(57)【要約】【課題】　哺乳動物由来の成分を含まない動物細胞培養用培地、およびそれを使用してタンパク質を製造する方法を提供することを目的とする。【解決手段】　本発明は、魚肉の酵素分解物及び／又は魚肉抽出物を含むことを特徴とする動物細胞培養用培地、およびそれを使用して所望のタンパク質を製造する方法に関する。さらに、本発明は、魚肉の酵素分解物及び／又は魚肉抽出物を含むことを特徴とする動物細胞培養用培地の添加剤に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
魚肉の酵素分解物及び／又は魚肉抽出物を含むことを特徴とする動物細胞培養用培地。
【請求項２】
動物細胞を培養して所望のタンパク質を製造するための培地であって、該培地が魚肉抽出物を含む請求項１記載の動物細胞培養用培地。
【請求項３】
動物細胞を培養して所望のタンパク質を製造するための培地であって、該培地が魚肉の酵素分解物を含む請求項１記載の動物細胞培養用培地。
【請求項４】
魚肉の酵素分解物が、魚肉又は魚肉抽出物をタンパク質分解酵素で処理して得られたものである請求項３記載の動物細胞培養用培地。
【請求項５】
タンパク質分解酵素が、プロテイナーゼ及び／又はペプチダーゼである請求項４記載の動物細胞培養用培地。
【請求項６】
魚肉の酵素分解物が、魚肉又は魚肉抽出物をプロテイナーゼ処理し、次いで、ペプチダーゼ処理して得られるものである請求項４記載の動物細胞培養用培地。
【請求項７】
動物細胞培養用培地が、哺乳動物由来の血清を含まない培地である請求項１−６のいずれかに記載の動物細胞培養用培地。
【請求項８】
動物細胞培養用培地が、アミノ酸、ビタミン類、脂質因子、エネルギー源、浸透圧調節剤、鉄源およびｐＨ緩衝剤を含む請求項１−７のいずれかに記載の動物細胞培養用培地。
【請求項９】
動物細胞が、所望のタンパク質をコードする遺伝子を導入されたものである請求項１−８のいずれかに記載の動物細胞培養用培地。
【請求項１０】
所望のタンパク質が、抗体又は生理活性物質である請求項９記載の動物細胞培養用培地。
【請求項１１】
動物細胞が、CHO細胞である請求項１−１０のいずれかに記載の動物細胞培養用培地。
【請求項１２】
魚肉が、鰹、ソウダガツオ、鱈、鯖、鮭および鰯からなる群より選ばれる１種以上である請求項１−１１のいずれかに記載の動物細胞培養用培地。
【請求項１３】
動物細胞を培養して所望のタンパク質を製造する方法において、該培養を魚肉の酵素分解物及び／又は魚肉抽出物を含むことを特徴とする動物細胞培養用培地を使用して行うタンパク質の製造方法。
【請求項１４】
魚肉の酵素分解物及び／又は魚肉抽出物を含むことを特徴とする動物細胞培養用培地の添加剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
　本発明は動物細胞培養用培地およびそれを使用してタンパク質を製造する方法に関する。詳しくは、本発明は魚肉抽出物又は魚肉の酵素分解物を含み、哺乳動物由来のタンパク質やその分解物等の成分を含まない動物細胞培養用培地およびそれを使用してタンパク質を製造する方法に関する。本発明はさらに魚肉抽出物又は魚肉の酵素分解物を含む動物細胞培養用培地の添加剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
　動物細胞を培養して該動物細胞の産生する天然型タンパク質を得ようとする場合、あるいは所望のタンパク質をコードする遺伝子を導入した動物細胞を培養して所望のタンパク質等を製造する場合には、塩類、糖類、アミノ酸類、およびビタミン類等の基礎栄養物のほかに、該動物細胞の増殖のために、通常哺乳動物由来の抽出物、具体的には牛胎児血清などの血清が５〜２０％の範囲で培地に添加されている。しかしながら、かかる哺乳動物由来の血清は、培地のコストの７５〜９５％を占めること、品質にロット間差があるため安定した増殖が得られないという欠点がある。また、哺乳動物由来の血清はオートクレーブ等で滅菌できないので、ウイルス又はマイコプラズマ汚染される可能性があり、その多くは無害であるものの、安定生産という点からは付加的な未知の要因となりうる。更に血清には５００種以上のタンパク質が含まれており、このため培養培地からの細胞産物である所望のタンパク質の単離、精製を複雑化する。このような安定生産上の問題を解消するために、血清の代わりとして、フェツイン、インスリン、トランスフェリンなどの血清由来の純化されたタンパク質を使用する方法が行われている。また、製造コストの観点から、哺乳動物より抽出された培地成分を使用する方法も試みられている。
