(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0006636463.tif 000020
［式中、
Ｒ1は、メチレン−３，４−ジオキシフェニルであり、
Ｒ2は、ＣＨ2（ＣＨ2）nＲ3またはＣＨＲ6ＣＨ2ＯＨであり、
Ｒ3は、ＯＨであり、
Ｒ6は、（Ｓ）−メチルであり、
ｎは１である］
を有する、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される化合物、これらの薬学的に許容される塩、ならびにこれらの鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体。
【請求項２】
式（ＩＩ）
【化２】
0006636463.tif 000021
で表される、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式（ＩＩＩ）
【化３】
0006636463.tif 000022
で表される、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ホスホジエステラーゼ酵素の阻害活性を示す、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
治療有効量の１種以上の請求項１に記載の化合物および１種以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項６】
活性成分として、（ａ）式（ＩＩ）の３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン、
（ｂ）式（ＩＩＩ）の３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン
からなる群から選択される化合物、または薬学的に許容される前記化合物の塩、前記化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体の少なくとも１つと、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
経口、局所、注射、経鼻および経直腸での投与のためである、請求項５または６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤で治療可能な障害の治療および／または予防のための医薬組成物の調製のためである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項９】
結石症、前立腺肥大症、肺高血圧症、尿道狭窄、女性および／または男性の性機能障害の治療または予防のためである、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
中間体メチル２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−３−（２−クロロアセチル）−５−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，３−ジヒドロオキサゾール−４−カルボキシレート（ｂ）の形成を含み、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中の乾燥ピリジン（Ｐｙ）溶液および塩化クロロアセチル溶液の存在下での、化合物（（Ｅ）−メチル２−（（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルメチレン）アミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−３−オキソプロパノエート（ａ）の反応により調製される、請求項２又は３に記載の式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物の合成方法。
【請求項１１】
化合物（ＩＩ）の形成が、中間体（ｂ）の反応を介してエチルアルコールおよび２−アミノエタノール（ｃ）を加えることにより起こる、請求項１０に記載の合成方法。
【請求項１２】
化合物（ＩＩＩ）の形成が、エチルアルコールおよび（Ｓ）−２−アミノプロパン−１−オール（ｄ）を中間体（ｂ）の反応媒体に加えることにより起こる、請求項１０に記載の合成方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンの新規な誘導体、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体；前記化合物および／またはこれらの誘導体の調製方法に関する。
【０００２】
本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンの前記新規化合物の誘導体、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を含む、医薬組成物；前記化合物および／または誘導体を含む薬剤、ならびに化合物および／または誘導体のホスホジエステラーゼ酵素阻害剤として、より特にホスホジエステラーゼ５型（ＰＤＥ−５）阻害剤としての使用；勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤、より特にＰＤＥ−５阻害剤で治療可能な障害の治療での化合物および／または誘導体の使用も包含する。
【０００３】
本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新規化合物、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を用いた、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤、具体的にはＰＤＥ−５阻害剤で治療可能な障害の治療方法も開示する。
【０００４】
特に、本発明は、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）および３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）と呼ばれる化合物を開示する。
【発明の背景】
【０００５】
ホスホジエステラーゼ阻害剤化合物は、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤で治療可能な他の疾患の治療および／または予防のための臨床医学で用いられる主な薬剤である。勃起障害の場合、ＰＤＥ−５阻害剤が、臨床医学で最も広範に用いられる。
【０００６】
性交不能症としてより一般的に知られる勃起障害は、男性の生活の質に最も影響を与える疾患の１つである。長い間、勃起障害は、効果的な治療の見込みが十分になく、男性を悩ませていた。
【０００７】
１９７０年代より前は、勃起障害のほぼすべての症例は、心理的原因によると考えられており、治療は、テストステロンの経験的投与または精神科医への紹介からなるものであった。１９７３年に開発された膨張式の陰茎プロテーゼなどの新しい治療の開発、および１９８０年代初期の海綿体内注射の出現は、現代の勃起障害の治療の歴史で重要な出来事であった。クエン酸シルデナフィル（バイアグラの活性成分）に基づく、経口使用からなる初の治療は、１９９８年に公開され、勃起障害の治療で重要な出来事であった。
【０００８】
経口治療は、男性に受け入れられやすく、ｃＧＭＰ−ＰＤＥ阻害剤、より特にＰＥＤ−５阻害剤の使用に対する臨床的研究から開発された。これらの化合物の前駆体は、血管拡張特性を有する、５−｛２−エトキシ−５−［（４−メチル−１−ピペラジニル）スルホニル］フェニル｝−１−メチル−３−プロピル−１，４−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、またはシルデナフィルであり、これは、一酸化窒素の効果を増強する。シルデナフィル分子は、ＵＳ５２５０５３４に最初に記載された。
【０００９】
その後、ＰＤＥ−５酵素からなる他の阻害剤化合物が開発され、多数の技術文献刊行物および特許刊行物で引用されている。公知の化合物の中には、ＵＳ３６３５１７８に最初に記載された、レビトラの活性成分であるバルデナフィル分子、ＵＳ５８５９００６に最初に記載された、シアリスの活性成分であるタダラフィル、ＵＳ８３３８４３２に最初に記載され、本発明の研究者らと同じチームにより開発された、まだ商品化されていないＢＬ−１０６化合物が挙げられる。
【００１０】
入手可能な研究では、ある形態の性機能障害は、男性の１０〜５２％に影響を与えることが報告されている。Ｆｅｌｄｍａｎおよびその同僚による研究では、４０〜７０歳の男性の５２％が、軽度、中程度および重度の勃起障害を有することが示された。４０〜７０歳では、軽度の勃起障害の有病率は、比較的一定を保っているが、中程度〜重度の勃起障害の有病率は、１０年ごとに増加し、すべて合わせた増加率は、４０代の４０％から７０代のほぼ７０％に増大する（Ｆｅｌｄｍａｎ  ＨＡ、Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  Ｉ、Ｈａｔｚｉｃｈｒｉｓｔｏｕ  ＤＧら、Ｉｍｐｏｔｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｍｅｄｉｃａｌ  ａｎｄ  ｐｓｙｃｈｏｓｏｃｉａｌ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ：ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ  Ｍａｌｅ  Ａｇｉｎｇ  Ｓｔｕｄｙ．Ｊ  Ｕｒｏｌ  １９９４；１５１：５４〜６１）。
【００１１】
さらに、研究者らは、組織弛緩化合物が、結石症（Ｋｏｒｋｅｓ，Ｆ．ら、Ｊ  Ｂｒａｓ  Ｎｅｆｒｏｌ．（２００９）３１（１）：５５）、前立腺肥大症（例えば、良性前立腺肥大症、前立腺炎）（ＷＯ９９１１２７９）および尿道狭窄（Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｗｅｒｆら、ＢＪＵ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（２００２）９０：５８８）の治療、またはそれらの治療、処置もしくは関連の手術での補助としての治療または作用に重点を置いた、様々な組織の弛緩を促進するために用いられていたことを発見した。組織弛緩により治療可能な他の障害および／または症状は、当技術分野で公知であり、記載されている。
【００１２】
