(57)【要約】【課題】血圧上昇抑制作用、悪玉コレステロール抑制作用および善玉コレステロール上昇作用などの生活習慣病予防および改善作用を有するエルカンプーレを含有した機能性食品を提供する。【解決手段】エルカンプーレ全草の乾燥物の６０％以上８０％以下の含水エタノール抽出エキス乾燥物を０．１ｇ以上１０ｇ以下含有する。血圧上昇抑制作用、悪玉コレステロール抑制作用および善玉コレステロール上昇作用などにより生活習慣病を予防および改善する。健康の維持および増進に有用である。【選択図】　　　　図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
エルカンプーレを含有し、
生活習慣病予防および改善作用を有する
ことを特徴としたエルカンプーレを含有した機能性食品。
【請求項２】
生活習慣病予防および改善用作用は、血圧上昇抑制作用である
ことを特徴とした請求項１記載のエルカンプーレを含有した機能性食品。
【請求項３】
生活習慣病予防および改善用作用は、悪玉コレステロール抑制作用と善玉コレステロール上昇作用とである
ことを特徴とした請求項１記載のエルカンプーレを含有した機能性食品。
【請求項４】
生活習慣病予防および改善用作用は、抗糖尿病効果である
ことを特徴とした請求項１記載のエルカンプーレを含有した機能性食品。
【請求項５】
生活習慣病予防および改善用作用は、抗肥満効果である
ことを特徴とした請求項１記載のエルカンプーレを含有した機能性食品。
【請求項６】
エルカンプーレのアルコール抽出物を含有している
ことを特徴とする請求項１ないし５いずれか記載のエルカンプーレを含有した機能性食品。
【請求項７】
エルカンプーレのアルコール抽出物は、６０％以上８０％以下の含水エタノールを含んでいる
ことを特徴とした請求項１ないし６いずれか記載のエルカンプーレを含有した機能性食品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、生活習慣病予防および改善作用を有するエルカンプーレを含有した機能性食品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、わが国においては食生活の欧米化を始めとするライフスタイルの変化によって、脂肪やエネルギの摂取過剰の食生活が多く見られている。その結果として高脂血症、肥満、高血圧、糖尿病と云った生活習慣病の罷患率が急激に上昇している。これら生活習慣病の典型例である、高血圧、高コレステロール、糖尿病の治療薬としては、多種多様なものが使用され、それぞれ一定の効果も認められている（例えば、特許文献１ないし３参照。）。
【０００３】
ところが、これらの治療薬剤は、疾病を有する人（病人）を対象とするものであると同時に、少なからず副作用を有しており、長期の服用には抵抗感も強い。
【０００４】
そこで、薬剤ではなく、人体に安全でかつ境界域にある人を対象とし、生活習慣病予防・改善効果が高い機能性食品の開発が強く望まれているが、この要望を完全に満たすものは未だないのが現状である。
【０００５】
従来、ペルーのアンデス地方の高地に生育している多年性の双子葉植物であるエルカンプーレが、古くプレインカ時代から万能薬として使用され、胃痛、慢性胃炎、肝機能障害抑制・改善などの効能が伝承、服用されてきている。一般には、その乾燥した全草を煎じて健康茶として服用されていた。
【０００６】
【特許文献１】
特開２００２−３６３０９５号公報（第３−５頁）
【０００７】
【特許文献２】
特開平６−３４５６６４号公報（第２−３頁）
【０００８】
【特許文献３】
特開平６−１３５８３９号公報（第２−７頁）
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、エルカンプーレの効能についての明確な裏づけも、また、このエルカンプーレの含有成分について有効な生理作用は明らかにされていないという問題を有している。
【００１０】
本発明は、このような点に鑑みなされたもので、生活習慣病予防および改善作用を有するエルカンプーレを含有した機能性食品を提供する。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
請求項１記載のエルカンプーレを含有した機能性食品は、エルカンプーレを含有し、生活習慣病予防および改善作用を有するものである。
【００１２】
そして、エルカンプーレを含有した食品を摂取することにより、生活習慣病の予防および改善が期待できる。
【００１３】
請求項２記載のエルカンプーレを含有した機能性食品は、請求項１記載のエルカンプーレを含有した機能性食品において、生活習慣病予防および改善用作用は、血圧上昇抑制作用であるものである。
【００１４】
そして、エルカンプーレを含有した食品の摂取により、血圧上昇の抑制を期待できる。
