(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリエチレングリコール、モノメトキシポリエチレングリコール及びそれらの組み合わせからなる群から選ばれる親水性ブロック（Ａ）；及び
ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ（乳酸−グリコリド）、ポリカプロラクトン、ポリジオキサン−２−オン及びそれらの組み合わせからなる群から選ばれる疎水性ブロック（Ｂ）
を含む、両親媒性ブロック共重合体組成物であって、
下記数式（１）：
ピーク（ａ）の面積／［ピーク（ａ）の面積＋ピーク（ｂ）の面積］×１００≧８５
（式中、ピーク（ａ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいてミセル高分子により示されるピークであり、ピーク（ｂ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいて非ミセル高分子により示されるピークである）
の条件を満たす、両親媒性ブロック共重合体組成物。
【請求項２】
下記数式（１ａ）：
ピーク（ａ）の面積／［ピーク（ａ）の面積＋ピーク（ｂ）の面積］×１００≧９０
（式中、ピーク（ａ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいてミセル高分子により示されるピークであり、ピーク（ｂ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいて非ミセル高分子により示されるピークである）
の条件を満たす、請求項１に記載の両親媒性ブロック共重合体組成物。
【請求項３】
下記数式（１ｂ）：
ピーク（ａ）の面積／［ピーク（ａ）の面積＋ピーク（ｂ）の面積］×１００≧９５
（式中、ピーク（ａ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいてミセル高分子により示されるピークであり、ピーク（ｂ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいて非ミセル高分子により示されるピークである）
の条件を満たす、請求項２に記載の両親媒性ブロック共重合体組成物。
【請求項４】
下記数式（２）：
ピーク（ａ）の面積／［ピーク（ａ）の面積＋ピーク（ｂ）の面積＋ピーク（ｃ）の面積］×１００≧８５
（式中、ピーク（ａ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいてミセル高分子により示されるピークであり、ピーク（ｂ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいて非ミセル高分子により示されるピークであり、ピーク（ｃ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいてモノマーにより示されるピークである）
の条件を満たす、請求項１に記載の両親媒性ブロック共重合体組成物。
【請求項５】
下記数式（２ａ）：
ピーク（ａ）の面積／［ピーク（ａ）の面積＋ピーク（ｂ）の面積＋ピーク（ｃ）の面積］×１００≧９０
（式中、ピーク（ａ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいてミセル高分子により示されるピークであり、ピーク（ｂ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいて非ミセル高分子により示されるピークであり、ピーク（ｃ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいてモノマーにより示されるピークである）
の条件を満たす、請求項４に記載の両親媒性ブロック共重合体組成物。
【請求項６】
下記数式（２ｂ）：
ピーク（ａ）の面積／［ピーク（ａ）の面積＋ピーク（ｂ）の面積＋ピーク（ｃ）の面積］×１００≧９５
（式中、ピーク（ａ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいてミセル高分子により示されるピークであり、ピーク（ｂ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいて非ミセル高分子により示されるピークであり、ピーク（ｃ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいてモノマーにより示されるピークである）
の条件を満たす、請求項５に記載の両親媒性ブロック共重合体組成物。
【請求項７】
両親媒性ブロック共重合体が、Ａ−Ｂ型のジブロック共重合体又はＢ−Ａ−Ｂ型のトリブロック共重合体である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の両親媒性ブロック共重合体組成物。
