(57)【要約】【課題】本発明は、ペルオキシソームの前記機能を解明するたのペルオキシソームの新規な変異体を提供するものである。【解決手段】本発明は、シロイロナズナのＡＤＬ２Ａ遺伝子の機能が欠損し、細胞内のペルオキシソームの形が巨大化し、長く変異した変異株、及びその製造方法に関する。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シロイヌナズナのＡＤＬ２Ａ遺伝子の機能が欠損し、細胞内のペルオキシソームの形が巨大化し、長く変異した変異株。
【請求項２】
変異体が、ペルオキシソーム移行シグナル配列がＣ末端に付加された緑色蛍光タンパク質をコードする遺伝子が導入されているものである請求項１に記載の変異体。
【請求項３】
シロイヌナズナをメタンスルホン酸エチルで処理し、得られた突然変異体の中から、ペルオキシソームの形態が巨大化し、長くなっているいるものを選抜してくることからなる、シロイヌナズナのＡＤＬ２Ａ遺伝子の機能が欠損し、細胞内のペルオキシソームの形が巨大化し、長く変異した変異株の製造方法。
【請求項４】
シロイヌナズナが、ペルオキシソーム移行シグナル配列がＣ末端に付加された緑色蛍光タンパク質をコードする遺伝子が導入されているシロイヌナズナである請求項３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、シロイヌナズナのＡＤＬ２Ａ遺伝子の機能が欠損し、細胞内のペルオキシソームの形が巨大化し、長く変異した変異株、及びその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
真核細胞では、さまざまな代謝機能が生体膜によって区画化されたオルガネラ（細胞内小器官）に存在する。個体が成長するうえで、各種のオルガネラが固有の機能を果たしつつ、協調的に働くことが必要不可欠である。これらのオルガネラは決して静的な状態のまま細胞内に存在しているのではなく、細胞の成長・分化に伴い生成、変換、消失するなどきわめて動的な状態にある。そして、多種多様に分化した真核細胞からなる高等動植物では、個々に分化した細胞内に存在するオルガネラが動的に変化し、それぞれ特殊化した機能をもちあわせている。逆にみれば、これはオルガネラの機能分化こそが真核細胞の多様化を可能にしているといえる。この事実は、動植物が示すさまざまな生理現象を解明していくうえで、オルガネラレベルでの解析が重要であることを示している。
【０００３】
ベルオキシソームは、真核細胞に普遍的に存在する直径０．５〜１．０μｍほどのオルガネラである。１９５０年代にマウスの肝臓組織で発見されて以来、機能をもたないオルガネラと考えられてきた。しかしながら、高等植物のベルオキシソームが脂質代謝に関与するという証明がなされ、さらにその後の研究によってこの機能が生物界全般のベルオキシソームに普遍化されることにより、一躍注目されるオルガネラとなりつつある。
高等植物細胞のベルオキシソームは、それぞれの機能により少なくとも３種類、（１）黄化子葉などに観察されるグリオキシソーム、（２）光合成器官に存在する緑葉ベルオキシソーム、（３）根などの器官にみられる特殊化していないベルオキシソーム、に細分される（非特許文献１参照）。これらの分化したベルオキシソームは高等植物のさまざまな器官において、それぞれの代謝系に必要な特異的な酵素群を内包している。
グリオキシソームは主に脂肪性種子の発芽段階における胚乳や子葉のような貯蔵器官細胞に存在している（非特許文献２参照）。このグリオキシソームは脂肪酸β酸化とグリオキシル酸回路の酵素群を有しており、貯蔵脂肪からショ糖への変換過程において中心的な役割を担っている。対照的に、緑葉ベルオキシソームは光合成器官の細胞に広く分布している。この緑葉ベルオキシソームにはいくつかのグリコール酸経路の諸酵素が含まれており、緑葉ベルオキシソーム、葉緑体、ミトコンドリア間における酵素反応によって光呼吸系を成立させている（非特許文献３参照）。一方、特殊化していないベルオキシソームに関する報告はあまり多くはなく、今のところ際だった生理的機能は不明である。
【０００４】
