(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトの皮膚におけるヘムオキシゲナーゼ１型の活性を増加する局所用組成物を製造するための化粧品活性成分の使用であって、前記化粧品活性成分は、フクスベシクロスス（Ｆｕｃｕｓ  Ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ）の抽出物を含む、前記使用。
【請求項２】
請求項１記載の使用であって、前記化粧品活性成分は、局所用組成物の総質量に基づき０．０１質量％乃至１０質量％の濃度で前記組成物中に組み込まれる請求項１記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
本出願は、全ての有用な目的のために、２０１２年１１月１５日に出願されたシリアル番号６１／７２６，７２２の仮出願の利益を請求し、その明細書及び図面は、参照としてここに組み込まれる。
【０００２】
技術分野
本発明は、皮膚等におけるヘモオキシゲナーゼ１型の活性を増加することによる、目の下の皮膚のくまの出現を含む目の下の皮膚の外観を改善するための化粧品活性成分に関する。より特には、本発明は、海草であるフクス  ベシクロスス（Ｆｕｃｕｓ  Ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ）の抽出物を含む化粧品活性成分に関する。
【０００３】
本発明は、目の下の皮膚のくまの出現を減少するために、活性成分として海草であるフクス  ベシクロススの抽出物を単独で又は更なる化粧品活性成分との組み合わせで含む、局所用化粧品組成物にも関する。
【背景技術】
【０００４】
目の下の皮膚のくまは、疲労及び／又は加齢の全般的な外観をもたらし得、そして、より若々しく及び活力のある顔をもたらすために、そのようなくまの出現を減少することが非常に望ましい。
そのため、これらのくまの出現を減少することを主張して、多数の化粧品又はスキンケア製品が市場に存在している。
【０００５】
そのようなくまは、数多くの原因に起因するが、主に、ヘムカタボライト、炎症及びメラニン蓄積の結果である。ヘムはヘムタンパク質の補欠分子族であり、例えばヘモグロビンは血液の主成分である。ヘムは拡張した血管から漏洩し、遊離ヘムとなるが、それは遊離ラジカルの産生を触媒し、また、炎症促進性及び酸化促進性である。ヘムオキシゲナーゼは、後にビリルビンに変換されるビリベルジン、一酸化炭素及びフェリチン中に蓄えられる鉄へのヘムの分解を触媒する律速酵素であるが、それらの全ては十分に説明された抗酸化性及び抗炎症性を有する。ヘムオキシゲナーゼ１（ＨＯ−１）は、誘導性アイソフォームである。ＨＯ−１を刺激することは、順に、ヘムの補足を刺激し、それによりくまの出現を減少する。従って、目の下の皮膚においてＨＯ−１の産生を刺激することが可能である化粧品活性成分を有することが望ましい。
【０００６】
更に、くまに取り組む多くの化粧品組成物は、“疲れ目”の外観を更に減少させるために、目の周りに生じる更なる皮膚の欠陥に取り組んでいる。例えば、くまに取り組んでいる製品は、しばしば更に、目の周りの腫れ（即ち、“目の下のたるみ”）、皺及び乾燥に取り組んでいる。それにより、該製品は、一般に、それぞれが１つの特定のタイプの欠陥に向けられる複数の化粧品活性成分を含む。複数の活性成分の使用は、そのような製品の製剤化において困難性を増大させ、同時に、原材料のコストを増大させる。そのため、目の周りと関連する複数の美容上の懸念に取り組むことが可能である単一の化粧品活性成分を有することが望ましい。
【発明の概要】
【０００７】
ブラダーラック（ｂｌａｄｄｅｒｗｒａｃｋ）又はロックウィード（ｒｏｃｋ  ｗｅｅｄ）としても一般に知られている、フクス  ベシクロスス（Ｆｕｃｕｓ  Ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ）は、大西洋の海岸線に沿った沿岸／低潮間帯地域において自然に観察される温
