(57)【要約】      （修正有）【課題】抗Ｂ７−Ｈ４抗体及び免疫複合体、ならびにそれらを使用する方法の提供。【解決手段】Ｂ７−Ｈ４に結合する単離された抗体であって、（ｉ）特定のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｉ）特定のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び（ｉｉｉ）特定のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む、前記抗体を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｂ７−Ｈ４に結合する単離された抗体であって、
（ａ）（ｉ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び（ｉｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、または
（ｂ）（ｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び（ｉｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
を含む、前記抗体。
【請求項２】
（ａ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、または
（ｂ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
配列番号５３の重鎖フレームワークＦＲ３配列をさらに含む、請求項１または請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５】
配列番号４７の軽鎖フレームワークＦＲ３配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６】
（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、
（ｂ）配列番号１２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｃ）配列番号１２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、または
（ｄ）（ａ）にあるようなＶＨ配列及び（ｂ）にあるようなＶＬ配列、または
（ｅ）（ｃ）にあるようなＶＨ配列及び（ｂ）にあるようなＶＬ配列、
を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項７】
配列番号３８または１２７のＶＨ配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項８】
配列番号１２６のＶＬ配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項９】
Ｂ７−Ｈ４に結合する単離された抗体であって、（ａ）配列番号３８のＶＨ配列及び配列番号１２６のＶＬ配列、または（ｂ）配列番号１２７のＶＨ配列及び配列番号１２６のＶＬ配列を含む、前記抗体。
【請求項１０】
Ｂ７−Ｈ４に結合する単離された抗体であって、
（ａ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
（ｂ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、
を含む、前記抗体。
【請求項１１】
モノクローナル抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１２】
ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１３】
Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体断片である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１４】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、またはＩｇＧ２ｂ抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１５】
１個以上の操作されたシステインアミノ酸残基を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１６】
前記１個以上の操作されたシステインアミノ酸残基は、前記軽鎖内に位置する、請求項１５に記載の抗体。
【請求項１７】
前記１個以上の操作されたシステインアミノ酸残基は、前記重鎖内に位置する、請求項１５に記載の抗体。
【請求項１８】
Ａ１１８Ｃ及びＳ４００Ｃから選択される少なくとも１つの突然変異を重鎖定常領域内に含む、請求項１７に記載の抗体。
【請求項１９】
Ｋ１４９Ｃ及びＶ２０５Ｃから選択される少なくとも１つの突然変異を軽鎖定常領域内に含む、請求項１６に記載の抗体。
【請求項２０】
Ｂ７−Ｈ４に結合する単離された抗体であって、（ａ）配列番号１３２の重鎖配列及び配列番号１３４の軽鎖配列、または（ｂ）配列番号１３３の重鎖配列及び配列番号１３４の軽鎖配列、または（ｃ）配列番号１３０の重鎖配列及び配列番号１４０の軽鎖配列、または（ｄ）配列番号１３０の重鎖配列及び配列番号１４１の軽鎖配列、または（ｅ）配列番号１３１の重鎖配列及び配列番号１４０の軽鎖配列、または（ｆ）配列番号１３１の重鎖配列及び配列番号１４１の軽鎖配列、または（ｇ）配列番号１４４の重鎖配列及び配列番号１４２の軽鎖配列、または（ｈ）配列番号１４４の重鎖配列及び配列番号１４３の軽鎖配列、または（ｉ）配列番号１３７の重鎖配列及び配列番号１３８軽鎖配列、または（ｊ）配列番号１３０の重鎖配列及び配列番号１４５の軽鎖配列、または（ｄ）配列番号１３０の重鎖配列及び配列番号１４６の軽鎖配列、または（ｅ）配列番号１３１の重鎖配列及び配列番号１４５の軽鎖配列、または（ｆ）配列番号１３１の重鎖配列及び配列番号１４６の軽鎖配列、または（ｇ）配列番号１４４の重鎖配列及び配列番号１４７の軽鎖配列、または（ｈ）配列番号１４４の重鎖配列及び配列番号１４８の軽鎖配列、を含む、前記抗体。
【請求項２１】
第１の半抗体及び第２の半抗体を含む二重エピトープ抗体であって、前記第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第１のエピトープに結合する第１のＶＨ／ＶＬユニットを含み、前記第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第２のエピトープに結合する第２のＶＨ／ＶＬユニットを含む、前記二重エピトープ抗体。
【請求項２２】
前記第１のエピトープまたは前記第２のエピトープは、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全てまたは一部分内に存在するエピトープである、請求項２１に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項２３】
前記第１のエピトープまたは前記第２のエピトープは、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖドメイン内に存在しないか、または、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン内に全体が存在するものではない、請求項２１または請求項２２に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項２４】
前記第１のエピトープは、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在し、前記第２のエピトープは、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖドメイン内に存在しないか、または、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン内に全体が存在するものではない、あるいは、前記第１のエピトープは、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖドメイン内に存在しないか、または、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン内に全体が存在するものではなく、前記第２のエピトープは、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在する、請求項２３に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項２５】
前記第１のエピトープ及び前記第２のエピトープは、各々独立して、
ａ）前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全てまたは一部分内に存在するエピトープ、
ｂ）Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメインの全てまたは一部分内に存在するエピトープ、及び
ｃ）前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃ含有ドメインの全てまたは一部分内に存在するエピトープ、
から選択される、請求項２１〜２４のいずれか１項に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項２６】
前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインは、配列番号７３のアミノ酸２９〜１５７の配列を有する、請求項２５に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項２７】
Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメインは、配列番号７３のアミノ酸１５８〜２５０の配列を有する、請求項２５または請求項２６に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項２８】
ａ）前記第１の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合し、前記第２の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合するか、または
ｂ）前記第１の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合し、前記第２の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合するか、または
ｃ）前記第１の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合し、前記第２の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合するか、または
ｄ）前記第１の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合し、前記第２の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合するか、または
ｅ）前記第１の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合し、前記第２の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合するか、または
ｆ）前記第１の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合し、前記第２の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、
請求項２１〜２７のいずれか１項に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項２９】
前記第１の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合し、前記第２の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合するか、または、前記第１の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合し、前記第２の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、請求項２８に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項３０】
前記第１の半抗体は、
（ａ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、
（ｂ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、
（ｃ）配列番号３８のＶＨ配列及び配列番号１２６のＶＬ配列、または
（ｄ）配列番号１２７のＶＨ配列及び配列番号１２６のＶＬ配列、
を含む、請求項２１〜２４のいずれか１項に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項３１】
前記第２の半抗体は、
（ａ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、
（ｂ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、
（ｃ）配列番号３８のＶＨ配列及び配列番号１２６のＶＬ配列、または
（ｄ）配列番号１２７のＶＨ配列及び配列番号１２６のＶＬ配列、
を含む、請求項２１〜２４のいずれか１項に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項３２】
前記第１の半抗体は、
（ａ）（ｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
（ｂ）配列番号５６のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列、
を含む、請求項２１〜２４及び３１のいずれか１項に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項３３】
前記第２の半抗体は、
（ａ）（ｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
（ｂ）配列番号５６のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列、
を含む、請求項２１〜２４及び３０のいずれか１項に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項３４】
前記抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４抗体である、請求項２１〜３３のいずれか１項に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項３５】
前記第１の半抗体は、ノブ突然変異を含む第１の重鎖定常領域を含み、前記第２の重鎖は、ホール突然変異を含む第２の重鎖定常領域を含むか、または、前記第１の半抗体は、ホール突然変異を含む第１の重鎖定常領域を含み、前記第２の重鎖は、ノブ突然変異を含む第２の重鎖定常領域を含む、請求項２１〜３４のいずれか１項に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項３６】
前記抗体は、ＩｇＧ１抗体であり、前記ノブ突然変異は、Ｔ３６６Ｗ突然変異を含む、請求項２１〜３５のいずれか１項に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項３７】
前記抗体は、ＩｇＧ１抗体であり、前記ホール突然変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖから選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つの突然変異を含む、請求項２１〜３６のいずれか１項に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項３８】
前記抗体は、ＩｇＧ４抗体であり、前記ノブ突然変異は、Ｔ３６６Ｗ突然変異を含む、請求項２１〜３５のいずれか１項に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項３９】
前記抗体は、ＩｇＧ４抗体であり、前記ホール突然変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ突然変異から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つの突然変異を含む、請求項２１〜３５のいずれか１項に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項４０】
ａ）前記第１の半抗体は、配列番号１５９若しくは１６３の重鎖配列、及び配列番号１４５若しくは１４６の軽鎖配列を含むか、
ｂ）前記第１の半抗体は、配列番号１６０若しくは１６４の重鎖配列、及び配列番号１４５若しくは１４６の軽鎖配列を含むか、
ｃ）前記第１の半抗体は、配列番号１６１若しくは１６５の重鎖配列、及び配列番号１４７若しくは１４８の軽鎖配列を含むか、
ｄ）前記第１の半抗体は、配列番号１６２若しくは１６６の重鎖配列、及び配列番号１４７若しくは１４８の軽鎖配列を含むか、
ｅ）前記第２の半抗体は、配列番号１５９若しくは１６３の重鎖配列、及び配列番号１４５若しくは１４６の軽鎖配列を含むか、
ｆ）前記第２の半抗体は、配列番号１６０若しくは１６４の重鎖配列、及び配列番号１４５若しくは１４６の軽鎖配列を含むか、
ｇ）前記第２の半抗体は、配列番号１６１若しくは１６５の重鎖配列、及び配列番号１４７若しくは１４８の軽鎖配列を含むか、または
ｈ）前記第２の半抗体は、配列番号１６２若しくは１６６の重鎖配列、及び配列番号１４７若しくは１４８の軽鎖配列を含む、
請求項２１〜３５のいずれか１項に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項４１】
ａ）前記第１の半抗体は、配列番号１５９若しくは１６３の重鎖配列、及び配列番号１４５若しくは１４６の軽鎖配列を含み、前記第２の半抗体は、配列番号１６２若しくは１６６の重鎖配列、及び配列番号１４７若しくは１４８の軽鎖配列を含むか、または
ｂ）前記第１の半抗体は、配列番号１６１若しくは１６５の重鎖配列、及び配列番号１４７若しくは１４８の軽鎖配列を含み、前記第２の半抗体は、配列番号１６０若しくは１６４の重鎖配列、及び配列番号１４５若しくは１４６の軽鎖配列を含む、
請求項２１〜３５のいずれか１項に記載の二重エピトープ抗体。
【請求項４２】
第１の半抗体及び第２の半抗体を含む二重エピトープ抗体であって、前記第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第１のエピトープと結合する第１のＶＨ／ＶＬユニットを含み、前記第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第２のエピトープと結合する第２のＶＨ／ＶＬユニットを含み、前記第１の半抗体は、配列番号１５９または１６３の重鎖配列、及び配列番号１４５の軽鎖配列を含み、前記第２の半抗体は、配列番号１６２または１６６の重鎖配列、及び配列番号１４７の軽鎖配列を含む、前記二重エピトープ抗体。
【請求項４３】
第１の半抗体及び第２の半抗体を含む二重エピトープ抗体であって、前記第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第１のエピトープと結合する第１のＶＨ／ＶＬユニットを含み、前記第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第２のエピトープと結合する第２のＶＨ／ＶＬユニットを含み、前記第１の半抗体は、配列番号１６１または１６５の重鎖配列、及び配列番号１４７の軽鎖配列を含み、前記第２の半抗体は、配列番号１６０または１６４の重鎖配列、及び配列番号１４５の軽鎖配列を含む、前記二重エピトープ抗体。
【請求項４４】
Ｂ７−Ｈ４は、配列番号７３のヒトＢ７−Ｈ４である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項４５】
単離された核酸であって、
ａ）請求項１〜２０及び４４のいずれか１項に記載の抗体、
ｂ）請求項２１〜４４のいずれか１項に記載の二重エピトープ抗体、
ｃ）請求項２１〜４４のいずれか１項に記載の二重エピトープ抗体の前記第１の半抗体、または
ｄ）請求項２１〜４４のいずれか１項に記載の二重エピトープ抗体の前記第２の半抗体、
をコードする、前記核酸。
【請求項４６】
請求項４５に記載の核酸を含む宿主細胞。
【請求項４７】
抗体を産生する方法であって、前記抗体または半抗体が産生されるように請求項４５に記載の宿主細胞を培養することを含む、前記方法。
【請求項４８】
請求項１〜４４のいずれか１項に記載の抗体と、細胞傷害性薬剤とを含む、免疫複合体。
【請求項４９】
前記細胞傷害性薬剤は、前記抗体配列内の操作されたシステインを介して前記抗体に複合される、請求項４８に記載の免疫複合体。
【請求項５０】
式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有し、式中、
（ａ）Ａｂは、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の抗体であり、
（ｂ）Ｌは、リンカーであり、
（ｃ）Ｄは、前記細胞傷害性薬剤であり、
（ｄ）ｐは、１〜８の範囲である、請求項４８または請求項４９に記載の免疫複合体。
【請求項５１】
前記細胞傷害性薬剤は、マイタンシノイド、オーリスタチン、カリチアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ネモルビシン誘導体、及び１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール（ＣＢＩ）から選択される、請求項４８〜５０のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項５２】
前記細胞傷害性薬剤は、オーリスタチンである、請求項４８〜５１のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項５３】
Ｄは、式ＤＥ、
2022002515.tif 000150
を有し、式中、Ｒ２及びＲ６は各々、メチルであり、Ｒ３及びＲ４は各々、イソプロピルであり、Ｒ５は、Ｈであり、Ｒ７は、ｓｅｃ−ブチルであり、各Ｒ８は、独立して、ＣＨ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＨ、及びＨから選択され、Ｒ９は、Ｈであり、Ｒ１８は、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリールである、請求項５２に記載の免疫複合体。
【請求項５４】
前記細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥである、請求項５３に記載の免疫複合体。
【請求項５５】
前記細胞傷害性薬剤は、式Ａ、
2022002515.tif 000151
のピロロベンゾジアゼピンであり、式中、点線は、Ｃ１とＣ２またはＣ２とＣ３の間の二重結合の任意の存在を示し、
Ｒ２は、独立して、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ、及びＣＯＲから選択され、任意にハロまたはジハロからさらに選択され、式中、ＲＤは、独立して、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、及びハロから選択され、
Ｒ６及びＲ９は、独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから選択され、
Ｒ７は、独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから選択され、
Ｑは、独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮＨから選択され、
Ｒ１１は、Ｈ、若しくはＲであるか、またはＱがＯである場合、ＳＯ３Ｍであるかのいずれかであり、式中、Ｍは、金属陽イオンであり、
Ｒ及びＲ’は、各々独立して、任意に置換されるＣ１−８アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクリル、及びＣ５−２０アリール基から選択され、任意に基ＮＲＲ’との関連で、Ｒ及びＲ’は、それらが結合する窒素原子と一緒に、任意に置換される４員、５員、６員、または７員の複素環式環を形成し、
Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９、及びＲ１７は、それぞれＲ２、Ｒ６、Ｒ９、及びＲ７について定義される通りであり、
Ｒ″は、Ｃ３−１２アルキレン基であり、その鎖は、１個以上のヘテロ原子及び／または任意に置換されている芳香族環によって分断され得、
Ｘ及びＸ’は、独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮ（Ｈ）から選択される、請求項４９〜５１のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項５６】
前記細胞傷害性薬剤は、構造、
2022002515.tif 000152
を有し、式中、ｎは、０または１である、請求項５５に記載の免疫複合体。
【請求項５７】
前記細胞傷害性薬剤は、ネモルビシン誘導体である、請求項４９〜５１のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項５８】
前記細胞傷害性薬剤は、
2022002515.tif 000153
から選択される構造を有する、請求項５７に記載の免疫複合体。
【請求項５９】
前記細胞傷害性薬剤は、１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール（ＣＢＩ）を含む、請求項４９〜５１のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項６０】
前記細胞傷害性薬剤は、式、
2022002515.tif 000154
を有し、式中、
Ｒ１は、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、若しくはＬへの結合から選択されるか、
Ｒ２は、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、若しくはＬへの結合から選択されるか、
Ｒａ及びＲｂは、独立して、Ｈ、及び１つ以上のＦで任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキルから選択されるか、または
Ｒａ及びＲｂは、５員若しくは６員のヘテロシクリル基を形成し、
Ｔは、Ｃ３−Ｃ１２アルキレン、Ｙ、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、（Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）−Ｙ−（Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）、及び（Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）−Ｙ−（Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）から選択されるテザー基であり、
式中、Ｙは、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１、アリール、及びヘテロアリールから選択され、
アルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールは、独立して、また任意に、Ｆ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ＯＰ（Ｏ）３Ｈ２、及びＣ１−Ｃ６アルキル（式中、アルキルは、１つ以上のＦで任意に置換される）で置換されるか、または
アルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールは、独立して、また任意に、Ｌへの結合で置換され、
Ｄ’は、
2022002515.tif 000155
から選択される薬剤部分であり、式中、波線は、Ｔへの結合の部位を示し、
Ｘ１及びＸ２は、独立して、Ｏ及びＮＲ３から選択され、式中、Ｒ３は、Ｈ、及び１つ以上のＦで任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ４は、Ｈ、ＣＯ２Ｒ、またはリンカー（Ｌ）との結合であり、式中、Ｒは、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはベンジルであり、
Ｒ５は、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである、請求項５９に記載の免疫複合体。
【請求項６１】
前記細胞傷害性薬剤は、
2022002515.tif 000156
から選択される構造を有する、請求項５９または請求項６０に記載の免疫複合体。
【請求項６２】
前記細胞傷害性薬剤は、以下の構造を含む、請求項５９または請求項６０に記載の免疫複合体。
2022002515.tif 000157
【請求項６３】
前記リンカーは、プロテアーゼによって切断可能である、請求項５０〜６２のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項６４】
前記リンカーは、ｖａｌ−ｃｉｔジペプチドまたはＰｈｅ−Ｌｙｓジペプチドを含む、請求項６３に記載の免疫複合体。
【請求項６５】
前記リンカーは、酸不安定性である、請求項５０〜６２のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項６６】
前記リンカーは、ヒドラゾンを含む、請求項６５に記載の免疫複合体。
【請求項６７】
式、
2022002515.tif 000158
を有し、式中、Ｓは、硫黄原子である、請求項４８〜５２のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項６８】
式、
2022002515.tif 000159
を有する、請求項４９、５０、または５５に記載の免疫複合体。
【請求項６９】
2022002515.tif 000160
2022002515.tif 000161
から選択される式を有する、請求項４９、５０、５７、または５８に記載の免疫複合体。
【請求項７０】
2022002515.tif 000162
2022002515.tif 000163
から選択される構造を有する、請求項４９、５０、及び５９〜６２のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項７１】
ｐは、２〜５、または１．４〜２の範囲である、請求項５０〜７０のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項７２】
請求項９、１０、２０、または４２に記載の抗体を含む、請求項５０〜７１のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項７３】
請求項４９〜７２のいずれか１項に記載の免疫複合体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬製剤。
【請求項７４】
追加の治療剤をさらに含む、請求項７３に記載の医薬製剤。
【請求項７５】
前記追加の治療剤は、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ）である、請求項７４に記載の医薬製剤。
【請求項７６】
Ｂ７−Ｈ４陽性がんを有する個体を処置する方法であって、前記個体に、有効量の、請求項４７〜７２のいずれか１項に記載の免疫複合体を投与することを含む、前記方法。
【請求項７７】
前記Ｂ７−Ｈ４陽性がんは、乳がん、卵巣がん、及び子宮内膜がんから選択される、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記Ｂ７−Ｈ４陽性がんは、トリプルネガティブ（ＥＲ−／ＰＲ−／Ｈｅｒ２−）乳がんである、請求項７６または７７に記載の方法。
【請求項７９】
追加の治療剤を前記個体に投与することをさらに含む、請求項７６〜７８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８０】
前記追加の治療剤は、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ）である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
Ｂ７−Ｈ４陽性細胞の増殖を阻害する方法であって、前記細胞を、請求項４８〜７２のいずれか１項に記載の免疫複合体に、前記細胞の表面上のＢ７−Ｈ４への前記免疫複合体の結合を許容する条件下で曝露し、それによって前記細胞の増殖を阻害することを含む、前記方法。
【請求項８２】
前記細胞は、乳がん細胞、卵巣がん細胞、または子宮内膜がん細胞である、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記細胞は、トリプルネガティブ（ＥＲ−／ＰＲ−／Ｈｅｒ２−）乳がんである、請求項８１または８２に記載の方法。
【請求項８４】
標識に複合された、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項８５】
前記標識は、陽電子放出体である、請求項８４に記載の抗体。
【請求項８６】
前記陽電子放出体は、８９Ｚｒである、請求項８５に記載の抗体。
【請求項８７】
生体試料中のヒトＢ７−Ｈ４を検出する方法であって、前記生体試料を、請求項１〜４４及び８４〜８６のいずれか１項に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体と、自然発生ヒトＢ７−Ｈ４への前記抗Ｂ７−Ｈ４抗体の結合を許容する条件下で接触させることと、前記生体試料中で、前記抗Ｂ７−Ｈ４抗体と自然発生ヒトＢ７−Ｈ４との間に複合体が形成されるかどうかを検出することと、を含む、前記方法。
【請求項８８】
前記抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、請求項９、１０、２０、４２、または４３にあるような抗体である、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記生体試料は、乳がん試料、卵巣がん試料、または子宮内膜がん試料である、請求項８７または請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記生体試料は、トリプルネガティブ（ＥＲ−／ＰＲ−／Ｈｅｒ２−）乳がんである、請求項８７〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９１】
Ｂ７−Ｈ４陽性がんを検出するための方法であって、（ｉ）標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体を、Ｂ７−Ｈ４陽性がんを有するかまたは有すると疑われる対象に投与することであって、前記標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体を含む、前記投与することと、（ｉｉ）前記対象における前記標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体を検出することと、を含み、前記標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体の検出は、前記対象におけるＢ７−Ｈ４陽性がんを示す、前記方法。
【請求項９２】
前記標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、標識されている請求項９、１０、２０、４３、または４４にあるような抗体である、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、陽電子放出体に複合された抗Ｂ７−Ｈ４抗体を含む、請求項９１または請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記陽電子放出体は、８９Ｚｒである、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
細胞傷害性薬剤に複合されており、また、構造、
2022002515.tif 000164
を有する抗体（Ａｂ）を含む免疫複合体であって、
式中、Ａｂは、ヒトＢ７−Ｈ４に結合する抗体であり、前記抗体は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１３４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、前記細胞傷害性薬剤は、前記抗体の１個以上の操作されたシステインに複合されており、前記操作されたシステインは、前記重鎖内のＡ１１８Ｃシステイン置換であり、ｐは、１．４〜２である、前記免疫複合体。
【請求項９６】
細胞傷害性薬剤に複合されており、また、構造、
2022002515.tif 000165
を有する抗体（Ａｂ）を含む免疫複合体であって、
式中、Ａｂは、ヒトＢ７−Ｈ４に結合する抗体であり、前記抗体は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１３４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、前記細胞傷害性薬剤は、前記抗体の１個以上の操作されたシステインに複合されており、前記操作されたシステインは、前記重鎖内のＡ１１８Ｃシステイン置換であり、ｐは、１．４〜２である、前記免疫複合体。
【請求項９７】
細胞傷害性薬剤に複合されており、また、構造、
2022002515.tif 000166
を有する抗体（Ａｂ）を含む免疫複合体であって、
式中、Ａｂは、第１の半抗体及び第２の半抗体を含む二重エピトープ抗体であり、前記第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第１のエピトープと結合する第１のＶＨ／ＶＬユニットを含み、前記第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第２のエピトープと結合する第２のＶＨ／ＶＬユニットを含み、前記第１の半抗体は、配列番号１５９または１６３の重鎖配列、及び配列番号１４５の軽鎖配列を含み、前記第２の半抗体は、配列番号１６２または１６６の重鎖配列、及び配列番号１４７の軽鎖配列を含み、前記細胞傷害性薬剤は、前記抗体の１個以上の操作されたシステインに複合されており、前記操作されたシステインは、前記軽鎖内のＫ１４９Ｃシステイン置換であり、ｐは、１．４〜２である、前記免疫複合体。
【請求項９８】
細胞傷害性薬剤に複合されており、また、構造、
2022002515.tif 000167
を有する抗体（Ａｂ）を含む免疫複合体であって、
式中、Ａｂは、第１の半抗体及び第２の半抗体を含む二重エピトープ抗体であり、前記第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第１のエピトープと結合する第１のＶＨ／ＶＬユニットを含み、前記第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第２のエピトープと結合する第２のＶＨ／ＶＬユニットを含み、前記第１の半抗体は、配列番号１６１または１６５の重鎖配列、及び配列番号１４７の軽鎖配列を含み、前記第２の半抗体は、配列番号１６０または１６４の重鎖配列、及び配列番号１４５の軽鎖配列を含み、前記細胞傷害性薬剤は、前記抗体の１個以上の操作されたシステインに複合されており、前記操作されたシステインは、前記軽鎖内のＫ１４９Ｃシステイン置換であり、ｐは、１．４〜２である、前記免疫複合体。
【請求項９９】
細胞傷害性薬剤に複合されており、また、構造、
2022002515.tif 000168
を有する抗体（Ａｂ）を含む免疫複合体であって、
式中、Ａｂは、第１の半抗体及び第２の半抗体を含む二重エピトープ抗体であり、前記第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第１のエピトープと結合する第１のＶＨ／ＶＬユニットを含み、前記第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第２のエピトープと結合する第２のＶＨ／ＶＬユニットを含み、前記第１の半抗体は、配列番号１５９または１６３の重鎖配列、及び配列番号１４５の軽鎖配列を含み、前記細胞傷害性薬剤は、前記抗体の１個以上の操作されたシステインに複合されており、前記操作されたシステインは、前記軽鎖内のＫ１４９Ｃシステイン置換であり、ｐは、１．４〜２である、前記免疫複合体。
【請求項１００】
細胞傷害性薬剤に複合されており、また、構造、
2022002515.tif 000169
を有する抗体（Ａｂ）を含む免疫複合体であって、
式中、Ａｂは、第１の半抗体及び第２の半抗体を含む二重エピトープ抗体であり、前記第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第１のエピトープと結合する第１のＶＨ／ＶＬユニットを含み、前記第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第２のエピトープと結合する第２のＶＨ／ＶＬユニットを含み、前記第２の半抗体は、配列番号１６０または１６４の重鎖配列、及び配列番号１４５の軽鎖配列を含み、前記細胞傷害性薬剤は、前記抗体の１個以上の操作されたシステインに複合されており、前記操作されたシステインは、前記軽鎖内のＫ１４９Ｃシステイン置換であり、ｐは、１．４〜２である、前記免疫複合体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１４年９月１２日出願の米国仮出願第６２／０４９，７０１号の優先権を主張するものであり、この仮出願は、任意の目的でその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、電子形式の配列表と共に提出される。この配列表は、２００，６０４バイトのサイズであり、２０１５年９月５日に作成された「２０１５−０９−１１＿０１１４６−００３８−００ＰＣＴ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」という名称のファイルとして提供される。電子形式の配列表内の情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００３】
本発明は、抗Ｂ７−Ｈ４抗体及び免疫複合体ならびにそれらを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
Ｂ７−Ｈ４は、Ｉ型膜貫通タンパク質であり、Ｔ細胞受容体抗原シグナルと併せて共シグナルを提供するタンパク質のＢ７スーパーファミリーのメンバーである。Ｂ７−Ｈ４は、Ｔ細胞機能の負の調節因子であり、Ｔ細胞の連結は、それらの成長、サイトカイン分泌、及び細胞傷害を阻害する。マウスにおけるＢ７−Ｈ４の排除は、免疫細胞の恒常性に影響せず、自己免疫の徴候はない。Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１１３（８）：１７５９−１７６７（２００９）、Ｓｕｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２６（１７）：６４０３−６４１１（２００６）。Ｂ７−Ｈ４の受容体は未知であり、特定されていない。
【０００５】
ヒトＢ７−Ｈ４は２８２アミノ酸タンパク質であり（アミノ末端シグナル配列を含む）、そのうち約２２７個のアミノ酸が、アミノ末端シグナル配列の切断後の細胞外空間に存在すると予測される。Ｂ７−Ｈ４は、Ｉｇ様Ｖドメイン、Ｉｇ様Ｃドメイン、膜貫通ドメイン、及び短い細胞質側末端を含む。
【０００６】
トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）は、乳がんの全報告事例のうち２０％未満を占め、依然として臨床医にとって重大な課題である。これらの腫瘍はホルモン受容体（ＥＲ＆ＰＲ）及びヒト上皮成長因子受容体２（Ｈｅｒ２）に対して陽性でないので、ＴＮＢＣ患者は、これらの受容体陽性乳がんの過半数の治療に有効となっているＥＲ／ＰＲ／Ｈｅｒ２受容体拮抗薬を用いる標的療法に不適格である。他の２つの乳がんサブタイプである基底様（ｂａｓａｌ−ｌｉｋｅ）型及びＨｅｒ２濃縮型は、ＥＲまたはＰＲを発現する可能性が低く、基底様がんの過半数はまた、Ｈｅｒ２陰性である。ＴＮＢＣ及び基底様型の両方にＥＲ／ＰＲ及びＨｅｒ２発現の欠如が共通するが、ＴＮＢＣの８０％のみが、侵攻性の基底様サブタイプに関連する分子プロファイルを示す。この理由で、ＴＮＢＣ及び基底様型は、重複する特徴を有するが明確に異なるサブタイプと見なされる。ＴＮＢＣ及び基底様型は、種々の組織学的サブタイプ（分泌性、腺様嚢胞性、髄質性、侵襲性乳管性、及び異形成性）を有し、一部はその他よりも侵攻性が低いが、全体としてはその過半数が、早期発症及び急速な進行を伴う。疾患が転移性になると、再発から死までの中位時間は、他の形態の乳がんと比較して大幅に短くなる。ＴＮＢＣの現在の治療手段には、アントラサイクリン、タキサン、白金剤、及び生物剤を用いた臨床治験が含まれる。しかしながら、ＴＮＢＣの管理のための許容されている標準治療はなく、こうした患者の予後は不良なままである。
【０００７】
ＴＮＢＣに対する標的化アプローチは、ＤＮＡ修復（Ｃｈｋ１、Ｃｈｋ２  ＰＡＲＰ）、血管新生（ＶＥＧＦ及びＶＥＧＡ）、ＥＧＦＲ、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴｏｒ、及びＳｒｃシグナル伝達経路の阻害によって、がんを攻撃するための裏口を見出すことに留まっている。いくつかの標的化アプローチには、乳がんの７０％超において発現されるアンドロゲン受容体、及びＴＮＢＣの４％において増幅されると報告されているＦＧＦＲが含まれる。これまでのところ、立証されているＴＮＢＣの治療のための分子標的は存在しない。
【０００８】
Ｂ７−Ｈ４は、Ｔ細胞受容体による抗原依存性シグナル伝達と併せて、その共阻害シグナルを介して免疫系を下方制御する可能性を有する、Ｂ７ファミリーのメンバーである。Ｂ７−Ｈ４は、正常なヒト組織内で名目上は発現されるが、女性生殖器系（乳房、卵巣、及び子宮内膜）のがんを含む多様なヒトがんにおいて高度に過剰発現される。Ｂ７−Ｈ４の発生率は、原発性（約９５％）及び転移性乳がん（約９７％）の両方を含み、侵襲性乳管がん及び小葉がんにおいて高いことが報告されている。増加したＢ７−Ｈ４染色は陰性のＰＲ及びＨｅｒ２ステータスに関連していたが、発現は腫瘍の等級または段階から独立していた。これらの種類の乳がんにおける高い割合のＢ７Ｈ４染色細胞に加えて、浸潤性リンパ球の数の随伴的減少もあった。近年、肺転移性乳がんのＢ７−Ｈ４ノックアウトモデルにおいて、著者らは、Ｂ７−Ｈ４−／−マウスが、野生型マウスと比較して、より少ない肺腫瘍小結節を有したこと、ならびに腫瘍負荷に対する生存率及び記憶応答の向上を示したことを報告した。これは、Ｂ７−Ｈ４−Ｉｇ融合タンパク質に結合した腫瘍関連好中球による、ＣＤ４及びＣＤ８細胞に対する免疫抑制作用に起因すると考えられた。これはまた、ＳＣＩＤマウス内でＢ７−Ｈ４を過剰発現する移植されたＳＫＯＶ３細胞が、野生型ＳＫＯＶ３細胞よりも侵攻性に成長した理由を説明し得る。さらに、ＳＫＢＲ３細胞内のＢ７−Ｈ４  ｍＲＮＡ及びタンパク質のノックダウンが、カスパーゼ活性及びアポトーシスの上昇につながったことが示された。まとめると、乳がんの分子標的としてのＢ７−Ｈ４の研究を是認するのに十分な証拠が存在する。
【０００９】
当該技術分野において、がん等のＢ７−Ｈ４関連病態の診断及び治療のために、Ｂ７−Ｈ４を標的とする薬剤が必要とされている。本発明はその必要性を満たし、また他の便益を提供する。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、抗Ｂ７−Ｈ４抗体及び免疫複合体ならびにそれらを使用する方法を提供する。
【００１１】
いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４に結合する単離された抗体であって、
（ａ）（ｉ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び（ｉｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、または
（ｂ）（ｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び（ｉｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
を含む、抗体が提供される。
【００１２】
いくつかの実施形態において、本抗体は、
（ａ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、または
（ｂ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
を含む。
【００１３】
いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号５３の重鎖フレームワークＦＲ３配列を含む。
【００１４】
いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号４７の軽鎖フレームワークＦＲ３配列を含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、本抗体は、
（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、
（ｂ）配列番号１２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
（ｃ）配列番号１２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、または
（ｄ）（ａ）にあるようなＶＨ配列及び（ｂ）にあるようなＶＬ配列、または
（ｅ）（ｃ）にあるようなＶＨ配列及び（ｂ）にあるようなＶＬ配列、
を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号３８または１２７のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号１２６のＶＬ配列を含む。
【００１７】
いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４に結合する単離された抗体が提供され、本抗体は、（ａ）配列番号３８のＶＨ配列及び配列番号１２６のＶＬ配列、または（ｂ）配列番号１２７のＶＨ配列及び配列番号１２６のＶＬ配列を含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４に結合する単離された抗体が提供され、本抗体は、
（ａ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
（ｂ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、
を含む。
【００１９】
本明細書に記載される実施形態のいずれかにおいて、本抗体は、モノクローナル抗体であっても良い。本明細書に記載される実施形態のいずれかにおいて、本抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体であっても良い。本明細書に記載される実施形態のいずれかにおいて、本抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体断片であっても良い。
【００２０】
本明細書に記載される実施形態のいずれかにおいて、本抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、またはＩｇＧ２ｂ抗体であっても良い。本明細書に記載される実施形態のいずれかにおいて、本抗体は、１個以上の操作されたシステインアミノ酸残基を含んでも良い。本明細書に記載される実施形態のいずれかにおいて、１個以上の操作されたシステインアミノ酸残基は、重鎖内に位置しても良い。本明細書に記載される実施形態のいずれかにおいて、１個以上の操作されたシステインアミノ酸残基は、軽鎖内に位置しても良い。本明細書に記載される実施形態のいずれかにおいて、本抗体は、Ａ１１８Ｃ及びＳ４００Ｃから選択される少なくとも１つの突然変異を重鎖定常領域内に含んでも良い。本明細書に記載される実施形態のいずれかにおいて、本抗体は、Ｋ１４９Ｃ及びＶ２０５Ｃから選択される少なくとも１つの突然変異を軽鎖定常領域内に含んでも良い。
【００２１】
いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４に結合する単離された抗体が提供され、本抗体は、（ａ）配列番号１３２の重鎖配列及び配列番号１３４の軽鎖配列、または（ｂ）配列番号１３３の重鎖配列及び配列番号１３４の軽鎖配列、または（ｃ）配列番号１３０の重鎖配列及び配列番号１４０の軽鎖配列、または（ｄ）配列番号１３０の重鎖配列及び配列番号１４１の軽鎖配列、または（ｅ）配列番号１３１の重鎖配列及び配列番号１４０の軽鎖配列、または（ｆ）配列番号１３１の重鎖配列及び配列番号１４１の軽鎖配列、または（ｇ）配列番号１４４の重鎖配列及び配列番号１４２の軽鎖配列、または（ｈ）配列番号１４４の重鎖配列及び配列番号１４３の軽鎖配列、または（ｉ）配列番号１３７の重鎖配列及び配列番号１３８軽鎖配列、または（ｊ）配列番号１３０の重鎖配列及び配列番号１４５の軽鎖配列、または（ｄ）配列番号１３０の重鎖配列及び配列番号１４６の軽鎖配列、または（ｅ）配列番号１３１の重鎖配列及び配列番号１４５の軽鎖配列、または（ｆ）配列番号１３１の重鎖配列及び配列番号１４６の軽鎖配列、または（ｇ）配列番号１４４の重鎖配列及び配列番号１４７の軽鎖配列、または（ｈ）配列番号１４４の重鎖配列及び配列番号１４８の軽鎖配列、を含む。
【００２２】
いくつかの実施形態において、第１の半抗体及び第２の半抗体を含む二重エピトープ抗体が提供され、第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第１のエピトープに結合する第１のＶＨ／ＶＬユニットを含み、第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第２のエピトープに結合する第２のＶＨ／ＶＬユニットを含む。いくつかの実施形態において、第１のエピトープまたは第２のエピトープは、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全てまたは一部分内に存在するエピトープである。いくつかの実施形態において、第１のエピトープまたは第２のエピトープは、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖドメイン内に存在しないか、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン内に全体が存在するものではない。いくつかの実施形態において、第１のエピトープは、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在し、第２のエピトープは、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖドメイン内に存在しないか、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン内に全体がは存在するものではない、あるいは、第１のエピトープは、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖドメイン内に存在しないか、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン内に全体が存在するものではなく、第２のエピトープは、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在する。いくつかの実施形態において、第１のエピトープ及び第２のエピトープは、各々独立して、
ａ）Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全てまたは一部分内に存在するエピトープ、
ｂ）Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメインの全てまたは一部分内に存在するエピトープ、及び
ｃ）Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃ含有ドメインの全てまたは一部分内に存在するエピトープ、
から選択される。
【００２３】
いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインは、配列番号７３のアミノ酸２９〜１５７の配列を有する。いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメインは、配列番号７３のアミノ酸１５８〜２５０の配列を有する。
【００２４】
いくつかの実施形態において、
ａ）第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合し、第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合するか、または
ｂ）前記第１の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合し、前記第２の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合するか、または
ｃ）前記第１の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合し、前記第２の半抗体は、前記Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合するか、または
ｄ）第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合し、第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合するか、または
ｅ）第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合し、第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン内のエピトープ全て若しくは一部分に結合するか、または
ｆ）第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合し、第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する。
【００２５】
いくつかの実施形態において、第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合し、第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合するか、または、第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合し、第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメインの全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する。
【００２６】
いくつかの実施形態において、第１の半抗体は、
（ａ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、
（ｂ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、
（ｃ）配列番号３８のＶＨ配列及び配列番号１２６のＶＬ配列、または
（ｄ）配列番号１２７のＶＨ配列及び配列番号１２６のＶＬ配列、
を含む。
【００２７】
いくつかの実施形態において、第２の半抗体は、
（ａ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、
（ｂ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、
（ｃ）配列番号３８のＶＨ配列及び配列番号１２６のＶＬ配列、または
（ｄ）配列番号１２７のＶＨ配列及び配列番号１２６のＶＬ配列、
を含む。
【００２８】
いくつかの実施形態において、第１の半抗体は、
（ａ）（ｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
（ｂ）配列番号５６のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列、
を含む。
【００２９】
いくつかの実施形態において、第２の半抗体は、
（ａ）（ｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
（ｂ）配列番号５６のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列、
を含む。
【００３０】
いくつかの実施形態において、二重エピトープ抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４抗体である。いくつかの実施形態において、第１の半抗体は、ノブ突然変異を含む第１の重鎖定常領域を含み、第２の重鎖は、ホール突然変異を含む第２の重鎖定常領域を含むか、または、第１の半抗体は、ホール突然変異を含む第１の重鎖定常領域を含み、第２の重鎖は、ノブ突然変異を含む第２の重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態において、二重エピトープ性抗体は、ＩｇＧ１抗体であり、ノブ突然変異は、Ｔ３６６Ｗ突然変異を含む。いくつかの実施形態において、二重エピトープ抗体は、ＩｇＧ１抗体であり、ホール突然変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖから選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つの突然変異を含む。いくつかの実施形態において、二重エピトープ抗体は、ＩｇＧ４抗体であり、ノブ突然変異は、Ｔ３６６Ｗ突然変異を含む。いくつかの実施形態において、二重エピトープ抗体は、ＩｇＧ４抗体であり、ホール突然変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ突然変異から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つの突然変異を含む。
【００３１】
いくつかの実施形態において、二重エピトープ抗体が提供され、
ａ）第１の半抗体は、配列番号１５９若しくは１６３の重鎖配列、及び配列番号１４５若しくは１４６の軽鎖配列を含むか、
ｂ）前記第１の半抗体は、配列番号１６０若しくは１６４の重鎖配列、及び配列番号１４５若しくは１４６の軽鎖配列を含むか、
ｃ）前記第１の半抗体は、配列番号１６１若しくは１６５の重鎖配列、及び配列番号１４７若しくは１４８の軽鎖配列を含むか、
ｄ）前記第１の半抗体は、配列番号１６２若しくは１６６の重鎖配列、及び配列番号１４７若しくは１４８の軽鎖配列を含むか、
ｅ）前記第２の半抗体は、配列番号１５９若しくは１６３の重鎖配列、及び配列番号１４５若しくは１４６の軽鎖配列を含むか、
ｆ）前記第２の半抗体は、配列番号１６０若しくは１６４の重鎖配列、及び配列番号１４５若しくは１４６の軽鎖配列を含むか、
ｇ）前記第２の半抗体は、配列番号１６１若しくは１６５の重鎖配列、及び配列番号１４７若しくは１４８の軽鎖配列を含むか、または
ｈ）第２の半抗体は、配列番号１６２若しくは１６６の重鎖配列、及び配列番号１４７若しくは１４８の軽鎖配列を含む。
【００３２】
いくつかの実施形態において、二重エピトープ抗体が提供され、
ａ）第１の半抗体は、配列番号１５９若しくは１６３の重鎖配列、及び配列番号１４５若しくは１４６の軽鎖配列を含み、第２の半抗体は、配列番号１６２若しくは１６６の重鎖配列、及び配列番号１４７若しくは１４８の軽鎖配列を含むか、または
ｂ）第１の半抗体は、配列番号１６１若しくは１６５の重鎖配列、及び配列番号１４７若しくは１４８の軽鎖配列を含み、第２の半抗体は、配列番号１６０若しくは１６４の重鎖配列、及び配列番号１４５若しくは１４６の軽鎖配列を含む。
【００３３】
いくつかの実施形態において、第１の半抗体及び第２の半抗体を含む二重エピトープ抗体が提供され、第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第１のエピトープに結合する第１のＶＨ／ＶＬユニットを含み、第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第２のエピトープに結合する第２のＶＨ／ＶＬユニットを含み、第１の半抗体は、配列番号１５９または１６３の重鎖配列、及び配列番号１４５の軽鎖配列を含み、第２の半抗体は、配列番号１６２または１６６の重鎖配列、及び配列番号１４７の軽鎖配列を含む。
【００３４】
本明細書に記載される実施形態のいずれかにおいて、Ｂ７−Ｈ４は、配列番号７３のヒトＢ７−Ｈ４であっても良い。
【００３５】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体をコードする単離された核酸が提供される。いくつかの実施形態において、本核酸を含む宿主細胞が提供される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体を産生する方法であって、抗体が産生されるように宿主細胞を培養することを含む、方法が提供される。
【００３６】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体と、細胞傷害性薬剤とを含む、免疫複合体が提供される。いくつかの実施形態において、細胞傷害性薬剤は、抗体配列内の操作されたシステインを介して本抗体に複合される。いくつかの実施形態において、免疫複合体は式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有し、式中、
（ａ）Ａｂは、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗体であり、
（ｂ）Ｌは、リンカーであり、
（ｃ）Ｄは、薬剤であり、
（ｄ）ｐは、１〜８の範囲である。
【００３７】
いくつかの実施形態において、Ｄすなわち細胞傷害性薬剤は、マイタンシノイド、オーリスタチン、カリチアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ネモルビシン誘導体、及び１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール（ＣＢＩ）から選択される。いくつかの実施形態において、Ｄすなわち細胞傷害性薬剤は、オーリスタチンである。いくつかの実施形態において、Ｄすなわち細胞傷害性薬剤は、式ＤＥ、
2022002515.tif 000003
を有し、式中、Ｒ２及びＲ６は各々、メチルであり、Ｒ３及びＲ４は各々、イソプロピルであり、Ｒ５は、Ｈであり、Ｒ７は、ｓｅｃ−ブチルであり、各Ｒ８は、独立して、ＣＨ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＨ、及びＨから選択され、Ｒ９は、Ｈであり、Ｒ１８は、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリールである。
いくつかの実施形態において、Ｄすなわち細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥである。
【００３８】
いくつかの実施形態において、Ｄすなわち細胞傷害性薬剤は、式Ａ、
2022002515.tif 000004
のピロロベンゾジアゼピンであり、式中、点線は、Ｃ１とＣ２またはＣ２とＣ３の間の二重結合の任意の存在を示し、
Ｒ２は、独立して、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ、及びＣＯＲから選択され、任意にハロまたはジハロからさらに選択され、式中、ＲＤは、独立して、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、及びハロから選択され、
Ｒ６及びＲ９は、独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから選択され、
Ｒ７は、独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから選択され、
Ｑは、独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮＨから選択され、
Ｒ１１は、Ｈ、若しくはＲであるか、またはＱがＯである場合、ＳＯ３Ｍであるかのいずれかであり、式中、Ｍは、金属陽イオンであり、
Ｒ及びＲ’は、各々独立して、任意に置換されるＣ１−８アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクリル、及びＣ５−２０アリール基から選択され、任意に基ＮＲＲ’との関連で、Ｒ及びＲ’は、それらが結合する窒素原子と一緒に、任意に置換される４員、５員、６員、または７員の複素環式環を形成し、
Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９、及びＲ１７は、それぞれＲ２、Ｒ６、Ｒ９、及びＲ７について定義される通りであり、
Ｒ″は、Ｃ３−１２アルキレン基であり、その鎖は、１個以上のヘテロ原子及び／または任意に置換されている芳香族環によって分断され得、
Ｘ及びＸ’は、独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮ（Ｈ）から選択される。
いくつかの実施形態において、Ｄすなわち細胞傷害性薬剤は、構造、
2022002515.tif 000005
を有し、式中、ｎは、０または１である。
【００３９】
いくつかの実施形態において、Ｄすなわち細胞傷害性薬剤は、ネモルビシン誘導体である。いくつかの実施形態において、Ｄすなわち細胞傷害性薬剤は、
2022002515.tif 000006
から選択される構造を有する。
【００４０】
いくつかの実施形態において、細胞傷害性薬剤は、１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール（ＣＢＩ）を含む。いくつかの実施形態において、細胞傷害性薬剤は、式、
2022002515.tif 000007
を有し、式中、
Ｒ１は、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、若しくはＬへの結合から選択されるか、
Ｒ２は、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、若しくはＬへの結合から選択されるか、
Ｒａ及びＲｂは、独立して、Ｈ、及び１つ以上のＦで任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキルから選択されるか、または
Ｒａ及びＲｂは、５員若しくは６員のヘテロシクリル基を形成し、
Ｔは、Ｃ３−Ｃ１２アルキレン、Ｙ、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、（Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）−Ｙ−（Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）、及び（Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）−Ｙ−（Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）から選択されるテザー基であり、
式中、Ｙは、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１、アリール、及びヘテロアリールから選択され、
アルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールは、独立して、また任意に、Ｆ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ＯＰ（Ｏ）３Ｈ２、及びＣ１−Ｃ６アルキル（式中、アルキルは、１つ以上のＦで任意に置換される）で置換されるか、または
アルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールは、独立して、また任意に、Ｌへの結合で置換され、
Ｄ’は、
2022002515.tif 000008
から選択される薬剤部分であり、式中、波線は、Ｔへの結合の部位を示し、
Ｘ１及びＸ２は、独立して、Ｏ及びＮＲ３から選択され、式中、Ｒ３は、Ｈ、及び１つ以上のＦで任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ４は、Ｈ、ＣＯ２Ｒ、またはリンカー（Ｌ）への結合であり、式中、Ｒは、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはベンジルであり、
Ｒ５は、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【００４１】
いくつかの実施形態において、細胞傷害性薬剤は、
2022002515.tif 000009
から選択される構造を有する。
いくつかの実施形態において、細胞傷害性薬剤は、以下の構造を含む。
2022002515.tif 000010
【００４２】
いくつかの実施形態において、本免疫複合体のリンカーは、プロテアーゼによって切断可能である。いくつかの実施形態において、リンカーは、ｖａｌ−ｃｉｔジペプチドまたはＰｈｅ−Ｌｙｓジペプチドを含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、酸不安定性である。いくつかの実施形態において、リンカーは、ヒドラゾンを含む。
【００４３】
いくつかの実施形態において、式、
2022002515.tif 000011
を有する免疫複合体が提供され、式中、Ｓは、硫黄原子である。
【００４４】
いくつかの実施形態において、式、
2022002515.tif 000012
を有する免疫複合体が提供され、式中、Ａｂは、本明細書に記載される抗体である。
【００４５】
いくつかの実施形態において、
2022002515.tif 000013
2022002515.tif 000014
から選択される式を有する免疫複合体が提供され、式中、Ａｂは、本明細書に記載される抗体である。
【００４６】
いくつかの実施形態において、
2022002515.tif 000015
から選択される式を有する免疫複合体が提供され、式中、Ａｂは、本明細書に記載される抗体である。
【００４７】
本明細書に記載される免疫複合体のいずれかにおいて、ｐは、１．４〜５、２〜５、１〜３、または１．４〜２の範囲であっても良い。
【００４８】
いくつかの実施形態において、免疫複合体が提供され、本免疫複合体は、細胞傷害性薬剤に複合された抗体（Ａｂ）を含み、また構造、
2022002515.tif 000016
を有し、
式中、Ａｂは、ヒトＢ７−Ｈ４に結合する抗体であり、本抗体は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１３４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、細胞傷害性薬剤は、本抗体の１個以上の操作されたシステインに複合されており、操作されたシステインは、重鎖内のＡ１１８Ｃシステイン置換であり、ｐは、１．４〜２である。
【００４９】
いくつかの実施形態において、免疫複合体が提供され、本免疫複合体は、細胞傷害性薬剤に複合された抗体（Ａｂ）を含み、また構造、
2022002515.tif 000017
を有し、
式中、Ａｂは、ヒトＢ７−Ｈ４に結合する抗体であり、本抗体は、配列番号１３４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１３４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、細胞傷害性薬剤は、本抗体の１個以上の操作されたシステインに複合されており、操作されたシステインは、重鎖内のＡ１１８Ｃシステイン置換であり、ｐは、１．４〜２である。
【００５０】
いくつかの実施形態において、免疫複合体が提供され、本免疫複合体は、細胞傷害性薬剤に複合された抗体（Ａｂ）を含み、また構造、
2022002515.tif 000018
を有し、
式中、Ａｂは、第１の半抗体及び第２の半抗体を含む二重エピトープ抗体であり、第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第１のエピトープに結合する第１のＶＨ／ＶＬユニットを含み、第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第２のエピトープに結合する第２のＶＨ／ＶＬユニットを含み、第１の半抗体は、配列番号１５９または１６３の重鎖配列、及び配列番号１４５の軽鎖配列を含み、第２の半抗体は、配列番号１６２または１６６の重鎖配列、及び配列番号１４７の軽鎖配列を含み、細胞傷害性薬剤は、本抗体の１個以上の操作されたシステインに複合されており、操作されたシステインは、軽鎖内のＫ１４９Ｃシステイン置換であり、ｐは、１．４〜２である。
【００５１】
いくつかの実施形態において、免疫複合体が提供され、本免疫複合体は、細胞傷害性薬剤に複合された抗体（Ａｂ）を含み、また構造、
2022002515.tif 000019
を有し、
式中、Ａｂは、第１の半抗体及び第２の半抗体を含む二重エピトープ抗体であり、第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第１のエピトープに結合する第１のＶＨ／ＶＬユニットを含み、第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第２のエピトープに結合する第２のＶＨ／ＶＬユニットを含み、第１の半抗体は、配列番号１６１または１６５の重鎖配列、及び配列番号１４７の軽鎖配列を含み、第２の半抗体は、配列番号１６０または１６４の重鎖配列、及び配列番号１４５の軽鎖配列を含み、細胞傷害性薬剤は、本抗体の１個以上の操作されたシステインに複合されており、操作されたシステインは、軽鎖内のＫ１４９Ｃシステイン置換であり、ｐは、１．４〜２である。
【００５２】
いくつかの実施形態において、免疫複合体が提供され、本免疫複合体は、細胞傷害性薬剤に複合された抗体（Ａｂ）を含み、また構造、
2022002515.tif 000020
を有し、
式中、Ａｂは、第１の半抗体及び第２の半抗体を含む二重エピトープ抗体であり、第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第１のエピトープに結合する第１のＶＨ／ＶＬユニットを含み、第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第２のエピトープに結合する第２のＶＨ／ＶＬユニットを含み、第１の半抗体は、配列番号１５９または１６３の重鎖配列、及び配列番号１４５の軽鎖配列を含み、細胞傷害性薬剤は、本抗体の１個以上の操作されたシステインに複合されており、操作されたシステインは、軽鎖内のＫ１４９Ｃシステイン置換であり、ｐは、１．４〜２である。
【００５３】
いくつかの実施形態において、免疫複合体が提供され、本免疫複合体は、細胞傷害性薬剤に複合された抗体（Ａｂ）を含み、また構造、
2022002515.tif 000021
を有し、
式中、Ａｂは、第１の半抗体及び第２の半抗体を含む二重エピトープ抗体であり、第１の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第１のエピトープに結合する第１のＶＨ／ＶＬユニットを含み、第２の半抗体は、Ｂ７−Ｈ４の第２のエピトープに結合する第２のＶＨ／ＶＬユニットを含み、第２の半抗体は、配列番号１６０または１６４の重鎖配列、及び配列番号１４５の軽鎖配列を含み、細胞傷害性薬剤は、本抗体の１個以上の操作されたシステインに複合されており、操作されたシステインは、軽鎖内のＫ１４９Ｃシステイン置換であり、ｐは、１．４〜２である。
【００５４】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される免疫複合体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬製剤が提供される。いくつかの実施形態において、医薬製剤は、追加の治療剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ）である。
【００５５】
いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４陽性がんを有する個体を処置する方法が提供され、本方法は、個体に、有効量の本明細書に記載される免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４陽性がんは、乳がん、卵巣がん、及び子宮内膜がんから選択される。いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４陽性がんは、トリプルネガティブ（ＥＲ−／ＰＲ−／Ｈｅｒ２−）乳がんである。いくつかの実施形態において、本方法は、追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ）である。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、ドセタキセル、ドキソルビシン、シクロホスファミド、カルボプラチン、パクリタキセル、ｎａｂ−パクリタキセル、ゲムシタビン、シスプラチン、及びＰＡＲＰ阻害剤（オラパリブ、イニパリブ（ｉｎｉｐａｒｉｂ）等）から選択される。
【００５６】
いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４陽性細胞の増殖を阻害する方法が提供され、本方法は、細胞を、本明細書に記載される免疫複合体に、細胞の表面上のＢ７−Ｈ４への免疫複合体の結合を許容する条件下で曝露し、それによって細胞の増殖を阻害することを含む。いくつかの実施形態において、細胞は、乳がん細胞、卵巣がん細胞、または子宮内膜がん細胞である。いくつかの実施形態において、細胞は、トリプルネガティブ（ＥＲ−／ＰＲ−／Ｈｅｒ２−）乳がんである。
【００５７】
いくつかの実施形態において、標識に複合された、本明細書に記載される抗体が提供される。いくつかの実施形態において、標識は、陽電子放出体である。いくつかの実施形態において、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。
【００５８】
いくつかの実施形態において、生体試料中のヒトＢ７−Ｈ４を検出する方法であって、生体試料を、本明細書に記載される抗Ｂ７−Ｈ４抗体と、自然発生ヒトＢ７−Ｈ４への抗Ｂ７−Ｈ４抗体の結合を許容する条件下で接触させることと、生体試料中で、抗Ｂ７−Ｈ４抗体と自然発生ヒトＢ７−Ｈ４との間に複合体が形成されるかどうかを検出することと、を含む、方法が提供される。いくつかの実施形態において、生体試料は、乳がん試料、卵巣がん試料、または子宮内膜がん試料である。いくつかの実施形態において、生体試料は、トリプルネガティブ（ＥＲ−／ＰＲ−／Ｈｅｒ２−）乳がんである。
【００５９】
いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４陽性がんを検出するための方法であって、（ｉ）標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体を、Ｂ７−Ｈ４陽性がんを有するかまたは有すると疑われる対象に投与することであって、標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、本明細書に記載される抗Ｂ７−Ｈ４抗体を含む、投与することと、（ｉｉ）対象における標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体を検出することと、を含む、方法が提供され、標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体の検出は、対象におけるＢ７−Ｈ４陽性がんを示す。いくつかの実施形態において、標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、陽電子放出体に複合された抗Ｂ７−Ｈ４抗体を含む。いくつかの実施形態において、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】実施例Ａに記載される、種々の組織におけるヒトＢ７−Ｈ４遺伝子発現のレベルのグラフ表現を示す。
【図２】実施例Ｂに記載される、インサイツハイブリダイゼーションによる乳がん試料におけるＢ７−Ｈ４の発現を示す。
【図３Ａ】実施例Ｂに記載される、（Ａ）全ての乳がんサブタイプにおけるＢ７−Ｈ４発現の発生率、（Ｂ）乳がんサブタイプ別の０、１＋、２＋、及び３＋レベルのＢ７−Ｈ４染色の発生率、（Ｃ）乳腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の全体的な発現（ウェスタン分析による）、（Ｄ）原発性乳腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の発現（ウェスタン分析による）、（Ｅ）卵巣腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の発現を示す。
【図３Ｂ】実施例Ｂに記載される、（Ａ）全ての乳がんサブタイプにおけるＢ７−Ｈ４発現の発生率、（Ｂ）乳がんサブタイプ別の０、１＋、２＋、及び３＋レベルのＢ７−Ｈ４染色の発生率、（Ｃ）乳腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の全体的な発現（ウェスタン分析による）、（Ｄ）原発性乳腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の発現（ウェスタン分析による）、（Ｅ）卵巣腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の発現を示す。
【図３Ｃ】実施例Ｂに記載される、（Ａ）全ての乳がんサブタイプにおけるＢ７−Ｈ４発現の発生率、（Ｂ）乳がんサブタイプ別の０、１＋、２＋、及び３＋レベルのＢ７−Ｈ４染色の発生率、（Ｃ）乳腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の全体的な発現（ウェスタン分析による）、（Ｄ）原発性乳腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の発現（ウェスタン分析による）、（Ｅ）卵巣腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の発現を示す。
【図３Ｄ】実施例Ｂに記載される、（Ａ）全ての乳がんサブタイプにおけるＢ７−Ｈ４発現の発生率、（Ｂ）乳がんサブタイプ別の０、１＋、２＋、及び３＋レベルのＢ７−Ｈ４染色の発生率、（Ｃ）乳腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の全体的な発現（ウェスタン分析による）、（Ｄ）原発性乳腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の発現（ウェスタン分析による）、（Ｅ）卵巣腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の発現を示す。
【図３Ｅ】実施例Ｂに記載される、（Ａ）全ての乳がんサブタイプにおけるＢ７−Ｈ４発現の発生率、（Ｂ）乳がんサブタイプ別の０、１＋、２＋、及び３＋レベルのＢ７−Ｈ４染色の発生率、（Ｃ）乳腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の全体的な発現（ウェスタン分析による）、（Ｄ）原発性乳腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の発現（ウェスタン分析による）、（Ｅ）卵巣腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の発現を示す。
【図４Ａ】（Ａ）実施例に記載されるように発達したある特定の抗Ｂ７−Ｈ４モノクローナル抗体の特性、及び（Ｂ）本明細書に記載される抗Ｂ７−Ｈ４モノクローナル抗体のエピトープ分類を示す。
【図４Ｂ】（Ａ）実施例に記載されるように発達したある特定の抗Ｂ７−Ｈ４モノクローナル抗体の特性、及び（Ｂ）本明細書に記載される抗Ｂ７−Ｈ４モノクローナル抗体のエピトープ分類を示す。
【図５】マウス抗体１Ｄ１１、３２Ｄ６、９Ｂ９、ならびに２２Ｃ１０の軽鎖及び重鎖可変領域配列のアライメントを示す。
【図６−１】マウス抗体ｍｕ１Ｄ１１及びそのヒト化変異形の軽鎖可変領域配列のアライメントを示す。
【図６−２】マウス抗体ｍｕ１Ｄ１１及びそのヒト化変異形の軽鎖可変領域配列のアライメントを示す。
【図７−１】マウス抗体ｍｕ１Ｄ１１及びそのヒト化変異形の重鎖可変領域配列のアライメントを示す。
【図７−２】マウス抗体ｍｕ１Ｄ１１及びそのヒト化変異形の重鎖可変領域配列のアライメントを示す。
【図８−１】マウス抗体ｍｕ２２Ｃ１０及びそのヒト化変異形の軽鎖可変領域配列を示す。
【図８−２】マウス抗体ｍｕ２２Ｃ１０及びそのヒト化変異形の軽鎖可変領域配列を示す。
【図９−１】マウス抗体ｍｕ２２Ｃ１０及びそのヒト化変異形の重鎖可変領域配列を示す。
【図９−２】マウス抗体ｍｕ２２Ｃ１０及びそのヒト化変異形の重鎖可変領域配列を示す。
【図１０】ヒト、チンパンジー（ｃｈｉｍｐ）、カニクイザル、ラット、及びマウス由来のＢ７−Ｈ４のアライメントを示す。
【図１１】抗Ｂ７−Ｈ４抗体の種交差反応性を示す。
【図１２】キメラ抗体ｃｈ１Ｄ１１及びｃｈ２２Ｃ１０ならびに種々のヒト化変異形の親和性測定値を示す。
【図１３】ＳＫ−ＢＲ３細胞における抗Ｂ７−Ｈ４  ９Ｂ９抗体の染色とＥＧＦ染色との重複によって示される、抗Ｂ７−Ｈ４抗体の内在化を示す。
【図１４】抗Ｂ７−Ｈ４抗体がＭＸ−１のリソソームに到達可能であることを示す。
【図１５】抗Ｂ７−Ｈ４免疫複合体が、ＭＸ−１乳がん異種移植片において有効性を示すことを示す。
【図１６】抗Ｂ７−Ｈ４免疫複合体が、ＨＢＣＸ−２４乳がん異種移植片において有効性を示すことを示す。
【図１７】抗Ｂ７−Ｈ４免疫複合体が、ＭＸ−１乳がん異種移植片において有効性を示すことを示す。
【図１８】抗Ｂ７−Ｈ４免疫複合体が、ＭＸ−１乳がん異種移植片において有効性を示すことを示す。
【図１９Ａ】（Ａ）ＦＡＣＳ及び免疫組織化学的検査によるＨＣＣ−１５６９ｘ２乳がん異種移植片上でのＢ７−Ｈ４の発現、ならびに（Ｂ）抗Ｂ７−Ｈ４免疫複合体が、ＨＣＣ−１５６９ｘ２乳がん異種移植片において有効性を示すことを示す。
【図１９Ｂ】（Ａ）ＦＡＣＳ及び免疫組織化学的検査によるＨＣＣ−１５６９ｘ２乳がん異種移植片上でのＢ７−Ｈ４の発現、ならびに（Ｂ）抗Ｂ７−Ｈ４免疫複合体が、ＨＣＣ−１５６９ｘ２乳がん異種移植片において有効性を示すことを示す。
【図２０Ａ】（Ａ）ｍＡｂ  Ａ５７．１を使用した、種々の正常なヒト組織、Ｂ７−Ｈ４を過剰発現する２９３細胞、及びヒト乳腺腺がんからのタンパク質溶解物のウェスタンブロットによる、正常なヒト組織におけるＢ７−Ｈ４発現、ならびに（Ｂ）ヒト乳腺腺がんと比較した、正常なヒト膵臓、乳房、腎臓、肺、及び肝臓における免疫組織化学的検査による、正常なヒト組織におけるＢ７−Ｈ４発現を示す。
【図２０Ｂ】（Ａ）ｍＡｂ  Ａ５７．１を使用した、種々の正常なヒト組織、Ｂ７−Ｈ４を過剰発現する２９３細胞、及びヒト乳腺腺がんからのタンパク質溶解物のウェスタンブロットによる、正常なヒト組織におけるＢ７−Ｈ４発現、ならびに（Ｂ）ヒト乳腺腺がんと比較した、正常なヒト膵臓、乳房、腎臓、肺、及び肝臓における免疫組織化学的検査による、正常なヒト組織におけるＢ７−Ｈ４発現を示す。
【図２１Ａ】図２１Ａ〜Ｄは、組み換えヒトＢ７−Ｈ４に結合するｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤのエピトープマッピングを示す。（Ａ）キメラＩｇ−ドメイン及び可溶性ヒトＢ７−Ｈ４−ＩｇＶ−Ｆｃ融合タンパク質に対するプラスミド発現構築物の図、（Ｂ）Ｂ７−Ｈ４（Ｉｇ−Ｖ）：ＭｏｌＸ（Ｉｇ−Ｃ、ＴＭ、ＣＤ）に結合するｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤの検出、（Ｃ）Ｂ７−Ｈ４−（Ｉｇ−Ｖ）−ｈＩｇＧ１  Ｆｃ融合タンパク質による組み換えヒトＢ７−Ｈ４を発現する２９３細胞上のｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤの代置、及び（Ｄ）２９３細胞に結合するｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤ一時的に発現組み換えヒトＢ７−Ｈ４  Ｓ１１４Ａグリコシル化突然変異体。
【図２１Ｂ】図２１Ａ〜Ｄは、組み換えヒトＢ７−Ｈ４に結合するｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤのエピトープマッピングを示す。（Ａ）キメラＩｇ−ドメイン及び可溶性ヒトＢ７−Ｈ４−ＩｇＶ−Ｆｃ融合タンパク質に対するプラスミド発現構築物の図、（Ｂ）Ｂ７−Ｈ４（Ｉｇ−Ｖ）：ＭｏｌＸ（Ｉｇ−Ｃ、ＴＭ、ＣＤ）に結合するｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤの検出、（Ｃ）Ｂ７−Ｈ４−（Ｉｇ−Ｖ）−ｈＩｇＧ１  Ｆｃ融合タンパク質による組み換えヒトＢ７−Ｈ４を発現する２９３細胞上のｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤの代置、及び（Ｄ）２９３細胞に結合するｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤ一時的に発現組み換えヒトＢ７−Ｈ４  Ｓ１１４Ａグリコシル化突然変異体。
【図２１Ｃ】図２１Ａ〜Ｄは、組み換えヒトＢ７−Ｈ４に結合するｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤのエピトープマッピングを示す。（Ａ）キメラＩｇ−ドメイン及び可溶性ヒトＢ７−Ｈ４−ＩｇＶ−Ｆｃ融合タンパク質に対するプラスミド発現構築物の図、（Ｂ）Ｂ７−Ｈ４（Ｉｇ−Ｖ）：ＭｏｌＸ（Ｉｇ−Ｃ、ＴＭ、ＣＤ）に結合するｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤの検出、（Ｃ）Ｂ７−Ｈ４−（Ｉｇ−Ｖ）−ｈＩｇＧ１  Ｆｃ融合タンパク質による組み換えヒトＢ７−Ｈ４を発現する２９３細胞上のｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤの代置、及び（Ｄ）２９３細胞に結合するｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤ一時的に発現組み換えヒトＢ７−Ｈ４  Ｓ１１４Ａグリコシル化突然変異体。
【図２１Ｄ】図２１Ａ〜Ｄは、組み換えヒトＢ７−Ｈ４に結合するｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤのエピトープマッピングを示す。（Ａ）キメラＩｇ−ドメイン及び可溶性ヒトＢ７−Ｈ４−ＩｇＶ−Ｆｃ融合タンパク質に対するプラスミド発現構築物の図、（Ｂ）Ｂ７−Ｈ４（Ｉｇ−Ｖ）：ＭｏｌＸ（Ｉｇ−Ｃ、ＴＭ、ＣＤ）に結合するｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤの検出、（Ｃ）Ｂ７−Ｈ４−（Ｉｇ−Ｖ）−ｈＩｇＧ１  Ｆｃ融合タンパク質による組み換えヒトＢ７−Ｈ４を発現する２９３細胞上のｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤの代置、及び（Ｄ）２９３細胞に結合するｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤ一時的に発現組み換えヒトＢ７−Ｈ４  Ｓ１１４Ａグリコシル化突然変異体。
【図２２Ａ】ｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＣ２及びｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤの（Ａ）軽鎖及び（Ｂ）重鎖のアミノ酸配列を示す。
【図２２Ｂ】ｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＣ２及びｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤの（Ａ）軽鎖及び（Ｂ）重鎖のアミノ酸配列を示す。
【図２３Ａ】（Ａ）ヒト、カニクイザル、マウス、及びラットＢ７−Ｈ４、ならびに乳がん細胞株ＭＸ−１において発現された内在性ヒトＢ７−Ｈ４に対する、ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＣ２及びｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤの親和性、ならびに（Ｂ）組み換えヒトＢ７−Ｈ４を過剰発現する２９３細胞に対するｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤ抗体−薬物複合体のインビトロの効力を示す。
【図２３Ｂ】（Ａ）ヒト、カニクイザル、マウス、及びラットＢ７−Ｈ４、ならびに乳がん細胞株ＭＸ−１において発現された内在性ヒトＢ７−Ｈ４に対する、ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＣ２及びｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤの親和性、ならびに（Ｂ）組み換えヒトＢ７−Ｈ４を過剰発現する２９３細胞に対するｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤ抗体−薬物複合体のインビトロの効力を示す。
【図２４Ａ】（Ａ）ＦＡＣＳ（上）及びＩＨＣ（下）による、ＨＣＣ−１５６９ｘ２（Ｈｅｒ２＋／ＥＲ−）乳がん細胞上でのＢ７−Ｈ４の発現、ならびにＨＣＣ−１５６９ｘ２（Ｈｅｒ２＋／ＥＲ−）乳がん異種移植片モデルにおける（Ｂ）ｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＣ２及び（Ｃ）ｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤ抗体薬物複合体の有効性を示す。
【図２４Ｂ】（Ａ）ＦＡＣＳ（上）及びＩＨＣ（下）による、ＨＣＣ−１５６９ｘ２（Ｈｅｒ２＋／ＥＲ−）乳がん細胞上でのＢ７−Ｈ４の発現、ならびにＨＣＣ−１５６９ｘ２（Ｈｅｒ２＋／ＥＲ−）乳がん異種移植片モデルにおける（Ｂ）ｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＣ２及び（Ｃ）ｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤ抗体薬物複合体の有効性を示す。
【図２４Ｃ】（Ａ）ＦＡＣＳ（上）及びＩＨＣ（下）による、ＨＣＣ−１５６９ｘ２（Ｈｅｒ２＋／ＥＲ−）乳がん細胞上でのＢ７−Ｈ４の発現、ならびにＨＣＣ−１５６９ｘ２（Ｈｅｒ２＋／ＥＲ−）乳がん異種移植片モデルにおける（Ｂ）ｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＣ２及び（Ｃ）ｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤ抗体薬物複合体の有効性を示す。
【図２５Ａ】（Ａ）ＦＡＣＳ（上）及びＩＨＣ（下）による、ＭＸ−１（Ｈｅｒ２−／ＥＲ−／ＰＲ−）乳がん細胞上でのＢ７−Ｈ４の発現、ならびに（Ｂ）ＭＸ−１（Ｈｅｒ２−／ＥＲ−／ＰＲ−）乳がん異種移植片モデルにおけるｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤ抗体薬物複合体の有効性を示す。
【図２５Ｂ】（Ａ）ＦＡＣＳ（上）及びＩＨＣ（下）による、ＭＸ−１（Ｈｅｒ２−／ＥＲ−／ＰＲ−）乳がん細胞上でのＢ７−Ｈ４の発現、ならびに（Ｂ）ＭＸ−１（Ｈｅｒ２−／ＥＲ−／ＰＲ−）乳がん異種移植片モデルにおけるｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤ抗体薬物複合体の有効性を示す。
【図２６Ａ】（Ａ）ＦＡＣＳ（上）及びＩＨＣ（下）による、ＴＮＢＣ（Ｈｅｒ２−／ＥＲ−／ＰＲ−）腫瘍細胞上でのＢ７−Ｈ４の発現、ならびに（Ｂ）ＴＮＢＣ（Ｈｅｒ２−／ＥＲ−／ＰＲ−）腫瘍異種移植片モデルにおけるｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤ抗体薬物複合体の有効性を示す。
【図２６Ｂ】（Ａ）ＦＡＣＳ（上）及びＩＨＣ（下）による、ＴＮＢＣ（Ｈｅｒ２−／ＥＲ−／ＰＲ−）腫瘍細胞上でのＢ７−Ｈ４の発現、ならびに（Ｂ）ＴＮＢＣ（Ｈｅｒ２−／ＥＲ−／ＰＲ−）腫瘍異種移植片モデルにおけるｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤ抗体薬物複合体の有効性を示す。
【図２７】８９ＺＲ標識ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃの組織内取り込み（ＩＤ／ｇ％）を示す。図は、脾臓、腎臓、肝臓、肺、及び血液におけるＡｂ−１及び抗ｇＤ抗体の分布を示す。
【図２８】２つのラット群それぞれからの代表的なラットにおける、８９Ｚｒ標識ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ（右）、及び８９Ｚｒ標識アイソタイプ対照（左）の、（Ａ）投薬後１６時間、（Ｂ）投薬後４８時間、（Ｃ）投薬後１２０時間における組織分布、ならびに（Ｄ）ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃによる、Ｍｘ−１細胞における内在性Ｂ７−Ｈ４、及び２９３細胞内で発現される種々の種由来のＢ７−Ｈ４の認識。
【図２９】ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ、アイソタイプ一致型抗体、または陽性対照としてのｍＣＴＬＡ−４Ｉｇを投与された、脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデルマウスにおける炎症を示す。
【図３０】ＭＸ−１細胞の表面に対する、二重エピトープ抗体であるノブ−ｈ１Ｄ１１ｖ１．９  ｖａｒＤ：ホール−ｈ２２Ｃ１０ｖ２．７（「ＫＨ１Ｄ＋２２Ｃ」）またはノブ−ｈ２２Ｃ１０ｖ２：ホール−７ｈ１Ｄ１１ｖ１．９ｖａｒＤ（「ＫＨ２２Ｃ＋１Ｄ」）、及び親の単一エピトープ抗体の結合性を示す。
【図３１Ａ−Ｄ】単一エピトープ抗Ｂ７−Ｈ４抗体（Ａ、Ｂ）ならびに二重エピトープ抗Ｂ７Ｈ４抗体（Ｃ、Ｄ）の膜染色及び内在化を示す。
【図３２Ａ】Ｂ７−Ｈ４陰性ＭＣＦ−７細胞（Ａ）、Ｂ７−Ｈ４陽性２９３ｈＢ７−Ｈ４細胞（Ｂ）、Ｂ７−Ｈ４陽性ＭＸ−１細胞（Ｃ）、及びＢ７−Ｈ４陽性ＳＫＢＲ３細胞（Ｄ）に対する、単一エピトープ抗Ｂ７Ｈ４抗体ならびに二重エピトープ抗Ｂ７Ｈ４抗体のインビトロの効力を示す。
【図３２Ｂ】Ｂ７−Ｈ４陰性ＭＣＦ−７細胞（Ａ）、Ｂ７−Ｈ４陽性２９３ｈＢ７−Ｈ４細胞（Ｂ）、Ｂ７−Ｈ４陽性ＭＸ−１細胞（Ｃ）、及びＢ７−Ｈ４陽性ＳＫＢＲ３細胞（Ｄ）に対する、単一エピトープ抗Ｂ７Ｈ４抗体ならびに二重エピトープ抗Ｂ７Ｈ４抗体のインビトロの効力を示す。
【図３２Ｃ】Ｂ７−Ｈ４陰性ＭＣＦ−７細胞（Ａ）、Ｂ７−Ｈ４陽性２９３ｈＢ７−Ｈ４細胞（Ｂ）、Ｂ７−Ｈ４陽性ＭＸ−１細胞（Ｃ）、及びＢ７−Ｈ４陽性ＳＫＢＲ３細胞（Ｄ）に対する、単一エピトープ抗Ｂ７Ｈ４抗体ならびに二重エピトープ抗Ｂ７Ｈ４抗体のインビトロの効力を示す。
【図３２Ｄ】Ｂ７−Ｈ４陰性ＭＣＦ−７細胞（Ａ）、Ｂ７−Ｈ４陽性２９３ｈＢ７−Ｈ４細胞（Ｂ）、Ｂ７−Ｈ４陽性ＭＸ−１細胞（Ｃ）、及びＢ７−Ｈ４陽性ＳＫＢＲ３細胞（Ｄ）に対する、単一エピトープ抗Ｂ７Ｈ４抗体ならびに二重エピトープ抗Ｂ７Ｈ４抗体のインビトロの効力を示す。
【発明を実施するための形態】
【００６１】
Ｉ．定義
本明細書における目的では、「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に定義される、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでも良く、またはそれは、アミノ酸配列変化を含有しても良い。いくつかの実施形態において、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。いくつかの実施形態において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列において、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
【００６２】
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の、総計の非共有性相互作用の強度を指す。別途指定されない限り、本明細書で使用されるとき、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する、本来の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例示説明及び例となる実施形態が、以下に記載される。
【００６３】
「親和性成熟」抗体は、変化を有しない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）において１つ以上の変化を有し、かかる変化が抗原に対する抗体の親和性の向上をもたらす、抗体を指す。
【００６４】
「抗Ｂ７−Ｈ４抗体」及び「Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体」という用語は、抗体が、診断剤及び／または治療剤として、Ｂ７−Ｈ４を標的とすることにおいて有用であるように、Ｂ７−Ｈ４と十分な親和性で結合することができる抗体を指す。一実施形態において、無関係の非Ｂ７−Ｈ４タンパク質への抗Ｂ７−Ｈ４抗体の結合の程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）によって測定するとき、Ｂ７−Ｈ４への抗体の結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態において、Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、、５ｎＭ以下、、４ｎＭ以下、、３ｎＭ以下、、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、異なる種由来のＢ７−Ｈ４の間で保存されるＢ７−Ｈ４のエピトープに結合する。
【００６５】
「抗体」という用語は、本明細書で最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含むがこれらに限定されない、種々の抗体構造を包含する。
【００６６】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分を含み、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、線状抗体、１本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６７】
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて、参照抗体のその抗原への結合を５０％以上遮断する抗体を指し、及び逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいて、抗体のその抗原への結合を５０％以上遮断する。例となる競合アッセイが本明細書に提供される。
【００６８】
「がん」及び「がん性」という用語は、未制御の細胞成長／増殖によって典型的に特徴付けられる、哺乳動物における生理的状態を指すか、または説明する。がんの例としては、がん腫、リンパ腫（例えば、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が挙げられるが、これらに限定されない。かかるがんのより具体的な例としては、扁平上皮細胞がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺がん、肺の扁平上皮がん、腹膜のがん、肝細胞がん、消化器がん、膵臓がん、神経膠腫、子宮頚がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝細胞腫、乳がん（トリプルネガティブ（ＥＲ−／ＰＲ−／Ｈｅｒ２−）乳がんを含む）、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜または子宮がん腫、唾液腺がん、腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝臓がん、白血病及び他のリンパ増殖性障害、ならびに種々の種類の頭頸部がんが挙げられる。
【００６９】
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部分が特定の源または種に由来する一方で、重鎖及び／または軽鎖の残りの部分が異なる源または種に由来する、抗体を指す。
【００７０】
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の型を指す。５つの主要な抗体クラスＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちの数個は、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分割される。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００７１】
本明細書で使用される「細胞傷害性薬剤」という用語は、細胞機能を阻害する若しくは阻止する、及び／または細胞死若しくは破壊を引き起こす、物質を指す。細胞傷害性薬剤には、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；化学療法剤若しくは化学療法薬（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他のインターカレート剤）；成長阻害剤；核酸分解酵素等の酵素及びそれらの断片；抗生物質；細菌、真菌、植物、若しくは動物起源の小分子毒素または酵素活性毒素（それらの断片及び／または変異形を含む）等の毒素；ならびに以下に開示される種々の抗腫瘍剤または抗がん剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００７２】
「エフェクター機能」は、抗体アイソタイプにより様々である、抗体のＦｃ領域に起因し得る生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
【００７３】
薬剤、例えば、医薬製剤の「有効量」は、必要な複数回投薬量で一定期間にわたる、所望の治療的または予防的結果を達成するために有効な量を指す。
【００７４】
「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位を指す。
【００７５】
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含有する、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異形Ｆｃ領域を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端にまで及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在することもあれば、しないこともある。本明細書で別途明記されない限り、Ｆｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基の付番は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれる、ＥＵ付番方式に従う。
【００７６】
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメインＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）において次の配列で現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
【００７７】
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書において、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有する、または本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する、抗体を指すように交換可能に使用される。
【００７８】
「Ｂ７−Ｈ４のグリコシル化型」という用語は、炭水化物残基の付加によって翻訳後修飾されている、Ｂ７−Ｈ４の自然発生型を指す。
【００７９】
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は、交換可能に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、かかる細胞の子孫を含む。宿主細胞には、初代形質転換細胞及び継代の数に関わらずそれに由来する子孫を含む、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれる。子孫は、核酸内容において親細胞と完全に同一でない場合があり、突然変異を含有し得る。元々形質転換された細胞においてスクリーニング若しくは選択されたものと同じ機能または生物活性を有する突然変異体子孫が、本明細書に含まれる。
【００８０】
「ヒト抗体」は、ヒト若しくはヒト細胞によって産生された、またはヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する、抗体のアミノ酸配列、または他のヒト抗体コード配列に対応する、アミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。
【００８１】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を代表する、フレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列の下位集団から行われる。一般に、配列の下位集団は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３にあるような下位集団である。一実施形態において、ＶＬについては、下位集団は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記）にあるような下位集団カッパＩである。一実施形態において、ＶＨについては、下位集団は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記）にあるような下位集団ＩＩＩである。
【００８２】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲからのアミノ酸残基及びヒトＦＲからのアミノ酸残基を含む、キメラ抗体を指す。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、そのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが、非ヒト抗体のそれらに対応し、そのＦＲの全てまたは実質的に全てが、ヒト抗体のそれらに対応する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含んでも良い。抗体、例えば非ヒト抗体の、「ヒト化型」は、ヒト化を経た抗体を指す。
【００８３】
本明細書で使用される「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、配列が高度に変化し、かつ／または構造的に規定されたループ（「超可変ループ」）を形成する、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般に、天然４本鎖抗体は、６つのＨＶＲを含み、このうち３つがＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、３つがＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある。ＨＶＲは一般に、超可変ループからの及び／または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）からのアミノ酸残基を含み、このうち後者が、配列可変性が最も高く、かつ／または抗原認識に関与する。例となる超可変ループは、アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）において生じる。（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７（１９８７）。）  例となるＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の２４〜３４、Ｌ２の５０〜５６、Ｌ３の８９〜９７、Ｈ１の３１〜３５Ｂ、Ｈ２の５０〜６５、及びＨ３の９５〜１０２において生じる。（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））。ＶＨにおけるＣＤＲ１を除いて、ＣＤＲは一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲはまた、抗原に接触する残基である、「特異性決定残基」または「ＳＤＲ」も含む。ＳＤＲは、短縮型（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ）ＣＤＲ、またはａ−ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲの領域内に含有される。例となるａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の３１〜３４、Ｌ２の５０〜５５、Ｌ３の８９〜９６、Ｈ１の３１〜３５Ｂ、Ｈ２の５０〜５８、及びＨ３の９５〜１０２において生じる。（Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．  Ｂｉｏｓｃｉ．  １３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）。別途指定されない限り、可変ドメインにおけるＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書においてＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ（上記）に従って付番される。
【００８４】
「免疫複合体」は、細胞傷害性薬剤を含むがこれらに限定されない１個以上の異種性分子（複数可）に複合されている抗体である。
【００８５】
「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサル等の非ヒト霊長類）、ウサギ、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、個体または対象は、ヒトである。
【００８６】
「単離された抗体」は、その天然環境の構成成分から分離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、例えば、電気泳動法（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフ法（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって判定するとき、９５％超または９９％超の純度まで精製される。抗体の純度の評価のための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．  Ｂ  ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
【００８７】
「単離された核酸」は、その天然環境の構成成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸には、核酸分子を通常含有する細胞内に含有される核酸分子が含まれるが、その核酸分子は、染色体外に、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に、存在する。
【００８８】
「抗Ｂ７−Ｈ４抗体をコードする単離された核酸」は、抗体重鎖及び軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１個以上の核酸分子を指し、それには単一のベクターまたは別個のベクターにおけるかかる核酸分子（複数可）が含まれ、かかる核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ以上の場所に存在する。
【００８９】
本明細書で使用される「Ｂ７−Ｈ４」という用語は、細胞内でのＢ７−Ｈ４前駆体タンパク質のプロセシングからもたらされる、いかなる天然の成熟Ｂ７−Ｈ４をも指す。この用語には、別途指定されない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来のＢ７−Ｈ４が含まれる。この用語には、Ｂ７−Ｈ４の自然発生変異形、例えば、スプライス変異形または対立遺伝子変異形も含まれる。シグナル配列を含む（シグナル配列、アミノ酸１〜２８を含む）、例となるヒトＢ７−Ｈ４前駆体タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号７３に示される。例となる成熟ヒトＢ７−Ｈ４のアミノ酸配列は、配列番号７４に示される。例となるカニクイザルＢ７−Ｈ４前駆体（シグナル配列、アミノ酸１〜２８を含む）の予測配列及び成熟配列は、それぞれ配列番号７５及び７６に示される。例となるラットＢ７−Ｈ４前駆体（シグナル配列、アミノ酸１〜２８を含む）のアミノ酸配列及び成熟配列は、それぞれ配列番号７７及び７８に示される。アミノ酸配列例となるマウスＢ７−Ｈ４前駆体（シグナル配列、アミノ酸１〜２８を含む）のアミノ酸配列及び成熟配列は、それぞれ配列番号７９及び８０に示される。例となるチンパンジーＢ７−Ｈ４前駆体（シグナル配列、アミノ酸１〜２４を含む）のアミノ酸配列及び成熟配列は、それぞれ配列番号８１及び８２に示される。
【００９０】
「Ｂ７−Ｈ４陽性がん」という用語は、細胞の表面上でＢ７−Ｈ４を発現する細胞を含むがんを指す。いくつかの実施形態において、細胞表面上でのＢ７−Ｈ４の発現は、例えば、Ｂ７−Ｈ４に対する抗体を、免疫組織化学的検査、ＦＡＣＳ等の方法において使用することで判定される。代替的に、Ｂ７−Ｈ４  ｍＲＮＡ発現は、細胞表面上でのＢ７−Ｈ４発現と相関するとされ、インサイツハイブリダイゼーション及びＲＴ−ＰＣＲ（定量ＲＴ−ＰＣＲを含む）から選択される方法によって判定することができる。
【００９１】
「Ｂ７−Ｈ４陽性細胞」という用語は、その表面上でＢ７−Ｈ４を発現する細胞を指す。
【００９２】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団に含まれる個々の抗体は、同一であり、かつ／または同じエピトープに結合するが、例えば、自然発生突然変異を含有する、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に発生する、可能性のある変異形抗体は例外であり、かかる変異形は一般に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含む、ポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対する。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られるという抗体の特徴を示すものであり、いずれかの特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されないものとする。例えば、本発明による使用対象のモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組み換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有するトランスジェニック動物を用いる方法を含むがこれらに限定されない、様々な技法によって作製されても良く、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法及び他の例となる方法は、本明細書に記載されている。
【００９３】
「裸の抗体」は、異種性部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射標識に複合されていない抗体を指す。裸の抗体は、医薬製剤中に存在しても良い。
【００９４】
「天然抗体」は、様々な構造を有する、自然発生免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｈｅａｖｙ  ｄｏｍａｉｎ）または重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｌｉｇｈｔ  ｄｏｍａｉｎ）または軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの型のうちの１つに割り当てられ得る。
【００９５】
「添付文書」という用語は、治療薬の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症についての情報、及び／またはその使用に関する警告を含む、かかる治療薬の商用のパッケージに通例含まれる指示書を指すように使用される。
【００９６】
参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列同一性最大パーセントを得るように配列をアライメントし、必要に応じてギャップを導入した後に、いずれの保存的置換も配列同一性の一部として考慮に入れずに、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合（％）として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを判定する目的のためのアライメントは、当該技術分野における技術の範囲内である種々の方式で、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の、公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、得ることができる。当業者は、比較されている配列の完全長にわたる最大のアライメントを得るために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列をアライメントするために適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的では、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって開発され、ソースコードは、ユーザ文書と共に米国著作権庁（Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ  Ｏｆｆｉｃｅ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９）に提出されており、米国著作権登録番号  ＴＸＵ５１００８７の下に登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に利用可能であるか、またはソースコードからコンパイルされても得る。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ  Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用する場合はコンパイルすべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変更はない。
【００９７】
アミノ酸配列比較のためにＡＬＩＧＮ−２が用いられる場合、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、またはそれと対比した、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（代替的に、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、またはそれと対比したある特定のアミノ酸配列同一性％を有する、またはそれを含む、所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、次のように算出される：
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、そのプログラムのＡ及びＢのアライメントにおいて完全な一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性％と等しくはならないことが理解されよう。特に別途定めのない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されるように、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られる。
【００９８】
「医薬製剤」という用語は、調製物の中に含有される活性成分の生物活性が有効になるような形態であり、製剤が投与されることになる対象にとって許容できないほど有毒である追加の構成成分を何ら含有しない、調製物を指す。
【００９９】
「薬学的に許容される担体」は、対象にとって無毒である、活性成分以外の医薬製剤中の成分を指す  薬学的に許容される担体には、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。
【０１００】
本明細書で使用されるとき、「処置」（及び「処置する」または「処置すること」等のその文法上の変形形態）は、個体が治療される自然過程を変えることを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理過程の間に行われても良い。処置の望ましい効果には、疾患の発生または再発の防止、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移の防止、疾患進行速度の低減、病状の回復または一時緩和、及び寛解または予後の改善が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延させるため、または疾患の進行を減速させるために使用される。
【０１０１】
「化学療法剤」は、がんの治療に有用な化学化合物を指す。化学療法剤の例としては、チオテパ及びシクロスホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））等のアルキル化剤；ブスルファン、イムプロスルファン、及びピポスルファン等のスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパ等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、及びトリメチロメラミンを含む、エチレンイミン及びメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトセシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、及び９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドレゼシン、カルゼレシン、及びビセレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンギスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタード等の窒素マスタード類；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチン等のニトロソ尿素類；エンジイン抗生物質（例えば、カリチアマイシン、特にカリチアマイシンγ１Ｉ及びカリチアマイシンωＩ１（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．  Ｅｄ．  Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照されたい）；ＣＤＰ３２３、経口α４インテグリン阻害剤；ダイネマイシンＡを含むダイネマイシン；エスペラマイシン；ならびにネオカルチノスタチン発色団及び関連する色素タンパクエンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射剤（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、リポソームドキソルビシンＴＬＣ  Ｄ−９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ＰＥＧ化リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））���及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン等の、抗生物質；メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン、及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）等の代謝拮抗薬；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート等の葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン等のプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン等のピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン等の抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌｓ）；葉酸等の葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン；エルフオルニチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタンシン及びアンサミトシン等のマイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメト（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジン；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）（特に、Ｔ−２トキシン、ベラクリンＡ（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ  Ａ）、ロリジンＡ（ｒｏｒｉｄｉｎ  Ａ）、及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥＴＭ）、及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））；クロランブシル；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチン（例えば、ＥＬ��ＸＡＴＩＮ（登録商標））、及びカルボプラチン等の白金剤；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、及びビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））を含む、チューブリン重合が微小管を形成することを阻止するビンカ類；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボリン；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））を含むレチノイン酸等のレチノイド；クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）またはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））等のビスホスホネート類；トロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、例えば、ＰＫＣ−α、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）等の、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子療法ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン等のワクチン類；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ＢＡＹ４３９００６（ソラフェニブ；Ｂａｙｅｒ）；ＳＵ−１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；ペリホシン、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテオソーム（ｐｒｏｔｅｏｓｏｍｅ）阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ−７７９；ティピファニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ（ｏｒａｆｅｎｉｂ）、ＡＢＴ５１０；オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））等のＢｃｌ−２阻害剤；ピクサントロン；ＥＧＦＲ阻害剤（以下の定義を参照されたい）；チロシンキナーゼ阻害剤；ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））等のセリンスレオニンキナーゼ阻害剤；ロナファーニブ（ＳＣＨ  ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲＴＭ）等のファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；ならびに上記のうちいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾロンの併用療法の略語）、及びＦＯＬＦＯＸ（５−ＦＵ及びロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮＴＭ）を用いた治療レジメンの略��）等の上記の２つ以上の組み合わせが挙げられる。
【０１０２】
本明細書に定義される化学療法剤には、「抗ホルモン剤」または「内分泌治療薬」が含まれ、これらは、がんの成長を促進し得るホルモンの効果を制御、低減、遮断、または阻害するように作用する。それら自体が、次のものを含むがこれらに限定されない、ホルモンであっても良い：タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標））、４−ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））、イドキシフェン、ドロロキシフェン、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、トリオキシフェン、ケオキシフェン、及びＳＥＲＭ３等の選択性エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）を含む、混合された作動薬／拮抗薬プロファイルを有する抗エストロゲン薬；フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））、及びＥＭ８００等の、作動薬特性を有しない純粋な抗エストロゲン薬（かかる薬剤は、エストロゲン受容体（ＥＲ）二量体化を遮断し、ＤＮＡ結合を阻害し、ＥＲターンオーバーを増加させ、かつ／またはＥＲレベルを抑制し得る）；ホルメスタン及びエキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））等のステロイド性アロマターゼ阻害剤、ならびにアナストラゾール（ａｎａｓｔｒａｚｏｌｅ）（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））、及びアミノグルテチミド等の非ステロイド性アロマターゼ阻害剤を含むアロマターゼ阻害剤、また、他のアロマターゼ阻害剤は、ボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、ファドロゾール、及び４（５）−イミダゾールを含む；リュープロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、ゴセレリン、ブセレリン、及びトリプテレリン（ｔｒｉｐｔｅｒｅｌｉｎ）を含む黄体ホルモン放出ホルモン作動薬；酢酸メゲストロール及び酢酸メドロキシプロゲステロン等のプロゲスチン、ジエチルスチルベストロール及びプレマリン等のエストロゲン、ならびにフルオキシメステロン、全トランス型レチノイン酸、及びフェンレチニド等のアンドロゲン／レチノイドを含む、性ステロイド；オナプリストン；抗プロゲステロン薬；エストロゲン受容体下方制御剤（ＥＲＤ）；フルタミド、ニルタミド、及びビカルタミド等の抗アンドロゲン薬；ならびに上記のうちいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに上記の２つ以上の組み合わせ。
【０１０３】
