(57)【要約】【課題】角質細胞の標本作製において、採取したときの状態が保存され、採取された角質細胞において裏表の混在が無く、角質細胞の立体形状を観察できる標本、この標本を用いる角質細胞の観察方法、及び前記標本の作製手段を提供する。【解決手段】支持体と、支持体に支持され皮膚から角質細胞を採取する粘着性を有し水系媒体によって膨潤して軟化する高分子化合物を含有する水軟化性粘着剤とを有する角質細胞採取用具を用い、この角質細胞採取用具の水軟化性粘着剤側の面を皮膚に貼り付けて圧着し、圧着した角質細胞採取用具を皮膚から剥離し、剥離した角質細胞採取用具の水軟化性粘着剤を水系媒体によって膨潤させて軟化し、軟化した水軟化性粘着剤に接着している角質細胞を転写体に転写することによって角質細胞標本を得る。【選択図】          図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
支持体と、この支持体に支持され皮膚から角質細胞を採取する粘着性を有する粘着剤とを有する角質細胞採取用具において、
前記粘着剤は、水系媒体によって膨潤して軟化する高分子化合物を含有する水軟化性粘着剤であることを特徴とする角質細胞採取用具。
【請求項２】
ディスク状であることを特徴とする請求項１に記載の角質細胞採取用具。
【請求項３】
水系媒体を通すための切れ目及び孔の何れか一方又は両方を前記支持体に有することを特徴とする請求項１又は２に記載の角質細胞採取用具。
【請求項４】
前記水軟化性粘着剤は、架橋構造を有する前記高分子化合物を含有することを特徴とする請求項１〜３の何れか一項に記載の角質細胞採取用具。
【請求項５】
前記水軟化性粘着剤は、架橋型ポリビニルアルコール系粘着剤及び架橋型ポリアクリル酸エステル系粘着剤の何れか一方又は両方を含有することを特徴とする請求項１〜４の何れか一項に記載の角質細胞採取用具。
【請求項６】
前記支持体が支持する前記水軟化性粘着剤に対して着脱自在に接着される被覆保護体を有することを特徴とする請求項１〜５の何れか一項に記載の角質細胞採取用具。
【請求項７】
前記被覆保護体は、前記水軟化性粘着剤に接する面がシリコーン処理されている被覆保護体であることを特徴とする請求項６に記載の角質細胞採取用具。
【請求項８】
請求項１〜７の何れか一項に記載の角質細胞採取用具を用いて角質細胞を採取する方法であって、
前記角質細胞採取用具の前記水軟化性粘着剤側の面を皮膚に貼り付けて圧着し、圧着した角質細胞採取用具を皮膚から剥離し、剥離した角質細胞採取用具の水軟化性粘着剤を水系媒体によって膨潤させて軟化し、軟化した水軟化性粘着剤に接着している角質細胞を転写体に転写することによって角質細胞を採取する、角質細胞の採取方法。
【請求項９】
転写体と、この転写体に転写された角質細胞とを有する角質細胞標本において、
請求項１〜７の何れか一項に記載の角質細胞採取用具の前記水軟化性粘着剤側の面を皮膚に貼り付けて圧着し、圧着した角質細胞採取用具を皮膚から剥離し、剥離した角質細胞採取用具の水軟化性粘着剤を水系媒体によって膨潤させて軟化し、軟化した水軟化性粘着剤に接着している角質細胞を転写体に転写することによって得られる角質細胞標本。
【請求項１０】
前記転写体がガラス板であることを特徴とする請求項９に記載の角質細胞標本。
【請求項１１】
転写体に転写された角質細胞を観察する角質細胞の観察方法において、
請求項１〜７の何れか一項に記載の角質細胞採取用具の前記水軟化性粘着剤側の面を皮膚に貼り付けて圧着し、圧着した角質細胞採取用具を皮膚から剥離し、剥離した角質細胞採取用具の水軟化性粘着剤を水系媒体によって膨潤させて軟化し、軟化した水軟化性粘着剤に接着している角質細胞を転写体に転写することによって得られた角質細胞標本の角質細胞を観察することを特徴とする角質細胞の観察方法。
【請求項１２】
角質細胞の採取前に空気に接触していた面の形状を観察することを特徴とする請求項１１に記載の角質細胞の観察方法。
【請求項１３】
