(57)【要約】    【課題】      微量な血液であっても血球成分の漏出や溶血なく血漿や血清を効率よく分離しうる血漿濾過ユニットを提供することにある。    【解決手段】  本発明の血漿濾過ユニットは少なくともガラス繊維濾紙と微多孔性膜が積層されている血液濾過材料と、液体不透過性材料よりなり該微多孔性膜の表面に装着され該微多孔性膜の面積より狭い開口を有し濾液の流出面積を規制する部材と、これらを収容する少なくとも２個の開口を有し該血液濾過材料を収容するホルダーとよりなる血液濾過ユニットよりなるものである。【選択図】        図１
2004361419.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくともガラス繊維濾紙と微多孔性膜が積層されている血液濾過材料と、液体不透過性材料よりなり該微多孔性膜の表面に装着され該微多孔性膜の面積より狭い開口を有し濾液の流出面積を規制する部材と、これらを収容する少なくとも２個の開口を有し該血液濾過材料を収容するホルダーとよりなる血液濾過ユニット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は全血から血漿または血清試料を調製する際に使用される血液濾過ユニットに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
血液中の構成成分例えば代謝産物、蛋白質、脂質、電解質、酵素、抗原、抗体などの種類や濃度の測定は通常全血を遠心分離して得られる血漿または血清を検体として行われている。ところが、遠心分離は手間と時間がかかる。特に少数の検体を急いで処理したいときや、現場検査などには、電気を動力とし、遠心分離機を必要とする遠心法は不向きである。そこで、濾過により全血から血漿を分離する方法が検討されてきた。
【０００３】
この濾過方法には、３〜６枚のガラス繊維濾紙をカラムに充填し、カラムの一方から全血を注入し、加圧や減圧を行なって他方から血漿や血清を得るいくつかの方法が公知化されている。
【特許文献１】特公昭４４−１４６７３号公報
【特許文献２】特開平２−２０８５６５号公報
【特許文献３】特開平４−２０８８５６号公報
【特許文献４】特公平５−５２４６３号公報
【０００４】
しかし、全血から濾過により自動分析等による測定に必要な量の血漿または血清を得る方法に関しては血糖など一部の項目を除いては、いまだ試行の段階にあり、広く実用化されるに至っていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、微量な血液であっても血球成分の漏出や溶血なく血漿や血清を効率よく分離しうる血液濾過ユニットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は上記課題を解決するべく鋭意検討の結果、濾材にガラス繊維濾紙と微多孔性膜を組み合わせるとともに濾材の血漿出口側にシール部材を設けて濾過材料の開口面積を狭めることによって前記目的を達成した血液濾過ユニットを完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、少なくともガラス繊維濾紙と微多孔性膜が積層されている血液濾過材料と、液体不透過性材料よりなり該微多孔性膜の表面に装着され該微多孔性膜の面積より狭い開口を有し濾液の流出面積を規制する部材と、これらを収容する少なくとも２個の開口を有し該血液濾過材料を収容するホルダーとよりなる血液濾過ユニットに関するものである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、全血からの血漿分離を効率よく行なうことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
ガラス繊維濾紙は密度が０．０２〜０．２程度、好ましくは０．０２〜０．１５程度、特に好ましくは０．０２〜０．０９程度で、保留粒子径が０．８〜９μｍ程度、特に１〜５μｍ程度のものが好ましい。ガラス繊維の表面を、特開平２−２０８５６５、同４−２０８８５６号公報に記載された様な方法で、親水性高分子で処理することによって濾過をより速やかに円滑に行なうことができる。また、ガラス繊維の表面をレクチンで処理することもできる。ガラス繊維濾紙は複数枚と積層して用いることができる。
