(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0006675334.tif 000072
（式中、
Ｘ１は、ＣＲ５又はＮであり；
Ｘ２は、ＣＲ５又はＮであり；
ただし、Ｘ１及びＸ２の両方がＮであることはなく；
Ｒ１は、水素又はＣ１−７アルキルであり；
Ｒ２は、水素、シアノ、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７ハロアルキル又はＣ３−８シクロアルキルであり；
Ｒ３は、水素、ハロ、Ｃ１−７アルキル、又はＣ１−７アルコキシであり；
Ｒ４は、水素、ハロ、Ｃ１−７アルキル、又はＣ１−７アルコキシであり；
各Ｒ５は、独立して、水素、ハロ、Ｃ１−７アルキル、又はＣ１−７アルコキシより選択され；
Ａは、Ｎ−ヘテロシクロアルキル又はＮＲ７Ｒ８であり、ここで、Ｎ−ヘテロシクロアルキルは、１又は２個の窒素環原子を含み、そしてＲ６より選択される１、２、３又は４個の置換基で場合により置換されており；
各Ｒ６は、独立して、水素、Ｃ１−７アルキル、アミノ、アミノ−Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル及びＣ１−７アルコキシ−ヘテロシクロアルキルより選択されるか、又は２個のＲ６が一緒になってＣ１−７アルキレンを形成し；
Ｒ７は、１個の窒素環原子を含むヘテロシクロアルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルは、Ｒ６より選択される１、２、３又は４個の置換基で場合により置換されており；
Ｒ８は、水素、Ｃ１−７アルキル又はＣ３−８シクロアルキルであり；
ただし、Ａが１個の窒素環原子のみを含むＮ−ヘテロシクロアルキルである場合、少なくとも１つのＲ６置換基は、アミノ又はアミノ−Ｃ１−７アルキルである）
の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２】
Ｘ１が、ＣＨ又はＮであり；
Ｘ２が、ＣＲ５であり；
Ｒ１が、Ｃ１−７アルキルであり；
Ｒ２が、水素、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７ハロアルキル又はＣ３−８シクロアルキルであり；
Ｒ３が、水素、ハロ、Ｃ１−７アルキル、又はＣ１−７アルコキシであり；
Ｒ４が、水素、ハロ、Ｃ１−７アルキル、又はＣ１−７アルコキシであり；
Ｒ５が、水素、ハロ、Ｃ１−７アルキル、又はＣ１−７アルコキシであり；
Ａが、Ｎ−ヘテロシクロアルキルであり、ここで、Ｎ−ヘテロシクロアルキルが、１又は２個の窒素環原子を含み、そしてＲ６より選択される１、２、３又は４個の置換基で場合により置換されており；
各Ｒ６が、独立して、水素、Ｃ１−７アルキル、アミノ、アミノ−Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル及びＣ１−７アルコキシ−ヘテロシクロアルキルより選択されるか、又は２個のＲ６が一緒になってＣ１−７アルキレンを形成し；
ただし、Ａが１個の窒素環原子のみを含むＮ−ヘテロシクロアルキルである場合、少なくとも１つのＲ６置換基は、アミノ又はアミノ−Ｃ１−７アルキルである、
請求項１記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項３】
Ｘ１がＣＨである、請求項１又は２記載の化合物、或いはその薬学的に許容し得る塩。
【請求項４】
Ｘ２がＣＨである、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項５】
Ｒ１がＣ１−７アルキルである、請求項１〜４のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項６】
Ｒ１がメチルである、請求項１〜５のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項７】
Ｒ２が水素、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７ハロアルキル又はＣ３−８シクロアルキルである、請求項１〜６のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項８】
Ｒ２が水素、メチル、エチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル又はシクロプロピルである、請求項１〜７のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項９】
Ｒ３が水素、ハロ、又はＣ１−７アルコキシである、請求項１〜８のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１０】
Ｒ３が水素、フルオロ、メトキシ又はエトキシである、請求項１〜９のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１１】
Ｒ４が水素又はハロである、請求項１〜１０のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１２】
Ｒ４が水素又はフルオロである、請求項１〜１１のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１３】
Ｒ４が水素である、請求項１〜１２のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１４】
Ｒ５が水素、ハロ、又はＣ１−７アルコキシである、請求項１〜１３のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１５】
Ｒ５が水素、フルオロ、クロロ又はメトキシである、請求項１〜１４のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１６】
Ｒ５が水素である、請求項１〜１５のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１７】
各Ｒ６が、独立して、Ｃ１−７アルキル、ヘテロシクロアルキル及びＣ１−７アルコキシ−ヘテロシクロアルキルより選択されるか、又は２個のＲ６が一緒になってＣ１−７アルキレンを形成する、請求項１〜１６のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１８】
各Ｒ６が、独立して、メチル、エチル、イソプロピル、メトキシ−アゼチジニル及びピロリジニルより選択されるか、又は２個のＲ６が一緒になってエチレン又はプロピレンを形成する、請求項１〜１７のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１９】
Ｒ７が、Ｒ６より選択される１、２、３又は４個の置換基で場合により置換されているピペラジニルである、請求項１〜１８のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２０】
Ｒ８が水素又はＣ１−７アルキルである、請求項１〜１９のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２１】
Ａが、
【化２】
0006675334.tif 000073
（式中、
Ｙは、Ｎ又はＣＨであり；
Ｒ８は、水素、Ｃ１−７アルキル又はＣ３−８シクロアルキルであり；
Ｒ９は、水素、Ｃ１−７アルキル、又は−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１４Ｒ１５であり；
Ｒ１０は、水素又はＣ１−７アルキルであり；
Ｒ１１は、水素又はＣ１−７アルキルであり；
Ｒ１２は、水素又はＣ１−７アルキルであり；
Ｒ１３は、水素又はＣ１−７アルキルであり；
Ｒ１４及びＲ１５は、独立して、水素、Ｃ１−７アルキル及びＣ３−８シクロアルキルより選択され；
ｎは、０、１又は２であり；
ｍは、０、１、２又は３であり；
又は、Ｒ９とＲ１０が一緒になってＣ１−７アルキレンを形成し；
又は、Ｒ９とＲ１２が一緒になってＣ１−７アルキレンを形成し；
又は、Ｒ１０とＲ１１が一緒になってＣ２−７アルキレンを形成し；
又は、Ｒ１０とＲ１２が一緒になってＣ１−７アルキレンを形成し；
又は、Ｒ１０とＲ１４が一緒になってＣ１−７アルキレンを形成し；
又は、Ｒ１２とＲ１３が一緒になってＣ２−７アルキレンを形成し；
又は、Ｒ１２とＲ１４が一緒になってＣ１−７アルキレンを形成し；
又は、Ｒ１４とＲ１５が一緒になって、アルコキシで場合により置換されているＣ２−７アルキレンを形成し；
ただし、ＹがＣＨである場合、Ｒ９は−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１４Ｒ１５であり；そして
ただし、ＹがＮであり、そしてＲ９が−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１４Ｒ１５である場合、ｍは、２又は３である）
である、請求項１〜２０のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２２】
ＹがＮである、請求項２１記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２３】
ＹがＣＨであり、そしてＲ９が−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１４Ｒ１５である、請求項２１記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２４】
ｎが１である、請求項２１〜２３のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２５】
Ｒ９が水素、ピロリジニル、又はメトキシ−アゼチジニルである、請求項２１、２２、及び２４のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２６】
Ｒ１０が水素、メチル、エチル又はイソプロピルである、請求項２１〜２５のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２７】
Ｒ１１が水素又はメチルである、請求項２１〜２６のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２８】
Ｒ１２が水素又はメチルである、請求項２１〜２７のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２９】
Ｒ１３が水素である、請求項２１〜２８のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項３０】
Ｒ９とＲ１０が一緒になってプロピレンを形成している、請求項２１記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項３１】
Ｒ１０とＲ１１が一緒になってエチレンを形成している、請求項２１記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項３２】
Ｒ１４とＲ１５が一緒になってプロピレン又はブチレンを形成している、請求項２１記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項３３】
Ａが、
【化３】
0006675334.tif 000074
（式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、請求項２１において定義されるとおりであり、Ｒ１６は、水素又はＣ１−７アルキルであり、そしてＲ１７は、Ｃ１−７アルコキシである）
の群より選択される、請求項１記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項３４】
Ａが、
【化４】
0006675334.tif 000075
（式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、請求項２１において定義されるとおりであり、そしてＲ１７は、Ｃ１−７アルコキシである）
の群より選択される、請求項１記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項３５】
Ａが、Ｒ６より選択される１、２、３又は４個の置換基で各々場合により置換されている、ピペラジニル、ジアゼパニル、ピロリジニル及びヘキサヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジニルの群より選択される、請求項１〜２１のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項３６】
ＡがＮＲ７Ｒ８である、請求項１〜２０のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項３７】
Ａが、
【化５】
0006675334.tif 000076
である、請求項２１記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項３８】
Ａが、
【化６】
0006675334.tif 000077
の群より選択される、請求項１〜２１のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項３９】
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−ピペラジン−１−イルベンズアミド；
Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−ピペラジン−１−イルベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｓ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（８ａＲ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（８ａＲ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−（１，４−ジアゼパン−１−イル）−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｓ，５Ｒ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−エトキシベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロベンズアミド；
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２，６−ジフルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−エトキシ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−Ｎ−（８−エチル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−Ｎ−（８−シクロプロピル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２，６−ジフルオロベンズアミド；
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロベンズアミド；
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−［（３Ｓ）−３−ピロリジン−１−イルピロリジン−１−イル］ベンズアミド；
Ｎ−（８−エチル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（８ａＲ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−Ｎ−（８−シクロプロピル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロベンズアミド；
Ｎ−（８−シクロプロピル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｓ）−３−ピロリジン−１−イルピロリジン−１−イル］ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
４−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｓ，５Ｒ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−クロロ−６−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−ピペラジン−１−イルベンズアミド；
２，５−ジフルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−（３−メチルピペラジン−１−イル）ベンズアミド；
２，３−ジフルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−（３−メチルピペラジン−１−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｒ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−ピロリジン−１−イルピロリジン−１−イル］ベンズアミド；
４−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−（３，３−ジメチルピペラジン−１−イル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
Ｎ−（８−シクロプロピル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロベンズアミド；
Ｎ−（８−シクロプロピル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−（３，３−ジメチルピペラジン−１−イル）−２−フルオロベンズアミド；
２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−ピロリジン−１−イルピロリジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（３Ｒ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−（３，３−ジメチルピペラジン−１−イル）−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｓ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−フルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］−Ｎ−［２−メチル−８−（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル］ベンズアミド；
Ｎ−［８−（ジフルオロメチル）−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル］−２−フルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−（３−プロパン−２−イルピペラジン−１−イル）ベンズアミド；
６−［（３Ｒ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ピリジン−３−カルボキサミド；
２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−６−ピペラジン−１−イルピリジン−３−カルボキサミド；
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−（４−ピロリジン−１−イルピペリジン−１−イル）ベンズアミド；及び
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−エトキシ−４−［４−（３−メトキシアゼチジン−１−イル）ピペリジン−１−イル］ベンズアミド
からなる群より選択される、請求項１〜３８のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項４０】