【請求項８】
疎水性ブロック（Ｂ）が、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ（乳酸−グリコリド）及びそれらの組み合わせからなる群から選ばれる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の両親媒性ブロック共重合体組成物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の両親媒性ブロック共重合体組成物、及び難水溶性薬物を含む、高分子ミセル医薬組成物。
【請求項１０】
難水溶性薬物が、パクリタキセル、ドセタキセル、７−エピパクリタキセル、ｔ−アセチルパクリタキセル、１０−デスアセチルパクリタキセル、１０−デスアセチル−７−エピパクリタキセル、７−キシロシルパクリタキセル、１０−デスアセチル−７−グルタリルパクリタキセル、７−Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシルパクリタキセル、７−Ｌ−アラニルパクリタキセル及びカバジタキセルからなる群から選ばれる１種以上である、請求項９に記載の高分子ミセル医薬組成物。
【請求項１１】
（ａ）親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）とを含む両親媒性ブロック共重合体組成物を、エタノール、メタノール、イソプロピルアルコール及びそれらの混合物からなる群から選ばれる有機溶媒に、４０℃〜７０℃の温度で１時間〜６時間溶解させる工程；及び
（ｂ）前記工程（ａ）で得られた溶液を１５℃〜３５℃の温度で１時間〜６時間層分離させる工程；
を含み、
親水性ブロック（Ａ）は、ポリエチレングリコール、モノメトキシポリエチレングリコール及びそれらの組み合わせからなる群から選ばれ；疎水性ブロック（Ｂ）は、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ（乳酸−グリコリド）、ポリカプロラクトン、ポリジオキサン−２−オン及びそれらの組み合わせからなる群から選ばれる、両親媒性ブロック共重合体組成物の精製方法。
【請求項１２】
工程（ａ）で用いられる有機溶媒の量が、両親媒性ブロック共重合体組成物重量に対して、２ｍＬ／ｇ〜８ｍＬ／ｇである、請求項１１に記載の両親媒性ブロック共重合体組成物の精製方法。
【請求項１３】
工程（ａ）で用いられる有機溶媒が、エタノールである、請求項１１に記載の両親媒性ブロック共重合体組成物の精製方法。
【請求項１４】
工程（ｂ）の生成物から残留有機溶媒を除去する工程をさらに含む、請求項１１に記載の両親媒性ブロック共重合体組成物の精製方法。
【請求項１５】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の両親媒性ブロック共重合体組成物を含む薬物担体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水溶液中における両親媒性ブロック共重合体によって形成されるミセルの安定性向上を提供する両親媒性ブロック共重合体組成物に関し、さらに詳しくは、非ミセル高分子（non-micelle polymer）及びモノマーを除去することによって、向上したミセルの安定性を有する両親媒性ブロック共重合体組成物及び前記両親媒性ブロック共重合体を含む医薬組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
両親媒性ブロック共重合体は、親水性高分子ブロックと疎水性高分子ブロックから構成される。親水性高分子ブロックは、生体内で血液タンパク質及び細胞膜と直接接触するので、生体適合性ポリエチレングリコール又はモノメトキシポリエチレングリコールなどが使用されてきた。疎水性高分子ブロックは、疎水性薬物との親和性を向上させ、生分解性を有するポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ（乳酸−グリコリド）、ポリカプロラクトン、ポリアミノ酸、ポリオルトエステルなどが使用されてきた。特に、ポリラクチド誘導体は優れた生体適合性を有し、体内で分解されて無害な乳酸になるため、種々の形態で薬物担体に応用されている。ポリラクチド誘導体は、その分子量に応じて様々な特性を有し、マイクロスフェア、ナノ粒子、高分子ゲル及びインプラント剤（implant agent）などの形態で開発されてきた。
【０００３】
薬物担体として用いられる両親媒性ブロック共重合体は、親水性及び疎水性高分子ブロックの構成比及び各分子量などを調節することにより薬物の放出速度を制御することができる。薬物の放出速度を正確に制御するためには、ミセルを形成できる両親媒性ブロック共重合体の含量が重要である。非ミセル高分子が最終両親媒性ブロック共重合体に含まれると、分子量分布が広くなり、ミセルを形成しない両親媒性ブロック共重合体の含量が多くなる。これは薬物をカプセル化するミセルの物理的安定性を低下させる。さらに、薬物が人体に投与されると、ミセル内に封入された薬物の安定性が低下して、過剰な放出が起こることがある。
