(57)【要約】【課題】乳酸菌培養物由来の新規なＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物及びその製造方法、該組成物を含有する飲食品又は飼料を提供する。【解決手段】アルコール発酵醪の蒸留残渣を含む培地で乳酸菌を培養して得られる、乳酸菌培養物又はその抽出物を有効成分とするＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物。該乳酸菌培養物から採取するＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物の製造方法。当該組成物を含んでなる飲食品又は飼料。【効果】抗ストレス活性が期待される機能性食品又は機能性飼料を得ることができる。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルコール発酵醪の蒸留残渣を含む培地で乳酸菌を培養して得られる、乳酸菌培養物又はその抽出物を有効成分とすることを特徴とするＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物。
【請求項２】
乳酸菌を培養する培地が焼酎粕を含む培地であることを特徴とする請求項１に記載のＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物。
【請求項３】
乳酸菌培養物の抽出物が脂溶性であることを特徴とする請求項１又は２に記載のＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物。
【請求項４】
アルコール発酵醪の蒸留残渣を含む培地で乳酸菌を培養し、乳酸菌培養物からＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物を採取することを特徴とするＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物の製造方法。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物を含んでなる飲食品又は飼料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物及びその製造方法に関し、また、ＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物を含んでなる飲食品又は飼料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
社会生活の複雑化、女性の社会進出等により、ストレスを抑える食品、医薬品の要望が高まってきている。代表的なリラックス効果物質としてはアルコール、特にエタノールがあり、各種酒類の成分として人類の歴史と共に使用されてきた。摂取された酒類中のエタノールは血液中に入った後、脳細胞に到達し、神経細胞シナプス後膜に埋め込まれているγ−アミノ酪酸（以下、ＧＡＢＡと略記する）受容体のサブユニット分子上のエタノール結合部位に結合し、その結果ＧＡＢＡ受容体が活性化して細胞外からの塩素イオンの流入を促進することにより神経細胞の活動を抑制し、神経細胞間の情報伝達速度を抑えることにより沈静作用、抗不安作用、抗不眠作用を引起こすことが知られている。同様な作用を示す化合物として、ベンゾジアゼピン、バルビツール酸、神経ステロイドが知られており、その中の一部は鎮静薬として使用されている。極端に強く働く物質は全身麻酔剤、睡眠薬として使用されている。エタノール以外に、精油成分に含まれるアルデヒド、エステル、長鎖アルコール等の芳香物質が、リラックス効果を有することが知られている。
【０００３】
エタノールの抗ストレス作用は飲酒によって発揮されるが、有効濃度が高いために過剰摂取になりやすく、時として深酔い、二日酔いをきたし、場合によれば肝臓、胃を傷める場合も見られる。また、過剰摂取を継続した場合には、習慣性からアルコール依存症に陥る恐れもある。
【０００４】
