(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
繭から蛹を取り出す繭切り工程と、
前記蛹の健康状態を判断する蛹健康状態判断工程と、
前記蛹の成育段階を判断する蛹成育段階判断工程と、
前記蛹に冬虫夏草の菌を植え付ける植菌工程と、
前記植菌工程の後に前記蛹への前記冬虫夏草の菌糸形成を促す感染工程と、
前記感染工程の後に前記蛹への感染状態を判断する感染確認工程と、
前記感染確認工程の後に前記冬虫夏草の子実体の形成を促す培養工程と
を有する冬虫夏草の培養方法。
【請求項２】
前記繭切り工程の後、前記植菌工程に入る前の間に、前記蛹を自然環境温度より低い温度で管理する蛹管理工程を有することを特徴とする請求項１に記載の冬虫夏草の培養方法。
【請求項３】
前記繭切り工程に入る前に、前記繭を前記自然環境温度より低い温度で管理する繭管理工程を有し、
前記蛹管理工程で管理する前記温度より前記繭管理工程で管理する前記温度を低く設定することを特徴とする請求項２に記載の冬虫夏草の培養方法。
【請求項４】
前記蛹健康状態判断工程では、
前記繭の内面に付着している前記蛹を判別する第１判別工程と、
未蛹化を判別する第２判別工程と、
硬化した前記蛹を判別する第３判別工程と
軟化した前記蛹を判別する第４判別工程と
を有し、
前記第１判別工程で判別した前記蛹、前記第２判別工程で判別した前記蛹、前記第３判別工程で判別した前記蛹、及び前記第４判別工程で判別した前記蛹のそれぞれの個体数と、前記繭切り工程で前記繭から取り出した前記蛹の個体総数との比率から前記蛹の健康状態を判断することを特徴とする請求項１から請求項３のいずれかに記載の冬虫夏草の培養方法。
【請求項５】
前記蛹成育段階判断工程では、
複数の段階に区分した眼点色判別スケールを用い、
前記蛹の眼点色を、前記眼点色判別スケールと比較することで前記蛹の前記成育段階を判断することを特徴とする請求項１から請求項４のいずれかに記載の冬虫夏草の培養方法。
【請求項６】
前記蛹成育段階判断工程で判断した前記蛹の前記成育段階に応じて前記蛹管理工程での前記温度を設定することを特徴とする請求項５で引用する請求項２に記載の冬虫夏草の培養方法。
【請求項７】
前記感染工程で前記蛹に直接接触する感染環境湿度を、前記培養工程で前記蛹に直接接触する培養環境湿度よりも低くすることを特徴とする請求項１から請求項６のいずれかに記載の冬虫夏草の培養方法。
【請求項８】
前記感染工程で前記蛹に直接接触する感染環境温度を、前記培養工程で前記蛹に直接接触する培養環境温度よりも低くすることを特徴とする請求項１から請求項７のいずれかに記載の冬虫夏草の培養方法。
【請求項９】
前記感染工程では、前記蛹をトレイ上に載置して感染室内の湿度及び気流の影響を前記
蛹が直接受ける状態とし、
前記培養工程では、前記蛹を培養ケース内に載置して培養室内の湿度及び気流の影響を直接受けない状態とすることを特徴とする請求項１から請求項８のいずれかに記載の冬虫夏草の培養方法。
【請求項１０】
前記感染確認工程では、前記蛹の硬度によって前記蛹への前記感染状態を判断することを特徴とする請求項１から請求項９のいずれかに記載の冬虫夏草の培養方法。
【請求項１１】
前記培養工程において、前記子実体を十分に形成しない前記蛹に対して、前記蛹の個体を切断し又は前記個体に切り込みを入れることを特徴とする請求項１から請求項１０のいずれかに記載の冬虫夏草の培養方法。
【請求項１２】
前記蛹管理工程では、前記蛹が上下方向に４個体以上重ならないように蛹管理容器に載置することを特徴とする請求項２に記載の冬虫夏草の培養方法。
【請求項１３】
前記感染工程では、前記蛹が上下方向には重ならないように感染トレイに載置することを特徴とする請求項２に記載の冬虫夏草の培養方法。
【請求項１４】
前記培養工程では、前記蛹が上下方向に３個体以上重ならないように感染トレイに載置することを特徴とする請求項１に記載の冬虫夏草の培養方法。
【請求項１５】
請求項３に記載の冬虫夏草の培養方法に用いる装置であって、
前記繭管理工程で用いる前記繭の収容容器を、長さ、幅、及び深さがいずれも６００ｍｍ以下としたことを特徴とする冬虫夏草の培養方法に用いる装置。
【請求項１６】
前記収容容器を構成する六面に、前記繭が通過しない開口部を設けたことを特徴とする請求項１５に記載の冬虫夏草の培養方法に用いる装置。
【請求項１７】
請求項１に記載の冬虫夏草の培養方法に用いる装置であって、
