(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉｂ）：
【化１】
0006750837.tif 000054
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄは、独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびハロゲン原子から選択され；
Ｒ２ａは、Ｃ１−６アルキル、およびハロゲン原子から選択され；
Ｒ３ａは、水素原子またはハロゲン原子であり；
Ｒ６は、水素原子、およびＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物、または医薬として許容なその塩。
【請求項２】
Ｒ１ｄは、水素原子、またはハロゲン原子である、請求項１に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。
【請求項３】
Ｒ２ａが塩素原子または臭素原子である、請求項１または２に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。
【請求項４】
Ｒ３ａが水素原子またはフッ素原子である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。
【請求項５】
式（Ｉｃ）：
【化２】
0006750837.tif 000055
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄは、独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびハロゲン原子から選択され；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、またはハロゲン原子であり；
ｎは、０〜５から選択される整数であり；
Ｒ３ｂは、ハロゲン原子であり；
Ｒ６は、水素原子、およびＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物、または医薬として許容なその塩。
【請求項６】
Ｒ１ｄは、水素原子、またはハロゲン原子である、請求項５に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。
【請求項７】
ｎが０または１である、請求項５または６に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。
【請求項８】
Ｒ３ｂがフッ素原子である、請求項５〜７のいずれか１項に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。
【請求項９】
４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−（２−ブロモフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−フルオロフェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−クロロフェニル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−フルオロフェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−（４−イソプロピルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−フルオロフェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−（２−メチルフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−（２−ブロモフェニル）−１−（４−イソプロピルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−フルオロフェノキシ）ブタン酸；
（Ｓ）−４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−フェノキシ）−２−メチルブタン酸；および
（Ｒ）−４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−フェノキシ）−２−メチルブタン酸；
から選択される化合物、または医薬として許容なその塩。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物、または医薬として許容なその塩を含む、シヌクレイノパチーの治療または予防のための医薬組成物。
【請求項１１】
シヌクレイノパチーが、パーキンソン病、レビー小体型認知症、または多系統萎縮症である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
経口投与用である、請求項１０または１１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シヌクレイノパチー治療薬または予防薬に関する。さらに本発明は、１，３，５−トリフェニルピラゾール誘導体を含有するシヌクレイノパチー治療または予防のための医薬組成物、および該化合物を使用するシヌクレイノパチーの治療方法または予防方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
α−シヌクレインはＳＮＣＡ遺伝子によってエンコードされるアミノ酸１４０残基からなるタンパク質であり、脳内のシナプス前末端において豊富に発現している。シヌクレイノパチーはα−シヌクレインの異常蓄積を特徴とする神経変性疾患群を意味し、レビー小体病でのレビー小体・神経突起における蓄積、多系統萎縮症のグリア細胞質封入体における蓄積などが知られている。α−シヌクレインのオリゴマー化において多価不飽和脂肪酸が関与することについて報告がされている（非特許文献１および２）。本格的な高齢化社会を迎えている我が国においてシヌクレイノパチーに該当する疾患の患者数は近年大きく増加している。【０００３】
脂肪酸結合タンパク質（Fatty Acid Binding Protein: FABP）は、低分子量（１４〜１５ｋＤａ）の細胞質型タンパク質であり、組織特異的に発現する。ＦＡＢＰは中鎖〜長鎖脂肪酸をリガンドとし、脂質代謝の恒常性維持やシグナル伝達に関与すると考えられている。ＦＡＢＰは、分子構造が互いに類似している複数のサブタイプが知られている。ＦＡＢＰ３は、心臓において発現しており、その機能は完全には解明されていないものの、脂質の取り込み、ミトコンドリアでのβ−酸化系への輸送などの脂質ホメオスタシスに関与していると考えられている。ＦＡＢＰ３の阻害活性を有する化合物について報告がされている（非特許文献２）。ＦＡＢＰ３がα-シヌクレイン凝集を促進することについて報告がされている（非特許文献１）。【０００４】
α-シヌクレイン凝集体（封入体）がパーキンソン病では黒質ドパミン神経に出現し、レビー小体型認知症では大脳皮質に瀰漫性に出現する。線維状シヌクレインをラット線条体に注入すると、黒質に加えて大脳皮質に凝集体が伝播して神経細胞にシヌクレイン封入体を形成するという報告がある（非特許文献３）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】J. Biol. Chem. 289 (2014) 1662-1666
【非特許文献２】Bioorg. Med. Chem. Lett. 23 (2013) 1662-1666
【非特許文献３】Neurobiology of Disease 2015; 82 :185-199
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
シヌクレイノパチーとして分類される神経変性疾患に対しては十分な効果が得られる治療方法および予防方法が確立しているとは言えず、新規な治療剤および予防剤が求められている。【０００７】
一つの側面において、本発明はシヌクレイノパチーの治療または予防に用いるための医薬組成物の提供を目的とする。さらに本発明は特定の１，３，５−トリフェニルピラゾール誘導体を用いたシヌクレイノパチーの治療方法または予防方法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を達成するために鋭意研究を進めたところ、１，３，５−トリフェニルピラゾール誘導体がα-シヌクレインの凝集を抑制すること、α-シヌクレイン凝集体の伝播をFABP3リガンドが著しく抑制すること、運動機能障害および認知機能障害を改善することなどの有益な効果を有することを発見し、本発明を完成させた。本明細書の開示は、以下の［１］〜［２０］に記載の発明を包含する。【０００９】
［１］式（Ｉ）：【００１０】
【化１】
0006750837.tif 000002
【００１１】
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃは、独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびハロゲン原子から選択され；
Ｒ１ｄは、水素原子、またはハロゲン原子であり；
Ｒ２およびＲ３は、独立して、Ｃ１−６アルキル、およびハロゲン原子から選択され；
Ｒ４は、水素原子、およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ５は、ＣＯＯＲ６、ＣＨ２ＯＨ、および１−テトラゾリルから選択され；
Ｒ６は、水素原子、およびＣ１−６アルキルから選択され；
ｎは、０〜５から選択される整数であり；
ｐは、０〜４から選択される整数であり；
ｑは、１または２である］
で表される化合物、または医薬として許容なその塩を含む、シヌクレイノパチーの治療または予防のための医薬組成物。【００１２】
［２］ｎが０または１であり、ｐが０であり、ｑが２である、［１］に記載の医薬組成物。【００１３】
［３］Ｒ４が水素原子であり、Ｒ５がＣＯＯＲ６である、［１］または［２］に記載の医薬組成物。【００１４】
［４］Ｒ１ａおよびＲ１ｂが、独立して、水素原子、塩素原子、臭素原子、メチルおよびメトキシから選択される、［１］〜［３］のいずれかに記載の医薬組成物。【００１５】
［５］式（Ｉａ）：【００１６】
【化２】
0006750837.tif 000003
【００１７】
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、およびＲ６は［１］〜［４］のいずれかに定義されたとおりであり、Ｒ２ａは、水素原子またはハロゲン原子であり、Ｒ３ａは、水素原子またはハロゲン原子である］
で表される化合物、または医薬として許容なその塩を含む、［１］〜［４］のいずれかに記載の医薬組成物。【００１８】
［６］Ｒ６が水素原子である、［１］〜［５］のいずれかに記載の医薬組成物。【００１９】
［７］４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（４−ブロモフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（３，４−ジクロロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（４−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（４−クロロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−フェニル−１−（４−イソプロピルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（４−メトキシフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（２−クロロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；および
４−（２−（１−（３−クロロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−（２−ブロモフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−フルオロフェノキシ）ブタン酸；
から選択される化合物、または医薬として許容なその塩を含有する、［１］に記載の組成物。【００２０】
［８］シヌクレイノパチーが、パーキンソン病、レビー小体型認知症、または多系統萎縮症である、［１］〜［７］のいずれかに記載の医薬組成物。【００２１】
［９］経口投与用である、［１］〜［８］のいずれかに記載の医薬組成物。【００２２】
［１０］式（Ｉｂ）：【００２３】
【化３】
0006750837.tif 000004
【００２４】
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄは、独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびハロゲン原子から選択され；
Ｒ２ａは、ハロゲン原子であり；
Ｒ３ａは、水素原子またはハロゲン原子であり；
Ｒ６は、水素原子、およびＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物、または医薬として許容なその塩。【００２５】
［１１］Ｒ１ｄは、水素原子、またはハロゲン原子である、［１０］に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。【００２６】
［１２］Ｒ２ａが塩素原子または臭素原子である、［１０］または［１１］に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。【００２７】
［１３］Ｒ３ａが水素原子またはフッ素原子である、［１０］〜［１２］のいずれかに記載の化合物、または医薬として許容なその塩。【００２８】
［１４］式（Ｉｃ）：【００２９】
【化４】
0006750837.tif 000005
【００３０】
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄは、独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびハロゲン原子から選択され；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、またはハロゲン原子であり；
ｎは、０〜５から選択される整数であり；
Ｒ３ｂは、ハロゲン原子であり；
Ｒ６は、水素原子、およびＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物、または医薬として許容なその塩。【００３１】
［１５］Ｒ１ｄは、水素原子、またはハロゲン原子である、［１４］に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。【００３２】
［１６］ｎが０または１である、［１４］または［１５］に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。【００３３】
［１７］Ｒ３ｂがフッ素原子である、［１４］〜［１６］のいずれかに記載の化合物、または医薬として許容なその塩。【００３４】
［１８］［１０］〜［１７］のいずれかに記載の化合物、または医薬として許容なその塩を含む、シヌクレイノパチーの治療または予防のための医薬組成物。【００３５】
［１９］シヌクレイノパチーが、パーキンソン病、レビー小体型認知症、または多系統萎縮症である、［１８］に記載の医薬組成物。【００３６】
［２０］経口投与用である、［１８］または［１９］に記載の医薬組成物。【００３７】
本明細書の開示は、さらに以下の［１−１］〜［１−２２］に記載の発明を包含する。【００３８】
［１−１］式（Ｉ）：【００３９】
【化５】
0006750837.tif 000006
【００４０】
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃは、独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびハロゲン原子から選択され；
Ｒ１ｄは、水素原子、またはハロゲン原子であり；
Ｒ２およびＲ３は、独立して、Ｃ１−６アルキル、およびハロゲン原子から選択され；
Ｒ４は、水素原子、およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ５は、ＣＯＯＲ６、ＣＨ２ＯＨ、および１−テトラゾリルから選択され；
Ｒ６は、水素原子、およびＣ１−６アルキルから選択され；
ｎは、０〜５から選択される整数であり；
ｐは、０〜４から選択される整数であり；
ｑは、１または２である］
で表される化合物、または医薬として許容なその塩を含む、シヌクレイノパチーの治療または予防のための医薬組成物。【００４１】
［１−２］ｎが０または１であり、ｐが０または１であり、ｑが２である、［１−１］に記載の医薬組成物。【００４２】
［１−３］ｎが０または１であり、ｐが０であり、ｑが２である、［１−１］または［１−２］に記載の医薬組成物。【００４３】
［１−４］Ｒ４が水素原子であり、Ｒ５がＣＯＯＲ６である、［１−１］〜［１−３］のいずれかに記載の医薬組成物。【００４４】
［１−５］Ｒ１ａおよびＲ１ｂが、独立して、水素原子、塩素原子、臭素原子、メチルおよびメトキシから選択される、［１−１］〜［１−４］のいずれかに記載の医薬組成物。【００４５】
［１−６］式（Ｉａ）：【００４６】
【化６】
0006750837.tif 000007
【００４７】
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、およびＲ６は［１−１］〜［１−４］のいずれかに定義されたとおりであり、Ｒ２ａは、水素原子またはハロゲン原子であり、Ｒ３ａは、水素原子またはハロゲン原子である］
で表される化合物、または医薬として許容なその塩を含む、［１−１］〜［１−５］のいずれかに記載の医薬組成物。【００４８】
［１−７］Ｒ２ａがＣ１−３アルキルまたはハロゲン原子である、［１−１］〜［１−６］のいずれかに記載の医薬組成物。【００４９】
［１−８］Ｒ６が水素原子である、［１−１］〜［１−７］のいずれかに記載の医薬組成物。【００５０】
［１−９］４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（４−ブロモフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（３，４−ジクロロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（４−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（４−クロロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−フェニル−１−（４−イソプロピルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（４−メトキシフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（２−クロロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（３−クロロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−（２−ブロモフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−フルオロフェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−クロロフェニル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−フルオロフェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−（４−イソプロピルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−フルオロフェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−（２−メチルフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−（２−ブロモフェニル）−１−（４−イソプロピルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−フルオロフェノキシ）ブタン酸；
