(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
0.05〜0.5％（w/v）の範囲の濃度のチモシンβ4、
0.5〜0.7％（w/v）の範囲の濃度の塩化ナトリウム、
0.05〜0.09％（w/v）の範囲の濃度の塩化カリウム、
0.03〜0.06％（w/v）の範囲の濃度の塩化カルシウム二水和物、
0.01〜0.05％（w/v）の範囲の濃度の塩化マグネシウム六水和物、
0.2〜0.5％（w/v）の範囲の濃度の酢酸ナトリウム三水和物、
0.1〜0.3％（w/v）の範囲の濃度のクエン酸ナトリウム二水和物
を含み、0.08〜2.0 mlの総1日用量を提供する単位剤形である、ドライアイ症候群の処置または予防のための医薬組成物。
【請求項２】
塩酸または水酸化ナトリウムをさらに含む、請求項1に記載の組成物。
【請求項３】
組成物が1回または数回使用するために0.01〜10 mlの容量を有する単位剤形であり、0.08〜2.0 mlの総1日用量を適切に提供する、請求項1に記載の組成物。
【請求項４】
組成物が1滴当たり0.01〜2.0 mlを滴下するための点眼容器に含まれ、0.08〜2.0 mlの総1日用量を適切に提供する、請求項1に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、チモシンβ4を含む眼科疾患のための治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
涙液は、通常の涙液および反射的な涙液を含み得る。通常の涙液は継続的に分泌されるが、一方、反射的な涙液は、あらゆる刺激、例えば痛み、ごみ、辛味、煙、におい、喜びもしくは悲しみの感情、または涙液の不足への反射的反応において一時的に分泌される。分泌された涙液は、眼の表面を覆うように角膜の表面に存在し、眼を保護して楽にする、眼の視界を確保するために角膜表面を滑らかにする、角膜および結膜の上皮細胞上の傷害を防ぐ、外部の細菌に対する抗菌活性を提供する、ならびに角膜に栄養を供給する役割を有し得る。涙液は、粘膜層、水層および脂肪層から構成され、およそ2〜3 mLの容量が、上記役割を果たすため1日当たり生成される。しかしながら、涙液中のこれらの層の少なくとも1つでも不足し、涙液膜の変化または生成される涙液の容量の不足を引き起こす場合、眼が乾燥し、涙液はその機能を果たすことができず、これは最終的にドライアイ症候群を引き起こす。
【０００３】
ドライアイ症候群は、角結膜炎障害とは無関係の涙液の量および／または質の点で異常な状態を指す［Masakazu YAMADA et al., Nippon Ganka Kiyo, 43, 1289-1293 (1992)］。また、ドライアイ症候群は、涙液膜の異常な変化または涙液の分泌不足と関連するすべての疾患を含み、例えば刺激症状、例えば涙液の不足、涙液の過度の蒸発または涙液成分のアンバランスのために眼球の表面上の傷害によって引き起こされる刺激、不快感および／または乾燥を感じること；さらに、結膜炎、膜上皮上の傷などをまた含む。ドライアイ症候群は、その代表的な例として乾燥結膜症候群、乾燥角結膜炎などを含み得るが、特にそれらに制限され得ない。
【０００４】
一般的に、ドライアイ症候群は、加齢に伴う涙液量の不足または機能低下のために主として生じ、それ故に、中年の女性または高齢者で多く見られる。上記以外に、ドライアイ症候群は炎症、薬（すなわち、高血圧症、過酸症、神経症、心気症などのための薬）の摂取、外傷、慢性結膜炎、眼瞼の異常な状態、前立腺疾患などと関連して引き起こされ得ることも報告された。ほとんどの場合、正確な原因は未だ不明であるが、ドライアイ症候群は異常な免疫反応によって引き起こされる自己免疫疾患のために生じ得ることが最近発見された。
【０００５】
免疫反応は、外部の（病原性）細菌の侵襲から身体を保護する反応であり、自己免疫疾患は、身体の防御機構、すなわち免疫系が異常を有し、免疫反応が過敏であるために自己の健康な細胞および組織を攻撃および破壊する状態を指す。自己免疫疾患は、ウイルスまたは細菌に対する身体におけるサイトカイン（身体の防御システムを制御および刺激するためのシグナル物質）環境の変化によって不適切な免疫反応が誘導され、これが自己免疫反応を過度にまたは不適切に制御することにより生じると考えられる。正確な病因はまだ知られていないが、自己免疫疾患は、環境因子、遺伝因子および／または免疫学的因子から生じる可能性が議論されている。
