(57)【要約】      （修正有）【課題】局所性または経口全身性抗生物質処置の有無に関係なく、大量の石鹸または脱脂物質の局所使用を伴わずに、自然な方法で、一般的な皮膚炎、脂漏性皮膚炎、酒さ、湿疹およびざ瘡を処置するための組成物を提供する。【解決手段】プロピオニバクテリウム・アクネスに属する病原性細菌によって引き起こされる感染症の処置における使用のための、特に、一般的な皮膚炎、脂漏性皮膚炎、酒さ、湿疹およびざ瘡の予防的および／または治癒的処置における使用のための、選択された乳酸菌株を開示する。加えて、プロピオニバクテリウム・アクネスに属する病原性細菌によって引き起こされる感染症の処置における使用のための、特に、一般的な皮膚炎、脂漏性皮膚炎、酒さ、湿疹およびざ瘡の予防的および／または治癒的処置に使用するための、選択された乳酸菌株を含む混合物またはこれらからなる混合物を含む組成物を開示する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
種プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）に属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するための細菌株であって、
・当該種ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）に属する細菌の株が、Probiotical SpA（Italy）によって単離されて２００９年７月２３日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）ＬＳ０３（ＩＤ  １３８２）（ＤＳＭ  ２２７７６）として同定されており、
・当該種ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）に属する細菌の株が、Probiotical SpA（Italy）によって単離されて２０１１年３月２日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）ＬＳ０４（ＤＳＭ  ２４６１８）として同定されており、
・当該種ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキ（Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii）に属する細菌の株が、Probiotical SpA（Italy）によって単離されて２００８年１２月１０日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキ（Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii）ＬＤＤ０１（ＤＳＭＺ  ２００７４）（ＤＳＭ  ２２１０６）として同定されており、
・当該種ラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）に属する細菌の株が、Probiotical SpA（Italy）によって単離されて２０１０年８月５日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）ＬＲＥ０４（ＤＳＭ  ２３８８０）として同定されており、
・当該種ビフィドバクテリウム・シュードロングム亜種グロボスム（Bifidobacterium pseudolongum ssp. globosum）に属する細菌の株が、Probiotical SpA（Italy）によって単離されて２０１２年１０月２日にＤＳＭＺに寄託されたビフィドバクテリウム・シュードロングム亜種グロボスム（Bifidobacterium pseudolongum ssp. globosum）ＢＰＳ０１（ＤＳＭ  ２６４５６）として同定されている、
当該細菌株。
【請求項２】
当該株が生きているかまたは死んでおり；好ましくは、チンダル化し（tyndallized）、超音波処理し、溶解した細胞、および／または画分または酵素および／またはその代謝物の形態であり得る、請求項１記載の使用のための株。
【請求項３】
当該種プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）に属する病原性細菌によって引き起こされる感染症が、好ましくは皮膚炎、脂漏性皮膚炎、湿疹、酒さおよびざ瘡を含む群またはこれらからなる群から選択されるいくつかの皮膚または真皮の疾患の発症の原因である、請求項１〜２いずれか１項記載の使用のための株。
【請求項４】
当該疾患がざ瘡である、請求項３記載の使用のための株。
【請求項５】
当該病原性細菌がプロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）  ＡＴＣＣ  １１８２７である、請求項１〜４いずれか１項記載の使用のための株。
【請求項６】
種プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）に属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するための組成物であって、
（ｉ）株ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）ＬＳ０３（ＤＳＭ  ２２７７６）、株ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）ＬＳ０４（ＤＳＭ  ２４６１８）を含む群またはこれらからなる群から選択される種ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）に属する細菌の少なくとも１種類の株および／またはその混合物；および／または
（ｉｉ）株ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキ（Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii）ＬＤＤ０１（ＤＳＭＺ  ２００７４）（ＤＳＭ  ２２１０６）、株ラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）ＬＲＥ０４（ＤＳＭ  ２３８８０）および／または株ビフィドバクテリウム・シュードロングム亜種グロボスム（Bifidobacterium pseudolongum ssp. globosum）ＢＰＳ０１（ＤＳＭ  ２６４５６）を含む群またはこれらからなる群から選択される細菌の少なくとも１種類の株；ならびに生理学的に許容される担体
を含む混合物またはこれからなる混合物の有効量を含む組成物。
【請求項７】
当該組成物が、
（ｉ）株ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）ＬＳ０３（ＤＳＭ  ２２７７６）を含む群またはこれからなる群から選択される種ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）に属する細菌の少なくとも１種類の株；および／または
（ｉｉ）株ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキ（Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii）ＬＤＤ０１（ＤＳＭＺ  ２００７４）（ＤＳＭ  ２２１０６）および株ラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）ＬＲＥ０４（ＤＳＭ  ２３８８０）を含む群またはこれらからなる群から選択される少なくとも１種類の細菌株；ならびに生理学的に許容される担体
を含む混合物またはこれらからなる混合物に有効量を含み；
当該組成物が、種プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）に属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するためのものである、
請求項６記載の使用のための組成物。
【請求項８】
当該混合物が、
・株ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）ＬＳ０３（ＤＳＭ  ２２７７６）；および／または
・株ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキ（Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii）ＬＤＤ０１（ＤＳＭＺ  ２００７４）（ＤＳＭ  ２２１０６）；ならびに生理学的に許容される担体
を含むかまたはこれらからなり；
