(57)【要約】【課題】口腔内に存在する特定の細菌がどの部位に多く繁殖しているのかを特定できる口腔内細菌密集部位の特定方法を提供する。【解決手段】歯科用印象材を使用して被験者の歯牙の印象を採得し、該歯科用印象材に付着して採取された口腔内細菌を、目的とする口腔内細菌に適した培養条件で該歯科用印象材面又は歯科用印象材の口腔内面に形成した培地模型で培養することにより目的とする口腔内細菌を増殖させて目視によりその口腔内細菌の密集部位を特定する。歯科用印象材面で培養する場合には、歯科用印象材として培地成分を含有する歯科用印象材を使用する場合や、歯科用印象材の口腔内面に培地を一層乗せる場合や、歯科用印象材の口腔内面に歯牙模型状のゲル状培地を形成する場合がある。【選択図】　　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
歯科用印象材を使用して被験者の歯牙の印象を採得し、該歯科用印象材に付着して採取された口腔内細菌を、目的とする口腔内細菌に適した培養条件で該歯科用印象材面で培養することにより目的とする口腔内細菌を増殖させて目視によりその口腔内細菌の密集部位を特定することを特徴とする口腔内細菌密集部位の特定方法。
【請求項２】
歯科用印象材として、培地成分を含有する歯科用印象材を使用する請求項１に記載の口腔内細菌密集部位の特定方法。
【請求項３】
被験者の歯牙の印象を採得した歯科用印象材の口腔内面に培地を一層乗せて該歯科用印象材に付着して採取された口腔内細菌を培養する請求項１に記載の口腔内細菌密集部位の特定方法。
【請求項４】
被験者の歯牙の印象を採得した歯科用印象材の口腔内面に、１〜２０重量％水溶液としたときに培養に適した温度及び室温でゲル化する物質と、目的とする口腔内細菌に適した培地とを添加したゲル状培地を所定範囲内の温度に加熱して液体状態にして注いで該歯科用印象材に付着して採取された口腔内細菌を培養した後、該ゲル状培地を該歯科用印象材から取り外した培地模型から口腔内細菌の密集部位を特定する請求項１に記載の口腔内細菌密集部位の特定方法。
【請求項５】
歯科用印象材を使用して被験者の歯牙の印象を採得し、該歯科用印象材の口腔内面に、１〜２０重量％水溶液としたときに培養に適した温度及び室温でゲル化する物質と、目的とする口腔内細菌に適した培地とを添加したゲル状培地を所定範囲内の温度に加熱して液体状態にして注ぎ、該ゲル状培地を培養前に該歯科用印象材から取り外した培地模型において該歯科用印象材に付着して採取された目的とする口腔内細菌を増殖させて該培地模型から目視によりその口腔内細菌の密集部位を特定することを特徴とする口腔内細菌密集部位の特定方法。
【請求項６】
１〜２０重量％水溶液としたときに培養に適した温度及び室温でゲル化する物質が、寒天，ゼラチン，カラギーナンから選ばれる少なくとも１種の物質である請求項４又は５に記載の口腔内細菌密集部位の特定方法。
【請求項７】
歯科用印象材が、アルギン酸塩印象材，シリコーンゴム印象材，ポリサルファイドゴム印象材，ビニルシリコーンゴム印象材，ポリエーテルゴム印象材，酸化亜鉛ユージノール印象材，寒天印象材から選ばれる少なくとも１種である請求項１ないし６の何れか１項に記載の口腔内細菌密集部位の特定方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、口腔内に存在する特定の細菌がどの部位に多く繁殖しているのかを特定できる口腔内細菌密集部位の特定方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
口腔内には５００種類以上の多種多様な細菌が存在することが明らかにされている。その中にはう蝕の原因となる細菌や歯周病を引き起こすと言われている細菌もある。う蝕の原因となる細菌として良く知られている細菌は、ストレプトコッカス・ミュータンスとストレプトコッカス・ソブリヌスである。その他、進行中のう蝕中に多く存在すると言われるラクトバシルス属もあり、これらの菌は二次う蝕などの原因にもなると言われている。また、歯周病の原因菌は明確にされていないが、アクチノバシラス・アクチノミセテムコミタンスやポルフィロモナス・ジンジバリス，バクテロイデス・インターメディアなどが関与しているのではないかと言われている。更に、口腔カンジダ症の原因菌として知られるカンジダ・アルビカンスなども口腔内に存在している。