【０００３】
　しかし、近年、哺乳動物由来の成分については、狂牛病（mad cow disease）、ウシ海綿状脳症（Bovine Spongiform Encephalopathy：BSE）、感染性海綿状脳症（Transmissible Spongiform Encephalopathy：TSE）、更にはクロイツフェルト・ヤコブ病（Creutzfeld-Jakob Disease：CJD）などとの関係が懸念され、安全性の点からこれら哺乳動物由来の成分を含有しない動物細胞培養用培地の出現が望まれている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
　動物細胞を培養する際、使用する培地中に上記のような哺乳動物由来の成分を添加しないと、培養の早い時期に細胞の生存率の著しい低下が生じ、培養液中の生細胞数が減少するため長期培養あるいは大量培養を行うことができないという問題があった。本発明はかかる問題のない、哺乳動物由来の成分を含まない動物細胞培養用培地、およびそれを使用してタンパク質を製造する方法を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
　上記のような課題を達成するために、本発明者らは、抗体タンパク質をコードする遺伝子で形質転換されたCHO細胞を用い、従来の動物細胞培養用培地から哺乳動物由来の成分を除いた培地に種々の物質を添加し、該CHO細胞の増殖を促進して抗体タンパク質を高濃度に産生させるような物質を得るべく鋭意検討した結果、魚肉抽出物又は魚肉の酵素分解物を加えることにより所期の目的が達成されることを見いだし、本発明を完成するに至った。
【０００６】
　即ち本発明は、魚肉抽出物又は魚肉の酵素分解物を含む動物細胞培養用培地、ならびにそれを使用してタンパク質を製造する方法に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
　以下本発明を詳細に説明する。なお、本明細書中で記載する全ての文献を参照として本明細書中に援用する。
　本発明の培地は、魚肉抽出物又は魚肉の酵素分解物を含む動物細胞培養用培地である。本発明によれば、従来動物細胞培養用培地として一般的に使用されている培地において哺乳動物由来の成分を添加しなくとも良好に動物細胞を培養することができる。
【０００８】
　本発明で使用する魚肉としては、鰹、ソウダガツオ、鮪、鯖、秋刀魚、鰯、鰺、鮭などの赤身魚や、鱈、鱸、平目、鰈、鯛などの白身魚などの魚肉が挙げられ、好ましくは鰹、ソウダガツオ、鱈、鯖、鮭、鰯である。
【０００９】
　本発明で使用する魚肉抽出物は、例えば、上記魚肉を適当な断片に切断したりあるいはミンチしてペースト状にして、その可溶性成分を熱水、例えば90−95℃の熱水で数十分から数十時間抽出することによって得ることが出来る。具体的には、鰹節製造時の鰹煮汁や缶詰製造時のクックドレン等が挙げられる。
【００１０】
　また、魚肉の酵素分解物は、例えば、魚肉を煮たものをそのまま、あるいは、ミンチしてペースト状にしたもの、あるいは上記のようにして得られた魚肉抽出物に適量の水を加え、必要に応じて加熱してタンパク変性させた後、タンパク質分解酵素で処理し、適宜遠心分離や濾過等により油分や不溶化物を除去することによって得ることができる。かかる魚肉抽出物あるいは魚肉の酵素分解物はpHを7−7.4程度に調整して使用するのがよい。
【００１１】
　本発明で使用するタンパク質分解酵素としては、プロテイナーゼ及び／又はペプチダーゼが挙げられる。本発明では、プロテイナーゼの語は、タンパク質を基質としてタンパク質を加水分解する酵素をいい、ペプチダーゼの語は、ペプチドを基質とするペプチド結合加水分解酵素をいう。すなわち、プロテアーゼのタンパク質基質に対する活性をプロテイナーゼ活性、ペプチド基質に対する活性をペプチダーゼ活性として区別することができる。タンパク質基質に対するプロテアーゼの活性によって、ペプチド結合鎖の中程からの切断を触媒するときにはプロテイナーゼという用語を用い、従ってエンドペプチダーゼは本明細書ではプロテイナーゼの１種として使用している。
