(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類の皮膚表面から採取したテストサンプル内の１つ以上のテスト分析物の存在や量を検出するための診断キットであって、
ａ）メンブレン（２０１）を含む、側方流動装置に対する分離インサート（２００、４１１）であり、前記メンブレンは厚さ、幅及び長さを有し、選択的に剛性支持フレーム（２０２）に固定されており、前記分離インサートは前記テストサンプルを収得するように構成されている分離インサートと、
ｂ）前記分離インサート（２００、４１１）を収容するように構成されている側方流動分析装置（３００、４００）と、
ｃ）哺乳類の皮膚表面（２１３）に前記分離インサートを着脱可能に取り付けるように構成されている固定部材（２１０）を有し、前記固定部材（２１０）は、前記分離インサート（２００、４１１）に圧力を印加することにより、前記哺乳類の前記皮膚表面（２１３）に対し、前記分離インサート（２００、４１１）を加圧するように構成されている膨張性レイヤ（２１２）を含む、
ことを特徴とする診断キット。
【請求項２】
前記側方流動装置は、前記分離インサートと結合される際、毛細管ベッドを形成するように構成されており、前記分離インサートと結合された前記側方流動装置（１００、５００）は、溶離区域（１０１、５０１）と、検出領域（ＤＡ）と、接合パッド（１０２、５０２）及び吸上パッド（１０４、１０５）の中から１つ以上のパッドとを含む、請求項１に記載の診断キット。
【請求項３】
前記メンブレンは、４ｍｍ以下の厚さと、前記厚さより大きい幅及び長さとを有し、前記側方流動装置は、前記メンブレンの前記幅と前記長さによって生成される平面方向である側方流動方向（Ｌ）を有するように構成されている、請求項１ないし請求項２のうち、いずれかの１項に記載の診断キット。
【請求項４】
前記側方流動装置は、溶離区域（１０１）と検出領域（ＤＡ）とを含み、前記分離インサートは、前記検出領域（ＤＡ）ではなく、前記溶離区域（１０１）である、請求項１ないし請求項３のうち、いずれか１項に記載の診断キット。
【請求項５】
前記側方流動装置は、溶離区域（５０１）と検出領域（ＤＡ）とを含み、前記分離インサートは、前記溶離区域ではなく、前記検出領域（ＤＡ）である、請求項１ないし請求項３のうち、いずれか１項に記載の診断キット。
【請求項６】
前記分離インサートは、剛性支持フレーム（２０２）に固定されているメンブレン（２０１）を含む、請求項１ないし請求項４のうち、いずれか１項に記載の診断キット。
【請求項７】
前記剛性支持フレーム（２０２）は、前記メンブレン（２０１）の外周部をカバーする、請求項６に記載の診断キット。
【請求項８】
前記固定部材の前記膨張性レイヤは、圧縮セルロースを含み、前記膨張性レイヤは、前記分離インサート（２００、４１１）と流体連通しない、請求項１に記載の診断キット。
【請求項９】
前記検出領域（ＤＡ）は、１つ以上のテスト分析物を選択的に保持するために１つ以上の親和分子を含有する検出区域と、選択的に、１つ以上の指示親和分子を選択的に保持するため、１つ以上の親和分子を含有する指示区域（１０６、５０６）とを含む、請求項２又は４又は５に記載の診断キット。
【請求項１０】
前記１つ以上のテスト分析物は、ケモカイン、インターロイキン、成長因子、ホルモン、酵素及びＩＬ‐１ａ、ＩＬ‐１ｂ、ＩＬ‐１ＲＡ、ＩＬ‐８、ＣＣＬ‐２、ＣＣＬ‐５、ＣＣＬ‐２７、ＣＸＣＬ‐１、ＣＸＣＬ‐２、ＣＸＣＬ‐９、Ｔｒａｐｐｉｎ２／Ｅｌａｆｉｎ、ｈＢＤ‐１、ｈＢＤ‐２、ＶＥＧＦ及びＴＳＬＰから構成される群から選択されるような、哺乳類の皮膚に存在する異なる分子で構成される群から選択される、請求項１ないし請求項９のうち、いずれか１項に記載の診断キット。
【請求項１１】
側方流動分析装置のための分離インサート（２００、４１１）であって、
剛性支持フレーム（２０２）に固定されているメンブレン（２０１）を含み、前記分離インサートは、哺乳類の皮膚表面（２１３）からテストサンプルを収得するように構成されており、
前記メンブレンは、前記メンブレンが取り付けられるように構成されている前記皮膚表面と反対方向に向かう側面において透水性を有し、
前記分離インサートは、前記分離インサートを、哺乳類の皮膚表面（２１３）に着脱可能に取り付けるように構成されている固定部材（２１０）をさらに含み、前記固定部材（２１０）は、前記分離インサート（２００、４１１）に圧力を印加することにより、前記哺乳類の前記皮膚表面（２１３）に対し、前記分離インサート（２００、４１１）を加圧するように構成されている膨張性レイヤ（２１２）を含む、
ことを特徴とする分離インサート。
【請求項１２】
前記メンブレンは、４ｍｍ以下の厚さと、前記厚さより大きい幅及び長さを有する、請求項１１に記載の分離インサート。
【請求項１３】
前記剛性支持フレームは、前記メンブレンの外周部をカバーする、請求項１１ないし請求項１２に記載の分離インサート。
【請求項１４】
前記分離インサートは、１つ以上のテスト分析物を選択的に保持するため、１つ以上の親和分子を含有する検出区域（１０５、５０５）を含む前記側方流動分析装置の検出領域（ＤＡ）である、請求項１１ないし請求項１３のうち、いずれか１項に記載の分離インサート。
【請求項１５】
前記１つ以上のテスト分析物は、ケモカイン、インターロイキン、成長因子、ホルモン、酵素及びＩＬ‐１ａ、ＩＬ‐１ｂ、ＩＬ‐１ＲＡ、ＩＬ‐８、ＣＣＬ‐２、ＣＣＬ‐５、ＣＣＬ‐２７、ＣＸＣＬ‐１、ＣＸＣＬ‐２、ＣＸＣＬ‐９、Ｔｒａｐｐｉｎ２／Ｅｌａｆｉｎ、ｈＢＤ‐１、ｈＢＤ‐２、ＶＥＧＦ及びＴＳＬＰから構成される群から選択されるような、哺乳類の皮膚に存在する異なる分子で構成される群から選択される、請求項１４に記載の分離インサート。
【請求項１６】
１つ以上のテスト分析物の存在若しくは量を検出するための方法であって、
ａ）哺乳類の皮膚表面に側方流動装置に対する分離インサート（２００、４１１）を着脱可能に取り付ける段階であり、前記分離インサートは剛性支持部（２０２）に固定されているメンブレンを含み、テストサンプルを収得するように構成されている段階を有し、前記分離インサート（２００、４１１）は、前記分離インサートを哺乳類の皮膚表面（２１３）に着脱可能に取り付けるように構成されている固定部材（２１０）により、前記皮膚表面に着脱可能に取り付けられており、前記固定部材は、前記分離インサート（２００、４１１）に圧力を印加することにより、前記哺乳類の前記皮膚表面（２１３）に対し、前記分離インサート（２００、４１１）を加圧するように構成されている膨張性レイヤ（２１２）を含み、
ｂ）前記哺乳類の前記皮膚表面（２１３）に前記分離インサート（２００、４１１）を少なくとも５分間放置する段階と、
ｃ）前記分離インサート（２００，４１１）を収容できるように適合されている側方流動分析装置内に前記テストサンプルを含有する前記分離インサートを固定する段階と、
ｄ）前記側方流動分析装置を展開する段階とを含む方法。
【請求項１７】