【００１０】
表面を親水化されており血球分離能を有する微多孔性膜は、実質的に分析値に影響を与える程には溶血することなく、全血から血球と血漿を特異的に分離するものである。この微多孔性膜は孔径がガラス繊維濾紙の保留粒子径より小さくかつ０．５μｍ以上、好ましくは０．５〜８μｍ程度、より好ましくは０．５〜４．５μｍ程度、特に好ましくは０．５〜３μｍ程度のものが適当である。また、空隙率は高いものが好ましく、具体的には、空隙率が約４０％から約９５％、好ましくは約５０％から約９５％、さらに好ましくは約７０％から約９５％の範囲のものが適当である。微多孔性膜の例としてはポリスルホン膜、弗素含有ポリマー膜等がある。
【００１１】
弗素含有ポリマーの微多孔性膜としては、特表昭６３−５０１５９４（ＷＯ  ８７／０２２６７）に記載のポリテトラフルオロエチレンのフィブリル（微細繊維）からなる微多孔性のマトリックス膜（微多孔性層）、Ｇｏｒｅ−Ｔｅｘ(Ｗ.Ｌ.Ｇｏｒｅ ａｎｄ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ社製）、Ｚｉｔｅｘ(Ｎｏｒｔｏｎ社製）、ポアフロン(住友電工社製）などがある。その他に、ＵＳ ３２６８８７２（実施例３及び４）、ＵＳ ３２６０４１３（実施例３及び４）、特開昭５３−９２１９５（ＵＳ ４２０１５４８）等に記載のポリテトラフルオロエチレンの微多孔性膜、ＵＳ ３６４９５０５に記載のポリビニリデンフルオリドの微多孔性膜などがある。
【００１２】
これらの弗素含有ポリマーの微多孔性膜の作成に当たっては、１種もしくは２種以上の弗素含有ポリマーを混合しても良いし、弗素を含まない１種もしくは２種以上のポリマーや繊維と混合し、製膜したものであつても良い。
【００１３】
構造としては、延伸しないもの、１軸延伸したもの、２軸延伸したもの、１層構成の非ラミネートタイプ、２層構成のラミネートタイプ、例えば繊維等の他の膜構造物にラミネートした膜等がある。
【００１４】
フイブリル構造又は一軸延伸もしくは二軸延伸した非ラミネートタイプの微多孔性膜は、延伸により、空隙率が大きくかつ濾過長の短い微多孔膜が作られる。濾過長が短い微多孔膜では、血液中の有形成分（主として赤血球）による目詰りが生じがたく、かつ血球と血漿の分離に要する時間が短いので、定量分析精度が高くなるという特徴がある。
【００１５】
弗素含有ポリマーの微多孔性膜は特開昭５７−６６３５９(ＵＳ ４７８３３１５）に記載の物理的活性化処理(好ましくはグロー放電処理又はコロナ放電処理)を微多孔膜層の少なくとも片面に施すことにより微多孔性膜の表面を親水化して、隣接する微多孔性膜との部分接着に用いられる接着剤の接着力を強化することができる。
【００１６】
弗素含有ポリマーの微多孔性膜は、そのままでは、表面張力が低く乾式分析要素の血球濾過層として用いようとしても、水性液体試料ははじかれてしまって、膜の表面や内部に拡散、浸透しないことは、周知の事実である。本発明では、第１の手段として弗素含有ポリマーの微多孔性膜に親水性を付与し親水性を高める手段として、弗素含有ポリマーの微多孔性膜の外部表面及び内部の空隙の表面を実質的に親水化するに充分な量の界面活性剤を弗素含有ポリマーの微多孔性膜に含浸させることにより、前記の水性液体試料がはじかれる問題点を解決した。
【００１７】
水性液体試料がはじかれることなく膜の表面や内部に拡散、浸透、移送されるに充分な親水性を弗素含有ポリマーの微多孔性膜に付与するには、一般に、弗素含有ポリマーの微多孔性膜の空隙体積の約０．０１％から約１０％、好ましくは約０．１％から約５．０％、更に好ましくは０．１％から１％の界面活性剤で微多孔性膜の空隙の表面が被覆されることが必要である。例えば、厚さが５０μｍの弗素含有ポリマーの微多孔性膜の場合に、含浸される界面活性剤の量は、一般に０．０５ｇ／ｍ２から２．５ｇ／ｍ２の範囲であることが好ましい。弗素含有ポリマーの微多孔性膜に界面活性剤を含浸させる方法としては、界面活性剤の低沸点（沸点約５０℃から約１２０℃の範囲が好ましい）の有機溶媒（例、アルコール、エステル、ケトン）溶液に弗素含有ポリマーの微多孔性膜を浸漬し、溶液を微多孔性膜の内部空隙に実質的に充分に行きわたらせた後、微多孔性膜を溶液から静かに引き上げ、風(温風が好ましい)を送り乾燥させる方法が一般的である
