(57)【要約】【課題】ペプチド合成の中間体である保護化ペプチド誘導体の工業的に実施可能な製造方法を提供する。【解決手段】保護化アミノ酸または保護化ペプチドとイミダゾリン化合物から得られる保護化アミノ酸または保護化ペプチドの酸フルオライドとアミノ酸またはペプチドの誘導体を反応させることにより保護化ペプチド誘導体を得る。【効果】医薬品またはその中間体として有用と考えられる保護化ペプチド誘導体を、保護化アミノ酸または保護化ペプチドとイミダゾリン化合物から合成した保護化アミノ酸または保護化ペプチドの酸フルオライドとアミノ酸またはペプチド誘導体から、工業的に実施可能な方法で、高収率で合成することが可能となる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）（化１）
【化１】
2004345987.tif 000012
（式中、Ｐはアミノ酸のアミノ保護基であり、Ａｎは側鎖に保護基を有してもよい天然または非天然のアミノ酸の構造式から、アミノ基の１個の水素原子とカルボキシル基の水酸基を差し引いた構造であり、ｎは１もしくは２以上の整数を表す）で表される保護化アミノ酸または保護化ペプチドと下記式（ＩＩ）（化２）
【化２】
2004345987.tif 000013
（式中、Ｒ１、Ｒ２は低級アルキル基を表す）で表されるイミダゾリン化合物を、塩基の存在下または非存在下、反応させることにより、下記式（ＩＩＩ）（化３）
【化３】
2004345987.tif 000014
（式中、Ｐ、Ａｎ及びｎは上記と同じ意味を表す。）で表される保護化アミノ酸または保護化ペプチドの酸フルオライドを製造する方法。
【請求項２】
イミダゾリン化合物が２，２−ジフルオロ−１，３−ジメチルイミダゾリジンであることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
請求項１または２に記載の方法で製造される式（ＩＩＩ）で表される保護化アミノ酸または保護化ペプチドの酸フルオライド。
【請求項４】
式（ＩＩＩ）で表される保護化アミノ酸または保護化ペプチドの酸フルオライドと下記式（ＩＶ）（化４）
【化４】
2004345987.tif 000015
（式中、Ｂｍは側鎖に保護基を有してもよい天然または非天然のアミノ酸の構造式から、アミノ基の１個の水素原子とカルボキシル基の水酸基を差し引いた構造であり、Ｒ３は水素原子、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロ環または置換されていてもよいヘテロ環アルキル基を表し、ｍは１以上の整数を表す）で表されるアミノ酸またはペプチドの誘導体を、塩基の存在下または非存在下、反応させて下記式（Ｖ）（化５）
【化５】
2004345987.tif 000016
（式中、Ｐ、Ａｎ、Ｂｍ、ｎ、ｍ、Ｒ３は上記と同じ意味を表す。）で表される保護化ペプチド誘導体を製造する方法。
【請求項５】
式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（Ｖ）中の−Ａｎ−が、下記式（ＶＩ）（化６）
【化６】
2004345987.tif 000017
（式中、Ｃｎ、Ｄｎ、Ｅｎは水素原子、置換されていてもよいアルキル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環またはヘテロ環アルキル基を表し、Ｈｎは０〜５の整数を表し、ｎは１もしくは２以上の整数を表す）を表し、式（ＩＶ）、（Ｖ）中の−Ｂｍ−が下記式（ＶＩＩ）（化７）
【化７】
2004345987.tif 000018
（式中、Ｓｍ、Ｔｍ、Ｕｍは水素原子、置換されていてもよいアルキル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環またはヘテロ環アルキル基を表し、Ｋｍは０〜５の整数を表し、ｍは１以上の整数を表す）で表される請求項１、２又は４に記載の製造方法。
【請求項６】
請求項６に記載の製造方法により製造される化合物。
【請求項７】
式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（Ｖ）中の−Ａｎ−、及び、式（ＩＶ）、（Ｖ）中の−Ｂｍ−が側鎖に保護基を有してもよい天然アミノ酸の構造式から、アミノ基の１個の水素原子とカルボキシル基の水酸基を差し引いた構造である請求項１、２、４又は５に記載の製造方法。
【請求項８】
請求項７に記載の製造方法により製造される化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、医薬品またはその中間体として有用と考えられる保護化ペプチド誘導体の工業的に実施可能な製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、ペプチド製造用原料として、保護化アミノ酸の酸クロライドや酸フルオライド等が知られている。しかし、ベンジルオキシカルボニル基で保護されたアミノ酸の酸クロライドは、オキサゾロンの生成によるラセミ化が起こることが知られている。よって、この酸クロライドを原料として合成したペプチドは異性体が含まれることになる。一方、保護化アミノ酸の酸フルオライドは、酸クロライドに比べ、ラセミ化が起こり難く、これを原料として合成したペプチドもラセミ化が見られない。しかし、保護化アミノ酸の酸フルオライドを合成するためのフッ素化剤は工業的には製造困難な上に、過剰量使用しないと反応が進行しない等の欠点を有していた。