(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
赤血球及び血漿を含む生体由来液を処理するフィルターであって、担体と、該担体に担持されたポリマーとを有し、前記ポリマーが、ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートと、双性イオンを含む官能基と、塩基性含窒素官能基と、を有し、前記塩基性含窒素官能基が、−ＮＨ2，−ＮＨＲ1又は−ＮＲ2Ｒ3（Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3は炭素数１〜３のアルキル基）であり、
前記ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレート（ｌ）と、前記塩基性含窒素官能基を有するモノマー単位（ｍ）と、前記双性イオンを含む官能基を有するモノマー単位（ｎ）と、のモル比が、前記ポリマーを構成するモノマー単位のモル比の全体を１００として、
ｌ＋ｍ＋ｎ＝１００，
０＜ｌ，ｍ，ｎ＜１００
の関係を満たす、
生体由来液処理フィルター。
【請求項２】
前記ポリマーが、前記担体１ｇあたり１．０ｍｇ以上３２．５ｍｇ以下の量で担持されている、請求項１に記載の生体由来液処理フィルター。
【請求項３】
前記双性イオンを含む官能基が、カルボベタイン、スルホベタイン、及びホスホベタインからなる群より選ばれた少なくとも一種に由来する、請求項１又は２に記載の生体由来液処理フィルター。
【請求項４】
前記ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレート（ｌ）と、前記塩基性含窒素官能基を有するモノマー単位（ｍ）と、前記双性イオンを含む官能基を有するモノマー単位（ｎ）と、のモル比が、ｌ／ｍ／ｎ＝４０．０〜９７．０／１．５〜３２．５／１．５〜３２．５である、請求項１〜３のいずれかに記載の生体由来液処理フィルター。
【請求項５】
前記ポリマーにおける前記塩基性含窒素官能基を有するモノマー単位が、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートである、請求項１〜４のいずれかに記載の生体由来液処理フィルター。
【請求項６】
前記ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートが、ヒドロキシエチル（メタ）アクリレートであり、前記Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートが、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレートであり、前記双性イオンを有する官能基がメタクリル酸メチルベタインである、請求項５に記載の生体由来液処理フィルター。
【請求項７】
前記ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートが、ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレートであり、前記Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートが、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレートであり、前記双性イオンを有する官能基がメタクリル酸メチルベタインである、請求項５に記載の生体由来液処理フィルター。
【請求項８】
前記担体の材質が、ポリエチレンテレフタラート又はポリブチレンテレフタラートである、請求項１〜７のいずれかに記載の生体由来液処理フィルター。
【請求項９】
前記担体が不織布である、請求項１〜８のいずれかに記載の生体由来液処理フィルター。
【請求項１０】
血小板除去用である、請求項１〜９のいずれかに記載の生体由来液処理フィルター。
【請求項１１】
赤血球及び血漿を含む生体由来液体を処理するフィルターデバイスであって、生体由来液体の入口及び出口を備えたハウジングと、前記ハウジング内に収容された請求項１〜１０のいずれかに記載の生体由来液処理フィルターと、を具備するフィルターデバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は赤血球及び血漿を含む生体由来液処理フィルター及びフィルターデバイスに関する。
【背景技術】
【０００２】
輸血分野においては、血液製剤中に含まれる混入白血球を除去した後に輸血を行う白血球除去輸血が一般的になっている。これは輸血にともなう頭痛、吐気、悪寒等の副作用や、受血者により深刻な影響を及ぼすアロ抗原感作、輸血後移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）、及びウイルス感染等の重篤な副作用が、主として輸血に用いられた血液製剤中に混入している白血球が原因となって引き起こされることが明らかになった為である。
【０００３】
血小板についても、輸血を受けた者の体内で抗血小板抗体が生成されることが明らかになり、抗血小板抗体の生成を抑制するためにも、血小板が除去された血液製剤の需要が高まる一方である。
【０００４】
血液浄化の分野においても、敗血症や全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）をはじめとする炎症状態の患者から白血球を体外循環フィルターデバイスで除去することにより、サイトカイン、及びアラーミンといった生理活性物質の産生を抑制する事で、炎症状態を治療する白血球除去療法が注目されている。
【０００５】
これら血液や血液製剤といった赤血球を含む生体由来液を処理する為のフィルターには、目標とするものの除去能力と同時に、赤血球への溶血等の悪影響を与えないことが要求される。
【０００６】
赤血球を含む生体由来液より、白血球や血小板を除去するフィルターに関して、特許文献１は、担体表面に４級アミンのアルキルスルホン酸を含んだポリマーをコーティングし、該表面をカチオン化及び親水化することにより、白血球及び血小板の双方との相互作用を上げて、双方を効率よく除去できるというフィルター及びフィルターデバイスを開示している。
