(57)【要約】　　　（修正有）【課題】免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであるＰＩＧＲ−２ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの生産方法、慢性関節リウマチ、乾せん、神経系疾患等の治療と診断アッセイにおけるそれらの使用を提供する。【解決手段】ＰＩＧＲ−２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と全長において少なくとも８０％同一であり、かつＰＩＧＲ−２ポリペプチドの活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、またはこのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチドを単離する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２のＰＩＧＲ−２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と全長において少なくとも８０％同一であり、かつＰＩＧＲ−２ポリペプチドの活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、またはこのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２】
前記のポリヌクレオチドが、配列番号２のＰＩＧＲ−２ポリペプチドをコードする配列番号１中に含まれるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】
前記のポリヌクレオチドが、その全長において配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】
配列番号１のポリヌクレオチドである、請求項３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】
ＤＮＡまたはＲＮＡである、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
配列番号２のＰＩＧＲ−２ポリペプチドのアミノ酸配列において１もしくは複数のアミノ酸が付加、欠失または置換されており、かつＰＩＧＲ−２ポリペプチドの活性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド。
【請求項７】
下記発現系が適合性の宿主細胞内に存在するとき配列番号２のポリペプチドと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＰＩＧＲ−２ポリペプチドを産生することができる発現系を含んでなるＤＮＡまたはＲＮＡ分子。
【請求項８】
請求項７に記載の発現系を含有する宿主細胞。
【請求項９】
ＰＩＧＲ−２ポリペプチドを産生させるのに十分な条件下で請求項８に記載の宿主細胞を培養し、この培養物から前記ポリペプチドを回収することを含んでなる、ＰＩＧＲ−２ポリペプチドの産生方法。
【請求項１０】
宿主細胞が適当な培養条件下でＰＩＧＲ−２ポリペプチドを産生するように、請求項７に記載の発現系を用いて宿主細胞を形質転換またはトランスフェクションすることを含んでなる、ＰＩＧＲ−２ポリペプチドを産生する細胞の作製方法。
【請求項１１】
全長において配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含んでなるＰＩＧＲ−２ポリペプチド。
【請求項１２】
配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
請求項１１に記載のＰＩＧＲ−２ポリペプチドに免疫特異的な抗体。
【請求項１４】
請求項１１に記載のＰＩＧＲ−２ポリペプチドの増大した活性または発現を必要としている患者を治療するための医薬組成物であって、治療上有効な量の、
（ａ）　前記受容体に対するアゴニスト、および／または
（ｂ）　前記ポリペプチド活性のｉｎ　ｖｉｖｏ　生産をもたらす形の、配列番号２のＰＩＧＲ−２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と全長において少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列、または前記ヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド、
を含んでなる医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１１に記載のＰＩＧＲ−２ポリペプチドの活性または発現を抑制する必要がある患者を治療するための医薬組成物であって、治療上有効な量の、
（ａ）　前記受容体に対するアンタゴニスト、および／または
（ｂ）　前記受容体をコードするヌクレオチド配列の発現を抑制する核酸分子、および／または
（ｃ）　前記受容体とそのリガンドについて競合するポリペプチド、
を含んでなる医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１１に記載のＰＩＧＲ−２ポリペプチドの発現または活性と関連した被験者の疾病またはその罹病性の検出方法であって、
（ａ）　前記被験者由来のゲノム中のＰＩＧＲ−２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に突然変異があるかどうかを調べる、および／または
（ｂ）　前記被験者から得られたサンプル中のＰＩＧＲ−２ポリペプチド発現の存在または量を分析する、
ことを含んでなる方法。
【請求項１７】
請求項１１に記載のＰＩＧＲ−２ポリペプチドに対するアゴニストの同定方法であって、
（ａ）　ＰＩＧＲ−２ポリペプチドを産生する細胞と候補化合物とを接触させ、そして
（ｂ）　その候補化合物がＰＩＧＲ−２ポリペプチドの活性化によりシグナルを発生させるか否かを調べる、
ことを含んでなる方法。
【請求項１８】
請求項１１に記載のＰＩＧＲ−２ポリペプチドに対するアンタゴニストの同定方法であって、
（ａ）　ＰＩＧＲ−２ポリペプチドを産生する細胞とアゴニストとを接触させ、そして
（ｂ）　前記アゴニストにより発生したシグナルが候補化合物の存在下で減少するか否かを調べる、
ことを含んでなる方法。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法により同定されたアンタゴニスト。
【請求項２０】
請求項１０に記載の方法により作製された組換え宿主細胞またはＰＩＧＲ−２ポリペプチドを発現しているその膜。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新たに同定されたポリヌクレオチド、このポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド、前記のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの使用、並びにその生産方法に関する。より詳細には、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは免疫グロブリンスーパーファミリーに関係しており、以後ＰＩＧＲ−２と記す。本発明はまた、このようなポリヌクレオチドおよびポリペプチドの作用を阻害または活性化することに関する。
【０００２】
【従来の技術】
免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子スーパーファミリーは、抗体のＨ鎖とＬ鎖のＶおよびＣドメインとの配列相同性を有する、多数の細胞表面糖タンパク質から構成されている。これらの分子は抗原、免疫グロブリンおよびサイトカインならびに接着分子のための受容体として機能している（Ａ．Ｆ．　Ｗｉｌｌｉａｍｓら，　Ａｎｎｕ．　Ｒｅｖ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　６：３８１−４０５，　１９８８）。
Ｉｇスーパーファミリーの大部分のメンバーは、複数のＩｇＶ−　およびＣ−　様ドメインを含む比較的複雑なポリドメイン分子である（Ｔ．　Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒら，　Ａｄｖ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　４４：１−６３，　１９８９）。しかしながら、それらの一サブセットは細胞外領域に単一のＩｇドメインのみを含む比較的単純な構造をもっている。このタイプの受容体の例としてＣＤ２８およびＣＤ８がある（Ａ．　Ａｒｕｆｆｏら，　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ　８４：８５７３−８５７７，　１９８７）。最近、単一の細胞外ＩｇＶドメインを含むＩｇ遺伝子スーパーファミリーの新規な膜糖タンパク質であるＣＭＲＦ−３５がＤ．Ｇ．　Ｊａｃｋｓｏｎら（Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　２２：１１５７−１１６３，　１９９２）　により同定された。今日まで、ＣＭＲＦ−３５は骨髄様分化経路とリンパ球様分化経路中の細胞上にもっぱら見いだされている。しかしながら、この遺伝子の発現は、マイトジェンやサイトカインによる白血球の刺激により著しく影響される（Ａ．　Ｄａｉｓｈら，　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　７９：５５−６３，　１９９３）。これにより、ＣＭＲＦ−３５は多様な白血球型の分化および増殖と大いに関係があることが示唆される。このことは、こうした受容体に治療ターゲットとしての確立され実証された歴史があることを示している。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