【００１８】
弗素含有ポリマーの微多孔性膜を親水性化処理に用いられる界面活性剤としては、非イオン性（ノニオン性）、陰イオン性（アニオン性）、陽イオン性（カチオン性）、両性いずれの界面活性剤をも用いることができる。
【００１９】
これらの界面活性剤のうちでは、ノニオン性界面活性剤が、赤血球を溶血させる作用が比較的低いので、全血を検体とするための多層分析要素においては有利である。ノニオン性界面活性剤としては、アルキルフェノキシポリエトキシエタノール、アルキルポリエーテルアルコール、ポリエチレングリコールモノエステル、ポリエチレングリコールジエステル、高級アルコールエチレンオキシド付加物（縮合物）、多価アルコールエステルエチレンオキシド付加物（縮合物）、高級脂肪酸アルカノールアミドなどがある。
【００２０】
ノニオン性界面活性剤の具体例として、次のものがある。
アルキルフェノキシポリエトキシエタノールとしては、
イソオクチルフェノキシポリエトキシエタノール：
（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００：オキシエチレン単位平均９〜１０含有）
（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−４５：オキシエチレン単位平均５含有）
ノニルフェノキシポリエトキシエタノール：
（ＩＧＥＰＡＬ ＣＯ−６３０：オキシエチレン単位平均９含有）
（ＩＧＥＰＡＬ ＣＯ−７１０：オキシエチレン単位平均１０〜１１含有)
（ＬＥＮＥＸ６９８：オキシエチレン単位平均９含有）
アルキルポリエーテルアルコールとしては、
高級アルコール  ポリオキシエチレンエーテル：
（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−６７：ＣＡ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ Ｎｏ．５９０３０−１５−８）
【００２１】
弗素含有ポリマーの微多孔性膜は、その多孔性空間に水不溶化した１種又は２種以上の水溶性高分子を設けることによって親水化したものであってもよい。水溶性高分子の例として、酸素を含む炭化水素にはポリビニルアルコール、ポリエチレンオキサイド、ポリエチレングリコール、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、窒素を含むものにはポリアクリルアミド、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアミン、ポリエチレンイミン、負電荷を有するものとしてポリアクリル酸、ポリメタアクリル酸、ポリスチレンスルホン酸などをあげることが出来る。不溶化は熱処理、アセタール化処理、エステル化処理、重クロム酸カリによる化学反応、電離性放射線による架橋反応等によって行えばよい。詳細は、特公昭５６−２０９４号公報及び特公昭５６−１６１８７号公報に開示されている。
【００２２】
ポリスルホンの微多孔性膜は、ポリスルホンをジオキサン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドンあるいはこれらの混合溶媒等に溶解して製膜原液を作製し、これを支持体上に、又は直接凝固液中に流延し洗浄、乾燥して行うことにより製造することができる。詳細は特開昭６２−２７００６号公報に開示されている。ポリスルホンの微多孔性膜は、そのほか特開昭５６−１２６４０号公報、特開昭５６−８６９４１号公報、特開昭５６−１５４０５１号公報等のも開示されており、それらも使用することができる。ポリスルホンの微多孔性膜も弗素含有ポリマーと同様界面活性剤を含有させ、あるいは水不溶化した水溶性高分子を設けることによって親水化することができる。