（Ｓ）−４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−フェノキシ）−２−メチルブタン酸；および
（Ｒ）−４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−フェノキシ）−２−メチルブタン酸；
から選択される化合物、または医薬として許容なその塩を含有する、［１−１］に記載の組成物。【００５１】
［１−１０］シヌクレイノパチーが、パーキンソン病、レビー小体型認知症、または多系統萎縮症である、［１−１］〜［１−９］のいずれかに記載の医薬組成物。【００５２】
［１−１１］経口投与用である、［１−１］〜［１−１０］のいずれかに記載の医薬組成物。【００５３】
［１−１２］式（Ｉｂ）：【００５４】
【化７】
0006750837.tif 000008
【００５５】
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄは、独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびハロゲン原子から選択され；
Ｒ２ａは、Ｃ１−６アルキル、およびハロゲン原子から選択され；
Ｒ３ａは、水素原子またはハロゲン原子であり；
Ｒ６は、水素原子、およびＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物、または医薬として許容なその塩。【００５６】
［１−１３］Ｒ１ｄは、水素原子、またはハロゲン原子である、［１−１２］に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。【００５７】
［１−１４］Ｒ２ａが塩素原子または臭素原子である、［１−１２］または［１−１３］に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。【００５８】
［１−１５］Ｒ３ａが水素原子またはフッ素原子である、［１−１２］〜［１−１４］のいずれかに記載の化合物、または医薬として許容なその塩。【００５９】
［１−１６］式（Ｉｃ）：【００６０】
【化８】
0006750837.tif 000009
【００６１】
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄは、独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびハロゲン原子から選択され；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、またはハロゲン原子であり；
ｎは、０〜５から選択される整数であり；
Ｒ３ｂは、ハロゲン原子であり；
Ｒ６は、水素原子、およびＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物、または医薬として許容なその塩。【００６２】
［１−１７］Ｒ１ｄは、水素原子、またはハロゲン原子である、［１−１６］に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。【００６３】
［１−１８］ｎが０または１である、［１−１６］または［１−１７］に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。【００６４】
［１−１９］Ｒ３ｂがフッ素原子である、［１−１６］〜［１−１８］のいずれかに記載の化合物、または医薬として許容なその塩。【００６５】
［１−２０］［１−１２］〜［１−１９］のいずれかに記載の化合物、または医薬として許容なその塩を含む、シヌクレイノパチーの治療または予防のための医薬組成物。【００６６】
［１−２１］シヌクレイノパチーが、パーキンソン病、レビー小体型認知症、または多系統萎縮症である、［１−２０］に記載の医薬組成物。【００６７】
［１−２２］経口投与用である、［１−２０］または［１−２１］に記載の医薬組成物。【００６８】
本明細書の開示は、さらに以下の［２−１］〜［２−１７］に記載の発明を包含する。【００６９】
［２−１］シヌクレイノパチーの治療または予防方法であって、有効量の式（Ｉ）：【００７０】
【化９】
0006750837.tif 000010
【００７１】
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃは、独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびハロゲン原子から選択され；
Ｒ１ｄは、水素原子、またはハロゲン原子であり；
Ｒ２およびＲ３は、独立して、Ｃ１−６アルキル、およびハロゲン原子から選択され；
Ｒ４は、水素原子、およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ５は、ＣＯＯＲ６、ＣＨ２ＯＨ、および１−テトラゾリルから選択され；
Ｒ６は、水素原子、およびＣ１−６アルキルから選択され；
ｎは、０〜５から選択される整数であり；
ｐは、０〜４から選択される整数であり；
ｑは、１または２である］
で表される化合物、または医薬として許容なその塩を対象に投与することを含む、前記方法。【００７２】
［２−２］ｎが０または１であり、ｐが０であり、ｑが２である、［２−１］に記載の方法。【００７３】
［２−３］Ｒ４が水素原子であり、Ｒ５がＣＯＯＲ６である、［２−１］または［２−２］に記載の方法。【００７４】
［２−４］Ｒ１ａおよびＲ１ｂが、独立して、水素原子、塩素原子、臭素原子、メチルおよびメトキシから選択される、［２−１］〜［２−３］のいずれかに記載の方法。【００７５】
［２−５］式（Ｉａ）：【００７６】
【化１０】
0006750837.tif 000011
【００７７】
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、およびＲ６は［２−１］〜［２−４］のいずれかに定義されたとおりであり、Ｒ２ａは、水素原子またはハロゲン原子であり、Ｒ３ａは、水素原子またはハロゲン原子である］
で表される化合物、または医薬として許容なその塩を含む、［２−１］〜［２−４］のいずれかに記載の方法。【００７８】
［２−６］Ｒ４が水素原子である、［２−１］〜［２−５］のいずれかに記載の方法。【００７９】
［２−７］化合物または医薬として許容なその塩が、
４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（４−ブロモフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（３，４−ジクロロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（４−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（４−クロロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−フェニル−１−（４−イソプロピルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（４−メトキシフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（２−クロロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１−（３−クロロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−（２−ブロモフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（１，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−フルオロフェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−クロロフェニル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−フルオロフェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−（４−イソプロピルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−フルオロフェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−（２−メチルフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−フェノキシ）ブタン酸；
４−（２−（５−（２−ブロモフェニル）−１−（４−イソプロピルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−フルオロフェノキシ）ブタン酸；
（Ｓ）−４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−フェノキシ）−２−メチルブタン酸；および
（Ｒ）−４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−フェノキシ）−２−メチルブタン酸；
から選択される化合物、または医薬として許容なその塩である、［２−１］に記載の方法。【００８０】
［２−８］シヌクレイノパチーが、パーキンソン病、レビー小体型認知症、または多系統萎縮症である、［２−１］〜［２−７］のいずれかに記載の方法。【００８１】
［２−９］化合物、または医薬として許容なその塩が経口投与される、［２−１］〜［２−８］のいずれかに記載の方法。【００８２】
［２−１０］化合物、または医薬として許容なその塩が、式（Ｉｂ）：【００８３】
【化１１】
0006750837.tif 000012
【００８４】
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄは、独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびハロゲン原子から選択され；
Ｒ２ａは、ハロゲン原子であり；
Ｒ３ａは、水素原子またはハロゲン原子であり；
Ｒ６は、水素原子、およびＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物、または医薬として許容なその塩である、［２−１］に記載の方法。【００８５】
［２−１１］Ｒ１ｄは、水素原子、またはハロゲン原子である、［２−１０］に記載の方法。【００８６】
［２−１２］Ｒ２ａが塩素原子または臭素原子である、［２−１０］または［２−１１］に記載の方法。【００８７】
［２−１３］Ｒ３ａが水素原子またはフッ素原子である、［２−１０］〜［２−１２］に記載の方法。【００８８】
［２−１４］化合物、または医薬として許容なその塩が、式（Ｉｃ）：【００８９】
【化１２】
0006750837.tif 000013
【００９０】
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄは、独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびハロゲン原子から選択され；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、またはハロゲン原子であり；
ｎは、０〜５から選択される整数であり；
Ｒ３ｂは、ハロゲン原子であり；
Ｒ６は、水素原子、およびＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物、または医薬として許容なその塩である、［２−１］に記載の方法。【００９１】
［２−１５］Ｒ１ｄは、水素原子、またはハロゲン原子である、［２−１４］に記載の方法。【００９２】
［２−１６］ｎが０または１である、［２−１４］または［２−１４］に記載の方法。【００９３】
［２−１７］Ｒ３ｂがフッ素原子である、［２−１４］〜［２−１６］のいずれかに記載の方法。
【発明の効果】
【００９４】
一つの側面において、本発明によりにシヌクレイノパチーの治療または予防に用いるための医薬組成物が提供される。別の側面において、本発明によりにシヌクレイノパチーの治療効果または予防効果を有する化合物が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１】図１は、α−シヌクレイン及びＦＡＢＰ３の発現遺伝子をトランスフェクションしたＰＣ１２細胞を使用した、α−シヌクレインのオリゴマー形成抑制形成試験の結果を示すウエスタンブロッティングである。ＦＡＢＰ３リガンドである実施例１〜３の化合物（Ex1〜Ex3）がオリゴマー形成抑制効果を示したのに対し、比較例１の化合物（CoEx1）はそのような効果を示さないことが確認された。
【図２】図２は、試験例４の試験（実施例１の化合物を使用）に供したマウスの前頭前皮質、背側海馬、黒質腹側被蓋野領域の脳切片の染色後の写真を示す。S129リン酸化抗体で認識されるα−シヌクレイン凝集体が染色されている箇所が、対照である溶媒投与群と比較して、ＦＡＢＰ３リガンド投与群では少ないことが確認された。
【図３】図３は、α-Syn S129リン酸化抗体陽性細胞がみられた脳領域を累積でプロットしたものである（両群ｎ＝３）。各個体のα-Syn PPFを注入した側にα−シヌクレイン凝集体が生じていること、およびＦＡＢＰ３リガンド投与群において凝集が抑制されることが確認された。
【図４】図４は、染色した脳切片においてα-Syn S129リン酸化抗体陽性細胞数をカウントし、測定脳領域の面積で標準化した結果を示すグラフである（両群ｎ＝３）。ＦＡＢＰ３リガンド（実施例１の化合物）投与群において凝集が抑制されることが確認された。
【図５】図５は、試験例５のローターロッド試験およびビームウォーキング試験により運動機能を評価した結果を示すグラフである。ローターロッド試験結果のグラフの縦軸はマウスが落下するまでの時間（秒、Latency）を示す。ローターロッド試験ではリガンドと投与群で Latency に短縮の傾向が確認された。ビームウォーキング試験結果のグラフの縦軸はマウスがゴールボックスに辿り着くまでに足を踏み外した回数（Number of footslips）を示す。ビームウォーキング試験ではリガンド投与群において踏み外し回数の減少傾向が確認された。
【図６】図６は、試験例６の新規物体認識試験により認知機能を評価した結果を示すグラフである。新規物体認識試験結果を示すグラフにおいて、縦軸は新規物体と既知物体の接触割合を示す（Discrimination index（％））。新規物体認識試験では、リガンド投与群において新規物体と既知物体の間で接触割合に大きな差があり、認知機能の改善傾向が確認された。
【図７】図７は、試験例７の新規物体認識試験により認知機能を評価した結果を示すグラフである。ＭＰＴＰ投与後無処置の群では認知機能障害が確認されたのに対し、リガンド投与群では対照群と比較して障害が見られなかった。
【図８】図８は、試験例８のローターロッド試験およびビームウォーキング試験により運動機能を評価した結果を示すグラフである。両試験において、ＭＰＴＰ投与後に生じた運動機能障害が、リガンド投与群では回復したことが確認された
【図９】図９は、試験例９のローターロッド試験およびビームウォーキング試験により運動機能を評価した結果を示すグラフである。ローターロッド試験結果グラフの各バーに示されている数字は各郡のｎを表す。両試験において、ＭＰＴＰ投与後に生じた運動機能障害が、リガンド投与群では回復したことが確認された。
【図１０】図１０は、試験例９の新規物体認識試験および受動回避試験により認知機能を評価した結果を示すグラフである。ＭＰＴＰ投与後無処置の群では認知機能障害が確認されたのに対し、リガンド投与群では対照群と比較して障害が見られなかった。受動回避試験結果を示すグラフの縦軸は、訓練試行で明室に入れた後に暗室に入った際に電気刺激を受けたマウスが、２４時間後にもう一度明室にいれた後に暗室に入るまでの時間（秒）を示す（Latency）。両試験において、比較例１の化合物投与群においては効果が確認できなかったのに対し、実施例１および３の化合物投与群では有意に効果が確認された。
【図１１】図１１は、試験例１１のパーキンソン病モデル動物を用いたドパミン神経保護評価試験の結果を示すグラフである。
【図１２】図１２は、試験例１２のパーキンソン病モデル動物を用いたα-シヌクレイン凝集抑制評価試験の結果を示すグラフである。
【図１３】図１３は、試験例１３のＡＮＳを用いたＦＡＢＰリガンドの親和性評価試験の結果を示す。
【図１４】図１４は、試験例で行ったローターロッド試験、ビームウォーキング試験、新規物体認識試験などの手順について示す図である。
【図１５】図１５は、試験例１３においてシーケンシングを行った塩基配列を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００９６】
以下、本発明を更に具体的に説明する。
【００９７】
本発明の１つの側面によれば、式（Ｉ）で表される化合物、または医薬として許容なその塩を有効成分として含有する、認知機能疾患または障害の治療または予防のための医薬組成物が提供される。１つの態様において、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）で表される化合物を有効成分として含有する、認知機能疾患または障害の治療または予防のための医薬組成物が提供される。本明細書において、式（Ｉ）で表される化合物には、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）で表される化合物が包含される。
【００９８】
本明細書において「Ｃ１−６アルキル」とは、炭素数１〜６の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、３−メチルブチル、２−メチルブチル、１−メチルブチル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、４−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、３−エチルブチル、および２−エチルブチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロプロピルメチルなどが含まれ、例えば、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−３アルキルなども含まれる。
【００９９】
本明細書において「Ｃ１−６アルコキシ」とは、アルキル部分として既に定義した炭素数１〜６のアルキル基を有するアルキルオキシ基［−Ｏ−（Ｃ１−６アルキル）］を意味し、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓ−ブトキシ、ｉ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、３−メチルブトキシ、２−メチルブトキシ、１−メチルブトキシ、１−エチルプロポキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、４−メチルペントキシ、３−メチルペントキシ、２−メチルペントキシ、１−メチルペントキシ、３−エチルブトキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシ、シクロプロピルメチルオキシなどが含まれ、例えば、Ｃ１−４アルコキシおよびＣ１−３アルコキシなども含まれる。
【０１００】
１−テトラゾリルは以下の基：
【０１０１】
【化１３】
0006750837.tif 000014
を意味する。
【０１０２】
ハロゲン原子の例としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などが挙げられる。
【０１０３】
式（Ｉ）においてｎが０の場合、Ｒ２で示される置換基は存在しない。またｐが０の場合、Ｒ３で示される置換基が存在しない。
【０１０４】