補助療法に関して本明細書で使用される「免疫抑制剤」という用語は、本明細書において処置されている哺乳動物の免疫系を抑制または遮蔽するように作用する物質を指す。これには、サイトカイン産生を抑制するか、自己抗原発現を下方制御若しくは抑制するか、またはＭＨＣ抗原を遮蔽する、物質が含まれることになる。かかる薬剤の例としては、２−アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン（米国特許  第４，６６５，０７７号を参照されたい）；非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）；ガンシクロビル、タクロリムス、コルチゾールまたはアルドステロン等のグルココルチコイド類、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、またはロイコトリエン受容体拮抗薬等の抗炎症剤；アザチオプリンまたはミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）等のプリン拮抗薬；シクロホスファミド等のアルキル化剤；ブロモクリプチン（ｂｒｏｍｏｃｒｙｐｔｉｎｅ）；ダナゾール；ダプソン；グルタルアルデヒド（これは、米国特許第４，１２０，６４９号に記載されているようにＭＨＣ抗原を遮蔽する）；ＭＨＣ抗原及びＭＨＣ断片に対する抗イディオタイプ抗体；シクロスポリンＡ；コルチコステロイド若しくはグルココルチコステロイドまたはグルココルチコイド類似体等のステロイド薬、例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン（ＳＯＬＵ−ＭＥＤＲＯＬ（登録商標）メチルプレドニゾロンコハク酸エステルナトリウム、及びデキサメタゾンを含む）；メトトレキサート（経口または皮下）等のジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤；クロロキン及びヒドロキシクロロキン等の抗マラリア剤；スルファサラジン；レフルノミド；サイトカインまたはサイトカイン受容体抗体（抗インターフェロンα、β、若しくはγ抗体、抗腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α抗体（インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））またはアダリムマブ）、抗ＴＮＦ−αイムノアドヘシン（エタネルセプト）、抗ＴＮＦ−β抗体、抗インターロイキン−２（ＩＬ−２）抗体及び抗ＩＬ−２受容体抗体、ならびに抗インターロイキン−６（ＩＬ−６）受容体抗体及び拮抗薬（ＡＣＴＥＭＲＡＴＭ（トシリズマブ）等）を含む）；抗ＣＤ１１ａ及び抗ＣＤ１８抗体を含む、抗ＬＦＡ−１抗体；抗Ｌ３Ｔ４抗体；異種性抗リンパ球グロブリン；ｐａｎ−Ｔ抗体、好ましくは抗ＣＤ３または抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；ＬＦＡ−３結合ドメインを含有する可溶性ペプチド（１９９０年７月２６日公開のＷＯ  ９０／０８１８７）；ストレプトキナーゼ；形質転換成長因子β（ＴＧＦ−β）；ストレプトドルナーゼ；宿主由来のＲＮＡまたはＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；、クロラムブシル；デオキシスパガリン；ラパマイシン；Ｔ細胞受容体（Ｃｏｈｅｎら、米国特許  第５，１１４，７２１号）；Ｔ細胞受容体断片（Ｏｆｆｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：４３０−４３２（１９９１）、ＷＯ  ９０／１１２９４、Ｉａｎｅｗａｙ，Ｎａｔｕｒｅ，３４１：４８２（１９８９）、及びＷＯ  ９１／０１１３３）；ＢＡＦＦ抗体及びＢＲ３抗体等のＢＡＦＦ拮抗薬ならびにｚＴＮＦ４拮抗薬（概説については、Ｍａｃｋａｙ  ａｎｄ  Ｍａｃｋａｙ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２３：１１３−５（２００２）を参照されたく、また、以下の定義も参照されたい）；ＣＤ４０−ＣＤ４０リガンドに対する遮断抗体を含む、抗ＣＤ４０受容体または抗ＣＤ４０リガンド（ＣＤ１５４）（例えば、Ｄｕｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６１：１３２８−３０（１９９３）、Ｍｏｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５４：１４７０−８０（１９９５））、及びＣＴＬＡ４−Ｉｇ（Ｆｉｎｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６５：１２２５−７（１９９４））等の、Ｔ細胞ヘルパーシグナルに干渉する生物剤；ならびにＴ１０Ｂ９等のＴ細胞受容体抗体（ＥＰ  ３４０，１０９）が挙げられる。本明細書において、いくつかの好ましい免疫抑制剤には、シクロホスファミド、クロラムブシル、アザチオプリン、レフルノミド、ＭＭＦ、またはメトトレキサートが含まれる。
【０１０４】
「ＰＤ−１系（ａｘｉｓ）結合拮抗薬」という用語は、ＰＤ−１シグナル伝達系におけるシグナル伝達からもたらされるＴ細胞機能障害を除去し、結果としてＴ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞殺滅）が修復されるかまたは向上するように、ＰＤ−１系結合パートナーと、その結合パートナーのうちの１つまたは複数との相互作用を阻害する、分子を指す。本明細書で使用されるとき、ＰＤ−１系結合拮抗薬には、ＰＤ−１結合拮抗薬、ＰＤ−Ｌ１結合拮抗薬、及びＰＤ−Ｌ２結合拮抗薬が含まれる。
【０１０５】
「ＰＤ−１結合拮抗薬」という用語は、ＰＤ−１と、その結合パートナー（ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２等）のうちの１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を、減少させるか、遮断するか、阻害するか、抑止するか、またはそれに干渉する、分子を指す。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合拮抗薬は、ＰＤ−１の結合パートナーのうちの１つ以上に対するＰＤ−１の結合を阻害する分子である。具体的な態様では、ＰＤ−１結合拮抗薬は、ＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２に対するＰＤ−１の結合を阻害する。例えば、ＰＤ−１結合拮抗薬には、ＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２とのＰＤ−１の相互作用から生じるシグナル伝達を、減少させるか、遮断するか、阻害するか、抑止するか、またはそれに干渉する、抗ＰＤ−１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及び他の分子が含まれる。一実施形態において、ＰＤ−１結合拮抗薬は、機能障害性Ｔ細胞の機能障害性を低下させる（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を向上させる）ように、ＰＤ−１を介してＴリンパ球媒介シグナル伝達で発現された細胞表面タンパク質によって、またはそれを介して媒介される、負の同時刺激性（ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ）シグナルを低減させる。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合拮抗薬は、抗ＰＤ−１抗体である。具体的な態様では、ＰＤ−１結合拮抗薬は、本明細書に記載されるＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ）である。別の具体的な態様では、ＰＤ−１結合拮抗薬は、本明細書に記載されるＭＫ−３４７５（ランブロリズマブ）である。別の具体的な態様では、ＰＤ−１結合拮抗薬は、本明細書に記載されるＣＴ−０１１（ピディリズマブ）である。別の具体的な態様では、ＰＤ−１結合拮抗薬は、本明細書に記載されるＡＭＰ−２２４である。別の具体的な態様では、ＰＤ−１結合拮抗薬は、本明細書に記載されるＰＤＲ００１である。別の具体的な態様では、ＰＤ−１結合拮抗薬は、本明細書に記載されるＲＥＧＮ２８１０である。別の具体的な態様では、ＰＤ−１結合拮抗薬は、本明細書に記載されるＢＧＢ−１０８である。
【０１０６】
「ＰＤ−Ｌ１結合拮抗薬」という用語は、ＰＤ−Ｌ１と、その結合パートナー（ＰＤ−１、Ｂ７−１等）のうちの１つまたは複数との相互作用から生じるシグナル伝達を、減少させるか、遮断するか、阻害するか、抑止するか、またはそれに干渉する、分子を指す。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合拮抗薬は、ＰＤ−Ｌ１の結合パートナーに対するＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する分子である。具体的な態様では、ＰＤ−Ｌ１結合拮抗薬は、ＰＤ−１及び／またはＢ７−１に対するＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合拮抗薬には、ＰＤ−Ｌ１と、その結合パートナー（ＰＤ−１、Ｂ７−１等）のうちの１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を、減少させるか、遮断するか、阻害するか、抑止するか、またはそれに干渉する、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及び他の分子が含まれる。一実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合拮抗薬は、機能障害性Ｔ細胞の機能障害性を低下させる（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を向上させる）ように、ＰＤ−Ｌ１を介してＴリンパ球媒介シグナル伝達で発現された細胞表面タンパク質によって、またはそれを介して媒介される、負の同時刺激性シグナルを低減させる。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合拮抗薬は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。具体的な態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブ）である。別の具体的な態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＤＸ−１１０５である。さらに別の具体的な態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。さらに別の具体的な態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）である。さらに別の具体的な態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブ（ａｖｅｌｕｍａｂ））である。
【０１０７】
「ＰＤ−Ｌ２結合拮抗薬」という用語は、ＰＤ−Ｌ２と、その結合パートナー（ＰＤ−１等）のうちの１つまたは複数との相互作用から生じるシグナル伝達を、減少させるか、遮断するか、阻害するか、抑止するか、またはそれに干渉する、分子を指す。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ２結合拮抗薬は、ＰＤ−Ｌ２の結合パートナーのうちの１つ以上に対するＰＤ−Ｌ２の結合を阻害する分子である。具体的な態様では、ＰＤ−Ｌ２結合拮抗薬は、ＰＤ−１に対するＰＤ−Ｌ２の結合を阻害する。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ２拮抗薬には、ＰＤ−Ｌ２と、その結合パートナー（ＰＤ−１等）のうちの１つまたは複数との相互作用から生じるシグナル伝達を、減少させるか、遮断するか、阻害するか、抑止するか、またはそれに干渉する、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及び他の分子が含まれる。一実施形態において、ＰＤ−Ｌ２結合拮抗薬は、機能障害性Ｔ細胞の機能障害性を低下させる（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を向上させる）ように、ＰＤ−Ｌ２を介してＴリンパ球媒介シグナル伝達で発現された細胞表面タンパク質によって、またはそれを介して媒介される、負の同時刺激性シグナルを低減させる。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ２結合拮抗薬は、イムノアドヘシンである。
【０１０８】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体を抗原に結合することに関与する、抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は概して、同様の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ｐａｇｅ  ９１（２００７）を参照されたい。）  抗原結合特異性を付与するためには、単一のＶＨまたはＶＬドメインで十分であり得る。さらに、抗原に結合する抗体からのＶＨまたはＶＬドメインを使用して、それぞれ、相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングすることにより、特定の抗原に結合する抗体を単離しても良い。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
【０１０９】
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、連結している別の核酸を増殖することが可能な核酸分子を指す。この用語には、自己複製核酸構造としてのベクター、ならびにベクターが導入されている宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。ある特定のベクターは、それらが作動的に連結されている核酸の発現を導くことが可能である。かかるベクターは、本明細書で「発現ベクター」と称される。
【０１１０】
「アルキル」は、通常の、第二級の、第三級の、または環状の炭素原子を含有する、Ｃ１−Ｃ１８炭化水素である。例は、メチル（Ｍｅ、−ＣＨ３）、エチル（Ｅｔ、−ＣＨ２ＣＨ３）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ、ｎ−プロピル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ、ｉ−プロピル、−ＣＨ（ＣＨ３）２）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ、ｎ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−Ｂｕ、ｉ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ、ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１−ヘキシル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３））、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３である。
【０１１１】
本明細書で使用される「Ｃ１−Ｃ８アルキル」という用語は、１〜８個の炭素原子を有する、直鎖または分岐鎖の、飽和または不飽和の炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１−Ｃ８アルキル」基としては、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、−ｎ−ヘキシル、−ｎ−ヘプチル、−ｎ−オクチル、−ｎ−ノニル、及び−ｎ−デシルが挙げられるが、これらに限定されず、一方で、分岐鎖のＣ１−Ｃ８アルキルとしては、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、２−メチルブチルが挙げられるが、これらに限定されず、不飽和のＣ１−Ｃ８アルキルとしては、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル，−アセチレニル、−プロピニル、−１−ブチニル、−２−ブチニル、−１−ペンチニル、−２−ペンチニル、−３−メチル−１ブチニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ１−Ｃ８アルキル基は、非置換でも良く、または、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮを含むがこれらに限定されない、１個以上の基で置換されていても良く、式中、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
【０１１２】
本明細書で使用される「Ｃ１−Ｃ１２アルキル」という用語は、１〜１２個の炭素原子を有する、直鎖または分岐鎖の、飽和または不飽和の炭化水素を指す。Ｃ１−Ｃ１２アルキル基は、非置換でも良く、または、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮを含むがこれらに限定されない、１個以上の基で置換されていても良く、式中、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
【０１１３】
本明細書で使用される「Ｃ１−Ｃ６アルキル」という用語は、１〜６個の炭素原子を有する、直鎖または分岐鎖の、飽和または不飽和の炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１−Ｃ６アルキル」基としては、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、及びｎ−ヘキシルが挙げられるが、これらに限定されず、一方で、分岐鎖のＣ１−Ｃ６アルキルとしては、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、及び２−メチルブチルが挙げられるが、これらに限定されず、不飽和のＣ１−Ｃ６アルキルとしては、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、及び−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、及び３−ヘキシルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ１−Ｃ６アルキル基は、Ｃ１−Ｃ８アルキル基について上述のように、非置換でも良く、または、１個以上の基で置換されていても良い。
【０１１４】
本明細書で使用される「Ｃ１−Ｃ４アルキル」という用語は、１〜４個の炭素原子を有する、直鎖または分岐鎖の、飽和または不飽和の炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１−Ｃ４アルキル」基としては、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチルが挙げられるが、これらに限定されず、一方で、分岐鎖のＣ１−Ｃ４アルキルとしては、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチルが挙げられるが、これらに限定されず、不飽和のＣ１−Ｃ４アルキルとしては、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、及び−イソブチレニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ１−Ｃ４アルキル基は、Ｃ１−Ｃ８アルキル基について上述のように、非置換でも良く、または、１個以上の基で置換されていても良い。
【０１１５】
「アルコキシ」は、酸素に単結合されたアルキル基である。例となるアルコキシ基としては、メトキシ（−ＯＣＨ３）及びエトキシ（−ＯＣＨ２ＣＨ３）が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｃ１−Ｃ５アルコキシ」は、１〜５個の炭素原子を有するアルコキシ基である。アルコキシ基は、アルキル基について上述のように、非置換でも良く、または、１個以上の基で置換されていても良い。
【０１１６】
「アルケニル」は、通常の、第二級の、第三級の、または環状の炭素原子を含有し、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素のｓｐ２二重結合を有する、Ｃ２−Ｃ１８炭化水素である。例としては、エチレンまたはビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、シクロペンテニル（−Ｃ５Ｈ７）、及び５−ヘキセニル（−ＣＨ２  ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｃ２−Ｃ８アルケニル」は、２〜８個の、通常の、第二級の、第三級の、または環状の炭素原子を含有し、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素のｓｐ２二重結合を有する、炭化水素である。
【０１１７】
「アルキニル」は、通常の、第二級の、第三級の、または環状の炭素原子を含有し、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素のｓｐ三重結合を有する、Ｃ２−Ｃ１８炭化水素である。例としては、アセチレン（−Ｃ≡ＣＨ）及びプロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｃ２−Ｃ８アルキニル」は、２〜８個の、通常の、第二級の、第三級の、または環状の炭素原子を含有し、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素のｓｐ三重結合を有する、炭化水素である。
【０１１８】
「アルキレン」は、１〜１８個の炭素原子の、親アルカンの同じまたは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することにより誘導される、２つの一価ラジカル中心を有する、飽和の、分岐鎖若しくは直鎖または環状の炭化水素ラジカルを指す。典型的なアルキレンラジカルとしては、メチレン（−ＣＨ２−）１，２−エチル（−ＣＨ２ＣＨ２−）、１，３−プロピル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、１，４−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）等が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１９】
「Ｃ１−Ｃ１０アルキレン」は、式−（ＣＨ２）１−１０−の直鎖飽和炭化水素基である。Ｃ１−Ｃ１０アルキレンの例としては、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オシチレン（ｏｃｙｔｙｌｅｎｅ）、ノニレン、及びデカレン（ｄｅｃａｌｅｎｅ）が挙げられる。
【０１２０】
「アルケニレン」は、２〜１８個の炭素原子の、親アルケンの同じまたは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することにより誘導される、２つの一価ラジカル中心を有する、不飽和の、分岐鎖若しくは直鎖または環状の炭化水素ラジカルを指す。典型的なアルケニレンラジカルとしては、１，２−エチレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）が挙げられるが、これに限定されない。
【０１２１】
「アルキニレン」は、２〜１８個の炭素原子の、親アルキンの同じまたは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することにより誘導される、２つの一価ラジカル中心を有する、不飽和の、分岐鎖若しくは直鎖または環状の炭化水素ラジカルを指す。典型的なアルキニレンラジカルとしては、アセチレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）、及び４−ペンチニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２２】
「アリール」は、炭素環式芳香族基を指す。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、及びアントラセニルが挙げられるが、これらに限定されない。炭素環式芳香族基または複素環式芳香族基は、非置換でも良く、または、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮを含むがこれらに限定されない、１個以上の基で置換されていても良く、式中、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
【０１２３】
「Ｃ５−Ｃ２０アリール」は、炭素環式芳香族環内に５〜２０個の炭素原子を有するアリール基である。Ｃ５−Ｃ２０アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、及びアントラセニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ５−Ｃ２０アリール基は、アリール基について上述のように、置換されていても良く、または非置換でも良い。「Ｃ５−Ｃ１４アリール」は、炭素環式芳香族環内に５〜１４個の炭素原子を有するアリール基である。Ｃ５−Ｃ１４アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、及びアントラセニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ５−Ｃ１４アリール基は、アリール基について上述のように、置換されていても良く、または非置換でも良い。
【０１２４】
「アリーレン」は、２つの共有結合を有するアリール基であり、以下の構造に示されるように、オルト、メタ、またはパラ構成にあっても良く、
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ここで、フェニル基は、非置換でも良く、または、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮを含むがこれらに限定されない、最大４個の基で置換されていても良く、式中、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
【０１２５】
「アリールアルキル」は、炭素原子（典型的には末端またはｓｐ３炭素原子）に結合した水素原子のうちの１個が、アリールラジカルで置換されている、非環式アルキルラジカルを指す。典型的なアリールアルキル基としては、ベンジル、２−フェニルエタン−１−イル、２−フェニルエテン−１−イル、ナフチルメチル、２−ナフチルエタン−１−イル、２−ナフチルエテン−１−イル、ナフトベンジル、２−ナフトフェニルエタン−１−イル等が挙げられるが、これらに限定されない。アリールアルキル基は、６〜２０個の炭素原子を含み、例えば、アリールアルキル基の、アルカニル、アルケニル、またはアルキニル基を含むアルキル部分は、１〜６個の炭素原子であり、アリール部分は、５〜１４個の炭素原子である。
【０１２６】
「ヘテロアリールアルキル」は、炭素原子（典型的には末端またはｓｐ３炭素原子）に結合した水素原子のうちの１個が、ヘテロアリールラジカルで置換されている、非環式アルキルラジカルを指す。典型的なヘテロアリールアルキル基としては、２−ベンズイミダゾリルメチル、２−フリルエチル等が挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアリールアルキル基は、６〜２０個の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基の、アルカニル、アルケニル、またはアルキニル基を含むアルキル部分は、１〜６個の炭素原子であり、ヘテロアリール部分は、５〜１４個の炭素原子、ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個の  ヘテロ原子である。ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分は、３〜７個の環員（２〜６個の炭素原子を有する単環、または、７〜１０個の環員（４〜９個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）を有する二環、例えばビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系であっても良い。
【０１２７】
「置換アルキル」、「置換アリール」、及び「置換アリールアルキル」は、それぞれ、１個以上の水素原子が、各々独立して、置換基で置換されている、アルキル、アリール、及びアリールアルキルを意味する。典型的な置換基としては、−Ｘ、−Ｒ、−Ｏ−、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｓ−、−ＮＲ２、−ＮＲ３、＝ＮＲ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、ＮＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−ＳＯ３−、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−ＰＯ−３、−ＰＯ３Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ２、−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ２が挙げられるが、これらに限定されず、式中、各Ｘは、独立して、ハロゲンＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩであり、各Ｒは、独立して、−Ｈ、Ｃ２−Ｃ１８アルキル、Ｃ６−Ｃ２０アリール、Ｃ３−Ｃ１４複素環、保護基、またはプロドラッグ部分である。上述のアルキレン、アルケニレン、及びアルキニレン基も、同様に置換されていても良い。
【０１２８】
「ヘテロアリール」及び「複素環」は、１個以上の環原子が、ヘテロ原子、例えば窒素、酸素、及び硫黄である、環系を指す。複素環ラジカルは、３〜２０個の炭素原子、ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含む。複素環は、３〜７個の環員（２〜６個の炭素原子、ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）を有する単環、または、７〜１０個の環員（４〜９個の炭素原子、ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）を有する二環、例えばビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系であっても良い。
【０１２９】
例となる複素環は、例えば、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ  Ａ．，“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９６８年）、具体的には第１章、第３章、第４章、第６章、第７章、及び第９章；“Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ”（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９５０年〜現在）、具体的には第１３巻、第１４巻、第１６巻、第１９巻、及び第２８巻；ならびにＪ．Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  （１９６０）８２：５５６６に記載されている。
【０１３０】
複素環の例には、限定ではなく例として、ピリジル、ジヒドロイピリジル（ｄｉｈｙｄｒｏｙｐｙｒｉｄｙｌ）、テトラヒドロピリジル（ピペリジル）、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、硫黄酸化テトラヒドロチオフェニル（ｓｕｌｆｕｒ  ｏｘｉｄｉｚｅｄ  ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｔｈｉｏｐｈｅｎｙｌ）、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ピペリジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、２−ピロリドニル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、ビス−テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス−テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、アゾシニル、トリアジニル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５，２−ジチアジニル、チエニル、チアントレニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチニル、２Ｈ−ピロリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、１Ｈ−インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、４ａＨ−カルバゾリル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイソオキサゾリル、オキシインドリル（ｏｘｉｎｄｏｌｙｌ）、ベンゾオキサゾリニル、及びイサチノイル（ｉｓａｔｉｎｏｙｌ）が含まれる。
【０１３１】
限定ではなく例として、炭素結合した複素環は、ピリジンの２位、３位、４位、５位、または６位、ピリダジンの３位、４位、５位、または６位、ピリミジンの２位、４位、５位、または６位、ピラジンの２位、３位、５位、または６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール、若しくはテトラヒドロピロールの２位、３位、４位、または５位、オキサゾール、イミダゾール、若しくはチアゾールの２位、４位、または５位、イソオキサゾール、ピラゾール、若しくはイソチアゾールの３位、４位、または５位、アジリジンの２位または３位、アゼチジンの２位、３位、または４位、キノリンの２位、３位、４位、５位、６位、７位、または８位、あるいはイソキノリンの１位、３位、４位、５位、６位、７位、または８位で、結合している。さらにより典型的には、炭素結合した複素環は、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、５−ピリジル、６−ピリジル、３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル、６−ピリダジニル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、６−ピリミジニル、２−ピラジニル、３−ピラジニル、５−ピラジニル、６−ピラジニル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、または５−チアゾリルを含む。
【０１３２】
限定ではなく例として、窒素結合した複素環は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ−インダゾールの１位、イソインドールまたはイソインドリンの２位、モルホリンの４位、及びカルバゾールまたはβ−カルボリンの９位で、結合している。さらにより典型的には、窒素結合した複素環は、１−アジリジル、１−アゼテジル、１−ピロリル、１−イミダゾリル、１−ピラゾリル、及び１−ピペリジニルを含む。
【０１３３】
「Ｃ３−Ｃ８複素環」は、環炭素原子のうちの１〜４個が、独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮからなる群からのヘテロ原子で置換されている、芳香族または非芳香族のＣ３−Ｃ８炭素環を指す。Ｃ３−Ｃ８複素環の代表例としては、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、チオフェニル、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、及びテトラゾリルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ３−Ｃ８複素環は、非置換でも良く、または、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮを含むがこれらに限定されない、最大７個の基で置換されていても良く、式中、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
【０１３４】
「Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ」は、複素環基の水素原子のうちの１個が結合で置換されている、上で定義されるＣ３−Ｃ８複素環基を指す。Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロは、非置換でも良く、または、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮを含むがこれらに限定されない、最大６個の基で置換されていても良く、式中、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
【０１３５】
「Ｃ３−Ｃ２０複素環」は、環炭素原子のうちの１〜４個が、独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮからなる群からのヘテロ原子で置換されている、芳香族または非芳香族のＣ３−Ｃ８炭素環を指す。Ｃ３−Ｃ２０複素環は、非置換でも良く、または、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮを含むがこれらに限定されない、最大７個の基で置換されていても良く、式中、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
【０１３６】
「Ｃ３−Ｃ２０ヘテロシクロ」は、複素環基の水素原子のうちの１個が結合で置換されている、上で定義されるＣ３−Ｃ２０複素環基を指す。
【０１３７】
「炭素環」は、単環として３〜７個の炭素原子、または二環として７〜１２個の炭素原子を有する、飽和または不飽和環を意味する。単環式炭素環は、３〜６個の環原子、さらにより典型的には５個または６個の環原子を有する。二環式炭素環は、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、若しくは［６，６］系として配置された７〜１２個の環原子、または、ビシクロ［５，６］若しくは［６，６］系として配置された９個若しくは１０個の環原子を有する。単環式炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペンタ−１−エニル、１−シクロペンタ−２−エニル、１−シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが挙げられる。
【０１３８】
「Ｃ３−Ｃ８炭素環」は、３員、４員、５員、６員、７員、または８員の、飽和または不飽和の、非芳香族炭素環式環である。代表的なＣ３−Ｃ８炭素環としては、−シクロプロピル、−シクロブチル、−シクロペンチル、−シクロペンタジエニル、−シクロヘキシル、−シクロヘキセニル、−１，３−シクロヘキサジエニル、−１，４−シクロヘキサジエニル、−シクロヘプチル、−１，３−シクロヘプタジエニル、−１，３，５−シクロヘプタトリエニル、−シクロオクチル、及び−シクロオクタジエニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ３−Ｃ８炭素環基は、非置換でも良く、または、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮを含むがこれらに限定されない、１個以上の基で置換されていても良く、式中、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
【０１３９】
「Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ」は、炭素環基の水素原子のうちの１個が結合で置換されている、上で定義されるＣ３−Ｃ８炭素環基を指す。
【０１４０】
「リンカー」は、共有結合、または抗体を薬物部分に共有結合させる原子の鎖を含む、化学部分を指す。種々の実施形態において、リンカーには、アルキルジイル、アリールジイル、ヘテロアリールジイル等の二価ラジカル、−（ＣＲ２）ｎＯ（ＣＲ２）ｎ−等の部分、アルキルオキシ（例えば、ポリエチレンオキシ、ＰＥＧ、ポリメチレンオキシ）及びアルキルアミノ（例えば、ポリエチレンアミノ、Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（商標））の反復単位、ならびに、スクシネート、スクシンアミド、ジグリコレート、マロネート、及びカプロアミドを含む、二価酸エステル及びアミドが含まれる。種々の実施形態において、リンカーは、バリン、フェニルアラニン、リジン、及びホモリジン等の１個以上のアミノ酸残基を含んでも良い。
【０１４１】
「キラル」という用語は、鏡像パートナーの重ね合せできない特性を有する分子を指し、一方で「アキラル」という用語は、それらの鏡像パートナーと重ね合せできる分子を指す。
【０１４２】
「立体異性体」という用語は、同一の化学構成を有するが、空間内の原子または基の配置に関して異なる、化合物を指す。
【０１４３】
「ジアステレオマー」は、２つ以上のキラル性の中心を有し、それらの分子が互いの鏡像でない、立体異性体を指す。ジアステレオマーは、異なる物理特性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、及び反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、電気泳動法及びクロマトグラフィー等の高解像度分析手順の下で分離し得る。
【０１４４】
「鏡像異性体」は、互いに重ね合せできない鏡像である、化合物の２つの立体異性体を指す。
【０１４５】
本明細書で使用される立体化学的な定義及び慣例は、概して、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、及びＥｌｉｅｌ，Ｅ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（１９９４）Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに従う。多くの有機化合物は、光学活性型で存在し、すなわち、それらは、平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性化合物を説明する際、Ｄ及びＬ、またはＲ及びＳという接頭辞は、そのキラル中心（複数可）の周りの分子の絶対配置を表すように使用される。ｄ及びｌまたは（＋）及び（−）という接頭辞は、化合物による平面偏光の回転の表示を指定するために用いられ、このうち（−）またはｌは、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄの接頭辞を有する化合物は、右旋性である。所与の化学構造について、これらの立体異性体は、それらが互いの鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体はまた、鏡像異性体とも称され得、かかる異性体の混合物は、しばしば鏡像異性体混合物と呼ばれる。鏡像異性体の５０：５０混合物は、ラセミ混合物またはラセミ体と称され、それらは化学反応またはプロセスにおいて立体選択または立体特異性が存在していない場合に生じ得る。「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」という用語は、光学活性を欠く２つの鏡像異性体種の等モル混合物を指す。
【０１４６】
「脱離基」は、別の官能基によって置換され得る官能基を指す。ある特定の脱離基は、当該技術分野で周知であり、例としては、ハロゲン化物（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、メタンスルホニル（メシル）、ｐ−トルエンスルホニル（トシル）、トリフルオロメチルスルホニル（トリフレート）、及びトリフルオロメチルスルホネートが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４７】
「保護基」という用語は、特定の官能性を、化合物上の他の官能基を反応させながら、ブロッキングするまたは保護するために一般的に用いられる置換基を指す。例えば、「アミノ保護基」は、化合物中のアミノ官能性をブロッキングまたは保護する、アミノ基に結合した置換基である。好適なアミノ保護基には、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、及び９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（９−ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｅｎｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）（Ｆｍｏｃ）が含まれるが、これらに限定されない。保護基の一般的な説明及びそれらの使用については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１、またはより新しい版を参照されたい。
【０１４８】
ＩＩ．組成物及び方法
一態様において、本発明は、Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体及びかかる抗体を含む免疫複合体に部分的に基づく。本発明の抗体及び免疫複合体は、例えば、Ｂ７−Ｈ４陽性がんの診断または治療に有用である。
【０１４９】
Ａ．例となる抗Ｂ７−Ｈ４抗体
いくつかの実施形態において、本発明は、Ｂ７−Ｈ４に結合する単離抗体を提供する。Ｂ７−Ｈ４は、例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上に見出されるＩ型膜貫通タンパク質である。本明細書に示されるように、Ｂ７−Ｈ４は、乳がん検体の約８０％、及び検査された卵巣腫瘍試料の約６０％で発現される。
【０１５０】
シグナル配列（アミノ酸１〜２８）を含む、例となる自然発生ヒトＢ７−Ｈ４前駆体タンパク質配列は、配列番号７３に提供され、対応する成熟Ｂ７−Ｈ４タンパク質配列は、配列番号７４（配列番号７３のアミノ酸２９〜２８２に対応する）に示される。
【０１５１】
ある特定の実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、以下の特徴のうちの少なくとも１つ以上を、任意の組み合わせで有する：
（ａ）Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜１５７）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合するか、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合するか、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合するか、または、配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合するか、または、配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、及び
（ｂ）Ｂ７−Ｈ４と、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、または９ｎＭ以下、または８ｎＭ以下、または７ｎＭ以下、または６ｎＭ以下、または５ｎＭ以下、または４ｎＭ以下、または３ｎＭ以下、または２ｎＭ以下、または１ｎＭ以下、かつ任意に０．０００１ｎＭ以上、または０．００１ｎＭ以上、または０．０１ｎＭ以上の親和性で結合する。
【０１５２】
非限定的な例となるかかる抗体には、本明細書に記載されるｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＣ２及びｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＤが含まれる。いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４は、ヒトＢ７−Ｈ４である。いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４は、ヒト、カニクイザル、マウス、及びラットＢ７−Ｈ４から選択される。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜１５７）の全てまたは一部分内に存在するエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８〜２５０）の全てまたは一部分内に存在するエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜２５０）の全てまたは一部分内に存在するエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全てまたは一部分内に存在するエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全てまたは一部分内に存在するエピトープに結合する。いくつかのかかる実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４と、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、または９ｎＭ以下、または８ｎＭ以下、または７ｎＭ以下、または６ｎＭ以下、または５ｎＭ以下、または４ｎＭ以下、または３ｎＭ以下、または２ｎＭ以下、または１ｎＭ以下、かつ任意に０．０００１ｎＭ以上、または０．００１ｎＭ以上、または０．０１ｎＭ以上の親和性で結合する。非限定的な例となるかかる抗体には、本明細書に記載されるｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＣ２及びｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＤが含まれる。いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４は、ヒトＢ７−Ｈ４である。いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４は、ヒトＢ７−Ｈ４またはカニクイザルＢ７−Ｈ４である。いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４は、マウスＢ７−Ｈ４またはラットＢ７−Ｈ４である。
【０１５４】
アッセイ
抗Ｂ７−Ｈ４抗体が「Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜１５７）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する」か、または、「Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する」か、または、「Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する」か、または、配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する」か、または、「配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する」かどうかを判定することは、実施例Ｆにおいて本明細書に記載されるように、ＦＡＣＳにより評価される競合結合性によって判定される。
【０１５５】
抗Ｂ７−Ｈ４抗体が「１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、または９ｎＭ以下、または８ｎＭ以下、または７ｎＭ以下、または６ｎＭ以下、または５ｎＭ以下、または４ｎＭ以下、または３ｎＭ以下、または２ｎＭ以下、または１ｎＭ以下の親和性で結合する」かどうかは、実施例Ｅにおいて本明細書に記載されるように判定される。選択されたヒト化変異形の解離定数は、放射性リガンド細胞結合アッセイを使用して判定した。簡潔に述べると、約２５０ｐＭ（未標識抗体競合相手と同じ）の１２５Ｉ−抗体トレーサーを、１０００ｎＭから始めて、未標識抗体の２倍希釈物の存在下で、１００，０００個のＭＸ−１細胞または２９３  Ｂ７−Ｈ４安定細胞株と共にインキュベートした。この抗体／細胞混合物を、２５℃で２時間、ＤＭＥＭ（１％  ＢＳＡ、３００ｎＭヒトＩｇＧ、０．１％アジド）中でインキュベートし、次いで収集し、ＭｉｌｌｉｐｏｒｅのＭｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ濾過プレートを使用して濾過した。Ｐｅｒｋｉｎ  ＥｌｍｅｒのＷｉｚａｒｄ  １４７０自動ガンマ計数器を使用して、Ｄｕｒａｐｏｒｅ膜フィルターを１０分間計数した。抗体親和性定数（Ｋｄ）は、ＮｅｗＬｉｇａｎｄソフトウェアを使用したスキャッチャード分析によって判定した。
【０１５６】
抗体１Ｄ１１ｖ１．９変異形及び他の実施形態
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体を提供する。
【０１５７】
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体を提供する。
【０１５８】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態では、本抗体は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、本抗体は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、本抗体は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１５９】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態では、本抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、本抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、本抗体は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１６０】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１６１】
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１２８から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメインと、を含む。
【０１６２】
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４１から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメインと、を含む。
【０１６３】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体を提供する。
【０１６４】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体を提供する。
【０１６５】
上記の実施形態のいずれにおいても、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ヒト化されている。一実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、上記の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワーク  ＶＨ１である。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、次の突然変異のうちのいずれか１つを含む、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である：軽鎖フレームワーク領域ＦＲ３内のＹ４９Ｈ、Ｖ５８Ｉ、Ｔ６９Ｒ、及び／またはＦ７１Ｙ突然変異；重鎖フレームワーク領域ＦＲ３内のＶ６７Ａ、Ｉ６９Ｌ、Ｒ７１Ａ、Ｔ７３Ｋ、及び／またはＴ７５Ｓ突然変異。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、上記の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、配列番号５３の重鎖フレームワークＦＲ３配列をさらに含む。いくつかのかかる実施形態において、重鎖可変ドメインフレームワークは、配列番号５３のＦＲ３配列を有する修飾ヒトＶＨ１フレームワークである。
【０１６７】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号３８または１２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３８または１２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３８または１２７において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号３８または１２７において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。
【０１６８】
任意に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号３８のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。具体的な実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１６９】
任意に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号１２７のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。具体的な実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１７０】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供され、本抗体は、配列番号１２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１２６において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１２６において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号１２６のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。具体的な実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１７１】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供され、本抗体は、上で提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。
【０１７２】
一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号３８及び配列番号１２６におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１２７及び配列番号１２６におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。
【０１７３】
さらなる態様において、本発明は、本明細書に提供される抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号３８のＶＨ配列及び配列番号１２６のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１２７のＶＨ配列及び配列番号１２６のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１７４】
ある特定の実施形態において、Ｂ７−Ｈ４に結合し、かつ次の特徴のうちの少なくとも１つを有する、上記の実施形態のいずれかによる抗体が提供される：（ａ）Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜１５７）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、本抗体は、次の特徴のうちの少なくとも１つ以上を、任意の組み合わせで有する：（ａ）Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜１５７）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する。
【０１７５】
本発明のさらなる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体または他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
【０１７６】
さらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによる抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、以下に記載される特徴のいずれかを、単独で、または組み合わせて、組み込んでも良い。
【０１７７】
抗体１Ｄ１１及び他の実施形態
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体を提供する。別の実施形態では、本発明は、本発明は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体を提供する。
【０１７８】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態では、本抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、本抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、本抗体は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１７９】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態では、本抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、本抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、本抗体は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１８０】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１８１】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１８２】
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメインと、を含む。
【０１８３】
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４１から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメインと、を含む。
【０１８４】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体を提供する。
【０１８５】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体を提供する。
【０１８６】
上記の実施形態のいずれにおいても、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ヒト化されている。一実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、上記の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワーク  ＶＨ１である。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、次の突然変異のうちのいずれか１つを含む、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である：配列番号１２８のｃｅ、（ｉｖ）軽鎖フレームワーク領域ＦＲ３内のＨＶＲutation；重鎖フレームワーク領域ＦＲ３内のＶ６７Ａ、Ｉ６９Ｌ、Ｒ７１Ａ、Ｔ７３Ｋ、及び／またはＴ７５Ｓ突然変異。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、上記の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、配列番号５１、５２、または５３の重鎖フレームワークＦＲ３配列をさらに含む。いくつかのかかる実施形態において、重鎖可変ドメインフレームワークは、配列番号５１、５２、または５３のＦＲ３配列を有する修飾ヒトＶＨ１フレームワークである。
【０１８８】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号４において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号４において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号４のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。具体的な実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１８９】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号３６、３７、３８、９９、１００、１０１、１０２、または１０３のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３６、３７、３８、９９、１００、１０１、１０２、または１０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３６、３７、３８、９９、１００、１０１、１０２、または１０３において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号３６、３７、３８、９９、１００、１０１、１０２、または１０３において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号３６、３７、３８、９９、１００、１０１、１０２、または１０３のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。具体的な実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１９０】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供され、本抗体は、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号３において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号３のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。具体的な実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１９１】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供され、本抗体は、配列番号３５、９３、９４、９５、９６、９７、または９８のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３５、９３、９４、９５、９６、９７、または９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３５、９３、９４、９５、９６、９７、または９８において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号３５、９３、９４、９５、９６、９７、または９８において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号３５、９３、９４、９５、９６、９７、または９８のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。具体的な実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１９２】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供され、本抗体は、上で提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。
【０１９３】
一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号４及び配列番号３におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１０１及び配列番号９３におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１０１及び配列番号９７におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１０２及び配列番号９８におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１０３及び配列番号９８におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１０１及び配列番号９６におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１０１及び配列番号９５におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１０１及び配列番号９４におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１００及び配列番号９３におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号９９及び配列番号９３におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号３６及び配列番号９３におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号３６及び配列番号３５におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号３７及び配列番号３５におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号３８及び配列番号３５におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。
【０１９４】
さらなる態様において、本発明は、本明細書に提供される抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号４のＶＨ配列及び配列番号３のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１０１のＶＨ配列及び配列番号９３のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１０１のＶＨ配列及び配列番号９７のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１０２のＶＨ配列及び配列番号９８のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１０３のＶＨ配列及び配列番号９８のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１０１のＶＨ配列及び配列番号９６のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１０１のＶＨ配列及び配列番号９５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１０１のＶＨ配列及び配列番号９４のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１００のＶＨ配列及び配列番号９３のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号９９のＶＨ配列及び配列番号９３のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号３６のＶＨ配列及び配列番号９３のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号３６のＶＨ配列及び配列番号３５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号３７のＶＨ配列及び配列番号３５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号３８のＶＨ配列及び配列番号３５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１９５】