前記側方流動分析装置は、溶離区域（１０１）及び検出領域（ＤＡ）を含み、前記分離インサートは前記溶離区域（１０１）である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記側方流動分析装置は、溶離区域（１０１）及び検出領域（ＤＡ）を含み、前記分離インサートは前記検出領域（ＤＡ）である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記哺乳類の前記皮膚表面は、ヒトの皮膚である、請求項１６ないし請求項１８のうち、いずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記側方流動分析装置は、前記分離インサートと結合される際、毛細管ベッドを形成するように構成されており、前記分離インサートに結合された前記側方流動装置（１００、５００）は、溶離区域（１０１、５０１）と、検出領域（ＤＡ）と、接合パッド（１０２、５０２）及び吸上パッド（１０４、５０４）の中から１つ以上のパッドを含む、請求項１６ないし請求項１９のうち、いずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記メンブレンは、４ｍｍ以下の厚さと、前記厚さより大きい幅及び長さを有し、前記
側方流動装置は、前記メンブレンの前記幅と前記長さによって生成される平面方向である側方流動方向（Ｌ）を有するように構成されている、請求項１６ないし請求項２０のうち、いずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳類の身体表面から採取されたテストサンプル内における１つ以上のテスト分析物の存在や量を検出するための側方流動分析装置に基づいた診断キット及び方法並びに側方流動分析装置に対するインサートに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ゲノミクス、トランスクリプトミクス、プロテオミクス、レギュロミクスの急速な発展に伴い、分子的・細胞的メカニズムを大規模に分析できるようになった。これら研究における重要な結果の１つは、機能ゲノミクスの発展であり、他の個人から得られた細胞はゲノム構造、遺伝子及びタンパク質の発現プロファイル及び特定の細胞機能を制御する調節メカニズムにおいて大差を有するということに対する理解が発展したことである。これにより、１つ以上のバイオマーカーの存在、不在及び／または濃度を通じ、哺乳類の現状を評価できるバイオマーカーを検出及び／またはバイオマーカーを定量化することに対する関心が引き起こされた。
【０００３】
それだけでなく、個別化医療や個別スキンケア分野でのように、個人レベルでの治療がどれだけ効率性を有するかを評価することに対する要求が存在する。
【０００４】
個別化医療に関し、１人の個人から皮膚疾患のような病を診断若しくは予後したり、または皮膚疾患のような病の感染性、発病若しくは予想される重症度を予測したり、または治療法に対する個人の反応性を予測したり、皮膚疾患のような特定病を治療した後、再発を予測及び／またはモニターリングする際に有用な現場診断装置に対する要求が存在する。
【０００５】
個別スキンケアに関し、化粧品のアンチリンクル若しくはアンチエージングという効果は、通常、これらの製品が全ての個人に類似効果をもたらすという仮定に基づく。しかし、これは事実ではない。様々な人と別のスキンタイプは、化粧品に対する反応が異なるため、特定形態の皮膚管理製品に対する個人の効果若しくは反応性を測定できる現場診断装置に対する要求がある。
【０００６】
女性の妊娠テストのような現場診断テストのために用いられてきた１つの迅速な方法が、側方流動分析法である。
【０００７】
側方流動分析方法が直面している難点の１つは、テストするサンプルを提供すること、特に皮膚にサンプルフォームを提供すること、特に再現性及び／または均一な方法で皮膚へサンプルフォームを提供することである。
【０００８】
女性の妊娠テストの場合、前記サンプルは殆どの場合に尿である。
【０００９】
Ａｂｅｌなどの米国特許出願の第２００５／０１７５９９２号は、ヒトの体液からターゲットを迅速に診断するための方法を記述している。特に、側方流動分析方法が適用されるが、この特許では、綿棒部材を用いて眼液からサンプルが非浸湿的に収集される。
【００１０】
米国特許出願の第２００５／０１７５９９２号の綿棒部材は、皮膚から分析物を収得するため、特に再現性及び／または均一な方式でサンプルを提供しようとするとき、またはサンプル内の１つ以上のテスト分析物の濃度を別の位置の皮膚から採取されたコントロールサンプルと比較しようとする要望があるときは、非常に適していない。
【００１１】
したがって、当業界で皮膚から分析物を収得・分析するためのキット及び方法、特に迅速な検出を可能にする現場診断装置に対する要求が存在する。さらに、当業界の先行技術と比較し、再現可能及び／または均一な方法でサンプルを提供できる現場診断装置用サンプリング方法に対する要求が存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、前述した先行技術に鑑みて行われたものであって、本発明の目的は、先行技術と比較して再現可能及び／または均一な方式で、例えばヒトの皮膚表面から分析物を収得するに非常に適した現場診断装置を提供し、または皮膚から分析物を収得する代案的な方式を有する現場診断装置を少なくとも提供しようとすることである。
【００１３】
前記の問題を解決できるよう、本発明は、哺乳類の皮膚表面のような哺乳類の身体表面から採取されたテストサンプル内における１つ以上のテスト分析物の存在や量を検出するための診断キットであって、選択的に剛性支持部２０２に固定されているメンブレン２０１を含む、側方流動装置に対する分離インサート２００、４１１であり、前記テストサンプルを収得するように構成されている分離インサートと、前記分離インサート２００、４１１を収容するように構成されている側方流動分析装置３００、４００と、哺乳類の皮膚表面２１３に前記分離インサートを着脱可能に取り付ける２１１ように構成されている固定部材２１０とを含む診断キットを提供する。いくつかの実施形態で、前記メンブレンは厚さ、幅及び長さを有する。
【００１４】
本発明のいくつかの実施形態で、前記側方流動装置は、前記分離インサートと結合される際、毛細管ベッドを形成するように構成されており、前記分離インサートに結合された前記側方流動装置１００、５００は、溶離区域１０１、５０１と、検出領域（ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｒｅａ，ＤＡ）と、接合パッド１０２、５０２及び吸上パッド１０４、５０４の中から１つ以上のパッドを含む。
【００１５】
本発明のいくつかの実施形態で、前記メンブレンは、４ｍｍ以下の厚さと、前記厚さより大きい幅及び長さを有し、前記側方流動装置は、実質的に前記メンブレンの前記幅と前記長さによって生成される平面方向である側方流動方向Ｌを有するように構成されている。
【００１６】
本発明のいくつかの実施形態で、前記固定部材２１０は、前記分離インサート２００、４１１に圧力を印加することにより、前記哺乳類の前記皮膚表面２１３に対し、前記分離インサート２００、４１１を加圧するように構成されている膨張性レイヤ２１２を含む。
【００１７】