【０００７】
また、特許文献２は、メチル（メタ）アクリレート及びジメチルアミノエチルアクリレート等の塩基性モノマーと、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート等のプロトン性中性親水性モノマーと、を含むポリマーを担体表面にコーティングすることで、白血球及び血小板を除去し、血液のプライミング性に優れるというフィルター及びフィルターデバイスを開示している。特許文献３は、塩基性官能基及び酸性官能基の両方を別々のモノマーにて導入した表面により、白血球除去性能を向上させるという技術を開示している。
【０００８】
特許文献４は、ポリマーがカチオン性であることによる赤血球へのダメージを抑えるために、カチオン性モノマーの影響を緩和し、溶血を防ぐための非イオン性モノマーをポリマー組成として加えた３元系ポリマーで担体表面をコーティングすることにより、白血球除去性能、及び溶血防止性を両立させるという技術を開示している。
【０００９】
特許文献５は、同様の考え方によって、酸性官能基を側鎖に有するモノマーをポリマー組成として加えた３元系ポリマーで担体表面をコーティングすることで、白血球除去能、及び溶血防止性を両立させるという技術を開示している。
【００１０】
特許文献６は、血液と接触する物質表面において、双性イオンを有する官能基と、第四級アミンなどのカチオンを永続的に有する官能基と、を導入することで、血液中の血球や血漿タンパク質の表面付着を遅らせると共に、血中に凝固剤として含まれるヘパリンで表面をコートすることにより、材料の血液適合性を向上させる技術を開示している。
【００１１】
非特許文献１は、親水性のポリヒドロキシエチルメタクリレート（ＰＨＥＭＡ）の表面を血清でプレコートすると、白血球の粘着量の顕著な増大が認められたと報告している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】特開２０００−１９７８１４号公報
【特許文献２】特許４２５２４４９号公報
【特許文献３】特開平８−２８１１００号公報
【特許文献４】国際公開第２００６／０１６１６３号公報
【特許文献５】国際公開第２００６／０１６１６６号公報
【特許文献６】特許第４２９５３５９号公報
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】岡野光夫ら、「免疫工学用材料の開発  ポリマー表面上における抗体の吸着、配向の制御とその応用」、人工臓器１０巻１号、１９８１年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、赤血球及び血漿を含む生体由来液を、赤血球へ悪影響を与えずに処理することのできる、生体由来液処理フィルター及びフィルターデバイスを提供する事を目的とする。
【００１５】
特許文献１に開示された技術においては、４級アミンのアルキルスルホン酸塩を含むモノマー単位を含有するポリマーを、また特許文献２に開示された技術においては、塩基性含窒素官能基を含むモノマー単位とプロトン性中性親水基を含むモノマー単位とを含有するポリマーを、担体表面にコーティングすることにより、親水性を向上させてフィルターへの濡れ性改善を試み、白血球除去性能、及び血小板除去性能の向上を目指している。しかしながら、本発明者らが特許文献１及び２に記載のフィルターで血液を処理したところ、フィルターへの赤血球付着や赤血球の溶血の問題があった。
【００１６】
特許文献３は、塩基性官能基及び酸性官能基の両方を別々のモノマーにて導入した表面により白血球除去性能を向上させる技術を開示しているが、赤血球の溶血性については言及がない。特許文献３においては、塩基性官能基及び酸性官能基を導入する方法として両性化学種であるモノマーを用いることが一手段として言及されているが、両性化学種を用いた場合に、塩基性官能基と酸性官能基を別々のモノマーによって導入した場合と同じく白血球除去性能を向上できるか否かは開示されていない。この点において、本発明者らが、塩基性官能基と酸性官能基の両方を有するメタクリル酸エチルベタインを導入した表面を評価したところ、白血球除去性能の向上は認められなかった。
【００１７】
特許文献４に開示された技術においては、塩基性含窒素官能基のアニオン性を緩和する為にポリマーの第３の成分としてＭＭＡ（メチルメタクリレート）やＤＥＧＭＥＭＡ（ジエチレングリコールメトキシエチルメタクリレート）等の非イオン性モノマーを加えた３元系ポリマーで担体表面をコーティングすることで、白血球除去能と溶血防止性の両立を試みているが、溶血性の防止は不十分であった。
【００１８】
また、特許文献５に開示された技術においても、特許文献４と同様の考え方により、カチオン性官能基を有するモノマーを第３成分として加えた３元系ポリマーで担体表面をコーティングする事で、白血球除去性能と溶血防止性の両立を試みているが、こちらも溶血性の防止は不十分であった。
【００１９】
特許文献６には、双性イオン基と、カチオンを永続的に有する第四級アミンと、が同時に導入された生体適合ポリマーが開示されているが、当該ポリマーを導入した表面の白血球除去性能及び赤血球の溶血性についての言及はない。この点において、本発明者らが、双性イオンを含む官能基と第四級アミンとを有するメタクリル酸ジエチル塩化アンモニウムとを含むポリマーでコーティングした表面を評価したところ、溶血性の防止が不十分であった。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートと、双性イオンを含む官能基と、塩基性含窒素官能基と、を有するポリマーを担持する担体を有するフィルターを用いることで、赤血球へ悪影響を及ぼすことなく、赤血球及び血漿を含む生体由来液を処理できることを見出し、本発明を完成した。
【００２１】
