(57)【要約】  【課題】  適正な評価方法に基づく抗血栓性食品の評価結果を、一目瞭然に食品に表示する方法を提供すること。  【解決手段】  抗血栓性評価として、抗凝固剤を加えない血液を用いたGorog Thrombosis Testによるin vitro評価、次いで実施されるHe-Neレーザー惹起全血血栓形成・溶解システムによるin vivo評価を組み合わせた評価方法が好ましい。その評価結果に基づく本発明による方法の表示は、選別の際、判りやすく、表示された抗血栓性食品の付加価値を高めることができる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
食品から得られる食品搾汁液・抽出液の抗血栓活性強度を測定し、この活性強度に基づいた抗血栓性評価に関する情報を、
(i)その食品またはその容器もしくは包装に付して示す、
(ii)その食品の宣伝・広告などに示す、または
(iii)上記(i)および(ii)の両方を行なう
ことを特徴とする抗血栓性食品の表示方法。
【請求項２】
食品から得られる食品搾汁液・抽出液中に含まれる抗血栓性成分の含有量を定量し、この含有量に基づいた抗血栓性評価に関する情報を、
(i)その食品またはその容器もしくは包装に付して示す、
(ii)その食品の宣伝・広告などに示す、または
(iii)上記(i)および(ii)の両方を行なう
ことを特徴とする抗血栓性食品の表示方法。
【請求項３】
上記の抗血栓性評価が、抗凝固剤を含まない血液と食品搾汁液・抽出液とを用いて、Go
rog Thrombosis Testによるin vitro評価、次いでHe-Neレーザー惹起血栓形成システムによるin vivo評価で行われることを特徴とする、請求項1または２のいずれかに記載の表示方法。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の方法により表示された食品またはその加工食品。
【請求項５】
請求項４に記載の食品が穀物、野菜または果物であることを特徴とする食品またはその加工食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗血栓性食品の表示方法に関する。詳しくは、食品の抗血栓活性強度に応じた評価、または食品中に含有される抗血栓性成分の含有量に基づいて得られた評価を食品等に付すことなどを含む、食品の抗血栓性表示方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
食事の西欧化（具体的には動物性食品摂取や脂肪摂取の増加など）や高齢化社会の到来などにより、心筋梗塞、糖尿病や高血圧症、高脂血症などの生活習慣病対策が大きな社会問題となっている。そうした生活習慣病の発症には、多くの場合、動脈血栓が深く関与している。さらに循環系疾患では、動脈硬化および血栓形成が関わっていることが多い。いわゆるロング・フライト（またはエコノミークラス）症候群においては、静脈血栓が深く関与している。また、抗血栓薬の投与がある種の癌や血管性痴呆、アルツハイマー痴呆の症状を改善することも報告されている。
【０００３】
血栓形成の予防は、現代における多くの疾患の予防と治療に大いに役立つことが期待される。血栓形成を未然に防ぐには、まず血小板活性の異常な亢進を早期に発見することが有効と言われる。そのため医薬品の抗血栓作用には、血栓形成に中心的役割を果たす血小板への作用が含まれる。同様に食品にも血栓に対する抗血栓形成性、血栓溶解性などの抗血栓性を有するものがあると推定される。現在、魚類や野菜・果実類のいくつかが、血栓予防性のある食品として供されているものの、その効果は謳われているほど確実なものでもない。その原因の一つは抗血栓活性についての評価方法が適切に確定していないことである。
【０００４】
血栓亢進の評価には、血小板反応性（血小板凝集能と血小板粘着性）を的確に反映するin vitro（インビトロ）での測定が必要である。血液凝固能や血小板機能の分析機器は数多く市販されているが、血栓溶解能の測定に適った測定装置として十分なものはほとんどみられず、ましてや、抗血栓性食品の選別に適切なスクリーニング方法なども見当たらない。
【０００５】
また、食品には抗血栓性の有効成分だけでなくその反対の生理活性を示す成分が含まれることも考慮に入れる必要がある。一般的に抗血栓性があると言われている食品および加工食品における実状は、その効能が有効成分の含有量だけから選別されることが多く、血栓形成阻害と血栓溶解促進および血栓に係わる酵素系とその阻害系との総和としての抗血栓活性の定量的把握が、現実にはおこなわれていない。さらに、抗血栓性があるとされる食品において、そうした生理的作用の表示と管理が適切な評価方法で行われず、単に定性的な特性に基づいて行われていることも少なくない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
