(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトから採取した生体試料中のＭＡＩＴ細胞について、（１）全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合、又は（２）ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８β、ＣＤ４４、及びＣＸＣＲ４からなる群より選ばれる１以上の表面抗原の発現量を測定することを含む、線維筋痛症の判定のための方法。
【請求項２】
線維筋痛症患者と、健常人、脊椎関節炎患者、及び／又は関節リウマチ患者とを鑑別するための方法である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記表面抗原が、ＣＤ４、ＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、ＣＤ１０７ａ及びＣＤ８βからなる群より選ばれる、請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記ＭＡＩＴ細胞のうち、ＣＤ８陽性（ＣＤ８＋）細胞について、ＣＣＲ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０及びＣＤ８βからなる群より選ばれる１以上の表面抗原の発現量が測定される、請求項２記載の方法。
【請求項５】
前記ＭＡＩＴ細胞のうち、ＣＤ４及びＣＤ８二重陰性（ＣＤ４−ＣＤ８−）細胞について、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲ１及びＣＤ１０７ａからなる群より選ばれる１以上の表面抗原の発現量が測定される、請求項２記載の方法。
【請求項６】
前記表面抗原が、ＣＤ４４若しくはＣＸＣＲ１、又はその両方である、請求項２記載の方法。
【請求項７】
前記ＭＡＩＴ細胞のうち、ＣＤ４−ＣＤ８−細胞について、ＣＸＣＲ１の発現量が測定される、請求項２記載の方法。
【請求項８】
前記表面抗原がＣＸＣＲ４である、請求項２記載の方法。
【請求項９】
以下（ａ）又は（ｂ）の方法である、請求項１記載の方法：
（ａ）全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合を測定することによる、線維筋痛症患者の疼痛の程度を判定するための方法；又は
（ｂ）全Ｔ細胞に対するＣＤ４陽性（ＣＤ４＋）ＭＡＩＴ細胞の存在割合を測定することによる、線維筋痛症患者を健常人から鑑別するための方法。
【請求項１０】
生体試料が末梢血である、請求項１〜９のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
前記発現量がタンパク質量である、請求項１〜１０のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
表面抗原タンパク質に対する抗体を用いて、前記表面抗原のタンパク質量が測定される、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
ヒトから採取した生体試料中のＭＡＩＴ細胞について、（１）全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合、又は（２）ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８β、ＣＤ４４、及びＣＸＣＲ４からなる群より選ばれる１以上の表面抗原の測定手段を含む、線維筋痛症の診断キット。
【請求項１４】
前記測定手段が抗体である、請求項１３記載の診断キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、線維筋痛症の判定のための方法及びキットなどに関する。特に、本発明は、線維筋痛症患者の健常人との鑑別方法、線維筋痛症患者の類似疼痛性疾患（脊椎関節炎、関節リウマチなど）患者との鑑別方法、及び線維筋痛症患者の疼痛の程度を判定するための方法、並びにそのためのキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
線維筋痛症（ＦＭＳ）は、慢性全身性疼痛、疲労、睡眠障害などを特徴とする原因不明の難病であり、女性の罹患率が非常に高く、日本では約２００万人の患者がいると考えられている。しかしながら、ＦＭＳの診断は非常に困難であるため、発症から５〜１０年を経てＦＭＳへの罹患が疑われ、ようやくＦＭＳと診断されることがある。現在病院等で一般的に使われている検査データに何の異常も見られない点で、ＦＭＳは、他の難病と根本的に異なる。このため、ＦＭＳ患者は精神疾患と診断されることが多く、また、ＦＭＳを疾患として認めない医師も多いことから、ＦＭＳ患者は身体的にも精神的にも苦しめられている。ＦＭＳは発症初期において適切な治療を施せば、その悪化を防ぐことが可能である。しかしながら、発症初期での治療の機会を逸すると症状は悪化し、ＦＭＳ患者は堪え難い疼痛と疲労感に悩まされて日常生活も困難となることがある。
【０００３】
ＦＭＳの正確な診断をさらに困難にしているのが他の類似疾患との混同である。全身性疼痛はＦＭＳのみに限定されるのではなく、関節リウマチ（ＲＡ）及び脊椎関節炎（ＳｐＡ）等でも見受けられる。さらに複雑なことに、ＦＭＳ患者はＳｐＡやＲＡを併発していることが多い。このことから、ＲＡや疼痛の専門医であってもＦＭＳの鑑別診断は困難であるという課題がある。また、現在用いられているＦＭＳの診断は圧痛点における痛みを基準としたもので（圧痛点試験）、主観的要素に依存し易いという課題がある。これらの諸問題から、ＦＭＳを敏速、正確かつ客観的に他の類似疾患と鑑別する方法が求められている。
【０００４】
ＦＭＳの判定に関連して、分子マーカー等を利用する幾つかの技術が知られている（特許文献１〜３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第１９９７／０１４９６３号
【特許文献２】国際公開第２０１２／０４６７０８号
【特許文献３】国際公開第２０１０／００４９６２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、ＦＭＳの判定に有用な新規マーカーを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは鋭意検討した結果、Ｔ細胞の一種であるＭＡＩＴ細胞、及び当該ＭＡＩＴ細胞上に発現している分子がＦＭＳの判定に有用なマーカーであること等を見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、以下のとおりである。
〔１〕ヒトから採取した生体試料中のＭＡＩＴ細胞について、（１）全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合、又は（２）ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８β、ＣＤ４４、及びＣＸＣＲ４からなる群より選ばれる１以上の表面抗原の発現量を測定することを含む、線維筋痛症の判定のための方法。
〔２〕線維筋痛症患者と、健常人、脊椎関節炎患者、及び／又は関節リウマチ患者とを鑑別するための方法である、〔１〕の方法。
〔３〕前記表面抗原が、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、ＣＤ１０７ａ及びＣＤ８βからなる群より選ばれる、〔２〕の方法。
〔４〕前記ＭＡＩＴ細胞のうち、ＣＤ８陽性（ＣＤ８＋）細胞について、ＣＣＲ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０及びＣＤ８βからなる群より選ばれる１以上の表面抗原の発現量が測定される、〔２〕の方法。
〔５〕前記ＭＡＩＴ細胞のうち、ＣＤ４及びＣＤ８二重陰性（ＣＤ４−ＣＤ８−すなわちＤＮ）細胞について、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲ１及びＣＤ１０７ａからなる群より選ばれる１以上の表面抗原の発現量が測定される、〔２〕の方法。
〔６〕前記表面抗原が、ＣＤ４４若しくはＣＸＣＲ１、又はその両方である、〔２〕の方法。
〔７〕前記ＭＡＩＴ細胞のうち、ＤＮ  ＭＡＩＴ細胞について、ＣＸＣＲ１の発現量が測定される、〔２〕の方法。
〔８〕前記表面抗原がＣＸＣＲ４である、〔２〕の方法。
〔９〕以下（ａ）又は（ｂ）の方法である、〔２〕の方法：
（ａ）全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合を測定することによる、線維筋痛症患者の疼痛の程度を判定するための方法；又は
（ｂ）全Ｔ細胞に対するＣＤ４陽性（ＣＤ４＋）ＭＡＩＴ細胞の存在割合を測定することによる、線維筋痛症患者を健常人から鑑別するための方法。
〔１０〕生体試料が末梢血である、〔１〕〜〔９〕のいずれかの方法。
〔１１〕前記発現量がタンパク質量である、〔１〕〜〔１０〕のいずれかの方法。
〔１２〕表面抗原タンパク質に対する抗体を用いて、前記表面抗原のタンパク質量が測定される、〔１１〕の方法。
〔１３〕ヒトから採取した生体試料中のＭＡＩＴ細胞について、（１）全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合、又は（２）ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８β、ＣＤ４４、及びＣＸＣＲ４からなる群より選ばれる１以上の表面抗原の測定手段を含む、線維筋痛症の診断キット。
