(57)【要約】【課題】異なる試料を異なる混合比で混ぜ合わせる場合に、異なる試料の安定した均一な混合を可能にする化学分析装置を提供する。【解決手段】化学分析装置は、図１に示すように、試料を挿入するための試料挿入孔１３、数１０μｍ〜数１００μｍの溝である微細流路が形成された流路基板１と、試料挿入孔１３に入れられた試料を押し出す押し出し装置２と、検出流路１２に対して平行に平行光３１を投入する光源装置３と、平行光３１を検出する検出装置４とを備える。微細流路の２つの異なる試料を混合する混合部１１は、異なる試料が流入する流路のそれぞれの断面積が異なる、あるいは、それぞれの交差位置が異なる、あるいは、それぞれの角度が異なる構造を有する。【選択図】　　　図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
２つの異なる試料を異なる比率で混合する溝幅１０〜９００μｍの混合部を備えた化学分析装置において、
１つの試料が流入する第１の流入流路と、
該第１の流入流路と異なる断面積を有し、他の試料が流入する第２の流入流路と、
前記第１の流入流路と前記第２の流入流路から流入する前記２つの異なる試料の混合後の試料を流出する流出流路と
を備えることを特徴とする化学分析装置。
【請求項２】
前記流出流路は、前記第１の流入流路の断面積と前記第２の流入流路の断面積を加えたものに等しい断面積を有することを特徴とする請求項１に記載の化学分析装置。
【請求項３】
２つの異なる試料を異なる比率で混合する溝幅１０〜９００μｍの混合部を備えた化学分析装置において、
１つの試料が流入する第１の流入流路と、
他の試料が流入する第２の流入流路と、
前記第１の流入流路の中心軸と前記第２の流入流路の中心軸と１点で交わらない中心軸を有し、前記２つの異なる試料の混合後の試料を流出する流出流路と
を備えることを特徴とする化学分析装置。
【請求項４】
２つの異なる試料を異なる比率で混合する溝幅１０〜９００μｍの混合部を備えた化学分析装置において、
１つの試料が流入する第１の流入流路と、
他の試料が流入する第２の流入流路と、
前記２つの異なる試料の混合後の試料を流出する流出流路とを備え、
前記第１の流入流路の前記流出流路に対する角度が前記第２の流入流路の前記流出流路に対する角度と異なることを特徴とする化学分析装置。
【請求項５】
試料が満たされた、前記第１の流入流路及び前記第２の流入流路に試料を流すための試料挿入孔と、
該試料挿入孔の上部に接着されたシートと
を更に備えることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の化学分析装置。
【請求項６】
前記シートの上部から凸状の押し出し用棒を前記試料挿入孔に差し込むことにより、前記第１の流入流路及び前記第２の流入流路に前記試料を流すことを特徴とする請求項５に記載の化学分析装置。
【請求項７】
前記第１の流入流路及び前記第２の流入流路に試料を流すための試料挿入孔に流量を制御しながら前記試料を挿入する試料挿入装置を更に備えることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項に記載の化学分析装置。
【請求項８】
前記混合後の試料を検出する検出流路と、
該検出流路の端面に設置された光学特性に優れた材質からなるカバーと
を更に備えることを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載の化学分析装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、微量な化学物質の反応や合成分析を行うμ−ＴＡＳあるいは血液検査などに用いられる検体検査装置等の微細流路を有する化学分析装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】
遺伝子解析や血液検査などの生化学分析、あるいは化学反応を効率的に行うために、開口断面の幅、深さが数１０μｍ〜数１００μｍの微細流路を有する化学分析装置を用いることがある。
【０００３】
