(57)【要約】【課題】　患者の神経細胞機能を維持し、喪失を防止し、および／または回復させる活性についての該薬物の試験方法を提供すること。【解決手段】　患者の神経細胞機能を維持し、その喪失を防止し、および／または回復する活性について薬物を試験する方法であって、神経毒性活性を有する薬剤を試験動物に投与し；試験動物に試験すべき薬物を投与し；前記薬剤の投与終了後２０日以内に該動物を殺害し；黒質緻密層を通る脳の連続切片を採取し；黒質緻密層を通る脳の１つ置きの連続切片におけるチロシンヒドロキシラーゼ陽性の細胞体の数を測定し、かつ、介在する切片におけるニッスル（Ｎissl）染色陽性の黒質緻密層の数を測定し；そして、チロシンヒドロキシラーゼ陽性の細胞体およびニッスル染色陽性の細胞体の数を、前記薬剤を投与していない対照動物の黒質緻密層を通る脳の連続切片におけるチロシンヒドロキシラーゼ陽性の細胞体およびニッスル染色陽性の細胞体の数と比較することからなる該方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
　患者の神経細胞機能を維持し、その喪失を防止し、および／または回復する活性について薬物を試験する方法であって、神経毒性活性を有する薬剤を試験動物に投与し；試験動物に試験すべき薬物を投与し；前記薬剤の投与終了後２０日以内に該動物を殺害し；黒質緻密層を通る脳の連続切片を採取し；黒質緻密層を通る脳の１つ置きの連続切片におけるチロシンヒドロキシラーゼ陽性の細胞体の数を測定し、かつ、介在する切片におけるニッスル（Ｎissl）染色陽性の黒質緻密層の数を測定し；そして、チロシンヒドロキシラーゼ陽性の細胞体およびニッスル染色陽性の細胞体の数を、前記薬剤を投与していない対照動物の黒質緻密層を通る脳の連続切片におけるチロシンヒドロキシラーゼ陽性の細胞体およびニッスル染色陽性の細胞体の数と比較することからなる該方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
　本出願は、１９９１年４月４日付け出願の米国特許出願０７／６７８,８７３号の一部継続出願である１９９１年８月２６日付け出願の米国特許出願０７／７５１,１８６号の一部継続出願である。
【０００２】
　本発明は、動物において神経細胞機能の維持、喪失の防止および／または回復において、薬物の活性につき該薬物を試験する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
　デプレニールは、最初、選択的モノアミンオキシダーゼ−Ｂ（ＭＡＯ−Ｂ）阻害剤として、脳ドーパミンのレベルを上昇させ、Ｌ−ドーパ（L-DOPA)から形成されるドーパミンの薬理学的作用を増強させるが、非選択的ＭＡＯ阻害剤で観察されるチアミン昇圧剤効果を妨げることに基づき、１０年前から、欧州において、パーキンソン病（ＰＤ）の通常の薬物療法（Ｌ−ジヒドロキシフェニルアラニン（Ｌ−ＤＯＰＡ）＋末梢デカルボキシラーゼ阻害剤）に対する付加薬剤として使用されてきた。組み合わせた薬物療法は、Ｌ−ＤＯＰＡの抗−無動原体効果を遅延させ、その結果、ＰＤ患者において、オン−オフ効果の消失、機能的不能の減少、および寿命の増大を生じると報告された（ベルンハイマー・エイチ（Bernheimer,H.)ら、ジャーナル・オブ・ニューロロジカル・サイエンス（J.Neurolog. Sci.)、１９７３、２０：４１５−４５５頁、バークマイヤー・ダブリュー（Birkmayer,W.)ら、ジャーナル・オブ・ニューラル・トランズム（J.Neural Transm.)、１９７５　３６：３０３−３３６頁、バークマイヤー・ダブリュー（Birkmayer,W.)ら、モド・プロブ・ファルマコサイキアトル（Mod.Prob.Pharmacopsychiatr.)、１９８３　１９：１７０−１７７頁、バークマイヤー・ダブリューおよびピイ・リーデレル（Birkmayer,W. and P. Riederer)、ハスラー・アール・ジイおよびジェイ・エフ・クリスト（Hassler,R.G. and J.F. Christ)編、アドバーンシズ・イン・ニューロロジー（Advances In Neurology)、１９８４　４０（Ｙ）：０〜８９００４頁、およびバークマイヤー・ダブリュー（Birkmayer,W.)、ジャーナル・オブ・ニューラル・トランズム（J.Neural Transm.)、１９８５、６４（２）：１１３〜１２８頁）。
【０００４】
　通常のＬ−ＤＯＰＡ療法に対する付加薬物としてのデプレニールの研究は、通常１年またはそれ未満までに喪失した短期間の利点を報告している。すべての者ではないが、一部の者は、レボドパ用量は、デプレニールと組み合わせて摂取した場合に、減少させることができることを報告している（エリザン・ティ・エス（Elizan,T.S.）ら、アーキ・ニューロル(Arch Neurol）、１９８９　４６（１２）：１２８０−１２８３頁、ピッシャー・ピイ・エイおよびエイチ・バース（Fischer,P.A. and H.Baas)、ジャーナル・オブ・ニューラル・トランズム（J.Neural Transm.)（補稿）、１９８７　２５：１３７−１４７頁、ゴルベ・エル・アイ（Golbe,L.I.)、ニューロロジー（Neurology)、１９８９　３９：１１０９−１１１１頁、リーバーマン・エイ・エヌ（Lieberman,A.N.)ら、ニューヨーク・ステイト・ジャーナル・オブ・メド（N.Y.State J. Med.)、１９８７　８７：６４６−６４９頁、ポウエ・ダブリュー、エフ・ゲルステルンブランド、およびジイ・ランソマイヤー（Poewe,W.,F. Gerstenbrand,and G.Ransomayer)、ジャーナル・オブ・ニューラル・トランズム（J.Neural Transm.)（補稿）、１９８７　２５：１３７−１４７頁、セダルバウム・ジェイ・エム、エム・ヘイ、およびエフ・エイチ・マクドウェル（Cedarbaum,J.M.,M.Hoey,and F.H.McDowell)、ジャーナル・オブ・ニューロサージェリー・サイキフトリー（J. Neurol Neurosurg Psychiatry)、１９８９　５２（２）：２０７−２１２頁、およびゴルベ・エル・アイ、ジェイ・ダブリュー・ラングストン、およびアイ・ショルソン（Golbe,L.I.,J.W.Langston,and I. Shoulson)、ドラッグズ（Drugs)、１９９０　３９（５）：６４６−６５１頁）。
【０００５】
　デプレニールはパーキンソン病の進行を遅延させるという報告（パーキンソン・エス・ジイ（Parkinson,S.G.)、アーキ・ニューロル（Arch Neurol)４６、１０５２−１０６０（１９８９）およびユー・エス・エイ（U.S.A.)、ピイ・エス・ジイ　ニュー・イングランド・ジャーナル・オブ・メディシン（P.S.G. N. Engl. J.Med.)、３２１、１３６４−１３７１（１９８９））により、同病気の患者に徐々に投与されているが、その作用を説明する満足すべきメカニズムは提案されていない。
【０００６】
　デプレニールをパーキンソン病（ＰＤ）で使用することの支持は、ダタトップ（DATATOP)プロジェクト（パーキンソン・エス・ジイ（Parkinson,S.G.)、アーキ・ニューロル（Arch Neurol)４６、１０５２−１０６０（１９８９）およびユー・エス・エイ（U.S.A.)、ピイ・エス・ジイ　ニュー・イングランド・ジャーナル・オブ・メディシン（P.S.G. N. Engl. J.Med.)、３２１、１３６４−１３７１（１９８９））の知見に大いに基づくものである。この多中心的研究は、デプレニールは、能力障害症候群の開始を遅らせ、ほぼ１年までのさらなる薬理学的治療を必要とすることを報告しており；これらの知見は少数の研究を除き独立して再度生まれている（テトルド・ジェイ・ダブリューおよびラングストン・ジェイ・ダブリュー（Tetrud,J.W. & Langston J.W.)、サイエンス（Science)２４５、５１９−５２２（１９８９））。不幸にも、ダタトップ（DATATOP)研究のデザインおよびその結論は、強烈な批判の対象となった（ランダウ・ダブリュー・エム（Landau,W.M.)、ニューロロジー（Neurology)４０、１３３７−１３３９（１９９０））。さらに、これらのプロジェクトの著者らは、その結果は、デプレニールがＰＤの進行を遅らせるという仮説（パーキンソン・エス・ジイ（Parkinson,S.G.)、アーキ・ニューロル（Arch Neurol)４６、１０５２−１０６０（１９８９）、ユー・エス・エイ（U.S.A.)、ピイ・エス・ジイ　ニュー・イングランド・ジャーナル・オブ・メディシン（P.S.G. N. Engl. J.Med.)、３２１、１３６４−１３７１（１９８９）およびテトルド・ジェイ・ダブリューおよびラングストン・ジェイ・ダブリュー（Tetrud,J.W. & Langston,J.W.)、サイエンス（Science)２４９、３０３−３０４（１９９０））と一致するが、「彼らは決して証明していない」と述べている（テトルド・ジェイ・ダブリューおよびラングストン（Tetrud,J.W. & Langston,J.W.)、サイエンス（Science)２４９、３０３−３０４（１９９０））。
【０００７】
　デプレニールは霊長類においてＭＰＴＰ−誘発神経毒をブロックするという観察（ラングストン・ジェイ・ダブリュー、フォルノ・エル・エス、ロバート・シイ・エスおよびイルウィン・アイ（Langston,J.W.,Forno,L.S.,Robert,C.S.& Irwin,I.)、ブレイン・リサーチズ（Brain Res.)２９２、３９０−３９４（１９８４））およびＭＰＴＰのそれと類似の作用メカニズムを伴う他の環境毒素はＰＤの病因と関連し得る（タンナー・シイ・エム（Tanner,C.M.)、ティ・アイ・エヌ・エス（TINS)１２、４９−５４（１９８９））という仮説に基づき、生存しているドーパミン作動性黒質線状体（ＤＮＳ）ニューロンのフリーラジカル誘発死滅を最小化することによって、ＭＡＯ−Ｂ阻害剤であるデプレニールは、ＰＤの進行を遅延し得ると提案されている（ラングストン・ジェイ・ダブリュー（Langston,J.W.)、パーキンソンズ・ディジーズ・アンド・ムーブメント・ディスオーダーズ（Parkinson's Disease and Movement Disorders)（ヤニコビック・ジェイ・アンド・トロサ・イー（Jankovic,J. & Tolosa,E.編)７５−８５（アーバンおよびシュバルツェンベルグ（Urban and Schwarzenberg)、バルチモア−ミューニッヒ（Baltimore−Munich)１９８８）。しかしながら、ＭＡＯ−Ｂはドーパミン作動性ニューロンには存在しないため（ビンセント・エス・アール(Vincent,S.R.)、ニューロサイエンス（Neuroscience)２８、１８９−１９９（１９８９）、ピンタリ・ジェイ・イー（Pintari,J.E.)ら、ブレイン・リサーチズ（Brain Res.)２７６、１２７−１４０（１９８３）、ウェストランド・ケイ・エヌ、デニイ・アール・エム（Westlund,K.N.,Denney,R.M.）、コヘルスペルゲル・エル・エム（Kochersperger L.M.)、ローズ・アール・エムおよびアベル・シイ・ダブリュー（Rose,R.M. & Abell,C.W.)、サイエンス（Science)（ワシントン・ディーシー（Wash.D.C.))２３０、１８１−１８３（１９８５）およびウェストランド・ケイ・エヌ、デニイ・アール・エム、ローズ・アール・エムおよびアベル・シイ・ダブリュー、ニューロサイエンス（Neuroscience)２５、４３９−４５６（１９８８）、ＭＰＴＰのそれと同様の方法で、ＤＮＳニューロンを損傷し得るドーパミン非作動性ニューロンで他の高毒性化合物が形成されるのでないならば、その阻害はどのようにしてＤＮＳニューロンを保護するのかは不明確である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