〔１４〕前記測定手段が抗体である、〔１３〕の診断キット。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の方法及びキットは、線維筋痛症の判定に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１Ａ】図１Ａは、線維筋痛症（ＦＭＳ）患者由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）における粘膜関連インバリアントＴ細胞（ＭＡＩＴ細胞）の代表的な蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）プロフィール、並びに全ＭＡＩＴ細胞、ＣＤ８＋ＭＡＩＴ細胞、並びにＤＮ  ＭＡＩＴ細胞におけるＮＫＧ２Ｄ発現を示す図である。図中の数値は、集団の百分率を示す。ＭＡＩＴ細胞は、ＣＤ３陽性（ＣＤ３＋）細胞におけるＶα７．２陽性（Ｖα７．２＋）ＣＤ１６１強陽性（ＣＤ１６１ｈｉｇｈ）として規定される。
【図１Ｂ】図１Ｂは、健常人（ＨＤ）（ｎ＝１６）、線維筋痛症（ＦＭＳ）（ｎ＝２６）、関節リウマチ（ＲＡ）（ｎ＝２１）、及び脊椎関節炎（ＳｐＡ）（ｎ＝３６，サンプル１つを欠く）における全ＭＡＩＴ細胞の頻度を示す図である。全Ｔ細胞（ＣＤ３＋）に対するＭＡＩＴ細胞（Ｖα７．２＋ＣＤ１６１ｈｉｇｈ）の百分率を示す。全てのデータを中央値で示す（図１Ｃ〜Ｈも同様）。水平線：中央値；ボックス；２５パーセンタイル及び７５パーセンタイル；ウィスカー：最大及び最小（図１Ｃ〜Ｈも同様）。アステリスクは、有意差を示す一対の群を示す（図１Ｃ〜Ｈも同様）。＊：Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１（Ｐ値は、クラスカル・ワリス検定後にダンの補正にて算出した）（図１Ｃ〜Ｈも同様）。
【図１Ｃ】図１Ｃは、ＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡにおけるＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞の頻度を示す図である。全Ｔ細胞（ＣＤ３＋）の範囲内におけるＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞（Ｖα７．２＋ＣＤ１６１ｈｉｇｈ  ＣＤ８＋）の百分率を示す。
【図１Ｄ】図１Ｄは、ＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡにおけるＤＮ  ＭＡＩＴ細胞の頻度を示す図である。全Ｔ細胞（ＣＤ３＋）の範囲内におけるＤＮ  ＭＡＩＴ細胞（Ｖα７．２＋ＣＤ１６１ｈｉｇｈ  ＤＮ）の百分率を示す。
【図１Ｅ】図１Ｅは、ＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡにおけるＣＤ４＋  ＭＡＩＴ細胞の頻度を示す図である。全Ｔ細胞（ＣＤ３＋）におけるＣＤ４＋  ＭＡＩＴ細胞（Ｖα７．２＋ＣＤ１６１ｈｉｇｈ  ＣＤ４＋）の百分率を示す。
【図１Ｆ】図１Ｆは、ＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡにおける全ＭＡＩＴ細胞（Ｖα７．２＋ＣＤ１６１ｈｉｇｈ）に占めるＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞（ＣＤ８＋Ｖα７．２＋ＣＤ１６１ｈｉｇｈ）の百分率を示す図である。
【図１Ｇ】図１Ｇは、ＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡにおける全ＭＡＩＴ細胞（Ｖα７．２＋ＣＤ１６１ｈｉｇｈ）に占めるＤＮ  ＭＡＩＴ細胞（ＣＤ８−ＣＤ４−Ｖα７．２＋ＣＤ１６１ｈｉｇｈ）の百分率を示す図である。
【図１Ｈ】図１Ｈは、ＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡにおける全ＭＡＩＴ細胞（Ｖα７．２＋ＣＤ１６１ｈｉｇｈ）に占めるＣＤ４＋  ＭＡＩＴ細胞（ＣＤ４＋Ｖα７．２＋ＣＤ１６１ｈｉｇｈ）の百分率を示す図である。
【図２Ａ】図２Ａは、全ＭＡＩＴ細胞、ＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞、及びＤＮ  ＭＡＩＴ細胞におけるケモカイン受容体の発現を示す図である。平均蛍光強度（ＭＦＩ）を中央値で示す（図２Ｂ〜Ｈも同様）。破線は、アイソタイプ・コントロールのＭＦＩを示す（図２Ｂ〜Ｈも同様）。水平線：中央値；ボックス；２５パーセンタイル及び７５パーセンタイル；ウィスカー：最大及び最小（図２Ｂ〜Ｈも同様）。アステリスクは、有意差を示す一対の群を示す（図２Ｂ〜Ｈも同様）。＊：Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１，＊＊＊Ｐ＜０．００１（ノンパラメトリック・マン−ホイットニーＵ検定）（図２Ｂ〜Ｈも同様）。
【図２Ｂ】図２Ｂは、全ＭＡＩＴ細胞、ＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞、及びＤＮ  ＭＡＩＴ細胞における共刺激分子の発現を示す図である。
【図２Ｃ】図２Ｃは、全ＭＡＩＴ細胞、ＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞、及びＤＮ  ＭＡＩＴ細胞におけるサイトカイン受容体の発現を示す図である。
【図２Ｄ】図２Ｄは、全ＭＡＩＴ細胞、ＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞、及びＤＮ  ＭＡＩＴ細胞におけるＳＬＡＭファミリー、メモリー及び活性化マーカーの発現を示す図である。
【図２Ｅ】図２Ｅは、全ＭＡＩＴ細胞、ＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞、及びＤＮ  ＭＡＩＴ細胞におけるＮＫ受容体の発現を示す図である。
【図２Ｆ】図２Ｆは、全ＭＡＩＴ細胞、ＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞、及びＤＮ  ＭＡＩＴ細胞におけるＣＤ９５（Ｆａｓ）の発現を示す図である。
【図２Ｇ】図２Ｇは、全ＭＡＩＴ細胞、ＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞、及びＤＮ  ＭＡＩＴ細胞におけるインテグリンファミリーの発現を示す図である。
【図２Ｈ】図２Ｈは、全ＭＡＩＴ細胞、ＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞、及びＤＮ  ＭＡＩＴ細胞における種々の分子の発現を示す図である。
【図３Ａ】図３Ａは、ＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡを識別する潜在的なバイオマーカー（ＣＣＲ４）を示す図である。示された細胞表面抗原について、ＭＦＩを中央値で示す（図３Ｂ〜Ｊも同様）。破線は、アイソタイプ・コントロールのＭＦＩを示す（図３Ｂ〜Ｊも同様）。水平線：中央値；ボックス；２５パーセンタイル及び７５パーセンタイル；ウィスカー：最大及び最小（図３Ｂ〜Ｊも同様）。図中の数値は、クラスカル・ワリス検定後のＰ値を示す（図３Ｂ〜Ｊも同様）。アステリスクは、有意差を示す一対の群を示す（図３Ｂ〜Ｊも同様）。＊：Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１，＊＊＊Ｐ＜０．００１（Ｐ値は、ダンの補正にて算出した）（図３Ｂ〜Ｊも同様）。ｔｏｔａｌ：全ＭＡＩＴ細胞；ＣＤ８＋；ＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞；ＤＮ：ＤＮ  ＭＡＩＴ細胞（図３Ｂ〜Ｊも同様）。
【図３Ｂ】図３Ｂは、ＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡを識別する潜在的なバイオマーカー（ＣＣＲ７）を示す図である。
【図３Ｃ】図３Ｃは、ＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡを識別する潜在的なバイオマーカー（ＣＤ９４）を示す図である。
【図３Ｄ】図３Ｄは、ＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡを識別する潜在的なバイオマーカー（ＣＤ１５０）を示す図である。
【図３Ｅ】図３Ｅは、ＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡを識別する潜在的なバイオマーカー（ＣＤ４４）を示す図である。
【図３Ｆ】図３Ｆは、ＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡを識別する潜在的なバイオマーカー（ＣＸＣＲ１）を示す図である。
【図３Ｇ】図３Ｇは、ＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡを識別する潜在的なバイオマーカー（ＣＸＣＲ４）を示す図である。
【図３Ｈ】図３Ｈは、ＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡを識別する潜在的なバイオマーカー（ＮＫｐ８０）を示す図である。
【図３Ｉ】図３Ｉは、ＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡを識別する潜在的なバイオマーカー（ＣＤ８β）を示す図である。
【図３Ｊ】図３Ｊは、ＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡを識別する潜在的なバイオマーカー（ＣＤ１０７ａ）を示す図である。