又、近年、μ−ＴＡＳ（Ｍｉｃｒｏ　Ｔｏｔａｌ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｓｙｓｔｅｍ）と呼ばれる数ｃｍ角程度のガラスやシリコン等のチップ上に送液、混合、反応、分析等の機能部を集積化した化学・生化学分析統合システムが提案されている（例えば、非特許文献１参照。）。図１０はμ−ＴＡＳの従来例の一つを示している。図１０に示すように、μ−ＴＡＳは、流路基板１０１内に微細流路１００が形成され、微細流路１００内で試料（試薬）の混合、反応、検出等を行うことにより、創薬や医療診断の予備実験等を行う。試料挿入孔１１３より試料を注入すると、試料は、流入流路１００ｅを通り、混合部１００ａで混合される。そして、反応部１００ｂで試料の化学反応が起こり、分離部１００ｃで反応後の試料の分離が行われる。反応後の試料は検出部１００ｄで検出され、不要な試料は廃液部１１６で回収される。
【０００４】
又、混合部１００ａがＴ字型の微細流路（例えば、非特許文献２参照。）や混合部１００ａの合流角度を調整した微細流路（例えば、非特許文献３参照。）を備える化学分析装置もある。
【０００５】
【非特許文献１】
「生産研究」５２巻７号、２０００年７月、Ｐ３０４−３１１
【０００６】
【非特許文献２】
「新技術説明会資料　マイクロリアクタの革新技術」科学技術振興事業団主催、２００２年３月４日、於：サイエンスプラザ地下１階ホール、Ｐ１０
【０００７】
【非特許文献３】
「化学工学会第６７会要旨集資料」Ｃ２０１
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
上記のように、従来の混合部１００ａは、通常、Ｙ字型が多く用いられており、異なる試料をほぼ等量づつ混ぜ合わせることが多いため、各々の流入流路１００ｅの断面積は変わらない。そのため、異なる試料を異なる混合比で混ぜ合わせる場合には、各々の流路から流入する試料の速度が違うため、異なる試料の接触する界面が不安定になり、流路軸方向上に対して均一な混合の妨げになる問題があった。
【０００９】
上記の問題に鑑み、本発明は、異なる試料を異なる混合比で混ぜ合わせる場合に、異なる試料の安定した均一な混合を可能にする化学分析装置を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するため、本発明の第１の特徴は、２つの異なる試料を異なる比率で混合する溝幅１０〜９００μｍの混合部を備えた化学分析装置において、（イ）１つの試料が流入する第１の流入流路と、（ロ）第１の流入流路と異なる断面積を有し、他の試料が流入する第２の流入流路と、（ハ）第１の流入流路と第２の流入流路から流入する２つの異なる試料の混合後の試料を流出する流出流路とを備える化学分析装置であることを要旨とする。ここで、「流入流路」とは、開口断面の幅、深さが数十μｍ〜数百μｍの試料を通過させる溝を指す。又、第１の特徴に係る化学分析装置の流出流路は、第１の流入流路の断面積と第２の流入流路の断面積を加えたものに等しい断面積を有しても良い。
【００１１】
本発明の第２の特徴は、２つの異なる試料を異なる比率で混合する溝幅１０〜９００μｍの混合部を備えた化学分析装置において、（イ）１つの試料が流入する第１の流入流路と、（ロ）他の試料が流入する第２の流入流路と、（ハ）第１の流入流路の中心軸と第２の流入流路の中心軸と１点で交わらない中心軸を有し、２つの異なる試料の混合後の試料を流出する流出流路とを備える化学分析装置であることを要旨とする。
【００１２】
本発明の第３の特徴は、２つの異なる試料を異なる比率で混合する溝幅１０〜９００μｍの混合部を備えた化学分析装置において、（イ）１つの試料が流入する第１の流入流路と、（ロ）他の試料が流入する第２の流入流路と、（ハ）２つの異なる試料の混合後の試料を流出する流出流路とを備え、第１の流入流路の流出流路に対する角度が第２の流入流路の流出流路に対する角度と異なる化学分析装置であることを要旨とする。
【００１３】
第１〜第３の特徴に係る化学分析装置によると、断面積が異なる流入流路、交差位置が異なる流入流路、角度が異なる流入流路を備えることにより、混合部で安定した混合を可能にすることができる。
【００１４】