【０００４】
両親媒性ブロック共重合体の純度を高めるための様々な精製方法がある。ポリラクチド誘導体を疎水性ブロックとして含む両親媒性ブロック共重合体を溶媒／非溶媒方法により精製する技術が知られている。この方法では、Ｄ，Ｌ−ラクチドモノマーを除去するために、精製用溶媒／非溶媒の組み合わせとして、塩化メチレン／エーテルの組み合わせが使用される。しかし、この方法は、エーテルに対する親水性ブロック（ポリエチレングリコール）の溶解度が低いので、非ミセル高分子の除去には効果的でない。非溶媒として用いられるエーテルの沸点が非常に低くいので、前記方法は工業的方法の適用において多くの問題を有している。
【０００５】
他の精製方法は、溶媒を使用せずにモノマーを除去する方法である。この用法では、ポリラクチド誘導体を含む両親媒性共重合体を合成した後、高温及び真空条件下で、未反応のラクチドモノマーを、昇華性を利用した昇華法（sublimation）により除去する。この方法は、工業化に有利に適用することができる。しかし、前記方法はモノマーを除去することしかできない。さらに、合成された高分子が高温及び真空条件下で長時間にわたって熱分解されるため、所望のように分子量を制御することは困難である。
【０００６】
特許文献１は、親水性溶媒と塩基性水溶液を用いて高分子を溶解した後、塩化ナトリウムを添加する塩析を利用して層分離することによって、高純度の両親媒性ブロック共重合体を製造する方法を開示している。層分離が生じると、親水性溶媒中の溶解度よりも水溶液中で著しく高い溶解度を有する不純物が除去される。しかし、非ミセル高分子の場合、親水性溶媒に対する溶解度が高いため、除去効果が低下する問題がある。
【０００７】
特許文献２には、液／液相分離による低分子量のＤ，Ｌ−ポリ乳酸の精製方法が開示されている。この方法では、重合した高分子を加熱してメタノール又はエタノールなどに溶解させた後、−７８℃で凍結保存して層分離させる。低分子量のポリ乳酸は上層の有機溶媒中に溶解しており、高分子量のポリ乳酸は下層で固化している。下層を分離し、溶媒を留去して、モノマー及びオリゴマーを除去し、分子量分布が狭い高純度のＤ，Ｌ−ポリ乳酸を得る。しかし、両親媒性ブロック共重合体の場合には、低温では溶解度が著しく低下するため、層分離が生じず、非ミセル高分子のみを除去することに問題がある。
【０００８】
従って、ポリ（α−ヒドロキシ酸）の疎水性高分子ブロックを含む両親媒性ブロック共重合体から非ミセル高分子を除去できる精製方法が必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】韓国  特許  第１０−１１８７４８７号
【特許文献２】米国  公開特許公報  第２００５−０２３８６１８号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的は、非ミセル高分子の含量が少ないことにより安定性が向上したミセルを形成することができる両親媒性ブロック共重合体組成物及びそれを含む医薬組成物を提供することである。
【００１１】
本発明の別の目的は、両親媒性ブロック共重合体組成物を精製する際に、液／液相分離方法によってモノマー及び非ミセル高分子を効果的に除去する方法を提供することである。
【００１２】
本発明さらに別の目的は、薬物担体を製造するための両親媒性ブロック共重合体組成物の使用を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の一側面によれば、ポリエチレングリコール又はその誘導体、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリルアミド及びそれらの組み合わせからなる群から選ばれる親水性ブロック（Ａ）；及びポリラクチド、ポリグリコリド、ポリマンデル酸、ポリカプロラクトン、ポリジオキサン−２−オン、ポリアミノ酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカルボネート及びそれらの組み合わせからなる群から選ばれる疎水性ブロック（Ｂ）を含む、両親媒性ブロック共重合体組成物であって、下記数式（１）：
ピーク（ａ）の面積／［ピーク（ａ）の面積＋ピーク（ｂ）の面積］×１００≧８５
（式中、ピーク（ａ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいてミセル高分子により示される示すピークであり、ピーク（ｂ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいて非ミセル高分子により示されるピークである）
の条件を満たす、両親媒性ブロック共重合体組成物を提供する。
