(57)【要約】【課題】動物の成長を促進し、かつ免疫作用を向上させる生物活性剤を提供する。【解決手段】含油農作物の種子かすから抽出される生物活性剤、特に、油−茶ツバキまたは茶の種子かすから抽出されるトリテルペンタイプのサポニンを、飼料添加物に用いる生物活性剤。より具体的には、カメリア　Ｌに属する植物のシードケーキから得られるトリテルペノイド・サポニンを有効成分として含む、ヒトおよび動物の免疫機能を改善し、かつ抗菌および抗ウイルス活性を強化するための生物活性剤。【選択図】　　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カメリア　Ｌに属する植物のシードケーキから得られるトリテルペノイド・サポニンを有効成分として含む、ヒトおよび動物の免疫機能を改善し、かつ抗菌および抗ウイルス活性を強化するための生物活性剤。
【請求項２】
カメリア　Ｌに属する植物のシードケーキから得られるトリテルペノイド・サポニンを有効成分として含む、動物の生理機能を高め、かつ肉質を向上させるための生物活性剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、動物の病気を防ぎかつ動物の成長および発育を促進する生物活性剤に関する。より特定的には、この発明の生物活性剤は、油脂植物から抽出された生物活性成分を含む生物活性剤であって、飼料および食餌内に、動物の免疫作用を向上するために、ならびに、動物の成長および発育を促進するために、それぞれ、飼料添加物および栄養分として加えられる生物活性剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ツバキ（カメリア　Ｌ（Ｃａｍｅｌｌｉａ　Ｌ．））に属する植物は、中国、日本、インドおよび他の多くの東南アジア諸国において非常に一般的である。中でも、カメリア・シネンシス（Ｃ．　ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、カメリア・オレイフェラ（Ｃ．　ｏｌｅｉｆｅｒａ）、およびカメリア・ジャポニカ（Ｃ．　ｊａｐｏｎｉｃａ）の３種に属する植物は、経済的に非常に価値が高い。たとえば、カメリア・シネンシス植物の葉は、茶を製造するのに使用が可能であり、カメリア・オレイフェラ植物の種子は、食用油を製造するのに使用され、カメリア・ジャポニカ植物は、観賞植物としてもまた有用である。
【０００３】
現代の飼料産業の進展に伴い、大量の抗生物質が動物の病気を防ぐためおよび動物の成長を促進するために、飼料添加物として使用されている。１９９０年には、中国では約２０００トンの抗生物質が飼料添加物して使用され、西欧および日本ではそれぞれ、約１３５０トンおよび１３００トンの抗生物質が、家禽用および家畜用飼料に使用された。最近では、アメリカ合衆国において抗生物質の売上額が１０．１９億米国ドルに達し、世界中の抗生物質の利用率が、年間３％増加している。しかしながら、抗生物質の長期利用は、微生物に薬剤耐性を与える結果となり、これは薬物耐性因子（Ｒ因子）のトランスロケーションを介して世界的な環境汚染を生み出すおそれがあり、また、動物加工品における残留の問題につながる結果となり、これは、ヒトの健康への脅威となり得る。ＷＨＯ（世界保健機関）およびＦＡＯ（国連食糧農業機関）は、飼料添加物としての抗生物質の代替物に関する研究に非常に力を入れている。現在、飼料添加物としての天然材料に関する研究開発が大きく進んできている。たとえば、飼料微生物および伝統的な漢方薬が広範囲で使用されてきた。しかし、飼料微生物は飼料処理中に不活性になりやすく、抗生物質との置換は部分的でしかない。伝統的な漢方添加物は、その組成が複雑でありまた作用が不安定であるため、広く使用することができない。このため、抗生物質に取り代わり、動物加工品中の抗生物質の残留を排除し、加工品の品質を向上し、かつ環境汚染を軽減するために、飼料添加物として天然生物活性成分を使用する必要がある。
【０００４】