【００１２】
　具体的には、パパイン、キモパパイン、プロメライン、フィシンなどの植物起源の酵素およびカビ、細菌、酵母などの微生物起源の酵素で、エンドペプチダーゼ、エキソペプチダーゼ、アミノペプチダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、ジペプチダーゼなどの酵素等が挙げられる。これらの酵素は単独あるいは併用して使用することができる。併用する場合は、それらを同時に添加してもよいし、段階的に添加してもよい。
【００１３】
　本発明における魚肉の酵素分解物としては、上記のプロテイナーゼで処理し、次いでペプチダーゼで処理して得られる魚肉の酵素分解物が好ましい。
　酵素処理は、使用する酵素の種類によって異なるが、通常、pH2−12、好ましくはpH4−8で、30−90℃、好ましくは40−65℃の温度で、30分−72時間、好ましくは3−24時間行う。その際、酵素は基質としてのタンパク質の0.01−10％、好ましくは0.5−5％、さらに好ましくは1−3％程度使用する。
【００１４】
　このようにして得られた魚肉の酵素分解物中の酵素を加温などによって失活させた後、遠心分離や濾過等を適宜行って油分や不溶化物を除去することによって酵素分解物を調製することができる。
【００１５】
　本発明の培地の他の成分としては通常動物細胞培養培地で使用されている各成分が適宜使用できるが、これらにはアミノ酸、ビタミン類、脂質因子、エネルギー源、浸透圧調節剤、鉄源、pH緩衝剤を含む。上記成分のほか、例えば、微量金属元素、界面活性剤、増殖補助因子、ヌクレオシドなどを添加しても良い。
【００１６】
　具体的には、例えば、L-アラニン、L-アルギニン、L-アスパラギン、L-アスパラギン酸、L-システイン、L-シスチン、L-グルタミン、L-グルタミン酸、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-ロイシン、L-リジン、L-メチオニン、L-オルニチン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン等、好ましくはL-アラニン、L-アルギニン、L-アスパラギン、L-アスパラギン酸、L-シスチン、L-グルタミン、L-グルタミン酸、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-ロイシン、L-リジン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン等のアミノ酸類；ｉ−イノシトール、ビオチン、葉酸、リポ酸、ニコチンアミド、ニコチン酸、p-アミノ安息香酸、パントテン酸カルシウム、塩酸ピリドキサール、塩酸ピリドキシン、リボフラビン、塩酸チアミン、ビタミンB12、アスコルビン酸等、好ましくはビオチン、葉酸、リポ酸、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、塩酸ピリドキサール、リボフラビン、塩酸チアミン、ビタミンB12、アスコルビン酸等のビタミン類；塩化コリン、酒石酸コリン、リノール酸、オレイン酸、コレステロール等、好ましくは塩化コリン等の脂質因子；グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース等、好ましくはグルコース等のエネルギー源；塩化ナトリウム、塩化カリウム、硝酸カリウム等、好ましくは塩化ナトリウム等の浸透圧調節剤；EDTA鉄、クエン酸鉄、塩化第一鉄、塩化第二鉄、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硝酸第二鉄等、好ましくは塩化第二鉄、EDTA鉄、クエン酸鉄等の鉄源類；炭酸水素ナトリウム、塩化カルシウム、リン酸二水素ナトリウム、HEPES、MOPS等、好ましくは炭酸水素ナトリウム等のpH緩衝剤を含む培地を例示できる。
【００１７】