ＰＤＥ−５阻害剤は、ｃＧＭＰの分解を抑制し、様々な組織で一酸化窒素（ＮＯ）の効果を長引かせるために、例えば、気道および血管でＮＯ誘発弛緩を維持するために［Ｂａｒｎｅｓ，ＰＪら（１９９５）］、ならびに組織でＮＯ誘発保護を維持するために（Ｄｕｆｆｉｎ，Ｒ．ら、Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２００８）１５３（４）：６２３）用いられていた。組織でのこのような作用は、肺高血圧症（市販品ではクエン酸シルデナフィルで治療する）；気管支炎；慢性喘息；高血圧症（ＥＰ７５８６５３、ＵＳ７５６９５７２）；レイノー病（Ｇｈｏｆｒａｎｉ  ＨＡら、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  ２００６；５：６８９）、右心不全の発症（Ｇｈｏｆｒａｎｉら（２００３）ＡＪＲＣＣＭ  １６７（８）：１１３９）；神経発生および脳卒中後の機能回復（Ｚｈａｎｇら（２００２）Ｓｔｒｏｋｅ  ３３：２６７５〜２６８０）；冠動脈弛緩（Ｈａｌｃｏｘら（２００２）Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ  ４０：１２３２）；女性の性的興奮障害（Ｎｅｈｒａら（２００１）Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｕｒｏｌ．１９（１）：１１５）；狭心症および鬱血性心不全（Ｒｅｆｆｅｌｍａｎｎら、Ｃｉｒｃ．（２００３）１０８（２）：２３９）を含むいくつかの障害、つまり、ホスホジエステラーゼ、特にＰＤＥ−５阻害剤で治療可能である障害の治療に有益であることが示されている。ＰＤＥ−５阻害剤で治療可能な他の障害は、当技術分野で公知であり、記載されている。
【００１３】
この枠組み内で、ホスホジエステラーゼ阻害剤化合物、より具体的にはＰＤＥ−５阻害剤の新しい代替物、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤で治療可能な他の疾患のための新しい治療を求めて、本発明の研究者らは、ＰＤＥ−５の阻害を含む、ホスホジエステラーゼ酵素の阻害活性を示す、本発明の対象である、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新しい化合物を開発した。
【発明の概要】
【００１４】
本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新しい化合物、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を提供することを目的とする。より具体的には、化合物は、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）および３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）と称される化合物、ならびに／または（任意の比率での）このような化合物の混合物である。
【００１５】
本発明の別の側面は、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤、具体的にはＰＤＥ−５阻害剤で治療可能な障害の治癒的および／または予防的治療のための、本発明の対象である、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される化合物の使用である。
【００１６】
本発明の目的はまた、本発明の対象である、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新規化合物の調製方法を提供することである。特に、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）および３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２−イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）の化合物、ならびに／または（任意の比率での）これらの化合物の混合物の調製方法である。
【００１７】
さらに、本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、有効量の６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンの新しい誘導体化合物、または（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を含む、医薬組成物を提供することも目的とする。
【００１８】
特に、医薬組成物は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）および３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）から選択される、少なくとも１種の６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新規化合物、または（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を含む。
【００１９】
本発明の更なる目的は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、治療有効量の６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンの新しい誘導体からなる化合物、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を含む薬剤を提供することである。特に、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）および３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）から選択される、少なくとも１種の６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新規化合物；ならびに／または（任意の比率での）このような化合物の混合物を含む、薬剤である。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、実施例１で得た化合物（ＢＬ−２３０）の特性に関する1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図２】図２は、実施例１で得た化合物（ＢＬ−２３０）の特性に関する13Ｃ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３】図３は、実施例１で得た化合物（ＢＬ−２３０）の特性に関するＨＲＭＳスペクトルを示す。
【図４】図４は、実施例２で得た化合物（ＢＬ−２３６）の特性に関する1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図５】図５は、実施例２で得た化合物（ＢＬ−２３６）の特性に関する13Ｃ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図６】図６は、実施例２で得た化合物（ＢＬ−２３６）の特性に関するＨＲＭＳスペクトルを示す。
【図７】図７は、ウサギ海綿体におけるフェニレフリン（ＰＥ）により誘発される収縮およびＤＭＳＯ（ビヒクル−負対照）の作用のグラフを示す。
【図８】図８は、ウサギ海綿体におけるフェニレフリン（ＰＥ）により誘発される収縮およびタダラフィルの弛緩作用のグラフを示す。
【図９】図９は、ウサギ海綿体におけるフェニレフリン（ＰＥ）により誘発される収縮およびＢＬ−２３０化合物の弛緩作用のグラフを示す。
【図１０】図１０は、ウサギ海綿体におけるフェニレフリン（ＰＥ）により誘発される収縮およびＢＬ−２３６化合物の弛緩作用のグラフを示す。
【図１１】図１１は、ＢＬ−２３０化合物およびタダラフィルの投与後のウサギ海綿体における弛緩のパーセントの用量反応曲線グラフを示す。
【図１２】図１２は、ＢＬ−２３０、タダラフィルおよびＤＭＳＯ（ビヒクル）を投与したときのウサギ海綿体における弛緩のパーセントの棒グラフを示す。
【図１３】図１３は、ＢＬ−２３６、タダラフィルおよびＤＭＳＯ（溶媒）を投与したときのウサギ海綿体における弛緩のパーセントの棒グラフを示す。
【図１４】図１４は、ＢＬ−２３０化合物の存在下で観察されたホスホジエステラーゼ酵素の阻害のパーセントを示す。
【図１５】図１５は、ＢＬ−２３６化合物の存在下で観察されたホスホジエステラーゼ酵素の阻害のパーセントを示す。
【発明の詳細な説明】
【００２１】
本発明は、特にＰＤＥ−５の阻害のためのホスホジエステラーゼ阻害剤で治療可能な疾患、例えば、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤で治療可能な他の疾患の治療で有用な新規化合物を開示する。本発明の化合物は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、式（Ｉ）
【００２２】
【化１】
0006636463.tif 000002
【００２３】
［式中、Ｒ1は、芳香族基、１個以上のヘテロ原子を含有する芳香族基、フェニル基、フェノール、３−メトキシ−４−フェノール、メチレン−３，４−ジオキシフェニル、２−メトキシフェニル、３−メトキシフェニル、４−メトキシフェニル、３，４−ジメトキシフェニル、２−ハロフェニル、３−ハロフェニル、４−ハロフェニル、フリル、ピリジン、二環式芳香族、１個以上のヘテロ原子を含有する二環式芳香族であり、
Ｒ2は、アリール、ヘテロアリール、二環式アリール、ＣＨ2（ＣＨ2）nＲ3、ＣＨ2（ＣＨ2）nＮＲ4Ｒ5、ＣＨＲ6ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＣＨ（ＯＨ）Ｒ7、ＣＨ2（ＣＨ2）ＯＲ8、ＣＨ2（ＣＨ2）nＳＲ9、カルボン酸塩、スルホン酸塩または第４級アンモニウム塩であり、
Ｒ3は、ＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ3+、Ｓ（Ｏ）Ｍｅ、ＳＯ3Ｈ、ＣＯ2Ｈ、Ｃｌ、カルボン酸塩、スルホン酸塩または第４級アンモニウム塩であり、
Ｒ4は、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、フェニル、ベンジルまたは第４級アンモニウム塩であり、
Ｒ5は、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、フェニル、ベンジルまたは第４級アンモニウム塩であり、
Ｒ6は、（Ｒ）−メチル、（Ｒ）−エチル、（Ｒ）−イソプロピル、（Ｒ）−イソブチル、（Ｒ）−フェニル、（Ｒ）−ＣＨ2ＳＨ、（Ｒ）−ＣＨ2ＣＨ2ＳＣＨ3、（Ｒ）−ベンジル、（Ｒ）−ｓｅｃ−ブチル、（Ｓ）−メチル、（Ｓ）−エチル、（Ｓ）−イソプロピル、（Ｓ）−イソブチル、（Ｓ）−フェニル、（Ｓ）−ＣＨ2ＳＨ、（Ｓ）−ＣＨ2ＣＨ2ＳＣＨ3、（Ｓ）−ベンジル、（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチルまたはＣＨ2ＯＨであり、
Ｒ7は、（Ｒ）−メチル、（Ｒ）−エチル、（Ｒ）−プロピル、（Ｒ）−イソプロピル、（Ｒ）−フェニル、（Ｒ）−ベンジル、（Ｓ）−メチル、（Ｓ）−エチル、（Ｓ）−プロピル、（Ｓ）−イソプロピル、（Ｓ）−フェニルまたは（Ｓ）−ベンジルであり、
Ｒ8は、Ｃ1〜6アルキル、Ｃ2〜6アルケニル、Ｃ2〜6アルキニル、フェニルまたはベンジルであり、
Ｒ9は、Ｃ1〜6アルキル、Ｃ2〜6アルケニル、Ｃ2〜6アルキニル、フェニルまたはベンジルであり、
Ｎは、０〜４の数値である］