すなわち、本発明の第１側面から、本発明者らは、従来の側方流動分析装置を、例えばヒトの皮膚表面からテストサンプルを収得するように構成されている分離インサートと、前記分離インサートを収容するように構成されている側方流動装置とに分けると、特に、例えば皮膚表面に前記分離インサートを着脱可能に固定する固定部材と組み合わせられた場合、ヒトの皮膚表面のような哺乳類の身体表面からサンプルを収得する際に役に立つことが分かった。
【００１８】
好適な実施形態で、前記固定部材は、前記分離インサートをさらに密に前記皮膚に加圧する膨張性レイヤの働きにより、前記分離インサートに更なる圧力を印加することができる。前述した先行技術（米国特許出願の２００５／０１７５９９２号）は、サンプルを収得するための綿棒部材の渦巻き動作が十分であることを暗示しているが、本発明らは、サンプルを収得するための代案的方式であり、多くの場合、皮膚からサンプルを収得するためのより優秀なサンプリング方法は、分離インサートを皮膚に着脱可能に固定し、膨張性レイヤによって更なる圧力を印加する方法であることが分かった。
【００１９】
本発明のいくつかの実施形態で、前記側方流動分析装置は、溶離区域１０１と検出領域ＤＡとを含み、前記分離インサートは、前記溶離区域１０１である。換言すると、前記分離インサートは、前記溶離区域若しくはサンプル領域にフィットするように適合されている。したがって、前記分離インサートは、前記検出領域ＤＡである。
【００２０】
本発明のいくつかの実施形態で、前記側方流動分析装置は、溶離区域５０１及び検出領域ＤＡを含み、前記分離インサートは、前記検出領域ＤＡである。換言すると、前記分離インサートは、固定された１つ以上の親和分子を有する検出区域５０５を含むことができる前記検出領域にフィットするように適合されている。したがって、前記分離インサートは、前記溶離区域若しくはサンプル領域ではない。一旦、前記分離インサートが前記側方流動分析装置の内部に置かれると、前記１つ以上のテスト分析物が前記固定された親和分子に既に結合されているという点で、かかる構成は側方流動分析を提供する変形された方法である。
【００２１】
本発明のいくつかの実施形態で、前記分離インサートは、剛性支持フレーム２０２に固定されているメンブレン２０１を含む。
【００２２】
本発明のいくつかの実施形態で、前記剛性支持フレーム２０２は、前記メンブレン２０１の外周部をカバーする。
【００２３】
本発明のいくつかの実施形態で、前記固定部材の前記膨張性レイヤは、圧縮セルロースを含み、前記膨張性レイヤは、前記分離インサート２００、４１１と流体連通しない。
【００２４】
本発明のいくつかの実施形態で、前記検出領域ＤＡは、１つ以上のテスト分析物を選択的に保持するため、１つ以上の親和分子を含有する検出区域１０５、５０５と、選択的に、１つ以上の指示親和分子を選択的に保持するため、１つ以上の親和分子を含有する指示区域１０６、５０６とを含む。
【００２５】
本発明のいくつかの実施形態で、前記１つ以上のテスト分析物は、ケモカイン、インターロイキン、成長因子、ホルモン、酵素及びＩＬ‐１ａ、ＩＬ‐１ｂ、ＩＬ‐１ＲＡ、ＩＬ‐８、ＣＣＬ‐２、ＣＣＬ‐５、ＣＣＬ‐２７、ＣＸＣＬ‐１、ＣＸＣＬ‐２、ＣＸＣＬ‐９、Ｔｒａｐｐｉｎ２／Ｅｌａｆｉｎ、ｈＢＤ‐１、ｈＢＤ‐２、ＶＥＧＦ及びＴＳＬＰから構成される群から選択されるような、哺乳類の皮膚に存在する異なる分子で構成される群から選択される。
【００２６】
本発明の他の側面から、側方流動分析装置のためのインサート２００、４１１であって、剛性支持フレーム２０２に固定されているメンブレン２０１を含み、前記分離インサートは、哺乳類の皮膚表面２１３からテストサンプルを収得するように構成されているインサートが提供される。
【００２７】
本発明のいくつかの実施形態で、前記メンブレンは、４ｍｍ以下の厚さと、前記厚さより大きい幅及び長さを有する。
【００２８】
本発明のいくつかの実施形態で、前記剛性支持フレームは、前記メンブレンの外周部をカバーする。
【００２９】
本発明のいくつかの実施形態で、前記インサートは、前記インサートを哺乳類の身体表面２１３に着脱可能に取り付ける２１３ように構成されている固定部材２１０をさらに含む。
【００３０】
本発明のいくつかの実施形態で、前記インサートは、１つ以上のテスト分析物を選択的に保持するため、１つ以上の親和分子を含有する検出区域１０５、５０５を含む前記側方流動分析装置の検出領域ＤＡである。
【００３１】
本発明のいくつかの実施形態で、前記メンブレンは、前記メンブレンが取り付けられるように構成されている前記皮膚表面とは反対方向に向かう側面において透水性を有する。
【００３２】
本発明のいくつかの実施形態で、前記１つ以上のテスト分析物は、ケモカイン、インターロイキン、成長因子、ホルモン、酵素及びＩＬ‐１ａ、ＩＬ‐１ｂ、ＩＬ‐１ＲＡ、ＩＬ‐８、ＣＣＬ‐２、ＣＣＬ‐５、ＣＣＬ‐２７、ＣＸＣＬ‐１、ＣＸＣＬ‐２、ＣＸＣＬ‐９、Ｔｒａｐｐｉｎ２／Ｅｌａｆｉｎ、ｈＢＤ‐１、ｈＢＤ‐２、ＶＥＧＦ及びＴＳＬＰから構成される群から選択されるような、哺乳類の皮膚に存在する異なる分子で構成される群から選択される。
【００３３】
本発明の他の側面から、１つ以上のテスト分析物の存在若しくは量を検出するための方法であって、哺乳類の皮膚表面に側方流動装置に対する分離インサート２００、４１１を着脱可能に取り付ける段階であり、前記分離インサートは剛性支持部２０２に固定されているメンブレンを含み、テストサンプルを収得するように構成されている段階と、前記哺乳類の前記皮膚表面２１３に前記分離インサート２００を少なくとも５分間放置する段階と、前記分離インサート３００、４００を収容できるように適合されている側方流動分析装置内に前記サンプルを含有する前記分離インサートを固定する段階と、前記側方流動分析装置を展開する段階とを含む方法が提供される。
【００３４】
本発明のいくつかの実施形態で、前記分離インサート２００、４１１は、前記分離インサートを哺乳類の皮膚表面２１３に着脱可能に取り付ける２１１ように構成されている固定部材２１０により、前記皮膚表面に着脱可能に取り付けられており、前記固定部材は、前記ａ）段階と前記ｂ）段階との間で活性化され、前記分離インサートを前記皮膚表面に対して加圧する力を発生させる膨張性レイヤ２１２を含む。
【００３５】
本発明のいくつかの実施形態で、前記側方流動分析装置は、溶離区域１０１及び検出領域ＤＡを含み、前記分離インサートは前記溶離区域１０１である。
【００３６】
本発明のいくつかの実施形態で、前記側方流動分析装置は、溶離区域１０１及び検出領域ＤＡを含み、前記分離インサートは前記検出領域ＤＡである。
【００３７】
本発明のいくつかの実施形態で、前記哺乳類の前記身体表面は、ヒトの皮膚である。
【００３８】
本発明のいくつかの実施形態で、前記側方流動装置は、前記分離インサートと結合される際、毛細管ベッドを形成するように構成されており、前記分離インサートに結合された前記側方流動装置１００、５００は、溶離区域１０１、５０１と、検出領域ＤＡと、接合パッド１０２、５０２及び吸上パッド１０４、５０４の中から１つ以上のパッドを含む。
【００３９】
本発明のいくつかの実施形態で、前記メンブレンは、４ｍｍ以下の厚さと、前記厚さより大きい幅及び長さを有し、前記側方流動装置は、実質的に前記メンブレンの前記幅と前記長さによって生成される平面方向である側方流動方向Ｌを有するように構成されている。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
