(57)【要約】【課題】蛋白質などの阻害を受け難く、広範囲のｐＨ領域で強力な殺菌力を有し、広い抗菌スペクトルを示し、安全性が高く、かつ使用後に分解して発生する化合物の残留毒性が極めて低い、優れた抗菌活性を有し、極めて安全性の高い、新規なビス第四級アンモニウム塩化合物を提供すること。【解決手段】下記一般式（１）2004345953.tif 000022で表される抗菌活性を有する新規な第四級アンモニウム塩化合物。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で表されることを特徴とする抗菌活性を有する新規な第四級アンモニウム塩化合物。
2004345953.tif 000018
（上記式中、Ｐｙはピリジン環あるいは縮合ピリジン環を、Ｒ１はＰｙの窒素原子に結合した炭素数６〜１８のアルキル基を示し、いずれも置換基を含んでもよい。Ｚは０または１を、ｍは１、２または３を、ｎは０、１または２を示し、Ｘ２はアニオンを示す。）
【請求項２】
下記一般式（２）で表される４−置換ピリジン系化合物のアルコラートと、下記一般式（３）で表されるジハロゲノアルキレンを反応させ、ついで一般式Ｒ１Ｘ２（Ｒ１は炭素数６〜１８のアルキル基を示し、置換基を含んでもよい。Ｘ２はアニオンを示す。）で表される化合物を反応させることを特徴とする下記一般式（１）で表される抗菌活性を有する新規な第四級アンモニウム塩化合物の製造方法。
2004345953.tif 000019
（上記式中、Ｐｙはピリジン環あるいは縮合ピリジン環を示し、ｎは０、１または２を、Ｍはアルカリ金属原子を示す。）
2004345953.tif 000020
（上記式中、Ｘ１はハロゲン原子を示し、ｍは１、２または３を、Ｚは０または１を示す。）
2004345953.tif 000021
（上記式中、Ｐｙはピリジン環あるいは縮合ピリジン環を、Ｒ１はＰｙの窒素原子に結合した炭素数６〜１８のアルキル基を示し、いずれも置換基を含んでもよい。Ｚは０または１を、ｍは１、２または３を、ｎは０、１または２を示し、Ｘ２はアニオンを示す。）
【請求項３】
請求項１に記載した一般式（１）で表される新規な第四級アンモニウム塩化合物を有効成分として含有することを特徴とする抗菌剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は抗菌活性を有する新規なビス第四級アンモニウム塩化合物およびその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
細菌や真菌などに抗菌活性を発揮するビス第四級アンモニウム塩化合物は古くから知られており、現在も抗菌剤として広く実用化されている。しかしながら、現在用いられている抗菌性のビス第四級アンモニウム塩化合物は、通常、抗菌活性は優れているが、同時に生分解生成物の残留毒性も高いため、実際の使用に関しては、環境に対する安全性と水に対する溶解性および安定性に問題があり、その適用範囲には制限があった。また、従来のビス第四級アンモニウム塩化合物は、抗菌力が糖質、蛋白質および脂質などに拮抗され、抗菌力がｐＨの低い（酸性）領域では低下し、かつ細胞芽胞に効果がないなどの欠点があった。
【０００３】
そこで、下記一般式（Ａ）および（Ｂ）で表されるビス第四級アンモニウム塩化合物（特許文献１参照）や、
2004345953.tif 000002
2004345953.tif 000003
