(57)【要約】【課題】液中へ浸漬するだけで、担持することができる、貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体、その製造方法及びそれを用いた人工骨または薬剤徐放体を提供する。【解決手段】人工的に作られた直径７０μｍ〜４ｍｍの立体的な貫通孔を有し、空隙率が２０％〜８０％であり、Ｃａ／Ｐモル比０．７５〜２．１のリン酸カルシウムを主成分とし、貫通孔内に高分子ハイドロゲルが充填された貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体、その製造方法及びそれを用いた人工骨または薬剤徐放体。【特許請求の範囲】
【請求項１】
人工的に作られた直径７０μｍ〜４ｍｍの立体的な貫通孔を有し、空隙率が２０％〜８０％であり、Ｃａ／Ｐモル比０．７５〜２．１のリン酸カルシウムを主成分とし、貫通孔内に高分子ハイドロゲルが充填された貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体。
【請求項２】
多孔質リン酸カルシウムが亜鉛を添加した多孔質リン酸カルシウムである請求項１に記載した貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体。
【請求項３】
亜鉛含有量が０．０１２重量％〜１．２重量％である請求項２に記載した貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体。
【請求項４】
高分子ハイドロゲルがゼラチン、ポリビニルアルコール、コラーゲン、寒天、．ヒアルロン酸、キトサンの中から選ばれた１種又は２種以上の高分子ハイドロゲルである請求項１−３のいずれかひとつに記載した貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体。
【請求項５】
高分子ハイドロゲルが乾燥状態にある請求項４記載の貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体。
【請求項６】
人工的に作られた直径７０μｍ〜４ｍｍの貫通孔が三次元網目状である請求項１から請求項５のいずれかひとつに記載した貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体。
【請求項７】
貫通孔の断面が円形、楕円形、多角形、またはこれらを組み合わせた外形のいずれか一つである請求項６に記載した貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体。
【請求項８】
直線状長柱体または一平面内でのみ屈曲した曲線状又は折れ線状である長柱体を一平面内で重ならないように配列後、その上に、直線状長柱体または一平面内でのみ屈曲した曲線状又は折れ線状である長柱体を、下層の長柱体と配列方向を変えて、一平面内で重ならないように配列し、さらにこのような長柱体の配列体を積層して、長柱体の配列体の積層構造物を作製し、この長柱体の配列体の積層構造物に対して、リン酸カルシウム前駆体を含む組成物を、全ての長柱体が粉末を貫通するように配置し、一平面内の長柱体が下層及び上層の長柱体と方向を異にし、かつ接点で下層及び上層の長柱体と直接接触するよう圧力５ＭＰａ〜５００ＭＰａで加圧成型し、加圧成型した成型体を５００℃〜１３００℃の酸化雰囲気中で燒結したリン酸カルシウム多孔質焼結体の孔内に、高分子溶液を注入して、ｇゲル化、凍結乾燥することを特徴とする貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体の製造方法。
【請求項９】
請求項１ないし請求項７のいずれかひとつに記載された貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体を用いた人工骨。
【請求項１０】
請求項１ないし請求項７のいずれかひとつに記載された貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体を用いた薬剤徐放体。
【請求項１１】
