(57)【要約】【課題】免疫抑制活性を有し、かつ副作用のない８−ケト−マクロスフェライドＡ物質、及び８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質を得、これらの物質が簡単な操作により製造し得る。【解決手段】マクロスフェライドＡ物質のクロロホルム溶液にＰＤＣを加えて攪拌し、反応液を濃縮して得られた粗生成物を分離、精製して８−ケト−マクロスフェライドＡ物質と１４−ケト−マクロスフェライドＡ物質（マクロスフェライドＢ物質）の混合物と、８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質を得、更に８−ケト−マクロスフェライドＡ物質と１４−ケト−マクロスフェライドＡ物質（マクロスフェライドＢ物質）の混合物をさらに分離、精製し、８−ケト−マクロスフェライドＡ物質を製造する。【選択図】　　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式［Ｉ］
【化１】
2004026745.tif 000007
で表される８−ケト−マクロスフェライドＡ物質からなる新規生理活性物質。
【請求項２】
請求項１に示される化合物が細胞遊走活性の阻害作用を有する請求項１記載の新規生理活性物質。
【請求項３】
請求項１に示される化合物が遅延型過敏症反応に対する抑制作用を有する請求項１記載の新規生理活性物質。
【請求項４】
請求項１に示される化合物が細胞遊走物質ケモカイン類に対して選択的特異性を有する請求項１記載の新規生理活性物質。
【請求項５】
細胞遊走物質ケモカイン類がＭＩＰ−１α、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ及びＥｏｔａｘｉｎの群から選ばれた請求項２又は４に記載の新規生理活性物質。
【請求項６】
マクロスフェライドＡ物質の溶液にＰＤＣを加えて攪拌し、その後反応液を濃縮して得られた粗生成物を分離、精製して８−ケト−マクロスフェライドＡと１４−ケト−マクロスフェライドＡ物質（マクロスフェライドＢ物質）の混合物を得、この混合物を分離、精製して８−ケト−マクロスフェライドＡ物質を合成することを特徴とする新規生理活性物質の製造法。
【請求項７】
上記の攪拌がアルゴン雰囲気下、かつ室温で行われる請求項６記載の新規生理活性物質の製造法。
【請求項８】
請求項６記載の方法で得た化合物が細胞遊走活性の阻害作用を有する請求項６又は７記載の新規生理活性物質の製造法。
【請求項９】
請求項６記載の方法で得た化合物が遅延型過敏症反応に対する抑制作用を有する請求項６又は７記載の新規生理活性物質の製造法。
【請求項１０】
請求項６記載の方法で得た化合物が細胞遊走物質ケモカイン類に対して選択的特異性を有する請求項６又は７記載の新規生理活性物質の製造法。
【請求項１１】
細胞遊走物質ケモカイン類がＭＩＰ−１α、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ及びＥｏｔａｘｉｎの群から選ばれた請求項８または１０記載の新規生理活性物質の製造法。
【請求項１２】
下記式［ＩＩ］
【化２】
2004026745.tif 000008
で表される８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質からなる新規生理活性物質。
【請求項１３】
請求項１２に示される化合物が細胞遊走活性の阻害作用を有する請求項１２記載の新規生理活性物質。
【請求項１４】
請求項１２に示される化合物が遅延型過敏症反応に対する抑制作用を有する請求項１２記載の新規生理活性物質。
【請求項１５】
請求項１２に示される化合物が細胞遊走物質ケモカイン類に対して選択的特異性を有する請求項１２記載の新規生理活性物質。
【請求項１６】
細胞遊走物質ケモカイン類がＭＩＰ−１α、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ及びＥｏｔａｘｉｎの群から選ばれた請求項１３又は１５記載の新規生理活性物質。
【請求項１７】
マクロスフェライドＡ物質の溶液にＰＤＣを加えて攪拌し、その後反応液を濃縮して得られた粗生成物を分離、精製して８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質を合成することを特徴とする新規生理活性物質の製造法。
【請求項１８】
上記の攪拌がアルゴン雰囲気下、かつ室温で行われる請求項１７記載の新規生理活性物質の製造法。
【請求項１９】
請求項１７記載の方法で得た化合物が細胞遊走活性の阻害作用を有する請求項１７記載の新規生理活性物質の製造法。
【請求項２０】
請求項１７記載の方法で得た化合物が遅延型過敏症反応に対する抑制作用を有する請求項１７記載の新規生理活性物質の製造法。
【請求項２１】
請求項１７記載の方法で得た化合物が細胞遊走物質ケモカイン類に対して選択的特異性を有する請求項１７記載の新規生理活性物質の製造法。
【請求項２２】
細胞遊走物質ケモカイン類がＭＩＰ−１α、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ及びＥｏｔａｘｉｎの群から選ばれた請求項１７又は２１記載の新規生理活性物質の製造法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は例えば心、腎、肝などの移植医療の際の免疫抑制に有効な他、リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、潰瘍性大腸炎などの自己免疫疾患の予防及び治療に有効な８−ケト−マクロスフェライドＡ物質及び８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質からなる新規生理活性物質及びその製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
難治性疾患の多くは、自己免疫反応が関与していると考えられている。免疫系の破綻により、自己の成分に対して免疫反応が起こると様々な疾患が誘導されることは知られており、これらは一般に自己免疫疾患と呼ばれる。自己免疫疾患の例としては、慢性間接リウマチ、溶血性貧血、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症等が挙げられる。特に、抗原感作を受けた後、時間を経てから再び抗原に接触したときに、強い細胞性免疫が誘導され、時に宿主を危険な状態とする病的な免疫反応を遅延型過敏症と呼んでいる。この他、腎臓移植、骨髄移植に伴う拒絶反応は、本来は生体の持つ正常な異物排除機構に他ならない。
