(57)【要約】【課題】潰瘍性大腸炎を反映する疾患マーカー、該疾患マーカーを利用した潰瘍性大腸炎の検出方法、該疾患の改善に有用な薬物のスクリーニング方法を提供する。【解決手段】ＣＨＩ３Ｌ２　遺伝子の塩基配列、ＤＵＯＸ２　遺伝子の塩基配列、ＶＲＬ−１　遺伝子の塩基配列、ＩＬ１７Ｒ　遺伝子の塩基配列、ＧＲＯ１　遺伝子の塩基配列または　ＧＲＯ３遺伝子の塩基配列において、連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／または該ポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドを、潰瘍性大腸炎の疾患マーカーとして利用する。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＨＩ３Ｌ２　遺伝子の塩基配列、ＤＵＯＸ２　遺伝子の塩基配列、ＶＲＬ−１　遺伝子の塩基配列、ＩＬ１７Ｒ　遺伝子の塩基配列、ＧＲＯ１　遺伝子の塩基配列または　ＧＲＯ３遺伝子の塩基配列において、連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／または該ポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドからなる、潰瘍性大腸炎の疾患マーカー。
【請求項２】
潰瘍性大腸炎の検出においてプローブまたはプライマーとして使用される請求項１記載の疾患マーカー。
【請求項３】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、潰瘍性大腸炎の検出方法：
（ａ）被験者の生体試料から調製されたＲＮＡまたはそれから転写された相補的ポリヌクレオチドと請求項１または２に記載の疾患マーカーとを結合させる工程、
（ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試料由来のＲＮＡまたは該ＲＮＡから転写された相補的ポリヌクレオチドを、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の測定結果に基づいて、潰瘍性大腸炎の罹患を判断する工程。
【請求項４】
工程（ｃ）における潰瘍性大腸炎の罹患の判断が、被験者について得られる測定結果を正常者について得られる測定結果と対比して、疾患マーカーへの結合量が増大していることを指標として行われる、請求項３に記載の潰瘍性大腸炎の検出方法。
【請求項５】
ＣＨＩ３Ｌ２　、ＤＵＯＸ２　、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１または　ＧＲＯ３　を認識する抗体を含有する、潰瘍性大腸炎の疾患マーカー。
【請求項６】
潰瘍性大腸炎の検出においてプローブとして使用される請求項５記載の疾患マーカー。
【請求項７】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む潰瘍性大腸炎の検出方法：
（ａ）被験者の生体試料から調製されたタンパク質と請求項５または６に記載の疾患マーカーとを結合させる工程、
（ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試料由来のタンパク質を、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の測定結果に基づいて、潰瘍性大腸炎の罹患を判断する工程。
【請求項８】
工程（ｃ）における潰瘍性大腸炎の罹患の判断が、被験者について得られる測定結果を正常者について得られる測定結果と対比して、疾患マーカーへの結合量が増大していることを指標として行われる請求項７記載の潰瘍性大腸炎の検出方法。
【請求項９】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質とＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞におけるＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応する遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現量を減少させる被験物質を選択する工程。
【請求項１０】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかの発現を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質とＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞におけるＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかの発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応するタンパク質の発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかの発現量を減少させる被験物質を選択する工程。
【請求項１１】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の機能または活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質をＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３に接触させる工程、
（ｂ）上記（ａ）の工程に起因して生じるＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の機能または活性を測定し、該機能または活性を被験物質を接触させない場合のＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の機能または活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の機能または活性の低下をもたらす被験物質を選択する工程。
【請求項１２】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＣＨＩ３Ｌ２のキチンへの結合活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質と、キチンおよびＣＨＩ３Ｌ２を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させたキチンのＣＨＩ３Ｌ２との結合活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照キチンのＣＨＩ３Ｌ２との結合活性と比較する工程、
（ｃ）上記　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記キチンのＣＨＩ３Ｌ２との結合活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【請求項１３】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＤＵＯＸ２のｃＡＭＰによる被発現誘導活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＤＵＯＸ２発現細胞を接触させ、細胞内ｃＡＭＰ濃度を上昇させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＤＵＯＸ２発現量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＤＵＯＸ２発現量と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のｃＡＭＰ濃度の上昇によるＤＵＯＸ２発現量増加を抑制する被験物質を選択する工程。
【請求項１４】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＤＵＯＸ２の酵素活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＮＡＤＰＨおよびＤＵＯＸ２を水溶液中で接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた水溶液のＮＡＤＰＨ酸化活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照水溶液のＮＡＤＰＨ酸化活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記水溶液のＮＡＤＰＨ酸化活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【請求項１５】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＤＵＯＸ２の酵素活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＮＡＤＰＨおよびＤＵＯＸ２を水溶液中で接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた水溶液の過酸化水素発生量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照水溶液の過酸化水素発生量と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記水溶液の過酸化水素発生量を抑制する被験物質を選択する工程。
【請求項１６】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＶＲＬ−１の熱刺激による活性化を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＶＲＬ−１発現細胞を接触させ、熱刺激を加える工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞の膜電位の変化を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞の膜電位の変化と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞の熱刺激による膜電位の変化を抑制する被験物質を選択する工程。
【請求項１７】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＩＬ１７Ｒを介した破骨細胞分化促進活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、骨芽細胞又は骨芽細胞様ストローマ細胞と、骨髄細胞およびＩＬ−１７を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＩＬ−１７による破骨細胞への分化を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＩＬ−１７による破骨細胞への分化と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＩＬ−１７によるＩＬ１７Ｒを介した破骨細胞への分化を抑制する被験物質を選択する工程。
【請求項１８】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＩＬ１７Ｒを介したサイトカイン産生活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＩＬ１７Ｒを発現しており、かつ炎症性サイトカイン産生可能な細胞およびＩＬ−１７を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＩＬ−１７による炎症性サイトカイン産生量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＩＬ−１７による炎症性サイトカイン産生量と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＩＬ−１７によるＩＬ１７Ｒを介した炎症性サイトカイン産生量を抑制する被験物質を選択する工程。
【請求項１９】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＩＬ１７Ｒの結合活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＩＬ１７Ｒを発現する細胞または該細胞から調製した細胞画分およびＩＬ−１７を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞または細胞画分のＩＬ−１７との結合活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞またはその細胞から調製した細胞画分のＩＬ−１７との結合活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞または細胞画分におけるＩＬ−１７とＩＬ１７Ｒとの結合活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【請求項２０】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＧＲＯ１による遊走活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、好中球およびＧＲＯ１を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＧＲＯ１による遊走活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＧＲＯ１による遊走活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＧＲＯ１による遊走活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【請求項２１】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＧＲＯ１の受容体への結合活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＧＲＯ１受容体を発現する細胞または該細胞から調製した細胞画分およびＧＲＯ１を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞または細胞画分のＧＲＯ１との結合活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞またはその細胞から調製した細胞画分のＧＲＯ１との結合活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞または細胞画分のＧＲＯ１との結合活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【請求項２２】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＧＲＯ１の細胞増殖活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＧＲＯ１反応性細胞およびＧＲＯ１を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＧＲＯ１による増殖活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＧＲＯ１による増殖活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＧＲＯ１による増殖活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【請求項２３】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＧＲＯ１によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、好中球およびＧＲＯ１を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＧＲＯ１によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＧＲＯ１による活性化と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＧＲＯ１によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離量を抑制する被験物質を選択する工程。
【請求項２４】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＧＲＯ３による遊走活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、好中球およびＧＲＯ３を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＧＲＯ３による遊走活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＧＲＯ３による遊走活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＧＲＯ３による遊走活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【請求項２５】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＧＲＯ３の受容体結合活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＧＲＯ３受容体を発現する細胞または該細胞から調製した細胞画分およびＧＲＯ３を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞または細胞画分のＧＲＯ３との結合活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞またはその細胞から調製した細胞画分のＧＲＯ３との結合活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞または細胞画分のＧＲＯ３との結合活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【請求項２６】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＧＲＯ３によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、好中球およびＧＲＯ３を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＧＲＯ３によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＧＲＯ３による活性化と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＧＲＯ３によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離量を抑制する被験物質を選択する工程。
【請求項２７】
潰瘍性大腸炎の改善または治療剤の有効成分を探索するための方法である、請求項９乃至２６のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項２８】
ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質を有効成分とする、潰瘍性大腸炎の改善または治療剤。
【請求項２９】
ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質が請求項９記載のスクリーニング法により得られるものである、請求項２８記載の潰瘍性大腸炎の改善または治療剤。
【請求項３０】
ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかの発現量、機能または活性を抑制する物質を有効成分とする、潰瘍性大腸炎の改善または治療剤。
【請求項３１】
ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかの発現量、機能または活性を抑制する物質が、請求項１０乃至２６に記載のスクリーニング法により得られるものである、請求項３０記載の潰瘍性大腸炎の改善または治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は潰瘍性大腸炎の診断に有用な疾患マーカーに関する。より詳細には、本発明は、腸炎症状の進展に関連して生じる潰瘍性大腸炎の遺伝子診断においてプライマーまたは検出プローブとして有効に利用できる疾患マーカーに関する。また本発明は、かかる疾患マーカーを利用した腸炎症状の進展に関連する潰瘍性大腸炎の検出方法（診断方法）に関する。
【０００２】
さらに本発明は、上記疾患マーカーを利用して、腸炎症状の進展に関連して生じる潰瘍性大腸炎の改善薬または治療薬として有効な物質をスクリーニングする方法、並びに該方法によって得られる上記物質を有効成分とする潰瘍性大腸炎の改善薬または治療薬に関する。
【０００３】
【従来の技術】
腸は、生体の生命活動に必須である栄養分・水分を消化吸収する器官である。一方で病原体などの異物を排除するための免疫防御機能も備えており相反する性質をバランスよく制御することで生命の維持を担っている器官でもある。しかしこれら機能バランスに異常が生じると、この動的平衡状態が破綻し様々な腸疾患が引き起こされることが知られている。特に近年患者数が増加してきている潰瘍性大腸炎は、スルファサラジン等の５−アミノサリチル酸製剤やステロイド等の薬物療法では満足できる治療効果が得られておらず、そのため腸切除手術、白血球除去等で治療している状態であり、よりよい薬物が必要とされている。
【０００４】
近年、抗ＴＮＦ抗体などのタンパク製剤がクローン病の治療剤として有効であることが知られている。しかしながら高価な薬剤でありステロイド耐性の患者のみの適応であり、また潰瘍性大腸炎に対する効果も弱いことから、未だ満足できる医療状況に無いのが現状である。
さらに、個々の患者によって薬物療法への反応が異なっており、現在用いられている治療薬すべてにおいて薬物療法に反応しない潰瘍性大腸炎患者が存在している。また、遺伝子多型と疾患感受性の解析からインターロイキン−１の多型やＮＯＤ２遺伝子の多型が疾患原因遺伝子と考えられるケースがあり、基礎医学的な研究においても個々の患者による病態発症の遺伝的背景に差異のあることが明らかになりつつある。
【０００５】
最近の医療現場では、潰瘍性大腸炎に限らず、個々の患者の症状に合わせて治療法を的確に選択することが望まれるようになってきている。高齢化社会でのＱＯＬ（Ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　ｌｉｆｅ）向上の必要性が認識されてきた近年では、特に、万人に共通した治療ではなく、個々の患者の症状に合わせて適切な治療が施されることが強く求められている。このような所謂テイラーメイド治療を行うためには、個々の疾患について患者の症状やその原因（遺伝的背景）を的確に反映する疾患マーカーが有用であり、その探索並びに開発を目指した研究が精力的に行われているのが現状である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、潰瘍性大腸炎の診断及び治療に有用な疾患マーカーを提供することを目的とする。より詳細には、本発明は腸炎症状の進展に関連して生じる潰瘍性大腸炎を特異的に反映した疾患マーカーを提供することを目的とする。さらに本発明は該疾患マーカーを利用した潰瘍性大腸炎の検出方法（遺伝子診断方法）、該疾患の改善または治療に有用な薬物をスクリーニングする方法、並びに該疾患の改善または治療に有用な薬物を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を行っていたところ、従来は潰瘍性大腸炎との関連が明らかではなかった以下の遺伝子：ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子が、潰瘍性大腸炎患者の病変部位において、正常大腸組織やクローン病患者大腸組織に比べ発現が大きく促進されていることを見出した。さらにこれらの遺伝子は、潰瘍性大腸炎病態関連組織である消化管系組織、および潰瘍性大腸炎の発症機構に関与する免疫系組織以外の臓器では、ほとんど発現していないことを見出した。
【０００８】
以上のように本発明者らは、消化管が傷害する自己免疫疾患と考えられている潰瘍性大腸炎において、これらの遺伝子、若しくはこれらの発現産物（タンパク質）が、優れた疾患マーカーであるとの知見を得た。さらに、これら遺伝子の発現抑制や、当該遺伝子によりコードされるタンパク質の発現抑制や機能（活性）抑制を指標としたスクリーニング系は、新たなメカニズムに基づく潰瘍性大腸炎の予防、改善または治療薬の探索に有効であるとの知見を得た。
本発明はかかる知見を基礎にして完成するに至ったものである。
【０００９】
すなわち、本発明は、下記に掲げるものである：
（１）　ＣＨＩ３Ｌ２　遺伝子の塩基配列、ＤＵＯＸ２　遺伝子の塩基配列、ＶＲＬ−１　遺伝子の塩基配列、ＩＬ１７Ｒ　遺伝子の塩基配列、ＧＲＯ１　遺伝子の塩基配列または　ＧＲＯ３　遺伝子の塩基配列において、連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／または該ポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドからなる、潰瘍性大腸炎の疾患マーカー。
（２）　潰瘍性大腸炎の検出においてプローブまたはプライマーとして使用される前記（１）記載の疾患マーカー。
（３）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、潰瘍性大腸炎の検出方法：
（ａ）被験者の生体試料から調製されたＲＮＡまたはそれから転写された相補的ポリヌクレオチドと前記（１）または（２）に記載の疾患マーカーとを結合させる工程、
（ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試料由来のＲＮＡまたは該ＲＮＡから転写された相補的ポリヌクレオチドを、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の測定結果に基づいて、潰瘍性大腸炎の罹患を判断する工程。
（４）　工程（ｃ）における潰瘍性大腸炎の罹患の判断が、被験者について得られる測定結果を正常者について得られる測定結果と対比して、疾患マーカーへの結合量が増大していることを指標として行われる、前記（３）に記載の潰瘍性大腸炎の検出方法。
（５）　ＣＨＩ３Ｌ２　、ＤＵＯＸ２　、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１または　ＧＲＯ３　を認識する抗体を含有する、潰瘍性大腸炎の疾患マーカー。
（６）　潰瘍性大腸炎の検出においてプローブとして使用される前記（５）記載の疾患マーカー。
（７）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む潰瘍性大腸炎の検出方法：
（ａ）被験者の生体試料から調製されたタンパク質と前記（５）または（６）に記載の疾患マーカーとを結合させる工程、
（ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試料由来のタンパク質を、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の測定結果に基づいて、潰瘍性大腸炎の罹患を判断する工程。
（８）　工程（ｃ）における潰瘍性大腸炎の罹患の判断が、被験者について得られる測定結果を正常者について得られる測定結果と対比して、疾患マーカーへの結合量が増大していることを指標として行われる前記（７）記載の潰瘍性大腸炎の検出方法。
（９）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質とＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞におけるＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応する遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現量を減少させる被験物質を選択する工程。
（１０）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかの発現を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質とＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞におけるＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかの発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応するタンパク質の発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかの発現量を減少させる被験物質を選択する工程。
（１１）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の機能または活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質をＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３に接触させる工程、