このような状況に鑑み、本発明による表示のもととなる抗血栓活性の評価においては、多数の食品の中から抗血栓性を有する食品を適切に選別できることが必要であると考え、使用する評価方法の適格ならびに方式の適正さについて種々、検証してきた。抗血栓性の証明には、必ず最後はin vivo（インビボ）の系で行なうこと、予備的スクリーニングと
なるin vitro（インビトロ）の方法においても、抗凝固剤を含まない新鮮全血を使用して測定し、血栓形成において中心的な役割を演ずる血小板が作用する局面での測定に基づいて評価することが肝要である。このような観点から、本発明者は、食品の抗血栓性に関する評価法として最も意義のある組み合わせであり、かつ効率的な方法を開発した。
【０００７】
高齢化社会となりつつある現在および今後も、日々摂取する食品の味、栄養、安全性への要求が消費者から急速に高まっている。上記評価方法に基づく食品の抗血栓性に関する情報について本発明による表示方法は、そうした消費者の関心と選別意識に直接的に訴え、食品選択の判断材料としての情報を提供することができる。
【０００８】
本発明は、食品搾汁液・抽出液と抗凝固剤を加えない血液とを用いて、抗血栓性を有する食品またはその品種を選別できる抗血栓性食品の評価方法を確立し、その評価方法に基づき食品またはその加工食品の抗血栓活性に関する評価の情報を食品類に付して示す方法などを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、食品から得られる食品搾汁液・抽出液の抗血栓活性強度を測定し、
この活性強度に基づいた抗血栓性評価を、
(i)その食品またはその容器もしくは包装に付して示す、
(ii)その食品の宣伝・広告などに示す、または
(iii)上記(i)および(ii)の両方を行なう
ことを特徴とする抗血栓性食品の表示方法である。
【００１０】
また、本発明は、食品から得られる食品搾汁液・抽出液中に含まれる抗血栓性成分の含有量を定量し、この含有量に基づいた抗血栓性評価を、
(i)その食品またはその容器もしくは包装に付して示す、
(ii)その食品の宣伝・広告などに示す、または
(iii)上記(i)および(ii)の両方を行なう
ことを特徴とする抗血栓性食品の表示方法である。
【００１１】
上記の抗血栓性評価は、抗凝固剤を含まない血液と食品抽出液とを用いて、Gorog Thro
mbosis Testによるin vitro評価、次いでHe-Neレーザー惹起血栓形成システムによるin v
ivo評価で行われることを特徴としている。
【００１２】
上記の方法により表示された食品またはその加工食品は、本発明に含まれる食品またはその加工食品である。
【００１３】
上記の食品またはその加工食品は穀物、野菜または果物であることが好ましい。
【００１４】
本発明は、抗血栓性食品の評価として、基本的に二方式（Gorog Thrombosis Testによ
るin vitro評価、次いでHe-Neレーザー惹起血栓形成システムによるin vivo評価）からなる評価方法とともに、その情報に関する表示または提示についてのシステムを提供する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明による表示方法は、新しい評価システムに基づく食品の抗血栓性評価についての情報を、食品などに付す抗血栓性に関する表示方法であるため、その表示された情報をもとに、抗血栓活性を有する食品を容易に選別することができる。その評価システムは、基本的に二方式からなる評価方法であり、抗凝固剤を加えない本来の血液凝固と血小板反応過程および血栓溶解過程を検出することができるin vitro評価法、次いで行われるin viv
o評価法を組み合わせることにより、効率的に食材の抗血栓形成能を品種間の差異のレベ
ルまで判別することができることを特徴とする。
【００１６】
本発明の表示方法により、適切かつ効率的に抗血栓性が選別され、その抗血栓性評価に関する情報がわかりやすく表示された抗血栓性食品が供給されることは、消費者にとっても非常にメリットがある。例えば、食品としてのトマトについて言えば、数多くのトマトの中から、抗血栓性の高いトマトを選択して購入することが可能となるからである。
【００１７】
さらに本発明による表示方法は、血栓予防効果のある食品として、消費者に購買意欲を刺激するため、市場において差別化をはかり付加価値を高めることにも寄与する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
