(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウロリチンＡ、ウロリチンＢ、ウロリチンＣ、ウロリチンＤ、およびウロリチンＥからなる群から選択される１以上を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤（ただし、血圧降下の用途を除く。）。
【請求項２】
ウロリチンＡ、ウロリチンＢ、ウロリチンＣ、ウロリチンＤ、およびウロリチンＥからなる群から選択される１以上を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害用飲食品（ただし、血圧降下の用途を除く。）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
アンジオテンシン変換酵素は、主に血圧の調節や電解質バランスの維持に関わっているレニン−アンジオテンシン系において重要な役割をもつ酵素である。レニン-アンジオテ
ンシン系においては、まず、主に肝臓で合成されるアンジオテンシノーゲンが、腎臓で産生、分泌されるレニンによって不活性なアンジオテンシンＩへ変換される。アンジオテンシンＩは更にアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）によってＣ末端の２つのアミノ酸残基が切断され血管収縮、血圧上昇等の生理活性を持つペプチドであるアンジオテンシンＩＩへ変換される。一方で、ＡＣＥは血管を拡張させ、血圧を低下させるブラジキニンを分解して不活性化する作用も有している。従って、この酵素の作用を抑制することによって血圧降下作用が期待でき、高血圧治療への有効性が確認されており、カプトプリルやエナラプリルなどのＡＣＥ阻害剤が高血圧治療薬として従来から利用されている。食品又は食品原料から得ることができるＡＣＥ阻害剤は安全性の高い降圧剤、健康志向食品として期待することができる。
これまでに、ＡＣＥ阻害剤としては、緑茶由来のポリフェノールであるテアフラビン類（特許文献１）や茶に含まれるカテキン類の合成誘導体（特許文献２）において活性が報告されている他、牛骨（特許文献３）、鶏肉（特許文献４）、チーズ（特許文献５）、酒粕（特許文献６）由来のペプチドが、ＡＣＥ阻害活性を有することが報告されている。
【０００３】
一方、ウロリチンと呼ばれるポリフェノールが存在することが知られている。ウロリチンＡに代表されるウロリチン類は、ザクロ、ラズベリー、ブラックベリー、クラウドベリー、イチゴ、クルミなどに含まれるエラジタンニンに由来するエラグ酸の代謝物として知られている。エラジタンニンは加水分解性タンニンに分類され、摂取されると体内で加水分解され、エラグ酸に変換されることが知られている。
エラジタンニンやエラグ酸は体内の腸管吸収性は非常に低いと言われているが、これらが摂取された際、ヒト結腸微生物叢によって更に代謝されることによってウロリチン類に変換されることが知られている。このようにして生成されるウロリチン類は生体内で最も重要な化合物の１つである。近年、ウロリチン類を生成する腸内細菌としてＧｏｒｄｏｎｉｂａｃｔｅｒ  ｕｒｏｌｉｔｈｉｎｆａｃｉｅｎｓが報告されている（非特許文献１）。
【０００４】
生体におけるウロリチンの生成については、ゲラニインなどのエラジタンニンを摂取させた後、尿中のウロリチンを分析することによってエラジタンニンの生体内における代謝物としてウロリチンが生じることがラットを用いた試験で報告されている（非特許文献２）。また、非特許文献３ではヒトにおいて、プニカラジンを主としたエラジタンニンを含むザクロ抽出物を摂取後の尿中においてウロリチン類縁体が検出され、特にウロリチンＡが主な代謝物として機能することが報告されている。ウロリチンＡには抗酸化作用（非特許文献４）、抗炎症作用（非特許文献５）、抗糖化作用（非特許文献６）など様々な有効性があることが報告されており、肥満、新陳代謝速度低下、メタボリックシンドローム、糖尿病、心血管疾患、高脂血症、神経変性疾患、認知障害、気分障害、ストレスおよび不安障害からなる群から選択される症状の治療または予防、体重管理、筋機能もしくは精神能力を向上させるために、ウロリチン類の一つであるウロリチンＡを含有する食品または栄養サプリメントなども報告されている（特許文献７）。
【０００５】
このように、ウロリチン類を食品、医薬品の原材料及びそれらの加工品等へ添加するこ
とが求められている。しかしながら、ウロリチン類が関わるアンジオテンシン変換酵素阻害作用および血圧降下作用は知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開昭６３−２１４１８３号公報
【特許文献２】特開２０１３−７９２２１号公報
【特許文献３】特開２００３−２８６２９８号公報
【特許文献４】特開２００４−０６７５１９号公報
【特許文献５】国際公開２００５／０６１５２９号パンフレット
【特許文献６】特開２００９−１９６９４９号公報