（ｂ）上記（ａ）の工程に起因して生じるＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の機能または活性を測定し、該機能または活性を被験物質を接触させない場合のＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の機能または活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の機能または活性の低下をもたらす被験物質を選択する工程。
（１２）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＣＨＩ３Ｌ２のキチンへの結合活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）被験物質と、キチンおよびＣＨＩ３Ｌ２を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させたキチンのＣＨＩ３Ｌ２との結合活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照キチンのＣＨＩ３Ｌ２との結合活性と比較する工程、
（ｃ）上記　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記キチンのＣＨＩ３Ｌ２との結合活性を抑制する被験物質を選択する工程。
（１３）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＤＵＯＸ２のｃＡＭＰによる被発現誘導活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＤＵＯＸ２発現細胞を接触させ、細胞内ｃＡＭＰ濃度を上昇させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＤＵＯＸ２発現量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＤＵＯＸ２発現量と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のｃＡＭＰ濃度の上昇によるＤＵＯＸ２発現量増加を抑制する被験物質を選択する工程。
（１４）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＤＵＯＸ２の酵素活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＮＡＤＰＨおよびＤＵＯＸ２を水溶液中で接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた水溶液のＮＡＤＰＨ酸化活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照水溶液のＮＡＤＰＨ酸化活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記水溶液のＮＡＤＰＨ酸化活性を抑制する被験物質を選択する工程。
（１５）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＤＵＯＸ２の酵素活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＮＡＤＰＨおよびＤＵＯＸ２を水溶液中で接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた水溶液の過酸化水素発生量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照水溶液の過酸化水素発生量と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記水溶液の過酸化水素発生量を抑制する被験物質を選択する工程。
（１６）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＶＲＬ−１の熱刺激による活性化を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＶＲＬ−１発現細胞を接触させ、熱刺激を加える工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞の膜電位の変化を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞の膜電位の変化と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞の熱刺激による膜電位の変化を抑制する被験物質を選択する工程。
（１７）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＩＬ１７Ｒを介した破骨細胞分化促進活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、骨芽細胞又は骨芽細胞様ストローマ細胞と、骨髄細胞およびＩＬ−１７を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＩＬ−１７による破骨細胞への分化を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＩＬ−１７による破骨細胞への分化と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＩＬ−１７によるＩＬ１７Ｒを介した破骨細胞への分化を抑制する被験物質を選択する工程。
（１８）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＩＬ１７Ｒを介したサイトカイン産生活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＩＬ１７Ｒを発現しており、かつ炎症性サイトカイン産生可能な細胞およびＩＬ−１７を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＩＬ−１７による炎症性サイトカイン産生量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＩＬ−１７による炎症性サイトカイン産生量と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＩＬ−１７によるＩＬ１７Ｒを介した炎症性サイトカイン産生量を抑制する被験物質を選択する工程。
（１９）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＩＬ１７Ｒの結合活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＩＬ１７Ｒを発現する細胞または該細胞から調製した細胞画分およびＩＬ−１７を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞または細胞画分のＩＬ−１７との結合活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞またはその細胞から調製した細胞画分のＩＬ−１７との結合活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞または細胞画分におけるＩＬ−１７とＩＬ１７Ｒとの結合活性を抑制する被験物質を選択する工程。
（２０）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＧＲＯ１による遊走活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、好中球およびＧＲＯ１を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＧＲＯ１による遊走活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＧＲＯ１による遊走活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＧＲＯ１による遊走活性を抑制する被験物質を選択する工程。
（２１）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＧＲＯ１の受容体への結合活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＧＲＯ１受容体を発現する細胞または該細胞から調製した細胞画分およびＧＲＯ１を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞または細胞画分のＧＲＯ１との結合活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞またはその細胞から調製した細胞画分のＧＲＯ１との結合活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞または細胞画分のＧＲＯ１との結合活性を抑制する被験物質を選択する工程。
（２２）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＧＲＯ１の細胞増殖活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＧＲＯ１反応性細胞およびＧＲＯ１を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＧＲＯ１による増殖活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＧＲＯ１による増殖活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＧＲＯ１による増殖活性を抑制する被験物質を選択する工程。
（２３）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＧＲＯ１によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、好中球およびＧＲＯ１を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＧＲＯ１によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＧＲＯ１による活性化と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＧＲＯ１によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離量を抑制する被験物質を選択する工程。
（２４）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＧＲＯ３による遊走活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、好中球およびＧＲＯ３を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＧＲＯ３による遊走活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＧＲＯ３による遊走活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＧＲＯ３による遊走活性を抑制する被験物質を選択する工程。
（２５）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＧＲＯ３の受容体結合活性を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、ＧＲＯ３受容体を発現する細胞または該細胞から調製した細胞画分およびＧＲＯ３を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞または細胞画分のＧＲＯ３との結合活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞またはその細胞から調製した細胞画分のＧＲＯ３との結合活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞または細胞画分のＧＲＯ３との結合活性を抑制する被験物質を選択する工程。
（２６）　下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、ＧＲＯ３によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）　被験物質と、好中球およびＧＲＯ３を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＧＲＯ３によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＧＲＯ３による活性化と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＧＲＯ３によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離量を抑制する被験物質を選択する工程。
（２７）　潰瘍性大腸炎の改善または治療剤の有効成分を探索するための方法である、前記（９）乃至（２６）のいずれかに記載のスクリーニング方法。
（２８）　ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質を有効成分とする、潰瘍性大腸炎の改善または治療剤。
（２９）　ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質が前記（９）記載のスクリーニング法により得られるものである、前記（２８）記載の潰瘍性大腸炎の改善または治療剤。
（３０）　ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかの発現量、機能または活性を抑制する物質を有効成分とする、潰瘍性大腸炎の改善または治療剤。
（３１）　ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかの発現量、機能または活性を抑制する物質が、前記（１０）乃至（２６）に記載のスクリーニング法により得られるものである、前記（３０）記載の潰瘍性大腸炎の改善または治療剤。
【００１０】
上記のように、本発明によれば、潰瘍性大腸炎の疾患マーカー、該疾患の検出系、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、またはＧＲＯ３遺伝子の発現を抑制する物質のスクリーニング系、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の発現、機能もしくは活性を抑制する物質のスクリーニング系、およびこれらの物質を有効成分とする潰瘍性大腸炎の改善および治療剤が提供される。
【００１１】
本発明は、前述するように、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子が、潰瘍性大腸炎患者の大腸病変組織において、大腸正常組織と比較して有意に発現上昇しており、またこれらの遺伝子は、正常組織においては、潰瘍性大腸炎病態関連組織である消化管系組織、および潰瘍性大腸炎の発症機構に関与する免疫系組織以外の臓器では、ほとんど発現していないことを見出したことに基づくものである。従って、これらの遺伝子及びその発現産物〔タンパク質、（ポリ）（オリゴ）ペプチド〕は、潰瘍性大腸炎の解明、診断、予防及び治療に有効に利用することができ、かかる利用によって医学並びに臨床学上、有用な情報や手段を得ることができる。さらに、個体（生体組織）における、上記遺伝子の発現またはその発現産物の検出、または該遺伝子の変異またはその発現不全の検出は、潰瘍性大腸炎の解明や診断に有効に利用することができる。
【００１２】
また、これらの遺伝子およびその発現産物並びにそれらからの派生物（例えば、遺伝子断片、抗体など）は、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、またはＧＲＯ３遺伝子の発現を抑制する物質、およびＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の発現量、機能もしくは活性を抑制する物質のスクリーニングに有用であり、該スクリーニングによって得られる物質は、潰瘍性大腸炎の予防、改善および治療薬として有効である。更に、これらの遺伝子のアンチセンス核酸（アンチセンスヌクレオチド）は、潰瘍性大腸炎の予防、改善及び治療薬として有用である。
【００１３】
【発明の実施の形態】
以下、本明細書において、アミノ酸、（ポリ）ペプチド、（ポリ）ヌクレオチドなどの略号による表示は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢの規定〔ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ，　Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ．，　１３８：　９　（１９８４）〕、「塩基配列又はアミノ酸配列を含む明細書等の作成のためのガイドライン」（日本国特許庁編）、および当該分野における慣用記号に従う。
【００１４】
本明細書において「遺伝子」または「ＤＮＡ」とは、２本鎖ＤＮＡのみならず、それを構成するセンス鎖およびアンチセンス鎖といった各１本鎖ＤＮＡを包含する趣旨で用いられる。またその長さによって特に制限されるものではない。従って、本明細書において遺伝子（ＤＮＡ）とは、特に言及しない限り、ヒトゲノムＤＮＡを含む２本鎖ＤＮＡおよびｃＤＮＡを含む１本鎖ＤＮＡ（正鎖）並びに該正鎖と相補的な配列を有する１本鎖ＤＮＡ（相補鎖）、およびこれらの断片のいずれもが含まれる。また当該「遺伝子」または「ＤＮＡ」には、特定の塩基配列（配列番号：１，２，３，４，５及び６）で示される「遺伝子」または「ＤＮＡ」だけでなく、これらによりコードされるタンパク質と生物学的機能が同等であるタンパク質（例えば同族体（ホモログやスプライスバリアントなど）、変異体及び誘導体）をコードする「遺伝子」または「ＤＮＡ」が包含される。かかる同族体、変異体または誘導体をコードする「遺伝子」または「ＤＮＡ」としては、具体的には、後述の（１−１）項に記載のストリンジェントな条件下で、前記の配列番号：１〜６で示されるいずれかの特定塩基配列の相補配列とハイブリダイズする塩基配列を有する「遺伝子」または「ＤＮＡ」を挙げることができる。
【００１５】
例えばヒト由来のタンパク質のホモログをコードする遺伝子としては、当該タンパク質をコードするヒト遺伝子に対応するマウスやラットなど他生物種の遺伝子が例示でき、これらの遺伝子（ホモログ）は、ＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ／）により同定することができる。具体的には、特定ヒト塩基配列をＢＬＡＳＴ（Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ　９０：５８７３−５８７７，　１９９３、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／）にかけて一致する（Ｓｃｏｒｅが最も高く、Ｅ−ｖａｌｕｅが０でかつＩｄｅｎｔｉｔｙが１００％を示す）配列のアクセッション番号を取得する。そのアクセッション番号をＵｎｉＧｅｎｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＵｎｉＧｅｎｅ／）に入力して得られたＵｎｉＧｅｎｅ　Ｃｌｕｓｔｅｒ　ＩＤ（Ｈｓ．で示す番号）をＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅに入力する。結果として得られた他生物種遺伝子とヒト遺伝子との遺伝子ホモログの相関を示したリストから、特定の塩基配列で示されるヒト遺伝子に対応する遺伝子（ホモログ）としてマウスやラットなど他生物種の遺伝子を選抜することができる。なお、遺伝子またはＤＮＡは、機能領域の別を問うものではなく、例えば発現制御領域、コード領域、エキソン、またはイントロンを含むことができる。
【００１６】
従って本明細書において「ＣＨＩ３Ｌ２　遺伝子」または「ＣＨＩ３Ｌ２　のＤＮＡ」といった用語を用いる場合、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号１）で示されるヒトＣＨＩ３Ｌ２　遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：１に記載のヒトＣＨＩ３Ｌ２　遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿００４０００）や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００１７】
また本明細書において「ＤＵＯＸ２　遺伝子」または「ＤＵＯＸ２　のＤＮＡ」といった用語を用いる場合、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号２）で示されるヒトＤＵＯＸ２　遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：２に記載のヒトＤＵＯＸ２　遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０１４０８０）や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００１８】
また本明細書において「ＶＲＬ−１　遺伝子」または「ＶＲＬ−１のＤＮＡ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号３）で示されるヒトＶＲＬ−１　遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：３に記載のヒトＶＲＬ−１　遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０１６１１３）や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００１９】
また本明細書において「ＩＬ１７Ｒ　遺伝子」または「ＩＬ１７Ｒ　のＤＮＡ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号４）で示されるヒトＩＬ１７Ｒ　遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：４に記載のヒトＩＬ１７Ｒ　遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０１４３３９）や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００２０】
また本明細書において「ＧＲＯ１　遺伝子」または「ＧＲＯ１　のＤＮＡ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号５）で示されるヒトＧＲＯ１　遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：５に記載のヒトＧＲＯ１　遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿　００１５１１）や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００２１】
また本明細書において「ＧＲＯ３　遺伝子」または「ＧＲＯ３のＤＮＡ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定塩基配列（配列番号６）で示されるヒトＧＲＯ３遺伝子（ＤＮＡ）や、その同族体、変異体及び誘導体などをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：６に記載のヒトＧＲＯ３遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿００２０９０）や、そのマウスホモログ、ラットホモログが包含される。
【００２２】
本明細書において「ポリヌクレオチド」とは、ＲＮＡおよびＤＮＡのいずれをも包含する趣旨で用いられる。なお、上記ＤＮＡには、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡのいずれもが含まれる。また上記ＲＮＡには、ｔｏｔａｌ　ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、及び合成のＲＮＡのいずれもが含まれる。
【００２３】
本明細書において「タンパク質」または「（ポリ）ペプチド」には、特定のアミノ酸配列（配列番号：７，８，９，１０，１１または１２）で示される「タンパク質」または「（ポリ）ペプチド」だけでなく、これらと生物学的機能が同等であることを限度として、その同族体（ホモログやスプライスバリアント）、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などが包含される。ここでホモログとしては、ヒトのタンパク質に対応するマウスやラットなど他生物種のタンパク質が例示でき、これらはＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ／）により同定された遺伝子の塩基配列から演繹的に同定することができる。また変異体には、天然に存在するアレル変異体、天然に存在しない変異体、及び人為的に欠失、置換、付加および挿入されることによって改変されたアミノ酸配列を有する変異体が包含される。なお、上記変異体としては、変異のないタンパク質または（ポリ）ペプチドと、少なくとも７０％、好ましくは８０％、より好ましくは９５％、さらにより好ましくは９７％相同なものを挙げることができる。またアミノ酸修飾体には、天然に存在するアミノ酸修飾体、天然に存在しないアミノ酸修飾体が包含され、具体的にはアミノ酸のリン酸化体が挙げられる。
【００２４】
従って本明細書において「ＣＨＩ３Ｌ２　タンパク質」または単に「ＣＨＩ３Ｌ２」といった用語を用いる場合、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号７）で示されるヒトＣＨＩ３Ｌ２やその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：７（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿００４０００）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＣＨＩ３Ｌ２　や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００２５】
また本明細書において「ＤＵＯＸ２タンパク質」または単に「ＤＵＯＸ２」といった用語を用いる場合、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号８）で示されるヒトＤＵＯＸ２　やその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：８（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０１４０８０）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＤＵＯＸ２や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００２６】
また本明細書において「ＶＲＬ−１タンパク質」または単に「ＶＲＬ−１」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号９）で示されるヒトＶＲＬ−１やその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：９（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０１６１１３）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＶＲＬ−１や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００２７】
また本明細書において「ＩＬ１７Ｒタンパク質」または単に「ＩＬ１７Ｒ」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号１０）で示されるヒトＩＬ１７Ｒやその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：１０（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０１４３３９）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＩＬ１７Ｒや、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００２８】
また本明細書において「ＧＲＯ１タンパク質」または単に「ＧＲＯ１」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号１１）で示されるヒトＧＲＯ１やその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：１１（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿００１５１１）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＧＲＯ１や、そのマウスホモログ、ラットホモログなどが包含される。
【００２９】
