(57)【要約】【課題】本発明では、漢方薬抽出方法と糞便菌叢分離プロセスとを深く組み合わせることで漢方処方菌叢カプセルを製造することにより、投与方法が変更されるとともに、治療効果が大幅に向上し、効率的で快適な治療アプローチが実現される。【解決手段】本発明は医薬品分野に属し、具体的には、糞便から分離された菌叢の凍結乾燥粉末と、漢方薬から有効成分を抽出して粉砕した漢方薬抽出粉末とを混合して得られる漢方処方菌叢カプセルを提供する。【選択図】図５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
糞便から分離された菌叢の凍結乾燥粉末と、漢方薬から有効成分を抽出して粉砕した漢方薬抽出粉末とを混合して得られることを特徴とする、漢方処方菌叢カプセル。
【請求項２】
前記糞便から菌叢を分離する方法は、管腔内容物中微生物分離装置を用いて分離することであることを特徴とする、請求項１に記載の漢方処方菌叢カプセル。
【請求項３】
前記糞便から分離された菌叢の凍結乾燥粉末の製造方法は、以下のステップ（１）から（４）を含み、
ステップ（１）において、無菌サンプリングボトルにより健康なドナーの糞便サンプルを採取し、密封して無菌操作室に移し、無菌使い捨て消耗品である濾過ボトル、ＡＢボトル、脱臭ボトル、緩衝ボトル、菌液ボトルと共にインテリジェント糞便菌叢分離システム内に直列配置して菌叢を収集し、
ステップ（２）において、加液駆動装置の自動液体注入装置により生理食塩水をサンプリングボトルに加えて糞便サンプルを浸漬し、
ステップ（３）において、サンプリングボトル中の混合菌液が順に濾過値が異なる濾過網を通過して緩衝ボトルに集まるようにエアポンプ二を起動し、さらに菌液駆動装置により緩衝ボトル中の菌液を菌液ボトルに注入した後、遠心分離し、遠心分離が終了した後、沈殿を残して上清液を除去し、前記沈殿は分離精製後の菌液沈殿であり、
ステップ（４）において、各遠心分離管にグリセリンを加え、振盪器で均一に混合し、予備凍結し、予備凍結した直後のサンプルを凍結乾燥し、凍結乾燥後の菌液を脱水して凍結乾燥粉末を得ることを特徴とする、請求項２に記載の漢方処方菌叢カプセル。
【請求項４】
前記サンプリングボトルに撹拌棒が設けられ、ステップ（２）においてサンプリングボトル内の撹拌棒により糞便サンプルを十分に均質になるように撹拌することを特徴とする、請求項３に記載の漢方処方菌叢カプセル。
【請求項５】
前記菌叢凍結乾燥粉末と前記漢方薬抽出粉末との体積比は０．５−２：１、好ましくは１：１であり、
前記菌叢凍結乾燥粉末と前記漢方薬抽出粉末との均一な混合は、両者を混合した後、マイクロミキサにより均一に撹拌することにより行われることを特徴とする、請求項１から４のいずれか１項に記載の漢方処方菌叢カプセル。
【請求項６】
さらに、耐酸性ヒプロメロースカプセルに充填して漢方処方菌叢カプセルを得ることを特徴とする、請求項５に記載の漢方処方菌叢カプセル。
【請求項７】
前記漢方薬抽出粉末は、西洋参、黄精、神麹、地骨皮、及び莪朮の漢方処方から有効成分を抽出し、粉砕して得られるものであることを特徴とする、請求項１から４のいずれか１項に記載の漢方処方菌叢カプセル。
【請求項８】
前記漢方処方中の西洋参と、黄精と、神麹と、地骨皮と、莪朮との重量比は８−１２：１２−１８：１２−１８：８−１２：８−１２、好ましくは１０：１５：１５：１０：１０であることを特徴とする、請求項７に記載の漢方処方菌叢カプセル。
【請求項９】
前記漢方薬抽出粉末の製造方法は以下のステップ（１）から（５）を含み、
ステップ（１）において、所定の割合で生薬を取り、細切り又は粉砕し、煎じ容器に入れ、
ステップ（２）において、水を添加して浸漬し、
ステップ（３）において、沸騰するまで加熱し、浸出させ、煎出液を分離し、生薬残渣を通常方法により２−３回煎出し、煎出液を収集し、
ステップ（４）において、煎出液をアルコール抽出、好ましくはエタノール抽出し、
ステップ（５）において、アルコール抽出された濾液を乾燥させた後、超微粉砕機により粉砕加工し、好ましくは１０μｍ未満の超微粉末に粉砕することを特徴とする、請求項７に記載の漢方処方菌叢カプセル。
【請求項１０】
