(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ステビアを含有する植物気孔開口促進剤。
【請求項２】
ステビアを含有する植物気孔開口促進剤であって、
アブシジン酸誘導性気孔閉鎖阻害活性を有する、請求項１に記載の植物気孔開口促進剤。
【請求項３】
ステビアを含有する植物気孔開口促進剤であって、
暗所気孔開口促進活性を有する、請求項１に記載の植物気孔開口促進剤。
【請求項４】
ステビアを含有する植物気孔開口促進剤であって、
明所気孔開口促進活性を有する、請求項１に記載の植物気孔開口促進剤。
【請求項５】
前記ステビアが、ステビオール化合物、ステビア抽出物、及び酵素処理ステビアからなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１〜４の何れか１項に記載の植物気孔開口促進剤。
【請求項６】
前記ステビアが、ステビオール、ステビオシド、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＭ、ステビオールビオシド、ルブソシド、及びズルコシドからなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１〜５の何れか１項に記載の植物気孔開口促進剤。
【請求項７】
前記ステビアが、ステビア抽出物である、請求項１〜５の何れか１項に記載の植物気孔開口促進剤。
【請求項８】
前記ステビアが、酵素処理ステビアである、請求項１〜５の何れか１項に記載の植物気孔開口促進剤。
【請求項９】
前記ステビアが、レバウジオシドである、請求項１〜５の何れか１項に記載の植物気孔開口促進剤。
【請求項１０】
請求項１〜９の何れか一項に記載の植物気孔開口促進剤を、植物若しくは植物の生育する土壌又は培養液に使用する、植物の気孔開口促進方法。
【請求項１１】
請求項１〜９の何れか１項に記載の植物気孔開口促進剤を植物に施用する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物気孔開口促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
陸生植物の表皮に存在する気孔は、１対の孔辺細胞により構成され、その開口度を調節することにより、植物と大気との間で光合成に関連する物質（二酸化炭素、酸素、水等）の植物内外の出入りを制御している。
【０００３】
気孔は、植物が光合成を盛んに行っている太陽光下（昼間）、特にシグナルとして作用する青色光域の光に応答して開口し、光合成に必要な二酸化炭素の取込み、蒸散、酸素の放出等を促進することが知られている。
【０００４】
蒸散は、強い日差しで上昇した葉温を低下させ、同時に根における水及び無機養分の取込みを促す。一方、植物が乾燥ストレスに曝されると、乾燥ストレスに応答して産出させる植物ホルモン（アブシジン酸）に応答して、気孔が閉鎖し、植物体からの水分損失を防ぐ。その反面、気孔の働きは二酸化炭素の取込み、蒸散、酸素の放出等を抑制することになる（非特許文献１）。このため、気孔開口を人為的に促進することにより、熱ストレス耐性向上、葉からの肥料成分の吸収促進、植物体内で生じた有害ガスの排出の促進等の効果が期待できることから、これまでにも気孔開口促進物質の探索が行われてきた。
【０００５】
例えば、特許文献１には、抗がん剤として知られているテンシロリムス等の特定の化合物を含有する植物気孔開口調節剤が開示されている。しかしながら、このテンシロリムスは、微生物Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓによって生産されるラパマイシンから誘導されるマクロライド化合物の一つであり、植物に用いるには高額である。
【０００６】
そこで、安価で、かつ安全性が高く、気孔開口促進効果に優れた物質が切望されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１６−１１７６８５号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｐｌａｎｔ  Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｍａｙ  ２０１６，ｖｏｌｕｍｅ  ７， Ａｒｔｉｃｌｅ ５７１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、安価で、かつ安全性が高く、気孔開口促進効果に優れた植物気孔開口促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記課題に鑑み鋭意研究を重ねた結果、本発明者等は、甘味料の原料であるステビアに含有される甘味成分及びその類縁化合物が植物気孔開口促進作用を有することを見出した。また、これらの化合物による気孔開口促進作用は、気孔閉鎖誘導性の植物ホルモンであるアブシジン酸による気孔閉鎖誘導を阻害すること、暗所での気孔閉鎖誘導を阻害すること、及び、明所での気孔開口を促進することを見出した。本発明は、これらの知見に基づいて更に研究を重ねた結果、完成されたものである。
【００１１】
すなわち、本発明は、以下のとおりである。
【００１２】
項１．
ステビアを含有する植物気孔開口促進剤。
項２．
前記ステビアが、ステビオール化合物、ステビア抽出物、及び酵素処理ステビアからなる群より選択される少なくとも１種である、項１に記載の植物気孔開口促進剤。
項３．
前記ステビアが、ステビオール、ステビオシド、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＭ、ステビオールビオシド、ルブソシド、及びズルコシドからなる群より選択される少なくとも１種である、項１又は２に記載の植物気孔開口促進剤。
項４．
前記ステビアが、ステビア抽出物である、項１又は２に記載の植物気孔開口促進剤。
項５．
前記ステビアが、酵素処理ステビアである、項１又は２に記載の植物気孔開口促進剤。
項６．
項１〜５の何れか一項に記載の植物気孔開口促進剤を、植物若しくは植物の生育する土壌又は培養液に使用する、植物の成長促進方法。
