(57)【要約】    【課  題】  長鎖核酸の分離に優れた電気泳動による核酸の分離方法に用いられる電気泳動支持体の提供。    【解決手段】かさ密度が０．０６〜０．３ｇ／ｃｍ３であり、構成するガラス繊維の太さが０．１〜２０μｍであるガラス不織布からなることを特徴とする電気泳動支持体。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
かさ密度が０．０６〜０．３ｇ／ｃｍ３であり、構成するガラス繊維の太さが０．１〜２０μｍであるガラス不織布からなることを特徴とする電気泳動支持体。
【請求項２】
かさ密度が０．１２〜０．３ｇ／ｃｍ３であり、構成するガラス繊維の太さが０．５〜１０μｍである請求項１記載の電気泳動支持体。
【請求項３】
かさ密度が０．１２〜０．２ｇ／ｃｍ３であり、構成するガラス繊維の太さが０．５〜４μｍである請求項１記載の電気泳動支持体。
【請求項４】
ガラス不織布の厚みが０．０５〜５ｍｍである請求項１〜３のいずれかに記載の電気泳動支持体。
【請求項５】
ガラス不織布の厚みが０．０５〜３ｍｍである請求項１〜３のいずれかに記載の電気泳動支持体。
【請求項６】
ガラス不織布の厚みが０．０５〜１ｍｍである請求項１〜３のいずれかに記載の電気泳動支持体。
【請求項７】
電気泳動法によって核酸を分離する方法において、電気泳動支持体として、かさ密度が０．０６〜０．３ｇ／ｃｍ３であり、構成するガラス繊維の太さが０．１〜２０μｍであるガラス不織布を用いることを特徴とする核酸の分離方法。
【請求項８】
かさ密度が０．０６〜０．３ｇ／ｃｍ３であり、構成するガラス繊維の太さが０．１〜２０μｍであるガラス不織布からなる電気泳動支持体の一端に核酸含有試料をスポットし、電気泳動支持体の一端側に設けられた陰極と、電気泳動支持体の他端側に設けられた陽極との間に電圧を印加して、試料中の核酸を該電気泳動支持体上で泳動・分離させることを特徴とする核酸の分離方法。
【請求項９】
ガラス不織布の厚みが、０．０５〜５ｍｍである請求項７又は８に記載の核酸の分離方法。
【請求項１０】
ガラス不織布が、かさ密度０．１２〜０．２ｇ／ｃｍ３であり、厚み０．０５〜１ｍｍであり、構成するガラス繊維の太さ０．５〜４μｍである請求項７〜９のいずれかに記載の核酸の分離方法。
【請求項１１】
かさ密度が０．０６〜０．３ｇ／ｃｍ３であり、構成するガラス繊維の太さが０．１〜２０μｍであるガラス不織布からなる電気泳動支持体の一端に核酸含有試料をスポットし、該電気泳動支持体の一端側に設けられた陰極と、該電気泳動支持体の他端側に設けられた陽極との間に電圧を印加して、試料中の核酸を該電気泳動支持体上で泳動・分離させ、ついで、分離した核酸を検出することを特徴とする核酸の分離・検出方法。
【請求項１２】
ガラス不織布が、かさ密度０．１２〜０．２ｇ／ｃｍ３であり、厚み０．０５〜１ｍｍであり、構成するガラス繊維の太さ０．５〜４μｍである請求項１１記載の核酸の分離・検出方法。
【請求項１３】
電気泳動支持体と、該電気泳動支持体の一端側に設けた陽極と、該電気泳動支持体の他端側に設けた陰極と、陽極と陰極との間に電圧を印加する手段とを備えている電気泳動分離装置であって、電気泳動支持体が、かさ密度が０．０６〜０．３ｇ／ｃｍ３であり、構成するガラス繊維の太さが０．１〜２０μｍであるガラス不織布からなることを特徴とする核酸の電気泳動分離装置。
【請求項１４】
ガラス不織布の厚みが、０．０５〜５ｍｍである請求項１３記載の電気泳動分離装置。
【請求項１５】
ガラス不織布が、かさ密度０．１２〜０．２ｇ／ｃｍ３であり、厚み０．０５〜１ｍｍであり、構成するガラス繊維の太さ０．５〜４μｍである請求項１３又は１４に記載の電気泳動分離装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、核酸の分離に用いられる電気泳動用の支持体、電気泳動分離方法及び電気泳動分離装置に関し、特に長鎖ＤＮＡの分離に好適に用いられる電気泳動用の支持体、電気泳動分離方法及び電気泳動分離装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
