藻アカモク成分の有効性に着目し、鋭意研究を行った結果、海藻アカモク水抽出物に高血糖症、糖尿病性高脂血症、糖尿病性骨粗鬆症等の糖尿病態を改善する作用があることを見い出した。すなわち、ストレプトゾトシン投与によって、膵臓β細胞からのインスリン分泌障害により糖尿病態が惹起されたＩ型糖尿病のモデル動物である実験的糖尿病ラットに、海藻アカモク水抽出物を経口投与したところ、高血糖、高脂血症、及び血清中ミネラル濃度の変動（カルシウムの上昇と無機リンの低下）が有意に改善され、また、実験的糖尿病ラットにおいては骨量減少が引き起こされたが、この骨量減少がアカモク水抽出液成分の経口投与によっても有意に修復されることを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち本発明は、アカモク（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｈｏｒｎｅｒｉ）又はその処理物を有効成分として含有することを特徴とする糖尿病態の予防・改善剤（請求項１）や、アカモクの処理物が、アカモクの抽出物であることを特徴とする請求項１記載の糖尿病態の予防・改善剤（請求項２）や、糖尿病態が、インスリン依存型糖尿病態であることを特徴とする請求項１又は２記載の糖尿病態の予防・改善剤（請求項３）や、糖尿病態が、高血糖症であることを特徴とする請求項１〜３記載のいずれか記載の糖尿病態の予防・改善剤（請求項４）や、糖尿病態が、糖尿病性高脂血症であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか記載の糖尿病態の予防・改善剤（請求項５）や、糖尿病態が、糖尿病性骨粗鬆症であることを特徴とする請求項１〜５のいずれか記載の糖尿病態の予防・改善剤（請求項６）に関する。
【００１０】
また本発明は、アカモク（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｈｏｒｎｅｒｉ）又はその処理物を有効成分として含有することを特徴とする糖尿病態の予防・改善用機能性食品又は食品素材（請求項７）や、アカモクの処理物が、アカモクの抽出物であることを特徴とする請求項７記載の糖尿病態の予防・改善用機能性食品又は食品素材（請求項８）や、アカモク（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｈｏｒｎｅｒｉ）又はその処理物を有効成分として含有することを特徴とする糖尿病態の予防・改善用飼料（請求項９）や、アカモクの処理物が、アカモクの抽出物であることを特徴とする請求項９記載の糖尿病態の予防・改善用飼料（請求項１０）に関する。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明の糖尿病態の予防・改善剤や、糖尿病態の予防・改善用機能性食品又は食品素材や、糖尿病態の予防・改善用飼料としては、アカモク又はその処理物を有効成分として含有するものであれば特に制限されるものではなく、上記アカモク又はその処理物としては、アカモクの乾燥物、アカモクの抽出物、アカモクの酵素処理物などを挙げることができる。上記アカモクの乾燥物としては特に制限されないが、アカモク全体を乾燥した後、粉末化することにより得たものが好ましい。また、アカモクの抽出物としては特に制限されないが、アカモクに抽出媒体を加えて粉砕した後、その可溶性成分を分取することにより得たものが好ましい。
【００１２】