項７．
ステビアの植物気孔開口促進剤としての使用方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、ステビアを含む植物気孔開口促進剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、マルバツユクサ裏表皮を用いて行った、ステビオールによる明所気孔開口促進活性の評価結果を示したグラフである。
【図２】図２は、マルバツユクサ裏表皮を用いて行った、ファームＡによる明所気孔開口促進活性の評価結果を示したグラフである。
【図３】図３は、ジャガイモ苗を用いて行った、ステビロンＴＫによる明所気孔開口促進活性の評価結果を示したグラフである。
【図４】図４は、マルバツユクサ裏表皮を用いて行った、ステビオールによる暗所気孔開口促進活性の評価結果を示したグラフである。
【図５】図５は、マルバツユクサ裏表皮を用いて行った、ステビオシドによる暗所気孔開口促進活性の評価結果を示したグラフである。
【図６】図６は、マルバツユクサ裏表皮を用いて行った、レバウジオシドＡによる暗所気孔開口促進活性の評価結果を示したグラフである。
【図７】図７は、マルバツユクサ裏表皮を用いて行った、ファームＡによる暗所気孔開口促進活性の評価結果を示したグラフである。
【図８】図８は、マルバツユクサ裏表皮を用いて行った、ステビオールによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖阻害活性の評価結果を示したグラフである。
【図９】図９は、マルバツユクサ裏表皮を用いて行った、ステビオシドによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖阻害活性の評価結果を示したグラフである。
【図１０】図１０は、マルバツユクサ裏表皮を用いて行った、レバウジオシドＡによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖阻害活性の評価結果を示したグラフである。
【図１１】図１１は、マルバツユクサ裏表皮を用いて行った、ファームＡによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖阻害活性の評価結果を示したグラフである。
【図１２】図１２は、トマト苗を用いて行った、ステビオールによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖阻害活性の評価結果を示したグラフである。
【図１３】図１３は、トマト苗を用いて行った、ステビオシドによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖阻害活性の評価結果を示したグラフである。
【図１４】図１４は、トマト苗を用いて行った、レバウジオシドＡによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖阻害活性の評価結果を示したグラフである。
【図１５】図１５は、トマト苗を用いて行った、ファームＡによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖阻害活性の評価結果を示したグラフである。
【図１６】図１６は、実施例１〜１５において測定した気孔開度の模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
ステビア
ステビア（学名：Ｓｔｅｖｉａ  ｒｅｂａｕｄｉａｎａ  Ｌ．）は、世界中で天然甘味料、食品添加物等として使用されている、南アメリカ原産のキク科ステビア属の多年草である。ステビアの草丈は、通常、５０ｃｍから１ｍ前後であり、その茎は白い細毛に覆われている。また、ステビアの別名は、アマハステビアである。
【００１６】
本明細書において、ステビアには、例えば、天然のステビアの葉、茎及び／又は根（以下、「天然のステビア」ともいう。）、天然のステビアを粉末化したステビア粉末、天然のステビア中に含まれる成分（ステビアから単離した化合物、以下、「単離成分」ということもある。）、天然のステビアから抽出した抽出物（以下、「ステビア抽出物」ということもある。）、ステビア抽出物の残渣、及び、この単離成分又はステビア抽出物を処理したもの（以下、「ステビア処理物又はステビア誘導体ということもある。）等が含まれる。
【００１７】
ここで、上記天然のステビア中に含まれる成分（単離成分）としては、ステビオール又はその誘導体が挙げられる。
【００１８】
ステビオールとは、下記一般式（１）：
【化１】
0006741262.tif 000002
[式中、Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、水素原子、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、糖アルコール、又はアミノ糖を示す。]
で表されるステビオール化合物のうち、Ｒ１及びＲ２がそれぞれ水素原子を示す化合物である。
【００１９】
また、ステビオールの誘導体としては、ステビオールから誘導される化合物であれば特に限定はなく、例えば、上記一般式（１）で表されるステビオール化合物のうち、Ｒ１及びＲ２が、同一又は異なって、水素原子、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、糖アルコール、又はアミノ糖を示す化合物（ただし、上記一般式（１）において、Ｒ１及びＲ２がそれぞれ水素原子を示す化合物（ステビオール）を除く。）である。
【００２０】
単糖としては、例えば、ケトトリオース（ジヒドロキシアセトン）、アルドトリオース（グリセルアルデヒド）等のトリオース；
ケトテトロース（エリトルロース）、アルドテトロース（エリトロース、トレオース）等のテトロース；
ケトペントース（リブロース、キシルロース）、アルドペントース（リボース、アラビノース、キシロース、リキソース）、デオキシ糖（デオキシリボース）等のペントース；
