(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
大腸癌に罹患していることが疑われる患者の、アフリベルセプト又はｚｉｖ−アフリベルセプトを用いた処置の結果を予測するためのバイオマーカーとしてのインターロイキン−８（ＩＬ−８）の使用。
【請求項２】
大腸癌に罹患していることが疑われる患者が、該大腸癌のアフリベルセプト治療又はｚｉｖ−アフリベルセプト治療の候補であるかどうかを決定するためのインターロイキン−８（ＩＬ−８）の使用方法であって、患者の生物学的サンプルを少なくとも１つのアッセイにかけて、ベースラインでＩＬ−８レベルを測定する工程を含み、ここでＩＬ−８の発現の参照レベルと比較して低い生物学的サンプルのＩＬ−８レベルは、該患者が大腸癌の治療の候補であることを示す、上記方法。
【請求項３】
大腸癌に罹患していることが疑われる患者が、該大腸癌のアフリベルセプト治療又はｚｉｖ−アフリベルセプト治療の候補であるかどうかを決定するためのインターロイキン−８（ＩＬ−８）の使用方法であって、患者の生物学的サンプルを少なくとも１つのアッセイにかけて、ベースラインでＩＬ−８レベルを測定する工程を含み、ここでＩＬ−８の発現の参照レベルと比較して高い生物学的サンプルのＩＬ−８レベルは、該患者が大腸癌の治療の候補ではないことを示す、上記方法。
【請求項４】
ＩＬ−８の発現の参照レベルが１０と３０ｐｇ／ｍｌとの間である、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
ＩＬ−８の発現の参照レベルが１９ｐｇ／ｍｌである、請求項２〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
大腸癌の処置についての治療有効性を最適化するためのインターロイキン−８（ＩＬ−８）の使用方法であって：
・  アフリベルセプト、又はｚｉｖ−アフリベルセプトを投与することによって処置された患者から得られた生物学的サンプル中のインターロイキン−８（ＩＬ−８）のレベルを決定する工程を含み、
ここで、インターロイキン−８（ＩＬ−８）レベルの増加は、その後の投与におけるアフリベルセプト、又はｚｉｖ−アフリベルセプトの量を減少する必要性を示す、上記方法。
【請求項７】
大腸癌に罹患していることが疑われる患者の処置におけるアフリベルセプト、又はｚｉｖ−アフリベルセプトの安全な使用を可能にするためにリスクを管理する方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）  アフリベルセプト、又はｚｉｖ−アフリベルセプトを用いた処置の開始前に、患者からの生物学的サンプル中のインターロイキン−８（ＩＬ−８）レベルを決定する工程；
（ｂ）  処置と並行して、患者からの生物学的サンプル中のインターロイキン−８（ＩＬ−８）レベルを決定する工程、
（ｃ）  工程（ｂ）において決定されたインターロイキン−８（ＩＬ−８）レベルを、工程（ａ）において決定されたレベルと比較する工程
を含み、
それにより、工程（ａ）のサンプルにおけるレベルと比較した工程（ｂ）のサンプルにおけるより高いインターロイキン−８（ＩＬ−８）レベルは、該患者が詳しくモニタリングされるべきであることを示す、上記方法。
【請求項８】
生物学的サンプルは、血液、血清及び血漿からなる群より選択される、請求項２〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
大腸癌が切除不能な大腸癌である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
決定されるインターロイキン−８（ＩＬ−８）レベルが循環レベルである、請求項２〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
大腸癌に罹患していることが疑われる患者を処置するための、アフリベルセプト、又はｚｉｖ−アフリベルセプトを含む医薬組成物であって、ここで該医薬組成物は、患者の生物学的サンプル中のＩＬ−８レベルが、ＩＬ−８の発現の参照レベルより低い場合に投与される、上記医薬組成物。
【請求項１２】
大腸癌に罹患していることが疑われる患者が、アフリベルセプト治療又はｚｉｖ−アフリベルセプト治療の候補であるかどうかを予測するためのキットであって、該キットは：
ａ）  インターロイキン−８（ＩＬ−８）レベルを測定するための手段；及び
ｂ）  大腸癌に罹患していることが疑われる患者が、アフリベルセプト治療又はｚｉｖ−アフリベルセプト治療の候補であるかどうかを予測する際の該キットの使用のための指示を伝えるラベル
を含む、上記キット。
【請求項１３】
ａ）  包装材料；
ｂ）  インターロイキン−８（ＩＬ−８）レベルを測定するための手段；及び
ｃ）  大腸癌に罹患していることが疑われる患者が、アフリベルセプト治療又はｚｉｖ−アフリベルセプト治療の候補であるかどうかを予測する際の前記ｂ）の手段の使用のための指示を伝えるラベル
を含む組み合わせ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌に罹患していることが疑われる患者のアフリベルセプト、又はziv-アフリベルセプトを用いた処置の結果を予測するためのバイオマーカーとしてのインターロイキン8(IL8)の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アフリベルセプト、又はziv-アフリベルセプト（VEGFR1R2-Fc.DELTA.C1 Flt1D2.Flk1D3.Fc.DELTA.C1又はAVE0005とも呼ばれる）は、ホモダイマータンパク質であり、各ダイマーは２つの同一のモノマーを含み、これらはそれぞれ、VEGFR1受容体のD2 Igドメインに融合され、それ自体はVEGFR2受容体のD3 Igドメイン、そしてIgG1のFcドメインに融合されたVEGFR1のシグナル配列を含む融合タンパク質である。
