(57)【要約】      （修正有）【課題】メタボリック症候群の患者を、様々な症状を安全かつ効果的に軽減しかつ西洋医学の潜在的な副作用を回避することができる単一の製剤で処置する方法を提供する。【解決手段】必要とする対象に、１〜２重量部のスキサンドラ・チネンシスの抽出物および５〜１０重量部のプシジウム・グアジャバの抽出物を含む医薬組成物の治療的有効量を投与し、血中尿酸を減少させる方法を提供する。１重量部のスキサンドラ・チネンシスおよび５重量部のプシジウム・グアジャバの抽出物を含むものが好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
血中尿酸を減少させる方法であって、それを必要とする対象に、1〜2重量部のスキサンドラ・チネンシスの抽出物および5〜10重量部のプシジウム・グアジャバの抽出物を含む医薬組成物の治療的有効量を投与することを含む方法。
【請求項２】
医薬組成物が、1重量部のスキサンドラ・チネンシスおよび5重量部のプシジウム・グアジャバの抽出物を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
医薬組成物がさらに、2〜3重量部のホルドイム・ブルガルの抽出物を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項４】
医薬組成物がさらに、2〜3重量部のホルドイム・ブルガルの抽出物、8〜10重量部のモルス・アルバの抽出物、5〜10重量部のカメリア・シネンシスの抽出物、5〜10重量部のブドウ種子の抽出物、2〜3重量部のクロム酵母、3〜5重量部のモモルジカ・シャランチアの粉末、およびこれらの成分の少なくとも一つの組み合わせからなる群から選択される活性成分を含む、請求項1に記載に方法。
【請求項５】
正常腎機能を維持するための、請求項1に記載の方法。
【請求項６】
キサンチンオキシダーゼの活性を阻害するための、請求項1に記載の方法。
【請求項７】
膵臓β細胞を保護する方法であって、それを必要とする対象に、1〜2重量部のスキサンドラ・チネンシスの抽出物および5〜10重量部のプシジウム・グアジャバの抽出物を含む医薬組成物の治療的有効量を投与することを含む方法。
【請求項８】
医薬組成物が、1重量部のスキサンドラ・チネンシスおよび5重量部のプシジウム・グアジャバの抽出物を含む、請求項7に記載の方法。
【請求項９】
医薬組成物がさらに、2〜3重量部のホルドイム・ブルガルの抽出物を含む、請求項7に記載の方法。
【請求項１０】
医薬組成物がさらに、2〜3重量部のホルドイム・ブルガルの抽出物、8〜10重量部のモルス・アルバの抽出物、5〜10重量部のカメリア・シネンシスの抽出物、5〜10重量部のブドウ種子の抽出物、2〜3重量部のクロム酵母、3〜5重量部のモモルジカ・シャランチアの粉末、およびこれらの成分の少なくとも一つの組み合わせからなる群から選択される活性成分を含む、請求項7に記載の方法。
【請求項１１】
糖尿病対象のβ細胞の重量を維持するための、請求項7に記載の方法。
【請求項１２】
インスリン抵抗性の処置である、請求項7に記載の方法。
【請求項１３】
体脂肪を減少させる方法であって、それを必要とする対象に、1〜2重量部のスキサンドラ・チネンシスの抽出物および5〜10重量部のプシジウム・グアジャバの抽出物を含む医薬組成物の治療的有効量を投与することを含む方法。
【請求項１４】
医薬組成物が、1重量部のスキサンドラ・チネンシスおよび5重量部のプシジウム・グアジャバの抽出物を含む、請求項13に記載の方法。
【請求項１５】
医薬組成物がさらに、2〜3重量部のホルドイム・ブルガルの抽出物を含む、請求項13に記載の方法。
【請求項１６】
医薬組成物がさらに、2〜3重量部のホルドイム・ブルガルの抽出物、8〜10重量部のモルス・アルバの抽出物、5〜10重量部のカメリア・シネンシスの抽出物、5〜10重量部のブドウ種子の抽出物、2〜3重量部のクロム酵母、3〜5重量部のモモルジカ・シャランチアの粉末、およびこれらの成分の少なくとも一つの組み合わせからなる群から選択される活性成分を含む、請求項13に記載の方法。
【請求項１７】
臓器の脂肪および体重の低下、ならびに体の筋肉の比率の増加のための、請求項13に記載の方法。
【請求項１８】
脂質異常症の処置である、請求項13に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、血中尿酸の減少、膵臓ベータ細胞の保護および体脂肪の減少を可能とする医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
高尿酸血症は、血中尿酸濃度が、男性対象については6.8〜7.0mg/dLよりも高く、または女性対象については6.0mg/dLよりも高いことと定義されている。高尿酸血症とそれに関連する代謝性疾患(例えば、痛風)は、米国では3〜5百万人の健康状態に影響を与えている。高尿酸血症の発症率は、平均寿命の延長、食生活の変化、アルコールの摂取、高尿酸に関連する状態(例えば、メタボリック症候群、腎機能不全、または高血圧)に連れて増加している。また、高尿酸血症の発生率に影響を与える因子として、年齢や民族など、付加的な要因がある。
【０００３】
糖尿病は、複数の因子が進行して起こる疾患である。典型的な症状としては、血糖の上昇、すなわち高血糖症が挙げられる。米国糖尿病学会(American Diabetes Society)の報告によると、世界人口の約6％が糖尿病に罹患している。高い血糖レベルを制御できなくなると、死亡率の上昇だけでなく、心血管疾患、腎疾患、神経疾患、眼疾患、高血圧、または脳血管疾患につながる。そのため、恒常性(ホメオスタシス)の制御が糖尿病処置の鍵となる。
