(57)【要約】      （修正有）【課題】細菌の混入が極めて少なく、かつ、濃縮精子採取操作を良好かつ容易に行うことができる密度勾配遠心分離用の精子洗浄濃縮キットを提供する。【解決手段】密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット１は、第１の遠心分離用有底管２３と、第１のキャップ２４と、密度勾配液とからなる複数本の密度勾配液収納遠心分離管２１とこれを立てた状態にて保持する第１のスタンド２２とからなる第１の立設遠心分離管集合体２と、第２の遠心分離用有底管３３と、第２のキャップ３４と、精子洗浄液とからなる複数本の洗浄液収納遠心分離管３１と、これを立てた状態にて保持する第２の分離管スタンド３２とからなる第２の立設遠心分離管集合体３とを備える。第２のキャップ３４は、第１のキャップ２４と識別可能な異なる色もしくは異なる形態となっている。【選択図】図１
0003203186.tif 000002
【実用新案登録請求の範囲】
【請求項１】
密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットであって、
第１の遠心分離用有底管と、前記第１の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第１のキャップと、前記第１の遠心分離用有底管内に収納された所定量の密度勾配液とからなる複数本の密度勾配液収納遠心分離管と、前記複数本の密度勾配液収納遠心分離管を立てた状態にて保持する第１の分離管スタンドとからなる第１の立設遠心分離管集合体と、
第２の遠心分離用有底管と、前記第２の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第２のキャップと、前記第２の遠心分離用有底管内に収納された所定量の精子洗浄液とからなる複数本の洗浄液収納遠心分離管と、前記複数本の洗浄液収納遠心分離管を立てた状態にて保持する第２の分離管スタンドとからなる第２の立設遠心分離管集合体とを備え、
前記洗浄液収納遠心分離管の前記第２のキャップは、前記密度勾配液収納遠心分離管の前記第１のキャップと識別可能な異なる色もしくは異なる形態となっていることを特徴とする密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット。
【請求項２】
前記第１の立設遠心分離管集合体における前記密度勾配液収納遠心分離管の本数と、前記第２の立設遠心分離管集合体における前記洗浄液収納遠心分離管との本数は、同じものとなっている請求項１に記載の精子洗浄濃縮キット。
【請求項３】
密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットであって、
第１の遠心分離用有底管と、前記第１の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第１のキャップと、前記第１の遠心分離用有底管内に収納された所定量の密度勾配液とからなる密度勾配液収納遠心分離管と、第２の遠心分離用有底管と、前記第２の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第２のキャップと、前記第２の遠心分離用有底管内に収納された所定量の精子洗浄液とからなる洗浄液収納遠心分離管と、前記密度勾配液収納遠心分離管と前記洗浄液収納遠心分離管を立てた状態にて保持する分離管スタンドとを備え、さらに、前記第２のキャップは、前記第１のキャップと識別可能な異なる色もしくは異なる形態となっていることを特徴とする密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット。
【請求項４】
密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットであって、
遠心分離用有底管と、前記遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能なキャップと、前記遠心分離用有底管内に収納された所定量の密度勾配液とからなる複数本の液体収納遠心分離管と、前記複数本の遠心分離管を立てた状態にて保持する分離管スタンドとからなる立設遠心分離管集合体と、前記密度勾配液より密度勾配形成物含有量が少ない第２の密度勾配液または精子洗浄液が収納された容器体とからなることを特徴とする密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット。
【請求項５】
前記精子洗浄濃縮キットは、精子洗浄液が収納された洗浄液収納容器体と、前記第２の密度勾配液が収納された密度勾配液容器体の両者を備えている請求項４に記載の精子洗浄濃縮キット。
【請求項６】
前記精子洗浄濃縮キットは、前記密度勾配液より密度勾配形成物含有量が少ない第２の密度勾配液が収納された第２密度勾配液収納容器体と、前記第２の密度勾配液より密度勾配形成物含有量が少ない第３の密度勾配液が収納された第３密度勾配液収納容器体とを備えている請求項４または５に記載の精子洗浄濃縮キット。
【請求項７】
前記精子洗浄液は、実質的に生理的等張液となっている請求項１ないし６のいずれかに記載の精子洗浄濃縮キット。
【請求項８】
前記密度勾配液は、ポリビニルピロリドン被膜もしくは共有結合シランを有するコロイド状シリカを含有し、かつ実質的に生理的等張液となっている請求項１ないし７のいずれかに記載の精子洗浄濃縮キット。
【請求項９】
密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットであって、
第１の遠心分離用有底管と、前記第１の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第１のキャップと、前記第１の遠心分離用有底管内に収納された所定量の密度勾配液とからなる複数本の密度勾配液収納遠心分離管と、前記複数本の密度勾配液収納遠心分離管を立てた状態にて保持する第１の分離管スタンドとからなる第１の立設遠心分離管集合体と、
第２の遠心分離用有底管と、前記第２の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第２のキャップと、前記第２の遠心分離用有底管内に収納された所定量の精子洗浄液とからなり、前記第１の立設遠心分離管集合体と同本の洗浄液収納遠心分離管と、前記複数本の洗浄液収納遠心分離管を立てた状態にて保持する第２の分離管スタンドとからなる第２の立設遠心分離管集合体とを備え、
前記洗浄液収納遠心分離管の前記第２のキャップは、前記密度勾配液収納遠心分離管の前記第１のキャップと識別可能な異なる色もしくは異なる形態となっており、かつ、前記精子洗浄液実質的に生理的等張液となっていることを特徴とする密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット。
【請求項１０】
密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットであって、