【図４Ａ】図４Ａは、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡにおける血清中のＣ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＲＰ）濃度（左パネル）、並びにＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡにおける血清中のＭａｔｒｉｘ  Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−３（ＭＭＰ−３）濃度（右パネル）を示す図である。水平線：中央値；ボックス；２５パーセンタイル及び７５パーセンタイル；ウィスカー：最大及び最小（図４Ｂも同様）。アステリスクは、有意差を示す一対の群を示す（図４Ｂも同様）。＊：Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１（Ｐ値は、クラスカル・ワリス検定後、ダンの補正によって算出した）（図４Ｂも同様）。
【図４Ｂ】図４Ｂは、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡにおける痛み指標であるＰａｉｎ  Ｖｉｓｕａｌ  Ａｎａｌｏｇ  Ｓｃａｌｅ（ＰＶＡＳ）（左パネル）、並びにＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡにおける疲労指標であるＦａｔｉｇｕｅ  Ｖｉｓｕａｌ  Ａｎａｌｏｇ  Ｓｃａｌｅ（ＦＶＡＳ）（右パネル）を示す図である。
【図４Ｃ】図４Ｃは、２６人のＦＭＳ患者（左パネル）、２１人のＲＡ患者（中央パネル）、及び３６人のＳｐＡ患者（右パネル）のコホートにおけるＰＶＡＳ／ＦＶＡＳとＭＡＩＴ細胞百分率（末梢血全ＣＤ３＋細胞に占めるＶα７．２＋ＣＤ１６１ｈｉｇｈ細胞の％）との間の相関性を示す図である。スピアマン順位相関検定で相関性を解析した。＊：Ｐ＜０．０５，ｒ：相関係数。
【図５】図５は、ＦＭＳにおけるＭＡＩＴ細胞頻度に対する薬物服用の影響を示す図である。薬物服用一時中断前後の同一個体（ｎ＝９）から採取した末梢血由来の全Ｔ細胞（ＣＤ３＋）に対する全ＭＡＩＴ細胞、ＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞、ＤＮ及びＣＤ４＋  ＭＡＩＴ細胞（Ｖα７．２＋ＣＤ１６１ｈｉｇｈ）の百分率を示す。統計学的有意差及びＰ値は、ウィルコクソン一致対符号順位（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ  ｍａｔｃｈｅｄ−ｐａｉｒｓ  ｓｉｇｎｅｄ  ｒａｎｋ）検定による。アステリスクは、有意であることを示す。＊：Ｐ＜０．０５。
【図６Ａ】図６Ａは、ＦＭＳにおけるＭＡＩＴ細胞表面抗原（ＣＣＲ４）に対する薬物服用の影響を示す図である。薬物服用の一時中断前後の同一個体（ｎ＝９）から採取した末梢血由来の全ＭＡＩＴ細胞、ＣＤ８＋  及びＤＮ  ＭＡＩＴ細胞におけるＣＣＲ４のＭＦＩを示す（図６Ｂ〜Ｌも同様）。統計学的有意差は、ウィルコクソン一致対符号順位検定で評価した（図６Ｂ〜Ｌも同様）。アステリスクは、有意差があることを示す（図６Ｂ〜Ｌも同様）。＊：Ｐ＜０．０５，＊＊：Ｐ＜０．０１（図６Ｂ〜Ｌも同様）。
【図６Ｂ】図６Ｂは、ＦＭＳにおけるＭＡＩＴ細胞表面抗原（ＣＣＲ５）に対する毎日の薬物服用の影響を示す図である。
【図６Ｃ】図６Ｃは、ＦＭＳにおけるＭＡＩＴ細胞表面抗原（ＣＸＣＲ４）に対する毎日の薬物服用の影響を示す図である。
【図６Ｄ】図６Ｄは、ＦＭＳにおけるＭＡＩＴ細胞表面抗原（ＣＤ２７）に対する毎日の薬物服用の影響を示す図である。
【図６Ｅ】図６Ｅは、ＦＭＳにおけるＭＡＩＴ細胞表面抗原（ＣＤ２８）に対する毎日の薬物服用の影響を示す図である。
【図６Ｆ】図６Ｆは、ＦＭＳにおけるＭＡＩＴ細胞表面抗原（誘導性共刺激性分子（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ：ＩＣＯＳ）に対する毎日の薬物服用の影響を示す図である。
【図６Ｇ】図６Ｇは、ＦＭＳにおけるＭＡＩＴ細胞表面抗原（ＣＤ１２７）に対する毎日の薬物服用の影響を示す図である。
【図６Ｈ】図６Ｈは、ＦＭＳにおけるＭＡＩＴ細胞表面抗原（ＣＤ９４）に対する毎日の薬物服用の影響を示す図である。
【図６Ｉ】図６Ｉは、ＦＭＳにおけるＭＡＩＴ細胞表面抗原（ＮＫｐ８０）に対する毎日の薬物服用の影響を示す図である。
【図６Ｊ】図６Ｊは、ＦＭＳにおけるＭＡＩＴ細胞表面抗原（ＣＤ６９）に対する毎日の薬物服用の影響を示す図である。
【図６Ｋ】図６Ｋは、ＦＭＳにおけるＭＡＩＴ細胞表面抗原（ＣＤ４９ｄ）に対する毎日の薬物服用の影響を示す図である。
【図６Ｌ】図６Ｌは、ＦＭＳにおけるＭＡＩＴ細胞表面抗原（ＣＤ２６）に対する毎日の薬物服用の影響を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、ヒトから採取した生体試料中のＭＡＩＴ細胞について、（１）全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合、又は（２）ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８β、ＣＤ４４、及びＣＸＣＲ４からなる群より選ばれる１以上の表面抗原の発現量を測定することを含む、線維筋痛症の判定のための方法を提供する。
【００１２】
線維筋痛症は、精神的要素、手術・事故などのＣＲＰＳ（Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｒｅｇｉｏｎａｌ  Ｐａｉｎ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、又は慢性疲労症候群を要因とし、疼痛を引き起こす基礎疾患がない一次線維筋痛症（原発性）と、疼痛を引き起こす基礎疾患（リウマチ性疾患、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、強直性脊椎炎、甲状腺機能低下症等）を併発する二次線維筋痛症（続発性）に分けられる。本発明の判定のための方法は、特に限定されるものではないが、一次線維筋痛症の判定に特に有用である。
【００１３】
粘膜関連インバリアントＴ細胞（Ｍｕｃｏｓａｌ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｉｎｖａｒｉａｎｔ  Ｔ  （ＭＡＩＴ）ｃｅｌｌ）は、免疫反応を担うＴ細胞の一種である。ＭＡＩＴ細胞は、多様性を有しない単一のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、すなわち、インバリアントＴＣＲを発現している。具体的には、ヒトＭＡＩＴ細胞のＴＣＲα鎖は、Ｖα７．２−Ｊα３３の組合せのみである（Ｌｅ  Ｂｏｕｒｈｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１），Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２，２１２−２１８）。ＭＡＩＴ細胞は、このようなインバリアントＴＣＲα鎖に加えて、特異的な表面抗原として、ＣＤ１６１（ＮＫＲＰ１とも呼ばれる），  やＩＬ−１８受容体アルファ鎖を発現する（Ｃｏｓｍｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００８），Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０５，１９０３−１９１６；及びＬｅ  Ｂｏｕｒｈｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１），Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２，２１２−２１８）。よって、ヒトＭＡＩＴ細胞は、一般的なＴ細胞マーカー（例、ＣＤ３）、並びにＭＡＩＴ細胞特異的であるインバリアントＴＣＲα鎖（Ｖα７．２−Ｊα３３）及びＣＤ１６１を発現する細胞として規定することができる。
【００１４】
ＭＡＩＴ細胞はヒトにおいて豊富に存在しており、例えば、末梢血、腸管及び肝臓に多く存在し、粘膜免疫において重要な役割を果たすと考えられている。本発明で用いられる生体試料は、ＭＡＩＴ細胞を含有する限り特に限定されず、例えば、血液試料（例、末梢血試料）、粘膜試料（例、口腔粘膜試料、咽頭粘膜試料、腸管粘膜試料）、および生検試料（例、腸管試料、肝臓試料）が挙げられる。好ましくは、生体試料は、血液試料である。
【００１５】
ＭＡＩＴ細胞は、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、並びにＣＤ４及びＣＤ８二重陰性（ＤＮ）細胞（ＣＤ４−ＣＤ８−細胞）から構成される。よって、ＣＤ４及びＣＤ８をマーカーとして用いることにより、ＭＡＩＴ細胞をＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、及びＣＤ４−ＣＤ８−細胞に更に分類することができる。
【００１６】
一実施形態では、本発明の方法は、ヒトから採取した生体試料中のＭＡＩＴ細胞について、全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合を測定することを含む。
【００１７】
本発明の方法において、全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合の測定は、例えば、Ｔ細胞マーカー（例、ＣＤ３）及びＭＡＩＴ細胞マーカー（例、Ｖα７．２、Ｊα３３、ＣＤ１６１）を利用することにより行うことができる。
【００１８】
例えば、上記存在割合の測定は、Ｔ細胞マーカーを利用して全Ｔ細胞数を測定し、次いでＭＡＩＴ細胞マーカーを利用してＭＡＩＴ細胞数を測定し、最後に全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の比率を評価することにより、行うことができる。また、このような測定は、Ｔ細胞マーカー及びＭＡＩＴ細胞マーカーを利用して、全Ｔ細胞数及びＭＡＩＴ細胞数を相対的に測定することにより、行われてもよい。具体的には、このような測定は、Ｔ細胞マーカー及びＭＡＩＴ細胞マーカーを利用した蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）により、行われてもよい。