【０００３】
こうした種々の自己免疫疾患、および過敏症等の治療のために、あるいは移植組織に対する拒絶反応を防ぐことを目的として、免疫応答を抑制する免疫抑制物質の開発が行われてきた。現在使用されている主な免疫抑制剤は、ステロイド剤、副腎皮質ホルモン、代謝拮抗剤、アルキル化剤等が知られているが、有効性、持続性、副作用などの点で必ずしも満足のいくものではなかった。また、強力な免疫抑制剤として汎用されているシクロスポリンＡや、タクロリムスは治療薬もしくは予防薬として有効であるが、投与に伴う腎毒性、抗体産生抑制など、副作用の面で重篤な問題が指摘されていた。
【０００４】
本発明者らは、細胞接着阻害作用を有する物質として、微生物の培養物からマクロスフェライドＡ物質及びＢ物質を採取し、該マクロスフェライドＡ物質及びＢ物質の形態的性質、生理的、生体的性状、および該物質の理化学的性質、分離、精製方法等を特開平８−３２５２８５号により開示した。その後、本発明者らはマクロスフェライドＡ物質及びＢ物質の各種理化学的性状やスペクトルデータを検討して、マクロスフェライドＡ物質及びＢ物質の化学構造を決定し、下記の文献により明らかにした。
【０００５】
Ｔａｋａｍａｔｓｕ．Ｓ，Ｋｉｍ　Ｙｏｎｇ−Ｐｉｌ，Ｈａｙａｓｈｉ．Ｍ，Ｈｉｒａｏｋａ．Ｈ，Ｎａｔｏｒｉ．Ｍ，Ｋｏｍｉｙａｍａ．Ｋ，ａｎｄ　Ｏｍｕｒａ．Ｓ，：Ｍａｃｒｏｓｐｈｅｌｉｄｅ，ａ　Ｎｏｖｅｌ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆ　Ｃｅｌｌ−ｃｅｌｌ　Ａｄｈｅｓｉｏｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌｅ　ＩＩ．Ｐｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ａｎｄ　Ｓｒｕｃｔｕｒａｌ　Ｅｌｃｉｄａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．４９，Ｎｏ．１　ｐｐ．９５−９８，１９９６。
【０００６】
上記の構造決定に基づき本発明者らはこれら物質の活性について検討の結果、マクロスフェライドＢ物質を有効成分として含む薬剤が、意外にも免疫抑制効果が高く、かつ副作用の少ない、従来の薬剤とは異なる作用機序を持った薬剤になり得ることを見出し、この知見に基づいて国際出願を行った（国際公開番号ＷＯ／ＪＰ００／０９４０７）。マクロスフェライドＢ物質を有効成分とする免疫抑制剤は、既存の免疫抑制剤よりも強力で、しかも抗体産生抑制作用が見られず、特に細胞性免疫に対する抑制作用に強い有効性の高い免疫抑制剤となり得ることが期待された。一方、マクロスフェライドＡ物質にはマクロスフェライドＢ物質が有するような免疫抑制作用はなかった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明者らはマクロスフェライドＡ物質を鋭意研究の結果、マクロスフェライドＡ物質のクロロホルム溶液にＰＤＣを加えて攪拌し、その後反応液を濃縮して得られた粗生成物を分離、精製して８−ケト−マクロスフェライドＡ物質と１４−ケト−マクロスフェライドＡ物質（マクロスフェライドＢ物質）の混合物と、８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質を得ることに成功した。次いで、８−ケト−マクロスフェライドＡ物質と１４−ケト−マクロスフェライドＡ物質（マクロスフェライドＢ物質）の混合物をさらに分離、精製し、８−ケト−マクロスフェライドＡ物質を得ることに成功した。このようにして得られた両物質の活性について検討したところ、両物質はともに高い免疫抑制作用を有することが確認された。
【０００８】
本発明はこのような知見に基づいて完成されたものであり、その目的とするところは免疫抑制活性の阻害作用を有し、かつ副作用のない８−ケト−マクロスフェライドＡ物質、及び８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質からなる新規生理活性物質およびこれらの物質を簡単な合成法により製造し得る新規生理活性物質の製造法を提供するものである。
【０００９】
尚、本明細書中における略称は下記を意味する。
ＭＳ　；マクロスフェライド物質、
ＭＳＡ；マクロスフェライドＡ物質、
ＭＳＢ；マクロスフェライドＢ物質、
８ｋＭＳＡまたは８−ｋｅｔｏ−ＭＳＡ；８−ケト−マクロスフェライドＡ物質、
８，１４ｋＭＳＡまたは８，１４−ｄｉｋｅｔｏ−ＭＳＡ；８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質、
ＭＳＪ；１２−ｍｅｔｈｏｘｙ−ＭＳＢまたは１２−メトキシ−マクロスフェライドＢ物質、
ＭＳＫ；１２−ｅｔｈｏｘｙ−ＭＳＢまたは１２−エトキシ−マクロフェライドＢ物質、
ＦＫ５０６；タクロリムス（藤沢薬品社製）。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明は、下記式［Ｉ］
【００１１】
【化３】
2004026745.tif 000002
で表される８−ケト−マクロスフェライドＡ物質からなる新規生理活性物質に関する。
【００１２】上記の式［Ｉ］で示される本発明の８−ケト−マクロスフェライドＡ物質は細胞遊走活性の阻害作用を有し、更に遅延型過敏症反応に対する抑制作用を有し、かつまた細胞遊走物質ケモカイン類に対して選択的特異性を示し、そして細胞遊走物質ケモカイン類がＭＩＰ−１α、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ及びＥｏｔａｘｉｎの群から選ばれた新規生理活性物質に関する。
【００１３】本発明は更に、マクロスフェライドＡ物質の溶液にＰＤＣを加えて攪拌し、その後反応液を濃縮して得られた粗生成物を分離、精製して８−ケト−マクロスフェライドＡと１４−ケト−マクロスフェライドＡ物質（マクロスフェライドＢ物質）の混合物を得、この混合物を分離、精製して８−ケト−マクロスフェライドＡ物質を合成する新規生理活性物質の製造法に関するものであり、上記の攪拌がアルゴン雰囲気下、かつ室温で行われる新規生理活性物質の製造法に関する。