第１の遠心分離用有底管と、前記第１の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第１のキャップと、前記第１の遠心分離用有底管内に収納された所定量の密度勾配液とからなる密度勾配液収納遠心分離管と、第２の遠心分離用有底管と、前記第２の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第２のキャップと、前記第２の遠心分離用有底管内に収納された所定量の精子洗浄液とからなる洗浄液収納遠心分離管と、前記密度勾配液収納遠心分離管と前記洗浄液収納遠心分離管を立てた状態にて保持する分離管スタンドとを備え、さらに、前記第２のキャップは、前記第１のキャップと識別可能な異なる色もしくは異なる形態となっており、前記密度勾配液および前記精子洗浄液は、実質的に生理的等張液となっていることを特徴とする密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット。
【請求項１１】
前記第２のキャップは、前記第１のキャップと識別可能な異なる色かつ異なる形態となっている請求項９または１０に記載の密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット。
【請求項１２】
密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットであって、
遠心分離用有底管と、前記遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能なキャップと、前記遠心分離用有底管内に収納された所定量の密度勾配液とからなる複数本の液体収納遠心分離管と、前記複数本の遠心分離管を立てた状態にて保持する分離管スタンドとからなる立設遠心分離管集合体と、前記密度勾配液より密度勾配形成物含有量が少ない第２の密度勾配液と、精子洗浄液が収納された容器体と、前記第２の密度勾配液より密度勾配形成物含有量が少ない第３の密度勾配液が収納された第３密度勾配液収納容器体とを備えることを特徴とする密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット。
【請求項１３】
前記精子洗浄液は、実質的に生理的等張液となっている請求項１２に記載の精子洗浄濃縮キット。
【請求項１４】
前記密度勾配液は、ポリビニルピロリドン被膜もしくは共有結合シランを有するコロイド状シリカを含有し、かつ実質的に生理的等張液となっている請求項９ないし１３のいずれかに記載の精子洗浄濃縮キット。
【考案の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本考案は、人工授精に用いるための哺乳動物の精子の採取、特に、雑菌等の混入の極めて少ない精子を密度勾配遠心法により採取するために使用される密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
医学的生殖介助（assisted reproduction technology：ＡＲＴ）に用いるために、ヒトから採取された精子の洗浄、濃縮が行われている。
男性不妊に対して、ＡＲＴが有効である。ＡＲＴは広義には配偶子の形成、受精、着床、妊娠維持を医学的に補助して不妊治療を行うことである。実際に行われているＡＲＴとしては、子宮腔内人工授精（intrauterin insemination:ＩＵＩ）、体外受精、胚移植（in vitro fertlization embryo transfer : ＩＶＦ−ＥＴ）、顕微受精（micro-insemination）などの人工的な授精である。
【０００３】
膣に射精された精液は子宮頚管、子宮腔内、卵管と雌性生殖路を遡上する。そして、遡上過程において、精子数は減少し、卵管膨大部に到達するのは、１０匹程度と考えられている。このため、ＡＲＴとしては、できるだけ少ない精子数で受精を可能とするため、雌性生殖路における精子遡上過程をバイパスして精子を卵子のより近くに送り届けるための手法が行われる。手法の一つであるＩＵＩでは、子宮頚管をバイパスして、精子を注入する。また、ＩＶＦ−ＥＴでは、卵を体外に取り出してインビトロで受精させる。また、卵細胞質精子注入（intra-cytoplasma sperm injection：ＩＣＳＩ）では、卵子の細胞質に一匹の精子を穿刺することにより受精をもバイパスさせる。
【０００４】
そして、ＡＲＴに用いられる精子は、授精法により調製条件が異なるものの、ＩＵＩでは、精子濃縮および細菌の除去が求められる。ＩＶＦ−ＥＴでは、必要とする精子濃度は減少するが、運動精子の選別、精漿、細菌の除去などが要求される（精子洗浄濃縮法）。精子の調製は、修飾コロイドシリカゲルまたはパーコール（Percoll）を用いた密度勾配遠心法を用いるのが一般的である。密度勾配遠心法により、運動精子は沈澱中に濃縮される。精子はその形成、成熟の過程で細胞質を失い、運動性を有する成熟精子は細胞質を有する細菌、未成熟精子等に比して密度が高い。密度勾配遠心分離法はこの原理に基づき、成熟運動精子を精漿または細菌から分離するものである。
【０００５】
しかし、従来の密度勾配遠心分離法用では、最初に、密度勾配遠心分離用の密度勾配液の準備、準備した密度勾配液の適量の採取、遠心管への採取した密度勾配液の注入といった作業が必要である。さらに、用いる密度勾配遠心分離法の種類により、他の密度勾配液、洗浄液の準備も必要であった。
特開２０００−２８８０８２号公報（特許文献１）の精子洗浄濃縮用チューブが提案されている。この精子洗浄濃縮用チューブは、開放端１１と細経化された底部１２を有するガラス製チューブ１と、このチューブ１の開放端１１に装着されるゴム袋２を含んでないる。また。細経底部１２には折切を容易にするための脆弱部１３が設けられている。
【０００６】
また、本願出願人は、特開２０１３−２３３３４８（特許文献２）の高濃度精子含有液採取用誘導具を提案している。この高濃度精子含有液採取用誘導具１は、合成樹脂製チューブ体２であり、拡径し側面に形成されたスリットを有する精子吸引用先端部３と、高濃度精子含有液採取器具９が接続可能な採取器具接続用後端部４とを備える。誘導具１は、遠心分離用有底管７内に収納可能であり、かつ有底管７内に収納された状態にて、端部３が底部に位置し、有底管７とともに遠心可能である。遠心分離後、有底管７の底部層に位置する高濃度精子含有液１５を後端部４側より吸引することにより、先端部３から高濃度精子含有液１５を吸引し、誘導具１内を通過させて、液採取器具９に採取可能となっている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０００−２８８０８２
【特許文献２】特開２０１３−２３３３４８
【考案の概要】
【考案が解決しようとする課題】
【０００８】
特許文献１および２のものも有効であるが、密度勾配遠心分離用の密度勾配液の準備、準備した密度勾配液の適量の採取、遠心管への採取した密度勾配液の注入といった作業は必要である。さらに、用いる密度勾配遠心分離法の種類により、他の密度勾配液、洗浄液の準備も必要であった。