　驚くべきことに、いずれの研究も、ＭＰＴＰが中枢神経系からクリアランスされた後に測定した場合、デプレニールがニューロンの生き残りに影響するか否かを決定するための、ＤＮＳニューロン数の測定を含んでいない。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
　本発明は、患者において神経細胞機能を維持し、その喪失を防止し、および／または回復させる活性につき薬物を試験する方法に関する。
　本発明の１の態様において、神経毒活性を有する薬剤を試験動物に投与し；薬物を該試験動物に投与し；該薬剤の投与の完了の２０日間以内に該試験動物を殺害し；黒質緻密体を通る脳の連続切片を採取し；該黒質緻密体を通る脳の１つ置きの連続切片におけるチロシンヒドロキシラーゼ陽性の細胞体の数を測定し、かつ、介在する切片におけるニッスル小体染色陽性の黒質緻密体の数を測定し；次いで、測定したチロシンヒドロキシラーゼ陽性の細胞体およびニッスル小体染色陽性の細胞体の数を、該薬剤を投与していない対照動物の黒質緻密体を通る脳の連続切片におけるチロシンヒドロキシラーゼ陽性の細胞体およびニッスル小体染色陽性の細胞体の数と比較することを特徴とする、患者において神経細胞機能を維持し、その喪失を防止し、および／または回復させる活性について該薬物を試験する方法を提供する。
【００１０】
　本発明のもう１の態様において、試験動物に対して軸索切断を施し；試験動物に薬物を投与し；軸索切断の部位からの組織学的切片についてコリンアセチルトランスフェラーゼ陽性の細胞体の数を測定し；測定したコリンアセチルトランスフェラーゼ陽性の細胞体の数を、該薬物を投与していない対照動物における軸索切断の部位からの連続区画におけるコリンアセチルトランスフェラーゼ陽性の細胞体の数と比較することを特徴とする、患者において神経細胞機能を維持し、その喪失を防止し、および／または回復させる活性につき該薬物を試験する方法が提供される。
【発明の効果】
【００１１】
　本発明によれば、神経細胞機能を維持し、喪失を防止し、または回復させる活性について薬剤を試験して、かかる活性を有する薬剤を選択し得る。
【００１２】
発明の詳細な記載
　本発明者らは、神経毒素１−メチル−４−フェニル−１，２，５，６−テトラヒドロピリジン（ＭＰＴＰ）によって誘発されたニューロン死滅の時間的進行を研究した。モノアミンオキシダーゼ−Ｂ（ＭＡＯ−Ｂ）の作用下、ジヒドロピリジニウム中間体（ＭＰＤＰ＋）を介して、ＭＰＴＰをその毒性代謝産物１−メチル−４−フェニル−ピリジニウムイオン（ＭＰＰ＋）まで酸化した。ＭＰＴＰはドーパミン非作動性細胞においてＭＰＰ＋に変換され、放出され、ドーパミン作動性細胞に摂取され、そこで、その神経毒効果を発揮すると信じられている（ビンセント・エス・アール（Vincent S.R.）、ニューロサイエンス（Neuroscience）、１９８９、２８、１８９−１９９頁、ピンタリ・ジェイ・イー（Pintari,J.E.）ら、ブレイン・リサーチズ（Brain Res.）、１９８３、２７６（１）、１２７−１４０頁、ウェストランド・ケイ・エヌ（Westlund,K.N.）ら、ニューロサイエンス（Neuroscience）、１９８８、２５（２）、４３９−４５６頁、ヤビッチ・ジェイ・エイ（Javitch）ら、ピイ・エヌ・エイ・エス（Ｐ.Ｎ.Ａ.Ｓ.）ＵＳＡ１９８５、８２（７）、２１７３−２１７７頁、メイヤー（Mayor）、１９８６＃１７６３、およびソンサッラ・ピイ・ケイ（Sonsalla,P.K.)ら、神経科学についての第１７回年会、ニューオリンズ、ルイジアナ州、米国、１９８７年１１月、１９８７、１３（２））。
【００１３】
　ＭＰＴＰはマウスにおいて急速に代謝され、クリアランスされる（ジォナネセン・ジェイ・エヌ（Johannessen,J.N.)、ライフ・サイエンス（Life Sci.)、１９８５、３６：２１９−２２４頁、マーケイ・エス・ピイ（Markey,S.P.)ら、ネイチャー（Nature)、１９８４、３１１、４６５−４６７頁、ラオ・ワイ・エス（Lau,Y.S.)ら、ライフ・サイエンス（Life Science)、１９８８、４３（１８）：１４５９−１４６４頁）。急速な代謝およびＭＰＴＰの分泌とは対照的に、本発明者らは、ドーパミン作動性ニューロンの喪失は、ＭＰＴＰ投与の停止後２０日間にわたって進行することを証明した。ＭＰＴＰ（３０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）を連続５日間マウスに腹腔内投与して（合計累積用量１５０ｍｇ／ｋｇ）、黒質緻密体（ＳＮｃ）および腹側被蓋領域（ＶＴＡ）におけるＴＨ−免疫陽性（ＴＨ＋）ニューロンのほぼ５０％の喪失を生じることを示した（ＭＰＴＰ用量およびカテコールアミン作動性ニューロンの喪失の間の関係については、ここに参照して一体化させるセニウーク・エヌ・エイ、ダブリュー・ジイ・タットン、およびシイ・イー・グリーンウッド（Seniuk,N.A.,W.G.Tatton,and C.E.Greenwood)、ブレイン・リサーチズ（Brain Res.)、１９９０、５２７：７〜２０頁参照）。また、本発明者らは、ＴＨ＋ＳＮｃニューロンの死滅には同様の時間的進行が続くことを見いだした。ＴＨ＋細胞体の２０−３０％は、ＭＰＴＰの投与完了後５日までに喪失し；ＴＨ＋ニューロンの喪失は次の１０〜１５日にわたり継続し、しかる後は検出可能な喪失はなかった。前記した分泌データに基づくと、ＴＨ＋ニューロンのこの継続的な喪失は、ＭＰＰ＋の存在によっては説明できない。また、ＴＨ＋およびニッスル小体染色ＳＮｃ細胞体のカウントのジョイント・プロットにより、ＴＨ＋細胞体の喪失は、ＴＨ免疫反応性の喪失よりむしろＳＮｃニューロンの死滅を表すことが確認された。
【００１４】
　ＴＨ＋ＳＮｃ細胞体の喪失と平行して、また、本発明者らは、ＳＮｃおよび腹側被蓋領域（ＶＴＡ）におけるＴＨタンパクの免疫密度における変化も見い出した。セーライン処理対照と比較して、５日におけるＭＰＴＰ−処理動物につき、残りのＴＨ＋ＤＮＳニューロンの細胞体では、細胞質ＴＨ免疫密度は４０％低かった。平均細胞体ＴＨ−免疫密度は、時間と共に増大し、ＭＰＴＰに続く２０日後までには対照レベルに到達した。線条体ＤＡ濃度および運動のごときドーパミン依存性挙動における変動は、ＴＨ−免疫化学における変化と平行することが判明した。さらに、本発明者らは、ＤＯＰＡＣ／ＤＡ比によって評価した線条体ＤＡ含量およびＤＡ合成における増加もまた挙動の回復に平行するらしく、ＭＰＴＰ暴露で生き残るＶＴＡおよびＳＮｃニューロンにおけるＤＡの含量および合成の増大を示した。
【００１５】
　かくして、本発明者らは、重要なことには、以下のＭＰＴＰ−誘発ニューロン損傷においては、ＴＨ＋ＳＮｃニューロンが効果的な修復および回復を受けるか、あるいはそうでなければそれらが死滅するという臨界的な２０日の期間があることを見い出した。
【００１６】
　デプレニールについてのほとんどの研究は、ＭＡＯ−Ｂ活性の阻害はin vivoにてＭＰＴＰからＭＰＰ＋への変換およびＭＰＴＰの神経毒性をブロックすることを示すのを企画してきた。その結果、デプレニールは、通常、ＭＰＴＰ暴露の間にＭＡＯ−Ｂ活性が阻害されることを保証するために、ＭＰＴＰ投与の先立つ数時間または数日間、および次いでその間を通じて投与された（例えば、コーエン・ジイ（Cohen,G.)ら、ユーロピーアン・ジャーナル・オブ・ファルマコロジー（Eur.J.Pharmacol.)、１９８４、１０６：２０９−２１０頁、ヘイキッラ・アール・イー（Heikkila,R.E.)ら、ユーロピーアン・ジャーナル・オブ・ファルマコロジー（Eur.J.Pharmacol.）、１９８５、１１６（３）：３１３−３１８頁、ヘイキッラ・アール・イー（Heikkila,R.E.)ら、ネイチャー（Nature)、１９８４、３１１：４６７−４６９頁およびラングストン・ジエイ・ダブリュー（Langston,J.W.)ら、サイエンス（Science)（ワシントン・ディー・シイ）、１９８４、２２５（４６６９）：１４８０−１４８２頁参照）。匹敵する結果が、ＡＧＮ−１１３３、ＡＧＮ−１１３５およびＭＤ２４０９２８のごとき他の選択的ＭＡＯ−Ｂの阻害剤を用いて得られており（ヘイキッラ・アール・イー（Heikkila,R.E.)ら、ユーロピーアン・ジャーナル・オブ・ファルマコロジー（Eur.J.Pharmacol.）、１９８５、１１６（３）：３１３−３１８頁およびフラー・アール・ダブリューおよびエル・エス・ケイ・ヘムリック（Fuller,R.W.and L.S.K. Hemrick)、ライフ・サイエンス(Life Sci.)、１９８５、３７（１２）：１０８９−１０９６頁）、デプレニールの作用メカニズムはＭＡＯ−Ｂをブロックし、それにより、当該毒素がその活性形に変換されるのを防ぐその能力によって媒介されることを示唆する。
【００１７】
　前記研究とは対照的に、本発明者らは、ＭＰＴＰのＭＰＰ＋への変換をブロックするその能力とは独立しているＤＳＮニューロンに対してデプレニールが影響し得るか否かを決定することに興味を持った。ＭＰＴＰ−処理マウス(１５０mg／ｋｇの累積用量）には、ＭＰＴＰ投与後３日ないし２０日にデプレニールを摂取させた（０.０１、０.２５、１０ｍｇ／ｋｇ i.p.；１週間当たり３回)。デプレニール投与は３日まで差し控えて、すべてのマウスがＭＰＰ＋のかなりのレベルに暴露され、すべてのＭＰＴＰおよびその代謝産物が中枢神経系から除去されてしまうのを確実とした。ＭＡＯ−Ｂ阻害剤であるクロルギリンもまた該ＭＰＴＰ−処理マウスに投与した。
【００１８】
　本発明者らは、セーライン処理マウスにおいては、約３８％のドーパミン作動性黒質緻密体（ＤＳＮ）ニューロンが２０日間にわたって徐々に死滅することを見いだした。ＤＳＮニューロンの数はＭＰＴＰ−セーラインおよびＭＰＴＰ−クロルギリン処理マウスにおいて実質的に同一であることが判明した。しかしながら、デプレニールはＭＰＴＰ−誘発損傷で生き残るＤＳＮニューロン数を増加させ（１６％喪失−０.０１ｍｇ／ｋｇ、１６％喪失−０.２５ｍｇ／ｋｇ、および１４％喪失−１０ｍｇ／ｋｇ）、すべての用量は同等の能力である。かくして、本発明者らは、デプレニールは死滅するニューロンを助け、効果的な修復を受けるその確率を増大させ、ドーパミン合成に必要なチロシンヒドロキシラーゼのごとき酵素のそれらの合成を再確立し得ることを示した。これは、さもなければ死滅してしまうニューロンにおいて損傷から死滅までを逆行させる、末梢または経口投与処理の最初の報告であると信じる。
【００１９】
　また、本発明者らは、デプレニール（０.２５ｍｇ／ｋｇまたは０.０１ｍｇ／ｋｇ）投与後２４時間、および１８日後（すなわち、動物を２０日において免疫化学につき犠牲した直後である２１日に対応）にＭＡＯ−ＡおよびＭＡＯ−Ｂを測定して、処理期間の最初および最後におけるＭＡＯ−ＡおよびＭＡＯ−Ｂ活性の測定を得た。驚くべきことに、０.０１ｍｇ／ｋｇ用量は、２つの期間において、いずれの有意なＭＡＯ−ＡまたはＭＡＯ−Ｂ阻害も生じないことを見いだした。かくして、０.０１ｍｇ／ｋｇデプレニールでのＤＳＮニューロンの顕著な救済はＭＳＯ−Ｂ阻害に帰されるのではないようである。
【００２０】