すなわち、本発明の態様は、赤血球及び血漿を含む生体由来液を処理するフィルターであって、担体と、該担体に担持されたポリマーとを有し、ポリマーが、ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートと、双性イオンを含む官能基と、塩基性含窒素官能基と、を有し、塩基性含窒素官能基が、−ＮＨ2，−ＮＨＲ1又は−ＮＲ2Ｒ3（Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3は炭素数１〜３のアルキル基）である、生体由来液処理フィルターである。
【００２２】
上記の生体由来液処理フィルターにおいて、ポリマーが、担体１ｇあたり１．０ｍｇ以上３２．５ｍｇ以下の量で担持されていてもよい。上記の生体由来液処理フィルターにおいて、双性イオンを含む官能基が、カルボベタイン、スルホベタイン、及びホスホベタインからなる群より選ばれた少なくとも一種に由来してもよい。
【００２３】
上記の生体由来液処理フィルターにおいて、ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレート（ｌ）と、塩基性含窒素官能基を有するモノマー単位（ｍ）と、双性イオンを含む官能基を有するモノマー単位（ｎ）と、のモル比が、ポリマーを構成するモノマー単位のモル比の全体を１００として、
ｌ＋ｍ＋ｎ＝１００，
０＜ｌ，ｍ，ｎ＜１００
の関係を満たしてもよい。
【００２４】
上記の生体由来液処理フィルターにおいて、ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレート（ｌ）と、塩基性含窒素官能基を有するモノマー単位（ｍ）と、双性イオンを含む官能基を有するモノマー単位（ｎ）と、のモル比が、ｌ／ｍ／ｎ＝４０．０〜９７．０／１．５〜３２．５／１．５〜３２．５であってもよい。
【００２５】
上記の生体由来液処理フィルターにおいて、ポリマーにおける塩基性含窒素官能基を有するモノマー単位が、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートであってもよい。
【００２６】
上記の生体由来液処理フィルターにおいて、ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートが、ヒドロキシエチル（メタ）アクリレートであり、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートが、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレートであり、双性イオンを有する官能基が、メタクリル酸メチルベタインであってもよい。
【００２７】
上記の生体由来液処理フィルターにおいて、ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートが、ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレートであり、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートが、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレートであり、双性イオンを有する官能基が、メタクリル酸メチルベタインであってもよい。
【００２８】
上記の生体由来液処理フィルターにおいて、担体の材質が、ポリエチレンテレフタラート又はポリブチレンテレフタラートであってもよい。あるいは、担体が、不織布であってもよい。
【００２９】
また、本発明の態様は、赤血球及び血漿を含む生体由来液体を処理するフィルターデバイスであって、生体由来液体の入口及び出口を備えたハウジングと、ハウジング内に収容された上記の生体由来液処理フィルターと、を具備するフィルターデバイスである。
【発明の効果】
【００３０】
本発明によれば、赤血球へ悪影響を与えずに赤血球及び血漿を含む生体由来液を処理することのできる、生体由来液処理フィルター及びフィルターデバイスを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】一実施形態に係る生体由来液処理フィルターデバイスを示す分解斜視図である。
【図２】一実施形態に係る血液製剤濾過システムを示す模式図である。
【図３】実施例におけるモノマー組成、コーティング量、担体材料、及び評価結果を示す表である。
【図４】比較例及び参考例におけるモノマー組成、コーティング量、担体材料、及び評価結果を示す表である。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
以下、本発明の好適な実施の形態（以下において、「本実施形態」という。）について詳細に説明する。なお以下の示す本実施形態は、この発明の技術的思想を具体化するための装置や方法を例示するものであって、この発明の技術的思想は構成部材の組み合わせ等を下記のものに特定するものではない。この発明の技術的思想は、特許請求の範囲において種々の変更を加えることができる。
【００３３】
本実施形態に係る赤血球及び血漿を含む生体由来液を処理するフィルターは、担体と、担体に担持されたポリマーと、を備え、ポリマーが、非イオン性基を有するモノマー単位であるヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートと、双性イオンを含む官能基と、塩基性含窒素官能基と、を有する。さらに、塩基性含窒素官能基は、−ＮＨ2，−ＮＨＲ1又は−ＮＲ2Ｒ3（Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3は炭素数１〜３のアルキル基）である。
【００３４】
赤血球及び血漿を含む生体由来液とは、生体に由来する液体であって赤血球が分散されたもののうち血漿を含有するものを全て包含し、具体的には血液や、血液から調製された血液製剤が含まれる。ポリマーは、例えば担体にコーティングされることによって担持される。以下、担体に担持されたポリマーを、「コーティングポリマー」ともいう。ただし、担体にポリマーを担持させる方法は、これに限定されない。
【００３５】
（コーティングポリマー）