本発明の１つの態様において、式（Ｉｂ）および式（Ｉｃ）におけるＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄは、独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびハロゲン原子から選択される。
【０１０５】
式（Ｉ）の化合物または医薬として許容なその塩が水和物などの溶媒和物を形成する場合には、本発明は該溶媒和物を用いて実施することができる。さらに本発明の化合物または医薬として許容なその塩は、混合物、溶液、結晶多形などとして適宜実施することができる。
【０１０６】
本発明の化合物として、例えば本明細書実施例に記載の化合物を使用することができ、より具体的には以下の化合物を使用することができる：
式（Ｉ）の化合物の「医薬として許容な塩」とは、医薬品として使用可能な塩であれば特に限定されない。本発明化合物が塩基と形成する塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウムなどの無機塩基との塩；メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン等の有機塩基との塩などが挙げられる。当該塩は、酸付加塩であってもよく、かかる塩としては、具体的には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の鉱酸；および、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸などの有機酸酸との酸付加塩が挙げられる。好ましくは、医薬として許容な塩として、カルボン酸である式（Ｉ）の化合物の塩基付加塩が例示される。
【０１０７】
本発明の１つの態様において、式（Ｉ）の化合物、そのエナンチオマー、そのジアステレオマー、または医薬として許容なその塩は、プロドラッグとして投与され、生体内において活性化合物に変換される。
【０１０８】
式（Ｉ）に含まれる化合物の例示として、実施例に記載の化合物、および以下の化合物が挙げられる。
【０１０９】
【化１４】
0006750837.tif 000015
【０１１０】
本発明におけるシヌクレイノパチーとは、α−シヌクレインの異常蓄積を特徴とする神経変性疾患を意味し、例えば、パーキンソン病、レビー小体型認知症、または多系統萎縮症が挙げられ、本発明の医薬組成物および方法は、例えば、シヌクレイノパチーの進行の抑制のために使用することができる。
【０１１１】
本発明の医薬組成物および方法において、処置するシヌクレイノパチーの進行度、重症度および病態については特に限定されない。パーキンソン病重症度分類はヤールＩ〜Ｖ度が用いられる。レビー小体型認知症には初期、中期、後期の段階があり、α−シヌクレインが封入体最初に出現部位から脳幹優位型、辺縁型、新皮質型に分けられる。さらに、多系統萎縮症の重症度分類ではmodified Ranking Scale １〜６が用いられ、病態により、Shy Drager 症候群、オリーブ橋小脳萎縮症、線条体鉱質変性症などに分類される。いずれもα−シヌクレイン封入体が神経細胞あるいはグルア細胞に発現する疾患群であり、本発明の医薬組成物および方法はこれらの疾患群から選択される疾患の治療または予防に使用することができる。
【０１１２】
前頭皮質あるいは海馬に神経細胞死がおこることで認知症が発症すると考えられる。本発明ではＦＡＢＰ３リガンドが凝集を抑制することに加えて、α−シヌクレイン凝集体の伝播を抑制することを提唱する。その結果脳内でのα−シヌクレイン凝集体による神経細胞死が抑制される。
【０１１３】
本発明の医薬組成物および方法は、特にレビー小体型認知症の治療、および予防に用いることができる。
【０１１４】
また、本発明の医薬組成物および方法は、運動機能障害および認知機能障害を改善や進行を抑制することができる。
【０１１５】
運動機能障害としては、パーキンソン病における振戦（手や足のふるえ）、無動（動きが遅くなる）、固縮（筋肉がかたくなってこわばり、関節の曲げ伸ばしに抵抗がある）、姿勢反射障害（体のバランスがとりにくくなる）、レビー小体型認知症においても、パーキンソン症状が、 多系統萎縮症においては、パーキンソン症状に加え、自律神経障害（排尿障害、勃起障害、起立性低血圧、発汗低下など）、小脳性運動失調:（失調性歩行と構音障害、四肢の運動失調、もしくは小脳性眼球運動障害）などが挙げられる。
【０１１６】
認知機能障害としては、レビー小体型認知症においては、記憶障害、前頭葉・頭頂葉機能障害（注意障害、視空間障害、構成障害、実行機能障害など）、認知機能の動揺、幻視などが挙げられる。パーキンソン病においては、初期では、遂行機能（プランニング，セットの変換・保持，問題解決など）、作動記憶、手続き記憶などの記憶機能，視空間機能の高次脳機能障害が見られる場合があり、進行すると幻視や視空間認知障害、思考緩慢等、レビー小体型認知症と類似した症候が見られる場合がある。多系統萎縮症においては、物忘れなど認知症が見られる場合、などが挙げられる。
【０１１７】
本発明の医薬組成物は、種々の剤形、例えば、経口投与のためには、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、丸剤、液剤、乳剤、懸濁液、溶液剤、酒精剤、シロップ剤、エキス剤、エリキシル剤とすることができ、非経口剤としては、例えば、皮下注射剤、静脈内注射剤、筋肉内注射剤、腹腔内注射剤などの注射剤；経皮投与または貼付剤、軟膏またはローション；口腔内投与のための舌下剤、口腔貼付剤；ならびに経鼻投与のためのエアゾール剤とすることができるが、これらには限定されない。これらの製剤は、製剤工程において通常用いられる公知の方法により製造することができる。
【０１１８】
当該医薬組成物は、一般に用いられる各種成分を含みうるものであり、例えば、１種以上の薬学的に許容され得る賦形剤、崩壊剤、希釈剤、滑沢剤、着香剤、着色剤、甘味剤、矯味剤、懸濁化剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、補助剤、防腐剤、緩衝剤、結合剤、安定剤、コーティング剤等を含みうる。また本発明の医薬組成物は、持続性または徐放性剤形であってもよい。
【０１１９】
本発明の医薬組成物の投与量は、投与経路、患者の体型、年齢、体調、疾患の度合い、発症後の経過時間等により、適宜選択することができ、本発明の医薬組成物は、治療有効量および／または予防有効量の上記式（Ｉ）の化合物を含むことができる。本発明において上記式（Ｉ）の化合物は、一般に１〜１０００ｍｇ／日／成人、例えば、１〜２００ｍｇ／日／成人、具体的には５〜１００ｍｇ／日／成人、より具体的には１０〜５０ｍｇ／日／成人の用量で使用されうる。当該医薬組成物の投与は、単回投与または複数回投与であってもよい。
【０１２０】
本発明の医薬組成物は、必要に応じ、従来公知の着色剤、保存剤、香料、風味剤、コーティング剤、抗酸化剤、ビタミン、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、およびミネラル分（鉄、亜鉛、マグネシム、ヨードなど）などの成分を含有していてもよい。本発明の医薬組成物は、経口投与に適した形態、例えば顆粒剤（ドライシロップを含む）、カプセル剤（軟カプセル剤、硬カプセル剤）、錠剤（チュアブル剤などを含む）、散剤（粉末剤）、丸剤などの各種の固形製剤、または内服用液剤（液剤、懸濁剤、シロップ剤を含む）などの液状製剤などの形態で調製してもよい。
【０１２１】
製剤化のための添加物としては、例えば、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、流動化剤、分散剤、湿潤剤、防腐剤、粘稠剤、ｐＨ調整剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、溶解補助剤が挙げられる。また、液剤の形態にする場合は、ペクチン、キサンタンガム、グアガムなどの増粘剤を配合することができる。また、コーティング剤を用いてコーティング錠剤にしたり、ペースト状の膠剤とすることもできる。さらに、他の形態に調製する場合であっても、従来の方法に従えばよい。
【０１２２】
本発明の治療方法または予防方法は上記記載に基づいて実施されうる。式（Ｉ）の化合物または医薬として許容なその塩が投与される対象としては、哺乳動物、例えばヒトが例示される。
【実施例】
【０１２３】
以下、実施例を示すことにより本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。【０１２４】
実施例１：４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸
［第１工程］（Ｅ）−３−（２−クロロフェニル）−１−（２−メトキシフェニル）プロプ−２−エン−１−オンの調製【０１２５】
【化１５】
0006750837.tif 000016
【０１２６】
２’−メトキシアセトフェノン（１．０ｇ，６．７ｍｍｏｌ，１．０当量）と２．５ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（３０ｍｌ）をエタノール（５０ｍｌ）に溶解させ、０℃で３０分攪拌した後、２−クロロベンズアルデヒド（１．１２３ｇ，８．０ｍｍｏｌ，１．２当量）を滴下し、２日間室温で攪拌した。エタノールを留去し、酢酸エチルで抽出し、有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥し濃縮し、標題化合物を固体として得た（２．１７８ｇ、収率１００％）。【０１２７】
Ｒｆ値：０．２１（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝７：１  ｖ／ｖ）。【０１２８】
１H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ: 8.01 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.71-7.62 (m, 2H), 7.50-7.39 (m, 2H), 7.35 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.30-7.26 (m, 2H), 7.06-6.98 (m, 2H), 3.89 (s, 3H)。【０１２９】
［第２工程］５−（２−クロロフェニル）−３−（２−メトキシフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾールの調製【０１３０】
【化１６】
0006750837.tif 000017
【０１３１】
（Ｅ）−３−（２−クロロフェニル）−１−（２−メトキシフェニル）プロプ−２−エン−１−オン（２．０２ｇ，７．４ｍｍｏｌ，１．０当量）とフェニルヒドラジン（１．１ｍｌ，１１．２ｍｍｏｌ，１．５当量）、をエタノール（５０ｍｌ）に溶解させ、酢酸（２ｍｌ）を加え、アルゴン雰囲気下で加熱還流下一晩攪拌した。酢酸エチルで抽出し、有機相を水で洗浄後、無水硫酸マグネシウム乾燥し濃縮した。得た中間体粗生成物をベンゼン（３０ｍｌ）に溶解させ、ＤＤＱ（２．５２ｇ，１１．１ｍｍｏｌ，１．５当量）を加え、加熱還流下一晩攪拌した。反応混合物を室温にもどし、酢酸エチルを用いてセライトろ過した。ろ液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、溶離液ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝８：１  ｖ／ｖ）により精製して、標題化合物を得た（２．３８７ｇ、収率：８９．３％）。【０１３２】
Ｒｆ値：０．３１（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝８：１  ｖ／ｖ）。【０１３３】
１H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ: 8.16 (dd, J = 7.6, 1.8 Hz, 1H), 7.42-7.40 (m, 1H), 7.36-7.21 (m, 9H),7.11 (s, 1H), 7.05 (td, J = 7.5, 1.2 Hz, 1H), 7.00 (dd, J = 8.3, 0.9 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H)。【０１３４】
［第３工程］５−（２−クロロフェニル）−３−（２−ヒドロキシフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾールの調製【０１３５】
【化１７】
0006750837.tif 000018
【０１３６】
５−（２−クロロフェニル）−３−（２−メトキシフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール（１．７１ｇ，４．７ｍｍｏｌ，１．０当量）を無水ジクロロメタン（３０ｍｌ）に溶解させ、アルゴン雰囲気下−１０℃にて、三臭化ほう素（１７％ジクロロメタン溶液、約１ｍｏｌ／Ｌ）（９．４５ｍｌ，９．４５ｍｍｏｌ，２．０当量）を滴下し、室温に戻しながら一晩撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で反応を停止させ、反応混合物をジクロロメタンで抽出し、有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥し濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、溶離液ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９：１  ｖ／ｖ）により精製し、標題の化合物を（１．４１ｇ、収率：８６．２％）を得た。【０１３７】
Ｒｆ値：０．３２（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９：１  ｖ／ｖ）。【０１３８】
１H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ: 10.82 (s, 1H), 7.64 (dd, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.43 (dq, J = 8.0, 0.6 Hz, 1H), 7.38-7.24 (m, 9H), 7.07 (dd, J = 8.2, 1.2 Hz, 1H), 6.97-6.93 (m, 1H), 6.90 (s, 1H)。【０１３９】
［第４工程］４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸エチルの調製【０１４０】
【化１８】
0006750837.tif 000019
【０１４１】
５−（２−クロロフェニル）−３−（２−ヒドロキシフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール（１．１４ｇ，３．３ｍｍｏｌ，１．０当量）、４−ブロモ酪酸エチル（０．６４ｇ，３．３ｍｍｏｌ，１．０当量）、炭酸カリウム（０．４５ｇ，３．３ｍｍｏｌ，１．０当量）、およびヨウ化カリウム（０．５４ｇ，３．３ｍｍｏｌ，１．０当量）の乾燥ＤＭＦ（５０ｍｌ）溶液を７０℃で攪拌し、２４時間後さらに４−ブロモ酪酸エチル（０．６４ｇ，３．３ｍｍｏｌ，１．０当量）、炭酸カリウム（０．４５ｇ，３．３ｍｍｏｌ，１．０当量）、ヨウ化カリウム（０．５４ｇ，３．３ｍｍｏｌ，１．０当量）を加え、７０℃でさらに一晩攪拌した。室温に戻した後に反応混合物に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加え、酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウム乾燥し濃縮した。残差をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝８：１  ｖ／ｖ，Ｒｆ＝０．１６）、微黄色油状の標題化合物を得た（１．６０２ｇ、収率：１００％）。【０１４２】
Ｒｆ値：０．１６（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝８：１  ｖ／ｖ）。【０１４３】
１H-NMR（300 MHz, CDCl3）δ: 8.14 (dd, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.44-7.41 (m, 1H), 7.35-7.21 (m, 9H), 7.08 (s, 1H), 7.05 (td, J = 7.5, 1.1 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.16-4.07 (m, 4H), 2.57 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.24-2.15 (m, 2H), 1.22 (t, J = 7.2 Hz, 3H)。【０１４４】
［第５工程］４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸の調製【０１４５】
【化１９】
0006750837.tif 000020
【０１４６】
４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸エチル（５．００ｇ，１０．８ｍｍｏｌ）を２．５ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）とエタノール（２５ｍＬ）の混合溶媒に溶解させ、一晩還流した。エタノールを留去し、残差に希塩酸を加え酢酸エチルで抽出し、有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥し濃縮した。残差をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１：１  ｖ／ｖ，Ｒｆ＝０．３７）、標題化合物を（３．５４ｇ、収率：７４．３％）を得た。【０１４７】
Ｒｆ値：０．３７（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１：１  ｖ／ｖ）、融点：８５．５−８６．５℃、化学純度：９８％（逆相ＨＰＬＣの面積％、検出ＵＶ波長：２５４ｎｍ）。【０１４８】
１H-NMR：(300 MHz CDCl3) δ: 8.00 (1H, dd, J = 7.7, 1.7 Hz), 7.43-7.40 (1H, m), 7.35-7.21 (9H, m), 7.06 (1H, td, J = 7.5, 1.1 Hz), 7.00 (1H, s), 6.99 (1H, d, J = 7.3 Hz), 4.15 (2H, t, J = 6.0 Hz ), 2.60 (2H, t, J = 7.2 Hz), 2.19 (2H, quin, J = 6.7 Hz)。【０１４９】
質量分析値（FAB （M+1）+）：433.2。【０１５０】
実施例２：４−（２−（１−（４−ブロモフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸【０１５１】
【化２０】
0006750837.tif 000021
【０１５２】
第１工程において２−クロロベンズアルデヒドの代わりにベンズアルデヒドを、第２工程においてフェニルヒドラジンの代わりに４−ブロモフェニルヒドラジンを用いた以外は、実施例１と同様の手法により、標題の化合物を調製した。【０１５３】
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ: 7.97 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.35-7.23 (m, 8H), 7.05 (dd, J = 7.6, 7.6 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.99 (s, 1H), 4.15 (t. J = 6.0 Hz, 2H), 2.62. (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.24-2.17 (m, 2H)。【０１５４】
高分解能質量分析(FAB, [M+H]+) C25H22BrN2O3 計算値 477.0814；実測値 477.0812.