【００２３】
その他の非繊維多孔性膜としては、特公昭５３−２１６７７号、米国特許１, ４２１，３４１号等に記載されたセルロースエステル類、例えば、セルロースアセテート、セルロースアセテート／ブチレート、硝酸セルロースからなるブラッシュポリマー膜が好ましい。６−ナイロン、６，６−ナイロン等のポリアミド、ポリエチレン、ポリプロピレン等の微多孔性膜でもよい。その他、特公昭５３−２１６７７号、特開昭５５−９０８５９号等に記載された、ポリマー小粒子、ガラス粒子、けい藻土等が親水性または非吸水性ポリマーで結合された連続空隙をもつ多孔性膜も利用できる。
【００２４】
非繊維層多孔性膜の有効孔径は０．３〜１０μｍ、好ましくは０．５〜５μｍ、特に有効なのは１〜３μｍである。本発明で非繊維層多孔性膜の有効孔径は、ＡＳＴＭ Ｆ３１６−７０に準拠した限界泡圧法（バブルポイント法）により測定した孔径で示す。非繊維層多孔性膜が相分離法により作られたいわゆるブラッシュ・ポリマーから成るメンブランフィルターである場合、厚さ方向の液体通過経路は、膜の製造の際の自由表面側（即ち光沢面）で最も狭くなっているのが普通で、液体通過経路の断面を円に近似したときの孔径は、自由表面の近くで最も小さくなっている。容積の通過経路における厚さ方向に関する最小孔径は、さらにフィルターの面方向について分布を持っており、その最大値が粒子に対する濾過性能を決定する。通常、それは限界泡圧法で測定される。
【００２５】
上に述べたように、相分離法により作られたいわゆるブラッシュ・ポリマーから成るメンブランフィルターでは、厚さ方向の液体通過経路は膜の製造の際の自由表面側（即ち光沢面）で最も狭くなっている。本発明の分析要素の非繊維層多孔性膜としてこの種の膜を用いる場合には、出口側を、メンブランフィルターの光沢面とすることが好ましい。
【００２６】
繊維質多孔性層を構成する材料としては、濾紙、不織布、織物生地（例えば平織生地）、編物生地（例えば、トリコット編）等を用いることができる。これらのうち織物、編物等が好ましい。織物等は特開昭５７−６６３５９号に記載されたようなグロー放電処理をしてもよい。
【００２７】
好ましい微多孔性膜はポリスルホン膜、酢酸セルローズ膜等であり、特に好ましいのはポリスルホン膜である。最も好ましい血液濾過材料は血液供給側からガラス繊維濾紙、セルロース濾紙、ポリスルホン膜をこの順に積層した積層体である。
【００２８】
本発明で用いられる濾過材料は特開昭６２−１３８７５６〜８号公報、特開平２−１０５０４３号公報、特開平３−１６６５１号公報等に開示された方法に従って各層を部分的に配置された接着剤で接着して一体化することができる。
【００２９】
本発明の濾過材料では、その表面のみで血球をトラップする訳ではなく、ガラス繊維濾紙の厚さ方向に浸透するに従って、初めは大きな血球成分、後には小さな血球成分と徐々に空隙構造にからめ、厚さ方向に全長にわたって血球を留め除去していく、いわゆる体積濾過作用によるものと理解される。
【００３０】
本方式により濾過し得る全血の量は、ガラス繊維濾紙中に存在する空間体積と全血中の血球の体積に大きく影響される。ガラス繊維濾紙の密度が高い（粒子保持孔径が小さい）と赤血球がガラス繊維濾紙の表面近傍にトラップされるので、表面からごく浅い領域でガラス繊維濾紙中の空間が閉塞状態になってしまうことが多い。従って、それ以上の濾過が進まず、結果として濾過、回収し得る血漿量も少なくなる。この際、回収血漿量を増やそうとして更に強い条件で加圧すると、血球の破壊、すなわち溶血が起きてしまう。つまり表面濾過に近いプロセスとなり、濾紙の空間体積利用効率は低い。
【００３１】
これに対し、ガラス繊維濾紙の密度を低くすると、血球は濾紙の深部（出口に近い領域）まで浸透していき血漿が通過できる空間が増すので、濾紙全体の空間体積が有効に利用され、回収される血漿の量も多くなる。
【００３２】
空間体積あるいは血漿濾過量に対応する指標として、透水速度が有効である。透水速度は、入口と出口をチューブに接続できるように絞った濾過ユニット中に一定面積のガラス繊維濾紙を密閉保持し、一定量の水を加えて一定圧力で加圧または減圧したときの、単位面積あたりの濾過量を速度で表したものであり、ｍｌ／ｓｅｃ等の単位を持つ。