角質細胞の転写体上における立体形状を観察することを特徴とする請求項１１に記載の角質細胞の観察方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、皮膚の性状或いは特性の鑑別に有用な角質細胞標本及び角質細胞の観察方法、及び前記角質細胞標本作製の為の角質細胞採取用具及び角質細胞の採取方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
角質細胞が、皮膚の性状或いは特性を鑑別する為の有用なツールであることは既に知られている。前記鑑別の指標としては、例えば、重層剥離の有無、程度といった角質細胞の採取された時の状況、有核細胞が存するか否かの角質細胞の性状、角質細胞の投影面積等が知られている。このような鑑別の指標により、敏感肌か否か、脂性肌か乾性肌か等の種々の状況が判定できることが知られている。このような指標の中では、角質細胞の投影面積が特に重要なファクターであると考えられている（例えば、特許文献１〜９参照。）。
【０００３】
また、このような研究が発展して行くに従って、ファクターとしては、従来用いていた面積よりは、体積等の立体的な形状に関するものがより重要なものであることが、最近の研究ではわかってきている（例えば、特許文献１０及び１１参照）。
【０００４】
しかるに、かかる立体形状を計測する為には、１個１個の角質細胞を粘着剤の拘束なしにガラス板等の転写体上に採取することが必要となる。転写体上に角質細胞を採取することができる技術として現在までに知られている技術としては、例えば、水溶性の粘着性高分子で角質細胞を捕捉、採取し、しかる後に、水系媒体で前記高分子を洗い流し濾紙で細胞を採取する方法（例えば、特許文献１２参照。）、或いは、溶媒による細胞の多少の形状の変化を犠牲にして、粘着テープを用いて角質細胞を採取し、溶剤で粘着剤を溶解し角質細胞を採取する方法（例えば、特許文献１０及び１１参照。）が知られている。
【０００５】
水溶性の粘着性高分子を用いて角質細胞を採取する従来の方法では、採取した角質細胞はバラバラになり、皮膚に存在していたときの角質細胞の状態の保存や裏表の区別は全く出来なくなり、角質細胞の採取の間に多くの情報が失われるとともに、このように採取された角質細胞を指標として皮膚を鑑別したときの確度も低下してしまわざるを得なかった。
【０００６】
角質細胞は、図４及び５に示すように、空気側に向いた面と組織側に向いた面ではその形状は大きく異なる。肌特性の正確な鑑別を行う為には、肌特性に対してより相関の高い、空気側に向いた面の観察も重要な要素となる。又、図６及び７に示すように、皮膚上での角質細胞の存在形態は、皮膚特性を良く反映している。どのような細胞がどのように存在していたかも、皮膚特性を知る上での重要な情報となる。
【０００７】
粘着テープを用い、溶剤で粘着剤を溶解して角質細胞を採取する従来の方法では、皮膚に存在していたときの角質細胞の表裏の向きが保たれた状態で角質細胞を採取することが可能である。しかしながら前述した方法では、前記溶剤によって角質細胞が変形しやすく、皮膚に存在していたときの立体的な形状が保存された状態で角質細胞を採取することは困難であった。
【０００８】
したがって、採取されたときの状態が保存され、裏表の混在が無く、立体形状を観察できる角質細胞標本の作製手段の開発が望まれていた。
【０００９】
一方、支持体上に水軟化性粘着剤を塗布してなる角質細胞採取用具は全く知られていないし、前記角質細胞採取用具を用いて、角質細胞採取用具の水軟化性粘着剤を塗布した面を皮膚に圧着し、剥離し、しかる後、水を加えて水軟化性粘着材を軟化させた後、ガラス板等の転写体に角質細胞を転写して作製した角質細胞標本が、採取されたときの状態の角質細胞の立体形状を観察できる標本となることも全く知られていなかった。
【００１０】
【特許文献１】
特開２００１−１３１３８号公報
【特許文献２】
特開２０００−２１２０３８号公報
【特許文献３】
特開２０００−２１２０３７号公報
【特許文献４】
特開２０００−２１２０３６号公報