【０００３】
近年、前述の各種細菌の唾液内での濃度を調べることがう蝕などの疾患への感染する危険性を調べる意味で重要とされている。その方法としては、研究室では被験者から唾液を採取し培養し、培地上にコロニーを形成させ、そのコロニーを数えることにより唾液内の細菌濃度を算出する方法が一般的である。
【０００４】
このような唾液の細菌濃度測定に使用される製品としては、オーラルケア社製の「デントカルトＳＭ」，「デントカルトＬＢ」，「デントカルトＣＡ」があり、それぞれミュータンス連鎖球菌の測定，ラクトバシルスの測定，カンジダ・アルビカンスの測定に使用されている。またＣＲＴバクテリア（イボクラ　ビバデント社製）は１つの製品でミュータンス連鎖球菌とラクトバシルスとの測定が同時に行える。
【０００５】
このように唾液内の細菌濃度を測定することにより口の中全体における平均的細菌濃度は知ることが可能であるが、実際の口腔内では細菌が密集している部分と疎な部分とがあるにも拘らず、これまで特定の細菌が口腔内のどの部分に密集しているかを特定する方法が存在しなかったため、歯科医による適切な歯磨き指導や細菌密集箇所への適切な予防治療を行うことができなかった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
そこで本発明は、特定の細菌が口腔内のどの部分に密集しているのか特定することができる方法を提供することを課題とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者は前記課題を解決すべく鋭意研究した結果、歯科で歯型を採得するときに用いた歯科用印象材に歯や歯肉に付着している細菌が付着していることに着目し、歯科用印象材に付着している細菌を歯科用印象材面又は歯科用印象材の口腔内面に形成した培地模型で目的とする口腔内細菌に適した適切な培養条件により増殖させて目視により観察することにより口腔内での細菌の密集箇所を特定できることを究明して本発明を完成した。
【０００８】
即ち本発明は、歯科用印象材を使用して被験者の歯牙の印象を採得し、該歯科用印象材に付着して採取された口腔内細菌を、目的とする口腔内細菌に適した培養条件で該歯科用印象材面で培養することにより目的とする口腔内細菌を増殖させて目視によりその口腔内細菌の密集部位を特定することを特徴とする口腔内細菌密集部位の特定方法と、歯科用印象材を使用して被験者の歯牙の印象を採得し、該歯科用印象材の口腔内面に、１〜２０重量％水溶液としたときに培養に適した温度及び室温でゲル化する物質と、目的とする口腔内細菌に適した培地とを添加したゲル状培地を所定範囲内の温度に加熱して液体状態にして注ぎ、該ゲル状培地を培養前に該歯科用印象材から取り外した培地模型において該歯科用印象材に付着して採取された目的とする口腔内細菌を増殖させて該培地模型から目視によりその口腔内細菌の密集部位を特定することを特徴とする口腔内細菌密集部位の特定方法とに関するものである。
【０００９】
そして前者の方法においては、歯科用印象材として培地成分を含有する歯科用印象材を使用する態様と、被験者の歯牙の印象を採得した歯科用印象材の口腔内面に培地を一層乗せて該歯科用印象材に付着して採取された口腔内細菌を培養する態様と、被験者の歯牙の印象を採得した歯科用印象材の口腔内面に１〜２０重量％水溶液としたときに培養に適した温度及び室温でゲル化する物質と、目的とする口腔内細菌に適した培地とを添加したゲル状培地を所定範囲内の温度に加熱して液体状態にして注いで該歯科用印象材に付着して採取された口腔内細菌を培養した後、該ゲル状培地を該歯科