【００３３】
具体例としては、濾過ユニット中に直径２０ｍｍのガラス繊維濾紙をセットし、その上に１００ｍｌの注射筒をたてて６０ｍｌの水を入れて自然流下させ、開始後１０秒と４０秒の間の３０秒間にガラス濾紙中を通り抜けた水の量をもって透水量とし、これから単位面積あたりの透水速度を算出する。
【００３４】
血漿の濾過に特に適しているのは透水速度が１．０〜１．３ｍｌ／ｓｅｃ程度のもので、例えば、ワットマン社ＧＦ／Ｄ、東洋濾紙ＧＡ−１００、同ＧＡ−２００等がある。さらに、市販のガラス繊維濾紙を熱水中で再分散してナイロンネット上で再抄紙して低密度濾紙（密度約０．０３）を作製することもでき、これは良好な血漿濾過特性を示す。
【００３５】
最適な濾過材料および濾過条件は、回収すべき血漿量および供給可能な血液の量によって設定することができる。例えば、１００〜５００μｌ程度の血漿を分離したいときには、ガラス繊維濾紙の厚さを２〜３ｍｍ、面積を１〜５ｃｍ２程度にすると良好な結果が得られる。
【００３６】
ホルダーは、血液濾過材料及び流出面積を規制する部材を収容する本体と、蓋体に分けた態様で作製される。いずれにも少なくとも１個の開口が設けられていて、一方は血液供給口として、場合により更に加圧口として、他方は吸引口として、場合により更に濾過された血漿または血清の排出口として使用される。濾過された血漿または血清の排出口を別に設けることもできる。本発明になる濾過ユニットは、上記本体に蓋体が取付けられると、これらの血液供給口と吸引口を除いて全体が密閉構造になる。ホルダーの内容積は濾過しようとする血液量によって異なるが通例０．１〜５ｍｌ、好ましくは０．５〜２ｍｌ程度である。ホルダーの、収容された血液濾過材料の微多孔性膜側すなわち血漿または血清の排出口となる側には、濾過された血漿等を効率よく回収するためロート状等の部屋を形成することが好ましい。ホルダーの材料はプラスチックが好ましい。例えば、メタアクリル酸エステル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエステル、ナイロン、ポリカーボネート等の透明あるいは不透明の樹脂が用いられる。
【００３７】
上記本体と蓋体の取付方法は、接着剤を用いた接合、融着等如何なる手段によってもよい。この際、上記本体と蓋体のいずれの周縁が内側に位置してもよく、あるいは突き合わせ状態であってもよい。また、上記本体と蓋体をネジ様の手段で組立分解ができる構造とすることもできる。
【００３８】
血漿濾過材料の形状に特に制限はないが、製造が容易なように、円形とすることが望ましい。この際、円の直径をホルダー本体の内径よりやや大きめとし、濾過材料の側面から血漿が漏れることを防ぐことができる。
【００３９】
流出面積規制部材は液体不透過性材料で形成され、血液濾過材料の底面積（微多孔性膜側の面の面積）より狭い開口を有している。この流出面積規制部材は血液濾過材料の濾液出口側すなわち微多孔性膜側に配置されて濾液の流出を阻止し、濾液がその開口から流出するよう流れを規制するものである。開口面積は血液濾過材料底面積の２０〜８０％程度、好ましくは３０〜５０％程度が適当である。流出面積規制部材は市販の各種接着テープ、プラスチックフィルム、薄いプラスチック板などでよく、血液濾過材料側面には接着剤などを塗布しておくことができる。
【００４０】
本発明の血液濾過ユニットの使用方法としては、該ユニットのガラス繊維濾紙側の開口に血液を供給し、反対側の開口から濾液である血漿または血清を採取する。血液の供給量は血液濾過材料の体積の１．２〜５倍程度、好ましくは２〜４倍程度が適当である。濾過に際しては血液供給口側からの加圧あるいは反対側からの減圧を行なって濾過を促進するのがよい。この加、減圧手段はいずれもシリンジを利用する方法が簡便である。シリンジのピストンを移動させる距離はピストンの移動体積が濾過材料の体積の２〜５倍程度になるようにするのがよい。移動速度は１ｃｍ２当り１〜５００ｍｌ／ｍｉｎ程 度、好ましくは２０〜１００ｍｌ／ｍｉｎ程度で移動時間は１〜１００秒程度、好ましくは３〜５０秒程度、さらに好ましくは５〜３０秒程度が適当である。使用後の濾過ユニットは通常は使い捨てとする。