で表される、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新しい化合物、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物を指す。
【００２４】
式（Ｉ）の化合物は、１つ以上のキラル中心を含有していてもよく、したがって、鏡像異性体および／またはジアステレオマーが存在していてもよい。特に、キラル中心は、式（Ｉ）の説明においてアスタリスク（*）で強調されている。したがって、本発明は、これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、式（Ｉ）の化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体も包含する。
【００２５】
式（Ｉ）の化合物は、２個の互変異性形態で存在していてもよく、本発明は、１個以上の互変異性形態および（任意の比率での）これらの形態の混合物を含む。
【００２６】
式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される酸を加えることにより形成される。塩の例としては、これらに限らないが、硝酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸または硫酸水素、リン酸、リン酸水素、酢酸、安息香酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、グルコン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸の塩が挙げられる。式（Ｉ）の化合物は、塩基、例えば、ナトリウムおよびカリウム塩とともに、薬学的に許容される金属塩中、特にアルカリ金属塩中で用いられてもよい。
【００２７】
具体的な態様において、本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、式（Ｉ）
【００２８】
【化２】
0006636463.tif 000003
【００２９】
［式中、Ｒ1は、メチレン−３，４−ジオキシフェニルであり、
Ｒ2は、ＣＨ2（ＣＨ2）nＲ3またはＣＨＲ6ＣＨ2ＯＨであり、
Ｒ3は、ＯＨであり、
Ｒ6は、（Ｓ）−メチルであり
Ｎは、１に等しい］
で表される、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新しい化合物、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；任意の比率で、鏡像体過剰率を有する、これらの個々の形態および／またはラセミもしくは非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を記載する。
【００３０】
より具体的な態様においては、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、
３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）と称される、式（ＩＩ）
【００３１】
【化３】
0006636463.tif 000004
【００３２】
および、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）と称される、式（ＩＩＩ）
【００３３】
【化４】
0006636463.tif 000005
【００３４】
により表される６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新規化合物、または（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体である。
【００３５】
本発明の別の態様において、化学構造式（ａ）で表される化合物、（Ｅ）−メチル２−（（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルメチレン）アミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−３−オキソプロパノエート、化学構造式（ｂ）で表される、メチル２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−３−（２−クロロアセチル）−５−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，３−ジヒドロオキサゾール−４−カルボキシレート、および化学構造式（ｃ）で表される、２−アミノエタノールのアミンを用いて得ることができる、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）と呼ばれる式（ＩＩ）の化合物の合成方法について言及する。
【００３６】
【化５】
0006636463.tif 000006
【００３７】
式（ＩＩ）の化合物の合成について、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中のピリジン（ＰＹ）乾燥溶液および塩化クロロアセチル溶液の存在下で化合物（ａ）を反応させることにより、化合物（ｂ）を調製する。反応を完了し、中間体（ｂ）を形成した後、これを、反応の最後で、エタノールおよび２−アミノエタノール（ｃ）を含む媒体に加え、エタノールおよび水を加える。これにより、スキーム［１］
【００３８】
【化６】
0006636463.tif 000007
【００３９】
に例示したように式（ＩＩ）の化合物が得られる。
【００４０】
したがって、本発明に係る３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）と称される式（ＩＩＩ）の化合物は、化学構造式（ａ）で表される化合物、（Ｅ）−メチル２−（（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルメチレン）アミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−３−オキソプロパノエート、化学構造式（ｂ）で表される、メチル２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−３−（２−クロロアセチル）−５−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，３−ジヒドロオキサゾール−４−カルボキシレート、および化学構造式（ｄ）で表されるアミン、（Ｓ）−２−アミノプロパン−１−オールを用いて得ることができる。
【００４１】
【化７】
0006636463.tif 000008
【００４２】
式（ＩＩＩ）の化合物の合成について、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中のピリジン（ＰＹ）乾燥溶液および塩化クロロアセチル溶液の存在下で化合物（ａ）を反応させることにより、化合物（ｂ）を調製する。反応を完了し、中間体（ｂ）を形成した後、これを、反応の最後で、エチルアルコールおよび（Ｓ）−２−アミノプロパン−１−オール（ｄ）を含む媒体に加え、エタノールおよび水を加える。これにより、スキーム［２］
【００４３】
【化８】
0006636463.tif 000009
【００４４】
に示したように、式（ＩＩＩ）の化合物が得られる。
【００４５】
本発明は、医薬組成物、すなわち、適当な剤形も企図し、そこで、前記組成物は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、有効量の１種以上の式（Ｉ）の化合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を活性成分として含む。
【００４６】
本発明の組成物は、好ましくは、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、
３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）と称される式（ＩＩ）
【００４７】
【化９】
0006636463.tif 000010
【００４８】
および３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）と称される式（ＩＩＩ）
【００４９】
【化１０】
0006636463.tif 000011
【００５０】
で表される新規化合物、または（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を活性成分として含む。
【００５１】
医薬組成物は、当技術分野で周知の方法で調製してもよい。適切には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓまたは類似の情報源を、本発明の担体化合物に適した医薬調合物を調製するために使用してもよい。
【００５２】
本発明の医薬組成物を、経口、局所、注射、経鼻および経直腸での手段により投与してもよい。選択される特定の様式は、組成物中に存在する化合物に依存する。
【００５３】
経口投与用の医薬組成物としては、これらに限らないが、粉末、顆粒、カプセル、錠剤、発泡錠、チュアブル錠、コーティング錠、丸剤、ゲル、チュアブルガム、フィルム、溶液、シロップ、エリキシル、懸濁剤、乳剤などを挙げることができる。
【００５４】
本発明は、治療有効量の１種以上の式（Ｉ）の化合物、ならびに／または塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステル；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体；ならびに１種以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物も企図する。
【００５５】
特に、医薬組成物は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、
（ａ）式（ＩＩ）で示される、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）
（ｂ）式（ＩＩＩ）で示される、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）
からなる群から選択される少なくとも１種の化合物、任意の比率でのこれらの混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体；ならびに１種以上の薬学的に許容される賦形剤を活性成分として含む。
【００５６】
塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、ここに記載した化合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体は、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤、例えば、ＰＤＥ−５で治療可能な障害の治療および／または予防で用いられる。ＰＤＥ阻害剤で治療可能な障害は、これらの例だけに限らないが、結石症、前立腺肥大症、肺高血圧症、尿道狭窄、女性の性機能障害および／または男性の性機能障害であってよい。
