(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の化合物から選ばれることを特徴とする重水素化チエノピペリジン誘導体またはその薬理上許容される塩。
【化５】
0006695361.tif 000028
【請求項２】
前記塩は、重水素化チエノピペリジン誘導体と、硫酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、酢酸、ギ酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シュウ酸またはコハク酸から形成される塩である請求項１に記載の重水素化チエノピペリジン誘導体の薬理上許容される塩。
【請求項３】
請求項１に記載の重水素化チエノピペリジン誘導体またはその薬理上許容される塩を含むことを特徴とする薬物組成物。
【請求項４】
前記薬物組成物は、薬学的に受容可能なキャリアをさらに含むことを特徴とする請求項３に記載の薬物組成物。
【請求項５】
請求項１に記載の重水素化チエノピペリジン誘導体またはその薬理上許容される塩の、心不全、脳卒中、不安定狭心痛などの心脳血管疾患を治療及び予防する薬物の調製における使用。
【請求項６】
請求項１に記載の重水素化チエノピペリジン誘導体またはその薬理上許容される塩の、抗血小板凝集の薬物の調製における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、有機化学及び薬物化学分野に関する。具体的には、本発明は、重水素化チエノピペリジン誘導体に関し、本発明は、さらに該重水素化チエノピペリジン誘導体の薬理上許容される酸付加塩、これらの調製方法、並びにこれらの心脳血管疾患を治療及び予防する薬物の調製における使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
クロピドグレル（Ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ）は、チオフェンピリジン類薬物であり、血小板の活性を効果的に抑制可能であり、現在、急性冠動脈症候群、及び経皮冠動脈の介入治療の患者に幅広く使用応用される抗血小板薬物である。その構造式は以下の通りである。
【化１】
0006695361.tif 000002
【０００３】
クロピドグレルは、不活性の前駆体薬物であり、肝細胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ４５０）酵素を介して転化して活性代謝物を形成する必要があり、その代謝過程は以下の通りである。
【化２】
0006695361.tif 000003
【０００４】
該代謝物は、血小板膜の表面のアデノシン二リン酸（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＡＤＰ）アクセプターＰ２Ｙ１２と結合し、ＡＤＰと血小板アクセプターとの結合、並びに二次ＡＤＰ媒介の糖タンパク質ＧＰＩＩｂＰＩＩＩａ複合体活性化を遮断する作用を発揮して、血小板の凝集を抑える（Ａｒｔｅｒｉｏ−ｓｃｌｅｒＴｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｅ  Ｂｉｏｌ，１９９９，１９（８）：２００２−２０１１）。クロピドグレルは、ステント内の亜急性血栓症の形成の発生率を顕著に低下させ、死亡、再発性心筋梗塞等の心臓血管事件の発生を減少させることが可能である。しかし、近年の研究によると、約１１％〜４４％（ＡｍＨｅａｒｔ  Ｊ，２００９，１５７（２）：３７５−３８２．）の患者は、クロピドグレルに対して低反応ひいては無反応であることが発見され、このような現象は「クロピドグレル抵抗」とも称される。
【０００５】
中国特許出願２０１３１０４２８０５２．４には、下記構造のクロピドグレル代謝物２−酸素クロピドグレルプロドラッグチエノピペリジン誘導体が開示され、「クロピドグレル抵抗」の改善のために用いられる。
【化３】
0006695361.tif 000004
【０００６】
しかしながら、該シリーズの化合物は、血小板凝集の抑制率が低く、加水分解速度が速い等の欠陥が相変わらず存在する。上記欠陥を解決し、臨床効果が速く、治療効果が高く、クロピドグレル抵抗を回避できる抗血小板凝集の新薬を開発すると同時に、製剤の作製に有利な化合物を探して、バイオアベイラビリティを向上させ、副作用を減少させて、溶解、吸収、服用に有利にするために、本発明は、中国特許出願２０１３１０４２８０５２．４を元に、一連の新規の重水素化チエノピペリジン誘導体、その調製方法、及び使用を開発している。中国特許出願２０１３１０４２８０５２．４の全文は、本発明に組み込んで、本発明の従来技術とする。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明が解決しようとする技術問題は、上記欠陥を克服し、新規の光学活性重水素化チエノピリジン誘導体を設計、合成して、治療効果が良好で、副作用が小さい抗血小板凝集薬物を開発することである。
【０００８】
具体的には、本発明の１つの目的は、光学活性重水素化チエノピペリジン誘導体またはその薬理上許容される塩、溶媒和物、多結晶体、エナンチオマーまたはラセモ混合物を提供することである。
【０００９】