請求項８に記載された貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体の製造方法を用いた人工骨の製造方法。
【請求項１２】
請求項８に記載された貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体の製造方法を用いた薬剤徐放体の製造方法。
【請求項１３】
請求項１から請求項７のいずれかひとつに記載された貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体を用いた組織工学スキャフォールド。
【請求項１４】
請求項８に記載された貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体の製造方法を用いた組織工学スキャフォールドの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する分野】
本発明は、貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体に関し、本発明によって得られる貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体は生体適合性が要求される、生体組織代替材料、組織工学スキャホールド、ＤＤＳ用薬剤担持媒体として利用することができる。
【０００２】
【従来の技術】
感染防止、生体組織の再構築、組織誘導、細胞分化を図るために抗生物質を含む薬剤、成長因子、細胞接着因子その他のタンパク、リン脂質、多糖類、ホルモン等の生物学的活性化物質（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）が使用される。これらの薬剤や活性化物質はそのまま生体に投与されるほか、何らかの生体材料等に担持させて、場合によってはさらにこれら担持材料から徐放させて使用される。
【０００３】
薬剤や生物学的活性化物質を生体材料に担持する方法としては、例えば、有機高分子の生体材料に担持する方法がある。
【０００４】
しかし骨組織はリン酸カルシウムが主成分である。骨組織に対しては、有機物に生物学的活性化物質を担持して細胞にリン酸カルシウムをゼロからつくらせるよりは、人工骨材料に使用されているリン酸カルシウムに生物学的活性化物質を担持して骨組織の再構築する方が早くて効率的である。
【０００５】
リン酸カルシウム質生体材料に薬剤や生物学的活性化物質を担持させる方法としては、おおむね、表面吸着、リン酸カルシウムセメントへの混合、容器内保持、気孔内への保持の４種類に分類できる。
【０００６】
このうち、リン酸カルシウム多孔体の気孔内に薬剤や生物学的活性化物質を担持する方法としては、水酸アパタイトやβリン酸三カルシウム多孔質焼結体の気孔中に成長因子や薬剤を物理的に保持する方法（特許文献１、特許文献４、特許文献５参照）、水酸アパタイトと生体崩壊性ポリマーを含む多孔性複合体に生理活性物質をさらに添加した組成物（特許文献２参照）、金属等の多孔性インプラントの気孔内に保持する方法（特許文献３参照）が開示されている。
【０００７】
これらのリン酸カルシウム多孔体の気孔構造は、袋小路状の非貫通気孔や閉気孔があるため、薬剤や生物学的活性化物質を担持させようとすると、袋小路状の気孔と閉気孔内に逃げ場を失った空気が充満して、多孔体内に薬剤や生物学的活性化物質の溶液がうまく浸透しないという現象が生じる。気孔が閉気孔や袋小路状気孔でなく、すべて貫通していて、液中で速やかに空気が排出されるリン酸カルシウム多孔体は、事実上、珊瑚をリン酸溶液中で水熱処理した多孔体や焼成牛骨のような生物由来リン酸カルシウム多孔体に限定される。生物由来リン酸カルシウム多孔体は、優れた点が多いものの、欠点は化学組成と相組成を人工多孔体ほど自由に選択できず、生体内での吸収性や組織再生促進性を制御できないことである。
【０００８】
人工リン酸カルシウム多孔体にしろ生物由来リン酸カルシウム多孔体にしろ、単純に気孔内に物理的に薬剤や生物学的活性化物質を保持するだけでは、長期の徐放に難がある。
【０００９】
