(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式１で表されるコウジ酸誘導体、その塩、その水和物又はその溶媒和物を有効成分として含むＦｏｘＯ３ａ遺伝子活性化用組成物であって、
【化１】
0006799542.tif 000014
（前記式中、Ｒ１は、−ＣＨ２−又は−ＣＨ２ＣＨ２−を示し、Ｒ２は、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨＣ（Ｏ）ＯＣＨ２−又は−ＣＨ＝ＣＨ−を示す。）
抗皮膚癌用である、
組成物。
【請求項２】
前記コウジ酸誘導体は、下記の化学式２で表されるコジルメチレンジオキシンナメートである、請求項１に記載の組成物。
【化２】
0006799542.tif 000015
【請求項３】
前記コウジ酸誘導体、その塩、その水和物、又はその溶媒和物は、組成物の総重量を基準として０．００００１〜１０質量％の範囲で含まれる、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物は、ＦｏｘＯ３ａ蛋白質発現増進用である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物は、皮膚外用剤組成物である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書には、コウジ酸誘導体を有効成分として含む長寿遺伝子、具体的に、Ｓｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ、ＥＲＣＣ８、ＦｏｘＯ３ａ遺伝子活性化用組成物が開示される。
【背景技術】
【０００２】
レチノイドとは、レチノール、レチノイン酸又はその誘導体の総称である。レチノイドは多様な生物学的作用を示し、皮膚に関しては、過角化、ニキビに対する効果が報告されており、アンチエイジングのための外用剤としてレチノールとレチノイン酸などのレチノイド効能は周知の事実である（非特許文献１）。しかし、これらのレチノイドは、肯定的な効果とともに、少量を皮膚に適用しただけでも刺激が現れるという短所をもっており、且つ、不安定で空気中に露出すると酸化し変質し易いため、その使用に多くの制約が伴う。そこで、レチノイドを安定化するための研究が進行し続けられてきているが、未だ皮膚に対する刺激、すなわち安全性の問題は解決できていない実情である。
【０００３】
一方、老化に関する研究は、主に光老化と内因性老化を中心に研究されてきた。光老化の場合、主な原因である紫外線を遮断し且つ紫外線照射による変化を予防できる方法が活発に研究されてきており、加齢により生じる内因性老化を緩和するための方法も研究されてきた。近年、このような老化現象をまとめて調節する方法を見出すのに研究が集中している。特に、個体の老化及び寿命を調節する遺伝子の研究を基に老化を予防し寿命を延ばす方法の研究が進行されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Photoaging and Tretinoin, S Kang., Dermatol Clin, 16 (2), 357-364, 1998
【非特許文献２】KIM, Mi-Sun et al., “The Effects of a Novel Synthetic Retinoid, Seletinoid G, on the Expression of Extracellular Matrix Proteins in Aged Human Skin in Vivo”, Clinica Chimica Acta, 2005, vol.362, pages 161-169
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
一側面において、本明細書は、抗癌又は寿命延長に関連した長寿遺伝子であるＳｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ、ＥＲＣＣ８、又はＦｏｘＯ３ａ遺伝子を活性化する組成物を提供することを目的とする。
【０００６】
他の側面において、本明細書は、レチノイドの問題点である皮膚刺激の問題を解決するとともに、皮膚外用剤として剤形の不安定性を解決できるようにレチノイドの受容体であるＲＡＲ（ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）に特異的に結合できるコウジ酸誘導体を用いて長寿遺伝子であるＳｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ、ＥＲＣＣ８、又はＦｏｘＯ３ａ遺伝子を活性化して皮膚細胞の寿命延長、皮膚保湿又は皮膚バリア強化に有効な組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
一側面において、本明細書に開示された技術は、下記の化学式１で表されるコウジ酸誘導体、その塩、そのプロドラッグ、その水和物、その溶媒和物又はその異性体を有効成分として含むＳｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ、ＥＲＣＣ８、及びＦｏｘＯ３ａからなる群から選ばれる１以上の遺伝子活性化用組成物を提供する。
【０００８】
【化１】
0006799542.tif 000002
【０００９】
（前記式中、Ｒ１は、−ＣＨ２−又は−ＣＨ２ＣＨ２−を示し、Ｒ２は、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨＣ（Ｏ）ＯＣＨ２−又は−ＣＨ＝ＣＨ−を示す。）
【００１０】
例示的な一具現例によれば、前記コウジ酸誘導体は、下記の化学式２で表されるコジルメチレンジオキシンナメートであってよい。
【００１１】
【化２】
0006799542.tif 000003
例示的な一具現例によれば、前記コウジ酸誘導体、その塩、そのプロドラッグ、その水和物、その溶媒和物又はその異性体は、組成物の総重量を基準として０．００００１〜１０質量％の範囲で含まれていてよい。
【００１２】
例示的な一具現例によれば、前記組成物は、Ｓｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ、ＥＲＣＣ８、及びＦｏｘＯ３ａからなる群から選ばれる１以上の蛋白質発現増進用であってよい。
【００１３】
例示的な一具現例によれば、前記組成物は、抗癌用であってよい。
【００１４】
例示的な一具現例によれば、前記組成物は、皮膚癌に対する抗癌用であってよい。
【００１５】
例示的な一具現例によれば、前記組成物は、寿命延長用であってよい。
【００１６】
例示的な一具現例によれば、前記組成物は、皮膚細胞の寿命延長用であってよい。
【００１７】
例示的な一具現例によれば、前記皮膚細胞は、皮膚真皮由来の線維芽細胞であってよい。
【００１８】
例示的な一具現例によれば、前記組成物は、皮膚保湿用又は皮膚バリア強化用であってよい。
