(57)【要約】【課題】　タンパクを含む生物学的組成物の滅菌のためのプロセスの提供。【解決手段】　タンパクを含む生物学的組成物、特に血液、胎盤、血清および血漿成分またはヒト若しくは動物由来の誘導体溶液、または植物組織若しくは動物組織の抽出によって、または生物工学的技術によって（すなわち、微生物、酵母、植物またはヒトまたは動物由来の天然若しくは組換え細胞の培養によって）得られたタンパクを含む組成物中の、微生物、特にウイルスを不活化するための方法に関し、これによりその目的に適した程度で、所望のタンパクの完全性を保持する。引いては、不活化または非生ワクチンに用いることを目的とするタンパク成分またはタンパク抗原がある場合、本方法は細菌性またはウイルス性調製物の不活化に適用される。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
　タンパクを含む生物学的組成物を、一般式（Ｉ）
【化１】
2004105740.tif 000005
（式中、Ｒ＝Ｈ、ＣＨ3またはＣ2Ｈ5である）の物質の存在下で殺ウイルスに有効な量の人工放射線照射に付する工程を含むタンパクを含む生物学的組成物を滅菌する方法。
【請求項２】
　少なくとも１つのエンベロープを持つ二本鎖ＤＮＡウイルスおよび少なくとも１つのエンベロープを持たない一本鎖ＤＮＡウイルスが少なくとも４Ｌｏｇで不活化される請求項１記載の方法。
【請求項３】
　放射線照射がＵＶ、ＩＲ、γ線照射、Ｘ線または可視光線である請求項１または２記載の方法。
【請求項４】
　式（Ｉ）中、Ｒ＝ＣＨ3（バニリン）である請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
　放射線照射がＵＶＡ、ＵＶＢまたはＵＶＣである請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
　放射線照射が２４０から２９０ｎｍの波長のＵＶＣである請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
　放射線照射が２５４ｎｍの波長のＵＶＣである請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
　タンパクを含む生物学的組成物が、精製された血漿タンパクを含む請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
　血漿タンパクが、凝固因子である請求項８記載の方法。
【請求項１０】
　凝固因子が、第Ｖ因子、第VII因子、第VIII因子、第IX因子、第Ｘ因子、第XI因子、第XIII因子およびフィブリノーゲンからなる群から選択される請求項９記載の方法。
【請求項１１】
　凝固因子が、第VIII因子である請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
　血漿タンパクが、放射線照射処理後にその生物活性の少なくとも８５％を保持している請求項８記載の方法。
【請求項１３】
　血漿タンパクが、放射線照射処理後にその生物活性の少なくとも９５％を保持している請求項８記載の方法。
【請求項１４】
　集合体の５％以下が放射線照射の間に形成される請求項８記載の方法。
【請求項１５】
　タンパクを含む生物学的組成物を、放射線照射および一般式（Ｉ）の化合物に付するより前に、後に、またはこれと同時に、組成物を少なくとも一つの別の殺ウイルス方法に付する請求項１記載の方法。
【請求項１６】
　別の殺ウイルス方法が、熱処理、ｐＨ操作、溶媒または界面活性剤処理、およびγ線照射処理からなる群から選択される請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
　一般式（Ｉ）の物質が０.１から２５mmol／ｌの濃度で用いられる請求項１記載の方法。
【請求項１８】
