(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性を含有する第１のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物と、第２のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物とを交雑させることによって得ることができる、フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性を含有するカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物またはその子孫であって、前記第１のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物がＮＣＩＭＢ受入番号４２３４８で寄託されており、前記フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性が、フィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）のＦ単離菌に対する耐性を含む、カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物またはその子孫。
【請求項２】
同じアッセイを用いて、同一の環境条件下及び同じフィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）の影響下で評価したときに、受入番号ＮＣＩＭＢ４２３４８でＮＣＩＭＢに寄託されている種子の代表的なサンプルであるＦＤ０９２２と統計的に同じ程度まで、フィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）に耐性である、請求項１に記載のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物。
【請求項３】
前記耐性が、標準的な耐性アッセイにおいて評価可能であり、１以下の耐性スコアが得られ、そして統計的に有意な程度まで同じアッセイにおいて、かつ同一の環境条件下及び同じフィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）の影響下で評価したときに、標準的な感受性商業品種により２以上のスコアが得られる、フィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）に耐性である、請求項１または２に記載のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物。
【請求項４】
フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性を含有するカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子であって、前記種子が植物ＦＤ０９２２を含む系統を有し、そして前記植物ＦＤ０９２２の代表的な種子がＮＣＩＭＢ受入番号４２３４８で寄託されており、前記フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性が、フィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）のＦ単離菌に対する耐性を含む、カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子。
【請求項５】
請求項４に記載の種子を成長させることによって生産される、カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物。
【請求項６】
第１の親カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物と、第２の親カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物とを交雑させるステップと、得られたＦ1ハイブリッドカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子を収穫するステップとを含む、Ｆ1ハイブリッドカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子の生産方法であって、前記第１または第２の親カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物が、請求項１〜３のいずれか１項に記載のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物である、方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法によって生産される、Ｆ1ハイブリッド種子。
【請求項８】
請求項７に記載のハイブリッド種子を成長させることによって生産される、ハイブリッド植物またはその部位。
【請求項９】
請求項８に記載のハイブリッド植物から生産される、フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性を含有する種子であって、前記フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性が、フィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）のＦ単離菌に対する耐性を含む、種子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規の広域フィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）耐性表現型を有するカタランツス・ロセウス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｒｏｓｅｕｓ）植物に関する。
【背景技術】
【０００２】
序論
以前はビンカ・ロセア（Ｖｉｎｃａ  ｒｏｓｅａ）として知られていたカタランツス・ロセウス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｒｏｓｅｕｓ）は、今ではカタランツスアルカロイドと呼ばれることもあるビンカアルカロイドの主要な供給源である。癌の治療に使用される一般的な薬物のビンクリスチンおよびビンブラスチンを含むこれらの化合物は、約１３０種存在する。
【０００３】
またカタランツス・ロセウス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｒｏｓｅｕｓ）は庭の観賞植物としても栽培される。いくつかの栽培品種が、ピンク、赤色、ライラック、および白色の多数の色合い、または暗色の中心部を有する薄い色合いの花を咲かせるために育種されている。
【０００４】
カタランツス・ロセウス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｒｏｓｅｕｓ）（Ｌ．）Ｇ．Ｄｏｎ（マダガスカル・ペリウィンクル（Ｍａｄａｇａｓｃａｒ  ｐｅｒｉｗｉｎｋｌｅ）または一年草Ｃ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ））は、植物病原体フィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）Ｂｒｅｄａ  ｄｅ  Ｈａａｎ（気中フィトフトラ）に対して高レベルの感受性を有する。Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）の存在は日常的に茎および葉枯れ病を引き起こし、時折、根腐れを引き起こすこともある。Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）は、Ｃ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）の経済的に最も重要な病原体の１つである（Ｊｅｆｆｅｒｓ  ａｎｄ  Ｍｅａｄｏｗｓ，２０１１）。他の多くのフィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）病と同様、この病害は通常根腐れを引き起こすよりもＣ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）の地上部分において発生するので、Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）は気中フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）と呼ばれることが多い。この病原体に感染した植物は治すことができず、通常死滅する。Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）が存在する場合、Ｃ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）の栽植は多くの場合１００％の死亡率を有する。Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）は、環境条件に耐性の厚膜胞子として感染土壌中で何年にもわたって生き延びることができる。