【００１９】
例示的な一具現例によれば、前記組成物は、皮膚外用剤組成物であってよい。
【発明の効果】
【００２０】
一側面において、本明細書に開示された技術は、抗癌又は寿命延長に関連した長寿遺伝子であるＳｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ、ＥＲＣＣ８、又はＦｏｘＯ３ａ遺伝子を活性化する組成物を提供する効果がある。
【００２１】
他の側面において、本明細書に開示された技術は、レチノイドの問題点である皮膚刺激問題を解決するとともに、皮膚外用剤として剤形の不安定性を解決できるようにレチノイドの受容体であるＲＡＲ（ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）に特異的に結合できるコウジ酸誘導体を用いて長寿遺伝子であるＳｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ、ＥＲＣＣ８、又はＦｏｘＯ３ａ遺伝子を活性化して皮膚細胞の寿命延長、皮膚保湿又は皮膚バリア強化に有効な皮膚改善用組成物を提供する効果がある。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本明細書の試験例においてｓｅｌｅｔｉｎｏｉｄ  Ｇを処理していない対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）のＤＡＰＩ染色観察結果を示す写真である（ｐｈａｓｅ；透過光、ＤＡＰＩ；ブルー(明るい部分)、ＦｏｘＯ３ａ；レッド(明るい部分)、Ｍｅｒｇｅ；バイオレット(明るい部分)）。上段の写真と下段の写真は同じテストを独立して２回実施した結果を示す。
【図２】本明細書の試験例においてｓｅｌｅｔｉｎｏｉｄ  Ｇを１５ｐｐｍで処理した試験群のＤＡＰＩ染色観察結果を示す写真である（ｐｈａｓｅ；透過光、ＤＡＰＩ；ブルー(明るい部分)、ＦｏｘＯ３ａ；レッド(明るい部分)、Ｍｅｒｇｅ；バイオレット(明るい部分)）。上段の写真と下段の写真は同じテストを独立して２回実施した結果を示す。
【図３】本明細書の試験例においてｓｅｌｅｔｉｎｏｉｄ  Ｇを１５０ｐｐｍで処理した試験群のＤＡＰＩ染色観察結果を示す写真である（ｐｈａｓｅ；透過光、ＤＡＰＩ；ブルー(明るい部分)、ＦｏｘＯ３ａ；レッド(明るい部分)、Ｍｅｒｇｅ；バイオレット(明るい部分)）。上段の写真と下段の写真は同じテストを独立して２回実施した結果を示す。
【図４】本明細書の試験例においてｓｅｌｅｔｉｎｏｉｄ  Ｇを４５０ｐｐｍで処理した試験群のＤＡＰＩ染色観察結果を示す写真である（ｐｈａｓｅ；透過光、ＤＡＰＩ；ブルー(明るい部分)、ＦｏｘＯ３ａ；レッド(明るい部分)、Ｍｅｒｇｅ；バイオレット(明るい部分)）。上段の写真と下段の写真は同じテストを独立して２回実施した結果を示す。
【図５】本明細書の試験例において核移行程度（ｎｕｃｌｅａｒ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ）をグラフで示した結果であって、対照群は１３．２％、ｓｅｌｅｔｉｎｏｉｄ  Ｇ  １５ｐｐｍ処理群は３５．７％、ｓｅｌｅｔｉｎｏｉｄ  Ｇ  １５０ｐｐｍ処理群は８６．３％、ｓｅｌｅｔｉｎｏｉｄ  Ｇ  ４５０ｐｐｍ処理群は６６．９％を示しており、セルレチノイドが長寿遺伝子ＦｏｘＯ３ａを顕著に活性化することを確認した。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００２４】
一側面において、本明細書に開示された技術は、下記の化学式１で表されるコウジ酸誘導体、その塩、そのプロドラッグ、その水和物、その溶媒和物又はその異性体を有効成分として含むＳｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ、ＥＲＣＣ８、及びＦｏｘＯ３ａからなる群から選ばれる１以上の遺伝子活性化用組成物を提供する。
【００２５】
【化３】
0006799542.tif 000004
【００２６】
（前記式中、Ｒ１は、−ＣＨ２−又は−ＣＨ２ＣＨ２−を示し、Ｒ２は、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨＣ（Ｏ）ＯＣＨ２−又は−ＣＨ＝ＣＨ−を示す。）
【００２７】
他の側面において、本明細書に開示された技術は、遺伝子活性化、蛋白質発現増進、抗癌、寿命延長、生体老化の遅延、生体老化症状の改善、皮膚保湿又は皮膚バリア強化、及び遺伝子関連疾患の改善からなる群から選ばれる一つ以上に用いるための、前記化学式１で表されるコウジ酸誘導体、その塩、そのプロドラッグ、その水和物、その溶媒和物及びその異性体からなる群から選ばれるいずれか一つ以上を提供する。
【００２８】
また他の側面において、本明細書に開示された技術は、前記化学式１で表されるコウジ酸誘導体、その塩、そのプロドラッグ、その水和物、その溶媒和物及びその異性体からなる群から選ばれるいずれか一つ以上、又はこれを有効成分として含む遺伝子活性化用、蛋白質発現増進用、抗癌用、寿命延長用、生体老化の遅延用、生体老化症状の改善用、皮膚保湿用又は皮膚バリア強化用、又は遺伝子関連疾患の改善用組成物を、これを必要とする個体に投与することを含む遺伝子活性化、蛋白質発現増進、抗癌、寿命延長、生体老化の遅延、生体老化症状の改善、皮膚保湿又は皮膚バリア強化、又は遺伝子関連疾患の改善方法を提供する。
【００２９】
また別の側面において、本明細書に開示された技術は、遺伝子活性化用、蛋白質発現増進用、抗癌用、寿命延長用、生体老化の遅延用、生体老化症状の改善用、皮膚保湿用又は皮膚バリア強化用、又は遺伝子関連疾患の改善用組成物を製造するための、前記化学式１で表されるコウジ酸誘導体、その塩、そのプロドラッグ、その水和物、その溶媒和物及びその異性体からなる群から選ばれるいずれか一つ以上の用途を提供する。
【００３０】
前記遺伝子は、Ｓｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ、ＥＲＣＣ８、及びＦｏｘＯ３ａからなる群から選ばれる１以上であり、前記蛋白質は、Ｓｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ、ＥＲＣＣ８、及びＦｏｘＯ３ａからなる群から選ばれる１以上の蛋白質であり、前記癌は皮膚癌を含み、前記寿命は皮膚細胞の寿命を含み、前記生体は皮膚を含み、前記改善は、予防、治療、又は改善のいずれか一つ以上を含む。
【００３１】
例示的な一具現例によれば、前記コウジ酸誘導体は、下記の化学式２で表されるコジルメチレンジオキシンナメートであってよい。
【００３２】
【化４】
0006799542.tif 000005
【００３３】
