(57)【要約】【課題】クロマトグラフィーに於いて、取扱う試料は微少化し、更に極微量化して、試料の前処理、即ち沈殿物の遠心分離機による処理やフィルターによる濾過作業の負担の増大を軽減し、容易に極微量試料の取り扱いが簡単な機構で実施できる。【解決手段】キャピラリーカラム、マイクロシリンジ等の細管が挿通可能で、且つ弾性を有するチューブを用い、該チューブの一端又は内部に孔径０．１〜５０μｍのフィルターを挿通定置させ、カップフィルター、ミッドフィルターのチューブフィルターを構成する。【選択図】    図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
キャピラリーカラム、マイクロシリンジ等の細管が挿通可能であって、該細管に適合する外径３ｍｍ以下の適宜長のチューブにフィルターを固定又は形成したことを特徴とするクロマトグラフィー用チューブフィルター。
【請求項２】
フィルターの孔径は０．１〜５０μｍであることを特徴とする請求項１に記載のクロマトグラフィー用チューブフィルター。
【請求項３】
金属、ガラス、パットフィルター等の硬質フィルターを弾性を有する合成樹脂製チューブに嵌合したことを特徴とする請求項１又は請求項２に記載のクロマトグラフィー用チューブフィルター。
【請求項４】
金属メッシュスクリーンを弾性を有する合成樹脂製チューブに嵌合固定させたことを特徴とする請求項１又は請求項２に記載のクロマトグラフィー用チューブフィルター。
【請求項５】
モノリス構造のフューズドシリカチューブを、弾性を有する合成樹脂製チューブに差込み、ミッドフィルターとしたことを特徴とする請求項１又は請求項２に記載のクロマトグラフィー用チューブフィルター。
【請求項６】
チューブ端部にゾルゲル合成でフィルターを形成させたことを特徴とする請求項１又は請求項２に記載のクロマトグラフィー用チューブフィルター。
【請求項７】
外径３ｍｍ以下の適宜のチューブ一端にフィルターを固定したチューブフィルターを、カラム端に嵌合させたことを特徴とするクロマトグラフィー用カラム。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、クロマトグラフィー用チューブフィルターに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】クロマトグラフィーに於いて、試料の前処理として、試料中の沈殿物を除去するためには遠心分離機を用いて処理したり、各種フィルター等を用いて濾過することが行われている。
然し、液体試料の場合、これらに使用したビン、器具等に試料成分を含んだ液体が残るため、更なる液体による洗浄が必要となり、希釈されることになってしまう。
【０００３】
それらを解決するため、ＨＰＬＣではループ代りにモノリス構造キャピラリーを用いて更に濃縮したり、インチューブＳＰＥ（ｓｏｌｉｄ  ｐｈａｓｅ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ＝固相抽出  ）等を用いて濃縮して分析が行われている。（例えば特許文献１参照）
これらの方法は、濃縮率が高く、数百μＬの試料を用いるだけで、十分満足できる結果が得られる。
従来の技術に於いては、この数百μＬ程度の少量の試料を濾過する効率の良い方法がなく、濾過せずにモノリス構造キャピラリーやインチューブＳＰＥなどを用いた分析装置に導入するしか方法がない。しかし、モノリス構造キャピラリーやインチューブＳＰＥは、内径の細いキャピラリー管で構成されており、前処理で取り切れない細かい浮遊物や、取扱い過程で混入する浮遊物は、目詰まりの原因となる。
又、最近では、バイオ関連分析に於いては、数μＬ程度の極微量液体の取扱いの必要性が増加してきており、キャピラリーなどの細管を用いた分析が重要となってきている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】これらの極微量試料の取扱いは、試料の移し替えなどの従来のバッチ方式では試料ロスが多く、使用困難である。そのためオンラインでのシステムアップした装置が必要となり、装置は大掛りとなり、高額となる。
尚、実際には生体試料は、液体に溶解し難いので、各種システム、モノリス構造キャピラリー等を用いても細いチューブ内部での目詰まりは避けらない。その場合には、インチューブやモノリス構造キャピラリーの交換が必要となり、装置の組直しを要する等の問題が多い。