当該組成物が、種プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）に属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するためのものであり、好ましくは当該細菌株が好ましくは約１：１、または２：１、または３：１、または４：１、または５：１、１：２の重量比で存在する、請求項６または７記載の使用のための組成物。
【請求項９】
当該混合物が、
・株ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）ＬＳ０３（ＤＳＭ  ２２７７６）；および／または
・株ラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）ＬＲＥ０４（ＤＳＭ  ２３８８０）；ならびに生理学的に許容される担体
を含むかまたはこれらからなり；
当該組成物が、種プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）に属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するためのものであり、好ましは、当該細菌株が好ましくは約１：１、または２：１、または３：１、または４：１、または５：１、１：２の重量比で存在する、請求項６〜８いずれか１項記載の使用のための組成物。
【請求項１０】
当該混合物が、
・株ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）ＬＳ０３（ＤＳＭ  ２２７７６）；および
・株ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキ（Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii）ＬＤＤ０１（ＤＳＭＺ  ２００７４）（ＤＳＭ  ２２１０６）；および
・株ラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）ＬＲＥ０４（ＤＳＭ  ２３８８０）；ならびに生理学的に許容される担体
を含むかまたはこれらからなり；
当該組成物が、種プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）に属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するためのものであり、好ましくは、当該細菌株が好ましくは約１：１：１、または２：１：１、または３：１：１、または４：１：１、または５：１：１、１：２：１、または１：１：２の重量比で存在する、請求項６〜９いずれか１項記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
当該混合物が、さらに、乳酸アンモニウム、好ましくは乳酸菌由来の発酵源の乳酸アンモニウムを含む、請求項６〜１０いずれか１項記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
当該組成物が、好ましくは顔、肩、背中、および胸の上部に生じる、面皰（pimple）またはせつ（furuncle）の処置に使用するためのものである、請求項６〜１１いずれか１項記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
当該細菌株が生きているかまたは死んでおり；より好ましくは当該細菌株がチンダル化し（tyndallized）、超音波処理し、溶解した細胞、および／または画分または酵素および／またはその代謝物の形態であり得る、請求項６〜１２いずれか１項記載の使用のための組成物。
【請求項１４】
当該感染症が、種プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）に属する病原性細菌によって引き起こされ、当該病原体がいくつかの皮膚または真皮の疾患の発症の原因であり、後者は、好ましくは皮膚炎、脂漏性皮膚炎、湿疹、酒さおよびざ瘡を含む群またはこれらからなる群から選択され；より好ましくは軽度、中等度または慢性のざ瘡を含む群またはこれらからなる群から選択され；好ましくは、当該病原性細菌がプロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）  ＡＴＣＣ  １１８２７である、請求項６〜１３いずれか１項記載の使用のための組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、種プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）に属する病原性細菌による感染症および／または炎症の処置に使用するための、特に、一般的な皮膚炎、脂漏性皮膚炎、酒さ、湿疹およびざ瘡の予防的および／または治癒的処置に使用するための選択された乳酸菌株に関する。さらにまた、本発明は、種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の処置に使用するための、特に、一般的な皮膚炎、脂漏性皮膚炎、酒さ、湿疹およびざ瘡の予防的および／または治癒的処置に使用するための、選択された乳酸菌株を含む混合物またはこれらからなる混合物を含む組成物に関する。この選択された乳酸菌株の混合物を含む組成物は、散剤、分散性散剤、顆粒剤、パケット剤またはスティック剤、液剤、スプレー液剤、シロップ剤、錠剤、カプセル剤、丸剤またはロゼンジ剤の剤形の経口用医薬品形態（新規な食品、サプリメント製品または医療用デバイスもしくは医薬組成物）；または皮膚用にそのまま使用されるクリーム剤、軟膏剤、ポマード剤、ゲル剤、ヒドロゲル剤、分散剤、乳剤またはスプレー剤の剤形の局所用医薬品形態（医療用デバイス用組成物または医薬組成物）、またはバンドエイドの剤形の経皮用医薬品形態にも製剤化される。
【０００２】
皮膚炎という用語は、皮膚疾患を包含することが知られており、一般に、刺激として現れる皮膚の炎症反応からなることが知られている。脂漏性皮膚炎（脂漏性湿疹とも称される）は、主に、頭皮、顔、胸および外耳道などの身体の部位を冒す皮膚炎である。特に、皮脂腺に富む皮膚の部位がより罹患しやすい。脂漏性皮膚炎は、しばしば、酒さと混同されたり、および／または、酒さを併発したりすることがある。酒さは、慢性皮膚病、すなわち、通常、顔の中央部に作用し、紅斑および炎症性ざ瘡様発疹として出現する、すなわち、ざ瘡と同様の丘疹および膿疱を伴う、皮膚の病理学的変化としても知られている。この後者の特徴から、それは過去に「ざ瘡酒さ」とも呼ばれたが、これはざ瘡との混同を避けるためにもはや使用されなくなった用語である。
【０００３】
ざ瘡は、毛嚢および関連皮脂腺の炎症過程によって特徴付けられる皮膚疾患（一般に「面皰（pimple）」または「せつ（furuncle）」と定義される）であることが知られている。毛嚢は、毛を形成する細胞を産生する皮膚（または真皮）の特定の構造体である。毛嚢は、底部に球と呼ばれる拡大部があり、表皮の表面まで狭くなっていく首をもつ表皮の袋状内屈（bag-shaped introflexion）である。毛嚢は、毛および関連皮脂腺とともに毛嚢脂腺複合体を形成する。皮膚に、より厳密には表皮の下に横たわる真皮に見られる皮脂腺は、主にコレステロールおよび脂肪酸からなる皮脂（生体液）と呼ばれる油性物質の産生および分泌が委ねられている。皮脂は、皮膚を柔らかくし、水和させる役割を果たし、かくして、乾燥するのを回避する。特に１２歳〜２０歳の白人対象体において、ざ瘡に最もよく罹患する身体の領域は顔、首、肩、背中および胸である。最も一般的なざ瘡の種類は「尋常性ざ瘡」と称される。
【０００４】
未解決の課題は、局所性または経口全身性抗生物質処置の有無に関係なく、大量の石鹸または脱脂物質の局所使用を伴わずに、自然な方法で、一般的な皮膚炎、脂漏性皮膚炎、酒さ、湿疹およびざ瘡を処置することができることである。例えば、局所使用のための抗炎症活性を有するコルチコステロイドの使用。
【０００５】
実際に、石鹸または脱脂物質の使用は、しばしば、不利であり、制限および欠点がないわけではない。例えばざ瘡、脂漏性皮膚炎、湿疹または酒さによって引き起こされる刺激を有する皮膚は、皮脂が多く存在するため「脂っぽい（fatty）」傾向にあるが、石鹸および洗剤によってもたらされる過度の脱脂作用は、実際、逆の効果を引き起こし、それによって皮膚はそれ自体を保護するためにそれ自体の皮脂産生を自然に増加させる。加えて、皮脂の過度の除去は、ヒドロリピド膜（hydrolipidic film）を変える可能性があり、細菌の定着を促進し、潜在的な刺激物に対する皮膚感受性を増加させる。
【０００６】
したがって、一般的な皮膚炎、脂漏性皮膚炎、酒さ、湿疹またはざ瘡に罹患している皮膚の石鹸または洗剤による局所処置は、決定的な処置ではなく、影響を受けるすべての対象体にとって効果的な処置であるとは言えない。
【０００７】