フッ素化剤としては、フッ化シアヌル酸やテトラメチルフルオロフォルムアミジニウムヘキサフルオロホスフェート等が知られているが、良収率を得るには、保護化アミノ酸に対し、フッ化シアヌルは、１０当量必要であったり、１当量用いた場合は、副反応が多い等の欠点を有していた（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５６，２６１１−２６１４（１９９１）、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１２，９６５１−９６５２（１９９０）、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５０（１８），５３０９−５３２２（１９９４））。また、フッ化シアヌルの製造原料である塩化シアヌルは、粘膜刺激性が高く、変異原性が報告されている。これらの問題点  により、これまで保護化アミノ酸の酸フルオライドの利用は制限されていた。
【０００３】
【非特許文献１】Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５６，２６１１−２６１４（１９９１）
【非特許文献２】Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１２，９６５１−９６５２（１９９０）
【非特許文献３】Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５０（１８），５３０９−５３２２（１９９４）
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ペプチド合成の中間体である保護化ペプチド誘導体の工業的に実施可能な製造方法を提供することを目的とするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記の目的を達成するために鋭意検討した結果、保護化アミノ酸または保護化ペプチドとイミダゾリン化合物から得られる保護化アミノ酸または保護化ペプチドの酸フルオライドとアミノ酸またはペプチドの誘導体を反応させることにより、保護化ペプチド誘導体が、工業的に実施可能な方法で、高収率で得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は、
▲１▼下記式（Ｉ）（化８）
【０００７】
【化８】
2004345987.tif 000002
【０００８】
（式中、Ｐはアミノ酸のアミノ保護基であり、Ａｎは側鎖に保護基を有してもよい天然または非天然のアミノ酸の構造式から、アミノ基の１個の水素原子とカルボキシル基の水酸基を差し引いた構造であり、ｎは１もしくは２以上の整数を表す）で表される保護化アミノ酸または保護化ペプチドと下記式（ＩＩ）（化９）
【０００９】
【化９】
2004345987.tif 000003
【００１０】
（式中、Ｒ１、Ｒ２は低級アルキル基を表す）で表されるイミダゾリン化合物を、塩基の存在下または非存在下、反応させることによる、下記式（ＩＩＩ）（化１０）
【００１１】
【化１０】
2004345987.tif 000004
【００１２】
（式中、Ｐ、Ａｎ、ｎは、前記定義と同じである）で表される保護化アミノ酸または保護化ペプチドの酸フルオライドの製造方法であり、また、
▲２▼イミダゾリン化合物が、２，２−ジフルオロ−１，３−ジメチルイミダゾリジン（ＤＦＩ）である上記▲１▼記載の製造方法であり、また、
▲３▼上記▲１▼、▲２▼の何れかの方法で製造する式（ＩＩＩ）で表される保護化アミノ酸または保護化ペプチドの酸フルオライドであり、また、
▲４▼式（ＩＩＩ）で表される保護化アミノ酸または保護化ペプチドの酸フルオライドと下記式（ＩＶ）（化１１）
【００１３】
【化１１】
2004345987.tif 000005
【００１４】
（式中、Ｂｍは側鎖に保護基を有してもよい天然または非天然のアミノ酸の構造式から、アミノ基の１個の水素原子とカルボキシル基の水酸基を差し引いた構造であり、Ｒ３は水素原子、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロ環または置換されていてもよいヘテロ環アルキル基を表し、ｍは１以上の整数を表す）で表されるアミノ酸またはペプチドの誘導体と、塩基の存在下または非存在下、反応させて下記式（Ｖ）（化１２）
【００１５】
【化１２】
2004345987.tif 000006
【００１６】
（式中、Ａｎ、Ｂｍ、Ｒ３、ｎ、ｍは、前記定義と同じである）で表される保護化ペプチド誘導体を製造する方法であり、また、
▲５▼式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（Ｖ）中の−Ａｎ−が、下記式（ＶＩ）（化１３）
【００１７】
【化１３】
2004345987.tif 000007
【００１８】
（式中、Ｃｎ、Ｄｎ、Ｅｎは水素原子、置換されていてもよいアルキル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環またはヘテロ環アルキル基を表し、Ｈｎは０〜５の整数を表し、ｎは１もしくは２以上の整数を表す）を表し、式（ＩＶ）、（Ｖ）中の−Ｂｍ−が下記式（ＶＩＩ）（化１４）
【００１９】
【化１４】
2004345987.tif 000008
【００２０】
（式中、Ｓｍ、Ｔｍ、Ｕｍは水素原子、置換されていてもよいアルキル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環またはヘテロ環アルキル基を表し、Ｋｍは０〜５の整数を表し、ｍは１以上の整数を表す）で表される保護化ペプチド誘導体の上記▲１▼、▲２▼、又は▲４▼記載の製造方法であり、また、
