(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物であって、
【化５４】
0006637988.tif 000064
式中、
Ｒ１およびＲ２は同一または異なる、それぞれ、１〜９個の炭素の直鎖アルキル、または２〜１１個の炭素のアルケニルもしくはアルキニルであり、かつ
Ｌ１は、５〜１８個の炭素を有する直鎖アルキレンまたはアルケニレンであり、かつ
Ｌ２は、５〜１８個の炭素を有するアルケニレンであるか、あるいは
Ｒ１は、１２〜２０個の炭素を有する分岐アルキルからなり、Ｒ２は、５〜１０個の炭素を有する直鎖アルキルまたは１２〜２０個の炭素を有する分岐アルキルからなり、かつ
Ｌ１およびＬ２は、それぞれ、結合、または１〜３個の炭素を有する直鎖アルキレンからなり、
ＸはＳであり、
Ｌ３は、結合、または１〜６個の炭素を有するアルキレンであり、
Ｒ３は、１〜６個の炭素を有するアルキレンであり、
Ｒ４およびＲ５は同一または異なる、それぞれ、１〜６個の炭素を有する直鎖または分岐アルキルである、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｌ３が結合である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ３がｎ−プロピレンまたはイソプロピレンである、請求項１〜２のいずれかに記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ４およびＲ５がそれぞれメチル、エチルまたはイソプロピルである、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれ、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個の炭素原子を有する分岐アルキルであり、Ｌ１およびＬ２のそれぞれが結合または１〜３個の炭素を有する直鎖アルキレンからなる、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】
Ｌ１およびＬ２のそれぞれが直鎖アルキレンである、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
Ｌ１およびＬ２の両方がアルケニレンである、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】
Ｌ１またはＬ２のいずれかまたは両方が１個の二重結合を含む、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
式Ｉの化合物であって、
【化５４】
0006637988.tif 000065
式中、
Ｒ１およびＲ２は同一または異なる、それぞれ、１〜９個の炭素の直鎖アルキル、または２〜１１個の炭素のアルケニルもしくはアルキニルであり、かつ
Ｌ１は、５〜１８個の炭素を有する直鎖アルキレンまたはアルケニレンであり、かつ
Ｌ２は、５〜１８個の炭素を有するアルケニレンであるか、あるいは
Ｒ１は、１２〜２０個の炭素を有する分岐アルキルからなり、Ｒ２は、５〜１０個の炭素を有する直鎖アルキルまたは１２〜２０個の炭素を有する分岐アルキルからなり、かつ
Ｌ１およびＬ２は、それぞれ、結合、または１〜３個の炭素を有する直鎖アルキレンからなり、
ＸはＳであり、
Ｌ３は、結合、または１〜６個の炭素を有するアルキレンであり、
Ｒ３は、１〜６個の炭素を有するアルキレンであり、
Ｒ４およびＲ５は同一または異なる、それぞれ、１〜６個の炭素を有する直鎖または分岐アルキルである、化合物、またはその溶媒和物または塩、および薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１０】
脂質粒子を含む、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ＲＮＡをさらに含み、前記ＲＮＡが封入されている、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記脂質粒子が、脂質複合体をさらに含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記脂質粒子が、非カチオン性脂質をさらに含む、請求項１０に記載の医薬組組成物。
【請求項１４】
式ＩＩＩの化合物であって、
【化５６】
0006637988.tif 000066
式中、
Ｒ１は、１〜１８個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキル、２〜１２個の炭素からなるアルケニルもしくはアルキニル、またはコレステリルからなり、
Ｒ２は、１〜１８個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキル、または２〜１８個の炭素からなるアルケニルからなり、
Ｌ１は、５〜９個の炭素からなる直鎖アルキルからなるか、またはＲ１がコレステリルからなる場合、Ｌ１は、３〜４個の炭素からなる直鎖アルキレンもしくはアルケニルからなり、
Ｘ１は、−Ｏ−（ＣＯ）−または−（ＣＯ）−Ｏ−からなり、
Ｘ２はＳまたはＯからなり、
Ｌ２は、結合、または１〜６個の炭素の直鎖アルキレンからなり、
Ｒ３は、１〜６個の炭素を有する直鎖または分岐アルキレンからなり、
Ｒ４およびＲ５は同一または異なり、それぞれ１〜６個の炭素の直鎖または分岐アルキルからなる、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
Ｘ１が、−Ｏ−（ＣＯ）−からなる、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｘ２がＳからなる、請求項１４〜１５のいずれかに記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ３がエチレン、ｎ−プロピレンまたはイソプロピレンからなる、請求項１４〜１６のいずれかに記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ４およびＲ５が独立して、メチル、エチル、またはイソプロピルからなる、請求項１４〜１７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１９】
Ｌ２が結合またはメチレンからなる、請求項１４〜１８のいずれかに記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つが、分岐または直鎖アルキルからなる、請求項１４〜１９のいずれかに記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれ、１３または１４個の炭素からなる、請求項１４〜２０のいずれかに記載の化合物。
【請求項２２】
Ｌ２がメチレンからなり、Ｒ３がエチレンからなり、Ｘ１が−Ｏ−（ＣＯ）−からなり、Ｘ２がＳからなり、Ｒ４およびＲ５がそれぞれメチルからなる、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｌ２が結合からなり、Ｒ３がエチレン、ｎ−プロピレンまたはイソプロピレンからなり、Ｘ１が−Ｏ−（ＣＯ）−からなり、Ｘ２がＳからなり、Ｒ４およびＲ５がそれぞれメチルからなる、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２４】
請求項１４〜２３のいずれかに記載の化合物を含む脂質粒子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、一部継続出願である、２０１５年５月８日出願の米国特許出願第１４／７０７，７９６号、および２０１５年５月８日出願の米国特許出願第１４／７０７，８７６号、ならびに２０１４年１１月１８日出願の米国特許出願第１４／５４６，１０５号に対する優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
多数の疾患の処置のための治療薬として、多数の異なる種類の核酸が現在開発中である。これらの核酸には、遺伝子治療におけるＤＮＡ、プラスミドベースの干渉核酸、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンス分子、リボザイムおよびアプタマーを含む、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）において使用するための低分子干渉核酸が含まれる。これらの分子が開発されるにつれ、それらを、安定で長い貯蔵寿命を有し、極性水溶液または無極性溶媒中で起こり得る副反応なしに、核酸の封入を可能にするために、無水有機または無水極性非プロトン性溶媒中に容易に組み入れることができる形態で製造する必要性が生じてきた。
【０００３】
本発明は、生物学的に活性な治療用分子の細胞内送達を促進する新規な脂質組成物に関する。本発明はまた、そのような脂質組成物を含み、治療有効量の生物学的に活性な分子を患者の細胞内に送達するのに有用な医薬組成物に関する。
【０００４】
被験体への治療用化合物の送達は、その治療効果にとって重要であり、通常、それは化合物が標的化された細胞および組織に到達する能力が限られていることにより、妨げられる可能性がある。そのような化合物が多種多様な送達手段によって組織の標的化された細胞に入るための改善が重要である。本発明は、生物学的に活性な分子の標的化された細胞内送達を促進する組成物内の新規な脂質および調製方法に関する。
【０００５】
患者の組織に対する有効な標的化がしばしば達成されない生物学的に活性な分子の例としては、（１）免疫グロブリン（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｉｎ）タンパク質を含む多数のタンパク質、（２）ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド、（３）アンチセンスポリヌクレオチド、ならびに（４）合成または天然由来の多くの低分子量化合物、例えばペプチドホルモンおよび抗生物質などが挙げられる。
【０００６】
医師が現在直面している根本的な課題の一つは、多数の異なる種類の核酸が、多数の疾患の処置のための治療薬として現在開発中であることである。これらの核酸には、遺伝子治療におけるＤＮＡ、プラスミド、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）において使用するための低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）、ｓｉＲＮＡ、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アンチセンス分子、リボザイム、アンタゴミア（ａｎｔａｇｏｍｉｒ）、およびアプタマーが含まれる。これらの核酸が開発されるにつれ、作製が簡単で、標的組織に容易に送達することができる脂質製剤を製造する必要性がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本明細書において、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶの化合物が記載される。
【化１】
0006637988.tif 000002
Ｒ１およびＲ２がそれぞれ、１〜９個の炭素からなる直鎖アルキル、２〜１１個の炭素からなるアルケニルもしくはアルキニルからなり、Ｌ１およびＬ２がそれぞれ、５〜１８個の炭素からなる直鎖アルキレンもしくはアルケニレンからなるか、またはＮと複素環を形成しており、Ｘ１およびＸ３がともに、−ＣＯ−Ｏ−からなり、Ｘ２がＳまたはＯからなり、Ｌ３が、結合、もしくは１〜６個の炭素からなる直鎖アルキレンからなるか、またはＮと複素環を形成しており、Ｒ３が、１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキレンからなり、Ｒ４およびＲ５が同一または異なり、それぞれ水素、または１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキルからなる、式Ｉの化合物、
またはその薬学的に許容される塩が記載される。
【０００８】
また本明細書において、
【化２】
0006637988.tif 000003
Ｒ１およびＲ２がともに、１〜１２個の炭素からなる直鎖アルキル、２〜１２個の炭素からなるアルケニルもしくはアルキニルからなり、Ｌ１およびＬ２がともに、５〜１８個の炭素からなる直鎖アルキレンもしくはアルケニレンからなるか、またはＮと複素環を形成し、ＸがＳからなり、Ｌ３が、結合、もしくは１〜６個の炭素からなる直鎖アルキレンからなるか、またはＮと複素環を形成し、Ｒ３が、１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキレンからなり、Ｒ４およびＲ５が同一または異なり、それぞれ水素、または１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキルからなる、式ＩＩの化合物、
またはその薬学的に許容される塩も記載される。
【０００９】
式ＩＩの化合物の一実施形態では、Ｌ１およびＬ２はともに、５個の炭素からなる直鎖アルキレンからなる。式Ｉの化合物の別の実施形態では、Ｒ３は、エチレンまたはプロピレンである。式Ｉの化合物の別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は同一または異なり、それぞれ水素、メチル、またはエチルである。式Ｉの化合物の別の実施形態では、Ｌ３は結合である。式Ｉの化合物の別の実施形態では、Ｒ１およびＲ２はともに、１０個の炭素からなる直鎖アルケニルからなる。
【００１０】
また本明細書において、
【化３】
0006637988.tif 000004
【化４】
0006637988.tif 000005
Ｒ１が、１２〜２０個の炭素を有する分岐アルキルからなり、Ｒ２が、５〜１０個の炭素を有する直鎖アルキルまたは１２〜２０個の炭素を有する分岐アルキルからなり、Ｌ１およびＬ２がそれぞれ、結合、または１〜３個の炭素原子を有する直鎖アルキルからなり、ＸがＳまたはＯからなり、Ｌ３が、結合、または低級アルキルからなり、Ｒ３が、低級アルキルであり、
Ｒ４およびＲ５が同一または異なり、それぞれ低級アルキルからなる、式ＩＩＩまたはＩＶの化合物またはその薬学的に許容される塩が記載される。
【００１１】
式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の一実施形態では、Ｌ３は結合からなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態、ＸはＳである。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｒ３は、エチレンである。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｒ３は、ｎ−プロピレンまたはイソプロピレンである。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は個別にメチル、エチル、またはイソプロピルである。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｌ１およびＬ２はそれぞれ、結合からなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｌ１およびＬ２はそれぞれ、メチレンからなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、分岐アルキルからなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｒ２は、アルキルからなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、１９または２０個の炭素原子からなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｒ１またはＲ２はそれぞれ、１３または１４個の炭素原子からなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｌ３はメチレンからなり、Ｒ３はエチレンであり、Ｘ２はＳであり、Ｒ４およびＲ５はそれぞれメチルである。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、式中、Ｌ３は結合からなり、Ｒ３はエチレンであり、ＸはＳであり、Ｒ４およびＲ５はそれぞれメチルである。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｌ３は結合からなり、Ｒ３はｎ−プロピレンからなり、ＸはＳからなり、Ｒ４およびＲ５はそれぞれメチルからなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｌ３は結合からなり、Ｒ３はイソプロピレンからなり、ＸはＳからなり、Ｒ４およびＲ５はそれぞれメチルからなる。
【００１２】
また、
【化５】
0006637988.tif 000006
Ｒ１が、１〜１８個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキル、２〜１２個の炭素からなるアルケニルもしくはアルキニル、またはコレステリルからなり、Ｒ２が、１〜１８個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキルまたはアルケニルからなり、Ｌ１が、５〜９個の炭素からなる直鎖アルキルからなるか、またはＲ１がコレステリルからなる場合、Ｌ１が、３〜４個の炭素からなる直鎖アルキレンもしくはアルケニルからなり、Ｘ１が、−Ｏ−（ＣＯ）−または−（ＣＯ）−Ｏ−からなり、Ｘ２がＳまたはＯからなり、Ｌ２が、結合、または１〜６個の炭素の直鎖アルキレンからなり、Ｒ３が、１〜６個の炭素を有する直鎖もしくは分岐アルキレンからなり、Ｒ４およびＲ５が同一または異なり、それぞれ１〜６個の炭素の直鎖もしくは分岐アルキルからなる、式Ｖの化合物、
またはその薬学的に許容される塩も記載される。
【００１３】
式Ｖの化合物の一実施形態では、Ｌ２は結合からなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｘ２はＳからなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｘ１は、−Ｏ−（ＣＯ）−である。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｒ３は、エチレンである。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｒ３は、ｎ−プロピレンまたはイソプロピレンである。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は個別にメチル、エチル、またはイソプロピルである。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｌ２は、メチレンからなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、分岐アルキルからなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｒ２は、アルキルからなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、１９または２０個の炭素原子からなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｒ１またはＲ２はそれぞれ、１３または１４個の炭素原子からなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｌ２はメチレンからなり、Ｒ３はエチレンであり、Ｘ１は−Ｏ−（ＣＯ）−であり、Ｘ２はＳであり、Ｒ４およびＲ５はともにメチルである。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｌ２は結合からなり、Ｒ３はエチレンであり、Ｘ１は−Ｏ−（ＣＯ）−であり、Ｘ２はＳであり、Ｒ４およびＲ５はともにメチルである。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｌ２は結合からなり、Ｒ３はｎ−プロピレンであり、Ｘ１は−Ｏ−（ＣＯ）−であり、Ｘ２はＳであり、Ｒ４およびＲ５はともにメチルである。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｌ２は結合からなり、Ｒ３はイソプロピレンであり、Ｘ１は−Ｏ−（ＣＯ）−であり、Ｘ２はＳであり、Ｒ４およびＲ５はともにメチルである。