【特許文献５】
特開２０００−２１２０３４号公報
【特許文献６】
特開２０００−２０４０１８号公報
【特許文献７】
特開２０００−１１６６２３号公報
【特許文献８】
特開平１１−３０４７９２号公報
【特許文献９】
特開平１０−１４２２２４号公報
【特許文献１０】
特開２００１−１１６７４５号公報
【特許文献１１】
特開２００１−１０８６７４号公報
【特許文献１２】
特開平９−８４７９６号公報
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、このような状況下で為されたものであり、角質細胞の標本作製において、採取したときの状態が保存され、採取された角質細胞において裏表の混在が無く、角質細胞の立体形状を観察できる標本、この標本を用いる角質細胞の観察方法、及び前記標本の作製手段を提供することを課題とする。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、このような状況に鑑みて、角質細胞の標本作製において、採取したときの状態が保存され、採取された角質細胞の裏表の混在が無く、角質細胞の立体形状を観察できる標本の作製手段を求めて鋭意研究努力を重ねた結果、支持体上に水軟化性粘着剤を有する角質細胞採取用具を作製し、前記角質細胞採取用具を用いて、角質細胞採取用具の粘着性高分子塗工面を皮膚に圧着し、剥離し、しかる後、水を加えて水軟化性粘着高分子を軟化させた後、ガラス板等の転写体に角質細胞を転写して、角質細胞標本を作成すると、採取したときの状態で裏表の混在無く角質細胞の立体形状を観察できる角質細胞標本となることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１３】
即ち、本発明は、以下に示す技術に関するものである。
（１）  支持体と、この支持体に支持され皮膚から角質細胞を採取する粘着性を有する粘着剤とを有する角質細胞採取用具において、粘着剤は、水系媒体によって膨潤して軟化する高分子化合物を含有する水軟化性粘着剤であることを特徴とする角質細胞採取用具。
（２）  ディスク状であることを特徴とする（１）に記載の角質細胞採取用具。
（３）  水系媒体を通すための切れ目及び孔の何れか一方又は両方を支持体に有することを特徴とする（１）又は（２）に記載の角質細胞採取用具。
（４）  水軟化性粘着剤は、架橋構造を有する高分子化合物を含有することを特徴とする（１）〜（３）の何れか一つに記載の角質細胞採取用具。
（５）  水軟化性粘着剤は、架橋型ポリビニルアルコール系粘着剤及び架橋型ポリアクリル酸エステル系粘着剤の何れか一方又は両方を含有することを特徴とする（１）〜（４）の何れか一つに記載の角質細胞採取用具。
（６）  支持体が支持する前記水軟化性粘着剤に対して着脱自在に接着される被覆保護体を有することを特徴とする（１）〜（５）の何れか一つに記載の角質細胞採取用具。
（７）  被覆保護体は、水軟化性粘着剤に接する面がシリコーン処理されている被覆保護体であることを特徴とする（６）に記載の角質細胞採取用具。
（８）  （１）〜（７）の何れか一つに記載の角質細胞採取用具を用いて角質細胞を採取する方法であって、角質細胞採取用具の水軟化性粘着剤側の面を皮膚に貼り付けて圧着し、圧着した角質細胞採取用具を皮膚から剥離し、剥離した角質細胞採取用具の水軟化性粘着剤を水系媒体によって膨潤させて軟化し、軟化した水軟化性粘着剤に接着している角質細胞を転写体に転写することによって角質細胞を採取する、角質細胞の採取方法。
（９）  転写体と、この転写体に転写された角質細胞とを有する角質細胞標本において、（１）〜（７）の何れか一つに記載の角質細胞採取用具の水軟化性粘着側の面を皮膚に貼り付けて圧着し、圧着した角質細胞採取用具を皮膚から剥離し、剥離した角質細胞採取用具の水軟化性粘着剤を水系媒体によって膨潤させて軟化し、軟化した水軟化性粘着剤に接着している角質細胞を転写体に転写することによって得られる角質細胞標本。