【００１５】
請求項３記載のエルカンプーレを含有した機能性食品は、請求項１記載のエルカンプーレを含有した機能性食品において、生活習慣病予防および改善用作用は、悪玉コレステロール抑制作用と善玉コレステロール上昇作用とであるものである。
【００１６】
そして、エルカンプーレを含有した食品の摂取により、悪玉コレステロール抑制作用と善玉コレステロール上昇作用とを期待できる。
【００１７】
請求項４記載のエルカンプーレを含有した機能性食品は、請求項１記載のエルカンプーレを含有した機能性食品において、生活習慣病予防および改善用作用は、抗糖尿病効果であるものである。
【００１８】
そして、エルカンプーレを含有した食品の摂取により、抗糖尿病効果を期待できる。
【００１９】
請求項５記載のエルカンプーレを含有した機能性食品は、請求項１記載のエルカンプーレを含有した機能性食品において、生活習慣病予防および改善用作用は、抗肥満効果であるものである。
【００２０】
そして、エルカンプーレを含有した食品の摂取により、抗肥満効果を期待できる。
【００２１】
請求項６記載のエルカンプーレを含有した機能性食品は、請求項１ないし５いずれか記載のエルカンプーレを含有した機能性食品において、エルカンプーレのアルコール抽出物を含有しているものである。
【００２２】
そして、エルカンプーレのアルコール抽出物を含有した機能性食品を摂取することにより、エルカンプーレを含有した食品をより効率良く摂取できる。
【００２３】
請求項７記載のエルカンプーレを含有した機能性食品は、請求項１ないし６いずれか記載のエルカンプーレを含有した機能性食品において、エルカンプーレのアルコール抽出物は、６０％以上８０％以下の含水エタノールを含んでいるものである。
【００２４】
そして、６０％以上８０％以下の含水エタノールを含んだエルカンプーレのアルコール抽出物を含有させることにより、エルカンプーレを含有した食品をより効率良く摂取できる。
【００２５】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施の一形態のエルカンプーレを含有した機能性食品を説明する。
【００２６】
まず、エルカンプーレの乾燥物、すなわちエルカンプーレの全草（根、茎、葉）の乾燥物を３０メッシュ以上１００メッシュ以下程度に粉砕する。そして、この粉砕したエルカンプーレの乾燥物を、含水アルコールに室温（より抽出効率を上げる場合には４０℃程度の温度）で４８時間以上７２時間以下浸漬してエキス分を抽出する。
【００２７】
抽出液は、そのまま減圧下に濃縮乾固してもよく、抽出液にデキストリン、ソルビトールなどの乾燥助剤を加えて噴霧乾燥してもよい。また、抽出・乾燥物を再度水に溶解し、活性炭、イオン交換樹脂処理などによりさらに精製してもよい。用いられるアルコールは、エタノール、プロパノールなどの低級アルコールであり、通常６０％以上８０％以下程度の含水アルコールをアルコールとして含んでいることが好ましい。この結果、エルカンプーレのアルコール抽出エキス乾燥物が得られる。
【００２８】
次いで、エルカンプーレの含水アルコール抽出エキス乾燥物が、これを含有した血圧上昇抑制作用、悪玉コレステロール抑制作用と善玉コレステロール上昇作用、抗糖尿病効果、抗肥満効果などの生活習慣病予防・改善用の機能性食品として提供される形態としては、散剤、顆粒、錠剤、糖衣錠、カプセル、液剤、シロップ状のいずれであってもよく、これらは適宜助剤、賦香料とともに賦形されてもよい。用いられる賦形剤、希釈剤としては、ゼラチン、糖類、澱粉類、脂肪酸、その塩、油脂、タルク、生理食塩水、その他のマスキング剤が挙げられる。
【００２９】
これらのものをそのまま服用してもよいが、各種料理品、菓子、キャンディなどの食品に混ぜて服用するのも好都合である。服用量は、個人差、個体差が大きいけれども、通常成人一日当たり、水分８．５％、糖質８３％を含むアルコール抽出エキス乾燥物として、０．１ｇ以上１０ｇ以下である。
【００３０】
【実施例】
以下、本発明のエルカンプーレのアルコール抽出エキス乾燥物を含有した生活習慣病予防および改善作用を有する機能性食品を、実験例を用いてさらに詳細に説明する。
【００３１】
（実験例１）
まず、エルカンプーレ・エキスパウダの調製としては、９８％エタノールを活性炭およびイオン交換樹脂処理した純水を用いて７０％に希釈した含水エタノールを調製し、この６００ｌに、６０メッシュに粉砕したエルカンプーレの乾燥全草（根、茎、葉；トワ商事株式会社販売）１２０ｋｇを加えて室温で７２時間浸漬した。
【００３２】
次いで、固形物を濾去して得た抽出液に、質量％が２％の食品用デキストリンを添加して混合し、これを噴霧乾燥してエルカンプーレのアルコール抽出噴霧乾燥物（エルカンプーレ・エキスパウダ）１５ｋｇ以上２０ｋｇ以下を得た。ここで、このエルカンプーレ・エキスパウダの分析結果を表１に示す。