生化学の分野においては、アガロースゲル、ポリアクリルアミドゲル、ろ紙、セルロース繊維等を支持体に用いる電気泳動法により、タンパク質、アミノ酸、ＤＮＡ等を分離する技術が広く用いられている。特に、分子生物学の分野においては、アガロースゲルやポリアクリルアミドゲル等を用いるゲル電気泳動法が、核酸、特にＤＮＡ断片の分離生成のための基本技術として用いられている。
【０００３】
しかしながら、ゲル電気泳動法、特にアガロース製ゲルを用いた定常・定方向電場中での通常の電気泳動法（サブマリン電気泳動法）では、長鎖ＤＮＡ（２０キロベースペアー（ｋｂｐ）よりも大きい、すなわち、約７μｍよりも長いゲノムＤＮＡ、以下同じ）の分離と分析が困難である。その理由は、ゲルの網目構造（マトリックス）の平均孔径（小さい穴から大きな穴の分布）が、長鎖ＤＮＡが自発的に取る多様な構造異性（縦横比の差が小さい丸まった形状から、差が大きい伸長した形状）の平均サイズと比べて小さいため、ゲル中を進行するＤＮＡが立体障害を受けるからである。この障害の解決法として、以下の２種類の手法が提案され、一般的に行われている。
【０００４】
ひとつの手法は、アガロースゲルを電気泳動支持体として用いるゲル電気泳動法において、ゲルのアガロース成分の濃度を低下させることによりマトリックス径を大きくする方法である（非特許文献１参照）。
【０００５】
もうひとつの手法は、ゲル電気泳動法において、電場の向きをある一方向から別の方向に変化させることにより、ＤＮＡの進行を遮蔽しているマトリックス（ＤＮＡ形状のうち断面積が大きい側に面した方向）とは別の立体障害を与えない近傍のマトリックス（ＤＮＡ形状のうち断面積が孔径と比べて小さい側に面した方向）へとＤＮＡをバイパスさせる方法である。言い換えれば、ＤＮＡ形状のうち断面積が大きい側に面した方向とＤＮＡ形状のうち断面積が孔径と比べて小さい側に面した方向の二方向について交互に電界を印加してＤＮＡを電気泳動させる方法である。
【０００６】
後者の方法としては、１９８４年シュワルツ（Ｓｈｗａｒｔｓ）とカンター（Ｃａｎｔｏｒ）らの考案したパルスフィールド電気泳動法が実現されている（非特許文献１、非特許文献２）。しかし、パルスフィールド電気泳動法は、高価で、場所を占有する大型（１ｍ×１ｍ程度）の実験機器が必要である。
一方、前者の方法のアガロース濃度を低下させることには限度があり、濃度が低ければ低いほどゲルの強度が腑化し、取り扱いが困難となる。また、該アガロースゲルは、調製に時間がかかり、保存期限が短く、取り扱いにくく、体積が大きいという難点を有している。近年、ゲノムＤＮＡのハイスループット（ｈｉｇｈ  ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ）解析の必要性が高まり、上記したような難点のない新規電気泳動支持体が求められており、特に、薄くて丈夫であり、小型化が可能であり、新しいマトリックスをもつ電気泳動支持体が求められている。
【０００７】
また、薄くて小型化ができる電気泳動支持体としては、ろ紙が挙げられ、このような電気泳動支持体を用いるろ紙電気泳動法が特許文献１に記載されている。しかしながら、ろ紙を電気泳動支持体に用いるには、網目の大きさにばらつきがある、溶質の拡散が大きい、分離性能があまりよくないという欠点があり、ろ紙の電気泳動支持体としての有用性が必ずしも満足のいくものではなかった。
【特許文献１】特開２００３−１８５６３０号公報
【非特許文献１】「ゲル電気泳動法」、「臨床ＤＮＡ診断法」、（1995年７月１日）、畑田出穂、森崎隆幸、鍋谷彰、向井常博著、金原出版（株）発行、54頁〜66頁