【特許文献７】特表２０１４−５０１７６４号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Int. J. Syst. Eval. Microbiol., 64, 2346-2352 (2014)
【非特許文献２】J. Agric. Food Chem. 56, 393-400 (2008)
【非特許文献３】Mol. Nutr. Food Res. 58, 1199-1211 (2014)
【非特許文献４】Biosci. Biotechnol. Biochem. 76, 395-399 (2012)
【非特許文献５】J. Agric. Food Chem. 60, 8866-8876 (2012)
【非特許文献６】Mol. Nutr. Food Res. 55, S35-S43 (2011)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は上記状況下でなされたものであり、本発明は、新規なアンジオテンシン変換酵素阻害剤の提供を課題とする。また、新規な血圧降下剤として、該アンジオテンシン変換酵素阻害剤を含む血圧降下剤の提供を課題とする。さらに、新規なアンジオテンシン変換酵素阻害用飲食品、および新規な血圧降下用飲食品の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、新規なアンジオテンシン変換酵素阻害剤を探索したところ、ウロリチン類がアンジオテンシン変換酵素の作用を抑制することを見出し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は以下に示すとおりである。
〔１〕ウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤。
〔２〕前記ウロリチン類が、ウロリチンＡ、ウロリチンＢ、ウロリチンＣ、ウロリチンＤ、およびウロリチンＥからなる群から選択される１以上である、〔１〕に記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤。
〔３〕〔１〕又は〔２〕に記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤を含む血圧降下剤。
〔４〕ウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害用飲食品。
〔５〕ウロリチン類を含有する血圧降下用飲食品。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、新規なアンジオテンシン変換酵素阻害剤として、ウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤を提供することができる。また、新規な血圧降下剤として、該アンジオテンシン変換酵素阻害剤を含む血圧降下剤を提供することができる。また、新規なアンジオテンシン変換酵素阻害用飲食品として、ウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害用飲食品を提供することができる。さらに、新規な血圧降下用飲食品として、ウロリチン類を含有する血圧降下用飲食品を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】本発明の一実施態様における、ウロリチンＡ濃度とアンジオテンシン変換酵素阻害率との関係を示すグラフである。
【図２】本発明の一実施態様における、ウロリチンＢ濃度とアンジオテンシン変換酵素阻害率との関係を示すグラフである。
【図３】本発明の一実施態様における、ウロリチンＣ濃度とアンジオテンシン変換酵素阻害率との関係を示すグラフである。
【図４】本発明の一実施態様における、ウロリチンＤ濃度とアンジオテンシン変換酵素阻害率との関係を示すグラフである。
【図５】本発明の一実施態様における、ウロリチンＥ濃度とアンジオテンシン変換酵素阻害率との関係を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、ウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤に係る第一の実施態様と、前記アンジオテンシン変換酵素阻害剤を含有する血圧降下剤に係る第二の実施態様を含む。
【００１３】
＜１．ウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤＞
本発明の第一の実施態様は、下記一般式（１）で表されるウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤である。
【００１４】
【化１】
0006791478.tif 000002
【００１５】
（ウロリチン類）
第一の実施態様におけるウロリチン類は特に限定されないが、その構造が上記一般式（１）で表される物質である。また、表１に示すように、ウロリチン類は化学式におけるＲ１〜Ｒ６によって、ウロリチンＡ、ウロリチンＢ、ウロリチンＣ、ウロリチンＤ、ウロリチンＥ、ウロリチンＭ３、ウロリチンＭ４、ウロリチンＭ５、ウロリチンＭ６、ウロリチンＭ７、及びイソウロリチンＡなどを含む。