【０００５】
Ｃ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）の病原体としてのＰ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）は１９１６年にインドで最初に報告され（Ｄａｓｔｕｒ，１９１６）、１９７７年にカリフォルニアで最初に報告された（Ｇｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９７７；Ｋｅｉｍ，１９７７）。Ｃ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）は米国の南半分の全域で人気の花壇用植物になっていたが、１９８０年代後半までに、Ｃ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）上で気中フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）が非常に蔓延したので、Ｃ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）の人気は実質的に低下した。
【０００６】
Ｃ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）におけるフィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）耐性は、既に文献に記載されている。米国特許第５４９１２８５号明細書（Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ  Ｓｅｅｄｓ，Ｉｎｃ）には、総アルカロイド含量のレベルの上昇がアブラムシおよびダニに対する植物の耐性の増大と直接関連し、そしてフィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）耐性のレベルともいくらか関連し得ると考えられるＣ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）植物が記載されている。
【０００７】
本発明は、フィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）に対する新規の広域耐性を有するカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物を初めて示す。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明はフィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する新規の広域遺伝的耐性を含有するカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物を提供し、前記植物の代表的な種子のサンプルは、ＮＣＩＭＢ受入番号４２３４８で寄託されている。
【０００９】
本発明はフィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する遺伝的耐性を含有するカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子を提供し、前記種子は、ＮＣＩＭＢ受入番号４２３４８で寄託された種子から成長させた植物またはその子孫から得ることができる。
【００１０】
一実施形態では、前記種子は、Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）のシンジェンタ（Ｓ）およびフロリダ（Ｆ）単離菌に対する耐性を含むフィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）に対する広域耐性を付与する対立遺伝子を含有する。
【００１１】
また、本発明の種子を成長させることによって生産されるカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物も提供されている。
【００１２】
また、本発明の植物の花粉および／または胚珠も提供されている。
【００１３】
本発明は、第１の親カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物と、第２の親カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物とを交雑させるステップと、得られたＦ1ハイブリッドカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子を収穫するステップとを含む、Ｆ1ハイブリッドカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子の生産方法を提供し、前記第１または第２の親カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物は本発明のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物である。
【００１４】
また、本発明の方法によって生産されるハイブリッド種子も提供されている。また、前記ハイブリッド種子を成長させることによって生産されるハイブリッド植物またはその部位も提供されている。
【００１５】
また、本発明の前記ハイブリッド植物から生産されるフィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性を含有する種子も提供されている。
【００１６】
また、ＮＣＩＭＢ受入番号４２３４８で寄託された生存可能なカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子、ならびに前記寄託種子から成長される植物およびその子孫も提供されており、子孫はフィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性を含有する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】２日にわたって、Ｓ単離菌の接種に対する９つのカタランツス・ロセウス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｒｏｓｅｕｓ）栽培品種／系列の病害重症度スコアを示す。
【図２】２日にわたって、Ｆ単離菌の接種に対する９つのカタランツス・ロセウス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｒｏｓｅｕｓ）栽培品種／系列の病害重症度スコアを示す。
【図３】図示される日付における温室Ｇ３およびＡ１内の温度を示す。ａ）Ｇ３：２０１２年１１月７日〜２０１２年１２月１６日；ｂ）Ｇ３：２０１４年６月１１日〜２０１４年７月２８日；ｃ）Ｇ３：２０１４年９月１０日〜１０月１日Ｇ３；およびｄ）Ａ１：２０１４年１０月２日〜１０月３０日。
【図４】５０ＤＡＬ％のＬＳ平均の交互作用プロット（処置*栽培品種）を示す。
【図５】生存期間のＬＳ平均の交互作用プロット（処置*栽培品種）を示す。
【図６】ＡＵＰＤＣのＬＳ平均の交互作用プロット（処置*栽培品種）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明は、フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する新規の広域遺伝的耐性を含有するカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物を提供し、前記植物の代表的な種子のサンプルは、ＮＣＩＭＢ受入番号４２３４８で寄託されている。
【００１９】