２型糖尿病の治療薬の製造における請求項１から９のいずれか１項に記載の漢方処方菌叢カプセルの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、医薬品技術分野に属し、具体的には糞便菌叢移植の技術分野に関し、より具体的には漢方処方糞便菌叢カプセル、その製造方法、及び２型糖尿病の治療薬における漢方糞便菌叢カプセルの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】  腸内菌叢の構造及び機能の変化は、肥満、２型糖尿病等の一連の代謝性疾患を引き起こす可能性がある。近年の研究により、糞便菌叢移植治療は、２型糖尿病患者の血糖コントロールレベル、代謝を改善し、インスリン感受性を向上できることが示されている。【０００３】  「糞便菌叢移植」（腸内細菌叢移植；Ｆｅｃａｌ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ＦＭＴ）とは、健康な人の便に含まれる機能性菌叢を経鼻胃チューブ又は十二指腸チューブ、胃鏡又は結腸鏡、直腸カテーテルを用いる浣腸等の方式により患者の胃腸管内に移植し、腸内菌叢のバランスを整え、腸管粘膜のバリアを修復することにより、特定の腸管内及び腸管外疾患に対する治療を実現することをいう。【０００４】  しかしながら、上記の投与方式では、腸内菌叢移植の治療目的を達成できるが、挿管状態又は内視鏡の使用下で菌液を患者の腸管に注入して治療する必要があるので、患者が心理的及び生理的に受け入れ難いため、この治療技術の臨床応用の普及が制限されている。田宏亮らは「菌叢カプセルによる大腸通過時間延長型便秘症の治療１５例臨床効果分析」（中国実用外科雑誌２０１６年４月第３６卷第４期）に菌叢カプセルを使用して大腸通過時間延長型便秘症を治療する１５例の臨床効果の分析を報告している。しかし、この研究は試みだけであり、対照群を使用せず、糞便菌叢移植の欠点の克服は十分ではない。特に、この文献では、菌叢カプセルの内容物は単一の菌液であり、一般的な補助材料を添加すると、菌液含有量が減少されるので、糞便菌叢移植を疾患の治療により良好に適用するために、さらなる研究が必要である。
【発明の概要】
【０００５】  上記問題に対して、本発明者は、従来の投与医薬品成分を新鮮な菌液により抽出し、凍結乾燥粉末を調製した。しかし、治療品質を向上させるために、菌液凍結乾燥粉末と漢方薬とを組み合わせて使用する必要がある。これを鑑みて、本発明者は、漢方薬抽出方法を使用し、２種類のプロセスを組み合わせて漢方処方菌叢カプセルに調製することにより、投与方法が変更されるとともに、治療効果が大幅に向上し、効率的で快適な治療アプローチが実現される。
【０００６】  本発明の技術的手段は以下の通りである。
本発明によれば、糞便から分離された菌叢の凍結乾燥粉末と、漢方薬から有効成分を抽出して粉砕した漢方薬抽出粉末とを混合して得られる漢方処方菌叢カプセルが提供される。
【０００７】  具体的な実施形態において、前記糞便から菌叢を分離する方法では、管腔内容物中微生物分離装置を用いて分離し、具体的には中国特許２０１４１０６０６３２５．４に記載の装置により分離する。
【０００８】  より具体的には、前記糞便から分離された菌叢の凍結乾燥粉末の製造方法は、以下のステップ（１）から（４）を含み、
ステップ（１）において、無菌サンプリングボトルにより健康なドナーの糞便サンプルを採取し、密封して無菌操作室に移し、無菌使い捨て消耗品である濾過ボトル、ＡＢボトル、脱臭ボトル、緩衝ボトル、菌液ボトルと共にインテリジェント糞便菌叢分離システム内に直列配置して菌叢を収集し、
ステップ（２）において、加液駆動装置により生理食塩水をサンプリングボトルに加えて糞便サンプルを浸漬し、
ステップ（３）において、サンプリングボトル中の混合菌液が順に濾過値が異なる濾過網を通過して緩衝ボトルに集まるようにエアポンプ二を起動し、さらに菌液駆動装置により緩衝ボトル中の菌液を菌液ボトルに注入した後、遠心分離し、遠心分離が終了した後、沈殿を残して上清液を除去し、前記沈殿は分離精製後の菌液沈殿であり、
ステップ（４）において、各遠心分離管にグリセリンを加え、振盪器で均一に混合し、予備凍結し、予備凍結した直後のサンプルを凍結乾燥し、凍結乾燥後の菌液を脱水して凍結乾燥粉末を得る。
【０００９】  さらに好ましくは、前記サンプリングボトルに撹拌棒が設けられ、ステップ（２）においてサンプリングボトル内の撹拌棒により糞便サンプルを十分に均質になるように撹拌する。
【００１０】  好ましい実施形態において、前記菌叢凍結乾燥粉末と前記漢方薬抽出粉末との体積比は０．５−２：１、好ましくは１：１である。具体的には、両者を混合した後、マイクロミキサにより均一に撹拌した後、耐酸性ヒプロメロースカプセルに充填する。
【００１１】  より好ましい実施形態において、前記漢方薬抽出粉末は、西洋参、黄精、神麹、地骨皮、及び莪朮の漢方処方から有効成分を抽出し、粉砕して得られるものである。より好ましくは、前記漢方処方中の西洋参と、黄精と、神麹と、地骨皮と、莪朮との重量比は８−１２：１２−１８：１２−１８：８−１２：８−１２、好ましくは１０：１５：１５：１０：１０である。
【００１２】  漢方薬有効成分の抽出は通常の方法により行うことができる。具体的な実施形態では、前記漢方薬抽出粉末の製造方法は以下のステップ（１）から（５）を含み、
ステップ（１）において、所定の割合で生薬を取り、細切り又は粉砕し、煎じ容器に入れ、