本発明のもう一つの目的は、前記光学活性重水素化チエノピペリジン誘導体またはその薬理上許容される塩、溶媒和物、多結晶体、エナンチオマーまたはラセモ混合物または薬物組成物の調製方法を提供することである。
【００１０】
本発明の更にもう一つの目的は、前記光学活性重水素化チエノピペリジン誘導体またはその薬理上許容される塩、溶媒和物、多結晶体、エナンチオマーまたはラセモ混合物または薬物組成物を活性成分とする薬物組成物を提供することである。
【００１１】
本発明の更にもう一つの目的は、前記光学活性重水素化チエノピペリジン誘導体またはその薬理上許容される塩、溶媒和物、多結晶体、エナンチオマーまたはラセモ混合物または薬物組成物の製薬方面における用途を提供することである。
【００１２】
本発明の更にもう一つの目的は、前記光学活性重水素化チエノピペリジン誘導体またはその薬理上許容される塩、溶媒和物、多結晶体、エナンチオマーまたはラセモ混合物または薬物組成物、あるいは前記薬物組成物を採用して関連する疾患の治療に用いる方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
上記目的を実現するために、本発明が採用する技術方案は以下の通りである。
本発明は、式（Ｉ）の構造を有する光学活性重水素化チエノピペリジン誘導体またはその薬理上許容される塩、溶媒和物、多結晶体、エナンチオマーまたはラセモ混合物を提供する。
【化４】
0006695361.tif 000005
ここで、ＣＤ３におけるＤは重水素であり、それは、水素の一種の安定同位体であり、ｄｅｕｔｅｒｉｕｍとも称される。
ＸはＰまたはＳであり、ｍは０または１であり、ｎは０または１であり、Ｒ１は、水素、Ｃ１−Ｃ４直鎖または分岐のハロゲンにより置換または無置換のアルカン基、フェニル基または置換フェニル基から選ばれ、Ｒ２は、無置換、水素、Ｃ１−Ｃ４直鎖または分岐のハロゲンにより置換または無置換のアルカン基、フェニル基または置換フェニル基から選ばれ、ここで、Ｒ２が無置換である場合、ＸとＯは二重結合を形成する。
【００１４】
ここで、ＸはＰで、ｍは０で、ｎは０であり、Ｒ１は、水素、ＣＨ３−、ＣＨ３ＣＨ２−、イソプロピル基、ＣＣｌ３ＣＨ２−、フェニル基から選ばれ、Ｒ２は、水素、ＣＨ３−、ＣＨ３ＣＨ２−、イソプロピル基、ＣＣｌ３ＣＨ２−、フェニル基から選ばれることが好ましい。
【００１５】
または、ここで、ＸはＰで、ｍは１で、ｎは１であり、Ｒ１は、水素、ＣＨ３−、ＣＨ３ＣＨ２−、イソプロピル基、ＣＣｌ３ＣＨ２−、ｔ−ブチル基、フェニル基から選ばれ、Ｒ２は、水素、ＣＨ３−、ＣＨ３ＣＨ２−、イソプロピル基、ＣＣｌ３ＣＨ２−、ｔ−ブチル基、フェニル基が選ばれる。
【００１６】
または、ここで、ＸはＳで、ｍは０で、ｎは０であり、Ｒ１は、水素、ＣＨ３−、ＣＨ３ＣＨ２−、イソプロピル基、ＣＣｌ３ＣＨ２−、ｔ−ブチル基、フェニル基から選ばれ、Ｒ２は無置換であり、かつ、ＸとＯは二重結合を形成する。
【００１７】
本発明に記載の重水素化チエノピペリジン誘導体は、以下の化合物であることが好ましい。
【化５】
0006695361.tif 000006
【００１８】
本発明は、前記重水素化チエノピペリジン誘導体の薬理上許容される塩をさらに含み、ここで、前記塩は、重水素化チエノピペリジン誘導体と硫酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、酢酸、ギ酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シュウ酸またはコハク酸とから形成される塩であってもよい。
【００１９】
本発明は、薬物組成物をさらに提供し、前記薬物組成物は本発明に記載の重水素化チエノピペリジン誘導体またはその薬理上許容される塩を含む。前記薬物組成物は、必要に応じて、薬学的に受容可能なキャリアをさらに含有してもよい。前記薬学的に受容可能な不活性キャリアは、固体または液体であってもよい。粉剤、錠剤、分散可能な粉剤、カプセル剤、坐剤及びカプセル形式の固体または半固体の薬物製剤に調製可能であり、このような場合、通常、固体キャリアを使用する。使用可能な固体キャリアは、希釈剤、フレーバー剤、可溶化剤、潤滑剤、懸濁剤、接着剤、膨張剤等のうちの１種また複数種の物質であることが好ましく、または封止物質であってもよい。粉状製剤において、キャリアには５％〜７０％の微粒化活性成分が含まれている。適切な固体キャリアの具体的な実例には、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク粉、蔗糖、乳糖、ペクチン、デキストリン、澱粉、ゼラチン、ガムトラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低沸点ワックス、カカオバター等が含まれている。これらは投薬しやすいため、錠剤、粉剤、カプセル剤は吸収に最も有利な経口摂取の固体製剤を代表する。
【００２０】
液体製剤は、溶液、懸濁液及び乳液を含む。例えば、非消化管投薬の注射可能な製剤は、水または水とプロピレングリコールの溶液形式であってもよく、生体の生理状態に適するようにその等張性、ｐＨなどを調節する。液体製剤は、ポリエチレングリコール水溶液の形式に作製してもよい。活性成分を水に溶解させてから、適切な着色剤、フレーバー剤、安定剤及び増ちょう剤を入れることによって、経口摂取の水溶液を調製してもよい。微粒化した活性成分を天然または合成の接着剤のような粘性物質、メチルセルロース、酸性メチルセルロースナトリウム、および他の既知の懸濁剤に分散させて、経口摂取のための水懸濁液を調製してもよい。