一実施形態では、本発明のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物はカタランツス・ロセウス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｒｏｓｅｕｓ）である。またカタランツス植物は、カタランツス・コリアセウス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｃｏｒｉａｃｅｕｓ）、カタランツス・ランセウス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｌａｎｃｅｕｓ）、カタランツス・ロンギフォリウス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｌｏｎｇｉｆｏｌｉｕｓ）、カタランツス・オバリス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｏｖａｌｉｓ）、カタランツス・プシルス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｐｕｓｉｌｌｕｓ）、カタランツス・シトゥルス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｓｃｉｔｕｌｕｓ）、およびカタランツス・トリコフィルス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｌｌｕｓ）を含むがこれらに限定されない別の種にも属し得る。
【００２０】
一実施形態では、本発明に従うカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物は一年草植物である。
【００２１】
また、フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性を含有する第１のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物と、第２のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物とを交雑させることによって得られる、フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性を含有するカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物も提供されており、前記第１のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物は、ＮＣＩＭＢ受入番号４２３４８で寄託されている。
【００２２】
また、フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性を含有する種子も提供されており、前記種子は、ＮＣＩＭＢ受入番号４２３４８で寄託された種子から成長させた植物またはその子孫から得ることができる。
【００２３】
また、フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性を含有するカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子も提供されており、前記種子は植物ＦＤ０９２２を含む系統を有し、前記植物ＦＤ０９２２の代表的な種子は、ＮＣＩＭＢ受入番号４２３４８で寄託されている。
【００２４】
また、フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する遺伝的耐性を含有するカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子も提供されており、前記遺伝的耐性は、受入番号ＮＣＩＭＢ４２３４８でＮＣＩＭＢに寄託されている種子の代表的なサンプルであるＦＤ０９２２において、またはフィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する前記遺伝的耐性を含むその子孫もしくは祖先において存在する。
【００２５】
一実施形態では、フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性は、耐性カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物の天然の遺伝的背景には存在しない。一実施形態では、本発明の植物は、フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性を含む、農学的に優良または栽培品種のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物である。
【００２６】
一実施形態では、カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子は、Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）のシンジェンタ（Ｓ）およびフロリダ（Ｆ）単離菌に対する耐性を含むフィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）に対する広域耐性を付与する対立遺伝子を含有する。Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）のＳおよびＦ単離菌は、当業者に知られている分子技術を用いて互いに区別することができる（Ｍａｍｍｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ，２０１３）。またＦ単離菌はＰｎ００２−０７としても知られており、フロリダ州オレンジ郡から単離されたものである。
【００２７】
Ｓ単離菌に対する耐性は、１９９４年に最初に特許を取得したものに類似している（米国特許第５４９１２８５号明細書を参照）。市販のハイブリッドは全て、Ｓ単離菌に対して高度に耐性である。現存の市販のハイブリッドはＦ単離菌に対してそれほど耐性ではない。
【００２８】
一実施形態では、同じアッセイ、特に以下の実施例２に記載されるアッセイを用いて、同一の環境条件下、特に同じフィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）の影響下で評価したときに、受入番号ＮＣＩＭＢ４２３４８でＮＣＩＭＢに寄託されている種子の代表的なサンプルであるＦＤ０９２２と統計的に同じ程度まで、フィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）に耐性であるカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物が提供される。
【００２９】
一実施形態では、フィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）に耐性であるカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物が提供され、前記耐性は、標準的な耐性アッセイ、特に以下の実施例２に記載されるアッセイにおいて評価することができ、１以下の耐性スコアが得られ、特に０の耐性スコアが得られ、そして統計的に有意な程度まで同じアッセイにおいて、かつ同一の環境条件下、特に同じフィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）の影響下で評価したときに、例えばサンストームディープピンクなどの標準的な感受性商業品種により２以上のスコアが得られる。
【００３０】
本発明に従うカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物はフィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）感染に対する高レベルの耐性を示し、特に、本植物は、接種の１４日後（ＤＡＩ）の段階でしおれまたは壊死の限られた症状を示す。集団内の植物の大多数は完全に無症状である。
【００３１】
一実施形態では、本発明に従う植物はフィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）感染に対する高レベルの耐性を示し、特に、本植物は、５０ＤＡＩにおいてしおれまたは壊死の限られた症状を示す。
【００３２】
一実施形態では、本発明に従う植物はコーラシリーズに属する。
【００３３】