明らかに、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を含むがこれらに限らない、機能障害または疾病を予防し、改善し、治療する上で何らかの役割を果たす新たな受容体を同定して特性付ける必要性が存在している。本発明は、このような受容体を提供するものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明は、一つの態様において、ＰＩＧＲ−２ポリペプチドおよび組換え物質、並びにその生産方法に関する。本発明のもう一つの態様はＰＩＧＲ−２ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用方法に関する。こうした使用には、とりわけ、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療が含まれる。他の態様では、本発明は、本発明により提供される物質を用いてアゴニストおよびアンタゴニストを同定する方法、並びに同定された化合物を用いてＰＩＧＲ−２の平衡異常と関連した症状を治療することに関する。本発明のさらに他の態様は、不適当なＰＩＧＲ−２活性またはＰＩＧＲ−２レベルと関連した疾病を検出するための診断アッセイに関する。
【０００５】
定義
下記の定義は、本明細書中で頻繁に使用される用語を理解しやすくするためのものである。
「ＰＩＧＲ−２」とは、特に、配列番号２で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドまたはそのアレル変異体を意味する。
「受容体活性」または「受容体の生物学的活性」とは、類似の活性、向上した活性、または望ましくない副作用が低下したこれらの活性を含めて、ＰＩＧＲ−２の代謝的または生理的機能を意味する。さらに、前記ＰＩＧＲ−２の抗原的および免疫原的活性も含まれる。
「ＰＩＧＲ−２遺伝子」とは、配列番号１で表されるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドまたはそのアレル変異体および／またはそれらの相補体を意味する。
【０００６】
本明細書中で用いる「抗体」には、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、ヒト化抗体、さらにＦａｂまたは他の免疫グロブリン発現ライブラリーの産物を含むＦａｂフラグメントが含まれる。
「単離された」とは、天然の状態から「人間の手によって」改変されたことを意味する。「単離された」組成物または物質が天然に存在するのであれば、それはそのもとの環境から変化しているか移動しており、またはその両方である。例えば、生存している動物の体内に自然界で存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離された」ものではないが、その天然状態の共存物質から分離されたポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、本明細書中で用いられるように、「単離された」ものである。
【０００７】
「ポリヌクレオチド」とは、一般に任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドをさし、これは修飾されていないＲＮＡもしくはＤＮＡ、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得る。「ポリヌクレオチド」には、制限するものではないが、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合ったＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合ったＲＮＡ、ＤＮＡとＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖でも、またはより典型的には二本鎖でもよく、一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合ったものでもよい）が含まれる。加えて、「ポリヌクレオチド」はＲＮＡもしくはＤＮＡまたはＲＮＡとＤＮＡの両方からなる三重鎖領域を意味する。「ポリヌクレオチド」という用語はまた、１個以上の修飾塩基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性または他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチル化された塩基およびイノシンのような特殊な塩基がある。ＤＮＡおよびＲＮＡに対してさまざまな修飾が行われてきた。こうして、「ポリヌクレオチド」は、自然界に一般的に存在するポリヌクレオチドの化学的、酵素的または代謝的に修飾された形態、並びにウイルスおよび細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴヌクレオチドと称される比較的短いポリヌクレオチドも包含する。
【０００８】
「ポリペプチド」とは、ペプチド結合または修飾されたペプチド結合（すなわち、ペプチドアイソスター）により連結された２個以上のアミノ酸を含む任意のペプチドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプチド」は短鎖（通常はペプチド、オリゴペプチドまたはオリゴマーという）と長鎖（一般的にはタンパク質という）の両方をさす。ポリペプチドは２０種類の遺伝子コード化アミノ酸以外のアミノ酸を含んでもよい。「ポリペプチド」は、翻訳後プロセシングのような天然のプロセスで、または当技術分野で公知の化学的修飾法のいずれかで修飾されたアミノ酸配列を含む。このような修飾は基本的な教科書、より詳細な学術論文および研究文献に詳述されている。修飾はペプチド骨格、アミノ酸側鎖、アミノまたはカルボキシル末端を含めてポリペプチドのどこでも行うことができる。同じタイプの修飾が所定のポリペプチドのいくつかの部位に同程度でまたはさまざまに異なる程度で存在してもよい。また、所定のポリペプチドが多くのタイプの修飾を含んでいてもよい。ポリペプチドはユビキチン化のために分枝していても、分枝のある又はない環状であってもよい。環状の、分枝した、または分枝した環状のポリペプチドは翻訳後の天然プロセスから生じることがあり、また、合成法によって製造することもできる。修飾としては、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解処理、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のようなタンパク質へのアミノ酸の転移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化などがある。例えば、ＰＲＯＴＥＩＮＳ　−　ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ　ＡＮＤ　ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ，第２版，　Ｔ．Ｅ．　Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，　Ｗ．Ｈ．　Ｆｒｅｅｍａｎ　ａｎｄ　Ｃｏｍｐａｎｙ，　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，　１９９３；　ＰＯＳＴＴＲＡＮＳＬＡＴＩＯＮＡＬ　ＣＯＶＡＬＥＮＴＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮ　ＯＦ　ＰＲＯＴＥＩＮＳ，　Ｂ．Ｃ．　Ｊｏｈｎｓｏｎ　編，　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，　１９８３中のＷｏｌｄ，　Ｆ．，　Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ：　Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ　ａｎｄ　Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ，　ｐｇｓ．　１−１２；　Ｓｅｉｆｔｅｒ　ら，　“Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｆｏｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓａｎｄ　ｎｏｎｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｆａｃｔｏｒｓ”，　Ｍｅｔｈ　Ｅｎｚｙｍｏｌ　（１９９０）　１８２：６２６−６４６；　および　Ｒａｔｔａｎ　ら，　“Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：　Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ　Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　Ａｇｉｎｇ”，　Ａｎｎ　ＮＹ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　���１９９２）　６６３：４８−６２を参照のこと。