図面を参照し、特定の例示的な実施形態を下記でさらに詳細に説明する。
【００４１】
【図１Ａ】本発明の他の実施形態に係る側方流動分析ストリップ１００の斜視図である。図１Ａは、サンプルパッド１０１、接合パッド１０２、検出区域１０５及び指示区域１０６（この２つの区域は多孔性支持部１０７に固定されている）、吸上パッド１０４及び裏当て材１０８が備えられている側方流動ストリップ１００を示す。Ｌは側方流動方向を示し、領域ＤＡは検出領域を定義する。
【図１Ｂ】サンプルパッド１０１が残りの側方流動ストリップから分離されている側方流動ストリップを示す。
【図１Ｃ】多孔性支持部１０７上のサンプルパッド１０１と、接合パッド１０２と、検出区域１０５と、指示区域１０６と、吸上パッド１０４とが隣接若しくは重畳し、裏当て材１０８上に配置されている、図１Ａの代案的な実施形態を示す。
【図１Ｄ】サンプルパッド１０１が残りの側方流動ストリップから分離されている図１Ｃの側方流動ストリップを示す。
【図２Ａ】図２は、本発明の他の実施形態において、分離インサート２００、固定部材２１０及び哺乳類の皮膚に前記分離インサートを把持する前記固定部材の別の図面を示す。図２Ａに、剛性支持部２０２に固定されているメンブレン２０１を備えている、側方流動分析装置に対する分離インサート２００を示す。
【図２Ｂ】同一の分離インサート２００の１つの実施形態を示しており、哺乳類の身体表面と接触しているメンブレン２０１の下部を示す。
【図２Ｃ】膨張性レイヤ２１２を備え、哺乳類の身体表面に着脱可能に取り付けられる２１１ように構成されている固定部材２１０を示す。
【図２Ｄ】分離インサートが固定部材２１０によって哺乳類の身体表面２１３に着脱可能に取り付けられており、膨張性レイヤ２１２の上部側面が示されている実施形態を示す。
【図３Ａ】本発明の１つの実施形態を示す。ハウジング３１０を備えている側方流動分析装置３００は、分離インサート２００と、側方流動装置の展開のために流体を添加できるようにするサンプルポート３１３を見せる開放位置におけるサンプルパッドカバー３１２と、検出区域と指示区域で反応を視覚的に検出できるようにする反応ウインドウ３１１とを備える。
【図３Ｂ】本発明の１つの実施形態の断面図であり、側方流動分析ハウジング３１０は、サンプルポート３１３を見せる閉鎖位置にサンプルパッドカバー３１２を備えているサンプルパッド１０１の位置に配置された分離インサート２００を含む。前記分離インサートは、多孔性支持部３０９と流体連通されており、多孔性支持部は、接合パッド３０２と流体連通されており、接合パッドは、検出区域及び指示区域１０５、１０６（及び不図示）が固定されている多孔性メンブレン３０７及び吸上パッド３０４と流体連通されている。最後に、反応ウインドウ３１１により、検出領域ＤＡの視覚的検査が可能になる。
【図４Ａ】本発明に係る実施形態を示す。ハウジング４１０が備えられた側方流動分析装置４００は、分離インサート４１１と、側方流動装置の展開のために流体を添加できるようにするサンプルポート４１３とを備えている。
【図４Ｂ】本発明の一実施形態に係る側方流動分析装置４００の断面図を示しているが、側面流動分析ハウジング４１０は、検出領域ＤＡの位置に挿入される分離インサート４１１を含む。サンプルパッド４０１、サンプルポート４１３及び吸上パッド４０４が示されているが、一旦、分離インサート４１１が完全に挿入されると、前記サンプルパッドは前記分離インサート４１１を介し、吸上パッド４０４と流体連結される。
【図４Ｃ】分離インサートが完全に挿入されている側方流動分析装置４００を示している。検出区域４０５及び指示区域４０６が示されている。
【図４Ｄ】本発明の一実施形態に係る側方流動分析装置４００の断面図である。分離インサート４１１は完全に挿入されており、検出区域４０５及び指示区域４０６が備えられている前記サンプルパッド４０１及び分離インサート４１１は、吸上パッド４０４と流体連通されている。
【図５Ａ】本発明の側方流動ストリップの他の実施形態の斜視図である。側方流動ストリップ５００は、サンプルパッド５０１と、接合パッド５０２と、検出区域５０５及び指示区域５０６（２つの区域は多孔性支持部５０７上に固定されている）と、吸上パッド５０４と、選択的に裏当て材５０８を備えている。Ｌは側方の流れ方向を表し、領域ＤＡは検出領域を定義する。
【図５Ｂ】多孔性支持部５０７上に固定されている検出区域５０５及び指示区域５０６が残りの側方流動ストリップから分離されている側方流動ストリップを示す。
【図６Ａ】実施例１に係る側方流動分析装置の敏感度を表す。サンプルパッドに直接に添加された異なる濃度の分析物を分析した。コントロール（左側）と分析物（右側）は、ＩＬ‐８の検出の視覚的検出濃度は約１ｎｇ／ｍｌであり、ｈＢＤ‐１の視覚的検出濃度は約０．２５ｎｇ／ｍｌであることを表す。
【図６Ｂ】皮膚に置かれたサンプルパッドを用い、ＩＬ‐８とｈＢＤ‐１が皮膚表面から検出できることを表す。
【図７Ａ】実施例２に係る側方流動分析装置の敏感度を表す。検出領域ＤＡに直接に添加された異なる濃度の分析物を分析した。コントロール（右側）と分析物（左側）は、ＩＬ‐８の検出の視覚的検出濃度は約１ｎｇ／ｍｌであり、ｈＢＤ‐１の視覚的検出濃度は約０．２５ｎｇ／ｍｌであることを表す。
【図７Ｂ】サンプリング領域として検出領域ＤＡを用い、分析物ＩＬ‐８とｈＢＤ‐１が皮膚表面から検出できることを表す。
【００４２】
この開示のメリットを考えると、図１ないし図５に示された何れの特徴も一定の縮尺で描かれていないということは、本技術分野の通常の技術者によって認識されるであろう。本明細書に開示されている例示的な実施例に対する理解をさらに促進できるよう、これら図面で一部の特徴のディメンション及び特性は、該当図面における他の特徴に相対的なものに拡大、歪曲若しくは変形することができる。
【００４３】
さらに、図面の個々の特徴は、他の実施形態を得るために相互に交換できるということは、本発明の属する技術分野の通常の技術者によって認識されるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
本発明の実施形態について記述する際、明確性を期するため、特定用語に依存する。しかし、本発明は、そのように選択された特定用語に限定されるものではなく、それぞれの特定用語は、類似の目的を達成できるよう、類似の方式で作動する全ての技術的均等物を含むものとして理解される。
【００４５】
テストサンプル内の１つ以上のテスト分析物の存在若しくは不在を検出できるよう、現場診断装置に側方流動分析を適用することができる。その判読は視覚的に行われ得るが、例えば検出区域１０５におけるテストストリップとして言及される１つ以上のカラードテストラインの存在若しくは不在に基づいて行われ、該当テストの確定／確認は、指示区域１０６で１つ以上のカラード表示ライン／ストライプの存在及び／または不在に基づいて行われ得る。前記テストは定量的であってよく、定性的（存在若しくは不在）であってもよく、前記検出／定量化は判読装置の助けを受けてもよく、若しくは側方流動分析のユーザーの目視による純粋な視覚的検出であってもよい。  
【００４６】