（上記式中、Ｙはピリジン環、キノリン環、イソキノリン環またはチアゾリン環を、Ｒ１は炭素数２〜１０のアルキレン基あるいはアルケニレン基を、Ｒ２はＹの窒素原子に結合した炭素数６〜１８のアルキル基を示し、いずれも置換基を含んでもよい。Ｘはアニオンを示す。）
【０００４】
下記一般式（Ｃ）で表されるビス第四級アンモニウム塩化合物（特許文献２参照）、
2004345953.tif 000004
（上記式中、Ｚはピリジン環を示し、Ｒ１およびＲ２は同一または異なり、各々水素原子または炭素数１〜６のアルキル基を示し、Ｒ３は炭素数３〜１８のアルケニレン基を示し、Ｒ４はＺの環窒素原子に結合した炭素数６〜１８のアルキル基またはアルケニル基を示し、Ｘはアニオンを示す。）
【０００５】
下記一般式（Ｄ）で表されるビス第四級アンモニウム塩化合物（特許文献３参照）が報告されている。
2004345953.tif 000005
（上記式中、Ｚはピリジン環またはキノリン環を、Ｒ３は炭素数２〜１８のアルキレン基あるいはアルケニレン基を、Ｒ４はＺの窒素原子に結合した炭素数６〜１８のアルキル基を示し、いずれも置換基を含んでもよい。Ｒ１およびＲ２は同一または異なって、Ｚの窒素原子以外の原子に結合した炭素数１〜３のアルキル基、水酸基、アミノ基、炭素数１〜３のアルコキシ基あるいは水素原子を、Ｘはアニオンをそれぞれ示す。）
【０００６】
【特許文献１】
特開平８−３０１７０３号公報
【特許文献２】
特開平１０−０９５７７３号公報
【特許文献３】
特開平６−３２１９０２号公報
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
上記の従来公知のビス第四級アンモニウム塩化合物よりも抗菌活性に極めて優れ、かつ生分解後の化合物は、残留毒性が少なく、地球環境に優しいビス第四級アンモニウム塩化合物の開発が強く望まれている。従って、本発明の目的は、蛋白質などの阻害を受け難く、広範囲のｐＨ領域で強力な殺菌力を有し、広い抗菌スペクトルを示し、安全性が高く、かつ使用後に分解して発生する化合物の残留毒性が極めて低い、優れた抗菌活性を有し、極めて安全性の高い、新規なビス第四級アンモニウム塩化合物およびその製造方法を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
上記目的は以下の本発明によって達成される。すなわち、本発明は、下記一般式（１）
2004345953.tif 000006
（上記式中、Ｐｙはピリジン環あるいは縮合ピリジン環を、Ｒ１はＰｙの窒素原子に結合した炭素数６〜１８のアルキル基を示し、いずれも置換基を含んでもよい。Ｚは０または１を、ｍは１、２または３を、ｎは０、１または２を示し、Ｘ２はアニオンを示す。）で表される抗菌活性を有する新規な第四級アンモニウム塩化合物を提供する。
【０００９】
また、本発明は、下記一般式（２）で表される４−置換ピリジン系化合物のアルコラートと、下記一般式（３）で表されるジハロゲノアルキレンを反応させ、ついで一般式Ｒ１Ｘ２（Ｒ１は炭素数６〜１８のアルキル基を示し、置換基を含んでもよい。Ｘ２はアニオンを示す。）で表される化合物を反応させることを特徴とする下記一般式（１）で表される抗菌活性を有する新規な第四級アンモニウム塩化合物の製造方法を提供する。
【００１０】
2004345953.tif 000007
（上記式中、Ｐｙはピリジン環あるいは縮合ピリジン環を示し、ｎは０、１または２を、Ｍはアルカリ金属原子を示す。）
2004345953.tif 000008
（上記式中、Ｘ１はハロゲン原子を示し、ｍは１、２または３を、Ｚは０または１を示す。）
【００１１】