【０００３】
タンパク質鎖は、N-アセチル-グルコサミン、フコース、ガラクトース、マンノース及びシアル酸でグリコシル化されて炭化水素構造に寄与する。N-連結オリゴ糖は、主に０、１又は２つの末端シアル酸を含む二分岐構造からなる。モノマーは配列番号１のアミノ酸配列を有する。
【０００４】
米国食品医薬品局(FDA)は、血管新生(滲出型)加齢性黄斑変性(AMD)を有する患者の処置についてアフリベルセプトを商標名EYLEA(R)で既に承認した。特に、EYLEA(R)は、硝子体内注射のために生成、加工及び製剤化されたアフリベルセプトについての商標名である。
【０００５】
癌適応症についてのアフリベルセプト(zaltraP)の登録のときに、及びAMDを処置する際のアフリベルセプトの承認された使用を考慮して、FDAは異なる名称(ziv-アフリベルセプト)を癌の処置における化合物の使用のために与えるよう要請した。従って、ziv-アフリ
ベルセプトは、静脈内注入による注射のために生成、加工、及び製剤化されたアフリベルセプトを含む医薬組成物を指名するためにFDAにより受け入れられた米国一般名(USAN)で
ある。Ziv-アフリベルセプトは、切除不能な大腸癌(mCRC)の処置のために商標名ZALTRAP(R)での販売についてFDAにより承認されている。
【０００６】
欧州医薬品庁(EMA)はzaltrapも承認したが、化合物について別の名称を要請しなかった。従って、欧州連合では名称「アフリベルセプト」が適応症にかかわらず使用される。
【０００７】
ZALTRAP(R)及びEYLEA(R)は、わずかに異なるプロセスにより得られる。これらは両方ともアフリベルセプト又はziv-アフリベルセプトを含有するが、アフリベルセプト又はziv-アフリベルセプトの凝集体の比率は、ZALTRAP(R)及びEYLEA(R)でわずかに異なる。
【０００８】
ZALTRAP(R)承認は、VELOUR試験-多施設無作為プラセボ対照フェーズIII試験から得られたデータに基づき、これはオキサリプラチン含有レジメンで以前に処置されたmCRCを有する患者のためのFOLFIRIレジメンと組み合わせてプラセボに対してアフリベルセプトの有効性を比較した。
【０００９】
AFFIRM、非盲検非比較フェーズII研究が、mCRCを有する患者における第一選択治療として施されるアフリベルセプト及び改変FOLFOX6(mFOLFOX6)の組み合わせを評価するために行われた。主要評価項目は12ヶ月無進行生存(PFS)であったが、バイオマーカーの調査は副次的目的の中にあった。
【００１０】
アフリベルセプトの有効性及び安全性に関連する鍵となる因子を理解するための試みにおいて、AFFIRM研究に参加している患者から将来を見越して集められた腫瘍組織及び連続的にサンプリングされた血漿においてアフリベルセプト処置のためのバイオマーカーを評価する調査が行われた。
【００１１】
血漿タンパク質、及び血管新生経路遺伝子におにおける一塩基多型(SNP)又はmCRの主要な発癌ドライバーにおける体細胞変異のいずれかを表す遺伝子変異体が、それらがPFSに関してアフリベルセプトに対する応答を予測し得るかどうかを評価するために分析された。続いて、これらのマーカーのいずれかが、胃腸穿孔、血栓症、高血圧及び蛋白尿のような抗血管新生薬誘導AEと相関するかどうかも評価された。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
アフリベルセプトによる癌の処置の有効性及び安全性にもかかわらず、処置からより多くの利益を得るはずである患者をより良好に同定する目標は残ったままである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
ベースラインでの高いIL8レベルがより短い生存期間と相関し、そして処置の間にIL8レベルが増加する患者は進行する可能性がより高いということが今や発見された。このことは、ベースラインで又は処置の間に高いIL8レベルを有する患者は、アフリベルセプト治療の間の疾患進行の危険性が高いということを示唆する。
【００１４】
腫瘍の発生及び進行におけるIL8の役割は先行技術において示唆されている。
【００１５】
フェーズII試験において、肝細胞癌患者はベバシズマブを投与された(Boige V, Malka D, Bourredjem A et al. Efficacy, safety, and biomarkers of single-agent bevacizumab therapy in patients with advanced hepatocellular carcinoma. Oncologist 2012;
17: 1063-1072)。循環内皮細胞(CEC)及び血漿サイトカイン及び血管新生因子(CAF)をベースライン及び処置の間中測定した。
【００１６】
この研究は、上昇したベースラインのIL-8(80pg/mlより高い)及びIL-6レベルが、より短い無進行生存(PFS)間隔及びより短い全生存(OS)期間の両方と相関するということを示した。
【００１７】
しかし著者らは、ソラフェニブを用いた別の研究を記載し、ここでは逆に、IL-8がPFS結果と相関しない唯一の血清サイトカインであった。
【００１８】