実施例３：４−（２−（１−（３，４−ジクロロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸【０１５５】
【化２１】
0006750837.tif 000022
【０１５６】
第１工程において２−クロロベンズアルデヒドの代わりにベンズアルデヒドを、第２工程においてフェニルヒドラジンの代わりに３，４−ジクロロフェニルヒドラジンを用いた以外は、実施例１と同様の手法により、標題の化合物を調製した。【０１５７】
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ= 8.00 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.38- 7.28 (m, 7H), 7.12-6.98 (m, 4H), 4.16 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.64 (t, J = 7.2 Hz), 2.25-2.18 (m, 2H)。【０１５８】
高分解能質量分析(FAB, [M+H]+) C25H21Cl2N2O3, 計算値 467.0929, 実測値 467.0942。【０１５９】
実施例４：４−（２−（５−（２−ブロモフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸【０１６０】
【化２２】
0006750837.tif 000023
【０１６１】
第１工程において２−クロロベンズアルデヒドの代わりに２−ブロモベンズアルデヒドを用いた以外は、実施例１と同様の手法により、標題の化合物を調製した。【０１６２】
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ= 8.03 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.61 (d,  J = 7.6 Hz, 1H), 7.34-7.20 (m, 9H), 7.05 (ddd, J = 7.6, 7.6, 1.2 Hz, 1H), 7.00-6.98 (m, 2H), 4.15 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.61 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.22-2.16 (m, 2H)。【０１６３】
高分解能質量分析(FAB, [M+H]+) C25H22BrN2O3 計算値 479.0793；実測値 479.0800。【０１６４】
実施例５：４−（２−（１−（４−イソプロピルフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸【０１６５】
【化２３】
0006750837.tif 000024
【０１６６】
第１工程において２−クロロベンズアルデヒドの代わりにベンズアルデヒドを、第２工程においてフェニルヒドラジンの代わりに４−イソプロピルフェニルヒドラジンを用いた以外は、実施例１と同様の手法により、標題の化合物を調製した。【０１６７】
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ= 7.93(dd, J = 7.8, 1.8 Hz, 1H), 7.30- 7.26 (m, 8H), 7.21-7.18 (m, 2H), 7.06-6.95 (m, 3H), 4.15 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.95-2.88 (m, 1H), 2.59 (t, J = 7.2 Hz), 2.23-2.16 (m, 2H), 1.25-1.23 (m, 6H)。【０１６８】
高分解能質量分析(FAB, [M+H]+) C28H29N2O3,, 計算値 441.2178, 実測値 441.2177。【０１６９】
実施例６：４−（２−（１−（３−クロロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸【０１７０】
【化２４】
0006750837.tif 000025
【０１７１】
第１工程において２−クロロベンズアルデヒドの代わりにベンズアルデヒドを、第２工程においてフェニルヒドラジンの代わりに３−クロロフェニルヒドラジンを用いた以外は、実施例１と同様の手法により、標題の化合物を調製した。【０１７２】
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ= 8.01 (dd, J = 7.8, 1.8 Hz, 1H), 7.51-7.50 (m, 1H), 7.35- 7.21 (m, 8H), 7.18-7.15 (m, 1H), 7.07-7.03 (m, 1H), 7.01-6.98 (m, 2H), 4.16 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.64 (t, J = 7.2 Hz), 2.25-2.18 (m, 2H)。【０１７３】
高分解能質量分析(FAB, [M+H]+) C25H22ClN2O3, 計算値 433.1319, 実測値 433.1330。【０１７４】
実施例７：４−（２−（１−（４−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸【０１７５】
【化２５】
0006750837.tif 000026
【０１７６】
第１工程において２−クロロベンズアルデヒドの代わりにベンズアルデヒドを、第２工程においてフェニルヒドラジンの代わりに４−フルオロフェニルヒドラジンを用いた以外は、実施例１と同様の手法により、標題の化合物を調製した。【０１７７】
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ= 7.96 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.36-7.26 (m, 8H), 7.07-7.02 (m, 3H), 6.99 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 4.16 (t, J =   6.4 Hz, 2H), 2.62 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.24- 2.18 (m, 2H)。【０１７８】
高分解能質量分析(FAB, [M+H]+) C25H22FN2O3, 計算値 417.1614, 実測値 417.1622。【０１７９】
実施例８：４−（２−（１−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸【０１８０】
【化２６】
0006750837.tif 000027
【０１８１】
第１工程において２−クロロベンズアルデヒドの代わりにベンズアルデヒドを、第２工程においてフェニルヒドラジンの代わりに４−tertブチルフェニルヒドラジンを用いた以外は、実施例１と同様の手法により、標題の化合物を調製した。【０１８２】
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ= 7.96 (dd, J = 7.6, 2.0 Hz, 1H), 7.37- 7.27 (m, 10H), 7.06-7.02 (m, 1H), 6.99 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.15 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.60 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.23-2.17 (m, 2H), 1.31 (s, 9H)。【０１８３】
高分解能質量分析(FAB, [M+H]+) C29H31N2O3, 計算値 455.2334, 実測値 455.2346。【０１８４】
実施例９：４−（２−（１，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−フルオロフェノキシ）ブタン酸【０１８５】
【化２７】
0006750837.tif 000028
【０１８６】
第１工程において２−クロロベンズアルデヒドの代わりにベンズアルデヒド、２’−メトキシアセトフェノンの代わりに５’−フルオロ−２’−メトキシアセトフェノンをを用いた以外は、実施例１と同様の手法により、標題の化合物を調製した。【０１８７】
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ= 7.75 (dd, J = 9.6, 3.2 Hz, 1H), 7.37-7.27 (m, 11H), 7.01-6.97 (m, 2H), 6.92 (dd, J= 8.8, 4.4 Hz, 1H), 4.12 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.61 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.23-2.17 (m, 2H)。【０１８８】
高分解能質量分析(FAB, [M+H]+) C25H22FN2O3, 計算値 417.1614, 実測値 417.1597。【０１８９】
実施例１０：４−（２−（５−クロロフェニル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−フルオロフェノキシ）ブタン酸【０１９０】
【化２８】
0006750837.tif 000029
【０１９１】
第１工程において２’−メトキシアセトフェノンの代わりに５’−フルオロ−２’−メトキシアセトフェノンをを用いた以外は、実施例１と同様の手法により、標題の化合物を調製した。【０１９２】
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ [ppm]: 7.82 (1H, dd, J = 9.6, 3.1 Hz), 7.42 (1H, br-d, J = 8.2 Hz), 7.34-7.21 (8H, overlapped), 7.05 (1H, s), 6.99 (1H, ddd, J = 9.0, 7.6, 3.1 Hz), 6.91 (1H, dd, J = 9.1, 4.6 Hz), 4.11 (2H, t, J = 6.1 Hz), 2.60 (2H, t, J = 7.3 Hz), 2.18 (2H, quin, J = 6.7 Hz)。【０１９３】
13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ [ppm]; 176.6, 158.1, 156.6, 152.3 (d, J = 1.8 Hz), 147.8 (d, J = 1.8 Hz), 140.4, 139.9, 134.0, 132.2, 130.2 (d, J = 6.8 Hz), 130.0, 128.8(2C), 127.3, 126.7, 124.2(2C), 123.5 (d, J = 7.9 Hz), 115.4 (d, J = 24.7 Hz), 115.1 (d, J = 23.1 Hz), 113.6 (d, J = 8.0 Hz), 110.7, 67.7, 30.4, 24.6。【０１９４】
高分解能質量分析(ESI-TOF-MS, [M-H]-) C25H19Cl1F1N2O3, 計算値 449.10682, 実測値 449.10312。【０１９５】
化学純度：>99%（逆相ＨＰＬＣの面積％、検出ＵＶ波長：２５４ｎｍ）。【０１９６】
実施例１１：４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−（４−イソプロピルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−フルオロフェノキシ）ブタン酸【０１９７】
【化２９】
0006750837.tif 000030
【０１９８】
第１工程において２’−メトキシアセトフェノンの代わりに５’−フルオロ−２’−メトキシアセトフェノンを用い、第２工程においてフェニルヒドラジンの代わりに４−イソプロピルフェニルヒドラジンを用いた以外は、実施例１と同様の手法により、標題の化合物を調製した。【０１９９】
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ [ppm]; 7.81 (1H, dd, J = 9.7, 3.1 Hz), 7.43 (1H, br-d, J = 8.1 Hz), 7.34-7.21 (5H, overlapped), 7.13 (2H, br-d, J = 8.5 Hz), 7.03 (1H, s), 6.98 (1H, ddd, J= 9.1, 7.5, 3.1 Hz), 6.91 (1H, dd, J= 9.0, 4.6 Hz), 4.11 (2H, t, J = 6.1 Hz), 2.88 (1H, sept, J = 6.9 Hz), 2.60 (2H, t, J = 7.2 Hz), 2.18 (2H, quin, J = 6.6 Hz), 1.21 (6H, d, J = 6.9 Hz)。【０２００】
13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ [ppm]; 175.8, 158.1, 156.6, 152.2, 148.1, 147.5, 140.3, 137.6, 134.0, 132.2, 130.3, 130.1, 130.0, 126.8(2C), 126.7, 124.1(2C), 115.4 (d, J = 24.4 Hz), 115.0 (d, J= 23.1 Hz), 113.6 (d, J = 8.2 Hz), 110.4, 67.6, 33.7, 30.3, 24.6, 23.9(2C)。【０２０１】
高分解能質量分析（ESI-TOF-MS, [M-H]-）C28H25Cl1F1N2O3, 計算値 491.15377. 実測値 491.15054。【０２０２】
化学純度：>99%（逆相ＨＰＬＣの面積％、検出ＵＶ波長：２５４ｎｍ）。【０２０３】
実施例１２：４−（２−（５−（２−メチルフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−フェノキシ）ブタン酸【０２０４】
【化３０】
0006750837.tif 000031
【０２０５】
第１工程において２−クロロベンズアルデヒドの代わりに２−メチルベンズアルデヒドを用いた以外は、実施例１と同様の手法により、標題の化合物を調製した。【０２０６】
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ [ppm]: 8.04 (1H, dd, J = 7.7, 1.7 Hz), 7.34-7.17 (10H, overlapped), 7.06 (1H, td, J= 7.5, 1.0 Hz), 6.99 (1H, br-d, J = 8.3 Hz), 6.89 (1H, s), 4.14 (2H, t, J= 6.1 Hz), 2.58 (2H, t, J = 7.2 Hz), 2.17 (2H, quin, J = 6.6 Hz), 2.06 (3H, s)。【０２０７】
13C-NMR (75 MHz, CDCl3) δ [ppm]: 177.2, 156.0, 148.9, 142.7, 140.1, 137.2, 130.9, 130.7, 130.4, 129.24, 129.19, 128.9, 128.7(2C), 126.9, 125.8, 123.9(2C), 122.1, 121.1, 112.4, 110.0, 66.8, 30.6, 24.6, 20.0。【０２０８】