希望であれば、探針の強度を測定するため、いくつかの実施形態で光学判読器のような判読装備を用いることができる。光学判読器の実際の構成及び構造は、一般的に測定される探針によって様々であり得る。例えば、用いられる光学検出技法は、発光（例えば、蛍光、燐光など）、吸光（例えば、蛍光、若しくは非蛍光）、回折などを含むが、これに限定されるものではない。本発明により、分析物の存在若しくは濃度に対する定性的、定量的若しくは半定量的測定を行うことができる。例えば、検出区域１０５及び指示区域１０６に結合された検出探針によって生成された信号の強度を用い、分析物の量を定量的に若しくは半定量的に測定することができる。
【００４７】
側方流動分析は（多孔性ペーパー若しくは焼結ポリマーのような）毛細管ベッドに基づくか、若しくは殆どの場合に互いに流体連通されている一連の毛細管ベッドに基づくことができる。前記毛細管ベッドは、毛細管力の働きにより、流体を運送できる能力を有している。本発明のいくつかの実施形態において、前記側方流動分析は、毛細管ベッドを形成できるように構築されている。
【００４８】
第１要素である前記サンプルパッド１０１は、スポンジとして働き、テストサンプルを保持する。テストサンプルが一旦浸漬されると、１つ以上のテスト分析物を含有する前記テストサンプルは、接合パッド１０２に移動するが、接合パッド１０２は、前記テストサンプル内の１つ以上のテスト分析物に結合するように設計されている検出探針にタグされた親和分子のような１つ以上の指示親和分子を含有している。検出区域１０５及び指示区域１０６（両者は全て１つ以上のストライプを備えており、別のセットの１つ以上の親和分子が固定されている）を有することができる検出領域ＤＡにテストサンプルがさらに移動する間、前記テストサンプルと前記１つ以上の親和分子が混合され、前記テストサンプル内の１つ以上のテスト分析物に対し、親和力を有している前記１つ以上の親和分子が互いに結合する。前記接合パッドから得られた前記親和分子と混合された前記テストサンプルが、前記検出領域ＤＡに至るまで、前記テストサンプル内の１つ以上の分析物は、前記接合パッドから得られた親和分子と結合する。続いて、この複合体は、前記検出区域１０５内のストライプ上の前記親和分子によって結合される。暫くすると、さらに多くの流体が前記検出区域を通過する場合、検出探針が蓄積され、ストライプの色が変わる。前記検出探針は、例えば前記親和分子に接合された金、若しくはラテックス粒子であって、検出探針でタグされている親和分子を製造することができる。また、前記検出区域ＤＡは、指示区域１０６を含むことができるが、指示区域は、前記側方流動分析が適切に行われたか否かを確認するコントローラとして働くことができる。かかる検出区域１０６はまた、前記接合パッドから得られた検出探針でタグされている前記親和分子のみで結合される固定された親和分子を備えている１つ以上のストライプを含むことができるが、前記検出区域１０５内の親和分子は、前記分析物と、前記接合パッドから得られた検出探針でタグされている親和分子のような指示親和分子の複合体に結合される。流体が検出領域ＤＡを通過した後、流体は吸上パッド１０４に進入するが、吸上パッドは一般的に全体の毛細管ベッド１０１、１０２、ＤＡ、１０４、若しくは１０７を通過して移動した流体のみを収容する。前記吸上パッドは毛細管作用を増進させ、前記サンプルパッド１０１、接合パッド１２０から前記検出領域ＤＡを通過する流体の流れを増進させるに役立つことができる。
【００４９】
前記側方流動分析ストリップは、選択的に裏付けレイヤ１０８及び／またはハウジング３１０、４１０を含むことができるが、ハウジングは流体‐非透過性であるため、側方流動分析ストリップを通過して流れる流体は、前記裏付けレイヤ１０８を通して漏れない。前記支持部のための適切な素材の例に、ガラスと、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリブタジエン、ポリビニルクロリド、ポリアマイド、ポリカーボネート、エポキシド類、メタクリレート類、ポリメラニンといった高分子素材とが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００５０】
前記検出区域１０５は、前記指示区域１０６の上流若しくは下流に位置することができる。前記検出区域若しくは指示区域のライン若しくはストライプは、テストサンプルの流れに実質的に垂直な方向に配置することができる。いくつかの実施形態で、前記ラインは、前記テストサンプルの流れに実質的に平行な方向であり得る。前記検出区域１０５若しくは指示区域１０６内の前記ライン若しくはストライプは、ライン若しくはストライプである必要はなく、例えばドットやパターンといった別の形状であってもよい。
【００５１】
本発明の一側面から、哺乳類の身体表面で採取したテストサンプル内の１つ以上のテスト分析物の存在若しくは量を検出するための診断キットであって、剛性指示部２０２に固定できるメンブレン２０１を含む、側方流動装置のための分離インサート２００、４１１であり、前記テストサンプルを収得できるように構成されている分離インサートと、前記分離インサートを収容できるように構成される側方流動分析装置３００、４００と、哺乳類の身体表面２１３に、前記分離インサートを着脱可能に取り付ける２１１ように構成されている固定部材２１０とを含む診断キットが提供される。
【００５２】
全体的に、本発明は、広範囲にわたって、可能な濃度の１つ以上のテスト分析物に対し、テストサンプル内の１つ以上のテスト分析物の存在若しくは不在を検出するための統合システムを提供する診断キットに関するものである。いくつかの実施形態で、前記１つ以上のテスト分析物の量はまた、定量的に検出される。前記診断キットは、側方流動分析装置３００、４００と、分離インサート２００、４１１と、前記テストサンプル内の１つ以上のテスト分析物を検出するための１つ以上の分析試薬を用いる。前記分析試薬は、前記テストサンプル内の１つ以上のテスト分析物の存在若しくは量を表す検出信号を生成できる検出探針でタグされた親和分子を含む。前記テスト分析物を定量化する１つの方法は、前記１つ以上のテスト分析物の知られている濃度を用いて、適した標準曲線を作成することによって行われる。
【００５３】
本発明のいくつかの実施形態で、前記１つ以上のテスト分析物は、ケモカイン、インターロイキン、成長因子、ホルモン、酵素及び哺乳類の皮膚のような哺乳類の身体表面に存在する異なる分子で構成される群から選択される。特定テスト分析物は、ＩＬ‐１ａ、ＩＬ‐１ｂ、ＩＬ‐１ＲＡ、ＩＬ‐８、ＣＣＬ‐２、ＣＣＬ‐５、ＣＣＬ‐２７、ＣＸＣＬ‐１、ＣＸＣＬ‐２、ＣＸＣＬ‐９、Ｔｒａｐｐｉｎ２／Ｅｌａｆｉｎ、ｈＢＤ‐１、ｈＢＤ‐２、ＶＥＧＦ及びＴＳＬＰから構成される群から選択される１つ以上を含むことができる。
【００５４】
本発明は、ケモカイン、インターロイキン、成長因子、ホルモン、若しくは酵素であり得る、哺乳類の皮膚に存在する任意の分子を検出するに適している。同様に、本発明は、薬品及び薬品代謝の産物が哺乳類の皮膚に分泌される限り、薬品及びその代謝産物を検出するに適している。かかる薬品の検出は、娯楽の目的で摂取した薬品はもちろん、医療及び／または美容の目的で摂取した薬品の全てを含む。
【００５５】