本考案の目的は、細菌の混入が極めて少なく、かつ、濃縮精子採取操作を良好かつ容易に行うことができる密度勾配遠心分離用の精子洗浄濃縮キットを提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記目的を達成するものは、以下のものである。
（１）  密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットであって、第１の遠心分離用有底管と、前記第１の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第１のキャップと、前記第１の遠心分離用有底管内に収納された所定量の密度勾配液とからなる複数本の密度勾配液収納遠心分離管と、前記複数本の密度勾配液収納遠心分離管を立てた状態にて保持する第１の分離管スタンドとからなる第１の立設遠心分離管集合体と、第２の遠心分離用有底管と、前記第２の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第２のキャップと、前記第２の遠心分離用有底管内に収納された所定量の精子洗浄液とからなる複数本の洗浄液収納遠心分離管と、前記複数本の洗浄液収納遠心分離管を立てた状態にて保持する第２の分離管スタンドとからなる第２の立設遠心分離管集合体とを備え、前記洗浄液収納遠心分離管の前記第２のキャップは、前記密度勾配液収納遠心分離管の前記第１のキャップと識別可能な異なる色もしくは異なる形態となっている密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット。
【００１０】
（２）  前記第１の立設遠心分離管集合体における前記密度勾配液収納遠心分離管の本数と、前記第２の立設遠心分離管集合体における前記洗浄液収納遠心分離管との本数は、同じものとなっている上記（１）に記載の精子洗浄濃縮キット。
（３）  密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットであって、第１の遠心分離用有底管と、前記第１の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第１のキャップと、前記第１の遠心分離用有底管内に収納された所定量の密度勾配液とからなる密度勾配液収納遠心分離管と、第２の遠心分離用有底管と、前記第２の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第２のキャップと、前記第２の遠心分離用有底管内に収納された所定量の精子洗浄液とからなる洗浄液収納遠心分離管と、前記密度勾配液収納遠心分離管と前記洗浄液収納遠心分離管を立てた状態にて保持する分離管スタンドとを備え、さらに、前記第２のキャップは、前記第１のキャップと識別可能な異なる色もしくは異なる形態となっている密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット。
【００１１】
（４）  密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットであって、遠心分離用有底管と、前記遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能なキャップと、前記遠心分離用有底管内に収納された所定量の密度勾配液とからなる複数本の液体収納遠心分離管と、前記複数本の遠心分離管を立てた状態にて保持する分離管スタンドとからなる立設遠心分離管集合体と、前記密度勾配液より密度勾配形成物含有量が少ない第２の密度勾配液または精子洗浄液が収納された容器体とからなる密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット。
（５）  前記精子洗浄濃縮キットは、精子洗浄液が収納された洗浄液収納容器体と、前記第２の密度勾配液が収納された密度勾配液容器体の両者を備えている上記（４）に記載の精子洗浄濃縮キット。
（６）  前記精子洗浄濃縮キットは、前記密度勾配液より密度勾配形成物含有量が少ない第２の密度勾配液が収納された第２密度勾配液収納容器体と、前記第２の密度勾配液より密度勾配形成物含有量が少ない第３の密度勾配液が収納された第３密度勾配液収納容器体とを備えている上記（４）または（５）に記載の精子洗浄濃縮キット。
（７）  前記精子洗浄液は、実質的に生理的等張液となっている上記（１）ないし（６）のいずれかに記載の精子洗浄濃縮キット。
（８）  前記密度勾配液は、ポリビニルピロリドン被膜もしくは共有結合シランを有するコロイド状シリカを含有し、かつ実質的に生理的等張液となっている上記（１）ないし（７）のいずれかに記載の精子洗浄濃縮キット。
【００１２】
（９）  密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットであって、
第１の遠心分離用有底管と、前記第１の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第１のキャップと、前記第１の遠心分離用有底管内に収納された所定量の密度勾配液とからなる複数本の密度勾配液収納遠心分離管と、前記複数本の密度勾配液収納遠心分離管を立てた状態にて保持する第１の分離管スタンドとからなる第１の立設遠心分離管集合体と、第２の遠心分離用有底管と、前記第２の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第２のキャップと、前記第２の遠心分離用有底管内に収納された所定量の精子洗浄液とからなり、前記第１の立設遠心分離管集合体と同本の洗浄液収納遠心分離管と、前記複数本の洗浄液収納遠心分離管を立てた状態にて保持する第２の分離管スタンドとからなる第２の立設遠心分離管集合体とを備え、前記洗浄液収納遠心分離管の前記第２のキャップは、前記密度勾配液収納遠心分離管の前記第１のキャップと識別可能な異なる色もしくは異なる形態となっており、かつ、前記精子洗浄液実質的に生理的等張液となっている密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット。
（１０）  密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットであって、第１の遠心分離用有底管と、前記第１の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第１のキャップと、前記第１の遠心分離用有底管内に収納された所定量の密度勾配液とからなる密度勾配液収納遠心分離管と、第２の遠心分離用有底管と、前記第２の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第２のキャップと、前記第２の遠心分離用有底管内に収納された所定量の精子洗浄液とからなる洗浄液収納遠心分離管と、前記密度勾配液収納遠心分離管と前記洗浄液収納遠心分離管を立てた状態にて保持する分離管スタンドとを備え、さらに、前記第２のキャップは、前記第１のキャップと識別可能な異なる色もしくは異なる形態となっており、前記密度勾配液および前記精子洗浄液は、実質的に生理的等張液となっていることを特徴とする密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット。
