(57)【要約】【課題】アミノ燐脂質のグリケーションを抑制する成分の提供。【解決手段】タマネギエキスを有効成分として含むアミノ燐脂質のグリケーション抑制剤。【特許請求の範囲】
【請求項１】
タマネギエキスを有効成分として含むアミノ燐脂質のグリケーション抑制剤。
【請求項２】
タマネギエキスが４０−８０℃の温度及び１００−３６０ｍｍＨｇの圧力の条件で留出した留分を含むタマネギエキスである請求項１のアミノ燐脂質のグリケーション抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アミノ燐脂質のグリケーション抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
タマネギは、野菜として広く使用されているが、そのなかに含まれる人体に有効な成分が注目されてきている。例えば、以下の作用があるとされる。
【０００３】
【非特許文献１】Ｋ．Ｔ．Ａｕｇｕｓｔｉら「Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．」６０，１２１（１９７５）など（血糖低下作用）。
【０００４】
【非特許文献２】Ａ．Ｂｏｒｄｉａら「Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ」２２、１０３（１９７５）など（脂質低下作用）。
【０００５】
【非特許文献３】Ａ．Ｎ．Ｍａｋｈｅｊａら「Ａｂｓｔｒ．８ｔｈ．Ｉｎｔ．Ｃｏｎｇｒ．Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ　ａｎｄ　Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ」Ｔｒｏｎｔｏ（Ｊｕｌｙ　１９８１）など（血小板凝集阻害作用）。
【０００６】
【非特許文献４】Ｉ．Ｓ．Ｍｅｎｏｎら「Ｂｒ．Ｍｅｄ．Ｊ．」３，３５１，１９６８；Ｋ．Ｋ．Ｓｈａｒｍａら「Ｉｎｄｉａｎ　Ｍｅｄ．Ｇａｚ．」１６，４７９（１９７７）など（フィブリン溶解作用）。
【０００７】
【非特許文献５】Ｄ．Ｗａｔｅｒら「Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．」１０７，１７（１９８５）など（抗アレルギー作用）。
【０００８】
【非特許文献６】
2004115491.tif 000002
、３４４（１９９９）（骨粗そう症阻害作用）。
【０００９】
また、最近、糖尿病の合併症（網膜症、神経障害、腎症）の原因として生体内の糖のカルボニル基とアミノ酸及び蛋白のアミノ基とが反応するメイラード反応（アミノカルボニル反応）による生成物（ａｄｖａｎｃｅｄ　ｇｌｙｃａｔｉｏｎ　ｅｎｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ；ＡＧＥ）が注目されてきている。ＡＧＥは、血管内皮細胞に作用し、血管透過性、血液凝固性を促進し、またマクロファージや網膜色素上皮細胞に作用して、各種サイトカイン、増殖因子の産生を増加させて、血管の新生を誘導して網膜症の進行を促進する。さらに、高血糖により神経構成蛋白にグリケーションが生ずると、神経の軸索の萎縮、変性、脱髄などが起き、またＡＧＥは、内皮細胞のＡＧＥ受容体に結合して活性酸素を生成する。そのため、神経障害が生ずる。また、マクロファージは、ＡＧＥを貧食し分解するが、一方受容体を介して各種サイトカインや成長因子を分泌して腎臓のメサンギウム細胞を増殖させ、さらにメサンギウム細胞から各種の基質の分泌増加を促進する。しかも、メサンギウム細胞にも受容体があるので、これを介してサイトカイン、増殖因子の産生を促進し、その結果、細胞外基質産生を増加させる。この基質にＡＧＥが作用すると、基質の蛋白間の結合異常が生じて糸球体に構造異常、機能異常が生ずる。このように、ＡＧＥは、糖尿病の合併症に関与している。そして、タマネギエキスは、この反応を抑制することができるとされている。