【０００９】
本明細書中で用いる「変異体」とは、基準のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと異なるが、欠くことのできない性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリペプチドのことである。典型的なポリヌクレオチドの変異体は基準ポリヌクレオチドとヌクレオチド配列の点で相違する。この変異体のヌクレオチド配列の変化は、基準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変更しても、しなくてもよい。ヌクレオチドの変化は、以下で述べるように、基準配列によりコードされるポリペプチドにおいてアミノ酸の置換、付加、欠失、融合および末端切断（トランケーション）を生じさせることができる。典型的なポリペプチドの変異体は基準ポリペプチドとアミノ酸配列の点で相違する。一般的には、基準ポリペプチドの配列と変異体の配列が全般的によく類似しており、多くの領域で同一となるような差異に限られる。変異体と基準ポリペプチドは任意に組み合わせた１以上の置換、付加、欠失によりアミノ酸配列が相違していてよい。置換または挿入されるアミノ酸残基は遺伝子コードによりコードされるものであっても、なくてもよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変異体はアレル変異体のように天然に存在するものでも、天然に存在することが知られていない変異体であってもよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの天然に存在しない変異体は、突然変異誘発法または直接合成により調製することができる。
【００１０】
「同一性」はヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の同一性の尺度である。一般に、最大級のマッチ（一致）が得られるように配列を並べる。「同一性」それ自体は当技術分野で認識された意味をもち、発表された技法を使って計算することができる。例えば、ＣＯＭＰＵＴＡＴＩＯＮＡＬ　ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＢＩＯＬＯＧＹ，　Ｌｅｓｋ，　Ａ．Ｍ．　編，　Ｏｘｆｏｒｄ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，　１９８８；　ＢＩＯＣＯＭＰＵＴＩＮＧ：　ＩＮＦＯＲＭＡＴＩＣＳ　ＡＮＤ　ＧＥＮＯＭＥ　ＰＲＯＪＥＣＴＳ，　Ｓｍｉｔｈ，　Ｄ．Ｗ．　編，　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，　１９９３；　ＣＯＭＰＵＴＥＲ　ＡＮＡＬＹＳＩＳ　ＯＦ　ＳＥＱＵＥＮＣＥ　ＤＡＴＡ，　ＰＡＲＴ　Ｉ，　Ｇｒｉｆｆｉｎ，　Ａ．Ｍ．　ａｎｄ　Ｇｒｉｆｆｉｎ，　Ｈ．Ｇ．　編，　Ｈｕｍａｎａ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ，　１９９４；　ＳＥＱＵＥＮＣＥ　ＡＮＡＬＹＳＩＳ　ＩＮ　ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＢＩＯＬＯＧＹ，　ｖｏｎＨｅｉｎｊｅ，　Ｇ．，　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，　１９８７；　および　ＳＥＱＵＥＮＣＥ　ＡＮＡＬＹＳＩＳ　ＰＲＩＭＥＲ，　Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，　Ｍ．　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，　Ｊ．編，　Ｍ　Ｓｔｏｃｋｔｏｎ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，　１９９１を参照のこと。２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列間の同一性を決定する方法は多数存在していると同時に、「同一性」なる用語は当業者には公知である　（Ｃａｒｉｌｌｏ，　Ｈ．　ａｎｄ　Ｌｉｐｔｏｎ，　Ｄ．，　ＳＩＡＭ　Ｊ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍａｔｈ　（１９８８）　４８：１０７３）　。２つの配列間の同一性または類似性を決定するために汎用される方法としては、Ｇｕｉｄｅ　ｔｏ　Ｈｕｇｅ　Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ，　Ｍａｒｔｉｎ　Ｊ．　Ｂｉｓｈｏｐ　編，　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ，　１９９４　および　Ｃａｒｉｌｌｏ，　Ｈ．　ａｎｄ　Ｌｉｐｔｏｎ，　Ｄ．，　ＳＩＡＭ　Ｊ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍａｔｈ　（１９８８）　４８：１０７３　に記載される方法があるが、これらに限らない。同一性および類似性の決定方法はコンピュータプログラムに体系化されている。２つの配列間の同一性および類似性を決定するための好適なコンピュータプログラム法としては、ＧＣＳプログラムパッケージ　（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，　Ｊ．ら，　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　（１９８４）　１２（１）：３８７）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ　（Ａｔｓｃｈｕｌ，　Ｓ．Ｆ．ら，　Ｊ　Ｍｏｌｅｃ　Ｂｉｏｌ　（１９９０）　２１５：４０３）があるが、これらに限らない。
【００１１】
一例として、配列番号１の基準ヌクレオチド配列に対して、例えば、少なくとも９５％の「同一性」を有するヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドとは、このポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が配列番号１の基準ヌクレオチド配列のそれぞれ１００ヌクレオチドにつき最高で５つの点突然変異を含みうることを除けば、基準配列と同一であることを意図している。言い換えると、基準ヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るには、基準配列中の５％までのヌクレオチドを欠失させるか、他のヌクレオチドで置換するか、または基準配列中の全ヌクレオチドの５％までのヌクレオチド数を基準配列に挿入すればよい。基準配列のこれらの突然変異は、基準ヌクレオチド配列の５’もしくは３’末端位置、またはこれらの末端位置の間のどこかで起こり、基準配列中のヌクレオチドの間に個々に、または基準配列内に１以上の連続するグループとして配置することができる。
【００１２】
同様に、配列番号２の基準アミノ酸配列に対して、例えば、少なくとも９５％の「同一性」を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドとは、このポリペプチド配列が配列番号２の基準アミノ酸配列のそれぞれ１００アミノ酸につき最高で５つのアミノ酸変更を含みうることを除けば、基準配列と同一であることを意図している。言い換えると、基準アミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを得るには、基準配列中の５％までのアミノ酸残基を欠失させるか、他のアミノ酸で置換するか、または基準配列中の全アミノ酸残基の５％までのアミノ酸数を基準配列に挿入すればよい。基準配列のこれらの変更は、基準アミノ酸配列のアミノもしくはカルボキシ末端位置、またはこれらの末端位置の間のどこかで起こり、基準配列中のアミノ酸残基の間に個々に、または基準配列内に１以上の連続したグループとして配置することができる。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明のポリペプチド
一つの形態において、本発明はＰＩＧＲ−２ポリペプチド（またはＰＩＧＲ−２タンパク質）に関する。このＰＩＧＲ−２ポリペプチドには、配列番号２および４のポリペプチドだけでなく、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチド、その全長において配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドも含まれる。さらに、少なくとも９７〜９９％同一であるものが特に好適である。また、その全長において配列番号２のアミノ酸配列を有するポリペプチドと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドもＰＩＧＲ−２ポリペプチドに含まれる。さらに、少なくとも９７〜９９％同一であるものが特に好適である。ＰＩＧＲ−２ポリペプチドはこの受容体の少なくとも１つの生物学的活性を示すことが好ましい。
【００１４】