2004345953.tif 000009
（上記式中、Ｐｙ、Ｒ１、Ｚ、ｍ、ｎおよびＸ２は前記と同じ意味である。）
また、本発明は、上記本発明の前記一般式（１）で表される新規な第四級アンモニウム塩化合物を有効成分として含有することを特徴とする抗菌剤を提供する。
【００１２】
【発明の実施の形態】
次に好ましい実施の形態を挙げて本発明をより詳細に説明する。
上記一般式（１）の化合物において、Ｒ１のアルキル基は、炭素数が６〜１８の範囲のものが用いられるが、抗菌力の観点から、炭素数８〜１４の範囲のアルキル基であることがより好ましい。なお、Ｘ２で示されるアニオンについては、特に限定されず、Ｃｌ−、Ｂｒ−、Ｉ−、ＮＯ３−、ＣＨ３ＣＯＯ−、およびＳＯ４２−などを含む。なお、アニオンについては、製造工程中、原料として使用するＲ１Ｘ２のＸ２を適当に選択するか、あるいは最終化合物を公知の方法でアニオン交換することによって所望のアニオンを選択できる。
【００１３】
次に本発明のビス第四級アンモニウム塩化合物の製造方法の一例を反応式で示すが、本発明はこれらの反応式に限定されるものではない。
例えば、下記式（２）で示される４−ヒドロキシピリジンにアルカリ金属を反応させて得られるアルコラート化合物と、下記式（３）で示されるジハロゲノエタンを反応させて下記式（４）で示される本発明のビス第四級アンモニウム塩化合物の中間体を得る。さらに、例えば、下記式（４）で示される中間体に下記式（５）で示される炭素数６〜１８のアルキルハライドを反応させると、下記式（１）で示される本発明の１例のビス第四級アンモニウム塩化合物が得られる。
【００１４】
2004345953.tif 000010
【００１５】
以上の例示は、前記一般式（１）において、ｍ＝１、ｎ＝０、Ｚ＝０の場合の例であり、ｍ、ｎおよびＺが他の数値の本発明の化合物も上記と同様な製造方法で得ることができる。
【００１６】
上記反応は通常有機溶媒中、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノールなどのアルコール類や、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルホルムアミド、ニトロメタン、ニトロエタン、アセトニトリル、メチルセロソルブ、エチルセロソルブ、クロロベンゼン、塩化エチレンなどの中で、約５０〜１２０℃の温度で行うことができる。反応時間は通常２〜４８時間程度とすることができる。
【００１７】
あるいは上記反応は、上記の如き溶媒の存在下に、オートクレーブ中で加圧下、好ましくは約１０〜１００ＭＰａ（メガパスカル）において約５０〜１００℃の温度で行うこともできる。
【００１８】
本発明において使用される前記一般式（２）で表されるアルコラートと前記一般式（３）で示される化合物との反応割合は厳密に制限されるものではない。上記反応により生成する一般式（１）の化合物は、通常の分離精製手段、例えば、再結晶操作などにより容易に精製することができる。
【００１９】
以上に述べた方法によって製造される前記一般式（１）で示される化合物におけるアニオン（Ｘ２）は必要に応じて一般的な処理方法によって所望の他のアニオンと交換することができる。アニオン（Ｘ２）は、特に限定されるものでなく、ヨウ素、臭素、フッ素、塩素、ヨウ素酸、臭素酸、塩素酸、過ヨウ素酸、硫酸、塩酸、硝酸、リン酸などの無機酸などのアニオン、有機酸、ヒドロキシ酸類、オキソ酸類、安息香酸類、有機スルフォン酸類などのアニオンを挙げることもできる。
【００２０】