　前記のような発明者の研究により、デプレニールが、毒性代謝物ＭＰＰ＋へのＭＰＴＰ変換を阻害することによって、その復活効果を媒介している可能性が排除された。その結果は、デプレニールがこれまで同定されていない作用機序を有することを示唆している。ドーパミン作動性ニュートロン自体におけるデプレニールの直接的効果を、これら細胞中にＭＡＯ-Ｂが存在しないことにより調和させることは困難であり（ヴィンセント，エス・アール（Ｖincent，Ｓ.Ｒ.)ら、ニューロサイエンス（Ｎeuroscience）28，189-199（1989)；ピンターリ，ジェイ・イー（Ｐintari，Ｊ.Ｅ.)ら、ブレイン・リサーチ（Ｂrain Ｒes.）276，127-140（1983)；ウェストルンド，ケイ・エヌ（Ｗestlund，Ｋ.Ｎ.)ら、サイエンス（Ｓcience)(ワシントン，Ｄ.Ｃ.）230、181-183（1988)およびウェストルンド，ケイ・エヌ（Ｗestlund，Ｋ.Ｎ.)ら、ニューロサイエンス（Ｎeuroscience）25，439-456（1988))、これらの結果がドーパミン作動性ニューロンそれ自体中のデプレニールによるＭＡＯ-Ｂ阻害に基づいて説明することができる見込みはない。さらに、０.０１ｍｇ／ｋｇのデプレニールを投与したＭＰＴＰマウス中におけるＭＡＯ-ＡおよびＭＡＯ-Ｂの測定によると、デプレニールがその復活効果をＭＡＯ-Ｂの阻害によって媒介することは、非常に疑わしくなった。デプレニールの復活効果は、神経系の細胞のいずれかによって媒介され得るのであり、その機序には、おそらく、ＭＡＯ-Ｂをブロックする構造に関連していない構造により、それら細胞上のレセプター（例えば、ニューロン親和性因子に対するレセプター）の活性化が関係している。このことは、デプレニールが、ちょうどドーパミン作動性ニューロンのみに影響を与えるのではなく、グリア栄養因子に応答する脳内におけるすべてのニューロンの死を防ぐのを助けることができることを意味するのであろう。従って、パーキンソン病に対して治療上効果的であるだけでなく、他の神経変性病や神経筋病、ならびに低酸素症、虚血、卒中または外傷による脳の損傷に効果的であり、脳の加齢化に関連するニューロンの進行性減少さえ遅延させ得る（コールマン，ピー・ディー（Ｃoleman，Ｐ.Ｄ.)およびフラッド，ディー・ジー（Ｆlood Ｄ.Ｇ.)、ニューロバイオロジー・オブ・エイジング（Ｎeurobiol.Ａging）8，521-845（1987)；マックギーア，ピー・エル（ＭaＧeer，Ｐ.Ｌ.)ら、パ−キンソニズム・アンド・エイジング（Ｐarkinsonism and Ａging）中、(ディー・ビー・カルネ（Ｄ.Ｂ.Ｃalne)、ディー，シー，−ジー・コーミ（Ｄ,Ｃ,-Ｇ.Ｃomi）およびアール・ホロウスキー（Ｒ.Ｈorowski）編）25-34（プレナム（Ｐlenum)，ニューヨーク，1989)。また、それは、外傷性および非外傷性の末梢神経損傷における筋肉の再支配を刺激するのに有用であり得る。
【００２１】
　１４日齢で軸索切断した後のラットの顔面運動ニューロンの生存率を調べたところ、デプレニールは軸索切断してから２１日後に生存している運動ニューロンの数を２.２倍に増大させることがわかった（本願の実施例３を参照)。従って、デプレニ−ルは軸索切断によって惹起される栄養供給の減少を部分的に補償することができることが示され、筋萎縮性側索硬化症における運動ニューロンの死の治療に、デプレニールがある役割を果たすことを示唆している。
【００２２】
　上で考察したように、本発明は、動物における神経細胞機能を維持し、その喪失を防止し、および／または回復させるための、デプレニールまたはデプレニールの誘導体もしくは類似体の使用；かかる用途に適したデプレニールを含有する医薬組成物；および神経細胞機能を維持し、その喪失を防止し、または回復させることによる神経系疾患の治療方法に関する。
【００２３】
　本発明で使用し得るのは、デプレニール、好ましくはＬ-デプレニール（ザ・メルク・インデックス（Ｔhe Ｍerck Ｉndex)、第11版、2893を参照)；デプレニールの誘導体、好ましくはデプレニールの医薬上許容される塩およびエステル；あるいは、デプレニールの類似体、好ましくはデプレニールの構造類似体、またはパルギリン、ＡＧＮ-１１３３、ＡＧＮ-１１３５およびＭＤ２４０９２８などのデプレニールの機能類似体；あるいは、イミプラミン、クロロプロマジン、アミトリプチリン、(−)２,３-ジクロロ-α-メチルベンジルアミン、Ｎ-シクロプロピル-置換アリールアルキルアミン類などの、必要に応じてＭＡＯ-Ｂを阻害する他の薬剤である。
【００２４】
　デプレニールまたはデプレノールの誘導体もしくは類似体の投与は、動物の神経細胞機能を維持し、その喪失を予防し、および／または回復させ得るので、神経変性病や神経筋病の治療に、ならびに低酸素症、低血糖症、虚血発作または外傷による脳の損傷に使用し、また、脳の加齢化に関連するニューロンの進行性減少さえ遅延させるために使用し得る。さらに詳しくは、デプレニールは、パーキンソン病、ＡＬＳ、頭部外傷または脊髄損傷や、虚血発作、呼吸不全による低酸素症、溺水、持続性痙攣、心臓停止、一酸化炭素への曝露、毒素への曝露、またはウイルス感染の直後の患者の治療に使用し得る。また、デプレニールまたはデプレニールの誘導体もしくは類似体は、外傷性および非外傷性の末梢神経損傷における筋肉の再支配を刺激するためにも使用し得る。
【００２５】
　本発明の医薬組成物は、デプレニールまたはデプレニールの誘導体もしくは類似体を、単独で含有するか、あるいは他の活性物質と共に含有する。かかる医薬組成物の使用は、経口的、局所的、直腸内、非経口的、局部的、吸入的または大脳内とすることができる。従って、それらは、固形または半固形、例えば、丸剤、錠剤、クリーム剤、ゼラチンカプセル剤、カプセル剤、坐剤、軟質ゼラチンカプセル剤、ゲル剤、メンブレン剤、チューブ剤である。非経口的な用途および大脳内での用途の場合には、筋肉内または皮下投与の形態を使用することができるか、あるいは、注入用または静脈内もしくは大脳内注射用の形態を使用することができ、従って、活性化合物の溶液として、あるいは、前記の用途に適すると共に生理学的液体に適合するモル浸透圧濃度を有する１種またはそれ以上の医薬上許容される賦形剤または希釈剤と混合すべき活性化合物の粉末として、調製することができる。局部的な用途の場合には、局部用のクリーム剤や軟膏剤の形態またはスプレー剤の形態の製剤を考える必要があり、吸入用途の場合には、スプレー剤、例えば鼻スプレー剤の形態の製剤を考える必要がある。
【００２６】
　本発明の製剤は、ヒトまたは動物への投与用とすることができる。それらは、液剤、スプレー剤、軟膏剤およびクリーム剤の場合には、好ましくは約１〜４ｍｇの活性成分を含有し、固形製剤の場合には、約０.１％〜５％、好ましくは約０.１％〜１０％の活性成分を含有する。投与すべき用量は、個々の必要性、所望の効果および選択された投与経路に依存するが、皮下、筋肉内または大脳内の注射によるヒトへの毎日投与量は、一般的には、０.１〜１０ｍｇ／日の活性物質、好ましくは１〜１０ｍｇ／日、最も好ましくは５〜１０ｍｇ／日の範囲内で変化する。
【００２７】
　前記の医薬組成物は、患者に投与することができる医薬上許容される組成物を調製するためのそれ自体公知の方法によって、有効量の活性物質を医薬上許容される賦形剤との混合物に組み合わせるように、調製することができる。適当な賦形剤は、例えば、レミントンの医薬品科学（Ｒemington's Ｐharmaceutical Ｓciences)[レミントンの医薬品科学（Ｒemington's Ｐharmaceutical Ｓciences)、マック・パブリッシング・カンパニー（Ｍack Ｐublishing Ｃompany)、イーストン、ペンシルベニア州、ＵＳＡ1985]。
【００２８】
　前記の医薬品組成物は、１種またはそれ以上の医薬上許容される賦形剤または希釈剤と共に、適当なｐＨと生理学的液体に対する等浸透圧性とを有する緩衝溶液中に含まれるデプレニールまたはデプレニールの誘導体もしくは類似体の溶液を包含するが、それに限定されるわけではない。
【００２９】
　前記のように、本発明はまた、患者の神経細胞機能を維持し、その喪失を防止し、および／または回復する活性について薬物を試験する方法に関する。
　本発明のある具体例に従って、患者の神経細胞機能を維持し、その喪失を防止し、および／または回復する活性について薬物を試験する方法であって、神経毒性活性を有する薬剤を試験動物に投与し；試験動物に前記薬物を投与し；前記薬剤の投与終了後２０日以内に該動物を殺害し；黒質緻密層を通る脳の連続切片を取り；黒質緻密層を通る脳の１つ置きの連続切片におけるチロシンヒドロキシラーゼ陽性の細胞体の数を測定し、かつ、介在する切片におけるニッスル（Ｎissl）染色陽性の黒質緻密層の数を測定し；そして、チロシンヒドロキシラーゼ陽性の細胞体およびニッスル染色陽性の細胞体の数を、前記薬剤を投与していない対照動物の黒質緻密層を通る脳の連続切片におけるチロシンヒドロキシラーゼ陽性の細胞体およびニッスル染色陽性の細胞体の数と比較することからなる方法が提供される。
【００３０】
　ある好ましい具体例では、神経毒性活性を有する薬剤は、ＭＰＴＰであり、最も好ましくは、３０ｍｇ／ｋｇ／日の量のＭＰＴＰであり、８週齢のマウス、好ましくはＣ５７ＢＬマウスに、５日間続けて（第−５〜０日；合計の好ましい累積的用量は１５０ｍｇ／ｋｇ）腹腔内投与する。ＭＰＴＰ投与を中止（第０日）してから３日後に、セーライン（対照動物）または適当な用量の薬物（試験動物）を用いて処理を開始する。好ましくは、薬物の投与を第３日目まで差し控えて、すべてのマウスが同等レベルのＭＰＰ＋に曝露されることと、すべてのＭＰＴＰおよびその代謝物が中枢神経系から除去されていることを確実にする。マウスは、最後のＭＰＴＰ注射を行ってから２０日後に、麻酔剤（ペントバルビタール）を過剰投与した後で、パラホルムアルデヒドを灌流することによって殺害する。脳は、中心線に沿って縦に２つに切断し、半分の脳を、表面の標認点が縦方向に完全に一致するように、ティッシュ-テック（Ｔissue-Ｔek）を用いて貼り合わせる。貼り合わせた脳を−７０℃のメチルブタン中で冷凍し、１０μｍの連続切片を、各ＳＮｃの縦方向の全長を通って切断する。
【００３１】
　黒質緻密層を通る脳の連続切片中のチロシンヒドロキシラーゼ陽性の細胞体の数は、一般的には、セニウク，エヌ・エイ（Ｓeniuk，Ｎ.Ａ.)ら、ブレイン・リサーチ（Ｂrain Ｒes.）527，7-20（1990）およびタットン，ダブリュー・ジー（Ｔatton，Ｗ.Ｇ.)ら、ブレイン・リサーチ（Ｂrain Ｒes.）527，21-32（1990)[これらは、出典を示すことにより明細書の一部とする］に記載され、以下のように変形された方法により、好ましくはポリクローナルＴＨ抗体を一次抗体として用い、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）との標準的なアビジン-ビオチン反応を可視化用の色原体として用いて測定し得る。スライドに載せた切片を、０.２％トリトン（Ｔriton)／０.１Ｍリン酸緩衝液中における非標識の一次ＴＨ抗血清と共に、４℃で一晩インキュベートする。組織をリン酸緩衝液で洗浄し、次いでビオチニル化ヤギ抗ウサギＩｇＧ二次抗体と共に、１時間インキュベートした後、アビジン-ＨＲＰインキュベーションに供する。０.０１％過酸化水素中におけるＤＡＢの０.０５％溶液を用いて、免疫反応した細胞体を可視化する。
【００３２】
　介在する切片は、セニウク（Ｓeniuk)ら、ブレイン・リサーチ（Ｂrain Ｒes.）527:7，1990およびタットン（Ｔatton)ら、ブレイン・リサーチ（Ｂrain Ｒes.）527：21，1990［これらは、出典を示すことにより明細書の一部とする］に記載されている手法に従って、ニッスル染色することにより、核の輪郭を明確にし得る。
【００３３】