ある特定の実施形態において、Ｂ７−Ｈ４に結合し、かつ次の特徴のうちの少なくとも１つを有する、上記の実施形態のいずれかによる抗体が提供される：（ａ）Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜１５７）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、本抗体は、次の特徴のうちの少なくとも１つ以上を、任意の組み合わせで有する：（ａ）Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜１５７）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する。
【０１９６】
本発明のさらなる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体または他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
【０１９７】
さらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによる抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、以下に記載される特徴のいずれかを、単独で、または組み合わせて、組み込んでも良い。
【０１９８】
抗体２２Ｃ１０及び他の実施形態
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体を提供する。
【０１９９】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体を提供する。
【０２００】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態では、本抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、本抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、本抗体は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０２０１】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態では、本抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、本抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、本抗体は、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０２０２】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０２０３】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０２０４】
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメインと、を含む。
【０２０５】
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメインと、を含む。
【０２０６】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体を提供する。
【０２０７】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体を提供する。
【０２０８】
上記の実施形態のいずれにおいても、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ヒト抗体である。
【０２０９】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２８において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号２８において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号２８のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。具体的な実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０２１０】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供され、本抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号２７において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２７において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号２７のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。具体的な実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０２１１】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供され、本抗体は、配列番号５５、５７，１０４、１０５、または１０６のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、配列番号５５、５７，１０４、１０５、または１０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号５５、５７、１０４、１０５、または１０６において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号５５、５７、１０４、１０５、または１０６において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号５５、５７、１０４、１０５、または１０６のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。具体的な実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０２１２】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供され、本抗体は、上で提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１１１及び配列番号１０４におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１１１及び配列番号５５におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１１２及び配列番号５５におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１１３及び配列番号５５におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１１４及び配列番号５５におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１１１及び配列番号１０５におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１１１及び配列番号１０６におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１１０及び配列番号５５におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１０９及び配列番号５５におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１０８及び配列番号５５におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１０７及び配列番号５５におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号５６及び配列番号５５におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。別の実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号５６及び配列番号５７におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。
【０２１３】
さらなる態様において、本発明は、本明細書に提供される抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１１１のＶＨ配列及び配列番号１０４のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１１１のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１１２のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する。抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１１３のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列と同じエピトープを含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体に結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１１４のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１１１のＶＨ配列及び配列番号１０５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１１１のＶＨ配列及び配列番号１０６のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１１０のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列と同じエピトープを含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体に結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１０９のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列と同じエピトープを含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体に結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１０８のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列と同じエピトープを含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体に結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号１０７のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列と同じエピトープを含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体に結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号５６のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列と同じエピトープを含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体に結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号５６のＶＨ配列及び配列番号５７のＶＬ配列と同じエピトープを含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体に結合する抗体が提供される。
【０２１４】
ある特定の実施形態において、Ｂ７−Ｈ４に結合し、かつ次の特徴のうちの少なくとも１つを有する、上記の実施形態のいずれかによる抗体が提供される：（ａ）Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜１５７）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、本抗体は、次の特徴のうちの少なくとも１つ以上を、任意の組み合わせで有する：（ａ）Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜１５７）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する。
【０２１５】
本発明のさらなる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ２ａ抗体または他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
【０２１６】
さらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによる抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、以下に記載される特徴のいずれかを、単独で、または組み合わせて、組み込んでも良い。
【０２１７】
抗体３２Ｄ６及び他の実施形態
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体を提供する。
【０２１８】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態では、本抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、本抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、本抗体は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０２１９】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０２２０】
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメインと、を含む。
【０２２１】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１８から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体を提供する。
【０２２２】
上記の実施形態のいずれにおいても、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ヒト抗体である。
【０２２３】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１２において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１２において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号１２のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。具体的な実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０２２４】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供され、本抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１１において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１１において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号１１のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。具体的な実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０２２５】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供され、本抗体は、上で提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１２及び配列番号１１におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。別の実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１２及び配列番号１１におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。
【０２２６】
さらなる態様において、本発明は、本明細書に提供される抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号１２のＶＨ配列及び配列番号１１のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０２２７】
ある特定の実施形態において、Ｂ７−Ｈ４に結合し、かつ次の特徴のうちの少なくとも１つを有する、上記の実施形態のいずれかによる抗体が提供される：（ａ）Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜１５７）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、本抗体は、次の特徴のうちの少なくとも１つ以上を、任意の組み合わせで有する：（ａ）Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜１５７）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合すること、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合すること、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合すること、または、配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合すること、配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合すること。
【０２２８】
本発明のさらなる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ２ａ抗体または他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
【０２２９】
さらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによる抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、以下に記載される特徴のいずれかを、単独で、または組み合わせて、組み込んでも良い。
【０２３０】
抗体９Ｂ９及び他の実施形態
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体を提供する。
【０２３１】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態では、本抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、本抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、本抗体は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０２３２】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０２３３】
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメインと、を含む。
【０２３４】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体を提供する。
【０２３５】
上記の実施形態のいずれにおいても、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ヒト抗体である。
【０２３６】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２０において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号２０において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号２０のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。具体的な実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０２３７】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供され、本抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１９において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１９において置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号１１のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。具体的な実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０２３８】
別の態様において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供され、本抗体は、上で提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号２０及び配列番号１９におけるＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。
【０２３９】
さらなる態様において、本発明は、本明細書に提供される抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号２０のＶＨ配列及び配列番号１９のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０２４０】
ある特定の実施形態において、Ｂ７−Ｈ４に対して、かつ次の特徴のうちの少なくとも１つを有する、上記の実施形態のいずれかによる抗体が提供される：（ａ）Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜１５７）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する  、または、配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合すること、または、配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、本抗体は、次の特徴のうちの少なくとも１つ以上を、任意の組み合わせで有する：（ａ）Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜１５７）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９〜２５０）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する、または、配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全て若しくは一部分内に存在するエピトープに結合する。
【０２４１】
本発明のさらなる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ２ａ抗体または他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
【０２４２】
さらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによる抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、以下に記載される特徴のいずれかを、単独で、または組み合わせて、組み込んでも良い。
【０２４３】
１．抗体親和性
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下の解離定数（Ｋｄ）を有し、任意に、１０−１３Ｍ以上である。（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）。
【０２４４】
一実施形態において、Ｋｄは、次のアッセイにより記載されるように、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて行われる放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、未標識抗原の一連の滴定の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原とＦａｂを平衡化し、次いで、抗Ｆａｂ抗体コーティングプレートで結合した抗原を捕捉することによって測定される（例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい）。アッセイの条件を確立するためには、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍＬの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンにより、室温（およそ２３℃）で２〜５時間ブロッキングする。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）内で、１００ｐＭまたは２６ｐＭの［１２５Ｉ］抗原を、目的のＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２の評価と一致）。目的のＦａｂを次いで一晩インキュベートするが、インキュベーションは、平衡に到達することを確実にするために、より長い期間（例えば、約６５時間）継続しても良い。その後、混合物を、室温での（例えば、１時間にわたる）インキュベーションのために、捕捉プレートに移す。次いでこの溶液を除去し、プレートを、ＰＢＳ中０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、ＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）でプレートを１０分間計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイにおいて使用するために選定する。
【０２４５】
別の実施形態によれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ  （登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いた表面プラズモン共鳴アッセイを使用し、２５℃で、約１０応答単位（ＲＵ）で固定化された抗原ＣＭ５チップを用いて測定される。簡潔に述べると、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化させる。抗原を１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍＬ（約０．２μＭ）まで希釈した後、カップリングされたタンパク質のおよそ１０応答単位（ＲＵ）を達成するように、５μＬ／分の流速で注射する。抗原の注射後、１Ｍのエタノールアミンを注射して、未反応の基をブロッキングする。動態測定については、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）に、２５℃で、およそ２５μＬ／分の流速で注射する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は、単純な１対１のＬａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、会合センサグラムと解離センサグラムとを同時に当てはめることによって算出される。平衡解離定数（Ｋｄ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比率として算出する。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによって、オン速度が１０６Ｍ−１  ｓ−１を超える場合、このオン速度は、撹拌されたキュベットを備えるストップフロー装着分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計において測定される、漸増濃度の抗原の存在下で、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の２５℃における蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の上昇または減少を測定する、蛍光消光技法を使用することによって、決定することができる。
【０２４６】
２．抗体断片
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに以下に記載される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．  ９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたく、また、ＷＯ  ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加したインビボ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
【０２４７】
ダイアボディは、二価性または二重特異性であっても良い、２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ  ４０４，０９７、ＷＯ  １９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．  ９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ（Ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）及びテトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）もまた、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．  ９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。
【０２４８】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て若しくは一部分または軽鎖可変ドメインの全て若しくは一部分を含む、抗体断片である。ある特定の実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６  Ｂ１号を参照されたい）。
【０２４９】
抗体断片は、本明細書に記載されるように、インタクトな抗体のタンパク質分解消化、ならびに組み換え宿主細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）またはファージ）による産生を含むがこれらに限定されない、種々の技法によって作製することができる。
【０２５０】
３．キメラ抗体及びヒト化抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載されている。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサル等の非ヒト霊長類に由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる実施例において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のそれから変更された、「クラススイッチされた」抗体である。キメラ抗体には、それらの抗原結合断片が含まれる。
【０２５１】
ある特定の実施形態において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的に、非ヒト抗体は、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減させるために、ヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはそれらの部分）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはそれらの部分）がヒト抗体配列に由来する、１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部分も含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を復元若しくは向上させるために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
【０２５２】
ヒト化抗体及びそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．  Ｂｉｏｓｃｉ．  １３：１６１９−１６３３（２００８）に概説されており、また、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，  ８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフティングを記載する）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２８：４８９−４９８（１９９１）（「表面再構築（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」を記載する）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャフリング」を記載する）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャフリングへの「誘導選択」アプローチを記載する）にさらに記載されている。
【０２５３】
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖または重鎖可変領域の特定の下位集団のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞成熟）フレームワーク領域またはヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．  Ｂｉｏｓｃｉ．  １３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）、及びＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２５４】
４．ヒト抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の種々の技法を使用して産生することができる。ヒト抗体は、概して、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ５：３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０：４５０−４５９（２００８）に記載されている。
【０２５５】
ヒト抗体は、抗原曝露に応答してインタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を含むインタクトな抗体を産生するように改変されているトランスジェニック動物に、免疫原を投与することによって、調製されても良い。かかる動物は典型的に、内在性免疫グロブリン遺伝子座を置き換える、または染色体外に存在するか、若しくは動物の染色体中にランダムに組み込まれる、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部分を含有する。かかるトランスジェニックマウスにおいて、内在性免疫グロブリン遺伝子座は、概して、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号、ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載する米国特許第５，７７０，４２９号、Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許第７，０４１，８７０号、ならびに  ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載する米国特許出願公開第ＵＳ  ２００７／００６１９００号も参照されたい）。かかる動物によって生成されるインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに修飾されても良い。
【０２５６】
ヒト抗体はまた、ハイブリドーマベースの方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫細胞株及びマウス−ヒト異種骨髄腫（ｈｅｔｅｒｏｍｙｅｌｏｍａ）細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい。）  ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されるヒト抗体もまた、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。追加の方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）、及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載する）に記載されるものが含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（Ｔｒｉｏｍａ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）、及びＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）にも記載されている。
【０２５７】
ヒト抗体はまた、ヒト由来ファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成されても良い。かかる可変ドメイン配列は、次いで、所望のヒト定常ドメインと組み合わされても良い。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技法が、以下に記載される。
【０２５８】
５．ライブラリ由来抗体
本発明の抗体は、コンビナトリアルライブラリを、所望の活性（単数または複数）を有する抗体についてスクリーニングすることによって、単離されても良い。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、かかるライブラリを、所望の結合特性を有する抗体についてスクリーニングするための、多様な方法が当該技術分野で知られている。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説されており、また、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）にさらに記載されている。
【０２５９】
ある特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーを、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングし、ファージライブラリ内でランダムに組み換え、次いでそれらを、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは典型的に、１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとして、抗体断片を提示する。免疫された源からのライブラリは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。代替的に、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）に記載されるように、ナイーブレパートリーを（例えば、ヒトから）クローニングして、いかなる免疫もなしに広範な非自己抗原及びまた自己抗原に対する抗体の単一源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリは、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されるように、再配列されていないＶ遺伝子セグメントを幹細胞からクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再配列を遂行することによって、合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリを記載する特許公開には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が含まれる。
【０２６０】
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体断片は、本明細書においてヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
【０２６１】
６．多重特異性抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。本明細書で使用される「多重特異性抗体」という用語は、ポリエピトープ性（ｐｏｌｙｅｐｉｔｏｐｉｃ）特異性を有する（すなわち、１個の分子上の２つ以上の異なるエピトープに結合可能であるか、または２個以上の異なる分子上のエピトープに結合可能である）抗原結合ドメインを含む抗体を指す。
【０２６２】
いくつかの実施形態において、多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原結合部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体（例えば、二重特異性抗体等）である。いくつかの実施形態において、多重特異性抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、１個の同じ分子内の２つのエピトープと結合しても良い（分子内結合）。例えば、多重特異性抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、同じＢ７−Ｈ４分子内の２つの異なるエピトープに結合しても良い。ある特定の実施形態において、多重特異性抗体が結合する２つの異なるエピトープは、１つの単一特異性抗体、例えば、従来の抗体または１つの免疫グロブリン単一可変ドメイン等によって通常は同時に結合されないエピトープである。いくつかの実施形態において、多重特異性抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、２個の明確に異なる分子内に位置するエピトープと結合しても良い（分子間結合）。例えば、多重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、１個のＢ７−Ｈ４分子上の１つのエピトープに結合しても良く、一方で、多重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインは、異なるＢ７−Ｈ４分子上の別のエピトープに結合し、それによって２個の分子を架橋しても良い。
【０２６３】
いくつかの実施形態において、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体等）の抗原結合ドメインは、２つのＶＨ／ＶＬユニットを含み、第１のＶＨ／ＶＬユニットは、第１のエピトープと結合し、第２のＶＨ／ＶＬユニットは、第２のエピトープに結合し、各ＶＨ／ＶＬユニットは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。かかる多重特異性抗体としては、完全長抗体、２つ以上のＶＬ及びＶＨドメインを有する抗体、及び抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、二重特異性ダイアボディ及びトリアボディ、共有結合または非共有結合で連結されている抗体断片等）が挙げられるが、これらに限定されない。重鎖可変領域の少なくとも一部分及び／または軽鎖可変領域の少なくとも一部分をさらに含むＶＨ／ＶＬユニットは、「アーム」または「ヘミマー」または「半抗体」とも称され得る。いくつかの実施形態において、ヘミマーは、第２のヘミマーとの分子内ジスルフィド結合の形成を可能にするのに十分な重鎖可変領域の一部分を含む。いくつかの実施形態において、ヘミマーは、例えば、相補的なホール突然変異若しくはノブ突然変異を含む第２のヘミマーまたは半抗体とのヘテロ二量体化を可能にするように、ノブ突然変異またはホール突然変異を含む。ノブ突然変異及びホール突然変異は、以下にさらに詳細に考察される。
【０２６４】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される多重特異性抗体は、二重特異性抗体であっても良い。本明細書で使用される「二重特異性抗体」という用語は、１個の分子上の２つの異なるエピトープに結合可能であるか、または２個の異なる分子上のエピトープに結合可能である抗原結合ドメインを含む多重特異性抗体を指す。二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体は、「二重特異性（ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）」を有するもの、または「二重特異性（ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）」であるものと称される場合もある。例となる二重特異性抗体は、Ｂ７−Ｈ４及び任意の他の抗原の両方に結合しても良い。ある特定の実施形態において、結合特異性のうちの一方は、Ｂ７−Ｈ４に対するものであり、他方は、ＣＤ３に対するものである。例えば、米国特許第５，８２１，３３７号を参照されたい。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体は、同じＢ７−Ｈ４分子の２つの異なるエピトープに結合しても良い。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体は、２個の異なるＢ７−Ｈ４分子上の２つの異なるエピトープに結合しても良い。二重特異性抗体はまた、Ｂ７−Ｈ４を発現する細胞に細胞傷害性薬剤を局在化させるために使用されても良い。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製することができる。
【０２６５】
多重特異性抗体を作製するための技法としては、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組み換え同時発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３）、ＷＯ  ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、及び「ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ）」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、ＷＯ２００９／０８９００４、ＵＳ２００９／０１８２１２７、ＵＳ２０１１／０２８７００９、Ｍａｒｖｉｎ  ａｎｄ  Ｚｈｕ，Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｓｉｎ．（２００５）２６（６）：６４９−６５８、及びＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ（２００５）Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｓｉｎ．，２６：１−９を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用される「ノブ・イン・ホール」または「ＫｎＨ」技術という用語は、それらが相互作用する界面において一方のポリペプチドに隆起（ノブ）を導入し、他方のポリペプチドに空洞（ホール）を導入することにより、インビトロまたはインビボで２つ一緒のポリペプチドの対形成を誘導する技術を指す。例えば、ＫｎＨは、抗体のＦｃ：Ｆｃ結合界面、ＣＬ：ＣＨ１界面、またはＶＨ／ＶＬ界面に導入されている（例えば、ＵＳ  ２０１１／０２８７００９、ＵＳ２００７／０１７８５５２、ＷＯ  ９６／０２７０１１、ＷＯ  ９８／０５０４３１、Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６：７８１−７８８、及びＷＯ２０１２／１０６５８７を参照されたい）。いくつかの実施形態において、ＫｎＨは、多重特異性抗体の製造中に２つの異なる重鎖が一緒になる対形成を推進する。例えば、Ｆｃ領域内にＫｎＨを有する多重特異性抗体は、各Ｆｃ領域に連結された単一可変ドメインをさらに含むことができ、または、同様の若しくは異なる軽鎖可変ドメインと対になる異なる重鎖可変ドメインをさらに含む。ＫｎＨ技術はまた、２つの異なる受容体の細胞外ドメイン、または異なる標的認識配列を含む任意の他のポリペプチド配列（例えば、アフィボディ、ペプチボディ、及び他のＦｃ融合物を含む）を一緒に対形成するために使用することができる。
【０２６６】
本明細書で使用される「ノブ突然変異」という用語は、ポリペプチドが別のポリペプチドと相互作用する界面において、ポリペプチドに隆起（ノブ）を導入する、突然変異を指す。いくつかの実施形態において、他方のポリペプチドは、ホール突然変異を有する。
【０２６７】
本明細書で使用される「ホール突然変異」という用語は、ポリペプチドが別のポリペプチドと相互作用する界面において、ポリペプチドに空洞（ホール）を導入する、突然変異を指す。いくつかの実施形態において、他方のポリペプチドは、ノブ突然変異を有する。
【０２６８】
簡潔な非限定的考察が以下に提供される。
【０２６９】
「隆起」は、ヘテロ多量体を安定化させ、それにより、例えば、ホモ多量体形成と比べてヘテロ多量体形成を優先するように、第１のポリペプチドの界面から突出し、したがって隣接する界面（すなわち、第２のポリペプチドの界面）にある補正的空洞内に位置付け可能である、少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。隆起は、元々の界面内に存在しても良く、または、合成的に（例えば、界面をコードする核酸を変化させることによって）導入されても良い。いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドの界面をコードする核酸は、隆起をコードするように変化させられる。これを達成するために、第１のポリペプチドの界面にある少なくとも１個の「原型」アミノ酸残基をコードする核酸が、原型アミノ酸残基よりも大きな側鎖体積を有する少なくとも１個の「移入」アミノ酸残基をコードする核酸で置換される。１個を超える原型残基及び対応する移入残基が存在し得ることは理解されよう。種々のアミノ残基の側鎖体積は、例えば、ＵＳ２０１１／０２８７００９の表１に示されている。「隆起」を導入するための突然変異は、「ノブ突然変異」と称される場合がある。
【０２７０】
いくつかの実施形態において、隆起の形成のための移入残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、及びトリプトファン（Ｗ）から選択される自然発生アミノ酸残基である。いくつかの実施形態において、移入残基は、トリプトファンまたはチロシンである。ある実施形態では、隆起の形成のための原型残基は、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、スレオニン、またはバリンのように、小さな側鎖体積を有する。
【０２７１】
「空洞」は、第２のポリペプチドの界面から凹んでおり、したがって隣接する第１のポリペプチドの界面上の対応する隆起を収容する、少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。空洞は、元々の界面内に存在しても良く、または、合成的に（例えば、界面をコードする核酸を変化させることによって）導入されても良い。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドの界面をコードする核酸は、空洞をコードするように変化させられる。これを達成するために、第２のポリペプチドの界面にある少なくとも１個の「原型」アミノ酸残基をコードする核酸が、原型アミノ酸残基よりも小さな側鎖体積を有する少なくとも１個の「移入」アミノ酸残基をコードするＤＮＡで置換される。１個を超える原型残基及び対応する移入残基が存在し得ることは理解されよう。いくつかの実施形態において、空洞の形成のための移入残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、及びバリン（Ｖ）から選択される自然発生アミノ酸残基である。いくつかの実施形態において、移入残基は、セリン、アラニン、またはスレオニンである。いくつかの実施形態において、空洞の形成のための原型残基は、チロシン、アルギニン、フェニルアラニン、またはトリプトファンのように、大きな側鎖体積を有する。「空洞」を導入するための突然変異は、「ホール突然変異」と称される場合がある。
【０２７２】
隆起は空洞内に「位置付け可能」であり、これは、それぞれ第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドの界面上の隆起及び空洞の空間的位置、ならびに隆起及び空洞の大きさが、界面における第１及び第２のポリペプチドの正常な会合を著しく撹乱させずに隆起が空洞内に位置し得るようなものであることを意味する。Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、及びＴｒｐ等の隆起は、典型的には界面の軸から直角に伸びず、好ましい立体構造を有しないため、対応する空洞との隆起のアライメントは、いくつかの事例において、Ｘ線結晶学または核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって得られるもの等の三次元構造に基づく隆起／空洞対のモデリングに依存し得る。これは、当該技術分野で広く許容されている技法を使用して達成することができる。
【０２７３】
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１定常領域内のノブ突然変異は、Ｔ３６６Ｗ（ＥＵ付番）である。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１定常領域内のホール突然変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）から選択される１つ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１定常領域内のホール突然変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）を含む。
【０２７４】
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４定常領域内のノブ突然変異は、Ｔ３６６Ｗ（ＥＵ付番）である。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４定常領域内のホール突然変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）から選択される１つ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４定常領域内のホール突然変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）を含む。
【０２７５】
多重特異性抗体はまた、静電的ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ  ｓｔｅｅｒｉｎｇ）効果を操作して抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製すること（ＷＯ  ２００９／０８９００４Ａ１）、２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい）、「ダイアボディ」技術を使用して二重特異性抗体断片を作製すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい）、及び１本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）、ならびに例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７：６０（１９９１）に記載される三重特異性抗体を調製することによって、作製されても良い。
【０２７６】
「オクトパス（Ｏｃｔｏｐｕｓ）抗体」または「二重可変ドメイン免疫グロブリン」（ＤＶＤ）を含む、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体もまた、本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ  ２００６／００２５５７６Ａ１、及びＷｕ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００７））を参照されたい。）。本明細書における抗体または断片にはまた、Ｂ７−Ｈ４ならびに別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用（Ｄｕａｌ  Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」が含まれる（例えば、ＵＳ  ２００８／００６９８２０を参照されたい）。
【０２７７】
７．抗体変異形
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列変異形が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を向上させることが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異形は、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な修飾を導入することによって、またはペプチド合成によって、調製されても良い。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、及び／またはそこへの残基の挿入、及び／またはその中での残基の置換が含まれる。最終構築物に到達するように、欠失、挿入、及び置換を任意に組み合わせることができるが、但し、その最終構築物が、所望の特性、例えば、抗原結合性を保有することを条件とする。
【０２７８】
ａ）置換、挿入、及び欠失変異形
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異形が提供される。置換型突然変異生成に対する目的の部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、表１において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１において、「例となる置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載される。アミノ酸置換が目的の抗体中に導入され、その産物が、所望の活性、例えば、保持された／向上した抗原結合、減少した免疫原性、または向上したＡＤＣＣ若しくはＣＤＣについて、スクリーニングされても良い。
2022002515.tif 000023
アミノ酸は、次の一般的な側鎖特性に従って分類されても良い：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０２７９】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。
【０２８０】
置換型変異形の種類の１つは、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１個以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらなる研究のために選択される、結果として生じる変異形（複数可）は、親抗体と比べて、ある特定の生物学的特性における改変（例えば、向上）（例えば、増加した親和性、低減した免疫原性）を有することになり、かつ／または親抗体の、実質的に保持されたある特定の生物学的特性を有するであろう。例となる置換型変異形は、例えば、本明細書に記載されるもの等のファージディスプレイベースの親和性成熟技法を使用して、簡便に生成され得る、親和性成熟抗体である。簡潔に述べると、１個以上のＨＶＲ残基を突然変異させ、変異形抗体をファージ上で提示させ、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。
【０２８１】
変化（例えば、置換）をＨＶＲにおいて行って、例えば、抗体親和性を向上させても良い。かかる変化は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を経るコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）、及び／またはＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）において行われても良く、結果として生じる変異形ＶＨまたはＶＬが、結合親和性について試験される。二次ライブラリを構築し、そこから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１）に記載されている。）  親和性成熟のいくつかの実施形態において、多様性が、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性突然変異生成）のうちのいずれかによって、成熟のために選定された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリが作り出される。次いでこのライブラリは、所望の親和性を有する任意の抗体変異形を特定するために、スクリーニングされる。多様性を導入するための別の方法は、数個のＨＶＲ残基（例えば、１回に４〜６個の残基）がランダム化される、ＨＶＲ指向性アプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異生成またはモデリングを使用して、具体的に特定されても良い。特に、ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が標的とされることが多い。
【０２８２】
ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、かかる変化が、抗原に結合する抗体の能力を実質的に低減させない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じても良い。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的変化（例えば、本明細書に提供される保存的置換）が、ＨＶＲにおいて行われても良い。かかる変化は、ＨＶＲ「ホットスポット」またはＳＤＲの外側にあっても良い。上で提供される変異形ＶＨ及びＶＬ配列のある特定の実施形態において、各ＨＶＲは、未変化であるか、１つ、２つ、若しくは３つを超えないアミノ酸置換を含有するかのいずれかである。
【０２８３】
突然変異生成のための標的とされ得る抗体の残基または領域を特定するための有用な方法の１つは、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５に記載される、「アラニンスキャニング変異生成」と呼ばれるものである。この方法では、標的残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕ等の荷電残基）のうちのある残基または残基の群を特定し、中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えて、抗体の抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを判定する。さらなる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の場所に導入されても良い。代替的に、または追加的に、抗原−抗体複合体の結晶構造を使用して、抗体と抗原との間の接触点が特定される。かかる接触残基及び隣接する残基は、置換の候補として標的とされるか、または排除されても良い。変異形をスクリーニングして、それらが所望の特性を含有するかどうかを判定しても良い。
【０２８４】
アミノ酸配列挿入には、１個の残基から１００個以上の残基を含有するポリペプチドの範囲の長さである、アミノ末端融合及び／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内（ｉｎｔｒａｓｅｑｕｅｎｃｅ）挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入型変異形には、抗体の血清中半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）またはポリペプチドに対する抗体のＮ末端若しくはＣ末端への融合が含まれる。
【０２８５】
ｂ）グリコシル化変異形
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変化させられる。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作り出されるか、または除去されるように、アミノ酸配列を変化させることによって、簡便に遂行され得る。
【０２８６】
抗体がＦｃ領域を含む場合、そこに結合した炭水化物が変化させられても良い。哺乳類細胞によって産生される天然抗体は、典型的に、概してＮ−結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に結合される、分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．  ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖類には、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖類構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれる。いくつかの実施形態において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾は、ある特定の向上した特性を有する抗体変異形を作り出すために行われても良い。
【０２８７】
一実施形態において、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合したフコースを欠いている炭水化物構造を有する、抗体変異形が提供される。例えば、かかる抗体におけるフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であっても良い。フコースの量は、例えば、ＷＯ  ２００８／０７７５４６に記載されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定した場合の、Ａｓｎ  ２９７に結合した全ての糖鎖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計と比べた、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均料を算出することによって判定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域における約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ付番）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体における小規模な配列変異に起因して、２９７位から約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位〜３００位の間に位置しても良い。かかるフコシル化変異形は、向上したＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第  ＵＳ  ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第ＵＳ  ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体変異形に関連する刊行物の例としては、ＵＳ  ２００３／０１５７１０８、ＷＯ  ２０００／６１７３９、ＷＯ  ２００１／２９２４６、ＵＳ  ２００３／０１１５６１４、ＵＳ  ２００２／０１６４３２８、ＵＳ  ２００４／００９３６２１、ＵＳ  ２００４／０１３２１４０、ＵＳ  ２００４／０１１０７０４、ＵＳ  ２００４／０１１０２８２、ＵＳ  ２００４／０１０９８６５、ＷＯ  ２００３／０８５１１９、ＷＯ  ２００３／０８４５７０、ＷＯ  ２００５／０３５５８６、ＷＯ  ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｂｉｏｅｎｇ．  ８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  ２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ  ２００３／０１５７１０８  Ａ１号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ）、及びＷＯ  ２００４／０５６３１２  Ａ１（Ａｄａｍｓら）（特に実施例１１における））、及びα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞等のノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｂｉｏｅｎｇ．  ８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が挙げられる。
【０２８８】