▲６▼上記▲５▼記載の製造方法により製造される化合物であり、また、
▲７▼式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（Ｖ）中の−Ａｎ−、及び、式（ＩＶ）、（Ｖ）中の−Ｂｍ−が側鎖に保護基を有してもよい天然アミノ酸の構造式から、アミノ基の１個の水素原子とカルボキシル基の水酸基を差し引いた構造である保護化ペプチド誘導体の上記▲１▼、▲２▼、▲４▼又は▲５▼記載の製造方法であり、また、
▲８▼上記▲７▼記載の製造方法により製造される化合物である。
【００２１】
【発明の実施の形態】
本発明において、式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（Ｖ）におけるＰは、一般的なアミノ酸のアミノ保護基であり、例えば、アセトアミドメチル基、アセチル基、アダマンチルオキシカルボニル基、ベンゾイル基、ベンジル基、ベンジルオキシカルボニル基、ベンジルオキシメチル基、２−ブロモベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ｔ−ブトキシメチル基、２−クロロベンジルオキシカルボニル基、フルオレニルメトキシカルボニル基、ホルミル基、２−（ｐ−ビフェニリル）プロピル−２−オキシカルボニル基、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル基、トリフルオロアセチル基、トリメチルアセトアミドメチル基、固体支持体等が挙げられる。
【００２２】
式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）におけるＡｎ、Ｂｍは、側鎖に保護基を有してもよい天然または非天然のアミノ酸の構造式から、アミノ酸の１個の水素原子とカルボキシル基の水酸基を差し引いた構造であり、例えば、グリシンの場合は、ＮＨＣＨ２ＣＯであり、Ｈ−Ａ１−Ａ２−…−Ａｎ−ＯＨ及びＨ−Ｂ１−Ｂ２−…−Ｂｍ−ＯＨは、ペプチドを意味する。また、Ａ１，…，Ａｎ，Ｂ１，…，Ｂｍは、各々独立しており同一であっても異なっていてもよく、各々、Ｌ体、Ｄ体、ラセミ体等が含まれる。また、ｎは１もしくは２以上の整数、ｍは１以上の整数を表し各々独立している。
【００２３】
−Ａｎ−、−Ｂｍ−を更に具体化した式（ＶＩ）、（ＶＩＩ）中のＣｎ、Ｄｎ、Ｅｎ、Ｓｍ、Ｔｍ、Ｕｍ、及び、式（ＩＶ）、（Ｖ）中のＲ３は、各々独立に、水素原子、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロ環、または置換されていてもよいヘテロ環アルキル基を表し、ＣｎとＤｎ、ＳｍとＴｍ、ＤｎとＥｎ、ＴｍとＵｍは、各々独立に、連結した環構造であってもよい。
【００２４】
置換されていてもよいアルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、メトキシエチル基、フェノキシメチル基、ベンジルオキシメチル基、メチルチオメチル基、フェニルチオメチル基、フルオレニルメチル基、フルオロエチル基、シクロヘキシルメチル基、ｎ−プロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基またはシクロヘキシル基等を挙げることができる。
【００２５】
置換されていてもよいアリール基としては、例えばフェニル基、トリル基、ブロモフェニル基、メトキシフェニル基、エチルフェニル基、プロピルフェニル基、ニトロフェニル基、アミドフェニル基、フルオレニル基、ナフチル基、ヒドロキシナフチル基、アントラセニル基、フェナントレニル基またはベンゾフェナントレニル基等が挙げられる。
【００２６】
置換されていてもよいアラルキル基としては、例えばベンジル基、２−フェニルエチル基、３−フェニルプロピル基、１−ナフチルメチル基、２−ナフチルメチル基、３−クロロベンジル基、４−クロロベンジル基、４−ブロモベンジル基、４−フルオロベンジル基、４−アミノベンジル基、２−ニトロベンジル基、４−メトキシベンジル基、３，４−ジヒドロキシベンジル基、３，４−ジメトキシベンジル基等を挙げることができる。
【００２７】
置換されていてもよいヘテロ環としては、テトラヒドロピラニル基、テトラヒドロフラニル基、アルキルテトラヒドロフラニル基、テトラヒドロチエニル基、メチルスルホニルテトラヒドロチエニル基、ピリジル基、ピラジル基、ピリミジル基、チエニル基、ヒドロキシピリジル基、イミダゾリル基、チアゾリル基、ピラゾリル基、ピラゾリル基、イソオキサゾリル基、イソチアゾリル基、ピロリル基、フリル基、ナフチリジニル基、キノリル基またはスルファモイルキノリル基等が挙げられる。
【００２８】
置換されていてもよいヘテロ環アルキル基としては、２−ピリジルメチル基、３−ピリジルメチル基、４−ピリジルメチル基、６−メトキシ−３−ピリジルメチル基、３−キノリルメチル基、Ｎ−メチル−４−イミダゾリルメチル基、２−アミノ−４−チアゾリルメチル基、モルホリノメチル基、２−フリルメチル基、３−フリルメチル基、２−チエニルメチル基、３−チエニルメチル基、ピロリルメチル基、オキサゾリルメチル基、イソオキサゾリルメチル基、チアゾリルメチル基、イソチアゾリルメチル基等が挙げられる。
【００２９】
環構造としては、ＣｎとＤｎ、または、ＳｍとＴｍが、独立に、−（ＣＨ２）３−、−（ＣＨ２）４−等で連結された構造やＤｎとＥｎ、または、ＴｍとＵｍが、独立に、−（ＣＨ２）５−等で連結された構造等が挙げられる。