（１０）  転写体がガラス板であることを特徴とする（９）に記載の角質細胞標本。
（１１）  転写体に転写された角質細胞を観察する角質細胞の観察方法において、（１）〜（７）の何れか一つに記載の角質細胞採取用具の水軟化性粘着剤側の面を皮膚に貼り付けて圧着し、圧着した角質細胞採取用具を皮膚から剥離し、剥離した角質細胞採取用具の水軟化性粘着剤を水系媒体によって膨潤させて軟化し、軟化した水軟化性粘着剤に接着している角質細胞を転写体に転写することによって得られた角質細胞標本の角質細胞を観察することを特徴とする角質細胞の観察方法。
（１２）  角質細胞標本の角質細胞の表面形状を観察することを特徴とする（１１）に記載の角質細胞の観察方法。
（１３）  角質細胞標本の角質細胞の立体形状を観察することを特徴とする（１１）に記載の角質細胞の観察方法。
【００１４】
【発明の実施の形態】
（１）本発明の角質細胞採取用具
本発明の角質細胞採取用具は、その形態については特に限定されないが、好ましくはテープ状又はディスク状の形態を取り、より好ましくはディスク状の形態を取る。
【００１５】
本発明の角質細胞採取用具は、支持体と、この支持体に支持され皮膚から角質細胞を採取する粘着性を有する粘着剤とを有し、前記粘着剤は、水系媒体によって膨潤して軟化する高分子化合物を含有する水軟化性粘着剤であることを特徴とする。
【００１６】
ここで、前記水軟化性粘着剤とは、通常は角質細胞を採取可能な粘着力を有し、水又は水溶性成分の水溶液等の水系媒体の存在下、前記水系媒体を吸収して膨潤するものの、水系媒体に溶出せず、又は水系媒体に一様に可溶化或いは分散しない性質を有する粘着剤を意味する。このような水軟化性粘着剤を用いると、例えば水系媒体により膨潤して軟化した粘着剤層の上にある角質細胞を転写体に転写することによって、採取時の状態が保存された角質細胞を採取することが可能である。
【００１７】
前記水軟化性粘着剤は、水系媒体の吸収前後に関わらず、採取した角質細胞を保持できる粘着力を有するが、水系媒体の吸収後では、採取した角質細胞をガラス板等の転写体に転写可能な程度に粘着力が低下する粘着特性を有することが、採取された角質細胞の立体形状を観察できる角質細胞標本を作製する上で好ましい。
【００１８】
前記水軟化性粘着剤は、前述したような性質を有していれば特に組成上の限定を受けない。前述したような性質を有する水軟化性粘着剤は、前述したような性質を有する一種又は二種以上の高分子化合物、及び必要に応じて添加される多価アルコール等の添加剤を含有する組成物によって構成することが可能である。前記水軟化性粘着剤としては、例えばアクリル系、ゴム系等の親油性高分子にポリアクリル酸やカルボキシメチルセルロース等の水溶性高分子や多価アルコール等を配合した組成物、ポリビニルアルコール等の親水性高分子に多価アルコール等の水溶性可塑剤を配合して架橋した組成物、ポリオールを原料としてポリオールの親水性を利用したポリウレタン系粘着剤等が挙げられる。
【００１９】
前記水軟化性粘着剤は、架橋構造を有する高分子化合物を含有することが、粘着特性と吸水性のバランスを容易に制御する上で好ましい。このような架橋構造を有する高分子化合物としては、例えば架橋型ポリビニルアルコール系粘着剤や架橋型ポリアクリル酸エステル系粘着剤等が挙げられ、カルボキシル基やアミノ基、水酸基等の親水性基を有する重合性単量体と（メタ）アクリル酸エステルとの共重合体を架橋したものが好ましく、カルボキシル基を有するビニル系単量体とアクリル酸エステルとの共重合体をイソシアナート系、エポキシ系、アルミキレート系、アジリジン系等の架橋剤を用いて架橋したものが特に好適である。
【００２０】
前記水軟化性粘着剤の粘着力は、前述した高分子化合物の種類や、高分子化合物と併用することができる多価アルコール等の各種添加剤の種類や配合量等によって調整することが可能である。また、カルボキシル基を有する水軟化性粘着剤の吸水性は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリエタノールアミン等の塩基性物質を添加したり、また、界面活性剤等を添加することによって調整することが可能である。