二分されたオリゴ糖類を有する、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖類がＧｌｃＮＡｃによって二分されている、抗体変異形がさらに提供される。かかる抗体変異形は、低減したフコシル化及び／または向上したＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体変異形の例は、例えば、ＷＯ  ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）、及びＵＳ  ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖類において少なくとも１個のガラクトース残基を有する、抗体変異形もまた提供される。かかる抗体変異形は、向上したＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体変異形は、例えば、ＷＯ  １９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌら）、ＷＯ  １９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及びＷＯ  １９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０２８９】
ｃ）Ｆｃ領域変異形
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸修飾が、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによってＦｃ領域変異形を生成しても良い。Ｆｃ領域変異形は、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含む、ヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含んでも良い。
【０２９０】
ある特定の実施形態において、本発明は、全部ではなく一部のエフェクター機能を保有し、それにより、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、ある特定のエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣ等）が不必要または有害である用途に関して望ましい候補となる、抗体変異形を企図する。インビトロ及び／またはインビボ細胞傷害性アッセイを実行して、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行して、抗体がＦｃγＲ結合を欠いている（よって、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、Ｆｃ（ＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、Ｆｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ、及びＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ９：４５７−４９２（１９９１）の４６４ページで表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照されたい）、及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、同第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載されている。代替的に、非放射性アッセイ法が用いられても良い（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．  Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。代替的に、または追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるもの等の動物モデルにおいて、評価されても良い。また、Ｃ１ｑ結合アッセイを行って、抗体がＣ１ｑに結合不可能であり、よってＣＤＣ活性を欠いていることを確認しても良い。例えば、ＷＯ  ２００６／０２９８７９及びＷＯ  ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行っても良い（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０１：１０４５−１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ  １０３：２７３８−２７４３（２００４）を���照されたい）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の判定も、当該技術分野で既知の方法を使用して行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照されたい）。
【０２９１】
いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸修飾が、新生児型Ｆｃ受容体に対するＩｇＧ結合を増加させるために、本明細書に提供される抗体のＦｃ部分に導入されても良い。ある特定の実施形態において、本抗体は、ＥＵ付番に従う次の３つの突然変異、すなわちＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ（「ＹＴＥ突然変異」）を含む（米国特許第８，６９７，６５０号、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８１（３３）：２３５１４−２３５２４（２００６）も参照されたい。ある特定の実施形態において、ＹＴＥ突然変異は、抗体がその同族の抗原に結合する能力に影響しない。ある特定の実施形態において、ＹＴＥ突然変異は、天然（すなわち、非ＹＴＥ突然変異体）抗体と比較して、抗体の血清中半減期を増加させる。いくつかの実施形態において、ＹＴＥ突然変異は、天然（すなわち、非ＹＴＥ突然変異体）抗体と比較して、抗体の血清中半減期を３倍増加させる。いくつかの実施形態において、ＹＴＥ突然変異は、天然（すなわち、非ＹＴＥ突然変異体）抗体と比較して、抗体の血清中半減期を２倍増加させる。いくつかの実施形態において、ＹＴＥ突然変異は、天然（すなわち、非ＹＴＥ突然変異体）抗体と比較して、抗体の血清中半減期を４倍増加させる。いくつかの実施形態において、ＹＴＥ突然変異は、天然（すなわち、非ＹＴＥ突然変異体）抗体と比較して、抗体の血清中半減期を少なくとも５倍増加させる。いくつかの実施形態において、ＹＴＥ突然変異は、天然（すなわち、非ＹＴＥ突然変異体）抗体と比較して、抗体の血清中半減期を少なくとも１０倍増加させる。例えば、米国特許第８，６９７，６５０号を参照されたく、また、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８１（３３）：２３５１４−２３５２４（２００６）も参照されたい。
【０２９２】
ある特定の実施形態において、ＹＴＥ突然変異体は、抗体の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を調節する手段を提供する。ある特定の実施形態において、ＹＴＥＯ突然変異体は、ヒト抗原に対するヒト化ＩｇＧ抗体のＡＤＣＣ活性を調節する手段を提供する。例えば、米国特許第８，６９７，６５０号を参照されたく、また、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８１（３３）：２３５１４−２３５２４（２００６）も参照されたい。
【０２９３】
ある特定の実施形態において、ＹＴＥ突然変異体は、血清中半減期、組織分布、及び抗体活性（例えば、ＩｇＧ抗体のＡＤＣＣ活性）の同時調節を可能にする。例えば、米国特許第８，６９７，６５０号を参照されたく、また、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８１（３３）：２３５１４−２３５２４（２００６）も参照されたい。
【０２９４】
低減したエフェクター機能を有する抗体には、ＥＵ付番によるＦｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有するものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ突然変異体には、ＥＵ付番によるアラニンへの残基２６５及び２９７の置換（すなわち、ＥＵ付番によるＤ２６５Ａ及びＮ２９７Ａ）を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体（米国特許第７，３３２，５８１号）を含む、ＥＵ付番によるアミノ酸２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、及び３２７位のうちの２つ以上における置換を有するＦｃ突然変異体が含まれる。ある特定の実施形態において、Ｆｃ突然変異体は、次の２つのアミノ酸置換を含む：Ｄ２６５Ａ及びＮ２９７Ａ。ある特定の実施形態において、Ｆｃ突然変異体は、次の２つのアミノ酸置換からなる：Ｄ２６５Ａ及びＮ２９７Ａ。
【０２９５】
ある特定の実施形態において、野生型ヒトＦｃ領域の３２９位（ＥＵ付番）におけるプロリン（Ｐ３２９）は、グリシン若しくはアルギニン、または、ＦｃのＰ３２９とＦｃｇＲＩＩＩのトリプトファン残基Ｗ８７及びＷ１１０との間に形成される、Ｆｃ／Ｆｃγ受容体界面内のプロリンサンドイッチを破壊するのに十分に大きなアミノ酸残基で置換される（Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．：Ｎａｔｕｒｅ  ４０６，２６７−２７３（２０  Ｊｕｌｙ  ２０００））。さらなる実施形態では、Ｆｃ変異形における少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、またはＰ３３１Ｓであり、さらに、別の実施形態では、該少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５ＡまたはヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅであり、これらは全てＥＵ付番に従う（米国特許第８，９６９，５２６号、これはその全体において参照により組み込まれる）。
【０２９６】
ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域のＦｃ変異形を含み、このポリペプチドは、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域のＰ３２９がグリシンで置換されており、Ｆｃ変異形は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５ＡまたはヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅにおいて少なくとも２つのさらなるアミノ酸置換を含み、残基は、ＥＵ付番に従って付番されている（米国特許第８，９６９，５２６号、これはその全体において参照により組み込まれる）。ある特定の実施形態において、Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ（ＥＵ付番）置換を含むポリペプチドは、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＡに対する低減した親和性の示し、野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域を含むポリペプチドによって誘発されるＡＤＣＣの少なくとも２０％にＡＤＣＣを下方調節し、かつ／またはＡＤＣＰを下方調節する（米国特許第８，９６９，５２６号、これはその全体において参照により組み込まれる）。
【０２９７】
具体的な実施形態では、野生型ヒトＦｃポリペプチドのＦｃ変異形を含むポリペプチドは、三重突然変異、すなわちＥＵ付番によるＰｒｏ３２９位におけるアミノ酸置換、Ｌ２３４Ａ突然変異、及びＬ２３５Ａ突然変異（Ｐ３２９／ＬＡＬＡ）を含む（米国特許第８，９６９，５２６号、これはその全体において参照により組み込まれる）。具体的な実施形態では、ポリペプチドは、次のアミノ酸置換を含む：ＥＵ付番によるＰ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ。
【０２９８】
ＦｃＲに対する向上または減少した結合性を有する、ある特定の抗体変異形が記載される。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ  ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたい）。
【０２９９】
ある特定の実施形態において、抗体変異形は、ＡＤＣＣを向上させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、及び／または３３４位（ＥＵ付番）における置換を有する、Ｆｃ領域を含む。
【０３００】
いくつかの実施形態において、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ  ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、変化した（すなわち、向上したかまたは減少したかのいずれかの）Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらす変化が、Ｆｃ領域において行われる。
【０３０１】
増加した半減期及び新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する向上した結合性を有する抗体は、胎児への母体ＩｇＧの移入に関与し（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２４：２４９（１９９４））、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域の結合性を向上させる１つ以上の置換を中に有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃ変異形には、ＥＵ付番によるＦｃ領域残基２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号）を有するものが含まれる。Ｆｃ領域変異形の他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ  ９４／２９３５１も参照されたい。
【０３０２】
ｄ）システイン操作された抗体変異形
ある特定の実施形態において、抗体の１個以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗体、例えば、「ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体」を作り出すことが望ましい場合がある。具体的な実施形態において、置換残基は、抗体の利用できる部位において生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性のチオール基がそれにより抗体の利用できる部位に位置付けられ、それを使用して、薬物部分またはリンカー−薬物中間体等の他の部分に抗体を複合して、本明細書にさらに記載される免疫複合体を作り出しても良い。ある特定の実施形態において、次の残基のうちの任意の１個以上が、システインで置換されても良い：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ付番）、重鎖のＡ１４０（ＥＵ付番）、重鎖のＬ１７４（ＥＵ付番）、重鎖のＹ３７３（ＥＵ付番）、軽鎖のＫ１４９（Ｋａｂａｔ付番）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ付番）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ付番）。具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗体は、ＨＣ−Ａ１４０Ｃ（ＥＵ付番）システイン置換を含む。具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗体は、ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ（Ｋａｂａｔ付番）システイン置換を含む。具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗体は、ＨＣ−Ａ１１８Ｃ（ＥＵ付番）システイン置換を含む。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成されても良い。
【０３０３】
ある特定の実施形態において、本抗体は、以下の重鎖システイン置換のうちの１つを含む。
2022002515.tif 000024
【０３０４】
ある特定の実施形態において、本抗体は、以下の軽鎖システイン置換のうちの１つを含む。
2022002515.tif 000025
【０３０５】
非限定的な例となるｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＣ２重鎖（ＨＣ）Ａ１１８Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、それぞれ配列番号１３２及び１３４の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。非限定的な例となるｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＤ重鎖（ＨＣ）Ａ１１８Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、それぞれ配列番号１３３及び１３４の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。非限定的な例となるｈｕ２２Ｃ１０．ｖ２．７重鎖（ＨＣ）Ａ１１８Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、それぞれ配列番号１３７及び１３８の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。
【０３０６】
例となるＳ４００Ｃシステイン操作された重鎖定常領域は、配列番号１３５に示される。Ｓ４００Ｃシステイン操作された重鎖定常領域は、配列番号１２７に示されるｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＣ２重鎖可変領域のＣ末端に融合されても良い。結果として生じるｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＣ２  ＨＣ  Ｓ４００Ｃ重鎖は、配列番号１３４に示される軽鎖等の、ｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＣ２カッパ軽鎖と対形成されても良い。Ｓ４００Ｃシステイン操作された重鎖定常領域は、配列番号３８に示されるｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＤ重鎖可変領域のＣ末端に融合されても良い。結果として生じるｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＤ  ＨＣ  Ｓ４００Ｃ重鎖は、配列番号１３４に示される軽鎖等の、ｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＤカッパ軽鎖と対形成されても良い。Ｓ４００Ｃシステイン操作された重鎖定常領域は、配列番号５６に示されるｈｕ２２Ｃ１０．ｖ２．７重鎖可変領域のＣ末端に融合されても良い。結果として生じるｈｕ２２Ｃ１０．ｖ２．７  ＨＣ  Ｓ４００Ｃ重鎖は、配列番号１３８に示される軽鎖等の、ｈｕ２２Ｃ１０．ｖ２．７カッパ軽鎖と対形成されても良い。
【０３０７】
非限定的な例となるｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＣ２軽鎖（ＬＣ）Ｋ１４９Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、それぞれ配列番号１３０及び１４０の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。非限定的な例となるｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＣ２軽鎖（ＬＣ）Ｋ１４９Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、それぞれ配列番号１３０及び１４５の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。非限定的な例となるｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＤ軽鎖（ＬＣ）Ｋ１４９Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、それぞれ配列番号１３１及び１４０の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。非限定的な例となるｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＤ軽鎖（ＬＣ）  Ｋ１４９Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、それぞれ配列番号１３１及び１４５の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。非限定的な例となるｈｕ２２Ｃ１０．ｖ２．７軽鎖（ＬＣ）Ｋ１４９Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、それぞれ配列番号１４４及び１４２の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。非限定的な例となるｈｕ２２Ｃ１０．ｖ２．７軽鎖（ＬＣ）Ｋ１４９Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、それぞれ配列番号１４４及び１４７の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。
【０３０８】
非限定的な例となるｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＣ２軽鎖（ＬＣ）Ｖ２０５Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、それぞれ配列番号１３０及び１４１の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。非限定的な例となるｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＣ２軽鎖（ＬＣ）Ｖ２０５Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、それぞれ配列番号１３０及び１４６の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。非限定的な例となるｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＤ軽鎖（ＬＣ）Ｖ２０５Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、それぞれ配列番号１３１及び１４１の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。非限定的な例となるｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９  ｖａｒＤ軽鎖（ＬＣ）Ｖ２０５Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、それぞれ配列番号１３１及び１４６の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。非限定的な例となるｈｕ２２Ｃ１０．ｖ２．７軽鎖（ＬＣ）Ｖ２０５Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、それぞれ配列番号１４４及び１４３の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。非限定的な例となるｈｕ２２Ｃ１０．ｖ２．７軽鎖（ＬＣ）Ｖ２０５Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、それぞれ配列番号１４４及び１４８の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。
【０３０９】
ｅ）抗体誘導体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、容易に入手可能な、追加の非タンパク質性部分を含有するように、さらに修飾されても良い。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレン（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）グリコールホモポリマー、プロリプロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性に起因して、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量のものであっても良く、分岐していても非分岐であっても良い。抗体に結合したポリマーの数は様々であり得、１つを超えるポリマーが結合される場合、それらは、同じ分子または異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、向上させるべき抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が規定の条件下で療法において使用されるかどうか等を含むがこれらに限定されない考慮事項に基づいて、決定することができる。
【０３１０】
別の実施形態において、放射線への曝露によって選択的に加熱されても良い、抗体と非タンパク質性部分との複合体が提供される。一実施形態において、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長のものであって良く、これには、一般の細胞を害さないが、非タンパク質性部分を、抗体−非タンパク質性部分に近位の細胞が殺滅される温度まで加熱する波長が含まれるが、これらに限定されない。
【０３１１】
Ｂ．組み換え法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される、組み換え法及び組成物を使用して産生されても良い。一実施形態において、本明細書に記載される抗Ｂ７−Ｈ４抗体をコードする単離された核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／またはＶＨを含むアミノ酸配列  （例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードしても良い。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのかかる実施形態において、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態において、宿主細胞は、真核性、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体を作製する方法が提供され、本方法は、上記に提供される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することとを含む。
【０３１２】
抗Ｂ７−Ｈ４抗体の組み換え産生については、例えば、上述の抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／または発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。かかる核酸は、慣例の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能である、オリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定され得る。
【０３１３】
抗体コードベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、本明細書に記載される原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、細菌において産生されても良い。細菌内での抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、大腸菌における抗体断片の発現を記載する、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照されたい。）  発現後、抗体は、可溶性画分において細菌細胞ペーストから単離されても良く、またさらに精製されても良い。
【０３１４】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、抗体コードベクターに好適なクローニングまたは発現宿主であり、それには、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全ヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌及び酵母株が含まれる。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
【０３１５】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と併せて、特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために使用され得る、多数のバキュロウイルス株が特定されている。
【０３１６】
植物細胞培養物もまた、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載している）を参照されたい。
【０３１７】
脊椎動物細胞もまた、宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合される哺乳類細胞株が、有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載される２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．  Ｒｅｐｒｏｄ．  ２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されるＴＭ４細胞；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸がん細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ３８３：４４−６８（１９８２）に記載されるＴＲＩ細胞；ＭＲＣ  ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳類宿主細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に好適なある特定の哺乳類宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
【０３１８】
Ｃ．アッセイ
本明細書に提供される抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、当該技術分野で既知の種々のアッセイによって、それらの物理／化学特性及び／または生物活性について特定されるか、スクリーニングされるか、または特徴付けられ得る。
【０３１９】
一態様において、本発明の抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣｏｒｅ（登録商標）、ＦＡＣＳ、またはウェスタンブロット等の既知の方法によって、その抗原結合活性について試験される。
【０３２０】
別の態様において、Ｂ７−Ｈ４への結合に関して、本明細書に記載される抗体のいずれかと競合する抗体を特定するために、競合アッセイを使用しても良い。ある特定の実施形態において、かかる競合抗体は、本明細書に記載される抗体によって結合されるものと同じエピトープ（例えば、直線状または立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例となる方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供されている。
【０３２１】
例となる競合アッセイでは、固定化されたＢ７−Ｈ４が、Ｂ７−Ｈ４に結合する第１の標識抗体（例えば、本明細書に記載される抗体のいずれか）と、Ｂ７−Ｈ４への結合に関して第１の抗体と競合するその能力について試験されている第２の未標識抗体とを含む溶液中で、インキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在しても良い。対照として、固定化されたＢ７−Ｈ４が、第１の標識抗体を含むが第２の未標識抗体を含まない溶液中でインキュベートされる。Ｂ７−Ｈ４への第１の抗体の結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰の未結合抗体が除去され、固定化されたＢ７−Ｈ４に関連する標識の量が測定される。固定化されたＢ７−Ｈ４に関連する標識の量が、対照試料と比べて試験試料中で実質的に低減している場合、それは、第２の抗体がＢ７−Ｈ４への結合に関して第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【０３２２】
Ｄ．免疫複合体
本発明はまた、化学療法剤若しくは化学療法薬、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、若しくは動物起源の酵素活性毒素、またはそれらの断片）、または放射性同位体（すなわち、放射性物質複合体（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ））等の、１つ以上の細胞傷害性薬剤に複合されている、本明細書における抗Ｂ７−Ｈ４抗体を含む、免疫複合体も提供する。
【０３２３】
免疫複合体は、腫瘍を標的とした薬物部分の送達を可能にし、いくつかの実施形態においては、腫瘍中の細胞内蓄積を可能にし、そこでは複合されていない薬物の全身投与が、正常な細胞に対して許容できないレベルの毒性をもたらし得る。（Ｐｏｌａｋｉｓ  Ｐ．（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ５：３８２−３８７）。
【０３２４】
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、強力な細胞傷害性薬物を抗原発現腫瘍細胞に対して標的とし（Ｔｅｉｃｈｅｒ，Ｂ．Ａ．（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ９：９８２−１００４）、それによって、有効性を最大限にし、オフターゲット毒性を最小限にすることにより治療指数を向上させることによって、抗体と細胞傷害性薬物との両方の特性を組み合わせる、標的化学療法分子である（Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．Ｊ．ａｎｄ  Ｓｅｎｔｅｒ  Ｐ．Ｄ．（２００８）Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒ．  １４（３）：１５４−１６９、Ｃｈａｒｉ，Ｒ．Ｖ．（２００８）Ａｃｃ．  Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｓ．４１：９８−１０７。
【０３２５】
本発明のＡＤＣ化合物には、抗がん活性を有するものが含まれる。いくつかの実施形態において、ＡＤＣ化合物には、薬物部分に複合された、すなわち、共有結合された、抗体が含まれる。いくつかの実施形態において、本抗体は、リンカーを通じて薬物部分に共有結合される。本発明の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、有効用量の薬物を腫瘍組織に選択的に送達し、それによって、治療指数（「治療濃度域」）を増加させながら、より高い選択性、すなわちより低い効果的用量を達成することができる。
【０３２６】
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）の薬物部分（Ｄ）は、細胞傷害効果または細胞静止効果を有する任意の化合物、部分、または基を含んでも良い。薬物部分は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合またはインターカレーション、ならびにＲＮＡポリメラーゼ、タンパク質合成、及び／またはトポイソメラーゼの阻害を含むがこれらに限定されない機序によって、その細胞傷害効果及び細胞静止効果を付与し得る。例となる薬物部分には、マイタンシノイド、ドラスタチン、オーリスタチン、カリチアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、ネモルビシン及びその誘導体、ＰＮＵ−１５９６８２、アントラサイクリン、デュオカルマイシン、ビンカアルカロイド、タキサン、トリコテセン、ＣＣ１０６５、カンプトセシン、エリナフィド、ならびに細胞傷害性活性を有するそれらの立体異性体、同配体、類似体、及び誘導体が含まれるが、これらに限定されない。かかる免疫複合体の非限定的な例が、以下にさらに詳細に考察される。
【０３２７】
１．例となる抗体−薬物複合体
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）化合物の例となる実施形態は、腫瘍細胞を標的とする抗体（Ａｂ）、薬物部分（Ｄ）、及びＡｂをＤに結合させるリンカー部分（Ｌ）を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、リジン及び／またはシステイン等の１個以上のアミノ酸残基を介してリンカー部分（Ｌ）に結合する。
【０３２８】
例となるＡＤＣは、式Ｉ、
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐ  Ｉ
を有し、式中、ｐは、１〜約２０である。いくつかの実施形態において、抗体に複合され得る薬物部分の数は、遊離システイン残基の数によって限定される。いくつかの実施形態において、遊離システイン残基は、本明細書に記載される方法によって抗体アミノ酸配列中に導入される。式Ｉの例となるＡＤＣには、１個、２個、３個、または４個の操作されたシステインアミノ酸を有する抗体が含まれるが、これらに限定されない（Ｌｙｏｎ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ（２０１２）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍ．  ５０２：１２３−１３８）。いくつかの実施形態において、１個以上の遊離システイン残基が、操作を使用することなく抗体においてすでに存在しており、その場合、既存の遊離システイン残基を使用して、抗体を薬物に複合しても良い。いくつかの実施形態において、本抗体は、１個以上の遊離システイン残基を生成するために、抗体の複合前に還元条件に曝露される。
【０３２９】
ａ）例となるリンカー
「リンカー」（Ｌ）は、１個以上の薬物部分（Ｄ）を抗体（Ａｂ）に連結させて、式Ｉの抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を形成するために使用することができる、二官能性または多官能性部分である。いくつかの実施形態において、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、薬物及び抗体に共有結合するために反応性官能基を有するリンカーを使用して調製することができる。例えば、いくつかの実施形態において、抗体（Ａｂ）のシステインチオールは、リンカーの反応性官能基または薬物−リンカー中間体との結合を形成して、ＡＤＣを作製することができる。
【０３３０】
一態様において、リンカーは、抗体上に存在する遊離システインと反応して共有結合を形成することができる、官能性を有する。非限定的な例となるかかる反応性官能基には、マレイミド、ハロアセトアミド、α−ハロアセチル、スクシンイミドエステル、４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル等の活性化エステル、無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアネート、及びイソチオシアネートが含まれる。例えば、Ｋｌｕｓｓｍａｎ，ｅｔ  ａｌ（２００４），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １５（４）：７６５−７７３の７６６ページにおける複合方法、及びその中の実施例を参照されたい。
【０３３１】
いくつかの実施形態において、リンカーは、抗体上に存在する求電子基と反応することができる、官能性を有する。例となるかかる求電子基には、アルデヒド基及びケトンカルボニル基が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、リンカーの反応性官能基のヘテロ原子が、抗体上の求電子基と反応し、抗体単位との共有結合を形成することができる。非限定的な例となるかかる反応性官能基には、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、及びアリールヒドラジドが含まれるが、これらに限定されない。
【０３３２】
リンカーは、１つ以上のリンカー構成要素を含んでも良い。例となるリンカー構成要素には、６−マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）、バリン−シトルリン（「ｖａｌ−ｃｉｔ」または「ＶＣ」）、アラニン−フェニルアラニン（「ａｌａ−ｐｈｅ」）、Ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢ」）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（「ＳＰＰ」）、及び４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート（「ＭＣＣ」）が含まれる。種々のリンカー構成要素が当該技術分野で既知であり、そのいくつかを以下に記載する。
【０３３３】
リンカーは、薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であっても良い。非限定的な例となる切断可能なリンカーには、酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾンを含む）、プロテアーゼ感受性（例えば、ペプチダーゼ感受性）リンカー、光分解性リンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）、ＵＳ  ５２０８０２０）が含まれる。
【０３３４】
ある特定の実施形態において、リンカーは、次の式ＩＩ、
2022002515.tif 000026
を有し、式中、Ａは、「ストレッチャー単位」であり、ａは、０〜１の整数であり、Ｗは、「アミノ酸単位」であり、ｗは、０〜１２の整数であり、Ｙは、「スペーサ単位」であり、ｙは、０、１、または２であり、Ａｂ、Ｄ、及びｐは、式Ｉについて上記に定義した通りである。かかるリンカーの例となる実施形態は、米国特許第７，４９８，２９８号に記載され、これは参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０３３５】
いくつかの実施形態において、リンカー構成要素は、抗体を別のリンカー構成要素または薬物部分に結合させる「ストレッチャー単位」を含む。非限定的な例となるストレッチャー単位が以下に示される（ここで波線は、抗体、薬物、または追加のリンカー構成要素への共有結合の部位を示す）。
2022002515.tif 000027
【０３３６】
いくつかの実施形態において、リンカーは、ＷＯ２０１５／０９５２２７、ＷＯ２０１５／０９５１２４、またはＷＯ２０１５／０９５２２３に記載されるもの等のペプチド模倣リンカーであっても良く、これらの文書は、その全体において参照により本明細書に組み込まれる。
【０３３７】
いくつかの実施形態において、リンカー構成要素は、「アミノ酸単位」を含む。いくつかのかかる実施形態において、アミノ酸単位は、プロテアーゼによるリンカーの切断を可能にし、それによって、リソソーム酵素等の細胞内プロテアーゼへの曝露時に免疫複合体からの薬物の放出を容易にする（Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２１：７７８−７８４）。例となるアミノ酸単位には、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、及びペンタペプチドが含まれるが、これらに限定されない。例となるジペプチドには、バリン−シトルリン（ｖｃまたはｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｆまたはａｌａ−ｐｈｅ）、フェニルアラニン−リジン（ｆｋまたはｐｈｅ−ｌｙｓ）、フェニルアラニン−ホモリジン（ｐｈｅ−ｈｏｍｏｌｙｓ）、及びＮ−メチル−バリン−シトルリン（Ｍｅ−ｖａｌ−ｃｉｔ）が含まれるが、これらに限定されない。例となるトリペプチドには、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｖａｌ−ｃｉｔ）及びグリシン−グリシン−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）が含まれるが、これらに限定されない。アミノ酸単位は、自然発生アミノ酸残基、及び／または微量アミノ酸、及び／またはシトルリン等の非自然発生アミノ酸類似体を含んでも良い。アミノ酸単位は、特定の酵素、例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ、及びＤ、またはプラスミンプロテアーゼによる、酵素的切断のために設計し、最適化することができる。
【０３３８】
いくつかの実施形態において、リンカー構成要素は、直接か、またはストレッチャー単位及び／若しくはアミノ酸単位を介してかのいずれかで、抗体を薬物部分に連結させる、「スペーサ」単位を含む。スペーサ単位は、「自壊性」または「非自壊性」であり得る。「非自壊性」スペーサ単位は、ＡＤＣの切断時にスペーサ単位の一部または全てが薬物部分に結合したままであるものである。非自壊性スペーサ単位の例としては、グリシンスペーサ単位及びグリシン−グリシンスペーサ単位が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、腫瘍細胞関連プロテアーゼによる、グリシン−グリシンスペーサ単位を含有するＡＤＣの酵素的切断は、ＡＤＣの残りの部分からのグリシン−グリシン−薬物部分の放出をもたらす。いくつかのかかる実施形態において、グリシン−グリシン−薬物部分は、腫瘍細胞内で加水分解ステップを受け、故にグリシン−グリシンスペーサ単位を薬物部分から切断する。
【０３３９】
「自壊性」スペーサ単位は、薬物部分の放出を可能にする。ある特定の実施形態において、リンカーのスペーサ単位は、ｐ−アミノベンジル単位を含む。いくつかのかかる実施形態において、ｐ−アミノベンジルアルコールは、アミド結合を介してアミノ酸単位に結合し、カルバミン酸塩、メチルカルバミン酸塩、または炭酸塩が、ベンジルアルコールと薬物との間に作られる（Ｈａｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｔｈｅｒ．  Ｐａｔｅｎｔｓ（２００５）１５：１０８７−１１０３）。いくつかの実施形態において、スペーサ単位は、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）である。いくつかの実施形態において、自壊性リンカーを含むＡＤＣは、構造、
2022002515.tif 000028
を有し、式中、Ｑは、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロ、または−シノであり、ｍは、０〜４の範囲の整数であり、ｐは、１〜約２０の範囲である。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜１０、１〜７、１〜５、または１〜４の範囲である。
【０３４０】
自壊性スペーサの他の例としては、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体等の、ＰＡＢ基と電子的に同様である芳香族化合物（米国特許第７，３７５，０７８号、Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔ．  ９：２２３７）及びオルト−またはパラ−アミノベンジルアセタールが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、置換及び非置換４−アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２：２２３）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］及びビシクロ［２．２．２］環系（Ｓｔｏｒｍ  ｅｔ  ａｌ（１９７２）Ｊ．Ａｍｅｒ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  ９４：５８１５）、ならびに２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙ，ｅｔ  ａｌ  （１９９０）Ｊ．Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ５５：５８６７）等の、アミド結合加水分解時に環化を経るスペーサを使用することができる。グリシン残基のα−炭素への薬物の連結は、ＡＤＣにおいて有用であり得る自壊性スペーサの別の例である（Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ（１９８４）Ｊ．Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２７：１４４７）。
【０３４１】
いくつかの実施形態において、リンカーＬは、分岐する多官能性リンカー部分を介した、抗体への１つを超える薬物部分の共有結合のための、樹状型リンカーであり得る（Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２：２２１３−２２１５、Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １１：１７６１−１７６８）。樹状リンカーは、ＡＤＣの効力に関連する、薬物対抗体のモル比、すなわち、負荷を増加させることができる。故に、抗体が１個しか反応性システインチオール基を有しないところに、多数の薬物部分が、樹状リンカーを介して結合され得る。
【０３４２】
非限定的な例となるリンカーが、式ＩのＡＤＣの関連において以下に示される。
2022002515.tif 000029
【０３４３】
さらなる非限定的な例となるＡＤＣは、構造、
2022002515.tif 000030
を含み、
式中、Ｘは、
2022002515.tif 000031
各Ｒは、独立して、ＨまたはＣ１-Ｃ６アルキルであり、ｎは、１〜１２である。
【０３４４】
典型的に、ペプチド型リンカーは、２個以上のアミノ酸及び／またはペプチド断片の間にペプチド結合を形成することによって、調製することができる。かかるペプチド結合は、例えば、液相合成法に従って調製され得る（例えば、Ｅ．Ｓｃｈｒоｄｅｒ  ａｎｄ  Ｋ．Ｌｕｂｋｅ（１９６５）“Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐｐ  ７６−１３６，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）。
【０３４５】
いくつかの実施形態において、リンカーは、溶解度及び／または反応性を調節する基で置換される。非限定的な例として、スルホネート（−ＳＯ３−）またはアンモニウム等の荷電置換基は、リンカー試薬の水溶性を増加させ、抗体及び／若しくは薬物部分とのリンカー試薬のカップリング反応を容易にし得るか、またはＡＤＣを調製するために用いられる合成経路に応じて、ＤとのＡｂ−Ｌ（抗体−リンカー中間体）、若しくはＡｂとのＤ−Ｌ（薬物−リンカー中間体）のカップリング反応を容易にし得る。いくつかの実施形態において、リンカーの一部分が抗体にカップリングされ、リンカーの一部分が薬物にカップリングされ、次いでＡｂ−（リンカー部分）ａが薬物−（リンカー部分）ｂにカップリングされて、式ＩのＡＤＣを形成する。いくつかのかかる実施形態において、抗体は、１つを超える（リンカー部分）ａ置換基を含み、その結果、１つを超える薬物が式ＩのＡＤＣにおいて抗体にカップリングされる。
【０３４６】
本発明の化合物は、次のリンカー試薬、すなわちビス−マレイミド−トリオキシエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、Ｎ−（β−マレイミドプロピルオキシ）−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、Ｎ−（ε−マレイミドカプロイルオキシ）スクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、Ｎ−［γ−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）、１，６−ヘキサン−ビス−ビニルスルホン（ＨＢＶＳ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロエート）（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、スクシンイミジル３−（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、スクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（ＳＭＰＢ）、スクシンイミジル６−［（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート］（ＳＭＰＨ）、イミノチオラン（ＩＴ）、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ならびにスクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート（ＳＶＳＢ）を用いて、また次のビス−マレイミド試薬、すなわちジチオビスマレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４−ビスマレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４ビスマレイミジル−２，３−ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビスマレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、ＢＭ（ＰＥＧ）２（以下に示される）、及びＢＭ（ＰＥＧ）３（以下に示される）；イミドエステルの二機能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ等）、活性エステル（ジスクシンイミジルスベレート等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド等）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムンゾイル等）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（トルエン２，６−ジイソシアネート等）、及びビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン等）を含めて、調製される、ＡＤＣを明示的に企図するが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ビス−マレイミド試薬は、チオール含有薬物部分、リンカー、またはリンカー−薬物中間体への、抗体におけるシステインのチオール基の結合を可能にする。チオール基と反応性である他の官能基には、ヨードアセトアミド、ブロモアセトアミド、ビニルピリジン、ジスルフィド、ピリジルジスルフィド、イソシアネート、及びイソチオシアネートが含まれるが、これらに限定されない。
2022002515.tif 000032
【０３４７】
ある特定の有用なリンカー試薬は、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．  （Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．（Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）等の、種々の商業的供給源から得るか、または当該技術分野において、例えば、Ｔｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｊ．Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ６７：１８６６−１８７２、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ，ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，３８：５２５７−６０、Ｗａｌｋｅｒ，Ｍ．Ａ．（１９９５）Ｊ．Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ６０：５３５２−５３５５、Ｆｒｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  ７：１８０−１８６、ＵＳ  ６２１４３４５、ＷＯ  ０２／０８８１７２、ＵＳ  ２００３１３０１８９、ＵＳ２００３０９６７４３、ＷＯ  ０３／０２６５７７、ＷＯ  ０３／０４３５８３、及びＷＯ  ０４／０３２８２８に記載される手順に従って、合成することができる。
【０３４８】
炭素−１４標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性ヌクレオチドの複合のための、例となるキレート剤である。例えば、ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。
【０３４９】
ｂ）例となる薬物部分
（１）マイタンシン及びマイタンシノイド
いくつかの実施形態において、免疫複合体は、１個以上のマイタンシノイド分子に複合される抗体を含む。マイタンシノイドは、マイタンシンの誘導体であり、チューブリン重合を阻害することによって作用する有糸分裂阻害剤である。マイタンシンは、東アフリカ潅木のＭａｙｔｅｎｕｓ  ｓｅｒｒａｔａから最初に単離された（米国特許第３８９６１１１号）。その後、ある特定の微生物もまた、マイタンシノール及びＣ−３マイタンシノールエステル等のマイタンシノイドを産生することが発見された（米国特許第４，１５１，０４２号）。合成マイタンシノイドは、例えば、米国特許第４，１３７，２３０号、同第４，２４８，８７０号、同第４，２５６，７４６号、同第４，２６０，６０８号、同第４，２６５，８１４号、同第４，２９４，７５７号、同第４，３０７，０１６号、同第４，３０８，２６８号、同第４，３０８，２６９号、同第４，３０９，４２８号、同第４，３１３，９４６号、同第４，３１５，９２９号、同第４，３１７，８２１号、同第４，３２２，３４８号、同第４，３３１，５９８号、同第４，３６１，６５０号、同第４，３６４，８６６号、同第４，４２４，２１９号、同第４，４５０，２５４号、同第４，３６２，６６３号、及び同第４，３７１，５３３号に開示されている。
【０３５０】
マイタンシノイド薬物部分は、（ｉ）発酵または発酵産物の化学修飾若しくは誘導体化による調製に比較的利用しやすく、（ｉｉ）非ジスルフィドリンカーを介した抗体への複合に好適な官能基を用いた誘導体化に適しており、（ｉｉｉ）血漿中で安定であり、（ｉｖ）多様な腫瘍細胞株に対して有効であるため、抗体−薬物複合体において魅力的な薬物部分である。
【０３５１】
マイタンシノイド薬物部分としての使用に好適なある特定のマイタンシノイドは、当該技術分野において既知であり、既知の方法によって天然源から単離すること、または遺伝子操作技法を使用して産生することができる（例えば、Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ（２００２）ＰＮＡＳ  ９９：７９６８−７９７３を参照されたい）。マイタンシノイドはまた、既知の方法によって合成的に調製されても良い。
【０３５２】
例となるマイタンシノイド薬物部分には、例えば、Ｃ−１９−デクロロ（米国特許  第４２５６７４６号）（例えば、アンサマイトシン（ａｎｓａｍｙｔｏｃｉｎ）Ｐ２の水素化アルミニウムリチウム還元により調製される）；Ｃ−２０−ヒドロキシ（またはＣ−２０−デメチル）＋／−Ｃ−１９−デクロロ（米国特許  第４３６１６５０号及び同第４３０７０１６号）（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ若しくはＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓを使用した脱メチル化、またはＬＡＨを使用した脱塩素反応により調製される）；及びＣ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ（−ＯＣＯＲ）、＋／−デクロロ（米国特許  第４，２９４，７５７号）（例えば、塩化アシルを使用したアシル化により調製される）等の、修飾芳香族環を有するもの、ならびに、芳香族環の他の位置における修飾を有するものが含まれるが、これらに限定されない。
【０３５３】
例となるマイタンシノイド薬物部分にはまた、例えば、Ｃ−９−ＳＨ（米国特許  第４４２４２１９号）（例えば、マイタンシノールとＨ２ＳまたはＰ２Ｓ５との反応により調製される）；Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ２  ＯＲ）（ＵＳ  ４３３１５９８）；Ｃ−１４−ヒドロキシメチルまたはアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２ＯＡｃ）（米国特許  第４４５０２５４号）（例えば、Ｎｏｃａｒｄｉａから調製される）；Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ（ＵＳ  ４３６４８６６）（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓによるマイタンシノールの変換により調製される）；Ｃ−１５−メトキシ（米国特許  第４３１３９４６号及び同第４３１５９２９号）（例えば、Ｔｒｅｗｉａ  ｎｕｄｌｆｌｏｒａから単離される）；Ｃ−１８−Ｎ−デメチル（米国特許  第４３６２６６３号及び同第４３２２３４８号）（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓによるマイタンシノールの脱メチル化により調製される）；及び４，５−デオキシ（ＵＳ  ４３７１５３３）（例えば、マイタンシノールの三塩化チタン／ＬＡＨ還元により調製される）等の修飾を有するものも含まれる。
【０３５４】
マイタンシノイド化合物上の多くの位置が、結合位置として有用である。例えば、従来のカップリング技法を使用したヒドロキシル基との反応によって、エステル結合を形成しても良い。いくつかの実施形態において、反応は、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４位、ヒドロキシル基で修飾されたＣ−１５位、及びヒドロキシル基を有するＣ−２０位において起こっても良い。いくつかの実施形態において、結合は、マイタンシノールまたはマイタンシノール類似体のＣ−３位において形成される。
【０３５５】
マイタンシノイド薬物部分には、構造、
2022002515.tif 000033
を有するものが含まれ、式中、波線は、マイタンシノイド薬物部分の硫黄原子とＡＤＣのリンカーとの共有結合を示す。各Ｒは、独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであっても良い。アミド基を硫黄原子に結合しているアルキレン鎖は、メタニル、エタニル、またはプロピルであっても良く、すなわち、ｍは、１、２、または３である（ＵＳ  ６３３４１０、ＵＳ  ５２０８０２０、Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３）。
【０３５６】
マイタンシノイド薬物部分のあらゆる立体異性体、すなわち、キラル炭素におけるＲ構成とＳ構成との任意の組み合わせが、本発明のＡＤＣに企図される（ＵＳ  ７２７６４９７、ＵＳ  ６９１３７４８、ＵＳ  ６４４１１６３、ＵＳ  ６３３４１０（ＲＥ３９１５１）、ＵＳ  ５２０８０２０、Ｗｉｄｄｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｊ．Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ４９：４３９２−４４０８、これらは、それらの全体において参照により組み込まれる）。いくつかの実施形態において、マイタンシノイド薬物部分は、次の立体化学を有する。
2022002515.tif 000034
【０３５７】
マイタンシノイド薬物部分の例となる実施形態には、次の構造を有するＤＭ１、ＤＭ３、及びＤＭ４が含まれるが、これらに限定されず、
2022002515.tif 000035
式中、波線は、薬物の硫黄原子と抗体−薬物複合体のリンカー（Ｌ）との共有結合を示す。
【０３５８】
他の例となるマイタンシノイド抗体−薬物複合体は、次の構造及び略語を有する（式中、Ａｂは抗体であり、ｐは、１〜約２０である。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜１０であるか、ｐは、１〜７であるか、ｐは、１〜５であるか、またはｐは、１〜４である）。
2022002515.tif 000036
【０３５９】
ＤＭ１がＢＭＰＥＯリンカーを介して抗体のチオール基に結合している例となる抗体−薬物複合体は、次の構造及び略語を有し、
2022002515.tif 000037
式中、Ａｂは抗体であり、ｎは、０、１、または２であり、ｐは、１〜約２０である。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜１０であるか、ｐは、１〜７であるか、ｐは、１〜５であるか、またはｐは、１〜４である。
【０３６０】
マイタンシノイドを含有する免疫複合体、それを作製する方法、及びそれらの治療用とは、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号及び同第５，４１６，０６４号、ＵＳ  ２００５／０２７６８１２  Ａ１、ならびに欧州特許第ＥＰ  ０  ４２５  ２３５  Ｂ１号に開示されており、これらの開示内容は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。また、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３（１９９６）、及びＣｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）も参照されたい。
【０３６１】
いくつかの実施形態において、抗体−マイタンシノイド複合体は、抗体またはマイタンシノイド分子のいずれの生物活性も著しく減少させることなく、抗体をマイタンシノイド分子に化学結合させることによって調製され得る。例えば、米国特許第５，２０８，０２０号を参照されたい（その開示内容は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる）。いくつかの実施形態において、抗体分子１個当たり平均３〜４個のマイタンシノイド分子が複合されているＡＤＣは、抗体の機能または可溶性に悪影響を与えることなく、標的細胞の細胞傷害性の向上における有効性を示した。いくつかの事例では、毒素／抗体の１個の分子でさえ、裸の抗体の使用と比べて細胞傷害性を向上させると予想される。
【０３６２】
抗体−マイタンシノイド複合体を作製するための例となる結合基には、例えば、本明細書に記載されるもの、ならびに、米国特許第５２０８０２０号、欧州特許第０  ４２５  ２３５  Ｂ１号、Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）、ＵＳ  ２００５／０２７６８１２  Ａ１、及びＵＳ  ２００５／０１６９９３  Ａ１に開示されているものが含まれ、これらの開示内容は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０３６３】
（２）オーリスタチン及びドラスタチン
薬物部分には、ドラスタチン、オーリスタチン、ならびにそれらの類似体及び誘導体が含まれる（ＵＳ  ５６３５４８３、ＵＳ  ５７８０５８８、ＵＳ  ５７６７２３７、ＵＳ  ６１２４４３１）。オーリスタチンは、海洋軟体動物化合物ドラスタチン−１０の誘導体である。いずれかの特定の理論に束縛されることを意図するものではないが、ドラスタチン及びオーリスタチンは、微小管動態、ＧＴＰ加水分解、ならびに核及び細胞の分裂に干渉し（Ｗｏｙｋｅ  ｅｔ  ａｌ（２００１）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  ４５（１２）：３５８０−３５８４）、抗がん活性（ＵＳ  ５６６３１４９）及び抗真菌活性（Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  ４２：２９６１−２９６５）を有することが示されている。ドラスタチン／オーリスタチン薬物部分は、ペプチド性薬物部分のＮ（アミノ）末端またはＣ（カルボキシル）末端を介して抗体に結合されても良い（ＷＯ  ０２／０８８１７２、Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２１（７）：７７８−７８４、Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｂｌｏｏｄ  １０２（４）：１４５８−１４６５）。
【０３６４】
例となるオーリスタチンの実施形態には、開示内容が全体において参照により本明細書に明示的に組み込まれるＵＳ  ７４９８２９８及びＵＳ  ７６５９２４１に開示されている、Ｎ末端結合したモノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦが含まれ、
2022002515.tif 000038
式中、ＤＥ及びＤＦの波線は、抗体または抗体−リンカー構成要素への共有結合部位を示し、かつ、各位置において、独立して、
Ｒ２は、Ｈ及びＣ１−Ｃ８アルキルから選択され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環、及びＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環、及びＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され、
Ｒ５は、Ｈ及びメチルから選択されるか、または
Ｒ４及びＲ５は一緒に、炭素環式環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、式中、Ｒａ及びＲｂは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、及びＣ３−Ｃ８炭素環から選択され、ｎは、２、３、４、５、及び６から選択され、
Ｒ６は、Ｈ及びＣ１−Ｃ８アルキルから選択され、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環、及びＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され、
各Ｒ８は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、及びＯ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され、