前記一般式（１）で表される本発明の新規なビス第四級アンモニウム塩化合物は、後記の試験例に示すように、種々の細菌や真菌に対して広い抗菌スペクトルを有しており、しかも、従来の市販の第四級アンモニウム塩などに比べて、１／１０〜１／１００の最少殺菌濃度という優れた抗菌活性を示す。特に、現在一般に広く使用されている塩化ベンザルコニウムと比較して約３０倍という高い抗菌活性を有しており、しかも急性経口毒性値が極めて低く、強力かつ安全な抗菌剤として極めて有用である。
【００２１】
しかも前記一般式（１）で表される本発明の化合物は、最少殺菌濃度が塩化ベンザルコニウムの１，０００分の１以下に低下するため、本発明の化合物の分解生成物も極めて少量となるため、環境に対して優しい抗菌剤ということができる。
【００２２】
前記一般式（１）で表される本発明の化合物は、特に腐敗菌および変敗菌に対する抗菌力が強く、従って、例えば、スライムコントロール剤や防菌防臭加工繊維製品、皮革製品、建材、木材、塗料、接着剤、プラスチック、フィルム、紙、パルプ、金属加工油、食品、医薬品、化粧品、文房具、畜産分野などにおける抗菌剤として幅広くその応用が期待できる。
【００２３】
本発明の抗菌剤は、前記一般式（１）で表される化合物を有効成分とする。通常は、水溶液の状態で使用され、その一般的濃度は０．０１〜２０質量％であるが、アルコールなど有機溶剤の溶液でもよいし、固体、顆粒、その他の形状でもよい。また、他の公知の抗菌剤と併用してもよい。該抗菌剤の使用方法は、従来公知の抗菌剤の使用方法と同様であり、特に限定されない。
【００２４】
【実施例】
次に実施例および試験例により本発明をさらに具体的に説明する。
実施例１＜４，４’−（１，２−ジオキシエチレン）−ジピリジンの合成＞
コンデンサー、攪拌機および窒素導入管付き１リットル四つ口フラスコに無水ジメチルホルムアルデヒド３００ｍｌと４−ヒドロキシピリジンの白色結晶９５．０ｇ（１．００モル）を加え、溶解後金属ナトリウム２４．１５ｇ（１．０５モル）を加え、４０℃で、窒素ガス雰囲気および撹拌下、１０時間反応を行い、白色スラリー状アルコラートを得た。次いで、該白色スラリー状アルコラートに１，２−ジクロロエタン４９．４８ｇ（０．５０モル）溶液を１時間かけて滴下した後、同条件下でさらに１０時間反応を継続した。反応終了後、過剰の１，２−ジクロロエタンをエーテル洗浄で除去、次いで水洗浄して副生した食塩を除去した。続いてシリカゲル（Ｗａｋｏｇｅｌ、Ｃ−２００）カラムを用いてメタノールで展開し、目的物を分離、濃縮後、１．３２ＫＰａ、２５℃で２４時間真空乾燥し、白色粉末物質９９．３６ｇを得た。
【００２５】
該白色粉末物質は本発明の化合物の中間体である４，４’−（１，２−ジオキシエチレン）−ジピリジン（以下、４ＤＯＢＰ−２と略す）と考えられ、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果からピリジン環のプロトンが７．８９〜７．８１ｐｐｍ（ｄ）と６．４９〜６．４５ｐｐｍ（ｄ）に、酸素に結合するメチレンプロトンは４．０５〜４．００ｐｐｍ（ｔ）に現れ、それぞれの積分値も一致した。上記４ＤＯＢＰ−２の元素分析結果は次の通りであった。測定値（理論値）Ｃ：６６．７３％（６６．６７％）、Ｈ：５．６８％（５．５６％）、Ｎ：１３．０１％（１２．９６％）で、いずれも０．２％以内の誤差範囲であった。なお、４ＤＯＢＰ−２の収率は４−ヒドロキシピリジンに対し９１．３６％であった。
【００２６】
実施例２＜４ＤＯＢＰ−２の四級化＞