　本発明の別の具体例に従って、患者の神経細胞機能を維持し、その喪失を防止し、および／または回復する活性について薬物を試験する方法であって、試験動物の軸索切断を行い；該試験動物に薬物を投与し；軸索切断部位由来の組織学的切片について、コリンアセチルトランスフェラーゼ陽性の細胞体の数を測定し；そして、測定されたコリンアセチルトランスフェラーゼ陽性の細胞体の数を、前記薬物を投与していない対照動物の軸索切断部位由来の連続切片におけるコリンアセチルトランスフェラーゼ陽性の細胞体の数と比較するからなる方法が提供される。
【００３４】
　好ましくは、試験動物、好ましくはラットに対して、片側の顔面神経の横断面切断を行い、対をなした損傷グループおよび無損傷グループを、セーライン（対照動物）または適当な用量の薬物（試験動物）で処理する。軸索切断の２１日後にラットを殺害し、タットン，ダブリュー（Ｔatton，Ｗ.Ｇ.)ら、ブレイン・リサーチ(Ｂrain Ｒes.）527：21、1990［これは、出典を示すことにより明細書の一部とする］の手法を用いて、脳幹の連続冠状縫合の組織学的切片を、コリンアセチルトランスフェラーゼ（ＣｈＡＴ）免疫細胞化学的に調べる。
【００３５】
　以下の非限定的な実施例は、本発明を例示するものである：
実施例
実施例１
　本実施例は、ＭＰＴＰを投与してからデプレニールによって救済した黒質緻密層（ＳＮｃ）由来のチロシンヒドロキシラーゼ免疫陽性（ＴＨ＋）ニューロンの減少を示す。
　この研究の第１の部分では、ＭＰＴＰに誘発されたニューロンの死の時間経過が、以下のように確立された。ＭＰＴＰ（３０ｍｇ／ｋｇ／日）を、８週齢の同系Ｃ５７ＢＬマウス（ジャクソン・ラボラトリー（Ｊackson Ｌaboratories）のナショナル・インスティテューツ・オブ・エイジング・コロニー（Ｎational Ｉnstitutes of Ａging colony)、ＵＳＡ（Ｃ５７ＢＬ／ＮＮｉａ))に、５日間続けて（ｎ＝６／時間間隔で）腹腔内投与した（合計の累積的用量は１５０ｍｇ／ｋｇ)。マウスを麻酔剤（ペントバルビタール）を過剰投与した後で、最後にＭＰＴＰを注射してから５、１０、１５、２０、３７および６０日後に、等張性セーライン（５％レオマクロデックス（rheomacrodex）および０.００８％キシロカイン（xylocane）を含有）および４％パラホルムアルデヒドを灌流することによって殺害した。２つに切断された脳を０.１ｍリン酸緩衝液中における４％パラホルムアルデヒドに一晩浸漬し、２０％スクロース中に入れた。
【００３６】
　この研究の第２の部分では、ＭＰＴＰに誘発されたＴＨ＋ＳＮｃニューロン減少のデプレニールによる救済が以下のように示された。ＭＰＴＰ（３０ｍｇ／ｋｇ／日）を、８週齢のＣ５７ＢＬマウスに、５日間続けて（ｎ＝６〜８／処理グループで）腹腔内投与した（第−５〜０日；合計の累積的用量は１５０ｍｇ／ｋｇ)。ＭＰＴＰ投与を中止（第０日）してから３日後に、マウスをセーライン、デプレニール（デプレニール・カナダ（Ｄeprenyl Ｃanada)(０.０１、０.２５または１０ｍｇ／ｋｇ腹腔内）またはクロロギリン（シグマ・ケミカル・カンパニー（Ｓhigma Ｃhemical Ｃompany，ＵＳＡ) (２ｍｇ／ｋｇ）で、１週間に３回処理した。デプレニール投与を第３日目まで差し控えて、すべてのマウスが同等レベルのＭＰＰ＋に曝露されることと、すべてのＭＰＴＰおよびその代謝物が中枢神経系から除去されていることを確実にした。デプレニールの用量は、デプレニールがラットの寿命を延長し、ＭＡＯ-Ｂ活性を約７５％だけ阻害するが、ＭＡＯ-Ｂ活性には全く効果を有しないか（０.２５ｍｇ／ｋｇ）、あるいはＭＡＯ-ＡおよびＭＡＯ-Ｂの両方の阻害を惹起することができる（１０ｍｇ／ｋｇ）ことを示す研究に使用される用量を反映するように選択した（ノール（Ｋnoll)、ジェイ・マウント・シナイ・ジェイ・メッド（Ｊ．Ｍt．Ｓinai Ｊ．Ｍed.）55，67-74（1988）およびノール（Ｋnoll)、ジェイ・メック・エイジング・デブ（Ｊ．Ｍech．Ａgeing．Ｄev.）46，237-262（1988)、デマレスト，ケイ・ティ（Ｄemarest，Ｋ.Ｔ.）およびアザルグ，エイ・ジェイ（Ａzzarg Ａ.Ｊ.)：モノアミン・オキシダーゼ：構造、機能および別機能（Ｍonoamine Ｏxidase：Ｓtructure，Function and Ａltered Ｆunction)(ティ・ピー・シンガー（Ｔ.Ｐ.Ｓinger)、アール・ダブリュー・フォン・コルフ（Ｒ.Ｗ.Ｖon Ｋorff)、ディー・エル・マーフィー（Ｄ.Ｌ.Ｍurphy)(編))中、アカデミック・プレス（Ａcademic Ｐress)、ニューヨーク（1979）423-430頁)。０.０１ｍｇ／ｋｇのデプレニール用量も選択された；この用量では、脳の組織に達するのは１０−７Ｍ未満である。マウスは、最後のＭＰＴＰ注射を行ってから２０日後に、麻酔剤（ペントバルビタール）を過剰投与した後で、パラホルムアルデヒドを灌流することによって殺害した。
【００３７】
　この研究の両方の部分に関して、脳は、中心線に沿って縦に２つに切断し、半分の脳を、表面の標認点が縦方向に完全に一致するように、ティッシュ-テック(Ｔissue-Ｔek)を用いて貼り合わせた。貼り合わせた脳を−７０℃のメチルブタン中で冷凍し、１０μｍの連続切片を、各ＳＮｃの縦方向の全長を通って切断した。
【００３８】
　１つ置きの切片を、一般的には、セニウク，エヌ・エイ（Ｓeniuk，Ｎ.Ａ.)ら、ブレイン・リサーチ（Ｂrain Ｒes.）527，7-20（1990）およびタットン，ダブリュー・ジー（Ｔatton，Ｗ.Ｇ.)ら、ブレイン・リサーチ（Ｂrain Ｒes.）527，21-32（1990)[これらは、出典を示すことにより明細書の一部とする］に記載され、以下のように変形された方法により、ポリクローナルＴＨ抗体を一次抗体として用い、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ)との標準的なアビジン-ビオチン反応（エイ・ビー・シー・キット（ＡＢＣ Ｋit)、ベクター・ラボズ（Ｖector Ｌabs)）を可視化用の色原体として用いたＴＨ免疫細胞化学的に調べた。スライドに載せた切片を、０.２％トリトン（Ｔriton)／０.１Ｍリン酸緩衝液中における非標識の一次ＴＨ抗血清（オイゲン・テック（Ｅugene Ｔech)）と共に、４℃で一晩インキュベートした。組織をリン酸緩衝液で洗浄し、次いでビオチニル化ヤギ抗ウサギＩｇＧ二次抗体と共に、１時間インキュベートした後、アビジン-ＨＲＰインキュベーションに供した。０.０１％過酸化水素中におけるＤＡＢの０.０５％溶液を用いて、免疫反応した細胞体を可視化した。累積的な光学密度を測定するために、対照およびＭＰＴＰ処理した脳由来の切片を、同じスライド上に載せることにより、この分析手法の可変性を変化させるスライドの効果を減少させ、免疫細胞化学的に調べた。
【００３９】
　ＴＨ＋ＳＮｃニューロンの数は、各々核全体を通る番号付けられた１つ置きの連続切片のカウントによって得られた。切片は、多重盲検による観察者によって再びカウントされ、観察者による偏りを調べた。得られた結果は、切片の厚さによって補正した（ケーニヒスマーク，ビー・ダブリュー（Ｋonigsmark，Ｂ.Ｗ.)：ナウタ，ダブリュー・エイチ（Ｎauta，Ｗ.Ｈ.)、エベッソン・エス・オー・イー（Ｅbesson Ｓ.Ｏ.Ｅ.）編、コンテンポラリー・リサーチ・メソッズ・イン・ニューロアナトミー（ＣontemporaryＲesearch Ｍethods in Ｎeuroanatomy)、ニューヨーク、スプリンガー・フェアラーク（Ｓpringer Ｖerlag)、315-380頁、1970)。平均値±標準誤差を、セーラインを注射した対照マウスについて計算した。次いで、次のデータを、図１に示すように、この平均値の百分率として表した。
【００４０】
　介在する切片は、ニッスル染色（セニウク（Ｓeniuk)ら、ブレイン・リサーチ（Ｂrain Ｒes.）527:7，1990；タットン（Ｔatton)ら、ブレイン・リサーチ（Ｂrain Ｒes.）527：21，1990［これらは、出典を示すことにより明細書の一部とする］を参照）することにより、核の輪郭を明確にした。貼り合わせた半分の脳について対をなす半分の切片は、実験グループおよび対照グループにおけるニューロン数の差が、浸透の違いや抗体または試薬に対する曝露の違いによるものではないことを保証した。
　各動物の各核の長さ方向を通る２０個の無作為に選択された半分の切片について、ＴＨ＋細胞体を含む領域を、顕微鏡にカメラ鮮明化（lucida）アタッチメントを用いてトレースし、次いでその輪郭を、標認点の局所的な組織学的特徴を用いて、すぐ隣のニッスル切片に置き換えた（各核には、通常、約９０対の切片が含まれていた)。輪郭内に核仁を含むニッスル細胞体の数を、ラットＳＮｃの評価基準（ポイリール（Ｐoirier)ら、1983，ブレイン・リサーチ・ビュリティン（Ｂrain Ｒes．Ｂull.）11：371）に類似した評価基準を用いて、グリアのプロファイル（４０〜１００μｍ２）を除く３つのサイズグループ（小−１４０〜２８０μｍ２、中−３００〜５４０μｍ２および大−５４０〜８４０μｍ２）に従って、カウントした。ＴＨ＋細胞体の数を、２０個のすぐ隣の切片の対応する領域におけるニッスル細胞体の数に対してプロットした。合わせたニッスル／ＴＨ＋カウントは、ＴＨ＋ＳＮｃ細胞体の数の減少が、ニューロンの破壊または生存ニューロンによるＴＨ免疫反応性の喪失によるものかどうかを決定する手段を与える（この手法の原理に関する詳細については、セニウク（Ｓeniuk)ら、1990、前出を参照)。図１では、ＭＰＴＰ後の０日目から２０日目までは、ＳＮｃ由来のＴＨ＋細胞体は減少を示すが、それ以後は減少を示さない。注射の予定（５日目）が終了した後、５日間で、２０％〜３０％のＴＨ＋細胞体が減少した；ＴＨ＋ニューロンの減少は、次の１０〜１５日間にわたって続いたが、それ以後は、さらに消滅しなかった。このようなＴＨ＋ニューロンの連続的減少は、ＭＰＴＰやその毒性代謝物ＭＰＰ＋が体内から急速に排除されるので、それらの存在によるものであると説明することはできなかった（ヨハネッセン，ジェイ・エヌ（Ｊohannessen，Ｔ.Ｎ.）ら、ライフ・サイエンス（Ｌife Ｓci)，36，219-224（1985)；マーキー，エス・ピー（Ｍarkey，Ｓ.Ｐ.)ら、ネイチャー（Ｎature)，311，465-467（1984)；およびラウ（Ｌau）ら、ライフ・サイエンス　（Ｌife Ｓcience)，43，1459-1464（1988))。いくつかのニューロンは、ニューロンを発達させて軸索または神経突起を延ばすことによって利用されるもの（バロン，ケイ・ヴィ（Ｂarron，Ｋ.Ｖ.)、ナーブ・オーガン・アンド・ティッシュ・リジェネレーション（Ｎerve，Ｏrgan and Ｔissue Ｒegeneration)：リサーチ・パースペクティブズ（Ｒesearch Ｐerspectives)(セイル，エフ・ジェイ(Ｓeil，Ｆ.Ｊ.)編）中、3-38（アカデミック・プレス（Ａcademic Ｐress)、ニューヨーク、1986）を参照）に類似したＤＮＡ転写「プログラム」を再活性化することによって、ＭＰＴＰを用いた場合に見られるような、軸索の損傷後の修復を開始させる能力を有する。ＴＮ＋ＳＮｃニューロンの場合には、これらのニューロンが、ＭＰＴＰに誘発された損傷の後で効果的な修復を受けて回復するか、あるいはそれらが死ぬ臨界的な２０日間が存在するようである。
【００４１】