【００１４】
本発明は更に、下記式［ＩＩ］
【００１５】
【化４】
2004026745.tif 000003
で表される８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質からなる新規生理活性物質に関する。
【００１６】
上記の式［ＩＩ］で示される本発明の８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質は細胞遊走活性の阻害作用を有し、更に遅延型過敏症反応に対する抑制作用を有し、かつまた細胞遊走物質ケモカイン類に対して選択的特異性を示し、そして細胞遊走物質ケモカイン類がＭＩＰ−１α、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ及びＥｏｔａｘｉｎの群から選ばれた新規生理活性物質に関する。
【００１７】
本発明は更に、マクロスフェライドＡ物質の溶液にＰＤＣを加えて攪拌し、その後、反応液を濃縮して得られた粗生成物を分離、精製して８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質を合成する新規生理活性物質の製造法に関するものであり、上記の攪拌がアルゴン雰囲気下、かつ室温で行われる新規生理活性物質の製造法に関する。
【００１８】
本発明の８−ケト−マクロスフェライドＡ物質及び８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質の出発原料であるマクロスフェライドＡ物質は、本発明者らによって、土壌から単離した微生物（Ｍｉｃｒｏｓｐｈａｅｒｏｐｓｉｓ　ｓｐ．ＦＯ−５０５０；ＦＥＲＭ　Ｐ−１４７７６）の培養物から、分離、精製された物質である。該微生物の形態的性質、生理的・生態的性状、および該物質の理化学的性質、分離、精製方法は特開平８−３２５２８５号に記載されている。また、ＭＳＡはその構造的な情報に基づいて化学的に合成することもできる（Ｓｕｎａｚｕｋａ　Ｔ．ｅｔ　ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１９：１０２４７−１０２４８，１９９７）。
【００１９】
【発明の実施の形態】
以下に本発明の参考例および実施例を挙げて具体的に説明するが、本発明はこれのみに限定されるものではない。
【００２０】
参考例１
微生物（Ｍｉｃｒｏｓｐｈａｅｒｏｐｓｉｓ　ｓｐ．ＦＯ−５０５０；ＦＥＲＭ　Ｐ−１４７７６）からのマクロスフェライドＡ物質の分離、精製
試験管（φ２×２０ｃｍ）にグルコース２．０％、酵母エキス０．２％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５％、ポリペプトン０．５％、リン酸二水素カリウム０．１％、寒天０．１％（ｐＨ５．６〜５．８）、１０ｍｌを滅菌し、これに酵母エキス０．４％、可溶性デンプン１．５％、リン酸−水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５％、寒天２．０％（ｐＨ６．０）を含む寒天斜面培地上に２７℃、６日間培養したＭｉｃｒｏｓｐｈａｅｒｏｐｓｉｓ　ｓｐ．ＦＯ−５０５０（ＦＥＲＭ　Ｐ−１４７７６）の斜面培養から一白金耳を接種し、２７℃で７２時間振とう培養して種母を得た。
【００２１】
次に、５００ｍｌ容三角フラスコに可溶性デンプン３．０％、グリセロール１．０％、キナコ２．０％、乾燥酵母０．３％、塩化カリウム０．３％、炭酸カルシウム０．２％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５％、リン酸二水素カリウム０．０５％を含む液体生産培地（ｐＨ６．５）１００ｍｌ（２０本）に仕込み滅菌した後、上記の方法で得られた種母１．０ｍｌを上記三角フラスコに無菌的に移植し、毎分２２０回転するロータリシェーカーにより２７℃で１２０時間振とう培養を行った。
【００２２】
得られた培養液を液体画分と菌体画分とに分け、液体画分については、酢酸エチルを加えて充分攪拌した後、分液操作により酢酸エチル抽出画分を得た。菌体画分については、これにメタノールを加え、充分攪拌した後、得られたメタノール画分を減圧濃縮してメタノールを留去後、酢酸エチルにより抽出した。液体および菌体の両画分より得た酢酸エチル画分を合わせ、減圧濃縮操作により酢酸エチル抽出画分３７９．４ｍｇを得た。
【００２３】
この酢酸エチル抽出画分を薄層シリカゲル（２０×２０ｃｍ、厚さ０．５ｍｍ、メルク社製）二枚に吸着させ、クロロホルム−メタノール混合溶媒（９：１）で展開した。Ｒｆ値が０．５付近で、紫外線ランプ（２５４，３６６ｎｍ）照射下で橙黄色の蛍光を示すバンドを分画し、クロロホルム−メタノール混合溶媒（１：１）で溶出した。得られた溶出画分を減圧濃縮してマクロスフェライド類を含む１８．３ｍｇの粗物質Ｉを得た。この粗物質Ｉを少量のメタノールに溶解し、高速液体クロマトグラフイー（センシューパック・ペガシル、φ２０×２５０ｍｍ）にかけ、４０％アセトニトリル溶液を移動相として活性画分を分取することによりマクロスフェライドＡ物質の純品１３．７ｍｇを得た。
【００２４】
参考例２
マクロスフェライドＡ物質の合成
マクロスフェライドＡ物質の出発原料であるマクロスフェライド物質は、２分子のｔｒａｎｓ−（４Ｒ，５Ｓ）−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−２−ｈｅｘｅｎｏｉｃａｃｉｄと、１分子の（３Ｓ）−ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒｉｃ　ａｃｉｄを有している。合成法として、１の２つの不斉炭素を（Ｅ，Ｅ）−ｈｅｘａ−２，４−ｄｉｅｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｅｓｔｅｒの位置選択的不斉ジヒドロキシル化反応により一挙に導入し、さらに４位の水酸基を立体反転して１の分子骨格を構築し、さらに、２分子の１と２を順次縮合させ、最後にマロラクトン化により構築した。
【００２５】
