(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
経口で投与され、タンパク質分解酵素による豚の肝臓分解物を含有することを特徴とする、認知機能の維持または改善剤。
【請求項２】
前記豚の肝臓分解物が１日あたり少なくとも266mg服用される量で経口投与されることを特徴とする、請求項１に記載の認知機能の維持または改善剤。
【請求項３】
前記豚の肝臓分解物が特定病原菌不在豚の肝臓から得られることを特徴とする、請求項１または２に記載の認知機能の維持または改善剤。
【請求項４】
前記特定病原菌不在豚がシュガーポーク（登録商標）であることを特徴とする、請求項３に記載の認知機能の維持または改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、認知機能の維持または改善剤に関し、特に、これを服用することにより、認知症を予防、または症状を維持もしくは改善することが可能である、豚の肝臓由来の認知機能の維持または改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
老いにともなう病気の一つとして認知症が知られている。
認知症とは、いったん発達した脳が損傷した結果、それまで獲得した知的能力（認知機能）が失われてしまった状態をいう。認知症の具体的な症状（認知機能障害）としては、物忘れのような記憶の障害のほか、判断力、計算力、理解力、学習力などの低下等が現れる。そのため、認知症といえる状態となった者は、社会生活や対人関係に支障をきたすようになる。
【０００３】
認知症が引き起こされる主な疾患にはアルツハイマー病やパーキンソン病などの変性疾患、脳血管障害、正常圧水頭症、ビタミンなどの代謝栄養障害、甲状腺機能低下などが挙げられ、これらの原因により生活に支障をきたすような認知機能障害が現れた場合に認知症と診断される。
上記の疾患は加齢とともに患う者が増加する傾向があり、従って日本においては高齢化の進展とともに、認知症と診断される人数も増加している。
さらに、２０１５年には「ベビーブーム世代」が高齢期に達し、今後、高齢者がさらに増加する。そのため、認知症と診断される者がさらに多くなると考えられる。
【０００４】
このような事情から、認知機能の維持または改善剤が求められている。
例えばその１つとして、アセトン不溶性かつ水溶性である哺乳類の肝臓抽出物を含む、認知症の治療用医薬組成物が提案されている（特許文献１）。
当該肝臓抽出物は、原料（肝臓）に大過剰のアセトンを添加して混合し、生じたアセトン不溶性画分をアセトンから分離し、さらに得られたアセトン不溶性画分を水に溶解させることで得ることができる。また、特許文献１の治療用医薬組成物は、筋肉内注射などの注射により対象に投与される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平５−２５５０９６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上述のとおり、特許文献１に記載の治療用医薬組成物は、注射により対象に投与される。しかしながら、高齢者が増加することにより介護の負担がさらに増していくことなども考慮すると、例えば認知症を伴った者自身によっても投与できるような、より簡単に使用できる剤形のものが好ましい。
【０００７】
本発明はこのような事情に基づきなされたものであり、より簡単に使用でき、認知機能を維持または改善可能である新規な認知機能の維持または改善剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者はより簡単に使用できる認知機能の維持または改善剤として経口投与の形態を着想し、鋭意研究を行った。その結果、タンパク質分解酵素による豚の肝臓分解物を対象に経口投与したときに、その対象の認知機能を維持または改善できることを見出し、本発明を完成させた。
【０００９】
すなわち、本発明の要旨は以下のとおりである。
[１]    経口で投与され、タンパク質分解酵素による豚の肝臓分解物を含有することを特徴とする、認知機能の維持または改善剤。
[２]    前記豚の肝臓分解物が１日あたり少なくとも266mg服用される量で経口投与され
ることを特徴とする、[１]に記載の認知機能の維持または改善剤。
[３]    前記豚の肝臓分解物が特定病原菌不在豚の肝臓から得られることを特徴とする、[１]または[２]に記載の認知機能の維持または改善剤。
[４]    前記特定病原菌不在豚がシュガーポーク（登録商標、以下同じ）であることを特徴とする、[３]に記載の認知機能の維持または改善剤。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、より簡単に使用でき、認知機能を維持または改善可能である新規な認知機能の維持または改善剤を提供することを目的とする。