ベンゾジアゼピン等を主成分とする鎮静薬も現在多量に使用されているが、これらの医薬品は長期間連続服用した場合には、習慣性及び副作用等の問題が懸念されている。最近、医薬品に頼らずに、日常摂取する食品により病気を抑えることが重要視されるようになってきた。例えば癌、糖尿病、高血圧等は食生活に注意することにより、その半分以上の発症が抑えられると言われている。同様に、食品中にエタノール、ベンゾジアゼピン等と同じような作用を示す物質が見つかれば、そのような食品を継続的に摂取することにより、日々、ストレスの少ないリラックスした状態で過ごすことが可能となる。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、乳酸菌培養物由来の新規なＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物及びその製造方法、該組成物を含有する飲食品又は飼料を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明を概説すれば、本発明の第１の発明は、ＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物に関する発明であって、アルコール発酵醪の蒸留残渣を含む培地で乳酸菌を培養して得られる、乳酸菌培養物又はその抽出物を有効成分とすることを特徴とする。
また本発明の第２の発明は、ＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物の製造方法に関する発明であって、アルコール発酵醪の蒸留残渣を含む培地で乳酸菌を培養し、乳酸菌培養物からＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物を採取することを特徴とする。
更に、本発明の第３の発明は、前記第１の発明のＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物を含んでなる飲食品又は飼料に関する。
【０００７】
本発明者らは、その安全性が広く認められている、乳酸菌の培養物中に抗ストレス活性を示す物質の探索を行った。活性の基準としてＧＡＢＡＡ受容体応答亢進活性の検討を行った。その結果、焼酎粕の乳酸菌発酵液中にＧＡＢＡＡ受容体応答亢進活性を見出し、本発明の完成に至った。
【０００８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について具体的に説明する。
本発明で用いる乳酸菌はＧＡＢＡＡ受容体応答亢進活性物質生成能を有するものであれば特に限定はないが、例としてラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、以下Ｌ．と略記する）属、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属、及びビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属等に属するものを挙げることができる。これらの中でもラクトバシラス属に属するものが好ましく、特にラクトバシラス　ブレビス（Ｌ．ｂｒｅｖｉｓ）に属するものが好ましく、この例としてラクトバシラス　ブレビスＩＦＯ−１２００５を挙げることができる。
【０００９】
乳酸菌の培養には、一般的な乳酸菌用培地を用いることが可能であるが、本発明によれば、産業廃棄物として処分されている焼酎粕（蒸留残渣）を主体とする培地が好適に用いられる。本発明で使用する焼酎粕は、米焼酎、麦焼酎、芋焼酎、蕎麦焼酎、黒糖焼酎、及び泡盛焼酎等の製造に副生する蒸留残渣（廃液）が最も適しているが、その他の同様な蒸留廃液である、甲類焼酎、白酒、ウオッカ、ブランデー、ウイスキー、ラム酒、ジン等の蒸留酒の製造で副生する残渣、通常の穀類からのアルコール発酵による工業用アルコール製造に際して副生する蒸留廃液も使用することが可能である。焼酎粕は、固液分離を行わなくても用いることが可能であるが、固形物を除去したもの、又はろ過液の濃縮物を用いることも可能である。
【００１０】
乳酸菌はあらかじめ前培養したものを使用することが好ましい。前培養培地は乳酸菌が増殖できる培地であれば特に限定はないが、例えばグルコース、酵母エキス、及びペプトンを含みｐＨを５〜６に調整した培地を挙げることができる。焼酎粕をそのまま培地として用いることも可能である。
【００１１】
焼酎粕はｐＨを３〜７、好ましくは４〜６に調整した後に乳酸菌の培養に使用する。更に、焼酎粕に窒素源、無機塩、及び／又はビタミン類等を添加してもよく、これらの添加で乳酸菌の増殖を更に高めることができる。以上のように調製した焼酎粕は滅菌処理を行うのが好ましい。滅菌処理方法については特に限定はないが、例として、低温保持殺菌法、恒温保持殺菌法、又は高温高圧滅菌法を挙げることができる。
【００１２】