【００２１】
投薬し易さ、及び剤量の均一のために、上記薬物製剤を剤量単位の形式に調製することは特に有利である。製剤の剤量単位の形式は、単一剤量として適する物理分離単位を指し、各単位には、期待される治療効果を発生する算出された所定量の活性成分が含まれている。このような剤量単位の形式は、錠剤、カプセルまたはチューブまたはバイアルに装入された粉剤、または管または瓶に装入された軟膏、ゲルまたはクリームのような包装形式であってもよい。
【００２２】
剤量単位の形式に含まれている活性成分の量は変更可能であるが、通常、選択する活性成分の効果に基づいて、１〜１０００ｍｇの範囲内に調節する。
【００２３】
当業者は、常法によってある状況に適する好ましい剤量を確定してもよい。通常、治療を始める量は活性成分の最適の剤量より低く、それから最適の治療効果を得るまで徐々に投薬剤量を増加させる。便利のために、一日の総剤量は幾つかの部分に分け、数回に分けて投薬してもよい。
【００２４】
本発明は、本発明に記載の重水素化チエノピペリジン誘導体またはその薬理上許容される塩の、心不全、脳卒中、不安定狭心痛などの心脳血管疾患を治療及び予防する薬物の調製における使用を提供する。特に、抗血小板凝集の薬物の調製における使用を提供する。
【００２５】
一方、本発明は、本発明の重水素化チエノピペリジン誘導体またはその薬理上許容される塩、溶媒和物、多結晶体、エナンチオマーまたはラセモ混合物の調製方法をさらに提供し、前記調製方法は下記の反応ステップを含む。
【化６】
0006695361.tif 000007
ここで、置換基は前記の通りである。
【００２６】
本発明の具体的な実施形態によれば、本発明の化合物ＴＳＤ−９は下記の方法によって調製可能である。
【化７】
0006695361.tif 000008
ここで、Ｒは塩素またはヒドロキシ基である。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】ＴＳＤ−８とクロピドグレルの体外におけるエステラーゼの加水分解速度図である。
【図２】ＴＳＤ−６とクロピドグレルの体外におけるエステラーゼの加水分解速度図である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下、実施例に基づいて本発明の更なる説明を行うが、本発明を制限することはない。
【００２９】
実施例１
（Ｒ）−オルトクロロメリック酸重水素化メチルエステル
【化８】
0006695361.tif 000009
（Ｒ）−オルトクロロメリック酸９．４ｇを３６ｍＬの重水素化メタノールに溶解させ、４Ｍ塩化水素／ジオキサン溶液１ｍＬを入れて、５時間加熱還流し、冷却してから溶剤を減圧、蒸発乾固し、残留物はメチレンクロライドで溶解し、順に５％炭酸カリウム水溶液、水を用いて洗浄し、無水硫酸ナトリウムを用いてメチレンクロライド溶液を乾燥し、乾燥剤をろ過、除去した後に蒸発乾固して、無色透明のオイル状（Ｒ）−オルトクロロメリック酸重水素化メチルエステル９．２ｇを得て、収率は８９．７％であった。
【００３０】
実施例２
（Ｒ）−２−（２−クロロフェニル）−２−（４−ニトロベンゼンスルホニルオキシ）−重水素化酢酸メチルエステル（ＩＩ−１）
【化９】
0006695361.tif 000010
（Ｒ）−オルトクロロメリック酸重水素化メチルエステル１０．２ｇを５０ｍＬの無水メチレンクロライドに溶解させ、トリエチルアミン６５．６ｇと触媒量のＤＭＡＰを入れて攪拌し、０℃まで温度を下げ、同じ温度で１２．２ｇのｐ−ニトロベンゼンスルホニルクロリドの５０ｍＬ無水メチレンクロライド溶液を滴下してから、保温しながら４時間反応させた。反応液に１００ｍＬの水を入れて、攪拌、静置、分液し、水相は再び１５０ｍＬのメチレンクロライドを用いて、三回に分けて抽出し、有機相を合併してから無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥剤をろ過、除去した後、メチレンクロライドを減圧、蒸発乾固して、ダークレッドのオイル状の粗生成物２０．９ｇを得て、メタノールを介して再結晶して、固体製品（ＩＩ−１）１５．８ｇを得て、収率は８１．３％であった。
【００３１】
実施例３
（２Ｓ）−２−（２−クロロフェニル）−２−（２−オキソ−７，７ａ−ジヒドロチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−５（２Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−イル）−重水素化酢酸メチルエステル（Ｖ−１）
【化１０】
0006695361.tif 000011
（Ｒ）−２−（２−クロロフェニル）−２−（４−ニトロベンゼンスルホニルオキシ）−重水素化酢酸メチルエステル（ＩＩ−１）５８．１ｇ（０．１５ｍｏｌ）、５，６，７，７ａ−テトラヒドロチオフェン［３．２−ｃ］ピリジン−２（４Ｈ）−ケトン塩酸塩（ＩＶ−１）３２．３ｇ（０．１７ｍｏｌ）、及び３７．８ｇ（０．３８ｍｏｌ）の炭酸水素カリウムを５００ｍＬのアセトニトリルに入れて、反応系は窒素ガスを用いて保護し、室温で２６時間攪拌した。反応液を静置してから不溶物をろ過して、ダークレッド母液を得た。溶剤を減圧、蒸発乾固し、高速カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝４：１）を介して、オイル状の製品３５．４ｇを得て、収率は７０％であった。