出発原料として（Ｅ，Ｅ）−ｈｅｘａ−２，４−ｄｉｅｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｔ−ｂｕｔｙｌ　ｅｓｔｅｒを用いＳｈａｒｐｒｅｓｓの不斉ジヒドロキシル化反応を行うことにより、末端オレフィンのみジヒドロキシル化（８５％ｅｅ）し、（４Ｓ，５Ｓ）−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−２−ｈｅｘｅｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｔ−ｂｕｔｙｌ　ｅｓｔｅｒを得た。続いて、このジオール体の５位の水酸基のみをＴＢＤＭＳ基で保護し、この物質の４位の水酸基を光延反応を用いて反転させ、アルコール体とした。この物質の４位の水酸基をＭＥＭ化し、続いて０．２ＮＮａＯＨで加水分解してカルボン酸を得た。
【００２６】
一方、ＭＥＭ化した物質をＴＢＡＦを用いて脱ＴＢＤＭＳ化し、アルコールを得た。ついで、先のカルボン酸体とアルコール体をＤＣＣ、ＤＭＰＡ、ＣＳＡを用いたＫｅｃｋ法により結合させ、続いてＡｃＯＨ酸性で脱ＴＢＤＭＳ化してアルコールとした。このアルコールと（３Ｓ）−ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒｉｃ　ａｃｉｄ誘導体とを先の条件で縮合後、ＴＦＡ、ｔｈｉｏａｎｉｓｏｌｅを用いた酸性条件でＴ−Ｂｕ基とＴＢＤＭＳ基を同時に脱保護してセコ酸を得た。次に、２，４，６−ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚｏｙｌ　ｃｈｌｏｒｉｄｅを用いる山口法によりマクロラクトン化を行い、トリラクトン体を得た。ついでＴＦＡを用いてＭＥＭ基を除去しマクロスフェライドＡ物質を合成した。
【００２７】
実施例１
８−ケト−マクロスフェライドＡ物質の合成
アルゴン雰囲気下、かつ室温でマクロスフェライドＡ物質（１０．９ｍｇ、３２μｍｏｌ）のクロロホルム（３ｍｌ）溶液にＰＤＣ（７２ｍｇ、１９２μＭ）を加え、３時間攪拌した。その後、反応液にエチルエーテル（３ｍｌ）を加えて希釈し、これをセライト（日本国、関東化学社製）を用いて吸引ろ過した後、ろ液を濃縮し、得られた粗生成物（３１ｍｇ）を分離用ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３　：ＭｅＯＨ＝９：１）で分離、精製し、８−ケト−マクロスフェライドＡ物質と１４−ケト−マクロスフェライドＡ物質（マクロスフェライドＢ物質）の混合物（５．１ｍｇ）を得た。
【００２８】
上記で得られた８−ケト−マクロスフェライドＡ物質と１４−ケト−マクロスフェライドＡ物質（マクロスフェライドＢ物質）の混合物を、さらにＨＰＬＣ（センシューパック、ＰＥＧＡＳＩＬ　ＯＤＳ、２×２５ｃｍ；３５％アセトニトリル、０．８ｍｌ／ｍｉｎ）で分離、精製し、目的とする無色針状結晶の８−ケト−マクロスフェライドＡ物質（１．９ｍｇ）を得た。得られた８−ケト−マクロスフェライドＡ物質の理化学的性質は下記の通りである。
【００２９】
（１）性状　　：無色針状結晶
（２）元素組成：Ｃ１６Ｈ２０Ｏ８　
（３）分子量　：３４０
（４）　１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：ＪＥＯＬ社製、核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中で測定）；δ：７．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，３−Ｈ）、７．０２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．８，５．３Ｈｚ，１０−Ｈ）、６．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，４−Ｈ）、６．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．８，１．３Ｈｚ，９−Ｈ），５．３５（１Ｈ，ｍ，１６−Ｈ）、５．２０（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６−Ｈ）、４．９０（１Ｈ，ｍ，１２−Ｈ）、４．１９（１Ｈ，ｍ，１１−Ｈ）、２．７１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．２，１０．６Ｈｚ，１５α　ｏｒ　β−Ｈ），２．５７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．２，２．６Ｈｚ，１５α　ｏｒ　β−Ｈ），１．５１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６−ＣＨ３　），１．３９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１２−ＣＨ３　）、１．３６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３，１６−ＣＨ３　）。
【００３０】
以上のように、８−ケト−マクロスフェライドＡ物質の理化学的性状やスペクトルデータを検討した結果、本物質は下記式［Ｉ］で表される化学構造であることが決定された。
【００３１】
【化５】
2004026745.tif 000004
【００３２】
実施例２
８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質の合成
アルゴン雰囲気下、かつ室温でマクロスフェライドＡ物質（１０．９ｍｇ、３２μｍｏｌ）のクロロホルム（３ｍｌ）溶液にＰＤＣ（７２ｍｇ、１９２μＭ）を加え、３時間攪拌した。その後、反応液にエチルエーテル（３ｍｌ）を加え希釈し、これをセライト（日本国、関東化学社製）を用いて吸引ろ過した後、ろ液を濃縮し、得られた粗生成物（３１ｍｇ）を分離用ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３　：ＭｅＯＨ＝１０：１）で精製し、Ｒｆ値０．７５の位置に目的とする無色油状物質８，１４−ジケト−マクロフェライドＡ物質（１．７ｍｇ）を得た。得られた８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質の理化学的性質は下記の通りである。