上記概要に示された本発明を、「抗血栓性評価に使用する方法」、「抗血栓性評価の方式」、「上記評価方法に基づく食品およびその加工食品への表示方法」の順に以下、説明する。
【００１９】
なお、本明細書における「抗血栓性」とは、血小板反応性（血小板凝集能と血小板粘着能）および血栓溶解を促進する性質(血栓溶解能)をいう。「抗血栓活性」とは、抗血栓性を示す作用をいう。
【００２０】
また「食品」とは、通念的な一般的飲食物に必ずしも限定されるものではなく、食材、さらには治療・予防に使用される食品をも含み、人間のみならず動物も摂取するものとして幅広い意味に解されるべきものである。同様に「加工食品」は、生産もしくは採取された食材を加工したもの全般をいい、嗜好食品、健康食品（（薬用）植物起源の種子や根茎、花、木皮、樹脂なども含まれる）、機能性食品、栄養機能食品、特定保健用食品、栄養強化食品、サプリメントなどもこれに包含される。
【００２１】
＜抗血栓性評価に使用する方法＞
血液のハンドリング上、抗凝固剤を用いざるを得えなかった従来技術に代わり、抗血栓性食品の適正な選別法として備えるべき要件は、(1)自然な状態の全血を使用すること(2)
動脈血栓で中心的な働きをしている血小板反応性（血小板凝集能と血小板粘着能）が測定できること、および(3)血栓溶解能が測定できることである。
【００２２】
そのための好適な方法として次に挙げる方法は、血栓形成阻害と血栓溶解促進の両活性のバランスの基に成立する抗血栓性についての評価を適切に反映する。評価の対象となる食品から得られた食品抽出液と抗凝固剤を用いない血液とを用いるin vitro評価として、ズリ惹起血小板反応性を調べるHaemostatometry(ヘモスタトメトリー)またはGorog Throm
bosis Test（Gorog氏の血栓形成試験）がある。さらに血管内に血小板を主体とする血栓
を形成するin vivo評価の方法として、He-Neレーザー惹起全血血栓形成・溶解システムによる評価方法がある。
【００２３】
ズリ惹起血小板反応性、血栓溶解能に関するin vitro評価に使用されるHaemostatometr
yおよびGorog Thrombosis Testの両評価方法では、抗凝固剤を加えない血液が使用されることから採血後直ちに測定が可能である。しかも従来の方法で指摘されていた血液試料調整の過程で反応性の高い血小板が失われている可能性もない。
【００２４】
本発明者は、食品の抗血栓性に関して、両評価方法とも同一対象の食品に対し同じ評価結果を与えることも確認している。よってin vitroの評価法として、Gorog Thrombosis T
estまたはHaemostatometer（ヘモスタトメーター）を用いたHaemostatometryのいずれを
用いてもよい。しかしながら、後述するように装置および測定操作の簡便さならびに良好な再現性からは、Gorog Thrombosis Testがより便利であり、しかもコスト的にも優れて
いるという結論に達している。
【００２５】
これらin vitro評価の測定原理は、前述したように抗凝固剤を用いない全血にズリ応力を与えて血小板を活性化し、プラスチックの部品内に血小板を主体とする止血栓を人工的に形成させることにより、対象となる食品から得られた食品搾汁液・抽出液による血小板反応性と血栓溶解能への効果を測定するものである。その場合、食品から得られる食品搾汁液・抽出液の抗血栓活性強度が求められ、その結果は、最終的に抗血栓活性強度に基づいた抗血栓性評価として表される。
【００２６】
別のin vitro評価として、食品から得られる食品搾汁液・抽出液中に含まれる抗血栓性成分の含有量を定量し、この含有量に基づくin vitro抗血栓性評価としてもよい。これと上記抗血栓活性強度に基づいたものを併せたin vitro評価とすることも可能である。これらのin vitro評価も本発明では、in vivo評価のためのスクリーニング用と位置づけられ
る。
【００２７】
in vivo評価方法の候補として開発したHe-Neレーザー惹起血栓形成法においては、種々の血管が血栓形成の対象となり得る。血栓を形成する血管として、より好ましくはマウスの頚動脈が選択される。頚動脈をHe-Neレーザーで照射し血栓を作成する。この場合、血
栓による完全閉塞には至らずにcyclic flow reductionがみられ、血栓の形成と消失は、
画像処理法により測定される。
【００２８】
＜抗血栓性の評価方式＞
食品の抗血栓性に関する検索、同一食品材料における品種間におけるそのスクリーニングは、あらゆる食品、食品材料、品種が対象となる。とりわけ、穀類、野菜、果物などの植物性起源のものは日常的に多く摂取されており、栄養または生理機能などについて関心がもたれることが多いことから、そうしたスクリーニングの対象として好適である。本発明では、実施例として、穀類、野菜、果物に絞って検索したが、その他の起源の食品、例えば動物性起源の食品材料をスクリーニングの対象から排除するものではない。次に述べる抗血栓形成性の評価システムは、穀物・野菜・果実等の食品素材を含め、どんな食品素材または食品にも適用でき、その結果に基づき抗血栓性食品を供することができる。