　一般式（Ｉ）の物質が０.５から５mmol／ｌの濃度で用いられる請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
　第VIII因子がフォンビルブラント因子と結合されている請求項１１記載の方法。
【請求項２０】
　一般式（Ｉ）の物質をウイルス不活化プロセスにおいて用いる方法。
【請求項２１】
　少なくとも一つの請求項１記載の方法により滅菌された成分を含む、ヒトまたは動物に使用するための医薬組成物。
【請求項２２】
　製造するために請求項１記載の方法が用いられた、ヒトまたは動物に使用するための医薬製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
　本発明は、タンパクを含む生物学的組成物、特に血液、胎盤、血清および血漿成分またはヒト若しくは動物由来の誘導体溶液（例えば、凝固因子、免疫グロブリン、アルブミン、ヘモグロビン・・・）中の、または植物組織若しくは動物組織の抽出によって、または生物工学的技術（すなわち、微生物、酵母、植物またはヒト若しくは動物由来の天然若しくは組換え細胞の培養）によって得られたタンパクを含む組成物（例えば、モノクローナル抗体・・・）中の、微生物、特にウイルスを不活化するための方法に関する。これによって、所望のタンパクの完全性は、その目的に適した程度に保持される。引いては、不活化または非生ワクチンに用いることを目的とするタンパク成分またはタンパク抗原がある場合、本方法は細菌性またはウイルス性調製物の不活化に適用される。
【０００２】
　本発明はまた、本発明の方法によって処理された、血液または血漿成分または誘導体またはタンパクを含む組成物、並びに前記タンパクを含む医薬品または動物薬に関する。
【背景技術】
【０００３】
　そのような製品の受容者または使用者に、微生物による汚染物質の感染がおこる可能性が無いことを保証することは、医薬品の製造においては絶えない懸念事項である。しかし、タンパクを含む医薬品は、通常ウイルスを含む可能性のある生体物質から供給されるため、またはその製造プロセスが、生物由来物そのものである試薬または培養培地を利用するため、医薬品はウイルスによって汚染される可能性がある。したがって、国際ガイドラインは、タンパクを基本とする生物医薬品の製造プロセス中に、その潜在的なウイルス性汚染物質を不活化するまたは除去するための専用の工程を導入することを推奨している。１９９６年２月１４日のガイダンスＣＰＭＰ／ＢＷＰ／２６８／９５のためのヨーロッパ注釈は、ウイルスを不活化するまたは除去するための明らかに効果的な方法を、感染性を約４Ｌｏｇ（＝４Ｌｏｇ１０）またはより大きく低減することが可能な方法であると定義している。
【０００４】
　タンパクを含む生物学的組成物中／由来のウイルスを不活化するまたは除去する課題に固有の問題は、ウイルスのサイズ、エンベロープを持っているまたは持っていないといった構造上の組成（さらに、脂質の相対量が異なることもある）、または一本鎖または二本鎖のＲＮＡまたはＤＮＡからなるゲノムが異なるというウイルスの極めて広い多様性に起因する。これらおよび他の相異点により、多くの公知の不活化方法は特定のウイルス種には非常に効果的であるがすべての種には効かないことが説明される。例えば、よく知られている溶媒―界面活性剤方法はエンベロープを持たないウイルスには効果がない。また、エンベロープを持たないウイルスの中には、熱処理または酸ｐＨ処理により容易に不活化することができるものがあるが、熱不活化に耐性なもの（例えば、パルボウイルス）、または酸ｐＨ不活化に耐性なもの（例えば、ポリオウイルス）もある。
【０００５】