【０００４】
脂質異常症は、血中リポタンパク質の濃度が異常な疾患を意味し、糖尿病と併発することが多く、糖尿病対象の心血管疾患や死亡の決定的な原因となっている。糖尿病対象の冠動脈疾患による死亡率は、非糖尿病対象の数倍であることが報告されている。
【０００５】
高尿酸血症、糖尿病および脂質異常症は、いわゆるメタボリック症候群である代謝障害を有するヒトに存在することが多い。上記の疾患の有病率を考慮して、血液の恒常性を改善することができる治療剤を開発する必要がある。本発明は、メタボリック症候群の患者を、様々な症状を安全かつ効果的に軽減しかつ西洋医学の潜在的な副作用を回避することができる単一の製剤で処置することを目的としている。
【発明の概要】
【０００６】
本明細書で提供される態様は、血中尿酸を減少させる方法であって、それを必要とする患者に、1〜2重量部のスキサンドラ・チネンシス(Schisandra chinensis)の抽出物および5〜10重量部のプシジウム・グアジャバ(Psidium guajava)の抽出物を含む医薬組成物の治療的有効量を投与することを含む方法である。
【０００７】
特定の実施態様において、医薬組成物は、1重量部のスキサンドラ・チネンシスおよび5重量部のプシジウム・グアジャバの抽出物を含む。
【０００８】
特定の実施態様において、医薬組成物はさらに、2〜3重量部のホルドイム・ブルガル(Hordeum vulgare)の抽出物を含む。
【０００９】
特定の実施態様において、医薬組成物はさらに、2〜3重量部のホルドイム・ブルガルの抽出物、8〜10重量部のモルス・アルバ(Morus alba)の抽出物、5〜10重量部のカメリア・シネンシス(Camellia sinensis)の抽出物、5〜10重量部のブドウ種子の抽出物、2〜3重量部のクロム酵母、3〜5重量部のモモルジカ・シャランチア(Momordicae sharantia)の粉末、およびこれらの成分の少なくとも一つの組み合わせからなる群から選択される活性成分を含む。
【００１０】
特定の実施態様において、該方法は、正常腎機能を維持するためのものである。
【００１１】
特定の実施態様において、該方法は、キサンチンオキシダーゼの活性を阻害するためのものである。
【００１２】
本明細書で提供される別の態様は、膵臓β細胞を保護する方法であって、それを必要とする対象に、治療的有効量の医薬組成物を投与することを含む方法である。
【００１３】
特定の実施態様において、該方法は、糖尿病対象のβ細胞の重量を維持するためのものである。
【００１４】
特定の実施態様において、該方法は、インスリン抵抗性の処置である。
【００１５】
本明細書で提供される別の態様は、体脂肪を減少させる方法であって、それを必要とする対象に、治療的有効量の医薬組成物を投与することを含む方法である。
【００１６】
特定の実施態様において、該方法は、臓器の脂肪および体重の低下、ならびに体の筋肉の比率の増加のためのものである。
【００１７】
特定の実施態様において、該方法は、脂質異常症の処置である。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
本開示の特徴は、添付の特許請求の範囲に具体的に記載されている。本発明の特徴および利点は、本開示の原理が利用される例示的な実施形態を規定する以下の詳細な説明、および以下に説明する添付の図面を参照することによって、より良く理解されよう。
【００１９】
【図１】図1は、本開示による組成物によるキサンチンオキシダーゼ(XO)の活性阻害の例示的な結果を示すものであり、ここでは、陰性対照群(無処置)、本開示による組成物で処置した群、およびアロプリノールで処置した陽性対照群を含む。
【００２０】
【図２】図2は、本開示による医薬組成物による血中尿酸の減少の例示的な結果を示すものであり、ここでは、試験対象を、高尿酸血症を誘導する20分前に本開示による組成物で処置し、高プリン食の摂取の0、1、2、および3時間後に血中尿酸濃度を測定した。(p< 0.05)
【００２１】
【図３】図3は、本開示による組成物によるラットの血中尿素の減少の例示的な結果を示すものであり、ここでは、糖尿病ラットを本開示による組成物(1X、2X、または5Xの用量)で8週間処置し、その後、ラットの血中尿素濃度を測定した。(p<0.05)
【００２２】
【図４】図4は、本開示による組成物によるHOMA-IR指数の低下の例示的な結果を示すものであり、ここでは、糖尿病ラットを本開示による組成物(1X、2X、または5Xの用量)で8週間処置し、その後、ラットのインスリン抵抗性を測定し、HOMA-IRを計算した。(p<0.05)
【００２３】
【図５】図5は、本開示による組成物による膵臓細胞の保護の例示的な結果を示すものであり、ここでは、糖尿病ラットを本開示による組成物で8週間処置し、その後、ラットの膵臓を切片し、IHC染色を行う。異なる群のβ細胞の形態を示す。((A)N：正常対照；(B)DM：糖尿病対照、(C)1Xの用量、(D)2Xの用量、または(E)5Xの用量) (p<0.05)
【００２４】
【図６】図6は、図5による群のβ細胞の重量の例示的な結果を示すものである。
【００２５】
【図７】図7は、本開示による組成物による内臓脂肪の重量に対する効果の例示的な結果を示すものであり、ここでは、肥満ラットを本開示による組成物で8週間処置し、その後、内臓脂肪の重量を測定した。(EAT：精巣上体脂肪組織、PF：腎周囲脂肪、MF：腸間膜脂肪、BF：体脂肪)(p<0.05)