前記感染工程で用いる感染トレイは、載置面に、前記蛹が通過しない複数の孔を設けたことを特徴とする冬虫夏草の培養方法に用いる装置。
【請求項１８】
請求項１に記載の冬虫夏草の培養方法に用いる装置であって、
前記培養工程で用いる培養容器は、内底面に、前記蛹を載置する網を備えたことを特徴とする冬虫夏草の培養方法に用いる装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、冬虫夏草の培養方法及びそれに用いる装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
蚕は大量飼育技術が確立されており、幼虫期よりも蛹期が冬虫夏草の感染率が高いこと、また感染方法として二次胞子の散布や浸漬よりも注射接種が優れていることが報告されている（特許文献１、非特許文献１、非特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特許第３５９３４２９号
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Chen, R. and Ichida, M. (2002) Infection of the Silkworm, Bombyx mori, with Cordyceps militaris. Journal of Insect Biotechnology and Sericology. 71, 61-63
【非特許文献２】Sato, H. and Shimazu, M. (2002) Stromata production for Cordyceps militaris (Clavicipitales: Clavicipitaceae) by injection of hyphal bodies to altenative host insects. Appl. Entomol. Zool. 37, 85-92
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、生存中の蛹に冬虫夏草の菌を接種する段階は限られており、蛹発育中期の眼点期を経ると成虫発育が進行し羽化が激増するため、眼点期からの限られた時期までに接種を行わなければならず、接種時期の判断は冬虫夏草の大量生産において大きな影響を与える。
また、冬虫夏草の大量生産を行う上では、現在各地で行われている養蚕による蚕飼育を前提とするため、ウイルス・細菌類を保有する蛹を避けることはできず、冬虫夏草の菌が感染することなく蛹が死んで腐敗してしまう。
腐敗蛹からは強烈な腐敗臭が発生するため、作業者に与える苦痛は大きい。さらに、内部が液状化し潰れやすい腐敗蛹は、量産工程では隔離することができないため、周辺の正常感染蛹にも影響を与えてしまう。従って、有効な腐敗抑制方法を見出す必要がある。
生きた蛹に冬虫夏草の菌を植え付けて感染させる培養においては、雑菌やウイルスに既に感染している蛹では、冬虫夏草の菌が感染する前に蛹が死ぬことで腐敗に至ってしまい、一方成育の進んだ蛹では、蛹は自然界では２週間程度の期間で羽化するために、冬虫夏草の菌が感染する前に蛹が羽化してしまい、冬虫夏草の菌の蛹への感染率は低下してしまう。
【０００６】
そこで本発明は、蛹の健康状態と成育段階を判断して冬虫夏草の菌を植え付けることで、感染せずに腐敗する蛹及び感染せずに羽化する蛹を減らし、感染率の高い培養を行うことができる冬虫夏草の培養方法及びそれに用いる装置を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
請求項１記載の本発明の冬虫夏草の培養方法は、繭から蛹を取り出す繭切り工程と、前記蛹の健康状態を判断する蛹健康状態判断工程と、前記蛹の成育段階を判断する蛹成育段階判断工程と、前記蛹に冬虫夏草の菌を植え付ける植菌工程と、前記植菌工程の後に前記蛹への前記冬虫夏草の菌糸形成を促す感染工程と、前記感染工程の後に前記蛹への感染状態を判断する感染確認工程と、前記感染確認工程の後に前記冬虫夏草の子実体の形成を促す培養工程とを有することを特徴とする。
請求項２記載の本発明は、請求項１に記載の冬虫夏草の培養方法において、前記繭切り工程の後、前記植菌工程に入る前の間に、前記蛹を自然環境温度より低い温度で管理する蛹管理工程を有することを特徴とする。