アカモク乾燥物の調製方法としては、生アカモクを水で洗浄後、凍結真空乾燥、天日乾燥、風乾、熱風乾燥、加熱乾燥、マイクロ波乾燥等により乾燥する方法や、乾燥後にミキサー等で粉末化して乾燥粉末を得る方法や、乾燥粉末を常法により顆粒化、カプセル化、錠剤化する方法などを具体例に例示することができるが、凍結真空乾燥後粉末化する方法を好適に例示することができる。また、アカモク抽出物の調製方法としては、アカモクに１〜５倍量、好ましくは２〜４倍量、特に好ましくは３倍量程度の常温水、熱水、脱イオン水等の水や、１０〜３０％、好ましくは２０％程度のアルコール水、ヘキサン等の各種有機溶媒を加えてホモゲナイザー等で磨砕・抽出し、これを４０００〜７０００ｇ、好ましくは５０００〜６０００ｇで５〜１５分間、好ましくは１０分間程度遠心分離して、可溶性画分を分離することにより、抽出物を得る方法を具体例に例示することができるが、３倍量程度の水を加えて磨砕・抽出し、これを５０００〜６０００ｇで１０分間程度遠心分離して、可溶性画分を分離する方法を好適に例示することができる。上記抽出物は、そのままで糖尿病態の改善薬の有効成分として用いることができるが、当該抽出物を、更に適当な精製手段、例えばシリカゲルカラムクロマト法、逆相カラムクロマト法、ゲル濾過クロマトグラフ法、膜分画法などにより活性の高い画分を分画して用いることもできる。また、採取したアカモクをすぐに加工処理しない場合は、１０℃以下の低温、例えば４〜５℃にて保存することが好ましい。
【００１３】
本発明において糖尿病態とは、Ｉ型及び／又はＩＩ型糖尿病及びこれら糖尿病に起因する種々の合併症等の疾病の症状を呈した状態をいい、糖尿病態としては、高血糖症、糖尿病性高脂血症、糖尿病性骨粗鬆症、糖尿病により体重が減少する症状や、糖尿病により血中ミネラル濃度が変動する症状、神経障害や網膜症や腎臓障害等の合併症などの症状を呈した状態を具体的に例示することができる。そして、本発明の糖尿病態の予防・改善剤は、高血糖症、糖尿病性高脂血症、糖尿病性骨粗鬆症などの糖尿病態の予防・改善作用を有することから、糖尿病態の予防剤や症状改善剤として、さらに食品に添加配合することにより該食品を糖尿病態の予防・改善作用を有する機能性食品とするための薬理組成物素材として、有利に用いることができる。かかる本発明の糖尿病態の予防・改善剤は、通常経口投与され、アカモク乾燥物は１日あたり１ｍｇ〜５ｇ／Ｋｇ体重、好ましくは１０〜１０００ｍｇ／Ｋｇ体重の範囲で摂取することにより、また、アカモク水抽出物（乾燥重量）は１日あたり、０．１〜１０００ｍｇ／Ｋｇ体重、好ましくは１〜１００ｍｇ／Ｋｇ体重の範囲で摂取することにより、糖尿病態の予防・改善作用をもたらすが、症状、性別、年齢等に応じて、摂取量は適宜調整することができる。
【００１４】
本発明の糖尿病態の予防・改善剤を医薬品として用いる場合は、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤などの各種調剤用配合成分を添加することができる他、他の高血糖症、糖尿病性高脂血症、糖尿病性骨粗鬆症等の糖尿病態の治療薬と併用することもできる。
【００１５】
アカモク又はその処理物を有効成分として含有する本発明の糖尿病態の予防・改善用機能性食品又は食品素材は、前記本発明の糖尿病態の予防・改善剤を飲食品原料の一部として用いたり、あるいは製造工程又は製造後に添加・配合することにより得ることができる。かかる機能性食品としては特に制限されるものではなく、クッキー、パン、ケーキ、煎餅などの焼き菓子、ラムネ菓子等などの錠菓、羊羹などの和菓子、プリン、ゼリー、アイスクリーム類などの冷菓、チューインガム、キャンディ等の菓子類や、クラッカー、チップス等のスナック類や、うどん、そば等の麺類や、かまぼこ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉練り製品や、チーズ、バターなどの乳製品や、みそ、しょう油、ドレッシング、マヨネーズ、甘味料等の調味類や、豆腐、こんにゃく、その他佃煮、餃子、コロッケ、サラダ、スープ、シチュー等の各種総菜や、ヨーグルト、ドリンクヨーグルト、ジュース、牛乳、豆乳、酒類、コーヒー、紅茶、煎茶、ウーロン茶、スポーツ飲料等の各種飲料などを具体的に例示することができる。例えば、アカモク乾燥品を微粉末化し、該微粉末を常法に従い打錠することにより錠菓を製造することができ、この場合かかる微粉末を造粒した後に打錠することもできる。また、アカモク乾燥品を微粉末化し、これに乳糖、デキストリン、乾燥酵母等を配合したものを打錠することもできる。