【非特許文献２】「生化学辞典  第３版」、（1998年10月８日）、今堀和友、山川民夫監修、（株）東京化学同人発行、５頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、アガロースゲル等を電気泳動支持体として用いる電気泳動では難しい、２０キロベースペアー（ｋｂｐ）よりも大きい、すなわち、約７μｍよりも長いゲノム核酸、特に長鎖ＤＮＡの分離に優れた電気泳動による核酸の分離方法、その方法に用いられる電気泳動支持体、及びその方法に用いられる電気泳動分離装置を提供することを主目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意検討を重ねた結果、電気泳動による核酸の分離方法に、かさ密度が０．０６〜０．３ｇ／ｃｍ３であり、構成するガラス繊維の太さが０．１〜２０μｍであるガラス不織布を電気泳動支持体として用いると、２０キロベースペアー（ｋｂｐ）よりも大きい、すなわち、約７μｍよりも長いゲノム核酸、特に長鎖ＤＮＡを工業的有利に分離できることを知見し、この方法が上記従来の問題点を一挙に解決できることを見出した。本発明者らは、上記知見を得た後、さらに検討を重ねて本発明を完成させるに至った。
【００１０】
すなわち、本発明は、
１）  かさ密度が０．０６〜０．３ｇ／ｃｍ３であり、構成するガラス繊維の太さが０．１〜２０μｍであるガラス不織布からなることを特徴とする電気泳動支持体、
【００１１】
２）  かさ密度が０．１２〜０．３ｇ／ｃｍ３であり、構成するガラス繊維の太さが０．５〜１０μｍである上記１）記載の電気泳動支持体、
【００１２】
３）  かさ密度が０．１２〜０．２ｇ／ｃｍ３であり、構成するガラス繊維の太さが０．５〜４μｍである上記１）記載の電気泳動支持体、
【００１３】
４）  ガラス不織布の厚みが０．０５〜５ｍｍである上記１）〜３）のいずれかに記載の電気泳動支持体、
【００１４】
５）  ガラス不織布の厚みが０．０５〜３ｍｍである上記１）〜３）のいずれかに記載の電気泳動支持体、
【００１５】
６）  ガラス不織布の厚みが０．０５〜１ｍｍである上記１）〜３）のいずれかに記載の電気泳動支持体、
【００１６】
７）  電気泳動法によって核酸を分離する方法において、電気泳動支持体として、かさ密度が０．０６〜０．３ｇ／ｃｍ３であり、構成するガラス繊維の太さが０．１〜２０μｍであるガラス不織布を用いることを特徴とする核酸の分離方法、
【００１７】
８）  かさ密度が０．０６〜０．３ｇ／ｃｍ３であり、構成するガラス繊維の太さが０．１〜２０μｍであるガラス不織布からなる電気泳動支持体の一端に核酸含有試料をスポットし、電気泳動支持体の一端側に設けられた陰極と、電気泳動支持体の他端側に設けられた陽極との間に電圧を印加して、試料中の核酸を該電気泳動支持体上で泳動・分離させることを特徴とする核酸の分離方法、
【００１８】
９）  ガラス不織布の厚みが、０．０５〜５ｍｍである上記７）又は８）に記載の核酸の分離方法、
【００１９】
１０）  ガラス不織布が、かさ密度０．１２〜０．２ｇ／ｃｍ３であり、厚み０．０５〜１ｍｍであり、構成するガラス繊維の太さ０．５〜４μｍである上記７）〜９）のいずれかに記載の核酸の分離方法、
【００２０】
１１）  かさ密度が０．０６〜０．３ｇ／ｃｍ３であり、構成するガラス繊維の太さが０．１〜２０μｍであるガラス不織布からなる電気泳動支持体の一端に核酸含有試料をスポットし、該電気泳動支持体の一端側に設けられた陰極と、該電気泳動支持体の他端側に設けられた陽極との間に電圧を印加して、試料中の核酸を該電気泳動支持体上で泳動・分離させ、ついで、分離した核酸を検出することを特徴とする核酸の分離・検出方法、
【００２１】
１２）  ガラス不織布が、かさ密度０．１２〜０．２ｇ／ｃｍ３であり、厚み０．０５〜１ｍｍであり、構成するガラス繊維の太さ０．５〜４μｍである上記１１）記載の核酸の分離・検出方法、