本明細書において、「塩」又は「薬学的に許容可能な塩」とは、薬学的に許容可能であり、親化合物（ｐａｒｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）の好ましい薬理活性を有する本発明の一側面に係る塩を意味する。無機酸又は有機酸又は無機塩基又は有機塩基から形成される通常の塩及び第四級アンモニウムの酸付加塩を含む。前記塩は、（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等といった無機酸から形成されるか；又は酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンテンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４−メチルビシクロ［２，２，２］−ｏｃｔ−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔｅｒｔ−ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸といった有機酸から形成される酸付加塩（ａｃｉｄ  ａｄｄｉｔｉｏｎ  ｓａｌｔ）；又は（２）親化合物に存在する酸性プロトンが置換される際に形成される塩を含んでよい。適切な塩基塩のより特定した例は、ナトリウム、リチウム、カリウム、マグネシウム、アルミニウム、カルシウム、亜鉛、Ｎ,Ｎ'−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルコサミン及びプロカインの塩を含む。
【００３４】
本明細書において、「薬学的に許容可能」とは、通常の医薬的服用量（ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｄｏｓａｇｅ）で利用する際に相当な毒性を避けることにより、動物、より具体的には、ヒトに使用することができるという政府またはこれに準ずる規制機構の承認を受けることができ、又は承認を受け、又は薬局方に列挙され、又はその他一般的な処方として認知されることを意味する。
【００３５】
本明細書において、「プロドラッグ（ｐｒｏｄｒｕｇ）」とは、ある薬物を化学的に変化させて、物理的、化学的性質を調節した薬物を意味し、それ自体は生理活性を示さないが、投与後に体内において化学的にあるいは酵素の作用によって元来の薬物に変わって薬効を発揮することができる。プロドラッグは、投与されると、代謝過程における化学変換を通じて活性薬物に変換される。一般に、このようなプロドラッグは、本発明に係る化合物の機能的誘導体であり、生体内で所望の化合物に簡単に変換される。例えば、適切なプロドラッグ誘導体を選別し製造する通常の方法は、文献［“Ｄｅｓｉｇｎ  Ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ”、Ｈ  Ｂｕｎｄ  Ｓａａｒｄ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８５］に記載されている。この文献の全ての内容は本願において参考として援用される。
【００３６】
本明細書において、「水和物（ｈｙｄｒａｔｅ）」とは、水が結合している化合物を意味し、水と化合物との間に化学的な結合力のない内包化合物を含む広範囲な概念である。
【００３７】
本明細書において、「溶媒和物」とは、溶質の分子やイオンと溶媒の分子やイオンとの間に生じた高次の化合物を意味する。
【００３８】
本明細書において、「異性体」とは、化学式は同じであるが、同一のものではない化合物の関係を意味し、このような異性体の種類には、構造異性体、幾何異性体、光学異性体、及び立体異性体がある。構造異性体とは、分子式は同じであるが、構造が違って別の性質を有する化合物を意味し、幾何異性体とは、二重結合で連結された二つの原子に結合された原子若しくは原子団の空間的配置の違いによって生じる異性体を意味し、立体異性体とは、同じ化学的構成を有するが、原子又は基の立体配置が互いに違う化合物を意味し、光学異性体（鏡像異性体）とは、互いに重ね合わせることのできない鏡像を有する一つの化合物の二つの立体異性体を意味し、部分立体異性体とは、２以上の非対称中心を有し、それらの分子が互いに鏡像ではない立体異性体を意味する。
【００３９】
本明細書において、「異性体」は、特に光学異性体（ｏｐｔｉｃａｌ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（例えば、本質的に純粋な鏡像異性体（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ  ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ）、本質的に純粋なジアステレオマー（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ  ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒｓ）、又はこれらの混合物）だけでなく、配座異性体（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（即ち、１つ以上の化学結合のその角度のみ異なる異性体）、位置異性体（ｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（特に、互変異性体（ｔａｕｔｏｍｅｒｓ））、又は幾何異性体（ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（例えば、シス−トランス異性体）を含む。
【００４０】
本明細書において、「本質的に純粋な（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ）」とは、例えば、鏡像異性体又はジアステレオマーと関連して用いた場合、鏡像異性体又はジアステレオマーを例として挙げることのできる具体的な化合物が約９０％以上、具体的に約９５％以上、より具体的に約９７％以上、又は約９８％以上、さらに具体的に約９９％以上、最も具体的に約９９．５％以上（ｗ／ｗ）存在することを意味する。
【００４１】
本明細書において、「遺伝子活性化」とは、染色体のＤＮＡ上にある特定の遺伝子が転写され蛋白質に翻訳されてその機能が示される過程を促進することを意味する。すなわち、遺伝子発現を促進させることによってｍＲＮＡへの転写及び蛋白質への翻訳過程が活発に起こることで前記遺伝子の機能が発現され易くすることを意味する。
【００４２】
前記Ｓｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ、ＥＲＣＣ８、及びＦｏｘＯ３ａ遺伝子は、寿命に関連した長寿遺伝子であると知られている。
【００４３】