興味深いことに、グリオキシソーム、緑葉ベルオキシソーム、特殊化していないベルオキシソームは、個体の成長などの環境変化に応じてその機能を他のベルオキシソームに転換させることが知られている（非特許文献２参照）。この現象は植物ベルオキシソーム固有のものであり、酵母や哺乳類などのベルオキシソームではみられない。黄化子葉のグリオキシソームは、光照射により子葉が緑化していく過程で、直接緑葉ペルオキシソームへと変化する。この過程においてインクエン酸リアーゼやリンゴ酸合成酵素のような脂質代謝酵素は特異的に分解される。そして、グリコール酸酸化酵素やヒドロキシピルビン酸還元酵素などの光呼吸酵素が新規に合成され、それらがベルオキシソームに輸送されることにより、グリオキシソームから緑葉ベルオキシソームへの機能転換が完了する。さらに、興味深いことに、この植物ベルオキシソームの機能転換は可逆的であり、老化段階にある子葉細胞では緑葉ベルオキシソームからグリオキシソームへの逆の機能転換が観察されている。このような植物ベルオキシソームの可逆的な分化は、これを支えるベルオキシソームへのタンパク質輸送系がたいへん柔軟に機能していることを想像させる。
【０００５】
このように植物のペルオキシソームは、その成長過程において可逆的に機能転換することが知られているオルガネラであるが、このような機能転換に関与している物質やペルオキシソームの機能に関与しているタンパク質については十分解明されていない。
ペルオキシソームの機能の転換の過程や、それぞれの機能を発現している場合の当該機能に関与しているタンパク質類を解明するために、ペルオキシソームの機能の欠損した変異体が製造されてきた。
【０００６】
例えば、本発明者らは植物細胞におけるベルオキシソーム機能制御に関連した遺伝子を同定するため、脂肪性種子植物のシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）を用いてベルオキシソーム機能を欠損した突然変異体の製造を行っている。
このような突然変異体としてグリオキシソームの脂肪酸β酸化系を欠損したシロイヌナズナ突然変異体（ｐｅｄ１〜３）を開発してきた（非特許文献４参照）。この変異体ｐｅｄは、２，４−ジク□口フエノキシ酪酸（２，４‐ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏｘｙ‐ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ；２，４‐ＤＢ）に対して耐性を示す。野生型では、２，４‐ＤＢの酪酸鎖は脂肪酸β酸化系に基質として認識され、切断され、その結果として、除草剤である２，４‐ジク□□フエノキシ酢酸（２，４−ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏｘｙａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ；２，４−Ｄ）に代謝される。しかしながら、この変異体では脂肪酸β酸化系が欠損しているためこの変換が行われず、結果として変異個体は生き残る。
本発明者らは、この選抜方法により、独立した３つの突然変異体ｐｅｄ１〜３の単離に成功した。これらの突然変異体はグリオキシソームの脂肪酸β酸化系の活性が減少しており、種子に蓄えられた脂肪からショ糖を産生することが妨げられるため、発芽後の成長にショ糖を必要とした。
【０００７】
また、本発明者らは、ペルオキシソームの形態の変異を解明するために、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）がペルオキシソームに蓄積されるシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）の変異体を開発してきた。即ち、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）のＣ末端側にペルオキシソームへの移行シグナル配列（ＰＴＳ１）を有する、ＤＬＫＡＬＥＬＰＶＳＫＬからなるアミノ酸配列を付加したタンパク質が発現するように遺伝子を改変した変異体を製造してきた（非特許文献５及び６参照）。