【００３３】
【表１】
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【００３４】
（実験例２）
次に、上記実験例１で得たエルカンプーレ・エキスパウダを質量比で１％含む飼育用飼料を調製した。また、対照食として、エルカンプーレを含まないＡＩＮ−９３組成（リーブスなど、ジャーナル・オブ・ニュートリション、１２３巻１９２３頁、１９９３年（Ｊ．Ｎｕｔｒ．、１２３、１９２３、１９９３））に準拠したカゼイン食を調製した。ここで、これら飼育用飼料およびカゼイン食の組成を表２に示す。なお、ＡＩＮ−９３は、米国国立栄養研究所が１９９３年に発表したマウス、ラットを用いた栄養研究のための標準精製飼料組成である。
【００３５】
【表２】
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【００３６】
さらに、本態性高血圧症のモデル動物として知られる脳卒中易発症性高血圧自然発症ラット（以下ＳＨＲＳＰと呼ぶ。）を用いて実験した。具体的には、１６週齢以上１７週齢以下のＳＨＲＳＰ（近畿大学医学部動物実験室より分与を受けた）を各群６匹ずつ使用して、温度２２．０±２．０℃、湿度５５．０±５．０％、１２時間の明暗切り替え方式（明期は午前８時から午後８時まで、暗期は午後８時から午前８時まで）で、飲み水（水道水）とともに、飼料自由摂取下で６週間飼育した。なお、本動物実験は「近畿大学医学部動物実験の指針」に則って実施した。そして、実験の間、１日置きに体重と飼料摂取量とを測定した。結果として、各群６匹の平均体重である体重測定値を表３に示す。
【００３７】
【表３】
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【００３８】
また、実験開始から３週間目以降、一週間毎に、無麻酔下で、ラット尾動脈圧・脈拍測定装置（ソフトロン非観血式自動血圧測定装置ＢＰ−９８Ａ、ソフトロン・コーポレーション製、東京）を用いて血圧を測定した。すなわち、ＳＨＲＳＰを加温器中、３８℃以上４０℃以下、４分間以上５分間以下予備加熱しておき、次いで測定器を取り付け、無麻酔下にて３８℃、５分間の条件で測定した。このとき、１検体に付き収縮期尾動脈圧および拡張期尾動脈圧を５回ずつ測定し、それぞれの平均値を最高および最低血庄値とした。ここで、これら最高血圧の動態を表４に示す。
【００３９】
【表４】
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【００４０】
また、実験開始から６週間後、絶食させずにエーテル麻酔下で開腹し、腹部大動脈より注射筒にて全血を採血した。この採血は、午前中に行い、得られた血液を室温にて１時間、次いで４℃にて１時間以上２時間以下放置した後、４℃にて１０分間、２５００ｒｐｍで遠心分離して血清を分離した。
【００４１】
このとき、グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミラーゼ（ＧＯＴ）活性の測定には、市販のＵＶ法によるキット（ＧＯＴ−ＵＶテストワコー；和光純薬工業株式会社製）を用いた。また、グルタミン酸ピルビン酸トランスアミラーゼ（ＧＰＴ）活性の測定には、市販のＵＶ法によるキット（ＧＰＴ−ＵＶテストワコー；和光純薬工業株式会社製）を用いた。
【００４２】
さらに、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）活性の測定には、市販のＵＶ法によるキット（ＬＤＨ−ＵＶテストワコー；和光純薬工業株式会社製）を用いた。また、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性の測定には、市販のＵＶ法によるキット（ＡＬＰ−ＵＶテストワコー；和光純薬工業株式会社製）を用いた。ここで、これら最終測定値の測定結果を表５に示す。
【００４３】
【表５】
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【００４４】
これらの結果、表３ないし表５に示すように、エルカンプーレパウダを添加した飼料を投与して飼育したＳＨＲＳＰ群と、対照飼料を投与して飼育したＳＨＲＳＰ群との成長曲線（増体量）および飼料摂取量に差は認められず、ともに順調な生育を示し、安全な飼料であることが認められた。一方、最高血圧は、飼料投与から４週目以降、エルカンプーレパウダを添加した飼料で上昇抑制効果が観られ、６週間投与後の最終測定最高血圧値は有意な低値が認められた。
【００４５】