焼酎粕等で乳酸菌を培養する際の菌体接種量に特に制限はないが、菌体接種量が少ないと、培養に時間を要するため、雑菌汚染を引起こす場合がある。また、菌体接種量が多すぎる場合には、前培養の費用、手間が大きくなって不利である。通常は焼酎粕の培地液量１ｍｌ当り乳酸菌を１×１０５〜　１×１０９個接種することが好ましい。培養温度は２０〜４５℃、好ましくは３０〜３７℃であり、培養時間は１時間〜１０日間、好ましくは１〜３日である。乳酸菌培養中のｐＨの変化に対しては通常はそのままでよいが、極端にｐＨ上昇、下降が見られる場合には酸又はアルカリでｐＨ調整を行えばよい。
【００１３】
乳酸菌培養液中のＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物の分析は、以下のようにして行うことができる。
【００１４】
ウシ脳からクローン化されたＧＡＢＡＡ受容体のα１、β１サブユニットのｃＤＮＡからＲＮＡポリメラーゼで酵素合成されたｃＲＮＡをアフリカツメガエルの卵母細胞に注入してＧＡＢＡＡ受容体を発現させ、これに試料を含むリンガー液を還流させて電気応答を測定した。実験操作を更に詳細に説明すると以下のようである。
【００１５】
「ｃＲＮＡの調製」
ＧＡＢＡＡ受容体のα１、β１サブユニットの遺伝子のｃＤＮＡ（Ｓｐ６プロモーター配列を含む）を含むプラスミド（岩手大学の新貝研究室より入手）を制限酵素で切断して直線化したのち、Ｓｐ６のＲＮＡポリメラーゼでｃＲＮＡを酵素的に合成した。
【００１６】
「アフリカツメガエル卵母細胞とｃＲＮＡの注入」
雌のアフリカツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓ　ｌａｅｖｉｓ）の成体を購入し、室温で飼育した。カエルを氷中に約１時間放置して眠らせた後、腹部を切り開いて卵母細胞を取り出した。これをコラーゲナーゼ（１ｍｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ　ｔｙｐｅ　Ｉ）を含むバース（Ｂａｒｔｈ）液〔８８ｍＭ　ＮａＣｌ、１ｍＭ　ＫＣｌ、２．４ｍＭ　ＮａＨＣＯ３、０．３３ｍＭ　Ｃａ（ＮＯ３）２、０．４１ｍＭ　ＣａＣｌ２、０．８２ｍＭ　ＭｇＳＯ４、７．５ｍＭトリス（Ｔｒｉｓ）、ｐＨ　７．６〕中に１時間放置した。バース液で洗ってコラーゲナーゼを除去した後、顕微鏡下で２本のピンセットを用いてろ胞細胞を１つ１つ丁寧に取り除いた。
【００１７】
調製したｃＲＮＡを、ジエチルピロカーボネートで処理し、オートクレーブにかけた滅菌水に溶かし、顕微鏡下でマイクロピペットを用いて約５０ｎｌを卵母細胞の１つ１つに注入した。注入した卵母細胞は、１６〜１８℃の恒温槽で培養し、２日後から電気応答を測定した。
【００１８】
「電気応答の測定」
ｃＲＮＡを注入して２〜７日間培養した卵母細胞を約０．３ｍｌの小さな容器の網の上にのせ、下からカエルのリンガー液（１１５ｍＭ　ＮａＣｌ、１ｍＭ　ＫＣｌ、１．８ｍＭ　ＣａＣｌ２、５ｍＭ　トリス、ｐＨ　７．２）を約２ｍｌ／分の流速で還流した。日本光電工業製の膜電位固定用増幅器（ＣＥＺ−１１００）を用いて、定まった電位（普通４０ｍＶ）のもとで流れる電流を測定した。まず、３Ｍ　ＫＣｌを充たした２本の微小電極を卵母細胞に刺した。１本の電極は膜電位を測定し、もう１本の電極は定めた電位に膜電位を保つための電流を流し、この電流をエヌエフ回路設計ブロック社製のフィルターによりノイズを除去した後記録した。
【００１９】
ＧＡＢＡ及び測定試料は、カエルのリンガー液に溶かした。これらの溶液は、還流装置のコックを切替えることで変更した。ＧＡＢＡのみを含む溶液の電気応答を標準（１００％）として、乳酸菌培養液の活性を測定した。同じ卵母細胞で数回繰り返して測定し、２〜３回ごとに標準応答を測定した。脱感作の影響を除くために、卵母細胞は１０分以上リンガー液で洗った後、次の測定を行った。
【００２０】
本発明のＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物は、乳酸菌培養物をそのまま濃縮した濃縮物、又は固液分離後の液を濃縮した濃縮物として得ることができる。また、該組成物は、培養物又はその濃縮物、あるいは固液分離した培養物又はその濃縮物から、ジエチルエーテル等の有機溶媒で抽出することができる。更に該組成物は、前記濃縮物あるいは抽出物を乾固した後、エタノール等の水溶性有機溶媒で抽出することも可能である。
【００２１】
このようにして、乳酸菌培養物からＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物を得ることができる。該組成物はそのまま摂取することができるだけでなく、天然物由来の飲食品又は飼料の素材となる。本発明で得られる食品素材はＧＡＢＡＡ受容体応答亢進活性を示し、その結果、日常的に摂取することで抗ストレス効果が期待され、日々の食事でストレスの多い日常をリラックスした状態で過ごすことが可能となる。