帯藻類の１種である。それは、幾つかの太平洋地域並びに北海及びバルト海においても観察することができる。
【０００８】
海草であるフクス  ベシクロススの抽出物が皮膚におけるＨＯ−１の発現を刺激し、それにより、目の下のくまの原因となることが既知であるヘモカタボライトの除去を補助することが、思いがけなく発見された。同様に、そのような抽出物が、追加された利点として、血管の拡張を減少させることができ且つヘムの漏洩を減少させることができる抗炎症性並びに目の下のたるみ及び皺の外観を更に改善する抗酸化性を有することも思いがけなく発見された。そのような抽出物は、コラーゲン産生も刺激し、それにより目の下及び周囲の皮膚における小皺及び皺の発現を減少させる。
【０００９】
よって、フクス（Ｆｕｃｕｓ）抽出物を含む組成物の局所適用を介して、目の周りに関連する複数の美容上の懸念に取り組むこと及び目に対してより若々しく及び活力のある外観を提供することを可能とする。
【００１０】
本発明の他の観点及び目的は、以下の記載、実施例及び請求項からより明らかとなるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１Ａ】図１−Ａは、種々の濃度におけるフクス  ベシクロスス水抽出物によるＨＯ１遺伝子発現の刺激を示すグラフである。
【図１Ｂ】図１−Ｂは、種々の濃度におけるフクス  ベシクロススＰＥＧ抽出物によるＨＯ１遺伝子発現の刺激を示すグラフである。
【図２Ａ】図２−Ａは、フクス  ベシクロスス抽出物によるケラチン生成細胞におけるＨＯ１タンパク質発現の刺激を示すグラフである。
【図２Ｂ】図２−Ｂは、フクス  ベシクロスス抽出物による線維芽細胞におけるＨＯ１タンパク質発現の刺激を示すグラフである。
【図３】図３は、フクス  ベシクロスス抽出物の抗酸化効力を示す更なるグラフである。
【図４】図４は、フクス  ベシクロスス抽出物の抗炎症効力を示すグラフである。
【図５】図５は、フクス  ベシクロスス抽出物のコラーゲン刺激効力を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明のフクス  ベシクロススは、天然由来（即ち、野生）のもの又は培養されたものであり得る。
【００１３】
フクス  ベシクロススの抽出物は、当業者に既知の抽出方法により得られ得る。該抽出は、水抽出又はアルコール又は水／アルコール混合物を用いる抽出により得られ得るが、ここで、前記アルコールは、イソプロパノール、エタノール又はメタノールであり得る。好ましくは、該抽出物は、水抽出からのものである。
【００１４】
本発明のフクス抽出物は、全組成物の約０．１質量％ないし約１０質量％、好ましくは、約０．５ないし約５％、より好ましくは約０．５％ないし約２％の濃度で化粧品活性成分として利用され得る。１％の濃度において、ケラチン生成細胞におけるＨＯ−１発現は４倍（媒体対照と比較して）に誘導され、ＩＬ−８産生は６０％（対照と比較して）阻害される。２％の濃度において、ケラチン生成細胞におけるＨＯ−１発現は８倍以上（媒体対照と比較して）に誘導される。
【００１５】
実施例及び図面において更に示されるように、本発明の化粧品活性成分は、目の下の皮
膚に適用された場合、複数の美容上の利点を提供する。より特には、本発明の化粧品活性成分は、皮膚細胞中のＨＯ−１を刺激し、非常に良好な抗酸化効力及び抗炎症効力を提供する。本発明のフクス抽出物は、コラーゲンを刺激することが示されており、また、線及び皺の外観における有利な効果も有し得る。複数の美容上の利点に起因して、本発明の抽出物は、化粧品製剤において、唯一の化粧品活性成分として使用し得るが、しかし、幾つかの態様においては、そのような抽出物を１種以上の更なる化粧品活性成分と組み合わせて使用することが望ましいままである。有利な更なる化粧品活性成分の例は、皮膚を白くする（ｓｋｉｎ  ｗｈｉｔｅｎｉｎｇ）化粧品成分又は皮膚を明るくする（ｓｋｉｎ  ｌｉｇｈｔｅｎｉｎｇ）化粧品成分である。