ＰＩＧＲ−２ポリペプチドは「成熟」タンパク質の形であっても、融合タンパク質のような、より大きいタンパク質の一部であってもよい。しばしば、追加のアミノ酸配列を含めることが有利であり、このようなアミノ酸配列としては、分泌すなわちリーダー配列、プロ配列、多重ヒスチジン残基のような精製に役立つ配列、または組換え生産の際の安定性を確保する付加的配列などがある。
【００１５】
また、ＰＩＧＲ−２ポリペプチドの断片も本発明に含まれる。こうした断片は全体的に前記ＰＩＧＲ−２ポリペプチドのアミノ酸配列の一部と同一であるが、全部とは同一でないアミノ酸配列を有するポリペプチドである。ＰＩＧＲ−２ポリペプチドと同様に、断片は「フリースタンディング」（それ自体で独立）していても、より大きいポリペプチド内に含まれていてもよく、つまりその大きいポリペプチドの一部または一領域、最も好ましくは一つの連続領域、を断片が構成していてもよい。本発明のポリペプチド断片の代表的な例として、およその見当でアミノ酸番号１−２０、２１−４０、４１−６０、６１−８０、８１−１００、および１０１からＰＩＧＲ−２ポリペプチドの末端までの断片が挙げられる。ここで、「およそ」とは、上記の範囲の一端または両端で数個、５個、４個、３個、２個または１個のアミノ酸が増えたり減ったりした範囲を含むものである。
【００１６】
好適な断片としては、例えば、アミノ末端を含む一連の残基もしくはカルボキシル末端を含む一連の残基の欠失、またはアミノ末端を含むものとカルボキシル末端を含むものとの二連の残基の欠失を除外すれば、ＰＩＧＲ−２ポリペプチドのアミノ酸配列を有するトランケーション（ｔｒｕｎｃａｔｉｏｎ）ポリペプチドが含まれる。また、αヘリックスとαヘリックス形成領域、βシートとβシート形成領域、ターンとターン形成領域、コイルとコイル形成領域、親水性領域、疎水性領域、α両親媒性領域、β両親媒性領域、可変性領域、表面形成領域、基質結合領域、および高抗原指数領域を含む断片のような、構造的または機能的特性により特徴づけられる断片も好適である。その他の好適な断片は生物学的に活性な断片である。生物学的に活性な断片は、同様の活性をもつ断片、その活性が向上した断片、または望ましくない活性が減少した断片を含めて、受容体活性を媒介するものである。さらに、動物、特にヒトにおいて抗原性または免疫原性がある断片も含まれる。
【００１７】
これらのポリペプチド断片はどれも、抗原活性を含めた該受容体の生物学的活性を保持することが好ましい。中でも、最も好ましい断片は配列番号４のアミノ酸配列をもつものである。特定された配列および断片の変異型も本発明の一部を構成する。好適な変異型は同類アミノ酸置換により対象物と異なるもの、すなわち、ある残基が同様の性質の他の残基で置換されているものである。典型的なこうした置換は、Ａｌａ，　Ｖａｌ，　Ｌｅｕ　および　Ｉｌｅの間；Ｓｅｒ　とＴｈｒ　の間；酸性残基　ＡｓｐとＧｌｕ　の間；Ａｓｎ　とＧｌｎ　の間；塩基性残基　ＬｙｓとＡｒｇ　の間；または芳香族残基　ＰｈｅとＴｙｒ　の間で起こる。特に、数個、５〜１０個、１〜５個または１〜２個のアミノ酸が任意の組合せで置換、欠失または付加されている変異型が好適である。
【００１８】
本発明のＰＩＧＲ−２ポリペプチドは任意の適当な方法で製造することができる。このようなポリペプチドには、単離された天然に存在するポリペプチド、組換え的に生産されたポリペプチド、合成的に製造されたポリペプチド、またはこれらの方法の組合せにより製造されたポリペプチドが含まれる。このようなポリペプチドの製造のための手段は当業界でよく理解されている。
【００１９】
本発明のポリヌクレオチド
本発明のもう一つの態様はＰＩＧＲ−２ポリヌクレオチドに関する。ＰＩＧＲ−２ポリヌクレオチドには、ＰＩＧＲ−２ポリペプチドおよび断片をコードする単離されたポリヌクレオチド、並びにこれらと密接に関連したポリヌクレオチドが含まれる。さらに特定すると、本発明のＰＩＧＲ−２ポリヌクレオチドとしては、配列番号２のＰＩＧＲ−２ポリペプチドをコードする配列番号１中に含まれるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、および配列番号１および３の特定配列を有するポリヌクレオチドがある。さらに、ＰＩＧＲ−２ポリヌクレオチドには、配列番号２のＰＩＧＲ−２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列とその全長において少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、および配列番号１のヌクレオチド配列とその全長において少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが含まれる。これに関連して、少なくとも９０％同一であるポリヌクレオチドが好適であり、特に少なくとも９５％同一であるものが好適である。さらに、少なくとも９７％同一であるものがより好ましく、少なくとも９８〜９９％同一であるものがより一層好ましく、少なくとも９９％同一であるものが最も好ましい。また、増幅反応に使用できる条件下、またはプローブやマーカーとして使用できる条件下でハイブリダイズするのに十分な、配列番号１中に含まれるヌクレオチド配列との同一性を有するヌクレオチド配列もＰＩＧＲ−２ポリヌクレオチドに含まれる。本発明はまた、このようなＰＩＧＲ−２ポリヌクレオチドと相補的なポリヌクレオチドを提供する。
【００２０】
本発明のＰＩＧＲ−２は、ヒトＰＩＧＲ−２をコードするｃＤＮＡの塩基配列決定の結果により示されるように、免疫グロブリンスーパーファミリーの他のタンパク質と構造的に関連している。配列番号１のｃＤＮＡ配列は配列番号２の２０５個のアミノ酸からなるポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ヌクレオチド番号１４７−７６１）を含んでいる。表２のアミノ酸配列（配列番号２）は２０４個のアミノ酸残基においてＣＭＲＦ３５（Ｄ．Ｇ．　Ｊａｃｋｓｏｎら，　Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：１１５７−１１６３，　１９９２）と約４３．８％同一である（ＦＡＳＴＡ使用）。さらに、ＰＩＧＲ−２は１０７個のアミノ酸残基にわたりヒト・ポリＩｇ受容体と２４．３％同一である（Ｐ．　Ｋｒａｊｃｉら，　Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ｒｅｓ．　Ｃｏｍｍｕｎ．，　１５８：７８３−７８９，　１９８９）。表１のヌクレオチド配列（配列番号１）は７４７個のヌクレオチド残基においてＣＭＲＦ３５（Ｄ．Ｇ．　Ｊａｃｋｓｏｎら，　Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　２２：１１５７−１１６３，　１９９２）と約６１．０％同一である（ＦＡＳＴＡ使用）。したがって、本発明のＰＩＧＲ−２ポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、とりわけ、それらの相同ポリペプチドおよびポリヌクレオチドと同様の生物学的機能／特性をもつことが予測されるが、それらの有用性は当業者には自明である。
【００２１】
ヒトＰＩＧＲ−２のヌクレオチド配列（配列番号１）
【表１】
2004000193.tif 000002
【００２２】
ヒトＰＩＧＲ−２のアミノ酸配列（配列番号２）
【表２】
2004000193.tif 000003
【００２３】
ＰＩＧＲ−２をコードする本発明の一つのポリヌクレオチドは、標準的なクローニングおよびスクリーニングにより、ヒト好酸球およびＢ細胞の細胞に含まれるｍＲＮＡから誘導されたｃＤＮＡライブラリーから、エクスプレスド・シークエンス・タグ（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｔａｇ：　ＥＳＴ）分析　（Ａｄａｍｓ，　Ｍ．Ｄ．ら，　Ｓｃｉｅｎｃｅ　（１９９１）　２５２：１６５１−１６５６；　Ａｄａｍｓ，　Ｍ．Ｄ．ら，　Ｎａｔｕｒｅ　（１９９２）　３５５：６３２−６３４；　Ａｄａｍｓ，　Ｍ．Ｄ．ら，　Ｎａｔｕｒｅ　（１９９５）　３７７　Ｓｕｐｐ：３−１７４）　を用いて得ることができる。また、本発明のポリヌクレオチドはゲノムＤＮＡライブラリーのような天然源から得ることができ、商業的に入手可能な公知の技法を用いて合成することもできる。
【００２４】
配列番号２のＰＩＧＲ−２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、表１中に含まれるポリペプチドコード配列（配列番号１のヌクレオチド番号１４７−７６１）と同一であっても、遺伝子コードの重複性（縮重）のため、やはり配列番号２のポリペプチドをコードする配列であってもよい。
【００２５】
本発明のポリヌクレオチドをＰＩＧＲ−２ポリペプチドの組換え生産のために用いる場合、そのポリヌクレオチドには、成熟ポリペプチドのコード配列またはその断片単独、他のコード配列（例えば、リーダーもしくは分泌配列、プレ−、プロ−もしくはプレプロ−タンパク質配列、または他の融合ペプチド部分をコードするもの）と同じリーディングフレームにある成熟ポリペプチドのコード配列またはその断片が含まれる。例えば、融合ポリペプチドの精製を容易にするマーカー配列がコードされ得る。本発明のこの態様の好ましい具体例として、マーカー配列は、ｐＱＥベクター（Ｑｉａｇｅｎ，　Ｉｎｃ．）により提供されかつＧｅｎｔｚ　ら，　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ　（１９８９）　８６：８２１−８２４に記載されるようなヘキサ−ヒスチジンペプチド、またはＨＡタグである。また、このポリヌクレオチドは５’および３’非コード配列、例えば、転写されるが翻訳されない配列、スプライシングおよびポリアデニル化シグナル、リボソーム結合部位、およびｍＲＮＡ安定化配列を含んでいてもよい。