【００１４】
核酸は好ましくは標的遺伝子の発現を抑制する活性を有する。標的遺伝子は好ましくは炎症と関連する遺伝子である。
【００１５】
また本明細書において、上記組成物のいずれかを使用することによって、哺乳動物の細胞内に核酸を導入するための方法も記載される。細胞は、肝臓、肺、腎臓、脳、血液、脾臓、または骨にあるものでもよい。組成物は好ましくは静脈内、皮下、腹腔内、または髄腔内投与される。好ましくは、本明細書に記載の組成物は、がんまたは炎症性疾患を処置するための方法において使用される。疾患は、免疫障害、がん、腎疾患、線維性疾患、遺伝子異常、炎症、および心血管障害からなる群より選択される１つであってもよい。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
式ＩＩの化合物であって、
【化４４】
0006637988.tif 000007
式中、
Ｒ１およびＲ２はともに、１〜１４個の炭素からなる直鎖アルキル、または２〜１４個の炭素からなるアルケニルもしくはアルキニルからなり、
Ｌ１およびＬ２はともに、５〜１８個の炭素からなる直鎖アルキレンもしくはアルケニレンからなるか、またはＮと複素環を形成しており、
ＸはＳであり、
Ｌ３は、結合、もしくは１〜６個の炭素からなる直鎖アルキレンからなるか、またはＮと複素環を形成しており、
Ｒ３は、１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキレンからなり、
Ｒ４およびＲ５は同一または異なり、それぞれ水素、または１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキルからなる、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
（項目２）
Ｒ１およびＲ２がともに、アルケニルである、項目１に記載の化合物。
（項目３）
Ｒ１およびＲ２がともに、アルキルである、項目１に記載の化合物。
（項目４）
Ｌ１およびＬ２がともに、直鎖アルキレンである、項目１に記載の化合物。
（項目５）
Ｌ１およびＬ２がともに、アルケニレンである、項目１に記載の化合物。
（項目６）
Ｌ１およびＬ２がともに、５個の炭素からなる直鎖アルキレンからなる、項目１に記載の化合物。
（項目７）
Ｒ３が、エチレンまたはプロピレンからなる、項目１に記載の化合物。
（項目８）
Ｒ４およびＲ５がそれぞれ、水素、メチル、またはエチルからなる、項目１に記載の化合物。
（項目９）
Ｌ３が結合からなる、項目１に記載の化合物。
（項目１０）
Ｌ３が、直鎖アルキレンからなる、項目１に記載の化合物。
（項目１１）
Ｒ１およびＲ２がともに、１０個の炭素からなる直鎖アルケニルからなる、項目１に記載の化合物。
（項目１２）
式１）〜１２）の化合物から選択される、項目１に記載の化合物。
【化４５】
0006637988.tif 000008
（項目１３）
式ＩＩＩまたはＩＶの化合物またはその薬学的に許容される塩であって、
【化４６】
0006637988.tif 000009
式中、
Ｒ１は、１２〜２０個の炭素を有する分岐アルキルからなり、
Ｒ２は、５〜１０個の炭素を有する直鎖アルキルまたは１２〜２０個の炭素を有する分岐アルキルからなり、
Ｌ１およびＬ２がそれぞれ、結合、または１〜３個の炭素原子を有する直鎖アルキルからなり、
ＸはＳまたはＯからなり、
Ｌ３は、結合、または１〜６個の炭素からなるアルキレンからなり、
Ｒ３は、１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキレンからなり、
Ｒ４およびＲ５は同一または異なり、それぞれ１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキルからなる、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
（項目１４）
Ｌ３が結合からなる、項目１３に記載の化合物。
（項目１５）
Ｌ３がアルキレンからなる、項目１７に記載の化合物。
（項目１６）
ＸがＳからなる、項目１３に記載の化合物。
（項目１７）
Ｒ３がエチレンからなる、項目１３に記載の化合物。
（項目１８）
Ｒ３が、ｎ−プロピレンまたはイソプロピレンからなる、項目１３に記載の化合物。
（項目１９）
Ｒ４およびＲ５がそれぞれ、メチル、エチル、またはイソプロピルからなる、項目１３に記載の化合物。
（項目２０）
Ｌ１およびＬ２がそれぞれ結合からなる、項目１３に記載の化合物。
（項目２１）
Ｌ１およびＬ２がそれぞれ、直鎖アルキレンからなる、項目１３に記載の化合物。
（項目２２）
Ｌ１およびＬ２がそれぞれメチレンからなる、項目１３に記載の化合物。
（項目２３）
Ｒ２が直鎖アルキルからなる、項目１３に記載の化合物。
（項目２４）
Ｒ２が分岐アルキルからなる、項目１３に記載の化合物。
（項目２５）
前記分岐アルキルが、１９または２０個の炭素原子からなる、項目２４に記載の化合物。
（項目２６）
前記分岐アルキルが、１３または１４個の炭素原子からなる、項目２４に記載の化合物。
（項目２７）
Ｌ３がメチレンからなり、Ｒ３がエチレンからなり、Ｘ２がＳからなり、Ｒ４およびＲ５がともにメチルからなる、項目１３に記載の化合物。
（項目２８）
Ｌ３が結合からなり、Ｒ３がエチレンからなり、ＸがＳからなり、Ｒ４およびＲ５がともにメチルからなる、項目１３に記載の化合物。
（項目２９）
Ｌ３が結合からなり、Ｒ３がｎ−プロピレンからなり、ＸがＳからなり、Ｒ４およびＲ５がともにメチルからなる、項目１３に記載の化合物。
（項目３０）
Ｌ３が結合からなり、Ｒ３がイソプロピレンからなり、ＸがＳからなり、Ｒ４およびＲ５がともにメチルからなる、項目１３に記載の化合物。
（項目３１）
式ＡＴＸ−Ｂ−１〜ＡＴＸ−Ｂ−１２の化合物から選択される、項目１３に記載の化合物。
【化４７】
0006637988.tif 000010
【化４８】
0006637988.tif 000011
【化４９】
0006637988.tif 000012
（項目３２）
式Ｖの化合物であって、
【化５０】
0006637988.tif 000013
式中、
Ｒ１は、１〜２０個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキル、または２〜１２個の炭素からなるアルケニルもしくはアルキニル、またはコレステリルからなり、
Ｒ２は、１〜２０個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキル、または２〜２０個の炭素からなるアルケニルもしくはアルキニル、またはコレステリルからなり、
Ｌ１は、３〜９個の炭素からなる直鎖アルキルからなるか、またはＲ１がコレステリルからなる場合、Ｌ１は、３〜４個の炭素からなる直鎖アルキレンもしくはアルケニルからなり、
Ｘ１は、−Ｏ−（ＣＯ）−または−（ＣＯ）−Ｏ−からなり、
Ｘ２はＳまたはＯからなり、
Ｌ２は、結合、または１〜６個の炭素の直鎖アルキレンからなり、
Ｒ３は、１〜６個の炭素を有する直鎖もしくは分岐アルキレンからなり、
Ｒ４およびＲ５は同一または異なり、それぞれ１〜６個の炭素の直鎖もしくは分岐アルキルからなる、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
（項目３３）
Ｘ１が、−Ｏ−（ＣＯ）−からなる、項目３２に記載の化合物。
（項目３４）
Ｘ２がＳからなる、項目３２に記載の化合物。
（項目３５）
Ｒ３がエチレンからなる、項目３２に記載の化合物。
（項目３６）
Ｒ３が、ｎ−プロピレンまたはイソプロピレンからなる、項目３２に記載の化合物。
（項目３７）
Ｒ４およびＲ５がそれぞれ、メチル、エチル、またはイソプロピルからなる、項目３２に記載の化合物。
（項目３８）
Ｌ２が結合からなる、項目３２に記載の化合物。
（項目３９）
Ｌ２がメチレンからなる、項目３２に記載の化合物。
（項目４０）
Ｒ２がアルキルからなる、項目３２に記載の化合物。
（項目４１）
Ｒ１およびＲ２がともに、分岐アルキルからなる、項目３２に記載の化合物。
（項目４２）
前記分岐アルキルが、１９または２０個の炭素原子からなる、項目４１に記載の化合物。
（項目４３）
前記分岐アルキルが、１３または１４個の炭素原子からなる、項目４１に記載の化合物。
（項目４４）
Ｌ２がメチレンからなり、Ｒ３がエチレンからなり、Ｘ１が−Ｏ−（ＣＯ）−からなり、Ｘ２がＳであり、Ｒ４およびＲ５がともにメチルからなる、項目３２に記載の化合物。
（項目４５）
Ｌ２が結合からなり、Ｒ３がエチレンからなり、Ｘ１が−Ｏ−（ＣＯ）−からなり、Ｘ２がＳからなり、Ｒ４およびＲ５がともにメチルからなる、項目３２に記載の化合物。
（項目４６）
Ｌ２が結合からなり、Ｒ３がｎ−プロピレンからなり、Ｘ１が−Ｏ−（ＣＯ）−からなり、Ｘ２がＳからなり、Ｒ４およびＲ５がともにメチルからなる、項目３２に記載の化合物。
（項目４７）
Ｌ２が結合からなり、Ｒ３がイソプロピレンからなり、Ｘ１が−Ｏ−（ＣＯ）−からなり、Ｘ２がＳからなり、Ｒ４およびＲ５がともにメチルからなる、項目３２に記載の化合物。
（項目４８）
式ＡＴＸ−Ａ−１〜ＡＴＸ−Ａ−２２の前記化合物からなる群から選択される、項目３２に記載の化合物。
【化５１】
0006637988.tif 000014
【化５２】
0006637988.tif 000015
【化５３】
0006637988.tif 000016
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】異なるカチオン性脂質により封入されたｓｉＲＮＡのノックダウン活性を示す。脂質には、ＭＣ３（０．３ｍｇ／ｋｇ）、ＮＣｌ（０．３ｍｇ／ｋｇ）、ＡＴＸ−５４７（０．３ｍｇ／ｋｇ）、ＡＴＸ−００１（０．３および１．０ｍｇ／ｋｇ）、ＡＴＸ−００２（０．３および１．０ｍｇ／ｋｇ）、およびＡＴＸ−００３（０．３および１．０ｍｇ／ｋｇ）が含まれる。マウス血漿中の第ＶＩＩ因子ノックダウンの量を、ビヒクル単独の注射と比較して、Ｃ５７ＢＬ６マウスへのｓｉＲＮＡ製剤の投与後に示す。異常および正常ヒト血漿中の第ＶＩＩ因子の量を対照として含める。第ＶＩＩ因子レベルにおける統計的に有意な減少（ｐ＜０．０１）をアステリスク（＊）により示す。
【図２】ビヒクル単独と比較してノックダウン百分率に正規化した、図２に示す結果に基づいた第ＶＩＩ因子活性のｓｉＲＮＡの効果の評価を示す。
【図３】異なるカチオン性脂質により封入されたｓｉＲＮＡのノックダウン活性を示す。脂質には、ＭＣ３（０．３および１．５ｍｇ／ｋｇ）、ＮＣｌ（０．３ｍｇ／ｋｇ）、ＡＴ５４７（０．１および０．３ｍｇ／ｋｇ）、ＡＴ００４（０．３）、ＡＴ００６（０．３および１．０ｍｇ／ｋｇ）、ＡＴＸ−０１０（０．３ｍｇ／ｋｇ）、およびＡＴ００１（０．３および１．５ｍｇ／ｋｇ）が含まれる。マウス血漿中の第ＶＩＩ因子ノックダウンの量を、ビヒクル単独の注射と比較して、Ｃ５７ＢＬ６マウスへのｓｉＲＮＡ製剤の投与後に示す。異常および正常ヒト血漿中の第ＶＩＩ因子の量を対照として含める。第ＶＩＩ因子レベルにおける統計的に有意な減少（ｐ＜０．０１）をアステリスク（＊）により示す。
【図４】ビヒクル単独と比較してノックダウン百分率に正規化した、図２に示す結果に基づいた第ＶＩＩ因子活性のｓｉＲＮＡの効果の評価を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
「少なくとも１つ」は、１つまたは複数（例えば、１〜３、１〜２、または１）を意味する。
【００１８】
「組成物」は、特定された成分を特定された量で含む生成物、ならびに特定された成分を特定された量で組み合わせることによって直接的または間接的に生じる任意の生成物を含む。
【００１９】
本発明の処置方法において、他の医薬との式１、Ｉ、およびＩＩの化合物の投与を記載するのに使用される「と組み合わせて」は、式１、Ｉ、およびＩＩの化合物と他の医薬が、個別の剤形で逐次的にもしくは同時に投与されるか、または同じ剤形で同時に投与されることを意味する。
【００２０】
「哺乳動物」は、ヒトもしくはその他の哺乳動物を意味するか、またはヒトを意味する。
【００２１】
「患者」は、ヒトとその他の哺乳動物の両方を含み、好ましくはヒトを含む。
【００２２】
「アルキル」は、飽和または不飽和、直鎖または分岐の炭化水素鎖を意味する。多様な実施形態では、アルキル基は、１〜１８個の炭素原子を有する、すなわち、Ｃ１〜Ｃ１８基であるか、またはＣ１〜Ｃ１２基、Ｃ１〜Ｃ６基、またはＣ１〜Ｃ４基である。独立して、多様な実施形態では、アルキル基は、０個の分岐（すなわち、直鎖である）、１個の分岐、２個の分岐、または２個超の分岐を有する。「アルケニル」は、１個の二重結合、２個の二重結合、２個超の二重結合を有し得る不飽和アルキルを意味する。「アルキニル（Ａｌｋｙｎａｌ）」は、１個の三重結合、２個の三重結合、または２個超の三重結合を有し得る不飽和アルキルを意味する。アルキル鎖は、１個の置換基（すなわち、アルキル基は一置換されている）、または１〜２個の置換基、または１〜３個の置換基、または１〜４個の置換基等で、任意選択で置換されていてもよい。置換基は、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、ボロニル、カルボキシ、ニトロ、シアノ、またはハロからなる群より選択されてもよい。アルキル基が１個または複数のヘテロ原子を取り込んでいる場合は、そのアルキル基は本明細書でヘテロアルキル基と称される。アルキル基上の置換基が炭化水素である場合は、生じた基は単に置換アルキルと称される。多様な態様では、置換基を含むアルキル基は、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、または７個未満の炭素を有する。
【００２３】
「低級アルキル」は、直鎖であっても分岐であってもよい鎖中に１〜６個の炭素原子を有する基を意味する。適切なアルキル基の非限定的な例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、およびヘキシルが挙げられる。
【００２４】
「アルコキシ」は、アルキル−Ｏ−基（式中、アルキルは上で定義した通りである）を意味する。アルコキシ基の非限定的な例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシおよびヘプトキシが挙げられる。親部分への結合はエーテル酸素を介する。
【００２５】
「アルコキシアルキル」は、アルコキシ−アルキル基（式中、アルコキシおよびアルキルは前述した通りである）を意味する。好ましいアルコキシアルキルは、低級アルキル基を含む。親部分への結合はアルキルを介する。
【００２６】
「アルキルアリール」は、アルキル−アリール基（式中、アルキルおよびアリールは前述した通りである）を意味する。好ましいアルキルアリールは低級アルキル基を含む。親部分への結合はアリールを介する。
【００２７】
「アミノアルキル」は、アルキル基を介して親部分に結合している、ＮＨ２−アルキル基（式中、アルキルは上で定義した通りである）を意味する。
【００２８】
「カルボキシアルキル」は、アルキル基を介して親部分に結合している、ＨＯＯＣ−アルキル基（式中、アルキルは上で定義した通りである）を意味する。
【００２９】
「市販の化学物質」および本明細書に示す実施例で使用した化学物質は、標準的な商業的供給源から入手することができ、ここでそのような供給源には、例えば、Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、Ｐａ．）、Ｓｉｇｍａ−Ａｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉｓ．）、Ａｖｏｃａｄｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｌａｎｃａｓｈｉｒｅ、Ｕ．Ｋ．）、Ｂｉｏｎｅｔ（Ｃｏｒｎｗａｌｌ、Ｕ．Ｋ．）、Ｂｏｒｏｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ、Ｎ．Ｃ．）、Ｃｏｍｂｉ−Ｂｌｏｃｋｓ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）、Ｅａｓｔｍａｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｅａｓｔｍａｎ  Ｋｏｄａｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、Ｎ．Ｙ．）、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏ．（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、Ｐａ．）、Ｆｒｏｎｔｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｌｏｇａｎ、Ｕｔａｈ）、ＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（Ｃｏｓｔａ  Ｍｅｓａ、Ｃａｌｉｆ．）、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｗｉｎｄｈａｍ、Ｎ．Ｈ．）、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｃｏｒｎｗａｌｌ、Ｕ．Ｋ）、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＩＩ）、Ｒｉｅｄｅｌ  ｄｅ  Ｈａｅｎ（Ｈａｎｎｏｖｅｒ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔ，Ｉｎｃ．（Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ．）、ＴＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａ（Ｐｏｒｔｌａｎｄ、Ｏｒｅｇ．）、およびＷａｋｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＵＳＡ，Ｉｎｃ．（Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、Ｖａ．）が含まれる。
【００３０】