【００１６】
【表１】
0006791478.tif 000003
【００１７】
このうち、アンジオテンシン変換酵素阻害作用が高いことから、ウロリチンＡ、ウロリチンＢ、ウロリチンＣ、ウロリチンＤ、ウロリチンＥが好ましく、中でもウロリチンＣがより好ましい。
【００１８】
ウロリチン類を得る方法は特段限定されず、市販されているものを用いてもよく、化学合成により合成してもよい。
市販のウロリチン類としては、例えば、ウロリチンＡ、ウロリチンＢ、ウロリチンＣ、ウロリチンＤ、ウロリチンＥ（Ｄａｌｔｏｎ  Ｐｈａｒｍａ社製）などを挙げることができる。
また、化学合成による合成方法としては常法に従うことができ、例えば、本明細書の実施例で説明するように、２−ブロモ−５−メトキシ安息香酸と塩化アルミニウムとを原料に用いてウロリチンＡを合成する方法が挙げられる。
【００１９】
また、植物からエラジタンニンの一種であるプニカラジンを抽出し、これをエラグ酸に加水分解した後、もしくはエラグ酸を抽出し、微生物を用いてウロリチン類に変換してもよい。
植物の種類は特段限定されず、ザクロ、ラズベリー、ブラックベリー、クラウドベリー、ボイセンベリー、イチゴ、クルミ、ゲンノショウコ等が挙げられる。このうち、エラジタンニン及び／又はエラグ酸を高含有していることから、ザクロ、ボイセンベリー、ゲンノショウコが好ましく、ザクロがより好ましい。
これらの植物は、いずれか１種のみを用いてもよいし、２種以上を併用してもよい。また、該植物からの抽出方法及び抽出条件は特段限定されず、常法に従えばよい。例えば、水抽出、熱水抽出、温水抽出、アルコール抽出、超臨界抽出等の公知の抽出方法を用いることができる。
【００２０】
溶媒抽出を行う場合、溶媒としては、例えば、水；メタノール、エタノール等の低級アルコールや、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の多価アルコール等のアルコール類（無水、含水の別を問わない）；アセトン等のケトン類、ジエチルエーテル、ジオキサン、アセトニトリル、酢酸エチルエステル等のエステル類、キシレン等が挙げられ、好ましくは水、エタノール等である。これらの溶媒は、いずれか１種のみを用いてもよいし、２種以上を併用してもよい。
抽出したプニカラジンなどのエラジタンニンをエラグ酸に加水分解する方法としては特段限定されないが、酸、酵素、微生物によって加水分解する方法が挙げられる。
微生物を用いてエラグ酸をウロリチン類に変換する方法としては特段限定されないが、例えば、Food Funct., 5, 8, 1779-1784 (2014)に記載にされている公知の方法を用いる
ことができる。
【００２１】
得られたウロリチン類をそのままの状態で使用することもできるが、乾燥させて粉末状のものを用いてもよい。また、必要に応じて、得られたウロリチン類に精製、濃縮処理等を施してもよい。精製処理としては、濾過又はイオン交換樹脂や活性炭カラム等を用いた吸着、脱色といった処理を行うことができる。また、濃縮処理としては、エバポレーター等の常法を利用できる。
【００２２】
また、得られたウロリチン類（又は精製処理物若しくは濃縮物）を凍結乾燥処理に供して粉末化する方法、デキストリン、コーンスターチ、アラビアゴム等の賦形剤を添加してスプレードライ処理により粉末化する方法等、公知の方法に従って粉末化してもよい。さらにその後に、必要に応じて純水、エタノール等に溶解して用いてもよい。
【００２３】
（アンジオテンシン変換酵素阻害剤）
第一の実施態様は、ウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤である。
背景技術にも記載した通り、アンジオテンシン変換酵素とは、アンジオテンシンＩのＣ末端の２つのアミノ酸残基を切断し、血管収縮、血圧上昇等の生理活性を持つペプチドであるアンギオテンシンＩＩへ変換する酵素のことである。本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤は、アンジオテンシンＩをアンジオテンシンＩＩへ変換する酵素を阻害する剤である。
一方で、アンジオテンシン変換酵素は血管を拡張させ、血圧を低下させるブラジキニンを分解して不活性化する作用も有している。
従って、アンジオテンシン変換酵素を阻害することは、アンジオテンシンＩからアンジオテンシンＩＩへの変換を阻害し、血圧降下ができることから、高血圧に伴う疾患の予防や治療に有用である。
このことから、本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤は、血圧降下の用途に好ましく用いられ、その好ましい形態は、医薬や飲食品、サプリメントである。
【００２４】
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤は、上記したウロリチン類のうち一種を含有してもよく、複数種を含有してもよい。また、ウロリチン類を単独で含有してもよいが、ウロリチン類以外に公知の賦形剤、香料、着色料、乳化剤、安定化剤、増粘剤、酵素、防腐剤、滑沢剤、界面活性剤、崩壊剤、崩壊抑制剤、結合剤、吸収促進剤、吸着剤、保湿剤、可溶化剤、保存剤、風味剤、甘味剤等を、本実施態様の効果を損なわない範囲で必要に応じて配合することができる。