一実施形態では、本発明に従う植物は、交配型（ｍａｔｉｎｇ  ｔａｐｅ）Ａ１を有するＰ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）単離菌に対する広域耐性を有する。一実施形態では、本発明に従う植物は、交配型Ａ２を有するＰ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）単離菌に対する広域耐性を有する。一実施形態では、本発明に従う植物は、メフェノキサム感受性を有するＰ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）単離菌に対する広域耐性を有する。一実施形態では、本発明に従う植物は、気中Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）に対する広域耐性を有する。また、本発明の植物の種子を成長させることによって生産されるカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物も提供される。
【００３４】
一実施形態では、本発明のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物はハイブリッドである。一実施形態では、本発明のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物は近交系である。
【００３５】
また、本発明のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物から生産される細胞の組織培養物も提供され、前記組織培養物の細胞は、種子、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、根、根端、雌しべ、葯、花、茎、および葉柄からなる群から選択される植物部位から生産される。
【００３６】
また、本明細書に記載される組織培養物から再生されるカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物も提供される。
【００３７】
また、本発明の植物の花粉および／または胚珠も提供される。
【００３８】
また、第１の親カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物と、第２の親カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物とを交雑させるステップと、得られたＦ1ハイブリッドカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子を収穫するステップとを含む、Ｆ1ハイブリッドカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子の生産方法も提供され、前記第１または第２の親カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物は本発明のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物である。
【００３９】
本発明はさらに、本発明のフィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）耐性植物と、別のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物とを交雑させることによる、開示されるカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物および種子の生産方法に関する。また本発明は、以下の属：ソラヌム（Ｓｏｌａｎｕｍ）、カプシクム（Ｃａｐｓｉｃｕｍ）、ユーカリプタス（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ）、カリカ（Ｃａｒｉｃａ）、アナナス（Ａｎａｎａｓ）、フラガリア（Ｆｒａｇａｒｉａ）、カメリア（Ｃａｍｅｌｌｉａ）、カスタネア（Ｃａｓｔａｎｅａ）、ペルセア（Ｐｅｒｓｅａ）、およびシトラス（ｃｉｔｒｕｓ）を含むがこれらに限定されない、カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）以外の属への遺伝的フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）耐性の伝達にも関する（Ｌａｍｏｕｒ，２０１３）。
【００４０】
遺伝的な（ｈｅｒｉｔａｂｌｅ  ｇｅｎｅｔｉｃ）広域耐性を別の植物に伝達するために、戻し交雑育種を使用することができる。このために望ましいホモ接合性栽培品種または近交系は反復親である。伝達すべき形質の供給源は、ドナー親と呼ばれる。得られた植物は、反復親（例えば、栽培品種）の特性と、ドナー親から伝達された望ましい形質とを有することが予想される。最初の交雑の後、ドナー親（フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）耐性、特にフロリダおよびシンジェンタ単離菌）の表現型を有する個体が選択され、反復親に対して繰り返し交雑（戻し交雑）される。得られた植物は、反復親（例えば、栽培品種）の特性と、ドナー親から伝達された望ましい形質とを有することが予想される。種々の形質および作物のために一般的に使用される他の育種方法の説明は、いくつかの参考図書の１つにおいて見出すことができる（Ａｌｌａｒｄ，１９６０；Ｓｉｍｍｏｎｄｓ，１９７９；Ｆｅｈｒ，１９８７）。
【００４１】
本発明に従うフィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する遺伝的耐性のために適切なドナー親はカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物ＦＤ０９２２でよく、その代表的な種子は、２０１５年１月７日にＮＣＩＭＢ４２３４８でＮＣＩＭＢ（Ｆｅｒｇｕｓｏｎ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ，Ｃｒａｉｂｓｔｏｎｅ  Ｅｓｔａｔｅ，Ｂｕｃｋｓｂｕｒｎ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ  ＡＢ２１９ＹＡ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）に寄託されている。
【００４２】
従って、本発明の説明に基づいて、そしてカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物ＦＤ０９２２（その代表的な種子は受入番号ＮＣＩＭＢ４２３４８で寄託されている）を所有すれば、当業者は、当該技術分野において周知の任意の育種技術を用いて、本発明に従うフィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する遺伝的耐性を任意の他のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物に伝達するのに何の困難もない。
【００４３】
また、本発明の方法によって生産されるハイブリッド種子も提供される。
【００４４】
また、本発明のハイブリッド種子を成長させることによって生産されるハイブリッド植物またはその部位も提供される。
【００４５】
また、本発明のハイブリッド植物から生産される、フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性を含有する種子も提供される。
【００４６】
また、ＮＣＩＭＢ受入番号４２３４８で寄託された生存可能なカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子、ならびに前記寄託種子から成長された植物およびその子孫も提供され、子孫はフィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性を含有する。
【００４７】
定義
本出願の範囲内で使用される技術用語および表現は、一般的に、本明細書において以下で他に指示されない限り、植物育種および栽培の関連技術においてそれらに普通に適用される意味が与えられるべきである。
【００４８】