【００２６】
【図８】図8は、本開示による組成物による、図7によるラット群の体脂肪率(BFP)に対する効果の例示的な結果を示すものである。(p<0.05)
【００２７】
【図９】図9は、本開示による組成物による体組成に対する効果の例示的な結果を示すものであり、ここでは、肥満ラットを本開示による組成物で8週間処置し、骨、脂肪および筋肉の比率を評価した。(p<0.05)
【００２８】
【図１０】図10は、本開示による組成物による体重に対する効果の例示的な結果を示すものであり、ここでは、肥満ラットを本開示による組成物で8週間処置し、体重を測定した。(p<0.05)
【００２９】
【図１１】図11は、本開示による組成物による食物変換効率(FCE)に対する効果の例示的な結果を示すものであり、ここで、肥満ラットを本開示による組成物で8週間処置し、FCEを測定した。(p<0.05)
【００３０】
本発明の説明
以下の実施態様は、添付の図面を参照することで、本開示の上記および他の技術的内容、特徴、および効果を明確に示すものである。実施態様による説明を通じて、当業者は、上記で特定された態様を達成するために本開示が採用する技術的アプローチおよび効果を明確に理解するであろう。
【００３１】
特に定義されていない限り、本明細書で使用されているすべての技術的および科学的用語は、本開示が関連する当業者が一般的に理解するのと同じ定義を有する。
【００３２】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用されているとき、単数形の「a」、「an」および「the」は、文脈が明らかに他を指示しない限り、複数の指示対象を含む。本願いおいて、「or」または「and」の使用は、別段の記載がない限り、「および／または」を意味する。さらに、「including」という用語の使用は、「include」、「includes」および「included」などの他の形態と同様に、限定的なものではない。本書で使用されているセクションの見出しは、整理することのみを目的としており、説明されている主題を制限するものとして解釈されるべきではない。特に断らない限り、本明細書で使用されるすべての材料は市販されており、容易に入手することができる。
【００３３】
本明細書で使用されている用語「約」は、用量などの測定量を意味し、実施態様における所定量に対する偏差±15％または±10％、好ましい実施態様における指定量に対する偏差±5％、さらなる好ましい実施態様における所定量に対する偏差±1％、または最も好ましい実施形態における所定量に対する偏差±0.1％を含み、一方で、量に関連する物質の性質はそれによって影響を受けないものとする。
【００３４】
高尿酸血症とも称される高血中尿酸は、血中尿酸濃度の異常な上昇を意味する。
【００３５】
具体的には、高尿酸血症とは、対象の血中尿酸濃度が長期に過剰であることを意味する。高尿酸血症のあり得る原因は、尿酸の過剰産生または尿酸の低排泄である。高尿酸血症の病因としては、肥満、アルコールまたはプリン体の過剰摂取、薬物(例えば、化学療法薬物または免疫抑制薬)の使用、高血圧、ヘモグロビンに関連する疾患、溶血性貧血、鎌状赤血球貧血、腎障害、骨髄増殖性疾患、リンパ増殖性疾患、副甲状腺機能亢進症、インスリン抵抗性に関連する疾患、糖尿病、臓器移植、または酵素の遺伝的欠陥などが挙げられる。
【００３６】
本明細書で使用される用語「糖尿病(diabetes mellitus)」(糖尿病(diabetes))には、Ｉ型糖尿病、II型糖尿病、妊娠性糖尿病または糖尿病の典型的な症状を有する他の状態(condition)が含まれる。
【００３７】
本明細書で使用される用語「糖尿病(diabetes mellitus)」(糖尿病(diabetes))は、血中グルコース濃度を正常レベルに制御できないような、グルコースの産生または消費の機能不全に関連する代謝障害を意味する。
【００３８】
高脂血症とも称される高血中脂肪は、リポタンパク質濃度の異常、例えば高VLDLおよび低HDLを意味する。
【００３９】
本明細書で使用される用語「処置する(treat)」、「処置する(treating)」、「処置(treatment)」とは、予防的および／または治療的に疾患または状態の少なくとも一つの症状を軽減、緩和または改善すること、追加の症状を予防すること、疾患または状態を抑制すること、例えば、疾患または状態の進行を阻止すること、疾患または状態を和らげること、疾患または状態の退行(regression)を引き起こすこと、疾患または状態によって引き起こされる状態を和らげること、または疾患または状態の症状を停止させることが含まれる。
【００４０】
本明細書で使用される用語「有効量」または「治療的有効量」とは、処置される疾患または状態の一つまたはそれ以上の症状をある程度和らげる、投与される物質または化合物の十分な量を意味する。その結果、疾患の徴候、症状または原因の減少および／または緩和、または生物学的システムのその他の望ましい変化が得られる。例えば、治療上の使用のための「有効量」とは、疾患の症状を臨床的に有意に減少させるために必要な、本明細書で開示されている化合物を含む組成物の量のことである。
【００４１】
本明細書で使用される用語「薬学的に許容できる」とは、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、その他の問題またはこれらの合併症状がなく、合理的な利益/リスク比に見合って、対象(例えば、ヒト対象)の組織と接触して使用するのに適した化合物、原料、組成物、および/または投与剤形を意味する。また、賦形剤はそれぞれ、製剤の他の成分と適合性があるという意味で「許容できる」ものでなければならない。