【００１４】
本発明の別の側面によれば、両親媒性ブロック共重合体組成物、及び難水溶性薬物を含む、高分子ミセル医薬組成物を提供する。
【００１５】
本発明のさらに別の側面によれば、（ａ）親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）とを含む両親媒性ブロック共重合体組成物を、エタノール、メタノール、イソプロピルアルコール及びそれらの混合物からなる群から選ばれる有機溶媒に、４０℃〜７０℃の温度で１時間〜６時間溶解させる工程；及び（ｂ）工程（ａ）で得られた溶液を１５℃〜３５℃の温度で１時間〜６時間層分離させる工程を含む、両親媒性ブロック共重合体組成物の精製方法を提供する。
【００１６】
本発明のさらに別の側面によれば、薬物担体の製造のための両親媒性ブロック共重合体組成物の使用を提供する。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、非ミセル高分子の含量が少ないことにより安定性が向上したミセルを形成することができる両親媒性ブロック共重合体組成物を得ることができる。両親媒性ブロック共重合体組成物は、高分子を熱分解することなく効果的に精製することができ、工業化に有利に適用することができる。また、本発明の両親媒性ブロック共重合体組成物を用いて医薬組成物を製造すると、ミセルの物理的安定性が向上し、苛酷条件下での保存安定性試験中における類縁物質産生が抑制されるため、保存安定性に優れた医薬組成物が得られる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明の実施例１及び比較例１で行ったサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析のクロマトグラムである（横軸の単位：分（min）、縦軸の単位：ｎＲＩＵ（ナノ屈折率単位）。ここで、ピーク（ａ）は、ミセルを形成するミセル高分子により示されるピークであり、ピーク（ｂ）は、ミセルを形成することができず可溶化形態である両親媒性ブロック共重合体（非ミセル高分子）によって示されるピークであり、ピーク（ｃ）は、モノマーであるＤ，Ｌ−ラクチドにより示されるピークである。両親媒性ブロック共重合体組成物中のミセル高分子の含量は（ａ）、（ｂ）、（ｃ）ピークの面積比で表され、下記数式（１）を満たすものであり、下記数式（１）及び数式（２）を満たすのもが好ましい。数式（１）：ピーク（ａ）の面積／［ピーク（ａ）の面積＋ピーク（ｂ）の面積］×１００≧８５；数式（２）：ピーク（ａ）の面積／［ピーク（ａ）の面積＋ピーク（ｂ）の面積＋ピーク（ｃ）の面積］×１００≧８５
【図２】本発明の実施例１で行ったガス透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）分析の得られたクロマトグラムである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下で、本発明をさらに詳細に説明する。
【００２０】
本明細書において、「ミセル高分子」とは、水溶液中でミセルを形成する両親媒性ブロック共重合体を意味し、「非ミセル高分子」とは、ミセルを形成できず、可溶化状態の両親媒性ブロック共重合体を意味する。
【００２１】
本発明の一具体例によれば、両親媒性ブロック共重合体は、親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）からなるＡ−Ｂ型のジブロック共重合体又はＢ−Ａ−Ｂ型のトリブロック共重合体であってもよい。
【００２２】
本発明の一具体例によれば、両親媒性ブロック共重合体の親水性ブロックの含量は、全体共重合体１００重量％に対して、２０〜９５重量％、より具体的には４０〜９５重量％であってもよい。また、両親媒性ブロック共重合体の疎水性ブロックの含量は、全体共重合体１００重量％に対して、５〜８０重量％、より具体的には５〜６０重量％であってもよい。
【００２３】
本発明の一具体例によれば、両親媒性ブロック共重合体の数平均分子量は、１，０００〜５０，０００ダルトン、より具体的には１，５００〜２０，０００ダルトンであってもよい。
【００２４】
本発明の一具体例によれば、親水性ブロックは、生体適合性高分子であってもよい。具体的には、ポリエチレングリコール又はその誘導体、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリルアミド及びそれらの組み合わせからなる群から選ばれるもの、より具体的には、ポリエチレングリコール、モノメトキシポリエチレングリコール及びそれらの組み合わせからなる群から選ばれるものを含むことができる。親水性ブロックの数平均分子量は、２００〜２０，０００ダルトン、より具体的には２００〜１０，０００ダルトンであってもよい。
【００２５】