本実施形態に係るフィルターに含まれるポリマーは、ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートと、双性イオンを含む官能基と、−ＮＨ2，−ＮＨＲ1又は−ＮＲ2Ｒ3（Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3は炭素数１〜３のアルキル基）である塩基性含窒素官能基と、を含有する。
【００３６】
ポリマーは、少なくとも、ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートと、双性イオンを含む官能基を有するモノマーと、塩基性含窒素官能基を有するモノマーと、の共重合体である。共重合体は、ランダム共重合体であってもよく、ブロック共重合体であってもよい。
【００３７】
双性イオンを含む官能基としては、下記一般式（１），（２），（３）で表される官能基が挙げられる。
【化１】
0006705685.tif 000002
【００３８】
一般式（１）は、カルボベタインを示す。一般式（１）中、Ｒ1は炭素数１以上のアルキル基である。
【化２】
0006705685.tif 000003
【００３９】
一般式（２）は、スルホベタインを示す。一般式（２）中、Ｒ2は炭素数１以上のアルキル基である。
【化３】
0006705685.tif 000004
【００４０】
一般式（３）は、ホスホベタインを示す。一般式（３）中、Ｒ3は炭素数１以上のアルキル基である。
【００４１】
一般式（１），（２），（３）で表される双性イオンを含む官能基のうち、経済性の面から好ましいのは、下記一般式（４）で表されるメタクリル酸メチルベタインに由来する官能基である。
【化４】
0006705685.tif 000005
【００４２】
塩基性含窒素官能基は、ブレンステッド・ローリーの酸塩基の定義より水素イオンを受容する能力を有する窒素原子を含む官能基として定義されることができる。すなわち、水素イオンを受容するための非共有電子対を有する−ＮＨ2，−ＮＨＲ1，−ＮＲ2Ｒ3（Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3は炭素数１〜３のアルキル基）で表されるアミノ基である。
【００４３】
一般に白血球等の生体の細胞は負の電荷を有する為、フィルターにおける上記の塩基性含窒素官能基の非共有電子対が水素イオンを受容した後にカチオン性を有することで、白血球と相互作用し、結果としてフィルターが白血球を除去できると考えられる。しかしながら、第四級アミンの様に溶液のｐＨ等の環境に依らずカチオンを示す官能基が存在すると、カチオン性が強くなりすぎ、赤血球を溶血させてしまう可能性が高まる。そのためカチオン性を付与する官能基として、−ＮＨ2，−ＮＨＲ1，−ＮＲ2Ｒ3で表される塩基性含窒素官能基が用いられる。
【００４４】
塩基性含窒素官能基を有する化合物の典型的な例としてはＮ，Ｎ−ジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートが挙げられ、中でも入手の容易性や経済性を勘案するとＮ，Ｎ−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレートが好ましい。
【００４５】
以下の理論に拘束されるものではないが、同じ側鎖内に正荷電と負荷電が存在する双性イオンを含む官能基によって正荷電と負荷電を担体に導入することにより、特定の荷電がフィルター表面に局在することがないため、赤血球同志の相互作用を緩和することができ、溶血性を低減できているものと考えられる。また双性イオンを含む官能基と塩基性含窒素官能基とを含むポリマー構成単位とすることにより、塩基性含窒素官能基で導入される正電荷により白血球除去性能の向上を図りつつ、組み合わされた双性イオンを含む官能基によって赤血球同志の相互作用を緩和し溶血防止性能も発揮することができているものと考えられる。さらに、ポリマーがヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートを含有することにより、白血球除去性能が向上するものと考えられる。
【００４６】
より高い溶血防止性を発揮させる観点で、双性イオンを含む官能基を有するモノマー単位の割合はコーティングポリマーが有するモノマー単位全体に対してモル比で１．５％以上が好ましい。全モノマー単位に対する双性イオンを含む官能基を有するモノマー単位の割合は、ポリマーを可溶な溶媒に抽出し、核磁気共鳴（ＮＭＲ）測定、アミノ基量測定、を組み合わせて算出することができる。
【００４７】
白血球除去及び／又は血小板除去用途のフィルターの場合、コーティングポリマーは、ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートと、塩基性含窒素官能基を有するモノマー単位と、側鎖に双性イオン含む官能基を有するモノマー単位と、からなり、これら以外のモノマー単位は含まないことが好ましい。換言すれば、コーティングポリマーを構成するモノマー単位のモル比の全体を１００として、コーティングポリマーに含まれるヒドロキシアルキル（メタ）アクリレート（ｌ）と、塩基性含窒素官能基を有するモノマー単位（ｍ）と、側鎖に双性イオン含む官能基を有するモノマー単位（ｎ）と、のモル比が、ｌ＋ｍ＋ｎ＝１００，０＜ｌ，ｍ，ｎ＜１００であるのが好ましい。モル比が上記範囲内にあることにより、溶血等の赤血球のダメージを抑えつつ、優れた白血球除去性能及び血小板除去性能を実現できる。双性イオンを含む官能基を有するモノマー単位のモル比が３２．５％を上回り、塩基性含窒素官能基を有するモノマー単位のモル比が１．５％を下回ると、赤血球の溶血には問題はないものの、白血球除去性能及び血小板除去性能が低下する傾向にある。溶血防止効果を確保しつつ、白血球除去及び／又は血小板除去の効果をより一層発揮するという観点から、コーティングポリマーに含まれるヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートと、塩基性含窒素官能基を有するモノマー単位と、双性イオンを含む官能基を有するモノマー単位と、のモル比は、例えば４０．０〜９７．０／１．５〜３２．５／１．５〜３２．５であり、好ましくは４０．０〜９５．０／２．５〜３０．０／２．５〜３０．０であり、より好ましくは５０．０〜９５．０／２．５〜３０．０／２．５〜３０．０であり、さらに好ましくは６０．０〜９５．０／２．５〜３０．０／２．５〜３０．０である。