【００１９】
あるいは、上記存在割合の測定は、生体試料におけるＴ細胞マーカーの発現量に対するＭＡＩＴ細胞マーカーの発現量の相対比率を指標として用いることにより、行われてもよい。例えば、このような相対比率は、生体試料から調製されたｍＲＮＡ抽出液又はタンパク質抽出液においてマーカーのｍＲＮＡ又はタンパク質の発現量を測定し、次いでその相対比率を評価することにより、算出することができる。また、このような相対比率は、上記抽出液においてマーカーのｍＲＮＡ又はタンパク質の発現量を相対的に測定することにより、算出されてもよい。
【００２０】
ｍＲＮＡの発現量の測定は、例えば、遺伝子発現量の測定手段（例、プライマー、プローブ）を用いて行うことができる。具体的には、遺伝子発現量の測定手段を用いる方法としては、例えば、遺伝子増幅法、及びハイブリダイゼーション法が挙げられる。遺伝子増幅法としては、例えば、変温遺伝子増幅法（例、ＰＣＲ）、及び等温遺伝子増幅法（例、ＬＡＭＰ、ＩＣＡＮ）が挙げられる。遺伝子増幅法では、逆転写酵素が併用されてもよい。ハイブリダイゼーション法としては、例えば、ノザンブロッティング法、及びマイクロアレイ法が挙げられる。
【００２１】
タンパク質の発現量の測定は、例えば、タンパク質量の測定手段（例、抗体、アプタマー）を用いて行うことができる。具体的には、タンパク質量の測定手段を用いる方法としては、例えば、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）（例、直接競合ＥＬＩＳＡ、間接競合ＥＬＩＳＡ、サンドイッチＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、磁性粒子法、免疫クロマト法、ルミネッセンス免疫測定法、スピン免疫測定法、ウエスタンブロット法、ラテックス凝集法が挙げられる。抗体としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、改変抗体（例、単鎖抗体）等の任意の抗体を用いることができる。
【００２２】
例えば、全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合を測定することにより、ＦＭＳ患者の疼痛の程度を判定することができる。図４Ｃ中の左上の図（ＦＭＳ対ＰＶＡＳ）に示されるとおり、ＦＭＳ患者の疼痛が激しいほど、全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合が有意に少ないことが理解できる。したがって、本発明の方法によれば、全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合が基準値以上のときに疼痛は相対的に弱い可能性があり、全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合が基準値より少ないときに疼痛は相対的に強い可能性があると判定することができる。また、複数の基準値を設定してもよく、例えば、全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合が第１基準値以上のときに疼痛の程度は相対的に弱い可能性があり、全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合が第１基準値より少なく第２基準値以上であるとき疼痛の程度は中程度であり、全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合が第２基準値より少ないときに疼痛の程度は相対的に強い可能性があると判定することができる。あるいは、全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合と疼痛の程度とは反比例の関係にあることから、反比例係数を利用することにより、全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合から疼痛の程度を推測することもできる。
【００２３】
また、全Ｔ細胞に対するＣＤ４＋  ＭＡＩＴ細胞の存在割合を測定することにより、ＦＭＳ患者を健常人から鑑別することができる。表３及び４に示されるとおり、ＦＭＳ患者は、健常人に比し、全Ｔ細胞に対するＣＤ４＋  ＭＡＩＴ細胞の存在割合が有意に少ないことが理解できる。したがって、本発明の方法によれば、全Ｔ細胞に対するＣＤ４＋  ＭＡＩＴ細胞の存在割合が基準値以上のときに被験体は健常である可能性があり、全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合が基準値より少ないときに被験体はＦＭＳに罹患している可能性があると判定することができる。このような基準値としては、ＦＭＳ患者及び健常人を鑑別し得るように適宜設定されたカットオフ値を利用することができる。
【００２４】
別の実施形態では、本発明の方法は、ヒトから採取した生体試料中のＭＡＩＴ細胞について、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８β、ＣＤ４４、及びＣＸＣＲ４からなる群より選ばれる１以上の表面抗原の発現量を測定することを含む。ＭＡＩＴ細胞は、上述したとおり、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、及びＣＤ４−ＣＤ８−細胞に更に分類することができる。
【００２５】
例えば、上記表面抗原の発現量の測定は、ヒトから採取した生体試料からＭＡＩＴ細胞を単離又は分離した後、単離又は分離されたＭＡＩＴ細胞において行うことができる。具体的には、このような測定は、ＭＡＩＴ細胞マーカー及び上記表現抗原を利用した蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）により、連続して行われてもよい。
【００２６】
あるいは、上記表面抗原の発現量の測定は、ヒトから採取した生体試料からＭＡＩＴ細胞を単離又は分離した後、当該単離又は分離された細胞から調製されたＭＡＩＴ細胞抽出液において上記表面抗原の発現量を測定することにより、行われてもよい。ＭＡＩＴ細胞の単離及び分離は、自体公知の方法により行うことができる。例えば、ＭＡＩＴ細胞は、ＭＡＩＴ細胞マーカー（例、Ｖα７．２、Ｊα３３、ＣＤ１６１）に対する抗体、ＭＡＩＴ細胞の分化・増殖を制御する、ＭＲ−１分子上にビタミンＢ２の誘導体をのせた（ｌｏａｄｅｄ）テトラマー分子（Ｒａｈｉｍｐｏｕｒ  Ａら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１５，Ｊｕｎ  ２９；２１２（７）：１０９５−１０８．ｄｏｉ：１０．１０８４／ｊｅｍ．２０１４２１１０）、又はその他のＭＡＩＴ細胞を認識し得る手段を用いて単離又は分離することができる。また、ＭＡＩＴ細胞抽出液における上記表面抗原の発現量の測定は、当該表面抗原ｍＲＮＡの発現量を測定することにより、又は当該表面抗原タンパク質の発現量を測定することにより、行うことができる。当該表面抗原ｍＲＮＡ又は表面抗原タンパク質の発現量の測定は、上記存在割合の測定で述べたものと同様に行うことができる。
【００２７】
特定の実施形態では、本発明の方法は、ＦＭＳ患者を健常人から鑑別するための方法である。この場合、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、ＣＤ１０７ａ及びＣＤ８βからなる群より選ばれる１以上の表面抗原の発現量を測定することにより、ＦＭＳ患者を健常人から鑑別することができる（表６及び図３Ａ〜Ｊ）。
例えば、全ＭＡＩＴ細胞（ＣＤ４＋，  ＣＤ８＋，ＤＮ細胞）について、ＦＭＳ患者は、健常人に比し、ＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、及びＣＤ８βからなる群より選ばれる１以上の表面抗原の発現量が有意に増加又は減少する。したがって、本発明の方法によれば、上記表面抗原の発現量が基準値以上又は基準値以下のときに被験体は健常である可能性があり、上記表面抗原の発現量が基準値未満又は基準値を超えるときに被験体はＦＭＳに罹患している可能性があると判定することができる。
また、ＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞について、ＦＭＳ患者は、健常人に比し、ＣＣＲ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０及びＣＤ８βからなる群より選ばれる１以上の表面抗原の発現量が有意に増加又は減少する。したがって、本発明の方法によれば、上記表面抗原の発現量が基準値以上又は基準値以下のときに被験体は健常である可能性があり、上記表面抗原の発現量が基準値未満又は基準値を超えるときに被験体はＦＭＳに罹患している可能性があると判定することができる。
さらに、ＣＤ４−ＣＤ８−  ＭＡＩＴ細胞について、ＦＭＳ患者は、健常人に比し、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲ１及びＣＤ１０７ａからなる群より選ばれる１以上の表面抗原の発現量が有意に減少する。したがって、本発明の方法によれば、上記表面抗原の発現量が基準値以上のときに被験体は健常である可能性があり、上記表面抗原の発現量が基準値未満のときに被験体はＦＭＳに罹患している可能性があると判定することができる。
このような基準値としては、ＦＭＳ患者及び健常人を鑑別し得るように適宜設定されたカットオフ値を利用することができる。
【００２８】