アオヤマ（Ａｏｙａｍａ）Ｓ．は、１９３１年にチャのシードケーキからテア・サポニンを最初に分離した（たとえば、非特許文献１参照。）。しかしながら、彼はこの純粋な化学物質を得られなかった。１９５２年には、東京大学のイシダテ（Ｉｓｈｉｄａｔｅ）Ｍ．およびウエダ（Ｕｅｄａ）Ｙ．が、テア・サポニンの純粋な結晶を得た（たとえば、非特許文献２参照。）。１９７０年代から、テア・サポニンの分離、特性評価および利用に関する一連の研究が、チャの主要産出国において行なわれた。この期間中に、多くの抽出方法および製品が開発された。
【０００５】
今や、ツバキから得られるサポニンがトリテルペノイド化合物に属することは明らかである。これは、アグリコン（Ｃ３０Ｈ５０Ｏ６）、糖類および有機酸類からなる複雑な化合物の１群である。ツバキから得られるサポニンの化学構造は、以下の文献を含む多くの文献に開示されている（たとえば、非特許文献３、非特許文
献４および非特許文献５参照。）。
【０００６】
テア・サポニンの研究における進展により、チャ種子およびチャ葉の副産物を完全に利用できる可能性が大いに増している。１９７２年には、スリランカのロバーツ（Ｒｏｂｅｒｔｓ）Ｇ．Ｒ．とその同僚が、テア・サポニンの抽出技術を改善し、その調製を産業化し、かつツバキ植物からのチャのシードケーキを使用するいくつかの他の方法を提案した（たとえば、非特許文献６および非特許文献７参照。）。ヤジシグル（Ｙａｚｉｃｉｇｌｕ）Ｔ．およびその同僚の推定によれば、トルコのチャ種子１５，０００トンから、約６００トンのテア・サポニンが抽出可能である。これまでに、テア・サポニンの製造の産業化が可能になってきており、ニッポン・イソメ・グリース・ケミカル社（Ｎｉｐｐｏｎ　Ｉｓｏｍｅ　Ｇｒｅａｓｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ．）は既に、テア・サポニンを商品化している。
【０００７】
ツバキから得られるサポニンは、産業に幅広く利用できる。最初の研究分野は医薬における利用であったが、この分野は、薬理学者が多くいるにもかかわらず、その進展は遅かった。サポニンの薬理学的作用には、抗浸透、抗炎症、およびせきの抑制がある。サポニンは、多種の水腫（ｏｅｄｅｍａ，旧名ｄｒｏｐｓｙ）に特別な作用を有すると報告された。
【０００８】
ツバキから得られるサポニンの産業利用は、新しく開拓された分野である。このサポニンは、水と油のエマルション、防腐剤、ビール産業における起泡剤、および日用品産業における洗剤等を製造するのに使用できる。また、織物の染料に損傷を与えることがないため、織物の色を保つ効果もある。洗濯の際に使用されると、毛織物製品が縮むのを防ぎ、また、織物の表面光沢を保つ効果もある。サポニンは、写真産業においても利用が可能である。
【０００９】
ツバキから得られるサポニンは、農業においても、特に、殺虫剤、殺菌剤およびスプレー殺虫剤の結合剤として、広く利用価値がある。その主要な利点は、殺虫剤の残留を防ぎ、環境を保護できることである。
【００１０】
【非特許文献１】
ＡｏｙａｍａＳ．，　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，　１９３１，　５１（５），　ｐ．３６７
【００１１】
【非特許文献２】
Ｉｓｈｉｄａｔｅ　Ｍ．　ａｎｄ　Ｕｅｄａ　Ｙ．，　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，　１９５２，　７２（１１），　ｐ．１５２５
【００１２】
【非特許文献３】
Ｙｏｓｈｉｏｋａ，　Ｉ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　Ｂｕｌｌｅｔｉｎ　（Ｔｏｋｙｏ），　１９７０，　１８．
Ｐ．１６１０
【００１３】
【非特許文献４】
Ｙｏｓｈｉｏｋａ，　Ｉ．　ｅｔ　ａｌ．，　”Ｔｈｅａ　ｓａｐｏｇｅｎｏｌ　Ａ．，　Ｔｈｅ　ｍａｊｏｒ　ｓａｐｏｇｅｎｏｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｅｅｄｓ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｏｆ　ｔｈｅａ　Ｓｉｎｅｎｓｉｓ　Ｌ．”，　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，　１９６６　（４８），　ｐ．５９７９−５９８４，　ｐ．５９７３−５９７８
