(57)【要約】【課題】生理活性物質又は抗癌剤、とりわけ、腫瘍壊死因子の癌治療における治療効果を予測する方法を提供することを課題とする。【解決手段】癌細胞における腫瘍壊死因子関連遺伝子の発現量に基づいて、癌治療における腫瘍壊死因子の効果を予測する方法を提供することにより課題を解決する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌細胞における腫瘍壊死因子関連遺伝子の発現量に基づいて、癌治療における腫瘍壊死因子の効果を予測する方法。
【請求項２】
腫瘍壊死因子関連遺伝子がプロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ−１）遺伝子、デスレセプター３（ＤＲ３）遺伝子、多剤薬剤耐性関連タンパク質５（ＭＲＰ５）遺伝子、又は多剤薬剤耐性関連タンパク質６（ＭＲＰ６）遺伝子から選ばれる１又は２以上の遺伝子である請求項１記載の癌治療における腫瘍壊死因子の効果を予測する方法。
【請求項３】
癌細胞が、培養株化細胞又は癌患者由来の癌細胞である請求項１又は２記載の癌治療における腫瘍壊死因子の効果を予測する方法。
【請求項４】
プロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ−１）遺伝子、デスレセプター３（ＤＲ３）遺伝子、多剤薬剤耐性関連タンパク質５（ＭＲＰ５）遺伝子、又は多剤薬剤耐性関連タンパク質６（ＭＲＰ６）遺伝子のいずれかのＤＮＡ配列を有するオリゴヌクレオチドプライマーと、熱耐性ＤＮＡポリメラーゼを含んでなる癌治療における腫瘍壊死因子の効果予測用キット。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、生理活性物質又は抗癌剤、とりわけ、腫瘍壊死因子の癌治療における治療効果を予測する方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
抗癌剤治療は有力な癌の治療方法として医療現場において利用されている。しかしながら、従来用いられている抗癌剤は、限られた種類の癌にしか効果がないことから、適用範囲が狭く、奏功率において満足できるものが数少ない。また、ほとんどの抗癌剤は強力な副作用を有しているため、患者への負担が極めて大きいという重大な問題点を抱えている。
【０００３】
近年、新たな癌治療剤として、生理活性物質を用いることに注目が集まりつつある。生理活性物質は、主に化学合成によって製造された従来の抗癌剤と比較して、より多種類の癌に対して抗癌作用を発揮するので、汎用性が高いという利点がある。生理活性物質のうち、とりわけ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α、ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ−α）は、１９７５年、エル・ジェー・オールド等によって、ＢＣＧ及び細胞内毒素を逐次投与したウサギやマウスなどの動物の血清中に分泌される細胞障害性因子として発見されて以来、多くの腫瘍細胞に対して、極めて強い抗癌作用を発揮する生理活性物質として、古くから注目を集めてきた。しかしながら、腫瘍壊死因子においても、従来の抗癌剤と同様に、重大な副作用を有しており、ある種の細胞に対して副次的な作用を発揮し、発熱等を引き起こすことから、医療現場において今だ活用されるに至っていない。
【０００４】