又、第１〜第３の特徴に係る化学分析装置は、試料が満たされた、第１の流入流路及び第２の流入流路に試料を流すための試料挿入孔と、試料挿入孔の上部に接着されたシートとを更に備えても良い。この化学分析装置によると、外部から試料を供給する手段が必要なく、試料を含んだ状態で流路基板の運搬や販売をすることができる。又、この化学分析装置は、シートの上部から凸状の押し出し用棒を試料挿入孔に差し込むことにより、第１の流入流路及び第２の流入流路に試料を流しても良い。この化学分析装置によると、シート越しに試料を押し出す際に、押し出し用棒に試料が付着しないという利点がある。
【００１５】
又、第１〜第３の特徴に係る化学分析装置は、第１の流入流路及び第２の流入流路に試料を流すための試料挿入孔に流量を制御しながら試料を挿入する試料挿入装置とを更に備えても良い。
【００１６】
更に、第１〜第３の特徴に係る化学分析装置は、混合後の試料を検出する検出流路と、検出流路の端面に設置された光学特性に優れた材質からなるカバーとを更に備えても良い。この化学分析装置によると、検出流路の端面が平行光の入射・入出の障害にならないので、平行光による色の変化等の検出が精度良く行われる。
【００１７】
【発明の実施の形態】
次に、図面を参照して、本発明の実施の形態を説明する。以下の図面の記載において、同一又は類似の部分には同一又は類似の符号を付している。但し、図面は模式的なものであることに留意すべきである。
【００１８】
本発明の実施の形態に係る化学分析装置は、図１に示すように、試料を挿入するための試料挿入孔１３、数１０μｍ〜数１００μｍの溝である微細流路が形成された流路基板１と、試料挿入孔１３に入れられた試料を押し出す押し出し装置２と、検出流路１２に対して平行に平行光３１を投入する光源装置３と、平行光３１を検出する検出装置４とを備える。流路基板１上の微細流路は、異なる試料を混合する混合部１１と、混合後の試料を流出する流出流路２０と、混合後の試料を検出する検出流路１２とを備える。
【００１９】
流路基板１の材質としては、石英等のガラス材料やポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）等のシリコンゴムあるいはポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）等のアクリル樹脂などが考えられる。更に、ガラスエポキシ樹脂、ポリプロピレン（ＰＰ）やポリテトラフロロエチレン（ＰＴＦＥ）等のフッ素樹脂、シリコン等の半導体材料、金属等でも構わない。
【００２０】
本発明の実施の形態では、異なる試料として、試薬と検体と例にとり、説明を行う。ここでは、検体とは検査する対象となる試料を指し、試薬とは検体を検査するために加えられる試料を指す。試薬と検体は異なる混合比で混合することを前提とする。
【００２１】
図１では、試料挿入装置として押し出し装置２を用いているが、押し出し装置２の他に、ポンプ等を用いても構わない。図１では、押し出し装置２は、試薬挿入孔１３ａに試薬を挿入し、検体挿入孔１３ｂに検体を挿入する。押し出し装置２は、駆動手段として、ギアつきステッピングモータあるいは差動ソレノイドによって駆動する可動部、圧電素子などを備え、異なった試料をそれぞれ異なった流量で流すことができる。押し出し装置２によって挿入される試料は、外部から供給されても良いし、試料挿入孔１３にあらかじめ挿入、封止されていても良い。試料が試料挿入孔１３に封入される場合は、図３において後に詳述する。試料挿入孔１３より押し出された試料は混合部１１へ流れ、そこで適切な混合比に混合され、その後、流出流路２０を通過し、検出流路１２へと流される。光源装置３はこの検出流路１２に平行光３１を入射できるようその光軸などが調整されており、検出装置４は検出流路１２を通った平行光３１を検出する。
【００２２】