また本明細書において「ＧＲＯ３タンパク質」または単に「ＧＲＯ３」といった用語を用いる場合も、配列番号で特に指定しない限り、特定アミノ酸配列（配列番号１２）で示されるヒトＧＲＯ３やその同族体、変異体、誘導体、成熟体及びアミノ酸修飾体などを包含する趣旨で用いられる。具体的には、配列番号：１２（ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿００２０９０）に記載のアミノ酸配列を有するヒトＧＲＯ３や、そのマウスホモログ、ラットホモログが包含される。
【００３０】
本明細書でいう「抗体」には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、またはＦａｂフラグメントやＦａｂ発現ライブラリーによって生成されるフラグメントなどのように抗原結合性を有する上記抗体の一部が包含される。
【００３１】
さらに本明細書において「疾患マーカー」とは、潰瘍性大腸炎の罹患の有無、罹患の程度若しくは改善の有無や改善の程度を診断するために、また潰瘍性大腸炎の予防、改善または治療に有用な候補物質をスクリーニングするために、直接または間接的に利用されるものをいう。これには、潰瘍性大腸炎の罹患に関連して生体内、特に大腸組織において、発現が変動する遺伝子またはタンパク質を特異的に認識し、また結合することのできる（ポリ）（オリゴ）ヌクレオチドまたは抗体が包含される。これらの（ポリ）（オリゴ）ヌクレオチドおよび抗体は、上記性質に基づいて、生体内、組織や細胞内などで発現した上記遺伝子及びタンパク質を検出するためのプローブとして、また（オリゴ）ヌクレオチドは生体内で発現した上記遺伝子を増幅するためのプライマーとして有効に利用することができる。
【００３２】
さらに本明細書において診断対象となる「生体組織」とは、潰瘍性大腸炎病に伴い本発明のＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、またはＧＲＯ３遺伝子が発現上昇する組織を指す。具体的には大腸組織及びその周辺組織などを指す。
【００３３】
以下、これらのＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子（以下これらの遺伝子を併せて本発明遺伝子と称する場合がある）、並びにこれらの発現産物（ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３、以下これらのタンパク質を併せて本発明タンパク質と称する場合がある）、およびそれらの派生物について、具体的な用途を説明する。
【００３４】
（１）潰瘍性大腸炎の疾患マーカーおよびその応用
（１−１）　ポリヌクレオチド
本発明におけるＣＨＩ３Ｌ２遺伝子は、ｃｈｉｔｉｎａｓｅ　３−ｌｉｋｅ　２遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＣＨＩ３Ｌ２遺伝子としては、配列番号：１に示すポリヌクレオチドが知られており（ＲｅｆＳｅｑ　（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ：８０／ｌｏｃｕｓｌｉｎｋ／ｒｅｆｓｅｑ．ｈｔｍｌ）　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿００４０００）、この収得方法についてもＨｕ，Ｂ．ら、Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２７１，　１９４１５−１９４２０，　１９９６に記載されるように公知である。
【００３５】
本発明におけるＤＵＯＸ２遺伝子は、ｄｕａｌ　ｏｘｉｄａｓｅ　２遺伝子またはｔｈｙｒｏｉｄ　ｏｘｉｄａｓｅ　２（ＴＨＯＸ２）遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＤＵＯＸ２遺伝子としては、配列番号：２に示すポリヌクレオチドが知られており（ＲｅｆＳｅｑ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０１４０８０）、この収得方法についてもＤｅ　Ｄｅｋｅｎ，　Ｘ．ら、Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２７５，　２３２２７−２３２３３，　２０００に記載されるように公知である。
【００３６】
本発明におけるＶＲＬ−１遺伝子は、ｖａｎｉｌｌｏｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｌｉｋｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　１遺伝子またはｖａｎｉｌｌｏｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｌｉｋｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ遺伝子またはｔｒａｎｓｉｅｎｔ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｃａｔｉｏｎ　ｃｈａｎｎｅｌ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　Ｖ　ｍｅｍｂｅｒ　２　（ＴＲＰＶ２）とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＶＲＬ−１遺伝子としては、配列番号：３に示すポリヌクレオチドが知られており（ＲｅｆＳｅｑ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０１６１１３）、この収得方法についてもＣａｔｅｒｉｎａ，　Ｍ．　Ｊ．ら、Ｎａｔｕｒｅ，　３９８，　４３６−４４１，　１９９９に記載されるように公知である。
【００３７】
本発明におけるＩＬ１７Ｒ遺伝子は、ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　１７　ｒｅｃｅｐｔｏｒ遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばＩＬ１７Ｒ遺伝子としては、配列番号：４に示すポリヌクレオチドが知られており（ＲｅｆＳｅｑ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿０１４３３９）、この収得方法についてもＹａｏ，Ｚ．ら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，　９，　７９４−８００，　１９９７に記載されるように公知である。
【００３８】
本発明におけるＧＲＯ１遺伝子は、ＧＲＯ１　ｏｎｃｏｇｅｎｅ、またはｍｅｌａｎｏｍａ　ｇｒｏｗｔｈ　ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　（ＭＧＳＡ）、またはｇｒｏｗｔｈ−ｒｅｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅ　ｐｒｏｄｕｃｔα（Ｇｒｏα）遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＧＲＯ１遺伝子としては、配列番号：５に示すポリヌクレオチドが知られており（ＲｅｆＳｅｑ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿００１５１１）、この収得方法についてもＡｎｉｓｏｗｉｃｚ，　Ａ．ら、Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　Ｕ．Ｓ．Ａ．，　８４，　７１８８−７１９２，　１９８７に記載されるように公知である。
【００３９】
本発明におけるＧＲＯ３遺伝子は、ＧＲＯ３　ｏｎｃｏｇｅｎｅ、またはｇｒｏｗｔｈ−ｒｅｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅ　ｐｒｏｄｕｃｔγ（Ｇｒｏγ）遺伝子とも呼ばれる公知の遺伝子である。例えばヒト由来のＧＲＯ３遺伝子としては、配列番号：６に示すポリヌクレオチドが知られており（ＲｅｆＳｅｑ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．　ＮＭ＿００２０９０）、この収得方法についてもＨａｓｋｉｌｌ，　Ｓ．ら、Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　Ｕ．Ｓ．Ａ．，　８７，　７７３２−７７３６，　１９９０に記載されるように公知である。
【００４０】
本発明は、前述するように、潰瘍性大腸炎に罹患した患者の大腸組織において、正常大腸組織に比して、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子が特異的に発現上昇しているという知見を発端に、これらの遺伝子発現の有無や発現の程度を検出することによって上記潰瘍性大腸炎の罹患の有無や罹患の程度が特異的に検出でき、該疾患の診断を正確に行うことができるという知見に基づくものである。
【００４１】
上記ポリヌクレオチドは、従って、被験者における上記遺伝子の発現の有無またはその程度を検出することによって、該被験者が潰瘍性大腸炎に罹患しているか否かまたはその罹患の程度を診断することのできるツール（疾患マーカー）として有用である。
また上記ポリヌクレオチドは、後述の（３−１）項に記載するような潰瘍性大腸炎の予防、改善または治療に有用な候補物質のスクリーニングにおいて、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、またはＧＲＯ３遺伝子の発現変動を検出するためのスクリーニングツール（疾患マーカー）としても有用である。
【００４２】
本発明の疾患マーカーは、前記ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、またはＧＲＯ３遺伝子の塩基配列において、連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／またはそれに相補的なポリヌクレオチドからなることを特徴とするものである。
【００４３】
具体的には、本発明の疾患マーカーは、配列番号１に記載のＣＨＩ３Ｌ２遺伝子の塩基配列、配列番号２に記載のＤＵＯＸ２遺伝子の塩基配列、配列番号３に記載のＶＲＬ−１遺伝子の塩基配列、配列番号４に記載のＩＬ１７Ｒ遺伝子の塩基配列、配列番号５に記載のＧＲＯ１遺伝子の塩基配列、または配列番号６に記載のＧＲＯ３遺伝子の塩基配列において、連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／またはそれに相補的なポリヌクレオチドからなるものを挙げることができる。
【００４４】
ここで相補的なポリヌクレオチド（相補鎖、逆鎖）とは、前記ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、またはＧＲＯ３遺伝子の塩基配列からなるポリヌクレオチドの全長配列、または該塩基配列において少なくとも連続した１５塩基長の塩基配列を有するその部分配列（ここでは便宜上、これらを「正鎖」ともいう）に対して、Ａ：ＴおよびＧ：Ｃといった塩基対関係に基づいて、塩基的に相補的な関係にあるポリヌクレオチドを意味するものである。ただし、かかる相補鎖は、対象とする正鎖の塩基配列と完全に相補配列を形成する場合に限らず、対象とする正鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズすることができる程度の相補関係を有するものであってもよい。なお、ここでストリンジェントな条件は、Ｂｅｒｇｅｒ　ａｎｄ　Ｋｉｍｍｅｌ　（１９８７，　Ｇｕｉｄｅ　ｔｏ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，　Ｖｏｌ．　１５２，　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ　ＣＡ）　に教示されるように、複合体或いはプローブを結合する核酸の融解温度（Ｔｍ）に基づいて決定することができる。例えばハイブリダイズ後の洗浄条件として、通常「１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、３７℃」程度の条件を挙げることができる。相補鎖はかかる条件で洗浄しても対象とする正鎖とハイブリダイズ状態を維持するものであることが好ましい。特に制限されないが、より厳しいハイブリダイズ条件として「０．５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、４２℃」程度、さらに厳しいハイブリダイズ条件として「０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃」程度の洗浄条件を挙げることができる。具体的には、このような相補鎖として、対象の正鎖の塩基配列と完全に相補的な関係にある塩基配列からなる鎖、並びに該鎖と少なくとも９０％、好ましくは９５％の相同性を有する塩基配列からなる鎖を例示することができる。
【００４５】
ここで、正鎖側のポリヌクレオチドには、前記ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、またはＧＲＯ３遺伝子の塩基配列、またはその部分配列を有するものだけでなく、上記相補鎖の塩基配列に対してさらに相補的な関係にある塩基配列からなる鎖を含めることができる。
【００４６】
さらに上記正鎖のポリヌクレオチド及び相補鎖（逆鎖）のポリヌクレオチドは、各々一本鎖の形態で疾患マーカーとして使用されても、また二本鎖の形態で疾患マーカーとして使用されてもよい。
【００４７】
本発明の潰瘍性大腸炎の疾患マーカーは、具体的には、前記ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、またはＧＲＯ３遺伝子の塩基配列（全長配列）からなるポリヌクレオチドであってもよいし、その相補配列からなるポリヌクレオチドであってもよい。またこれら本発明遺伝子もしくは該遺伝子に由来するポリヌクレオチドを選択的に（特異的に）認識するものであれば、上記全長配列またはその相補配列の部分配列からなるポリヌクレオチドであってもよい。この場合、部分配列としては、上記全長配列またはその相補配列の塩基配列から任意に選択される少なくとも１５個の連続した塩基長を有するポリヌクレオチドを挙げることができる。
【００４８】
なお、ここで「選択的に（特異的に）認識する」とは、例えばノーザンブロット法においては、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、ＧＲＯ３遺伝子、またはこれらに由来するポリヌクレオチドが特異的に検出できること、またＲＴ−ＰＣＲ法においては、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、ＧＲＯ３遺伝子、またはこれらに由来するポリヌクレオチドが特異的に生成されることを意味するが、それに限定されることなく、当業者が上記検出物または生成物がこれらの遺伝子に由来するものであると判断できるものであればよい。
【００４９】
本発明の疾患マーカーは、例えば配列番号１に記載のＣＨＩ３Ｌ２遺伝子の塩基配列、配列番号２に記載のＤＵＯＸ２遺伝子の塩基配列、配列番号３に記載のＶＲＬ−１遺伝子の塩基配列、配列番号４に記載のＩＬ１７Ｒ遺伝子の塩基配列、配列番号５に記載のＧＲＯ１遺伝子の塩基配列、または配列番号６に記載のＧＲＯ３遺伝子の塩基配列をもとに、例えばｐｒｉｍｅｒ　３（　ＨＹＰＥＲＬＩＮＫ　ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｅ．ｗｉ．ｍｉｔ．ｅｄｕ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｐｒｉｍｅｒ／ｐｒｉｍｅｒ３．ｃｇｉ）あるいはベクターＮＴＩ（Ｉｎｆｏｍａｘ社製）を利用して設計することができる。具体的には前記本発明遺伝子の塩基配列を　ｐｒｉｍｅｒ　３またはベクターＮＴＩのソフトウエアにかけて得られる、プライマーまたはプローブの候補配列、若しくは少なくとも該配列を一部に含む配列をプライマーまたはプローブとして使用することができる。
【００５０】
本発明の疾患マーカーは、上述するように連続する少なくとも１５塩基の長さを有するものであればよいが、具体的にはマーカーの用途に応じて、長さを適宜選択し設定することができる。
【００５１】
（１−２）プローブまたはプライマーとしてのポリヌクレオチド
本発明において潰瘍性大腸炎の検出（診断）は、被験者の生体組織、特に大腸組織におけるＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子から選ばれるいずれかの遺伝子の発現の有無または発現レベル（発現量）を評価することによって行われる。この場合、上記本発明の疾患マーカーは、上記遺伝子の発現によって生じたＲＮＡまたはそれに由来するポリヌクレオチドを特異的に認識し増幅するためのプライマーとして、または該ＲＮＡまたはそれに由来するポリヌクレオチドを特異的に検出するためのプローブとして利用することができる。
【００５２】
本発明疾患マーカーを潰瘍性大腸炎の検出（遺伝子診断）においてプライマーとして用いる場合には、通常１５ｂｐ〜１００ｂｐ、好ましくは１５ｂｐ〜５０ｂｐ、より好ましくは１５ｂｐ〜３５ｂｐの塩基長を有するものが例示できる。また検出プローブとして用いる場合には、通常１５ｂｐ〜全配列の塩基数、好ましくは１５ｂｐ〜１ｋｂ、より好ましくは１００ｂｐ〜１ｋｂの塩基長を有するものが例示できる。
【００５３】
本発明の疾患マーカーは、ノーザンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲ法、ｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダーゼーション法などといった、特定遺伝子を特異的に検出する公知の方法において、常法に従ってプライマーまたはプローブとして利用することができる。該利用によって潰瘍性大腸炎におけるＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子またはＧＲＯ３遺伝子の発現の有無または発現レベル（発現量）を評価することができる。
測定対象試料としては、使用する検出方法の種類に応じて、被験者の大腸組織の一部をバイオプシ等で採取するか、若しくは腸管洗浄液等から回収し、そこから常法に従って調製したｔｏｔａｌ　ＲＮＡを用いてもよいし、さらに該ＲＮＡをもとにして調製される各種のポリヌクレオチドを用いてもよい。
【００５４】
また、生体組織における本発明遺伝子の遺伝子発現レベルは、ＤＮＡチップを利用して検出あるいは定量することができる。この場合、本発明の疾患マーカーは当該ＤＮＡチップのプローブとして使用することができる（例えば、アフィメトリックス社の　Ｇｅｎｅ　Ｃｈｉｐ　Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５　Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅの場合、２５ｂｐの長さのポリヌクレオチドプローブとして用いられる）。かかるＤＮＡチップを、生体組織から採取したＲＮＡをもとに調製される標識ＤＮＡまたはＲＮＡとハイブリダイズさせ、該ハイブリダイズによって形成された上記プローブ（本発明疾患マーカー）と標識ＤＮＡまたはＲＮＡとの複合体を、該標識ＤＮＡまたはＲＮＡの標識を指標として検出することにより、生体組織中での本発明遺伝子の発現の有無または発現レベル（発現量）が評価できる。
【００５５】
上記ＤＮＡチップは、本発明遺伝子のいずれかと結合し得る１種または２種以上の本発明疾患マーカーを含んでいれば良い。複数の疾患マーカーを含むＤＮＡチップの利用によれば、ひとつの生体試料について、同時に複数の遺伝子の発現の有無または発現レベルの評価が可能である。
【００５６】
本発明の疾患マーカーは、潰瘍性大腸炎の診断、検出（罹患の有無や罹患の程度の診断）に有用である。具体的には、該疾患マーカーを利用した潰瘍性大腸炎の診断は、被験者の大腸組織と正常者の大腸組織におけるＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの遺伝子の遺伝子発現レベルの違いを判定することによって行うことができる。この場合、遺伝子発現レベルの違いには、発現のある／なしの違いだけでなく、被験者の大腸組織と正常者の大腸組織の両者ともに発現がある場合でも、両者間の発現量の格差が２倍以上、好ましくは３倍以上の場合が含まれる。具体的にはＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子は潰瘍性大腸炎で発現誘導を示すので、被験者の大腸組織で発現しており、該発現量が正常者の大腸組織の発現量と比べて２倍以上、好ましくは３倍以上多ければ、被験者について潰瘍性大腸炎の罹患が疑われる。
【００５７】
（１−３）抗体
本発明は、潰瘍性大腸炎の疾患マーカーとして、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＣＨＩ３Ｌ２」ともいう）、ＤＵＯＸ２遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＤＵＯＸ２」ともいう）、ＶＲＬ−１遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＶＲＬ−１」ともいう）、ＩＬ１７Ｒ遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＩＬ１７Ｒ」ともいう）、ＧＲＯ１遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＧＲＯ１」ともいう）、またはＧＲＯ３遺伝子の発現産物（タンパク質）（これを本明細書においては「ＧＲＯ３」ともいう）を特異的に認識することのできる抗体を提供する。
【００５８】
ここで、ＣＨＩ３Ｌ２としては配列番号１に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、ＤＵＯＸ２としては配列番号２に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、ＶＲＬ−１としては配列番号３に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、ＩＬ１７Ｒとしては配列番号４に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、ＧＲＯ１としては配列番号５に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質、ＧＲＯ３としては配列番号６に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質を挙げることができる。
【００５９】
なお、配列番号１に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号７で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号２に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号８で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号３に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号９で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号４に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号１０で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、配列番号５に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号１１で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を、そして配列番号６に示されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の具体的様態としては配列番号１２で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質を例示することができる。
【００６０】
なお、配列番号７に示すタンパク質はヒト由来のＣＨＩ３Ｌ２遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その収得方法についても文献（Ｈｕ，　Ｂ．ら、Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２７１，　１９４１５−１９４２０，　１９９６）　に記載されるように公知である。
【００６１】
また配列番号８に示すタンパク質はヒト由来のＤＵＯＸ２遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その収得方法についても文献（Ｄｅ　Ｄｅｋｅｎ，　Ｘ．ら、Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２７５，　２３２２７−２３２３３，　２０００）　に記載されるように公知である。
【００６２】
また配列番号９に示すタンパク質はヒト由来のＶＲＬ−１遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その収得方法についても文献（Ｃａｔｅｒｉｎａ，　Ｍ．　Ｊ．ら、Ｎａｔｕｒｅ，　３９８，　４３６−４４１，　１９９９）　に記載されるように公知である。
【００６３】
また配列番号１０に示すタンパク質はヒト由来のＩＬ１７Ｒ遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その収得方法についても文献（Ｙａｏ，Ｚ．ら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，　９，　７９４−８００，　１９９７）　に記載されるように公知である。
【００６４】
また配列番号１１に示すタンパク質はヒト由来のＧＲＯ１遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その収得方法についても文献（Ａｎｉｓｏｗｉｃｚ，　Ａ．ら、Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　Ｕ．Ｓ．Ａ．，　８４，　７１８８−７１９２，　１９８７）　に記載されるように公知である。
【００６５】
また配列番号１２に示すタンパク質はヒト由来のＧＲＯ３遺伝子によってコードされる公知のタンパク質であり、その収得方法についても文献（Ｈａｓｋｉｌｌ，　Ｓ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　Ｕ．Ｓ．Ａ．，　８７，　７７３２−７７３６，　１９９０）　に記載されるように公知である。
【００６６】
本発明は、前述するように、潰瘍性大腸炎に罹患した患者の大腸組織において、正常な大腸組織に比して、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子が特異的に発現上昇しているという知見を発端に、これらの遺伝子の発現産物（タンパク質）の有無やその発現の程度を検出することによって上記潰瘍性大腸炎の罹患の有無や罹患の程度が特異的に検出でき、該疾患の診断を正確に行うことができるという発想に基づくものである。上記抗体は、従って、被験者における上記タンパク質の発現の有無またはその程度を検出することによって、該被験者が潰瘍性大腸炎に罹患しているか否かまたはその疾患の程度を診断することのできるツール（疾患マーカー）として有用である。
また上記抗体は、後述の（３−２）項に記載するような潰瘍性大腸炎の予防、改善または治療に有用な候補物質のスクリーニングにおいて、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１およびＧＲＯ３のいずれかの発現変動を検出するためのスクリーニングツール（疾患マーカー）としても有用である。
【００６７】
本発明の抗体は、その形態に特に制限はなく、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１およびＧＲＯ３のいずれかを免疫抗原とするポリクローナル抗体であっても、またそのモノクローナル抗体であってもよい。さらにこれら本発明タンパク質のアミノ酸配列のうち少なくとも連続する、通常８アミノ酸、好ましくは１５アミノ酸、より好ましくは２０アミノ酸からなるポリペプチドに対して抗原結合性を有する抗体も、本発明の抗体に含まれる。
【００６８】
これらの抗体の製造方法は、すでに周知であり、本発明の抗体もこれらの常法に従って製造することができる（Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，　Ｃｈａｐｔｅｒ　１１．１２〜１１．１３（２０００））。具体的には、本発明の抗体がポリクローナル抗体の場合には、常法に従って大腸菌等で発現し精製したＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＲＯ３を用いて、あるいは常法に従ってこれら本発明タンパク質の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドを合成して、家兎等の非ヒト動物に免疫し、該免疫動物の血清から常法に従って得ることが可能である。一方、モノクローナル抗体の場合には、常法に従って大腸菌等で発現し精製したＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＲＯ３、あるいはこれらタンパク質の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドをマウス等の非ヒト動物に免疫し、得られた脾臓細胞と骨髄腫細胞とを細胞融合させて調製したハイブリドーマ細胞の中から得ることができる（Ｃｕｒｒｅｎｔ　ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｅｄｉｔ．　Ａｕｓｕｂｅｌ　ｅｔ　ａｌ．　（１９８７）　Ｐｕｂｌｉｓｈ．　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　Ｓｏｎｓ．　Ｓｅｃｔｉｏｎ　１１．４〜１１．１１）。