　セーラインのみで処理したマウスのすぐ隣の切片の対応する領域に由来するＴＨ＋およびニッスル染色ＳＮｃ細胞体のカウントを合わせたプロット（３匹の動物の値は図２のＡ１-Ａ３にまとめられている）は、ＴＨ＋細胞体の数がニッスル細胞体の数と直線的に関係し、中位のサイズのＳＮｃ細胞体（図２のＡ２）および大きいサイズのＳＮｃ細胞体（図２のＡ３）に関する（図２の対角線によって示される）ｎ等値対角線の付近に接近して分散していることを示している。図２の各プロットでは、半分の切片あたりの細胞体のニッスルカウントおよびＴＨ＋カウントの平均±標準偏差は、各Ｙ軸の上端および各Ｘ軸の右端に、それぞれ示されている。中位および大きい細胞体については、ニッスル細胞体の平均数は、対応するＴＨ＋細胞体の平均数を、５〜１０％超過していたが、これはＴＨ＋ではない黒質線状体ニューロンの割合（ヴァン・デル・コーイ（Ｖan derＫooy）ら、ニューロサイエンス（Ｎeuroscience）28：189，1981）に対応しているようである。
【００４２】
　生理食塩処理した動物における小サイズのＳＮｃ細胞体の組み合わせ総数は、小さなニューロンのごく少数部分のみがＴＨ免疫反応性であり、それゆえ、ドーパミン作用的であることを示す（図２　Ａ１）。これらの結果は、大および中サイズの細胞体がドーパミン作用的ニューロンの細胞体である一方で、より小さな細胞体の大部分が局部的に分枝している内部ニューロンの細胞体であるということを示す先のげっ歯類における知見を支持している（ファン・デル・コディ（Van der Kody）ら，１９８１年，スプラ（supra）；ポイリアー（poirier）ら，ブレイン・レス・ビュル（Brain. Res. Bull.）,１１：３７１，１９８３年）。ＭＰＴＰのみまたはＭＰＴＰに続いてセーライン処理した動物（ＭＰＴＰ−セーライン処理動物についての値を図２Ｂ１、２Ｂ２および２Ｂ３に示す）における組み合わせニッスル／ＴＨ総数は、ＭＰＴＰ処理の完了後２０日までには、ＴＨ＋細胞体の喪失が、生存ニューロンにおけるＴＨ免疫反応性の喪失よりもむしろＳＮｃニューロンの死を表すということを確認するものであった。図２Ｂ２および２Ｂ３は、ニッスルおよびＴＨ＋細胞体の総数が、各切片につき２１.６＋／−１５.５および２０.６＋／−１５.５から中サイズおよび大サイズの細胞体それぞれにつき１２.４＋／−８.０および１１.４＋／−７.２にまで減少しても（値は＋／−１.０標準偏差を表す）、総数間の殆ど同じ値の関係が維持されたことを示す。ＳＮｃニューロンがＴＨ免疫反応性を失うが死なない場合、組み合わせプロットのばらつきが等価対角線上の上方に位置することが期待される（セニウク（Seniuk）ら，ブレイン・レス（Brain Res.）５２７：７，１９９０年）。さらに、図２Ｂ１は、多くの小サイズのニッスル染色細胞体が、小サイズのＳＮｃ細胞体のＴＨ＋成分の減少（各切片につき４.１＋／−２.８から２.３＋／−１.６）に伴い僅かに減少（各切片につき２６.２＋／−１８.３から２２.４＋／−１２.５）したことを示す。中および大サイズの細胞体の幾分かの喪失が萎縮により生じ、その結果、ＭＰＴＰ処理に対応してそれらの断面積がもはや中および大サイズの範囲内でなくなる場合には、小サイズのニッスル染色細胞体数が増加すると期待される。
【００４３】
　図３は、それぞれの核の吻側尾状体全長にわたる交互の１０ミクロンシリーズの各切片のＳＮｃ核についてのＴＨ＋ＳＮｃ細胞体を表し、積算頻度分散として表される。各処理の代表的な軌跡を図３に示す。セーラインのみ、ＭＰＴＰ（１５０ｍｇ／ｋｇ）およびセーライン、ならびにＭＰＴＰおよびデプレニール（０.２５ｍｇ／ｋｇ，１週間に３回）処理したマウスのニューロン総数値は、図４のヒストグラム法で表される値と共通である。図４に示したように、すべてのＳＮｃ核に関する積算分散頻度曲線（ｎ＝４／処理群）は、同様のパターンを有し、該毒素に相対的に耐性であるニューロンを含む核の吻側部分（切片１０〜４０）においてそれが最大となると思われるのであるが、ＭＰＴＰによるＴＨ＋細胞体の喪失およびデプレニールによるそれらの回復が核の全部分において起こったことを示す。図４はまた、３群の動物間の個々の頻度分散曲線に重なりがないことを示す。
【００４４】
　図４に示すデータは、すべての試験の平均数（ｎ＝６〜８マウス／処理群、すなわち１２〜１６個のＳＮｃ核）±ＴＨ＋細胞体／ＳＮｃ核の標準偏差を表す。これらの値を得るために、コニヒスマルク，ビー・ダブリュ（Konigsmark,B.W）,コンテンポラリー・リサーチ・メソッズ・イン・ニューロアナトミー(Contemporary Research Methods in Neuroanatomy)(ナウタ,ダブリュ・エイチ（Nauta,W.H.）およびエベソン,エス・オー・イー(Ebesson SOE)編）３１５−３８０頁（スプリンガー・フェアラーク(Springer Verlag)，ニューヨーク，１９７０年）記載のごとく相関係数２.１５を用いて、ＴＨ＋の粗総数をニューロン数に変換した。図４は、デプレニール処理マウスにおける、ＭＰＴＰのみを与えられた動物に対するＴＨ＋　ＳＮｃ細胞体の増加数を示す。デプレニールの少量および多量投与双方は、ＴＨ＋　ＳＮｃニューロン喪失防止においては等価であった。
【００４５】
　特別に図４は、セーラインのみで処理された動物について観察されたＴＨ＋細胞体の修正数の平均値（３０１４＋／−３０４，平均値＋／−標準偏差）が、ＭＰＴＰのみで処理した動物（１７５６＋／−１６１）およびＭＰＴＰ−セーライン処理群（１８７２＋／−１８７，１９０４＋／−３０８および１８０５±１８５）において有意に減少したことを示す（マン−ホイットニ（Mann-Whitney）試験、ｐ＜０.００１）。それゆえ、ＭＰＴＰはそれら３種のＭＰＴＰ前処理群（図４黒棒）においてＴＨ＋細胞体の３６、３８および４２％の平均喪失を引き起こした。すべてのＭＰＴＰセーライン対照群は統計的に同じ（ｐ＞０.０５）であった。図４はまた、ＭＰＴＰ−セーライン（１７０６＋／−２１３.６）およびＭＰＴＰ−クロルジリン（１７２５＋／−２１３.６）の値が統計的に同じであるために、ＭＡＯ−Ａ阻害剤であるクロルジリンがニューロンを回復しないことを示す。
【００４６】
　デプレニールは、ＭＰＴＰ投与後のＴＨ＋　ＳＮｃ細胞体数を、それぞれ１０、０.２５、０.０１ｍｇ／ｋｇの投薬量において、２５８６＋／−１６１（喪失１４％）、２５３５＋／−１６９（喪失１６％）および２７４７＋／−１４５にまで増加させた。よって、すべてのデプレニール投薬量は、ＭＰＴＰにより引き起こされるＴＨ＋細胞体の喪失を、ＭＰＴＰの後セーライン処理した場合に見られる喪失の５０％以下に減少させた。すなわち、３種のデプレニール投薬量すべてが、セーライン処理動物と比べて、同様かつ統計的に有意（ｐ＜０.００１）なニューロン数の増加を生じた。
【００４７】
　図３および４に示した結果は、上で議論したＭＰＴＰ誘導によるＴＨ＋　ＳＮｃの喪失を考慮すると、ずっと衝撃的なものである。５日目までに、２０日目んまでに死んだであろうところのＴＨ＋　ＳＮｃニューロンのうち７５％がすでにそのＴＨ−免疫反応性を失っており、死んだであろうところの２５％のＴＨ＋　ＳＮｃニューロンのみが５〜２０日の間にＴＨ−免疫反応性を失い続けた。ニューロン喪失の経時変化が本研究のはじめの部分とその継ぎの部分で同様であると仮定すると、ＴＨ＋　ＳＮｃ細胞体数は、３日目に平均値３０１４細胞体／核から２１６９へと減少し、ついで、さらに２０日目までに平均値１８７２細胞体／核にまで減少するであろう。デプレニール処理マウス（０.２５ｍｇ／ｋｇ）はそれにより平均値２５３５細胞体／核を有しており、デプレニールが、投与１７日間に死んだすべてのＴＨ＋ＳＮｃニューロンを回復させ、もはやＴＨ＋免疫反応性によって確認できない幾分かのＴＨ＋　ＳＮｃニューロンを回復させることさえできることを示す。
【００４８】
　図２Ｃ１〜Ｃ３の組み合わせニッスル／ＴＨ＋総数を、ＭＰＴＰに続くデプレニール０.２５ｍｇ／ｋｇ投与処理した３匹の動物の蓄積したデータに関してプロットした。図２Ｃ２は、ＭＰＴＰ−セーライン処理動物（図２Ｂ２）と比較した場合のニッスルおよびＴＨ＋の中サイズのＳＮｃ細胞体の喪失の組み合わせの減少を示す。ＭＰＴＰ−セーライン処理動物（図２Ｂ３）と比べると、ＭＰＴＰ−デプレニール処理動物（図２Ｃ３）に関する大サイズの細胞体の相対的に小さい減少が起こる。組み合わせニッスル／ＴＨ＋プロットは、ＭＰＴＰ−デプレニール処理マウスにおけるＴＨ＋　ＳＮｃ細胞体の抑えられた喪失が、ＴＨ免疫反応性でないニューロン数の減少というよりもむしろニューロンの死の減少によるものであることを確認する。
【００４９】
実施例２
　ＭＰＴＰ処理マウスに実施例１で示した方法に従いデプレニール（０.０１ｍｇ／ｋｇまたは０.２５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。ＭＡＯ−ＡおよびＭＡＯ−Ｂの測定値を、以下に示す方法により、最初の０.０１ｍｇ／ｋｇまたは０.２５ｍｇ／ｋｇのデプレニール投与後２４時間および１８日後（２０日目に免疫化学的分析のために動物をと殺した丁度その後である２１日目に相当）に得た。ウルトマン，アール・ジェイ（Wurtman，R.J.）およびアクセルロド，ジェイ（Axelrod,J.),バイオケム・ファーマコル(Biochem.Pharmacol.)１９６３年；１２：１４３９−１４４４の方法により、ＭＡＯ−ＡとＭＡＯ−Ｂを区別するために基質を変更して、新鮮組織ホモジネートにおいてＭＡＯ活性を測定した。本法は、トルエン／酢酸エチル中の（１４−Ｃ）−セロトニン（ＭＡＯ−Ａ用）または（１４−Ｃ）フェニルエチルアミン（ＭＡＯ−Ｂ用）いずれかの酸性代謝物の抽出物に基づく。組織ホモジネートを、放射性標識したセロトニン（１００マイクロモラー）またはフェニルエチルアミン（１２.５マイクロモラー）いずれかを含むりん酸カリウム緩衝液中、３７℃にてインキュベーションした。ＨＣｌを添加することにより反応を停止し、トルエン／酢酸エチル中に酸性代謝物を抽出した。トルエン／酢酸エチル層の放射活性を液体シンチレーションスペクトル分析により測定した。煮沸組織ホモジネートまたは酵素（クレイン，エス・ビー(crane,S.B.)およびグリーンウッド，シー・イー(Greenwood,C.E.)，「食物脂肪源はラットのミトコンドリアのモノアミノキシダーゼ活性およびメクロニュートリエントセレクションに影響する］，ファーマコル・バイオケム・ビヘイビ（Pharmacol.Biochem.Behav.），１９８７年；２７：１−６）を含む反応混合物のいずれかから盲検値を得た。
【００５０】
　図１５は、最初の０.２５ｍｇ／ｋｇまたは０.０１ｍｇ／ｋｇのデプレニール投与後２４時間および１８日後（２０日目に免疫化学的分析のために動物をと殺した丁度その後である２１日目に相当）のＭＡＯ−ＡおよびＭＡＯ−Ｂ測定値を表す。これより、ＭＡＯ−Ｂ阻害（１００％のＭＡＯ−Ｂ活性を阻害）は、処理期間１７日間ずっと徐々に上昇し、２つの測定値（図１の対応した標識ｄ４およびｄ２２）は、処理期間の始めと終わりにおけるＭＡＯ−ＡおよびＭＡＯ−Ｂ活性の図を示す。
【００５１】
　各ペアー上の角カッコ内のＫＳ可能性は、コルモゴロフ−スミルノフ(Kolmogolov-Smirnov)の２試料非−パラメーター統計試験（シーゲル，エス(Siegel,S.)，ノン・パラメトリック・スタティスティカル・フォー・ザ・ビヘイビアラル・サイエンス（non-parametric statistical testing)マクグロー・ヒル・ブック・カンパニー(McGraw-Hill Book Company)，１９５６年，１２７−１３６頁）の結果を表し、デプレニール−セーライン処理ペアーが同じ数の群から誘導されるかどうかを調べるものである。何等かの有意な相違を検出するためにはｐ＜０.５である値が要求され、ｐ＜０.０１が好ましい。よって、ＭＡＯ−Ｂ阻害剤が高投薬量で弱いＭＡＯ−Ａ阻害を起こしうるという理由で、０.２５ｍｇ／ｋｇデプレニール投薬量に関する真の値であるかもしれないｄ４における弱いが検出可能なＭＡＯ−Ａ阻害が存在する。０.２５ｍｇ／ｋｇの投薬量は、ｄ４（７２％の活性、２８％の阻害）およびｄ２２（３１％の活性、６９％の阻害）の両方において強いＭＡＯ−Ｂ阻害を引き起こす。抗−抑制効果のためには９０％またはそれ以上のＭＡＯ阻害が必要であるが、考えられる２８〜６９％のＭＡＯ−Ｂ阻害は０.２５ｍｇ／ｋｇのデプレニール投与における回復を媒介しうる。