「化学文献に記載された化合物」は、当業者に公知のように、化合物および化学反応を対象とする参考図書およびデータベースによって同定することができる。本明細書に開示の化合物の調製に有用な反応物の合成を詳述する、または本明細書に開示の化合物の調製を記載する論文への参照を提供する適切な参考図書および専門書には、例えば、「Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｓ．Ｒ．Ｓａｎｄｌｅｒら、「Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ」、第２版、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８３年；Ｈ．Ｏ．Ｈｏｕｓｅ、「Ｍｏｄｅｒｎ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ」、第２版、Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｉｎｃ．Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ、Ｃａｌｉｆ．、１９７２年；Ｔ．Ｌ．Ｇｌｉｃｈｒｉｓｔ、「Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、第２版  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９２年；Ｊ．Ｍａｒｃｈ、「Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ」、第５版、Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２００１年が含まれ、特定のおよび類似の反応物は、大抵の公共および大学図書館で利用可能な、Ａｍｅｒｉｃａｎ  ＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙのＣｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｓｅｒｖｉｃｅによって用意された公知の化学物質のインデックスによって同定することもでき、またオンラインデータベースによって同定することもできる（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）。公知であるがカタログで市販されていない化学物質は、特注化学物質合成会社によって調製することができ、標準的な化学物質供給会社（例えば、上に列挙したもの）の多くが、特注合成サービスを提供している。
【００３１】
「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨード基を意味する。好ましくは、フルオロ、クロロまたはブロモであり、より好ましくは、フルオロおよびクロロである。
【００３２】
「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を意味する。好ましくは、フッ素、塩素および臭素である。
【００３３】
「ヘテロアルキル」は、飽和または不飽和、直鎖または分岐の、炭素および少なくとも１個のヘテロ原子を含む鎖である。ヘテロアルキル基は、多様な実施形態では、１個のヘテロ原子、または１〜２個のヘテロ原子、または１〜３個のヘテロ原子、または１〜４個のヘテロ原子を有し得る。一態様では、ヘテロアルキル鎖は、１から１８（すなわち、１〜１８）員の原子（炭素およびヘテロ原子）を含み、多様な実施形態では、１〜１２、または１〜６、または１〜４員の原子を含む。独立して、多様な実施形態では、ヘテロアルキル基は、０個の分岐（すなわち、直鎖である）、１個の分岐、２個の分岐、または２個超の分岐を有する。独立して、一実施形態では、ヘテロアルキル（ｈｅｔｅｒｅｏａｌｋｙｌ）基は飽和している。別の実施形態では、ヘテロアルキル基は不飽和である。多様な実施形態では、不飽和ヘテロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｌｋｙｌ）は、１個の二重結合、２個の二重結合、２個超の二重結合、および／または１個の三重結合、２個の三重結合、もしくは２個超の三重結合を有し得る。ヘテロアルキル鎖は置換であっても無置換であってもよい。一実施形態では、ヘテロアルキル鎖は無置換である。別の実施形態では、ヘテロアルキル鎖は置換されている。置換ヘテロアルキル鎖は、１個の置換基（すなわち、一置換されることによって）を有し得るか、例えば１〜２個の置換基、または１〜３個の置換基、または１〜４個の置換基等を有し得る。例示的なヘテロアルキル置換基としては、エステル（−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ）およびカルボニル（−Ｃ（Ｏ）−）が挙げられる。
【００３４】
「ヒドロキシアルキル」は、ＨＯ−アルキル基（式中、アルキルは先に定義した通りである）を意味する。好ましいヒドロキシアルキルは低級アルキルを含む。適切なヒドロキシアルキル基の非限定的な例としては、ヒドロキシメチルおよび２−ヒドロキシエチルが挙げられる。
【００３５】
「水和物」は、溶媒分子がＨ２Ｏである溶媒和物である。
【００３６】
「脂質」は、脂肪酸のエステルを含む有機化合物を意味し、水中で不溶性であるが、多くの有機溶媒に可溶性であることを特徴とする。脂質は、通常、少なくとも３つのクラス、（１）脂肪、および油、ならびにワックスを含む「単純脂質」、（２）リン脂質および糖脂質を含む「化合物脂質」、ならびに（３）ステロイドなどの「由来脂質」に分けられる。
【００３７】
「脂質粒子」は、治療用核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を目的の標的部位（例えば、細胞、組織、器官など）に送達するために使用され得る脂質製剤を意味する。好ましい実施形態では、脂質粒子は、カチオン性脂質、非カチオン性脂質（例えば、リン脂質）、粒子の凝集を防止する複合脂質（例えば、ＰＥＧ−脂質）、および任意選択でコレステロールから典型的には形成される核酸脂質粒子である。典型的には、治療用核酸（例えば、ｍＲＮＡ）は、粒子の脂質部分に封入され得、それによって酵素分解からそれを保護する。
【００３８】
脂質粒子は、典型的には、３０ｎｍ〜１５０ｎｍ、４０ｎｍ〜１５０ｎｍ、５０ｎｍ〜１５０ｎｍ、６０ｎｍ〜１３０ｎｍ、７０ｎｍ〜１１０ｎｍ、７０ｎｍ〜１００ｎｍ、８０ｎｍ〜１００ｎｍ、９０ｎｍ〜１００ｎｍ、７０〜９０ｎｍ、８０ｎｍ〜９０ｎｍ、７０ｎｍ〜８０ｎｍ、または３０ｎｍ、３５ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、または１５０ｎｍの平均直径を有し、実質的に無毒性である。さらに、核酸は、本発明の脂質粒子内に存在する場合、ヌクレアーゼによる分解に対して水溶液中で抵抗性である。
【００３９】
「溶媒和物」は、本開示の化合物と１つまたは複数の溶媒分子との物理的会合を意味する。この物理的会合は、様々な程度のイオン結合および共有結合を伴い、これには水素結合が含まれる。ある特定の例では、例えば１つまたは複数の溶媒分子が結晶性固体の結晶格子中に取り込まれたときなど、溶媒和物は単離することができる。「溶媒和物」は、溶液相および単離可能な溶媒和物の両方を包含する。適切な溶媒和物の非限定的な例としては、エタノレート、メタノレートなどが挙げられる。
【００４０】
「脂質封入」は、完全に封入された、部分的に封入された、またはそれらの両方のｍＲＮＡなどの治療用核酸を提供する脂質粒子を意味し得る。好ましい実施形態では、核酸（例えば、ｍＲＮＡ）は、脂質粒子中で完全に封入される。
【００４１】
「脂質複合体」は、脂質粒子の凝集を阻害する複合脂質を意味する。そのような脂質複合体としては、例えば、ジアルキルオキシプロピルにカップリングされるＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ−ＤＡＡ複合体）、ジアシルグリセロールにカップリングされるＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ−ＤＡＧ複合体）、コレステロールにカップリングされるＰＥＧ、ホスファチジルエタノールアミンにカップリングされるＰＥＧ、およびセラミドに複合されるＰＥＧ、カチオン性ＰＥＧ脂質、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）−脂質複合体、ポリアミドオリゴマー（例えば、ＡＴＴＡ−脂質複合体）、ならびにそれらの混合物などのＰＥＧ−脂質複合体が挙げられるが、これらに限定されない。ＰＥＧまたはＰＯＺは、脂質に直接的に複合し得るか、またはリンカー部分を介して脂質に連結され得る。例えば、非エステル含有リンカー部分およびエステル含有リンカー部分を含む、ＰＥＧまたはＰＯＺを脂質にカップリングするのに適切ないかなるリンカー部分も使用され得る。ある特定の好ましい実施形態では、アミドまたはカルバミン酸などの非エステル含有リンカー部分が使用される。
【００４２】
「両親媒性脂質」は、脂質材料の疎水性部分が、疎水性相に向けられ、一方、親水性部分が、水相に向けられる材料を意味する。親水性の特徴は、炭水化物、リン酸、カルボキシ、スルファト、アミノ、スルフヒドリル、ニトロ、ヒドロキシル、および他の同様の基などの極性または荷電した基の存在に由来する。疎水性は、長鎖飽和および不飽和脂肪族炭化水素基、ならびに１つ以上の芳香族基、脂環式基、または複素環基（複数可）によって置換されたそのような基が挙げられるが、これらに限定されない無極性の基の包含によって与えられ得る。両親媒性化合物の例としては、リン脂質、アミノ脂質、およびスフィンゴ脂質が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４３】
リン脂質の代表的な例としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、およびジリノレオイルホスファチジルコリンが挙げられるが、これらに限定されない。スフィンゴ脂質、スフィンゴ糖脂質ファミリー、ジアシルグリセロール、およびβ−アシルオキシ酸などのリンが欠乏する他の化合物はまた、両親媒性脂質と名付けられた基内である。加えて、上記の両親媒性脂質は、トリグリセライドおよびステロールを含む他の脂質と混合され得る。
【００４４】
「中性脂質」は、選択されたｐＨで無荷電または中性双性イオン形態のいずれかで存在する脂質種を意味する。生理学的ｐＨで、そのような脂質としては、例えば、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、セファリン、コレステロール、セレブロシド、およびジアシルグリセロールが挙げられる。
【００４５】
「非カチオン性脂質」は、両親媒性脂質、または中性脂質、もしくはアニオン性脂質を意味し、以下により詳細に記載される。
【００４６】
「アニオン性脂質」は、生理学的ｐＨで負に荷電される脂質を意味する。これらの脂質としては、ホスファチジルグリセロール、カルジオリピン、ジアシルホスファチジルセリン、ジアシルホスファチジン酸、Ｎ−ドデカノイルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−スクシニルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−グルタリルホスファチジルエタノールアミン、リジルホスファチジルグリセロール、パルミトイルオレイオルホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）、および中性脂質に連結される他のアニオン性修飾基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４７】
「疎水性脂質」という用語は、長鎖飽和および不飽和脂肪族炭化水素基、ならびに１つ以上の芳香族基、脂環式基、または複素環基（複数可）によって任意選択で置換されたそのような基が挙げられるが、これらに限定されない無極性の基を有する化合物を意味する。適切な例としては、ジアシルグリセロール、ジアルキルグリセロール、Ｎ−Ｎ−ジアルキルアミノ、１，２−ジアシルオキシ−３−アミノプロパン、および１，２−ジアルキル−３−アミノプロパンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４８】
「カチオン性脂質」および「アミノ脂質」という用語は、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上の脂肪酸もしくは脂肪アルキル鎖、およびｐＨ滴定可能なアミノ頭部基（例えば、アルキルアミノまたはアルキルアミノ頭部基）を有するそれらの脂質およびそれらの塩を含むために、本明細書において相互交換可能に使用される。カチオン性脂質は、カチオン性脂質のｐＫａ以下のｐＨで典型的にはプロトン化され（すなわち、正に荷電される）、ｐΚａ以上のｐＨで実質的に中性である。本発明のカチオン性脂質はまた、滴定可能なカチオン性脂質と称され得る。一部の実施形態では、カチオン性脂質は、プロトン化可能３級アミン（例えば、ｐＨ滴定可能）頭部基、各アルキル鎖が独立して０〜３個（例えば、０、１、２、または３個）の二重結合を有するＣ１８アルキル鎖、およびエーテル、エステル、または頭部基とアルキル鎖との間のケタール結合を含む。そのようなカチオン性脂質としては、ＤＳＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｅｎＤＭＡ、γ−ＤＬｅｎＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−Ｃ２−ＤＭＡ（ＤＬｉｎ−Ｃ２Ｋ−ＤＭＡ、ＸＴＣ２、  およびＣ２Ｋとしても公知）、ＤＬｉｎ−Ｋ−Ｃ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−Ｃ４−ＤＭＡ、ＤＬｅｎ−Ｃ２−ＤＭＡ、ｙ−ＤＬｅｎ−Ｃ２−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｍ−Ｃ２−ＤＭＡ（ＭＣ２としても公知）、ＤＬｉｎ−Ｍ−Ｃ３−ＤＭＡ（ＭＣ３としても公知）、および（ＤＬｉｎ−ＭＰ−ＤＭＡ）（１−Ｂ１１としても公知）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４９】
「置換」という用語は、水素以外の特定された基での、または同一であっても異なっていてもよい、それぞれが例えば独立して選択される、１つもしくは複数の基、部分、もしくはラジカルでの置換を意味する。
【００５０】
「アンチセンス核酸」とは、ＲＮＡ−ＲＮＡまたはＲＮＡ−ＤＮＡまたはＲＮＡ−ＰＮＡ（タンパク質核酸；Ｅｇｈｏｌｍら、１９９３年  Ｎａｔｕｒｅ  ３６５巻、５６６頁）相互作用によって標的ＲＮＡに結合し、標的ＲＮＡの活性を変える非酵素的核酸分子（概説については、ＳｔｅｉｎおよびＣｈｅｎｇ、１９９３年  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１巻、１００４頁ならびにＷｏｏｌｆら、米国特許第５，８４９，９０２号を参照）を意味する。典型的には、アンチセンス分子は、アンチセンス分子の単一の連続配列に沿って、標的配列と相補的である。しかしながら、ある特定の実施形態では、アンチセンス分子は、基質分子がループを形成するように基質に結合し得る、かつ／またはアンチセンス分子は、アンチセンス分子がループを形成するように結合し得る。したがって、アンチセンス分子は、２つの（もしくはさらに多くの）非連続の基質配列と相補的であり得るか、またはアンチセンス分子の２つの（もしくはさらに多くの）非連続の配列部分が標的配列と相補的であり得るか、あるいはこの両方である。さらに、アンチセンスＤＮＡは、ＤＮＡ−ＲＮＡ相互作用によって標的ＲＮＡを標的化することによってＲＮａｓｅ  Ｈを活性化するのに使用することができ、ＲＮａｓｅ  Ｈは二本鎖中の標的ＲＮＡを消化する。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡのＲＮａｓｅ  Ｈ切断を活性化することができる、１つまたは複数のＲＮａｓｅ  Ｈ活性化領域を含み得る。アンチセンスＤＮＡは、化学合成することができるか、一本鎖ＤＮＡ発現ベクターまたはその同等物を使用することによって発現することができる。アンチセンスＲＮＡは、標的遺伝子ｍＲＮＡと相補的な配列を有するＲＮＡ鎖である。センスＲＮＡはアンチセンスＲＮＡと相補的な配列を有しており、その相補的アンチセンスＲＮＡにアニールしてｉＮＡを形成する。これらのアンチセンスおよびセンスＲＮＡはＲＮＡシンセサイザーで従来合成されてきた。
【００５１】
「核酸」は、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドおよび一本鎖または二本鎖形態のそれらのポリマーを指す。この用語は、合成、天然由来および非天然由来の、参照核酸と類似の結合特性を有し、参照ヌクレオチドと類似の様式で代謝される、公知のヌクレオチド類似体または修飾された主鎖残基もしくは連結を含む核酸を包含する。そのような類似体の例としては、限定なしに、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラル−メチルホスホネート、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド−核酸（ＰＮＡ）が挙げられる。
【００５２】
「ＲＮＡ」とは、少なくとも１つのリボヌクレオチド残基を含む分子を意味する。「リボヌクレオチド」とは、β−Ｄ−リボ−フラノース部分の２’位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドを意味する。この用語は、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、単離ＲＮＡ、例えば、部分的に精製されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換え作製ＲＮＡ、ならびに１つまたは複数のヌクレオチドの付加、欠失、置換および／または改変によって天然由来ＲＮＡとは異なる改変ＲＮＡを含む。そのような改変には、例えば干渉ＲＮＡの末端への、または内部への、例えばＲＮＡの１つまたは複数のヌクレオチドでの、非ヌクレオチド材料の付加が含まれ得る。本発明のＲＮＡ分子中のヌクレオチドは、非天然由来ヌクレオチドもしくは化学合成ヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドなどの非標準ヌクレオチドも含み得る。これらの改変ＲＮＡは、類似体または天然由来ＲＮＡの類似体と称され得る。本明細書では、「リボ核酸」および「ＲＮＡ」という用語は、少なくとも１つのリボヌクレオチド残基を含む分子を指し、これには、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ノンコーディングＲＮＡ、および多価ＲＮＡが含まれる。リボヌクレオチドは、β−Ｄ−リボ−フラノース部分の２’位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドである。これらの用語には、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、単離ＲＮＡ、例えば、部分的に精製されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換え作製ＲＮＡ、ならびに１つまたは複数のヌクレオチドの付加、欠失、置換、修飾、および／または改変によって天然由来ＲＮＡとは異なる修飾および改変ＲＮＡを含む。ＲＮＡの改変としては、例えば干渉ＲＮＡの末端（複数可）または内部への、例えばＲＮＡ分子中のＲＮＡヌクレオチドの１つまたは複数のヌクレオチドにおける非ヌクレオチド材料の付加を挙げることができ、そのようなものとしては非天然由来ヌクレオチドまたは化学合成ヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドなどの非標準ヌクレオチドを挙げることができる。これらの改変ＲＮＡは、類似体と称され得る。
【００５３】