【０００６】
現在、大部分の自己免疫疾患は、ステロイド剤または免疫抑制剤を用いて処置または予防される。これらのうち、ヒトを含む哺乳類のドライアイ症候群を処置または予防するための薬物の代表的な例は、Allergan plc.,から入手可能なRESTASISTMであり、これは0.05％（w/v）シクロスポリンA点眼剤（米国特許第5,474,979号）である。
【０００７】
シクロスポリンAは、約20 mg/ml〜30 mg/mlの水溶性を有する非可溶性医薬であり、RESTASISTMは、液液分散を含むマイクロエマルジョン形態で調製される。しかしながら、マイクロエマルジョンは、熱力学的に不安定であり、しばしば不適切な状態、例えば凝集、沈降、クリーミング、粒子成長または付着を引き起こし、液液分散が容易に破壊されるという欠点を有する。したがって、より安定な粒子を作るために、ナノスケールに粒子径を減少させ、ナノエマルジョン形態に調製する試みがあった（韓国特許第1008189号）。しかしながら、ナノエマルジョンの製造方法は、高価な装置、例えば高圧ホモジナイザー、マイクロフルイダイザーを必要とし、装置における劣化を生じ得て、それ故に多くの努力および高い生産コストを必要とする欠点がある。
【０００８】
さらに、RESTASISTMは、貯蔵時間の短いヒマシ油ベースエマルジョンである。また、RESTASISTMは、最近ドライアイ症候群の処置または予防のための医薬として最も広く利用されるが、その最も適切なバイオアベイラビリティはまだ知られていない。例えば、RESTASISTMの完全な効果を示すのに数週間かかり得る。この場合、バイオアベイラビリティは、それを投与後標的の眼組織において検出される薬物のパーセンテージを意味する。ここで、薬物の検出は、薬力学的（シクロスポリンAへの生物学的応答の定量）または薬物動態学的（実際の医薬濃度の定量）態様で実施され得る。
【０００９】
したがって、ドライアイ症候群の処置または予防適用において、より向上した物理化学的安定性を有する製剤およびより改善されたバイオアベイラビリティを有する薬物の要求が継続されており、これらの課題を克服するために、チモシンβ4の研究が現在進行中である。
【００１０】
チモシンβ4は、1981年に胸腺で最初に発見されたタンパク質であり、これは41〜43アミノ酸を含み、等電点は5.1である。1991年に、チモシンβ4は、初めてLivaらにより動物細胞からのアクチン隔離分子として見出され、その後、免疫調節および神経内分泌作用を示すことが発見された。
【００１１】
一方、チモシンβ4は、胸腺細胞における末端デオキシヌクレオチドトランスフェラーゼの機能を有するだけでなく、またマクロファージおよびその抗原の移動ならびに視床下部外植片による黄体形成ホルモンの分泌を増加させることが報告されている。また、上記物質が、内皮の付着および移動を増加させるためにシトシンアラビノシドの毒性を排除し、造血幹細胞の細胞周期を抑制することも知られている。さらに、韓国特許出願公開第10-2008-0033939号には、眼の炎症、感染性疾患（細菌、真菌またはウイルスによる）および緑内障を処置するための、殺菌かつ活性な防腐剤ならびにチモシンβ4を含む眼科用液剤（すなわち、点眼剤溶液）の使用が記載されている。
【００１２】
しかしながら、ドライアイ症候群を処置するための点眼剤組成物における最適な組合せおよび個々の成分は、上記韓国特許出願公開を含むいずれの文書にも未だ開示されていない。したがって、本発明者は、ドライアイ症候群の処置および予防のために提供される従来の薬物および製剤の欠点を改善するために努力し、チモシンβを含む最も適切な成分およびそれらの割合ならびにそれらの最も効果的な用量を見出した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
（技術的課題）
本発明の目的は、チモシンβ4を含む最適な点眼剤組成物およびそれらの最適な1日用量を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
（技術的解決法）