ＳＩＲＴ１（ｓｉｌｅｎｔ  ｍａｔｉｎｇ  ｔｙｐｅ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ２  ｈｏｍｏｌｏｇ；Ｓｉｒｔｕｉｎ  １）はＮＡＤ＋依存的脱アセチル酵素であって、ヒトのＳｉｒｔ−１遺伝子は１０番染色体の６９．６４−６９．６８Ｍｂに位置し、例えば、ＮＭ＿００１１４２４９８のｍＲＮＡ配列を有するものである。また、ＮＰ＿００１１３５９７０の蛋白質配列を有するものである。色々な蛋白質のリシン残基を脱アセチル化して蛋白質機能を調節する酵素であると知られており（Ａｇｅｉｎｇ  Ｒｅｓ、Ｖｏｌ．１頁３１３−３２６、（２００２））、老化細胞の死滅を抑制する効果があると知られている。
【００４４】
米国のハーバード医科大学の研究陣では食べ物の摂取量を減らしたときに寿命が延びる理由として、Ｓｉｒｔ−１の活動が増加するためだという事実を発表したことがある（Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００４  Ｊｕｌ  １６；３０５（５６８２）：３９０−２．Ｅｐｕｂ  ２００４  Ｊｕｎ  １７．）。ＮＡＤ＋依存的ｃｌａｓｓ  ＩＩＩヒストン脱アセチル活性を有する酵母のＳｉＲ２と最も類似し、特に、Ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ−ｋＢ、ｐ５３等の転写因子に付いているアセチル基を切り出してこれらの機能を調節する（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、Ｖｏｌ．６４、頁７５１３−７５２５、（２００４）；Ｃｅｌｌ、Ｖｏｌ．１０７、頁１４９−１５９、（２００１）；Ｔｒｅｎｄｓ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ、Ｖｏｌ．１７、頁１８６−１９１、（２００６））。
【００４５】
ＳＩＲＴ１は、遺伝子発現抑制と関連したクロマチン組換え、ＤＮＡ損傷反応、食餌制限に伴う寿命延長などに関与する（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ.、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１０、１６４１、２００５）。また、ＳＩＲＴ１は、アレルギー性呼吸器疾患に関与すると知られている（Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１０  Ｆｅｂ；１２５（２）：４４９−４６０．ｅ１４．ｄｏｉ：１０.１０１６／ｊ．ｊａｃｉ．２００９．０８．００９．Ｅｐｕｂ  ２００９  Ｏｃｔ  ２７.）。ＳＩＲＴ１は、酵母のＳｉＲ２と同様、ヒストン脱アセチル化を通じてクロマチンを組換え、遺伝子の発現を抑制し、ヒストン蛋白質の他にも細胞成長、ストレス反応、内分泌調節などに関連した多様な転写因子の脱アセチル化を誘導する。
【００４６】
近年の研究によれば、前記ＳＩＲＴ１の脱アセチル化活性を増加させることで糖尿、肥満、神経退行性疾患又は老化関連疾患などに適用する技術が報告されている。すなわち、遺伝子発現、糖代謝、インスリン産生、炎症反応、脳神経細胞保護などに関与して細胞の成長、老化、死を制御し、且つ、組織及び個体水準では、癌、代謝疾患、肥満、炎症疾患、糖尿、心臓疾患、脳退行性疾患などの多様な老化疾患の発生に関与すると報告されている。
【００４７】
Ｋｌｏｔｈｏは、ＫＬ遺伝子によって生成される酵素であって、当該遺伝子はβ−グルクロニダーゼと関連したＩ型蛋白質を生成する。ヒトのＫｌｏｔｈｏ遺伝子は１３番染色体の３３．５９−３３．６４Ｍｂに位置し、例えば、ＮＭ_００４７９５のｍＲＮＡ配列を有するものである。また、ＮＰ_００４７８６の蛋白質配列を有するものである。
【００４８】
Ｋｌｏｔｈｏ遺伝子がノックアウト（ｋｎｏｃｋ−ｏｕｔ）したマウスは、各種の老化現象が速い速度で増加し、１,２５（ＯＨ）２Ｄ３濃度上昇と関連した動脈硬化、血管石灰化、軟組織石灰化、肺気腫、活動低下、生殖腺形成異常、不妊、皮膚萎縮、運動失調症、低血糖症及び高リン酸血症が現れる（Ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ  Ｋｌｏｔｈｏ  ｇｅｎｅ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ａ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｒｅｓｅｍｂｌｉｎｇ  ａｇｅｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ  １９９７；３９０,４５−５１）。逆に、Ｋｌｏｔｈｏ蛋白質発現が増加すると、寿命増加、インスリン抵抗性増加及びＩＧＦ−１抵抗性増加などが現れる（Ｋｕｒｏｓｕ  ｅｔ  ａｌ.、２００５）。
【００４９】
ヒトにおいても長寿遺伝子と知られているＫｌｏｔｈｏの単一塩基多形成は、寿命短縮、骨粗鬆症、脳卒中及び冠状動脈疾患と関連していることが報告されたことがある（Ａｒｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ.、２００２，Ｋａｗａｎｏ  ｅｔ  ａｌ.、２００２；Ｍｕｌｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ.、２００５，Ｏｇａｔａ  ｅｔ  ａｌ.、２００２；Ｙａｍａｄａ  ｅｔ  ａｌ.、２００５）。また、Ｋｌｏｔｈｏ蛋白質の数値が高いと、脳細胞寿命が延び且つ心臓疾患などの関連疾患の発病を減少させると共に注意力、記憶力、認知力などの認識能力を強化させ、また、この蛋白質が不足すると、老化過程が促進することが明らかになった。しかし、現在の皮膚細胞とＫｌｏｔｈｏ発現の関連性やＫｌｏｔｈｏ発現を増加させることができる物質についての研究がない実情である。
【００５０】
ＸＰＤ（ＥＲＣＣ２；Ｅｘｃｉｓｉｏｎ  ｒｅｐａｉｒ  ｃｒｏｓｓ−ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｇｒｏｕｐ  ２）蛋白質は、ＤＮＡ保存性を維持する修復機構の一構成員である。これは、ＤＮＡ巻き戻しに関与する二つの酵素の一つであり、他のＸＰ蛋白質と共にＤＮＡ修復の一種類であるヌクレオチド切断修復を遂行し、ＸＰＤ遺伝子損傷は多様な皮膚疾患と老化の原因になる（Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ．２００３  Ｊｕｎ；１１（６）：１６３５−４６．）。ヒトのＸＰＤ遺伝子は１９番染色体の４５．８５−４５．８７Ｍｂに位置し、例えば、ＮＭ_０００４００のｍＲＮＡ配列を有するものである。また、ＮＰ_０００３９１の蛋白質配列を有するものである。
【００５１】