他方、石鹸または洗剤による局所処置の代替法は、例えばざ瘡のような皮膚疾患（皮膚炎）を治療するために、例えばテトラサイクリンもしくはミノサイクリンまたはそれらの誘導体に基づくもののような局所性または経口全身性抗生物質の使用を処方することによって感染の原因となる細菌を阻止する、多くの皮膚科医によって使用されている典型的なストラテジーによって表される。
【０００８】
ざ瘡の場合、例えば、プロピオニフォーム（propioniform）のタイプの細菌が、皮膚に生じる実際の炎症（身体の反応）および感染症の原因である。
【０００９】
種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する細菌は、皮膚または真皮表面に見られ、特に、例えばざ瘡のようないくつかの皮膚疾患を引き起こす。ざ瘡は、例えば、種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する細菌が皮膚の孔を詰まらせた場合に生じ、皮膚自体の炎症を介して身体（免疫系）によって阻止される感染症を生じさせる。
【００１０】
ざ瘡の病因に関して、病原微生物プロピオニバクテリウム・アクネス（P. acnes）は、皮脂腺管にコロニーを形成して自然免疫応答を引き起こすだけでなく、炎症を起こしていない面皰から炎症を起こしている丘疹、小結節までの膿疱まで進行すると述べられている。プロピオニバクテリウム・アクネスに起因する炎症およびざ瘡によって引き起こされる顔面病変に関する研究は、ＩＬ−８のレベルが顔面組織のざ瘡のない隣接領域よりも約３０１５倍高いこと（ｐ＜０.００１）を示している（非特許文献１；非特許文献２）。
【００１１】
ケモカインＩＬ−８は、しばしば、炎症と関連しており、酸化ストレスによって増加し、かくして、局所炎症の重要なパラメーターとなる：この理由から、それはざ瘡における主要な炎症誘発性メディエーターであると同定された。
【００１２】
プロピオニバクテリウム・アクネスの異なる株は、ケラチノサイトからのＨＢＤ２、ＩＬ−８およびＩＬ−１αの分泌を誘導する可変能力を示すことが判明した（非特許文献３）。
【００１３】
上記のことから、病原微生物プロピオニバクテリウム・アクネスは、感染症を引き起こすプロセスおよび炎症を発症するプロセス（どちらもざ瘡の根底にある）の原因であるので、感染症に対して作用することができ、同時に、炎症に対して作用することができるざ瘡の有効な治療法（予防的および／または治癒的）を有することが望ましい。
【００１４】
種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する細菌に対して作用する特定の局所性または全身性抗生物質の使用が、必ずではないがざ瘡を処置するための療法となることが判明した。
【００１５】
しかしながら、局所性抗生物質（例えば、局所使用のための抗炎症活性を有するコルチコステロイドなど）または全身性抗生物質の使用は、プロピオニフォーム細菌がざ瘡または皮膚に影響を及ぼす他の疾患の発症を引き起こすメカニズムの根底にある原因の除去に失敗する。加えて、局所性または全身性抗生物質の使用は、主としてそれらが長期間にわたって投与された場合、その使用を強く制限する副作用および禁忌がないわけではない。さらにまた、抗生物質の使用が証明された抗生物質耐性およびプロピオニバクテリウム・アクネスの耐性株の発生を引き起こすという事実に起因する問題がある。
【００１６】
これに関して、いくつかの局所性または全身性抗生物質の静菌活性、殺菌活性および抗炎症活性は、局所治療に用いられる抗微生物剤のいくつか（クリンダマイシン、エリスロマイシン、メクロサイクリンおよびゲンタマイシン）に対して耐性のプロピオニバクテリウム・アクネスの株の増殖を引き起こす欠点を有する。
【００１７】
したがって、これまで、皮膚の炎症またはアレルギーを誘発する感染症の原因となる病原体を処置できることが必要とされている。
【００１８】
詳しくは、石鹸または洗剤の使用および局所性または全身性抗生物質の使用の両方を回避するかまたは強く低減するように、皮膚炎、脂漏性皮膚炎、湿疹、酒さおよびざ瘡を処置するための効果的で自然な処置法が必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１９】
【非特許文献１】“The role of inflammation in the pathology of acne”, (Literature Review) Emil A. Tanghetti MD Center for Dermatology and Laser Surgery, Sacramento, California, Sept. 2013, volume 6, number 9
【非特許文献２】“Inflammation and Extracellular Matrix Degradation Mediated by Activated Transcription Factors Nuclear Factor-kB and Activator Protein-1 in inflammatory Acne Lesions in Vivo”, Sewon Kang et al, American Journal of Pathology, Vol. 166, No. 6, June 2005
【非特許文献３】“Pathways to inflammation: acne pathophysiology”(Review article) Taylor M et al, EJD, vol. 21, n.° 3, May-June 2011
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
したがって、長期間にわたり投与することができ、禁断症状や副作用がなく、プロピオニバクテリウム・アクネスによる感染症に対して作用し、かつ、病原微生物プロピオニバクテリウム・アクネスによって誘発された炎症に続く免疫系に引き起こされる不均衡に対する応答として作用する決定的で効果的な処置である、ざ瘡に対する処置が依然としてオペレーターによって強く必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本出願人は、精力的で長期に及ぶ研究開発活動の後、天然に存在する細菌株の非常に大きな群から特定の乳酸菌株を選択および単離することに成功して、上記の必要性を満たした。この選択された乳酸菌株は、いくつかの皮膚疾患、例えば特にざ瘡などの原因である病原体プロピオニバクテリウム・アクネスに対して効果的である。
【００２２】
本発明の目的は、特許請求の範囲に記載されるような、種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するための、種ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）に属する細菌の少なくとも１種類の株である。
【００２３】
好ましい実施態様において、種ラクトバチルス・サリバリウスに属する細菌の少なくとも１種類の株は、Probiotical SpA（Italy）によって単離されて２００９年７月２３日にInstitute Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH（以下、ＤＳＭＺ）に寄託されたラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０３（ＩＤ  １３８２）（ＤＳＭ  ２２７７６）として同定されている。
【００２４】
別の好ましい実施態様において、種ラクトバチルス・サリバリウスに属する細菌の少なくとも１種類の株は、Probiotical SpA（Italy）によって単離されて２０１１年３月２日にInstitute Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH（以下、ＤＳＭＺ）に寄託されたラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０４（ＤＳＭ  ２４６１８）として同定されている。
【００２５】
さらに別の好ましい実施態様において、当該細菌株は、生きているかまたは死んでおり；好ましくは、チンダル化し（tyndallized）、超音波処理し、溶解した細胞、および／または画分または酵素および／またはその代謝物の形態であり得る。
【００２６】
別の好ましい実施態様において、種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症は、好ましくは皮膚炎、脂漏性皮膚炎、湿疹、酒さおよびざ瘡を含む群またはこれらからなる群から選択される、いくつかの皮膚または真皮の疾患の発症の原因である。さらに好ましくは、当該疾患は軽度、中等度または慢性のざ瘡である。
【００２７】
別の好ましい実施態様において、当該病原性細菌はプロピオニバクテリウム・アクネス  ＡＴＣＣ  １１８２７である。
【００２８】