すなわち、タンパク質分解酵素による豚の肝臓分解物を含有する本発明の認知機能の維持または改善剤を服用することにより、認知機能を維持または改善することができるので、認知症を予防、または症状を維持もしくは改善することが可能である。しかも、本発明の認知機能の維持または改善剤は、経口投与の形態で、例えば対象自身によっても服用可能であるため、従来のものと比較して、より簡単に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】試験例１に係り、ラットアストログリア細胞（RCR-1）の細胞の増殖と添加した成分との関係を示すグラフである。
【図２】試験例１に係り、マウスミクログリア細胞(MG6)の細胞の増殖と添加した成分との関係を示すグラフである。
【図３】試験例１に係り、神経芽細胞(IMR-32)の細胞の増殖と添加した成分との関係を示すグラフである。
【図４】試験例２に係り、投与前および投与後における長谷川式簡易認知評価スケール（HDR-S）のスコア値を示すグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本実施形態は、タンパク質分解酵素（プロテアーゼ）による豚の肝臓分解物を含有することを特徴とする、認知機能の維持または改善剤に関する。以下、本実施形態の認知機能の維持または改善剤について、詳細に説明する。
【００１３】
本実施形態の認知機能の維持または改善剤を経口で摂取することにより認知機能が維持または改善されることの機構については、現在のところ必ずしも明確でないが、豚肝臓由来のペプチドやリン脂質などの複合的な作用と考えられる。
なお、上述の特許文献1に開示される発明は、水溶性ペプチド類を有効成分とするものであり、製造過程において、リン脂質などの機能性脂質をはじめとする水不溶性画分は完全に除去されている。また、市場で販売されている肝臓分解物も、限外濾過などの固液分離法を用いて製造されているため、脂質など水に溶解しない成分は含まれない。
一方、本実施形態に係る豚の肝臓分解物は、豚肝臓由来のペプチド画分を豊富に含み、かつ、リン脂質をはじめとする幅広い成分がそのまま残存している。
【００１４】
本実施形態に係る豚の肝臓を入手する豚の種類、品種などは特に限定されず、当業者が適宜設定することができる。
一方で、本実施形態に係る豚は、特定病原菌不在豚（Specific Pathogen Free豚、SPF豚）であることが好ましい。
特定病原菌不在豚とは、妊娠末期の母豚から帝王切開により取り出された豚の子孫で、豚の発育に大きな影響を及ぼす病気、具体的にはトキソプラズマ感染症、マイコプラズマ肺炎、萎縮性鼻炎、オーエスキー病、豚赤痢にかかっていない豚をいう。
【００１５】
さらに、本実施形態においては、上記の特定病原菌不在豚が、シュガーポークであることがより好ましい。
シュガーポークは３代かけて衛生管理された特定病原菌不在豚である。具体的には、親豚が分娩する直前に帝王切開して子豚を取り出し、これを上述の５つの病原体がいない安全な原々種にし、つぎにこの豚から普通分娩で生まれた子どもを原種にし、さらにこの豚から生まれた豚が、シュガーポークの親豚となる。
またシュガーポークは、徹底した衛生管理の基、植物性飼料のみによって飼育され、抗生物質、抗菌剤、化学薬品などが投与されることなく生育される。
【００１６】
本実施形態に係る肝臓分解物は、例えば、シュガーポーク等の豚の肝臓を酵素処理した後、処理液を濾過する方法等により得ることができる。
【００１７】
製造方法の一例について、より具体的に説明する。
まず、肝臓原料をホモジナイザーあるいはミンチカッター等を用いて粉砕し、得られた粉砕物に水を加え、反応液とする。添加される水の量は特に限定されず、当業者が適宜設定できる。
なお、本実施形態に係る豚の肝臓の形態は特に限定されず、豚から得られた肝臓であれば生のものでも冷凍等の処理がされていてもよい。また、反応液の調製過程についても上述のものに限らず、例えば豚の肝臓を予め粉砕等の処理に供したものを入手し、これを水に懸濁させて反応液を調製するようにしてもよい。
【００１８】
次に、反応液にタンパク質分解酵素を加え、酵素処理を行う。
本実施形態において、使用されるタンパク質分解酵素は適宜選択でき、エンドペプチダーゼあるいはエキソペプチダーゼのいずれであってもよく、また、これらを組み合わせて使用してもよい。
エンドペプチダーゼとしては、ニュートラーゼ（ノボザイムス）、アルカラーゼ（ノボザイムス）、ヌクレイシン（エイチヴィアイ）、スミチームMP（新日本化学工業）、ブロメラインF（天野製薬）、オリエンターゼ20A（エイチヴィアイ）、モルシンF（キッコー
マン）、ニューラーゼF（天野製薬）、スミチームAP（新日本化学工業）等が挙げられる