さらに、表５に示すように、エルカンプーレを添加した飼料を投与して飼育したＳＨＲＳＰ群であるエルカンプーレ投与群と、対照飼料を投与して飼育したＳＨＲＳＰ群である対照群との血清中の肝機能関連酵素活性において、ＧＯＴ、ＧＰＴ、ＬＤＨ活性では両群間に差は認められなかったことから、エルカンプーレ投与による肝機能障害作用は無いと考えられる。また、ＡＬＰ活性では、エルカンプーレ投与群が対照群に対して有意な低値が観られた。
【００４６】
ここで、血清コレステロール、リン脂質、トリグリセライド含量は、市販の酵素法によるキット（コレステロールＥ−テストワコー、リン脂質Ｃ−テストワコー、トリグリセライドＥ−テストワコー；和光純薬工業株式会社製）を用いて測定した。また、血清中のチオバルビツール酸反応性物質は、市販のキット（過酸化脂質−テストワコー；和光純薬工業株式会社製）を用いて測定した。すなわち、血清に１／１２規定硫酸と１０％リンタングステン酸を加え、充分攪拌する。
【００４７】
この後、この攪拌させた血清を４℃、１００００回転にて１０分間遠心分離し、沈殿を蒸留水に懸濁、チオバルビツール酸（ＴＢＡ）試薬を加え、沸騰湯浴中にて６０分間過酸化脂質と反応させた。さらに、この反応物を冷却した後、ブタノールを加え、チオバルビツール酸反応性物質（ＴＢＡＲＳ）を抽出し、この後、４℃、２５００回転にて５分間遠心分離し、上層を取り、励起波長５１５ｎｍ、蛍光波長５５３ｎｍの蛍光強度を測定した。
【００４８】
同様に、低比重リポタンパク（ＬＤＬ：悪玉）の抗酸化性は、市販のキット（過酸化脂質−テストワコー；和光純薬工業株式会社製）を用いて測定した。すなわち、ＬＤＬ分画を１０ｍＭ燐酸塩バッファ（ｐＨ７．４）で４℃にて一晩透析し、この後１０μＭ硫酸銅液により３７℃、４時間酸化した。次に、ＥＤＴＡ・２Ｎａを加えた後、１／１２規定硫酸、次いで１０％リンタングステン酸を加えてから充分に攪拌した。さらに、上記血清ＴＢＡＲＳ含量測定と同様にしてＬＤＬ−ＴＢＡＲＳを測定した。ここで、これら測定結果を表６に示す。
【００４９】
【表６】
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【００５０】
この結果、表６に示すように、血清中の脂質含量では、エルカンプーレ投与群において血清リン脂質含量に有意な高値が認められた。これはＬＤＬ分画の脂質含量の有意な高値に基づいていた。さらに、高比重リポタンパク（ＨＤＬ：善玉）分画においてコレステロール含量の有意な高値が認められた。また、血清のＴＢＡＲＳ値に差は認められなかったが、ＬＤＬ分画のＴＢＡＲＳ値ではエルカンプーレ投与群で低値傾向が見られた。したがって、これらの結果からエルカンプーレによるＨＤＬ−コレステロール（善玉コレステロール）の上昇と、ＬＤＬの抗酸化性とが裏付けられていると考えられる。
【００５１】
さらに、各群のＳＨＲＳＰの全血を採取した後、速やかに肝臓を摘出し、周囲結合組織を取り除いた後、キムワイプで血液や体液を拭き取り湿重量を測定した。なお、肝臓比重量は処分時における単位体重（１００ｇ）当たりの肝臓重量の割合で示した。
【００５２】
また、肝臓中の脂質抽出は、フォルシュなどの方法に準拠して行った（フォルシュなど、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ２２６巻、４９７−５０９、１９５７（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２２６、４９７−５０９、１９５７））。すなわち、氷冷下で肝臓組織約０．２ｇに１ｍｌの水を加え、ホモジナイザ処理し、次いでクロロホルムとメタノールの２：１混合液を５ｍｌ加え、ホモジナイザ処理を続け脂質を抽出した。この後、処理液を１５℃、５分間、２５００ｒｐｍにて遠心分離し、下層のクロロホルム層を肝臓中の総脂質の抽出液とした。そして、この一部を取り、窒素ガス気流下でクロロホルムを蒸発させ、肝臓脂質含量測定用の試料とした。
【００５３】
ここで、肝臓中のコレステロール、リン脂質、トリグリセライド含量は、市販の酵素法によるキット（コレステロールＥ−テストワコー、リン脂質ｃ−テストワコー、トリグリセライドＥ−テストワコー；和光純薬工業株式会社製）を用いて測定した。
【００５４】
そして、氷冷下で、肝臓組織約１ｇに０．３Ｍ蔗糖、５０ｍＭ食塩、１０ｍＭＥＤＴＡ・４Ｎａそして１０ｍＭジチオスレイトール（ＤＤＴ）を含む５０ｍＭトリスー塩酸バッファ（ｐＨ７．４）を９ｍｌ加え、混合液をホモジナイズした（ラボスタラＬＳ−１５、大和株式会社製）。さらに、４℃にて２５００ｒｐｍ、３０分間遠心分離し、この遠心分離した後の上清を４℃にて１６０００ｒｐｍ、２０分間高速遠心分離した。
【００５５】
