(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量のＮ−｛（Ｒ）−１−［８−クロロ−２−（１−オキシピリジン−３−イル）キノリン−３−イル］−２，２，２−トリフルオロエチル｝ピリド［３，２−ｄ］−ピリミジン−４−イルアミンまたはその薬学的に許容可能な塩を含む、シェーグレン症候群の治療および／または予防のための医薬組成物。
【請求項２】
シェーグレン症候群の治療および／または予防のための医薬の製造のための、Ｎ−｛（Ｒ）−１−［８−クロロ−２−（１−オキシピリジン−３−イル）キノリン−３−イル］−２，２，２−トリフルオロエチル｝ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンまたはその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項３】
シェーングレン症候群が原発性シェーグレン症候群である、請求項１に記載の医薬組成物、または請求項２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、既知の化合物の新規な治療的使用に関する。より詳細には、本発明は、シェーグレン症候群の治療においてフッ素化エチル側鎖を含む特定の置換キノリン誘導体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｎ−｛（Ｒ）−１−［８−クロロ−２−（１−オキシピリジン−３−イル）キノリン−３−イル］−２，２，２−トリフルオロエチル｝−ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンは、Ｗ２０１２／０３２３３４に具体的に開示される。その刊行物に記載されている化合物は、特に有害な炎症、自己免疫性、心血管性、神経変性、代謝性、腫瘍学的、侵害受容および眼科的状態の治療において、医薬品として有益であるとことが述べられている。
【０００３】
しかしながら、ＷＯ２０１２／０３２３３４において、そこに記載されている化合物が、シェーグレン症候群の治療において有益であり得ることの特定の開示または示唆はない。
【０００４】
シェーグレン症候群は、免疫細胞が、外分泌腺、主に唾液腺および涙腺を攻撃して破壊する慢性自己免疫疾患である。シェーグレン症候群の特徴的な症状は、特に口（口腔乾燥症）および目（眼球乾燥症；乾性角結膜炎）の乾燥を発生する。シェーグレン症候群は、皮膚、鼻および膣の乾燥を引き起こし、腎臓、血管、肺、肝臓、膵臓、脳および末梢神経系を含む他の身体の器官に影響を及ぼし得る。シェーグレン症候群は、「第１の」疾患（それ自体で生じる）として、または「第２の」状態としてのいずれかに臨床的に分類され、それは、全身性エリテマトーデスまたは関節リウマチなどの少なくとも１つの他の結合組織疾患と関連して起こる。
【０００５】
シェーグレン症候群は、最大で人口の３％までに現われ、地理的な蔓延の変化は、ほとんどまたは全くないと考えられる。女性は男性より９倍多く病気を発症する可能性が高い。発症の平均年齢は、４０〜６０歳であり、シェーグレン症候群の罹患率は、年齢とともに増加する。
【０００６】
シェーグレン症候群は、身体の重要な器官に損傷を与え、症状が安定し、悪化し、または寛解する可能性がある。一部の患者は、乾燥した目と口の軽度の症状しか経験がないが、他は、良好な健康のサイクルを衰弱させて、その後重度の病気を患う。多くの患者は、個別に症状を治療することができるが、他の人は、目のかすみ、目の不快感、再発性口腔感染、耳下腺の腫れ、嗄声および嚥下と食べることの困難に耐えなければならない。衰弱する疲労や関節痛は、生活の質を著しく低下させる可能性がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
現在、シェーグレン症候群のための治療法は知られておらず、腺分泌を回復する効果的な治療もない。既存の治療は、一般的には、対症的で支持的であり、水分補充療法（例えば、目と口の乾燥の症状を緩和するため）および様々な形態の潤滑を含む。慢性的なドライアイの治療のためのシクロスポリン、唾液の流れを刺激するためのセビメリンまたはピロパルピンを含む処方薬が利用可能である。メトトレキサートおよびヒドロキシクロロキンなどの抗炎症剤もまた、筋骨格症状の改善のために処方されている。しかしながら、広範な重篤な副作用がある場合に限り、現在利用可能な医薬品は、理想的ではない。
【０００８】
驚くべきことに、Ｎ−｛（Ｒ）−１−［８−クロロ−２−（１−オキシピリジン−３−イル）−キノリン−３−イル］−２，２，２−トリフルオロエチル｝ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンは、シェーグレン症候群のインビボ動物モデルにおいて効果的であることが、現在わかっている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
したがって、本発明は、シェーグレン症候群の治療および／または予防において使用のために、式（Ａ）のＮ−｛（Ｒ）−１−［８−クロロ−２−（１−オキシピリジン−３−イル）キノリン−３−イル］−２，２，２−トリフルオロエチル｝ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン：
【化１】
0006721606.tif 000002