【００４２】
本明細書で使用される用語「担体」とは、細胞または組織が薬を吸収するのを助ける非毒性の化合物または医薬品を意味するもので、固体、液体、または半液体の担体を含む。
【００４３】
薬学的に許容できる担体は、例えば、賦形剤、アジュバント、希釈剤、充填剤もしくは増量剤、造粒剤、コーティング剤、放出制御剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、防腐剤、抗酸化剤、緩衝剤、懸濁化剤、濃化剤、香味料、甘味剤、矯味剤、安定剤または医薬組成物に習慣的に使用される他のいかなる賦形剤から選択され得る。
【００４４】
適当な賦形剤の例としては、ラクトース、グルコース、スクロース、ソルビトール、マンノース、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカントゴム、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン(PVP)、セルロース、ddH2O、シロップ、またはメチルセルロースが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４５】
本開示によれば、医薬組成物は、経口投与、非経腸投与、局所投与、鼻腔内投与、気管支内投与、舌下投与、直腸投与または経皮投与に適したいずれかの形態であってもよい。非経腸投与を目的とした組成物の場合、静脈内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、皮下投与、あるいは注射、点滴またはその他の送達手段による標的臓器または組織への直接送達を目的として製剤化することができる。
【００４６】
経口投与に適した医薬剤形には、錠剤、カプセル(硬殻(hard shell)または軟殻(soft sell))、カプレット、ピル、ロゼンジ、シロップ、溶液、パウダー、顆粒、エリキシル、懸濁液、舌下錠剤、ウェーハ、または口腔内パッチなどのパッチがある。
【００４７】
本明細書に記載の医薬組成物は、凍結乾燥によって保存することができ、使用前に適切な担体で再構成することができる。凍結乾燥および再構成は、当業者の通常の技術に従って行うことができ、当業者は、凍結乾燥および再構成がある程度の活性の損失に寄与し、医薬の用量を補償のために上方に調整すべきであることを理解するであろう。
【００４８】
本明細書に記載の医薬組成物は、血中尿酸値を低下させるための他の治療剤と組み合わせて、併用療法として使用ことができる。血中尿酸を低下させるための治療剤は、アロプリノール、フェブキソスタット、スルフィンピラゾン、ベンズブロマロン、プロベネシド、ペグロチカーゼ、プリカーゼ、ラスブリカーゼ、ペグ化ウリカーゼ、フェノフィブラートの少なくとも一つから選択される。
【００４９】
本明細書で提供される一態様は、1〜2重量部のスキサンドラ・チネンシスの抽出物および5〜10重量部のプシジウム・グアジャバの抽出物を含む医薬組成物を提供することである。
【００５０】
本明細書に開示される医薬組成物はさらに、薬学的に許容できる担体を含むことができる。
【００５１】
特定の実施態様において、該医薬組成物はさらに、2〜3重量部のホルドイム・ブルガルの抽出物、8〜10重量部のモルス・アルバの抽出物、5〜10重量部のカメリア・シネンシスの抽出物、5〜10重量部のブドウ種子の抽出物、2〜3重量部のクロム酵母、3〜5重量部のモモルジカ・シャランチアの粉末、およびこれらの成分の少なくとも一つの組み合わせからなる群から選択される活性成分を含む。
【００５２】
特定の実施態様において、該医薬組成物は、1重量部のスキサンドラ・チネンシスおよび5重量部のプシジウム・グアジャバの抽出物を含む。
【００５３】
特定の実施態様において、該医薬組成物は、約1重量部のスキサンドラ・チネンシスの抽出物、約5重量部のプシジウム・グアジャバの抽出物、および約3重量部のホルドイム・ブルガルの抽出物を含む。
【００５４】
特定の実施態様において、該医薬組成物は、約1重量部のスキサンドラ・チネンシスの抽出物、約5重量部のプシジウム・グアジャバの抽出物、約3重量部のホルドイム・ブルガルの抽出物、約10重量部のモルス・アルバの抽出物、約10重量部のカメリア・シネンシスの抽出物、約10重量部のブドウ種子の抽出物、約3重量部のクロム酵母、および約5重量部のモモルジカ・シャランチアの粉末を含む。
【００５５】
特定の実施態様において、上記の抽出物は、別々にまたは同時に投与される。
【００５６】
特定の実施態様において、本明細書に記載の該医薬組成物は、経口的にまたは非経腸的に投与される。
【００５７】
本明細書に開示されるある態様は、高血中尿酸に関連する疾患または状態を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療的有効量の本明細書に開示される医薬組成物を投与することを含む方法を提供することである。
【００５８】
本明細書に開示される別の態様は、高血中尿酸に関連する疾患または状態のための医薬を製造するための医薬組成物を提供することである。
【００５９】
特定の実施態様において、該医薬は、正常腎機能の維持に使用される。
【００６０】
特定の実施態様において、該医薬は、キサンチンオキシダーゼの活性の阻害に使用される。
【００６１】
本開示によれば、該医薬は、腎臓疾患、痛風、肥満、糖尿病、インスリン抵抗性またはメタボリック症候群の予防または処置に使用される。