【０００５】
これらを解決できる装置乃至フィルターは存在せず、極微量成分を扱う場合にも遠心分離機などで浮遊物を取り除く面倒な作業が必要不可欠であった。
更に、最近フューズトシリカチューブに直接充填剤を詰めて分離カラムとして或いはガードカラムとして使用することが提案されている。
この際、高圧状態での使用の際には、充填剤が抜け落ちるため、高圧状態での使用には危険が伴っていた。
【０００６】
【特許文献１】特開平２００２−７９００１号公報
【０００７】
【課題を解決するための手段】そこで本発明者は、極微量の試料を取扱う際に、試料ロスがなく、大掛かりな装置は必要なく、極めて簡単な器具にて試料、就中液体試料を極めて簡単に濾過し、極少量の液体試料も殆ど手を加えることなく、試料として使用する状態にすることが可能なフィルターを提案せんとするもので、キャピラリーカラム、マイクロシリンジ等の細管の挿通可能であって、該細管に適合する外径３ｍｍ以下の適宜長のチューブにフィルターを固定又は形成したことを特徴とする。
【０００８】
【発明の実施の形態】以下、図に示す実施形態により、本発明を詳細に説明する。
１はチューブで、外径３ｍｍ以下の、テフロン（登録商標）、ピークなどの合成樹脂製でキャピラリーカラム２、シリンジ針３等の細管５を挿通可能で且つ大きな隙間なく適合できる径に形成している。該チューブ１は弾力性を有することが必要である。このチューブ１の内径は、キャピラリーカラム２、シリンジ針３等の細管を挿通可能且つ大きな隙間なく適合できるものであればよく、例えば、キャピラリーカラム２の外径が０．３７５ｍｍであれば、内径０．４ｍｍのように挿通自在に形成する。又、このチューブ１の長さは、その使用用途に応じ適宜選択できるが、通常の使用時、例えば濾過フィルターとしては液面から、好ましくは３０ｍｍ以上、上部に位置する程度が使用に便である。又、溶液フィルターとして、溶液中に入れる場合、その液の深さに対応して、又、シリンジ針３等に使用する場合等、例えばフェラル止めに適当な長さに選択できる。
【０００９】
４はフィルターで、ステンレス等の金属製、ガラス、石英、パット（ピークテフロン）モノリス構造等の適度の硬度を有する材質で、２０Ｍｐａ程度の耐圧性を有するものがよい。
このフィルター４のメッシュ乃至スルポア径は使用目的に応じて選択できるが、０．１μｍ以上５０μｍ位がよい。
又、このフィルター４の厚さは用途に応じ選択できるが、この厚さの変化に応じて溶液の通過量を選定できる。
【００１０】
上記フィルター４をチューブ１の一端又は内部に固定させる。この一端の固定はパイプの先端を加熱し、温度により拡開し、フィルター４を挿入し、チューブ１の先端の温度低下により凝縮してフィルター４を締付固定させる。或いは又、フィルター４をチューブ１内に挿通定置させることもできる。
又、チューブ１端を切り口の角を面取りしたり、段を付けることにより、フィルターを挿入し易く出来る。或いは、チューブ１端を加熱溶融させ、フィルターを挿入した後、チューブの冷却により固着させ融着する方法もとられる。この場合はフィルター４を金属、就中ステンレスのメッシュスクリーンを用いることは推奨される。チューブ１の端部にフィルター４を固定した型をカップフィルターとし、チューブ１の内部にフィルター４を挿通した型をミッドフィルターとし、これらを総称してチューブフィルターと云う。
【００１１】
【実施例】
〔実施例１〕  内径１．５ｍｍ、外径３ｍｍ、長さ２０ｃｍのテフロン（登録商標）製チューブ１の一端を３００℃で加熱して拡開しながら、該拡開部に外径１．５８ｍｍ、孔径５μｍ、厚み１ｍｍのステンレス焼結フィルター４を挿入し、融着とその後の冷却により固定し、チューブフィルターとしてのカップフィルターＡ（以下同じ）とした。（図１）
〔実施例２〕  内径１．５ｍｍ、外径３ｍｍ、長さ２０ｃｍのテフロン（登録商標）製チューブ１の一端を３００℃で加熱して拡開しながら、該拡開部に外径１．５８ｍｍ、孔径５μｍ、厚み２ｍｍのガラス製フィルター４を挿入し、融着とその後の冷却により固定し、カップフィルターＢとした。（図１）
〔実施例３〕  内径１．５ｍｍ、外径３ｍｍ、長さ２０ｃｍのテフロン（登録商標）製チューブ１の一端を２００℃で加熱して拡開しながら、該拡開部に外径１．５８ｍｍ、孔径５μｍ、厚み２ｍｍのパットフィルター４を挿入し、融着とその後の冷却により固定し、カップフィルターＣとした。（図１）