ステップ（２）において、水を添加して浸漬し、
ステップ（３）において、沸騰するまで加熱し、浸出させ、煎出液を分離し、生薬残渣を通常方法により２−３回煎出し、煎出液を収集し、
ステップ（４）において、煎出液をアルコール抽出、好ましくはエタノール抽出し、
ステップ（５）において、アルコール抽出された濾液を乾燥させた後、超微粉砕機により粉砕加工し、好ましくは１０μｍ未満の超微粉末に粉砕する。
【００１３】  本発明によれば、２型糖尿病の治療薬の製造における前記漢方処方菌叢カプセルの使用がさらに提供される。
【００１４】  本発明によれば、糞便から分離された菌叢の凍結乾燥粉末と漢方薬抽出有効成分とを粉砕して均一に混合するステップを含み、ここで、両者を混合した後、マイクロミキサにより均一に撹拌し、さらに耐酸性ヒプロメロースカプセルに充填する前記漢方処方菌叢カプセルの製造方法がさらに提供される。
【００１５】  本発明によれば、２型糖尿病の治療薬の漢方薬組成物がさらに提供される。前記組成物は、西洋参、黄精、神麹、地骨皮、莪朮を含み、それらの重量比は８−１２：１２−１８：１２−１８：８−１２：８−１２、好ましくは１０：１５：１５：１０：１０である。
【００１６】  本発明の治療メカニズムは、糖尿病の臨床的特徴によると、中医学の「消渇」に属する。伝統的な中医学では、消渇の主な病機は陰虚燥熱であり、陰虚が本、燥熱が標とされている。中医学では、消渇の「熱」は、「燥熱」、「湿熱」、「淤熱」に分かれている。この３つの熱の中に、淤熱による病証では、奇妙な症候が現れることが多く、治療も困難となり、消渇が様々な頑固な疾患になる主要な原因である。また、気は津液を生成できるため、滋陰潤燥と同時に益気薬を投与すると、より良い補陰作用を奏することができる。糖尿病の「陰虚が本、淤熱が標」という病機に基づいて、益気養陰、清熱活血の治療方法を採用し、本発明者は西洋参、黄精、神麹、地骨皮、莪朮から有効成分を抽出し、抽出された漢方薬有効成分を粉砕した後、糞便菌叢凍結乾燥粉末と精妙に組み合わせてカプセルを製造し、２型糖尿病に対する治療効果を検討した。本発明では、西洋参は君薬であり、益気生津、滋陰潤燥清熱の効果を奏し、糖尿病の陰虚を治療する。黄精、地骨皮、莪朮は臣薬である。その中で、黄精は平性で、補気養陰、潤肺益腎、西洋参の益気生津を補助する効果を奏する。地骨皮は清熱涼血の効果を奏する。莪朮は行気破淤、健脾の効果を奏する。地骨皮と莪朮は作用が同じ、清熱涼血化淤の効果を奏し、淤熱の症状を治療することができる。神麹は佐薬であり、健脾和胃、消食化積、腸胃積熱解消、気機調暢の作用を有する。本発明の処方は、生薬の種類が少なくて効果が高く、複数の効果を奏し、配合が慎重で、病機に合致する。また、現代の薬理学によって、本処方の薬物はいずれも血糖値調節、脂質降下、血行動態改善の作用を有することが実証されている。神麹は腸内菌叢失調を改善することもできる。よって、本発明の処方の効果は、中国伝統医学と西洋医学の両方ともにより実証されるため、説得力が強い。
【００１７】  本発明は、以下の有益な効果を有する。本発明では、漢方薬抽出方法と糞便菌叢分離プロセスとを深く組み合わせることにより、漢方処方菌叢カプセルを製造することで、投与方法が変更されるとともに、治療効果が大幅に向上し、効率的で快適な治療アプローチが実現される。本発明の漢方処方と腸内菌叢とを組み合わせて製造された漢方処方菌叢カプセルは、臨床検証により、治療効果が顕著であることが証明され、両者の組み合わせは相補効果を有し、漢方薬の煎じ薬を煎じるのが不便で、服用しにくいとの欠点を解決しながら、菌叢を注入時に大腸内視鏡を使用することで患者にもたらす痛苦を克服するとともに、治療効果も顕著に向上する。適用、安全、有効の要求が満たされるとともに、環境保護、人間性、便利の要望が実現される。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明で使用されるインテリジェント糞便菌叢分離システムの構造模式図（即ち、中国特許２０１４１０６０６３２５．４の図１）である。
【図２】本発明の無菌使い捨て消耗品の構造模式図である。
【図３】漢方薬抽出プロセスのフローチャートである。
【図４】本発明のインテリジェント糞便菌叢分離システム中のステンレス濾過網の構造模式図である。ここで、Ａグレードは１．０ｍｍ、Ｂグレードは６００μｍ、Ｃグレードは５００μｍ、Ｄグレードは３５０μｍ、Ｅグレードは２５０μｍ、Ｆグレードは２００μｍ、Ｇグレードは１５０μｍ、Ｈグレードは１００μｍ、Ｉグレードは７０μｍ、Ｊグレードは６０μｍ、Ｋグレードは４０μｍである。
【図５】本発明の漢方処方菌叢のプロセスのフローチャートである。
【図６】２型糖尿病モデルラットの空腹時血糖値に対する漢方処方菌叢カプセル調製液の影響を示す。
