(57)【要約】【課題】大型培養容器の底板の面積が１００ｃｍ２以上である吸水性の良好な容器入り培地を使用した検出感度が良好な食品の微生物検査法を提供する。【解決手段】培地を培養容器に入れた容器入り培地を使用して食品に含有する微生物を検査する方法において、使用する容器入り培地が、底板の面積が１００ｃｍ２以上の大型培養容器に培地を入れたものであることを特徴とする食品の微生物検査法であって、大型培養容器の底板の形状が円形であることを好ましい態様としている。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
培地を培養容器に入れた容器入り培地を使用して食品に含有する微生物を検査する方法であって、使用する容器入り培地が、底板の面積が１００ｃｍ２以上の大型培養容器に培地を入れたものであることを特徴とする食品の微生物検査法。
【請求項２】
大型培養容器の底板の形状が円形である請求項１に記載の食品の微生物検査法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、培養容器の底板の面積が１００ｃｍ２以上である容器入り培地を使用した食品の微生物検査法に関し、特に検出感度が良好な食品の微生物検査法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
食品の安全性確保のための衛生的品質チェックの他に、食品の品質・保存性向上のためには変敗微生物の汚染防止などの微生物管理が必要である。すなわち、原材料、中間製品、製品などの経時的試料についての微生物検査、食品製造に使用する装置、機械、器具類等の付着微生物、処理・加工・包装場などの空中微生物、あるいは、作業員の手指の検査等、微生物学的品質管理は食品の製造において重要な問題となっている。
【０００３】
一般に生菌数の測定には、標準寒天平板菌数測定法が用いられるが、ここで使用される平板（培養容器）は、直径９０ｍｍ、深さ１５ｍｍ程度のシャーレ（以下、このサイズのシャーレを通常のシャーレと記載する。）等が例示され、これに培地が添加されて検査に供される。この場合、培地に塗抹される検査試料の容量は、培養容器の底板の面積の大きさにより限定されるものであった。このため、わずかな微生物汚染を感度良く検出するために、培地に塗抹する検査試料の容量を増やそうとしても量的に限界があり、希薄な検査試料中のわずかな微生物を検出する目的で検査試料を増やす場合においては、前記通常のシャーレを使用した培地による微生物検査では精度の良い結果は得られなかった。このような状況から、通常の培地組成を有し、検査試料を大量（２ｍｌ以上）に添加できる吸水性の良好な大型培地による高感度な食品の微生物検査法が待望されていた。
【０００４】
従来から、シャーレの直径が１５０ｍｍである大型培地（日本ベクトンディッキンソン社製。例えば、製品番号２２１２３７：トリプチケースソイ寒天培地（１５０×１５ｍｍ）、又は製品番号２９２３０５：レシチン，ポリソルベート８０添加トリプチケースソイ寒天培地（１５０×１５ｍｍ）。以下、従来技術１と記載する。）が市販されていた。また、検査に使用する検査試料が５ｍｌまで添加することが可能な高吸収型の大腸菌群測定プレート（３Ｍ〔ミネソタ・マイニング・アンド・マニュファクチャリング・カンパニー〕社製。製品番号６４０５又は６４１５：Ｈｉｇｈ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  Ｃｏｌｉｆｏｒｍ  Ｃｏｕｎｔ  Ｐｌａｔｅ。以下、従来技術２と記載する。）が市販されていた。しかしながら、前記従来技術には以下に記載する問題点が含まれていた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
従来技術１の大型培地は、シャーレの直径が１５０ｍｍであり通常のシャーレに比して十分な大きさを有しているが、この大型培地の用途は空中の浮遊菌の測定などの環境測定用に使用されるものであった。また、培地の吸水性を考慮したものではなかったために、多量のサンプルの接種ができず、食品の微生物検査には適さず、本発明の課題を解決するには至らなかった。