【００４８】
コーティングポリマーに含まれるヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートと、塩基性含窒素官能基を有するモノマー単位と、双性イオンを含む官能基を有するモノマー単位と、のモル比の測定及び算出手順を、ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートと、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートと、メタクリル酸メチルベタインと、を例に説明する。まず、コーティングポリマーをジメチルスルホキシド等の適切な溶媒へ溶解後、プロトン核磁気共鳴（1Ｈ−ＮＭＲ）測定を行う。得られた1Ｈ−ＮＭＲから、すべてのモノマー単位に含まれるＨに帰属するピーク（０．３−１．３ｐｐｍのピークと１．３−２．２ｐｐｍのピーク）からモノマー単位の全体量を求める。次に、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートに含まれるＨに帰属されるピーク（２．６ｐｐｍ）と、双性イオンを側鎖に有するモノマー単位に含まれるＨに帰属するピーク（３．７ｐｐｍ）から、各々の量を求める。さらに、モノマー単位の全体量から、先に求めた２つのモノマー単位の量を差し引いた残りを、ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートの量として、ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートと、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートと、メタクリル酸メチルベタインとの存在比を算出する。
【００４９】
（ポリマーの原料）
ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートとしては、例えば、ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート及びヒドロキシプロピル（メタ）アクリレートが挙げられる。
【００５０】
上述の式（１）〜（３）で表される双性イオンを含む官能基を有するポリマーを合成するためには、下記一般式（５），（６），（７）で表される化合物を原料としてポリマーを合成するのが好ましい。
【化５】
0006705685.tif 000006
【００５１】
一般式（５）中、Ｒ5，Ｒ6は、Ｈ又は炭素数１〜３のアルキル基であり、Ｒ4，Ｒ7は、ＣＨ2−ＣＨ2、ＣＨ2−ＣＨＲa、ＣＨＲa−ＣＨ2、ＣＨＲa−ＣＨＲb、ＣＨＲa−ＣＲbＲc、ＣＲaＲb−ＣＨＲc、ＣＲａＲb−ＣＲcＲd、及び（ＣＨ2）g（ｇ＝２〜６の整数）のいずれかであり、Ｒa，Ｒb，Ｒc，Ｒdは、炭素数１〜３のアルキル基である。
【化６】
0006705685.tif 000007
【００５２】
一般式（６）中、Ｒ9，Ｒ11は、Ｈ又は炭素数１〜３のアルキル基であり、Ｒ8，Ｒ10は、ＣＨ2−ＣＨ2、ＣＨ2−ＣＨＲa、ＣＨＲa−ＣＨ2、ＣＨＲa−ＣＨＲb、ＣＨＲa−ＣＲbＲc、ＣＲaＲb−ＣＨＲc、ＣＲaＲb−ＣＲcＲd、及び（ＣＨ2）g（ｇ＝２〜６の整数）のいずれかであり、Ｒa，Ｒb，Ｒc，Ｒdは炭素数１〜３のアルキル基である。
【化７】
0006705685.tif 000008
【００５３】
一般式（７）中、Ｒ14，Ｒ15，Ｒ16は、Ｈ又は炭素数１〜３のアルキル基であり、Ｒ12，Ｒ13は、ＣＨ2−ＣＨ2、ＣＨ2−ＣＨＲa、ＣＨＲa−ＣＨ2、ＣＨＲa−ＣＨＲb、ＣＨＲa−ＣＲbＲc、ＣＲaＲb−ＣＨＲc、ＣＲaＲb−ＣＲcＲd、及び（ＣＨ2）g（ｇ＝２〜６の整数を表す）のいずれかであり、Ｒa，Ｒb，Ｒc，Ｒdは、炭素数１〜３のアルキル基である。
【００５４】
塩基性含窒素官能基をポリマーに導入するためのモノマーとしては、例えば、下記一般式（８）で表される化合物が挙げられる。
【化８】
0006705685.tif 000009
【００５５】
一般式（９）中、Ｒ19，Ｒ21，Ｒ22は、Ｈ、又は炭素数１〜３のアルキル基、フェニル基、及びこれらの誘導体のいずれかであり、Ｒ20は、ＣＨ2−ＣＨ2、ＣＨ2−ＣＨＲa、ＣＨＲa−ＣＨ2、ＣＨＲa−ＣＨＲb、ＣＨＲa−ＣＲbＲc、ＣＲaＲb−ＣＨＲc、ＣＲaＲb−ＣＲcＲd、及び（ＣＨ2）e（ｅ＝２〜６の整数を表す）のいずれかであり、Ｒa，Ｒb，Ｒc，Ｒdは、炭素数１〜３のアルキル基である。
【００５６】
一般式（９）で表されるモノマーの典型例としてはＮ，Ｎ−ジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートが挙げられ、中でも入手の容易性や経済性を勘案するとＮ，Ｎ−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレートが好ましい。
【００５７】
（担体）
担体の材質は、赤血球を含む生体由来液を処理するフィルターとして使用されるものであれば特に制限されるものではないが、熱可塑性ポリマーであることが好ましい。担体の材質が熱可塑性ポリマーであると、溶融させて紡糸を行うことが可能であるため、例えば、メルトブロー法、フラッシュ紡糸法又は抄造法等により、不織布、紙、織布又はメッシュの形態にすることができる。このような形態の自由度の観点から、担体の材質は、ポリエチレンテレフタラート又はポリブチレンテレフタラートであることがより好ましい。
【００５８】
担体の形態としては、例えば、不織布、紙、織布、メッシュ、粒子、及び中空糸が挙げられ、中でも不織布が好ましい。なお、不織布とは、編織に依らず繊維又は糸の集合体が、化学的、熱的又は機械的に結合された布状のものをいう。
【００５９】
担体が、不織布又は織布の場合、その平均繊維直径は０．３μｍ〜１０．０μｍとすることができ、０．３μｍ〜３．０μｍであることが好ましく、０．５μｍ〜１．８μｍであること更に好ましい。平均繊維直径が０．３μｍ以上である場合、血液をろ過する際の圧力損失が適度である。また、１０．０μｍ以下である場合、白血球除去性能及び血小板除去性能がより顕著に発揮される傾向にあるので、これらの用途に好適である。