【図７】２型糖尿病モデルラットの血清インスリンに対する漢方処方菌叢カプセル調製液の影響を示す。
【図８】２群の治療前後のＦＢＧの比較を示す。
【図９】２群の治療前後のＰＢＧの比較を示す。
【図１０】２群の治療前後のＨｂＡ１ｃの比較を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】  以下、具体的な実施形態により本発明をさらに詳しく説明するが、これらの実施形態は本発明を制限せず、例示的なものに過ぎない。
【００２０】  実施例１：菌叢の抽出
本発明では、インテリジェント糞便菌叢分離システムと使い捨て消耗品を使用して自動的に分離して抽出する。ここで、インテリジェント糞便菌叢分離システムは管腔内容物中微生物分離装置（中国特許ＺＬ２０１４１０６０６３２５．４）、又は糞便分析前処理装置（型番：ＦＭＴ−５Ａ−５０／  ＦＭＴ−６Ａ−５０）である。使い捨て消耗品は、濾過ボトル３、分離物罐４、分注ボトル５、脱臭装置８、吸液脱臭緩衝ボトル１１及び菌液管路２２等を含む。
【００２１】  本発明の菌叢抽出方法の主なステップは以下の通りである。
無菌原料タンク（無菌使い捨て消耗品、図２）を用いて健康なドナーの糞便サンプル２００ｇを収集し、密封して無菌操作室に移し、濾過ボトル３、分離物罐４、分注ボトル５、脱臭装置８、吸液脱臭緩衝ボトル１１及び菌液管路２２等と共にインテリジェント糞便菌叢分離システムに入れて菌叢を収集した。
【００２２】  加液駆動装置７により１０００ｍｌ生理食塩水をサンプリングボトルに注入して糞便サンプルを浸漬し、撹拌装置により糞便サンプルを十分に均質になるように撹拌した。
【００２３】  エアポンプ二３１を起動し、サンプリングボトル中の混合菌液を順にＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｊ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ（具体的な数値は図４を参照）の濾過値が異なる濾過ボトル３に通過させて分注ボトル５に集めた。５℃の条件下で遠心分離し、その後、上清を捨て、沈殿を残し、この沈殿は分離精製した後の菌液沈殿であり、総重量は約１００ｇであった。
【００２４】  各分注ボトル５に約１０ｍｌ（１２．６ｇ）のグリセリンを加え、振盪器で均一に混合し、−８０℃冷蔵庫に入れ、１時間予備凍結した。予備凍結終了後、直ちに予備凍結後のサンプルを菌液調製凍結乾燥機（例えば、商品名：凍結乾燥機；メーカー：寧波新芝生物科技股分有限公司；型番：ｓｃｉｅｎｔｚ−１８Ｎ）に移して圧力０．００６Ｐａで１０時間以上凍結乾燥し、凍結乾燥後の菌液を脱水して菌叢凍結乾燥粉末を得た。
【００２５】  実施例２：漢方薬の抽出
従来の濃縮抽出法により漢方薬の有効成分を抽出し（漢方薬抽出プロセスは図３を参照）、具体的な方法は以下の通りである。
重量比１０：１５：１５：１０：１０で生薬である西洋参、黄精、神麹、地骨皮、莪朮を取り、適宜に細切り又は粉砕し、煎じ容器に入れた。
【００２６】  生薬が完全に浸漬されるように適量の水を添加し、適宜の時間浸漬した。
【００２７】  沸騰するまで加熱し、所定時間浸出させ、煎出液を分離し、生薬残渣を通常方法で２−３回煎出させ、煎出液を収集した。
【００２８】  水煎液を比重１：１まで蒸発させ、冷却した後、２倍のエタノールを加え、均一に混合し、一晩放置して沈殿させ、翌日に上清を濾過し、沈殿物を少量の６０％エタノールで洗浄し、洗浄液と濾液とを合わせ、エタノールを減圧回収した後、濃度１ｇ／ｍｌまで濃縮したときに冷却場所に移し（又は一定量の水を加えて均一に混合する）、一定時間静置し、完全に沈殿させ、濾過した。
【００２９】  濾液を真空乾燥機で乾燥し、乾燥した後、超微粉砕機により粉砕加工し、１０μｍの超微粉末を得た。
【００３０】  実施例３：漢方処方菌叢カプセルの製造
漢方処方菌叢カプセルのプロセスを図５に示す。実施例１の菌叢凍結乾燥粉末と実施例２の抽出された漢方薬抽出粉末とを体積比１：１で混合した後、マイクロミキサにより均一に撹拌し、漢方処方菌叢を製造し、各カプセルに漢方薬粉末１．５ｇ、菌粉１．５ｇが含まれるように耐酸性ヒプロメロースカプセルに充填し、さらに密封包装袋で包装した後、−２０℃の冷蔵庫に保存した。
【００３１】  実施例４：２型糖尿病モデルラットに対する漢方処方菌叢カプセルの治療作用
実験研究により、２型糖尿病モデルラットの糖脂質代謝及びインスリン抵抗に対する本発明の漢方処方菌叢カプセル影響を分析した。
【００３２】  １実験材料
１．１実験動物
ＳＰＦグレードのＳＤ雄性ラット（４０匹）、体重：２００±２０ｇ、８週齢。５匹／ケージで分けて湿度４０％−６０％、室温１６−２６℃で飼育した。通常の飼料を給与し、水を自由に摂取させ、夜前に給食した。ラットの食物摂取量及び水摂取量を動的観察し、体重を週に１回測った。ケージのマットを毎日交換した。
