(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化するためのスイッチであって、前記スイッチが、
ａ．前記ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、
ｂ．非天然アミノ酸を含む抗体または抗体の抗原結合断片を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）であって、標的細胞上の表面分子と相互作用するＴＩＤと
を含み、前記ＣＡＲ−ＩＤが、前記非天然アミノ酸を介して前記ＴＩＤの可変領域に部位特異的に結合している、スイッチ。
【請求項２】
リンカーをさらに含み、前記リンカーが、前記ＣＡＲ−ＩＤを前記ＴＩＤの前記非天然アミノ酸に部位特異的に結合させている、請求項１に記載のスイッチ。
【請求項３】
前記リンカーが、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、シクロオクチン基、またはこれらの組合せを含む、請求項２に記載のスイッチ。
【請求項４】
前記ＣＡＲ−ＩＤが低分子を含む、請求項１に記載のスイッチ。
【請求項５】
前記低分子がハプテンである、請求項４に記載のスイッチ。
【請求項６】
前記ハプテンが、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）またはビオチンから選択される、請求項５に記載のスイッチ。
【請求項７】
前記ＴＩＤが、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項１に記載のスイッチ。
【請求項８】
前記ＴＩＤが、抗ＣＤ１９抗体または抗ＣＤ１９抗体の抗原結合部分を含む、請求項１に記載のスイッチ。
【請求項９】
前記ＴＩＤが、抗ＣＤ１９抗体の短鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）である、請求項７に記載のスイッチ。
【請求項１０】
前記ＴＩＤが、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＢＭＳＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ１抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、および抗Ｈｅｒ２抗体からなる群から選択される抗体、またはその抗原結合部分を含む、請求項１に記載のスイッチ。
【請求項１１】
前記ＴＩＤが、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＢＭＳＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ１抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、および抗Ｈｅｒ２抗体からなる群から選択される抗体の単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）を含む、請求項１に記載のスイッチ。
【請求項１２】
前記非天然アミノ酸が、前記ＴＩＤに含まれる前記抗体の一部に挿入されているか、または前記非天然アミノ酸が、前記ＴＩＤに含まれる前記抗体のアミノ酸と置き換わっている、請求項１に記載のスイッチ。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載のスイッチおよび薬学的に許容される塩、添加剤、またはビヒクルを含む医薬組成物。
【請求項１４】
前記ＣＡＲ−ＩＤが、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸、葉酸、またはこれらの誘導体を含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記スイッチが、前記ＣＡＲ−ＩＤを前記ＴＩＤに結合させるリンカーをさらに含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
がんを処置する方法における使用のための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のスイッチを含む組成物または請求項１３〜１４のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、前記方法は、前記スイッチまたは前記医薬組成物をそれを必要とする被験体に投与することを含む、組成物。
【請求項１７】
がんを処置する方法における使用のための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のスイッチを含む組成物または請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、前記方法は、（ｉ）前記スイッチまたは前記医薬組成物と、（ｉｉ）前記スイッチに含まれる前記ＣＡＲ−ＩＤに結合するキメラ抗原受容体を含む１つまたは複数のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞とをそれを必要とする被験体に投与することを含む、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１３年１０月１５日に出願された米国仮出願第６１／８９１，３４７号；２０１３年１０月２５日に出願された米国仮出願第６１／８９５，７０４号；および２０１４年６月６日に出願された米国仮出願第６２／００９，０５６号の利益を請求し、これらはすべて、その全体が参照によって援用される。
【背景技術】
【０００２】
免疫療法は、ノーベル賞受賞者であるＰａｕｌ  Ｅｈｒｌｉｃｈにより「魔法の弾丸」と考えられて以来、急速に、化学療法に対する魅力的な代替法となりつつある。具体的に述べると、遺伝子改変されたＴ細胞を使用して、免疫系が、悪性腫瘍細胞を認識し、消失させるように「再教示する」免疫療法は、初期段階の臨床試験において目覚ましい結果をもたらしつつある。このような遺伝子療法は、化学療法抵抗性の多くの機構を回避し、再発性／難治性疾患に対して活性であり、根治療法のための現実的可能性をもたらす。しかし、遺伝子療法による技法は、臨床において、慢性免疫調節異常および死亡までも含む、著明な危険性に遭遇している。改善された免疫療法を求めて、本発明者らは、遺伝子改変されたＴ細胞を選択的に活性化および不活化させる方法であって、現在臨床で調べられつつあるエフェクター療法より安全で、かつ、多用途な方法を確立した。
【０００３】
遺伝子操作されたキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）の養子移入は、免疫系に、腫瘍細胞を認識し、消失させる能力をもたらす。この療法は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）患者および急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）患者のための臨床試験において、持続的な寛解を達成しており、化学療法に対する強力な代替法として急速に出現しつつある。これらの成功にもかかわらず、この療法は、血液標的の場合の毒性のリンパ球減少症（lymphophenia）および慢性の低ガンマグロブリン血症、および充実性腫瘍標的の場合の致死性のオフターゲット細胞溶解をもたらす、ＣＡＲ−Ｔの持続性の活性に起因して、重大な安全性に関する懸念を被っている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本明細書では、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチであって、（ａ）低分子を含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）非天然アミノ酸を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含むスイッチが開示される。ＣＡＲ−ＩＤは、エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と相互作用しうる。エフェクター細胞は、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）でありうる。標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）は、標的細胞上の表面分子と相互作用しうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位特異的に連結することができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤの非天然アミノ酸に、部位特異的に連結することができる。ＴＩＤは、抗体または抗体断片を含みうる。抗体断片は、Ｆａｂを含みうる。抗体または抗体断片は、免疫グロブリンの少なくとも一部を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに部位特異的に連結することができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤの非天然アミノ酸に部位特異的に連結することができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに、１つまたは複数の化学基を介して連結することができる。化学基は、オキシム、トリアゾール、シクロオクチン、テトラジン、シクロプロペン、ノルボルネン、ｔｒａｎｓ−シクロオクテン、およびセレノシステインからなる群から選択され得る。化学基は、リンカーとＴＩＤの間で形成することができる。代替的に、または加えて、化学基は、リンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で形成することができる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチはさらに、１つまたは複数のさらなるリンカーを含みうる。１つまたは複数のさらなるリンカーは、さらなるＴＩＤを、ＣＡＲ−ＩＤに連結することができる。代替的に、または加えて、１つまたは複数のさらなるリンカーは、さらなるＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに連結することもできる。１つまたは複数のさらなるリンカーを、ＴＩＤにコンジュゲートすることができる。代替的に、１つまたは複数のさらなるリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤにコンジュゲートすることもできる。１つまたは複数のさらなるリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合しているリンカーに接続することができる。リンカーは、約２５Åの長さを保有しうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤとＴＩＤの間の、約２．５Å〜約１００Åの距離をもたらすことができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ハプテンでありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣまたはその誘導体を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＤＯＴＡ、ジニトロフェノール、ビオチン、およびこれらの誘導体から選択することができる。ＴＩＤは、非天然アミノ酸を含むポリペプチドを含みうる。ポリペプチドは、抗体またはその断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。非天然アミノ酸は、ポリペプチドがそれに基づくかまたはそれに由来する抗体または断片のアミノ酸残基と置き換わることができる。ポリペプチドは、抗体の軽鎖に基づきうるか、またはこれに由来しうる。非天然アミノ酸は、ポリペプチドがそれに基づくかまたはそれに由来する抗体の軽鎖のアミノ酸と置き換わることができる。例えば、非天然アミノ酸は、抗体軽鎖のセリン残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖またはその相同体のセリン２０２と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖のグリシン残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖またはその相同体のグリシン６８と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖のトレオニン残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖またはその相同体のトレオニン１０９と置き換わることができる。ポリペプチドは、抗体の重鎖に基づきうるか、またはこれに由来しうる。非天然アミノ酸は、抗体重鎖のリシン残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体重鎖またはその相同体のリシン１３６と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体重鎖のアラニン残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体重鎖またはその相同体のアラニン１２３と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体重鎖のセリン残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体重鎖またはその相同体のセリン７４と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖のアミノ酸残基および抗体重鎖のアミノ酸残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖のグリシン残基および抗体重鎖のアミノ酸と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖のグリシン残基および抗体重鎖のセリン残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体重鎖のセリン残基および抗体軽鎖のアミノ酸残基と置き換わることができる。抗体軽鎖のグリシン残基は、グリシン６８またはその相同体でありうる。抗体重鎖のセリン残基は、セリン７４またはその相同体でありうる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖のセリン残基および抗体重鎖のアミノ酸と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖のセリン残基および抗体重鎖のリシン残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体重鎖のリシン残基および抗体軽鎖のアミノ酸残基と置き換わることができる。抗体軽鎖のセリン残基は、セリン２０２またはその相同体でありうる。抗体重鎖のセリン残基は、リシン１３６またはその相同体でありうる。ＴＩＤは、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＳ１抗体、およびこれらの断片から選択された抗体に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、およびこれらの断片から選択することができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣを含むことが可能であり、ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体またはその断片を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣを含むことが可能であり、ＴＩＤは、抗Ｈｅｒ２抗体またはその断片を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣを含むことが可能であり、ＴＩＤは、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＬＬ１抗体、抗ＣＤ３３抗体、またはこれらの断片から選択することができる。ＴＩＤは、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチドによりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号５〜９のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１０〜１７のいずれか１つのポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、配列番号１０〜１７のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つのポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なアミノ酸配列を含みうる。標的細胞は、がん細胞でありうる。複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチの純度は、少なくとも約９０％でありうる。複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチの均質性は、少なくとも約９０％でありうる。複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチの構造的均質性は、少なくとも約９０％でありうる。
【０００５】
本明細書ではさらに、ＣＡＲ−ＥＣスイッチであって、（ａ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的上の表面分子に結合する標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含み、ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤが、アミド結合により接続された、２つまたはこれを超えるアミノ酸を含まないスイッチが開示される。ＣＡＲ−ＩＤは、１つ〜５つのアミノ酸を含みうる。ＴＩＤは、１つ〜５つのアミノ酸を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチのモル質量（molar  mass）は、約１５００Ｄａ未満でありうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチのモル質量は、約２５００Ｄａ未満でありうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、リンカーに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤとＴＩＤは、リンカーによって部位特異的に連結することができる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチはさらに、１つまたは複数のさらなるリンカーを含みうる。１つまたは複数のさらなるリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、さらなるＴＩＤに連結することができる。代替的に、または加えて、１つまたは複数のリンカーは、ＴＩＤを、さらなるＣＡＲ−ＩＤに連結することができる。１つまたは複数のさらなるリンカーを、ＴＩＤにコンジュゲートすることができる。代替的に、１つまたは複数のさらなるリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤにコンジュゲートすることができる。１つまたは複数のさらなるリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合しているリンカーに接続することができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣ、ジニトロフェノール、ビオチン、およびこれらの誘導体から選択することができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣを含みうる。ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも５０％相同な標的に結合しうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸、低分子コレシストキニンＢ受容体アンタゴニスト、１０マーのペプチドによる黄体形成ホルモン放出ホルモン、葉酸（folate）、これらの誘導体、またはこれらの修飾形から選択することができる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸を含みうる。ＴＩＤは、葉酸を含みうる。ＴＩＤは、葉酸受容体、黄体形成ホルモン放出ホルモン受容体、およびコレシストキニンＢ受容体から選択される受容体と少なくとも５０％相同な標的に結合しうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣを含むことが可能であり、ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも５０％相同な表面分子に結合しうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣを含むことが可能であり、ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣを含むことが可能であり、ＴＩＤは、葉酸受容体と少なくとも５０％相同な表面分子に結合しうる。キメラ抗原受容体に結合する構成要素は、ＦＩＴＣを含むことが可能であり、ＴＩＤは、葉酸またはその誘導体を含みうる。標的は、がん細胞でありうる。複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチの均質性は、少なくとも約９０％でありうる。
【０００６】
本明細書ではさらに、ＣＡＲ−ＥＣスイッチであって、（ａ）ＦＩＴＣまたはその誘導体を含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）抗体または抗体断片を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）と、（ｃ）ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに連結するリンカーとを含むスイッチが開示される。抗体または抗体断片は、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＤ１９抗体、またはこれらの断片から選択することができる。リンカーを伴うＣＡＲ−ＥＣスイッチの形状は、リンカーを伴わないＣＡＲ−ＥＣスイッチの形状と異なりうる。例えば、ＴＩＤに対するＣＡＲ−ＩＤの角度は、リンカーを伴わないスイッチ内の、ＴＩＤに対するＣＡＲ−ＩＤの角度と比較して、リンカーによって変化し得る。リンカーを伴うスイッチ内のＣＡＲ−ＩＤとＴＩＤの間の距離は、リンカーを伴わないスイッチ内のＣＡＲ−ＩＤとＴＩＤの間の距離と異なりうる。例えば、リンカーを伴うスイッチ内のＣＡＲ−ＩＤとＴＩＤの間の距離は、リンカーを伴わないスイッチ内のＣＡＲ−ＩＤとＴＩＤの間の距離より大きい場合がある。
【０００７】
本明細書では、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化するためのスイッチであって、（ａ）ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）非天然アミノ酸を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）であって、標的細胞上の表面分子と相互作用するＴＩＤとを含むスイッチが開示される。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、非天然アミノ酸を介してＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤの非天然アミノ酸に部位特異的に結合させることができる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、非天然アミノ酸を介してＣＡＲ−ＩＤをＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤをＴＩＤの非天然アミノ酸に部位特異的に結合させることができる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、シクロオクチン基、またはこれらの組合せを含みうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。低分子は、ハプテンでありうる。低分子は、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）でありうる。ＴＩＤは、ＦＩＴＣのイソチオシアネートにコンジュゲートすることができる。スイッチはさらに、ＦＩＴＣのイソチオシアネートにコンジュゲートしうるリンカーを含みうる。低分子は、ビオチンでありうる。ＴＩＤは、抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体の単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗ＢＭＳＡ、抗ＣＥＡ、抗ＣＬＬ１、抗ＣＳ１、抗ＥＧＦＲ、および抗Ｈｅｒ２からなる群から選択される抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗ＢＭＳＡ、抗ＣＥＡ、抗ＣＬＬ１、抗ＣＳ１、抗ＥＧＦＲ、および抗Ｈｅｒ２からなる群から選択される抗体の単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチドによりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号５〜９のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１０〜１７のいずれか１つのポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、配列番号１０〜１７のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つのポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なアミノ酸配列を含みうる。非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する抗体の一部に挿入することができる。非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する抗体のアミノ酸と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、ｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦ）でありうる。非天然アミノ酸は、ｐ−アジドフェニルアラニン（ｐＡｚＦ）でありうる。非天然アミノ酸は、抗体の軽鎖に挿入することができる。非天然アミノ酸は、抗体の重鎖に挿入することができる。
【０００８】
本明細書ではさらに、１つまたは複数のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現させる、キメラ抗原受容体エフェクター細胞が開示される。１つまたは複数のＣＡＲは、抗ＦＩＴＣ抗体またはその断片を含みうる。抗ＦＩＴＣ抗体またはその断片は、マウス４−４−２０  ｓｃＦｖ、キメラ４Ｄ５Ｆｌｕ  ｓｃＦｖ、マウス４Ｍ５．３  ｓｃＦｖ、およびヒトＦＩＴＣ−Ｅ２  ｓｃＦｖから選択することができる。ＣＡＲは、配列番号１〜４から選択される、１つまたは複数のポリヌクレオチドによりコードされうる。ＣＡＲは、配列番号１〜４から選択される、１つまたは複数のポリヌクレオチドと少なくとも約７０％同一なポリヌクレオチドによりコードされうる。
【０００９】
本明細書では、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化させるための複数のスイッチを含む組成物であって、複数のスイッチのうちの１つのスイッチが、（ａ）ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的細胞上の表面分子と相互作用する標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含み、スイッチの少なくとも約６０％が、構造的に相同である組成物が開示される。スイッチの少なくとも約８０％は、構造的に相同でありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。低分子は、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）でありうる。低分子は、ビオチンでありうる。低分子は、ジニトロフェノールでありうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。低分子は、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体でありうる。低分子は、葉酸またはその誘導体でありうる。ＴＩＤは、抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体の単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗ＢＭＳＡ、抗ＣＥＡ、抗ＣＬＬ１、抗ＣＳ１、抗ＥＧＦＲ、および抗Ｈｅｒ２からなる群から選択される抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗ＢＭＳＡ、抗ＣＥＡ、抗ＣＬＬ１、抗ＣＳ１、抗ＥＧＦＲ、および抗Ｈｅｒ２からなる群から選択される抗体の単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチドによりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号５〜９のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１０〜１７のいずれか１つのポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、配列番号１０〜１７のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つのポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、非天然アミノ酸を含みうる。非天然アミノ酸は、ｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦ）でありうる。非天然アミノ酸は、ｐ−アジドフェニルアラニン（ｐＡｚＦ）でありうる。上記複数のスイッチのうちの上記スイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、非天然アミノ酸を介してＣＡＲ−ＩＤをＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤをＴＩＤの非天然アミノ酸に部位特異的に結合させることができる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、シクロオクチン基、またはこれらの組合せを含みうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。
【００１０】
本明細書では、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化させるための複数のスイッチを含む組成物であって、複数のスイッチのうちの１つのスイッチが、（ａ）ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）ポリペプチドを含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含み、ＣＡＲ−ＩＤが、スイッチの少なくとも６０％において、ＴＩＤ内の同じ所定の部位に結合している組成物が開示される。ＣＡＲ−ＩＤは、スイッチの少なくとも約８０％において、ＴＩＤ内の同じ所定の部位に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。低分子は、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）でありうる。低分子は、ビオチンでありうる。低分子は、ジニトロフェノールでありうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。低分子は、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体でありうる。低分子は、葉酸またはその誘導体でありうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体の単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗ＢＭＳＡ、抗ＣＥＡ、抗ＣＬＬ１、抗ＣＳ１、抗ＥＧＦＲ、および抗Ｈｅｒ２からなる群から選択される抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗ＢＭＳＡ、抗ＣＥＡ、抗ＣＬＬ１、抗ＣＳ１、抗ＥＧＦＲ、および抗Ｈｅｒ２からなる群から選択される抗体の単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチドによりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号５〜９のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１０〜１７のいずれか１つのポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、配列番号１０〜１７のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つのポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、非天然アミノ酸を含みうる。非天然アミノ酸は、ｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦ）でありうる。非天然アミノ酸は、ｐ−アジドフェニルアラニン（ｐＡｚＦ）でありうる。上記複数のスイッチのうちの上記スイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤをＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、非天然アミノ酸を介してＣＡＲ−ＩＤをＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤをＴＩＤの非天然アミノ酸に部位特異的に結合させることができる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、シクロオクチン基、またはこれらの組合せを含みうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。ＴＩＤ内の所定の部位は、アミノ酸残基でありうる。アミノ酸残基は、非天然アミノ酸でありうる。非天然アミノ酸は、ｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦ）でありうる。非天然アミノ酸は、ｐ−アジドフェニルアラニン（ｐＡｚＦ）でありうる。
【００１１】
本明細書ではさらに、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成する方法であって、キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を、標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）に部位特異的に連結し、これにより、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成するステップを含む方法が開示される。代替的に、または加えて、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成する方法は、（ａ）非天然アミノ酸をポリペプチドへと組み込むことにより、標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を生成するステップと、（ｂ）ＴＩＤを、キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と接触させ、これにより、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成するステップとを含みうる。方法はさらに、第１のリンカーをＴＩＤにカップリングさせて、ＴＩＤおよび第１のリンカーを含む第１のスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。第１のリンカーは、ＴＩＤに、オキシムライゲーションによりカップリングさせることができる。方法はさらに、第２のリンカーをＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせて、ＣＡＲ−ＩＤおよび第２のリンカーを含む第２のスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。第２のリンカーは、オキシムライゲーションによってＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせることができる。ＴＩＤを、ＣＡＲ−ＩＤと接触させるステップは、第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体と接触させるステップを含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体と接触させるステップは、クリック化学反応を実行するステップを含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体と接触させるステップは、付加環化反応を実行するステップを含みうる。付加環化反応は、［３＋２］付加環化反応でありうる。
【００１２】
本明細書では、（ａ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含むスイッチを生成する方法であって、（ａ）第１のリンカーをＴＩＤにカップリングさせて、ＴＩＤにコンジュゲートした第１のリンカーを含む第１のスイッチ中間体を生成するステップと、（ｂ）第１のスイッチ中間体をＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせ、これにより、スイッチを生成するステップとを含む方法が開示される。方法はさらに、第２のリンカーをＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせて、ＣＡＲ−ＩＤにコンジュゲートした第２のリンカーを含む第２のスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。第１のスイッチ中間体をＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせるステップは、第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体にカップリングさせるステップを含みうる。第１のリンカーをＴＩＤにカップリングさせるステップは、オキシムライゲーションを含みうる。第２のリンカーは、シクロオクチンを含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体にカップリングさせるステップは、付加環化反応を含みうる。第１のリンカーは、アジドを含みうる。付加環化反応は、第２のリンカーのシクロオクチンを、第１のリンカーのアジドと反応させるステップを含みうる。付加環化反応は、［３＋２］付加環化反応を含みうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。低分子は、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体でありうる。低分子は、葉酸またはその誘導体でありうる。ＴＩＤは、抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体の単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗ＢＭＳＡ、抗ＣＥＡ、抗ＣＬＬ１、抗ＣＳ１、抗ＥＧＦＲ、および抗Ｈｅｒ２からなる群から選択される抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗ＢＭＳＡ、抗ＣＥＡ、抗ＣＬＬ１、抗ＣＳ１、抗ＥＧＦＲ、および抗Ｈｅｒ２からなる群から選択される抗体の単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチドによりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号５〜９のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１０〜１７のいずれか１つのポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、配列番号１０〜１７のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つのポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、非天然アミノ酸を含みうる。非天然アミノ酸は、ｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦ）でありうる。非天然アミノ酸は、ｐ−アジドフェニルアラニン（ｐＡｚＦ）でありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を含みうる。低分子は、ビオチンでありうる。低分子は、ジニトロフェノールでありうる。第１のリンカーは、二官能性リンカーでありうる。第１のリンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。第１のリンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。第１のリンカーは、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、シクロオクチン基、またはこれらの組合せを含みうる。第１のリンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。第１のリンカーは、シクロオクチンを含みうる。第１のリンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。第１のリンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールまたは１，２，４−トリアゾールでありうる。第２のリンカーは、二官能性リンカーでありうる。第２のリンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。第２のリンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。第２のリンカーは、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、シクロオクチン基、またはこれらの組合せを含みうる。第２のリンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。第２のリンカーは、シクロオクチンを含みうる。第２のリンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。第２のリンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールまたは１，２，４−トリアゾールでありうる。
【００１３】
本明細書では、開示されるキメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチのいずれかを含むキットが開示される。キットはさらに、ＣＡＲ−ＥＣを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と相互作用するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣは、ＣＡＲを発現させるＴ細胞を含みうる。キットはさらに、１つまたは複数のさらなる、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、異なりうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、異なる標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、異なるＣＡＲ−ＩＤを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、類似しうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、同じＴＩＤを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、同じＣＡＲ−ＩＤを含みうる。
【００１４】
本明細書では、第１のスイッチ中間体を含むキットが開示される。第１のスイッチ中間体は、キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を含みうる。第１のスイッチ中間体はさらに、第１のリンカーを含みうる。第１のリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤにコンジュゲートすることができる。キットはさらに、第２のスイッチ中間体を含みうる。第２のスイッチ中間体は、第１の標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含みうる。第２のスイッチ中間体はさらに、第２のリンカーを含みうる。第２のリンカーは、第１のＴＩＤにコンジュゲートすることができる。キットはさらに、ＣＡＲ−ＥＣを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と相互作用するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣは、ＣＡＲを発現させるＴ細胞を含みうる。キットはさらに、１つまたは複数のさらなるスイッチ中間体を含みうる。１つまたは複数のスイッチ中間体は、１つまたは複数のさらなるＣＡＲ−ＩＤを含みうる。１つまたは複数のさらなるスイッチ中間体のＣＡＲ−ＩＤは、第１のスイッチ中間体のＣＡＲ−ＩＤと異なりうる。１つまたは複数のさらなるスイッチ中間体のＣＡＲ−ＩＤは、第１のスイッチ中間体のＣＡＲ−ＩＤと同じでありうる。ＣＡＲ−ＩＤを含む１つまたは複数のさらなるスイッチ中間体はさらに、リンカーを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを含む１つまたは複数のさらなるスイッチ中間体のリンカーは、第１のスイッチ中間体の第１のリンカーと異なりうる。ＣＡＲ−ＩＤを含む１つまたは複数のさらなるスイッチ中間体のリンカーは、第１のスイッチ中間体の第１のリンカーと同じでありうる。代替的に、または加えて、１つまたは複数のスイッチ中間体は、１つまたは複数のさらなるＴＩＤを含みうる。１つまたは複数のさらなるスイッチ中間体のＴＩＤは、第２のスイッチ中間体のＴＩＤと異なりうる。１つまたは複数のさらなるスイッチ中間体のＴＩＤは、第２のスイッチ中間体のＴＩＤと同じでありうる。ＴＩＤを含む１つまたは複数のさらなるスイッチ中間体はさらに、リンカーを含みうる。ＴＩＤを含む１つまたは複数のさらなるスイッチ中間体のリンカーは、第２のスイッチ中間体の第２のリンカーと異なりうる。ＴＩＤを含む１つまたは複数のさらなるスイッチ中間体のリンカーは、第２のスイッチ中間体の第２のリンカーと同じでありうる。
【００１５】
本明細書ではさらに、式ＸＩＩＩ：
Ａ−Ｌ−Ｂ  （式ＸＩＩＩ）
［式中、
Ａは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸誘導体または２−（４−（（２−アミノ−４−オキソ３，４−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチルアミノ）ベンズアミド）ペンタン二酸（葉酸）誘導体であり、
Ｌは、結合またはリンカーであり、
Ｂは、フルオレセイン誘導体またはビオチン誘導体である］
の化合物が開示される。
【００１６】
一部の実施形態では、式ＸＩＩＩ（Ａ−Ｌ−Ｂ）のＡは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸誘導体である。２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸誘導体は、式ＸＩＶ：
【化１】
0006637415.tif 000002
［式中、
Ｑは、
【化２】
0006637415.tif 000003
からなる群から選択され、
Ｅは、
【化３】
0006637415.tif 000004
からなる群から選択され、
Ｘは、Ｃ１〜Ｃ５アルキレンまたはＣ１〜Ｃ４アルキレン（Ｃ＝Ｏ）−であり、
各Ｒ１は、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはＣ１〜Ｃ４ハロアルキルから選択される］
の誘導体でありうる。
２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸誘導体は、式ＸＩＶａ：
【化４】
0006637415.tif 000005
の誘導体でありうる。
２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸誘導体は、式ＩＩｂ：
【化５】
0006637415.tif 000006
の２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸誘導体でありうる。
２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸誘導体は、式ＸＩＶｃ：
【化６】
0006637415.tif 000007
の誘導体でありうる。
２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸誘導体は、式ＸＩＶｄ：
【化７】
0006637415.tif 000008
の誘導体でありうる。
【００１７】
一部の実施形態では、式ＸＩＩＩ（Ａ−Ｌ−Ｂ）のＡは、葉酸誘導体である。葉酸誘導体は、
【化８】
0006637415.tif 000009
［式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはＣ１〜Ｃ４ハロアルキルであり、
各Ｒ３は、独立に、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、およびＣ１〜Ｃ４アルコキシから選択される］
からなる群から選択することができる。葉酸誘導体は、
【化９】
0006637415.tif 000010
でありうる。葉酸誘導体は、
【化１０】
0006637415.tif 000011
でありうる。
【００１８】
一部の実施形態では、式ＸＩＩＩ（Ａ−Ｌ−Ｂ）のＢは、フルオレセイン誘導体である。フルオレセイン誘導体は、式ＸＶおよび式ＸＶＩ：
【化１１】
0006637415.tif 000012
［式中、
Ｒ２は、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｒ１）または−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２であり、
各Ｒａは、独立に、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択されるか、もしくは
２つのＲａは、併せて、任意選択で置換されたヘテロシクリル環を形成し、
各Ｒ３は、独立に、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、およびＣ１〜Ｃ４アルコキシから選択され、
ｐは、０〜３であり、
Ｒ４は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１〜Ｃ４アルキル、または−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ１であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはＣ１〜Ｃ４ハロアルキルである］
から選択することができる。
式ＸＶのフルオレセイン誘導体は、式ＸＶａ：
【化１２】
0006637415.tif 000013
の誘導体でありうる。
式ＸＶＩのフルオレセイン誘導体は、式ＸＶＩａ：
【化１３】
0006637415.tif 000014
の誘導体でありうる。
【００１９】
式ＸＩＩＩ（Ａ−Ｌ−Ｂ）のＢは、ビオチン誘導体でありうる。ビオチン誘導体は、
【化１４】
0006637415.tif 000015
からなる群から選択することができる。
【００２０】
式ＸＩＩＩ（Ａ−Ｌ−Ｂ）のＬは、リンカーでありうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。リンカーは、アリールまたはヘテロアリールを含みうる。リンカーは、アリールを含みうる。アリールは、フェニルでありうる。フェニルは、二置換されていてもよい。二置換フェニルは、１，４−二置換フェニルでありうる。二置換フェニルは、１，３−二置換フェニルでありうる。フェニルは、三置換されていてもよい。フェニルは、四置換されていてもよい。置換フェニルの置換基の２つは、ＮＯ２でありうる。場合によって、リンカーは、ベンジル置換基を含まない。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、２つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、３つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、４つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、５つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、６つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、７つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、８つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、９つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、１０またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、１１またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、１２またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、１３またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、１４またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミドを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミドを含むことが可能であり、他方の端部に、アミンを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミドを含むことが可能であり、他方の端部に、トリアゾールを含みうる。
【００２１】
リンカーは、
【化１５】
0006637415.tif 000016
からなる群から選択することができる。
【００２２】
式ＸＩＩＩ（Ａ−Ｌ−Ｂ）は、式ＸＩＩＩａ：
【化１６】
0006637415.tif 000017
でありうる。
式ＸＩＩＩａのＡは、
【化１７】
0006637415.tif 000018
でありうる。
【００２３】
式ＸＩＩＩは、式ＸＩＩＩｂ：
【化１８】
0006637415.tif 000019
でありうる。Ａは、
【化１９】
0006637415.tif 000020
でありうる。
【００２４】
本明細書では、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化させるためのスイッチ中間体であって、（ａ）低分子を含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）であって、ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するＣＡＲ−ＩＤと、（ｂ）ＣＡＲ−ＩＤに接続されたリンカーであって、ＣＡＲ−ＥＣと相互作用する領域を含まず、標的細胞上の表面分子と相互作用する領域を含まないリンカーとを含むスイッチ中間体が開示される。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、シクロオクチン基、またはこれらの組合せを含みうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールまたは１，２，４−トリアゾールでありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ビオチンを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ジニトロフェノールを含みうる。
【００２５】
本明細書では、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化させるためのスイッチ中間体であって、（ａ）非天然アミノ酸を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）であって、標的細胞上の表面分子と相互作用するＴＩＤと、（ｂ）ＴＩＤに接続されたリンカーであって、ＣＡＲ−ＥＣと直接相互作用する領域を含まず、標的細胞と直接相互作用する領域を含まないリンカーとを含むスイッチ中間体が開示される。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーを含みうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも４つのＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも１０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも２０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも３０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アジドを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミノオキシを含みうる。リンカーは、アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカーでありうる。リンカーは、オキシムライゲーションを介してＴＩＤに結合させることができる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。低分子は、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体でありうる。低分子は、葉酸またはその誘導体でありうる。ＴＩＤは、抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体の単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗ＢＭＳＡ、抗ＣＥＡ、抗ＣＬＬ１、抗ＣＳ１、抗ＥＧＦＲ、および抗Ｈｅｒ２からなる群から選択される抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗ＢＭＳＡ、抗ＣＥＡ、抗ＣＬＬ１、抗ＣＳ１、抗ＥＧＦＲ、および抗Ｈｅｒ２からなる群から選択される抗体の単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチドによりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号５〜９のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１０〜１７のいずれか１つのポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、配列番号１０〜１７のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つのポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、非天然アミノ酸を含みうる。非天然アミノ酸は、ｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦ）でありうる。非天然アミノ酸は、ｐ−アジドフェニルアラニン（ｐＡｚＦ）でありうる。
【００２６】
本明細書ではさらに、状態を処置する方法であって、１つまたは複数の、本明細書で開示されるキメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチまたはそれらの医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与するステップを含む方法が開示される。方法はさらに、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むキメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を、それを必要とする被験体に投与するステップを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチとＣＡＲ−ＥＣは、同時に投与することができる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチとＣＡＲ−ＥＣは、逐次的に投与することができる。ＣＡＲは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と相互作用しうる。ＣＡＲ−ＩＤは、フルオレセイン誘導体またはビオチン誘導体を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含みうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。低分子は、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体でありうる。低分子は、葉酸またはその誘導体でありうる。ＴＩＤは、抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体の単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗ＢＭＳＡ、抗ＣＥＡ、抗ＣＬＬ１、抗ＣＳ１、抗ＥＧＦＲ、および抗Ｈｅｒ２からなる群から選択される抗体の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗ＢＭＳＡ、抗ＣＥＡ、抗ＣＬＬ１、抗ＣＳ１、抗ＥＧＦＲ、および抗Ｈｅｒ２からなる群から選択される抗体の単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチドによりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号５〜９のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１０〜１７のいずれか１つのポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、配列番号１０〜１７のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つのポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つと少なくとも約７０％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、非天然アミノ酸を含みうる。非天然アミノ酸は、ｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦ）でありうる。非天然アミノ酸は、ｐ−アジドフェニルアラニン（ｐＡｚＦ）でありうる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーを含みうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも４つのＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも１０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも２０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも３０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アジドを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミノオキシを含みうる。リンカーは、アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカーでありうる。ＣＡＲは、抗ＦＩＴＣ抗体またはその断片を含みうる。状態は、がんでありうる。
【００２７】
本明細書では、疾患または状態を処置する方法であって、キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）および標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含む第１のキメラ抗原エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチを、それを必要とする被験体に投与するステップを含む方法が開示される。方法はさらに、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのＣＡＲ−ＩＤに結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むキメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を、被験体に投与するステップを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチとＣＡＲ−ＥＣは、同時に投与することができる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチとＣＡＲ−ＥＣは、逐次的に投与することができる。方法はさらに、第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与するステップを含みうる。第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、第１の標的上の第１の表面分子に結合することが可能であって、第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、第２の標的上の第２の表面分子に結合しうる。第１のスイッチと第２のスイッチは、同時に投与することができる。第１のスイッチと第２のスイッチは、逐次的に投与することができる。第１の表面分子と第２の表面分子は、異なりうる。第１の表面分子と第２の表面分子は、同じでありうる。第１の標的と第２の標的は、異なりうる。第１の標的と第２の標的は、同じでありうる。第１の表面分子と第２の表面分子は、異なる標的上にありうる。第１の表面分子と第２の表面分子は、同じ標的でありうる。第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチと第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＣＡＲ−ＥＣ上の同じキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に結合しうる。方法はさらに、１つまたは複数のさらなるＣＡＲ−ＥＣを投与するステップを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣは、同じでありうる。ＣＡＲ−ＥＣは、異なりうる。ＣＡＲ−ＥＣは、Ｔ細胞、エフェクターＢ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、およびこれらの前駆体から選択することができる。ＣＡＲ−ＥＣは、Ｔ細胞でありうる。Ｔ細胞は、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ幹細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ８／ＣＤ４＋Ｔ細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージから選択することができる。ＣＡＲ−ＥＣのＣＡＲは、抗体またはその断片を含みうる。抗体は、抗ＦＩＴＣ抗体またはその断片を含みうる。その断片は、ｓｃＦｖでありうる。ＣＡＲ−ＥＣのＣＡＲは、配列番号１〜４から選択される、１つまたは複数のポリヌクレオチドによりコードされうる。ＣＡＲは、配列番号１〜４から選択される、１つまたは複数のポリヌクレオチドと少なくとも約７０％同一なポリヌクレオチドによりコードされうる。状態は、がんでありうる。がんは、再発性がん、難治性がん、神経膠芽細胞腫、卵巣がん、前立腺がん、ホルモン不応性前立腺がん、および乳がんから選択することができる。がんは、液性腫瘍または固形腫瘍から選択される腫瘍を含みうる。がんは、異種腫瘍（heterogeneous  tumor）を含みうる。がんは、血液悪性腫瘍でありうる。血液悪性腫瘍は、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ性白血病、びまん性大細胞リ��パ腫、濾胞性リンパ腫、および多発性骨髄腫から選択することができる。血液悪性腫瘍は、Ｂ細胞悪性腫瘍でありうる。血液悪性腫瘍は、ＣＤ１９陽性血液悪性腫瘍でありうる。状態は、感染症でありうる。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化するためのスイッチであって、
ａ．前記ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、
ｂ．非天然アミノ酸を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）であって、標的細胞上の表面分子と相互作用するＴＩＤと
を含むスイッチ。
（項目２）
前記ＣＡＲ−ＩＤが、前記ＴＩＤに結合している、項目１に記載のスイッチ。
（項目３）
前記ＣＡＲ−ＩＤが、前記非天然アミノ酸を介して前記ＴＩＤに結合している、項目１に記載のスイッチ。
（項目４）
前記ＣＡＲ−ＩＤが、前記ＴＩＤの前記非天然アミノ酸に部位特異的に結合している、項目１に記載のスイッチ。
（項目５）
リンカーをさらに含む、項目１に記載のスイッチ。
（項目６）
前記リンカーが、前記ＣＡＲ−ＩＤを前記ＴＩＤに結合させている、項目５に記載のスイッチ。
（項目７）
前記リンカーが、前記非天然アミノ酸を介して前記ＣＡＲ−ＩＤを前記ＴＩＤに結合させている、項目５に記載のスイッチ。
（項目８）
前記リンカーが、前記ＣＡＲ−ＩＤを前記ＴＩＤの前記非天然アミノ酸に部位特異的に結合させている、項目５に記載のスイッチ。
（項目９）
前記リンカーが、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、シクロオクチン基、またはこれらの組合せを含む、項目５に記載のスイッチ。
（項目１０）
前記ＣＡＲ−ＩＤが、低分子を含む、項目１に記載のスイッチ。
（項目１１）
前記低分子が、ハプテンである、項目１０に記載のスイッチ。
（項目１２）
前記低分子が、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）である、項目１０に記載のスイッチ。
（項目１３）
前記ＴＩＤが、ＦＩＴＣのイソチオシアネートにコンジュゲートしている、項目１２に記載のスイッチ。
（項目１４）
ＦＩＴＣのイソチオシアネートにコンジュゲートしたリンカーをさらに含む、項目１２に記載のスイッチ。
（項目１５）
前記低分子が、ビオチンである、項目１０に記載のスイッチ。
（項目１６）
前記ＴＩＤが、抗体の少なくとも一部に基づくか、またはこれに由来する、項目１に記載のスイッチ。
（項目１７）
前記ＴＩＤが、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づくか、またはこれに由来する、項目１に記載のスイッチ。
（項目１８）
前記ＴＩＤが、抗ＣＤ１９抗体の少なくとも一部に基づくか、またはこれに由来する、項目１に記載のスイッチ。
