(57)【要約】【課題】養殖フグの生産を円滑に行うためにフグの疾病を予防し、且つ魚体を無毒化することが生産者および消費者の双方から要望されている。【解決手段】ふ化直後乃至ふ化後１５週間以内のフグを殺菌処理及び／又は除菌処理を行った養殖水で飼育するフグの疾病予防および無毒化の方法である。殺菌処理は紫外線殺菌処理、オゾン殺菌処理及び加熱殺菌処理のいずれかであり、除菌処理はミクロフィルター、限外濾過膜、透析膜及び逆浸透膜のいずれかによる濾過処理である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ふ化直後乃至ふ化後１５週間以内のフグを殺菌処理を行った養殖水で飼育することを特徴とするフグの疾病予防および無毒化の方法。
【請求項２】
ふ化直後乃至ふ化後１５週間以内のフグを除菌処理を行った養殖水で飼育することを特徴とするフグの疾病予防および無毒化の方法。
【請求項３】
ふ化直後乃至ふ化後１５週間以内のフグを殺菌処理および除菌処理を行った養殖水で飼育することを特徴とするフグの疾病予防および無毒化の方法。
【請求項４】
前記ふ化直後乃至ふ化後１５週間以内のフグがふ化後１０週間以上でふ化後１５週間以内のフグであることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか１項に記載のフグの疾病予防および無毒化の方法。
【請求項５】
前記殺菌処理が紫外線殺菌処理、オゾン殺菌処理および加熱殺菌処理のいずれか１種または２種以上であることを特徴とする請求項１、請求項３および４のいずれか１項に記載のフグの疾病予防および無毒化の方法。
【請求項６】
前記加熱殺菌処理の加熱温度が５０℃〜９９℃であり、加熱時間が１分〜２時間であることを特徴とする請求項５に記載のフグの疾病予防および無毒化の方法。
【請求項７】
前記除菌処理がミクロフィルター、限外濾過膜、透析膜および逆浸透膜のいずれか１種または２種以上による濾過であることを特徴とする請求項２、請求項３および４のいずれか１項に記載のフグの疾病予防および無毒化の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ふ化直後乃至ふ化後１５週間以内のフグを殺菌処理、除菌処理並びに殺菌処理および除菌処理した養殖水で飼育するフグの疾病予防および無毒化の方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
フグ料理は日本の食文化を代表する料理として美食家によって愛好されてきた。しかし、フグ料理の中でも最も美味といわれるトラフグの漁獲高は昭和６３年をピークとして減少傾向にあり、それを補うものとして養殖トラフグの飼育が盛んとなり、平成元年以降は養殖トラフグの取扱い高が天然トラフグの漁獲高を上回り、その傾向は現在も続いている（例えば、非特許文献１参照。）。天然トラフグは卵巣、肝臓、腸などの内臓に毒を有し、希には死亡事故を起こしたため、他の魚類とは区別して取り扱われている。天然トラフグにおけるこのような毒の存在は餌としているプランクトンなどに毒が含まれ、食物連鎖によるものいわれている（例えば、非特許文献２参照。）。
【０００３】