４−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｓ，５Ｒ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｒ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−ピロリジン−１−イルピロリジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（３Ｓ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−フルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］−Ｎ−［２−メチル−８−（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル］ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−ピペラジン−１−イルベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｓ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（８ａＲ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（８ａＲ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−（１，４−ジアゼパン−１−イル）−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｓ，５Ｒ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｓ）−３−ピロリジン−１−イルピロリジン−１−イル］ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
２−クロロ−６−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−ピペラジン−１−イルベンズアミド；
２，５−ジフルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−（３−メチルピペラジン−１−イル）ベンズアミド；
２，３−ジフルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−（３−メチルピペラジン−１−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−（３，３−ジメチルピペラジン−１−イル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−ピロリジン−１−イルピロリジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（３Ｒ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−（３，３−ジメチルピペラジン−１−イル）−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
Ｎ−［８−（ジフルオロメチル）−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル］−２−フルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−（３−プロパン−２−イルピペラジン−１−イル）ベンズアミド；
６−［（３Ｒ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ピリジン−３−カルボキサミド；及び
２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−６−ピペラジン−１−イルピリジン−３−カルボキサミド
からなる群より選択される、請求項１〜３９のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項４１】
４−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｓ，５Ｒ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｒ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−ピロリジン−１−イルピロリジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（３Ｓ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；及び
２−フルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］−Ｎ−［２−メチル−８−（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル］ベンズアミド
からなる群より選択される、請求項１〜４０のいずれか一項記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項４２】
式（ＶＩＩＩ）：
【化７】
0006675334.tif 000078
（式中、
Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、請求項１〜１６のいずれか一項において定義されるとおりであり；
Ｙは、ハロゲン又はトリフルオロメタンスルホナートである）
の化合物、又はその塩。
【請求項４３】
Ｙがブロモである、請求項４２記載の化合物、又はその塩。
【請求項４４】
４−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−ブロモ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；及び
４−ブロモ−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド
からなる群より選択される、請求項４２記載の化合物、又はその塩。
【請求項４５】
請求項１〜４１のいずれか一項記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を調製するための方法であって、式（Ｖ）の化合物の、触媒、配位子、塩基及び溶媒の存在下における、式（ＶＩ）の化合物との高温での反応：
【化８】
0006675334.tif 000079
（式中、Ａ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、請求項１〜３８のいずれか一項において定義されるとおりである）を含む、方法。
【請求項４６】
請求項１〜４１のいずれか一項記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を調製するための方法であって、
ａ）溶媒中、温度８０℃〜２００℃で加熱することによる芳香族求核置換反応；又は
ｂ）溶媒中、温度２０℃〜１００℃で加熱することによる触媒、配位子、塩基の存在下でのBuchwald-Hartwigアミノ化反応
のいずれかでの、式（ＶＩＩＩ）の化合物の、化合物Ｍ−Ａとの反応：
【化９】
0006675334.tif 000080
（式中、
Ａ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、請求項１〜３８のいずれか一項において定義されるとおりであり、
Ｙは、ハロゲン又はトリフルオロメタンスルホナートであり、
Ｍは、水素、ナトリウム又はカリウムであり、Ｍは、Ａの窒素原子を通じてＡと結合している）
を含む、方法。
【請求項４７】
請求項１〜４１のいずれか一項記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を含む、医薬組成物。
【請求項４８】
治療活性物質として使用するための、請求項１〜４１のいずれか一項記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項４９】
ＳＭＮ欠失関連状態の治療又は予防に使用するための、請求項１〜４１のいずれか一項記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項５０】
脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の治療又は予防に使用するための、請求項１〜４１のいずれか一項記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項５１】
ＳＭＮ欠失関連状態を治療又は予防するための、請求項４７記載の医薬組成物。
【請求項５２】
脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を治療又は予防するための、請求項４７記載の医薬組成物。
【請求項５３】
ＳＭＮ欠失関連状態の治療又は予防用の医薬の調製のための、請求項１〜４１のいずれか一項記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩の使用。
【請求項５４】
脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の治療又は予防用の医薬の調製のための、請求項１〜４１のいずれか一項記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
序論
本発明は、ＳＭＮ２遺伝子スプライシング調節薬である化合物、それらの製造、それらを含む医薬組成物及びＳＭＮ欠失関連疾患の処置のための、特に、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための医薬としてのそれらの使用を提供する。
【０００２】
特に、本発明は、式（Ｉ）：
【化１】
0006675334.tif 000002
（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、本明細書に記載されるとおりである）
の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩に関する。
【０００３】
背景技術
脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）は、最も広い意味では、脊髄及び脳幹における進行性の運動ニューロン減少（筋力低下及び筋委縮をもたらす）を特徴とする、遺伝性及び後天性中枢神経系（ＣＮＳ）疾患の集積（collection）を表す。最も一般的な形態のＳＭＡは、運動ニューロン生存（ＳＭＮ）遺伝子における突然変異により引き起こされ、乳幼児から成人に至るまで影響を及ぼす、広範囲にわたる重症度を示す（Crawford and Pardo, Neurobiol. Dis., 1996, 3:97）。
【０００４】
小児ＳＭＡは、この神経変性疾患の最も重篤な形態である。症状には、筋力低下、筋肉の緊張低下、弱い泣き声、弱々しさ（limpness）又はばったり倒れ込む（flop）傾向、哺乳（sucking）又は嚥下困難、肺又は喉における分泌物の蓄積、摂食困難、及び気道感染に対する感受性増加が含まれる。足が腕よりも弱くなる傾向にあり、頭を上げる、上半身を起こす（sitting up）といった、発達の審査事項に達することができない。一般に、症状が早く現れるほど、寿命が短い。運動神経細胞が悪化するので、症状は程なく現れる。重篤な形態の疾患は致命的で、いずれの形態も治療方法は知られていない。重篤な形態のＳＭＡである乳幼児は、呼吸を支援する筋肉が弱いために、呼吸器疾患で死亡することが多い。軽度な形態のＳＭＡである個体は、広範な医療支援が必要な場合もある（特に、スペクトルのより重篤な側にいる（at the more severe end）者では）が、ずっと長く生きる。ＳＭＡ障害の臨床スペクトルは、次の５つに分けられている。
【０００５】
（ａ）０型ＳＭＡ（子宮内ＳＭＡ）は、疾患の最も重篤な形態であり、出生前に始まる。通常、０型ＳＭＡの最初の症状は、妊娠３０週と３６週の間で最初に観測され得る胎児の運動減少である。出生後、これらの新生児は動きがほとんどなく、嚥下及び呼吸について困難を有する。
【０００６】
（ｂ）１型ＳＭＡ（小児ＳＭＡ又はWerdnig-Hoffmann病）は、０ヶ月と６ヶ月の間で症状を示す。ＳＭＡの形態は、やはり極めて重篤である。患者は座る能力を獲得することがなく、通常、換気補助なしでは最初の２年以内で死に至る。
【０００７】
（ｃ）２型ＳＭＡ（中間型ＳＭＡ）は、発症年齢が７〜１８ヶ月である。患者は補助なしで座る能力を獲得するが、自力で立つ、又は歩く能力を獲得することはない。このグループにおける予後は、呼吸器障害の程度に大きく依存する。
【０００８】
（ｄ）３型ＳＭＡ（若年性ＳＭＡ又はKugelberg-Welander病）は、一般に１８ヶ月より後に診断される。３型ＳＭＡの個体は、その疾病経過の間のある時点では自力で歩くことができるが、青年期又は成人期に車いすに束縛されるようになりことが多い。
【０００９】
（ｅ）４型ＳＭＡ（成人発症ＳＭＡ）。通常、青年期後期に舌、手、又は足が弱まり始め、体の他の領域に進行する。成人ＳＭＡの疾病経過はずっと遅く、平均余命にほとんど又は全く影響しない。
【００１０】
ＳＭＮ遺伝子は、連鎖解析により染色体５ｑ内の複合体領域（complex region）にマッピングされている（Lefebvre S. et al., Cell (1995) 80:155）。ヒトでは、この領域には約５０００００塩基対（ｋｂ）の逆位重複が含まれ、ほぼ同じ２コピーのＳＭＮ遺伝子をもたらしている。ＳＭＡは、両染色体上の、遺伝子のテロメア側（telomeric）コピー（ＳＭＮ１）の失活変異又は欠失（ＳＭＮ１遺伝子機能の低下をもたらす）によって引き起こされる。しかし、すべての患者は、遺伝子のセントロメア側（centromeric）コピー（ＳＭＮ２）を維持しており、ＳＭＡ患者におけるＳＭＮ２遺伝子のコピー数は、一般に疾患の重篤度と逆の相関がある；即ち、重篤度の低いＳＭＡの患者では、ＳＭＮ２のコピーが多い。ＳＭＮ２プレ−ｍＲＮＡは、エキソン７における、翻訳上影響のないＣからＴへの変異によって引き起こされる、エキソン７の選択的スプライシングを起こす。その結果、ＳＭＮ２から生成する転写産物の大半は、エキソン７を欠き（Δ７ＳＭＮ２）、不完全なＳＭＮタンパク（機能障害を有し、速やかに分解される）をコードしている。
【００１１】
ＳＭＮタンパクは、ＲＮＡのプロセシング及び代謝において役割を果たしており、ｓｎＲＮＰと称される特定のクラスのＲＮＡ−タンパク質複合体の組み立てを仲介するという、よく特徴付けられた機能を有する。ＳＭＮは、運動ニューロンにおいて他の機能を有する可能性があるが、運動ニューロンの選択的変性を阻止する上でのその役割は、十分立証されていない。
【００１２】
多くの場合、ＳＭＡは、臨床症状に基づき、またＳＭＮ１遺伝子のエキソン７の完全な欠失によって診断される。しかし、症例の約５％において、ＳＭＡは、ＳＭＮ１の失活以外の、遺伝子内の変異により引き起こされており、そのうちのいくつかはわかっているが、その他のものはまだ明らかにされていない。場合によっては、ＳＭＮ１遺伝子試験が実行可能でないか、何の異常も示さない時に、筋電図検査（ＥＭＧ）又は筋生検といった他の試験が示されることがある。
【００１３】
ＳＭＡ患者のための医療的ケアは、現時点では呼吸、栄養及びリハビリテーションケアをはじめとする支持療法に限られており、疾患の根本的な原因に対処するための薬物は知られていない。ＳＭＡに対する現状の処置は、慢性的な運動単位の減少の二次的な影響の予防及び管理からなる。１型ＳＭＡにおける主要な管理問題は、呼吸器系疾患（これは症例の大半における死因である）の予防及び初期処置である。ＳＭＡに苦しむ幼児の中には成人まで成長する者もいるが、１型ＳＭＡである者の平均余命は２年未満である。
【００１４】
ＳＭＡのマウスモデルがいくつか開発されている。特に、ＳＭＮデルタエキソン７（Δ７ＳＭＮ）モデル（Le et al., Hum. Mol. Genet., 2005, 14:845）は、ＳＭＮ２遺伝子と、数コピーのΔ７ＳＭＮ２  ｃＤＮＡの両者を保有し、１型ＳＭＡの表現型における特徴の多くを概括している。Δ７ＳＭＮモデルは、ＳＭＮ２発現研究と、運動機能及び生存の評価の両方に用いることができる。Ｃ／Ｃ−アレルマウスモデル（Jackson Laboratory strain #008714, The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME）は、低重篤度ＳＭＡ疾患のモデルを提供するが、明らかな筋力低下を有していない。このマウスモデルは、マウスＳｍｎ１遺伝子が失活しており、完全なＳＭＮ２遺伝子と、選択的スプライシングを起こすハイブリッドｍＳｍｎ１−ＳＭＮ２遺伝子の両者を保有している。Ｃ／Ｃ−アレルマウスでは、ＳＭＮ２全長（ＦＬ  ＳＭＮ２）ｍＲＮＡと、ＳＭＮタンパクの両者のレベルが低下している。Ｃ／Ｃ−アレルマウスモデルは、ＳＭＮ２発現研究に用いられる。
【００１５】
ＳＭＡの遺伝的基盤及び病態生理の理解が進んだ結果、処置のためのいくつかの戦略が検討されたが、臨床において成功を示したものはまだない。
【００１６】
ウィルス送達ベクターを用いるＳＭＮ１の遺伝子置換及び分化したＳＭＮ１＋／＋幹細胞を用いる細胞置換は、ＳＭＡの動物モデルにおいて有効性を示した。これらのアプローチがヒトに適用できるまでには、安全性及び免疫応答を測定し、また新生児期に処置を開始するための要件に対処するため、更なる研究が必要である。
【００１７】
ＳＭＮ２の選択的スプライシングの修正も、合成核酸（ｉ）及び（ｉｉ）：（ｉ）ＳＭＮ２プレ−ｍＲＮＡ中の配列要素を標的とし、全長ＳＭＮ２  ｍＲＮＡの生成に向かってスプライシング反応の結果を変えるアンチセンスオリゴヌクレオチド（Passini et al., Sci. Transl. Med., 2011, 3:72ra18; and, Hua et al., Nature, 2011, 478:123）、（ｉｉ）スプライシング中に変異断片を置換して、全長ＳＭＮ１  ｍＲＮＡを生成し、完全に機能するＲＮＡ配列を提供するトランス−スプライシングＲＮＡ分子（Coady and Lorson, J Neurosci., 2010, 30:126）を用いて、培養細胞において達成されている。
【００１８】
検討中の他のアプローチには、ＳＭＮレベルを高める、残存ＳＭＮ機能を増進する、又は低下したそのレベルを補う薬物を探索することが含まれる。アミノグリコシドは、異常な停止コドンの翻訳上の読み飛ばし（translational read-through）を促進することにより、Δ７ＳＭＮ２  ｍＲＮＡから生成する、安定化された延長Δ７ＳＭＮタンパクの発現を増進することが示されているが、中枢神経系への浸透が少なく、また反復投与後には毒性がある。アクラルビシン等の化学療法剤は、培養細胞においてＳＭＮタンパクを増加させることが示されているが、これらの薬物の毒性プロファイルは、ＳＭＡ患者における長期使用を禁じるものである。臨床試験中のある種のＳＭＡ処置用薬物には、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤（例えば、酪酸塩、バルプロ酸及びヒドロキシ尿素）及びｍＲＮＡ安定化剤（ｍＲＮＡデキャッピング阻害剤ＲＧ３０３９（Pfizer社））といった転写活性化剤が含まれ、目標は、ＳＭＮ２遺伝子から転写された総ＲＮＡ量を増加させることである。しかし、ＨＤＡＣ阻害剤又はｍＲＮＡ安定化剤の使用は、ＳＭＡの根本的な原因に対処するものではなく、またヒトにおいて、安全上の問題となりうる事項を伴う、転写及び遺伝子発現の全体的な増加をもたらす恐れがある。
【００１９】
別のアプローチでは、オレソキシムのような神経保護剤が研究のために選択されてきた。そのような戦略は、ＳＭＡの処置のために、ＳＭＮを対象としたものではなく、ＳＭＮ欠損運動ニューロンを神経変性から保護することを目的として検討されている。
【００２０】
ＳＭＮ２遺伝子から転写されたＲＮＡへの、ＳＭＮのエキソン７の組み入れを増加させる化合物を同定するために設計された系、及びそのようにして同定されたある種のベンゾオキサゾール及びベンゾイソキサゾール化合物が、国際出願公開公報第ＷＯ２００９／１５１５４６Ａ１号に記載されている。Δ７ＳＭＮ２  ｍＲＮＡから安定化されたＳＭＮタンパクを生成するようなリボゾームのフレームシフティングを引き起こす化合物を同定するために設計された系、及びそのようにして同定されたある種のイソインドリン化合物が、国際出願公開公報第ＷＯ２０１０／０１９２３６Ａ１号及び第ＷＯ２０１３／１１９９１６Ａ２号に記載されている。
【００２１】
ＳＭＡの遺伝的基盤及び病態生理の理解においてなされた進歩にもかかわらず、最も壊滅的な小児神経疾患の一つである脊髄性筋萎縮症の経過を変える化合物を同定することに対する必要性が依然として存在する。
【００２２】
発明の詳細な説明
別途定義しない限り、本明細書において用いられる専門用語及び科学用語はいずれも、本発明が属する分野における当業者によって理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似又は等価の方法及び物質を、本発明の実施又は試験において使用することができるが、適切な方法及び物質を以下に記載する。
【００２３】
本明細書において言及される刊行物、特許出願、特許その他の参考文献はいずれも、その全体が参照により組み入れられる。
【００２４】
別に示さない限り、本明細書において用いられる命名法は、ＩＵＰＡＣ系統的命名法に基づくものである。
【００２５】
別に示さない限り、本明細書において、構造中の炭素、酸素、硫黄又は窒素原子上に見られる空の電子価（open valency）はいずれも、水素の存在を示す。
【００２６】
本明細書に記載の定義は、問題とされる用語が単独で現れているか、組み合わせで現れているかに関わらず適用される。本明細書に記載の定義は、付け足して、例えば「ヘテロシクロアルキルアリール」、「ハロアルキルヘテロアリール」、「アリールアルキルヘテロシクロアルキル」、又は「アルコキシアルキル」のような、化学的に関連する組み合わせを形成することができることが意図される。その組み合わせの最後の成員（member）は、分子の残りの部分と結合している基である。その組み合わせの他の成員は、その結合している基と、文字の列に関して逆順で結合し、例えば、Ｃ１−７アルコキシ−ヘテロシクロアルキルという組み合わせは、Ｃ１−７アルコキシで置換されたヘテロシクロアルキルを指す。