【００５７】
さらに、本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、ここに記載した化合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を含む、医薬組成物が、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤、例えば、ＰＤＥ−５で治療可能な障害の治療および／または予防のために用いられることを企図する。ＰＤＥ阻害剤で治療可能な障害は、これらの例だけに限らないが、結石症、前立腺肥大症、肺高血圧症、尿道狭窄、女性の性機能障害および／または男性の性機能障害であってよい。
【００５８】
特に、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、式（ＩＩ）で示される３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）および式（ＩＩＩ）で示される３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）の化合物、または（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体である。
【００５９】
さらに、本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、有効量の少なくとも１種の６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新しい化合物、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を投与する、ホスホジエステラーゼの活性と関連した障害の治療および／または予防方法を提供する。ＰＤＥ阻害剤で治療可能な障害は、これらの例だけに限らないが、勃起障害、結石症、前立腺肥大症、肺高血圧症、尿道狭窄、女性の性機能障害および／または男性の性機能障害であってよい。
【００６０】
本発明は、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、有効量の少なくとも１種の６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される新しい化合物、（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体を投与することによる、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤、例えば、ＰＤＥ−５で治療可能な障害の治療および／または予防方法についても開示する。
【００６１】
特に、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン［ＢＬ−２３０、式（ＩＩ）］および３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン［ＢＬ−２３６、式（ＩＩＩ）］の化合物、または（任意の比率での）これらの誘導体の混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体。
【００６２】
［実施例］
詳細に記載された以下の実施例は、本発明を例示するものであり、本発明の保護範囲を限定するものではなく、同じ観点で様々な修正が当技術分野の専門家に示唆されると予想される。このような同等の功績は、添付の特許請求の範囲および領域内に含まれるべきである。
【００６３】
例１：３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）と称される式ＩＩの化合物の調製
機械的撹拌機、追加の漏斗およびＣａＣｌ2を含有する乾燥管を備えた５００ｍＬのフラスコに、化合物（ａ）（１０．２０ｇ、２８．０ｍｍｏｌ）および乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１０２ｍＬ中の乾燥ピリジン（１１．３ｍｌ）溶液を加え、これを３０分間撹拌した。この懸濁液に、乾燥ＴＨＦ３０ｍＬ中の塩化クロロアセチル（２．９ｍＬ、３６．４ｍｍｏｌ）溶液（試薬２）を約２時間かけて徐々に加えた。この添加後、反応混合物を、室温で４時間反応させることにより、中間体（ｂ）を形成した。この期間の最後に、エタノール（４２ｍＬ）および２−アミノエタノール（３９．３ｇ、６４４．０ｍｍｏｌ）として知られる化合物（ｃ）を媒体に加え、混合物を１６時間撹拌した。この期間の最後に、エタノール２５０ｍｌおよび水１００ｍｌを媒体に加えた。該系を真空蒸留にかけ、生成物が沈殿するまで、過剰な溶媒を除去した。フラスコを室温まで冷却し、次いで０〜５℃の温度で冷却した。冷却した系を、２時間撹拌しながら０〜５℃の温度で維持した。得られた懸濁液を真空ろ過し、沈殿物をエタノール１００ｍＬで洗浄した。固体を２５０ｍＬのフラスコに入れ、エタノール６０ｍＬを加え、混合物を３０分間撹拌した。この期間の後、固体をろ過し、真空乾燥することにより、式（ＩＩ）の生成物を以下のスキーム［１］に従って形成した。
【００６４】
スキーム［１］：化合物３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）の合成
【００６５】
【化１１】
0006636463.tif 000012
【００６６】
この方法で得た化合物は、ＩＵＰＡＣ名３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３０）を有し、式（ＩＩ）
【００６７】
【化１２】
0006636463.tif 000013
【００６８】
で示される化学構造を有し、以下の特性を有する：分子式Ｃ23Ｈ19Ｎ3Ｏ6；黄色の固体；融点２５４〜２５８℃、1H NMR (500 MHz, (CD3)2SO): δ 11.87 (1s, 1H), 8.96 (1s, 1H), 7.85 (d, J = 10.0 Hz, 1H) , 7.47 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.18〜7.05 (m, 5H), 6.98 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.05 (s, 2H), 4.84-4.32 (m, 1H); 4.28 (dd, J = 30.0 Hz, J = 15.0 Hz, 2H), 3.65-3.61 (m, 2H), 3.50〜3.45 (m, 2H) (図1); 13C NMR (125 MHz, (CD3)2SO): δ159.1, 157.2, 148.8, 148.1, 148.0, 136.3, 131.5, 131.3, 125.7, 122.7, 121.8, 121.1, 120.9, 112.7, 108.8, 107.0, 105.4 , 102.8, 101.9, 90.8, 58.9, 52.9, 48.2 (図2); HRMS (EI) m/z C23H19N3O6の計算値: [433.1274]+ 実測値: 434.1336 [M+H]+ (図3).
例２：３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）と称される式（ＩＩＩ）の化合物の調製
機械的撹拌機、追加の漏斗およびＣａＣｌ2を含有する乾燥管を備えた５００ｍＬのフラスコに、化合物（ａ）（１０．２０ｇ、２８．０ｍｍｏｌ）および乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１０２ｍＬ中の乾燥ピリジン（１１．３ｍｌ）溶液を加え、これを３０分間撹拌した。この懸濁液に、乾燥ＴＨＦ３０ｍＬ中の塩化クロロアセチル（２．９ｍＬ、３６．４ｍｍｏｌ）溶液（試薬２）を約２時間かけて徐々に加えた。この添加後、反応混合物を、室温で４時間反応させることにより、中間体（ｂ）を形成した。この期間の最後に、エタノール（４２ｍＬ）および（Ｓ）−２−アミノプロパン−１−オール（４８．４ｇ、６４４．０ｍｍｏｌ）と称される化合物（ｄ）を媒体に加え、混合物を１６時間撹拌した。この時間の最後に、エタノール２５０ｍｌおよび水１００ｍｌを媒体に加えた。該系を真空蒸留にかけ、生成物が沈殿するまで、過剰な溶媒を除去した。フラスコを室温まで冷却し、次いで０〜５℃の温度で冷却した。冷却した系を、２時間撹拌しながら０〜５℃の温度で維持した。得られた懸濁液を真空ろ過し、沈殿物をエタノール１００ｍＬで洗浄した。固体を２５０ｍＬのフラスコに入れ、エタノール６０ｍＬを加え、混合物を３０分間撹拌した。この期間の後、固体をろ過し、真空乾燥することにより、式（ＩＩＩ）の生成物を以下のスキーム［２］に従って形成した。
【００６９】
スキーム［２］：化合物３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）の合成
【００７０】
【化１３】
0006636463.tif 000014
【００７１】
この方法で得た化合物は、ＩＵＰＡＣ名３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン（ＢＬ−２３６）を有し、式（ＩＩＩ）
【００７２】
【化１４】
0006636463.tif 000015
【００７３】
で示される化学構造を有し、以下の特性を有する：分子式Ｃ24Ｈ21Ｎ3Ｏ6；黄色の固体；融点２３５〜２３９℃、1H NMR (300 MHz, (CD3)2SO): δ11.87 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 8.98 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.14〜7.06 (m, 5H), 6.98 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.4 (s, 2H) , 4.85 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.67〜4.60 (m, 1H), 4.07 (dd, J = 21.0 Hz, J = 18.0 Hz, 2H), 3.59〜3.52 (m, 1H), 3.51〜3.40 (m, 1H), 1.07 (d, J = 6.0 Hz, 3H) (図4); 13C NMR, 75 MHz, (CD3)2SO, δ159.5, 157.5, 148.8, 148.1, 148.0, 136.3, 131.6, 131.3, 125.7, 122.6, 121.8, 121.0, 120.9, 112.8, 108.8, 107.0, 105.7, 102.8, 101.9, 90.7, 61.9, 49.9, 46.5, 13.7 (図5); HRMS (EI) m/z [C24H21N3O6] +の計算値: 447.1430, 実測値: 470.1325 [M+Na]+ (図6).