この変異体は、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するが、当該タンパク質にはＣ末端にペルオキシソーム移行シグナル配列が付加されているために、発現したＧＦＰはペルオキシソームに蓄積され、その結果ペルオキシソームの形態を緑色の蛍光により確認することができるものである。同時に、付加したペルオキシソーム移行シグナル配列がペルオキシソームへのタンパク質の移行をおこなうものであることが確認された。
【０００８】
植物のペルオキシソームは、非常に複雑な機能転換の過程や、脂質の分解やタンパク質の蓄積や光合成にも関与などの種々の重要な機能を果たしているオルガネラであり、ペルオキシソームの機能を解明することは脂質の分解などの単一の機能の応用だけでなく、植物の生育の制御のためにも必要なことであり、ペルオキシソームの機能の解析のための各種の変異体の製造が求められている。
【０００９】
【非特許文献１】
ベアバーズ  エイチら、アヌアルレビュープラントフィジオロジー、３０巻、１５９−１９３頁  （１９７９年）（Ｂｅａｖｅｒｓ，  Ｈ．：  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．
３０，  １５９−１９３  （１９７９））
【非特許文献２】
ニシムラ  エムら、セルストラクチャーフンクション、２１巻、３８７−３９３頁  （１９９６年）（  Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．：  Ｃｅｌｌ  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｆｕｎｃｔ．  ２１，  ３８７−３９３  （１９９６））
【非特許文献３】
トルバート  エヌ  イー、エヌワイ  アカデミックサイエンス、３８６巻、２５４−２６８頁  （１９８２年）（Ｔｏｌｂｅｒｔ，  Ｎ．Ｅ．：  Ａｎｎ．  ＮＹ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ３８６，  ２５４−２６８  （１９８２））
【非特許文献４】
ハヤシ  エムら、プラントセル、１０巻、１８３−１９５頁  （１９９８年）（  Ｈａｙａｓｈｉ  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．：  Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  １０，  １８３−１９５  （１９９８））
【非特許文献５】
マノ、エス、及びハヤシ、エムら、１９９９年、プラント  ジェー、１７巻、３０９−３２０頁（Ｍａｎｏ，Ｓ．，  Ｈａｙａｓｈｉ，Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９９）  Ｐｌａｎｔ  Ｊ．，  １７，  ３０９−３２０）
【非特許文献６】
マノ、エス、及びナカモリ、シーら、２００２年、プラント  セル  フィジオロ、４３巻、３３１−３４１頁（Ｍａｎｏ，Ｓ．，  Ｎａｋａｍｏｒｉ，Ｃ．，  ｅｔ  ａｌ．，  （２００２）  Ｐｌａｎｔ
Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，  ４３，  ３３１−３４１）
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、植物細胞におけるペルオキシソームの機能転換に関与している物質やペルオキシソームの機能に関与しているタンパク質を解明することを目的としている。本発明は、ペルオキシソームの前記機能を解明するたのペルオキシソームの新規な変異体を提供するものである。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明は、シロイヌナズナのＡＤＬ２Ａ遺伝子の機能が欠損し、細胞内のペルオキシソームの形が巨大化し、長く変異した変異株に関する。
また、本発明は、シロイヌナズナをメタンスルホン酸エチルで処理し、得られた突然変異体の中から、ペルオキシソームの形態が巨大化し、長くなっているいるものを選抜してくることからなる、シロイヌナズナのＡＤＬ２Ａ遺伝子の機能が欠損し、細胞内のペルオキシソームの形が巨大化し、長く変異した変異株の製造方法に関する。