　上記成分のほか、例えば、硫酸銅、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸マグネシウム、塩化ニッケル、塩化スズ、塩化マグネシウム、亜ケイ酸ナトリウム等、好ましくは硫酸銅、硫酸亜鉛、硫酸マグネシウム等の微量金属元素；Tween80、プルロニックF68等の界面活性剤；および組換え型インシュリン、組換え型IGF、組換え型EGF、組換え型FGF、組換え型PDGF、組換え型TGF-α、塩酸エタノールアミン、亜セレン酸ナトリウム、レチノイン酸、塩酸プトレッシン等、好ましくは亜セレン酸ナトリウム、塩酸エタノールアミン、組換え型IGF、塩酸プトレッシン等の増殖補助因子；デオキシアデノシン、デオキシシチジン、デオキシグアノシン、アデノシン、シチジン、グアノシン、ウリジン等のヌクレオシドなどを添加してもよい。なお上記本発明の好適例においては、ストレプトマイシン、ペニシリンGカリウム及びゲンタマイシン等の抗生物質や、フェノールレッド等のpH指示薬を含んでいても良い。
【００１８】
　本発明の培地を具体的に調製するには、市販の動物細胞培養用培地、例えば、ＢＭＥ培地、ＭＥＭ培地、ＤＭＥＭ培地、Ｆ１０培地、Ｆ１２培地などの培地に、哺乳動物由来の成分に代えて、魚肉抽出物又は魚肉の酵素分解物を添加して調製してもよい。
【００１９】
　本発明においては、培地中Brix 5%以下、好ましくは、Brix 0.5-3%、特に好ましくはBrix 1-2%程度の濃度となるように培地に魚肉抽出物又は魚肉の酵素分解物を添加する。なお、上記濃度は屈折糖度計により測定した可溶性固形分を指標にした濃度である。
【００２０】
　また、培地中のその他の成分の含量は、アミノ酸は0.05−1500mg/L、ビタミン類は0.001−10mg/L、脂質因子は0−200mg/L、エネルギー源は1−20g/L、浸透圧調節剤は0.1−10000mg/L、鉄源は0.1−500mg/L、pH緩衝剤は1−10000mg/L、微量金属元素は0.00001−200mg/L、界面活性剤は0−5000mg/L、増殖補助因子は0.05−10000μg/Lおよびヌクレオシドは0.001−50mg/Lの範囲であり、培養する動物細胞の種類、所望のタンパク質の種類などにより適宜決定できる。
【００２１】
　培地のｐＨは培養する細胞により異なるが、一般的にはｐＨ６．８〜７．６、多くの場合ｐＨ７．２〜７．４である。
　本発明の培地は特に限定されることなく種々の動物細胞を好適に培養するのに使用できる。例えば、遺伝子工学的操作によって所望の抗体あるいは生理活性物質の遺伝子を組み込んだCOS細胞やCHO細胞、あるいは、抗体を産生するマウス−ヒト、マウス−マウス、マウス−ラット等のハイブリドーマに代表される融合細胞を培養することが可能である。特に、CHO細胞の培養に好適である。勿論、本発明の動物細胞培養用培地は、動物細胞を培養して該動物細胞の産生する天然型タンパク質を得ようとする場合にも使用でき、上述した細胞の他に、ＢＨＫ細胞、ＨｅＬａ細胞などの培養にも使用できる。
【００２２】
　培養条件は使用する細胞の種類によって異なるので、適宜好適な条件を決定すればよい。例えばCHO細胞であれば通常、気相のCO2濃度が0−40%、好ましくは、2−10%の雰囲気下、30−39℃、好ましくは、37℃程度で、1−14日間培養すればよい。
【００２３】
　また、動物細胞培養用の各種の培養装置としては、例えば発酵槽型タンク培養装置、エアーリフト型培養装置、カルチャーフラスコ型培養装置、スピンナーフラスコ型培養装置、マイクロキャリアー型培養装置、流動層型培養装置、ホロファイバー型培養装置、ローラーボトル型培養装置、充填槽型培養装置等を用いて培養することができる。
【００２４】
　本発明の動物細胞培養用培地中で培養を行うことにより、動物細胞により生産されたタンパク質を培地中に得ることができる。動物細胞のタンパク質の生産は、単にそれを培養するのみで良いものや、特殊な操作を必要とするものも存在するがそれらの操作又は条件等は培養する動物細胞により適宜決定すれば良い。例えば遺伝子工学的操作によりマウス−ヒトキメラ抗体をコードする遺伝子を含むベクターでトランスフォームされたCHO細胞では、前記のような条件下で培養を実施することにより、1−14日間、好ましくは7−10日間程度で所望のタンパク質を培地中に得ることができる。これを常法（例えば、抗体工学入門、地人書館、p.102-104；Affinity Chromatography Principles & Methods、アマシャム　ファルマシア　バイテク（株）、p.56-60など参照）に従い単離、精製することによって、所望のタンパク質を得ることができる。
【００２５】