フグの養殖として、従来は海面養殖が主流であったが、最近では飼育水槽を陸上に設置し、人工海水などを養殖水とする陸上養殖が盛んになってきた。しかし、人工海水では、養殖水のコストが高くなり、その採算性に問題を生じている。また、海水を養殖水とすると、コスト面では海面養殖に近くなるが、養殖水を循環して使用する場合には、特に寄生虫、原虫、細菌、ウイルスなどの病原体が繁殖し、養殖魚に感染する恐れがあるので、養殖水を殺菌する方法が提案されている。例えば、養殖中の魚の餌や排泄物などを比重差により循環水の流れから分離し、循環水中の病原菌や有害プランクトンなどを紫外線照射によって殺菌する方法（例えば、特許文献１参照。）、流下する原水に、焔上する燃焼ガスを直接接触させて加熱し、加熱殺菌する方法（例えば、特許文献２参照。）、被処理液をその温度より１０℃以上低い温度に保持する第１工程と、この第１工程を経た液を５０℃以上に加温保持する第２工程からなる殺菌方法（例えば、特許文献３参照）、浄化部に微生物を担持する担体を設け、バクテリアなどの微生物により有機物を分解し、浄化すると共に、８０℃以上で加熱殺菌を行っている循環浄化浴装置（例えば、特許文献４参照。）などがある。
【０００４】
また、養殖フグには毒を検出することは少ないといわれているが、これはフグの卵には毒性があり、受精卵もわずかながら毒性を有しており、孵化後約１週間までは毒性が検出されるものの、その後は毒性が検出されなくなるといわれている。しかるに、天然フグでは上述のように食物連鎖により、毒物が蓄積されるため、内蔵に毒を有するといわれている（例えば、非特許文献２参照。）。
【０００５】
【特許文献１】
特開昭５５−５４８３６号公報、特許請求の範囲（１）
【特許文献２】
特開平５−３７３６号公報、特許請求の範囲、請求項１
【特許文献３】
特開昭６３−１０７７９４号公報、第２頁左上欄第５行目〜第８行目
【特許文献４】
特開平２−６８１８８号公報、第１頁右欄下から第３行目〜第２頁左上欄第９行目
【非特許文献１】
多部田修編、水産学シリーズ１１１、「トラフグの漁業と資源管理」、株式会社恒星社厚生閣、平成９年３月３０日発行、１０〜１１頁
【非特許文献２】
野口玉雄著、ＮＨＫブックス［７６８］、「フグはなぜ毒をもつのか」［海洋生物の不思議］、日本放送出版協会、１９９６年１２月１５日第２刷発行、２２頁および２８〜４０頁
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
天然フグの漁獲高が期待できない現状にあって、養殖フグの生産を円滑に行うためフグの疾病を予防し、且つ魚体を無毒化することが生産者および消費者の双方から強く要望されており、フグ養殖業者としての課題であった。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、ふ化直後の週令の低い稚魚を飼育し、なおかつ養殖水を殺菌処理または除菌処理することにより、目的を達成することを見出した。すなわち、ふ化直後乃至ふ化後１５週間以内のフグを殺菌処理を行った養殖水で飼育することを特徴とするフグの疾病予防および無毒化の方法であって、ふ化直後乃至ふ化後１５週間以内のフグがふ化後１０週間以上でふ化後１５週間以内のフグであることが好ましく、殺菌処理が紫外線殺菌処理、オゾン殺菌処理および加熱殺菌処理のいずれか１種または２種以上であることが好ましい。また、加熱殺菌処理の加熱温度が５０℃〜９９℃であり、加熱時間が１分〜２時間であることが特に好ましい。
【０００８】
本発明の第二は、ふ化直後乃至ふ化後１５週間以内のフグを除菌処理を行った養殖水で飼育することを特徴とするフグの疾病予防および無毒化の方法であって、ふ化直後乃至ふ化後１５週間以内のフグがふ化後１０週間以上でふ化後１５週間以内のフグであることが好ましく、除菌処理がミクロフィルター、限外濾過膜、透析膜および逆浸透膜のいずれか１種または２種以上による濾過であることが特に好ましい。
【０００９】