別の特定の実施形態では、本発明の方法は、ＦＭＳ患者をＲＡ患者から鑑別するための方法である。この場合、ＣＤ４４若しくはＣＸＣＲ１、又はその両方の発現量を測定することにより、ＦＭＳ患者をＲＡ患者から鑑別することができる（表６並びに図３Ｅ及びＦ）。
例えば、全ＭＡＩＴ細胞（ＣＤ４＋，  ＣＤ８＋，ＤＮ細胞）について、ＦＭＳ患者は、ＲＡ患者に比し、ＣＤ４４の発現量が有意に減少する。したがって、本発明の方法によれば、ＣＤ４４の発現量が基準値以上のときに被験体はＦＭＳではなくＲＡに罹患している可能性があり、ＣＤ４４の発現量が基準値未満のときに被験体はＲＡではなくＦＭＳに罹患している可能性があると判定することができる。
また、ＤＮ（ＣＤ４−ＣＤ８−）  ＭＡＩＴ細胞について、ＦＭＳ患者は、ＲＡ患者に比し、ＣＸＣＲ１の発現量が有意に減少する。したがって、本発明の方法によれば、ＣＸＣＲ１の発現量が基準値以上のときに被験体はＦＭＳではなくＲＡに罹患している可能性があり、ＣＸＣＲ１の発現量が基準値未満のときに被験体はＲＡではなくＦＭＳに罹患している可能性があると判定することができる。
このような基準値としては、ＦＭＳ患者及びＲＡ患者を鑑別し得るように適宜設定されたカットオフ値を利用することができる。
【００２９】
さらに別の特定の実施形態では、本発明の方法は、ＦＭＳ患者をＳｐＡ患者から鑑別するための方法である。この場合、ＣＸＣＲ４の発現量を測定することにより、ＦＭＳ患者をＳｐＡ患者から鑑別することができる（表６及び図３Ｇ）。
例えば、全ＭＡＩＴ細胞、及びＤＮ（ＣＤ４−ＣＤ８−）  ＭＡＩＴ細胞について、ＦＭＳ患者は、ＳｐＡ患者に比し、ＣＸＣＲ４の発現量が有意に減少する。したがって、本発明の方法によれば、ＣＸＣＲ４の発現量が基準値以上のときに被験体はＦＭＳではなくＳｐＡに罹患している可能性があり、ＣＸＣＲ４の発現量が基準値未満のときに被験体はＳｐＡではなくＦＭＳに罹患している可能性があると判定することができる。このような基準値としては、ＦＭＳ患者及びＳｐＡ患者を鑑別し得るように適宜設定されたカットオフ値を利用することができる。
【００３０】
さらに別の実施形態では、本発明の方法は、ＳｐＡ患者を健常人から鑑別するための方法である。この場合、ヒトから採取したＭＡＩＴ細胞表面のＣＤ９４の発現量を測定することにより、ＳｐＡ患者と健常人とを鑑別することが可能である（表６Ａ、図３Ｃ）。
【００３１】
本発明はまた、上記生体試料（例、血液試料）において、ＣＲＰ若しくはＭＭＰ−３、又はその両方の量を測定することを含む、ＦＭＳの判定のための方法を提供する。本方法は、上述した方法と併用されてもよい。このような量の測定は、上述したようなタンパク質の発現量の測定と同様にして行うことができる。本方法によれば、ＦＭＳをＲＡ及び／又はＳｐＡから鑑別することができる（図４Ａ、並びに表７及び８）。ＦＭＳ患者は、ＲＡ及び／又はＳｐＡ患者に比し、ＣＲＰ及びＭＭＰ−３の発現量が有意に低い。したがって、本発明の方法によれば、ＣＲＰ及びＭＭＰ−３の量が基準値以上のときに被験体はＦＭＳではなくＲＡ及び／又はＳｐＡに罹患している可能性があり、ＣＲＰ及びＭＭＰ−３の発現量が基準値未満のときに被験体はＲＡ及び／又はＳｐＡではなくＦＭＳに罹患している可能性があると判定することができる。このような基準値としては、ＦＭＳ患者をＲＡ患者及び／又はＳｐＡ患者と鑑別し得るように適宜設定されたカットオフ値を利用することができる。また、本発明の方法によれば、ＣＲＰ若しくはＭＭＰ−３、又はその両方の量を測定すること等により、ＲＡをＦＭＳ及び／又はＳｐＡから鑑別すること、並びにＳｐＡをＦＭＳ及び／又はＲＡから鑑別することもできる。
【００３２】
本発明の方法はまた、薬物による治療効果の判定に利用することができる。例えば、全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合を測定することにより、ＦＭＳ患者の疼痛の程度を判定することができるので、当該存在割合を指標として、薬物による疼痛軽減効果を判定することができる。また、上記表面抗原は健常人に対してＦＭＳ患者で特異的な発現量を示し得ることから、薬物による治療前後及び治療中において、上記表面抗原の発現量をモニターすることにより、例えば、上記表面抗原がＦＭＳ患者に特異的な発現量から健常人にみられる通常の発現量に変化し得るかどうかを評価することにより、薬物による治療効果を判定することもできる。
【００３３】
本発明はまた、ヒトから採取した生体試料中のＭＡＩＴ細胞について、（１）全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合、又は（２）ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８β、ＣＤ４４、及びＣＸＣＲ４からなる群より選ばれる１以上の表面抗原の測定手段を含む、線維筋痛症の診断キットを含む。
【００３４】
一実施形態では、本発明の診断キットは、ヒトから採取した生体試料中のＭＡＩＴ細胞について、全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合の測定手段を含む。全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合の測定手段としては、例えば、Ｔ細胞マーカー（例、ＣＤ３）の測定手段、及びＭＡＩＴ細胞マーカー（例、Ｖα７．２、Ｊα３３、ＣＤ１６１）の測定手段の組合せが挙げられる。マーカーの測定手段としては、例えば、遺伝子発現量又はタンパク質量の測定手段（例、２以上のプライマー、プローブ、抗体、又はアプタマー）が挙げられる。好ましくは、測定手段は抗体であるが、これに限定されるものではない。また、ＭＡＩＴ細胞マーカーの測定手段の一つとして、Ｖα７．２を認識する結合分子である、ビタミンＢ２の誘導体をのせた（ｌｏａｄｅｄ）ＭＲ−１テトラマー分子が挙げられる。ＭＡＩＴ細胞の存在割合の測定手段としては、このようなＭＡＩＴ細胞を認識し得る手段であればいずれも使用可能である。
【００３５】
例えば、本発明の診断キットは、全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合の測定手段を含む、ＦＭＳ患者の疼痛の程度の判定用キットである。この場合、本発明の診断キットは、全Ｔ細胞に対するＭＡＩＴ細胞の存在割合の測定手段として、Ｔ細胞マーカー（例、ＣＤ３）の測定手段、及びＭＡＩＴ細胞マーカー（例、Ｖα７．２、Ｊα３３、ＣＤ１６１）の測定手段を含む。
【００３６】
また、本発明の診断キットは、全Ｔ細胞に対するＣＤ４＋  ＭＡＩＴ細胞の存在割合の測定手段を含む、健常人からのＦＭＳ患者の鑑別用キットである。この場合、本発明の診断キットは、全Ｔ細胞に対するＣＤ４＋  ＭＡＩＴ細胞の存在割合の測定手段として、Ｔ細胞マーカー（例、ＣＤ３）の測定手段、及びＭＡＩＴ細胞マーカー（例、Ｖα７．２、Ｊα３３、ＣＤ１６１）の測定手段に加えて、ＭＡＩＴ細胞の分類マーカーであるＣＤ４の測定手段を含む。
【００３７】
別の実施形態では、本発明の診断キットは、ヒトから採取した生体試料中のＭＡＩＴ細胞について、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８β、ＣＤ４４、及びＣＸＣＲ４からなる群より選ばれる１以上の表面抗原の測定手段を含む。本診断キットは、ＭＡＩＴ細胞の１以上の分類マーカー（例、ＣＤ４、ＣＤ８）の測定手段、及びＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ８β、ＣＤ４４、及びＣＸＣＲ４からなる群より選ばれる１以上の表面抗原の測定手段の組合せを含んでいてもよい。表面抗原の測定手段としては、例えば、遺伝子発現量又はタンパク質量の測定手段（例、２以上のプライマー、プローブ、抗体、又はアプタマー）が挙げられる。本診断キットはまた、上述したような、Ｔ細胞マーカー（例、ＣＤ３）の測定手段、及び／又はＭＡＩＴ細胞マーカー（例、Ｖα７．２、Ｊα３３、ＣＤ１６１）の測定手段をさらに含んでいてもよい。好ましくは、測定手段は抗体である。
【００３８】
特定の実施形態では、本発明の診断キットは、健常人からのＦＭＳ患者の鑑別用キットである。この場合、本発明の診断キットは、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、ＣＤ１０７ａ及びＣＤ８βからなる群より選ばれる１以上の表面抗原の測定手段を含む。
例えば、ＭＡＩＴ細胞（ＣＤ４＋／−ＣＤ８＋／−細胞）について、ＦＭＳ患者は、健常人に比し、ＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、及びＣＤ８βからなる群より選ばれる１以上の表面抗原の発現量が有意に増加又は減少する。したがって、本発明の診断キットは、ＭＡＩＴ細胞マーカー（例、Ｖα７．２、Ｊα３３、ＣＤ１６１）の測定手段、及びＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、及びＣＤ８βからなる群より選ばれる１以上の表面抗原の測定手段を含んでいてもよい。
また、ＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞について、ＦＭＳ患者は、健常人に比し、ＣＣＲ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０及びＣＤ８βからなる群より選ばれる１以上の表面抗原の発現量が有意に増加又は減少する。したがって、本発明の診断キットは、ＭＡＩＴ細胞マーカー（例、Ｖα７．２、Ｊα３３、ＣＤ１６１）の測定手段、ＣＤ８の測定手段、並びにＣＣＲ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０及びＣＤ８βからなる群より選ばれる１以上の表面抗原の測定手段を含んでいてもよい。