ケトヘキソース（プシコース、フルクトース、ソルボース、タガトース）、アルドヘキソース（アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、タロース）、デオキシ糖（フコース、フクロース、ラムノース）等のヘキソース；
セドヘプツロース等のヘプトース；又はこれらの誘導体等が挙げられる。
【００２１】
二糖としては、例えば、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、ツラノース、セロビオース等のニ糖類；又はこれらの誘導体等が挙げられる。
【００２２】
三糖としては、例えば、ラフィノース、メレジトース、マルトトリオース等の三糖類；又はこれらの誘導体等が挙げられる。
【００２３】
四糖としては、例えば、アカルボース、スタキオース等の四糖類；又はこれらの誘導体等が挙げられる。
【００２４】
オリゴ糖としては、例えば、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、マンナンオリゴ糖（ＭＯＳ）等のオリゴ糖類；又はこれらの誘導体等が挙げられる。
【００２５】
糖アルコールとは、アルドース又はケトースのカルボニル基が還元されて生成する糖の一種であり、例えば、エリスリトール、トレイトール等のテトリトール；アラビイトール、キシリトール、リビトール等のペンチトール；イジトール、ガラクチトール、グリシトール、マンニトール等のヘキシトール；ボレミトール、ペルセイトール等のヘプチトール；マルチトール；又はこれらの誘導体等が挙げられる。
【００２６】
アミノ糖とは、アミノ基（アミン）を含む糖であり、例えば、グルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルムラミン酸、ガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、マンノサミン、Ｎ−アセチルマンノサミン、ノイラミン酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸、ダウノサミン、フルクトサミン、ヘキソサミン、ケトサミン、ムラミルジペプチド、ペロサミン、シアル酸；又はこれらの誘導体等が挙げられる。
【００２７】
これらの単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、又はその誘導体は、単独で用いてもよく、また混合して用いてもよい。
【００２８】
ここで、二糖、三糖、四糖、及びオリゴ糖は、上記単糖のうち何れか２つ以上の単糖がグリコシド結合によって重合したものである。
【００２９】
これらステビオール化合物は、上記天然のステビア中に含まれる成分（単離成分）であってもよく、又は、化学合成によって製造したものでもよい。
【００３０】
上記一般式（１）で表されるステビオール化合物としては、具体的に、ステビオール、ステビオシド、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＧ、レバウジオシドＨ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＪ、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＬ、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＯ、ズルコシド、ステビオールビオシド、ルブソシド等が挙げられる。
【００３１】
これらステビオール化合物のうち、ステビオール（上記一般式（１）において、Ｒ１及びＲ２がそれぞれ水素原子である化合物）以外の化合物は、ステビオールを骨格とする配糖体、すなわち、「ステビオール配糖体」ということもできる。ステビオール化合物は、１種又は２種以上の化合物を用いることができる。
【００３２】
なお、ステビオシドは、ステビオサイド(ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ）ともいう。レバウジオシドは、レバウディオサイド、レバウジオサイド（ｒｅｂａｕｄｉｏｓｉｄｅＡ）ともいう。ズルコシドは、ズルコサイド（ｄｕｌｃｏｓｉｄｅ）ともいう。ステビオールビオシドは、ステビオールビオサイド（ｓｔｅｖｉｏｌｂｉｏｓｉｄｅ）ともいう。ルブソシドは、ルブソサイド（ｒｕｂｕｓｏｓｉｄｅ）ともいう。ステビオールは、ステビオル（ｓｔｅｖｉｏｌ）ともいう。
【００３３】
ステビア抽出物としては、キク料ステビアから抽出されたものであれば特に限定はない。ステビア抽出物として、例えば、ステビアの植物体（葉、茎、及び、根を含む）を、室温〜熱水で抽出することによって得られた抽出物、該抽出物を精製して得られたもの等が挙げられる。このステビア抽出物は、単独又は溶液等を含む希釈品である液体、粉末、顆粒品等の形態で用いることができる。ここで、ステビア抽出物は、１種又は２種以上のステビア抽出物を用いることができる。なお、市販されているステビア抽出物を使用することもできる。市販のステビア抽出物として、例えば、ファームＡ（登録商標、ＯＡＴアグリオ株式会社製）、ステビロン（登録商標）ＴＫ（守田化学工業株式会社製）等が挙げられる。
【００３４】
ステビア処理物（ステビア誘導体ともいう。）は、天然のステビア、ステビアから得られた成分（単離成分、単離化合物）、又はステビア抽出物を、化学処理又は酵素処理することにより得られた成分をいう。
中でも、ステビアを酵素処理して得られた化合物（以下、「酵素処理ステビア」という）は、ステビア又はステビア抽出物を、酵素で処理することによって得られた処理物であれば特に限定されない。酵素処理ステビアとして、例えば、ステビア抽出物にα−グルコシルトランスフェラーゼ等を用いてグルコースを付加して得られた処理物等が挙げられる。ここで、酵素処理ステビアは、１種又は２種以上の酵素処理ステビアを用いることができる。
【００３５】
本明細書において、ステビアには、１種のステビア成分又は２種以上のステビア組成物、ステビア抽出物、１種又は２種以上の酵素処理ステビアだけでなく、これらの混合物も含まれる。
【００３６】