【００５２】
　最も重要には、０.０１ｍｇ／ｋｇの投薬量は、ｄ４およびｄ２２において、有意なＭＡＯ−ＡまたはＭＡＯ−Ｂ阻害を全く起こさない。よって、０.０１ｍｇ／ｋｇ投与による著しい回復は０.２５ｍｇ／ｋｇのものと等価であるが、ＭＡＯ−Ｂ阻害によるものではあり得ない。それゆえ、デプレニールは、ＭＡＯ−Ｂをブロックする構造に関連していなくてもよい３次元構造を通して受容体を活性化しうる。
【００５３】
実施例３
　メイン州バー・ハーバーのジャクソン・ラブズ(Jackson Labs)社の５週齢のオスのＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを個別ケージで飼育し、適宜エサと水を与えた。マウスに最初の２週間のならし期間を与え、２１℃一定の別室で明暗１２時間ずつのサイクルに置いた。仮定上の「昼」は８時に始まり、仮定上の「夜」は２０時に始まる。仮定上の昼には光量を２００ルクスに維持した。ストウルチング(Stoelting)電気モニターで運動状態を選択的に定量し、それぞれのマウスのセンサー・ボックスを各ケージの下に置いた。エサおよび訓練期間のごとき高頻度の信号妨害は記録しなかった。個々のマウスの運動状態を、頻繁な暗闇（ＤＤ）またはＬＤ条件下で９０〜１２０日間連続的にモニターした。約２０日後、マウスに１日２回、５日間、セーラインまたはＭＰＴＰ注射処理を行った（注射前の日を−５〜０日とする）（積算投薬量を３７.５、７５、１５０および３００ｍｇ／ｋｇとした）。仮定上の昼の間に注射がすでに行われる。「点灯」４時間後に最初の注射を行い、「消灯」４時間前に２回目の注射を行った。
【００５４】
　運動活性のスペクトル分析（ブルームフィールド，ピー(Bloomfielld,P.)フーリエ・アナリシス・オブ・タイム・シリーズ：アン・イントロダクション(Fourier Analysis of Time Series:An Introduction)；ジョン・ワイリー・アンド・サンズ(John Wylie and Sons)ニューヨーク，１９７６年、ブライアム，イー・オー(Brigham,E.O.)，ザ・ファスト・フーリエ・トランスフォーム(The Fast Fourier Transform)；プレンチス−ホール(Prentis-Hall)，ニューヨーク，１９７４年、マーメアリス，ピー・ゼット(Marmarelis,P.Z.)，マーメアリス，ブイ・ゼット(Marmarelis,V.Z.)，アナリシス・オブ・フィジオロジカル・システムズ−ザ・ホワイト−ノイズ・アプローチ（Analysis of Physiological Systems-the White-noise Approach），プレナム・プレス(Plenum Press)，ニューヨークおよびロンドン，１９７８年）を、迅速フーリエ変換を用いたシスタット（ＳＹＳＴＡＴ）統計ソフトウェア・プログラムにより行った。丁度２４０時間（約１０日）または１２０時間（約５日）すぎの期間の活性総数を用いた。試料数を選択し、丁度１２８または２５６を越えるようにして、２乗の法則を満たすようにした。フーリエ解析の前に、活性値をスプリット−コサイン−ベル・テーパーで処理して強い成分からの他の成分中への漏れを減らした。ついで、これらの値を０ないし５１２個の試料で埋めた。ついで、これらの値から平均値を除去し、５.１２ないし５１２の時間／サイクル値を包含する１００個ののラグについて、フーリエ変換を計算した。強度を平方して各成分のベキ数を決定し、各時間／サイクル値に対するベキ数を総ベキ数のパーセンテージとして表した。
【００５５】
　神経化学的分析を、最後のＭＰＴＰ注射後、５、１０、１５および２０日に行った。けい椎を外すことによりと殺し、脳を除去した。線状組織を解剖し、核アキュムベンおよび尾状を含めた。組織を、そのカテコールアミン濃度を電気化学的検出する逆相イオンペアー高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により測定するまで、２−メチルブタン（コダック社製）中、−７０℃に冷却した。組織試料を秤量し、ついで、ジヒヂリキシベンジルアミンを内部標準として含有する０.２Ｎ過塩素酸中でホモジネートし、アルミナ上に抽出した（メフォード，アイ・エヌ・ジェイ(Mefford,I.N.J.)，ニューロサイエンス・メソ(Neurosciencve Meth.)１９８１年，３，２０７−２２４）。カテコールアミンを０.１Ｎりん酸中に脱離させ、濾過し、ウルトラスフェアＯＤＳ５μｍカラムに注入した。移動相は７.１ｇ／ｌのＮａ２ＨＰＯ４、５０ｍｇ／ｌのＥＤＴＡ、１００ｍｇ／ｌのオクチル硫酸ナトリウムおよび１０％メタノールを含有する。検出器電位はＡｇ−ＡｇＣｌリファレンス電極に対して＋０.７２であった。インターラン変化性は約５％であった。
【００５６】
　図５は、９２日間の典型的な記録を示し、黒棒はＭＰＴＰ注射間隔（合計１５０ｍｇ／ｋｇ、５日間毎日３０ｍｇ／ｋｇ）を示す。活性変化の上のそれぞれの垂直な棒は１時間の活性の合計を表す。活性ピークのの大きさの循環的変化を導入する速いほう（約２４時間）の規則的なリズムの上に乗った１００〜２００時間のゆっくりとしたリズムがあることに注意すべきである。活性強度のみならずこれらのパターンの規則正しさは、ＭＰＴＰ注射期間（６７５〜８４２時間）に優位に影響されているが、１２００時間、すなわち注射後１５〜２０日までには「回復」するように思われた。
【００５７】
　時間領域における運動活性分析は、多数の内因性の活性サイクルの付加により複雑化し、その結果、フーリエ分析を用いてデータを定量した。セーライン注射マウスからのＬＤおよびＤＤプレインジェクションコントロール期間に関する高分析能スペクトルを図６に示す。該スペクトルを２５６個の活性総数について計算し、ついで、フーリエ変換を適用する前に、４０９６個の値をゼロで埋めた。図６ａにおいて、ＬＤおよびＤＤ両方のスペクトルは約２４時間／サイクルにおける主ピークを示し、それは全ベキ数の７５％以上を含む。ＬＤピークよりも約９分短いサイクル長へのＤＤピーク中心のシフトに注意すべきである。図６ｂにおいて、２番目のピークが１００〜２５０時間／サイクルに生じており、それは図５の粗データからの先の観察結果と矛盾しない。このピークは、ＬＤスペクトルと比べると、ＤＤスペクトルに関して約５０時間／サイクルだけシフトしている。より長い時間／サイクル値は他のピークと重ならない。ＬＤに乗っている間だけ生じる３番目の小さなピークが６０−９０時間／サイクルにわたり生じることに注意すべきである。ゆっくりしたピークからの周期的なピークのはっきりした分離が、ＭＰＴＰ注射後の主たる２４時間目の成分のベキ数の変化を個々に評価することを可能にした。それゆえ、運動活性を２２〜２６時間／サイクルのピーク下のベキ数のパーセンテージとして表す。
【００５８】
　図７において、パネルＡは、セーライン注射による動物の内在性活性の妨害が、注射前および注射後の日々に対するＰ２２〜２６のベキ数のパーセンテージを減少させるに十分であったことを示す。よって、パネルＢのような活性変化は、ＭＰＴＰ注射期間に関する信頼出来る解釈とはなりえない。セーライン注射は、注射後の期間（例えばパネルＣ）におけるＰ２２〜２６に何の変化も起こさなかった。対照的に、１５０および３００ｍｇ／ｋｇの投薬量（図８参照）は、Ｐ２２〜２６の著しい抑制を生じたが、１２ないし２０日までには回復した（パネルＢおよびＤ）。
【００５９】
　図８は、セーラインおよび３７.５または７５ｍｇ／ｋｇＭＰＴＰ注射は、Ｐ２２〜２６の運動活性を、対照の注射前の日々の運動活性から変化させなかったことを示す（誤差を示す棒は、プールした対照の活性に関して＋／−１の標準偏差を表す）。対照的に、Ｐ２２〜２６のピークのベキ数は、１５０または３００ｍｇ／ｋｇのＭＰＴＰ処理後５日に平均対照値の２０〜６０％にまで減少し、中心となる２０日までには正常に戻った。
【００６０】
　１５０ｍｇ／ｋｇのＭＰＴＰまたはセーライン処理した２番目のシリーズの動物を、ＭＰＴＰ注射後５、１０、１５、２０および６０日目にＴＨ免疫化学的分析用にと殺し、切片をアビジン−結合西洋ワサビ・ペルオキシダーゼおよびジアミノベンジジンで可視化した。パラホルムアルデヒドを拡散させた脳を中心に沿って２つの部分に分け、ティッシュ−テック(Tissue-Tek)を用いてセーライン注射およびＭＰＴＰ注射動物の半分ずつの脳を貼り合わせた。一連の１０μｍｇ切片を、脳幹を通して取り、両方の動物からのＳＮｃを含むようにし、その結果、セーラインおよびＭＰＴＰ処理動物からのＳＮｃニューロンが直接隣会い、同様の濃度の抗体および試薬にさらされるようにした。パネルＡおよびパネルＢ（図９）は、５および２０日目に貼り合わせたＳＮｃ切片を表す。
【００６１】
　図１０のパネルＡは、全核を取ったＭＰＴＰ処理によるＴＨ＋、ＳＮｃおよびＶＴＡニューロン細胞体の総数を対応するセーライン注射動物に対する平均総数のパーセンテージとして示す（誤差の棒は標準偏差）。ＭＰＴＰ注射動物を塗りつぶした印で表す。２０日目以降ＴＨ＋細胞体数の明らかな維持に伴い、５〜２０日目から検出可能なＴＨ免疫反応性のあるＳＮｃ細胞体数が徐々に減少したことに注意すべきである。パネルＢ、ＣおよびＤはセーラインおよびＭＰＴＰ注射動物についての線状体ＤＡならびにＤＯＰＡＣ濃度を示す。図８の運動活性の回復にともなって線条体ＤＡ濃度が正常レベルに回復する経時変化の類似性に注意すべきである。ＭＰＴＰ注射動物のＤＯＰＡＣ／ＤＡ比は５〜１０日目にわたり著しく増加して急速に減少し、ついで、セーライン注射動物の２倍の一定値を維持している。
【００６２】
　コンピューターによる吸光度（ＯＤ）測定システムを用いて細胞体ＴＨ免疫反応性ならびに貼り合わせた脳切片について、任意に選んだＳＮｃおよびＶＴＡ細胞体（タットン，ダブリュ・ジー(Tatton,W.G.)ら，ブレイン・レス(Brain Res.)，１９９０年、５２７，２１−３２）に対する、すぐに隣接した組織におけるバックグラウンドの免疫反応性を測定した。単位面積あたりのバックグラウンドＯＤを、各細胞の単位面積あたりの細胞体ＯＤから差し引いて、単位面積あたりの細胞のＴＨ免疫密度を評価した。各張り合わせた切片のセーライン注射動物の脳の半分についてのバックグラウンドＯＤを用いて、ＭＰＴＰのバックグラウンドＯＤおよびセーラインとＭＰＴＰの細胞のＯＤに関する値の規格化を行った。図１０は、セーラインまたは１５０ｍｇ／ｋｇのＭＰＴＰ注射５〜２０日後の規格化バックグラウンドおよびＴＨ＋　ＳＮｃ細胞体についての細胞の測定値に関する分散を表す。この研究および他の研究においては、張り合わせた脳を用いて、細胞の値を確実に比較できるセーラインおよびＭＰＴＰ注射の脳の半分について、有意に（ｐ＜０.０５）バックグラウンド値が異なることはなかった。セーライン注射動物に関する対照の分散は、平均バックグラウンドレベルの２および４倍の並数を持ち、平均バックグラウンドレベルの０.５ないし６倍の範囲のＳＮｃ細胞体に関する免疫密度の双峰分散を示した。
【００６３】
　ＭＰＴＰ処理したＳＮｃおよびＶＴＡ細胞体に関する細胞のＴＨ免疫密度の著しい減少が５日以内にあり、注射後２０日までにセーライン対照と同等の分散にまで徐々に回復した（図１０および１１）。ＭＰＴＰ処理によるＳＮｃおよびＶＴＡニューロンのＴＨ免疫密度の回復は、線条体ＤＡおよび運動活性の回復と並行していた。
【００６４】