本発明の別の目的は、種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するための組成物であって、種ラクトバチルス・サリバリウスに属する細菌の少なくとも１種類の株および生理学的に許容される担体を含む混合物またはこれらからなる混合物の有効量を含む組成物である。
【００２９】
好ましい実施態様において、当該使用のための組成物は、単離されて２００９年７月２３日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０３（ＩＤ  １３８２）（ＤＳＭ  ２２７７６）として同定された、種ラクトバチルス・サリバリウスに属する細菌の少なくとも１種類の株を含む。
【００３０】
別の好ましい実施態様において、当該使用のための組成物は、単離されて２０１１年３月２日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０４（ＤＳＭ  ２４６１８）として同定された、種ラクトバチルス・サリバリウスに属する細菌の少なくとも１種類の株を含む。
【００３１】
別の実施態様において、当該使用のための組成物は、生きていても死んでいてもよく、好ましくは、チンダル化し、超音波処理し、溶解した細胞、および／または画分または酵素および／またはその代謝物の形態であり得る、種ラクトバチルス・サリバリウスに属する細菌の少なくとも１種類の株（ラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０３（ＩＤ  １３８２）（ＤＳＭ  ２２７７６）および／またはラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０４（ＤＳＭ  ２４６１８））を含む。
【００３２】
別の実施態様において、当該使用のための組成物は、好ましくは皮膚炎、脂漏性皮膚炎、湿疹、酒さおよびざ瘡を含む群またはこれらからなる群から選択されるいくつかの皮膚または真皮の疾患の発症の原因である種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および炎症の両方に対して活性がある。さらに好ましくは、当該疾患は、軽度、中等度または慢性のざ瘡である。
【００３３】
別の実施態様において、当該使用のための組成物は、例えば病原性細菌プロピオニバクテリウム・アクネス  ＡＴＣＣ  １１８２７によって引き起こされる感染症および炎症の両方に対して活性がある。
【００３４】
本出願人は、Ｔｈ１およびＴｈ２リンパ球の活性を調節する能力を評価するために細菌の７０種類の株を試験した。最初のスクリーニングから、７０種類の被験株のうち２２種類が顕著な抗炎症活性を有することが判明した（プロＴｈ２株）。これら２２種類の細菌株を、さらに、ケモカインＩＬ−８の放出を阻害する能力を評価するために研究した。ケモカインＩＬ−８は、しばしば、炎症に関連し、酸化ストレスによって増加し、かくして、局所炎症の重要なパラメーターとなる：この理由から、ざ瘡における主要炎症誘発性メディエーターであると同定された。
【００３５】
当該研究は、ＢＰＳ０１（ＤＳＭ  ２６４５６）およびＬＳ０４（ＤＳＭ  ２４６１８）などの、このプロバイオティック細菌（probiotic bacteria）の２２種類の株（表１）のすべてが、ＰＨＡ活性化ＰＢＭＣによって産生されるＩＬ−８の放出を１０〜２５％有意に阻害することができることを示した。特に、プロバイオティック細菌の３種類の株：ＬＤＤ０１（ＤＳＭ  ２２１０６)、ＬＲＥ０４（ＤＳＭ  ２３８８０）およびＬＳ０３（ＤＳＭ  ２２７７６）は、ＩＬ−８の産生を減少させることができ、それぞれ、３６％、４４％および３０％の減少をもたらす。かくして、ＩＬ−８の阻害において非常に顕著な作用を有するこれらのプロバイオティック株の使用は、プロピオニバクテリウム・アクネスによる炎症および感染部位でのケモカインの炎症誘発活性の制限に主要な関連性があることが明らかである。
【００３６】
本発明の目的は、種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するための種ラクトバチルス・サリバリウスに属する細菌の株であり；当該種ラクトバチルス・サリバリウスに属する細菌の株は、Probiotical SpA（Italy）によって単離されて２０１１年３月２日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０４（ＤＳＭ  ２４６１８）として同定されている。
【００３７】
本発明の目的は、種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するための種ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキ（Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii）に属する細菌の株であり；当該種ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキに属する細菌の株は、Probiotical SpA（Italy）によって単離されて２００８年１２月１０日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキＬＤＤ０１（ＤＳＭＺ  ２００７４）（ＤＳＭ  ２２１０６）として同定されている。
【００３８】
本発明の目的は、種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するための種ラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）に属する細菌の株であり；当該種ラクトバチルス・ロイテリに属する細菌の株は、Probiotical SpA（Italy）によって単離されて２０１０年８月５日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・ロイテリＬＲＥ０４（ＤＳＭ  ２３８８０）として同定されている。
【００３９】
本発明の目的は、種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するための種ビフィドバクテリウム・シュードロングム亜種グロボスム（Bifidobacterium pseudolongum ssp. globosum）に属する細菌の株であり；当該種ビフィドバクテリウム・シュードロングム亜種グロボスムに属する細菌の株は、Probiotical SpA（Italy）によって単離されて２０１２年１０月２日にＤＳＭＺに寄託されたビフィドバクテリウム・シュードロングム亜種グロボスムＢＰＳ０１（ＤＳＭ  ２６４５６）として同定されている。
【００４０】
本発明の目的は、種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するための組成物であって、
（ｉ）株ラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０３（ＤＳＭ  ２２７７６）、株ラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０４（ＤＳＭ  ２４６１８）を含む群またはこれらからなる群から選択される種ラクトバチルス・サリバリウスに属する細菌の少なくとも１種類の株および／またはその混合物；および／または
（ｉｉ）株ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキＬＤＤ０１（ＤＳＭＺ  ２００７４）（ＤＳＭ  ２２１０６）、株ラクトバチルス・ロイテリＬＲＥ０４（ＤＳＭ  ２３８８０）および／または株ビフィドバクテリウム・シュードロングム亜種グロボスムＢＰＳ０１（ＤＳＭ  ２６４５６）を含む群またはこれらからなる群から選択される少なくとも１種類の細菌株；ならびに生理学的に許容される担体
を含む混合物またはこれらからなる混合物の有効量を含む組成物である。実施態様において、本発明の当該使用のための組成物は、さらに、乳酸アンモニウム、好ましくは乳酸菌由来の発酵源の乳酸アンモニウムをも含む。
【００４１】
本発明の目的は、種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するための組成物であって、
（ｉ）株ラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０３（ＤＳＭ  ２２７７６）を含む群またはこれからなる群から選択される種ラクトバチルス・サリバリウスに属する細菌の少なくとも１種類の株；および／または
（ｉｉ）株ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキＬＤＤ０１（ＤＳＭＺ  ２００７４）（ＤＳＭ  ２２１０６）および株ラクトバチルス・ロイテリＬＲＥ０４（ＤＳＭ  ２３８８０）を含む群またはこれらからなる群から選択される少なくとも１種類の細菌株；ならびに生理学的に許容される担体