さらに、得られた上清を４℃にて４００００ｒｐｍ（１０００００ｇ）、６０分間超遠心分離し、ミクロソーム画分の沈殿（ペレット）を得た。この沈殿にミクロソーム抽出用バッファを４ｍｌ加え、４℃にて充分に懸濁した後、再度４℃にて４００００ｒｐｍ（１０００００ｇ）、６０分間超遠心分離し、得られた茶褐色の沈殿を肝臓中のミクロソーム画分とした。この後、リン酸バッファ５００μｌを入れ、氷冷下においてマルチスタラで沈殿がなくなるまで攪拌した。そして、得られた懸濁液を肝臓脂質代謝関連酵素活性測定用として−８０℃で凍結保存した。
【００５６】
また、肝臓ミクロソーム画分中に存在するコレステロールを基質として、コレステロール−７α−ヒドロキシラーゼ（７α−ヒドロキシラーゼ）によるＮＡＤＰ系を使用した酸化反応（水酸化反応）により生成する７α−ヒドロキシコレステロールをコレステロールオキシダーゼにより７α−ヒドロキシ−４−コレステン−３−オン（ＨＣＯ）に変換する。さらに、この変換反応が終了した後、反応生成物ＨＣＯをｎ−ヘキサンにて抽出し、荻島などの方法（荻島、奥田；アナリテイカル・バイオケミストリ、１５８巻、２２８、１９８６、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１５８、２２８、１９８６）に準拠してＨＰＬＣにより分析した。
【００５７】
このとき、７α−ヒドロキシラーゼ活性は、ミクロソーム画分の蛋白含量１ｍｇあたり１分間に生じるＨＣＯ量（ｐｍｏｌ／ｍｉｎ／ｍｇミクロソーム蛋白）にて示した。そして、これら測定結果を表７に示す。
【００５８】
【表７】
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【００５９】
この結果、表７に示すように、両試験群間に単位体重あたりの肝臓重量に差は認められなかったが、肝臓単位重量当たりの脂質含量に関し、エルカンプーレ投与群ではコレステロール含量で有意な低値、トリグリセライド含量で低値傾向を示した。また、肝臓コレステロールの胆汁酸への異化律速酵素であるコレステロール−７α−ヒドロキシラーゼ活性は、エルカンプーレ投与群で有意な高値が認められた。このことは、エルカンプーレエキスパウダ供与食によって、コレステロール−７α−ヒドロキシラーゼ活性が亢進され、肝臓コレステロールの胆汁酸への異化、胆汁中への排泄が増加し、肝臓中のコレステロール含量が低値を示すと考えられる。
【００６０】
したがって、エルカンプーレの乾燥物、またはその全草乾燥物のアルコール抽出物を添加した飼料を、ＳＨＲＳＰに供与して飼育したところ、ＳＨＲＳＰは順調に生育するとともに、優れた血圧上昇抑制作用、悪玉コレステロール抑制作用と善玉コレステロール上昇作用が認められたので、エルカンプーレ（エキスパウダ）が健康の維持および増進に有用であることが確認できた。
【００６１】
（実験例３）
次に、エルカンプーレによるヒト唾液由来のα−アミラーゼに対する阻害作用の実験について説明する。
【００６２】
まず、エルカンプーレの数多くの薬効のうち、抗肥満効果や抗糖尿病効果は、このエルカンプーレに含まれるキサントン誘導体の１つのマンジフェリンであることが推察される。そこで、このエルカンプーレエキスおよび純品のマンジフェリンを用いてヒト唾液由来のα−アミラーゼのデンプン分解活性に対する阻害作用を検討した。
【００６３】
用いる試料としては、エルカンプーレエキス原液（トワ商事株式会社より提供）と、可溶性デンプン（和光純薬工業製）と、α−アミラーゼ：１００００ｕｎｉｔｓ／ｍｌ（ｆｒｏｍ　ｈｕｍａｎ　ｓａｌｉｖａ，Ｌｅｅ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ製）を用意した。
【００６４】
ここで、α−アミラーゼは、デンプンをデキストリン、マルトトリオース、マルトース、イソマルトースに加水分解する酵素であり、ヒトの唾液および膵液に存在する。なお、このα−アミラーゼが阻害されるとデンプンは加水分解されないので、このデンプンの消化吸収が抑えられると、抗糖尿病効果や抗肥満効果がある。
【００６５】
そして、サンプル液の調製は、まず、エバポレターでエルカンプーレエキス原液のエタノールを飛ばして−８０℃で凍結してからさらに凍結乾燥する。次いで、この得られたパウダ１０ｍｇを精度０．１ｍｇで量って、８０％のエタノールを１０ｍｌ加え、完全に溶かす。さらに、このサンプル液を８０％のエタノールで１０，２０，５０，１００，２００，５００μｇ／ｍｌとなるように各種濃度のサンプル液を調製して、それぞれを５℃で保存する。
【００６６】
同様に、マンジフェリン１ｍｇを精度０．１ｍｇで量って、５０％のエタノール１０ｍｌを加え、完全に溶かす。さらに、このサンプル液を５０％のエタノールでｌ，２，５，１０，２０，５０μｇ／ｍｌとなるように各種濃度のサンプル液を調製して、それぞれを５℃で保存する。
【００６７】
次いで、可溶性デンプン溶液の調整は、試験する度に調製する必要があるが、可溶性デンプン２００ｍｇ以上５００ｍｇ以下を精度０．１ｍｇで量り、純水５ｍｌを加えて沸騰水浴中で１０分間加熱してから、よく攪拌させて室温まで冷却した後に使用する。