　本発明者らは、ＭＰＴＰで処理したマウスにおける長時間運動活性の分析に対して高速フーリエ変換による分光分析技術を適合させた。これによって、最近の取り扱いまたは観察者の存在により覚醒された動物の主観的アセスメントに無関係な、非常に高感度かつ再現可能なデータが得られる。まず、ラットおよびマウスＳＮｃニューロンが毒素に対して耐性であるという見解によって、ＭＰＴＰが齧歯類において運動欠乏を起こさないことが提案された。これは、主に、ＭＰＴＰの後の線条体ドーパミンの一過性変化だけが報告された神経化学的データに基づいていた［リカート,ジー・エイ（Ｒicuarte,Ｇ.Ａ.）ら、ブレイン・リサーチ（Ｂrain Ｒes.）１９８６、３７６、１１７〜１２４、およびウォルターズ,エイ（Ｗalters,Ａ.）ら、バイオジェニック・アミンズ（Ｂiogenic Ａmines）１９８４、１、２９７〜３０２］。他には、線条体ＤＡ濃度の維持された変化と関係すると思われる高用量の毒素で処置されたマウスにおける、遅延化された肢の運動、異常歩行および慢性的に減少した運動活性を報告したものがある［デュボイシン,アール・シー（Ｄuvoisin,Ｒ.Ｃ.）ら、リーセント・ディベロープメント・イン・パーキンソンズ・ディジーズ（Ｒecent Ｄevelopment in Ｐarkinson's Ｄisease）；エス・ファーン（Ｓ.Ｆahn）ら、レイブン・プレス（Ｒaven Ｐress）：ニューヨーク、１９８６；第１４７頁〜第１５４頁、ヘイッキラ,アール・イー（Ｈeikkila,Ｒ.Ｅ.）ら、サイエンス（Ｓcience）１９８４、２２４、１４５１〜１４５３、ヘイッキラ,アール・イー（Ｈeikkila,Ｒ.Ｅ.）ら、ライフ・サイエンス（Ｌife Ｓci.）１９８５、３６、２３１〜２３６］。ＭＰＴＰの後の齧歯類における運動活性の変化の従来の測定は、あいにく、短期間測定［サガール・エイ（Ｓaghal Ａ.）ら、ニューロサイエンス・レターズ（Ｎeurosci.Ｌett.）１９８５、４８、１７９〜１８４］または短く単離された測定［ウイリス,ジー・エル（Ｗillis,Ｇ.Ｌ.）ら、ブレイン・リサーチ・ブリチン（Ｂrain Ｒes Ｂull）１９８７、１９、５７〜６２］であった。今日まで、ネコ［シュナイダー,ジェイ・エス（Ｓhneider,Ｊ.Ｓ.）ら、イクスペリメンタル・ニューロロジー（Ｅxp Ｎeurol）１９８６、９１、２９３〜３０７]、マーモセット［ウォーターズ,シー・エム（Ｗaters,Ｃ.Ｍ.）ら、ニューロサイエンス（Ｎeuroscience）１９８７、２３、１０２５〜１０３９］または齧歯類［チュー,シー・シー（Ｃhiueh,Ｃ.Ｃ.）ら、サイコファーマコロジー・ブリチン（Ｐsychopharmacol.Ｂull.）１９８４、２０、５４８〜５５３、およびヨハネセン,ジェイ・エム（Ｊohannessen,Ｊ.Ｍ.）ら、ライフ・サイエンス（Ｌife Ｓci.）１９８５、３６、２１９〜２２４］を含む種々のＭＰＴＰモデルにおいて観察された行動回復の満足な説明はなかった。
【００６５】
　ＳＮｃおよびＶＴＡ細胞体におけるＰ２２−２６ピークの下でパワーによって測定された運動活性、線条体ＤＡ濃度およびＴＨ免疫密度は、ＭＰＴＰ処置後の正常に向かう回復において相互に関連させられる。検出可能なＴＨ免疫反応性を持つＳＮｃおよびＶＴＡ細胞体の数は、ＭＰＴＰ処置後の最初の２０日間にかけて定常状態レベルに減少する。故に、線条体中のドーパミン濃度は増大し、一方、検出可能なＴＨ濃度を持つＳＮｃおよびＶＴＡニューロンの数は減少する。ＤＯＰＡＣ／ＤＡ比の急速な上昇および低下は、細胞外空間中のＤＡが喪失する線条体においてＤＡ終末の死滅に関係すると思われる。しかも、該比率は、ＤＡ合成によって、ＭＰＴＰ暴露にかかわらず生存するＳＮｃニューロンが増加することを示唆する初期の発見を援護して、１５日後の増加したレベルで維持される。
【００６６】
　おそらく、ＳＮｃおよびＶＴＡニューロンの細胞体におけるＴＨ免疫密度の測定によっては、ＴＨ濃度の直線推定値は得られない。おそらく、ペルオキシダーゼ反応の使用によって、細胞質中の第２抗体−アビジン複合体数の直線推定値が得られるが［レイス,ディ・ジェイ（Ｒeis,Ｄ.Ｊ.）ら、サイトケミカル・メソッズ・イン・ニューロアナトミー（Ｃytochemical Ｍethods in Ｎeuroanatomy）アラン・アール・リス・インコーポレイテッド（Ａlan Ｒ.Ｌiss,Ｉnc.）；ニューヨーク、１９８２；第２０５頁〜第２２８頁]、本発明者らのポリクローナル抗体に対する親和性定数、ならびに第１および第２抗体間の免疫反応に対する親和性定数によって、エピトープの濃度およびアビジン分子の濃度間の直線関係は得られない。しかも、この結果、おそらく、ＭＰＴＰ暴露にもかかわらず生存しているＶＴＡおよびＳＮｃの細胞体中のＴＨ濃度の回復が示される。ＴＨ免疫密度の回復は、線条体ＤＡ濃度の増加に相当し、これは、ＴＨ合成の回復がＤＡ濃度の回復の因子であり、かつ、おそらく、個々の生存ニューロンによるＤＡ合成を増加させることを示唆する。
【００６７】
　齧歯類における新線条体ドーパミン作動性系および他のカテコールアミン作動性系は、運動活性の発生に関係していた［タバー,ジェイ（Ｔabar Ｊ.）ら、ファーマコロジー・バイオケミストリー・アンド・ビヘイビャー（Ｐharmacol Ｂiochem Ｂehav）１９８９、３３、１３９〜１４６、オバーランダー,シー（Ｏberlander,Ｃ.）ら、ニューロサイエンス・レターズ（Ｎeurosci.Ｌett.）１９８６、６７、１１３〜１１８、メルニック,エム・イー（Ｍelnick,Ｍ.Ｅ.）ら、第１７回神経科学協会の年次会議（１７th Ａnnual Ｍeeting Ｏf Ｔhe Ｓociety Ｆor Ｎeuroscience）、アメリカ合衆国ルイジアナ州ニュー・オルレアンズ、１９８７年１１月、１３、マレク,ジー・ジェイ（Ｍarek,Ｇ.Ｊ.）ら、ブレイン・リサーチ（Ｂrain Ｒes）１９９０、５１７、１〜７、コストブスキー,ダブリュ（Ｋostowski,Ｗ.）ら、Ａcta Ｐhysiol.Ｐol. １９８２、３３、３８５〜３８８、フィンク,ジェイ・エス（Ｆink,Ｊ.Ｓ.）、スミス,ジー・ピー（Ｓmith,Ｇ.Ｐ.）Ｊ.Ｃomp.Ｐhysiol.Ｐsych. １９７９、９３、２４〜６５]。しかも、ＳＮｃまたはＶＴＡニューロンの特異的役割は、たとえあるとしても、不確実である。故に、運動活性に関連しているＳＮｃおよび線条体パラメーターについての相互に関係した回復は、必ずしも、原因および作用を含まなくてよい。しかも、本発明者らは、ＭＰＴＰによって、種々のカテコールアミン作動性系におけるＴＨ＋ニューロンの同様の喪失が引き起こされるので［セニュク,エヌ・エイ（Ｓeniuk,Ｎ.Ａ.）ら、ブレイン・リサーチ（Ｂrain Ｒes.）１９９０、５２７：第７頁〜第２０頁]、本発明者らがＳＮｃおよびＶＴＡドーパミン作動性ニューロンについて示したものと同様のこれらの系における伝達物質関連機能の回復［セニュク,エヌ・エイ（Ｓeniuk,Ｎ.Ａ.）ら、ブレイン・リサーチ（Ｂrain Ｒes.）１９９０、５２７：第７頁〜第２０頁]は、運動回復を引き起こすことを示した。ＤＡ合成の回復は、ＭＰＴＰ暴露にかかわらずに生存しているＳＮｃニューロンがそれらの仲間の喪失を補償しようとする試みを表し、該補償の成分が回復に関連し、次いで、ＭＰＴＰ暴露にかかわらず生存しているニューロンにおけるチロシンヒドロキシラーゼの合成を増加させることを表す。
【００６８】
実施例４
　デプレニールが他の軸索損傷ニューロン表現型、例えばラットの運動ニューロンの死滅を減少させることができるかを測定するために実験を行った。軸索切断後に死滅したラットの運動ニューロンの割合は、生存の最初の４日間、最大であり（８０〜９０％喪失)、次の３〜４週間にわたって成人レベルに低下した（２０〜３０％）［セントナー（Ｓendtner）ら、ネイチャー（Ｎature）、３４５、４４０〜４４１、１９９０、スナイダー・ダブリュ・ディ（Ｓnider Ｗ.Ｄ.）およびサンダー,エス・ジェイ（Ｔhanedar,Ｓ.Ｊ.）Ｃompl.Ｎeuro １、２７０、４８９、１９８９]。１４日齢のラットの２つのグループ（ｎ＝６）に、片側顔面神経横断を与え（外傷)、２つのグループは外傷を受けなかった（無外傷)。外傷および無外傷のグループを対にして、これを１日おきにセーラインまたはデプレニール（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置した。該ラットを、軸索切断後、２１日目に殺し、顔面神経核のレベルで脳幹の連続冠状組織切片を、コリンアセチルトランスフェラーゼ（ＣｈＡＴ）免疫細胞化学［本明細書中に引用記載するＴattonら、Ｂrain Ｒes.５２７：２１、１９９０]、ニッスル染色［本明細書中に引用記載するＳeniukら、Ｂrain Ｒes.５２７：７、１９９０；Ｔattonら、Ｂrain Ｒes.５２７：２１、１９９０］について処理した（第１２図）。
【００６９】
　特に、１４日齢のスプラーギュ−ドーレイ（Ｓprague−Ｄawley）ラットの２つのグループについてハロタン−亜酸化窒素麻酔下で、茎乳突孔について、右顔面神経をその軸索で横断し、一方、他の２つのグループは手術しなかった（各グループにおいてｎ＝６)。手術日に、外傷グループおよび無外傷グループにデプレニール１０ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与し始め、殺すまで１日おきに投与した。他の外傷グループおよび無外傷グループには、セーラインを同一注射した。横断の２１日後に、該ラットを麻酔の過剰投与によって殺し、次いで、等張性セーラインおよびリン酸塩緩衝液中４％パラホルムアルデヒドで灌流した。無外傷グループ由来の脳を中央線に沿って縦に２等分し、セーライン処置動物およびデプレニール処置動物由来の半分の脳を、表面ランドマークが符号するように、ティシュ・テックを使用して一緒に接着した。無外傷動物についての接着した脳および外傷動物についての無傷脳を−７０℃メチルブタン中で冷凍し、顔面神経核を含有する髄質の部分を通って、１０μｍ連続切片を切断した。各第３連続切片をＣｈＡＴに対するポリクローナル抗体と反応させ、ビオチニル化した第２抗体とインキュベートし、次いで、ＨＲＰコンジュゲートしたアビジンとインキュベートし、最後に、ジアミノベンジジンおよびＨ２Ｏ２と反応させた［Ｔattonら、Ｂrain Ｒes. ５２７：２１、１９９０］。接着した半分の脳についての対になった切片は、デプレニールおよびセーライン無外傷対照グループ間の免疫反応におけるいずれかの差異が、抗体または試薬に対する異なる浸透または暴露によらないことを確実にした。
【００７０】
　第１２図は、顔面神経の横断に対して同側の顔面神経核を通る隣接したＣｈＡＴ免疫反応切片（Ａ１おびＢ１）ならびにニッスル染色切片（Ａ２およびＢ２）の顕微鏡写真を示す。ＡおよびＡ２は、セーライン処置動物についてであり、Ｂ１およびＢ２は、デプレニール処置動物についてである。
【００７１】
　第１３図は、異なる外傷および処置グループの顔面神経核についてのＣｈＡＴ＋細胞体の下図についての棒グラフを示す(バー−平均、誤差バー−標準偏差)。核プロフィールを含有するＣｈＡＴ免疫反応性細胞体は、顔面神経核全体を通って連続して採取された各第３切片から計数した。各バーの頂上の値は、平均値である。Ｉpsi.ＬesionおよびＣontra.Ｌesionは、各々、顔面神経横断に対して同側および対側にあることを示す。計数は、顔面神経核におけるＣｈＡＴ＋細胞体の合計数を概算するようには調節されなかった。そこで、無外傷グループについての数は、ニッスル染色細胞体の数について報告された値の約３分の１である。該値を、マン−ホイットニーＵ試験を使用してペアワイズ法で統計学的に比較した。
【００７２】