【００１０】
生物体に存在するアミノ燐脂質であるホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）は、周知のように、分子内にアミノ基を有するため、蛋白質と同じく、グリケーションが生起する。生体外（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）では、ＰＥは、グルコースと反応してアマドリ型燐脂質を生成することが分かり、このアマドリ型燐脂質が構造変化して最終段階生成物になるものと思われる。
【００１１】
【非特許文献７】Ｌｅｒｔｓｉｒｉ，Ｓ．、Ｍｉｙａｚａｗａ，Ｔ．ら「Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．」６２、８９３−９０１（１９９８）。
【００１２】
生体内（ｉｎ　ｖｉｖｏ）でも、糖化した燐脂質が生成・蓄積されていることが分かってきている。例えば、動脈硬化症者の大動脈弓部硬化巣の燐脂質は、１３％が糖化されており、糖尿病を併発した患者の硬化巣では燐脂質の７．３％が糖化物であったとされる。
【００１３】
【非特許文献８】Ｒａｖａｎｄｉ，Ａら「Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．」２０、４６７−４７７（２０００）。
【００１４】
ヒト赤血球のグリコヘモグロビン値とアマドリ型ＰＥの蓄積量とは比例することが報告されている。
【００１５】
【非特許文献９】Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ−Ｕｌｔｚｍａｎ、Ｃ．Ｍ．ら「Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．」３９１，２４５−２５４（２００１）。
【００１６】
また、アマドリ型ホスファチジルエタノールアミンが鉄と共存すると、活性酸素を発生して、脂質過酸化が著しく誘発されることが認められた。
【００１７】
【非特許文献１０】Ｏａｋ，Ｊ．Ｈ．，Ｍｉｙａｚａｗａ，Ｔ．ら「ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ．」４８１，２６−３０（２０００）。
【００１８】
アマドリ型ＰＥの高感度定量法により、ラットでは、加齢に応じてアミノ燐脂質のグリケーションが亢進することも分かった。
【００１９】
【非特許文献１１】Ｏａｋ，Ｊ．Ｈ．，Ｍｉｙａｚａｗａ，Ｔ．ら「Ｊ．Ｌｉｐｉｄ．Ｒｅｓ．」４３、（３）（２００２）。
【００２０】
これらの事実から、加齢または高血糖では、生体膜に糖化燐脂質が生成し、そのため膜脂質の過酸化が誘発されるものと考えられ、アミノ燐脂質のグリケーションは、糖尿病などの疾患の進展と増悪化の要因と思われる。しかし、アミノ燐脂質のグリケーションを抑制する成分は、現在のところ見いだされていない。
【００２１】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、アミノ燐脂質のグリケーションを抑制する成分を見いだすことを目的とする。
【００２２】
【課題を解決するための手段】
本発明は、タマネギエキスを有効成分として含むアミノ燐脂質のグリケーション抑制剤に関する。
【００２３】
本発明で用いられるタマネギエキスは、タマネギから例えば溶媒による抽出または減圧濃縮による抽出により得ることができる。溶媒抽出よりも減圧濃縮のほうが、安全性の面から好ましい。使用されるタマネギは、その種類、産地、収穫時期などに限定されない。例えば、減圧濃縮でエキスを得るには、タマネギの生鱗茎を収穫した後、水洗し、剥皮する。次に、適当な大きさに破砕し、圧搾または遠心分離などにより搾汁し、得られたタマネギ搾汁を減圧濃縮により濃縮してタマネギエキスを得る。濃縮の条件として、例えば７５−９５℃の加熱温度、４５−４０℃の蒸発温度及び１０−２０ｍｍＨｇの圧力で行われる。濃縮度は、特に限定されないが、濃縮したエキス中の水溶性固形分が３０−７５重量％の範囲が好ましい。