本発明の一具体例によれば、疎水性ブロックは、生分解性高分子及びα−ヒドロキシ酸から誘導されるモノマーの高分子であってもよい。具体的には、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ（乳酸−グリコリド）、ポリマンデル酸、ポリカプロラクトン、ポリジオキサン−２−オン、ポリアミノ酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカルボネート及びそれらの組み合わせからなる群から選ばれるもの、より具体的には、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ（乳酸−グリコリド）及びそれらの組み合わせからなる群から選ばれるものを含むことができる。疎水性ブロックの数平均分子量は、２００〜２０，０００ダルトン、より具体的には２００〜１０，０００ダルトンであってもよい。
【００２６】
本発明の一具体例によれば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）の疎水性高分子ブロックを含む両親媒性ブロック共重合体は、開始剤として、ヒドロキシル基を有する親水性高分子及びα−ヒドロキシ酸のラクトンモノマーを用いた公知の開環重合方法によって合成することができる。例えば、開始剤として、ヒドロキシル基を有する親水性ポリエチレングリコール又はモノメトキシポリエチレングリコールをＬ−ラクチド又はＤ，Ｌ−ラクチドを開環重合することができる。開始剤である親水性ブロックに存在するヒドロキシル基の数に応じてジブロック又はトリブロック共重合体の合成が可能である。開環重合においては、酸化スズ、酸化鉛、オクタン酸スズ、オクタン酸アンチモン等の有機金属触媒を用いることができ、医療用高分子の製造には生体適合性を有するオクタン酸スズを用いることが好ましい。
【００２７】
本発明の両親媒性ブロック共重合体組成物は、下記数式（１）の条件を満たし、好ましくは下記数式（１ａ）の条件を満たし、より好ましくは下記数式（１ｂ）の条件を満たす。
数式（１）：ピーク（ａ）の面積／［ピーク（ａ）の面積＋ピーク（ｂ）の面積］×１００≧８５
数式（１ａ）：ピーク（ａ）の面積／［ピーク（ａ）の面積＋ピーク（ｂ）の面積］×１００≧９０
数式（１ｂ）：ピーク（ａ）の面積／［ピーク（ａ）の面積＋ピーク（ｂ）の面積］×１００≧９５
【００２８】
一態様において、本発明の両親媒性ブロック共重合体組成物は、数式（１）の条件を満たすとともに、下記数式（２）の条件を満たし、好ましくは下記数式（２ａ）の条件を満たし、より好ましくは下記数式（２ｂ）の条件を満たす：
数式（２）：ピーク（ａ）の面積／［ピーク（ａ）の面積＋ピーク（ｂ）の面積＋ピーク（ｃ）の面積］×１００≧８５
数式（２ａ）：ピーク（ａ）の面積／［ピーク（ａ）の面積＋ピーク（ｂ）の面積＋ピーク（ｃ）の面積］×１００≧９０
数式（２ｂ）：ピーク（ａ）の面積／［ピーク（ａ）の面積＋ピーク（ｂ）の面積＋ピーク（ｃ）の面積］×１００≧９５
【００２９】
前記数式において、ピーク（ａ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいてミセル高分子により示されるピークであり、ピーク（ｂ）は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいて非ミセル高分子により示されるピークであり、ピーク（ｃ）は、モノマーによって示されるピークである。
【００３０】
医薬組成物、例えば高分子ミセル医薬組成物は、数式（１）の条件を満たす本発明の両親媒性ブロック共重合体組成物を薬物の高分子担体（即ち、薬物担体）として使用することによって製造することができる。
【００３１】
本発明の一例による医薬組成物は、有効成分として難水溶性薬物を含むことができる。難水溶性薬物は、水への溶解度（２５℃）が１００ｍｇ／ｍＬ以下の薬物から選ぶことができる。また、抗癌剤（antineoplastic agents）、抗真菌剤（antifungal agents）、免疫抑制剤（immunosuppressants）、麻酔剤（analgesics）、消炎鎮痛剤（anti-inflammatory agents）、抗ウイルス剤（antiviral agents）、鎮静剤（anxiolytic sedatives）、造影剤（contrasting agents）、コルチコステロイド（corticosteroids）、診断薬（diagnostic agents）、診断造影剤（diagnostic imaging agents）、利尿剤（diuretics）、プロスタグランジン（prostaglandins）、放射線剤（radiopharmaceuticals）、ステロイド（steroid）を含む性ホルモン剤（sex hormones）及びそれらの組み合わせから選ぶことができるが、それらに限定されない。
【００３２】