「ヌクレオチド」とは、本明細書では、当技術分野において認識されるように、当技術分野において周知の天然塩基（標準）、および修飾塩基を含むものである。そのような塩基は一般にヌクレオチド糖部分の１’位に位置している。ヌクレオチドは一般に塩基、糖、およびリン酸基を含む。ヌクレオチドは、無修飾であっても、糖、リン酸および／または塩基部分で修飾されていてもよい（相互交換可能にヌクレオチド類似体、修飾ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、非標準ヌクレオチドなどとも称される；例えば、ＵｓｍａｎおよびＭｃＳｗｉｇｇｅｎ、前掲；Ｅｃｋｓｔｅｉｎら、国際ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／０７０６５号；Ｕｓｍａｎら、国際ＰＣＴ公開第ＷＯ９３／１５１８７号；ＵｈｌｍａｎおよびＰｅｙｍａｎ、前掲を参照、すべてが参照によって本明細書に組み込まれる）。Ｌｉｍｂａｃｈら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  ＡｃｉｄｓＲｅｓ．２２巻：２１８３頁、１９９４年により要約されるように、当技術分野において公知の修飾核酸塩基のいくつかの例がある。核酸分子に導入することができる塩基修飾の非限定的な例のいくつかとして、イノシン、プリン、ピリジン−４−オン、ピリジン−２−オン、フェニル、シュードウラシル、２，４，６−トリメトキシベンゼン、３−メチルウラシル、ジヒドロウリジン、ナフチル、アミノフェニル、５−アルキルシチジン（例えば、５−メチルシチジン）、５−アルキルウリジン（例えば、リボチミジン）、５−ハロウリジン（例えば、５−ブロモウリジン）または６−アザピリミジンもしくは６−アルキルピリミジン（例えば、６−メチルウリジン）、プロピンなど（Ｂｕｒｇｉｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３５巻：１４０９０頁、１９９６年；ＵｈｌｍａｎおよびＰｅｙｍａｎ、前掲）が挙げられる。「修飾塩基」とは、本態様では、１’位におけるアデニン、グアニン、シトシン、およびウラシル以外のヌクレオチド塩基またはそれらの同等物を意味する。
【００５４】
本明細書では、相補的なヌクレオチド塩基は、互いと水素結合を形成するヌクレオチド塩基の対である。アデニン（Ａ）はチミン（Ｔ）またはＲＮＡではウラシル（Ｕ）と対を形成し、グアニン（Ｇ）はシトシン（Ｃ）と対を形成する。核酸の相補的セグメントまたは鎖は、互いにハイブリダイズする（水素結合によって連結する）。「相補的」とは、核酸が、伝統的なワトソン−クリックまたは他の非伝統的な結合様式によって別の核酸配列と水素結合（複数可）を形成し得ることを意味する。
【００５５】
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、長さ２１〜２３のヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、遺伝子発現を調節するｍｉＲＮＡは、ＤＮＡから転写される遺伝子によりコードされるが、タンパク質に翻訳されない（ノンコーディングＲＮＡ）；その代わり、ｍｉＲＮＡは、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡとして公知の一次転写産物から、ｐｒｅ−ｍｉＲＮＡと呼ばれる短いステム−ループ構造にプロセシングされ、最終的に機能性ｍｉＲＮＡにプロセシングされる。成熟ｍｉＲＮＡ分子は１つまたは複数のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子と部分的に相補的であり、その主な機能は遺伝子発現を下方制御することである。
【００５６】
本明細書では、短鎖干渉ＲＮＡまたはサイレンシングＲＮＡとして時に知られる、「低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）」という用語は、生物学において多種多様な役割を果たす、長さ１６〜４０ヌクレオチドの、ｄｓＲＮＡ分子のクラスを指すのに用いられる。最も注目すべきことに、ｓｉＲＮＡはＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路に関与し、特定の遺伝子の発現に干渉する。ＲＮＡｉ経路におけるそれらの役割に加えて、ｓｉＲＮＡは、例えば、抗ウイルス機構として、ＲＮＡｉ関連経路においても、またはゲノムのクロマチン構造を形成するのにおいても作用する；これらの経路の複雑さが現在解明されているのみである。
【００５７】
本明細書では、ＲＮＡｉという用語は、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）により制御され、細胞内の短いｄｓＲＮＡ分子により開始されるＲＮＡ依存性遺伝子サイレンシング過程を指し、ここで短いｄｓＲＮＡ分子は、アルゴノートタンパク質と呼ばれる触媒ＲＩＳＣ成分と相互作用する。ｄｓＲＮＡまたはＲＮＡ様ｉＮＡまたはｓｉＲＮＡが外来性である場合（ＲＮＡゲノムをもつウイルスによる感染またはトランスフェクトしたｉＮＡもしくはｓｉＲＮＡに由来する）、ＲＮＡまたはｉＮＡは細胞質に直接移入され、ダイサーと命名された酵素により短い断片に切断される。開始ｄｓＲＮＡは、ゲノム中のＲＮＡコード遺伝子から発現されるｐｒｅ−ｍｉＲＮＡにおけるように、内在性（細胞内で発生する）でもあり得る。そのような遺伝子からの一次転写産物は、まずプロセシングされて核内でｐｒｅ−ｍｉＲＮＡの特徴的なステム−ループ構造を形成し、次いで細胞質に輸送され、ダイサーにより切断される。したがって、外来性および内在性の２つのｄｓＲＮＡ経路は、ＲＩＳＣ複合体に集中する。ＲＩＳＣの活性成分であるアルゴノートタンパク質は、それらが結合したｓｉＲＮＡまたはｉＮＡと相補的な標的ｍＲＮＡ鎖を切断する。ダイサーにより生成される断片は二本鎖であるので、それらはそれぞれ理論上では機能性ｓｉＲＮＡまたはｉＮＡを生成し得る。しかしながら、二本鎖のうち一本のみが、ガイド鎖と呼ばれるが、アルゴノートタンパク質と結合し、遺伝子サイレンシングを誘導する。他方のアンチガイド鎖またはパッセンジャー鎖は、ＲＩＳＣ活性化中に分解される。
【００５８】
本明細書において、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶの化合物が記載される。本明細書において、
【化６】
0006637988.tif 000017
Ｒ１およびＲ２はともに、１〜９個の炭素からなる直鎖アルキル、２〜１１個の炭素からなるアルケニルもしくはアルキニルからなり、
Ｌ１およびＬ２はともに、５〜１８個の炭素からなる直鎖アルキレンもしくはアルケニレンからなるか、またはＮと複素環を形成しており、
Ｘ１及びＸ３はともに−ＣＯ−Ｏ−からなり、
Ｘ２はＳまたはＯであり、
Ｌ３は、結合、もしくは１〜６個の炭素からなる直鎖アルキレンからなるか、またはＮと複素環を形成しており、
Ｒ３は、１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキレンからなり、
Ｒ４およびＲ５は同一または異なり、それぞれ水素、または１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキルからなる、式Ｉの化合物、
またはその薬学的に許容される塩が記載される。
【００５９】
また本明細書において、下記の表１に列挙されたＡＴＸ−００１〜ＡＴＸ−０１７、ＡＴＸ−０２１〜ＡＴＸ−０２３、およびＡＴＸ−０２６〜ＡＴＸ−０３０に列挙された化合物のいずれか、またはその薬学的に許容される塩も記載される。
【００６０】
また本明細書において、
【化７】
0006637988.tif 000018
Ｒ１およびＲ２はともに、１〜１２個の炭素からなる直鎖アルキル、２〜１２個の炭素からなるアルケニルもしくはアルキニルからなり、
Ｌ１およびＬ２はともに、５〜１８個の炭素からなる直鎖アルキレンもしくはアルケニレンからなるか、またはＮと複素環を形成しており、
ＸはＳであり、
Ｌ３は、結合、もしくは１〜６個の炭素からなる直鎖アルキレンであるか、またはＮと複素環を形成しており、Ｒ３は、１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキレンであり、
Ｒ４およびＲ５は同一または異なり、それぞれ水素、または１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキルからなる、式ＩＩの化合物、またはその薬学的に許容される塩も記載される。
【００６１】
式ＩＩの化合物の一実施形態では、Ｌ１およびＬ２はともに、５個の炭素からなる直鎖アルキレンからなる。式Ｉの化合物の別の実施形態では、Ｒ３は、エチレンまたはプロピレンである。式Ｉの化合物の別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は同一または異なり、それぞれ水素、メチル、またはエチルである。式Ｉの化合物の別の実施形態では、Ｌ３は結合である。式Ｉの化合物の別の実施形態では、Ｒ１およびＲ２はともに、１０個の炭素からなる直鎖アルケニルからなる。
【００６２】
式ＩおよびＩＩの化合物の別の実施形態では、化合物は、下記の表１に列挙されたＡＴＸ−００１〜ＡＴＸ−０１７、ＡＴＸ−０２１〜ＡＴＸ−０２３、およびＡＴＸ−０２６〜ＡＴＸ−０３０に列挙された化合物のいずれか、または式１）〜１２）から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩からなる。
【化８】
0006637988.tif 000019
【化９】
0006637988.tif 000020
【００６３】
また本明細書において、
【化１０】
0006637988.tif 000021
式中、
Ｒ１は、１２〜２０個の炭素を有する分岐アルキルからなり、
Ｒ２は、５〜１０個の炭素を有する直鎖アルキルまたは１２〜２０個の炭素を有する分岐アルキルからなり、
Ｌ１およびＬ２がそれぞれ、結合、または１〜３個の炭素原子を有する直鎖アルキルからなり、
ＸはＳまたはＯからなり、
Ｌ３は、結合、または低級アルキルからなり、
Ｒ３は、低級アルキルからなり、
Ｒ４およびＲ５は同一または異なり、それぞれ低級アルキルからなる、式ＩＩＩまたはＩＶの化合物、
またはその薬学的に許容される塩も記載される。
【００６４】
式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の一実施形態では、Ｌ３は結合からなり、式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態、ＸはＳである。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｒ３はエチレンである。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｒ３は、ｎ−プロピレンまたはイソプロピレンである。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は個別にメチル、エチル、またはイソプロピルである。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｌ１およびＬ２はともに、結合からなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｌ１およびＬ２はともに、メチレンからなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、分岐アルキルからなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｒ２は、アルキルからなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｒ１およびＲ２はともに、１９または２０個の炭素原子からなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｒ１およびＲ２はともに、１３または１４個の炭素原子からなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｌ３はメチレンからなり、Ｒ３はエチレンからなり、Ｘ２はＳからなり、Ｒ４およびＲ５はともにメチルからなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、式中、Ｌ３は結合からなり、Ｒ３はエチレンからなり、ＸはＳからなり、Ｒ４およびＲ５はともにメチルからなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｌ３は結合からなり、Ｒ３はｎ−プロピレンからなり、ＸはＳからなり、Ｒ４およびＲ５はともにメチルからなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、Ｌ３は結合からなり、Ｒ３はイソプロピレンからなり、ＸはＳからなり、Ｒ４およびＲ５はともにメチルからなる。式ＩＩＩまたはＩＶの化合物の別の実施形態では、以下の通り、式ＡＴＸ−Ｂ−１〜ＡＴＸ−Ｂ−１２の化合物からなる群から選択される。
【化１１】
0006637988.tif 000022
【化１２】
0006637988.tif 000023
【化１３】
0006637988.tif 000024
また、
【化１４】
0006637988.tif 000025
式中、
Ｒ１は、１〜１８個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキル、または２〜１２個の炭素からなるアルケニルもしくはアルキニル、またはコレステリルからなり、
Ｒ２は、１〜１８個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキルまたはアルケニルもしくはアルキニル、またはコレステリルからなり、
Ｌ１は、５〜９個の炭素からなる直鎖アルキルからなるか、またはＲ１がコレステリルからなる場合、Ｌ１は、３〜４個の炭素からなる直鎖アルキレンもしくはアルケニルからなり、
Ｘ１は、−Ｏ−（ＣＯ）−または−（ＣＯ）−からなり、
Ｘ２はＳまたはＯからなり、
Ｌ２は、結合、または１〜６個の炭素の直鎖アルキレンからなり、
Ｒ３は、１〜６個の炭素を有する直鎖もしくは分岐アルキレンからなり、
Ｒ４およびＲ５は同一または異なり、それぞれ１〜６個の炭素の直鎖もしくは分岐アルキルからなる、式Ｖの化合物、
またはその薬学的に許容される塩も記載される
【００６５】
式Ｖの化合物の一実施形態では、Ｌ２は結合からなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｘ２はＳからなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｘ１は、−Ｏ−（ＣＯ）−である。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｒ３は、エチレンからなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｒ３は、ｎ−プロピレンまたはイソプロピレンからなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ、メチル、エチル、またはイソプロピルからなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｌ２は、メチレンからなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、分岐アルキルからなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｒ２は、アルキルからなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、１９または２０個の炭素原子からなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｒ１またはＲ２はそれぞれ、１３または１４個の炭素原子からなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｌ２はメチレンからなり、Ｒ３はエチレンからなり、Ｘ１は−Ｏ−（ＣＯ）−からなり、Ｘ２はＳからなり、Ｒ４およびＲ５はともにメチルからなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｌ２は結合からなり、Ｒ３はエチレンであり、Ｘ１は−Ｏ−（ＣＯ）−からなり、Ｘ２はＳからなり、Ｒ４およびＲ５はともにメチルからなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｌ２は結合からなり、Ｒ３はｎ−プロピレンからなり、Ｘ１は−Ｏ−（ＣＯ）−からなり、Ｘ２はＳからなり、Ｒ４およびＲ５はともにメチルからなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、Ｌ２は結合からなり、Ｒ３はイソプロピレンからなり、Ｘ１は−Ｏ−（ＣＯ）−からなり、Ｘ２はＳからなり、Ｒ４およびＲ５はともにメチルからなる。式Ｖの化合物の別の実施形態では、化合物は、式ＡＴＸ−Ａ−１〜ＡＴＸ−Ａ−２２の化合物から選択される
【化１５】
0006637988.tif 000026
【化１６】
0006637988.tif 000027
【化１７】
0006637988.tif 000028
【化１８】
0006637988.tif 000029
【００６６】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶの化合物は、脂質分子のナノ粒子または二重層を含む脂質組成物において、その薬学的に許容される塩であり得る。脂質二重層は好ましくは中性脂質またはポリマーをさらに含む。脂質組成物は好ましくは液体媒体を含む。組成物は、好ましくは核酸をさらに封入している。核酸は好ましくはＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を利用することによって、標的遺伝子の発現を抑制する活性を有する。脂質組成物は好ましくは核酸および中性脂質またはポリマーをさらに含む。脂質組成物は好ましくは核酸を封入している。
【００６７】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶの化合物は、同様に本開示の範囲内である塩を形成する。本明細書での式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、またはＶの化合物への言及は、別段の指示がない限り、その塩への言及を含むものと理解される。「塩（複数可）」という用語は、本明細書で用いる場合、無機および／または有機酸と形成した酸性塩、ならびに無機および／または有機塩基と形成した塩基性塩を示す。さらに、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、またはＶの化合物のそのような塩が、ピリジンまたはイミダゾールなどであるがこれらに限定されない塩基性部分、またはカルボン酸などであるがこれに限定されない酸性部分、および両性イオン（「分子内塩」）を含み得る。塩は、薬学的に許容される（すなわち、無毒性、生理学的に許容される）塩であってもよいが、その他の塩もまた有用である。式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、またはＶの化合物の塩は、例えば、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、またはＶの化合物と、等量などの量の酸または塩基とを、塩が沈殿するものなどの媒体中で、または水性媒体中で反応させた後、凍結乾燥することによって形成し得る。
【００６８】
例示的な酸付加塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩（２−ｎａｐｔｈａｌｅｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩（本明細書に記載のものなど）、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩（トシル酸塩としても公知）、ウンデカン酸塩などが含まれる。さらに、塩基性薬学的化合物から薬学的に有用な塩を形成するのに適すると一般に考えられる酸は、例えば、Ｓ．Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９７７年）６６巻（１号）１〜１９頁；Ｐ．Ｇｏｕｌｄ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（１９８６年）３３巻、２０１〜２１７頁；Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｔｈｅ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９６年）、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋによって；およびＴｈｅ  Ｏｒａｎｇｅ  Ｂｏｏｋ（Ｆｏｏｄ  ＆  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）で論じられている。これらの開示は参照によって本明細書に組み込まれる。