【００３２】
実施例４
【化１１】
0006695361.tif 000012
２−酸素重水素化クロピドグレル中間体ＩＩ（２００ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を５ｍＬの無水テトラヒドロフランに溶解させ、零下２０℃まで温度を下げ、リチウムジイソプロピルアミン（２．０Ｍ、０．５ｍＬ、１ｍｍｏｌ）を入れて２０分間攪拌し、化合物ＩＩＩａ（１０４ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を反応液に入れて、自然に昇温させて１２時間反応させ、４％の塩酸を用いてクエンチ反応を行い、５０ｍＬの酢酸エチルを入れて、それぞれ炭酸水素ナトリウムと飽和食塩を用いて有機層を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過、濃縮する。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝４：１）を介して精製して、化合物ＴＳＤ−１（２４５ｍｇ、収率９２％）を得た。
【００３３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．６７−７．６５（ｍ，１Ｈ），７．４２−７．４０（ｍ，１Ｈ），７．３１−７．２６（ｍ，２Ｈ），６．２５（ｄ，１Ｈ），４．９１（ｓ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．６４−３．６０（ｍ，１Ｈ），３．５１−３．４８（ｍ，１Ｈ），２．８９−２．８７（ｍ，２Ｈ），２．７５−２．７３（ｍ，２Ｈ），ＭＳ：ｍ／ｚ  ４４９［Ｍ＋１］＋。
【００３４】
実施例５
【化１２】
0006695361.tif 000013
２−酸素重水素化クロピドグレル中間体ＩＩ（５００ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの無水テトラヒドロフランに溶解させ、零下２０℃まで温度を下げ、リチウムジイソプロピルアミン（２．０Ｍ、１．２５ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）を入れて３０分間攪拌し、化合物ＩＩＩｂ（３１１ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を反応液に入れて、自然に昇温させて１２時間反応させ、４％の塩酸を用いてクエンチ反応を行い、１００ｍＬ酢酸エチルを入れて、それぞれ炭酸水素ナトリウムと飽和食塩を用いて有機層を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過、濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝４：１）を介して精製して、化合物ＴＳＤ−２（６６０ｍｇ、収率９３％）を得た。
【００３５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．６９−７．６６（ｍ，１Ｈ），７．４３−７．４１（ｍ，１Ｈ），７．３３−７．２８（ｍ，２Ｈ），６．２７（ｄ，１Ｈ），４．９１（ｓ，１Ｈ），４．２７−４．１８（ｍ，４Ｈ），３．６５−３．６１（ｍ，１Ｈ），３．５２−３．４９（ｍ，１Ｈ），２．９０−２．８７（ｍ，  ２Ｈ），２．７６−２．７４（ｍ，２Ｈ），１．３９−１．３６（ｄｔ，６Ｈ）．ＭＳ：ｍ／ｚ  ４７７［Ｍ＋１］＋。
【００３６】
実施例６
【化１３】
0006695361.tif 000014
２−酸素重水素化クロピドグレル中間体ＩＩ（１００ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を５ｍＬ無水テトラヒドロフランに溶解させ、零下２０℃まで温度を下げ、リチウムジイソプロピルアミン（２．０Ｍ、０．２５ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）を入れて２０分間攪拌し、化合物ＩＩＩｄ（９７ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を反応液に入れて、自然に昇温させて１２時間反応させ、４％の塩酸を用いてクエンチ反応を行い、５０ｍＬの酢酸エチルを入れて、それぞれ炭酸水素ナトリウムと飽和食塩を用いて有機層を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過、濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝２：１）を介して精製して、化合物ＴＳＤ−４（１６２ｍｇ、収率９５％）を得た。
【００３７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．７１−７．６８（ｍ，１Ｈ），７．４７−７．４２（ｍ，５Ｈ），７．３５−７．２４（ｍ，１０Ｈ），６．２８（ｄ，１Ｈ），４．９２（ｓ，１Ｈ），２．８９−２．８７（ｍ，２Ｈ），２．７５−２．７３（ｍ，２Ｈ），ＭＳ：ｍ／ｚ  ５７３［Ｍ＋１］＋。
【００３８】
実施例７
【化１４】
0006695361.tif 000015