〔実施例４〕  内径０．３５ｍｍ、外径１．５８ｍｍ、長さ３ｃｍのピーク製チューブ１の一端を３００℃で加熱して拡開しながら、該拡開部に外径０．４０ｍｍ、孔径２μｍのステンレス製メッシュフィルター４を挿入し、融着とその後の冷却により固定し、カップフィルターＤとした。（図２）
〔実施例５〕  内径０．３５ｍｍ、外径１．５８ｍｍ、長さ３ｃｍのピーク製チューブ１の一端を３００℃で加熱して拡開しながら、該拡開部に外径０．３７ｍｍ、厚み１ｍｍのステンレス焼結フィルター４を挿入し、融着とその後の冷却により固定し、カップフィルターＥとした。（図１）
〔実施例６〕  内径０．３５ｍｍ、外径１．５８ｍｍ、長さ３ｃｍのテフロン（登録商標）製チューブ１の一端を拡開しながら、該拡開部に外径０．３７５ｍｍ、スルポア径１μｍ、長さ５ｍｍのモノリス構造のハイブリッドシリカゲルフューズドシリカチューブ４１をテフロン（登録商標）製チューブ１を６０℃で加熱しながら差込みミッドフィルターＦとした。（図３）
〔実施例７〕  内径０．６７ｍｍ、外径１．５８ｍｍ、長さ３ｃｍのピーク製チューブ１の一端を２００℃で加熱して拡開しながら、該拡開部に外径０．７ｍｍ、孔径５μｍ、厚み２ｍｍのパットフィルター４を挿入し、融着とその後の冷却により固定し、カップフィルターＧとした。（図１）
【００１２】
〔実施例８〕  内径０．０６３５ｍｍ、外径０．３７ｍｍ、長さ５１ｃｍのピーク製チューブ１の両端２．５ｍｍを、０．０１ＷＴ％白金触媒を添加した２０％ポリシラザンキシレン溶液に漬け、空気中で２時間加熱し、両端２．５ｍｍ部分にアモルファスシリカ膜を形成させた。
２０％テトラメトシキシラン、１０％メチルトリメトキシシラン、５％ポリエチレングリコール、０．１Ｎ酢酸溶液をパイプに満たし、シリコンゴムで封管し、８０℃で１２時間過熱し、１次孔を持つモノリス構造のハイブリッドゾルを内部に作成した。
ポリエチレングリコール添加量で１次孔を０．３〜５０μｍまでコントロールできる。
ポリエチレングリコールなどの緩衝ポリマーを添加しないアルコキシランだけにより作成したフリットでは、モノリス構造にならず、十分な貫通孔がなく、液圧が高くなった。
中央部分で切断し、結合された両端部分より水を０．５Ｍｐａで流し、両端部分の内面に結合した２．５ｍｍのゾル部分を残し、内表面と結合していない未反応ゾル及び及び未反応試薬を抜いた。
次に、１５０℃で加熱し、完全にゲル化したモノリス構造を持つハイブリッドシリカゲルフィルター４２を一端に作成した長さ２５．５ｃｍのカップフィルターＨとした。（図４）
アモルファスシリカを表面に作成せず、同様の方法でゲルを作成したものは、表面との結合が生じず、０．５Ｍｐａでの洗浄工程でゾルが全て抜けてしまった。
フィルター作成には、アモルファスシリカ膜を作成後のゲル化が重要と云うことになる。
【００１３】
〔実施例９〕  又、溶液フィルターとしての使用について図５，図６により説明する。
ポンプ８に連結したキャピラリーカラム等の細管５により、容器６中の溶液、例えば試料溶液７を吸引する際に、細管５先端に本願チューブフィルターを用い、細管５先端に挿通して本願カップフィルターＥを嵌合した状態で容器６中の試料溶液７に投入して、ポンプ８を作動させる。この際、カップフィルターＥを細管５に嵌合しただけで、フェラル等の固定具或いは接着等の固定をしないでもよい。
然るとき、フィルター４を介して試料溶液７が吸入されるが、試料溶液７中の浮遊物等はフィルター４により阻止され、濾過された試料溶液７のみが吸引され、細管５、ポンプ８を経て所望のインジェクター９１、本カラム９２、検出器９３等よりなる分析機器９等へ送られる。
【００１４】
〔実施例１０〕  上記の実施例について具体例を説明する。
ＨＰＬＣ用送液ポンプＭＰ７１１の溶離液入り口に外径１／１６ｉｎ、内径０．２５ｍｍ、長さ１ｍのテフロン（登録商標）細管５を接続し、ポンプ８後に、インジェクター９１（内部ループ方式が推奨される。）を経由し、内径０．３ｍｍ×１５０ｍｍイナートシル（登録商標）ＷＰ３００Ｃ８充填カラム９２を接続し、更にＵＶ検出器９３を接続し、水道水を濾過せず４μＬ／ｍｉｎの一定流速で流した。
当初、圧力は６Ｍｐａであったが、約３０分後には、カラム９２の圧力が徐々に上がり始め、１時間後には推奨使用圧力の２０Ｍｐａを超え、カラム９２が破損した。