【００２７】
用語「部」は、１つ以上の化学結合により他の原子又は分子と結合して、分子の一部を形成している原子又は化学的に結合した一群の原子を指す。例えば、式（Ｉ）の変数Ａ、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、式（Ｉ）の中核構造と共有結合により結合している部を指す。
【００２８】
用語「１つ以上の」は、置換基の数を表している場合、１個の置換基から、可能な最大数の置換までの範囲、即ち、置換基による、１個の水素の置換からすべての水素の置換までを指す。
【００２９】
用語「場合による」又は「場合により」は、その後に記載された事象又は状況が発生し得るが、発生する必要はないこと、及びその記載には、その事象又は状況が発生している例及び発生していない例が含まれることを指す。
【００３０】
用語「置換基」は、親分子上の水素原子を置換している原子又は一群の原子を指す。
【００３１】
用語「置換されている」は、特定された基が１つ以上の置換基を有することを指す。任意の基が複数の置換基を有することができ、種々の置換基が与えられている場合、その置換基は独立に選択され、同一である必要はない。用語「非置換の」は、特定された基が置換基を有していないことを意味する。用語「場合により置換されている」は、特定された基が非置換であるか、又は、可能な置換基の群から独立に選択される１つ以上の置換基で置換されていることを意味する。置換基の数を表している場合、用語「１つ以上の」は、１個の置換基から、可能な最大数の置換まで、即ち、置換基による、１個の水素の置換からすべての水素の置換までを意味する。
【００３２】
用語「この発明の化合物」及び「本発明の化合物」は、本明細書において開示される化合物及びその立体異性体、互変異性体、溶媒和物、及び塩（例えば、薬学的に許容し得る塩）を指す。
【００３３】
本発明の化合物が固体である場合、これらの化合物ならびにその溶媒和物及び塩は、種々の固体型、特に種々の結晶型で存在する場合があり、それらのすべてが本発明及び特定された式の範囲内であると意図されると当業者には理解される。
【００３４】
用語「薬学的に許容し得る塩」は、生物学的にもその他の面でも好ましからざるものでない塩を指す。薬学的に許容し得る塩には、酸付加塩及び塩基付加塩の両方が含まれる。
【００３５】
用語「薬学的に許容し得る酸付加塩」は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、炭酸、リン酸といった無機酸、及び、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸（maloneic acid）、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、アントラニル酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、エンボン酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、及びサリチル酸といった、有機酸の脂肪族、脂環式（cycloaliphatic）、芳香族、アリール脂肪族（araliphatic）、ヘテロ環式、カルボキシル、及びスルホンの部類より選択される有機酸と共に形成された、薬学的に許容し得る塩を指す。具体的には、本発明の薬学的に許容し得る塩は、塩酸塩、二塩酸塩、又は三塩酸塩、を生成する、塩酸と共に形成された塩であり、より具体的には、塩酸塩である。
【００３６】
用語「薬学的に許容し得る塩基付加塩」は、有機又は無機塩基と共に形成された薬学的に許容し得る塩を指す。許容し得る無機塩基の例には、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、及びアルミニウム塩が含まれる。無毒な有機塩基由来の薬学的に許容し得る塩には、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジエチルアミノエタノール、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン類、ピペリジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、及びポリアミン樹脂といった、１級、２級、及び３級アミン、天然の置換されているアミンを含む置換されているアミン、環状アミン及び塩基性イオン交換樹脂の塩が含まれる。
【００３７】
本明細書において用いられる立体化学の定義及び慣習は一般に、S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York及びEliel, E. and Wilen, S., “Stereochemistry of Organic Compounds”, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994に従う。光学活性化合物を記載するに際し、接頭辞Ｄ及びＬ、又はＲ及びＳは、分子の絶対配置（その分子のキラル中心についての）を指すものとして用いられる。考慮されるキラル中心に結合した置換基を、Cahn、Ingold及びPrelogの順位規則（Cahn et al. Angew. Chem. Inter. Edit. 1966, 5, 385; errata 511）に従って順位付けする。接頭辞Ｄ及びＬ又は（＋）及び（−）は、化合物による平面偏光の回転の記号を指定するのに用いられ、（−）又はＬは、その化合物が左旋性であることを指定する。（＋）又はＤの接頭辞が付いた化合物は、右旋性である。
【００３８】
用語「キラル中心」は、４個の同じでない置換基と結合した炭素原子を指す。用語「キラルな」は、鏡像との重ね合わせができないことを指すが、用語「アキラルな」は、その鏡像との重ね合わせができる実施形態を指す。キラルな分子は光学活性である、即ち、それらは平面偏光の面を回転させる能力を有する。
【００３９】
本発明の化合物は、１個以上のキラル中心を有していてよく、光学的に純粋なエナンチオマー、エナンチオマーの混合物（例えばラセミ体のような）、光学的に純粋なジアステレオアイソマー、ジアステレオアイソマーの混合物、ジアステレオアイソメリックなラセミ体又はジアステレオアイソメリックなラセミ体の混合物の形態で存在し得る。化学構造中にキラル中心が存在するときには常に、そのキラル中心に関連するすべての立体異性体が本発明に包含されることが意図される。
【００４０】
用語「ハロ」、「ハロゲン」、及び「ハロゲン化物」は、本明細書においては交換可能なものとして用いられ、フルオロ、クロロ、ブロモ、又はヨードを指す。ハロゲンの具体的な例は、フルオロ及びクロロである。
【００４１】
用語「アルキル」は、炭素原子１〜１２個の１価の直鎖状又は分岐鎖状飽和炭化水素基を指す。具体的な実施形態では、アルキルは、１〜７個の炭素原子、より具体的な実施形態では、１〜４個の炭素原子を有する。アルキルの例には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、又はtert−ブチルが含まれる。アルキルの具体的な例は、メチル、エチル及びイソプロピルである。
【００４２】
用語「ハロアルキル」は、アルキル基であって、そのアルキル基の水素原子のうち少なくとも１個が、同一又は異なるハロゲン原子、特にフルオロ原子で置換されているものを指す。ハロアルキルの例には、モノフルオロ−、ジフルオロ−又はトリフルオロ−メチル、−エチル又は−プロピル、例えば、３，３，３−トリフルオロプロピル、２−フルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、フルオロメチル、又はトリフルオロメチル等が含まれる。用語「ペルハロアルキル」は、アルキル基であって、そのアルキル基のすべての水素原子が、同一又は異なるハロゲン原子で置換されているものを指す。ハロアルキルの具体的な例は、トリフルオロメチル及びジフルオロメチルである。
【００４３】
用語「アルコキシ」は、式−Ｏ−Ｒ’（式中、Ｒ’はアルキル基である）の基を指す。アルコキシ部の例には、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、及びtert−ブトキシが含まれる。アルコキシの具体的な例は、メトキシ及びエトキシである。
【００４４】
用語「２環系」は、共通の単結合又は２重結合を介して（縮環２環系）、一連の３個以上の共通の原子を介して（橋架け２環系）又は共通の１個の原子を介して（スピロ２環系）互いに縮合した２個の環を指す。２環系は、飽和、部分不飽和、不飽和又は芳香族であり得る。２環系は、Ｎ、Ｏ及びＳより選択されるヘテロ原子を含んでいてよい。同様に、用語「３環系」は、２環系について記載したようにして互いに縮合した３個の環を指す。
【００４５】
用語「シクロアルキル」は、環炭素原子３〜１０個の飽和単環式又は２環式炭化水素基を指す。具体的な実施形態では、シクロアルキルは、環炭素原子３〜８個の１価の飽和単環式炭化水素基を指す。２環式は、１個以上の炭素原子を共有する２個の飽和炭素環からなることを意味する。具体的なシクロアルキル基は、単環式である。単環式シクロアルキルの例は、シクロプロピル、シクロブタニル、シクロペンチル、シクロヘキシル又はシクロヘプチルである。２環式シクロアルキルの例は、ビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、又はビシクロ［２．２．２］オクタニルである。シクロアルキルの１つの具体的な例は、シクロプロピルである。
【００４６】
用語「ヘテロシクロアルキル」は、環原子３〜９個で、Ｎ、Ｏ及びＳより選択される１、２、又は３個の環ヘテロ原子を含み、残りの環原子は炭素である、飽和又は部分不飽和単、２又は３環系を指す。具体的な実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、環原子４〜７個で、Ｎ、Ｏ及びＳより選択される１、２、又は３個の環ヘテロ原子を含み、残りの環原子は炭素である、１価の飽和単環系である。単環式飽和ヘテロシクロアルキルの例は、アゼチジニル、オキシラニル、アゼチジニル、オキセタニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロ−チエニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、チアゾリジニル、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、１，１−ジオキソ−チオモルホリン−４−イル、アゼパニル、ジアゼパニル、ホモピペラジニル、又はオキサゼパニルである。２環式飽和ヘテロシクロアルキルの例は、８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクチル、キヌクリジニル、８−オキサ−３−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクチル、９−アザ−ビシクロ［３．３．１］ノニル、３−オキサ−９−アザ−ビシクロ［３．３．１］ノニル、又は３−チア−９−アザ−ビシクロ［３．３．１］ノニルである。部分不飽和ヘテロシクロアルキルの例は、ジヒドロフリル、イミダゾリニル、ジヒドロ−オキサゾリル、テトラヒドロ−ピリジニル、又はジヒドロピラニルである。ヘテロシクロアルキルの具体的な例は、１，４−ジアゼパニル、ヘキサヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジニル、ピペリジニル、ピペラジニル及びピロリジニルである。ヘテロシクロアルキルのより具体的な例は、ピペラジニル及びピロリジニルである。
【００４７】
用語「Ｎ−ヘテロシクロアルキル」は、少なくとも１個の窒素環原子を含むヘテロシクロアルキル基であって、そのヘテロシクロアルキル基の、分子の残りの部分との結合点が、窒素環原子を介しているものを指す。Ｎ−ヘテロシクロアルキルの具体的な例は、１，４−ジアゼパニル、ヘキサヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジニル、ピペリジニル、ピペラジニル及びピロリジニルである。Ｎ−ヘテロシクロアルキルのより具体的な例は、ピペラジニル及びピロリジニルである。
【００４８】
化合物に関しての用語「塩基性度」は、本明細書においては、共役酸の酸性度定数の、１０を底とする負の対数（ｐＫａ＝−ｌｏｇＫａ）で表わされる。共役酸のｐＫａが大きいほど、塩基はより強い（ｐＫａ＋ｐＫｂ＝１４）。本願においては、ある原子又は官能基がプロトンを受容するのに適しており、またその共役酸の計算されたｐＫａが少なくとも７である場合、より好ましくは、その共役酸の計算されたｐＫａが少なくとも７．８である場合、最も好ましくは、その共役酸の計算されたｐＫａが少なくとも８である場合に、それを「塩基性である」と称する。ｐＫａ値は、F. Milletti et al., J. Chem. Inf. Model (2007) 47:2172-2181に記載されているようにしてコンピュータ計算されたものである。
【００４９】
用語「アルキレン」は、炭素原子１〜７個の２価直鎖状飽和炭化水素基又は炭素原子３〜７個の２価分岐鎖状飽和炭化水素基を指す。アルキレン基の例には、メチレン、エチレン、プロピレン、２−メチルプロピレン、ブチレン、２−エチルブチレン、ペンチレン、ヘキシレンが含まれる。アルキレンの具体的な例は、エチレン、プロピレン、及びブチレンである。
【００５０】
用語「アミノ」は、式−ＮＲ’Ｒ”（式中、Ｒ’及びＲ”は、独立に水素、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール又は本明細書において記載されるものである）の基を指す。或いは、Ｒ’とＲ”が、それらが結合する窒素と共に、ヘテロシクロアルキルを形成してもよい。用語「１級アミノ」は、Ｒ’とＲ”の両方が水素である基を指す。用語「２級アミノ」は、Ｒ’が水素であり、Ｒ”が水素以外の基である基を指す。用語「３級アミノ」は、Ｒ’とＲ”の両方が水素以外である基を指す。具体的な２級及び３級アミンは、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、フェニルアミン、ベンジルアミンジメチルアミン、ジエチルアミン、ジプロピルアミン及びジイソプロピルアミンである。
【００５１】
用語「保護基」は、合成化学において従来それに関連付けられていた意味において、多官能性化合物中のある反応性部位を選択的にブロックして、別の保護されていない反応性部位において選択的に化学反応を行いうるようにする基を指す。保護基は、適切な点で除去することができる。例示的な保護基は、アミノ−保護基、カルボキシ−保護基又はヒドロキシ−保護基である。
【００５２】
用語「アミノ−保護基」は、アミノ基を保護することを意図される基を指し、これには、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル（カルボベンジルオキシ、ＣＢＺ）、Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、tert−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、及びトリフルオロアセチルが含まれる。これらの基の更なる例は、T. W. Greene and P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 2nd ed., John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, 1991, chapter 7；E. Haslam, "Protective Groups in Organic Chemistry", J. G. W. McOmie, Ed., Plenum Press, New York, NY, 1973, Chapter 5、及びT.W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley及びSons, New York, NY, 1981に見出される。用語「保護アミノ基」は、アミノ−保護基で置換されているアミノ基を指す。
【００５３】
用語「脱保護」又は「脱保護する」は、工程であって、それによって、選択的な反応が完結した後に保護基が除去される工程を指す。脱保護剤には、酸、塩基又は水素、特に、炭酸カリウム又はナトリウム、アルコール性溶液中の水酸化リチウム、メタノール中の亜鉛、酢酸、トリフルオロ酢酸、パラジウム触媒、又は三臭化ホウ素が含まれる。
【００５４】
用語「医薬活性成分」（又は「ＡＰＩ」）は、医薬組成物中の、特定の生物活性を有する化合物又は分子を指す。
【００５５】
用語「医薬組成物」及び「医薬処方物」（又は「処方物」）は、交換可能なものとして用いられ、それを必要とする哺乳類、例えばヒトに投与される、薬学的に許容し得る賦形剤と共に、治療有効量の医薬活性成分を含む混合物又は溶液を指す。
【００５６】
用語「薬学的に許容し得る」は、医薬組成物を調製するのに有用な、一般に安全であり、無毒で、生物学的にもその他の面でも好ましからざるものでなく、獣医学用、またヒト用の薬学的使用に許容し得る物質の特性を指す。
【００５７】
用語「薬学的に許容し得る賦形剤」、「薬学的に許容し得る担体」及び「治療上不活性な賦形剤」は、交換可能なものとして用いることができ、薬学的製品を処方するのに用いられる崩壊剤、結合剤、増量剤、溶媒、緩衝剤、等張化剤、安定剤、酸化防止剤、界面活性剤、担体、希釈剤又は滑沢剤といった、治療活性を有しておらず、投与を受ける被験体に対して無毒である、医薬組成物中の任意の薬学的に許容し得る成分を指す。
【００５８】
用語「個体」又は「被験体」は、哺乳類を指す。哺乳類には、家畜（例えば、牝ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及びサルなどのヒト以外の霊長類）、ウサギ、及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある実施形態では、個体又は被験体はヒトである。
【００５９】
用語「治療有効量」は、被験体に投与されたとき、（ｉ）特定の疾患、病状又は異常を処置し又は予防する、（ｉｉ）特定の疾患の１つ以上の症状、病状又は異常を減じ、改善し、又は排除する、又は（ｉｉｉ）本明細書に記載の特定の疾患の１つ以上の症状、病状又は異常の発症を予防し又は遅延させる、本発明の化合物又は分子の量を指す。治療有効量は、化合物、処置される疾患状態、処置される疾患の重症度、被験体の年齢及び相対的な健康状態、投与の経路及び形態、担当の医師又は獣医師の判断、及びその他の因子によって変動する。
【００６０】
疾患状態を「処置すること」又はその「処置」という用語には、疾患状態を抑制すること、即ち、疾患状態又はその臨床症状の進行を停止させること、又は疾患状態を緩和すること、即ち、疾患状態又はその臨床症状の一時的又は恒久的な軽減を起こさせることが含まれる。
【００６１】
用語「ＳＭＮ欠失関連疾患」には、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、神経性（neutogenic）先天性多発性関節拘縮症（ＡＭＣ）、筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）が含まれる。用語「脊髄性筋萎縮症」（又はＳＭＡ）は、ＳＭＮ１遺伝子機能の損失をもたらす、両方の染色体上のＳＭＮ１遺伝子における不活化変異又は欠失によって引き起こされる疾患に関するものである。
【００６２】
ＳＭＡの症状には、筋力低下、筋肉の緊張低下、弱い鳴き声、弱い咳、弱々しさ又はばったり倒れ込む傾向、哺乳又は嚥下困難、呼吸困難、肺又は喉における分泌物の蓄積、握り拳が汗ばんでいること、舌がぴくぴくする／振動すること、横になっているときでも頭がしばしば片方に傾くこと、腕よりも弱い傾向にある足、しばしば「カエルの脚」の位置を取る足、摂食困難、気道感染に対する感受性増加、腸／膀胱虚弱、通常よりも軽い体重、補助なしで座れないこと、歩行障害、這って歩くことができない、また低血圧、反射消失、及び前角（anterior hom）細胞の損失に関連する多発性先天性拘縮（関節拘縮症）が含まれる。
【００６３】
用語「脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を処置すること」又は「脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置」には、以下の作用：（ｉ）ＳＭＡの重症度の減少又は改善；（ｉｉ）ＳＭＡの発症の遅延；（ｉｉｉ）ＳＭＡの進行の抑制；（ｉｖ）被験体の入院の減少；（ｖ）被験体についての入院期間の長さの減少；（ｖｉ）被験体の生存の増加；（ｖｉｉ）被験体の生活の質の向上；（ｖｉｉｉ）ＳＭＡに関連する症状の数の減少；（ｉｘ）ＳＭＡに関連する１つ以上の症状の重症度の減少の又は改善；（ｘ）ＳＭＡに関連する症状の継続期間の減少；（ｘｉ）ＳＭＡに関連する症状の再発の予防；（ｘｉｉ）ＳＭＡの症状の進行又は発症の抑制；及び／又は（ｘｉｉｉ）ＳＭＡに関連する症状の進行の抑制のうちの１つ以上が含まれる。
【００６４】