【００１２】
本発明らは、ペルオキシソームの形成の分子機構を解明するために、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）の局在を指標にした変異体を製造した。即ち、ペルオキシソーム移行シグナル配列を有するＧＦＰを発現するシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）の変異体（非特許文献６参照）に各種の化学薬品などで突然変異を誘発させた変異体を製造した。
本発明者らは、メタンスルホン酸エチルを用いて突然変異を誘発させて、約３７，０００のＭ２植物の中から８２個の変異体を分離してきた。これらの変異体の中にペルオキシソームが以上に大きくかつ長くなっている変異体を見出した。この本発明の変異体を以下、ａｐｍ（ａｂｅｒｒａｎｔ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ）と称する。
【００１３】
本発明の変異体ａｐｍのひとつのクラスであるａｐｍ１は、ペルオキシソームの形が長くなり、細胞内の数も減少するという表現型を示す。本発明のａｍｐ１変異体の中の３種（ａｐｍ１−１、ａｐｍ１−６、及びａｐｍ１−１３）のペルオキシソームの形態を図１に図面に代わるカラー写真で示す。図１の上段は根の細胞であり、下段は葉の細胞である。図１の左側からＧＦＰが導入された変異体（ＧＦＰ−ＰＴＳ１）、本発明の変異体ａｐｍ１−１、本発明の変異体ａｐｍ１−１３、及び本発明の変異体ａｐｍ１−６をそれぞれ示す。このように、本発明の変異体ａｐｍ１は、ペルオキシソーム（図１において緑色に明るく輝いている部分）が巨大化し、かつ糸状に長くなっているものである。このような形態の変化は、葉よりも根において顕著に表れている。
これは、生育過程におけるペルオキシソームの分裂が抑制された結果と考えられる。即ち、植物の成長に伴って、ペルオキシソームも分裂し、小さくかつ球形に近い形態になるのであるが、ペルオキシソームの分裂が抑制されたために、細胞の成長に伴ってペルオキシソームが巨大化したものと考えられる。
また、同時にａｐｍ１はミトコンドリアも巨大化しており、ミトコンドリアの分裂とペルオキシソームの分裂に関与する遺伝子に変異が起きたものと考えられた。なお、図１の写真においてはミトコンドリアは表示されていない。
この変異体は、葉緑体、核、液胞、ゴルジ体及びＥＲなどには異常は無かった。
【００１４】
そこで、本発明の変異体ａｐｍ１の遺伝子を解析したところ、この変異帯ａｐｍ１はダイナミンファミリーの１種であるＡＤＬ２Ａ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  Ｄｙｎａｍｉｎ−Ｌｉｋｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ２Ａ）タンパク質をコードしている遺伝子ＡＤＬ２Ａｐに異常が生じていることが明らかになった。即ち、ＡＰＭ１遺伝子は、ダイナミンファミリーの１種であるＡＤＬ２Ａタンパク質をコードしている遺伝子ＡＤＬ２Ａｐであることが判明した。シロイヌナズナの野生型のＡＤＬ２Ａタンパク質をコードしているゲノムの塩基配列を配列表の配列番号１に示す。
この遺伝子はシロイヌナズナの第４染色体に位置しており、図２にこの遺伝子の地図を示す。マーカーのＣＢＦ１とｎｇａ１１３９の間を拡大したものが図２の中段に示されている。その中のＴ１６Ｌ１にＡＤＬ２Ａタンパク質をコードすつ遺伝子が存在し、当該部分を拡大したものを図２の下段に示す。
本発明の変異体ａｐｍ１の２４種（ａｐｍ１−１〜ａｐｍ１−２４）における遺伝子が変異している位置を四角で囲った枠中にａｐｍ１の番号で示している。
いずれの変異体もＡＤＬ２Ａの遺伝子に変異を生じさせているものであった。
【００１５】
ダイナミン類やダイナミン様タンパク質は、種々の生物学的な過程において膜構造の制御を行っているタンパク質であることが知られている。ＡＤＬ２Ａは、ミトコンドリアに関与しているＤｎｍ１と同じクラスに属するタンパク質であり、このクラスには膜を融合や分裂に関与しているタンパク質のダイナミンタンパク質類は分類されていない。