【００２９】
本発明による抗血栓性の評価は、基本的に二方式からなる評価方法に基づくため次の二段階のステップを踏むことが望ましい。すなわち多数の試料（対象となる食品から得られた食品搾汁液・抽出液）について低コストで迅速かつ簡便に評価できるin vitro評価方法をスクリーニング用の評価方法として採用する。多数の試料を処理できるin vitroでの測定方法として、上記のようにGorog Thrombosis TestまたはHaemostatometryのいずれを用いてもよい。あるいは食品から得られる食品搾汁液・抽出液中に含まれる抗血栓性成分の含有量を定量し、この含有量に基づいたin vitro抗血栓性評価としてもよい。
【００３０】
本発明では、多数の各種食品から抗血栓性を有する食品および加工食品などを選別するための最適な抗血栓性の評価方式として、まず、食品搾汁液・抽出液を用いて血栓形成系と血栓溶解系の両活性の測定を行うことのできるGorog Thrombosis Testによるin vitro
評価を行なう。本法は操作等が簡便で、しかも再現性にも優れるためである。
【００３１】
in vitro評価のスクリーニングで抗血栓性を有すると判定された食品またはその加工食品について、次にHe-Neレーザー惹起全血血栓形成・溶解システムを用いて食品の抗血栓
性・血栓溶解能に関するin vivo評価を行う。生体内で実際に抗血栓形成性が実現されて
いるかを確認するために必ず最後の段階にin vivoの評価方法を組み入れる必要があるた
めである。
【００３２】
なお、in vitro測定法が不要または実施不可能なものについては直ちにin vivo評価法
を実施してもよい。また、in vivo法の採用に際して、食品が固体または粉体の場合には
、経口投与後１週間〜数ヵ月後に測定を行うことが望ましい。
【００３３】
Gorog Thrombosis Testによるin vitro評価、次いでHe-Neレーザー惹起全血血栓形成・溶解システムによるin vivo評価を行うことにより抗血栓性を有すると評価され、その評
価結果を表示された食品（その品種も含まれる）およびその加工食品は、その提供の形態、方法を問わず、本発明の範囲に含まれる。そのような食品またはその加工食品には穀物、野菜または果物が含まれる。
【００３４】
抗血栓性評価の対象となる食品を評価用試料として用意する工程は、夾雑物もしくは共存物を除去し、精選するものであり、そのためには当業界で通常用いられている技術、例えば、洗浄、粉砕、剥皮、研磨、圧搾、篩分けなどの方法を使用することができる。
【００３５】
次いで、この食品から抗血栓活性を有する抽出液を作製する工程は、水、塩類を含有する溶液、あるいはアルコール系、エーテル系、ケトン系、エステル系などの適当な抽出溶剤を用いて行うことができる。
【００３６】
上記工程で得られた食品抽出液は、そのまま抗血栓活性強度の測定に供してもよい。あるいはさらに分画して抗血栓性成分を有する画分を得ることもできる。抗血栓性成分を有する画分の分画の程度は任意であり、評価の必要性に応じて行われる。
【００３７】
食品（その品種も含まれる）から、抗血栓性作用を担う活性成分（必ずしも一種類とは限らず、複数の物質が程度の差こそあれ、抗血栓性を示すことも考えられる。）を抽出し同定、定量することは、従来の方法を利用して行なうことができる。本発明による抗血栓性評価に関する情報の表示として、食品から調製される食品抽出液について、そうした抗血栓性成分の含有量を分析して得た結果に基づいて行われる評価の提示であってもよい。
【００３８】
抗血栓性成分の定量は、任意の精製程度で行なってもよく、必ずしも純粋に単離した試料で行なう必要はない。上記画分から、抗血栓性成分を単離同定するには、従来用いられている天然物化学または生化学的手法を利用して行うことができる。通常利用されている分画方法、例えば、遠心分離、限外ろ過、塩析、イオン交換クロマトグラフィーなどの各種方法、あるいはそれら分離方法の組み合わせにより行うことができる。
【００３９】
＜上記評価方法に基づく食品およびその加工食品への表示方法＞
食品の抗血栓性評価の結果に基づいて、その評価結果に関する情報を、後記の表２などに示す表現もしくはそれに代わる適切な表現、あるいは適当な形式、例えば格付けまたは等級表示などとしてその食品または加工食品に適正に表示（または提示）する。
【００４０】