別のフェーズII試験において、切除不能な大腸癌(mCRC)患者はベバシズマブを投与された(Kopetz S, Hoff PM, Morris JS et al. Phase II trial of infusional fluorouracil, irinotecan, and bevacizumab for metastatic colorectal cancer: efficacy and circulating angiogenic biomarkers associated with therapeutic resistance. J Clin Oncol 2010; 28: 453-459)。
【００１９】
37のCAFのレベルをベースラインで、処置の間、及び進行性疾患(PD)の時点で評価した。
【００２０】
著者らは、3.7pg/mlの中央値より高い上昇したベースラインIL8はより短いPFS期間と関連すると結論づけた。 
【００２１】
これらの結果は、抗体であるベバシズマブを用いて得られた。アフリベルセプトは抗体ではなく融合タンパク質であり、従って異なる作用様式を有する。
【００２２】
別の薬物を用いて得られた結果から、所定の薬物による癌処置の有効性に対するバイオマーカーの効果を推測することは不可能である。
【００２３】
もっと強い理由から、患者が処置の候補とみなされる閾値の上又は下の閾値を、２つの異なる薬物の間に外挿することはできない。
【００２４】
本発明は、癌に罹患していることが疑われる患者のアフリベルセプト、又はziv-アフリベルセプトを用いた処置の結果を予測するためのバイオマーカーとしてのインターロイキン-8(IL-8)の使用に関する。
【００２５】
一局面において、本発明は、癌に罹患していることが疑われる患者が該癌のアフリベルセプト治療、又はziv-アフリベルセプト治療の候補であるかどうかを決定する方法を提供し、該方法は、患者の生物学的サンプルを少なくとも１つのアッセイにかけて、ベースラインでＩＬ−８レベルを測定する工程を含み、ここで生物学的サンプルのＩＬ−８レベルがＩＬ−８の発現の参照レベルと比較して低い場合、該患者は癌の治療の候補として同定される。
【００２６】
別の局面において、本発明は、癌に罹患していることが疑われる患者が、該癌のアフリベルセプト治療又はｚｉｖ−アフリベルセプト治療の候補であるかどうかを決定する方法を提供し、該方法は、患者の生物学的サンプルを少なくとも１つのアッセイにかけて、ベースラインでＩＬ−８レベルを測定する工程を含み、ここで生物学的サンプルのＩＬ−８レベルがＩＬ−８の発現の参照レベルと比較して高い場合、該患者は癌の治療の候補ではないと同定される。
【００２７】
一実施態様において、IL-8発現の参照レベルは、約10と約30pg/mlとの間に含まれる。
【００２８】
さらなる実施態様において、IL-8の発現の参照レベルは、約15と約25pg/mlとの間、又は17と約21pg/mlとの間に含まれる。
【００２９】
さらなる実施態様において、IL-8の発現の参照レベルは、約18pg/ml、約19pg/ml又は約20pg/mlである。
【００３０】
本発明はまた、癌を有する患者をアフリベルセプト又はｚｉｖ−アフリベルセプトを用いて処置するための方法に関し、治療有効量のアフリベルセプト、又はｚｉｖ−アフリベルセプトを患者に投与することを含み、ここで患者の生物学的サンプル中のＩＬ−８レベルはＩＬ−８の発現の参照レベルと比較して低い。
【００３１】
本発明はさらに、癌の処置についての治療有効性を最適化する方法に関し、該方法は：ａ）  アフリベルセプト、又はｚｉｖ−アフリベルセプトを、癌に罹患していることが疑われる患者に投与する工程；及び
ｂ）  患者の生物学的サンプル中のインターロイキン−８（ＩＬ−８）のレベルを決定する工程を含み、
ここで、インターロイキン−８（ＩＬ−８）レベルの増加は、その後の投与におけるアフリベルセプト、又はｚｉｖ−アフリベルセプトの量を減少する必要性を示す。
【００３２】
本発明のさらなる目的は、癌に罹患していることが疑われる患者の処置におけるアフリベルセプト、又はｚｉｖ−アフリベルセプトの安全な使用を可能にするためにリスクを管理する方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）  アフリベルセプト、又はｚｉｖ−アフリベルセプトを用いた処置の開始前に、患者からの生物学的サンプル中のインターロイキン−８（ＩＬ−８）レベルを決定する工程；
（ｂ）  処置と並行して、患者からの生物学的サンプル中のインターロイキン−８（ＩＬ−８）レベルを決定する工程、
（ｃ）  工程（ｂ）において決定されたインターロイキン−８（ＩＬ−８）レベルを、工程（ａ）において決定されたレベルと比較する工程
を含み、
それにより、工程（ａ）のサンプルにおけるレベルと比較した工程（ｂ）のサンプルにおけるより高いインターロイキン−８（ＩＬ−８）レベルは、該患者が詳しくモニタリングされるべきであることを示す。
【００３３】
上記の方法の１つの実施態様において、生物学的サンプルは、血液、血清及び血漿からなる群より選択される。
【００３４】
上記の方法の１つの実施態様において、癌は結腸癌、大腸癌又は直腸癌である。
【００３５】
１つのさらなる実施態様において、大腸癌は切除不能な大腸癌である。
【００３６】
本発明の別の実施態様において、被験体はアフリベルセプトで処置され、そしてさらに、オキサリプラチン、5-フルオロウラシル(5-FU)及びフォリン酸(すなわち、FOLFOX処置)、フォリン酸、5-フルオロウラシル及びイリノセタン（irinocetan）(すなわち、FOLFIRI処置)、又は5-フルオロウラシル及びフォリン酸(すなわち、FUFOL又はLV5FU2処置)を用いた化学療法処置を受ける。
【００３７】
