(57)【要約】【課題】本発明は、ササを効率的に増殖する方法を開発することを課題とする。【解決手段】シュートの誘導までは暗黒下で培養を行い、節の増殖は暗黒下で行い、節から株の形成は連続照明で行うことにより解決できる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シュートの誘導を暗黒下で行うことを特徴とする組織培養によるササの増殖方法。
【請求項２】
節の増殖は暗黒下で行い、節から株の形成は連続照明で行うことを特徴とする組織培養によるササの増殖方法。
【請求項３】
培地がオーキシンを含む寒天培地であることを特徴とする請求項１または２記載のササの増殖方法。
【請求項４】
オーキシンがナフタレン酢酸であることを特徴とする請求項３記載のササの増殖方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ササを効率的に増殖する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、タケ類を材料とした組織培養による植物体の大量増殖方法は、植物組織から誘導した不定胚を介して植物体を増殖する方法と、シュートの増殖を介して増殖させる方法とがあった。しかし、これらの方法はいずれも外植体の培養から植物体の再生に至るまで一連の過程は、培養体の分化と成育の段階に応じて組成の異なる培地へ連続的に移し変えることが必要であったため、非常に煩雑で生産効率の上がらない方法であった。
【０００３】
また、従来のタケ類を材料とした組織培養においては、慣行により光環境は明期が１６時間で暗期が８時間が多用されていたが、光の明暗周期についての認識がなされないまま培養を行っていた。
【０００４】
ササの培養方法としては、特開２００１−４５８９７号公報（特許文献１）にササの成長期に糖無添加の培地を用い、成長期及び順化期に特定の二酸化炭素濃度と特定の光合成有効光量子束の環境下で培養を行うことが記載されているが、これも二酸化炭素と光とが必要であるとの観点でなされたものである。
【０００５】
【特許文献１】
特開２００１−４５８９７号公報
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ササを効率的に増殖する方法を開発することを課題とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、上記課題を解決するために鋭意努力した結果、シュートの誘導までは暗黒条件下で培養を行う等が有効であることを見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は
（１）シュートの誘導を暗黒下で行うことを特徴とする組織培養によるササの増殖方法、
（２）節の増殖は暗黒下で行い、節から株の形成は連続照明で行うことを特徴とする組織培養によるササの増殖方法、
（３）培地がオーキシンを含む寒天培地であることを特徴とする（１）または（２）記載のササの増殖方法、
（４）オーキシンがナフタレン酢酸であることを特徴とする（３）記載のササの増殖方法
である。
【０００９】
本発明は、光の明暗の周期に植物が反応することを積極的に利用して、シュート誘導〜節増殖〜株までの分化を制御し、そのことによって培養体の分化と成育の段階に応じて組成の異なる培地への移し変えをする必要がなくなることを特徴とするものである。
【００１０】
本発明において、ササとは茎を被う皮が腐るまで脱落しないものを言い、タケと区別している。ササにはクマザサ属、シノ属、メダケ属、カンチク属、ヤダケ属等があるが、本発明はいずれのササにも有効である。
【００１１】
また、図１から分るように茎とそれについている葉を一括して「シュート」と称し、シュートは葉がついているところの「節」と、節と節の間である「節間」からなる。「節」には「腋芽」と呼ばれる芽が付属している。本発明は、この節が腋芽を持つことに着目し、節の増殖をササの増殖に利用したものである。
【００１２】
オーキシンは、植物の茎の先端で生産され、植物の成長を促進・調節する植物ホルモンであり、インドール−３−酢酸、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸やナフタレン酢酸等があり、本発明ではいずれも使用可能であるが中でもナフタレン酢酸が特に有効である。
【００１３】
ササの用途としては種々あるが、本発明では特に芝生に代えて緑化を行う際の材料として用いられ、また法面の造成にも有効である。
以下に実施例を示し本発明をより具体的に説明する。
【００１４】
【発明の実施の形態】
【実施例】
（無菌発芽）
材料には、クマイザサ（Ｓａｓａ  ｓｅｎａｎｅｎｓｉｓ（Ｆｒａｎｃｈ．ｅｔ  Ｓａｖａｔ．）Ｒｅｈｄ．）を用いた。７月中旬にかけて完熟した種子を採取し、これらを１００％エタノールに浸漬することで比重選抜を行い、エタノール中に沈んだものだけを試験に供した。
【００１５】
種子は外頴と内頴を取り除いた後、流水で水洗を行った。次に、この種子を７０％エタノールで３０秒間、その後、有効塩素濃度１％の次亜塩素酸ナトリウムで１０分間殺菌処理した後に滅菌水で３回洗浄した。殺菌した種子はクリーンベンチ内において、メスを用いて種子から胚を切り取り、この胚を外植片として培養に供した。
【００１６】