高分解能質量分析（ESI-TOF-MS, [M-H]-）C26H23N2O3, 計算値 411.17087, 実測値 411.16706。【０２０９】
化学純度：>99%（逆相ＨＰＬＣの面積％、検出ＵＶ波長：２５４ｎｍ）。【０２１０】
実施例１３：４−（２−（５−（２−ブロモフェニル）−１−（４−イソプロピルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−フルオロフェノキシ）ブタン酸【０２１１】
【化３１】
0006750837.tif 000032
【０２１２】
第１工程において２’−メトキシアセトフェノンの代わりに５’−フルオロ−２’−メトキシアセトフェノンを、および２−クロロベンズアルデヒドの代わりに２−ブロモベンズアルデヒドを用い、第２工程においてフェニルヒドラジンの代わりに４−イソプロピルフェニルヒドラジンを用いた以外は、実施例１と同様の手法により、標題の化合物を調製した。【０２１３】
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ [ppm]; 7.82 (1H, dd, J = 9.7, 3.1 Hz), 7.62 (1H, br-d, J = 7.6 Hz), 7.29-7.21 (5H, overlapped), 7.13 (2H, br-d, J = 8.5 Hz), 7.02 (1H, s), 6.98 (1H, ddd, J= 9.0, 7.6, 3.1 Hz), 6.91 (1H, dd, J= 9.1, 4.7 Hz), 4.11 (2H, t, J = 6.1 Hz), 2.87 (1H, sept, J = 6.9 Hz), 2.61 (2H, t, J = 7.2 Hz), 2.18 (2H, quin, J = 6.6 Hz), 1.21 (6H, d, J = 6.9 Hz)。【０２１４】
13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ [ppm]; 176.0, 158.1, 156.6, 152.2, 148.1, 147.4, 141.8, 137.5, 133.1, 132.42, 132.35, 130.2(2C), 127.2, 126.8(2C), 124.2(2C), 115.4 (d, J = 24.4 Hz), 115.0 (d, J= 23.1 Hz), 113.6 (d, J = 8.5 Hz), 110.4, 67.7, 33.7, 30.3, 24.6, 23.8(2C)。【０２１５】
高分解能質量分析（ESI-TOF-MS, [M-H]-） C28H25Br1F1N2O3, 計算値 535.10326, 実測値 535.10054。【０２１６】
化学純度：>99%（逆相ＨＰＬＣの面積％、検出ＵＶ波長：２５４ｎｍ）。【０２１７】
実施例１４：（Ｓ）−４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−フェノキシ）−２−メチルブタン酸
［第１工程］（Ｓ）−４−ベンジル−３−（４−（ベンジルオキシ）ブタノイル）オキサゾリジン−２−オンの調製【０２１８】
【化３２】
0006750837.tif 000033
【０２１９】
４−ベンジルオキシブタン酸（２．５０ｇ，１２．９ｍｍｏｌ，１．０当量）、（Ｓ）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノン（４．５６ｇ，２５．７ｍｍｏｌ，２．０当量）、４−ジメチルアミノピリジン（１．５７ｇ，１２．９ｍｍｏｌ，１，０当量）を乾燥ジクロロメタン（１００ｍｌ）に溶解させ、アルゴン雰囲気下０℃にて、ジイソプロピルカルボジイミド（２．１９ｍｌ，１４．２ｍｍｏｌ，１．１当量）を滴下し、室温で一晩撹拌した。反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に加え、ジクロロメタンで抽出し、有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥し濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、溶離液ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１：１  ｖ／ｖ）により精製し、表題の化合物（３．６７ｇ、収率：８０．６％）を無色の油状物質として得た。【０２２０】
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ [ppm]：7.35-7.26 (m, 8H), 7.19 (d, J= 6.9 Hz, 2H), 4.64-4.56 (m, 1H), 4.51 (s, 2H), 4.14-4.07 (m, 2H), 3.58 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.27 (dd, J = 13.8, 3.3 Hz, 1H), 3.07 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.69 (dd, J = 13.2, 9.3 Hz, 1H), 2.04 (quintet, J = 6.6 Hz, 2H)。【０２２１】
［第２工程］（Ｓ）−４−ベンジル−３−（（Ｓ）−４−（ベンジルオキシ）−２−メチルブタノイル）オキサゾリジン−２−オンの調製【０２２２】
【化３３】
0006750837.tif 000034
【０２２３】
（Ｓ）−４−ベンジル−３−（４−（ベンジルオキシ）ブタノイル）オキサゾリジン−２−オン（１．３９ｇ，３．９４ｍｍｏｌ，１．０当量）を乾燥テトラヒドロフラン（４０ｍｌ）に溶解させ、アルゴン雰囲気下−５０℃にてナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（１．０ｍｏｌ／Ｌテトラヒドロフラン溶液、４．７３ｍｌ，４．７３ｍｍｏｌ，１．２当量）を滴下した。反応混合物を−５０℃で５分、−１５℃で１５分撹拌した。再び−５０℃に冷却し、乾燥テトラヒドロフラン（４ｍｌ）に溶解させたヨードメタン（１．２３ｍｌ，１９．７ｍｍｏｌ，５．０当量）を滴下した。反応混合物を１５分で５℃ずつ昇温していき、−５℃で５時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液で反応を停止させ、酢酸エチルで抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、溶離液ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝３：１  ｖ／ｖ）により精製し、表題の化合物（１．１５ｇ、収率：７９％）を淡黄色の油状物質として得た。【０２２４】
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ [ppm]：7.34-7.19 (m, 8H), 7.17-7.14 (m, 2H), 4.49-4.36 (m, 3H), 4.00-3.88 (m, 2H), 3.73 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 3.61-3.50 (m, 2H), 3.20 (dd, J = 13.5, 3.6 Hz, 1H), 2.70 (dd, J = 13.2 Hz, 1H), 2.24-2.12 (m, 1H), 1.79-1.70 (m, 1H), 1.24 (d, J = 6.9 Hz, 3H)。【０２２５】
13C-NMR (75 MHz, CDCl3) δ [ppm]: 177.10, 153.26, 138.51, 135.42, 129.40, 128.84, 128.27, 127.59, 127.53, 127.23, 72.84, 68.47, 65.83, 55.21, 37.98, 35.14, 33.63, 18.08。【０２２６】
［第３工程］（Ｓ）−４−ベンジル−３−（（Ｓ）−４−ヒドロキシ−２−メチルブタノイル）オキサゾリジン−２−オンの調製【０２２７】
【化３４】
0006750837.tif 000035
【０２２８】
（Ｓ）−４−ベンジル−３−（（Ｓ）−４−（ベンジルオキシ）−２−メチルブタノイル）オキサゾリジン−２−オン（１．０６ｇ，２．９０ｍｍｏｌ，１．０当量）をエタノール（１０ｍｌ）に溶解させ、アルゴン雰囲気下パラジウム炭素（０．１０ｇ）を加え、風船を用いてフラスコ内を水素で満たした。反応混合物を水素雰囲気下、室温で１２時間撹拌し、セライトを用いてろ過し、酢酸エチルで洗いこんだ。ろ液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、溶離液ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１：１  ｖ／ｖ）により精製し、表題の化合物（０．７７９ｇ、収率：９７．０％）を淡黄色の液体として得た。【０２２９】
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ [ppm]: 7.38-7.28 (m, 3H), 7.20-7.17 (m, 2H), 5.18 (br-s, 1H), 4.48 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 4.35 (td, J = 8.7, 3.0 Hz, 1H), 4.23-4.05 (m, 3H), 2.94-2.81 (m, 2H), 2.65-2.54 (m, 1H), 2.49-2.39 (m, 1H), 2.00-1.86 (m, 1H), 1.29 (d, J = 6.9 Hz, 3H)。【０２３０】
13C-NMR (75 MHz, CDCl3) δ [ppm]: 180.17, 158.96, 135.97, 129.07, 128.97, 127.34, 69.71, 66.27, 53.81, 41.55, 34.18, 30.74, 15.22。【０２３１】
高分解能質量分析（ESI-TOF-MS, [M+H]+）C15H20NO4, 計算値 278.1392, 実測値 278.1389。【０２３２】
［第４工程］（Ｓ）−４−ベンジル−３−（（Ｓ）−４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）−２−メチルブタノイル）オキサゾリジン−２−オンの調製【０２３３】
【化３５】
0006750837.tif 000036
【０２３４】
５−（２−クロロフェニル）−３−（２−ヒドロキシフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール（０．３００ｇ，０．８６５ｍｍｏｌ，１．０当量）、（Ｓ）−４−ベンジル−３−（（Ｓ）−４−ヒドロキシ−２−メチルブタノイル）オキサゾリジン−２−オン（０．２５２ｇ，０．９０８ｍｍｏｌ，１．０５当量）、トリフェニルホスフィン（０．２３８ｇ，０．９０８ｍｍｏｌ，１．０５当量）を乾燥ジエチルエーテルに溶解させ、アルゴン雰囲気下０℃でアゾジカルボン酸ジイソプロピル（４０％トルエン溶液，  約１．９ｍｏｌ／Ｌ）を滴下した。反応混合物を室温で３日間撹拌し、濃縮して残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、溶離液ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝３：１  ｖ／ｖ）により精製し、表題の化合物（０．３２１ｇ、収率：６１．２％）を無色の油状物質として得た。【０２３５】
[α]25D +54.9 (c = 1.0, CHCl3)
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ [ppm]: 8.13 (dd, 7.8, 1.8 Hz, 1H), 7.54-7.48 (m, 1H), 7.40-7.19 (m, 12H), 7.13-7.10 (m, 2H), 7.06 (s, 1H), 7.04 (td, J = 3.3, 1.2 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.50-4.42 (m, 1H), 4.27-4.20 (m, 1H), 4.15-4.07 (m, 1H), 4.04 (dt, J = 6.9, 1.5 Hz, 1H), 3.99 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 3.90 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 3.16 (dd, J = 13.8, 3.3 Hz, 1H), 2.71 (dd, J = 13.5, 9.6 Hz, 1H), 2.46-2.34 (m, 1H), 2.08-1.97 (m, 1H), 1.31 (d, J = 7.2 Hz, 1H)。【０２３６】
13C-NMR (75 MHz, CDCl3) δ [ppm]: 176.4, 156.0, 153.0, 148.5, 140.3, 140.1, 135.2, 134.0, 132.4, 130.6, 130.0, 129.8, 129.4, 129.1, 128.8, 128.7, 127.2, 126.9, 126.8, 123.9, 121.8, 121.0, 112.1, 111.0, 66.4, 66.0, 55.1, 37.8, 35.2, 33.2, 18.2。【０２３７】
高分解能質量分析（ESI-TOF-MS, [M+H]+）C36H33ClN3O4, 計算値 606.2154, 実測値 606.2142。【０２３８】
［第５工程］（Ｓ）−４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−フェノキシ）−２−メチルブタン酸の調製【０２３９】
【化３６】
0006750837.tif 000037
【０２４０】
（Ｓ）−４−ベンジル−３−（（Ｓ）−４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）−２−メチルブタノイル）オキサゾリジン−２−オン（０．１００ｇ，０．１６５ｍｍｏｌ，１．０当量）をテトラヒドロフラン／水（３：１，２．０ｍｌ）に溶解させ、０℃で３０％過酸化水素水（０．１０ｍｌ，０．８９ｍｍｏｌ，５．４当量）を滴下し、続けて水（０．３ｍｌ）に溶解させた水酸化リチウム（０．０２８ｇ，０．６６ｍｍｏｌ，４．０当量）を滴下した。０℃で３時間撹拌し、水（０．５ｍｌ）に溶解させたチオ硫酸ナトリウム（０．１ｇ）を加えて反応を停止し，１ｍｏｌ／Ｌ塩酸水溶液で反応混合物を酸性とした。テトラヒドロフランを留去し、酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、溶離液ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝３：１  ｖ／ｖ）により精製し、表題の化合物（５４．５ｍｇ、収率：７３．９％）を無色のアモルファスとして得た。【０２４１】
[α]25D +47.5 (c = 1.0, CHCl3)。【０２４２】
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ [ppm]： 7.93 (dd, J = 7.5, 1.8 Hz, 1H), 7.42-7.38 (m, 1H), 7.35-7.21 (m, 9H), 7.05 (td, J = 7.5, 1.2 Hz, 1H), 7.01-6.98 (m, 2H), 4.26-4.19 (m, 1H), 4.08-4.00 (m, 1H), 2.94-2.82 (m, 1H), 2.17-2.07 (m, 1H), 2.05-1.98 (m, 1H), 1.10 (d, J = 6.9 Hz, 3H)。【０２４３】