【００６９】
例示的な塩基性塩には、アンモニウム塩；ナトリウム、リチウム、およびカリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウムおよびマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、ベンザチン、ジシクロヘキシルアミン、ヒドラバミン（Ｎ，Ｎ−ビス（デヒドロアビエチル）エチレンジアミンと形成される）、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミド、ｔ−ブチルアミンなどの有機塩基（例えば、有機アミン）との塩、ならびにアルギニンまたはリシンなどのアミノ酸との塩などが含まれる。塩基性窒素含有基は、ハロゲン化低級アルキル（例えば、塩化、臭化、およびヨウ化メチル、エチル、プロピル、およびブチル）、硫酸ジアルキル（例えば、硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミル）、長鎖ハロゲン化物（例えば、塩化、臭化、およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチル、およびステアリル）、ハロゲン化アリールアルキル（例えば、臭化ベンジルおよびフェネチル）などの薬剤で四級化し得る。
【００７０】
すべてのそのような酸および塩基塩が、本開示の範囲内の薬学的に許容される塩であることが意図され、すべての酸および塩基塩が、本開示の目的のために、式Ｉの対応する化合物の遊離形態に等しいと考えられる。
【００７１】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶの化合物は、水和形態を含め、非溶媒和および溶媒和形態で存在することができる。一般に、水、エタノールなどの薬学的に許容される溶媒との溶媒和形態は、本開示の目的のために、非溶媒和形態と等しい。
【００７２】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶの化合物およびその塩、溶媒和物は、それらの互変異性体形態（例えば、アミドまたはイミノエーテルとして）で存在してもよい。すべてのそのような互変異性体形態が、本開示の一部として、本明細書で企図される。
【００７３】
また、本開示の化合物の多形も本開示の範囲内である（すなわち、式Ｉの化合物の多形は、本開示の範囲内である）。
【００７４】
本発明の化合物のすべての立体異性体（例えば、幾何異性体、光学異性体など）（化合物の塩、溶媒和物、およびプロドラッグのもの、ならびにプロドラッグの塩および溶媒和物のものを含めて）は、例えば、多様な置換基上の不斉炭素によって存在し得るものなど、エナンチオマー形態（不斉炭素が存在しなくても存在し得る）、回転異性体形態、アトロプ異性体およびジアステレオマー形態を含めて、本開示の範囲内で企図される。本開示の化合物の個々の立体異性体は、例えば、他の異性体を実質的に含まなくてもよく、例えば、ラセミ体として、またはすべての他の、もしくは他の選択された立体異性体と混合されていてもよい。本明細書の化合物のキラル中心は、ＩＵＰＡＣによる１９７４年の勧告で規定される通り、ＳまたはＲ配置を有し得る。「塩」、「溶媒和物」などという用語の使用は、本開示の化合物のエナンチオマー、立体異性体、回転異性体、互変異性体、ラセミ体またはプロドラッグの塩および溶媒和物にも等しく当てはまることが意図される。
【００７５】
化学療法剤（抗新生物剤）として使用することができる化合物のクラスには、アルキル化剤、代謝拮抗物質、天然生成物およびそれらの誘導体、ホルモンおよびステロイド（合成類似体を含む）ならびに合成物質が含まれる。これらのクラスの化合物の例を下に示す。
【００７６】
脂質粒子
本明細書は、脂質粒子内に封入された１つ以上の治療用ｍＲＮＡ分子を含む脂質粒子を提供する。
【００７７】
一部の実施形態では、脂質粒子中のｍＲＮＡがヌクレアーゼ分解に対して水溶液中で抵抗性であるように、ｍＲＮＡは脂質粒子の脂質部分内に完全に封入される。他の実施形態では、本明細書に記載の脂質粒子は、ヒトなどの哺乳動物に対して実質的に無毒性である。脂質粒子は、典型的には、３０ｎｍ〜１５０ｎｍ、４０ｎｍ〜１５０ｎｍ、５０ｎｍ〜１５０ｎｍ、６０ｎｍ〜１３０ｎｍ、７０ｎｍ〜１１０ｎｍ、または７０〜９０ｎｍの平均直径を有する。本発明の脂質粒子はまた、典型的には、１：１〜１００：１、１：１〜５０：１、２：１〜２５：１、３：１〜２０：１、５：１〜１５：１、または５：１〜１０：１、または１０：１〜１４：１、または９：１〜２０：１の脂質：ＲＮＡ比（質量／質量比）を有する。一実施形態では、脂質粒子は、１２：１の脂質：ＲＮＡ比（質量／質量比）を有する。別の実施形態では、脂質粒子は、１３：１の脂質：ｍＲＮＡ比（質量／質量比）を有する。
【００７８】
好ましい実施形態では、脂質粒子は、ｍＲＮＡ、カチオン性脂質（例えば、本明細書に記載の１つ以上のカチオン性脂質またはそれらの塩）、リン脂質、および粒子の凝集を阻害する複合脂質（例えば、１つ以上のＰＥＧ−脂質複合体）を含む。脂質粒子はまた、コレステロールを含み得る。脂質粒子は、１つ以上のポリペプチドを発現する少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のｍＲＮＡを含み得る。
【００７９】
核酸脂質粒子において、ｍＲＮＡは、粒子の脂質部分内に完全に封入され得、それによってヌクレアーゼ分解から核酸を保護する。好ましい実施形態では、ｍＲＮＡを含む脂質粒子は、粒子の脂質部分内に完全に封入され、それによってヌクレアーゼ分解から核酸を保護する。ある特定の例では、脂質粒子中のｍＲＮＡは、３７℃で少なくとも２０、３０、４５、または６０分間のヌクレアーゼに対する粒子の曝露の後、実質的に分解されない。ある特定の他の例では、脂質粒子中のｍＲＮＡは、３７℃で少なくとも３０、４５、または６０分、または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、または３６時間の血清中の粒子のインキュベーションの後、実質的に分解されない。他の実施形態では、ｍＲＮＡは、粒子の脂質部分と複合体を形成している。本発明の製剤の利点のうちの１つは、核酸脂質粒子組成物が、ヒトなどの哺乳動物に対して実質的に無毒性であるということである。
【００８０】
「完全に封入される」とは、核酸脂質粒子中の核酸（例えば、ｍＲＮＡ）が、遊離ＲＮＡを著しく分解し得る血清またはヌクレアーゼアッセイへの曝露の後、著しく分解されないことを意味する。完全に封入されるとき、１００％の遊離核酸を通常分解し得る処置において、好ましくは２５％未満の粒子中の核酸が分解され、より好ましくは１０％未満、最も好ましくは５％未満の粒子中の核酸が分解される。「完全に封入される」はまた、核酸脂質粒子が、インビボ投与時にそれらの成分部分に急速に分解しないことを意味する。
【００８１】
核酸の文脈において、完全封入は、核酸と関連したときに蛍光が増強される色素を使用する膜不透過性蛍光色素排除アッセイを実施することによって決定され得る。封入は、色素をリポソーム製剤に添加し、生じた蛍光を測定し、それを少量の非イオン洗剤の添加時に観察される蛍光と比較することによって決定される。リポソーム二重層の洗剤媒介性破壊により、封入された核酸が放出され、それが膜不透過性色素と相互作用することを可能にする。核酸封入は、Ｅ＝（Ｉ０−Ｉ）／Ｉ０として計算され得、式中／かつＩ０は、洗剤の添加前および添加後の蛍光輝度を指す。
【００８２】
他の実施形態では、本発明は、複数の核酸脂質粒子を含む核酸脂質粒子組成物を提供する。
【００８３】
脂質粒子は、粒子の３０％〜１００％、４０％〜１００％、５０％〜１００％、６０％〜１００％、７０％〜１００％、８０％〜１００％、９０％〜１００％、３０％〜９５％、４０％〜９５％、５０％〜９５％、６０％〜９５％、７０％〜９５％、８０％〜９５％、８５％〜９５％、９０％〜９５％、３０％〜９０％、４０％〜９０％、５０％〜９０％、６０％〜９０％、７０％〜９０％、８０％〜９０％、または少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％（またはそれらの任意の割合またはその中の範囲）が、ｍＲＮＡをその中に封入させるように、粒子の脂質部分内に完全に封入されたｍＲＮＡを含む。
【００８４】
脂質粒子の意図される使用によって、成分の比率は変更され得、特定の製剤の送達効率は、当該技術分野で公知のアッセイを使用して測定され得る。
【００８５】
カチオン性脂質
本明細書は、特定のカチオン性脂質化合物の合成を含む。この化合物は、後述のセクションで実証されるように、細胞および組織にポリヌクレオチドを送達するのに特に適している。本明細書に記載のリポ大環状（ｌｉｐｏｍａｃｒｏｃｙｃｌｅ）化合物は、例えば、レシピエントおよび添加剤として、他の目的にも使用してもよい。
【００８６】
カチオン性脂質化合物の合成方法は、当技術分野における技術知識によって合成することができる。当業者は、これらの化合物を生成するための他の方法、および本明細書の他の化合物も生成する他の方法を認識するであろう。
【００８７】
カチオン性脂質化合物は、微粒子、ナノ粒子、リポソームまたはミセルを形成するために、薬剤と組み合わせることができる。粒子、リポソームまたはミセルにより送達される薬剤は、気体、液体または固体の形態であり得、薬剤はポリヌクレオチド、タンパク質、ペプチド、または小分子であってもよい。リポ大環状化合物は、粒子を形成するために、他のカチオン性脂質化合物、ポリマー（合成または天然）、界面活性剤、コレステロール、炭水化物、タンパク質、または脂質と組み合わせることができる。次いでこれらの粒子は、医薬組成物を形成するために、薬学的賦形剤と任意選択で組み合わせてもよい。
【００８８】
本明細書は、新規なカチオン性脂質化合物およびそのようなカチオン性脂質化合物の使用に基づく薬物送達系を提供する。この系は、患者、組織、器官または細胞に、ポリヌクレオチド、タンパク質、小分子、ペプチド、抗原、または薬物を送達する薬学／薬物送達分野で使用することができる。これらの新規な化合物は、コーティング、添加剤、賦形剤、材料または生物工学のための材料として使用することもできる。
【００８９】
本明細書のカチオン性脂質化合物は、薬物送達分野において、いくつかの異なる使用を提供する。カチオン性脂質化合物のアミン含有部分は、ポリヌクレオチドと複合体を形成するのに使用され得、それによってポリヌクレオチドの送達を増強し、それらの分解を防止する。カチオン性脂質化合物は、送達される薬剤を含むピコ粒子、ナノ粒子、微粒子、リポソームおよびミセルを形成するのにも使用することができる。好ましくは、カチオン性脂質化合物は生体適合性および生分解性であり、形成された粒子もまた生分解性および生体適合性であり、送達される薬剤の制御持続放出をもたらすのに使用することができる。これらおよびそれらの対応する粒子は、より低いｐＨでプロトン化されていることを考えると、ｐＨ変化に応答性でもあり得る。これらはまた、細胞への薬剤の送達においてプロトンスポンジとして作用して、エンドソーム溶解を起こし得る。
【００９０】
ある特定の実施形態では、カチオン性脂質化合物は比較的細胞無毒性である。カチオン性脂質化合物は生体適合性および生分解性であり得る。カチオン性脂質は、およそ５．５からおよそ７．５の範囲内の、より好ましくはおよそ６．０からおよそ７．０の間のｐＫａを有し得る。カチオン性脂質は、およそ３．０からおよそ９．０の間の、またはおよそ５．０からおよそ８．０の間の所望のｐＫａを有するように設計することができる。本明細書に記載のカチオン性脂質化合物は、いくつかの理由、すなわち、ＤＮＡ、ＲＮＡ、他のポリヌクレオチド、および他の負に荷電した薬剤と相互作用するための、ｐＨを緩衝するための、エンドソーム浸透圧破壊（ｅｎｄｏ−ｏｓｍｏｌｙｓｉｓ）を引き起こすための、送達される薬剤を保護するためのアミノ基を含むという理由で薬物送達にとって特に魅力的であり、それらは市販の出発物質から合成することができる、かつ／またはそれらはｐＨ応答性であり、所望のｐΚａを有するように操作することができる。
【００９１】
カチオン性脂質化合物を含有する組成物は、３０〜７０％のカチオン性脂質化合物、０〜６０％のコレステロール、０〜３０％のリン脂質および１〜１０％のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であり得る。好ましくは、この組成物は、３０〜４０％のカチオン性脂質化合物、４０〜５０％のコレステロール、および１０〜２０％のＰＥＧである。他の好ましい実施形態では、この組成物は、５０〜７５％のカチオン性脂質化合物、２０〜４０％のコレステロール、および５〜１０％のリン脂質、および１〜１０％のＰＥＧである。この組成物は、６０〜７０％のカチオン性脂質化合物、２５〜３５％のコレステロール、および５〜１０％のＰＥＧを含有してもよい。この組成物は、９０％までのカチオン性脂質化合物および２〜１５％のヘルパー脂質（ｈｅｌｐｅｒ  ｌｉｐｉｄ）を含有し得る。
【００９２】
製剤は、例えば、８〜３０％の化合物、５〜３０％のヘルパー脂質、および０〜２０％のコレステロール；４〜２５％のカチオン性脂質、４〜２５％のヘルパー脂質、２〜２５％のコレステロール、１０〜３５％のコレステロール−ＰＥＧ、および５％のコレステロール−アミン；または２〜３０％のカチオン性脂質、２〜３０％のヘルパー脂質、１〜１５％のコレステロール、２〜３５％のコレステロール−ＰＥＧ、および１〜２０％のコレステロール−アミン；または９０％までのカチオン性脂質および２〜１０％のヘルパー脂質、またはさらに１００％のカチオン性脂質を含有する脂質粒子製剤とすることができる。
【００９３】
非カチオン性脂質
脂質粒子中で使用される非カチオン性脂質は、安定した複合体を作製することができる多種多様な中性の非荷電、双性イオン、またはアニオン性脂質のいずれかであることができる。
【００９４】
非カチオン性脂質の非限定的な例としては、レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、リゾレシチン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、卵スフィンゴミエリン（ＥＳＭ）、セファリン、カルジオリピン、ホスファチジン酸、セレブロシド、ジセチルリン酸、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）などのリン脂質が挙げられる。ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイル−ホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、パルミトイルオレイオル−ホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＤＯＰＥ−ｍａｌ）、ジパルミトイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、モノメチル−ホスファチジルエタノールアミン、ジメチル−ホスファチジルエタノールアミン、ジエライドイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、ステアロイルオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、リゾホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン、およびそれらの混合物。他のジアシルホスファチジルコリンおよびジアシルホスファチジルエタノールアミンリン脂質もまた使用され得る。これらの脂質におけるアシル基は、好ましくは、Ｃ１０〜Ｃ２４炭素鎖、例えば、ラウロイル、ミリストイル、パルミトイル、ステアロイル、またはオレオイルを有する脂肪酸に由来するアシル基である。
【００９５】
非カチオン性脂質の追加の例としては、コレステロールなどのステロールおよびそれらの誘導体が挙げられる。コレステロール誘導体の非限定的な例としては、５α−コレスタノール、５α−コプロスタノール、コレステリル−（２’−ヒドロキシ）−エチルエーテル、コレステリル−（４’−ヒドロキシ）−ブチルエーテル、および６−ケトコレスタノールなどの極性類似体；５α−コレスタン、コレステノン、５α−コレスタノン、５α−コレスタノン、およびデカン酸コレステリルなどの非極性類似体；ならびにそれらの混合物が挙げられる。好ましい実施形態では、コレステロール誘導体は、コレステリル−（４’−ヒドロキシ）−ブチルエーテルなどの極性類似体である。
【００９６】
一部の実施形態では、脂質粒子中に存在する非カチオン性脂質は、１つ以上のリン脂質およびコレステロールまたはそれらの誘導体の混合物を含むか、またはそれからなる。他の実施形態では、脂質粒子中に存在する非カチオン性脂質は、１つ以上のリン脂質、例えば、コレステロールを含まない脂質粒子製剤を含むか、またはそれからなる。さらに他の実施形態では、脂質粒子中に存在する非カチオン性脂質は、コレステロールまたはその誘導体、例えば、リン脂質を含まない脂質粒子製剤を含むか、またはそれからなる。
【００９７】
非カチオン性脂質の他の例としては、例えば、ステアリルアミン、ドデシルアミン、ヘキサデシルアミン、アセチルパルミテート、グリセロールリシノール酸塩、ヘキサデシルステアレート、ミリスチン酸イソプロピル、両性アクリルポリマー、トリエタノールアミン−ラウリル硫酸、アルキル−アリール硫酸ポリエチルオキシ化脂肪酸アミド、臭化ジオクタデシルジメチルアンモニウム、セラミド、およびスフィンゴミエリンなどの非亜リン酸含有脂質が挙げられる。
【００９８】
一部の実施形態では、非カチオン性脂質は、粒子中に存在する全脂質の１０ｍｏｌ〜６０ｍｏｌ％、２０ｍｏｌ％〜５５ｍｏｌ、２０ｍｏｌ％〜４５ｍｏｌ％、２０ｍｏｌ％〜４０ｍｏｌ％、２５ｍｏｌ％〜５０ｍｏｌ％、２５ｍｏｌ％〜４５ｍｏｌ％、３０ｍｏｌ％〜５０ｍｏｌ％、３０ｍｏｌ％〜４５ｍｏｌ％、３０ｍｏｌ％〜４０ｍｏｌ％、３５ｍｏｌ％〜４５ｍｏｌ％、３７ｍｏｌ％〜４２ｍｏｌ％、または３５ｍｏｌ％、３６ｍｏｌ％、３７ｍｏｌ％、３８ｍｏｌ％、３９ｍｏｌ、４０ｍｏｌ％、４１ｍｏｌ％、４２ｍｏｌ、４３ｍｏｌ％、４４ｍｏｌ％、または４５ｍｏｌ％（またはそれらの任意の割合またはその中の範囲）を構成する。
【００９９】
脂質粒子が、リン脂質およびコレステロールまたはコレステロール誘導体の混合物を含む実施形態では、混合物は、粒子中に存在する全脂質の４０ｍｏｌ％、４５ｍｏｌ％、５０ｍｏｌ％、５５ｍｏｌ％、または６０ｍｏｌ％までを構成し得る。
【０１００】
一部の実施形態では、混合物中のリン脂質成分は、粒子中に存在する全脂質の２ｍｏｌ％〜２０ｍｏｌ％、２ｍｏｌ％〜１５ｍｏｌ％、２ｍｏｌ％〜１２ｍｏｌ％、４ｍｏｌ％〜１５ｍｏｌ％、または４ｍｏｌ％〜１０ｍｏｌ％（またはそれらの任意の割合またはその中の範囲）を構成し得る。ある特定の好ましい実施形態では、混合物中のリン脂質成分は、粒子中に存在する全脂質の５ｍｏｌ％〜１０ｍｏｌ％、５ｍｏｌ％〜９ｍｏｌ％、５ｍｏｌ％〜８ｍｏｌ％、６ｍｏｌ％〜９ｍｏｌ％、６ｍｏｌ％〜８ｍｏｌ％、または５ｍｏｌ％、６ｍｏｌ％、７ｍｏｌ％、８ｍｏｌ％、９ｍｏｌ％、または１０ｍｏｌ％（またはそれらの任意の割合またはその中の範囲）を構成する。
【０１０１】