一具体例において、難水溶性薬物は、抗癌剤から選んでもよく、具体的には、タキサン抗癌剤であってもよい。タキサン抗癌剤は、例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、７−エピパクリタキセル、ｔ−アセチルパクリタキセル、１０−デスアセチルパクリタキセル、１０−デスアセチル−７−エピパクリタキセル、７−キシロシルパクリタキセル、１０−デスアセチル−７−グルタリルパクリタキセル、７−Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシルパクリタキセル、７−Ｌ−アラニルパクリタキセル及びカバジタキセルからなる群から選ばれる１種以上であってもよい。より具体的には、パクリタキセル、ドセタキセル又はそれらの組み合わせであってもよい。
【００３３】
本発明の医薬組成物の製造方法において、高分子ミセルを形成するための従来の方法を使用することができる。一例では、本発明の医薬組成物の製造方法は、（ａ）難水溶性薬物と両親媒性ブロック共重合体組成物を有機溶媒に溶解させる工程；及び（ｂ）工程（ａ）で得られた溶液に水性溶媒を加えて高分子ミセルを形成させる工程を含むことができる。
【００３４】
本発明の医薬組成物の製造方法において、有機溶媒としては、水混和性有機溶媒、例えば、アルコール、アセトン、テトラヒドロフラン、酢酸、アセトニトリル、ジオキサン及びそれらの組み合わせからなる群から選ばれるものを使用することができるが、これに限定されない。また、水性溶媒としては、通常の水、蒸溜水、注射用蒸溜水、生理食塩水、５％グルコース、緩衝液及びそれらの組み合わせからなる群から選ばれるものを使用することができるが、これに限定されない。
【００３５】
本発明の医薬組成物の製造方法は、工程（ａ）の後に、有機溶媒を除去する工程をさらに含むことができる。
【００３６】
本発明の方法に従って製造される医薬組成物に含まれる難水溶性薬物の含量は、両親媒性ブロック共重合体組成物１００重量部に対して、０．１〜５０重量部、より具体的には０．５〜３０重量部であってもよい。難水溶性薬物の含量が両親媒性ブロック共重合体組成物の含量に比べて少なすぎると、薬物当たりの使用される両親媒性高分子の重量比が大きくなり、投与前の再構成（Reconstitution）時間が長くなる可能性がある。一方、難水溶性薬物の量が多すぎると、難水溶性薬物の急激な析出が問題となる場合がある。
【００３７】
本発明はまた、（ａ）親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）とを含む両親媒性ブロック共重合体組成物を、エタノール、メタノール、イソプロピルアルコール及びそれらの混合物からなる群から選ばれる有機溶媒に、４０〜７０℃の温度で１時間〜６時間溶解させる工程；及び（ｂ）工程（ａ）で得られた溶液を１５℃〜３５℃の温度で１時間〜６時間層分離させる工程を含む両親媒性ブロック共重合体組成物の精製方法を提供する。
【００３８】
一具体例によれば、工程（ａ）において、両親媒性ブロック共重合体組成物を有機溶媒に溶解させるための温度は、好ましくは４０℃〜６０℃、より好ましくは４５℃〜５５℃であり、溶解時間は好ましくは１時間〜４時間、より好ましくは２時間〜３時間であってもよい。また、工程（ｂ）において、層分離温度は好ましくは２０℃〜３０℃であり、層分離時間は好ましくは１時間〜４時間、より好ましくは２時間〜３時間であってもよい。前記条件で層分離を行えば、モノマーや触媒などの不純物を除去することができ、非ミセル高分子を効果的に除去することができる。
【００３９】
一具体例によれば、工程（ａ）で使用される有機溶媒の量は、両親媒性ブロック共重合体組成物重量に対して、好ましくは２ｍＬ／ｇ〜８ｍＬ／ｇ、より好ましくは４ｍＬ／ｇ〜６ｍＬ／ｇであってもよい。有機溶媒の使用量が高分子の使用量より多いと、精製効率が高くなり、収率は低下する傾向がある。また、有機溶媒としては、好ましくはエタノールを使用することができる。エタノールは、医薬品の製造に利用できる毒性の低い溶媒である。
【００４０】
また、一具体例によれば、本発明の精製方法は、工程（ｂ）の生成物から残留有機溶媒を除去する工程をさらに含むことができる。
【００４１】
一具体例によれば、本発明の両親媒性ブロック共重合体組成物において、水溶液中でミセルを形成することができない両親媒性ブロック共重合体（非ミセル高分子）の含量は１０％以下（ＳＥＣ分析時）であってもよい。
【００４２】
本発明は、以下の実施例によってより詳細に説明される。ただし、これらの実施例は本発明を例示することのみを目的としており、本発明の範囲はこれらの実施例によってなんら限定されるものではない。
【実施例】
【００４３】
製造例１：モノメトキシポリエチレングリコール及びＤ，Ｌ−ラクチドからなるジブロック共重合体（ｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ）の合成
モノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ、数平均分子量＝２，０００）１５０ｇを撹拌機付き５００ｍＬの丸底フラスコに加え、１２０℃にて真空下２時間撹拌して、水分を除去した。トルエン２００μＬに溶解させたオクタン酸スズ（Ｓｎ（Ｏｃｔ）2）０．１５ｇを反応フラスコに加え、さらに１時間真空撹拌して、トルエンを留去した。次いで、Ｄ，Ｌ−ラクチド１５０ｇを加え、窒素雰囲気下で撹拌して、溶解させた。Ｄ，Ｌ−ラクチドが完全に溶解した後、反応器を密閉し、重合反応を１２０℃で１０時間行った。
【００４４】
実施例１：エタノールを用いる層分離方法によるジブロック共重合体（ｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ）の精製
製造例１で得られたｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ２０ｇを１口フラスコに加え、エタノール１２０ｍＬを加えて撹拌しながら５０℃で２時間溶解させた。高分子溶液を分液ロートに移し、層分離を２５℃で２時間行った。層分離が完了した後、下層の高分子溶液を１口フラスコに移した。高分子溶液中の残存エタノールを、真空蒸留器を利用して真空蒸留により除去した。
【００４５】
精製した共重合体の試料を採取し、1Ｈ−ＮＭＲで分析し、モノメトキシポリエチレングリコールの末端基である−ＯＣＨ3を基準にして適当なピークの相対強度を求め、ラクチドの含量及び分子量を算出した。精製した共重合体を以下の条件下でＧＰＣ及びＳＥＣによってさらに分析した。分析結果を下記表１に示す。
【００４６】
［ＳＥＣ分析条件］
ｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡを水に溶解させて、濃度を０．５％とし、次いで分析した。
（１）ＳＥＣカラム：Ｓｈｏｄｅｘ，ＯＨｐａｋ  ＳＢ−８０４  ＨＱ（８．０×３００ｍｍ）
（２）移動相：リン酸緩衝食塩水１００％
（３）流速：１ｍＬ／分
（４）注入量：５０μＬ
（５）検出器：ＲＩＤ
（６）温度：２５℃
【００４７】
［ＧＰＣ分析条件］
ｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡを６．０ｍｇ秤取し、ＨＰＬＣ用クロロホルム４ｍＬを加えて高分子を溶解させた。標準試料としてポリエチレングリコール（６１０、１０１０、１４８０、４０４０、７８３０、１６１００、２１３００ｇ／ｍｏｌ）を使用した。
（１）ＧＰＣカラム：Ｐｌｇｅｌ  ５μｍ  Ｍｉｘｅｄ−Ｃ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｃｏｌｕｍｎ（Agilent社）
（２）移動相：ＨＰＬＣ用クロロホルム
（３）流速：１ｍＬ／分
（４）注入量：１００μＬ
（５）検出器：ＲＩＤ
（６）温度：３５℃
【００４８】
比較例１：昇華法によるジブロック共重合体（ｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ）の精製
製造例１で得られたｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ３０ｇを１口フラスコに加え、１２０℃で溶融させた。磁気バーで撹拌下、反応器を真空ポンプに接続し、ラクチドを１ｔｏｒｒ以下圧力下で昇華法により７時間除去した。得られた共重合体を実施例１と同じ方法で分析した。分析結果を下記表１に示す。
【表１】
0006796205.tif 000002
【００４９】
表１の結果から、ＳＥＣ分析から、昇華法による精製よりもエタノールを用いた層分離法による精製の方がモノマーの除去が良好であり、非ミセル高分子がさらに除去されていることがわかる［実施例１ではラクチドの面積（Area by SEC）は０であったが、比較例１ではピークが観察された（図１（ｃ））］。非ミセル高分子がさらに除去されたことをＳＥＣ分析で確認することができる。また、ＧＰＣ分析の結果から、両親媒性ブロック共重合体の平均分子量が増加し、ＰＤＩが減少して分子量分布がさらに狭くなることが確認された。
【００５０】
実施例２：エタノールを用いる層分離法により精製した高分子を用いるパクリタキセル含有高分子ミセル組成物の製造
実施例１で得られたｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ５ｇ及びパクリタキセル１ｇを秤取し、そこにエタノール４ｍＬを加え、混合物が完全に溶解するまで６０℃で撹拌して、透明な溶液を形成させた。その後、丸底フラスコ付きロータリーエバポレーターを用いて６０℃で３時間エタノールを減圧留去した。その後、温度を５０℃に下げ、室温の精製水１４０ｍＬを加え、溶液が青色で透明になるまで反応させて、高分子ミセルを形成させた。凍結乾燥化剤として、無水ラクトース２．５ｇを加え、完全に溶解させ、孔径２００ｎｍのフィルターでろ過し、凍結乾燥して、粉末としてパクリタキセルを含む高分子ミセル組成物を得た。