【００３３】
（１）性状　　：無色油状
（２）元素組成：Ｃ１６Ｈ１８Ｏ８　
（３）分子量　：３３８
（４）　１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：ＪＥＯＬ社製、核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中で測定）；δ：７．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，４−Ｈ）、７．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．８，Ｈｚ，９−Ｈ）、６．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１０−Ｈ）、６．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，３−Ｈ）、５．２０（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６−Ｈ），５．１２（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１２−Ｈ）、５．３１（１Ｈ，ｍ，１６−Ｈ），２．８４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．５，１１．３Ｈｚ，１５α　ｏｒ　β−Ｈ）、２．６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．５，２．１Ｈｚ，１５α　ｏｒ　β−Ｈ），１．５１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６−ＣＨ３　）、１．３９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１２−ＣＨ３　）、１．３４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１６−ＣＨ３　）。
【００３４】
以上のように、８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質の各種理化学的性状やスペクトルデータを検討した結果、本物質は下記式［ＩＩ］で表される化学構造であることが決定された。
【００３５】
【化６】
2004026745.tif 000005
【００３６】
マクロスフェライド化合物は、これまでにマクロスフェライドＡ物質１）、マクロスフェライドＢ物質１）、マクロスフェライドＣ物質２）、マクロスフェライドＤ物質２）、マクロスフェライドＥ物質３）、マクロスフェライドＦ物質３）、マクロスフェライドＧ物質３）、マクロスフェライドＨ物質３）、マクロスフェライドＩ物質４）、マクロスフェライドＪ物質５）、マクロスフェライドＫ物質５）、マクロスフェライドＬ物質６）が知られていた。しかし、本発明の８−ケト−マクロスフェライドＡ物質の化学構造及び８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質の化学構造で示される化合物はいずれも既知のマクロスフェライドＡ〜Ｌに該当するものはなく、新規化合物であることが示された。
【００３７】
実施例３
マクロスフェライド類の細胞遊走活性の阻害作用について説明する。
活性測定方法
本発明による８−ケト−マクロスフェライドＡ物質及び８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質（マクロスフェライド類）の生物活性は、細胞遊走活性の阻害作用において評価した。細胞遊走活性はｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ　ｃｈａｍｂｅｒ（日本国、家田貿易社製）を用いて評価した。この装置はｃｈａｍｂｅｒが上室と下室に多孔性（直径５μｍ）のフイルターにより仕切られており、上室に細胞を、下室に細胞遊走物質を添加する。この細胞遊走物質により細胞は下室に遊走するが、この時、上室あるいは下室にマクロスフェライド類を添加することにより細胞遊走が抑制されれば、そのマクロスフェライド類は細胞遊走阻害活性を有することが示唆される。
【００３８】
本発明による実験では、免疫担当細胞により産生される細胞遊走物質ケモカイン類のうち、ｍｏｎｏｃｙｔｅ　ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ−１（ＭＣＰ−１）に着目した。このＭＣＰ−１は、Ｆｕｒｕｔａｎｉ　Ｙ，Ｎｏｍｕｒａ　Ｈ，Ｎｏｔａｋｅ　Ｍ，Ｏｙａｍａｄａ　Ｙ，Ｆｕｋｕｉ　Ｔ，Ｙａｍａｄａ　Ｍ，Ｌａｒｓｅｎ　ＣＧ，Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ　ＪＪ，Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ　Ｋ，Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃＤＮＡ　ｆｏｒ　ｈｕｍａｎ　ｍｏｎｏｃｙｔｅ　ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ（ＭＣＡＦ）．Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ．Ｖｏｌ．１５９，Ｎｏ．１，ｐｐ，２４９−２５５，１９８９に記載されている。そこで、ＭＣＰ−１について本発明の８−ケト−マクロスフェライドＡ物質及び８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質の細胞遊走活性の阻害作用を、以下の実験例に従って検討した。
【００３９】
実験例１