前記テストサンプルは、側方流動装置に対する分離インサートを用いて、哺乳類の身体表面から採取する。前記分離インサートは、剛性支持部２０２に固定できるメンブレン２０１を含む。
【００５６】
前記メンブレン２０１を安定化できるよう、前記剛性支持部２０２を用いることができるが、剛性支持部は、曲がったり折れたりせず、例えば元の位置におけるネジ固定のように、側方流動分析装置３００の元の位置で分離インサートがフィットされたり、若しくはクリックされるようにし、前記分離インサートの操作を容易にするのに用いることができる。いくつかの実施形態で、前記剛性支持部は、例えば図２Ａに示すように、メンブレンの外周部をカバーしている。
【００５７】
前記メンブレンは、前記テストサンプルを収得するように構成されるが、これは前記メンブレンが前記テストサンプルを吸着できなければならないことを意味し、そのようにできる任意の素材が適合し得る。前記メンブレンに用いられる素材は、多糖類（例えば、紙のようなセルロース素材、セルロースアセテート及びニトロセルロースといったセルロース誘導体）、ポリエーテルスルホン、ポリエチレン、ナイロン、ポリビニルデンフルオライド、ポリエステル、ポリプロピレン、綿若しくは布といった合成・改質された天然、合成若しくは自然発生の素材を含むことができるが、これに限定されるものではない。いくつかの実施形態で、前記メンブレンは非接着性であり、前記メンブレンに移送される皮膚細胞の量を最小化する。前記剛性支持部に用いられる素材は、プラスチック素材、複合材、金属若しくは金属合金を含むが、これに限定されるものではない。
【００５８】
前記メンブレンは、類似シートであり得る。前記メンブレンは、（４、３、２、１ｍｍ未満のような）４ｍｍ以下の厚さと、全て前記厚さより大きい幅及び長さを有することができる。いくつかの実施形態で、メンブレンの幅及び長さは、全て前記厚さより大きい（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、５０倍より大きいか、或いは4，５，６，７，８，９，１０，５０倍まで大きい）。いくつかの実施形態で、前記メンブレンは長方形のような四角形であり、いくつかの実施形態で、前記メンブレンは円形である。前記メンブレンが不整形、例えば四角形若しくは長方形でなければ、前記幅、長さ及び厚さは、かかる不整形に対する最大値を意味する。例えば、円の幅は、直径であり得る。幅および長さの例は、４，５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０ｍｍであってもよく、例えば幅及び長さの範囲は、５〜３０ｍｍである。
【００５９】
前記テストサンプルは、哺乳類の身体表面から採取され、前記１つ以上のテスト分析物を含む。前記テストサンプルは、哺乳類の身体表面から前記メンブレンへのサンプルの拡散によって得られる。メンブレンは身体表面のサンプリング部位に取り付けられる間、若しくはメンブレンが身体表面のサンプリング部位に取り付けられる前に、固定された体積の流体を用いてメンブレンを湿潤させ、サンプリング作業に役に立つことができる。
【００６０】
いくつかの実施形態で、前記メンブレンは、前記メンブレンが取り付けられるように構成される前記皮膚表面と反対方向に向かう側面において透水性を有する。このため、メンブレンが取り付けられる間、固定された体積の流体を用いてメンブレンを湿潤させることができ、図３に示すように、例えばメンブレンが溶離区域の一部として働くとき、側方流動装置を展開するための液体を添加することが可能になる。即ち、前記メンブレンが取り付けられるように構成されている皮膚表面と反対方向に向かう側面からメンブレンの湿潤が可能になる。
【００６１】
好適な実施形態において、前記皮膚表面は、人体の皮膚のような皮膚であり、好適な実施形態において、前記哺乳類は人体である。
【００６２】
前記テストサンプルがメンブレンに移送された後、前記分離インサートは、前記分離インサート２００、４１１を収容するように構成されている側方流動分析装置３００、４００の内部へ挿入される。
【００６３】
本発明のいくつかの実施形態で、側方流動装置が前記分離インサートと結合される際、前記側方流動装置は、毛細管ベッドを形成するように構築されるが、前記分離インサートと結合された前記側方流動装置１００、５００は、溶離区域１０１、５０１と、検出領域ＤＡと、接合パッド１０２、５０２及び吸上パッド１０４、５０４の中から１つ以上のパッドとを含む。
【００６４】
本発明のいくつかの実施形態で、前記側方流動（ラテラルフロー）装置は、実質的に前記メンブレンの前記幅及び前記長さによって生成された平面方向である側方流動（ラテラルフロー）方向Ｌを有するように構成される。実質的に前記平面方向は、前記側方流動装置の別の要素とメンブレンの部分的重畳のような重畳はもちろん、隣接を含む（例えば、側方流動装置の要素１０１、１０２、１０７、１０４が隣接したものとして示された図１を参照）。例えば、分離インサート２００が多孔性支持部３０９、接合パッド３０２、多孔性メンブレン３０７及び吸上パッド３０４と部分的に重畳されている図３を参照する。もし前記多孔性支持部３０９が前記分離インサートと完全に重畳されていると、前記サンプルパッドから前記に検出領域ＤＡまでの側方流動方向Ｌは、平面に垂直するものとは反対に、実質的に前記メンブレンの幅及び長さによって生成される平面方向を有する。
【００６５】
分離インサートと側方流動装置を結合するための多数の可能性が存在するが、好適な実施形態で、前記インサートの前記メンブレンのパートを用意し、前記インサートを前記側方流動分析装置の同一位置にフィットさせ、再現性を増加させることができる。再現可能な方式で前記インサートの前記メンブレンのパートを同一位置に配置する１つの方法は、前記メンブレンを剛性支持部に固定することである。
【００６６】
身体表面の特定スポットから、再現性があり且つ均一な方式で前記テストサンプルを収得しようとする場合、好ましくは前記インサートは固定部材２１０を用いて前記身体表面に着脱可能に取り付けられる２１１。着脱可能な方式で前記インサートを前記身体表面に取り付けることにより、特定時間の間、前記インサートのメンブレンの大きさによって定義される特定領域をサンプリングすることが可能になる。例えば、再現可能な方式で皮膚の病変領域から採取されたテストサンプルにおける特定テスト分析物の濃度と、例えば皮膚の健康な領域若しくは非病変領域から採取されたテストサンプルにおける特定テスト分析物の濃度とを比較する場合、同一の皮膚領域の大きさが同一期間の間サンプリングされたときに有利である。サンプル対サンプル変異体に関しては、綿棒で擦ることはあまり正確に定義されなかった領域で行われ、非再現的な方式で行われるが、これは、皮膚の病変領域を綿棒で擦って得られるテストサンプルと同一の大きさを有する、綿棒を用いて、例えば非病変皮膚から得られるテストサンプルを用意し難いということを意味するので、前記インサートを着脱可能に取り付けると、綿棒部材を用いて領域を綿棒で擦ることより有利である。結論的に、着脱可能な取付により、綿棒で擦ることが排除される。
【００６７】
病変皮膚の一例は、炎症皮膚、例えば病変乾癬皮膚であり、非病変皮膚の一例は非炎症皮膚、例えば非病変乾癬皮膚であり得る。
【００６８】