【００３０】
また、式（ＶＩ）、（ＶＩＩ）中のＨｎ、Ｋｍは、各々独立に０〜５の整数を表し、ｎは１もしくは２以上の整数、ｍは１以上の整数を表し各々独立している。
【００３１】
式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）におけるＡｎ、Ｂｍが、側鎖に保護基を有してもよい天然アミノ酸の構造式から、アミノ基の１個の水素原子とカルボキシル基の水酸基を差し引いた構造である場合の天然アミノ酸としては、例えば、グリシン、アラニン、ロイシン、プロリン、フェニルアラニン、チロシン、メチオニン、セリン、スレオニン、シスチン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン、アルギニン、ヒドロキシリジン、ヒスチジン、トリプトファン、バリン、β−アラニン等が挙げられ、これらの内のα−アミノ酸は、Ｌ体である。Ａｎ、Ｂｍが、側鎖に保護基を有してもよい非天然アミノ酸の構造式から、アミノ基の１個の水素原子とカルボキシル基の水酸基を差し引いた構造である場合の非天然アミノ酸としては、上記天然アミノ酸のＤ体やラセミ体等、および、ヒドロキシプロリン、ノルロイシン、オルニチン、３−（１−ナフチル）アラニン、３−（２−ナフチル）アラニン、３−（４−クロロフェニル）アラニン、３−（３−クロロフェニル）アラニン、３−（２−クロロフェニル）アラニン、３−（４−フルオロフェニル）アラニン、３−（２−チエニル）アラニン、３−（２−フリル）アラニン、３−シクロヘキシルアラニン等のＬ体、Ｄ体、ラセミ体等が挙げられる。
【００３２】
上述の側鎖に保護基を有する天然アミノ酸および非天然アミノ酸の側鎖の保護基としては、例えば、スレオニンやセリンのように側鎖に水酸基を持つ場合には、メチル基、メトキシメチル基、２−メトキシエトキシメチル基、テトラヒドロピラニル基、β−トリメチルシリルエチル基、ｔ−ブチル基、アダマンチル基、４−メトキシベンジル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、トリフェニルメチル基、１−ベンジルオキシカルボニル基等が挙げられる。
【００３３】
チロシンのように側鎖にフェノール基を持つ場合は、メチル基、メトキシメチル基、メトキシエトキシエチル基、β−トリメチルシリルエチル基、メチルチオメチル基、テトラヒドロピラニル基、アダマンチル基、４−メトキシベンジル基、ｔ−ブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、２，４−ジニトロフェニル基等が挙げられる。
【００３４】
アスパラギン酸やグルタミン酸に見られるカルボニル基側鎖は、次に挙げる基で保護しなければならない。ｔ−ブチル基、１−または２−アダマンチル基、メトキシメチル基、フェニル基、テトラヒドロピラニル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、４−メトキシベンジル基、ベンジル基、ｐ−クロロベンジル基等が挙げられる。
【００３５】
システインのように側鎖の官能基がメルカプト基である場合には、ｔ−ブチル基、ｔ−ブチルチオ基、４−メトキシベンジル基、ｔ−ブチルチオ基、４−メトキシベンジル基、トリフェニルメチル基、アダマンチル基等が挙げられる。
【００３６】
リジンやオルニチンといったγ−アミノ基のようなアミノ基のようなアミノ基が側鎖にある場合には、カルボベンズオキシカルボニル基、ｔ−ブチルオキシカルボニル基、アダマンチルオキシカルボニル基等が挙げられる。
【００３７】
ヒスチジンのようなイミダゾール基を持つアミノ酸の場合は、フルオレニルメチルオキシカルボニル基、ｔ−ブチルオキシカルボニル基、ｔ−ブチルオキシメチル基、トリフェニルメチル基、ベンジルオキシメチル基等が用いられる。
【００３８】
アルギニンのようにグアニジン側鎖を持つアミノ酸の場合には、グアニジンのω−窒素を保護するためにメトキシトリメチルスルホニル基、ペンタメチルクロマンスルホニル基、ペンタメチルクロマンスルホニル基、ビスアダマンチルオキシカルボニル基、メシチレンスルホニル基等が用いられる。
【００３９】
グルタミンやアスパラギンのように側鎖にアミド基を持つ場合には、ジメトキシベンジルヒドリル基、９−キサントエニル基、２，４，６−トリメトキシベンジル基等が用いられる。
【００４０】
こうした保護基は当業者にとっては周知である。これらは弱酸性または塩基性条件下で除去され、室温でトリフルオロ酢酸で処理すると開裂するものがよい。
【００４１】
式（ＩＩ）中のＲ１、Ｒ２は、低級アルキル基を表し、各々独立して、メチル基、エチル基、イソプロピル基、ｎ−プロピル基、イソブチル基またはｎ−ブチル基等が挙げられ、特に、式（ＩＩ）のイミダゾリン化合物としては、２，２−ジフルオロ−１，３−ジメチルイミダゾリジン（ＤＦＩ）が好ましい。上記イミダゾリン化合物の使用量は、式（Ｉ）で表される保護化アミノ酸または保護化ペプチドに対し、０．５〜５倍モルが好ましく、更に好ましくは、０．９〜２倍モルである。
【００４２】
また、式（ＩＶ）で表されるアミノ酸またはペプチドの誘導体は、塩酸、硫酸等の鉱酸塩でもよく、その使用量は、式（Ｉ）で表される保護化アミノ酸または保護化ペプチドに対し、０．５〜５倍モルが好ましく、更に好ましくは、０．９〜２倍モルである。
【００４３】