本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、文脈が他に明白に指示しない限り、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、複数の指示対照を含む。従って、例えば、「植物（単数）」への言及は、１つまたは複数の植物を含む。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「育種」という用語および文法的なその変化形は、子孫の個体を発生させる任意のプロセスを指す。育種は有性もしくは無性生殖的、またはこれらの任意の組み合わせであり得る。例示的な非限定的な種類の育種には、交雑、自殖、倍加半数体の派生的生成（ｄｏｕｂｌｅｄ  ｈａｐｌｏｉｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、倍数体化、およびこれらの組み合わせが含まれる。本発明の花の表現型は、育種によって容易かつ安定的に子孫に伝達され得る。
【００５０】
本明細書で使用される場合、植物の育種との関連での「ハイブリッド」という用語は、２つの近交系間の交雑を含むがこれに限定されない、異なる系統または品種または種の植物を交雑させることによって生産された、遺伝的に異なる親の子孫である植物を指す。
【００５１】
「栽培品種カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物」または「優良カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物」は、本発明の範囲内では、もはや天然状態ではないが人の世話により、そして人の使用および／または消費のために発育された植物を指すと理解される。「栽培品種植物」はさらに、天然の形質および／またはその天然の遺伝的性質の一部として本発明の主題である形質を含む野生型種を排除すると理解される。
【００５２】
「植物」は、任意の発育段階にある任意の植物である。
【００５３】
「植物細胞培養物」は、例えば、プロトプラスト、細胞培養細胞、植物組織の細胞、花粉、花粉管、胚珠、胚嚢、接合子および胚などの、種々の発育段階にある植物単位の培養物を意味する。
【００５４】
本明細書で使用される場合、「植物部位」という語句は、植物をそこから再生することができる、植物中の無傷の植物細胞などの単細胞および細胞組織、細胞凝集塊、ならびに組織培養物を含む植物の部位を指す。植物部位の例としては、花粉、胚珠、葉、胚、根、根端、葯、花、果実、茎、苗条、および種子からの単細胞および組織、ならびに接ぎ穂、台木、プロトプラスト、カルスなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５５】
本明細書で使用される場合、「集団」という用語は、共通の遺伝的由来を共有する植物の遺伝的に異質な集まりを意味する。植物の集団は、通常、程度の差はあるが、花色の出現に関して成熟時に同じ表現型を有する１０以上の植物に相当する。
【００５６】
本明細書で使用される場合、「子孫」という用語は、特定の交雑の派生物を指す。通常、子孫は２つの個体の育種から生じるが、同じ種（特に、いくつかの植物および雌雄同体動物）は自殖させることもできる（すなわち、同じ植物がオスおよびメスの両配偶子のドナーとしての機能を果たす）。派生物は、例えば、Ｆ1、Ｆ2、またはそれに続く任意の世代であり得る。
【００５７】
「フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する耐性」または「耐性植物」は、フィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）による攻撃または侵襲に抵抗する植物の能力を指す。特定の植物によって示される耐性のレベルは、例えば、本明細書の以下の実施例２に記載されるような耐性アッセイを使用し、症状の重症度を評価するために０〜５のスケールを用いてスコア化することができる。本発明の耐性植物は、０〜１の症状の重症度を有する。「広域耐性」カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物は、少なくとも、同じＰ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）単離菌に対して、カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物ＦＤ０９２２（その代表的な種子は受入番号ＮＣＩＭＢ４２３４８で寄託されている）と有意に同じ耐性レベルまで耐性である。
【００５８】
「形質」は、本発明の範囲内で、特徴または表現型を指すと理解される。形質は優性的に遺伝されても劣性的に遺伝されてもよく、あるいは一遺伝子性でも多遺伝子性でもよい。
【００５９】
「優性」は、本発明の範囲内で、ヘテロ接合状態またはホモ接合状態で存在するときに表現型を決定する対立遺伝子を指すと理解される。
【００６０】
「劣性」対立遺伝子は、ホモ接合状態で存在するときにのみ表示される。
【００６１】
種子の寄託
変種ＦＤ０９２２（カタランツス・ロセウス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｒｏｓｅｕｓ）植物）の種子は、ブタペスト条約の約定に基づいて、２０１５年１月７日に番号ＮＣＩＭＢ４２３４８でＮＣＩＭＢ（Ｃｒａｉｂｓｔｏｎｅ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，ＵＫ）に寄託されている。
【００６２】
種子の寄託は、Ｓｙｎｇｅｎｔａ  Ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｉｏｎｓ  ＡＧ，Ｂａｓｅｌ  ４００２，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄの名称で行われた。
【実施例】
【００６３】
本明細書に記載される実施例は本発明の説明であり、それに対する限定であることは意図されない。本発明の種々の実施形態は、本発明に従って記載されている。本明細書に記載および説明される方法および植物に、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、多数の修正および変更が成され得る。
【００６４】
実施例１
耐性育種
Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）に耐性であるとしてＣ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）のコーラシリーズを導入したが、この病原体に対して感受性があるいくつかの例が認められた（Ｊｅｆｆｅｒｓ  ａｎｄ  Ｍｅａｄｏｗｓ，２０１１）。従って、２つの耐性（コーララベンダー、コーラバーガンディ）および１つの感受性（タイタンブラッシュ）の３つのＣ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）の栽培品種を使用して、病害のコーラ植物からの４つの単離菌を含む、１３年間にわたってＣ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）から回収されたＰ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）の４０の単離菌の病原性を評価した。また、交配型およびメフェノキサムに対する感受性について、全ての単離菌を検査した。単離菌は病原性が著しく異なり、栽培品種は感受性が著しく異なり、単離菌と栽培品種との著しい交互作用が存在し、単離菌が栽培品種を異なった形で侵すことが示された。単離菌を３つの病原性グループ：弱毒性、中間毒性、および強毒性に分類した。９つの弱毒性の単離菌は植物のいずれに対しても病害をほとんど引き起こさず、２１の中間毒性の単離菌は、主にタイタンブラッシュ植物に対して病害を引き起こした。１０の強毒性単離菌は３つの栽培品種全ての植物に対して病害を引き起こし、多くの場合、タイタンおよびコーラ植物の両方を死滅させた。強毒性の単離菌はメフェノキサム感受性であり、通常、交配型Ａ２であった。
【００６５】
シンジェンタはＣ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）の病害問題を特定し、気中フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する耐性を育種する計画を開始することを決定した。気中フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する耐性を見出すために初期の試みでは市販のＣ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）の生殖質を用いたが、このソースから適切な耐性は見出されなかった。各獲得物を気中フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）耐性について検査し、そのうちの１つが高度に耐性であることが見出された。その取得物は、シンジェンタにおける気中フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する全ての将来の耐性育種のための基礎としての役割を果たした。