本発明の目的を達成するために、ドライアイ症候群の処置または予防のための医薬組成物であって、チモシンβ4、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム二水和物および塩化マグネシウム六水和物を含む医薬組成物が提供される。
【発明の効果】
【００１５】
（有利な効果）
本発明の医薬組成物は、シクロスポリンAを含む点眼剤よりドライアイ症候群の改善に効果的である。本発明の利点としては、従来の点眼剤と比較して眼の刺激低下、物理化学的安定性の向上およびより長期の貯蔵期間が挙げられるが、これらに限定されない。特に、本発明は、従来の点眼剤と比較してあらゆる添加剤の使用を最小限にしながら、優れた安定性を達成し得る。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図1は、実施例2、実施例4、実施例5およびプラセボコントロールのそれぞれ代表的な製剤の投与後の時間に対する角膜表面フルオレセイン染色スコアの変化を示す。
【図２】図2は、実施例2、実施例4、実施例5およびプラセボコントロールの代表的な製剤の投与後の時間に対する角膜表面フルオレセイン染色スコアのベースラインからの変化を示す。
【図３】図3は、実施例2、実施例4、実施例5およびプラセボコントロールの代表的な製剤の投与後の時間に対するフルオレセイン染色スコアのベースラインからの変化を示す。
【図４】図4は、実施例1、実施例2および実施例3の代表的な製剤の投与後の6日目および13日目における角膜表面フルオレセイン染色スコアの変化を示す。
【図５】図5は、実施例2、比較例1およびプラセボコントロールの代表的な製剤の投与後の6日目および13日目における角膜表面フルオレセイン染色スコアの変化を示す。
【図６】図6は、実施例2およびプラセボコントロールの代表的な製剤の投与後の30日目における角膜表面フルオレセイン染色スコアの変化を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
（最良の形態）
本発明の目的を達成するために、本発明は、ドライアイ症候群の処置または予防のための医薬組成物であって、チモシンβ4、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム二水和物および塩化マグネシウム六水和物を含む医薬組成物を提供する。
【００１８】
本明細書で用いる用語「チモシンβ4」は、43アミノ酸から構成され4.9 kDaを有するポリペプチドを指し、これは時にチモシンベータ−4またはTβ4と呼ばれる。このタンパク質は、内皮細胞のインビトロでの遊走および分化の間上方制御される。多くのチモシンβ4アイソタイプがこれまで発見されており、チモシンβ4の公知アミノ酸配列と約70％以上、約75％以上または約80％以上の相同性を有する。本発明によるチモシンβ4は、野生型チモシンβ4のN末端変異体またはC-末端変異体でもあり得る。好ましくは、本発明によるチモシンβ4は、配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質である。チモシンβ4の濃度は0.01〜1.0％（w/v）、好ましくは0.05〜0.5％（w/v）の範囲であり得る。
【００１９】
また、塩化ナトリウムの濃度は0.1〜1.2％（w/v）または0.3〜1.0％（w/v）の範囲であり得る。好ましくは、それは0.5〜0.7％（w/v）の範囲である。また、塩化カリウムの濃度は0.01〜0.15％（w/v）または0.03〜0.12％（w/v）の範囲であり得る。好ましくは、それは0.05〜0.09％（w/v）の範囲である。また、塩化カルシウム二水和物の濃度は0.01〜0.12％（w/v）または0.03〜0.09％（w/v）の範囲であり得る。好ましくは、それは0.03〜0.06％（w/v）の範囲である。また、塩化マグネシウム六水和物の濃度は0.01〜0.12％（w/v）、好ましくは0.01〜0.05％（w/v）の範囲であり得る。
【００２０】
一方、本発明による医薬組成物は、塩酸または水酸化ナトリウムをさらに含み得る。塩酸または水酸化ナトリウムは、組成物のpHを調節するために適切に加えられ得る。組成物のpHは、pH6.5〜7.5、またはpH6.8〜7.2であり得る。好ましくは、組成物はpH7.0を有し得る。