同様に、入り口テフロン（登録商標）細管５に本願カップフィルターＡを被せて流したところ、２時間後でもカラム９２圧力の上がりはなく、圧力の上昇はなかった。
カップフィルターＢ，Ｃでも同じ結果となり、溶液濾過に有効であることが実証された。
カップフィルターＣに於いては、約６時間後に気泡が入り込み、ポンプの下降が見られた。
同様に作成した、新しいカップフィルターＣに交換したところ、気泡の発生はなくなり、汎用のポンプ溶離液フィルターと同様に使用できることが判った。
【００１５】
従来から市販されている汎用のステンレス容液フィルターと本発明カップフィルタＡで、溶離液を０．１％アセトン水溶液に変えてから、実際の検出器のＵＶ吸収が変化する時間を調べた。
従来のフィルターでは、数１００μＬの内部容量を持っているため、流し始めから４０分後にベースがゆっくりと上昇し、１４０分後に一定のベースとなった。（図７）
本発明のカップフィルターＡでは、パイプ先端にフィルター４が濾過面でしっかりと接触するので、十分な濾過機能を保ちながら通液内部容量は殆んどなくなる。パイプ１内部容量５０μＬ分経過後の１０分後に急激にベースが上がり、４０分後に安定した（図８）。フィルター４部分の容積が従来のフィルターより小さく、すぐに置換がなされた。
以上のように、キャピラリーＬＣにおける溶液フィルターとして有効であった。
【００１６】
図９，図１０，図１１により、微量液体の送液の際に、スプリット量の制御を行う場合を説明する。
１２は三方ジョイントであって、Ｔ字状に形成され、流入部１３は流入パイプ１４の挿入口１５と流入パイプ１４を締付固定するオシネ１６とフェラル１７を備えている。流入パイプ１４を挿入口１５の隔壁に押付け固定することができるようになっている。内部空間１８を挟んで対応位置に同型の流出部１９を設け、流出パイプ２０を挿入口２１の隔壁まで挿入し、オシネ２２とフェラル２３により固定してある。
【００１７】
三方ジョイント１２の流入部１３と流出部１９の側壁に流出部２４を流出部１９と同型に形成してある。即ち、流出部２４は流出パイプ２５を挿入口２６を隔壁まで挿通し、オシネ等２７とフェラル２８により固定してある。
フェラル１７，２３，２８はテフロン（登録商標）、ダイフロン、ピークなどの樹脂製のものが繰り返し使用でき、よく使用される。又、オシネ１６，２２，２７とフェラル１７，２３，２８が各々１つになった手締めで使える一体型タイプもある。
【００１８】
而して、三方ジョイント１２を用いて、スプリットする場合、流入パイプ１４より流入部１３に流入された液体は、流出部１９、同２４の液体抵抗に応じて、スプリット量が制御されるのである。そこで、微量液体の送液に於けるスプリット比を調整するため、流出パイプ２５には内径の細かいカラムやパイプなどを取付けることになる。然し、内径の細かいカラムは、詰まり易いのが常であり、故障の原因となる。
【００１９】
そこで、この流出パイプ２５である内径の細いカラムやパイプなどの細管５端部にカップフィルターＥを被せて、フェラル２８とオシネ２７を用いて、流出部２４の挿入口２６に挿入固定できる。フェラル２８とオシネ２７が一体型の樹脂製のものでも良い。
然るとき、液抵抗のあるカラムや細いパイプなどの細管５を使用しても、浮遊物等はフィルター４にて止められ、流入することはなく、スプリット抵抗管として機能する。
然も、本願カップフィルターＥは、被せてあるため、オシネ２７を外すことにより着脱自在である。更に、フェラル２８はカップフィルターＥに締め込まれているだけであり、カップフィルターＥは抵抗管２５となるパイプやカラムなどの細管５から簡単に取外すことができ、交換が極めて容易である。詰まるのは、フィルター部分のみであり、簡単に取替えられ、抵抗管としてのカラム等はそのまま使用できる。
【００２０】
〔実施例１１〕  図１１の具体的使用例を以下に示す。
ＨＰＬＣ用送液ポンプＭＰ７１１の溶離液入り口に外径１／１６ｉｎ、内径０．２５ｍｍ、長さ１ｍのテフロン（登録商標）チューブ５を接続し、ポンプ８後にスプリッター用３方ジョイント１２を経由し、インジェクター９１（内部ループ方式が推奨される。）を経由し、内径０．３ｍｍ×１５０ｍｍのイナートシル（登録商標）ＷＰ３００Ｃ８充填カラム９２を接続し、水道水を濾過せず２０μＬ／ｍｉｎの一定流速で流した。
ウラシルを注入した結果、溶出時間は３．５分であった。