（項目１９）
前記ＴＩＤが、抗ＣＤ１９抗体の単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づくか、またはこれに由来する、項目１に記載のスイッチ。
（項目２０）
前記ＴＩＤが、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗ＢＭＳＡ、抗ＣＥＡ、抗ＣＬＬ１、抗ＣＳ１、抗ＥＧＦＲ、および抗Ｈｅｒ２からなる群から選択される抗体の少なくとも一部に基づくか、またはこれに由来する、項目１に記載のスイッチ。
（項目２１）
前記ＴＩＤが、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗ＢＭＳＡ、抗ＣＥＡ、抗ＣＬＬ１、抗ＣＳ１、抗ＥＧＦＲ、および抗Ｈｅｒ２からなる群から選択される抗体の単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部に基づくか、またはこれに由来する、項目１に記載のスイッチ。
（項目２２）
前記非天然アミノ酸が、前記抗体の一部に挿入されており、前記ＴＩＤが前記抗体に基づくかまたはそれに由来する、項目１６に記載のスイッチ。
（項目２３）
前記非天然アミノ酸が、前記抗体のアミノ酸と置き換わり、前記ＴＩＤが前記抗体に基づくかまたはそれに由来する、項目１６に記載のスイッチ。
（項目２４）
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化させるための複数のスイッチを含む組成物であって、前記複数のスイッチのうちの１つのスイッチが、（ａ）前記ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的細胞上の表面分子と相互作用する標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含み、前記スイッチの少なくとも約６０％が、構造的に相同である組成物。
（項目２５）
前記スイッチの少なくとも約８０％が、構造的に相同である、項目２４に記載の組成物。
（項目２６）
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化させるための複数のスイッチを含む組成物であって、前記複数のスイッチのうちの１つのスイッチが、（ａ）前記ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）ポリペプチドを含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含み、前記ＣＡＲ−ＩＤが、前記スイッチの少なくとも６０％において、前記ＴＩＤ内の同じ所定の部位に結合している、組成物。
（項目２７）
前記ＣＡＲ−ＩＤが、前記スイッチの少なくとも約８０％において、前記ＴＩＤ内の同じ所定の部位に結合している、項目２６に記載の組成物。
（項目２８）
前記ＣＡＲ−ＩＤが、低分子を含む、項目２４または２６に記載の組成物。
（項目２９）
前記低分子が、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）である、項目２８に記載の組成物。
（項目３０）
前記ＴＩＤが、低分子を含む、項目２４または２６に記載の組成物。
（項目３１）
前記低分子が、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸、葉酸、またはこれらの誘導体からなる群から選択される、項目３０に記載の組成物。
（項目３２）
前記複数のスイッチのうちの前記１つのスイッチが、リンカーをさらに含む、項目２４または２６に記載の組成物。
（項目３３）
前記リンカーが、前記ＣＡＲ−ＩＤを前記ＴＩＤに結合させている、項目３２に記載の組成物。
（項目３４）
前記ＴＩＤ内の前記所定の部位が、アミノ酸残基である、項目２６に記載の組成物。
（項目３５）
前記アミノ酸残基が、非天然アミノ酸である、項目３４に記載の組成物。
（項目３６）
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化させるためのスイッチ中間体であって、
ａ．低分子を含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）であって、前記ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するＣＡＲ−ＩＤと、
ｂ．前記ＣＡＲ−ＩＤに接続されたリンカーであって、前記ＣＡＲ−ＥＣと相互作用する領域を含まず、標的細胞上の表面分子と相互作用する領域を含まないリンカーと
を含むスイッチ中間体。
（項目３７）
前記リンカーが、シクロオクチンを含む、項目３６に記載のスイッチ中間体。
（項目３８）
前記リンカーが、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーである、項目３６に記載のスイッチ中間体。
（項目３９）
前記リンカーが、トリアゾールを含む、項目３６に記載のスイッチ中間体。
（項目４０）
前記トリアゾールが、１，２，３−トリアゾールまたは１，２，４−トリアゾールである、項目３９に記載のスイッチ中間体。
（項目４１）
前記ＣＡＲ−ＩＤが、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を含む、項目３６に記載のスイッチ中間体。
（項目４２）
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化させるためのスイッチ中間体であって、
ａ．非天然アミノ酸を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）であって、標的細胞上の表面分子と相互作用するＴＩＤと、
ｂ．前記ＴＩＤに接続されたリンカーであって、前記ＣＡＲ−ＥＣと直接相互作用する領域を含まず、前記標的細胞と直接相互作用する領域を含まないリンカーと
を含むスイッチ中間体。
（項目４３）
前記リンカーが、二官能性リンカーである、項目３６または項目４２に記載のスイッチ中間体。
（項目４４）
前記リンカーが、ヘテロ二官能性リンカーである、項目３６または項目４２に記載のスイッチ中間体。
（項目４５）
前記リンカーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、項目３６または項目４２に記載のスイッチ中間体。
（項目４６）
前記リンカーが、一方の端部に、アジドを含む、項目４２に記載のスイッチ中間体。
（項目４７）
前記リンカーが、一方の端部に、アミノオキシを含む、項目４２に記載のスイッチ中間体。
（項目４８）
前記リンカーが、アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカーである、項目４２に記載のスイッチ中間体。
（項目４９）
前記リンカーが、オキシムライゲーションを介して前記ＴＩＤに結合している、項目４２に記載のスイッチ中間体。
（項目５０）
前記ＴＩＤが、抗体または抗体断片に基づくか、またはこれに由来する、項目４２に記載のスイッチ中間体。
（項目５１）
前記ＴＩＤが、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含む、項目４２に記載のスイッチ中間体。
（項目５２）
（ａ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含むスイッチを生成する方法であって、
ａ．第１のリンカーを、前記ＴＩＤにカップリングさせて、前記ＴＩＤにコンジュゲートした前記第１のリンカーを含む第１のスイッチ中間体を生成するステップと、
ｂ．前記第１のスイッチ中間体を、前記ＣＡＲ−ＩＤにカップリングし、これにより、前記スイッチを生成するステップと
を含む方法。
（項目５３）
第２のリンカーを、前記ＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせて、前記ＣＡＲ−ＩＤにコンジュゲートした前記第２のリンカーを含む第２のスイッチ中間体を生成するステップをさらに含む、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記第１のスイッチ中間体を、前記ＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせることが、前記第１のスイッチ中間体を、前記第２のスイッチ中間体にカップリングさせることを含む、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記第１のリンカーを、前記ＴＩＤにカップリングさせることが、オキシムライゲーションを含む、項目５３に記載の方法。
（項目５６）
前記第２のリンカーが、シクロオクチンを含む、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
前記第１のスイッチ中間体を、前記第２のスイッチ中間体にカップリングさせることが、付加環化反応を含む、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
前記第１のリンカーが、アジドを含む、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
前記付加環化反応が、前記第２のリンカーの前記シクロオクチンを、前記第１のリンカーの前記アジドと反応させることを含む、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
前記付加環化反応が、［３＋２］付加環化反応を含む、項目５７に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】図１は、ＦＩＴＣベースの切り替え型ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームの非限定的な例を示す図である。
【００２９】
【図２Ａ】図２Ａは、抗ＣＤ１９Ｆａｂを含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）についての概略図であって、非天然アミノ酸であるｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦ）で置き換わりうる天然アミノ酸部位の非限定的な例を伴う概略図である。ＨＣは、重鎖を表し、ＬＣは、軽鎖を表す。
【００３０】
【図２Ｂ】図２Ｂは、オキシム反応に続き、ｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦ）残基のケトンを、ヘテロ二官能性のＮ３−ＴＥＧ−ＯＮＨ２リンカーでタンパク質を修飾する化学ハンドルとして使用する「クリック」反応からなる、２ステップのコンジュゲーション反応を示す図である。この概略図では、ＦＩＴＣを、修飾されたタンパク質にクリック反応させうる、シクロオクチンを末端とするリンカーで修飾する。
【００３１】
【図３−１】図３は、Ｅ：Ｔ比を１０：１とするＦＩＴＣ−ＣＡＲ−ＥＣ細胞傷害性アッセイ、および２４時間にわたるインキュベーションからの結果を示す図である。図３Ａは、ＬＣ  Ｓ２０２でコンジュゲートした抗ＣＤ１９  ＦＩＴＣスイッチを有する４つのＦＩＴＣ−ＣＡＲ−ＥＣ構築物の、ＩＭ−９細胞に対する細胞傷害性を示す図である。図３Ｂは、ＬＣ  Ｓ２０２でコンジュゲートした抗ＣＤ１９  ＦＩＴＣスイッチを有する４つのＦＩＴＣ−ＣＡＲ−ＥＣ構築物の、Ｋ５６２細胞に対する細胞傷害性を示す図である。図３Ｃは、ＨＣ  Ｋ１３６、ＬＣ  Ｓ２０２、その両方でコンジュゲートした、または非特異的（例えば、ランダム）コンジュゲーションを伴うＦＩＴＣスイッチを有する、ＦＩＴＣ−ＣＡＲ−ＥＣである４Ｍ５．３の、ＩＭ−９細胞に対する細胞傷害性を示す図である。図３Ｄは、ＬＣ  Ｓ２０２で、または非特異的に（例えば、ランダムに）コンジュゲートしたＨｅｒ２スイッチを有するＦＩＴＣ−ＣＡＲ−ＥＣである４Ｍ５．３の、ＳＫＢＲ３細胞に対する細胞傷害性を示す図である。ＬＣは、軽鎖を表す。
【図３−２】図３は、Ｅ：Ｔ比を１０：１とするＦＩＴＣ−ＣＡＲ−ＥＣ細胞傷害性アッセイ、および２４時間にわたるインキュベーションからの結果を示す図である。図３Ａは、ＬＣ  Ｓ２０２でコンジュゲートした抗ＣＤ１９  ＦＩＴＣスイッチを有する４つのＦＩＴＣ−ＣＡＲ−ＥＣ構築物の、ＩＭ−９細胞に対する細胞傷害性を示す図である。図３Ｂは、ＬＣ  Ｓ２０２でコンジュゲートした抗ＣＤ１９  ＦＩＴＣスイッチを有する４つのＦＩＴＣ−ＣＡＲ−ＥＣ構築物の、Ｋ５６２細胞に対する細胞傷害性を示す図である。図３Ｃは、ＨＣ  Ｋ１３６、ＬＣ  Ｓ２０２、その両方でコンジュゲートした、または非特異的（例えば、ランダム）コンジュゲーションを伴うＦＩＴＣスイッチを有する、ＦＩＴＣ−ＣＡＲ−ＥＣである４Ｍ５．３の、ＩＭ−９細胞に対する細胞傷害性を示す図である。図３Ｄは、ＬＣ  Ｓ２０２で、または非特異的に（例えば、ランダムに）コンジュゲートしたＨｅｒ２スイッチを有するＦＩＴＣ−ＣＡＲ−ＥＣである４Ｍ５．３の、ＳＫＢＲ３細胞に対する細胞傷害性を示す図である。ＬＣは、軽鎖を表す。
【００３２】
【図４Ａ】図４Ａは、ｐ−アジドフェニルアラニン（ｐＡｚＦ）を介するコンジュゲーションについての概略図である。ｐＡｚＦ非天然アミノ酸を、抗ＣＤ１９へと組み込んで、シクロオクチンリンカーで修飾されたＦＩＴＣ分子への、単一ステップの「クリック」コンジュゲーションのための、タンパク質新生基質を生成する。
【００３３】
【図４Ｂ】図４Ｂは、ＣＡＲ−ＥＣの有効性について、３つのマウスモデルにおいて調べるためのフローチャートを示す図である。
【００３４】
【図５Ａ】図５Ａは、ＴｒｉＡリンカーにより連結された、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸およびＦＩＴＣの構造を描示する図である。
【００３５】
【図５Ｂ】図５Ｂは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸−ＴｒｉＡ−ＦＩＴＣ  ＣＡＲ−ＥＣスイッチの合成スキームを描示する図である。
【００３６】
【図５Ｃ】図５Ｃは、Ｃ４−２（ＰＳＭＡ＋）前立腺がん細胞をターゲティングする抗ＦＩＴＣ−ＣＡＲ  Ｔ細胞による、２４時間にわたる細胞傷害性アッセイであって、Ｐ−ＴｒｉＡ−ＦＩＴＣの段階希釈を伴うアッセイについての結果を示す図である。各濃度は、３連で実行した。結果は、細胞傷害性の平均百分率として示す。
【００３７】
【図６Ａ】図６Ａは、葉酸−ＦＩＴＣスイッチの構造を描示する図である。
【００３８】
【図６Ｂ】図６Ｂ〜Ｃは、異なる濃度の葉酸−ＦＩＴＣスイッチの存在下において、ＫＢ（ＦＲ＋）（図６Ｂ）標的細胞またはＡ５４９（ＦＲ−）（図６Ｃ）標的細胞と共に共インキュベートされた抗ＦＩＴＣ−ＣＡＲ−ＥＣについての、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害性アッセイの結果を示す図である。各濃度は、３連で実行した。結果は、細胞傷害性の平均百分率として示す。
【図６Ｃ】図６Ｂ〜Ｃは、異なる濃度の葉酸−ＦＩＴＣスイッチの存在下において、ＫＢ（ＦＲ＋）（図６Ｂ）標的細胞またはＡ５４９（ＦＲ−）（図６Ｃ）標的細胞と共に共インキュベートされた抗ＦＩＴＣ−ＣＡＲ−ＥＣについての、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害性アッセイの結果を示す図である。各濃度は、３連で実行した。結果は、細胞傷害性の平均百分率として示す。
【００３９】
【図７】図７は、ＣＣＫ２Ｒアンタゴニストである、Ｚ３６０を描示する図である。
【００４０】
【図８】図８は、天然ＬＨＲＨ（黄体形成ホルモン放出ホルモン）の、タンパク質分解に対して安定な変化形である、［Ｄ−Ｌｙｓ６］−ＬＨＲＨを描示する図である。
【００４１】
【図９Ａ】図９Ａは、非天然アミノ酸を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を生成する、ｐ−アジドフェニルアラニン（p-aziophenylalanine）（ｐＡｚＦ）の組み込みのための、抗ＣＤ１９抗体内の変異部位を描示する図である。
【００４２】
【図９Ｂ】図９Ｂは、クリック反応を介する、ＦＩＴＣ−リンカー中間体の、変異させたＦａｂを含む多様な標的相互作用ドメインへの、１ステップの部位特異的コンジュゲーションを描示する図である。
【００４３】
【図１０−１】図１０Ａ〜Ｎは、ＦＩＴＣ−抗ＣＤ１９抗体スイッチについてのＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す図である。
【図１０−２】図１０Ａ〜Ｎは、ＦＩＴＣ−抗ＣＤ１９抗体スイッチについてのＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す図である。
【００４４】
【図１１】図１１は、ＦＩＴＣ−抗ＣＤ１９抗体スイッチについてのＳＤＳ−ＰＡＧＥサイズ排除クロマトグラフィーを示す図である。
【００４５】
【図１２】図１２は、フローサイトメトリーにより測定される、ＦＩＴＣ−抗ＣＤ１９抗体スイッチによる細胞傷害性を示す図である。
【００４６】
【図１３】図１３は、Ｐ−ＴｒｉＡ−ＦＩＴＣベースのスイッチおよび抗ＦＩＴＣ−ＣＡＲＴ細胞で処置されたマウスにおける、ＰＳＭＡ陽性腫瘍の退縮を示す図である。
【００４７】
【図１４】図１４Ａ〜Ｉは、例示的なスイッチについての概略図である。
【００４８】
【図１５】図１５Ａ〜Ｈは、例示的なスイッチ中間体についての概略図である。
【００４９】
【図１６】図１６は、スイッチの生成についての例示的な概略図である。
【００５０】
【図１７】図１７Ａ〜Ｃは、ＣＡＲ−ＥＣの調節因子およびＣＡＲ−ＥＣについての概略図である。
【００５１】
【図１８】図１８は、例示的なリンカーを描示する図である。
【００５２】
【図１９】図１９は、ヘテロ二官能性リンカーを描示する図である。
【００５３】
【図２０】図２０は、二官能性リンカーを合成するための一般的スキームを示す図である。
【００５４】
【図２１】図２１は、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製され、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより特徴付けされた、ＦＩＴＣ−抗ＣＤ１９抗体コンジュゲートを示す図である。
【００５５】
【図２２−１】図２２は、ＦＩＴＣ−抗ＣＤ１９抗体コンジュゲートについてのＥＳＩ−ＭＳを示す図である。
【図２２−２】図２２は、ＦＩＴＣ−抗ＣＤ１９抗体コンジュゲートについてのＥＳＩ−ＭＳを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
現行のＣＡＲ−Ｔ療法は、煩瑣な方法および安全性に対する容認できない危険性の問題を抱えている。これらの主な限界は、ＣＡＲ−Ｔ活性を制御する方法が不十分なことの結果であることが多い。例えば、現行の抗ＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ療法は、持続性のＢ細胞形成不全を結果としてもたらす。ＣＡＲ−Ｔの活性を制御するスイッチを導入すれば、新生物性細胞を消失させた後に応答をオフにすることで、Ｂ細胞の再増殖が可能となる。近年の前臨床研究では、ＣＡＲ−Ｔ系は、抗体ベースのスイッチにより制御することが可能であり、ここで、抗体は、標的細胞（例えば、がん細胞）に結合し、これにより、活性をオフにすることが可能となることが実証されている。これらの系は、概念上は、ＣＡＲ−Ｔを使用して、腫瘍の切り替え型ターゲティングを可能とするが、それらは、抗体の非特異的標識化など、一連の限界を抱えている。システインまたはリシンを使用する、抗体の非特異的標識化は、非機能的であり、薬物動態を変化させ、潜在的に免疫原性であり、かつ／または最適化が困難でありうる変異体を含む不均質な生成物をもたらすことが多い。加えて、単一抗体上に複数のＣＡＲ−Ｔ結合性領域を含む抗体ベースのスイッチは、Ｔ細胞に対する多価基質をもたらし、これは、非特異的活性化を引き起こす可能性がある。
【００５７】
また、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の免疫原性も、懸念される。例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞表面上の一部の外来タンパク質（例えば、アビジン）の発現により、所望されない免疫応答が活性化する可能性がある。さらに、ＣＡＲによるシグナル伝達を最適化して、標的（例えば、がん細胞）に対して、所望の効果を最大とすることもできる。
【００５８】
形状が正確であり、活性および特異性が制御された、均質なＣＡＲ−Ｔ細胞スイッチを開発することは、安全で制御可能な処置を維持しながら、悪性腫瘍を根絶するのに必要な効力および持続性を有するＣＡＲ−Ｔ療法を開発するのに、極めて重要でありうる。本明細書で開示される組成物、方法、プラットフォーム、およびキットは、これらの必要に応じる。
【００５９】
本明細書では、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）の活性の調節における使用のためのスイッチが開示される。一般に、スイッチは、（ａ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含む。スイッチはさらに、１つまたは複数のリンカーを含みうる。ＴＩＤは、ポリペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ポリペプチドは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含むように修飾することができる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。場合によって、ＴＩＤは、アミド結合により接続された、２つまたはこれを超えるアミノ酸を含まない。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。場合によって、ＣＡＲ−ＩＤは、アミド結合により接続された、２つまたはこれを超えるアミノ酸を含まない。
【００６０】
本明細書では、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）の活性を調節するためのスイッチであって、（ａ）ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）非天然アミノ酸を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含み、ＴＩＤが、標的細胞上の表面分子と相互作用するスイッチが開示される。
【００６１】
本明細書では、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）の活性を調節するためのスイッチであって、（ａ）ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的細胞上の表面分子と相互作用する標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含み、ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤが、アミド結合により接続された、２つまたはこれを超えるアミノ酸を含まないスイッチが開示される。
【００６２】
本明細書では、様々な疾患および状態を処置するのに有用な、キメラ抗原受容体を発現させるエフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）およびキメラ抗原受容体を発現させるエフェクター細胞スイッチ（ＣＡＲ−ＥＣスイッチ）が開示される。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、（ａ）低分子を含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）抗体または抗体断片を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含みうる。抗体または抗体断片は、結合性抗体断片（Ｆａｂ断片）または全長抗体を含みうる。
【００６３】
本明細書ではさらに、（ａ）第１の低分子を含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）第２の低分子を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチを開示される。
【００６４】
本明細書では、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）の活性を調節するための複数のスイッチを含む組成物であって、複数のスイッチのうちの１つのスイッチが、（ａ）ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的細胞上の表面分子と相互作用する標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含み、スイッチの少なくとも約６０％が、構造的に相同である組成物が開示される。
【００６５】
本明細書では、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）の活性を調節するための複数のスイッチを含む組成物であって、複数のスイッチのうちの１つのスイッチが、（ａ）ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）ポリペプチドを含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含み、ＣＡＲ−ＩＤが、スイッチの少なくとも６０％においてＴＩＤの同じアミノ酸残基に結合している組成物が開示される。
【００６６】
本明細書で開示される、スイッチおよびスイッチ中間体を生成する方法は、ＣＡＲ−ＥＣ細胞活性の制御、オフターゲット反応性のタイトレーション、腫瘍崩壊症候群（ＴＬＳ）の抑止、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の緩和、ならびに／またはアフィニティー、価数、形状、リンカーの長さ、および／もしくはＣＡＲ−ＥＣスイッチ構成要素／ＣＡＲ−ＥＣスイッチ領域の部位特異的コンジュゲーションを介するリンカー化学反応による、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの結合の最適化をもたらすことが有利でありうる。
【００６７】
本明細書では、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）の活性を調節するためのスイッチを生成する方法が開示される。方法は、（ａ）非天然アミノ酸を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を得るステップと、（ｂ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を、ＴＩＤに結合させ、これにより、スイッチを生成するステップとを含みうる。
【００６８】
本明細書ではさらに、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）の活性を調節するためのスイッチを生成する方法であって、（ａ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を、標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）と接触させるステップと、（ｂ）ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤ上の所定の部位に結合させることによりスイッチを生成するステップとを含む方法が開示される。
【００６９】
本明細書ではさらに、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）の活性を調節するためのスイッチを生成する方法であって、（ａ）複数のキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を、複数の標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）と接触させるステップと、（ｂ）複数のＣＡＲ−ＩＤのうちの１つまたは複数のＣＡＲ−ＩＤを、複数のＴＩＤのうちの１つまたは複数のＴＩＤに結合させ、これにより、複数のスイッチを生成するステップとを含み、スイッチの少なくとも約６０％が、構造的に相同である方法が開示される。
【００７０】
本明細書ではさらに、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）の活性を調節するためのスイッチを生成する方法であって、（ａ）複数のキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を、複数の標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）と接触させるステップと、（ｂ）複数のＣＡＲ−ＩＤのうちの１つのＣＡＲ−ＩＤを、複数のＴＩＤのうちの１つのＴＩＤに結合させ、これにより、複数のスイッチを生成するステップとを含み、ＣＡＲ−ＩＤを、スイッチの少なくとも６０％においてＴＩＤの同じアミノ酸残基に結合させる方法が開示される。
【００７１】
本明細書ではさらに、式ＩＶ：Ｘ−Ｌ１−Ｌ２−Ｙまたは式ＩＶＡ：Ｙ−Ｌ２−Ｌ１−Ｘのスイッチを生成する方法であって、（ａ）Ｌ１を、Ｘにカップリングさせて、式ＩＩＡの第１の中間体：Ｌ１−Ｘ（式中、ｉ．Ｘが、エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を含み；ｉｉ．Ｌ１が、Ｘにカップリングさせる前の第１のリンカーを含む）を生成するステップと、（ｂ）Ｌ２を、Ｙにカップリングさせて、式ＶＡの第２の中間体：Ｙ−Ｌ２（式中、ｉ．Ｙが、標的細胞上の表面分子と相互作用する標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含み；ｉｉ．Ｌ２が、Ｘにカップリングさせる前の第２のリンカーを含む）を生成するステップと、（ｃ）第１の中間体を、第２の中間体に連結し、これにより、式ＩＶ（Ｘ−Ｌ１−Ｌ２−Ｙ）または式ＩＶＡ（Ｙ−Ｌ２−Ｌ１−Ｘ）のスイッチを生成するステップとを含む方法が開示される。
【００７２】
本明細書では、スイッチ中間体が開示される。スイッチ中間体は、（ａ）低分子を含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）であって、ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するＣＡＲ−ＩＤと、（ｂ）ＣＡＲ−ＩＤに接続されたリンカーであって、ＣＡＲ−ＥＣと相互作用する領域を含まず、標的細胞上の表面分子と相互作用する領域を含まないリンカーとを含みうる。
【００７３】
本明細書ではさらに、（ａ）低分子を含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）であって、ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するＣＡＲ−ＩＤと、（ｂ）ＣＡＲ−ＩＤに接続されたリンカーであって、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、および／またはシクロオクチン基を含むリンカーとを含むスイッチ中間体が開示される。
【００７４】
本明細書ではさらに、（ａ）非天然アミノ酸を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）であって、標的細胞上の表面分子と相互作用するＴＩＤと、（ｂ）ＴＩＤに接続されたリンカーであって、ＣＡＲ−ＥＣと直接相互作用する領域を含まず、標的細胞と直接相互作用する領域を含まないリンカーとを含むスイッチ中間体が開示される。
【００７５】
本明細書ではさらに、（ａ）ポリペプチドまたは低分子を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）であって、標的細胞上の表面分子と相互作用するＴＩＤと、（ｂ）ＴＩＤに接続されたリンカーであって、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、および／またはシクロオクチン基を含むリンカーとを含むスイッチ中間体が開示される。
【００７６】
本明細書ではさらに、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）の活性を調節するためのスイッチ中間体を生成する方法であって、（ａ）標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を、リンカーと接触させるステップであって、リンカーが、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、および／またはシクロオクチン基を含むステップと、（ｂ）リンカーを、ＴＩＤに結合させ、これにより、スイッチ中間体を生成するステップとを含む方法が開示される。
【００７７】
本明細書ではさらに、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）の活性を調節するためのスイッチ中間体を生成する方法であって、（ａ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を、リンカーと接触させるステップであって、リンカーが、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、および／またはシクロオクチン基を含むステップと、（ｂ）リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させ、これにより、スイッチ中間体を生成するステップとを含む方法が開示される。
【００７８】
本明細書ではさらに、ユニバーサルキメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）プラットフォームが開示される。ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームは、１つまたは複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチ、ＣＡＲ−ＥＣ、ＣＡＲ−ＥＣ中間体、およびリンカーを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣは、スイッチに対する超高アフィニティー抗体または超高アフィニティー抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含みうる。
【００７９】
本明細書ではさらに、疾患または状態を処置する方法であって、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを、それを必要とする被験体に投与するステップを含む方法が開示される。方法はさらに、ＣＡＲ−ＥＣを、それを必要とする被験体に投与するステップを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、タイトレーション可能な応答、安全性の改善、および／またはスイッチの投与を制御することによるＣＡＲ−ＥＣ細胞活性の停止をもたらしうる。ＣＡＲ−Ｔ細胞活性の制御における従来の手法であって、ＣＡＲ−Ｔ活性「をオフにする」手法と対照的に、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチは一般に、ＣＡＲ−ＥＣ活性化因子または「オン」スイッチとして機能する。
【００８０】
本明細書では、それを必要とする被験体における疾患または状態を処置する方法であって、被験体に、（ａ）ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）非天然アミノ酸を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含むスイッチであって、ＴＩＤが、標的細胞上の表面分子と相互作用するスイッチを投与するステップを含む方法が開示される。
【００８１】
本明細書ではさらに、がんを伴う被験体の処置における使用のための医薬組成物の製造におけるスイッチの使用であって、スイッチが、（ａ）ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）非天然アミノ酸を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含み、ＴＩＤが、標的細胞上の表面分子と相互作用するスイッチの使用が開示される。
【００８２】
ＣＡＲ−ＥＣプラットフォーム、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ、およびＣＡＲ−ＥＣを生成するための方法、キット、および組成物が提供される。本明細書で開示される方法、キット、および組成物を使用して、エフェクター細胞を活性化させることができる。例えば、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）は、エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と相互作用することが可能であり、ＣＡＲ−スイッチの標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）は、標的上の表面分子と相互作用し、これにより、エフェクター細胞を活性化させ、エフェクター細胞の活性を、標的に向けることが可能である。これらの方法、キット、および組成物は、多数の疾患の治療に使用することができる。ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームを使用して、異なる長さ、価数、配向性、リンカー、ＣＡＲ−ＩＤ、およびＴＩＤを伴う、様々なＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成することができる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの可変性により、様々な疾患および状態の処置において、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを最適化することができる。例えば、異種腫瘍および血液細胞悪性腫瘍（例えば、急性リンパ芽球性白血病および慢性リンパ性白血病）は、特定の標的に対して最適化されたＣＡＲ−ＥＣおよびＣＡＲ−ＥＣスイッチで、より効果的に処置することができる。また、異種腫瘍も、１つを超える腫瘍抗原を標的とする、複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチで、より効果的に処置することができる。既に見られたＣＡＲ−ＥＣ療法と異なり、本発明は、全てではないにせよ、多くの、このような最適化を提供する。下記でより充分に記載される、組成物、方法、およびキットについての詳細を読めば、当業者には、本発明のこれらの目的および他の目的、これらの利点および他の利点、ならびにこれらの特徴および他の特徴が明らかとなる。
【００８３】
そうでないことが明示されない限りにおいて、本明細書で使用される「スイッチ」および「ＣＡＲ−ＥＣスイッチ」という用語は、互換的に使用され、低分子−抗体スイッチ、ハプテン−抗体スイッチ、および／または低分子スイッチを指す場合がある。ハプテン−抗体スイッチまたはハプテン−低分子スイッチの抗体部分は、抗体の少なくとも一部または全抗体を含みうる。例えば、ハプテン−抗体スイッチの抗体部分は、重鎖の少なくとも一部、軽鎖の少なくとも一部、可変領域の少なくとも一部、定常領域の少なくとも一部、相補性決定領域（ＣＤＲ）の少なくとも一部、またはこれらの組合せを含みうる。低分子抗体スイッチおよび／またはハプテン抗体スイッチの抗体部分は、Ｆｃ（断片、結晶性）領域の少なくとも一部を含みうる。低分子抗体スイッチおよび／またはハプテン抗体スイッチの抗体部分は、相補性決定領域（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３）の少なくとも一部を含みうる。低分子抗体スイッチおよび／またはハプテン抗体スイッチの抗体部分は、Ｆａｂ（断片、抗原結合性）領域の少なくとも一部を含みうる。ハプテン−抗体スイッチは、ハプテン−Ｆａｂスイッチでありうる。
【００８４】
本方法、本キット、および本組成物についてより詳細に記載する前に、本発明は、このような方法、キット、または組成物は、当然ながら、変化しうるので、記載される特定の方法、キット、または組成物に限定されるものではないことを理解されたい。また、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲だけにより限定されるので、本明細書で使用される用語法は、特定の実施形態だけについて記載することを目的とするものであり、限定的であることを意図するものではないことも理解される。実施例は、当業者に、本発明をどのように実行し、使用するのかについての、完全な開示および記載をもたらすように示されるものであり、本発明者らが何を自らの発明であるとみなすのかについての範囲を限定するように意図するものでも、下記の実験が、実施される全ての実験または唯一の実験であることを表すように意図するものでもない。使用される数（例えば、量、温度など）に関して精度を確保するように努力がなされているが、いくらかの実験誤差および偏差が考慮されるべきである。そうでないことが指し示されない限りにおいて、部分は、重量部であり、分子量は、平均分子量であり、温度は、摂氏温度であり、圧力は、大気圧または大気圧近傍の圧力である。
【００８５】
値の範囲が提示される場合、文脈によりそうでないことが明確に指示されない限りにおいて、下限の単位の１０分の１まで、その範囲の上限と下限の間の各中間の値も具体的に開示されることが理解される。言明された範囲内の任意の言明された値または中間の値と、その言明された範囲内の他の任意の言明された値または中間の値の間の各小範囲も、本発明内に包含される。これらの小範囲の上限および下限は、独立で、範囲内に含まれる場合もあり、範囲から除外される場合もあるが、限界の一方もしくは両方が小範囲内に含まれる各範囲、または限界のいずれも含まれない各範囲もまた、本発明内に包含され、言明された範囲内の、任意の具体的に除外された限界下に置かれる。言明された範囲が、限界の一方または両方を含む場合、これらの含まれた限界の一方または両方を除外する範囲もまた、本発明内に含まれる。
【００８６】
そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書で記載される方法および材料と同様または同等な、任意の方法および材料を、本発明の実施または試行において使用しうるが、ここでは、一部の可能で好ましい方法および材料について記載される。本明細書で言及される全ての刊行物は、それらとの関連で刊行物が引用される方法および／または材料について開示および記載するように、参照により本明細書に組み込まれる。齟齬が生じる範囲では、本開示が、組み込まれた刊行物の任意の開示に優先されることが理解される。
【００８７】
本開示を読めば、当業者に明らかな通り、本明細書で記載され、例示される個々の実施形態の各々は、個別の構成要素および特徴を有するが、これらは、本発明の範囲または精神から逸脱しない限りにおいて、他の複数の実施形態のいずれかの特徴からたやすく分離することもでき、これらとたやすく組み合わせることもできる。列挙される任意の方法は、列挙される事象の順序で実行することもでき、論理的に可能な、他の任意の順序で実行することもできる。
【００８８】
本明細書内および添付の特許請求の範囲内で使用される通り、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈によりそうでないことが明確に指示されない限りにおいて、複数の指示対象を含むことに注意すべきである。したがって、例えば、「細胞（a  cell）」に対する言及は、複数のこのような細胞を含み、「ペプチド（the  peptide）」に対する言及は、１つまたは複数のペプチド、およびこれらの同等物、例えば、当業者に公知のポリペプチドなどに対する言及を含む。
【００８９】
本明細書で論じられる刊行物は、本出願の出願日以前にそれらが開示されたことだけのために提示される。本明細書内のいかなることがらも、本発明に、先行発明の理由でこのような刊行物に先行する権利がないということの容認としてはみなされないものとする。さらに、提示される公開日は、実際の公開日と異なる場合があり、これらは、独立に確認する必要がある。
【００９０】
本明細書では、本発明の好ましい実施形態について示し記載しているが、当業者には、このような実施形態は、例だけを目的とするものであることが明らかである。今や、当業者は、本発明から逸脱せずに、多数の変化、変更、および置き換えに想到する。本発明を実施するには、本明細書で記載される、本発明の実施形態に対する多様な代替物を援用しうることを理解されたい。以下の特許請求の範囲により、本発明の範囲が規定され、これにより、これらの特許請求の範囲およびそれらの同等物の範囲内の方法および構造が包含されることを意図する。
【００９１】
ＣＡＲ−ＥＣスイッチ
本明細書では、スイッチ（例えば、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ）、このようなスイッチを生成する方法、およびこれらの使用が開示される。一般に、スイッチは、（ａ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含みうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のさらなるＣＡＲ−ＩＤを含みうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のさらなるＴＩＤを含みうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のリンカーを含みうる。図１４Ａ〜Ｉは、例示的なスイッチについて描示する。図１４Ａに示される通り、スイッチは、ＴＩＤ（１４０５）に結合しているＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）を含みうる。図１４Ｂに示される通り、スイッチは、ＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）、リンカー（１４１０）、およびＴＩＤ（１４０５）を含みうる。リンカー（１４１０）により、ＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）を、ＴＩＤ（１４０５）に結合させることができる。図１４Ｃに示される通り、スイッチは、ＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）、第１のリンカー（１４１５）、第２のリンカー（１４１０）、およびＴＩＤ（１４０５）を含みうる。第１のリンカー（１４１５）と第２のリンカー（１４１０）とは、互いと接続することができる。加えて、第１のリンカー（１４１５）は、ＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）に結合させることができ、第２のリンカー（１４１０）は、ＴＩＤ（１４０５）に結合させることができ、これにより、ＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）の、ＴＩＤ（１４０５）への結合が結果としてもたらされる。第１のリンカー（１４１０）と第２のリンカー（１４１５）は、同じでありうる。第１のリンカー（１４１０）と第２のリンカー（１４１５）は、異なりうる。
【００９２】
スイッチは、ＣＡＲ−ＩＤと、２つまたはこれを超えるＴＩＤとを含みうる。図１４Ｄに示される通り、スイッチは、ＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）、第１のＴＩＤ（１４０５）、および第２のＴＩＤ（１４２０）を含みうる。第１のＴＩＤ（１４０５）および第２のＴＩＤ（１４２０）は、ＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）に結合させることができる。図１４Ｅに示される通り、スイッチは、ＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）、リンカー（１４１０）、第１のＴＩＤ（１４０５）、および第２のＴＩＤ（１４２０）を含みうる。リンカー（１４１０）により、第１のＴＩＤ（１４０５）を、ＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）に結合させることができる。第２のＴＩＤ（１４２０）は、ＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）に結合させることができる。図１４Ｆに示される通り、スイッチは、ＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）、第１のリンカー（１４１０）、第２のリンカー（１４１５）、第１のＴＩＤ（１４０５）、および第２のＴＩＤ（１４２０）を含みうる。第１のリンカー（１４１０）により、第１のＴＩＤ（１４０５）を、ＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）に結合させることができる。第２のリンカー（１４１５）により、第２のＴＩＤ（１４２０）を、ＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）に結合させることができる。第１のＴＩＤ（１４０５）と第２のＴＩＤ（１４２０）は、同じでありうる。第１のＴＩＤ（１４０５）と第２のＴＩＤ（１４２０）は、異なりうる。第１のリンカー（１４１０）と第２のリンカー（１４１５）は、同じでありうる。第１のリンカー（１４１０）と第２のリンカー（１４１５）は、異なりうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のさらなるＣＡＲ−ＩＤを含みうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のさらなるＴＩＤを含みうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のリンカーを含みうる。
【００９３】
スイッチは、ＴＩＤおよび２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＩＤを含みうる。図１４Ｇに示される通り、スイッチは、ＴＩＤ（１４０５）、第１のＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）、および第２のＣＡＲ−ＩＤ（１４２５）を含みうる。第１のＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）および第２のＣＡＲ−ＩＤ（１４２５）は、ＴＩＤ（１４０５）に結合させることができる。図１４Ｈに示される通り、スイッチは、ＴＩＤ（１４０５）、リンカー（１４１０）、第１のＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）、および第２のＣＡＲ−ＩＤ（１４２５）を含みうる。リンカー（１４１０）により、第１のＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）を、ＴＩＤ（１４０５）に結合させることができる。第２のＣＡＲ−ＩＤ（１４２５）は、ＴＩＤ（１４０５）に結合させることができる。図１４Ｉに示される通り、スイッチは、ＴＩＤ（１４０５）、第１のリンカー（１４１０）、第２のリンカー（１４１５）、第１のＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）、および第２のＣＡＲ−ＩＤ（１４２５）を含みうる。第１のリンカー（１４１０）により、第１のＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）を、ＴＩＤ（１４０５）に結合させることができる。第２のリンカー（１４１５）により、第２のＣＡＲ−ＩＤ（１４２５）を、ＴＩＤ（１４０５）に結合させることができる。第１のＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）および第２のＣＡＲ−ＩＤ（１４２５）は、同じでありうる。第１のＣＡＲ−ＩＤ（１４０１）および第２のＣＡＲ−ＩＤ（１４２５）は、異なりうる。第１のリンカー（１４１０）と第２のリンカー（１４１５）は、同じでありうる。第１のリンカー（１４１０）と第２のリンカー（１４１５）は、異なりうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のさらなるＣＡＲ−ＩＤを含みうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のさらなるＴＩＤを含みうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のリンカーを含みうる。
【００９４】
ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤの、ＴＩＤへの結合は、当技術分野で公知の任意の方法により起こりうる。例えば、ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、融合、挿入、グラフティング、またはコンジュゲーションにより結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに融合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに挿入することができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤにコンジュゲートすることができる。
【００９５】
スイッチは、（ａ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸、葉酸、またはこれらの誘導体を含みうる。ハプテンを含むＣＡＲ−ＩＤと、低分子を含むＴＩＤとを含むスイッチは、ハプテン−低分子スイッチと称することができる。
【００９６】
スイッチは、キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と相互作用しうる。ＴＩＤは、標的上の表面分子と相互作用しうる。ＴＩＤは、非天然アミノ酸を含みうる。ＴＩＤは、抗体または抗体断片に基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。抗体または抗体断片は、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含有するように修飾することができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに部位特異的に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤ内の非天然アミノ酸に部位特異的に結合させることができる。低分子を含むＣＡＲ−ＩＤと、抗体または抗体断片を含むＴＩＤとを含むスイッチは、低分子−抗体スイッチと称することができる。
【００９７】
スイッチは、（ａ）ＦＩＴＣまたはその誘導体を含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含みうる。ＴＩＤは、抗体の重鎖に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗体の軽鎖に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗体のＦａｂに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体またはその断片を含みうる。ＴＩＤは、抗Ｈｅｒ２抗体またはその断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＳ１抗体またはその断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体またはその断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、抗ＣＤ３３抗体、もしくはこれらの断片、またはこれらの組合せから選択される抗体または抗体断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ１９Ｆａｂでありうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２２  Ｆａｂでありうる。ＴＩＤは、抗Ｈｅｒ２  Ｆａｂでありうる。ＴＩＤは、抗ＣＳ１  Ｆａｂでありうる。ＴＩＤは、抗ＢＣＭＡ  Ｆａｂでありうる。ＴＩＤは、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ  Ｆａｂでありうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２０  Ｆａｂ、抗ＥＧＦＲ  Ｆａｂ、抗ＣＥＡ  Ｆａｂ、抗ＣＬＬ−１  Ｆａｂ、抗ＣＤ３３  Ｆａｂ、またはこれらの組合せから選択されるＦａｂに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに部位特異的に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに融合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに挿入することができる。ＴＩＤは、ＣＡＲ−ＩＤに挿入することができる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチはさらに、１つまたは複数のリンカーを含みうる。１つまたは複数のリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチはさらに、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。ＴＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＣＡＲ−ＩＤ内の１つまたは複数の非天然アミノ酸を介してＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤ内の１つまたは複数の非天然アミノ酸を介してＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＣＡＲ−ＩＤ内の１つまたは複数の非天然アミノ酸、およびＴＩＤ内の１つまたは複数の非天然アミノ酸を介してＴＩＤに結合させることができる。
【００９８】
スイッチは、（ａ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含むことが可能であり、ここで、ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤは、アミド結合により連結された、２つまたはこれを超えるアミノ酸を含まない。ＣＡＲ−ＩＤは、第１の低分子を含みうる。ＴＩＤは、第２の低分子を含みうる。第１の低分子と第２の低分子は、異なりうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のリンカーを含みうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のさらなるＣＡＲ−ＩＤを含みうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のさらなるＴＩＤを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、１つのアミノ酸を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、約１つ、約２つ、約３つ、約４つ、または約５つのアミノ酸を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、２つまたはこれを超えるアミノ酸を含みうる。２つまたはこれを超えるアミノ酸は、互いと隣接しうる。２つまたはこれを超えるアミノ酸は、互いと接続することができる。２つまたはこれを超えるアミノ酸は、互いと隣接しない場合がある。２つまたはこれを超えるアミノ酸は、アミド結合により連結されない場合がある。
【００９９】
スイッチは、（ａ）ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的細胞上の表面分子と相互作用する標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含むことが可能であり、ここで、ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤは、アミド結合により接続された、２つまたはこれを超えるアミノ酸を含まない。スイッチはさらに、１つまたは複数のさらなるＣＡＲ−ＩＤを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＤＯＴＡ、ジニトロフェノール、キノン、ビオチン、アニリン、アトラジン、アニリン誘導体、ｏ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ヒドララジン、ハロタン、ジゴキシゲニン、ベンゼンアルソネート、ラクトース、トリニトロフェノール、ビオチンまたはその誘導体からなる群から選択されうる。ＣＡＲ−ＩＤは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ビオチンを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ジニトロフェノールを含みうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のさらなるＴＩＤを含みうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、葉酸またはその誘導体を含みうる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。スイッチはさらに、２つまたはこれを超えるリンカーを含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、シクロオクチン基、またはこれらの組合せを含みうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも４つのＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも１０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも２０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも３０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アジドを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミノオキシを含みうる。リンカーは、アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカーでありうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールまたは１，２，４−トリアゾールでありうる。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーでありうる。リンカーは、ＴｒｉＡリンカーでありうる。
【０１００】
スイッチは、（ａ）ＦＩＴＣを含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも５０％相同な表面分子に結合する、標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含みうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体もしくは修飾形を含みうる。ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも５０％、５５％、５７％、６０％、６２％、６５％、６７％、７０％、７２％、７５％、７７％、８０％、８２％、８５％、８７％、９０％、９２％、９５％、９７％、または約１００％相同な表面分子に結合しうる。ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも７０％相同な表面分子に結合しうる。ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも８０％相同な表面分子に結合しうる。ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも９０％相同な表面分子に結合しうる。ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも９５％相同な表面分子に結合しうる。
【０１０１】
スイッチは、（ａ）ＦＩＴＣを含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）葉酸受容体と少なくとも５０％相同な標的に結合する、標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含みうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、葉酸またはその誘導体もしくは修飾形を含みうる。ＴＩＤは、葉酸受容体と約５０％、５５％、５７％、６０％、６２％、６５％、６７％、７０％、７２％、７５％、７７％、８０％、８２％、８５％、８７％、９０％、９２％、９５％、９７％、または約１００％相同な表面分子に結合しうる。ＴＩＤは、葉酸受容体と約７０％相同な表面分子に結合しうる。ＴＩＤは、葉酸受容体と約８０％相同な表面分子に結合しうる。ＴＩＤは、葉酸受容体と約９０％相同な表面分子に結合しうる。ＴＩＤは、葉酸受容体と約９５％相同な表面分子に結合しうる。
【０１０２】
スイッチは、約１０００ｋＤａ、１１００ｋＤａ、１２００ｋＤａ、１３００ｋＤａ、１４００ｋＤａ、１５００ｋＤａ、１６００ｋＤａ、１７００ｋＤａ、１８００ｋＤａ、１９００ｋＤａ、２０００ｋＤａ、２１００ｋＤａ、２２００ｋＤａ、２３００ｋＤａ、２４００ｋＤａ、２５００ｋＤａ、２６００ｋＤａ、２７００ｋＤａ、２８００ｋＤａ、２９００ｋＤａ未満、または約３０００ｋＤａ未満でありうる。スイッチは、約１２００ｋＤａ未満でありうる。スイッチは、約１５００ｋＤａ未満でありうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、約２０００ｋＤａ未満でありうる。
【０１０３】
ＴＩＤに部位特異的な様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントは、ＴＩＤにランダムな様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントと少なくとも同等でありうる。ＴＩＤに部位特異的な様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントは、ＴＩＤにランダムな様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントを超えうる。ＴＩＤに部位特異的な様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントは、ＴＩＤにランダムな様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントを、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％超えうる。ＴＩＤに部位特異的な様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントは、ＴＩＤにランダムな様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントを、少なくとも約１０％超えうる。ＴＩＤに部位特異的な様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントは、ＴＩＤにランダムな様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントを、少なくとも約２５％超えうる。ＴＩＤに部位特異的な様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントは、ＴＩＤにランダムな様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントを、少なくとも約５０％超えうる。ＴＩＤに部位特異的な様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントは、ＴＩＤにランダムな様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントを、少なくとも約７５％超えうる。ＴＩＤに部位特異的な様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントは、ＴＩＤにランダムな様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントを、少なくとも約８５％超えうる。ＴＩＤに部位特異的な様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントは、ＴＩＤにランダムな様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントを、少なくとも約９０％超えうる。
【０１０４】
ＴＩＤに部位特異的な様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントは、ＴＩＤにランダムな様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントの少なくとも約１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０倍でありうる。ＴＩＤに部位特異的な様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントは、ＴＩＤにランダムな様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントの少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００倍でありうる。ＴＩＤに部位特異的な様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントは、ＴＩＤにランダムな様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントの少なくとも約２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１０００倍でありうる。ＴＩＤに部位特異的な様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントは、ＴＩＤにランダムな様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントの少なくとも約２倍でありうる。ＴＩＤに部位特異的な様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントは、ＴＩＤにランダムな様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントの少なくとも約３倍でありうる。ＴＩＤに部位特異的な様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントは、ＴＩＤにランダムな様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントの少なくとも約４倍でありうる。ＴＩＤに部位特異的な様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントは、ＴＩＤにランダムな様式で結合しているＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチの細胞傷害性パーセントの少なくとも約５倍でありうる。
【０１０５】
スイッチ中間体
本明細書では、スイッチ中間体（例えば、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ中間体、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ中間体）、このようなスイッチを生成する方法、およびこれらの使用が開示される。一般に、スイッチ中間体は、（ａ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）リンカーとを含む。スイッチ中間体はさらに、１つまたは複数のさらなるＣＡＲ−ＩＤを含みうる。スイッチ中間体はさらに、１つまたは複数のさらなるリンカーを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、１つまたは複数の官能基を含みうる。リンカーは、１つまたは複数の官能基を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチ中間体は、ＣＡＲ−ＩＤスイッチ中間体と称することができる。スイッチ中間体はさらに、１つまたは複数のさらなるＣＡＲ−ＩＤを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＤＯＴＡ、ジニトロフェノール、キノン、ビオチン、アニリン、アトラジン、アニリン誘導体、ｏ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ヒドララジン、ハロタン、ジゴキシゲニン、ベンゼンアルソネート、ラクトース、トリニトロフェノール、ビオチンまたはその誘導体からなる群から選択されうる。ＣＡＲ−ＩＤは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ビオチンを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ジニトロフェノールを含みうる。スイッチ中間体はさらに、１つまたは複数のさらなるリンカーを含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。リンカーはさらに、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも４つのＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも１０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも２０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも３０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アジドを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミノオキシを含みうる。リンカーは、アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカーでありうる。リンカーは、一方の端部に、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールまたは１，２，４−トリアゾールでありうる。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーでありうる。リンカーは、ＴｒｉＡリンカーでありうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに、オキシムライゲーションにより結合させることができる。