本発明の式（Ｉ）で表される保護化アミノ酸または保護化ペプチドの酸フルオライド（ＩＩＩ）を製造する際に使用する塩基、及び、保護化アミノ酸または保護化ペプチドの酸フルオライド（ＩＩＩ）とアミノ酸またはペプチドの誘導体（ＩＶ）から保護化ペプチド誘導体（Ｖ）を製造する際の塩基は、各々独立しており、使用してもしなくてもよいが、使用する場合は、ペプチド合成に一般的に使用される有機塩基または無機塩基であり、有機塩基としては、ピリジン、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、２，４，６−コリジン、トリス（２−アミノエチル）アミン、１，８−ビス（ジメチルアミノ）ナフタレン、キノリン、イソキノリン等の有機アミンが挙げられ、無機塩基としては、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム等のアルカリ金属またはアルカリ土類金属の炭酸塩、炭酸水素塩等が挙げられる。これらの塩基の使用量は任意であるが、式（Ｉ）で表される保護化アミノ酸または保護化ペプチドに対し、１０倍モル以下が好ましく、更に２倍モル以下が好ましい。
【００４４】
また、ペプチド合成用の一般的な添加剤であるＮ−オキシコハク酸イミド（ＨＯＳｕ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）等を加えてもよい。これらの添加剤の使用量は任意であるが、式（ＩＩ）で表される保護化ペプチドに対し、１０倍モル以下が好ましく、更に２倍モル以下が好ましい。
【００４５】
本発明に反応溶媒として使用する有機溶媒は、ベンゼン、トルエン、キシレン等の炭化水素系溶媒、ニトロベンゼン等のニトロベンゼン系溶媒、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル系溶媒、酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン、クロロベンゼン等のハロゲン系溶媒、Ｎ，Ｎ−ジメチルイミダゾリジノン、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、スルホラン等の非プロトン性極性溶媒等が挙げられ、これらは混合して用いてもよい。また、水との混合溶媒として用いてもよい。反応溶媒の使用量は特に規定しないが、好ましくは式（Ｉ）で表される保護化アミノ酸またはペプチドの１００倍量（重量）以下であり、更に２０倍量（重量）以下が好ましい。
【００４６】
本発明における反応温度、すなわち、イミダゾリン化合物の滴下および熟成温度、および、イミダゾリン化合物の滴下および熟成温度、および、保護化アミノ酸または保護化ペプチドの酸フルオライドとアミノ酸またはペプチドの誘導体との反応および熟成温度は、各々独立に任意であるが、ラセミ化が起こり難い、−５０〜５０℃が好ましく、更に好ましくは、−３０〜３０℃である。また、滴下温度と熟成温度は異なっていてもよい。滴下時間および熟成時間も任意であるが、合計で２時間程度で十分である。
【００４７】
反応形式は特に限定しないが、例えば、保護化ペプチドと塩基を反応溶媒中で混合し、これにイミダゾリン化合物を滴下し、保護化ペプチドの酸フルオライドを生成し、これを予め調整しておいたアミノ酸またはペプチドの誘導体と塩基を有機溶媒中で混合した液に滴下する方法等が用いられる。後処理法および精製法も特に制限されないが、例えば、反応液を塩酸水にて処理した有機層を、炭酸水素ナトリウム水、水にて洗浄後、濃縮し、カラム精製する方法等が用いられる。
また、生成した保護化ペプチド誘導体の異性体比は、ＮＭＲ測定結果より調べた。
【００４８】
【実施例】
以下に実施例により、本発明を具体的に説明する。
［製造例１］
２，２−ジフルオロ−１，３−ジメチルイミダゾリジン（ＤＦＩ）の合成
１Ｌガラス製フラスコに、２−クロロ−１，３−ジメチルイミダゾリニウムクロリド（以下、ＣＤＣと略記する）（９９．７４ｇ，０．５９０ｍｏｌ）、スプレードライフッ化カリウム（１０２．８４ｇ，１．７７０ｍｏｌ）、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＩ）（３２９．１４ｇ）を装入して窒素雰囲気下８０℃で６時間反応を行った。反応後、反応混合物を室温まで冷却し、無機塩を濾別した後、無機塩をＤＭＩ約１６０ｇで洗浄した。得られた反応液中のＤＦＩ濃度は１５．１％であった（ＤＦＩ７６．３ｇ，収率９５．０ｍｏｌ％／ＣＤＣ）。反応液から減圧蒸留によりＤＦＩ７２．５ｇを得た（純度９９％，蒸留収率９５％）。
【００４９】
沸点：４７．０℃／３７ｍｍＨｇ，ＥＩＭＳ：１３６（Ｍ＋），１１７（Ｍ＋−Ｆ＋），ＩＲ（ｎｅａｔ）ｃｍ−１：１４８６，１３８５，１２９５，１２４２，１０８５，９６６，７１１，Ｆ分析値：計算値２７．９％，実測値２７．７％，１Ｈ−ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ基準）：２．５２（ｓ，６Ｈ），３．０５（ｓ，４Ｈ），１３Ｃ−ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ，ＣＤＣｌ３，−４５℃，ＣＤＣｌ３基準）：３１．４（ｓ，−ＣＨ３×２），４７．６（ｓ，−ＣＨ２ＣＨ２−），１２８．５（ｔ，Ｊ＝２３０Ｈｚ，＝ＣＦ２），１９Ｆ−ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ，ＣＤＣｌ３，−４５℃，ＣＦＣｌ３基準）：−７０．９（ｓ，＝ＣＦ２）
【００５０】
［実施例１］
ｔ−ブトキシカルボニルフェニルアラニルフルオライド（Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｆ）の合成