次に、図２を用いて、本発明の実施の形態に係る微細流路について詳しく説明する。試薬挿入孔１３ａから挿入された試薬は、第１の流入流路１９ａを通り混合部１１において、検体と混合される。一方、検体挿入孔１３ｂから挿入された検体は、第２の流入流路１９ｂを通り混合部１１において、試薬と混合される。混合された試料は、流出流路２０を通り、流路切り換え部１５から検出流路１２に流される。流路切り換え部１５の構造については、図７において後に詳述する。検出流路１２が混合された試料で満たされ、混合後の化学反応が進行する各時間帯に対して、検出流路１２に平行光３１を入射し、検出流路１２内の混合液を通過した光を検出することにより混合液の検査を行う。１枚の流路基板１に複数の混合部１１、検出流路１２を設けることにより１枚の流路基板１で同様の過程により検査する複数の検査を順次、あるいは平行して行うことができる。又、図２では検出前の混合は１回のみ行っているが、試料挿入孔１３を検出流路１２に向かう流路中に複数配置することにより複数回の混合後に検出を行うことも可能である。
【００２３】
次に、図３を用いて、押し出し装置２によって挿入される試料が、試料挿入孔１３にあらかじめ挿入、封止される場合について説明する。図３（ｂ）に示すように、流入流路１９が形成された流路基板上に、流入流路１９の一端に合致する位置に試料を挿入するための貫通孔である試料挿入孔１３を備える流路基板を張り合わせる。試料挿入孔１３に試料を挿入した後、その上面に適切な接着用部材７によりラテックスゴムなど大変形可能な部材で作られたシート６を張りつける。接着方法としては、接着用部材７による接着に限らず、機械的な押し付け、熱による融着、超音波振動などを用いても構わない。試料挿入孔１３には、微細流路に流すことができる試料量が挿入されるので、その直径、深さは２０ｍｍ以下である。設計上は、数ｍｍ程度が妥当である。
【００２４】
シート６を張りつけると、図３（ａ）に示すように、シートの下面に試料挿入孔１３があり、その周りを接着用部材７が取り囲む状態となる。又、試料挿入孔１３の下部に流入流路１１が存在する。シート６には、シートの取り外しの便宜を図るため、シート取り外し部６ａを設けても構わない。又、あらかじめ試料が挿入され、その上面にシートがとりつけられた流路基板を用いても構わない。
【００２５】
試料挿入孔１３に試料が充填された流路基板は、押し出し装置２に備えられた凸状の押し出し用棒２１の下に配置される。押し出し装置２は、押し出し用棒２１の位置を制御することにより、試料挿入孔１３内に封止された試料を、シート６越しに流入流路１９に押し出す。押し出し装置２が押し出す力、速度を制御することにより、試料を任意の流量で流入流路１９に流すことができる。押し出し用棒２１の制御手段として、押し出し装置２は、ギア付きのステッピングモータや、差動ソレノイドなどにより駆動される可動部、あるいは圧電素子を備える。
【００２６】
試料挿入孔１３に試料を封止した流路基板によると、シート越しに試料を押し出す際に、押し出し用棒２１に試料が付着しないという利点がある。又、この流路基板によると、外部から試料を供給する手段が必要なく、試料を含んだ状態で流路基板の運搬や販売をすることができる。
【００２７】
次に、図４〜６を用いて、図２の混合部１１について、３種類の形態を説明する。
【００２８】
図４は、第１の流入流路１９ａと第２の流入流路１９ｂの断面積が異なる混合部１１の拡大図である。第１の流入流路１９ａと第２の流入流路１９ｂの幅、深さを変えることにより、第１の流入流路１９ａと第２の流入流路１９ｂの開口断面積を異なるものにすることができる。第１の流入流路１９ａを通して供給される試薬と第２の流入流路１９ｂを通して供給される検体をｍ：ｎの体積比で混合する場合、第１の流入流路１９ａと第２の流入流路１９ｂの断面積比を、ｍ：ｎとする。図４では、断面積が正方形である場合を示しているが、断面積は、長方形や半円形、その他の形状でも構わないことは勿論である。この微細流路によると、試薬と検体の流入速度がほぼ等速になり、異なる混合比の試料を均一に混合することができる。又、左右の流入流路の断面積をｍ：ｎとせず、左右から流入する異なる試料の流入速度が違っていても、第１の流入流路１９ａと第２の流入流路１９ｂの断面積を変えることにより、第１の流入流路１９ａと第２の流入流路１９ｂの断面積が等しい場合よりその速度差が小さくなり、安定した流れを供給できる。
【００２９】
又、第１の流入流路１９ａ、第２の流入流路１９ｂ、流出経路２０の断面積比をｍ：ｎ：ｍ＋ｎとしても良い。つまり、流出経路２０の断面積が、第１の流入流路１９ａと第２の流入流路１９ｂの断面積を足し合わせたものと等しくなる。この微細流路によると、混合部で混合された試料の流れが滞ることなく、安定した流れを供給することができる。