【００２２】
１３）  電気泳動支持体と、該電気泳動支持体の一端側に設けた陽極と、該電気泳動支持体の他端側に設けた陰極と、陽極と陰極との間に電圧を印加する手段とを備えている電気泳動分離装置であって、電気泳動支持体が、かさ密度が０．０６〜０．３ｇ／ｃｍ３であり、構成するガラス繊維の太さが０．１〜２０μｍであるガラス不織布からなることを特徴とする核酸の電気泳動分離装置、
【００２３】
１４）  ガラス不織布の厚みが、０．０５〜５ｍｍである上記１３）記載の電気泳動分離装置、及び
【００２４】
１５）  ガラス不織布が、かさ密度０．１２〜０．２ｇ／ｃｍ３であり、厚み０．０５〜１ｍｍであり、構成するガラス繊維の太さ０．５〜４μｍである上記１３）又は１４）に記載の電気泳動分離装置、
に関する。
【発明の効果】
【００２５】
本発明の電気泳動支持体は、２０キロベースペアー（ｋｂｐ）よりも大きい、すなわち、約７μｍよりも長いゲノム核酸、特に長鎖ＤＮＡの分離に有用であり、ゲルと異なり、調製の必要もなく、保存期限もなく、取り扱いが簡便である。さらに、薄くて丈夫であり、小型化が可能である。
また、本発明の方法は、２０キロベースペアー（ｋｂｐ）よりも大きい、すなわち、約７μｍよりも長いゲノム核酸、特に長鎖ＤＮＡの分離を容易に実現できる。本発明の装置は、このような分離方法を工業的有利に実施することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
本発明で用いられるガラス不織布は、ガラス繊維からなる不織布であって、かさ密度が０．０６〜０．３ｇ／ｃｍ３であり、構成するガラス繊維の太さが０．１〜２０μｍであれば特に限定されない。ここで、かさ密度は、ＪＩＳ  Ｐ−８１１８によって測定される値である。構成するガラス繊維の太さは、ガラス不織布を常温硬化型のエポキシ樹脂（ソマール（株）製、タイプ；エピフォームＲ２１００）で包埋し、研磨して構成するガラス繊維の断面を削り出し、断面写真を電子顕微鏡（日本電子（株）製ＪＳＭ５５１０）にて撮影することにより測定される値である。
【００２７】
上記ガラス不織布に用いられるガラス繊維は、長繊維であってもよいし、短繊維（チョップドストランド）であってもよいが、好ましくは短繊維である。短繊維の繊維長は、通常、０．１〜１５ｍｍであり、好ましくは１〜５ｍｍである。ガラス繊維の種類としては、例えばＥガラス、シリカガラス、Ｄガラス、Ｓガラス、Ｔガラス、Ｃガラス及びＨガラス等が挙げられる。本発明においては、ガラス繊維の太さが０．１〜２０μｍであるが、好ましくは０．５〜１０μｍであり、より好ましくは０．５〜４μｍである。
【００２８】
上記ガラス不織布は、上記ガラス繊維から公知の手段を用いて製造される。例えば、上記ガラス繊維からウェブを形成し、ついでウェブ中の繊維同士を接合し、その後、所望により、仕上げ処理（例えば浸染、なせん、染み込ませ、塗布、被覆、積層等）に付されて製造される。例えば、ペーパー状のガラス不織布（ガラスペーパー）を製造する場合、上記ガラス短繊維から湿式抄造法を用いて製造される。より具体的には、公知の分散剤や増粘剤などを配合した水中にガラス短繊維を均一に分散させ、抄造し、シ−ト状にする。ついで、抄造したシートに、例えばエポキシ樹脂、フェノール樹脂、アクリル酸エステル、酢酸ビニルなどの共重合体エマルジョンなどの結合剤をスプレー、塗布または含浸した後、結合剤が付着したシ−トを乾燥することによりガラスペーパーを製造できる。
ガラス不織布の製造に用いられる添加剤（例えば上記した分散剤、増粘剤、結合剤等）などはそれぞれ公知のものであってよいが、例えば電気泳動による核酸分離後に蛍光マーカーを用いて分離した核酸を可視化する場合には、上記した添加剤として蛍光物質を使用しないのが好ましい。
上記ガラス不織布の形状は、特に限定されないが、例えば、シート状、ペーパー状、ハニカム状、マット状、ブロック状などが挙げられる。