ＴＳＤ−２（５００ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの乾燥メチレンクロライドに溶解させ、ＴＭＳＢｒ（１．７ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）を入れて、室温で１２ｈ反応させ、反応を中止し、溶剤を減圧、乾燥してから、１０ｍＬのメタノールを入れて１ｈ攪拌した。反応液を直接濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ブタノール：ギ酸：水＝５：５：１）を介して精製して、化合物ＴＳＤ−６（３９０ｍｇ、収率９０％）を得た。
【００３９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ７．６０（ｄ，１Ｈ），７．５３（ｄ，１Ｈ），７．４１−７．４０（ｍ，２Ｈ），６．２４（ｓ，１Ｈ），４．９１（ｓ，１Ｈ），３．５６（ｓ，２Ｈ），２．８５（ｂｒｓ，２Ｈ），２．６６（ｂｒｓ，２Ｈ），ＭＳ：ｍ／ｚ  ４２１［Ｍ＋１］＋。
【００４０】
実施例８
【化１５】
0006695361.tif 000016
２−酸素重水素化クロピドグレル中間体ＩＩ（５００ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を５ｍＬの無水テトラヒドロフランに溶解させ、零下２０℃まで温度を下げ、リチウムジイソプロピルアミン（２．０Ｍ、１．２５ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）を入れて２０分間攪拌し、化合物ＩＩＩｅ（４６６ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を反応液に入れて、自然に昇温させて１２時間反応させ、４％の塩酸を用いてクエンチ反応を行い、１００ｍＬの酢酸エチルを入れて、それぞれ炭酸水素ナトリウムと飽和食塩を用いて有機層を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過、濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝２：１）を介して精製して、化合物ＴＳＤ−７（２６９ｍｇ、収率３２％）を得た。
【００４１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．６９−７．６５（ｍ，１Ｈ），７．４２−７．４０（ｍ，１Ｈ），７．３１−７．２４（ｍ，２Ｈ），６．１７（ｓ，１Ｈ），５．４６（ｓ，１Ｈ），５．４３（ｓ，１Ｈ），４．９１（ｓ，１Ｈ），３．６４−３．６０（ｍ，１Ｈ），３．５０−３．４７（ｍ，１Ｈ），２．９１−２．８８（ｍ，２Ｈ），２．７５−２．７２（ｍ，２Ｈ），１．５０（ｓ，１８Ｈ）．ＭＳ：ｍ／ｚ  ５６０［Ｍ＋１］＋。
【００４２】
実施例９
【化１６】
0006695361.tif 000017
ＴＳＤ−６（５００ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのメチレンクロライドに溶解させ、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ）を入れて、室温で１ｈ攪拌し、減圧、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ブタノール：ギ酸：水＝５：５：１）を介して精製して、化合物ＴＳＤ−８（１４０ｍｇ、収率３５％）を得た。
【００４３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ７．６２−７．６０（ｍ，１Ｈ），７．５４−７．４１（ｍ，３Ｈ），６．１８（ｓ，１Ｈ），５．８４（ｓ，１Ｈ），５．３７−５．３２（ｄ，２Ｈ），４．２６−３．９８（ｍ，２Ｈ），３．７４−３．６６（ｍ，２Ｈ），３．１５−３．００（ｍ，２Ｈ），ＭＳ：ｍ／ｚ  ４５１［Ｍ＋１］＋。
【００４４】
実施例１０
【化１７】
0006695361.tif 000018
２−酸素重水素化クロピドグレル中間体ＩＩ（１５０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を５ｍｌの無水テトラヒドロフランに溶解させ、零下２０℃まで温度を下げ、リチウムジイソプロピルアミン（２．０Ｍ、０．４ｍＬ、０．８ｍｍｏｌ）を入れて２０分間攪拌し、化合物ＩＩＩｃ（１０８ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を反応液に入れて、自然に昇温させて室温で１２時間反応させ、４％の塩酸を用いてクエンチ反応を行い、５０ｍＬの酢酸エチルを入れて、それぞれ炭酸水素ナトリウムと飽和食塩水を用いて有機層を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過、濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝２：１）を介して精製して、化合物ＴＳＤ−３（１９２ｍｇ、収率８５％）を得た。