【００１４】
【非特許文献５】
Ｙｏｓｈｉｏｋａ，　Ｉ．　ｅｔ　ａｌ．，　”Ｓａｐｏｎｉｎ　ａｎｄ　Ｓｐｏｇｅｎｏｌ　ＩＩＩ　ｓｅｅｄｓ　ｓａｐｏｇｅｎｏｌｓ　ｏｆ　Ｔｈｅａ　Ｓｉｎｅｎｓｉｓ　Ｌ　（３），　Ｔｈｅａ　ｓａｐｏｇｅｎｏｌ　Ｅ　ａｎｄ　ｍｉｎｏｒ　ｓａｐｏｇｅｎｏｌｓ”，　Ｃｈｅｍ．　Ｐｈａｒ．　Ｂｕｌｌ．，　１９７１，　１９（６），　ｐ．１１８６−１１９９
【００１５】
【非特許文献６】
Ｒｏｂｅｒｔｓ　Ｇ．Ｒ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｔｅａ　ＱＵＡＲＴＥＲＬＹ，　１９７２，　４３（３）
【００１６】
【非特許文献７】
Ｗｉｃｋｒｅｍａｓｔｉｎｇｈｅ　Ｒ．Ｌ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｔｅａ　Ｑｕａｒｔｅｒｌｙ，　１９７２，　４３（３）
【００１７】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、ツバキから得られるサポニンを抗生物質に代わるものとして、飼料添加物として利用することに関する研究は、未だ文書で明らかにされておらず、動物の成長および免疫作用促進に関する上記サポニンの作用もまた、文書では未だ明らかにされていない。
【００１８】
この発明の１つの目的は、動物の成長を促進する生物活性剤を提供することである。
【００１９】
この発明の別の目的は、動物の免疫作用、ならびに動物の抗菌および抗ウイルス作用を向上する生物活性剤を提供することである。
【００２０】
この発明のまた別の目的は、飼料添加物として用いることのできる油脂植物の生物活性抽出物を含む生物活性剤を提供することである。
【００２１】
この発明の別の目的は、新規なヘルスケア剤として用いることのできる生物活性剤を提供することである。
【００２２】
この発明のさらなる目的は、抗菌および抗ウイルス剤として用いることできる生物活性剤を提供することである。
【００２３】
【課題を解決するための手段】
ツバキから得られるサポニンの長年にわたる研究開発を経て、本発明者は期せずして、ツバキのシードケーキから抽出されるサポニンが免疫作用を向上し、また、抗菌および抗ウイルスの作用を有することを発見した。これは、いくつかの条件下で安全であり、動物の成長を増進することができる。
【００２４】
【発明の実施の形態】
本出願の文中に使用される「シードケーキ」という語は、含油植物の種子から油を抽出した後に得られる残渣を意味する。
【００２５】
「ツバキシードケーキ」という語は、カメリア・シネンシス、カメリア・オレイフェラおよびカメリア・ジャポニカ等のツバキ植物から得られるシードケーキを意味する。
【００２６】
この発明に使用されるトリテルペノイド・サポニンは、油脂植物から抽出されたものである。好ましくは、これはツバキ科に属する植物から得られ、最も好ましくは、ツバキ植物の葉および種子から得られるものである。
【００２７】
この発明において使用されるトリテルペノイド・サポニンの製造のためのプロセスを以下に示す。
【００２８】
油を抽出した後のシードケーキを粉砕し、アルコールおよび他の有機試薬に浸す。有機抽出液を濾過し、濃縮しかつ乾燥して、トリテルペノイド・サポニン粉末を得る。温度は２０〜５０℃、好ましくは３０〜４０℃の範囲とする。有機試薬の濃度は、６０〜９０％の範囲とする。乾燥方法として、真空乾燥または噴霧乾燥を用いることができる。
【００２９】
上記の方法に従って得られたサポニンは、飼料添加物またはヘルスケア剤として直接使用できる。また、微量元素と組合せて使用することも可能である。
【００３０】
このサポニン調製物の用量および使用方法は、通常の飼料添加物およびヘルスケア剤と同様である。飼料への含量は、５０〜１５００ｐｐｍ、好ましくは２５０〜７５０ｐｐｍの範囲とすることができる。
【００３１】
この発明は、天然のツバキシードケーキからの生物活性成分を含む生物活性剤を、飼料添加物として使用できるものとして提供する。これは、従来の飼料中の抗生物質を完全に置換できるものであり、したがって、動物加工品中の抗生物質の残留を防ぎ、高品質の動物加工品を製造し、環境汚染を低減し、かつ動物の生産能力を高める。これはまた、栄養になるヘルスケア剤としても使用できる。このように、廉価の油−種子粉末が有効に利用できるようになり、社会的および経済的により多くの恩恵をもたらす。