【００６０】
ここで平均繊維直径とは、フィルターを構成する不織布又は織布から一部をサンプリングし、電子顕微鏡で観察した写真により測定した平均直径である。
【００６１】
（フィルター）
フィルターにおいて、コーティングポリマーは、担体に担持されており、その担持量（「コーティング量」ともいう。）は、担体１ｇあたり１．０ｍｇ以上３２．５ｍｇ以下、好ましくは２．０ｍｇ以上３２．０ｍｇ以下、より好ましくは２．５ｍｇ以上３１．５ｍｇ以下である。コーティング量が担体１ｇあたり１．０ｍｇ以上であると、フィルターの赤血球を含む生体由来液への濡れ性が高く、フィルターの流れ性が良いため、フィルターの一部が使われないエアーブロックを起し難い。また、ポリマーの赤血球を含む生体由来液への溶出及び溶血を防止する観点で、コーティング量は担体１ｇあたり３２．５ｍｇ以下が好ましい。ここで、担持とは、コーティングポリマーが、例えば、化学的、物理的又は電気的に担体と結合又は吸着していることを意味する。
【００６２】
コーティング量は、以下の手順により算出される。コーティングポリマーを担持させる前の担体を６０℃に設定した乾燥機中で１時間乾燥させた後、デシケーター内に１時間以上放置した後に重量（Ａｇ）を測定する。コーティングポリマーを担持させた担体（フィルター）を同様に６０℃の乾燥機中で１時間乾燥させた後、デシケーター内に１時間以上放置した後に重量（Ｂｇ）を測定する。コーティング量は以下の算出式により算出される。
コーティング量（ｍｇ／ｇ担体）＝（Ｂ−Ａ）×１０００／Ａ
【００６３】
本実施形態に係るフィルターは、赤血球を含む生体由来液を、赤血球へ悪影響を与えずに処理することができるため、赤血球を含む血液製剤用の白血球及び／又は血小板除去フィルターデバイス用のフィルターや、患者血液から活性化した白血球を除去する為の体外循環治療フィルターデバイス用フィルターとして好適に用いられる。赤血球を含む血液製剤としては、例えば、全血製剤、及び赤血球製剤が挙げられる。上記効果を鑑みれば、赤血球を含む血液製剤は、輸血用製剤であることが好ましい。
【００６４】
体外循環治療用フィルターデバイスの治療対象疾患としては、敗血症、全身炎症性症候群（ＳＩＲＳ）、リウマチ、及び潰瘍性大腸炎等、白血球による過剰な生理活性物質の放出が原因の一つである疾患であれば適用可能である。
【００６５】
本発明の一実施形態において、赤血球を含む血液製剤用白血球及び血小板除去フィルター及びフィルターデバイスが提供される。
【００６６】
（フィルターの製造方法）
フィルターは、上述した担体に、上述したコーティングポリマーを担持させることにより得ることができる。担持方法、具体的にはコーティング方法は、特に限定はされないが、例えば、塗布法、スプレー法、ディップ法を用いることができる。
【００６７】
ディップ法は、アルコール、クロロホルム、アセトン、テトラヒドロフラン、又はジメチルホルムアミド等の適当な有機溶媒に上述したコーティングポリマーを溶解したコーティング液中に、担体を浸漬させた後、余分な溶液を取り除き、ついで風乾等の適切な手段により乾燥させることにより実施できる。乾燥方法としては、乾燥気体中での風乾する方法、減圧雰囲気中で常温又は加熱しながら乾燥を行う方法などがある。
【００６８】
塗布法及びスプレー法は、上記コーティング液を担体に塗布又はスプレーした後、上述のように乾燥させることにより実施できる。
【００６９】
（生体由来液処理フィルターデバイス）
図１は、一実施形態に係る生体由来液処理フィルターデバイスを示す分解斜視図である。図１に示す生体由来液処理フィルターデバイス１００は、赤血球を含む血液製剤の入口１を有する樹脂製治具１０と、血液製剤の出口２を有する樹脂製治具１１とを備え、樹脂製治具１０及び樹脂製治具１１で形成されたハウジング内に本実施形態に係るフィルター２０を９枚重ねたフィルターユニット２１を含んでなる。フィルターユニット２１におけるフィルター２０の枚数は、特に制限はなく、適宜設定してよい。また、樹脂製治具１０及び樹脂製治具１１は、融着、接着剤による接着等により、結合していてもよい。
【００７０】
図２は、一実施形態に係る生体由来液処理システムを示す模式図である。図２に示す生体由来液処理システム２００は、処理前生体由来液２１０を収容したシリンジポンプ１１０と、生体由来液処理フィルターデバイス１００と、処理後生体由来液２２０を収容する容器１３０とを備える。シリンジポンプ１１０と生体由来液処理フィルターデバイス１００は、チューブ１４０により連結されている。また、生体由来液処理フィルターデバイス１００と容器１３０は、チューブ１５０により連結されている。
【００７１】
シリンジポンプ１１０からチューブ１４０を介して移送された処理前生体由来液２１０は、生体由来液処理フィルターデバイス１００で処理され、白血球及び血小板が除去される。生体由来液処理フィルターデバイス１００で処理前生体由来液２１０が濾過される際の圧力は、圧力計１２０で計測される。生体由来液処理フィルターデバイス１００は、上述した本実施形態に係るフィルターを含んでいるため、処理後生体由来液２２０は赤血球の溶血等が生じていない。処理後生体由来液２２０は容器１３０に収容される。例えば生体由来液が血液製剤であれば、輸血用血液製剤として使用される。
【実施例】
【００７２】
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例によって限定されるものではない。
【００７３】
［実施例１］
（コーティングポリマーの合成及びモル比測定）
ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート（ＨＥＭＡ）と、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレート（ＤＥＡＥＭＡ）と、メタクリル酸メチルベタイン（ＣＭＢ）と、の共重合体を通常の溶液重合によって合成した。重合条件は、各モノマー濃度が１モル／Ｌのエタノール溶液に、開始剤としてアゾイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）０．００２５モル／Ｌ存在下、６０℃で８時間重合反応を行った。得られたポリマー重合液を水中に滴下し、析出したポリマーを回収した。回収したポリマーは粉砕した後、減圧条件下で２４時間乾燥してコーティングポリマーを得た。