用印象材から取り外した培地模型から口腔内細菌の密集部位を特定する態様とがあり、この１〜２０重量％水溶液としたときに培養に適した温度及び室温でゲル化する物質を使用する場合と前記した後者の発明においては１〜２０重量％水溶液としたときに培養に適した温度及び室温でゲル化する物質が寒天，ゼラチン，カラギーナンから選ばれる少なくとも１種の物質であることが好ましく、また本発明においては歯科用印象材は、アルギン酸塩印象材，シリコーンゴム印象材，ポリサルファイドゴム印象材，ビニルシリコーンゴム印象材，ポリエーテルゴム印象材，酸化亜鉛ユージノール印象材，寒天印象材から選ばれる少なくとも１種であればよいことも究明したのである。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明に係る口腔内細菌密集部位の特定方法を実施するには、先ず歯科用印象材を使用して被験者の歯牙の印象を採得する。歯科用印象材としては、一般に使用されているアルギン酸塩印象材，シリコーンゴム印象材，ポリサルファイドゴム印象材，ビニルシリコーンゴム印象材，ポリエーテルゴム印象材，酸化亜鉛ユージノール印象材，寒天印象材などを使用することが望ましい。なお、市販されている歯科用印象材そのもの以外でも歯科用印象材と同等の成分や機能を有する組成物を用いてもよいのは勿論である。
【００１１】
次に、印象の採取後、印象を採取した歯科用印象材に付着にして採取された口腔内細菌を目的とする口腔内細菌に適した培養条件、即ち培養に適した温度（一般的に２０〜４５℃），湿度（一般的に３０〜１００％）などの環境でその歯科用印象材面又は歯科用印象材の口腔内面に形成した培地模型で培養することにより目的とする口腔内細菌を増殖させ、出現したコロニーの状態から目視によりその口腔内細菌の密集部位を特定するのである。
【００１２】
このように印象を採取した歯科用印象材に付着にして採取された口腔内細菌を目的とする口腔内細菌に適した培養条件で培養するには、目的とする口腔内細菌の増殖のために栄養分や成長物質などを培地として供給することが好ましい。培地の供給方法としては、歯科用印象材中に予め増殖を目的とする口腔内細菌に適した培地を含有させておくことができ、この場合には歯科用印象材を使用して被験者の歯牙の印象を採得した歯科用印象材をそのままの状態で目的とする口腔内細菌に適した培養条件に維持して、歯科用印象材面上で直接目的とする口腔内細菌を培養することにより増殖させて出現した目的とする口腔内細菌のコロニーの状態から目視により口腔内細菌の密集部位を特定する。このときの歯科用印象材は培地用基材として保湿性，通気性に優れ培地中の栄養分の供給を行い易いアルギン酸塩印象材，寒天印象材が好ましい。
【００１３】
また本発明に係る口腔内細菌密集部位の特定方法の別の実施形態として、歯科用印象材を使用して被験者の歯牙の印象を採得した後、その歯科用印象材の口腔内面に目的とする口腔内細菌の培養に適した培地を塗布や噴霧により一層乗せてその歯科用印象材に付着して採取された口腔内細菌を培養して増殖させて出現した目的とする口腔内細菌のコロニーの状態から目視により口腔内細菌の密集部位を特定することも可能である。
【００１４】
更に本発明に係る口腔内細菌密集部位の特定方法の別の実施形態として、歯科用印象材を使用して被験者の歯牙の印象を採取し、その歯科用印象材の口腔内面に１〜２０重量％水溶液としたときに培養に適した温度及び室温でゲル化する物質と、目的とする口腔内細菌に適した培地とを添加したゲル状培地を所定範囲内の温度に加熱して液体状態にして注ぎ、印象採得した歯科用印象材に付着して採取された口腔内細菌を目的とする口腔内細菌に適した培養条件でそのゲル状培地上で増殖させた後、そのゲル状培地を歯科用印象材から取り外して培地模型とすることにより、その培地模型上で目視によりその口腔内細菌の密集部位を特定する方法を挙げることもできる。このときの歯科用印象材はゲル状培地をゲル状状態で取り外すことができる歯科用印象材であれば特に限定されない。