【０１０６】
スイッチ中間体は、（ａ）低分子を含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）であって、ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体と相互作用するＣＡＲ−ＩＤと、（ｂ）ＣＡＲ−ＩＤに接続されたリンカーであって、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、および／またはシクロオクチン基を含むリンカーとを含みうる。スイッチ中間体はさらに、１つまたは複数のさらなるＣＡＲ−ＩＤを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＤＯＴＡ、ジニトロフェノール、キノン、ビオチン、アニリン、アトラジン、アニリン誘導体、ｏ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ヒドララジン、ハロタン、ジゴキシゲニン、ベンゼンアルソネート、ラクトース、トリニトロフェノール、ビオチンまたはその誘導体からなる群から選択することができる。ＣＡＲ−ＩＤは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ビオチンを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ジニトロフェノールを含みうる。スイッチ中間体はさらに、１つまたは複数のさらなるリンカーを含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。リンカーはさらに、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも４つのＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも１０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも２０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも３０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アジドを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミノオキシを含みうる。リンカーは、アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカーでありうる。リンカーは、一方の端部に、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに、オキシムライゲーションにより結合させることができる。
【０１０７】
代替的に、または加えて、スイッチ中間体は、（ａ）標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）と、（ｂ）リンカーとを含みうる。スイッチ中間体はさらに、１つまたは複数のさらなるＴＩＤを含みうる。スイッチ中間体はさらに、１つまたは複数のさらなるリンカーを含みうる。ＴＩＤは、１つまたは複数の官能基を含みうる。リンカーは、１つまたは複数の官能基を含みうる。ＴＩＤを含むスイッチ中間体は、ＴＩＤスイッチ中間体と称することができる。スイッチ中間体はさらに、１つまたは複数のさらなるＴＩＤを含みうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、葉酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、抗体または抗体断片に基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択されうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体でありうる。抗体は、抗ＥＧＦＲ抗体でありうる。抗体は、抗ＣＤ２０抗体でありうる。抗体は、抗ＨＥＲ２抗体でありうる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。抗体は、配列番号１０〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含みうる。抗体は、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つに基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。スイッチ中間体はさらに、１つまたは複数のさらなるリンカーを含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、シクロオクチン基、またはこれらの組合せを含みうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも４つのＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも１０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも２０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも３０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アジドを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミノオキシを含みうる。リンカーは、アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカーでありうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールまたは１，２，４−トリアゾールでありうる。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーでありうる。リンカーは、ＴｒｉＡリンカーでありうる。リンカーは、ＴＩＤに、オキシムライゲーションにより結合させることができる。
【０１０８】
スイッチ中間体は、（ａ）ポリペプチドまたは低分子を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）であって、標的細胞上の表面分子と相互作用するＴＩＤと、（ｂ）ＴＩＤに接続されたリンカーであって、１つまたは複数の末端に、アルコキシアミン（またはアミノオキシ）基、アジド基、および／またはシクロオクチン基を含むリンカーとを含みうる。スイッチ中間体はさらに、１つまたは複数のさらなるＴＩＤを含みうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、葉酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、抗体または抗体断片に基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択することができる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体でありうる。抗体は、抗ＥＧＦＲ抗体でありうる。抗体は、抗ＣＤ２０抗体でありうる。抗体は、抗ＨＥＲ２抗体でありうる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。抗体は、配列番号１０〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含みうる。抗体は、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つに基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。スイッチ中間体はさらに、１つまたは複数のさらなるリンカーを含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、シクロオクチン基、またはこれらの組合せを含みうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも４つのＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも１０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも２０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも３０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アジドを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミノオキシを含みうる。リンカーは、アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカーでありうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。
【０１０９】
図１５Ａ〜Ｈは、例示的なスイッチ中間体について描示する。図１５Ａは、ＣＡＲ−ＩＤ（１５０５）およびリンカー（１５１０）を含むスイッチ中間体を示す。図１５Ｂは、ＣＡＲ−ＩＤ（１５０５）およびリンカー（１５２０）を含むスイッチ中間体であって、リンカーが、官能基（１５１５）を含むスイッチ中間体を示す。図１５Ｃは、ＣＡＲ−ＩＤ（１５０５）、第１のリンカー（１５１０）、および第２のリンカー（１５５５）を含むスイッチ中間体を示す。図１５Ｄは、ＣＡＲ−ＩＤ（１５０５）、第１のリンカー（１５２０）、および第２のリンカー（１５５５）を含むスイッチ中間体であって、第１のリンカー（１５２０）が、官能基（１５１５）を含むスイッチ中間体を示す。図１５Ｅは、ＴＩＤ（１５３５）およびリンカー（１５４０）を含むスイッチ中間体を示す。図１５Ｆは、ＴＩＤ（１５３５）およびリンカー（１５５０）を含むスイッチ中間体であって、リンカーが、官能基（１５４５）を含むスイッチ中間体を示す。図１５Ｇは、ＴＩＤ（１５３５）、第１のリンカー（１５４０）、および第２のリンカー（１５６０）を含むスイッチ中間体を示す。図１５Ｈは、ＴＩＤ（１５３５）、第１のリンカー（１５５０）、および第２のリンカー（１５６０）を含むスイッチ中間体であって、第１のリンカー（１５５０）が、官能基（１５４５）を含むスイッチ中間体を示す。
【０１１０】
スイッチ中間体は、式ＩＩＩＡ：Ｌ１−Ｙまたは式ＩＩＩ：Ｙ−Ｌ１（式中、Ｙは、ＰＳＭＡと少なくとも５０％相同な表面分子と相互作用するＴＩＤを含み、Ｌ１は、リンカーを含む）の化合物を含みうる。スイッチ中間体は、式ＩＩＩＡ：Ｌ１−Ｙまたは式ＩＩＩ：Ｙ−Ｌ１（式中、Ｙは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸を含み、Ｌ１は、リンカーを含む）の化合物を含みうる。ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも５０％、５５％、５７％、６０％、６２％、６５％、６７％、７０％、７２％、７５％、７７％、８０％、８２％、８５％、８７％、９０％、９２％、９５％、９７％、または約１００％相同な表面分子と相互作用しうる。ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも７０％相同な表面分子と相互作用しうる。ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも８０％相同な表面分子と相互作用しうる。ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも９０％相同な表面分子と相互作用しうる。ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも９５％相同な表面分子と相互作用しうる。
【０１１１】
非限定的な例によれば、スイッチ中間体は、式ＶＩ、式ＶＩＩ、式ＶＩＩＩ、および式ＩＸ：
【化２０】
0006637415.tif 000021
の化合物から選択される化合物を含みうる。非限定的な例によれば、スイッチ中間体は、式ＶＩ、式ＶＩＩ、式ＶＩＩＩ、および式ＩＸの化合物の誘導体、類似体、異性体、再配列体（rearrangement）、または修飾体（modification）から選択される化合物を含みうる。
【０１１２】
スイッチ中間体は、式Ｘ：
【化２１】
0006637415.tif 000022
の化合物を含みうる。
【０１１３】
スイッチ中間体は、式ＸＩ：
【化２２】
0006637415.tif 000023
の化合物を含みうる。
【０１１４】
スイッチ中間体は、式ＸＩＩ：
【化２３】
0006637415.tif 000024
の化合物を含みうる。
【０１１５】
非限定的な例によれば、スイッチ中間体は、式Ｘ、式ＸＩ、および式ＸＩＩ：
【化２４】
0006637415.tif 000025
の化合物の誘導体、類似体、異性体、再配列体、または修飾体から選択される化合物を含みうる。
【０１１６】
本明細書ではさらに、式ＸＩＩＩ：
Ａ−Ｌ−Ｂ  （式ＸＩＩＩ）
［式中、
Ａは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸誘導体または２−（４−（（２−アミノ−４−オキソ３，４−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチルアミノ）ベンズアミド）ペンタン二酸（葉酸）誘導体であり、
Ｌは、結合またはリンカーであり、
Ｂは、フルオレセイン誘導体またはビオチン誘導体である］
のＣＡＲ−ＥＣスイッチが開示される。
【０１１７】
一部の実施形態では、式ＸＩＩＩ（Ａ−Ｌ−Ｂ）のＡは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸誘導体である。２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸誘導体は、式ＸＩＶ：
【化２５】
0006637415.tif 000026
［式中、
Ｑは、
【化２６】
0006637415.tif 000027
からなる群から選択され；
Ｅは、
【化２７】
0006637415.tif 000028
からなる群から選択され；
Ｘは、Ｃ１〜Ｃ５アルキレンまたはＣ１〜Ｃ４アルキレン（Ｃ＝Ｏ）−であり、
各Ｒ１は、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはＣ１〜Ｃ４ハロアルキルから選択される］
の誘導体でありうる。
２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸誘導体は、式ＸＩＶａ：
【化２８】
0006637415.tif 000029
の誘導体でありうる。
２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸誘導体は、式ＩＩｂ：
【化２９】
0006637415.tif 000030
の２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸誘導体でありうる。
２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸誘導体は、式ＸＩＶｃ：
【化３０】
0006637415.tif 000031
の誘導体でありうる。
２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸誘導体は、式ＸＩＶｄ：
【化３１】
0006637415.tif 000032
の誘導体でありうる。
【０１１８】
一部の実施形態では、式ＸＩＩＩ（Ａ−Ｌ−Ｂ）のＡは、葉酸誘導体である。葉酸誘導体は、
【化３２】
0006637415.tif 000033
［式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはＣ１〜Ｃ４ハロアルキルであり、
各Ｒ３は、独立に、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、およびＣ１〜Ｃ４アルコキシから選択される］
からなる群から選択することができる。葉酸誘導体は、
【化３３】
0006637415.tif 000034
でありうる。葉酸誘導体は、
【化３４】
0006637415.tif 000035
でありうる。
【０１１９】
一部の実施形態では、式ＸＩＩＩ（Ａ−Ｌ−Ｂ）のＢは、フルオレセイン誘導体である。フルオレセイン誘導体は、式ＸＶおよび式ＸＶＩ：
【化３５】
0006637415.tif 000036
［式中、
Ｒ２は、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｒ１）または−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２であり、
各Ｒａは、独立に、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択されるか、または
２つのＲａは、併せて、任意選択で置換されたヘテロシクリル環を形成し、
各Ｒ３は、独立に、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、およびＣ１〜Ｃ４アルコキシから選択され、
ｐは、０〜３であり、
Ｒ４は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１〜Ｃ４アルキル、または−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ１であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはＣ１〜Ｃ４ハロアルキルである］
から選択することができる。
式ＸＶのフルオレセイン誘導体は、式ＸＶａ：
【化３６】
0006637415.tif 000037
の誘導体でありうる。
式ＸＶＩのフルオレセイン誘導体は、式ＸＶＩａ：
【化３７】
0006637415.tif 000038
の誘導体でありうる。
【０１２０】
式ＸＩＩＩ（Ａ−Ｌ−Ｂ）のＢは、ビオチン誘導体でありうる。ビオチン誘導体は、
【化３８】
0006637415.tif 000039
からなる群から選択することができる。
【０１２１】
式ＸＩＩＩ（Ａ−Ｌ−Ｂ）のＬは、リンカーでありうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。リンカーは、アリールまたはヘテロアリールを含みうる。リンカーは、アリールを含みうる。アリールは、フェニルでありうる。フェニルは、二置換フェニルでありうる。二置換フェニルは、１，４−二置換フェニルでありうる。二置換フェニルは、１，３−二置換フェニルでありうる。フェニルは、三置換フェニルでありうる。フェニルは、四置換フェニルでありうる。置換フェニルの置換基の２つは、ＮＯ２でありうる。場合によって、リンカーは、ベンジル置換基を含まない。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、２つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、３つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、４つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、５つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、６つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、７つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、８つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、９つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、１０個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、１１個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、１２個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、１３個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、１４個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミドを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミドを含むことが可能であり、他方の端部に、アミンを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミドを含むことが可能であり、他方の端部に、トリアゾールを含みうる。
【０１２２】
リンカーは、
【化３９】
0006637415.tif 000040
【化４０】
0006637415.tif 000041
からなる群から選択することができる。
【０１２３】
式ＸＩＩＩ（Ａ−Ｌ−Ｂ）は、式ＸＩＩＩａ：
【化４１】
0006637415.tif 000042
のものでありうる。
式ＸＩＩＩａのＡは、
【化４２】
0006637415.tif 000043
でありうる。
【０１２４】
式ＸＩＩＩは、式ＸＩＩＩｂ：
【化４３】
0006637415.tif 000044
のものでありうる。
Ａは、
【化４４】
0006637415.tif 000045
でありうる。
【０１２５】
式ＸＩＩＩのＣＡＲ−ＥＣスイッチについての一部の実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、
【化４５】
0006637415.tif 000046
である。
式ＸＩＩＩのＣＡＲ−ＥＣスイッチについての他の実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、
【化４６】
0006637415.tif 000047
である。
【０１２６】
キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）
本明細書で開示されるスイッチは、１つまたは複数のキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を含みうる。本明細書で開示されるスイッチは、２つまたはこれを超えるキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を含みうる。本明細書で開示されるスイッチは、３つまたはこれを超えるキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を含みうる。本明細書で開示されるスイッチは、４つまたはこれを超えるキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を含みうる。本明細書で開示されるスイッチは、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、またはこれを超えるキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＩＤは、同じでありうる。３つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＩＤの少なくとも２つは、同じでありうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＩＤは、異なりうる。３つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＩＤの少なくとも２つは、異なりうる。ＣＡＲ−ＩＤの数は、安全性および有効性について最適化することができる。例えば、ＴＩＤ当たり１つまたは２つのＣＡＲ−ＩＤは、効率的なＣＡＲ−Ｔの活性化をもたらしうるが、ＴＩＤ当たり３つまたは４つのＣＡＲ−ＩＤは、ＣＡＲ−Ｔの非特異的活性化を結果としてもたらしうる。
【０１２７】
本明細書で開示されるスイッチ中間体は、１つまたは複数のキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を含みうる。本明細書で開示されるスイッチ中間体は、２つまたはこれを超えるキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を含みうる。本明細書で開示されるスイッチ中間体は、３つまたはこれを超えるキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を含みうる。本明細書で開示されるスイッチ中間体は、４つまたはこれを超えるキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を含みうる。本明細書で開示されるスイッチ中間体は、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、またはこれを超えるキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＩＤは、同じでありうる。３つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＩＤの少なくとも２つは、同じでありうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＩＤは、異なりうる。３つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＩＤの少なくとも２つは、異なりうる。
【０１２８】
ＣＡＲ−ＩＤは、天然に存在する分子でありうる。例えば、ＣＡＲ−ＩＤは、内因性タンパク質に基づきうるか、またはこれに由来しうる。代替的に、ＣＡＲ−ＩＤは、野生型バージョンのタンパク質を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、人工分子または合成分子でありうる。例えば、ＣＡＲ−ＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含むタンパク質を含みうる。代替的に、ＣＡＲ−ＩＤは、天然に存在しない野生型タンパク質の修飾形を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）に結合させない場合、細胞膜を越える可能性がありうる。場合によって、ＣＡＲ−ＩＤの少なくとも一部は、遺伝子によりコードされない。ＣＡＲ−ＩＤの少なくとも一部は、合成でありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、天然に存在しないポリペプチドを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、有機分子でありうる。ＣＡＲ−ＢＣは、無機分子でありうる。
【０１２９】
ＣＡＲ−ＩＤは、低分子でありうる。低分子は、有機化合物でありうる。低分子のサイズは、約１０−８ｍ、約１０−９ｍ、約１０−１０ｍのオーダーのサイズでありうる。低分子のサイズは、約１０−７ｍ未満のサイズでありうる。低分子のサイズは、約１０−８ｍ未満のサイズでありうる。低分子のサイズは、約１０−９ｍ未満のサイズでありうる。低分子のサイズは、約１０−１０ｍ未満のサイズでありうる。低分子のサイズは、約１０−１１ｍ未満のサイズでありうる。
【０１３０】
低分子の質量は、約５０００ｋＤａ未満、約４５００ｋＤａ未満、約４０００ｋＤａ未満、約３５００ｋＤａ未満、約３０００ｋＤａ未満、約２５００ｋＤａ未満、約２０００ｋＤａ未満、約１５００ｋＤａ未満、約１０００ｋＤａ未満、約９００ｋＤａ未満、約５００ｋＤａ未満、または約１００ｋＤａ未満でありうる。
【０１３１】
場合によって、低分子は、ポリペプチドを含まない。場合によって、低分子は、アミド結合により連結された、２つまたはこれを超えるアミノ酸を含む。低分子は、化学化合物でありうる。
【０１３２】
ＣＡＲ−ＩＤは、ハプテンを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、タンパク質、抗体、または抗体断片など、大型の担体分子に結合させると、免疫応答を誘導しうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣまたはその誘導体でありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＤＯＴＡ、ジニトロフェノール、キノン、ビオチン、アニリン、アトラジン、アニリン誘導体、ｏ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ヒドララジン、ハロタン、ジゴキシゲニン、ベンゼンアルソネート、ラクトース、トリニトロフェノール、ビオチンまたはその誘導体から選択することができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ペニシリン薬またはこれらの誘導体でありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、キノンまたはこれらの誘導体でありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＤＯＴＡまたはこれらの誘導体でありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ジニトロフェノールまたはこれらの誘導体でありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ビオチンまたはその誘導体でありうる。
【０１３３】
代替的に、ＣＡＲ−ＩＤは、ハプテンを含まない。ＣＡＲ−ＩＤは、ステロイド、ビタミン、ビタマー、代謝物、抗生物質、単糖、二糖、脂質、脂肪酸、核酸、アルカロイド、グリコシド、フェンジン（phenzine）、ポリケチド、テルペン、およびテトラピロール、ならびにこれらの部分から選択することができる。
【０１３４】
標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）
本明細書で開示されるスイッチは、１つまたは複数の標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含みうる。本明細書で開示されるスイッチは、２つまたはこれを超える標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含みうる。本明細書で開示されるスイッチは、３つまたはこれを超える標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含みうる。本明細書で開示されるスイッチは、４つまたはこれを超える標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含みうる。本明細書で開示されるスイッチは、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、またはこれを超える標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含みうる。２つまたはこれを超えるＴＩＤは、同じでありうる。３つまたはこれを超えるＴＩＤの少なくとも２つは、同じでありうる。２つまたはこれを超えるＴＩＤは、異なりうる。３つまたはこれを超えるＴＩＤの少なくとも２つは、異なりうる。
【０１３５】
本明細書で開示されるスイッチ中間体は、１つまたは複数の標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含みうる。本明細書で開示されるスイッチ中間体は、２つまたはこれを超える標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含みうる。本明細書で開示されるスイッチ中間体は、３つまたはこれを超える標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含みうる。本明細書で開示されるスイッチ中間体は、４つまたはこれを超える標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含みうる。本明細書で開示されるスイッチ中間体は、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、またはこれを超える標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含みうる。２つまたはこれを超えるＴＩＤは、同じでありうる。３つまたはこれを超えるＴＩＤの少なくとも２つは、同じでありうる。２つまたはこれを超えるＴＩＤは、異なりうる。３つまたはこれを超えるＴＩＤの少なくとも２つは、異なりうる。
【０１３６】
一般に、ＴＩＤは、標的上の分子または標的に由来する分子と相互作用する。非限定的な例によれば、ＴＩＤは、低分子、リガンド、受容体アゴニスト、受容体アンタゴニスト、酵素阻害剤、ＤＮＡアプタマー、ＰＮＡアプタマー、ビタミン、基質および基質類似体から選択することができる。場合によって、ＴＩＤは、抗体または抗体断片を含まない。
【０１３７】
ＴＩＤは、ビタミンまたはその誘導体を含みうる。非限定的な例によれば、ビタミンは、ビタミンＡ、ビタミンＢ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、およびビタミンＫから選択することができる。ビタミンは、ビタミンＣでありうる。ビタミンは、ビタミンＤでありうる。ビタミンは、葉酸またはその誘導体を含みうる。ビタミンは、葉酸またはその誘導体でありうる。ＴＩＤは、葉酸でありうる。ＴＩＤは、ビタマーを含みうる。ＴＩＤは、ビタミン代謝物またはビタミン前駆体を含みうる。非限定的な例によれば、ビタマーは、レチノール、レチナール、ベータカロテン、カロテノイド、チアミン、リボフラビン、ナイアシン、ナイアシンアミド、パントテン酸、ピリドキシン、ピリドキサミン、ピリドキサール（pyridozl）、ビオチン、葉酸（folic  acid）、フォリン酸、シアノコバラミン、ヒドロキシコバラミン、メチルコバラミン、アスコルビン酸、コレカルシフェロール、エルゴカルシフェロール、トコフェロール、トコトリエノール、フィロキノン、およびメナキノンまたはこれらの誘導体から選択することができる。ＴＩＤは、抗酸化剤またはその誘導体を含みうる。
【０１３８】
ＴＩＤは、酵素阻害剤でありうる。非限定的な例によれば、ＴＩＤは、チロシンキナーゼ阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、成長因子受容体阻害剤、ホルモン受容体阻害剤、ｊａｎｕｓキナーゼ阻害剤、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｂｒａｆ阻害剤、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、および熱ショックタンパク質阻害剤から選択することができる。酵素阻害剤は、アパチニブ、ボルテゾミブ、イマチニブ、イブルチニブ、セリシクリブ、ボスチニブ、カボザンチニブ、クリゾチニブ、ダブラフェニブ、ダサチニブ、ドキソルビシン、エルロチニブ、エベロリムス、ゲフィチニブ、イマチニブ、イニパリブ、ラパチニブ、ＬＥＥ０１１、ＬＧＸ８１８、ミロチニブ、オバトクラックス、オラパリブ、パゾパニブ、ＰＤ−０３３２９９１、ペリフォシン、ポナチニブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、サリノマイシン、ソラフェニブ（sorafebnib）、スニチニブ、タモキシフェン、テムシロリムス、トファシチニブ、トラメチニブ、バンデタニブ、およびベムラフェニブ、またはこれらの誘導体から選択することができる。
【０１３９】
ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸（2-[3-(1,3-dicarboxypropy)ureidol]pentanedioic  acid）またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、腫瘍に侵入するのに十分な程度に小型でありうる。
【０１４０】
ＴＩＤは、ポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、ポリペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、合成ポリペプチドを含みうる。合成ポリペプチドとは、遺伝子によりコードされないポリペプチドを指す場合がある。ＴＩＤは、天然に存在するポリペプチドを含みうる。天然に存在するポリペプチドとは、遺伝子によりコードされるポリペプチドを指す場合がある。ポリペプチドは、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、または約９０、またはこれを超えるアミノ酸を含みうる。
【０１４１】
ＴＩＤは、１０マーのペプチドホルモンである黄体形成ホルモン放出ホルモン、ボンベシン、ゴナドトロピン放出ホルモン、ペンタガストリン、ｃＲＧＤ、オクトレオチド、オクトレオテート、およびこれらの類似体から選択することができる。ＴＩＤは、ゴナドトロピン放出ホルモン受容体、前立腺特異的膜抗原、ｃ型レクチン様分子、葉酸受容体、コレシストキニンＢ受容体、ソマトスタチン受容体、αｖβ３インテグリン、ガストリン放出ペプチド受容体、ニューロキニン受容体、メラノコルチン受容体、ニューロテンシン（neurotenin）受容体、黄体形成ホルモン放出ホルモン受容体、および神経ペプチド受容体と少なくとも５０％相同な標的に結合しうる。
【０１４２】
ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に基づくか、またはこれに由来するアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列と少なくとも６０％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含みうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含みうる。
【０１４３】
ＴＩＤは、コレシストキニンＢ受容体アゴニストを含みうる。ＴＩＤは、コレシストキニンＢ受容体アンタゴニスト（例えば、ＣＣＫ２アンタゴニスト）を含みうる。非限定的な例として述べると、ＴＩＤは、図７に描示されるコレシストキニンＢ受容体アンタゴニストを含みうる。
【０１４４】
ＴＩＤは、抗体または抗体断片に基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。本明細書で使用される「抗体断片」という用語は、全長形態以外の、抗体の任意の形態を指す。本明細書の抗体断片は、全長抗体内に存在する小型の構成要素である抗体、および操作された抗体を含む。抗体断片は、Ｆｖ、Ｆｃ、Ｆａｂ、および（Ｆａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディー、トリアボディー、テトラボディー、二官能性ハイブリッド抗体、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、ＣＤＲの組合せ、可変領域、フレームワーク領域、定常領域、重鎖、軽鎖、選択的な足場非抗体分子（alternative  scaffold  non-antibody  molecule）、および二重特異性抗体を含むがこれらに限定されない。そうでないことが具体的に言及されない限りにおいて、「抗体（antibody）」または「抗体（antibodies）」という用語を使用する言明および特許請求の範囲は具体的に、「抗体断片（antibody  fragment）」および抗体断片（antibody  fragments）を含みうる。
【０１４５】
ＴＩＤは、Ｆｖ、Ｆｃ、Ｆａｂ、および（Ｆａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディー、トリアボディー、テトラボディー、二官能性ハイブリッド抗体、モノクローナル溶解ＴＣＲ（monoclonal  solution  TCR）、相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、ＣＤＲの組合せ、可変領域、フレームワーク領域、定常領域、重鎖、軽鎖、選択的な足場非抗体分子、および二重特異性抗体から選択されうる抗体または抗体断片を含みうる。ポリペプチドは、免疫グロブリンでありうる。ポリペプチドは、Ｆａｂでありうる。ＴＩＤは、モノクローナルＴＣＲでありうる。
【０１４６】
ＴＩＤは、ヒト抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、ヒト操作抗体、非ヒト抗体、および／またはキメラ抗体でありうる。非ヒト抗体は、親の非ヒト親抗体の特異性およびアフィニティーを保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減するように、ヒト化することができる。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ（またはそれらの部分）が非ヒト抗体配列に由来し、ＦＲ（またはそれらの部分）がヒト抗体配列に由来する、１つまたは複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、任意選択で、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。一部の実施形態では、例えば、抗体の特異性またはアフィニティーを回復または改善するように、ヒト化抗体内の一部のＦＲ残基を、非ヒト抗体（例えば、ＣＤＲ残基が由来する抗体）に由来する、対応する残基で置換する。
【０１４７】
ＴＩＤは、キメラ抗体に基づきうるか、またはこれに由来しうる。キメラ抗体とは、元は別個の抗体をコードした、２つまたはこれを超える抗体遺伝子をつなぐことにより創出される抗体を指す場合がある。キメラ抗体は、第１の抗体に由来する少なくとも１つのアミノ酸と、第２の抗体に由来する少なくとも１つのアミノ酸とを含むことが可能であり、ここで、第１の抗体と第２の抗体とは異なる。抗体または抗体断片の少なくとも一部は、ウシ種、ヒト種、またはネズミ種に由来しうる。抗体または抗体断片の少なくとも一部は、ラット、ヤギ、モルモット、またはウサギに由来しうる。抗体または抗体断片の少なくとも一部は、ヒトに由来しうる。抗体または抗体断片の少なくとも一部は、カニクイザルに由来しうる。
【０１４８】
ＴＩＤは、哺乳動物、鳥類、魚類、両生類、および爬虫類に由来する抗体または抗体断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。哺乳動物は、肉食動物、齧歯類、ゾウ、有袋類、ウサギ、コウモリ、霊長類、アザラシ、アリクイ、クジラ目動物、奇蹄目動物、および偶蹄目動物を含むがこれらに限定されない。哺乳動物は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウシ、ウマ、ヤギ、またはブタでありうる。
【０１４９】
ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、抗ＣＤ３３抗体、および抗ＣＥＡ抗体からなる群から選択される抗体または抗体断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体またはその断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗Ｈｅｒ２抗体またはその断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＥＧＦＲ抗体またはその断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体またはその断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２２抗体またはその断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＳ１抗体またはその断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＬＬ−１抗体またはその断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ３３抗体またはその断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＴＩＤは、抗ＣＥＡ抗体またはその断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。
【０１５０】
ＴＩＤは、免疫グロブリン（Ｉｇ）に基づきうるか、またはこれに由来しうる。免疫グロブリンは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、これらの断片またはこれらの修飾形から選択することができる。免疫グロブリンは、ＩｇＧでありうる。ＩｇＧは、ＩｇＧ１でありうる。ＩｇＧは、ＩｇＧ２でありうる。ＩｇＧは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）の結合を低減するために、１つまたは複数のＦｃ変異を有しうる。Ｆｃ変異は、ＩｇＧの重鎖内のＦｃ変異でありうる。ＩｇＧ１内のＦｃ変異は、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａでありうる。ＩｇＧ１内のＦｃ変異は、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ｅでありうる。ＩｇＧ１内のＦｃ変異は、Ｎ２９７Ａでありうる。ＩｇＧ２内のＦｃ変異は、Ｖ２３４ＡおよびＶ２３７Ａでありうる。ＴＩＤは、Ｆｃヌル免疫グロブリンまたはその断片を含みうる。
【０１５１】
ＴＩＤは、アドゥ−トラスツズマブエムタンシン、アレムツズマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ゲムツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、イブリツモマブチウキセタン、もしくはパニツムマブ、またはこれらの断片からなる群から選択される抗体を含みうる。場合によって、ＴＩＤは、セツキシマブを含まない。ＴＩＤは、アービタックスまたはこれらの断片でありうる。ＴＩＤは、アービタックスでありえない。ＴＩＤは、リツキシマブまたはこれらの断片でありうる。ＴＩＤは、リツキシマブでありえない。ＴＩＤは、トラスツズマブまたはこれらの断片でありうる。ＴＩＤは、トラスツズマブでありえない。
【０１５２】
ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体またはその断片でありうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２２抗体またはその断片でありうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体またはその断片でありえない。ＴＩＤは、非限定的な例によれば、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ−１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ２０、ＢＣＭＡ、ＣＳ１またはこれらの断片から選択される抗原を標的化しうる。抗原は、野生型抗原を含みうる。抗原は、１つまたは複数の変異を含みうる。
【０１５３】
ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体またはその断片を含みうる。抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号１６または相同なアミノ酸配列を含みうる。アミノ酸配列は、配列番号１６と約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、または約２％相同でありうる。抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖は、配列番号１７または相同なアミノ酸配列を含みうる。アミノ酸配列は、配列番号１７と約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、または約２％相同でありうる。
【０１５４】
ＴＩＤは、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片でありうる。ＴＩＤは、抗ＣＳ１抗体またはその断片でありうる。ＴＩＤは、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体またはその断片でありうる。ＴＩＤは、抗Ｈｅｒ２抗体またはその断片でありうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ２０抗体または抗体断片を含みうる。ＴＩＤは、抗ＣＥＡ抗体または抗体断片を含みうる。ＴＩＤは、抗ＥＧＦＲ抗体または抗体断片を含みうる。ＴＩＤは、抗ＣＥＡ抗体または抗体断片を含みうる。ＴＩＤは、抗ＣＬＬ−１抗体または抗体断片を含みうる。ＴＩＤは、抗ＣＤ３３抗体または抗体断片を含みうる。ＴＩＤは、トラスツズマブまたはその断片を含みうる。ＴＩＤは、セツキシマブまたはその断片を含みえない。ＴＩＤは、トラスツズマブまたはその断片を含みえない。ＴＩＤは、リツキシマブまたはその断片を含みえない。ＴＩＤは、ＥｐＣＡＭまたはその断片に対する抗体を含みえない。ＴＩＤは、配列番号５〜９から選択されるヌクレオチドまたはアミノ酸配列によりコードされる抗体または抗体断片であって、非天然アミノ酸が、抗体または抗体断片の任意のアミノ酸と置き換わりうる抗体または抗体断片でありうる。
【０１５５】
ＴＩＤは、低分子でありうる。低分子は、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸でありうる。低分子は、葉酸でありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣまたはその誘導体でありうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチはさらに、第２のＴＩＤを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つを超えるＴＩＤを含みうる。
【０１５６】
ＴＩＤは、プロテインＡ、リポカリン、フィブロネクチンドメイン、アンキリンコンセンサスリピートドメイン、およびチオレドキシンからなる群から選択されるポリペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。
【０１５７】
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。１つまたは複数のＣＡＲ−ＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。１つまたは複数のＴＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。１つまたは複数のリンカーは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤの、ＴＩＤへの結合は、１つまたは複数の非天然アミノ酸を介して起こりうる。１つまたは複数のリンカーは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を介して１つまたは複数のＣＡＲ−ＩＤを１つまたは複数のＴＩＤに部位特異的に連結することができる。代替的に、または加えて、１つまたは複数のリンカーは、１つまたは複数のＴＩＤを、１つまたは複数のＴＩＤに、部位特異的に連結することができるが、ここで、１つまたは複数のＴＩＤを、１つまたは複数のＴＩＤに連結するのに、非天然アミノ酸は要求されない。ＴＩＤは、ＴＩＤ上の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはこれを超える非天然アミノ酸に連結することができる。ＴＩＤは、ＴＩＤ上の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはこれを超える非天然アミノ酸に、部位特異的に連結することができる。代替的に、ＴＩＤは、ＴＩＤ上の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはこれを超える非天然アミノ酸に連結することができる。ＴＩＤは、ＴＩＤ上の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはこれを超える非天然アミノ酸に、部位特異的に連結することができる。
【０１５８】
キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）は、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、またはこれを超える非天然アミノ酸を含みうる。ＴＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。本明細書で開示されるターゲティング抗体またはターゲティング抗体断片は、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、またはこれを超える非天然アミノ酸を含みうる。非天然アミノ酸は、リンカーと反応して、化学結合を作製しうる。
【０１５９】
１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤ内の２つの天然に存在するアミノ酸の間に挿入することができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤ内の１つまたは複数の天然に存在するアミノ酸と置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤのＮ末端に組み込むことができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤのＣ末端に組み込むことができる。非天然アミノ酸は、標的上の分子または標的に由来する分子と相互作用するＴＩＤの領域に対して遠位に組み込むことができる。非天然アミノ酸は、標的上の分子または標的に由来する分子と相互作用するＴＩＤの領域の近傍に組み込むことができる。非天然アミノ酸は、標的上の分子または標的に由来する分子と相互作用するＴＩＤの領域内に組み込むことができる。
【０１６０】
１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤ内の１つまたは複数のアミノ酸と置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤ内の任意の天然アミノ酸と置き換わることができる。
【０１６１】
１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの軽鎖内に組み込むことができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの重鎖内に組み込むことができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの重鎖および軽鎖内に組み込むことができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの軽鎖内のアミノ酸と置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの重鎖内のアミノ酸と置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの重鎖内および軽鎖内のアミノ酸と置き換わることができる。
【０１６２】
１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの軽鎖のアラニンと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの軽鎖のシステインと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの軽鎖のセリンと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの軽鎖のリシンと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの軽鎖のアスパラギンと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの軽鎖のトレオニンと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの重鎖のアラニンと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの重鎖のシステインと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの重鎖のセリンと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの重鎖のリシンと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの重鎖のアスパラギンと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの重鎖のトレオニンと置き換わることができる。
【０１６３】
１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの軽鎖のＳｅｒ２０２と置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの重鎖のＬｙｓ１３６と置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの重鎖のＡｌａ１２３と置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの軽鎖のＳｅｒ２０２および重鎖のＬｙｓ１３６と置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来する免疫グロブリンの軽鎖のＴｈｒ１０９と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、ポリペプチドがそれに基づくかまたはそれに由来する抗体の軽鎖のアミノ酸と置き換わることができる。例えば、非天然アミノ酸は、抗体軽鎖のセリン残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖またはその相同体のセリン２０２と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖のグリシン残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖またはその相同体のグリシン６８と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖のトレオニン残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖またはその相同体のトレオニン１０９と置き換わることができる。ポリペプチドは、抗体の重鎖に基づきうるか、またはこれに由来しうる。非天然アミノ酸は、抗体重鎖のリシン残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体重鎖またはその相同体のリシン１３６と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体重鎖のアラニン残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体重鎖またはその相同体のアラニン１２３と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体重鎖のセリン残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体重鎖またはその相同体のセリン７４と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖のアミノ酸残基および抗体重鎖のアミノ酸残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖のグリシン残基および抗体重鎖のアミノ酸と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖のグリシン残基および抗体重鎖のセリン残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体重鎖のセリン残基および抗体軽鎖のアミノ酸残基と置き換わることができる。抗体軽鎖のグリシン残基は、グリシン６８またはその相同体でありうる。抗体重鎖のセリン残基は、セリン７４またはその相同体でありうる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖のセリン残基および抗体重鎖のアミノ酸と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体軽鎖のセリン残基および抗体重鎖のリシン残基と置き換わることができる。非天然アミノ酸は、抗体重鎖のリシン残基および抗体軽鎖のアミノ酸残基と置き換わることができる。抗体軽鎖のセリン残基は、セリン２０２またはその相同体でありうる。抗体重鎖のセリン残基は、リシン１３６またはその相同体でありうる。
【０１６４】
１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤのアミノ酸と置き換わることができ、ここで、ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体またはその断片である。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖の任意のセリンと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖の任意のリシンと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖の任意のアスパラギンと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖の任意のトレオニンと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖の任意のセリンと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖の任意のリシンと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖の任意のアスパラギンと置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖の任意のトレオニンと置き換わることができる。抗体または抗体断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片であることが可能であり、ここで、１つまたは複数の非天然アミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖の１つまたは複数のアミノ酸と置き換わることができる。抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号１６を含みうる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、配列番号１６の１つまたは複数のアミノ酸と置き換わることができる。配列番号１６の１つまたは複数のアミノ酸は、Ｇ６８、Ｋ１０７、Ｔ１０９、Ｅ１５２、Ｓ１５６、Ｋ１６９、およびＳ２０２を含む群から選択することができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖の１つまたは複数のアミノ酸と置き換わることができる。抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖は、配列番号１７を含みうる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、配列番号１７の１つまたは複数のアミノ酸と置き換わることができる。配列番号１７の１つまたは複数のアミノ酸は、Ｓ７４、Ａ１２１、およびＫ１３６からなる群から選択することができる。
【０１６５】
１つまたは複数の非天然アミノ酸は、２０個の天然アミノ酸の１つをコードしないコドンによりコードされうる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ナンセンスコドン（終止コドン）によりコードされうる。終止コドンは、アンバーコドン（amber  codon）でありうる。アンバーコドンは、ＵＡＧ配列を含みうる。終止コドンは、オーカーコドンでありうる。オーカーコドンは、ＵＡＡ配列を含みうる。終止コドンは、オパールコドンまたはアンバーコドン（umber  codon）でありうる。オパールコドンまたはアンバーコドン（umber  codon）は、ＵＧＡ配列を含みうる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、４塩基コドンによりコードされうる。
【０１６６】
１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦまたはｐＡｃＰｈｅ）でありうる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、セレノシステインでありうる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ｐ−フルオロフェニルアラニン（ｐＦＰｈｅ）でありうる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ｐ−アジドフェニルアラニン（ｐＡｚＦ）、ｐ−アジドメチルフェニルアラニン（ｐＡｚＣＨ２Ｆ）、ｐ−ベンゾイルフェニルアラニン（ｐＢｐＦ）、ｐ−プロパルギルオキシフェニルアラニン（ｐＰｒＦ）、ｐ−ヨードフェニルアラニン（ｐＩＦ）、ｐ−シアノフェニルアラニン（ｐＣＮＦ）、ｐ−カルボキシルメチルフェニルアラニン（ｐＣｍＦ）、３−（２−ナフチル）アラニン（ＮａｐＡ）、ｐ−ボロノフェニルアラニン（ｐＢｏＦ）、ｏ−ニトロフェニルアラニン（ｏＮｉＦ）、（８−ヒドロキシキノリン−３−イル）アラニン（ＨＱＡ）、セレノシステイン、および（２，２’−ビピリジン−５−イル）アラニン（ＢｉｐｙＡ）を含む群から選択することができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、４−（６−メチル−ｓ−テトラジン−３−イル）アミノフェニルアラニンでありうる。
【０１６７】
１つまたは複数の非天然アミノ酸は、β−アミノ酸（β３およびβ２）、ホモアミノ酸、プロリン誘導体およびピルビン酸誘導体、３−置換アラニン誘導体、グリシン誘導体、環置換されたフェニルアラニン誘導体およびチロシン誘導体、直鎖状のコアアミノ酸、二アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、Ｎ−メチルアミノ酸、またはこれらの組合せでありうる。
【０１６８】
非天然アミノ酸のさらなる例は、１）Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、３−ニトロ−Ｌ−チロシン、ｐ−ニトロ−Ｌ−フェニルアラニン、ｍ−メトキシ−Ｌ−フェニルアラニン、およびｐ−イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニンなど、多様な置換チロシン類似体および置換フェニルアラニン類似体；２）光架橋されうる、アリールアジド基およびベンゾフェノン基を伴うアミノ酸；３）固有の化学反応性を有するアミノ酸であって、アセチル−Ｌ−フェニルアラニンおよびｍ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−アリル−Ｌ−チロシン、Ｏ−（２−プロピニル）−Ｌ−チロシン、ｐ−エチルチオカルボニル−Ｌ−フェニルアラニンおよびｐ−（３−オキソブタノイル）−Ｌ−フェニルアラニンを含むアミノ酸；４）Ｘ腺結晶構造解析における位相決定のための重原子含有アミノ酸であって、ｐ−ヨード−Ｌ−フェニルアラニンおよびｐ−ブロモ−Ｌ−フェニルアラニンを含む重原子含有アミノ酸；５）酸化還元反応において活性のアミノ酸である、ジヒドロキシ−Ｌ−フェニルアラニン；６）ｂ−Ｎ−アセチルグルコサミン−Ｏ−セリンおよびａ−Ｎ−アセチルガラクトサミン−Ｏ−トレオニンを含むグリコシル化アミノ酸；７）ナフチル側鎖、ダンシル側鎖、および７−アミノクマリン側鎖を伴う蛍光アミノ酸；８）アゾベンゼンおよびニトロベンジルによるＣｙｓ側鎖、Ｓｅｒ側鎖、およびＴｙｒ側鎖を伴う、光切断するアミノ酸および光異性化するアミノ酸；９）ホスホチロシン模倣体である、ｐ−カルボキシメチル−Ｌ−フェニルアラニン；１０）グルタミン相同体である、ホモグルタミン；ならびに１１）２−アミノオクタン酸を含むがこれらに限定されない。非天然アミノ酸は、化学基を組み込むように修飾することができる。非天然アミノ酸は、ケトン基を組み込むように修飾することができる。
【０１６９】
１つまたは複数の非天然アミノ酸は、少なくとも１つのオキシム基、カルボニル基、ジカルボニル基、ヒドロキシルアミン基、またはこれらの組合せを含みうる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、少なくとも１つのカルボニル官能基、ジカルボニル官能基、アルコキシアミン官能基、ヒドラジン官能基、非環式アルケン官能基、非環式アルキン官能基、シクロオクチン官能基、アリールアジド／アルキルアジド官能基、ノルボルネン官能基、シクロプロペン官能基、ｔｒａｎｓ−シクロオクテン官能基、またはテトラジン官能基、またはこれらの組合せを含みうる。
【０１７０】
１つまたは複数の非天然アミノ酸は、当技術分野で公知の方法により、ＴＩＤおよび／またはＣＡＲ−ＩＤへと組み込むことができる。細胞ベースの系または無細胞系を使用して、ＴＩＤおよび／またはＣＡＲ−ＩＤの遺伝子配列を変化させ、これにより、１つまたは複数の非天然アミノ酸を伴うＴＩＤおよび／またはＣＡＲ−ＩＤを生成することができる。栄養要求性株を、操作したｔＲＮＡおよびシンセターゼの代わりに使用することができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、１つまたは複数の天然アミノ酸の選択的反応により生成することができる。選択的反応は、１つまたは複数の酵素により媒介されうる。非限定的な１つの例では、１つまたは複数のシステインの、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）との選択的反応により、１つまたは複数のホルミルグリシンを生成することができる（参照によりその全体が組み込まれる、Rabukaら、Nature  Protocols、７巻：１０５２〜１０６７頁（２０１２年）を参照されたい）。
【０１７１】
リンカーを形成する化学反応には、１つまたは複数の非天然アミノ酸が関与しうる。リンカーを形成する化学反応は、生体直交型反応でありうる。リンカーを形成する化学反応は、クリック化学反応でありうる。
【０１７２】
さらなる非天然アミノ酸は、それらの全てが参照によりそれらの全体が組み込まれる、Liuら（Annu  Rev  Biochem、７９巻：４１３〜４４頁、２０１０年）、Wangら（Angew  Chem  Int  Ed、４４巻：３４〜６６頁、２００５年）およびＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０３９４７２号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０３９４６８号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８８００９号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０５８６６８号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８９１４２号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８８０１１号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００１４８５号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４９３９７号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４７８２２号、および同第ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４４６８２号において開示されている。