【００２１】
前記支持体に支持されている前記水軟化性粘着剤の膜の厚さは、１０μｍ以上であることが好ましく、２０〜１００μｍであることが特に好ましい。前記水軟化性粘着剤の膜の厚さが１０μｍより薄いと角質細胞に対して十分な密着性が得られないことがあり、角質細胞の採取が疎らになる不具合を生じることがある。
【００２２】
前記支持体の材料としては、ポリエチレンテレフタレート等のポリエステル、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ナイロン、ビニロン、ポリオレフィン等の樹脂、紙、及び金属等が好ましく例示でき、ポリエチレンテレフタレートが特に好適に例示できる。
【００２３】
また、前記支持体の形態は、特に限定されないが、角質細胞の採取時に皮膚に一様の圧力で圧着させることが重要なことから、形状維持性のある薄板の形態であることがより好ましい。前記支持体は厚さ２０〜１００μｍ程度に加工されている支持体であることが、皮膚に圧着した時に適度に変形して水軟化性粘着剤の皮膚への密着率を向上させる上で好ましい。
【００２４】
また、前記支持体の形状は、特段の限定はないが、一定の圧力で一様に皮膚に前記水軟化性粘着剤を密着させる上でディスク状であることが好ましい。前記支持体の形状がディスク状である場合では、前記ディスク状の直径は、前記の観点から１０〜３０ｍｍが好ましい。
【００２５】
また、前記支持体としてフィルムを用いる場合は、前記水系媒体を通す切れ込みや開口部を有することが、角質細胞採取後、角質細胞の転写体への転写工程において水軟化性粘着剤を水系媒体で素早く軟化させる上で好ましい。このような切れ込みや開口部としては、例えば切れ目や孔等が挙げられる。
【００２６】
前記支持体に設けられる切れ込み等の数は、特に限定されず、設けられる切れ込み等の形態や支持体の大きさ、前記高分子化合物の吸水性等に応じて適宜設定することができる。例えば支持体に設けられる切れ込みの数としては、４〜３２が、水軟化性粘着剤の水系媒体による軟化の促進、及び角質細胞の適切な採取効率を維持する上で好ましい。
【００２７】
特に好ましい支持体の形態は、直径１０〜３０ｍｍの円形に形成され、円の中心に対して放射状に延びる線上にある切れ目であって、中心及び円周まで至らない切れ目を６〜１０本有するポリエチレンテレフタレートのディスクである。前記切れ目が支持体の中心で交差すると、角質細胞の採取効率が損なわれる場合がある。
【００２８】
また、前記支持体は、角質細胞の採取時等における角質細胞採取用具の取り扱いを容易にする上で、支持体の周縁に設けられる、ハンドリングのための耳を有することが好ましい。
【００２９】
本発明の角質細胞採取用具は、前記支持体に水軟化性粘着剤を支持させることによって形成される。前記支持させる方法としては、通常粘着テープ等を作製するときに用いられる方法、又はそれに準じて行うことが出来る。前記支持させる方法としては、例えば、前記水軟化性粘着剤の溶液を前記支持体に直接噴霧して乾燥させる方法、水軟化性粘着剤又はその溶液をドクターブレード等で塗布して乾燥させる方法、シリコーン類をコートした被覆保護体のように表面がシリコーン等の離型性に優れる材質で形成されている被覆保護体上に、水軟化性粘着剤又はその溶液を噴霧或いはドクターブレード等で塗布して乾燥させ、しかる後に被覆保護体と支持体とを貼り合わせ、水軟化性粘着剤を被覆保護体から支持体へと転写する方法等が好適に例示できる。特に好ましいのは、被覆保護体に塗布された水軟化性粘着剤を被覆保護体から支持体へ水軟化性粘着剤を転写する方法である。
【００３０】