【００６６】
耐性育種のために使用したＰ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）単離菌はカリフォルニア州、ネバダ州、およびテキサス州のいくつかの場所に由来し、全ての単離菌は、気中フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対して同じレベルの耐性を有するＣ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）において検査したときに、同様のレベルの病原性を示した。耐性育種プログラムの適度に早い時点で、将来の耐性育種努力のために、病害スクリーニングに使用した１２のうちの１つの単離菌を選択した。選択された単離菌は、カリフォルニア州で成長させた感染Ｃ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）植物に由来した。
【００６７】
Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）に耐性の最初の種子Ｃ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）シリーズは２００７年のコーラＣ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）種子シリーズであり、コーラは、気象条件が病害の発現のために非常に有利である場合でも、Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）に対する強い耐性を実証したので、産業界で広く受け入れられた。しかしながら、コーラの感受性についての報告があった。コーラＣ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）が気中フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対して感受性であるという最初の報告は２００７年にフロリダ州中部からであり、その後の報告は、ジョージア州およびフロリダ州南部からであった。
【００６８】
コーラの感受性の報告に応えて、コーラＣ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）にとって毒性であるＦ単離菌と名付けたフロリダ州南部からのＰ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）の単離菌と、コーラＣ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）の最初の耐性育種で使用した単離菌と同様の病害応答を生じるＳ単離菌と名付けたＰ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）の別の単離菌とを用いて、シンジェンタ内でのＣ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）耐性育種が行われた。この研究は、接種への応答に関するバイオアッセイを行うことにより、既知の感受性栽培品種および現存する市販のコーラハイブリッドと比べて、Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）のＳおよびＦ単離菌の両方に対して高度に耐性である種子系列（ＦＤ０９２２）を同定した。本特許出願は、全ての既知の感受性栽培品種および現存のコーラ材料に関する著しい改良点として、ＦおよびＳ単離菌の両方に対するＦＤ０９２２の高レベルの耐性を示す。
【００６９】
実施例２
病原性グループの確認
以下の栽培品種を研究で使用した：栽培品種Ａ（ＦＤ０９２２）；栽培品種Ｂ（コーララベンダー）；栽培品種Ｃ（コーラカスケードチェリー）；および栽培品種Ｄ（サンストームディープピンク−感受性対照）。
【００７０】
野外試験の目的は、一年草ビンカの４つの遺伝子型が、コーラ植物にとって毒性であるＰ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）の単離菌に対して感受性であるかどうかを決定することであった。
【００７１】
１つのコンテナにつき２つの遺伝子型のそれぞれを有する６つの植物が存在した。これは、１２の植物／コンテナおよび１８の植物／遺伝子型×単離菌の組み合わせを表した。
【００７２】
以下の表１はコンテナ番号を遺伝子型／複製および対応する処理１〜５と共に示す。
【００７３】
【表１】
0006746589.tif 000002
【００７４】
確立されたフィールドプロットを用いて、一年草ビンカの４つの遺伝子型を５つの接種菌処理に対して評価した。１つは非接種対照処理であり、４つは、Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）の異なる単離菌で構成された処理であった（表２）。２０１４年８月２２日に植物を受け取り、Ｆａｆａｒｄ  ３Ｂ無土壌コンテナミックスを含有する３３５リットルの槽に植えた。各遺伝子型の３つの複製を、１つの複製につき６つの植物で槽に植えた。ランダム化分割法を用いて２つの栽培品種を各槽に植えた。オーバーヘッド灌漑システムにより植物に毎日水を与え、必要に応じてＭｉｒａｃｌｅＧｒｏ可溶性肥料を用いて施肥した。植物が定着したら、各槽内の土壌を処理の１つからの接種菌に感染させた。接種菌は、２５℃で３週間、１０％のＶ８ジュースブロスに浸した無菌バーミキュライト上で個々の単離菌を成長させることにより製造した。個々の単離菌の接種菌（表２）をプールし、十分に混合して、各処理のための接種菌の複合バッチを製造した。２０１４年９月３日に、２００ｍｌの複合接種菌を２０００ｍｌの新たなＦａｆａｒｄ  ３Ｂコンテナミックスと混合し、次にこの混合物を各槽の表面全体に広げることによって植物を接種した。感染コンテナミックスを槽内のコンテナミックスの上部層に手で挿入し、次に槽に十分に水を与えて接種菌を取り込み、乾燥を防止する。
【００７５】
接種の後、以下の評定尺度を用いて、症状の重症度について各植物を毎週評価した：
０＝植物の０％が症状［しおれまたは壊死］を示す、すなわち無症状、健康、
１＝植物の１〜１０％が症状を示す、
２＝植物の１１〜５０％が症状を示す、
３＝植物の５１〜９０％が症状を示す、
４＝植物の９１〜９９％が症状を示す、
５＝植物の１００％が症状を示す、すなわち死滅。
【００７６】
植物を接種後５０日間（約７週間）評価した。病害植物を槽から取り出し、単離のために研究室に持ち込んだ。各遺伝子型の代表的な植物の茎および葉組織をＰＡＲＰＨ−Ｖ８選択培地に置き、Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）による感染を確認した。プレートを暗所において２５℃で３〜７日間保持して、病原体を感染組織から成長させた。ＪＭＰ  Ｐｒｏ統計ソフトウェアを用いて２元配置ＡＮＯＶＡによりデータを分析した。症状重症度スコアを分析前の範囲の中央値に変換した：
０＝０％
１＝５．５％
２＝３０．５％
３＝７０．５％
４＝９５％
５＝１００％
【００７７】
この研究において全部で１９の単離菌を使用し、全て、１９９６年〜２００８年の間に病害一年草ビンカ植物から回収された。全ての単離菌は殺菌剤Ｓｕｂｄｕｅ  ＭＡＸＸ（活性成分メフェノキサム）に対して感受性であり、両方の交配型が表される。６つの単離菌がＡ１であり、１３の単離菌がＡ２であった。以前に実行された試験における「コーラ」ビンカ植物に対する病原性に基づいて、単離菌を４つのグループに分類した（Ｊｅｆｆｅｒｓ  ａｎｄ  Ｍｅａｄｏｗｓ，２０１１）。
・  処理１は、「コーラ」および「ニルバーナ」植物が発売されるよりも以前の２００２年にサウスカロライナ州（ＳＣ）の植物から回収された２つの毒性のある単離菌により構成された。
・  処理２は、２０００年、２００５年、および２００８年にＳＣの植物から回収された３つの毒性のある単離菌により構成された。
・  処理３は、２００７年および２００８年にフロリダ州（ＦＬ）およびテキサス州（ＴＸ）の「コーラ」または「ニルバーナ」植物から回収された毒性のある単離菌により構成された。