請求項３記載の本発明は、請求項５で引用する請求項２に記載の冬虫夏草の培養方法において、前記繭切り工程に入る前に、前記繭を前記自然環境温度より低い温度で管理する繭管理工程を有し、前記蛹管理工程で管理する前記温度より前記繭管理工程で管理する前記温度を低く設定することを特徴とする。
請求項４記載の本発明は、請求項１から請求項３のいずれかに記載の冬虫夏草の培養方法において、前記蛹健康状態判断工程では、前記繭の内面に付着している前記蛹を判別する第１判別工程と、未蛹化を判別する第２判別工程と、硬化した前記蛹を判別する第３判別工程と軟化した前記蛹を判別する第４判別工程とを有し、前記第１判別工程で判別した前記蛹、前記第２判別工程で判別した前記蛹、前記第３判別工程で判別した前記蛹、及び前記第４判別工程で判別した前記蛹のそれぞれの個体数と、前記繭切り工程で前記繭から取り出した前記蛹の個体総数との比率から前記蛹の健康状態を判断することを特徴とする。
請求項５記載の本発明は、請求項１から請求項４のいずれかに記載の冬虫夏草の培養方法において、前記蛹成育段階判断工程では、複数の段階に区分した眼点色判別スケールを用い、前記蛹の眼点色を、前記眼点色判別スケールと比較することで前記蛹の前記成育段階を判断することを特徴とする。
請求項６記載の本発明は、請求項５で引用する請求項２に記載の冬虫夏草の培養方法において、前記蛹成育段階判断工程で判断した前記蛹の前記成育段階に応じて前記蛹管理工程での前記温度を設定することを特徴とする。
請求項７記載の本発明は、請求項１から請求項６のいずれかに記載の冬虫夏草の培養方法において、前記感染工程で前記蛹に直接接触する感染環境湿度を、前記培養工程で前記蛹に直接接触する培養環境湿度よりも低くすることを特徴とする。
請求項８記載の本発明は、請求項１から請求項７のいずれかに記載の冬虫夏草の培養方法において、前記感染工程で前記蛹に直接接触する感染環境温度を、前記培養工程で前記蛹に直接接触する培養環境温度よりも低くすることを特徴とする。
請求項９記載の本発明は、請求項１から請求項８のいずれかに記載の冬虫夏草の培養方法において、前記感染工程では、前記蛹をトレイ上に載置して感染室内の湿度及び気流の影響を前記蛹が直接受ける状態とし、前記培養工程では、前記蛹を培養ケース内に載置して培養室内の湿度及び気流の影響を直接受けない状態とすることを特徴とする。
請求項１０記載の本発明は、請求項１から請求項９のいずれかに記載の冬虫夏草の培養方法において、前記感染確認工程では、前記蛹の硬度によって前記蛹への前記感染状態を判断することを特徴とする。
請求項１１記載の本発明は、請求項１から請求項１０のいずれかに記載の冬虫夏草の培養方法において、前記培養工程において、前記子実体を十分に形成しない前記蛹に対して、前記蛹の個体を切断し又は前記個体に切り込みを入れることを特徴とする。
請求項１２記載の本発明は、請求項２に記載の冬虫夏草の培養方法において、前記蛹管理工程では、前記蛹が上下方向に４個体以上重ならないように蛹管理容器に載置することを特徴とする。
請求項１３記載の本発明は、請求項２に記載の冬虫夏草の培養方法において、前記感染工程では、前記蛹が上下方向には重ならないように感染トレイに載置することを特徴とする。
請求項１４記載の本発明は、請求項１に記載の冬虫夏草の培養方法において、前記培養工程では、前記蛹が上下方向に３個体以上重ならないように感染トレイに載置することを特徴とする。
請求項１５記載の本発明は、請求項３に記載の冬虫夏草の培養方法に用いる装置であって、前記繭管理工程で用いる前記繭の収容容器を、長さ、幅、及び深さがいずれも６００ｍｍ以下としたことを特徴とする。
請求項１６記載の本発明は、請求項１５に記載の冬虫夏草の培養方法に用いる装置であって、前記収容容器を構成する六面に、前記繭が通過しない開口部を設けたことを特徴とする。
請求項１７記載の本発明は、請求項１に記載の冬虫夏草の培養方法に用いる装置であって、前記感染工程で用いる感染トレイは、載置面に、前記蛹が通過しない複数の孔を設けたことを特徴とする。
請求項１８記載の本発明は、請求項１に記載の冬虫夏草の培養方法に用いる装置であって、前記培養工程で用いる培養容器は、内底面に、前記蛹を載置する網を備えたことを特徴とする。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、感染率の高い培養を行うことで、腐敗した蛹の除去作業や羽化時に排出される蛾尿処理及び蚕蛾の除去作業の負担を軽減でき、腐敗や羽化による環境悪化を防げるとともに作業負担を軽減することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】本発明の一実施例による冬虫夏草の培養方法の工程を示すフローチャート