　一方、治療タンパクは、通常複雑な構造でかつ非常に壊れやすい、すなわち分解（タンパクの一次構造の修飾）および／または変性（タンパクの二次、三次および四次構造の修飾）に対し感受性が強く、このことはタンパクが強引なウイルス不活化方法に耐えるのを困難にしている。これらの分子の修飾は、タンパクの生物活性または抗原特性の損失、保管中のその製剤の安定性の低下、および、そのような製品の受容者を反復投与または塗布におけるアレルギー反応の危険にさらす虞のある新たな免疫原性特性の原因となる。
【０００６】
　それゆえ、新しくて予測不可能なウイルス汚染物質を含むすべてのウイルス種に対し有効であり、治療タンパクの製造と両立し得る、明らかに効果的なウイルス不活化方法を有
する必要がある。
【０００７】
　光不活化は、ＩＲおよび／または可視光線および／またはＵＶ光またはＸまたはγ線の線源を用いて、液体または乾燥形態の生物学的組成物を照射することから成る技術である。低エネルギー光、例えば可視光線またはＵＶＡ光の場合は、光をメチレンブルー、ソラレンまたはリボフラビンなどの光増感剤と組み合わせて用いることが必要である。光不活化は、標的となる生体分子への光エネルギーの直接的または間接的（増感剤を通して）移動により起こる。これは、放射線照射プロセスの間に酸素または水の活性化により形成される可能性のある活性酸素種（ＲＯＳ）の形成に起因する酸化機序を伴うこともある。
【０００８】
　光不活化は基本的に、タンパクよりも核酸を好んで標的とすることでき、このことがこの技術を治療タンパクの分野で魅力的なものにしている。これは、用いる光増感剤の核酸挿入または親和特性の理由から、またはタンパクとは異なり核酸成分によるＵＶＣ（例えば、２５４ｎｍの波長で）の選択吸着の理由から、およびタンパクよりも大きいことと核酸配列における一次分解点が将来の正しい複製およびその結果である対応するウイルスの増殖を理論的に回避できるという事実とに起因する光分解に対する核酸のより強い感受性の理由から可能となる。
【０００９】
　光不活化技術は、前世紀の５０年代中ごろから、特に血液および血漿誘導体の分野において試みられ、ときに用いられてきたが、今日まで成功ばかりではなかった。この低い成功率の主な理由の一つは、最も耐性のあるウイルス（例えば、修復機序を可能にする二本鎖ＤＮＡを有するウイルス）を不活化するのに必要なエネルギーにおいては、深刻な損傷が関与するタンパクにも生じることにある。
【００１０】
　したがって、今日、光不活化技術を有効性が確認できるものにし、そして現代の輸血制度または完全ＧＭＰ条件下の製薬工場に移転可能なものにする装置または機械、例えば、ＧＢ２　２００　０２０に記載されているスタティックミキサー（ｓｔａｔｉｃ　ｍｉｘｅｒ）が装備された流動式放射線照射装置が存在するにもかかわらず、この技術は現在のところ、特に頑強な製品（例えば、粗ヒト血漿画分、またはＵＶＣ若しくはγ照射された動物血清画分、動物ペプトン、または培養培地成分として若しくは細胞培養由来の生物工学医薬品若しくはワクチンの製造における試薬として使用されるいくつかの酵素など）を除いては、認可されている血液製剤または医薬品のいずれの製造においても使用されていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
　明らかに効果的なウイルス不活化、すなわち約４Ｌｏｇまたはそれより大きい力価低減を達成すると共に、光不活化中のタンパクの損傷を制限するために、いくつかの提案がされてきた。
【００１２】
　米国特許第６,１９０,６０８Ｂ１および２００１／００４６４５０Ａ１において、血漿誘導体中のエンベロープを持たないウイルスを不活化するため、ＵＶＣ管状フローセル放射線照射装置を使用することが提案されている。これにより利用するエネルギーを、６４０Ｊ／ｍ2以下、ただし血漿誘導体活性を８５％より大きく保持するのに十分なレベルに調節する。提示されたデータによれば、この方法は、一本鎖ウイルスＥＭＣ（脳心筋炎ウイルス）およびＭＶＭ（マウスパルボウイルス）には非常に効果があるが、エンベロープを持つ二本鎖ウイルスＢＨＶを十分に不活化することはできなかった（さまざまな血漿誘導体において２.５から３.０Ｌｏｇ低減のみ）。