13C-NMR (75 MHz, CDCl3) δ [ppm]: 180.3, 156.0, 149.0, 140.4, 139.7, 133.9, 132.2, 130.2, 130.04, 129.99, 129.5, 129.4, 128.9(2C), 127.4, 126.7, 124.5(2C), 121.7, 121.1, 112.4, 110.3, 65.6, 36.4, 33.3, 17.0。【０２４４】
高分解能質量分析（ESI-TOF-MS, [M+H]+）C26H24Cl1N2O3, 計算値 447.14755, 実測値 447.14591。【０２４５】
実施例１５：（Ｒ）−４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−フェノキシ）−２−メチルブタン酸
［第１工程］（Ｒ）−４−ベンジル−３−（４−（ベンジルオキシ）ブタノイル）オキサゾリジン−２−オンの調製【０２４６】
【化３７】
0006750837.tif 000038
【０２４７】
４−ベンジルオキシブタン酸（２．５０ｇ，１２．９ｍｍｏｌ，１．０当量）、（Ｒ）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノン（４．５６ｇ，２５．７ｍｍｏｌ，２．０当量）、４−ジメチルアミノピリジン（１．５７ｇ，１２．９ｍｍｏｌ，１，０当量）を乾燥ジクロロメタン（１００ｍｌ）に溶解させ、アルゴン雰囲気下０℃にて、ジイソプロピルカルボジイミド（２．１９ｍｌ，１４．２ｍｍｏｌ，１．１当量）を滴下し、室温で一晩撹拌した。反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に加え、ジクロロメタンで抽出し、有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥し濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、溶離液ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１：１  ｖ／ｖ）により精製し、表題の化合物（３．７６ｇ、収率：８２．７％）を無色の油状物質として得た。【０２４８】
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ [ppm]：7.35-7.26 (m, 8H), 7.19 (d, J= 6.6 Hz, 2H), 4.64-4.56 (m, 1H), 4.51 (s, 2H), 4.13-4.06 (m, 2H), 3.58 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.27 (dd, J = 13.5, 3.3 Hz, 1H), 3.07 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.69 (dd, J = 13.2, 9.3 Hz, 1H), 2.04 (quintet, J = 6.9 Hz, 2H)。【０２４９】
［第２工程］（Ｒ）−４−ベンジル−３−（（Ｒ）−４−（ベンジルオキシ）−２−メチルブタノイル）オキサゾリジン−２−オンの調製【０２５０】
【化３８】
0006750837.tif 000039
【０２５１】
（Ｒ）−４−ベンジル−３−（４−（ベンジルオキシ）ブタノイル）オキサゾリジン−２−オン（０．７５０ｇ，２．１２ｍｍｏｌ，１．０当量）を乾燥テトラヒドロフラン（２０ｍｌ）に溶解させ、アルゴン雰囲気下−５０℃にてナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（１．０ｍｏｌ／Ｌテトラヒドロフラン溶液、２．５５ｍｌ，２．５５ｍｍｏｌ，１．２当量）を滴下した。−５０℃で５分、−１５℃で１５分撹拌した。再び−５０℃に冷却し、乾燥テトラヒドロフラン（２ｍｌ）に溶解させたヨードメタン（０．６６ｍｌ，１１ｍｍｏｌ，５．０当量）を滴下した。反応混合物を１５分で５℃ずつ昇温していき、−５℃で５時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液で反応を停止させ、酢酸エチルで抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、溶離液ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝３：１  ｖ／ｖ）により精製し、表題の化合物（０．６２ｇ、収率：８０％）を淡黄色の油状物質として得た。【０２５２】
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ [ppm]：7.34-7.19 (m, 8H), 7.17-7.14 (m, 2H), 4.49-4.36 (m, 3H), 3.73 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 3.61-3.50 (m, 2H), 3.20 (dd, J = 13.2, 3.3 Hz, 1H), 2.70 (dd, J = 13.2, 9.6 Hz, 1H), 2.24-2.12 (m, 1H), 1.79-1.70 (m, 1H), 1.24 (d, J = 6.6 Hz, 3H)。【０２５３】
13C-NMR (75 MHz, CDCl3) δ [ppm] : 177.11, 153.27, 138.52, 135.43, 129.41, 128.85, 128.28, 127.64, 127.54, 127.23, 72.84, 68.48, 65.84, 55.22, 37.99, 35.15, 33.64, 18.08。【０２５４】
［第３工程］（Ｒ）−４−ベンジル−３−（（Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−メチルブタノイル）オキサゾリジン−２−オンの調製【０２５５】
【化３９】
0006750837.tif 000040
【０２５６】
（Ｒ）−４−ベンジル−３−（（Ｒ）−４−（ベンジルオキシ）−２−メチルブタノイル）オキサゾリジン−２−オン（０．５９７ｇ，１．６３ｍｍｏｌ，１．０当量）をエタノール（５．０ｍｌ）に溶解させ、アルゴン雰囲気下パラジウム炭素（０．０６ｇ）を加え、風船を用いてフラスコ内を水素で満たした。反応混合物を水素雰囲気下、室温で１２時間撹拌し、セライトを用いてろ過し、酢酸エチルで洗いこんだ。ろ液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、溶離液ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１：１  ｖ／ｖ）により精製し、表題の化合物（０．３８８ｇ、収率：８６．１％）を淡黄色の液体として得た。【０２５７】
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ [ppm]： 7.37-7.28 (m, 3H), 7.19-7.17 (m, 2H), 5.26 (br-s, 1H), 4.48 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 4.35 (td, J = 8.7, 2.4 Hz, 1H), 4.23-4.05 (m, 3H), 2.94-2.82 (m, 2H), 2.68-2.54 (m, 1H), 2.49-2.39 (m, 1H), 2.00-1.86 (m, 1H), 1.29 (d, J = 6.9 Hz, 3H)。【０２５８】
13C-NMR (75 MHz, CDCl3) δ [ppm]: 180.18, 159.02, 135.96, 129.07, 128.97, 127.32, 69.70, 66.27, 53.80, 41.53, 34.18, 30.73, 15.21。【０２５９】
高分解能質量分析（ESI-TOF-MS, [M+H]+）C15H20NO4, 計算値 278.1392, 実測値 278.1387。【０２６０】
［第４工程］（Ｒ）−４−ベンジル−３−（（Ｒ）−４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）−２−メチルブタノイル）オキサゾリジン−２−オンの調製【０２６１】
【化４０】
0006750837.tif 000041
【０２６２】
５−（２−クロロフェニル）−３−（２−ヒドロキシフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール（０．３００ｇ，０．８６５ｍｍｏｌ，１．０当量）、（Ｒ）−４−ベンジル−３−（（Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−メチルブタノイル）オキサゾリジン−２−オン（０．２５２ｇ，０．９０８ｍｍｏｌ，１．０５当量）、トリフェニルホスフィン（０．２３８ｇ，０．９０８ｍｍｏｌ，１．０５当量）を乾燥ジエチルエーテルに溶解させ、アルゴン雰囲気下０℃でアゾジカルボン酸ジイソプロピル（４０％トルエン溶液，  約１．９ｍｏｌ／Ｌ）を滴下した。反応混合物を室温で３日間撹拌し、濃縮して残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、溶離液ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝３：１  ｖ／ｖ）により精製し、表題の化合物（０．３２３ｇ、収率：６１．６％）を無色の油状物質として得た。【０２６３】
[α]25D -53.3 (c = 1.0, CHCl3)。【０２６４】
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ [ppm]： 8.13 (dd, J = 7.5, 1.8 Hz, 1H), 7.52-7.49 (m, 1H), 7.40-7.19 (m, 12H), 7.13-7.10 (m, 2H), 7.06-7.00 (m, 2H), 6.98 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.50-4.42 (m, 1H), 4.27-4.20 (m, 1H), 4.15-4.07 (m, 1H), 4.04 (dt, J = 6.9, 1.8 Hz, 1H), 3.99 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 3.90 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 3.16 (dd, J = 13.5, 3.3 Hz, 1H), 2.71 (dd, J = 13.5, 9.6 Hz, 1H), 2.46-2.34 (m, 1H), 2.08-1.97 (m, 1H), 1.31 (d, J = 7.2 Hz, 1H)。【０２６５】
13C-NMR (75 MHz, CDCl3) δ [ppm]: 176.4, 156.0, 153.0, 148.5, 140.3, 140.1, 135.2, 134.0, 132.4, 130.0, 129.8, 129.4, 129.1, 128.9, 128.7, 127.2, 126.9, 126.8, 123.9, 121.8, 121.0, 112.1, 111.0, 66.4, 66.0, 55.1, 37.8, 35.2, 33.2, 18.2。【０２６６】
高分解能質量分析（ESI-TOF-MS, [M+H]+）C36H33ClN3O4, 計算値 606.2154. 実測値 606.2178。【０２６７】
［第５工程］（Ｒ）−４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−フェノキシ）−２−メチルブタン酸の調製【０２６８】
【化４１】
0006750837.tif 000042
【０２６９】
（Ｒ）−４−ベンジル−３−（（Ｒ）−４−（２−（５−（２−クロロフェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）−２−メチルブタノイル）オキサゾリジン−２−オン（０．１４０ｇ，０．２３１ｍｍｏｌ，１．０当量）をテトラヒドロフラン／水（３：１，２．８ｍｌ）に溶解させ、０℃で３０％過酸化水素水（０．１４ｍｌ，１．２５ｍｍｏｌ，５．４当量）を滴下し、続けて水（０．４ｍｌ）に溶解させた水酸化リチウム（０．０３９ｇ，０．９２ｍｍｏｌ，４．０当量）を滴下した。０℃で３時間撹拌し、水（０．７ｍｌ）に溶解させたチオ硫酸ナトリウム（０．１４ｇ）を加えて反応を停止し，１ｍｏｌ／Ｌ塩酸水溶液で反応混合物を酸性とした。テトラヒドロフランを留去し、酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、溶離液ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝３：１  ｖ／ｖ）により精製し、表題の化合物（９１．０ｍｇ、収率：８８．２％）を無色のアモルファスとして得た。【０２７０】
[α]25D -48.2 (c = 1.0, CHCl3)。【０２７１】
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ [ppm]; 7.96 (dd, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 10.8, 1.2 Hz, 1H), 7.34-7.20 (m, 9H), 7.05 (td, J = 7.2, 0.9 Hz, 1H), 6.99-6.97 (m, 2H), 4.24-4.17 (m, 1H), 4.09-4.01 (m, 1H), 2.21-2.10 (m, 1H), 2.03-1.92 (m, 1H), 1.13 (d, J = 6.9 Hz, 3H)。【０２７２】
13C-NMR (75 MHz, CDCl3) δ [ppm]; 180.8, 156.0, 148.9, 140.3, 139.8, 133.9, 132.2, 130.14, 130.12, 130.0, 129.4, 129.4, 128.8(2C), 127.3, 126.7, 124.4(2C), 121.7, 121.1, 112.4, 110.5, 65.6, 36.4, 33.2, 17.0。【０２７３】
高分解能質量分析（ESI-TOF-MS, [M+H]+）C26H24Cl1N2O3, 計算値 447.14755, 実測値 447.14874。【０２７４】
比較例１：４−（２−（１−（２−メトキシフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸
［第１工程］（（Ｅ）−１−（２−メトキシフェニル）−３−フェニルプロプ−２−エン−１−オンの調製【０２７５】
【化４２】
0006750837.tif 000043
【０２７６】
２’−メトキシアセトフェノン（１．０９ｇ，６．６０ｍｍｏｌ）と１０％水酸化カリウム水溶液（８０ｍＬ，１４２ｍｍｏｌ）をエタノール（１５ｍＬ）に溶解させ，０℃で３０分間撹拌した後，ベンズアルデヒド（０．８００ｍＬ，７．９２ｍｍｏｌ）を滴下し，約２日間室温で撹拌した。エバポレーターによりエタノールを留去し，酢酸エチル（３０ｍＬ）で４回抽出し，硫酸マグネシウムで乾燥し，濾過した溶液を濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、溶離液：酢酸エチル／ヘキサン＝１：７  （ｖ／ｖ））によって精製し，標題化合物を黄色油状物質として得た（１．５２ｍｇ，６．３６ｍｍｏｌ，収率：９６％）。【０２７７】
