(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一つのオープンリーディングフレームを含むとともに、コードされたペプチドまたはタンパク質の発現を促進する少なくとも一つの修飾を含み、少なくとも一つの前記修飾は、野生型配列に比べてＧ／Ｃ含有量を増大させることを含む、医学的処置における使用のための修飾ｍＲＮＡを含む医薬的組成物であって、前記医薬的組成物はジェット注射によって投与される、医薬的組成物。
【請求項２】
前記医薬的組成物は皮内投与される、請求項１に記載の使用のための医薬的組成物。
【請求項３】
前記医薬的組成物は筋肉内投与される、請求項１に記載の使用のための医薬的組成物。
【請求項４】
前記医薬的組成物は皮下投与される、請求項１に記載の使用のための医薬的組成物。
【請求項５】
前記修飾ｍＲＮＡは非修飾の基準ｍＲＮＡと比較して、前記コードされたペプチドまたはタンパク質の促進された発現によって特徴づけられる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用のための医薬的組成物。
【請求項６】
前記修飾ｍＲＮＡによりコードされたペプチドまたはタンパク質の発現が、同じ前記修飾ｍＲＮＡがジェット注射以外の手法で投与される基準と比較して、少なくとも５倍促進されている、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用のための医薬的組成物。
【請求項７】
前記修飾ｍＲＮＡは少なくとも一つの抗原、治療的タンパク質、または抗体をコードする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用のための医薬的組成物。
【請求項８】
前記少なくとも一つの修飾は、コドン最適化、ＵＴＲ修飾、アデノシンヌクレオチドが３０を超えるポリＡテール、ポリＣ配列、ｍ７ＧｐｐｐＮのもの以外の５’−キャップ構造、ヒストンステムループ配列、および化学修飾ヌクレオチドから成る群から選択される修飾をさらに含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用のための医薬的組成物。
【請求項９】
前記少なくとも一つの修飾は化学修飾されたＡＲＣＡ−キャップである、請求項８に記載の使用のための医薬的組成物。
【請求項１０】
前記ＡＲＣＡ−キャップはホスホロチオエートで修飾されている、請求項９に記載の使用のための医薬的組成物。
【請求項１１】
前記少なくとも一つの修飾はＵＴＲ修飾であり、当該ＵＴＲは安定ＲＮＡからＵＴＲを導入することによって修飾されている、請求項８に記載の使用のための医薬的組成物。
【請求項１２】
前記安定ＲＮＡはアルファグロブリンＵＴＲおよびベータグロブリンＵＴＲから選択される、請求項１１に記載の使用のための医薬的組成物。
【請求項１３】
前記少なくとも一つの修飾はＵＴＲ修飾であり、前記ＵＴＲはＴＯＰ遺伝子から５’−ＵＴＲを導入することによって修飾されている、請求項８に記載の使用のための医薬的組成物。
【請求項１４】
前記化学修飾ヌクレオチドはシュードウリジン−５’−三リン酸および５−メチルシチジン−５’−三リン酸から選択される、請求項８に記載の使用のための医薬的組成物。
【請求項１５】
前記修飾ｍＲＮＡは以下の修飾、すなわち、野生型配列に比べてＧ／Ｃ含有量を増大させること、少なくとも一つのＵＴＲ修飾、アデノシンヌクレオチドが３０を超えるポリＡテール、およびヒストンステムループ配列を含む、請求項８に記載の使用のための医薬的組成物。
【請求項１６】
前記ヒストンステムループ配列は、配列番号４４による核酸配列である、請求項１５に記載の使用のための医薬的組成物。
【請求項１７】
前記修飾ｍＲＮＡは追加でｍ７ＧｐｐｐＮ５’−キャップを含む、請求項１５または１６に記載の使用のための医薬的組成物。
【請求項１８】
請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の使用のための医薬的組成物であって、前記ポリＡテールは５０を超えるアデノシンヌクレオチドを含む、医薬的組成物。
【請求項１９】
請求項１５〜１８のいずれか１項に記載の使用のための医薬的組成物であって、前記ポリＡテールは６４のアデノシンヌクレオチドから成る、医薬的組成物。
【請求項２０】
前記医薬的組成物は更に少なくとも一つの好適な医薬的賦形剤を含むことを特徴とする、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の医薬的組成物。
【請求項２１】
哺乳動物の真皮または筋肉中のＲＮＡコードされたペプチドまたはタンパク質の局在化された発現を向上させるための医薬的組成物であって、
コードされたペプチドまたはタンパク質の発現を促進する少なくとも一つの修飾を含み、少なくとも一つの前記修飾は、野生型配列に比べてＧ／Ｃ含有量を増大させることを含むとともに、前記ペプチドまたはタンパク質をコードする少なくとも一つのオープンリーディングフレームを含む修飾ｍＲＮＡを含み、前記医薬的組成物がジェット注射により投与されることを特徴とする、医薬的組成物。
【請求項２２】
前記ＲＮＡコードされたタンパク質は抗原、治療的タンパク質、または抗体である、請求項２１に記載の医薬的組成物。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれか１項に記載の医薬的組成物の製造のための、少なくとも一つの前記修飾を含む修飾ｍＲＮＡの使用。
【請求項２４】
請求項１〜２２のいずれか１項に記載の医薬的組成物を含む、パーツキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、少なくとも一つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、当該のコードされたペプチドまたはタンパク質の発現を促進する少なくとも一つの修飾を含む、ＲＮＡに関する。更に、本発明は、被験体にジェット注射により投与される前述のような修飾ＲＮＡの、医学的使用に関する。本発明は更に、望ましくは遺伝子治療および／または遺伝子的ワクチン接種の分野における、ジェット注射による投与のための前記修飾ＲＮＡを含む医薬的組成品およびパーツキットに関する。加えて、本発明は、前記修飾ＲＮＡをジェット注射により投与することを含む、（哺乳類の）真皮または筋肉中のＲＮＡコードされたペプチドまたはタンパク質の（局在化された）発現を向上させるための方法に関する。そして最後に、本発明は、必要な被験体へのジェット注射により前記ＲＮＡを投与することを含む、処置の方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
遺伝子治療および遺伝子的ワクチン接種は、近代医学の最も有望で急速に開発が進んでいる方法に属する。これらは、多くの種類の病気の治療のための、高度に専門的で個人に対応した選択肢を提供し得る。特に、遺伝性の遺伝子的疾患の他に自己免疫疾患、伝染性疾患、癌性または腫瘍関連疾患、炎症性疾患が、前述のような処置手法の対象となり得る。また、これらの手法により前述のような疾患の（若年期での）発症を防止することも想定される。
【０００３】
遺伝子治療の背景にある主な理論上の概念は、特定の疾患の病理学的な状態に関連する不完全な遺伝子発現の適切な調整である。病理学的に変容された遺伝子発現は、必須遺伝子産物の不足または過生産につながる恐れがある。ここでいう必須遺伝子産物とは例えば、ホルモンのようなシグナル因子、ハウスキーピング因子、代謝酵素、構造タンパク質などである。変容された遺伝子発現は、転写および／または翻訳の制御ミスのみに起因するだけでなく、特定のタンパク質をコードするＯＲＦ内の突然変異に起因する可能性もある。病的突然変異は例えば、染色体異常によって、または点突然変異やフレームシフト変異などのより特異的な突然変異によって引き起こされる可能性がある。これらの変異はすべて、当該の遺伝子産物の限定された機能性につながる恐れがあり、また、場合によっては、機能の完全な損失につながる恐れがある。しかし、突然変異が細胞の転写または翻訳の機構に関わるタンパク質をコードする遺伝子に影響する場合も、転写および／または翻訳の制御ミスが起こり得る。そのような突然変異は、（本質的に）機能的な遺伝子の、病理学的な発現増加制御または減少制御につながる恐れがある。そのような制御機能を発揮する遺伝子産物をコードする遺伝子は、例えば、転写因子、シグナル受容体、メッセンジャータンパク質などであってもよい。しかし、制御タンパク質をコードするそのような遺伝子の機能の損失は、ある状況下においては、不完全な遺伝子産物のより下流側として作用する他の因子の人工的な導入により、逆転する可能性がある。そのような遺伝子欠陥はまた、当該の影響を受けた遺伝子そのものの置換を通した遺伝子療法によって補償できる可能性もある。