【００５１】
比較例２：昇華法により精製した高分子を用いるパクリタキセル含有高分子ミセル組成物の製造
比較例１で得られたｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡを用いたことを除いて、実施例２と同じ方法でパクリタキセル含有高分子ミセル組成物を製造した。
【００５２】
実施例３：エタノールを用いる層分離法により精製した高分子を用いたドセタキセル含有高分子ミセル組成物の製造
実施例１で得られたｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ１９ｇ及びドセタキセル１ｇを秤取し、そこにエタノール７ｍＬを加え、混合物が完全に溶解するまで２５℃で撹拌して、透明な溶液を形成させた。その後、丸底フラスコ付きロータリーエバポレーターを用いて２５℃で３時間エタノールを減圧留去した。その後、室温で精製水２２５ｍＬを加え、溶液が青色で透明になるまで反応させて、高分子ミセルを形成させた。凍結乾燥化剤として、無水ラクトース５．０ｇを加え、完全に溶解させ、孔径２００ｎｍのフィルターでろ過した後、凍結乾燥して、粉末としてドセタキセルを含む高分子ミセル組成物を得た。
【００５３】
比較例３：昇華法により精製した高分子を用いるドセタキセル含有高分子ミセル組成物の製造
比較例１で得られたｍＰＥＧ−ＰＤＬＬＡを用いたことを除いて、実施例３と同じ方法でドセタキセル含有高分子ミセル組成物を製造した。
【００５４】
試験例１：パクリタキセル含有高分子ミセルの苛酷条件下での保存安定性比較実験
パクリタキセル含有高分子ミセル組成物（実施例２、比較例２）を６０℃のオーブン中に２又は４週間保存し、８０％アセトニトリル水溶液に溶解させ、パクリタキセル濃度６００ｐｐｍになるように希釈することにより検液を調製した。その後、調製した検液を下記条件下ＨＰＬＣで分析し、類縁物質含量を比較した。苛酷試験時間による類縁物質量（％）変化を下記表２に示す。
【００５５】
動的光散乱装置を用いて、ミセルの粒径を平均粒径により測定した。測定結果を下記表２に示す。
【００５６】
［ＨＰＬＣの条件］
カラム：粒径２．７μｍ、ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ  １２０ＰＦＰ（４．６×１５０ｍｍ、２．７μｍ）（Agilent column）
移動相条件
【表２】
0006796205.tif 000003
検出器：紫外吸光光度計（２２７ｎｍ）
流速：０．６ｍｌ／分
個別類縁物質の含量（％）＝１００（Ｒｉ／Ｒｕ）
Ｒｉ：検液分析で検出された個別類縁物質の面積
Ｒｕ：検液分析で検出された全ピーク面積の合計
【００５７】
【表３】
0006796205.tif 000004
【００５８】
表２の結果から、エタノール層分離法により精製した高分子を用いた薬物含有ミセルでは、類縁物質の生成が著しく抑制されていることがわかる。これは製品開発の際に、保存安定性を向上させることが期待される。
【００５９】
試験例２：ドセタキセル含有高分子ミセルの苛酷条件での保存安定性比較実験
ドセタキセル含有高分子ミセル組成物（実施例３、比較例３）を４０℃のオーブン中に１、２又は４週間保存し、ミセル組成物２０ｍｇを水１０ｍＬに溶解させ、検液の全量が５０ｍＬになるように移動相で希釈することにより検液を調製した。その後、調製した検液を下記条件下ＨＰＬＣで分析し、類縁物質含量を比較した。苛酷試験時間による類縁物質量（％）変化を下記表３に示す。
【００６０】
動的光散乱装置を用いて、ミセルの粒径を平均粒径により測定した。測定結果を下記表３に示す。
【００６１】
［ＨＰＬＣの条件］
カラム：Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ  １００ＲＰ−１８、２５０×４．０ｍｍ（５μｍ）又はこれと類似のカラム
移動相：アセトニトリル：メタノール：水混合液（２６：３２：４２）
流速：１．５ｍＬ／分
注入量：２０μＬ
検出器：紫外吸光光度計（２３２ｎｍ）
カラム温度：２０℃
個別類縁物質の含量（％）＝１００（Ｒｉ／Ｒｕ）
Ｒｉ：検液分析で検出された個別類縁物質の面積
Ｒｕ：検液分析で検出された全ピーク面積の合計
【００６２】
【表４】
0006796205.tif 000005
【００６３】
表３の結果から、エタノール層分離法により精製した高分子を用いた薬物含有ミセルでは、類縁物質の生成が著しく抑制されていることがわかる。ミセルの安定性が増大し、薬物がミセル中に長期間安定に含まれていることが確認された。一方、昇華法により精製した高分子を使用した場合には、試験期間中に薬物の沈殿が観察された。
【図１】
0006796205.tif 000006
【図２】
0006796205.tif 000007