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の第１の実施の形態による冬虫夏草の培養方法は、繭から蛹を取り出す繭切り工程と、蛹の健康状態を判断する蛹健康状態判断工程と、蛹の成育段階を判断する蛹成育段階判断工程と、蛹に冬虫夏草の菌を植え付ける植菌工程と、植菌工程の後に蛹への冬虫夏草の菌糸形成を促す感染工程と、感染工程の後に蛹への感染状態を判断する感染確認工程と、感染確認工程の後に冬虫夏草の子実体の形成を促す培養工程とを有するものである。本実施の形態によれば、蛹健康状態判断工程と蛹成育段階判断工程とを有し、蛹の健康状態と成育段階を判断して冬虫夏草の菌を植え付けることで、感染せずに腐敗する蛹及び感染せずに羽化する蛹を減らし、感染率の高い培養を行うことができる。感染率が高まることで、腐敗した蛹の除去作業や羽化時に排出される蛾尿処理及び蚕蛾の除去作業の負担を軽減でき、腐敗や羽化による環境悪化を防げるとともに作業負担を軽減することができる。
【００１１】
本発明の第２の実施の形態は、第１の実施の形態による冬虫夏草の培養方法において、繭切り工程の後、植菌工程に入る前の間に、蛹を自然環境温度より低い温度で管理する蛹管理工程を有するものである。本実施の形態によれば、蛹の成育を遅延させることができ、羽化の発生を抑制して感染率を高めることができる。
【００１２】
本発明の第３の実施の形態は、第２の実施の形態による冬虫夏草の培養方法において、繭切り工程に入る前に、繭を自然環境温度より低い温度で管理する繭管理工程を有し、蛹管理工程で管理する温度より繭管理工程で管理する温度を低く設定するものである。本実施の形態によれば、繭管理工程での温度を蛹管理温度での温度より低く設定することで蛹へのダメージを軽減できるとともに羽化の発生を抑制できるため感染率を高めることができる。
【００１３】
本発明の第４の実施の形態は、第１から第３のいずれかの実施の形態による冬虫夏草の培養方法において、蛹健康状態判断工程では、繭の内面に付着している蛹を判別する第１判別工程と、未蛹化を判別する第２判別工程と、硬化した蛹を判別する第３判別工程と
軟化した蛹を判別する第４判別工程とを有し、第１判別工程で判別した蛹、第２判別工程で判別した蛹、第３判別工程で判別した蛹、及び第４判別工程で判別した蛹のそれぞれの個体数と、繭切り工程で繭から取り出した蛹の個体総数との比率から蛹の健康状態を判断するものである。本実施の形態によれば、第１判別工程、第２判別工程、第３判別工程、及び第４判別工程でそれぞれ判別した蛹数を不良個体数として不良率を算出して蛹の健康状態を判断することで、感染率の予測ができ、冬虫夏草の菌を植え付けるか否かを判断することができる。
【００１４】
本発明の第５の実施の形態は、第１から第４の実施の形態による冬虫夏草の培養方法において、蛹成育段階判断工程では、複数の段階に区分した眼点色判別スケールを用い、蛹の眼点色を、眼点色判別スケールと比較することで蛹の成育段階を判断するものである。本実施の形態によれば、眼点色判別スケールを用いて眼点色によって成育段階を予測することで、羽化の可能性の高い蛹への冬虫夏草の菌の植え付けを回避でき、感染率の高い培養を行うことができる。
【００１５】
本発明の第６の実施の形態は、第５で引用する第２の実施の形態による冬虫夏草の培養方法において、蛹成育段階判断工程で判断した蛹の成育段階に応じて蛹管理工程での温度を設定するものである。本実施の形態によれば、濃い眼点色であり成育の進んだ蛹に対しては低温（例えば５℃）に設定することで羽化を抑制し、薄い眼点色であり成育が進んでいない蛹に対しては中温（例えば１０℃〜２０℃）に設定することで蛹へのダメージを軽減しつつ成育の抑制を行うことができる。
【００１６】
本発明の第７の実施の形態は、第１から第６のいずれかの実施の形態による培養方法において、感染工程で蛹に直接接触する感染環境湿度を、培養工程で蛹に直接接触する培養環境湿度よりも低くするものである。本実施の形態によれば、感染工程では湿度を低くすることで腐敗を抑制でき、培養工程では湿度を高くすることで子実体の形成を促すことができる。
【００１７】