一方、ＤＮＡ修復欠陥は老化を加速化して老化関連疾病を惹起（Ｂｅｓｔ，ＢＰ（２００９）．“Ｎｕｃｌｅａｒ  ＤＮＡ  ｄａｍａｇｅ  ａｓ  ａ  ｄｉｒｅｃｔ  ｃａｕｓｅ  ｏｆ  ａｇｉｎｇ”．Ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２（３）：１９９−２０８．）し、癌発生危険（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  Ｃ、Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  Ｈ、Ｐａｙｎｅ  ＣＭ、Ｇａｒｅｗａｌ  Ｈ．ＤＮＡ  ｒｅｐａｉｒ/ｐｒｏ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｄｕａｌ−ｒｏｌｅ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  ｆｉｖｅ  ｍａｊｏｒ  ＤＮＡ  ｒｅｐａｉｒ  ｐａｔｈｗａｙｓ：ｆａｉｌ−ｓａｆｅ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｍｕｔａｔ  Ｒｅｓ．２００２  Ｊｕｎ；５１１（２）：１４５−７８．Ｒｅｖｉｅｗ．）を高める。
【００５２】
このようなＤＮＡ修復欠陥に影響を及ぼすＤＮＡ修復蛋白質であるＸＰＤの遺伝子突然変異は、色素性乾皮症、コケイン症候群、硫黄欠乏性毛髪発育異常症の原因として作用する。色素性乾皮症は、高率に皮膚癌を発症する劣性遺伝子の光過敏性皮膚疾患であり、ＤＮＡ修復に関連した遺伝子突然変異によって発症する。コケイン症候群は、矮小症の一形態であって、成長が遅れたり、光過敏性を発症したり、早老症を発症したりするのが特徴である。この疾患もまた、ＤＮＡ修復遺伝子に欠陥が生じて発症すると知られており、コケイン症候群を発症する遺伝子が蛋白質の生成にも関与することで、細胞内への異常な蛋白質の蓄積と産生により症状が現れるとされている。コケイン症候群は四種類の形態があり、これらのうち色素性乾皮症と複合的に発症する症候群もある。硫黄欠乏性毛髪発育異常症は硫黄を含む蛋白質産生の欠乏で毛髪を脆くし折れ易くする。これらの三種の疾患の共通の原因蛋白質と知られているものが、まさしくＤＮＡ修復蛋白質の一つのＸＰＤである。
【００５３】
ＥＲＣＣ８（Ｅｘｃｉｓｉｏｎ  ｒｅｐａｉｒ  ｃｒｏｓｓ−ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｇｒｏｕｐ  ８）もまた、ＤＮＡ修復過程で重要な役割をする蛋白質である。ヒトのＥＲＣＣ８遺伝子は５番染色体の６０．１７−６０．２４Ｍｂに位置し、例えば、ＮＭ_００００８２のｍＲＮＡ配列を有するものである。また、ＮＰ_００００７３の蛋白質配列を有するものである。ＥＲＣＣ８の変異が発生した場合、早期老化現象を伴う遺伝疾患であるコケイン症候群が発症することがある。この早期老化現象からＥＲＣＣ８が老化に多大な影響を及ぼしていることが分かる。
【００５４】
ＦｏｘＯ３ａ遺伝子は寿命に関連した長寿遺伝子と知られている。ＦｏｘＯ３ａは長寿遺伝子と知られているＦｏｘＯ３（Ｆｏｒｈｅａｄ  ｂｏｘ  Ｏ３）によりエンコードされる蛋白質であり、且つインスリン信号伝達経路に位置する転写因子であってＭｎ−ＳＯＤ、Ｃａｔａｌａｓｅのような酵素の発現に作用する蛋白質である。ヒトのＦｏｘＯ３遺伝子は６番染色体の１０８．８８−１０９．０１Ｍｂに位置し、例えば、ＮＭ_００１４５５のｍＲＮＡ配列を有するものである。また、ＮＰ_００１４４６の蛋白質配列を有するものである。ＦｏｘＯ３ａが活性化すると、生体内防御機作の活性化などによって抗老化効能を具現する。
【００５５】
ＦｏｘＯ３蛋白質は、さらに癌抑制剤としても知られている（Ｍｙａｔｔ  ＳＳ、Ｌａｍ  ＥＷ（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００７）．“Ｔｈｅ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ｆｏｒｋｈｅａｄ  ｂｏｘ（Ｆｏｘ）  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ”．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ７（１１）：８４７−５９．）。ＦｏｘＯ３遺伝子活性は癌の発生と関連があり、その活性低下が癌でしばしば現れ、ＦｏｘＯ３遺伝子はリンパ球増殖に伴う炎症性疾患にも関与すると知られている（Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００４．２１：２０３−２１３.、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．２００４．１０１：２９７５−２９８０.、Ｃｅｌｌ  １９９９．９６：８５７−８６８）。
【００５６】
例示的な一具現例によれば、前記コウジ酸誘導体、その塩、そのプロドラッグ、その水和物、その溶媒和物又はその異性体は、組成物の総重量を基準として０．００００１〜１０質量％の範囲で含まれることによって副作用なしで優れた効能及び剤形安定性を有し得る。また、より具体的に、前記コウジ酸誘導体、その塩、そのプロドラッグ、その水和物、その溶媒和物又はその異性体は、組成物の総重量を基準として０．０００１〜５質量％の範囲、より具体的に、０．０００５〜３質量％、さらに具体的に、０．００１〜２質量％の範囲であってよい。
【００５７】
例示的な一具現例によれば、前記組成物は、Ｓｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ、ＥＲＣＣ８、及びＦｏｘＯ３ａからなる群から選ばれる１以上の蛋白質発現増進用であってよい。
【００５８】
例示的な一具現例によれば、前記組成物は、抗癌用であってよい。
【００５９】
例示的な一具現例によれば、前記組成物は、皮膚に対する抗癌用であってよい。
【００６０】
例示的な一具現例によれば、前記組成物は、寿命延長用、生体老化の遅延用又は生体老化症状の改善用であってよい。
【００６１】
例示的な一具現例によれば、前記組成物は、皮膚細胞の寿命延長用であってよい。
【００６２】
例示的な一具現例によれば、前記皮膚細胞は、皮膚真皮由来の線維芽細胞であってよい。
【００６３】
例示的な一具現例によれば、前記組成物は、皮膚保湿用又は皮膚バリア強化用であってよい。
【００６４】
例示的な一具現例によれば、前記組成物は、Ｓｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ、ＥＲＣＣ８、又はＦｏｘＯ３ａ遺伝子関連疾患の予防、改善又は治療用であってよい。
【００６５】
Ｓｉｒｔ−１関連疾患は、色々な蛋白質のリシン残基を脱アセチル化して蛋白質機能を調節する酵素であるＳｉｒｔ−１蛋白質の不足又は抑制などのＳｉｒｔ−１によって引き起こされる疾患であり、具体的に、癌、糖尿病、退行性神経疾患、肥満、炎症疾患、アレルギー性呼吸器疾患などがある。前記退行性神経疾患は、アルツハイマー、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病又は多発性硬化症であってよく、前記炎症疾患は、皮膚炎、アレルギー、結膜炎、歯周炎、鼻炎、中耳炎、咽喉炎、扁桃炎、肺炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、肝炎、食道炎、胃炎、腸炎、すい臓炎、大腸炎、腎臓炎、関節炎、全身性浮腫、局所性浮腫であってよい。