実施例１で得られた４ＤＯＢＰ−２の９９．３６ｇ（０．４６モル）を無水エタノール３００ｍｌに溶解後、コンデンサー、攪拌機および窒素導入管付き四つ口フラスコに入れ、窒素ガス雰囲気および撹拌、還流下、オクチルブロマイド２３１．６０ｇ（１．２０モル）を１．５時間かけて滴下した。滴下終了後、同条件で７０時間を継続した。反応終了後、反応混合物を酢酸エチル／エタノール（１：１）の混合溶液で再結晶を３回繰り返した。次いで１．３２ＫＰａ、２５℃で２４時間真空乾燥し、淡黄色粉末状物質２４１．３０ｇを得た。
【００２７】
該淡黄色粉末状物質は４，４’−（１，２−ジオキシエチレン）ビス（１−オクチル−ピリジウムブロマイド）（以下、４ＤＯＢＰ−２，８（Ｂｒ）と略す）と考えられ、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果からピリジン環のプロトンが８．００〜７．９７ｐｐｍ（ｑ）と６．５３〜６．５１ｐｐｍ（ｑ）に、酸素に結合するメチレンプロトンは３．５１〜３．４７ｐｐｍ（ｔ）に、窒素に直結するメチレンプロトンは４．４３〜４．３５ｐｐｍ（ｔ）に、窒素に結合するアルキル基の末端プロトンは０．９２〜０．８９ｐｐｍ（ｔ）に、その他の窒素直結アルキレンプロトンは１．４０〜１．３１ｐｐｍ（ｍ）に現れ、それぞれの積分値も一致した。４ＤＯＢＰ−２，８（Ｂｒ）の元素分析結果は次の通りであった。測定値（理論値）Ｃ：５５．９０％（５５．８１％）、Ｈ：７．７７％（７．６４％）、Ｎ：４．６０％（４．６５％）で、いずれも０．２％以内の誤差範囲であった。なお、４ＤＯＢＰ−２，８（Ｂｒ）のｍｐは１２３．０〜１２４．２℃、収率は４−ヒドロキシピリジンに対し８０．１７％であった。以上の分析結果から４ＤＯＢＰ−２，８（Ｂｒ）の構造は下記の通りであることが確認された。
【００２８】
2004345953.tif 000011
【００２９】
実施例３＜４，４’−（１，４−ジオキシブチレン）−ジピリジンの合成＞
実施例１において、１，２−ジクロロエタン４９．４８ｇ（０．５０モル）の代わりに１，４−ジブロモブタン１０７．９６ｇ（０．５０モル）を使用した他は実施例１と同様に処理して白色粉末物質１０９．９８ｇを得た。
【００３０】
該白色粉末物質は４，４’−（１，４−ジオキシブチレン）−ジピリジン（以下、４ＤＯＢＰ−４と略す）と考えられ、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果からピリジン環のプロトンが７．７８〜７．７１ｐｐｍ（ｄ）と６．５３〜６．２６ｐｐｍ（ｄ）に、酸素に結合するメチレンプロトンは４．２１〜４．００ｐｐｍ（ｔ）と１．８５〜１．７８ｐｐｍ（ｍ）に現れ、それぞれの積分値も一致した。上記４ＤＯＢＰ−４の元素分析結果は次の通りであった。測定値（理論値）Ｃ：６８．８０％（６８．８９％）、Ｈ：６．６８％（６．５６％）、Ｎ：１１．８０％（１１．８４％）で、いずれも０．２％以内の誤差範囲であった。なお、４ＤＯＢＰ−４の収率は４−ヒドロキシピリジンに対して９０．１５％であった。
【００３１】
実施例４＜４ＤＯＢＰ−４の四級化＞
実施例１において、４ＤＯＢＰ−２の９９．３６ｇ（０．４６モル）の代わりに４ＤＯＢＰ−４の１０９．９８ｇ（０．４５モル）を用いた他は実施例１と同様に処理して淡黄色粉末状物質が得られた。
【００３２】