【０００６】
また、従来技術２の大腸菌群測定プレートは、検査試料が５ｍｌまで添加することが可能な高吸収型の培地が採用されているが、粉体化された培地が培養容器の底板に接着した乾燥培地タイプである。このため、検査時に水を含む液状の検査試料を加えて培地を膨潤させて復元させる必要があり、検査試料の容量や成分の違いによって膨潤した培地の組成等の条件が変化するという問題が残されていた。また、迅速で正確な微生物数の測定試験には適さないことから、一定条件に基づく食品の微生物検査を行うには十分なものとは言い難いものであった。即ち、あらかじめ通常の培地組成を有し、吸水性を付与した培地を大型培養容器に入れたものは存在しなかった。
【０００７】
本発明は前記事情に鑑みてなされたものであり、通常の培地組成を有し、検査試料を大量（２ｍｌ以上）に添加できる吸水性の良好な大型生培地による高感度な食品の微生物検査法を提供することを目的としている。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
前記目的を達成するための本発明は、培地を培養容器に入れた容器入り培地を使用して食品に含有する微生物を検査する方法において、使用する容器入り培地が、底板の面積が１００ｃｍ２以上の大型培養容器に培地を入れたものであることを特徴とする食品の微生物検査法であって、大型培養容器の底板の形状が円形であることを好ましい態様としている。
【０００９】
【発明の実施の形態】
次に、本発明の好ましい実施態様について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施態様に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。
【００１０】
本発明の食品の微生物検査法（以下、本発明の検査法と略記することがある。）は、通常の一般生菌数の計測に用いられる標準寒天平板菌数測定法に基づき、混釈（希釈）平板法や塗抹平板法等に適用することが可能である。
【００１１】
本発明の検査法に使用する検査試料は、培養後の培養容器に３０〜３００個程度のコロニーが得られるように、検体中の推定菌数に応じて希釈を行うことが可能であるが、あらかじめ検査試料溶液中の菌数が少ないことがわかっている場合には、希釈等をしないで検査試料原液をそのまま検査に供することができる。培養容器１枚あたりに添加できる検査試料の容量は、０．１〜５．０ｍｌの範囲で適宜選択することができる。特に菌数が少ない検査試料の場合は、２．０ｍｌ以上を添加することが可能である。
【００１２】
図１は本発明の培養容器Ｓ（シャーレ）の第１実施形態を示す分解斜視図であり、この培養容器Ｓは、容器本体１０と、この容器本体１０に被せる蓋体２０とから構成され、容器本体１０に培地を収容して蓋体２０を被せた状態で恒温器等に収容して培養するために用いられる。容器本体１０は、可撓性のある合成樹脂製シートを成形した一体物であり、底板１１と、周囲壁１２とを有している。前記蓋体２０は、可撓性のある合成樹脂製シート、好ましくは前記容器本体１０と同じか又は類似の合成樹脂製シートを成形した一体物であり、天板２１と、立ち上げ壁２２と、折返部２３とを有している。前記天板２１は略円板状であり、この天板２１の外周部には、その全周にわたって該天板２１の上面（図１において上側の面）の側に立ち上げられた立ち上げ壁２２が周設されている。この立ち上げ壁２２の天板２１からの立ち上げ先端（上端）には、外側にフック状に折り返した形状の折返部２３が該立ち上げ壁２２の全周にわたって形成、周設されている。前記折返部２３は、立ち上げ壁２２の立ち上げ先端（上端）から外側にフランジ状に張り出されてリング状の平坦な上面２４を形成する張り出し部２５と、この張り出し部２５の外周部の全周にわたって前記上面２４に対する下面側に突出させて周設された返し部２６とを有している。なお、本発明において「フック状」とは、断面が台形状のものに限られる訳ではなく、断面逆Ｕ字状、断面逆Ｖ字状、断面凸字状等、折り返し形状を形成できるものであればいかなる形状であっても「フック状」の範囲に包含される。