好ましいステビアは、ステビオール、ステビオシド、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＭ、ステビオールビオシド、ルブソシド、ズルコシド、及びステビア抽出物であり、より好ましくはステビオール、ステビオシド、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＭ、ステビオールビオシド、ルブソシド、ズルコシド、及びステビア抽出物であり、特に好ましくは、ステビオール、ステビオシド及びレバウジオシドＡ、及びステビア抽出物である。
【００３７】
本発明に用いるステビアは、植物の気孔開口を促進することができる。したがって、ステビア、ステビア抽出物、及び酵素処理ステビアからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする植物気孔開口促進剤として用いることができる。
【００３８】
植物の気孔開口は、気孔閉鎖誘導性の植物ホルモンであるアブシジン酸によって抑制されるが、本発明の植物気孔開口促進剤は、その活性を阻害することができる。
【００３９】
また、植物は暗条件下においては気孔の閉鎖を誘導するが、本発明の植物気孔開口促進剤は、その誘導作用を打ち消す方向に働くことができる。本発明の植物気孔開口促進剤は、明条件下での気孔開口をさらに促進する効果がある。
【００４０】
本発明の植物気孔開口促進剤の対象植物は、気孔を有する陸生植物である限り特に限定されない。本発明の植物気孔開口促進剤を使用できる有用植物としては、特に限定はなく、例えば、稲、大麦、小麦、ライ麦、オート麦、トウモロコシ等の穀類；
大豆、小豆、そら豆、えんどう豆、インゲン豆、落花生等の豆類；
林檎、柑橘類、梨、葡萄、桃、梅、桜桃、胡桃、栗、アーモンド、バナナ、イチゴ等の果樹又は果実類；
キャベツ、トマト、ホウレンソウ、ブロッコリー、レタス、タマネギ、ネギ、ピーマン、ナス、ペッパー等の葉又は果菜類；
ニンジン、馬鈴薯、サツマイモ、サトイモ、大根、蓮根、カブ、ゴボウ、ニンニク等の根菜類；
棉、麻、ビート、ホップ、サトウキビ、テンサイ、オリーブ、ゴム、コーヒー、タバコ、茶等の加工用作物；
カボチャ、キュウリ、マクワウリ、スイカ、メロン等のウリ類；
オーチャードグラス、ソルガム、チモシー、クローバー、アルファルファ等の牧草類；
高麗芝、ベントグラス等の芝類；
ラベンダー、ローズマリー、タイム、パセリ、胡椒、生姜等の香料鑑賞用作物；
キク、バラ、カーネーション、蘭等の花卉類；
イチョウ、サクラ類、アオキ等の庭木；
トドマツ類、エゾマツ類、松類、ヒバ、杉、桧等の林木等が挙げられる。
【００４１】
本発明の植物気孔開口促進剤は、上記した有効成分のみからなるものでもよいが、上記した有効成分に加えて、後述の剤形、施用態様等に応じて種々の添加剤を含むことができる。植物気孔開口促進剤中の上記有効成分の含有割合は、後述の剤形、施用態様等に応じて適宜決定することができる。例えば、液剤を気孔に接触させる場合であれば、通常０．００１〜８０，０００μＭ、好ましくは０．０１〜８，０００μＭ、より好ましくは０．１〜８００μＭ程度が例示される。
【００４２】
本発明の植物気孔開口促進剤の剤形は、農学的に許容される剤形である限り特に限定はなく、例えば、液剤、固形剤、粉剤、顆粒剤、粒剤、水和剤、フロアブル剤、乳剤、ペースト剤、分散剤等が挙げられる。
【００４３】
添加剤は、農学的に許容される添加剤である限り特に限定はなく、例えば、担体、界面活性剤、増粘剤、増量剤、結合剤、ビタミン類、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、揮散抑制剤、色素等が挙げられる。
【００４４】
本発明の植物気孔開口促進剤の施用態様は、農薬の使用態様として公知の態様（或いは将来開発される態様）である限り特に限定はなく、例えば、散布、滴下、塗布、植物生育環境中（土壌中、水中、固形培地中、液体培地中、培養液中等）への混合又は溶解等が挙げられる。
【実施例】
【００４５】
以下、実施例及び試験例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【００４６】
材料（原料）
・ステビオール（ＣｈｒｏｍａＤｅｘ, Ｉｎｃ社製）
・ステビオシド（東京化成工業株式会社製）
・レバウジオシドＡ（東京化成工業株式会社製）
・ファームＡ（登録商標、ＯＡＴアグリオ株式会社製）：所定の比率にてステビア草地上部と水とを混合し、加熱した後、遠心分離により得られた液相を真空濃縮したものを、所定の期間、発酵処理を行って得られたものであり、ステビオール並びにステビオシド、レバウジオシドＡ等のステビオール配糖体を含有する（実施例１６参照）。
・ステビロン（登録商標）ＴＫ（守田化学工業株式会社製）：ステビア抽出物であって、ステビオール配糖体を８０％以上含有する甘味料である。
・アブシジン酸（富士フィルム和光純薬株式会社製又は東京化成工業株式会社製）
・気孔開度測定溶液（１０ｍＭ ＭＥＳ−ＫＯＨ［ｐＨ６．５］， ５０ｍＭ  ＫＣｌ,  ０．１ｍＭ  ＣａＣｌ２、いずれも富士フィルム和光純薬株式会社製）
・試験溶液：上記気孔開度測定溶液に、以下の実施例１〜１５に記載の原料を所定の終濃度となるように添加したものを試験溶液とした。
・葉面散布処理化合物溶液：アブシジン酸、及び、ステビオール、ステビオシド、又はレバウジオシドＡを所定の終濃度となるように添加し、さらに、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０（東京化成工業株式会社製）を展着剤として終濃度１００ｐｐｍとなるように混合した水溶液を葉面散布処理化合物溶液とした。
・葉面散布処理用ファームＡ溶液：ファームＡを所定の終濃度となるよう添加した水溶液を葉面散布処理用ファームＡ溶液とした。
・葉面散布処理用アブシジン酸溶液：アブシジン酸を所定の終濃度となるよう添加した水溶液を葉面散布処理用アブシジン酸溶液とした。
・葉面散布処理用ステビロンＴＫ溶液：ステビロンＴＫを所定の終濃度となるよう添加し、加えてＴｗｅｅｎ（登録商標）８０（東京化成工業株式会社製）を展着剤として終濃度１００ｐｐｍとなるように混合した水溶液を葉面散布処理用ステビロンＴＫ溶液とした。