【００２５】
アンジオテンシン変換酵素阻害剤全量に対するウロリチン類の含有量は、本実施態様による所望の効果が奏される限り特に限定されないが、ウロリチン類の総量として、通常０．００００１質量％以上、好ましくは０.０００１質量％以上、より好ましくは０．００
１質量％以上であり、また、通常２０質量％以下、好ましくは３質量％以下、より好ましくは１質量％以下である。
【００２６】
（医薬）
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤を医薬の素材として用いる場合、その剤形は、予防または治療しようとする疾患や医薬の使用形態、投与経路等に応じて選択することができる。例えば、錠剤、被覆錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、注射剤、坐剤、浸剤、煎剤、チンキ剤等が挙げられる。これ
らの各種製剤は、常法に従って主薬に対して必要に応じて充填剤、増量剤、賦形剤、結合剤、保湿剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用し得る既知の補助剤を用いて製剤化することができる。また、この医薬製剤中に着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬を含有させてもよい。
また、好ましい疾患としては、血圧の上昇に起因するものであり、例えば高血圧症が挙げられ、その中でも好ましくは、脳梗塞、脳出血、くも膜下出血、心筋梗塞、狭心症、腎臓病である。
【００２７】
医薬全量に対する上記アンジオテンシン変換酵素阻害剤の含有量は、各発明による所望の効果が奏される限り特に限定されないが、ウロリチン類の総量として、通常０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上であり、また、通常１０質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．１質量％以下である。
【００２８】
（飲食品）
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤を飲食品の素材として用いる場合、一般の飲食品の他、特定保健用食品、栄養補助食品、機能性食品、病者用食品、食品添加物等（これらには飲料も含まれる。本明細書において同じ。）として使用できる。飲食品の形態としては、ウロリチン類を含有する植物自体や動物自体ではなく、清涼飲料、ミルク、プリン、ゼリー、飴、ガム、グミ、ヨーグルト、チョコレート、スープ、クッキー、スナック菓子、アイスクリーム、アイスキャンデー、パン、ケーキ、シュークリーム、ハム、ミートソース、カレー、シチュー、チーズ、バター、ドレッシング等を例示することができる。
【００２９】
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤を含む飲食品は、水、タンパク質、糖質、脂質、ビタミン類、ミネラル類、有機酸、有機塩基、果汁、フレーバー類等を主成分として使用することができる。タンパク質としては、例えば、全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、大豆タンパク質、鶏卵タンパク質、肉タンパク質等の動植物性タンパク質、及びこれらの加水分解物、バターなどが挙げられる。糖質としては、糖類、加工澱粉（デキストリンのほか、可溶性澱粉、ブリティッシュスターチ、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテル等）、食物繊維などが挙げられる。脂質としては、例えば、ラード、サフラワー油、コーン油、ナタネ油、ヤシ油、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の植物性油脂などが挙げられる。ビタミン類としては、例えば、ビタミンＡ、カロチン類、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ群、ビタミンＥ、ビタミンＫ群、ビタミンＰ、ビタミンＱ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸などが挙げられ、ミネラル類としては、例えば、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレン、乳清ミネラルなどが挙げられる。有機酸としては、例えば、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、酒石酸などが挙げられる。これらの成分は、２種以上を組み合わせて使用してもよく、合成品及び／又はこれらを多く含む飲食品を用いてもよい。
【００３０】