【００１３】
図２は容器本体１０を示す図であり、図２（ａ）は容器本体１０の平面図、（ｂ）は側断面図である。図２（ａ）に示すように、本実施形態において、容器本体１０の底板１１は略円板状であり、この底板１１の外周部には、その全周にわたって立ち上げるようにして形成された周囲壁１２が周設されている。この周囲壁１２の底板１１からの立ち上げ先端（上端）には、図２（ｂ）に示すように、外側にフック状に折り返した形状の折返部１３が該周囲壁１２の全周にわたって形成、周設されている。前記折返部１３は、周囲壁１２の立ち上げ先端（上端）から外側にフランジ状に張り出されてリング状の平坦な上面１４を形成する張り出し部１５と、この張り出し部１５の外周部の全周にわたって前記上面１４に対する下面側に突出させて周設された返し部１６とを有している。
【００１４】
尚、容器本体１０及び蓋体２０の形状は、平面視円形に限定されず、容器本体１０の底板面積が１００ｃｍ２以上であれば、三角形、四角形、又は五角形以上の多角形、楕円形等のいずれの形状にすることが可能であり、１００〜１７０ｃｍ２の面積を有するものが好ましい。尚、容器本体１０に収容する培地の量は、１枚あたり３０ｇ以上、特に３０〜８０ｇが好ましい。すなわち面積が１００ｃｍ２以上、培地の量が３０ｇ以上であれば、あらかじめ菌数が少ないことがわかっている検査試料の生菌数を測定する際に、検査試料を２ｍｌ以上培地に添加することが可能であり、通常のシャーレを使用した培地で検査する場合に比して高感度で検査試料中の微生物を検出することが可能となる。
【００１５】
本発明の検査法に使用する培地は、培地成分として、微生物の生育に必要な成分である、グルコース、乳糖等の糖類、アミノ酸、ペプトン、硝酸塩、アンモニウム塩等の窒素源、カリウム、リン、マグネシウム等の無機塩類、ビタミン等の生育因子を含有させることが可能である。また、培地は、単に培地成分を溶解水に溶解させた液体培地と液体培地にゲル化剤を添加して固化させた固体培地に大別されるが、本発明の検査法では固体培地を選択することができ、本発明の固体培地とは前記定義したとおり、寒天等のゲル化剤で固化させた平板培地等の使用時に固体状の培地である。ゲル化剤としては、寒天、ゼラチン、ジェランガム、カラギーナン等を例示することができる。
【００１６】
本発明の培地の組成を具体的に例示するならば、以下に示す組成が挙げられる。例えば、日本食品衛生法、日本薬局方、国際酪農連盟の規格基準（ＩＤＦ  ＳＴＡＮＤＡＲＤ）等の微生物試験法等に規定されている普通寒天培地、標準寒天培地、デオキシコレート寒天培地、ＥＭＢ培地、遠藤培地、ＢＣＰ加プレートカウント寒天培地、卵黄加マンニット食塩寒天培地、ポテトデキストロース寒天培地、バイオレットレッド胆汁酸塩乳糖（ＶＲＢＬ）寒天培地、酵母エキス−ブドウ糖−クロラムフェニコール寒天培地、酸性ＭＲＳ培地、Ｍ１７培地、Ｂａｉｒｄ−Ｐａｒｋｅｒ寒天培地（ＥＴＧＰ寒天培地）等〔［日本薬学会編、「乳製品試験法・注解」、金原出版株式会社、平成２年４月１０日、ｐ．１１１−１２５］、［「ＩＤＦ  ＳＴＡＮＤＡＲＤ（１９９１年改訂版）」、社団法人日本国際酪農連盟発行、平成３年１２月２５日、ｐ．３０６、ｐ．４７０、ｐ．６４５−６４７］、［坂崎利一監修、「新細菌培地学講座・下ＩＩ（第二版）」、株式会社近代出版、１９９６年８月１５日、ｐ．６２−６３］〕である。
【００１７】
前記の培地は、検査試料を添加した際の吸水性を向上させる目的で、固体培地組成中の溶解水の５〜３０％程度を減圧乾燥法により乾燥した部分乾燥固体培地として、本発明の検査法において使用することが可能である。具体的には滅菌処理済の培地を無菌的に培養容器（シャーレ）に分注し、冷却固化した後、固化した培地を乾燥機を使用して１ｋＰａの圧力で減圧乾燥し、固体培地から部分的に溶解水を除去する。このようにして製造された固体培地は、乾燥に起因する微生物の生育阻害が認められず、吸水性に優れ、短時間で大量の検査試料を塗抹することが可能で、迅速で正確な微生物数の測定試験に最適な固体培地である。
【００１８】