一方、全世界的プロジェクトの成果であるヒトの全遺伝子解析などの遺伝学の進歩により、ＤＮＡマイクロアレイ法などの遺伝子関連の検索ツールの開発が急ピッチで進んでいる。エイチ．アブラタニ著、実験医学、増刊号、第１９巻、第１９号（２００１年）、２５１８乃至２５２４頁では、ＤＮＡマイクロアレイ法を用いる遺伝子の発現プロファイルの解析により、癌の性格をより正確に理解することで、癌の診断に役立てようとする試みや、ケー．チバ等著、実験医学、増刊号、第１９巻、第１９号（２００１年）、２５０７乃至２５１２頁では、抗癌剤などの薬剤の効果の個人差を予め予測する試み、いわゆる薬理ゲノミクスが提案されている。これらの試みは、癌などの疾病の診断や治療において、試行錯誤的な治療を実施することなく、最初から有力な治療方法を選択することができるので、患者の肉体的負担を減少させるばかりか、高価な医薬品の使用量が減少するので、医療費などの経済的な負担を減少させる効果が大いに期待される。このような薬剤の効果を予測する方法が適用可能なケースはまだあまり知られていないが、今後の研究により適用可能なケースが増加すると考えられる。この方法は、腫瘍壊死因子を始めとする抗癌剤においても、いまだ確立していないが、これらにも適用することが可能となれば、顕著な生理活性を有していながらも、副作用があるゆえに、臨床に用いることができなかった腫瘍壊死因子を始めとする抗癌剤を、癌治療に利用することへの糸口となる可能性がある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、生理活性物質又は抗癌剤、とりわけ、癌治療における腫瘍壊死因子の効果を予測する方法を提供することを課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
上記課題を解決すべく、本発明者等は、広く癌由来の細胞株において、アポトーシス関連遺伝子、腫瘍壊死因子関連遺伝子などの遺伝子の発現プロファイルを検索することによって、腫瘍壊死因子の感受性と関連深い遺伝子を数種見いだした。さらに、それらの遺伝子の発現量を調べることによって癌治療における腫瘍壊死因子の効果を予測する方法を確立し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、癌治療における腫瘍壊死因子の効果の予測を、腫瘍壊死因子関連遺伝子、とりわけ、プロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ−１）遺伝子、デスレセプター３（ＤＲ３）、多剤薬剤耐性関連タンパク質５（ＭＲＰ５）遺伝子、又は多剤薬剤耐性関連タンパク質６（ＭＲＰ６）遺伝子の発現に着目しておこなうものである。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明でいう腫瘍壊死因子とは、ヒト又はヒト以外の温血動物の腫瘍壊死因子全般を含み、ヒト若しくはヒト以外の温血動物由来の細胞を適宜の方法で培養して、適宜の腫瘍壊死因子誘発剤を作用し産生させることにより製造されたもの、ヒト若しくはヒト以外の温血動物由来の腫瘍壊死因子の遺伝子を組み込んだ適宜の発現ベクターを作製し、大腸菌、酵母などの菌体、動植物自体若しくはその培養細胞内に導入し、必要に応じて誘導剤を用いて産生させることにより製造されたもの、又は、プロテインエンジニアリングによって全部又は一部が化学合成法などにより作製されたいずれのものであってもよい。これら腫瘍壊死因子は、天然型、組換型の両方を含み、製法、由来は問わない。また、腫瘍壊死因子を産生誘導する物質を患者に投与することによって、体内で産生された腫瘍壊死因子や遺伝子治療などによって体内に導入された外来性の腫瘍壊死因子遺伝子により、体内で産生された腫瘍壊死因子であってもよい。