【００３３】  １．２薬物と試薬
実施例３で得られた漢方処方菌叢カプセルは、使用時に濃度２．１ｇ／ｍｌに調製した。この濃度は、ラット胃内投与器を通過可能な最大濃度である。
【００３４】  ピオグリタゾン（Ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ、１５ｍｇ／錠、江蘇恒瑞医薬有限公司、国薬准字：Ｈ２００４０６３１）。
【００３５】  ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）（米国のｓｉｇｍａ社の製品）。グルコース測定キット（上海栄盛生物薬業有限公司）、インスリンＥＬＩＳＡキット（英国のＲ＆Ｇ社製、上海元象医療器械有限公司分注）。クエン酸三ナトリウム、クエン酸、ペントバルビタールナトリウム。
【００３６】  １．３高脂肪・高糖質飼料の処方
コレステロール、豚脂、蔗糖、卵黄粉、普通飼料。
【００３７】  １．４主な機器及び器材
血糖値計及び血糖値試験紙（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｍｐａｎｉｅｓ）、自動免疫濁度分析装置。卓上型遠心分離機、複数の注射器、試験管、ビーカー及び複数のメスシリンダー、精密電子天びん、電子はかり、錫箔紙等。
【００３８】  ２実験方法
２．１モデルの作成
１週間適応給餌した後、ランダムに正常対照群（１０匹）及びモデル群（３０匹）に分け、正常対照群に普通飼料を与え、モデル群に高脂肪・高糖質飼料を６週間与えた後、モデル群ラットにストレプトゾトシン（ＳＴＺ，３０ｍｇ／ｋｇ）を単回腹腔内注射し、正常対照群（Ａ群）に等量クエン酸緩衝液を単回注射し、７２ｈ後に採血し、ジョンソン＆ジョンソンのＳｕｒｅＳｔｅｐＰｌｕｓ血糖値計で全血血糖を測定し、血糖値≧１６．７ｍｍｏｌ／Ｌである場合、２型糖尿病ラットモデルであると確定する。
【００３９】  ２．２動物の群分けと投与
モデルを作成した後、モデルラットを１０匹／群でモデル対照群（Ｂ群）、ピオグリタゾン群（Ｃ群）、漢方処方菌叢群（Ｄ群）にランダムに分けた。別途、１０匹の正常対照群（Ａ群）を設けた。Ｃ群にピオグリタゾン２．５ｇ／ｋｇ・ｄを胃内投与し、Ｄ群に漢方処方菌叢カプセルの調製液１２ｇ／ｋｇ・ｄを胃内投与し、Ａ群とＢ群に等量の生理食塩水を胃内投与した。投与体積は１０ｍｌ／ｋｇ体重であり、１回／日、固定時間で投与し、８週間連続投与した。
【００４０】  実験期間において食物摂取と水摂取を制限せず、インスリン及び他の血糖降下薬を使用しなかった。
【００４１】  ２．３血液サンプルの収集
モデル構築前及び胃内投与の８週間後にラットを安楽死させた。安楽死させる前に１２時間禁食させ、体重、体長及び尾の長さを測定し、眼窩採血し、インスリン及び血糖等の生化学的指標を測定しておいた。
【００４２】  ２．４生化学的及び免疫学的指標の検出
血糖を自動生化学分析装置により検出した。すべての測定項目はキットの説明書に従って操作した。
【００４３】  ２．５統計処理
各群の異なる時間帯の各観察指標の変化状況を観察して比較し、ＳＰＳＳ  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ  ２２．０統計ソフトウェアにより仮説検定と相関分析を行った。すべての測定データは平均
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は分散分析（Ｏｎｅｗａｙ−ＡＮＯＶＡ）で行った。Ｐ＜０．０５は統計的有意差があることを示す。
【００４４】  実験の結果
１モデルラットの空腹時血糖値に対する漢方処方菌叢カプセル調製液の影響
治療後の漢方処方菌叢群、ピオグリタゾン群の空腹時血糖値は、治療前と比較して、いずれも顕著な有意差（ｐ＜０．０１）があり、治療後の漢方処方菌叢群、ピオグリタゾン群の空腹時血糖値は、モデル群と比較していずれも顕著な有意差（ｐ＜０．０１）がある。結果を表１、図６に示す。
【００４５】
【表１】
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【００４６】  ２モデルラットの血清空腹インスリンに対する漢方処方菌叢カプセル調製液の影響
治療後の漢方処方菌叢群及びピオグリタゾン群のラット血清空腹インスリンレベルは、治療前と比較して顕著に上昇し、統計的有意性があり（Ｐ＜０．０１）、両群は２型糖尿病モデル群と比較していずれも顕著な有意差（Ｐ＜０．０１）がある。結果を表２、図７に示す。
【００４７】
【表２】