【００１６】
更なる好ましい化粧品組成物は、更なる及び／又は補完する有利な皮膚効果を有する１種以上の更なる海洋−由来の局所スキンケア成分を含み得る。例として、そのような局所組成物における使用のための好適な海洋−由来の局所スキンケア成分は、それらの全部が参照としてここに組み込まれる米国特許出願公開第２０１０−００４７２１９号明細書（Ｃｅｃｃｏｌｉ等）、米国特許出願公開第２０１０−０３１６７２０号明細書（Ｓｔａｔｚ等）、米国特許出願公開第２００９−０１４２３７０号明細書（Ｓｈｉｈ等）、米国特許第７１２８９１４号明細書（Ｌｅｃｌｅｒｃ等）、米国特許第７２２０５１７号明細書（Ｎｉｚａｒｄ等）中に記載されたもの並びにコンドラス  クリスパス（Ｃｈｏｎｄｒｕｓ  ｃｒｉｓｐｕｓ）抽出物を含み得る。多くの他の化粧品活性成分が、皮膚の健康的及び／又は物理的な外観を改善するために当業者に既知である。当業者は、所望の効果を最適化するために、化粧品組成物又は皮膚用組成物をどのように製剤化するかを知っている。
【００１７】
本発明の抽出物を含む化粧品組成物は、例えば、保存料、皮膚軟化剤、乳化剤、界面活性剤、保湿剤、増粘剤、調整剤、塗膜形成剤、安定剤、抗酸化剤、テクスチャー付与剤（ｔｅｘｔｕｒｉｚｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、光沢剤、マット化剤、可溶化剤、顔料、染料、香料及び日焼け防止剤からなる群より選択される成分の少なくとも１種のような当業者に既知の化粧品的に又は皮膚科学的に許容可能な成分を含み得る。ＣＴＦＡ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、第２版（１９９２年）は、特に局所使用のために好適であり且つ本発明の活性成分と組み合わせて使用され得る、化粧品及び医薬品産業において日常的に使用されている種々の化粧品及び医薬品成分を記載している。ここで使用される用語“化粧品的に又は皮膚科学的に許容可能”とは、妥当なリスクに対する利点の比率と釣り合う、過度の毒性、不和合性、不安定性、刺激性、アレルギー応答等を伴うことなく、皮膚と接触して使用するために好適であることを意味する。
【００１８】
有利には、上記で示された組成物は、水性又は油性である溶液、クリーム又は水性又は油性のゲル、特に、ポット又はチューブ、特に、シャワーゲル、シャンプー；ミルク；特に、水中油又は油中水の、多重の又はシリコン化された、エマルジョン、マイクロエマルジョン又はナノエマルジョン；特に、ガラス又はプラスチックボトル又は投薬ボトル又はエアロゾルのローション；アンプル；液体石鹸；皮膚用ケーキ；軟膏；フォーム；好ましくは液体、ペースト又は固体の、例えば、スティックの形態にある無水製品；及び粉末からなる群より選択される形態に製剤化される。
【００１９】
幾つかの態様において、本発明の化粧品組成物は、特に“加齢した（ａｇｅｄ）”と呼ばれる皮膚（即ち、４０歳以上の実年齢を有する個人の皮膚）に適用することを意図する、皺取り又は老化防止として既知のタイプのものである。他の態様において、化粧品組成物は、ファンデーション又はコンシーラーのような顔の皮膚をメーキャップするための製品又はＵＶ損傷から皮膚を保護するための製品、とりわけ、サンスクリーン又はアフターサンケア製品である。
【００２０】
目の下の皮膚のくまの発現を減少するために、フクス  ベシクロススの抽出物の安全で且つ有効な量を、それを必要とする人物の皮膚に局所適用することを含む美容スキンケアの方法もまた開示される。この方法は、くま及びたるみだけでなく、小皺及び皺も有し得る加齢した皮膚の治療のために特に有用である。
【００２１】