また、腫瘍壊死因子の安定性、作用効果を調節するために、例えば、グルコース、ガラクトース、Ｎ−アセチルクルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、フコース、マンノース、キシロース、シアル酸などの単糖によって構成されたＮ−グリコシル結合型又はＯ−グリコシル結合型糖鎖、ヒアルロン酸、ヘパラン硫酸などの硫酸化糖質による糖鎖、又は、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコールなどの水溶性高分子により修飾された腫瘍壊死因子であってもよく、または、腫瘍壊死因子活性を有する範囲内で部分的にアミノ酸配列が改変された腫瘍壊死因子であってもよい。
【０００９】
また、本発明による腫瘍壊死因子は、腫瘍壊死因子以外の物質、例えば、インターフェロン、インターロイキン、成長ホルモンなどの生理活性物質、抗癌剤、抗生物質、ワクチン、生薬、漢方薬などの医薬品などと併用してもよい。
【００１０】
本発明でいう腫瘍壊死因子関連遺伝子とは、腫瘍壊死因子により発現誘導されたり、腫瘍壊死因子を発現誘導することに関わる遺伝子であって、例えば、腫瘍壊死因子受容体遺伝子、アポトーシス関連遺伝子、腫瘍壊死因子シグナル伝達関連遺伝子、多剤薬剤耐性遺伝子などであり、例えば後述の表３に示されるものが挙げられる。とりわけ、腫瘍壊死因子シグナル伝達関連遺伝子の一つであるプロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ−１、以下本明細書においては、単に「Ａｋｔ−１」と記述することもある）遺伝子、受容体遺伝子関連の一つであるデスレセプター３（ＤＲ３、以下本明細書においては、単に「ＤＲ３」と記述することもある）遺伝子、多剤薬剤耐性関連タンパク質５（ＭＲＰ５、以下本明細書においては、単に「ＭＲＰ５」と記述することもある）遺伝子、又は多剤薬剤耐性関連タンパク質６（ＭＲＰ６、以下本明細書においては、単に「ＭＲＰ６」と記述することもある）遺伝子は、それらが多く発現している細胞においては、腫瘍壊死因子に対する感受性が高く、腫瘍壊死因子の治療効果に密接に関わっており、これら遺伝子の発現量を調べることは、腫瘍壊死因子の癌治療効果を予測することに極めて有利に利用できる。
【００１１】
本発明でいう癌細胞は、癌組織由来の細胞であり、癌患者から採取した癌細胞であっても、株化細胞であってもよく、とりわけ、治療対象の患者の組織から摘出された癌細胞であるのが好ましい。
【００１２】
腫瘍壊死因子関連遺伝子の発現量を調べる方法としては、腫瘍壊死因子関連遺伝子のタンパク質レベルでの発現量を測定する方法、すなわち、癌細胞において発現された腫瘍壊死因子関連タンパク質を適宜な方法により抽出するか、あるいは、細胞そのままを使用して、発現されているタンパク質の量を調べる方法であり、例えば、常法の、ＥＩＡ法、ＲＩＡ法、免疫沈降法、免疫細胞染色法、電気泳動法、ウエスタンブロッティング法、パニング法、ＨＰＬＣ法、ペプチドシークエンス法などが挙げられ、これらを適宜組み合わせて用いることができる。
【００１３】