Ｒ９は、Ｈ及びＣ１−Ｃ８アルキルから選択され、
Ｒ１０は、アリールまたはＣ３−Ｃ８複素環から選択され、
Ｚは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、またはＮＲ１２であり、式中、Ｒ１２は、Ｃ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され、
ｍは、１〜１０００の範囲の整数であり、
Ｒ１３は、Ｃ２−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１４は、ＨまたはＣ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１５の各事例は、独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１６の各事例は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１８は、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８複素環）、及び−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）から選択され、
ｎは、０〜６の範囲の整数である。
【０３６５】
一実施形態において、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ７は、独立して、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ５は、−Ｈまたはメチルである。例となる実施形態において、Ｒ３及びＲ４は各々、イソプロピルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルである。
【０３６６】
なおも別の実施形態では、Ｒ２及びＲ６は各々、メチルであり、Ｒ９は−Ｈである。
【０３６７】
さらに別の実施形態では、Ｒ８の各事例は、−ＯＣＨ３である。
【０３６８】
例となる実施形態において、Ｒ３及びＲ４は各々、イソプロピルであり、Ｒ２及びＲ６は各々、メチルであり、Ｒ５  は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ８の各事例は−ＯＣＨ３であり、Ｒ９は−Ｈである。
【０３６９】
一実施形態において、Ｚは、−Ｏ−または−ＮＨ−である。
【０３７０】
一実施形態において、Ｒ１０は、アリールである。
【０３７１】
例となる実施形態において、Ｒ１０は、−フェニルである。
【０３７２】
例となる実施形態において、Ｚが−Ｏ−である場合、Ｒ１１は、−Ｈ、メチル、またはｔ−ブチルである。
【０３７３】
一実施形態において、Ｚが−ＮＨである場合、Ｒ１１は、−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、式中、Ｒ１５は、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２であり、Ｒ１６は、−Ｃ１−Ｃ８アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨである。
【０３７４】
別の実施形態では、Ｚが−ＮＨである場合、Ｒ１１は、−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、式中、Ｒ１５は、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈである。
【０３７５】
式ＤＥの例となるオーリスタチンの実施形態は、ＭＭＡＥであり、式中、波線は、抗体−薬物複合体のリンカー（Ｌ）への共有結合を示す。
2022002515.tif 000039
【０３７６】
式ＤＦの例となるオーリスタチンの実施形態は、ＭＭＡＦであり、式中、波線は、抗体−薬物複合体のリンカー（Ｌ）への共有結合を示す。
2022002515.tif 000040
【０３７７】
他の例となる実施形態には、ペンタペプチドオーリスタチン薬物部分のＣ末端にフェニルアラニンカルボキシ修飾を有するモノメチルバリン化合物（ＷＯ  ２００７／００８８４８）、及びペンタペプチドオーリスタチン薬物部分のＣ末端にフェニルアラニン側鎖修飾を有するモノメチルバリン化合物（ＷＯ  ２００７／００８６０３）が含まれる。
【０３７８】
ＭＭＡＥまたはＭＭＡＦ及び種々のリンカー構成要素を含む、式ＩのＡＤＣの非限定的な例となる実施形態は、次の構造及び略語を有する（式中、「Ａｂ」は抗体であり、ｐは、１〜約８であり、「Ｖａｌ−Ｃｉｔ」は、バリン−シトルリンジペプチドであり、「Ｓ」は、硫黄原子である。
2022002515.tif 000041
【０３７９】
ＭＭＡＦ及び種々のリンカー構成要素を含む、式ＩのＡＤＣの非限定的な例となる実施形態は、Ａｂ−ＭＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ及びＡｂ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦをさらに含む。タンパク分解性に切断可能でないリンカーによって抗体に結合しているＭＭＡＦを含む免疫複合体は、タンパク分解性に切断可能なリンカーによって抗体に結合しているＭＭＡＦを含む免疫複合体と同等の活性を保有することが示されている（Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  １７：１１４−１２４）。いくつかのかかる実施形態において、薬物放出は、細胞内での抗体分解によってもたらされると考えられる。
【０３８０】
典型的には、ペプチドベースの薬物部分は、２個以上のアミノ酸及び／またはペプチド断片間にペプチド結合を形成することによって調製可能である。かかるペプチド結合は、例えば、液相合成法によって調製することができる（例えば、Ｅ．  Ｓｃｈｒｏｄｅｒ  ａｎｄ  Ｋ．  Ｌuｂｋｅ，“Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐｐ  ７６−１３６，１９６５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい）。オーリスタチン／ドラスタチン薬物部分は、いくつかの実施形態において、ＵＳ  ７４９８２９８、ＵＳ  ５６３５４８３、ＵＳ  ５７８０５８８、Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ（１９８９）Ｊ．Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １１１：５４６３−５４６５、Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １３：２４３−２７７、Ｐｅｔｔｉｔ，Ｇ．Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９６，７１９−７２５、Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｊ．Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．  １  ５：８５９−８６３、及びＤｏｒｏｎｉｎａ（２００３）Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２１（７）：７７８−７８４の方法に従って調製されても良い。
【０３８１】
いくつかの実施形態において、式ＤＥのオーリスタチン／ドラスタチン薬物部分（ＭＭＡＥ等）、及び式ＤＦのオーリスタチン／ドラスタチン薬物部分（ＭＭＡＦ等）、ならびに薬物−リンカー中間体及びそれらの誘導体、例えばＭＣ−ＭＭＡＦ、ＭＣ−ＭＭＡＥ、ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、及びＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ等は、ＵＳ  ７４９８２９８、Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  １７：１１４−１２４、及びＤｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２１：７７８−７８４に記載の方法を使用して調製され、次いで目的の抗体に複合されても良い。
【０３８２】
（３）カリチアマイシン
いくつかの実施形態において、本免疫複合体は、１個以上のカリチアマイシン分子に複合される抗体を含む。抗体のカリチアマイシンファミリー及びその類似体は、ピコモルを下回る濃度での二本鎖ＤＮＡ切断を産生することができる（Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：３３３６−３３４２、Ｌｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８：２９２５−２９２８）。カリチアマイシンは、細胞内作用部位を有するが、ある特定の例では、原形質膜を容易には横断しない。したがって、抗体媒介性の内在化を介したこれらの薬剤の取り込みは、いくつかの実施形態において、その細胞障害効果を大きく向上させ得る。カリチアマイシン薬物部分を用いて抗体−薬物複合体を調製する非限定的な例となる方法は、例えば、ＵＳ  ５７１２３７４、ＵＳ  ５７１４５８６、ＵＳ  ５７３９１１６、及びＵＳ  ５７６７２８５に記載されている。
【０３８３】
いくつかの実施形態において、抗体に複合されたカリチアマイシン薬物部分は、式、
2022002515.tif 000042
を有する化合物であり、式中、Ｘは、ＢｒまたはＩであり、Ｌは、リンカーであり、Ｒは、水素、Ｃ１−６アルキル、または−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１−６アルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１−６  アルキルである。
【０３８４】
いくつかの実施形態において、ＸはＢｒであり、Ｒａは水素であり、Ｒはイソプロピルである。
【０３８５】
他の実施形態において、ＸはＢｒであり、Ｒａは水素であり、Ｒはエチルである。
【０３８６】
他の実施形態において、ＸはＩであり、Ｒａは水素であり、Ｒはイソプロピルである。
【０３８７】
他の実施形態において、ＸはＩであり、Ｒａ  は水素であり、Ｒはエチルである。
【０３８８】
いくつかの実施形態において、ＸはＢｒであり、Ｒａは水素であり、Ｒは−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である。
【０３８９】
他の実施形態において、ＸはＩであり、Ｒａは水素であり、Ｒは−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である。
【０３９０】
他の実施形態において、ＸはＩであり、Ｒａはエチルであり、Ｒは−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である。
【０３９１】
他の実施形態において、ＸはＢｒであり、Ｒａはエチルであり、Ｒは−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である。
【０３９２】
（４）ピロロベンゾジアゼピン
いくつかの実施形態において、ＡＤＣは、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）を含む。いくつかの実施形態において、ＰＤＢ二量体は、具体的なＤＮＡ配列を認識し、それに結合する。天然産物アントラマイシンであるＰＢＤは、１９６５年に最初に報告された（Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９６５）Ｊ．Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，８７：５７９３−５７９５、Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９６５）Ｊ．Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，８７：５７９１−５７９３）。それ以来、自然発生及び類似体の両方の、三環式ＰＢＤ足場の二量体を含む、いくつかのＰＢＤが、報告されている（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｖ．  １９９４，４３３−４６５（ＵＳ  ６８８４７９９、ＵＳ  ７０４９３１１、ＵＳ  ７０６７５１１、ＵＳ  ７２６５１０５、ＵＳ  ７５１１０３２、ＵＳ  ７５２８１２６、ＵＳ  ７５５７０９９）。いずれかの特定の理論に束縛されることを意図するものではないが、二量体構造は、Ｂ型ＤＮＡの副溝との等螺旋性（ｉｓｏｈｅｌｉｃｉｔｙ）に適切な三次元形状を付与し、結合部位において滑り嵌めをもたらすと考えられている（Ｋｏｈｎ，Ｉｎ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ＩＩＩ．  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３−１１（１９７５）、Ｈｕｒｌｅｙ  ａｎｄ  Ｎｅｅｄｈａｍ−ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒ，（１９８６）Ａｃｃ．  Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｓ．，１９：２３０−２３７）。Ｃ２アリール置換基を有する二量体ＰＢＤ化合物は、細胞傷害性薬剤として有用であることが示されている（Ｈａｒｔｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７０（１７）：６８４９−６８５８；Ａｎｔｏｎｏｗ  （２０１０）  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ５３（７）：２９２７−２９４１、Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ（２００９）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １９（２２）：６４６３−６４６６）。
【０３９３】
いくつかの実施形態において、ＰＢＤ化合物は、インビボで除去可能な窒素保護基を用いてＮ１０位にてそれらを保護することによって、プロドラッグとして用いることができる（ＷＯ  ００／１２５０７、ＷＯ  ２００５／０２３８１４）。
【０３９４】
ＰＢＤは、抗体に複合されており、結果として生じるＡＤＣは、抗がん特性を有することが示されている（ＵＳ  ２０１０／０２０３００７）。ＰＢＤ二量体上の非限定的な例となる結合部位には、５員のピロロ環、ＰＢＤ単位の間のテザー、及びＮ１０−Ｃ１１イミン基が含まれる（ＷＯ  ２００９／０１６５１６、ＵＳ  ２００９／３０４７１０、ＵＳ  ２０１０／０４７２５７、ＵＳ  ２００９／０３６４３１、ＵＳ  ２０１１／０２５６１５７、ＷＯ  ２０１１／１３０５９８）。
【０３９５】
ＡＤＣの非限定的な例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ、
2022002515.tif 000043
のもの、ならびにその塩及び溶媒和物であり、式中、
波線は、リンカーへの共有結合部位を示し、
点線は、Ｃ１とＣ２またはＣ２とＣ３の間の二重結合の任意の存在を示し、
Ｒ２は、独立して、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ、及びＣＯＲから選択され、任意にハロまたはジハロからさらに選択され、式中、ＲＤは、独立して、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、及びハロから選択され、
Ｒ６及びＲ９は、独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから選択され、
Ｒ７は、独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから選択され、
Ｑは、独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮＨから選択され、
Ｒ１１は、Ｈ、若しくはＲであるか、またはＱがＯである場合、ＳＯ３Ｍであるかのいずれかであり、式中、Ｍは、金属陽イオンであり、
Ｒ及びＲ’は、各々独立して、任意に置換されるＣ１−８アルキル、Ｃ１−１２  アルキル、Ｃ３−８  ヘテロシクリル、Ｃ３−２０複素環、及びＣ５−２０  アリール基から選択され、任意に基ＮＲＲ’との関連で、Ｒ及びＲ’は、それらが結合する窒素原子と一緒に、任意に置換される４員、５員、６員、または７員の複素環式環を形成し、
Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９、及びＲ１７は、それぞれＲ２、Ｒ６、Ｒ９、及びＲ７について定義される通りであり、
Ｒ″は、Ｃ３−１２  アルキレン基であり、その鎖は、１個以上のヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｈ）、ＮＭｅ、及び／または芳香族環、例えば、ベンゼンまたはピリジンによって分断され得、それらの環は、任意に置換されており、
Ｘ及びＸ’は、独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮ（Ｈ）から選択される。
【０３９６】
いくつかの実施形態において、Ｒ及びＲ’は、各々独立して、任意に置換されるＣ１−１２アルキル、Ｃ３−２０  複素環、及びＣ５−２０  アリール基から選択され、任意に基ＮＲＲ’との関連で、Ｒ及びＲ’は、それらが結合する窒素原子と一緒に、任意に置換される４員、５員、６員、または７員の複素環式環を形成し、
【０３９７】
いくつかの実施形態において、Ｒ９  及びＲ１９は、Ｈである。
【０３９８】
いくつかの実施形態において、Ｒ６及びＲ１６は、Ｈである。
【０３９９】
いくつかの実施形態において、Ｒ７及びＲ１７  は両方とも、ＯＲ７Ａであり、式中、Ｒ７Ａ  は、任意に置換されるＣ１−４  アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ７ＡはＭｅである。いくつかの実施形態において、Ｒ７Ａはは、Ｃｈ２Ｐｈであり、式中、Ｐｈは、フェニル基である。
【０４００】
いくつかの実施形態において、Ｘは、Ｏである。
【０４０１】
いくつかの実施形態において、Ｒ１１は、Ｈである。
【０４０２】
いくつかの実施形態において、各単量体単位においてＣ２とＣ３との間に二重結合が存在する。
【０４０３】
いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２は、独立して、Ｈ及びＲから選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２  は、独立して、Ｒである。いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２  は、独立して、任意に置換されるＣ５−２０アリールまたはＣ５−７アリールまたはＣ８−１０アリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２  は、独立して、任意に置換されたフェニル、チエニル、ナフチル、ピリジル、キノリニル、またはイソキノリニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２は、独立して、＝Ｏ、＝ＣＨ２、＝ＣＨ−ＲＤ、及び＝Ｃ（ＲＤ）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２は、各々、＝ＣＨ２である。いくつかの実施形態において、Ｒ２  及びＲ１２  は、各々、Ｈである。いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２  は、各々、＝Ｏである。いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２  は、各々、＝ＣＦ２である。いくつかの実施形態において、Ｒ２及び／またはＲ１２は、独立して、＝Ｃ（ＲＤ）２である。いくつかの実施形態において、Ｒ２  及び／またはＲ１２は、独立して、＝ＣＨ−ＲＤである。
【０４０４】
いくつかの実施形態において、Ｒ２及び／またはＲ１２が＝ＣＨ−ＲＤであるとき、各基は、独立して、以下に示される配置のいずれかを有し得る。
2022002515.tif 000044
いくつかの実施形態において、ａ＝ＣＨ−ＲＤは、配置（Ｉ）にある。
【０４０５】
いくつかの実施形態において、Ｒ″は、Ｃ３  アルキレン基またはＣ５  アルキレン基である。
【０４０６】
いくつかの実施形態において、ＡＤＣの例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（Ｉ）、
2022002515.tif 000045
の構造を有し、式中、ｎは、０または１である。
【０４０７】
いくつかの実施形態において、ＡＤＣの例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（ＩＩ）、
2022002515.tif 000046
の構造を有し、式中、ｎは、０または１である。
【０４０８】
いくつかの実施形態において、ＡＤＣの例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（ＩＩＩ）、
2022002515.tif 000047
の構造を有し、式中、ＲＥ及びＲＥ”  は、各々独立して、ＨまたはＲＤから選択され、式中、ＲＤは、上記のように定義され、
式中、ｎは、０または１である。
【０４０９】
いくつかの実施形態において、ｎは、０である。いくつかの実施形態において、ｎは、１である。いくつかの実施形態において、ＲＥ及び／またはＲＥ”はＨである。いくつかの実施形態において、ＲＥ及びＲＥ”  は、Ｈである。いくつかの実施形態において、ＲＥ及び／またはＲＥ”は、ＲＤであり、式中、ＲＤは、任意に置換されるＣ１−１２アルキルである。いくつかの実施形態において、ＲＥ  及び／またはＲＥ”は、ＲＤであり、式中、ＲＤは、メチルである。
【０４１０】
いくつかの実施形態において、ＡＤＣの例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（ＩＶ）、
2022002515.tif 000048
の構造を有し、式中、Ａｒ１  及びＡｒ２は、各々独立して、任意に置換されたＣ５−２０アリールであり、式中、Ａｒ１及びＡｒ２は、同じであっても異なっても良く、
式中、ｎは、０または１である。
【０４１１】
いくつかの実施形態において、ＡＤＣの例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（Ｖ）、
2022002515.tif 000049
の構造を有し、式中、Ａｒ１  及びＡｒ２  は、各々独立して、任意に置換されたＣ５−２０アリールであり、式中、Ａｒ１  及びＡｒ２は、同じであっても異なっても良く、
式中、ｎは、０または１である。
【０４１２】
いくつかの実施形態において、Ａｒ１及びＡｒ２は、各々独立して、任意に置換されたフェニル、フラニル、チオフェニル、及びピリジルから選択される。いくつかの実施形態において、Ａｒ１  及びＡｒ２  は、各々独立して、任意に置換されたフェニルである。いくつかの実施形態において、Ａｒ１  及びＡｒ２  は、各々独立して、任意に置換されたチエン−２−イルまたはチエン−３−イルである。いくつかの実施形態において、Ａｒ１  及びＡｒ２  は、各々独立して、任意に置換されたキノリニルまたはイソキノリニルである。キノリニルまたはイソキノリニル基は、任意の利用可能な環の位置を通じて、ＰＢＤコアに結合されても良い。例えば、キノリニルは、キノリン−２−イル、キノリン−３−イル、キノリン−４イル、キノリン−５−イル、キノリン−６−イル、キノリン−７−イル、及びキノリン−８−イルであり得る。いくつかの実施形態において、キノリニルは、キノリン−３−イル及びキノリン−６−イルから選択される。イソキノリニルは、イソキノリン−１−イル、イソキノリン−３−イル、イソキノリン−４イル、イソキノリン−５−イル、イソキノリン−６−イル、イソキノリン−７−イル、及びイソキノリン−８−イルであり得る。いくつかの実施形態において、イソキノリニルは、イソキノリン−３−イル及びイソキノリン−６−イルから選択される。
【０４１３】
ＡＤＣのさらなる非限定的な例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ｂ、
2022002515.tif 000050
のもの、ならびにその塩及び溶媒和物であり、式中、
波線は、リンカーへの共有結合部位を示し、
ＯＨに接続された波線は、ＳまたはＲ配置を示し、
ＲＶ１  及びＲＶ２は、独立して、Ｈ、メチル、エチル、及びフェニル（このフェニルは、特に４位において、フルオロで任意に置換されても良い）、ならびにＣ５−６ヘテロシクリルから選択され、式中、ＲＶ１及びＲＶ２は、同じであっても異なっても良く、
ｎは、０または１である。
【０４１４】
いくつかの実施形態において、ＲＶ１  及びＲＶ２  、は独立して、Ｈ、フェニル、及び４−フルオロフェニルから選択される。
【０４１５】
いくつかの実施形態において、リンカーは、Ｂ環のＮ１０イミン、Ｃ環のＣ−２エンド／エキソ位、またはＡ環を連結するテザー単位を含む、ＰＢＤ二量体薬物部分の種々の部位のうちの１つにおいて結合されても良い（以下の構造Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）を参照されたい）。
【０４１６】
ＡＤＣの非限定的な例となるＰＢＤ二量体構成要素には、次の式Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）が含まれる。
2022002515.tif 000051
【０４１７】
式Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）は、それらのＮ１０−Ｃ１１イミン型で示される。例となるＰＢＤ薬物部分にはまた、以下の表に示される、カルビノールアミン及び保護されたカルビノールアミン型も同様に含まれる。
2022002515.tif 000052
式中、
Ｘは、ＣＨ２（ｎ＝１〜５）、Ｎ、またはＯであり、
Ｚ及びＺ’は、独立して、ＯＲ及びＮＲ２から選択され、式中、Ｒは、１〜５個の炭素原子を含有する第一級、第二級、または第三級アルキル鎖であり、
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２、及びＲ’２  は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８  アルキル、Ｃ２−Ｃ８  アルケニル、Ｃ２−Ｃ８  アルキニル、Ｃ５−２０アリール（置換アリールを含む）、Ｃ５−２０  ヘテロアリール基、−ＮＨ２、−ＮＨＭｅ、−ＯＨ、及び−ＳＨから選択され、式中、いくつかの実施形態において、アルキル、アルケニル、及びアルキニル鎖は、最大５個の炭素原子を含み、
Ｒ３  及びＲ’３  は、独立して、Ｈ、ＯＲ、ＮＨＲ、及びＮＲ２から選択され、式中、Ｒは、１〜５個の炭素原子を含有する第一級、第二級、または第三級アルキル鎖であり、
Ｒ４及びＲ’４  は独立して、Ｈ、Ｍｅ、及びＯＭｅから選択され、
Ｒ５は、Ｃ１−Ｃ８  アルキル、Ｃ２−Ｃ８  アルケニル、Ｃ２−Ｃ８  アルキニル、Ｃ５−２０  アリール（ハロ、ニトロ、シアノ、アルコキシ、アルキル、ヘテロシクリルによって置換されたアリールを含む）、及Ｃ５−２０  ヘテロアリール基から選択され、式中、いくつかの実施形態において、アルキル、アルケニル、及びアルキニル鎖は、最大５個の炭素原子を含み、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８  アルキル、または保護基（アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、またはバリン−シトルリン−ＰＡＢ等の自壊性単位を含む部分等）であり、
Ｒ１２  はは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８  アルキル、または保護基であり、
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２、Ｒ’２、Ｒ５、若しくはＲ１２  のうちの１つの水素、またはＡ環の間の−ＯＣＨ２ＣＨ２（Ｘ）ｎＣＨ２ＣＨ２Ｏ−スペーサの水素は、ＡＤＣのリンカーに接続された結合と置き換えられている。
【０４１８】
ＡＤＣの例となるＰＤＢ二量体部分には、次のものが含まれるが、これらに限定されない（波線は、リンカーへの共有結合の部位を示す）。
2022002515.tif 000053
【０４１９】
ＰＢＤ二量体を含むＡＤＣの非限定的な例となる実施形態は、次の構造、
2022002515.tif 000054
を有し、式中、
ｎは、０〜１２である。いくつかの実施形態において、ｎは、２〜１０である。いくつかの実施形態において、ｎは、４〜８である。いくつかの実施形態において、ｎは、４、５、６、７、及び８から選択される。
【０４２０】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＰＢＤ二量体を含むＡＤＣは、ピリジン脱離基を含むリンカー−薬物中間体を、硫黄原子を介して抗体のシステインチオールと複合して、ジスルフィド連結を形成することによって作成され得る。さらに、いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＰＢＤ二量体を含むＡＤＣは、チオピリジル脱離基を含むリンカー−薬物中間体を複合することによって作製されても良く、ここでは、ピリジン環が１個以上のニトロ基で置換される。いくつかの実施形態において、ピリジル環は、−ＮＯ２で一置換される。いくつかの実施形態において、−ＮＯ２一置換は、ジスルフィドに対してパラである。いくつかの実施形態において、ＰＢＤ二量体は、Ｎ１０位を介して接続される。例えば、ＰＢＤ二量体を含む非限定的な例となるＡＤＣは、Ｎ１０連結型ＰＢＤリンカー中間体（以下に示される）であるモノメチルエチルピリジルジスルフィドを抗体に複合することによって作製されても良い。
2022002515.tif 000055
いくつかの実施形態において、上のＮ１０連結型ＰＢＤリンカー中間体を複合することは、以下に示されるモノメチルジスルフィドＮ１０連結型ＰＢＤ抗体−薬物複合体を産生する。
2022002515.tif 000056
例えば、ＰＣＴ公開第  ＷＯ  ２０１３／０５５９８７号を参照されたい。
【０４２１】
ＰＢＤ二量体−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−Ａｂ及びＰＢＤ二量体−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ−Ａｂのリンカーは、プロテアーゼ切断可能であり、一方でＰＢＤ二量体−マレイミド−アセタールは、酸不安定性である。
【０４２２】
ＰＢＤ二量体、及びＰＢＤ二量体を含むＡＤＣは、当該技術分野で既知の方法に従って調製されても良い。例えば、ＷＯ  ２００９／０１６５１６、ＵＳ  ２００９／３０４７１０、ＵＳ  ２０１０／０４７２５７、ＵＳ  ２００９／０３６４３１、ＵＳ  ２０１１／０２５６１５７、ＷＯ  ２０１１／１３０５９８、ＷＯ  ２０１３／０５５９８７を参照されたい。
【０４２３】
（５）１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール（ＣＢＩ）二量体薬物部分
いくつかの実施形態において、ＡＤＣは、１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール（ＣＢＩ）を含む。５−アミノ−１−（クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール（アミノＣＢＩ）クラスのＤＮＡ副溝アルキル化剤は、強力な細胞毒素であり（Ａｔｗｅｌｌ，ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ｊ．Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，４２：３４００）、ある数のクラスのがん療法用に設計されたプロドラッグにおいてエフェクター単位として利用されている。これらは、抗体複合体（Ｊｅｆｆｒｅｙ，ｅｔ  ａｌ．  （２００５）Ｊ．Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，４８：１３４４）、カルバミン酸ニトロベンジルに基づく遺伝子療法用プロドラッグ（Ｈａｙ，ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｊ．Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ４６：２４５６）、及び低酸素活性化プロドラッグのような対応するニトロ−ＣＢＩ誘導体（Ｔｅｒｃｅｌ，ｅｔ  ａｌ（２０１１）Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ．，Ｉｎｔ．  Ｅｄ．，５０：２６０６−２６０９）を含んでいる。ＣＢＩ及びピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）ファーマコフォアは、アルキル鎖によって共に連結されている（Ｔｅｒｃｅｌ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｊ．Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ  ４６：２１３２−２１５１）。
【０４２４】
いくつかの実施形態において、ＡＤＣは、１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール（ＣＢＩ）二量体を含む（ＷＯ  ２０１５／０２３３５５）。いくつかのかかる実施形態において、この二量体は、二量体の半分がＣＢＩ部分であり、二量体のもう半分がＰＢＤ部分である、ヘテロ二量体である。
【０４２５】
いくつかの実施形態において、ＣＢＩ二量体は、式、
2022002515.tif 000057
を含み、
式中、
Ｒ１  は、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、若しくはリンカー（Ｌ）との結合から選択され、
Ｒ２は、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、若しくはリンカー（Ｌ）との結合から選択され、
Ｒａ  及びＲｂ  は、独立して、Ｈ、及び１つ以上のＦで任意に置換されるＣ１−Ｃ６  アルキルから選択されるか、またはＲａ  及びＲｂは、５員若しくは６員のヘテロシクリル基を形成し、
Ｔは、Ｃ３−Ｃ１２アルキレン、Ｙ、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、（Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）−Ｙ−（Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）、及び（Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）−Ｙ−（Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）から選択されるテザー基であり、
式中、Ｙは、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１、アリール、及びヘテロアリールから選択され、
アルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールは、独立して、また任意に、Ｆ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ＯＰ（Ｏ）３Ｈ２、及びＣ１−Ｃ６アルキル（式中、アルキルは、１つ以上のＦで任意に置換される）で置換されるか、または
アルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールは、独立して、また任意に、Ｌへの結合で置換され、
Ｄ’は、
2022002515.tif 000058
から選択される薬剤部分であり、式中、波線は、Ｔへの結合の部位を示し、
Ｘ１及びＸ２は、独立して、Ｏ及びＮＲ３から選択され、式中、Ｒ３は、Ｈ、及び１つ以上のＦで任意に置換されるＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ４は、Ｈ、ＣＯ２Ｒ、またはリンカー（Ｌ）との結合であり、式中、Ｒは、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはベンジルであり、
Ｒ５は、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０４２６】
ＡＤＣの例となるＣＢＩ二量体部分には、次のＣＢＩ−ＰＢＤ二量体が含まれるが、これらに限定されない（波線は、リンカーへの共有結合の部位を示す）。
2022002515.tif 000059
以下のＣＢＩ−ＣＢＩ二量体：
2022002515.tif 000060
【０４２７】
ＣＢＩ二量体を含むＡＤＣの非限定的な例となる実施形態は、次の構造を有する。
2022002515.tif 000061
2022002515.tif 000062
【０４２８】
（６）アントラサイクリン
いくつかの実施形態において、アントラサイクリンを含むＡＤＣ。アントラサイクリンは、細胞傷害活性を示す抗菌性化合物である。いずれかの特定の理論に束縛されることを意図するものではないが、アントラサイクリンは、１）薬物分子を細胞のＤＮＡ内にインターカレートすることによる、ＤＮＡ依存性核酸合成の阻害、２）細胞巨大分子と反応して細胞を損傷させるフリーラジカルの薬物の産生、及び／または３）薬物分子と細胞膜との相互作用を含む、いくつかの異なる機序によって細胞を殺滅するように作用し得ることが、研究により示されている（例えば、Ｃ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  Ａｎｄ  Ｓｔｏｒａｇｅ  Ｏｆ  Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ  Ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ”ｉｎ  Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｎ．Ｒ．Ｂａｃｈｕｒ，“Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｄａｍａｇｅ”ｉｄ．ａｔ  ｐｐ．９７−１０２を参照されたい）。アントラサイクリンは、その細胞傷害潜在力のために、白血病、乳がん、肺がん、卵巣腺がん、及び肉腫等の多数のがんの治療に使用されている（例えば、Ｐ．Ｈ−Ｗｉｅｒｎｉｋ，ｉｎ  Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ：Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｓｔａｔｕｓ  Ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｐ  １１を参照されたい）。
【０４２９】
非限定的な例となるアントラサイクリンとしては、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ダウノマイシン、ネモルビシン、及びこれらの誘導体が挙げられる。ダウノルビシン及びドキソルビシンの免疫複合体ならびにプロドラッグが調製され、研究されている（Ｋｒａｔｚ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  １３：４７７−５２３、Ｊｅｆｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １６：３５８−３６２、Ｔｏｒｇｏｖ  ｅｔ  ａｌ（２００５）Ｂｉｏｃｏｎｊ．  Ｃｈｅｍ．  １６：７１７−７２１、Ｎａｇｙ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９７：８２９−８３４、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｂｉｏｏｒｇ．  ＆  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２：１５２９−１５３２、Ｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｊ．Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ４５：４３３６−４３４３、ＥＰ  ０３２８１４７、ＵＳ  ６６３０５７９）。抗体−薬物複合体であるＢＲ９６−ドキソルビシンは、腫瘍関連抗原であるＬｅｗｉｓ−Ｙと特異的に反応し、第Ｉ相及び第ＩＩ相試験において評定されている（Ｓａｌｅｈ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｊ．Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １８：２２８２−２２９２、Ａｊａｎｉ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒ．  ６：７８−８１、Ｔｏｌｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １７：４７８−４８４）。
【０４３０】
ＰＮＵ−１５９６８２は、ネモルビシンの強力な代謝物（または誘導体）である（Ｑｕｉｎｔｉｅｒｉ，ｅｔ  ａｌ．  （２００５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １１（４）：１６０８−１６１７）。ネモルビシンは、ドキソルビシンのグリコシドアミノ上に２−メトキシモルホリノ基を有するドキソルビシンの半合成類似体であり、肝細胞がん腫の第ＩＩ／ＩＩＩ相治験を含む臨床評価を受けている（Ｇｒａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ．  Ｒｅｖ．１７：１３３、Ｒｉｐａｍｏｎｔｉ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｂｒｉｔ．  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ６５：７０３；）（Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２２，Ａｂｓ１４４８、Ｑｕｉｎｔｉｅｒｉ（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４４：１ｓｔ  Ｅｄ，Ａｂｓ  ４６４９、Ｐａｃｃｉａｒｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｊｏｕｒ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２４：１４１１６）。
【０４３１】
ネモルビシンまたはネモルビシン誘導体を含む、非限定的な例となるＡＤＣは、式Ｉａに示され、
2022002515.tif 000063
式中、Ｒ１は、水素原子、ヒドロキシ、またはメトキシ基であり、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ基、またはその薬学的に許容される塩であり、
Ｌ１及びＺは、一緒に、本明細書に記載されるリンカー（Ｌ）であり、
Ｔは、本明細書に記載される抗体（Ａｂ）であり、
ｍは、１〜約２０である。いくつかの実施形態において、ｍは、１〜１０、１〜７、１〜５、または１〜４である。
【０４３２】
いくつかの実施形態において、Ｒ１及びＲ２の両方がメトキシ（−ＯＭｅ）である。
【０４３３】
ネモルビシンまたはネモルビシン誘導体を含む、さらなる非限定的な例となるＡＤＣは、式Ｉｂに示され、
2022002515.tif 000064
式中、Ｒ１は、水素原子、ヒドロキシ、またはメトキシ基であり、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ基、またはその薬学的に許容される塩であり、
Ｌ２及びＺは、一緒に、本明細書に記載されるリンカー（Ｌ）であり、
Ｔは、本明細書に記載される抗体（Ａｂ）であり、
ｍは、１〜約２０である。いくつかの実施形態において、ｍは、１〜１０、１〜７、１〜５、または１〜４である。
【０４３４】
いくつかの実施形態において、Ｒ１及びＲ２の両方がメトキシ（−ＯＭｅ）である。
【０４３５】
いくつかの実施形態において、ネモルビシン含有ＡＤＣのネモルビシン構成成分は、ＰＮＵ−１５９６８２である。いくつかのかかる実施形態において、ＡＤＣの薬物部分は、次の構造、
2022002515.tif 000065
のうちの一方を有しても良く、
式中、波線は、リンカー（Ｌ）への結合を示す。
【０４３６】
ＰＮＵ−１５９６８２を含むアントラサイクリンは、いくつかの結合部位、及び本明細書に記載されるリンカーを含む多様なリンカーを介して、抗体に複合されても良い（ＵＳ  ２０１１／００７６２８７、ＷＯ２００９／０９９７４１、ＵＳ  ２０１０／００３４８３７、ＷＯ  ２０１０／００９１２４）。
【０４３７】
ネモルビシン及びリンカーを含む例となるＡＤＣには、次のものが含まれるが、これらに限定されない。
2022002515.tif 000066
2022002515.tif 000067
（式中、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ及びＣ１−Ｃ６アルキルから選択される）、及び
2022002515.tif 000068
【０４３８】
ＰＮＵ−１５９６８２マレイミドアセタール−Ａｂのリンカーは酸不安定性であるが、ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−Ａｂ、ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−スペーサ−Ａｂ、及びＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−スペーサ（Ｒ１Ｒ２）−Ａｂのリンカーは、プロテアーゼ切断可能である。
【０４３９】
（７）アマトキシン
いくつかの実施形態において、本免疫複合体は、１個以上のアマトキシン分子に複合された抗体を含む。アマトキシンは、８個のアミノ酸から構成される環状ペプチドである。それらは、Ａｍａｎｉｔａ  ｐｈａｌｌｏｉｄｅｓキノコから単離することもでき、または合成的に調製することもできる。アマトキシンは、哺乳類細胞のＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼＩＩを特異的に阻害し、それによって、患部細胞の転写及びタンパク質生合成も特異的に阻害する。細胞内での転写の阻害は、成長及び増殖の停止を引き起こす。例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  ＪＮＣＩ  １０４：１−１３（２０１２）、ＷＯ２０１０１１５６２９、ＷＯ２０１２０４１５０４、ＷＯ２０１２１１９７８７、ＷＯ２０１４０４３４０３、ＷＯ２０１４１３５２８２、及びＷＯ２０１２１１９７８７を参照されたい。いくつかの実施形態において、１個以上のアマトキシン分子は、１個以上のα−アマニチン分子である。
【０４４０】
（８）他の薬物部分
薬物部分にはまた、ゲルダナマイシン（Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｊ．Ｎａｔ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．  ９２（１９）：１５７３−１５８１、Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １０：１０２５−１０２８、Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  １３：７８６−７９１）、ならびに、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、αサルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、マイトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、リストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、及びトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）を含むがこれらに限定されない、酵素活性毒素及びその断片も含まれる。例えば、ＷＯ  ９３／２１２３２を参照されたい。
【０４４１】
薬物部分にはまた、核酸分解活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼまたはＤＮＡエンドヌクレアーゼ）も含まれる。
【０４４２】
ある特定の実施形態において、免疫複合体は、高放射性原子を含んでも良い。多様な放射性同位体が、放射性物質複合（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）抗体の産生に利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。いくつかの実施形態において、免疫複合体が検出のために使用される場合、それは、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えばＴｃ９９若しくはＩ１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ＭＲＩとしても知られる）のためのスピン標識、例えばジルコニウム８９、ヨウ素１２３、ヨウ素１３１、インジウム１１１、フッ素１９、炭素１３、窒素１５、酸素１７、ガドリニウム、マンガン、または鉄等を含んでも良い。ジルコニウム８９は、例えば、ＰＥＴ画像法のために、種々の金属キレート剤と錯化され、抗体に複合されても良い（ＷＯ  ２０１１／０５６９８３）。
【０４４３】
放射標識または他の標識は、既知の方法で免疫複合体に組み込まれても良い。例えば、ペプチドを生合成しても良いし、または、例えば、１個以上の水素の代わりに１個以上のフッ素１９原子を含む好適なアミノ酸前駆体を使用して、化学合成しても良い。いくつかの実施形態において、Ｔｃ９９、Ｉ１２３、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、及びＩｎ１１１等の標識は、抗体内のシステイン残基を介して結合されても良い。いくつかの実施形態において、イットリウム９０は、抗体のリジン残基を介して結合することができる。いくつかの実施形態において、ＩＯＤＯＧＥＮ法（Ｆｒａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９７８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．  ８０：４９−５７を使用して、ヨウ素１２３を組み込むことができる。“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ”（Ｃｈａｔａｌ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  １９８９）には、ある特定の他の方法が記載されている。
【０４４４】
ある特定の実施形態において、免疫複合体は、プロドラッグ活性化酵素に複合された抗体を含んでも良い。いくつかのかかる実施形態において、プロドラッグ活性化酵素は、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、ＷＯ  ８１／０１１４５を参照されたい）を、抗がん薬等の活性薬物に変換する。かかる免疫複合体は、いくつかの実施形態では、抗体依存性酵素媒介性プロドラッグ療法（「ＡＤＥＰＴ」）において有用である。抗体に複合され得る酵素としては、アルカリホスファターゼ（リン酸塩含有プロドラッグを遊離薬物に変換させるのに有用）；アリールスルファターゼ（硫酸塩含有プロドラッグを遊離薬物に変換させるのに有用））；シトシンデアミナーゼ（無毒性５−フルオロシトシンを抗がん薬である５−フルオロウラシルに変換させるのに有用）；セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼ、及びカテプシン類（カテプシンＢ及びＬ等）といったプロテアーゼ（ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換させるのに有用）；Ｄ−アラニルカルボキシペプチダーゼ（Ｄ−アミノ酸置換基を含有するプロドラッグを変換させるのに有用）；β−ガラクトシダーゼ及びノイラミニダーゼ等の炭水化物切断酵素（グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に変換させるのに有用）；β−ラクタマーゼ（β−ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に変換させるのに有用）；ならびにペニシリンＶアミダーゼ及びペニシリンＧアミダーゼ等のペニシリンアミダーゼ（それらのアミン窒素において、それぞれフェノキシアセチルまたはフェニルアセチル基で誘導体化された薬物を、遊離薬物に変換させるのに有用）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、酵素は、当該技術分野で周知の組み換えＤＮＡ技法によって、抗体に共有結合されても良い。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６０４−６０８（１９８４）を参照されたい。
【０４４５】
ｃ）薬物負荷
薬物負荷は、式Ｉの分子における抗体１つ当たりの薬物部分の平均数である、ｐによって表される。薬物負荷は、１抗体当たり１〜２０個の薬物部分（Ｄ）の範囲であり得る。式ＩのＡＤＣは、１〜２０個の範囲の薬物部分と共に複合された抗体の集団を含む。複合反応からのＡＤＣの調製における、抗体１つ当たりの薬物部分の平均数は、質量分析法、ＥＬＩＳＡアッセイ、及びＨＰＬＣ等の従来の手段によって特徴付けられても良い。ｐの単位でのＡＤＣの定量分布がまた決定されても良い。いくつかの事例において、ｐがある特定の値である同種のＡＤＣの、他の薬物負荷を有するＡＤＣからの分離、精製、及び特性評価は、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動等の手段によって達成されても良い。
【０４４６】
いくつかの抗体−薬物複合体について、ｐは、抗体上の結合部位の数によって限定され得る。例えば、上記のある特定の例となる実施形態にあるように、結合がシステインチオールである場合、抗体は、１個のみ若しくは数個のシステインチオール基を有し得るか、または、１個のみ若しくは数個の十分に反応性のチオール基を有し得、それを通じてリンカーが結合され得る。ある特定の実施形態において、より高い薬物負荷、例えば、５超のｐは、ある特定の抗体−薬物複合体において凝集、不溶性、毒性、または細胞透過性の喪失を引き起こし得る。ある特定の実施形態において、ＡＤＣについての平均薬物負荷は、１〜約８、すなわち約２〜約６、または約３〜約５の範囲である。実際、ある特定のＡＤＣについて、抗体１つ当たりの薬物部分の最適な比率は、８未満であり得、また約２〜約５であり得ることが示されてきた（ＵＳ  ７４９８２９８）。
【０４４７】
ある特定の実施形態において、理論上の最大数よりも少ない薬物部分が、複合反応中に抗体に複合される。抗体は、以下に考察されるように、例えば、薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬と反応しないリジン残基を含有し得る。一般に、抗体は、薬物部分に連結し得る多くの遊離及び反応性システインチオール基を含有せず、実際、抗体におけるほとんどのシステインチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在する。ある特定の実施形態において、抗体は、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）またはトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）等の還元剤により、部分還元または完全還元条件下で還元されて、反応性システインチオール基を生成し得る。ある特定の実施形態において、本抗体は、リジンまたはシステイン等の反応性求核基を現わすために、変性条件に供される。
【０４４８】
ＡＤＣの負荷（薬物／抗体比）は、異なる方式で、また例えば、（ｉ）抗体と比べて薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬のモル過剰量を限定すること、（ｉｉ）複合反応時間または温度を限定すること、及び（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための部分または限定的還元条件によって、制御されても良い。
【０４４９】
１個を超える求核基が薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬と反応する場合、結果として生じる生成物は、抗体に結合した１個以上の薬物部分が分布しているＡＤＣ化合物の混合物であることを理解されたい。抗体１つ当たりの薬物の平均数（薬物−抗体比、またはＤＡＲ）は、抗体に特異的かつ薬物に特異的である、二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって混合物から算出されても良い。個々のＡＤＣ分子は、質量分析法によって混合物中で特定され、ＨＰＬＣ、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって、分離されても良い（例えば、ＭｃＤｏｎａｇｈ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｐｒｏｔ．  Ｅｎｇｒ．  Ｄｅｓｉｇｎ  ＆  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  １９（７）：２９９−３０７、Ｈａｍｂｌｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０、Ｈａｍｂｌｅｔｔ，Ｋ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．  “Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｌｏａｄｉｎｇ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ３０  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．６２４，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ  ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ｍａｒｃｈ  ２００４、Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．  “Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ｔｈｅ  ｌｏｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．６２７，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ  ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ｍａｒｃｈ  ２００４）。ある特定の実施形態において、単一の負荷値を有する同種のＡＤＣが、電気泳動またはクロマトグラフィーによって複合混合物から単離されても良い。
【０４５０】
ｄ）免疫複合体を調製するある特定の方法
式ＩのＡＤＣは、（１）抗体の求核基を二価リンカー試薬と反応させて、共有結合を介してＡｂ−Ｌを形成し、続いて薬物部分Ｄと反応させることと、（２）薬物部分の求核基を二価リンカー試薬と反応させて、共有結合を介してＤ−Ｌを形成し、続いて抗体の求核基と反応させることとを含む、いくつかの経路によって、当業者に既知の有機化学反応、条件、及び試薬を用いて調製されても良い。後者の経路を介して式ＩのＡＤＣを調製するための例となる方法は、ＵＳ  ７４９８２９８に記載され、これは参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０４５１】
抗体上の求核基には、（ｉ）Ｎ末端アミン基、（ｉｉ）側鎖アミン基、例えば、リジン、（ｉｉｉ）側鎖チオール基、例えば、システイン、及び（ｉｖ）抗体がグリコシル化される糖ヒドロキシルまたはアミノ基が含まれるが、これらに限定されない。アミン、チオール、及びヒドロキシル基は、求核性であり、（ｉ）ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート（ｈａｌｏｆｏｒｍａｔｅｓ）、及び酸ハロゲン化物等の、活性エステル、（ｉｉ）ハロアセトアミド等のアルキル及びベンジルハロゲン化物、ならびに（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシル、及びマレイミド基を含む、リンカー部分及びリンカー試薬上の求電子基と反応して、共有結合を形成することが可能である。ある特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド、すなわちシステイン架橋を有する。抗体が完全還元または部分還元されるように、ＤＴＴ（ジチオスレイトール）またはトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）等の還元剤での処理によって、抗体をリンカー試薬との複合に対して反応性にしても良い。各システイン架橋はこのようにして、理論上、２つの反応性のチオール求核剤を形成することになる。追加の求核基は、リジン残基の修飾を通じて、例えば、リジン残基を２−イミノチオラン（トラウト試薬（Ｔｒａｕｔ’ｓ  ｒｅａｇｅｎｔ））と反応させて、アミンのチオールへの変換をもたらすことによって、抗体中に導入することができる。反応性のチオール基もまた、１個、２個、３個、４個、またはそれよりも多いシステイン残基を導入することによって  （例えば、１個以上の非天然システインアミノ酸残基を含む変異形抗体を調製することによって）、抗体中に導入され得る。
【０４５２】
本発明の抗体−薬物複合体はまた、アルデヒドまたはケトンカルボニル基等の抗体上の求電子基と、リンカー試薬または薬物上の求核基との間の反応によって産生されても良い。リンカー試薬上の有用な求核基には、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、及びアリールヒドラジドが含まれるが、これらに限定されない。一実施形態において、本抗体は、リンカー試薬または薬物上の求核置換基と反応可能である求電子部分を導入するように修飾される。別の実施形態において、グリコシル化抗体の糖を、例えば、過ヨウ素酸酸化試薬で酸化させて、リンカー試薬または薬物部分のアミン基と反応し得るアルデヒド基またはケトン基を形成しても良い。結果として生じるイミンＳｃｈｉｆｆ塩基群は、安定した結合を形成し得るか、または例えば、水素化ホウ素試薬によって還元されて、安定したアミン結合を形成し得る。一実施形態において、グリコシル化された抗体の炭水化物部分の、ガラクトースオキシダーゼまたはメタ過ヨウ素酸ナトリウムのいずれかとの反応は、抗体において、薬物上の適切な基と反応することができるカルボニル（アルデヒド及びケトン）基を生み出し得る（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）。別の実施形態において、Ｎ末端セリンまたはスレオニン残基を含有する抗体は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムと反応して、第１のアミノ酸の代わりにアルデヒドの産生をもたらすことができる（Ｇｅｏｇｈｅｇａｎ  ＆  Ｓｔｒｏｈ，（１９９２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  ３：１３８−１４６、ＵＳ  ５３６２８５２）。かかるアルデヒドは、薬物部分またはリンカー求核剤と反応させることができる。
【０４５３】
薬物部分上の例となる求核基には、（ｉ）ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート、及び酸ハロゲン化物等の、活性エステル、（ｉｉ）ハロアセトアミド等のアルキル及びベンジルハロゲン化物、ならびに（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシル、及びマレイミド基を含む、リンカー部分及びリンカー試薬上の求電子基と反応して、共有結合を形成することができる、アミン、チオール、ヒドロキシル、ヒドラジド、オキシム、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、及びアリールヒドラジド基が含まれるが、これらに限定されない。
【０４５４】
ＡＤＣを調製するために使用され得る、非限定的な例となるクロスリンカー試薬は、本明細書における「例となるリンカー」と題される節に記載される。かかるクロスリンカー試薬を使用して、タンパク質性部分及び化学部分を含む２個の部分を連結する方法は、当該技術分野で知られている。いくつかの実施形態において、抗体及び細胞傷害性薬剤を含む融合タンパク質は、例えば、組み換え技法またはペプチド合成によって作製されても良い。組み換えＤＮＡ分子は、互いに隣接しているか、または複合体の所望の特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって隔離されているかのいずれかの、複合体の抗体及び細胞傷害性部分をコードする領域を含んでも良い。
【０４５５】
なおも別の実施形態において、抗体は、腫瘍の事前標的化（ｐｒｅ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）において利用するために「受容体」（ストレプトアビジン等）に複合されても良く、その腫瘍の事前標的化において、抗体−受容体複合体が患者に投与され、続いて除去剤を使用した血液循環からの未結合複合体の除去、次いで細胞傷害性薬剤（例えば、薬物または放射性ヌクレオチド）に複合されている「リガンド」（例えば、アビジン）の投与が行われる。
【０４５６】
表Ａの抗体薬物複合体５１〜５８は、薬物部分のリンカー試薬によるカップリングによって、またＷＯ  ２０１３／０５５９８７、ＷＯ  ２０１５／０２３３５５、ＷＯ  ２０１０／００９１２４、ＷＯ  ２０１５／０９５２２７の手順に従って調製され、本明細書に記載されるシステイン操作された抗体を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体のいずれかと複合されても良い。
2022002515.tif 000069
2022002515.tif 000070
【０４５７】
さらなる例となる抗体薬物複合体には、以下のものが含まれる。
2022002515.tif 000071
2022002515.tif 000072
【０４５８】
単純化のため、上記の構造及びＡＤＣ５１〜５８の構造は、抗体に結合される１個のリンカー−薬物基のみを示すことに留意されたい。上述のように、１個を超えるリンカー−薬物基が、抗体に結合されても良い。
【０４５９】
Ｅ．診断及び検出のための方法及び組成物
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗Ｂ７−Ｈ４抗体のいずれも、生体試料中のＢ７−Ｈ４の存在を検出するために有用である。本明細書で使用される「検出すること」という用語は、定量または定性検出を包含する。「生体試料」は、例えば、細胞または組織（例えば、がん性であるかまたはがん性の可能性がある、乳房組織、子宮内膜組織、卵巣組織を含む、生検材料）を含む。
【０４６０】
一実施形態において、診断または検出方法において使用するための抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供される。さらなる態様において、生体試料中のＢ７−Ｈ４の存在を検出する方法が提供される。ある特定の実施形態において、本方法は、生体試料を、本明細書に記載される抗Ｂ７−Ｈ４抗体と、Ｂ７−Ｈ４への抗Ｂ７−Ｈ４抗体の結合を許容する条件下で接触させることと、生体試料中で、抗Ｂ７−Ｈ４抗体とＢ７−Ｈ４との間に複合体が形成されるかどうかを検出することとを含む。かかる方法は、インビトロ法であっても、インビボ法であっても良い。一実施形態において、例えば、Ｂ７−Ｈ４が患者の選択のためのバイオマーカーである場合、抗Ｂ７−Ｈ４抗体を使用して、抗Ｂ７−Ｈ４抗体を用いた療法に適格な対象を選択する。さらなる実施形態において、生体試料は、例えば、細胞または組織（例えば、がん性であるかまたはがん性の可能性がある、乳房組織、子宮内膜組織、卵巣組織を含む、生検材料）である。
【０４６１】
さらなる実施形態において、例えば、がんを診断する、がんの予後を判定する、若しくはがんを病期分類する、適切な治療過程を決定する、または療法に対するがんの反応を監視する目的のために、抗Ｂ７−Ｈ４抗体を、インビボで使用して、例えば、インビボ画像法によって、対象におけるＢ７−Ｈ４陽性がんを検出する。インビボ検出のための当該技術分野で既知の方法の１つは、例えば、ｖａｎ  Ｄｏｎｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  １２：１３７９−１３８９（２００７）及びＶｅｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  ４４：１２７１−１２８１（２００３）に記載される、免疫−陽電子放出断層撮影（免疫−ＰＥＴ）である。かかる実施形態において、対象においてＢ７−Ｈ４陽性がんを検出するための方法が提供され、本方法は、標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体を、Ｂ７−Ｈ４陽性がんを有するかまたは有することが疑われる対象に投与することと、対象における標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体を検出することとを含み、標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体の検出は、対象におけるＢ７−Ｈ４陽性がんを示す。かかる実施形態のある特定のものにおいて、標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、及び１２４Ｉ等の陽電子放出体に複合された抗Ｂ７−Ｈ４抗体を含む。特定の実施形態において、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。
【０４６２】
さらなる実施形態において、診断または検出方法は、基質に固定化された第１の抗Ｂ７−Ｈ４抗体を、Ｂ７−Ｈ４の存在について試験されるべき生体試料と接触させることと、その基質を第２の抗Ｂ７−Ｈ４抗体に曝露することと、その第２の抗Ｂ７−Ｈ４が、生体試料中で、第１の抗Ｂ７−Ｈ４抗体とＢ７−Ｈ４との間の複合体に結合されるかどうかを検出することとを含む。基質は、任意の支持培地、例えば、ガラス、金属、セラミック、ポリマービーズ、スライド、チップ、及び他の基質であっても良い。ある特定の実施形態において、生体試料は、細胞または組織（例えば、がん性であるかまたはがん性の可能性がある、乳房組織、子宮内膜組織、卵巣組織を含む、生検材料）を含む。ある特定の実施形態において、第１または第２の抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、本明細書に記載される抗体のいずれかである。
【０４６３】