【００６９】
抗体の作製に免疫抗原として使用されるＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＲＯ３は、本発明により提供される遺伝子の配列情報（配列番号１〜６）に基づいて、ＤＮＡクローニング、各プラスミドの構築、宿主へのトランスフェクション、形質転換体の培養および培養物からのタンパク質の回収の操作により得ることができる。これらの操作は、当業者に既知の方法、あるいは文献記載の方法（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ　ｅｔ　ａｌ．，　ＣＳＨ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　（１９８３），　ＤＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　ＤＭ．　Ｇｌｏｖｅｒ，　ＩＲＬ　ＰＲＥＳＳ　（１９８５））などに準じて行うことができる。
【００７０】
具体的には、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＲＯ３をコードする遺伝子が所望の宿主細胞中で発現できる組み換えＤＮＡ（発現ベクター）を作製し、これを宿主細胞に導入して形質転換し、該形質転換体を培養して、得られる培養物から、目的タンパク質を回収することによって、本発明抗体の製造のための免疫抗原としてのタンパク質を得ることができる。また、これらＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＲＯ３の部分ペプチドは、本発明により提供されるアミノ酸配列の情報（配列番号７〜１２）に従って、一般的な化学合成法（ペプチド合成）によって製造することもできる。
【００７１】
なお、本発明のＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＲＯ３には、配列番号７，８，９，１０，１１または１２に示す各アミノ酸配列に関わるタンパク質のみならず、その相同物も包含される。該相同物としては、上記配列番号７〜１２のいずれかで示されるアミノ酸配列において、１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、且つ改変前の元のタンパク質と免疫学的に同等の活性を有するタンパク質を挙げることができる。
【００７２】
ここで同等の免疫学的活性を有するタンパク質としては、適当な動物あるいはその細胞において特定の免疫反応を誘発し、かつＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＲＯ３に対する抗体と特異的に結合する能力を有するタンパク質を挙げることができる。
【００７３】
なお、タンパク質におけるアミノ酸の変異数や変異部位は、その免疫学的活性が保持される限り制限はない。免疫学的活性を喪失することなくアミノ酸残基が、どのように、何個置換、挿入あるいは欠失されればよいかを決定する指標は、当業者に周知のコンピュータプログラム、例えばＤＮＡ　Ｓｔａｒ　ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて見出すことができる。例えば変異数は、典型的には、全アミノ酸の１０％以内であり、好ましくは全アミノ酸の５％以内であり、さらに好ましくは全アミノ酸の１％以内である。また置換されるアミノ酸は、置換後に得られるタンパク質がＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＲＯ３と同等の免疫学的活性を保持している限り、特に制限されないが、タンパク質の構造保持の観点から、残基の極性、電荷、可溶性、疎水性、親水性並びに両親媒性など、置換前のアミノ酸と似た性質を有するアミノ酸であることが好ましい。例えば、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ及びＴｒｐは互いに非極性アミノ酸に分類されるアミノ酸であり、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、Ａｓｎ及びＧｌｎは互いに非荷電性アミノ酸に分類されるアミノ酸であり、Ａｓｐ及びＧｌｕは互いに酸性アミノ酸に分類されるアミノ酸であり、またＬｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓは互いに塩基性アミノ酸に分類されるアミノ酸である。ゆえに、これらを指標として同群に属するアミノ酸を適宜選択することができる。
【００７４】
本発明の抗体は、また、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＲＯ３の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドを用いて調製されるものであってよい。かかる抗体の製造のために用いられるオリゴ（ポリ）ペプチドは、機能的な生物活性を有することは要しないが、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＲＯ３と同様な免疫原特性を有するものであることが望ましい。好ましくはこの免疫原特性を有し、且つＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＲＯ３のアミノ酸配列において少なくとも連続する８アミノ酸、好ましくは１５アミノ酸、より好ましくは２０アミノ酸からなるオリゴ（ポリ）ペプチドを例示することができる。
【００７５】
かかるオリゴ（ポリ）ペプチドに対する抗体の製造は、宿主に応じて種々のアジュバントを用いて免疫学的反応を高めることによって行うこともできる。限定はされないが、そのようなアジュバントには、フロイントアジュバント、水酸化アルミニウムのようなミネラルゲル、並びにリゾレシチン、プルロニックポリオル、ポリアニオン、ペプチド、油乳剤、キーホールリンペットヘモシアニン及びジニトロフェノールのような表面活性物質、ＢＣＧ（カルメット−ゲラン桿菌）やコリネバクテリウム−パルヴムなどのヒトアジュバントが含まれる。
【００７６】
本発明の抗体は、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＲＯ３に特異的に結合する性質を有することから、該抗体を利用することによって、被験者の組織内に発現した上記タンパク質を特異的に検出することができる。すなわち、当該抗体は被験者の組織内におけるＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＲＯ３のタンパク発現の有無を検出するためのプローブとして有用である。
【００７７】
具体的には、患者の大腸組織の一部をバイオプシ等で採取、もしくは腸管洗浄液等から回収し、そこから常法に従ってタンパク質を調製して、例えばウェスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ法など公知の検出方法において、上記抗体を常法に従ってプローブとして使用することによって、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＲＯ３を検出することができる。
【００７８】
潰瘍性大腸炎の診断に際しては、被験者の大腸組織におけるＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１およびＧＲＯ３のいずれか少なくとも一つと正常な大腸組織におけるこれらのタンパク質との量の違いを判定すればよい。この場合、タンパク量の違いには、タンパクのある／なし、あるいはタンパク量の違いが２倍以上、好ましくは３倍以上の場合が含まれる。具体的には、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１およびＧＲＯ３は潰瘍性大腸炎で発現誘導を示すので、被験者の大腸組織で該遺伝子の発現産物（ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、ＧＲＯ３）が存在しており、該量が正常な大腸組織の発現産物量と比べて２倍以上、好ましくは３倍以上多いことが判定されれば、潰瘍性大腸炎の罹患が疑われる。
【００７９】
（２）潰瘍性大腸炎の検出方法（診断方法）
本発明は、前述した本発明疾患マーカーを利用した潰瘍性大腸炎の検出方法（診断方法）を提供するものである。
【００８０】
具体的には、本発明の検出方法（診断方法）は、被験者の大腸組織の一部をバイオプシ等で採取するか、もしくは腸管洗浄液等から回収し、そこに含まれる潰瘍性大腸炎に関連するＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの遺伝子発現レベル、およびこれらの遺伝子に由来するタンパク質（ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、ＧＲＯ３）を検出し、その発現量またはそのタンパク質量を測定することにより、潰瘍性大腸炎の罹患の有無またはその程度を診断するものである。また本発明の検出（診断）方法は、例えば潰瘍性大腸炎患者において、該疾患の改善のために治療薬を投与した場合における、該疾患の改善の有無またはその程度を検出（診断）することもできる。
【００８１】
本発明の検出方法は次の（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の工程を含むものである：
（ａ）　被験者の生体試料と本発明の疾患マーカーを接触させる工程、
（ｂ）　生体試料中のＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの遺伝子発現レベル、またはＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１およびＧＲＯ３のいずれかのタンパク質量を、上記疾患マーカーと指標として測定する工程、
（ｃ）　（ｂ）の結果をもとに、潰瘍性大腸炎の罹患を判断する工程。
【００８２】
ここで用いられる生体試料としては、被験者の生体組織（大腸組織及びその周辺組織など）から調製される試料を挙げることができる。具体的には、該組織から調製されるＲＮＡ含有試料、若しくはそれからさらに調製されるポリヌクレオチドを含む試料、または上記組織から調製されるタンパク質を含む試料を挙げることができる。かかるＲＮＡ、ポリヌクレオチドまたはタンパク質を含む試料は、被験者の大腸組織の一部をバイオプシ等で採取するか、もしくは腸管洗浄液等から回収し、そこから常法に従って調製することができる。
本発明の診断方法は、測定対象として用いる生体試料の種類に応じて、具体的には下記のようにして実施される。
【００８３】
（２−１）　測定対象の生体試料としてＲＮＡを利用する場合
測定対象物としてＲＮＡを利用する場合、潰瘍性大腸炎の検出は、具体的に下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む方法によって実施することができる：
（ａ）被験者の生体試料から調製されたＲＮＡまたはそれから転写された相補的ポリヌクレオチドと、前記本発明の疾患マーカー（ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子またはＧＲＯ３遺伝子の塩基配列において連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／又は該ポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチド）とを結合させる工程、
（ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試料由来のＲＮＡまたは該ＲＮＡから転写された相補的ポリヌクレオチドを、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の測定結果に基づいて、潰瘍性大腸炎の罹患を判断する工程。
【００８４】
測定対象物としてＲＮＡを利用する場合は、本発明の検出方法（診断方法）は、該ＲＮＡ中のＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現レベルを検出し、測定することによって実施される。具体的には、本発明の検出方法（診断方法）は、本発明の疾患マーカー（ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子またはＧＲＯ３遺伝子の塩基配列において連続する少なくとも１５塩基を有するポリヌクレオチド及び／又はその相補的なポリヌクレオチド）をプライマーまたはプローブとして用いて、ノーザンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲ法、ＤＮＡチップ解析法、ｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダイゼーション解析法などにより前記疾患マーカーへのＲＮＡまたはその転写物の結合量が増大していることを指標として行うことにより実施できる。
【００８５】
ノーザンブロット法を利用する場合は、本発明の上記疾患マーカーをプローブとして用いることによって、ＲＮＡ中のＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現の有無やその発現レベルを検出、測定することができる。具体的には、本発明の疾患マーカー（相補鎖）を放射性同位元素（３２Ｐ、３３Ｐなど：ＲＩ）や蛍光物質などで標識し、それを、常法に従ってナイロンメンブレン等にトランスファーした被験者の生体組織由来のＲＮＡとハイブリダイズさせた後、形成された疾患マーカー（ＤＮＡ）とＲＮＡとの二重鎖を、疾患マーカーの標識物（ＲＩ若しくは蛍光物質）に由来するシグナルを放射線検出器（ＢＡＳ−１８００ＩＩ、富士フィルム社製）または蛍光検出器で検出、測定する方法を例示することができる。また、ＡｌｋＰｈｏｓ　Ｄｉｒｅｃｔ　Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ　ａｎｄ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　（Ａｍｅｒｓｈａｍ　ＰｈａｒａｍｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ社製）を用いて、該プロトコールに従って疾患マーカー（プローブＤＮＡ）を標識し、被験者の生体組織由来のＲＮＡとハイブリダイズさせた後、疾患マーカーの標識物に由来するシグナルをマルチバイオイメージャーＳＴＯＲＭ８６０（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）で検出、測定する方法を使用することもできる。
【００８６】
ＲＴ−ＰＣＲ法を利用する場合は、本発明の上記疾患マーカーをプライマーとして用いることによって、ＲＮＡ中のＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現の有無や発現レベルを検出、測定することができる。具体的には、被験者の生体組織由来のＲＮＡから常法に従ってｃＤＮＡを調製して、これを鋳型として標的のＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子またはＧＲＯ３遺伝子の領域が増幅できるように、本発明の疾患マーカーから調製した一対のプライマー（上記ｃＤＮＡ（−鎖）に結合する正鎖、＋鎖に結合する逆鎖）をこれとハイブリダイズさせて、常法に従ってＰＣＲ法を行い、得られた増幅二本鎖ＤＮＡを検出する方法を例示することができる。なお、増幅された二本鎖ＤＮＡの検出は、上記ＰＣＲを予めＲＩや蛍光物質で標識しておいたプライマーを用いて行うことによって産生される標識二本鎖ＤＮＡを検出する方法、産生された二本鎖ＤＮＡを常法に従ってナイロンメンブレン等にトランスファーさせて、標識した疾患マーカーをプローブとして使用してこれとハイブリダイズさせて検出する方法などを用いることができる。なお、生成された標識二本鎖ＤＮＡ産物はアジレント２１００バイオアナライザ（横河アナリティカルシステムズ社製）などで測定することができる。また、ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ　ＲＴ−ＰＣＲ　Ｒｅａｇｅｎｔｓ　（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　社製）で該プロトコールに従ってＲＴ−ＰＣＲ反応液を調製し、ＡＢＩ　ＰＲＩＳＭ　７７００　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　社製）で反応させて、該反応物を検出することもできる。
【００８７】
ＤＮＡチップ解析を利用する場合は、本発明の上記疾患マーカーをＤＮＡプローブ（１本鎖または２本鎖）として貼り付けたＤＮＡチップを用意し、これに被験者の生体組織由来のＲＮＡから常法によって調製されたｃＲＮＡとハイブリダイズさせて、形成されたＤＮＡとｃＲＮＡとの二本鎖を、本発明の疾患マーカーから調製される標識プローブと結合させて検出する方法を挙げることができる。また、上記ＤＮＡチップとして、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの遺伝子発現レベルの検出、測定が可能なＤＮＡチップを用いることもできる。かかる遺伝子の発現レベルを検出、測定することができるＤＮＡチップとしては、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社のＧｅｎｅ　Ｃｈｉｐ　Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５　Ａ，　Ｂ，Ｃ，　Ｄ，　Ｅを挙げることができる。かかるＤＮＡチップを用いた、被験者ＲＮＡ中のＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの遺伝子発現レベルの検出、測定については、実施例において詳細に説明する。
【００８８】
（２−２）　測定対象の生体試料としてタンパク質を用いる場合
測定対象物としてタンパク質を用いる場合は、本発明の潰瘍性大腸炎の検出方法（診断方法）は、生体試料中のＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１およびＧＲＯ３のいずれかを検出し、その量を測定することによって実施される。具体的には下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む方法によって実施することができる：
（ａ）被験者の生体試料から調製されたタンパク質と本発明の疾患マーカー（ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＬＯ３を認識する抗体）とを結合させる工程、
（ｂ）該疾患マーカーに結合した生体試料由来のタンパク質を、上記疾患マーカーを指標として測定する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の測定結果に基づいて、潰瘍性大腸炎の罹患を判断する工程。
【００８９】
より具体的には、本発明の潰瘍性大腸炎の検出方法（診断方法）は、本発明の疾患マーカー（ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＲＯ３を認識する抗体）を用いて、ウエスタンブロット法などにより当該マーカーへのＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１およびＧＲＯ３のいずれかの結合量が増大していることを指標として行うことにより実施できる。
【００９０】
ウエスタンブロット法は、一次抗体として本発明疾患マーカーを用いた後、二次抗体として１２５Ｉなどの放射性同位元素、蛍光物質、ホースラディッシュペルオキシターゼ（ＨＲＰ）などの酵素等で標識した標識抗体（一次抗体に結合する抗体）を用い、得られる標識化合物の放射性同位元素、蛍光物質などに由来するシグナルを放射線測定器（ＢＡＳ−１８００ＩＩ：富士フィルム社製など）、蛍光検出器などで検出し、測定することによって実施できる。また、一次抗体として本発明疾患マーカーを用いた後、ＥＣＬ　Ｐｌｕｓ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔｔｉｎｇ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　（アマシャム　ファルマシアバイオテク社製）を用いて、該プロトコールに従って検出し、マルチバイオイメージャーＳＴＯＲＭ８６０（アマシャム　ファルマシアバイオテク社製）で測定することもできる。
【００９１】
なお、上記において測定対象とするＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１およびＧＲＯ３の機能または活性は、既に知られており、該タンパク質の量と機能乃至活性とは一定の相関関係を有している。従って、上記タンパク質の結合量の測定に代えて、該タンパク質の機能または活性の測定を行うことによっても、本発明の潰瘍性大腸炎の検出（診断）を実施することができる。すなわち本発明は、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＲＯ３の機能または活性を指標として、これを公知の方法（具体的には後述の（３−３）項を参照）に従って測定、評価することからなる、潰瘍性大腸炎の検出（診断）方法をも包含する。
【００９２】
（２−３）潰瘍性大腸炎の診断
潰瘍性大腸炎の診断は、例えば、被験者の大腸組織におけるＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの遺伝子発現レベル、あるいはこれらの遺伝子の発現産物であるタンパク質（ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、ＧＲＯ３）の量、機能若しくは活性（以下これらを合わせて「タンパク質レベル」ということがある）を、正常な大腸組織における当該遺伝子発現レベルまたは当該タンパク質レベルと比較し、両者の違いを判定することによって行うことができる。
【００９３】
この場合、正常な大腸組織から採取調製した生体試料（ＲＮＡまたはタンパク質を含む試料）が必要であるが、これらは潰瘍性大腸炎に罹患していない人の大腸組織をバイオプシ等で採取するか、もしくは腸管洗浄液等から回収することによって取得することができる。なお、ここでいう「潰瘍性大腸炎に罹患していない人」とは、少なくとも潰瘍性大腸炎の自覚症状がなく、好ましくは他の検査方法、例えば内視鏡検査や、注腸Ｘ腺検査、消化管の生検などの結果、潰瘍性大腸炎でないと診断された人をいう。なお、当該「潰瘍性大腸炎に罹患していない人」を以下、本明細書では単に正常者という場合もある。
【００９４】
被験者の大腸組織と正常な大腸組織（潰瘍性大腸炎に罹患していない人の大腸組織）との遺伝子発現レベルまたはタンパク質レベルの比較は、被験者の生体試料と正常者の生体試料を対象とした測定を並行して行うことで実施できる。並行して行わない場合は、複数（少なくとも２つ、好ましくは３以上、より好ましくは５以上）の正常な大腸組織を用いて均一な測定条件で測定して得られたＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの遺伝子発現レベル、若しくはこれらの遺伝子の発現産物であるタンパク質（ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、ＧＲＯ３）レベルの平均値または統計的中間値を、正常者の遺伝子発現レベル若しくはタンパク質の量として、比較に用いることができる。
【００９５】
被験者が、潰瘍性大腸炎であるかどうかの判断は、該被験者の大腸組織におけるＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの遺伝子発現レベル、またはその発現産物であるタンパク質（ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、ＧＲＯ３）レベルが、正常者のそれらのレベルと比較して２倍以上、好ましくは３倍以上多いことを指標として行うことができる。また、被験者の上記遺伝子発現レベルまたはタンパク質レベルが、いかなる正常者のそれらのレベルに比べて多ければ、該被験者は潰瘍性大腸炎であると判断できるか、該疾患の罹患が疑われる。
【００９６】
（３）候補薬のスクリーニング方法
（３−１）　遺伝子発現レベルを指標とするスクリーニング方法
本発明は、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質のスクリーニング方法を提供する。
【００９７】
本発明のスクリーニング方法は次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）被験物質とＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞におけるＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応する遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現量を減少させる被験物質を選択する工程。
【００９８】
かかるスクリーニングに用いられる細胞としては、内在性および外来性を問わず、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかを発現する培養細胞全般を挙げることができる。培養細胞においてこれら本発明遺伝子が発現しているか否かは、公知のノーザンブロット法やＲＴ−ＰＣＲ法にてこれらの遺伝子発現を検出することにより、容易に確認することができる。
【００９９】
具体的には、例えば以下の（１）〜（３）：
（１）　潰瘍性大腸炎の動物モデルより単離、調製した腸管組織やリンパ系組織由来の細胞、
（２）　種々の刺激剤で処理又は未処理の腸管組織やリンパ系組織由来の細胞、
（３）　本発明遺伝子のいずれかを導入した細胞、
等を挙げることができる。
【０１００】
ここで前記（１）の動物モデルとしては、潰瘍性大腸炎の動物モデルとして周知である如何なる動物モデルをも用いることができ、具体的には、（１）自然発症炎症性腸疾患（ＩＢＤ）モデル（Ｃ３Ｈ／ＨｅＪＢｉｒマウス、Ｃｏｔｔｏｎ　ｔｏｐ　ｔａｍａｒｉｎｓ等）、（２）化学物質誘発モデル（ジニトロクロロベンゼン誘発モデル（ラット）、酢酸モデル（ラット）、トリニトロスルホン酸誘発モデル（マウス、ラット、ウサギ）、デキストラン硫酸誘発モデル（マウス、ラット、ハムスター）、カラゲナン誘発モデル（ラット、モルモット）、インドメタシン誘発モデル（ラット）等）、（３）トランスジェニック、ミュータント（ＩＬ−２ノックアウトマウス、ＩＬ−１０ノックアウトマウス、ＴＣＲノックアウトマウス等）、または（４）移入モデル（ＣＤ４５ＲＢｈｉ移入ＳＣＩＤマウス等）を挙げることができる。
また前記（１）の腸管組織由来の細胞としては、好ましくは大腸（結腸）由来の初代培養細胞が挙げられる。
【０１０１】
前記（２）の腸管組織やリンパ系組織由来の細胞としては、好ましくは大腸（結腸）由来の株化細胞が挙げられ、具体的には　Ｃａｃｏ−２細胞（ヒト結腸腺癌由来、ＡＴＴＣ株番号ＨＴＢ−３７）、ＨＴ−２９細胞（ヒト結腸腺癌由来、ＡＴＴＣ株番号ＨＴＢ−３８）またはＣＯＬＯ　２０５　細胞（ヒト結腸腺癌由来、ＡＴＴＣ株番号ＣＣＬ−２２２）等を挙げることができる。また前記（２）のリンパ系組織由来の細胞としては、好ましくはリンパ球、単球、マクロファージ、好中球または好酸球が挙げられる。また株化細胞としてＲＡＷ　２６４．７細胞（マウス単球由来、ＡＴＴＣ株番号ＴＩＢ−７１）、Ｕ−９３７細胞（ヒト組織球性リンパ腫由来、ＡＴＴＣ株番号ＣＲＬ−１５９３．２）、ＴＨＰ−１細胞（ヒト単球由来、ＡＴＴＣ株番号ＴＩＢ−２０２）またはＪｕｒｋａｔ細胞（ヒトＴ細胞リンパ腫由来、ＡＴＴＣ株番号ＴＩＢ−１５２）等を挙げることができる。
前記（２）において刺激剤とは、リポポリサッカライド（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　：ＬＰＳ）、ホルボールエステル（ＰＭＡ等）、カルシウムイオノフォア、サイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＴＮＦα、ＩＦＮγ等）等を挙げることができる。これら刺激剤で刺激することにより細胞は炎症部位の環境により近い活性化状態になることが知られている。
【０１０２】
前記（３）の遺伝子導入細胞としては、前記（１）及び（２）に挙げた細胞の他、通常遺伝子導入に用いられる宿主細胞、すなわちＣＯＰ、Ｌ、Ｃ１２７、Ｓｐ２／０、ＮＳ−１、ＮＩＨ３Ｔ３、ＳＴ２等のマウス由来細胞、ラット由来細胞、ＢＨＫ、ＣＨＯ等のハムスター由来細胞、ＣＯＳ１、ＣＯＳ３、ＣＯＳ７、ＣＶ１、Ｖｅｒｏ等のサル由来細胞、ＨｅＬａ、２９３等のヒト由来細胞、およびＳｆ９、Ｓｆ２１、Ｈｉｇｈ　Ｆｉｖｅ等の昆虫由来細胞などが例示される。
さらに、本発明のスクリーニング方法に用いられる細胞には、細胞の集合体である組織なども含まれる。
【０１０３】
本発明のスクリーニング方法によってスクリーニングされる被験物質（候補物質）は、制限されないが、核酸（本発明遺伝子のアンチセンスヌクレオチドを含む）、ペプチド、タンパク質、有機化合物、無機化合物などであり、本発明スクリーニングは、具体的にはこれらの被験物質またはこれらを含む試料（被験試料）を上記細胞および／または組織と接触させることにより行われる。かかる被験試料としては、被験物質を含む細胞抽出液、遺伝子ライブラリーの発現産物、合成低分子化合物、合成ペプチド、天然化合物などが挙げられるが、これらに制限されない。