【００６８】
さらに、α−アミラーゼ溶液の調製は、市販品のα−アミラーゼ溶液（１００００ｕｎｉｔｓ／ｍｌ）から１０μｌをとり、０．２５Ｍリン酸バッファ（ｐＨ７．０）を加えて１０ｍｌにしてから、１ｍｌずつ小分けして−２０℃で凍結保存する。なお、使用する際にさらに必要な濃度まで０．２５Ｍリン酸バッファ（ｐＨ７．０）で希釈する。また、他の試薬の調製は、常法に準じて調製する。
【００６９】
次に、ヒト唾液由来のα−アミラーゼに対する阻害作用の測定方法について説明する。
【００７０】
まず、可溶性デンプン溶液５０μｌにサンプル液２５μｌを加えてから、３７℃で５分プレインキュベートをする。それぞれの処理に２０秒間隔でα−アミラーゼ溶液２５μｌを加え、３７℃で３０分反応させる。
【００７１】
また、酵素を添加する順と同じ順に２０秒間隔で０．１Ｍ塩酸１ｍｌを加えて反応を止める。そして、これら反応液２００μｌをとる。さらに、これら反応液に０．０１Ｍヨウ素溶液２ｍｌを加えてから、よく攪拌させて１時間静置する。この後、これら反応液を６６０ｎｍで吸光度を測定する。さらに、コントロール群も上述と同じ手順で調製してから６６０ｎｍで吸光度を測定する。
【００７２】
なお、酵素阻害率はコントロールとの比較で算出する。算出方法としては、酵素阻害率（％）＝〔（Ｃ−Ｂ）／（Ａ−Ｂ）〕×１００、Ａ：デンプン溶液＋バッファ、Ｂ：デンプン溶液＋酵素溶液＋バッファ、Ｃ：デンプン溶液＋酵素溶液＋サンプル溶液とした。
【００７３】
結果として、各条件で測定したα−アミラーゼ活性の阻害率は図１ないし図６に示すように、３種の反応系でマンジフェリンとエルカンプーレエキスとがともに酵素阻害活性があることが示唆された。持に、高濃度サンプルの条件下で明らかな阻害活性があった。しかしながら、酵素濃度１ｕｎｉｔ／ｍｌの場合では、基質濃度２ｍｇ／ｍｌと５ｍｇ／ｍｌとがともに加水分解の程度が８０％以上９０％以下に達してしまい高すぎて、全体で比較的に低い阻害率を示した。なお、図１ないし図６中の横軸値は、反応系中での最終濃度である。
【００７４】
これに対し、酵素濃度０．５ｕｎｉｔ／ｍｌおよび基質濃度５ｍｌ／ｍｌの反応系では、加水分解の程度が２０％以上５０％以下と低くて、全体で比較的に高い阻害率を示した。この結果、基質と酵素との濃度比をさらに修正すれば、より良い結果が得られると考えられる。
【００７５】
次いで、図７に示すように、エルカンプーレエキスの阻害率と添加濃度との間での相関関係は、酵素濃度０．５ｕｎｉｔ／ｍｌと基質濃度５ｍｇ／ｍｌとの反応系で、５０％の阻害活性をもつエルカンプーレエキスの添加濃度（ＩＣ５０）が１９．８μｇ／ｍｌであった。
【００７６】
さらに、図８に示すように、３反応系で得られたマンジフェリンとエルカンプーレエキスとの阻害率の間での相関関係は、異なった反応系より得られた阻害率の間で直線相関が成立することが示された。上述のように、基質と酵素との濃度比を修正した反応系であれば、よりよい回帰方程式を得られるかもしれない。よって、これら結果は、回帰方程式によりエルカンプーレエキスのマンジフェリン含量を推定する方法を確立する可能性が示された。
【００７７】
したがって、エルカンプーレエキスは、試験管内（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）でα−アミラーゼ活性を阻害する。この阻害活性強度（ＩＣ５０）は、酵素濃度０．５ｕｎｉｔ／ｍｌおよび基質濃度５ｍｇ／ｍｌの反応系で約２０μｇ／ｍｌであった。この結果、エルカンプーレエキスには抗糖尿病効果、抗肥満効果があることが確認された。
【００７８】
さらに、この阻害活性がマンジフェリンの阻害活性と高い相関関係を示すことより、エルカンプーレエキスのα−アミラーゼ阻害活性は主にマンジフェリンによるものと考えられる。また、エルカンプーレエキスの阻害活性とマンジフェリン量と間に高い相関関係があることより、エルカンプーレエキスのα−アミラーゼ阻害活性の測定によって、エルカンプーレエキスに含まれるマンジフェリン含量を推定でき、エルカンプーレエキスの品質を評価する方法を確立することが可能である。
【００７９】
（実験例４）
次に、エルカンプーレによる糖尿病に対する有効作用評価の実験について説明する。
【００８０】
ラット腸管より得たα−グルコシダーゼ（α−Ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ）画分を使用し、エルカンプーレエキスパウダのα−グルコシダーゼ阻害作用について検討した。
【００８１】