本発明の角質細胞採取用具は、保管性及び取り扱い性の点から、完成品の一形態として、前記支持体が支持する前記水軟化性粘着剤に対して着脱自在に接着される被覆保護体を有することが好ましい。前記被覆保護体は、水軟化性粘着剤に接する面が水軟化性粘着剤に対して着脱自在な材質で構成されていれば、その材質や形態等は特に限定されない。このような被覆保護体としては、水軟化性粘着剤に接する面がシリコーン処理されている形態が挙げられ、シリコーン薄膜で基体をコートし、水軟化性粘着剤に接する面がシリコーン薄膜で形成されている形態が好ましい。前記基体としては、例えばポリラミ紙や、ポリエチレンテレフタレート等の樹脂で形成されたシートが好ましい。
【００３１】
なお、前記支持体は、角質細胞の採取位置や採取された角質細胞の有無の確認等を行う上で、透明な材質で形成されていることが好ましい。前記被覆保護体は、このような支持体を用いたときに、採取時に被覆保護体の有無を確認する上で、紙等の不透明な材質を含む被覆保護体であることが好ましい。
【００３２】
（２）本発明の角質細胞の採取方法
本発明の角質細胞の採取方法は、前記本発明の角質細胞採取用具を用いて角質細胞を採取する方法であって、角質細胞採取用具の水軟化性粘着剤側の面を皮膚に貼り付けて皮膚に圧着し、圧着した角質細胞採取用具を皮膚から剥離し、剥離した角質細胞採取用具の水軟化性粘着剤を水系媒体によって膨潤させて軟化し、軟化した水軟化性粘着剤に接着している角質細胞を転写体に転写することによって角質細胞を採取することを特徴とする。
【００３３】
本発明の角質細胞の採取方法によれば、皮膚の表面にある角質細胞が、角質細胞の空気に接触していた面側が水軟化性粘着剤に接着された状態で皮膚から採取され、水系媒体による水軟化性粘着剤の軟化後における転写体への角質細胞の転写では、角質細胞における真皮側の面が転写体に接して転写体上に転写される。したがって、角質細胞は、水軟化性粘着剤が接触した領域の皮膚の表面にあった状態と同じ状態で、空気に接触していた面を上方（外側）にして、転写体上に転写される。
【００３４】
水軟化性粘着剤を水系媒体によって膨潤させ軟化させる方法は、特に限定されない。水軟化性粘着剤の膨潤させ軟化させる方法としては、例えば角質細胞採取用具を水系媒体に浸漬する方法が好適に挙げられる。また、水系媒体の組成や温度等の条件は、特に限定されず、水軟化性粘着剤の種類等に応じて適宜設定される。
【００３５】
軟化した水軟化性粘着剤から転写体に角質細胞を転写する方法は、従来技術において通常行われる、粘着テープに採取した角質細胞を転写体に転写する方法、又はこの方法に準じて行うことができる。このような方法としては、例えば、皮膚から剥離した角質細胞採取用具をガラス板等の転写体に貼り付け、これを適当な時間（例えば４時間程度）水に浸漬し、その後、角質細胞採取用具を転写体から静かに剥離する方法が挙げられる。この方法では、角質細胞採取用具の水への浸漬と、角質細胞採取用具の転写体への貼り付けとの順序は逆であっても良い。このような方法によれば、転写材の表面に角質細胞が採取時の状態で転写される。
【００３６】
前記転写体は、軟化した水軟化性粘着剤から角質細胞が転写できるものであれば特に限定されない。転写体は、転写された角質細胞をそのまま観察できるものであることが、角質細胞の観察を容易に行う上で、また転写した角質細胞の状態を保存する上で好ましい。このような転写体としては、例えばプレパラートを作製するためのガラス板等の光透過性を有する板状部材が挙げられる。
【００３７】
かくして、本発明の角質細胞の採取方法では、支持体における水軟化性粘着剤の塗布面を皮膚に圧着し、剥離し、しかる後、水等の水系媒体を加えて水軟化性粘着剤を軟化させた後、ガラス板等の転写体に角質細胞を転写することにより、転写体上に、皮膚に存在していたときの形態を維持しながら、角質細胞の立体構造がわかるような状態で、角質細胞を採取することが可能である。
【００３８】
（３）本発明の角質細胞標本
本発明の角質細胞標本は、前記転写体と、この転写体に転写された角質細胞とを有し、前記本発明の角質細胞採取用具、好ましくはディスク状の角質細胞採取用具を用いて、前記角質細胞採取用具の前記水軟化性粘着剤面側を皮膚に貼り付けて圧着し、圧着した角質細胞採取用具を皮膚から剥離し、剥離した角質細胞採取用具の水軟化性粘着剤を水系媒体によって膨潤させて軟化し、軟化した水軟化性粘着剤に接着している角質細胞を転写体に転写することによって作製される標本である。