【００１６】
アカモク又はその処理物を有効成分として含有する本発明の糖尿病態の予防・改善用飼料は、公知のブタ、ウシ等の家畜用の飼料やニワトリ等の家禽用の飼料に、アカモク又はその処理物を配合することにより調製することができ、かかるアカモク又はその処理物が有効成分として配合された飼料は、家畜や家禽の糖尿病態の予防・改善に有用である。
【００１７】
【実施例】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
実施例１［材料］
実験動物は、ウイスター系雄ラット（４週齢；体重８５−９０ｇ）（日本ＳＬＣから入手）を用いた。また、ストレプトゾトシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ；ＳＴＺ）（Ｓｉｇｍａ社（米国）製）を、生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）に溶解した５０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ４．５）液中に溶解し、６．０ｍｇ／０．５ｍｌの濃度のものを調製し、投与ＳＴＺ液とした。海藻アカモク抽出液は、文献（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ４７  ５３３−５３８，  ２００１）記載の方法、すなわち、Ｐｈｙｓｃｏｔｒｏｎホモゲナイザーを用いて、新鮮なアカモクを精製蒸留水でホモジネートし、冷却下５０００ｇで１０分間遠心分離し、その遠心上清液を凍結乾燥し、この凍結乾燥であるアカクモ抽出物の一定量を精製蒸留水に溶解することにより調製した。
【００１８】
実施例２［投与方法］
これらラットを以下の８群に分け、各群それぞれ７匹使用した。
１群（対照群）；精製蒸留水を１日１回胃ゾンデを用いて経口投与して１４日間飼育。
２群（アカモク投与群）；海藻アカモク抽出液を１日１回胃ゾンデにより経口投与（１０ｍｇ／ｍｌ／１００ｇラット体重）して１４日間飼育。
３群（ストレプトゾトシン投与群）；投与ＳＴＺ液を１回皮下投与（６．０ｍｇ／０．５ｍｌ／１００ｇラット体重）後、精製蒸留水を１日１回胃ゾンデを用いて経口投与して１４日間飼育。
４群（ストレプトゾトシン及びアカモク投与群）；投与ＳＴＺ液を１回皮下投与（６．０ｍｇ／０．５ｍｌ／１００ｇラット体重）後、海藻アカモク抽出液を１日１回経口投与して１４日間飼育。
５群（対照群）；精製蒸留水を１日１回胃ゾンデにより経口投与して２１日間飼育。
６群（アカモク投与群）；海藻アカモク抽出液を１日１回胃ゾンデにより経口投与（１０ｍｇ／ｍｌ／１００ｇラット体重）して２１日間飼育。
７群（ストレプトゾトシン投与群）；投与ＳＴＺ液を１回皮下投与（６．０ｍｇ／０．５ｍｌ／１００ｇラット体重）後、精製蒸留水を１日１回胃ゾンデを用いて経口投与して２１日間飼育。
８群（ストレプトゾトシン及びアカモク投与群）；投与ＳＴＺ液を１回皮下投与（６．０ｍｇ／０．５ｍｌ／１００ｇラット体重）後、海藻アカモク抽出液を１日１回胃ゾンデにより経口投与（１０ｍｇ／ｍｌ／１００ｇラット体重）して２１日間飼育。
【００１９】
実施例３［測定項目と測定方法］