【０１０４】
また本発明スクリーニングに際して、被験物質と細胞とを接触させる条件は、特に制限されないが、該細胞が死滅せず且つ本発明遺伝子を発現できる培養条件（温度、ｐＨ、培地組成など）を選択するのが好ましい。
【０１０５】
実施例に示すように、潰瘍性大腸炎に罹患した患者の大腸（結腸）組織では、正常な大腸（結腸）組織に比して、特異的にＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子が発現上昇している。この知見から、これら本発明遺伝子の発現亢進は潰瘍性大腸炎と関連していると考えられる。よって本発明のスクリーニング方法には、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現レベルを指標として、その発現を抑制する物質（発現レベルを正常レベルに戻す物質）を探索する方法が包含される。このスクリーニング方法によって、潰瘍性大腸炎の緩和／抑制作用を有する（潰瘍性大腸炎に対して改善／治療効果を発揮する）候補物質を提供することができる。
すなわち本発明のスクリーニング方法は、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質を探索することによって、潰瘍性大腸炎の改善薬または治療薬の有効成分となる候補物質を提供するものである。
【０１０６】
候補物質の選別は、具体的にはＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかが発現している細胞を用いる場合は、被験物質（候補物質）を添加した細胞における前記本発明遺伝子の発現レベルが、被験物質（候補物質）を添加しない細胞のそのレベルに比して低くなることをもって、行うことができる。また、これらＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現に発現誘導物質を必要とする細胞を用いる場合は、発現誘導物質（例えばリポポリサッカライド（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：ＬＰＳ）、ホルボールエステル（ＰＭＡ等）、カルシウムイオノフォア、サイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＴＮＦα、ＩＦＮγ等）等）によって誘導される発現が被験物質の存在によって抑制されること、すなわち発現誘導物質の存在下で被験物質を接触させた細胞の遺伝子発現が、発現誘導物質存在下で被験物質を接触させなかった対照細胞（正のコントロール）に比して低くなることを指標として、当該被験物質を候補物質として選別することができる。
【０１０７】
より具体的には、例えば結腸由来細胞であるＣａｃｏ−２細胞、ＨＴ−２９細胞またはＣＯＬＯ　２０５　細胞等の細胞を用いて潰瘍性大腸炎の改善薬または治療薬の有効成分となる候補物質をスクリーニングするには、被験物質を加えない細胞（対照細胞）と、被験物質を加えた細胞とで、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現レベルを比較し、その発現レベルの減少を指標として候補物質を選別することができる。また、リポポリサッカライド（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：ＬＰＳ）、ホルボールエステル（ＰＭＡ等）、カルシウムイオノフォア、サイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＴＮＦα、ＩＦＮγ等）などの刺激剤を添加した細胞（対照細胞）と、刺激剤と被験物質とを同時に加えた細胞とで、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現レベルを比較し、その発現レベルの減少を指標として候補物質を選別することができる。また、前記刺激剤を添加して、既にＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかが発現誘導された状態の細胞に被験物質を添加し、被験物質を添加しない対照細胞とで、前記本発明遺伝子の発現レベルを比較して、その発現レベルの低下を指標として候補物質を選別することもできる。
【０１０８】
このような本発明のスクリーニング方法における遺伝子発現レベルの検出及び定量は、前記細胞から調製したＲＮＡまたは該ＲＮＡから転写された相補的ポリヌクレオチドと本発明の疾患マーカーとを用いて、前記（２−１）項に記述したように、ノーザンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲ法など公知の方法、あるいはＤＮＡチップを利用する方法に従って実施できる。指標とする遺伝子発現レベルの低下（抑制、減少）の程度は、被験物質（候補物質）を接触させた細胞におけるＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現が、被験物質（候補物質）を接触させない対照細胞における発現量と比較して１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％以上の低下（抑制、減少）を例示することができる。
【０１０９】
またＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現レベルの検出及び定量は、これら本発明遺伝子の発現を制御する遺伝子領域（発現制御領域）に、例えばルシフェラーゼ遺伝子などのマーカー遺伝子をつないだ融合遺伝子を導入した細胞株を用いて、マーカー遺伝子由来のタンパク質の活性を測定することによっても実施できる。本発明のＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現抑制物質のスクリーニング方法には、かかるマーカー遺伝子の発現量を指標として標的物質を探索する方法も包含されるものであり、この意味において、前記（９に記載する「ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、ＧＲＯ３遺伝子」の概念には、これら本発明遺伝子の発現制御領域とマーカー遺伝子との融合遺伝子が含まれる。
【０１１０】
なお、上記マーカー遺伝子としては、発光反応や呈色反応を触媒する酵素の構造遺伝子が好ましい。具体的には、上記のルシフェラーゼ遺伝子のほか、分泌型アルカリフォスファターゼ遺伝子、クロラムフェニコール・アセチルトランスフェラーゼ遺伝子、βグルクロニダーゼ遺伝子、βガラクトシダーゼ遺伝子、及びエクオリン遺伝子などのレポーター遺伝子が例示できる。
また、ここで前記本発明遺伝子の発現制御領域は、例えば該遺伝子の転写開始部位上流約１ｋｂ、好ましくは約２ｋｂを用いることができる。
【０１１１】
本発明遺伝子の発現制御領域は、例えば（ｉ）５’−ＲＡＣＥ法（例えば、５’ｆｕｌｌ　Ｒａｃｅ　Ｃｏｒｅ　Ｋｉｔ（宝酒造社製）等を用いて実施される）、オリゴキャップ法、Ｓ１プライマーマッピング等の通常の方法により、５’末端を決定するステップ；（ｉｉ）Ｇｅｎｏｍｅ　Ｗａｌｋｅｒ　Ｋｉｔ（クローンテック社製）等を用いて５’−上流領域を取得し、得られた上流領域について、プロモーター活性を測定するステップ；を含む手法等により同定することができる。また融合遺伝子の作成、およびマーカー遺伝子由来の活性測定は公知の方法で行うことができる。
【０１１２】
本発明のスクリーニング方法により選別される物質は、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子の少なくとも一種の遺伝子発現抑制剤として位置づけることができる。これらの物質が有する本発明遺伝子に対する発現抑制作用は、大腸組織障害の抑制に深く関わっているものと考えられる。よってこれらの物質は、潰瘍性大腸炎を緩和、抑制（改善、治療）する薬物の有力な候補物質となる。
【０１１３】
（３−２）タンパク質の発現量を指標とするスクリーニング方法
本発明は、ＣＨＩ３Ｌ２（ＣＨＩ３Ｌ２タンパク質）、ＤＵＯＸ２（ＤＵＯＸ２タンパク質）、ＶＲＬ−１（ＶＲＬ−１タンパク質）、ＩＬ１７Ｒ（ＩＬ１７Ｒタンパク質）、ＧＲＯ１（ＧＲＯ１タンパク質）およびＧＲＯ３（ＧＲＯ３タンパク質）のいずれかの発現を抑制する（減少させる）物質をスクリーニングする方法を提供する。
【０１１４】
本発明スクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含む：
（ａ）被験物質とＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１およびＧＲＯ３のいずれかを発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞における　ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１およびＧＲＯ３のいずれかの発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記に対応するタンパク質の発現量と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１およびＧＲＯ３のいずれかの発現量を減少させる被験物質を選択する工程。
【０１１５】
本発明スクリーニングに用いられる細胞は、内在性および外来性を問わず、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかを発現し、発現産物としてのＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１およびＧＲＯ３のいずれかを有する培養細胞全般を挙げることができる。ここでＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、ＧＲＯ３の発現は、遺伝子産物であるタンパク質を公知のウエスタンブロット法にて検出することにより、容易に確認することができる。該細胞としては、具体的には、前記（３−１）項の（１）〜（３）に記載したような、潰瘍性大腸炎の疾患モデルとして用いられうる動物モデルより単離、調製した腸管組織やリンパ系組織由来の初代培養細胞、種々の刺激剤で処理した腸管組織やリンパ系組織由来の株化細胞、または本発明遺伝子のいずれかを導入した株化細胞などが挙げられる。また当該細胞の範疇には、その細胞膜画分、細胞質画分、細胞核画分なども含まれる。
【０１１６】
本発明スクリーニング方法によってスクリーニングされる被験物質（候補物質）は、制限されないが、核酸（本発明遺伝子のアンチセンスヌクレオチドを含む）、ペプチド、タンパク質、有機化合物、無機化合物などであり、本発明スクリーニングは、具体的にはこれらの被験物質またはこれらを含む試料（被験試料）を上記細胞や細胞膜画分と接触させることにより行われる。かかる被験試料としては、被験物質を含む細胞抽出液、遺伝子ライブラリーの発現産物、合成低分子化合物、合成ペプチド、天然化合物などが挙げられるが、これらに制限されない。
【０１１７】
実施例に示すように、潰瘍性大腸炎に罹患した患者の大腸（結腸）組織では、正常な大腸（結腸）組織に比して、特異的にＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子が発現上昇している。この知見から、これら本発明遺伝子の発現産物（タンパク質）の発現亢進は潰瘍性大腸炎と関連していると考えられる。よって本発明のスクリーニング方法には、これらＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかのタンパク発現レベルを指標として、その発現量を低下させる物質（発現レベルを正常レベルに戻す物質）を探索する方法が包含される。このスクリーニング方法によって、潰瘍性大腸炎の緩和／抑制作用を有する（潰瘍性大腸炎に対して改善／治療効果を発揮する）候補物質を提供することができる。
すなわち本発明のスクリーニング方法は、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかの発現量を低下させる物質を探索することによって、潰瘍性大腸炎の改善薬または治療薬の有効成分となる候補物質を提供するものである。
【０１１８】
候補物質の選別は、具体的にはＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかを発現産生している細胞を用いる場合は、被験物質（候補物質）を添加した細胞における前記本発明タンパク質のタンパク量（レベル）が、被験物質（候補物質）を添加しない細胞のその量（レベル）に比して低くなることを指標として、行うことができる。また、これらＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかの発現産生に発現誘導物質を必要とする細胞を用いる場合は、発現誘導物質（例えばリポポリサッカライド（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：ＬＰＳ）、ホルボールエステル（ＰＭＡ等）、カルシウムイオノフォア、サイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＴＮＦα、ＩＦＮγ等）等）によって誘導される当該タンパクの産生が被験物質の存在によって抑制されること、すなわち発現誘導物質の存在下で被験物質を接触させた細胞の遺伝子発現が、発現誘導物質存在下で被験物質を接触させなかった対照細胞（正のコントロール）に比して低くなることを指標として、当該被験物質を候補物質として選別することができる。
【０１１９】
より具体的には、例えば結腸由来細胞であるＣａｃｏ−２細胞、ＨＴ−２９細胞またはＣＯＬＯ　２０５　細胞等の細胞を用いて潰瘍性大腸炎の改善薬または治療薬の有効成分となる候補物質をスクリーニングするには、被験物質を加えない細胞（対照細胞）と、被験物質を加えた細胞とで、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかのタンパク質の量（レベル）を比較し、その量（レベル）の減少を指標として候補物質を選別することができる。また、リポポリサッカライド（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：ＬＰＳ）、ホルボールエステル（ＰＭＡ等）、カルシウムイオノフォア、サイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＴＮＦ等）などの刺激剤を添加した細胞（対照細胞）と、刺激剤と被験物質とを同時に加えた細胞とで、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかのタンパク質の量（レベル）を比較し、その量（レベル）の低下を指標として候補物質を選別することができる。また、前記刺激剤を添加して、既にＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかが産生された状態の細胞に被験物質を添加し、被験物質を添加しない対照細胞とで、前記本発明タンパク質の量（レベル）を比較して、その量（レベル）の低下を指標として候補物質を選別することもできる。
【０１２０】
本発明のスクリーニング方法にかかるＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３のいずれかの産生量は、前述したように、例えば本発明疾患マーカーなどの抗体（例えばヒトＣＨＩ３Ｌ２タンパク質またはそのホモログ、ヒトＤＵＯＸ２タンパク質またはそのホモログ、ヒトＶＲＬ−１タンパク質またはそのホモログ、ヒトＩＬ１７Ｒタンパク質またはそのホモログ、ヒトＧＲＯ１タンパク質またはそのホモログ、ヒトＧＲＯ３タンパク質またはそのホモログを認識する抗体）を用いたウエスタンブロット法などの公知方法に従って定量できる。ウエスタンブロット法は、一次抗体として本発明疾患マーカーを用いた後、二次抗体として１２５Ｉなどの放射性同位元素、蛍光物質、ホースラディッシュペルオキシターゼ（ＨＲＰ）などの酵素等で標識した一次抗体に結合する抗体を用いて標識し、これら標識物質由来のシグナルを放射線測定器（ＢＡＳ−１８００ＩＩ：富士フィルム社製など）、蛍光検出器などで測定することによって実施できる。また、一次抗体として本発明疾患マーカーを用いた後、ＥＣＬ　Ｐｌｕｓ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔｔｉｎｇ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　（アマシャム　ファルマシアバイオテク社製）を利用して、該プロトコールに従って検出し、マルチバイオイメージャーＳＴＯＲＭ８６０（アマシャム　ファルマシアバイオテク社製）で測定することもできる。
【０１２１】
（３−３）　タンパク質の機能（活性）を指標とするスクリーニング方法
本発明は、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングする方法を提供する。本発明のスクリーニング方法は次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
【０１２２】
（ａ）被験物質を　ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３に接触させる工程、
（ｂ）上記（ａ）の工程に起因して生じるＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の機能または活性を測定し、該機能または活性を被験物質を接触させない場合のＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の機能または活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の機能または活性の低下をもたらす被験物質を選択する工程。
【０１２３】
本発明のスクリーニング方法おいては、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の公知の機能・活性に基づく如何なる機能・活性測定方法をも利用することができる。すなわち、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の公知の機能・活性測定系に被験物質を添加し、当該ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の公知の機能・活性を抑制・阻害する被験物質を、潰瘍性大腸炎に対して改善／治療効果を有する候補物質として選択するスクリーニング方法であれば、本発明のスクリーニング方法の範疇に含まれる。
【０１２４】
前記本発明のスクリーニングは、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３を含む水溶液、細胞または該細胞から調製した細胞画分と、被験物質とを接触させることにより行うことができる。
【０１２５】
ここでＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３を含む水溶液としては、例えばＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３を含む通常の水溶液の他、これらのタンパク質を含む細胞溶解液、細胞破砕液、核抽出液あるいは細胞の培養上清などを例示することができる。
【０１２６】
また、本発明のスクリーニング方法に用いられる細胞としては、内在性及び外来性を問わず、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３を発現し得る細胞を挙げることができる。該細胞としては、具体的には、前記（３−１）項の（１）〜（３）に記載したような、潰瘍性大腸炎の疾患モデルとして用いられうる動物モデルより単離、調製したリンパ系組織や腸管組織由来の初代培養細胞、種々の刺激剤で処理したリンパ系組織や腸管組織由来の株化細胞、または本発明遺伝子のいずれかを導入した株化細胞などを用いることができる。
また本発明のスクリーニング方法に用いられる細胞画分とは、上記細胞に由来する各種の画分を意味し、これには、例えば細胞膜画分、細胞質画分、細胞核画分などが含まれる。
【０１２７】
前記スクリーニングにおいて用いられるＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、およびＧＲＯ３は、いずれも公知のタンパク質であり、前記（１−３）に記述したように、本発明により提供される遺伝子の配列情報（配列番号１〜６）に基づいて、ＤＮＡクローニング、各プラスミドの構築、宿主へのトランスフェクション、形質転換細胞の培養、および必要に応じて培養物からのタンパク質の回収の操作により得ることができる。これらの操作は、当業者に既知の方法、あるいは文献記載の方法（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　Ｔ．　Ｍａｎｉａｔｉｓ　ｅｔ　ａｌ．，　ＣＳＨ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　（１９８３），　ＤＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　ＤＭ．　Ｇｌｏｖｅｒ，　ＩＲＬ　ＰＲＥＳＳ　（１９８５））などに準じて行うことができる。
【０１２８】
実施例に示すように、潰瘍性大腸炎に罹患した患者の大腸（結腸）組織では、正常な大腸（結腸）組織に比して、特異的にＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子が発現上昇している。この知見から、これらの遺伝子の発現産物（タンパク質）の機能（活性）亢進は、潰瘍性大腸炎と関連していると考えられる。よって本発明のスクリーニング方法には、これらＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の機能（活性）を指標として、該タンパク質の機能（活性）を抑制する物質を探索する方法が包含される。本発明スクリーニング方法によれば、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の機能または活性を抑制する物質を探索でき、かくして潰瘍性大腸炎の緩和／抑制作用を有する（潰瘍性大腸炎に対して改善／治療効果を発揮する）候補物質が提供される。
【０１２９】
すなわち本発明のスクリーニング方法は、ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３の機能または活性を抑制する物質を探索することによって、潰瘍性大腸炎の改善薬または治療薬の有効成分となる候補物質を提供するものである。
【０１３０】
本発明スクリーニング方法によってスクリーニングされる被験物質（候補物質）は、制限されないが、核酸、ペプチド、蛋白質（ＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１、またはＧＲＯ３に対する抗体を含む）、有機化合物、無機化合物などであり、本発明スクリーニングは、具体的にはこれらの被験物質またはこれらを含む試料（被験試料）を上記水溶液、細胞または細胞画分と接触させることにより行われる。被験試料としては、被験物質を含む、細胞抽出液、遺伝子ライブラリーの発現産物、合成低分子化合物、合成ペプチド、天然化合物などが挙げられるが、これらに制限されない。
【０１３１】
以下、本発明タンパク質の各々の機能（活性）に基づくスクリーニング方法につき例示する。
【０１３２】
ＣＨＩ３Ｌ２は、ヒト関節軟骨細胞初代培養液より発見された３９ｋＤの蛋白質である。さらにｃＤＮＡクローニングが行われ、細菌のキチナーゼと相関性を示すものの、触媒残基であるグルタミン酸が無く、キチン分解活性をもたないことなどが明らかとなった（Ｈｕ，　Ｂ．　ら、　Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２７１，　１９４１５−１９４２０，　１９９６、およびＯＭＩＮデータベース６０１５２６）。
【０１３３】
ＣＨＩ３Ｌ２の結合活性を抑制する物質のスクリーニング方法は、下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）被験物質と、キチンおよびＣＨＩ３Ｌ２を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させたキチンのＣＨＩ３Ｌ２との結合活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照キチンのＣＨＩ３Ｌ２との結合活性と比較する工程、
（ｃ）上記　（ｂ）の比較結果に基づいて、上記キチンのＣＨＩ３Ｌ２との結合活性を抑制する被験物質を選択する工程。
ＣＨＩ３Ｌ２のキチンとの結合活性は、キトビオース、キトトリオース、キトテトラオースなどのキチンとの結合を、表面プラズモン解析（ビアコア）などによって測定する（Ｃｈａｎｇ，　Ｎ．Ｃ．ら、Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２７６，　１７４９７−１７５０６，　２００１）。もしくは、キチンを結合したアフィニティカラムや、放射性同位元素などで標識したキチンを用いて結合を測定することもできる。
【０１３４】
ＤＵＯＸ２遺伝子は、ｃＡＭＰによって発現が増加することが報告されている（Ｄｅ　Ｄｅｋｅｎ　Ｘ．　Ｊ．ら、　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２７５，　２３２２７−２３２３３，　２０００）。そこで、ＤＵＯＸ２を発現することが可能な細胞を用い、その細胞内部のｃＡＭＰ濃度を増加させ、被験化合物存在下にて、ＤＵＯＸ２の発現増加が抑制されるかどうかを検討することができる。
【０１３５】
ＤＵＯＸ２の被発現誘導活性を抑制する物質のスクリーニング方法は、下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＤＵＯＸ２発現細胞を接触させ、細胞内ｃＡＭＰ濃度を上昇させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＤＵＯＸ２発現量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＤＵＯＸ２発現量と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のｃＡＭＰ濃度の上昇によるＤＵＯＸ２発現量増加を抑制する被験物質を選択する工程。
ＤＵＯＸ２発現量の測定は、前記（３−２）項に記載したように、公知のウエスタンブロット法にて行うことができる。
【０１３６】
また、ＤＵＯＸ２は甲状腺の形質膜画分に存在することが知られ、カルシウムイオン依存的にＮＡＤＰＨを酸化し過酸化水素を生成する。過酸化水素は甲状腺ホルモンの合成反応に用いられる。ｃＤＮＡクローニングによりＤＵＯＸ１とＤＵＯＸ２が存在し、アミノ酸配列にて８３％の相同性を持つことがわかったが、機能の違いなどは明らかになっていない。両遺伝子ともｃＡＭＰによって発現が増加する（Ｄｅ　Ｄｅｋｅｎ　Ｘ．ら、Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２７５，　２３２２７−２３２３３，　２０００）。ラットのＤＵＯＸ２の発現分布を調べたところ、甲状腺を上回って腸で発現していることが明らかとなった（Ｄｕｐｐｙ　Ｃ．ら、　　Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ｒｅｓ．　Ｃｏｍｍｕｎ．，　２７７，　２８７−２９２，　２０００）。
【０１３７】
ＤＵＯＸ２の酵素活性を抑制する物質のスクリーニング方法は、下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＮＡＤＰＨおよびＤＵＯＸ２を水溶液中で接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた水溶液のＮＡＤＰＨ酸化活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照水溶液のＮＡＤＰＨ酸化活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記水溶液のＮＡＤＰＨ酸化活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０１３８】
また、ＤＵＯＸ２の酵素活性を抑制する物質のスクリーニング方法は、下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＮＡＤＰＨおよびＤＵＯＸ２を水溶液中で接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた水溶液の過酸化水素発生量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照水溶液の過酸化水素発生量と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記水溶液の過酸化水素発生量を抑制する被験物質を選択する工程。
【０１３９】
前記２種類のスクリーニング方法におけるＤＵＯＸ２の酵素活性は、ＤＵＯＸ２、もしくはＤＵＯＸ２を含む形質膜画分とＮＡＤＰＨを反応させ、ＮＡＤＰＨ　の酸化や過酸化水素の産生を検出することによって、測定することができる（Ｄｕｐｕｙ，　Ｃ．ら，　Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ，　１８５，　５９７−６０３，　１９８９）。この反応系に被験化合物を存在させ、ＤＵＯＸ２の酵素活性の阻害の程度を測定することができる。
【０１４０】