本発明においては、上記ガラス不織布の厚みが０．０５〜５ｍｍであるのが好ましく、０．０５〜３ｍｍであるのがより好ましく、０．０５〜１ｍｍであるのが最も好ましい。
【００２９】
本発明の核酸分離方法は、上記電気泳動支持体を用いて実施できる。例えば、上記電気泳動支持体の一端に核酸含有試料をスポットし、電気泳動支持体の一端側に設けられた陰極と、電気泳動支持体の他端側に設けられた陽極との間に電圧を印加することにより、試料中の核酸を電気泳動支持体上で泳動・分離させることができる。このような核酸の泳動・分離は、通常、緩衝液の存在下に行われる。本発明においては、陽極と陰極と電気泳動支持体とが緩衝液に浸されて、上記泳動・分離が行われてよいが、陽極と陰極と、電気泳動支持体の両端部のみとが緩衝液に浸されて、上記泳動・分離が行われるのが好ましい。
【００３０】
本発明に用いる試料は、核酸を含有するものであれば特に限定されないが、ＰＣＲ産物、生物試料（例えば尿、体液、細胞培養物等）などを例示することができる。また、上記核酸としては、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ、ゲノムなどが挙げられるが、本発明においては、上記核酸がＤＮＡ、ＲＮＡ、ゲノムなどの断片であってもよいし、これらの混合物であってもよい。とりわけ、２０キロベースペアー（ｋｂｐ）よりも大きい、すなわち、約７μｍよりも長いゲノム核酸が好ましく、長鎖ＤＮＡ（２０キロベースペアー（ｋｂｐ）よりも大きい、すなわち、約７μｍよりも長いゲノムＤＮＡ）がより好ましい。
【００３１】
陰極と陽極との距離は、特に限定されないが、通常、１００〜５００ｍｍであり、好ましくは２００〜３００ｍｍである。上記電圧は、通常１００〜３０００Ｖであり、好ましくは５００〜１０００Ｖである。
【００３２】
上記緩衝液としては、公知の電気泳動用の緩衝液、特にゲル電気泳動用の緩衝液が挙げられ、より具体的には、トリエチルアミン（ＴＥＡ）緩衝液やトリス−酢酸−エチレンジアミン四酢酸（ＴＡＥ）緩衝液等が挙げられるが、好ましくはＴＡＥ緩衝液であり、より好ましくは４０ｍＭトリス酢酸でｐＨを７．５に滴定した後、１ｍＭ  エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を添加して調製したＴＡＥ緩衝液である。
【００３３】
本発明においては、試料を電気泳動支持体にスポットする前に、定常化（ｐｒｅ−ｒｕｎ）処理を行ってもよい。定常化処理は、緩衝液を注入した後の陰極と陽極との間に電圧を印加することにより行うことができる。このような定常化処理は、従来十分に確立した技術であるので、本発明もこの技術に従ってよい。電圧は、通常５０〜１０００Ｖであり、好ましくは１００〜５００Ｖである。その際の電流は、通常１ｍＡ以下である。処理時間は、通常１５分間〜９０分間であり、好ましくは２０分間〜６０分間である。
【００３４】
上記電気泳動支持体に、例えばアガロースゲル等の短鎖核酸用の公知の電気泳動支持体を付加してもよい。このようにして、本発明の分離方法を実施することで、長鎖核酸のみならず、短鎖のものに対してもより優れた分離能を発揮できる。また、上記電気泳動支持体がガラスシートを積層したものである場合、電気泳動支持体の配置が、前記ガラスシートの積層方向が天頂方向と垂直となる配置であるのが好ましい。このように配置することで、電気泳動分離された核酸片をガラスシートと共に個別に取り出すことができるようになる。
【００３５】
上記したように核酸を分離した後、公知の方法を用いて分離した核酸を検出できる。検出手段は、ゲル電気泳動において用いられる公知の手段であってよい。より具体的には、アイソトープを用いる放射線検出方法、ＵＶ照射による蛍光を観察する方法、レーザー光源を用いて蛍光観察する方法などが挙げられるが、とりわけ、ＵＶ照射による蛍光を観察する方法が好ましい。ＵＶ照射による蛍光を観察する方法の好ましい態様としては、電気泳動体上の核酸を電気泳動によって分離した後、該電気泳動支持体を取り出し、これを公知のゲル電気泳動用ＤＮＡ染料液（例えばエチジウムブロミド溶液等）に浸して、その後、紫外線を照射して核酸の分離バンドを検出することなどが挙げられる。