例３：単離したウサギ海綿体におけるＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の弛緩作用の評価
組織
この研究のために、ニュージーランド白ウサギ（２〜３．５ｋｇ）を使用して、陰茎組織を得、それを切開し、冷却したクレブス溶液に移した。この研究のために、ニュージーランド白ウサギの陰茎組織の４個の海綿体細片（ＣＣ）を使用した。
【００７４】
等尺性張力の記録
細片を、３７℃、７．３〜７．５のｐＨのクレブス溶液を含有する、１０ｍｌの組織インキュベーションチャンバーに置き、９５％の酸素（Ｏ2）および５％の二酸化炭素（ＣＯ2）の混合物で連続的に気泡を発生させた。最初の張力１０ｍＮを組織に加えた後、６０分間平衡期間をおいた。張力の変化（等尺性力）を、等尺性トランスデューサー（ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、オーストラリア）を用いて得、これを、データ収集システムＰｏｗｅｒＬａｂ４／３０（Ｃｈａｒｔ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ＢＬ−２３０用バージョン７．３．７、ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｍａ、ＵＳＡおよびＢＬ−２３６用バージョン７．０、ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｍａ）に記録した。
【００７５】
データを分析すると、（ａ）図７〜１０から分かるように、１μＭのフェニレフリン（ＰＥ）は、ウサギ海綿体組織の持続的収縮を誘発することができ、（ｂ）化合物を可溶化するために使用した担体であるジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の投与は、組織の弛緩を誘発せず（図７）、（ｃ）１μＭのタダラフィルの投与は、組織の弛緩を起こし（図８）、（Ｄ）１μＭの濃度のＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物は、同じ濃度のタダラフィルのものに類似した組織の弛緩形状を形成した（各々、図９および１０）。
【００７６】
ＢＬ−２３０化合物およびタダラフィル（０．００１〜１０μＭ）の累積濃度反応曲線を、１μＭのＰＥで予備収縮させたウサギ海綿体細片で得た。図１１から分かるように、ＢＬ−２３０化合物は、タダラフィル（０．００１〜１０μＭ）で観察されたものに類似した用量依存的弛緩を起こし、これはフェニレフリン収縮に起因する。さらに、図１２および１３は、ＢＬ−２３０、ＢＬ２３６化合物およびタダラフィルで観察された弛緩も例示しており、そこで、ＢＬ−２３０は、ウサギ海綿体の７８．４７％の弛緩を誘発することができ、ＢＬ−２３６は９３．０５％誘発し、タダラフィルはウサギ海綿体の約１００％の弛緩を誘発したことが観察できる（図１２および１３）。一方で、ＤＭＳＯは、約２０％というほんのわずかな弛緩を示した。
【００７７】
結果は、ＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物は、ウサギ海綿体組織において弛緩を起こすことを示している。
【００７８】
例４：式（ＩＩ）のＢＬ−２３０化合物および式（ＩＩＩ）のＢＬ−２３６化合物のホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）の阻害プロファイルを評価するためのインビトロ前臨床試験
これらの試験は、ＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の１３種類のヒトホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）の阻害プロファイルを評価するために行われた。より具体的には、ＰＤＥ１Ｂ、ＰＤＥ２Ａ1、ＰＤＥ３Ａ、ＰＤＥ３Ｂ、ＰＤＥ４Ａ1A、ＰＤＥ４Ｂ1、ＰＤＥ４Ｄ2、ＰＤＥ５、ＰＤＥ６、ＰＤＥ７Ａ、ＰＤＥ８Ａ1、ＰＤＥ１０Ａ2およびＰＤＥ１１Ａ4の阻害プロファイルである。これらの試験のために、当技術分野ですでに公知であり、標準化されている酵素による試験が行われた。
【００７９】
４．１：ＰＤＥ１Ｂ酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用活性
ヒトＰＤＥ１Ｂ酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用を、ｓｆ９細胞で発現するヒト組換え酵素を用いて、環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）からの５’−グアノシン一リン酸（５’ＧＭＰ）の産生を測定することにより定量した。検出方法は、ＨＴＲＦ（登録商標）（Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  Ｔｉｍｅ  Ｒｅｓｏｌｖｅｄ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用した。
【００８０】
試験化合物、参照化合物または水（対照）を、４４．４ｍＭのトリスヒドロキシメチルアミノメタン塩酸塩（トリス−ＨＣｌ）、５．２８ｍＭの塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ2）、０．８８ｍＭの塩化カルシウム（ＣａＣｌ2）、２．６４ｍＭのジチオスレイトール（ＤＴＴ）ならびに０．１９８Ｕのカルモジュリンおよび０．０４４％のポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）（ｐＨ７．８）を含有する緩衝液中の０．０７ＵのＰＤＥ１Ｂ酵素と混合した。次いで、２４０ｎＭのｃＧＭＰ基質を加えることにより、反応を開始し、混合物を室温で３０分間インキュベートした。基礎対照測定のために、酵素を反応混合物から省いた。蛍光アクセプター（Ｄｙｅ２標識ｃＧＭＰ）および蛍光ドナー（ユーロピウムクリプテートで標識した抗ｃＧＭＰ抗体）を１ｍＭの３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）の存在下で加えた。６０分後、残留ｃＧＭＰの量に対応する蛍光の移動を、マイクロプレートリーダー（ＲｕｂｙＳｔａｒ、ＢＭＧ）を用いて、λｅｘ＝３３７ｎｍ、λｅｍ＝６２０ｎｍおよびλｅｍ＝６６５ｎｍで測定した。酵素の活性を、６６５ｎｍで測定したシグナルを６２０ｎｍで測定したシグナルで割ることにより求めた（比）。結果を、対照酵素の活性の阻害のパーセントで表した。標準の阻害性参照化合物であるカルミダゾリウムを使用し、これを、いくつかの濃度で各実験において試験し、阻害曲線を得、そこからＩＣ50値を計算した。
【００８１】
この試験のために、研究者らは、Ｂｅｎｄｅｒ［ＢＥＮＤＥＲ、ＡＴ  ａｎｄ  Ｂｅａｖｏ，ＪＡ（２００６）．Ｃｙｃｌｉｃ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｕｓｅ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．，５８：４８８］により示された教示を基礎として使用した。
【００８２】
結果によれば、ＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物は、各々、ＰＤＥ１Ｂ酵素の活性を阻害しなかったことが観察された（図１４および１５）。
【００８３】
４．２：ＰＤＥ２Ａ1、ＰＤＥ３Ａ、ＰＤＥ４Ａ1A、ＰＤＥ４Ｂ1、ＰＤＥ７Ａ、ＰＤＥ８Ａ1、ＰＤＥ１０Ａ2およびＰＤＥ１１Ａ4酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用活性
ヒトＰＤＥ２Ａ1、ＰＤＥ３Ａ、ＰＤＥ４Ａ1A、ＰＤＥ４Ｂ1、ＰＤＥ７Ａ、ＰＤＥ８Ａ1、ＰＤＥ１０Ａ2およびＰＤＥ１１Ａ4酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用を、ｓｆ９細胞で発現するヒト組換え酵素を用いて、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）からの５’−アデノシン一リン酸（５’ＡＭＰ）の産生を測定することにより定量した。検出方法は、ＨＴＲＦ（登録商標）を使用した。
【００８４】