【００１３】
　米国特許第５,９８１,１６３において、タイプＩのＲＯＳ失活剤（フリーラジカルＲＯ
Ｓ種の失活剤）およびＲＯＳ失活剤タイプII（ＲＯＳ分子一重項酸素の失活剤）を組み合わせて使用して、または双方のＲＯＳタイプを失活させる分子を使用して放射線照射する間の酸化損傷からタンパクを保護することが提案されている。失活剤タイプＩまたはタイプIIの例として、以下の化合物が特許請求されている：マンニトール、グリセロール、グルタチオン、ＳＯＤ（スーパーオキシド・ジスムターゼ）（全てタイプＩ失活剤）、ヒスチジン、トリプトファン（両方ともタイプII失活剤）およびアスコルビン酸塩（タイプＩかタイプIIかは表示せず）。タイプＩおよびタイプIIの両方を失活する失活剤の例として、フラボノイド化合物のみ、特にルチンが特許請求されている。ルチンは、タイプＩおよびタイプII失活剤の組み合わせよりも効果的で、最も効果的な保護剤として提示されている。発明者等は、血漿および様々な血漿誘導体（第VIII因子、アルブミン、免疫グロブリンおよびフィブリノーゲン）に対するＵＶＣ不活化の使用について彼らが報告しているいくつかの刊行物中で、ルチンの優先傾向を確認していた−例えばPhotochemistry and Photobiology 1997,65(3),432-435を参照されたい−しかし、１９９７年の論文の著者は、１.６ｍｍｏｌ／ｌルチンの存在下ではアルブミン中のＥＭＣウイルスの不活化が低減すること、および、アルブミン二量体およびより大きな集合体の形成からも明らかなように、この濃度のルチンではアルブミン分解／変性に対する有意な保護が見られないことを報告している。これら集合体の除去は、続く精製工程においてＳｅｐｈａｃｒｙｌ　Ｓ２００　ＨＲカラムを通したろ過によって行った。一方、ルチンは分子量の大きな複雑な分子であり（６１０Ｄａ）水性溶液に溶けにくいため、不活化工程の後で製品から除去することは困難である。さらに、変異原性物質として確認されているルチンは、医療品の生産で使用するには重大な懸念となるかもしれない−Mutation Research 1986, 170: 103-113を参照されたい。
【００１４】
　本発明は、現行方法に特有の不利点を有することなく、微生物、特に全ての種類のウイルス（エンベロープを持つおよびエンベロープを持たないウイルス）を明らかに効果的な（すなわち、関連するタンパクの損傷を最小限に抑えつつ、タンパクを含む生物学的組成物中のウイルスを約４Ｌｏｇまたはそれを越えるＬｏｇで低減させる）方法で不活化するための新たな滅菌方法を得ることを目的としている。
【００１５】
　別の目的は、ヒトまたは動物に使用するためのタンパクを含む医薬品の総合的な安全性を、それらの製造プロセスに新たな滅菌方法を含めることによって向上させることである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
　驚くべきことに、タンパクが放射線照射プロセスの間、下記一般式（Ｉ）の物質により保護されているという条件下においては、光不活化プロセスをタンパクを含む組成物に適用することができ、これは、光不活化に対しより耐性を有するウイルス（すなわち二本鎖ＤＮＡウイルス）を含むエンベロープを持つウイルスおよびエンベロープを持たないウイルスに対して、４Ｌｏｇのウイルス低減因子を得るのに十分なエネルギーを持っていることが見出された：
【化１】
2004105740.tif 000002
（式中、Ｒ＝Ｈ、ＣＨ3またはＣ2Ｈ5である）。
【００１７】
　非常に良い効果を有する物質はバニリン（Ｒ＝ＣＨ3）である。バニリンは、主に菓子類、飲料、食品、生薬および香水において使用される香料添加剤である。これは単純な１５２Ｄａの分子であり、水性溶液にすぐに溶け、ＧＲＡＳ（安全であるとして一般に認められているもの）に分類される。