上記の実施形態のいずれかに従って診断または検出され得る例となる障害としては、Ｂ７−Ｈ４陽性乳がん、Ｂ７−Ｈ４陽性卵巣がん、及びＢ７−Ｈ４陽性子宮内膜がん等のＢ７−Ｈ４陽性がんが挙げられる。いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４陽性がんは、Ｂ７−Ｈ４トリプルネガティブ（ＥＲ−／ＰＲ−／Ｈｅｒ２−）乳がんである。いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４陽性がんは、実施例Ｂにおいて本明細書に記載される条件下で、「０」（腫瘍細胞の９０％超における非常に弱いまたはゼロの染色に対応する）を超える、抗Ｂ７−Ｈ４免疫組織化学（ＩＨＣ）またはインサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）スコアを受けるがんである。別の実施形態において、Ｂ７−Ｈ４陽性がんは、実施例Ｂにおいて本明細書に記載される条件下で定義されるように、１＋、２＋、または３＋レベルでＢ７−Ｈ４を発現する。いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４陽性がんは、Ｂ７−Ｈ４ｍＲＮＡを検出する逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイに従って、Ｂ７−Ｈ４を発現するがんである。いくつかの実施形態において、ＲＴ−ＰＣＲは、定量ＲＴ−ＰＣＲである。
【０４６４】
ある特定の実施形態において、標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供される。標識には、直接検出される標識または部分（蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、及び放射性標識等）、ならびに例えば、酵素反応または分子相互作用を通じて、間接的に検出される酵素またはリガンド等の部分が含まれるが、これらに限定されない。例となる標識には、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び  １３１Ｉ、希土類キレートまたはフルオレセイン及びその誘導体等のフルオロフォア、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルセリフェラーゼ（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅｓ）、例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖質オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸塩デヒドロゲナーゼ、過酸化水素を用いて色素前駆体を酸化させる酵素、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、またはマイクロペルオキシダーゼとカップリングされた、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ等の複素環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定した遊離ラジカル等が含まれるが、これらに限定されない。別の実施形態において、標識は、陽電子放出体である。陽電子放出体には、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、及び１２４Ｉが含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。
【０４６５】
Ｆ．医薬製剤
本明細書に記載される抗Ｂ７−Ｈ４抗体または免疫複合体の医薬製剤は、所望の程度の純度を有するかかる抗体または免疫複合体を、１つ以上の任意の薬学的に許容される担体と混合することによって（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、調製される。薬学的に許容される担体は、一般に、用いられる投薬量及び濃度で、受容者に対して無毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等の緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、若しくはベンジルアルコール；メチル若しくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、若しくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート薬剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書における例となる薬学的に許容される担体には、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０  （ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質といった、介在性（ｉｎｓｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ）薬物分散剤がさらに含まれる。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある特定の例となるｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼ等の１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わされる。
【０４６６】
例となる凍結乾燥抗体または免疫複合体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体または免疫複合体製剤には、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載されるものが含まれ、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝液を含む。
【０４６７】
本明細書における製剤はまた、治療されている特定の適応症に対する必要に応じて、１つを超える活性成分、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない相補的活性を有する成分を含有しても良い。例えば、いくつかの事例において、例えば、Ｂ７−Ｈ４陽性乳がん（Ｂ７−Ｈ４陽性トリプルネガティブ（ＥＲ−／ＰＲ−／Ｈｅｒ２−）乳がんを含む）、Ｂ７−Ｈ４陽性卵巣がん、またはＢ７−Ｈ４陽性子宮内膜がん等のＢ７−Ｈ４陽性がんの治療のためのＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ）をさらに提供することが望ましい場合がある。
【０４６８】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合によって調製される、マイクロカプセル、例えば、それぞれ、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）中またはマクロエマルション中の、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル中に、封入されても良い。かかる技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．  （１９８０）に開示されている。
【０４６９】
徐放性調製物が調製されても良い。徐放性製剤の好適な例としては、抗体または免疫複合体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが挙げられ、そのマトリクスは、造形品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。
【０４７０】
インビボ投与のために使用されるべき製剤は、一般に滅菌されている。滅菌状態は、例えば、滅菌濾過膜を通じた濾過によって、容易に遂行され得る。
【０４７１】
Ｇ．治療方法及び組成物
本明細書に提供される抗Ｂ７−Ｈ４抗体または免疫複合体のいずれも、方法、例えば、治療方法において使用され得る。
【０４７２】
一態様において、本明細書に提供される抗Ｂ７−Ｈ４抗体または免疫複合体は、Ｂ７−Ｈ４陽性細胞の増殖を阻害する方法において使用され、本方法は、細胞を、抗Ｂ７−Ｈ４抗体または免疫複合体に、細胞の表面上のＢ７−Ｈ４への抗Ｂ７−Ｈ４抗体または免疫複合体の結合を許容する条件下で曝露し、それによって細胞の増殖を阻害することを含む。ある特定の実施形態において、本方法は、インビトロ法またはインビボ法である。さらなる実施形態において、細胞は、乳房細胞、卵巣細胞、または子宮内膜細胞である。
【０４７３】
インビトロでの細胞増殖の阻害は、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）から市販されている、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙを使用してアッセイされても良い。そのアッセイは、代謝的に活性な細胞を示す、存在するＡＴＰの定量化に基づいて、培養物中の生存細胞の数を判定する。Ｃｒｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈ．  １６０：８１−８８、米国特許  第６６０２６７７号を参照されたい。このアッセイは、９６ウェルまたは３８４ウェル形式で行われても良く、自動化高処理スクリーニング（ＨＴＳ）に適している。Ｃｒｅｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ  ６：３９８−４０４を参照されたい。アッセイ手順は、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を培養細胞に直接添加することを伴う。これは、細胞溶解及びルシフェラーゼ反応によって生み出される発光シグナルの生成をもたらす。発光シグナルは、存在するＡＴＰの量に比例し、それは培養物中に存在する生存細胞の数に直接比例する。データは、ルミノメーターまたはＣＣＤカメラ画像化デバイスによって記録することができる。発光出力は、相対発光量（ＲＬＵ）として表される。
【０４７４】
別の態様において、薬として使用するための抗Ｂ７−Ｈ４抗体または免疫複合体が提供される。さらなる態様において、治療方法において使用するための抗Ｂ７−Ｈ４抗体または免疫複合体が提供される。ある特定の実施形態において、Ｂ７−Ｈ４陽性がんの治療に使用するための抗Ｂ７−Ｈ４抗体または免疫複合体が提供される。ある特定の実施形態において、本発明は、Ｂ７−Ｈ４陽性がんを有する個体を処置する方法において使用するための抗Ｂ７−Ｈ４抗体または免疫複合体を提供し、本方法は、個体に、有効量の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または免疫複合体を投与することを含む。１つのかかる実施形態において、本方法は、個体に、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤（例えば、以下に記載されるもの）を投与することをさらに含む。
【０４７５】
さらなる態様において、本発明は、薬の製造または調製における、抗Ｂ７−Ｈ４抗体または免疫複合体の使用を提供する。一実施形態において、薬は、Ｂ７−Ｈ４陽性がんの治療のためのものである。さらなる実施形態において、薬は、Ｂ７−Ｈ４陽性がんを治療する方法において使用するためのものであり、本方法は、Ｂ７−Ｈ４陽性がんを有する個体に、有効量の薬を投与することを含む。１つのかかる実施形態において、本方法は、個体に、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤（例えば、以下に記載されるもの）を投与することをさらに含む。
【０４７６】
さらなる態様において、本発明は、Ｂ７−Ｈ４陽性がんを治療するための方法を提供する。一実施形態において、本方法は、かかるＢ７−Ｈ４陽性がんを有する個体に、有効量の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または免疫複合体を投与することを含む。１つのかかる実施形態において、本方法は、個体に、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。
【０４７７】
上記の実施形態のいずれかによるＢ７−Ｈ４陽性がんは、例えば、Ｂ７−Ｈ４陽性乳がん（Ｂ７−Ｈ４陽性トリプルネガティブ（ＥＲ−／ＰＲ−／Ｈｅｒ２−）乳がんを含む）、Ｂ７−Ｈ４陽性卵巣がん、及びＢ７−Ｈ４陽性子宮内膜がんであっても良い。いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４陽性がんは、実施例Ｂにおいて本明細書に記載される条件下で、「０」（腫瘍細胞の９０％超における非常に弱いまたはゼロの染色に対応する）を超える、抗Ｂ７−Ｈ４免疫組織化学（ＩＨＣ）またはインサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）スコアを受けるがんである。別の実施形態において、Ｂ７−Ｈ４陽性がんは、実施例Ｂにおいて本明細書に記載される条件下で定義されるように、１＋、２＋、または３＋レベルでＢ７−Ｈ４を発現する。いくつかの実施形態において、Ｂ７−Ｈ４陽性がんは、Ｂ７−Ｈ４  ｍＲＮＡを検出する逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイに従って、Ｂ７−Ｈ４を発現するがんである。いくつかの実施形態において、ＲＴ−ＰＣＲは、定量ＲＴ−ＰＣＲである。
【０４７８】
上記の実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０４７９】
さらなる態様において、本発明は、例えば、上の治療方法のいずれかにおいて使用するための、本明細書に提供される抗Ｂ７−Ｈ４抗体または免疫複合体のいずれかを含む、医薬製剤を提供する。一実施形態において、医薬製剤は、本明細書に提供される抗Ｂ７−Ｈ４抗体または免疫複合体のいずれかと、薬学的に許容される担体とを含む。別の実施形態において、医薬製剤は、本明細書に提供される抗Ｂ７−Ｈ４抗体または免疫複合体のいずれかと、少なくとも１つの追加の治療剤（例えば、以下に記載されるもの）とを含む。
【０４８０】
本発明の抗体または免疫複合体は、単独で、または他の薬剤と組み合わせてのいずれかで、療法に使用することができる。例えば、本発明の抗体または免疫複合体は、少なくとも１つの追加の治療剤と同時投与されても良い。ある特定の実施形態において、追加の治療剤は、例えば、Ｂ７−Ｈ４陽性乳がん（Ｂ７−Ｈ４陽性トリプルネガティブ（ＥＲ−／ＰＲ−／Ｈｅｒ２−）乳がんを含む）等のＢ７−Ｈ４陽性がんの治療のためのＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ）である。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、例えば、Ｂ７−Ｈ４陽性乳がん（Ｂ７−Ｈ４陽性トリプルネガティブ（ＥＲ−／ＰＲ−／Ｈｅｒ２−）乳がんを含む）等のＢ７−Ｈ４陽性がんの治療のために、ドセタキセル、ドキソルビシン、シクロホスファミド、カルボプラチン、パクリタキセル、ｎａｂ−パクリタキセル、ゲムシタビン、シスプラチン、及びＰＡＲＰ阻害剤（オラパリブ、イニパリブ等）から選択される。ある特定の実施形態において、例えば、がんがＨｅｒ２＋がんであるときには、追加の治療剤はＫａｄｃｙｌａ（登録商標）（トラスツズマブエムタンシン）またはＰｅｒｊｅｔａ（登録商標）（ペルツズマブ）である。
【０４８１】
かかる併用療法は、組み合わせた投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤中に含まれる）、及び別個の投与を包含し、別個の投与の場合、本発明の抗体または免疫複合体の投与は、追加の治療剤及び／またはアジュバントの投与の前、それと同時、及び／またはその後に行うことができる。本発明の抗体または免疫複合体はまた、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
【０４８２】
本発明の抗体または免疫複合体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、ならびに局所処置のために所望される場合、病巣内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬は、任意の好適な経路によって、例えば、投与が短時間であるか慢性的であるかに部分的に応じて、静脈内または皮下注射等の注射によって行われて良い。単回または種々の時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むがこれらに限定されない、種々の投薬スケジュールが本明細書で企図される。
【０４８３】
本発明の抗体または免疫複合体は、良好な医療行為と一致した様式で、製剤化され、投薬され、投与されることになる。この文脈における考慮の要因には、治療されている特定の障害、処置されている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床的病態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジュール管理、及び医療従事者に既知の他の要因が含まれる。抗体または免疫複合体は、必要ではないが、任意に、問題の障害を予防または治療するために現在使用されている１つ以上の薬剤と共に製剤化される。かかる他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体または免疫複合体の量、障害または治療の種類、及び上で考察された他の要因に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載されるのと同じ投薬量で、本明細書に記載される投与経路により、または本明細書に記載される投薬量の約１〜９９％、または適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量及び任意の経路によって、使用される。
【０４８４】
疾患の予防または治療のために、本発明の抗体または免疫複合体の適切な投薬量（単独でまたは１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用されるとき）は、治療対象の疾患の種類、抗体または免疫複合体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体または免疫複合体が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴及び抗体または免疫複合体への反応、ならびに主治医の裁量に依存することになる。抗体または免疫複合体は、患者に、１回で、または一連の治療にわたって、好適に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば、１回以上の別個の投与によってであれ、連続注入によってであれ、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体または免疫複合体が、患者への投与のための初回の候補投薬量であり得る。１つの典型的な１日投薬量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。病態に応じて数日間またはより長い日数にわたる反復投与について、治療は、一般に、疾患症状の所望の抑制が生じるまで持続されることになる。抗体または免疫複合体の１つの例となる投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内となる。故に、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（またはこれらの任意の組み合わせ）の１回以上の用量が患者に投与されても良い。かかる用量は、断続的に、例えば、毎週または３週間毎に（例えば、患者が抗体の約２〜約２０回、または例えば、約６回用量を受容するように）投与されても良い。より高い初回の負荷用量、続いて１回以上のより低い用量が投与されても良い。しかしながら、他の投薬レジメンが有用な場合がある。この療法の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易に監視される。
【０４８５】
上の製剤または治療方法のうちのいずれも、本発明の免疫複合体及び抗Ｂ７−Ｈ４抗体の両方を使用して行われ得ることが理解される。
【０４８６】
Ｈ．製品
本発明の別の態様において、上述の障害の治療、予防、及び／または診断に有用な物質を含有する製品が提供される。本製品は、容器と、容器上の若しくは容器と関連したラベルまたは添付文書とを含む。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ等が含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチック等の多様な材料から形成されて良い。容器は、組成物を、それ自体で、または障害を治療する、予防する、及び／若しくは診断するのに有効な別の組成物と組み合わせて保有し、また滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈注射用溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本発明の抗体または免疫複合体である。ラベルまたは添付文書は、選定した病態を治療するために組成物が使用されることを表示する。さらに、本製品は、（ａ）組成物が中に含有された第１の容器（この組成物は本発明の抗体または免疫複合体を含む）、及び（ｂ）組成物が中に含有された第２の容器（この組成物はさらなる細胞傷害性薬剤または治療剤を含む）を含んでも良い。本発明のこの実施形態の製品は、組成物が特定の病態を治療するために使用され得ることを表示する添付文書をさらに含んでも良い。代替的に、または追加的に、本製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液またはデキストロース溶液等の、薬学的に許容される緩衝液を含む、第２の（または第３の）容器をさらに含んでも良い。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的立場及びユーザの立場から望ましい他の材料をさらに含んでも良い。
【０４８７】
ＩＩＩ．実施例
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。上記に提供される一般的説明を考慮すると、種々の他の実施形態が実施され得ることが理解される。
【０４８８】
Ａ．ヒトＢ７−Ｈ４遺伝子発現
１．Ｂ７−Ｈ４  ｍＲＮＡの発現
ヒトＢ７−Ｈ４遺伝子発現を、遺伝子発現情報を含む専有データベース（ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓ（登録商標）、Ｇｅｎｅ  Ｌｏｇｉｃ  Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を使用して分析した。ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓ（登録商標）データベースのグラフ分析を、マイクロアレイプロファイルビューワを使用して行った。図１は、種々の組織におけるヒトＢ７−Ｈ４遺伝子発現のグラフ表現である。ｙ軸の目盛りは、ハイブリダイゼーションシグナル強度に基づく遺伝子発現レベルを示す。列挙する各組織の名称から延びている線の左及び右の両方に点が見える。線の左に見える点は、正常な組織における遺伝子発現を表し、線の右に見える点は、腫瘍及び罹患組織における遺伝子発現を表す。図１は、ある特定の腫瘍または罹患組織における、その正常な対応物と比較して増加したＢ−Ｈ４遺伝子発現を示す。具体的には、Ｂ７−Ｈ４は、乳房、子宮内膜、及び卵巣腫瘍において大幅に過剰発現している。
【０４８９】
２．Ｂ７−Ｈ４タンパク質の発現
ヒトの正常な組織をＧｅｎｅｎｔｅｃｈ’ｓ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから入手した。タンパク質を、製造業者の指示に従ってＣｏｍｐｌｅｔｅ  Ｌｙｓｉｓ−Ｍ（Ｒｏｃｈｅ）中で均質化することで凍結組織から抽出した。全てのタンパク質溶解物を、Ｎａｎｏｄｒｏｐ  １０００を使用して定量化し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって完全性及び濃度一貫性について確認した。
【０４９０】
全Ｂ７−Ｈ４タンパク質の評定は、各試料に対して約５０μｇのタンパク質溶解物を使用し、４℃の０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含有するＯｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝液（Ｌｉ−Ｃｏｒ，Ｌｉｎｃｏｌｎ，ＮＥ）中１μｇ／ｍＬのＡ５７．１  ｍＡｂ（ｄｉａＤｅｘｕｓ，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）でプローブするウェスタンブロットによって決定した。ＴＢＳＴ緩衝液で洗浄した後、ヤギ抗マウスＩＲＤｙｅ  ８００ＣＷ二次抗体（Ｌｉ−Ｃｏｒ）とのインキュベーション（１：１５，０００）を行い、ブロットをＯｄｙｓｓｅｙ  Ｉｎｆａｒｅｄ  Ｉｍａｇｅｒ（Ｌｉ−Ｃｏｒ）上で画像化した。
【０４９１】
正常なヒト（ＦＤＡ９９９ｃ）、カニクイザル（ＣｙＦＤＡ１ａ）、マウス（ＭＯ５４１）、及びラット（Ｒａｔ９０１）組織のマイクロアレイ（ＴＭＡ）をＵＳ  Ｂｉｏｍａｘ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から得た。免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）を、Ｖｅｎｔａｎａ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＸＴ自動染色装置（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）上で行った。ホルマリンで固定したパラフィン包埋組織のマイクロアレイ切片を脱パラフィン化し、ＣＣ１溶液（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で６０分間前処理した後、１．５ｕｇ／ｍＬのＡ５７．１ウサギｍＡｂまたはナイーブウサギＩｇＧのいずれかと共に３７℃で６０分間インキュベートした。ＯｍｎｉＭａｐ抗ウサギＨＲＰ及びＤＡＢ（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて１６分間検出を行った後、Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ  ＩＩ及びＢｌｕｉｎｇ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で対比染色した。経験豊かな病理学者が染色の強度及び幅を考慮しながら試料をスコア化した。スコア化：０（陰性）：９０％超の細胞において非常に弱いかまたはゼロのハイブリダイゼーション、１＋（軽度）：主要なハイブリダイゼーションパターンが弱い、２＋（中等度）：主要なハイブリダイゼーションパターンが過半数（５０％超）の細胞において中程度に強い、３＋（強度）：主要なハイブリダイゼーションパターンが過半数（５０％超）の細胞において強い。
【０４９２】
Ｂ７−Ｈ４は、ｒｈＢ７−Ｈ４を過剰発現している２９３細胞、及び乳腺腺がんの代表的な事例に由来するタンパク質溶解物において高度に発現された（図２０Ａ）。高度にグリコシル化された形態のＢ７−Ｈ４（約６０ｋＤａ）が、乳腺腺がん試料と比較して、胎盤、心臓、乳房、腎臓、膵臓、食道、肝臓、肺、及び精巣において微弱に検出されたが、非グリコシル化形態のＢ７−Ｈ４（約２８ｋＤａ）では検出されなかった。細胞膜上でのＢ７−Ｈ４の発現は、ＩＨＣによって次の正常な組織上でのみ観察された：乳房の管上皮、膵臓の腺房及び管上皮、腎臓の細管上皮、胆管上皮、ならびに気管／肺、頸部、及び胎盤の上皮（図２０Ｂ）。肝細胞におけるＢ７−Ｈ４の細胞内発現の形跡があったが、膜性発現はなかった。全体としては、ウェスタンブロット及びＩＨＣからの結果は一貫している。同様のＷＢ及びＩＨＣ結果がカニクイザルについて観察された（データ割愛）。Ａ５７．１でのウェスタンブロット及びＩＨＣ結果の両方が、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈにて成長させたＢ７−Ｈ４に対するウサギｍＡｂで独立して確認された（データ割愛）。この結果は、大部分の正常な組織が低レベルのＢ７−Ｈ４を発現するが、わずかな組織のみがその細胞表面にＢ７−Ｈ４を提示することを示す。
【０４９３】
Ｂ．乳がん腫及び卵巣がん腫におけるヒトＢ７−Ｈ４の発生率
乳がん腫におけるＢ７−Ｈ４の発現を評定するために、２０２個の原発性乳がん腫を複数源から入手した。組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）を、Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．  ２００１  Ｓｅｐ；１９５（１）：７２−９に記載されているように複製コアを使用して組織化し、これに、一致した事例に由来する正常な乳房細胞を含めた。
【０４９４】
Ｂ７−Ｈ４発現を、ヒトＢ７−Ｈ４に対するＡ５７．１抗体（ｄｉａＤｅｘｕｓ，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡＢ７−Ｈ４）を使用して免疫組織化学的検査によって判定した。熟練した病理学者が、染色の強度（銀粒子）及び幅を考慮しながら以下のスキームに従ってハイブリダイゼーション強度をスコア化した。
０（陰性）：９０％超の腫瘍細胞において非常に弱いかまたはゼロのハイブリダイゼーション
１＋（軽度）：主要なハイブリダイゼーションパターンが弱い
２＋（中等度）：主要なハイブリダイゼーションパターンが過半数（５０％超）の腫瘍性細胞において中程度に強い
３＋（強度）：主要なハイブリダイゼーションパターンが過半数（５０％超）の腫瘍性細胞において強い
同じＡ５７．１抗体を使用して、正常な乳房組織におけるハイブリダイゼーションの特異性に対する照合を行った。
【０４９５】
図２は、染色が０、１＋、２＋、及び３＋レベルである例となる乳がん腫切片を示す。画像中の銀粒子の堆積は、抗体のハイブリダイゼーション及びＢ７−Ｈ４タンパク質の発現を示す。これらの事例の約８０％が、試料の６５％において中等度（２＋）から高度（３＋）のＢ７−Ｈ４染色で、円周状の膜質及び細胞質染色を示した（合計：スコア０（４０）、１＋（３１）、２＋（７４）、３＋（５７））。
【０４９６】
異なる乳がんサブタイプにおけるＢ７−Ｈ４発現及び発生率の有意性を評定するために、乳がん試料を集めてまとめ、原発性腫瘍のヒト上皮成長因子受容体２（Ｈｅｒ２）、ホルモン受容体（ＨＲ）、及びトリプルネガティブ（ＴＮ）状態に基づいて３つのサブタイプに分類した。Ｂ７−Ｈ４を発現した腫瘍の割合（％）に対して上述のように施術しスコア化した。
【０４９７】
図３Ａに示すように、Ｂ７−Ｈ４発現は全ての乳がんサブタイプにおいて蔓延し、全サブタイプの約６５％が陽性（スコア１〜３）であった。具体的には、約６０％のＨｅｒ２＋及びＨＲ＋乳がんサブタイプもＢ７−Ｈ４を発現し、約８０％のＴＮ乳がんがＢ７−Ｈ４陽性であった。図３Ｂは、免疫組織化学的検査によって測定した、乳がんサブタイプにおける０、１＋、２＋、及び３＋レベルのＢ７−Ｈ４染色の発生率を示す。約２０％のＨｅｒ２＋及びＨＲ＋乳がんサブタイプ、ならびに約２５％のＴＮ乳がんサブタイプは、Ｂ７−Ｈ４について１＋レベルの染色を示した。約２８％のＨｅｒ２＋及びＴＮ乳がんサブタイプ、ならびに約１８％のＨＲ＋乳がんサブタイプは、Ｂ７−Ｈ４について２＋レベルの染色を示した。約１５％、約２０％、及び約２５％のＨｅｒ２＋、ＨＲ＋、及びＴＮ乳がんサブタイプは、それぞれ、Ｂ７−Ｈ４についての３＋レベルの染色を示した。
【０４９８】
ウェスタンブロット分析はまた、図３Ｃに示すように、乳腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の全体的な発現が約７０％であり、これらの乳腫瘍の約４０％において発現が大幅に高いことを示唆した。ＭＸ−１腫瘍モデルを内在性陽性対照として、Ｂ７−Ｈ４について陰性の腫瘍細胞株であるＢＴ５４９を内在性陰性対照として使用し、１０個の異なる乳腫瘍試料を４個の正常な乳房組織（正常とは腫瘍に隣接する正常な組織として定義される）と比較してＢ７−Ｈ４タンパク質発現について評定した。ヒトＢ７−Ｈ４をトランスフェクトした２９３野生型細胞及び２９３細胞も対照に含めた。Ｂ−アクチンレベルを使用して負荷の不一致を正規化した。
【０４９９】
Ｂ７−Ｈ４は、ウェスタンブロット分析を使用しＡ５７．１抗体を使用して検出した場合に、８２％の原発性乳腫瘍（Ｘｅｎｔｅｃｈパネル）において発現された。図３Ｄに示すように、Ｂ７−Ｈ４は、試験した２８個中２３個の原発性乳腫瘍において約６２Ｋｄの帯域として出現する。
【０５００】
ウェスタンブロット分析はまた、図３Ｅに示すように、卵巣腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の全体的な発現が約８０％であり、これらの卵巣腫瘍の約６０％において発現が大幅に高いことを示唆する。
【０５０１】
Ｃ．マウスモノクローナル抗体生成
ヒトＢ７−Ｈ４に対するモノクローナル抗体を、以下の手順を使用して生成した。Ｂａｌｂ／Ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）の２つの別個の群を、組み換えヒトＢ７−Ｈ４を過剰発現している２９３細胞、またはヒトＢ７−Ｈ４のＤＮＡ発現構築物のいずれかで高度免疫処理し、マウスＢ７−Ｈ４  ＫＯ  ＢＬ／６Ｎマウスの第３の群を、Ｃ末端Ｆｃがマウス骨髄腫発現系において発現しているマウスＢ７−Ｈ４細胞外ドメイン（ＥＣＤ、アミノ酸２９〜２５８）で免疫処理した。
【０５０２】
Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ，ＵＳＡ）に、ＰＢＳ中のヒトＢ７−Ｈ４を過剰発現している２９３細胞（腹腔内注射で１投薬当たり５００万個）、または乳酸加リンゲル液中のｈｕＢ７−Ｈ４プラスミドＤＮＡ（尾静脈注射）のいずれかを注射した後、組み換えヒトＢ７−Ｈ４ＥＣＤでタンパク質をブーストした（腹腔内注射で１投薬当たり４μｇ）。マウスＢ７−Ｈ４  ＫＯ  ＢＬ／６Ｎマウスに、上述のように、代謝性スクアレン（４％ｖ／ｖ）、Ｔｗｅｅｎ  ８０（０．２％ｖ／ｖ）、トレハロース６，６−ジミコレート（０．０５％ｗ／ｖ）、及びモノホスホリルリピドＡ（０．０５％ｗ／ｖ、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ）を含有するアジュバント中の組み換えマウスＢ７−Ｈ４  ＥＣＤを注射した（後足蹠注射）。血清力価を、６〜９回の注射後に標準的な酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）及びＦＡＣＳによって評定した。血清Ｂ７−Ｈ４陽性マウスから採取した脾臓Ｂ細胞を、電気融合（Ｈｙｂｒｉｍｕｎｅ、Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）によってマウス骨髄腫細胞（Ｘ６３．Ａｇ８．６５３、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）と融合させた。１０〜１４日後、ハイブリドーマの上清をＥＬＩＳＡによって抗体分泌についてスクリーニングした。その後、全ての陽性クローンを拡大し、ＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳによってｈｕＢ７−Ｈ４及びｍｕＢ７−Ｈ４への結合について再スクリーニングした。次の４個のハイブリドーマクローンを特定した：組み換えヒト−、カニクイザル−、及びマウス−Ｂ７−Ｈ４を発現している安定した細胞株を用いて蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣｓ）によって強力に反応させた、１Ｄ１１（マウスＢ７−Ｈ４で免疫処理したｍＢ７−Ｈ４  ＫＯマウスから特定）、２．３２Ｄ６（ヒトＢ７−Ｈ４によるＤＮＡ免疫処理マウスから特定）、ならびに９Ｂ９及び３．２２．Ｃ１０（組み換えヒトＢ７−Ｈ４を過剰発現している２９３細胞による細胞免疫処理から特定）。
【０５０３】
図４Ａは、生成されたある特定のモノクローナル抗体及びある特定の特性を示し、その一部を以下にさらに詳細に説明する。
【０５０４】
Ｄ．マウスモノクローナル抗体のクローニング及びキメラ化
モノクローナル抗体１Ｄ１１、３２Ｄ６、９Ｂ９、及び２２Ｃ１０を、以下のようにクローニング及びキメラ化した。
【０５０５】
全ＲＮＡを、標準的な方法を使用して、マウス１Ｄ１１、３２Ｄ６、９Ｂ９、及び２２Ｃ１０を産生しているハイブリドーマ細胞から抽出した。軽鎖可変（ＶＬ）及び重鎖可変（ＶＨ）ドメインを、重鎖及び軽鎖に対する縮重プライマーを用いたＲＴ−ＰＣＲを使用して増幅した。順方向プライマーは、ＶＬ及びＶＨ領域のＮ末端アミノ酸配列に特異的であった。それぞれ、ＬＣ及びＨＣ逆方向プライマーは、定常軽（ＣＬ）及び定常重ドメイン１（ＣＨ１）における、種間で高度に保存されている領域にアニールするように設計した。インサートのポリヌクレオチド配列を、配列決定の常法を使用して決定した。１Ｄ１１  ＶＬ及びＶＨアミノ酸配列を配列番号３及び４に示す。１Ｄ１１重鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３を、それぞれ、配列番号５、６、及び７に示す。１Ｄ１１軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３を、それぞれ、配列番号８、９、及び１０に示す。３２Ｄ６  ＶＬ及びＶＨアミノ酸配列を、配列番号１１及び１２に示す。３２Ｄ６重鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３を、それぞれ、配列番号１３、１４、及び１５に示す。３２Ｄ６軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３を、それぞれ、配列番号１６、１７、及び１８に示す。９Ｂ９  ＶＬ及びＶＨアミノ酸配列を、配列番号１９及び２０に示す。９Ｂ９重鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３を、それぞれ、配列番号２１、２２、及び２３に示す。９Ｂ９軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３を、それぞれ、配列番号２４、２５、及び２６に示す。２２Ｃ１０  ＶＬ及びＶＨアミノ酸配列を、配列番号２７及び２８に示す。２２Ｃ１０重鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３を、それぞれ、配列番号２９、３０、及び３１に示す。２２Ｃ１０軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３を、それぞれ、配列番号３２、３３、及び３４に示す。抗体１Ｄ１１、３２Ｄ６、９Ｂ９、及び２２Ｃ１０の軽鎖及び重鎖可変領域のアライメントを図５に示す。
【０５０６】
ヒトラムダ軽鎖定常領域上にクローニングした９Ｂ９を除き、マウス重鎖可変領域をヒトＩｇＧ１重鎖定常領域上にクローニングし、軽鎖可変領域をヒトカッパ軽鎖定常領域上にクローニングすることによって、各抗体をキメラ化した。
【０５０７】
Ｅ．１Ｄ１１及び２２Ｃ１０のヒト化
モノクローナル抗体１Ｄ１１及び２２Ｃ１０を以下に記載のようにヒト化した。残基番号は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に従う。
【０５０８】
アクセプターヒトコンセンサスフレームワーク上への直接的超可変領域グラフト
１Ｄ１１及び２２Ｃ１０のヒト化中に構築した変異形をＩｇＧの形態で評価した。マウス１Ｄ１１及び２２Ｃ１０に由来するＶＬ及びＶＨドメインを、ヒトＶＬカッパＩ（ＶＬＫＩ）及びヒトＶＨ下位集団Ｉ（ＶＨＩ）コンセンサス配列とアライメントした。
【０５０９】
マウス１Ｄ１１（ｍｕ１Ｄ１１）抗体に由来する超可変領域を操作して、ＶＬＫＩ及びＶＨＩアクセプターフレームワークにし、ヒト化１Ｄ１１．ｖ１（ｈ１Ｄ１１．ｖ１）、１Ｄ１１．ｖ２（ｈ１Ｄ１１．ｖ２）、１Ｄ１１．ｖ３（ｈ１Ｄ１１．ｖ３）、１Ｄ１１．ｖ４（ｈ１Ｄ１１．ｖ４）、１Ｄ１１．ｖ１．１（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．１）、１Ｄ１１．ｖ１．２（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．２）、１Ｄ１１．ｖ１．３（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．３）、１Ｄ１１．ｖ１．４（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．４）、１Ｄ１１．ｖ１．５（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．５）、１Ｄ１１．ｖ１．６（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．６）、１Ｄ１１．ｖ１．７（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．７）、１Ｄ１１．ｖ１．８（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．９）、及び１Ｄ１１．ｖ１．９（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．９）を生成した。具体的には、ｍｕ１Ｄ１１  ＶＬドメインから、２４〜３４位（Ｌ１）、５０〜５６位（Ｌ２）、及び８９〜９７位（Ｌ３）を、ＶＬＫＩにグラフトした。ｍｕ１Ｄ１１  ＶＨドメインから、２６〜３５位（Ｈ１）、５０〜６５位（Ｈ２）、及び９５〜１０２位（Ｈ３）を、ＶＨＩにグラフトした。
【０５１０】
加えて、ある特定の残基は、ＣＤＲ構造を調整し抗原適合度を微調整し得る「バーニア」ゾーンとして作用するフレームワーク残基の一部であることが分かっている。例えば、Ｆｏｏｔｅ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２４：４８７−４９９（１９９２）（図５及び６）を参照されたい。これらのＣＤＲの定義は、その配列超可変性（Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．＆  Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．（１９７０））、その構造的位置（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．＆  Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．（１９８７））、及びその抗原−抗体接触への関与（ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２６２：７３２−７４５（１９９６））によって定義される位置を含む。例えば、ＶＨ及びＶＬ中の次の位置が、次のヒト化１Ｄ１１変異形におけるマウス配列から保持された。
【０５１１】
ｈ１Ｄ１１．ｖ１−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７、６９、及び７１位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４９位、ならびにＶＬのフレームワークＩＩＩ中の６９及び７１位
【０５１２】
ｈ１Ｄ１１．ｖ２−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７、６９、及び７１位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４９位、ならびにＶＬのフレームワークＩＩＩ中の７１位
【０５１３】
ｈ１Ｄ１１．ｖ３−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７位、６９位、７１位、及び７３位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４９位、ならびにＶＬのフレームワークＩＩＩ中の５８、６９、及び７１位
【０５１４】
ｈ１Ｄ１１．ｖ４−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７、６９、７１、７３、及び７５、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４９位、ならびにＶＬのフレームワークＩＩＩ中の５８、６９、及び７１位
【０５１５】
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．１−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７、６９、及び７１、ＶＬのフレームワークＩＩＩ中の６９及び７１位
【０５１６】
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．２−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７、６９、及び７１位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４９位、ならびにＶＬのフレームワークＩＩＩ中の７１位
【０５１７】
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．３−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７、６９、及び７１位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４９位、ならびにＶＬのフレームワークＩＩＩ中の６９位
【０５１８】
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．４−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６９及び７１位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４９位、ならびにＶＬのフレームワークＩＩＩ中の６９及び７１位
【０５１９】
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．５−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７及び７１位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４９位、ならびにＶＬのフレームワークＩＩＩ中の６９及び７１位
【０５２０】
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．６−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７及び６９位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４９位、ならびにＶＬのフレームワークＩＩＩ中の６９及び７１位
【０５２１】
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．７−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７及び６９位、ＶＬのフレームワークＩＩＩ中の６９及び７１位
【０５２２】
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．８−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７位、ＶＬのフレームワークＩＩＩ中の６９及び７１位
【０５２３】
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．９−ＶＨ中の変化なし、ＶＬのフレームワークＩＩＩにおける６９及び７１位
【０５２４】
１Ｄ１１の種々のヒト化変異形に対する軽鎖可変領域配列及び重鎖可変領域配列を、それぞれ、図６及び７に示す。
【０５２５】
４つ全てのｈ１Ｄ１１変異形（ｈ１Ｄ１１．ｖ１〜４）の中で、ｈ１Ｄ１１．ｖ１が最も近い親和性を保持することが、ヒトＢ７−Ｈ４を発現している２９３細胞に対するＦＡＣＳによるマウス１Ｄ１１との比較によって示された。その結果、追加のｈ１Ｄ１１．ｖ１変異形が、上述のように重鎖可変領域及び軽鎖可変領域両方の異なるバーニア位置を修飾することによって生成された。
【０５２６】
マウス２２Ｃ１０（ｍｕ２２Ｃ１０）抗体に由来する超可変領域を操作して、ＶＬＫＩ  及びＶＨＩアクセプターフレームワークにし、種々のヒト化２２Ｃ１０を生成した。具体的には、ｍｕ２２Ｃ１０  ＶＬドメインから、２４〜３４位（Ｌ１）、５０〜５６位（Ｌ２）、及び８９〜９７位（Ｌ３）を、ＶＬＫＩにグラフトした。ｍｕ２２Ｃ１０  ＶＨドメインから、２６〜３５位（Ｈ１）、５０〜６５位（Ｈ２）、及び９５〜１０２位（Ｈ３）を、ＶＨＩにグラフトした。
【０５２７】
例えば、ＶＨ及びＶＬ中の次の位置が、次のヒト化２２Ｃ１０変異形におけるマウス配列から保持された。
【０５２８】
ｈ２２Ｃ１０．ｖ１−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７、６９、７１、及び９３位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４６及び４７位、ならびにＶＬのフレームワークＩＩＩ中の７１位
【０５２９】
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７、６９、７１、及び９３位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４６及び４７位
【０５３０】
ｈ２２Ｃ１０．ｖ３−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７、６９、７１、７３、及び９３位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４６及び４７位
【０５３１】
ｈ２２Ｃ１０．ｖ４−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７、６９、７１、７６、及び９３位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４６及び４７位
【０５３２】
ｈ２２Ｃ１０．ｖ５−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７、６９、７１、７５、７６、及び９３位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４６及び４７位
【０５３３】
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２．１−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７、６９、７１、及び９３位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４７位
【０５３４】
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２．２−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７、６９、７１、及び９３位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４６位
【０５３５】
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２．３−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６９、７１、及び９３位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４６及び４７位
【０５３６】
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２．４−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７、７１、及び９３位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４６及び４７位
【０５３７】
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２．５−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７、６９、及び９３位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４６及び４７位
【０５３８】
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２．６−−ＶＨのフレームワークＩＩＩ中の６７、６９、及び７１位、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４６及び４７位
【０５３９】
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２．７−ＶＨ中の変化なし、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４６及び４７位
【０５４０】
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２．８−ＶＨ中の変化なし、ＶＬのフレームワークＩＩ中の４６位
【０５４１】
２２Ｃ１０の種々のヒト化変異形に対する軽鎖可変領域配列及び重鎖可変領域配列を、それぞれ、図８及び９に示す。
【０５４２】
１Ｄ１１及び２２Ｃ１０のヒト化変異形を、各超可変領域に別個のオリゴヌクレオチドを使用して、クンケルの突然変異生成によって生成した。正しいクローンをＤＮＡ配列決定によって特定した。
【０５４３】
変異形の評価
スクリーニングの目的で、まずＩｇＧ変異形を２９３細胞中で産生した。ＶＬ及びＶＨをコードしているベクターを２９３細胞中にトランスフェクトした。ＩｇＧを、タンパク質Ａ親和性クロマトグラフィーによって細胞培地から精製した。
【０５４４】
小規模の調製物をまずＦＡＣＳ及びスキャッチャード分析によってスクリーニングして、組み換え及び内在性Ｂ７−Ｈ４への種特異性及び親和性（Ｋｄ）を判定した。異なる濃度（０〜１０μｇ／ｍＬ）のヒト化変異形を、組み換えヒト−、カニクイザル−、またはマウス−Ｂ７−Ｈ４を過剰発現している２９３細胞、及び内在性ヒトＢ７−Ｈ４を発現している腫瘍細胞株であるＭＸ−１と共に、４℃で４０分間インキュベートした後、洗浄し、４℃で２０分間、Ｄｙｌｉｇｈｔ−６５０と複合した二次ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体で染色することによって、最初のＥＣ５０及び種特異性を判定した。蛍光シグナルを、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒを用いて得て、ＥＣ５０値を、Ｇｒａｐｈ  ＰａｄのプログラムＰｒｉｓｍ  ４を用いて判定した。
【０５４５】
１．種交差反応性
モノクローナル抗体を、ヒト以外の種に由来するＢ７−Ｈ４と交差反応するかどうかを判定するために試験した。図１０は、ヒト（配列番号７３）、チンパンジー（配列番号８１）、カニクイザル（配列番号７５）、ラット（配列番号７７）、及びマウス（配列番号７９）Ｂ７−Ｈ４の間のアライメントを示す。全５種間で同一の残基を赤色のボックス内の分類によって示す。異なる残基は赤色の点で示す。Ｂ７−Ｈ４オーソログは、非常に高い配列同一性を有する（ヒトＢ７−Ｈ４  １００％、チンパンジーＢ７−Ｈ４  ９６．０９％、カニクイザルＢ７−Ｈ４  ９８．６％、ラットＢ７−Ｈ４  ８６．８７％、及びマウスＢ７−Ｈ４  ８７．６３％）。特に、ラットＢ７−Ｈ４は、マウスＢ７−Ｈ４と９７．１７％同一である。Ｂ７−Ｈ４オーソログはまた、非常に高い配列相同性を有する（ヒトＢ７−Ｈ４  １００％、チンパンジーＢ７−Ｈ４  ９７．４２％、カニクイザルＢ７−Ｈ４  ９８．８％、ラットＢ７−Ｈ４  ８９．３％、及びマウスＢ７−Ｈ４  ９０．１２％）。
【０５４６】
各種のＢ７−Ｈ４への結合を、Ｂ７−Ｈ４（ヒト、チンパンジー、カニクイザル、ラット、またはマウスＢ７−Ｈ４）を安定してトランスフェクトした２９３細胞のＦＡＣＳ分析、及び染色したＤｙｌｉｇｈｔ−６５０と複合したヤギ抗ヒト抗体によって判定した。トランスフェクトしていない２９３細胞は、通常Ｂ７−Ｈ４を発現しない。
【０５４７】
図１１に示すように、代表的なＦＡＣスクリーニングデータは、組み換えヒト、カニクイザル、及びマウスＢ７−Ｈ４に、親キメラ抗体の範囲にあるＥＣ５０で結合するｈｕ１Ｄ１１ｖ１．７〜９及びｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７〜８を示す。
【０５４８】
２．抗体親和性
スキャッチャード分析を標準的な手順（Ｈｏｌｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１２０５−１２１０（１９９２））に従って行い、ｃｈ１Ｄ１１、ｃｈ９Ｂ９、ｃｈ２２１０、及びｃｈ３２Ｄ６抗体の相対的結合親和性を判定した。
【０５４９】
抗Ｂ７−Ｈ４抗体を、間接的ヨードゲン法を使用して［Ｉ１２５］標識した。［Ｉ１２５］標識化抗Ｂ７−Ｈ４抗体を、ＮＡＰ−５カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用したゲル濾過によって遊離１２５Ｉ−Ｎａから精製し、精製したヨウ化抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、８〜１０μＣｉ／mｇの比活性度範囲を有した。一定濃度の［Ｉ１２５］標識化抗体と、漸減濃度の連続希釈した標識していない抗体とを含有する５０μＬ体積の競合アッセイ混合物を９６ウェルプレート中に配置した。ヒト、カニクイザル、ラット、若しくはマウスＢ７−Ｈ４またはＭＸ−１腫瘍細胞を安定して発現している２９３細胞を、３７°Ｃの５％のＣＯ２中の増殖培地において培養した。細胞を、Ｓｉｇｍａ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎを使用してフラスコから切り離し、１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、３００ｍＭのヒトＩｇＧ、及び０．１％のアジ化ナトリウムを含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）からなる結合緩衝液で洗浄した。洗浄した細胞を、結合緩衝液０．２ｍＬ中細胞１００，０００個の密度で９６ウェルプレートに添加した。各ウェルにおける［Ｉ１２５］標識化抗体の最終濃度は約２５０ｐＭであった。競合アッセイにおける標識していない抗体の最終濃度は、１０個の２倍希釈ステップを通した１０００ｎＭ〜緩衝液のみのアッセイ０ｎＭの範囲であった。競合アッセイを３連で行った。競合アッセイを２時間室温でインキュベートした。２時間のインキュベーションの後、競合アッセイをＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎフィルタープレート（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）に移し、結合緩衝液で４回洗浄して、結合した［Ｉ１２５］標識化抗体から遊離物を分離した。Ｗａｌｌａｃ  Ｗｉｚａｒｄ  １４７０ガンマ計数器（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．；Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，ＭＡ）でフィルターを計数した。抗体の結合親和性を判定するためにＭｕｎｓｏｎ及びＲｏｂａｒｄの適合アルゴリズム（Ｍｕｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｒｏｂａｒｄ  １９８０）を使用するＮｅｗＬｉｇａｎｄソフトウェア（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を使用して、結合データを評定した。
【０５５０】
図４Ａに示すように、ｃｈ１Ｄ１１は、安定してトランスフェクトした２９３細胞上で発現されるヒトＢ７−Ｈ４、カニクイザルＢ７−Ｈ４、マウスＢ７−Ｈ４、及びラットＢ７−Ｈ４に、それぞれ、６．１ｎＭ、４．１ｎＭ、９．４ｎＭ、及び４．１ｎＭの親和性で結合した。ｃｈ２２Ｃ１０は、安定してトランスフェクトした２９３細胞上で発現されるヒトＢ７−Ｈ４、カニクイザルＢ７−Ｈ４、マウスＢ７−Ｈ４、及びラットＢ７−Ｈ４に、それぞれ、６．６ｎＭ、４．６ｎＭ、１８．３ｎＭ、及び５．７ｎＭの親和性で結合した。ｃｈ９Ｂ９は、安定してトランスフェクトした２９３細胞上で発現されるヒトＢ７−Ｈ４、カニクイザルＢ７−Ｈ４、マウスＢ７−Ｈ４、及びラットＢ７−Ｈ４に、それぞれ、６．６ｎＭ、５．２ｎＭ、１３．７ｎＭ、及び４．７ｎＭの親和性で結合した。ｃｈ３２Ｄ６は、安定してトランスフェクトした２９３細胞上で発現されるヒトＢ７−Ｈ４及びカニクイザルＢ７−Ｈ４に、それぞれ、４．８ｎＭ及び３．１ｎＭの親和性で結合した。
【０５５１】
種々のヒト化抗Ｂ７−Ｈ４抗体の親和性も、上述のようにスキャッチャード分析を使用して評定した。ヒトＢ７−Ｈ４を安定して発現しているＭＸ−１腫瘍細胞を、３７°Ｃの５％のＣＯ２中の増殖培地において培養した。図１２に示すように、ｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．７、ｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．８、及びｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９は、ヒトＢ７−Ｈ４に、それぞれ、８．３ｎＭ、８．７ｎＭ、及び７．８ｎＭの親和性で結合した（親１Ｄ１１抗体の７．８ｎＭと比較して）。Ｈｕ２２Ｃ１０．ｖ２．７及びｈｕ２２Ｃ１０．ｖ２．８は、ヒトＢ７−Ｈ４に、それぞれ６．３ｎＭ及び１０ｎＭの親和性で結合した（親２２Ｃ１０抗体の４．９ｎＭと比較して）。
【０５５２】
Ｆ．モノクローナル抗体エピトープ分類
モノクローナル抗体のエピトープ分類を決定するために、ＦＡＣＳ分析を行って他の抗体が参照抗体を代置するかどうかを評価した。
【０５５３】
細胞に基づく競合結合ＦＡＣＳアッセイを使用してエピトープ分類を決定した。組み換えヒトＢ７−Ｈ４を発現している２９３細胞を、標識していない抗体（０、０．０５、０．５、５、５０μｇ／ｍＬ）の存在下で、Ｄｙｌｉｇｈｔ−４８８で標識したトレーサー抗体（０．３〜１μｇ／ｍＬ）と共にインキュベートした。トレーサーが標識していない抗体で代置されるときに競合が生じ、このことは、抗体がＢ７−Ｈ４上の同じかまたは同様の領域に特異的に結合することを示す（これは同じ抗体をトレーサー及び競合相手として使用するときに生じるはずである）。トレーサーが異なる標識していない抗体によって代置されない場合、標識していない抗体はＢ７−Ｈ４における異なる領域に結合する。
【０５５４】
Ｂ７−Ｈ４抗体がＢ７−Ｈ４のＩｇ−ＶドメインまたはＩｇ−Ｃドメインのいずれかに結合するかどうかを判定するために、キメラＩｇドメイン分子を、Ｂ７−Ｈ４（ＩｇＶ；スペーサＳ１５１−Ｖ１５７を含むＧ２８−Ｆ１５０）非関連性（Ｉｇ−Ｃ）（構築物８８）、または非関連性の（Ｉｇ−Ｖ）−Ｂ７−Ｈ４（Ｉｇ−Ｃ；ＴＭ／ＣＤ  Ｄ２３７−Ｋ２８２を含むＤ１５８−Ｇ２３６）（構築物８８Ｂ）膜タンパク質のいずれかを含有するように、標準的な分子クローニング法を使用して操作した。Ｎ末端または細胞質タグを結合させて、これらの構築物をトランスフェクトした２９３細胞が細胞膜上にタンパク質を発現することを確認した（データ割愛）。簡潔に述べると、ポリフェクトを使用して、２９３細胞に構築物８８及び８８Ｂを一時的にトランスフェクトした。４８時間後、細胞を、１０μｇ／ｍＬのＤｙｌｉｇｈｔ−４８８または−６５０で標識したｃｈ９Ｂ９、ｃｈ１Ｄ１１、ｃｈ２２Ｃ１０、またはｃｈ３２Ｄ６によって４℃で３０〜４０分間染色し、洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  ｃａｌｉｂｕｒで分析した。
【０５５５】
加えて、結果を、操作した可溶性Ｂ７−Ｈ４（Ｉｇ−Ｖ；Ｇ２８−Ｖ１５７）−Ｆｃ融合タンパク質を用いて別々に確認した。３〜３００倍の濃度の色素標識したトレーサー抗体でインキュベートしたとき、ＦＡＣＳによって判定して、２９３−ｈｕＢ７−Ｈ４細胞へのトレーサーの結合は遮断された。
【０５５６】
Ｂ７−Ｈ４（Ｉｇ−Ｖ）ドメインは、単一のＮ連結型グリコシル化部位（Ｎ１１２〜Ｓ１１４）を含有し、グリコシル化が抗体のＢ７−Ｈ４への結合に影響するかどうかを判定するために、標準的な部位特異的突然変異生成を使用してＳ１１４をアラニンで置換して、完全長ヒトＢ７−Ｈ４膜構築物におけるグリコシル化を防止した。突然変異させたＳ１１４ＡヒトＢ７−Ｈ４構築物を、ポリフェクトを用いて２９３細胞にトランスフェクトし、４８時間後に、２９３−ｈｕＢ７−Ｈ４安定細胞株と共にＦＡＣＳによって抗体結合について分析した。
【０５５７】
図４Ａは、「エピトープ分類」と題した縦列においてこれらの結果を要約している。図４に示すように、抗体１Ｄ１１及び９Ｂ９は両方とも「Ａ」に分類されるエピトープに結合し、一方で抗体２２．Ｃ１０は「Ｂ」に分類されるエピトープに結合し、抗体３２Ｄ６は、「Ｃ」に分類されるエピトープに結合する。
【０５５８】
３つのモノクローナル抗体は疑いなくＢ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖドメインに結合し、ｃｈ２２Ｃ１０はＩｇ−Ｖ／Ｉｇ−Ｃの両方を含むエピトープに結合する可能性があること、及びかかる結合はグリコシル化非依存性であった（４個全ての抗体がアイソタイプ対照より１００倍大きく結合した）ことをさらに確認した。ｃｈ１Ｄ１１及びｃｈ２２Ｃ１０についての代表的なデータを図４Ｂに示す。使用したｃｈ１Ｄ１１のバージョンは、１Ｄ１１  ｍＡｂ軽鎖がＣ４３Ｇにて置換を含むわずかに修飾したバージョンのｃｈ１Ｄ１１であった。モノクローナル抗体のいずれによっても、Ｂ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｃドメインへの結合は検出されなかった。
【０５５９】
Ｇ．抗Ｂ７−Ｈ４抗体の内在化
ＡＤＣ標的の１つの望ましい属性は、抗体を細胞内の分解性コンパートメント中に内在化させる能力である。抗Ｂ７−Ｈ４抗体が結合時に内在化されるかどうかを判定するために、細胞培養物で処理した４ウェルチャンバスライド（Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）にＳＫＢＲ３腺がん細胞を播種し、Ｄｙｌｉｇｈｔ  ５９４と複合した抗Ｂ７−Ｈ４  ９Ｂ９  ｍＡｂ（１０μｇ／ｍＬ）または抗ＥＧＦ−Ａｌｅｘａ  ４８８（３μｇ／ｍＬ）のいずれかを膜染色対照として用いて２時間４℃でインキュベートした。内在化のため、両方を添加して２時間４℃でインキュベートした。その後、細胞を洗浄し、リソソームプロテアーゼ阻害剤ペプスタチン（５μｇ／ｍＬ）／ロイペプチン（１０μｇ／ｍＬ）の存在下での１６時間の追跡に供した。次に、全ての処理群を３％のパラホルムアルデヒド（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）中で２０分間室温にて固定化し、５０ｍＭの塩化アンモニウム及びＰＢＳで洗浄した後、ＤＡＰＩで核染色した。Ｌｅｉｃａ  ＳＰ５共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）を画像分析に使用した。
【０５６０】
図１３に示すように、９Ｂ９及びＥＧＦ（リソソームマーカーとして使用した）染色の著しい重複が細胞内で見られた。これらの結果は、抗Ｂ７−Ｈ４  ＡＤＣが、効果的に内在化し、分解を経て、薬物を放出して、がん細胞を殺滅するはずであることを予測する。
【０５６１】
抗Ｂ７−Ｈ４抗体がリソソームに到達することを実証するために、色素複合体で標識したｃｈ１Ｄ１１及びｃｈ２２Ｃ１０抗Ｂ７−Ｈ４抗体を、ＭＸ−１がん細胞と共にインキュベートし、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）を使用して、抗体の細胞内局在を追跡した。ＦＲＥＴは、２つの発色団、この場合はドナー及びアクセプター間のエネルギー移動の機序である。簡潔に述べると、ｃｈ１Ｄ１１またはｃｈ２２Ｃ１０のいずれかを、カテプシン切断部位を含むペプチドスペーサによって互いに結び付いている２つの色素であるＦＡＭ及びＴＡＭＲＡに複合した。未切断状態では、緑色色素（ドナー）は赤色色素（アクセプター）が近接近していることに起因して消光するため、膜及び細胞質染色は赤色に見える。抗体複合体がリソソームに進入すると、リソソーム酵素カテプシンは、ペプチドスペーサを切断してドナーのアクセプターからの距離を増加させることにより、赤色色素のエネルギー移動を防止し、緑色色素の可視化を可能にする。これを遂行するために、細胞を２μｇ／ｍＬの抗体複合体と共に氷上で３０分間インキュベートした。膜染色（Ｔ０）を示すために、Ｌｅｉｃａ  ＳＰ５共焦点顕微鏡を用いて３７℃での１０時間にわたる低速度撮影によって細胞を即座に撮影した。図１４に示すように、ｃｈ１Ｄ１１及びｃｈ２２Ｃ１０の両方がリソソーム中に局在化した。インタクトな複合体（赤色）及び切断された複合体（緑色）の統合した画像は、両複合体がリソソーム中に共局在化している黄色の領域を示す。
【０５６２】
Ｈ．抗Ｂ７−Ｈ４抗体薬物複合体の産生
より大規模な抗体産生のために、抗体をＣＨＯ細胞中で産生した。ＶＬ及びＶＨをコードしているベクターをＣＨＯ細胞中にトランスフェクトし、ＩｇＧをタンパク質Ａ親和性クロマトグラフィーによって細胞培地から精製した。
【０５６３】
抗Ｂ７−Ｈ４抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を、１Ｄ１１、２２Ｃ１０、及び９Ｂ９を、本明細書に示される薬物−リンカー部分ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥに複合することによって産生した。便宜上、薬物−リンカー部分ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥはときに、これらの実施例及び図面において、「ｖｃＭＭＡＥ」または「ＶＣＥ」と称される。複合前に、抗体を、ＴＣＥＰにより、ＷＯ  ２００４／０１０９５７  Ａ２に記載される手法に従った標準的な方法を使用して、部分的に還元した。部分的に還元した抗体を、例えば、Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２１：７７８−７８４及びＵＳ  ２００５／０２３８６４９  Ａ１に記載される手法に従った標準的な方法を使用して、薬物−リンカー部分に複合した。簡潔に述べると、部分的に還元した抗体を薬物−リンカー部分と組み合わせて、抗体の還元したシステイン残基への薬物−リンカー部分の複合を可能にした。複合体反応を反応停止処理し、ＡＤＣを生成した。
【０５６４】
加えて、１Ｄ１１を本明細書に示すアセタールリンカーを持つ薬物−リンカー部分ＰＮＵ−１５９６８２マレイミド（ＰＮＵ−１５９６８２マレイミドアセタールリンカー）に複合することによって、抗Ｂ７−Ｈ４抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を産生した。
【０５６５】
各ＡＤＣに対する薬物負荷（抗体１つ当たりの薬物部分の平均数）を判定すると、結果は、抗Ｂ７−Ｈ４抗体について３．５〜３．９（オーリスタチン）及び１．６〜１．９（ネモルビシン）であった。
【０５６６】
Ｉ．ＭＸ−１ヒト乳がん細胞株異種移植片における抗Ｂ７−Ｈ４抗体薬物複合体の有効性
抗Ｂ７−Ｈ４  ＡＤＣの有効性を、ＭＸ−１ヒト乳がん異種移植片モデルを使用して調査した。ＭＸ−１細胞株は、トリプルネガティブ（ＴＮ；ＥＲ（−）／ＰＲ（−）／Ｈｅｒ２（−））乳管がん細胞株（ＮＣＩ−Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ  ＤＣＴ  Ｔｕｍｏｒ  Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）である。Ｂ７−Ｈ４は、ＭＸ−１細胞において高度に発現され、これを、ＩＨＣ、ＦＡＣＳ、ＩＦ、ならびに共焦点顕微鏡法及びウェスタンブロットによって確認した。ＭＸ−１腫瘍断片（１ｍｍ３）（９Ｂ９を使用してＦＡＣＳによりＢ７−Ｈ４陽性）を、１群当たり１０匹のマウスの背側部に皮下移植し、移植片が接種後に１００〜１５０ｍｍ３  に到達したら、マウスに、３ｍｇ／ｋｇ若しくは１０ｍｇ／ｋｇのヒト抗ｇＤ  ５Ｂ６−ｖｃＭＭＡＥ対照抗体−薬物複合体、３ｍｇ／ｋｇ若しくは１０ｍｇ／ｋｇのｃｈ９Ｂ９−ｖｃＭＭＡＥ抗体−薬物複合体、ｃｈ２２Ｃ１０−ｖｃＭＭＡＥ抗体−薬物複合体、ｃｈ１Ｄ１１−ｖｃＭＭＡＥ抗体−薬物複合体、または１０ｍｇ／ｋｇのｃｈ９Ｂ９裸抗体の単回静脈内注射、あるいはビヒクル（ＰＢＳ）のみを付与した。抗体の存在を、注射後１、７、及び１４日にＰＫ採血によって確認した。