また、腫瘍壊死因子関連遺伝子のｍＲＮＡレベルによる発現量を測定する方法、すなわち、癌細胞において発現された腫瘍壊死因子関連遺伝子のｍＲＮＡを適宜の方法により抽出したり、細胞そのままを使用して、発現されているｍＲＮＡ若しくはそれを鋳型にして逆転写酵素により合成したｃＤＮＡ量を調べる方法であり、例えば、常法の、ノーザンブロッティング法、サザンブロッティング法、ハイブリダイゼーション法、マグネットビーズ法、電気泳動法、ＰＣＲ法、ＤＮＡシークエンシング法などが挙げられ、これらを適宜組み合わせて用いることができる。本発明においては、ＰＣＲ法の変法である後述のリアルタイムＰＣＲ法が処理速度、定量精度が共に優れていることから最も有利に用いられる。また、ｍＲＮＡ若しくはそのｃＤＮＡは癌細胞から抽出しなくとも、市販品の各種細胞、各種臓器あるいは各種組織由来のＲＮＡ若しくはそのｃＤＮＡ、又は、それらがプレブロッテング膜、ＤＮＡマイクロアレイなどの形態に加工されたもののうち、適したものを利用することもできる。
【００１４】
癌細胞の腫瘍壊死因子感受性を調べる方法としては、まず、腸癌、肺癌、膵癌、乳癌、胃癌、肝癌、腎癌、神経癌、皮膚癌、咽喉癌、肉腫、子宮癌などの癌患者から採取した癌細胞或いはこれら由来の培養株化細胞を、通常用いられる培養培地で培養し、０．１乃至１０μｇ／ｍｌの腫瘍壊死因子を添加し、適宜の時間培養した後、癌細胞を回収し、ヨウ化プロピジウムなどの色素で細胞を染色し、死滅若しくはアポトーシスを起こした細胞数を、分光光度計、フローサイトメトリーなどで測定する。対照として腫瘍壊死因子を添加しないで培養した場合と、死滅若しくはアポトーシスを起こした細胞数を比較して腫瘍壊死因子の感受性を算出することができる。また、ヌードマウスなどの実験動物に癌患者から採取した癌細胞を移植し、さらに腫瘍壊死因子を投与して飼育した後、実験動物の腫瘍の大きさを測定して癌細胞の腫瘍壊死因子に対する感受性を測定することもできる。
【００１５】
腫瘍壊死因子関連遺伝子の発現量を評価する方法として、細胞、組織間で発現量の差の少ない遺伝子、例えば、グリセロアルデヒドリン酸脱水素酵素などの解糖系の酵素、又は、βアクチンなどの細胞骨格タンパク質などの発現量を内部標準にして、腫瘍壊死因子関連遺伝子の相対発現量を算出する方法、又は、癌細胞が由来する組織の正常細胞での各腫瘍壊死因子関連遺伝子の発現量を基準にして発現量の増減を調べる方法が挙げられる。こうして得られる発現量についてのデータは、データに適した適宜の統計的手法、例えば、マン・ホイットニーのＵ検定、スチューデントのｔ検定、クラスター分析などによって、所望の有意差水準において有意差が存在するか検証することが好ましい。
【００１６】
以下、実験によって、本発明を詳細に説明する。
【００１７】
【実験１】
＜各種臓器由来の細胞株の腫瘍壊死因子感受性＞
アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）、ジャパニーズ・コレクション・オブ・リサーチ・バイオリソーシス（ＪＣＲＢ）、ユーロピアン・コレクション・オブ・セル・カルチャーズ（ＥＣＡＣＣ）、ジャーマン・コレクション・オブ・ミクロオルガニズムズ・アンド・セル・カルチャーズ（ＤＳＭＺ）、国立医薬品食品研究所（ＮＩＨＮ）又は東北大学加齢医学研究所（ＩＤＡＣ）から入手した６９種類の株化細胞又は癌患者から摘出した２１種類の癌細胞を、１０％（ｖ／ｖ）牛胎児血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培地中に１×１０４乃至３×１０４個／ｍｌの濃度で培養した後、５ｎｇ／ｍｌの腫瘍壊死因子を添加し、３７℃、５％ＣＯ２中で４８時間培養した。陰性対象としては、腫瘍壊死因子を添加しないものを用いた。培養液から細胞を採取し、７０％（ｖ／ｖ）冷エタノール水溶液中に２時間放置し固定化した。固定化された細胞を４０μｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウムを含有するリン酸−食塩緩衝液（ｐＨ７．