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ: 7.64 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.61-7.57 (m, 3H), 7.48 (ddd, J = 15.2, 15.2, 2.0 Hz, 1H), 7.41-7.35 (m, 4H), 7.05 (dd, J = 6.4, 6.4 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H)。
［第２工程］３−（２−（ベンジルオキシ）フェニル）−１−（２−メトキシフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾールの調製【０２７８】
【化４３】
0006750837.tif 000044
【０２７９】
（Ｅ）−１−（２−メトキシフェニル）−３−フェニルプロプ−２−エン−１−オン（３００ｍｇ，１．２６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３０ｍＬ）に溶解させ，アルゴン雰囲気下，−７８℃でシリンジを用いて三臭化ホウ素（１．０ｍｏｌ／Ｌジクロロメタン溶液、２．５２ｍＬ）を加えた。反応混合物を−７８℃で３０分間撹拌し，室温に戻して７時間撹拌した。反応溶液を飽和食塩水（１５０ｍＬ）にあけ、酢酸エチル（３０ｍＬ）で４回抽出し，抽出液を飽和食塩水で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥し，濾過した溶液を濃縮した。残渣をアセトンに溶解させ，炭酸カリウム（３６７ｍｇ，２．６６ｍｍｏｌ）存在下，ベンジルブロミド（２３９μＬ，２．０１ｍｍｏｌ）をシリンジを用いて加え，１１時間加熱還流した。アセトンを留去し，酢酸エチル（３０ｍＬ）で４回抽出し，飽和食塩水で洗った。硫酸マグネシウムで乾燥し，濾過した溶液を濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、溶離液：酢酸エチル／ヘキサン＝１：７（ｖ／ｖ））によって精製し，生成物として（Ｅ）−１−（２−（ベンジルオキシ）フェニル）−３−フェニルプロプ−２−エン−１−オン（２８７ｍｇ，０．９１ｍｍｏｌ，収率：６９％（２工程））を得た。得られた化合物を２−メトキシフェニルヒドラジン塩酸塩（２３８ｍｇ，１．３７ｍｍｏｌ）と共にエタノール（２０ｍＬ）に溶解させ，酢酸（２．０ｍＬ）を加えた。反応溶液をアルゴン雰囲気下で約２０時間加熱還流した。溶媒をエバポレーターにより留去し，酢酸エチル（３０ｍＬ）で４回抽出し，硫酸マグネシウムで乾燥し，濾過した溶液を濃縮した。残渣を２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノベンゾキノン（４１３ｍｇ，１．８２ｍｍｏｌ）と共にベンゼン（２０ｍＬ）に溶解させ，８５℃で１６時間加熱した。反応溶液を室温に戻し，セライト濾過し，濾液を濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、溶離液：酢酸エチル／ヘキサン＝１：１０（ｖ／ｖ））によって精製し，標題化合物を淡黄色アモルファス状物質として得た（２４９ｍｇ，０．５７０ｍｍｏｌ，収率：６３％（２工程））。【０２８０】
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ＝8.13 (dd, J= 8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.55-7.53 (m, 3H), 7.55- 7.17 (m, 10H), 7.13 (s, 1H), 7.07-7.03 (m, 3H), 6.87 (dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1H), 5.23 (s, 2H), 3.43 (s, 3H)。【０２８１】
［第３工程］２−（１−（２−メトキシフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノールの調製【０２８２】
【化４４】
0006750837.tif 000045
【０２８３】
３−（２−（ベンジルオキシ）フェニル）−１−（２−メトキシフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール（２４５ｍｇ，０．５７０ｍｍｏｌ）を酢酸エチルに溶解させ，１０％パラジウム担持活性炭（４９ｍｇ）を加え，０．３ＭＰａの水素雰囲気下で６時間接触還元を行った。反応混合物をセライト濾過し，濾液を濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、溶離液：酢酸エチル／ヘキサン＝１：１０（ｖ／ｖ））によって精製し，標題の化合物を無色アモルファス状物質として得た（１５３ｍｇ，０．４４７ｍｍｏｌ，収率：７８％）。【０２８４】
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ＝10.87 (s, 1H), 7.66 (dd, J = 8.7,  1.2 Hz, 1H), 7.47 (dd, J = 5.9, 1.5 Hz, 1H), 7.41-7.37 (m, 1H), 7.30-7.27 (m, 5H), 7.24- 7.21 (m, 1H), 7.08-7.02 (m, 2H), 6.96-6.92 (m, 1H), 6.90-6.88 (m, 2H), 3.45 (s, 3H)。【０２８５】
［第４工程］４−（２−（１−（２−メトキシフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸メチルの調製【０２８６】
【化４５】
0006750837.tif 000046
【０２８７】
実施例１の第４工程と同様の手法により，２−（１−（２−メトキシフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノールから４−（２−（１−（２−メトキシフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸メチル（１７２ｍｇ，０．３８８ｍｍｏｌ，８１％）を無色油状物として得た。【０２８８】
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ＝8.09 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.53 (dd, J = 7.8, 1.4 Hz, 1H), 7.37-7.33 (m, 1H), 7.30-7.23 (m, 7H), 7.08 (s, 1H), 7.07-6.96 (m, 4H), 6.86 (dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1H), 4.15(t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.66 (s, 3H), 3.43 (s, 3H), 2.63 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.27-2.19 (m, 2H)。【０２８９】
［第５工程］４−（２−（１−（２−メトキシフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸の調製【０２９０】
【化４６】
0006750837.tif 000047
【０２９１】
実施例１の第５工程と同様の手法により，４−（２−（１−（２−メトキシフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸メチルから４−（２−（１−（２−メトキシフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノキシ）ブタン酸（９５．０ｍｇ，０．２２０ｍｍｏｌ，５８％）を無色アモルファス状物質として得た。【０２９２】
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ＝7.83 (dd, J = 7.8, 1.8 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.39-7.24 (m, 7H), 7.05-6.98 (m, 3H), 6.92-6.88 (m, 2H), 4.14(t,  J= 6.0 Hz, 2H), 3.49 (s, 3H), 2.56 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 2.21-2.15 (m, 2H)。【０２９３】
高分解能質量分析(FAB, [M+H]+) C26H25N2O4, 計算値 429.1814, 実測値 429.1827。【０２９４】
試験例１：ＦＡＢＰ３リガンド活性評価
ＦＡＢＰ３リガンド活性評価に対する評価には，１，８−ＡＮＳ（１−アニリノナフタレン−８−スルホン酸）を用いた蛍光ディスプレースメントアッセイを採用した。１，８−ＡＮＳのような蛍光性物質は，疎水性の環境下において，蛍光強度が増加する性質を有する。この性質を利用し，１，８−ＡＮＳをＦＡＢＰの疎水性リガンド結合部位に各化合物と競合的に結合させ，１，８−ＡＮＳを用いる実験系で使用される波長である励起波長３５５ｎｍ，測定波長４６０ｎｍでその蛍光強度を比較することにより，各化合物のＦＡＢＰに対するリガンド活性を評価した。化合物の希釈溶媒はエタノールを採用した。【０２９５】
測定用９６穴プレートとしてNunc製の黒色プレートを使用し，各ウェルに，４０μＬのリン酸ナトリウムバッファー及びＦＡＢＰ３（AVISCERA BIOSCIENCE社製）のリン酸ナトリウムバッファー溶液（２５０ｎＭ、２５μＬ）を加え，ブランクには２５μＬのリン酸ナトリウムバッファーを加えた．各ウェルに検出試薬として１，８−ＡＮＳ（ALDRICH社製）溶液（１０μＭ、エタノール／リン酸ナトリウムバッファー溶液＝１：４  ｖ／ｖ、２５μＬ）を加え，各種濃度に希釈した化合物のエタノール溶液を１０μＬずつ加えた（最終エタノール濃度は１５％）。プレートリーダー内で１０秒間振盪し，室温で１０分間インキュベートした．その後，励起波長３５５ｎｍ，測定波長４６０ｎｍで蛍光測定した。測定にはパーキンエルマージャパン（株）製 ARVO TM X Oneを使用した。評価した化合物は，１×１０−５Ｍ，１×１０−６Ｍ，１×１０−７Ｍ，１×１０−８Ｍの４点で評価した。また，ポジティブコントロールとしてＦＡＢＰ３との親和性を有するオレイン酸，ネガティブコントロールとして，リガンドの溶媒であるエタノールを用いた。【０２９６】
試験例２：ＦＡＢＰ４リガンド活性評価
ＦＡＢＰ４の評価もＦＡＢＰ３と同じく１，８−ＡＮＳを用いた蛍光ディスプレースメントアッセイを採用した。ＦＡＢＰ４についてはCayman Chemical Companyから販売されているアッセイキット（FABP4 Inhibitor/Ligand Screening Assay Kit）を用いて評価した。化合物を溶解する溶媒はエタノールを用い，ポジティブコントロールにはキット付属のアラキドン酸を用いた。測定手順は上記のＦＡＢＰ３アッセイと同様に行った。
測定は各２回行い，その平均値を測定結果とした。ＩＣ５０の算出には，Light Stone社のPCソフトOriginを用いた。評価結果を表１に示す。【０２９７】
【表１−１】
0006750837.tif 000048
【０２９８】
【表１−２】
0006750837.tif 000049
【０２９９】
試験例３：α−シヌクレインオリゴマー形成阻害活性試験
既存の方法に従い（Shioda ら, J Biol Chem 2014;289:18957-18965）ＰＣ１２細胞にα−シヌクレイン及びＦＡＢＰ３の遺伝子をトランスフェクションし、血清含有DMEM（10% ウマ血清, 5%牛新生仔血清, ペニシリン／ストレプトマイシン含有)中で、該細胞をリガンド（実施例１〜４の化合物、１０μＭ）により１６時間処置した。それらの細胞をホモジナイズしたサンプルを、未変性条件で５〜１３．５％ポリアクリルアミドゲルで80mAで３時間泳動し、その後PVDFメンブレンに70V定電圧下で２時間転写し、ウエスタンブロッティングに供した。【０３００】
結果を図１に示す。培養液中にの添加により、ＦＡＢＰ３リガンド（実施例１〜３、１０μＭ）の化合物を添加した系ではα−シヌクレインのオリゴマー形成が抑制されたのに対し、比較例１の化合物を添加した系ではオリゴマーの形成が抑制されたなかったことが確認された。【０３０１】
試験例４：α−シヌクレイン凝集抑制効果確認のためのin vivo試験
無菌リン酸緩衝液生理食塩液（ｐH=7.4）中で、ヒトα−シヌクレインリコンビナントタンパク質（５μｇ／μＬ、rPeptide., Bogart,GA）を３７℃、１００ｒｐｍの条件下で７日間インキュベーションし、線維化ヒトα−シヌクレイン（α-Syn PPF 、シヌクレイン凝集体）を作製した。無菌リン酸緩衝液生理食塩液（ｐH=7.4）中で超音波処理後、１０週齢の雄性 C57BL6 N マウス（１２時間の明暗サイクル（明期9:00-21:00;暗期21:00-9:00）温度２３±１℃、湿度55±5％の条件下で飼育）の右側黒質領域 (Bregma から後方３．３ｍｍ，右方１．２ｍｍ，深さ３．８５ｍｍ）にα-Syn PPF を流速０．２μＬ／分で１０μｇを脳定位固定装置に脳固定後マイクロシリンジで注入した。手術２４時間後、溶媒（ｎ＝３）またはＦＡＢＰ３リガンド（実施例１の化合物、１．０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．、ｎ＝３）を一日一回四週間投与した。各行動薬理試験終了後、マウスを還流固定し、一匹のマウスから各領域（前頭前皮質、線条体、背側海馬、黒質腹側被蓋野領域）の５０μｍの脳切片３枚を作製した。リン酸化α−シヌクレイン (ser129) (α-Syn S129) 抗体（Abcam, Cambridge, UK）を用い、α−シヌクレイン凝集体を免疫組織化学染色法により同定した。図２に示すように、FABP3 リガンド投与群においては、α−シヌクレイン凝集体（封入体）形成の抑制が確認された。【０３０２】
図３は、α-Syn S129 陽性細胞がみられた脳領域を累積でプロットしたものである（両群ｎ＝３）。各個体のα-Syn PPFを注入した側にα−シヌクレイン凝集体が生じていること、およびFABP3 リガンド投与群において凝集が抑制されることが確認された。【０３０３】
染色した脳切片においてα-Syn S129 陽性細胞数をカウントし、測定脳領域の面積で標準化した結果を図４のグラフに示す（両群ｎ＝３）。ＦＡＢＰ３リガンド投与群において凝集が抑制されることが確認された。【０３０４】
試験例５：運動機能評価
α-Syn PPF 注入マウスに一日一回四週間、溶媒（ｎ＝３）またはＦＡＢＰ３リガンド（実施例１の化合物、１．０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．、ｎ＝３）を投与し、ローターロッド試験およびビームウォーキング試験により運動機能を評価した。ローターロッド試験はマウスをローラーの上に載せ、２０ｒｐｍの速度でローラーを回転させた際にマウスが落下するまでの時間（Latency）を測定した。落下するまでの時間はリガンド投与群で減少傾向が確認された。ビームウォーキング試験は細い板の上にマウスを置き歩行させ、ゴールボックスに辿り着くまでに足を踏み外した回数を測定した。結果を図５に示す。ビームウォーキング試験ではリガンド投与群において踏み外し回数の減少傾向が確認された。【０３０５】