【００７４】
コーティングポリマー中のヒドロキシエチル（メタ）アクリレートモノマーと、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレートモノマーと、メタクリル酸メチルベタインと、のモル比は、得られたコーティングポリマーをジメチルスルホキシドへ溶解した後、1Ｈ−ＮＭＲ測定を行うことにより算出した結果、ヒドロキシエチル（メタ）アクリレートと、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレートと、メタクリル酸メチルベタインと、のモル比は、７０．０／１０．０／２０．０であった。
【００７５】
（コーティング液の調製）
上記コーティングポリマーを９０Ｗ／Ｗ％のエチルアルコールへ添加した後、１２時間撹拌し、コーティングポリマー濃度が０．５６重量％のコーティング液を調整した。
【００７６】
（コーティング方法）
平均繊維直径１．２μｍのポリエチレンテレフタラート（ＰＥＴ）繊維よりなる不織布（４０ｇ／ｍ2目付、旭化成せんい社製「マイクロウェッブ」）を２１０ｍｍ×１５０ｍｍの大きさに切り出し、上記コーティング液を入れた金属製バットへ２０秒間浸漬させた。余剰コーティング液を落とした後、室温にて風乾させた。
【００７７】
（コーティング量の測定）
上記コーティングの際に、２１０ｍｍ×１５０ｍｍに切り出した不織布を６０℃設定の熱風乾燥機で１時間乾燥の後に測定した不織布重量（Ａｇ）と、上記方法によりコーティングを行った不織布を同様に６０℃設定の熱風乾燥機で１時間以上乾燥の後に測定したコーティング後不織布重量（Ｂｇ）を用いて、下記算出式よりコーティング量を求めた。
コーティング量＝（重量Ｂ−重量Ａ）×１０００／重量Ａ
その結果、担体１ｇあたりのコーティング量は２０．０ｍｇであった。
【００７８】
（白血球除去性能、血小板除去性能及び溶血試験方法）
上記コーティング後不織布を２０φｍｍの打ち抜き刃で打ち抜き、９枚重ねて図１に示すような血液製剤の入口１と出口２を備えた樹脂製治具１０及び１１に挟んで除去フィルターデバイスを作製した。この除去フィルターデバイスについて、図２に示すような濾過システムを用いて血液評価試験（白血球除去性能、血小板除去性能及び溶血試験）を実施した。血液評価試験に用いた血液製剤は、ＣＰＤ添加保存ヒト全血である。ドナーより採血し、室温にて２４時間保存後の血液を用いた。試験の際の血液製剤の流量は４０ｍＬ／時に設定した。
【００７９】
（白血球除去性能）
以下の計算式に従い、白血球除去性能を算出した結果、白血球除去性能は４．７であった。
白血球除去能＝−ｌｏｇ［（濾過後血液製剤中の白血球濃度）／（濾過前血液製剤中の白血球濃度）］
【００８０】
なお、濾過前後の血液製剤中の白血球濃度の測定は、ベクトンデッキンソン社（ＢＤ社）製白血球数測定用キット「ＬｅｕｃｏＣＯＵＮＴ」及びＢＤ社製フローサイトメーター  ＦＡＣＳ  ＣａｎｔｏＩＩを使用して行った。
【００８１】
（血小板除去性能）
以下の計算式に従い、血小板除去性能を算出した結果、血小板除去性能は９９％であった。
血小板除去性能（％）＝［（濾過前血液製剤中の血小板濃度−濾過後血液製剤中の血小板濃度）／濾過前血液製剤中の血小板濃度］×１００
【００８２】
なお、濾過前後の血液製剤中の血小板濃度は、多項目自動血球計数装置（日本Ｓｙｓｍｅｘ社製  Ｋ−４５００）を用いて測定した。
【００８３】
（溶血試験方法）
濾過前後の血液製剤を３０００回転／分（１７００×ｇ）１５分間遠心分離した後、白い紙等を背景にして、上清部分の着色を濾過前後で観察比較し、以下の基準で評価した。その結果、（−）溶血無であった。
（ｉ）濾過前の血液製剤の上清と比べて濾過後の血液製剤の上清の赤色が明らかに濃いものを（＋）溶血あり
（ｉｉ）濾過前の血液製剤の上清と比べて濾過後の血液製剤の上清に赤色着色が見られるものを（±）溶血あり
（ｉｉｉ）濾過前の血液製剤の上清と比べて濾過後の血液製剤の上清に赤色着色を認められないものを（−）溶血無
【００８４】
［実施例２］
コーティングポリマーのコーティング量が担体１ｇあたり２．５ｍｇであること以外は実施例１と同様であるフィルターを使用した。実施例１と同様の方法で白血球除去性能、血小板除去性能、及び溶血評価を実施した結果、それぞれ、４．６、９９％、及び（−）溶血無であった。
【００８５】
［実施例３］
コーティングポリマーのコーティング量が担体１ｇあたり３０．０ｍｇであること以外は、実施例１と同様であるフィルターを使用した。実施例１と同様の方法で白血球除去性能、血小板除去性能及び溶血評価を実施した結果、それぞれ、４．６、９９％、及び（−）溶血無であった。
【００８６】
［実施例４］
コーティングポリマーの組成がＨＥＭＡ／ＤＥＡＥＭＡ／ＣＭＢ＝９５．０／２．５／２．５（モル比）であること、及びコーティングポリマーのコーティング量が担体１ｇあたり１．０ｍｇであること以外は、実施例１と同様であるフィルターを使用した。実施例１と同様の方法で白血球除去性能、血小板除去性能及び溶血評価を実施した結果、それぞれ、４．６、９９％、及び（−）溶血無であった。
【００８７】
［実施例５］
コーティングポリマーの組成がＨＥＭＡ／ＤＥＡＥＭＡ／ＣＭＢ＝６７．５／３０．０／２．５（モル比）であること、及びコーティングポリマーのコーティング量が担体１ｇあたり３０．０ｍｇであること以外は、実施例１と同様であるフィルターを使用した。実施例１と同様の方法で白血球除去性能、血小板除去性能及び溶血評価を実施した結果、それぞれ、４．７、９９％、及び（−）溶血無であった。
【００８８】
［実施例６］