【００６２】
本開示によれば、該医薬は予想どおりに、高脂血症、非アルコール性脂肪性肝疾患(NAFLD)、非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)、アテローム性動脈硬化症または高血圧を含むがこれらに限定されない、高血中尿酸に関連する疾患または状態の予防または処置に使用される。
【００６３】
特定の態様において、該医薬は、痛風または腎臓疾患(急性腎症、慢性腎症、尿の腎結石症(uric nephrolithiasis)、または慢性腎臓疾患を含む)の処置に使用される。
【００６４】
本開示の別の態様は、膵臓β細胞を保護するための医薬を製造するための、本明細書に開示される医薬組成物の使用を提供することである。
【００６５】
特定の実施態様において、該医薬は、糖尿病対象のβ細胞の重量の維持に使用される。
【００６６】
特定の実施態様において、該医薬は、インスリン抵抗性の処置に使用される
【００６７】
本開示の別の態様は、体脂肪を減少させるための医薬を製造するための、本明細書に開示される医薬組成物の使用を提供することである。
【００６８】
特定の実施態様において、該医薬は、臓器の脂肪および体重の低下、および体の筋肉の比率の増加に使用される。
【００６９】
本開示で使用される該医薬組成物は、1〜2重量部のスキサンドラ・チネンシスの抽出物および5〜10重量部のプシジウム・グアジャバの抽出物を含む。
【００７０】
好ましい実施態様において、本開示で使用される該医薬組成物はさらに、2〜3重量部のホルドイム・ブルガルの抽出物を含む。
【００７１】
より好ましい実施態様において、本開示で使用される医薬組成物はさらに、2〜3重量部のホルドイム・ブルガルの抽出物、8〜10重量部のモルス・アルバの抽出物、5〜10重量部のカメリア・シネンシスの抽出物、5〜10重量部のブドウ種子の抽出物、2〜3重量部のクロム酵母、3〜5重量部のモモルジカ・シャランチアの粉末、およびこれらの成分の少なくとも一つの組み合わせからなる群から選択される活性成分を含む。
【００７２】
本開示によれば、本明細書で使用される抽出物は、先行技術に開示されているような方法、例えば、20〜75℃の抽出温度下、乾燥原料を水またはアルコール(例えば含水エタノール)で抽出する工程；抽出後、粗抽出物を濾過・殺菌する工程；生成物を乾燥させて、抽出物を得る工程を含む方法によって製造される。ただし、抽出方法はこれに限定されるものではない。
【００７３】
抽出生成物を乾燥させる方法は、本開示では特に限定されず、先行技術で開示されている方法、例えば、空気乾燥、真空乾燥、噴霧乾燥、ドラム乾燥または凍結乾燥(freeze drying)(凍結乾燥(lyophilization))などを使用することができる。
【００７４】
特定の実施態様によれば、スキサンドラ・チネンシスの抽出物は、スキサンドラ・チネンシスの新鮮なまたは乾燥した果実を水で抽出し、抽出された溶液を濾過した後、乾燥させることによって得られる。
【００７５】
特定の実施態様において、プシジウム・グアジャバの抽出物は、乾燥したプシジウム・グアジャバの葉を水またはエタノールで抽出し、加圧によって濾過し、そして抽出された溶液を殺菌した後、噴霧乾燥することによって得られる。
【００７６】
特定の実施態様において、ホルドイム・ブルガルの抽出物は、ホルドイム・ブルガル(大麦麦芽とも知られている)の種子を水で抽出し、不純物を沈殿させ、膜(membrane)で濾過し、そして残留物を乾燥・粉砕して抽出物を得ることで得られる。
【００７７】
特定の実施態様において、モルス・アルバの抽出物は、乾燥したモルス・アルバの葉を水またはアルコール(例えば含水エタノール)で抽出し、濾過して不溶性物質を除去し、そして濃縮・乾燥させて抽出物を得ることによって得られる。
【００７８】
特定の実施態様において、カメリア・シネンシスの抽出物は、カメリア・シネンシスの葉を水で抽出し、濾過して不溶性物質を除去した後、アルコールで抽出し、アルコール抽出溶液を回収し、そして濃縮・乾燥させて抽出物を得ることによって得られる。
【００７９】
特定の実施態様において、ブドウ種子の抽出物は、ブドウの種子をアルコールで抽出し、濾過して不純物を除去し、そして抽出溶液を乾燥させて抽出物を得ることによって得られる。
【００８０】
特定の実施態様において、クロム酵母は、乾燥酵母(サッカロマイセス・セレヴィシエ(Saccharomyces cerevisiae))を低温殺菌によって殺菌・不活性化し、そして乾燥させてクロム酵母を得ることによって得られる。この方法によれば、必須ミネラル、ビタミン、およびその他の微量栄養素が保存される。
【００８１】
特定の実施態様において、モモルジカ・シャランチアの粉末は、モモルジカ・シャランチア(苦瓜としても知られる)の果実をスライシングして乾燥させた後、粉砕することによって得られる。
【００８２】
上記の方法で調製された成分を、本開示に従って混合し、実験のための下記の調製物を得る(表1)。
【００８３】
【表１】
2022001569.tif 000002
【実施例】
【００８４】
実施例１  キサンチンオキシダーゼの阻害
【００８５】
キサンチンオキシダーゼ(XO)は、ヒトが尿酸を合成するための必須酵素である。プリン体はヒポキサンチンに代謝され、ヒポキサンチンはXOによってさらにキサンチンに代謝され、さらに尿酸が合成される。したがって、XOの活性を阻害することにより、尿酸の合成阻害が効果的に引き起こされる。アロプリノールは一般的なXO阻害剤であり、高尿酸症の処置に治療的に使用される。