ここで、「表示」とは、食品の抗血栓性評価に関する情報を外部に分かるように、言語、動作、文字、図形その他の手段によって表されること、またはその表された事柄をいう。
【００４１】
以下の「表示」の内容、表現、「表示」の様式、方法などは、適正に行なわれる必要がある。すなわち、食品などが薬事法、栄養改善法、食品衛生法などの国内外の諸法令に適合する場合は、その表示規制を遵守する形で行ない、適合しない場合には、そうした国内外の法令による食品などの表示規制に違背・抵触しない形で行なうことである。
【００４２】
格付けまたは等級表示としては、例えば、ＡＡＡ、ＡＡ、Ａ、Ｂ+、Ｂ-のランク、あるいは４、３、２、１、０の５段階ランク表示など、抗血栓性の程度を一目瞭然に表示できる形式が好ましい。数字による表示は、後記の表２に示される抗血栓性の強度とそのまま同じである。このようなランクをつけることができる根拠は、in vitro評価において抗血栓性に関する測定で得られる数値に基づくことによる。
【００４３】
上記評価に基づいた抗血栓性評価に関する情報を表示（または提示）する場合、具体的な例を挙げると、「Gorog氏の抗血栓テストなどで判定された抗血栓性、ＡＡＡクラスの
○○○（食品名）」、「二方式の抗血栓性テストでランク４（効果が非常に強い）と確認された○○○（食品名）」のような表現が考えられる。しかし、これらの例に限定されるものではなく、必要に応じ適切な内容と表現により示すことが望ましい。
【００４４】
そうした表示（または提示）は、印刷物に記載するか、またはシール、タグの類に印刷（記載）して、これらの印刷物もしくはシール類を食品そのもの、またはその容器もしくは包装（紙）に付すことによりおこなうことができる。あるいは包装（紙）または容器に、評価に関する情報を直接印刷（記載）して表示（または提示）してもよく、抗血栓性に関する情報が記載された上記印刷物をその食品とともに容器に入れるか、食品の横に掲示して店頭に並べてもよい。これらの行為も本発明では、広義の「付す」ことと解される。
【００４５】
抗血栓性に関する情報の表示（または提示）は、対象食品の宣伝、広告において表示（または提示）する態様もある。その場合、通常の宣伝、広告のメッセージ、キャッチコピーなどに上記表示（または提示）を含めてもよい。また、商品の説明（紹介、案内）のカタログ、パンフレットの類において表示（または提示）されてもよい。例えば「○○○（食品名）の抗血栓性は、ＡＡＡクラスです」のような文言である。さらにインターネットなどの通信手段を介して、会社、家庭等の端末に当該食品を紹介する際に、抗血栓性評価に関する情報の上記表示（または提示）を行なうことができる。他の利用としてコンピュータの記憶手段に、各種食品の抗血栓性のランク表示をデータベースとして記憶させ、随時、求めに応じて一般に供する形態も考えられる。これらの行為も本発明では、広義の「宣伝・広告などに示す」ことと解される。
【００４６】
以上のようにして、表示（または提示）を通じて流通業者、販売業者、消費者などは、その食品の抗血栓性評価に関する情報を得ることができ、仕入れ、購入の際の判断の一材料となる。
【００４７】
上記のように本発明は、抗血栓性食品について基本的に二方式（Gorog Thrombo sis Te
stによるin vitro評価、次いでHe-Neレーザー惹起血栓形成システムによるin vivo評価）よりなる評価方法ならびに食品の抗血栓性評価に関する情報の表示（または提示）方法についてのシステムを提供する。なお、このような情報の表示（または提示）は、一般の消費者、販売業者など不特定の人々を対象とするとは限らず、限定された対象、集団に対するための表示（または提示）であってもよい。
【実施例１】
【００４８】
以下、本発明を、実施例を挙げてさらに具体的に説明する。本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。
【００４９】
本発明では、血栓形成阻害と血栓溶解促進の両活性の測定を指標として、食品の抗血栓性スクリーニングを行うためのin vitroの評価には、Haemostatometerを自作するととも
に、Gorog Thrombosis Test（Montrose Diagnostics Limited社、英国）を入手して用い
た。次いでHe-Neレーザー惹起全血血栓形成・溶解システムによるin vivoの評価には、He
-Neレーザー（Model NEO-50MS；日本科学エンジニアリング（株）製）、CCDカメラ（Mode
l TMC-７；竹中機器システム（株）製）、ビデオ（Model SR-1750；日本ビクター（株）
製）等を備えたシステムを用いた。
【００５０】
評価のための材料として用いた動物は、例えば10週齢の雄性Wistar/STラット（SLC Co.