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤を含有する飲食品は、常法に従って製造することができる。また、本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤の、飲食品への配合量、配合方法、配合時期は適宜選択することができる。さらに、必要に応じて、瓶、袋、缶、箱、パック等の適宜の容器に封入することができる。
飲食品全量に対する上記アンジオテンシン変換酵素阻害剤の含有量は、各発明による所望の効果が奏される限り特に限定されないが、ウロリチン類の総量として、通常０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上であり、また、通常１０質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．１質
量％以下である。
【００３１】
（サプリメント）
サプリメントとは、dietary supplementからなる飲食品区分の１つであり、本明細書では、アンジオテンシン変換酵素阻害作用等を発揮する機能補助物質をいう。
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤をサプリメントの素材として用いる場合、固形物、ゲル状物、液状物の何れの形態とすることができる。サプリメントの形態としては、例えば、各種加工飲食品、粉末、錠剤、丸剤、カプセル、ゼリー、顆粒等の形態にすることができる。
【００３２】
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤をサプリメントの素材として用いる場合、デキストリン等の賦形剤、ビタミンＣ等の保存剤、バニリン等の嬌味剤、ベニバナ色素等の色素、単糖、オリゴ糖および多糖類（例、グルコース、フルクトース、スクロース、サッカロース、およびこれらを含有する糖質）、酸味料、香料、油脂、乳化剤、全脂粉乳、または寒天などの添加剤を含有していてもよい。これらの成分は、２種以上を組み合わせて使用してもよく、合成品及び／又はこれらを多く含んでもよい。
【００３３】
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤をサプリメントの素材として用いる場合、常法に従って製造することができる。また、サプリメントへの配合量、配合方法、配合時期は適宜選択することができる。さらに、必要に応じて、瓶、袋、缶、箱、パック等の適宜の容器に封入することができる。
【００３４】
サプリメント全量に対する上記アンジオテンシン変換酵素阻害剤の含有量は、上記効果が発揮される限り特段限定されないが、ウロリチン類として、総量で、通常０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上であり、また、通常１０質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．１質量％以下である。
【００３５】
（表示）
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤を含有する、医薬、飲食品、サプリメント等は、アンジオテンシン変換酵素阻害作用のために用いられるものである旨の表示を付した医薬、飲食品、サプリメント等として販売することができる。
【００３６】
前記「表示」とは、需要者に対して上記用途を知らしめるための全ての行為を意味し、上記用途を想起・類推させうるような表示であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、すべてが各実施態様における「表示」に該当する。しかしながら、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により表示することが好ましい。具体的には、医薬、飲食品、サプリメント等に係る商品又は商品の包装に上記用途を記載する行為、商品又は商品の包装に上記用途を記載したものを譲渡し、引き渡し、譲渡若しくは引渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的（インターネット等）方法により提供する行為、等が例示できる。
【００３７】
一方、表示としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示）であることが好ましく、特に包装、容器、カタログ、パンフレット、ＰＯＰ等の販売現場における宣伝材、その他の書類等への表示が好ましい。
【００３８】
また、例えば、本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤を含有する飲食品で
あれば、健康食品、機能性食品、特別用途食品、栄養機能食品（これらには飲料も含まれる。本明細書において同じ。）、医薬用部外品等としての表示を例示することができ、その他厚生労働省によって認可される表示、例えば、特定保健用食品、これに類似する制度にて認可される表示を例示できる。後者の例としては、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク低減表示等を例示することができ、詳細にいえば、健康増進法施行規則（平成１５年４月３０日日本国厚生労働省令第８６号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）、及びこれに類する表示が、典型的な例として列挙することが可能である。