【０００４】
上記のように、遺伝子療法および遺伝子的ワクチン接種の両方は、本質的に、患者への核酸分子の投与および、それに続く、当該のコードされた遺伝子的情報の転写および／または翻訳に基づく。
【０００５】
遺伝子療法および遺伝子的ワクチン治療における投与のための核酸分子として、ＲＮＡ同様ＤＮＡも使用されてよい。ＤＮＡは比較的安定しており、扱いやすいことが知られている。しかし、ＤＮＡの使用は、投与されるＤＮＡ断片の、患者のゲノム内への意図せぬ挿入のリスクを生じ、当該の不完全な遺伝子の機能の損失につながる可能性がある。さらなるリスクとして、抗ＤＮＡ抗体の意図せぬ生成の可能性が発生している。もう一つの欠点は、ＤＮＡ投与およびそれに引き続く転写／翻訳によって達成され得る、コードされたペプチドまたはタンパク質の発現レベルが限定されていることである。他の因子の中で、ＤＮＡ転写を制御する特定の転写因子の存在は、投与されるＤＮＡの発現レベルに重大な影響力を有する。そのような因子がない場合は、ＤＮＡ転写は、十分な量のＲＮＡを算出することはない。その結果、得られる翻訳されたペプチドまたはタンパク質のレベルは限定される。
【０００６】
遺伝子療法または遺伝子的ワクチン接種のためにＤＮＡの代わりにＲＮＡを用いることにより、意図せぬゲノムの統合および抗ＤＮＡ抗体の生成のリスクを最小限にする、あるいは完全に避けることができる。しかし、ＲＮＡはどちらかと言えば不安定な分子種と考えられている。一方、細胞外空間において、ＲＮＡは、ほとんど遍在しているＲＮアーゼによる分解を受けやすい。他方、細胞質中のインビボｍＲＮＡ半減期は酵素的ｍＲＮＡ崩壊の速度によって限定される。酵素的ｍＲＮＡ崩壊の速度は、少なくとも部分的には、当該ｍＲＮＡ分子中のシス作用エレメントに依存する。これにより、ｍＲＮＡの制御された分解は真核細胞生物遺伝子発現の適切な制御に貢献する（Friedelら、Conserved principles of mammalian transcriptional regulation revealed by RNA half-life, Nucleic Acid Research, 2009, 1-12）。したがって、各々の自然発生ｍＲＮＡは、当該ｍＲＮＡが由来する遺伝子に依って個別の半減期を有する。
【０００７】
多年に渡り、一般的に、ｍＲＮＡは不安定なため遺伝子療法の目的のために効果的に使用することはできないとされてきた。しかしこの１０年、いくつかの研究グループがこの難題に挑戦し、導入効果およびタンパク質発現の期間について驚くべき結果を伴ってｍＲＮＡ媒介導入の実行可能性を証明しただけでなく、ｐＤＮＡを使用することの主要な利点を示すことにも成功した。そうした利点の一つは、ｍＲＮＡは、コードされたタンパク質が発現するために、核障壁を越える必要がないという状況である（Tavernierら、J Control Release. 2011 Mar 30;150(3):238-47.PMID:20970469に記述）。
【０００８】
遺伝子治療および遺伝子的ワクチン接種のためには通常、修飾されその結果安定化したＲＮＡが、通常は早く分解される非修飾ＲＮＡよりも、より好適である。一方、当該のＲＮＡ配列によってコードされる産物は、インビボで累積することが意図される。一方、好適な投薬形態のために調製される際や、保存過程において、および投与される際に、当該ＲＮＡは、その構造的および機能的完全性を維持しなければならない。したがって、ＲＮＡが早期の分解および崩壊をしてしまわないようにするために、遺伝子治療または遺伝子的ワクチン接種のための安定なＲＮＡ分子を供給するためのかなりの努力が行われた。
【０００９】
細胞内への導入の後、（安定化されていない）ｍＲＮＡの半減期は限定される。その結果、このｍＲＮＡによりコードされたタンパク質の生成は、最大で数日間継続する。明らかに、この事実は（安定化されていない）ｍＲＮＡベースの遺伝子療法の適用可能性を限定している。例えば、遺伝性疾患を矯正することはできない。なぜなら、遺伝性疾患の矯正は反復的な投与を必要とするからである（Tavernierら、J Control Release. 2011 Mar 30;150(3):238-47.PMID:20970469に記述）。
【００１０】
先述のように、ｍＲＮＡはＤＮＡと比べて、一般的にかなり不安定な分子と考えられている。特にｍＲＮＡがひとたび細胞質に達すると、分解酵素にさらされ、不安定となる。ｍＲＮＡの不安定さの主要な理由は、糖残基の第二炭素原子に水酸基が存在していることである。このことが、立体的障害のためにｍＲＮＡが安定した二重βへリックス構造をとることを妨げ、また当該分子をより加水分解されやすくする。細胞内ｍＲＮＡ送達の初期報告は疑わしい。主な理由は、ｍＲＮＡは極めて変容しやすく、導入プロトコルに耐えられなかったと考えられるからである。
【００１１】
先述のように、ＲＮＡの利点の一つは、ＲＮＡの発現が生じるために、当該ＲＮＡを細胞の細胞質まで送達するだけで十分であることである（核膜を越えなければならないＤＮＡとは、対照的である）。しかし、サイズの大きさおよび、負に帯電したリン酸基に起因する親水性の性質が原因で、むき出しの核酸分子は効果的に細胞内に侵入することはない。加えて、ＲＮＡはヌクレアーゼ媒介分解を大変受けやすい。従って、遺伝子療法のための難題は、細胞へのＲＮＡ伝送の効果的および安全な手段を開発することである。
【００１２】
一般的に、ウイルス性および非ウイルス性伝送手法が説明される（例えば、Tavernierら、J Control Release. 2011 Mar 30;150(3):238-47.PMID:20970469を参照）。安全性と工程の経済性に関しては、非ウイルス性伝送手法が通常好まれる。これらの手法のうち細胞壁の障壁機能の物理的妨害に基づくものもあるし、伝送される遺伝子が分解されることなく、標的となる細胞への遺伝子伝送を促進するためにカチオン性担体分子を用いるものもある。
【００１３】
むき出しのｍＲＮＡの取り込みメカニズムへの最初の洞察は、注射による皮内投与を調査するマウスの研究により得られた。この研究において、真皮の細胞内への局所的な侵入は可飽和であることが示唆される。つまり、一定のタンパク質レベルにしか、ｍＲＮＡの皮内注射により到達されないということである。より精密なインビトロでの研究が、取り込みの可飽和性を確証し、また取り込みは温度および投与量依存性でもあることを示した（Schlakeら、RNA biology 9:11, 1-12; November 2012に）。
【００１４】
今までのところ、皮内注射が最も頻繁にｍＲＮＡベースの適用例のために用いられている。皮内注射は、ランゲルハンス細胞および皮膚樹状細胞によるｍＲＮＡの取り込みを可能にし、その後に排出リンパ節への送達が想定される（Van Lintら、Human Vaccines & Immunotherapeutics 9:2, 248-257; February 2013に記述）。ＲＮＡ送達のために用いられている他の投与ルートは、筋肉内注射、節内注射（リンパ節内への注射）、腫瘍内注射を含む。
【００１５】
ＲＮＡをワクチンとして使用した経験からだけでなくとも、インビボでの異種ｍＲＮＡの導入により媒介されるタンパク質発現は一般的に可能であり、検出可能なほどの免疫応答を起こすのに十分であることは明らかである。しかし、ｍＲＮＡ媒介タンパク質供給により、効果的な免疫応答を起こすことおよび、さらには、治療的な効果を獲得することが、タンパク質発現の要求水準の点から、より必要とされているかも知れない。
【００１６】