Ltd., 日本）または10週齢の雄性C57BL/６マウス（SLC Co. Ltd., 日本）であり、日本
生理学会の定める「生理学領域における動物実験に関する基本方針」に従ってこれらの動物を取り扱い、in vitroおよびin vivoの動物モデルの評価を行った。動物モデルのin vi
tro評価では抗凝固剤を用いないで採血した血液を用いて行ったが、ヒトの採血した血液
を用いて評価することもできる。
【００５１】
検体としての穀物・野菜・果実などの食品試料は、個体による活性の偏りを避けるため、一品種ごとに数個体を用いて全体を試料とし、可食部分を乳鉢と乳棒を用いて室温ですりつぶした搾汁液をミリポアフィルター（ニューステラディスク（R）0.45μm，クラボウ（株），日本）で濾過し、濾液を測定まで−80℃で冷凍保存し、測定時に解凍し、食品抽出液として使用した。
【００５２】
本発明において動物材料を用いたHaemostatometryまたはGorog Thrombosis TestならびにHe-Neレーザー惹起血栓形成・溶解システムよる評価技術操作の概要は、以下の表１に
例示したとおりである。
【００５３】
【表１】
2004275175.tif 000002
【００５４】
統計処理には、通常利用されている手法、例えば、2群間の平均値の差の検定には、in
vitro実験では、スチューデントのｔ-検定（対応あり）を、ex vivoおよびin vivo実験の検定ではｔ-検定（対応なし）を用いて行うことができる。また、3群間以上の平均値の差の検定にはANOVAを用いる。
【００５５】
＜Haemostatometryによる評価＞
例えば、Haemostatometryによる評価の場合には３チャンネルのHaemostatometer装置が
工夫され、抗凝固処理しない血液が用いられ、ズリ力によって活性化される血小板の反応性と流動下の凝固能が同時に測定される（図１；装置の機構図を参照）。測定に必要な血液量が比較的少ないのも特徴である。
【００５６】
採血後シリンジをAにセットし、２本のポリエチレンチューブのひとつより流動パラフ
ィン（Liquid paraffin）がシリンジ内に流入され、その結果、他方のチューブから血液
（Native Blood）が流出し、血液は37℃の生理食塩水（Saline）中Bを通った後、血液溜C
に流入する（図１の上図）。血液は60mmHg下、一定の速度で流され、採血２分30秒後にB
においてチューブを針（Needle）で窄刺すると窄刺により出血が起こるが、穴はズリ力によって活性化され形成された血小板血栓により塞がれ、やがて血液凝固により血流は停止する。これらの現象はPressure Transducerの圧センサーにより圧変化として測定され、
窄刺による最大の圧降下から圧が30％回復するまでの面積をH１、90％回復までの面積をH
２とし血小板反応性の指標とする（図１の下図）。また採血から血液凝固により10mmHgの圧降下が起こるまでの時間をCT１、10mmHgになるまでの時間をCT２とし血液凝固能の指標とする（図１の下図）。予めシリンジ内に食品から調製した液（食品抽出液）を入れておくと食品の血小板反応性と血液凝固能への影響を検討でき、また本方法により血栓溶解能も測定可能である。
Haemostatometryによる抗血栓性評価は、表２に示す評価基準に従う。
【００５７】
【表２】
2004275175.tif 000003
【００５８】
＜Gorog Thrombosis Testによる評価＞
Gorog Thrombosis Testの測定装置（図２）は、Montrose Diagnostics Limited社（英
国）から入手可能であり、具体的な測定の手順および操作は操作指示書に従って行えばよ
い。その測定原理を、図３に示す。
【００５９】
本法においても抗凝固処理しない血液が用いられ、ズリ力によって活性化される血小板の反応性と血栓溶解能が流動下で同時に測定される。採血後、所定量の血液および試料溶液（食品抽出液）を含むシリンジを用いて、装置の上面（図２）にある試料注入用の穴からディスポーザブルチューブに血液を注入する。このディスポーザブルチューブは、プラスチック製であり、２種のタイプが用意されている。いずれも先細りの円錐形となっており、筒断面の形状が図３に示すように異なっている。このチューブ内に大小各1個の鉄ボ