さらに、ＣＤ４−ＣＤ８−  ＭＡＩＴ細胞について、ＦＭＳ患者は、健常人に比し、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲ１及びＣＤ１０７ａからなる群より選ばれる１以上の表面抗原の発現量が有意に減少する。したがって、本発明の診断キットは、ＭＡＩＴ細胞マーカー（例、Ｖα７．２、Ｊα３３、ＣＤ１６１）の測定手段、ＣＤ４及びＣＤ８の測定手段、並びにＣＣＲ４、ＣＸＣＲ１及びＣＤ１０７ａからなる群より選ばれる１以上の表面抗原の測定手段を含んでいてもよい。
【００３９】
別の特定の実施形態では、本発明の診断キットは、ＲＡ患者からのＦＭＳ患者の鑑別用キットである。この場合、本発明の診断キットは、ＣＤ４４若しくはＣＸＣＲ１、又はその両方の測定手段を含む。
例えば、全ＭＡＩＴ細胞（ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＤＮ細胞）について、ＦＭＳ患者は、ＲＡ患者に比し、ＣＤ４４の発現量が有意に減少する。したがって、本発明の診断キットは、ＭＡＩＴ細胞マーカー（例、Ｖα７．２、Ｊα３３、ＣＤ１６１）の測定手段、及びＣＤ４４の測定手段を含んでいてもよい。
また、ＤＮ  （ＣＤ４−ＣＤ８−）  ＭＡＩＴ細胞について、ＦＭＳ患者は、ＲＡ患者に比し、ＣＸＣＲ１の発現量が有意に減少する。したがって、本発明の診断キットは、ＭＡＩＴ細胞マーカー（例、Ｖα７．２、Ｊα３３、ＣＤ１６１）の測定手段、ＣＤ４及びＣＤ８の測定手段、並びにＣＸＣＲ１の測定手段を含んでいてもよい。
【００４０】
さらに別の特定の実施形態では、本発明の診断キットは、ＳｐＡ患者からのＦＭＳ患者の鑑別用キットである。この場合、本発明の診断キットは、ＣＸＣＲ４の測定手段を含む。
例えば、ＤＮ  ＭＡＩＴ細胞（ＣＤ４−ＣＤ８−）について、ＦＭＳ患者は、ＳｐＡ患者に比し、ＣＸＣＲ４の発現量が有意に低下している。したがって、本発明の診断キットは、ＭＡＩＴ細胞マーカー（例、Ｖα７．２、Ｊα３３、ＣＤ１６１）の測定手段、及びＣＸＣＲ４の測定手段を含んでいてもよい。
【００４１】
本発明はまた、上記生体試料（例、血液試料）において、ＣＲＰ若しくはＭＭＰ−３、又はその両方の測定手段を含む、ＦＭＳの診断キットを提供する。本診断キットの構成要素は、上述した診断キットの構成要素として含まれていてもよい。本診断キットによれば、ＦＭＳをＲＡ及び／又はＳｐＡから鑑別することができる。また、本診断キットによれば、ＲＡをＦＭＳ及び／又はＳｐＡから鑑別すること、並びにＳｐＡをＦＭＳ及び／又はＲＡから鑑別することもできる。
【００４２】
上述した測定手段は、検出用物質に連結されていてもよい。測定手段は、検出用物質に直接的または間接的（即ち、リンカーの使用により）に連結され得る。検出用物質としては、例えば、酵素（例、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ）、親和性物質（例、ストレプトアビジン、ビオチン）、蛍光物質（例、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン）、発光物質（例、ルシフェリン、エクオリン）、放射性物質が挙げられる。
【００４３】
上述した測定手段は、固相上に固定されていてもよい。固相としては、例えば、メンブレン（例、ニトロセルロース膜）、粒子、プレート（例、マルチウェルプレート）、デバイス（例、ＭＡＩＴ細胞分離用デバイス）が挙げられる。固相の材質としては、例えば、ポリマー性物質、磁性物質、ガラス、金属が挙げられる。
【００４４】
上述したような本発明の診断キットは、例えば、本発明の方法の実施に有用である。
【実施例】
【００４５】
以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるものではない。
【００４６】
以下の実施例で頻出する用語について、以下の略号を用いる。
ＦＭＳ：線維筋痛症
ＲＡ：関節リウマチ
ＳｐＡ：脊椎関節炎
ＨＤ：健常人
ＭＡＩＴ細胞：粘膜関連インバリアントＴ細胞
ＤＮ  ＭＡＩＴ細胞：ＣＤ４及びＣＤ８二重陰性  ＭＡＩＴ細胞（ＣＤ４−ＣＤ８−  ＭＡＩＴ細胞）
【００４７】
１．方法
１−１）患者
被験体は、２６人のＦＭＳ患者、２１人のＲＡ患者、及び３７人のＳｐＡ患者、並びに１６人のＨＤから構成されていた。患者の特徴を表１に要約する。全てのＦＭＳ患者は、ＡＣＲ基準［Ｈａｕｓｅｒ  Ｗら（２０１２）  Ｒｅｕｍａｔｉｓｍｏ  ６４：１９４〜２０５；及びＳｃｏｔｔ  ＤＬら（２０１０）  Ｌａｎｃｅｔ  ３７６：１０９４〜１１０８］を満たしていた。ＨＩＶ、糖尿病、末梢神経障害、脱髄障害（例、多発性硬化症）、及び炎症性リウマチ疾患（例、ＲＡ、ＳｐＡ、及びリウマチ性多発筋痛）等の疾患を併発している患者は、ＦＭＳ群から除いた。ＲＡは、１９８７年のＡＣＲ基準［Ｓｃｏｔｔ  ＤＬら（２０１０）  Ｌａｎｃｅｔ  ３７６：１０９４〜１１０８］にしたがい診断した。全てのＳｐＡ患者は、欧州脊椎関節炎スタディ・グループによる標準セット及び／又はニューヨーク基準により修正された標準セット［Ｄｏｕｇａｄｏｓ  Ｍら（２０１１）  Ｌａｎｃｅｔ  ３７７：  ２１２７〜２１３７］を満たした。全てのＲＡ、ＳｐＡ、及びＦＭＳ患者は、一次線維筋痛症でありかつ如何なる生物学的治療（例、抗ＴＮＦ−α又は抗ＩＬ−６モノクローナル抗体）も受けていなかった。いずれのＳｐＡ患者も、ＨＬＡ−Ｂ２７を保有していなかった。
【００４８】
【表１】
0006674759.tif 000002
【００４９】
１−２）倫理的承認
研究機関審査委員会又は倫理委員会の承認（北海道大学大学院医学研究科及び時計台記念病院）並びに書面による患者の同意書を、ヘルシンキ宣言にしたがい研究参加前に得た。
【００５０】
１−３）サンプル
ＦＭＳ、ＲＡ、ＳｐＡ、及びＨＤの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール勾配を用いて調製し、６０５ｎｍフィルターを備えたＭＡＣＳＱｕａｎｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，ドイツ）を用いて、既報［Ｗａｋａｏ  Ｈら（２０１３）  Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  １２：５４６〜５５８］で報告したとおり、８色蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）解析に供した。細胞表面抗原の発現については、ブリリアントバイオレット４２１標識ＣＤ３＋、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）標識ＣＤ１６１＋、及びＰＥ／Ｃｙ７又はフルオレセインイソチオシアネート標識（ＦＩＴＣ）抗Ｖα７．２（３Ｃ１０）＋のサブセットにおいて、示したフィコエリスリン（ＰＥ）標識抗ヒト抗体を用いて解析した。反応混合物は、ブリリアントバイオレット６０５標識ＣＤ４、ＡＰＣ／Ｃｙ７標識ＣＤ８、及びＦＩＴＣ又はＰＥ／Ｃｙ７標識ＣＤ４５ＲＯを含んでいた。用いたＰＥ標識細胞表面抗原の完全なリストを、表２Ａ及びＢに提示する。９人のＦＭＳ患者においてサンプル調製前に、薬物服用を最低４８時間中断した。
【００５１】
【表２Ａ】
0006674759.tif 000003
【００５２】
【表２Ｂ】
0006674759.tif 000004
【００５３】
１−４）統計学
ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ｖｅｒ．６）を用いて、ＦＡＣＳデータの統計学的解析を行い、細胞表面抗原の発現強度の有意差を、ノンパラメトリック・マン−ホイットニーＵ検定、クラスカル・ワリス検定及びウィルコクソン一致対符号順位（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ  ｍａｔｃｈｅｄ−ｐａｉｒｓ  ｓｉｇｎｅｄ  ｒａｎｋ）検定で評価した。必要に応じて、ダンの補正（Ｄｕｎｎ’ｓ  ｍｕｌｔｉｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）により、Ｐ値を補正した。Ｐ値＜０．０５である場合、有意差を示すものとした。
【００５４】
２．結果及び考察
ＦＭＳが広範な疼痛、疲労、及び心的苦痛を特徴とすることを考慮すると、炎症性サイトカインは、神経内分泌異常を誘発し、最終的にこれらの症状につながる役割を果たすと考えられる。幾つかの報告により、ＦＭＳにおける炎症性サイトカインの異常な発現が観察されている［Ｐｅｒｎａｍｂｕｃｏ  ＡＰら（２０１３）  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ３１：Ｓ６０〜Ｓ６３；Ｋａｄｅｔｏｆｆ  Ｄら（２０１２）  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  ２４２：３３〜３８；及びＳｔｕｒｇｉｌｌ  Ｊら（２０１４）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ  ２０１４：９３８５７６］。しかし、サイトカインの供給源は同定されておらず、バイオマーカーとしてのそれらの潜在的有用性は疑問である。そこで、本発明者らは、多くの炎症性サイトカイン及びケモカインを産生するＭＡＩＴ細胞［Ｗａｋａｏ  Ｈら（２０１３）  Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  １２：５４６〜５５８］を解析した。ＦＭＳ患者由来のＭＡＩＴ細胞の代表的なＦＡＣＳプロフィール及び付随する細胞表面抗原発現（ＮＫＧ２Ｄ，ＮＫ受容体）を図１Ａに示す。次いで、本発明者らは、本疾患における全ＭＡＩＴ細胞（ＣＤ３＋細胞の範囲内においてＶα７．２＋ＣＤ１６１ｈｉｇｈ細胞として規定される）の百分率を比較したところ、それらはＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡにおいてそれぞれ中央値（２５パーセンタイル；及び７５パーセンタイル）：２．