【０５６７】
図１５に示すように、相当な腫瘍成長阻害が、試験した両方の濃度の３つ全ての抗Ｂ７−Ｈ４抗体−薬物複合体で達成された。
【０５６８】
Ｊ．ＨＢＣＸ−２４乳がん細胞株異種移植片における抗Ｂ７−Ｈ４抗体薬物複合体の有効性
抗Ｂ７−Ｈ４  ＡＤＣの有効性を、ＨＢＣＸ−２４乳がん異種移植片モデルを使用して調査した。ＨＢＣＸ−２４細胞株は、トリプルネガティブ（ＴＮ；ＥＲ（−）／ＰＲ（−）／Ｈｅｒ２（−））乳がん細胞株である。Ｂ７−Ｈ４は、ＨＢＣＸ−２４乳がん細胞において高度に発現され、これを、ＩＨＣ、ＦＡＣＳ、ＩＦ、ならびに共焦点顕微鏡法及びウェスタンブロットによって確認した。免疫組織化学的検査によって測定して、ＨＢＣＸ−２４乳がん細胞におけるＢ７−Ｈ４染色は、１＋及び２＋レベルの発生率であった。ＨＢＣＸ−２４腫瘍断片（２０ｍｍ３）を、１群当たり５〜１０匹のマウスの背側部に皮下移植し、移植片が接種後に７５〜２００ｍｍ３  に到達したら、マウスに、６ｍｇ／ｋｇ若しくは１０ｍｇ／ｋｇのヒト抗ｇＤ  ５Ｂ６−ｖｃＭＭＡＥ対照抗体−薬物複合体、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、若しくは１０ｍｇ／ｋｇのｃｈ９Ｂ９−ｖｃＭＭＡＥ抗体−薬物複合体、または１０ｍｇ／ｋｇのｃｈ９Ｂ９裸抗体の単回静脈内注射、あるいはビヒクル（ＰＢＳ）のみを付与した。抗体の存在を、注射後１、７、及び１４日のＰＫ採血によって確認した。
【０５６９】
図１６に示すように、相当な腫瘍成長阻害が、試験した全ての濃度のｃｈ９Ｂ９抗Ｂ７−Ｈ４抗体−薬物複合体で達成された。
【０５７０】
Ｋ．ＭＸ−１乳がん細胞異種移植片における抗Ｂ７−Ｈ４抗体薬物複合体の有効性
アセタールリンカーを持つ薬物−リンカー部分ＰＮＵ−１５９６８２マレイミドに１Ｄ１１を複合することによって産生した抗Ｂ７−Ｈ４  ＡＤＣの有効性を、ＭＸ−１乳がん異種移植片モデルを使用して調査した。ＭＸ−１腫瘍断片（１ｍｍ３）を、１群当たり１０匹のマウスの背側部に皮下移植し、移植片が接種後に１００〜１５０ｍｍ３に到達したら、マウスに、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、若しくは２．５ｍｇ／ｋｇのヒト抗ｇＤ  ５Ｂ６−ｖｃＭＭＡＥ対照抗体−薬物複合体、または０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、若しくは２．５ｍｇ／ｋｇのアセタールリンカーを持つｃｈ１Ｄ１１−ＰＮＵ−１５９６８２マレイミドの単回静脈内注射、あるいはビヒクル（ＰＢＳ）のみを付与した。抗体の存在を、注射後１、７、及び１４日にＰＫ採血によって確認した。
【０５７１】
図１７に示すように、２．５ｍｇ／ｋｇ用量のｃｈ１Ｄ１１  ＡＤＣは腫瘍成長を遅滞させるが、０．１ｍｇ／ｋｇ及び０．５ｍｇ／ｋｇのより低い用量は腫瘍成長に認識可能な影響を及ぼさないことが分かった。
【０５７２】
Ｌ．ＭＸ−１乳がん細胞異種移植片における抗Ｂ７−Ｈ４抗体薬物複合体の有効性
ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７の抗Ｂ７−Ｈ４  ＡＤＣの有効性を、実施例Ｋに記載したようにＭＸ−１異種移植片モデルを使用して調査した。マウスを１０匹の群に分け、１２ｍｇ／ｋｇのｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７裸抗体；０．５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇのｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ；６若しくは１２ｍｇ／ｋｇのヒト抗ｇＤ−５Ｂ６−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ；またはビヒクル（ＰＢＳ）のみの静脈内単回用量を投与した。抗体の存在をＰＫ採血によって確認した。腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）を、次の式を使用して、ビヒクルとの関連における各処置群に対する１日当たりの腫瘍体積−時間近似曲線下領域（ＡＵＣ）パーセントとして算出した。
ＴＧＩ％＝１００´（１−ＡＵＣ処置／日，ＡＵＣビヒクル／日）
１００％のＴＧＩ値は腫瘍の停止を示し、１％超であるが１００％未満であるＴＧＩは腫瘍成長の遅延を示し、１００％超のＴＧＩは腫瘍の退縮を示す。
【０５７３】
図１８に示すように、ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥは、６、９、及び１２ｍｇ／ｋｇ用量について、それぞれ、９１％、１０６％、及び１０８％の顕著な腫瘍成長阻害を示し、９ｍｇ／ｋｇ用量で部分寛解（ＰＲ）が３８％、完全寛解（ＣＲ）が６２％であった。寛解は、ビヒクルまたは対照ＡＤＣのいずれでも観察されなかった。
【０５７４】
Ｍ．ＨＣＣ−１５６９ｘ２乳がん細胞異種移植片における抗Ｂ７−Ｈ４抗体薬物複合体の有効性
ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７の抗Ｂ７−Ｈ４  ＡＤＣの有効性を、ＨＣＣ−１５６９ｘ２（Ｈｅｒ２＋／＋／ＥＲ−）−）乳がん細胞異種移植片モデルを使用して調査した。ＨＣＣ−１５６９ｘ２は、ＮＣＲヌードマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｃｉｔｙ，ＩＮ）中の親ＨＣＣ１５６９細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から生じる異種移植片腫瘍の２回の連続継代から生成されるインビボ由来の細胞株である。Ｂ７−Ｈ４は、ＨＣＣ−１５６９ｘ２異種移植片において高度に発現され、これを、ＩＨＣ及びＦＡＣＳによって確認した（図１９Ａ）。ＳＣＩＤベージュマウスの乳房脂肪体にＨＣＣ−１５６９ｘ２細胞（マトリゲル中５×１０６  ）を接種し、腫瘍体積が２５０〜３７５ｍｍ３に到達するまで監視した。マウスを１０匹の群に分け、５ｍｇ／ｋｇのｃｈ２２Ｃ１０−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、または３ｍｇ／ｋｇ若しくは５ｍｇ／ｋｇのｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、または５ｍｇ／ｋｇのヒト抗ｇＤ−５Ｂ６−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、またはビヒクル（ＰＢＳ）のみの静脈内単回用量を投与した。抗体の存在をＰＫ採血によって確認した。
【０５７５】
図１９Ｂに示すように、ｃｈ２２Ｃ１０−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ及びｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥは、５ｍｇ／ｋｇ用量で、それぞれ、１０７％及び１０５％の腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）を示した。キメラ２２Ｃ１０抗体薬物複合体とヒト化２２Ｃ１０抗体薬物複合体との間の有効性の顕著な差異はなかった。より低い３ｍｇ／ｋｇ用量のｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥは、ビヒクルまたは対照ＡＤＣのいずれかと比較して、９４％の腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）を示した。
【０５７６】
Ｎ．ｈ１Ｄ１１ｖ１．９の変異形
ｈ１Ｄ１１ｖ１．９の変異形を、節Ｆ（「モノクローナル抗体エピトープ分類」）に記載するように、部位特異的突然変異生成のための標準的な分子生物学的プロトコールを使用して作製した。
【０５７７】
軽鎖への修飾を図２２Ａに示す。アミノ酸置換Ｎ９３Ｄを、ｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＣ２及びｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤに対する軽鎖のＣＤＲ−Ｌ３において作製した。
【０５７８】
重鎖への修飾を図２２Ｂに示す。アミノ酸置換Ｄ９６Ａを、重鎖ｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＣ２のＣＤＲ−Ｈ３において作製した。操作したシステイン（Ａ１１８Ｃ）を、リンカー−薬剤複合体の部位特異的結合のために、ｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＣ２及びｈ１Ｄ１１ｖ１．９＿ＶａｒＤの重鎖定常領域中、及びｈ２２Ｃ１０ｖ２．７中にも組み込んだ。
【０５７９】
Ｏ．ｈ１Ｄ１１ｖ１．９の変異形のある特定の特性
１．種交差反応性及び親和性
ｈ１Ｄ１１ｖ１．９変異形Ｃ２及びＤの親和性を、節Ｅ（「抗体親和性」）において前述したように、スキャッチャード分析によって判定した。
【０５８０】
図２３Ａに示すように、抗体変異形は、親抗体種特異性と、組み換えヒトまたはカニクイザルまたはマウスまたはラットＢ７−Ｈ４、及び乳がん細胞株ＭＸ−１中で発現される内在性ヒトＢ７−Ｈ４への高い親和性との両方を維持した。ＶａｒＣ２に対する親和性は、０．９．ｎＭ（組み換えヒトＢ７−Ｈ４）、２．０ｎＭ（ＭＸ−１細胞上のヒトＢ７−Ｈ４）、１．０ｎＭ（組み換えカニクイザルＢ７−Ｈ４）、２．１ｎＭ（組み換えマウスＢ７−Ｈ４）、及び１．２ｎＭ（組み換えラットＢ７−Ｈ４）であり、ＶａｒＤは、２．９ｎＭ（組み換えヒトＢ７−Ｈ４）、７．４ｎＭ（ＭＸ−１細胞上のヒトＢ７−Ｈ４）、３．７ｎＭ（組み換えカニクイザルＢ７−Ｈ４）、５．０ｎＭ（組み換えマウスＢ７−Ｈ４）、及び２．７ｎＭ（組み換えラットＢ７−Ｈ４）である。
【０５８１】
２．エピトープマッピング
組み換えヒトＢ７−Ｈ４上のｈ１Ｄ１１ｖ１．９変異形Ｄ（ｈ１Ｄ１１ｖ１．９ｖａｒＤ）抗体の結合部位を、図２１の上部に示すように（図４Ｂも参照）、また実質的に実施例Ｆに記載のように、Ｂ７−Ｈ４のＩｇ−Ｖ様ドメインまたはＩｇ−Ｃ様ドメインのいずれかを発現しているキメラＩｇ分子を使用して決定した。Ｎ末端ヘルペス−ｇＤタグの１０〜１００倍染色によって判断した場合、全ての構築物がキメラＩｇの細胞表面発現を示した。ｈ１Ｄ１１ｖ１．９ｖａｒＤは、模擬トランスフェクトした２９３細胞と比較して、Ｂ７−Ｈ４のＩｇ−Ｖドメインを発現しているＩｇ−キメラへの顕著な結合（約４４倍）を示した（図２１、左のパネル）。この観察を、３倍連続濃度（０．１〜３００μｇ／ｍＬ）の可溶性Ｂ７−Ｈ４  ＩｇＶ−Ｆｃ融合タンパク質の存在下でのヒトＢ７−Ｈ４を安定して発現している２９３細胞へのｈ１Ｄ１１ｖ１．９ｖａｒＤ（１μｇ／ｍＬ）の競合的結合によって確認した。この場合、２９３−ｈＢ７Ｈ４へのｈ１Ｄ１１ｖ１．９ｖａｒＤの結合は、用量依存的にＢ７−Ｈ４  Ｉｇ−Ｖ−Ｆｃによって阻害された（図２１、中央のパネル）。ｈ１Ｄ１１ｖ１．９ｖａｒＤによるＢ７−Ｈ４のＩｇ−Ｃドメインを持つＩｇ−キメラへの結合はなかったが、Ｍｏｌ−Ｘ  Ｉｇ−Ｖ特異抗体では有意な検出（３９倍）があった。
【０５８２】
Ｂ７−Ｈ４のＩｇ−Ｖ様ドメインは、Ｎ１１２位〜Ｓ１１４位にて単一のＮ連結型グリコシル化部位を含む。Ｓ１１４のアラニンによる置換は、故に、ＮＸＳ／Ｔモチーフを除去し、ｈ１Ｄ１１ｖ１．９ｖａｒＤによる結合の顕著な喪失にはつながらなかった（図２１、右のパネル）。合わせると、これらの観察は、ｈ１Ｄ１１ｖ１．９ｖａｒＤが、親抗体と同様にグリコシル化に依存しない様式でヒトＢ７−Ｈ４のＩｇ−Ｖドメインに結合することを示す。
【０５８３】
Ｐ．抗Ｂ７−Ｈ４抗体−薬物複合体のインビトロでの効力
抗Ｂ７−Ｈ４のｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ｖａｒＤ、ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７、ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ｖａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ、及びｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ抗体薬物複合体の効力を、組み換えヒトＢ７−Ｈ４を過剰発現している２９３細胞を使用して判定した。
【０５８４】
実質的に実施例Ｈにおいて本明細書に記載するように、Ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ｖａｒＤ、ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７、ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ｖａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ、及びｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃを、ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥに複合した。Ｊｕｎｕｔｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２６：９２５−３２も参照されたい。ｍＡｂ１つ当たりの複合されたＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ分子の数を、６５３０  Ａｃｃｕｒａｔｅ−Ｍａｓｓ  Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ  Ｔｉｍｅ−ｏｆ−Ｆｌｉｇｈｔ（Ｑ−ＴＯＦ）ＬＣ／ＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、ＬＣ／ＭＳ分析によって定量した。サイズ排除クロマトグラフィーによって純度を判定した。簡潔に述べると、試料を、８０℃に加熱したＰＲＬＰ−Ｓカラム、１０００Å、８μｍ（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）上でクロマトグラフィーにかけた。４．３分間の３０〜６０％の線形勾配Ｂ（溶媒Ａ、水中０．０５％のＴＦＡ；溶媒Ｂ、アセトニトリル中０．０４％のＴＦＡ）を使用し、溶出剤は、エレクトロスプレー源を使用して直接イオン化した。データを収集し、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｍａｓｓ  Ｈｕｎｔｅｒ定性分析ソフトウェアを使用してデコンボリューションした。ＬＣ／ＭＳ分析の前に、抗体薬物複合体を、１：１００ｗ／ｗの酵素対抗体比、ｐＨ８．０、及び３７℃にて、リシルエンドペプチダーゼ（Ｗａｋｏ）で３０分間処理して、分析を容易にするためにＦａｂ及びＦｃ部分を産生した。クロマトグラフィー条件は、異なるピークにおけるＦａｂ及びＦａｂ＋１薬物の基準解像度を得るように選択した。薬物対抗体比（ＤＡＲ）を、２８０ｎｍでのＵＶクロマトグラムの積分ピークエリアを使用し、デコンボリューションしたＬＣ／ＭＳ結果中に存在するイオンの存在度から直交性に算出した。ＬＣ／ＭＳを使用してピークを特定した。Ａ１１８Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢの薬物：Ｆａｂ比は約１：１であり、インタクトなＡ１１８Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢの薬物：抗体比（ＤＡＲ）は、約２：１（または約２のＤＡＲ）であった。インタクトな非ＴＨＩＯＭＡＢ抗体−薬物複合体のＤＡＲは約３であった。
【０５８５】
９６ウェルプレートにおいて、１ｍＬ当たり１．３３×１０４個の細胞での１５０μＬのＢ７−Ｈ４を発現している２９３細胞を蒔き、２４時間回復させた。翌日、非ｔｈｉｏｍａｂ抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を０．００３〜１０μｇ／ｍＬの範囲の３倍連続希釈で添加し、Ａ１１８Ｃ  ｔｈｉｏｍａｂ  ＡＤＣを、０．００４５〜１５μｇ／ｍＬの範囲の３倍希釈で添加した。ＡＤＣ間の薬物負荷の差異を正規化するために、ＴＨＩＯＭＡＢ  ＡＤＣをより高くして投薬した。ＡＤＣの希釈は最終濃度の４倍で行い、連続希釈した薬物を５０μＬで適切なウェルに加えた。細胞を、４日間５％のＣＯ２と共に３７℃でインキュベートした。細胞生存率を、試薬ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して判定し、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  ２０１２  Ｍｕｌｔｉ−Ｌａｂｅｌ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）上でデータを得て、Ｐｒｉｓｍ  ４を用いてそれを分析した。
【０５８６】
図２３Ｂに示すように、実線は非ＴＨＩＯＭＡＢ  ＡＤＣを表し、破線はＡ１１８Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ  ＡＤＣ（「ＴＤＣ」）を表す。Ｂ７−Ｈ４を過剰発現している２９３細胞の同様のインビトロでの殺滅が、対応する陰性対照抗ｇＤ−５Ｂ６  ＡＤＣと比較して、非ＴＨＩＯＭＡＢ  ＡＤＣ及びＡ１１８Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ  ＡＤＣの両方について観察された。ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ｖａｒＤ−ｖｃ−ＭＭＡＥ及びｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ｖａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥについてのＥＣ５０は、それぞれ、５５．４ｎｇ／ｍＬ及び８１．９ｎｇ／ｍＬであり、ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７−ｖｃ−ＭＭＡＥ及びｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥについては、それぞれ、３３．９ｎｇ／ｍＬ及び４０．５ｎｇ／ｍＬであった。
【０５８７】
Ｑ．Ｈｅｒ２＋ＨＣＣ−１５６９ｘ２乳がん細胞異種移植片モデルにおける抗Ｂ７−Ｈ４変異形Ｃ２及びＤ抗体薬物複合体の有効性
抗Ｂ７−Ｈ４のｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＣ２−ｖｃ−ＭＭＡＥ、ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ−ｖｃ−ＭＭＡＥ、ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＣ２  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥ、及びｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＡＤＣ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥの有効性を、ＨＣＣ−１５６９ｘ２（Ｈｅｒ２＋／ＥＲ−）乳がん細胞異種移植片モデルを使用して調査した。Ｂ７−Ｈ４は、ＨＣＣ−１５６９ｘ２腫瘍異種移植片（分離させた肝臓腫瘍異種移植片細胞またはＦＦＰＥ切片）において高度に発現され、これを、ＩＨＣ及びＦＡＣＳによって確認した（図２４Ａ）。ＳＣＩＤベージュマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の＃２／３乳房脂肪体にＨＣＣ−１５６９ｘ２細胞（ＨＢＳＳ：マトリゲル中５×１０６）を接種し、腫瘍体積が約３３０ｍｍ３に到達するまで監視した。マウスを８匹（ＶａｒＣ２）または９匹（ＶａｒＤ）の群に分け、１．５ｍｇ／ｋｇ、若しくは３ｍｇ／ｋｇ、若しくは６ｍｇ／ｋｇ、若しくは９ｍｇ／ｋｇのｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＣ２  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥ、または３ｍｇ／ｋｇ若しくは９ｍｇ／ｋｇの対照抗ｇＤ−５Ｂ６−ｖｃ−ＭＭＡＥ、またはビヒクル（２０ｍＭのヒスチジン−酢酸緩衝液）のみの静脈内単回用量を投与した。抗体の存在をＰＫ採血によって確認した。
【０５８８】
マウスの第２の群を９匹の群に分け、３ｍｇ／ｋｇのｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ−ｖｃ−ＭＭＡＥ、または１．５ｍｇ／ｋｇ、若しくは３ｍｇ／ｋｇ、若しくは６ｍｇ／ｋｇ、若しくは９ｍｇ／ｋｇのｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥ、３ｍｇ／ｋｇの対照抗ｇＤ−５Ｂ６−ｖｃ−ＭＭＡＥ、３ｍｇ／ｋｇ若しくは９ｍｇ／ｋｇの対照抗ｇＤ−５Ｂ６−ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥ、裸のｈ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ、またはビヒクル（２０ｍＭのヒスチジン−酢酸緩衝液）のみのいずれかの静脈内単回用量を投与した。抗体の存在をＰＫ採血によって確認した。
【０５８９】
腫瘍を測定し、体重を研究期間中１週間に２回収集した。腫瘍体積（ｍｍ３）を、式（長さ×幅２×０．５）を使用して算出した。腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）を、次の式を使用して、ビヒクルとの関連における各処置群に対する１日当たりの腫瘍体積−時間近似曲線下領域（ＡＵＣ）パーセントとして算出した。
ＴＧＩ％＝１００×（１−ＡＵＣ処置／日÷ＡＵＣビヒクル／日）
１００％のＴＧＩ値は腫瘍の停止を示し、１％超であるが１００％未満であるＴＧＩは腫瘍成長の遅延を示し、１００％超のＴＧＩは腫瘍の退縮を示す。
【０５９０】
図２４Ｂに示すように、相当な有効性が、１１８％のＴＧＩ％で９ｍｇ／ｋｇのｈ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＣ２  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥについて観察された（４／８の部分寛解、及び４／８の完全寛解）。腫瘍退縮も、９６％（１／８の部分寛解）及び１０８％（３／８の部分寛解）のＴＧＩ％で３ｍｇ／ｋｇ及び６ｍｇ／ｋｇの群において見られた。加えて、体重減少は、いずれの処置群でも観察されなかった。寛解は、対照ＡＤＣまたはビヒクルのいずれでも観察されなかった。
【０５９１】
図２４Ｃに示すように、用量依存的有効性が観察され、ここでは、１．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、及び９ｍｇ／ｋｇのｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥの単回用量は、それぞれ、５６％、７５％、９１％、及び９３％のＴＧＩ％をもたらした。３ｍｇ／ｋｇ用量での有効性は、マウスがｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥを受けた場合とｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ−ｖｃ−ＭＭＡＥを受けた場合とでほぼ同等であった。体重減少は、いずれの処置群でも観察されなかった。寛解は、裸のｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ、対照ＡＤＣ、またはビヒクルのいずれでも観察されなかった。
【０５９２】
Ｒ．ＴＮＢＣ  ＭＸ−１乳がん細胞異種移植片モデルにおける抗Ｂ７−Ｈ４抗体薬物複合体の有効性
ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ及びｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ  ＡＤＣの抗Ｂ７−Ｈ４  ＴＤＣまたはＡＤＣの有効性を、ＭＸ−１（Ｈｅｒ２−／ＥＲ−／ＰＲ−）乳がん異種移植片モデルを使用して調査した。Ｂ７−Ｈ４は、ＭＸ−１腫瘍異種移植片（分離させた肝臓腫瘍異種移植片細胞またはＦＦＰＥ切片）において高度に発現され、これを、ＩＨＣ及びＦＡＣＳによって確認した（図２５Ａ）。ＮＣＲヌードマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｃｉｔｙ，ＩＮ）の＃２／３乳房脂肪体にＭＸ−１細胞（マトリゲル中１×１０６）を接種し、腫瘍体積が約２４０ｍｍ３に到達するまで監視した。マウスを９匹の群に分け、３ｍｇ／ｋｇのｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ−ｖｃ−ＭＭＡＥ、または１．５ｍｇ／ｋｇ、若しくは３ｍｇ／ｋｇ、若しくは６ｍｇ／ｋｇ、若しくは９ｍｇ／ｋｇのｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥ、９ｍｇ／ｋｇのｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ、あるいは３ｍｇ／ｋｇ若しくは９ｍｇ／ｋｇの対照抗ｇＤ−５Ｂ６  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥ、あるいはビヒクル（２０ｍＭのヒスチジン−酢酸緩衝液）のみの静脈内単回用量を投与した。抗体の存在をＰＫ採血によって確認した。
【０５９３】
図２５Ｂに示すように、相当な腫瘍の退縮が、ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ−ｖｃ−ＭＭＡＥまたはｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥのいずれかの全用量によって達成され、ＴＧＩ％は、９５〜１１９％の範囲であった（３、６、及び９ｍｇ／ｋｇ用量のｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥは、それぞれ、１１４％、１１７％、及び１１９％のＴＧＩ％をもたらした）。３ｍｇ／ｋｇ用量の非ＴＨＩＯＭＡＢ  ＡＤＣ及びＴＨＩＯＭＡＢ  ＡＤＣの有効性は同様であったが、３ｍｇ／ｋｇのＴＨＩＯＭＡＢ  ＡＤＣに対する応答は、３ｍｇ／ｋｇの非ＴＨＩＯＭＡＢ  ＡＤＣを投薬した動物よりも低い腫瘍再成長で、投薬後約２５日間持続した。体重は、研究期間を通して両群において維持された。これらの群において研究終了時（２９日目）に腫瘍再成長または体重減少の兆候が見られなかったため、有効性は、６ｍｇ／ｋｇまたは９ｍｇ／ｋｇのｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥで改善された。ビヒクル群及び陰性対照群は、顕著な腫瘍阻害または体重減少を示さなかった。
【０５９４】
Ｓ．ＨＣＩ−００２乳がん細胞異種移植片モデルにおける抗Ｂ７−Ｈ４抗体薬物複合体の有効性
抗Ｂ７−Ｈ４  ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥ及びｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７−ｖｃ−ＭＭＡＥ  ＡＤＣの有効性を、Ｈｕｎｔｓｍａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｕｔａｈ）にて成長させた患者由来のトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ；Ｈｅｒ２−／ＥＲ−／ＰＲ−）異種移植片モデル（ＨＣＩ−００２）を使用して調査した。Ｂ７−Ｈ４は、ＨＣＩ−００２腫瘍異種移植片から切り離した細胞の細胞表面上に発現されるが、ＦＡＣＳによってＭＸ−１モデルにおいて観察されたものを下回った。ＩＨＣは、ＦＦＰＥ異種移植片切片上で同様のレベルの発現を示した（図２６Ａ）。ＮＣＲヌードマウスの＃２／３乳房脂肪パッドに２×２ｍｍの腫瘍断片を移植し、腫瘍体積が約２６０ｍｍ３に到達するまで監視した。マウスを７匹の群に分け、３ｍｇ／ｋｇのｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７−ｖｃ−ＭＭＡＥ、または３ｍｇ／ｋｇ、若しくは６ｍｇ／ｋｇ、若しくは９ｍｇ／ｋｇのｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥ、３ｍｇ／ｋｇ若しくは９ｍｇ／ｋｇの対照抗ｇＤ  ５Ｂ６  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥ、またはビヒクル（２０ｍＭのヒスチジン−酢酸緩衝液）のみの静脈内単回用量を投与した。抗体の存在をＰＫ採血によって確認した。
【０５９５】
図２６Ｂに示すように、相当な腫瘍の退縮が、ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７−ｖｃ−ＭＭＡＥまたはｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥのいずれかの全用量によって達成され、ＴＧＩ％は、１１２〜１１５％の範囲であった（３、６、及び９ｍｇ／ｋｇ用量のｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥは、それぞれ、１１２％、１１４％、及び１１４％のＴＧＩ％をもたらした）。３ｍｇ／ｋｇのｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７−ｖｃ−ＭＭＡＥとｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥとの間の顕著な差異はなかったが、両群における少数の動物は、２５日目前後に腫瘍再成長を示し始めた。全体として、顕著な体重減少は３ｍｇ／ｋｇ群では観察されなかった。これらの群において研究終了時（３３日目）に腫瘍再成長または体重減少の兆候が見られなかったため、有効性は、６ｍｇ／ｋｇ及び９ｍｇ／ｋｇのｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥでわずかに改善された。ビヒクル群及び陰性対照群は顕著な腫瘍阻害を示さなかったが、これは９ｍｇ／ｋｇの抗ｇＤ  ５Ｂ６  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥを投薬したマウスを除き、これらのマウスは、２０日目までは腫瘍成長を遅延させたが、研究終了前または終了時に許容される最大腫瘍体積に到達した。
【０５９６】
以前の実験では、２〜３ｍｇ／ｋｇ用量の従来のＡＤＣは、ヒトの臨床試験において観察される用量制限毒性（ＤＬＴ、２．４ｍｇ／ｋｇ）に近いことが分かった。Ｊｕｎｕｔｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２６：９２５−９３２を参照されたい。ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）技術（すなわち、本明細書で考察するＡ１１８Ｃ等のシステインを操作した抗体）は、従来の抗体−薬物複合体の同等の細胞傷害性薬物用量と比較して有効性を喪失することなく、改善された安全性を付与することが報告されている。同上。発明者らのデータは、３〜６ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ４−ｖｃ−ＭＭＡＥ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）用量が、従来のＡＤＣと比較した循環におけるより長い保持及びより低い薬物抗体比に起因して、より良好な有効性及び安全性をもたらすはずであることを示唆する。
【０５９７】
Ｔ．ラットにおける抗Ｂ７−Ｈ４抗体組織分布
組織分布を、側鎖リジンを介してデスフェリオキサミンＢ（ＤＦＯ）キレート基に複合したｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃを使用して、ジルコニウムｉＰＥＴ画像化によって評定した。例えば、Ｖｅｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  ４４：１２７１−８１を参照されたい。全ての試験は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．にてＡＡＡＬＡＣに承認されているＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅのガイドラインに従って実施した。
【０５９８】
拘束するために動物を３．５％のセボフルランで軽度に麻酔し、体温を温かい気流によって維持した。ラット（ｎ＝２／群）に、外側尾静脈を介して１ｍＣｉ（７００μＬ、０．７ｍｇ／ｍＬ）の８９Ｚｒ−ｍＡｂを注射した。ＰＥＴ／ＣＴスキャナ（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ，ＴＮ，ＵＳＡ）を使用するＰＥＴスキャンは、０日目及び１日目の時点については１５分の静態スキャン、２日目には３０分の静態スキャン、５日目には１時間のスキャンに増加させて、放射性崩壊を補償した。全てのＰＥＴスキャンの直後に、ＰＥＴデータの解剖学的基準及び減衰補正のためのＣＴスキャンを続けた。体長全体を収めるために１ラット当たり２回のスキャンが必要であった。リストモードデータを、ベータ平滑化パラメータを０．０５に設定したベンダー提供の反復ＯＰ−ＭＡＰ実装を使用して、０．４×０．４ｍｍの２５６×２５６面内ボクセル及び０．８ｍｍの面直交ボクセルの厚さの画像に再構築した。例えば、Ｑｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，ＩＥＥＥ  ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ｏｎ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｉｍａｇｉｎｇ，１９：４９３−５０６を参照されたい。
【０５９９】
正規化していない取り込みを、特定の目的領域（ＲＯＩ；この実験では、卵巣、肺、肝臓等の組織）１グラム当たりの平均注射用量（ＩＤ）として表す。１グラム当たりの放射能の注射用量（ＩＤ）の割合（％）は、ＩＤ／ｇ％＝ＲＯＩ活性÷放射能の注射用量×１００％で決定する。ＲＯＩ活性は、目的領域（ＲＯＩ）において蓄積された放射能であり、これは、画像スキャンではピクセルとして測定される。
【０６００】
図２７に示すように、８９Ｚｒ標識化ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃは、卵巣を除いて５日目まで、アイソタイプ一致型対照である８９Ｚｒ−抗ｇＤと同様の組織分布（血液、脾臓、腎臓、肝臓、及び肺）を示した。１６時間後、８９Ｚｒ標識化ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃは、血液プール及び卵巣における分布を示した（図２８Ａ）。抗体が血液プールから消散すると、最大値投影法により、アイソタイプ対照と比較して、卵巣においてのみ８９Ｚｒ標識化ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃの顕著な蓄積が示され、取り込み値は、それぞれ２．７５％＋／−０．４及び１．０％＋／−０．２であった（図２８Ｂ、Ｃ）。この結果は、ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９−ＶａｒＤ  ＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃが組み換えラットＢ７−Ｈ４に結合するため、想定外ではない（図２８Ｄ）。他の組織は、５日目までにいずれの抗体の画像化によっても蓄積を示さなかった。
【０６０１】
Ｕ．抗Ｂ７−Ｈ４抗体はマウスモデルにおいて炎症を増大させない
ｍｕ１Ｄ１１を脳脊髄炎（ＥＡＥ）の実験モデルにおいて評定した。０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、０．１ｍＬのＰＢＳ及び０．１ｍＬのＣＦＡ中の３００μｇのＭＯＧ３５−５５ペプチドを含有する０．２ｍＬのエマルションで免疫処理した。全ての群は、０．１ｍＬのＰＢＳ中の百日咳毒素（２００ｎｇ）のＩＰ注射も受けた。被験物質を、３週間、週３回、１０ｍｇ／ｋｇでＩＶ投与した。百日咳毒素の第２のＩＰ用量を２日目に与えた。７日目に臨床評価を開始し、マウスを、２５日目まで、臨床検査によって週３回評定した。臨床的スコア化は次のように行った：０−正常マウス、疾患の明白な兆候なし。１−尾の引きずりまたは後肢の衰弱のいずれか。２−尾の引きずり及び後肢の衰弱。３−後肢の部分麻痺。４ａ−後肢の完全麻痺；４ｂ−中等度から重度の前肢の衰弱を伴う後肢の完全麻痺。５−ＥＡＥによる瀕死状態または死亡。被験物質：陽性対照（ｍＣＴＬＡ−４−Ｉｇ、ｍＩｇＧ２ａ）、陰性対照（抗ｇｐ１２０、ｍＩｇＧ２ａ）、抗Ｂ７−Ｈ４  ｍｕ１Ｄ１１（ｍＩｇＧ２ａ）。図２９に示すように、ＥＡＥは、ｍＣＴＬＡ−４Ｉｇによって回復されたが、疾患の発症及び重症度の低減または悪化のいずれにおいても、アイソタイプ一致型Ｉｇ対照またはｍｕ１Ｄ１１（「Ａｂ−１１」）抗体間で顕著な差異はなかった。いずれかの特定の理論に束縛されることを意図するものではないが、ＣＩＡモデル（データ割愛）及びＥＡＥモデルにおける増大した炎症の欠如は、腫瘍阻害がＭＭＡＥの作用によるものであり、抗Ｂ７−Ｈ４抗体による抗腫瘍免疫の再開に由来するものではないことを示唆する。
【０６０２】
Ｖ．抗Ｂ７Ｈ４二重エピトープ抗体
ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９  ｖａｒＤ／ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７の二重エピトープ抗体分子を、ノブの半抗体アームとホールの半抗体アームとを別個に発現させることによって、ノブ−ホール式で産生した。発現した半抗体アームを別個に精製した後、インビトロで組織化して二重エピトープ抗体にした。簡潔に述べると、ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９の重鎖を再配列して、ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９ノブｐＨＩＳ重鎖（配列番号１４９）及びｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９ホールＦＬＡＧ重鎖（配列番号１５１）にした。ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７の重鎖を再配列して、ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７ノブｐＨＩＳ重鎖（配列番号１５４）及びｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７ホールＦＬＡＧ重鎖（配列番号１５６）にした。インビトロで組織化した二重エピトープ分子の精製のために、ｐｏｌｙ−ｈｉｓタグ（ｐＨＩＳ）をノブアームのカルボキシ末端部に付加し、ＦＬＡＧタグをホールアームのカルボキシ末端部に付加した。ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９  ｖａｒＤの軽鎖（配列番号１４５）は薬物複合体のためのＫ１４９Ｃ突然変異を含み、ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７の軽鎖（配列番号１４７）も同様であった。ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９  ｖａｒＤ  Ｋ１４９Ｃ．ノブｐＨＩＳ／ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７  Ｋ１４９Ｃ．ホールＦＬＡＧの産生のため、ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９  ｖａｒＤノブＨＩＳ重鎖（配列番号１４９）／ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９  ｖａｒＤ  Ｋ１４９Ｃ軽鎖（配列番号１４５）、及びｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７ホールＦＬＡＧ重鎖（配列番号１５６）／ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７  Ｋ１４９Ｃ軽鎖（配列番号１４７）を、以下に記載のように、Ｅｘｐｉ２９３細胞中で別個に発現させた。ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７  Ｋ１４９Ｃ．ノブｐＨＩＳ／ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９  ｖａｒＤ  Ｋ１４９Ｃ．ホールＦＬＡＧの産生のため、ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７ノブｐＨＩＳ重鎖（配列番号１５４）／ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７  Ｋ１４９Ｃ軽鎖（配列番号１４７）及びｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９  ｖａｒＤ  Ｋ１４９Ｃ．ホールＦＬＡＧ重鎖（配列番号１５１）／ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．９  ｖａｒＤ  Ｋ１４９Ｃ軽鎖（配列番号１４５）を、以下に記載のように、Ｅｘｐｉ２９３細胞中で別個に発現させた。
【０６０３】
二重エピトープ抗体の各アームを、３０ｍＬの哺乳動物の一過性発現培養において半抗体として発現させた。簡潔に述べると、Ｅｘｐｉ２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．）に、各半抗体の重鎖及び軽鎖（軽鎖と対になったＨｉｓタグ付きのノブ重鎖、または軽鎖と対になったＦＬＡＧタグ付きホール重鎖）をコードしているプラスミドＤＮＡをトランスフェクトし、製造業者のプロトコールに従って培養した。細胞培養上清を、０．１ｍＬのＭａｂＳｅｌｅｃｔ  Ｓｕｒｅ樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を含む新たな試験管に移し、プラットフォーム振盪器（Ｉｎｎｏｖａ  ２０００，Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上で２００ｒｐｍで一晩インキュベートした。沈殿させた後、樹脂をフィルタープレートに移し、ｐＨ７．４の１ｍＬのＰＢＳ緩衝液で２回洗浄して、未結合タンパク質及び培地成分を除去した。結合した半抗体を、３つの連続溶出ステップにおいて溶出緩衝液（５０ｍＭのリン酸、ｐＨ２．９）を用いて樹脂から溶出させ（全溶出体積は約０．５１ｍＬであった）、中和緩衝液（１Ｍのアルギニン、０．６８５Ｍのコハク酸塩、ｐＨ５．０）を添加してｐＨを上昇させた。半抗体調製物の濃度を、分光光度計（Ｎａｎｏｄｒｏｐ  ８０００，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で２８０ｎｍの波長での吸光度を測定した後で算出した。
【０６０４】
単離した半抗体を同じ濃度に正規化し、１：１の比で混合した。１ＭのアルギニンのｐＨ９．５の溶液を添加して、混合物のｐＨを８．０に上昇させた。還元したＬ−グルタチオン（１Ｍのアルギニン中の０．５Ｍの原液、ｐＨ９．５）を添加して、グルタチオン濃度が溶液中のタンパク質の量を２００倍超過するようにした。この混合物を３２℃で２４時間インキュベートして、半抗体を二重エピトープ抗体に組織化させた。
【０６０５】
上述のように生成した所望の二重エピトープ抗体（ノブ半抗体及びホール半抗体で構成されるヘテロ二量体）を、２ステップのプロセスを使用して他の種（組織化されていない半抗体、及びノブ−ノブまたはホール−ホールのホモ二量体）から分離した。第１のステップは、０．１ｍＬのＮｉ−ＮＴＡアガロース樹脂（Ｑｉａｇｅｎ）をカスタムパックした（Ｇｌｙｃｅｎ  Ｃｏｒｐ．）液体処理先端部（Ｄｙｎａｍｉｃ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＬＬＣ、１．２５ｍＬ）の使用を伴う。Ｌｙｎｘ  ＬＭ１２００液体処理ワークステーションを使用して、ＨＩＳタグの付いた全ての種（組織化されていないノブ半抗体、ノブ−ノブのホモ二量体、及びノブ−ホールヘテロ二量体を含む）を、１５サイクルのピペッティングによって樹脂先端部に捕捉した。樹脂先端部をｐＨ７．４の１ｍＬのＰＢＳで洗浄し、ＨＩＳタグの付いた種を、溶出緩衝液（５０ｍＭのリン酸ナトリウム、５００ｍＭの塩化ナトリウム、３００ｍＭのイミダゾール、ｐＨ７．５）を用いて、２回の連続溶出ステップ（全溶出体積は約０．５ｍＬ）で先端部から溶出させた。溶出させた試料を試薬グレードの水と１：２で希釈して、次のステップに備えた。
【０６０６】
調製の第１段階の後、０．４ｍＬの５０％の抗ＦＬＡＧ抗体樹脂スラリー（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を、溶出させた試料に添加し、結果として得られる混合物を、２００ｒｐｍの振盪器上で３時間４℃にてインキュベートした。樹脂を、１０００ｒｐｍでの５分間の遠心分離によって上清から分離した。樹脂をフィルタープレートに移し、ｐＨ７．４の１ｍＬのＰＢＳで洗浄して、未結合タンパク質を除去した。結合した二重エピトープ抗体（ヘテロ二量体）を、３回の連続溶出において合計約１．５７ｍＬの溶出緩衝液（５０ｍＭのリン酸、ｐＨ２．９）を使用して樹脂から溶出させ、ｐＨ１１．０の０．１１ｍＬの２０倍ＰＢＳで中和して、精製した二重エピトープ抗体溶液のｐＨを６．０に調整した。
【０６０７】
Ｗ．抗Ｂ７−Ｈ４二重エピトープ抗体による機能的結合
組織化された抗Ｂ７−Ｈ４二重エピトープ抗体を、ＭＸ−１細胞の細胞表面における腫瘍由来の内在性ヒトＢ７−Ｈ４への結合について評定した。二重エピトープ抗体ノブ−ｈ１Ｄ１１ｖ１．９  ｖａｒＤ：ホール−ｈ２２Ｃ１０ｖ２．７（「ＫＨ１Ｄ＋２２Ｃ」）またはノブ−ｈ２２Ｃ１０ｖ２：ホール−７ｈ１Ｄ１１ｖ１．９ｖａｒＤ（「ＫＨ２２Ｃ＋１Ｄ」）（各々、細胞傷害性薬剤の結合のための軽鎖Ｋ１４９Ｃ突然変異を含み、各々、Ｄｙｌｉｇｈｔ−６５０複合体で標識されている）を、４０分間氷上で、３重のステップにおいて０．０１〜１０μｇ／ｍＬの範囲の濃度でＭＸ−１細胞とインキュベートした。細胞を洗浄し、ヨウ化プロピジウムの存在下で再懸濁させ、直後に４つのカラーパラメータによるＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（商標）で分析した。
【０６０８】
図３０は、抗Ｂ７−Ｈ４二重エピトープ抗体が、ＭＸ−１細胞の表面において親単一エピトープ抗体に相当する親和性でＢ７−Ｈ４と結合することを示す。
【０６０９】
Ｘ．二重エピトープ抗体の膜染色及び内在化
上述のＤｙｌｉｇｈｔ−６５０に複合した抗体を使用して、ＭＸ−１細胞膜への本抗体の結合、及びその後続の細胞への内在化を監視した。ＭＸ−１細胞を、Ｎｕｎｃ（商標）Ｌａｂ−Ｔｅｋ（商標）チャンバ付き１．０ホウケイ酸カバーガラス上に、１チャンバ当たり細胞約３０，０００個で蒔いた。細胞を１日かけて回復及び成長させた後、ｈ１Ｄ１１ｖ１．９  ｖａｒＤ、ｈ２２Ｃ１０ｖ２．７、二重エピトープ抗体ノブ−ｈ１Ｄ１１ｖ１．９  ｖａｒＤ：ホール−ｈ２２Ｃ１０ｖ２．７、または二重エピトープノブ−ｈ２２Ｃ１０ｖ２：ホール−７ｈ１Ｄ１１ｖ１．９ｖａｒＤで染色した。細胞を、１５μｇ／ｍＬの蛍光に複合された抗体（各々、Ａｂ分子１個当たり約６個の色素分子を有する）で氷上で１時間かけて染色した。本抗体を含む培地を除去し、新たな氷冷培地で置き換え、画像化または３７℃に遷移するまで氷上に保った。０時間、１時間、２時間、３時間、４時間、及び５時間の時点で、共焦点顕微鏡法によって撮像した。Ｄｙｌｉｇｈｔ−６５０抗体複合体が光源への曝露の結果として光退色するのを最小限に抑えるために、チャンバスライドを各時点に対して作製した。
【０６１０】
図３１Ａ〜Ｂは、単一エピトープ親抗Ｂ７−Ｈ４抗体についての結果を示し、図３１Ｃ〜Ｄは、二重エピトープ抗Ｂ７−Ｈ４抗体についての結果を示す。５時間の時点を図３１に示す。Ｃ及びＤ中の画像は、親単一エピトープ抗体と比較して、二重エピトープ抗体の細胞内部のより強い染色及びより蛍光性の点を示す。
【０６１１】
Ｙ．二重エピトープ抗Ｂ７−Ｈ４抗体による乳腫瘍細胞株のインビトロの殺滅
単一特異性及び二重エピトープ抗Ｂ７−Ｈ４抗体のインビトロの効力の評定を、実施例Ｐに記載するように続いて行った。全ての抗体は、軽鎖Ｋ１４９Ｃ突然変異を含み、ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥに複合され、薬物−抗体比（ＤＡＲ）は約２であった。本抗体を、Ｂ７−Ｈ４陰性ＭＣＦ−７細胞、Ｂ７−Ｈ４陽性２９３ｈＢ７−Ｈ４細胞、Ｂ７−Ｈ４陽性ＭＸ−１細胞、及びＢ７−Ｈ４陽性ＳＫＢＲ３細胞に対して試験した。
【０６１２】
この実験の結果を図３２Ａ〜Ｄに示す。図３２Ａに示すように、単一エピトープ抗Ｂ７−Ｈ４  ＡＤＣまたは二重エピトープ抗Ｂ７−Ｈ４  ＡＤＣのいずれも、Ｂ７−Ｈ４乳腫瘍細胞株ＭＣＦ−７に影響しなかった。対照的に、全てのＡＤＣが、細胞表面にてＢ７−Ｈ４の多数のコピー（抗体ｈ１Ｄ１１ｖ１．９ｖａｒＤを使用して測定して、細胞１個当たり約１．２×１０６コピー）を発現する、２９３−ｈＢ７−Ｈ４細胞に対する同様の効力を示した。図３２Ｂを参照されたい。図３２Ｃ及びＤに示すように、細胞膜にて極めてより低いレベルのＢ７−Ｈ４を有する（抗体ｈ１Ｄ１１ｖ１．９ｖａｒＤを使用して測定して、ＭＸ−１については細胞１個当たり約１×１０５  コピー、ＳＫＢＲ３については細胞１個当たり約１．９×１０４  コピー）乳腫瘍細胞株ＭＸ−１（トリプルネガティブ）及びＳＫＢＲ３（Ｈｅｒ２＋）においては、抗Ｂ７−Ｈ４二重エピトープ抗体は、親単一エピトープ抗体と比較して、腫瘍細胞成長の阻害にあたりより強力であった。
【０６１３】
いずれかの特定の理論に束縛されることを意図するものではないが、図３１の結果は、内在化が、単一エピトープ抗体と比較して二重エピトープ抗体でより高いことを示し、このことは、図３２Ｃ及びＤに示す向上したインビトロの殺滅が、腫瘍細胞への改善した薬物送達の結果であり得ることを示唆する。
【０６１４】
Ｚ．表Ａに例示されるある特定の抗体−薬物複合体を作製するためのある特定のリンカー−薬物（ＬＤ）中間体の合成
ＡＤＣ−５１のリンカー−薬物中間体：（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピル（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（ＭＳ（ＥＳＩ）：８７５［Ｍ＋Ｈ］＋）は、ＷＯ２０１３／０５５９８７の手順によって調製され得る。
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【０６１５】
塩化スルフリル（２．３５ｍＬのＤＣＭ中の１．０Ｍ溶液、２．３５ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下で０℃（氷／アセトン）にて、脱水ＤＣＭ（７．５ｍＬ）中の５−ニトロピリジン−２−チオール（３３４ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に滴加する。反応混合物は、黄色の懸濁液から黄色の溶液となり、それを室温で温まらせた後で２時間撹拌し、その後、溶媒を真空蒸発によって除去して、黄色固体を得る。この固体をＤＣＭ（１５ｍＬ）中に再溶解し、アルゴン雰囲気下で０℃にて、脱水ＤＣＭ（７．５ｍＬ）中の（Ｒ）−２−メルカプトプロパン−１−オール（２１３ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）の溶液で滴下処理する。反応混合物を室温に温まらせて２０時間撹拌すると、この時点でのＬＣ／ＭＳによる分析により、１．４１分の保持時間（ＥＳ＋）ｍ／ｚ  ２４７（［Ｍ＋Ｈ］＋．、約１００％の相対強度）にて相当な産生物の形成が明らかとなる。沈殿物を濾過により除去し、濾液を真空蒸発させて橙色固体を得て、これをＨ２Ｏ（２０ｍＬ）で処理し、水酸化アンモニウム溶液で塩基性化する。混合物をＤＣＭ（３×２５ｍＬ）で抽出し、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、真空蒸発させて、粗産生物を得る。フラッシュクロマトグラフィー（増分１％での勾配溶出：１００％のＤＣＭから９８：２ｖ／ｖのＤＣＭ／ＭｅＯＨ）による精製によって、油状の（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロパン−１−オールを得る（１１１ｍｇ、収率２１％）。
【０６１６】
トリホスゲン（４８ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を、脱水ＤＣＭ（５ｍＬ）中の（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロパン−１−オール（１１１ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）及びピリジン（３４μＬ、３３．５ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加する。反応混合物をアルゴン雰囲気下で４５分間撹拌させた後、溶媒を真空蒸発によって除去して、黄色フィルム状の（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピルカルボノクロリデートを得る。産生物を、精製または分析せずに次のステップに持ち越す。
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【０６１７】
脱水ＤＣＭ（５ｍＬ）中の（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピルカルボノクロリデート（約１３９ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）の溶液を、ＷＯ  ２０１３／０５５９８７中の実施例１の手順によって作製され得るジ−ｔｅｒｔ−ブチル（（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（６−（（２Ｒ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンシクロペンタン−１−カルボニル）−４−メトキシ−３，１−フェニレン））ジカルバメート５１ａ（４３０ｍｇ、約０．４５ｍｍｏｌ）と、ピリジン（４０μＬ、３９ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）との室温にある脱水ＤＣＭ（１２ｍＬ）中の撹拌溶液に滴加する。反応混合物を２．５時間アルゴン雰囲気下で撹拌させると、この時点でのＬＣ／ＭＳによる分析により、保持時間２．４２分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ  １２２６（［Ｍ＋Ｈ］＋．、約２０％の相対強度）、１２４８（［Ｍ＋Ｎａ］＋．、約６０％の相対強度）にて相当な産生物の形成が明らかとなる。混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、ＳｉＯ２で処理し、溶媒を真空蒸発によって除去する。結果として得られる残基をフラッシュクロマトグラフィー（増分１０％での勾配溶出：８０：２０ｖ／ｖのヘキサン／ＥｔＯＡｃから７０：３０ｖ／ｖのヘキサン／ＥｔＯＡｃ）による精製に供して、黄色泡状のｔｅｒｔ−ブチル（２−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）オキシ）メチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−５−（（５−（４−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）オキシ）メチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシ−５−（（（（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロポキシ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）ペンチル）オキシ）−４−メトキシフェニル）カルバメート５１ｂを得る（４１９ｍｇ、収率７６％）。（ＭＳ（ＥＳＩ）：１２２４［Ｍ＋Ｈ］＋）
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【０６１８】
氷酢酸（２４ｍＬ）を、ＴＨＦ（８ｍＬ）及びＨ２Ｏ（８ｍＬ）中のＴＢＳで保護した５１ｂ（４１９ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加する。反応混合物を１６時間撹拌させると、この時点でのＬＣ／ＭＳによる分析により、保持時間１．８２分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ  ９９７（［Ｍ＋Ｈ］＋．、約１００％の相対強度）、１０１９（［Ｍ＋Ｎａ］＋．、約４５％の相対強度）にて観察される所望の産生物との反応競合が明らかとなる。反応混合物を、ＮａＨＣＯ３  の冷却した（０〜５℃）飽和溶液（４００ｍＬ）に滴加する。中性溶液を室温に温まらせ、ＥｔＯＡｃ（４×１００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＨ２Ｏ（８０ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４））、濾過し、真空蒸発させて、粗産生物を得る。フラッシュクロマトグラフィー（増分１％での勾配溶出：１００％のＤＣＭから９８：２ｖ／ｖのＤＣＭ／ＭｅＯＨ）による精製により、黄味を帯びた泡状のｔｅｒｔ−ブチル（２−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−５−（（５−（４−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシ−５−（（（（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロポキシ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）ペンチル）オキシ）−４−メトキシフェニル）カルバメート５１ｃを得る（３４１ｍｇ、収率１００％）。（ＭＳ（ＥＳＩ）：９９５［Ｍ＋Ｈ］＋）
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【０６１９】
脱水ＤＣＭ（７．５ｍＬ）中の無水ＤＭＳＯ（１０７μＬ、１８８ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン雰囲気下で、−４５℃（ドライアイス／ＣＨ３ＣＮ）にて、脱水ＤＣＭ（７．５ｍＬ）中の塩化オキサリルの撹拌溶液（４１０μＬのＤＣＭ中２．０Ｍ溶液、０．８２ｍｍｏｌ）に滴加する。−４５℃で１５分撹拌した後、反応混合物を、脱水ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の５１ｃ（３４１ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）の溶液で滴下処理する。−４５℃でさらに１時間撹拌した後、反応混合物を、脱水ＤＣＭ（７．５ｍＬ）中のＴＥＡ（４７６μＬ、３４２ｍｇ、３．４２ｍｍｏｌ）の溶液で滴下処理する。反応混合物を１．５時間かけて室温に温まらせて、ＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈した後、飽和ＮＨ４Ｃｌ（１５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１５ｍＬ）、ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、真空蒸発させて、粗産生物を得る。フラッシュクロマトグラフィー（増分０．４％での勾配溶出：１００％のＤＣＭから９８．４：１．６ｖ／ｖのＤＣＭ／ＭｅＯＨ）による精製により、黄味を帯びた泡状のｔｅｒｔ−ブチル（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−８−（（５−（（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−１０−（（（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロポキシ）カルボニル）−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート５１ｄを得る（２２７ｍｇ、収率６７％）：ＬＣ／ＭＳ保持時間１．６９分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ  ９９３（［Ｍ＋Ｈ］＋．、約８０％の相対強度）、１０１５（［Ｍ＋Ｎａ］＋．、約２０％の相対強度）。
【０６２０】
９５：５ｖ／ｖのＴＦＡ／Ｈ２Ｏの溶液（４ｍＬ）に、０℃（氷／アセトン）にて５１ｄの粗試料（２１６ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を添加する。０℃で３０分間撹拌した後、ＬＣ／ＭＳ（保持時間１．６０分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ  ８７５（［Ｍ＋Ｈ］＋．、約１００％の相対強度）にて所望の産生物ピーク）によって判断して、反応完了と見なしても良い。反応混合物を冷たい状態に保ち、ＮａＨＣＯ３  の冷却した飽和水溶液（１００ｍＬ）に滴加する。混合物をＤＣＭ（３×３０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、真空蒸発させて、粗産生物をもたらす。フラッシュクロマトグラフィー（増分０．４％での勾配溶出：１００％のＣＨＣｌ３  から９８．４：１．６ｖ／ｖのＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ）による精製により、黄色泡状のＬＤ−５１を得る（１２７ｍｇ、収率６６％）：ＬＣ／ＭＳ  （実行１５分）、保持時間６．１８分（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ８７５  （［Ｍ＋Ｈ］＋．、約１００％の相対強度）；１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ９．２１  （ｓ，  １Ｈ），  ８．３０  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．８  Ｈｚ），  ７．６９  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ４．５  Ｈｚ），  ７．６２  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．９  Ｈｚ），  ７．４９  （ｓ，  １Ｈ），  ７．２５  （ｓ，  １Ｈ），  ６．７９  （ｓ，  １Ｈ），  ６．７４  （ｓ，  １Ｈ），  ５．５８  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ４．４，  ９．８  Ｈｚ），  ５．２２−５．１０  （ｍ，  ４Ｈ），  ４．４３  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ３．７  Ｈｚ），  ４．３３−４．２５  （ｍ，  ４Ｈ），  ４．１５−３．９８  （ｍ，  ５Ｈ），  ３．９５−３．８０  （ｍ，  ７Ｈ），  ３．６８−３．５９  （ｍ，  １Ｈ），  ３．２０−３．０７  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．９９−２．８７  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．７６−２．６８  （ｍ，  ２Ｈ），  １．９９−１．８３  （ｍ，  ４Ｈ），  １．７２−１．５７  （ｍ，  ２Ｈ），  １．１９  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ）。
【０６２１】
ＡＤＣ−５２のリンカー−薬物中間体：２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピル（２，５−ビス（（Ｅ）−３−（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−５−（ホスホノオキシ）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３−イル）−３−オキソプロプ−１−エン−１−イル）フェニル）カルバメート（ＭＳ（ＥＳＩ）：１０９８［Ｍ＋Ｈ］＋）は、ＷＯ  ２０１５／０２３３５５ＬＤ−５３の手順によって調製され得、（Ｓ）−１−（クロロメチル）−３−（（Ｅ）−３−（４−（（Ｅ）−３−（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−５−（ホスホノオキシ）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３−イル）−３−オキソプロプ−１−エン−１−イル）−２−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）フェニル）アクリロイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イル二水素ホスフェート（ＭＳ（ＥＳＩ）：９９４［Ｍ＋Ｈ］＋）は、ＷＯ  ２０１５／０２３３５５の手順によって調製され得る。
【０６２２】
ＡＤＣ−５４のリンカー−薬物中間体：（Ｒ）−２−（（３−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピル（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（ＭＳ（ＥＳＩ）：８７６［Ｍ＋Ｈ］＋）は、ＷＯ  ２０１３／０５５９８７の手順によって調製され得る。
【０６２３】
ＡＤＣ−５５のリンカー−薬物中間体：４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（２−オキソ−２−（（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−イル）エチル）エタン−１，２−ジイルビス（メチルカルバメート）。
【０６２４】
ＵＳ  ８３８９６９７の実施例３に従い、３ｍＬのメタノール及び２ｍＬのＨ２Ｏ中のＰＮＵ−１５９６８２の溶液（１５．３ｍｇ、０．０２０３８ｍｍｏｌ）（このＰＮＵ−１５９６８２は、ＷＯ  １９９８／０２４４６、及びＵＳ  ８４７０９８４の実施例１において報告されているように調製され得る）に、１ｍＬのＨ２Ｏ中のＮａＩＯ４の溶液（５．１ｍｇ、０．０２３８ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を、出発物質が検出可能でなくなるまで（ＴＬＣ及びＨＰＬＣ分析）、室温で３時間撹拌する。溶媒を減圧下で除去し、赤色の粗固体（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−｛［（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］［１，３］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］オキシ｝−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−カルボン酸５５ａ（ＭＳ（ＥＳＩ）：６２８［Ｍ＋Ｈ］＋）を、ＷＯ  ２０１０／００９１２４の手順によって、ＬＤ−５５（ＭＳ（ＥＳＩ）：１３５５［Ｍ＋Ｈ］＋）に変換する。
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【０６２５】
ＡＤＣ−５６のリンカー−薬物中間体：（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−Ｎ−（２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）エチル）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−カルボキサミド（ＭＳ（ＥＳＩ）：８４２［Ｍ＋Ｈ］＋）は、ＷＯ  ２０１３／０５５９８７の手順によって調製され得る。
【０６２６】
ＡＤＣ−５７のリンカー−薬物中間体：（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−Ｎ−（２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピル）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−カルボキサミド（ＭＳ（ＥＳＩ）：８５６［Ｍ＋Ｈ］＋）は、ＵＳ８３８９６９７の手順によって調製され得る。
【０６２７】
ＡＤＣ−５８のリンカー−薬物中間体：（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−Ｎ−（２−メチル−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピル）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−カルボキサミド（ＭＳ（ＥＳＩ）：８７０［Ｍ＋Ｈ］＋）は、ＵＳ８３８９６９７の手順によって調製され得る。
【０６２８】
上述の発明は、明確な理解のために、例示説明及び例によりある程度詳細に記載されているが、これらの説明及び例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書で引用される全ての特許及び科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。
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【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２１Ｃ】
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【図２１Ｄ】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１Ａ−Ｄ】
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【図３２Ａ】
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【図３２Ｂ】
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【図３２Ｃ】
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【図３２Ｄ】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和3年10月11日(2021.10.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【外国語明細書】
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