【００３０】
図５は、第１の流入流路１９ａの中心軸と、第２の流入流路１９ｂの中心軸との交わる点が、流出流路２０の中心軸と１点で交わらない混合部１１の拡大図である。ここで、「中心軸」とは、流路幅の中心を通る軸を指す。通常の混合部１１においては、図４に示すように、第１の流入流路１９ａの中心軸と、第２の流入流路１９ｂの中心軸と、流出流路２０の中心軸は１点で交わる。図５に示すように、第１の流入流路１９ａを中心軸からずらすことにより、第１の流入流路１９ａを流れる試料よりも、第２の流入流路１９ｂを流れる試料を大きい体積比で混合することができる。この微細流路によると、異なる試料を異なる混合比で混ぜ合わせる場合に、異なる試料の安定した均一な混合が可能となる。
【００３１】
図６は、流出流路２０に対する第１の流入流路１９ａの角度αと流出流路２０に対する第２の流入流路１９ｂの角度βが異なる混合部１１の拡大図である。この微細流路によると、異なる試料を異なる混合比で混ぜ合わせる場合に、異なる試料の安定した均一な混合が可能となる。
【００３２】
次に、図７を用いて、図２の流路切り換え部１５の構造の一例を説明する。検出流路１２における平行光３１を用いた検出を行う際に、検出流路１２と流出流路２０を立体的に交差させて配置する。これは、流出流路２０が目標としない検出流路１２と交わり、そちらの検出流路１２に混合液（検出液）が流れることを防ぐためである。図７（ａ）では、流出流路２０と検出流路１２が直行して交差する例を示したが、斜め方向や同一方向で交差するように設けてもよい。ここで、多数の検出を一枚の流路基板１で行う場合、一つの流路基板１上に交差する流路を多数配置することはできないので、流出流路２０と検出流路１２を異なる流路基板１上に作り、それらを階層的に重ね、その間を貫通孔２２で結んでも良い。図７（ｂ）では、流出流路２０を備えた第１の流路基板１ａと、貫通孔２２を備えた第２の流路基板１ｂと、検出流路１２を備えた第３の流路基板１ｃを階層的に重ね合わせ、検出流路１２と流出流路２０を立体的に交差させて配置している。
【００３３】
次に、図８を用いて、図２の検出流路１２の端面形状について説明する。いかなる製法によっても検出流路１２の端面は凹凸が残り、平行光３１の入射・入出の障害になる。そのため、図８（ａ）に示すように、検出流路１２を貫通孔として形成し、その両端には光透過性など光学特性に優れた石英などを材質とするカバー５を張り合わせる。この張り合わせ方法としては、ヒートボンディング、熱融着、オプティカルコンタクト、機械的な締め上げなどが挙げられる。この検出流路１２によると、検出流路１２の端面が平行光３１の入射・入出の障害にならないので、平行光３１による色の変化等の検出が精度良く行われる。又、検出流路１２の一方の端には、試料が検出流路１２の端面まで充填されるように、端面に逃げのための流路を形成しその先に試料を貯蔵するドレイン１６を形成する。図８（ｂ）に示すように、ドレイン１６には空気抜き用孔２３が設けられる。図８（ａ）では、逃げの流路及びドレインは横方向に設けているが、これに限らず、縦方向等に設けてもよい。又、このドレイン１６は、検出流路１２を流れてくる試料の初期部分を検出対象として用いたくない場合に、この初期部分の試料を検出流路１２から除く場合にも用いることができる。更に、カバー５を取り外すことにより、検出流路１２あるいはドレイン１６にある試料を容易に取り出すことができる。
【００３４】
次に、図９を用いて、光源装置３から平行光３１を検出流路１２に入射し、検出装置４で検出を行う方法について説明する。試薬を加えられた検体は、検出流路１２において平行光３１を投射される。検出装置４は、反応などにより変化する検体の色を測定する。通常、検出流路１２において光を用いた検出を行う際は、検出光は検出流路１２に対して垂直に入射される。ここでは、流路基板１上に設けられた検出流路１２に対して平行な検出光３１を入射することにより、検出流路１２中の試料を平行光３１が通過する距離が長くなり、検出のシグナル／ノイズ比（Ｓ／Ｎ比）を大幅に改善することができる。光源装置３の光源としてはレーザー、発光ダイオード、ライト、ランプ光源等を用いることも可能であり、光源の光を光ファイバーなどで絞り込んでも良い。