【００１８】
　このように、本発明はタンパクを含む生物学的組成物の滅菌のための方法に関するものであり、前記方法は、前記組成物を一般式（Ｉ）：
【化２】
2004105740.tif 000003
（式中、Ｒ＝Ｈ、ＣＨ3またはＣ2Ｈ5である）
の物質の存在下で殺ウイルスに有効な量の人工放射線照射に付する工程を含む。
【００１９】
　本発明はまた、少なくとも１つのエンベロープを持つ二本鎖ＤＮＡウイルスおよび少なくとも１つのエンベロープを持たない一本鎖ＤＮＡウイルスを少なくとも４Ｌｏｇで不活化する方法に関する。
【００２０】
　本発明はまた、放射線照射がＵＶ、ＩＲ、γ線照射、Ｘ線または可視光線である方法に関する。
【００２１】
　本発明はまた、式（Ｉ）中、Ｒ＝ＣＨ3（バニリン）である方法に関する。
【００２２】
　本発明はまた、放射線照射がＵＶＡ、ＵＶＢまたはＵＶＣである方法に関する。
【００２３】
　本発明はまた、放射線照射が２４０から２９０ｎｍの波長のＵＶＣである方法に関する。
【００２４】
　本発明はまた、放射線照射が２５４ｎｍの波長のＵＶＣである方法に関する。
【００２５】
　本発明はまた、前記タンパクを含む生物学的組成物が、精製された血漿タンパクを含む方法に関する。
【００２６】
　本発明はまた、前記血漿タンパクが、凝固因子である方法に関する、
　本発明はまた、前記凝固因子が、第Ｖ因子、第VII因子、第VIII因子、第IX因子、第Ｘ因子、第XI因子、第XIII因子およびフィブリノーゲンから成る群から選択される方法に関する、
　本発明はまた、凝固因子が、第VIII因子である方法に関する、
　本発明はまた、前記血漿タンパクが、放射線照射処理後にその生物活性の少なくとも８５％を保持している方法に関する。
【００２７】
　本発明はまた、前記血漿タンパクが、放射線照射処理後にその生物活性の少なくとも９５％を保持している方法に関する。
【００２８】
　本発明はまた、集合体の５％以下が放射線照射の間に形成される方法に関する。
【００２９】
　本発明はまた、前記タンパクを含む生物学的組成物を、前記放射線照射および前記一般式（Ｉ）の化合物に付するより前に、後に、またはこれと同時に、組成物を少なくとも一つの別の殺ウイルス方法に付する方法に関する。
【００３０】
　本発明はまた、別の殺ウイルス方法が、熱処理、ｐＨ操作、溶媒または界面活性剤またはおよび界面活性剤処理、およびγ線処理から成る群から選択される方法に関する。
【００３１】
　本発明はまた、一般式（Ｉ）の物質が０.１から２５ｍｍｏｌ／ｌの濃度で用いられる方法に関する。
【００３２】
　本発明はまた、一般式（Ｉ）の物質が０.５から５ｍｍｏｌ／ｌの濃度で用いられる方法に関する。
【００３３】
　本発明はまた、第VIII因子をフォンビルブラント因子と結合させる方法に関する。
【００３４】
　本発明はまた、一般式（Ｉ）の物質を、ウイルス不活化プロセスにおいて用いる方法に関する。
【００３５】
　本発明はさらに、少なくとも一つの本明細書記載の方法により滅菌された成分を含む、ヒトまたは動物に使用するための医薬組成物方法に関する。
【００３６】
　そして本発明は、ヒトまたは動物に使用するための医薬品であって、その生成のためにタンパクを含む生物学的組成物を滅菌するための工夫に富んだ方法が用いられている医薬品に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