より具体的には、用語「ＳＭＡを処置すること」は、以下の有益な効果のうちの１つ以上を指す：（ｉ）筋力低下の減少；（ｉｉ）筋力の増加；（ｉｉｉ）筋委縮の減少；（ｉｖ）運動機能低下の減少；（ｖ）運動ニューロンの増加；（ｖｉｉ）運動ニューロン損失の減少；（ｖｉｉｉ）ＳＭＮ欠損運動ニューロンの変性からの保護；（ｉｘ）運動機能の増加；（ｘ）肺機能の増進；及び／又は（ｘｉ）肺機能低下の減少。
【００６５】
更に詳細には、用語「ＳＭＡを処置すること」は、ヒト乳児又はヒト幼児が自力で上半身を起こす、或いはヒト乳児、ヒト幼児、ヒト小児又はヒト成人が、自力で起立する、自力で歩行する、自力で走る、自力で呼吸する、自力で寝返りを打つ（to turn during sleep）、又は自力で嚥下する機能的能力又は機能的能力の保持を指す。
【００６６】
疾患状態を「予防すること」又はその「予防」という用語は、その疾患状態を呈する、又はそのようになりやすい可能性があるが、その疾患状態の症状をまだ経験したり、示したりしていない被験体において、その疾患状態の臨床症状を発症させないことを指す。
【００６７】
用語「全長ＳＭＮ２ミニ遺伝子ｍＲＮＡの産生についてのＥＣ１．５ｘ濃度」（又は「ＥＣ１．５ｘミニ遺伝子」）は、全長ＳＭＮ２ミニ遺伝子ｍＲＮＡの量を、ビヒクルで処理した細胞におけるそれに比して１．５倍多いレベルまで増加させるのに有効な試験化合物の濃度と定義される。
【００６８】
用語「ＳＭＮタンパク質発現についてのＥＣ１．５ｘ濃度」（又は「ＥＣ１．５ｘＳＭＮタンパク質」）は、ＳＭＡ患者の線維芽細胞におけるＳＭＮタンパク質を、ビヒクルの対照から産生される量に比して１．５倍の量産生するのに有効な試験化合物の濃度と定義される。
【００６９】
詳細には、本発明は、式（Ｉ）：
【化２】
0006675334.tif 000003
（式中、
Ｘ１は、ＣＲ５又はＮであり；
Ｘ２は、ＣＲ５又はＮであり；ただし、Ｘ１及びＸ２の両方がＮであることはなく；
Ｒ１は、水素又はＣ１−７アルキルであり；
Ｒ２は、水素、シアノ、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７ハロアルキル又はＣ３−８シクロアルキルであり；
Ｒ３は、水素、ハロ、Ｃ１−７アルキル、又はＣ１−７アルコキシであり；
Ｒ４は、水素、ハロ、Ｃ１−７アルキル、又はＣ１−７アルコキシであり；
Ｒ５は、独立に水素、ハロ、Ｃ１−７アルキル、又はＣ１−７アルコキシより選択され；
Ａは、Ｎ−ヘテロシクロアルキル又はＮＲ７Ｒ８であり、ここで、Ｎ−ヘテロシクロアルキルは、１又は２個の窒素環原子を含み、そしてＲ６より選択される１、２、３又は４個の置換基で場合により置換されており；
Ｒ６は、独立に水素、Ｃ１−７アルキル、アミノ、アミノ−Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル及びＣ１−７アルコキシ−ヘテロシクロアルキルより選択されるか、又は２個のＲ６が一緒になってＣ１−７アルキレンを形成し；
Ｒ７は、１個の窒素環原子を含むヘテロシクロアルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキルは、Ｒ６より選択される１、２、３又は４個の置換基で場合により置換されており；
Ｒ８は、水素、Ｃ１−７アルキル又はＣ３−８シクロアルキルであり；
ただし、Ａが１個の窒素環原子のみを含むＮ−ヘテロシクロアルキルである場合、少なくとも１つのＲ６置換基は、アミノ又はアミノ−Ｃ１−７アルキルである）
の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩に関する。
【００７０】
本発明の特定の実施形態は、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩である。
【００７１】
更に、本明細書において開示される特定のＸ１、Ｘ２、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３又はＲ４に関するすべての実施形態は、本明細書において開示される別のＸ１、Ｘ２、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３又はＲ４に関する任意の他の実施形態と組み合わされていてもよいと理解される。
【００７２】
本発明の特定の一実施形態は、式（Ｉ）の化合物であって、
Ｘ１は、ＣＨ又はＮであり；
Ｘ２は、ＣＲ５であり；
Ｒ１は、Ｃ１−７アルキルであり；
Ｒ２は、水素、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７ハロアルキル又はＣ３−８シクロアルキルであり；
Ｒ３は、水素、ハロ、Ｃ１−７アルキル、又はＣ１−７アルコキシであり；
Ｒ４は、水素、ハロ、Ｃ１−７アルキル、又はＣ１−７アルコキシであり；
Ｒ５は、水素、ハロ、Ｃ１−７アルキル、又はＣ１−７アルコキシであり；
Ａは、Ｎ−ヘテロシクロアルキルであり、ここで、Ｎ−ヘテロシクロアルキルは、１又は２個の窒素環原子を含み、そしてＲ６より選択される１、２、３又は４個の置換基で場合により置換されており；
Ｒ６は、独立に水素、Ｃ１−７アルキル、アミノ、アミノ−Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル及びＣ１−７アルコキシ−ヘテロシクロアルキルより選択されるか、又は２個のＲ６が一緒になってＣ１−７アルキレンを形成し；
ただし、Ａが１個の窒素環原子のみを含むＮ−ヘテロシクロアルキルである場合、少なくとも１つのＲ６置換基は、アミノ又はアミノ−Ｃ１−７アルキルである式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩に関する。
【００７３】
本発明の特定の一実施形態は、Ｘ１がＮであり；ただし、Ｘ１及びＸ２の両方がＮであることはない、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００７４】
本発明の特定の一実施形態は、Ｘ１がＣＲ５である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００７５】
本発明の特定の一実施形態は、Ｘ１がＣＨである、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００７６】
本発明の特定の一実施形態は、Ｘ２がＮであり；ただし、Ｘ１及びＸ２の両方がＮであることはない、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００７７】
本発明の特定の一実施形態は、Ｘ２がＣＲ５である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００７８】
本発明の特定の一実施形態は、Ｘ２がＣＨである、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００７９】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ１がＣ１−７アルキル、特にメチルである、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００８０】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ２が水素、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７ハロアルキル又はＣ３−８シクロアルキル；具体的には水素又はＣ１−７ハロアルキル；より具体的にはＣ１−７ハロアルキルである、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００８１】
本発明の更により具体的な一実施形態は、Ｒ２が水素、メチル、エチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル又はシクロプロピル；具体的には水素、ジフルオロメチル又はトリフルオロメチル；最も具体的にはトリフルオロメチルである、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００８２】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ３が水素、ハロ又はＣ１−７アルコキシ、特にハロである、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００８３】
本発明の更により具体的な一実施形態は、Ｒ３が水素、フルオロ、メトキシ又はエトキシ、特にフルオロである、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００８４】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ４が水素又はハロ、特に水素である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００８５】
本発明の更により具体的な一実施形態は、Ｒ４が水素又はフルオロ、特に水素である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００８６】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ５が水素、ハロ又はＣ１−７アルコキシ、特に水素である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００８７】
本発明の更により具体的な一実施形態は、Ｒ５が水素、フルオロ、クロロ又はメトキシ、特に水素である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００８８】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ６が、独立にＣ１−７アルキル、ヘテロシクロアルキル及びＣ１−７アルコキシ−ヘテロシクロアルキルより選択されるか、又は２個のＲ６が一緒になってＣ１−７アルキレンを形成している、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００８９】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ６が、独立にメチル、エチル、イソプロピル、メトキシ−アゼチジニル及びピロリジニルより選択されるか、又は２個のＲ６が一緒になってエチレン又はプロピレンを形成している、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００９０】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ７が、Ｒ６より選択される１、２、３又は４個の置換基で場合により置換されているピペラジニルである、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００９１】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ８が水素又はＣ１−７アルキル、特に水素又はメチルである、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００９２】
本発明の特定の一実施形態は、式（Ｉ’）：
【化３】
0006675334.tif 000004
（式中、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、本明細書に記載されるとおりである）
の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩に関する。
【００９３】
本発明の特定の一実施形態は、Ａが、１又は２個の窒素環原子を含み、そしてＲ６より選択される１、２、３又は４個の置換基で場合により置換される飽和単環又は二環式Ｎ−ヘテロシクロアルキルである、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００９４】
本発明の特定の一実施形態は、本明細書において定義されるＡ中の前記Ｎ−ヘテロシクロアルキル又はＲ７中の前記ヘテロシクロアルキルが、Ｒ６より選択される１又は２個の置換基で置換されている、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００９５】
本発明の特定の一実施形態は、本明細書において定義されるＡ中の前記Ｎ−ヘテロシクロアルキルが更に、１個の環窒素原子が塩基性であることを特徴とする、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００９６】
本発明の特定の一実施形態は、Ａが、
【化４】
0006675334.tif 000005
（式中、
Ｙは、Ｎ又はＣＨであり；
Ｒ８は、水素、Ｃ１−７アルキル又はＣ３−８シクロアルキルであり；
Ｒ９は、水素、Ｃ１−７アルキル、又は−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１４Ｒ１５であり；
Ｒ１０は、水素又はＣ１−７アルキルであり；
Ｒ１１は、水素又はＣ１−７アルキルであり；
Ｒ１２は、水素又はＣ１−７アルキルであり；
Ｒ１３は、水素又はＣ１−７アルキルであり；
Ｒ１４及びＲ１５は、独立に水素、Ｃ１−７アルキル及びＣ３−８シクロアルキルより選択され；
ｎは、０、１又は２であり；
ｍは、０、１、２又は３であり；
又は、Ｒ９とＲ１０が一緒になってＣ１−７アルキレンを形成し；
又は、Ｒ９とＲ１２が一緒になってＣ１−７アルキレンを形成し；
又は、Ｒ１０とＲ１１が一緒になってＣ２−７アルキレンを形成し；
又は、Ｒ１０とＲ１２が一緒になってＣ１−７アルキレンを形成し；
又は、Ｒ１０とＲ１４が一緒になってＣ１−７アルキレンを形成し；
又は、Ｒ１２とＲ１３が一緒になってＣ２−７アルキレンを形成し；
又は、Ｒ１２とＲ１４が一緒になってＣ１−７アルキレンを形成し；
又は、Ｒ１４とＲ１５が一緒になって、アルコキシで場合により置換されているＣ２−７アルキレンを形成し；
ただし、ＹがＣＨである場合、Ｒ９は−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１４Ｒ１５であり；そして
ただし、ＹがＮであり、そしてＲ９が−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１４Ｒ１５である場合、ｍは、２又は３である）
である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００９７】
本発明の特定の一実施形態は、Ａが、
【化５】
0006675334.tif 000006
（式中、Ｙ、ｎ、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３は、先に定義されたとおりである）
である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００９８】
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３のうちの少なくとも１つが水素でないとき、脳への浸透が改善されることが見出された。本発明の特定の一実施形態において、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３のうちの少なくとも１つは、水素以外のものである。
【００９９】
本発明の特定の一実施形態は、ＹがＮである、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１００】
本発明の特定の一実施形態は、ＹがＣＨであり、そしてＲ９が−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１４Ｒ１５である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１０１】
本発明の特定の一実施形態は、ＹがＣＨであり、そしてＲ９が−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１４Ｒ１５であり、ｍが０である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１０２】
本発明の特定の一実施形態は、ｎが１である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１０３】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ９が水素、ピロリジニル、又はメトキシ−アゼチジニル、より具体的には水素である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１０４】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ１０が水素、メチル、エチル又はイソプロピル、より具体的にはメチルである、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１０５】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ１１が水素又はメチル、より具体的には水素である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１０６】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ１２が水素又はメチル、より具体的には水素である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１０７】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ１３が水素である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１０８】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ９とＲ１０が一緒になってプロピレンを形成している、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１０９】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ１０とＲ１１が一緒になってエチレンを形成している、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１１０】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ１４とＲ１５が一緒になってプロピレン又はブチレンを形成している、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１１１】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ１４とＲ１５が一緒になってプロピレンを形成している、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１１２】
本発明の特定の一実施形態は、Ｒ１４とＲ１５が一緒になってブチレンを形成している、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１１３】
本発明の特定の一実施形態は、Ａが、
【化６】
0006675334.tif 000007
（式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、本明細書において定義されるとおりであり、Ｒ１６は、水素又はＣ１−７アルキルであり、Ｒ１７は、Ｃ１−７アルコキシである）
の群より選択される、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１１４】
本発明の特定の一実施形態は、Ａが、
【化７】
0006675334.tif 000008
（式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、本明細書において定義されるとおりであり、Ｒ１７は、Ｃ１−７アルコキシである）
の群より選択される、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１１５】
本発明の特定の一実施形態は、Ａが、ピペラジニル、ジアゼパニル、ピロリジニル及びヘキサヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジニル（各々、本明細書において定義されるＲ６より選択される１、２、３又は４個の置換基で場合により置換されている）の群より選択される、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１１６】
本発明の特定の一実施形態は、Ａが、ピペラジン−１−イル、１，４−ジアゼパン−１−イル、ピロリジン−１−イル及びヘキサヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２（１Ｈ）−イル（各々、本明細書において定義されるＲ６より選択される１又は２個の置換基で場合により置換されている）の群より選択される、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１１７】
本発明の特定の一実施形態は、ＡがＮＲ７Ｒ８（式中、Ｒ７及びＲ８は、本明細書において定義されるとおりである）である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１１８】