【００１３】
（１１）  前記第２のキャップは、前記第１のキャップと識別可能な異なる色かつ異なる形態となっている上記（９）または（１０）に記載の密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット。
（１２）  密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットであって、遠心分離用有底管と、前記遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能なキャップと、前記遠心分離用有底管内に収納された所定量の密度勾配液とからなる複数本の液体収納遠心分離管と、前記複数本の遠心分離管を立てた状態にて保持する分離管スタンドとからなる立設遠心分離管集合体と、前記密度勾配液より密度勾配形成物含有量が少ない第２の密度勾配液と、精子洗浄液が収納された容器体と、前記第２の密度勾配液より密度勾配形成物含有量が少ない第３の密度勾配液が収納された第３密度勾配液収納容器体とを備える密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット。
（１３）  前記精子洗浄液は、実質的に生理的等張液となっている上記（１２）に記載の精子洗浄濃縮キット。
（１４）  前記密度勾配液は、ポリビニルピロリドン被膜もしくは共有結合シランを有するコロイド状シリカを含有し、かつ実質的に生理的等張液となっている上記（９）ないし（１３）のいずれかに記載の精子洗浄濃縮キット。
【考案の効果】
【００１４】
本考案の密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットは、第１の遠心分離用有底管と、第１の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第１のキャップと、第１の遠心分離用有底管内に収納された所定量の密度勾配液とからなる複数本の密度勾配液収納遠心分離管と、複数本の密度勾配液収納遠心分離管を立てた状態にて保持する第１の分離管スタンドとからなる第１の立設遠心分離管集合体と、第２の遠心分離用有底管と、第２の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第２のキャップと、第２の遠心分離用有底管内に収納された所定量の精子洗浄液とからなる複数本の洗浄液収納遠心分離管と、複数本の洗浄液収納遠心分離管を立てた状態にて保持する第２の分離管スタンドとからなる第２の立設遠心分離管集合体とを備え、洗浄液収納遠心分離管の第２のキャップは、密度勾配液収納遠心分離管の第１のキャップと識別可能な異なる色もしくは異なる形態となっている。
【００１５】
この密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットでは、密度勾配液収納遠心分離管と洗浄液収納遠心分離管を有するので、密度勾配液収納遠心分離管を用いた精子の遠心分離操作を容易に行うことができ、かつ、遠心分離により、下層に集約された精子層を採取し、洗浄液収納遠心分離管に注入し、遠心分離することにより、洗浄濃縮された精子採取することができる。また、遠心分離により、集約された下層精子層の上部に位置する上層を除去した後、洗浄液収納遠心分離管内の洗浄液を分離管の精子層の上部に注入し、再度、遠心分離することにより、洗浄濃縮された精子採取することもできる。そして、洗浄液収納遠心分離管の第２のキャップと密度勾配液収納遠心分離管の第１のキャップとは、識別可能な異なる色もしくは異なる形態となっているため、両者を取り違える可能性が極めて少ない。
【００１６】
また、本考案の密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットは、第１の遠心分離用有底管と、第１の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第１のキャップと、第１の遠心分離用有底管内に収納された所定量の密度勾配液とからなる密度勾配液収納遠心分離管と、第２の遠心分離用有底管と、第２の遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能な第２のキャップと、第２の遠心分離用有底管内に収納された所定量の精子洗浄液とからなる洗浄液収納遠心分離管と、密度勾配液収納遠心分離管と洗浄液収納遠心分離管を立てた状態にて保持する分離管スタンドとを備え、さらに、第２のキャップは、第１のキャップと識別可能な異なる色もしくは異なる形態となっている。
【００１７】
この密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットにおいても、密度勾配液収納遠心分離管と洗浄液収納遠心分離管を有するので、密度勾配液収納遠心分離管を用いた精子の遠心分離操作を容易に行うことができ、かつ、遠心分離により、下層に集約された精子層を採取し、洗浄液収納遠心分離管に注入し、遠心分離することにより、洗浄濃縮された精子採取することができる。また、遠心分離により、集約された下層精子層の上部に位置する上層を除去した後、洗浄液収納遠心分離管内の洗浄液を分離管の精子層の上部に注入し、再度、遠心分離することにより、洗浄濃縮された精子採取することもできる。そして、洗浄液収納遠心分離管の第２のキャップと密度勾配液収納遠心分離管の第１のキャップとは、識別可能な異なる色もしくは異なる形態となっているため、両者を取り違える可能性が極めて少ない。
【００１８】
また、本考案の密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットは、遠心分離用有底管と、遠心分離用有底管の開口部を封止し、かつ着脱可能なキャップと、遠心分離用有底管内に収納された所定量の密度勾配液とからなる複数本の液体収納遠心分離管と、複数本の遠心分離管を立てた状態にて保持する分離管スタンドとからなる立設遠心分離管集合体と、密度勾配液より密度が低い第２の密度勾配液または精子洗浄液が収納された容器体とからなる。
【００１９】