本発明の第８の実施の形態は、第１から第７のいずれかの実施の形態による培養方法において、感染工程で蛹に直接接触する感染環境温度を、培養工程で蛹に直接接触する培養環境温度よりも低くするものである。本実施の形態によれば、感染工程では温度を低くすることで蛹の成育を遅延させて羽化を抑制でき、培養工程では温度を高くすることで子実体の形成を促すことができる。
【００１８】
本発明の第９の実施の形態は、第１から第８のいずれかの実施の形態による培養方法において、感染工程では、蛹をトレイ上に載置して感染室内の湿度及び気流の影響を蛹が直接受ける状態とし、培養工程では、蛹を培養ケース内に載置して培養室内の湿度及び気流の影響を直接受けない状態とするものである。本実施の形態によれば、感染工程では気流によって特に蛹の体表面を乾燥させることで腐敗を抑制でき、培養工程では気流の影響を受けず一定の高い湿度を保つことで子実体の形成を促すことができる。
【００１９】
本発明の第１０の実施の形態は、第１から第９のいずれかの実施の形態による培養方法において、感染確認工程では、蛹の硬度によって蛹への感染状態を判断するものである。感染の有無は蛹の体表色によって判別が可能であるが、蛹の体内での菌糸の形成が十分である場合には、蛹自身が十分な硬度を持つため、本実施の形態のように、蛹の硬度によって感染状態を判断することで、蛹を切断して内部観察を行うことなく感染状態を正確に判断できる。
【００２０】
本発明の第１１の実施の形態は、第１から第１０のいずれかの実施の形態による培養方法において、培養工程において、子実体を十分に形成しない蛹に対して、蛹の個体を切断し又は個体に切り込みを入れるものである。本実施の形態のように、蛹の個体の切断又は切り込み形成で、この切断箇所又は切り込み箇所からの子実体の形成を促すことができる。
【００２１】
本発明の第１２の実施の形態は、第２の実施の形態による培養方法において、蛹管理工程では、蛹が上下方向に４個体以上重ならないように蛹管理容器に載置するものである。本実施の形態によれば、特に下部に位置する蛹に他の蛹の荷重が加わることでダメージを受けることを防止でき、例えば軟化病などの蛹の体液が他の健康な蛹に付着することを軽減でき、また蛹同士が密着し合うことによる体温上昇に伴う蛹の成育を防止できる。
【００２２】
本発明の第１３の実施の形態は、第２の実施の形態による培養方法において、感染工程では、蛹が上下方向には重ならないように感染トレイに載置するものである。本実施の形態によれば、体内に接種する場合には蛹から滴下する体液、又は、体表面に噴霧する場合には蛹の体表から滴下する植菌液が、他の蛹に付着することを防止することができ、特に雑菌やウイルス菌による汚染拡大を防止できる。
【００２３】
本発明の第１４の実施の形態は、第１の実施の形態による培養方法において、培養工程では、蛹が上下方向に３個体以上重ならないように培養容器内に載置するものである。本実施の形態によれば、蛹から子実体が形成される空間を確実に設けることができ、全ての蛹からの子実体の形成を促すことができる。
【００２４】
本発明の第１５の実施の形態は、第３の実施の形態による培養方法に用いる装置において、繭管理工程で用いる繭の収容容器を、長さ、幅、及び深さがいずれも６００ｍｍ以下としたものである。本実施の形態によれば、容器内で繭同士が密着し、繭が密集状態となることによる局部的な温度上昇を防止でき、温度上昇に伴う蛹の成育を防止できる。
【００２５】
本発明の第１６の実施の形態は、第１５の実施の形態による培養方法に用いる装置において、収容容器を構成する六面に、繭が通過しない大きさの開口部を設けたものである。本実施の形態によれば、容器内で繭同士が密着し、繭が密集状態となることによる局部的な温度上昇を防止でき、温度上昇に伴う蛹の成育を防止できる。
【００２６】
本発明の第１７の実施の形態は、第１の実施の形態による冬虫夏草の培養方法に用いる装置において、感染工程で用いる感染トレイは、載置面に、蛹が通過しない複数の孔を設けたものである。本実施の形態によれば、蛹の体表面の乾燥を促し、腐敗の発生を抑制できる。
【００２７】
本発明の第１８の実施の形態は、第１の実施の形態による冬虫夏草の培養方法に用いる装置において、培養工程で用いる培養容器は、内底面に、蛹を載置する網を備えたものである。湿度を高めることで培養容器内には液体が溜まることがあるが、本実施の形態によれば、網によってこの液体による蛹への影響を防止できる。
【実施例】
【００２８】
以下本発明の一実施例による冬虫夏草の培養方法について説明する。