化学療法処置は、少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10又は多くとも10、9、8、7、6、5、4、3、2の薬剤を組み合わせてもよく、例えば、オキサリプラチン、5-フルオロウラシル(5-FU)及びフォリン酸の組み合わせ(すなわち、以下の実施例に記載されるようなFOLFOX処置又は改変FOLFOX6処置)、フォリン酸、5-フルオロウラシル及びイリノセタンの組み合わせ(すなわち、FOLFIRI処置)、又は5-フルオロウラシル及びフォリン酸の組み合わせ(すなわち、FUFOL又はLV5FU2処置)。
【００３８】
これに関して、出願WO2012146610は、FOLFIRIと組み合わせたアフリベルセプト又はziv-アフリベルセプトによるmCRCの処置の方法に関する。この出願の内容は、参照により加入される。
【００３９】
上記の方法の１つの実施態様において、治療有効量のアフリベルセプト又はziv-アフリベルセプト、オキサリプラチン、5-フルオロウラシル(5-FU)及びフォリン酸が前記患者に投与される。
【００４０】
上記の方法の１つの実施態様において、治療有効量のアフリベルセプト又はziv-アフリベルセプト、フォリン酸、5- フルオロウラシル(5-FU)およびイリノセタンが前記患者に投与される。
【００４１】
上記の方法の１つのさらなる実施態様において、約200 mg/m2と約600 mg/m2との間に含まれる投薬量でのフォリン酸、約2000 mg/m2と約4000 mg/m2との間に含まれる投薬量での5-フルオロウラシル(5-FU)、約100 mg/m2と約300 mg/m2との間に含まれる投薬量でのイリノセタン及び約1 mg/kgと約10 mg/kgとの間に含まれる投薬量でのアフリベルセプトが患者に投与される。
【００４２】
上記の方法の１つのさらなる実施態様において、約400 mg/m2の投薬量でのフォリン酸、約2800 mg/m2の投薬量での5-フルオロウラシル(5-FU)、約180 mg/m2の投薬量でのイリノセタン、及び約4 mg/kgの投薬量でのアフリベルセプトが患者に投与される。
【００４３】
上記の方法の１つのさらなる実施態様において、フォリン酸は約400 mg/m2の投薬量で静脈内投与され、5-フルオロウラシル(5-FU)は約2800 mg/m2の投薬量で静脈内投与され、イリノセタンは約180 mg/m2の投薬量で静脈内投与され、そしてアフリベルセプトは約4 mg/kgの投薬量で静脈内投与され、そしてここで、組み合わせは、２週ごとに投与される。
【００４４】
上記の方法の１つのさらなる実施態様において、フォリン酸、5-フルオロウラシル(5-FU)、イリノセタン及びアフリベルセプトは、9週と18週との間に含まれる期間の間２週ごとに静脈内投与される。
【００４５】
上記の方法の１つのさらなる実施態様において、フォリン酸はアフリベルセプト投与の直後に静脈内投与される。これはまた、約２時間の期間にわたってアフリベルセプト投与の直後に静脈内投与され得る。
【００４６】
上記の方法の１つのさらなる実施態様において、イリノセタンはアフリベルセプト投与の直後に静脈内投与される。これはまた、約90分間の期間にわたってアフリベルセプト投与の直後に静脈内投与され得る。
【００４７】
上記の方法の１つのさらなる実施態様において、5-フルオロウラシル(5-FU)は、アフリベルセプト投与の直後に投与される。
【００４８】
上記の方法の１つのさらなる実施態様において、第一の量の5-フルオロウラシル(5-FU)が、アフリベルセプト投与の直後に静脈内投与され、そして第二の量の5-FUが第一の量の後に持続注入で静脈内投与される。
【００４９】
上記の方法の１つのさらなる実施態様において、約400 mg/m2の5-フルオロウラシル(5-FU)は、アフリベルセプト投与後に２〜４分の期間にわたって静脈内投与され、そしてここで2400 mg/m2の5-FUは、400 mg/m2の投与後に約４６時間にわたって持続注入で静脈内投与される。
【００５０】
一実施態様において、前記患者は、オキサリプラチン又はベバシズマブに基づく治療で以前に処置されたことがある。
【００５１】
別の実施態様において、前記患者は、化学療法、放射線療法、又は外科手術が不成功であった。
【００５２】
本発明はまた、癌に罹患していることが疑われる患者を処置するためのアフリベルセプト又はziv-アフリベルセプトに関し、ここで患者の生物学的サンプル中のIL-8レベルは、約15と約50pg/mlとの間よりも低い。
【００５３】
本発明はさらに、癌に罹患していることが疑われる患者が、アフリベルセプト治療又はｚｉｖ−アフリベルセプト治療の候補であるかどうかを予測するためのキットに関し、該キットは：
ａ）  インターロイキン−８（ＩＬ−８）レベルを測定するための手段；及び
ｂ）  場合により、癌に罹患していることが疑われる患者が、アフリベルセプト治療又はｚｉｖ−アフリベルセプト治療の候補であるかどうかを予測する際の該キットの使用のための指示を伝えるラベル
を含む。
【００５４】
本発明の別の局面は、
ａ）  包装材料；
ｂ）  インターロイキン−８（ＩＬ−８）レベルを測定するための手段；及び
ｃ）  癌に罹患していることが疑われる患者が、アフリベルセプト治療又はｚｉｖ−アフリベルセプト治療の候補であるかどうかを予測する際の前記キットの使用のための指示を伝えるラベル
を含む製品にさらに関する。
【００５５】
本発明の上記方法及び使用は、例えば、インビトロ又はエクスビボの方法及び使用であってもよい。
【００５６】
IL8タンパク質の発現レベルを測定するための手段は、当該分野で周知であり、そしてELISAアッセイのようなイムノアッセイを含む。IL8タンパク質を測定するための手段は、IL8に特異的に結合する抗体を含む。このような手段は、フルオロフォア又は放射性化合物のような検出可能な化合物で標識され得る。例えば、IL8に特異的に結合するプローブ又は抗体は、検出可能な化合物で標識され得る。あるいは、キットが抗体を含む場合、該キットは検出可能な化合物で標識された二次抗体をさらに含み得、これがIL8に特異的に結合する非標識抗体に結合する。