９％（０．９；４．７）、１．５％（０．８；２．８）、０．９％（０．４；２．４）、１．６％（０．６；２．９）を示すことが見出された（図１Ｂ及び表３）。しかしながら、これらの疾患間で如何なるＭＡＩＴ細胞集団において統計学的有意差は見出されなかった。ＭＡＩＴ細胞は主にＣＤ８＋細胞及び二重陰性（ＤＮ）細胞、並びに僅かなＣＤ４＋細胞から構成される［Ｌｅ  Ｂｏｕｒｈｉｓ  Ｌら（２０１１）  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：２１２〜２１８］ことから、各サブセットをさらに解析した。クラスカル・ワリス検定後、ＣＤ４＋  ＭＡＩＴ細胞並びにＤＮ  ＭＡＩＴ細胞において、ＭＡＩＴ細胞頻度の差異が認められた（表４）。Ｐ値の補正によってＨＤとＳｐＡとの間でのＤＮ  ＭＡＩＴ細胞の頻度差異の存在、及びＨＤとＦＭＳとの間でのＣＤ４＋  ＭＡＩＴ細胞の頻度の差異の存在が明らかになった（図１Ｄ〜Ｅ及び表３及び４）。全ＭＡＩＴ細胞（Ｖα７．２＋ＣＤ１６１ｈｉｇｈ細胞）におけるＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞、ＤＮ  ＭＡＩＴ細胞、及びＣＤ４＋  ＭＡＩＴ細胞の存在割合を解析したところ、ＳｐＡではＨＤに比較して、ＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞の有意な増加と共にＤＮ  ＭＡＩＴ細胞の減少が観察された（図１Ｆ〜Ｇ）。これは、全ＭＡＩＴ細胞中のＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞の存在割合の増加（ＤＮ  ＭＡＩＴ細胞の減少との均衡作用である可能性が最も高い）がＳｐＡを特徴付けるものであり、ＳｐＡ鑑別診断のマーカーとして利用できる。ＣＤ４＋  ＭＡＩＴ細胞が僅かにしか存在しないことから、以下の実験では全ＭＡＩＴ細胞、ＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞及びＤＮ  ＭＡＩＴ細胞を使用して研究を行った。
【００５５】
【表３】
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【００５６】
【表４】
0006674759.tif 000006
【００５７】
本発明者らは、ＭＡＩＴ細胞の細胞表面抗原がＨＤとＦＭＳの鑑別を可能にすると推察した。本発明者らは、ＦＭＳでは、ＨＤと比較した場合、全ＭＡＩＴ細胞及びＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞においてＣＣＲ７（リンパ節へのホーミングに必要とされるケモカイン受容体）が有意に増加すること、並びにＤＮ  ＭＡＩＴ細胞においてＣＤ２７（Ｔ細胞活性化のための共刺激分子）が有意に増加することを見出した（図２Ａ〜Ｈ、及び表５）。対照的に、ＨＤと比較した場合、ＭＡＩＴ細胞の全てのサブセットにおいて、２つのケモカイン受容体であるＣＣＲ４及びＣＸＣＲ１、ナチュラルキラー（ＮＫ）受容体であるＮＫｐ８０、シグナル伝達性リンパ球会合分子（Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ（ＳＬＡＭ））ファミリーであるＣＤ１５０、並びに共受容体ＣＤ８βが減少した一方で、全ＭＡＩＴ細胞及びＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞におけるＣＤ２４４（別のＳＬＡＭファミリーメンバー）の減少、全ＭＡＩＴ細胞におけるＣＤ６９（活性化マーカー）の減少、及びＤＮ  ＭＡＩＴ細胞におけるＣＤ１０７ａの減少が認められた（図２Ａ〜Ｈ、及び表５）。
【００５８】
【表５】
0006674759.tif 000007
【００５９】
次に、本発明者らは、ＨＤ、ＦＭＳ、ＲＡ、及びＳｐＡを差別化できる、ＭＡＩＴ細胞の細胞表面抗原を解明することを試みた。その結果、クラスカル・ワリス検定により、ＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ４、ＣＤ９４、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、ＣＤ４４、ＣＤ８β、及びＣＤ１０７ａがこれらの３つの疾患を鑑別する可能性があるマーカーであることが明らかとなった（表６Ａ及びＢ，クラスカル・ワリス検定）。Ｐ値補正後（もしくはダンの補正後）、ＨＤ、ＲＡ及びＳｐＡからＦＭＳを鑑別するための有望な主要マーカーとしてＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ１、ＮＫｐ８０、ＣＤ１５０、ＣＤ８β、及びＣＤ１０７ａを同定することできた（図３Ａ〜Ｊ及び表６Ａ及びＢ，補正Ｐ値）。また、ＤＮ  ＭＡＩＴ細胞におけるＣＸＣＲ１及び全ＭＡＩＴ細胞におけるＣＤ４４は、ＲＡからＦＭＳを差別化するための補助マーカーとして有用であり得る（図３Ａ〜Ｊ、及び表６Ａ及びＢ）。ＣＸＣＲ４は、全ＭＡＩＴ細胞においてＨＤからＳｐＡを鑑別するマーカーであり、また、全ＭＡＩＴ細胞及びＤＮ  ＭＡＩＴ細胞においてＦＭＳ及びＳｐＡを識別するのに有用であると思われた（図３Ａ〜Ｊ、並びに表６Ａ及びＢ）。これまでに検討した細胞表面分子のうち、全ＭＡＩＴ細胞及びＤＮ  ＭＡＩＴ細胞においてはＣＤ９４が、ＤＮ  ＭＡＩＴ細胞ではＣＸＣＲ１が、ＲＡとＳｐＡとの鑑別を可能にする（図３Ａ〜Ｊ、並びに表６Ａ及びＢ）。
【００６０】
【表６Ａ】
0006674759.tif 000008
【００６１】
【表６Ｂ】
0006674759.tif 000009
【００６２】
血清の解析により、ＲＡでは、ＦＭＳ及び／又はＳｐＡと比較すると、ＣＲＰのレベルが上昇することが示された（図４Ａ、並びに表７及び８）。ＦＭＳにおけるＭＭＰ−３レベルは、ＲＡ及びＳｐＡにおけるものよりも有意に低かった（図４Ａ、並びに表７及び８）。したがって、ＣＲＰ及びＭＭＰ−３は、これらの疾患を識別するための潜在的なバイオマーカーとなり得る。ＣＲＰ及びリウマチ因子等のバイオマーカーにかかわらず、２０〜５０％のＲＡ患者が、これらのバイオマーカーを欠いている［Ｓｃｏｔｔ  ＤＬら（２０１０）  Ｌａｎｃｅｔ  ３７６：１０９４〜１１０８］。これは、ＲＡの新規バイオマーカーに対する潜在的なニーズがあることを意味する。この点に関して、ＣＣＲ７は、全ＭＡＩＴ細胞及びＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞においてＨＤからＲＡを鑑別するためのバイオマーカーとなり得る（図３Ａ〜Ｊ、並びに表６Ａ及びＢ）。疼痛視覚的アナログスケール（Ｐａｉｎ  Ｖｉｓｕａｌ  Ａｎａｌｏｇ  Ｓｃａｌｅ：ＰＶＡＳ）を比較した場合、ＦＭＳ及びＳｐＡは、ＲＡに比し、より高い値を示した（図４Ｂ、並びに表７及び８）。同様に、ＦＭＳは、ＲＡに比し、より高い疲労視覚的アナログスケール（Ｆａｔｉｇｕｅ  Ｖｉｓｕａｌ  Ａｎａｌｏｇ  Ｓｃａｌｅ：ＦＶＡＳ）を示した（図４Ｂ、並びに表７及び８）。興味深いことに、ＦＭＳにおいてＰＶＡＳとＭＡＩＴ細胞頻度との間に負の相関性が存在したことから、ＭＡＩＴ細胞がＦＭＳの病態に何らかの形で関与することが示唆される（図４Ｃ）。ＭＡＩＴ細胞における細胞表面抗原の解析データと組み合わせると、ＣＲＰ、ＭＭＰ−３及び、ＰＶＡＳ及びＦＶＡＳは、ＲＡ及び／又はＳｐＡからＦＭＳを鑑別する補助マーカーとして有用であり得る。
【００６３】
【表７】
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【００６４】
【表８】
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【００６５】
上記解析時、ＦＭＳ患者は服薬中であったことから、本発明者らは、毎日の服薬がＭＡＩＴ細胞サブセットの頻度、及びＭＡＩＴ細胞表面分子の発現強度に影響するか否か評価した（表９）。薬物服用中断４８時間後、ＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞の血中頻度は増加した一方で、ＣＤ４＋  ＭＡＩＴ細胞、ＤＮ  ＭＡＩＴ細胞及び全ＭＡＩＴ細胞には変化が観察されなかった。このことはＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞に薬物感受性があり、ＦＭＳの病態と密接に関連することを示唆する（図５及び表１０）。このような中断はまた、ＤＮ  ＭＡＩＴ細胞におけるＣＣＲ４の増加、及び全ＭＡＩＴ細胞におけるＣＣＲ５の増加を導いたが、ＣＸＣＲ４発現は全ＭＡＩＴ細胞及びＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞で減少した（図６Ａ〜Ｌ及び表１１）。ＣＣＲ４及びＣＣＲ５が、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、及びＣＣＬ１１等の炎症性ケモカインの受容体であることを考慮すると、このような増加は、ＦＭＳの病態の一部は炎症性だといえる［Ｋａｄｅｔｏｆｆ  Ｄら（２０１２）  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  ２４２：３３−３８；及びＳｔｕｒｇｉｌｌ  Ｊら（２０１４）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ  ２０１４：９３８５７６］。薬物服用の中断によって、ＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞においてＣＤ２７の発現亢進が見られた（図６Ａ〜Ｌ及び表１１）。
【００６６】
【表９】