本発明の第三は、ふ化直後乃至ふ化後１５週間以内のフグを殺菌処理および除菌処理を行った養殖水で飼育することを特徴とするフグの疾病予防および無毒化の方法であって、ふ化直後乃至ふ化後１５週間以内のフグがふ化後１０週間以上でふ化後１５週間以内のフグであることが好ましく、殺菌処理が紫外線殺菌処理、オゾン殺菌処理および加熱殺菌処理のいずれか１種または２種以上であることが好ましく、加熱殺菌処理の加熱温度が５０℃〜９９℃であり、加熱時間が１分〜２時間であることが特に好ましい。また、除菌処理がミクロフィルター、限外濾過膜、透析膜および逆浸透膜のいずれか１種または２種以上による濾過であることが特に好ましい。
【００１０】
【発明の実施の形態】
養殖フグでは、天然の雌フグを捕獲して採卵し、これに雄フグの精子をかけ、人工授精させてふ化させる。ふ化した後、フグの体長が少なくとも２０ｍｍ程度になるまでは水槽中で飼育されるが、本発明にいうふ化直後乃至ふ化後１５週間以内のフグとは、人工授精させてふ化した直後から１５週間以内のフグをいい、フグが元来保有している毒量も少なく、この段階のフグを養殖することにより、フグの無毒化が達成できる。また、保有している養殖技術により飼育を開始するフグの体長またはふ化後の日数は左右される。
【００１１】
フグの養殖に用いる養殖水としては、地下海水、表層海水、海洋深層水などを使用することができる。ここで、地下海水とは、その食塩濃度が海水と同程度の濃度を有する地下水のことをいい、海岸線より陸地側にある井戸より採取するのが一般的であるが、淡水の湧水が混合した地下水は地下海水には含まれない。また、表層海水とは、通常、海面養殖を行う表層の海水をいい、無機栄養物質に不足しているが、分解性の溶存有機物質やキレート物質が多い補償深度以浅の有光層の海水である。また、海洋深層水とは、中島敏光の定義する（海洋深層水の利用、第１刷、緑書房、２００２年５月１日発行、第７８頁）、光合成による有機物生産よりも有機物分解が卓越し、且つ、鉛直混合や人為の少ない、補償深度以深の資源性の高い海洋水、であって、水深２００ｍ以深の海水をいう。この海洋深層水は、無機栄養物質に富み、しかも細菌数が１０２／ｍｌ程度であり、表層水の１０３〜１０４／ｍｌに比して非常に少なく、フグの養殖水として、特に無毒化を図る上で優れている。しかし、溶存酸素量は表層水に比して少なく、フグの養殖水とするためには、酸素を溶解させることが望ましい。
【００１２】
本発明にいう殺菌処理とは、各種の殺菌方法により養殖水中の寄生虫、原虫、細菌、ウイルスなどの微生物を死滅させる処理をいう。
【００１３】
本発明にいう紫外線殺菌処理とは、養殖水に紫外線を照射することにより養殖水中の寄生虫、原虫、細菌、ウイルスなどの病原体を殺菌することをいい、紫外線照射装置は市販の装置を使用することができるが、その紫外線量は単位時間当たりに処理する養殖水の量および紫外線の照射の仕方に依存し、通常紫外線発生装置の消費電力量によって示される。また、紫外線による殺菌処理は薬品を使用することがないので、養殖水の殺菌処理には適した方法である。
【００１４】
本発明にいうオゾン殺菌処理とは、オゾン発生装置により発生したオゾンを養殖水中に通気し、養殖水中の寄生虫、細菌、ウイルスなどの病原体を殺菌することをいい、オゾン発生装置は市販の装置を使用することができるが、オゾンの単位時間当たりの通気量は処理すべき養殖水の量および水質に依存する。このオゾン殺菌処理は養殖水にオゾンを通気させた後、オゾンの一部が酸素となり、養殖水中の溶存酸素量を高めるので、養殖水の殺菌処理には適した方法である。
【００１５】
また、オゾン発生装置は無声放電のほか、紫外線によりオゾンを発生させる場合が多く、養殖水の殺菌処理には、紫外線殺菌処理およびオゾン殺菌処理の併用が好まれて使用されている。
【００１６】