試験化合物、参照化合物または水（対照）を、４４．４ｍＭのトリスＨＣｌ、５．２８ｍＭのＭｇＣｌ2、２．６４ｍＭのＤＴＴおよび０．０４４％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０（ｐＨ７．８）を含有する緩衝液中の酵素（酵素およびそれらの使用量を表１に示す）と混合した。次いで、４０ｎＭのｃＡＭＰ基質を加えることにより、反応を開始し、混合物を室温で３０分間インキュベートした。基礎対照測定のために、酵素を反応混合物から省いた。蛍光アクセプター（Ｄｙｅ２標識ｃＡＭＰ）および蛍光ドナー（ユーロピウムクリプテートで標識した抗ｃＡＭＰ抗体）を１ｍＭのＩＢＭＸの存在下で加えた。６０分後、移動残留ｃＡＭＰの量に対応する蛍光を、マイクロプレートリーダー（ＲｕｂｙＳｔａｒ、ＢＭＧ）を用いて、λｅｘ＝３３７ｎｍ、λｅｍ＝６２０ｎｍおよびλｅｍ＝６６５ｎｍで測定した。酵素の活性を、６６５ｎｍで測定したシグナルを６２０ｎｍで測定したシグナルで割ることにより求めた（比）。結果を、対照酵素の活性の阻害のパーセントで表した。使用した各酵素に対して用いた標準の阻害性参照化合物を表１に記載した。これを、いくつかの濃度で各実験において試験し、阻害曲線を得、そこからＩＣ50値を計算した。
【００８５】
この試験のために、研究者らは、Ｂｅｎｄｅｒ（ＢＥＮＤＥＲ、ＡＴ  ａｎｄ  Ｂｅａｖｏ，ＪＡ（２００６）．Ｃｙｃｌｉｃ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｕｓｅ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．，５８：４８８［ＰＤＥ３Ａ1およびＰＤＥ２Ａ］；Ｓａｌｄｏｕ（ＳＡＬＤＯＵ，Ｎら（１９９８）Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ＰＤＥ４  ｉｓｏｆｏｒｍｓ：  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，  Ｃｅｌｌ  ＳｉＧｎａｌ．，１０：４２７．［ＰＤＥ４Ａ1AおよびＰＤＥ４B1］）；Ｓｍｉｔｈ（ＳＭＩＴＨ，ＳＪら（２００４）Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ＢＲＬ  ５０４８１［Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｏ−４−ｍｅｔｈｙｌ−ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｅｎｅ］，ａ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  ７：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ，ｌｕｎｇ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ，ａｎｄ  ＣＤ８＋Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍ．，６６：１６７９．［ＰＤＥ７Ａ）］）；Ｆｉｓｈｅｒ（ＦＩＳＨＥＲ，ＤＡら（１９９８），Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＰＤＥ８Ａ，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｈｕｍａｎ  ｃＡＭＰ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，２４６：５７０．［ＰＤＥ８Ａ1］）；Ｓｏｄｅｒｌｉｎｇ（ＳＯＤＥＲＬＩＮＧ  ＳＨら（１９９９），Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｄｕａｌ−ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  ｇｅｎｅ  ｆａｍｉｌｙ：ＰＤＥ１０Ａ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９６：７０７１［ＰＤＥ１０Ａ2］）；およびＦａｗｃｅｔｔ（ＦＡＷＣＥＴ  Ｌら（２０００），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｈｕｍａｎ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  ｇｅｎｅ  ｆａｍｉｌｙ：ＰＤＥ１１Ａ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９７：３７０２．［ＰＤＥ１１Ａ4］）により示された教示を基礎として使用した。
【００８６】
表１：
酵素および各々のＰＤＥ阻害剤の標準参照化合物のリスト
【００８７】
【表１】
0006636463.tif 000016
【００８８】
得られた結果によれば、ＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物は、各々、ＰＤＥ２Ａ1、ＰＤＥ３Ａ、ＰＤＥ４Ａ1A、ＰＤＥ４Ｂ1、ＰＤＥ７ＡおよびＰＤＥ８Ａ1酵素の活性を阻害しなかったことが観察された（図１４および１５）。一方で、ＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物は、各々、ＰＤＥ１１Ａ4酵素の活性を７５％および８０％阻害した。さらに、ＢＬ−２３０化合物は、ＰＤＥ１０Ａ2酵素の活性を３５％まで阻害できたことが観察できる。
【００８９】
４．３：ＰＤＥ３Ｂ酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用活性
ヒトＰＤＥ３Ｂ酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用を、ｓｆ９細胞で発現するヒト組換え酵素を用いて、ｃＡＭＰからの５’ＡＭＰの産生を測定することにより定量した。検出方法は、ＨＴＲＦ（登録商標）を使用した。
【００９０】
試験化合物、参照化合物または水（対照）を、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、６ｍＭのＭｇＣｌ2、３ｍＭのＤＴＴおよび０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０（ｐＨ７．８）を含有する緩衝液中の０．７ＵのＰＤＥ３Ｂ酵素と混合した。次いで、４０ｎＭのｃＡＭＰ基質を加えることにより、反応を開始し、混合物を２２℃で３０分間インキュベートした。基礎対照測定のために、酵素を反応混合物から省いた。蛍光アクセプター（Ｄｙｅ２標識ｃＡＭＰ）および蛍光ドナー（ユーロピウムクリプテートで標識した抗ｃＡＭＰ抗体）を１ｍＭのＩＢＭＸの存在下で加えた。６０分後、残留ｃＡＭＰの量に対応する蛍光の移動を、マイクロプレートリーダー（ＲｕｂｙＳｔａｒ、ＢＭＧ）を用いて、λｅｘ＝３３７ｎｍ、λｅｍ＝６２０ｎｍおよびλｅｍ＝６６５ｎｍで測定した。酵素の活性を６６５ｎｍで測定したシグナルを６２０ｎｍで測定したシグナルで割ることにより求めた（比）。結果を、対照酵素の活性の阻害のパーセントで表した。標準の阻害性参照化合物であるミルリノンを使用し、これを、いくつかの濃度で各実験において試験し、阻害曲線を得、そこからＩＣ50値を計算した。
【００９１】
この試験のために、研究者らは、Ｂｅｎｄｅｒ（ＢＥＮＤＥＲ、ＡＴおよびＢｅａｖｏ，ＪＡ（２００６）．Ｃｙｃｌｉｃ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｕｓｅ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．、５８：４８８）により示された教示を基礎として使用した。
【００９２】
得られた結果によれば、ＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物は、各々、ＰＤＥ３Ｂ酵素の活性を阻害しなかったことが観察された（図１４および１５）。
【００９３】
４．４：ＰＤＥ４Ｄ2酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用活性
ヒトＰＤＥ４Ｄ2酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用を、ｓｆ９細胞で発現するヒト組換え酵素を用いて、ｃＡＭＰから５’ＡＭＰの産生を測定することにより定量した。検出方法は、ＨＴＲＦ（登録商標）を使用した。