【０１７３】
当業者は、ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームを、疾患または状態において標的とされる細胞上の様々な分子に拡張しうることを想定する。非限定的な例として述べると、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、結腸がんおよび肺がんのためのＥＧＦＲ、神経膠腫および神経膠芽細胞腫のためのＥＧＦＲｖＩＩＩ、多発性骨髄腫のためのＢＣＭＡおよびＣＳ１、ならびに急性骨髄性白血病のためのＣＬＬ−１およびＣＤ３３をターゲティングする抗体に基づくか、またはこれらに由来するＴＩＤを含みうる。本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、がん細胞を標的とするのに使用される低分子を含むＴＩＤを含みうる。葉酸を含むＴＩＤを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチを使用して、卵巣がんを処置することができる。２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸を含むＴＩＤを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチを使用して、ＰＳＭＡ陽性前立腺がん細胞を処置することができる。
【０１７４】
リンカー
本明細書で開示されるスイッチは、１つまたは複数のリンカーを含みうる。本明細書で開示されるスイッチは、２つまたはこれを超えるリンカーを含みうる。本明細書で開示されるスイッチは、３つまたはこれを超えるリンカーを含みうる。本明細書で開示されるスイッチは、４つまたはこれを超えるリンカーを含みうる。本明細書で開示されるスイッチは、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、またはこれを超えるリンカーを含みうる。２つまたはこれを超えるリンカーは、同じでありうる。３つまたはこれを超えるリンカーの少なくとも２つは、同じでありうる。２つまたはこれを超えるリンカーは、異なりうる。３つまたはこれを超えるリンカーの少なくとも２つは、異なりうる。
【０１７５】
本明細書で開示されるスイッチ中間体は、１つまたは複数のリンカーを含みうる。本明細書で開示されるスイッチ中間体は、２つまたはこれを超えるリンカーを含みうる。本明細書で開示されるスイッチ中間体は、３つまたはこれを超えるリンカーを含みうる。本明細書で開示されるスイッチ中間体は、４つまたはこれを超えるリンカーを含みうる。本明細書で開示されるスイッチ中間体は、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、またはこれを超えるリンカーを含みうる。２つまたはこれを超えるリンカーは、同じでありうる。３つまたはこれを超えるリンカーの少なくとも２つは、同じでありうる。２つまたはこれを超えるリンカーは、異なりうる。３つまたはこれを超えるリンカーの少なくとも２つは、異なりうる。
【０１７６】
図１８は、例示的なリンカーについて描示する。図１９は、例示的なヘテロ二官能性リンカーについて描示する。図２０は、二官能性リンカーを合成するための一般的スキームを示す。さらなる例示的なリンカーおよびリンカーを構築する方法は、参照によりその全体が組み込まれる、ＷＯ２０１４／１５３００２において見出すことができる。
【０１７７】
リンカーは、キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）に結合させることができる。リンカーは、標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）に結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させることができる。１つまたは複数のリンカーは、１つまたは複数のＣＡＲ−ＩＤを、１つまたは複数のＴＩＤに結合させることができる。１つまたは複数のリンカーは、１つまたは複数のＣＡＲ−ＩＤを、１つまたは複数のＴＩＤに、部位特異的な様式で結合させることができる。部位特異的な様式による結合は、１つまたは複数のＣＡＲ−ＩＤを、１つまたは複数のＴＩＤ上の所定の部位に結合させることを含みうる。代替的に、または加えて、部位特異的な様式による結合は、１つまたは複数のＣＡＲ−ＩＤを、１つまたは複数のＴＩＤ内の非天然アミノ酸に結合させることを含みうる。１つまたは複数のリンカーは、１つまたは複数のＣＡＲ−ＩＤを、１つまたは複数のＴＩＤに、部位に依存しない様式で結合させることができる。部位に依存しない様式による結合は、１つまたは複数のＣＡＲ−ＩＤを、１つまたは複数のＴＩＤ上のランダムな部位に結合させることを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはこれを超えるＴＩＤに、部位特異的な様式で結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはこれを超えるＴＩＤに、部位に依存しない様式で結合させることができる。代替的に、ＴＩＤは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはこれを超えるＣＡＲ−ＩＤに、部位特異的な様式で結合させることができる。部位特異的な様式による結合は、１つまたは複数のＴＩＤを、１つまたは複数のＣＡＲ−ＩＤ上の所定の部位に結合させることを含みうる。ＴＩＤは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはこれを超えるＣＡＲ−ＩＤに、部位に依存しない様式で結合させることができる。部位に依存しない様式による結合は、１つまたは複数のＴＩＤを、１つまたは複数のＣＡＲ−ＩＤ上のランダムな部位に結合させることを含みうる。
【０１７８】
１つまたは複数のリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤ、ＴＩＤ、またはこれらの組合せにカップリングさせることができる。１つまたは複数のリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせて、式ＩＩＡ：Ｌ１−Ｘまたは式ＩＩ：Ｘ−Ｌ１（式中、Ｘは、ＣＡＲ−ＩＤであり、Ｌ１は、リンカーである）の、１つまたは複数のスイッチ中間体を形成することができる。１つまたは複数のリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに、オキシムによりカップリングさせることができる。１つまたは複数のリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに、シクロオクチン、シクロプロペン、アリールアジド／アルキルアジド、ｔｒａｎｓ−シクロオクテン、ノルボルネン（norborene）、テトラジン、またはこれらの組合せによりカップリングさせることができる。１つまたは複数のリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに、共有結合、非共有結合、イオン結合、またはこれらの組合せによりカップリングさせることができる。１つまたは複数のリンカーは、ＴＩＤにカップリングさせて、式ＩＩＩＡ：Ｌ１−Ｙまたは式ＩＩＩ：Ｙ−Ｌ１（式中、Ｙは、ＴＩＤであり、Ｌ１は、リンカーである）による、１つまたは複数のスイッチ中間体を形成することができる。１つまたは複数のリンカーは、ＴＩＤに、オキシムによりカップリングさせることができる。１つまたは複数のリンカーは、ＴＩＤに、シクロオクチン、シクロプロペン、アリールアジド／アルキルアジド、ｔｒａｎｓ−シクロオクテン、ノルボルネン、テトラジン、またはこれらの組合せによりカップリングさせることができる。１つまたは複数のリンカーは、ＴＩＤに、共有結合、非共有結合、イオン結合、またはこれらの組合せによりカップリングさせることができる。
【０１７９】
ＴＩＤは、１つまたは複数のアミノ酸を含みうる。１つまたは複数のアミノ酸は、天然アミノ酸を含みうる。リンカーは、ＴＩＤ上の１つまたは複数の天然アミノ酸とカップリングしうる。１つまたは複数のアミノ酸は、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。リンカーは、ＴＰ上の１つまたは複数の非天然アミノ酸とカップリングしうる。リンカーは、部位特異的変異誘発の生成物であるアミノ酸とカップリングしうる。リンカーは、部位特異的変異誘発の生成物であるシステインとカップリングしうる。リンカー（例えば、置換マレイミド）は、部位特異的変異誘発の生成物であるシステイン、およびネイティブなシステイン残基とカップリングしうる。各々が相補的な反応性官能基を伴う２つのリンカーは、互いにカップリングしうる。
【０１８０】
１つまたは複数のリンカーは、切断可能なリンカーでありうる。１つまたは複数のリンカーは、切断不可能なリンカーでありうる。１つまたは複数のリンカーは、可撓性リンカーでありうる。１つまたは複数のリンカーは、非可撓性リンカーでありうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。二官能性リンカーは、１つの端部に、第１の官能基を含むことが可能であり、第２の端部に、第２の官能基を含みうる。二官能性リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。ヘテロ二官能性リンカーは、１つの端部に、第１の官能基を含むことが可能であり、第２の端部に、第２の官能基を含むことが可能であり、ここで、第１の官能基と第２の官能基は、異なる。二官能性リンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。ホモ二官能性リンカーは、１つの端部に、第１の官能基を含むことが可能であり、第２の端部に、第２の官能基を含むことが可能であり、ここで、第１の官能基と第２の官能基は、同じである。
【０１８１】
リンカーは、化学結合を含みうる。リンカーは、官能基を含みうる。リンカーは、ポリマーを含みうる。ポリマーは、ポリエチレングリコールでありうる。リンカーは、アミノ酸を含みうる。
【０１８２】
リンカーは、１つまたは複数の官能基を含みうる。リンカーは、２つまたはこれを超える官能基を含みうる。リンカーは、３つまたはこれを超える官能基を含みうる。リンカーは、４つまたはこれを超える官能基を含みうる。リンカーは、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、またはこれを超える官能基を含みうる。リンカーは、二官能性エチレングリコールリンカーでありうる。
【０１８３】
リンカーは、エチレングリコールを含みうる。リンカーは、約１つ、約２つ、約３つ、約４つ、約５つ、約６つ、約７つ、約８つ、約９つ、約１０個、約１１個、約１２個、約１３個、約１４個、約１５個、約１６個、約１７個、約１８個、約１９個、または約２０個、またはこれを超えるエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、４つまたはこれを超えるエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、８つまたはこれを超えるエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、１０個またはこれを超えるエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、１２個またはこれを超えるエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、１５個またはこれを超えるエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、２０個またはこれを超えるエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、２５個またはこれを超えるエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、３０個またはこれを超えるエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、３５個またはこれを超えるエチレングリコールサブユニットを含みうる。
【０１８４】
リンカーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含みうる。リンカーは、約１つ、約２つ、約３つ、約４つ、約５つ、約６つ、約７つ、約８つ、約９つ、約１０個、約１１個、約１２個、約１３個、約１４個、約１５個、約１６個、約１７個、約１８個、約１９個、または約２０個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、４つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、８つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、１０個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、１２個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、１５個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、２０個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、２５個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、３０個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、３５個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。
【０１８５】
リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。
【０１８６】
リンカーは、アリールまたはヘテロアリールを含みうる。リンカーは、アリールを含みうる。アリールは、フェニルでありうる。フェニルは、二置換フェニルでありうる。二置換フェニルは、１，４−二置換フェニルでありうる。二置換フェニルは、１，３−二置換フェニルでありうる。フェニルは、三置換フェニルでありうる。フェニルは、四置換フェニルでありうる。置換フェニルの置換基の２つは、ＮＯ２でありうる。場合によって、リンカーは、ベンジル置換基を含まない。
【０１８７】
リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、２つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、３つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、４つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、５つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、６つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、７つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、８つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、９つまたはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、１０個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、１１個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、１２個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、１３個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。リンカーは、１４個またはこれを超えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ユニットを含みうる。
【０１８８】
リンカーは、一方の端部に、アミドを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミドを含むことが可能であり、他方の端部に、アミンを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミドを含むことが可能であり、他方の端部に、トリアゾールを含みうる。
【０１８９】
１つまたは複数のリンカーは、１，４−ジカルボキシル部分を含みうる。１つまたは複数のリンカーは、１，３−ジニトロ置換されたフェニル部分を含みうる。
【０１９０】
１つまたは複数のリンカーは、１つまたは複数の反応性官能基を含みうる。反応性官能基は、カップリングパートナー上の相補的な反応性官能基と反応しうる。リンカー上の反応性官能基の、カップリングパートナー上の相補的な反応性官能基との反応は、リンカーの、ＣＡＲ−ＥＣスイッチへの組み込みの前に起こりうる。
【０１９１】
リンカーは、アルコキシアミン、ヒドラジン、アリールアジド／アルキルアジド、アルキン、アルケン、テトラジン、ジクロロトリアジン、トレシレート、炭酸スクシンイミジル、炭酸ベンゾトリアゾール、炭酸ニトロフェニル、炭酸トリクロロフェニル、カルボニルイミダゾール、コハク酸スクシンイミジル、マレイミド、ビニルスルホン、ハロアセトアミド、およびジスルフィドから選択される、少なくとも１つの反応性官能基を含みうる。アルケンは、ノルボルネン、ｔｒａｎｓ−シクロオクテン、およびシクロプロペンから選択することができる。リンカーは、少なくとも１つのアルコキシアミンを含みうる。リンカーは、少なくとも１つのアジドを含みうる。リンカーは、少なくとも１つのシクロオクチンを含みうる。リンカーは、少なくとも１つのテトラジンを含みうる。
【０１９２】
１つまたは複数のリンカーは、１つまたは複数の末端に、アルコキシアミン（またはアミノオキシ）基、アジド基、および／またはシクロオクチン基を含みうる。１つまたは複数のリンカーは、一方の端部に、アルコキシアミンを含むことが可能であり、他方の端部に、アジド基を含みうる。１つまたは複数のリンカーは、一方の端部に、アルコキシアミン基を含むことが可能であり、他方の端部に、シクロオクチン基を含みうる。アルコキシアミンは、アミノ酸上のケトン基と共に、安定なオキシムを形成しうる。アルコキシアミンは、非天然アミノ酸上のケトン基と共に、安定なオキシムを形成しうる。ケトン基は、ｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦ）上にありうる。
【０１９３】
１つまたは複数のリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤ上の反応性官能基の、ＴＩＤに結合しているリンカーの相補的な反応性官能基との反応により形成することができる。１つまたは複数のリンカーは、ＴＩＤ上のアミノ酸または別の反応性官能基の、ＣＡＲ−ＩＤに結合しているリンカーの相補的な反応性官能基との反応により形成することができる。１つまたは複数のリンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに結合しているリンカーの、ＴＩＤに結合している別のリンカーとの反応により形成することができる。図１６は、２つのスイッチ中間体上の反応性官能基の反応によるリンカーの生成についての概略図を示す。図１６に示される通り、ＣＡＲ−ＩＤ（１６０５）および第１のリンカー（１６１０）を含む第１のスイッチ中間体（１６０１）を、ＴＩＤ（１６２５）および第２のリンカー（１６３０）を含む第２のスイッチ中間体（１６２０）と接触させる。第１のリンカー（１６１０）の反応性官能基（１６１５）は、第２のリンカー（１６３５）の第２の官能基（１６３５）と反応して、新規のリンカー（１６４５）を生成させる。２つのスイッチ中間体（１６０１、１６２０）の反応は、ＣＡＲ−ＩＤ（１６０５）を含むスイッチ（１６４０）であって、新規のリンカー（１６４５）を介して、ＴＩＤ（１６２５）に接続されたスイッチ（１６４０）の形成を結果としてもたらす。
【０１９４】
リンカーは、生体直交型反応の生成物でありうる。例えば、ケトン側鎖、アジド側鎖、アルキン側鎖、アルケン側鎖、およびテトラジン側鎖を含有するアミノ酸は、ナンセンスコドンおよびフレームシフトコドンに応答して、遺伝子によりコードされうる。これらの側鎖は、生体直交型コンジュゲーション反応のための化学ハンドルとして作用しうる（参照によりその全体が組み込まれる、Kimら、Curr  Opin  Chem  Bio、１７巻：４１２〜４１９頁（２０１３年））。リンカーは、オキシム、テトラゾール、ディールスアルダー付加物、ヘテロディールスアルダー付加物、芳香族置換反応生成物、求核置換反応生成物、エステル、アミド、カルバメート、エーテル、チオエーテル、またはミカエル反応生成物を含みうる。リンカーは、付加環化生成物、メタセシス反応生成物、金属媒介クロスカップリング反応生成物、ラジカル重合性生成物、酸化カップリング生成物、アシル転移反応生成物、または光クリック反応生成物でありうる。付加環化は、ヒュイスゲン付加環化でありうる。付加環化は、銅非含有［３＋２］ヒュイスゲン付加環化でありうる。付加環化は、ディールスアルダー反応でありうる。付加環化は、ヘテロディールスアルダー反応でありうる。リンカーは、酵素媒介反応の生成物でありうる。リンカーは、トランスグルタミナーゼ媒介反応の生成物であり得、その非限定的な例は、Linら、J.  Am.  Chem.  Soc.、１２８巻：４５４２〜４５４３頁（２００６年）およびＷＯ２０１３／０９３８０９において記載されている。リンカーは、ＰｏｌｙＴｈｅｒｉｃｓによるＴｈｉｏＢｒｉｄｇｅ（商標）技術など、２つのシステイン残基を接続するジスルフィド架橋を含みうる。リンカーは、２つのアミノ酸残基を接続するマレイミド架橋を含みうる。リンカーは、２つのシステイン残基を接続するマレイミド架橋を含みうる。
【０１９５】
２つまたはこれを超えるリンカーを、連結することができる。２つまたはこれを超えるリンカーは、１つまたは複数の銅非含有反応により連結することができる。２つまたはこれを超えるリンカーは、１つまたは複数の付加環化により連結することができる。２つまたはこれを超えるリンカーは、１つまたは複数のヒュイスゲン付加環化により連結することができる。２つまたはこれを超えるリンカーは、１つまたは複数の銅非含有［３＋２］ヒュイスゲン付加環化により連結することができる。２つまたはこれを超えるリンカーは、１つまたは複数の銅含有反応により連結することができる。２つまたはこれを超えるリンカーは、１つまたは複数のディールスアルダー反応により連結することができる。２つまたはこれを超えるリンカーは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応により連結することができる。
【０１９６】
ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、リンカーの長さを調整することにより最適化することができる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、異なる長さのリンカーを含みうる。リンカーは、比較的短い場合がある。リンカーは、比較的長い場合がある。１つまたは複数のリンカーは、約１オングストローム（Å）〜約１２０オングストローム（Å）の間の長さでありうる。１つまたは複数のリンカーは、約５オングストローム（Å）〜約１０５オングストローム（Å）の間の長さでありうる。１つまたは複数のリンカーは、約１０オングストローム（Å）〜約１００オングストローム（Å）の間の長さでありうる。１つまたは複数のリンカーは、約１０オングストローム（Å）〜約９０オングストローム（Å）の間の長さでありうる。１つまたは複数のリンカーは、約１０オングストローム（Å）〜約８０オングストローム（Å）の間の長さでありうる。１つまたは複数のリンカーは、約１０オングストローム（Å）〜約７０オングストローム（Å）の間の長さでありうる。１つまたは複数のリンカーは、約１５オングストローム（Å）〜約４５オングストローム（Å）の間の長さでありうる。１つまたは複数のリンカーは、約４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、２７、３０オングストロームもしくはこれを上回る長さと同等でありうるか、または約４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、２７、３０オングストロームもしくはこれを上回る長さを超えうる。１つまたは複数のリンカーは、約１０オングストロームの長さと同等でありうるか、またはこれを超えうる。１つまたは複数のリンカーは、約１５オングストロームの長さと同等でありうるか、またはこれを超えうる。１つまたは複数のリンカーは、約２０オングストロームの長さと同等でありうるか、またはこれを超えうる。１つまたは複数のリンカーは、約１１０、１００、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０オングストロームもしくはこれを下回る長さと同等でありうるか、または約１１０、１００、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０オングストロームもしくはこれを下回る長さ未満でありうる。１つまたは複数のリンカーは、約１００オングストロームの長さと同等であるかまたはこれ未満でありうる。１つまたは複数のリンカーは、約８０オングストロームの長さと同等であるかまたはこれ未満でありうる。１つまたは複数のリンカーは、約６０オングストロームの長さと同等であるかまたはこれ未満でありうる。１つまたは複数のリンカーは、約４０オングストロームの長さと同等であるかまたはこれ未満でありうる。
【０１９７】
リンカーの全長は、約１オングストローム（Å）〜約１２０オングストローム（Å）の間でありうる。リンカーの全長は、約５オングストローム（Å）〜約１０５オングストローム（Å）の間でありうる。リンカーの全長は、約１０オングストローム（Å）〜約１００オングストローム（Å）の間でありうる。リンカーの全長は、約１０オングストローム（Å）〜約９０オングストローム（Å）の間でありうる。リンカーの全長は、約１０オングストローム（Å）〜約８０オングストローム（Å）の間でありうる。リンカーの全長は、約１０オングストローム（Å）〜約７０オングストローム（Å）の間でありうる。リンカーの全長は、約１５オングストローム（Å）〜約４５オングストローム（Å）の間でありうる。リンカーの全長は、約４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、２７、３０オングストロームもしくはこれを上回る長さと同等でありうるか、または約４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、２７、３０オングストロームもしくはこれを上回る長さを超えうる。リンカーの全長は、約１０オングストロームと同等でありうるか、またはこれを超えうる。リンカーの全長は、約１５オングストロームと同等でありうるか、またはこれを超えうる。リンカーの全長は、約２０オングストロームと同等でありうるか、またはこれを超えうる。リンカーの全長は、約１１０、１００、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０オングストロームもしくはこれを下回る長さと同等でありうるか、または約１１０、１００、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０オングストロームもしくはこれを下回る長さ未満でありうる。リンカーの全長は、約１００オングストロームと同等でありうるか、またはこれ未満でありうる。リンカーの全長は、約８０オングストロームと同等でありうるか、またはこれ未満でありうる。リンカーの全長は、約６０オングストロームと同等でありうるか、またはこれ未満でありうる。リンカーの全長は、約４０オングストロームと同等でありうるか、またはこれ未満でありうる。リンカーの全長は、約２５Åと同等でありうるか、またはこれ未満でありうる。ＣＡＲ−ＩＤとＴＩＤの間の距離は、約３０Åでありうる。
【０１９８】
本明細書では、複数のスイッチを含む組成物であって、複数のスイッチのうちの１つのスイッチが、（ａ）ＣＡＲ−ＩＤと、（ｂ）ＴＩＤと、（ｃ）リンカーとを含み、複数のスイッチのスイッチ（the  switches  of  the  plurality  of  switches）の少なくとも約６０％が、構造的に均質である組成物が開示される。複数のスイッチのスイッチの少なくとも約６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、または６９％は、構造的に均質でありうる。複数のスイッチのスイッチの少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、または７９％は、構造的に均質でありうる。複数のスイッチのスイッチの少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、または８９％は、構造的に均質でありうる。複数のスイッチのスイッチの少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％は、構造的に均質でありうる。構造的に均質なＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＣＡＲ−ＩＤとＴＩＤとを部位特異的に連結することによりもたらすことができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに、部位特異的に連結することができる。リンカーは、ＴＩＤに、部位特異的に連結することができる。リンカーの第１の部位は、ＣＡＲ−ＩＤに、部位特異的に連結することができ、リンカーの第２の部位は、ＴＩＤに、部位特異的に連結することができる。
【０１９９】
スイッチおよびスイッチ中間体を生成する方法
本明細書では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成する方法が開示される。一般に、方法は、キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を、標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）に結合させるステップを含む。代替的に、方法は、ＣＡＲ−ＩＤおよびリンカーを含むスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップを含みうる。方法は、ＴＩＤおよびリンカーを含むスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップを含みうる。方法は、ＣＡＲ−ＩＤおよび第１のリンカーを含む第１のスイッチ中間体を、ＴＩＤおよび第２のリンカーを含む第２のスイッチに結合させるステップを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤの、ＴＩＤへの結合は、部位特異的な様式で起こりうる。部位特異的な様式による結合は、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤ上の所定の部位に結合させることを含みうる。部位特異的な様式による結合は、ＴＩＤを、ＣＡＲ−ＩＤ上の所定の部位に結合させることを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤの、ＴＩＤへの結合は、部位に依存しない様式で起こりうる。部位に依存しない様式による結合は、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤ上のランダムな部位に結合させることを含みうる。部位に依存しない様式による結合は、ＴＩＤを、ＣＡＲ−ＩＤ上のランダムな部位に結合させることを含みうる。方法はさらに、１つまたは複数のさらなるＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップを含みうる。方法はさらに、１つまたは複数の（or  more）さらなるＴＩＤを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップを含みうる。方法はさらに、１つまたは複数のさらなるリンカーを使用して、ＴＩＤをＣＡＲ−ＩＤに接続するステップを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の化学反応を実行するステップを含みうる。
【０２００】
スイッチを生成する方法は、抗体または抗体断片に基づくか、またはこれに由来するＴＩＤを、ＣＡＲ−ＩＤまたはＣＡＲ−ＩＤを含むスイッチ中間体に連結して、（ａ）ＴＩＤと、（ｂ）１つまたは複数のリンカーと、（ｃ）ＣＡＲ−ＩＤとを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成するステップを含みうる。１つまたは複数のリンカーは、ＴＩＤを、ＣＡＲ−ＩＤに連結することができる。ＴＩＤを、ＣＡＲ−ＩＤに連結するステップは、部位特異的な様式で起こりうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤ上の所定の部位に、１つまたは複数のリンカーを介して結合させることができる。ＴＩＤは、ＣＡＲ−ＩＤ上の所定の部位に、１つまたは複数のリンカーを介して結合させることができる。
【０２０１】
本明細書では、式Ｉ：Ｘ−Ｌ１−Ｙまたは式ＩＡ：Ｙ−Ｌ１−Ｘ（式中、Ｘは、キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）であり、Ｙは、標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）であり、Ｌ１は、リンカーである）のスイッチを生成する方法が開示される。Ｘは、ＣＡＲに結合する低分子であることが可能であり、Ｙは、抗体または抗体断片でありうる。Ｘは、ペプチドを含まないＣＡＲに結合する低分子であることが可能であり、Ｙは、抗体または抗体断片を含まないペプチドでありうる。Ｘは、ペプチドを含まないＣＡＲに結合する低分子であることが可能であり、Ｙは、ペプチドを含まないターゲティング低分子でありうる。方法は、１つまたは複数の反応を実行して、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤ内の所定の部位に結合させるステップを含みうる。１つまたは複数の反応を実行して、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、複数のＣＡＲ−ＩＤを、複数のＴＩＤと混合するステップを含みうる。方法は、リンカーの一方の端部を、ＴＩＤに結合させるステップに続く、リンカーの他の端部の、ＣＡＲ−ＩＤへの結合を含みうる。方法は、リンカーの一方の端部を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップに続く、リンカーの他の端部の、ＴＩＤへの結合を含みうる。リンカーの、ＴＩＤへの結合は、部位特異的な様式で起こりうる。リンカーは、ＴＩＤの所定のアミノ酸に結合させることができる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。リンカーは、アミノ酸と相互作用する官能基を含みうる。リンカーの、ＴＩＤへの結合は、部位に依存しない様式で起こりうる。リンカーは、ＴＩＤにランダムに結合させることができる。リンカーは、ＴＩＤ内の官能基と反応する官能基を含みうる。リンカーの、ＣＡＲ−ＩＤへの結合は、部位特異的な様式で起こりうる。リンカーの、ＣＡＲ−ＩＤへの結合は、部位に依存しない様式で起こりうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤ内の官能基と反応する官能基を含みうる。１つまたは複数の反応を実行して、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、オキシムライゲーションを実行するステップを含みうる。
【０２０２】
代替的に、または加えて、方法は、反応を実行して、リンカーまたはリンカーの前駆体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させて、ＣＡＲ−ＩＤにコンジュゲートしたリンカーを含むスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。スイッチ中間体は、式ＩＩ：Ｘ−Ｌ１または式ＩＩＡ：Ｌ１−Ｘ（式中、Ｘは、ＣＡＲ−ＩＤであり、Ｌ１は、リンカーまたはリンカーの前駆体である）を有しうる。リンカーは、部位特異的な様式で、ＣＡＲ−ＩＤにコンジュゲートすることができる。リンカーは、部位に依存しない様式で、ＣＡＲ−ＩＤにコンジュゲートすることができる。１つまたは複数の反応を実行して、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、スイッチ中間体のリンカー部分を、ＴＩＤに結合させるステップを含みうる。１つまたは複数の反応を実行して、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、リンカーまたはリンカー前駆体を含む複数のスイッチ中間体であって、ＣＡＲ−ＩＤにコンジュゲートしたスイッチ中間体を、複数のＴＩＤと接触させるステップを含みうる。スイッチ中間体のリンカー部分の、ＴＩＤへの結合は、部位特異的な様式で起こりうる。ＴＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。スイッチのリンカー部分は、１つまたは複数の非天然アミノ酸を介してＴＩＤに結合させることができる。スイッチ中間体のリンカー部分の結合は、部位に依存しない様式で起こりうる。
【０２０３】
代替的に、または加えて、方法は、反応を実行して、リンカーまたはリンカーの前駆体を、ＴＩＤに結合させて、ＴＩＤにコンジュゲートしたリンカーまたはリンカーの前駆体を含むスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。スイッチ中間体は、式ＩＩＩ：Ｙ−Ｌ１または式ＩＩＩＡ：Ｌ１−Ｙ（式中、Ｙは、ＴＩＤであり、Ｌ１は、リンカーまたはリンカー前駆体である）のスイッチ中間体でありうる。リンカーは、部位特異的な様式で、ＴＩＤにコンジュゲートすることができる。リンカーは、部位に依存しない様式で、ＴＩＤにコンジュゲートすることができる。１つまたは複数の反応を実行して、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、スイッチ中間体のリンカー部分を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップを含みうる。１つまたは複数の反応を実行して、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、ＴＩＤにコンジュゲートしたリンカーまたはリンカー前駆体を含む複数のスイッチ中間体を、複数のＣＡＲ−ＩＤと接触させるステップを含みうる。スイッチ中間体のリンカー部分の、ＣＡＲ−ＩＤへの結合は、部位特異的な様式で起こりうる。スイッチ中間体のリンカー部分の結合は、部位に依存しない様式で起こりうる。
【０２０４】
方法は、１つまたは複数のリンカーを、ＴＩＤにカップリングさせて、式ＩＩＩ：Ｙ−Ｌ１または式ＩＩＩＡ：Ｌ１−Ｙ（式中、Ｙは、ＴＩＤであり、Ｌ１は、リンカーである）のスイッチ中間体を生成するステップと、スイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤにコンジュゲートし、これにより、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成するステップとを含みうる。スイッチ中間体は、部位特異的な様式で、ＣＡＲ−ＩＤにコンジュゲートすることができる。スイッチ中間体は、部位に依存しない様式で、ＣＡＲ−ＩＤにコンジュゲートすることができる。方法はさらに、１つまたは複数の非天然アミノ酸を、ＣＡＲ−ＩＤおよび／またはＴＩＤに組み込むステップを含みうる。スイッチ中間体は、非天然アミノ酸の使用を介して、部位特異的な様式で、ＣＡＲ−ＩＤにコンジュゲートすることができる。
【０２０５】
方法は、１つまたは複数のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせて、式ＩＩ：Ｘ−Ｌ１または式ＩＩＡ：Ｌ１−Ｘ（式中、Ｘは、ＣＡＲ−ＩＤであり、Ｌ１は、リンカーである）のスイッチ中間体を生成するステップと、スイッチ中間体を、ＴＩＤにコンジュゲートし、これにより、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成するステップとを含みうる。スイッチ中間体は、部位特異的な様式で、ＴＩＤにコンジュゲートすることができる。スイッチ中間体は、部位に依存しない様式で、ＴＩＤにコンジュゲートすることができる。方法はさらに、１つまたは複数の非天然アミノ酸を、ＣＡＲ−ＩＤおよび／またはＴＩＤに組み込むステップを含みうる。スイッチ中間体は、非天然アミノ酸の使用を介して、部位特異的な様式で、ＴＩＤにコンジュゲートすることができる。
【０２０６】
式ＩＩ：Ｘ−Ｌ１または式ＩＩＡ：Ｌ１−Ｘ（式中、Ｘは、ＣＡＲ−ＩＤおよびＬ１である）のスイッチ中間体を、ＴＩＤにコンジュゲートするステップは、オキシムを形成するステップを含みうる。式ＩＩＩ：Ｙ−Ｌ１または式ＩＩＩＡ：Ｌ１−Ｙ（式中、Ｙは、ＴＩＤおよびＬ１である）のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤにコンジュゲートするステップは、オキシムを形成するステップを含みうる。オキシムを形成するステップは、酸性条件下で、１つまたは複数の反応を実行するステップを含みうる。オキシムを形成するステップは、弱い酸性条件下で、１つまたは複数の反応を実行するステップを含みうる。オキシムを形成するステップは、弱い中性条件下で、１つまたは複数の反応を実行するステップを含みうる。
【０２０７】
スイッチを生成する方法は、（ａ）非天然アミノ酸を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を生成するステップと、（ｂ）第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させて、ＴＩＤおよび第１のリンカーを含む第１のスイッチ中間体を生成するステップと、（ｃ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）および第２のリンカーを含む第２のスイッチ中間体を、第１のスイッチ中間体に結合させ、これにより、スイッチを生成するステップとを含みうる。非天然アミノ酸は、ｐ−アセチルフェニルアラニン（p-acetylphenalanine）（ｐＡｃＦ）でありうる。ＴＩＤは、抗体または抗体断片に基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択することができる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体でありうる。抗体は、抗ＥＧＦＲ抗体でありうる。抗体は、抗ＣＤ２０抗体でありうる。抗体は、抗ＨＥＲ２抗体でありうる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。抗体は、配列番号１０〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含みうる。抗体は、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つに基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。第１のリンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。第１のリンカーは、シクロオクチンを含みうる。第１のリンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、アジドを含みうる。第１のリンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。第１のリンカーは、アジド−ＰＥＧ−アミノキシリンカーを含みうる。第１のリンカーは、非天然アミノ酸のケトンに結合させることができる。第１のリンカーは、ＴＩＤに、オキシムライゲーションを介して結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣを含みうる。第２のリンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。第２のリンカーは、シクロオクチンを含みうる。第２のリンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、アジドを含みうる。第２のリンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。第２のリンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。第２のスイッチ中間体は、第１のスイッチ中間体に、クリック化学反応を介して結合させることができる。第２のスイッチ中間体は、第１のスイッチ中間体に、付加環化反応により結合させることができる。付加環化反応は、［３＋２］付加環化反応でありうる。
【０２０８】
リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤにコンジュゲートして、スイッチを生成するステップは、リンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の結合を形成するステップを含みうる。リンカーを、ＴＩＤにコンジュゲートして、スイッチを生成するステップは、リンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の結合を形成するステップを含みうる。１つまたは複数の結合は、イオン結合、共有結合、非共有結合、またはこれらの組合せを含みうる。リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤにコンジュゲートするさらなる方法は、参照によりその全体が組み入れられる、Robertsら、Advanced  Drug  Delivery  Reviews、５４巻：４５９〜４７６頁（２００２年）において記載されている通りに実施することができる。
【０２０９】
ＣＡＲ−ＩＤは、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＩＤのいずれかを含みうる。例えば、ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＤＯＴＡ、ジニトロフェノール、キノン、ビオチン、アニリン、アトラジン、アニリン誘導体、ｏ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ヒドララジン、ハロタン、ジゴキシゲニン、ベンゼンアルソネート、ラクトース、トリニトロフェノール、ビオチン、およびこれらの誘導体からなる群から選択され得る。ＴＩＤは、本明細書で開示されるＴＩＤのいずれかを含みうる。例えば、ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、葉酸を含みうる。ＴＩＤは、抗体または抗体断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。抗体または抗体断片は、抗ＣＤ１９を含みうる。抗体または抗体断片は、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗ＢＭＳＡ、抗ＣＥＡ、抗ＣＬＬ１、抗ＣＳ１、抗ＥＧＦＲ、および抗Ｈｅｒ２からなる群から選択される。リンカーは、本明細書で開示されるリンカーのいずれかを含みうる。例えば、リンカーは、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、シクロオクチン基、またはこれらの組合せを含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のＰＥＧサブユニットを含みうる。
【０２１０】
本明細書では、式ＩＶ：Ｘ−Ｌ１−Ｌ２−Ｙ（式中、Ｘは、ＣＡＲ−ＩＤであり、Ｌ１は、第１のリンカーであり、Ｌ２は、第２のリンカーであり、Ｙは、ＴＩＤである）のスイッチを生成する方法が開示される。方法は、（ａ）Ｌ１を、Ｘにカップリングさせて、式ＩＩ：Ｘ−Ｌ１の第１のスイッチ中間体を生成するステップと、（ｂ）Ｌ２を、Ｙにカップリングさせて、式Ｖ：Ｌ２−Ｙの第２のスイッチ中間体を生成するステップと、（ｃ）式ＩＩの第１のスイッチ中間体を、式Ｖの第２のスイッチ中間体に連結し、これにより、式ＩＶのスイッチを生成するステップとを含みうる。
【０２１１】
本明細書では、式ＩＶＡ：Ｙ−Ｌ２−Ｌ１−Ｘ（式中、Ｙは、ＴＩＤであり、Ｌ１は、第１のリンカーであり、Ｌ２は、第２のリンカーであり、Ｘは、ＣＡＲ−ＩＤである）のスイッチを生成する方法が開示される。方法は、（ａ）Ｌ１を、Ｘにカップリングさせて、式ＩＩＡ：Ｌ１−Ｘの第１のスイッチ中間体を生成するステップと、（ｂ）Ｌ２を、Ｙにカップリングさせて、式ＶＡ：Ｙ−Ｌ２の第２のスイッチ中間体を生成するステップと、（ｃ）式ＩＩＡの第１の中間体を、式ＶＡの第２の中間体に連結し、これにより、式ＩＶＡのＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成するステップとを含みうる。
【０２１２】
方法はさらに、１つまたは複数の非天然アミノ酸を、Ｘおよび／またはＹに組み込むステップを含みうる。Ｌ１は、Ｘに、部位特異的な様式でカップリングさせることができる。Ｌ１は、Ｘに、部位特異的な様式で、１つまたは複数の非天然アミノ酸を介してカップリングさせることができる。Ｌ２は、Ｙに、部位特異的な様式でカップリングさせることができる。Ｌ２は、Ｙに、部位特異的な様式で、１つまたは複数の非天然アミノ酸を介してカップリングさせることができる。方法はさらに、Ｘをコードする核酸を修飾して、Ｘ内に１つまたは複数のアンバーコドンを生成するステップを含みうる。方法はさらに、Ｙをコードする核酸を修飾して、Ｙ内に１つまたは複数のアンバーコドンを生成するステップを含みうる。
【０２１３】
リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤにコンジュゲートして、第１のスイッチ中間体を生成するステップは、リンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の結合を形成するステップを含みうる。リンカーを、ＴＩＤにコンジュゲートして、第２のスイッチ中間体を生成するステップは、リンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の結合を形成するステップを含みうる。１つまたは複数の結合は、イオン結合、共有結合、非共有結合、またはこれらの組合せを含みうる。リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤにコンジュゲートするさらなる方法は、参照によりその全体が含まれる、Robertsら、Advanced  Drug  Delivery  Reviews、５４巻：４５９〜４７６頁（２００２年）において記載されている通りに実施することができる。
【０２１４】
第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に連結するステップは、ヒュイスゲン付加環化、ディールスアルダー反応、ヘテロディールスアルダー反応、または酵素媒介反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に連結することにより、オキシム、テトラゾール、ディールスアルダー付加物、ヘテロディールスアルダー付加物、芳香族置換反応生成物、求核置換反応生成物、エステル、アミド、カルバメート、エーテル、チオエーテル、ミカエル反応生成物、付加環化生成物、メタセシス反応生成物、金属媒介クロスカップリング反応生成物、ラジカル重合化生成物、酸化カップリング生成物、アシル転移反応生成物、または光クリック反応生成物を生成させることができる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に連結することにより、ジスルフィド架橋またはマレイミド架橋を生成することができる。
【０２１５】
Ｌ１および／またはＬ２は、二官能性リンカー、切断可能なリンカー、切断不可能なリンカー、エチレングリコールリンカー、二官能性エチレングリコールリンカー、可撓性リンカー、または非可撓性リンカーから選択されるリンカーを含みうる。Ｌ１および／またはＬ２は、シクロオクチン、シクロプロペン、アリールアジド／アルキルアジド、ｔｒａｎｓ−シクロオクテン、ノルボルネン、およびテトラジンを含む群から選択されるリンカーを含みうる。Ｌ１の端部および／またはＬ２の端部は、アルコキシアミンを含みうる。Ｌ１の端部および／またはＬ２の端部は、アジド基またはシクロオクチン基を含みうる。Ｘは、Ｌ１に、シクロオクチン、シクロプロペン、アリールアジド／アルキルアジド、ｔｒａｎｓ−シクロオクテン、ノルボルネン、およびテトラジンから選択される化学基によりカップリングさせることができる。第１のスイッチ中間体（Ｘ−Ｌ１またはＬ１−Ｘ）と第２のスイッチ中間体（Ｙ−Ｌ２またはＬ２−Ｙ）とを連結するステップは、１つまたは複数の銅非含有反応を実行するステップを含みうる。第１のスイッチ中間体（Ｘ−Ｌ１またはＬ１−Ｘ）と第２のスイッチ中間体（Ｙ−Ｌ２またはＬ２−Ｙ）とを連結するステップは、１つまたは複数の銅含有反応を実行するステップを含みうる。第１のスイッチ中間体（Ｘ−Ｌ１またはＬ１−Ｘ）と第２のスイッチ中間体（Ｙ−Ｌ２またはＬ２−Ｙ）とを連結するステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。第１のスイッチ中間体（Ｘ−Ｌ１またはＬ１−Ｘ）と第２のスイッチ中間体（Ｙ−Ｌ２またはＬ２−Ｙ）とを連結するステップは、１つまたは複数のヒュイスゲン付加環化を含みうる。第１のスイッチ中間体（Ｘ−Ｌ１またはＬ１−Ｘ）と第２のスイッチ中間体（Ｙ−Ｌ２またはＬ２−Ｙ）とを連結するステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体（Ｘ−Ｌ１またはＬ１−Ｘ）と第２のスイッチ中間体（Ｙ−Ｌ２またはＬ２−Ｙ）とを連結するステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。
【０２１６】
本明細書で開示される方法は、１つまたは複数のリンカーを、１つまたは複数のＴＩＤ、ＣＡＲ−ＩＤ、またはこれらの組合せにカップリングさせて、１つまたは複数のスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。スイッチ中間体は、リンカーに結合しているＴＩＤ（例えば、ＴＩＤスイッチ中間体）を含みうる。スイッチ中間体は、リンカーに結合しているＣＡＲ−ＩＤ（例えば、ＣＡＲ−ＩＤスイッチ中間体）を含みうる。方法は、第１のリンカーをＴＩＤにカップリングさせて、ＴＩＤスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。方法は、リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせて、ＣＡＲ−ＩＤスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。
【０２１７】
１つまたは複数のリンカーの、ＴＩＤおよびＣＡＲ−ＩＤへのカップリングは、同時に起こりうる。１つまたは複数のリンカーの、ＴＩＤおよびＣＡＲ−ＩＤへのカップリングは、逐次的に起こりうる。１つまたは複数のリンカーの、ＴＩＤおよびＣＡＲ−ＩＤへのカップリングは、単一の反応体積中で起こりうる。１つまたは複数のリンカーの、ＴＩＤおよびＣＡＲ−ＩＤへのカップリングは、２つまたはこれを超える反応体積中で起こりうる。
【０２１８】
１つまたは複数のリンカーを、ＴＩＤおよび／またはＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせるステップは、リンカーとＴＩＤおよび／またはＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数のオキシムを形成するステップを含みうる。１つまたは複数のリンカーを、ＴＩＤおよび／またはＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせるステップは、リンカーとＴＩＤおよび／またはＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の安定な結合を形成するステップを含みうる。１つまたは複数のリンカーを、ＴＩＤおよび／またはＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせるステップは、リンカーとＴＩＤおよび／またはＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の共有結合を形成するステップを含みうる。１つまたは複数のリンカーを、ＴＩＤおよび／またはＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせるステップは、リンカーとＴＩＤおよび／またはＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の非共有結合を形成するステップを含みうる。１つまたは複数のリンカーを、ＴＩＤおよび／またはＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせるステップは、リンカーとＴＩＤおよび／またはＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数のイオン結合を形成するステップを含みうる。
【０２１９】
１つまたは複数のリンカーを、ＴＩＤおよび／またはＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせるステップは、１つまたは複数のリンカーを、ＴＩＤおよび／またはＣＡＲ−ＩＤに、部位特異的にカップリングさせるステップを含みうる。部位特異的にカップリングさせるステップは、１つまたは複数のリンカーを、ＴＩＤの非天然アミノ酸および／またはＣＡＲ−ＩＤに連結するステップを含みうる。１つまたは複数のリンカーを、ＴＩＤの非天然アミノ酸および／またはＣＡＲ−ＩＤに連結するステップは、オキシムの形成を含みうる。１つまたは複数のリンカーを、ＴＩＤの非天然アミノ酸および／またはＣＡＲ−ＩＤに連結するステップは、非限定的な例として述べると、１つまたは複数のリンカーのヒドロキシルアミンを、アミノ酸のアルデヒドまたはケトンと反応させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。
【０２２０】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに部位特異的に連結するか、リンカーまたはリンカーの前駆体を、ＣＡＲ−ＩＤに部位特異的に結合させるか、リンカーまたはリンカーの前駆体を、ＴＩＤに部位特異的に結合させるか、ＣＡＲ−ＩＤスイッチ中間体を、ＴＩＤに部位特異的に結合させるか、ＴＩＤスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに部位特異的に結合させるか、またはＴＩＤスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤスイッチ中間体に部位特異的に結合させるように、１つまたは複数の反応を実行するステップは、銅非含有反応、付加環化、ヒュイスゲン付加環化、銅非含有［３＋２］ヒュイスゲン付加環化、銅含有反応、ディールスアルダー反応、ヘテロディールスアルダー反応、メタセシス反応、金属媒介クロスカップリング反応、ラジカル重合化、酸化カップリング、アシル転移反応、光クリック反応、酵素媒介反応、トランスグルタミナーゼ媒介反応から選択される、１つまたは複数の反応を実行するステップを含みうる。
【０２２１】
本明細書で開示されるスイッチは、ＦＩＴＣまたはその誘導体を含むＣＡＲ−ＩＤを含みうる。このようなスイッチを生成する方法は、リンカーもしくはその前駆体、ＴＩＤを含むスイッチ中間体（例えば、ＴＩＤスイッチ中間体）、またはＴＩＤを、ＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせるステップを含みうる。リンカーまたはその前駆体、ＴＩＤスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせるステップは、ＦＩＴＣのイソチオシアネートの、リンカーもしくはその前駆体、ＴＩＤスイッチ中間体、またはＴＩＤへのコンジュゲーションを含みうる。ＴＩＤは、ポリペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ポリペプチドは、抗体または抗体断片でありうる。ＴＩＤを、ＣＡＲ−ＩＤにカップリングさせるステップは、ＦＩＴＣのイソチオシアネートを、ＴＩＤのアミノ酸にコンジュゲートするステップを含みうる。アミノ酸は、リシンでありうる。方法は、１つまたは複数の（or  more）ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤにカップリングさせるステップを含みうる。方法は、２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＩＤに由来するＦＩＴＣを、２つまたはこれを超えるＴＩＤのアミノ酸にコンジュゲートするステップを含みうる。２つまたはこれを超えるアミノ酸は、リシンでありうる。
【０２２２】
本明細書で開示されるスイッチを生成するステップは、エステルカップリングを含みうる。エステルカップリングは、ＣＡＲ−ＩＤとＴＩＤの間で、アミド結合を形成することを含みうる。エステルカップリングは、スイッチ中間体とＴＩＤの間で、アミド結合を形成することを含みうる。スイッチ中間体は、リンカーに結合しているＣＡＲ−ＩＤを含みうる。アミド結合は、スイッチ中間体のリンカーとＴＩＤの間で形成することができる。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーでありうる。アミド結合は、スイッチ中間体のリンカーとＴＩＤのアミノ酸の間で形成することができる。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。低分子は、ＦＩＴＣでありうる。ＴＩＤは、ポリペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ポリペプチドは、抗体または抗体断片でありうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。
【０２２３】
本明細書で開示されるスイッチを生成する方法は、（ａ）（ｉ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）；および（ｉｉ）リンカーを含むスイッチ中間体を得るステップと、（ｂ）スイッチ中間体を、標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）と接触させ、これにより、スイッチを生成するステップとを含みうる。スイッチ中間体を、ＴＩＤと接触させるステップは、エステルカップリング反応を実施するステップを含みうる。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーを含みうる。ＴＩＤは、１つまたは複数のアミノ酸を含みうる。エステルカップリング反応を実施するステップは、スイッチ中間体のＮＨＳエステルリンカーと、ＴＩＤの１つまたは複数のアミノ酸の間で、アミド結合を形成するステップを含みうる。方法はさらに、複数のスイッチを生成するステップを含みうる。複数のスイッチの、２つまたはこれを超えるスイッチは、ＴＩＤの２つまたはこれを超える異なるアミノ酸に結合している、２つまたはこれを超えるスイッチ中間体を含みうる。例えば、第１のスイッチ中間体は、第１のＴＩＤのリシン残基に結合させることができ、第２のスイッチ中間体は、第２のＴＩＤのグリシン残基に結合させることができる。複数のスイッチの、２つまたはこれを超えるスイッチは、ＴＩＤの同じアミノ酸に結合している、２つまたはこれを超えるスイッチ中間体を含みうる。例えば、２つまたはこれを超えるスイッチ中間体は、第１のＴＩＤおよび第２のＴＩＤのリシン残基に結合させることができる。複数のスイッチの、２つまたはこれを超えるスイッチは、ＴＩＤ内の２つまたはこれを超える異なる位置に位置する同じアミノ酸に結合している、２つまたはこれを超えるスイッチ中間体を含みうる。例えば、第１のスイッチ中間体は、第１のＴＩＤのリシン１０に結合させることができ、第２のスイッチ中間体は、第２のＴＩＤのリシン４５に結合させることができる。複数のスイッチの、２つまたはこれを超えるスイッチは、ＴＩＤ内の同じ位置に位置する同じアミノ酸に結合している、２つまたはこれを超えるスイッチ中間体を含みうる。例えば、第１のスイッチ中間体は、第１のＴＩＤのリシン１０に結合させることができ、第２のスイッチ中間体は、第２のＴＩＤのリシン１０に結合させることができる。
【０２２４】
本明細書で開示されるスイッチを生成する方法は、１つまたは複数の非天然アミノ酸を使用するステップを含みうる。方法は、１つまたは複数の非天然アミノ酸を、ＣＡＲ−ＩＤに組み込むステップを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体と相互作用しうるポリペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ポリペプチドは、非抗体ベースのポリペプチドでありうる。一般に、非抗体ベースのポリペプチドは、抗体または抗体断片を含まないポリペプチドである。非天然アミノ酸は、非抗体ベースのポリペプチドに組み込むことができる。非天然アミノ酸は、非抗体ベースのポリペプチドのアミノ酸と置き換わることができる。代替的に、または加えて、方法は、１つまたは複数の非天然アミノ酸を、ＴＩＤに組み込むステップを含みうる。ＴＩＤは、ポリペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ポリペプチドは、抗体でありうる。ポリペプチドは、非抗体ベースのポリペプチドでありうる。非天然アミノ酸は、ポリペプチドに組み込むことができる。非天然アミノ酸は、ポリペプチドのアミノ酸と置き換わることができる。
【０２２５】
スイッチを生成する方法はさらに、ＣＡＲ−ＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来するポリペプチド内の、１つまたは複数のアミノ酸残基を修飾するステップを含みうる。スイッチを生成する方法は、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来するポリペプチド内の、１つまたは複数のアミノ酸残基を修飾するステップを含みうる。１つまたは複数のアミノ酸残基を修飾するステップは、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列内の１つまたは複数のヌクレオチドを変異させるステップを含みうる。コードするヌクレオチド配列内の１つまたは複数のヌクレオチドを変異させるステップは、アミノ酸をコードするコドンを、ナンセンスコドンに変化させるステップを含みうる。
【０２２６】
１つまたは複数の非天然アミノ酸を、ＣＡＲ−ＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来するポリペプチドに組み込むステップは、ポリペプチド内の１つまたは複数のアミノ酸残基を修飾して、抗体または抗体断片内に１つまたは複数のアンバーコドンを生成するステップを含みうる。１つまたは複数の非天然アミノ酸を、ＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来するポリペプチドに組み込むステップは、ポリペプチド内の１つまたは複数のアミノ酸残基を修飾して、抗体または抗体断片内に１つまたは複数のアンバーコドンを生成するステップを含みうる。
【０２２７】
１つまたは複数の非天然アミノ酸は、アンバーコドンに応答して、ポリペプチドへと組み込むことができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ポリペプチドへと部位特異的に組み込むことができる。
【０２２８】
１つまたは複数の非天然アミノ酸を、ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤがそれに基づくかまたはそれに由来するポリペプチドに組み込むステップは、抗体、抗体断片、またはターゲティングペプチドを部位特異的に修飾するために、カノニカルの２０種のアミノ酸に対して直交型の化学反応性を有する、１つまたは複数の遺伝子によりコードされる非天然アミノ酸の使用を含みうる。１つまたは複数の非天然アミノ酸を組み込むステップは、１つまたは複数のｔＲＮＡシンセターゼの使用を含みうる。ｔＲＮＡシンセターゼは、アミノアシルｔＲＮＡシンセターゼでありうる。ｔＲＮＡシンセターゼは、変異体のｔＲＮＡシンセターゼ（mutant  tRNA  synthesis）でありうる。１つまたは複数の非天然アミノ酸を組み込むステップは、ｔＲＮＡ／ｔＲＮＡシンセターゼ対を含みうる。ｔＲＮＡ／ｔＲＮＡシンセターゼ対は、ｔＲＮＡ／アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼ対を含みうる。ｔＲＮＡ／ｔＲＮＡシンセターゼ対は、ｔＲＮＡＴｙｒ／チロシル−ｔＲＮＡシンセターゼ対を含みうる。１つまたは複数の非天然アミノ酸を組み込むステップは、発展型ｔＲＮＡ／アミノアシル−ｔＲＮＡシンセターゼ対の使用であって、１つまたは複数の非天然アミノ酸を、１つまたは複数のアンバーナンセンスコドンに応答して、ポリペプチド内の規定された部位に、部位特異的に組み込むための使用を含みうる。
【０２２９】
非天然アミノ酸を組み込むためのさらなる方法は、Chatterjeeら（A  Versatile  Platform  for  Single-and  Multiple-Unnatural  Amino  Acid  Mutagenesis  in  Escherichia  coli、Biochemistry、２０１３年）、Kazaneら（J  Am  Chem  Soc、１３５巻（１号）：３４０〜６頁、２０１３年）、Kimら（J  Am  Chem  Soc、１３４巻（２４号）：９９１８〜２１頁、２０１２年）、Johnsonら（Nat  Chem  Biol、７巻（１１号）：７７９〜８６頁、２０１１年）およびHutchinsら（J  Mol  Biol、４０６巻（４号）：５９５〜６０３頁、２０１１年）において開示されている方法を含むがこれらに限定されない。
【０２３０】
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化するためのスイッチを生成する方法は、（ａ）非天然アミノ酸を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を得るステップと、（ｂ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を、ＴＩＤに結合させ、これにより、スイッチを生成するステップとを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＤＯＴＡ、ジニトロフェノール、キノン、ビオチン、アニリン、アトラジン、アニリン誘導体、ｏ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ヒドララジン、ハロタン、ジゴキシゲニン、ベンゼンアルソネート、ラクトース、トリニトロフェノール、ビオチンまたはその誘導体からなる群から選択され得る。ＣＡＲ−ＩＤは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ビオチンを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ジニトロフェノールを含みうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、葉酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、抗体または抗体断片に基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択され得る。抗体は、抗ＣＤ１９抗体でありうる。抗体は、抗ＥＧＦＲ抗体でありうる。抗体は、抗ＣＤ２０抗体でありうる。抗体は、抗ＨＥＲ２抗体でありうる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。抗体は、配列番号１０〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含みうる。抗体は、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つに基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。リンカーはさらに、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも４つのＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも１０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも２０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも３０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アジドを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミノオキシを含みうる。リンカーは、アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカーでありうる。リンカーは、一方の端部に、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールまたは１，２，４−トリアゾールでありうる。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーでありうる。リンカーは、ＴｒｉＡリンカーでありうる。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーでありうる。