いくつかの実施形態で、前記固定部材は、接着素材のストリップである。
【００６９】
前記テストサンプルを収得する際、再現性及び均一性を向上させようとする場合、前記固定部材２１０は前記分離インサート２００、４１１に圧力を印加して、哺乳類の身体表面２１３に対し、前記分離インサート２００、４１１を加圧するように構成される膨張性レイヤ２１２を含むことができる。前記分離インサートに圧力を印加できる前記膨張性レイヤを構成する１つの方法は、前記膨張性レイヤを前記分離インサートと前記固定部材との間に配置することである。前記膨張性レイヤ２１２は、膨張して、前記分離インサー２００、４１１の前記メンブレン２０１に圧力を印加できるレイヤである。膨張性レイヤには、膨張性ポーチ、スプリングによって作動する装置のような膨張性素材若しくは膨潤性素材が挙げられる。いくつかの実施形態で、前記素材は圧縮セルロースである。圧縮セルロースは水溶液のような液状と接触して、膨潤することで、メンブレン２０１に圧力を印加する。それにより、哺乳類の皮膚に対し、密に加圧することになる。かかる事実は、膨張性レイヤを備えた分離インサートを用いて、皮膚からサンプルを得る場合の標準偏差が、膨張性レイヤを用いない場合に比べ、改善されたことを示す実施例３の表１から分かる。本発明のいくつかの実施形態で、もし前記膨張性レイヤが前記メンブレンと流体連通する、例えば圧縮セルロース以外の素材で製造されると、テストサンプルの一部が前記膨張性レイヤに伝達される恐れがあるので、前記膨張性レイヤは、前記分離インサート２００、４１１と流体連通しない。いくつかの実施形態で、前記膨張性レイヤと前記メンブレンとの間に非活性裏当てレイヤが存在し、テストサンプルが前記膨張性レイヤの内部へ拡散できなくなる。
【００７０】
したがって、本発明のいくつかの実施形態で、剛性支持フレーム２０２に固定されたメンブレン２０１を含む、側方流動分析装置に対する分離インサートであって、前記分離インサートは哺乳類の身体表面２１３からテストサンプルを収得するように構成されている分離インサートが提供され、本発明のいくつかの実施形態で、前記インサートは哺乳類の身体表面２１３に前記インサートを着脱可能に取り付ける２１１ように構成される固定部材２１０をさらに含む。
【００７１】
上述した実施形態は、溶離区域１０１及び検出領域ＤＡを含む側方流動分析装置の本発明の一実施形態を参照しながら説明したが、その場合に前記分離インサートは前記溶離区域１０１である。換言すると、前記分離インサートは、前記溶離区域若しくはサンプル領域に合わせて調整されている。
【００７２】
しかし、本発明は、溶離区域５０１及び検出領域ＤＡを含み、前記分離インサートが前記検出領域ＤＡである側方流動分析装置の実施形態を含む。換言すると、前記分離インサートは前記検出領域に合わせて調整されているが、前記検出領域は、固定されている１つ以上の親和分子を有する検出区域５０５を含むことができる。一旦、前記分離インサートが前記側方流動分析装置の内部に配置されると、前記１つ以上のテストサンプルが前記固定された親和分子に既に結合されているという点で、これは側方流動分析を提供する変形された方式である。
【００７３】
前記分離インサートが前記検出領域ＤＡである、かかる実施形態で、前記テストサンプルが哺乳類の身体表面から収得される際、前記１つ以上のテスト分析物は、検出区域４０５に固定されている前記親和分子に既に結合されているはずであるという点で、前記側方流動分析装置は若干異なって機能する。続いて、前記サンプルパッド４０１に流体を添加し、前記側方流動分析を展開すると、前記接合パッドから得られた検出探針でタグされている前記親和分子が前記検出領域ＤＡの上部に移動し、これらは前記検出区域に固定されていた前記親和分子に既に結合されている１つ以上のテスト分析物に結合することにより、前記テストサンプル内の前記１つ以上のテスト分析物の存在若しくは量を検出する。
【００７４】
本発明のいくつかの実施形態で、前記検出領域ＤＡは、１つ以上のテスト分析物を選択的に保持するための１つ以上の親和分子を含有する検出区域１０５、５０５を含み、選択的に前記接合パッドから得られた検出探針でタグされた親和分子のような１つ以上の親和分子を含有する指示区域１０６、５０６を含む。
【００７５】
親和分子とは、１つ以上の分析物に主に結合し、興味の対象である、かかる分析物を選択的に保持する分子である。一般に、親和分子は、他の分析物に比べ、特定の分析物若しくは特定部類の分析物に対し、より大きな親和力を有する分子である。かかる分子の中から最も注目すべき例には、アドネクチン、アフィボディ、アンチカリン、ノッチン、設計アンキリン反復タンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）及びクーニッツといった改変タンパク質足場（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｃａｆｆｏｌｄｓ）及び有機足場及び／若しくは高分子足場はもちろん、抗体（多クローン）及び／または単クローン及びこれらの断片、アプタマー及び収容体である。
【００７６】
本発明の他の側面から、１つ以上のテスト分析物の存在若しくは量を検出するための方法が提供されるが、前記方法は次の段階を含む。
【００７７】
剛性支持部２０２に固定されたメンブレン２０１を含む、側方流動装置に対する分離インサート２００、４１１であって、前記テストサンプルを収得するように構成されている前記分離インサートを哺乳類の身体表面に着脱可能に取り付ける段階と、少なくとも５分間若しくは十分な量のテストサンプルの収得が終了する間、前記哺乳類の身体表面に、前記分離インサート２００のメンブレンを放置する段階と、前記分離インサート３００、４００を収容するように調整されている側方流動分析装置に前記テストサンプルを含有する前記分離インサートを固定する段階と、前記側方流動分析装置を展開する段階とを含む。
【００７８】
本発明のいくつかの実施形態で、前記分離インサート２００、４１１は、哺乳類の身体表面２１３に前記分離インサートを着脱可能に取り付ける２１１ように構成されている固定部材２１０により、前記身体表面に着脱可能に取り付けられるが、前記固定部材は段階ａ）と段階ｂ）との間に活性化される膨張性レイヤ２１２を含んでおり、前記身体表面に対して前記分離インサートを加圧する力を生成する。
【００７９】
前記分離インサートの前記メンブレンレイヤは、サンプリングの間に前記皮膚に取り付けられるが、十分な量のテストサンプルが収得されたらサンプリングが終了する。いくつかの場合、前記メンブレンレイヤは、少なくとも５分、少なくとも１０分、少なくとも１５分、少なくとも２０分、少なくとも３０分、少なくとも４０分、少なくとも５０分、少なくとも６０分のように少なくとも１分、最大５分、最大１０分、最大１５分、最大２０分、最大３０分、最大４０分、最大５０分、最大６０分のように最大２４時間、前記皮膚に取り付けられると十分である。より迅速な検出が可能になるので、できる限りサンプリング時間を短くすることが好ましい。１分ないし３０分、特に１５分ないし３０分の間、前記メンブレンが皮膚に取り付けられていたり、若しくは前記メンブレンが前記皮膚と流体連通している場合に、本発明のサンプリング方法はサンプリング時間を考慮し、十分に敏感でなければならないという点が予想される。