【００６６】
Ｋｌｏｔｈｏ関連疾患は、Ｋｌｏｔｈｏ蛋白質の不足などのＫｌｏｔｈｏによって引き起こされる疾患であって、具体的に、癌、動脈硬化、骨粗鬆症、脳卒中、アルツハイマーなどがある。
【００６７】
ＸＰＤ関連疾患は、ＤＮＡ修復欠陥に影響を及ぼすＤＮＡ修復蛋白質であるＸＰＤによって引き起こされる疾患であって、具体的に、癌、色素性乾皮症、コケイン症候群、硫黄欠乏性毛髪発育異常症などがある。
【００６８】
ＥＲＣＣ８関連疾患は、ＤＮＡ修復欠陥に影響を及ぼすＤＮＡ修復蛋白質であるＥＲＣＣ８によって引き起こされる疾患であって、具体的に、癌、コケイン症候群などがある。
【００６９】
ＦｏｘＯ３関連疾患とは、ＦｏｘＯ３遺伝子活性又は抑制によって引き起こされる疾患であって、癌、退行性神経疾患、炎症性疾患などがある。退行性神経疾患の例としては、アルツハイマー疾患、パーキンソン疾患、ルーゲーリック疾患、ハンチントン疾患、多発性硬化症などが挙げられる。炎症性疾患の例としては、皮膚炎、アレルギー、結膜炎、歯周炎、鼻炎、中耳炎、咽喉炎、扁桃炎、肺炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、肝炎、食道炎、胃炎、腸炎、すい臓炎、大腸炎、腎臓炎、関節炎、全身性浮腫、局所性浮腫などが挙げられる。
【００７０】
例示的な一具現例によれば、前記組成物は、皮膚外用剤組成物であってよく、本明細書において皮膚外用剤組成物は、薬学組成物及び化粧料組成物の両方を含むものを意味する。
【００７１】
前記薬学組成物は、一側面において、薬学組成物の製造に通常用いる好適な担体、賦形剤及び希釈剤をさらに含んでいてよい。一側面において、組成物に含まれていてよい担体、賦形剤及び希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリトリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルジネート、ゼラチン、リン酸カルシウム、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、及び鉱物油などが挙げられる。
【００７２】
前記化粧料組成物に含まれる成分は、有効成分としてのコウジ酸誘導体、その塩、そのプロドラッグ、その水和物、その溶媒和物又はその異性体の他、化粧料組成物に通常用いられる成分を含んでいてよく、例えば、抗酸化剤、安定化剤、溶解化剤、ビタミン、顔料、色素及び香料のような通常の助剤、そして担体を含んでいてよい。
【００７３】
前記化粧料組成物は、当業界で通常的に製造されるいかなる剤形にも製造でき、例えば、溶液、懸濁液、乳濁液、ペースト、ゲル、クリーム、ローション、パウダー、石鹸、界面活性剤含有クレンジング、オイル、粉末ファウンデーション、乳濁液ファウンデーション、ワックスファウンデーション及びスプレーなどに剤形化されていてよいが、これらに限定されるものではない。より詳しくは、柔軟化粧水、栄養化粧水、ローション、ボディーローション、栄養クリーム、マッサージクリーム、モイスチャークリーム、ハンドクリーム、エッセンス、アイクリーム、クレンジングクリーム、クレンジングフォーム、クレンジングウォーター、パック、ゲル、パッチ、スプレー、パウダー、水中油（Ｏ／Ｗ）型又は油中水（Ｏ／Ｗ）型などの基礎化粧料、リップスティック、メーキャップベース又はファウンデーションなどのメーキャップ化粧料、シャンプー、リンス、ボディークレンザー、歯磨き粉又は口腔清浄制などの洗浄料、ヘアトニック、ゲル又はムースなどの整髪剤、養毛剤又は染毛剤などの毛髪用化粧料の剤形に製造されていてよい。
【００７４】
本明細書に係る化粧料組成物の剤形がペースト、クリーム又はゲルである場合は、担体成分として、動物性油、植物性油、ワックス、パラフィン、澱粉、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、シリカ、タルク、又は酸化亜鉛などが用いられていてよい。
【００７５】
本明細書に係る化粧料組成物の剤形がパウダー又はスプレーである場合は、担体成分として、ラクトース、タルク、シリカ、アルミニウムヒドロキシド、カルシウムシリケート、又はポリアミドパウダーが用いられていてよく、特にスプレーである場合は、さらに、クロロフルオロヒドロカーボン、プロパン／ブタン、又はジメチルエーテルのような推進剤を含んでいてよい。
【００７６】
本明細書に係る化粧料組成物の剤形が溶液又は乳濁液である場合は、担体成分として、溶媒、溶解化剤、又は乳濁化剤が用いられていてよく、例えば、水、エタノール、イソプロパノール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、ブチレングリコール、１,３−ブチルグリコールオイル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、グリセロール、グリセリン、脂肪族エステル、フェノキシエタノール、トリエタノールアミン、ポリエチレングリコール、蜜蝋、ポリソルベート６０、セスキオレイン酸ソルビタン、パラフィン、ステアリン酸ソルビタン、親油型モノステアリン酸グリセリン、ステアリン酸、ステアリン酸クリセリル／ＰＥＧ−４００ステアレート、カルボキシポリマー、シトステロール、オレイン酸ポリグリセリル−２、セラミド、コレステロール、ステアレス−４、リン酸ジセチル、マカダミアオイル、カルボキシビニルポリマー、キサンタンガム、又はソルビタンの脂肪酸エステルなどがある。
【００７７】
本明細書に係る化粧料組成物の剤形が懸濁液である場合は、担体成分として、水、エタノール、ブチレングリコール、又はプロピレングリコールのような液状の希釈剤、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールエステル及びポリオキシエチレンソルビタンエステルのような懸濁剤、微小結晶性セルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒアルロン酸ナトリウム、フェノキエタノール、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、アガーまたはトラガカントなどが用いられていてよい。
【００７８】
本明細書に係る化粧料組成物の剤形が界面活性剤含有クレンジングである場合は、担体成分として、脂肪族アルコールスルフェート、脂肪族アルコールエーテルスルフェート、スルホサクシネートモノエステル、イセチオン酸、イミダゾリウム誘導体、メチルタウレート、サルコシネート、脂肪酸アミドエーテルスルフェート、アルキルアミドベタイン、脂肪族アルコール、脂肪酸グリセリド、脂肪酸ジエタノールアミド、植物性油、ラノリン誘導体、又はエトキシル化グリセロール脂肪酸エステルなどが用いられていてよい。