　第１３図に示すとおり、顔面神経核の全長を通る各第３連続切片についてＣｈＡＴイムノポジティブ（ＣｈＡＴ＋）細胞体の数は、無外傷−セーライングループおよび無外傷−デプレニールグループについて統計学的に同一であった（ｐ＝０.５２０）。対照的に、ＣｈＡＴ＋細胞体の数は、顔面神経各横断に対して同側（２３.８％無外傷−セーライン、ｐ＝０.００３）および対側（８２.２％無外傷−セーライン、ｐ＝０.０２４）の顔面神経核についての外傷−セーライングループについて有意に減少した。デプレニール処置は、同側外傷顔面神経核についてのＣｈＡＴ＋細胞体の数の２倍以上であり（５２.７％無外傷−セーライン、ｐ＝０.００４）、対側核についてのＣｈＡＴ＋数の減少を防止した。その結果、それらは、無外傷グループと統計学的に同一であった（ｐ＝０.８７３）。
【００７３】
　第１４図は、隣接切片の組合せニッスル／ＣｈＡＴ＋数を示す。ＣｈＡＴについて免疫反応させたものの間の介在切片の各対の一方はニッスル染色であった。カメラルシダの助けをかりて、ＣｈＡＴ＋細胞体およびニッスル染色仁含有細胞体の数［標準についてのＯppenheim,Ｒ.Ｗ. ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ.Ｂiol.Ｃhem.）.Ｃomp.Ｎeurol. ２４６：２８１、１９８６］を、各動物について各核の長さを通して２０個の任意選択切片上の隣接する切片の適合領域において計数した。次いで、ニッスルの数を、隣接切片についてのＣｈＡＴ＋数に対してプットした（各外傷−処置グループの３匹の動物由来の数値を集めた）。ニッスルおよびＣｈＡＴ＋細胞体数の比較を行って、イムノポジティブ・ソマタの数の減少が運動ニューロンの死滅または免疫反応性の喪失をもたらすかを決定した。
【００７４】
　無外傷グループについてのニッスル／ＣｈＡＴ細胞体数の組合せプロット（第１４図Ａ）は、セーラインのグループ（ニッスル２７.６＋／−１２.０４、ＣｈＡＴ＋ ２７.３＋／−１３.８０、ｐ＝０.５２６、同一グループのニッスルおよびＣｈＡＴ数は、対になったｔ試験を使用して比較した）およびデプレニールのグループ（ニッスル ２８.９＋／−１３.２、ＣｈＡＴ ２８.５＋／１３.８、ｐ＝０.６４１）について同一の平均値および標準偏差値を有する等価対角線の回りで対称的である分布を示す。同側外傷−セーライン動物（第１４図Ｂ）は、等価対角線に対して非対称的な分布を有する低い組合せ値を示し（高いニッスル値へのシフトは、矢印によって記される）、ＣｈＡＴ＋数（９.７＋／−４.０、ｐ＝０.００１）と比較してニッスル数（１２.６＋／−４.１８）についての高い平均値においてもたらされる。外傷−デプニールの点（第１４図Ｂ）は、セーラインの点よりも小さい減少を示し、等価対角線の回りで対称的な分布を有した（ニッスル１７.６＋／−＋／−６.５、ＣｈＡＴ＋ １７.５＋／−６.１、ｐ＝０.６１６）。最後に、対側外傷動物についてのプロット（第１４図Ｃ）は、セーライン（ニッスル ２４.６＋／−１０.１、ＣｈＡＴ＋ ２４.８＋／−１０.７、ｐ＝０.１５９）およびデプレニール（ニッスル ２８.９＋／−１２.１、２８.５＋／−１２.０、ｐ＝０.７４１）の両グループについての点は、等価対角線に対して対称的に分布する。
【００７５】
　かくして、前記等価対角線への組合せニッスル／ＣｈＡＴ＋プロットの分布および同側外傷−セーライン動物についての組合せニッスルおよびＣｈＡＴ＋数間の有意な差異（第１４図）は、第１３図において示したＣｈＡＴ＋細胞体の数の約８４％低下の結果、運動ニューロンの死滅を生じ、一方ＣｈＡＴ＋免疫反応性の喪失は、ＣｈＡＴ＋運動ニューロンの約１６％の減少を引き起こすだけであった。組合せ数は、対側核からのＣｈＡＴ＋細胞体の喪失のすべてが、結果として運動ニューロンの死滅を生じることも示した。最も重要には、組合せ数は、デプレニール処置によって、運動ニューロンの死滅の著しい低下を引き起こし、同側核の生き残っている運動ニューロンにおけるＣｈＡＴ免疫反応性の喪失を逆転または防止した。
【００７６】
　これは、デプレニールが運動ニューロンの死滅を防止することができるという第１の証拠であり、デプレニールが軸索損傷ニューロンの死滅を低下させることができることを示す研究からなる。未成熟ラットにおける軸索切断運動ニューロンの死滅は、それらが神経支配した筋肉からの栄養支持体について運動ニューロン依存性をもたらすと思われる［Ｃrews,Ｌ.およびＷigston,Ｄ.Ｊ.；Ｊ. Ｎeurosci １０、１６４４３、１９９０；Ｓnider,Ｗ＞Ｄ.およびＴhanedar,Ｓ.上記］。最近の研究によって、いくつかの神経栄養因子がこの概念を支持する運動ニューロンの喪失を低下させることができることが示された［Ｓendtner,Ｍ.ら、Ｎature ３４５、４４０、１９９０］。この研究によって、デプレニールが、標的由来栄養剤の喪失に対して補償するいくつかのメカニズムを活性化する能力を有することが示唆される。神経変性疾患におけるデプレニールの作用の部分は、低下した栄養支持体について同様の補償をもたらす。
【００７７】
　顔面神経横断に対して対側の顔面神経核における少量の運動ニューロンの死滅の発見は、運動神経の切片に対して対側の無償神経における軸索の低下した数［Ｔamaki Ｋ. Ａnat.Ｒec. ５６、２１９、１９３３］および対側核の他の様々な変化［Ｐearson,Ｃ.Ａ.ら、Ｂrain Ｒes. ４６３、１９８８］の前記報告と一致している。デプレニールは、対側の運動ニューロンの死滅を完全に防止する。　軸索は、コリンアセチルトランスフェラーゼ［Ｈoeover,Ｄ.Ｒ. ＆ Ｈancock,Ｊ.Ｃ. Ｎeuroscience １５、４８１、１９８５］を含む顔面運動ニューロンにおけるタンパク合成の一過性の変化を開始する［Ｔetzlaff,Ｗ.ら、Ｎeuro Ｓci. ８、３１９１（１９８８）］。ＣｈＡＴ免疫反応性を失う、小さい割合の、同側の核におけるセーライン処置運動ニューロン（１６％）は、おそらく、免疫化学的に検出できるのに充分なＣｈＡＴ濃度を回復しなかった生存運動ニューロンを示す。デプレニールは、生存運動ニューロンにおけるＣｈＡＴ免疫反応性の喪失を防止または逆転した。
【００７８】
　デプレニールの用量（１０ｍｇ／ｋｇ）は、ＭＡＯ−Ｂ活性の大部分およびいくつかのＭＡＯ−Ａ活性をよく遮断するのに充分であった［Ｄemarest,Ｋ.Ｔ.、Ａazzaro,Ａ.Ｊ.、Ｍonoamine Ｏxidase: Ｓtructure, Ｆunction and Ａltered Ｆunctions（Ｓinger,Ｔ.Ｐ.、Ｋorff,Ｒ.Ｗ.およびＭurphy,Ｄ.Ｌ.編）４２３−３４０、Ａcademic Ｐress、Ｎew Ｙork、１９７９］。故に、運動ニューロン死滅の減少は、ＭＡＯ−ＢまたはＭＡＯ−Ａ阻害によるか、または両酵素に無関係である。しかしながら、０.０１ｍｇ／ｋｇデプレニール用量によって、１０ｍｇ／ｋｇ用量で得られたものと同様の運動ニューロン死滅の減少が得られると思われる。０.０１ｍｇ／ｋｇ用量は、ＭＡＯ−ＡまたはＭＡＯ−Ｂいずれの阻害をも生じず、０.０１ｍｇ／ｄｇデプレニールによる救助がＭＡＯ−ＡまたはＭＡＯ−Ｂ阻害によらないことを示す。（実施例２を参照）。かくして、運動ニューロン死滅の減少は、きっと、ＭＡＯ−ＢまたはＭＡＯ−Ａに無関係である。
【００７９】
　最近の研究によって、この領域への動脈血供給の一過性の中断後、背側線条体ニューロンの壊死の低下において、ＭＡＯ阻害剤がデプレニールよりも有効であることが示される［Ｍatsui,Ｙ. and Ｋamagae,Ｙ.，Ｎeurossci lett １２６、１７５−１７８、１９９１］。しかも、マウスにおいてＭＡＯ−Ａの阻害を生じるには低すぎるが、ＭＡＯ−Ｂの２０〜７５％阻害を生じるには充分なデプレニール用量（０.２５ｍｇ／ｋｇ）は、ＳＮｃニューロンの死滅の防止において１０ｍｇ／ｋｇ用量と同様に有効である。ＭＡＯ−Ｂは、いくつかのセロトン作動性ニューロンおよびヒスタミン作動性ニューロン中に存在するが、主として、グリア細胞中に濃縮されている［Ｖincent,Ｓ.Ｒ. Ｎeurosci ２８、１８９−１９９（１９８９）；Ｐintari,Ｊ.Ｅ.ら、Ｂrain Ｒes. ２７６、１２７−１４０、１９８３］。小グリア細胞が増殖性応答を示し、大グリアがすぐ近隣の運動ニューロンを含む軸索に対してタンパク合成の増大によって応答するので、グリア細胞は、ニューロン死滅の、デプレニール誘発防止に含まれる。
【図面の簡単な説明】
【００８０】
【図１】図１は、ＭＰＴＰの投与後における黒質緻密体（ＳＮｃ）におけるチロシンヒドロキシラーゼ免疫陽性（ＴＨ＋）ニューロンの数を示すグラフである。
【図２】図２は、セーラインのみでの処理した（Ａ１、Ａ２、Ａ３）、ＭＰＴＰ−セーラインで処理した（Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３）およびＭＰＴＰ−デプレニールで処理した動物（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３）について、直ぐに隣接する区画の対応する領域からのＴＨ＋およびニッスル小体染色ＳＮｃ細胞体のカウントのジョイント・プロットであり、データは、ＭＰＴＰ処理の２０日後において各群における３匹の動物からプールしたものである。
【図３】図３は、核全体を通じての別の１０ミクロン連続区画から採取した個々の代表的なＳＮｃ核についての、ＴＨ＋　ＳＮＣニューロンの累積カウント−対−区画数を示すグラフである。
【図４】図４は、ＭＰＴＰ、ＭＰＴＰ−セーラインおよびＭＰＴＰ−デプレニール処理マウスについての平均値およびＳＥＭ値を示すグラフである。
【図５】図５は、ＭＰＴＰを注射したマウスについての運動活性のスペクトル分析を示す。
【図６】図６は、セーライン注射マウスからのＬＤおよびＤＤプレ注射対照期間についての高分解出力スペクトルを示す。
【図７】図７は、対照およびＭＰＴＰマウスについての高分解出力スペクトルを示す。
【図８】図８は、正規化した合計％ピーク出力−対−メジアン日を示すグラフである。
【図９】第９Ａおよび９Ｂは、ＭＰＴＰまたはセーラインで処理した動物からの接着した脳についてのＳＮｃ区画を示す。
【図１０】図１０Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、対応するセーライン注射動物についての平均カウントのパーセントとして表した核全体から採取したＭＰＴＰ処理後のＴＨ＋ＳＮｃおよびＶＴＡニューロン細胞体のカウント（Ａ）；線条体ＤＡの濃度（Ｂ）；セーラインおよびＭＰＴＰ注射マウスについての、線条体ＤＯＰＡＣの濃度、およびＤＯＰＡＣ／ＤＡ比（Ｄ）を示すグラフである。
【図１１】図１１は、セーラインバックグラウンドについての平均ＯＤ／平均Ｏ.Ｄ.−対−ＭＰＴＰ注射後日数を示すグラフである。
【図１２】図１２は、顔面神経の横断と同側の顔面核を通じての隣接ＣｈＡＴ免疫反応させた（Ａ１およびＢ１）およびニッスル小体染色した（Ａ２およびＢ２）区画の顕微鏡写真を示す。
【図１３】図１３は、異なる損傷および処理群に対する顔面核についてのＣｈＡＴ＋細胞体のカウントの棒グラフである（棒−平均、誤差棒−標準偏差）。
【図１４】図１４は、非損傷群(図１４Ａ)、同側損傷−セーライン動物（図１４Ｂ）、損傷−デプレニール動物(図１４Ｂ)、および対側損傷動物（図１４Ｃ）についての隣接区画のジェイント・ニッスル／ＣｈＡＴ＋カウントを示すグラフである。
【図１５】図１５は、デプレニールの最初の投与（０.２５ｍｇ／ｋｇまたは０.０１ｍｇ／ｋｇ）の２４時間後（ｄ４）および１８日後（ｄ２２）におけるＭＡＯ−ＡおよびＭＡＯ−Ｂ測定を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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