(57)【要約】【課題】定量性のあるシワの評価法提供する。【解決手段】動物に生じたシワの評価法であって、シワの生じた部位の像を二次元化し、該二次元化像より、シワの部分を抽出し、シワ以外の部分の像を不可視化し、シワ部分の形状を物理量に変換し、個体ごとの該物理量を比較する。該二次元化手段としては、写真撮影などが好ましく例示できる。シワの部分を抽出し、シワ以外の部分の像を不可視化し、シワ部分の形状を物理量に変換する手段としては、写真上に、透明の及び／又は半透明のシートを置き、該透明の及び／又は半透明のシート上にシワの部分を写し取り、写し取った線分の長さを計測する方法が好ましく例示できる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物に生じたシワの評価法であって、シワの生じた部位の像を二次元化し、該二次元化像より、シワの部分を抽出し、シワ以外の部分の像を不可視化し、シワ部分の形状を物理量に変換し、個体ごとの該物理量を比較することを特徴とする、シワの評価法。
【請求項２】
シワの生じた部位の像を二次元化する手段が、シワの生じた部分からレプリカ標本を作製し、これを写真に撮すことであることを特徴とする請求項１に記載のシワの評価法。
【請求項３】
二次元化像より、シワの部分を抽出し、シワ以外の部分の像を不可視化し、シワ部分の形状を物理量に変換する手段が、請求項２に記載のシワの生じた部分のレプリカ像の写真上に、透明の及び／又は半透明のシートを置き、該透明の及び／又は半透明のシート上にシワの部分を写し取り、写し取った線分の長さを計測する方法であることを特徴とする、請求項２に記載のシワの評価法。
【請求項４】
動物に生じたシワの評価法であって、次に示すステップに従って為されることを特徴とする、請求項１〜３何れか１項に記載のシワの評価法。
１）シワの生じた部位のレプリカ標本を作成するステップ。
２）前記レプリカ標本の写真を撮影するステップ。
３）前記レプリカ標本の写真の上に、透明の及び／又は半透明のシートを置き、該透明の及び／又は半透明のシート上にシワの部分を写し取るステップ。
４）透明の及び／又は半透明のシート上に写し取られた線分の長さを計測するステップ。５）動物ごとの線分の長さの代表値を算出するステップ。
６）群ごとに各動物の線分の長さの代表値を比較するステップ。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、シワの評価法に関し、更に詳細には、定量性に優れるシワの評価法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
化粧料などの皮膚外用剤の分野に於いて、紫外線の累積照射や老化によって生じるシワを抑制或いは改善することは積年の課題となっている大テーマである。シワ生成抑制の為に多くの素材が開発されている。しかしながら、シワ生成抑制素材に於いて、決定的なもの、実用上で効果を奏するものは殆ど無いのが現状である。この大きな原因としては、的確なシワ形成モデルが存在していないことと、生成したシワを定量的に評価する手段が無かったことが挙げられる。特に定量的評価手段の欠如は、素材間の力価の適切な比較を阻害する原因ともなっている為、美白物質などのようにスクリーニング系の構築が出来ない原因ともなっている。即ち、定量性のあるシワの評価法の開発が望まれていたと言える。
【０００３】
これまでに開発されてきたシワの評価法としては、シワの状態を肉眼で観察し、レプリカを作成し、これに斜め４５度より光を照射し、出来た影の面積よりシワを鑑別、評価する方法（特開平９−３８０４５）、スコアを付して評価する方法（再表９８／４００４５）、取り込んだ画像をその輝度分布より自動解析する方法（特開２００２−２６３０８４）、画像を分光学的に分析しシワを抽出する方法（特開平１０−３３９７６７０）、皮膚表面の三次元計測データをフーリエ変換して、そのパワースペクトル分析からシワの深度を計測する方法などが存在するが、何れも細かな皮溝皮丘の溝までもシワとして捉える為に、実際の状態よりもシワを重篤度のものと評価してしまう為、実用化されているものはスコア判定する技術のみであると言える。スコア判定に於いては、その精密な判定には技能を必要とするし、連続的でない、変域が狭い等のスコアそのものの性質の為、統計学的に処理することはなかなか困難であると言える。即ち、χ二乗検定は出来ても、Ｆ検定やｔ検定はしにくいという欠点があり、この為、定量的な比較には向いているとは言い難かった。