【００３５】
本発明の実施の形態に係る化学分析装置によると、断面積が異なる流入流路、交差位置が異なる流入流路、角度が異なる流入流路を備えることにより、混合部で安定した均一な混合を可能にすることができる。特に、混合比が１：１０から１：１００と大きく、かつその比率の正確さの厳密さが要求される分野においては、異なる混合比に対しても混合部での流れが安定し、精度良い混合を可能にすることができる。
【００３６】
（その他の実施の形態）
本発明は上記の実施の形態によって記載したが、この開示の一部をなす論述及び図面はこの発明を限定するものであると理解すべきではない。この開示から当業者には様々な代替実施の形態、実施例及び運用技術が明らかとなろう。
【００３７】
例えば、本発明の実施の形態に係る微細流路の混合部１１は、図４に示す断面積が異なる流入流路、図５に示す交差位置が異なる流入流路、図６に示す角度が異なる流入流路のそれぞれの違いを組み合わせた構造を有しても構わない。例えば、第１の流入経路１９ａと第２の流入経路１９ｂの断面積比を変え、なおかつ、流出流路２０に対する第１の流入流路１９ａの角度をα、流出流路２０に対する第２の流入流路１９ｂの角度をβとすることも可能である。混合する試料の混合体積比、比重、量などにより、多数の組み合わせが考えられる。
【００３８】
このように、本発明はここでは記載していない様々な実施の形態等を含むことは勿論である。従って、本発明の技術的範囲は上記の説明から妥当な特許請求の範囲に係る発明特定事項によってのみ定められるものである。
【００３９】
【発明の効果】
本発明によると、異なる試料を異なる混合比で混ぜ合わせる場合に、異なる試料の安定した均一な混合を可能にする化学分析装置を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の実施の形態に係る化学分析装置の斜視図である。
【図２】本発明の実施に形態に係る流路基板を上から見た図である。
【図３】（ａ）は、本発明の実施の形態に係る試薬挿入孔を上から見た図、（ｂ）は、（ａ）のＡ−Ａに沿った断面図である。
【図４】本発明の実施に形態に係る混合部の拡大図である（その１）。
【図５】本発明の実施に形態に係る混合部の拡大図である（その２）。
【図６】本発明の実施に形態に係る混合部の拡大図である（その３）。
【図７】（ａ）は、本発明の実施に形態に係る流路切り換え部を上から見た図、（ｂ）は、（ａ）のＢ−Ｂに沿った断面図である。
【図８】（ａ）は、本発明の実施の形態に係るドレイン部分を上から見た図、（ｂ）は、（ａ）のＣ−Ｃに沿った断面図である。
【図９】本発明の実施に形態に係る検出流路の断面図である。
【図１０】従来のμ−ＴＡＳの斜視図である。
【符号の説明】
１、１０１　流路基板
１ａ　第１の流路基板
１ｂ　第２の流路基板
１ｃ　第３の流路基板
３　光源装置
４　検出装置
５　カバー
６　シート
６ａ　シート取り外し部
１１　混合部
１２　検出流路
１３、１１３　試料挿入孔
１３ａ　試薬挿入孔
１３ｂ　検体挿入孔
１５　流路切り換え部
１６　ドレイン
１９　流入流路
１９ａ　第１の流入流路
１９ｂ　第２の流入流路
２０　流出経路
２１　押し出し用棒
２２　貫通孔
２３　空気抜き用孔
３１　平行光
１００　微細流路
１００ａ　混合部
１００ｂ　反応部
１００ｃ　分離部
１００ｄ　検出部
１００ｅ　流入流路
１１６　廃液部
【図１】
2004117308.tif 000003
【図２】
2004117308.tif 000004
【図３】
2004117308.tif 000005
【図４】
2004117308.tif 000006
【図５】
2004117308.tif 000007
【図６】
2004117308.tif 000008
【図７】
2004117308.tif 000009
【図８】
2004117308.tif 000010
【図９】
2004117308.tif 000011
【図１０】
2004117308.tif 000012