【００２４】
減圧濃縮では、４０−８０℃好ましくは６０−７５℃の温度及び１００−３６０ｍｍＨｇ好ましくは１５０−２９０ｍｍＨｇの圧力で留出してくる留分（以下、初留分とする）を採取し、それを後の減圧濃縮により得られた留分に添加し混合したエキスが好ましい。初留分の採取に当たっては、そのまま採取してもよいが、好ましくは活性炭または珪藻土などに吸着させ、有機溶媒例えばエタノールなどで溶出し、溶出液から溶媒を除いて得る。初留分の生成量は、生のタマネギの重量に基づいて０．０１−０．０２重量％である。そして、得られた初留分を加えて、本発明のタマネギエキスが得られる。
【００２５】
本発明の抑制剤のグリケーション抑制作用は、種々の系を用いて確認できるが、例えば、１、２−ジ（シス−９−オクタデセノイル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ジオレイルＰＥ）とＤ−グルコースとの系を挙げることができる。メタノール中のこの系をインキュベートすると、ジオレイルＰＥの減少とともにアマドリ型ＰＥが多量に生成し蓄積する。本発明の抑制剤は、このアマドリ型ＰＥの生成を抑制する（実施例１）。
【００２６】
また、アミノ燐脂質のグリケーションにより生成するアマドリ型ＰＥは、細胞死を誘発する。この事実は、例えば、前記のジオレイルＰＥとＤ−グルコースとの系をインキュベートし、その脂質抽出物でマクロファージ系細胞系であるＪ７７４Ａ．１を処理すると、顕著な細胞死（アポトーシスに特徴的なクロマチン凝縮及び核の断片化など）が認められることから立証される（インキュベート前の試料では細胞死誘発は認められない）。一方、タマネギエキスを加えた系では、細胞死が抑制される（参考例１）。細胞死が抑制されるというこの結果から、タマネギエキスは、アマドリ型ＰＥの生成を抑制することが分かる。
【００２７】
本発明のアミノ燐脂質のグリケーション抑制剤は、投与にあたって、経口で使用される。使用には、そのままでもよいが、例えば粉末、顆粒、細粒、錠剤、カプセルなどの従来の剤型にして使用することができる。これらの剤型の製造には、従来行われている方法が用いられる。例えば、錠剤の製造では、タマネギエキスに従来添加物として使用されているものを加えて十分に混合する。添加物としては、例えばとうもろこし澱粉、コムギ澱粉、馬鈴薯澱粉、乳糖、ブドウ糖、マンニトール、炭酸カルシウム、硫酸カルシウムなど；結合剤例えば澱粉類、デキストリン、アラビアガム、トラガントガム、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、メチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコールなど；崩壊剤例えば澱粉類、ポリビニルピロリドン、結晶セルロースなど；滑沢剤例えばステアリン酸マグネシウム、タルクなど；着色剤、香料などが挙げられる。得られた混合物を湿式または乾式で顆粒とするかまたはすることなく、打錠機にかけて打錠し、錠剤とする。錠剤中のタマネギエキスの量は、任意でよい。
【００２８】
本発明のアミノ燐脂質のグリケーション抑制剤の投与にあたっては、症状に応じ、成人では１日１−数回、１日当たり合計量でタマネギエキスとして約３−８ｇ、好ましくは４−６ｇ用いる。
【００２９】
本発明のアミノ燐脂質のグリケーション抑制剤は、タマネギそのものが古来から食品として使用されてきており、毒性は殆ど認められない。
【００３０】
本発明の薬剤は、以下の実施例に示されるように、アミノ燐脂質のグリケーション抑制作用に優れている。
【００３１】
【実施例】
実施例　１