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【００６７】
【表１０】
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【００６８】
【表１１】
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【００６９】
同様に、ＣＤ２８の発現は、ＭＡＩＴ細胞の全てのサブセットで増加した（図６Ａ〜Ｌ及び表１１）。これらに加えて、別の共刺激分子ＩＣＯＳの増加が、全ＭＡＩＴ細胞及びＤＮ  ＭＡＩＴ細胞で認められた（図６Ａ〜Ｌ及び表１１）。ＣＤ１２７発現もまた、全てのＭＡＩＴ細胞サブセットで向上した（図６Ａ〜Ｌ及び表１１）。これらの結果は、ＦＭＳにおけるＭＡＩＴ細胞が活性化された表現型を有していること、並びにＣＤ１２７（ＩＬ−７受容体α鎖）発現の上昇がＩＬ−１７Ａ及びＩＦＮ−γ産生亢進に至ることを示唆する［Ｐｅｒｎａｍｂｕｃｏ  ＡＰら（２０１３）  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ３１：Ｓ６０〜Ｓ６３；及びＴａｎｇ  ＸＺら（２０１３）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９０：３１４２〜３１５２］。ＣＤ９４は全ＭＡＩＴ細胞及びＤＮ  ＭＡＩＴ細胞で低下し、また、全ＭＡＩＴ細胞及びＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞ではＮＫｐ８０が低下した（図６Ａ〜Ｌ及び表１１）。ＨＬＡ−Ｅ多型は強直性脊椎炎発症に関連する［Ｐａｌａｄｉｎｉ  Ｆら（２００９）  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ  １１：Ｒ１７１］ことから、ＣＤ９４の発現低下は（ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ）−（ＨＬＡ−Ｅ）相互作用の低下につながり、これがＦＭＳの一つの病因となっているのかもしれない。ＣＤ６９の減少もまた、ＭＡＩＴ細胞の全てのサブセットで認められた（図６Ａ〜Ｌ及び表１１）。このことは、薬物服用の中断によりＭＡＩＴ細胞は休止期に維持されることを示す。対照的に、ＣＤ４９ｄ（インテグリンファミリーメンバー）及びＣＤ２６（ジペプチダーゼ）は、全ＭＡＩＴ細胞及びＣＤ８＋  ＭＡＩＴ細胞で増加した（図６Ａ〜Ｌ及び表１１）。ＣＤ４９ｄ（ｖｅｒｙ  ｌａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ−４のα４サブユニット）は慢性リンパ球白血病細胞の骨髄及びリンパ器官へのホーミングを担うこと、並びにＭＡＩＴ細胞が多発性硬化症患者の脳内炎症性病変中に見出されていること［Ｂｒａｃｈｔｌ  Ｇら（２０１４）  Ａｎｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ９３：３６１〜３７４；及びＩｌｌｅｓ  Ｚら（２００４）  Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６：２２３〜２３０］を考慮すると、ＭＡＩＴ細胞は、この分子を介してホーミング特性を変化させており、ＦＭＳの病態と密に関連していることが予期される。薬剤服用中断によるＭＡＩＴ細胞上ＣＤ２６の発現亢進は、ＲＡ治療においてメトトレキサート使用がＣＤ４＋Ｔ細胞上のＣＤ２６発現に影響しなかった事と対照的である［Ｅｌｌｉｎｇｓｅｎ，Ｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６６，４５１−４５７（２００７）；  Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６：２２３〜２３０］。ＣＤ２６は、多くの増殖因子、ケモカイン及びサイトカン前駆体の切断を担うことから、ＣＤ２６の増加は、ＦＭＳにおけるＣＣＬ１１、ＩＬ−１、ＩＬ−６、及びＩＬ−８等の炎症性メディエーター産生上昇を促していると考えられる［Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｐｉｎｔｏ  Ｉら（２０１４）  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  １６１：２００〜２０３；Ｂｏｔｅ  ＭＥら（２０１３）  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ８：ｅ７４５２４；Ｇａｒｃiａ  ＪＪら（２０１４）  Ａｎｎ  Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ５１：５７６〜５８１；Ｉｍａｍｕ���ａ  Ｍら（２０１４）  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｔｅｒｖ  Ａｇｉｎｇ  ９：９３９〜９４４；及びＯｕ  Ｘら（２０１３）  Ｂｌｏｏｄ  １２２：１６１〜１６９］。これまでにＦＭＳで報告されている他の炎症性サイトカインの産生亢進を鑑みると、これら産物は、神経内分泌の異常を引き起こし、最終的に広範な疼痛を生じさせる［Ｐｅｒｎａｍｂｕｃｏ  ＡＰら（２０１３）  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ３１：Ｓ６０〜Ｓ６３；Ｙｕｎｕｓ  ＭＢ（２０１２）  Ｐａｉｎ  Ｒｅｓ  Ｔｒｅａｔ  ２０１２：５８４５７３；及びＳｔｕｒｇｉｌｌ  Ｊら（２０１４）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ  ２０１４：９３８５７６］。これに関して、多くの炎症性サイトカイン及びケモカインを産生するＭＡＩＴ細胞は、少なくとも一部は、ＦＭＳの病態を担うと推測し得る。
【００７０】
興味深いことに、ＦＭＳにおいて特異的に発現変化を示す全ての抗原が、薬物服用中断時に発現変化を示したわけではないことに留意すべきである。実際、ＣＤ１５０、ＣＤ２４４、ＣＤ８β、ＣＣＲ７、及びＣＤ１０７ａの発現は影響を受けなかった（表５、並びに表６Ａ及びＢ、並びにデータ示さず）。これらのデータは、ＭＡＩＴ細胞における幾つかの細胞表面分子が診断マーカーとして有用であるという事実を全体として裏付けるものであり、さらには、それらが抗痙攣薬、抗鬱薬、オピオイド及び非ステロイド性抗炎症薬等の種々の薬物に感受性であることを示す（表９、並びに図５及び６）。服薬とＭＡＩＴ細胞における表現型の変化との間にある信号の分子経路及び機構を解明するために更なる研究が必要である。このような解析は、依然として謎であるＦＭＳの病因及び／又は病態におけるＭＡＩＴ細胞機能に光明を投じるものである。
【産業上の利用可能性】
【００７１】
本発明の方法及びキットは、線維筋痛症（ＦＭＳ）の判定に有用である。
【図１Ａ】
0006674759.tif 000015
【図１Ｂ】
0006674759.tif 000016
【図１Ｃ】
0006674759.tif 000017
【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
0006674759.tif 000019
【図１Ｆ】
0006674759.tif 000020
【図１Ｇ】
0006674759.tif 000021
【図１Ｈ】
0006674759.tif 000022
【図２Ａ】
0006674759.tif 000023
【図２Ｂ】
0006674759.tif 000024
【図２Ｃ】
0006674759.tif 000025
【図２Ｄ】
0006674759.tif 000026
【図２Ｅ】
0006674759.tif 000027
【図２Ｆ】
0006674759.tif 000028
【図２Ｇ】
0006674759.tif 000029
【図２Ｈ】
0006674759.tif 000030
【図３Ａ】
0006674759.tif 000031
【図３Ｂ】
0006674759.tif 000032
【図３Ｃ】
0006674759.tif 000033
【図３Ｄ】
0006674759.tif 000034
【図３Ｅ】
0006674759.tif 000035
【図３Ｆ】
0006674759.tif 000036
【図３Ｇ】
0006674759.tif 000037
【図３Ｈ】
0006674759.tif 000038
【図３Ｉ】
0006674759.tif 000039
【図３Ｊ】
0006674759.tif 000040
【図４Ａ】
0006674759.tif 000041
【図４Ｂ】
0006674759.tif 000042
【図４Ｃ】
0006674759.tif 000043
【図５】
0006674759.tif 000044
【図６Ａ】
0006674759.tif 000045
【図６Ｂ】
0006674759.tif 000046
【図６Ｃ】
0006674759.tif 000047
【図６Ｄ】
0006674759.tif 000048
【図６Ｅ】
0006674759.tif 000049
【図６Ｆ】
0006674759.tif 000050
【図６Ｇ】
0006674759.tif 000051
【図６Ｈ】
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【図６Ｉ】
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【図６Ｊ】
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【図６Ｋ】
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【図６Ｌ】
0006674759.tif 000056