２）中で２０分染色した。染色された細胞は、フローサイトメトリー（ベックマンコールター社販売、商品名『ＥＰＩＣＳ　ＸＬ』）によって、各細胞のＤＮＡ含量を測定し、専用のソフトウエア（ベックマンコールター社販売、商品名『ＷＩＮＣＹＣＬＥ』）によって、アポトーシスを起こした細胞の割合を計測した。さらに、陰性対照の腫瘍壊死因子非添加の同一種類の細胞におけるアポトーシスを起こした細胞の割合を減じた後、腫瘍壊死因子感受性の評価を４ランク、すなわち、アポトーシスを起こした細胞の割合が、５％未満をＡランク、５以上１０％未満をＢランク、１０以上２０％未満をＣランク、２０％以上をＤランクとランク分けした。結果を表１及び表２に示す。
【００１８】
【表１】
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【００１９】
【表２】
2004000190.tif 000003
【００２０】
表１及び表２に示すように、実験に用いる９０種類の細胞は、腫瘍壊死因子の感受性により、Ａランクが５６、Ｂランクが１８、Ｃランクが７、Ｄランクが９に分類された。
【００２１】
【実験２】
＜各種細胞による各種因子の発現＞
表１及び表２に示す９０種類の細胞から、市販のＲＮＡ調製キット（キアゲン社販売、商品名『Ｒｎｅａｓｙ　Ｍｉｄｉ　ｋｉｔ』）を使用して、常法にしたがってそれぞれＲＮＡを調製した。このＲＮＡ１μｇを、別途調製した１μｇのランダムヘキサマー、１００単位のマウス乳癌ウイルス逆転写酵素を含む１００μｌの反応溶液と、２５℃１０分間、４２℃３０分間反応させたのち、９９℃で５分間処理して、反応を停止させ、ｃＤＮＡを得た。
【００２２】
次に、ＤＮＡデータベースのユニジーン（Ｕｎｉｇｅｎｅ）に登録されている腫瘍壊死因子関連遺伝子から４９種類を選抜し、さらに、内部標準遺伝子としてβアクチン遺伝子について、配列表における配列番号１乃至１００に示すＰＣＲ用のプライマーを作製した。常法にしたがって、リアルタイムＰＣＲ法を市販の装置（アプライドバイオシステムズ社販売、商品名『ＡＢＩＰＲＩＳＭ　７７００　シークエンス・ディテクション・システム』）を用いて行った。すなわち、２０ｎｇのｃＤＮＡ、１００ｎＭのセンスプライマー及び１００ｎＭのアンチセンスプライマーを水に溶解し１２．５μｌとし、それに１２．５μｌの『ＳＹＢＲグリーンＰＣＲマスターミックス』（アプライドバイオシステムズ社販売）を添加して反応溶液を調製した。これを、９０℃１５秒、６０℃１分で４５サイクルのＰＣＲを行い、各遺伝子の発現量を、内部対照のβアクチン遺伝子の発現量と比較し、相対発現量として数値化した。次に、実験１でのランク分けにしたがい、各遺伝子において、Ａランクに対するＢ、Ｃ又はＤランクについてマン・ホイットニーのＵ検定を行い、有意水準ｐ＜０．０１又はｐ＜０．０５で有意差があるかどうか調べた。結果を表３に示す。
【００２３】
【表３】
2004000190.tif 000004
【００２４】
表３に示すように、ｍＲＮＡレベルにおけるＡｋｔ−１、ＤＲ３、ＭＲＰ５及びＭＲＰ６遺伝子の発現量は、腫瘍壊死因子の感受性の高い細胞において、統計的に有意に高い発現量を示した。図１乃至４にｍＲＮＡレベルにおけるＡｋｔ−１、ＤＲ３、ＭＲＰ５又はＭＲＰ６遺伝子の発現量の統計処理の結果を示す。また、ｍＲＮＡレベルでのＡｋｔ−１遺伝子の発現を癌細胞の由来別にしてみたところ、図５に示すように、腸、乳、肺、膵由来の細胞株において、Ａｋｔ−１遺伝子の発現量が高く、これらの臓器の癌は腫瘍壊死因子の治療効果が高い可能性が予測された。