ＶＲＬ−１はジーンバンクデータベースよりバニロイドレセプター（ＶＲ１、神経細胞に存在、カプサイシンなどの刺激によって活性化されるカチオンチャンネル）に相同性の高いＥＳＴ配列として見つかり、その後、ラット・脳、ヒト・骨髄細胞株よりｃＤＮＡが単離された。ＶＲ１と異なり、熱（４３℃）、プロトン濃度（ｐＨ　６．０以下）、カプサイシンなどの刺激によって活性化されず、５２℃の熱によって始めて活性化することがわかっている（Ｃａｔｅｒｉｎａ，　Ｍ．　Ｊ．ら、　Ｎａｔｕｒｅ，　３９８，　４３６−４４１，　１９９９）。
【０１４１】
ＶＲＬ−１の熱刺激による活性化を抑制する物質のスクリーニング方法は、下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＶＲＬ−１発現細胞を接触させ、熱刺激を加える工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞の膜電位の変化を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞の膜電位の変化と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞の熱刺激による膜電位の変化を抑制する被験物質を選択する工程。
【０１４２】
ＶＲＬ−１の熱刺激による活性化は、熱刺激による膜電位の変化を測定する。すなわち、ＶＲＬ−１発現細胞に熱刺激を加え、生じる膜電位変化を検出することによって、ＶＲＬ−１の活性化を測定することができる（Ｃａｔｅｒｉｎａ，　Ｍ．　Ｊ．ら、　Ｎａｔｕｒｅ，　３９８，　４３６−４４１，　１９９９）。この反応系に被験化合物を存在させ、ＶＲＬ−１活性化により生じた膜電位の変化を阻害する活性を測定することができる。
【０１４３】
インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）はＴ細胞由来のサイトカインであり、さまざまな機能が探索されている（臨床免疫、２９，　６７８−６８２，　１９９７）。ＩＬ−１７　は滑膜由来の線維芽細胞に対してＩＬ−６やＩＬ−８、ＧＣＳＦなどの炎症性サイトカインの産生誘導をおこすとともに、成熟好中球の分化誘導を引き起こす事が知られている。また、慢性関節リウマチとの関連や、骨芽細胞等と骨髄細胞との共培養系において破骨細胞への分化を促進することも報告されている（特開２０００−１８６０４６（Ｐ２０００−１８６０４６Ａ））。ＩＬ−１７のかかる機能は、その特異的受容体ＩＬ１７Ｒを介して発現する。上記知見に基づき、下記のようなスクリーニング方法が例示される。
【０１４４】
ＩＬ１７Ｒの破骨細胞分化促進活性を抑制する物質のスクリーニング方法は、下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、骨芽細胞又は骨芽細胞様ストローマ細胞と、骨髄細胞、およびＩＬ−１７を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＩＬ−１７による破骨細胞への分化を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＩＬ−１７による破骨細胞への分化と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＩＬ−１７による破骨細胞への分化を抑制する被験物質を選択する工程。
【０１４５】
ＩＬ−１７のＩＬ１７Ｒを介した破骨細胞分化促進活性を測定するには、骨芽細胞又は骨芽細胞様ストローマ細胞と骨髄細胞との共培養系において前記細胞培養後に各ｗｅｌｌ中の接着細胞を固定後、ＴＲＡＰ染色しＴＲＡＰ陽性破骨細胞数を計測することにより評価する方法（特開２０００−１８６０４６（Ｐ２０００−１８６０４６Ａ））や、破骨細胞形成シグナル伝達を測定する方法（特開２０００−１８６０４６（Ｐ２０００−１８６０４６Ａ）、ＰＧＥ２の産生アッセイ；ＰＧＥ−２　アッセイキット・倉敷紡績株式会社、ＯＣＩＦ結合分子の発現アッセイ；Ｙａｓｕｄａら、Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ，　９５，　３５９７−３６０２　，　１９９８、ＴＲＡＰ活性アッセイ；Ｎａｋａｇａｗａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ｒｅｓ．　Ｃｏｍｍｕｎ．，　２５３：　３９５，　１９９８、カルシトニン受容体の発現アッセイ；Ｙａｓｕｄａら、Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ，　９５：　３５９７，　１９９８）などがある。
【０１４６】
ＩＬ１７Ｒのサイトカイン産生活性を抑制する物質のスクリーニング方法は、下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＩＬ−１７Ｒを発現しており、かつ炎症性サイトカイン産生可能な細胞およびＩＬ−１７を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＩＬ−１７による炎症性サイトカイン産生量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＩＬ−１７による炎症性サイトカイン産生量と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＩＬ−１７による炎症性サイトカイン産生量を抑制する被験物質を選択する工程。
【０１４７】
ＩＬ１７Ｒのサイトカイン産生活性の測定は、繊維芽細胞、ケラチノサイト、上皮細胞、内皮細胞等の接着性細胞に、被験物質およびＩＬ−１７を作用させ、ＩＬ−６，ＩＬ−８，Ｇ−ＣＳＦ，ＭＣＰ−１，ＰＧＥ２等のサイトカイン、ケモカイン、炎症性因子の産生を測定する方法がある（Ｉｎｔｅｒｎ．　Ｒｅｖ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　１６：　５４１−５５１，　１９９８）。
【０１４８】
ＩＬ１７Ｒの結合活性を抑制する物質のスクリーニング方法は、下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＩＬ−１７Ｒを発現する細胞または該細胞から調製した細胞画分およびＩＬ−１７を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞または細胞画分のＩＬ−１７との結合活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞またはその細胞から調製した細胞画分のＩＬ−１７との結合活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞または細胞画分のＩＬ−１７との結合活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０１４９】
ＩＬ１７Ｒの結合活性の測定は、ＩＬ−１７Ｒを発現する細胞または該細胞から調製した細胞画分に、被験物質およびＩＬ−１７を作用させ、ＩＬ−６，ＩＬ−８，Ｇ−ＣＳＦ，ＭＣＰ−１，ＰＧＥ２等のサイトカイン、ケモカイン、炎症性因子の産生をＥＬＩＳＡにより測定する方法がある（Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．　１８３：　２５９３−２６０３，　１９９６、Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．　３７：　２３９−４５，　２００２　）。
【０１５０】
ＧＲＯ１は、ＣＸＣサブファミリーに属するケモカインの１種である。Ｇｒｏ　α、ＭＧＳＡ、ＮＡＰ−３、ＣＸＣＬ１とも呼ばれる。ヒトメラノーマ細胞で分泌される細胞分裂誘導因子として発見された後、他のケモカインと構造がにていることから炎症細胞走化性因子として注目された。機能として、好中球走化性、好中球エラスターゼ活性化、好塩基球遊走活性、多核白血球細胞の肺胞腔への浸潤誘導、マラリア原虫の赤血球への侵入抑制、メラノーマ細胞の増殖誘導、ＨＵＶＥＣ　（ｈｕｍａｎ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ）　の増殖誘導などが知られている（山下ら、ケモカインハンドブック（細胞工学　別冊　ハンドブックシリーズ、義江ら監修）ｐ３５−３７、秀潤社、２０００年）。
【０１５１】
ＧＲＯ１の遊走活性を抑制する物質のスクリーニング方法は、下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、好中球およびＧＲＯ１を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＧＲＯ１による遊走活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＧＲＯ１による遊走活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＧＲＯ１による遊走活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０１５２】
ＧＲＯ１の受容体への結合活性を抑制する物質のスクリーニング方法は、下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＧＲＯ１受容体を発現する細胞または該細胞から調製した細胞画分およびＧＲＯ１を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞または細胞画分のＧＲＯ１との結合活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞またはその細胞から調製した細胞画分のＧＲＯ１との結合活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞または細胞画分のＧＲＯ１との結合活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０１５３】
ＧＲＯ１の細胞増殖活性を抑制する物質のスクリーニング方法は、下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、メラノーマ細胞などのＧＲＯ１反応性細胞およびＧＲＯ１を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた細胞のＧＲＯ１による増殖活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＧＲＯ１による増殖活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＧＲＯ１による増殖活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０１５４】
ＧＲＯ１によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離を抑制する物質のスクリーニング方法は、下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、好中球およびＧＲＯ１を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＧＲＯ１によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＧＲＯ１による活性化と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＧＲＯ１によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離量を抑制する被験物質を選択する工程。
【０１５５】
前記ＧＲＯ１のスクリーニング方法に用いられるＧＲＯ１の機能または増殖活性の測定方法には、好中球遊走活性を測定する方法、好中球の活性化により遊離されるライソザイム酵素や活性酸素を測定する方法などがある。走化性因子の遊走活性測定は、Ｂｏｙｄｅｎ法（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１１５，　４５３−４６６，　１９６２）を基本にした改良法（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　１０，４０９−４１６，１９６６，　　Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．６４，５２１−５３０，１９７１，Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　４６，２５１−２５８，１９８１，　　Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ　３５，１８２−１８５，１９８２）がそれぞれに検討され用いられてきた。最近になり、Ｇａｌｌｉｎら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１０，２３３−２４０，１９７３）やＫｕｒｉｈａｒａら（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｙｎ．，７，７４７−７５４，１９８４）　は、Ｃｒ標識した好中球を用いてこれまで問題であったＢｏｙｄｅｎ法の欠点をカバーできるケモタキシス　　アッセイ法を考案している。また、Ｗａｔａｎａｂｅら（Ｊａｐａｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，３９，１０２−１０４，１９８５，　　Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２２，１３−１８，１９８９）　は、マルチウエルタイプのボイデンチェンバーを考案し、これを用いて多数のサンプルの好中球走化性を測定できるシステムを開発した。一方、ＧＲＯ１により活性化された好中球は脱顆粒を起こし、エラスターゼ、カテプシンＧ、ミエロパーオキシダーゼ、βグルクロニダーゼ、コラゲナーゼ、Ｔｙｐｅ　ＩＶ　ゼラチナーゼなどの酵素を放出したり、活性酸素を放出することが知られており、遊離したライソザイム酵素を測定する方法がある。ここでライソザイム酵素又は活性酵素産生量の測定は、例えば　Ｇｒｙｋｉｅｗｉｃｚ，　Ｇ．　ら、Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２６０，　３４４０（１９８５）、又は　Ｐｅｖｅｒｉ，　Ｐ．　ら、Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　１６７，　１５４７（１９８８）　）等に記載の方法を参考にして行うことができる。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した場合のライソザイム酵素又は活性酵素産生量が、被験物質を添加しない場合のライソザイム酵素又は活性酵素産生量に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０１５６】
ＧＲＯ３は、ＣＸＣサブファミリーに属するケモカインの１種である。Ｇｒｏ　γ、ＭＩＰ−２β、ＣＸＣＬ３とも呼ばれる。ＧＲＯ３の機能として、ｉｎ　ｖｉｖｏ　におけるヒト骨髄由来の造血幹細胞や前駆細胞に対する増殖抑制、好中球に対する走化性、ケモカイネシス、細胞内カルシウム濃度上昇などが知られている（小幡ら、ケモカインハンドブック（細胞工学　別冊　ハンドブックシリーズ、義江ら監修）ｐ４０−４１、秀潤社、２０００年）。
【０１５７】
ＧＲＯ３の遊走活性を抑制する物質のスクリーニング方法は、下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、好中球およびＧＲＯ３を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＧＲＯ３による遊走活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＧＲＯ３による遊走活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＧＲＯ３による遊走活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０１５８】
ＧＲＯ３の受容体への結合活性を抑制する物質のスクリーニング方法は、下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、ＧＲＯ３受容体を発現する細胞または該細胞から調製した細胞画分およびＧＲＯ３を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞または細胞画分のＧＲＯ３との結合活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞またはその細胞から調製した細胞画分のＧＲＯ３との結合活性と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞または細胞画分のＧＲＯ３との結合活性を抑制する被験物質を選択する工程。
【０１５９】
ＧＲＯ３によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離を抑制する物質のスクリーニング方法は、下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質と、好中球およびＧＲＯ３を接触させる工程、
（ｂ）　被験物質を接触させた上記細胞のＧＲＯ３によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離量を測定し、該活性を被験物質を接触させない対照細胞のＧＲＯ３による活性化と比較する工程、
（ｃ）　上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記細胞のＧＲＯ３によるライソザイム酵素又は活性酸素の遊離量を抑制する被験物質を選択する工程。
【０１６０】
前記ＧＲＯ３の機能または活性を抑制する物質の測定方法には，好中球遊走活性を測定する方法，好中球の活性化により遊離されるライソザイム酵素や活性酸素を測定する方法などがある。走化性因子の遊走活性測定はＢｏｙｄｅｎ法（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．　１１５，　４５３−４６６，　１９６２）を基本にした改良法（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　１０，４０９−４１６，１９６６，　　Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．６４，５２１−５３０，１９７１，Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　４６，２５１−２５８，１９８１，　　Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ３５，１８２−１８５，１９８２）がそれぞれに検討され用いられてきた。最近になり，Ｇａｌｌｉｎら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．　１１０，２３３−２４０，１９７３）やＫｕｒｉｈａｒａら（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｙｎ．　７，７４７−７５４，１９８４）　はＣｒ標識した好中球を用いてこれまで問題であったＢｏｙｄｅｎ法の欠点をカバーできるケモタキシス　　アッセイ法を考案されている。また、Ｗａｔａｎａｂｅら（Ｊａｐａｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．　３９，１０２−１０４，１９８５，　　Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　２２，１３−１８，１９８９）　は，マルチウエルタイプのボイデンチェンバーを考案し，これを用いて多数のサンプルの好中球走化性を測定できるシステムを開発した。一方，ＧＲＯ３により活性化された好中球は脱顆粒を起こし，エラスターゼ，カテプシンＧ，ミエロパーオキシダーゼ，βグルクロニダーゼ，コラゲナーゼ，Ｔｙｐｅ　ＩＶ　ゼラチナーゼなどの酵素を放出したり，活性酸素を放出することが知られており、遊離したライソザイム酵素を測定する方法がある。
【０１６１】
ここで好中球の遊走活性測定は、Ｂｏｙｄｅｎ法（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．　１１５，　４５３−４６６，　１９６２）、又はその改良法（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　１０，４０９−４１６，１９６６，　　Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．６４，５２１−５３０，１９７１，Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　４６，２５１−２５８，１９８１，　　Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ　３５，１８２−１８５，１９８２）を参考にして行うことができる。また最近になり，Ｇａｌｌｉｎら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．　１１０，２３３−２４０，１９７３）やＫｕｒｉｈａｒａら（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｙｎ．　７，７４７−７５４，１９８４）　はＣｒ標識した好中球を用いてこれまで問題であったＢｏｙｄｅｎ法の欠点をカバーできるケモタキシスアッセイ法を考案しており、この手法を用いて行うこともできる。また、Ｗａｔａｎａｂｅら（Ｊａｐａｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．　３９，１０２−１０４，１９８５，　Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　２２，１３−１８，１９８９）はマルチウエルタイプのボイデンチェンバーを考案し、これを用いて多数のサンプルの好中球走化性を測定することもできる。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した場合の好中球遊走活性が、被験物質を添加しない場合の好中球遊走活性に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。一方、ＧＲＯ３により活性化された好中球は脱顆粒を起こし、エラスターゼ、カテプシンＧ、ミエロパーオキシダーゼ、βグルクロニダーゼ、コラゲナーゼ、Ｔｙｐｅ　ＩＶ　ゼラチナーゼなどの酵素を放出したり、活性酸素を放出することが知られており、遊離したライソザイム酵素を測定する方法がある。ここでライソザイム酵素又は活性酵素産生量の測定は、例えば　Ｇｒｙｋｉｅｗｉｃｚ，　Ｇ．　ら、Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２６０，　３４４０（１９８５）、又は　Ｐｅｖｅｒｉ，　Ｐ．　ら、Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　１６７，　１５４７（１９８８）　）等に記載の方法を参考にして行うことができる。候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加した場合のライソザイム酵素又は活性酵素産生量が、被験物質を添加しない場合のライソザイム酵素又は活性酵素産生量に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０１６２】
またＧＲＯ１及び　ＧＲＯ３はリガンドであり、その受容体として以下のものが知られている。
・ＧＲＯ１：ＣＸＣＲ２
・ＧＲＯ３：ＣＸＣＲ２
【０１６３】
よって、これら本発明タンパク質（ＧＲＯ１及び　ＧＲＯ３）の機能または活性の低下をもたらす被験物質（候補物質）のスクリーニングは、被験物質が、前記受容体とリガンドとの結合を阻害するか否かを測定することによって行うことができる。具体的には本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質の存在下で、前記受容体と前記リガンドとを接触させる工程、
（ｂ）　上記受容体に対するリガンドの結合量を測定し、当該結合量を、被験物質非存在下で受容体とリガンドとを接触させることによって得られる受容体に対するリガンドの結合量（対照結合量）と比較する工程、及び
（ｃ）　上記（ｂ）の結果に基づいて、対照結合量に比して結合量を低下させる被験物質を選択する工程。
【０１６４】
この場合、前記受容体とリガンドとの結合阻害は、１）受容体に結合することによって、リガンドの受容体への結合を阻害する態様のものであってもよいし、２）リガンドに結合することによって、リガンドの受容体への結合を阻害する態様のものであってもよい。但し、とりわけ１）の態様の場合は、受容体に結合してもリガンドと同じ作用を発揮しない被験物質を選択することが必要である。このため、上記のスクリーニング方法で選別された被験物質は更に、下記：
（ｄ）上記（ｃ）で選択された被験物質の中から、更にリガンドと同じ作用を発揮しない被験物質を選択する工程、
に供することが好ましい。
【０１６５】
本発明スクリーニングで用いる受容体は、精製物（単離物）であっても良いし、当該受容体を含有する細胞またはその細胞画分の形態であっても良い。
本発明スクリーニングで用いる受容体を含有する細胞は、当該受容体を天然に発現している細胞を用いても良いし、また当該受容体をコードする遺伝子を細胞に導入して作製した形質転換細胞を用いても良い。
【０１６６】
前記形質転換細胞は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　２ｎｄ　Ｅｄｔ．，　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ　（１９８９）等の基本書に従い、当業者にとって公知の方法で調製することができる。例えば、前記受容体のｃＤＮＡをｐＣＡＧＧＳ（Ｇｅｎｅ　１０８，１９３−１９９（１９９１））、ｐｃＤＮＡ１．１、ｐｃＤＮＡ３．１誘導体（インビトロジェン社）などの公知の発現ベクターに挿入する。その後、適当な宿主に導入し、培養することにより、導入した受容体のＤＮＡに対応するタンパク質を発現させた形質転換細胞を作製することができる。宿主としては、一般的に広く普及している、ＣＨＯ細胞、Ｃ１２７細胞、ＢＨＫ２１細胞、ＣＯＳ細胞などを用いることができるが、これに限定されることなく、酵母、細菌、昆虫細胞などを用いることもできる。
【０１６７】
受容体タンパク質のｃＤＮＡを有する発現ベクターの宿主細胞への導入方法としては、公知の発現ベクターの宿主細胞への導入方法であれば、どのような方法でもよく、例えばリン酸カルシウム法（Ｊ．　Ｖｉｒｏｌ．，　５２，　４５６−４６７（１９７３））、ＬＴ−１（Ｐａｎｖｅｒａ社製）を用いる方法、遺伝子導入用リピッド（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ、Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ；Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ社製）を用いる方法などが挙げられる。
前記受容体を天然に発現する細胞、および前記受容体を発現する形質転換細胞は、そのままスクリーニングに用いることができるが、細胞膜をスクリーニングに用いる場合は、例えば以下のようにして細胞膜画分を得ることができる。すなわちまず細胞に低張バッファーを添加し、細胞を低張破壊した後、ホモジナイズし、遠心分離することにより細胞膜画分の沈殿物を得る。そしてこの沈殿物をバッファーに懸濁することにより、受容体を含有する細胞膜画分を得ることができる。得られた細胞膜画分は、抗体を結合させたカラム等により常法で精製することもできる。
【０１６８】
本発明スクリーニングで用いられる前記リガンド（ＧＲＯ１及び　ＧＲＯ３）も、前記受容体と同様の手法で調製された形質転換細胞から、常法により組換えタンパクを回収することにより得ることができる。
これらリガンドは、そのままで用いても良いし、任意の標識物質で標識されたものを用いることもできる。ここで標識物質としては、放射性同位体（３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、１２５Ｉ等）、蛍光物質（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｐｒｏｂｅｓ社Ａｌｅｘａ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｌａｂｅｌｉｎｇ　Ｋｉｔｓ等）、化学発光物質（Ａｓｓａｙ　Ｄｅｓｉｇｎｓ社Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ　Ｌａｂｅｌｉｎｇ　Ｋｉｔ等）、ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ社ＥＺ−Ｌｉｎｋ　Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ　Ｋｉｔｓ等）、マーカータンパク質、またはペプチドタグなどを例示することができる。マーカータンパク質としては、例えばアルカリフォスファターゼ（Ｃｅｌｌ，　６３，１８５−１９４，１９９０）、抗体のＦｃ領域（Ｇｅｎｂａｎｋ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ　Ｍ８７７８９）、またはＨＲＰ（Ｈｏｒｓｅ　ｒａｄｉｓｈ　ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）などの従来公知のマーカータンパク質を挙げることができる。またペプチドタグとしては、例えばＭｙｃタグ、Ｈｉｓタグ、ＦＬＡＧタグなどの従来公知のペプチドタグを挙げることができる。