【００７９】
本発明の一側面に係る組成物の剤形例を以下で説明するか、他の種々の剤形にも応用可能であり、これらは本発明を限定するためのものではなく、単に本発明を具体的に説明するためのものである。
【００８０】
［剤形例１］カプセル剤
コジルメチレンジオキシンナメート１０ｍｇ、結晶性セルロース３ｍｇ、ラクトース１４．８ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム０．２ｍｇを、通常のカプセル剤の製造方法により混ぜ合わせ、ゼラチンカプセルに充填して、カプセル剤を製造した。
【００８１】
［剤形例２］液剤
コジルメチレンジオキシンナメート２０ｍｇ、異性化糖１０ｇ、マンニトール５ｇを、通常の液剤製造方法により適量の精製水に加えて溶解させ、レモン香料を適量加えた後、前記の成分を混ぜ合わせ、次いで、精製水を加えて、総量１００ｍｌに調節した後、褐色のビンに充填し滅菌して、液剤を製造した。
【００８２】
［剤形例３］軟膏
下記の組成にて通常の方法により軟膏を製造した（質量％）。
コジルメチレンジオキシンナメート............. ３.０
グリセリン................................... ８.０
ブチレングリコール........................... ４.０
流動パラフィン............................. １５.０
βグルカン................................... ７.０
カルボマー................................... ０.１
カプリリック／カプリックトリグリセリド....... ３.０
スクアラン................................... １.０
セテアリルグルコシド......................... １.５
ステアリン酸ソルビタン....................... ０.４
セテアリルアルコール......................... １.０
蜜蝋......................................... ４.０
防腐剤、色素、香料........................... 適 量
精製水....................................... 残 量
【００８３】
［剤形例４］栄養化粧水
下記の組成にて通常の方法により栄養化粧水を製造した（質量％）。
コジルメチレンジオキシンナメート.............. ０.１
グリセリン.................................... ３.０
ブチレングリコール............................ ３.０
プロピレングリコール.......................... ３.０
カルボキシビニルポリマー...................... ０.１
蜜蝋.......................................... ４.０
ポリソルベート６０............................ １.５
カプリリック／カプリックトリグリセリド........ ５.０
スクアラン.................................... ５.０
セスキオレイン酸ソルビタン.................... １.５
セテアリルアルコール.......................... １.０
トロメタミン.................................. ０.２
防腐剤、香料.................................. 適 量
精製水........................................ 残 量
【００８４】
［剤形例５］栄養クリーム
下記の組成にて通常の方法により栄養クリームを製造した（質量％）。
コジルメチレンジオキシンナメート.............. ０.１
グリセリン.................................... ３.５
ブチレングリコール............................ ３.０
流動パラフィン................................ ７.０
βグルカン.................................... ７.０
カルボマー.................................... ０.１
カプリリック／カプリックトリグリセリド........ ３.０
スクアラン.................................... ５.０
セテアリルグルコシド.......................... １.５
ステアリン酸ソルビタン........................ ０.４
ポリソルベート６０............................ １.２
トロメタミン.................................. ０.１
防腐剤、香料.................................. 適 量
精製水........................................ 残 量
【００８５】
以下、実施例を挙げて本発明をより詳しく説明することにする。これらの実施例は、単に本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の範囲がこれらの実施例によって制限されると解釈されないのは、当業界における通常の知識を有する者にとって自明であろう。
【００８６】
試験例．長寿遺伝子活性化の効果
Ｓｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ及びＥＲＣＣ８の場合
本明細書に開示されたコウジ酸誘導体の長寿遺伝子活性化の効果を確認するために、正常ヒト角化細胞（Ｎｏｒｍａｌ  Ｈｕｍａｎ  Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ、ＮＨＫ）と線維芽細胞（Ｎｏｒｍａｌ  Ｈｕｍａｎ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ、ＮＨＦ）を用いて、コジルメチレンジオキシンナメートがＳｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ及びＥＲＣＣ８活性化に及ぼす影響をレチノールと共に比較した。
【００８７】