【００２１】
また、本発明による医薬組成物は、酢酸またはクエン酸をさらに含み得る。
【００２２】
本明細書で用いられる酢酸は、式CH3COOHで表される弱酸である。本発明において、これは、酢酸塩の形態でも用いられ得る。酢酸塩の一の実施態様は、酢酸ナトリウム三水和物であり得る。酢酸またはその塩は、組成物の全容量に対して0.01％（w/v）〜1.5％（w/v）の量で含まれ得る。また、酢酸またはその塩は、0.1％（w/v）〜0.8％（w/v）、好ましくは0.2％（w/v）〜0.5％（w/v）の量で含まれ得る。
【００２３】
本明細書で用いられるクエン酸は、式C6H8O7で表される化合物である。本発明において、これは、クエン酸塩の形態でも用いられ得る。クエン酸塩は、クエン酸の誘導体であり、クエン酸塩の実施態様は、クエン酸ナトリウムおよびクエン酸ナトリウム二水和物であり得る。クエン酸およびその塩は、一般的にpH変化を軽減するために緩衝液として用いられ、本発明は、当該技術分野において通常用いられる量より極めて多い量のクエン酸またはその塩を必要とする。この場合、クエン酸またはその塩は、0.01％（w/v）〜0.5％（w/v）の量で含まれ得る。また、クエン酸またはその塩は、0.05％（w/v）〜0.25％（w/v）、好ましくは0.1％（w/v）〜0.3％（w/v）の量で含まれ得る。
【００２４】
本発明による組成物は、眼科適用に利用可能な製剤に製造され得る。より具体的には、製剤は、例えば、液剤、ローション剤、硬膏剤、ゲル剤、クリーム剤、ペースト剤、スプレー剤、懸濁液、分散剤、ヒドロゲル剤、軟膏剤、オイルまたは発泡剤などを含み得る。
【００２５】
組成物は、0.01％（w/v）〜1.5％（w/v）、好ましくは0.05％（w/v）〜0.5％（w/v）のチモシンβ4を含み得る。
【００２６】
また、組成物は、0.08〜2.0 mlの総1日用量を提供するために単位剤形に製剤化され得て、この目的のために、組成物の定量的投与を可能にし得る眼科使用のための容器に適切に充填され得る。この目的のために、組成物は、1回または数回用いられ得る0.01〜10 mlの用量を備える単位剤形に製剤化され得る。また、医薬組成物を0.08〜2.0 mlの総1日用量で適切に提供するために、組成物は、1滴当たり0.01〜2.0 mlを滴下する点眼容器に含まれ得る。
【００２７】
本発明の別の態様によれば、ドライアイ症候群の処置のための方法であって、対象体に上記組成物を投与することを含む方法が提供される。
【００２８】
より具体的には、本発明は、活性成分としてチモシンβ4を含む有効量の組成物と眼組織を接触させることを含む、処置方法を提供する。直接投与の例としては、眼組織と組成物を接触させるために、例えば、液剤、ローション剤、硬膏剤、ゲル剤、クリーム剤、ペースト剤、スプレー剤、懸濁液、分散剤、ヒドロゲル剤、軟膏剤、オイルまたは発泡剤の形態で組成物を対象体に直接適用することが挙げられ得る。
【００２９】
また、組成物は、0.08〜2.0 mlの総1日用量を提供するために単位剤形に製剤化され得て、この目的のために、組成物の定量的投与を可能にし得る眼科使用のための容器に適切に充填され得る。この目的のために、組成物は、1回または数回用いられ得る0.01〜10 mlの用量を備える単位剤形に製剤化され得る。また、医薬組成物を0.08〜2.0 mlの総1日用量で適切に提供するために、組成物は、1滴当たり0.01〜2.0 mlを滴下する点眼容器に含まれ得る。好ましくは、組成物は、上記用量でb.i.d.からq.i.d.投与され得る。
【００３０】
本発明の別の態様によれば、上記方法で製造されるチモシンβ4を含む点眼剤が提供される。上記のように製剤化されるチモシンβ4は、酸素または熱に曝露されず、それ故に長期間安定でその活性を維持し得る。チモシンβ4の活性が長時間維持されるため、本発明による点眼剤は、その薬理作用を長期間維持し得る。
【００３１】
（発明の形態）
以下に、本発明をより良く理解するために、本発明を以下の実施例によってより詳細に記載する。しかしながら、これらの実施態様は、種々の改変または改良を含み得て、本発明の範囲が以下の実施例の範囲内に限定されると解されない。
【００３２】
点眼剤の製造方法
本発明の点眼剤を以下の方法により製造し得る。