【００２５】
【実験３】
＜クラスター分析＞
実験２の結果である４９種類の遺伝子のプロファイルを元に、遺伝子間のクラスター分析を、常法の因子分析及び主成分分析法を市販のコンピューターソフトウエアー（商品名『ＥＰＣＬＵＳＴ』、ユーロピアン・バイオインフォマティク・インスティチュート社販売）にしたがって行った。その結果を図６に示す。この結果から、Ａｋｔ−１、ＭＲＰ５及びＭＲＰ６遺伝子は同一のクラスターに分類され、同じような挙動を示していることが判明した。この結果は、少なくとも、腫瘍壊死因子の治療効果を予測することが可能な遺伝子のグループとして、Ａｋｔ−１遺伝子に代表されるグループとＤＲ３遺伝子に代表されるグループの２グループが存在することを示している。
【００２６】
【実験４】
＜細胞膜抗原の発現＞
腫瘍壊死因子は、アポトーシス誘導により細胞を死に導く作用以外にも、細胞膜抗原の一つであるＩＣＡＭ−１の発現を促進する作用を有している。そこで、Ａｋｔ−１遺伝子の発現と、ＩＣＡＭ−１の発現に関連性があるか検討した。実験１の結果を参照し、腫瘍壊死因子感受性細胞７種（肺癌患者Ｂ、ＨＣＴ−１５、ＲＤ、ＯＢＡ−ＬＫ−１、ＣｏＬｏ２０５、ＣｏＬｏ２０６及びＹＭＢ−１−Ｅ）及び腫瘍壊死因子非感受性細胞７種（大腸癌患者Ａ、皮膚癌患者Ａ、肺癌患者Ｅ、神経癌患者Ａ、肝癌患者Ｄ、ＰＫ−４５Ｈ及びＭＫＮ−７）を選抜し、それぞれを、２×１０４細胞／ｍｌの濃度に１０％（ｖ／ｖ）牛胎児血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培地により細胞懸濁液とし、その３ｍｌに、５ｎｇ／ｍｌのヒト腫瘍壊死因子を添加し、市販の６穴プレートにて、３７℃、５％ＣＯ２中で２４時間培養した。細胞を回収し、マウス抗ヒトＩＣＡＭ−１抗体（商品名『ＢＢＡ−３』、アールアンドビーシステム社販売）で４０分間、４℃で処理し、１％（ｖ／ｖ）ウシ血清アルブミンを含有するリン酸食塩緩衝液で細胞を洗浄した後、フルオレセイン標識の抗マウスイムノグロブリンＧ抗体で４０分間、４℃で処理し、３％（ｖ／ｖ）ホルマリンで処理した後、これらの細胞を、フローサイトメトリー（ベックマンコールター社販売、商品名『ＥＰＩＣＳ　ＸＬ』）にて、蛍光強度を測定し、ＩＣＡＭ−１の膜表面での発現量を調べ、実験２のＡｋｔ−１遺伝子の発現データと合わせて、相関性について調べた。結果を図７に示す。図７における▼印は腫瘍壊死因子感受性細胞を、○印は腫瘍壊死因子非感受性細胞を示すものである。
【００２７】
図７によれば、７種類の腫瘍壊死因子感受性細胞（▼）のうち２種類がＩＣＡＭ−１の発現量が増加しているものの５種類は変化がなく、７種類の腫瘍壊死因子非感受性細胞（○）のうち２種類がＩＣＡＭ−１の発現量に変化がないものの５種類は増加していることから、腫瘍壊死因子感受性とＩＣＡＭ−１の発現量は、有意な統計的な相関性は認められなかった。一方、腫瘍壊死因子感受性細胞（▼）は、腫瘍壊死因子非感受性細胞（○）よりも有意にｍＲＮＡレベルでのＡｋｔ−１遺伝子の発現量が多く、マン・ホイットニーのＵ検定により、腫瘍壊死因子感受性とＡｋｔ−１遺伝子の発現量には高い相関性が認められた。この結果は、Ａｋｔ−１遺伝子の発現量を調べることによる腫瘍壊死因子の効果の予測は、腫瘍壊死因子が有する多種多様な作用効果のうちのひとつであるＩＣＡＭ−１発現を予測することよりも、アポトーシス誘導による抗腫瘍効果の予測に適していることを示している。
【００２８】
以下、実施例により、本発明を詳細に説明する。なお、本発明は実施例に限定されるものではない。
【００２９】