【００２６】
さらに好適な具体例は、数個、５〜１０個、１〜５個、１〜３個、１〜２個、または１個のアミノ酸残基が任意の組合せで置換、欠失または付加されている、表２のＰＩＧＲ−２ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号２）を含むＰＩＧＲ−２変異型をコードするポリヌクレオチドである。中でも、本発明の好適なポリヌクレオチドは表４のアミノ酸配列（配列番号４）をコードする表３のヌクレオチド配列（配列番号３）中に含まれる。
【００２７】
ヒトＰＩＧＲ−２の部分ヌクレオチド配列（配列番号３）
【表３】
2004000193.tif 000004
【００２８】
ヒトＰＩＧＲ−２の部分アミノ酸配列（配列番号４）
【表４】
2004000193.tif 000005
【００２９】
本発明はさらに、前記の配列とハイブリダイズするポリヌクレオチドに関する。これに関して、本発明は特にストリンジェントな条件下で前記のポリヌクレオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドに関する。本明細書中で用いる「ストリンジェントな条件」とは、配列間に少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より一層好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性があるときだけハイブリダイゼーションが起こる条件を指す。
【００３０】
配列番号１中に含まれるヌクレオチド配列またはその断片と同一であるか実質的に同一である本発明のポリヌクレオチドは、ＰＩＧＲ−２ポリペプチドをコードする全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するために、また、ＰＩＧＲ−２遺伝子との配列類似性が高い他の遺伝子（ヒト以外の種に由来する相同体およびオーソログ体（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）をコードする遺伝子を含む）のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するために、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡのハイブリダイゼーションプローブとして用いることができる。このようなハイブリダイゼーション技法は当業者には公知である。一般的に、これらのヌクレオチド配列は対象物のヌクレオチド配列に対して８０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％の同一性を有する。プローブはたいてい１５個以上のヌクレオチドを含み、好ましくは３０個以上を含み、５０個以上のヌクレオチドを有していてもよい。特に好ましいプローブは３０〜５０個の範囲のヌクレオチドを有するものである。
【００３１】
一実施態様において、ＰＩＧＲ−２ポリペプチド（ヒト以外の種に由来する相同体およびオーソログ体を含む）をコードするポリヌクレオチドを得ることは、配列番号１のヌクレオチド配列またはその断片（配列番号３のヌクレオチド配列を含む）を有する標識プローブを用いて、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で適当なライブラリーをスクリーニングし、前記のポリヌクレオチド配列を含む全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離する各工程を含んでなる。このようなハイブリダイゼーション技法は当業者に公知である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は上で定義したとおりであるか、または、５０％　ホルムアミド、５×ＳＳＣ　（１５０ｍＭ　ＮａＣｌ，　１５ｍＭ　クエン酸三ナトリウム）　、５０ｍＭリン酸ナトリウム　（ｐＨ７．６）、５×Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液、１０％　デキストラン硫酸および２０μｇ／ｍｌの変性し剪断したサケ精子ＤＮＡを含有する溶液中で４２℃で一夜インキュベートし、次いでフィルターを　０．１×ＳＳＣ　中約６５℃で洗浄する条件である。
【００３２】
本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、動物およびヒトの疾病に対する治療薬および診断薬を探索するための研究用の試薬および材料として利用することができる。
【００３３】
ベクター、宿主細胞、発現
本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含有するベクター、このベクターにより遺伝子操作された宿主細胞、および組換え法による本発明のポリペプチドの生産に関する。本発明のＤＮＡ構築物から誘導されたＲＮＡを用いてこの種のタンパク質を生産するための無細胞翻訳系も使用することができる。
【００３４】
組換え体生産に関しては、本発明のポリヌクレオチドの発現系またはその一部を組み入れるために、宿主細胞が遺伝子操作される。宿主細胞へのポリヌクレオチドの導入は、Ｄａｖｉｓら，　ＢＡＳＩＣ　ＭＥＴＨＯＤＳ　ＩＮ　ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＢＩＯＬＯＧＹ　（１９８６）　および　Ｓａｍｂｒｏｏｋら，　ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＣＬＯＮＩＮＧ：　Ａ　ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ　ＭＡＮＵＡＬ，　第２版，　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ，　Ｎ．Ｙ．　（１９８９）などの多くの標準的な実験室マニュアルに記載される方法、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、トランスベクション（ｔｒａｎｓｖｅｃｔｉｏｎ）、マイクロインジェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、スクレープローディング（ｓｃｒａｐｅ　ｌｏａｄｉｎｇ）、射出導入（ｂａｌｌｉｓｔｉｃ　ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）または感染により行うことができる。
【００３５】
適当な宿主の代表的な例として、細菌細胞（例：ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、大腸菌、ストレプトミセス、枯草菌）、真菌細胞（例：酵母、アスペルギルス）、昆虫細胞（例：ドロソフィラＳ２、スポドプテラＳｆ９）、動物細胞（例：ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ　１２７、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ　２９３、Ｂｏｗｅｓ　メラノーマ細胞）および植物細胞が挙げられる。
【００３６】
多種多様な発現系を使用することができる。こうした発現系として、特に、染色体、エピソームおよびウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由来、挿入エレメント由来、酵母染色体エレメント由来、ウイルス（例：バキュロウイルス、ＳＶ４０のようなパポバウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、レトロウイルス）由来のベクター、およびこれらの組合せに由来するベクター、例えば、コスミドやファージミドのようなプラスミドとバクテリオファージの遺伝的要素に由来するものがある。この発現系は発現を起こさせるだけでなく発現を調節する制御配列を含んでいてもよい。一般的に、宿主内でのポリペプチドの産生のためにポリヌクレオチドを維持し、増やし、発現するのに適した系またはベクターはどれも使用することができる。Ｓａｍｂｒｏｏｋら，　ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＣＬＯＮＩＮＧ：　Ａ　ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ　ＭＡＮＵＡＬ　（前掲）　に記載されるような、日常的に用いられる公知の技法のいずれかにより、適当なヌクレオチド配列を発現系に挿入することができる。
【００３７】
翻訳されたタンパク質を小胞体の内腔に、細胞周辺腔に、または細胞外の環境に分泌させるために、適当な分泌シグナルを目的のポリペプチドに組み込むことができる。これらのシグナルは目的のポリペプチドに対して内因性であっても、異種シグナルであってもよい。
【００３８】
スクリーニングアッセイで使用するためＰＩＧＲ−２ポリペプチドを発現させようとする場合、そのポリペプチドを細胞の表面に産生させることが好適である。この場合は、スクリーニングアッセイでの使用に先立って細胞を回収する。ＰＩＧＲ−２ポリペプチドが培地に分泌される場合は、そのポリペプチドを回収し精製するために培地を回収する。細胞内に産生される場合は、その細胞をまず溶解し、その後にポリペプチドを回収する必要がある。