　ＧＢ　２　２００　０２０に記載されているものと似たＵＶ流動式放射線照射装置を用いた様々な実験において、バニリンをルチンと、また壊れやすいタンパクのモデルとしてのフィブリノーゲン含有組成物および第VIII因子含有組成物と比較した。これらのタンパクの分解／変性の評価は、放射線照射の前および後のその集合体含有量だけでなく、生物活性も測定することにより行われた。ウイルス不活化は、様々なモデルウイルス、特に、パルボウイルス−ＣＰＶ＝イヌパルボウイルス−（一本鎖ＤＮＡを有するエンベロープを持たないウイルス）、およびヘルペスウイルス−ＰＲＶ＝仮性狂犬病ウイルス−（二本鎖ＤＮＡを有するエンベロープを持っているウイルス）についてのスパイキング実験において評価した。これらの実験では、バニリンはルチンによく匹敵しており、特に、最も抵抗性のあるウイルスＰＲＶに対してより高いＬｏｇ不活化数を可能にした。さらにバニリンは、構造の複雑さ、低水溶性、および変異原性に関する懸念の点でのルチンの欠点を有していない。バニリン濃度の適した範囲は、フィブリノーゲンを含む組成物において樹立され、１および２ｍＭの間であることがわかった。この範囲は、各タンパクを含む組成物についても同様に、フィブリノーゲンを含む溶液に行われたモデルで確認されることが必要である。米国特許第５,９８１,１６３において可能な安定剤として勧められているいくつかのタイプＩまたはタイプII失活剤は、単独でまたは組み合わせて試験されているが、全く成功していない。
【００３８】
　バニリンはここで、放射線照射プロセス中のタンパクの保護において、タイプＩ／タイプIIＲＯＳ失活剤理論では単純に説明できない異常な特性を示した。なぜならば、知られているタイプＩおよびタイプIIの単独または組み合わせのどちらにおいても効果は見られなかったからである。
【００３９】
　以下の実施例は、発明の範囲を制限することなく、これら全ての実験のより詳細な条件及び結果述べるものである。
【実施例１】
【００４０】
　ルチンによって安定化されていない、または０.５ｍＭのルチンによって安定化されたブリノーゲン（５ｇ／Ｌフィブリノーゲン、５０ｍｍｏｌ／ｌＮａＣｌ、２０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸ナトリウムで緩衝された、ｐＨ７.３溶液）を、ＧＢ２　２００　０２０に記載されているスタティックミキサーが装備されたＵＶ流動式放射線照射装置で処理した。安定化されていない溶液および安定化された溶液をＰＲＶ（最終濃度７Ｌｏｇ　ＣＣＩＤ50／ｍｌ）またはＣＰＶ（最終濃度７Ｌｏｇ　ＣＣＩＤ50／ｍｌ）でスパイクした。
【００４１】
　ＵＶＣ照射された放射線照射装置のチューブは直径６ｍｍ、長さ３５ｃｍだった。照射されたチューブは、２５４ｎｍの最大発光を提供する４つのＵＶＣランプ（各１５ワット、長さ４０ｃｍ、フィリップス　ＴＵＶ　１６Ｗ、オランダ）によって囲まれていた。
【００４２】
　材料を２５０のｍｌ／分の流速で注入し、放射線照射装置を通して８回再循環させた。
【００４３】
　安定化されていない溶液では、放射線照射後ＰＲＶ力価が４.５Ｌｏｇで低減し、ＣＰＶ力価は低減し検出されなかった（すなわち、７Ｌｏｇを超える低減）ことがわかった。ルチンで安定化された溶液では、ＰＲＶ力価が３Ｌｏｇで低減し、ＣＰＶ力価は低減し検出されなかった（すなわち、７Ｌｏｇを超える低減）。
【００４４】
　タンパク集合体形成は、ＴＳＫ　Ｇ　４０００ＳＷＸＬカラム、ＴｏｓｏＨａａｓ、日本を使用したＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）によって研究された。
【００４５】
　安定化されていない溶液では、処理後２２％の新たな集合体が見られた。ルチンで安定化された溶液では、１％のみの新たな集合体が見られた。
【実施例２】
【００４６】
　米国特許第５,９８１,１６３において言及されるように、２つの別の実験で、マンニトールによって安定化されていない、または２つの濃度（２ｍｍｏｌ／ｌ；１００ｍＭ）でマンニトールによって安定化されたフィブリノーゲン（５ｇ／Ｌフィブリノーゲン、５０ｍｍｏｌ／ｌＮａＣｌ、２０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸ナトリウムで緩衝された、ｐＨ７.３溶液）を、実施例１に記載されたのと同じ放射線照射装置および放射線照射条件で処理した。