上記各群のラットを、それぞれ最終投与の２４時間後にエーテル麻酔下で体重を測定した後、心臓穿刺により採血後屠殺し、大腿骨を摘出した。採血の３０分後に血液を２５００回転で５分間遠心分離して血清を採取し、血清中のグルコース濃度は和光純薬工業株式会社製のグルコース測定用キット「グルコース−テストワコー」を、血清中のトリグリセライド濃度は和光純薬工業株式会社製のトリグリセライド測定用キット「トリグリセライド−テストワコー」を、血清中のカルシウム濃度は和光純薬工業株式会社製のカルシウム測定用キット「カルシウムＣ−テストワコー」を、血清中の無機リン濃度は和光純薬工業株式会社製の無機リン濃度測定用キット「ピーテストワコー」を、それぞれ使用説明書のとおり用いて定量した。また大腿骨は、筋肉組織を除去し、骨幹部（皮質骨）と骨幹端部（海綿骨）組織に分け、冷０．２５Ｍショ糖溶液中で骨髄細胞を洗浄除去した。それぞれの骨組織を用いて、以下に記載の方法でカルシウム量、骨の石灰化の促進に関する最も重要な酵素であるアルカリ性ホスファターゼの発現量、及び骨組織中の細胞数の指標としてＤＮＡ量をそれぞれ測定した。
【００２０】
（骨カルシウムの測定）
摘出した大腿骨の組織片を０．２５Ｍショ糖溶液で洗浄、乾燥後、骨重量を測定した。その後、組織片に濃硝酸を加えて１２０℃で１２時間灰化し、原子吸光分光光度計（パーキンエルマー社製「パーキンエルマー３０３」）を用いて骨カルシウム量を定量した。
【００２１】
（アルカリ性ホスファターゼ活性の測定）
摘出した大腿骨の組織片を０．２５Ｍのショ糖液で洗浄し、６．５ｍＭのバルビタール緩衝液（ｐＨ７．４）３ｍｌ中で破砕し、超音波処理した。この液を遠心分離して上清を酵素液としてＷａｌｔｅｒ及びＳｃｈｕｔｔの方法（ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  Ａｎａｌｙｓｉｓ，  Ｖｏｌ１−２，ｐ８５６，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９６５）に従って測定した。すなわち、ｐ−ニトロフェニール燐酸を基質として、ジエタノールアミン緩衝液（ｐＨ９．８）２ｍｌに酵素液０．０５ｍｌを添加し、３７℃で３０分間インキュベーションし、０．０５ＮのＮａＯＨを１０ｍｌ添加した後、分光光度計を用いて吸光度（４０５ｎｍ）を測定し、骨に対する治療剤及び骨に対する作用の知られている化合物の骨アルカリ性ホスファターゼ活性を調べた。
【００２２】
（ＤＮＡ量の定量）
骨組織中の細胞数の指標として、ＤＮＡ量を定量した。摘出した大腿骨の組織片を０．２５Ｍのショ糖溶液で洗浄し、湿重量を測定した。その後、０．１ＮのＮａＯＨ４ｍｌ中で粉砕して、４℃で２４時間浸透させた。この液を遠心分離し、上清を試料としてＣｅｒｉｏｔｔｉらの方法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，  ２４１：  ３４−７７，  １９５１）に従って定量した。すなわち、試料２ｍｌに濃塩酸１ｍｌ及び０．０４％のインドール溶液１ｍｌを添加し沸騰水中で１００℃に加熱後、急冷して、クロロホルム４ｍｌで抽出し、クロロホルム層を採取して、分光光度計（４９０ｎｍ）を用いて骨中のＤＮＡ量を測定した。
【００２３】
（データの処理）
得られたデータは、各群７匹のラットの値の平均値±標準誤差として表示した（表１〜４及び図１〜図２２参照）。また、有意差検定はＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ‐ｔｅｓｔ（ｔ検定）を用いて行なった。なお、危険率（ｐ）＜０．０５以下を有意差ありとした。
【００２４】
実施例４［結果］
（体重、血清中グルコース濃度及びトリグリセライド濃度）
糖尿病ラットの体重、血清中グルコース濃度及びトリグリセライド濃度の変動に及ぼす海藻アカモク抽出物経口投与の修復効果を図１〜６及び表１に示す。なお、図表中に対照群（１、５群）のデータと比較してｐ＜０．０１であった場合には※印を、ストレプトゾトシン単独投与群（３、７群）と比較してｐ＜０．０１であった場合には♯印を付した。