該淡黄色粉末状物質は４，４’−（１，４−ジオキシブチレン）ビス（１−オクチル−ピリジウムブロマイド）（以下、４ＤＯＢＰ−４，８（Ｂｒ）と略す）と考えられ、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果からピリジン環のプロトンが８．００〜７．９７ｐｐｍ（ｑ）と６．５３〜６．５１ｐｐｍ（ｑ）に、酸素に結合するメチレンプロトンは３．８８〜３．５７ｐｐｍ（ｔ）と２．０５〜１．９８ｐｐｍ（ｍ）に、窒素に直結するメチレンプロトンは５．５８〜５．３５ｐｐｍ（ｔ）に、アルキル基の末端プロトンは１．００〜０．９７ｐｐｍ（ｔ）に、その他の窒素直結アルキレンプロトンは１．４１〜１．２０ｐｐｍ（ｍ）に現れ、それぞれの積分値も一致した。上記４ＤＯＢＰ−４，８（Ｂｒ）の元素分析結果は次の通りであった。測定値（理論値）Ｃ：５７．２０％（５７．１４％）、Ｈ：８．０１％（７．９４％）、Ｎ：４．５０％（４．４４％）で、いずれも０．２％以内の誤差範囲であった。なお、４ＤＯＢＰ−４，８（Ｂｒ）のｍｐは１２４．０〜１２５．５℃、収率は４−ヒドロキシピリジンに対して７９．０５％であった。以上の分析結果から４ＤＯＢＰ−４，８（Ｂｒ）の構造は下記の通りであることが確認された。
【００３３】
2004345953.tif 000012
【００３４】
実施例５＜４−ヒドロキシエチルピリジンの合成＞
コンデンサー、攪拌機および窒素導入管付き１リットル四つ口フラスコに４−メチルピリジン１５０ｇ（１．６１モル）を入れ、２０％ホルマリン溶液１８０ｇ（１．２０モル）を窒素ガス雰囲気および撹拌下、１３０℃で１時間かけて滴下した。滴下終了後、同条件で４時間反応を継続した。反応終了後、未反応の４−メチルピリジンおよびホルマリンを水蒸気蒸留で留去した。次いで該反応混合物を減圧蒸留し、１．９７ＫＰａ、１２５〜１２６℃で無色透明の粘稠液体の４−ヒドロキシエチルピリジン１２４．８９ｇを得た。４−ヒドロキシエチルピリジンの収率はホルマリンに対し９５．００％であった。
【００３５】
実施例６＜４，４’−（３，６−ジオキシオクタメチレン）−ジピリジンの合成＞
実施例１において、４−ヒドロキシピリジン９５．００ｇ（１．００モル）に代えて、４−ヒドロキシエチルピリジン１２４．８９ｇ（１．０２モル）を用いた他は実施例１と同様に処理して白色粉末物質１３４．００ｇを得た。
【００３６】
該白色粉末物質は本発明の目的化合物の中間体である４，４’−（３，６−ジオキシオクタメチレン）−ジピリジン（以下、４ＤＯＢＰ−Ａ２−２と略す）と考えられ、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果からピリジン環のプロトンが８．４２〜８．４０ｐｐｍ（ｑ）と７．３３〜７．３２ｐｐｍ（ｑ）に、ピリジン環と酸素間のメチレンプロトンは３．８４〜３．８１ｐｐｍ（ｔ）に、酸素間のメチレンプロトンは４．１５〜４．１０ｐｐｍ（ｔ）に現れ、それぞれの積分値も一致した。４ＤＯＢＰ−Ａ２−２の元素分析結果は次の通りであった。測定値（理論値）はＣ：７０．４３％（７０．５９％）、Ｈ：７．４８％（７．３５％）、Ｎ：１０．１０％（１０．２９％）でいずれも０．２％以内の誤差範囲であった。なお、４ＤＯＢＰ−Ａ２−２の収率はホルマリンに対して８２．１１％であった。
【００３７】
実施例７＜４ＤＯＢＰ−Ａ２−２の四級化＞
実施例１において、４ＤＯＢＰ−２の９９．３６ｇ（０．４６モル）の代わりに、実施例６で合成した４ＤＯＢＰ−Ａ２−２の１３４．００ｇ（０．４９モル）を用いた他は実施例１と同様に処理して淡黄色粉末状物質２８８．４０ｇを得た。
【００３８】