・  処理４は、１０の無毒の単離菌（８つは、１９９６年〜２００４年の間にＳＣの植物から回収され、２つは、Ｂａｌｌ  Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｃｏ．により提供され、由来不明である）により構成された。
【００７８】
病害一年草ビンカ植物から回収されたフィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）の単離菌に基づいて野外試験で使用された処理の概要は表２に示される。
【００７９】
【表２】
0006746589.tif 000003
【００８０】
死滅した植物の全てからＰ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）が単離され、従って、植物の死滅を引き起した病原体は他になかった。
【００８１】
３つの病害パラメータを分析した：
・  ５０ＤＡＩ（試験の最後）における症状の重症度  −  表３〜５および図４を参照；
・  症状重症度スコアが５に到達するまでの生存期間（日数）  −  最大５０ＤＡＩ；
・  病害進行曲線下面積（ＡＵＤＰＣ）  −  異なる処理において単離菌の病原性および攻撃性の両方が説明されるので最も意味あるパラメータである。
【００８２】
栽培品種Ｂ（コーララベンダー）の多数の植物は５０ＤＡＩで生きていたが、３または４の症状重症度スコアを有したので、生存期間は、栽培品種の評価のための最も意味のある病害パラメータではない。３つの病害パラメータの全てについて、処理*栽培品種交互作用は高度に有意であった（表３、６、９を参照）が、この交互作用は、ランク順序の切り換えにより栽培品種が異なった形で応答した結果ではない。代わりに、処理５（非処理対照）では病害がなく、処理４（無毒の単離菌）による病害はほんのわずかであることによって引き起こされた（図４、５、６を参照）。従って、５つの処理の全てにわたる栽培品種の主効果を評価し、そして４つの栽培品種の全てにわたる処理の主効果も評価した。
【００８３】
実施例３
症状の重症度
５０ＤＡＩ（感染の５０日後）における症状の重症度は表３〜５に示され、４つの栽培品種は全て病害重症度が異なり、栽培品種Ａ（ＦＤ０９２２）は感受性が圧倒的に最も低く、植物はわずか１８．２％の症状のある組織を示し、栽培品種Ｄ（サンストームディープピンク）は最も感受性であった（植物は７９．８％症候性であった）。処理３、２、および１は最も毒性があった。
【００８４】
表３は、接種の５０日後における症状の重症度（％）の２元配置ＡＮＯＶＡである。一年生ビンカ４つの栽培品種における５つの接種菌処理の効果が示される。
【００８５】
【表３】
0006746589.tif 000004
【００８６】
表４は栽培品種間の差を示し、平均はＰ＝０．０５でフィッシャーの制約付最小有意差により分離される。
【００８７】
【表４】
0006746589.tif 000005
【００８８】
表５は処理間の差を示し、平均はＰ＝０．０５でフィッシャーの制約付最小有意差により分離される。
【００８９】
【表５】
0006746589.tif 000006
【００９０】
実施例４
生存期間
表６〜８は、生存期間に基づいて、栽培品種の感受性が如何に異なるかを示す。栽培品種Ａ（ＦＤ０９２２）およびＢ（コーララベンダー）は栽培品種Ｃ（コーラカスケードチェリー）よりも長く生存し、これら３つの栽培品種は、栽培品種Ｄ（サンストームディープピンク）よりも長く生存した。栽培品種Ａ（ＦＤ０９２２）の植物の全てはこの試験の５０日間を生存し、大部分は症状の発生がほんのわずかであった。栽培品種Ｂ（コーララベンダー）の植物の大部分が生存したが、これらのうちの多くは深刻な症状の発生を有した。栽培品種Ｃ（コーラカスケードチェリー）およびＤ（サンストームディープピンク）では、いくつかの植物が試験中に死滅した。このパラメータに基づいて、処理３は最も毒性であり、処理１、２、および３は様々な程度の病原性を示した。
【００９１】
表６は、接種後の生存日数（最大５０ＤＡＩまで）の２元配置ＡＮＯＶＡである。一年草ビンカの４つの栽培品種に対する５つの接種菌処理の効果が示される。
【００９２】
【表６】
0006746589.tif 000007
【００９３】
表７は栽培品種間の差を示し、平均はＰ＝０．０５でフィッシャーの制約付最小有意差により分離される。
【００９４】
【表７】
0006746589.tif 000008
【００９５】
表８は処理間の差を示し、平均はＰ＝０．０５でフィッシャーの制約付最小有意差により分離される。
【００９６】
【表８】
0006746589.tif 000009
【００９７】
実施例５
病害進行曲線下面積（ＡＵＤＰＣ）
ＡＵＤＰＣは、５０ＤＡＩの試験期間全体にわたって病害の発生が考慮されるので、最も意味のある病害パラメータである。症状の重症度と同様に、４つの栽培品種は全て感受性が異なり、栽培品種Ａ（ＦＤ０９２２）は感受性が最も低く、栽培品種Ｄ（サンストームディープピンク）は最も感受性であった。処理３は最も毒性であり、処理２および１は処理４よりも毒性があった。
【００９８】
表9. 2元配置ANOVA
【表９】
0006746589.tif 000010
【００９９】
表１０は栽培品種間の差を示し、平均はＰ＝０．０５でフィッシャーの制約付最小有意差により分離される。
【０１００】
【表１０】
0006746589.tif 000011
【０１０１】
表１１は処理間の差を示し、平均はＰ＝０．０５でフィッシャーの制約付最小有意差により分離される。
【０１０２】
【表１１】
0006746589.tif 000012
【０１０３】
実施例６
研究の結論
全ての栽培品種のいくつかの植物はこの試験の５０日間にわたって葉枯れ病を発生したが、相対感受性は、栽培品種間で大きく異なった。栽培品種Ａ（ＦＤ０９２２）は感受性が最も低く、ごくわずかな症状を発生しただけであった。あるいは、栽培品種Ｄ（サンストームディープピンク）は最も感受性であり、試験が終了する前に多数の植物が死滅した。全体として、処理３は最も毒性であったが、処理１および２も高度の病原性を示した。予想される通り、処理４は毒性が最も低かった。これらのデータは、栽培品種Ａ（ＦＤ０９２２）が、以前に「コーラ」植物を死滅させたＰ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）の毒性のある単離菌に対して高レベルの耐性を有することを示す。
【０１０４】
実施例７
植物材料
Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）のＳおよびＦ単離菌に対応して、９つの栽培品種／系列の病害の重症度を評価した。４つの既知の完全に感受性の栽培品種を対照として特定し、これにはサンストームディープピンク、サンストームアプリコット、タイタンホワイト、およびパシフィカアイシーピンクが含まれた。４つの現存のコーラ市販品がＳおよびＦ単離菌に対する耐性の違いを示すことを確認し、これにはコーラホワイト、コーララベンダー、コーラピンク、およびコーラパンチが含まれた。１つの系列がＰ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）のＳおよびＦ単離菌の両方に対して高レベルの耐性を示すことを確認し、これにはＦＤ０９２２が含まれる。
【０１０５】
２０１２年１１月７日（Ｓ単離菌  平均２３℃）、２０１４年６月１１日（ＳおよびＦ単離菌  平均２５℃）、および２０１４年９月１０日（Ｆ単離菌  平均２２℃）の３日にわたって、カリフォルニア州ギルロイにおいて温室条件下のＳｕｎｓｈｉｎｅ  ＬＰ５  ＬＬ培地中、２８８セルのトレイに２つの複製／単離菌型／播種日を播種した。各複製は、各栽培品種／系列の４８の実生を含んだ。播種の３週間後、接種の１時間前に実生をＨ2Ｏで飽和させ、土壌に直接適用した１ｍＬのＰ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）遊走子懸濁液により接種した。データ収集が完了するまで土壌を湿性に保持した。
【０１０６】
実施例８
病害の重症度データ
接種の１４日後に、各栽培品種／系列内の発芽した実生（４８播種／栽培品種）のそれぞれについて病害の重症度データを収集した。データは、２０１２年１２月１２日（Ｓ単離菌）、２０１４年７月２５日（ＳおよびＦ単離菌）、および２０１４年１０月１６日（Ｆ単離菌）に収集した。
【０１０７】
Ｊｅｆｆｅｒｓ（私信）により記載されるような以下の評定尺度を各実生に適用した。
【０１０８】
【表１２】
0006746589.tif 000013