【００３２】
【実施例】
以下に示す例は、この発明をより詳細に説明するために使用するものであって、この発明の範囲をいかようにも限定するものではない。
【００３３】
例１
生物活性飼料添加物Ａの調製
カメリア・オレイフェラのシードケーキ８０００グラムを、８３％アルコール（ｖ／ｖ）で３回抽出して、すべての有機抽出物を合わせて真空乾燥した。８００グラムの抽出粉末が得られ、これを直接、飼料添加物として使用した。
【００３４】
例２
生物活性飼料添加物Ｂの調製
飼料グレードの硫酸亜鉛２５グラムと、飼料グレードの硫酸マンガン２５グラムを、例１で得られた飼料添加物Ａ１０００グラムに加えた。均一に混ぜた後に、飼料添加物Ｂが得られた。
【００３５】
例３
生物活性飼料添加物Ｃの調製
１００グラムの飼料グレードの硫酸亜鉛、１００グラムの飼料グレードの硫酸マンガンおよび５０グラムのビタミンＣを、１０００グラムの上に記載した添加物Ａに加えた。均一に混ぜた後に、飼料添加物Ｃが得られた。
【００３６】
例４
家畜の生存率の向上
１９９２年７月から１９９４年６月までに、３１０８羽の生後１日のひなどり（４群）、３２０頭の生後１１日の子豚（８群）および６００羽の産卵目的の発育期のニワトリを対照群と試験群に割り当てて、生存率の試験を行なった。対照群に使用された飼料は、ＡＭＶブロイラー用完全飼料、ＰＣＳ豚用完全飼料および、Ｗａｎｇｈａｉブランドの産卵鶏用完全飼料であった。これら３つの飼料組成物の配合は以下のとおりである。
【００３７】
【表１】
2004000223.tif 000002
【００３８】
【表２】
2004000223.tif 000003
【００３９】
【表３】
2004000223.tif 000004
【００４０】
試験群には、対照群の食餌に含まれているすべての抗生物質に代えて、例１より得られた生物活性添加物５００ｐｐｍを使用した。実験の４９日後、１２０日後、および２１日後の生存率が、ブロイラー、子豚および発育期の産卵鶏について、それぞれ評価された。結果は、表１に示すとおりであった。
【００４１】
【表４】
2004000223.tif 000005
【００４２】
この結果は、サザンカ・サポニンが食餌中の抗生物質に代えて使用できることを示している。生存率は、ブロイラー、発育期の産卵鶏および子豚においてそれぞれ、０．９５％、１４．２９％（Ｐ＜０．０１）および１．９１％増加した。
【００４３】
例５
家畜の体重増加を増す効果
例４と同じ実験設定のもと、この発明によって得られた生物活性剤の、体重増加への効果を、試験開始４９日目に調べた（表２）。結果を下の表２に示す。
【００４４】
【表５】
2004000223.tif 000006
【００４５】
ブロイラーに関しては、正味増加は４８．６グラム／羽だけ増加し、ＡＤＧは２．４９％増加した。子豚については、正味増加は２．２５ｋｇ／頭だけ増加し、ＡＤＧは９．６４％増加した。
【００４６】
例６
飼料効率を増す効果
例４に記載したものと同じ実験条件下で、この発明の生物活性剤を含む飼料添加物の飼料効率への効果を調べた。結果を表３に示す。
【００４７】
【表６】
2004000223.tif 000007
【００４８】
この結果は、抗生物質を生物活性サポニンに置換したことにより、体重増加に対する飼料の割合がブロイラーおよび子豚のそれぞれについて、９．７１％（Ｐ＜０．０５）および４．７２％だけ低減したことを示す。
【００４９】
例７
肉の栄養分含量を増す効果
例４と同じ実験設定のもと、試験開始４９日目にニワトリの脂肪およびアミノ酸プロフィールを測定した。結果は、サポニンがニワトリの栄養分の質を向上させ得ることを示した。特に、トレオニン含量は８．３８％（Ｐ＜０．０５）増加した。
【００５０】
例８
家畜加工品の処理値を増す効果
例４と同じ実験設定のもと、試験開始４９日目に、いくつかの加工処理指数を調べた。サポニンに置換することにより、ブロイラーについて、歩留り率および全体の肉の色素がそれぞれ、１．９３％および７．４８％向上した。肉の水分損失率およびｐＨはそれぞれ、１．３７％および２．５０％減少した。この結果は、サポニンの添加が肉の加工処理および貯蔵に有益であることを示す。