スプリッター１２には、抵抗管２５として内径０．０５ｍｍ、外径０．３７５ｍｍ、長さ５ｍのフューズドシリカキャピラリーカラムを取付けた。
当初、圧力は６．０Ｍｐａであったが、４０分後にカラム圧が急に上がり、推奨使用圧力の２０Ｍｐａを超え、カラム９２が破損した。
スプリッター１２側の抵抗管２５が溶離液の汚れによって詰まってしまったのが原因であった。新しいフューズドシリカキャピラリーカラムに交換したところ、５．８Ｍｐａとなり、溶出時間は３．９分となった。
異なる抵抗管を使用すると、２．９分となった。
結局、抵抗管の作成のバラつきが大きく保持に影響した。
【００２１】
本発明カップフィルターＥをスプリット流出口２４側に取付けたところ、同じように圧力上昇が生じた。然し、カップフィルターＥだけを替えて、同じ抵抗管２５を使用したところ、同じ圧力で同じ保持時間が得られた。
本発明カップフィルターＥを用いれば、抵抗管２５本体が詰まらず、何回でも使用でき、再現性のよいデータが得られることになった。
又、当然ながらインジェクター側の入り口に同じ本発明のカップフィルターを入れることにより、インジェクターや本カラムの詰まりを防止することも出来る。
【００２２】
次いで、前処理ロボットや注入用軽量シリンジなどのシリンジ針３及び細管５の使用について図１２、図１３により説明する。
注入用シリンジ針３及び細管５の先端に本願カップフィルターＧを嵌合して被覆状態とすると、樹脂製であるため、その弾性により前処理ロボットなどのシリンジ針に被せるだけで、充分シールされる。
そのため、前処理における濾過に十分に使用できる。
従来の減圧濾過や遠心分離などと異なり、シリンジ針３の先部分に濾過のためのフィルター４が接触することになり、試料ロスがなく、微量成分の濾過に適する（図１３）。
又、従来、減圧濾過では無理で、加圧濾過を必要とする不要物が多い試料に於いては、例えば、インジェクター９１のヘッドに固定する。この固定の際にはフェラル２９やオシネ３０等を用いて締付固定する。
この締付固定は、チューブ１が樹脂製で弾性があるため、フェラル２９等により確実に締付固定が出来る。
フェラル２９は、テフロン（登録商標）、ダイフロン、ピークなどの樹脂製のものが繰り返し使用でき、推奨される。
【００２３】
その後、プランジャー３１により試料溶液を圧入すると、試料溶液中の不純物は、フィルター４により濾過され、インジェクター９１のヘッドにシリンジ針３２より直接圧入され、インチューブキャピラリーやモノリス構造体等へのダメージとなる浮遊物、他の流入を防ぎ、或いは少なくすることが出来る（図１２）。
したがって、ＨＰＬＣに於いて、モノリスキャピラリー、インチューブＳＰＥを用いて試料溶液７を濃縮し、分析を行う場合のそれらに対する詰まりの原因を除去し、インチューブキャピラリーやモノリスキャピラリーの交換の必要性をなくし、或いは減少させることが出来る。
【００２４】
〔実施例１２〕  図６と同じシステムにより、容器６１を用い、細管５にカップフィルターＣを取付け、グラジエントモードにした。
試料として、タンパク質を消化したペプチド試料をそのまま４方バルブ用注入ポートを経由し、２５μＬマイクロシリンジ（７０２Ｎ）で１０μＬを連続分析した。
分析条件
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図１４にそのクロマトグラムを示す。
５２回注入後にはカラム圧力の上昇が見られ、５４回目に２０Ｍｐａを超え、カラムが使用できなくなった。
シリンジ針３２の先端に本願カップフィルターＧを被せ、バルブに直接接続し、同様に連続分析を行った。３０回後にカップフィルターＧが詰まり、液の注入が出来なくなったが、新しいカップフィルターＣに交換することで問題なく注入できた。
２０回毎にカップフィルターＧを交換することにより、そのような詰まりもなく連続分析が可能となり、５００回注入後でもカラム９２の圧力上昇はなかった。
従来分析に於いては、このような試料による詰まりを防ぐため、遠心分離やフィルター濾過を行うが、試料が少量しか得られないタンパク質成分では、ロスが生じ、試料の前処理が出来なかった。又、高価な分析カラムが劣化することを諦めて分析することもあった。
【００２５】
本発明のカップフィルターＧは、シリンジ針３に簡単に被せることが出来、更にインジェクター９１に直接、手締めタイプのジョイント３０などで供締めで取付けることが出来るため、粘性試料でもカップと針の周りからの漏れがなくなる。