【００９４】
試験化合物、参照化合物または水（対照）を、１．５ｍＭのＭｇＣｌ2、０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を補足したハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）（Ｉｎｖｉｔｏｒｏｇｅｎ）中の０．７５ＵのＰＤＥ４Ｄ2と混合した。次いで、４０ｎＭのｃＡＭＰ基質を加えることにより、反応を開始し、混合物を３７℃で１５分間インキュベートした。基礎対照測定のために、酵素を反応混合物から省いた。蛍光アクセプター（Ｄｙｅ２標識ｃＡＭＰ）および蛍光ドナー（ユーロピウムクリプテートで標識した抗ｃＡＭＰ抗体）を１ｍＭのＩＢＭＸの存在下で加えた。６０分後、室温にて、マイクロプレートリーダー（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ，  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて、移動残留ｃＡＭＰの量に対応する蛍光を、λｅｘ＝３３７ｎｍ、λｅｍ＝６２０ｎｍおよびλｅｍ＝６６５ｎｍで測定した。酵素の活性を、６６５ｎｍで測定したシグナルを６２０ｎｍで測定したシグナルで割ることにより求めた（比）。結果を、対照酵素の活性の阻害のパーセントで表した。標準の阻害性参照化合物であるロリプラムを使用し、これを、いくつかの濃度で各実験において試験し、阻害曲線を得、そこからＩＣ50値を計算した。
【００９５】
この試験のために、研究者らは、Ｓａｌｄｏｕ（ＳＡＬＤＯＵ，Ｎら（１９９８）Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ＰＤＥ４  ｉｓｏｆｏｒｍｓ：ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，  Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌ．，１０：４２７）により示された教示を基礎として使用した。
【００９６】
得られた結果によれば、ＢＬ−２３０化合物はＰＤＥ４Ｄ2酵素の活性を５５％阻害したのに対して、ＢＬ−２３６化合物はこの酵素の阻害作用を示さなかったことが分かる（図１４および１５）。
【００９７】
４．５：ＰＤＥ５酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用活性
ヒトＰＤＥ５酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用を、Ｃｅｒｅｐヒト血小板から単離した酵素を用いて、ｃＧＭＰからの５’ＧＭＰの産生を測定することにより定量した。検出方法は、シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）を使用した。
【００９８】
試験化合物、参照化合物または水（対照）を、４０ｍＭのトリスＨＣｌ（ｐＨ７．８）、３ｍＭのＭｇＣｌ2、１．４ｍＭのＤＴＴ、０．２１％のＢＳＡ、２００ｍＭの塩化アンモニウム（ＮＨ4Ｃｌ）、１μＭのｃＧＭＰおよび０．１μＣｉの［3Ｈ］ｃＧＭＰを含有する緩衝液に加えた。次いで、酵素（単離の効率に応じた最終量）を加えることにより、反応を開始し、混合物を２２℃で６０分間インキュベートした。基礎対照測定のために、酵素を反応混合物から省いた。この後、ＳＰＡインキュベーションビーズを加えた。２２℃で２０分間撹拌した後、［3Ｈ］５’ＧＭＰの量をシンチレーションカウンター（Ｔｏｐｃｏｕｎｔ、Ｐａｃｋａｒｄ）で定量した。結果を、対照酵素の活性の阻害のパーセントで表した。標準の阻害性参照化合物であるジピリダモールを使用し、これを、いくつかの濃度で各実験において試験し、阻害曲線を得、そこからＩＣ50値を計算した。
【００９９】
この試験のために、研究者らは、Ｗｅｉｓｈａａｒ（Ｗｅｉｓｈａａｒ，Ｒ．Ｅら（１９８６）、Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｆｏｒｍｓ  ｏｆ  ｃｙｃｌｉｃ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  ｉｎ  ｃａｒｄｉａｃ  ａｎｄ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ａｎｄ  ｐｌａｔｅｌｅｔｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、３５：７８７）により示された教示を基礎として使用した。
【０１００】
得られた結果によれば、ＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物は、ＰＤＥ５の強力な阻害剤であり、ＢＬ−２３０は、９０％の阻害を示し、ＢＬ−２３６は、８６％の阻害を示したことを発見した（各々、図１４および１５）。
【０１０１】
４．６：ＰＤＥ６酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用活性
ヒトＰＤＥ６酵素の活性に対するＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物の作用を、Ｃｅｒｅｐウシ網膜から単離した酵素を用いて、ｃＧＭＰからの５’ＧＭＰの産生を測定することにより定量した。検出方法は、シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）を使用した。
【０１０２】
試験化合物、参照化合物または水（対照）を、４０ｍＭのトリスＨＣｌ（ｐＨ７．８）、３ｍＭのＭｇＣｌ2、１．４ｍＭのＤＴＴ、０．２１％のＢＳＡ、２００ｍＭのＮＨ4Ｃｌ、２μＭのｃＧＭＰおよび０．０５μＣｉの［3Ｈ］ｃＧＭＰを含有する緩衝液に加えた。次いで、酵素（単離の効率に応じた最終量）を加えることにより、反応を開始し、混合物を２２℃で６０分間インキュベートした。基礎対照測定のために、酵素を反応混合物から省いた。この後、ＳＰＡインキュベーションビーズを加えた。２２℃で２０分間撹拌した後、［3Ｈ］５’ＧＭＰの量をシンチレーションカウンター（Ｔｏｐｃｏｕｎｔ、Ｐａｃｋａｒｄ）で定量した。結果を、対照酵素の活性の阻害のパーセントで表した。標準の阻害性参照化合物であるザプリナストを使用し、これを、いくつかの濃度で各実験において試験し、阻害曲線を得、そこからＩＣ50値を計算した。
【０１０３】
この試験のために、研究者らは、Ｂａｌｌａｒｄ（Ｂａｌｌａｒｄ，Ａ．Ｓ．ら（１９９８）Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｓｉｌｄｅｎａｆｉｌ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃｏｒｐｕｓ  ｃａｖｅｒｎｏｓｕｍ  ｔｉｓｓｕｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｃｙｃｌｉｃ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  ｉｓｏｚｙｍｅｓ，Ｊ．Ｕｒｏｌ．，１５９．２１６４）により示された教示を基礎として使用した。
【０１０４】
得られた結果によれば、ＢＬ−２３０およびＢＬ−２３６化合物は、ＰＤＥ６の強力な阻害剤であり、ＢＬ−２３０は、８５％の阻害を示し、ＢＬ−２３６は、９０％の阻害を示したことを発見した（各々、図１４および１５）。
【０１０５】
使用した試験にかかわらず、５０％超の阻害（または刺激）を示す結果は、強い作用を示している。２５〜５０％の阻害（または刺激）は、低いまたは中程度の作用を示していることが、結果から分かる。２５％未満の阻害（または刺激）の結果は、有意と見なされず、主に対照周辺のシグナルの変動に割り当てられる。
［付記］
以下に、本願出願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］
式（Ｉ）
【化１５】
0006636463.tif 000017
［式中、