しかし、液体の浸透のために、多孔体を貫通する７０μｍ以上の気孔、好ましくは１００μｍ以上の大気孔から成り、なおかつ十分な気孔率を有し、化学組成をＣａ／Ｐモル比０．７５から２．１まで自由に変更でき、骨形成促進に重要な元素を添加でき、相組成も比較的変更容易な人工リン酸カルシウム多孔体の気孔に、薬剤や生物学的活性化物質の担持のための高分子ハイドロゲルを充填し、貫通気孔内のハイドロゲル中に薬剤や生物学的活性化物質を担持することは知られていなかった。
【００１０】
【特許文献１】米国特許第６，３４６，１２３号明細書
【特許文献２】米国特許第５，７６６，６１８号明細書
【特許文献３】米国特許第５，９４７，８９３号明細書
【特許文献４】特開平９−３０９８８号明細書
【特許文献５】特開２００３−５５０６１号明細書
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
本発明では、生物由来リン酸カルシウム多孔体並みに、気孔が多孔体を貫通していて、その直径が７０μｍ以上、好ましくは１００μｍ以上の大気孔から成り、なおかつ十分な気孔率を有し、化学組成をＣａ／Ｐモル比０．７５から２．１まで自由に変更でき、骨形成促進に重要な元素を添加でき、相組成も比較的変更容易なリン酸カルシウム多孔体の気孔内に薬剤担持可能な高分子ハイドロゲルを導入することで、生物学的活性化因子や薬剤を担持でき、立体的な貫通気孔であるがゆえに生物学的活性化因子や薬剤の溶液を滴下またはこれら液中へ浸漬するだけで、担持することができる、貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体を提供することを目的とする。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
本発明において、人工的につくられた立体的な貫通孔とは、長柱体をオス型に使用してひとつひとつ作製した貫通孔で、さらに貫通方向が２方向以上の方向性を有するものであり、さらに貫通の始点と終点位置が意図的に設計されたもので、さらに焼結体を完全に貫通するものであり、さらに各々の貫通孔の間隔と配置が人為的に設計された貫通孔のことである。
【００１３】
高分子ハイドロゲルとは、多量に水を含むことができる親水性ポリマーのことであり、吸水状態にあるか乾燥状態にあるかは、問わない。このような高分子ハイドロゲルを構成する高分子としては、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ハイドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ）、ハイドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）などのセルロース誘導体、アルギン酸、ヒアルロン酸、アガロース、デンプン、デキストラン、プルランなどの多糖及びその誘導体、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレンオキサイド、ポリ（メタ）アクリルアミド、ポリ（メタ）アクリル酸等のホモポリマー、或いはこれらと多糖などとの共重合体、混合物及び他のモノマーとの共重合体、コラーゲン、ゼラチンなどのタンパク質及びその誘導体、あるいは、ヘパリン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、デキストラン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパラン硫酸などのグリコサミノグリカン、キチン、キトサンなどの多糖類、ムコ多糖類を挙げることができる。これらの材料の動物種あるいはタイプ、サブタイプ、その抽出、精製法の違いについては、特にこだわらない。
【００１４】
本発明において、人工的につくられた立体的な貫通孔とは、長柱体をオス型に使用してひとつひとつ作製した貫通孔で、さらに貫通方向が２方向以上の方向性を有するものであり、さらに貫通の始点と終点位置が意図的に設計されたもので、さらに焼結体を完全に貫通するものであり、さらに各々の貫通孔の間隔と配置が人為的に設計された貫通孔のことである。
【００１５】