本発明にいう加熱殺菌処理とは、養殖水中の寄生虫、原虫、細菌、ウイルスなどの微生物を加熱処理により死滅させることをいい、これらの微生物は５０℃以上では生育しないため、養殖水を５０℃以上に保持することが必要である。加熱温度が高いほど細菌、ウイルスなどの死滅に要する時間が短くてよく、加熱時間が長いほど細菌、ウイルスなどの死滅に要する温度は低くても良い。従って、加熱温度に応じて、加熱時間を適宜設定することができる。表１に示した水族の代表的病原性ウイルスの不活化温度条件と不活化所要時間より、加熱温度が５０℃〜９９℃の範囲であれば、加熱時間が１分〜２時間の加熱条件で、いずれのウイルスも不活化することができる。
【００１７】
加熱温度については、５０℃〜９９℃、好ましくは５０℃〜８０℃、さらに好ましくは５５℃〜７０℃であり、最適範囲としては５５℃〜６５℃である。これは加熱温度が５０℃より低いと、寄生虫、原虫、細菌、ウイルスなどの死滅、特にウイルスの不活化が不十分であり、魚病の発生を抑制できないという問題があり、加熱温度が９９℃より高いと、養殖水として適温まで冷却するためには、効率が悪いという問題がある。一方、加熱時間は１分〜２時間、好ましくは１分〜１時間である。これは加熱温度にもよるが、加熱時間が１分より短いと、寄生虫、原虫、細菌、ウイルスなどの死滅、特にウイルスの不活化が不十分であり、魚病の発生を抑制できないという問題があり、加熱時間が２時間より長いと、無駄な加熱を行うことになり、熱効率が悪くなるので、養殖水として循環して使用する場合には、効率が悪くなるという問題がある。
【００１８】
【表１】
2004275020.tif 000002
【００１９】
本発明にいう殺菌処理を行った養殖水とは、上記各種の殺菌方法により寄生虫、原虫、細菌、ウイルスなどの微生物を死滅させた養殖水をいい、本発明にいう除菌処理を行った養殖水とは、ミクロフィルター、限外濾過膜、透析膜、逆浸透膜などにより濾過することによって寄生虫、原虫、細菌、ウイルスなどの微生物を除去した養殖水をいう。従って、殺菌処理を行った養殖水または除菌処理を行った養殖水によりフグを養殖することによりフグが疾病に罹ることを予防することができる。除菌処理を行うための、ミクロフィルター、限外濾過膜、透析膜、逆浸透膜などの濾過膜は、平膜であっても中空糸膜であってもよいが、中空糸膜の方が濾過装置を小型化できるので、好まれている。
【００２０】
本発明にいうフグの無毒化とは、フグの養殖が終了し、水揚げした時点で、フグの各部位が無毒であることをいう。フグの各部位が無毒であることとは、部位別にマウスに腹腔内投与した場合、毒性を示さないということであって、各部位ともに１０ＭＵ／ｇ未満であることである。ここで、１ＭＵ（マウスユニット）とは、体重２０ｇのマウス１匹を腹腔内投与後３０分で死亡させる毒量を示すことである。
【００２１】
【実施例】
本発明の殺菌処理および除菌処理を備えた、フグの養殖システムの一例を図１に示したが、本発明の趣旨はこれに限定されるものではない。フグの養殖を行うためには、まず取水工程において、養殖水として使用する、地下海水、表層海水、海洋深層水などを採取し、貯水槽に貯えられる。養殖水として使用する海水は、貯水槽より濾過工程を経て、殺菌工程へ送られる。この濾過工程では、単なる浮遊物の除去を行ってもよいし、本発明の除菌処理を行うこともできる。また、前記濾過を多段に行うこともできる。殺菌工程により殺菌処理を経た養殖水は、養殖水貯槽に貯えられる。養殖水貯槽の養殖水は、酸素の溶入を受け飼育水槽へ注入される。フグを養殖することにより、養殖水は残餌およびフグの排泄物により汚染されるので、随時養殖水を抜き取り、濾過工程へ移す。このときの濾過はベルトフィルターの使用が好ましい。固形物を除去した養殖水は窒素化合物が含まれているので、次の浄化工程に移され、硝化処理を受けて窒素化合物の濃度を下げた後、殺菌工程へ戻され、循環される。
【００２２】