対照群（１、５群）の値と比較して、ストレプトゾトシンを単独投与した群（３、７群）の１４日目及び２１日目の体重増加の有意な低下（図１、２）、血清中のグルコースの著しい増加（図３、４）及びトリグリセライド濃度の著しい増加（図５、６）が引き起こされ、糖尿病態をもたらした（表１）が、これらの変動は、海藻アカモク抽出物を１４日間及び２１日間経口投与した群（４、８群）では有意に抑制されることが見い出され、抗糖尿病効果を発揮することが明らかになった。なお、アカモク単独投与群（２、６群）には、体重及び血清中グルコース濃度の有意な変動は認められなかったが、２１日間の投与により血清トリグリセライド濃度の有意な低下がみられた（表１及び図６）。これらの結果から、海藻アカモク成分には血清脂質低下作用があり、糖尿病態の高血糖、高脂血症及び体重減少に対して有意な改善効果があることが見い出された。
【００２５】
【表１】
2004217559.tif 000002
【００２６】
（血清中のカルシウム濃度及び無機リン濃度）
糖尿病ラットの血清中のカルシウム濃度及び無機リン濃度の変動に及ぼす海藻アカモク抽出物経口投与の修復効果を図７〜１０及び表２に示す。なお、図表中に対照群（１、５群）のデータと比較してｐ＜０．０１であった場合には※印を、ストレプトゾトシン単独投与群（３、７群）と比較してｐ＜０．０１であった場合には♯印を付した。
アカモク単独投与群（２、６群）のカルシウム濃度及び無機リン濃度は、対照群（１、５群）と比較して、アカモク抽出物の経口投与により有意に変動しなかった。また、ストレプトゾトシン単独投与により糖尿病態を惹起された群（３、７群）では、投与の１４日目及び２１日目における血清中のカルシウム濃度の有意な上昇（図７、８）と血清中の無機リン濃度の有意な低下（図９、１０）が認められたが、これらの変動は、海藻アカモク抽出物を１４日間及び２１日間経口投与した群（４、８群）では有意に改善されることが見い出された（表２及び図７〜１０）。このように、糖尿病状態において、血清中のミネラル濃度が変動するが、この変動はアカモク抽出物の投与によって有意に修復されることが明らかとなり、抗糖尿病効果を発揮した。
【００２７】
【表２】
2004217559.tif 000003
【００２８】
（骨成分）
糖尿病ラットの大腿骨組織の骨幹部（皮質骨）の骨成分の変動に及ぼす海藻アカモク抽出物経口投与の修復効果を図１１〜１６及び表３に、大腿骨組織の骨幹端部（海綿骨）組織の骨成分の変動に及ぼす海藻アカモク抽出物経口投与の修復効果を図１７〜２２及び表４に示す。なお、図表中に対照群（１、５群）のデータと比較してｐ＜０．０１であった場合には※印を、ストレプトゾトシン単独投与群（３、７群）と比較してｐ＜０．０１であった場合には♯印を付した。
アカモク単独投与群（２、６群）の大腿骨組織の骨幹部（皮質骨）及び骨幹端部（海綿骨）組織のカルシウム量、アカリホスファターゼ（骨石灰化促進酵素）活性及びＤＮＡ量（骨組織中の細胞数の指標）は、対照群（１、５群）の値と比較して、海藻アカモク抽出物の経口投与により、その投与の１４日目及び２１日目において、有意に上昇していた。ストレプトゾトシン単独投与群においては、骨幹部及び骨幹端部の上記骨成分のすべてが有意に減少することが認められたが、これらの減少は、海藻アカモク抽出物を１４日間及び２１日間経口投与した群（４、８群）では有意に改善されることが見い出された。このように、糖尿病状態における骨成分の減少がアカモク抽出液の経口投与により有意に改善されることが明らかになった。
【００２９】
【表３】
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【００３０】
【表４】
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【００３１】
（まとめ）