ＲＮＡの、被験体の細胞内への効果的な運搬はしたがって、依然として、異種ｍＲＮＡの手段により細胞内に導入されるタンパク質の効果的な発現の、障害となっている。ＲＮＡベースの医薬品の治療的な効果性は、特に遺伝子療法の分野では、治療的ＲＮＡ分子中にコードされた遺伝子産物の効果的な発現に大きく依存する。
【００１７】
従って、本発明の目的は、細胞または組織内に導入されるＲＮＡ分子に含まれる遺伝子情報の発現を促進することである。とりわけ、本発明の目的は、遺伝子療法または遺伝子的ワクチン接種のために用いられ、被験体に投与されるＲＮＡ分子中にコードされるタンパク質の発現を促進することである。
【００１８】
本発明の根本にある目的は、請求項の内容によって達成される。
【発明の概要】
【００１９】
本発明は、少なくとも一つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、医学的用途のために、コードされたタンパク質の発現を促進する少なくとも一つの修飾（「修飾ＲＮＡ」）を含むＲＮＡを提供し、前記修飾ＲＮＡは被験体にジェット注射により投与されることを特徴とされる。とりわけ、本発明は、ジェット注射により発現がさらに促進される少なくとも一つのペプチドまたはタンパク質を含む、修飾ＲＮＡを提供する。さらに、本発明は、望ましくは遺伝子療法および／または遺伝子的ワクチン接種の分野における使用のための、ジェット注射による投与のための前記修飾ＲＮＡを含む医薬的組成物およびパーツキットを提供する。加えて、本発明は、当該ＲＮＡ中にコードされているタンパク質の発現を促進する少なくとも一つの修飾を含むそれぞれのＲＮＡのジェット注射によりタンパク質発現を促進する方法を提供する。
【００２０】
要約すると、本発明の目的は、修飾ＲＮＡであって、標的組織または標的細胞中の、当該のコードされたタンパク質の発現が、ジェット注射によって付加的に促進されることを特徴とする修飾ＲＮＡの提供によって達成される。
【００２１】
以下に示す図面は、単に説明のためのものであって、本発明をより詳細に描写ものである。これらの図面は、本発明を図面の例にのみ限定するために作図されるものではない。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】モルモットにおけるルシフェラーゼ発現を示す図であり、モルモットに、ジェット注射または従来の皮内針皮内針により、Photinus pyralis ルシフェラーゼをコードする修飾ｍＲＮＡ(PpLuc(GC)-muag-A64-C30-ヒストンSL)を２０μｇ注射した。注射２４時間後、皮膚サンプルを準備しルシフェラーゼ発現を測定した。
【図２】モルモットモルモットにおけるルシフェラーゼ発現を示す図であり、モルモットに、ジェット注射または従来の皮内針注射により、Photinus pyralis ルシフェラーゼをコードする修飾ｍＲＮＡ(PpLuc(GC)-muag-A64-C30-ヒストンSL)を異なる投与量（１０、４０、および８０ｇ）注射した。注射２４時間後、皮膚サンプルを準備しルシフェラーゼ発現を測定した。
【図３】修飾および非修飾ＲＮＡの比較を示す図であり、モルモットに、ジェット注射または従来の皮内針注射により、非修飾ｍＲＮＡ（PpLuc(wt)-A30）およびPhotinus pyralis ルシフェラーゼをコードする修飾ｍＲＮＡ(PpLuc(GC)-muag-A64-C30-ヒストンSL)を異なる投与量（５および８０ｇ）注射した。注射２４時間後、皮膚サンプルを準備しルシフェラーゼ発現を測定した。
【図４】ｍＲＮＡ配列R1265: PpLuc(GC)-muag-A64-C30-ヒストンSL（配列番号:46）を示す図である。
【図５】ｍＲＮＡ配列R2652: PpLuc(wt)-A30（配列番号:47）を示す図である。
【図６】ｍＲＮＡ配列R3454: PpLuc(wt)-A64（配列番号:48）を示す図である。
【図７】ｍＲＮＡ配列R2462: PpLuc(GC)-A64-C30-ヒストンSL（配列番号:49）を示す図である。
【図８】ｍＲＮＡ配列R1256: PpLuc(GC)-muag-A64-C30（配列番号:50）を示す図である。
【図９】ｍＲＮＡ配列R2393: PpLuc(nat)-muag-A64-C30-ヒストンSL（配列番号:51）を示す図である。
【図１０】ｍＲＮＡ配列R2403: RAV-G(GC)-muag-A64-C30-ヒストンSL（配列番号:52）を示す図である。
【図１１】ｍＲＮＡ配列R3513: EPO(wt)-A30（配列番号:53）を示す図である。
【図１２】ｍＲＮＡ配列R3135: HSD17B4-EPO(GC)-アルブミン7-A64-C30-ヒストンSL（配列番号:54）を示す図である。
【図１３】エリスロポエチン（ＥＰＯ）をコードする非修飾および修飾ｍＲＮＡの比較を示す図であり、モルモットに、ジェット注射または従来の皮内針により、エリスロポエチン（ＥＰＯ）をコードする非修飾ｍＲＮＡ(R3513:EPO(wt)-A30)または修飾ｍＲＮＡ(HSD17B4-EPO(GC)-アルブミン7-A64-C30-ヒストンSL)を注射した。各動物には３部位ずつ、各注射部位に８０μｇのＲＮＡを各々の注射部位ごとに注射した。注射２４時間後、血液サンプルを準備し、実施例５で説明したようにＥＰＯ発現を測定した。
【図１４】ＲＳＶ−ＦｍＲＮＡワクチンに含まれているようなＲＳＶ長菌種（RSV-F long）のＲＳＶ−Ｆタンパク質をコードする、Ｇ／Ｃ最適化ｍＲＮＡ配列R2510（配列番号：６４）を示す図である。
【００２３】
【図１５Ａ】図１５は、ＲＳＶｍＲＮＡワクチン（抗体滴定量）の、従来のシリンジ針注射およびジェット注射の比較を示す図であり、雌のモルモット（ｎ＝８／群）に、ＲＳＶ−ＦｍＲＮＡワクチン（R2510を８０μｇ）を、従来の針注射で（i.d.:intradermally、皮内）１×１００μｌ、注射針で（i.d.）４×２５μｌ、またはジェット注射で（i.d.）１×１００μｌのいずれかによりを皮内（i.d.）注射した。コントロール群（ｎ＝２）には、２０μｇの不活化ＲＳＶ長菌株（２×５０μｌ）を筋肉内（i.m.:intramuscularly）注射した。全ての動物は１４日目および２８日目にブースター注射を受けた。抗ＲＳＶ−Ｆ抗体滴定量の検定のため、血液サンプルは、−３日目（最初のワクチン接種の３日前）ならびに７日目、２１日目および４２日目に収集した。実施例４で説明するように実験を実施した。図１５Ａは、ELISAにより検定したlgG1終点滴定量を示す図である。
【図１５Ｂ】図１５は、ＲＳＶｍＲＮＡワクチン（抗体滴定量）の、従来のシリンジ針注射およびジェット注射の比較を示す図であり、雌のモルモット（ｎ＝８／群）に、ＲＳＶ−ＦｍＲＮＡワクチン（R2510を８０μｇ）を、従来の針注射で（i.d.:intradermally、皮内）１×１００μｌ、注射針で（i.d.）４×２５μｌ、またはジェット注射で（i.d.）１×１００μｌのいずれかによりを皮内（i.d.）注射した。コントロール群（ｎ＝２）には、２０μｇの不活化ＲＳＶ長菌株（２×５０μｌ）を筋肉内（i.m.:intramuscularly）注射した。全ての動物は１４日目および２８日目にブースター注射を受けた。抗ＲＳＶ−Ｆ抗体滴定量の検定のため、血液サンプルは、−３日目（最初のワクチン接種の３日前）ならびに７日目、２１日目および４２日目に収集した。実施例４で説明するように実験を実施した。図１５Ｂは、ELISAにより検定されるlgG2a終点滴定量を示す図であり、見ての通り、ジェット注射（１×１００μｌ）によりワクチンを投与した２１日目（１４日目の最初のブースター注射の一週間後）には、ＲＳＶ−ＦｍＲＮＡワクチンはすでにlgG1サブクラス（Ａ）の抗Ｆタンパク質抗体を導入している。比較しうる抗体滴定量には、従来の針注射によりワクチン（４×２５μｌ）を投与した４２日目（２８日目のブースターワクチン接種２週間後）に達したのみである。
【図１６】ＲＳＶｍＲＮＡワクチン（ウイルス中和滴定量）の、従来のシリンジ針注射およびジェット注射の比較を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