を含む混合物またはこれらからなる混合物の有効量を含む組成物である。実施態様において、本発明のこの使用のための組成物は、さらに、乳酸アンモニウム、好ましくは乳酸菌由来の発酵源の乳酸アンモニウムをも含む。
【００４２】
有利には、当該混合物ひいては当該組成物は、
・株ラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０３（ＤＳＭ  ２２７７６）；および／または
・株ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキＬＤＤ０１（ＤＳＭＺ  ２００７４）（ＤＳＭ  ２２１０６）；ならびに生理学的に許容される担体
を含むかまたはこれらからなり；当該組成物は、種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するためのものである。当該細菌株は、好ましくは、約１：１、または２：１、または３：１、または４：１、または５：１、１：２の重量比で存在する。実施態様において、本発明の当該使用のための組成物は、さらに、乳酸アンモニウム、好ましくは乳酸菌由来の発酵源の乳酸アンモニウムをも含む。
【００４３】
有利には、当該混合物ひいては当該組成物は、
・株ラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０３（ＤＳＭ  ２２７７６）；および／または
・株ラクトバチルス・ロイテリＬＲＥ０４（ＤＳＭ  ２３８８０）；ならびに生理学的に許容される担体
を含むかまたはこれらからなり；当該組成物は、種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するためのものである。当該細菌株は、好ましくは、約１：１、または２：１、または３：１、または４：１、または５：１、１：２の重量比で存在する。実施態様において、本発明の当該使用のための組成物は、さらに、乳酸アンモニウム、好ましくは乳酸菌由来の発酵源の乳酸アンモニウムをも含む。
【００４４】
有利には、当該混合物ひいては当該組成物は、
・株ラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０３（ＤＳＭ  ２２７７６）；および
・株ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキＬＤＤ０１（ＤＳＭＺ  ２００７４）（ＤＳＭ  ２２１０６）；および
・株ラクトバチルス・ロイテリＬＲＥ０４（ＤＳＭ  ２３８８０）；ならびに生理学的に許容される担体
を含むかまたはこれらからなり；当該組成物は、種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するためのものである。当該細菌株は、好ましくは、約１：１：１、または２：１：１、または３：１：１、または４：１：１、または５：１：１、１：２：１、または１：１：２の重量比である。実施態様において、本発明の当該使用のための組成物は、さらに、乳酸アンモニウム、好ましくは乳酸菌由来の発酵源の乳酸アンモニウムをも含む。
【００４５】
本発明の組成物は、好ましくは顔、肩、背中、および胸の上部に生じている、面皰またはせつの処置に用いるために有効に適用される、
【００４６】
当該混合物において、細菌の少なくとも１種類の株、または本発明のラクトバチルス属（Lactobacilli）／ビフィドバクテリウム属（Bifidobacteria）の株の組合せは、混合物１ｇにつき１×１０6〜１×１０12ＣＦＵ；好ましくは、混合物１ｇにつき１×１０7〜１×１０11ＣＦＵ；より好ましくは、混合物１ｇにつき１×１０8〜１×１０10ＣＦＵからなる総量である。実施態様において、本発明の当該使用のための組成物は、さらに、組成物の重量に対して１〜３０重量％からなる量で、好ましくは組成物の重量に対して５〜１５重量％からなる量で、乳酸アンモニウム、好ましくは乳酸菌由来の発酵源の乳酸アンモニウムをも含む。
【００４７】
当該使用のための組成物において、細菌の少なくとも１種類の株、または本発明のラクトバチルス属／ビフィドバクテリウム属の株の組合せは、組成物１ｇにつき１×１０6〜１×１０11ＣＦＵ；好ましくは、組成物１ｇにつき１×１０7〜１×１０10ＣＦＵ；より好ましくは、組成物１ｇにつき１×１０8〜１×１０9ＣＦＵからなる総量である。
【００４８】
当該使用のための組成物は、さらに、必要に応じて、必要な／好適な量の補助剤（co-formulant）、賦形剤、担体、界面活性剤、佐剤（adjuvant）、保存剤、着色剤を含むこともできる。当該物質は、好適には、製剤化の分野の熟練した製薬技術者によって知られており通常使用されているものから定量的および定性的に選択される。
【００４９】
この選択された乳酸菌株の混合物を含む本発明の組成物は、散剤、分散性散剤、顆粒剤、パケット剤またはスティック剤、液剤、スプレー液剤、シロップ剤、錠剤、カプセル剤、丸剤またはロゼンジ剤の剤形の経口用医薬品形態（新規な食品、サプリメント製品または医療用デバイスまたは医薬組成物）；または皮膚用にそのまま使用されるクリーム剤、軟膏剤、ポマード剤、ゲル剤、ヒドロゲル剤、分散剤、乳剤またはスプレー剤の剤形の局所用医薬品形態（医療用デバイス用組成物または医薬組成物）、またはバンドエイドの剤形の経皮用医薬品形態にも製剤化される。
【００５０】
上記細菌株は、本発明の混合物中に、当該混合物の総重量に対して１％〜５０重量％、好ましくは５％〜４０重量％、より好ましくは、１０％〜３０％からなる量で存在する。しかしながら、当該パーセンテージは、使用しようとする製薬形態の種類に依存する。例えば、カプセル剤の場合、当該細菌の量は、２５％よりも多く、例えば、３５％よりも多い。
【００５１】
実施態様において、当該組成物は、１用量あたり１×１０6〜１×１０11ＣＦＵ、好ましくは１用量あたり１×１０8ＣＦＵ〜１×１０10ＣＦＵからなる濃度で細菌株を含む。当該用量は、０.２〜１０ｇを含むことができ、例えば０.２５ｇ、１ｇ、３ｇ、５ｇまたは７ｇからなり得る。当該細菌株は、固体形態、例えば粉末、乾燥粉末または凍結乾燥粉末の形態で組成物中に存在することができる。
【００５２】
本明細書および／または特許請求の範囲に記載した株は全てブダペスト条約に従って寄託された。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
（原文に記載なし）
【実施例】
【００５４】
実験部分
１．細菌プロピオニバクテリウム・アクネス  ＡＴＣＣ  １１８２７の阻害試験
公的に入手可能な細菌プロピオニバクテリウム・アクネス  ＡＴＣＣ  １１８２７の阻害試験を行った。
【００５５】
本出願人が行った精力的な研究活動は、種プロピオニバクテリウム・アクネスに属する病原性細菌を阻害することができる乳酸菌の１種類以上の株を検出、選択および単離することに重点をおいた。
【００５６】
この理由から、種ラクトバチルス・サリバリウスおよびラクトバチルス・ラムノサス（Lactobacillus rhamnosus）に属する細菌の多数の株のために大規模なスクリーニング試験セットを設定した。プレート阻害技術を用いた。
【００５７】
病原体プロピオニバクテリウム・アクネス（ＡＴＣＣ  １１８２７）を、その培養ブロスを調製することによって使用した。病原性細菌を、１％グルコースを添加したＢＨＩ（ブレインハートインフージョン（Brain Hearth Infusion））培地中でマクファーランドのスケールの約２の密度まで増殖させ、次いで、生理食塩水で１：１０に希釈した。当該懸濁液をラインボールド（Reimbold）培地にプレーティングした。
【００５８】
本出願人は、潜在的な候補株の第２の選択された群を得るために、種ラクトバチルス・サリバリウスおよびラクトバチルス・ラムノサスに属する細菌の株の第１の大きな群に対する実験活動を開始した。次に、本出願人は、さらなる選択を行い、最後に、標的病原株に対する顕著な活性を示す下記の細菌株を試験した：
【００５９】
２００９年７月２３日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０１（ＩＤ  １７９７）（ＤＳＭ  ２２７７５）（＊）；
２０１２年１月１２日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・サリバリウスＤＬＶ８（ＩＤ  １８１３）（ＤＳＭ  ２５５４５）（＊）；
２００９年７月２３日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０３（ＩＤ  １３８２）（ＤＳＭ  ２２７７６）（＊）；
２００８年１１月１４日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・ラムノサスＬＲ０６（ＩＤ  １６９７）（ＤＳＭ  ２１９８１）（＊）；