本発明においては、人工的に立体的な貫通孔を作製するために断面寸法９０μｍ以上５．０ｍｍ以下、好ましく１００μｍ以上３．０ｍｍ以下、長さが断面図寸法の３倍以上、好ましく１０倍以上の多数の長柱体を気孔のオス型として使用する。長柱体状オス型の材質は、金属、木材、竹その他植物材料、木材、炭素材料、ハロゲンを含まない弾性率１０ＧＰａ以上のポリマー具体的にはポリエチレン、ナイロン、ポリアセタール、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリエステル、ＡＢＳ、ポリスチレン、フェノール、尿素樹脂、エポキシ樹脂、アクリライト、好ましくはハロゲンを含まない１０ＧＰａ以上の熱硬化性ポリマー具体的にはポリエステル、フェノール樹脂、尿素樹脂、エポキシ樹脂から選ばれる１種又は複数種の固体である。これらの固体を使用する理由は、その高弾性率にある。すなわち、本発明では成形時に長柱体オス型が圧力５ＭＰａ以上５００ＭＰａ以下、好ましくは１０ＭＰａ以上２００ＭＰａで加圧されるため、長柱体オス型の弾性率が１０ＧＰａ以下の場合には、長柱体自身が０．０５％以上の変形を生じ、加圧時の気孔閉鎖や、加圧後の長柱体の復形による成形体破壊が生じるからである。ハロゲンを含むポリマーの場合は、ハロゲンがリン酸カルシウムと反応して、生体適合性の低い塩素アパタイト（Ｃａ１０（ＰＯ４）６Ｃｌ２）やフッ素アパタイト（Ｃａ１０（ＰＯ４）６Ｆ２）が、焼結時に生成するからである。さらに、ポリマーが熱硬化性ポリマーであるほうが、ポリマーの溶融による粉体やバインダーとの反応が避けられて焼成中の気孔閉鎖が少ない。
【００１６】
長柱体の断面形状には特に制限はないが、少なくとも１組の平行な辺をもつ多角形、楕円、円、または少なくとも１組の平行な辺と曲線からなる図形であれば、加圧成形や長柱体の引き抜きに有利である。長柱体の伸長方向の形状は屈曲のない直線状または一平面内でのみ屈曲した曲線状又は折れ線状である必要がある。二平面以上の面内で屈曲している場合は、加圧成形の際に長柱体状オス型の変形を生じ、長柱体オス型の破壊、加圧後の長柱体の復形による成形体破壊等が生じて、加圧成形に支障がある。
【００１７】
長柱体状オス型の断面寸法は、最終的に必要とされる気孔の大きさによって決まる。人工骨または組織工学用リン酸カルシウム多孔体にあっては、最小でも、焼結後に大きさ３０μｍの血管内皮細胞や骨芽細胞が同時に複数個侵入できるための気孔が必要である。焼結により１０−２０％の気孔径収縮が生じるため、焼結後の気孔径を７０μｍ以上にするためには、長柱体状オス型の断面寸法は９０μｍ以上であることが必要になる。また、人工骨または組織工学用リン酸カルシウム多孔体にあっては直径４ｍｍ以上の血管を侵入させる必要性は特になく、焼結による１０−２０％の気孔径収縮を考慮しても、長柱体状オス型の断面寸法は５．０ｍｍ以上ある必要はない。以上の理由により、長柱体状オス型の断面寸法の大きさは９０μｍ以上５．０ｍｍ以下となる。長柱体状オス型の長さは、断面図寸法の３倍以上、好ましく１０倍以上が望ましい。長柱体状オス型の長さが断面寸法の３倍以下では、全ての長柱体が粉末を貫通するように添加した場合は、出来上がる多孔体の最大寸法が１０ｍｍ程度に制限されてしまうため、人工骨や組織工学に利用する際の実用上の価値が非常に少ない。
【００１８】
多孔体の強度を向上させるためこれらの長柱体オス型をまず配列して粉末を添加し、配列面を加圧圧縮する。長柱体オス型の配列は２次元配列であるか３次元配列であるかは問わない。長柱体オス型の２次元配列を複数層積層して３次元配列としてもよい。配列の方向性は、等間隔平行、異間隔平行の他、非平行でも良い。複数の長柱体状オス型を周囲から１点に向けて集中するように配列した放射状、複数点に向けて集中するように配列した複放射状、さらには樹脂状とすることもできる。但し、放射状、複放射状、樹脂状とするときは、長柱体の端面が他の長柱体と接触する部分の接着を、勘合、接着等で完全接触させる必要がある。接触が不完全であるとこの部分が焼結後袋小路気孔になってしまう。加圧成形時の圧力は５ＭＰａ以上５００ＭＰａ以下、好ましくは１０ＭＰａ以上２００ＭＰａである。加圧成形時の圧力をこの範囲とするのは、圧力５ＭＰａ以下では、粉体粒子の密着が不充分となり、十分強度のある多孔体が作製できず、加圧が５００ＭＰａ以上では、長柱体状オス型の変形や破壊が起こりやすいためである。さらに、加圧が５００ＭＰａ以上の場合には、積層工程終了後に長柱体状オス型を引き抜く場合に、長柱体状オス型が、加圧成形物から抜けなかったり、長柱体状オス型が粉体との間の摩擦で摩耗されることがあり、金属製長柱体状オス型を使用した場合に問題となる。