【００５７】
IL8の発現レベルを測定するための手段はまた、例えば反応及び／又は洗浄緩衝液のような試薬を含み得る。手段は例えばバイアル又はマイクロタイタープレートに存在していても、又はプライマー及びプローブの場合のようにマイクロアレイのような固体支持体に結合されていてもよい。
【００５８】
アフリベルセプト又はziv-アフリベルセプトは、処置しようとする患者に不利益でない製剤で提供される。
【００５９】
一実施態様において、アフリベルセプト又はziv-アフリベルセプトは、最終ｐHに調整された、スクロース及びポリソルベート20(安定剤)、塩化ナトリウム、クエン酸塩緩衝液、及びリン酸ナトリウム緩衝液を含む製剤で提供される。
【００６０】
別の実施態様において、アフリベルセプト又はziv-アフリベルセプトは、２つの製剤体裁（drug product presentations）で供給される: 
- 100mgアフリベルセプト又はziv-アフリベルセプト／4.0mL（名目の濃度)での体裁
- 200mgアフリベルセプト又はziv-アフリベルセプト／8.0mL(名目の濃度)での第二の体裁。
【００６１】
両方の体裁は、25 mg/mLのアフリベルセプト又はziv-アフリベルセプトでの同じ体積の滅菌溶液から製造される。
【００６２】
患者への注入の前に、濃縮液を0.9%塩化ナトリウム溶液又は5%デキストロースで希釈する。
【００６３】
上記の方法又は使用において使用される抗癌剤は、処置しようとする患者に不利益でない薬学的に許容しうる担体、賦形剤又は希釈剤中で提供される。
【００６４】
本発明の組成物において使用され得る薬学的に許容しうる担体及び賦形剤としては、限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、d-a-トコフェロールポリエチレングリコール1000スクシネートのような自己乳化送達系(SEDDS)、Tweensのような医薬投薬形態において使用される界面活性剤、又は他の同様のポリマー送達マトリックス、ヒト血清アルブミンのような血清タンパク質、リン酸塩のような緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、プロタミン硫酸塩のような塩又は電解質、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン-ポリオキシプロピレン-ブロックポリマー、ポリエチレングリコール及び羊毛脂が挙げられる。
【００６５】
当業者には当然のことながら、組成物は、意図された投与経路と適合するように適切に製剤化される。適切な投与経路の例としては非経口経路が挙げられ、これらとしては、例えば、筋内、皮下、静脈内、腹腔内又は局所腫瘍内注射が挙げられる。経口経路も使用され得るが、ただし組成物は、胃及び腸の酵素から有効成分を保護することができる、経口投与に適した形態である。
【００６６】
用語「治療」、「治療の」、「処置」及び「処置すること」は、本明細書において、(1) このような用語が適用される疾患状態若しくは状態の症状の進行、増悪又は悪化を遅れさせるか若しくは停止させること；(2) このような用語が適用される疾患状態若しくは状態の症状を軽減するか若しくは寛解を引き起こすこと; 及び／又は(3) このような用語が適用される疾患状態若しくは状態を逆転若しくは治癒させることを目的とする治療方法又はプロセスを特徴づけるために使用される。
【００６７】
本明細書で使用される用語「インターロイキン-8」及び「IL-8」は交換可能に使用され、そして選択的スプライシング変異体、対立遺伝子変異体を含む天然に存在する全てのアイソフォームを指し、そしてIL-8タンパク質の天然に存在する変異体、SNP(一塩基多型)、及び切断形態又は分泌形態を含む。
【００６８】
特に、用語「インターロイキン8」は、UniProtKB/Swiss-Prot受け入れ番号P10145(配列番号2)に対応するアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはこれらからなるポリペプチド及び／又は
ａ）  (a)のポリペプチドの成熟アイソフォームに対応するポリペプチド(すなわち、シグナルペプチドの切断後に得られる)；及び／又は
ｂ）  (a)若しくは(b)のポリペプチドの対立遺伝子変異体；及び／又は
ｃ）  (a)、(b)若しくは(c)のポリペプチドのスプライシング変異体；及び／又は
ｄ）  (a)、(b)、(c)若しくは(d)のポリペプチドの構成的活性変異体
ｅ）  (a)、(b)、(c)、(d)若しくは(e)のポリペプチドのタンパク質分解プロセスにより得られるアイソフォームを指す。
【００６９】
「ポリペプチドのアイソフォーム」は、全長ポリペプチド参照配列に対して少なくとも約50%、55%、60%、65%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、又は99%のアミノ酸配列同一性を有し、かつ同じ生物学的活性を有するポリペプチドを意味する。本出願の文脈において、同一性のパーセンテージは、グローバルアライメントを使用して計算される(すなわち、２つの配列をそれらの全長にわたって比較する）。2つまたはそれ以上の配列の同一性を比較するための方法は当該分野で周知である。例えば、２つの配列の全長を考慮する場合のそれら２つの配列の最適なアライメント（ギャップを含む）を見つけるためにNeedleman-Wunschグローバルアライメントアルゴリズム(Needleman and Wunsch、1970 J. Mol. Biol. 48:443-453)を使用する<<needle>>プログラムが使用され得る。needleプログラムは、例えば、ebi.ac.ukワールドワイドウェブサイトで利用可能である。本発明に従う同一性のパーセントは、10.0に等しい「ギャップ開始（Gap Open）」パラメーター、0.5に等しい「ギャップ伸長（Gap Extend）」パラメーター、及びBlosum62マトリックスを用いてEMBOSS::needle (グローバル)プログラムを使用して計算することができる。