次に実施例に基づき、本発明を具体的に説明するが、本発明の趣旨はこれに限定されるものではない。
【００２３】
（実施例１）
地下海水を採取し、中圧式紫外線殺菌装置により、紫外線殺菌処理を行った後、水冷式オゾン発生器によりオゾンを発生させ、オゾン殺菌処理を行った。次に６５℃、３０分間の加熱殺菌処理を行い、養殖水とした。養殖水に酸素を飽和濃度まで溶入後、１００トンの飼育水槽へ注入した。この飼育水槽へ愛媛県産のトラフグ稚魚１６０００尾を投入し、飼育した。投入した稚魚２６尾を抜き取り、その体重、体長および肥満度を測定し、表２に示した。なお、肥満度は式１によって計算された値である。
【００２４】
【数１】
2004275020.tif 000003
【００２５】
【表２】
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【００２６】
（試験例１）
実施例１で飼育したトラフグ稚魚を一部分槽し、残りのトラフグ稚魚を６ヶ月間飼育した。６ヶ月間飼育したトラフグ１２尾を採取し、肝臓を摘出し、マウス毒性試験を実施した。マウス毒性試験に供したトラフグの体重、肝重量、体長および肥満度を測定し、表３に示した。
試料の調製：毒性試験用の試料の調製およびマウスの毒性試験は食品衛生検査指針、理化学編（１９９３）厚生省生活局監修に従った。摘出した肝を細かく切り、ペースト状にした後、肝ペースト５ｇを試験管にとり、０．１％酢酸を５ｍｌ加えて、十分懸濁した。試料液を試験管に入れたまま沸騰水に十分浸漬した。熱水浸漬中は試験管の口にビー玉を置き栓として、また試料液を１０分間加熱し、その間３回撹拌を行った。加熱終了後、氷水に浸漬、冷却した後、遠心分離（３０００Ｇ、１０分間、常温）した。遠心分離後の試料は、上から脂質層・水溶液層・固形物層であり、上層の脂質分は捨て、真中の水溶液層を別の試験管に採取した。下層の固形物に新しく０．１％酢酸を２ｍｌ加えて懸濁後、上記の通りに加熱・冷却・遠心分離を繰り返し、水溶液層を採取した。別の試験管に採っておいた抽出液と合わせて１０ｍｌになるように蒸留水を加えた。これを粗毒原液として、その後の試験に使用した。
マウス毒性試験：試験動物として生後４週、体重１９ｇ〜２１ｇの健康な  ｄｄＹ系雄マウスを使用した。マウスの体重を量り、粗毒液１ｍｌを注射器で足の付け根から腹腔内に注入した。各粗毒液についてマウス５匹を使った。注入直後からマウスが致死するまでの時間を測定した（最大３０分）。マウスの死亡判定は呼吸の停止で行った。
毒量の計算：表４に示した、致死時間からマウス単位（ＭＵ）を換算する換算表を用い、毒量（マウス単位、ＭＵ）を算出した。マウス重量の補正は、表５に示した、マウス体重−マウス単位補正表を用いて、ＭＵの補正を行った。得られたＭＵ・抽出比・希釈倍率から原検体１ｇ中の毒力を式２により算出した。なお、今回の試験の抽出比は２、希釈倍率は１であった。
人間への摂取量換算：粗毒液は５ｇの肝から抽出され１０ｍｌに調製されたので、マウスに注入された１ｍｌ中にはトラフグ肝０．５ｇあたりの毒素が抽出されたことになる。マウスの体重は約２０ｇであるので、人間の体重を５０ｋｇと仮定すると、人間（５０ｋｇ）が肝を１２５０ｇ摂取したと推測換算できる。
結果：今回の試験において、検査時間中に中毒症状を起こしたマウスは全くみられなかった。この場合、ＭＵは＜１となり、原検体１ｇの毒力は「＜２」と表すことができ、これは食用に供しても健康を害するおそれがないと判断される１０ＭＵ／ｇに及ばず、今回の検査に供したトラフグの肝臓には人間の健康を害する毒力はもたないと判断した。
【００２７】
【数２】
2004275020.tif 000005
【００２８】
【表３】
2004275020.tif 000006