【００３９】
組換え細胞培養物からＰＩＧＲ−２ポリペプチドを回収し精製するには、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含めた公知の方法を用いることができる。最も好ましくは、高速液体クロマトグラフィーが精製に用いられる。ポリペプチドが単離および／または精製中に変性されるときは、タンパク質を再生させるための公知の技法を用いて、活性のあるコンフォメーションを復元することが可能である。
【００４０】
診断アッセイ
本発明はまた、診断薬としてのＰＩＧＲ−２ポリヌクレオチドの使用に関する。機能障害と関連したＰＩＧＲ−２遺伝子の変異型の検出は、ＰＩＧＲ−２の過少発現、過剰発現または変化した発現により生ずる疾病またはその罹病性の診断に追加しうる、またはその診断を下しうる診断用ツールを提供するだろう。ＰＩＧＲ−２遺伝子に変異がある個体を、さまざまな技法によりＤＮＡレベルで見つけ出すことができる。
【００４１】
診断用の核酸は、被験者の細胞、例えば血液、尿、唾液、組織の生検または剖検材料から得ることができる。検出のためにゲノムＤＮＡを直接使用しても、分析前にＰＣＲまたは他の増幅法を使って酵素的に増幅してもよい。同様のやり方でＲＮＡまたはｃＤＮＡを使用することもできる。欠失および挿入変異は、正常な遺伝子型と比較したときの増幅産物のサイズの変化により検出できる。点突然変異は増幅ＤＮＡを標識ＰＩＧＲ−２ヌクレオチド配列とハイブリダイズさせることで同定できる。完全にマッチした配列とミスマッチの二重鎖とはＲＮアーゼ消化により、または融解温度の差異により区別できる。また、ＤＮＡ配列の差異は、変性剤を用いるまたは用いないゲルでのＤＮＡ断片の電気泳動の移動度の変化により、または直接ＤＮＡ配列決定によっても検出できる（例えば、Ｍｙｅｒｓら，　Ｓｃｉｅｎｃｅ　（１９８５）　２３０：１２４２　を参照のこと）。特定位置での配列変化はヌクレアーゼプロテクションアッセイ（例えば、ＲＮアーゼおよびＳ１プロテクション）または化学的開裂法によっても確認できる（Ｃｏｔｔｏｎら，　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ　（１９８５）　８５：４３９７−４４０１を参照のこと）。別の実施態様では、例えば、遺伝子変異の効率のよいスクリーニングを行うため、ＰＩＧＲ−２ヌクレオチド配列またはその断片を含むオリゴヌクレオチドプローブのアレイを構築することができる。アレイ技法は公知で、一般的な適用可能性を有し、遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変異性を含めた分子遺伝学のさまざまな問題を解きあかすために用いられている（例えば、Ｍ．　Ｃｈｅｅら，　Ｓｃｉｅｎｃｅ，　Ｖｏｌ．２７４，　ｐｐ．６１０−６１３　（１９９６）　を参照のこと）。
【００４２】
診断アッセイは、前記の方法によりＰＩＧＲ−２遺伝子の変異を検出することで、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）への罹りやすさを診断または判定する方法を提供する。
【００４３】
さらに、被験者から得られたサンプルからＰＩＧＲ−２ポリペプチドまたはＰＩＧＲ−２ｍＲＮＡのレベルの異常な低下または増加を測定する方法により、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の診断を下すことができる。発現の低下または増加は、当技術分野で公知のポリヌクレオチド定量法のいずれか、例えばＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮアーゼプロテクション、ノーザンブロット、その他のハイブリダイゼーション法によりＲＮＡレベルで測定することができる。宿主から得られたサンプル中のＰＩＧＲ−２ポリペプチドのようなタンパク質のレベルを測定するためのアッセイ法は当業者によく知られている。こうしたアッセイ法として、ラジオイムノアッセイ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロット分析、ＥＬＩＳＡアッセイなどがある。
【００４４】
かくして、もう一つの態様において、本発明は、特に慢性関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）などの疾病または疾病への罹りやすさを診断するためのキットに関し、このキットは、
（ａ）　ＰＩＧＲ−２ポリヌクレオチド（好ましくは、配列番号１のヌクレオチド配列）またはその断片、
（ｂ）　（ａ）　のポリヌクレオチドに相補的なヌクレオチド配列、
（ｃ）　ＰＩＧＲ−２ポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）またはその断片、または
（ｄ）　ＰＩＧＲ−２ポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）に対する抗体、
を含んでなる。このようなキットにおいて、（ａ）　、（ｂ）　、（ｃ）　または　（ｄ）が実質的な構成成分であることが理解されよう。
【００４５】
染色体アッセイ
本発明のヌクレオチド配列はまた、染色体の同定にも有用である。この配列は個々のヒト染色体上の特定の位置を標的指向し、その特定位置とハイブリダイズすることができる。本発明に従って関連配列の染色体地図を作成することは、これらの配列と遺伝子関連疾患とを相関させる上で重要な第一段階である。ひとたび配列が正確な染色体位置にマッピングされたら、その染色体上のその配列の物理的位置を遺伝地図データと相関させることができる。この種のデータは、例えば、Ｖ．　ＭｃＫｕｓｉｃｋ，　Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ　Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ　ｉｎ　Ｍａｎ　（Ｊｏｈｎｓ　Ｈｏｐｋｉｎｓ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｗｅｌｃｈ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｌｉｂｒａｒｙ　からオンラインで入手可能）　中に見いだせる。その後、同一の染色体領域にマッピングされた遺伝子と疾患との関係を連鎖分析（物理的に隣接した遺伝子の共遺伝）により同定する。
【００４６】
患者と正常個体とのｃＤＮＡまたはゲノム配列の差異も調べることができる。患者の一部または全部に変異が観察されるが、どの正常個体にも観察されない場合は、その変異が疾病の原因である可能性がある。
【００４７】
抗体
本発明のポリペプチドまたはその断片もしくは類似体、またはそれらを発現する細胞は、ＰＩＧＲ−２ポリペプチドに免疫特異的な抗体を産生するための免疫原としても使用することができる。「免疫特異的」とは、その抗体が従来技術における他の関連ポリペプチドに対するその親和性よりも本発明のポリペプチドに対して実質的に高い親和性を有することを意味する。
【００４８】
ＰＩＧＲ−２ポリペプチドに対する抗体は、慣用のプロトコールを用いて、動物（好ましくはヒト以外）に該ポリペプチドまたはエピトープを含む断片、類似体もしくは細胞を投与することにより得られる。モノクローナル抗体の調製には、連続細胞系の培養物により産生される抗体をもたらす任意の技法を用いることができる。例を挙げると、ハイブリドーマ技法　（Ｋｏｈｌｅｒ，　Ｇ．およびＭｉｌｓｔｅｉｎ，　Ｃ．，　Ｎａｔｕｒｅ　（１９７５）　２５６：４９５−４９７）、トリオーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法　（Ｋｏｚｂｏｒら，　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　Ｔｏｄａｙ　（１９８３）　４：７２）　およびＥＢＶ−ハイブリドーマ技法　（Ｃｏｌｅら，　ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ　ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ　ＡＮＤ　ＣＡＮＣＥＲ　ＴＨＥＲＡＰＹ，　ｐｐ．７７−９６，　Ａｌａｎ　Ｒ．　Ｌｉｓｓ，　Ｉｎｃ．，　１９８５）　などがある。
【００４９】
本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体をつくるために、一本鎖抗体の調製法（米国特許第４，９４６，７７８　号）を適応させることができる。また、ヒト化抗体を発現させるために、トランスジェニックマウスまたは他の哺乳動物を含む他の生物を利用することができる。
前記の抗体を用いて、そのポリペプチドを発現するクローンを単離・同定したり、アフィニティークロマトグラフィーでそのポリペプチドを精製することもできる。
ＰＩＧＲ−２ポリペプチドに対する抗体は、とりわけ、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療に使用できる可能性がある。
【００５０】
ワクチン