ヒト急性単球型白血病細胞ＴＨＰ−１細胞［ＲＣＢ、ＲＩＫＥＮ　Ｃｅｌｌ　Ｂａｎｋ（理研細胞バンク）より入手］を用いた。ＴＨＰ−１細胞はＭＣＰ−１ｒｅｃｅｐｔｏｒであるＣＣＲ２を発現し、ＭＣＰ−１刺激により細胞遊走を惹起する。ＴＨＰ−１細胞およびＭＣＰ−１（ＤＡＫＯ社製）は０．１％牛血清アルブミン、１０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地でそれぞれ調製した。このように調整した１０ｎｇ／ｍｌのＭＣＰ−１をｃｈａｍｂｅｒの下室に、また４×１０６　ｃｅｌｌ／ｍｌのＴＨＰ−１細胞懸濁液を上室に入れた。そこで、コントロールとしてマクロスフェライドＢ物質（国際公開番号ＷＯ／ＪＰ００／０９４０７：ＭＳＢ）を下室に添加し、３７℃で２時間インキュベートした後、下室に遊走された細胞をＭＴＴ法により染色し、５４０ｎｍの吸光度を測定した。その結果は図１に示した。
【００４０】
実験例２
ヒト急性単球型白血病細胞ＴＨＰ−１細胞［ＲＣＢ、ＲＩＫＥＮ　Ｃｅｌｌ　Ｂａｎｋ（理研細胞バンク）より入手］を用いた。ＴＨＰ−１細胞はＭＣＰ−１ｒｅｃｅｐｔｏｒであるＣＣＲ２を発現し、ＭＣＰ−１刺激により細胞遊走を惹起する。ＴＨＰ−１細胞およびＭＣＰ−１（ＤＡＫＯ社製）は０．１％牛血清アルブミン、１０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地でそれぞれ調製した。このように調整した１０ｎｇ／ｍｌのＭＣＰ−１をｃｈａｍｂｅｒの下室に、また４×１０６　ｃｅｌｌ／ｍｌのＴＨＰ−１細胞懸濁液を上室に入れた。そこで、８−ケト−マクロスフェライドＡ物質または８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質をｃｈａｍｂｅｒの上室に添加し、３７℃で２時間インキュベートした後、下室に遊走された細胞をＭＴＴ法により染色し、５４０ｎｍの吸光度を測定した。その結果は図１に示した。
【００４１】
実験例３
ヒト急性単球型白血病細胞ＴＨＰ−１細胞［ＲＣＢ、ＲＩＫＥＮ　Ｃｅｌｌ　Ｂａｎｋ（理研細胞バンク）より入手］を用いた。ＴＨＰ−１細胞はＭＣＰ−１ｒｅｃｅｐｔｏｒであるＣＣＲ２を発現し、ＭＣＰ−１刺激により細胞遊走を惹起する。ＴＨＰ−１細胞およびＭＣＰ−１（ＤＡＫＯ社製）は０．１％牛血清アルブミン、１０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地でそれぞれ調整した。このように調整した１０ｎｇ／ｍｌのＭＣＰ−１をｃｈａｍｂｅｒの下室に、また４×１０６　ｃｅｌｌ／ｍｌのＴＨＰ−１細胞懸濁液を上室に入れた。そこで、８−ケト−マクロスフェライドＡ物質または８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質を下室に添加し、３７℃で２時間インキュベートした後、上室に遊走された細胞をＭＴＴ法により染色し、５４０ｎｍの吸光度を測定した。その結果は図１に示した。
【００４２】
実験結果
図１は縦軸に吸光度（５４０ｎｍ）が表され、横軸に化合物ＭＳＢ、８−ｋｅｔｏ−ＭＳＡ及び８，１４−ｄｉｋｅｔｏ−ＭＳＡの用量（μｇ／ｍＬ）が表してある。ＭＳＢ、８−ｋｅｔｏ−ＭＳＡまたは８，１４−ｄｉｋｅｔｏ−ＭＳＡをＴＨＰ−１細胞とともにｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ　ｃｈａｍｂｅｒの上室に添加した場合（実験例２）、細胞の遊走を阻害しないことが確認された。しかしながら、実験例１及び実験例３のように、ＭＳＢ、８−ｋｅｔｏ−ＭＳＡまたは８，１４−ｄｉｋｅｔｏ−ＭＳＡをＭＣＰ−１細胞とともにｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ　ｃｈａｍｂｅｒの上室に添加した場合は、図１に示したように細胞の遊走を阻害することが確認された。
【００４３】
図１において、ＭＳＢは−◇−で表され、８−ｋｅｔｏ−ＭＳＡは−●−で表され、８，１４−ｄｉｋｅｔｏ−ＭＳＡは−▲−として表してある。ＭＳＢは少量用量から増大するに従い、細胞の遊走活性の抑制が示される。同様に、８−ｋｅｔｏ−ＭＳＡ及び８，１４−ｄｉｋｅｔｏ−ＭＳＡにおいても細胞の遊走活性の抑制が見られ、特に本発明の物質が３．０〜２５μｇ／ｍＬの濃度において添加された場合、ＴＨＰ−１細胞の遊走を用量依存的に抑制した。また、その阻害作用は化合物８−ｋｅｔｏ−ＭＳＡ（ＩＣ５０，μｇ／ｍＬ）に比べ、８，１４−ｄｉｋｅｔｏ−ＭＳＡ（ＩＣ５０，μｇ／ｍＬ）が約４倍強かった。
【００４４】
実験例４
細胞遊走物質ケモカイン類の選択的特異性について説明する。
実験例３と同様の方法を用いて、細胞遊走物質ケモカインＭＣＰ−１以外のケモカイン類、ＭＩＰ−１α、ＲＡＮＴＥＳ、およびＥｏｔａｘｉｎについて検討した。これらの物質については以下の文献に詳しく述べてある。
【００４５】
（１）ＭＩＰ−１α；ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｐｒｏｔｅｉｎ−１　ａｌｐｈａ，ＤＡＫＯ社製：Ｓｈｅｒｒｙ　Ｂ，Ｔｅｋａｍｐ−Ｏｌｓｏｎ　Ｐ，Ｇａｌｌｅｇｏｓ　Ｃ，Ｂａｕｅｒ　Ｄ，Ｄａｖａｔｅｌｉｓ　Ｇ，Ｗｏｌｐｅ　ＳＤ，Ｍａｓｉａｒｚ　Ｆ，Ｃｏｉｔ　Ｄ，Ｃｅｒａｍｉ　Ａ．Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｐｒｏｔｅｉｎ　１，ａｎｄ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｏｓｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｐｒｏｔｅｉｎ　１　ｂｅｔａ．Ｊ．Ｅｘｐ　Ｍｅｄ．Ｖｏｌ．１６８，Ｎｏ．６，ｐｐ２２５１−２２５９，１９８８。
【００４６】
（２）ＲＡＮＴＥＳ；ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｕｐｏｎ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，ｎｏｒｍａｌ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ａｎｄ　ｓｅｃｒｅｔｅｄ　ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ，ＤＡＫＯ社製：Ｄｏｎｌｏｎ　ＴＡ，ＫｒｅｎｓｋｙＡＭ，Ｗａｌｌａｃｅ　ＭＲ，Ｃｏｌｌｉｎｓ　ＦＳ，Ｌｏｖｅｔｔ　Ｍ，Ｃｌａｙｂｅｒｇｅｒ　Ｃ．Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｈｕｍａｎ　Ｔ−ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｇｅｎｅ，ＲＡＮＴＥＳ（Ｄ１７Ｓ１３６Ｅ），ｔｏ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　１７ｑ１１．２−ｑ１２．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ．Ｖｏｌ．６，Ｎｏ．３，ｐｐ．５４８−５５３，１９９０。