培地は、Ｗｏｏｄｙ  Ｐｌａｎｔ（ＷＰ）無機塩に２０ｇ／ｌｓｕｃｒｏｓｅと７．２５ｍｇ／ｌ寒天を加え、これに植物成長調節物質０〜４．０ｍｇ／１６−ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｏｐｕｒｉｎｅ（ＢＡＰ）と、０と０．６ｍｇ／ｌｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ  ａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ（ＮＡＡ）を１０種類の濃度に組み合わせたものを用いた。培地の酸度はｐＨ０．５７〜０．５８に調整した。培地の容器は、ガラス製培養ビン（６２．５×６２．５×１１０ｍｍ）を使用した。これに培地を３０ｍｌ分注して、オートクレーブで殺菌した。
殺菌した種子より摘出したササ外植片（胚）を各培地あたり２個ずつ置床し、２５℃の暗黒下で培養した。外植片の置床後、３０日目の発芽数を表１に示した。
【００１７】
【表１】
2004290042.tif 000002
【００１８】
表１から、ＮＡＡ濃度が０．６ｍｇ／ｌでＢＡＰ濃度が０〜０．６ｍｇ／ｌの処理区で発芽率が高いことがわかる。
発芽したものはシュートの伸長を呈し、発芽しなかったものは、枯死またはカルスに至った。伸長したシュートは、３０日置きに同組成の新たな培地に植え継ぎ、同条件下で培養を継続した。培養開始から２ヶ月目以降には、シュートは２節以上含む状態に成長した。この暗黒環境下で形成したシュートは白色を呈していた。
【００１９】
なお、ササ外植片を上記と同様の処理を行い、２５℃の連続照明下で培養した場合は、発芽するものはなかった（２０外植片中０外植片）。
これらのことから、クマイザサ種子からのシュートの誘導には培地にＮＡＡの添加が有効であり、光は阻害的な要因であることがわかった。
【００２０】
（シュートの伸長による節の増殖）
暗黒下で胚から誘導したシュートを２つの節を１単位とするシュート細片に切り離し、ＷＰ無機塩に２０ｇ／ｌｓｕｃｒｏｓｅと７．２５ｍｇ／ｌ寒天を加え、植物成長調節物質０〜４．０ｍｇ／１ＢＡＰと、０〜０．７５ｍｇ／ｌＮＡＡを１１種類の濃度に組み合わせた培地に植え付けた。この際シュート細片の植え付けは、下部の節が寒天培地中に埋まるように行った。培養環境は２５℃の暗黒下とした。また継代培養の間隔は約３０日として、継代培養毎に伸長したシュートを２つの節を１単位とするシュート細片にして同組成の新たな培地に植え付けた。シュート細片から生じた新たな節の数を表２に示す。
【００２１】
【表２】
2004290042.tif 000003
【００２２】
表２から、ＮＡＡが０．７５ｍｇ／ｌの時、節の増殖率が最も高く、増殖率は平均５．３節／２節／３０日であった。すなわち、この処理区が節の増殖に適していることがわかった。
【００２３】
上記の培養条件下において、２節を１単位として培地に植え付けたシュート細片の成長様式は、何れの処理区においても上部の節からは新たなシュートが伸長し、下部の節からは発根した。しかし、基部からの新たなシュートの分化（分げつ）はなく、成長は単なる上部節でのシュートと下部節からの根が、それぞれ上下方向に伸長するのみであった。また、この暗黒環境下での培養体は、白色を呈していた（図２）。
【００２４】
（増殖したシュートから株の形成）
暗黒下で誘導して、増殖させたシュート２節を１単位としたシュート細片に切りわけて、これをＷＰ無機塩に２０ｇ／ｌｓｕｃｒｏｓｅと７．２５ｍｇ／ｌ寒天を加え、植物成長調節物質０．７５ｍｇ／１ＮＡＡを含む培地に植え付けて、２５℃連続照明の環境下で培養を行った。この際シュート細片の植え付けは、下部の節が寒天培地中に埋まるように行った。
【００２５】
処理の開始から約１週間程度で、白色のシュートは緑色に変化した。その後、３０日以内に上部の節からは新たなシュートの伸長が始まり、これに伴い新たに形成した節からは葉が展開した。また、シュート細片の下部の節からは発根して植物体に再生した。３０日置きに同組成の新たな培地に移植して、同条件下で培養を継続すると、再生した植物体の基部に新たなシュートの分化（分げつ）が始まり、このシュートの伸長に伴い再生植物体の叢状化が進み株の形態を呈する再生植物体となった（図３）。この時点での苗長は約１０ｃｍ程度であった。
【００２６】
（再生植物体の順化と圃場での成長）
再生した植物体を培養ビンから取り出し、根に付着した寒天を水洗により取り除いた後、栽培用土（バーミキュライトとピートモスを体積１：１の割合）を充填した黒色ビニールポット（直径９ｃｍ）に植え付けて（図４）、温室において自然光下で順化を行った。順化は、ポットに移植したササ苗の上に直接、寒冷紗を掛けることで葉からの蒸散を抑制する手法で行った。潅水は土壌表面に乾燥を観察した場合に適宜行った。寒冷紗を使用した順化処理は１週間行い、その後寒冷紗の覆いを取り除いて、３週間同条件下で養成した後、再生植物体を圃場へ移植した。再生植物体の順化と圃場への移植は、５月から９月の間に４回に分けて行い、それぞれ１５〜２０個体を供試した。順化過程から圃場への移植後における各過程での再生植物体の生存率を表３に示す。
【００２７】
【表３】
2004290042.tif 000004
【００２８】
表３から、再生植物体の順化過程における生存率は、８５〜１００％の範囲であり、圃場への移植後の生存率は７１〜１００％であることがわかる。圃場で生存した再生植物体の成長は良好であり、再生植物体の屋外においても十分に生存が可能であることが明らかになった。
【００２９】
【発明の効果】
本発明により、ササの苗を生産する工程が単純化され、効率的にかつ大量にササを増殖させることが可能となった。
【図面の簡単な説明】
【図１】ササの部分名称を示す図。
【図２】ササの培養体の写真を示す図。
【図３】ササの再生植物体の写真を示す図。
【図４】ササの再生植物体をポットに植え付けた写真を示す図。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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