【００３３】
1-1. 秤量
原料、試薬および溶媒をそれぞれ秤量する。
【００３４】
1-2. 混合
秤量した試薬をそれぞれ溶媒としての注射用滅菌水に入れ、混合して完全に溶解させる。その後、秤量した量のチモシンβ4を混合物に加え、完全に溶解するまで混合する。
【００３５】
1-3. pH調整
混合の完了後、水酸化ナトリウムおよび塩酸を用いて溶液をpH7.0に調整する。
【００３６】
1-4. ろ過
調整後、溶液を0.2μmフィルターでろ過する。
【００３７】
1-5. 充填
ろ過後、混合物を低密度ポリエチレン容器に充填し、続いて容器を密閉する。
【００３８】
［薬物］
本発明の所望の目的のために、チモシンβ4は、組成物の全容量に対して、好ましくは0.05〜0.5％（w/v）の濃度、最も好ましくは0.1％（w/v）の濃度で含まれる。
【００３９】
［pH調節剤］
眼科製剤は、使用時の快適性、耐性および安定性の観点から、涙液の生理的pHと同様のpH値を有するように製造され得る。
【００４０】
涙液のpH値は、通常およそ7.4である。しかしながら、眼がその滲出液またはまばたきにより刺激されるとき、涙液のpHは低下する。反対に、眼瞼が長時間開いたままである場合、涙液膜は、周囲空気中のCO2の分圧との平衡によりアルキル化され、それ故に、涙液のpHはpH9以上になる。
【００４１】
本明細書において製造される眼科製剤は、pH3.5〜11.5、好ましくはpH3.5〜9.0、より好ましくはpH4.5〜8.0、最も好ましくはpH5.5〜7.8を有し得る。この目的のために、本発明の組成物は、塩酸および／または水酸化ナトリウムをさらに含み得る。
【００４２】
［他の添加剤］
本発明の所望の効果のために、組成物は、組成物の全容量に対して、0.5〜0.7％（w/v）の塩化ナトリウム、0.05〜0.09％（w/v）の塩化カリウム、0.03〜0.06％（w/v）の塩化カルシウム二水和物、および0.01〜0.05％（w/v）の塩化マグネシウム六水和物を含み得る。最も好ましくは、組成物は、組成物の全容量に対して、0.6〜0.7％（w/v）の塩化ナトリウム、0.07〜0.08％（w/v）の塩化カリウム、0.04〜0.05％（w/v）の塩化カルシウム二水和物、および0.02〜0.04％（w/v）の塩化マグネシウム六水和物を含む。
【００４３】
一の実施態様によれば、本発明の組成物は、本発明の最も優れた効果をもたらすために、組成物の全容量に対して、0.2〜0.5％（w/v）の酢酸ナトリウム三水和物および／または0.1〜0.3％（w/v）のクエン酸ナトリウム二水和物をさらに含み得る。
【００４４】
［用量および投与］
0.05〜0.5％（w/v）のチモシンβ4を含む本発明の組成物は、0.08〜2 mlの総1日用量で眼組織と1日1回または数回接触させるとき、眼の刺激および他の副作用を最小限にしながら最適の効果を示し得る。この目的のために、本発明の組成物は、1日1回または数回の使用のために0.01〜10 mlの容量を備える単位剤形に製剤化され得る。また、このような単位剤形は、上記の総1日用量を適切に提供するように、1滴当たり0.01〜2.0 mlを滴下する点眼容器に含まれ得る。
【実施例】
【００４５】
実施例1〜実施例5：点眼剤の製造
点眼剤を以下の表1に示す組成比率で製造した。他に断らない限り、表1の数値は、組成物の全容量に対する濃度の％（w/v）を指す。例えば、実施例1のチモシンβ4の濃度は、0.05％（w/v）であり、実施例2のチモシンβ4の濃度は、0.1％（w/v）であり、実施例3のチモシンβ4の濃度は、0.5％（w/v）であり、実施例4のチモシンβ4の濃度は、1％（w/v）であり、実施例5のチモシンβ4の濃度は、2％（w/v）である。
【表１】
0006634451.tif 000002
【００４６】
一方、比較例1は、市場で市販されている0.05％（w/v）のシクロスポリンを含む、RESTASISTMであった。
【００４７】
実験的実施例1：貯蔵安定性試験
実施例2および比較例1の製剤の貯蔵後の安定性を調べるために、両点眼剤を室温（15〜25℃）および冷蔵下で70日間貯蔵した。その後、組成物の外観を観察し、組成物中の薬物の力価をHPLCにより測定した。製造直後では、実施例2におけるチモシンβ4の含有量は、1 mg/mlであり、一方、比較例1におけるシクロスポリンの含有量は、0.5 mg/mlであった。次の条件下でHPLCを実施した。