Anidral Srl（Italy）（現在、Probiotical SpA（Italy））によって２００４年７月２０日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・ラムノサスＬＲ０４（ＩＤ  １１３２）（ＤＳＭ  １６６０５）；
Anidral Srl（Italy）（現在、Probiotical SpA（Italy））によって２００７年９月２７日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・ラムノサスＬＲ０５（ＩＤ  １６０２）（ＤＳＭ  １９７３９）。
【００６０】
上記（＊）はすべてProbiotical SpA（Italy）によって寄託された。
【００６１】
当該細菌をＭＲＳブロスへ２回の連続接種することにより再生し、遠心分離し、新鮮な培地（ｖ／ｖ）に再懸濁した；Ｃと示される。上清を中和し、濾過した；Ｓと示される。
【００６２】
次いで、図１に示されるように浸漬ディスク技術（soaked-disk technique）によって、阻害試験を行った。
【００６３】
上記試験は、すぐに、２００９年７月２３日にＤＳＭＺに寄託された株ラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０３（ＩＤ  １３８２）（ＤＳＭ  ２２７７６）の標的病原株に対して驚くべき大きな阻害能を示した。
【００６４】
当該阻害活性は、２００９年７月２３日にＤＳＭＺに寄託された株ラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０３（ＩＤ  １３８２）（ＤＳＭ  ２２７７６）の、病原体プロピオニバクテリウム・アクネスに対して非常に活性を有するバクテリオシンを産生する能力に起因する。酸性度および／または過酸化水素の生成の可能性に起因する効果のみが生じることは合理的に排除することができる。前者の理由は、類似の酸性化活性を有する他の細菌は当該標的病原体の増殖に影響を及ぼさなかったので、考慮されない；第２の理由は、プレートインキュベーションが乳酸桿菌（lactobacilli）による過酸化水素の形成を妨げる状態である嫌気生活下で起こったので、考慮されない。
【００６５】
この結果に基づいて、当該研究を、他の可能性のある候補にまで拡大し、得られた結果を、２００９年７月２３日にＤＳＭＺに寄託された株ラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０３（ＩＤ  １３８２）（ＤＳＭ  ２２７７６）でさらに確認した。
【００６６】
次に、第２の試験で以下の細菌株を試験した：
【００６７】
２０１０年８月５日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・ロイテリＬＲＥ０１（ＩＤ  １７７５）（ＤＳＭ  ２３８７７）；
２０１０年８月５日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・ロイテリＬＲＥ０２（ＩＤ  １７７４）（ＤＳＭ  ２３８７８）；
２０１０年８月５日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・ロイテリＬＲＥ０３（ＩＤ  １７７７）（ＤＳＭ  ２３８７９）；
２０１０年８月５日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・ロイテリＬＲＥ０４（ＩＤ  １７７９）（ＤＳＭ  ２３８８０）；
２０１１年９月２日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・ロイテリＬＲＥ０５（ＩＤ  １８０７）（ＤＳＭ  ２５１３９）。
【００６８】
上記のものはすべてProbiotical SpA（Italy）によって寄託された。
【００６９】
文献においていくつかのストレプトコッカス・サーモフィルス（Streptococci thermophilus）が広域スペクトルバクテリオシンを産生することができることが判明していたので、本出願人もまた、種ストレプトコッカス・サーモフィルス（S. thermophilus）に属する細菌の株のいくつかを試験に含ませた：
【００７０】
２００４年７月２０日にＤＳＭＺに寄託されたストレプトコッカス・サーモフィルス（Streptococcus thermophilus）ＹＯ２（１４２７）（ＤＳＭ  １６５９０）；
２００４年７月２０日にＤＳＭＺに寄託されたストレプトコッカス・サーモフィルスＹＯ３（１２８６）（ＤＳＭ  １６５９１）；
２００４年７月２０日にＤＳＭＺに寄託されたストレプトコッカス・サーモフィルスＹＯ４（１２８８）（ＤＳＭ  １６５９２）；
２００４年７月２０日にＤＳＭＺに寄託されたストレプトコッカス・サーモフィルスＹＯ５（１４０５）（ＤＳＭ  １６５９３）。
【００７１】
上記のものはすべてAnidral Srl（Italy）（現在、Probiotical SpA（Italy））によって寄託された。
【００７２】
本出願人は、第１の実験に記載したように細菌再懸濁液のスクリーニングを行い、かくして、図２に示されるような以下の結果を得た。
【００７３】
この株の第２のスクリーニングにおいて、有用な結果は得られず、さらに、本発明の株ＬＳ０３のバクテリオシン活性の特殊性質を確認した。
【００７４】
次いで、標的病原株に対する阻害活性を裏付けるために、株ＬＳ０３を用いて新たな試験を行った。
【００７５】
この第２の試験は、Ｌｉｃｈｔｅｎａ  Ｎｏｒｍａ−Ａｃｎ（登録商標）と称される市販の抗ざ瘡製剤の一部である陽性対照としての株ラクトバチルス・ラムノサスＴ１２（ＩＤ  １７３８）ＬＭＧ  Ｐ-２５２１１（国際公開第２０１１／０２９７８４号）との比較としての役割を果たした。
【００７６】
第１の試験に記載されているように、細菌株を増殖させた後、ブロス培養液を２つのアリコートに分けた；第１のブロス培養液アリコートは、遠心分離による上清除去の前に中和した；一方、残りの第２のアリコートは、最初に遠心分離し、次に、上清だけを中和した。
【００７７】
文献において、いくつかのバクテリオシンが、実際に、酸性ｐＨに依存して当該病原体の細胞膜に付着するかまたはしないかが判明していた。
【００７８】
かくして、試験した試料は、試験した２つの株のいずれについても４つであった：（ラクトバチルス・ラムノサスＴ１２（ＩＤ  １７３８）ＬＭＧ  Ｐ−２５２１１およびラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０３（ＩＤ  １３８２）  −  ＤＳＭ  ２２７７６）。結果を図３に示す。
【００７９】
再度、２００９年７月２３日にＤＳＭＺに寄託された株ラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０３（ＩＤ  １３８２）（ＤＳＭ  ２２７７６）は、対照として使用した株ラクトバチルス・ラムノサスＴ１２  ＬＭＧ  Ｐ−２５２１１（Ｌｉｃｈｔｅｎａ  Ｎｏｒｍａ−Ａｃｎ（登録商標））よりも優れた阻害能を示す。
【００８０】
細菌株ＬＳ０３によって産生されたバクテリオシンは、ｐＨに依存する付着能を示し、かくして、異なる状況においてその阻害作用を発揮することができる。酸性環境のみにおける活性は完全には有用ではない。
【００８１】
２．ＰＢＭＣ（末梢血単核球）におけるＩＬ−８放出を阻害するプロバイオティック株の能力の評価
２.１  目的
この研究において、プロバイオティック細菌の７０種類の株を、リンパ球Ｔｈ１およびＴｈ２の活性を調節するそれらの能力を評価するために試験した。試験した７０種類の株の第１のスクリーニングにより、それらのうち２２種類（表１）が顕著な抗炎症活性を有することが判明した（プロＴｈ２株）。
【００８２】
プロバイオティック細菌のこれら２２種類の株（表１）を、それらのケモカインＩＬ−８放出阻害能を評価するためにさらに研究した（図４）。ケモカインＩＬ−８は、しばしば、炎症に関連しており、酸化ストレスによって増加し、かくして、局所炎症の重要なパラメーターとなる：この理由から、ざ瘡における主要炎症誘発性メディエーターであると同定された。
【００８３】
この研究において、ＰＢＭＣによるＩＬ−８の放出の阻害におけるプロバイオティック細菌の選択された株の能力（表１）を分析した。ＩＬ−８は、ざ瘡において過剰に産生される典型的な炎症誘発性ケモカインである。
【００８４】
【表１】
2022002509.tif 000002
【００８５】
２.２  方法：ＰＢＭＣ刺激
・プロトコールＦＩＣＯＬＬに従って健康対象体の末梢血からＰＢＭＣを単離する。
・ＰＢＭＣをＰＨＡ（フィトヘマグルチニン）１μｇ／ｍｌと一緒に１時間プレインキュベートする。
・ＰＢＭＣをプロバイオティック株で２４時間刺激する。
・１００００ｒｐｍで５分間遠心分離した後、上清を回収し、使用するまで−８０℃で保存する。