【００１９】
本発明において、亜鉛を添加した多孔質リン酸カルシウムとは、亜鉛の固溶であればリン酸カルシウムのカルシウムを亜鉛が不純物として一部置換したリン酸カルシウムを含む多孔質リン酸カルシウムである。亜鉛の固溶には固溶限界があり、固溶限界以上に亜鉛をリン酸カルシウムに添加させる場合は、亜鉛を固溶したリン酸カルシウムの他に、亜鉛の酸化物やリン酸塩が生成して、亜鉛の酸化物やリン酸塩を含む組成物となる。固溶限界以上に亜鉛を添加した多孔質リン酸カルシウムとは、亜鉛を固溶したリン酸カルシウムの他に、亜鉛の酸化物やリン酸塩を含む多孔質リン酸カルシウムである。固溶限界は、例えば低温型Ｃａ３（ＰＯ４）２であれば、全カルシウムの約１２ｍｏｌ％である。
【００２０】
本発明では、リン酸カルシウム前駆体とは、加熱によりリン酸カルシウムとなる組成物のことで、リン酸カルシウム自身もリン酸カルシウム前駆体とする。
【００２１】
リン酸カルシウム前駆体粉末としては全体としてＣａ／Ｐモル比が０．７５以上２．１以下、好ましくは１．１以上１．９以下のものを使用することができる。Ｃａ／Ｐモル比１．５以下の範囲にあっても、亜鉛を含むリン酸カルシウム前駆体粉体の場合は、焼結後に亜鉛固溶リン酸三カルシウムとＣａＺｎ２（ＰＯ４）２の混合物とすることができる。しかし、Ｃａ／Ｐモル比０．７５以下で亜鉛を添加した場合は、亜鉛の含有モル数のほうがカルシウムの含有モル数より多い結果となり、リン酸カルシウム質焼結体でなくなる。従って、リン酸カルシウム前駆体粉末のＣａ／Ｐモル比の下限は０．７５とした。Ｃａ／Ｐモル比が２．１以上では毒性限界以上の酸化カルシウム生成を伴い、焼結後の多孔体の生体適合性が損なわれるため、リン酸カルシウム前駆体粉末のＣａ／Ｐモル比の上限は２．１とした。リン酸カルシウム前駆体粉末の粒子径には特に制限はないが、約０．１μｍから１００μｍであることが望ましい。
亜鉛を含まないリン酸カルシウム前駆体粉末のＣａ／Ｐモル比は１．５以上２．０以下であることが望ましい。このようなリン酸カルシウム粉末としては、具体的には単独でもＣａ／Ｐモル比が１．５以上２．０以下である水酸アパタイト、リン酸三カルシウム、リン酸４カルシウム、非晶質リン酸カルシウム、及びこれらの混合物のほか、これらの単独粉末又は混合物にＣａ／Ｐモル比が１．５以下または２．０以上の粉末、具体的には、リン酸水素カルシウム、グリセロリン酸カルシウム、金属カルシウム、酸化カルシウム、炭酸カルシウム、乳酸カルシウム、クエン酸カルシウム、硝酸カルシウム、カルシウムアルコキサイド等のカルシウム塩が混合されたものでもよいし、リン酸アンモニウム、リン酸等が混合されたものでもよい。これらの化合物は、化学量論組成のものであってもいし、非化学量論組成のものでもよい。
【００２２】
亜鉛を含むリン酸カルシウム前駆体粉末としては、亜鉛を固溶した水酸アパタイト、非晶質リン酸カルシウム、リン酸４カルシウム、リン酸三カルシウムのほか、金属亜鉛及び亜鉛の酸化物、水酸化物、リン酸塩、硝酸塩、炭酸塩を添加したリン酸カルシウム粉体を挙げることができる。亜鉛の塩化物、弗化物、硫酸塩は焼結時に生体適合性の低い塩素、フッ素、硫酸基が残存する結果となるため、使用できない。
【００２３】
多孔質リン酸カルシウムを作製するために、添加するリン酸カルシウム前駆体粉末の量は、経験的に（長柱体間隙の体積）ｘ（リン酸カルシウム前駆体理論密度）で計算されるリン酸カルシウム前駆体粉末量の３％以上１４％未満、好ましくは４％以上６．５％以下となるように正確に秤量する必要がある。３％以下では粉体を加圧することが困難である。粉末量が１４％以上だと長柱体柱面が粉末に完全に埋没し、以下に説明する積層過程で、隣接層の長柱体と接触しなくなる。この場合は、粉体を加圧後、粉体と長柱体の高さが同じになるまで余分な粉体を除去する。
好ましい範囲４％以上６．５％以下に粉末を添加した場合は、長柱体面が一部露出する結果となり、積層過程で配向面と垂直方向に気孔を連続させることができる。ただし、好ましい範囲４％以上６．５％以下の粉末添加量であっても、粉体と長柱体の高さが同じになるまで余分な粉体を除去する工程を行った方が、より多くの気孔を配向面と垂直方向に連続させることが出来る。