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１０】
本発明はまた、シェーグレン症候群の治療および／または予防のための方法を提供し、この方法は、そのような治療を必要とする患者に有効量の上記のような式（Ａ）のＮ−｛（Ｒ）−１−［８−クロロ−２−（１−オキシピリジン−３−イル）キノリン−３−イル］−２，２，２−トリフルオロエチル｝ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンまたはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む。
【００１１】
本発明はまた、シェーグレン症候群の治療および／または予防のための医薬の製造のための、上記のような式（Ａ）のＮ−｛（Ｒ）−１−［８−クロロ−２−（１−オキシピリジン−３−イル）キノリン−３−イル］−２，２，２−トリフルオロエチル｝ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンまたはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
シェーグレン症候群の有効な治療および／または予防のために、医薬組成物が提供され得、これは、医薬担体に関連して、上記のような式（Ａ）のＮ−｛（Ｒ）−１−［８−クロロ−２−（１−オキシピリジン−３−イル）キノリン−３−イル］−２，２，２−トリフルオロエチル｝ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンまたはその薬学的に許容可能な塩を含む。典型的な医薬組成物は、経口、口腔、非経口、経鼻、局所、眼科、若しくは直腸投与に適した形態、または吸入または送気による投与に適した形態をとり得る。
【００１３】
経口投与について、医薬組成物は、例えば、錠剤、トローチ剤、カプセル剤、液剤、シロップ剤または懸濁剤の形態をとり得るか、またはそれらは、使用前に水または他の適切な賦形剤を用いて構成のための乾燥生成物として提供され得る。口腔投与について、組成物は、錠剤またはトローチ剤の形態をとり得る。非経口投与について、組成物は、注射用、例えばボーラス注射または注入用に処方され得、皮下投与について、または長時間作用処方、例えば、移植または筋肉内注射によって投与され得るデポー製剤で処方され得；注射のための処方は、単位剤形、例えば、ガラスアンプルまたは複数回投与容器、例えば、ガラスバイアルで表され得、油性または水性賦形剤中の懸濁液、溶液またはエマルションとしてそのような形態をとり得るか、または有効成分は、使用前に、適切な賦形剤、例えば、無菌の発熱物質を含まない水を用いる構成のための粉末形態であり得る。経鼻投与または吸入による投与について、組成物は、加圧パックまたはネブライザー用のエアロゾルスプレー提示の形態をとり得る。局所投与について、組成物は、軟膏またはローションの形態をとり得る。眼科投与について、組成物は、微粉化した懸濁液または軟膏として処方され得る。直腸投与について、組成物は、坐剤として処方され得る。
【００１４】
組成物は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ, Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ, 第２１版, ２０１１年に記載されるように、製薬業界で周知の慣例によって処方され得る。
【００１５】
シェーグレン症候群の治療および／または予防における使用のために、Ｎ−｛（Ｒ）−１−［８−クロロ−２−（１−オキシピリジン−３−イル）キノリン−３−イル］−２，２，２−トリフルオロエチル｝ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンまたはその薬学的に許容可能な塩は、体重の約１ｎｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇ、一般的には約２ｎｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、典型的には約５ｎｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ、適切には約１０ｎｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、理想的には約１日投与量で適切には投与され得る。有効成分は、典型的には、１日１〜４回の投与計画で投与されるだろう。１０ｎｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、より詳細には１０ｎｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇの
【００１６】
所望の場合、Ｎ−｛（Ｒ）−１−［８−クロロ−２−（１−オキシピリジン−３−イル）キノリン−３−イル］−２，２，２−トリフルオロエチル｝ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンまたはその薬学的に許容可能な塩は、別の薬学的に活性な薬剤、例えば、メトトレキサートまたはヒドロキシクロロキンなどの抗炎症性分子と一緒に併用投与され得る。
【００１７】
本発明の特定の側面について、以下説明する。