【０００４】
一方、シワの評価に於いて、動物に生じたシワの評価法であって、シワの生じた部位の像を二次元化し、該二次元化像より、シワの部分を抽出し、シワ以外の部分の像を不可視化し、シワ部分の形状を物理量に変換し、個体ごとの該物理量を比較する方法は、全く知られていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、この様な状況下為されたものであり、定量性のあるシワの評価法提供することを課題とする。
【０００６】
【課題の解決手段】
この様な状況に鑑みて、本発明者らは、定量性のあるシワの評価法を求めて、鋭意研究努力を重ねた結果、動物に生じたシワの評価法であって、シワの生じた部位の像を二次元化し、該二次元化像より、シワの部分を抽出し、シワ以外の部分の像を不可視化し、シワ部分の形状を物理量に変換し、個体ごとの該物理量を比較することにより、定量的なシワの評価が為しうることを見出し、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は、以下に示す技術に関するものである。
（１）動物に生じたシワの評価法であって、シワの生じた部位の像を二次元化し、該二次元化像より、シワの部分を抽出し、シワ以外の部分の像を不可視化し、シワ部分の形状を物理量に変換し、個体ごとの該物理量を比較することを特徴とする、シワの評価法。
（２）シワの生じた部位の像を二次元化する手段が、シワの生じた部分からレプリカ標本を作製し、これを写真に撮すことであることを特徴とする（１）に記載のシワの評価法。
（３）二次元化像より、シワの部分を抽出し、シワ以外の部分の像を不可視化し、シワ部分の形状を物理量に変換する手段が、請求項２に記載のシワの生じた部分のレプリカ像の写真上に、透明の及び／又は半透明のシートを置き、該透明の及び／又は半透明のシート上にシワの部分を写し取り、写し取った線分の長さを計測する方法であることを特徴とする、請求項２に記載のシワの評価法。
（４）動物に生じたシワの評価法であって、次に示すステップに従って為されることを特徴とする、（１）〜（３）何れか１項に記載のシワの評価法。
１）シワの生じた部位のレプリカ標本を作成するステップ。
２）前記レプリカ標本の写真を撮影するステップ。
３）前記レプリカ標本の写真の上に、透明の及び／又は半透明のシートを置き、該透明の及び／又は半透明のシート上にシワの部分を写し取るステップ。
４）透明の及び／又は半透明のシート上に写し取られた線分の長さを計測するステップ。５）動物ごとの線分の長さの代表値を算出するステップ。
６）群ごとに各動物の線分の長さの代表値を比較するステップ。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明のシワの評価法は、動物に生じたシワの評価法であって、シワの生じた部位の像を二次元化し、該二次元化像より、シワの部分を抽出し、シワ以外の部分の像を不可視化し、シワ部分の形状を物理量に変換し、個体ごとの該物理量を比較することを特徴とする。ここで、シワの実態の評価においては、動物としては、人間、マウス、ラット、兎、犬、豚などのほ乳類が好適に適用され、又、シワ改善などの作用を調べるシワ評価に於いては、マウス、ラット、兎、犬、豚などの人間を除くほ乳類が好適に適用される。
【０００８】