。
また、エキソペプチダーゼとしては、フレーバーザイム（ノボザイムス）、スミチームFP（新日本化学工業）、アクチナーゼ（科研製薬）、コクラーゼP（ジェネンコア）等が挙げられる。  反応条件は特に限定されないが、例えば、５０〜５５℃の温度で１２〜２４時間程度の反応時間として行うことができる。また、酵素の使用量も適宜設定できるが例えば肝臓重量の０．１〜０．５質量％程度とすることができる。
【００１９】
次いで、酵素処理を行った反応液に含まれているタンパク分解酵素を失活させる。当該失活処理における条件も特に限定されないが、例えば、反応液を９０℃の温度で１時間程度加熱処理することにより行うことができる。
【００２０】
続いて、タンパク質分解酵素を失活させた反応液を濾過に供して未分解物を除去し、本実施形態の豚の肝臓分解物を得る。なお、得られた豚の肝臓分解物は乾燥させて例えば粉末状として用いることもできるほか、液体状のまま用いることも可能である。また、例えば乾燥処理の前に液体状の肝臓分解物（濾液）に添加するなどして、デキストリンなどの賦形剤などを加えるようにすることもできる。
【００２１】
本実施形態の認知機能の維持または改善剤は、例えば上述のようにして得られる豚の肝臓分解物を含有する。その含有量は特に限定されず、当業者が適宜設定できるが、例えば、認知機能の維持または改善剤あたり、３０質量％以上、より好ましくは３０質量％以上８０質量％以下含有する。
また、豚の肝臓分解物のほか１００質量％とする量の他の成分を含んでいてもよく、例えば、上述の賦形剤のほか、基剤、滑択剤、香料、などから構成されていてもよい。
【００２２】
本実施形態の認知機能の維持または改善剤の形態（剤型）については特に限定されず、医薬品、医薬部外品または食品などとして製造することができ、例えばハードゼラチンカプセル等に上述の豚の肝臓分解物を充填した形態や上述の豚の肝臓分解物を液体成分に分散させた態様とすることができる。
また、本実施形態の認知機能の維持または改善剤が服用される量は、特に限定されず、その形態などを考慮して適宜設定可能であり、例えばハードゼラチンカプセルあたりにおいて豚の肝臓分解物が１００〜５００ｍｇ含有されるようにすることができる。
一日あたりの服用量についても、認知機能の維持または改善作用の観点から、例えば本実施形態に係る豚の肝臓分解物が２６６ｍｇ以上、好ましくは７９０ｍｇ以上、より好ましくは１５８０ｍｇ以上服用されるようにすることができる。また、当該一日当たりの服用量の上限値についても特に限定されないが、これ以上摂取しても効果に差がないため、２６６０ｍｇ以下の量で服用されるようにすることができる。
【００２３】
以上、本実施形態によれば、個人差はあるが、経口投与により、認知機能を維持または改善することができる、認知機能の維持または改善剤を提供することができる。
豚の肝臓分解物を含有する本実施形態の認知機能の維持または改善剤を服用することにより、認知機能の維持または改善して、認知症を予防、または症状を維持もしくは改善することが可能である。
【００２４】
また、本実施形態の認知機能の維持または改善剤は経口投与により認知機能を維持または改善することが可能であるため、従来のものより簡単に対象に投与することができ、例えば対象自身によって服用することも可能である。
【００２５】
また、本実施形態の認知機能の維持または改善剤は、アセトンなどの有機溶媒を使用することなく調製することが可能である。したがって、従来のものと比較して安全性に優れ、食品などの形態で服用することができる。
【実施例】
【００２６】
以下、実施例によって本発明の認知機能の維持または改善剤をより具体的に説明する。なお、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２７】
[認知機能の維持または改善剤の調製]
シュガーポークから採取した肝臓原料（冷凍）７５０ｇをホモジナイザー、あるいはミンチカッターでペースト状になるまで粉砕し、イオン交換水８．０Ｌを加えたものを反応液とした。
５Ｌ容反応槽に、得られた反応液と、タンパク質分解酵素（ニュートラーゼ（ノボサイムス））３．７５ｇ添加し、５０℃、３００ｒｐｍの条件で１５時間程度攪拌し、酵素反応を行った。
反応終了後、９０℃で１時間加熱処理を行い、酵素を失活させた。次いで、反応液を濾過し、未分解物を除去した。
続いて、濾液にデキストリン２００ｇを賦形剤として添加し、噴霧乾燥（条件；アトマイザ回転速度１０，０００ｒｐｍ、熱風入口温度１８５℃、排気出口温度１００℃）を行い、粉末状の豚の肝臓分解物と賦形剤との混合物(６０９ｇ、豚肝臓分解物：４０９ｇ)を得た。
【００２８】
次に、得られた粉末状の上記混合物（３９６ｍｇ）をゼラチンハードカプセルに充填し、実施例１の認知機能の維持または改善剤とした（豚肝臓分解物の割合は２６６ｍｇ／カプセル）。