本発明による冬虫夏草は、蚕を寄主とする、ハナサナギタケ（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｔｅｎｕｉｐｅｓ）、コナサナギタケ（Ｉｓａｒｉａ  ｆａｒｉｎｏｓａ）、サナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）、ウスキサナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｔａｋａｏｍｏｎｔａｎａ）である。
蚕は、古来より養蚕農家で飼育されてきた交雑種（家蚕）の他、小石丸、クワコなど鱗翅目カイコガ科に属する昆虫である。
本発明における冬虫夏草の培養方法は、生きた状態の蚕の蛹に冬虫夏草の菌を植え付ける方法である。
植え付ける菌には、冬虫夏草の子実体に形成された子嚢胞子又は分生胞子、又は培養により得られる二次胞子を用いる他、菌糸体を用いることもできる。また冬虫夏草の菌の植え付け（植菌）は、昆虫体内への直接接種の他、体表面への散布や、餌への散布でもよい。
【００２９】
本実施例による冬虫夏草の培養方法の工程を図１に示す。
養蚕農家又は養蚕施設にて飼育された繭は、養蚕農家単位又は養蚕施設単位で区分されて管理される（繭管理工程：Ｓ１）。同一養蚕農家又は同一養蚕施設であっても、飼育棟や飼育ユニットなどの飼育環境が異なる場合には、飼育棟単位又は飼育ユニット単位で区分することが好ましい。更には同一養蚕農家若しくは同一養蚕施設、又は同一飼育棟若しくは同一飼育ユニットなど、飼育環境が同一であっても、上族日によって区分することが好ましい。
Ｓ１における繭管理工程では、繭を自然環境温度より低い温度で管理する。繭管理工程での温度は、３〜２０℃の範囲、更には３〜１０℃の範囲が好ましい。
繭管理工程は、上族日から７日目以降で１２日目以前とし、上族日から８日目以降で１０日目以前が好ましい。繭は収繭及び毛羽取り後に繭管理工程に入る。そのため、上族日からの経過日数が短いと蛹の体表面が十分に成育しておらず柔らかいために、振動などの衝撃によっていわゆる鼻付など蛹が傷つきやすく、また繭の内面に付着する蛹が増加しやすいため好ましくない。また上族日からの経過日数が長いと蛹の成育が進み羽化までの日数が短くなるために、感染せずに羽化する蛹が増加するため好ましくない。
繭管理工程で用いる繭の収容容器は、長さ、幅、及び深さをいずれも６００ｍｍ以下とする。長さ、幅、及び深さをいずれも６００ｍｍ以下とすることで、容器内で繭同士が密着し、密集状態となることによる局部的な温度上昇を防止でき、温度上昇に伴う蛹の成育を防止できる。
収容容器を構成する六面には、繭が通過しない大きさの開口部を設けることが好ましい。開口部によって、容器内で繭同士が密着し、繭が密集状態となることによる局部的な温度上昇を防止でき、温度上昇に伴う蛹の成育を防止できる。
【００３０】
Ｓ１における繭管理工程の後に検査繭切り工程を行う（Ｓ２）。
Ｓ２における検査繭切り工程は、抜き取りのサンプリング検証であり、繭管理工程で管理されている区分単位で、一定数だけの繭をサンプリング対象として抜き取り、抜き取った繭から蛹を取り出す。
【００３１】
検査繭切り工程で繭から取り出した蛹に対して健康状態を判断する（Ｓ３）。
Ｓ３における蛹健康状態判断工程では、繭の内面に付着している蛹を判別する第１判別工程と、未蛹化を判別する第２判別工程と、硬化した蛹を判別する第３判別工程と、軟化した蛹を判別する第４判別工程とを有している。
なお、Ｓ３における蛹健康状態判断工程は、Ｓ２における検査繭切り工程の中で行うことが作業性に優れている。
第１判別工程で判別される蛹は、蛹の体液によって繭の内面に付着している蛹であり、そのほとんどは死亡している。
第２判別工程で判別される蛹は、未だ蛹に変態していない（未蛹化）ものであり、その後に蛹化する場合もあるが、蛹化が遅れる可能性がある。
第３判別工程で判別される蛹は、硬化病、例えば白きょう病、黄きょう病、緑きょう病、黒きょう病に感染している蛹であり、既に死亡している。
第４判別工程で判別される蛹は、軟化病に感染している蛹であり、病原的には各種細菌病と、ウイルス病（細胞質多角体病、伝染性軟化病）が含まれ、必ずしも死亡しているとは限らないが、数日の期間で個体が崩れ体液が出て死亡に至るケースが多く、冬虫夏草の菌がその後に感染する可能性は低い。
【００３２】