【００４７】
実施例１：ステビオールによる明所気孔開口促進活性の評価
マルバツユクサ（Ｃｏｍｍｅｌｉｎａ  ｂｅｎｇｈａｌｅｎｓｉｓ  Ｌ.）の裏表皮を剥離して気孔開度測定溶液に浸漬し、暗所に２時間静置した。その後、前記気孔開度測定溶液にステビオールを１００μＭ又は３００μＭ（終濃度）になるよう添加した各試験溶液、又はステビオール無添加（比較例１）の気孔開度測定溶液にマルバツユクサ裏表皮を浸漬し、３時間明所に静置した。顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＢＨ２;対物レンズ  ＳＰｌａｎ  １０［オリンパス株式会社製］倍率２００倍）に取り付けたデジタルカメラ（ＬＣＤ（Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｙｓｔａｌ  Ｄｉｓｐｌａｙ：液晶ディスプレイ）、ケニス株式会社製）を使って、試験溶液に浸漬した後のマルバツユクサ裏表皮を撮影した。計測ソフト（デジタルマイクロアナライザー、日本ポラロイド株式会社製；ポラロイドは登録商標）を用いて気孔開度を測定した。なお、気孔開度とは、図１６に示している、気孔の内径のことをいう。気孔開度の測定は、各添加濃度について８０個以上実施した。各添加濃度で得られた気孔開度をステビオール無添加（０μＭ、比較例１）での気孔開度と比較して、スチューデントｔ−検定による統計解析を実施した。その結果を、図１及び表１に示す。
【００４８】
測定値は平均±標準誤差で示す。図中、＊＊：Ｐ＜０．０１であり、＊：Ｐ＜０．０５である。以下の図２〜図１５についても同様である。
【００４９】
【表１】
0006741262.tif 000003
【００５０】
＜結果＞
ステビオールを１００μＭ又は３００μＭで添加した場合、ステビオール無添加（０μＭ：比較例１）の場合と比較して、気孔開度の増大が見られた。特に、ステビオールを３００μＭ添加した場合、図１に示すように統計学的に有意な気孔開度の増大が見られ、明所での気孔開口促進が確認された。これより、ステビオールが気孔開口促進効果を有することがわかった。
【００５１】
実施例２：ファームＡによる明所気孔開口促進活性の評価
剥離したマルバツユクサの裏表皮を気孔開度測定溶液に浸漬し、暗所にて２時間静置した。その後、ファームＡを５００倍又は２５０倍希釈（最終濃度）になるように添加した各試験溶液、又はファームＡ無添加（比較例２）の気孔開度測定溶液にマルバツユクサ裏表皮を浸漬し、３時間明所に置いた後、実施例１と同様にして気孔開度を測定した。その結果を、図２及び表２に示す。
【００５２】
【表２】
0006741262.tif 000004
【００５３】
＜結果＞
ファームＡを５００倍希釈又は２５０倍希釈になるように添加した場合、ファームＡ無添加（比較例２）の場合と比較して、図２に示すように統計学的に有意な気孔開度の増大が見られ、明所での気孔開口促進が確認された。これより、ファームＡが気孔開口促進効果を有することがわかった。
【００５４】
実施例３：ステビロンＴＫによる気孔開口促進効果の評価
２０１９年３月９日に培土としてくみあい園芸用育苗培土愛菜１号（片倉コープアグリ株式会社製）をスリット鉢ＣＳＭ−Ｌ（兼弥産業株式会社製）に深さ１０ｃｍで種芋（男爵芋、株式会社コメリにて購入）を植え、出芽後、芽数を一つに調整した。４月１８日１２：３０以降において、生育状態が同程度の株を選抜し、ステビロンＴＫを終濃度として２００，０００倍、１００，０００倍、５０，０００倍、又は２５，０００倍希釈となるよう展着剤を加えて葉面散布処理用ステビロンＴＫ溶液を調製し、葉面散布処理を行った。なお、比較対象（比較例３）として展着剤のみを含む水溶液を散布した。翌日（１９日）の１１：００から１２：３０の間において、気孔開口の指標となる気孔コンダクタンスの値を、リーフポロメーターＳＣ−１（ＭＥＴＥＲ  Ｇｒｏｕｐ, Ｉｎｃ.社製）を用いて計測した。計測においては、各個体の完全展開葉の新葉から数えて第２葉の複葉を５枚計測し、中庸３点の計測を、各処理条件につき３株ずつ実施し、続く解析に用いた。統計解析としては、展着剤のみを含む水を処理した株（比較例３）より得られた測定結果との比較を行い、下表３及び図３を得た。なお、本計測値については、その値が大きいほど気孔が良く開いている状態であることを示している。
【００５５】
【表３】
0006741262.tif 000005
【００５６】
＜結果＞
ステビロンＴＫをいずれの希釈倍数で添加した場合においても、ステビロンＴＫ無添加（比較例３）の場合と比較して、図３に示すように統計学的に有意な気孔コンダクタンス計測値の向上が見られた。これより、ステビロンＴＫが気孔開口促進効果を有することがわかった。
【００５７】
実施例４：ステビオールによる暗所気孔開口促進活性の評価
剥離したマルバツユクサの裏表皮を気孔開度測定溶液に浸漬し、暗所にて２時間静置した。その後、ステビオールを２００μＭ又は３００μＭ（最終濃度）になるように添加した各試験溶液、又はステビオール無添加（比較例４）の気孔開度測定溶液にマルバツユクサ裏表皮を浸漬し、３時間暗所に置いた後、実施例１と同様にして気孔開度を測定した。その結果を、図４及び表４に示す。
【００５８】
【表４】
0006741262.tif 000006
【００５９】
＜結果＞
ステビオールを２００μＭ又は３００μＭで添加した場合、ステビオール無添加（０μＭ：比較例４）の場合と比較して、図４に示すように気孔開度が統計的に有意に増大し、暗所での気孔開口促進効果が確認された。これより、ステビオールが気孔開口促進効果を有することがわかった。
【００６０】
実施例５：ステビオシドによる暗所気孔開口促進活性の評価
剥離したマルバツユクサの裏表皮を気孔開度測定溶液に浸漬し、暗所にて２時間静置した。その後、ステビオシドを１００μＭ、２００μＭ、又は３００μＭ（最終濃度）になるように添加した各試験溶液、又はステビオシド無添加（比較例５）の気孔開度測定溶液にマルバツユクサ裏表皮を浸漬し、３時間暗所に置いた後、実施例１と同様にして気孔開度を測定した。その結果を、図５及び表５に示す。