【００４１】
濾過で得た血漿や血清は常法に従って分析が行なわれるが、本発明の濾過ユニットは特に乾式分析素子を用いて複数項目を分析する場合に有効である。
【実施例１】
【００４２】
１）  濾過ユニットの製作
図１に示す濾過ユニットを作製した。この濾過ユニット１はフィルターホルダー２とシリンジ３からなっている。フィルターホルダー２は外径２５ｍｍ内径２０ｍｍの短円筒状をしており、フィルターを収納するフィルターホルダー本体４と該本体４に螺着する蓋体５で構成されている。フィルターホルダー本体４は、下端が開放されていて内側にはフィルター収容部６が形成され、外周面下部には蓋体５を螺着させる螺子溝が刻まれている。一方、上面は閉止されていてその中央には血液吸入口７が突出形成されている。蓋体５の内周面上部には本体４の螺子溝と螺合する螺子溝が刻まれている。蓋体５の底面は中央部が下方に膨出していてその下端にはシリンジ３の１ズル８を嵌込む吸引口９が空出形成されている。
【００４３】
上記のフィルターホルダーを倒置してそこに直径２０．１ｍｍの円板に打ち抜いたガラス繊維濾紙１０(ワットマン ＧＦ／Ｄ）を２枚重ねてセットした。この濾紙は、坪量１２２．４ｇ／ｍ２、厚さ１．３ｍｍ、密度０．０９４ｇ／ｃｍ３であった。その上に厚さ１ｍｍのセルロース濾紙１１(Ｃｙｔｏｓｅｐ社 Ｃｙｔｏｓｅｐ、直径２０．１ｍｍ）を直径１３ｍｍの穴を有する直径２０．１ｍｍの両面テープ１２で固定した。その上に孔径２μｍ、厚さ０．１５ｍｍのポリスルフォン多孔質膜１１（富士写真フイルム製ＰＳ、直径２０．１ｍｍ）を重ね、更にその上に中心に直径８ｍｍの穴を有する直径２０．１ｍｍの粘着ビニールテープ１４を圧着した。
【００４４】
２）  採血
男子健常者よりヘパリン添加全血５ｍｌを採血した。ヘマトクリットを測定したところ４４％であった。
【００４５】
３）  ヘマトクリット低下試薬（ＨＬ試薬）溶液の調製
硫酸リチウム１水塩(Ｌｉ２ＳＯ４・Ｈ２Ｏ）を秤量、蒸留水にて溶解して、濃度が２Ｍの水溶液を調製した。
【００４６】
４）  ＨＬ試薬添加全血の調製
容量２ｍｌのサンプルチューブに３）で調製したＨＬ試薬溶液３０μｌを秤取し、これにヘパリン全血１．５ｍｌを添加、混合した。ヘマトクリットを測ったところ３０％であった。
【００４７】
５）  血漿濾過
４）で調製した全血を１）で製作した濾過ユニットに接続し、およそ６００μｌ／ｍｉｎの吸引速度で２０秒間吸引した。ポリスルフォン膜上に血漿が濾過分離された。
【００４８】
６）  分離血漿の回収
濾過分離された血漿をマイクロピペットで吸引、秤取した。およそ３９５μｌの血漿を分離回収できた。溶血は全く認められなかった。
【００４９】
用いたガラス繊維濾紙の体積は６２８ｍｍ３なのでその1
／２は３１４ｍｍ３（＝３１４μｌ）である。本発明方法によれば、容易に且つ、確実にガラス繊維濾紙の体積の１／２以上の血漿を分離回収できることが確かめられた。
【実施例２】
【００５０】
健常女子より採血し、ヘパリン添加全血２０ｍｌを得た。このもののＨｃｔを測ったところ４１％であった。その１部を遠心分離して血漿を抜き取りＨｃｔ値の高い全血を調製した。また全血に血漿のみを添加して低いＨｃｔの全血を調製した。全部でＨｃｔの異なる検体５種類(Ｎｏ.１〜Ｎｏ.５)を調製した。Ｎｏ．１〜Ｎｏ．５の検体について、２ＭのＬｉ２ＳＯ４を全血１ｍｌあたり５０μｌ添加した。実施例１と同じ濾過ユニットを用いて減圧濾過した。但し、全血を上部から導入し、下部吸引口に５ｍｌの注射筒をセットし、８００μｌの排気量で３０秒間かけて吸引した。ガラス繊維濾紙の体積は１８５ｍｍ３（＝１８５μｌ）であった。
【００５１】
【表１】
2004361419.tif 000003
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】本発明の実施例で使用した濾過ユニットの断面図である。
【符号の説明】
【００５３】
１…濾過ユニット
２…フィルターホルダー
３…シリンジ