本発明の特定の一実施形態は、Ａが、
【化８】
0006675334.tif 000009
（式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、本明細書に記載されるとおりである）
である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１１９】
本発明の特定の一実施形態は、Ａが、
【化９】
0006675334.tif 000010
（式中、Ｒ８は、水素又はメチルである）
である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１２０】
本発明の特定の一実施形態は、Ａが、
【化１０】
0006675334.tif 000011
の群より選択される、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１２１】
本発明の特定の一実施形態は、Ａが、
【化１１】
0006675334.tif 000012
の群より選択される、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０１２２】
具体的な本発明の式（Ｉ）の化合物は、
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−ピペラジン−１−イルベンズアミド；
Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−ピペラジン−１−イルベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｓ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（８ａＲ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（８ａＲ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−（１，４−ジアゼパン−１−イル）−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｓ，５Ｒ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−エトキシベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロベンズアミド；
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２，６−ジフルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−エトキシ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−Ｎ−（８−エチル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−Ｎ−（８−シクロプロピル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２，６−ジフルオロベンズアミド；
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロベンズアミド；
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−［（３Ｓ）−３−ピロリジン−１−イルピロリジン−１−イル］ベンズアミド；
Ｎ−（８−エチル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（８ａＲ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−Ｎ−（８−シクロプロピル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロベンズアミド；
Ｎ−（８−シクロプロピル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｓ）−３−ピロリジン−１−イルピロリジン−１−イル］ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
４−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｓ，５Ｒ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−クロロ−６−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−ピペラジン−１−イルベンズアミド；
２，５−ジフルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−（３−メチルピペラジン−１−イル）ベンズアミド；
２，３−ジフルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−（３−メチルピペラジン−１−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｒ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−ピロリジン−１−イルピロリジン−１−イル］ベンズアミド；
４−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−（３，３−ジメチルピペラジン−１−イル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
Ｎ−（８−シクロプロピル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロベンズアミド；
Ｎ−（８−シクロプロピル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−（３，３−ジメチルピペラジン−１−イル）−２−フルオロベンズアミド；
２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−ピロリジン−１−イルピロリジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（３Ｒ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−（３，３−ジメチルピペラジン−１−イル）−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｓ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−フルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］−Ｎ−［２−メチル−８−（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル］ベンズアミド；
Ｎ−［８−（ジフルオロメチル）−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル］−２−フルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−（３−プロパン−２−イルピペラジン−１−イル）ベンズアミド；
６−［（３Ｒ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ピリジン−３−カルボキサミド；
２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−６−ピペラジン−１−イルピリジン−３−カルボキサミド；
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−（４−ピロリジン−１−イルピペリジン−１−イル）ベンズアミド；
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−エトキシ−４−［４−（３−メトキシアゼチジン−１−イル）ピペリジン−１−イル］ベンズアミド；
及びその薬学的に許容し得る塩からなる群より選択されるものである。
【０１２３】
具体的な本発明の式（Ｉ）の化合物は、
４−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｓ，５Ｒ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｒ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−ピロリジン−１−イルピロリジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（３Ｓ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−フルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］−Ｎ−［２−メチル−８−（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル］ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−ピペラジン−１−イルベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｓ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（８ａＲ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（８ａＲ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−（１，４−ジアゼパン−１−イル）−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｓ，５Ｒ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｓ）−３−ピロリジン−１−イルピロリジン−１−イル］ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
２−クロロ−６−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−ピペラジン−１−イルベンズアミド；
２，５−ジフルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−（３−メチルピペラジン−１−イル）ベンズアミド；
２，３−ジフルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−（３−メチルピペラジン−１−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−（３，３−ジメチルピペラジン−１−イル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−ピロリジン−１−イルピロリジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（３Ｒ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−（３，３−ジメチルピペラジン−１−イル）−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
Ｎ−［８−（ジフルオロメチル）−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル］−２−フルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−（３−プロパン−２−イルピペラジン−１−イル）ベンズアミド；
６−［（３Ｒ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ピリジン−３−カルボキサミド；
２−メトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−６−ピペラジン−１−イルピリジン−３−カルボキサミド；
及びその薬学的に許容し得る塩からなる群より選択されるものである。
【０１２４】
具体的な本発明の式（Ｉ）の化合物は、
４−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｓ，５Ｒ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−［（３Ｒ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−ピロリジン−１−イルピロリジン−１−イル］ベンズアミド；
４−［（３Ｓ）−３−エチルピペラジン−１−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
２−フルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］−Ｎ−［２−メチル−８−（トリフルオロメチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル］ベンズアミド；
及びその薬学的に許容し得る塩からなる群より選択されるものである。
【０１２５】
式（ＶＩＩＩ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物の製造における中間体として適切である。
【０１２６】
本発明の他の１つの実施形態は、式（ＶＩＩＩ）：
【化１２】
0006675334.tif 000013
（式中、
Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、本明細書に記載されるとおりであり；
Ｙは、ハロゲン又はトリフルオロメタンスルホナートである）
の化合物、又はその塩に関する。
【０１２７】
本発明の特定の一実施形態は、Ｙがフルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード又はトリフルオロメタンスルホナート、特にブロモである、式（ＶＩＩＩ）の化合物に関する。
【０１２８】
具体的な本発明の式（ＶＩＩＩ）の化合物は、
４−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；
４−ブロモ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド；及び
４−ブロモ−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド
からなる群より選択されるものである。
【０１２９】
製造方法
先に定義された式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩は、当該分野において公知の標準的な方法に従って調製することができる。
【０１３０】
スキーム１に示すように、式（ＩＩＩ）の化合物は、触媒（例えば、トリス（ジベンジリデン−アセトン）ジパラジウム（０）（Pd2(dba)3））及び配位子（例えば、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル）及び塩基（例えば、炭酸セシウム）及び溶媒（例えば、トルエン）の存在下における、式（ＩＩ）の化合物と、式Ａ−Ｈの２級アミンの間でのBuchwald-Hartwigアミノ化反応により得ることができる（式中、Ａ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ３及びＲ４は、本明細書に記載されるとおりであり、Ｒ１８は、Ｃ１−７アルキルである）。酸誘導体（ＩＶ）を形成する水性塩基（例えば、ＬｉＯＨ、ＮａＯＨ等）の存在下でのエステル加水分解の後、１級アミドへの変換（例えば、ＣＤＩ及び水性水酸化アンモニウムを用いる）が、式（Ｖ）の化合物を与える。最後に、触媒（例えば、トリス（ジベンジリデン−アセトン）ジパラジウム（０）（Pd2(dba)3））、配位子（例えば、（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン）、塩基（例えば、炭酸セシウム）及び溶媒（例えば、ジオキサン）の存在下での、高温（例えば、１００℃）における式（ＶＩ）の化合物での式（Ｖ）の化合物のBuchwald-Hartwigアミド化反応が、最終的な式（Ｉ）の化合物（式中、Ｒ１及びＲ２は、本明細書に記載されるとおりである）を与える。
【０１３１】
式Ａ−ＨのＮ−ヘテロシクロアルキルＡが付加的な１級又は２級アミノ基を含む場合、そのような付加的な１級又は２級アミノ基を、適切なアミノ保護基（Ｂｏｃ又はＣＢＺのような）を用いて保護し、式（ＶＩ）の化合物での式（Ｖ）の化合物のBuchwald-Hartwigアミド化反応の後で、最終生成物である式（Ｉ）の化合物を得るために、付加的な脱保護工程（例えば、ジオキサン中のＨＣｌを用いる）が必要である。
【化１３】
0006675334.tif 000014
【０１３２】
一実施形態において、本発明は、先に定義された式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩の製造方法であって、触媒（例えば、トリス（ジベンジリデン−アセトン）ジパラジウム（０）（Pd2(dba)3））、配位子（例えば、（ジフェニルホスフィノ）−９、９−ジメチルキサンテン）、塩基（例えば、炭酸セシウム）及び溶媒（例えば、ジオキサン）の存在下での、高温（例えば、１００℃）における、式（Ｖ）の化合物の式（ＶＩ）の化合物との反応を含む製造方法に関する（式中、Ａ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、本明細書に記載されるとおりである）。
【化１４】
0006675334.tif 000015
【０１３３】
或いは、式（Ｉ）の化合物は、スキーム２に示すようにして、触媒（例えば、ヨウ化銅（Ｉ））、配位子（例えば、（１，１０−フェナントロリン）、塩基（例えば、Ｋ３ＰＯ４）及び溶媒（例えば、ジオキサン）の存在下での、高温（例えば、１２０℃）における、式（ＶＩＩ）の化合物の、式（ＶＩ）の誘導体との式（ＶＩＩＩ）の化合物を与えるカップリング反応を通じて調製することができる（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、本明細書に記載されるとおりである）。
【０１３４】
最後に、式（ＶＩＩＩ）の化合物を、化合物Ｍ−Ａと、以下：
ａ）溶媒（例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、又はジメチルホルムアミド（ＤＭＦ））中、８０℃〜２００℃の温度で加熱することによる芳香族求核置換反応（特に、Ｙがフルオロであるか、又はＹがクロロであり、Ｘ１が窒素である場合）；又は
ｂ）溶媒（例えば、トルエン）中、触媒（例えば、トリス（ジベンジリデン−アセトン）ジパラジウム（０）（Pd2(dba)3））、配位子（例えば、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル）、塩基（例えば、炭酸セシウム）の存在下に、２０℃〜１００℃の温度で加熱することによるBuchwald-Hartwigアミノ化反応；
のいずれかで反応させて、式（Ｉ）の化合物を与える（式中、Ａは、本明細書において定義されるとおりであり、Ｍは、水素、ナトリウム又はカリウム、特に水素であり、Ｍは、Ａの窒素原子を通じてＡと結合している）。
【化１５】
0006675334.tif 000016
【０１３５】
一実施形態において、本発明は、先に定義された式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩の製造方法であって、以下：
ａ）溶媒（特にジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、又はジメチルホルムアミド（ＤＭＦ））中、８０℃〜２００℃の温度で加熱することによる芳香族求核置換反応（特に、Ｙがフルオロであるか、又はＹがクロロであり、Ｘ１が窒素である場合）；又は
ｂ）溶媒（特にトルエン）中、触媒（特にトリス（ジベンジリデン−アセトン）ジパラジウム（０）（Pd2(dba)3））、配位子（特に２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル）、塩基（特に炭酸セシウム）の存在下に、２０℃〜１００℃の温度で加熱することによるBuchwald-Hartwigアミノ化反応；
のいずれかでの、式（ＶＩＩＩ）の化合物の化合物Ｍ−Ａとの反応を含む製造方法に関する（式中、Ａ、Ｘ１、Ｘ２、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、本明細書において定義されるとおりであり、Ｍは、水素、ナトリウム又はカリウム、特に水素であり、Ｍは、Ａの窒素原子を通じてＡと結合している）。
【化１６】
0006675334.tif 000017
【０１３６】
特に、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩は、本明細書中の実施例に記載された方法に従って調製することができる。