該淡黄色粉末状物質は本発明の目的物質である４，４’−（３，６−ジヒドロキシオクタメチレン）ビス（１−オクチル−ピリジウムブロマイド）（以下、４ＤＯＢＰ−Ａ２−２，８（Ｂｒ）と略す）と考えられ、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果からピリジン環のプロトンが７．９５〜７．９０ｐｐｍ（ｑ）と６．６７〜６．５０ｐｐｍ（ｑ）に、酸素に結合するメチレンプロトンは３．９８〜３．６７ｐｐｍ（ｔ）と２．１５〜２．０８ｐｐｍ（ｍ）に、窒素に直結するメチレンプロトンは５．６８〜５．４５ｐｐｍ（ｔ）に、アルキル基の末端プロトンは、１．０２〜０．９６ｐｐｍ（ｔ）に、その他の窒素に直結するアルキレンプロトンは、１．４３〜１．３０ｐｐｍ（ｍ）に現れ、それぞれの積分値も一致した。４ＤＯＢＰ−２Ａ−２，８（Ｂｒ）の元素分析結果は次の通りであった。測定値（理論値）はＣ：５８．３０％（５８．３６％）、Ｈ：８．１１％（８．２１％）、Ｎ：４．２０％（４．２６％）でいずれも０．２％以内の誤差範囲であった。なお、４ＤＯＢＰ−Ａ２−２，８（Ｂｒ）のｍｐは１２６．５〜１２７．０℃、収率はホルマリンに対して７４．６０％である。以上の分析結果から４ＤＯＢＰ−Ａ２−２，８（Ｂｒ）の構造は下記の通りであることが確認された。
【００３９】
2004345953.tif 000013
【００４０】
実施例８＜４，４’−（１，８−ジヒドロキシオクタメチレン）ビス（１−オクチル−ピリジウムブロマイド）（以下４ＤＯＢＰ−６，８（Ｂｒ）と略す）の合成＞
・４ＤＯＢＰ−６，８（Ｂｒ）の中間体である４，４’−（１，８−ジヒドロキシオクタメチレン）ジピリジンの合成
実施例１において、１，２−ジクロロエタンの４９．４８ｇ（０．５０モル）の代わりに１，６−ジブロモエタンの１２１．９９ｇ（０．５０モル）を使用した他は実施例１と同様に処理して白色粉末物質１１０．５０ｇを得た。
【００４１】
該白色粉末物質は４ＤＯＢＰ−６，８（Ｂｒ）の中間体である４，４’−（１，８−ジヒドロキシオクタメチレン）ジピリジン（以下４ＤＯＢＰ−６と略す）と考えられ、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果からピリジン環のプロトンが７．８１〜７．８０ｐｐｍ（ｄ）と６．４５〜６．４３ｐｐｍ（ｄ）に、酸素に結合するメチレンプロトンは３．９９〜３．９６ｐｐｍ（ｔ）に、酸素原子間のその他のアルキレンプロトンは１．８０ｐｐｍ（ｍ）と１．３６ｐｐｍ（ｍ）に現れ、それぞれの積分値も一致した。４ＤＯＢＰ−６の元素分析結果は次の通りであった。測定値（理論値）はＣ：７０．４８％（７０．５９％）、Ｈ：７．２８％（７．３５％）、Ｎ：１０．３０％（１０．２９％）であり、いずれも０．２％以内の誤差範囲であった。なお、４ＤＯＢＰ−６の収率は４−ヒドロキシピリジンに対し８１．２５％であった。
【００４２】
実施例９＜４ＤＯＢＰ−６の四級化＞
実施例１において、４ＤＯＢＰ−２の９９．３６ｇ（０．４６モル）の代わりに４ＤＯＢＰ−６の１１０．５０ｇ（０．４１モル）を用いた他は実施例１と同様に処理して淡黄色粉末状物質２４０．２１ｇが得られた。
【００４３】