本発明の変異体ａｐｍ１では、ペルオキシソームのみならず、ミトコンドリアの分裂も抑制されていることから、ＡＤＬ２Ａタンパク質は、ペルオキシソームとミトコンドリアの２種類のオルガネラの分裂に関与していることが明らかになった。
本発明の変異体により、ＡＤＬ２Ａタンパク質が、ペルオキシソームとミトコンドリアの成熟に必要なタンパク質であることが判明した。
【００１６】
本発明の変異体は、野生型に比べて矮性を示す。また、蔗糖非存在下における発芽時には、根の成長が抑えられる。図３及び図４は本発明のａｍｐ１変異体の中の３種（ａｐｍ１−１、ａｐｍ１−６、及びａｐｍ１−１３）の発育を観察した図面に代わるカラー写真である。図３は、播種から７日目の根の発育を比較したものである。図３の左からｐｅｄ１（非特許文献４参照）、ＧＦＰが導入された変異体（ＧＦＰ−ＰＴＳ１）、本発明の変異体ａｐｍ１−１、本発明の変異体ａｐｍ１−１３、及び本発明の変異体ａｐｍ１−６をそれぞれ示す。図４は播種から２０日目の発育を葉の生育から観察したものである。図４の左側からＧＦＰが導入された変異体（ＧＦＰ−ＰＴＳ１）、本発明の変異体ａｐｍ１−１、本発明の変異体ａｐｍ１−１３、及び本発明の変異体ａｐｍ１−６をそれぞれ示す。
これは、ペルオキシソームにおける脂肪の分解が充分に機能していないことを示している。
この用に、本発明の変異体ａｐｍ１は、ペルオキシソームとミトコンドリアが巨大化しているが、その機能は低下しており、とりわけ両者の協調した機能が必要とされる光呼吸系及び脂肪酸代謝系の活性が低下していることが示された。
【００１７】
本発明の変異体は、真野らの方法（非特許文献５及び６参照）により、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）に、クラゲ緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）のＣ末端にペルオキシゾームへのタンパク質移行シグナルであるペプチド（ＤＬＫＡＬＥＬＰＶＳＫＬ）を付加したタンパク質ＧＦＰ−ＨＩを発現する形質転換体を製造し、次いでこれをメタンスルホン酸エチルにより通常の方法で処理することにより製造することができる。
メタンスルホン酸エチルで処理された突然変異体の中から、顕微鏡で観察してペルオキシソームが巨大化し、長くなっているもの（ＧＦＰにより緑色の蛍光を顕微鏡で観察することができる）を選抜することにより、本発明の変異体を得ることができる。本発明の開示により、本発明の変異体がＡＤＬ２Ａタンパク質をコードする遺伝子の機能の欠損であることが明らかにされているので、ジーンターゲッティング法などのノックアウト生物の製造方法により本発明の変異体を製造することも可能である。この場合には任意の遺伝子により標的となるＡＤＬ２Ａの遺伝子をノックアウトすることができる。
また、本発明の変異体は、緑色蛍光タンパク質をコードする遺伝子が導入されたものであってもよい。本発明の変異体における緑色蛍光タンパク質は、ペルオキシソームの形態を観察することができようにするために、そのＣ末端又はＮ末端にペルオキシソーム移行シグナル配列、例えばＰＴＳ１として認識される（Ａ／Ｃ／Ｐ／Ｓ）−（Ｋ／Ｈ／Ｒ）−（Ｉ／Ｌ／Ｍ）配列や、ＰＴＳ２として認識されるＲ−（Ａ／Ｉ／Ｌ／Ｑ）−Ｘ５−Ｈ−（Ｆ／Ｉ／Ｌ）を有するものである。このような緑色蛍光タンパク質をコードしている遺伝子を導入しておくことにより、顕微鏡による選抜が容易となる。
【００１８】
【実施例】
次に実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００１９】
実施例１  （形質変異体の製造）
真野らの方法（非特許文献５及び６参照）により、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）に、クラゲ緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）のＣ末端にペルオキシゾームへのタンパク質移行シグナルであるペプチド（ＤＬＫＡＬＥＬＰＶＳＫＬ）を付加したタンパク質ＧＦＰ−ＨＩを発現する形質転換体を製造した。