・Ｅ.Ｌ.Ｉ.Ｓ.Ａ.キット（eBioscience、Ｈｕｍａｎ  ＩＬ−８  ＥＬＩＳＡ  Ｒｅａｄｙ−Ｓｅｔ−Ｇｏ、第２世代）を用いてＩＬ−８放出を評価する。
・当該データを分析し、対応ｔ検定を用いて統計学的評価を行う。データは、ｐ＜０.０５値について有意であると考えられる。
【００８６】
２.３  方法：ＩＬ−８を評価するためのＥＬＩＳＡプロトコール
・１×コーティングバッファーでプレートをコーティングし、４℃で一夜インキュベートする；
・洗浄バッファー（３×）で洗浄する；
・各ウェルに１×ブロッキングバッファーを分配し、室温で１時間インキュベートする；
・洗浄バッファー（１×）で洗浄する；
・試料を分配し、標準曲線、室温で２時間インキュベートする；
・洗浄バッファー（５×）で洗浄する；
・各ウェルに検出抗体バッファーを分配し、室温で１時間インキュベートすること；
・洗浄バッファー（５×）で洗浄する；
・各ウェルにアビジン−ＨＲＰバッファーを分配し、室温で３０分間インキュベートする；
・洗浄バッファー（７×）で洗浄する；
・１×ＴＭＢ溶液で１５分間インキュベートし、停止溶液で中断する；
・４５０ｎｍで分光光度法により読み取る。
【００８７】
２.４  結果：ＰＨＡで１時間予備刺激し、次いで、プロバイオティック細菌の選択された株（表１）とともにＴｈ２を２４時間インキュベートし、ＥＬＩＳＡ技術により評価した後のケモカインＩＬ−８アッセイの結果を図４に示す。
【００８８】
図４において、値「０」（零）は、炎症状態の基準値と関係している。基本的に、それはＰＨＡ活性化細胞を表す。それは、ＩＬ−８放出の第１選択刺激である（それは、ＩＬ−８の最大産生を表す＝陽性対照）。一方、値「−０.２５％」は、ＩＬ−８放出の２５％減少を表す。
【００８９】
２.５  結論
当該研究から、ＢＰＳ０１（ＤＳＭ  ２６４５６）およびＬＳ０４（ＤＳＭ  ２４６１８）などのプロバイオティック細菌の２２種類の株（表１）は全て、ＰＨＡ活性化ＰＢＭＣによって産生されたＩＬ−８の放出を１０〜２５％有意に阻害することができることが判明した。特に、プロバイオティック細菌の３種類の株：ＬＤＤ０１（ＤＳＭ  ２２１０６）、ＬＲＥ０４（ＤＳＭ  ２３８８０）およびＬＳ０３（ＤＳＭ  ２２７７６）は、ＩＬ−８産生を減少させることができ、それぞれ、３６％、４４％および３０％に相当する減少を達成する。
【００９０】
かくして、このようにＩＬ−８の阻害において非常に顕著な作用を有するこれらプロバイオティック株の使用は、プロピオニバクテリウム・アクネスによる炎症および感染症の部位におけるケモカインの炎症誘発作用の制限に基本的に関連することが明らかである。
【図１】
2022002509.tif 000003
【図２】
2022002509.tif 000004
【図３】
2022002509.tif 000005
【図４】
2022002509.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】令和3年9月22日(2021.9.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願明細書または図面に記載の発明。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９０】
かくして、このようにＩＬ−８の阻害において非常に顕著な作用を有するこれらプロバイオティック株の使用は、プロピオニバクテリウム・アクネスによる炎症および感染症の部位におけるケモカインの炎症誘発作用の制限に基本的に関連することが明らかである。
さらに、本発明は次の態様を含む。
項１. 種プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）に属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するための細菌株であって、
・当該種ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）に属する細菌の株が、Probiotical SpA（Italy）によって単離されて２００９年７月２３日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）ＬＳ０３（ＩＤ  １３８２）（ＤＳＭ  ２２７７６）として同定されており、
・当該種ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）に属する細菌の株が、Probiotical SpA（Italy）によって単離されて２０１１年３月２日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）ＬＳ０４（ＤＳＭ  ２４６１８）として同定されており、
・当該種ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキ（Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii）に属する細菌の株が、Probiotical SpA（Italy）によって単離されて２００８年１２月１０日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキ（Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii）ＬＤＤ０１（ＤＳＭＺ  ２００７４）（ＤＳＭ  ２２１０６）として同定されており、
・当該種ラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）に属する細菌の株が、Probiotical SpA（Italy）によって単離されて２０１０年８月５日にＤＳＭＺに寄託されたラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）ＬＲＥ０４（ＤＳＭ  ２３８８０）として同定されており、
・当該種ビフィドバクテリウム・シュードロングム亜種グロボスム（Bifidobacterium pseudolongum ssp. globosum）に属する細菌の株が、Probiotical SpA（Italy）によって単離されて２０１２年１０月２日にＤＳＭＺに寄託されたビフィドバクテリウム・シュードロングム亜種グロボスム（Bifidobacterium pseudolongum ssp. globosum）ＢＰＳ０１（ＤＳＭ  ２６４５６）として同定されている、
当該細菌株。
項２. 当該株が生きているかまたは死んでおり；好ましくは、チンダル化し（tyndallized）、超音波処理し、溶解した細胞、および／または画分または酵素および／またはその代謝物の形態であり得る、項１記載の使用のための株。
項３. 当該種プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）に属する病原性細菌によって引き起こされる感染症が、好ましくは皮膚炎、脂漏性皮膚炎、湿疹、酒さおよびざ瘡を含む群またはこれらからなる群から選択されるいくつかの皮膚または真皮の疾患の発症の原因である、項１〜２いずれか１項記載の使用のための株。
項４. 当該疾患がざ瘡である、項３記載の使用のための株。
項５. 当該病原性細菌がプロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）  ＡＴＣＣ  １１８２７である、項１〜４いずれか１項記載の使用のための株。
項６. 種プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）に属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するための組成物であって、
（ｉ）株ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）ＬＳ０３（ＤＳＭ  ２２７７６）、株ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）ＬＳ０４（ＤＳＭ  ２４６１８）を含む群またはこれらからなる群から選択される種ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）に属する細菌の少なくとも１種類の株および／またはその混合物；および／または
（ｉｉ）株ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキ（Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii）ＬＤＤ０１（ＤＳＭＺ  ２００７４）（ＤＳＭ  ２２１０６）、株ラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）ＬＲＥ０４（ＤＳＭ  ２３８８０）および／または株ビフィドバクテリウム・シュードロングム亜種グロボスム（Bifidobacterium pseudolongum ssp. globosum）ＢＰＳ０１（ＤＳＭ  ２６４５６）を含む群またはこれらからなる群から選択される細菌の少なくとも１種類の株；ならびに生理学的に許容される担体