【００１５】
また、このようなゲル状培地を用いる場合に、歯科用印象材を使用して被験者の歯牙の印象を採得し、該歯科用印象材の口腔内面に、１〜２０重量％水溶液としたときに培養に適した温度及び室温でゲル化する物質と、目的とする口腔内細菌に適した培地とを添加したゲル状培地を所定範囲内の温度に加熱して液体状態にして注ぎ、該ゲル状培地を培養前に該歯科用印象材から取り外した培地模型において歯科用印象材に付着して採取された目的とする口腔内細菌を増殖させてその培地模型から目視によりその口腔内細菌の密集部位を特定することもできる。
【００１６】
前記１〜２０重量％水溶液としたときに培養に適した培養温度及び室温でゲル化する物質としては、口腔内細菌に為害性が無く且つ口腔内細菌を殺すことが無い４６℃以下の温度の水溶液がゲル化する物質であれば特に限定されないが、具体的には寒天，ゼラチン，カラギーナンから選ばれる少なくとも１種の物質であることが好ましい。
【００１７】
このような本発明に係る口腔内細菌密集部位の特定方法に適した培地としては、その特定の目的とする口腔内細菌に適した培地が使用され、例えば、ミュータンス連鎖球菌を選択的に増殖させるには培地としてはミュータンス連鎖球菌の検出に用いられるＭＳ寒天培地や，ＭＳ寒天培地にバシトラシンとショ糖とを追加したＭＳＢ培地が好ましく用いられる。他にもＴＹＣＳＢ培地やＴＳＹ２０Ｂなどの培地も使用できる。これらの培地としては、バシトラシンを１ｍｇから５０ｍｇ含有させたものも好ましい。
【００１８】
またラクトバシルス属を選択的に増殖させるには、ロゴサ（Ｒｏｇｏｓａ）等により考案されたＳＬ培地を主成分として使用することが好ましい［Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＤｅｎｔａｌＲｅｓａｒｃｈ　ｖｏｌ．３０　ｐ６８２　１９５１］。また、カンジダ・アルビカンスを選択的に増殖させるには、サボウランド（Ｓａｂｏｕｒａｕｄ）寒天培地又はニッケルソン（Ｎｉｃｋｅｒｓｏｎ）寒天培地を元に便宜配合を変えて使用することが好ましい。
【００１９】
【実施例】
以下に実施例を示すが、本発明はこれ等実施例に限定されるものではない。
＜実施例１＞
寒天濃度を５％にしたＭＳＢ寒天培地（製品名：Ｍｉｔｉｓ　Ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ　Ａｇａｒ，Ｄｉｆｃｏ社製）：９０ｇ，寒天（和光純薬社製）：３５ｇ，水：１Ｌを混合して作製した培地を１２１℃で１５分間オートクレーブで殺菌した後、５０℃程度に冷却し、更に１％亜テルル酸（和光純薬社製）：２００μＬとストレプトコッカス・ミュータンスに適した培地としてバシトラシン（和光純薬社製）：４．７５ｍｇとを加えてストレプトコッカス・ミュータンス用培地を作製した。そして被験者の上顎歯牙の全印象をシリコーン印象材（製品名：エグザファインレギュラータイプ，ジーシー社製）で採得し、このシリコーン印象材の口腔内側面にこのストレプトコッカス・ミュータンス用培地：約４０ｇを４５℃程度の温度で注ぎ込み室温に放置することによりゲル化させた。そしてこのシリコーン印象材をゲル状培地と共に３７℃で２日間培養後に、シリコーン印象材よりゲル状培地を取り出し、この歯牙模型状のゲル状培地で増殖したストレプトコッカス・ミュータンスは大臼歯の歯茎部によく密集しているコロニーが目視により確認できた。
【００２０】
＜実施例２＞
ＭＲＳ液体培地（商品名：Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ　ＭＲＳ　Ｂｒｏｔｈ，Ｄｉｆｃｏ社製）：５５ｇ，水：１Ｌを混合した培地を１２１℃で１５分間オートクレーブで殺菌してラクトバシルス属用培地を作製した。そして被験者の上顎歯牙の全印象をシリコーン印象材（製品名：エグザファインレギュラータイプ，ジーシー社製）で採得し、このシリコーン印象材の口腔内側面にこのラクトバシルス属用培地：約２ｇを軽く噴霧し、それを３７℃で２日間培養した。このシリコーン印象材上に増殖したラクトバシルス属の密集部位を観察した処、大臼歯の歯茎部によく密集しているコロニーが目視により確認できた。