【００３６】
本発明においては、上記核酸の分離方法に、上記電気泳動支持体と、該電気泳動支持体の一端側に設けた陽極と、該電気泳動支持体の他端側に設けた陰極と、陽極と陰極との間に電圧を印加する手段とを備えている核酸の電気泳動分離装置を用いることができる。このような核酸の電気泳動分離装置としては、例えば図１に示す装置などが挙げられる。
【００３７】
図１に示すように本発明の装置は、電源、陰極、陽極及び上記電気泳動支持体を備えている電気泳動分離装置であって、電気泳動支持体上に試料入口が設けられている。電気泳動支持体（４）上に設けられた試料入口（６）に、核酸含有試料をスポットし、電源（５）によって電圧を印加し、陰極（２）から陽極（３）にかけて通電させ、試料中の核酸を分離することができる。
【００３８】
以下、図面を用いて本発明の好ましい態様をより具体的に説明する。
図２に示す装置は、（着脱式の）電源、陰極、陽極及び上記した電気泳動支持体を備えている電気泳動分離装置であって、さらに陰極槽、陽極槽、試料入口及びカバーを備えている。
電源（５）に陰極プラグ（９）と陽極プラグ（１０）を差込む。陰極槽（８）と陽極槽（９）にそれぞれ緩衝液を注ぎ、両槽における水頭圧を揃える。陰極（２）と陽極（３）との間に設置されている電気泳動支持体（４）上の試料入口（６）に、試料を滴下し、電源（５）のスイッチ（図示せず）を入れ、電圧を印加し、通電させることにより、試料中の核酸を分離させる。その後、電気泳動支持体（４）を取り出し、ＤＮＡ染料液に浸し、電気泳動支持体（４）に向けてＵＶ照射し、核酸の分離を確認する。
【実施例】
【００３９】
（実施例１）
以下の試料、試薬を用いた。
試料
ＤＮＡ試料：２０ｋｂｐ長と２ｋｂｐ長のＤＮＡ：λｇｔｌｌＤＮＡ（ストラテイジエン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）社から購入）を制限酵素Ｋｐｎ  Ｉで切断して得られた断片の混合物。
【００４０】
泳動用試薬
ＴＡＥ緩衝液：４０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−酢酸（ｐＨ７．５）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ水溶液
ＢＰＢ溶液：１％  ＳＤＳ、５０％グリセロール（ｇｌｙｃｅｒｏｌ）、０．０５％ブロモフェノール  ブルー（Ｂｒｏｍｏｐｈｅｎｏｌ  Ｂｌｕｅ）水溶液
ＤＮＡ染料液：０．５ｍｇ／ｍｌ  エチジウムブロマイド（Ｅｔｈｉｄｉｕｍ  Ｂｒｏｍｉｄｅ）水溶液
【００４１】
２００μｍ厚のグラスペーパー（かさ密度０．１６ｇ／ｃｍ３、構成するガラス繊維の太さ０．６μｍ）を、長さ２３０ｍｍ、幅１０〜１３ｍｍの大きさになるようにはさみで切り出し、グラスペーパー片とし、これをＴＡＥ緩衝液中で、終夜、静置して平衡化した。同容積・同形状の陰極槽と陽極槽を平板に置き、等体積のＴＡＥ緩衝液を注ぎ、両槽における水頭圧を揃えた。電気泳動支持体としてグラスペーパー片を空中に懸架し、グラスペーパー片の末端部分のみを陰極槽と陽極槽に浸すように、両槽の間に設置した。その後、定電圧５００Ｖ、２ｍＡで５５分間通電し、定常化処理を行った。ＤＮＡ試料溶液（１μｇ、９μｌ）に１μｌのＢＰＢ溶液を加えてから、６０℃で５分間加温することでＤＮＡの凝集を解消した。ＤＮＡ試料をスポット位置に滴下し、ただちに１，０００Ｖ（定電圧、２５．５ｃｍ電極間）の電圧を印加し、１２ｍＡで６０分間通電を続けた。通電終了後、グラスペーパー片をＤＮＡ染料液に浸し、１０〜１５分間静置した。グラスペーパー片をＵＶトランスイルミネーター上に置いて、２５４ｎｍ波長の光を下から照射した。可視化されたＤＮＡを、オレンジフィルターを装着したデジタルカメラで記録した。記録した結果を図３（ａ）に示す。