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【００４８】  実験結果及び分析：動物実験により、漢方処方菌叢群の治療後の空腹時血糖値は治療前と比較して顕著な有意差があり（ｐ＜０．０１）、モデル群と比較して顕著な有意差（ｐ＜０．０１）があったことが示されている。これは、漢方処方菌叢カプセルは、血糖値降下作用を有することを示している。
【００４９】  漢方処方菌叢群ラットの治療後の空腹時血清インスリンレベルは治療前と比較して上昇し、統計的有意性があり（Ｐ＜０．０１）、モデル群と比較して顕著な有意差があった（Ｐ＜０．０１）。これは、漢方処方菌叢カプセルはインスリン分泌を促進し、空腹インスリンレベルを向上させる作用を有し、この作用により血糖降下効果を実現する可能性があることを示している。
【００５０】  実施例５：２型糖尿病に対する漢方処方菌叢カプセルの臨床効果の観察
２型糖尿病に対する本発明の漢方処方菌叢カプセルの治療効果を検証するために、本発明者は、６０名の患者を選択して漢方処方菌叢カプセル（実施例３で製造された漢方処方菌叢カプセル）により２型糖尿病を治療して臨床的に観察した。すべての患者をランダムに２群に分け、ここで治療群に３０例、対照群に３０例が含まれる。治療前に両群患者は性別、年齢、疾患経過、体重指数等のいずれにも統計的有意差がなく、比較可能性がある。
【００５１】  １、治療計画
両群の患者に対して健康教育、飲食制御、定期的な運動が含まれる一般的な的基礎治療を行った。
【００５２】  対照群：基礎治療＋一般的な西洋薬（中国２型糖尿病防治指南（２０１０年版））による治療。
【００５３】  治療群：基礎治療＋一般的な西洋薬（中国２型糖尿病防治指南（２０１０年版））による治療＋漢方処方菌叢カプセル（２回／日、２０粒／回）による治療。
【００５４】  両群はいずれも４週間を１つの治療コースとし、３つの治療コース観察した。
【００５５】  ２、西洋医学の診断標準
（１）糖尿病［１９９９年にＷＨＯによって策定された糖尿病診断標準に準じる］。
▲１▼ＤＭ「三多一少」等の症状が顕著であり、ランダム血糖値≧１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ（２００ｍｇ／ｄｌ）
▲２▼空腹時静脈血漿血糖値≧７．０ｍｍｏｌ／Ｌ（１２６ｍｇ／ｄｌ）
▲３▼ＯＧＴＴ（７５ｇグルコースを経口投与）２時間ＰＧ≧１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ（２００ｍｇ／ｄｌ）
上記３つの条件のうちの１つを満たせば、診断の根拠と標準とすることができる。定期的な再検査の結果は依然として診断標準を満たした場合、診断は確立される。
【００５６】  （２）２型糖尿病の診断標準
１９９７年７月のＤｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ雑誌に発表された糖尿病病因学分型標準を参照し、糖尿病の診断標準を満たすとともに、インスリン放出試験結果が下記条件の１つを満たすと、２型糖尿病として診断される。
▲１▼相対的インスリン不足を伴うインスリン抵抗
▲２▼インスリン抵抗を伴う顕著なインスリン欠乏
【００５７】  ３、選択標準
（１）年齢は１８歳から６５歳の間にある者
（２）インフォームドコンセント
（３）２型糖尿病の診断標準を満たした者
（４）性別制限なし
【００５８】  ４、除外標準
（１）Ｔ１ＤＭ、妊娠、薬物等の要因による血糖値上昇
（２）規定通りに薬を服用しないことで治療効果を判断できない者又は資料不完全等により治療効果判断が影響される者
（３）他の薬物臨床研究に参加している患者
【００５９】  ５、治療前後の両群の血糖、糖化ヘモグロビンの変化
治療前の両群の血糖、糖化ヘモグロビンを比較したら、有意差がなく（Ｐ＞０．０５）、比較可能性を有した。治療後の治療群及び対照群患者の空腹時血糖値、食後血糖値はいずれも顕著に低下し、治療前と比較していずれも顕著な有意差があった（Ｐ＜０．０１）。治療群の治療後の空腹時血糖値の改善は対照群と比較して顕著な有意差があり（Ｐ＜０．０１）、治療群の食後血糖値の改善は対照群と比較して有意差があり（Ｐ＜０．０５）、治療群の糖化ヘモグロビンの改善は対照群と比較して有意差があった（Ｐ＜０．０５）（表３、図８、図９、図１０を参照）
【００６０】
【表３】
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【００６１】  ６、結果分析
治療後の治療群及び対照群患者の空腹時血糖値、食後血糖値、糖化ヘモグロビンはいずれも顕著に低下し、対照群と比較して有意差があり（Ｐ＜０．０５又はＰ＜０．０１）、２型糖尿病に対する一般的な西洋薬＋漢方処方菌叢カプセルの血糖改善作用は単一の一般的な西洋薬による血糖制御作用よりも高いことを示している。
【００６２】  実施例６：臨床例