【００８６】
本開示における調製物1(すなわち、1重量部のスキサンドラ・チネンシスの抽出物および5重量部のプシジウム・グアジャバの抽出物を含む組成物) を本実施例で使用した。
【００８７】
本開示による調製物1の尿酸合成に対する阻害は、インビトロ分析プラットフォーム上で、キサンチンオキシダーゼ阻害アッセイによって試験した。XO活性のインビトロ試験は、以下の工程を含んでいた：
(1)調製物1、リン酸緩衝液およびXO溶液を25℃下で15分間放置し、反応の準備をし；
(2)基質としてキサンチン溶液を添加し、混合物を25℃下で15分間放置して反応させ；
(3)1N HClを添加して反応を弱め；そして
(4)HPLCで反応緩衝液中の尿酸濃度を測定する。(C18カラム、流速：1ml/min；波長：295nm)
【００８８】
本実施例の結果を図1に示す。図1に示すように、本開示の調製物1によって、陰性対照と比較して、XO活性の78％が阻害された。また、アロプリノールで処置した陽性対照群では、約94％の阻害率であった。
【００８９】
したがって、本実施例の点から見て、本開示による組成物は、XOの活性を阻害することができ、それは尿酸の合成を阻害する能力を意味する。したがって、本組成物は、高尿酸に関連する疾患または状態の処置に使用することができる。
【００９０】
実施例2  血中尿酸の減少
【００９１】
本開示の調製物2 (すなわち、2重量部のスキサンドラ・チネンシスの抽出物、8重量部のプシジウム・グアジャバの抽出物および3重量部のホルドイム・ブルガルの抽出物を含む組成物)を本実施例に使用した。
【００９２】
調製物2を高尿酸血症に罹患している患者に投与し、その用量は患者1人当たり3gであった。投与前、投与の1時間後および投与の2時間後に血中尿酸濃度を測定した。血中尿酸は、尿酸測定器であるMultiSure(APEXBIO、台湾)を用いて検出した。その結果を表2に示す。
【００９３】
【表２】
2022001569.tif 000003
【００９４】
本実施例の結果を表2に示す。表2によれば、高尿酸血症患者を調製物2で処置してから1時間後には、尿酸レベルが1.27〜16.46％減少し、高尿酸血症患者に調製物2を投与してから2時間後には、尿酸レベルが11.39〜26.97％減少した。
【００９５】
このように本実施例によれば、本開示による組成物は、尿酸濃度を効果的に減少させることができ、高尿酸に関連する疾患の処置に使用することができる。
【００９６】
実施例3  血中尿酸の減少
【００９７】
本開示の調製物3を本実施例に使用した(すなわち、1重量部のスキサンドラ・チネンシスの抽出物、5重量部のプシジウム・グアジャバの抽出物、3重量部のホルドイム・ブルガルの抽出物、10重量部のモルス・アルバの抽出物、10重量部のカメリア・シネンシスの抽出物、10重量部のブドウ種子の抽出物、3重量部のクロム酵母および5重量部のモモルジカ・シャランチアの粉末を含む組成物)
【００９８】
ヒト対象(男性：5名；女性：2名)を、本明細書に開示されている調製物3で処置し、尿酸レベルを測定した。対象を無作為に2群に分け、陰性対照群(プラセボ)と実験群とした。
【００９９】
高尿酸症状を誘発するために、実験群の対象をそれぞれ、ビール330mlと乾燥アンコビエス(dry anchovies)30g(合計223Kcal)を含む高プリン食を摂取するようにした。高尿酸症状を誘発する20分前に調製物3を対象に投与し、その用量は対象1人当たり3g(乾燥重量)であり、高プリン食の摂取の0、1、2、3時間後に血中尿酸レベルを測定した。
【０１００】
すべての実験結果は、SPSS 18.0を用いて、一元配置のANOVAとそれに続くダンカンの新多重範囲検定(Duncan's new multiple range test、DMRT)を含む分析を行った。統計値はすべて平均±SDで示した。
【０１０１】
図2によると、調製物3を投与しなかった群(対照群)の対象の血中尿酸レベルは明らかに上昇しており、高プリン食の摂取後1、2、3時間で約31％、21％および10％上昇していた。一方、調製物3を投与した群(実験群)では、対象の尿酸レベルは上昇しなかった。
【０１０２】
これ故に、本実施例の点から見て、本明細書に開示されている医薬組成物は、高プリン食による尿酸の増加を予防ことができ、血中尿酸レベルを効果的に低下させることができる。本発明の医薬組成物は、高尿酸に関連する疾患の処置に使用することができる。
【０１０３】
実施例4  腎機能の保護
【０１０４】
糖尿病性腎症は、血糖制御の喪失によって引き起る糖尿病の一般的な合併症の一つである。腎臓の機能不全の状態において尿素が体内に蓄積され、これは機能不全が重症である場合には尿毒症につながる。
【０１０５】
本実施例において、糖尿病ラットを調製物3の組成物で処置したところ、糖尿病症状の改善が観察された。
【０１０６】
まず、雄のSprague-Dawleyラット(6週齢)40匹を、糖尿病対照群(DM)、正常対照群(N)および調製物3を1X、2X、5Xの用量でそれぞれ投与した実験群を含むの5群(各群8匹ラット)に無作為に割り付けた。各群のラットは、温度(22±2℃)、湿度(55±5％)、12時間の日照サイクルの下、ケージ内で飼育した。
【０１０７】
ラットに高脂肪(>20%)、高精製糖(スクロース、またはスクロースとフルクトースの組成>50)の食餌を、低用量のニコチンアミド(NA)(Sigma, USA)およびストレプトゾトシン(STZ)(Sigma, USA)とともに給餌することで、糖尿病様および高血糖の症状を誘発させた。実験開始日から犠牲にする8週前の間、ラットに上記に記載の食餌を給餌し続け、高血糖の発生を誘発させた。また、上記の実験において、糖尿病症状が成功的に誘発されるまでに、3日ごとにNA(30〜60mg/kg)を腹腔内に注射し、その15〜30分後にSTZ(10〜20mg/kg)を注射した。