第１判別工程から第４判別工程で判別した蛹は不良蛹とされる。蛹健康状態判断工程では、第１判別工程で判別した蛹、第２判別工程で判別した蛹、第３判別工程で判別した蛹、及び第４判別工程で判別した蛹の各不良個体数と、繭切り工程で繭から取り出した蛹のサンプル個体総数とから比率（不良率）を算出することで、蛹の健康状態を、繭管理工程で管理されている区分単位で判断する。
蛹健康状態判断工程において、不良率が一定値を上回ると健康状態が良好でないと判断し、その区分については、植菌対象から除外する。
このように、第１判別工程、第２判別工程、第３判別工程、及び第４判別工程でそれぞれ判別した蛹数を不良個体数として不良率を算出して蛹の健康状態を判断することで、感染率の予測ができ、植菌を行うか否かを判断することができる。
【００３３】
検査繭切り工程で繭から取り出した蛹に対して蛹の成育段階を判断する（Ｓ４）。
Ｓ４における蛹成育段階判断工程では、複数の段階に区分した眼点色判別スケールを用い、蛹の眼点色を眼点色判別スケールと比較することで、蛹の成育段階を、繭管理工程で管理されている区分単位で判断する。
蛹化後所定期間は、眼点は確認されない。しかし、上族日から１１日目以降に血液トレハロース濃度が上昇しはじめ、この時期と眼点形成時期が関連しているため、眼点形成がはじまり、眼点色の変化が肉眼で判別可能となる。
従って、眼点色判別スケールを用いて眼点色によって成育段階を予測することで、羽化の可能性の高い蛹への植菌を回避でき、感染率の高い培養を行うことができる。
具体的には、成育段階が進んだ区分に対しては、植菌対象から除外する、植菌後の一定期間は感染工程を炭酸ガス麻酔環境下で行う、又は、他の区分よりも先に植菌工程の対象とするなど、成育段階が進んでいる区分と成育段階が進んでいない区分との処理方法又は処理タイミングを異ならせることができる。
また、蛹成育段階判断工程で判断した蛹の成育段階に応じて、区分単位で蛹管理工程での温度を設定することも好ましい。
例えば、濃い眼点色であり成育の進んだ蛹に対しては低温（例えば５℃）に設定することで羽化を抑制し、薄い眼点色であり成育が進んでいない蛹に対しては中温（例えば１０℃〜２０℃）に設定することで蛹へのダメージを軽減しつつ成育の抑制を行い、眼点発現前であれば中高温（例えば１５〜２５℃）に設定することができる。
【００３４】
Ｓ２からＳ４でのサンプリング検証の後、又はＳ２からＳ４でのサンプリング検証と同時に、区分別に繭切り工程を行う（Ｓ５）。
Ｓ５における繭切り工程は、Ｓ３において健康状態が良好でないと判断される区分を除き、健康状態が良好と判断された区分については全数を対象として繭から蛹を取り出す。
Ｓ６における蛹健康状態判断工程、及びＳ７における蛹成育段階判断工程は、健康状態が良好と判断された区分について、全数を対象とする以外は、Ｓ３における蛹健康状態判断工程、及びＳ４における蛹成育段階判断工程と同一内容であるが、第１判別工程、第２判別工程、第３判別工程、及び第４判別工程でそれぞれ判別した不良蛹を、Ｓ８での蛹管理工程の対象から除外する。
【００３５】
Ｓ８における蛹管理工程では、Ｓ５における繭切り工程の後、Ｓ９における植菌工程に入る前の間、区分単位で蛹を自然環境温度より低い温度で管理する。
自然環境温度より低い温度で管理することで、蛹の成育を遅延させることができ、羽化の発生を抑制して感染率を高めることができる。
蛹管理工程で管理する温度は、Ｓ１における繭管理工程で管理する温度以上に設定する。
蛹管理温度での温度を、繭管理工程での温度以上に設定することで、蛹へのダメージを軽減できるとともに羽化の発生を抑制できるため感染率を高めることができる。
蛹管理工程では、蛹が上下方向に４個体以上重ならないように蛹管理容器に載置する。
蛹が上下方向に４個体以上重ならないように載置することで、特に下部に位置する蛹に他の蛹の荷重が加わることでダメージを受けることを防止でき、例えば軟化病などの蛹の体液が他の健康な蛹に付着することを軽減でき、また蛹同士が密着し合うことによる体温上昇に伴う蛹の成育を防止できる。
Ｓ９は、冬虫夏草の菌を蛹に植え付ける植菌工程である。
植菌には、蛹が有する外的免疫機構に阻まれることがない点で、二次胞子の散布や浸漬よりも注射接種が優れている。
注射接種を行う場合には、蛹の中腸及び頭部を避け、背面の環節間膜に行うことが好ましい。
【００３６】
Ｓ９における植菌工程の後に、蛹への冬虫夏草の菌糸形成を促す感染工程を行う（Ｓ１０）。