Ｎ−｛（Ｒ）−１−［８−クロロ−２−（１−オキシピリジン−３−イル）キノリン−３−イル］−２，２，２−トリフルオロエチル｝−ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン［以下、「化合物（Ａ）」という］は、シェーグレン症候群を模倣するマウス唾液腺における異所性リンパ節形成（ｅｃｔｏｐｉｃ ｌｙｍｐｈｏｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓ）の誘導可能なモデルにおいてインビボで研究された。得られた結果を添付図面に示す。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、０日目から予防的に賦形剤または化合物（Ａ）で処理されたマウスの唾液腺におけるカニューレ挿入後１５日目のリンパ球プロフィールのＦＡＣＳ（蛍光活性化細胞選別）を示す。賦形剤:  n  =  ３匹のマウス    化合物(A):  n  =  ５匹のマウス    MZ  B細胞  =辺縁帯Ｂ細胞  FO  B細胞  =濾胞性Ｂ細胞    *  p  <  0.05    **  p  <  0.01
【図２】図２は、カニューレ挿入後３日目から治療的に賦形剤または化合物（Ａ）で処理したマウスの唾液腺におけるカニューレ挿入後１５日目のリンパ球プロフィールのＦＡＣＳ分析を示す。賦形剤:  n  =  ４匹のマウス    化合物(A):  n  =  ５匹のマウス    MZ  B  細胞  =辺縁帯Ｂ細胞    FO  B細胞  =濾胞性Ｂ細胞    *  p  <  0.05    **  p  <  0.01
【図３】図３は、０日目から予防的に賦形剤または化合物（Ａ）で処理されたマウスの唾液腺におけるカニューレ挿入後１５日目にＴＬＯ（三次リンパ器官）関連遺伝子の遺伝子発現を示す。示された遺伝子をコードするｍＲＮＡ転写物の定量的ＲＴ−ＰＣＲ分析は、ハウスキーピング遺伝子に標準化した。ＲＱとして提示された相対的発現値は、カニューレ挿入後０日目の唾液腺の値で較正された。賦形剤:  n  =  ３匹のマウス    化合物(A):  n  =  ２匹のマウス    *  p  <  0.05
【図４】図４は、０日目から予防的にまたはカニューレ挿入後３日目から治療的に賦形剤または化合物（Ａ）で処理されたマウスの唾液腺のカニューレ挿入後１５日目のＴＬＯ関連遺伝子の遺伝子発現を示す。賦形剤:    n  =  ３匹のマウス    化合物(A),カニューレ挿入後０日目:  n  =  ３匹のマウス    化合物(A),カニューレ挿入後３日目:  n  =  3匹のマウス    *  p  <  0.05    **  p  <  0.01    ***  p  <  0.001
【実施例】
【００１９】
方法
化合物（Ａ）は、ｉｎ Ｊ. Ｉｍｍｕｎｏｌ., ２０１２, １８９, ３７６７−３７７６においてＭ. Ｂｏｍｂａｒｄｉｅｒｉらによって記載された誘導性異所性リンパ組織形成のインビトロマウスモデルにおいて評価され、これは、シェーグレン症候群の認識された動物モデルである。
【００２０】
簡潔には、野生型（Ｃ５７ＢＬ／６）マウスは、顎下腺排出管の逆行カニューレを介して複製欠損アデノウイルス５（ＡｄＶ５）（１０８ｐ.ｆ.ｕ.）を与えられ、カニューレ挿入後の特定の時点で、犠牲にした。化合物（Ａ）または賦形剤対照は、それぞれカニューレ挿入後の０日目または３日目のいずれかで開始する予防的および治療的の両方で毎日チューブによる栄養補給によって投与された。単離されたマウス唾液腺における免疫細胞状態を評価するために、単一細胞懸濁液のフローサイトメトリーおよび定量的リアルタイムＰＣＲを使用して、サンプル中のタンパク質およびｍＲＮＡ発現を評価した。
【００２１】
唾液腺の酵素消化およびフローサイトメトリー
間質細胞消化
化合物（Ａ）または賦形剤のいずれかを投与されたマウスから複製欠損ＡｄＶ５注入唾液腺が、異なる時点で処分したマウスから単離された。腺を切開し、氷上でＲＰＭＩ−１６４０（２％ＦＣＳ含有）（１ｍＬ）中に入れた。全ての唾液腺を回収したら、ＲＰＭＩ−１６４０を除去し、酵素混合物（２％ＦＣＳ、０．８ｍｇ／ｍＬのディスパーゼ、０．２ｍｇ／ｍＬのコラーゲナーゼＰ、および０．１ｍｇ／ｍＬのＤＮアーゼＩを含むＲＭＰＩ）（２ｍＬ）で置換した。唾液腺を小片に切断し、管を、マグネティックスターラーを用いて水浴中で３７℃でインキュベートした。２０分後、唾液腺切片を、１ｍＬピペットを用いて非常にゆっくりとピペットし、組織をさらに破壊し、ほとんどの細胞を放出させた。混合物を水浴中で置き換え、大きな断片を３０秒間沈降させ、その後酵素混合物を除去した。氷冷ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中の０．５％のＢＳＡ、２ｍＭのＥＤＴＡ）（１０ｍＬ）を添加し、遠心分離した（１８００ｒｐｍ、４分、４℃）。
【００２２】
遠心分離後、新鮮な酵素混合物（２ｍＬ）を消化管に添加した。内容物を、１ｍＬのピペットを使用して静かに混合し、１ｍＬのピペットを使用して定期的に穏やかに混合しながらインキュベートした。１０分後、細胞を１ｍＬのピペットを使用して３０秒間激しく混合した。断片を再度沈降させ、上清を除去し、以前に遠心した細胞ペレットに添加し、新鮮な酵素混合物（２ｍＬ）を消化管に添加した。次に軽く保たれた場合、全ての残りの唾液腺断片が完全に消化されるまで、消化混合物を５分ごとに１ｍＬピペットを使用して激しく混合した。最後に、各採取管が唾液腺の細胞内容物全体を含むまで、上清を各除去（１８００ｒｐｍ、４分、４℃）後、遠心分離した。細胞を７０μｍのナイロンメッシュでろ過し、血球計を使用して計数した。