カラム：Waters Delta-Pak C18 5μm (3.9 X 150 mm)
移動相A：0.1％TFAを含む水、B：0.1％TFAを含むアセトニトリル
流速：1.0 mL/分
検出：UV 205 nm
カラム温度：室温
注入量：10 mL
【表２】
0006634451.tif 000003
【００４８】
結果を次の表3に示す。
【表３】
0006634451.tif 000004
【００４９】
このように、実施例2の組成物は、比較例1と比較してより優れた貯蔵安定性を示す。
【００５０】
実験的実施例2：ドライアイ症状の改善の検討
プラセボコントロール（チモシンβ4なしの製剤）と比較して、チモシンβ4の種々の濃度を含む実施例2、4および5の組成物によりドライアイ症候群を処置する効果を測定するために、ドライアイ症候群のマウスモデルで実験を行った。ドライアイ症状を誘導するために、8週齢の雌のマウスC57BL/6を用い、各群当たり8匹のマウスをCAE（Controlled Adverse Environment、制御された悪環境）下実験に供した。涙液の生成を阻害し、ドライアイ疾患症状を悪化させるために、試験薬物投与後6日目と10日目の間に0.5 mg/0.2 mlのスコポラミン臭化水素酸塩をq.i.d.注射した。試験薬物を14日間1日4回0.005 mlの総1日用量で投与し、処置効果を測定するために、角膜表面フルオレセイン染色試験を試験薬物投与後9、12および14日目に実施し、角膜表面フルオレセイン染色スコアの変化を観察した。参考までに、角膜表面フルオレセイン染色スコアは、ドライアイ症候群の症状を定量化する方法であり、スコアの減少は症状の改善を意味する。
【００５１】
実験結果を図1、2および3に示す。
【００５２】
図1および2を参照すると、ベースラインは、ドライアイ症候群を誘導する前の健常なマウスにおける角膜表面フルオレセイン染色スコアを指す。一方、「投与前」は、ドライアイ症候群を誘導した後であるが試験薬物を投与する前であるマウスにおける角膜表面フルオレセイン染色スコアを指す。
【００５３】
図1に示す結果から、プラセボコントロール、実施例4および実施例5は、角膜表面フルオレセイン染色スコアが増加したが、14日目に低い角膜表面フルオレセイン染色スコアを示した。ベースラインと比較して、これらの群で改善効果は観察されなかった。しかしながら、実施例2は、驚くべきことにドライアイ症状を改善する有意な効果を有した。したがって、チモシンβ4の効果は投与される用量に比例しないことが分かった。
【００５４】
図2は、投与後の時間に対する角膜表面フルオレセイン染色スコアのベースラインからの変化を示す。図2に示す結果によれば、実施例2のみがドライアイ症候群を改善した。
【００５５】
図3は、角膜の下領域において測定した角膜表面フルオレセイン染色スコアの変化を示す。図3に示す結果によれば、実施例2および5の両方がドライアイ症候群を改善したが、プラセボコントロールと比較して、実施例2のみが症状を悪化させずにこのような改善を生じた。
【００５６】
したがって、実施例2の組成物がドライアイ症候群の改善に最も効果的であった。
【００５７】
実験的実施例3：ドライアイ症状を改善するための所望の濃度の決定
1日2回実施例1〜3の製剤を投与することによりドライアイ症候群を処置および改善する効果をドライアイ症候群モデルマウスで試験した。ドライアイ症候群の症状を誘導するために、8週齢の雌のマウスC57BL/6を用い、各群当たり5匹のマウスを制御された悪環境（CAE）下実験に供した。涙液の生成を阻害し、ドライアイの症状を悪化させるために、試験薬物投与後6日目と10日目の間に0.5 mg/0.2 mlのスコポラミン臭化水素酸塩をq.i.d.注射した。各試験薬物（実施例1、2および3）を6日間1日2回0.005 mlの総1日用量で投与した。処置効果を測定するために、角膜表面フルオレセイン染色試験を投与前ならびに投与後6日目および13日目にそれぞれ実施し、角膜表面フルオレセイン染色スコアの変化を観察した。
【００５８】
実験結果を図4に示す。
【００５９】