４…ホルダー本体
５…蓋体
６…フィルター収容部
７，９…血液出入口
８…ノズル
１０…ガラス繊維濾紙
１１…セルロール濾紙
１２…両面テープ
１３…ポリスルホン微多孔性膜
１４…流出面積規制部材
【図１】
2004361419.tif 000004
【手続補正書】
【提出日】平成16年9月22日(2004.9.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】
少なくともガラス繊維濾紙と微多孔性膜が積層されている血液濾過材料と、液体不透過性材料よりなり該微多孔性膜の表面に装着されかつ直径が血液濾過材料底面の直径に対する比で２０〜８０％の開口を有し濾液の流出面積を規制する部材と、該ガラス繊維濾紙を血液供給側にそして該微多孔性膜を濾液排出側にしてこれらを収容し、かつ少なくとも血液供給口と濾液排出口を有する容器とよりなる血液濾過ユニット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
すなわち、本発明は、少なくともガラス繊維濾紙と微多孔性膜が積層されている血液濾過材料と、液体不透過性材料よりなり該微多孔性膜の表面に装着されかつ直径が血液濾過材料底面の直径に対する比で２０〜８０％の開口を有し濾液の流出面積を規制する部材と、該ガラス繊維濾紙を血液供給側にそして該微多孔性膜を濾液排出側にしてこれらを収容し、かつ少なくとも血液供給口と濾液排出口を有する容器とよりなる血液濾過ユニット関するものである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
その他の非繊維質多孔性膜としては、特公昭５３−２１６７７号、米国特許１, ４２１，３４１号等に記載されたセルロースエステル類、例えば、セルロースアセテート、セルロースアセテート／ブチレート、硝酸セルロースからなるブラッシュポリマー膜が好ましい。６−ナイロン、６，６−ナイロン等のポリアミド、ポリエチレン、ポリプロピレン等の微多孔性膜でもよい。その他、特公昭５３−２１６７７号、特開昭５５−９０８５９号等に記載された、ポリマー小粒子、ガラス粒子、けい藻土等が親水性または非吸水性ポリマーで結合された連続空隙をもつ多孔性膜も利用できる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
非繊維質層多孔性膜の有効孔径は０．３〜１０μｍ、好ましくは０．５〜５μｍ、特に有効なのは１〜３μｍである。本発明で非繊維質層多孔性膜の有効孔径は、ＡＳＴＭ Ｆ３１６−７０に準拠した限界泡圧法（バブルポイント法）により測定した孔径で示す。非繊維質層多孔性膜が相分離法により作られたいわゆるブラッシュ・ポリマーから成るメンブランフィルターである場合、厚さ方向の液体通過経路は、膜の製造の際の自由表面側（即ち光沢面）で最も狭くなっているのが普通で、液体通過経路の断面を円に近似したときの孔径は、自由表面の近くで最も小さくなっている。容積の通過経路における厚さ方向に関する最小孔径は、さらにフィルターの面方向について分布を持っており、その最大値が粒子に対する濾過性能を決定する。通常、それは限界泡圧法で測定される。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
上に述べたように、相分離法により作られたいわゆるブラッシュ・ポリマーから成るメンブランフィルターでは、厚さ方向の液体通過経路は膜の製造の際の自由表面側（即ち光沢面）で最も狭くなっている。本発明の血液濾過材料要素の非繊維質層多孔性膜としてこの種の膜を用いる場合には、出口側を、メンブランフィルターの光沢面とすることが好ましい。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