具体的に、コジルメチレンジオキシンナメートとレチノールのそれぞれを角化細胞（ＮＨＫ）、線維芽細胞（ＮＨＦ）に１０ｐｐｍの濃度で処理し、３７℃で２４時間間培養した後、細胞から全ＲＮＡを分離して、Ｓｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ及びＥＲＣＣ８  ｍＲＮＡの相対的な発現量を比較した。ＮＨＦ（ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ）は、Ｌｏｎｚａ（Ａｌｌｅｎｄａｌｅ、ＮＪ、ＵＳＡ）から購入した後、６０ｍｍ皿ディッシュに培地（ＤＭＥＭ）を利用して２×１０５ずつ分注し、３７℃で２４時間培養した。次いで、培地を捨てて新しい組織培養フラスコに移した。また、ＮＨＥＫｓ（ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ）は、Ｌｏｎｚａ（Ａｌｌｅｎｄａｌｅ、ＮＪ、ＵＳＡ）から購入して角化細胞成長培地（ＫＧＭ−ＧＯＬＤ、Ｌｏｎｚａ、Ａｌｌｅｎｄａｌｅ、ＮＪ、ＵＳＡ）で培養し、０．０２５％トリプシンで剥離して継代培養し、新しい組織培養フラスコに移した。継代培養２内の細胞を実験に用いた。
【００８８】
全ＲＮＡは、メーカーのプロトコルに従ってＴＲＩｚｏｌ  ＴＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いて分離した。ＲＮＡ濃度は、分光光度法にて測定し、ＲＮＡ  ｉｎｔｅｇｒｉｔｙは、ＢｉｏＡｎａｌｙｚｅｒ  ２１００（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いて測定した。ＲＮＡ  ４μｇをＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ(登録商標)ＩＩＩ逆転写酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いてｃＤＮＡに逆転写させ、分取量を−７０℃で保存し、ターゲット遺伝子の発現水準は定量的リアルタイムＴａｑＭａｎ  ＲＴ−ＰＣＲ（７５００Ｆａｓｔ、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ、ＵＳＡ）で測定した。サイクル条件は、９５℃で１０分間、９５℃で１５分間５０サイクル、及び６０℃で１分間とした。
【００８９】
【表１】
0006799542.tif 000006
【００９０】
【表２】
0006799542.tif 000007
【００９１】
【表３】
0006799542.tif 000008
【００９２】
【表４】
0006799542.tif 000009
【００９３】
【表５】
0006799542.tif 000010
【００９４】
【表６】
0006799542.tif 000011
【００９５】
【表７】
0006799542.tif 000012
【００９６】
【表８】
0006799542.tif 000013
【００９７】
前記表に見られるように、本明細書に開示のコウジ酸誘導体は、長寿遺伝子と知られているＳｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ及びＥＲＣＣ８遺伝子の発現量を顕著に増加させることが分かる。すなわち、前記コウジ酸誘導体は、Ｓｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ及びＥＲＣＣ８遺伝子を活性化し、長寿遺伝子として作用するこれらの機能を活性化することが分かる。
【００９８】
ヒトの皮膚を構成する細胞のうち表皮の大部分を占めている角化細胞（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）は、皮膚水分蒸発を抑制する保湿、外部有害因子から皮膚を守るバリア機能と関連が深い。本明細書に開示の組成物は、コウジ酸誘導体を有効成分として含むことによって、皮膚水分蒸発を抑制する保湿及び外部有害因子から皮膚を守るバリア機能をする角化細胞においてＳｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ及びＥＲＣＣ８遺伝子を活性化し、皮膚保湿及び皮膚バリア強化に有効な皮膚改善効果を奏することが分かる。また、本明細書に開示のコウジ酸誘導体は、長寿遺伝子であるＳｉｒｔ−１、Ｋｌｏｔｈｏ、ＸＰＤ及びＥＲＣＣ８を活性化することによって、皮膚細胞、具体的に真皮の大部分を占めている線維芽細胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ）の寿命延長効果を奏することが分かる。このような効果は、レチノールに比べて遥かに優れたものと示された。
【００９９】
ＦｏｘＯ３ａ遺伝子の場合
本明細書に開示のコウジ酸誘導体の長寿遺伝子活性化の効果を確認するために、ヒトメラノーマ細胞（Ｈｕｍａｎ  ＭＮＴ１  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ）をＬｏｎｚａから購入して、コジルメチレンジオキシンナメートであるｓｅｌｅｔｉｎｏｉｄ  ＧがＦｏｘＯ３ａ遺伝子活性化に及ぼす影響を核移行程度（ｎｕｃｌｅａｒ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ）で確認した。
【０１００】
具体的に、ｓｅｌｅｔｉｎｏｉｄ  Ｇをヒトメラノーマ細胞に１５、１５０、４５０ｐｐｍの濃度で４８時間処理し、１／１００００に希釈したＤＡＰＩ溶液で３０分間染色した後、共焦点レーザー走査型顕微鏡（Ｃｏｎｆｏｃａｌ  Ｌａｓｅｒ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ、Ｚｅｉｓｓ）で観察して、レッド蛍光とブルー蛍光とが核中で重なってバイオレット蛍光として観察される程度でＦｏｘＯ３ａ活性化程度を評価した。
− 一次抗体：ａｎｔｉ−ＦｏｘＯ３ａ（１：２００）、４℃、オーバーナイト
− 二次抗体：Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｇｏａｔ（１：５０００）、常温、１時間
【０１０１】
その結果、本明細書に開示のコウジ酸誘導体は、長寿遺伝子と知られているＦｏｘＯ３ａ遺伝子の発現量を顕著に増加させることが分かった。すなわち、前記コウジ酸誘導体は、ＦｏｘＯ３ａ遺伝子を活性化し、癌抑制剤、長寿遺伝子として作用するその機能を活性化することが分かる。
【０１０２】
以上、本発明の内容の特定の部分について詳細に記述したが、当業界における通常の知識を有する者にとって、このような具体的な記述は、単なる好ましい実施態様であるに過ぎず、これによって本発明の範囲が制限されるものではないことは明白であろう。したがって、本発明の実質的な範囲は、添付された請求項とそれらの等価物によって定義されると言えよう。
【図１】
0006799542.tif 000016
【図２】
0006799542.tif 000017
【図３】
0006799542.tif 000018
【図４】
0006799542.tif 000019
【図５】
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