【００２４】
リン酸カルシウム前駆体粉末に添加するバインダーは、通常のリン酸カルシウム加圧成形に用いられるのと同様に、２重量％以上−１０重量％以下、好ましくは２重量％以上５重量％以下のポリビニルアルコールでよい。１０重量％ポリビニルアルコール添加では、焼結後の多孔体の壁や梁が多孔質となり、強度の向上が不十分であり、２重量％ポリビニルアルコール添加では、粉体粒子同士の粘着が弱く、加圧成形できない。溶剤は５重量％以上５２重量％以下、好ましくは１０重量％以上４５重量％以下で添加することが望ましい。溶剤の添加により、粉体の流動性が向上して加圧時に長柱体状オス型の間隙に隙間なく粉体を充てんできる。溶剤を添加した場合には、焼結工程の前に溶剤を蒸発させるための乾燥工程を行う。溶剤の添加量を５％以上５２％以下とした理由は、５％以下では実際上乾燥粉末とおなじであり、溶剤添加の効果がなく、５２％以上の場合は焼結後の多孔体の壁や梁が多孔質となり、強度向上が不十分となるからである。
【００２５】
リン酸カルシウム前駆体粉末またはこれにバインダーを含む組成物、場合によってはさらに溶剤を含む組成物を用いて作製された単位となる加圧成形物を複数積層させてもよい。積層は複数の単位層をあらかじめ作製しておき、１回で全てを積層させてもよいし、単位層を加圧成形製後に、その単位層上で別の単位層を成形して積層させてもよい。あらかじめ長柱体オス型の２次元配列を複数層積層しておいて３次元配列とし、これにリン酸カルシウム前駆体粉末またはこれにバインダーを含む組成物、場合によってはさらに溶剤を含む組成物を圧入して加圧成型してもよい。積層工程では、ある層の長柱体状オス型が上下に隣接する長柱体状オス型と複数の接点を持つようにし、なおかつ、隣りあう層中で、長柱体状オス型の方向が異なるようにする。こうすることで、長柱体状オス型の接点が積層方向への連続気孔となる。加圧成形時の圧力は、単層成形工程と同様、圧力５ＭＰａ以上５００ＭＰａ以下、好ましくは１０ＭＰａ以上２００ＭＰａである。
【００２６】
リン酸カルシウム粉体には、骨形成やその他の生体機能を強化するために、亜鉛を添加することができる。亜鉛の焼結後の含有量は、骨の亜鉛含有濃度の１倍以上１００倍までの範囲とする。骨の亜鉛含有濃度は０．０１２重量％−０．０２１７重量％である。亜鉛含有量が骨の含有量の１倍以下では、亜鉛の持つ生体機能促進作用を骨中で発揮することは出来ない。また、１００倍以上の含有量では、骨組織中で使用する人工骨においても、細胞培養液中で使用する組織工学スキャフォールドにおいても、亜鉛が過剰となり毒性を発現する。２５倍以上１００倍以下の含有量の場合は、骨組織中では毒性を発現するものの、細胞培養液中では毒性を発現せず、組織工学スキャフォールドとして使用できる。
【００２７】
亜鉛は、リン酸カルシウム粉末を構成するリン酸カルシウム結晶に固溶させておいてもよいし、無機塩、金属、酸化物、水酸化物、有機金属化合物として混合させておいてもよい。無機塩、金属、酸化物、水酸化物、有機金属化合物をあらかじめ混合させておく場合は、焼結時にこれら元素はリン酸カルシウムと反応して固溶する。混合亜鉛量が固溶限界以上の場合は、焼結後亜鉛固溶リン酸カルシウムの他に亜鉛酸化物またはリン酸塩が生成する。無機塩として混合させる場合は、焼結時に陰イオン団が揮発する、炭酸塩や硝酸塩が好ましい。
【００２８】
作成された加圧成形体中の長柱体状オス型は、焼結前に、金属の場合は、必ず引き抜いて除去する。その他の竹、木材、炭素材料、ポリマーからなる長柱体状オス型の場合は焼成前に引き抜いても良いが、そのまま粉体中に包埋させたままでも焼成時に消失する。
【００２９】
粉体に水を添加した場合、加圧成形した場合は焼成前に室温にて、重量変化がなくなるまで乾燥させる。乾燥温度に特に指定はないが、室温もしくはそれ以下の温度のほうが好ましい。５０℃以上ではバインダーにポリビニルアルコールを使用した場合は、ポリビニルアルコールに変質が生じ、その結果、焼結しても焼結密度が上がらず、積層界面で剥離する場合が多い。乾燥温度が４０℃以上の場合も、ときおり積層界面での剥離が生じることがある。