コーティングポリマーの組成がＨＥＭＡ／ＤＥＡＥＭＡ／ＣＭＢ＝６７．５／２．５／３０．０（モル比）であること、及びコーティングポリマーのコーティング量が担体１ｇあたり１．０ｍｇであること以外は、実施例１と同様であるフィルターを使用した。実施例１と同様の方法で白血球除去性能、血小板除去性能及び溶血評価を実施した結果、それぞれ、４．５、９９％、及び（−）溶血無であった。
【００８９】
［実施例７］
コーティングポリマーの組成がヒドロキシプロピルメタクリル酸（ＨＰＭＡ）／ＤＥＡＥＭＡ／ＣＭＢ＝６７．５／３０．０／２．５（モル比）であること、及びコーティングポリマーのコーティング量が担体１ｇあたり３０．０ｍｇであること以外は、実施例１と同様であるフィルターを使用した。実施例１と同様の方法で白血球除去性能、血小板除去性能及び溶血評価を実施した結果、それぞれ、４．７、９９％、及び（−）溶血無であった。
【００９０】
［実施例８］
コーティングポリマーの組成がＨＰＭＡ／ＤＥＡＥＭＡ／ＣＭＢ＝９５．０／２．５／２．５（モル比）であること、及びコーティングポリマーのコーティング量が担体１ｇあたり１．０ｍｇであること以外は、実施例１と同様であるフィルターを使用した。実施例１と同様の方法で白血球除去性能、血小板除去性能及び溶血評価を実施した結果、それぞれ、４．５、９９％、及び（−）溶血無であった。
【００９１】
［実施例９］
用いた不織布の材料がポリブチレンテレフタラート（ＰＢＴ）である事以外は、実施例１と同様であるフィルターを使用した。実施例１と同様の方法で白血球除去性能、血小板除去性能及び溶血評価を実施した結果、それぞれ４．７、９９％及び（−）溶血無であった。
【００９２】
［比較例１］
コーティングポリマーの組成がＨＥＭＡ／ＤＥＡＥＭＡ＝７０．０／３０．０（モル比）であること、及びコーティングポリマーのコーティング量が担体１ｇあたり５．０ｍｇであること以外は、実施例１と同様であるフィルターを使用した。実施例１と同様の方法で白血球除去性能、血小板除去性能及び溶血評価を実施した結果、それぞれ、４．０、９９％、及び（＋）溶血ありであった。
【００９３】
［比較例２］
コーティングポリマーの組成が、ＨＥＭＡ／ＣＭＢ＝８５．０／１５．０（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるフィルターを使用した。実施例１と同様の方法で白血球除去性能、血小板除去性能及び溶血評価を実施した結果、それぞれ、２．８、６０％、及び（−）溶血無であった。
【００９４】
［比較例３］
コーティングポリマーの組成がＨＥＭＡ／ＤＥＡＥＭＡ／ＣＭＢ＝３０．０／３５．０／３５．０（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるフィルターを使用した。実施例１と同様の方法で白血球除去性能、血小板除去性能及び溶血評価を実施した結果、それぞれ、３．８、９９％、及び（±）溶血ありであった。
【００９５】
［比較例４］
コーティングポリマーのコーティング量が担体１ｇあたり３５．０ｍｇであること以外は、実施例１と同様であるフィルターを使用した。実施例１と同様の方法で白血球除去性能、血小板除去性能及び溶血評価を実施した結果、それぞれ、４．７、９９％、及び（＋）溶血ありであった。
【００９６】
［比較例５］
コーティングポリマーの組成が２−メトキシエチル（メタ）アクリレート（ＭＥＭＡ）／ＤＥＡＥＭＡ／ＣＭＢ＝７０．０／１０．０／２０．０（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるフィルターを使用した。実施例１と同様の方法で白血球除去性能、血小板除去性能及び溶血評価を実施した結果、それぞれ、４．４、９９％、及び（−）溶血無であった。
【００９７】
［比較例６］
コーティングポリマーの組成がＨＥＭＡ／ＤＥＡＥＭＡ／ＡＨ（アクリル酸；カチオン性モノマー）＝６０．０／３０．０／１０．０（モル比）であること、及びコーティングポリマーのコーティング量が担体１ｇあたり２０．０ｍｇであること以外は、実施例１と同様であるフィルターを使用した。実施例１と同様の方法で白血球除去性能、血小板除去性能及び溶血評価を実施した結果、それぞれ、３．７、９０％、及び（＋）溶血ありであった。
【００９８】
［比較例７］
コーティングポリマーの組成がＨＥＭＡ／ＤＥＡＥＭＡ／ＤＥＧＭＥＭＡ（ジエチレングリコールメトキシエチルメタクリル酸；非イオン性モノマー）＝６０．０／３０．０／１０．０（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるフィルターを使用した。実施例１と同様の方法で白血球除去性能、血小板除去性能及び溶血評価を実施した結果、それぞれ、３．７、９９％、及び（＋）溶血ありであった。
【００９９】
［参考例１］
現行、白血球除去フィルターデバイス（旭化成メディカル社製  Ｓｅｐａｃｅｌ）よりフィルターを取り出し、実施例１と同様の方法で白血球除去性能、血小板除去性能及び溶血評価を実施した結果、それぞれ、３．０、９５％、及び（−）溶血無であった。
【０１００】
実施例、比較例及び参考例におけるモノマー組成、コーティング量、担体材料、及び評価結果を図４及び図５に併せて示す。
【０１０１】
コーティングポリマー中のモノマー成分として、ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートと、塩基性含窒素官能基を有するモノマーと、側鎖に双性イオンを含む官能基を有するモノマーと、を含み、その組成比を制御することにより赤血球及び血漿を含む生体由来液を、赤血球へ悪影響を与える事無く処理できた。また、白血球及び血小板の除去用途のフィルターの場合、高効率で白血球及び血小板を除去できた。
【符号の説明】
【０１０２】
１…入口、２…出口、１０，１１…樹脂製治具、２０…フィルター、２１…フィルターユニット、１００…生体由来液処理フィルターデバイス、１１０…シリンジポンプ、１３０…容器、１４０，１５０…チューブ，２００…生体由来液処理システム、２１０…処理前生体由来液、２２０…処理後生体由来液。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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