【０１３７】
医薬組成物
他の１つの実施形態は、本発明の化合物及び治療上不活性な担体、希釈剤又は薬学的に許容し得る賦形剤を含む医薬組成物又は医薬、また、そのような組成物及び医薬を調製するための本発明の化合物の使用方法を提供する。
【０１３８】
組成物は、良質の医療のための原則（good medical practice）と整合する様式で処方され、投薬され（dosed）、投与される（administered）。この文脈における考慮のための要素には、処置される具体的な疾患、処置される具体的な哺乳類、個々の患者の臨床状態、疾患の原因、物質の送達部位、投与の方法、投与の計画、及びその他の医師にとって公知の要素が含まれる。
【０１３９】
本発明の化合物は、経口、局所（バッカル及び舌下を含む）、直腸、経膣、経皮、非経口、皮下、腹腔内、肺内、皮内、髄腔内及び硬膜外及び経鼻、ならびに、局所処置のために必要であれば、病巣内投与を含む、任意の適切な手段により投与してよい。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が含まれる。
【０１４０】
本発明の化合物は、任意の簡便な投与形態、例えば錠剤、散剤、カプセル剤、液剤、分散剤、懸濁剤、シロップ剤、スプレー剤、坐剤、ゲル剤、乳剤、パッチ剤等で投与してよい。そのような組成物は、薬剤調合における従来の成分、例えば、希釈剤、担体、ｐＨ調製剤、保存剤、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色剤、香味剤、浸透圧を変えるための塩、緩衝剤、マスキング剤、酸化防止剤、及び更なる活性物質を含んでいてよい。それらはまた、更に他の治療上有益な物質を含んでいてよい。
【０１４１】
典型的な処方物は、本発明の化合物と、担体又は賦形剤を混合することにより調製される。適切な担体及び賦形剤は、当業者によく知られており、例えば、Ansel H.C. et al., Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (2004) Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia；Gennaro A.R. et al., Remington: The Science and Practice of Pharmacy (2000) Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia；及びRowe R.C, Handbook of Pharmaceutical Excipients (2005) Pharmaceutical Press, Chicagoに詳細に記載されている。処方物 にはまた、薬物（即ち、本発明の化合物又はその医薬組成物）の的確な提供をもたらす、又は製剤製品（即ち、医薬）の製造を支援するための、１種以上の緩衝剤、安定化剤、界面活性剤、湿潤剤、滑沢剤、乳化剤、懸濁化剤、保存剤、酸化防止剤、不透明化剤（opaquing agents）、滑剤、加工助剤、着色剤、甘味料、芳香剤、香味剤、希釈剤及びその他公知の添加剤が含まれていてよい。
【０１４２】
本発明の化合物を投与し得る投与量は、広い範囲で変動し得るものであり、当然ながら、各々の具体的な症例において、個々の要求に適合されよう。一般に、経口投与の場合、一般式（Ｉ）の化合物を１人あたり１日約０．０１〜１０００mgという投与量が適切であるはずだが、必要であれば上記の上限を超えることもあり得る。
【０１４３】
適切な経口投与形態の一例は、無水乳糖約３０〜９０mg、クロスカルメロースナトリウム約５〜４０mg、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）Ｋ３０約５〜３０mg、及びステアリン酸マグネシウム約１〜１０mgを配合した、本発明の化合物約１００mg〜５００mgを含む錠剤である。まず、粉末にした成分を共に混合し、次いでＰＶＰの溶液と混合する。得られた組成物を乾燥し、造粒し、ステアリン酸マグネシウムと混合し、従来の装置を用いて圧縮して、錠剤の形態とすることができる。
【０１４４】
エアロゾル処方物の一例は、例えば１０〜１００mgの本発明の化合物を、適切な緩衝溶液、例えばリン酸緩衝液に溶解し、必要であれば、等張化剤（tonicifier）、例えば塩化ナトリウムのような塩を添加することにより、調製することができる。溶液を、例えば０．２μmフィルターを用いて濾過し、不純物及び混入物を除去してもよい。
【０１４５】
使用
上記したように、式（Ｉ）の化合物及びその薬学的に許容し得る塩は、有用な薬理学的特性を有し、ＳＭＮ１及び／又はＳＭＮ２遺伝子から転写されたｍＲＮＡへの、ＳＭＮ１及び／又はＳＭＮ２のエキソン７の組み入れを促進して、ＳＭＮタンパク質の発現増加を、それを必要とするヒト被験体において起こさせることが見出された。
【０１４６】
本発明の化合物は、単独又は他の薬物との組み合わせのいずれかで、ＳＭＮ１遺伝子における不活化変異又は欠失により引き起こされる、及び／又はＳＭＮ１遺伝子機能の損失又は欠陥に関連する疾患の処置又は予防に用いることができる。これらの疾患には脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）が含まれるが、これに限定されない。
【０１４７】
本発明の特定の一実施形態は、先に定義された式（Ｉ）の化合物又は先に定義されたその薬学的に許容し得る塩及び１種以上の薬学的に許容し得る賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【０１４８】
本発明の特定の一実施形態は、ＳＭＮ１遺伝子における不活化変異又は欠失により引き起こされる、及び／又はＳＭＮ１遺伝子機能の損失又は欠陥に関連する疾患の処置又は予防のための、特に、ＳＭＡの処置又は予防のための、先に定義された式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩及び１種以上の薬学的に許容し得る賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【０１４９】
本発明の特定の一実施形態は、治療上有効な物質として使用するための、特に、ＳＭＮ１遺伝子における不活化変異又は欠失により引き起こされる、及び／又はＳＭＮ１遺伝子機能の損失又は欠陥に関連する疾患の処置又は予防のための、特に、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置又は予防のための、治療上有効な物質として使用するための、先に定義された式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩に関する。
【０１５０】
本発明の特定の一実施形態は、ＳＭＮ１遺伝子における不活化変異又は欠失により引き起こされる、及び／又はＳＭＮ１遺伝子機能の損失又は欠陥に関連する疾患の処置又は予防に使用するための、特に、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置又は予防に使用するための、先に定義された式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩に関する。
【０１５１】
本発明の特定の一実施形態は、ＳＭＮ１遺伝子における不活化変異又は欠失により引き起こされる、及び／又はＳＭＮ１遺伝子機能の損失又は欠陥に関連する疾患の処置又は予防、特に、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置又は予防の方法であって、先に定義された式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を被験体に投与することを含む方法に関する。
【０１５２】
本発明の特定の一実施形態は、ＳＭＮ１遺伝子における不活化変異又は欠失により引き起こされる、及び／又はＳＭＮ１遺伝子機能の損失又は欠陥に関連する疾患の処置又は予防のための、特に、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置又は予防のための、先に定義された式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩の使用に関する。
【０１５３】
本発明の特定の一実施形態は、ＳＭＮ１遺伝子における不活化変異又は欠失により引き起こされる、及び／又はＳＭＮ１遺伝子機能の損失又は欠陥に関連する疾患の処置又は予防用の、特に、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置又は予防用の、医薬の調製のための、先に定義された式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩の使用に関する。そのような医薬は、先に定義された式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を含む。
【０１５４】
実施例
本発明は、以下の実施例を参照してより十分に理解されよう。ただし、それらが本発明の範囲を限定していると解すべきではない。
【０１５５】
使用される略語
ＡＣＮ：アセトニトリル；Ｂｏｃ：tert−ブチルオキシカルボニル；Ｂ２（ｐｉｎ）２：ビス（ピナコラト）ジボロン；ＣＢＺ：ベンジルオキシカルボニル；ＣＤＩ：１，１’−カルボニルジイミダゾール；ＣＨ２Ｃｌ２：ジクロロメタン；ｄｂａ：ジベンジリデンアセトン；ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン；ＤＭＡ：ジメチルアセトアミド；ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；ＮＭＰ：Ｎ−メチルピロリドン；Ｐｄ２（ｄｂａ）３：トリス（ジベンジリデン−アセトン）ジパラジウム（０）；Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２：（１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド；ＰＰＴＳ：ピリジニウムｐ−トルエンスルホナート；ＴＥＡ：トリエチルアミン；ＲＴ：室温；Ｘａｎｔｐｈｏｓ：ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン
【０１５６】
中間体Ａ．１
tert−ブチル （２Ｒ）−４−（３−フルオロ−４−メトキシカルボニルフェニル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシラートの調製
【化１７】
0006675334.tif 000018
トルエン（１１ml）中のメチル ４−ブロモ−２−フルオロベンゾアート（１．１０ｇ、４．７mmol）、（Ｒ）−tert−ブチル ２−メチルピペラジン−１−カルボキシラート（１．０４ｇ、５．２mmol）、炭酸セシウム（２．３１ｇ、７．１mmol）の混合物に、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．１３ｇ、０．１mmol）及び（rac）−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフタレン（０．２７ｇ、０．４mmol）をアルゴン下で加え、混合物を密閉したチューブ内で１００℃に２０時間加熱した。次に、反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、水、ブラインで洗浄し、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｐｔ  ０：１〜４：６）による精製が、標記生成物を黄色の固体として与えた（０．９９ｇ、６０％）。MS (m/e):352.0 (M+H+)
【０１５７】
中間体Ａ．１と同様に、下記表の中間体Ａ．２〜Ａ．２３を、対応するアミン及び臭化アリールから調製した。
【表１】
0006675334.tif 000019
0006675334.tif 000020
0006675334.tif 000021
0006675334.tif 000022
【０１５８】
中間体Ａ．２４
tert−ブチル ４−（２，５−ジフルオロ−４−メトキシカルボニルフェニル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシラートの調製
【化１８】
0006675334.tif 000023
【０１５９】
工程Ａ：
ＤＭＡ（５ml）中のメチル ２，４，５−トリフルオロベンゾアート（１．３９３ｇ、７．３３mmol、当量：１．００）及び２−メチルピペラジン（２．２３ｇ、２１．８mmol、当量：２．９８）の撹拌した溶液を、マイクロ波反応器中、１００℃で１５分間加熱した。溶媒を真空下で蒸発させ、残留物をＣＨ２Ｃｌ２に溶解して、Ｈ２Ｏで洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。
【０１６０】
工程Ｂ：
粗混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１０mL）に溶解し、トリエチルアミン（１．２３mL、８．７９mmol、当量：１．２）を加えた。溶液を０℃に冷却して、ＣＨ２Ｃｌ２（３．７５ml）中のジ−tert−ブチル ジカルボナート（２．４１ｇ、１０．９mmol、当量：１．４９）の溶液を滴下した。反応混合物を室温で１８時間撹拌した。水を反応物に加え、層を分離した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させて、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ）による精製が、標記化合物を白色の固体として与えた（１．７７ｇ、６５％）。MS (m/e):371.1 (M+H+)。
【０１６１】
中間体Ａ．２５
tert−ブチル ４−（４−エトキシカルボニル−２，３−ジフルオロフェニル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシラートの調製
【化１９】
0006675334.tif 000024
【０１６２】
工程Ａ：
ＤＭＡ（５ml）中のエチル ２，３，４−トリフルオロベンゾアート（１．５１ｇ、７．４mmol、当量：１．００）及び２−メチルピペラジン（２．２７ｇ、２２．２mmol、当量：３）の溶液を、マイクロ波反応器中、１００℃で１５分間加熱した。溶媒を真空下で蒸発させた。ＥｔＯＡｃ及びＮａＨＣＯ３水溶液を残留物に加えた。層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２で２回逆抽出した。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、黄色の油状物２．１５ｇを与えた。
【０１６３】
工程Ｂ：
この粗油状物をＣＨ２Ｃｌ２（１０ml）に溶解して、トリエチルアミン（１．２４ml、８．８８mmol、当量：１．２）を加えた。溶液を０℃に冷却して、ＣＨ２Ｃｌ２（３．７５ml）中のジ−tert−ブチル ジカルボナート（２．４５ｇ、１１．１mmol、当量：１．５）の溶液を滴下した。反応混合物を室温で１８時間撹拌した。水を反応物に加え、層を分離した。水層をＣＨ２Ｃｌ２で２回逆抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して、真空下で濃縮した。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ）により精製して、これを２つの位置異性体に分離させ、第二番目の溶離化合物が所望の標記誘導体であり、明黄色の油状物として得た（１．５４ｇ、５４％）。MS (m/e):385.3 (M+H+)。
【０１６４】
中間体Ｂ．１
tert−ブチル （２Ｒ）−４−（４−カルバモイル−３−フルオロフェニル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシラートの調製
【化２０】
0006675334.tif 000025
ＭｅＯＨ（６ml）中のtert−ブチル （２Ｒ）−４−（３−フルオロ−４−メトキシカルボニルフェニル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシラート（０．９５ｇ、２．７mmol、中間体Ａ．１）の溶液に、水酸化ナトリウム（１．４ml、水中６M、６．１mmol）を加え、反応物を５５℃に７時間加熱した。次に、反応物をＩＲ１２０＋樹脂を加えて酸性化し、濾過し、濃縮して、粗（Ｒ）−４−（４−（tert−ブトキシカルボニル）−３−メチルピペラジン−１−イル）−２−フルオロ安息香酸（０．８２ｇ、９０％）を白色の粉末として与えた。次に、粗酸をＤＭＦ（６ml）に再溶解し、１，１’−カルボニルジイミダゾール（０．５１ｇ、３．２mmol）を加え、混合物を１時間撹拌して、その後水酸化アンモニウム（１．３ml、２５％水性、８．４mmol）を加えた。０．５時間後、反応物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮して、標記化合物を白色の固体として与えた（０．７４ｇ、９０％）。MS (m/e):282.1 (M-tBu+H+)。
【０１６５】
中間体Ｂ．１と同様に、下記表の中間体Ｂ．２〜Ｂ．１７を、対応するエステルから調製した。
【表２】
0006675334.tif 000026
0006675334.tif 000027
0006675334.tif 000028
【０１６６】
中間体Ｂ．１８
４−［（８ａＲ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−フルオロベンズアミドの調製
【化２１】
0006675334.tif 000029
ＭｅＯＨ（２ml）中の（Ｒ）−メチル ２−フルオロ−４−（ヘキサヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２（１Ｈ）−イル）ベンゾアート（０．１２ｇ、０．４mmol、中間体Ａ．５）の溶液に、水酸化ナトリウム（０．１ml、水中６M、０．６mmol）を加え、反応物を５５℃で４時間加熱した。次に、反応物を濃縮して、粗（ナトリウム（Ｒ）−２−フルオロ−４−（ヘキサヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２（１Ｈ）−イル）ベンゾアートを与え、次にこれをＤＭＦ（２ml）に再溶解し、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウム テトラフルオロボラート（０．１７ｇ、０．５mmol）を加え、混合物を１時間撹拌して、その後水酸化アンモニウム（０．９ml、２５％水性、２２．５mmol）を加えた。０．５時間後、反応物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ  ９５：５〜９：１）による精製が、標記生成物を白色の粉末として与えた（０．２ｇ、定量）。MS (m/e):264.2 (M+H+)
【０１６７】
中間体Ｂ．１８と同様に、下記表の中間体Ｂ．１９〜Ｂ．２４を、対応するエステルから調製した。
【表３】
0006675334.tif 000030
0006675334.tif 000031
【０１６８】
中間体Ｂ．２５
tert−ブチル ４−（４−カルバモイル−３−クロロ−５−フルオロフェニル）ピペラジン−１−カルボキシラートの調製
【化２２】
0006675334.tif 000032
【０１６９】
工程Ａ：
ジオキサン（１５ml）中の４−ブロモ−２−クロロ−６−フルオロ安息香酸（１．００ｇ、３．９５mmol、当量：１．００）、tert−ブチル ピペラジン−１−カルボキシラート（８８２mg、４．７３mmol、当量：１．２）、ＢＩＮＡＰ（４９１mg、０．７８９mmol、当量：０．２）及び炭酸セシウム（３．８６ｇ、１１．８mmol、当量：３）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１７７mg、０．７８９mmol、当量：０．２）の溶液を、１００℃で加熱し、一晩撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、クエン酸水溶液で洗浄した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９５／５〜８／２）により精製して、４−（４−tert−ブトキシカルボニルピペラジン−１−イル）−２−クロロ−６−フルオロ−安息香酸０．３０８ｇ（２２％）を明褐色の固体として与えた。
【０１７０】
工程Ｂ：
４−（４−（tert−ブトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル）−２−クロロ−６−フルオロ安息香酸（１９０mg、５３０mmol、当量：１．００）及びＣＤＩ（０．１１２ｇ、０．６８８mmol、当量：１．３）を、ＤＭＦ（２．５ml）中で合わせて、明黄色の溶液を与えた。反応混合物を１．５時間撹拌した。更なるＣＤＩ（８５．９mg、０．５３０mmol、当量：１．００）を加え、反応混合物を更に１．５時間撹拌した。水酸化アンモニウム（１．０３ml、２６．５mmol、当量：５０）を加え、反応混合物を１時間撹拌した。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて、真空下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９８／２）が、標記化合物（０．１２ｇ、６２％）を明黄色の固体として与えた。MS (m/e):302.1 (M-tBu+H+)。