【００３９】
本発明の角質細胞標本は、前述した本発明の角質細胞の採取方法の説明から明らかなように、皮膚に存在した形態を維持しながら、角質細胞の立体構造がわかるような状態の角質細胞を有する。したがって、皮膚に存在していた状態の角質細胞の立体形状の観察や角層の観察に用いることができる。本発明の角質細胞標本には、転写体上の角質細胞に、染色剤やモノクローナル抗体等による染色等の、その後の観察に有用な処理を行った標本も含まれる。
【００４０】
（４）本発明の角質細胞の観察方法
本発明の角質細胞の観察方法は、前記本発明の角質細胞標本の角質細胞を観察する方法である。前記角質細胞標本は、皮膚に存在した形態を維持しながら、角質細胞の立体構造がわかるような状態の角質細胞を有することから、本発明の角質細胞の観察方法によれば、皮膚に存在していた状態と同じ配置の角質細胞や角層を観察することができる。
【００４１】
本発明の角質細胞の観察方法では、一つ一つの角質細胞を観察することもできるが、複数の角質細胞の配置や、角質細胞の立体的な特性等のように、角質細胞が皮膚に存在していた状態が反映されるような角質細胞の観察を行うことが好ましい。
【００４２】
前記角質細胞標本は、水軟化性粘着剤が接触した領域の皮膚の表面にあった角質細胞がその状態を維持したまま転写されていることから、角質細胞標本の角質細胞は、前記領域の皮膚の表面を表す。したがって、本発明の角質細胞の観察方法では、角質細胞標本の角質細胞の表面形状を観察すると、角質細胞の採取部位の皮膚の表面形状を標本から観察することができる。
【００４３】
また、前記角質細胞標本は、角質細胞における空気に接触していた面を上方（空気側）にし、角質細胞における真皮側の面を下方（転写体側）とする角質細胞を有することから、角質細胞標本の角質細胞は、前記領域の皮膚の表面の角層の立体構造を表す。したがって、本発明の角質細胞の観察方法では、皮膚表面の観察では通常見ることができない、角質細胞標本の角質細胞における下方（転写タイ側）の形状や、側方の形状や、断面形状等の立体形状を観察すると、角質細胞の採取部位の皮膚表面の、表面側以外の方向から見た形状を標本から観察することができる。
【００４４】
特に、この様に存在状態をコントロールした形態で、採取された角質細胞が立体的に観察できる標本については知られていないので、本発明の角質細胞の観察方法では、その様な立体形態を観察することが好ましい。
【００４５】
本発明の角質細胞の観察方法は、角質細胞標本や皮膚の観察に通常知られている手段によって行うことが可能である。このような手段としては、例えば、光学顕微鏡、ビデオマイクロスコープ、原子間力顕微鏡、走査型電子顕微鏡等が好適に例示できる。
【００４６】
本発明の角質細胞の観察方法によれば、皮膚に存在していた状態の角質細胞（角層）の様子が観察されることから、角質細胞が採取された皮膚の状態や特性を鑑別することが可能となる。このような皮膚の鑑別としては、例えば、重層剥離の程度、形態或いは状態、アトピー性皮膚炎等で顕著な変化が起こる角質細胞の上面形状、及び皮膚のバリア機能や感受性等が挙げられる。このような皮膚の鑑別には、公知の鑑別法を利用することができる。また、このような皮膚の鑑別によれば、使用する化粧料の適否や、美容のための皮膚の状態のチェック等の、美容のための皮膚の鑑別を行うことができる。
【００４７】
【実施例】
以下に、実施例を挙げて、本発明について、更に詳細に説明を加えるが、本発明がかかる実施例にのみ限定されないことは言うまでもない。
【００４８】
＜実施例１＞
次に示す工程に従って、図１に示す、本発明の角質細胞採取用のディスク１を作製した。
【００４９】