この形質転換体の種子をエチルメタンスルホン酸で処理して突然変異を誘発させた。得られた約３７０００の突然変異体の中から、ペルオキシゾームが極端に長くなっている子孫、８２個体を選抜した（図１参照）。これらの変異体をａｐｍ（ａｂｅｒｒａｎｔ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ）と命名し、その中のほぼ同じ形態をしているものをａｐｍ１とした。
【００２０】
実施例２  変異体ａｐｍ１の育成
実施例１で得られた変異体ａｐｍ１に中から、ａｐｍ１−１、ａｐｍ１−６、及びａｐｍ１−１３を播種して育成した。比較としてＧＦＰ−ＰＴＳ１を同様に育成した。７日目の結果を図３に示し、２０日目の結果を図４にそれぞれ示す。
【００２１】
実施例３  変異体ａｐｍ１の遺伝子の解析
変異体ａｐｍ１の遺伝子を常法に従って解析した。その結果、ａｐｍ１−１〜ａｐｍ１−２４の２４種についてＡＤＬ２Ａタンパク質をコードする遺伝子に異常があることが判明した。これらの２４種の変異体の遺伝子の異常箇所を図２の下段に示す。
【００２２】
【発明の効果】
本発明の変異体を解析した結果、ペルオキシソームの分裂にはダイナミンファミリーの１種であるＡＤＬ２Ａタンパク質が関与していることが明らかとなり、また、このタンパク質の欠損によりペルオキシソームだけでなくミトコンドリアの分裂も抑制され、ＡＤＬ２Ａタンパク質がペルオキシソーム及びミトコンドリアの２種類のオルガネラの分裂に関与していることが明らかになった。このことは、ＡＤＬ２Ａタンパク質がペルオキシソームやミトコンドリアの発育の抑制剤として機能すること調整できることを明らかにしたものである。
また、本発明の変異体は、ペルオキシソームの発達や分化に関するものであり、本発明の変異体によりペルオキシソームの機能解析が進展し、ペルオキシソームの機能の調整、例えば、脂質代謝の調整や光合成の調節などに有用となるばかりでなく、脂質の代謝促進などのペルオキシソームの有する機能を植物の生体外で利用するための基礎とすることができる。
【００２３】
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、本発明のａｍｐ１変異体の中の３種（ａｐｍ１−１、ａｐｍ１−６、及びａｐｍ１−１３）のペルオキシソームの形態を示す図面に代わるカラー写真である。図１の上段は根の細胞であり、下段は葉の細胞である。図１の左側からＧＦＰが導入された変異体（ＧＦＰ−ＰＴＳ１）、本発明の変異体ａｐｍ１−１、本発明の変異体ａｐｍ１−１３、及び本発明の変異体ａｐｍ１−６をそれぞれ示す。
【図２】図２は、本発明の変異体の遺伝子の異常となっている箇所を示すものである。図２はシロイヌナズナの第４染色体であり、マーカーのＣＢＦ１とｎｇａ１１３９の間を拡大したものが図２の中段に示されている。その中のＴ１６Ｌ１にＡＤＬ２Ａタンパク質をコードすつ遺伝子が存在し、当該部分を拡大したものを図２の下段に示す。本発明の変異体ａｐｍ１の２４種（ａｐｍ１−１〜ａｐｍ１−２４）における遺伝子が変異している位置を四角で囲った枠中にａｐｍ１の番号で示している。
【図３】図３は、本発明のａｍｐ１変異体の中の３種（ａｐｍ１−１、ａｐｍ１−６、及びａｐｍ１−１３）の発育を観察した図面に代わるカラー写真である。図３は、播種から７日目の根の発育を比較したものである。図３の左からｐｅｄ１（非特許文献４参照）、ＧＦＰが導入された変異体（ＧＦＰ−ＰＴＳ１）、本発明の変異体ａｐｍ１−１、本発明の変異体ａｐｍ１−１３、及び本発明の変異体ａｐｍ１−６をそれぞれ示す。
【図４】図４は、図３は本発明のａｍｐ１変異体の中の３種（ａｐｍ１−１、ａｐｍ１−６、及びａｐｍ１−１３）の発育を観察した図面に代わるカラー写真である。図４は播種から２０日目の発育を葉の生育から観察したものである。図４の左側からＧＦＰが導入された変異体（ＧＦＰ−ＰＴＳ１）、本発明の変異体ａｐｍ１−１、本発明の変異体ａｐｍ１−１３、及び本発明の変異体ａｐｍ１−６をそれぞれ示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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