ｔ−ブトキシカルボニルフェニルアラニン（Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ）  １．３２ｇ（４．９８ｍｍｏｌ），ジクロロメタン  ２１．２８ｇ，ピリジン  ０．９１ｇ（１１．５０ｍｍｏｌ）をガラス製フラスコに装入して窒素置換した後、−２５℃に冷却した。これにＤＦＩ  ０．７８ｇ（５．７３ｍｍｏｌ）を滴下した後、０℃まで昇温して２時間反応させた。続いて、メタノール  ３．３ｍｌを０℃で添加して２５℃で１時間反応させて、生成したＢｏｃ−Ｐｈｅ−Ｆをメチルエステル（Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＭｅ）に変換した。反応後、反応混合物を水  ７５ｍｌに排出し、ＣＨＣｌ３  ５０ｍｌを加えて有機層を分液した。続いて、水層をＣＨＣｌ３  ２０ｍｌで３回抽出した後、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、水、飽和食塩水で洗浄して無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥後、有機層を濃縮して、粗Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＭｅを得た。カラム精製（ＷＡＫＯ  ＧＥＬ  Ｃ−２００，Ｈｅｘａｎｅ：ＡｃＯＥｔ＝２：１）によりＢｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＭｅ  １．３６ｇを得た（取出し収率：９７．８ｍｏｌ％／Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ）。
【００５１】
１Ｈ−ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ基準）：１．４１（ｓ，９Ｈ），３．０８（ｍ，２Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），４．５８（ｍ，１Ｈ），４．９５（ｍ，１Ｈ），７．２５（ｍ，５Ｈ）
【００５２】
［比較例１］
ｔ−ブトキシカルボニルフェニルアラニルフルオライド（Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｆ）の合成
フルオロ−テトラメチルホルムアミジニウムヘキサフルオロフォスフェート（ＴＦＦＨ）０．６１ｇ（２．３１ｍｍｏｌ），ジクロロメタン  ４．５２ｇをガラス製フラスコに装入して窒素置換した後、０℃に冷却した。これに、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ  ０．５３ｇ（２．００ｍｍｏｌ），ジクロロメタン  ３．９６ｇ，ピリジン  ０．３４ｇ（４．３０ｍｍｏｌ）の混合溶液を滴下した後、０℃で２時間反応させた。続いて、メタノール  １．３ｍｌを０℃で添加して２５℃で１時間反応させて、生成したＢｏｃ−Ｐｈｅ−Ｆをメチルエステル（Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＭｅ）に変換した。反応後、反応混合物を水  ７５ｍｌに排出し、ＣＨＣｌ３  ５０ｍｌを加えて有機層を分液した。続いて、水層をＣＨＣｌ３  ２０ｍｌで３回抽出した後、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、水、飽和食塩水で洗浄して無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥後、有機層を濃縮して、粗Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＭｅを得た。カラム精製（ＷＡＫＯ  ＧＥＬ  Ｃ−２００，Ｈｅｘａｎｅ：ＡｃＯＥｔ＝２：１）によりＢｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＭｅ  ０．４３ｇを得た（取出し収率：７６．８ｍｏｌ％／Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ）。
【００５３】
【表１】
2004345987.tif 000009
【００５４】
［実施例２］
ｔ−ブトキシカルボニルフェニルアラニルアラニンメチルエステル（Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−ＯＭｅ）の合成（Ｏｎｅ−ｐｈａｓｅ  Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  １）