【００４７】
　材料を、放射線照射装置を通して６回注入した。
【００４８】
　タンパク集合体形成を実施例１に記載のように測定した。
【００４９】
　安定化されていない溶液では、処理後にそれぞれ１８および２０％の新たな集合体が見られた。
【００５０】
　２ｍｍｏｌ／ｌマンニトールで安定化された溶液では、処理後に７％の新たな集合体が見られた。１００ｍｍｏｌ／ｌマンニトールで安定化された溶液では、処理後に９％の新たな集合体が見られた。
【実施例３】
【００５１】
　米国特許第５,９８１,１６３において言及されるように、ヒスチジンによって安定化されていない、または２つの濃度（２ｍｍｏｌ／ｌ；５ｍＭ）でヒスチジンによって安定化されたブリノーゲン（５ｇ／Ｌフィブリノーゲン、５０ｍｍｏｌ／ｌＮａＣｌ、２０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸ナトリウムで緩衝された、ｐＨ７.２溶液）を、実施例１に記載されたのと同じ放射線照射装置および放射線照射条件で処理した。
【００５２】
　材料を、放射線照射装置を通して６回注入した。
【００５３】
　タンパク集合体形成を実施例１に記載のように測定した。
【００５４】
　安定化されていない溶液では、処理後に２０％の新たな集合体が見られた。
【００５５】
　２ｍｍｏｌ／ｌヒスチジンで安定化された溶液では、処理後に１０％の新たな集合体が見られた。５ｍｍｏｌ／ｌヒスチジンで安定化された溶液では、処理後に１２％の新たな集合体が見られた。
【実施例４】
【００５６】
　米国特許第５,９８１,１６３において提案されるように、ヒスチジンおよびマンニトールの混合物によって安定化されていない、または以下の濃度：２ｍｍｏｌ／ｌヒスチジンおよび１００ｍｍｏｌ／ｌマンニトールで、ヒスチジンおよびマンニトールの混合物によって安定化されたフィブリノーゲン（５ｇ／Ｌフィブリノーゲン、５０ｍｍｏｌ／ｌＮａＣｌ、２０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸ナトリウムで緩衝された、ｐＨ７.３溶液）を、実施例１に記載されたのと同じ放射線照射装置および放射線照射条件で処理した。
【００５７】
　材料を、放射線照射装置を通して６回注入した。
【００５８】
　タンパク集合体形成を実施例１に記載のように測定した。
【００５９】
　安定化されていない溶液では、処理後に２０％の新たな集合体が見られた。ヒスチジン＋マンニトールで安定化された溶液では、処理後に９％の新たな集合体が見られた。
【実施例５】
【００６０】
　バニリンによって安定化されていない、または異なる濃度のバニリン（０.０１；０.０５；０.１；０.５；１；２；３および４ｍＭ）によって安定化されたフィブリノーゲン（５ｇ／Ｌフィブリノーゲン、５０ｍｍｏｌ／ＩＮａＣｌ、２０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸ナトリウムで緩衝された、ｐＨ７.３溶液）を、実施例１に記載されたのと同じ放射線照射装置および放射線照射条件で処理した。
【００６１】
　材料を、放射線照射装置を通して８回注入した。
【００６２】
　タンパク集合体形成を実施例１に記載のように測定した。
【００６３】
　安定化されていない溶液では、処理後に２０％の新たな集合体が見られた。
【００６４】
　０.０１ｍｍｏｌ／ｌバニリンで安定化された溶液では、処理後に１３％の新たな集合体が見られた。
【００６５】
　０.０５ｍｍｏｌ／ｌバニリンで安定化された溶液では、処理後に９％の新たな集合体が見られた。
【００６６】
　０.１ｍｍｏｌ／ｌバニリンで安定化された溶液では、処理後に７％の新たな集合体が見られた。
【００６７】
　０.５ｍｍｏｌ／ｌバニリンで安定化された溶液では、処理後に３％の新たな集合体が見られた。
【００６８】