【０１０８】
調製物3の組成物の用量の推定は、USFDAにより発表された「Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers」(54-1)に準拠し、60kgの成人を基準とする。高等実験生物については、原則として、ヒト対象の推定摂取量(mg/kg/day)の6.2倍量がラットの1倍量に相当するという換算に従っている。
【０１０９】
糖尿病性腎症の末期になると、腎臓の濾過機能が徐々に障害され、尿素を濾過して排泄することができなくなる。本実施例において、各群のラットに、以下の調製物3の組成物を毎日投与した：正常対照群のラットには、胃管栄養法によって1mLの脱イオンH2O中の正常餌(common feed, MFG)を経口給餌し；糖尿病対照群(DM)のラットには、胃管栄養法によって1mLの脱イオンH2O中の高脂肪食(HFD)を経口給餌し；1Xの用量群(1X)のラットには、胃管栄養法によって調製物3の組成物(283mg/kg)および高脂肪食(HFD)を経口給餌し；そして、2Xおよび5Xの用量群(2Xおよび5X)のラットには、566mg/kgおよび1416mg/kgの用量を除いて、1Xの用量群と同様に調製物3の組成物をそれぞれ給餌した。8週間の実験期間中、ラットの血中尿素の変動をモニターし、組成物の投与の効果を分析した。
【０１１０】
図3は、本実施例の結果を示すものである。図3によれば、調製物3の組成物を2Xおよび5Xの用量で処置した群におけるラットの血中尿素濃度は、処置してない糖尿病群(DM)のラットに比べて有意に低い。(p<0.05) さらに、単に1Xの用量を投与した場合、血中尿素濃度は減少する傾向にあるが、その減少は糖尿病群(DM)に比べて有意ではない。(p>0.05) したがって、本実施例の点から見て、本明細書に開示されている組成物は、血中尿素濃度を効果的に低下させ、腎機能を保護すると同時に、糖尿病性腎症を予防することができる。
【０１１１】
実施例5  膵臓細胞の保護
【０１１２】
本実施態様において、本明細書で使用されるラット、飼育条件および組成物(調製物3)は、実施例4と同様であり、本明細書で繰り返さない。
【０１１３】
本明細書では、インスリン抵抗性の恒常性モデル評価の方法(HOMA-IR)をインスリン感受性の指標として利用する。インスリンの抵抗性は、HOMA-IRによって決定する。
【０１１４】
実験中、空腹のラットの血液を定期的に採取し、空腹時の血中のインスリン濃度とグルコース濃度を測定した。空腹時のインスリンの測定は、Rat Insulin ELISA Kit(Mercodia, USA)を用いて行う。空腹時のグルコースの測定には、週に一回ラットの血液を尾静脈を介して採取すること、20〜500mg/dLのグルコース濃度に対して検出可能な感度を有するグルコース検出器(Optium xceed)で濃度を分析することが含まれている。HOMA-IRの計算式は以下の通りである：
HOMA-IR指標＝(空腹時血清中のグルコース濃度(mmol/L)×空腹時血清中のインスリン濃度(μU/mL))/22.5
【０１１５】
HOMA-IR指数の分析結果を図4に示す。第0週では、各群のHOMA-IR指数は変化しなかった。しかし、2週目から、調製物3の組成物(1X、2Xおよび5X)で処置した群のHOMA-IR指数は、糖尿病群(DM)よりも有意に低かった(P＜0.05)。4週目〜6週目の期間中、調製物3の組成物 (1X、2Xおよび5X)で処置した群のHOMA-IR指数は、2週目に比べてわずかに高かったが、それでも糖尿病群(DM)よりも有意に低かった(P＜0.05)。
【０１１６】
また、8週目において、グルコース濃度の増加に伴い、糖尿病群(DM)のグルコース濃度は正常群よりも高くなったが(P＜0.05)、糖尿病群と実験群(1X、2Xおよび5Xの用量)の間には有意な差はなかった。それは、糖尿病群のラットが重度のインスリン抵抗性を獲得し、膵臓β細胞が疲労によって機能不全になり、グルコース濃度に応じてインスリンを分泌できなくなっているためであることを暗示した。こうして、図4の点から見て、調製物3の組成物の投与により、膵臓β細胞の正常機能を維持してインスリンを分泌し、糖尿病ラットのインスリン感受性を効果的に維持することができる。
【０１１７】
さらに、8週目にラットを犠牲にして、膵臓組織をヘマトキシリン・エオジン(HE)染色と免疫組織化学的検査(IHC)を行い、各群のラットの膵臓細胞の形態を観察し、β細胞の重量を測定した。β細胞の測定は、先行技術(Saisho et al, 2013)に開示されている方法に従っており、β細胞の質量を計算するために膵臓から一片を切断すること、計算のためにいくつかの領域を選択すること、そして、質量を組織の総重量で割ってパーセンテージを示して、その偏差を較正することを含む。β細胞の質量の計算式は、
β細胞の質量＝膵臓組織の総重量×［(β細胞の数/膵臓における細胞数の合計)/膵臓細胞の面積］である。
【０１１８】
図5は、各群のラットの膵臓細胞の形態の違いを示すものである。図5には、糖尿病ラット(DM群)のβ細胞の量は他の群のラットに比べて明らかに少なく、形態的外観は部分的であったことが開示しており、これは、糖尿病ラットは腎機能が障害されたことを暗示した。一方、本組成物を1X、2X、または5Xの用量で処置した群のラットでは、より多くの無傷のβ細胞を有する膵臓組織が観察された。