【００２２】
本発明で得られるＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物を利用して作る飲食品、飼料等について特に限定はないが、例としては、栄養補助食品、健康食品、調味液、飲料、漬物、及び酒類を挙げることができる。
【００２３】
実験例
後述の実施例１の方法に準じて得た乳酸菌培養液を固液分離した後、ロータリーエバポレータで１０倍濃縮した。このようにして得られた濃縮液１０ｍｌをジエチルエーテル１０ｍｌで抽出し、エーテルを除去した後、０．１ｍｌエタノールに溶解したものを活性測定に使用した。一方、対照として乳酸菌培養前の焼酎粕を遠心分離した後、５０ｍｌをジエチルエーテル５０ｍｌで抽出し、エーテルを除去した後５０μｌのエタノールで抽出液を調製し、活性測定に使用した。表１に１０μＭ　ＧＡＢＡによるＧＡＢＡＡ受容体応答への効果を示した。表１より明らかなように、乳酸菌培養を行った焼酎粕はより強い応答の亢進活性を示した。
【００２４】
【表１】
2004105041.tif 000002
【００２５】
焼酎粕に乳酸菌を生育させることにより、培養液中にＧＡＢＡが生成することは既に見出している（特願２００１−１７８１７７）。今回、焼酎粕の乳酸菌培養液からジエチルエーテル抽出操作で得られた、ＧＡＢＡが混入していない抽出液において強いＧＡＢＡＡ受容体応答亢進活性が確認された。焼酎粕中にも弱いＧＡＢＡＡ受容体応答亢進活性が見られたが、その活性は乳酸菌培養液に比べて４分の１未満であった。
【００２６】
【実施例】
以下、本発明を実施例によって更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００２７】
実施例１
米焼酎粕２ｋＬを加熱殺菌したのち、フィルタープレスで固形分を除去した。
得られたろ過液１．５ｋＬ（ｐＨ　４．０）に４８％ＮａＯＨを添加してｐＨを５．２に調整した。次に、このようにして得られた焼酎粕を３ｋＬ容の培養槽に入れ１２０℃、１５分加熱して、乳酸菌培養用の培地とした。これに、別に用意した前培養液１５Ｌを接種して３０℃でかくはん培養した。通気は行わなかった。前培養はグルコース０．５％、酵母エキス　０．５％、ペプトン　０．５％でｐＨを５．５に調整した培地にラクトバシラス　ブレビス　ＩＦＯ−１２００５を接種して行った。３０℃で２日間本培養後に遠心分離で乳酸菌菌体を除去し、加熱殺菌した後、減圧濃縮装置で液量を１／１０に濃縮した。
このようにして得られたサンプル１０ｍｌをジエチルエーテル１０ｍｌで抽出し、エーテルを除去した後、０．１ｍｌのエタノールに溶解したものを活性測定に使用した。１０μＭ濃度のＧＡＢＡのＧＡＢＡＡ受容体応答活性を標準（１００％）にした場合、上記抽出液を０．２μｌ／ｍｌ加えた場合にはＧＡＢＡＡ受容体応答は６２％亢進した。
【００２８】
実施例２
実施例１で得られた乳酸菌培養液の濃縮液を５０Ｌ、蔗糖１４ｋｇ、リンゴ濃縮果汁５Ｌ、安定剤０．３５ｋｇ、香料０．０５ｋｇ、色素若干、水　４５Ｌを混合した。一晩低温室で静置したのち、０．４５μｍの膜孔を有する精密ろ過装置を用いてろ過滅菌を行い、健康機能性食品の調製を行った。風味、嗜好性等を官能検査で調べた結果、非常に良好な飲料であることが認められた。
【００２９】
実施例３
実施例１で得られた乳酸菌培養液の濃縮液１Ｌを、トウモロコシ粉５９０ｇ、大豆油１８０ｇ、脱脂米ぬか１３０ｇ、魚粉６０ｇ、動物性油脂１０ｇ、炭酸カルシウム１０ｇ、食塩１０ｇ、ベタイン１０ｇと混合して家畜飼料の調製を行った。鶏、豚、牛等の家畜で調べた結果、嗜好性は良好であり、給餌を数ヶ月継続した後では家畜の性格も温和なものになった。
【００３０】
【発明の効果】
本発明によれば、穀類の分解物等の天然物を原料として製造される蒸留酒等の蒸留残渣を含む培地に乳酸菌を生育させることにより、抗ストレス作用が期待されるＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物を得ることができる。このようにして得られた組成物は栄養補助食品として摂取することができるだけでなく、医薬品原料として使用することも期待できる。
発明の組成物を各種の食品又は飼料等の製造に用いることにより、ＧＡＢＡＡ受容体応答亢進組成物を多く含み、抗ストレス活性が期待される機能性食品又は機能性飼料を得ることができる。本発明は焼酎粕等の高度利用による再資源化及び廃棄物の低減化を目指したものであり、地球環境の保護にも寄与するものである。