【００６１】
【表５】
0006741262.tif 000007
【００６２】
＜結果＞
ステビオシドを１００μＭ、２００μＭ又は３００μＭで添加した場合、ステビオシド無添加（０μＭ：比較例５）の場合と比較して、気孔開度の増大が見られた。特に、ステビドシドの添加濃度が１００μＭ及び２００μＭの場合、図５に示すように統計学的に有意な気孔開度の増大が見られ、ステビドシドが暗所での気孔開口促進効果を有することがわかった。
【００６３】
実施例６：レバウジオシドＡによる暗所気孔開口促進活性の評価
剥離したマルバツユクサの裏表皮を気孔開度測定溶液に浸漬し、暗所にて２時間静置した。その後、レバウジオシドＡを１０μＭ、１００μＭ、２００μＭ、又は３００μＭ（最終濃度）になるように添加した各試験溶液、又はレバウジオシドＡ無添加（比較例６）の気孔開度測定溶液にマルバツユクサ裏表皮を浸漬し、３時間暗所に置いた後、実施例１と同様にして気孔開度を測定した。その結果を、図６及び表６に示す。
【００６４】
【表６】
0006741262.tif 000008
【００６５】
＜結果＞
レバウジオシドＡをいずれの濃度で添加した場合においても、レバウジオシドＡ無添加（０μＭ：比較例６）の場合と比較して、図６に示すように統計学的に有意な気孔開度の増大が見られ、暗所での気孔開口促進が確認された。これより、レバウジオシドＡが気孔開口促進効果を有することがわかった。
【００６６】
実施例７：ファームＡによる暗所気孔開口促進活性の評価
剥離したマルバツユクサの裏表皮を気孔開度測定溶液に浸漬し、暗所にて２時間静置した。その後、ファームＡを２，０００、１，０００、又は５００倍希釈（最終濃度）になるように添加した各試験溶液、又はファームＡ無添加（比較例７）の気孔開度測定溶液にマルバツユクサ裏表皮を浸漬し、３時間暗所に置いた後、実施例１と同様にして気孔開度を測定した。その結果を、図７及び表７に示す。
【００６７】
【表７】
0006741262.tif 000009
【００６８】
＜結果＞
ファームＡをいずれの希釈倍数で添加した場合においても、ファームＡ無添加（比較例７）の場合と比較して、図７に示すように統計学的に有意な気孔開度の増大が見られ、ファームＡが暗所での気孔開口促進作用を有することがわかった。
【００６９】
実施例８：ステビオールによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖阻害活性の評価  その１
マルバツユクサの裏表皮を剥離して気孔開度測定溶液に浸漬し、明所に３時間静置した。その後、気孔開度測定溶液に１０μＭ（終濃度）アブシジン酸、及びステビオール４００μＭ又は６００μＭを添加した各試験溶液、又は１０μＭ（終濃度）アブシジン酸のみを添加し、ステビオール無添加（比較例８）の気孔開度測定溶液にマルバツユクサ裏表皮を浸漬し、２時間静置した後、実施例１と同様にして気孔開度を測定した。その結果を、図８及び表８に示す。
【００７０】
【表８】
0006741262.tif 000010
【００７１】
＜結果＞
ステビオールを４００μＭ又は６００μＭで添加した場合、ステビオール無添加（０μＭ：比較例８）の場合と比較して、図８に示すように気孔開度が統計的に有意に大きく、ステビオールによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖阻害効果が確認された。
【００７２】
実施例９：ステビオシドよるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖阻害活性の評価  その１
マルバツユクサの裏表皮を剥離して気孔開度測定溶液に浸漬し、明所に３時間静置した後、1０μＭ（終濃度）アブシジン酸、及びステビオシドを３００、又は８００μＭ（終濃度）添加した各試験溶液、又は１０μＭ（終濃度）アブシジン酸のみを添加し、ステビオシド無添加（比較例９）の気孔開度測定溶液にマルバツユクサ裏表皮を浸漬し、２時間静置した後、実施例１と同様にして気孔開度を測定した。その結果を、図９及び表９に示す。
【００７３】
【表９】
0006741262.tif 000011
【００７４】
＜結果＞
ステビオシドを３００μＭ又は８００μＭで添加した場合、ステビオシド無添加（０μＭ：比較例９）と比較して、図９に示すように気孔開度が統計的に有意に大きく、ステビオシドによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖阻害効果が確認された。
【００７５】
実施例１０：レバウジオシドＡによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖誘導阻害活性の評価  その１
マルバツユクサの裏表皮を剥離して気孔開度測定溶液に浸漬し、明所に３時間静置した後、1０μＭ（終濃度）アブシジン酸、及びレバウジオシドＡを１００、３００、又は５００μＭ（終濃度）添加した各試験溶液、又は１０μＭ（終濃度）アブシジン酸のみを添加し、レバウジオシドＡ無添加（比較例１０）の気孔開度測定溶液にマルバツユクサ裏表皮を浸漬し、２時間静置した後、実施例１と同様にして気孔開度を測定した。その結果を、図１０及び表１０に示す。
【００７６】
【表１０】
0006741262.tif 000012
【００７７】
＜結果＞
レバウジオシドＡを１００μＭ、３００μＭ又は５００μＭで添加した場合、レバウジオシドＡ無添加（０μＭ：比較例１０）の場合と比較して、図１０に示すように気孔開度が統計的に有意に大きく、レバウジオシドＡによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖阻害効果が確認された。
【００７８】
実施例１１：ファームＡによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖誘導阻害活性の評価  その１