実施例４で説明するように実験を実施した。−３日目、２１日目、および４２日目にプラーク減少アッセイによりウイルス中和滴定量（ＶＮＴｓ）を検定した。ＶＮＴの中央値を時間上にプロットした。ＶＮＴは、ウイルス制御の６０％減少の終点において相互中和抗体として示された。見ての通り、有意なＲＳＶ中和滴定量は４２日目、ワクチンをジェット注射（１×１００μｌ）により投与したときのみ測定された。
【００２５】
明瞭性、判読性のために以下の定義を提供する。これらの定義のために言及されるいかなる技術的な特性も、本発明の各々および全ての実施例に基づいて解釈されてもよい。これらの実施例において提供される。追加の定義および説明がとくに提供されてもよい。本発明において核酸配列が報告される場合、それらの配列それぞれは一般的に、特定のＲＮＡまたはＤＮＡ配列および対応するＤＮＡまたはＲＮＡ相当部の両方を含む。例えば、ＤＮＡ配列が提供される場合、当業者は、当該の対応するＲＮＡ配列は、ウラシル残基のよるチミンの置換、またはその逆によって得られることを理解しているものである。
【００２６】
遺伝子療法：
遺伝子療法は典型的には、患者の身体または患者の身体の隔離された要素（例えば隔離された組織／細胞）の、ペプチドまたはタンパク質をコードする核酸による治療を意味するものとして理解され得る。遺伝子療法は典型的には、ａ）任意の投与ルートによる、核酸（望ましくはここに定義するＲＮＡ分子）の、患者への直接の投与、または、インビトロ／エクスビボまたはインビボのいずれかで患者の細胞のトランスフェクションを生じる、患者の隔離された細胞／組織へのインビトロでの投与、ｂ）導入された核酸分子の転写および／または翻訳、ならびに、選択的にはｃ）患者に核酸が直接投与されなかった場合の、隔離された、トランスフェクションを施された細胞の、患者への再投与、の、少なくとも一つの手順を含み得る。
【００２７】
遺伝子的ワクチン接種：
遺伝子的ワクチン接種は、典型的には、抗体または免疫原もしくはそれらの断片をコードする核酸分子の投与によるワクチン接種を意味するものとして理解され得る。当該の核酸分子は、患者の身体へ、または患者の隔離された細胞へ投与され得る。身体の特定の細胞のトランスフェクションにて、または隔離された細胞のトランスフェクションにて、これらの細胞により抗体および免疫原が発現され得、続いて免疫システムに供給されて適応性（すなわち抗体特異性）免疫応答を誘発し得る。したがって、遺伝子的ワクチン接種は典型的にはａ）通常インビボまたはインビトロのいずれかで患者の細胞のトランスフェクションを生じる、核酸（望ましくはここに定義するＲＮＡ分子）の、被験体（望ましくは患者）への、または被験体（望ましくは患者）の隔離された細胞への投与、ｂ）導入された核酸分子の転写および／または翻訳、ならびに、選択的にはｃ）患者に核酸が直接投与されなかった場合の、隔離された、トランスフェクションを施された細胞の、被験体（望ましくは患者）への再投与、の、少なくとも一つの手順を含む。
【００２８】
免疫システム：
免疫システムは生体を感染から保護し得る。病原体が生体の物理的な障壁を通過することに成功し、この生体に侵入した場合、先天性免疫システムは即座の、しかし非特異性の応答を提供する。病原体がこの先天性の応答を回避した場合、脊椎動物は第二の保護層、適応性免疫システムを有している。ここで、免疫システムはその応答を感染の間に獲得し、病原体の認識を向上させる。この向上した応答はその後、病原体が除去された後も、免疫的な記憶という形で保持され、この病原体に遭遇する度ごとに適応性免疫応答がより早く強力な攻撃を仕掛けることを可能にする。これにより、免疫システムは先天性および適応性免疫応答を含む。これら２つの部分の各々が典型的にはいわゆる体液成分および細胞成分を含む。
【００２９】
適応性免疫システム：
適応性免疫システムは本来、病原菌の成長の除去または予防のために用いられる。適応性免疫システムは典型的には、脊椎動物の免疫システムに、（免疫性を生み出すために）特定の病原体を認識し覚え、また当該病原体と遭遇する度により強い攻撃を仕掛ける力を提供することによって適応性免疫応答を制御する。適応性免疫システムは体細胞超変異（加速された体細胞突然変異の過程）、およびＶ（Ｄ）Ｊ組み換え（抗原レセプター遺伝子セグメントの不可逆的な遺伝子組み換え）が原因で、高度に適応可能である。このメカニズムは少数の遺伝子が非常に大きな数の異なる抗体レセプターを生み出すことを可能にしており、抗体レセプターはその後、各個別のリンパ球に対して特異的に発現される。遺伝子再配列は各細胞のＤＮＡ中で不可逆的な変化を引き起こすので、そのような細胞の子細胞（子孫細胞）の全てはその後、長期間の特異的な免疫への鍵である記憶Ｂ細胞および記憶Ｔ細胞を含む、同一のレセプター特異性をコードする遺伝子を継承する。
【００３０】
先天性免疫システム：
先天性免疫システムは非特異的（または不特異的）免疫システムとしても知られ、典型的には、非特異的な様式で宿主を他の生体による感染から防御する細胞およびメカニズムを含む。これは先天性免疫システムの細胞は、包括的なやり方で病原体を認識して応答し得るが、適応性免疫システムとは異なり、長期的な、または保護的な免疫性を宿主に与えるものではないことを意味する。先天性免疫システムは、例えば、
Ｔｏｌｌ様レセプター類（ＴＬＲ）のリガンドや、リポ多糖類、ＴＮＦアルファ、ＣＤ４０リガンド、あるいはサイトカイン類、モノカイン類、リンホカイン類、インターロイキン類またはケモカイン類、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＩＦＮアルファ、ＩＦＮベータ、ＩＦＮガンマ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＬＴ−ベータ、ＴＮＦアルファ、成長因子、およびｈＧＨ、ヒトＴｏｌｌ様レセプターＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０のリガンド、ネズミＴｏｌｌ様レセプターＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２またはＴＬＲ１３のリガンド、ＮＯＤ様レセプターのリガンド、ＲＩＧ−１様レセプターのリガンド、免疫賦活性核酸、免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）、ＣｇＰ−ＤＮＡ、抗菌因子、抗ウイルス因子、などの他の補助物質によって活性化され得る。本発明による医薬的組成物は、一つあるいはそれ以上の前述のような物質を含み得る。典型的には、先天性免疫システムの応答は、化学因子の生成（サイトカイン類と呼ばれる特異化された化学媒介物質、補体カスケードの活性化、特異化された白血球による、生体・組織・血液・リンパ内の異物の特定および除去、適応性免疫システムの活性化、ならびに／または感染因子に対する物理的および化学的障壁として働くこと、を含む）を通して、感染部位への免疫細胞を補充することを含み得る。
【００３１】
免疫応答：
免疫応答は典型的には、適応性免疫システムの特定の抗原に対する特異的な応答（いわゆる特異的または適応性免疫応答）または先天性免疫システムの非特異的な応答（いわゆる非特異的または先天性免疫応答）、またはそれらの組み合わせである。
【００３２】
適応性免疫応答：