【０１１９】
さらに、図6によると、調製物3を1X、2X、または5Xの用量で処置した群のラットのβ細胞の質量は、糖尿病ラットのβ細胞の質量よりも有意に高く(P＜0.05)、調製物3を2Xまたは5Xの用量で処理した群のラットのβ細胞の質量も、調製物を1Xの用量で処理したラットのβ細胞の質量よりも高かった。このことから、調製物3の組成物は、膵臓細胞の保護に対する用量依存的な傾向を示している。
【０１２０】
図5および図6の点から見て、本明細書に開示されている組成物は、β細胞の正常な機能を効果的に維持することができ、また、膵臓β細胞の質量を維持することができる。
【０１２１】
実施例6 臓器の脂肪、体脂肪および体重の減少ならびに体の筋肉の比率の上昇
【０１２２】
6週齢の雄性Sprague-Dawleyラット16匹を、健康対照群(n=8)、高脂肪肥満群(n=4)および1Xの用量群(n=4)の3群にランダムに分けた。
【０１２３】
実験開始時に、ラットに正常食(MFG)を1週間給餌して馴化させた。その後、健康対照群には引き続き正常食を給餌し、高脂肪肥満群には、5.24kcal/gのカロリーで100Kcalあたり60%が脂肪である高脂肪食に変更して肥満を誘導した。同時に、健康対照群と高脂肪食肥満群は脱イオン水で処置し、1Xの用量群には、本明細書に開示されている組成物を追加投与した。
【０１２４】
上述した相違点を除き、ラット、飼育条件および本実施例で使用した組成物(調製物3)は実施例4のものと同じであり、本明細書で繰り返さない。
【０１２５】
8週間の給餌後、ラットを犠牲にし、臓器および体の脂肪ならびに体重を分析した。犠牲にしたラットの精巣上体脂肪組織(EAT)、腎周囲脂肪(PF)および腸間膜脂肪(MF)の重量を測定し、式：BFP=〔体脂肪の質量(g)/体重(g)〕×100％［ここで、体脂肪質量(g)＝EAT(g)＋PF(g)＋MF(g)］によって体脂肪率(BFP)を計算した。
【０１２６】
図7によれば、高脂肪肥満群のラットの、EAT、PFおよびMFを含む内臓脂肪は、1Xの用量群に比べて2倍と有意に高かった。それゆえ、調製物3で処置した群では、EAT、PFおよびMFならびに体脂肪は有意に増加せず、健康対照群と同じレベルまで回復した。
【０１２７】
さらに、図8によれば、高脂肪食のラットのBFPは、健康対照群よりも1.5倍高く、調製物3による組成物で処置した1Xの用量群のBFPは、健康対照群と同様に、高脂肪肥満群と比較して、有意に増加せず、約60％であった。
【０１２８】
したがって、図7に開示されているBFRおよび臓器の脂肪の質量によれば、調製物3による組成物の投与により、体脂肪および臓器の脂肪の増加を効果的に抑制し、それらの脂肪を正常な範囲に維持することができる。
【０１２９】
さらに、各群のラットの体組成を2重エネルギーX線吸収測定法(Dual-energy X-ray absorptiometry)で分析し、その結果を図9に示す。図9によれば、高脂肪肥満群のラットのBFPは、健康対照群および1Xの用量群に比べて40％高く、体の筋肉の比率は健康対照群および1Xの用量群に比べて80％と有意に減少した。
【０１３０】
それに対して、調製物3の1Xの用量で処置した群のラットのBFPおよび体の筋肉の比率は、健康対照群と同様であった。
【０１３１】
さらに、図10には、各群のラットの体重の変化を開示している。高脂肪肥満群のラットの体重は、健康対照群および1Xの用量群と比較して、34％と有意に高く、これは、調製物3による組成物が体重を効果的に維持し、肥満を予防できることを示している。
【０１３２】
食物転換効率(food conversion efficiency, FCE)は、各群のラットの食物摂取と体重変化によって計算した。図11は、FCEの計算結果を示している。摂餌量は、1Xの用量群のラットおよび高脂肪肥満群のラットと同程度であったが、1Xの用量群のFCEは高脂肪肥満群よりも5％低かった。このように、調製物3による組成物によりFCEを効果的に低下できることを示している。
【０１３３】
図7〜図10の点から見て、本開示による組成物は、体脂肪および臓器の脂肪を効果的に減少させることができ、体重および体脂肪を減少させることができ、体の筋肉の比率を効果的に上昇させることができる。さらに図11の点から見て、本開示による組成物は、食物転換効率を低下させることができ、体重をさらに減少させることもできる。
【０１３４】
本開示の好ましい実施対象を本明細書に示し、説明してきたが、そのような実施態様はただ例示として提供され、組み合わせて実施できることは当業者には明らかであろう。本開示から逸脱することなく、多数の変形、変更、および置換が当業者に生じるようになる。本明細書に記載された本開示の実施形態に対する様々な代替案が、本開示を実施する際に採用され得ることを理解すべきである。以下の請求項が本開示の範囲を定義し、これらの請求項の範囲内の方法および構造、ならびにそれらの等価物がそれによってカバーされることを意図している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2022001569.tif 000012
【図１０】
2022001569.tif 000013
【図１１】
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【外国語明細書】
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