【００３０】
加圧成形体の焼結工程は、通常の電気炉を用い大気雰囲気下で、５００℃以上１５００℃以下、好ましくは７００℃以上１４００℃以下で行う。５００℃以下では焼結は起こらず、１５００℃以上では多くのリン酸カルシウムが分解する。  最適焼結温度は、焼結させるリン酸カルシウム粉末の化学組成によって異なる。例をあげれば、水酸アパタイト（Ｃａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２：Ｃａ／Ｐモル比＝１．６７）の最適焼結温度は９００℃以上１２００℃以下である。低温型リン酸三カルシウム（Ｃａ３（ＰＯ４）２：Ｃａ／Ｐモル比＝１．５０）の最適焼結温度は、９００℃以上１１００℃以下である。高温型リン酸三カルシウムの最適焼結温度は１２００℃以上１５００℃以下である。亜鉛を含有する低温型リン酸三カルシウムの最適焼結温度は９００℃以上１２００℃以下である。亜鉛を含有する高温型リン酸三カルシウムの最適焼結温度は１３００℃以上１５００℃以下である。
焼結工程終了後、密度を測定して気孔率を求めることができる。気孔の連通状態は、顕微鏡、実体鏡、電子顕微鏡、染色液浸透によって評価することができる。多孔体の圧縮強度をインストロン型の万能試験機を用いて評価することができる。
【００３１】
高分子ハイドロゲルの気孔内への導入は、高分子溶液を多孔体気孔内へ導入した後、ｐＨ変化、温度変化、ゲル化剤添加、放射線照射のいずれか又は２種以上の操作によって、気孔内でハイドロゲルを形成させる。例えば高分子ハイドロゲルがポリビニルアルコールであれば、オートクレーブ中１００℃以上加熱で、重合度８８００、ケン化度９９％のポリビニルアルコールを溶解させて２．５％濃度とし、６５０ｍｍＨｇの減圧下で多孔体内に導入後、−５０℃下に１０時間、更に４℃下で１０時間放置操作を繰り返し、ポリビニルアルコールを気孔内でゲル化させる。その後、多孔体と共に凍結乾燥を行ない、貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体とする。例えば高分子ハイドロゲルがアガロースである場合、大気圧下９０℃でアガロースを溶解させて作製した、３％アガロース溶液を６５０ｍｍＨｇの減圧下で多孔体内に導入後、室温まで冷却し、アガロースを気孔内でゲル化させる。その後、多孔体と共に凍結乾燥を行ない、多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体とする。例えば高分子ハイドロゲルがゼラチンである場合、大気圧下６０℃でゼラチン濃度５％、グルタルアルデヒド濃度０．０５％に作製した、ゼラチン溶液を６５０ｍｍＨｇの減圧下で多孔体内に導入後、４℃５時間放置し、気孔内でゼラチンをゲル化させる。グリシン溶液により余分なグルタルアルデヒドを中和した後、ゼラチンを導入した多孔体を凍結乾し、多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体とする。例えば高分子ハイドロゲルがアルギン酸である場合、室温でアルギン酸ナトリウムを溶解させて作製した、３％アルギン酸ナトリウム溶液を６５０ｍｍＨｇの減圧下で多孔体内に導入後、塩化カルシウム溶液を加えてアルギン酸を気孔内でゲル化させる。その後、多孔体と共に凍結乾燥を行ない、貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体とすることができる。
高分子ハイドロゲルの導入状態は、導入前後の重量変化、顕微鏡観察、実体鏡観察、電子顕微鏡観察、染色液浸透によって評価することができる。
【００３２】
以下実施例により本発明を説明する。
（実施例１）
５０  ｍｌビーカーに６０℃に加温した超純水１７ｇとゼラチン１ｇ（新田ゼラチン（株）、Ｔｙｐｅ＃３００、Ｌｏｔ．  ０２０６２７）を加え、５０  −  ６０  ℃においてスターラーで撹拌した。ゼラチンが完全に溶解するまで６分要した。スターラーで撹拌させながら０．２５，  ０．５，  １．０，  ２．５  ％  濃度のグルタルアルデヒド溶液２ｇを１０  秒程度かけて滴下し、５０  −  ６０  ℃においてスターラーで３分撹拌した。４種類のゼラチン溶液はそれぞれ１１  ｘ  １１  ｃｍのバットに流し入れ、４℃  ５時間静置し架橋させた。ゲル化したゼラチン１０  ｇ  程度を−２０℃３ｈで予備冷却した後、凍結乾燥を６時間行った。各ゼラチン溶液中におけるグルタルアルデヒド濃度とゼラチンハイドロゲルの含水率を表１に示す。