容器は、血液濾過材料及び流出面積を規制する部材を収容する本体と、蓋体に分けた態様で作製される。いずれにも少なくとも１個の開口が設けられていて、一方は血液供給口として、場合により更に加圧口として、他方は濾過された血漿または血清の排出口として、場合により更に吸引口として使用される。本発明になる濾過ユニットは、上記本体に蓋体が取付けられると、これらの血液供給口と濾液排出口を除いて全体が密閉構造になる。容器の内容積は濾過しようとする血液量によって異なるが通例０．１〜５ｍｌ、好ましくは０．５〜２ｍｌ程度である。容器の、収容された血液濾過材料の微多孔性膜側すなわち血漿または血清の排出口となる側には、濾過された血漿等を効率よく回収するためロート状等の部屋を形成することが好ましい。容器の材料はプラスチックが好ましい。例えば、メタアクリル酸エステル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエステル、ナイロン、ポリカーボネート等の透明あるいは不透明の樹脂が用いられる。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
血液濾過材料の形状に特に制限はないが、製造が容易なように、円形とすることが望ましい。この際、円の直径を容器本体の内径よりやや大きめとし、濾過材料の側面から血漿が漏れることを防ぐことができる。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
流出面積規制部材は液体不透過性材料で形成され、血液濾過材料の底面積（微多孔性膜側の面の面積）より狭い開口を有している。この流出面積規制部材は血液濾過材料の濾液出口側すなわち微多孔性膜側に配置されて濾液の流出を阻止し、濾液がその開口から流出するよう流れを規制するものである。開口面積は開口の外径が血液濾過材料底面の外径に対する比で２０〜８０％程度、好ましくは３０〜５０％程度が適当である。流出面積規制部材は市販の各種接着テープ、プラスチックフィルム、薄いプラスチック板などでよく、血液濾過材料側面には接着剤などを塗布しておくことができる。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４２】
１）  濾過ユニットの製作
図１に示す濾過ユニットを作製した。この濾過ユニット１はフィルター容器２とシリンジ３からなっている。フィルター容器２は外径２５ｍｍ内径２０ｍｍの短円筒状をしており、フィルターを収納するフィルター容器本体４と該本体４に螺着する蓋体５で構成されている。フィルター容器本体４は、下端が開放されていて内側にはフィルター収容部６が形成され、外周面下部には蓋体５を螺着させる螺子溝が刻まれている。一方、上面は閉止されていてその中央には血液吸入口７が突出形成されている。蓋体５の内周面上部には本体４の螺子溝と螺合する螺子溝が刻まれている。蓋体５の底面は中央部が下方に膨出していてその下端にはシリンジ３の１ズル８を嵌込む吸引口９が空出形成されている。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
上記のフィルター容器を倒置してそこに直径２０．１ｍｍの円板に打ち抜いたガラス繊維濾紙１０(ワットマン ＧＦ／Ｄ）を２枚重ねてセットした。この濾紙は、坪量１２２．４ｇ／ｍ２、厚さ１．３ｍｍ、密度０．０９４ｇ／ｃｍ３であった。その上に厚さ１ｍｍのセルロース濾紙１１(Ｃｙｔｏｓｅｐ社 Ｃｙｔｏｓｅｐ、直径２０．１ｍｍ）を直径１３ｍｍの穴を有する直径２０．１ｍｍの両面テープ１２で固定した。その上に孔径２μｍ、厚さ０．１５ｍｍのポリスルフォン多孔質膜１３（富士写真フイルム製ＰＳ、直径２０．１ｍｍ）を重ね、更にその上に中心に直径８ｍｍの穴を有する直径２０．１ｍｍの粘着ビニールテープ１４を圧着した。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
【表１】
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【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
１…濾過ユニット
２…フィルター容器
３…シリンジ
４…容器本体
５…蓋体
６…フィルター収容部
７，９…血液出入口
８…ノズル
１０…ガラス繊維濾紙
１１…セルロース濾紙
１２…両面テープ
１３…ポリスルホン微多孔性膜
１４…流出面積規制部材