ここで使用される用語“安全で且つ有効な量”は、正当な医学的判断の範囲内における妥当なリスクに対する利点の比率において、治療される状態を改善するためには又は所望のスキンケアの有利な効果をもたらすためには十分に高いものの、重篤な副作用を回避するのには十分に低い活性成分の量を意味する。成分の“安全で且つ有効な量”は、特定の成分、皮膚を通して浸透する成分の能力、使用者の皮膚の状態及び当業者に既知の他の類似の要因で変化し得る。
【００２２】
目の下の皮膚の外観を改善するために必要な継続時間は、特定の化粧品組成物とその中に含まれるフクス抽出物の量の総合的な効力に基づいて変化し得るものの、１つの好ましい態様において、目の下の皮膚のくまの出現を減少するための方法は、少なくとも１日１回、フクス  ベシクロスス抽出物を含む化粧品組成物の安全で且つ有効な量を前記皮膚に適用することを含み、ここで、前記化粧品組成物は、約０．１％ないし１０％のフクス抽出物を含む。
【実施例】
【００２３】
本発明は、以下に示す実施例のやり方により、更に提示されるが、それらに限定されるべきものではない。特段の指定が無い限り、この中のあらゆる実施例中に記載される割合は、質量パーセントとして表現される。温度は、摂氏温度であり、圧力は、大気圧である。
【００２４】
抽出物
フクス  ベシクロスス  バイオマスを商業的供給業者から入手し、そのようなバイオマスの種々の抽出を以下に示すようにして行った。
【００２５】
水抽出
１．５％の粗く砕かれたフクス  ベシクロスス  バイオマスを９５％の脱イオン水に添加し、終夜室温でプロップ混合（ｐｒｏｐ  ｍｉｘｅｄ）した。結果として得られた混合物をフィルターソックスを通して粗い濾過（ｃｏａｒｓｅ−ｆｉｌｔｅｒｅｄ）に付し、その後、０．２２ミクロンの最終細孔径まで、珪藻土を伴う積層されたディスクフィルター、続いてキャニスターフィルターを通して精密濾過された。
【００２６】
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）抽出
１０％の粗く砕かれたフクス  ベシクロスス  バイオマスを９０％の１５％ＰＥＧ溶液に添加し、終夜室温で比例混合した。結果として得られた混合物をフィルターソックスを通して粗い濾過（ｃｏａｒｓｅ−ｆｉｌｔｅｒｅｄ）に付し、その後、０．２２ミクロンの最終細孔径まで、珪藻土を伴う積層されたディスクフィルター、続いてキャニスターフィルターを通して精密濾過された。
【００２７】
ＨＯ−１刺激、抗酸化効果及び抗炎症効果の評価
フクス抽出物を調製し、ヘムオキシゲナーゼ１刺激、抗酸化効力及び抗炎症効力のためのスクリーニングを行った。試験のプロトコールを以下に記載する。
【００２８】
フクス抽出物によるＨＯ−１遺伝子発現の刺激（ＲＴ−ＰＣＲ）
正常なヒトの表皮のケラチン生成細胞及び正常なヒトの皮膚線維芽細胞を、２４時間フクス水抽出物（０．５％、１％及び２％の濃度）で処理し、細胞を１回ＰＢＳで洗浄し、
全てのＲＮＡを細胞から抽出し、ヘムオキシゲナーゼ１遺伝子のために特異的なプライマーセットを使用するＲＴ−ＰＣＲ反応における鋳型として使用した。結果は、ハウスキーピング遺伝子により標準化され、未処理の対照と比較する２を底とする対数として表された。結果のグラフを図１−Ａに示した。同様のアッセイをフクスＰＥＧ抽出物（０．１％、０．３％及び１％の濃度）のために行った。結果のグラフを図１−Ｂに示した。
【００２９】
ケラチン生成細胞及び線維芽細胞におけるフクス抽出物によるＨＯ−１遺伝子発現の刺激（ウエスタンブロット法）