【００４５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．６８−７．６７（ｍ，１Ｈ），７．４１−７．３９（ｍ，１Ｈ），７．３４−７．２８（ｍ，２Ｈ），  ６．２８（ｄ，１Ｈ），４．９２（ｓ，１Ｈ），４．７４（ｍ，２Ｈ），４．２６−４．１７（ｍ，４Ｈ），３．６４−３．６１（ｍ，１Ｈ），３．５３−３．４９（ｍ，１Ｈ），１．２８（ｄ，１２Ｈ）．ＭＳ：ｍ／ｚ  ５０５［Ｍ＋１］＋。
【００４６】
実施例１１
【化１８】
0006695361.tif 000019
２−酸素重水素化クロピドグレル中間体ＩＩ（５００ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を５ｍＬの無水テトラヒドロフランに溶解させ、零下２０℃まで温度を下げ、リチウムジイソプロピルアミン（２．０Ｍ、１．２５ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）を入れて２０分間攪拌し、化合物ＩＶを反応液に入れて、自然に昇温させて１２時間反応させ、４％の塩酸を用いてクエンチ反応を行い、１００ｍＬの酢酸エチルを入れて、それぞれ炭酸水素ナトリウムと飽和食塩を用いて有機層を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過、濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝２：１）を介して精製して、化合物ＴＳＤ−９（２６９ｍｇ、収率３２％）を得た。
【００４７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．６９−７．６５（ｍ，１Ｈ），７．４２−７．４０（ｍ，１Ｈ），７．３１−７．２４（ｍ，２Ｈ），６．１７（ｓ，１Ｈ），５．４６（ｓ，１Ｈ），５．４３（ｓ，１Ｈ），４．９１（ｓ，１Ｈ），３．６４−３．６０（ｍ，１Ｈ），３．５０−３．４７（ｍ，１Ｈ），２．９１−２．８８（ｍ，２Ｈ），２．７５−２．７２（ｍ，２Ｈ），１．５０（ｓ，１８Ｈ）．ＭＳ：ｍ／ｚ  ５６３［Ｍ＋１］＋。
【００４８】
実施例１２
本発明の化合物の薬効の研究
実験方法：
血小板懸濁液に少量のＡＤＰ（濃度が０．９μｍｏｌ／Ｌ以下）を入れると、迅速に血小板の凝集を引き起こすことができるが、すぐ解凝集される。中等剤量のＡＤＰ（１．０μｍｏｌ／Ｌ程度）を入れると、第１凝集の時相に終了及び解凝集してから間もなく、再び二回目の不可逆的な凝集時相が出現する。不可逆的な凝集時相の最大凝集率は、被試験品の血液凝固機能に対する影響の評価に用いることが可能である。本実験は、Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｐｒｅｃｉｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．のＮＪ４型のセミオート血小板凝集装置を採用し、タスリー・ファーマシューティカル・グループ・カンパニー・リミテッドから提供される被試験品の血小板凝集に対する抑制作用を観察した。
【００４９】
実験材料：
動物：Ｗｉｓｔａｒ雄ラット、２３０−２５０ｇ、Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ．から購入。
試薬：ＡＤＰ、Ｓｉｇｍａ社。
被試験品：１６個の被試験品はタスリー・ファーマシューティカル・グループ・カンパニー・リミテッドから提供され、ここで、ＴＳＣ−１〜４、ＴＳＣ−６〜９の調製方法は、中国特許出願２０１３１０４２８０５２．４を参照している。
投薬剤量：被試験品は０．２５％ＣＭＣで混合懸濁し、３ｍｇ／ｋｇ体重で投薬し、投薬体積２ｍＬであった。
【００５０】
実験ステップ：
ラットに投薬した２時間後、ペントバルビタールナトリウム麻酔を行い、腹部の大動脈から採血し、クエン酸ナトリウム１：９で抗凝固し、多血小板血漿と乏血小板血漿を遠心採血し、両者の混合比率は乏：多＝３：１であった。
【００５１】
実験結果：
【表１】
0006695361.tif 000020
【００５２】
ＡＤＰ誘導の血小板凝集の実験において、各被試験品はいずれも、ラット血小板の凝集を顕著に抑制する作用を有するとともに、血小板の第２時相の凝集を逆転させて、解凝集を引き起こすことが可能であった。かつ、本発明の重水素化チエノピペリジンシリーズの誘導体（ＴＳＤ−１〜４、６〜９）の血小板の凝集を抑制する作用は、非重水素化のチエノピペリジンシリーズ誘導体（ＴＳＣ−１〜ＴＳＣ−４、ＴＳＣ−６〜ＴＳＣ−９）より顕著に優れていた。
【００５３】
実施例１３
化合物ＴＳＤ−８とクロピドグレルの体外におけるエステラーゼの加水分解速度の対比試験
インビトロインキュベーションの方法を採用して、ＴＳＤ−８とクロピドグレル硫酸水素塩のラットの全血における加水分解速度を測定した。
【００５４】
ラットの新鮮な全血３ｍＬを採血し、ガラス試験管に放置した。３０μｇ／ｍＬのＴＳＤ−８とクロピドグレル硫酸水素塩（生理食塩水調製）を入れて、各組に並行に３つの実験を行った。試験管を３７℃の恒温で振盪し、固定時点１０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、４０ｍｉｎ、５０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ、７０ｍｉｎ、８０ｍｉｎ、９０ｍｉｎ、１００ｍｉｎ、１１０ｍｉｎ、１２０ｍｉｎに１００μＬを取り出し、９００μＬのメタノールを入れて、直ちに反応を中止し、再び順に１００μＬのメタノール水（１：１、ｖ／ｖ）と、１００μＬ内部標準（安定、１００ｎｇ／ｍＬ）を入れた。低温で、１３０００ｒｐｍで１０ｍｉｎ遠心し、上清を他のＥＰ管に移動し、２０μＬを取ってサンプルとした。