【０１０９】
個々の植物データを各栽培品種／系列、複製、および播種日に対して平均化し、標準偏差を計算した（表１３；図１および２を参照）。植物を成長させた温度は図３に示される。
【０１１０】
【表１３】
0006746589.tif 000014
【０１１１】
フィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）接種菌は、以下のように調製した。カタランツス・ロセウス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｒｏｓｅｕｓ）（Ｃ．ロセウス（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ））実生は、土壌に直接適用した遊走子懸濁液を用いて接種した。Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）遊走子の生成は、Ｓａｎｄｌｉｎ，１９９３に概説されるように、以下のステップを含む：
１）Ｖ８ジュース培地の調製
ａ．  ２００ｍＬのＶ８ジュース、３ｇのＣａＣＯ3、１５ｇの寒天、および８００ｍＬのＨ2Ｏの混合物を１２１℃で２２分間オートクレーブすることにより、Ｖ８ジュース寒天培地を調製した。次に培地を冷却し、無菌１００−ｘ−１０ｍｍペトリ皿に分注した。
２）接種の前に菌糸体培養物をＶ８培地上、室温で７〜１０日間成長させた。
３）ＤＩ  Ｈ2Ｏ中に懸濁させた庭園土壌（１０ｇ／Ｌ）中で土壌抽出物を調製した。
４）菌糸体寒天培養物を１．５平方ｃｍに切断し、ＲＯ  Ｈ2Ｏ中で洗浄した。
５）正方形の寒天をペトリ皿内で、１２時間の光を当てて１〜２日間、２４℃でインキュベートして、胞子嚢の形成を誘導した。
６）遊走子の形成および放出を誘導するために、ペトリ皿の土壌抽出物を除去し、新しい土壌抽出物で置換および浸漬させた。次にペトリ皿を３０分間冷蔵庫（５℃）に入れた。次にペトリ皿を取り出し、遊走子の形成および放出のために室温に１時間置いた。
７）遊走子接種菌を１×１０5遊走子／ｍＬまで希釈し、土壌に適用した。
【０１１２】
実施例９
２０１５年の再現野外試験
２０１４年に行った試験を再現するために２０１５年に再現野外試験を行った。しかしながら、２０１５年の試験は、植物の成長および病害の発生の両方に最適な時期である真夏に行った。２０１４年の試験は、温度が低くなり始める晩夏および初秋に行った。２つの試験では環境条件が異なるにもかかわらず、結果は非常に類似していた。栽培品種Ａは感受性が最も低く、ごくわずかな症状を発生しただけであった。あるいは、栽培品種Ｄは最も感受性であり、試験が終了する前に多数の植物が死滅した。全体として、処理３および１は最も毒性であるが、処理２も高度の病原性を示した。これらの３つの処理は「コーラ」植物に対して毒性のある単離菌で構成されたので、このことは理にかなっている。予想される通り、処理４は毒性が最も低く、この処理は、以前の実験で「コーラ」植物に対して毒性が弱かった単離菌で構成したものであった。これらの結果は非常に有望であり、栽培品種Ａは、Ｐ．ニコチアネ（Ｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）の単離菌の多様な集団（以前に「コーラ」植物を死滅させた毒性のある単離菌を含む）に対する高レベルの耐性を有することが確認される。
【０１１３】
引用文献
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本発明の好ましい態様は、下記の通りである。
〔１〕フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性を含有する第１のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物と、第２のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物とを交雑させることによって得ることができる、フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性を含有するカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物またはその子孫であって、前記第１のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物がＮＣＩＭＢ受入番号４２３４８で寄託されている、カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物またはその子孫。
〔２〕同じアッセイ、特に実施例２に記載されるアッセイを用いて、同一の環境条件下、特に同じフィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）の影響下で評価したときに、受入番号ＮＣＩＭＢ４２３４８でＮＣＩＭＢに寄託されている種子の代表的なサンプルであるＦＤ０９２２と統計的に同じ程度まで、フィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）に耐性である、前記〔１〕に記載のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物。
〔３〕前記耐性が、標準的な耐性アッセイ、特に実施例２に記載されるアッセイにおいて評価可能であり、１以下の耐性スコアが得られ、特に０の耐性スコアが得られ、そして統計的に有意な程度まで同じアッセイにおいて、かつ同一の環境条件下、特に同じフィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）の影響下で評価したときに、例えばサンストームディープピンクなどの標準的な感受性商業品種により２以上のスコアが得られる、フィトフトラ・ニコチアネ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）に耐性である、前記〔１〕または〔２〕に記載のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物。
〔４〕フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性を含有するカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子であって、前記種子が植物ＦＤ０９２２を含む系統を有し、そして前記植物ＦＤ０９２２の代表的な種子がＮＣＩＭＢ受入番号４２３４８で寄託されている、カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子。
〔５〕前記〔４〕に記載の種子を成長させることによって生産される、カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物。
〔６〕第１の親カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物と、第２の親カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物とを交雑させるステップと、得られたＦ1ハイブリッドカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子を収穫するステップとを含む、Ｆ1ハイブリッドカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）種子の生産方法であって、前記第１または第２の親カタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物が、前記〔１〕〜〔３〕に記載のカタランツス（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）植物である、方法。
〔７〕前記〔６〕に記載の方法によって生産される、Ｆ1ハイブリッド種子。
〔８〕前記〔７〕に記載のハイブリッド種子を成長させることによって生産される、ハイブリッド植物またはその部位。
〔９〕前記〔８〕に記載のハイブリッド植物から生産される、フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）に対する広域遺伝的耐性を含有する種子。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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