他の実施形態では、混合物中のコレステロール成分は、粒子中に存在する全脂質の２５ｍｏｌ％〜４５ｍｏｌ％、２５ｍｏｌ％〜４０ｍｏｌ％、３０ｍｏｌ％〜４５ｍｏｌ％、３０ｍｏｌ％〜４０ｍｏｌ％、２７ｍｏｌ％〜３７ｍｏｌ、２５ｍｏｌ％〜３０ｍｏｌ％、または３５ｍｏｌ％〜４０ｍｏｌ％（またはそれらの任意の割合またはその中の範囲）を構成し得る。ある特定の好ましい実施形態では、混合物中のコレステロール成分は、粒子中に存在する全脂質の２５ｍｏｌ％〜３５ｍｏｌ％、２７ｍｏｌ％〜３５ｍｏｌ％、２９ｍｏｌ％〜３５ｍｏｌ％、３０ｍｏｌ％〜３５ｍｏｌ％、３０ｍｏｌ％〜３４ｍｏｌ％、３１ｍｏｌ％〜３３ｍｏｌ％、または３０ｍｏｌ％、３１ｍｏｌ％、３２ｍｏｌ％、３３ｍｏｌ％、３４ｍｏｌ％、または３５ｍｏｌ％（またはそれらの任意の割合またはその中の範囲）を構成する。
【０１０２】
脂質粒子が、リン脂質を含まない実施形態では、コレステロールまたはその誘導体は、粒子中に存在する全脂質の２５ｍｏｌ％、３０ｍｏｌ％、３５ｍｏｌ％、４０ｍｏｌ％、４５ｍｏｌ％、５０ｍｏｌ％、５５ｍｏｌ％、または６０ｍｏｌ％までを構成し得る。
【０１０３】
一部の実施形態では、リン脂質を含まない脂質粒子製剤中のコレステロールまたはその誘導体は、粒子中に存在する全脂質の２５ｍｏｌ％〜４５ｍｏｌ％、２５ｍｏｌ％〜４０ｍｏｌ％、３０ｍｏｌ％〜４５ｍｏｌ％、３０ｍｏｌ％〜４０ｍｏｌ％、３１ｍｏｌ％〜３９ｍｏｌ％、３２ｍｏｌ％〜３８ｍｏｌ％、３３ｍｏｌ％〜３７ｍｏｌ％、３５ｍｏｌ％〜４５ｍｏｌ％、３０ｍｏｌ％〜３５ｍｏｌ％、３５ｍｏｌ％〜４０ｍｏｌ％、または３０ｍｏｌ％、３１ｍｏｌ％、３２ｍｏｌ％、３３ｍｏｌ％、３４ｍｏｌ％、３５ｍｏｌ％、３６ｍｏｌ％、３７ｍｏｌ％、３８ｍｏｌ％、３９ｍｏｌ％、または４０ｍｏｌ％（またはそれらの任意の割合またはその中の範囲）を構成し得る。
【０１０４】
他の実施形態では、非カチオン性脂質は、粒子中に存在する全脂質の５ｍｏｌ％〜９０ｍｏｌ％、１０ｍｏｌ％〜８５ｍｏｌ％、２０ｍｏｌ％〜８０ｍｏｌ％、１０ｍｏｌ％（例えば、リン脂質のみ）、または６０ｍｏｌ％（例えば、リン脂質およびコレステロールまたはその誘導体）（またはそれらの任意の割合またはその中の範囲）を構成する。
【０１０５】
脂質粒子中に存在する非カチオン性脂質のパーセンテージは、標的量であり、製剤中に存在する非カチオン性脂質の実際の量は、例えば、±５ｍｏｌ％で変化し得る。
【０１０６】
脂質複合体
カチオン性に加えて、本明細書に記載の脂質粒子は、脂質複合体をさらに含み得る。複合脂質は、それが粒子の凝集を防止することにおいて有用である。適切な複合脂質としては、ＰＥＧ−脂質複合体、カチオン性ポリマー脂質複合体、およびそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０７】
好ましい実施形態では、脂質複合体は、ＰＥＧ−脂質であり、ＰＥＧ−脂質の例としては、ジアルキルオキシプロピルにカップリングされるＰＥＧ（ＰＥＧ−ＤＡＡ）、ジアシルグリセロールにカップリングされるＰＥＧ（ＰＥＧ−ＤＡＧ）、ホスファチジルエタノールアミンなどのリン脂質にカップリングされるＰＥＧ（ＰＥＧ−ＰＥ）、セラミドに複合されるＰＥＧ、コレステロールまたはその誘導体に複合されるＰＥＧ、およびそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０８】
ＰＥＧは、２つの末端ヒドロキシル基を有するエチレンＰＥＧ反復単位の直鎖、水溶性ポリマーである。ＰＥＧは、それらの分子量によって分類され、以下、モノメトキシポリエチレングリコール（ＭｅＰＥＧ−ＯＨ）、モノメトキシポリエチレングリコール−スクシネート（ＭｅＰＥＧ−Ｓ）、モノメトキシポリエチレングリコール−スクシニミジルスクシネート（ＭｅＰＥＧ−Ｓ−ＮＨＳ）、モノメトキシポリエチレングリコール−アミン（ＭｅＰＥＧ−ＮＨ２）、モノメトキシポリエチレングリコール−トレシレート（ＭｅＰＥＧ−ＴＲＥＳ）、モノメトキシポリエチレングリコール−イミダゾリル−カルボニル（ＭｅＰＥＧ−ＩＭ）、および末端メトキシ基の代わりに末端ヒドロキシル基を含むそのような化合物（例えば、ＨＯ−ＰＥＧ−Ｓ、ＨＯ−ＰＥＧ−Ｓ−ＮＨＳ、ＨＯ−ＰＥＧ−ＮＨ２）を含む。
【０１０９】
本明細書に記載のＰＥＧ−脂質複合体のＰＥＧ部分は、５５０ダルトン〜１０，０００ダルトンにわたる平均分子量を含み得る。ある特定の例では、ＰＥＧ部分は、７５０ダルトン〜５，０００ダルトン（例えば、１，０００ダルトン〜５，０００ダルトン、１，５００ダルトン〜３，０００ダルトン、７５０ダルトン〜３，０００ダルトン、７５０ダルトン〜２，０００ダルトン）の平均分子量を有する。好ましい実施形態では、ＰＥＧ部分は、２，０００ダルトン〜７５０ダルトンの平均分子量を有する。
【０１１０】
ある特定の例では、ＰＥＧは、アルキル、アルコキシ、アシル、またはアリール基によって任意選択で置換されていてもよい。ＰＥＧは、脂質に直接的に複合し得るか、またはリンカー部分を介して脂質に連結され得る。例えば、非エステル含有リンカー部分およびエステル含有リンカー部分を含む、ＰＥＧを脂質にカップリングするのに適切ないかなるリンカー部分も使用され得る。好ましい実施形態では、リンカー部分は、非エステル含有リンカー部分である。適切な非エステル含有リンカー部分としては、アミド（−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）、アミノ（−ＮＲ−）、カルボニル（−Ｃ（Ｏ）−）、カルバミン酸（−ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ−）、ウレア（−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−）、ジスルフィド（−Ｓ−Ｓ−）、エーテル（−０−）、スクシニル（−（０）ＣＣＨ２ＣＨ２Ｃ（０）−）、スクシナミジル（−ＮＨＣ（０）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（０）ＮＨ−）、エーテル、ジスルフィド、およびそれらの組み合わせ（カルバミン酸リンカー部分およびアミドリンカー部分をともに含むリンカーなど）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、カルバミン酸リンカーは、ＰＥＧを脂質にカップリングするために使用される。
【０１１１】
他の実施形態では、エステル含有リンカー部分は、ＰＥＧを脂質にカップリングするために使用される。適切なエステル含有リンカー部分としては、例えば、炭酸塩（−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−）、スクシノイル、リン酸エステル（−Ｏ−（Ｏ）ＰＯＨ−Ｏ−）、スルホン酸エステル、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【０１１２】
様々な鎖長および程度の飽和の多種多様なアシル鎖基を有するホスファチジルエタノールアミンは、脂質複合体を形成するためにＰＥＧに複合され得る。そのようなホスファチジルエタノールアミンは市販されるか、または当業者に公知の従来の技術を使用して単離または合成され得る。Ｃ１０〜Ｃ２０の範囲内の炭素鎖長を有する飽和または不飽和脂肪酸を含むホスファチジルエタノールアミンが好ましい。モノ−またはジ−不飽和脂肪酸および飽和または不飽和脂肪酸の混合物を有するホスファチジルエタノールアミンもまた使用され得る。適切なホスファチジルエタノールアミンとしては、ジミリストイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、およびジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１３】
「ジアシルグリセロール」または「ＤＡＧ」という用語は、２つの脂肪アシル鎖を有する化合物を含み、そのＲ１およびＲ２はともに、独立して、エステル結合によってグリセロールの１位および２位に結合される２〜３０個の炭素を有する。アシル基は、飽和されるか、または様々な程度の不飽和を有し得る。適切なアシル基としては、ラウロイル（Ｃ１２）、ミリストイル（Ｃ１４）、パルミトイル（Ｃ１６）、ステアロイル（Ｃ１８）、およびイコソイル（Ｃ２０）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、Ｒ１およびＲ２は同一であり、すなわち、Ｒ１およびＲ２はともに、ミリストイル（すなわち、ジミリストイル）であり、Ｒ１およびＲ２はともに、ステアロイル（すなわち、ジステアロイル）である。
【０１１４】
「ジアルキルオキシプロピル」または「ＤＡＡ」という用語は、２つのアルキル鎖を有する化合物を含み、そのＲおよびＲはともに、独立して、２〜３０個の炭素を有する。アルキル基は、飽和されるか、または様々な程度の不飽和を有し得る。
【０１１５】
好ましくは、ＰＥＧ−ＤＡＡ複合体は、ＰＥＧ−ジデシルオキシプロピル（Ｃ１０）複合体、ＰＥＧ−ジラウリルオキシプロピル（Ｃ１２）複合体、ＰＥＧ−ジミリスチルオキシプロピル（Ｃ１４）複合体である。ＰＥＧ−ジパルミチルオキシプロピル（Ｃ１６）複合体、またはＰＥＧ−ジステアリルオキシプロピル（Ｃ１８）複合体。これらの実施形態では、ＰＥＧは、好ましくは７５０〜２，０００ダルトンの平均分子量を有する。特定の実施形態では、ＰＥＧの末端ヒドロキシル基は、メチル基を用いて置換されている。
【０１１６】
前述に加えて、他の親水性ポリマーは、ＰＥＧの代わりに使用され得る。ＰＥＧの代わりに使用され得る適切なポリマーの例としては、ポリビニルピロリドン、ポリメチルオキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミドおよびポリジメチルアクリルアミド、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ならびにヒドロキシメチルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロースなどの誘導体化セルロースが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１７】
一部の実施形態では、脂質複合体（例えば、ＰＥＧ−脂質）は、粒子中に存在する全脂質の０．１ｍｏｌ％〜２ｍｏｌ％、０．５ｍｏｌ％〜２ｍｏｌ％、１ｍｏｌ％〜２ｍｏｌ％、０．６ｍｏｌ％〜１．９ｍｏｌ％、０．７ｍｏｌ％〜１．８ｍｏｌ％、０．８ｍｏｌ％〜１．７ｍｏｌ％、０．９ｍｏｌ％〜１．６ｍｏｌ％、０．９ｍｏｌ％〜１．８ｍｏｌ％、１ｍｏｌ％〜１．８ｍｏｌ％、１ｍｏｌ％〜１．７ｍｏｌ％、１．２ｍｏｌ％〜１．８ｍｏｌ％、１．２ｍｏｌ％〜１．７ｍｏｌ％、１．３ｍｏｌ％〜１．６ｍｏｌ％、または１．４ｍｏｌ％〜１．５ｍｏｌ％（またはそれらの任意の割合またはその中の範囲）を構成する。他の実施形態では、脂質複合体（例えば、ＰＥＧ−脂質）は、粒子中に存在する全脂質の０ｍｏｌ％〜２０ｍｏｌ％、０．５ｍｏｌ％〜２０ｍｏｌ％、２ｍｏｌ％〜２０ｍｏｌ％、１．５ｍｏｌ％〜１８ｍｏｌ％、２ｍｏｌ％〜１５ｍｏｌ％、４ｍｏｌ％〜１５ｍｏｌ％、２ｍｏｌ％〜１２ｍｏｌ％、５ｍｏｌ％〜１２ｍｏｌ％、または２ｍｏｌ％（またはそれらの任意の割合またはその中の範囲）を構成する。
【０１１８】
さらなる実施形態では、脂質複合体（例えば、ＰＥＧ−脂質）は、粒子中に存在する全脂質の４ｍｏｌ％〜１０ｍｏｌ％、５ｍｏｌ％〜１０ｍｏｌ％、５ｍｏｌ％〜９ｍｏｌ％、５ｍｏｌ％〜８ｍｏｌ％、６ｍｏｌ％〜９ｍｏｌ％、６ｍｏｌ％〜８ｍｏｌ％、または５ｍｏｌ％、６ｍｏｌ％、７ｍｏｌ％、８ｍｏｌ％、９ｍｏｌ％、または１０ｍｏｌ％（またはそれらの任意の割合またはその中の範囲）を構成する。
【０１１９】
本発明の脂質粒子中に存在する脂質複合体（例えば、ＰＥＧ−脂質）のパーセンテージは、標的量であり、製剤中に存在する脂質複合体の実際の量は、例えば、±２ｍｏｌで変化し得る。当業者は、脂質複合体の濃度が、用いられる脂質複合体、および脂質粒子が融合性になる速度によって変化し得ることを理解するであろう。
【０１２０】
組成物および脂質複合体の濃度を制御することによって、当業者は、脂質複合体が脂質粒子から交換する速度、次に、脂質粒子が融合性になる速度を制御し得る。さらに、例えば、ｐＨ、温度、またはイオン強度を含む他の変数は脂質粒子が融合性になる速度を変更および／または制御するために使用され得る。脂質粒子が融合性になる速度を制御するために使用され得る他の方法は、本開示を読むことによって当業者には明らかになるであろう。また、組成物および脂質複合体の濃度を制御することによって、当業者は、脂質粒子サイズを制御することができる。
【０１２１】
投与のための組成物および製剤
本開示の核酸−脂質組成物は、多様な経路により、例えば、全身送達を実施するために静脈内、非経口、腹腔内または局所経路を介して投与することができる。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、例えば、肺もしくは肝臓などの標的組織の細胞において、または炎症組織において、細胞内に送達され得る。一部の実施形態では、本開示は、インビボでｓｉＲＮＡを送達するための方法を提供する。核酸−脂質組成物は、被験体に静脈内、皮下、または腹腔内投与することができる。一部の実施形態では、本開示は、哺乳動物の被験体の肺に干渉ＲＮＡをインビボで送達するための方法を提供する。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において疾患または障害を処置する方法を提供する。治療有効量の、核酸、カチオン性脂質、両親媒性物質、リン脂質、コレステロール、およびＰＥＧ連結コレステロールを含有する本開示の組成物は、組成物によって低減、減少、下方制御、またはサイレンシングすることができる遺伝子の発現または過剰発現に関連する疾患または障害を有する被験体に投与することができる。
【０１２３】
本開示の組成物および方法は、経口、直腸、膣、鼻内、肺内、または経皮もしくは皮膚送達、あるいは目、耳、皮膚または他の粘膜表面への局所送達を含む多種多様な粘膜投与様式によって被験体に投与することができる。本開示の一部の態様では、粘膜組織層は、上皮細胞層を含む。上皮細胞は、肺、気管、気管支、肺胞、鼻、頬、表皮、または胃腸のものであり得る。本開示の組成物は、機械的噴霧デバイスなどの従来のアクチュエータ、ならびに加圧式、電気作動式または他の種類のアクチュエータを使用して投与することができる。
【０１２４】
本開示の組成物は、鼻または肺スプレーとして、水溶液で投与することができ、当業者に公知の多種多様な方法によってスプレーの形態で投薬することができる。本開示の組成物の肺送達は、液滴、粒子、またはスプレーの形態の組成物を投与することによって達成され、このような組成物を、例えばエアロゾル化、霧化、または噴霧化することができる。組成物、スプレーまたはエアロゾルの粒子は、液体形態または固体形態のいずれかであり得る。鼻スプレーとして液体を投薬するための好ましいシステムは、米国特許第４，５１１，０６９号に開示されている。そのような製剤は、本開示による組成物を水中に溶解して、水溶液を生成し、前記溶液を無菌にすることによって簡便に調製され得る。製剤は、多用量容器で、例えば米国特許第４，５１１，０６９号に開示されている密閉投薬システムで提示してもよい。他の適切な鼻スプレー送達システムは、Ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ、Ｙ．Ｗ．Ｃｈｉｅｎ編、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８５年；および米国特許第４，７７８，８１０号に記載されている。さらなるエアロゾル送達形態には、例えば、圧縮空気、ジェット、超音波、圧電式ネブライザーが含まれ得、これは薬学的溶媒、例えば、水、エタノール、またはこれらの混合物中に溶解または懸濁された生物学的に活性な薬剤を送達する。
【０１２５】
本開示の鼻および肺スプレー溶液は、典型的には、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０）などの表面活性剤、および１種または複数の緩衝液と任意選択で製剤化された薬物または送達される薬物を含む。本開示の一部の実施形態では、鼻スプレー溶液は噴霧体をさらに含む。鼻スプレー溶液のｐＨは、ｐＨ６．８から７．２であってもよい。採用する薬学的溶媒は、ｐＨ４〜６のわずかに酸性の水性緩衝液とすることもできる。化学的安定性を増強または維持するために、保存料、界面活性剤、分散剤またはガスを含む他の成分を添加してもよい。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、本開示は、本開示の組成物を含有する溶液、および肺内、粘膜、または鼻内スプレーまたはエアロゾル用のアクチュエータを含む医薬品である。
【０１２７】
本開示の組成物の剤形は、液滴もしくはエマルションの形態の、またはエアロゾルの形態の液体であり得る。
【０１２８】
本開示の組成物の剤形は、投与前に液体中で再構成することができる、固体であり得る。固体は粉末として投与することができる。固体はカプセル剤、錠剤またはゲル剤の形態であり得る。
【０１２９】
本開示内の肺送達のための組成物を製剤化するには、生物学的に活性な薬剤を、薬学的に許容される多様な添加剤、ならびに活性な薬剤（複数可）の分散用の基剤または担体と組み合わせることができる。添加剤の例としては、アルギニン、水酸化ナトリウム、グリシン、塩酸、クエン酸、およびこれらの混合物などのｐＨ調整剤が挙げられる。他の添加剤には、局所麻酔剤（例えば、ベンジルアルコール）、等張化剤（ｉｓｏｔｏｎｉｚｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール）、吸着阻害剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０）、溶解促進剤（例えば、シクロデキストリンおよびその誘導体）、安定化剤（例えば、血清アルブミン）、ならびに還元剤（例えば、グルタチオン）が含まれる。粘膜送達のための組成物が液体である場合、０．９％（ｗ／ｖ）生理食塩液の張度を単位として参照して測定したとき、製剤の張度は、投与部位の粘膜で大幅な不可逆の組織損傷が引き起こされない値に典型的に調整される。一般に、溶液の張度は、１／３から３、より典型的には１／２から２、ほとんどの場合には３／４から１．７の値に調整される。
【０１３０】
生物学的に活性な薬剤は、基剤またはビヒクルに分散してもよく、これは活性な薬剤および任意の所望の添加剤を分散する能力を有する親水性化合物を含み得る。基剤は、ポリカルボン酸またはその塩、カルボン酸無水物（例えば、無水マレイン酸）の他のモノマー（例えば、メチル（メタ）アクリレート、アクリル酸等）とのコポリマー、ポリ酢酸ビニル、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンなどの親水性ビニルポリマー、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等のセルロース誘導体、およびキトサン、コラーゲン、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、ヒアルロン酸などの天然ポリマー、ならびにこれらの無毒性の金属塩を含むがこれらに限定されない、広範囲の適切な担体から選択することができる。しばしば、生分解性ポリマーが基剤または担体として選択され、例えば、ポリ乳酸、ポリ（乳酸−グリコール酸）コポリマー、ポリヒドロキシ酪酸、ポリ（ヒドロキシ酪酸−グリコール酸）コポリマーおよびこれらの混合物である。代替的にまたは加えて、ポリグリセリン脂肪酸エステル、スクロース脂肪酸エステル等の合成脂肪酸エステルを担体として採用することができる。親水性ポリマーおよび他の担体を単独でまたは組み合わせて使用することができ、部分結晶化、イオン結合、架橋などによって、担体に増強した構造的一体性を付与することができる。担体は、流体または粘性溶液、ゲル、ペースト、粉末、マイクロスフェア、および鼻粘膜への直接適用のためのフィルムを含む多種多様な形態で提供することができる。本文脈における選択された担体の使用は、生物学的に活性な薬剤の吸収の促進をもたらし得る。
【０１３１】