【００２９】
[参考試験：豚肝臓分解物の神経活性化効果]
実施例１の場合と同様の方法で粉末状の豚の肝臓分解物と賦形剤との混合物を調製し、これを参考例の認知機能の維持または改善剤とした（以下、参考例のPLDとも称す）。
参考例のPLDを用いて、神経系細胞への作用について検討を行った。また、ホスファチジルコリン(PC；和光純薬製)およびコリン塩化物(C；和光純薬製)についても参考として併せて検討を行った。検討のための試験は、それぞれの神経系細胞の増殖促進または増殖抑制効果を指標とした。PLD、PCはジメチルスルフォキシド(DMSO；ナカライテスク)、Cはリン酸緩衝生理食塩液（PBS；和光純薬）で懸濁または溶解し、それぞれ図１〜３に示す濃度に調製した。
ラットアストログリア細胞（RCR-1）、マウスミクログリア細胞(MG6)および神経芽細胞(IMR-32)を培養液で6×１０4個/mL(IMR-32については1×１０5個/mL) に調製し、96穴のマイクロプレート(Tlue line社)に0.1mLずつ加え、CO2インキュベーターで24時間培養した。その後、それぞれの濃度に調製したPLD、PCおよびCを加え、24時間培養した。培地をアスピレート後、細胞増殖性試験試薬（アラマーブルー試薬、Thermo scientific社）を10%で加えた培地0.1mLを加え、2時間後に530/590nm (Ex/Em)における蛍光光度をマルチプレートリーダー（BioTech社）によって測定した(Day1)。蛍光輝度測定後は、反応試薬を除去し、それぞれのウェルに新鮮培地を加え、再度24時間培養した。その後、細胞増殖性試験試薬入培地を0.1mL加え、2時間後に530/590nmにおける蛍光輝度を測定した（Day2）。
【００３０】
結果を図１〜３に示す。PCとCはRCR-1細胞の増殖を促進したが、PLDにおいてはRCR-1細胞の増殖が抑制された。一方、MG6細胞においては、PLDとCで細胞増殖の促進がみられた。IMR-32細胞においては、顕著な影響は認められなかった。これらの結果はDay1に比較してDay2において、より顕著であった。
以上の結果から、参考例のPLDは神経細胞の種類に応じて、その作用が異なることが示唆された。特にPLDがMG-6細胞の増殖を促進したことは、ミクログリア細胞による神経細胞への栄養補給や沈着物排除等の効果が期待される。これは、PLDの認知機能改善効果を期待させるものと考えられた。
すなわち、PLDが単なる細胞増殖促進又は細胞増殖抑制を示すものではなく、細胞内の信号伝達系に作用して、細胞の増殖を調整していることが可能性として考えられる。また、Day1に比較してDay2で顕著な作用が認められたことも、細胞内の信号伝達系に作用している可能性を示唆していると考えられる。
【００３１】
[豚肝臓分解物の経口摂取したときの評価]  
実施例１の認知機能の維持または改善剤(以下、実施例１のPLDとも称す)を用いて、ヒトにおける評価を行った。試験は、日本薬科大学倫理委員会の承認を得て行った。具体的には、PLDを1日6カプセル経口投与した8名（75.0±11.2歳）とPLDを1日3カプセル経口投与した5名（80.8±8.9歳）の認知機能を評価した。
認知機能の評価は、「長谷川式簡易認知評価スケール（HDR-S）」を実施して行い、投与開始日から2週間後と4週間後のHDR-Sのスコア値を評価の指標とした。なお、本試験の協力者は、高血圧症、糖尿病、脳卒中の後遺症等で医療機関を受診している方となっている。
その結果を図４に示す。PLDを1日6カプセル経口投与した実験群では、PLD服用前のHDR-Sスコア値は25.3±2.1であり、投与後2週間では28.0±2.1にスコア値の増加が観察された。また、4週間後においても28.0±1.9とスコア値の増加が観察された。PLDを1日6カプセル経口投与した際の2週間後及び4週間後のHDR-Sの改善は、Dunnett検定の結果、1%以下の危険率で統計的な有意差を認めた。1日6カプセル経口投与では、2週間後及び4週間後において8名中6名(75%)がHDR-Sにおいて2点以上の改善を認めた。一方、PLDを1日3カプセル経口投与した場合は、服用前の24.4±3.8に対して2週間後は25.8±3.0、4週間後は24.6±4.2と統計学的に有意なHDR-Sの改善は認められなかった。しかしながら、2週間後では5名中3名（60%）、4週間後では5名中1名（20%）で2点以上のHDR-S改善が観察された。
すなわち、当該試験例２においては、個人差はあるものの、実施例の認知機能の維持または改善剤の経口投与により、認知機能の改善効果が確認された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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