適応性免疫応答は、典型的には、免疫システムの抗原特異的な応答として理解され得る。抗原特異性は、特定の病原体または病原体に感染した細胞に対して調整された応答の生成を可能にする。これらの調製された応答を仕掛ける能力は通常、「記憶細胞」によって体内に保持される。もし病原体が身体に一度以上感染した場合、これらの特異的な記憶細胞が素早く用いられて病原体を除去する。この場合、適応性免疫応答の第一工程は、ナイーブ抗原特異的Ｔ細胞または、抗原特異的免疫応答を誘導することができる異なる免疫細胞の、抗原提示細胞による活性化である。これは、ナイーブＴ細胞定常的に通過しているリンパ組織および器官中で起こる。抗原提示細胞として働きうる３つの細胞タイプは樹状細胞、マクロファージ、およびＢ細胞である。これらの細胞の各々は、免疫応答の誘発において明確な機能を有する。樹状突起は抗原を、ファゴサイトーシスおよびマクロピノサイトーシスにより取り込み得る。また、例えば異物抗原との遭遇により、樹状突起は賦活されて各所のリンパ組織に移住し、そこで成熟樹状細胞に分化する。マクロファージは、バクテリアなどの粒状の抗原を捕食し、感染因子または他の適切な刺激により誘発されてＭＨＣ分子を発現する。自身のレセプターを介して可溶性タンパク質抗体を結合し内在化するというＢ細胞の特有の能力も、Ｔ細胞を誘発するために重要であり得る。ＭＨＣ分子は典型的にはＴ細胞に対する抗原の提示の要因となる。ここにおいて、ＭＨＣ分子に対する抗原の提示はＴ細胞の活性化につながり、そのことがＴ細胞の増殖およびアームドエフェクターＴ細胞への分化を誘発する。エフェクターＴ細胞の最も重要な機能は、感染細胞のＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞による殺傷および、Ｔｈ１細胞（集合して細胞媒介免疫を形作る）によるマクロファージの活性化、ならびにＴｈ２およびＴｈ１細胞両方によりＢ細胞を活性化して異なる階級の抗体を生成し、その結果体液性免疫応答を駆動する。Ｔ細胞は、抗原を直接認識および結合しない代わりに、病原体由来タンパク質抗原（例えば、他の細胞の表面でＭＨＣ分子に結合される、いわゆるエピトープ）などの短いペプチドフラグメントを認識するＴ細胞レセプターにより、抗原を認識する。
【００３３】
細胞性免疫／細胞性免疫応答：
細胞性免疫は典型的にはマクロファージ、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球の活性化および、抗原に応答した多様なサイトカイン類の放出に関係する。より一般的には、細胞性免疫は抗体に基づくのではなく、免疫システムの細胞の活性化に基づいている。典型的には、細胞性免疫応答は例えば、細胞（例えば、樹状細胞や他の細胞のような、表面に異物抗原のエピトープを提示する特異的な免疫細胞）中でアポトーシスを誘発可能な抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球を活性化することによって特徴づけられ得る。そのような細胞はウイルスに感染または細胞内細菌、あるいは腫瘍抗原を提示する癌細胞に感染している可能性がある。更なる特徴は、マクロファージおよびナチュラルキラー細胞を病原体を破壊できるように活性化することおよび、細胞を活性化して、適応性応答および先天性免疫応答に関わる他の細胞の機能に影響する多様なサイトカインを分泌させることである。
【００３４】
免疫原：
本発明において、免疫原とは典型的には免疫応答を賦活することができる化合物であると理解され得る。免疫原はペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質であることが望ましい。特に望ましい実施例において、本発明の精神における抗原とは、提供された核酸分子の翻訳の産物であり、ここに定義する人工核酸分子であることが望ましい。典型的には、免疫原は少なくとも適応性免疫応答を誘発する。
【００３５】
抗原：
本発明において「抗原」とは典型的には、免疫システムによって（望ましくは適応性免疫応答によって）認識され得る物質であって、例えば、適応性免疫応答の一部としての抗体および／または抗原特異的Ｔ細胞の形成によって、抗原特異的免疫応答を引き起こすことが可能な物質のことを指す。典型的には、抗原は、ＮＨＣ細胞によってＴ細胞に対し提示され得るペプチドまたはタンパク質であり得る、または含み得る。
【００３６】
エピトープ：
エピトープ（「抗原決定基」とも呼ばれる）は、Ｔ細胞エピトープとＢ細胞エピトープとに分けることができる。本発明においてＴ細胞または当該タンパク質の一部は、望ましくは６からおよそ２０またはさらにそれ以上の長さのアミノ酸を含み得る。当該の長さのアミノ酸とは例えば、望ましくはおよそ８個からおよそ１０個のアミノ酸（例えば８個、９個、または１０個、もしくは更に１１個または１２個のアミノ酸）を有するＨＣクラスＩ分子により加工または提示されるフラグメント、または、望ましくはおよそ１３個またはそれ以上のアミノ酸（例えば１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個またはさらにそれ以上のアミノ酸）を有するＨＣクラス２分子により加工または提示されるフラグメントであり、これらのフラグメントはアミノ酸配列の任意の部分から選択され得る。これらのフラグメントは典型的には、ペプチドフラグメントとＭＨＣ分子から成る複合体の形で、Ｔ細胞によって認識される。すなわち、当該フラグメントは典型的には、本来の形では認識されることはない。Ｂ細胞エピトープは典型的には、ここに定義する（本来の）タンパク質またはペプチド抗原の外側の表面に位置するフラグメントである。ここに定義するタンパク質またはペプチド抗原は、望ましくは５個から１５個のアミノ酸を有することが望ましく、５個から１２個のアミノ酸を有することがより望ましく、６個から９個のアミノ酸を有することが更により望ましく、抗体によって認識され得る。すなわち、本来の形で認識され得る。
【００３７】
そのようなタンパク質またはペプチドのエピトープはさらに、そのようなタンパク質またはペプチドの、ここに言及されるいかなる変種からも選択され得る。ここにおいて、抗原決定基は、配座または不連続エピトープであってもよい。当該配座または不連続エピトープは、ここに定義するように当該タンパク質またはペプチドのアミノ酸配列において不連続であるが、一つのポリペプチド鎖から構成される３次元構造あるいは連続または直線エピトープのなかで共に見受けられる、ここに定義するタンパク質またはペプチドの断片から構成される。
【００３８】
アジュバント／アジュバント組成物：
最も広い意味では、アジュバントまたはアジュバント組成物とは典型的には、薬剤やワクチンなど他の因子の効果を変容させ（例えば、向上させる）得る、薬理学的および／または免疫学的因子のことである。広い意味に解釈され、物質の広域スペクトラムのことを指す。典型的には、これらの物質は抗原の免疫原性を向上させることができる。例えば、アジュバントは先天性免疫システムにより認識され得、例えば、先天性免疫システムを誘発し得る。「アジュバント」は典型的には適応性免疫応答を誘発することはない。その意味においては、「アジュバント」は抗原には該当しない。アジュバントの作用様式は、適応性免疫応答を生ずる、抗原によって引き起こされる効果とは異なる。
【００３９】
タンパク質：タンパク質とは典型的には一つまたはそれ以上のペプチドまたはポリペプチドを含む。タンパク質は典型的には３次元形状に折りたたまれている。このことは当該タンパク質が生物的機能を発揮するために要求され得る。
【００４０】
ペプチド：ペプチドまたはポリペプチドは典型的には、ペプチド結合により結びついているアミノ酸モノマーのポリマーである。典型的には５０個以下のモノマーユニットを含有する。しかしながら、ペプチドという用語は５０個以上のモノマーユニットを含む分子であることの否認であるわけではない。長いペプチドはポリペプチドとも呼ばれ、典型的には５０個から６００個のモノマーのユニットを有している。
【００４１】
フラグメントつまりタンパク質の部位：本発明におけるフラグメントつまりタンパク質の部位とは典型的には、タンパク質のアミノ酸配列の連続的な部位に対応するペプチドであると理解され得る。およそ６個からおよそ２０個または更にそれ以上の長さのアミノ酸を有していることが望ましい。例えば、望ましくはおよそ８個からおよそ１０個（例えば、８個、９個、あるいは１０個（もしくは更に１１個または１２個））の長さのアミノ酸
を有するＭＨＣクラスＩにより加工または提示される部位、または、望ましくはおよそ１３個またはそれ以上（例えば、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個または更にそれ以上）の長さのアミノ酸を有するＭＨＣクラスＩＩ分子により加工および提示されるフラグメントである。これらのフラグメントは当該のアミノ酸配列の任意の部位から選択され得る。これらのフラグメントは典型的には、ペプチドフラグメントとＭＨＣ分子から成る複合体の形で、Ｔ細胞により認識される。すなわち、当該フラグメントは典型的には、本来の形では認識されることはない。ここに定義するフラグメントつまりタンパク質の部位はまた、それらのタンパク質のエピトープまたは機能的部位を含み得る。望ましくは、本発明においてフラグメントつまりタンパク質の部位は抗原、特に、例えば抗原決定基（「エピトープ」とも呼ばれる）などの免疫原であり、抗原的特性を有し、適応性免疫応答を誘発する。ゆえに、タンパク質またはペプチドのフラグメントは、少なくとも一つの、それらのタンパク質またはペプチドのエピトープを含み得る。更には、細胞外ドメイン、細胞内ドメインまたは膜貫通ドメインのような、タンパク質のドメイン、および、タンパク質の中途停止版も、タンパク質のフラグメントを含むと理解され得る。