【００８０】
本発明の実施形態を記述する際に、全ての可能な実施形態の組合及び置換は明示的に記述していない。しかし、特定の手段が互いに異なる従属請求項に上述されていなかったり、或いは他の実施形態で記述されていないという単なる事実は、これら手段の組合が本発明に有利に用いられないということを示すものではない。本発明は記述された実施形態の全ての可能な組合及び置換を考慮する。
【００８１】
本明細書において、用語「含む」は、全ての場合に「構成する」、「構成される」に置き換えることが、本発明者によって意図される。
【００８２】
実施例１：図３に係る装置を用いたＩＬ‐８及びｈＢＤ‐１の検出
本実施例は、側方流動分析装置３００から分離されたサンプルパッド２００の分離インサートがヒトの皮膚からＩＬ‐８及びｈＢＤ‐１を検出する側方流動分析（図３）に用いられることを示す。
【００８３】
0006721501.tif 000002
【００８４】
テスト敏感度の測定
泳動バッファーに分析物のＩＬ‐８及びｈＢＤ‐１を、０．２５ｎｇ／ｍｌ、１．２５ｎｇ／ｍｌ濃度に希釈し、この特別なセットアップ装置の敏感度を測定するために用いた（図６ａ）。テストのため、分析物をサンプルパッドに添加（５０μｌ）し、分析カセットを組立てて泳動バッファーを１００μｌ添加した。
【００８５】
図６ａの側方流動ストリップは、ＩＬ‐８の視覚的検出濃度が約１ｎｇ／ｍｌであり、ｈＢＤ‐１の視覚的検出濃度が約０．２５ｎｇ／ｍｌであることを示す。
【００８６】
皮膚からＩＬ‐８及びｈＢＤ‐１を分析するため、サンプルパッド２００を２５μｌのミリＱ水で湿潤させ、１５分間、接触皮膚炎の皮膚の病変領域と接触させ、側方流動分析カセット３１０の内部に挿入した後、１００μｌの泳動バッファーを添加して展開させた。
【００８７】
図６ｂに側方流動ストリップが示されているが、皮膚表面から収得されたサンプルからＩＬ‐８及びｈＢＤ‐１（右側）が検出できることが分かる。コントロールが示されている（左側）。
【００８８】
実施例２：図４に係る装置を用いたＩＬ‐８及びｈＢＤ‐１の検出
本実施例は、側方流動分析装置４００から分離された検出領域４１１、５０７の分離インサートがヒトの皮膚からＩＬ‐８及びｈＢＤ‐１を検出する側方流動分析に用いられることを示す。
【００８９】
0006721501.tif 000003
【００９０】
テスト敏感度の測定
泳動バッファーに分析物のＩＬ‐８及びｈＢＤ‐１を、０．２５ｎｇ／ｍｌ、１．２５ｎｇ／ｍｌ濃度に希釈し、この特別なセットアップ装置の敏感度を測定するために用いた（図７Ａ）。テストのため、分析物を検出領域のメンブレンに添加（５０μｌ）し、分析カセットを組立して泳動バッファーを１００μｌ添加した。
【００９１】
図７Ａの側方流動ストリップは、ＩＬ‐８の視覚的検出濃度が約１ｎｇ／ｍｌであり、ｈＢＤ‐１の視覚的検出濃度が約０．２５ｎｇ／ｍｌであることを示す。
【００９２】
皮膚からＩＬ‐８及びｈＢＤ‐１を分析するため、検出領域４１１、５０７を２５μｌのミリＱ水で湿潤させ、１５分間、接触皮膚炎の皮膚の病変領域と接触させ、側方流動分析カセット４１０の内部に挿入した後、１００μｌの泳動バッファーを添加して展開させた。
【００９３】
図７Ｂに側方流動ストリップが示されているが、皮膚表面から収得されたサンプルからＩＬ‐８及びｈＢＤ‐１（右側）が検出できることが分かる。コントロールが示されている（左側）。
【００９４】
実施例３：膨張性レイヤ２１２の効果を示す実施例
サンプリング段階で膨張性レイヤの効果をテストした。ヒトの皮膚からＩＬ‐８及びｈＢＤ‐１を検出するため、側方流動装置のサンプルパッド構成（図１、２、３）を用い、皮膚の分析における安定的、且つ信頼性のある結果が得られることを示す。
【００９５】
0006721501.tif 000004
【００９６】
膨張性レイヤを備えるか、若しくは備えていないサンプルパッドを用いて得られた分析結果を比較すると、下記の表１から明らかなように、膨張性レイヤは分析結果の再現性及び品質を向上させることが分かる。
【００９７】
下記の表は、検出濃度と皮膚の分析結果の偏差から膨張性レイヤの効果を示す。２つの異なる捕獲抗体であるＩＬ‐８及びｈＢＤ‐１を有する、膨張性素材を備えるか若しくは備えていないサンプルパッド（膨張性素材がないサンプルパッドで、前記膨張性素材は非膨張性素材に代替）を４人の個人に着脱可能に固定させた後、それぞれミリＱ水（１５０μｌ）で湿潤させ、３つのパッチを用いてそれぞれの個人を分析した。サンプルパッドを接触皮膚炎の皮膚領域に１５分間、晒した後、同一の処理を行った。分析濃度は、標準曲線と側方流動ストリップ判読器を用いて定量化した。平均濃度、標準偏差、標準偏差のパーセンテージ（％）を算出した。
【００９８】
【表１】
0006721501.tif 000005
【００９９】
判読結果から、膨張性レイヤのないサンプルパッドに比べ、サンプルパッドに膨張性レイヤがある装置は、有意味に分析物の高い値をもたらし、有意味に低い標準偏差及び標準偏差のパーセンテージをもたらすことが分かる。
【０１００】
前記膨張性レイヤによって生成される定圧により、前記膨張性レイヤを備える装置から得られた、さらに高い敏感度及び低い偏差は、皮膚に対するサンプルパッドの素材の確実で均一な接触に関連している。
【図１−１】
0006721501.tif 000006
【図１−２】
0006721501.tif 000007
【図２ａ）】
0006721501.tif 000008
【図２ｂ）】
0006721501.tif 000009
【図２ｃ）】
0006721501.tif 000010
【図２ｄ）】
0006721501.tif 000011
【図３ａ）】
0006721501.tif 000012
【図３ｂ）】
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【図４ａ）】
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【図４ｂ）】
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【図４ｃ）】
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【図４ｄ）】
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【図５ａ）】
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【図５ｂ）】
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【図６ａ）】
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【図６ｂ）】
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【図７ａ）】
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【図７ｂ）】
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