実施例５の臨床効果に基づいて、以下の典型的な症例を提供する。症例の治療計画は、２回／日で毎回２０粒を服用し、４週間を１つの治療コースとし、３つの治療コースの治療を受けた。
【００６３】  症例１
患者：張某、男性、７２歳。「２型糖尿病」を３０年以上罹患し、血糖を制御するために「グリクラジド３０ｍｇ  ｑｄ、アカルボース５０ｍｇ  ｔｉｄ」を経口服用したが、効果は高くなかったため、「サクサグリプチン５ｍｇ  ｑｄ」を追加して服用したら、空腹時血糖値は８．５−９．５ｍｍｏｌ／ｌ、食後血糖値は１０−１２ｍｍｏｌ／ｌ、糖化ヘモグロビンは７−７．５％に制御された。口渇多飲が顕著で、やや太り、便が乾燥し、疲れやすく、口苦く、舌が赤くて舌苔が黄く、脈弦が弱かった。本発明の漢方処方菌叢カプセルを服用し、３つの治療コースの治療を受けたところ、口渇口苦、疲労の症状は顕著に改善され、排便は１日１回になった。空腹時血糖値は７ｍｍｏｌ／ｌ前後，食後血糖値は８ｍｍｏｌ／ｌ前後、糖化ヘモグロビンは６．８％に制御された。
【００６４】  症例２
患者：王某某、女性、６９歳。「２型糖尿病」を１８年間罹患し、血糖を制御するために「メトホルミン５００ｍｇ  ｔｉｄ」を経口服用したが、消化管の症状が顕著であったため、「サクサグリプチン５ｍｇ  ｑｄ、レパグリニド１ｍｇ  ｔｉｄ」を服用するようになったら、空腹時血糖値は９−１０ｍｍｏｌ／ｌ、食後血糖値は９−１２ｍｍｏｌ／ｌ、糖化ヘモグロビン８．５％前後に制御され、血糖値の変動が大きく、低血糖反応が発生したので、飲食を過度に制御するのを遠慮するようになった。消穀善飢が顕著で、お腹が張り、便が緩かったり硬かったりし、便溏しやすく、疲れやすく、口が乾き、舌紅少苔で、脈細数であった。本発明の漢方処方菌叢カプセルを服用し、３つの治療コースの治療を受けたところ、空腹感が顕著に軽減し、満腹感及び便の状況が顕著に改善され、空腹時血糖値は６−９ｍｍｏｌ／ｌ、食後血糖値は１０ｍｍｏｌ／ｌ前後、糖化ヘモグロビンは７．８％に制御された。
【００６５】  症例３
患者：陸某、男性、５６歳。「２型糖尿病」を１０年間罹患し、血糖を制御するために「メトホルミン、サクサグリプチン」を経口服用したら、空腹時血糖値は８−１０ｍｍｏｌ／ｌ、食後血糖値は９−１１ｍｍｏｌ／ｌ、糖化ヘモグロビンは７．７％に制御された。口渇多飲で、お腹が張りやすく、便溏しやすかった。本発明の漢方処方菌叢カプセルを服用し、３つの治療コースの治療を受けたところ、口乾、満腹感及び便の状況が顕著に改善され、メトホルミンの服用を停止したら、空腹時血糖値は６−７ｍｍｏｌ／ｌ、食後血糖値は９ｍｍｏｌ／ｌ前後、糖化ヘモグロビンは７．１％に制御された。
【００６６】  症例４
患者：金某某、男性、８１歳。「２型糖尿病」を３０年間以上罹患し、血糖を制御するために多種類の血糖降下薬を経口服用したが、効果は高くなかった。５年前に血糖を制御するために「ノボリン３０Ｒ（朝２６ｕ、夜１２ｕ）」と「西格列汀１００ｍｇ  ｑｄ」を服用するようになったところ、空腹時血糖値は７−１０ｍｍｏｌ／ｌ、食後血糖値は８−１４ｍｍｏｌ／ｌ、糖化ヘモグロビンは７．５％前後に制御された。血糖値の変動が大きく、飲食制御が良くなく、焦慮しやすく、運動不足で、お腹が張り、便が２−３日に１回で、舌が赤く舌苔が黄色く、脈弦であった。本発明の漢方処方菌叢カプセルを服用し、３つの治療コースの治療を受けたところ、症状が顕著に改善され、空腹時血糖値は６−９ｍｍｏｌ／ｌ、食後血糖値は９−１０ｍｍｏｌ／ｌ前後、糖化ヘモグロビンは６．４％に制御された。インスリンの毎日の用量は４ｕ減少した。
【００６７】  症例５
患者：李某某、男性、４３歳。「２型糖尿病」を３年間罹患し、血糖を制御するために「メトホルミン１０００ｍｇ／日」を経口服用したら、空腹時血糖値は良好で、糖化ヘモグロビンは６．５％であったが、消化管の症状が顕著で、お腹が張りやすく、便溏しやすく、舌が淡紅で歯痕があり、舌苔が白膩であった。血糖値の制御が良好であるため、しばらく血糖降下薬を交換したくなかった。本発明の漢方処方菌叢カプセルを服用し、３つの治療コースの治療を受けたところ、満腹感、便溏が改善され、メトホルミンの服用を停止した後、糖化ヘモグロビンは６．０％であった。
【００６８】  症例６
患者：林某、男性、７６歳。「２型糖尿病」を２０年間罹患し、血糖を制御するために「インスリングラルギン、皮下注射、１８ｕ／日」＋「アカルボース、経口服用、１５０ｍｇ／日」を投与しており、空腹時血糖値は６−８ｍｍｏｌ／ｌ、食後血糖値は８−１２ｍｍｏｌ／ｌ、朝御飯２時間後の血糖値は１１ｍｍｏｌ／ｌ前後に制御され、他の時間の血糖値は良好であり、糖化ヘモグロビンは７．２％であり、口渇多飲、便が緩かったり硬かったりし、便器に粘着され、舌紅少苔で、脈が弱かった。本発明の漢方処方菌叢カプセルを服用し、３つの治療コースの治療を受けたところ、口乾、便の状況が顕著に改善され、体が楽になり、朝食後血糖値は７−１０ｍｍｏｌ／ｌ、糖化ヘモグロビンは７％になった。