本発明の別の態様は、哺乳動物において免疫学的応答を引き出す方法に関し、この方法は、特に慢性関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）から前記動物を防御するための抗体および／またはＴ細胞免疫応答を生ずるのに十分なＰＩＧＲ−２ポリペプチドまたはその断片を哺乳動物に接種することを含んでなる。本発明のさらに別の態様は、哺乳動物を疾病から防御する抗体を産生させるような免疫学的応答を引き出すために、ｉｎ　ｖｉｖｏ　でＰＩＧＲ−２ポリヌクレオチドの発現を指令するベクターを介してＰＩＧＲ−２ポリペプチドを供給することを含んでなる、哺乳動物において免疫学的応答を引き出す方法に関する。
【００５１】
本発明の更なる態様は、哺乳動物宿主に導入したとき、その哺乳動物においてＰＩＧＲ−２ポリペプチドに対する免疫学的応答を引き出す免疫学的／ワクチン製剤（組成物）に関し、この組成物はＰＩＧＲ−２ポリペプチドまたはＰＩＧＲ−２遺伝子を含有する。ワクチン製剤は適当な担体をさらに含んでいてもよい。ＰＩＧＲ−２ポリペプチドは胃の中で分解されうるので、非経口的（皮下、筋肉内、静脈内、皮内等への注射を含む）に投与することが好ましい。非経口投与に適した製剤としては、酸化防止剤、緩衝液、静菌剤およびこの製剤を受容者の血液と等張にする溶質を含みうる水性および非水性の無菌注射液、並びに懸濁化剤または増粘剤を含んでいてもよい水性および非水性の無菌懸濁液がある。こうした製剤は１回量容器または数回量容器（例えば、密閉アンプルおよびバイアル）で提供することができ、また、使用直前に無菌の液状担体を添加するだけでよい凍結乾燥状態で保管することもできる。ワクチン製剤はこの製剤の免疫原性を増強するためのアジュバント系、例えば水中油型のアジュバント系や当技術分野で公知の他のアジュバント系を含んでいてもよい。投与量はワクチンの比活性で変化し、ルーチンな実験操作により簡単に決定できる。
【００５２】
スクリーニングアッセイ
本発明のＰＩＧＲ−２ポリペプチドは、この受容体と結合して本発明の受容体ポリペプチドを活性化する化合物（アゴニスト）またはその活性を阻害する化合物（アンタゴニスト）のスクリーニング法において使用することができる。こうして、本発明のポリペプチドは、例えば、細胞、無細胞調製物、化学物質ライブラリーおよび天然産物の混合物中の小分子基質およびリガンドを評価するためにも用いられる。これらの基質およびリガンドは天然の基質およびリガンドであってよく、また、構造的もしくは機能的な模擬物であってもよい（Ｃｏｌｉｇａｎら，　Ｃｕｒｒｅｎｔ
Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　１（２）：　Ｃｈａｐｔｅｒ　５　（１９９１）を参照のこと）。
【００５３】
ＰＩＧＲ−２ポリペプチドは多くの病理を含めて多数の生物学的機能に関与している。したがって、一方ではＰＩＧＲ−２を刺激し、他方ではＰＩＧＲ−２の機能を阻害し得る化合物および薬物を見つけ出すことが望まれる。一般的に、アゴニストは慢性関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）のような症状の治療および予防目的で用いられる。アンタゴニストは慢性関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）のような症状のさまざまな治療および予防目的で使用しうる。
【００５４】
一般に、こうしたスクリーニング法は細胞表面に本発明の受容体ポリペプチドを発現する適当な細胞を作製することを含む。この種の細胞には哺乳動物、酵母、ショウジョウバエ由来の細胞または大腸菌細胞が含まれる。次いで、この受容体を発現する細胞（もしくは発現された受容体を含む細胞膜）を試験化合物と接触させて、その結合または機能的応答の刺激もしくは阻害を観察する。
【００５５】
アッセイにより候補化合物の結合を簡単に試験することができ、そこでは候補化合物と直接または間接に結合された標識により、または標識した競合物質との競合を用いるアッセイにより、該受容体を担持する細胞への付着が検出される。さらに、これらのアッセイでは、該受容体を表面に担持する細胞に適した検出系を用いて、候補化合物が該受容体の活性化により生ずるシグナルを結果的にもたらすか否かを試験することができる。一般的に、活性化の阻害剤は既知のアゴニストの存在下でアッセイされ、候補化合物の存在がアゴニストによる活性化に与える影響が調べられる。
【００５６】
さらに、これらのアッセイは、候補化合物とＰＩＧＲ−２ポリペプチドを含む溶液とを混ぜ合わせて混合物をつくり、この混合物中のＰＩＧＲ−２活性を測定し、そしてこの混合物のＰＩＧＲ−２活性を標準と比較する各ステップを含むだけでよい。
【００５７】
また、ＰＩＧＲ−２のｃＤＮＡ、タンパク質またはこのタンパク質に対する抗体を用いて、細胞内でのＰＩＧＲ−２　ｍＲＮＡまたはタンパク質の生産に及ぼす添加化合物の作用を検出するためのアッセイを組み立てることができる。例えば、当技術分野で公知の標準方法によりモノクローナルまたはポリクローナル抗体を用いて、ＰＩＧＲ−２タンパク質の分泌レベルまたは細胞結合レベルを測定するためのＥＬＩＳＡを構築することができ、これは適切に操作された細胞または組織からのＰＩＧＲ−２の生産を抑制または増強する物質（それぞれアンタゴニストまたはアゴニストともいう）の探索に用いることができる。スクリーニングアッセイを行うための標準的な方法は当技術分野でよく理解されている。
【００５８】
ＰＩＧＲ−２の可能性のあるアンタゴニストの例としては、抗体、ある場合には、ＰＩＧＲ−２のリガンドと密接な関係があるオリゴヌクレオチドもしくはタンパク質（例えば、リガンドの断片）、または該受容体と結合するが応答を誘導しない（それゆえ該受容体の活性を妨げる）小分子などがある。
【００５９】
かくして、他の態様において、本発明は、ＰＩＧＲ−２ポリペプチドのアゴニスト、アンタゴニスト、リガンド、受容体、基質、酵素など、またはＰＩＧＲ−２ポリペプチドの生産を低下または増加させる化合物を同定するためのスクリーニングキットに関し、このキットは、
（ａ）　ＰＩＧＲ−２ポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）
（ｂ）　ＰＩＧＲ−２ポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）を発現する組換え細胞、
（ｃ）　ＰＩＧＲ−２ポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）を発現する細胞膜、または
（ｄ）　ＰＩＧＲ−２ポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）に対する抗体、
を含んでなる。このようなキットにおいて、（ａ）　、（ｂ）　、（ｃ）　または　（ｄ）が実質的な構成成分であることが理解されよう。
【００６０】
予防法および治療法
本発明は、ＰＩＧＲ−２活性の過剰量と不足量のどちらにも関係した異常な状態の治療法を提供する。
ＰＩＧＲ−２の活性が過剰である場合は、いくつかのアプローチが利用可能である。一つのアプローチは、リガンドのＰＩＧＲ−２への結合をブロックすることにより、または第二シグナルを抑制することで異常な状態を軽減することにより活性化を阻害するのに有効な量で、前記の阻害剤化合物（アンタゴニスト）を製剤学上許容される担体とともに患者に投与することを含んでなる。
もう一つのアプローチでは、リガンドと結合する能力がまだある可溶性形態のＰＩＧＲ−２ポリペプチドを、内因性のＰＩＧＲ−２との競合状態で投与することができる。このような競合剤の典型的な例はＰＩＧＲ−２ポリペプチドの断片である。
【００６１】
さらに別のアプローチでは、発現阻止法を使って内因性ＰＩＧＲ−２をコードする遺伝子の発現を抑制することができる。こうした公知技術は、体内で生成されるか別個に投与されるアンチセンス配列の使用を必要とする。例えば、Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ　ａｓ　Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｏｆ　Ｇｅｎｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，　ＣＲＣ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ，　ＦＬ　（１９８８）中のＯ’Ｃｏｎｎｏｒ，　Ｊ　Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ　（１９９１）　５６：５６０　を参照のこと。あるいはまた、この遺伝子と共に三重らせんを形成するオリゴヌクレオチドを供給することもできる。例えば、Ｌｅｅら，　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ　（１９７９）　６：３０７３；　Ｃｏｏｎｅｙら，　Ｓｃｉｅｎｃｅ　（１９８８）　２４１：４５６；　Ｄｅｒｖａｎら，　Ｓｃｉｅｎｃｅ　（１９９１）　２５１：１３６０　を参照のこと。これらのオリゴマーはそれ自体を投与することもできるし、関連オリゴマーをｉｎ　ｖｉｖｏ　で発現させることもできる。
【００６２】