具体的には、まず、粗α−グルコシダーゼ画分の分離として、３００ｇ以上４００ｇ以下の雄のウイスターラットをエーテル麻酔にて安楽死させる。次いで、このラットの空腸部をトライツ靭帯から下方へ２０ｃｍ以上２５ｃｍ以下摘出し、氷冷下で３ｃｍ位の断片に細切する。この後、各断片を切開し、氷冷生理食塩水にて十分に洗浄してから、粘膜部分をスライドガラスにてゆっくりとそぎ取る。さらに、得られた粘膜部分を氷冷した５０ｍＭマンニトール（Ｍａｎｎｉｔｏｌ）含有２ｍＭトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ７．１）に懸濁させて、氷冷下で低速にてホモゲナイズする。また、最終濃度が１０ｍＭとなるように、５０倍に希釈した０．５Ｍ塩化カルシウムを加えて、氷冷下で１５分間放置する。
【００８２】
この後、４℃にて５５００ｒｐｍ（３０００ｇ）、１５分間低速遠心分離し、さらに、この低速遠心分離した上清を４℃にて１６４００ｒｐｍ（２７０００ｇ）、３０分間高速遠心分離する。さらに、この高速遠心分離後の刷子縁膜画分の沈殿を、０．１Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）に懸濁させる。このとき、０．１Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）は、ラット１匹あたり得られる刷子縁膜画分の沈殿に対し５００μｌを用いる。そして、上記懸濁液５μｌを蒸留水にて１００μｌとし、このうちの４０μｌを使用して、タンパク量を測定した結果、タンパク量が４ｍｇ／ｍｌ以上６ｍｇ／ｍｌ以下となる。なお、上記懸濁液は、０．１Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）にて１０倍に希釈してから−４０℃にて使用時まで凍結保存する。
【００８３】
次いで、α−グルコシダーゼ阻害活性測定としては、まず、０．１Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）にて適宜希釈したエルカンプーレエキス試料１０μｌに、７４ｍＭスクロースまたはマルトース２０μｌを加えてから、３７℃で３分間プレインキュベートする。次いで、上記方法により得られた、粗α−グルコシダーゼ画分溶液を０．１Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）にて１０倍に希釈した溶液１０μｌを加え、混合液を３７℃で３０分間インキュベートする。
【００８４】
さらに、これらインキュベートされた反応液に蒸留水１６０μｌを添加して最終的に２００μｌとした後、これら反応液を攪拌してから、沸騰水浴中に２分間浸漬させる。この後、これら反応液を素早く冷却した後、これら反応液の一部（４０μｌ）を取り、グルコース　ＣＩＩ−テストワコー（和光純薬工業株式会社製）にて生成したグルコースを定量する。ここで、阻害０％としての対照は、試料として０．１Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）２５μｌを用いる。
【００８５】
次いで、マンジフェリンでのα−グルコシダーゼ阻害活性測定としては、１．２５ｍＭマンジフェリン［Ｘａｎｔｈｏｎｅ　Ｃ−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ（ＳｉｇｍａＭ３５４７）２．１１２ｍｇを５０％−ＭｅＯＨ４ｍｌに溶解させた］を０．１Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）にて希釈して、１ｍＭ，０．５ｍＭ，０．２５ｍＭ，０．１２５ｍＭ，０．０６３ｍＭ溶液を作成して、それぞれを試料とする。そして、これらそれぞれの試料１０μｌに７４ｍＭスクロースまたはマルトース２０μｌを加えてから、３７℃で３分間プレインキュベートする。
【００８６】
次いで、上記方法により得られた、粗α−グルコシダーゼ画分溶液を０．１Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）にて１０倍に希釈した溶液１０μｌを加え、混合液を３７℃で３０分間インキュベートする。この後、これらインキュベートされた反応液に蒸留水１６０μｌを添加して最終的に２００μｌとした後、これら反応液を攪拌してから、沸騰水浴中に２分間浸漬させる。さらに、これら反応液を素早く冷却した後、これら反応液の一部（４０μｌ）を取り、グルコース　ＣＩＩ−テストワコー（和光純薬工業株式会社製）にて生成したグルコースを定量する。
【００８７】
以上の結果、２００倍以上３００倍以下に希釈したエルカンプーレエキスの添加によりα−グルコシダーゼ活性の５０％阻害作用（ＩＣ５０）を有することが明らかになった。
【００８８】
一方、図９に示すように、マンジフェリンのＩＣ５０を測定すると０．１ｍｇ／ｍｌ以上０．１５ｍｇ／ｍｌ以下であった。さらに、現在抗糖尿病剤として使用されているアカルボーズ（Ａｃａｒｂｏｓｅ；バイエル社製）のＩＣ５０を同様に測定したところ、０．１２μｇ／ｍｌ以上０．１５μｇ／ｍｌであった。