【実施例】
肺癌患者５名から摘出した癌細胞から、常法にしたがって、それぞれＲＮＡを採取し、これらを鋳型にしてマウス乳癌ウイルス逆転写酵素によりｃＤＮＡを調製した。次にこれらのｃＤＮＡ２０μｇを鋳型にして、Ａｋｔ−１ｍＲＮＡ検出用のプライマー（配列表における配列番号２９及び３０）あるいはβアクチンｍＲＮＡ検出用のプライマー（配列表における配列番号９９及び１００）各１００ｎＭ、熱耐性ＤＮＡポリメラーゼなどを含有する『ＳＹＢＲグリーンＰＣＲマスターミックス』（アプライドバイオシステムズ社販売）を１２．５μｌ添加して反応溶液を調製した。これらを、リアルタイムＰＣＲ装置（アプライドバイオシステムズ社販売、商品名『ＡＢＩＰＲＩＳＭ　７７００　シークエンス・ディテクション・システム』）により、９０℃１５秒、６０℃１分で４５サイクルのＰＣＲを行うことにより、内部標準のβアクチンｍＲＮＡの発現量を基準にしてＡｋｔ−１遺伝子の発現量を算出した。
【００３０】
一方、肺癌患者５名から摘出した上記癌細胞を、それぞれ、１匹当り１×１０４個ずつ１０匹のヌードマウスの腹腔に移植し、その２日後に、半数の５匹に１匹当り５ｎｇの腫瘍壊死因子を静脈投与した。３週間後に、カツユキ・ハラナカ等、『インターナショナル・ジャーナル・オブ・キャンサー』、第３４巻、２６３乃至２６７頁（１９８４年）に記載の方法にしたがって腫瘍体積を計測し、腫瘍壊死因子を投与しなかった対照と比較し抗腫瘍効果を評価した。その結果、ｍＲＮＡレベルでのＡｋｔ−１遺伝子の発現量が多いほど腫瘍壊死因子による抗腫瘍効果は高くなっていた。
【００３１】
【発明の効果】
叙述のとおり、本発明によれば、癌細胞における腫瘍壊死因子の感受性は、Ａｋｔ−１、ＤＲ３などの遺伝子の発現量に高い相関性を有していることから、これらの遺伝子の発現量を測定することにより、腫瘍壊死因子の効果を予測できる。したがって、本発明を癌患者の治療に先立って用いれば、腫瘍壊死因子による治療を安全にかつ無駄なく行うことができる。また、Ａｋｔ−１遺伝子の発現量の測定は、腫瘍壊死因子の作用効果のうち、抗腫瘍効果を予測するのに適している。したがって、本発明によれば、従来医薬品として利用不可能といわれてきた腫瘍壊死因子の医薬品用途の可能性を検索できる。また、腫瘍壊死因子などの抗癌剤の適用可能な癌の種類を調べることにも応用することができる。
【００３２】
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
【図１】各腫瘍壊死因子感受性ランクにおけるｍＲＮＡレベルでのＡｋｔ−１遺伝子の相対発現量を示す。
【図２】各腫瘍壊死因子感受性ランクにおけるｍＲＮＡレベルでのＤＲ３遺伝子の相対発現量を示す。
【図３】各腫瘍壊死因子感受性ランクにおけるｍＲＮＡレベルでのＭＲＰ５遺伝子の相対発現量を示す。
【図４】各腫瘍壊死因子感受性ランクにおけるｍＲＮＡレベルでのＭＲＰ６遺伝子の相対発現量を示す。
【図５】細胞の由来別のｍＲＮＡレベルでのＡｋｔ−１遺伝子の発現量の比較を示す。
【図６】腫瘍壊死因子関連遺伝子のクラスター分析の結果を示す。
【図７】腫瘍壊死因子感受性と、ｍＲＮＡレベルでのＡｋｔ−１遺伝子の発現量又はＩＣＡＭ−１の発現量の関係を示す。
▼は腫瘍壊死因子感受性細胞を、○は腫瘍壊死因子感受性細胞を示す。
【図１】
2004000190.tif 000054
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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