Ｓ１０における感染工程では、蛹が上下方向には重ならない状態で蛹を感染トレイに載置する。蛹が上下方向には重ならない状態とは、他の蛹の上に乗り上げてしまい、蛹が感染トレイの載置面から完全に浮き上がった状態ではないことを意味し、蛹の一部分が他の蛹の上に乗ってしまう状態はあり得る。すなわち、蛹の一部分が他の蛹に重なることは、蛹が上下方向には重ならない状態である。
蛹が上下方向には重ならないように載置することで、蚕の体内に接種する場合には蛹から滴下する体液、又は、体表面に噴霧する場合には蛹の体表から滴下する植菌液が、他の蛹に付着することを防止することができ、特に雑菌やウイルス菌による汚染拡大を防止できる。
感染トレイは、複数に区画されていることが好ましい。この区画によって蛹同士の接触を少なくすることができる。例えば、区画は、所定高さの壁によって形成し、一つの区画には１０以上５０以下の個体数の蛹を収容する。
感染工程の期間は、菌種により、また感染室内の温度によって異なるが、５〜１５日程度である。感染工程では、蛹をトレイ上に載置して感染室内の湿度及び気流の影響を蛹が直接受ける状態とすることで、気流によって特に蛹の体表面を乾燥させることができ腐敗を抑制できる。
【００３７】
植菌から所定期間（感染工程）経過後に感染確認を行う（Ｓ１１）。
Ｓ１１における感染確認工程では、蛹の硬度によって蛹への感染状態を判断する。
感染の有無は蛹の体表色によって判別が可能であるが、蛹の体内での菌糸の形成が十分である場合には、蛹自身が十分な硬度を持つため、蛹の硬度によって感染状態を判断することで、蛹を切断して内部観察を行うことなく感染状態を正確に判断できる。
感染工程で用いる感染トレイは、載置面に、蛹が通過しない複数の孔を設けているか、吸水シートを設けることで、蛹の体表面の乾燥を促し、腐敗の発生を抑制できる。
感染確認工程では、感染せずに腐敗した蛹を除去して廃棄処分とする（Ｓ１２）。
【００３８】
Ｓ１１における感染確認工程で感染が確認された蛹は、感染トレイから培養容器に移し、また感染室から培養室へ移動して培養工程に移る（Ｓ１３）。
Ｓ１３における培養工程では、冬虫夏草の子実体の形成を促す。
培養工程では、蛹を培養ケース内に載置して、培養室内の湿度及び気流の影響を直接受けない状態とすることで、培養ケース内を一定の高い湿度を保つことができ、子実体の形成を促すことができる。
培養工程では、蛹が上下方向に３個体以上重ならないように培養容器内に載置する。蛹が上下方向に３個体以上重ならないように載置することで、蛹から子実体が形成される空間を確実に設けることができ、全ての蛹からの子実体の形成を促すことができる。
培養工程で用いる培養容器は、内底面に、蛹を載置する網を備えることが好ましい。湿度を高めることで培養容器内には液体が溜まることがあるが、網によってこの液体による蛹への影響を防止できる。
培養工程において、子実体を十分に形成しない蛹に対しては、蛹の個体を切断し又は個体に切り込みを入れることが有効である。蛹の個体の切断又は切り込み形成で、この切断箇所又は切り込み箇所からの子実体の形成を促すことができる。
【００３９】
Ｓ１０における感染工程で蛹に直接接触する感染環境湿度は、Ｓ１３における培養工程で蛹に直接接触する培養環境湿度よりも低く設定する。感染工程では湿度を低くすることで蛹の腐敗を抑制でき、培養工程では湿度を高くすることで子実体の形成を促すことができる。
また、Ｓ１０における感染工程で蛹に直接接触する感染環境温度は、Ｓ１３における培養工程で蛹に直接接触する培養環境温度よりも低く設定する。感染工程では温度を低くすることで蛹の成育を遅延させて羽化を抑制でき、培養工程では温度を高くすることで子実体の形成を促すことができる。
【００４０】
以上のように本発明は、繭から蛹を取り出す繭切り工程と、蛹の健康状態を判断する蛹健康状態判断工程と、蛹の成育段階を判断する蛹成育段階判断工程と、蛹に冬虫夏草の菌を植え付ける植菌工程と、植菌工程の後に蛹への冬虫夏草の菌糸形成を促す感染工程と、感染工程の後に蛹への感染状態を判断する感染確認工程と、感染確認工程の後に冬虫夏草の子実体の形成を促す培養工程とを有し、蛹の健康状態と成育段階を判断して植菌を行うことで、感染せずに腐敗する蛹及び感染せずに羽化する蛹を減らし、感染率の高い培養を行うことができる。
【産業上の利用可能性】
【００４１】
本発明は、生きた昆虫を用いた冬虫夏草の培養方法での感染率を高めることができる。
【図１】
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