【００５５】
【表２】
0006695361.tif 000021
【００５６】
図１から分かるように、ＴＳＤ−８の各時点の濃度はいずれもクロピドグレルより大きいため、ラットの全血における加水分解速度はクロピドグレルより遅く、全血におけるクロピドグレル硫酸水素塩は、５０ｍｉｎ程度の際に、濃度が既に定量下限より低いが、化合物ＴＳＤ−８はまだ検出できた。
【００５７】
実施例１４
化合物ＴＳＤ−６とクロピドグレルの体外におけるエステラーゼの加水分解速度の対比試験
インビトロインキュベーションの方法を採用して、ＴＳＤ−６とクロピドグレル硫酸水素塩のラットの全血における加水分解速度を測定した。
【００５８】
ラットの新鮮な全血３ｍＬを採血し、ガラス試験管に放置する。３０μｇ／ｍＬのＴＳＤ−６とクロピドグレル硫酸水素塩（生理食塩水調製）を入れて、各組に並行に３つの実験を行った。試験管は３７℃の恒温で振盪し、固定時点１０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、４０ｍｉｎ、５０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ、７０ｍｉｎ、８０ｍｉｎ、９０ｍｉｎ、１００ｍｉｎ、１１０ｍｉｎ、１２０ｍｉｎに１００μＬを取り出し、９００μＬのメタノールを入れて、直ちに反応を中止し、再び１００μＬのメタノール水（１：１、ｖ／ｖ）と、１００μＬ内部標準（安定、１００ｎｇ／ｍＬ）を入れた。低温で、１３０００ｒｐｍで１０ｍｉｎ遠心し、上清を他のＥＰ管に移動し、２０μＬを取ってサンプルとした。
【００５９】
【表３】
0006695361.tif 000022
【００６０】
図２から分かるように、ＴＳＤ−６の各時点の濃度も、いずれもクロピドグレルより大きく、ラットの全血における加水分解速度はクロピドグレルより顕著に遅く、全血におけるクロピドグレル硫酸水素塩は、５０ｍｉｎ程度の際に、濃度は既に定量下限より低いが、化合物ＴＳＤ−６はまだ検出できた。
【００６１】
実施例１５
ＴＳＤ−６、ＴＳＣ−６、Ｉ−１とクロピドグレルのラットの体内代謝産物の２−ｏｘｏ−ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌの薬物動態比較であり、化合物の構造は以下の式に示す通りである。
【化１９】
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【００６２】
試験動物：雄ＳＤラット２４匹、６−７週齢、動物体重２４０〜２９０ｇ、ＳＨＡＮＧＨＡＩ  ＳＬＡＣ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＡＮＩＭＡＬ  ＣＯ．，ＬＴＤから購入、動物合格証番号は２０１５０００５１４６４８である。試験の前、動物は少なくとも３日間飼養して環境に適応するようにする必要がある。静脈注射（ＩＶ）組の動物は絶食させず、経口摂取、胃内投与（ＰＯ）組の動物は投薬前に一晩絶食させ、投薬してから４ｈに飼料を給餌し、試験全体において、動物に自由に水を飲用させた。
【００６３】
被試験薬物：クロピドグレル硫酸水素塩（Ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ）、ＴＳＣ−６、Ｉ−１及びＴＳＤ−６は、タスリー・ファーマシューティカル・グループ・カンパニー・リミテッドから提供された。
【００６４】
動物の組分けとサンプリング時点：２４匹のＳＤラットを８組に分け、各組３匹とし、静脈注射組の動物は足の甲の静脈を通じて３ｍｇ／ｋｇの被試験薬物を給与し、胃内投与組の動物は強制的に１５ｍｇ／ｋｇの被試験薬物を給与した。投薬方法は表４に示す。
【００６５】
【表４】
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【００６６】
サンプル採集と保存：所定時点に基づいて、対応する動物を固定し、尾静脈から約８０μＬを採血し、血液サンプルはヘパリンナトリウムを用いて抗凝固して、湿った氷上に放置した。直ちに、６０μＬの血液試料を取って６００μＬの内部標準溶液（４０ｎｇ／ｍＬジクロフェナクアセトニトリル溶液、０．１％ギ酸含有）に入れて、０．５ｍｉｎボルテックスし、１２０００ｒｐｍ、４℃で５ｍｉｎ遠心して、上澄み液を得た。上澄み液サンプルをまずドライアイスに放置して凍結保存してから、−７０℃の冷蔵庫に移動して、サンプルを分析するまで長期保存した。
【００６７】
試験結果：
【表５】
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【００６８】
重要な代謝産物２−ｏｘｏ−ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌの薬物動態比較研究から分かるように、我々が開発した重水素化化合物ＴＳＤ−６の重要な代謝中間体の暴露量は、経口摂取または静脈注射投薬においても、いずれも非重水素化化合物ＴＳＣ−６及び同種類の類似化合物Ｉ−１より顕著に高い。薬物データはＴＳＤ−６がより良好で独特な代謝性質を有することを示し、これは薬効の向上に有利であり、従来化合物の欠陥を克服する。
【００６９】
実施例１６