【００３９】
＜２．血圧降下剤＞
本発明の第二の実施態様は、上記第一の実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤を含む血圧降下剤である。
本実施態様に係る血圧降下剤は、ウロリチン類を単独で含有してもよいが、上記成分以外に公知の賦形剤、香料、着色料、乳化剤、安定化剤、増粘剤、酵素、防腐剤、滑沢剤、界面活性剤、崩壊剤、崩壊抑制剤、結合剤、吸収促進剤、吸着剤、保湿剤、可溶化剤、保存剤、風味剤、甘味剤等を本実施態様の効果を損なわない範囲で必要に応じて配合することができる。
【００４０】
血圧降下剤全量に対するウロリチン類の含有量は、本実施態様による所望の効果が奏される限り特に限定されないが、ウロリチン類の総量として、通常０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上であり、また、通常１０質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．１質量％以下である。
【００４１】
本実施態様に係る血圧降下剤は、実施形態に合わせ、医薬や飲食品、サプリメントなどの形態で用いることができる。本実施態様に係る血圧降下剤に関する説明には、第一の実施態様に記載した説明を援用する。
【００４２】
尚、本実施態様に係る血圧降下作用はウロリチン類に起因するものである。よって、本発明の他の一実施態様として、ウロリチン類を含む血圧降下剤が挙げられる。ウロリチン類を含む血圧降下剤に関する説明には、第一の実施態様および第二の実施態様に記載した説明を援用する。
【実施例】
【００４３】
以下、具体的な実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００４４】
（ウロリチン類の分析方法）
ウロリチン類の一例としてウロリチンＡを用いた場合を説明する。ウロリチンＡの分析はＨＰＬＣを用いて行った。即ち、ウロリチンＡ（Ｄａｌｔｏｎ  Ｐｈａｒｍａ社製）を適当な溶媒に溶解させて調製した溶液を下記のＨＰＬＣ条件下で分析し、純度（％）（Ａ）およびＨＰＬＣにおけるピーク面積値（Ｂ）を用いて、下記算出式（１）及び算出式（２）によりウロリチンＡのファクター及びサンプルのウロリチンＡ濃度を算出した。
【００４５】
（ウロリチンＡのファクター算出式）
ウロリチンＡのファクター＝（Ｂ）／（ウロリチンＡの標準液の濃度（ｍｇ／Ｌ）×（Ａ）／１００）  ・・・（１）
（サンプルのウロリチンＡ濃度算出式）
サンプルのウロリチンＡ濃度（ｍｇ／Ｌ）＝サンプル中のウロリチンＡのピーク面積値／
ウロリチンＡのファクター  ・・・（２）
【００４６】
（分析条件）
分析カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３（２５０×４．６ｍｍ）（ＧＬ  Ｓｃｉｅｎｃｅ社製）
検出波長：３０５ｎｍ
移動相：水／アセトニトリル／酢酸 ＝ ７４／２５／１
カラム温度：４０℃
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
上記条件下、ウロリチンＡは１６．５分に保持時間を有した。
【００４７】
（ウロリチンＡの調製）
２−ブロモ−５−メトキシ安息香酸５ｇ（和光純薬工業株式会社製）と塩化アルミニウム１５ｇを１５０ｍＬのクロロベンゼン中で２．５時間還流した。冷却後、反応液を氷水に移し、２５０ｍＬのジエチルエーテルを用いて３回抽出を行った。得られた抽出液を減圧濃縮してジエチルエーテルを留去し、２−ブロモ−５−ヒドロキシ安息香酸４．２ｇを得た。得られた２−ブロモ−５−ヒドロキシ安息香酸３．９ｇとレゾルシノール３．９ｇ（東京化成工業株式会社製）を９ｍＬの４Ｍ ＮａＯＨ水溶液中で６０℃、３０分間加熱
した。この反応液に１０％硫酸銅水溶液１．８ｍＬを加えた後、更に８０℃、１０分間の加熱を行った。生成した沈殿物をろ過によって回収し、ウロリチンＡの白色粉末を得た。
【００４８】
＜アンジオテンシン変換酵素阻害の評価＞
［実施例１］
アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）（Ｓｉｇｍａ社製）を１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．３）（３００ｍＭ  ＮａＣｌを含む）に溶解後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ、４℃）し、上清を回収して１００ｍＵ／ｍＬのＡＣＥ溶液を調製し、酵素液とした。９６ウェルマイクロプレートに１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．３）に溶解した１７５ｍＭ  Ｈｉｐ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ（株式会社ペプチド研究所製）２５μＬ、および、ウロリチンＡの終濃度が７．８１ｍｇ／Ｌ、６２．５ｍｇ／Ｌ、５００ｍｇ／Ｌ、又は１０００ｍｇ／Ｌとなるように試験サンプル液５０μＬを添加して３７℃、１０ｍｉｎプレインキュベーションを行った。その後、上記酵素液１００μＬを添加し、３７℃、４０ｍｉｎの酵素反応を行った。１Ｎ  水酸化ナトリウム溶液２０μＬを添加することによって反応を停止させ、メタノールに溶解した０．２％  ｏ−フタルアルデヒド（和光純薬工業株式会社製）１０μＬを加えて遮光下で１５分間反応させた後に３．６Ｍ  リン酸溶液１５μＬを加えて、励起波長３４０ｎｍ、蛍光波長４２０ｎｍの条件下、酵素反応生成物の蛍光強度を測定した。
基質Ｈｉｐ−Ｈｉｓ−ＬｅｕにＡＣＥを添加すると、酵素反応の結果、該基質は馬尿酸とＨｉｓ−Ｌｅｕとに加水分解される。Ｈｉｓ−Ｌｅｕはアルカリ条件下でｏ−フタルアルデヒドにより蛍光を発する。つまり、ＡＣＥ阻害活性が大きい場合には、Ｈｉｓ−Ｌｅｕの生成量は小さいため蛍光強度が小さいことになる。
【００４９】
［比較例１］
ウロリチンＡを添加しないこと以外は上記実施例１と同様にしたものをコントロール（比較例１）として用いた。
【００５０】
また、ＡＣＥを添加しないこと以外は上記実施例１と同様にしたものを試験反応液のブランクとして用いた。更に、コントロールにおいてＡＣＥを添加しないこと以外は上記実施例１と同様にしたものをコントロールのブランクとした。
【００５１】
ＡＣＥ阻害率は下記算出式（１）により算出した。
ＡＣＥ阻害率（％）＝｛１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００  ・・・（３）
Ａ：試験反応液（実施例１）（ＡＣＥ添加、ウロリチンＡ添加）の蛍光強度
Ｂ：試験反応液（実施例１）のブランク（ＡＣＥ非添加、ウロリチンＡ添加）の蛍光強度
Ｃ：コントロール（比較例１）（ＡＣＥ添加、ウロリチンＡ非添加）の蛍光強度
Ｄ：コントロール（比較例１）のブランク（ＡＣＥ非添加、ウロリチンＡ非添加）の蛍光強度
【００５２】
ウロリチンＡ濃度とＡＣＥ阻害率との関係を表すグラフを図１に示す。図１に示すように、ウロリチンＡの濃度依存的にＡＣＥ阻害率の増加が見られ、ウロリチンＡがＡＣＥ阻害剤として作用することが確認された。
【００５３】
［実施例２、比較例２］
試験サンプルとして市販のウロリチンＢ（Ｄａｌｔｏｎ  Ｐｈａｒｍａ社製）を用い、終濃度が１５．６ｍｇ／Ｌ、６２．５ｍｇ／Ｌ、２５０ｍｇ／Ｌ、又は１０００ｍｇ／Ｌとなるように反応液を調製した以外は実施例１と同じ方法で行った。
【００５４】
ウロリチンＢ濃度とＡＣＥ阻害率との関係を表すグラフを図２に示す。図２に示すように、ウロリチンＢの濃度依存的にＡＣＥ阻害率の増加が見られ、ウロリチンＢがＡＣＥ阻害剤として作用することが確認された。
【００５５】
［実施例３、比較例３］
試験サンプルとして市販のウロリチンＣ（Ｄａｌｔｏｎ  Ｐｈａｒｍａ社製）を用い、終濃度が７．８１ｍｇ／Ｌ、３１．３ｍｇ／Ｌ、１２５ｍｇ／Ｌ、又は５００ｍｇ／Ｌとなるように反応液を調製した以外は実施例１と同じ方法で行った。
【００５６】
ウロリチンＣ濃度とＡＣＥ阻害率との関係を表すグラフを図３に示す。図３に示すように、ウロリチンＣの濃度依存的にＡＣＥ阻害率の増加が見られ、ウロリチンＣがＡＣＥ阻害剤として作用することが確認された。
【００５７】
［実施例４、比較例４］
試験サンプルとして市販のウロリチンＤ（Ｄａｌｔｏｎ  Ｐｈａｒｍａ社製）を用いて反応液を調製した以外は実施例１と同じ方法で行った。
【００５８】
ウロリチンＤ濃度とＡＣＥ阻害率との関係を表すグラフを図４に示す。図４に示すように、ウロリチンＤの濃度依存的にＡＣＥ阻害率の増加が見られ、ウロリチンＤがＡＣＥ阻害剤として作用することが確認された。
【００５９】
［実施例５、比較例５］
試験サンプルとして市販のウロリチンＥ（Ｄａｌｔｏｎ  Ｐｈａｒｍａ社製）を用い、終濃度が１５．６ｍｇ／Ｌ、６２．５ｍｇ／Ｌ、２５０ｍｇ／Ｌ、又は１０００ｍｇ／Ｌとなるように反応液を調製した以外は実施例１と同じ方法で行った。
【００６０】
ウロリチンＥ濃度とＡＣＥ阻害率との関係を表すグラフを図５に示す。図５に示すように、ウロリチンＥの濃度依存的にＡＣＥ阻害率の増加が見られ、ウロリチンＥがＡＣＥ阻害剤として作用することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００６１】
本発明は、医薬、飲食品、サプリメント等の製剤技術に適用できる。これらは、アンジオテンシン変換酵素阻害、血圧降下等のために用いられる。
【図１】
0006791478.tif 000004
【図２】
0006791478.tif 000005
【図３】
0006791478.tif 000006
【図４】
0006791478.tif 000007
【図５】
0006791478.tif 000008