この密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キットでは、密度勾配液収納遠心分離管を有するので、密度勾配液収納遠心分離管の密度勾配液の上に希釈精液を注入した後、遠心分離することにより、下層に精子層を形成する精子の遠心分離操作を容易に行うことができる。さらに、遠心分離により、集約された下層精子層の上部に位置する上層を除去した後、容器体が洗浄液を収納している場合には、洗浄液を分離管の精子層の上部に注入し、再度、遠心分離することにより、洗浄濃縮された精子採取することもできる。また、容器体が、密度勾配液より密度が低い第２の密度勾配液を収納する場合には、密度勾配液収納遠心分離管が収納する密度勾配液上に、第２の密度勾配液を積層した後、希釈精液注入し、遠心分離することにより、２層法を用いた精子の遠心分離操作を容易に行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、本考案の実施例の密度勾配遠心分離用の精子洗浄濃縮キットの斜視図である。
【図２】図２は、図１に示した精子洗浄濃縮キットに使用されている複数本の遠心分離管を立てた状態にて保持した分離管スタンドの正面図である。
【図３】図３は、図２に示した複数本の遠心分離管を立てた状態にて保持した分離管スタンドの説明図である。
【図４】図４は、図１ないし図３に示した分離管スタンドの斜視図である。
【図５】図５は、図１に示した精子洗浄濃縮キットに使用されている遠心分離管の正面図である。
【図６】図６は、図５に示した遠心分離管の縦断面図である。
【図７】図７は、図５に示した遠心分離管の説明図である。
【図８】図８は、本考案の他の実施例の密度勾配遠心分離用の精子洗浄濃縮キットの正面図である。
【図９】図９は、図８に示した精子洗浄濃縮キットの縦断面図である。
【図１０】図１０は、図８に示した精子洗浄濃縮キットの斜視図である。
【図１１】図１１は、本考案の他の実施例の密度勾配遠心分離用の精子洗浄濃縮キットの斜視図である。
【図１２】図１２は、本考案の他の実施例の密度勾配遠心分離用の精子洗浄濃縮キットの斜視図である。
【図１３】図１３は、本考案の他の実施例の密度勾配遠心分離用の精子洗浄濃縮キットの斜視図である。
【図１４】図１４は、本考案の他の実施例の密度勾配遠心分離用の精子洗浄濃縮キットの斜視図である。
【考案を実施するための形態】
【００２１】
本考案の密度勾配遠心分離用の精子洗浄濃縮キットを図面に示す実施例を用いて説明する。
本考案の密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット１は、第１の遠心分離用有底管２３と、第１の遠心分離用有底管２３の開口部を封止し、かつ着脱可能な第１のキャップ２４と、第１の遠心分離用有底管２３内に収納された所定量の密度勾配液２５とからなる複数本の密度勾配液収納遠心分離管２１と、複数本の密度勾配液収納遠心分離管２１を立てた状態にて保持する第１の分離管スタンド２２とからなる第１の立設遠心分離管集合体２と、第２の遠心分離用有底管３３と、第２の遠心分離用有底管３３の開口部を封止し、かつ着脱可能な第２のキャップ３４と、第２の遠心分離用有底管３３内に収納された所定量の精子洗浄液３５とからなる複数本の洗浄液収納遠心分離管３１と、複数本の洗浄液収納遠心分離管３１を立てた状態にて保持する第２の分離管スタンド３２とからなる第２の立設遠心分離管集合体３とを備え、洗浄液収納遠心分離管３１の第２のキャップ３４は、密度勾配液収納遠心分離管２１の第１のキャップ２４と識別可能な異なる色もしくは異なる形態となっている。
【００２２】
本考案の密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット１は、図１に示すように、第１の立設遠心分離管集合体２と、第２の立設遠心分離管集合体３とを備える。
第１の立設遠心分離管集合体２は、図１ないし図３に示すように、複数本の密度勾配液収納遠心分離管２１と、複数本の遠心分離管２１を立てた状態にて保持する分離管スタンド２２とからなる。
【００２３】
密度勾配液収納遠心分離管２１は、遠心分離用有底管２３と、遠心分離用有底管２３の開口部を封止し、かつ着脱可能なキャップ２４と、遠心分離用有底管２３内に収納された密度勾配液２５とからなる。
【００２４】
遠心分離用有底管２３は、図５ないし図７に示すように、閉塞下端５１を有し、上端が開口した筒状体であり、内部に収納空間５０を有している。下端部は、閉塞下端５１に向かって縮径している。また、有底管２３は、下端部より上部側の部分は、ほぼ同一内径、同一外径の円筒部となっている。下端部は、図示するように、テーパー状に縮径することが好ましい。
【００２５】
有底管２３の材質としては、硬質樹脂もしくは半硬質樹脂が好適であり、特に、内部を視認可能な透明性を備えることが望ましい。具体的には、有底管７の材質としては、ポリプロピレン、ポリエチレンなどのポリオレフィン、ポリスチレン，ＳＢＳなどのスチレン系樹脂、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレートなどのポリエステル樹脂、アクリロニトリル系樹脂、ポリ塩化ビニル、ＰＭＭＡ（ポリメチルメタアクリレート）等を用いることが好ましい。
【００２６】
キャップ２４は、図５ないし図７に示すような、有底管２３の上端部に装着可能な短い筒状部と、筒状部の後端を閉塞する閉塞部とを有している。この実施例のものでは、閉塞部は、内方に向かって突出するものとなっている。
また、有底管２３およびキャップ２４は、離脱可能な係合部を備えていることが好ましい。図５ないし図７に示すものでは、有底管２３の開口端の外面には、キャップ２４との係合部を備えている。特に、図５ないし図７に示すものでは、有底管２３の後端部の外面には、第１の螺合部５２が形成されており、キャップ２４の筒状部の内面には、第１の螺合部５２と螺合可能な第２の螺合部５３が形成されている。
【００２７】
キャップ２４の材質としては、半硬質樹脂もしくは軟質樹脂が好適である。具体的には、ポリプロピレン、ポリエチレンなどのポリオレフィンもしくはポリオレフィンエラストマー、ポリスチレン，ＳＢＳなどのスチレン系樹脂、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレートなどのポリエステル樹脂もしくはポリエステルエラストマー等を用いることができる。
【００２８】
遠心分離管２１に充填される密度勾配液２５としては、浸透圧が、２５０〜３５０ｍＯｓｍであることが好ましく、２０℃での比重が、１．０００〜１．３００であることが好ましく、ｐＨは、４．５〜７．６であることが好ましい。特に、浸透圧が、２７０〜３２０ｍＯｓｍであることが好ましく、２０℃での比重が１．０００〜１．１３０であることが好ましく、ｐＨは、６．５〜７．５であることが好ましい。さらに、密度勾配液のエンドトキシンレベルは０．１２ＥＵ／ｍｌ以下であることが好ましい。また、密度勾配液２５の注入量としては、０．５〜１２．０ｍｌが好ましく、特に、２．０〜７．０ｍｌが好適である。
【００２９】