式ＴＳＣ−６、Ｉ−１、ＴＳＤ−６及びクロピドグレルのラットの尾出血モデルにおける薬効対比研究
動物及び飼養：
種類、品種：ＳＤラット、
提供：ＳＬＡＣ
体重：２５０−３５０ｇ
性別：雄
動物数：３０
【００７０】
飼養条件：清潔な動物部屋で飼養し、温度は２０．５〜２２．５℃、湿度は５０〜６５％、光照射は１５０〜２５０Ｌｘとし、１２時間で昼夜を切り替える（６：００〜１８：００は昼である）。
【００７１】
被試験物、対照薬物、及び調製方法：化合物ＴＳＣ−６、Ｉ−１、ＴＳＤ−６及びクロピドグレルを５ｍＬの０．２５％ＣＭＣに溶解させ、３７度で２０ｍｉｎ超音波処理し、攪拌子で懸濁液になるまで攪拌した。
【００７２】
剤量設定及び根拠：被試験化合物の剤量は、ＴＳＣ−６、Ｉ−１、ＴＳＤ−６が１ｍｇ／ｋｇであった。ポジ型化合物のクロピドグレルの投薬剤量は１０ｍｇ／ｋｇであり、参照文献及び本実験室の実験結果に基づいて設定した。
【００７３】
投薬方式：経口摂取、胃内投与。
【００７４】
実験方法：
・動物が入室してから、１週間環境に適応させ、実験前に１６時間絶食させた。
・テスト化合物を経口摂取で２ｈ投薬して、クロピドグレルを経口摂取で投薬して４ｈ後、尾出血時間の記録を開始した。
・尾出血時間の記録の１０ｍｉｎ前、ペントバルビタールナトリウム（５０ｍｇ／ｋｇ、ｉｐ）を用いてラットを麻酔し、ラットが完全に麻酔された後、検出時間に達した時、ラットの尾先から１．３ｍｍ離れた箇所で、はさみを用いて裁断し、かつ垂直に３７℃の生理食塩水に浸入させ、血流が出現する時に、計時を開始した。
・血流が中断する時間が２０秒を超える時に、計時を中止する。最大の血流観察時間を４０分間と設定し、４０分を超える場合、計時を中止し、４０分として算出した。
【００７５】
試験結果：
【表６】
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【００７６】
ＴＳＣ−６、Ｉ−１、ＴＳＤ−６とクロピドグレルのラットの尾出血モデルにおける尾出血時間を比較することによって、化合物の抗凝固効果を評価した。我々が開発した重水素化化合物のＴＳＤ−６の抗凝固效果は非重水素化の化合物ＴＳＣ−６と同種類の類似物Ｉ−１より顕著に優れており、ＴＳＤ−６の独特な抗凝固活性を示すことが分かった。
【００７７】
実施例１７
式ＴＳＣ−６、Ｉ−１、ＴＳＤ−６とクロピドグレルのラット動静脈血栓回路モデルの薬効対比研究
動物及び飼養：
種類、品種：ＳＤラット、
提供：ＳＬＡＣ
体重：２５０−３５０ｇ
性別：雄
動物数：３０
【００７８】
飼養条件：清潔な動物部屋で飼養し、温度は２０．５〜２２．５℃、湿度は５０〜６５％、光照射は１５０〜２５０Ｌｘとし、１２時間で昼夜切り替えた（６：００〜１８：００は昼である）。
【００７９】
被試験物、対照薬物、及び調製方法：化合物ＴＳＣ−６、Ｉ−１、ＴＳＤ−６とクロピドグレルを５ｍＬの０．２５％ＣＭＣに溶解させ、３７度で２０ｍｉｎ超音波処理し、攪拌子で懸濁液になるまで攪拌した。
【００８０】
剤量設定及び根拠：被試験化合物の剤量は、ＴＳＣ−６、Ｉ−１、ＴＳＤ−６が１ｍｇ／ｋｇであった。ポジ型化合物のクロピドグレルの投薬剤量は１０ｍｇ／ｋｇであり、参照文献及び本実験室の実験結果に基づいて設定した。
【００８１】
投薬方式：経口摂取、胃内投与。
【００８２】
器具と材料
・綿棒、乾燥綿球、アルコール綿、Ａｎｅｒｄｉａｎ綿球。
・手術用はさみ、眼科ピンセット、止血鉗子、マイクロはさみ、マイクロピンセット、動脈クリップ。
・３−０手術用縫合糸、太いＰＥ管（Ｉ．Ｄ．＊Ｏ．Ｄ．＝１．１４ｍｍ＊１．６３ｍｍ、８ｃｍ長さ）、細いＰＥ管（Ｉ．Ｄ．＊Ｏ．Ｄ．＝０．７２ｍｍ＊１．２２ｍｍ、６ｃｍ長さ）。
・操作板、拘束ロープ、計時器、精密電子天秤、秤量紙。
・注射器、生理食塩水。
【００８３】
７．実験方法
・動物が入室してから、１週間環境に適応させ、実験前に１６時間絶食させた。
・テスト化合物を経口摂取で２ｈ投薬して、クロピドグレルを経口摂取で投薬して４ｈ後、動静脈血液回路の循環を開始した。
・動静脈血液回路の循環を開始する約１５ｍｉｎ前に、ペントバルビタールナトリウム（５０ｍｇ／ｋｇ、ｉｐ）を用いてラットを麻酔した。
・左側の外頸静脈、右側の頸動脈を分離し、かつそれぞれ細いＰＥ管を挿入した。
・２本のＰＥ管をもう１本の長さ８ｃｍの太いＰＥ管で接続して、１つの循環通路を形成した。太いＰＥ管には、１本の長さ６ｃｍの手術用縫合糸（３−０）含む。
・循環通路を開放した１５ｍｉｎ後、血流を遮断し、糸と血栓を取り出し、血液を吸着してから称量し、糸自体の重量を引くと血栓の重量が得られた。
【００８４】
試験結果：
【表７】
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【００８５】
ＴＳＣ−６、Ｉ−１、ＴＳＤ−６とクロピドグレルのラットの動静脈血栓回路モデルにおいて形成する血栓重量を比較することによって、化合物の抗凝固效果を評価した。我々が開発した重水素化化合物ＴＳＤ−６が形成した血栓重量は、非重水素化の化合物ＴＳＣ−６と同種類の類似物Ｉ−１より顕著に低く、ＴＳＤ−６の独特な抗凝固活性を示すことが分かった。
【図１】
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【図２】
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