【００４２】
（実施例２）
ＤＮＡ試料として、４４ｋｂｐ長のＤＮＡ（ストラテイジエン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）社から購入したλｇｌｌ  ＤＮＡ）を用いたこと以外、実施例１と同様にしてＤＮＡを電気泳動分離し、ＤＮＡ断片を可視化し、可視化したＤＮＡ断片をデジタルカメラで記録した。結果を図３（ｂ）に示す。
【００４３】
（比較例１）
濃度０．３％のアガロースゲルを調製し、これを電気泳動支持体として用いて、コールドルーム内（気温４℃）で、低電圧下、終夜、実施例１と同じ試料のサブマリン電気泳動分離を行った。電気泳動分離後、実施例１と同様にして、ＤＮＡ断片を可視化し、可視化したＤＮＡ断片をデジタルカメラで記録した。結果を図４（ａ）に示す。
【００４４】
（比較例２）
実施例２と同じ試料を用いたこと以外、比較例１と同様にしてＤＮＡの分離・分析を行った。結果を図４（ｂ）に示す。
【００４５】
図３から、２ｋｂｐ、２０ｋｂｐ、４４ｋｂｐのＤＮＡ断片の検出位置が重複せず、それぞれ異なるので、実施例の電気泳動分離が良好に行われたことがわかる。一方、図４からは、４４ｋｂｐのＤＮＡ断片の検出位置と２０ｋｂｐのＤＮＡ断片の検出位置とが重なり、比較例の電気泳動分離が良好でないことが分かる。
【００４６】
（実施例３）
グラスペーパーに代えてブロック形状のガラス不織布（かさ密度０．１６ｇ／ｃｍ３、構成するガラス繊維の太さ０．６μｍ）を電気泳動支持体として用いたこと以外、実施例１と同様にしてＤＮＡの分離を行い、ブロック形状のガラス不織布片をＤＮＡ染料液に浸し、ＵＶ照射して、ＤＮＡ断片を可視化した。
【００４７】
（実施例４）
ガラス不織布を一定の外形形状に加工したシート（かさ密度０．１６ｇ／ｃｍ３、構成するガラス繊維の太さ０．６μｍ）を積層し、その全体に垂直な層に収めて上下方向に固定した上で垂直方向に電界を印加して、実施例１と同様のＤＮＡ試料の電気泳動分離を行った。
【産業上の利用可能性】
【００４８】
本発明は、核酸の分離、特に長鎖核酸の分離に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】電源、陰極、陽極及び電気泳動支持体を備えている電気泳動分離装置であって、電気泳動支持体上に試料入口が設けられている装置の模式図である。
【図２】電源、陰極、陽極及び電気泳動支持体を備えている電気泳動分離装置であって、さらに陰極槽と陽極槽とカバーとを備えている装置の模式図である。
【図３】実施例のＤＮＡ断片の検出結果を示す。（ａ）は２ｋｂｐのＤＮＡ断片と２０ｋｂｐのＤＮＡ断片との検出結果を示し、（ｂ）は４４ｋｂｐのＤＮＡ断片の検出結果を示す。
【図４】比較例のＤＮＡ断片の検出結果を示す。（ａ）は２ｋｂｐのＤＮＡ断片と２０ｋｂｐのＤＮＡ断片との検出結果を示し、（ｂ）は４４ｋｂｐのＤＮＡ断片の検出結果を示す。
【符号の説明】
【００５０】
１    電気泳動分離装置
２    陰極
３    陽極
４    電気泳動支持体
５    電源
６    試料入口
７    カバー
８    陰極槽
９    陽極槽
１０    陰極プラグ
１１    陽極プラグ
１２    スポット位置
１３    ４４ｋｂｐのＤＮＡ断片の検出位置
１４    ２０ｋｂｐのＤＮＡ断片の検出位置
１５    ２ｋｂｐのＤＮＡ断片の検出位置
【図１】
2004361393.tif 000002
【図２】
2004361393.tif 000003
【図３】
2004361393.tif 000004
【図４】
2004361393.tif 000005