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ  １．０６ｇ（４．００ｍｍｏｌ），ジクロロメタン  １６．８８ｇ，ピリジン  ０．６５ｇ（８．２２ｍｍｏｌ）をガラス製フラスコに装入して窒素置換した後、−２５℃に冷却した。これにＤＦＩ  ０．５４ｇ（４．００ｍｍｏｌ）を滴下した後、０℃まで昇温して２時間反応させた。  続いて、このＢｏｃ−Ｐｈｅ−Ｆ合成反応混合物を、Ｈ−Ａｌａ−ＯＭｅ・ＨＣｌ  ０．５６ｇ（４．００ｍｍｏｌ），ジクロロメタン  ６．５５ｇ，ピリジン  ０．３２ｇ（４．００ｍｍｏｌ）混合液に０℃で添加した後、２５℃で１時間反応させた。反応後、反応混合物にジクロロメタン  ７９．８０ｇを添加して、５％ＨＣｌ２０ｍｌで２回，１０％ＮａＨＣＯ３  ２０ｍｌで２回，水  ２０ｍｌで２回洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥後、有機層を濃縮して、粗Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−ＯＭｅを得た。カラム精製（ＷＡＫＯ  ＧＥＬ  Ｃ−２００，Ｈｅｘａｎｅ：ＡｃＯＥｔ＝１：１）によりＢｏｃ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−ＯＭｅ  １．２１ｇを得た（取出し収率：８６．３ｍｏｌ％／Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ）。また、この結晶をＨＰＬＣ分析した（ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ  ＯＤ−Ｈ（ダイセル工業）、ヘキサン：２−プロパノール＝９５：５）結果、ラセミ化したＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−ＯＭｅは含まれていないことを確認した。
【００５５】
１Ｈ−ＮＭＲ（δ，ｐｐｍ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ基準）：１．３５（ｄ，３Ｈ）１．４１（ｓ，９Ｈ），３．０８（ｍ，２Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），４．３５（ｍ，１Ｈ），４．５２（ｍ，１Ｈ），４．９８（ｍ，１Ｈ），６．４０（ｍ，１Ｈ），７．２５（ｍ，５Ｈ）
【００５６】
【表２】
2004345987.tif 000010
【００５７】
［実施例３］
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−ＯＭｅの合成（Ｔｗｏ−ｐｈａｓｅ  Ｃｏｕｐｌｉｎｇ）
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ  ０．５３ｇ（２．００ｍｍｏｌ），ジクロロメタン  ８．４４ｇ，ピリジン  ０．３２ｇ（４．０５ｍｍｏｌ）をガラス製フラスコに装入して窒素置換した後、−２５℃に冷却した。これにＤＦＩ  ０．２７ｇ（２．００ｍｍｏｌ）を滴下した後、０℃まで昇温して２時間反応させた。  続いて、このＢｏｃ−Ｐｈｅ−Ｆ合成反応混合物を、Ｈ−Ａｌａ−ＯＭｅ・ＨＣｌ  ０．２８ｇ（２．０１ｍｍｏｌ），水  ６．４０ｇ，ＮａＨＣＯ３  ０．１７ｇ（２．０２ｍｍｏｌ）混合液に０℃で添加した後、２５℃で１時間反応させた。反応後、有機層を分液し、水層をジクロロメタン  ３０ｍｌで３回抽出した後、有機層を５％ＨＣｌ  ２０ｍｌで２回，１０％ＮａＨＣＯ３  ２０ｍｌで２回，水  ２０ｍｌで２回洗浄して、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥後、有機層を濃縮して、粗Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−ＯＭｅを得た。カラム精製（ＷＡＫＯ  ＧＥＬＣ−２００，Ｈｅｘａｎｅ：ＡｃＯＥｔ＝１：１）によりＢｏｃ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−ＯＭｅ  ０．４２ｇを得た（取出し収率：５９．４ｍｏｌ％／Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ）。
【００５８】
【表３】
2004345987.tif 000011
【００５９】
［実施例４］
Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシルフェニルアラニルフルオライド（Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｆ）の合成
１００ｍｌ３つ口フラスコに、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシル−Ｌ−フェニルアラニン（Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＯＨ）１．０６９ｇ（３．００ｍｍｏｌ）、ピリジン０．５１４ｇ（６．５０ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン１０ｍｌを仕込み、−３０℃に冷却した。ＤＦＩ０．４５ｇ（３．３ｍｍｏｌ）を−３０〜−２５℃で滴下し、その後、−１０℃以下で１時間熟成し、Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｆを得た。その後、メタノール２ｍｌを−１０℃以下で滴下した。２０℃以下で２時間攪拌後、ジクロロメタン２０ｍｌおよび水３０ｍｌを加え分液した。有機層を更に水３０ｍｌで２回洗浄した。有機層を飽和食塩水５ｍｌで洗浄後、ＭｇＳＯ４にて乾燥した。ＭｇＳＯ４を濾過後、濃縮した。これをカラム精製し（ＷＡＫＯ  ＧＥＬ  Ｃ−２００、ＡｃＯＥｔ）、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル  １．１１ｇを得た（取出し収率：１００ｍｏｌ％／Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＯＨ）。これをＨＰＬＣ分析した（ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ  ＯＤ−Ｈ（ダイセル工業）、ヘキサン：２−プロパノール＝３：２）結果、Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＯＭｅ：Ｚ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＯＭｅ＝９５．８：４．２であった。