ＰＩＧＲ−２およびその活性の過少発現に関係した異常な状態を治療する場合も、いくつかのアプローチを取ることができる。一つのアプローチは、治療上有効な量のＰＩＧＲ−２を活性化する化合物（すなわち、前記のアゴニスト）を製剤学上許容される担体とともに患者に投与して、異常な状態を緩和することを含んでなる。別法として、患者の関連細胞においてＰＩＧＲ−２を内因的に産生させるために遺伝子治療を用いることができる。例えば、上で述べたような複製欠損レトロウイルスベクターによる発現のために本発明のポリヌクレオチドを遺伝子操作する。次にレトロウイルス発現構築物を単離し、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含有するレトロウイルスプラスミドベクターで形質導入されたパッケージング細胞に導入する。その結果、パッケージング細胞は対象の遺伝子を含有する感染性のウイルス粒子を産生するようになる。ｉｎ　ｖｉｖｏ　での細胞処理およびｉｎ　ｖｉｖｏ　でのポリペプチド発現のために、これらの産生細胞を患者に投与する。遺伝子治療の概論に関しては、Ｈｕｍａｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，　Ｔ　Ｓｔｒａｃｈａｎａｎｄ　ａｎｄ　Ａ　Ｐ　Ｒｅａｄ，　ＢＩＯＳ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ　Ｌｔｄ　（１９９６）　中のＣｈａｐｔｅｒ　２０，　Ｇｅｎｅ　Ｔｈｅｒａｐｙ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｇｅｎｅｔｉｃ−ｂａｓｅｄ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ（およびその中の引用文献）を参照のこと。
【００６３】
製剤および投与
可溶性形態のＰＩＧＲ−２ポリペプチドのようなペプチド、アゴニストおよびアンタゴニストペプチド、または小分子は適当な製剤学上の担体と組み合わせて製剤化することができる。このような製剤は治療上有効な量のポリペプチドまたは化合物と、製剤学上許容される担体または賦形剤を含有する。この種の担体としては、食塩水、生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、およびこれらの組合せがあるが、これらに限らない。製剤は投与様式に適合させるべきであり、これは当技術分野の技量の範囲内である。本発明はさらに、前記の本発明組成物の１以上の成分を充填した１以上の容器を含んでなる医薬用パックおよびキットに関する。
本発明のポリペプチドおよび他の化合物は単独で使用しても、他の化合物例えば治療用化合物と一緒に使用してもよい。
【００６４】
医薬組成物を全身投与するときの好ましい形態は、注入（注射）、典型的には静注である。皮下、筋肉内または腹腔内のような他の注入経路も使用できる。全身投与の別の手段は、胆汁酸塩、フシジン酸、その他の界面活性剤などの浸透剤を用いた経粘膜および経皮投与である。さらに、腸溶剤またはカプセル剤として適切に製剤化されているのであれば、経口投与も可能である。これらの化合物は軟膏、ペースト、ゲルなどの剤形で局所に投与しても、かつ／または局在化させてもよい。
【００６５】
必要な投与量範囲はペプチドの選択、投与経路、製剤の性質、患者の状態、そして医師の判断に左右される。しかし、適当な投与量は患者の体重１ｋｇあたり０．１　〜１００　μｇ　の範囲である。利用可能な化合物が多種多様であり、それぞれの投与経路の効率も異なるため、必要とされる投与量は広範に変動することを予想すべきである。例えば、経口投与は静注による投与よりも高い投与量を必要とすることが予想される。こうした投与量レベルの変動は、当技術分野でよく理解されているような、標準的経験的な最適化手順を用いて調整することができる。
【００６６】
治療に用いるポリペプチドは、上述したような「遺伝子治療」と称する治療法において、患者の体内で産生させることもできる。例えば、患者由来の細胞を、ｅｘ　ｖｉｖｏ　でポリペプチドをコードするＤＮＡまたはＲＮＡのようなポリヌクレオチドにより、例えばレトロウイルスプラスミドベクターを用いて、遺伝子工学的に操作する。その後、この細胞を患者に導入する。
【００６７】
【実施例】
以下の実施例は、特にことわらない限り、当業者には公知の一般的方法を用いて実施した。実施例は単なる例示であって、本発明を制限するものではない。
実施例１
全長ｃＤＮＡを得るための方法はいくつかあるが、そのうちの２つを以下に説明する。
１）ｃＤＮＡ末端の高速増幅（Ｒａｐｉｄ　Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃＤＮＡ　Ｅｎｄｓ：　ＲＡＣＥ）法は５’末端を得るために利用することができる。Ｆｒｏｈｍａｎら，　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８５，　８９９８−９００２　（１９８８）を参照のこと。簡単に述べると、特定のオリゴヌクレオチドをｍＲＮＡにアニーリングし、これによりｃＤＮＡ鎖の合成を開始させる。ＲＮアーゼＨを用いてｍＲＮＡを破壊した後、ｃＤＮＡの３’末端にポリＣアンカー配列を付加し、得られた断片をネステッド（ｎｅｓｔｅｄ）組のアンチセンスプライマーおよびアンカー配列プライマーを用いて増幅する。増幅断片は適当なベクターにクローニングして、制限分析および配列解析にかける。
２）ポリメラーゼ連鎖反応は、２組のプライマーを用いるネステッドＰＣＲを連続して行うことで、ヒトｃＤＮＡライブラリー由来のｃＤＮＡの５’末端を増幅するために使用することができる。１組のアンチセンスプライマーは部分ｃＤＮＡの５’末端に特異的であり、もう１組のプライマーはベクター特異的配列にアニーリングする。増幅産物は適当なベクターにクローニングして、制限分析および配列解析にかける。
【００６８】
実施例２：　ＰＩＧＲ−２は免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーに属する
ＰＩＧＲ−２の細胞外領域は、（１）　ＩｇＶフォールド保存残基の存在および（２）　いくつかの他のＩｇ様タンパク質（ポリＩｇＶ１　およびＶ４　、ＣＭＲＦ３５、ＴＣＲ　ＶβおよびＩｇκＶＬ）に対する相同性により示されるように、Ｖ様フォールド（Ｖ−ｌｉｋｅｆｏｌｄ）をもつ単一のＩｇドメインを含む。
以下のアライメント（並列化）において、ダッシュ（−）はＰＩＧＲ−２の残基と同一の残基の位置を示す。Ｉｇ可変部（Ａ．Ｎ．　Ｂａｒｃｌａｙら，　Ｔｈｅ　ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｆａｃｔｓ　ｂｏｏｋ，　第２版，　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，　１９９７）において高度に保存されているＰＩＧＲ−２の残基は下線で示される。
【００６９】
2004000193.tif 000006
2004000193.tif 000007
【００７０】
実施例３：　ＰＩＧＲ−２遺伝子発現パターン
Ｉｇスーパーファミリーの新しいメンバーであるＰＩＧＲ−２が同定された。この新遺伝子の推定上のタンパク質配列はＣＭＲＦ３５に対して、特に細胞外ドメインにおいて、中程度のしかし広範囲の相同性を示す。ＰＩＧＲ−２を含むＥＳＴ配列は好酸球やＢ細胞などの白血球から主に単離され、このことは免疫機能におけるＰＩＧＲ−２の役割を示唆する。
【００７１】
実施例４：　組換え可溶性ＰＩＧＲ−２タンパク質
ＰＩＧＲ−２の細胞外ドメインは、他の免疫グロブリンドメインタンパク質、例えばＣＤ４　（Ｋ．Ｃ．　Ｄｅｅｎら，　Ｎａｔｕｒｅ　３３１：８２−８４　（１９８８））に関して記載されているように、膜貫通ドメインの開始点（表２ではヒスチジン１７３）での切断により分泌可溶性タンパク質として発現される。また、ＰＩＧＲ−２は、ＣＤ４（Ｄ．Ｊ．　Ｃａｐｏｎら，　Ｎａｔｕｒｅ　３１７：５２５−５３１　（１９８９））について記載されているように、ＰＩＧＲ−２の同じ細胞外領域をＨ鎖ＩｇＧのヒンジおよび定常部に連結することで、分泌される可溶性Ｉｇ融合タンパク質として発現される。さらに、オリゴマーＩｇ融合タンパク質の作製は、Ｒ．Ｉ．Ｆ．　Ｓｍｉｔｈ　＆　Ｓ．Ｌ．　Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　１２：６８３−６８８　（１９９４）およびＲ．Ｉ．Ｆ．　Ｓｍｉｔｈら，　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　１５４：２２２６−２２３６　（１９９５）中にＩｇＭテールピース（ｔａｉｌｐｉｅｃｅ）セグメントについて例示されるように、ＩｇＧのＦｃドメインのＣ末端へのＩｇＭまたはＩｇＡのテールピースセグメントの付加により可能である。これらのタンパク質を昆虫細胞またはＣＯＳ−７やＣＨＯのような哺乳動物細胞において産生させて、標準的な方法で精製すると、これらタンパク質はツール（ｔｏｏｌ）、治療薬および診断薬として有用である。かくして、これらのタンパク質は次の目的で使用される。
ａ）操作された組換えタンパク質のアミノ酸配列解析によりＮ末端リーダーの開裂部位を決定する。
ｂ）次の目的でポリクローナルおよびモノクローナル抗体を生成する。
１）さまざまな組織および細胞型におけるＰＩＧＲ−２タンパク質発現の検出
２）細胞の分化および増殖の誘導、サイトカインの生産、細胞死アッセイのようなＰＩＧＲ−２タンパク質の機能研究
ｃ）培養細胞に添加したときに、および免疫疾患の動物モデルにおいて、アゴニスト／アンタゴニスト活性について試験する。
ｄ）１以上のリガンドの検索。
ｅ）治療薬および／または診断薬として使用可能なＰＩＧＲ−２タンパク質の小分子アゴニストまたはアンタゴニストについてのスクリーニングアッセイを確立する。
【００７２】
本明細書中に引用された、特許および特許出願明細書を含めた全ての刊行物は、あたかも各刊行物が明確にかつ個々に示されているかのように、その全体を参考としてここに組み入れるものとする。
【００７３】
【配列表】
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