【０１６９】
受容体結合阻害活性の測定は、具体的には、以下の方法が例示される。すなわち、前記受容体を含有する水溶液（通常緩衝液が用いられる）、前記細胞若しくは細胞膜画分に、１０−３〜１０−１０Ｍの適当な濃度に調製した被験化合物溶液（通常溶媒には水もしくは緩衝液が用いられるが、溶解度に応じてエタノールやＤＭＳＯを添加することもできる）を加えた後、標識した前記リガンドを加え、一定時間（通常、１０分〜２時間）反応させる。その後遠心分離等により上清を単離して放射活性を測定し、上清中に含まれる標識したリガンド量を計測することができる。あるいは、形質転換細胞もしくは細胞膜画分を含む沈殿物を界面活性剤、塩基を含む溶液に溶解し、その放射活性を測定し、沈殿物に含まれる標識リガンド量を計測することもできる。
【０１７０】
上記の数値を、被験化合物の代わりに溶媒をブランクとして用いて実施した場合の値（対照結合量）と比較することにより、被験化合物が、受容体と標識リガンドの結合を阻害するか否かを評価することができる。すなわち候補物質のスクリーニングは、被験物質存在下での結合量が、被験物質非存在下での結合量に比して、減少するか否かを指標にして行うことができる。
具体的な阻害率（％）については、以下の式：
｛１−（被験物質を添加した場合に受容体と結合した標識リガンド量）／（被験物質非添加時における受容体と結合した標識リガンド量）｝Ｘ１００
で算出することによって求めることができる。
【０１７１】
さらに、ＧＲＯ１及び　ＧＲＯ３の受容体であるＣＸＣＲ２は、以下の如きＧＰＣＲ（Ｇ蛋白共役型受容体；Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｕｐｌｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ）であることが知られている。よって、これら本発明タンパク質（ＧＲＯ１及び　ＧＲＯ３）の機能または活性の低下をもたらす被験物質（候補物質）のスクリーニングは、ＧＰＣＲ活性を阻害するか否かを測定することによって、行うことができる。以下、代表的な手法として、（１）　ＧＴＰとの結合活性に基づくスクリーニング、及び（２）　ＧＰＣＲの生理活性に基づくスクリーニングについて記述する。
【０１７２】
（１）ＧＴＰとの結合活性に基づくスクリーニング
ＧＴＰとの結合活性に基づくスクリーニングは、ＧＰＣＲがＧＤＰ存在下でＧＴＰアナログであるＧＴＰγＳと結合する性質を利用して行うことが出来る。すなわち本発明のスクリーニングは、ＧＰＣＲとＧＴＰγＳとの結合（より具体的にはＧＰＣＲとＧタンパク質との複合体とＧＴＰγＳとの結合）を被験物質が阻害（抑制）するか否かを測定することによって、行うことができる。具体的には本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質の存在下で、前記ＧＰＣＲ、前記ＧＲＯ１または　ＧＲＯ３およびＧＴＰを接触させる工程、
（ｂ）　上記（ａ）の工程に起因して生じるＧＴＰ結合量を測定し、当該結合量を、被験物質非存在下でＧＰＣＲ、ＧＲＯ１または　ＧＲＯ３およびＧＴＰを接触させることによって得られるＧＴＰ結合量（対照結合量）と比較する工程、及び
（ｃ）　上記（ｂ）の結果に基づいて、対照結合量に比してＧＴＰ結合量を低下させる被験物質を選択する工程。
【０１７３】
本発明スクリーニングで用いるＧＰＣＲを含有する細胞は、前記受容体結合阻害活性に基づくスクリーニング方法で用いる細胞と同様のものを使用することができる。
次に、前記細胞から遠心分離等の操作により、細胞膜画分を調製する。これを、適当な緩衝液などの溶媒中で、前記ＧＲＯ１または　ＧＲＯ３および被験物質とともに混合し、一定時間（例えば、３０分〜２時間）インキュベートする。更に、［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳを混合し、一定時間（例えば、３０分〜２時間）インキュベートする。グラスフィルター上で、緩衝液で洗浄することにより結合反応を終了させた後、フィルター上の放射活性を測定することにより、前記ＧＰＣＲとＧタンパク質との複合体に結合した［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ　量を算出することができる。候補物質のスクリーニングは、被験物質存在下での［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ結合量が、被験物質非存在下での［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ結合量に比して、減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０１７４】
（２）　ＧＰＣＲの生理活性に基づくスクリーニング
ＧＰＣＲにアゴニストリガンド（ＧＲＯ１または　ＧＲＯ３）が結合することによって生ずる生理活性を指標として、ＧＰＣＲの機能（活性）を抑制する候補物質を選別することもできる。具体的には本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）　被験物質の存在下で、前記受容体と前記リガンドとを接触させる工程、
（ｂ）　上記（ａ）の工程に起因して生じるＧＰＣＲを介した生理活性を測定し、当該生理活性を、被験物質非存在下で受容体とリガンドとを接触させることによって得られるＧＰＣＲを介した生理活性（対照生理活性）と比較する工程、及び
（ｃ）　上記（ｂ）の結果に基づいて、対照生理活性に比して生理活性を低下させる被験物質を選択する工程。
【０１７５】
ここでＧＰＣＲを介した生理活性としては、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内カルシウムイオン濃度の増加もしくはその抑制、細胞内ｃＡＭＰ濃度の増加もしくはその抑制、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内タンパク質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓ活性化、ｃＡＭＰ応答性エレメントのレポータージーンの活性化もしくはその抑制等が挙げられる。
該生理活性は、公知の方法、または市販の測定用キットを用いて測定することができる。すなわち、前記ＧＰＣＲを含有する細胞をマルチウェルプレート等に培養する。新鮮な培地、あるいは細胞毒性を示さない適当なバッファーに交換し、被験化合物、および／またはリガンド等を添加して一定時間インキュベートした後、細胞を抽出、あるいは上清液を回収して生成した産物をそれぞれ該当する方法に従って定量する。生理活性の指標とする物質（例えばアラキドン酸など）の生成が、細胞が含有する分解酵素によって測定不能な場合は、該分解酵素に対する阻害剤を併用することもできる。また、ｃＡＭＰ産生抑制などの活性については、フォルスコリンなどで細胞の産生量を増大させて、感度良く測定することもできる。
【０１７６】
具体的な測定手順としては、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｉｍａｇｉｎｇ　ｐｌａｔｅ　ｒｅａｄｅｒ（ＦＬＩＰＲ）を用いて、細胞内カルシウム濃度の変動を検出することなどが挙げられる。前記ＧＰＣＲが、Ｇｑ蛋白ではなくＧｓ蛋白もしくはＧｉ蛋白と共役して存在する場合でも、そのシグナルをＧｑタイプのシグナルに変換し、細胞内カルシウムイオン量を測定することにより、スクリーニングを行うことができる。すなわち、
１）前記ＧＰＣＲ遺伝子の発現ベクターと、Ｇｑ蛋白、もしくはＧｑｓ５蛋白（Ｇｑｓ５とは、Ｃ末端に、Ｇｓ蛋白のＣ末端アミノ酸５残基を置換したＧｑ蛋白を意味する。）、もしくはＧｑｉ５蛋白（Ｇｑｉ５とは、Ｃ末端に、Ｇｉ蛋白のＣ末端アミノ酸５残基を置換したＧｑ蛋白を意味する。）の発現ベクターを作製する。ここで、細胞株としては、ＣＨＯ−Ｋ１細胞等を用いることができ、上記発現ベクターを遺伝子導入試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔｏａｍｉｎｅ　（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）等を用いて共導入することができる。
２）次に該細胞を、ｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄ（色素を細胞内に保持するために、ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｄｒｕｇ−ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｐｕｍｐの阻害剤として用いる。）、およびＦｌｕｏ−３　ＡＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｐｒｏｂｅ社）等のカルシウムイオンによって蛍光活性を示す色素を含むＦ１２培養培地中で、ＣＯ２インキュベーターにて一定時間（例えば３０分〜２時間）培養する。
３）リガンドをｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄを含むＨＢＳＳ等の培養培地に溶解した溶液を、添加し、２分後までＦＬＩＰＲにて計測する。検出は、４８８ｎｍのアルゴンレーザーで細胞を励起し、カルシウムイオンが結合したＦｌｕｏ−３の蛍光を５００−５６０ｎｍの波長でとらえることによって行う。リガンド添加直後から６０秒後までの蛍光強度から、添加前の値をバックグラウンドとして差し引いた値を活性とする。被験物質を添加する場合はリガンドを添加する前に添加し、その後リガンドを添加する。
４）候補物質の選択は、被験物質の存在下におけるカルシウムイオン量が、被験物質非存在下におけるカルシウムイオン量に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０１７７】
また、ｃＡＭＰ応答性エレメントのレポータージーンアッセイを用いる方法は、前記ＧＰＣＲにリガンドが結合して生じるシグナル伝達により活性化されるｃＡＭＰ応答性エレメント（ＣＲＥ）の下流にルシフェラーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、成長ホルモン、ＧＦＰなどのレポーター遺伝子を連結し、レポータージーンアッセイを行う方法である。すなわち、１）前記ＧＰＣＲ遺伝子の発現ベクターと、Ｇタンパク（Ｇｓ、Ｇｉ）の発現ベクター、およびｃＡＭＰ応答性エレメント（ＣＲＥ）の下流にルシフェラーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、成長ホルモン、ＧＦＰなどのレポーター遺伝子を連結した遺伝子を作製する。ここで、細胞株としては、ＣＨＯ−Ｋ１細胞等を用いることができ、上記発現ベクターを遺伝子導入試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔｏａｍｉｎｅ　（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）等を用いて共導入することができる。また、前記Ｇタンパクを発現している細胞を用いる場合は、前記ＧＰＣＲの遺伝子発現ベクターおよびレポーターベクターのみを導入する。
２）次に該細胞を、適当な培地中で、ＣＯ２インキュベーターにて一定時間（例えば４〜８時間）培養する。
３）培地交換後、リガンドを適当な培養培地に溶解した溶液を添加し、一定時間（４時間〜２４時間）後、レポーター活性を測定する。例えばルシフェラーゼの場合は、細胞溶解液で細胞を溶かし、その一部分を用いてルシフェラーゼ基質溶液（プロメガ社Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　ａｓｓａｙ　ｓｙｓｔｅｍ等）と反応させた際の発光をルミノメーターで測定する。被験物質はリガンドを添加する前に添加する。
４）候補物質の選択は、被験物質の存在下におけるレポーター活性が、被験物質非存在下におけるレポーター活性に比して減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０１７８】
かくして選抜取得される被験物質は、潰瘍性大腸炎を緩和、抑制（改善、治療）する薬物の有力な候補となる。
【０１７９】
上記（３−１）〜（３−３）に記載する本発明のスクリーニング方法によって選別された候補物質は、さらに潰瘍性大腸炎のモデル動物である以下の（１）〜（３）の動物：（１）自然発症炎症性腸疾患（ＩＢＤ）モデル（Ｃ３Ｈ／ＨｅＪＢｉｒマウス、Ｃｏｔｔｏｎ　ｔｏｐ　ｔａｍａｒｉｎｓ等）、（２）化学物質誘発モデル（ジニトロクロロベンゼン誘発モデル（ラット）、酢酸モデル（ラット）、トリニトロスルホン酸誘発モデル（マウス、ラット、ウサギ）、デキストラン硫酸誘発モデル（マウス、ラット、ハムスター）、カラゲナン誘発モデル（ラット、モルモット）、インドメタシン誘発モデル（ラット）等）、（３）トランスジェニック、ミュータント（ＩＬ−２ノックアウトマウス、ＩＬ−１０ノックアウトマウス、ＴＣＲノックアウトマウス等）、または（４）移入モデル（ＣＤ４５ＲＢｈｉ移入ＳＣＩＤマウス等）、を用いた薬効試験、安全性試験、さらに潰瘍性大腸炎患者への臨床試験に供してもよく、これらの試験を実施することによって、より実用的な潰瘍性大腸炎の改善または治療薬を取得することができる。このようにして選別された物質は、さらにその構造解析結果に基づいて、化学的合成、生物学的合成（発酵）または遺伝子学的操作によって、工業的に製造することができる。
【０１８０】
なお、上記（３−１）〜（３−３）に記載するスクリーニング方法は、潰瘍性大腸炎の改善または治療薬の候補物質を選別するのみならず、潰瘍性大腸炎の既存の若しくは新規な改善または治療薬（候補薬）が、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現を抑制するか否か、あるいはＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１およびＧＲＯ３のいずれかの発現若しくは機能・活性を抑制するか否かを評価、確認するためにも用いることができる。すなわち本発明のスクリーニング方法の範疇には、候補物質の探索のみならず、このような評価あるいは確認を目的とするものも含まれる。
【０１８１】
（４）潰瘍性大腸炎の改善・治療剤
本発明は、潰瘍性大腸炎の改善・治療剤を提供するものである。
本発明はＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、ＧＲＯ３遺伝子及びこれらの遺伝子によりコードされるタンパク質が、潰瘍性大腸炎と関連しているという新たな知見から、これら遺伝子の発現を抑制する物質、あるいは、これら遺伝子によりコードされるタンパク質の発現若しくは機能（活性）を抑制する物質が、上記疾患の改善または治療に有効であるという考えに基づくものである。すなわち、本発明の潰瘍性大腸炎の改善・治療剤は、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現を抑制する物質、あるいはＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１およびＧＲＯ３のいずれかの発現若しくは機能（活性）を抑制する物質を有効成分とするものである。
【０１８２】
当該有効成分となるＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現抑制物質、あるいはＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１およびＧＲＯ３のいずれかの発現若しくは機能（活性）抑制物質は、上記のスクリーニング方法を利用して選別されたもののみならず、選別された物質に関する情報に基づいて常法に従って工業的に製造されたものであってもよい。
【０１８３】
ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかの発現抑制物質、あるいはＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１およびＧＲＯ３のいずれかの発現若しくは機能（活性）抑制物質は、そのままもしくは自体公知の薬学的に許容される担体（賦形剤、増量剤、結合剤、滑沢剤などが含まれる）や慣用の添加剤などと混合して医薬組成物として調製することができる。当該医薬組成物は、調製する形態（錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤などの経口投与剤；注射剤、点滴剤、外用剤、坐剤などの非経口投与剤）等に応じて経口投与または非経口投与することができる。また投与量は、有効成分の種類、投与経路、投与対象または患者の年齢、体重、症状などによって異なり一概に規定できないが、通常、１日投与用量として、数ｍｇ〜２ｇ程度、好ましくは数十ｍｇ程度を、１日１〜数回にわけて投与することができる。
【０１８４】
また、上記の物質がＤＮＡによりコードされるものであれば、該ＤＮＡを遺伝子治療用ベクターに組み込み、遺伝子治療を行うことも考えられる。更に、上記有効成分物質がＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子のいずれかに対するアンチセンスヌクレオチドの場合は、そのままもしくは遺伝子治療用ベクターにこれを組込むことにより、遺伝子治療を行うこともできる。これらの場合も、遺伝子治療用組成物の投与量、投与方法は患者の体重、年齢、症状などにより変動し、当業者であれば適宜選択することが可能である。
【０１８５】
上記アンチセンスヌクレオチドを利用する遺伝子治療につき詳述すれば、該遺伝子治療は、通常のこの種の遺伝子治療と同様にして、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその化学的修飾体を直接患者の体内に投与することにより目的遺伝子の発現を制御する方法、もしくはアンチセンスＲＮＡを患者の標的細胞に導入することにより該細胞による目的遺伝子の発現を制御する方法により実施できる。
【０１８６】
ここで「アンチセンスヌクレオチド」には、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、またはＧＲＯ３遺伝子の少なくとも８塩基以上の部分に対応するアンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡなどが含まれる。具体的には、配列番号：１〜６のいずれかに記載の塩基配列の少なくとも８塩基以上の部分に対応するアンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡなどが含まれる。
【０１８７】
また、その化学修飾体には、例えばホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、アルキルホスホトリエステル、アルキルホスホナート、アルキルホスホアミデートなどの、細胞内への移行性または細胞内での安定性を高め得る誘導体（”Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　ＲＮＡ　ａｎｄ　ＤＮＡ”　ＷＩＬＥＹ−ＬＩＳＳ刊、１９９２年、ｐｐ．１−５０、Ｊ．　Ｍｅｄ．　Ｃｈｅｍ．　３６，　１９２３−１９３７（１９９３））が含まれる。これらは常法に従い合成することができる。
【０１８８】
アンチセンスヌクレオチドまたはその化学的修飾体は、細胞内でセンス鎖ｍＲＮＡに結合して、目的遺伝子の発現、即ちＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、またはＧＲＯ３遺伝子の発現を抑制することができ、かくしてＣＨＩ３Ｌ２、ＤＵＯＸ２、ＶＲＬ−１、ＩＬ１７Ｒ、ＧＲＯ１またはＧＲＯ３の機能（活性）を抑制することができる。
【０１８９】
アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその化学的修飾体を直接生体内に投与する方法において、用いられるアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその化学修飾体は、好ましくは５−２００塩基、さらに好ましくは８−２５塩基、最も好ましくは１２−２５塩基の長さを有するものとすればよい。その投与に当たり、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその化学的修飾体は、通常慣用される安定化剤、緩衝液、溶媒などを用いて製剤化され得る。
アンチセンスＲＮＡを患者の標的細胞に導入する方法において、用いられるアンチセンスＲＮＡは、好ましくは１００塩基以上、より好ましくは３００塩基以上、さらに好ましくは５００塩基以上の長さを有するものとすればよい。また、この方法は、生体内の細胞にアンチセンス遺伝子を導入するｉｎ　ｖｉｖｏ法および一旦体外に取り出した細胞にアンチセンス遺伝子を導入し、該細胞を体内に戻すｅｘ　ｖｉｖｏ法を包含する（日経サイエンス，　１９９４年４月号，　２０−４５頁、月刊薬事，　３６　（１），　２３−４８　（１９９４）、実験医学増刊，　１２　（１５），　全頁　（１９９４）など参照）。この内ではｉｎ　ｖｉｖｏ法が好ましく、これには、ウイルス的導入法（組換えウイルスを用いる方法）と非ウイルス的導入法がある（前記各文献参照）。
【０１９０】
上記組換えウイルスを用いる方法としては、例えばレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、ポリオウイルス、シンビスウイルスなどのウイルスゲノムに本発明遺伝子のアンチセンスヌクレオチドを組込んで生体内に導入する方法が挙げられる。この中では、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルスなどを用いる方法が特に好ましい。非ウイルス的導入法としては、リポソーム法、リポフェクチン法などが挙げられ、特にリポソーム法が好ましい。他の非ウイルス的導入法としては、例えばマイクロインジェクション法、リン酸カルシウム法、エレクトロポレーション法なども挙げられる。
【０１９１】
遺伝子治療用製剤組成物は、上述したアンチセンスヌクレオチドまたはその化学修飾体、これらを含む組換えウイルスおよびこれらウイルスが導入された感染細胞などを有効成分とするものである。該組成物の患者への投与形態、投与経路などは、治療目的とする疾患、症状などに応じて適宜決定できる。例えば注射剤などの適当な投与形態で、静脈、動脈、皮下、筋肉内などに投与することができ、また患者の疾患対象部位に直接投与、導入することもできる。ｉｎ　ｖｉｖｏ法を採用する場合、遺伝子治療用組成物は、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、またはＧＲＯ３遺伝子のアンチセンスヌクレオチドを含む注射剤などの投与形態の他に、例えばＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、またはＧＲＯ３遺伝子のアンチセンスヌクレオチドを含有するウイルスベクターをリポソームまたは膜融合リポソームに包埋した形態（センダイウイルス（ＨＶＪ）−リポソームなど）とすることができる。これらのリポソーム製剤形態には、懸濁剤、凍結剤、遠心分離濃縮凍結剤などが含まれる。また、遺伝子治療用組成物は、上記ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、またはＧＲＯ３遺伝子のアンチセンスヌクレオチドを含有するベクターを導入されたウイルスで感染された細胞培養液の形態とすることもできる。これら各種形態の製剤中の有効成分の投与量は、治療目的である疾患の程度、患者の年齢、体重などにより適宜調節することができる。通常、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、またはＧＲＯ３遺伝子に対するアンチセンスヌクレオチドの場合は、患者成人１人当たり約０．０００１−１００ｍｇ、好ましくは約０．００１−１０ｍｇが数日ないし数カ月に１回投与される量とすればよい。アンチセンスヌクレオチドを含むレトロウイルスベクターの場合は、レトロウイルス力価として、１日患者体重１ｋｇ当たり約１×１０３ｐｆｕ−１×１０１５ｐｆｕとなる量範囲から選ぶことができる。アンチセンスヌクレオチドを導入した細胞の場合は、１×１０４細胞／ｂｏｄｙ−１×１０１５細胞／ｂｏｄｙ程度を投与すればよい。
【０１９２】
【実施例】
次に、本発明を実施例によりさらに具体的に説明する。しかし、本発明はこれらの実施例になんら限定されるものではない。
【０１９３】
実施例１　　ヒト組織サンプルからトータルＲＮＡの調製
ヒトの正常な大腸組織１１７サンプル、潰瘍性大腸炎患者の大腸病変組織３サンプル、およびクローン病患者の大腸病変組織２サンプルから、それぞれ常法に従いトータル　ＲＮＡ　を調製した。
【０１９４】
さらにヒトの右心房正常組織１５１サンプル、右心室正常組織１４０サンプル、左心房正常組織１３２サンプル、子宮筋層正常組織９０サンプル、子宮頚部正常組織９０サンプル、胸正常組織８４サンプル、肺正常組織７７サンプル、胸腺正常組織６７サンプル、卵巣正常組織６２サンプル、腎臓正常組織６１サンプル、皮膚正常組織５６サンプル、小腸正常組織４８サンプル、直腸正常組織４６サンプル、肝臓正常組織４２サンプル、白血球正常組織３７サンプル、胃正常組織３７サンプル、子宮正常組織３２サンプル、子宮内膜正常組織３１サンプル、筋肉正常組織３０サンプル、前立腺正常組織２８サンプル、脾臓正常組織２６サンプル、脂肪組織正常組織２５サンプル、膵臓正常組織２０サンプル、食道正常組織２０サンプル、十二指腸正常組織１７サンプル、甲状腺正常組織１３サンプル、卵管正常組織１３サンプル、リンパ節正常組織１１サンプル、静脈正常組織８サンプル、軟組織正常組織７サンプル、前頭葉皮質正常組織７サンプル、海馬正常組織６サンプル、網正常組織５サンプル、左心室正常組織５サンプル、喉頭正常組織５サンプル、心臓正常組織５サンプル、側頭葉皮質正常組織５サンプル、骨正常組織５サンプル、副腎正常組織５サンプル、精嚢正常組織４サンプル、小脳正常組織４サンプルおよび膀胱正常組織４サンプルより、それぞれ常法に従いトータル　ＲＮＡ　を調製した。
【０１９５】
実施例２　　ＤＮＡチップ解析
実施例１に示したサンプルより調製したｔｏｔａｌ　ＲＮＡを用いて、ＤＮＡチップ解析を行った。なお、ＤＮＡチップ解析はＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社Ｇｅｎｅ　Ｃｈｉｐ　Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５セットを用いて行った。具体的には、解析は、（１）　ｔｏｔａｌ　ＲＮＡからｃＤＮＡの調製、（２）　該ｃＤＮＡからラベル化ｃＲＮＡの調製、（３）　ラベル化ｃＲＮＡのフラグメント化、（４）　フラグメント化ｃＲＮＡとプローブアレイとのハイブリダイズ、（５）　プローブアレイの染色、（６）　プローブアレイのスキャン、及び（７）　遺伝子発現解析、の手順で行った。
【０１９６】
（１）　ｔｏｔａｌ　ＲＮＡからｃＤＮＡの調製
実施例１で得られた各ｔｏｔａｌ　ＲＮＡ　１０μｇとＴ７−（ｄＴ）２４プライマー（Ａｍｅｒｓｈａｍ社製）１００ｐｍｏｌを含む１１μＬの混合液を、７０℃、１０分間加熱した後、氷上で冷却した。冷却後、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ　Ｃｈｏｉｃｅ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｆｏｒ　ｃＤＮＡ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ社製）に含まれる５×Ｆｉｒｓｔ　Ｓｔｒａｎｄ　ｃＤＮＡ　Ｂｕｆｆｅｒ　４μＬ、該キットに含まれる０．１Ｍ　ＤＴＴ　（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ）２μＬ、該キットに含まれる１０ｍＭ　ｄＮＴＰ　Ｍｉｘ　１μＬを添加し、４２℃で２分間加熱した。更に、該キットに含まれるＳｕｐｅｒ　ＳｃｒｉｐｔＩＩ　ＲＴ　２μＬ（４００Ｕ）を添加し、４２℃で１時間加熱した後、氷上で冷却した。冷却後、ＤＥＰＣ処理水（ナカライテスク社製）滅菌蒸留水９１μＬ、該キットに含まれる５×Ｓｅｃｏｎｄ　Ｓｔｒａｎｄ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ　Ｂｕｆｆｅｒ　３０μＬ、１０ｍＭ　ｄＮＴＰ　Ｍｉｘ　３μＬ、該キットに含まれるＥ．　ｃｏｌｉ　ＤＮＡ　Ｌｉｇａｓｅ　１μＬ（１０Ｕ）、該キットに含まれるＥ．　ｃｏｌｉ　ＤＮＡ　Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　Ｉ　４μＬ（４０Ｕ）、該キットに含まれるＥ．　ｃｏｌｉ　ＲＮａｓｅＨ　１μＬ（２Ｕ）を添加し、１６℃で２時間反応させた。次いで、該キットに含まれるＴ４　ＤＮＡ　Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　２μＬ（１０Ｕ）を加え、１６℃で５分間反応させた後、０．５Ｍ　ＥＤＴＡ　１０μＬを添加した。次いで、フェノール／クロロホルム／イソアミルアルコール溶液（ニッポンジーン社製）１６２μＬを添加し、混合した。該混合液を、予め室温、１４，０００ｒｐｍ、３０秒間遠心分離しておいたＰｈａｓｅ　Ｌｏｃｋ　Ｇｅｌ　Ｌｉｇｈｔ（エッペンドルフ社製）に移し、室温で１４，０００ｒｐｍ、２分間遠心分離した後、１４５μＬの水層をエッペンドルフチューブに移した。得られた溶液に、７．５Ｍ酢酸アンモニウム溶液７２．５μＬ、エタノール３６２．５μＬを加えて混合した後、４℃で１４，０００ｒｐｍ、２０分間遠心分離した。遠心分離後、上清を捨て、作製したｃＤＮＡを含むペレットを得た。その後、該ペレットに８０％エタノール０．５ｍＬを添加し、４℃で１４，０００ｒｐｍ、５分間遠心分離した後、上清を捨てた。再度同様の操作を行った後、該ペレットを乾燥させ、ＤＥＰＣ処理水１２μＬに溶解した。以上の操作により実施例１で調製した各トータル　ＲＮＡから、各ｃＤＮＡを取得した。