を含む混合物またはこれからなる混合物の有効量を含む組成物。
項７. 当該組成物が、
（ｉ）株ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）ＬＳ０３（ＤＳＭ  ２２７７６）を含む群またはこれからなる群から選択される種ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）に属する細菌の少なくとも１種類の株；および／または
（ｉｉ）株ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキ（Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii）ＬＤＤ０１（ＤＳＭＺ  ２００７４）（ＤＳＭ  ２２１０６）および株ラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）ＬＲＥ０４（ＤＳＭ  ２３８８０）を含む群またはこれらからなる群から選択される少なくとも１種類の細菌株；ならびに生理学的に許容される担体
を含む混合物またはこれらからなる混合物に有効量を含み；
当該組成物が、種プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）に属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するためのものである、
項６記載の使用のための組成物。
項８. 当該混合物が、
・株ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）ＬＳ０３（ＤＳＭ  ２２７７６）；および／または
・株ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキ（Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii）ＬＤＤ０１（ＤＳＭＺ  ２００７４）（ＤＳＭ  ２２１０６）；ならびに生理学的に許容される担体
を含むかまたはこれらからなり；
当該組成物が、種プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）に属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するためのものであり、好ましくは当該細菌株が好ましくは約１：１、または２：１、または３：１、または４：１、または５：１、１：２の重量比で存在する、項６または７記載の使用のための組成物。
項９. 当該混合物が、
・株ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）ＬＳ０３（ＤＳＭ  ２２７７６）；および／または
・株ラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）ＬＲＥ０４（ＤＳＭ  ２３８８０）；ならびに生理学的に許容される担体
を含むかまたはこれらからなり；
当該組成物が、種プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）に属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するためのものであり、好ましは、当該細菌株が好ましくは約１：１、または２：１、または３：１、または４：１、または５：１、１：２の重量比で存在する、項６〜８いずれか１項記載の使用のための組成物。
項１０. 当該混合物が、
・株ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）ＬＳ０３（ＤＳＭ  ２２７７６）；および
・株ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキ（Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii）ＬＤＤ０１（ＤＳＭＺ  ２００７４）（ＤＳＭ  ２２１０６）；および
・株ラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）ＬＲＥ０４（ＤＳＭ  ２３８８０）；ならびに生理学的に許容される担体
を含むかまたはこれらからなり；
当該組成物が、種プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）に属する病原性細菌によって引き起こされる感染症および／または炎症の予防的および／または治癒的処置に使用するためのものであり、好ましくは、当該細菌株が好ましくは約１：１：１、または２：１：１、または３：１：１、または４：１：１、または５：１：１、１：２：１、または１：１：２の重量比で存在する、項６〜９いずれか１項記載の使用のための組成物。
項１１. 当該混合物が、さらに、乳酸アンモニウム、好ましくは乳酸菌由来の発酵源の乳酸アンモニウムを含む、項６〜１０いずれか１項記載の使用のための組成物。
項１２. 当該組成物が、好ましくは顔、肩、背中、および胸の上部に生じる、面皰（pimple）またはせつ（furuncle）の処置に使用するためのものである、項６〜１１いずれか１項記載の使用のための組成物。
項１３. 当該細菌株が生きているかまたは死んでおり；より好ましくは当該細菌株がチンダル化し（tyndallized）、超音波処理し、溶解した細胞、および／または画分または酵素および／またはその代謝物の形態であり得る、項６〜１２いずれか１項記載の使用のための組成物。
項１４. 当該感染症が、種プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）に属する病原性細菌によって引き起こされ、当該病原体がいくつかの皮膚または真皮の疾患の発症の原因であり、後者は、好ましくは皮膚炎、脂漏性皮膚炎、湿疹、酒さおよびざ瘡を含む群またはこれらからなる群から選択され；より好ましくは軽度、中等度または慢性のざ瘡を含む群またはこれらからなる群から選択され；好ましくは、当該病原性細菌がプロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）  ＡＴＣＣ  １１８２７である、項６〜１３いずれか１項記載の使用のための組成物。
【手続補正書】
【提出日】令和3年12月3日(2021.12.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
【図１】ラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０１（ＩＤ  １７９７）（ＤＳＭ  ２２７７５）、ラクトバチルス・サリバリウスＤＬＶ８（ＩＤ  １８１３）（ＤＳＭ  ２５５４５）、ラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０３（ＩＤ  １３８２）（ＤＳＭ  ２２７７６）およびラクトバチルス・ラムノサスＬＲ０６（ＩＤ  １６９７）の各細菌株の標的病原株に対する浸漬ディスク技術による阻害試験の結果を示す。
【図２】ラクトバチルス・ロイテリＬＲＥ０１（ＩＤ  １７７５）（ＤＳＭ  ２３８７７）、ラクトバチルス・ロイテリＬＲＥ０２（ＩＤ  １７７４）（ＤＳＭ  ２３８７８）、ラクトバチルス・ロイテリＬＲＥ０３（ＩＤ  １７７７）（ＤＳＭ  ２３８７９）、ラクトバチルス・ロイテリＬＲＥ０４（ＩＤ  １７７９）（ＤＳＭ  ２３８８０）、ラクトバチルス・ロイテリＬＲＥ０５（ＩＤ  １８０７）（ＤＳＭ  ２５１３９）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＯ２（１４２７）（ＤＳＭ  １６５９０）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＯ３（１２８６）（ＤＳＭ  １６５９１）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＯ４（１２８８）（ＤＳＭ  １６５９２）およびストレプトコッカス・サーモフィルスＹＯ５（１４０５）（ＤＳＭ  １６５９３）の各細菌株の細菌再懸濁液のスクリーニングの結果を示す。
【図３】標的病原株に対するラクトバチルス・サリバリウスＬＳ０３（ＩＤ  １３８２）（ＤＳＭ  ２２７７６）およびラクトバチルス・ラムノサスＴ１２（ＩＤ  １７３８）ＬＭＧ  Ｐ−２５２１１の阻害能の比較試験の結果を示す。
【図４】表１に記載の各プロバイオティック細菌のＥＬＩＳＡ技術により評価したケモカインＩＬ−８アッセイの結果を示す。
【外国語明細書】
2022002509000001.pdf