密度勾配液に添加される密度勾配形成物としては、パーコール（ポリビニルピロリドン被膜を有するコロイド状シリカ）、パーコールプラス（共有結合シランを有するコロイド状シリカ）、フィコール（スクロースとエピクロロヒドリンの共重合物）、スクロースなどを含有する水性液体があげられる、これらに限定されない。フィコールは、例えば、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ＰＬＵＳ（ファルマシアバイオテク株式会社、東京）、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ−１０７７（シグマ  アルドリッチ  ジャパン株式会社、東京）、およびリンフォプレップ（Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ）（登録商標）（ニコメッド、オスロ（ノルウェー））など名称の製品が市販されている。パーコールおよびパーコールプラスは、Ｐｅｒｃｏｌｌ、Ｐｅｒｃｏｌｌ  ＰＬＵＳ（シグマ  アルドリッチ  ジャパン株式会社、東京）という名称の製品が市販されている。
【００３０】
密度勾配液の基剤は、生理的等張液であることが好ましく、例えば、生理食塩水、リンゲル液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が使用される。さらに、密度勾配液は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、リン酸二水素カリウム、炭酸水素ナトリウム、ＤＬ−乳酸ナトリウム、Ｄ−グルコース、ピルビン酸ナトリウム、塩化カルシウム、ＨＥＰＥＳ［4-(2-HydroxyEthyl)-1-PiperazineEthaneSulfonic acid］、デキストラン、タウリン、カフェイン、ＰＶＰなどを含有していてもよい。
【００３１】
密度勾配液は、上述した密度勾配形成物含有水性液体を上記の密度勾配液用基剤にて希釈することにより、作成することが好ましい。具体的には、Ｐｅｒｃｏｌｌ、Ｐｅｒｃｏｌｌ  ＰＬＵＳを密度勾配液用基剤にて、含有量が４０〜８０％となるように希釈することにより作成される。
【００３２】
スタンド２２は、図１ないし図４に示すように、上面に設けられた複数の凹部２８を備えている。凹部２８は、有底管２３の下部を収納し、かつ、密度勾配液収納遠心分離管２１を立てた状態にて保持可能な深さを有している。また、凹部２８は、有底管２３の外径より若干大きい内径を有している。そして、このスタンドには、複数、具体的には、２５個（５個×五列）設けられている。なお、凹部２８の工数は、５〜５０程度が好適であり、特に、２０〜３０が好ましい。また、この実施例のスタンドでは、図１ないし図４に示すように、隣り合う列の凹部が向かい合うことなく、若干前後方向にずれたものとなっている。これにより、立設されている遠心分離管２１を凹部２８より容易に抜去可能かつ挿入可能なものとなっている。
【００３３】
第２の立設遠心分離管集合体３は、図１ないし図３に示すように、複数本の洗浄液収納遠心分離管３１と、複数本の遠心分離管２１を立てた状態にて保持する分離管スタンド３２とからなる。
洗浄液収納遠心分離管３１は、遠心分離用有底管２３と、遠心分離用有底管２３の開口部を封止し、かつ着脱可能な第２のキャップ３４と、遠心分離用有底管２３内に収納された洗浄液３５とからなる。遠心分離用有底管２３は、上述したものと同じである。
【００３４】
この実施例では、第２のキャップ３４は、図５ないし図７に示した第１のキャップと同様に、有底管２３の上端部に装着可能な短い筒状部と、筒状部の後端を閉塞する閉塞部とを有している。この実施例のものでは、閉塞部は、内方に向かって突出するものとなっている。有底管２３およびキャップ３４は、図５ないし図７に示した実施例と同様に、離脱可能な係合部を備えていることが好ましい。係合部の形態としては、上述した有底管２３と第１のキャップ２４が備えるようなものが好適である。第２のキャップ３４の形成材料も、上述した第１のキャップにて説明したものが好適に使用できる。
【００３５】
そして、この実施例では、第２のキャップ３４は、第１のキャップと識別可能な異なる色にて形成されている。第１のキャップ２４と第２のキャップ３４の色の組み合わせは、容易に識別できるものであれば、どのようなものであってもよい。例えば、第１のキャップ２４と第２のキャップ３４の一方が白で他方が青、赤もしくは黒、第１のキャップ２４と第２のキャップ３４の一方が黄色で、他方が赤、青もしくは黒、第１のキャップ２４と第２のキャップ３４の一方が青で、他方が赤もしくは黒などの組みあわせが考えられる。
【００３６】
また、第２のキャップ３４としては、形態が上述した第１のキャップと異なり、これにより、容易に識別可能なものであってもよい。例えば、第１のキャップと第２のキャップ間には、軸方向長に明らか差があるもの、第１のキャップと第２のキャップが、一方が真円形であり、他方が多角形であるものなどが考えられる。さらに、第１のキャップと第２のキャップは、上記のような形態の相違に加えて、上述のような色の相違の両者を有するものであってもよい。
【００３７】
洗浄液３５は、生理的等張液であることが好ましく、例えば、生理食塩水、リンゲル液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が使用される。さらに、密度勾配液は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、リン酸二水素カリウム、炭酸水素ナトリウム、ＤＬ−乳酸ナトリウム、Ｄ−グルコース、ピルビン酸ナトリウム、塩化カルシウム、ＨＥＰＥＳ［4-(2-HydroxyEthyl)-1-PiperazineEthaneSulfonic acid］、タウリン、カフェインなどを含有していてもよい。
【００３８】
洗浄液３５としては、浸透圧が、２５０〜３００ｍＯｓｍであることが好ましく、ｐＨは、４．５〜７．５であることが好ましい。特に、浸透圧が、２７０〜３００ｍＯｓｍであることが好ましく、ｐＨは、６．５〜７．５であることが好ましい。さらに、洗浄液のエンドトキシンレベルは０．１２ＥＵ／ｍｌ以下であることが好ましい。また、洗浄液３５の注入量としては、０．５〜１５．０ｍｌが好ましく、特に、２．０〜７．０ｍｌが好適である。
【００３９】
スタンド３２は、上述したスタンド２２と同じである。特に、この実施例では、第１の立設遠心分離管集合体２における密度勾配液収納遠心分離管２１の本数と、第２の立設遠心分離管集合体３における洗浄液収納遠心分離管３１との本数は、同じものとなっている。これのより、一方の遠心分離管があまることがない。
【００４０】
次に、図８ないし図１０に示す実施例の密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット１０について説明する。
精子洗浄濃縮キット１０は、第１の遠心分離用有底管２３と、第１の遠心分離用有底管２３の開口部を封止し、かつ着脱可能な第１のキャップ２４と、第１の遠心分離用有底管２３内に収納された所定量の密度勾配液２５とからなる密度勾配液収納遠心分離管２１と、第２の遠心分離用有底管３３と、第２の遠心分離用有底管３３の開口部を封止し、かつ着脱可能な第２のキャップ３４と、第２の遠心分離用有底管３３内に収納された所定量の精子洗浄液３５とからなる洗浄液収納遠心分離管３１と、密度勾配液収納遠心分離管２１と洗浄液収納遠心分離管３１を立てた状態にて保持する分離管スタンド１１とを備える。そして、第２のキャップ３４は、第１のキャップ２４と識別可能な異なる色もしくは異なる形態となっている。