【０１９７】
（２）　ｃＤＮＡからラベル化ｃＲＮＡの調製
各ｃＤＮＡ溶液５μＬに、ＤＥＰＣ処理水１７μＬ、ＢｉｏＡｒｒａｙ　Ｈｉｇｈ　Ｙｉｅｌｄ　ＲＮＡ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ　Ｌａｂｅｌｉｎｇ　Ｋｉｔ（ＥＮＺＯ社製）に含まれる１０×ＨＹ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ　Ｂｕｆｆｅｒ　４μＬ、該キットに含まれる１０×Ｂｉｏｔｉｎ　Ｌａｂｅｌｅｄ　Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ　４μＬ、該キットに含まれる１０×ＤＴＴ　４μＬ、該キットに含まれる１０×ＲＮａｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　Ｍｉｘ　４μＬ、該キットに含まれる２０×Ｔ７　ＲＮＡ　Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　２μＬを混合し、３７℃で５時間反応させて、ラベル化ｃＲＮＡを調製した。反応後、該反応液にＤＥＰＣ処理水６０μＬを加えたのち、ＲＮｅａｓｙ　Ｍｉｎｉ　Ｋｉｔ（ＧＩＡＧＥＮ社製）を用いて添付プロトコールに従い、調製したラベル化ｃＲＮＡを精製した。
【０１９８】
（３）　ラベル化ｃＲＮＡのフラグメント化
各ラベル化ｃＲＮＡ　２０μｇを含む溶液に、５×Ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ　Ｂｕｆｆｅｒ（２００ｍＭトリス−酢酸　ｐＨ８．１（Ｓｉｇｍａ社製）、　５００ｍＭ酢酸カリウム（Ｓｉｇｍａ社製）、１５０ｍＭ酢酸マグネシウム（Ｓｉｇｍａ社製））８μＬを加えた反応液４０μＬを、９４℃で３５分間加熱した後、氷中に置いた。これによって、ラベル化ｃＲＮＡをフラグメント化した。
【０１９９】
（４）　フラグメント化ｃＲＮＡとプローブアレイとのハイブリダイズ
各フラグメント化ｃＲＮＡ　４０μＬに、５ｎＭ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　Ｏｌｉｇｏ　Ｂ２（Ａｍｅｒｓｈａｍ社製）４μＬ、１００×Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｃＲＮＡ　Ｃｏｃｋｔａｉｌ　４μＬ、Ｈｅｒｒｉｎｇ　ｓｐｅｒｍ　ＤＮＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）４０μｇ、Ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ　ＢＳＡ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ社製）２００μｇ、２×ＭＥＳ　Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　Ｂｕｆｆｅｒ（２００ｍＭ　ＭＥＳ、２Ｍ　［Ｎａ＋］，　４０ｍＭ　ＥＤＴＡ、０．０２％　Ｔｗｅｅｎ２０　（Ｐｉｅｒｃｅ社製）、ｐＨ６．５〜６．７）　２００μＬ、及びＤＥＰＣ処理水１４４μＬを混合し、４００μＬのハイブリカクテルを得た。得られた各ハイブリカクテルを９９℃で５分間加熱し、更に４５℃で５分間加熱した。加熱後、室温で１４，０００ｒｐｍ、５分間遠心分離し、ハイブリカクテル上清を得た。
【０２００】
一方、１×ＭＥＳハイブリダイゼーションバッファーで満たしたＨｕｍａｎ　ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５プローブアレイ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）を、ハイブリオーブン内で、４５℃、６０ｒｐｍで１０分間回転させた後、１×ＭＥＳハイブリダイゼーションバッファーを除去してプローブアレイを調製した。上記で得られたハイブリカクテル上清２００μＬを該プローブアレイにそれぞれ添加し、ハイブリオーブン内で４５℃、６０ｒｐｍで１６時間回転させ、フラグメント化ｃＲＮＡとハイブリダイズしたプローブアレイを得た。
【０２０１】
（５）　プローブアレイの染色
上記で得られたハイブリダイズ済みプローブアレイそれぞれからハイブリカクテルを回収除去した後、Ｎｏｎ−Ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ　Ｗａｓｈ　Ｂｕｆｆｅｒ（６×ＳＳＰＥ（２０×ＳＳＰＥ（ナカライテスク社製）を希釈）、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％Ａｎｔｉｆｏａｍ０−３０（Ｓｉｇｍａ社製））で満たした。次にＮｏｎ−Ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ　Ｗａｓｈ　ＢｕｆｆｅｒおよびＳｔｒｉｎｇｅｎｔ　Ｗａｓｈ　Ｂｕｆｆｅｒ（１００ｍＭ　ＭＥＳ、０．１Ｍ　ＮａＣｌ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）をセットしたＧｅｎｅＣｈｉｐ　Ｆｌｕｉｄｉｃｓ　Ｓｔａｔｉｏｎ　４００（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）の所定の位置にフラグメント化ｃＲＮＡとハイブリダイズしたプローブアレイを装着した。その後染色プロトコールＥｕＫＧＥ−ＷＳ２に従って、１次染色液（１０μｇ／ｍＬ　Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ　Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ　（ＳＡＰＥ）（ＭｏｌｅｃμＬａｒ　Ｐｒｏｂｅ社製）、２ｍｇ／ｍＬ　Ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ　ＢＳＡ、１００ｍＭ　ＭＥＳ、１Ｍ　ＮａＣｌ（Ａｍｂｉｏｎ社製）、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％Ａｎｔｉｆｏａｍ０−３０）、　２次染色液（１００μｇ／ｍＬ　Ｇｏａｔ　ＩｇＧ　（Ｓｉｇｍａ社製）、３μｇ／ｍＬ　Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ　Ａｎｔｉ−Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　（Ｖｅｃｔｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）、２ｍｇ／ｍＬ　Ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ　ＢＳＡ、１００ｍＭ　ＭＥＳ、１Ｍ　ＮａＣｌ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％Ａｎｔｉｆｏａｍ０−３０）により染色した。
【０２０２】
（６）　プローブアレイのスキャン、及び　（７）　遺伝子発現量解析
染色した各プローブアレイをＨＰ　ＧｅｎｅＡｒｒａｙ　Ｓｃａｎｎｅｒ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）に供し、染色パターンを読み取った。染色パターンをもとにＧｅｎｅＣｈｉｐ　Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）によってプローブアレイ上の遺伝子の発現を解析した。次に、解析プロトコールに従ってＮｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎを行ったのち、各サンプルにおける各プローブ（各遺伝子）の発現量（ａｖｅｒａｇｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）を算出した。同一のプローブにつき、サンプルの種類ごとに遺伝子発現量の平均値を求め、さらに各サンプル種類間における発現量の変化率を求めた。
【０２０３】
実施例３　　潰瘍性大腸炎患者大腸病変組織にて、発現が増加している遺伝子の選抜
実施例２で行ったＤＮＡチップ解析による遺伝子発現の解析結果から、結腸正常組織に比べて潰瘍性大腸炎患者の結腸病変組織で発現が増加しているプローブセットのうち、最も変化率の大きいプローブから４００番目までを選択した。また、クローン病患者の大腸病変組織に比べて潰瘍性大腸炎患者の結腸病変組織で発現が増加しているプローブセットについても変化率の大きいものから４００番目までを選択した。両グループで共通に選抜されたプローブにつき解析した結果、共通に発現増加するプローブとして６９プローブが選択された。
【０２０４】
次にこれら６９プローブの中から、より病態との関連性の高いプローブを選択する目的で、病変関連組織（大腸を含む消化管）および潰瘍性大腸炎の発症機構に関与する免疫系組織以外の組織において発現量の低いプローブを選択した。すなわち、これら６９プローブについて、結腸正常組織を含む４３種類の正常組織における発現量をＤＮＡチップの結果より解析し、消化管もしくは免疫系組織以外の組織において発現量の低いプローブを選択した。次に、これら選択されたプローブの対応遺伝子を調べ、これらの遺伝子の中から、さらに薬剤ターゲットとなる機能を有する遺伝子を選別した。
その結果、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子およびＧＲＯ３遺伝子の計６遺伝子が選択された。
【０２０５】
【表１】
2004135545.tif 000002
【０２０６】
表中、Ｈｕｍａｎ　Ｕ９５プローブ名は　Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５　Ｃｈｉｐ　におけるプローブ名を示す。また表中　Ａｃｃ　Ｎｏは、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースにおけるアクセッション番号を示す。また表中、変動倍率は、Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｕ９５　Ｃｈｉｐで解析した結腸正常組織の遺伝子発現量を１とした場合における潰瘍性大腸炎患者の遺伝子発現量、およびクローン病患者の結腸病変組織での遺伝子発現量を１とした場合における潰瘍性大腸炎患者の遺伝子発現量を示す。また各遺伝子の塩基配列およびアミノ酸配列を示す後記配列表の配列番号も合わせて示す。
【０２０７】
選択された遺伝子の中には、既に潰瘍性大腸炎の治療薬開発のターゲットとなっているマトリックスプロテアーゼ３、マトリックスプロテアーゼ１２、トロンボキサンＡ合成酵素、ＮＯ合成酵素などが含まれており、上記の選抜方法で確かに潰瘍性大腸炎患者特異的に発現が増加し、かつ治療薬のターゲットとなる遺伝子を網羅的に選抜することができることが明らかとなった。選択された遺伝子の中からこれら遺伝子を除外したものが、表１に記載の６遺伝子である。
【０２０８】
以上のように、選別された前記６個の遺伝子は、正常な結腸組織と比較して　潰瘍性大腸炎患者の結腸組織で特異的に発現上昇しており、また病態との関連性の高い遺伝子であった。従ってこれら６遺伝子およびその発現産物（タンパク質）は、潰瘍性大腸炎に関するマーカーとして応用可能であると考えられた。また、これらの遺伝子またはその発現産物（タンパク質）を用いることによって、潰瘍性大腸炎を緩和、抑制する治療薬の候補薬をスクリーニングすることが可能であると考えられた。
【０２０９】
実施例４　ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、および／またはＧＲＯ３遺伝子発現抑制剤のスクリーニング
Ｃａｃｏ−２細胞（ヒト結腸腺癌由来、ＡＴＴＣ株番号ＨＴＢ−３７、大日本製薬株式会社）、ＨＴ−２９細胞（ヒト結腸腺癌由来、ＡＴＴＣ株番号ＨＴＢ−３８、大日本製薬株式会社）、またはＣＯＬＯ　２０５　細胞（ヒト結腸腺癌由来、ＡＴＴＣ株番号ＣＣＬ−２２２、大日本製薬株式会社）を、１０％　不活性化牛胎児血清、２ｍＭグルタミン、５０ＩＵ／ｍｌペニシリン、５０ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン含有Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ培地を用い、３７℃、ＣＯ２濃度５％の条件下で培養する。計数したＣａｃｏ−２細胞、ＨＴ−２９細胞またはＣＯＬＯ　２０５　細胞を２４穴組織培養プレートに０．６−１．２ｘ１０５　ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２で播種し、３７℃、ＣＯ２濃度５％で培養する。これらの細胞に対して刺激剤（ホルボール１２−ミリステート１３アセテート、サイトカイン（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎγ、Ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ−α、Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１、Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６等）あるいはＢｕｔｙｒａｔｅ）の存在下で被験物質含有溶液（１００　μＭ、１０　μＭ、および　１　μＭの各濃度の被験物質を含む溶液）を添加する。ここで対照実験として、被験物質無添加の細胞についても同様の培養を行う（コントロール）。これらの各培養細胞より抽出したＲＮＡを用いて実施例２に記載された方法で、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、および／またはＧＲＯ３遺伝子の発現量を調べる。その発現量からコントロールと比べて、ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、および／またはＧＲＯ３遺伝子の発現量が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上低下している培養系に添加した被験物質を、潰瘍性大腸炎を緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０２１０】
実施例５　ＣＨＩ３Ｌ２の機能（活性）抑制剤のスクリーニング
Ｃｈａｎｇ，　Ｎ．Ｃら、Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２７６，　１７４９７−１７５０６，　２００１に記載の方法を参考にＣＨＩ３Ｌ２のキトオリゴ糖との結合を測定し、測定系に被験化合物を存在させることによってその結合阻害活性を測定し、ＣＨＩ３Ｌ２の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。すなわち、ＢＩＡｃｏｒｅＸ（アマシャムファルマシア社）を用いてキトビオース、キトトリオース、キトテトラオースなどのキトオリゴ糖との結合を、表面プラズモン解析によって測定する。センサーチップＣＭ　５とＳＡ（ストレプトアビジンを結合させたＣＭ　５チップ）、アミンカップリングキット（タンパク質をチップに固定するキット）およびＨＢＳ　ｂｕｆｆｅｅｒはアマシャムファルマシア社より、６−（ｂｉｏｔｉｎｙｌ）−ａｍｉｎｏｃａｐｒｏｙｌｈｙｄｒａｚｉｄｅ　（ＢＡＣＨ、キトオリゴ糖のビオチン化に用いる）はメルク社、　キトビオース、キトトリオース、キトテトラオースは生化学社より購入できる。精製ＣＨＩ３Ｌ２をＢＩＡｃｏｒｅＸ　のマニュアルに従いＣＭ　５　に固定する。被験物質存在下および非存在下にて、０．８　ｍＭのキトオリゴ糖が存在するＨＢＳ　ｂｕｆｆｅｅｒを３０　ｕｌ／ｍｉｎ　の流速にて流し、キトオリゴ糖とＣＨＩ３Ｌ２の結合を、その後ＨＢＳ　ｂｕｆｆｅｅｒを流して解離の様子を測定する。もしくは、逆にキトオリゴ糖を固定したチップに、被験物質存在下および非存在下にて、１．４　ｕＭＣＨＩ３Ｌ２溶液を流すことによって結合・解離の様子を測定する。キトオリゴ糖のチップへの固定はＳｈｉｎｏｈａｒａ，　Ｙ．ら、Ｊ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ．，　１１７，　８１２５−８１４８，　１９９５を参考に実施できる。すなわち、２００　ｎｍｏｌキトテトラオース水溶液１００　ｕｌ　と４００　ｎｍｏｌ　ＢＡＣＨ　３０％　アセトニトリル溶液１００　ｕｌ　を９５℃で２　時間反応させる。生成したビオチン化キトテトラオースはＴＬＣにて分離、精製する（ＨＰ−ＴＬＣ　Ｓｉｌｉｃａ　Ｇｅｌ　６０　アルミニウムプレート／メルク社、展開液はｎ−プロピルアルコール、水、３２％アンモニア　［５０：２０：２５，　ｖ／ｖ／ｖ］）。１　ｐｍｏｌ　のビオチン化キトテトラオースをＨＢＳ−Ｐ　ｂｕｆｆｅｒ（アマシャムファルマシア社）中、ＳＡチップに固定する。
被験物質添加群のキトオリゴ糖との結合活性が被験物質無添加群に比して１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、潰瘍性大腸炎を緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０２１１】
実施例６　ＤＵＯＸ２の機能（活性）抑制剤のスクリーニング
Ｄｕｐｕｙ，　Ｃ．ら，　Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ，　１８５，　５９７−６０３，　１９８９に記載の方法を参考にＤＵＯＸ２のＮＡＤＰＨ　酸化活性、もしくは過酸化水素生成活性を測定し、測定系に被験化合物を存在させることによってその阻害活性を測定し、ＤＵＯＸ２の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
ブタ甲状腺からのＤＵＯＸ２を含む形質膜画分の精製
ブタ甲状腺　１５０　ｇ　を１５０　ｍｌ　の緩衝液Ａ（５０　ｍＭ　リン酸ナトリウムｐＨ　７．２、１　ｍＭ　ＥＧＴＡ、２　ｍＭ　塩化マグネシウム、１　ｍＭ　ジチオスレイトール、１６　ｍｇ　／　Ｌ　ＰＭＳＦ）とともにホモジナイズし、チーズクロスなどの布でろ過した後、遠心分離する。沈殿を緩衝液Ｂ（５０　ｍＭ　リン酸ナトリウムｐＨ　７．２、２　ｍＭ　塩化マグネシウム、０．２５　Ｍショ糖）にて再懸濁、再び遠心分離と再懸濁を２回繰り返して洗浄、４７　ｍｌ　のストックＰｅｒｃｏｌｌ　溶液（０．２５　Ｍ　ショ糖、９０％［ｖ／ｖ］　Ｐｅｒｃｏｌｌ）を含み２２２　ｍｌ　になるよう緩衝液Ｂにてメスアップした後、ショ糖密度勾配による遠心分離を２０，０００　ｇ、３０　分間行う。上面近くの混濁層を、０．１　Ｍ　ＫＣｌ　を含んだ緩衝液Ｂに懸濁、遠心分離後、沈殿を１５　ｍｌ　の緩衝液Ｂに再懸濁後、−８０℃にて冷凍保存する（Ｄｕｐｕｙ，　Ｃ．ら，　Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ，　１８５，　５９７−６０３　（１９８９））。
【０２１２】
ＮＡＤＰＨ　酸化活性の測定
酵素を含む１　ｍｌ　の緩衝液（５０　ｍＭ　リン酸ナトリウムｐＨ　７．２、１　ｍＭ　アジ化ナトリウム、０．４　ｍＭ　ＥＧＴＡ、０．５　ｍＭ　塩化カルシウム）に、０．１　ｍＭ　になるようＮＡＤＰＨを添加し、被験物質存在下および非存在下にて、３０℃で反応を行う。３４０　ｎｍ　の吸光度の減少にてＮＡＤＰＨ　の酸化を測定する。
被験物質添加群のＮＡＤＰＨ　酸化活性が被験物質無添加群に比して１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、潰瘍性大腸炎を緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０２１３】
過酸化水素生成活性の測定
酵素を含む１　ｍｌ　の緩衝液（５０　ｍＭ　リン酸ナトリウムｐＨ　７．２、１　ｍＭ　アジ化ナトリウム、０．４　ｍＭ　ＥＧＴＡ、０．５　ｍＭ　塩化カルシウム）に、０．１　ｍＭ　になるようＮＡＤＰＨを添加し、被験物質存在下および非存在下にて、３０℃で反応を行う。１００　ｕｌ　の１．２　ＭＨＣｌ　を添加し、反応の停止とＮＡＤＰＨの破壊を行う。生成した過酸化水素はｐＨ　７．４、西洋わさびペルオキシダーゼ存在下、ｓｃｏｐｏｌｅｔｉｎ　蛍光（ｅｘｉｔａｔｉｏｎ　３６０　ｎｍ、ｅｍｉｓｓｉｏｎ　４６０　ｎｍ）の減少で測定する。
被験物質添加群の過酸化水素生成活性が被験物質無添加群に比して１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、潰瘍性大腸炎を緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０２１４】
実施例７　ＶＲＬ−１の機能（活性）抑制剤のスクリーニング
Ｃａｔｅｒｉｎａ，　Ｍ．　Ｊ．ら、　Ｎａｔｕｒｅ，　３９８，　４３６−４４１，　１９９９に記載の方法を参考に熱刺激によるＶＲＬ−１の電流誘起活性を測定する。測定系に被験化合物を存在させることによってその阻害活性を測定し、ＶＲＬ−１の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
すなわち、ＨＥＫ２９３細胞などにｃＤＮＡをトランスフェクトし、ＶＲＬ−１を発現させる。ホールセル　膜電位固定法により、被験物質存在下および非存在下、５４℃にて４５秒間熱刺激を加え、電流誘起のピークを測定する。もしくは、アフリカツメガエルの卵母細胞にＶＲＬ−１のｃＲＮＡをマイクロインジェクトする。４〜７日後、２電極膜電位固定法により測定を行い、被験物質存在下および非存在下、５５℃にて１５秒間熱刺激を加え、電流誘起のピークを測定する。
候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない細胞に比して被験物質を添加した細胞の電流誘起のピークが１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、潰瘍性大腸炎を緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０２１５】
実施例８　ＩＬ−１７の機能（活性）抑制剤のスクリーニング
特開２０００−１８６０４６（Ｐ２０００−１８６０４６Ａ）に記載の方法を参考にＩＬ−１７の破骨細胞形成活性を測定する。測定系に被験化合物を存在させることによってその阻害活性を測定し、ＩＬ−１７の機能（活性）を抑制する物質をスクリーニングすることができる。
新生児マウスから得られた頭骸骨（２０から３０個）を０．１％コラーゲナーゼ及び０．２％ディスパーゼを用い、順序よく５回消化することにより初代培養骨芽細胞を調製する。一方、マウス骨髄細胞は成熟マウスから得る。骨芽細胞と骨髄細胞との共培養はＵｄａｇａｗａ　らの方法（Ｕｄａｇａｗａ　ｅｔ　ａｌ．：　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ，　８７，　７２６０−７２６４（１９９０））により実施する。即ち、４８−ｗｅｌｌ　プレートを用い、初代培養骨芽細胞（２×１０４　ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）と骨髄細胞（５×１０５　ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）　とを１０％牛血清（ＦＢＳ，　ＪＲＨ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ　社製）を含むα−ＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ　ＢＲＡＬ社製）培地　０．３　ｍｌ　中で共培養する。被験物質存在下および非存在下、ＩＬ−１７（１　ｎｇ／ｍｌ）を添加して培養を行い、３日目に新鮮培地で培地交換する。破骨細胞形成は、６〜７日間培養後に各ｗｅｌｌ中の接着細胞を固定後、ＴＲＡＰ染色しＴＲＡＰ陽性破骨細胞数を計測することにより評価する。ＴＲＡＰ染色に際しては、接着細胞を１０％ホルムアルデヒドで３分間固定し、各ｗｅｌｌの表面を風乾させ、次いで基質として０．０１％　ＡＳ−ＭＳリン酸塩（Ｓｉｇｍａ　社）及び５０　ｍＭ　の酒石酸ナトリウム存在中での反応生成物に対する染色色素として０．０３％　ｒｅｄ　ｖｉｏｌｅｔ　ＬＢ塩を含む酢酸バッファー中、室温で１０分間インキュベートする。ＴＲＡＰ陽性細胞は黒っぽい赤色として出現する。３つ以上の核を含むＴＲＡＰ陽性多核細胞を破骨細胞として計数する（特開２０００−１８６０４６（Ｐ２０００−１８６０４６Ａ））。
候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない細胞に比して被験物質を添加した細胞の破骨細胞数が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、潰瘍性大腸炎を緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０２１６】
実施例９　ＧＲＯ１の機能（活性）抑制剤のスクリーニング
ヒトＧＲＯ１はリコンビナントタンパクとして大日本製薬あるいはコスモバイオ等から購入する。０．１−１０００ｎＭのＧｒｏα溶液１５０μｌをブラインドウエルケモタキシスチャンバーの下部ウエルに添加する。ポリビニルピロリドン非含有の３μｍ孔径ポリカーボネートフィルターを下部ウエルの上に置き、その上にヒト好中球画分２５０μｌを添加する。被験化合物とコントロールは下部ウエルとその上部に添加する。以上のように組み立てたケモタキシスチャンバーを３７℃、５％ＣＯ２、６０分間インキュベーションする。フィルターを取り除きメタノールで固定化後に２％トルイジンブルー（Ｓｉｇｍａ）で染色し遊走した好中球数を計測する。ヒト好中球画分は健常人から採血した血液をヘパリン処理した容器に等量の０．９％生理食塩水を添加し、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心法で単核球を分離後に５％Ｄｅｘｔｒａｎ含有０．９％生理食塩水（Ｓｉｇｍａ）中で沈殿物として得た好中球画分を低調液処理により赤血球を溶血し２回洗浄後にカルシウムとマグネシウム含有ハンクス平衡塩溶液（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，　Ｉｎｃ．）で２ｘ１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌに懸濁して調製する。
候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない場合の細胞数に比して被験物質を添加した場合の細胞数が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、潰瘍性大腸炎を緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０２１７】
実施例１０　ＧＲＯ３の機能（活性）抑制剤のスクリーニング
ヒトＧＲＯ３はリコンビナントタンパクとして大日本製薬あるいはコスモバイオ等から購入する。０．１−１０００ｎＭのＧＲＯγ溶液１５０μｌをブラインドウエルケモタキシスチャンバーの下部ウエルに添加する。ポリビニルピロリドン非含有の３μｍ孔径ポリカーボネートフィルターを下部ウエルの上に置き、その上にヒト好中球画分２５０μｌを添加する。被験化合物とコントロールは下部ウエルとその上部に添加する。以上のように組み立てたケモタキシスチャンバーを３７℃、５％ＣＯ２、６０分間インキュベーションする。フィルターを取り除きメタノールで固定化後に２％トルイジンブルー（Ｓｉｇｍａ）で染色し遊走した好中球数を計測する。ヒト好中球画分は健常人から採血した血液をヘパリン処理した容器に等量の０．９％生理食塩水を添加し、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心法で単核球を分離後に５％Ｄｅｘｔｒａｎ含有０．９％生理食塩水（Ｓｉｇｍａ）中で沈殿物として得た好中球画分を低調液処理により赤血球を溶血し２回洗浄後にカルシウムとマグネシウム含有ハンクス平衡塩溶液（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，　Ｉｎｃ．）で２ｘ１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌに懸濁して調製する。
候補物質のスクリーニングは、被験物質を添加しない場合の細胞数に比して被験物質を添加した場合の細胞数が１０％、好ましくは３０％、特に好ましくは５０％　以上減少した系に添加していた被験物質を、潰瘍性大腸炎を緩和、抑制（改善、治療）する候補化合物として選択する。
【０２１８】
【発明の効果】
本発明によって、潰瘍性大腸炎患者（潰瘍性大腸炎及びクローン病）の結腸病変組織において、結腸正常組織と比較して特異的に発現増大している遺伝子（ＣＨＩ３Ｌ２遺伝子、ＤＵＯＸ２遺伝子、ＶＲＬ−１遺伝子、ＩＬ１７Ｒ遺伝子、ＧＲＯ１遺伝子、およびＧＲＯ３遺伝子）が明らかになった。かかる遺伝子は潰瘍性大腸炎の遺伝子診断に用いられるマーカー遺伝子（プローブ、プライマー）として有用である。かかるマーカー遺伝子によれば潰瘍性大腸炎であるかどうか、その原因を明らかにすることができ（診断精度が向上）、これによりより適切な治療を施すことが可能となる。すなわち、潰瘍性大腸炎の適切な治療のためのツールとして利用することができる。
【０２１９】
また、上記遺伝子の発現増加と潰瘍性大腸炎との関連性から、該遺伝子の発現を抑制する化合物は、潰瘍性大腸炎の治療薬として有用と考えられる。従って、これら遺伝子の発現の抑制または減少、または当該遺伝子がコードするタンパク質の発現や機能（活性）の抑制または減少を指標とすることによって、潰瘍性大腸炎の治療薬となり得る候補薬をスクリーニングし選別することが可能である。本発明は、このような潰瘍性大腸炎治療薬の開発技術をも提供する。
【０２２０】
【配列表】
2004135545.tif 000003
2004135545.tif 000004
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