【０２３１】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤのアミノ酸に結合させることを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位特異的な様式で結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤ内の所定の部位に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位に依存しない様式で結合させることができる。
【０２３２】
方法はさらに、第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させて、第１のスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化（one  or  cycloadditions）を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、オキシムライゲーションを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数のオキシムを形成するステップを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の安定な結合を形成するステップを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の共有結合を形成するステップを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の非共有結合を形成するステップを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数のイオン結合を形成するステップを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、リンカーを、ＴＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。
【０２３３】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップを含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。
【０２３４】
方法はさらに、第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させて、第２のスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、オキシムライゲーションを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数のオキシムを形成するステップを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の安定な結合を形成するステップを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の共有結合を形成するステップを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の非共有結合を形成するステップを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数のイオン結合を形成するステップを含みうる。
【０２３５】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップを含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させることは、１つまたは複数の付加環化（one  or  cycloadditions）を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させることは、銅非含有反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させることは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させることは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させることは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させることは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させることは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させることは、リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤのアミノ酸に結合させることを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させることは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。
【０２３６】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップを含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。
【０２３７】
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化するためのスイッチを生成する方法は、（ａ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を、標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）と接触させるステップと、（ｂ）ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤ上の所定の部位に結合させることによりスイッチを生成するステップとを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＤＯＴＡ、ジニトロフェノール、キノン、ビオチン、アニリン、アトラジン、アニリン誘導体、ｏ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ヒドララジン、ハロタン、ジゴキシゲニン、ベンゼンアルソネート、ラクトース、トリニトロフェノール、ビオチンまたはその誘導体からなる群から選択することができる。ＣＡＲ−ＩＤは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ビオチンを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ジニトロフェノールを含みうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、葉酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、抗体または抗体断片に基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択することができる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体でありうる。抗体は、抗ＥＧＦＲ抗体でありうる。抗体は、抗ＣＤ２０抗体でありうる。抗体は、抗ＨＥＲ２抗体でありうる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。抗体は、配列番号１０〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含みうる。抗体は、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つに基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。リンカーはさらに、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも４つのＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも１０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも２０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも３０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アジドを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミノオキシを含みうる。リンカーは、アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカーでありうる。リンカーは、一方の端部に、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールまたは１，２，４−トリアゾールでありうる。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーでありうる。リンカーは、ＴｒｉＡリンカーでありうる。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーでありうる。
【０２３８】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位特異的な様式で結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤ内の所定の部位に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位に依存しない様式で結合させることができる。
【０２３９】
方法はさらに、第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させて、第１のスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、オキシムライゲーションを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数のオキシムを形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の安定な結合を形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の共有結合を形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の非共有結合を形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数のイオン結合を形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、リンカーを、ＴＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。
【０２４０】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップを含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。
【０２４１】
方法はさらに、第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させて、第２のスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、オキシムライゲーションを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数のオキシムを形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の安定な結合を形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の共有結合を形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の非共有結合を形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数のイオン結合を形成することを含みうる。
【０２４２】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップを含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。
【０２４３】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップを含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。
【０２４４】
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化するためのスイッチを生成する方法は、（ａ）複数のキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を、複数の標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）と接触させるステップと、（ｂ）複数のＣＡＲ−ＩＤのうちの１つまたは複数のＣＡＲ−ＩＤを、複数のＴＩＤのうちの１つまたは複数のＴＩＤに結合させ、これにより、複数のスイッチを生成するステップであり、スイッチの少なくとも約６０％が、構造的に相同であるステップとを含みうる。スイッチの少なくとも約６５％、７０％、７２％、７５％、７７％、８０％、８２％、８５％、８７％、９０％、９２％、９５％、９７％、９９％、または１００％は、構造的に相同でありうる。スイッチの少なくとも約７０％は、構造的に相同でありうる。スイッチの少なくとも約７５％は、構造的に相同でありうる。スイッチの少なくとも約８０％は、構造的に相同でありうる。スイッチの少なくとも約８５％は、構造的に相同でありうる。スイッチの少なくとも約９０％は、構造的に相同でありうる。スイッチの少なくとも約９５％は、構造的に相同でありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＤＯＴＡ、ジニトロフェノール、キノン、ビオチン、アニリン、アトラジン、アニリン誘導体、ｏ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ヒドララジン、ハロタン、ジゴキシゲニン、ベンゼンアルソネート、ラクトース、トリニトロフェノール、ビオチンまたはその誘導体からなる群から選択することができる。ＣＡＲ−ＩＤは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ビオチンを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ジニトロフェノールを含みうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、葉酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、抗体または抗体断片に基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択することができる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体でありうる。抗体は、抗ＥＧＦＲ抗体でありうる。抗体は、抗ＣＤ２０抗体でありうる。抗体は、抗ＨＥＲ２抗体でありうる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。抗体は、配列番号１０〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含みうる。抗体は、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つに基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。リンカーはさらに、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも４つのＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも１０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも２０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも３０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アジドを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミノオキシを含みうる。リンカーは、アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカーでありうる。リンカーは、一方の端部に、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールまたは１，２，４−トリアゾールでありうる。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーでありうる。リンカーは、ＴｒｉＡリンカーでありうる。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーでありうる。
【０２４５】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位特異的な様式で結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤ内の所定の部位に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位に依存しない様式で結合させることができる。
【０２４６】
方法はさらに、第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させて、第１のスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化（one  or  cycloadditions）を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、オキシムライゲーションを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数のオキシムを形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の安定な結合を形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の共有結合を形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の非共有結合を形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数のイオン結合を形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、リンカーを、ＴＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。
【０２４７】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップを含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。
【０２４８】
方法はさらに、第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させて、第２のスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、オキシムライゲーションを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数のオキシムを形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の安定な結合を形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の共有結合を形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の非共有結合を形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数のイオン結合を形成することを含みうる。
【０２４９】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップを含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。
【０２５０】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップを含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化（one  or  cycloadditions）を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。
【０２５１】
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化するためのスイッチを生成する方法は、（ａ）複数のキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を、複数の標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）と接触させるステップと、（ｂ）複数のＣＡＲ−ＩＤのうちの１つのＣＡＲ−ＩＤを、複数のＴＩＤのうちの１つのＴＩＤに結合させ、これにより、複数のスイッチを生成するステップであって、ＣＡＲ−ＩＤを、スイッチの少なくとも約６０％において、ＴＩＤの同じアミノ酸残基に結合させるステップとを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、スイッチの少なくとも約６２％、６５％、６７％、７０％、７２％、７５％、７７％、８０％、８２％、８５％、８７％、９０％、９２％、９５％、９７％、９９％、または１００％において、ＴＩＤの同じアミノ酸残基に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、スイッチの少なくとも約７０％において、ＴＩＤの同じアミノ酸残基に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、スイッチの少なくとも約７５％において、ＴＩＤの同じアミノ酸残基に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、スイッチの少なくとも約８０％において、ＴＩＤの同じアミノ酸残基に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、スイッチの少なくとも約８５％において、ＴＩＤの同じアミノ酸残基に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、スイッチの少なくとも約９０％において、ＴＩＤの同じアミノ酸残基に結合させることができる。
【０２５２】
ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＤＯＴＡ、ジニトロフェノール、キノン、ビオチン、アニリン、アトラジン、アニリン誘導体、ｏ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ヒドララジン、ハロタン、ジゴキシゲニン、ベンゼンアルソネート、ラクトース、トリニトロフェノール、ビオチンまたはその誘導体からなる群から選択することができる。ＣＡＲ−ＩＤは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ビオチンを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ジニトロフェノールを含みうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、葉酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、抗体または抗体断片に基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択することができる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体でありうる。抗体は、抗ＥＧＦＲ抗体でありうる。抗体は、抗ＣＤ２０抗体でありうる。抗体は、抗ＨＥＲ２抗体でありうる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。抗体は、配列番号１０〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含みうる。抗体は、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つに基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。リンカーはさらに、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも４つのＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも１０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも２０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも３０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アジドを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミノオキシを含みうる。リンカーは、アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカーでありうる。リンカーは、一方の端部に、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールまたは１，２，４−トリアゾールでありうる。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーでありうる。リンカーは、ＴｒｉＡリンカーでありうる。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーでありうる。
【０２５３】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位特異的な様式で結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤ内の所定の部位に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位に依存しない様式で結合させることができる。
【０２５４】
方法はさらに、第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させて、第１のスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化（one  or  cycloadditions）を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、オキシムライゲーションを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数のオキシムを形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の安定な結合を形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の共有結合を形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の非共有結合を形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数のイオン結合を形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、リンカーを、ＴＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。
【０２５５】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップを含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。
【０２５６】
方法はさらに、第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させて、第２のスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、オキシムライゲーションを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数のオキシムを形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の安定な結合を形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の共有結合を形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の非共有結合を形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数のイオン結合を形成することを含みうる。
【０２５７】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップを含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化（one  or  cycloadditions）を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。
【０２５８】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップを含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化（one  or  cycloadditions）を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。
【０２５９】
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化するためのスイッチを生成する方法は、（ａ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を、標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）と接触させるステップと、（ｂ）ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに、オキシムコンジュゲーション、ヒュイスゲン付加環化、またはディールスアルダー反応により結合させ、これにより、スイッチを生成するステップとを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＤＯＴＡ、ジニトロフェノール、キノン、ビオチン、アニリン、アトラジン、アニリン誘導体、ｏ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ヒドララジン、ハロタン、ジゴキシゲニン、ベンゼンアルソネート、ラクトース、トリニトロフェノール、ビオチンまたはその誘導体からなる群から選択することができる。ＣＡＲ−ＩＤは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ビオチンを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ジニトロフェノールを含みうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、葉酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、抗体または抗体断片に基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択することができる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体でありうる。抗体は、抗ＥＧＦＲ抗体でありうる。抗体は、抗ＣＤ２０抗体でありうる。抗体は、抗ＨＥＲ２抗体でありうる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。抗体は、配列番号１０〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含みうる。抗体は、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つに基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。リンカーはさらに、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも４つのＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも１０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも２０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも３０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アジドを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミノオキシを含みうる。リンカーは、アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカーでありうる。リンカーは、一方の端部に、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールまたは１，２，４−トリアゾールでありうる。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーでありうる。リンカーは、ＴｒｉＡリンカーでありうる。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーでありうる。
【０２６０】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化（one  or  cycloadditions）を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位特異的な様式で結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤ内の所定の部位に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位に依存しない様式で結合させることができる。
【０２６１】
方法はさらに、第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させて、第１のスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化（one  or  cycloadditions）を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、オキシムライゲーションを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数のオキシムを形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の安定な結合を形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の共有結合を形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の非共有結合を形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数のイオン結合を形成することを含みうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、リンカーを、ＴＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。第１のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。
【０２６２】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップを含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化（one  or  cycloadditions）を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第１のスイッチ中間体を、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。
【０２６３】
方法はさらに、第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させて、第２のスイッチ中間体を生成するステップを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化（one  or  cycloadditions）を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、オキシムライゲーションを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数のオキシムを形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の安定な結合を形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の共有結合を形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の非共有結合を形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数のイオン結合を形成することを含みうる。
【０２６４】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップを含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップは、リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。第２のスイッチ中間体を、ＴＩＤに結合させるステップとは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。
【０２６５】
ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップを含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化（one  or  cycloadditions）を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に結合させるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。
【０２６６】
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化させるためのスイッチ中間体を生成する方法は、（ｂ）標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を、１つまたは複数の末端にアミノオキシ基、アジド基、および／またはシクロオクチン基を含むリンカーと接触させるステップと、（ｃ）リンカーを、ＴＩＤに結合させるステップとを含みうる。ＴＩＤは、抗体または抗体断片に基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択することができる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体でありうる。抗体は、抗ＥＧＦＲ抗体でありうる。抗体は、抗ＣＤ２０抗体でありうる。抗体は、抗ＨＥＲ２抗体でありうる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。抗体は、配列番号１０〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含みうる。抗体は、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つに基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。リンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、オキシムを形成するステップを含みうる。オキシムは、ＴＩＤ上のアミノ酸のケトンと、リンカー上のアミノオキシ基の間で形成することができる。オキシムは、リンカーのアルコキシアミン基と、非天然アミノ酸のケトンの間で形成することができる。オキシムは、リンカーのアルコキシアミン基と、非天然アミノ酸のケトンの間で形成することができ、ここで、非天然アミノ酸は、ｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦ）である。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、シクロオクチン基、またはこれらの組合せを含みうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも４つのＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも１０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも２０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも３０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アジドを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミノオキシを含みうる。リンカーは、アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカーでありうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールまたは１，２，４−トリアゾールでありうる。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーでありうる。リンカーは、ＴｒｉＡリンカーでありうる。リンカーは、ＮＨＳエステルリンカーでありうる。
【０２６７】
リンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化（one  or  cycloadditions）を含みうる。リンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。リンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。リンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。リンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。リンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。リンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、オキシムライゲーションを含みうる。リンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、リンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数のオキシムを形成することを含みうる。リンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、リンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の安定な結合を形成することを含みうる。リンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、リンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の共有結合を形成することを含みうる。リンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、リンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の非共有結合を形成することを含みうる。リンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、リンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数のイオン結合を形成することを含みうる。リンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、リンカーを、ＴＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。リンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。
【０２６８】
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を活性化させるためのスイッチ中間体を生成する方法は、（ａ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を、リンカーと接触させるステップであって、リンカーが、１つまたは複数の末端に、アミノオキシ基、アジド基、および／またはシクロオクチン基を含むステップと、（ｂ）リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップとを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＤＯＴＡ、ジニトロフェノール、キノン、ビオチン、アニリン、アトラジン、アニリン誘導体、ｏ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ヒドララジン、ハロタン、ジゴキシゲニン、ベンゼンアルソネート、ラクトース、トリニトロフェノール、ビオチンまたはその誘導体からなる群から選択することができる。ＣＡＲ−ＩＤは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ビオチンを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ジニトロフェノールを含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。リンカーはさらに、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも４つのＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも１０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも２０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、少なくとも３０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アジドを含みうる。リンカーは、一方の端部に、アミノオキシを含みうる。リンカーは、アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカーでありうる。リンカーは、一方の端部に、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに、オキシムライゲーションにより結合させることができる。
【０２６９】
リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化（one  or  cycloadditions）を含みうる。リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、オキシムライゲーションを含みうる。リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、リンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数のオキシムを形成することを含みうる。リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、リンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の安定な結合を形成することを含みうる。リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、リンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の共有結合を形成することを含みうる。リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、リンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の非共有結合を形成することを含みうる。リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、リンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数のイオン結合を形成することを含みうる。リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。
【０２７０】
式ＩＶ：Ｘ−Ｌ１−Ｌ２−Ｙまたは式ＩＶＡ：Ｙ−Ｌ２−Ｌ１−Ｘのスイッチを生成する方法は、（ａ）Ｌ１を、Ｘにカップリングさせて、式ＩＩＡ：Ｌ１−Ｘ（式中、（ｉ）Ｘは、エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を含み；（ｉｉ）Ｌ１は、Ｘにカップリングさせる前の第１のリンカーを含む）の第１のスイッチ中間体を生成するステップと、（ｂ）Ｌ２を、Ｙにカップリングさせて、式ＶＡ：Ｙ−Ｌ２（式中、（ｉ）Ｙは、標的細胞上の表面分子と相互作用する標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含み；（ｉｉ）Ｌ２は、Ｘにカップリングさせる前の第２のリンカーを含む）の第２のスイッチ中間体を生成するステップと、（ｃ）第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体に連結し、これにより、式ＩＶまたはＩＶＡのスイッチを生成するステップとを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＤＯＴＡ、ジニトロフェノール、キノン、ビオチン、アニリン、アトラジン、アニリン誘導体、ｏ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ヒドララジン、ハロタン、ジゴキシゲニン、ベンゼンアルソネート、ラクトース、トリニトロフェノール、ビオチンまたはその誘導体からなる群から選択することができる。ＣＡＲ−ＩＤは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ビオチンを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ジニトロフェノールを含みうる。
【０２７１】
第１のリンカーは、二官能性リンカーでありうる。第１のリンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。第１のリンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。第１のリンカーはさらに、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。第１のリンカーは、少なくとも４つのＰＥＧサブユニットを含みうる。第１のリンカーは、少なくとも１０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。第１のリンカーは、少なくとも２０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。第１のリンカーは、少なくとも３０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。第１のリンカーは、一方の端部に、アジドを含みうる。第１のリンカーは、一方の端部に、アミノオキシを含みうる。第１のリンカーは、アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカーでありうる。第１のリンカーは、一方の端部に、シクロオクチンを含みうる。第１のリンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。
【０２７２】
ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、葉酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、抗体または抗体断片に基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択することができる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体でありうる。抗体は、抗ＥＧＦＲ抗体でありうる。抗体は、抗ＣＤ２０抗体でありうる。抗体は、抗ＨＥＲ２抗体でありうる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。抗体は、配列番号１０〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含みうる。抗体は、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つに基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。
【０２７３】
第２のリンカーは、二官能性リンカーでありうる。第２のリンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。第２のリンカーは、ホモ二官能性リンカーでありうる。第２のリンカーはさらに、１つまたは複数のポリエチレングリコールサブユニットを含みうる。第２のリンカーは、少なくとも４つのＰＥＧサブユニットを含みうる。第２のリンカーは、少なくとも１０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。第２のリンカーは、少なくとも２０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。第２のリンカーは、少なくとも３０個のＰＥＧサブユニットを含みうる。第２のリンカーは、一方の端部に、アジドを含みうる。第２のリンカーは、一方の端部に、アミノオキシを含みうる。第２のリンカーは、アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカーでありうる。第２のリンカーは、一方の端部に、シクロオクチンを含みうる。第２のリンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。
【０２７４】
方法はさらに、１つまたは複数の非天然アミノ酸を、Ｘに組み込むステップを含みうる。Ｌ１を、Ｘにカップリングさせるステップは、Ｌ１を、Ｘ内の非天然アミノ酸に結合させるステップを含みうる。Ｌ１を、Ｘにカップリングさせるステップは、部位特異的結合を含みうる。Ｌ１を、Ｘにカップリングさせるステップは、Ｌ１を、所定の部位内のＸに結合させるステップを含みうる。Ｌ１を、Ｘにカップリングさせるステップは、オキシムライゲーションを含みうる。Ｌ１を、Ｘにカップリングさせるステップは、エステルカップリングを含みうる。
【０２７５】
方法はさらに、１つまたは複数の非天然アミノ酸を、Ｙへと組み込むステップを含みうる。Ｌ２を、Ｙにカップリングさせるステップは、Ｌ２を、Ｙ内の非天然アミノ酸に結合させるステップを含みうる。Ｌ２を、Ｙにカップリングさせるステップは、部位特異的結合を含みうる。Ｌ２を、Ｙにカップリングさせるステップは、Ｌ２を、所定の部位内のＹに結合させるステップを含みうる。Ｌ２を、Ｙにカップリングさせるステップは、オキシムライゲーションを含みうる。Ｌ２を、Ｙにカップリングさせるステップは、エステルカップリングを含みうる。
【０２７６】
第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体にカップリングさせるステップは、１つまたは複数の付加環化（one  or  cycloadditions）を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、［３＋２］ヒュイスゲン付加環化を含みうる。１つまたは複数の付加環化は、銅非含有付加環化を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体にカップリングさせるステップは、銅非含有反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体にカップリングさせるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体にカップリングさせるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体にカップリングさせるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体にカップリングさせるステップは、１つまたは複数のイソチオシアネートカップリングを含みうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体にカップリングさせるステップは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。第１のスイッチ中間体を第２のスイッチ中間体にカップリングさせるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。第１のスイッチ中間体は、第２のスイッチ中間体に、部位特異的な様式で結合させることができる。第１のスイッチ中間体は、第２のスイッチ中間体内の所定の部位に結合させることができる。第１のスイッチ中間体は、第２のスイッチ中間体に、部位に依存しない様式で結合させることができる。
【０２７７】
第１のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化（one  or  cycloadditions）を含みうる。第１のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第１のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第１のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第１のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第１のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第１のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、オキシムライゲーションを含みうる。第１のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数のオキシムを形成するステップを含みうる。第１のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の安定な結合を形成するステップを含みうる。第１のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の共有結合を形成するステップを含みうる。第１のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数の非共有結合を形成するステップを含みうる。第１のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、第１のリンカーとＣＡＲ−ＩＤの間で、１つまたは複数のイオン結合を形成するステップを含みうる。第１のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、リンカーを、ＣＡＲ−ＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。第１のリンカーを、ＣＡＲ−ＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。
【０２７８】
第２のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の付加環化（one  or  cycloadditions）を含みうる。第２のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、銅非含有反応を含みうる。第２のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の銅含有反応を含みうる。第２のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のディールスアルダー反応を含みうる。第２のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のヘテロディールスアルダー反応を含みうる。第２のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数のエステルカップリングを含みうる。第２のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、オキシムライゲーションを含みうる。第２のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数のオキシムを形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の安定な結合を形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の共有結合を形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数の非共有結合を形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、第２のリンカーとＴＩＤの間で、１つまたは複数のイオン結合を形成することを含みうる。第２のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、リンカーを、ＴＩＤのアミノ酸に結合させるステップを含みうる。アミノ酸は、非天然アミノ酸でありうる。第２のリンカーを、ＴＩＤに結合させるステップは、１つまたは複数の生体直交型反応を含みうる。
【０２７９】
本明細書で開示されるスイッチを生成する方法はさらに、スイッチを精製するステップを含みうる。方法はさらに、ＴＩＤ、ＣＡＲ−ＩＤ、リンカー、またはこれらの任意の組合せ（combinatino）を精製するステップを含みうる。方法はさらに、１つまたは複数のスイッチ中間体を精製するステップを含みうる。ＴＩＤは、ポリペプチドを含みうる。ポリペプチドは、抗体または抗体断片を含みうる。スイッチ中間体は、ＴＩＤおよびリンカーを含みうる。スイッチおよびスイッチ中間体を精製するステップは、過剰なリンカー、過剰なＴＩＤ、および過剰なＣＡＲ−ＩＤを除去するステップを含みうる。過剰なリンカー、過剰なＴＩＤ、および過剰なＣＡＲ−ＩＤは、同時に除去することができる。過剰なリンカー、過剰なＴＩＤ、および過剰なＣＡＲ−ＩＤは、逐次的に除去することができる。ポリペプチドを含むＴＩＤおよびＣＡＲ−ＩＤの除去は、スイッチ、スイッチ中間体、リンカー、ＣＡＲ−ＩＤ、および／またはＴＩＤを含む溶液を、１つまたは複数のプロテアーゼで処理することを含みうる。スイッチ、スイッチ中間体、リンカー、ＣＡＲ−ＩＤ、および／またはＴＩＤを精製するステップは、カラム精製を含みうる。スイッチ、スイッチ中間体、リンカー、ＣＡＲ−ＩＤ、および／またはＴＩＤを精製するステップは、１つまたは複数の濃縮用カラム、電気泳動、濾過、遠心分離、クロマトグラフィー、またはこれらの組合せの使用を含みうる。クロマトグラフィーは、サイズ排除クロマトグラフィーを含みうる。さらなるクロマトグラフィー法は、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、金属結合、イムノアフィニティークロマトグラフィー、および高速液体クロマトグラフィーまたは高圧液体クロマトグラフィーを含むがこれらに限定されない。電気泳動は、変性電気泳動または非変性電気泳動を含みうる。
【０２８０】
スイッチ、スイッチ中間体、リンカー、ＣＡＲ−ＩＤ、および／またはＴＩＤは、１つまたは複数の精製タグまたは精製分子を含みうる。リンカーは、１つまたは複数のタグを含みうる。タグを使用して、スイッチ、スイッチ中間体、リンカー、ＣＡＲ−ＩＤ、および／またはＴＩＤを精製することができる。タグの例は、ポリヒスチジン、ＦＬＡＧ（登録商標）タグ、ＨＡ、ｃ−ｍｙｃ、Ｖ５、キチン結合タンパク質（ＣＢＰ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、およびグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を含むがこれらに限定されない。タグは、非ペプチドタグでありうる。タグは、ビオチンでありうる。１つまたは複数のタグは、１つまたは複数のプロテアーゼにより切断されうる。
【０２８１】
方法はさらに、ＣＡＲ−ＢＰ、ＣＡＲ−ＩＤ、ＣＡＲ−ＩＤ、ＴＣ、ＴＩＤおよびこれらの中間体の凍結乾燥または超遠心分離を含みうる。
【０２８２】
スイッチ、スイッチ中間体、リンカー、ＣＡＲ−ＩＤ、および／またはＴＩＤの純度は、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはこれを上回る％と同等でありうるか、または５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはこれを上回る％を超えうる。スイッチ、スイッチ中間体、リンカー、ＣＡＲ−ＩＤ、および／またはＴＩＤの純度は、８５％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。スイッチ、スイッチ中間体、リンカー、ＣＡＲ−ＩＤ、および／またはＴＩＤの純度は、９０％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。スイッチ、スイッチ中間体、リンカー、ＣＡＲ−ＩＤ、および／またはＴＩＤの純度は、９５％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。ＣＡＲ−ＢＰ、ＣＡＲ−ＩＤ、ＣＡＲ−ＩＤ、ＴＣ、ＴＩＤおよびこれらの中間体の純度は、９７％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。
【０２８３】
本明細書で開示されるスイッチまたはスイッチ中間体の均質性は、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはこれを上回る％と同等でありうるか、または５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはこれを上回る％を超えうる。スイッチまたはスイッチ中間体の均質性は、８５％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。スイッチまたはスイッチ中間体の均質性は、９０％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。スイッチまたはスイッチ中間体の均質性は、９５％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。スイッチまたはスイッチ中間体の均質性は、９７％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。均質性とは、構造的均質性を指す場合がある。均質性は、細胞を被験体に投与する前の構造的均質性でありうる。均質性は、細胞活性によるＣＡＲ−ＥＣスイッチへの修飾（メチル化、アセチル化、グリコシル化など）の前の構造的均質性でありうる。これらの高百分率の均質性は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの効果の予測可能性の増大をもたらしうる。これらの高百分率の均質性は、被験体における状態を処置するように、ＣＡＲ−ＥＣと組み合わされた場合の、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのオフターゲット効果の減少をもたらしうる。
【０２８４】
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成する方法は、純度が５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはこれを上回る％と同等であるか、または５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはこれを上回る％を超える複数のスイッチを生成するステップを含みうる。複数のスイッチの純度は、８５％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。複数のスイッチの純度は、９０％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。複数のスイッチは、９５％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。複数のスイッチの純度は、９７％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。純度は、当技術分野で公知の方法（例えば、色、水分含量、発熱物質含量、不純物含量など）により評価することができる。ＦＩＴＣを含むＣＡＲ−ＩＤおよびポリペプチドを含むＴＩＤを含む複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチであって、オキシムコンジュゲーション、ヒュイスゲン付加環化、またはディールスアルダー反応により生成されるＣＡＲ−ＥＣスイッチの純度は、７０％、７５％、８０％、８２％、８５％、８７％、９０％、９２％、９５％、９７％、または９９％を超えうる。ＦＩＴＣを含むＣＡＲ−ＩＤおよびポリペプチドを含むＴＩＤを含む複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチであって、オキシムコンジュゲーション、ヒュイスゲン付加環化、またはディールスアルダー反応により生成されるＣＡＲ−ＥＣスイッチの純度は、８５％を超えうる。ＦＩＴＣを含むＣＡＲ−ＩＤおよびポリペプチドを含むＴＩＤを含む複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチであって、オキシムコンジュゲーション、ヒュイスゲン付加環化、またはディールスアルダー反応により生成されるＣＡＲ−ＥＣスイッチの純度は、９０％を超えうる。ＦＩＴＣを含むＣＡＲ−ＩＤおよびポリペプチドを含むＴＩＤを含む複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチであって、オキシムコンジュゲーション、ヒュイスゲン付加環化、またはディールスアルダー反応により生成されるＣＡＲ−ＥＣスイッチの純度は、９５％を超えうる。ＦＩＴＣを含むＣＡＲ−ＩＤおよび低分子を含むＴＩＤを含む複数のスイッチであって、化学合成により生成されるスイッチの純度は、７０％、７５％、８０％、８２％、８５％、８７％、９０％、９２％、９５％、９７％、または９９％を超える純度でありうる。ＦＩＴＣを含むＣＡＲ−ＩＤおよび低分子を含むＴＩＤを含む複数のスイッチであって、化学合成により生成されるスイッチの純度は、８０％を超える純度でありうる。ＦＩＴＣを含むＣＡＲ−ＩＤおよび低分子を含むＴＩＤを含む複数のスイッチであって、化学合成により生成されるスイッチの純度は、８５％を超える純度でありうる。ＦＩＴＣを含むＣＡＲ−ＩＤおよび低分子を含むＴＩＤを含む複数のスイッチであって、化学合成により生成されるスイッチの純度は、９０％を超える純度でありうる。ＦＩＴＣを含むＣＡＲ−ＩＤおよび低分子を含むＴＩＤを含む複数のスイッチであって、化学合成により生成されるスイッチの純度は、９５％を超える純度でありうる。ＦＩＴＣを含むＣＡＲ−ＩＤおよび低分子を含むＴＩＤを含む複数のスイッチであって、化学合成により生成されるスイッチの純度は、９８％を超える純度でありうる。