ールが入っており、ボールとチューブ管壁の間に小さな隙間が形成されている。血液を含む試料液がシリンジからディスポーザブルチューブ内に入れられると、血液は重力に従って下に流れ、ボールとチューブ管壁の間の隙間を流れる。この隙間を流れるときに大きなズリ力が発生し、これにより血小板の活性化が始まる。ディスポーザブルチューブ下端から落下してくる血液滴を、フォトセンサーにより光学的に検出し、液滴の落下間隔を測定する。活性化され生じた血小板凝集塊が、ボールと管壁の隙間につまり、隙間が狭くなると液滴の落下間隔は長くなる。
【００６０】
Gorog Thrombosis Testによる評価では、図４に示すように、測定時間内（X-軸）にお
ける、液滴が次々に落下する間隔の変化（d（秒）,Y-軸）をプロットすることにより、閉塞時間（occlusion time;ＯＴ）と血栓溶解時間（thrombolysis time;ＬＴ）が求められ
、これらの値の変化から試料の効果の強さが示される。すなわち、ＯＴは、血小板反応性（血小板粘着能と血小板凝集能）の指標となり、ＬＴは、血栓溶解能の指標となる（図４）。
【００６１】
本法では、上記のように測定の操作自体が極めて簡単であり、しかもHaemostatometry
のように複雑かつ間接的な検出手段ではないため、再現性がより高くなっている。
【００６２】
＜マウス頚動脈を用いたin vivoの実験＞
・He-Neレーザー惹起血栓形成法による抗血栓活性の測定
ネンブタール（R）（Sodium pentobarbital, Abbott Lab., USA）をマウス殿筋に注射
し麻酔した（65mg/kg body weight）。20分後に、左大腿動脈にポリエチレンチューブ（P
E10, Becton Dickinson and Company, USA）を留置した。次いでマウス頸部を切開し、左総頚動脈を露出させ、乾燥防止のため随時、生理食塩水（37℃）を滴下した。施術後のマウスを、37℃に保温してある顕微鏡載物台上に固定した（Model CH-2またはBH-2, オリンパス（株）、日本）。石英ファイバーを用いて鏡筒内に導入され、ダイクロイックミラー（dichroic mirror）で反射、対物レンズ（x4）により集光（200μm at focal plane）されたHe-Neレーザー（Model NEO-50MS；日本科学エンジニアリング（株））をマウス頚動
脈（径450〜500μm）に照射した（図５）。血栓形成はカニューレからEvans blue  (Merc
k Co. Ltd.、ドイツ)を、動脈に注入した後に開始させた。血栓形成過程は頚動脈を落射
照明装置で照明し（Model LG-PS2, オリンパス（株）、日本）、鏡筒上部に設置したCCD
カメラを介して（Model TMC-７；竹中機器システム（株）製）、ビデオ（Model SR-1750
；日本ビクター（株）製）経由でパソコンに取り込んだ（Macintosh Power Mac（R）、G3
）（図５および６）。  Evans blueを動脈に注入する直前および注入してから、10秒間隔で600秒間、合計61枚の画像を取り込んだ。
【００６３】
・血栓体積解析法と血栓形成傾向の評価
記録された血栓画像をパソコンに取り込み、画像解析ソフト「Image Analyst」（R）（Automatix Inc., USA）を用いて、血栓面積の算出を行った。すなわち、画像に一定の輝
度閾値を与えて血栓の輪郭を求め、輪郭内の面積を計測した（図６Ａ）。この値に輝度値を乗じて積分光学濃度を求めて血栓の３次元画像を作成し、これを血栓体積の近似値とした（図６Ｂ）。
【００６４】
血栓形成開始から600秒間にわたる血栓体積の経時的変化を、図７に示す。成長した血
栓は飛翔血栓として血流により流された。そして血栓の成長は増減を繰り返した。Evans
blueを動脈に注入してから600秒間、合計61枚の画像の血栓体積を計測し合算したものを
、血栓形成傾向の指標Ｔとした（図８）。これらの詳細は、Ijiri Y, Miura M, Hashimot
o M, Fukunaga C, Watanabe S, Kubota A, Oiwa K, Okuda T, Yamamoto J: A new model
to evaluate the diet-induced prothrombotic state, using He-Ne laser-induced thro
mbogenesis in the carotid artery of apolipoprotein E-deficient and low-density l