又、試料による詰まりが生じた場合には、カップフィルターＧのみ簡単に取外し交換ができ、連続分析が可能となる。
それにより、濾過や遠心分離などの試料ロスがある前処理なしで注入することが出来る。又、上記試料を１０分の１に希釈し、粘性を低くした試料ならば、弾力のある樹脂を被せるため、充分シールされ、金属針などを用いる前処理ロボットにも使用できた。
【００２６】
本発明カップフィルターＧを前処理ロボットの細管５に被せて、自動濾過を行い、そのまま注入しても、上記実施例と同じように本カラムの劣化を抑えることが出来た（図１３）。
本実施例では、タンパクを対象としたため、メタルフリーのパットフィルターを使用しているが、金属影響のない試料ならば、金属製フィルターでもよく、又針径に合せてカップフィルター内径は自由に選択できる。
【００２７】
〔実施例１３〕  シリンジニードル部分の管内部にモノリス構造物が形成されている場合を例にとって以下に説明する。
２００μＬシリンジを用い、ニードル部分を外した状態で農薬を添加した水試料を吸引する。次いで、このシリンジに内径２００μＬ、長さ５０ｍｍ、オクタデシル基で化学修飾されたモノリス構造シリカチューブを取付ける。プランジャーを押下げてモノリス構造部分に通液し、目的成分を保持させる。
全ての試料を抽出後、吸引操作を行い、モノリス構造部分に残った水を除去する。次いで、ニードル部分をシリンジから取外す。別のシリンジで農薬を抽出する有機溶媒（ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）を２０μＬ計り取る。そのシリンジの先端にモノリス構造部分の形成されたニードルを取付け、ガスクロマトグラフの注入口に差込む。プランジャーを押下げ、溶媒で目的とする農薬成分を溶出し、ガスクロマトグラフに導入する。
【００２８】
注入口：４０℃〜２５０℃  １秒間に１℃昇温（オンカラム注入）
ガスクロマトグラフ温度：４０℃（１分）〜２５０℃（５分）  １分間に１５度昇温
カラム：ジメチルポリシロキサンを化学修飾したキャピラリーカラム  内径０．２５ｍｍ、長さ１５ｍ、膜圧０．２５ｍｍ
検出器：ＦＰＤ  ２００℃
この試料分析のクロマトグラムを図１５に示す。
１：ダイアジノン  ２：イプロベンホス  ３：フェニトロチオン  ４：イソキサチオン  ５：ＥＰＮ
【００２９】
この分析を１０回連続分析した。１０回注入後には試料の汚れによりプランジャーが詰まり動かなくなった。又、モノリス構造部分には肉眼でも汚れが見られた。
シリンジの先端にカップフィルターＡを被せ、同様の操作を行った結果、１０回注入後にも動きのもたつきは見られず、１回目と同じピークが得られた。
尚、モノリス構造部分の汚れも見られなかった。
【００３０】
〔実施例１４〕  本発明フィルターを用いたＨＰＬＣカラムについて実施例を図１６、図１７を用いて示す。
内径０．１ｍｍ、外径０．３７５、長さ１５０ｍｍのフューズドシリカチューブカラム２に、ＨＰＬＣ用充填剤イナートシル（登録商標）ＯＤＳ−３  ７０を３５Ｍｐａで、メタノール溶媒で充填した。
カラム２上流側入口に、カップフィルターＤを隙間なく取付け、フェラル７１、オシネ７２を用いて共締めした。フェラル７１とオシネ７２が一体型のものでも良い。ジョイントの共締め位置（パイプ先端からフェラル７１までの長さ７３）は、インジェクションジョイントの奥行きに当てて合せ、デッドボリュームが出来ないような位置とした。
キャピラリー保護のため、外側には内径０．５ｍｍのピークチューブ７４を被せた。
カラム２下流側出口は、本発明ミッドフィルターＦを隙間なく取付けた。ミッドフィルターＦ以後に圧力がかかる場合では、入り口側のようにジョイントにて共締めしてもよいが、本実施例では、ミッドフイルターＦ挿通のみとした。
以上のようにＨＰＬＣカラムを構成した。
ピークチューブ７４等は樹脂製パイプのため、力を加えない限り、外れたりすることはないが、カラム後の抵抗により圧力が掛かる場合や、より取り扱いを行い易くするため、保護管をしっかり固定したい場合などには、図１７の例のようにジョイント７５を設けることにより、使い易くすることが出来る。
【００３１】
従来タイプのカラムでは、フィルターを止めるためのジョイント部分が必ず必要となり、インジェクターには余分な配管を介して接続することになってしまう。