【００７０】
「アイソフォーム」はまた、IL8タンパク質の全ての翻訳後修飾形態を指す。翻訳後修飾アイソフォームは、アセチル化、ホルミル化、リポイル化（lipoylated）、ミリストイル化、パルミトイル化、アルキル化、メチル化、アミド化、グリコシル化、ヒドロキシル化、ニトロシル化、リン酸化、硫酸化、ポリシアル化及びシアル化形態を含み得る。
【００７１】
「IL-8の発現の参照レベル」は、例えば、健常被験体の集団又はアフリベルセプト治療を必要とする被験体の集団において測定されたIL-8の発現レベルにもとづいて決定された、単一の値又は値の範囲として決定され得る。
【００７２】
一実施態様において、IL-8の発現の参照レベルは、アフリベルセプト治療を必要とする被験体の集団において測定されるIL-8の発現レベルに基づいて決定される。
【００７３】
典型的には、分析された集団は、IL-8の発現の測定されたレベルに基づいてパーセンタイルに分割され得る。参照レベルは、アフリベルセプトでの処置が有効である癌に罹患している患者と、アフリベルセプトでの処置が癌を治癒するほど十分有効でない癌に罹患している患者との間の最良の分離をもたらすパーセンタイルとして定義され得る。
【００７４】
以下の実施例１において報告される研究において、IL-8の発現の参照レベルは19pg/mlであった(77パーセンタイル)。
【００７５】
しかし、IL-8の発現の参照レベルは、i)調査した集団のサイズに従って、かつii)IL-8発現を測定するために使用された方法に依存して、変化し得る。
【００７６】
インターロイキン8タンパク質のレベルは、例えば、ELISAアッセイのような免疫学的検出方法を使用して決定され得る。これらの方法は、インターロイキン8タンパク質に結合する抗体、例えば、モノクローナル若しくはポリクローナル抗体、単鎖抗体のような抗体変異形若しくはフラグメント、二特異性抗体（diabody）、ミニボディ（minibody）、単鎖Fvフラグメント(sc(Fv))、Sc(Fv)2抗体、Fabフラグメント若しくはF(ab')2フラグメント、又は単一ドメイン抗体を含む。このような抗体は当該分野で周知であり、市販されている。これらはまた、特にインターロイキン8タンパク質で動物（例えば、ウサギ、ラット又はマウス）を免疫することにより得られる。ウェスタンブロット法、免疫組織化学/免疫蛍光(すなわち、固定された細胞又は組織でのタンパク質検出)、RIA(放射-結合イムノアッセイ（radio-linked immunoassay）)ラジオイムノアッセイ、ELISA(酵素結合免疫吸着測定法)、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射線アッセイ、蛍光イムノアッセイ、例えばFIA(蛍光-結合イムノアッセイ（fluorescence-linked immunoassay）)、化学発光イムノアッセイ、ECLIA(電気化学発光イムノアッセイ)及びプロテインAイムノアッセイのような技術を使用して、競合及び非競合アッセイを含む一連の免疫学的アッセイにおいてタンパク質発現を決定するために抗体を使用し得る。このようなアッセイは通常であり、当業者に周知である(Ausubel et al (1994) Current Protocols in Molecular Biology、Vol. 1、John Wiley & Sons、Inc.、New York)。
【００７７】
インターロイキン8のタンパク質発現はまた、質量分析アッセイ(LC-MS又はLC-MS/MS)のようなプロテオーム法により決定され得る。定性的及び定量的質量分析技術が公知であり、そして当該分野で使用される。この目的のために、マーカータンパク質に特異的な標的ペプチドが選択され、そして安定同位体で標識された合成ペプチドを用いて確立された較正曲線に基づいて定量される。規定された量の同位体標識標的ペプチドを添加した酵素消化物（Enzymatic digests）を、質量分析と連結した液体クロマトグラフィーにより分析した。標識標的ペプチドと非標識標的ペプチドとの間の比を測定して、標的ペプチド濃度、従ってタンパク質マーカー濃度を評価する。
【００７８】
表現「循環IL8」は、血液、血清及び血漿中に存在するIL8タンパク質を意味することを意図される。
【００７９】
「被験体」又は「患者」は、ヒト又はサル、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ウサギ、ウシ、ウマ、ヤギ及び羊のような非ヒト哺乳動物であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００８０】
【図１】図1及び2は、IL8レベルと疾患進行の可能性との間の関係を示す。ベースラインでのIL-8血漿レベルに関して１２ヶ月後の疾患進行の可能性(図1)、並びにベースラインと疾患進行の前の時点での最後の測定点との間のIL8血漿レベルの差異(図2)が示される。手短には、図1は、高いIL8レベルが疾患進行の増加した可能性と相関すること、及びこの効果がFOLFOX処置患者に対してアフリベルセプト処置患者においてわずかにより顕著であったということを示す。