試験例６：認知機能評価試験
α−Syn PPF 注入マウスに一日一回四週間、溶媒（ｎ＝３）またはＦＡＢＰ３リガンド（実施例１の化合物、１．０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．、ｎ＝３）を投与し、新規物体認識試験により、認知機能を評価した。新規物体認識試験は、訓練試行では同じ形の物体を置きマウスに記憶させ、試験試行では片方の物体を新規物体に代え、両物体に対する接触割合を評価した。結果を図６に示す。新規物体認識試験では、リガンド投与群において新規物体と既知物体の間で接触割合に大きな差があり、認知機能の改善傾向が確認された。【０３０６】
試験例７：パーキンソン病モデル動物を用いた認知機能評価試験
ドパミン神経毒である１−メチル−４−フェニル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン（ＭＰＴＰ、２５ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．、Sigma-Aldrich社(St Louis, MO）より購入）を１０週齢の雄性 C57BL6 N マウスに一日一回五日間連続投与し、パーキンソン病モデル動物を作製した。ＭＰＴＰ最終投与２４時間後から溶媒またはＦＡＢＰ３リガンド（実施例３の化合物、１．０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．、各群ｎ＝７）を一日一回二週間投与した。認知機能障害がみられるＭＰＴＰ投与四週間後に新規物体認識試験により認知機能を評価した。結果を図７に示す。ＭＰＴＰ投与後に溶媒のみを投与した群（対象群）では認知機能障害が確認されたのに対し、リガンド投与群では障害が見られなかった。【０３０７】
試験例８：パーキンソン病モデル動物を用いた運動機能評価試験
ＭＰＴＰ最終投与２４時間後から溶媒またはＦＡＢＰ３リガンド（実施例３の化合物）（１．０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．、各群ｎ＝７）を一日一回二週間投与した。運動機能障害がみられるＭＰＴＰ投与三週間後にローターロッド試験およびビームウォーキング試験により、運動機能を評価した。結果を図８に示す。ローターロッド試験では溶媒のみを投与した群（対象群）でLatancy が有意に減少し、リガンド投与群で完全に回復した。ビームウォーキング試験では対象群で足を踏み外す回数が有意に上昇し、リガンド投与群で完全に回復した。両試験において、ＭＰＴＰ投与後に生じた運動機能障害が、リガンド投与群では回復したことが確認された。【０３０８】
試験例９：パーキンソン病モデル動物を用いた運動機能評価試験
ＭＰＴＰ（２５ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）を１０週齢の雄性C57BL6 N マウスに一日一回五日間連続投与し、パーキンソン病モデル動物を作製した。ＭＰＴＰ最終投与２４時間後から溶媒（ｎ＝６）、ＦＡＢＰ３リガンド（実施例１の化合物、０．１ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝５），０．５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７），または１．０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６），ｐ．ｏ．）、ＦＡＢＰ３リガンド（実施例３の化合物、１．０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．）および非ＦＡＢＰ３リガンド（比較例１の化合物、１．０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．）を一日一回投与した。運動機能障害がみられるＭＰＴＰ投与後三週目において、ローターロッド試験及びビームウォーキング試験により運動機能を評価した。結果を図９に示す。ローターロッド試験では溶媒のみを投与した群（対象群）で低下したLatencyは実施例１および３の化合物で有意に改善し、比較例１の化合物では改善しなかった。ビームウォーキング試験では足を踏み外す回数がＭＰＴＰ投与で有意に上昇し、実施例１および３の化合物で有意に改善し、比較例１の化合物では改善しなかった。すなわち、比較例１の化合物投与群においては効果が確認できなかったのに対し、実施例１および３の化合物投与群では有意に効果が確認された。【０３０９】
試験例１０：パーキンソン病モデル動物を用いた認知機能評価試験
ＭＰＴＰ（２５ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）を１０週齢の雄性C57BL6 N マウスに一日一回五日間連続投与し、パーキンソン病モデル動物を作製した。ＭＰＴＰ最終投与２４時間後から溶媒（ｎ＝６）、ＦＡＢＰ３リガンド（実施例１の化合物、０．１ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝５），０．５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７），または１．０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６），ｐ．ｏ．）、ＦＡＢＰ３リガンド（実施例３の化合物、１．０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．）および非ＦＡＢＰ３リガンド（比較例１の化合物、１．０ｍｇ／ｋｇ，ｐ．ｏ．）を一日一回投与した。認知機能障害がみられるＭＰＴＰ投与後四週目に新規物体認識試験および受動回避試験を用い認知機能について評価した。受動回避試験は、訓練試行では明室にマウスを入れ、暗室にマウスが入った際に電気刺激（０．３ｍＡ，２秒）を与えた。２４時間後にもう一度マウスを明室にいれ、暗室に入るまでの時間を測定した。結果を図１０に示す。【０３１０】
比較例１の化合物投与群においては効果が確認できなかったのに対し、実施例１および３の化合物投与群では有意に効果が確認された。【０３１１】
試験例１１：パーキンソン病モデル動物を用いたドパミン神経保護評価試験
ＭＰＴＰ（２５ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）を１０週齢のC57BL6 Nマウスに一日一回５日間連続投与し、パーキンソン病モデル動物を作製した。ＭＰＴＰ最終投与２４時間後から溶媒（ｎ＝６）、ＦＡＢＰ３リガンド（実施例１の化合物、０．１ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝５），０．３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６）または１．０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝４），ｐ．ｏ．）、ＦＡＢＰ３リガンド（実施例３の化合物、１．０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝４），ｐ．ｏ．）および非ＦＡＢＰ３リガンド（比較例１の化合物、１．０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７），ｐ．ｏ．）を一日一回投与した。ドパミン神経の脱落およびα−シヌクレイン多量体形成がみられるＭＰＴＰ投与後４週目においてマウスを灌流固定し、５０μｍの厚さで黒質領域を含む脳切片を作製した。ドパミン神経のマーカー蛋白質であるチロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）抗体（Immunostar社製、mouse monoclonal antibody 22941、１：１０００）と反応させ、蛍光標識された二次抗体（Alexa 594 anti-mouse IgG (Jackson ImmunoResearch社製、1:500)）で検出し、陽性細胞数を評価した。結果を図１１に示す。【０３１２】
溶媒のみ投与群で低下したＴＨ陽性細胞数は実施例１および３の化合物の投与により有意に改善し、比較例１の化合物では改善しなかった。すなわち、比較例１の化合物ではドパミン神経細胞数に改善効果が確認できなかったのに対し、実施例１および３の化合物投与群では有意に効果が確認された。【０３１３】
試験例１２：パーキンソン病モデル動物を用いたα-シヌクレイン凝集抑制評価試験
ＭＰＴＰ（２５ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）を１０週齢のC57BL6 Nマウスに一日一回５日間連続投与し、パーキンソン病モデル動物を作製した。ＭＰＴＰ最終投与２４時間後から溶媒（ｎ＝６）、ＦＡＢＰ３リガンド（実施例１の化合物、０．１ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝５），０．３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６）または１．０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝４），ｐ．ｏ．）、ＦＡＢＰ３リガンド（実施例３の化合物、１．０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝４），ｐ．ｏ．）および非ＦＡＢＰ３リガンド（比較例１の化合物、１．０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７），ｐ．ｏ．）を一日一回投与した。ドパミン神経の脱落およびα−シヌクレイン多量体形成がみられるＭＰＴＰ投与後４週目においてマウスを灌流固定し、５０μｍの厚さで黒質領域を含む脳切片を作製した。ＴＨ抗体（Immunostar社製、mouse monoclonal antibody 22941、１：１０００）およびα−シヌクレイン抗体（Santa Cruz社製、rabbit polyclonal antibody SC-7011-R、１：２００）と反応させ、蛍光標識された二次抗体（Alexa 488 anti-rabbit IgG (Jackson ImmunoResearch社製、1:500)）で検出し、陽性細胞数を評価した。結果を図１２に示す。【０３１４】
溶媒のみ投与群で増加したＴＨおよびα−シヌクレイン二重陽性細胞数は実施例１の化合物で改善し、実施例３では改善傾向がみられた。一方、比較例１の化合物では改善しなかった。すなわち、シヌクレインの凝集が生じていないドパミン神経細胞数に関して、比較例１の化合物では改善効果が確認できなかったのに対し、実施例１および３の化合物投与群では有意に効果が確認された。【０３１５】
試験例１３：ＡＮＳを用いたＦＡＢＰリガンドの親和性評価試験
大腸菌［ＢＬ２１（ＤＥ３）株］にＧＳＴ−ＦＡＢＰ３およびＧＳＴ−ＦＡＢＰ４をそれぞれ発現させたのち、グルタチオンカラムを用いてアフィニティー精製を行った。【０３１６】
ＧＳＴ−ＦＡＢＰ３およびＧＳＴ−ＦＡＢＰ４ベクターのクローニングは以下の方法で行った。マウス心臓から単離したｍＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写したのち、ＰＣＲ法によりＦＡＢＰ３遺伝子（ＲｅｆＳｅｑＩＤ：ＮＭ＿０１０１７４．１）およびＦＡＢＰ４遺伝子（ＲｅｆＳｅｑＩＤ：ＮＭ＿０２４４０６．２）をそれぞれ増幅させた。これらのｃＤＮＡをそれぞれDNA ligasion kit（タカラバイオ、草津）およびIn-fusion kit（タカラバイオＵＳＡ、ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて、ｐＧＥＸ−２Ｔベクター（ＧＥヘルスケアジャパン、東京）のＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ切断部位の間に挿入することで、ベクターを作製した。【０３１７】
図１５にシーケンシングを行ったＧＳＴ−ＦＡＢＰ３およびＧＳＴ−ＦＡＢＰ４の塩基配列を記載する（最初と最後のGGATTCおよびGAATTC が制限酵素切断部位である）。【０３１８】
ＧＳＴ結合タンパク質の精製は、GST purification kit（タカラバイオUSA）を用いて行った。大腸菌を遠心により回収したのち、付属のExtractionバッファーと酸化アルミニウム粉末を加え、乳鉢で破砕した。遠心した上清を付属のグルタチオンカラムに加え、氷上で30分間静置した。その後、カラム内の上清を捨て、Extractionバッファーで洗浄を行ったのち、グルタチオンを含む溶出バッファーで溶出した。溶出産物のタンパク質濃度を２８０  ｎｍ  の吸光度から算出したのち、ＡＮＳアッセイに用いた。【０３１９】
ＦＡＢＰタンパク質と結合し蛍光を発する１−アニリノナフタレン−８−スルホン酸（ＡＮＳ，最終濃度４ｍＭ、１０ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４，４０ｍＭ  ＫＣｌ，ｐＨ７．４の溶液中）とＦＡＢＰタンパク質（最終濃度０．４ｍＭ）、さらに各種リガンドを０ｎＭ、１００ｎＭ、１０００ｎＭ、２０００ｎＭ、４０００ｎＭ  （最終）の濃度で２分間インキュベートしたのち、ＡＮＳの蛍光を測定した（Ｅｘ／Ｅｍ＝３５５ｎｍ／４６０ｎｍ）。各リガンド濃度における蛍光強度をリガンド非存在下におけるＡＮＳ蛍光強度に対する相対値（％）に変換したのち、以下の等式を用いて非回帰分析により解離定数Ｋｄ（ｎＭ）を算出した。【０３２０】
Ｆ＝Ｆ０−｛［１＋（Ｐｔ＋Ｌｔ）Ｋａ−［（Ｐｔ−Ｌｔ）２Ｋａ２＋２（Ｐｔ＋Ｌｔ）Ｋａ＋１］１／２］／［２ＰｔＫａ］｝（Ｆ０−Ｆｍａｘ）
Ｆ：ある条件における相対蛍光強度（％）；
Ｆ０：リガンド非存在下における蛍光強度（＝１００）；
Ｐｔ：ＦＡＢＰタンパク質濃度（＝４００ｎＭ）；
Ｌｔ：リガンド濃度（＝１００，１０００，２０００，４０００ｎＭ）；
Ｋａ：解離定数Ｋｄの逆数（ｎＭ−１）；
Ｆｍａｘ＊：ＦＡＢＰがリガンドにより完全に占有された時の相対蛍光強度。【０３２１】
結果を表２に示す。リガンドとして使用したLigands １〜１０は、それぞれ実施例１〜３の化合物、比較例１の化合物、実施例１０〜１５の化合物を使用した。その構造式を以下に示す。【０３２２】
【化４７】
0006750837.tif 000050
【０３２３】
【化４８】
0006750837.tif 000051
【０３２４】
【化４９】
0006750837.tif 000052
【０３２５】
今回、リガンドの溶解性の観点から、Ｌｔ＝１００，０００ｎＭ（リガンド６および８以外），２０，０００ｎＭ（リガンド６および８）時の相対蛍光強度をＦｍａｘとした。【０３２６】
測定結果に基づいて算出した解離定数Ｋｄを以下の表に示す。【０３２７】
【表２】
0006750837.tif 000053
【０３２８】
上記表のＫｄ値は３回の測定の平均±ＳＥとして表示されている。【０３２９】
なお、図面に示す試験結果において、＊および＊＊はそれぞれコントロールに対する有意差ｐ＜０．０５、およびｐ＜０．０１であることを示し、＃および＃＃はそれぞれMPTP投与後に溶媒を投与した群に対する有意差がｐ＜０．０５、およびｐ＜０．０１であることを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【配列表】
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