Ｒ1は、芳香族基、１個以上のヘテロ原子を含有する芳香族基、フェニル基、フェノール、３−メトキシ−４−フェノール、メチレン−３，４−ジオキシフェニル、２−メトキシフェニル、３−メトキシフェニル、４−メトキシフェニル、３，４−ジメトキシフェニル、２−ハロフェニル、３−ハロフェニル、４−ハロフェニル、フリル、ピリジン、二環式芳香族、１個以上のヘテロ原子を含有する二環式芳香族であり、  Ｒ2は、アリール、ヘテロアリール、二環式アリール、ＣＨ2（ＣＨ2）nＲ3、ＣＨ2（ＣＨ2）nＮＲ4Ｒ5、ＣＨＲ6ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＣＨ（ＯＨ）Ｒ7、ＣＨ2（ＣＨ2）ＯＲ8、ＣＨ2（ＣＨ2）nＳＲ9、カルボン酸塩、スルホン酸塩または第４級アンモニウム塩であり、
Ｒ3は、ＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ3+、Ｓ（Ｏ）Ｍｅ、ＳＯ3Ｈ、ＣＯ2Ｈ、Ｃｌ、カルボン酸塩、スルホン酸塩または第４級アンモニウム塩であり、
Ｒ4は、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、フェニル、ベンジルまたは第４級アンモニウム塩であり、
Ｒ5は、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、フェニル、ベンジルまたは第４級アンモニウム塩であり、
Ｒ6は、（Ｒ）−メチル、（Ｒ）−エチル、（Ｒ）−イソプロピル、（Ｒ）−イソブチル、（Ｒ）−フェニル、（Ｒ）−ＣＨ2ＳＨ、（Ｒ）−ＣＨ2ＣＨ2ＳＣＨ3、（Ｒ）−ベンジル、（Ｒ）−ｓｅｃ−ブチル、（Ｓ）−メチル、（Ｓ）−エチル、（Ｓ）−イソプロピル、（Ｓ）−イソブチル、（Ｓ）−フェニル、（Ｓ）−ＣＨ2ＳＨ、（Ｓ）−ＣＨ2ＣＨ2ＳＣＨ3、（Ｓ）−ベンジル、（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチルまたはＣＨ2ＯＨであり、
Ｒ7は、（Ｒ）−メチル、（Ｒ）−エチル、（Ｒ）−プロピル、（Ｒ）−イソプロピル、（Ｒ）−フェニル、（Ｒ）−ベンジル、（Ｓ）−メチル、（Ｓ）−エチル、（Ｓ）−プロピル、（Ｓ）−イソプロピル、（Ｓ）−フェニルまたは（Ｓ）−ベンジルであり、
Ｒ8は、Ｃ1〜6アルキル、Ｃ2〜6アルケニル、Ｃ2〜6アルキニル、フェニルまたはベンジルであり、
Ｒ9は、Ｃ1〜6アルキル、Ｃ2〜6アルケニル、Ｃ2〜6アルキニル、フェニルまたはベンジルであり、
Ｎは、０〜４の数値である］
を有する、６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンから誘導される化合物、これらの誘導体の混合物、これらの塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステル；ならびにこれらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、これらの鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体。
［２］
Ｒ1が、メチレン−３，４−ジオキシフェニルであり、Ｒ2が、ＣＨ2（ＣＨ2）nＲ3またはＣＨＲ6ＣＨ2ＯＨであり、Ｒ3が、ＯＨであり、Ｒ6が、（Ｓ）−メチルであり、Ｎが、１に等しい、［１］に記載の化合物。
［３］
式（ＩＩ）
【化１６】
0006636463.tif 000018
で表される、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンである、［２］に記載の化合物。
［４］
式（ＩＩＩ）
【化１７】
0006636463.tif 000019
で表される、３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオンである、［２］に記載の化合物。
［５］
ホスホジエステラーゼ酵素の阻害活性を示す、［１］〜［４］のいずれかに記載の化合物。
［６］
治療有効量の１種以上の［１］に記載の化合物および１種以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
［７］
塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグおよび薬学的に許容されるエステルを含む、
（ａ）式（ＩＩ）の３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（２−ヒドロキシエチル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン、
（ｂ）式（ＩＩＩ）の３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５イル）−７−（（Ｓ）１−ヒドロキシプロパン−２イル）−１−（１Ｈ−インドール−３−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン
からなる群から選択される少なくとも１種の化合物、または任意の比率でのこれらの混合物；これらの個々の形態および／またはラセミもしくは鏡像体過剰率を任意の比率で有する非ラセミ混合物の形態で分割された、前記化合物の鏡像異性体および／またはジアステレオ異性体；ならびに１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を活性成分として含む、［６］に記載の医薬組成物。
［８］
経口、局所、注射、経鼻および経直腸での投与のためである、［６］または［７］に記載の医薬組成物。
［９］
ホスホジエステラーゼ酵素の阻害のための使用である、［１］〜［４］のいずれかに記載の化合物の使用。
［１０］
勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤で治療可能な障害の治療および／または予防のための医薬組成物の調製のためである、［１］〜［４］のいずれかに記載の化合物の使用。
［１１］
結石症、前立腺肥大症、肺高血圧症、尿道狭窄、女性および／または男性の性機能障害の治療または予防のためである、［１０］に記載の使用。
［１２］
勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤で治療可能な障害の治療のためである、［６］〜［８］のいずれかに記載の医薬組成物の使用。
［１３］
有効量の少なくとも１種の［１］に記載の化合物を投与することを含む、ホスホジエステラーゼの活性と関連した障害の治療および／または予防方法。
［１４］
勃起障害、結石症、前立腺肥大症、肺高血圧症、尿道狭窄、女性および／または男性の性機能障害の治療および／または予防のためである、［１３］に記載の方法。
［１５］
有効量の少なくとも１種の［１］に記載の化合物を投与することを含む、勃起障害、組織弛緩により治療可能な障害および／または症状、ならびにホスホジエステラーゼ阻害剤で治療可能な障害の治療および／または予防方法。
［１６］
中間体メチル２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−３−（２−クロロアセチル）−５−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，３−ジヒドロオキサゾール−４−カルボキシレート（ｂ）の形成を含み、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中の乾燥ピリジン（Ｐｙ）溶液および塩化クロロアセチル溶液の存在下での、化合物（（Ｅ）−メチル２−（（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルメチレン）アミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−３−オキソプロパノエート（ａ）の反応により調製される、［３］および［４］に記載の式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物の合成方法。
［１７］
化合物（ＩＩ）の形成が、中間体（ｂ）の反応を介してエチルアルコールおよび２−アミノエタノール（ｃ）を加えることにより起こる、［１６］に記載の合成方法。
［１８］
化合物（ＩＩＩ）の形成が、エチルアルコールおよび（Ｓ）−２−アミノプロパン−１−オール（ｄ）を中間体（ｂ）の反応媒体に加えることにより起こる、［１６］に記載の合成方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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