【００８９】
また、エルカンプーレエキスには、その他のキサントン誘導体としてベリディフォリン（Ｂｅｌｌｉｄｉｆｏｌｉｎ）が含まれていることが知られている。このベリディフォリン含量が、キサントン誘導体の中で最も含量が多い。このベリディフォリンに関しては、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ：Ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ）誘導糖尿病ラットにおいて、血糖値低下作用があることが認められている。このように、エルカンプーレエキスには、糖尿病（血糖値）改善に作用することが知られているキサントン誘導体が豊富に含有されており、抗糖尿病作用を発揮することが十分期待できる。
【００９０】
（製剤例１）
実験例１で得たエルカンプーレ・エキスパウダの粉末１ｇに柑橘フレーバ０．０１ｇと馬鈴薯澱粉１０ｇとを混合し、常法により錠剤（食品）を調製した。
【００９１】
（製剤例２）
実験例１で得たエルカンプーレ・エキスパウダの粉末０．５ｇに、精製白糖１０ｇと、柑橘フレーバ０．０５ｇとを加えた組成のものに、水を加えて全量１２０ｍｌとし、プラスチックボトル詰めとして飲料製品（ドリンク剤）を調製した。
【００９２】
【発明の効果】
請求項１記載のエルカンプーレを含有した機能性食品によれば、エルカンプーレを含有した機能性食品を摂取することにより、生活習慣病の予防および改善が期待できる。
【００９３】
請求項２記載のエルカンプーレを含有した機能性食品によれば、請求項１記載のエルカンプーレを含有した機能性食品の効果に加え、エルカンプーレを含有した機能性食品の摂取により、血圧上昇の抑制を期待できる。
【００９４】
請求項３記載のエルカンプーレを含有した機能性食品によれば、請求項１記載のエルカンプーレを含有した機能性食品の効果に加え、エルカンプーレを含有した食品の摂取により、悪玉コレステロール抑制作用と善玉コレステロール上昇作用とを期待できる。
【００９５】
請求項４記載のエルカンプーレを含有した機能性食品によれば、請求項１記載のエルカンプーレを含有した機能性食品の効果に加え、エルカンプーレを含有した機能性食品の摂取により、抗糖尿病効果を期待できる。
【００９６】
請求項５記載のエルカンプーレを含有した機能性食品によれば、請求項１記載のエルカンプーレを含有した機能性食品の効果に加え、エルカンプーレを含有した機能性食品の摂取により、抗肥満効果を期待できる。
【００９７】
請求項６記載のエルカンプーレを含有した機能性食品によれば、請求項１ないし５いずれか記載のエルカンプーレを含有した機能性食品の効果に加え、エルカンプーレのアルコール抽出物を含有した機能性食品の摂取により、エルカンプーレを含有した食品をより効率良く摂取できる。
【００９８】
請求項７記載のエルカンプーレを含有した機能性食品によれば、請求項１ないし６いずれか記載のエルカンプーレを含有した機能性食品の効果に加え、６０％以上８０％以下の含水エタノールを含んだエルカンプーレのアルコール抽出物を含有させることにより、エルカンプーレを含有した食品をより効率良く摂取できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】エルカンプーレを含有した機能性食品におけるエルカンプーレエキス（基質２ｍｇ／ｍｌ）によるα−アミラーゼ（１ｕｎｉｔ／ｍｌ）に対する阻害活性を示すグラフである。
【図２】マンジフェリン（基質２ｍｇ／ｍｌ）によるα−アミラーゼ（１ｕｎｉｔ／ｍｌ）に対する阻害活性を示すグラフである。
【図３】同上エルカンプーレエキス（基質５ｍｇ／ｍｌ）によるα−アミラーゼ（１ｕｎｉｔ／ｍｌ）に対する阻害活性を示すグラフである。
【図４】マンジフェリン（基質５ｍｇ／ｍｌ）によるα−アミラーゼ（１ｕｎｉｔ／ｍｌ）に対する阻害活性を示すグラフである。
【図５】同上エルカンプーレエキス（基質５ｍｇ／ｍｌ）によるα−アミラーゼ（０．５ｕｎｉｔ／ｍｌ）に対する阻害活性を示すグラフである。
【図６】マンジフェリン（基質５ｍｇ／ｍｌ）によるα−アミラーゼ（０．５ｕｎｉｔ／ｍｌ）に対する阻害活性を示すグラフである。
【図７】同上エルカンプーレエキスが５０％酵素活性を阻害する際の濃度を示すグラフである。
【図８】同上エルカンプーレエキスとマンジフェリンの阻害活性の間での相関関係を示すグラフである。
【図９】マンジフェリン（基質２５ｍｇ／ｍｌ）によるα−グルコシダーゼに対する阻害活性を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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