該淡黄色粉末状物質は４ＤＯＢＰ−６，８（Ｂｒ）と考えられ、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果からピリジン環のプロトンが８．８０〜８．７８ｐｐｍ（ｍ）と７．５３〜７．５１ｐｐｍ（ｍ）に、酸素に結合するメチレンプロトンは４．５１〜４．４７ｐｐｍ（ｔ）に、その他のアルキレンプロトンは２．００〜１．８５ｐｐｍ（ｍ）に、窒素に直結するメチレンプロトンは５．５８〜５．３５ｐｐｍ（ｔ）に、アルキル基の末端プロトンは０．９２〜０．８９ｐｐｍ（ｔ）に、その他の窒素直結アルキレンプロトンは１．５２〜１．３１ｐｐｍ（ｍ）に現れ、それぞれの積分値も一致した。４ＤＯＢＰ−６，８（Ｂｒ）の元素分析結果は次の通りであった。測定値（理論値）はＣ：５０．８６％（５１．０６％）、Ｈ：６．９８％（７．１８％）、Ｎ：３．６７％（３．７２％）であり、いずれも０．２％以内の誤差範囲であった。なお、４ＤＯＢＰ−６，８（Ｂｒ）のｍｐは１２３．０〜１２４．０℃、収率は４−ヒドロキシピリジンに対し７３．０３％であった。以上の分析結果から４ＤＯＢＰ−６，８（Ｂｒ）の構造は下記の通りであることが確認された。
【００４４】
2004345953.tif 000014
【００４５】
試験例１＜本発明の化合物（１）の各種細菌に対する静菌活性＞
本発明の化合物（１）として実施例２で得られた４ＤＯＢＰ−２，８（Ｂｒ）、実施例４で得られた４ＤＯＢＰ−４，８（Ｂｒ）および実施例７で得られた４ＤＯＢＰ−２Ａ−２，８（Ｂｒ）を用いた。対照化合物には塩化ベンザルコニウムを用いて最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を測定した。
【００４６】
最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の測定は一般的なブロス希釈法に従い、ニュトリエントブロスを用いて、菌懸濁濃度が１０６ｃｅｌｌ／ｍｌになるように調整した定常期状態の菌液を段階希釈した薬剤溶液と混合し、３７℃、２４時間静置培養後、増殖の有無によりＭＩＣ値を決定した。
【００４７】
供試菌としてグラム陰性菌１０種およびグラム陽性菌６種を用いた。その結果を表１に示す。
【００４８】
2004345953.tif 000015
【００４９】
試験例２＜本発明の化合物（１）の各種細菌に対する殺菌活性（ＭＢＣ）＞
本発明の化合物の例として、４ＤＯＢＰ−２，８（Ｂｒ）、４ＤＯＢＰ−４，８（Ｂｒ）および４ＤＯＢＰ−２Ａ−２，８（Ｂｒ）を用いた。対照化合物にはヨウ化ベンザルコニウムを用いた。
【００５０】
供試菌としてグラム陰性菌５種およびグラム陽性菌４種を用い、前記と同様にして最小殺菌濃度（ＭＢＣ）を測定した。その結果を表２に示す。
【００５１】
2004345953.tif 000016
【００５２】
試験例３＜真菌に対する最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の測定＞
本発明の化合物（１）の例として、４ＤＯＢＰ−２，８（Ｂｒ）、４ＤＯＢＰ−４，８（Ｂｒ）および４ＤＯＢＰ−２Ａ−２，８（Ｂｒ）を用いた。対照化合物にはＴＢＺ（２−（４’−チアゾリル）ベンズイミダゾール）を用いた。
【００５３】
最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の測定は、一般的なブロス希釈法に従い、サブロー培地を用い、前培養した供試菌を湿潤剤添加殺菌水で胞子液を調製した。希釈薬剤溶液１ｍｌと胞子液１ｍｌを混合し、インキュベーダー中で３０℃、１週間培養後、増殖の有無を濁度で判定し、濁度を生じていないところをＭＩＣとした。その結果を表３に示す。
【００５４】
2004345953.tif 000017
【００５５】
【発明の効果】
本発明の抗菌活性を有する新規なビス第四級アンモニウム塩化合物は、上記試験例からも明らかなように、既知の第四級アンモニウム塩化合物に比べて、極めて優れた殺菌効果と広い抗菌スペクトルを示し、かつ安全性も高い。