アクリル酸−２−エチルヘキシル５０重量部、アクリル酸ブチル４５重量部、アクリル酸５重量部を酢酸エチル１５０ｇに溶解し、２，２’−アゾビスイソブチロニトリルを０．５ｇ添加した後、窒素雰囲気下６０℃で２４時間重合を行った。次に、水酸化カリウム２．７ｇを含むメタノール溶液を添加攪拌して、アクリル酸が部分中和されたアクリル酸エステル共重合体溶液を調製した。次に、このアクリル酸エステル共重合体溶液（固形分４０％）１００重量部に対して、エポキシ系架橋剤である三菱ガス化学社製Ｅ−ＡＸを０．０２５部添加攪拌して水軟化性粘着剤を作製した。得られた水軟化性粘着剤を、厚さが５０μｍの透明ポリエステルフィルム上に乾燥後の厚みが３０μｍとなるように塗布乾燥し、シリコーン処理した、厚さが５０μｍの白色ポリエステルフィルムを貼合した。次に、ポンチを用いて、直径２０ｍｍの円形の円周の一部から突出する耳を有する形状に打ち抜いて、角質細胞採取用ディスク（ディスク１）を作製した。
【００５０】
＜実施例２＞
実施例１の角質細胞採取用のディスク１に、図２に示すように、直径２０ｍｍの円形において、中心及び円周部を残して中心に対して放射状に延びる８本の切れ込みを入れて、本発明の角質細胞採取用のディスク２とした。
【００５１】
＜試験例１＞
実施例１、２のディスク１、２を用いて、角質細胞の採取とガラス板への転写を試験した。シリコーン処理した白色ポリエステルフィルムを剥がして、水軟化性粘着剤面が皮膚に接するようにしてパネラーの頬部に約１分間、ディスク全面が接触するようにディスクを圧着し、速やかに剥離した。しかる後に、一定時間、水系媒体としての蒸留水中に浸漬し、蒸留水に浸漬したディスクをガラス板に被せて、ディスクに採取された角質細胞をガラス板に転写させ、これにガラス板をさらに被せてプレパラートを作製した。ディスクとプレパラートの角質細胞を光学顕微鏡で観察し、それぞれに存在する細胞数を計数し、浸漬時間と角質細胞のガラス板への転写率を求めた。結果を表１に示す。
【００５２】
【表１】
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【００５３】
これより、前記ディスクとしては、切れ目を有するものの方が好ましいことがわかる。又、浸漬２時間の条件でディスク２からガラス板上に転写して作製した角質細胞標本の原子間力顕微鏡での観察図を図３に示す。これより、本発明の角質細胞標本が角層の観察に好適なものであることがわかる。
【００５４】
【発明の効果】
本発明によれば、角質細胞の標本作製において、採取したときの状態で裏表の混在無く角質細胞の立体的に観察できる角質細胞標本、その作製手段及び作製方法、及び角質細胞の観察方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の角質細胞採取用具の一実施例であるディスク１の構造を示す斜視図である。
【図２】本発明の角質細胞採取用具の一実施例であるディスク２の構造を示す斜視図である。
【図３】ディスク２から転写された角質細胞を有する角質細胞標本の角質細胞を、角質細胞の空気接触面側から表した原子間力顕微鏡写真である。
【図４】粘着テープを用い、溶剤で粘着剤を溶解して角質細胞を採取する従来の方法によって採取した、アトピー性皮膚炎患者の湿疹部及び無疹部の角質細胞を、空気接触面側から表した光学顕微鏡写真である。
【図５】粘着テープを用い、溶剤で粘着剤を溶解して角質細胞を採取する従来の方法によって採取した、アトピー性皮膚炎患者の湿疹部及び無疹部の角質細胞を、真皮側から表した光学顕微鏡写真である。
【図６】粘着テープを用い、溶剤で粘着剤を溶解して角質細胞を採取する従来の方法によって採取した、アトピー性皮膚炎患者の湿疹部の角質細胞を、空気接触面側から表した電子顕微鏡写真である。
【図７】粘着テープを用い、溶剤で粘着剤を溶解して角質細胞を採取する従来の方法によって採取した、健常者の角質細胞を、真皮側から表した電子顕微鏡写真である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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