【０２８５】
キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）
本明細書で開示される方法、プラットフォーム、およびキットは、１つまたは複数のキメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）またはそれらの使用を含みうる。方法、プラットフォーム、またはキットは、２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣまたはそれらの使用を含む。方法、プラットフォーム、またはキットは、複数のＣＡＲ−ＥＣまたはそれらの使用を含みうる。複数のＣＡＲ−ＥＣのうちの少なくとも２つは、同じ細胞型のものでありうる。複数のＣＡＲ−ＥＣのうちの少なくとも２つは、同じ細胞系統のものでありうる。複数のＣＡＲ−ＥＣのうちの少なくとも２つは、異なる細胞型のものでありうる。複数のＣＡＲ−ＥＣのうちの少なくとも２つは、異なる細胞系統のものでありうる。複数のＣＡＲ−ＥＣのうちの少なくとも２つは、同一のＣＡＲを含みうる。複数のＣＡＲ−ＥＣのうちの少なくとも２つは、２つまたはこれを超える異なるＣＡＲを含みうる。複数のＣＡＲ−ＥＣのうちの少なくとも２つは、２つまたはこれを超える類似のＣＡＲを含みうる。
【０２８６】
ＣＡＲ−ＥＣは、ＣＡＲを発現させるエフェクター細胞を含みうる。エフェクター細胞は、Ｔ細胞でありうる。エフェクター細胞は、Ｔ細胞系統の細胞でありうる。エフェクター細胞は、成熟Ｔ細胞でありうる。エフェクター細胞は、前駆体Ｔ細胞でありうる。エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞でありうる。エフェクター細胞は、ナイーブＴ細胞でありうる。エフェクター細胞は、メモリーＴ幹細胞（ＴＭＳＣ）でありうる。エフェクター細胞は、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）でありうる。エフェクター細胞は、エフェクターＴ細胞（ＴＥ）でありうる。エフェクター細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞でありうる。Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞でありうる。エフェクター細胞は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞でありうる。エフェクター細胞は、αβＴ細胞でありうる。エフェクター細胞は、γδＴ細胞でありうる。エフェクター細胞は、ナチュラルキラーＴ細胞でありうる。エフェクター細胞は、ヘルパーＴ細胞でありうる。Ｔ細胞は、ＦｏｘＰ３を過剰発現させうる。
【０２８７】
エフェクター細胞は、標的または標的細胞に近接させると、標的または標的細胞に対して効果を有するエフェクター細胞でありうる。エフェクター細胞は、標的または標的細胞に近接させると、標的または標的細胞に対して細胞傷害性効果を有する細胞でありうる。エフェクター細胞は、免疫細胞でありうる。エフェクター細胞は、Ｂ細胞、単球、血小板、白血球、好中球、好酸球、好塩基球、マクロファージ、またはリンパ球から選択することができる。エフェクター細胞は、リンパ球でありうる。エフェクター細胞は、マクロファージでありうる。エフェクター細胞は、食細胞でありうる。エフェクター細胞は、エフェクターＢ細胞でありうる。エフェクター細胞は、ナチュラルキラー細胞でありうる。エフェクター細胞は、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチまたはスイッチ中間体で処置される被験体に由来する細胞でありうる。
【０２８８】
ＣＡＲ−ＥＣは、配列番号１〜４から選択される、１つまたは複数のポリヌクレオチドを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣは、配列番号１〜４から選択される、１つまたは複数のポリヌクレオチドと、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一なポリヌクレオチドを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣは、配列番号１〜４から選択される、１つまたは複数のポリヌクレオチドと少なくとも約７０％同一なポリヌクレオチドを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣは、配列番号１〜４から選択される、１つまたは複数のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを発現させうる。ＣＡＲ−ＥＣは、配列番号１〜４から選択される、１つまたは複数のポリヌクレオチドと、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一なポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを発現させうる。ポリヌクレオチドは、構成的に発現させることができる。ポリヌクレオチドは、条件的に発現させることができる。例えば、ＣＡＲ−ＥＣ内のポリヌクレオチドの発現を活性化させるために、薬物を、ＣＡＲ−ＥＣに投与する。代替的に、ＣＡＲ−ＥＣ内のポリヌクレオチドの発現を停止させるために、薬物を、ＣＡＲ−ＥＣに投与する。
【０２８９】
本明細書では、１つまたは複数のＣＡＲ−ＥＣを生成する方法が開示される。方法は、（ａ）エフェクター細胞に、配列番号１〜４から選択される、１つまたは複数のポリヌクレオチドを含む１つまたは複数のウイルスを感染させるステップと、（ｂ）エフェクター細胞を、培養培地中で培養し、これにより、ＣＡＲ−ＥＣを生成するステップとを含みうる。方法はさらに、１つまたは複数の試薬を、培養培地に投与して、ポリヌクレオチドの発現を刺激するステップを含みうる。方法はさらに、１つまたは複数の試薬を、培養培地に投与して、ＣＡＲ−ＥＣについて富化するステップを含みうる。例えば、ポリヌクレオチドはさらに、ウイルスを感染させたエフェクター細胞について富化するのに使用しうる薬物選択マーカーを含みうる。方法はさらに、ＣＡＲ−ＥＣを精製するステップを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣを精製するステップは、細胞分取器を使用するステップを含みうる。例えば、ポリヌクレオチドはさらに、ウイルスを感染させたエフェクター細胞を精製するのに使用しうる検出用マーカー（例えば、蛍光タンパク質）を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣを精製するステップは、陽性選択を含みうる。例えば、エフェクター細胞とＣＡＲ−ＥＣとを含む混合物は、ＣＡＲ−ＥＣのＣＡＲと相互作用しうる分子を含むカラムに通すことができる。したがって、ＣＡＲ−ＥＣは、カラムに結合させることができ、感染に成功しなかったエフェクター細胞は、溶出物中に放出される。カラムは、複数回にわたり洗浄することができる。ＣＡＲ−ＥＣは、カラムから溶出させることができる。ＣＡＲ−ＥＣを精製するステップは、陰性選択を含みうる。例えば、感染したエフェクター細胞内のＣＡＲの発現は、表面分子の下方調節を結果としてもたらしうる。エフェクター細胞とＣＡＲ−ＥＣとを含む混合物は、下方調節された表面分子と相互作用しうる分子を含むカラムに通すことができる。したがって、感染していないエフェクター細胞は、カラムに結合させることができ、ＣＡＲを発現させるエフェクター細胞は、溶出物中に放出される。ウイルスは、レンチウイルスでありうる。ウイルスは、アデノウイルスでありうる。ウイルスは、レトロウイルスでありうる。ウイルスは、アデノ随伴ウイルスでありうる。ウイルスは、自己相補型アデノ随伴ウイルス（ｓｃＡＡＶ）でありうる。ウイルスは、改変ヒト免疫不全（ＨＩＶ）ウイルスでありうる。ウイルスは、改変単純ヘルペス（ＨＳＶ）ウイルスでありうる。
【０２９０】
ＣＡＲ−ＥＣを生成する方法は、（ａ）エフェクター細胞に、配列番号１〜４から選択される、１つまたは複数のポリヌクレオチドを含む１つまたは複数のベクターをトランスフェクトするステップと、（ｂ）エフェクター細胞を、培養培地中で培養し、これにより、ＣＡＲ−ＥＣを生成するステップとを含みうる。方法はさらに、１つまたは複数の試薬を、培養培地に投与して、ポリヌクレオチドの発現を刺激するステップを含みうる。方法はさらに、１つまたは複数の試薬を、培養培地に投与して、ＣＡＲ−ＥＣについて富化するステップを含みうる。例えば、ポリヌクレオチドはさらに、トランスフェクトされたエフェクター細胞について富化するのに使用しうる薬物選択マーカーを含みうる。方法はさらに、ＣＡＲ−ＥＣを精製するステップを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣを精製するステップは、細胞分取器を使用するステップを含みうる。例えば、ポリヌクレオチドはさらに、トランスフェクトされたエフェクター細胞を精製するのに使用しうる検出用マーカー（例えば、蛍光タンパク質）を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣを精製するステップは、陽性選択を含みうる。例えば、エフェクター細胞とＣＡＲ−ＥＣとを含む混合物は、ＣＡＲ−ＥＣのＣＡＲと相互作用しうる分子を含むカラムに通すことができる。したがって、ＣＡＲ−ＥＣは、カラムに結合させることができ、トランスフェクトするのに成功しなかったエフェクター細胞は、溶出物中に放出される。カラムは、複数回にわたり洗浄することができる。ＣＡＲ−ＥＣは、カラムから溶出させることができる。ＣＡＲ−ＥＣを精製するステップは、陰性選択を含みうる。例えば、トランスフェクトされたエフェクター細胞内のＣＡＲの発現は、表面分子の下方調節を結果としてもたらしうる。エフェクター細胞とＣＡＲ−ＥＣとを含む混合物は、下方調節された表面分子と相互作用しうる分子を含むカラムに通すことができる。したがって、トランスフェクトされていないエフェクター細胞は、カラムに結合させることができ、ＣＡＲを発現させるエフェクター細胞は、溶出物中に放出される。
【０２９１】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本明細書で開示されるスイッチは、ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と相互作用し、これにより、ＣＡＲ−ＥＣの活性を調節することが可能である。一般に、ＣＡＲ−ＩＤの、ＣＡＲとの相互作用は、細胞による免疫応答の活性化を結果としてもたらしうる。ＣＡＲは、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含みうる。細胞外ドメインは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのＣＡＲ−ＩＤと相互作用しうる。細胞外ドメインは、抗体の少なくとも一部を含みうる。場合によって、抗体は、全長抗体ではない。細胞外ドメインは、免疫グロブリンまたはその断片の少なくとも一部を含みうる。免疫グロブリンまたはその断片は、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ｓｃＦｖ、ｄｉ−ｓｃＦｖ、ｂｉ−ｓｃＦｖ、およびＦａｂ、Ｆｃ、Ｆ（ａｂ’）２、ｐＦｃ’、ナノボディー、アフィボディー、ＤＡＲＰｉｎ、ダイアボディー、ラクダ科動物抗体（camelid）、操作Ｔ細胞受容体、またはモノボディーを含む群から選択することができる。免疫グロブリンは、ＩｇＧ４を含みうる。
【０２９２】
抗体の結合アフィニティーは、約０．０１ｐＭ、約０．０２ｐＭ、約０．０３ｐＭ、約０．０４ｐＭ、０．０５ｐＭ、約０．０６ｐＭ、約０．０７ｐＭ、約０．０８ｐＭ、約０．０９ｐＭ、約０．１ｐＭ、約０．２ｐＭ、０．３ｐＭ、約０．４ｐＭ、約０．５ｐＭ、約０．６ｐＭ、約０．７ｐＭ、約０．８ｐＭ、約０．９ｐＭ、または約１ｐＭ、約２ｐＭ、約３ｐＭ、約４ｐＭ、約５ｐＭ、約６ｐＭ、約７ｐＭ、約８ｐＭ、約９ｐＭ、約１０ｐＭ、約０．０１ｎＭ、約０．０２ｎＭ、約０．０３ｎＭ、約０．０４ｎＭ、約０．０５ｎＭ、約０．０６ｎＭ、約０．０７ｎＭ、約０．０８ｎＭ、約０．０９ｎＭ、約０．１ｎＭ、約０．２ｎＭ、約０．３ｎＭ、約０．４ｎＭ、約０．５ｎＭ、約０．６ｎＭ、約０．７ｎＭ、約０．８ｎＭ、約０．９ｎＭ、約１ｎＭ、約２ｎＭ、約３ｎＭ、約４ｎＭ、約５ｎＭ、約６ｎＭ、約７ｎＭ、約８ｎＭ、約９ｎＭ、約１０ｎＭ、約１２ｎＭ、約１４ｎＭ、約１６ｎＭ、約１８ｎＭ、約２０ｎＭ、約２２ｎＭ、約２４ｎＭ、約２６ｎＭ、約２８ｎＭ、または約３０ｎＭでありうる。細胞外ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部を含みうる。細胞外ドメインは、アビジンまたはこれらの断片を含みうる。細胞外ドメインは、アビジンまたはその断片を含みえない。抗体は、抗ＦＩＴＣ抗体またはその断片を含みうる。抗ＦＩＴＣ抗体は、抗ＦＩＴＣ  ｓｃＦｖでありうる。抗ＦＩＴＣ  ｓｃＦｖは、４−４−２０、４Ｄ５Ｆｌｕ、４Ｍ５．３、およびＦＩＴＣ−Ｅ２から選択することができる。抗ＦＩＴＣ  ｓｃＦｖは、配列番号１〜４から選択される配列によりコードされうる。
【０２９３】
ＦＩＴＣに対する抗体またはその断片の、ＦＩＴＣに対する結合アフィニティーは、０．１ｐＭ未満でありうる。ＦＩＴＣに対する抗体またはその断片の、ＦＩＴＣに対する結合アフィニティーは、約０．１ｐＭ〜約１ｐＭの間でありうる。ＦＩＴＣに対する抗体またはその断片の、ＦＩＴＣに対する結合アフィニティーは、約１ｐＭ〜約１０ｐＭの間でありうる。ＦＩＴＣに対する抗体またはその断片の、ＦＩＴＣに対する結合アフィニティーは、約１０ｐＭ、約２０ｐＭ、約３０ｐＭ、約４０ｐＭ、約５０ｐＭ、約６０ｐＭ、約７０ｐＭ、約８０ｐＭ、約９０ｐＭ、または約１００ｐＭでありうる。ＦＩＴＣに対する抗体またはその断片の、ＦＩＴＣに対する結合アフィニティーは、約１００ｐＭ、約２００ｐＭ、約３００ｐＭ、約４００ｐＭ、約５００ｐＭ、約６００ｐＭ、約７００ｐＭ、約８００ｐＭ、約９００ｐＭ、または約１ｎＭでありうる。ＦＩＴＣに対する抗体またはその断片の、ＦＩＴＣに対する結合アフィニティーは、約１ｎＭ、約２ｎＭ、約３ｎＭ、約４ｎＭ、約５ｎＭ、約６ｎＭ、約７ｎＭ、約８ｎＭ、約９ｎＭ、または約１０ｎＭでありうる。ＦＩＴＣに対する抗体またはその断片の、ＦＩＴＣに対する結合アフィニティーは、約１０ｎＭ、約１５ｎＭ、約２０ｎＭ、約２５ｎＭ、約３０ｎＭ、約３５ｎＭ、約４０ｎＭ、約４５ｎＭ、または約５０ｎＭでありうる。ＦＩＴＣに対する抗体またはその断片の、ＦＩＴＣに対する結合アフィニティーは、５０ｎＭを超えうる。ＦＩＴＣに対する抗体は、抗ＦＩＴＣ  ｓｃＦｖまたはその断片を含みうる。抗ＦＩＴＣ  ｓｃＦｖは、４−４−２０、４Ｄ５Ｆｌｕ、４Ｍ５．３、およびＦＩＴＣ−Ｅ２を含む群から選択することができる。４−４−２０の結合アフィニティーは、約０．２ｎＭでありうる。４Ｄ５Ｆｌｕの結合アフィニティーは、約２０ｎＭでありうる。４Ｍ５．３の結合アフィニティーは、約０．３ｐＭでありうる。ＦＩＴＣ−Ｅ２の結合アフィニティーは、約０．３ｎＭでありうる。
【０２９４】
膜貫通ドメインおよび／または細胞内ドメインは、細胞質シグナル伝達ドメインの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＣＤ３ξ、ＣＤ２８、および４−１ＢＢを含む群から選択されるシグナル伝達分子の少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、Ｆｃ受容体またはその一部を含みうる。Ｆｃ受容体またはその一部は、ＣＤ１６またはその一部でありうる。シグナル伝達分子は、ＣＤ３ξを含みうる。シグナル伝達分子は、ＣＤ２８を含みうる。シグナル伝達分子は、４−１ＢＢを含みうる。細胞内ドメインは、ＣＤ３ξの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＣＤ２８の少なくとも一部を含むことが可能であり、細胞内ドメインは、４−１ＢＢの少なくとも一部を含むことが可能であり、細胞内ドメインは、ＯＸ−４０の少なくとも一部を含むことが可能であり、細胞内ドメインは、ＣＤ３０の少なくとも一部を含むことが可能であり、細胞内ドメインは、ＣＤ４０の少なくとも一部を含むことが可能であり、細胞内ドメインは、ＣＤ２の少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＣＤ２７の少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＰＤ−１の少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＩＣＯＳの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）の少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＣＤ７の少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＬＩＧＨＴの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＮＫＧ２Ｃの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、Ｂ７−Ｈ３の少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、１つまたは複数のシグナル伝達分子に由来する細胞質シグナル伝達ドメインの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、２つまたはこれを超える細胞質シグナル伝達ドメインの少なくとも一部を含みうる。２つまたはこれを超える細胞質シグナル伝達ドメインは、２つまたはこれを超える異なるシグナル伝達分子に由来しうる。細胞内ドメインは、３つまたはこれを超える細胞質シグナル伝達ドメインの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、４つまたはこれを超える細胞質シグナル伝達ドメインの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、１つまたは複数のシグナル伝達分子に結合するリガンドの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＣＤ８３に結合するリガンドの少なくとも一部を含みうる。
【０２９５】
ＣＡＲ−ＥＣプラットフォーム
本明細書では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現させるエフェクター細胞と、本明細書で開示されるキメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチとを含む、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）プラットフォームが開示される。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、均質でありうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、構造的に均質でありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、本明細書で開示される、ＣＡＲに結合する低分子（ＣＡＲ−ＩＤ）およびＣＡＲに結合する構成要素（ＣＡＲ−ＩＤ）から選択することができる。ＴＩＤは、本明細書で開示される、標的相互作用ドメインおよびＴＩＤから選択することができる。
【０２９６】
ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームは、複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチを含むことが可能であり、ここで、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの少なくとも１つは、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチである。複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチを含みうる。複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個またはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチを含みうる。複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、２０個を超える、２５個を超える、３０個を超える、３５個を超える、４０個を超える、４５個を超える、または５０個を超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチを含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、本明細書で開示される１つまたは複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチ、またはこれらの組合せから選択することができる。
【０２９７】
本明細書で開示される抗体またはペプチドは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。ＴＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を介して連結することができる。ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤは、２つの非天然アミノ酸により連結することができる。ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤは、３つの非天然アミノ酸により連結することができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、ＴＩＤの１つまたは複数のアミノ酸残基と置き換わることができる。１つまたは複数の非天然アミノ酸は、本明細書で開示されるペプチドまたは抗体の任意のアミノ酸と置き換わることができる。
【０２９８】
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣプラットフォームはさらに、２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチを含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、２つまたはこれを超える同一のＣＡＲ−ＩＤを含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、２つまたはこれを超える異なるＣＡＲ−ＩＤを含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、２つまたはこれを超える類似のＣＡＲ−ＩＤを含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＩＤは、類似のアミノ酸配列を含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＩＤのアミノ酸配列は、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、または約２％同一でありうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＩＤのアミノ酸配列は、約７５％同一でありうる。
【０２９９】
２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、２つまたはこれを超える異なるＴＩＤを含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、２つまたはこれを超える同一のＴＩＤを含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、２つまたはこれを超える類似のＴＩＤを含みうる。２つまたはこれを超えるＴＩＤは、類似のアミノ酸配列を含みうる。２つまたはこれを超えるＴＩＤのアミノ酸配列は、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、または約２％同一でありうる。２つまたはこれを超えるＴＩＤのアミノ酸配列は、約７５％同一でありうる。
【０３００】
ＣＡＲ−ＥＣの標的
本明細書で開示されるスイッチは、１つまたは複数のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を、１つまたは複数の標的に向けうる。一般に、ＣＡＲ−ＥＣおよび標的をＣＡＲ−ＥＣスイッチに結合させることにより、ＣＡＲ−ＥＣの活性が標的に対して効果を有するのに十分に接近するＣＡＲ−ＥＣに対して標的を近接させる。例えば、ＣＡＲ−ＥＣおよび標的を、ＣＡＲ−ＥＣスイッチに結合させると、ＣＡＲ−ＥＣは、標的上のサイトカイン受容体に結合する、サイトカインを放出しうる。本明細書で開示されるスイッチは、１つまたは複数のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を、２つまたはこれを超える標的に向けうる。本明細書で開示されるスイッチは、１つまたは複数のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を、３つまたはこれを超える標的に向けうる。本明細書で開示されるスイッチは、４つまたはこれを超えるキメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を、１つまたは複数の標的に向けうる。本明細書で開示されるスイッチは、５またはこれを超えるキメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を、１つまたは複数の標的に向けうる。本明細書で開示されるスイッチは、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個またはこれを超えるキメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を、１つまたは複数の標的に向けうる。２つまたはこれを超える標的は、同じでありうる。２つまたはこれを超える標的は、同じ細胞型のものでありうる。２つまたはこれを超える標的は、同じ細胞系統のものでありうる。２つまたはこれを超える標的は、異なりうる。２つまたはこれを超える標的は、異なる細胞型のものでありうる。２つまたはこれを超える標的は、異なる細胞系統のものでありうる。３つまたはこれを超える標的のうちの少なくとも２つは、同じでありうる。３つまたはこれを超える標的のうちの少なくとも２つは、同じ細胞型のものでありうる。３つまたはこれを超える標的のうちの少なくとも２つは、同じ細胞系統のものでありうる。３つまたはこれを超える標的のうちの少なくとも２つは、異なりうる。３つまたはこれを超える標的のうちの少なくとも２つは、異なる細胞型のものでありうる。３つまたはこれを超える標的のうちの少なくとも２つは、異なる細胞系統のものでありうる。
【０３０１】
標的は、細胞でありうる。標的は、細胞の断片でありうる。標的は、１つまたは複数の細胞でありうる。標的は、疾患または状態を患う被験体に由来する細胞を含みうる。標的は、感染細胞を含みうる。標的は、病原体に感染した細胞を含みうる。標的は、罹患細胞を含みうる。標的は、がん細胞でありうる。標的は、遺伝子改変細胞でありうる。標的は、１つまたは複数の分裂細胞でありうる。標的は、被験体に対して外来の細胞を含みうる。標的は、侵入生物（例えば、酵母、蠕虫、細菌、真菌）に由来しうる。標的は、病原体でありうる。標的は、細菌でありうる。標的は、ウイルスまたはその一部でありうる。
【０３０２】
標的は、幹細胞、がん幹細胞、多能性細胞、造血幹細胞、または内皮前駆細胞から選択することができる。標的は、組織に由来しうる。組織は、脳、食道、乳房、結腸、肺、神経膠、卵巣、子宮、精巣、前立腺、消化管、膀胱、肝臓、胸腺、骨、および皮膚から選択することができる。標的は、１つまたは複数の内分泌腺に由来しうる。代替的に、または加えて、標的は、１つまたは複数の内分泌腺に由来しうる。内分泌腺は、リンパ腺、下垂体、甲状腺、副甲状腺、膵臓、性腺、または松果腺でありうる。
【０３０３】
標的は、がん性細胞を含みうる。がん性細胞は、組織に由来しうる。組織は、脳、食道、乳房、結腸、肺、神経膠、卵巣、子宮、精巣、前立腺、消化管、膀胱、肝臓、胸腺、および皮膚から選択することができる。がん性細胞は、骨に由来しうる。がん性細胞は、血液に由来しうる。がん性細胞は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、単球、血小板、白血球、好中球、好酸球、好塩基球、リンパ球、造血幹細胞、または内皮前駆細胞に由来しうる。がん性細胞は、ＣＤ１９陽性Ｂリンパ球に由来しうる（be  derived  from  a  CD19-positive  B  lymphocyte）。がん性細胞は、幹細胞に由来しうる。がん性細胞は、多能性細胞に由来しうる。がん性細胞は、１つまたは複数の内分泌腺に由来しうる。内分泌腺は、リンパ腺、下垂体、甲状腺、副甲状腺、膵臓、性腺、または松果腺でありうる。
【０３０４】
標的は、ＣＤ１９陽性細胞でありうる。標的は、ＣＤ１９陽性Ｂリンパ球でありうる。標的は、Ｈｅｒ２陽性細胞でありうる。Ｈｅｒ２陽性細胞は、Ｈｅｒ２陽性乳がん細胞でありうる。標的は、ＢＣＭＡ陽性細胞でありうる。標的は、ＢＣＭＡ陽性多発性骨髄腫細胞でありうる。標的は、ＣＳ１陽性細胞でありうる。ＣＳ１陽性細胞は、多発性骨髄腫細胞でありうる。標的は、ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性細胞でありうる。標的は、ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性神経膠芽細胞腫細胞でありうる。標的は、ＣＤ２０陽性細胞でありうる。標的は、ＰＳＭＡ陽性細胞でありうる。標的は、ＰＳＭＡ陽性前立腺がん細胞でありうる。標的は、葉酸受容体陽性細胞でありうる。標的は、葉酸受容体陽性卵巣がん細胞でありうる。
【０３０５】
ＣＡＲ−ＥＣの標的上の表面分子
本明細書で開示されるスイッチの標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）は、標的上の分子に結合しうるか、またはこれと相互作用しうる。ＴＩＤは、標的上の抗原、タンパク質、ペプチド、または生体分子に結合しうる。タンパク質は、酵素でありうる。酵素は、酵素活性を有しうる。非限定的な例によれば、生体分子は、線維、バイオポリマー（例えば、コラーゲン）、グリカン、糖脂質、プロテオグリカン、脂質、ステロール、炭水化物、核酸、および細胞断片から選択することができる。抗原は、細胞上の表面抗原または細胞表面マーカーの少なくとも一部でありうる。抗原は、細胞上の受容体または共受容体でありうる。
【０３０６】
ＴＩＤは、標的上の抗原に結合しうる。抗原は、標的上の表面抗原でありうる。抗原は、タンパク質、脂質、糖脂質、炭水化物、多糖、核酸、またはこれらの組合せから選択することができる。抗原は、細菌、ウイルス、および他の微生物の部分（例えば、コート、莢膜、細胞壁、鞭毛、線毛（fimbrae）、および毒素）を含みうる。抗原は、グリカンを含みうる。抗原は、脂質を含みうる。抗原は、糖脂質を含みうる。抗原は、炭水化物を含みうる。抗原は、タンパク質を含みうる。抗原は、修飾を含みうる。非限定的な例によれば、修飾は、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、パルミトイル化、またはメチル化でありうる。抗原は、前立腺特異的膜抗原を含みうる。
【０３０７】
抗原は、１つまたは複数の抗体の産生を惹起しうる。抗原とは、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）を結合させ、Ｔ細胞受容体に提示されうる、分子または分子断片を指す場合がある。「抗原」という用語はまた、免疫原も指す場合がある。免疫原は、それ自体で被験体に注射されると、適応免疫応答を引き起こしうる。免疫原は、それ自体で免疫応答を誘導しうる。抗原は、スーパー抗原、Ｔ細胞依存性抗原、またはＴ細胞非依存性抗原でありうる。
【０３０８】
抗原は、外因性抗原または内因性抗原でありうる。外因性抗原は、外界から、例えば、吸入、摂取、または注射により、体内に入った抗原であることが典型的である。一部の抗原は、外因性抗原として生じ、後に内因性となりうる（例えば、細胞内ウイルス）。細胞内抗原は、感染細胞が破壊されると、循環へと再び放出し戻される場合がある。内因性抗原は、かつては正常であった細胞内に、正常な細胞代謝の結果として、またはウイルス感染または細胞内の細菌感染のために発生した抗原でありうる。
【０３０９】
抗原はまた、自己抗原を含みうる。自己抗原は、特定の自己免疫疾患を患う患者の免疫系により認識される、正常タンパク質またはタンパク質の複合体（および、場合によって、ＤＮＡまたはＲＮＡ）でありうる。これらの抗原は、正常な状態下では、免疫系の標的となるべきではないが、これらの患者においては、主に、遺伝的因子および環境因子に起因して、このような抗原に対する正常な免疫寛容が失われている。
【０３１０】
抗原は、腫瘍抗原を含みうる。腫瘍抗原またはネオ抗原は、腫瘍細胞の表面上のＭＨＣ  Ｉ分子またはＭＨＣ  ＩＩ分子により提示される抗原でありうる。これらの抗原は、場合によって、腫瘍細胞により提示される場合があるが、正常細胞によっては提示されない。この場合、これらは、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）と呼ばれ、一般に、腫瘍特異的変異から生じる。腫瘍細胞および正常細胞により提示される抗原がより一般的であり、これらは、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）と呼ばれる。これらの抗原を認識する細胞傷害性Ｔリンパ球は、それらが増殖または転移する前に、腫瘍細胞を破壊することが可能でありうる。また、腫瘍抗原は、腫瘍の表面に、例えば、変異受容体の形態で存在する場合もあり、この場合、それらは、Ｂ細胞により認識されうる。
【０３１１】
抗原は、受容体でありうる。受容体は、細胞外受容体でありうる。受容体は、細胞表面受容体でありうる。受容体は、ホルモン、神経伝達物質、サイトカイン、成長因子、または細胞認識分子に結合しうる。受容体は、膜貫通受容体でありうる。受容体は、酵素連結受容体でありうる。
【０３１２】
ＴＩＤは、表面分子に結合しうる。非限定的な例によれば、表面分子、は、標的上の抗原、受容体、共受容体、膜貫通タンパク質、または細胞マーカーから選択することができる。細胞表面タンパク質は、コレシストキニンＢ受容体、ゴナドトロピン放出ホルモン受容体、ソマトスタチン受容体２、ａｖｂ３インテグリン、ガストリン放出ペプチド受容体、ニューロキニン１受容体、メラノコルチン１受容体、ニューロテンシン受容体、神経ペプチドＹ受容体、およびＣ型レクチン様分子１から選択することができる。
【０３１３】
ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９８％、または約１００％相同な標的に結合しうる。ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも約５０％相同な標的に結合しうる。ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも約７０％相同な標的に結合しうる。ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも約８５％相同な標的に結合しうる。ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）のリガンド、活性化因子、結合性分子、またはこれらの誘導体を含みうる。ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）阻害剤またはこれらの誘導体を含みうる。ＰＳＭＡはまた、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩおよびＮ−アセチル−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−グルタミン酸ペプチダーゼＩとも称しうる。ＰＳＭＡ阻害剤は、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体でありうる。
【０３１４】
ＴＩＤは、葉酸受容体と少なくとも約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９８％、または約１００％相同な標的に結合しうる。ＴＩＤは、葉酸受容体と少なくとも約５０％相同な標的に結合しうる。ＴＩＤは、葉酸受容体と少なくとも約７０％相同な標的に結合しうる。ＴＩＤは、葉酸受容体と少なくとも約８５％相同な標的に結合しうる。ＴＩＤは、葉酸受容体のリガンド、葉酸受容体の阻害剤、葉酸受容体の活性化因子、葉酸受容体結合性分子、またはこれらの誘導体から選択することができる。ＴＩＤは、葉酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、葉酸またはその誘導体から本質的になりうる。
【０３１５】
受容体は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）でありうる。ＧＰＣＲ受容体は、ＧＮＲＨ受容体、エンドセリン受容体、Ｓｍｏｏｔｈｅｎｅｄ、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＣＫ２受容体、Ｓ１Ｐ受容体、プロテアーゼ活性化受容体（ＰＡＲ）、またはこれらの部分でありうる。受容体は、イオンチャネル連結受容体でありうる。イオンチャネル連結受容体は、電位開口型カリウムチャネル、電位開口型カルシウムチャネル、一過性受容体電位チャネル、メラスタチン様一過性受容体電位チャネル（例えば、ＴＲＰＭ１、ＴＲＰＭ７、ＴＲＰＭ８）、バニロイドチャネル（vallinoid  channel）（例えば、ＴＲＰＶ６）、または上皮ナトリウムチャネルでありうる。
【０３１６】
ＴＩＤは、標的上の受容体と相互作用しうる。受容体は、成長因子受容体でありうる。成長因子受容体は、表皮成長因子受容体、線維芽細胞成長因子受容体、血小板由来成長因子受容体、神経成長因子受容体、形質転換成長因子受容体、骨形成タンパク質成長因子受容体、肝細胞成長因子受容体、血管内皮成長因子受容体、幹細胞因子受容体、インスリン成長因子受容体、ソマトメジン受容体、またはエリスロポエチン受容体でありうる。受容体は、ホルモン受容体でありうる。受容体は、インスリン受容体でありうる。受容体は、エイコサノイド受容体、プロスタグランジン受容体、エストロゲン受容体、濾胞刺激ホルモン受容体、プロゲステロン受容体、成長ホルモン受容体、またはゴナドトロピン放出ホルモン受容体でありうる。受容体は、アドレナリン作動性受容体でありうる。受容体は、インテグリンでありうる。受容体は、Ｅｐｈ受容体でありうる。
【０３１７】
受容体は、免疫受容体でありうる。免疫受容体は、パターン認識受容体、ｔｏｌｌ様受容体、ＮＯＤ様受容体、キラー活性化受容体、キラー阻害受容体（killer  inhibitor  receptor）、Ｆｃ受容体、Ｂ細胞受容体、補体受容体、ケモカイン受容体、またはサイトカイン受容体でありうる。サイトカイン受容体は、インターロイキン受容体、インターフェロン受容体、形質転換成長因子受容体、腫瘍壊死因子受容体、またはコロニー刺激因子受容体でありうる。
【０３１８】
受容体は、受容体キナーゼでありうる。受容体キナーゼは、チロシンキナーゼ受容体でありうる。受容体キナーゼは、セリンキナーゼ受容体でありうる。受容体キナーゼは、トレオニンキナーゼ受容体でありうる。受容体キナーゼは、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＰＩ３Ｋ、ＰＫＡ、ＰＫＣ、ＡＫＴ、ＡＭＰＫ、またはホスホリパーゼを活性化させうる。受容体キナーゼは、ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナル伝達経路を活性化させうる。受容体キナーゼは、Ｊａｋ、Ｓｔａｔ、またはＳｍａｄを活性化させうる。
【０３１９】
ＴＩＤは、糖脂質を含む表面分子と相互作用しうる。ＴＩＤは、炭水化物を含む表面分子と相互作用しうる。ＴＩＤは、分化クラスター（cluster  of  differentiation）（ＣＤ）タンパク質を含む表面分子と相互作用しうる。ＴＩＤは、ＣＤ３４、ＣＤ３１、ＣＤ１１７、ＣＤ４５、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１５、ＣＤ２４、ＣＤ１１４、ＣＤ１８２、ＣＤ１４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ９１、ＣＤ１６、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ２５、Ｆｏｘｐ３、ＣＤ８、ＣＤ３８、ＣＤ６１、ＣＤ５６、ＣＤ３０、ＣＤ１３、およびＣＤ３３からなる群から選択される表面分子と相互作用しうる。
【０３２０】
キット、ベクター、およびポリヌクレオチド
本明細書では、本明細書で開示される１つまたは複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチを含むキットが開示される。キットはさらに、２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチを含みうる。キットは、３つのＣＡＲ−ＥＣスイッチを含みうる。キットは、約３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、１２個、１５個、２０個、２４個、３０個、３５個、４８個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９６個、１００個、１２０個、１５０個、２００個、３００個、３８４個、４００個、５００個、６００個、７００個、８００個、９００個、または１０００個のＣＡＲ−ＥＣスイッチを含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチを含むキットは、２つまたはこれを超える同一の非天然アミノ酸を含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、２つまたはこれを超える異なる非天然アミノ酸を含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、２つまたはこれを超える類似の非天然アミノ酸を含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、２つまたはこれを超える非天然アミノ酸を、異なる部位において含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、２つまたはこれを超える非天然アミノ酸を、隣接する部位において含みうる。キットは、生物学的研究のために援用することができる。キットは、疾患または状態を診断するために使用することができる。キットは、疾患または状態を処置するために使用することができる。キットはさらに、１つまたは複数のエフェクター細胞を含みうる。エフェクター細胞は、Ｔ細胞でありうる。エフェクター細胞は、１つまたは複数のＣＡＲを発現させうる。キットはさらに、ＣＡＲの抗体／ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含みうる。キットはさらに、ＣＡＲの抗体／ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含みうる。ＣＡＲは、本明細書で開示されるＣＡＲのいずれかから選択することができる。
【０３２１】
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチの抗体および／またはペプチドは、配列番号５〜９から選択される、１つまたは複数のポリヌクレオチドによりコードされうる。ＣＡＲまたはその一部は、配列番号５〜９から選択される、１つまたは複数のポリヌクレオチドと少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一なポリヌクレオチドによりコードされうる。本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチの抗体および／またはペプチドは、配列番号５〜９から選択される、１つまたは複数のポリヌクレオチドと少なくとも約７０％同一でありうるポリヌクレオチドによりコードされうる。本明細書では、配列番号５〜９から選択される、１つまたは複数のポリヌクレオチドを含むベクターが開示される。
【０３２２】
治療的使用
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチおよびスイッチ中間体は、それを必要とする被験体における疾患または状態の処置で使用することができる。本明細書で開示されるスイッチまたはスイッチ中間体は、疾患を処置するための医薬の製造において使用することができる。それを必要とする被験体における疾患または状態を処置する方法は、本明細書で開示されるスイッチのいずれかを、被験体に投与するステップを含みうる。スイッチは、キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）および標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含みうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のさらなるＣＡＲ−ＩＤを含みうる。スイッチは、低分子を含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のＴＩＤを含みうる。スイッチは、抗体に基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含む、標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含みうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体でありうる。抗体は、配列番号１０〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含みうる。抗体は、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つに基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、非天然アミノ酸を含むポリペプチドを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤは、部位特異的な様式で結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤの、ＴＩＤへの部位特異的な結合は、非天然アミノ酸により起こりうる。ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤは、部位に依存しない様式で結合させることができる。スイッチは、低分子を含むＴＩＤを含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、葉酸を含みうる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のさらなるリンカーを含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、アジドを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。代替的に、または加えて、方法はさらに、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を投与するステップを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現させうる。ＣＡＲは、配列番号１〜４のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＣＡＲは、抗体に基づくか、またはこれに由来する外部ドメインを含みうる。ＣＡＲの外部ドメインは、抗ＦＩＴＣ抗体に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＣＡＲの外部ドメインは、抗ＦＩＴＣ  ｓｃＦｖに基づきうるか、またはこれに由来しうる。スイッチおよびＣＡＲ−ＥＣは、同時に投与することができる。スイッチおよび���ＡＲ−ＥＣは、逐次的に投与することができる。
【０３２３】
それを必要とする被験体における疾患または状態を処置する方法は、１つまたは複数のスイッチ中間体を、被験体に投与するステップを含みうる。スイッチ中間体は、ＣＡＲ−ＩＤおよびリンカーを含むことが可能であり、ここで、リンカーは、反応性官能基を含む。スイッチ中間体は、ＴＩＤおよびリンカーを含みうる。スイッチ中間体は、ＴＩＤおよびリンカーを含むことが可能であり、ここで、リンカーは、反応性官能基を含む。スイッチ中間体は、反応性官能基を含むＣＡＲ−ＩＤを含みうる。スイッチ中間体は、反応性官能基を含むＴＩＤを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを含む第１のスイッチ中間体は、ＴＩＤを含む第２のスイッチ中間体と組み合わせることができる。ＣＡＲ−ＩＤおよびリンカーを含む第１のスイッチ中間体は、ＴＩＤを含む第２のスイッチ中間体と組み合わせることができる。ＣＡＲ−ＩＤを含む第１のスイッチ中間体は、ＴＩＤおよびリンカーを含む第２のスイッチ中間体と組み合わせることができる。ＣＡＲ−ＩＤおよび第１のリンカーを含む第１のスイッチ中間体は、ＴＩＤおよび第２のリンカーを含む第２のスイッチ中間体と組み合わせることができる。第１のスイッチ中間体は、第１の反応性官能基を含みうる。第２のスイッチ中間体は、第２の反応性官能基を含みうる。第１のスイッチの第１の反応性官能基と、第２のスイッチの第２の反応性官能基は、互いと相互作用しうる。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。ＴＩＤは、抗体に基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体でありうる。抗体は、配列番号１０〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含みうる。抗体は、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つに基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、非天然アミノ酸を含むポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、葉酸を含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、アジドを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。
【０３２４】
方法は、１つまたは複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与するステップを含みうる。方法は、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、１２個、１５個、２０個、２４個、３０個、３５個、４８個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９６個、１００個、１２０個、１５０個、２００個、３００個、３８４個、４００個、５００個、６００個、７００個、８００個、９００個、１０００個またはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与するステップを含みうる。方法は、２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与するステップを含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、同じＣＡＲ−ＩＤを含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、同じＴＩＤを含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、同じリンカーを含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つまたは複数の異なるＣＡＲ−ＩＤを含みうる。２つまたはこれを超える（two  more）ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つまたは複数の異なるＴＩＤを含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つまたは複数の異なるリンカーを含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つまたは複数の同一の非天然アミノ酸を含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つまたは複数の異なる非天然アミノ酸を含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つまたは複数の類似する非天然アミノ酸を含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を、同じ部位において含みうる。例えば、第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチの第１のＴＩＤは、非天然アミノ酸を、３０９位において含むことが可能であり、第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチの第２のＴＩＤは、非天然アミノ酸を、３０９位において含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を、異なる部位において含みうる。例えば、第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチの第１のＴＩＤは、非天然アミノ酸を、１１０位において含むことが可能であり、第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチの第２のＴＩＤは、非天然アミノ酸を、２０５位において含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を、隣接する部位において含みうる。例えば、第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチの第１のＴＩＤは、非天然アミノ酸を、２０２位において含むことが可能であり、第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチの第２のＴＩＤは、非天然アミノ酸を、２０３位において含みうる。非天然アミノ酸は、ＴＩＤ内の非天然アミノ酸でありうる。非天然アミノ酸は、ＣＡＲ−ＩＤ内の非天然アミノ酸でありうる。
【０３２５】
本明細書では、それを必要とする被験体における疾患または状態を処置する方法であって、本明細書で開示されるキメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチを、被験体に投与するステップを含み、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に結合する、キメラ抗原受容体結合性低分子（ＣＡＲ−ＩＤ）と、標的上の表面分子に結合し、非天然アミノ酸を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含む方法が開示される。ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤは、非天然アミノ酸により、部位特異的に連結することができる。非限定的な例によれば、ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣでありうる。非限定的な例によれば、ＴＩＤは、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体から選択することができる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに接続することができる。リンカーは、ＴＩＤ内の非天然アミノ酸に接続することができる。リンカーは、ＴＩＤに、オキシムライゲーションにより結合させることができる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、アジドを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。代替的に、または加えて、方法はさらに、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を投与するステップを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現させうる。ＣＡＲは、配列番号１〜４のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＣＡＲは、抗体に基づくか、またはこれに由来する外部ドメインを含みうる。ＣＡＲの外部ドメインは、抗ＦＩＴＣ抗体に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＣＡＲの外部ドメインは、抗ＦＩＴＣ  ｓｃＦｖに基づきうるか、またはこれに由来しうる。スイッチおよびＣＡＲ−ＥＣは、同時に投与することができる。スイッチおよびＣＡＲ−ＥＣは、逐次的に投与することができる。疾患または状態は、がんでありうる。がんは、前立腺がんでありうる。がんは、乳がんでありうる。がんは、白血病でありうる。
【０３２６】
本明細書では、それを必要とする被験体における疾患または状態を処置する方法であって、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチを、被験体に投与するステップを含み、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含み、ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤが、アミド結合により連結された、２つまたはこれを超えるアミノ酸を含まない方法が開示される。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子でありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、非限定的な例によれば、ＦＩＴＣでありうる。ＴＩＤは、低分子でありうる。ＴＩＤは、葉酸またはその誘導体でありうる。ＴＩＤは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と少なくとも５０％相同な標的上の表面分子と相互作用しうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体でありうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに接続することができる。リンカーは、ＴＩＤ内の非天然アミノ酸に接続することができる。リンカーは、ＴＩＤに、オキシムライゲーションにより結合させることができる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、アジドを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。代替的に、または加えて、方法はさらに、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を投与するステップを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現させうる。ＣＡＲは、配列番号１〜４のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＣＡＲは、抗体に基づくか、またはこれに由来する外部ドメインを含みうる。ＣＡＲの外部ドメインは、抗ＦＩＴＣ抗体に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＣＡＲの外部ドメインは、抗ＦＩＴＣ  ｓｃＦｖに基づきうるか、またはこれに由来しうる。スイッチおよびＣＡＲ−ＥＣは、同時に投与することができる。スイッチおよびＣＡＲ−ＥＣは、逐次的に投与することができる。疾患または状態は、がんでありうる。
【０３２７】
本明細書で開示されるスイッチまたはスイッチ中間体は、疾患を処置するための医薬の製造において使用することができる。スイッチは、キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）および標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）を含みうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のリンカーを含みうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のさらなるＣＡＲ−ＩＤを含みうる。スイッチはさらに、１つまたは複数のＴＩＤを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。ＴＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤは、部位特異的な様式で結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤの、ＴＩＤへの部位特異的結合は、非天然アミノ酸により起こりうる。ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤは、部位に依存しない様式で結合させることができる。スイッチ中間体は、ＣＡＲ−ＩＤおよびリンカーを含みうる。スイッチ中間体は、ＣＡＲ−ＩＤおよびリンカーを含むことが可能であり、ここで、リンカーは、反応性官能基を含む。スイッチ中間体は、ＴＩＤおよびリンカーを含みうる。スイッチ中間体は、ＴＩＤおよびリンカーを含むことが可能であり、ここで、リンカーは、反応性官能基を含む。スイッチ中間体は、反応性官能基を含むＣＡＲ−ＩＤを含みうる。スイッチ中間体は、反応性官能基を含むＴＩＤを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤを含む第１のスイッチ中間体は、ＴＩＤを含む第２のスイッチ中間体と組み合わせることができる。ＣＡＲ−ＩＤおよびリンカーを含む第１のスイッチ中間体は、ＴＩＤを含む第２のスイッチ中間体と組み合わせることができる。ＣＡＲ−ＩＤを含む第１のスイッチ中間体は、ＴＩＤおよびリンカーを含む第２のスイッチ中間体と組み合わせることができる。ＣＡＲ−ＩＤおよび第１のリンカーを含む第１のスイッチ中間体は、ＴＩＤおよび第２のリンカーを含む第２のスイッチ中間体と組み合わせることができる。第１のスイッチ中間体は、第１の反応性官能基を含みうる。第２のスイッチ中間体は、第２の反応性官能基を含みうる。第１のスイッチの第１の反応性官能基と、第２のスイッチの第２の反応性官能基は、互いに相互作用しうる。
【０３２８】
本明細書では、エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、非天然アミノ酸を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含むスイッチの使用であって、ＴＩＤが、標的上の表面分子と相互作用して、それを必要とする被験体における疾患または状態を処置する使用が開示される。ＣＡＲ−ＩＤとＴＩＤは、結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤとＴＩＤは、部位特異的な様式で結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤの、ＴＩＤへの部位特異的結合は、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤ内の非天然アミノ酸に結合させることを含みうる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。ＴＩＤは、抗体に基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択することができる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体でありうる。抗体は、抗ＥＧＦＲ抗体でありうる。抗体は、抗ＣＤ２０抗体でありうる。抗体は、抗ＨＥＲ２抗体でありうる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。抗体は、配列番号１０〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含みうる。抗体は、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つに基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、非天然アミノ酸を含むポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、葉酸を含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、アジドを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。疾患は、がんでありうる。がんは、前立腺がんでありうる。がんは、乳がんでありうる。がんは、白血病でありうる。
【０３２９】
本明細書では、疾患を処置するための医薬の製造において、エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と相互作用するキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、非天然アミノ酸を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含むスイッチの使用であって、ＴＩＤが、標的上の表面分子と相互作用する使用が開示される。ＣＡＲ−ＩＤとＴＩＤは、結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤとＴＩＤは、部位特異的な様式で結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤの、ＴＩＤへの部位特異的結合は、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤ内の非天然アミノ酸に結合させることを含みうる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含みうる。ＴＩＤは、抗体に基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択することができる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体でありうる。抗体は、抗ＥＧＦＲ抗体でありうる。抗体は、抗ＣＤ２０抗体でありうる。抗体は、抗ＨＥＲ２抗体でありうる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。抗体は、配列番号１０〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含みうる。抗体は、配列番号５〜９のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＴＩＤは、配列番号１８〜５６のいずれか１つに基づくか、またはこれに由来するポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、非天然アミノ酸を含むポリペプチドを含みうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、葉酸を含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、アジドを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。疾患は、がんでありうる。がんは、前立腺がんでありうる。がんは、乳がんでありうる。がんは、白血病でありうる。
【０３３０】
本明細書ではさらに、被験体における疾患または状態を処置するための、（ａ）ＦＩＴＣまたはその誘導体を含む、キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的上の表面分子と相互作用する標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含むスイッチの使用が開示される。ＴＩＤは、ポリペプチドを含みうる。ポリペプチドは、抗体または抗体断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択することができる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体でありうる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。ＴＩＤは、非天然アミノ酸を含むポリペプチドを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに部位特異的に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、非天然アミノ酸を介してＴＩＤに部位特異的に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位に依存しない様式で結合させることができる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、アジドを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。ＴＩＤは、標的上の表面分子との相互作用を含みうる。表面分子は、ＣＤ１９でありうる。ＣＤ１９は、Ｂ細胞上にありうる。ＣＤ１９は、形質細胞上にありうる。ＣＤ１９は、プラズマＢ細胞上にありうる。ＣＤ１９は、プラズマ細胞上にありうる。ＣＤ１９は、エフェクターＢ細胞上にありうる。疾患または状態は、がんでありうる。がんは、多発性骨髄腫でありうる。
【０３３１】
本明細書ではさらに、被験体における疾患または状態を処置するための、（ａ）ＦＩＴＣまたはその誘導体を含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的上の表面分子と相互作用する標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含むスイッチの使用が開示される。ＴＩＤは、ポリペプチドを含みうる。ポリペプチドは、抗体または抗体断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択することができる。抗体は、抗ＨＥＲ２抗体でありうる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。ＴＩＤは、非天然アミノ酸を含むポリペプチドを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに部位特異的に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、非天然アミノ酸を介してＴＩＤに部位特異的に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位に依存しない様式で結合させることができる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、アジドを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。ＴＩＤは、標的上の表面分子との相互作用を含みうる。表面分子は、Ｈｅｒ２でありうる。Ｈｅｒ２は、がん細胞上にありうる。Ｈｅｒ２は、乳がん細胞上にありうる。Ｈｅｒ２は、乳房組織に由来する細胞上にありうる。標的は、Ｈｅｒ２を発現させる細胞でありうる。標的は、Ｈｅｒ２を過剰発現させる細胞でありうる。疾患または状態は、がんでありうる。がんは、乳がんでありうる。
【０３３２】