その例を以下に説明する。
内径０．１ｍｍ、外径０．３７５、長さ１５０ｍｍのフューズドシリカチューブカラム２に、ＨＰＬＣ用充填剤イナートシル（登録商標）ＯＤＳ−３  ７０を３５Ｍｐａで、メタノール溶媒で充填した。
ジョイント７５にフィルター４を打ち込み、充填したキャピラリー２を差込み、フェラル７１及びオシネ７２にてジョイント７５に締め込んだ。出口側も同じようにジョイントを接続し、従来タイプカラムを作成した（図１８）。
入口側は、ジョイント７５に配管７６を奥まで入れ、フェラル７１とオシネ７２で締付けた。
インジェクター側は、インジェクター９１におけるフェラルからの奥行き７６に合せて、配管７６をフェラル７１とオシネ７２にて接続した。配管７６はオシネ７２，７２やフェラル７１，７１が接続できる限り短い長さのものを使用した。
従来カラムに於いては、ジョイント内部にフィルター４が埋め込められ、カラム２内の充填剤７０の溶出を防ぐ構造になっている。特に入口側では、別途配管で接続する必要性が生じてしまい、充填剤フィルター入口がその配管の下流側になるため、配管部分は出来るだけ短くしてもまるまるデッドボリュームとなってしまう。
【００３２】
本発明カップフィルターを用いたＨＰＬＣカラムでは、インジェクションジョイントの奥先までフィルターが入り込むため、配管によるデッドボリュームをなくすことができる。
更に、従来カラムでは、フィルターは充填カラム本体に入れられるか又は、ジョイントに組み込まれてしまうため、フィルターが詰まった場合には、高価なカラム全体の取替えやジョイント部分の取替えが必要となる。
本フィルターのチューブ部分は、弾力性のある樹脂であるため、カップフィルター交換のみでフィルターの目詰まりを直すことができる。
又、従来のフィルター部の打ち込みはジョイント内なので、状態を目視で確かめることができず、打ち込み具合によっては、充填剤の漏れが生じることもある。
本発明フィルターＤでは、外側にフィルターが露出するため、目視確認が可能である。ミッドフィルターＦにおいても、テフロン（登録商標）などの透過性の樹脂を用いれば、目視確認ができる。又、目視確認ができなくても、取外しが可能なため、カップフィルター単独での漏れ試験が可能である。
【００３３】
従来のような配管接続したカラムと本発明インジェクターに直結したカラムで、図６または実施例９の装置を用いて、アセトニトリル／水＝６５／３５、流速０．４μＬ／ｍｉｎ  ２５４ｎｍ、注入量１０ｎＬ、試料１．アセトフェノン、２．ベンゼン、３．トルエン、４．ナフタレンの分析を行い、比較した。
従来カラムでは、シャープなピークが得られなかった（図１９）が、本発明カラムでは４番目のナフタレンに於いて、理論段数１１０００段ピーク対象性１．１４と良好な結果が得られた（図２０）。
又、カップフィルター交換後でもデータに変化は見られなかった。
【００３４】
〔実施例１５〕  本発明カップフィルターＨにＨＰＬＣ用充填剤イナートシル（登録商標）ＯＤＳ−３を３５Ｍｐａでメタノール溶媒で充填した。カラム上流側入口にカップフィルターＤを隙間なく取付け、ジョイントにて共締めした。ジョイントの共締め位置は、実施例１４と同様インジェクションジョイントの奥行きに当てて合せ、デッドボリュームができないような位置とした。カラム下流側は、検出器などの接続ができるようにジョイントにフェラル７１とオシネ７２で締付け、ＨＰＬＣ用カラムとした（図２１）。
更にもう１種ＨＰＬＣ用カラムを作成した。充填されたカップフィルターＨのフィルター側の端部を、インジェクター９１に取付け、カラム下流側出口は本発明カップフィルターＤを隙間なく取付け、ジョイントにて共締めした（図２２）。
２種のＨＰＬＣカラムとした。
【００３５】
図１１の装置を用いて、インジェクターの前にスプリットを設けて、アセトニトリル／水／＝６５／３５、流速２μＬ／ｍｉｎ（スプリット１／２０）２５４ｎｍ、注入量１ｎＬ、試料１．アセトフェノン、２．ベンゼン、３．トルエン、４．ナフタレンを分析した。
実施例１４と同じように、両カラムとも理論段数１１０００段、ピーク対称性１．１４と良好な結果が得られた。
カップフィルターＨに充填した充填カラムでは、フィルターが内面としっかりと結合しているため、高圧充填が可能で、充填方向と異なる方向で分析してもシャープなピークが得られた。
【００３６】