北海道産タマネギ１１ｋｇを水洗機で２回水洗した。次に、皮を剥き、フェザーミルで破砕し、得られた破砕物を搾汁機により搾汁して、搾汁１０．３ｋｇ（ブリックス：７．６）を得た。遠心薄膜式減圧濃縮機を用いて、減圧濃縮した。６０−７５℃の温度及び１５０−２９０ｍｍＨｇの圧力で留出してくる成分を活性炭層に通して吸着させた。吸着物をエタノールで溶出させて、得られた溶液からエタノールを蒸発により除去し、残存する成分１．６ｇ（以下、成分Ｘとする）を採取した。減圧濃縮を、さらに、加熱温度９２℃、蒸発温度４２℃及び圧力１５ｍｍＨｇで行い、濃縮エキス（以下、エキスＹとする）１．１ｋｇを得た。エキスＹに、上記の成分Ｘを加えて、以下の実験に使用するタマネギエキスを得た。
【００３２】
１、２−ジ（シス−９−オクタデセノイル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ジオレイルＰＥ）（和光純薬工業製）３４０μＭ及びＤ−グルコース（和光純薬工業製）１００ｍＭを含む２０ｍＬのメタノールを、６０℃で１日間インキュベートした（コントロール）。一方、ジオレイルＰＥ及びＤ−グルコースを含むメタノール溶液に、上記のタマネギエキスを０．１％（ｖ／ｖ）または０．０１％（ｖ／ｖ）となるように添加し、同様にインキュベートした。経時的に、反応液からＦｏｌｃｈ法により脂質成分を抽出した。得られた抽出物を２０ｍＬのメタノールに再溶解し、分析用の試料液とした。
【００３３】
試料液５０μＬを、ＨＰＬＣ−エレクトロスプレイイオン化質量分析装置（ＨＰＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳ）及びＨＰＬＣ−光散乱検出器（ＨＰＬＣ−ＥＬＳＤ）にかけ、アマドリ型ＰＥ（糖化ＰＥ）の生成量を定量した。分析条件は、以下の通りであった。カラム：ＴＳＫゲルＯＤＳ−８０Ｔｓ（４．６ｍｍＩ．Ｄ．×２５ｃｍ；東ソー製）、分析温度：３５℃、溶離液：メタノール／水（９９．５：０．５、ｖ／ｖ；５ｍＭ酢酸アンモニウムを含む）、流速：１．０ｍＬ／分、検出器：ＥＳＩ／ＭＳ検出器（Ｍａｒｉｎｅｒ；ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社製）またはＥＬＳＤ検出器（ＳＥＤＥＸ５５；ＳＥＤＥＲＥ社製）。測定値は、平均値±標準偏差（ｎ＝５）で示した。試料間の有意差検定は、Ｓｔｕｄｅｎｔ−ｔで行った。
【００３４】
得られた結果は、以下の通りである。アマドリ型ＰＥの生成量は、コントロールでは、１５２μＭであるのに対し、タマネギエキスを０．１％（ｖ／ｖ）添加したものは、９３μＭ、そして０．０１％（ｖ／ｖ）を添加したものは、８８μＭであった（ｐは＜０．００５）。即ち、タマネギエキスの添加によるアマドリ型ＰＥの生成量は、コントロールのそれの約５３−６７％に低下した。
【００３５】
参考例　１
実施例１の試料液１．５ｍＬを、窒素ガスで濃縮・乾固し、１０μＬのエタノールに溶解した。得られたエタノール溶液を１０ｍＬのＲＰＭＩ　１６４０（０．１％ＦＢＳ含有）培地に加えて、テスト培地にした。マクロファージ系細胞株Ｊ７７４Ａ．１（ＪＣＲＢ細胞パンク）（５０００細胞／穴）を９６穴マイクロプレートにまき、ＲＰＭＩ　１６４０（１０％ＦＢＳ含有）培地で２４時間前培養した。次に、テスト培地で２４時間培養し、試料液（脂質グリケーション生成物）の細胞毒性をＷＳＴ−１法により評価した。
【００３６】
結果は、以下の通りである。テスト開始時の生細胞の数を１００％とすると、ジオレイルＰＥ及びＤ−グルコースのみを有するコントロールでは、培養後では６５％に低下した。しかし、タマネギエキスを０．１％（ｖ／ｖ）を有する試料では、なお１００％のままであった（ｐは＜０．００５）。この結果から、タマネギエキスは、燐脂質のグリケーションを抑制することによって、細胞死を抑制することが分かる。