シワを生じた部位の像の二次元化は、立体を平面に変換する為に使用されている一般的な方法が適用することが出来、例えば、シワの生じた部位の像を二次元化する手段が、シワの生じた部分からレプリカ標本を作製し、これを写真等に撮す方法、シワの部分をそのまま写真などに撮す方法、三次元計測を行い三次元座標のマトリックス化し、これより投影像を作成する方法などが例示できる。これらの中で特に好ましいものは、シワの生じた部位の像を二次元化する手段が、シワの生じた部分からレプリカ標本を作製し、これを写真に撮す方法である。これは、皮膚そのままの写真では、肌色のムラが存在する為、肌色によるノイズが生じやすい為最適とは言えず、三次元計測の投影では、装置、操作が大がかりになり処理速度に何があり、それ故最適とは言えない為である。レプリカ標本では、肌色の色むらの要素を除くことが出来、装置、操作ともに大がかりではなく、処理時間も短くてすむ利点がある。
【０００９】
本発明のシワの評価法に於ける、シワの部分を抽出し、シワ以外の部分の像を不可視化する手段であるが、例えば、二次元化した像のシワの部分にマークを施し、その他の部分を消すような処置、シワの部分のみを無地の平面に転写する方法などが例示できる。前者としては、シワの部分に、その部分の輝点の極端に輝度を高くするか、極端に低くするか等のシワを表すマークをし、その輝点の性質を有さない輝点の輝度を平坦にする方法などが上げられ、後者としては、マークした輝点の位置の二次元座標のマトリックスを、他の平面上に再現する方法や、もっと簡便には、二次元化した像に、透明の及び／又は半透明のシートを置き、該透明の及び／又は半透明のシート上にシワの部分を写し取る方法などが例示できる。前記透明の及び／又は半透明のシートとしては、ポリエチレンテレフタレートフィルム、ポリエステルフィルム、ポリビニリデンフィルム、ポリアルキレンフィルムなどの等の樹脂フィルム、硫酸処理紙、パラフィン含浸紙、シリコーンコート紙等の透明度の高い紙類などが好適に例示できる。又、転写方法としては、印刷或いはバッチ作業で手で、フェルトペンなどを用いて写し取ることなどが例示できる。特に好ましい形態は、手軽さと、その効果から、二次元化した像に、透明の及び／又は半透明のシートを置き、該透明の及び／又は半透明のシート上にシワの部分を、バッチ作業で写し取る方法である。
【００１０】
かくして、抽出されたシワのみの像は、その物理量を計測、算出し、それを以てそのシワの像の代表値とする。かかる物理量としては、シワの像の長さやシワの像の面積などが好適に例示でき、算出のし易さと、専門家が行った、シワの精密な肉眼判定とも良く一致する特性を有することから、シワの像の長さ（線分としての長さ）を用いることがより好ましい。各部位ごとの、或いは動物群ごとの全てのシワの長さを加算して長さの総和を算出し、別途算出したシワの像の総数で除すれば部位或いは動物群の平均のシワの長さを求めることが出来る。かかるシワの長さの総和、シワの像の総数、平均のシワの像の長さの何れもの値が、シワの特徴を表す指標として用いることが出来るが、光老化などの動物老化モデルを取り扱う場合の指標としては、平均のシワの像の長さを用いることが特に好ましい。
【００１１】
即ち、本発明のシワの評価法は、特に好ましい形態としては、次に示す工程ステップに従って行うことが特に好ましい。
１）シワの生じた部位のレプリカ標本を作成するステップ。
２）前記レプリカ標本の写真を撮影するステップ。
３）前記レプリカ標本の写真の上に、透明の及び／又は半透明のシートを置き、該透明の及び／又は半透明のシート上にシワの部分を写し取るステップ。
４）透明の及び／又は半透明のシート上に写し取られた線分の長さを計測するステップ。５）動物ごとの線分の長さの代表値を算出するステップ。
６）群ごとに各動物の線分の長さの代表値を比較するステップ。
【００１２】
本発明のシワの評価法を応用して、光老化抑制剤の評価を行う場合は、例えば、次のような手順に従って行えばよい。
１）各動物の使用部位のシワの状況を、部位のレプリカを取り、本発明のシワの評価方法に従って、動物ごとのシワの像の長さの平均値を求める。
２）群全体のシワの像の平均値がほぼ等しくなり、且つ、その分散も等しくなるように群を４つに分ける。