【００４７】
（３）Ｅｏｔａｘｉｎ；ＤＡＫＯ社製：Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ−ＪｏｈｎｓｏｎＤＡ，Ｃｏｌｌｉｎｓ　ＰＤ，Ｒｏｓｓｉ　ＡＧ，Ｊｏｓｅ　ＰＪ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ　ＴＪ．Ｔｈｅ　ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ，ｅｏｔａｘｉｎ，ａｃｔｉｖａｔｅｓ　ｇｕｉｎｅａ−ｐｉｇ　ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｄ　ｃａｕｓｅｓ　ｔｈｅｉｒ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｌｕｎｇ　ｉｎ　ｖｉｖｏ．Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ．Ｖｏｌ．１９７，Ｎｏ．３，ｐｐ．１１６７−１１７２，１９９３。
【００４８】
上記の細胞遊走物質ケモカイン類、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、ＲＡＮＴＥＳ及びＥｏｔａｘｉｎに対するＭＳＡ、８−ｋｅｔｏ−ＭＳＡ（本発明物質）、８，１４−ｄｉｋｅｔｏ−ＭＳＡ（本発明物質）、ＭＳＢ、ＭＳＪ、ＭＳＫおよびＦＫ５０６（既知物質）に対する選択的特異性を検討した。その結果は、下記に示す通りであった。
【００４９】
2004026745.tif 000006
【００５０】
本発明の８−ｋｅｔｏ−ＭＳＡ及び８，１４−ｄｉｋｅｔｏ−ＭＳＡは細胞遊走物質ケモカインＭＣＰ−１以外のケモカイン類であるＭＩＰ−１α、ＲＡＮＴＥＳ及びＥｏｔａｘｉｎ群の細胞遊走活性には影響せず、細胞遊走物質ケモカインＭＣＰ−１に高い作用特異性を示すことが確認された。その活性は８−ｋｅｔｏ−ＭＳＡはＭＳＢの１．５倍であり、８，１４−ｄｉｋｅｔｏ−ＭＳＡは約６倍強い物質であった。
【００５１】
実験例５
遅延型過敏症性反応に対する抑制作用について説明する。
８−ケト−マクロフェライドＡ物質及び８，１４−ジケト−マクロフェライドＡ物質のｉｎ　ｖｉｖｏでの効果は、ＶＩ型アレルギーの動物実験モデルであるマウス遅延型過敏症モデルの足蹠浮腫により評価した。ＢＤＦＩ系マウス（日本国、日本エスエルシー社より入手）に２ｍｇ／ｍｌのメチル化牛血清アルブミン（ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ　Ｂｏｖｉｎｅ　Ｓｅｒｕｍ　Ａｌｂｕｍｉｎ，ｍＢＳＡ）とフロインド不完全アジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ　ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ　ａｄｊｕｖａｎｔ）を等量混合してエマルジョンを作製し、その０．１ｍｌを背部皮下に注射した（一次感作）。
【００５２】
一次感作７日後、５０μＬの０．４ｍｇ／ｍｌのｍＢＳＡを右足蹠皮下に注射した（２次感作）。対称として左足蹠に同量の生理食塩水を注射した。炎症の程度は左右足蹠の厚みの差を算出して評価した。薬物は０．５％エタノール−生理食塩水溶液で以下に述べる濃度に調整した。ＭＳＢ、８−ｋｅｔｏ−ＭＳＡの２０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、及び８，１４−ｄｉｋｔｏ−ＭＳＡの１０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇは各々、一次感作後６日間、腹腔内注射した。コントロールとして０．５％エタノール−生理食塩水溶液を投与した。左右足蹠の厚みの差を算出して抑制効果を判定した。その結果を図２に示した。
【００５３】
実験結果
図２は縦軸に足蹠の厚みの差（ｃｍ）が表され、横軸に用量（ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）が表してある。コントロールは−□−で表され、ＭＳＢは−◇−で表され、８−ｋｅｔｏ−ＭＳＡは−●−で表され、８，１４−ｄｉｋｅｔｏ−ＭＳＡは−▲−としてそれぞれ表してある。ＭＳＢ、８−ｋｅｔｏ−ＭＳＡ、８，１４−ｄｉｋｅｔｏ−ＭＳＡのＩＣ５０値はそれぞれ、８．３ｍｇ／ｋｇ、７．２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇであり、８−ｋｅｔｏ−ＭＳＡ、８，１４−ｄｉｋｅｔｏ−ＭＳＡはＭＳＢに比べ、約１．１５倍、２．８倍強い抑制活性を有することが確認された。
【００５４】
【発明の効果】
本発明はマクロスフェライドＡ物質のクロロホルム溶液にＰＤＣを加えて攪拌し、その反応液を濃縮して得られた粗生成物を分離、精製して８−ケト−マクロスフェライドＡ物質と１４−ケト−マクロスフェライドＡ物質（マクロスフェライドＢ物質）の混合物と、８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質を得、更に、８−ケト−マクロスフェライドＡ物質と１４−ケト−マクロスフェライドＡ物質（マクロスフェライドＢ物質）の混合物をさらに分離、精製して、８−ケト−マクロスフェライドＡ物質を得る。得られた両物質はともに細胞遊走活性の阻害作用、細胞遊走物質ケモカイン類に対する選択的特異性を有し、更に遅延型過敏性反応に強い抑制活性を有し、免疫抑制物質として期待される。
【００５５】
引用文献