【００４２】
医薬的有効量：
本発明における医薬的有効量とは典型的には、例えば病原的な状況において、免疫応答、発現されるペプチドまたはタンパク質の病原性レベルの変化、または欠乏している遺伝子産物の代行のような、医薬的な効果を誘導するのに十分な量として理解される。
【００４３】
配列同一性：
２またはそれ以上の配列は、同じ長さおよび順番のヌクレオチドまたはアミノ酸を示す場合、同一である。同一性のパーセンテージは典型的には、二つの配列が同一である度合いを表す。すなわち、典型的には、配列場所において参照配列の同一ヌクレオチドに相当するヌクレオチドのパーセンテージを表す。同一性の度合いの検定のためには、比較される配列は、同じ長さ（すなわち、比較される配列の最長の配列の長さ）を示すものである必要がある。このことは、８個のヌクレオチドから成る第一の配列は、１０個のヌクレオチドから成る、第一の配列を含む第二の配列に対し８０％同一であることを意味する。言い換えれば、本発明において、配列の同一性は、同じ長さを有する二つまたはそれ以上の配列中で同じ場所を有する配列のヌクレオチドのパーセンテージと関連することが望ましい。ギャップは通常、配列中の実際の場所とは関係なく、非同一の場所として見なされる。
【００４４】
配列のフラグメント：配列のフラグメントは典型的には、例えば核酸分子またはアミノ酸配列などの全ての長さの配列の、より短い部分である。したがって、フラグメントは、典型的には、当該の全ての長さの配列内の相当する範囲と同一の配列から構成される。本発明において望ましい配列のフラグメントは、構成物の連続した範囲から成る。構成物の連続した範囲とは例えば、当該のフラグメントが由来する分子の構成物の連続した範囲に相当するヌクレオチドまたはアミノ酸などである。こうした構成物の連続した範囲は、当該のフラグメントが由来する全体の（すなわち、全ての長さの）分子の、少なくとも３０％、より望ましくは少なくとも４０％、より望ましくは少なくとも５０％、更により望ましくは少なくとも６０％、更により望ましくは少なくとも７０％、更により望ましくは少なくとも８０％を占める。
【００４５】
核酸分子の配列：核酸分子の配列とは典型的には、核酸分子のヌクレオチドの特定および個別の順番（すなわち配列）のことであると理解される。タンパク質またはペプチドの配列は、典型的にはそのアミノ酸の順番すなわち配列のことであると理解される。
【００４６】
安定化核酸分子：安定化核酸分子とは、望ましくはＤＮＡまたはＲＮＡ分子であって、例えば環境的要因や（例えばエキソまたはエンドヌクレアーゼなどによる）酵素消化などによる崩壊または分解に対して、修飾されていない核酸分子よりも安定的であるように修飾された核酸分子のことである。望ましくは、本発明における安定化核酸分子は、原核細胞または真核細胞（望ましくはヒト細胞のような哺乳動物細胞）といった細胞の中で安定化される。安定化効果はまた、例えば安定化核酸分子を含む医薬的組成物の製造過程などにおけるバッファ溶液中など、細胞の外でも実現され得る。
【００４７】
非相同配列：二つの配列が同じ遺伝子から由来不可能な場合、当該二つの配列は典型的には「非相同」であると理解される。すなわち、非相同配列は同じ生物から由来可能であり得るが、それらは自然に（天然に）同じ核酸分子の中で（例えば、同じｍＲＮＡの中などで）発生することはない。
【００４８】
核酸分子：核酸分子とは、核酸構成要素を含む（望ましくは、核酸構成要素から構成される）分子である。核酸分子という用語は、望ましくはＤＮＡまたはＲＮＡ分子を指す。望ましくは「ポリヌクレオチド」という用語と同義的に使用される。望ましくは、核酸分子は、糖／リン酸骨格のホスホジエステル結合により互いに共有結合的に結びついたヌクレオチドモノマーを含む、または、から構成されるポリマーである。
【００４９】
オープンリーディングフレーム：本発明におけるオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）とは典型的には、ペプチドまたはタンパク質に翻訳され得る数組の三連ヌクレオチドの配列であり得る。オープンリーディングフレームは望ましくは、開始コドン（すなわち、通常はアミノ酸メチオニン（ＡＴＧまたはＡＵＧ）をコードする３つの連続したヌクレオチドの組み合わせ）を、自身の５’末端および後続領域に含有する。当該の後続領域は通常、ヌクレオチド３つ分の長さである。ＯＲＦは望ましくは停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、ＴＧＡ）によって終結される。典型的には、これはオープンリーディングフレームの唯一の停止コドンである。したがって、本発明におけるオープンリーディングフレームは望ましくは、３の倍数の数の多数のヌクレオチドから成るヌクレオチド配列であり、当該ヌクレオチド配列は開始コドン（例えばＡＴＧまたはＡＵＧ）で始まり、望ましくは停止コドン（例えば、それぞれＴＡＡ、ＴＧＡ、またはＴＡＧまたはＵＡＡ、ＵＡＧ、ＵＧＡ）で終了する。オープンリーディングフレームは孤立され得、また、例えばベクターまたはｍＲＮＡのような、より長い核酸配列の中に取り込まれ得る。オープンリーディングフレームはまた、「タンパク質コーディング領域」と呼ばれることもある。
【００５０】
ＤＮＡ：ＤＮＡはデオキシリボ核酸の一般的な略称である。デオキシリボ核酸は核酸分子すなわち、ヌクレオチドから成るポリマーである。これらのヌクレオチドは通常は、デオキシアデノシン一リン酸、デオキシチミジン一リン酸、デオキシグアノシン一リン酸、およびデオキシシチジン一リン酸のモノマーであり、それ自体は糖部（デオキシリボース）、基部およびリン酸部から成り、特徴的な骨格構造によって重合している。骨格構造は典型的には、第一のモノマーのヌクレオチドの糖部（すなわちデオキシリボース）と、第二の隣接するモノマーのリン酸部の間のホスホジエステル結合によって形成される。モノマーの特定の順番、すなわち、糖／リン酸骨格に結合している基部の順番は、ＤＮＡ配列と呼ばれている。ＤＮＡは一本鎖でもあり得るし、二本鎖でもあり得る。二本鎖の形状において、第一鎖のヌクレオチドは典型的には、例えばＡ／ＴベースペアリングおよびＧ／Ｃベースペアリングにより、第二鎖のヌクレオチドと複合する。
【００５１】
ＲＮＡ、ｍＲＮＡ：ＲＮＡとはリボ核酸の一般的な略称である。ＲＮＡは核酸分子、すなわち、ヌクレオチドから成るポリマーである。これらのヌクレオチドは通常、アデノシン一リン酸、ウリジン一リン酸、グアノシン一リン酸およびシチジン一リン酸のモノマーであり、いわゆる骨格に沿って互いに結びついている。骨格は、第一のモノマーの糖（すなわちリボース）と、第二の隣接するモノマーのリン酸部の間のホスホジエステル結合によって形成される。特定のモノマー配列は、ＲＮＡ配列と呼ばれる。通常ＲＮＡは、例えば細胞内部での、ＤＮＡ配列の転写によって獲得可能であり得る。真核細胞の中では、転写は典型的には核またはミトコンドリアの内部で実行される。インビボでは、ＤＮＡの転写は通常、いわゆる未熟ＲＮＡを生じ、未熟ＲＮＡはいわゆるメッセンジャーＲＮＡ（通常ｍＲＮＡと略称される）に加工される必要がある。例えば真核生物における、未熟ＲＮＡの加工は、スプライシング、５’キャッピング、ポリアデニル化、核またはミトコンドリアからの放出などの、多数の異なるポスト転写修飾を含む。これらの工程の全体は、ＲＮＡの成熟化とも呼ばれる。成熟メッセンジャーＲＮＡは通常、特定のペプチドまたはプロテインのアミノ酸配列に翻訳され得るヌクレオチド配列を提供する。典型的には、成熟ｍＲＮＡは、５’キャップ、選択的に５’ＵＴＲ、オープンリーディングフレーム、選択的には３’ＵＴＲ、およびポリＡ配列を含む。メッセンジャーＲＮＡとは別に、転写および／または翻訳に関わり得るいくつかの非コードタイプのＲＮＡが存在する。「ＲＮＡ」という用語はさらに、ウイルスＲＮＡ、レトロウイルスＲＮＡおよびレプリコンＲＮＡなどの、他のコードＲＮＡ分子を包含する。