正常なヒトの表皮のケラチン生成細胞（ＮＨＥＫ）及び正常なヒトの皮膚線維芽細胞を、３日間フクス水抽出物（１％及び２％の濃度）でそれぞれ処理した。細胞はその後、プロテアーゼ阻害剤のカクテルを含むＲＩＰＡ緩衝液中における溶解によりウエスタンブロット法のために加工された。該溶解物は１５秒間超音波処理され、１２０００ｇで１０分間遠心分離され、ＢＣＡアッセイによるタンパク質含有量のために上澄みが定量された。ヘムオキシゲナーゼ１タンパク質のレベルは、その後、４−２０％アクリルアミド勾配ゲル中の電気泳動、ニトロセルロース膜への転写及びマウス  抗−ヒト  ヘムオキシゲナーゼ１抗体及びマウス  抗−β−アクチン抗体を用いる９０分間のブロッティング（タンパク質負荷を標準化するために）により解析された。洗浄の後、該膜は、６０分間、ＨＲＰ結合抗−マウス抗体でブロッティングされた。ヘムオキシゲナーゼ１及びβ−アクチンのバンドを溶解し、Ｋｏｄａｋ  Ｉｍａｇｅ  Ｓｔａｔｉｏｎ  ４０００Ｒにおける化学発光により定量した。結果を、ヘムオキシゲナーゼ１のバンドの標準化された強度として、図２−Ａ（ケラチン生成細胞）及び図２−Ｂ（線維芽細胞）に示した。
【００３０】
抗酸化アッセイ（ＤＰＰＨアッセイ）
該アッセイは、ＤＰＰＨ法を用いて行われた。１００μＬのサンプル又は標準物質（Ｔｒｏｌｏｘ−ＶｉｔａｍｉｎＥ）を９６ウェルプレートにおいて、１００μＬの１００μＭのＤＰＰＨ溶液と混合し、室温で２０分間混合し、吸収を５１０ｎｍで読み込んだ。結果は、トロロックス当量として表示した。０．５％、１％、２％及び５％の濃度のフクス水抽出物の効力のグラフを図３に示した。
【００３１】
抗炎症アッセイ（ＩＬ−８アッセイ）
正常なヒトの表皮のケラチン生成細胞をフクス抽出物で処理し、同時にＩＬ−１ｂにより終夜刺激した。上澄みのＩＬ−８レベルをＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄシステム、ミネアポリス州、ＭＮ５５４１３、ＵＳＡ）により計測した。結果を未処理対照（フクス無しだがＩＬ−１ｂ使用）のパーセンテージとして表示した。０．５％、１％及び２％の濃度のフクス水抽出物の効力のグラフを図４に示した。
【００３２】
コラーゲン刺激
参照としてここに組み込まれる、“インビトロ測定のための免疫アッセイ方法（Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ）”と表題された２０１２年６月２０日に提出された米国特許出願公開第１３／５２８０８７号明細書に記述されている方法を使用してコラーゲン１をアッセイした。本発明のフクス水抽出物で処理した後、細胞を専用の溶菌液で破壊し、沈着したコラーゲンＩを１次抗体であるヒト抗−コラーゲンＩ（Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、モンリュソン、フランス）及びＤＥＬＦＩＡ  Ｅｕｒｏｐｉｕｍ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、クルタブフ、フランス）プローブと結合した二次抗体である抗−ＩｇＧにより検出した。沈着したコラーゲンの量に比例するユーロピウム関連の蛍光を計測した。結果をＰＢＳ対照のコラーゲンパーセンテージとして表示した。結果を図５に示した。
【００３３】
化粧品組成物
本発明の化粧品活性成分を含む例示的なクリーム化粧製品は以下の通り：
液晶クリーム：
以下の表１に示された相Ａを大きなビーカー内でプロップ混合機（ｐｒｏｐ  ｍｉｘｅｒ）を用いて混合した。ガムが膨張するまで混合した。７５℃に加熱した。以下の表１に示された相Ｂをサイドのビーカー内でプロップ混合機を用いて混合した。均一になるまで水浴中で８０℃まで加熱した。相Ｂを相Ａに添加し、均一になるまでＳｉｌｖｅｒｓｏｎホモジナイザー（２０００−４０００ｒｐｍ）を用いて混合した。スイープ混合（ｓｗｅｅｐ  ｍｉｘ）（５０ｒｐｍ）に移動し、冷却を開始した。４０℃以下で、均一になるまでホモジナイザー（３０００−５０００ｒｐｍ）下で相ＣをＡＢに添加した。スイープに戻し、３０℃で滴下した。
【表１】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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