粘膜、鼻、または肺送達のための製剤は、基剤または賦形剤として親水性低分子量化合物を含有し得る。そのような親水性低分子量化合物は、水溶性の活性な薬剤、例えば生理学的に活性なペプチドまたはタンパク質などが基剤から活性な薬剤が吸収される身体表面に拡散する輸送媒体（ｐａｓｓａｇｅ  ｍｅｄｉｕｍ）を提供する。親水性低分子量化合物は、任意に粘膜または投与雰囲気から水分を吸収し、水溶性の活性ペプチドを溶解する。親水性低分子量化合物の分子量は一般に１０，０００以下であり、好ましくは３，０００以下である。親水性低分子量化合物の例としては、ポリオール化合物、例えば、スクロース、マンニトール、ラクトース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−エリトロース、Ｄ−リボース、Ｄ−キシロース、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、ラクツロース、セロビオース、ゲンチオビオース（ｇｅｎｔｉｂｉｏｓｅ）、グリセリン、ポリエチレングリコール、およびこれらの混合物を含む、オリゴ、二および単糖などが挙げられる。親水性低分子量化合物のさらなる例としては、Ｎ−メチルピロリドン、アルコール（例えば、オリゴビニルアルコール、エタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール等）、およびこれらの混合物が挙げられる。
【０１３２】
本開示の組成物は、薬学的に許容される担体として、生理学的条件を模倣するのに必要な物質として、例えばｐＨ調整剤および緩衝剤、張度調整剤、および湿潤剤など、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミン、およびこれらの混合物を代替的に含有してもよい。固体組成物には、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウムなどを含む従来の無毒性の薬学的に許容される担体を使用することができる。
【０１３３】
本開示のある特定の実施形態では、生物学的に活性な薬剤は、例えば徐放性ポリマーを含む組成物、時限放出製剤（ｔｉｍｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）で投与することができる。活性な薬剤は、迅速な放出から保護する担体、例えば、ポリマー、マイクロカプセル化送達系または生体接着性ゲルなどの制御放出ビヒクルを使用して調製することができる。本開示の多様な組成物中の活性な薬剤の長時間送達は、組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムヒドロゲルおよびゼラチンを含ませることによってもたらすことができる。
【０１３４】
ある特定の実施形態に関して本開示を説明し、多くの詳細を例示目的で示してきたが、本開示がさらなる実施形態を含むこと、また本明細書に記載した詳細のいくつかを本開示から逸脱することなくかなり変更し得ることが当業者には明らかであろう。本開示はそのようなさらなる実施形態、変更形態および均等物を含む。特に、本開示は、多様な例示的な成分および例の特徴、用語または要素の任意の組合せを含む。
【実施例】
【０１３５】
（実施例１）
例示的な式Ｉの化合物を表１に提示する。
【表１−１】
0006637988.tif 000030
【表１−２】
0006637988.tif 000031
表１は、各化合物の名称および構造、その分子量、そのｐＫａ、および実施例１９で下に記載するアッセイにおけるそのノックダウン生物活性（ＫＤ）を示す。
【０１３６】
例示的な式ＩＩおよびＩＩＩの化合物を表２および３に提示する。
【表２】
0006637988.tif 000032
【表３−１】
0006637988.tif 000033
【表３−２】
0006637988.tif 000034
【表３−３】
0006637988.tif 000035
【０１３７】
例示的な式Ｖの化合物を表４に提示する。
【表４−１】
0006637988.tif 000036
【表４−２】
0006637988.tif 000037
【表４−３】
0006637988.tif 000038
表１は、各化合物の名称および構造、その分子量、そのｐＫａ、および実施例１９で下に記載するアッセイにおけるそのノックダウン生物活性（ＫＤ）を示す。
（実施例２）メチル８−ブロモジオクタノエートの合成
【化１９】
0006637988.tif 000039
【０１３８】
Ｎ２雰囲気下、８−ブロモオクタン酸を乾燥メタノールに溶解した。濃Ｈ２ＳＯ４を滴下添加し、反応混合物を還流下３時間撹拌した。
【０１３９】
反応を薄層クロマトグラフィーにより完了するまで監視した。溶媒を真空下完全に除去した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水で洗浄した。水層を酢酸エチルで再抽出した。全有機層を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。有機層を再度水で洗浄し、最後にブラインで洗浄した。生成物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。
（実施例３）ジメチル８，８’−（ベンザンジイル）ジオクタノエートの合成
【化２０】
0006637988.tif 000040
【０１４０】
乾燥Ｋ２ＣＯ３をとり、Ｎ２下で乾燥ジメチルホルムアミドに加えた。ジメチルホルムアミド中ベンジルアミンをゆっくりと加えた。次いでジメチルホルムアミドに溶解したメチル８−ブロモオクタノエートを室温で加えた。反応混合物を８０℃に加熱し、反応物を撹拌しながら３６時間維持した。
【０１４１】
反応を薄層クロマトグラフィーにより完了するまで監視した。反応生成物を室温に冷却し、水を添加した。化合物を酢酸エチルで抽出した。水層を酢酸エチルで再抽出した。全有機層を水で洗浄し、最後にブライン溶液で洗浄した。生成物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。
【０１４２】
反応生成物を、クロロホルム中３％メタノールのシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。４４ｇｍの純粋な生成物を回収した。
【０１４３】
クロロホルム中１０％メタノールのＴＬＣシステムを使用して、ニンヒドリンで着色する（ｃｈａｒｒｉｎｇ）ことによって可視化して、生成物はＲｆ：０．８で移動した。全体収率は８２％であった。化合物は薄褐色の液体であった。構造を１Ｈ−ＮＭＲにより確認した。
（実施例４）ジメチル８，８’−アザンジイルジオクタノエートの合成
【化２１】
0006637988.tif 000041
【０１４４】
ジメチル８，８’−（ベンザンジイル）ジオクタノエートを水素化ガラス容器に移し、エタノールを添加した後、１０％Ｐｄ／Ｃを加えた。反応混合物をＰａｒｒ振とう装置内で５０ポンド毎平方インチ［ｐｓｉ］のＨ２雰囲気圧下で、室温で２時間振とうした。
【０１４５】
反応生成物をセライトで濾過し、熱酢酸エチルで洗浄した。ろ液を真空下濃縮した。
（実施例５）ジメチル８，８’−（（ｔｅｒｔブトキシカルボニル）アザンジル）ジオクタノエートの合成
【化２２】
0006637988.tif 000042
【０１４６】
ジメチル８，８’−アザンジイルジオクタノエートをＤＣＭに移し、Ｅｔ３Ｎを反応塊（ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｍａｓｓ）に移し、０℃に冷却した。ＤＣＭで希釈したＢｏｃ無水物を上記反応物に滴下添加した。添加が完了した後、反応混合物を室温で３時間撹拌した。
【０１４７】
反応物を水でクエンチし、ＤＣＭ層を分離した。水相をＤＣＭで再抽出して、合わせたＤＣＭ層をブライン溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濃縮後、４０ｇｍの粗製化合物を収集した。
【０１４８】
粗製反応生成物を、ヘキサン中０〜１２％酢酸エチルを使用するカラムクロマトグラフィーにより精製した。回収収率は４８％であった。単一の生成物が、ニンヒドリンで着色して、ヘキサン中２０％酢酸エチルの薄層クロマトグラフィーにより、Ｒｆ０．５で移動した。
（実施例６）８，８’−（（ｔｅｒｔブトキシカルボニル）アザンジイル）オクタン酸の合成
【化２３】
0006637988.tif 000043
【０１４９】
ジメチル８，８’−（（ｔｅｒｔブトキシカルボニル）アザンジル）ジオクタノエートをＴＨＦに移した。６Ｎ水酸化ナトリウム溶液を室温で加えた。反応物を室温で終夜撹拌しながら維持した。
【０１５０】
反応塊を真空下２５℃で蒸発させて、ＴＨＦを除去した。反応生成物を５Ｎ  ＨＣｌで酸性化した。酢酸エチルを水性層に加えた。分離した有機層を水で洗浄し、水層を酢酸エチルで再抽出した。合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶液を濃縮して、１８ｇｍの粗製の塊を得た。
（実施例７）ジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）８，８’（（ｔｅｒｔブトキシカルボニル）アザンジイル）の合成
【化２４】
0006637988.tif 000044
【０１５１】
８，８’−（（ｔｅｒｔブトキシカルボニル）アザンジイル）ジオクタン酸を乾燥ＤＣＭに溶解した。この溶液にＨＡＴＵを加えた。ジイソプロピルエチルアミンを室温で反応混合物にゆっくりと加えた。内部温度は４０℃に上昇し、淡黄色の溶液が形成された。ＤＭＡＰを反応混合物に加えた後、乾燥ＤＣＭ中ｃｉｓ−２−ノネン−１−オール溶液を加えた。反応物は褐色に変色した。反応物を室温で５時間撹拌した。
【０１５２】
反応を完了するまで薄層クロマトグラフィーにより確認した。水を反応生成物に加え、これをＤＣＭで抽出した。ＤＣＭ層を水で洗浄した後、ブライン溶液で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、３５ｇｍの粗製化合物を得た。
（実施例８）ＡＴＸ−００１の合成
【化２５】
0006637988.tif 000045
【０１５３】
ジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）８，８’（（ｔｅｒｔブトキシカルボニル）アザンジイル）ジオクタノエート（０．０２３ｍｏｌ、１５ｇ）を乾燥ジクロロメタン（ＤＣＭ）（２００ｍｌ）に溶解した。トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を０℃加えて、反応を開始させた。反応温度を３０分間撹拌しながらゆっくりと室温まで温めた。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。反応生成物を真空下４０℃で濃縮し、粗製の残渣をＤＣＭで希釈し、１０％ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。水性層をＤＣＭで再抽出し、合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。収集した粗生成物（１２グラム）を窒素ガス下で乾燥ＤＣＭ（８５ｍｌ）に溶解した。トリホスゲンを加え、反応混合物を０℃に冷却し、Ｅｔ３Ｎを滴下添加した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。Ｎ２下での蒸留によって反応塊からＤＣＭ溶媒を除去した。反応生成物を０℃に冷却し、ＤＣＭ（５０ｍｌ）、および２−（（２−（ジメチルアミノ）エチル）チオ）酢酸（０．０３９ｍｏｌ、６．４ｇ）およびカルボジイミド（ＥＤＣ・ＨＣｌ）（０．０５４ｍｏｌ、１０．４ｇ）で希釈した。次いで、反応混合物を室温で終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。反応生成物を０．３Ｍ  ＨＣｌ溶液（７５ｍｌ）で希釈し、有機層を分離した。水性層をＤＣＭで再抽出し、合わせた有機層を１０％Ｋ２ＣＯ３水溶液（７５ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を濃縮して、１０グラムの未精製の塊を得た。粗製の化合物を、３％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用するシリカゲルカラム（１００〜２００メッシュ）により精製した。収量は１０．５ｇ（６８％）であった。
（実施例９）ＡＴＸ−００２の合成
【化２６】
0006637988.tif 000046
【０１５４】
ジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）８，８’（（ｔｅｒｔブトキシカルボニル）アザンジイル）ジオクタノエート（１３．８５ｍｍｏｌ、９グラム）を乾燥ＤＣＭ（１５０ｍｌ）に溶解した。ＴＦＡを０℃で加えて、反応を開始させた。反応温度を３０分間撹拌しながらゆっくりと室温まで温めた。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。反応生成物を真空下４０℃で濃縮し、粗製の残渣をＤＣＭで希釈し、１０％ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。水性層をＤＣＭで再抽出し、合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。収集した粗生成物を窒素ガス下で乾燥ＤＣＭ（８５ｍｌ）に溶解した。トリホスゲンを加え、反応混合物を０℃に冷却し、Εｔ３Νを滴下添加した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。Ｎ２下での蒸留によって反応塊からＤＣＭ溶媒を除去した。反応生成物を０℃に冷却し、ＤＣＭ（５０ｍｌ）で希釈し、２−（ジメチルアミノ）エタンチオールＨＣｌ（０．０６３ｍｏｌ、８．３ｇ）を加えた後、Ｅｔ３Ｎ（乾燥）を加えた。次いで、反応混合物を室温で終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。反応生成物を０．３Ｍ  ＨＣｌ溶液（７５ｍｌ）で希釈し、有機層を分離した。水性層をＤＣＭで再抽出し、合わせた有機層を１０％Ｋ２ＣＯ３水溶液（７５ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を濃縮して、１０グラムの未精製の塊を得た。粗製の化合物を、３％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用するシリカゲルカラム（１００〜２００メッシュ）により精製した。収量は３．１グラムであった。
（実施例１０）ＡＴＸ−００３の合成
【化２７】
0006637988.tif 000047
【０１５５】
ジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）８，８’（（ｔｅｒｔブトキシカルボニル）アザンジイル）ジオクタノエート（０．００３３７ｍｏｌ、２．２ｇ）を乾燥ＤＣＭ（２０ｍｌ）に溶解した。ＴＦＡを０℃で加えて、反応を開始させた。反応温度を３０分間撹拌しながらゆっくりと室温まで温めた。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。反応生成物を真空下４０℃で濃縮し、粗製の残渣をＤＣＭで希釈し、１０％ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。水性層をＤＣＭで再抽出し、合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。収集した粗生成物を窒素ガス下で乾燥ＤＣＭ（１０ｍｌ）に溶解した。トリホスゲン（０．０１８２ｍｏｌ、５．４ｇ）を加え、反応混合物を０℃に冷却し、Ｅｔ３Ｎを滴下添加した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。Ｎ２下での蒸留によって反応塊からＤＣＭ溶媒を除去した。反応生成物を０℃に冷却し、ＤＣＭ（１５ｍｌ）で希釈し、２−（ジメチルアミノ）プロパンチオールＨＣｌ（０．０１８２ｍｏｌ、２．８２ｇ）を加えた後、Ｅｔ３Ｎ（乾燥）を加えた。次いで、反応混合物を室温で終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。反応生成物を０．３ＭＨＣｌ水溶液（２０ｍｌ）で希釈し、有機層を分離した。水性層をＤＣＭで再抽出し、合わせた有機層を１０％Ｋ２ＣＯ３水溶液（５０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を濃縮して、５グラムの未精製の塊を得た。粗製の化合物を、３％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用するシリカゲルカラム（１００〜２００メッシュ）により精製した。収量は０．９グラムであった。
（実施例１１）ＡＴＸ−００４の合成
【化２８】
0006637988.tif 000048
【０１５６】
ジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）８，８’（（ｔｅｒｔブトキシカルボニル）アザンジイル）ジオクタノエート（０．０２３ｍｏｌ、１５ｇ）をＤＣＭ（２００ｍｌ）に溶解した。ＴＦＡを０℃で加えて、反応を開始させた。反応温度を３０分間撹拌しながらゆっくりと室温まで温めた。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。反応生成物を真空下４０℃で濃縮し、粗製の残渣をＤＣＭで希釈し、１０％ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。水性層をＤＣＭで再抽出し、合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。収集した粗生成物、ジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）８，８’−アザンジイルジオクタノエート（５．８５３ｍｍｏｌ、３．２ｇ）を窒素下で乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、２−（（３−（ジメチルアミノ）プロピル）チオ）酢酸（１０．４８ｍｍｏｌ、１．８５ｇ）およびＥＤＣＨＣｌ（１４．５６ｍｍｏｌ、２．７８ｇ）を添加した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応物を水（３０ｍｌ）でクエンチし、ＤＣＭ（３０ｍｌ）で希釈し、有機層を分離した。水性層をＤＣＭで再抽出し、合わせた有機層を１０％Ｋ２ＣＯ３水溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。粗製の化合物を、３％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用するシリカゲルカラム（１００〜２００メッシュ）により精製した。収量は１グラム（２４．２％）であった。
（実施例１２）ＡＴＸ−００５の合成
【化２９】
0006637988.tif 000049
【０１５７】
ジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）８，８’（（ｔｅｒｔブトキシカルボニル）アザンジイル）ジオクタノエート（０．０２３ｍｏｌ、１５ｇ）を乾燥ＤＣＭ（２００ｍｌ）に溶解した。ＴＦＡを０℃で加えて、反応を開始させた。反応温度を３０分間撹拌しながらゆっくりと室温まで温めた。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。反応生成物を真空下４０℃で濃縮し、粗製の残渣をＤＣＭで希釈し、１０％ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。水性層をＤＣＭで再抽出し、合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗製の反応生成物、ジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）８，８’−アザンジイルジオクタノエート（５．８５３ｍｍｏｌ、３．２ｇ）を窒素ガス下でジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解した。２−（（３−（ジメチルアミノ）プロピル）チオ）酢酸（１０．４８ｍｍｏｌ、１．８５ｇ）およびＥＤＣ・ＨＣｌ（１４．５６ｍｍｏｌ、２．７８ｇ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。反応生成物を水（３０ｍｌ）でクエンチし、ＤＣＭ（３０ｍｌ）で希釈した。水性層をＤＣＭで再抽出し、合わせた有機層を１０％Ｋ２ＣＯ３水溶液（７５ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を濃縮して、５グラムの未精製の塊を得た。粗製の化合物を、３％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用するシリカゲルカラム（１００〜２００メッシュ）により精製した。収量は１グラム（２４．２％）であった。
（実施例１３）ＡＴＸ−００６の合成
【化３０】
0006637988.tif 000050
【０１５８】
ジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）８，８’（（ｔｅｒｔブトキシカルボニル）アザンジイル）ジオクタノエートを乾燥ＤＣＭ（１５０ｍｌ）に溶解した。ＴＦＡを０℃で加えて、反応を開始させた。反応温度を３０分間撹拌しながらゆっくりと室温まで温めた。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。反応生成物を真空下４０℃で濃縮し、粗製の残渣をＤＣＭで希釈し、１０％ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。水性層をＤＣＭで再抽出し、合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。収集した粗生成物を窒素ガス下で乾燥ＤＣＭ（８５ｍｌ）に溶解した。トリホスゲンを加え、反応混合物を０℃に冷却し、Ｅｔ３Ｎを滴下添加した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。未精製の反応生成物を窒素雰囲気下で乾燥ＤＭＦに溶解し、２−（（２−（ジエチルアミノ）エチル）チオ）酢酸（３．９３ｍｍｏｌ、７５１ｍｇ）およびＥＤＣ・ＨＣｌ（５．４５ｍｍｏｌ、１．０ｇ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応を水（３ｍｌ）でクエンチし、過剰なＤＭＦを真空下２５℃で除去した。反応生成物を水で希釈し、水性層をＤＣＭ（２０ｍｌ）で三度抽出した。合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を濃縮して、２グラムの未精製の塊を得た。３％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用するシリカゲルカラム（１００〜２００メッシュ）による精製後、収量は１．２グラム（７６％）であった。
（実施例１４）ＡＴＸ−００９の合成
【化３１】
0006637988.tif 000051
【０１５９】
ジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）８，８’（（ｔｅｒｔブトキシカルボニル）アザンジイル）ジオクタノエート（１３．８５ｍｍｏｌ、９グラム）を乾燥ＤＣＭ（２０ｍｌ）に溶解した。ＴＦＡを０℃で加えて、反応を開始させた。反応温度を３０分間撹拌しながらゆっくりと室温まで温めた。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。反応生成物を真空下４０℃で濃縮し、粗製の残渣をＤＣＭで希釈し、１０％ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。水性層をＤＣＭで再抽出し、合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。ジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）８，８’−アザンジイルジオクタノエート（０．９０９ｍｍｏｌ、５００ｍｇ）を窒素雰囲気下で乾燥ＤＣＭ（２０ｍｌ）に溶解した。トリホスゲンを加え、反応混合物を０℃に冷却し、Ｅｔ３Ｎを滴下添加した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。窒素雰囲気下での蒸留によって、反応塊からＤＣＭ溶媒を除去した。２−（エチル（メチル）アミノ）エタン−１−チオール塩酸塩（４．５７５ｍｍｏｌ、７１５ｍｇ）をＤＭＦ（７ｍｌ）およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（５ｍｌ）に溶解し、０℃でＴＨＦ中水素化ナトリウム懸濁液に滴下添加した。次いで、反応混合物を室温で終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。反応生成物を酢酸エチルおよび冷水で希釈した。反応物を５％ＨＣｌ（９ｍｌ）で中和し、有機層を分離した。水性層を酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）（２０ｍｌ）で再抽出し、冷水およびブライン中で洗浄し、合わせた有機層を洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を濃縮して、１グラムの粗生成物を得た。化合物を、３％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用するシリカゲルカラム（１００〜２００メッシュ）により精製して、１００ｍｇを得た。
（実施例１５）ＡＴＸ−０１０の合成
【化３２】
0006637988.tif 000052
【０１６０】
ジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）８，８’（（ｔｅｒｔブトキシカルボニル）アザンジイル）ジオクタノエート（３．０７９ｍｍｏｌ、２ｇ）を乾燥ＤＣＭ（２０ｍｌ）に溶解した。ＴＦＡを０℃で加えて、反応を開始させた。反応温度を３０分間撹拌しながらゆっくりと室温まで温めた。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。反応生成物を真空下４０℃で濃縮し、粗製の残渣をＤＣＭで希釈し、１０％ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。水性層をＤＣＭで再抽出し、合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。収集した粗生成物を窒素ガス下で乾燥ＤＣＭ（２０ｍｌ）に溶解した。トリホスゲン（１４．５５ｍｍｏｌ、４．３２ｇ）を加え、反応混合物を０℃に冷却し、Ｅｔ３Ｎを滴下添加した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。Ｎ２下での蒸留によって反応塊からＤＣＭ溶媒を除去した。反応生成物を０℃に冷却し、ＤＣＭ（２０ｍｌ）で希釈し、２−（ジメチルアミノ）エタンチオールＨＣｌ（０．０６３ｍｏｌ、８．３ｇ）を加えた後、Ｅｔ３Ｎ（乾燥）を加えた。次いで、反応混合物を室温で終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。反応生成物を０．３Ｍ  ＨＣｌ溶液（２０ｍｌ）で希釈し、有機層を分離した。水性層をＤＣＭで再抽出し、合わせた有機層を１０％Ｋ２ＣＯ３水溶液（２０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を濃縮して、１０グラムの未精製の塊を得た。粗製の化合物を、３％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用するシリカゲルカラム（１００〜２００メッシュ）により精製した。収量は１．４ｇ（７５％）であった。
【０１６１】
（実施例１６）ＡＴＸ−Ａ−４（以下でＡＴＸ−０３１と称される）の合成
【化３３】
0006637988.tif 000053
【０１６２】
（実施例１７）表１からのＡＴＸ−０１１〜ＡＴＸ−０１７、ＡＴＸ−０２１〜ＡＴＸ−０２３、およびＡＴＸ−０２６〜ＡＴＸ−０３０、ならびに表２、３、および４の化合物の合成
ＡＴＸ−０１１〜ＡＴＸ−０１７、ＡＴＸ−０２１〜ＡＴＸ−０２３、およびＡＴＸ−０２６〜ＡＴＸ−０３０、ＡＴＸ−Ａ−１〜ＡＴＸ−Ａ−２２、ならびに表２、３、および４の化合物の合成は、本明細書中に記載の合成反応に適切な出発材料を置き換えることによって、実施例１〜１５の合成に従う。
【０１６３】
（実施例１８）インビボマウス第ＶＩＩ因子サイレンシング
リポソームライブラリーの肝臓標的型インビボスクリーンを使用して、肝細胞（細胞は肝実質を含む）において高レベルのｓｉＲＮＡ媒介性遺伝子サイレンシングを促進する一連の化合物を試験した。血液凝固因子である第ＶＩＩ因子は、肝臓への機能性ｓｉＲＮＡ送達をアッセイするのに適切な標的遺伝子である。この因子は肝細胞で特異的に生成されるので、遺伝子サイレンシングは、網内系の細胞（例えば、クッパー細胞）への送達とは対照的に、実質への送達の成功を示す。さらに、第ＶＩＩ因子は血清中で容易に測定することのできる分泌タンパク質であり、動物を安楽死させる必要がない。ｍＲＮＡレベルでのサイレンシングは、タンパク質のレベルを測定することによって容易に決定することができる。このことは、タンパク質の短い半減期（２〜５時間）による。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｓ）に、尾静脈注射によって食塩液またはリポソーム製剤中のｓｉＲＮＡのいずれかを０．００６ｍｌ／ｇの容量で与えた。投与の４８時間後、動物をイソフルラン（ｉｓｏｆｌｕｏｒａｎｅ）吸入によって麻酔し、血液を、眼窩後方を出血させることにより血清分離管に収集した。第ＶＩＩ因子タンパク質の血清中レベルを、製造業者のプロトコールによって発色アッセイ（Ｂｉｏｐｈｅｎ  ＦＶＩＩ、Ａｎｉａｒａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して試料において決定した。食塩液で処置した動物から収集した血清を使用して、標準曲線を生成した。
【０１６４】
第ＶＩＩＩ因子を対象とするｓｉＲＮＡを有する組成物を、ＡＴＸ−００１、ＡＴＸ−００２、ＡＴＸ−００３、およびＡＴＸ−５４７、ならびに比較試料ＮＣ１およびＭＣ３（Ａｌｎｙｌａｍ）と製剤化した。これらを０．３ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇで動物に注射した。Ｃ５７ＢＬ６マウスへのｓｉＲＮＡ製剤の投与後に、ＭＣ３（０．３ｍｇ／ｋｇ）、ＮＣ１（０．３ｍｇ／ｋｇ）、ＡＴＸ−５４７（０．３ｍｇ／ｋｇ）、ＡＴＸ−００１（０．３および１．０ｍｇ／ｋｇ）、ＡＴＸ−００２（０．３および１．０ｍｇ／ｋｇ）、ならびにＡＴＸ−００３（０．３および１．０ｍｇ／ｋｇ）により封入されたｓｉＲＮＡを、マウス血漿中の第ＶＩＩ因子をノックダウンする能力について測定した。結果は、対照と比較して、ＡＴＸ−００１およびＡＴＸ−００２が０．３ｍｇ／ｋｇで最も有効であったことを示した（図１および２）。
【０１６５】
Ｃ５７ＢＬ６マウスへのｓｉＲＮＡ製剤の投与後に、ＭＣ３（０．３および１．５ｍｇ／ｋｇ）、ＮＣｌ（０．３ｍｇ／ｋｇ）、ＡＴＸ−５４７（０．１および０．３ｍｇ／ｋｇ）、ＡＴＸ−００４（０．３）、ＡＴＸ−００６（０．３および１．０ｍｇ／ｋｇ）、ＡＴＸ−０１０（０．３ｍｇ／ｋｇ）、ならびにＡＴＸ−００１（０．３および１．５ｍｇ／ｋｇ）により封入されたｓｉＲＮＡを、マウス血漿中の第ＶＩＩ因子ノックダウンについて測定した。結果は、ＡＴＸ−００１およびＡＴＸ−０１０が最も有効であったことを示した（図３および４）。例示的な化合物のノックダウン活性を、０．３ｍｇ／ｋｇについて示し、ＡＴＸ−０１８、ＡＴＸ−０１９、およびＡＴＸ−０２０については０．０５ｍｇ／ｋｇで示す（表１）。
【０１６６】
（項目１）
式ＩＩの化合物であって、
【化３４】
0006637988.tif 000054
式中、
Ｒ１およびＲ２はともに、１〜１２個の炭素からなる直鎖アルキル、または２〜１２個の炭素からなるアルケニルもしくはアルキニルからなり、
Ｌ１およびＬ２はともに、５〜１８個の炭素からなる直鎖アルキレンもしくはアルケニレンからなるか、またはＮと複素環を形成しており、
ＸはＳであり、
Ｌ３は、結合、もしくは１〜６個の炭素からなる直鎖アルキレンからなるか、またはＮと複素環を形成しており、
Ｒ３は、１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキレンからなり、
Ｒ４およびＲ５は同一または異なり、それぞれ水素、または１〜６個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキルからなる、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
（項目２）
Ｌ１およびＬ２がともに、５個の炭素からなる直鎖アルキレンからなる、項目１に記載の化合物。
（項目３）
Ｒ３が、エチレンまたはプロピレンからなる、項目１に記載の化合物。
（項目４）
Ｒ４およびＲ５が同一または異なり、それぞれ水素、メチル、またはエチルからなる、項目１に記載の化合物。
（項目５）
Ｌ３が結合からなる、項目１に記載の化合物。
（項目６）
Ｒ１およびＲ２がともに、１０個の炭素からなる直鎖アルケニルからなる、項目１に記載の化合物。
（項目７）
式１）〜１２）の化合物から選択される、項目１に記載の化合物。
【化３５】
0006637988.tif 000055
（項目８）
式ＩＩＩまたはＩＶの化合物であって、
【化３６】
0006637988.tif 000056
式中、
Ｒ１は、１２〜２０個の炭素を有する分岐アルキルからなり、
Ｒ２は、５〜１０個の炭素を有する直鎖アルキルまたは１２〜２０個の炭素を有する分岐アルキルからなり、
Ｌ１およびＬ２がそれぞれ、結合、または１〜３個の炭素原子を有する直鎖アルキルからなり、
ＸはＳまたはＯからなり、
Ｌ３は、結合、または低級アルキルからなり、
Ｒ３は、低級アルキルからなり、
Ｒ４およびＲ５は同一または異なり、それぞれ低級アルキルからなる、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
（項目９）
Ｌ３が結合からなる、項目８に記載の化合物。
（項目１０）
ＸがＳからなる、項目８に記載の化合物。
（項目１１）
Ｒ３がエチレンからなる、項目８に記載の化合物。
（項目１２）
Ｒ３が、ｎ−プロピレンまたはイソプロピレンからなる、項目８に記載の化合物。
（項目１３）
Ｒ４およびＲ５がそれぞれ、メチル、エチル、またはイソプロピルからなる、項目８に記載の化合物。
（項目１４）
Ｌ１およびＬ２がともに結合からなる、項目８に記載の化合物。
（項目１５）
Ｌ１およびＬ２がともにメチレンからなる、項目８に記載の化合物。
（項目１６）
Ｒ２がアルキルからなる、項目８に記載の化合物。
（項目１７）
Ｒ１およびＲ２がともに、分岐アルキルからなる、項目８に記載の化合物。
（項目１８）
前記分岐アルキルが、１９または２０個の炭素原子からなる、項目１７に記載の化合物。
（項目１９）
前記分岐アルキルが、１３または１４個の炭素原子からなる、項目１７に記載の化合物。
（項目２０）
Ｌ３がメチレンからなり、Ｒ３がエチレンからなり、Ｘ２がＳからなり、Ｒ４およびＲ５がともにメチルからなる、項目８に記載の化合物。
（項目２１）
Ｌ３が結合からなり、Ｒ３がエチレンからなり、ＸがＳからなり、Ｒ４およびＲ５がともにメチルからなる、項目８に記載の化合物。
（項目２２）
Ｌ３が結合からなり、Ｒ３がｎ−プロピレンからなり、ＸがＳからなり、Ｒ４およびＲ５がともにメチルからなる、項目８に記載の化合物。
（項目２３）
Ｌ３が結合からなり、Ｒ３がイソプロピレンからなり、ＸがＳからなり、Ｒ４およびＲ５がともにメチルからなる、項目８に記載の化合物。
（項目２４）
式ＡＴＸ−Ｂ−１〜ＡＴＸ−Ｂ−１２の化合物から選択される、項目８に記載の化合物。
【化３７】
0006637988.tif 000057
【化３８】
0006637988.tif 000058
【化３９】
0006637988.tif 000059
（項目２５）
式Ｖの化合物であって、
【化４０】
0006637988.tif 000060
式中、
Ｒ１は、１〜１８個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキル、または２〜１２個の炭素からなるアルケニルもしくはアルキニル、またはコレステリルからなり、
Ｒ２は、１〜１８個の炭素からなる直鎖もしくは分岐アルキルまたはアルケニルからなり、Ｌ１は、５〜９個の炭素からなる直鎖アルキルからなるか、またはＲ１がコレステリルからなる場合、Ｌ１は、３〜４個の炭素からなる直鎖アルキレンもしくはアルケニルからなり、
Ｘ１は、−Ｏ−（ＣＯ）−または−（ＣＯ）−Ｏ−からなり、
Ｘ２はＳまたはＯからなり、
Ｌ２は、結合、または１〜６個の炭素の直鎖アルキレンからなり、
Ｒ３は、１〜６個の炭素を有する直鎖もしくは分岐アルキレンからなり、
Ｒ４およびＲ５は同一または異なり、それぞれ１〜６個の炭素の直鎖もしくは分岐アルキルからなる、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
（項目２６）
Ｘ１が、−Ｏ−（ＣＯ）−からなる、項目２５に記載の化合物。
（項目２７）
Ｘ２がＳからなる、項目２５に記載の化合物。
（項目２８）
Ｒ３がエチレンからなる、項目２５に記載の化合物。
（項目２９）
Ｒ３が、ｎ−プロピレンまたはイソプロピレンからなる、項目２５に記載の化合物。
（項目３０）
Ｒ４およびＲ５がそれぞれ、メチル、エチル、またはイソプロピルからなる、項目２５に記載の化合物。
（項目３１）
Ｌ２が結合からなる、項目２５に記載の化合物。
（項目３２）
Ｌ２がメチレンからなる、項目２５に記載の化合物。
（項目３３）
Ｒ２がアルキルからなる、項目２５に記載の化合物。
（項目３４）
Ｒ１およびＲ２がともに、分岐アルキルからなる、項目２５に記載の化合物。
（項目３５）
前記分岐アルキルが、１９または２０個の炭素原子からなる、項目３４に記載の化合物。
（項目３６）
前記分岐アルキルが、１３または１４個の炭素原子からなる、項目３４に記載の化合物。
（項目３７）
Ｌ２がメチレンからなり、Ｒ３がエチレンからなり、Ｘ１が−Ｏ−（ＣＯ）−からなり、Ｘ２がＳであり、Ｒ４およびＲ５がともにメチルからなる、項目２５に記載の化合物。
（項目３８）
Ｌ２が結合からなり、Ｒ３がエチレンからなり、Ｘ１が−Ｏ−（ＣＯ）−からなり、Ｘ２がＳからなり、Ｒ４およびＲ５がともにメチルからなる、項目２５に記載の化合物。
（項目３９）
Ｌ２が結合からなり、Ｒ３がｎ−プロピレンからなり、Ｘ１が−Ｏ−（ＣＯ）−からなり、Ｘ２がＳからなり、Ｒ４およびＲ５がともにメチルからなる、項目２５に記載の化合物。
（項目４０）
Ｌ２が結合からなり、Ｒ３がイソプロピレンからなり、Ｘ１が−Ｏ−（ＣＯ）−からなり、Ｘ２がＳからなり、Ｒ４およびＲ５がともにメチルからなる、項目２５に記載の化合物。
（項目４１）
式ＡＴＸ−Ａ−１〜ＡＴＸ−Ａ−２２の化合物からなる群から選択される、項目２５に記載の化合物。
【化４１】
0006637988.tif 000061
【化４２】
0006637988.tif 000062
【化４３】
0006637988.tif 000063
【図１】
0006637988.tif 000067
【図２】
0006637988.tif 000068
【図３】
0006637988.tif 000069
【図４】
0006637988.tif 000070