１）：Ｔａｋａｍａｔｓｕ　Ｓａｔｏｓｈｉ，Ｋｉｍ　Ｙｏｎｇ−Ｐｉｌ，Ｈａｙａｓｈｉ　Ｍａｓａｈｉｋｏ，Ｈｉｒａｏｋａ　Ｈｉｄｅｍｉ，ＮａｔｏｒｉＭａｓａｈｉｋｏ；Ｋｏｍｉｙａｍａ　Ｋａｎｋｉ；Ｏｍｕｒａ　Ｓａｔｏｓｈｉ．Ｍａｃｒｏｓｐｈｅｌｉｄｅ，ａ　ｎｏｖｅｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆ　ｃｅｌｌ−ｃｅｌｌ　ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．ＩＩ　Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ａｎｄ　ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ｅｌｃｉｄａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．４９，Ｎｏ．１，ｐｐ．９５−９８，１９９６。
【００５６】
２）：Ｔａｋａｍａｔｓｕ　Ｓａｔｏｓｈｉ，Ｈｉｒａｏｋａ　Ｈｉｄｅｍｉ，Ｋｉｍ　Ｙｏｎｇ−Ｐｉｌ，Ｈａｙａｓｈｉ　Ｍａｓａｈｉｋｏ，ＮａｔｏｒｉＭａｓａｈｉｋｏ；Ｋｏｍｉｙａｍａ　Ｋａｎｋｉ　ａｎｄ　Ｏｍｕｒａ　Ｓａｔｏｓｈｉ．Ｍａｃｒｏｓｐｈｅｌｉｄｅ，Ｃ　ａｎｄ　Ｄ，ｎｏｖｅｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｏｆ　ｃｅｌｌ　ａｄｈｅｓｉｏｎ．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．５０，Ｎｏ．１０，ｐｐ．８７８−８８０，１９９７。
【００５７】
３）：Ｎｕｍａｔａ　Ａｔｓｕｓｈｉ，Ｉｒｉｔａｎｉ　Ｍａｓａｓｈｉ，Ｙａｍａｄａ　Ｔａｋｅｓｈｉ，Ｍｉｎｏｕｒａ　Ｋａｔｓｕｈｉｋｏ，Ｍａｔｓｕｍｕｒａ　Ｅｉｋｏ，Ｙａｍｏｒｉ　Ｔａｋａｏ　ａｎｄ　Ｔｓｕｒｕｏ　Ｔａｋａｓｈｉ．Ｎｏｖｅｌ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ａ　ｆｕｎｇａｌ　ｓｔｒａｉｎ　ｆｒｏｍ　ａ　ｓｅａｈａｒｅ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒ，Ｖｏｌ．３８，Ｎｏ．４７，ｐｐ．８２１５−８２１８，１９９７。
【００５８】
４）：Ｙａｍａｄａ　Ｔａｋｅｓｈｉ，Ｉｒｉｔａｎｉ　Ｍａｓａｓｈｉ，Ｄｏｉ　Ｍｉｔｓｕｎｏｂｕ，Ｍｉｎｏｕｒａ　Ｋａｔｓｕｈｉｋｏ，Ｉｔｏ　Ｔａｄａｙｏｓｈｉ，ａｎｄ　Ｎｕｍａｔａ　Ａｔｓｕｓｈｉ．Ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｓｔｅｒｅｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｃｅｌｌ−ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ｍａｃｒｏｓｐｈｅｌｉｄｅｓ　Ｃ，Ｅ−Ｇ　ａｎｄ　Ｉ，ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ａ　Ｐｅｒｉｃｏｎｉａ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ａｎ　Ａｐｌｙｓｉａ　ｓｅａ　ｈａｒｅ．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｐｅｒｋｉｎ　Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ　１．Ｎｏ．２２，ｐｐ．３０４６−３０５３，２００１。
【００５９】
５）：Ｆｕｋａｍｉ　Ａｋｉｋｏ，Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ　Ｙｏｓｕｋｅ，Ｎａｋａｍｕｒａ　Ｔｏｍｏｎｏｒｉ，Ｒｈｏ　Ｍｕｎ−Ｃｈｕａｌ，Ｋａｗａｇｕｃｈｉ　Ｋａｎａｋｏ，Ｈａｙａｓｈｉ　Ｍａｓａｈｉｋｏ，Ｋｏｍｉｙａｍａ　Ｋａｎｋｉ　ａｎｄ　Ｏｍｕｒａ　Ｓａｔｏｓｈｉ．Ｎｅｗ　ｍｅｍｂｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍａｃｒｏｓｐｈｅｌｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｍｉｃｒｏｓｐｈａｅｒｏｐｓｉｓ　ｓｐ．ＦＯ−５０５０　ＩＶ．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．５２，Ｎｏ．５，ｐｐ．５０１−５０４，１９９９。
【００６０】
６）：Ｙａｍａｄａ　Ｔａｋｅｓｈｉ，Ｉｒｉｔａｎｉ　Ｍａｓａｓｈｉ，Ｍｉｎｏｕｒａ　Ｋａｔｓｕｈｉｋｏ，Ｎｕｍａｔａ　Ａｔｓｕｓｈｉ，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ　Ｙｕｉｃｈｉ　ａｎｄ　Ｗａｎｇ，Ｙｏｎｇ−Ｇａｎｇ．Ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｓｔｅｒｅｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｃｅｌｌ−ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ｍａｃｒｏｓｐｈｅｌｉｄｅｓ　Ｈ　ａｎｄ　Ｌ　ｆｒｏｍ　Ｐｅｒｉｃｏｎｉａ　ｂｙｓｓｏｉｄｅｓ　ＯＵＰＳ−Ｎ１３３．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．５５，Ｎｏ．２，ｐｐ．１４７−１５４，２００２。
【図面の簡単な説明】
【図１】Ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ　ｃｈａｍｂｅｒを用いて既知のマクロスフェライドＢ物質、本発明による８−ケト−マクロスフェライドＡ物質及び８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質の細胞遊走活性の阻害作用を評価した測定結果を示したものである。
【図２】ＶＩ型アレルギーの動物実験モデルであるマウス遅延型過敏症モデルの足蹠浮腫により既知のマクロスフェライドＢ物質、本発明による８−ケト−マクロスフェライドＡ物質及び８，１４−ジケト−マクロスフェライドＡ物質の遅延型過敏症反応に対する抑制効果の測定結果を示したものである。
【図１】
2004026745.tif 000009
【図２】
2004026745.tif 000010