【００６０】
［実施例５］
Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシルフェニルアラニルフルオライド（Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｆ）の合成
１００ｍｌ３つ口フラスコに、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシル−Ｌ−フェニルアラニン（Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＯＨ）１．０６９ｇ（３．００ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン１０ｍｌを仕込み、０℃に冷却した。ＤＦＩ  ０．４５ｇ（３．３ｍｍｏｌ）を０〜５℃で滴下し、その後、０〜５℃で２時間熟成し、Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｆを得た。その後、メタノール２ｍｌを５℃以下で滴下した。２０℃以下で２時間攪拌後、ジクロロメタン２０ｍｌおよび水３０ｍｌを加え分液した。有機層を更に水３０ｍｌで２回洗浄した。有機層を飽和食塩水５ｍｌで洗浄後、ＭｇＳＯ４にて乾燥した。ＭｇＳＯ４を濾過後、濃縮した。これをカラム精製し（ＷＡＫＯ  ＧＥＬ  Ｃ−２００、ＡｃＯＥｔ）、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル  ０．８９ｇを得た（取出し収率：８０ｍｏｌ％／Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＯＨ）。これをＨＰＬＣ分析した（ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ  ＯＤ−Ｈ（ダイセル工業）、ヘキサン：２−プロパノール＝３：２）結果、Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＯＭｅ：Ｚ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＯＭｅ＝９８．５：１．５であった。
【００６１】
［実施例６］
Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシルフェニルアラニルアラニンメチルエステル（Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−ＯＭｅ）の合成
２５ｍｌ３つ口フラスコに、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシル−Ｌ−フェニルアラニン（Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ）０．７１３ｇ（２．００ｍｍｏｌ）、ピリジン  ０．３４０ｇ（４．３０ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン１０ｍｌを仕込み、−３０℃に冷却した。ＤＦＩ  ０．３０４ｇ（２．２３ｍｍｏｌ）を−３０〜−２５℃で滴下し、その後、−１０℃で１時間熟成した。これを予め調整しておいた、Ｌ−アラニンメチルエステル塩酸塩（Ａｌａ−ＯＭｅ・ＨＣｌ）０．３３５ｇ（２．４０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０．５１７ｇ（４．００ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン１０ｍｌの混合液へ２０℃にて滴下し２時間熟成した。これを５％塩酸水１０ｍｌにて１回、１０％炭酸水素ナトリウム水１０ｍｌにて２回、水１０ｍｌにて２回洗浄した。ＭｇＳＯ４にて乾燥後、濃縮した。これをカラム精製（ＷＡＫＯ  ＧＥＬ  Ｃ−２００、ＡｃＯＥｔ）し、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシンフェニルアラニンメチルエステル（Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−ＯＭｅ）０．８６０ｇを得た（取出し収率：９７．３ｍｏｌ％／Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ）であった。ＮＭＲを測定した結果、Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−ＯＭｅ：Ｚ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＯＭｅ＝７８：２２であった。
【００６２】
【発明の効果】
本発明によれば、医薬品またはその中間体として有用と考えられる保護化ペプチド誘導体を、保護化アミノ酸または保護化ペプチドとイミダゾリン化合物から合成した保護化アミノ酸または保護化ペプチドの酸フルオライドとアミノ酸またはペプチド誘導体から、工業的に実施可能な方法で、高収率で合成することが可能になった。