【００４１】
この精子洗浄濃縮キット１０は、１本の密度勾配液収納遠心分離管２１と、同様に、１本の洗浄液収納遠心分離管３１と、それらを同時に立てた状態にて保持する分離管スタンド１１とを備える。
密度勾配液収納遠心分離管２１は、上述したものと同じである。また、洗浄液収納遠心分離管３１も上述したものと同じである。そして、上述したものと同様に、第２のキャップ３４は、第１のキャップ２４と識別可能な異なる色もしくは異なる形態となっている。
【００４２】
図８ないし図１０に示す実施例では、第２のキャップ３４は、第１のキャップと識別可能な異なる色にて形成されている。第１のキャップ２４と第２のキャップ３４の色の組み合わせは、容易に識別できるものであれば、どのようなものであってもよい。例えば、第１のキャップ２４と第２のキャップ３４の一方が白で他方が青、赤もしくは黒、第１のキャップ２４と第２のキャップ３４の一方が黄色で、他方が赤、青もしくは黒、第１のキャップ２４と第２のキャップ３４の一方が青で、他方が赤もしくは黒などの組みあわせが考えられる。
【００４３】
また、第２のキャップ３４としては、形態が上述した第１のキャップと異なり、これにより、容易に識別可能なものであってもよい。例えば、第１のキャップと第２のキャップ間には、軸方向長に明らか差があるもの、第１のキャップと第２のキャップが、一方が真円形であり、他方が多角形であるものなどが考えられる。さらに、第１のキャップと第２のキャップは、上記のような形態の相違に加えて、上述のような色の相違の両者を有するものであってもよい。
【００４４】
スタンド１１は、図８ないし図１０に示すように、上面に設けられた２つの凹部１２，１３を備えている。凹部１２は、密度勾配液収納遠心分離管２１の下部を収納し、かつ、密度勾配液収納遠心分離管２１を立てた状態にて保持可能な深さを有している。凹部１３は、洗浄液収納遠心分離管３１の下部を収納し、かつ、洗浄液収納遠心分離管３１を立てた状態にて保持可能な深さを有している。また、凹部１２，１３は、各分離管の有底管２３の外径より若干大きい内径を有している。
【００４５】
次に、図１１に示す実施例の精子洗浄濃縮キット１ａについて説明する。
この実施例の密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット１ａは、遠心分離用有底管２３と、遠心分離用有底管２３の開口部を封止し、かつ着脱可能なキャップ２４と、遠心分離用有底管２３内に収納された所定量の密度勾配液２５とからなる複数本の密度勾配液充填遠心分離管と、複数本の遠心分離管を立てた状態にて保持する分離管スタンドとからなる立設遠心分離管集合体２と、精子洗浄液が収納された容器体４とからなる。
【００４６】
特に、図示する実施例の精子洗浄濃縮キット１ａでは、精子洗浄液４３が収納された容器体４を備えている。容器体４は、容器本体４１と、容器本体４１の上部に着脱可能に装着された蓋４２と、内部に収納された精子洗浄液４３を備えている。容器本体４１としては、内部に精子洗浄液４３が収納可能であり、収納されている精子洗浄液４３を取り出せるものであれば、どのようなものであってもよい。なた、蓋についても、容器本体４１を開閉できるものであれば、どのようなものであってもよい。精子洗浄液４３としては、生理的等張液であることが好ましく、例えば、生理食塩水、リンゲル液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が使用される。さらに、密度勾配液は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、リン酸二水素カリウム、炭酸水素ナトリウム、ＤＬ−乳酸ナトリウム、Ｄ−グルコース、ピルビン酸ナトリウム、塩化カルシウム、ＨＥＰＥＳ［4-(2-HydroxyEthyl)-1-PiperazineEthaneSulfonic acid］、タウリン、カフェインなどを含有していてもよい。
【００４７】
立設遠心分離管集合体２は、上述したものと同じである。よって、密度勾配液２５，密度勾配液充填遠心分離管２１、これを立てた状態にて保持する分離管スタンド２２、立設遠心分離管集合体２も上述したものと同じである。
【００４８】
そして、本考案の精子洗浄濃縮キットは、図１２に示すようなものであってもよい。
この実施例の密度勾配遠心分離法用の精子洗浄濃縮キット１ｂは、遠心分離用有底管２３と、遠心分離用有底管２３の開口部を封止し、かつ着脱可能なキャップ２４と、遠心分離用有底管２３内に収納された所定量の密度勾配液２５とからなる複数本の密度勾配液充填遠心分離管と、複数本の遠心分離管を立てた状態にて保持する分離管スタンドとからなる立設遠心分離管集合体２と、密度勾配液２５より密度勾配形成物含有量が少ない（密度が低い）第２の密度勾配液が収納された容器体４ａとからなる。
【００４９】
この実施例の精子洗浄濃縮キット１ｂでは、密度勾配液２５より密度勾配形成物含有量が少ない（密度が低い）第２の密度勾配液が収納された容器体４ａを備えている。容器体４ａは、容器本体４１と、容器本体４１の上部に着脱可能に装着された蓋４２と、内部に収納された第２の密度勾配液４３ａを備えている。容器本体４１としては、内部に第２の密度勾配液４３ａが収納可能であり、収納されている第２の密度勾配液４３ａを取り出せるものであれば、どのようなものであってもよい。なた、蓋についても、容器本体４１を開閉できるものであれば、どのようなものであってもよい。
【００５０】
第２の密度勾配液４３ａとしては、密度勾配液２５より密度勾配形成物含有量が少ない、具体的には、密度が低いものが用いられている。
第２の密度勾配液としては、浸透圧が、２５０〜３５０ｍＯｓｍであることが好ましく、２０℃での比重が、１．０００〜１．３００であり、かつ、密度勾配液２５より、０．０１５〜０．０３５程度低いことが好ましく、ｐＨは、４．５〜７．５であることが好ましい。特に、浸透圧が、２７０〜３００ｍＯｓｍであることが好ましく、ｐＨは、６．５〜７．５であることが好ましい。さらに、密度勾配液のエンドトキシンレベルは０．１２ＥＵ／ｍｌ以下であることが好ましい。
【００５１】
密度勾配液に添加される密度勾配形成物としては、パーコール（ポリビニルピロリドン被膜を有するコロイド状シリカ）、パーコールプラス（共有結合シランを有するコロイド状シリカ）、フィコール（スクロースとエピクロロヒドリンの共重合物）、スクロースなどを含有する水性液体があげられる。しかし、これらに限定されない。フィコールは、例えば、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ＰＬＵＳ（ファルマシアバイオテク株式会社、東京）、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ−１０７７（シグマ  アルドリッチ  ジャパン株式会社、東京）、およびリンフォプレップ（Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ）（登録商標）（ニコメッド、オスロ（ノルウェー））など名称の製品が市販されている。パーコールおよびパーコールプラスは、Ｐｅｒｃｏｌｌ、Ｐｅｒｃｏｌｌ  ＰＬＵＳ（シグマ  アルドリッチ  ジャパン株式会社、東京）という名称の製品が市販されている。