本明細書ではさらに、被験体における疾患または状態を処置するための、（ａ）ＦＩＴＣまたはその誘導体を含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的上の表面分子と相互作用する標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含むスイッチの使用が開示される。ＴＩＤは、ポリペプチドを含みうる。ポリペプチドは、抗体または抗体断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択することができる。抗体は、抗ＣＳ１抗体でありうる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。ＴＩＤは、非天然アミノ酸を含むポリペプチドを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに部位特異的に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、非天然アミノ酸を介してＴＩＤに部位特異的に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位に依存しない様式で結合させることができる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、アジドを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。ＴＩＤは、標的上の表面分子との相互作用を含みうる。表面分子は、ＣＳ１でありうる。ＣＳ１は、Ｂ細胞上にありうる。ＣＳ１は、形質細胞上にありうる。ＣＳ１は、プラズマＢ細胞上にありうる。ＣＳ１は、プラズマ細胞上にありうる。ＣＳ１は、エフェクターＢ細胞上にありうる。疾患または状態は、がんでありうる。がんは、多発性骨髄腫でありうる。
【０３３３】
本明細書ではさらに、被験体における疾患または状態を処置するための、（ａ）ＦＩＴＣまたはその誘導体を含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的上の表面分子と相互作用する標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含むスイッチの使用が開示される。ＴＩＤは、ポリペプチドを含みうる。ポリペプチドは、抗体または抗体断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択することができる。抗体は、抗ＢＣＭＡ抗体でありうる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。ＴＩＤは、非天然アミノ酸を含むポリペプチドを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに部位特異的に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、非天然アミノ酸を介してＴＩＤに部位特異的に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位に依存しない様式で結合させることができる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、アジドを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。ＴＩＤは、標的上の表面分子との相互作用を含みうる。表面分子は、ＢＣＭＡでありうる。ＢＣＭＡは、Ｂ細胞上にありうる。ＢＣＭＡは、形質細胞上にありうる。ＢＣＭＡは、プラズマＢ細胞上にありうる。ＢＣＭＡは、プラズマ細胞上にありうる。ＢＣＭＡは、エフェクターＢ細胞上にありうる。疾患または状態は、がんでありうる。がんは、多発性骨髄腫でありうる。
【０３３４】
本明細書ではさらに、被験体における疾患または状態を処置するための、（ａ）ＦＩＴＣまたはその誘導体を含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的上の表面分子と相互作用する標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含むスイッチの使用が開示される。ＴＩＤは、ポリペプチドを含みうる。ポリペプチドは、抗体または抗体断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体からなる群から選択することができる。抗体は、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体でありうる。ＴＩＤは、抗体断片を含みうる。ＴＩＤは、非天然アミノ酸を含むポリペプチドを含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに部位特異的に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、非天然アミノ酸を介してＴＩＤに部位特異的に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位に依存しない様式で結合させることができる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、アジドを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。ＴＩＤは、標的上の表面分子との相互作用を含みうる。表面分子は、受容体でありうる。受容体は、成長因子受容体でありうる。成長因子受容体は、ＥＧＦＲでありうる。ＥＧＦＲは、ＥＧＦＲｖＩＩＩでありうる。表面分子は、神経膠腫に由来する細胞上にありうる。表面分子は、神経膠芽細胞腫（glioblastom）に由来する細胞上にありうる。表面分子は、神経膠細胞上にありうる。表面分子は、上衣細胞、星状細胞、または希突起膠細胞（oligondendrocyte）上にありうる。疾患または状態は、がんでありうる。がんは、脳腫瘍でありうる。がんは、神経膠腫でありうる。がんは、神経膠芽細胞腫でありうる。
【０３３５】
本明細書では、疾患または状態の処置を必要とする被験体における疾患または状態を処置するための、（ａ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含むスイッチの使用であって、ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤが、アミド結合により連結された、２つまたはこれを超えるアミノ酸を含まない使用が開示される。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣを含みうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、葉酸を含みうる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、アジドを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位特異的な様式で結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤ上の所定の部位に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、ＦＩＴＣのイソチオシアネートの、ＴＩＤへのコンジュゲーションにより結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、エステルカップリングにより結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに、クリック化学反応により結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに化学的に結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに、オキシムライゲーションにより結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、リンカーに、ＦＩＴＣのイソチオシアネートの、リンカーへのコンジュゲーションにより結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、リンカーに、エステルカップリングにより結合させることができる。リンカーは、ＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、ＴＩＤに化学的に結合させることができる。リンカーは、ＴＩＤに、オキシムライゲーションにより結合させることができる。疾患または状態は、がんでありうる。がんは、前立腺がんでありうる。がんは、卵巣がんでありうる。
【０３３６】
本明細書では、疾患を処置するための医薬の製造において、（ａ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含む低分子ＣＡＲ−ＥＣスイッチの使用であって、ＣＡＲ−ＩＤおよびＴＩＤが、アミド結合により連結された、２つまたはこれを超えるアミノ酸を含まない使用が開示される。ＣＡＲ−ＩＤは、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＦＩＴＣを含みうる。ＴＩＤは、低分子を含みうる。ＴＩＤは、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体を含みうる。ＴＩＤは、葉酸を含みうる。スイッチはさらに、リンカーを含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、アジドを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位特異的な様式で結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤ上の所定の部位に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、ＦＩＴＣのイソチオシアネートの、ＴＩＤへのコンジュゲーションにより結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、エステルカップリングにより結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに、クリック化学反応により結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに化学的に結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに、オキシムライゲーションにより結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、リンカーに、ＦＩＴＣのイソチオシアネートの、リンカーへのコンジュゲーションにより結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、リンカーに、エステルカップリングにより結合させることができる。リンカーは、ＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、ＴＩＤに化学的に結合させることができる。リンカーは、ＴＩＤに、オキシムライゲーションにより結合させることができる。疾患または状態は、がんでありうる。がんは、前立腺がんでありうる。がんは、卵巣がんでありうる。
【０３３７】
本明細書ではさらに、疾患または状態を処置するための、（ａ）ＦＩＴＣを含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸またはその誘導体を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含むスイッチの使用が開示される。疾患または状態は、がんでありうる。がんは、前立腺がんでありうる。スイッチはさらに、リンカー（linker.  linker）を含みうる。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、アジドを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位特異的な様式で結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤ上の所定の部位に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、ＦＩＴＣのイソチオシアネートの、ＴＩＤへのコンジュゲーションにより結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、エステルカップリングにより結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに、クリック化学反応により結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに化学的に結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに、オキシムライゲーションにより結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、リンカーに、ＦＩＴＣのイソチオシアネートの、リンカーへのコンジュゲーションにより結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、リンカーに、エステルカップリングにより結合させることができる。リンカーは、ＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、ＴＩＤに化学的に結合させることができる。リンカーは、ＴＩＤに、オキシムライゲーションにより結合させることができる。
【０３３８】
本明細書では、疾患または状態を処置するための、（ａ）ＦＩＴＣを含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、（ｂ）葉酸またはその誘導体を含む標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）とを含むスイッチの使用が開示される。リンカーは、二官能性リンカーでありうる。リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーでありうる。リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットを含みうる。リンカーは、シクロオクチンを含みうる。リンカーは、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーでありうる。リンカーは、アジドを含みうる。リンカーは、トリアゾールを含みうる。トリアゾールは、１，２，３−トリアゾールでありうる。トリアゾールは、１，２，４−トリアゾールでありうる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、部位特異的な様式で結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤ上の所定の部位に結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、ＦＩＴＣのイソチオシアネートの、ＴＩＤへのコンジュゲーションにより結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、ＴＩＤに、エステルカップリングにより結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤを、ＴＩＤに、クリック化学反応により結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに化学的に結合させることができる。リンカーは、ＣＡＲ−ＩＤに、オキシムライゲーションにより結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、リンカーに、ＦＩＴＣのイソチオシアネートの、リンカーへのコンジュゲーションにより結合させることができる。ＣＡＲ−ＩＤは、リンカーに、エステルカップリングにより結合させることができる。リンカーは、ＴＩＤに結合させることができる。リンカーは、ＴＩＤに化学的に結合させることができる。リンカーは、ＴＩＤに、オキシムライゲーションにより結合させることができる。疾患または状態は、がんでありうる。がんは、卵巣がんでありうる。
【０３３９】
本明細書で開示される方法は、１つまたは複数のエフェクター細胞を投与するステップを含みうる。１つまたは複数のエフェクター細胞は、本明細書で開示されるキメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）のいずれか１つを含みうる。１つまたは複数のエフェクター細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドを含みうる。ＣＡＲは、配列番号１〜４のいずれか１つのヌクレオチド配列によりコードされうる。ＣＡＲは、抗体に基づくか、またはこれに由来する外部ドメインを含みうる。ＣＡＲの外部ドメインは、抗ＦＩＴＣ抗体に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ＣＡＲの外部ドメインは、抗ＦＩＴＣ  ｓｃＦｖに基づきうるか、またはこれに由来しうる。スイッチおよびＣＡＲ−ＥＣは、同時に投与することができる。スイッチおよびＣＡＲ−ＥＣは、逐次的に投与することができる。方法は、第１のエフェクター細胞と第２のエフェクター細胞とを投与するステップを含みうる。第１のエフェクター細胞と第２のエフェクター細胞は、異なりうる。第１のエフェクター細胞と第２のエフェクター細胞は、同じでありうる。第１のエフェクター細胞と第２のエフェクター細胞は、同じ細胞型のものでありうる。第１のエフェクター細胞と第２のエフェクター細胞は、同じ細胞系統のものでありうる。第１のエフェクター細胞は、第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチの第１のＣＡＲ−ＩＤに結合する、第１の細胞外ドメインを有するＣＡＲを含むことが可能であり、第２のエフェクター細胞は、第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチの第２のＣＡＲ−ＩＤに結合する、第２の細胞外ドメインを有するＣＡＲを含みうる。第１のＣＡＲ−ＩＤと第２のＣＡＲ−ＩＤは、異なりうる。第１のＣＡＲ−ＩＤと第２のＣＡＲ−ＩＤは、同じでありうる。第１のＣＡＲ−ＩＥＣスイッチと第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、異なりうる。第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチと第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、異なるＴＩＤを含みうる。第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチと第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、同じでありうる。第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチと第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、同じＴＩＤを含みうる。
【０３４０】
ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、それがエフェクター細胞を標的細胞に近接させるため、治療効果を有しうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの意図される適応における治療効果は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、エフェクター細胞を、標的細胞に動員することに起因しうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの意図される適応における治療効果は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、エフェクター細胞を、標的細胞に動員することに完全に起因しうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの意図される適応における治療効果は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、エフェクター細胞を、標的細胞に動員することに主に起因しうる。
【０３４１】
意図される適応についての治療効果は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、タンパク質、ペプチド、または生体分子を、標的細胞に動員することに起因しうる。意図される適応についての治療効果は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、タンパク質、ペプチド、または生体分子を、標的細胞に動員することに完全に起因しうる。意図される適応における治療効果は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、タンパク質、ペプチド、または生体分子を、標的細胞に動員することに少なくとも部分的に起因しうる。
【０３４２】
ＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与することは、エフェクター細胞をさらに投与しなければ、いかなる治療効果も有しえない。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、エフェクター細胞をさらに投与しなければ、顕著な、所望の、および／または意図される治療効果を有しえない。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、エフェクター細胞をさらに投与しなければ、ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームの意図される適応に向けていかなる治療効果も有しえない。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの部分または構成要素（例えば、ＴＩＤ）は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ（例えば、ＣＡＲ−ＩＤ）の第２の部分または構成要素にコンジュゲートしなければ、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの意図される適応に向けて治療効果を有しえない。ＣＡＲ−ＥＣスイッチ（例えば、ＣＡＲ−ＩＤ、ＴＩＤ）の部分または構成要素の用量であって、ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームの一部として投与される場合に治療効果をもたらす用量は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの部分または構成要素が、その用量で、単独で投与されれば、治療効果を有しえない。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの部分または構成要素は、エフェクター細胞を、標的細胞に動員すること以外のいかなる治療効果も有することを意図されない場合がある。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの部分または構成要素が標的細胞に対して有しうる治療効果は、エフェクター細胞、タンパク質、ペプチド、または生体分子を、標的細胞に動員するＣＡＲ−ＥＣスイッチの治療効果と比べて無視しうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの部分または構成要素が標的細胞に対して有しうる治療効果は、エフェクター細胞を、標的細胞に動員することによる治療効果未満である。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの部分または構成要素を、標的細胞に結合させることは、標的細胞からの意図されない応答を誘導しうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの部分または構成要素を、標的細胞に結合させることは、エフェクター細胞、タンパク質、ペプチド、または生体分子を、標的細胞に動員することによる治療効果に加えた、意図されない治療効果を誘導しうる。
【０３４３】
本明細書では、被験体における疾患または状態を処置するためのプラットフォーム、キット、および方法が開示される。被験体は、疾患または状態を患っている可能性がある。被験体は、１つを超える疾患または状態を患っている可能性がある。被験体は、慢性リンパ性白血病を患っている可能性がある。被験体は、急性リンパ芽球性白血病を患っている可能性がある。被験体は、動物でありうる。被験体は、哺乳動物でありうる。哺乳動物は、ヒト、チンパンジー、ゴリラ、サル、ウシ、ウマ、ロバ、ラバ、イヌ、ネコ、ブタ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ラット、ハムスター、モルモット、またはマウスでありうる。被験体は、鳥類またはニワトリでありうる。被験体は、ヒトでありうる。被験体は、成人でありうる。被験体は、小児でありうる。小児は急性リンパ芽球性白血病を患っている可能性がある。被験体は、６カ月齢未満でありうる。被験体は、少なくとも約１歳、約２歳、約３歳、約４歳、約５歳、約６歳、約７歳、約８歳、約９歳、約１０歳、約１１歳、約１２歳、約１３歳、約１４歳、または約１５歳でありうる。被験体は、少なくとも約１６歳、約１７歳、または約１８歳でありうる。被験体は、少なくとも約１９歳、約２０歳、または約２５歳でありうる。被験体は、少なくとも約３０歳、約３５歳、約４０歳、約４５歳、約５０歳、約５５歳でありうる。被験体は、少なくとも約６０歳、約６５歳、約７０歳、約７５歳、約８０歳、または約８５歳でありうる。被験体は、約９０歳、約９５歳、約１００歳、または約１０５歳でありうる。被験体は、６５歳を超えている場合がある。被験体は、３０歳未満でありうる。
【０３４４】
本明細書で開示されるスイッチおよびスイッチ中間体を使用して、それを必要とする被験体における１つまたは複数の疾患または状態を処置することができる。疾患または状態は、がん、病原性感染症、自己免疫疾患、炎症性疾患、または遺伝性障害でありうる。
【０３４５】
場合によって、１つまたは複数の疾患は、がんを含む。がんは、再発性がんおよび／または難治性がんを含みうる。がんは、急性がんでありうる。がんは、慢性がんでありうる。がんは、再発性がんでありうる。がんは、加速化された難治性がんでありうる。がんは、寛解している可能性がある。がんは、病期Ｉのがん、病期ＩＩのがん、病期ＩＩＩのがん、または病期ＩＶのがんでありうる。がんは、若年性がんでありうる。がんは、成人がんでありうる。がんの例は、肉腫、癌（carcinoma）、リンパ腫、または白血病を含むがこれらに限定されない。疾患または状態は、細胞増殖性障害でありうる。細胞増殖性障害は、固形腫瘍、リンパ腫、白血病、および脂肪肉腫から選択することができる。がんは、骨髄性白血病、リンパ芽球性白血病、骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄単球性白血病、好中球性白血病、骨髄異形成症候群、Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、大細胞リンパ腫、混合細胞型リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、再発性小リンパ球性リンパ腫、有毛細胞白血病、多発性骨髄腫、好塩基球性白血病、好酸球性白血病、巨核芽球性白血病、単芽球性白血病、単球性白血病、赤白血病（ｅｒｙｔｈｒｏｌｅｕｋｅｍｉａ）、赤白血病（ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、および肝細胞癌から選択することができる。がんは、血液悪性腫瘍を含みうる。血液悪性腫瘍は、Ｂ細胞悪性腫瘍を含みうる。がんは、慢性リンパ性白血病を含みうる。がんは、急性リンパ芽球性白血病を含みうる。がんは、ＣＤ１９陽性バーキットリンパ腫を含みうる。
【０３４６】
がんは、神経内分泌がんを含みうる。がんは、膵臓がんを含みうる。がんは、膵外分泌がんを含みうる。がんは、甲状腺がんを含みうる。甲状腺がんは、甲状腺髄様がんを含みうる。
【０３４７】
がんは、前立腺がんを含みうる。前立腺がんは、ＰＳＭＡ陽性前立腺がんでありうる。ＰＳＭＡの発現は、一部または全部の病期の前立腺がんにおいて高度に上方調節される可能性があり、これらの中のがん細胞に限定されうる。がんは、ホルモン−不応性前立腺がんでありうる。
【０３４８】
がんは、上皮がんを含みうる。がんは、乳がんを含みうる。がんは、子宮内膜がんを含みうる。がんは、卵巣がんを含みうる。卵巣がんは、間質性卵巣がんを含みうる。がんは、子宮頸がんを含みうる。
【０３４９】
がんは、皮膚がんを含みうる。皮膚がんは、血管新生性皮膚がん（neo-angiogenic  skin  cancer）を含みうる。皮膚がんは、黒色腫を含みうる。
【０３５０】
がんは、腎臓がんを含みうる。
【０３５１】
がんは、肺がんを含みうる。肺がんは、小細胞肺がんを含みうる。肺がんは、非小細胞肺がんを含みうる。
【０３５２】
がんは、結腸直腸がんを含みうる。がんは、胃がんを含みうる。がんは、結腸がんを含みうる。
【０３５３】
がんは、脳がんを含みうる。脳がんは、脳腫瘍を含みうる。がんは、神経膠芽細胞腫を含みうる。がんは、星状細胞腫を含みうる。
【０３５４】
がんは、血液がんを含みうる。血液がんは、白血病を含みうる。白血病は、骨髄性白血病を含みうる。がんは、リンパ腫を含みうる。リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫を含みうる。
【０３５５】
がんは、肉腫を含みうる。一般に、肉腫とは、骨、軟骨、脂肪、筋肉、血管、または他の結合組織もしくは支持組織のがんである。肉腫は、骨がん、線維肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性神経鞘腫、両側前庭神経鞘腫、骨肉腫、軟組織肉腫（例えば、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、葉状嚢胞肉腫（cystosarcoma  phylloides）、皮膚線維肉腫、デスモイド腫瘍、類上皮肉腫、骨外性骨肉腫、線維肉腫、血管周囲細胞腫、血管肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、リンパ肉腫、悪性線維性組織球腫、神経線維肉腫、横紋筋肉腫、および滑膜肉腫）を含むがこれらに限定されない。肉腫は、ユーイング肉腫を含みうる。
【０３５６】
がんは、癌でありうる。一般に、癌とは、身体の表面を覆い、ホルモンを産生し、腺を構成する細胞である、上皮細胞内で始まるがんである。非限定的な例として述べると、癌は、乳がん、膵臓がん、肺がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、腎臓がん、膀胱がん、胃がん、前立腺がん、肝臓がん、卵巣がん、脳がん、膣がん、外陰がん、子宮がん、口腔がん、陰茎がん、精巣がん、食道がん、皮膚がん、ファローピウス管のがん、頭頸部がん、消化管間質がん、腺癌、皮膚または眼内黒色腫、肛門領域がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、尿道がん、腎盂がん、尿管がん、子宮内膜がん、子宮頸部がん、下垂体がん、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、脳幹神経膠腫、および脊髄腫瘍（spinal  axis  tumor）を含む。場合によって、がんは、基底細胞癌、扁平上皮癌（squamous）、黒色腫、非黒色腫、または紫外線（日光）角化症などの皮膚がんである。
【０３５７】
場合によって、がんは、肺がんである。肺がんは、気管から分岐し、肺（気管支）または肺の小空気嚢（肺胞）に供給する気道内で始まりうる。肺がんは、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌、および中皮腫（mesotheliomia）を含む。ＮＳＣＬＣの例は、扁平細胞癌、腺癌、および大細胞癌を含む。中皮腫は、肺および胸腔の内膜（胸膜）または腹部の内膜（腹膜）のがん性腫瘍でありうる。中皮腫は、アスベストへの曝露に起因しうる。がんは、神経膠芽細胞腫などの脳がんでありうる。
【０３５８】
代替的に、がんは、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍でありうる。ＣＮＳ腫瘍は、神経膠腫または非神経膠腫として分類することができる。神経膠腫は、悪性神経膠腫、高悪性度神経膠腫、びまん性内在性橋神経膠腫でありうる。神経膠腫の例は、星状細胞腫、希突起膠細胞腫（または希突起神経膠腫の要素と星状細胞腫の要素との混合状態）、および上衣腫を含む。星状細胞腫は、低悪性度星状細胞腫、未分化星状細胞腫、多形膠芽細胞腫、毛様細胞性星状細胞腫、多形黄色星状細胞腫、および上衣下巨細胞性星状細胞腫を含むがこれらに限定されない。希突起膠細胞腫は、低悪性度希突起膠細胞腫（または希突起星状細胞腫）および未分化希突起膠細胞腫を含む。非神経膠腫は、髄膜腫、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、および髄芽腫を含む。場合によって、がんは、髄膜腫である。
【０３５９】
白血病は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、または慢性骨髄性白血病でありうる。さらなる白血病の種類は、有毛細胞白血病、慢性骨髄単球性白血病、および若年性骨髄単球性白血病を含む。
【０３６０】
リンパ腫とは、リンパ球のがんであり、Ｂリンパ球から発症する場合もあり、Ｔリンパ球から発症する場合もある。２つの主要なリンパ腫の種類は、ホジキン病として既に公知のホジキンリンパ腫、および非ホジキンリンパ腫である。ホジキンリンパ腫は、リード−シュテルンベルク細胞の存在を顕徴とする。非ホジキンリンパ腫とは、ホジキンリンパ腫以外の全てのリンパ腫である。非ホジキンリンパ腫は、低悪性度のリンパ腫および侵襲性のリンパ腫でありうる。非ホジキンリンパ腫は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、小細胞リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、節外性濾胞辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、およびリンパ腫様肉芽腫症を含むがこれらに限定されない。
【０３６１】
がんは、固形腫瘍を含みうる。がんは、肉腫を含みうる。がんは、膀胱がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、肺がん、黒色腫、骨髄腫、甲状腺がん、膵臓がん、神経膠腫、脳の悪性神経膠腫、神経膠芽細胞腫、卵巣がん、前立腺がん、およびＰＳＭＡ陽性前立腺がんからなる群から選択することができる。がんの抗原発現は、不均一でありうる。がんの抗原発現は、モジュレートされている可能性がある。抗原は、表面抗原でありうる。がんは、骨髄腫を含みえない。がんは、黒色腫を含みえない。がんは、結腸がんを含みえない。がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）でありうる。がんは、再発性ＡＬＬでありうる。がんは、難治性ＡＬＬでありうる。がんは、再発性難治性ＡＬＬでありうる。がんは、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）でありうる。がんは、再発性ＣＬＬでありうる。がんは、難治性ＣＬＬでありうる。がんは、再発性難治性ＣＬＬでありうる。
【０３６２】
がんは、乳がんを含みうる。乳がんは、トリプルポジティブ乳がん（エストロゲン受容体陽性、プロゲステロン受容体陽性、およびＨｅｒ２陽性）でありうる。乳がんは、トリプルネガティブ乳がん（エストロゲン受容体陰性、プロゲステロン受容体陰性、およびＨｅｒ２陰性）でありうる。乳がんは、エストロゲン受容体陽性乳がんでありうる。乳がんは、エストロゲン受容体陰性乳がんでありうる。乳がんは、プロゲステロン受容体陽性乳がんでありうる。乳がんは、プロゲステロン受容体陰性乳がんでありうる。乳がんは、Ｈｅｒ２陰性乳がんを含みうる。乳がんは、低発現Ｈｅｒ２乳がんを含みうる。乳がんは、Ｈｅｒ２陽性乳がんを含みうる。Ｈｅｒ２を発現させる細胞株は、臨床免疫組織化学による特徴付けを反映する抗原密度であって、悪性腫瘍を、０（細胞当たりのＨｅｒ２抗原＜２０，０００）、１＋（細胞当たりのＨｅｒ２抗原１００，０００）、２＋（細胞当たりのＨｅｒ２抗原５００，０００）、および３＋（細胞当たりのＨｅｒ２抗原＞２，０００，０００）として分類する抗原密度について、十分に特徴付けられている。本発明は、これらの分類による乳がんを処置する方法を提供する。乳がんは、Ｈｅｒ２  ０と分類される乳がんを含みうる。乳がんは、Ｈｅｒ２  １＋と分類される乳がんを含みうる。乳がんは、Ｈｅｒ２  ２＋と分類される乳がんを含みうる。乳がんは、Ｈｅｒ２  ３＋と分類される乳がんを含みうる。
【０３６３】
疾患または状態は、病原性感染症でありうる。病原性感染症は、１つまたは複数の病原体により引き起こされうる。場合によって、病原体は、細菌、真菌、ウイルス、または原虫である。
【０３６４】
例示的な病原体は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ属、Ｂｏｒｒｅｌｉａ属、Ｂｒｕｃｅｌｌａ属、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ属、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ属、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ属、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ属、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ属、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ属、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ属、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ属、Ｌｉｓｔｅｒｉａ属、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ属、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ属、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属、Ｓｈｉｇｅｌｌａ属、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ属、Ｖｉｂｒｉｏ属、またはＹｅｒｓｉｎｉａ属を含むがこれらに限定されない。場合によって、病原体により引き起こされる疾患または状態は、結核であり、不均質試料は、細菌であるＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに由来する外来分子と、被験体に由来する分子とを含む。場合によって、細菌により引き起こされる疾患または状態は、結核、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属およびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属などの細菌により引き起こされうる肺炎、Ｓｈｉｇｅｌｌａ属、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ属、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属などの細菌により引き起こされうる食物由来の病気、ならびに破傷風、腸チフス、ジフテリア、梅毒、およびハンセン病などの感染症である。疾患または状態は、天然に存在する細菌叢の不均衡により引き起こされる膣疾患である、細菌性膣症でありうる。代替的に、疾患または状態は、髄膜（例えば、脳および脊髄を覆う保護膜）の細菌性炎症である、細菌性髄膜炎である。細菌により引き起こされる、他の疾患または状態は、細菌性肺炎、尿路感染症、細菌性胃腸炎、および細菌性皮膚感染症を含むがこれらに限定されない。細菌性皮膚感染症の例は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓまたはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓにより引き起こされうる膿痂疹；リンパの拡散を伴う深部表皮の連鎖球菌感染により引き起こされうる丹毒；および正常な皮膚微生物叢または外因性細菌により引き起こされうる蜂巣炎を含むがこれらに限定されない。
【０３６５】
病原体は、Ｃａｎｄｉｄａ属、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ属、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ属、およびＳｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ属などの真菌でありうる。真菌により引き起こされる疾患または状態の例は、いんきんたむし、酵母感染症、白癬、および水虫を含むがこれらに限定されない。
【０３６６】
病原体は、ウイルスでありうる。ウイルスの例は、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、エプスタイン−バーウイルス、肝炎ウイルス（例えば、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス）、単純ヘルペスウイルス（１型および２型）、サイトメガロウイルス、ヘルペスウイルス、ＨＩＶ、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、パピローマウイルス、パラインフルエンザウイルス、ポリオウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、風疹ウイルス、および水痘帯状疱疹ウイルスを含むがこれらに限定されない。ウイルスにより引き起こされる疾患または状態の例は、風邪、インフルエンザ、肝炎、ＡＩＤＳ、水痘、風疹、ムンプス、麻疹、いぼ、および灰白髄炎を含むがこれらに限定されない。
【０３６７】
病原体は、Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ属（例えば、Ａ．ａｓｔｒｏｎｙｘｉｓ、Ａ．ｃａｓｔｅｌｌａｎｉｉ、Ａ．ｃｕｌｂｅｒｔｓｏｎｉ、Ａ．ｈａｔｃｈｅｔｔｉ、Ａ．ｐｏｌｙｐｈａｇａ、Ａ．ｒｈｙｓｏｄｅｓ、Ａ．ｈｅａｌｙｉ、Ａ．ｄｉｖｉｏｎｅｎｓｉｓ）、Ｂｒａｃｈｉｏｌａ属（例えば、Ｂ．ｃｏｎｎｏｒｉ、Ｂ．ｖｅｓｉｃｕｌａｒｕｍ）、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ属（例えば、Ｃ．ｐａｒｖｕｍ）、Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒａ属（例えば、Ｃ．ｃａｙｅｔａｎｅｎｓｉｓ）、Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ属（例えば、Ｅ．ｃｕｎｉｃｕｌｉ、Ｅ．ｈｅｌｌｅｍ、Ｅ．ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ）、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ属（例えば、Ｅ．ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、Ｅｎｔｅｒｏｃｙｔｏｚｏｏｎ属（例えば、Ｅ．ｂｉｅｎｅｕｓｉ）、Ｇｉａｒｄｉａ属（例えば、Ｇ．ｌａｍｂｌｉａ）、Ｉｓｏｓｐｏｒａ属（例えば、Ｉ．ｂｅｌｌｉ）、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ属（例えば、Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍ、Ｍ．ｃｅｙｌｏｎｅｎｓｉｓ）、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ属（例えば、Ｎ．ｆｏｗｌｅｒｉ）、Ｎｏｓｅｍａ属（例えば、Ｎ．ａｌｇｅｒａｅ、Ｎ．ｏｃｕｌａｒｕｍ）、Ｐｌｅｉｓｔｏｐｈｏｒａ属、Ｔｒａｃｈｉｐｌｅｉｓｔｏｐｈｏｒａ属（例えば、Ｔ．ａｎｔｈｒｏｐｏｐｈｔｈｅｒａ、Ｔ．ｈｏｍｉｎｉｓ）、およびＶｉｔｔａｆｏｒｍａ属（例えば、Ｖ．ｃｏｒｎｅａｅ）などの原虫でありうる。
【０３６８】
疾患または状態は、自己免疫疾患または自己免疫関連疾患でありうる。自己免疫障害は、身体にそれ自身の組織を攻撃させる、身体の免疫系の機能不全でありうる。自己免疫疾患および自己免疫関連疾患の例は、アジソン病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性心筋炎、ベーチェット病、セリアック病、クローン病、皮膚筋炎、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、若年性関節炎、糖尿病、若年性糖尿病、川崎症候群、ランバート−イートン症候群、ループス（ＳＬＥ）、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、多発性硬化症、重症筋無力症、天疱瘡、結節性多発動脈炎、Ｉ型多腺性自己免疫症候群、ＩＩ型多腺性自己免疫症候群、およびＩＩＩ型多腺性自己免疫症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発筋炎、乾癬、乾癬性関節炎、ライター症候群、再発性多発性軟骨炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、精液および精巣の自己免疫疾患、スティッフパーソン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症を含むがこれらに限定されない。
【０３６９】
疾患または状態は、炎症性疾患でありうる。炎症性疾患の例は、肺胞炎、アミロイドーシス、血管炎、強直性脊椎炎、阻血性壊死、バセドウ病、ベル麻痺、滑液包炎、手根管症候群、セリアック病、胆管炎、膝蓋軟骨軟化症、慢性活動性肝炎、慢性疲労症候群、コーガン症候群、先天性股関節形成異常、肋軟骨炎、クローン病、嚢胞性線維症、ドケルバン腱炎、糖尿病関連関節炎、びまん性特発性骨増殖症、円板状ループス、エーラス−ダンロス症候群、家族性地中海熱、筋膜炎、線維炎／線維筋痛症、有痛性肩拘縮症、ガングリオン嚢胞、巨細胞性動脈炎、痛風、グレーブス病、ＨＩＶ関連リウマチ性疾患症候群、副甲状腺機能亢進関連関節炎、感染性関節炎、炎症性腸症候群／刺激性腸症候群、若年性関節リウマチ、ライム病、マルファン症候群、ミクリッツ病、混合性結合組織病、多発性硬化症、筋筋膜痛症候群、骨関節炎、骨軟化症、骨粗鬆症およびコルチコステロイド誘導性骨粗鬆症、ぺージェット病、回帰性リウマチ、パーキンソン病、プランマー病、リウマチ性多発筋痛症、多発筋炎、偽性痛風、乾癬性関節炎、レイノー現象／症候群、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、坐骨神経痛（腰椎神経根障害）、強皮症、壊血病、鎌状細胞関節炎、シェーグレン症候群、脊椎管狭窄症、脊椎すべり症、スティル病、全身性エリテマトーデス、高安（脈なし）病、腱炎、テニス肘／ゴルフ肘、甲状腺関連関節炎、ばね指、潰瘍性大腸炎、ウェゲナー肉芽腫症、およびウィップル病を含むがこれらに限定されない。
【０３７０】
本明細書で開示される処置法は、サイトカインレベルにより測定されるオフターゲット活性を含みうる。方法により、サイトカインレベルにより測定されるオフターゲット活性を、他のＣＡＲ−ＥＣ療法と比較して低減することができる。方法により、インターフェロンガンマレベルにより測定されるオフターゲット活性を低減することができる。低減されうる他のオフターゲット活性は、毒性のリンパ球減少症、固形腫瘍標的による致死性の細胞溶解、および血液標的についての慢性低ガンマグロブリン血症を含む。本明細書で開示される処置法および組成物を使用して、ＣＤ１９介在性Ｂ細胞形成不全を含むがんを処置することができる。方法および組成物により、ＣＤ１９介在性Ｂ細胞形成不全を最小化することができる。方法により、長期にわたるＢ細胞形成不全を回避することができる。
【０３７１】
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣプラットフォーム、方法、および組成物を使用して、それを必要とする被験体における異種腫瘍または異種血液細胞悪性腫瘍を処置することができる。「汎Ｂ細胞」マーカーであるＣＤ２０は、Ｂ細胞新生物について最も広く標的とされる抗原であり、ＦＤＡにより承認されている抗体であるリツキシマブは、多くの白血病およびリンパ腫の処置において、極めて重要な構成要素である。しかし、ＣＤ２０抗原の発現のモジュレーションに関連する抵抗性機構が、顕著な数の患者において生じる。ＣＤ１９抗原またはＣＤ２０抗原単独によるターゲティングは、根治療法に不十分なことが明らかである。本明細書で開示される方法は、特異性の異なる２つまたはこれを超えるスイッチ（例えば、抗ＣＤ１９抗体によるＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび抗ＣＤ２０抗体によるＣＡＲ−ＥＣスイッチ）の構築および投与をもたらす。本明細書で開示される方法は、特異性の異なる２つまたはこれを超えるスイッチ（例えば、抗ＣＤ１９抗体によるＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび抗ＣＤ２２抗体によるＣＡＲ−ＥＣスイッチ）の構築および投与をもたらす。異種腫瘍または異種血液細胞悪性腫瘍は、第１の抗体によるＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび第２の抗体によるＣＡＲ−ＥＣスイッチで処置することができ、ここで、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、２つの異なる標的に結合する。１つまたは複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、逐次的に投与することもでき、同時に投与することもできる。
【０３７２】
ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つまたは複数のさらなる治療剤と共に投与することができる。１つまたは複数のさらなる治療剤は、免疫療法、化学療法、およびステロイドからなる群から選択することができる。１つまたは複数のさらなる治療剤は、化学療法薬でありうる。化学療法薬は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、トポイソメラーゼ阻害剤、有糸分裂阻害剤、コルチコステロイド、または分化誘導剤でありうる。化学療法薬は、アクチノマイシンＤ、ブレオマイシン、アルトレタミン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルボプラチン、カペシタビン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、エストラムスチン、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ）、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ）、イキサベピロン、Ｌ−アスパラギナーゼ、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ）、ペメトレキセド、ペントスタチン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、テニポシド、チオグアニン、チオテパ、トポテカン（Ｈｙｃａｍｔｉｎ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、レチノイド、トレチノイン（ＡＴＲＡまたはＡｔｒａｌｉｎ（登録商標））、ベキサロテン（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））および三酸化ヒ素（Ａｒｓｅｎｏｘ（登録商標））から選択することができる。化学療法は、嚥下用の丸薬として投与することもでき、筋肉または脂肪組織への注射、静脈内注射、局所注射、または体腔への直接的な注射として投与することもできる。
【０３７３】
１つまたは複数のさらなる治療剤は、血管新生阻害剤を含みうる。血管新生阻害剤は、ベバシズマブ、イトラコナゾール、カルボキシアミドトリアゾール、ＴＮＰ−４７０、ＣＭ１０１、ＩＦＮアルファ、ＩＬ−１２、血小板因子４、スラミン、ＳＵ５４１６、トロンボスポンディン、ＶＥＧＦＲアンタゴニスト、ヘパリンを伴う血管新生抑制性ステロイド、軟骨（ＣＡＲ−ＥＣｉｌａｇｅ）由来血管新生阻害因子、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、アンギオスタチン、エンドスタチン、ソラフェニブ、スニチニブ、パゾパニブ、エベロリムス、２−メトキシエストラジオール、テコガラン、テトラチオモリブデート、サリドマイド、プロラクチン、αｖβ３阻害剤、リノマイド、タスキニモド、可溶性ＶＥＧＦＲ−１、可溶性ＮＲＰ−１、アンギオポエチン２、バソスタチン、カルレチクリン、ＴＩＭＰ、ＣＤＡＩ、Ｍｅｔｈ−１、Ｍｅｔｈ−２、インターフェロン−アルファ、インターフェロン−ベータ、インターフェロン−ガンマ、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−４、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、プロトロンビン、アンチトロンビンＩＩＩ断片、プロラクチン、ＶＥＧＩ、ＳＰＡＲＣ、オステオポンチン、マスピン、カンスタチン、プロリフェリン関連タンパク質、およびレスチンから選択することができる。
【０３７４】
１つまたは複数のさらなる治療剤は、ホルモン療法を含みうる。ホルモン療法は、抗エストロゲン（例えば、フルベストラント（Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標））、タモキシフェン、トレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）））；アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、エキセメスタン（Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標））、レトロゾール（Ｆｅｍａｒａ（登録商標）））；プロゲスチン（例えば、酢酸メゲストロール（Ｍｅｇａｃｅ（登録商標）））；エストロゲン；抗アンドロゲン（例えば、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、ニルタミド（Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（登録商標）））；ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）または黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニストまたはＬＨＲＨ類似体（例えば、ロイプロリド（Ｌｕｐｒｏｎ（登録商標））、ゴセレリン（Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標）））から選択することができる。
【０３７５】
１つまたは複数のさらなる治療剤は、ステロイドを含みうる。ステロイドは、コルチコステロイドでありうる。ステロイドは、コルチゾールまたはその誘導体でありうる。ステロイドは、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン（Ｓｏｌｕｍｅｄｒｏｌ（登録商標））、またはデキサメタゾンから選択することができる。
【０３７６】
ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つまたは複数のさらなる療法と共に投与することができる。１つまたは複数のさらなる療法は、レーザー療法を含みうる。１つまたは複数のさらなる療法は、放射線療法を含みうる。１つまたは複数のさらなる療法は、手術を含みうる。
【０３７７】
ＣＡＲ−ＥＣ調節因子
場合によって、不活性のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を被験体から除去するか、またはＣＡＲ−ＥＣによるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を下方調節することが所望でありうる。例えば、ＣＡＲ−ＥＣは、被験体からの免疫応答を引き出す場合があり、ＣＡＲの発現を下方調節して、免疫応答を消失させることが所望でありうる。代替的に、ＣＡＲ−ＥＣの細胞死を誘発することが所望でありうる。本明細書では、被験体におけるＣＡＲ−ＥＣを調節する方法であって、ＣＡＲ−ＥＣの調節因子を投与するステップを含む方法が開示される。ＣＡＲ−ＥＣを活性化させ、ＣＡＲ−ＥＣの活性を、標的に向ける、本明細書で開示されるスイッチと異なり、ＣＡＲ−ＥＣの調節因子は、ＣＡＲ−ＥＣ上の表面分子と相互作用して、ＣＡＲの発現の下方調節を誘導するか、またはＣＡＲ−ＥＣのプログラム細胞死を誘導する。ＣＡＲ−ＥＣは、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含みうる。ＣＡＲの発現は、プロモーターにより制御することができる。プロモーターは、調節プロモーターでありうる。例えば、ＣＡＲの発現は、Ｔｅｔプロモーターにより制御することができる。テトラサイクリンまたはその誘導体（例えば、ドキシサイクリン）の非存在下では、ＣＡＲ−ＥＣは、ＣＡＲを発現させうる。テトラサイクリンまたはその誘導体の存在下では、ＣＡＲの発現は、阻害される。したがって、ＣＡＲ−ＥＣの調節因子は、ＣＡＲの発現を阻害する分子（例えば、テトラサイクリン、ドキシサイクリン）を含みうる。ＣＡＲの発現は、キメラ調節系により制御することができる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子は、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドに操作された特異的配列と相互作用しうるトランス活性化因子を含みうる。キメラ系は、テトラサイクリン、プロゲステロンアンタゴニストであるＲＵ４８６、昆虫ホルモンであるエクジソン、またはラパマイシン（ＦＫ５０６）により調節することができる。これらの薬物またはホルモン（またはそれらの類似体）は、天然のリガンド結合性ドメインまたは変異体のリガンド結合性ドメイン、ならびに内因性または外因性のＤＮＡ結合性ドメインおよび転写活性化ドメインから構成されるモジュレーターである、トランス活性化因子に作用しうる（参照によりその全体が組み込まれる、Agha-MohammadiおよびLotze、Regulatable  systems:  applications  in  gene  therapy  and  replicating  viruses、J  Clin  Invest.、１０５巻（９号）：１１７７〜１１８３頁、２０００年）。
【０３７８】
ＣＡＲ−ＥＣの調節因子は、ＣＡＲ−ＥＣのＣＡＲと相互作用する分子を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子は、ＣＡＲ−ＥＣ上のＣＡＲについて、ＣＡＲ−ＥＣスイッチと競合しうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子は、低分子を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子は、ペプチドを含みうる。ペプチドは、抗体または抗体断片でありうる。
【０３７９】
ＣＡＲ−ＥＣの調節因子はさらに、薬物または毒素を含みうる。薬物または毒素は、ＣＡＲ−ＥＣのＣＡＲと相互作用するＣＡＲ−ＥＣの調節因子の部分にコンジュゲートすることができる。薬物または毒素は、メイタンシン（maytasine）（例えば、ＤＭ１、ＤＭ４）、モノメチルアウリスタチンＥ、モノメチルアウリスタチンＦ、Ｋｉ−４．ｄｇＡ、ドラスタチン１０、カリケアミシン、ＳＮ−３８、デュオカルマイシン、イリノテカン、リシン、サポリン、ゲロニン、ヨウシュヤマゴボウの抗ウイルス性タンパク質、ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ外毒素Ａ、またはジフテリア毒素から選択することができる。毒素は、毒物、細菌性毒素（例えば、破傷風、ジフテリアを引き起こす細菌性毒素）、植物毒素、または動物毒素を含みうる。毒素は、ヘビ毒でありうる。毒素は、ビンブラスチンを含みうる。毒素は、アウリスタチンを含みうる。毒素は、リポソーム膜で覆われた小胞内に含有されうる。抗体は、リポソーム膜で覆われた小胞に結合させることができる。
【０３８０】
図１７Ａ〜Ｃは、例示的なＣＡＲ調節因子−ＣＡＲ−ＥＣ間の相互作用についての概略図を示す。図１７Ａに示される通り、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）（１７０１）は、キメラ抗原受容体（１７０４）および共刺激分子（１７２０）を含みうる。ＣＡＲ（１７０４）は、外部ドメイン（１７１５）、膜貫通ドメイン（１７１０）、および内部ドメイン（１７０５）を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子（１７２５）は、ＣＡＲ（１７０４）の外部ドメイン（１７１５）と相互作用しうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子（１７２５）の、ＣＡＲ（１７０４）への結合は、ＣＡＲ−ＥＣのアポトーシスを誘導しうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子（１７２５）の、ＣＡＲ（１７０４）への結合は、ＣＡＲ−ＥＣの活性化誘導性細胞死を誘導しうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子（１７２５）の、ＣＡＲ（１７０４）への結合は、ＣＡＲ−ＥＣの自食を誘導しうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子（１７２５）の、ＣＡＲ（１７０４）への結合は、ＣＡＲの下方調節を誘導しうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子（１７２５）の、ＣＡＲ（１７０４）への結合は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、ＣＡＲに結合することを防止しうる。
【０３８１】
図１７Ｂに示される通り、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）（１７３０）は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）（１７３１）、共刺激分子（１７５０）および表面分子（１７５５）を含みうる。ＣＡＲ（１７３１）は、外部ドメイン（１７４５）、膜貫通ドメイン（１７４０）、および内部ドメイン（１７３５）を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子（１７６０）は、ＣＡＲ（１７３１）の外部ドメイン（１７１５）と相互作用する第１の端部（１７６５）と、ＣＡＲ−ＥＣ上の表面分子（１７５５）と相互作用する第２の端部（１７７０）とを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子（１７６０）の一方の端部の、ＣＡＲ（１７３１）およびＣＡＲ−ＥＣ（１７３０）の表面分子（１７５５）への結合は、ＣＡＲ−ＥＣのアポトーシスを誘導しうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子（１７６０）の一方の端部の、ＣＡＲ（１７３１）およびＣＡＲ−ＥＣ（１７３０）の表面分子（１７５５）への結合は、ＣＡＲ−ＥＣの活性化誘導性細胞死を誘導しうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子（１７６０）の一方の端部の、ＣＡＲ（１７３１）およびＣＡＲ−ＥＣ（１７３０）の表面分子（１７５５）への結合は、ＣＡＲ−ＥＣの自食を誘導しうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子（１７６０）の一方の端部の、ＣＡＲ（１７３１）およびＣＡＲ−ＥＣ（１７３０）の表面分子（１７５５）への結合は、ＣＡＲの下方調節を誘導しうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子（１７６５）の一方の端部の、ＣＡＲ（１７３１）への結合は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、ＣＡＲに結合することを防止しうる。
【０３８２】
図１７Ｃに示される通り、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）（１７７５）は、キメラ抗原受容体（１７７４）および共刺激分子（１７７９）を含みうる。ＣＡＲ（１７７４）は、外部ドメイン（１７７８）、膜貫通ドメイン（１７７７）、および内部ドメイン（１７７６）を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子（１７８０）は、エフェクター細胞上のＣＡＲ（１７７４）の外部ドメイン（１７７８）と相互作用する第１の領域（１７８１）を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子（１７８０）はさらに、別の細胞（１７９０）上の表面分子（１７９１）と相互作用する第２の領域（１７８２）を含みうる。細胞（１７９０）は、ＣＡＲ−ＥＣと相互作用しうるサイトカインまたは他の分子を分泌しうる。サイトカインまたは他の分子の、ＣＡＲ−ＥＣとの相互作用は、ＣＡＲ−ＥＣのアポトーシスを誘導しうる。サイトカインまたは他の分子の、ＣＡＲ−ＥＣとの相互作用は、ＣＡＲ−ＥＣの活性化誘導性細胞死を誘導しうる。サイトカインまたは他の分子の、ＣＡＲ−ＥＣとの相互作用は、ＣＡＲ−ＥＣの自食を誘導しうる。サイトカインまたは他の分子の、ＣＡＲ−ＥＣとの相互作用は、ＣＡＲの下方調節を誘導しうる。ＣＡＲ−ＥＣの調節因子（１７８１）の一方の端部の、ＣＡＲ（１７７４）への結合は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、ＣＡＲに結合することを防止しうる。
【０３８３】
ＣＡＲ−ＥＣは、ＣＡＲ−ＥＣの調節因子と相互作用しうる表面分子を発現させるように改変されたエフェクター細胞を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣ上の表面分子は、ウイルスタンパク質またはその断片でありうる。代替的に、または加えて、エフェクター細胞は、細胞表面マーカーではない、ウイルスタンパク質またはその断片を発現させる。ウイルスタンパク質またはその断片を発現させるエフェクター細胞は、薬物でターゲティングすることができる。エフェクター細胞が、ウイルスタンパク質またはその断片を含む場合、薬物は、アバカビル、アシクロビル、アデフォビル、アマンタジン、アンプレナビル、アンプリゲン、アルビドール、アタザナビル、アトリプラ、バラビル、ボセプレビル（boceprevirertet）、シドフォビル、コンビビル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エドクスジン、エファビレンツ、エムトリシタビン、エンフビルチド、エンテカビル、侵入阻害剤、ファムシクロビル、固定用量の組合せによる抗レトロウイルス薬、フォミビルセン、フォサンプレナビル、フォスカルネット、フォスフォネット、融合阻害剤、ガンシクロビル、イバシタビン、イムノビル、イドクスウリジン、イミキモド、インジナビル、イノシン、インテグラーゼ阻害剤、ＩＩＩ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン、ラミブジン、ロピナビル、ロビリド、マラビロク、モロキシジン、メチサゾン、ネルフィナビル、ネビラピン、ネキサビル、ヌクレオシド類似体、オセルタミビル、ペグインターフェロンアルファ−２ａ、ペンシクロビル、ペラミビル、プレコナリル、ポドフィロトキシン、プロテアーゼ阻害剤（protease  inhibiro）、ラルテグラビル、逆転写酵素阻害剤、リバビリン、リマンタジン、リトナビル、ピラミジン、サキナビル、ソフォスブビル、スタブジン、相乗作用増強レトロウイルス薬、ティーツリー油、テラプレビル、テノホビル、テノホビルジソプロシキル、チプラナビル、トリフルリジン、トリジビル、トロマンタジン、ツルバダ、バラシクロビル、ビクリビロック、ビダラビン、ビラミジン、ザシタビン、ザナミビル、またはジドブジンを含む群から選択することができる。薬物は、ガンシクロビルでありうる。薬物は、アシクロビルでありうる。
【０３８４】
医薬組成物
本明細書で開示されるスイッチ、スイッチ中間体、およびＣＡＲ−ＥＣは、１つまたは複数の組成物の製剤化において使用することができる。組成物は、医薬組成物でありうる。１つまたは複数のスイッチ、スイッチ中間体、および／またはＣＡＲ−ＥＣを含む組成物はさらに、１つまたは複数の薬学的に許容される塩、添加剤、またはビヒクルを含みうる。薬学的に許容される塩、添加剤、またはビヒクルは、担体、添加剤、賦形剤（ｄｉｌｕｅｎｔ）、抗酸化剤、保存剤、着色剤、香味剤、および希釈剤（ｄｉｌｕｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、充填剤、増量剤、バッファ（ｂｕｆｆｅｒ）、送達媒体、等張剤、共溶媒、湿潤剤、錯化剤、緩衝剤（ｂｕｆｆｅｒｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、抗微生物剤、および界面活性剤を含むがこれらに限定されない。中性緩衝食塩液または血清アルブミンと混合された食塩液は、例示的な適切な担体である。
【０３８５】
組成物は、アスコルビン酸などの抗酸化剤；低分子量のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリシンなどのアミノ酸；ブドウ糖、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；ならびに／またはＴｗｅｅｎ、プルロニック、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含みうる。これもまた、例として述べると、適切な等張性増強剤は、アルカリ金属のハロゲン化物（好ましくは塩化ナトリウムまたは塩化カリウム）、マンニトール、ソルビトールなどを含む。適切な保存剤は、塩化ベンザルコニウム、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸などを含む。また、過酸化水素も、保存剤として使用することができる。適切な共溶媒は、グリセリン、プロピレングリコール、およびＰＥＧを含む。適切な錯化剤は、カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ−シクロデキストリン、またはヒドロキシ−プロピル−ベータ−シクロデキストリンを含む。適切な界面活性剤または湿潤剤は、ソルビタンエステル、ポリソルベート８０などのポリソルベート、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポール（tyloxapal）などを含む。バッファは、酢酸バッファ、ホウ酸バッファ、クエン酸バッファ、リン酸バッファ、重炭酸バッファ、またはトリス−ＨＣｌバッファなど、従来のバッファでありうる。酢酸バッファは、約ｐＨ４〜５．５であることが可能であり、トリスバッファは、約ｐＨ７〜８．５でありうる。さらなる医薬品については、Remington’s  Pharmaceutical  Sciences、１８版、A.  R.  Gennaro編、Mack  Publishing  Company、１９９０年に示されている。
【０３８６】