ipoprotein receptor-  deficient mice.: Blood Coagul Fibrinolysis. 13: in press,
2002に記載されている。
【００６５】
このHe-Neレーザー惹起血栓形成法による抗血栓活性の測定例を図１０（ｂ）に示した
。ここでは、先天的動脈硬化マウス（apoE-/-・LDLR-/-のDKマウス）を用いて、血栓形成傾向の比較実験を行った。図１０（ａ）に示す組成の基本食を調製し、一方、この基本食の組成における炭水化物源として同年に同一圃場で収穫された４品種「ホクシン」、「タイセツコムギ」、「きたもえ」、「北海257号」の国産の原穀小麦をそのまま製粉した全
粒粉を用いるとともに、これに伴い他の成分量を若干変更して実験食を調製した。そして、それぞれをDKマウスに与えて血栓形成傾向を測定した。
【００６６】
図１０（ｂ）の結果に示されるように、同じ種である小麦でも品種の違いにより血栓形成傾向に及ぼす影響について有意な差が認められた。
【００６７】
[実施例１]
前記のような評価方法および評価基準に従い、下記の表３に示すような穀類・野菜・果実についていくつかの品種について評価したところ、前記のように食品には抗血栓性成分だけでなくその反対の生理活性を示す成分が含まれることに由来するものと思われる品種差がみられることを見出し、どのような品種に高い抗血栓性がみられるかを明らかにすることができた。
【００６８】
抗血栓性を有する食品は、このような銘柄の穀類・野菜・果実の食品素材に限定されるものではなく、それ以外の銘柄の穀類・野菜・果実であってもよいし、穀物・野菜・果実以外の有用な他の食品素材であってもよい。
【００６９】
以下の表４に、本発明により得られた抗血栓性の野菜、果実の品種差の結果を、表２に表示されている抗血栓作用の評価基準に基づいて示す。なお上述したように、これらの結果は、Gorog Thrombosis Testの測定装置を使って測定しても、あるいはHaemostatometry
によって測定しても、いずれも同じ結果を得ることができる。したがって、表２にある強度は、上記いずれの方法を使用した場合にも、抗血栓活性強度として共通に用いることができる。表４の結果から、品種差によりその効力が異なることがわかる。（品種は便宜的にコード番号で表示している。）
【００７０】
【表３】
2004275175.tif 000004
【００７１】
【表４】
2004275175.tif 000005
【００７２】
【表５】
2004275175.tif 000006
【００７３】
上記の結果については、それぞれ次にHe-Neレーザー惹起血栓形成・溶解システムによ
るin vivoの評価方法を行って比較した。このin vivoの評価においても、その抗血栓性は上記のin vitro結果と同様であることが確認された。in vivoの評価の一例として、図９
にトマトの一品種（KG99-4）とタマネギの一品種（北01-1）の結果を示す。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１】図１は、ヘモスタトメーター（Haemostatometer）装置の機構（上図）ならびにヘモスタトグラムの解析（下図）を示す。下図において、横軸は、採血後の時間（分）、縦軸は圧力（mmHg）を表す。
【図２】図２は、Gorog Thrombosis  Testの装置の写真を示す。装置に示された装置名称は、Gorogの原語で表示されている。
【図３】図３は、Gorog Thrombosis  Testの測定原理を示す。
【図４】図４は、Gorog Thrombosis Testにおける解析の方法を示す。
【図５】図５は、He-Neレーザー惹起全血血栓形成法を示す。
【図６】図６は、画像処理によりマウス頚動脈に形成された血栓の体積測定法を示す。
【図７】図７は、血栓体積の経時的変化を示す。
【図８】図８は、血栓形成傾向の指標Ｔの算出法を示す。
【図９】図９は、小麦ＫＧ９９−４およびタマネギ北０１−１の血栓形成に対する作用を示す。
【図１０】図１０は、品種の異なる小麦の血栓形成に対する作用を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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