【図２】他方で、図2は、ベースラインと比較したIL8の増加もまた疾患進行に対応するということを示す。IL8の増加は対数尺度でプロットされているので、-3と0との間の数値は<1pg/mLのIL8の増加に対応するが、0と3との間の値は、>1pg/mLの増加を表す。従って、データは、ベースラインと比較したIL8の小さな増加でさえ既にアフリベルセプトアームにおける疾患進行の増加した可能性と対応するということを示す。
【発明を実施するための形態】
【００８１】
〔実施例〕
実施例: AFFIRM研究におけるPFSに対するインターロイキン8の効果
研究ECF10668 (AFFIRM)
EFC10668は:
ｉ) 第一選択処置として２週ごとに静脈内投与される改変FOLFOX6(オキサリプラチン、5-フルオロウラシル(5-FU)及びフォリン酸の組み合わせ)(アームA)；又は
ii) 第一選択処置として２週ごとに静脈内投与される改変FOLFOX6と組み合わせた4mg/kgでのアフリベルセプト；又は
で処置された切除不能な大腸癌(MCRC)を有する患者における有害な効果を比較する無作為化多国籍研究として設計された。
【００８２】
投与のスケジュール
割り当てられたアームによって、患者にアフリベルセプト、その直後にオキサリプラチン、5-フルオロウラシル(5-FU)及びフォリン酸 (改変FOLFOX6レジメン)又は改変FOLFOX6単独のいずれかを静脈内投与した。
【００８３】
進行（又は許容できない毒性、又は同意した脱退）まで２週ごとにこの処置を繰り返した。
【００８４】
投薬量
アフリベルセプトアームに無作為に選ばれた患者に4mg/kg静脈内（IV）を２週ごとに投与した。
【００８５】
両方の処置群の患者に以下を投与した:
・  オキサリプラチン(Eloxatin(R))
・  フォリン酸 (ロイコボリンとしても知られる)
・  5-フルオロウラシル
オキサリプラチン、5-フルオロウラシル、及びフォリン酸の処方:
・  使用した製品は病院/診療所の薬局で入手可能なものであった
・  投与経路: IV
・  用量: オキサリプラチン、フォリン酸、及び5-フルオロウラシルを、以下のように、mFOLFOX6レジメンに従って投与した:
・  １日目に2時間IV注入としてオキサリプラチン 85mg/m2
・  １日目に2時間IV注入としてフォリン酸 350mg/m2
・  １日目にIVボーラスとして5-フルオロウラシル400mg/m2、次いで１日目に開始した46時間持続IV注入として2400mg/m2。
【００８６】
体表面積>2.0m2の場合、オキサリプラチン及び5-FUの実際の用量は、安全性の理由から最大BSA 2.0m2に調整されるべきであった。重篤な毒性の場合には用量減少及び／又は処置遅延及び／又は処置中断する予定であった。改変FOLFOX6レジメンをアフリベルセプト投与後に投与した。
【００８７】
処置期間:
個々の患者についての処置を、進行まで、又は許容できない毒性が発生するまで若しくは患者の脱退の同意まで施した。
【００８８】
処置期間は約12ヶ月と見積もられた。
【００８９】
人口統計学及びベースライン特徴
以下の表1は、バイオマーカー評価可能集団と評価不能集団との間のベースラインでの人口統計学及び患者の特徴を比較する。
【００９０】
患者の起源の地域を除いて全ての特徴は集団間で同様であった：東欧は、バイオマーカー評価不能集団と比較してバイオマーカー評価可能集団において大きな割合を占める傾向があり、そして他の国は小さな割合を占める傾向にあった。
【００９１】
【表１】
0006685276.tif 000002
【００９２】
【表２】
0006685276.tif 000003
【００９３】
ベースラインでの疾患特徴
ベースラインでの疾患特徴は２つの集団で同様であった(以下の表2及び3を参照のこと)。
【００９４】
【表３】
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【００９５】
【表４】
0006685276.tif 000005
【００９６】
安全性評価
A. 曝露の程度
以下の表4は、バイオマーカー評価可能集団の患者を、バイオマーカー評価不能集団の患者よりもわずかに長く処置に曝露されたことを示す(サイクル数の中央値: 9又は10に対して12)。
【００９７】
バイオマーカー評価可能集団における処置アーム間で差異はなかった。
【００９８】
【表５】
0006685276.tif 000006
【００９９】
B. 血漿プロファイリング
27のサイトカイン、増殖因子又は可溶性受容体の血漿濃度を、酵素結合免疫吸着測定法(ELISA)により２つのFluorokine(R) MAPキット(ヒト血管形成パネルA及びヒト好感度サイトカインパネル; R&D Systems)を使用して決定した。競合実験を行い、VEGF-A、VEGF-D及び胎盤増殖因子(PlGF)を検出しながらアフリベルセプトの干渉を調べた。アンジオポエチン-2 (ANGPT2)、SDF1-α、HGF、VEGF-C、可溶性VEGF受容体3(sFLT4、sVEGFR3)及びsVEGFR2を単一ELISA(R&D Systems)により評価した。血漿マーカーをベースライン、最初の研究処置注入の３０日後及び６０日後、並びに最後のアフリベルセプト注入の３０日後に分析した。
【０１００】
統計分析
評価可能なバイオマーカーを用いた患者と評価可能なバイオマーカーを用いていない患者との間の差異を、カテゴリー変数について両側フィッシャー直接確率法、及び連続型変数についてはANOVAを使用して評価した。体細胞変異の不在又は存在を0又は1として、及び存在するマイナー対立遺伝子の数によってSNP遺伝子型を0、1又は2としてコードすることにより、バイオマーカーを定量的変数として分析した。PFSに対するベースラインバイオマーカーの線形効果を、以下の共変数を用いてCox比例ハザードモデルを使用して評価した: 米国東海岸癌臨床試験グループ(ECOG)一般状態(0-1対2)、肝臓のみ転移(有/無)、及び遠隔転移器官の数(1対>1)、処置効果、バイオマーカー効果及びバイオマーカー−処置相互作用効果。後者の２つの効果の有意性を、２自由度Wald検定により一緒に調べた。拡張統計法を補助的方法で記載する。