【００５２】
密度勾配液の基剤は、生理的等張液であることが好ましく、例えば、生理食塩水、リンゲル液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が使用される。さらに、密度勾配液は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、リン酸二水素カリウム、炭酸水素ナトリウム、ＤＬ−乳酸ナトリウム、Ｄ−グルコース、ピルビン酸ナトリウム、塩化カルシウム、ＨＥＰＥＳ［4-(2-HydroxyEthyl)-1-PiperazineEthaneSulfonic acid］、デキストラン、タウリン、カフェイン、ＰＶＰなどを含有していてもよい。
【００５３】
第２の密度勾配液４３ａは、上述した密度勾配形成物含有水性液体を上記の密度勾配液用基剤にて希釈することにより、作成することが好ましい。具体的には、Ｐｅｒｃｏｌｌ、Ｐｅｒｃｏｌｌ  ＰＬＵＳを密度勾配液用基剤にて、含有量が４０〜６０％となるように希釈することにより作成される。そして、密度勾配液２５は、Ｐｅｒｃｏｌｌ、Ｐｅｒｃｏｌｌ  ＰＬＵＳを密度勾配液用基剤にて、含有量が７０〜８０％となるように希釈することにより作成されることが好ましい。
【００５４】
また、本考案の精子洗浄濃縮キットは、図１３に示すようなものであってもよい。この実施例の精子洗浄濃縮キット１ｃの基本構成は、上述した精子洗浄濃縮キット１ａと同じである。相違は、精子洗浄液４３が収納された容器体４を備えるとともに、上述した精子洗浄濃縮キット１ｂが備えていた第２の密度勾配液が収納された容器体４ａを備える点のみである。よって、この実施例の精子洗浄濃縮キット１ｃは、立設遠心分離管集合体２と、精子洗浄液が収納された容器体４と、第２の密度勾配液が収納された容器体４ａとからなる。それぞれについては、上述したものと同じである。
【００５５】
また、本考案の精子洗浄濃縮キットは、図１４に示すようなものであってもよい。この実施例の精子洗浄濃縮キット１ｄの基本構成は、図１２に示した精子洗浄濃縮キット１ｂと同じである。この精子洗浄濃縮キット１ｄは、密度勾配液より密度勾配形成物含有量が少ない（密度が低い）第２の密度勾配液が収納された第２密度勾配液収納容器体４ａと、第２の密度勾配液より密度勾配形成物含有量が少ない（密度が低い）第３の密度勾配液が収納された第３の密度勾配液収納容器体４ｂを備える点のみである。
【００５６】
第３の密度勾配液収納容器体４ｂは、容器本体４１と、容器本体４１の上部に着脱可能に装着された蓋４２と、内部に収納された第３の密度勾配液４３ｂを備えている。容器本体４１としては、内部に第３の密度勾配液４３ｂが収納可能であり、収納されている第３の密度勾配液４３ｂを取り出せるものであれば、どのようなものであってもよい。なた、蓋についても、容器本体４１を開閉できるものであれば、どのようなものであってもよい。
【００５７】
第３の密度勾配液４３ｂとしては、上述した第２の密度勾配液４３ａより密度勾配形成物含有量が少ないもしくは含有しない、具体的には、密度が低いものが用いられている。
第３の密度勾配液としては、浸透圧が、２５０〜３５０ｍＯｓｍであることが好ましく、２０℃での比重が、１．０００〜１．３００であり、第２の密度勾配液４３ａより、０．０１５〜０．０３５程度低いことが好ましく、ｐＨは、４．５〜７．５であることが好ましい。特に、浸透圧が、２７０〜３００ｍＯｓｍであることが好ましく、ｐＨは、６．５〜７．５であることが好ましい。さらに、密度勾配液のエンドトキシンレベルは０．１２ＥＵ／ｍｌ以下であることが好ましい。
【００５８】
第３の密度勾配液４３ｂは、上述した密度勾配形成物含有水性液体を上記の密度勾配液用基剤にて希釈することにより、作成することが好ましい。具体的には、Ｐｅｒｃｏｌｌ、Ｐｅｒｃｏｌｌ  ＰＬＵＳを密度勾配液用基剤にて、含有量が２０〜４０％となるように希釈することにより作成される。
【００５９】
次に、本考案の精子洗浄濃縮方法について、図２ないし図４に示す精子洗浄濃縮キット１０を用いた場合を例に取り、説明する。
先ず、精液の受付を行い、氏名、カルテ番号等の確認および、目視による観察（血精液症等のチェック）を行う。次に、患者氏名の確認を行い、シリンジに、精液を数ｍｌ吸引して精液量の測定を行った後、シリンジで精液を数回吸入、排出して液化ならびに均一化を図る。精液が均一に液化されたら、これをスライドグラスに滴下して精子数および運動率を観察する。次に、精液の液化状態およびゲルの混在を観察する。
【００６０】
そして、精液に同量のハンクス液または生食を加えてシリンジで吸入、排出を繰り返して希釈し、この希釈した精液をシリンジに吸引して、密度勾配液収納遠心分離管２１の密度勾配液上に積層する。精液の全量を密度勾配液に積層した後、密度勾配液収納遠心分離管２１の精液と、密度勾配液２５の界面の両側部分、通常両側２ｃｍの範囲を、例えばＬ型攪拌棒で攪拌して界面を無くする。
【００６１】
次に、密度勾配液収納遠心分離管２１を例えば、３０００ｒｐｍ（１．０００ｘｇ）で２０〜３０分間遠心分離する。遠心分離により、精子は、密度勾配液収納遠心分離管２１下端の細径底部２６に濃縮される。トランスファーカニューレ（所定長の細管）を先端に装着したシリンジを準備し、トランスファーカニューレの先端部を遠心分離管２１の精子集約層に配置した後、シリンジを操作して吸引し、トランスファーカニューレ内に精子濃厚液を採取する。
【００６２】
そして、精子を採取したトランスファーカニューレを洗浄液収納遠心分離管３１内に挿入し、シリンジを操作して、トランスファーカニューレ内の精子濃厚液を精子洗浄液３５内に注入する。そして、トランスファーカニューレを用いて、撹拌した後、洗浄液収納遠心分離管２１を例えば、３０００ｒｐｍ（１．０００ｘｇ）で２０〜３０分間遠心分離する。これにより、下層に洗浄された精子集約層が形成される。トランスファーカニューレを先端に装着した別のシリンジを用いて、精子集約層より上層部分を吸引除去する。これにより、洗浄された濃厚精液が採取される。
【符号の説明】
【００６３】
１、１０  精子洗浄濃縮キット
２  第１の立設遠心分離管集合体
３  第２の立設遠心分離管集合体
１１  分離管スタンド
２１  密度勾配液収納遠心分離管
２３  第１の遠心分離用有底管
２４  第１のキャップ
２５  密度勾配液
３１  洗浄液収納遠心分離管
３３  遠心分離用有底管
３４  第２のキャップ
３５  精子洗浄液
【図１】
0003203186.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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