【０１７１】
中間体Ｂ．２６
tert−ブチル （２Ｒ）−４−（５−カルバモイル−６−メトキシピリジン−２−イル）−２−エチルピペラジン−１−カルボキシラートの調製
【化２３】
0006675334.tif 000033
【０１７２】
工程Ａ：
ＤＭＦ（２ml）中の（Ｒ）−tert−ブチル ２−エチルピペラジン−１−カルボキシラート（０．２０８ｇ、０．９７１mmol、当量：１．００）及びトリエチルアミン（０．１３５ml、０．９７１mmol、当量：１．００）の溶液に、メチル ２，６−ジクロロニコチナート（０．２００ｇ、０．９７１mmol、当量：１．００）を加え、反応混合物を３０℃で４．５時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水及びブラインで洗浄し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させて、溶媒を蒸発させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン、１／４）により精製して、tert−ブチル （２Ｒ）−４−（６−クロロ−５−メトキシカルボニル−２−ピリジル）−２−エチル−ピペラジン−１−カルボキシラート１６０mg（４３％）を白色の固体として与えた。MS (m/e): 384.2 (M+H+)。
【０１７３】
工程Ｂ：
密閉したチューブ内で、tert−ブチル （２Ｒ）−４−（６−クロロ−５−メトキシカルボニル−２−ピリジル）−２−エチル−ピペラジン−１−カルボキシラート（１６１mg、０．４１９mmol、当量：１．００）をＭｅＯＨ（２ml）に溶解し、ナトリウムメトキシド（０．３８８ml、２．１mmol、当量：５）を加え、混合物を９０℃に加熱して、４．５時間撹拌した。反応混合物をクエン酸水溶液で酸性化し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて、６−［（３Ｒ）−４−tert−ブトキシカルボニル−３−エチル−ピペラジン−１−イル］−２−メトキシ−ピリジン−３−カルボン酸を与えた。MS (m/e):366.2 (M+H+)。粗生成物を、更なる精製することなく、次の工程においてそのまま用いた。
【０１７４】
工程Ｃ：
ＤＭＦ（３ml）中の６−［（３Ｒ）−４−tert−ブトキシカルボニル−３−エチル−ピペラジン−１−イル］−２−メトキシ−ピリジン−３−カルボン酸（１３５mg、０．３６９mmol、当量：１．００）及びＣＤＩ（７１．９mg、０．４４３mmol、当量：１．２）の溶液を、室温で１時間撹拌した。水酸化アンモニウム（０．７１９ml、１８．５mmol、当量：５０）を加え、２時間以上撹拌した。反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて、溶媒を蒸発させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記生成物をtert−ブチル （２Ｒ）−４−（５−カルバモイル−６−メトキシピリジン−２−イル）−２−エチルピペラジン−１−カルボキシラートを白色の固体として与えた（２０mg、１５％）。MS (m/e):365.2(M+H+)。
【０１７５】
中間体Ｂ．２７
tert−ブチル ４−（５−カルバモイル−６−メトキシピリジン−２−イル）ピペラジン−１−カルボキシラートの調製
【化２４】
0006675334.tif 000034
中間体Ｂ．２６と同様に、tert−ブチル ４−（５−カルバモイル−６−メトキシピリジン−２−イル）ピペラジン−１−カルボキシラートを、メチル ２，６−ジクロロニコチナート及びtert−ブチル ピペラジン−１−カルボキシラートから調製した。MS (m/e):337.2 (M+H+)。
【０１７６】
中間体Ｃ．１
６−ブロモ−２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジンの調製
【化２５】
0006675334.tif 000035
ｉＰｒＯＨ（３０ml）中の５−ブロモ−３−メチルピラジン−２−アミン（４．６３ｇ、２４．６mmol）の懸濁液に、１−ブロモ−２，２−ジメトキシプロパン（３．６６ml、２７．１mmol）、ピリジニウムパラ−トルエンスルホン酸（０．６２ｇ、２．５mmol）を加え、混合物を密閉したチューブ内で６５℃に３６時間加熱した。反応物をＤＣＭで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｐｔ  １：４〜１：１）による精製が、標記生成物を明黄色の結晶質固体として与えた（３．９６ｇ、７１％）。MS (m/e):226.1 (M+H+, Br)
【０１７７】
中間体Ｃ．２
６−ブロモ−８−エチル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジンの調製
【化２６】
0006675334.tif 000036
ｉＰｒＯＨ（１０ml）中の５−ブロモ−３−エチルピラジン−２−アミン（０．６８、３．３７mmol）の懸濁液に、１−ブロモ−２，２−ジメトキシプロパン（０．５４ml、４．０４mmol）、ピリジニウムパラ−トルエンスルホン酸（０．０８４ｇ、０．３３７mmol）を加え、混合物を９０℃に４時間加熱した。反応物をＤＣＭで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｐｔ  １：４〜１：１）による精製が、標記生成物を明褐色の固体として与えた（０．５１ｇ、６３％）。MS (m/e):240.1 (M+H+, Br)。
【０１７８】
中間体Ｃ．３
６−ブロモ−８−シクロプロピル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジンの調製
【化２７】
0006675334.tif 000037
【０１７９】
工程Ａ：
氷浴中で冷却したアセトニトリル（１０ml）中の３−シクロプロピルピラジン−２−アミン（２７５mg、２．０３mmol、当量：１．００）の溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（３６２mg、２．０３mmol、当量：１．００）を少量ずつ加えた。２０分後、溶媒を蒸発させて、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ２／１）による精製が、５−ブロモ−３−シクロプロピル−ピラジン−２−アミン（２７９mg、６４％）を明黄色の固体として与えた。MS (m/e):214.1 (M+H+, Br)。
【０１８０】
工程Ｂ：
ｉＰｒＯＨ（５ml）中の５−ブロモ−３−シクロプロピルピラジン−２−アミン（０．２７４、１．２８mmol）の懸濁液に、１−ブロモ−２，２−ジメトキシプロパン（０．２０７ml、１．５４mmol）、ピリジニウムパラ−トルエンスルホン酸（０．０３２ｇ、０．１２８mmol）を加え、混合物を９０℃に３時間加熱した。反応物をＤＣＭで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｐｔ  １：４〜１：１）による精製が、標記生成物の６−ブロモ−８−シクロプロピル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジンを明褐色の固体として与えた（０．１５８ｇ、４８％）。MS (m/e):252.1 (M+H+, Br)。
【０１８１】
中間体Ｃ．４
６−クロロ−８−トリフルオロメチル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジンの調製
【化２８】
0006675334.tif 000038
【０１８２】
工程Ａ：
水（１２ml）中のナトリウム トリフルオロメタンスルフィナート（１．２ｇ、７．７mmol）の溶液に、ＤＣＭ（３０ml）中の５−クロロピラジン−２−アミン（１．０ｇ、７．７mmol）の溶液を加えた。tert−ブチルヒドロペルオキシド（１．０ml、ノナン中５．５M、５．５mmol）を２時間かけて滴下した。次に、ナトリウム トリフルオロメタンスルフィナート（１．２ｇ、７．７mmol）の２番目の部分を加え、次いでtert−ブチルヒドロペルオキシド（１．０ml、ノナン中５．５M、５．５mmol）の２番目の部分を６時間かけて滴下した。反応物をＤＣＭで繰り返し抽出し、合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ）による精製が、５−クロロ−３−（トリフルオロメチル）ピラジン−２−アミンを黄色の結晶として与えた（０．９ｇ、５７％）。MS (m/e):198.0. (M+H+, Cl)
【０１８３】
工程Ｂ：
ｉＰｒＯＨ（６ml）中の５−クロロ−３−（トリフルオロメチル）ピラジン−２−アミン（０．７７ｇ、３．８mmol）の懸濁液に、１−ブロモ−２，２−ジメトキシプロパン（０．５７ml、４．２mmol）、ピリジニウムパラ−トルエンスルホン酸（０．１ｇ、０．４mmol）を加え、混合物を密閉したチューブ内で１００℃に９６時間加熱した。反応物をＤＣＭで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｐｔ  ３：７〜１：０）による精製が、標記生成物を褐色の粉末として与えた（０．１５ｇ、１７％）。MS (m/e):236.1. (M+H+, Cl)
【０１８４】
中間体Ｃ．５
６−クロロ−８−ジフルオロメチル−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジンの調製
【化２９】
0006675334.tif 000039
【０１８５】
工程Ａ：
ＤＣＭ（６０ml）中の５−クロロピラジン−２−アミン（１．０ｇ、７．７mmol）の溶液に、水（２４ml）中のビス（ジフルオロメチルスルフィニルオキシ）亜鉛（２．３ｇ、７．７mmol）及びＦｅ（ＮＯ３）３．９Ｈ２Ｏ（０．３ｇ、０．８mmol）の懸濁液を加え、混合物を撹拌した。tert−ブチルヒドロペルオキシド（２．２ml、ノナン中５．５M、１２．１mmol）を、総反応時間８時間に対して、４５分毎に０．２mlずつ加えた。反応物をＤＣＭで希釈し、水で洗浄し、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ  １：０〜４：１）による精製が、５−クロロ−３−（ジフルオロメチル）ピラジン−２−アミンを黄色の結晶として与えた（０．６ｇ、４０％）。MS (m/e):180.0. (M+H+, Cl)。
【０１８６】
工程Ｂ：
ｉＰｒＯＨ（１０ml）中の５−クロロ−３−（ジフルオロメチル）ピラジン−２−アミン（０．５ｇ、２．８mmol）の懸濁液に、１−ブロモ−２，２−ジメトキシプロパン(１．１ml、８．４mmol）、ピリジニウムパラ−トルエンスルホン酸（０．１ｇ、０．３mmol）を加え、混合物を密閉したチューブ内で６５℃に１８時間加熱した。反応物をＤＣＭで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｐｔ  １：４〜１：０）による精製が、標記生成物を褐色の粉末（０．２０ｇ、４０％）として与えた。MS (m/e):218.1. (M+H+, Cl)
【０１８７】
中間体Ｄ．１
４−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド
【化３０】
0006675334.tif 000040
密閉したチューブ内で、ジオキサン（５mL）中の４−ブロモ−２−フルオロベンズアミド（１５０mg、０．６８８mmol）、６−ブロモ−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン（１４６mg、０．６８８mmol）、ヨウ化銅（Ｉ）（１３．１mg、０．０６８mmol、０．１当量）、Ｋ３ＰＯ４（３０７mg、１．４４mmol、２．１当量）及び１，１０−フェナントロリン（１４．９mg、０．１３８mmol、０．２当量）を、１２０℃で一晩加熱した。反応混合物をセライト濾過し、真空下で濃縮して、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９９／１〜９８／２）での精製が、４−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド２４mg（１０％）を与えた。MS (m/e): 349.1 (M+H+, Br)。
【０１８８】
中間体Ｄ．２
４−ブロモ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド
【化３１】
0006675334.tif 000041
密閉したチューブ内で、ジオキサン（５mL）中の４−ブロモベンズアミド（９４．３mg、０．４７２mmol）、６−ブロモ−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン（１００mg、０．４７２mmol）、ヨウ化銅（Ｉ）（８．９mg、０．０４７mmol、０．１当量）、Ｋ３ＰＯ４（２１０mg、０．９９mmol、２．１当量）及び１，１０−フェナントロリン（１７mg、０．０９４mmol、０．２当量）を、１２０℃で一晩加熱した。反応混合物をセライトで濾過し、真空下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９９／１〜９８／２）での精製が、４−ブロモ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド４２mg（１８％）を白色の固体として与えた。MS (m/e): 331.1 (M+H+, Br)。
【０１８９】
中間体Ｄ．３
４−ブロモ−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド
【化３２】
0006675334.tif 000042
密閉したチューブ内で、ジオキサン（５mL）中の４−ブロモ−２−エトキシベンズアミド（２８８mg、０．１．１８mmol）、６−ブロモ−２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン（２７５mg、１．３０mmol）、ヨウ化銅（Ｉ）（２２．５mg、０．１１８mmol、０．１当量）、Ｋ３ＰＯ４（５２６mg、２．４８mmol、２．１当量）及び１，１０−フェナントロリン（４２．５mg、０．２３６mmol、０．２当量）を、１２０℃で一晩加熱した。反応混合物をセライト濾過し、真空下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９９／１〜９８／２）での精製が、標記生成物１５９mg（３６％）を白色の固体として与えた。MS (m/e): 375.2 (M+H+, Br)。
【０１９０】
一般手順１
Buchwaldアミノ化反応
トルエン中の臭化アリール誘導体（１当量）、第二級アミン（２当量）、トリス（ジベンジリデン−アセトン）ジパラジウム（０）（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）（０．０８当量）、ナトリウムtert−ブトキシド（１．５当量）及びジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（キサントホス）（０．１２当量）の溶液を、８０〜１３０℃で一晩加熱した。溶媒を蒸発させて、生成物をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーによりそのまま精製した。
【０１９１】
一般手順２
Ｂｏｃ脱保護
Ｂｏｃ保護アミンを、ＭｅＯＨ−ジオキサンの混合物中の溶液に入れた。ジオキサン中のＨＣｌ溶液（４M、１０当量）を加え、撹拌を完了するまで続けた（０．２時間〜４時間）。所望する生成物を濾過により集め、真空下で乾燥させた。
【０１９２】
実施例１
２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−ピペラジン−１−イルベンズアミド塩酸塩の調製
【化３３】
0006675334.tif 000043
一般手順１（Buchwaldアミノ化）、次いで一般手順２（Ｂｏｃ脱保護）に従って、２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−ピペラジン−１−イルベンズアミド塩酸塩を、４−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド（実施例Ｄ．１）及びtert−ブチル ピペラジン−１−カルボキシラートから調製した。MS (m/e):391.8 (M+H+)。
【０１９３】
実施例２
Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−ピペラジン−１−イルベンズアミド塩酸塩の調製
【化３４】
0006675334.tif 000044
一般手順１（Buchwaldアミノ化）、次いで一般手順２（Ｂｏｃ脱保護）に従って、Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−ピペラジン−１−イルベンズアミド塩酸塩を、４−ブロモ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド（実施例Ｄ．２）及びtert−ブチル ピペラジン−１−カルボキシラートから調製した。MS (m/e):337.1 (M+H+)。
【０１９４】
実施例３
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミドの調製
【化３５】
0006675334.tif 000045
一般手順１（Buchwaldアミノ化）に従って、４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミドを、４−ブロモ−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド（実施例Ｄ．３）及び（８ａＳ）−１，２，３，４，６，７，８，８ａ−オクタヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジンから調製した。MS (m/e): 421.4(M+H+)。
【０１９５】
実施例４
２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｓ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミドの調製
【化３６】
0006675334.tif 000046
一般手順１（Buchwaldアミノ化）、次いで一般手順２（Ｂｏｃ脱保護）に従って、２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｓ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミドを、４−ブロモ−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド（実施例Ｄ．３）及びtert−ブチル （２Ｓ）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシラートから調製した。MS (m/e): 395.3(M+H+)。
【０１９６】
実施例５
２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミドの調製
【化３７】
0006675334.tif 000047
一般手順１（Buchwaldアミノ化）、次いで一般手順２（Ｂｏｃ脱保護）に従って、２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミドを、４−ブロモ−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド（実施例Ｄ．３）及びtert−ブチル （２Ｒ）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシラートから調製した。MS (m/e): 395.3(M+H+)。
【０１９７】
実施例６
４−［（８ａＲ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミドの調製
【化３８】
0006675334.tif 000048
一般手順１（Buchwaldアミノ化）に従って、４−［（８ａＲ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミドを、４−ブロモ−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド（実施例Ｄ．３）及び（８ａＲ）−１，２，３，４，６，７，８，８ａ−オクタヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジンから調製した。MS (m/e): 421.4(M+H+)。
【０１９８】
実施例７
４−［（８ａＲ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミドの調製
【化３９】
0006675334.tif 000049