【００６９】  症例７
患者：李某、男性、５１歳。「２型糖尿病」と診断されてから１ヶ月。身体検査のときに血糖値上昇が発見され、空腹時血糖値が１２ｍｍｏｌ／ｌになり、病因で検査を受けた結果、「２型糖尿病」と診断され、糖化ヘモグロビンは９．８％であり、口渇が顕著で、当時に「ノボラピッド３０、朝２２ｕ夜１０ｕ、皮下注射」＋「サクサグリプチン５ｍｇ／日」を投与して血糖値を制御するとともに、本発明の漢方処方菌叢カプセルと併用し、３つの治療コースの治療を受けたところ、血糖値の制御が良好で、口渇が顕著に改善され、糖化ヘモグロビンは６．４％になった。
【００７０】  症例８
患者：張某、女性、７０歳。「２型糖尿病」と診断されてから８年。血糖を制御するために「レパグリニド１ｍｇ  ｔｉｄ」＋「サクサグリプチン５ｍｇ  ｑｄ」を服用しており、空腹時血糖値は７−８ｍｍｏｌ／ｌ、食後血糖値は８−１１ｍｍｏｌ／ｌ、糖化ヘモグロビンは７．３％に制御され、口渇多飲、便が緩かったり硬かったりし、舌紅少苔で、脈が弱かった。本発明の漢方処方菌叢カプセルと組み合わせて服用し、３つの治療コースの治療を受けたところ、口乾、便の状況が顕著に改善され、空腹時血糖値は６−８ｍｍｏｌ／ｌ、食後血糖値は７−９ｍｍｏｌ／ｌ、糖化ヘモグロビンは６．４％になった。
【００７１】  症例９
患者：魯某某、女性、８１歳。「２型糖尿病」と診断されてから約４０年。血糖を制御するために「ノボラピッド３０、朝２６ｕ、夜１４ｕ」を皮下注射しており、食事が不規則であり、おやつをよく食べたので、血糖値の制御が良くなく、変動が大きく、７−１６ｍｍｏｌ／ｌの間であり、食事を制御しにくく、糖化ヘモグロビンは８．４％であり、「糖尿病性網膜症、末梢神経障害」との合併症があり、口渇多飲、お腹が張りやすく、手足が痺れ、視界がぼやけ、皮膚がかゆみ、記憶力が低下し、口内潰瘍が発生しやすく、便秘で、舌紅苔薄黄で、脈が弱かった。インスリンの使用を指導し、食べ過ぎたか又は血糖値が高いときに注射量を調整し、本発明の漢方処方菌叢カプセルと併用し、３つの治療コースの治療を受けたところ、口乾、視界のぼやけ、皮膚のかゆみが改善され、排便が順調になり、食生活を変えるのは難しいが、血糖値は７−１１ｍｍｏｌ／ｌ、糖化ヘモグロビンは７％になった。
【００７２】  症例１０
患者：南某、男性、５０歳。「２型糖尿病」と診断されてから約１２年。血糖を制御するために「インスリングラルギン２０ｕ／日皮下注射」＋「ノボノーム、食事前に１ｍｇ経口服用」を服用し、消化不良で、お腹が張りやすく、２年前に胃不全麻痺の可能性があると考えられ、血糖値が６−１３ｍｍｏｌ／ｌの間で変動し、食べすぎて食物を消化しないため、お腹が張りやすくて嘔吐することもあり、排便が不規則で、１−４日に１回で、便が緩かったり硬かったりし、舌が淡紅で歯痕があり、舌苔が白膩であり、脈が弱かった。規則的に食事するように指導するとともに、本発明の漢方処方菌叢カプセルと併用し、３つの治療コースの治療を受けたところ、満腹感が顕著に軽減され、嘔吐しなくなり、便の状況が顕著に改善され、血糖値は６−１１ｍｍｏｌ／ｌ、糖化ヘモグロビンは７．５％になった。
【００７３】  症例１１
患者：陳某某、女性、６７歳。「２型糖尿病」と診断されてから約２０年。血糖降下薬を経口服用したが、血糖制御が良くないため、「インスリングラルギン、１４ｕ／日で皮下注射」＋「アカルボース、食事前５０ｍｇ噛んで服用」を服用するようになった。毎日にインスリンを注射することで、焦慮し、空腹時血糖値は７ｍｍｏｌ／ｌ前後、食後血糖値は９−１０ｍｍｏｌ／ｌ、糖化ヘモグロビンは８％であり、本発明の漢方処方菌叢カプセルと併用し、３つの治療コースの治療を受けたところ、焦慮が改善され、インスリングラルギンの用量が１０ｕ／日まで減少され、空腹時血糖値は７ｍｍｏｌ／ｌ前後、食後血糖値は７−９ｍｍｏｌ／ｌ、糖化ヘモグロビンは７．５％になった。
【００７４】  症例１２
患者：張某某、男性、３７歳。身体検査時に血糖値が上昇したことが発見された。その後、「２型糖尿病」と診断された。発見時に空腹時血糖値は７．２ｍｍｏｌ／ｌ、食後血糖値は１０．０ｍｍｏｌ／ｌ、糖化ヘモグロビンは７．８％であり、消穀善飢、口乾であった。飲食を制御し、適量に運動するとともに、本発明の漢方処方菌叢カプセルを服用し、３つの治療コースの治療を受けたところ、消穀善飢、口乾が改善され、空腹時血糖値は６．５ｍｍｏｌ／ｌ前後、食後血糖値は８．０ｍｍｏｌ／ｌ前後、糖化ヘモグロビンは７．３％になった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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