　上記の製造方法によって、抗ヒトIL-6レセプター抗体などの組換え抗体（キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト型化抗体を含む）、顆粒球コロニー刺激因子（G-CSF）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）、エリスロポエチン、インターフェロン、IL-1やIL-6等のインターロイキン、t-PA、ウロキナーゼ、血清アルブミン、血液凝固第VIII因子等の遺伝子組換えタンパク質を製造　することができる。
【産業上の利用可能性】
【００２６】
　本発明の動物細胞培養用培地は、魚肉抽出物又は魚肉の酵素分解物を含有することにより、牛胎児血清等の高価で品質のばらつきが大きいタンパク質を使用すること無く、安定的に動物細胞を培養することが可能である。更に本発明の魚肉抽出物又は魚肉の酵素分解物を含有する細胞培養用培地で動物細胞を培養することにより、近年問題となっている異常プリオンあるいはウイルス等による汚染の危険性は除去され、安全なバイオ医薬品を製造し提供することができる。　
【実施例】
【００２７】
　以下に本発明を更に詳細に説明するための実施例を示すが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。当業者にとっては種々の変更、改変が可能であり、これらも本発明の範囲に含まれる。
【００２８】
　実施例１：魚肉（鰯）抽出物の調製
　魚肉として市販の鰯を使用した。魚肉をミンチ状にカットしたもの５００ｇに水２５００ｇを加え、９５℃の温度で９０分間抽出した。
【００２９】
　その後遠心分離、濾過により不溶物、油分を除去、濃縮し魚肉（鰯）抽出物６４ｇを得た。
　実施例２：魚肉（鰹）の酵素分解物の調製
　魚肉として市販の鰹を使用した。鰹をミンチ状にカットしたもの１０００ｇに水１５００ｇを加え、植物由来のパパイン４ｇで、ｐＨ６．０、５０℃の条件下で１時間インキュベ−トし、酵素分解を行った。次に、カビ由来のエキソペプチダーゼ４ｇでさらに上記条件下で２０時間酵素分解を行った後、９５℃に加熱することで酵素を失活させた。その後遠心分離、濾過により不溶物、油分を除去、濃縮して、本発明の魚肉（鰹）の酵素分解物５００ｇを調製した。
【００３０】
　実施例３：培地の調製
　基本となる動物細胞培養用培地として、市販のDMEM/F12培地（GIBCO BRL Products and Reference Guide, p.357-358）からチミジン、ヒポキサンチンを除去した培地に以下の成分を添加したもの（以下において培地Ａと記載する）を用いた。
（培地Ａ）
市販のDMEM/F12培地からチミジン、ヒポキサンチンを除去した培地に以下の成分を添加したもの：
　　アスコルビン酸30mg/L、
　　デオキシアデノシン（1H2O）10mg/L、
　　デオキシシチジン10mg/L、
　　デオキシグアノシン10mg/L、
　　アデノシン5mg/L、
　　シチジン5mg/L、
　　グアノシン5mg/L、
　　ウリジン5mg/L、
　　エタノールアミン（HCl）4mg/L、
　　プルロニックF-68 1000mg/L、
　　塩化第二鉄（6H2O）18.9mg/L
　上記培地Ａに、実施例２で調製した酵素分解物を最終濃度Brix 1%あるいはBrix 2%で添加し、濾過滅菌した。
【００３１】
　実施例４：抗体産生量に及ぼす効果
　国際特許出願公開番号ＷＯ９２／１９７５９号公報の実施例１０に記載されたヒトエロンゲ−ションファクタ−Ｉαプロモ−タ−を利用し、特開平８−９９９０２号公報の参考例２に記載された方法に準じて作成したヒト型化ＰＭ−１抗体（抗ヒトＩＬ−６レセプタ−抗体）を産生するCHO細胞株を用いて試験した。
【００３２】
　本明細書の実施例２で調製した魚肉酵素分解物を最終濃度Brix 1%あるいはBrix 2%含有する培地Aに上記CHO細胞（1.5x105cell/ml）を添加し、シェーカーフラスコ型細胞培養装置を用いて37℃、5%CO2のインキュベーター条件下で10日間培養した。
【００３３】
　次いで生細胞数、細胞生存率、ならびに培地から得られた抗体タンパク質の産生量を測定した。産生量は逆相系高速液体クロマトグラフィーを使用して測定した。
　対照として実施例２の酵素分解物に代えて牛肉加水分解物10g/L（PrimatoneTM：米国、Quest社製）を含む培地を調製し、同様の方法でCHO細胞を培養した。