【００２１】
＜実施例３＞
ＭＲＳ液体培地（商品名：Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ　ＭＲＳ　Ｂｒｏｔｈ，Ｄｉｆｃｏ社製）：５５ｇ，水：１Ｌを混合した培地を１２１℃で１５分間オートクレーブで殺菌してラクトバシルス属用培地を作製した。そして被験者の上顎歯牙の全印象をアルギン酸塩印象材（製品名：アローマファインＤＦＩＩＩノーマルセット，ジーシー社製）で採得し、このアルギン酸塩印象材の口腔内側面にこのラクトバシルス属用培地を塗布し、それを３７℃で２日間培養した。このアルギン酸塩印象材上に増殖したラクトバシルス属の密集部位を観察した処、大臼歯及び小臼歯の歯茎部に密集しているコロニーが目視により確認できた。
【００２２】
＜実施例４＞
ＭＲＳ液体培地（商品名：Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ　ＭＲＳ　Ｂｒｏｔｈ，Ｄｉｆｃｏ社製）：５５ｇ，水：１Ｌを混合して１２１℃で１５分間オートクレーブで殺菌した培地：６０ｇを水の代わりにを使用してアルギン酸塩印象材粉末（製品名：アローマファインＤＦＩＩＩノーマルセット，ジーシー社製）：２４ｇに混錬したアルギン酸塩印象材を使用して、被験者の上顎歯牙の全印象を採得し、そのままの状態で３７℃で２日間培養した。このアルギン酸印象材上に増殖したラクトバシルス属の密集部位を観察した処、大臼歯の歯茎部によく密集しているコロニーが目視により確認できた。
【００２３】
＜実施例５＞
寒天濃度を５％にしたＭＳＢ寒天培地（製品名：Ｍｉｔｉｓ　Ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ　Ａｇａｒ，Ｄｉｆｃｏ社製）：９０ｇ，寒天（和光純薬社製）：３５ｇ，水：１Ｌを混合して作製した培地を１２１℃で１５分間オートクレーブで殺菌した後、５０℃程度に冷却し、更に１％亜テルル酸（和光純薬社製）：２００μＬとストレプトコッカス・ミュータンスに適した培地としてバシトラシン（和光純薬社製）：４．７５ｍｇとを加えてストレプトコッカス・ミュータンス用培地を作製した。そして被験者の上顎歯牙の全印象をシリコーン印象材（製品名：エグザファインレギュラータイプ，ジーシー社製）で採得し、このシリコーン印象材の口腔内側面にこのストレプトコッカス・ミュータンス用培地：約４０ｇを４５℃程度の温度で注ぎ込み室温に放置することによりゲル化させた。しかる後にこのゲル状培地をシリコーン印象材より取り出して、この歯牙模型状のゲル状培地を３７℃で２日間培養して増殖させたところストレプトコッカス・ミュータンスは大臼歯の歯茎部及び裂溝部によく密集しているコロニーが目視により確認できた。
【００２４】
【発明の効果】
以上に詳述したように本発明に係る口腔内細菌密集部位の特定方法は、従来唾液内の濃度でのみ特定していた各種の口腔内細菌を歯列の印象模型又は歯牙模型状のゲル状培地上で培養することにより、どの歯牙及び／又はどの歯牙に対応する部位の歯肉のどの部位に細菌が密集しているのかを特定することができる方法である。従って、口腔内細菌密集部位を特定することにより、歯科医による適切な歯磨き指導や細菌密集箇所への適切な予防治療を行うことができるようになるばかりか、採得した歯科用印象材の口腔内側面に１〜２０重量％水溶液としたときに培養に適した温度及び室温でゲル化する物質と目的とする口腔内細菌に適した培地とを添加したゲル状培地を所定範囲内の温度に加熱して液体状態にして注いで歯牙模型状のゲル状培地を形成した場合には培養後にそのゲル状培地を歯科の知識のない患者に直接が見せて簡単に口腔内細菌の密集部位を理解させて以後の治療方針を説明するのに有効であり、その歯科医療に貢献する価値の非常に大きなものである。