３）１群は、光照射、検体投与群、１群は光非照射、検体投与群、１群は光照射、検体非投与群、残る１群は光非照射、検体非投与群とし、光照射及び検体投与を開始する。（週５回連続１日１回投与、３〜４０週）この時、既に充分なデータが存在すれば、光非照射、検体投与群と光非照射、検体非投与群は設定しなくても良い。
４）投与終了後、レプリカを取り、レプリカ像を写真に撮し、これに透明シートを重ねて、油性フェルトペンでシワを写し取り、シワの長さを計測し、群ごとのシワの長さの平均値を算出する。これによって群間比較を行う。
４）の作業は、非侵襲的な作業なので、３）の作業の間にも行うことが出来る。この様なモニタリングを入れることにより、実験条件の的確性、光老化抑制剤の作用の特徴などを把握することも出来る。この様な、モニタリングは従来のスコア値による観察、判定では、段階数であり、指標の１単位が粗すぎるので行いづらかったが、本発明のシワの評価法では、連続数であり、精密なモニタリングが行え、これによって適正な実験条件で評価することが行える。
【００１３】
【実施例】
以下に、実施例を挙げて、本発明について更に詳細に説明を加えるが、本発明が、かかる実施例にのみ限定されないことは言うまでもない。
【００１４】
＜実施例１＞
ヘアレスマウスを用いて、これまで光によるシワ生成を抑制する作用が知られている、レチノイン酸を用いて、この物質の光老化抑制作用（光によるシワ生成の抑制作用）を調べた。即ち、１群５匹のヘアレスマウスを用い、光照射検体投与群と光照射検体非投与群の２群を設定した。光照射は、背中全面に８０ｍＪ／ｃｍ２の紫外線（ＳＥランプ：ＢＬＢランプ＝１：１）を３０分照射し、検体投与群は、紫外線照射後にレチノイン酸０．０５％エタノール溶液を５０μｌ背部全面に塗布し、検体非投与群はエタノールのみを同様に塗布した。かかる作業は週５日間連続で１日１回行った。この作業を８週間続け、シワの状態を、従来のスコア法と４５度光照射造影法と本発明のシワの評価法で観察した。スコア法では、シワなしをスコア１とし、最大のシワをスコア６とし、専門家がおこなった。又、４５度光照射造影法は特開平９−３８０４５の記載に準じて行った。本発明のシワ評価法は、４ｃｍ２の範囲のレプリカを写真に撮り、これに透明なＰＥＴシートをかぶせて、油性フェルトペンでシワ部分を写し取り、この長さを指標として評価した。スコア法の結果を表１に、造影法の結果を表２に、本発明の評価法の結果を表３に示す。これより、本発明の評価法に於いては、レチノイン酸とコントロールの差が如実に現れていることがわかる。更に、スコア法と造影法の相関関係を図１に、スコア法と本発明の評価法の相関関係を図２に示す。これより、スコア法と造影法はあまり相関性が無く、スコア法と本発明の評価法には優れた相関関係が存在するのがわかる。更に、スコア法の変域が１〜６であるのに対し、本発明の評価法では０〜２５０ｍｍであり、本発明の評価法によれば、これまでのスコア法のデータを生かしつつも、更に精密な観察ができることがわかる。尚、＊の判定マークは１％の危険率で有意差ありを、＊＊の判定マークは０．１％の危険率で有意差ありを示す。
【００１５】
【表１】
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【００１６】
【表２】
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【００１７】
【表３】
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【００１８】
【発明の効果】
本発明によれば、定量性のあるシワの評価法提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１のスコア法と造影法の相関関係を示す図である。
【図２】実施例１のスコア法と本発明の評価法の相関関係を示す図である。
【図１】
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【図２】
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