　１ｍｍｏｌ／ｌバニリンで安定化された溶液では、処理後に２％の新たな集合体が見られた。
【００６９】
　２ｍｍｏｌ／ｌバニリンで安定化された溶液では、処理後に１％の新たな集合体が見られた。
【００７０】
　３ｍｍｏｌ／ｌバニリンで安定化された溶液では、処理後に１％の新たな集合体が見られた。
【００７１】
　４ｍｍｏｌ／ｌバニリンで安定化された溶液では、処理後に１％の新たな集合体が見られた。
【実施例６】
【００７２】
　バニリンによって安定化されていない、または１ｍｍｏｌ／ｌ若しくは２ｍｍｏｌ／ｌバニリンによって安定化されたフィブリノーゲン（５ｇ／Ｌフィブリノーゲン、５０ｍｍｏｌ／ｌＮａＣｌ、２０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸ナトリウムで緩衝された、ｐＨ７.３溶液）を、実施例１に記載されたのと同じＵＶ流動式放射線照射装置および放射線照射条件で処理した。
【００７３】
　安定化されていない溶液および安定化された溶液をＰＲＶ（最終濃度７Ｌｏｇ　ＣＣＩＤ50／ｍｌ）またはＣＰＶ（最終濃度７Ｌｏｇ　ＣＣＩＤ50／ｍｌ）でスパイクした。
【００７４】
　材料を２５０のｍｌ／分の流速で注入し、放射線照射装置を通して８回再循環させた。
【００７５】
　放射線照射後安定化されていない溶液では、ＰＲＶ力価が４.５Ｌｏｇで低減し、ＣＰＶ力価は低減し検出されなかった（すなわち、７Ｌｏｇを超える低減）ことがわかった。バニリンで安定化された溶液では、ＰＲＶ力価が５.５Ｌｏｇ（１ｍｍｏｌ／ｌおよび２ｍｍｏｌ／ｌバニリン）で低減し、ＣＰＶ力価は低減し検出されなかった（１ｍｍｏｌ／ｌおよび２ｍｍｏｌ／ｌバニリン）、これは７Ｌｏｇを超える低減に相当する。
【実施例７】
【００７６】
　バニリンまたはルチンによって安定化されていない、または３濃度（０.５ｍＭ、１ｍｍｏｌ／ｌおよび２ｍＭ）のバニリンまたはルチンによって安定化されたフィブリノーゲン（５ｇ／Ｌフィブリノーゲン、５０ｍｍｏｌ／ｌＮａＣｌ、２０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸ナトリウムで緩衝された、ｐＨ７.３溶液）。
【００７７】
　安定化されていない溶液およびバニリンまたはルチンによって安定化された溶液をＰＲＶ（最終濃度７Ｌｏｇ　ＣＣＩＤ50／ｍｌ）またはＣＰＶ（最終濃度７Ｌｏｇ　ＣＣＩＤ50／ｍｌ）でスパイクした。
【００７８】
　溶液を実施例１に記載されたのと同じ放射線照射装置および放射線照射条件で処理した。
【００７９】
　材料を、装置を通して８回注入した。
【００８０】
　タンパク集合体形成を実施例１に記載のように測定した。
【００８１】
　結果は表１を参照されたい。
【００８２】
【表１】
2004105740.tif 000004
【実施例８】
【００８３】
　バニリンによって安定化されていない、または２ｍｍｏｌ／ｌのバニリンによって安定化された第VIII因子（５ｇ／Ｌタンパク溶液中、クエン酸塩／ＮａＣｌ／グリシンで緩衝された、ｐＨ７.３溶液）。安定化されていない、および２ｍｍｏｌ／ｌのバニリンによって安定化された溶液をＰＲＶ（最終濃度７Ｌｏｇ　ＣＣＩＤ50／ｍｌ）でスパイクした。
【００８４】
　溶液を実施例１に記載されたのと同じ放射線照射装置および放射線照射条件で処理した。
【００８５】
　材料を、装置を通して６回注入した。
【００８６】
　第VIII因子活性を第VIII因子クロマトグラフィーアッセイにより測定した。安定化されていない溶液では、処理後、第VIII因子活性の５０％の減少が見られた。
【００８７】
　２ｍｍｏｌ／ｌバニリンの存在化では、処理後、第VIII因子活性の１０％の減少が見られた。
【００８８】
　放射線照射後、安定化されていない溶液では、ＰＲＶ力価が４Ｌｏｇで低減した。２ｍｍｏｌ／ｌバニリンで安定化された溶液では、ＰＲＶ力価が５Ｌｏｇで低減した。