【表１】
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どの条件でも含水率９４％以上という高い含水率が得られた。
【００３３】
（実施例２）
実施例１の条件２を用いて、多孔体孔内に５％ゼラチンハイドロゲルを導入した。５０  ｍｌビーカーに６０℃に加温した超純水１７ｇとゼラチン１ｇ（新田ゼラチン（株）、Ｔｙｐｅ＃３００、Ｌｏｔ．  ０２０６２７）を加え、５０  −６０  ℃においてスターラーで撹拌した。ゼラチンが完全に溶解するまで６分要した。スターラーで撹拌させながら０．５％グルタルアルデヒド溶液２ｇを１０  秒程度かけて滴下し、５０  −  ６０  ℃においてスターラーで３分撹拌した。多孔体（１５  ｘ  １５  ｘ  ３  ｍｍ）をゼラチン溶液に沈め、６５０  ｍｍ  Ｈｇにおいて真空を５分ひき、多孔体の孔内に５％ゼラチン溶液を導入した。４℃５時間静置し架橋した。５０  ｍｌビーカーにゼラチンを導入した多孔体と１００ｍＭグリシン溶液５０  ｍｌを加え、３７℃３時間かけて、余分なグルタルアルデヒドを中和した。超純水で軽く洗浄し、多孔体の周りの余分な水分を取り除いた。ゼラチンを導入した多孔体は  −２０℃において５時間予備冷却した後、凍結乾燥６時間行った。多孔体の孔内にはゼラチンハイドロゲルが充填されていることを確認した。（図１）
【００３４】
（実施例３）
実施例２で作製した、ゼラチンハイドロゲルを導入した多孔体（１５ｘ１５ｘ３  ｍｍ）に、赤色の色素分子ニューコクシン（Ｔｒｉｓｏｄｉｕｍ７−ｈｙｄｒｏｘｙ−８−（４−ｓｕｌｆｏｎａｔｏ−１−ｎａｐｈｔｈｙｌａｚｏ）−１，３−ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｄｉｓｕｌｆｏｎａｔｅ分子量６３１．５１）の溶液を吸収させた。溶液は多孔体底面（１５ｘ３  ｍｍの面）から４℃で吸収させると、６時間後には色素の一部は貫通孔内のハイドロゲル中を拡散し、他方の面まで達した。その後、反対側の低面からも色素分子溶液を吸収させた。その結果、多孔体は全体に気孔に沿って赤く染色された（図２）。多孔体を切断したところ、内部全体に赤色のゼラチンゲルが観察された（図２）。すなわち、色素分子が多孔体孔内のゼラチンハイドロゲル中を拡散し、ハイドロゲル中に担持された。このことは生物学的活性化物質分子や薬剤分子も同様に担持できることを示している。
【００３５】
【本発明の効果】
本発明では、気孔が多孔体を貫通していて、その直径が７０μｍ以上、好ましくは１００μｍ以上の大気孔から成り、なおかつ十分な気孔率を有し、化学組成をＣａ／Ｐモル比０．７５から２．１まで自由に変更でき、骨形成促進に重要な元素を添加でき、相組成も比較的変更容易なリン酸カルシウム多孔体の気孔内に、薬剤担持可能な高分子ハイドロゲルを気孔内に導入することで、生物学的活性化因子や薬剤を担持でき、立体的な貫通気孔であるがゆえに生物学的活性化因子や薬剤の溶液を滴下またはこれら液中へ浸漬するだけで、担持ができる、生物由来リン酸カルシウム多孔体並みの貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体を提供することができた。
【図面の簡単な説明】
【図１】ゼラチン導入前の多孔体（上）とゼラチン導入後の多孔体（下）の貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体の拡大写真。
【図２】ゼラチン導入後、色素分子ニューコクシンを担持した貫通を有する多孔質リン酸カルシウム高分子ハイドロゲル複合体（上）とその断面拡大写真（下）。
【図１】
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【図２】
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