一般手順１（Buchwaldアミノ化）に従って、４−［（８ａＲ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミドを、４−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド（実施例Ｄ．１）及び（８ａＲ）−１，２，３，４，６，７，８，８ａ−オクタヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジンから調製した。MS (m/e): 395.3(M+H+)。
【０１９９】
実施例８
４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミドの調製
【化４０】
0006675334.tif 000050
一般手順１（Buchwaldアミノ化）に従って、４−［（８ａＳ）−３，４，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミドを、４−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド（実施例Ｄ．１）及び（８ａＳ）−１，２，３，４，６，７，８，８ａ−オクタヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジンから調製した。MS (m/e): 395.3(M+H+)。
【０２００】
実施例９
４−（１，４−ジアゼパン−１−イル）−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミドの調製
【化４１】
0006675334.tif 000051
一般手順１（Buchwaldアミノ化）に従って、４−（１，４−ジアゼパン−１−イル）−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミドを、４−ブロモ−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド（実施例Ｄ．３）及び１，４−ジアゼパンから調製した。MS (m/e): 395.3(M+H+)。
【０２０１】
実施例１０
４−［（３Ｓ，５Ｒ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミドの調製
【化４２】
0006675334.tif 000052
一般手順１（Buchwaldアミノ化）に従って、４−（１，４−ジアゼパン−１−イル）−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミドを、４−ブロモ−２−エトキシ−Ｎ−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）ベンズアミド（実施例Ｄ．３）及び（２Ｒ，６Ｓ）−２，６−ジメチルピペラジンから調製した。MS (m/e): 409.3(M+H+)。
【０２０２】
実施例１１
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−［（３Ｒ）−３−メチルピペラジン−１−イル］ベンズアミドの調製
【化４３】
0006675334.tif 000053
【０２０３】
工程Ａ：
チューブ内で、ジオキサン（２ml）中の（Ｒ）−tert−ブチル ４−（４−カルバモイル−３−フルオロフェニル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシラート（０．１０ｇ、０．３mmol、中間体Ｂ．１）、６−ブロモ−２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン（０．０８ｇ、０．４mmol、中間体Ｃ．１）、（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（０．０３ｇ、０．０４mmol）、炭酸セシウム（０．１４ｇ、０．４mmol）の懸濁液を、アルゴンで泡立てた超音波処理により脱気した。次に、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．０１ｇ、０．１mmol）を加え、チューブを密閉し、混合物を１００℃に３時間加熱した。次に、反応物をＤＣＭで希釈し、水で洗浄し、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｐｔ  １：１〜７：３）による精製が、（Ｒ）−tert−ブチル ４−（４−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イルカルバモイル）−３−フルオロフェニル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシラート（０．１１ｇ、７７％）を明褐色の粉末として与えた。MS (m/e): 483.4(M+H+)。
【０２０４】
工程Ｂ：
（Ｒ）−tert−ブチル ４−（４−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イルカルバモイル）−３−フルオロフェニル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシラート（０．１０ｇ、０．２mmol）を、ジオキサン中の塩酸（４ml、４M）に懸濁し、２０分間撹拌した。次に、反応物を蒸発乾固し、水に再溶解し、ＤＣＭで洗浄し、次に飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加えて、水溶液を塩基性にし、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（９５：５）で再抽出し、濃縮して、標記生成物（０．０８ｇ、定量）を黄色の粉末として与えた。(m/e): 383.3 (M+H+)。
【０２０５】
実施例１１と同様に、下記表の実施例１２〜４７を、対応するカルボキサミド及びヘテロアリールハライド、次いで必要に応じて脱保護から調製した。
【表４】
0006675334.tif 000054
0006675334.tif 000055
0006675334.tif 000056
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実施例４８
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−（４−ピロリジン−１−イルピペリジン−１−イル）ベンズアミドの調製
【化４４】
0006675334.tif 000064
【０２０６】
工程Ａ：
２−フルオロ−４−（１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］デカン−８−イル）ベンズアミド（Ａ．２２）を、実施例１と同様に、６−ブロモ−２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン（Ｃ．１）と反応させて、Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−（１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］デカン−８−イル）ベンズアミドを与えた。MS (m/e): 426.3(M+H+)
【０２０７】
工程Ｂ：
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−（１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］デカン−８−イル）ベンズアミド（０．１４ｇ、０．３mmol）を、ジオキサン（２．５ml）に溶解して、６M ＨＣｌ水溶液（２．３ml、１３．８mmol）を加えた。混合物を２時間撹拌し、その後、飽和水性炭酸水素ナトリウムを加え中和して、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機物をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮して、Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−（４−オキソピペリジン−１−イル）ベンズアミド（０．１３ｇ、定量）を黄色の粉末として与えた。
【０２０８】
工程Ｃ：
ＤＣＭ（２ml）中のＮ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−（４−オキソピペリジン−１−イル）ベンズアミド（０．１２ｇ、０．３mmol）の溶液に、ピロリジン（０．０３ml、０．４mmol）、次いでトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（０．１ｇ、０．５mmol）を加え、反応物を０．５時間撹拌した。次に、反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ  ９：１〜７：３＋  ＮＨ４ＯＨ）による精製が、Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−（４−ピロリジン−１−イルピペリジン−１−イル）ベンズアミド（０．１１ｇ、８２％）を白色の粉末として与えた。MS (m/e): 437.4(M+H+)
【０２０９】
実施例４９
Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−エトキシ−４−［４−（３−メトキシアゼチジン−１−イル）ピペリジン−１−イル］ベンズアミド
【化４５】
0006675334.tif 000065
標記化合物を、Ｎ−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）−２−フルオロ−４−（４−オキソピペリジン−１−イル）ベンズアミド（実施例４８、工程Ｂ）を３−メトキシアゼチジン塩酸塩と反応させて、実施例４８（工程Ｃ）と同様に調製した。MS (m/e): 479.4(M+H+)
【０２１０】
生物学的アッセイ
本記載をより詳細に説明し、またその理解を支援すべく、以下の非限定的な生物学的実施例を提供するが、これは本記載の範囲をより十分に示すためのものであって、その範囲を具体的に限定していると解すべきものではない。現在知り得る、又は後で開発され得る（これは当業者の確認の範囲内であろう）ような本記載の変形は、本記載の範囲内であり、また本明細書において後でクレームされていると見なされる。これらの例は、本明細書に記載のある化合物のin vitro及び／又はin vivoの試験を示し、また、ＳＭＮ２遺伝子から転写されたｍＲＮＡへのＳＭＮ２のエキソン７の組み入れを促進することによりＳＭＡを処置する上での、その化合物の有用性を示している。式（Ｉ）の化合物は、ＳＭＮ２遺伝子から転写されたｍＲＮＡへのＳＭＮ２のエキソン７の組み入れを促進し、またＳＭＮ２遺伝子から産生されるＳＭＮタンパク質のレベルを増加させ、よって、ＳＭＡの処置を、それを必要とするヒト被験体において行うのに用いることができる。これらの例は更に、本明細書に記載のある化合物のin vitro及び／又はin vivoの試験を示し、また、ＳＭＮ１遺伝子から転写されたｍＲＮＡへのＳＭＮＩのエキソン７の組み入れを促進する上での、その化合物の有用性を示している。従って、式（Ｉ）の化合物は、ＳＭＮ１遺伝子から転写されたｍＲＮＡへのＳＭＮ１のエキソン７の組み入れをも促進し、またＳＭＮ１遺伝子から産生されるＳＭＮタンパク質のレベルをも増加させる。
【０２１１】
アッセイ１
培養細胞におけるＳＭＮ２ミニ遺伝子プレ−ｍＲＮＡスプライシングについてのＲＴ−ｑＰＣＲアッセイ
逆転写定量的ＰＣＲ（ＲＴ−ｑＰＣＲ）に基づくアッセイを用いて、ＳＭＮ２エキソン７を含む全長ＳＭＮ２ミニ遺伝子（本明細書においては「ＦＬ ＳＭＮ２ミニ」の用語で呼ぶ）ｍＲＮＡのレベルを、前記ミニ遺伝子で安定的にトランスフェクションされ、試験化合物で処理されたＨＥＫ２９３Ｈ細胞株において定量する。用いた材料とそれぞれの供給元を下記表１に列挙する。
【表５】
0006675334.tif 000066
【０２１２】
国際公開公報第ＷＯ２００９／１５１５４６Ａ１号第１４５頁、段落［００４００］〜第１４７頁段落［００４１２］（その中の図１及び図３を含む）に記載されているようにして、ＳＭＮ２−Ａミニ遺伝子構築物を調製した。
【０２１３】
ＳＭＮ２−Ａミニ遺伝子構築物で安定的にトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｈ細胞（１０，０００細胞／ウェル）を、９６穴平底プレート中の細胞培養培地（ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ、２００μg／mLハイグロマイシン含有）２００μLにまき、細胞の適切な分散と細胞の均一な単層の形成を確実にするため、直ちにプレートを旋回させる。６時間かけて細胞を付着させる。７点の濃度曲線が生成するよう、試験化合物を１００％ＤＭＳＯ中３．１６倍で段階希釈した。試験化合物の溶液（１μL、２００ｘ  ＤＭＳＯ中）を、細胞を含むウェルそれぞれに添加し、プレートを細胞培養インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２、相対湿度１００％）内で２４時間インキュベーションする。各々の試験化合物濃度について、２つ組で調製する。次いで、Cells-To-Ct lysis buffer中で細胞を溶解し、溶解物を−８０℃で保存する。
【０２１４】
表２で参照するプライマー及びプローブを用いて、全長ＳＭＮ２−Ａミニ遺伝子及びＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡを定量する。プライマーＳＭＮ Ｆｏｒｗａｒｄ Ａ（SEQ ID NO.1）は、エキソン７内のヌクレオチド配列（ヌクレオチド２２〜ヌクレオチド４０）とハイブリダイズし、プライマーＳＭＮ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ａ（SEQ ID NO.2）は、ホタルルシフェラーゼのコーディング配列内のヌクレオチド配列とハイブリダイズし、ＳＭＮプローブＡ（SEQ ID NO.3）は、エキソン７内（ヌクレオチド５０〜ヌクレオチド５４）及びエキソン８（ヌクレオチド１〜ヌクレオチド２１）内のヌクレオチド配列とハイブリダイズする。これら３つのオリゴヌクレオチドの組み合わせは、ＳＭＮ１又はＳＭＮ２ミニ遺伝子のみを検出し（ＲＴ−ｑＰＣＲ）、内因性ＳＭＮ１又はＳＭＮ２遺伝子を検出しないであろう。
【表６】
0006675334.tif 000067
【０２１５】
ＳＭＮ ｆｏｒｗａｒｄ及びｒｅｖｅｒｓｅプライマーは、最終濃度０．４μMで用いる。ＳＭＮプローブは、最終濃度０．１５μMで用いる。ＧＡＰＤＨプライマーは、最終濃度０．２μM、プローブは、０．１５μMで用いる。
【０２１６】
２ｘ ＲＴ−ＰＣＲ ｂｕｆｆｅｒ ７．５μL、２５ｘ ＲＴ−ＰＣＲ ｅｎｚｙｍｅ ｍｉｘ ０．４μL、２０ｘ ＧＡＰＤＨプライマー−プローブ ｍｉｘ ０．７５μL、水 ４．００７５μL、１０倍希釈細胞溶解物 ２μL、１００μM ＳＭＮ ｆｏｒｗａｒｄプライマー ０．０６μL、１００μM ＳＭＮ ｒｅｖｅｒｓｅプライマー ０．０６μL、及び１００μM ＳＭＮプローブ ０．２２５μLを合わせて、ＳＭＮ２−ミニ遺伝子ＧＡＰＤＨ ｍｉｘ（総体積１５μL）を調製する。
【０２１７】
ＰＣＲを以下の温度で、示された時間行う：ステップ１：４８℃（１５分）；ステップ２：９５℃（１０分）；ステップ３：９５℃（１５秒）；ステップ４：６０℃（１分）；その後、ステップ３と４を合計４０サイクル繰り返す。
【０２１８】
各反応混合物は、ＳＭＮ２−Ａミニ遺伝子とＧＡＰＤＨプライマー／プローブセットの両者を含み（多重設計）、２種の転写物のレベルの同時測定が可能である。
【０２１９】
ＦＬ ＳＭＮ２ミニｍＲＮＡの存在量の、ビヒクル対照で処理した細胞におけるそれに対しての増加を、改変ΔΔＣｔ法（Livak and Schmittgen, Methods, 2001, 25:402-8に記載）を用いてリアルタイムＰＣＲデータから求める。ＦＬ ＳＭＮ２ミニ及びＧＡＰＤＨのそれぞれについて、増幅効率Ｅを、増幅曲線の傾きから計算する。次いで、ＦＬ ＳＭＮ２ミニ及びＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの存在量を、（１＋Ｅ）−Ｃｔ（式中、Ｃｔは、各アンプリコンについての閾値である）として計算する。ＦＬ ＳＭＮ２ミニｍＲＮＡの存在量を、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ存在量に対して標準化する。次いで、試験化合物で処理した試料からのＦＬ ＳＭＮ２ミニｍＲＮＡ存在量（標準化したもの）を、ビヒクルで処理した細胞からのＦＬ ＳＭＮ２ミニｍＲＮＡ存在量（標準化したもの）で除算して、ビヒクル対照に対してのＦＬ ＳＭＮ２ミニｍＲＮＡのレベルを求める。
【０２２０】
表３は、本発明の特定の化合物についての、上記の手順に従って生成させた７点の濃度データから得られた、全長ＳＭＮ２ミニ遺伝子ｍＲＮＡの産生についてのＥＣ１．５ｘ濃度を提供する。
【０２２１】
本発明の化合物の特別なものは、全長ＳＭＮ２ミニ遺伝子ｍＲＮＡの産生についてのＥＣ１．５ｘ濃度≦５μMを示す。
【０２２２】
本発明の化合物のより特別なものは、全長ＳＭＮ２ミニ遺伝子ｍＲＮＡの産生についてのＥＣ１．５ｘ濃度≦１μMを示す。
【０２２３】
本発明の化合物の最も特別なものは、全長ＳＭＮ２ミニ遺伝子ｍＲＮＡの産生についてのＥＣ１．５ｘ濃度≦０．１μMを示す。
【表７】
0006675334.tif 000068
【０２２４】
アッセイ２
培養細胞におけるＳＭＮタンパク質アッセイ
ＳＭＮ ＨＴＲＦ（均一時間分解蛍光）アッセイを用いて、試験化合物で処理したＳＭＡ患者の繊維芽細胞におけるＳＭＮタンパク質のレベルを定量する。用いた材料とそれぞれの供給元を下記表４に列挙する。
【表８】
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【０２２５】
細胞を解凍し、ＤＭＥＭ−１０％ＦＢＳ中で７２時間培養する。細胞をトリプシン処理し、計数し、濃度２５，０００細胞／mLとなるようにＤＭＥＭ−１０％ＦＢＳに再懸濁する。細胞懸濁液をウェルあたり５，０００細胞で９６穴マイクロタイタープレートに入れ（plated）、３〜５時間インキュベーションする。７点の濃度曲線が生成するよう、試験化合物を１００％ＤＭＳＯ中３．１６倍で段階希釈した。試験化合物溶液１μLを、細胞を含むウェルに移し、細胞を細胞培養インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２、相対湿度１００％）内で４８時間インキュベーションする。各々の試験化合物濃度について、３つ組の試料を作る。４８時間後、ウェルから上清を除去し、プロテアーゼ阻害剤を含むRIPA lysis buffer ２５μLをウェルに添加し、振とうしつつ室温で１時間インキュベーションする。希釈液２５μLを添加し、次いで得られた溶解物３５μLを３８４穴プレート（各ウェルが、抗体溶液 ５μL（SMN reconstitution buffer中、anti-SMN d2 及び anti-SMN cryptate の１：１００希釈）を含む）に移す。プレートを１分間遠心して溶液をウェルの底に追いやり、次いで室温で１晩インキュベーションする。プレートの各ウェルについて、EnVision multilabel plate reader（Perkin-Elmer）で６６５nm及び６２０nmでの蛍光を測定する。
【０２２６】
試料、ブランク及びビヒクル対照ウェルのそれぞれについて、６６５nmにおけるシグナルを、６２０nmにおけるシグナルで除算することにより、標準化蛍光シグナルを計算する。シグナルの標準化は、溶解物のマトリックス効果による、可能性のある蛍光消光を考慮したものである（accounts for）。各試料ウェルについての標準化した蛍光から、ブランク対照ウェルについての標準化した平均蛍光を減算し、次いでこの差をブランク対照ウェルについての標準化した平均蛍光で除算し、得られた数値に１００を乗じることにより、各試料ウェルについてのΔＦ値（百分率の値でのＳＭＮタンパク質存在量の測定値）を計算する。各試料ウェルについてのΔＦ値は、試験化合物で処理した試料からのＳＭＮタンパク質存在量を表す。各試料ウェルについてのΔＦ値をビヒクル対照ウェルについてのΔＦ値で除算して、ビヒクル対照に対しての、ＳＭＮタンパク質存在量の増加の倍率（fold increase）を計算する。表５は、本発明の特定の化合物についての、上記の手順に従って生成させた７点の濃度データから得られた、ＳＭＮタンパク質発現についてのＥＣ１．５ｘ濃度を提供する。
【０２２７】
本発明の化合物の特別なものは、ＳＭＮタンパク質発現についてのＥＣ１．５ｘ濃度≦１０μMを示す。
【０２２８】
本発明の化合物のより特別なものは、ＳＭＮタンパク質発現についてのＥＣ１．５ｘ濃度≦１０００nMを示す。
【０２２９】
本発明の化合物の最も特別なものは、ＳＭＮタンパク質発現についてのＥＣ１．５ｘ濃度≦５００nMを示す。
【０２３０】
表６は、本発明の特定の化合物についての、上記の手順に従って生成させた７点の濃度データから得られた、ＳＭＮタンパク質の最大の増加の倍率を提供する。
【０２３１】
本発明の化合物の特別なものは、最大の増加の倍率＞１．５を示す。
【０２３２】
本発明の化合物のより特別なものは、最大の増加の倍率＞１．７を示す。
【０２３３】
本発明の化合物の最も特別なものは、最大の増加の倍率＞１．８を示す。
【表９】
0006675334.tif 000070
【表１０】
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