【０１０１】
結果
AFFIRM試験のITT集団における２３６人の患者のうち、２２７人(96%)が応答について評価可能であった。これらのうち、130人(57%)は少なくとも１つの生物学的サンプルを提供し、そのうち60人(46%)及び70人(54%)はそれぞれmFOLFOX6アーム及びmFOLFOX6＋アフリベルセプトアームに参加した。ベースライン又は有効性及び安全性エンドポイントでの患者のバイオメトリクス、民族性、及び疾患特徴に関して、生物学的サンプルを提供した患者と提供しなかった患者との間で偽発見率(FDR)調整P値0.05で大きな差異はなかった(表1)。少なくとも１つの生物学的サンプルを提供した者のうち、51人(39%)は３つのバイオマーカータイプのそれぞれについてサンプルを提供し、88人(68%)及び97人(74%)の患者はそれぞれのバイオマーカータイプのうち２つ又は１つについてサンプルを提供した。サブ解析（sub-analyses）のために小さすぎる患者群を避けるために、各バイオマーカータイプを別々に分析した。
【０１０２】
有効性についての血漿マーカーのプロファイリング
27のマーカーの血漿レベルを、表５に示されるように、異なる時点（すなわち、ベースライン[87人の患者]；処置開始の30日後及び60日後[82人及び73人の患者]；並びに最後の処置の30日後[56人の患者]）で測定した。
【０１０３】
【表６】
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【０１０４】
表６に示されるように、全てのサイトカインをpg/mlで測定したが、関連モデルについて対称分布又はより小さな数値(ng/ml)を得ることが必要な場合はいくつかの変換を適用した。
【０１０５】
【表７】
0006685276.tif 000008
【０１０６】
我々は、処置との交互作用を可能にしながら、ベースラインでの各血漿マーカーのPFSとの関係を評価した(表7)。最低P値はIL8について得られた(P=0.0211; 交互作用についてFDR=0.596及びP=0.0218)。
【０１０７】
【表８】
0006685276.tif 000009
【０１０８】
Coxモデルは、血漿マーカーとPFSハザード関数のlogとの間の線形関係を仮定するが、大幅に変化する連続的なマーカーを分析する場合この仮定に反し得るので、閾値効果はより関連性があるかもしれない。我々は、処置と血漿マーカーとの交互作用を最大にする最適なカットオフレベルを探すことによりこの可能性を調べた。IL8については、最適カットオフは19 pg/ml(77パーセンタイル)であった。この閾値を用いてIL8を２値変数として分析したモデルは、連続的IL8レベルを用いたモデルよりも良好にフィットした(AIC 469.3対477.6)。低いIL8レベル(≦19 pg/ml、患者の77%)を有する患者は、mFOLFOX6アームよりもアフリベルセプト/mFLOFOX6アームにおいてより長いPFSを示した(表8)。
【０１０９】
【表９】
0006685276.tif 000010
【０１１０】
我々はまた、血漿マーカーの処置関連変化がアフリベルセプト処置結果を予測し得るかどうかを分析した。Coxモデルは、ベースライン血漿レベルの効果、並びにベースライン及び中止、疾患進行又は死亡の前の最後の時点(すなわち、処置の30日目又は60日目)で測定された発現の差異を含んでいたが、処置アームとの交互作用を可能にしていた。IL8は、ベースラインからの変化のPFSに対する有意な効果を有する唯一のマーカーであった(P=0.0018; FDR=0.0478; 表9)。この効果は処置アーム間で変わらなかった(P=0.2028)。高いベースライン又はベースライン後増加したIL8レベルは、12ヶ月での疾患進行のより高い可能性に対応する（図1及び2)。
【０１１１】
【表１０】
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【０１１２】
血漿バイオマーカーをベースラインでのみ測定した場合、IL8はPFSに対して最も顕著な効果を有しており、これはアフリベルセプト処置患者におけるより短いPFSに関連する高い循環IL8 (IL8>19 pg/mL)を伴う閾値効果として最もよく説明された。
【０１１３】
血漿バイオマーカーがベースライン及び処置の間に測定された場合、処置の間に測定された増加したレベルのIL8とともにベースラインでの高い循環IL8レベルは、減少したPFS(FDR=0.0478)と有意に関係していた。
【０１１４】
結論
我々は、ベースラインでの高いIL8レベルがより短い生存期間と相関しており、そして処置の間に増加するレベルのIL8を有する患者はより進行する可能性が高いということを確認した。
【０１１５】
このことは、ベースライン又は処置の間に高いIL8レベルを有する患者は、アフリベルセプト治療の間に疾患進行の増加した危険性があるということを示唆する。
【図１】
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【図２】
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【配列表】
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