マルバツユクサの裏表皮を剥離して気孔開度測定溶液に浸漬し、明所に３時間静置した後、1０μＭ（終濃度）アブシジン酸、及びファームＡを５００倍希釈（終濃度）になるよう添加した各試験溶液、又は１０μＭ（終濃度）アブシジン酸のみを添加し、ファームＡ無添加（比較例１１）の気孔開度測定溶液にマルバツユクサ裏表皮を浸漬し、２時間静置した後、実施例１と同様にして気孔開度を測定した。その結果を、図１１及び表１１に示す。
【００７９】
【表１１】
0006741262.tif 000013
【００８０】
＜結果＞
ファームＡをいずれの希釈倍数で添加した場合においても、ファームＡ無添加（比較例１１）と比較して、図１１に示すように統計学的に有意な気孔開度の増大が見られ、ファームＡによる明所でのアブシジン酸誘導性気孔閉鎖阻害効果が確認された。
【００８１】
実施例１２：ステビオールによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖誘導阻害活性の評価  その２
２０１８年７月３１日において育苗用ポット（ビーポットＹ−５５型、キャネロン化工株式会社製）に、培土としてくみあい園芸用育苗培土愛菜１号（片倉コープアグリ株式会社製）を擦切り一杯入れ、そこに、トマト（品種：ポンテローザ）を各ポット２粒ずつ播種し、ＯＡＴアグリオ株式会社栽培研究センター人工気象室（２５℃、暗期／明期 １１時間／１３時間、明期は６：００〜１９：００）に設置した。給水は底面給液で実施し、子葉展開時に株の選抜を行った。およそ４葉齢まで生育させた作物について、Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ８０を１００ｐｐｍ、アブシジン酸３０μＭ、ならびにステビオールを０μＭ（比較例１２）、１００μＭ、３００μＭ、又は５００μＭそれぞれ溶解させた薬液を、地上部に均一に８月２１日８：３０に散布した。作物の第２葉頂葉の葉裏について、当日１１：３０及び１６：００に、瞬間接着剤（一般用瞬間ボンドアロンアルファ（登録商標）、東亞合成株式会社製）とカバーガラスを用いて気孔を写し取り、気孔観察用試料を作成した。これを顕微鏡観察（倍率１，０００倍）し、気孔の開閉個数を１００個以上計数し、下式に従って気孔開口率を算出した。
【００８２】
（式）気孔開口率（％）＝ １００ x （開口している気孔数）/（調査気孔総数）
【００８３】
調査については各処理条件について４反復にて行い、各個体の調査より得られた気孔開口率についてステビオール無添加（０μＭ：比較例１２）区に対するスチューデントｔ−検定による有意差検定を行った。その結果を、図１２及び表１２に示す。
【００８４】
【表１２】
0006741262.tif 000014
【００８５】
＜結果＞
いずれの添加濃度及び調査時間においても、ステビオール無添加（０μＭ：比較例１２）の場合と比較して、図１２に示すように統計学的に有意な気孔開口率の向上が見られ、ステビオールによるアブシジン酸誘導性の気孔閉鎖阻害効果が確認された。
【００８６】
実施例１３：ステビオシドによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖誘導阻害活性の評価  その２
２０１８年２月２７日において育苗用ポット（ビーポットＹ−５５型、キャネロン化工株式会社製）に、培土としてくみあい園芸用育苗培土愛菜１号（片倉コープアグリ株式会社製）を擦切り一杯入れ、そこに、トマト（品種：ポンテローザ）を各ポット２粒ずつ播種し、ＯＡＴアグリオ株式会社栽培研究センター人工気象室（２５℃、暗期／明期 １１時間／１３時間、明期は６：００〜１９：００）に設置した。給水は底面給液で実施し、子葉展開時に株の選抜を行った。およそ３葉齢まで生育させた作物について、Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ８０を１００ｐｐｍ、アブシジン酸３０μＭ、ならびにステビオシドをそれぞれ０μＭ（比較例１３）、３００μＭ、又は５００μＭ溶解させた薬液を、地上部に均一に３月１５日８：３０に散布した。作物の第２葉頂葉の葉裏について、当日１１：３０及び１６：００に、瞬間接着剤（一般用瞬間ボンドアロンアルファ（登録商標）、東亞合成株式会社製）とカバーガラスを用いて気孔を写し取り、気孔観察用試料を作成した。これを顕微鏡観察（倍率１，０００倍）し、気孔の開閉個数を１００個以上計数し、下式に従って気孔開口率を算出した。
【００８７】
（式）気孔開口率（％）＝ １００ x （開口している気孔数）/（調査気孔総数）
【００８８】
調査については各処理条件について４反復にて行い、各個体の調査より得られた気孔開口率についてステビオシド無添加（０μＭ：比較例１３）区に対するスチューデントｔ−検定による有意差検定を行った。その結果を、図１３及び表１３に示す。
【００８９】
【表１３】
0006741262.tif 000015
【００９０】
＜結果＞
いずれの添加濃度及び調査時間においても、ステビオシド無添加（０μＭ：比較例１３）の場合と比較して、気孔開口率の向上が見られた。特に、５００μＭ処理且つ１１：３０を除く添加濃度及び調査時間においては、図１３に示すように統計学的に有意な気孔開口率の向上が見られ、ステビオシドによるアブシジン酸誘導性の気孔閉鎖阻害効果が確認された。
【００９１】
実施例１４：レバウジオシドＡによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖阻害活性の評価  その２
２０１８年３月８日において育苗用ポット（ビーポットＹ−５５型、キャネロン化工株式会社製）に、培土としてくみあい園芸用育苗培土愛菜１号（片倉コープアグリ株式会社製）を擦切り一杯入れ、そこに、トマト（品種：ポンテローザ）を各ポット２粒ずつ播種し、ＯＡＴアグリオ株式会社栽培研究センター人工気象室（２５℃、暗期／明期 １１時間／１３時間、明期は６：００〜１９：００）に設置した。給水は底面給液で実施し、子葉展開時に株の選抜を行った。およそ３葉齢まで生育させた作物について、Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ８０を１００ｐｐｍ、アブシジン酸３０μＭ、ならびにレバウジオシドＡをそれぞれ０μＭ（比較例１４）、１００μＭ、３００μＭ、又は５００μＭ溶解させた薬液を、地上部に均一に３月２７日８：３０に散布した。作物の第２葉頂葉の葉裏について、当日１１：３０及び１６：３０に、瞬間接着剤（一般用瞬間ボンドアロンアルファ（登録商標）、東亞合成株式会社製）とカバーガラスを用いて気孔を写し取り、気孔観察用試料を作成した。これを顕微鏡観察（倍率１，０００倍）し、気孔の開閉個数を１００個以上計数し、下式に従って気孔開口率を算出した。