【発明の効果】本発明の請求項１によれば、キャピラリーカラム、マイクロシリンジ等の細管が挿通可能であって、該細管に適合する外径３ｍｍ以下の適宜長のパイプにフィルターを固定又は形成したので、キャピラリーカラムやシリンジに挿通装着するだけで、液体試料中の浮遊物、沈殿物の濾過が行われ、試料としての使用可能状態にすることが出来る。然も、大掛かりな装置を必要とせず、操作は極めて容易に、その上簡単な装置で実施でき、又、試料ロスがなく、容器等の洗浄も必要としないので、更に生体試料等の取扱い困難な試料でも、キャピラリーカラム等の目詰まりが回避でき、分析工程も大幅に簡略化できる等実用効果著大である。
【００３７】
又、請求項２によれば、フィルターの孔径は０．１〜５０μｍであるので、上記請求項１の効果に加えて浮遊物、沈殿物による抵抗管等の目詰まりを回避し、本願カップフィルター通過の液体試料はそのまま殆んど手を加えることなく試料として分析工程へ供給することが出来る。
【００３８】
又、請求項３，４によれば、金属、ガラス、パットフィルター等の硬質フィルターを弾性を有する合成樹脂製パイプに嵌合し、或いは金属メッシュスクリーンを弾性を有する合成樹脂製パイプに嵌合固定させたので、請求項１の効果に加えて、弾性を有する合成樹脂製パイプに硬質のフィルターを装着するのに合成樹脂製パイプを加熱し、拡開でき、更に一部融着状態となり、製作に便利であり、且つその固定が確実に行われる効果がある。
【００３９】
又、請求項５によれば、モノリス構造のフューズドシリカチューブを、弾性を有する合成樹脂製チューブに差込み、ミッドフィルターとしたので、請求項１の効果に加えて空間容量を小さくすることが出来、対称性の良いピークを得ることが出来る。
【００４０】
又、請求項６によれば、パイプ端部にゾルゲル合成でフィルターを形成させたので、ゾルゲル合成でミクロフィルターを形成することにより、液体試料の性質に応じて所望の材質、口径等を選択でき、その濾過性能を高めることが出来る。
【００４１】
更に、請求項７によれば、外径３ｍｍ以下の適宜のチューブ一端にフィルターを固定したチューブフィルターを、カラム一端に嵌合させたので、カラム先端にあらかじめカップフィルターが設置されていることになり、インジェクタージョイント等への接合部に直ちに挿通固定でき、使用に便利であり、且つ配管によるデッドボリュームをなくすことができ、カラムの使用効果を一層上げることが出来る。又、フィルターがチューブ内面と強固に結合しているので、高圧充填が可能で、更に充填方向を変えても分析でき、両側の使用ができ、使用上便利である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明一実施例中央縦断面図
【図２】本発明他実施例中央縦断面図
【図３】本発明他実施例中央縦断面図
【図４】本発明他実施例中央縦断面図
【図５】本発明一使用例一部縦断側面説明図
【図６】本発明他使用例概略説明図
【図７】従来型フィルター使用による検出器を使用したＵＶ吸収の変化を示す図
【図８】本発明フィルター使用による検出器を使用したＵＶ吸収の変化を示す図
【図９】三方ジョイントを使用した従来型スプリット制御機構図
【図１０】三方ジョイントを使用した本発明スプリット制御機構図
【図１１】図１０の本発明スプリット制御機構の一使用例説明図
【図１２】本発明シリンジ針への使用状態説明図
【図１３】本発明一実施例溶離液濾過状態説明図
【図１４】本発明フィルター利用による図６の装置を用いて得たクロマトグラム
【図１５】本発明一実施例を用いて得たクロマトグラム
【図１６】本発明フィルターを用いた一実施例カラム説明図
【図１７】本発明フィルターを用いた一実施例カラム説明図
【図１８】従来タイプのカラムの一部縦断側面説明図
【図１９】従来の装置を用いて得たクロマトグラム
【図２０】本発明一実施例の装置使用により得られたクロマトグラム
【図２１】本発明一実施例を用いて構成したカラムの一部縦断説明図
【図２２】本発明他実施例を用いて構成したカラムの一部縦断説明図
【符号の説明】
１  チューブ
２  キャピラリーカラム
３  シリンジ針
４  フィルター
５  細管
６  容器
７  試料溶液
８  ポンプ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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