本発明の検査法における微生物の培養温度は特に限定されず、検査する食品の対象となる微生物の性質に応じて適宜設定することが可能である。
【００１９】
次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００２０】
【実施例】
実施例１
（生乳中の大腸菌群の検出）
基礎培地として次の組成の各原料を均一に分散又は溶解し、冷却固化した後の最終的な培地のｐＨが７．２になるように０．１ｍｏｌ／ｌの水酸化ナトリウム水溶液又は０．１ｍｏｌ／ｌの塩酸水溶液を添加して調整した。このｐＨを調整した基礎培地をオートクレーブ（岩楯医療機器製作所社製）を使用して１００℃で１０分間加熱殺菌し、その後５０℃に冷却して、図１と同型の直径１２ｃｍのプラスチック製シャーレ（底板面積：１１３ｃｍ２）に１枚あたり４４ｇを分注し、冷却固化した。固化した培地を乾燥機（ＬＡＢＣＯＮＣＯ社製）を使用して１．５ｋＰａの圧力で減圧乾燥法により乾燥し、水分１４ｍｌを除去して、培地量３０ｇの固体平板培地（大腸菌群の検出用固体培地）約２５枚を製造した。
【００２１】
原材料                                              配合量
カゼインペプトン（ディフコ社製）                    １０ｇ
乳糖（メルク社製）                                  １０ｇ
デスオキシコール酸ナトリウム（メルク社製）            １ｇ
塩化ナトリウム（和光純薬工業社製）                    ５ｇ
リン酸水素二カリウム（和光純薬工業社製）              ２ｇ
クエン酸鉄アンモニウム（和光純薬工業社製）            ２ｇ
ニュートラルレッド（和光純薬工業社製）                ０．０３３ｇ
寒天（伊那食品工業社製）                            １５ｇ
精製水                                          １４９０ｍｌ
【００２２】
検体として搾乳後より１週間経過した、未殺菌の牛の乳（生乳）を使用して前記平板培地により大腸菌群の検出を行った。すなわち、該生乳を２ｍｌ前記固体平板培地に接種し、恒温乾燥機を用いて３７℃で２０時間培養し、集落の発現を観察し、その陽性陰性を判定した。
【００２３】
その結果、固体平板培地上に赤く変色した２０個の集落と、この色調とは異なる７つの集落が観察された。赤く変色した集落について常法（厚生省生活衛生局監修、「食品衛生検査指針  微生物編」、日本食品衛生協会発行、１９９０年１２月２５日、ｐ．７９−９１）に基づき細菌の同定を行った結果、赤色に変色した集落は全て大腸菌群に属する菌であることが確認された。また赤く変色しなかった集落についても、上記の方法にて大腸菌群の確認を行ったが、全て大腸菌群とは確認されなかった。即ち、この大腸菌群検出用培地を用いた本発明の微生物検査法により、生乳中の大腸菌群を確実かつ高感度に検出できることが判明した。
【００２４】
【発明の効果】
以上詳記したとおり、本発明は培養容器本体の底板の面積が１００ｃｍ２以上である容器入り培地を使用した食品の微生物検査法に関するものであり、通常の培地組成を有していることから様々な検査培地に適用して幅広い微生物の検査を行うことができる。また、培地の吸水性が良好であることから、検査試料を大量に添加でき、微生物を高感度に検出することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の食品の微生物試験法に使用する培養容器（シャーレ）の分解斜視図である。
【図２】図１に示す培養容器に用いられる容器本体を示し、（ａ）は容器本体の平面図、（ｂ）は側断面図である。
【符号の説明】
１０…容器本体、１１…底板、１２…周囲壁、１３…折返部、１４…上面、１５…張り出し部、１６…返し部、２０…蓋体、２１…天板、２２…立ち上げ壁、２３…折返部、２４…上面、２５…張り出し部、２６…返し部、Ｓ…培養容器。
【図１】
2004290089.tif 000002
【図２】
2004290089.tif 000003