【００３４】
　得られた結果を図１に示す。対照と比較すると、鰹の酵素分解物 Brix 1%を含有する培地で培養したCHO細胞は対照と同等の細胞増殖を示した。また鰹の酵素分解物 Brix 2%を含有する培地で培養したCHO細胞は対照以上の抗体タンパク質の産生量が得られた。
【００３５】
　実施例５：種々の魚肉の酵素分解物を用いた培地の抗体産生量に及ぼす効果
　鰹、鰯、鮭、ソウダカツオ、鱈、鯖を原料とした魚肉の酵素分解物を非哺乳動物由来培地に添加して抗体タンパク質の産生量の検討を行った。
魚肉の酵素分解物の調製
　魚肉の酵素分解物を実施例２に記載の方法を用いて調製した。すなわち、魚肉をミンチ状にカットし、植物由来のエンドペプチダーゼであるパパインで酵素分解を行った。次にカビ由来のエキソペプチダーゼでさらに酵素分解を行い加温することで酵素を失活させた。遠心分離、濾過により不溶物、油分を除去、濃縮して魚肉の酵素分解物を調製した。
培地の調製及び試験方法
　実施例４で記載したヒト型化ＰＭ−１抗体（抗ヒトＩＬ−６レセプタ−抗体）蛋白をコードする遺伝子及びdhfr選択マーカー遺伝子で形質転換されたdhfr（−）のCHO細胞を、鰹、鰯、鮭、ソウダカツオ、鱈、鯖の酵素分解物を最終濃度10g/L（Brix 1%）あるいは15g/L（Brix 1.5%）含有する培地Bに添加し、シェーカーフラスコ型細胞培養装置を用いて37℃、5%CO2のインキュベーター条件下で10日間培養した。そして生細胞数、細胞生存率、抗体タンパク質の産生量を測定した。培地Bの成分を以下に示す。
（培地B）
市販のDMEM/F12培地からチミジン、ヒポキサンチンを除去した培地に以下の成分を添加したもの：
　　アスコルビン酸12.5mg/L、
　　デオキシアデノシン（1H2O）2.5mg/L、
　　デオキシシチジン2.5mg/L、
　　デオキシグアノシン2.5mg/L、
　　アデノシン2.5mg/L、
　　シチジン2.5mg/L、
　　グアノシン2.5mg/L、
　　ウリジン5.0mg/L、
　　プトレッシン（2HCl）0.2mg/L、
　　エタノールアミン（HCl）0.975mg/L、
　　プルロニックF-68 500mg/L、
　　クエン酸鉄10mg/L
結果
　得られた結果を図４に示す。魚肉の加水分解物による抗体タンパク質の産生量には違いが見られた。すなわち、魚肉の酵素分解物の最終濃度がBrix 1%（10g/L）添加の場合、産生量が高い順に鰹 ＞ ソウダガツオ ＞ 鱈 ＞ 鮭 ＞ 鯖 ＞鰯 である。また魚肉の酵素分解物の最終濃度がBrix 1.5%（15g/L）添加の場合は鰹 ＞ ソウダガツオ ＞ 鱈 ＞ 鯖 ＞ 鮭 ＞鰯 である。
【００３６】
　以上の試験から、使用する魚肉の種別により魚肉酵素分解物が抗体タンパク質産生量に及ぼす効果は異なるが、抗体蛋白をコードする遺伝子及びdhfr選択マーカー遺伝子で形質転換されたdhfr（−）のCHO細胞の増殖と抗体タンパク質の産生にいずれも効果があることが明らかとなった。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】図１は、魚肉酵素分解物をBrix 1%およびBrix 2%含有する培地、ならびに牛肉加水分解物を10g/L含有する培地中で培養したCHO細胞の生細胞数を示すグラフである。
【図２】図２は、魚肉酵素分解物をBrix 1%およびBrix 2%含有する培地、ならびに牛肉加水分解物を10g/L含有する培地中で培養したCHO細胞の細胞生存率（％）を示すグラフである。
【図３】図３は、魚肉酵素分解物をBrix 1%およびBrix 2%含有する培地、ならびに牛肉加水分解物を10g/L含有する培地中で培養したCHO細胞が培地中に産生した抗体タンパク質濃度（mg/L）を示すグラフである。
【図４】図４は、実施例５における、シェーカーフラスコ型細胞培養装置を用いた細胞培養結果を示す。図中のそれぞれの縦軸は生細胞数、細胞生存率、抗体タンパク質の産生量を、横軸は培地Bを用いて培養を開始してからの培養日数を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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