組成物は、液体形態、凍結乾燥形態または冷凍乾燥形態でありうる。組成物は、１つまたは複数の凍結乾燥保護剤、添加剤、界面活性剤、高分子量の構造（structural  additive）および／または増量剤（例えば、米国特許第６，６８５，９４０号、同第６，５６６，３２９号、および同第６，３７２，７１６号を参照されたい）を含みうる。一実施形態には、スクロース、ラクトース、またはトレハロースなどの非還元糖である、凍結乾燥保護剤が含まれる。一般に含まれる凍結乾燥保護剤の量は、再構成すると、結果として得られる製剤が等張性となるような量であるが、また、高張性またはわずかに低張性の製剤も適しうる。加えて、凍結乾燥保護剤の量は、凍結乾燥の際に、タンパク質の容認できない量の分解および／または凝集を防止するのに十分な量でもあるべきである。例示的な凍結乾燥保護剤濃度は、あらかじめ凍結乾燥させた製剤中の糖（例えば、スクロース、ラクトース、トレハロース）では、約１０ｍＭ〜約４００ｍＭである。別の実施形態には、例えば、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０）；ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）；ポリ（エチレングリコール）フェニルエーテル（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ）；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；ラウリル硫酸ナトリウム（sodium  laurel  sulfate）；オクチルグリコシドナトリウム；ラウリルスルホベタイン、ミリスチルスルホベタイン、リノレイルスルホベタイン、またはステアリルスルホベタイン；ラウリルサルコシン、ミリスチルサルコシン、リノレイルサルコシン、またはステアリルサルコシン；リノレイルベタイン、ミリスチルベタイン、またはセチルベタイン；ラウロアミドプロピルベタイン、コカミドプロピルベタイン、リノレアミドプロピルベタイン、ミリスタミドプロピルベタイン、パルミドプロピルベタイン、またはイソステアラミドプロピルベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）；ミリスタミドプロピルジメチルアミン、パルミドプロピルジメチルアミン、またはイソステアラミドプロピルジメチルアミン；ナトリウムメチルココイル−タウレート、または二ナトリウムメチルオフェイル−タウレート（disodium  methyl  ofeyl-taurate）；ならびにＭＯＮＡＱＵＡＴ（商標）シリーズ（Ｍｏｎａ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｐａｔｅｒｓｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、ポリエチレングリコール（polyethyl  glycol）、ポリプロピレングリコール（polypropyl  glycol）、およびエチレングリコールとプロピレングリコールとのコポリマー（例えば、プルロニック、ＰＦ６８など）などの非イオン性界面活性剤およびイオン界面活性剤など、界面活性剤が含まれる。あらかじめ凍結乾燥させた製剤中に存在しうる界面活性剤の例示的な量は、約０．００１〜０．５％である。高分子量の構造添加物（例えば、充填剤、結合剤）は、例えば、アカシア、アルブミン、アルギン酸、リン酸カルシウム（二塩基性）、セルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶セルロース、デキストラン、デキストリン、デキストレート、スクロース、チロース、アルファ化デンプン、硫酸カルシウム、アミロース、グリシン、ベントナイト、マルトース、ソルビトール、エチルセルロース、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二ナトリウム、ピロ亜硫酸二ナトリウム、ポリビニルアルコール、ゼラチン、ブドウ糖、グアーガム、液体グルコース、圧縮糖、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、マルトデキストリン、ポリエチレンオキシド、ポリメタクリレート、ポビドン、アルギン酸ナトリウム、トラガントガム、微結晶セルロース、デンプン、およびゼインを含みうる。高分子量の構造添加物の例示的な濃度は、０．１重量％〜１０重量％である。他の実施形態には、増量剤（例えば、マンニトール、グリシン）が含まれうる。
【０３８７】
組成物は、非経口投与に適しうる。例示的な組成物は、動物への、当業者に利用可能な任意の経路であって、関節内経路、皮下経路、静脈内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、脳内（実質内）経路、脳室内経路、筋肉内経路、眼内経路、動脈内経路、または病変内経路などの経路による注射または注入に適する。非経口製剤は、任意選択で、薬学的に許容される保存剤を含有する、滅菌、発熱物質非含有、等張性の水溶液であることが典型的である。
【０３８８】
非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルである。水性担体は、水、アルコール溶液／水溶液、エマルジョン、または食塩液および緩衝媒体を含む懸濁液を含む。非経口ビヒクルは、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸加リンゲル液、または固定油を含む。静脈内ビヒクルは、リンゲルデキストロースに基づく補充剤など、流体補充剤および栄養物補充剤、電解質補充剤などを含む。また、例えば、抗微生物剤、抗酸化剤、キレート化剤、不活性ガスなどのような、保存剤および他の添加物も、存在しうる。一般に、参照によりその全体が組み込まれる、Remington’s  Pharmaceutical  Science、１６版、Mack  Eds.、１９８０年を参照されたい。
【０３８９】
本明細書で記載される医薬組成物は、生成物の局所濃度（例えば、ボーラス効果、デポ剤効果）および／または特定の局所環境内の安定性もしくは半減期の増加をもたらす様式で、制御送達または持続送達のために製剤化することができる。組成物は、本明細書で開示される、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ、ポリペプチド、核酸、またはベクターの製剤であって、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸などのポリマー化合物の粒子状調製物、ならびに生分解性マトリックス、注射用マイクロスフェア、マイクロカプセル状粒子、マイクロカプセル、生体浸食性粒子ビーズ、リポソーム、および活性剤の制御放出または持続放出をもたらし、これにより、デポ注射として送達されうる、植え込み用送達デバイスなどの媒介物（agent）などを伴う製剤を含みうる。このような持続送達手段または制御送達手段を製剤化するための技法は、公知であり、様々なポリマーが、薬物の制御放出および制御送達のために開発および使用されている。このようなポリマーは、生分解性および生体適合性であることが典型的である。鏡像異性ポリマーセグメントまたは鏡像異性ポリペプチドセグメントと、ハイドロゲルとの複合体化により形成されるポリマーハイドロゲルを含み、温度感受性またはｐＨ感受性を有するポリマーハイドロゲルは、生体活性のタンパク質薬剤（例えば、極めて長鎖のＣＤＲ３を含む抗体）の封入に関与する温和な水性条件のために、薬物のデポ効果をもたらすために望ましい場合がある。例えば、医薬組成物の送達のための、制御放出用多孔性ポリマー微粒子についての、ＷＯ９３／１５７２２における記載を参照されたい。この目的に適する材料には、ポリラクチド（例えば、米国特許第３，７７３，９１９号を参照されたい）、ポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８Ａ）などのポリ−（ａ−ヒドロキシカルボン酸）のポリマー、Ｌ−グルタミン酸とガンマエチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー（Sidmanら、Biopolymers、２２巻：５４７〜５５６頁（１９８３年））、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）（Langerら、J.  Biomed.  Mater.  Res.、１５巻：１６７〜２７７頁（１９８１年）；およびLanger、Chem.  Tech.、１２巻：９８〜１０５頁（１９８２年））、エチレン酢酸ビニル、またはポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。他の生分解性ポリマーは、ポリ（ラクトン）、ポリ（アセタール）、ポリ（オルトエステル）、およびポリ（オルトカーボネート）を含む。持続放出組成物はまた、当技術分野で公知の複数の方法（例えばEppsteinら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、８２巻：３６８８〜９２頁（１９８５年）を参照されたい）のいずれかにより調製しうる、リポソームを含みうる。担体それ自体またはその分解生成物は、標的組織内で非毒性であるべきであり、状態をさらに悪化させるべきでない。これは、標的障害の動物モデルにおける日常的なスクリーニングにより決定することもでき、このようなモデルが利用可能でない場合は、正常な動物において決定することもできる。持続放出のための、組換えタンパク質のマイクロカプセル化は、ヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、ヒトインターフェロン（ｒｈＩＦＮ）、インターロイキン−２、およびＭＮ  ｒｇｐ１２０に対して実施されて成功している。Johnsonら、Nat.  Med.、２巻：７９５〜７９９頁（１９９６年）；Yasuda、Biomed.  Ther.、２７巻：１２２１〜１２２３頁（１９９３年）；Horaら、Bio/Technology、８巻：７５５〜７５８頁（１９９０年）；Cleland、「Design  and  Production  of  Single  Immunization  Vaccines  Using  Polylactide  Polyglycolide  Microsphere  Systems」、Vaccine  Design中:  The  Subunit  and  Adjuvant  Approach、PowellおよびNewman編（Plenum  Press:  New  York、１９９５年）、４３９〜４６２頁；ＷＯ９７／０３６９２、ＷＯ９６／４００７２、ＷＯ９６／０７３９９；ならびに米国特許第５，６５４，０１０号。これらのタンパク質の持続放出製剤は、その生体適合特性および広範にわたる生分解特性のために、ポリ乳酸ポリグリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）を使用して開発した。ＰＬＧＡの分解生成物である、乳酸およびグリコール酸は、ヒト体内で速やかにクリアランスされうる。さらに、このポリマーの分解可能性は、その分子量および組成にも依存しうる（Lewis、「Controlled  release  of  bioactive  agents  from  lactide/glycolide  polymer」、M.  ChasinおよびR.  Langer（編）中、Biodegradable  Polymers  as  Drug  Delivery  Systems（Marcel  Dekker:  New  York、１９９０年）、１〜４１頁）。持続放出組成物のさらなる例は、例えば、ＥＰ５８，４８１Ａ、米国特許第３，８８７，６９９号、ＥＰ１５８，２７７Ａ、カナダ特許第１１７６５６５号、U.  Sidmanら、Biopolymer、２２巻、５４７頁［１９８３年］、R.  Langerら、Chem.  Tech.、１２巻、９８頁［１９８２年］、Sinhaら、J.  Control.  Release、９０巻、２６１頁［２００３年］、Zhuら、Nat.  Biotechnol.、１８巻、２４頁［２０００年］；ならびにDaiら、Colloids  Surf  B  Biointerfaces、４１巻、１１７頁［２００５年］を含む。
【０３９０】
また、生体接着性ポリマーも、本開示の組成物中の使用または本開示の組成物を伴う使用のために想定される。生体接着物質とは、長期にわたり生体基材に接着することが可能な、合成材料および天然に存在する材料である。例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌおよびポリカルボフィルはいずれも、ポリ（アクリル酸）の合成架橋誘導体である。天然に存在する物質に基づく生体接着性送達系は、例えば、ヒアルロナンとしてもまた公知のヒアルロン酸を含む。ヒアルロン酸とは、Ｄ−グルクロン酸およびＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの残基からなる、天然に存在するムコ多糖である。ヒアルロン酸は、脊椎動物の細胞外組織マトリックス内であって、結合組織内、ならびに滑液中および眼の硝子体液中および房水中を含む組織マトリックス内で見出される。ヒアルロン酸のエステル化誘導体は、生体適合性であり、かつ、生分解性である送達における使用のためのマイクロスフェアを生成するのに使用されている（例えば、Cortivoら、Biomaterials（１９９１年）、１２巻：７２７〜７３０頁；ＥＰ５１７，５６５；ＷＯ９６／２９９９８；Illumら、J.  Controlled  Rel.、（１９９４年）、２９巻：１３３〜１４１頁を参照されたい）。
【０３９１】
生分解性ポリマーマトリックスおよび非生分解性ポリマーマトリックスのいずれも、本開示の組成物を送達するのに使用することができ、このようなポリマーマトリックスは、天然または合成のポリマーを含みうる。生分解性マトリックスが好ましい。放出が生じる間の期間は、ポリマーの選択に基づく。数時間〜３〜１２カ月間の範囲の期間にわたる放出が最も所望されることが典型的である。生分解性送達系を形成するのに使用しうる、例示的な合成ポリマーは、乳酸およびグリコール酸のポリマー、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、ポリアルキレンテレフタレート（terepthalate）、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリビニルハライド、ポリビニルピロリドン、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリ酸無水物、ポリウレタンおよびそのコポリマー、ポリ（酪酸（butic  acid））、ポリ（吉草酸）、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、アクリル酸エステルおよびメタクリル酸エステルのポリマー、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシルエチルセルロース、三酢酸セルロース、硫酸セルロースナトリウム塩、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ酢酸ビニル、ポリビニルクロリド、ポリスチレン、およびポリビニルピロリドンを含む。例示的な天然のポリマーは、アルギネート、ならびにデキストランおよびセルロースを含む他の多糖、コラーゲン、これらの化学的誘導体（化学基、例えば、アルキル、アルキレンの置換、付加、ヒドロキシル化、酸化、および当業者により日常的に施される他の修飾）、アルブミンおよび他の親水性タンパク質、ゼインおよび他のプロラミン、ならびに疎水性タンパク質、コポリマー、ならびにこれらの混合物を含む。一般に、これらの材料は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける酵素的加水分解または水への曝露により、表面またはバルクにおける浸食により分解される。ポリマーは、任意選択で、その重量の最大約９０％までの水を吸収することが可能であり、さらに、任意選択で、多価イオンまたは他のポリマーにより架橋される、ハイドロゲルの形態である（例えば、ＷＯ０４／００９６６４、ＷＯ０５／０８７２０１、Sawhneyら、Macromolecules、１９９３年、２６巻、５８１〜５８７頁を参照されたい）。
【０３９２】
送達系はまた、コレステロール、コレステロールエステルなどのステロール、および脂肪酸、またはモノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリドなどの中性脂肪を含む脂質である非ポリマー系；ハイドロゲル放出系；シラスティック系；ペプチドベースの系；蝋によるコーティング；従来の結合剤および添加剤を使用する圧縮錠；部分的に融合させた埋没物（implant）なども含む。具体例は、（ａ）生成物が、米国特許第４，４５２，７７５号、同第４，６７５，１８９号、および同第５，７３６，１５２号において記載されているマトリックスなどのマトリックス内の形態で含有される浸食系；ならびに（ｂ）生成物が、米国特許第３，８５４，４８０号、同第５，１３３，９７４号、および同第５，４０７，６８６号において記載されているポリマーなどのポリマーから、制御された速度で浸み広がる拡散系を含むがこれらに限定されない。生成物を含有するリポソームは、例えば、ＤＥ３，２１８，１２１；Epsteinら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、８２巻：３６８８〜３６９２頁（１９８５年）；Hwangら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、７７巻：４０３０〜４０３４頁（１９８０年）；ＥＰ５２，３２２；ＥＰ３６，６７６；ＥＰ８８，０４６；ＥＰ１４３，９４９；ＥＰ１４２，６４１；ＪＰ８３−１１８００８；米国特許第４，４８５，０４５号、および同第４，５４４，５４５号；およびＥＰ１０２，３２４など、公知の方法（methods  known  methods）により調製することができる。
【０３９３】
代替的に、または加えて、組成物は、罹患領域への、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを吸収させるかまたは封入した、膜、スポンジ、または他の適切な材料の植え込みを介して、局所投与することができる。植え込みデバイスを使用する場合、デバイスは任意の適切な組織または器官へと植え込むことができ、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチ、核酸、またはベクターの送達は、ボーラスによる、または持続投与による、または持続注入を使用するカテーテルによるデバイスを介した直接的送達の場合もある。
【０３９４】
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを含む医薬組成物は、例えば、乾燥粉末など、吸入用に製剤化することができる。吸入溶液はまた、エアゾール送達のための液化噴霧体中でも製剤化することができる。さらに別の製剤では、溶液は、噴霧化することもできる。肺内投与用のさらなる医薬組成物は、例えば、化学修飾されたタンパク質の肺内送達について開示する、ＷＯ９４／２００６９において記載されている医薬組成物を含む。肺内送達では、粒子サイズは、肺の遠位部への送達に適するべきである。例えば、粒子サイズは、１μｍ〜５μｍであり得るが、例えば、各粒子が多孔性に富む場合は、より大きな粒子も使用することができる。
【０３９５】
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを含有する、ある特定の製剤は、経口投与することができる。このようにして投与される製剤は、錠剤およびカプセル剤など、固体剤形の調合で通常使用される担体を伴い製剤化することもでき、これらを伴わずに製剤化することもできる。例えば、カプセル剤は、消化管内で、バイオアベイラビリティーが最大化され、全身循環以前の分解が最小化される時点において、製剤の活性部分を放出するようにデザインすることができる。さらなる薬剤も、選択的結合剤（binding  agent）の吸収を容易とするように組み入れることができる。また、賦形剤、香味剤、融点の低い蝋、植物油、滑沢剤、懸濁化剤、錠剤崩壊剤、および結合剤（binder）も、用いることができる。
【０３９６】
別の調製物は、錠剤の製造に適する非毒性の添加剤を伴う混合物中に有効量の、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを伴いうる。錠剤を滅菌水中または別の適切なビヒクル中に溶解させることにより、溶液は、単位用量形態で調製することができる。適切な添加剤は、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムもしくは重炭酸ナトリウム、ラクトース、またはリン酸カルシウムなど、不活性の賦形剤；あるいはデンプン、ゼラチン、またはアカシアなどの結合剤；あるいはステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、または滑石などの滑沢剤を含むがこれらに限定されない。
【０３９７】
適切な医薬製剤および／または好ましい医薬製剤は、意図される投与経路、送達フォーマット、および所望の投与量に応じて、本開示および製剤化技術についての一般的知見に照らして決定することができる。投与方式に関わらず、有効用量は、患者の体重、体表面積、または器官のサイズに従い計算することができる。本明細書で記載される製剤の各々を伴う処置に適する投与量を決定するための計算のさらなる精緻化は、当技術分野で日常的になされており、当技術分野で日常的に実施される作業の範囲内にある。適切な投与量は、適切な用量反応データの使用により確認することができる。
【実施例】
【０３９８】
以下の例示的な例は、本明細書で記載される適用、系、および方法についての実施形態を表すものであり、いかなる形でも限定的であることを意図するものではない。
【０３９９】
（実施例１）
部位特異的に連結されたＦＩＴＣ−抗ＣＤ１９抗体ＣＡＲ−Ｔスイッチプラットフォームの、ＣＡＲ−Ｔによる細胞傷害性
抗ＦＩＴＣ  ｓｃＦｖである、４−４−２０（４−４−２０）、４Ｄ５Ｆｌｕ（４Ｄ５Ｆｌｕ）、４Ｍ５．３（４Ｍ５．３）、およびＦＩＴＣ−Ｅ２（ＦＩＴＣ−Ｅ２）（表１）を、第２世代のＣＡＲ（Ｃ末端から：ＣＤ３ζ、４−１ＢＢ、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＦＩＴＣ  ｓｃＦｖ）を含有するレンチウイルスベクターへとサブクローニングした。Ｔ細胞に、結果として得られるレンチウイルスベクターを用いて形質導入した。
【０４００】
【表１】
0006637415.tif 000048
【０４０１】
ＣＡＲ−Ｔスイッチの生成は、抗ＣＤ１９Ｆａｂの、非天然アミノ酸であるｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦ）による部位特異的修飾を使用して達成した。ｐＡｃＦは、抗ＣＤ１９  Ｆａｂの結合インターフェースに対して遠位の、２つの独立の部位（重鎖：ＨＣ  Ｋ１３６；または軽鎖：ＬＣ  Ｓ２０２；図２Ａ）に組み込んだ。次いで、ｐＡｃＦのケトンを化学ハンドルとして使用して、オキシムライゲーションを介して、Ｆａｂを、ヘテロ二官能性アジド−ＰＥＧ−アミノオキシリンカー（Ｎ３−ＴＥＧ−ＯＮＨ２）で部位特異的に修飾した（図２Ｂ）。オキシムライゲーションは、生理学的条件下で高度に安定である。次いで、［３＋２］付加環化反応により、ＰＥＧ−シクロオクチンリンカーで修飾されたＦＩＴＣを、タンパク質と「クリック反応」させた。
【０４０２】
切り替え型ＣＡＲ−Ｔプラットフォームの活性および特異性を評価するため、４つのＦＩＴＣベースのキメラ抗原受容体（形質導入効率は、４０〜６０％であった）の１つを保有するレンチウイルスを用いて形質導入された単離ヒトエフェクター細胞の細胞傷害性についてアッセイした。ＣＤ１９陽性多発性骨髄腫細胞（ＩＭ−９；ＥＣ５０＝３〜１２ｐＭ）およびＣＤ１９陽性急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）細胞（ＲＳ４；１１）に対するＣＡＲ−Ｔの細胞溶解活性は、抗ＣＤ１９−ＦＩＴＣスイッチに依存したが、ＣＤ１９陰性細胞（Ｋ５２６；ＥＣ５０：検出なし）に対する活性は極めて低かった（図３Ａ〜Ｂ；表２）。これらのアッセイでは、細胞溶解が、ＦＩＴＣ  ｓｃＦｖアフィニティーに依存しないことは予測外であった。これらの結果は、ＣＤ１９陽性バーキットリンパ腫（Ｄａｕｄｉ）細胞およびＣＤ−１９陽性ＩＭ−９細胞に対して再現可能であった。注目すべきことに、結果は、抗ＣＤ１９−ＦＩＴＣ（平均ＦＩＴＣ対抗体比＝２：１）のランダムコンジュゲーションを介して生成されたスイッチが、ＬＣ  Ｓ２０２ｐＡｃＦ、ＨＣ  Ｋ１３６ｐＡｃＦ、またはこれらの両方への部位特異的コンジュゲーションにより作製されたスイッチほど効果的でないことを指し示す（図３Ｃ）。加えて、非特異的にコンジュゲートしたスイッチが、１ｎＭまたはこれを上回る濃度でもたらす、ＣＤ１９陰性Ｋ５６２細胞に対するバックグラウンドの細胞溶解も（部位特異的にコンジュゲートしたスイッチより）大きかった。非特異的にコンジュゲートしたスイッチはまた、細胞傷害性アッセイにおいて、バッチ間のばらつきも実証した。こうして、部位特異的スイッチは、予備結果において、大きな有効性と小さなオフターゲット性を実証したことから、それらのさらなる調査が後押しされた。
【０４０３】
細胞傷害性アッセイ
【０４０４】
形質導入されたヒトエフェクター細胞（約５０％の形質導入効率）を、標的細胞と共に、濃度を変化させるＦＩＴＣ「スイッチ」の存在下において、１０：１（全Ｔ細胞対標的細胞）の比で、２４時間にわたり共インキュベートした。標的細胞の再指向溶解（redirected  lysis）は、製造業者のプロトコールに従い、ＣｙｔｏＴｏｘ９６非放射性細胞傷害性アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）により決定した。細胞傷害性の百分率は、細胞傷害性％＝（吸光度の実験平均−吸光度の自然発生平均）／（最大殺滅時における吸光度の平均−吸光度の自然発生平均）×１００により計算した。
【０４０５】
【表２】
0006637415.tif 000049
【０４０６】
（実施例２）
部位特異的に連結されたＦＩＴＣ−抗Ｈｅｒ２抗体ＣＡＲ−Ｔスイッチによる細胞傷害性
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）抗体に基づく抗Ｈｅｒ２スイッチを使用して、ＳＫＢＲ３  Ｈｅｒ２陽性乳がん細胞に対するＣＡＲ−Ｔ活性についてアッセイした。ランダムにコンジュゲートしたＦＩＴＣ−抗ＣＤ１９抗体ＣＡＲ−Ｔスイッチと同様の様式で、Ｆａｂスイッチは、ＦＩＴＣと、ランダムにコンジュゲートするか、またはＬＣ  Ｓ２０２ｐＡｃＦにおいてコンジュゲートした。結果は、ＬＣ  Ｓ２０２ｐＡｃＦにおいてコンジュゲートしたＦＩＴＣを伴う、このＦＩＴＣ−抗Ｈｅｒ２抗体ＣＡＲ−Ｔスイッチが、Ｈｅｒ２陽性細胞に対する活性の制御において有効（ＥＣ５０＝８〜２０ｎＭ）であることを実証した（図３Ｄ、表３）。また、非特異的にコンジュゲートしたスイッチは、細胞傷害性アッセイにおいても、バッチ間のばらつきを実証した。
【０４０７】
【表３】
0006637415.tif 000050
【０４０８】
（実施例３）
それぞれのＣＡＲについてアフィニティーを変化させての、ＦＩＴＣ−抗Ｈｅｒ２によるＣＡＲ−Ｔスイッチの有効性
Ｈｅｒ２を発現させる細胞株は、臨床免疫組織化学による特徴付けを反映する抗原密度であって、悪性腫瘍を、０（細胞当たりの抗原＜２０，０００）、１＋（細胞当たり１００，０００）、２＋（細胞当たり５００，０００）、および３＋（細胞当たり＞２，０００，０００）として分類する抗原密度について、十分に特徴付けられている。Ｈｅｒ２について定量的に特徴付けられた細胞株のアベイラビリティーにより、ＣＡＲ−Ｔ  ｓｃＦｖのアフィニティーの、抗原密度に対する効果について研究するのに理想的な系となっている。Ｈｅｒ２スイッチの、ＳＫＢＲ３細胞（Ｈｅｒ２、３＋）に対する有効性について実証する予備データに基づき、乳がん株であるＭＤＡ  ＭＢ４５３（Ｈｅｒ２、２＋）、ＭＤＡ  ＭＢ２３１（Ｈｅｒ２、１＋）、およびＭＤＡ  ＭＢ４６８（Ｈｅｒ２、陰性、０）に対する、多様なＨｅｒ２スイッチの活性について調べた。切除不可能なＨｅｒ２  １＋乳がんまたはＨｅｒ２  ２＋乳がんに対する有効な療法は存在しない（トラスツズマブが処方されるのは、３＋患者に限られる）ため、このＣＡＲ−Ｔの臨床適用は、切除不可能な乳がんを伴う何千人もの女性のための、有意義な処置選択肢を提示しうる。加えて、Ｈｅｒ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞を伴う臨床試験では、これらの療法が、高用量では潜在的に毒性であることも実証されている。ＣＡＲ−Ｔ応答の滴定をオンまたはオフにするスイッチの使用は、この文脈では特に有利でありうる。
【０４０９】
【表４】
0006637415.tif 000051
【０４１０】
（実施例４）
最適なスイッチの生物物理的特徴
疑似的免疫シナプスにおける構造−活性関係の完全な理解は、切り替え型ＣＡＲ−ＥＣを、臨床候補物質に推し進めるのに極めて重要である。本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを作製するのに、部位特異的コンジュゲーション法を使用するため、従来の非特異的コンジュゲーション法を使用する別の方法では調査しえなかった、スイッチの生物物理的特徴（例えば、スイッチの形状、長さ、価数、および抗体フォーマット、ならびにＣＡＲ−ＥＣの活性化に対するそれらの効果）を評価することができる。
【０４１１】
現行の２ステップのコンジュゲーション法（オキシムライゲーションに続く、クリック化学反応；図２）は、リンカーの最適化に簡便であったが、スケーラブルな生成には、１ステップのクリックコンジュゲーションが所望される。この目的のために、１ステップによるＦＩＴＣ−リンカーの結合のためのタンパク質新生クリック基質として働くように、非天然アミノ酸であるｐ−アジドフェニルアラニン（ｐＡｚＦ）を組み込む（図５Ａ）。このコンジュゲーション戦略を使用するスイッチのサイズについて調査するため、ＰＥＧリンカーの長さを、４ＰＥＧサブユニット（１６Å）〜３２ＰＥＧサブユニット（１１２Å）で変化させ、細胞傷害性を媒介するスイッチの能力について評価する。短過ぎるリンカーが結合に干渉するのに対し、過度に長いリンカーは、ＣＡＲ−Ｔと標的細胞の間の距離を増加させることにより有効性を減じる。
【０４１２】
部位特異的コンジュゲーションの、切り替え型ＣＡＲ−ＥＣに対する効果についてさらに研究するため、ｐＡｚＦを、元の部位から３０Åまたはこれを超えるＬＣ  Ｔ１０９またはＨＣ  Ａ１２３に組み込み、スイッチの形状を、免疫シナプスに対して垂直となるように「切り替える」。加えて、これらの部位は、Ｆａｂの抗原結合インターフェースの近傍にあり、ＣＡＲ−Ｔをその標的に近接させる。Ｆａｂを通してさらなる変異を調査する。
【０４１３】
価数の効果については、ｐＡｚＦ残基を、タンパク質内の複数の部位に組み込んで、多価基質を同時に作製することにより調べた。予備結果は、２つのＦＩＴＣ分子の、ＬＣ  Ｓ２０２およびＨＣ  Ｋ１３６の両方に対するコンジュゲーションは、１つの部位へのコンジュゲーションと同等に効果的であることを指し示した（図３Ｃ）。
【０４１４】
（実施例５）
異種移植マウスモデルおよび同系マウスモデルならびに異種腫瘍を伴うマウスモデルにおける、ＣＡＲ−Ｔ系の評価
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、スイッチおよびオフターゲット反応性の最適化の後で、ＣＡＲ−Ｔプラットフォームの有効性について、異種移植マウスモデル、同系マウスモデル、および異種マウスモデルという３つのマウスモデルにおいて解析する（図４Ｂに描示されるフローチャートを参照されたい）。ｉｎ  ｖｉｖｏ研究では、最適なＦＩＴＣ−ＣＡＲ−Ｔ構成を実施する。スイッチの血清中半減期は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける活性を調節する能力に対して大きな影響を及ぼす可能性があるため、ＦａｂスイッチおよびＩｇＧスイッチのＰＫについてまず評価した。血清中半減期を、持続的なＴ細胞応答を安全に滴定する能力と均衡させることが重要である。Ｆａｂ’は、ＣＡＲ−ＥＣの有効性および制御に理想的な（ｔ１／２＝３〜４時間）抗体フォーマットでありうる。抗体のＦＩＴＣによる修飾は、ＰＫを有意には変化させないと予測される。ＰＫ研究におけるＦＩＴＣコンジュゲートの完全性は、サンドイッチＥＬＩＳＡおよび高分解度質量分析により確認される。静脈内投与に加えてまた、皮下バイオアベイラビリティーも評価する。
【０４１５】
異種移植
【０４１６】
有効性について評価するため、マウス異種移植モデルを使用して、これらの切り替え型プラットフォームを、ＣＡＲ−Ｔスイッチプラットフォームにより既に開発されているプラットフォームと比較する。この目的のために、ＲＳ４；１１細胞株、ＮＡＬＭ−６細胞株、Ｒａｊｉ細胞株、または他のＣＤ１９陽性細胞株を使用して、非肥満型糖尿病−重症複合型免疫不全症（ＮＯＤ−ＳＣＩＤ−γ−／−；ＮＳＧ）マウスにおいて腫瘍モデルを確立する。ＦＩＴＣ−ＣＡＲ−ＥＣは、ＩＶ送達され、用量範囲調査を、ＦＩＴＣ抗ＣＤ１９スイッチについて実行し、野生型のＣＤ１９  Ｆａｂ対照と比較する。有効性は、腫瘍負荷および全生存に基づき判定する。マウスは、末梢血中のＣＡＲ−ＥＣの増殖についてモニタリングするため、毎週の採血により、９０日間にわたりモニタリングする。ＣＡＲ−ＥＣについての、詳細な免疫表現型による特徴付けは、マルチチャネルフローサイトメトリーを使用して、標準的な表現型パラメータに従い規定される、エフェクター表現型、メモリー表現型、老化（終末分化）表現型、またはアネルギー化表現型に焦点を当てる。これは、切り替え型ＣＡＲ−ＥＣのｉｎ  ｖｉｖｏにおける発生が、特定のＴ細胞コンパートメントへのバイアスを受け、これにより、ＣＡＲ−Ｔ−１９と比較した、細胞の臨床的持続性に影響が及びうるのかどうかを決定するのに特に適当である。
【０４１７】
ＦａｂベースのスイッチおよびＩｇＧベースのスイッチを、観察されるＰＫデータに従う適切な投与量で送達し、それらの有効性を比較する。ＩｇＧは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるその長い貯留時間のために、このモデルにおいて最も効果的でありうる。この考えについてのさらなる調査は、同系モデルに対して実行する。
【０４１８】
ＮＳＧマウスにおける異種移植モデルを作り出すために、原発性患者由来ＡＬＬ試料または原発性患者由来ＣＬＬ試料を得る。フローサイトメトリーにより、原発性試料を、ＣＤ１９の発現について特徴付ける。治療を施す前に、２〜３週間にわたり、マウスにおいて、白血病を確立する。ＣＡＲ−Ｔ−１９と対比した有効性は、末梢血中のＣＤ１９＋ＡＬＬ芽球カウントについてモニタリングすることにより判定する。白血病がコントロールされていないか、または消失していない場合は、増殖した芽球について免疫表現型解析する（具体的には、ＣＤ１９抗原発現の喪失について探索するが、さらなる研究については、下記を参照されたい（vida  infra））。また、ＣＡＲ−ＥＣの存続についてもモニタリングする（ＣＡＲ−ＥＣは、ＲＳ４；１１ベースの異種移植片と実質的に異ならないと予測されるが）。
【０４１９】
同系
【０４２０】
切り替え型ＣＡＲ−ＥＣを、免疫適格Ｂ細胞リンパ腫マウスモデルにおいて、Ｂ細胞形成不全を逆転する能力について調べる。マウスサロゲートＣＡＲ−Ｔを作製するために、マウス脾臓細胞への形質導入のために、操作されたＦＩＴＣベースのキメラ受容体を、モロニーマウス白血病ベースのレトロウイルスベクターにクローニングする。マウス由来のシグナル伝達ドメインである、ＣＤ２８およびＣＤ３ｚを使用する。抗ヒトＣＤ１９抗体は、マウスＣＤ１９と交差反応しないので、ラット抗マウスＣＤ１９ハイブリドーマである１Ｄ３を得（ＡＴＣＣから）、可変領域を配列決定する。この配列を、非天然アミノ酸組み込みのための発現ベクターへとクローニングして、スイッチを作製し、キメラ抗原受容体へとクローニングして、ＣＡＲ−Ｔ−１９マウスサロゲートを作製する。
【０４２１】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける形質導入の最適化および有効性の評価の後で、Ｍｙｃ５−ＣＤ１９細胞株を使用して、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、Ｂ細胞リンパ腫を確立する。ＣＡＲ−ＥＣおよびスイッチは、異種移植研究およびサロゲート系によるｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイに基づく投与スケジュールにより投与する。このモデルで特に興味深いのは、ＦａｂベースのスイッチおよびＩｇＧベースのスイッチを、Ｍｙｃ５−ＣＤ１９の消失速度およびＢ細胞の除去速度について比較することである。異種移植研究と同様に、ＣＡＲ−Ｔの増殖についてモニタリングし、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて、免疫表現型による特徴付けを実行する。リンパ腫細胞の根絶の後で、スイッチ投与を停止させ、末梢血中のＢ細胞の再増殖についてモニタリングする。サロゲートＣＡＲ−Ｔ−１９およびサロゲート切り替え型ＣＡＲ−Ｔのいずれも、長期にわたる寛解を可能とすることが予測されるが、Ｂ細胞集団の再増殖を可能とするのは、切り替え型プラットフォームに限られる。所定のコホートに対する組織学的検査（histology）を介して、ＣＡＲ−Ｔの、主要な器官への浸潤についてモニタリングし、治療後１８０日間まで細胞解析を実行する。刺激の非存在下における、ＣＡＲ−ＥＣの長期にわたる存続について追跡する。
【０４２２】
異種腫瘍をターゲティングするためのＣＡＲ−ＥＣスイッチ
【０４２３】
抗ＣＤ２０抗体であるリツキシマブに基づく第２のスイッチは、ＣＡＲ−Ｔ−１９療法の間に、単一の養子導入ＣＡＲ−Ｔを使用して、ＣＤ１９エスケープ変異体に帰せられるＡＬＬの再発に対抗するように、同じ患者における異なる抗原を逐次的に、または同時にターゲティングする。
【０４２４】
抗ＣＤ２０スイッチは、実施例３で決定された最適な特徴を使用して、抗ＣＤ１９スイッチと類似の様式で作製される。リツキシマブに基づくＣＡＲ−Ｔ−２０を、比較のために構築する。ＣＤ２０陽性ＩＭ−９細胞株およびＤａｕｄｉ細胞株に対する有効性について、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで調べる。異種Ｂ細胞性リンパ芽球を作製するため、レンチウイルスベクターを使用して、慢性骨髄性白血病由来Ｋ５６２細胞株（これは、ＣＤ２０およびＣＤ１９について陰性である）に、ＣＤ１９抗原を安定的に形質導入する。均質なＣＤ１９発現を伴う集団を得るように、フローソーティングを介して単一細胞クローンを得る。次いで、この細胞株に、ＣＤ２０を形質導入し、高レベルの抗原発現（ＣＤ２０ｈｉ）または低レベルの抗原発現（ＣＤ２０ｌｏｗ）により分取する。ＣＤ１９＋ＣＤ２０−と、ＣＤ１９＋ＣＤ２０ｈｉまたはＣＤ１９＋ＣＤ２０ｌｏｗとの混合物に対する切り替え型ＣＡＲ−Ｔの活性化、および細胞傷害性について、ＣＤ１９スイッチおよびＣＤ２０スイッチ（同時的投与または逐次的投与）を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて評価する。方法は、集団内の百分率が最低のＣＤ２０ｈｉ細胞またはＣＤ２０ｌｏｗ細胞であって、リツキシマブスイッチでＣＡＲ−Ｔを刺激する必要がある細胞について研究する機会をもたらす。次いで、この系について、異種移植マウスモデルにおいて調べる。ＣＤ１９＋ＣＤ２０−とＣＤ１９＋ＣＤ２０＋との混合物を使用して、異種移植モデルを確立する。代替的に、本発明者らによる初期異種移植研究において、ＣＤ１９発現またはＣＤ２０発現について不均質であることが判明する場合は、原発性患者由来のＡＬＬ試料を、この実験に使用する。抗ＣＤ２０スイッチを伴う切り替え型ＣＡＲ−ＥＣを投与して、ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋集団を消失させ、ＣＤ１９＋ＣＤ２０−細胞の増殖を可能とする。同じＣＡＲ−Ｔを再ターゲティングすることの実行可能性を実証するため、その後、抗ＣＤ１９スイッチを投与し、残りの異種移植片の成長についてモニタリングする。腫瘍を、屠殺されたマウスのコホートにおける抗原発現または原発性芽球内の抗原発現について評価する。また、同時的ターゲティングについても評価する。処置を、ＣＡＲ−Ｔ−１９、ＣＡＲ−Ｔ−２０、またはこれらの両方について同時に比較する。この方法は、持続性のＢ細胞の喪失を回避しながら、臨床における再発への傾向に対して顕著な利点をもたらしうる。
【０４２５】
（実施例６）
低分子スイッチ
ＰＢＭＣおよび細胞株
【０４２６】
ヒトＰＢＭＣは、健常ドナーの全血液から、製造業者のプロトコールに従い、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ＰＬＵＳ（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）密度勾配培地を用いる遠心分離により、新たに単離した。細胞は、５％のヒトＡＢ血清（Ｖａｌｌｅｙ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ、Ｗｉｎｃｈｅｓｔｅｒ、ＶＡ）を含有するＡＩＭ−Ｖ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中、３：１の（ビーズ対細胞）比のＤｙｎａｂｅａｄｓ  Ｈｕｍａｎ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ−Ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ＣＤ３／ＣＤ２８（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）により、速やかに活性化させた。レンチウイルスの産生は、ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞株を使用して実行した。ウイルス上清を使用して、プロタミン硫酸塩および組換えヒトＩＬ２（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）の存在下におけるスピノキュレーションを介して、活性化させたＰＢＭＣに直接形質導入した。Ｃ４−２細胞株、ＫＢ細胞株、およびＡ５４９細胞株を、それぞれ、１０％のウシ胎仔血清を補充した、ＲＰＭＩ−１６４０中、イーグル最小必須培地中、およびＦ−１２Ｋ培地中で維持した（全てＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製）。
【０４２７】
図５Ａは、Ｐ−ＴｒｉＡ−ＦＩＴＣの構造を示す。図５Ｂは、ＦＩＴＣにコンジュゲートする、ＴｒｉＡ−２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸リンカーを合成するためのスキームについて描示する。図５Ｃは、Ｃ４−２（ＰＳＭＡ＋）前立腺がん細胞をターゲティングする抗ＦＩＴＣ−ＣＡＲ  Ｔ細胞についての、２４時間にわたる細胞傷害性アッセイであって、Ｐ−ＴｒｉＡ−ＦＩＴＣの段階希釈液を伴うアッセイからの結果について描示する。各濃度は、３連で実行した。結果は、細胞傷害性の平均百分率として示す。図５Ｃに描示されるグラフについての数値を、表５に示す。
【表５】
0006637415.tif 000052
【０４２８】
図６Ａは、葉酸−ＦＩＴＣの構造を示す。図６Ｂ〜６Ｃは、濃度を変化させる葉酸−ＦＩＴＣの存在下において、ＫＢ（ＦＲ＋）（図６Ｂを参照されたい）標的細胞またはＡ５４９（ＦＲ−）（図６Ｃを参照されたい）標的細胞と共に共インキュベートされた抗ＦＩＴＣ−ＣＡＲ−Ｔについての、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける細胞傷害性アッセイからの結果について描示する。各濃度は、３連で実行した。結果は、細胞傷害性の平均百分率として示す。図６Ｂおよび６Ｃに描示されるグラフについての数値を、それぞれ、表６および７に示す。
【０４２９】
【表６】
0006637415.tif 000053
【０４３０】
【表７】
0006637415.tif 000054
【０４３１】
（実施例７）
ＣＡＲおよびＣＡＲ−Ｔスイッチの構築
ＣＡＲは、以下の通りに構築した。
【０４３２】
ＬＶ−ＥＦ１ａ−４−４−２０−ＢＢＺ（配列番号１）は、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を標的とするように設計した。２０ｎＭのアフィニティーを有するｓｃＦｖ  ４−４−２０は、マウスハイブリドーマから生成し、フレームワーク移植またはエラープローンＤＮＡシャフリングにより成熟させた。それは、参考文献であるPlueckthun  A.、Improving  in  vivo  folding  and  stability  of  a  sigle-chain  Fv  antibody  fragment  by  loop  grafting、Protein  Eng.、１９９７年８月、１０巻（８号）：９５９〜６６頁による、重鎖および（ＧＧＧＧＳ）６（配列番号５７、ここでｎ＝６）リンカーに前置される軽鎖を伴って構築された。
【０４３３】
ＬＶ−ＥＦ１ａ−４Ｄ５Ｆｌｕ−ＢＢＺ（配列番号２）は、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を標的とするように設計した。２０ｎＭのアフィニティーを有するｓｃＦｖ  ４Ｄ５Ｆｌｕは、４−４−２０のＣＤＲを、ヒト化Ｈｅｒ２／ｎｅｕ  ｓｃＦｖ  ４Ｄ５のフレームワークに移植することにより発生させた。それは、参考文献であるJung  S、Plueckthun  A.、Improving  in  vivo  folding  and  stability  of  a  sigle-chain  Fv  antibody  fragment  by  loop  grafting、Protein  Eng.、１９９７年８月、１０巻（８号）：９５９〜６６頁による、重鎖および（ＧＧＧＧＳ）６（配列番号５７、ここでｎ＝６）リンカーに前置される軽鎖を伴って構築された。
【０４３４】
ＬＶ−ＥＦ１ａ−４Ｍ５．３−ＢＢＺ（配列番号３）は、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を標的とするように設計した。アフィニティーを０．３ｐＭとするｓｃＦｖ  ４Ｍ５．３は、その親であるｓｃＦｖ  ４−４−２０であって、エラープローンＤＮＡシャフリングにより変異誘発されたｓｃＦｖ  ４−４−２０から作り出した。それは、参考文献であるBoder  ET、Midelfort  KS、Wittrup  KD、Directed  evolution  of  antibody  fragments  with  monovalent  femtomolar  antigen-binding  affinity、Proc  Natl  Acad  Sci  U  S  A.、２０００年９月２６日、９７巻（２０号）：１０７０１〜５頁による、重鎖および２５個のアミノ酸のリンカー（ＳＳＡＤＤＡＫＫＤＡＡＫＫＤＤＡＫＫＤＤＡＫＫＤＧ）（配列番号５８）に前置される軽鎖を伴って構築された。
【０４３５】
ＬＶ−ＥＦ１ａ−ＦＩＴＣ−Ｅ２−ＢＢＺ（配列番号４）は、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を標的とするように設計した。０．３ｎＭのアフィニティーを有するｓｃＦｖ  ＦＩＴＣ−Ｅ２は、ファージディスプレイを使用することにより、ナイーブヒトｓｃＦｖライブラリーから選択した。それは、参考文献であるVaughan  J、Williams  AJ、Pritchard  K、Osbourn  JK、Pope  AR、Earnshaw  JC、McCafferty  J、Hodits  RA、Wilton  J、Johnson  KS、Human  antibodies  with  sub-nanomolar  affinities  isolated  from  a  large  non-immunized  phage  display  library、Nat  Biotechnol.、１９９６年３月、１４巻（３号）：３０９〜１４頁による、軽鎖および（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号５７、ここでｎ＝３）リンカーに前置される重鎖を伴って構築された。
【０４３６】
ＣＡＲ−Ｔスイッチの標的相互作用ドメイン（ＴＩＤ）は、以下の通りに構築した。
【０４３７】
ｐＢＡＤ−ＣＤ１９ｗｔ（配列番号５）は、Ｂ細胞表面上および関連の悪性腫瘍上に見出される、マウス抗ヒトＣＤ１９受容体を標的とするＦａｂを含む。配列は、マウス抗ヒトＣＤ１９  ＶＨおよびＶＬドメインを、ヒトＣＨ１およびＣＬフレームに挿入することにより構築した。配列は、Milone  MC、Fish  JD、Carpenito  C、Carroll  RG、Binder  GK、Teachey  D、Samanta  M、Lakhal  M、Gloss  B、Danet−Desnoyers  G、Campana  D、Riley  JL、Grupp  SA、June  CH、Chimeric  receptors  containing  CD137  signal  transduction  domains  mediate  enhanced  survival  of  T  cells  and  increased  antileukemic  efficacy  in  vivo、Mol  Ther.、２００９年８月、１７巻（８号）：１４５３〜６４頁による配列であった。配列は、抗ＣＤ１９抗体であるＦＭＣ６３に由来した。配列は、ｐＢＡＤベクターへとクローニングした。
【０４３８】
ｐＢＡＤ−ＣＤ１９  ＬＳ２０２Ｘ  ｍｔ（配列番号６）は、Ｂ細胞表面上および関連の悪性腫瘍上に見出される、マウス抗ヒトＣＤ１９受容体を標的とするＦａｂを含む。配列は、マウス抗ヒトＣＤ１９  ＶＨおよびＶＬドメインを、ヒトＣＨ１およびＣＬフレームに挿入することにより構築した。軽鎖のセリン２０２に、１つのアンバー変異体部位（Amber  mutant  site）が存在する。アンバー変異体部位は、非天然アミノ酸の組み込みを可能とする。
【０４３９】
ｐＢＡＤ−ＣＤ１９  ＨＫ１３６Ｘ  ｍｔ（配列番号７）は、Ｂ細胞表面上および関連の悪性腫瘍上に見出される、マウス抗ヒトＣＤ１９受容体を標的とするＦａｂを含む。配列は、マウス抗ヒトＣＤ１９  ＶＨおよびＶＬドメインを、ヒトＣＨ１およびＣＬフレームに挿入することにより構築した。重鎖のリシン１３６に、１つのアンバー変異体部位が存在する。アンバー変異体部位は、非天然アミノ酸の組み込みを可能とする。
【０４４０】
ｐＢＡＤ−ＣＤ１９  ＬＳ２０２／ＨＫ１３６Ｘ  ｍｔ（配列番号８）は、Ｂ細胞表面上および関連の悪性腫瘍上に見出される、マウス抗ヒトＣＤ１９受容体を標的とするＦａｂを含む。配列は、マウス抗ヒトＣＤ１９  ＶＨおよびＶＬドメインを、ヒトＣＨ１およびＣＬフレームに挿入することにより構築した。軽鎖のセリン２０２と重鎖のリシン１３６において、２つのアンバー変異体部位が存在する。アンバー変異体部位は、非天然アミノ酸の組み込みを可能とする。
【０４４１】
（実施例８）
ＦＩＴＣ−αＣＳ１抗体ＣＡＲ−Ｔスイッチによる細胞傷害性
ＦＩＴＣ−αＣＳ１抗体ＣＡＲ−Ｔスイッチによる細胞傷害性について、ＭＭ．１Ｓ細胞株でアッセイした。抗ＣＳ１クローンであるＨｕＬｕｃ６３に由来する可変領域（配列番号１０または１１）を、Ｆａｂフォーマット内のヒト定常領域にクローニングし、Ｅ  ｃｏｌｉ細胞内で、ｐＢＡＤベクターから発現させた。Ｆａｂは、プロテインＧにより精製し、ＮＨＳエステル活性化リンカー−ＦＩＴＣ分子を使用して、ＦＩＴＣと非特異的にコンジュゲートした。コンジュゲーションにより、０．５〜１．５の範囲の抗体対ＦＩＴＣ比がもたらされた。細胞傷害性を評価するため、ＦＩＴＣ−Ｅ２  ｓｃＦｖに由来する抗ＦＩＴＣ  ＣＡＲ−Ｔを、コンジュゲートした抗ＣＳ１−ＦＩＴＣスイッチの濃度を変化させて、標的細胞に対して１０：１の比で使用した。
【０４４２】
【表８】
0006637415.tif 000055
【０４４３】
（実施例９）
ＦＩＴＣ−αＢＣＭＡ抗体ＣＡＲ−Ｔスイッチによる細胞傷害性
ＦＩＴＣ−αＢＣＭＡ抗体ＣＡＲ−Ｔスイッチによる細胞傷害性について、ＲＰＭＩ  ８２２６（ＢＣＭＡ＋）細胞株でアッセイした。抗ＢＣＭＡクローンであるＢＣＭＡ９８に由来する可変領域（配列番号１４または１５）を、Ｆａｂフォーマット内のヒト定常領域にクローニングし、Ｅ  ｃｏｌｉ細胞内で、ｐＢＡＤベクターから発現させた。Ｆａｂは、プロテインＧにより精製し、ＮＨＳエステル活性化リンカー−ＦＩＴＣ分子を使用して、ＦＩＴＣと非特異的にコンジュゲートした。コンジュゲーションにより、０．５〜１．５の範囲の抗体対ＦＩＴＣ比がもたらされた。細胞傷害性を評価するため、ＦＩＴＣ−Ｅ２  ｓｃＦｖに由来する抗ＦＩＴＣ  ＣＡＲ−Ｔを、コンジュゲートした抗ＢＣＭＡ−ＦＩＴＣスイッチの濃度を変化させて、標的細胞に対して１０：１の比で使用した。
【０４４４】
【表９】
0006637415.tif 000056
【０４４５】
（実施例１０）
ＦＩＴＣ−αＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体ＣＡＲ−Ｔスイッチによる細胞傷害性
ＦＩＴＣ−ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体スイッチによる細胞傷害性について、Ｕ８７ＭＧΔＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ＋）細胞株およびＡ５４９（ＥＧＦＲｖＩＩＩｌｏｗ）細胞株でアッセイした。抗ＥＧＦＲｖＩＩＩクローンであるｈｕ８０６に由来する可変領域（配列番号１２および１３）を、Ｆａｂフォーマット内のヒト定常領域にクローニングし、Ｅ  ｃｏｌｉ細胞内で、ｐＢＡＤベクターから発現させた。Ｆａｂは、プロテインＧにより精製し、ＮＨＳエステル活性化リンカー−ＦＩＴＣ分子を使用して、ＦＩＴＣと非特異的にコンジュゲートした。コンジュゲーションにより、０．５〜１．５の範囲の抗体対ＦＩＴＣ比がもたらされた。細胞傷害性を評価するため、ＦＩＴＣ−Ｅ２  ｓｃＦｖに由来する抗ＦＩＴＣ  ＣＡＲ−Ｔを、コンジュゲートした抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ−ＦＩＴＣスイッチの濃度を変化させて、標的細胞に対して１０：１の比で使用した。
【０４４６】
【表１０】
0006637415.tif 000057
【０４４７】
（実施例１１）
抗ＣＤ１９  Ｆａｂ内のＦＩＴＣコンジュゲーション部位の最適化
本明細書で開示される抗ＦＩＴＣ−ＣＡＲ−Ｔ細胞は、従来のＣＡＲ−Ｔ細胞と類似のシグナル伝達ドメインから構成されるが、切り替え型ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性化は、従来のＣＡＲ−Ｔ細胞について観察される二元複合体（例えば、標的細胞およびＣＡＲ−Ｔ細胞）と比較した、三元複合体（例えば、標的細胞、抗体スイッチ、およびＣＡＲ−Ｔ細胞）の形成に依拠する。したがって、三元複合体の各構成要素について研究して、ユニバーサルＣＡＲ−ＥＣプラットフォームに最適なパラメータを決定する。コンジュゲーション部位の効果について研究するために、ｐＡｚＦを、抗ＣＤ１９  Ｆａｂの軽鎖（ＬＣ）上および重鎖（ＨＣ）上の異なる位置に組み込んだ、複数の抗ＣＤ１９  Ｆａｂ変異体を発現させた（図９Ａ）。ｐＡｚＦは、抗ＣＤ１９  Ｆａｂの軽鎖のセリン２０２（ＬＣＳ２０２）位、グリシン６８（ＬＣＧ６８）位、およびトレオニン１０９（ＬＣＴ１０９）位に組み込んだ。ｐＡｚＦは、抗ＣＤ１９  Ｆａｂの重鎖のセリン７４（ＨＣＳ７４）位、アラニン１２１（ＨＣ１２１）位、リシン１３６（ＨＣＫ１３６）位に組み込んだ。また、二重変異体も、ｐＡｚＦを、軽鎖のセリン２０２および重鎖のリシン１３６（ＬＣＳ２０２／ＨＣＫ１３６）へと組み込み、ｐＡｚＦを、重鎖のセリン７４および軽鎖のグリシン６８（ＨＣＳ７４／ＬＣＧ６８）へと組み込むことにより構築した。略述すると、直交的なアンバーサプレッサーｔＲＮＡとアミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ（ａａＲＳ）との対を、Ｅ．ｃｏｌｉ内で、異なる位置にＴＡＧコドンを含有するＦａｂ遺伝子と共に共発現させ、培養物を成長させ、ｐＡｚＦを、導入されたＴＡＧコドンに組み込んだ。Ｅ．ｃｏｌｉのペリプラズム溶解の後、Ｆａｂを、プロテインＧアフィニティー精製により精製した。ｐＡｚＦの、分子量およびＦａｂ内の部位特異的組み込みは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルおよびＥＳＩ−ＭＳにより検証した。次いで、ｐＡｚＦを異なる部位において含有する変異体Ｆａｂを、単一ステップの反応により、シクロオクチン−ＦＩＴＣリンカーで部位特異的に修飾した（図９Ｂ）。最終的な抗体コンジュゲートを、サイズ排除クロマトグラフィーによりさらに精製し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（図１１および図２１）およびＥＳＩ−ＭＳ（図１０Ａ〜Ｎおよび図２２Ａ〜Ｈ）により特徴付けした。図１１に示される通り、レーン１は、タンパク質標準物質であり、レーン２は、ＬＣＧ６８であり、レーン３は、ＬＣＴ１０９であり、レーン４は、ＨＣＳ７４であり、レーン５は、ＨＣＡ１２１であり、レーン６は、ＬＣＳ２０２であり、レーン７は、ＨＣＫ１３６であり、レーン８は、ＬＣＳ２０２／ＨＣＫ１３６であり、レーン９は、ブランクであり、レーン１０は、ＤＴＴで処理されたＬＣＳ２０２／ＨＣＫ１３６である。図２１に示される通り、レーン１は、タンパク質標準物質であり、レーン２は、ＬＣＳ２０２（ＤＴＴなし）であり、レーン３は、ＨＣＳ７４（ＤＴＴなし）であり、レーン４は、ＨＣＳ７４／ＬＣＧ６８（ＤＴＴなし）であり、レーン５は、ＤＡＲが約１のＷＴ（ＤＴＴなし）であり、レーン６は、ブランクであり、レーン７は、ＬＣＳ２０２（ＤＴＴあり）であり、レーン８は、ＨＣＳ７４（ＤＴＴあり）で���り、レーン９は、ＨＣＳ７４／ＬＣＧ６８（ＤＴＴあり）であり、レーン１０は、ＤＡＲが約１のＷＴ（ＤＴＴあり）である。図１０Ａは、ＨＣＳ７４についてのＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図１０Ｂは、ＨＣＫ１３６についてのＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図１０Ｃは、ＬＣＳ２０２／ＨＣＫ１３６についてのＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図１０Ｄは、ＨＣＡ１２１についてのＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図１０Ｅは、ＬＣＧ６８についてのＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図１０Ｆは、ＬＣＳ２０２についてのＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図１０Ｇは、ＬＣＴ１０９についてのＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図１０Ｈは、ＨＣＳ７４についてのデコンボリューションしたＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図１０Ｉは、ＨＣＫ１３６についてのデコンボリューションしたＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図１０Ｊは、ＬＣＳ２０２／ＨＣＫ１３６についてのデコンボリューションしたＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図１０Ｋは、ＨＣＡ１２１についてのデコンボリューションしたＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図１０Ｌは、ＬＣＧ６８についてのデコンボリューションしたＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図１０Ｍは、ＬＣＳ２０２についてのデコンボリューションしたＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図１０Ｎは、ＬＣＴ１０９についてのデコンボリューションしたＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図２２Ａは、ＨＣＳ７４／ＬＣＧ６８についてのＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図２２Ｂは、ＤＡＲが約２の野生型抗ＣＤ１９−ＦＩＴＣについてのＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図２２Ｃは、ＤＡＲが約１の野生型抗ＣＤ１９−ＦＩＴＣについてのＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図２２Ｄは、ＤＡＲが約０．５の野生型抗ＣＤ１９−ＦＩＴＣについてのＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図２２Ｅは、ＨＣＳ７４／ＬＣＧ６８についてのデコンボリューションしたＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図２２Ｆは、ＤＡＲが約２の野生型抗ＣＤ１９−ＦＩＴＣについてのデコンボリューションしたＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図２２Ｇは、ＤＡＲが約１の野生型抗ＣＤ１９−ＦＩＴＣについてのデコンボリューションしたＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。図２２Ｈは、ＤＡＲが約０．５の野生型抗ＣＤ１９−ＦＩＴＣについてのデコンボリューションしたＥＳＩ−ＭＳスキャンを示す。ＦＩＴＣ分子への部位特異的コンジュゲーションが完了したら、異なる濃度のスイッチ分子の存在下における、抗ＦＩＴＣ（ＦＩＴＣ−Ｅ２）ＣＡＲ−Ｔ細胞の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける細胞溶解活性について、ＣＤ１９＋  Ｂ細胞白血病細胞株であるＮＡＬＭ−６を、標的細胞として使用して評価した。略述すると、抗ＦＩＴＣ−ＣＡＲ  Ｔ細胞（ＦＩＴＣ−Ｅ２）およびＮＡＬＭ６（ＣＤ１９＋）細胞を、エフェクター対標的比を５対１として、多様な抗ＣＤ１９Ｆａｂ−ＦＩＴＣコンジュゲートスイッチ分子の段階希釈液と共に共培養した。細胞傷害性は、フローサイトメトリーにより測定した。図１２ならびに表１１および１２に示される通り、大半のスイッチ分子は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、ピコモル濃度範囲の強力な有効性を実証した。抗体の可変領域内に位置する２つのコンジュゲーション部位である、ＬＧ６８およびＨＳ７４は、他の��置と比較して優れた活性を実証したことは注目すべきである。さらに、二重コンジュゲートであるＨＳ７４／ＬＧ６８Ｘ抗ＣＤ１９−ＦＩＴＣスイッチが、最も顕著な有効性の改善を裏付け、本発明者らのアッセイ環境において、ピコモル濃度未満（ＥＣ５０＝０．０７ｐＭ）の活性を結果としてもたらした。したがって、これらの結果は、最適なスイッチ分子の開発における、各Ｆａｂの理想的なコンジュゲーション部位を決定することの重要性を裏付ける。
【０４４８】
【表１１】
0006637415.tif 000058
【０４４９】
【表１２】
0006637415.tif 000059
【０４５０】
（実施例１２）
ＦＩＴＣ−ＣＡＲＴおよびＰ−ＴｒｉＡ−ＦＩＴＣのｉｎ  ｖｉｖｏにおける有効性
ＰＳＭＡターゲティング低分子スイッチであるＰ−ＴｒｉＡ−ＦＩＴＣについての、マウスにおける薬物動態（ＰＫ）研究により、化合物の静脈内（ＩＶ）半減期は短い（modest）（ｔ１／２＝１．０８±０．１４時間）ことが明らかにされた。略述すると、皮下Ｃ４−２（ＰＳＭＡ＋）腫瘍を、非肥満型糖尿病−重症複合型免疫不全症（ＮＯＤ−ＳＣＩＤ−γ−／−；ＮＳＧ）マウスにおいて確立した。触知可能な腫瘍（腫瘍の長さまたは幅＞２００ｍｍ３）が形成されたら、ＦＩＴＣ−ＣＡＲＴ細胞（ＦＩＴＣ−Ｅ２）を、腹腔内注射により養子導入し、毎日１ｍｇ／ｋｇの用量のＰ−ＴｒｉＡ−ＦＩＴＣを、連続１０日間にわたり静脈内投与した。スイッチ処置の完了の際に、ＦＩＴＣ−ＣＡＲＴ細胞およびＰ−ＴｒｉＡ−ＦＩＴＣを施されたマウスでは、腫瘍が退縮したのに対し、ＣＡＲＴ細胞もしくはスイッチだけ、またはビヒクル（ＰＢＳ）の毎日の投与を伴うＣＡＲＴ細胞を施されたマウスでは、腫瘍の成長が続いた（図１３を参照されたい）。このｉｎ  ｖｉｖｏにおける有効性研究により、Ｐ−ＴｒｉＡ−ＦＩＴＣスイッチと組み合わせたＦＩＴＣ−ＣＡＲＴ細胞は、ＰＳＭＡ陽性腫瘍をターゲティングするのに高度に有効であることが指し示される。さらなる研究は、切り替え型ＣＡＲ−Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏにおける用量タイトレーション可能性を裏付ける特徴付けおよび最適化も伴いうる。
【０４５１】
（実施例１３）
Ｂ細胞リンパ腫の処置における、抗ＦＩＴＣ  ＣＡＲ−ＥＣおよびＦＩＴＣ−抗ＣＤ１９スイッチについての評価
目的：本研究では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現させるエフェクター細胞およびスイッチを含む、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）の、Ｂ細胞リンパ腫の処置における有効性および安全性について評価する。ＣＡＲは、抗ＦＩＴＣ  ｓｃＦｖを含む外部領域を含む。スイッチは、ＦＩＴＣを含むキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ−ＩＤ）と、抗ＣＤ１９ｓｃＦｖを含む標的相互作用ドメインとを含む。
【表１２Ａ】
0006637415.tif 000060
【０４５２】
研究の種類：介入
【０４５３】
研究設計：評価項目の分類：安全性／有効性の研究
介入モデル：単一群割当て
マスキング：オープンラベル
主目的：処置
【０４５４】
主要転帰尺度：
有害事象を伴う患者の数。［時間枠：２年間。］［安全性問題としての指定：あり］：Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｆｆｅｃｔｓ（ＣＴＣＡＥ）ｖｅｒｓｉｏｎ  ４．０により、ＣＡＲ  Ｔ細胞の毒性プロファイルを決定する。
【０４５５】
副次的転帰尺度：
ｉｎ  ｖｉｖｏにおける抗ＦＩＴＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞の生存期間。［時間枠：２年間。］［安全性問題としての指定：なし］：抗ＦＩＴＣレンチウイルスベクターを形質導入されたＣＡＲ  Ｔ細胞の生存を測定する。
ＣＡＲ  Ｔ細胞に対する奏効率。［時間枠：２年間。］［安全性問題としての指定：なし］：第４世代のＣＡＲ  Ｔ細胞で処置された患者に対する奏効率であって、部分寛解（ＰＲ）、完全寛解（ＣＲ）、疾患安定（ＳＤ）および疾患進行（ＰＤ）を含む奏効率について記載する。
患者の生存期間。［時間枠：２年間。］［安全性問題としての指定：なし］：第４世代のＣＡＲ  Ｔ細胞で処置された患者の生存期間であって、無進行生存（ＰＦＳ）および全生存（ＯＳ）を含む生存期間について評価する。
【表１２Ｂ】
0006637415.tif 000061
【表１２Ｃ】
0006637415.tif 000062
【０４５６】
詳細な記載：
【０４５７】
ＣＤ１９単鎖抗体ベースのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−操作Ｔ細胞は、慢性Ｂ細胞白血病および急性Ｂ細胞白血病の処置における大きな臨床的可能性を実証している。Ｂ細胞リンパ腫は、Ｂ細胞白血病と同様に、ＣＤ１９表面分子を発現させ、Ｂ細胞リンパ腫患者の大半は、標準的な化学放射線療法で治癒させることができない。ＣＤ１９  ＣＡＲベースの養子Ｔ細胞療法は、体液性免疫欠損を結果としてもたらす、望ましくない有害作用である、ＣＤ１９  Ｂ細胞の喪失と関連する。本研究では、新規の抗ＦＩＴＣ  ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＦＩＴＣ−抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖスイッチを、リンパ腫患者における有効性および安全性の両方について評価する。抗ＦＩＴＣ  ＣＡＲ−Ｔ細胞およびＦＩＴＣ−抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖスイッチを施される患者は、注入応答、腫瘍の根絶効果、ＣＡＲ  Ｔ細胞の寿命、ならびにＣＡＲ  Ｔ細胞および／またはＦＩＴＣ−抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖスイッチの休薬後におけるＢ細胞機能の回復について緊密にモニタリングされる。
【０４５８】
【表１２Ｄ】
0006637415.tif 000063
【０４５９】
基準
【０４６０】
組み入れ基準：
・免疫組織化学（ＩＨＣ）またはフローサイトメトリーにより判明した、再発性ＣＤ１９（＋）Ｂ細胞リンパ腫患者または難治性ＣＤ１９（＋）Ｂ細胞リンパ腫患者。
・自己幹細胞移植（ＡＳＣＴ）に不適格であるか、またはＡＳＣＴ後に再発していること。
・Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｓｔａｔｕｓが０〜２であること。
・年齢≧１８歳。
・室内空気におけるパルスオキシメトリーが＞９０％であること。
・アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）＜正常値の上限（ＵＬＮ）の３倍、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）＜ＵＬＮの３倍；血清中ビリルビンおよびアルカリホスファターゼ＜ＵＬＮの２倍として規定される適正な肝機能。
・血清中クレアチニン＜２．０ｍｇ／ｄｌとして規定される適正な腎機能。
・ＬＶＥＦ≧５０％により規定される適正な心機能
・Ｈｂ≧８０ｇ／Ｌ
・測定可能な疾患を同定しうること。
・平均余命≧３カ月間。
・性的に活動性の患者は、研究期間中および研究の終了後１年間にわたり、より有効な妊娠制御法の１つ（one  of  the  more  effective  birth  control  methods）を活用する意向を持たなければならない。男性のパートナーは、コンドームを使用すべきである。
・患者は、インフォームドコンセントに署名しなければならない。
【０４６１】
除外基準：
・コントロール不能な活動性の感染症。
・Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）による活動性の感染症。
・ＨＩＶ陽性
・妊娠中または授乳中。
・現在別の臨床試験に登録していること。
・全身ステロイドの使用中であること。
【０４６２】
本明細書では、本発明の好ましい実施形態について示し記載しているが、当業者には、このような実施形態は、例だけのために提供されるものであることが明らかである。今や、当業者は、本発明から逸脱せずに、多くの変化、変更、および代替に想到する。本発明を実施するには、本明細書で記載される、本発明の実施形態に対する多様な代替物を用いうることを理解されたい。
【表１３−１】
0006637415.tif 000064
【表１３−２】
0006637415.tif 000065
【表１３−３】
0006637415.tif 000066
【表１３−４】
0006637415.tif 000067
【表１３−５】
0006637415.tif 000068
【表１３−６】
0006637415.tif 000069
【表１３−７】
0006637415.tif 000070
【表１３−８】
0006637415.tif 000071
【表１３−９】
0006637415.tif 000072
【表１３−１０】
0006637415.tif 000073
【表１４−１】
0006637415.tif 000074
【表１４−２】
0006637415.tif 000075
【表１４−３】
0006637415.tif 000076
【表１４−４】
0006637415.tif 000077
【表１４−５】
0006637415.tif 000078
【表１４−６】
0006637415.tif 000079
【表１４−７】
0006637415.tif 000080
【表１４−８】
0006637415.tif 000081
【表１４−９】
0006637415.tif 000082
【表１５−１】
0006637415.tif 000083
【表１５−２】
0006637415.tif 000084
【表１６−１】
0006637415.tif 000085
【表１６−２】
0006637415.tif 000086
【表１７】
0006637415.tif 000087
【図１】
0006637415.tif 000088
【図２Ａ】
0006637415.tif 000089
【図２Ｂ】
0006637415.tif 000090
【図３−１】
0006637415.tif 000091
【図３−２】
0006637415.tif 000092
【図４Ａ】
0006637415.tif 000093
【図４Ｂ】
0006637415.tif 000094
【図５Ａ】
0006637415.tif 000095
【図５Ｂ】
0006637415.tif 000096
【図５Ｃ】
0006637415.tif 000097
【図６Ａ】
0006637415.tif 000098
【図６Ｂ】
0006637415.tif 000099
【図６Ｃ】
0006637415.tif 000100
【図７】
0006637415.tif 000101
【図８】
0006637415.tif 000102
【図９Ａ】
0006637415.tif 000103
【図９Ｂ】
0006637415.tif 000104
【図１０−１】
0006637415.tif 000105
【図１０−２】
0006637415.tif 000106
【図１１】
0006637415.tif 000107
【図１２】
0006637415.tif 000108
【図１３】
0006637415.tif 000109
【図１４Ａ】
0006637415.tif 000110
【図１４Ｂ】
0006637415.tif 000111
【図１４Ｃ】
0006637415.tif 000112
【図１４Ｄ】
0006637415.tif 000113
【図１４Ｅ】
0006637415.tif 000114
【図１４Ｆ】
0006637415.tif 000115
【図１４Ｇ】
0006637415.tif 000116
【図１４Ｈ】
0006637415.tif 000117
【図１４Ｉ】
0006637415.tif 000118
【図１５Ａ】
0006637415.tif 000119
【図１５Ｂ】
0006637415.tif 000120
【図１５Ｃ】
0006637415.tif 000121
【図１５Ｄ】
0006637415.tif 000122
【図１５Ｅ】
0006637415.tif 000123
【図１５Ｆ】
0006637415.tif 000124
【図１５Ｇ】
0006637415.tif 000125
【図１５Ｈ】
0006637415.tif 000126
【図１６】
0006637415.tif 000127
【図１７Ａ】
0006637415.tif 000128
【図１７Ｂ】
0006637415.tif 000129
【図１７Ｃ】
0006637415.tif 000130
【図１８】
0006637415.tif 000131
【図１９】
0006637415.tif 000132
【図２０】
0006637415.tif 000133
【図２１】
0006637415.tif 000134
【図２２−１】
0006637415.tif 000135
【図２２−２】
0006637415.tif 000136
【配列表】
0006637415000001.app