図4に示す結果から、投与前に測定したスコアと比較して、実施例2および3の製剤のb.i.d.投与の実験群が、実施例1の製剤のb.i.d.投与の実験群より角膜表面フルオレセイン染色スコアの大きな減少を示したことが分かる。特に、実施例2のスコアは、実施例3より大きく減少した。
【００６０】
したがって、実施例2の薬物濃度が、実施例1および3と比較して、ドライアイ症候群の改善により効果的である。
【００６１】
実験的実施例4：ドライアイ症状の改善における0.05％（w/v）シクロスポリン（比較例1）との比較
ドライアイ症候群マウスモデルにおいて、ドライアイ症状を改善する効果を実施例2と、アクティブコントロールとしての比較例1とプラセボコントロールとの間で比較した。ドライアイ症候群の症状を誘導するために、8週齢の雌のマウスC57BL/6を用い、各群当たり5匹のマウスを制御された悪環境（CAE）下実験に供した。涙液の生成を阻害し、ドライアイ疾患症状を悪化させるために、試験薬物投与後6日目と10日目の間に0.5 mg/0.2 mlのスコポラミン臭化水素酸塩をq.i.d.注射した。試験薬物を6日間1日2回0.005 mlの総1日用量で投与した。処置効果を測定するために、角膜表面フルオレセイン染色試験を試験薬物投与前ならびに投与後6日目および13日目にそれぞれ実施し、角膜表面フルオレセイン染色スコアの変化を観察した。
【００６２】
実験結果を図5に示す。
【００６３】
図5に示す結果から、投与前に測定したスコアと比較して、実施例2が、アクティブコントロールとしての比較例1より角膜表面フルオレセイン染色スコアの著しく大きな減少を示したことが分かる。より具体的には、実施例2の製剤の投与は、5日目までに角膜表面フルオレセイン染色の有意に減少させた。一方、6日目から、ドライアイ症候群の悪化に対する試験薬物の影響を観察するためにスコポラミンを投与した。結果として、実施例2の投与が、スコポラミンによって引き起こされるドライアイ症候群の悪化を著しく阻害したことが分かった。
【００６４】
実験的実施例5：臨床試験（フェーズII）
上記の非臨床結果に基づいて、ドライアイ症候群の兆候および症状に関して実施例2とプラセボコントロールとの間の安全性および有効性を比較するために、フェーズIIの臨床試験を実施した。試験薬物の安全性および有効性に関して0.1％（w/v）チモシンβ4点眼剤をプラセボコントロールと比較するために、制御された悪環境（CAE）下一施設において二重盲検およびランダム割り当てでこの臨床試験を実施した。より具体的には、各群の36名をそれぞれプラセボコントロールおよび実施例2の製剤の投与に供した。1滴当たり40μlを滴下するためのスクイズボトルを30日間1日2回1または2滴投与するために用いた。処置効果を測定するために、角膜表面フルオレセイン染色試験を投与前および投与後30日目にそれぞれ実施し、角膜表面フルオレセイン染色スコアの変化を観察した。
【００６５】
実験結果を図6に示す。
【００６６】
図6に示す結果から、角膜表面フルオレセイン染色の著しい差異が、プラセボコントロールと比較して実施例2の製剤を1日2回投与した後に見られた。したがって、非臨床結果に一致して、この臨床試験の結果は、実施例2がドライアイ症候群の処置に効果的であることを確認する。
【００６７】
実験的実施例6：刺激試験
点眼剤によって引き起こされる刺激の程度を実施例2と比較例1との間で比較した。点眼剤の投与後、不快感の程度、例えば眼のチクチクした痛みまたは視覚のぼけを、次のように1〜5のスケールに準拠して測定した：1-非常に不満；2-不満；3-適度；4-満足；および5-非常に満足。
【００６８】
次の表4に示すように、結果が測定された。
【表４】
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【００６９】
したがって、実施例2は、比較例1と比較して、ユーザーがより少ない刺激でより快適に感じることを可能にした。
【００７０】
配列表フリーテキスト
配列番号1：SDKPDMAEIE KFDKSKLKKT ETQEKNPLPS KETIEQEKQA GES
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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