【００５２】
バイシストロン性ＲＮＡ、マルチシストロン性ＲＮＡ：双シストロン性または多シストロン性ＲＮＡは典型的には、ＲＮＡ、望ましくはｍＲＮＡであり、典型的には２つ（バイシストロン性）またはそれ以上（マルチシストロン性）のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有しうる。ここでのオープンリーディングフレームとは、ペプチドまたはタンパク質に翻訳可能なコドンの配列のことである。
【００５３】
Ｇ／Ｃ修飾：Ｇ／Ｃ修飾核酸とは典型的には、ここに定義する核酸、望ましくはＲＮＡ分子であって、望ましくは野生型配列に比べてグアノシンおよび／またはシトシンヌクレオチドを多く含む、修飾野生型配列に基づく。そのような数の増加は、アデノシンまたはチミジンヌクレオチドを含むコドンの、グアノシンまたはシトシンヌクレオチドを含むコドンへの置換によって生じ得る。富化Ｇ／Ｃ含有量をＤＮＡまたはＲＮＡのコード領域内に生じさせる場合、当該の遺伝子的コードの変質を活用する。したがって、当該のコドン置換は、望ましくは、コードされるアミノ酸残基は変化させずに、核酸分子のＧ／Ｃ含有量だけを増大させる。
【００５４】
５’キャップ：５’キャップとは典型的には、構成要素、典型的には修飾ヌクレオチドの構成要素であり、一般的には成熟ｍＲＮＡの５’末端に「キャップ」をする。５’キャップは典型的には修飾ヌクレオチドによって、特にグアニンヌクレオチドの誘導体によって形成され得る。望ましくは、５’キャップは５’−５’−三リン酸結合を介して５’末端に結合している。５’キャップはメチル化されてもよく、例えばｍ７ＧｐｐｐＮは、Ｎが、５’キャップを有する核酸の末端５’ヌクレオチド（典型的にはＲＮＡの５’末端）である。天然に存在する５’キャップはｍ７ＧｐｐｐＮである。
【００５５】
免疫賦活性ＲＮＡ：本発明における免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）は典型的には、先天性免疫応答を誘導可能なＲＮＡのことである。通常はオープンリーディングフレームを有しておらず、従ってペプチド抗原または免疫原を提供しないが、例えば特定の種類のＴｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）または他の適切なレセプターに結合することにより、免疫応答を誘発する。しかしもちろん、オープンリーディングフレームを有しペプチド／タンパク質をコードするｍＲＮＡも、先天性免疫応答を誘導し得、従って、免疫賦活性ＲＮＡであり得る。
【００５６】
ポリＡ配列：ポリＡ配列（ポリＡテールまたは３’−ポリＡテールとも呼ばれる）とは、典型的にはアデニンヌクレオチドの配列のことであると理解される。例えば、およそ４００個までのヌクレオチドであり、例えばおよそ２０個からおよそ４００個まで、望ましくはおよそ５０個からおよそ４００個まで、より望ましくはおよそ５０個からおよそ３００個まで、さらにより望ましくは５０個から２５０個まで、最も望ましくはおよそ６０個からおよそ２５０個までのアデニンヌクレオチドである。ポリＡ配列は典型的にはｍＲＮＡの３’末端に位置する。本発明においては、ポリＡ配列はｍＲＮＡ内または他の任意の核酸分子内に、例えばベクターの転写によって位置し得る。他の任意の核酸分子内とは例えばベクター中であり、例えば、例えばベクターの転写によりＲＮＡ（望ましくはｍＲＮＡ）の生産の鋳型として働くベクターの中のことである。
【００５７】
ポリアデニル化：ポリアデニル化とは典型的には、ＲＮＡ分子（例えば未熟ｍＲＮＡ）などの核酸分子に対する、ポリＡ配列の付加のことであると理解される。ポリアデニル化はいわゆるポリアデニル化信号によって誘導され得る。この信号は望ましくは、ポリアデニル化を受ける核酸分子（例えばＲＮＡ分子）の３’末端におけるヌクレオチドストレッチの中に位置する。ポリアデニル化信号は典型的にはアデニンおよびウラシル／チミンヌクレオチド（望ましくは六量体配列ＡＡＵＡＡＡ）からなる六量体を含む。他の配列、望ましくは六量体配列もまた考えられる。ポリアデニル化は典型的にはプレｍＲＮＡ（未熟ｍＲＮＡとも呼ばれる）の加工の間に発生する。典型的には、（プレｍＲＮＡから成熟ｍＲＮＡへの）ＲＮＡ成熟化は、ポリアデニル化の工程を含む。
【００５８】
３’−非翻訳領域（３’ＵＴＲ）：３’ＵＴＲは典型的には、ｍＲＮＡのタンパク質コード領域（すなわちオープンリーディングフレーム）とポリＡ配列の間に位置する、ｍＲＮＡの一部分である。当該ｍＲＮＡの３’ＵＴＲはアミノ酸配に翻訳されない。３’ＵＴＲは一般的に、遺伝子発現工程の間にそれぞれのｍＲＮＡに転写される遺伝子によってコードされる。ゲノム配列は最初に、選択的イントロンを含む未熟ｍＲＮＡに転写される。当該の未熟ｍＲＮＡはその後さらに、成熟化工程において、成熟ｍＲＮＡに加工される。この成熟化工程は、選択的イントロンを切り取るための未熟ｍＲＮＡの５’キャッピングおよびスプライシング、ならびに、未熟ｍＲＮＡや選択的エンド／エキソヌクレアーゼ開裂などの３’末端の修飾を含む。本発明において、３’ＵＴＲは、タンパク質コード領域の停止コドンに対して３’の位置（望ましくは、タンパク質コード領域の停止コドンに対し直近の３’の位置）にあり、またポリＡ配列の５’側に（望ましくは、ヌクレオチドに対し、当該ポリＡ配列に直近の５’）伸長している、成熟ｍＲＮＡの配列に相当する。「相当する」という用語は、当該の３’ＵＴＲ配列を定義するために用いられるｍＲＮＡ配列中などのＲＮＡ配列、または、そのようなＲＮＡ配列に相当するＤＮＡ配列であり得るという意味である。本発明において、「遺伝子の３’ＵＴＲ」という語（例えば「アルファまたはベータグロブリンの３’ＵＴＲ」）は、この遺伝子から由来する成熟ｍＲＮＡ（すなわち、遺伝子の転写および未熟ｍＲＮＡの成熟化により得られるｍＲＮＡ）の３’ＵＴＲに相当する配列のことである。「遺伝子の３’ＵＴＲ」という語は、３’ＵＴＲのＤＮＡ配列およびＲＮＡ配列を包含する。
【００５９】
５’−非翻訳領域（５’ＵＴＲ）は典型的には、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の特定の部位のことであると理解される。ｍＲＮＡのオープンリーディングフレームの５’に位置する。典型的には、５’ＵＴＲは転写開始部位から始まり、オープンリーディングフレームの開始コドンより１ヌクレオチド前で終わる。５’ＵＴＲは遺伝子発現を制御するためのエレメント（制御エレメントとも呼ばれる）を含み得る。そのような制御エレメントは例えば、リボソーム結合部位または５’末端オリゴピリミジン区域である。５’ＵＴＲは、例えば５’キャップの付加によりポスト転写的に修飾され得る。本発明において５’ＵＴＲは、５’キャップと開始コドンの間に位置する、成熟ｍＲＮＡの配列に相当する。望ましくは、５’ＵＴＲは５’キャップに対して３’の位置にあるヌクレオチドから（望ましくは５’キャップに対して直近の３’の位置にあるヌクレオチドから）、タンパク質コード領域の開始コドンに対して５’の位置にあるヌクレオチドに向かって（望ましくはタンパク質コード領域の開始コドンに対して直近の５’の位置にあるヌクレオチドに向かって）伸長する配列に相当する。成熟ｍＲＮＡの５’キャップに対して直近の３’の位置にあるヌクレオチドは典型的には、転写開始部位に相当する。「相当する」という用語は、５’ＵＴＲ配列は、例えば５’ＵＴＲ配列を定義するために使われるｍＲＮＡ配列、または、そのようなＲＮＡに相当するＤＮＡ配列の中のＲＮＡ配列であり得るということを意味する。本発明において、「遺伝子の５’ＵＴＲ」という用語は、この遺伝子から由来する成熟ｍＲＮＡ（すなわち、遺伝子の転写および未熟ＲＮＡの成熟化によって得られるｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲに相当する配列のことである。「遺伝子の５’ＵＴＲ」という用語は、５’ＵＴＲのＤＮＡ配列およびＲＮＡ配列を包含する。