【００２９】
【表４】
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【００３０】
【表５】
2004275020.tif 000008
【００３１】
（試験例２）
実施例１で６ヶ月間飼育したトラフグ１０尾を採取し、肝臓を摘出し、液体クロマトグラフ質量分析測定（ＬＣ／ＭＳ）によるテトロドトキシンの検出を行った。測定に供したトラフグの体重、肝重量、体長および肥満度を測定し、表６に示した。
試料の調製：試験例１のマウス毒性試験用の試料の調製と同じ方法で調製した粗毒原液を試験に使用した。
ＬＣ／ＭＳによるテトロドトキシン（ＴＴＸ）の検出：粗毒原液を０．４５μｍのフィルターに通して液体クロマトグラフ質量分析測定（ＬＣ／ＭＳ）に使用した。その分析条件は次の通りである。
（１）ＬＣ／ＭＳシステム
Ａｌｌｉａｎｎｃｅ  ＬＣ／ＭＳ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｗａｔｅｒｓ  ＺＭＤ）
（２）ＬＣ条件
ＨＰＬＣ：Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２６９０ＸＥ（Ｗａｔｅｒｓ）
カラム：Ｐｕｒｅｓｉｌ  Ｃ１８（４．６×２５０ｍｍ，  Ｗａｔｅｒｓ）
カラム温度：２５℃
移動相：３０ｍＭヘプタフルオロ酪酸−１ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５．０）
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
（３）ＭＳ条件
イオン化法：ＥＳＩ＋
Ｄｅｓｏｌｖａｔｉｏｎ温度：３５０℃
Ｓｏｕｒｃｅｂｌｏｃｋ温度：１２０℃
コーン電圧：５０Ｖ
流速：０．２ｍｌ／ｍｉｎ（スプリッターを介して）
標準試料のＴＴＸ濃度は５ＭＵに調整してあり、１ＭＵはＴＴＸ０．２２μｇに相当するので、この場合は１．１μｇ含まれていることになる。ＬＣ／ＭＳによるＴＴＸの測定の結果、養殖トラフグの肝臓中においては全くＴＴＸが検知されず、実施例１において育成されたトラフグの肝臓には、ＴＴＸが蓄積されていないことが判った。
【００３２】
【表６】
2004275020.tif 000009
【００３３】
【発明の効果】
本発明による、ふ化直後乃至ふ化後１５週間以内のフグを殺菌処理または除菌処理を行った養殖水中で飼育することにより、養殖水中の寄生虫、原虫、細菌、ウイルスなどの病原体を排除することができるので、養殖フグの疾病を予防することができる。さらに、ふ化後１週間程度でフグ体内の毒素を排出した後、フグ毒を含有している細菌、原虫、植物プランクトンおよび動物プランクトンなどを摂取することなく、飼育することができるので、養殖フグを無毒化することができる。特に、除菌処理においてミクロフィルタ、限外濾過膜、透析膜および逆浸透膜などを使用することにより、養殖水中の寄生虫、原虫、細菌、ウイルスなどの病原体を排除することができるので、殺菌処理と同じくフグの疾病を予防することができると共に養殖フグを無毒化することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】フグの養殖システムの一例
【図２】ＴＴＸ標品および養殖トラフグ肝臓のＬＣ／ＭＳクロマトグラム（肝１−５）
【図３】ＴＴＸ標品および養殖トラフグ肝臓のＬＣ／ＭＳクロマトグラム（肝６−１０）
【図１】
2004275020.tif 000010
【図２】
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【図３】
2004275020.tif 000012