【００９２】
（式）気孔開口率（％）＝ １００ x （開口している気孔数）/（調査気孔総数）
【００９３】
調査については各処理条件４反復にて行い、各個体の調査より得られた気孔開口率についてレバウジオシドＡ無添加（０μＭ：比較例１４）区に対するスチューデントｔ−検定による有意差検定を行った。その結果を、図１４及び表１４に示す。
【００９４】
【表１４】
0006741262.tif 000016
【００９５】
＜結果＞
いずれの添加濃度及び調査時間においても、レバウジオシドＡ無添加（０μＭ：比較例１０）の場合と比較して、気孔開口率の向上が見られた。特に、レバウジオシドＡを３００μＭ及び５００μＭの濃度で添加して処理した場合においては、図１４に示すように統計学的に有意な気孔開口率の向上が見られ、レバウジオシドＡによるアブシジン酸誘導性の気孔閉鎖阻害が確認された。
【００９６】
実施例１５：ファームＡによるアブシジン酸誘導性気孔閉鎖誘導阻害活性の評価  その２
２０１７年１０月１８日において育苗用ポット（ビーポットＹ−５５型、キャネロン化工株式会社製）に、培土としてくみあい園芸用育苗培土愛菜１号（片倉コープアグリ株式会社製）を擦切り一杯入れ、そこに、トマト（品種：ポンテローザ）を各ポット２粒ずつ播種し、ＯＡＴアグリオ株式会社栽培研究センター人工気象室（２５℃、暗期／明期 １１時間／１３時間、明期は６：００〜１９：００）に設置した。給水は底面給液で実施し、子葉展開時に株の選抜を行った。およそ３葉齢まで生育させた作物について、Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ８０を１００ｐｐｍ、アブシジン酸１０μＭ、ならびにファームＡを無添加（比較例１５）、１，０００、又は５００倍希釈にて溶解させた薬液を、地上部に均一に１１月７日９：００に散布した。作物の第２葉頂葉の葉裏について、翌日１１：３０に、瞬間接着剤（一般用瞬間ボンドアロンアルファ（登録商標）、東亞合成株式会社製）とカバーガラスを用いて気孔を写し取り、気孔観察用試料を作成した。これを顕微鏡観察（倍率１，０００倍）し、同一視野内の気孔の開口部と気孔縦長とを８個計測（図１６参照）し、下式に従って気孔開度を算出し、これらの平均値を算出した。これを各条件４反復にて実施し、得られた平均値についてスチューデントｔ−検定による統計解析を行い、下表１５及び図１５を得た。
【００９７】
（式）  気孔開口比率  ＝  気孔開度（μｍ） / 気孔縦長（μｍ）
【００９８】
【表１５】
0006741262.tif 000017
【００９９】
＜結果＞
いずれの添加希釈倍数においても、ファームＡ無添加（比較例１５）の場合と比較して、図１５に示すように統計学的に有意な気孔開口比率の向上が見られ、ファームＡによる明所でのアブシジン酸誘導性気孔閉鎖阻害効果が確認された。
【０１００】
実施例１６：ファームＡ中に含有されるステビオール及びステビオール配糖体含量の分析
ファームＡについて、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法により、ステビオール、ステビオシド、及びレバウジオシドＡの含量を分析した。分析装置として、溶媒低圧グラジエントポンプＰＵ−２０８９型、インテリジェントオートサンプラーＡＳ−２０５１型、ＰＤＡ検出器ＭＤ−２０１８型、及びカラムオーブンＣＯ−２０６７より構成される液体クロマトグラフィー装置（日本分光株式会社製）を使用した。分析用カラムとしてはＬ−ｃｏｌｕｍｎ ２ ＯＤＳ, ５μｍ （ｓｉｚｅ４．６×２５０ｍｍ、一般財団法人化学物質評価機構製）を用いた。移動相としては、ステビオールについては、０．１％リン酸（和光純薬株式会社製）を含有する水とアセトニトリルとの４０：６０の混合溶液、ステビオシド及びレバウジオシドＡについては、０．１％リン酸を含有する水とアセトニトリルとの７０：３０の混合溶液を用いた。流速は、１ｍＬ／ｍｉｎ、カラム温度は４０℃とし、検出は２１０ｎｍの紫外線吸収スペクトルと設定し、溶出を行い、各化合物由来のピークの検出及び定量を行った。ファームＡの１０倍希釈液を作成し、ろ過処理を行ったものを分析用試料とした。得られた吸収スペクトルピーク面積を、標準品を用いて作成した検量線における近似式に当てはめ、試料中濃度の算出を行った結果、下表１６を得た。
【０１０１】
【表１６】
0006741262.tif 000018
【０１０２】
＜結果＞
ファームＡ中には、ステビオール及びステビオール配糖体が含有されることが確認された。
【要約】
【課題】安価で、かつ安全性が高く、気孔開口促進効果に優れた植物気孔開口促進剤を提供すること。
【解決手段】本発明は、ステビアを含有する植物気孔開口促進剤である。
【選択図】なし【図１】
0006741262.tif 000019
【図２】
0006741262.tif 000020
【図３】
0006741262.tif 000021
【図４】
0006741262.tif 000022
【図５】
0006741262.tif 000023
【図６】
0006741262.tif 000024
【図７】
0006741262.tif 000025
【図８】
0006741262.tif 000026
【図９】
0006741262.tif 000027
【図１０】
0006741262.tif 000028
【図１１】
0006741262.tif 000029
【図１２】
0006741262.tif 000030
【図１３】
0006741262.tif 000031
【図１４】
0006741262.tif 000032
【図１５】
0006741262.tif 000033
【図１６】
0006741262.tif 000034