【００５１】
例９
肉中の重金属を減じる効果
例４と同じ実験設定のもと、肉中の重金属成分の含量を、４９日目に原子吸光光度計で測定した。結果は、サポニンがブロイラーについて、肉中のＣｄおよびＰｂ含量をそれぞれ９４．４１％および３８．２８％減じたことを示した。
【００５２】
例１０
抗酸化の効果
例１で得られた生物活性剤７５０ｐｐｍを、通常の飼料に加えた。４０℃で４９日間のインキュベーションの後に、飼料の酸度をＫＯＨ滴定法によって測定し、過酸化値をチオ硫酸ナトリウム法によって、および、ビタミンＡの含量をＨＰＬＣによって測定した。結果は、酸度および過酸化値がそれぞれ３８．７９％および２１．２８％（Ｐ＜０．０５）減少したこと、また、サポニンが脂肪およびビタミンＡを保護することを示した。
【００５３】
例１１
免疫作用および抗ウイルス性を増す効果
例１より得られたサポニンを、ブロイラーの飼料中に１回の用量を７５０ｐｐｍとして加えた。２８日目にニワトリにＩＢＤウイルスを注射した後、３４日目に血液および脾臓のサンプルをとった。その結果、免疫グロブリン、Ｔリンパ球トランスフォーメーション率、インターロイキン２（ＩＬ−２）および赤血球Ｃ３ｂ受容体がそれぞれ、１１．５６％（Ｐ＜０．０１）、５４．０９％（Ｐ＜０．０５）、５２．６６％（Ｐ＜０．０５）および２１．７１％（Ｐ＜０．０５）増加した。これは、サポニンが免疫作用を向上させかつ抗ウイルスの効果を有することを示す。
【００５４】
例１２
フリーラジカル捕捉および抗突然変異の効果
発光分析の結果は、例１より得られたサポニンが約９４．４０％のスーパーオキシドアニオンラジカル（Ｏ２−）（Ｐ＜０．０１）および、７８．１９％（Ｐ＜０．０１）のヒドロキシルラジカル（ＯＨ−）を取除いたことを示した。メタンスルホン酸エチル（ＥＭＳ）を、成熟した雄鳥および雌鳥にそれぞれ８２ｍｇ／ｋｇおよび８０ｍｇ／ｋｇの用量で、３日間筋内注射にて投与した。７５０ｐｐｍのサザンカ・サポニンを添加することにより、雄鳥の精子の奇形率は５８．９６％（Ｐ＜０．０１）減少し、雌鳥の排卵率は２８．６４％、卵の受精率は７５．５４％（Ｐ＜０．０１）増加した。これらの結果は、抽出した生物活性添加物が、アルキル化試薬によって誘発される奇形に対して細胞を守る効果を有することを示した。
【００５５】
例１３
抗菌効果
７５０ｐｐｍの抽出した生物活性剤を、その抗菌作用を評価するために培養皿に加えた。結果は、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）およびサルモネラ（ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）を抑制する濃度はそれぞれ１．２５−０．５ｍｇ／ｍＬおよび０．１５６３−０．０３９０ｍｇ／ｍＬであることを示した。
【００５６】
例１４
ホルモン、タンパク質および酵素レベルを増す効果
例４と同じ実験設定のもと、４９日目に静脈血のサンプルをとった。結果は、サポニンを添加することで血清のテストステロンレベルが２５．６１％（Ｐ＜０．０５）、血清の総タンパク質含量が１１．０８％、アルカリホスファターゼの活性が１９．０２３％、アミラーゼの活性が１６．７９％および総タンパク質加水分解酵素の活性が４９．３７％向上したことを示した。
【００５７】
例１５
水生動物の生長への効果
カメ、エビ（プローン）およびウナギの食餌中に１０ｐｐｍのサザンカ・サポニンを添加することにより、それらの生存率および生長率が向上した。
【００５８】
例１６
サザンカ・サポニンの安全性試験
例１から得られたテア・サポニンをラットの食餌中に５０００ｐｐｍ加えた。３０日の給餌の後に、ラットの体細胞および生殖細胞には異常な徴候は認められなかった。試験結果は、テア・サポニンが飼料添加物として安全であることを示した。
【００５９】
この発明が以上の例のみに限定されるものではなく、多くの変形および修正がこの発明の範囲から離れることなく可能であることは当業者には理解されるであろう。この発明の範囲は、添付の請求の範囲によって定義されるものである。