【００２３】
フローサイトメトリー分析
単一細胞懸濁液を、以下の抗体の「カクテル」との氷冷ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中０．５％ＢＳＡ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ）中、４℃で３０分間、希釈抗体（１００μＬ）と共にインキュベートした：ＣＤ４５ ＰＥＲＣＰＣＹ５．５(１：３００)またはＣＤ４５ ｅＦｌｕｏｒ７８０(１：８００)クローン３０−Ｆ１１、ＣＤ３ｅ ＰＥＣＹ７またはＦＩＴＣ (１：１００)クローン１４５−２Ｃ１１、ＣＤ４ ｅｆｌｕｏｒ４５０ (１：１００)クローンＲＭ４−５、ＣＤ６２Ｌ ＰＥ(１：５００)クロ−ンＭＥＬ−１４、ＣＤ４４ ＦＩＴＣ(１：５００)クローンＩＭ７、ＣＤ８ａ ＡＰＣ（１：４００）クローン５３−６．７, Ｂ２２０ ＦＩＴＣ (１：２００)またはＢ２２０ ｅｆｌｕｏｒ４５０（１：５０）クローンＲＡ３−６Ｂ２、ＣＤ２３ ＰＥ(１：２００)クローンＢ３Ｂ４、ＣＤ１９ ＰＥ（１：２００）またはＡＰＣ−ＣＹ７(１：１００)クロ−ン１Ｄ３およびＣＤ５ ＦＩＴＣ (１：１００)クローン５３−７．３ (ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅからの全て)およびＣＤ２１ ＡＰＣ (１：５０)クローン ７Ｇ６ (ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから)。Ｋｉ６７の細胞内染色を、製造業者のプロトコールに従って固定化／透明性緩衝液セット（Ｆｉｘａｔｉｏｎ／Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ Ｓｅｔ）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用することによって行った。
【００２４】
すなわち、所望の抗体のカクテルによる表面染色後、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、固定化／透明性緩衝液セット（Ｆｉｘａｔｉｏｎ／Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ Ｓｅｔ）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）（３５０μＬ）に再懸濁し、４℃で３０分間インキュベートした。細胞を、４分間、１８００ｒｐｍで固定化／透明性緩衝液セット（Ｆｉｘａｔｉｏｎ／Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ Ｓｅｔ）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で２回洗浄し、続いて２０分間、４℃でＫｉ６７ Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ６４７（１：５０）クローンＢ５６（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でインキュベートした。次に、細胞を緩衝液で洗浄し、ＦＡＣＳ中に再懸濁し、非生存細胞を排除するために、設定された前方／側方散乱ゲートを有するＣｙａｎ−ＡＤＰ（Ｄａｋｏ）を用いて分析した。データをＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を用いて分析した。
【００２５】
結果
単離されたリンパ球に対するフローサイトメトリーによって確認されるように、賦形剤処理マウスと比較して、ＴおよびＢ細胞の数の有意な減少が、化合物（Ａ）で予防的に処理されたマウスのカニューレ状の唾液腺においてインビボで観察された（図１）。同様に、ＴおよびＢ細胞の数の有意な減少は、単離されたリンパ球に対するフローサイトメトリーによって確認されるように、賦形剤処理マウスと比較して、カニューレ挿入後３日目から化合物（Ａ）で治療的に処理されたマウスのカニューレ状の唾液腺においてインビボで観察された（図２）。
【００２６】
ＴＬＯ関連遺伝子の遺伝子発現プロファイルもまた、化合物（Ａ）で予防的に処理されたマウスにおいて有意に阻害された（図３および４）。この減少は、カニューレ挿入後３日目から治療的に処理されたマウスにおいて保存された（図４）。
【００２７】
結論
これらの研究は、化合物（Ａ）は、シェーグレン症候群の認識されたインビボ動物モデルにおいて、炎症病巣の解離および唾液腺炎症の解消において、予防的または治療的に投与された場合に効果的であることを証明する。
【図１−１】
0006721606.tif 000003
【図１−２】
0006721606.tif 000004
【図２−１】
0006721606.tif 000005
【図２−２】
0006721606.tif 000006
【図３】
0006721606.tif 000007
【図４】
0006721606.tif 000008