以上の結果から明らかなように、ストレプトゾトシン誘発糖尿病態（Ｉ型−インスリン分泌障害による糖尿病）における体重減少、高血糖（グルコース）、高脂血症（トリグリセライド）及び血清中ミネラル（カルシウムの上昇と無機リンの低下）濃度の変動が、海藻アカモク水抽出液成分の経口摂取により有意に改善され、海藻アカモク水抽出液成分が、抗糖尿病作用を発揮する組成物であることが見い出された。さらに、ストレプトゾトシン誘発糖尿病態においては骨量減少が引き起こされたが、この骨量減少がアカモク水抽出液成分の経口投与によっても有意に修復されることが明らかになった。このようなアカモク水抽出液成分の抗糖尿病効果は、ストレプトゾトシン投与によるＩ型糖尿病と同様にＩＩ型糖尿病（インスリン分泌非依存性の糖尿病）においても発揮されるものと考えられる。
【００３２】
【発明の効果】
本発明によると、海藻アカモク又はその処理物、特に水抽出物を有効成分として用いることで、高血糖症、高脂血症、糖尿病性骨粗鬆症等の糖尿病態を改善することができる。また、食経歴の長い海藻であるアカモクからの調製物であるため安全性が高く、若い時期から日常的に予防目的で摂取することができるので、個人の老後の健康的な生活に資するばかりでなく、高齢化社会の医療費削減への貢献が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の各ラット群における１４日間飼育後の体重を示す図である。
【図２】本発明の各ラット群における２１日間飼育後の体重を示す図である。
【図３】本発明の各ラット群における１４日間飼育後の血清中のグルコース濃度を示す図である。
【図４】本発明の各ラット群における２１日間飼育後の血清中のグルコース濃度を示す図である。
【図５】本発明の各ラット群における１４日間飼育後の血清中のトリグリセライド濃度を示す図である。
【図６】本発明の各ラット群における２１日間飼育後の血清中のトリグリセライド濃度を示す図である。
【図７】本発明の各ラット群における１４日間飼育後の血清中のカルシウム濃度を示す図である。
【図８】本発明の各ラット群における２１日間飼育後の血清中のカルシウム濃度を示す図である。
【図９】本発明の各ラット群における１４日間飼育後の血清中の無機リン濃度を示す図である。
【図１０】本発明の各ラット群における２１日間飼育後の血清中の無機リン濃度を示す図である。
【図１１】本発明の各ラット群における１４日間飼育後の大腿骨骨幹部（皮質骨）組織の骨成分のカルシウム量を示す図である。
【図１２】本発明の各ラット群における２１日間飼育後の大腿骨骨幹部（皮質骨）組織の骨成分のカルシウム量を示す図である。
【図１３】本発明の各ラット群における１４日間飼育後の大腿骨骨幹部（皮質骨）組織の骨成分のアルカリホスファターゼ活性を示す図である。
【図１４】本発明の各ラット群における２１日間飼育後の大腿骨骨幹部（皮質骨）組織の骨成分のアルカリホスファターゼ活性を示す図である。
【図１５】本発明の各ラット群における１４日間飼育後の大腿骨骨幹部（皮質骨）組織の骨成分のＤＮＡ量を示す図である。
【図１６】本発明の各ラット群における２１日間飼育後の大腿骨骨幹部（皮質骨）組織の骨成分のＤＮＡ量を示す図である。
【図１７】本発明の各ラット群における１４日間飼育後の大腿骨骨幹端部（海綿骨）組織の骨成分のカルシウム量を示す図である。
【図１８】本発明の各ラット群における２１日間飼育後の大腿骨骨幹端部（海綿骨）組織の骨成分のカルシウム量を示す図である。
【図１９】本発明の各ラット群における１４日間飼育後の大腿骨骨幹端部（海綿骨）組織の骨成分のアルカリホスファターゼ活性を示す図である。
【図２０】本発明の各ラット群における２１日間飼育後の大腿骨骨幹端部（海綿骨）組織の骨成分のアルカリホスファターゼ活性を示す図である。
【図２１】本発明の各ラット群における１４日間飼育後の大腿骨骨幹端部（海綿骨）組織の骨成分のＤＮＡ量を示す図である。
【図２２】本発明の各ラット群における２１日間飼育後の大腿骨骨幹端部（海綿骨）組織の骨成分のＤＮＡ量を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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