【００６０】
５’末端オリゴピリミジン区域（ＴＯＰ）：５’末端オリゴピリミジン区域（ＴＯＰ）は典型的には、核酸分子の５’末端領域（例えば特定のｍＲＮＡ分子の５’末端領域、または、特定の遺伝子の、例えば非転写領域などの機能的構成要素）に位置するピリミジンヌクレオチドのストレッチのことである。当該の配列はシチジンで始まるが、シチジンは通常転写開始領域に相当し、シチジンには通常およそ３個から３０個のピリミジンヌクレオチドが後続する。例えば、ＴＯＰは３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、あるいはさらにそれ以上のヌクレオチドを含み得る。ピリミジンストレッチおよび、したがって５’ＴＯＰは、ＴＯＰの下流に位置する第一プリンヌクレオチドに対して５’ヌクレオチド一つ分手前で終了する。５’末端オリゴピリミジン区域を含むメッセンジャーＲＮＡとはしばしば、ＴＯＰｍＲＮＡを指す。したがって、そのようなメッセンジャーＲＮＡを提供する遺伝子とは、ＴＯＰ遺伝子を指す。ＴＯＰ配列は例えば、ペプチド伸長因子およびリボソームタンパク質をコードする遺伝子およびｍＲＮＡの中に発見されている。
【００６１】
ＴＯＰモチーフ：本発明において、ＴＯＰモチーフとは、上記に定義した５’ＴＯＰに相当する核酸配列のことである。従って、本発明におけるＴＯＰモチーフとは望ましくは、３〜３０個の長さを有するピリミジンヌクレオチドストレッチである。ＴＯＰモチーフは、少なくとも３個のピリミジンヌクレオチドから成ることが望ましく、少なくとも４個のピリミジンヌクレオチドから成ることが望ましく、少なくとも５個のピリミジンヌクレオチドから成ることが望ましく、少なくとも６個のピリミジンヌクレオチドから成ることがより望ましく、少なくとも７個のピリミジンヌクレオチドから成ることがより望ましく、少なくとも８個のピリミジンヌクレオチドから成ることが最も望ましく、当該のピリミジンヌクレオチドストレッチは、自身の５’末端のシトシンヌクレオチドから開始することが望ましい。ＴＯＰ遺伝子およびＴＯＰｍＲＮＡにおいて、ＴＯＰモチーフは望ましくは、自身の５’末端の転写開始部位から始まり、前記遺伝子またはｍＲＮＡの中の第一プリン残基に対して５’ヌクレオチド一つ分手前で終了する。本発明の精神におけるＴＯＰモチーフは望ましくは、５’ＵＴＲを表す配列の５’末端、または、５’ＵＴＲをコードする配列の５’末端に位置する。従って、望ましくは、３個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドのストレッチがそれぞれの配列（例えば本発明による修飾ＲＮＡ、本発明による修飾ＲＮＡの５’ＵＴＲエレメント、またはここで定義されるＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲから由来する核酸配列）の５’末端に位置する場合、この３個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドのストレッチは本発明の精神において「ＴＯＰモチーフ」と呼ばれる。言い換えれば、３個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドのストレッチで、５’ＵＴＲや５’ＵＴＲエレメントの５’末端に位置しておらず、５’ＵＴＲまたは５’ＵＴＲエレメント内の他のどこにでも位置している場合は、望ましくは「ＴＯＰモチーフ」とは呼ばない。
【００６２】
ＴＯＰ遺伝子：ＴＯＰ遺伝子は典型的には５’末端オリゴピリミジン区域の提示によって特徴づけられる。さらに、ほとんどのＴＯＰ遺伝子は成長関連翻訳的制御によって特徴づけられる。しかしながら、組織特異的翻訳的制御のＴＯＰ遺伝子も知られている。上記に定義したように、ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲは、ＴＯＰ遺伝子由来の成熟ｍＲＮＡの５’ＵＴＲに相当し、好ましくは、当該５’キャップに対して３’の位置のヌクレオチドから、当該開始コドンに対して５’の位置のヌクレオチドに向かって伸長する。ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲは典型的には如何なる開始コドンも含んでおらず、上流ＡＵＧ（ｕＡＵＧ）または上流オープンリーディングフレーム（ｕＯＲＦ）を全く含まないことが望ましい。ここにおいて、上流ＡＵＧおよび上流オープンリーディングフレームは典型的には、翻訳されるべきオープンリーディングフレームの開始コドン（ＡＵＧ）の５’に生じるＡＵＧおよびオープンリーディングフレームのことであると理解される。ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲは一般的に比較的短い。ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲの長さは、ヌクレオチド２０個からヌクレオチド５００個までの間であり、典型的にはヌクレオチドおよそ２００個より短く、ヌクレオチドおよそ１５０個より少ないことが望ましく、ヌクレオチドおよそ１００個より少ないことがより望ましい。本発明の精神における典型的なＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲは、特許出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１２／００２４４８ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号１−１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２１−１３６３による配列中の当該開始コドン（すなわち当該ＡＵＧ）あるいはその相同体または変異体（それらの開示は、本明細書に参照によって組み込まれている）に対して５の位置のヌクレオチドに対し直近の５’の位置のヌクレオチドに向かって伸長する核酸配列のことである。ここでは、特に望ましいＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲのフラグメントは、５’ＴＯＰモチーフを欠いたＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲである。「ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ」という用語は、天然に存在するＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲを指すことが望ましい。
【００６３】
非修飾基準ＲＮＡ：天然に存在する通りに野生型ＲＮＡに相当するＲＮＡ。例えば、非修飾基準ＲＮＡは、天然に存在するヌクレオチド（天然に存在する５’キャップ構造ｍ７ＧｐｐｐＮ、選択的には天然に存在する５’ＵＴＲ、天然に存在するｍＲＮＡ配列中に存在する場合は野生型オープンリーディングフレーム、選択的には、天然に存在するｍＲＮＡ配列中に存在する場合は、天然に存在する３’ＵＴＲ、および、おおよそ３０個のアデノシンのポリＡ配列などの、天然に存在する修飾、および／または天然に存在する非翻訳領域を含むヌクレオチドを含む）を含むｍＲＮＡ配列に相当する。
【００６４】
トランスフェクション：「トランスフェクション」という用語は、ＤＮＡまたはＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）分子などの核酸分子の、細胞、望ましくは真核細胞への導入のことを指す。本発明において、「トランスフェクション」という用語は、核酸分子を細胞内に（望ましくは哺乳類の細胞などの真核細胞内に）導入するための、技術を有する者に公知の任意の方法を含む。かかる方法は、例えば、エレクトロポレーション、例えばカチオン性脂質および／またはリポソームベースのリポフェクション、リン酸カルシウム析出、ナノ粒子ベーストランスフェクション、ウイルスベーストランスフェクション、あるいは、ＤＥＡＥデキストランまたはポリエチレンイミンなどのカチオン性ポリマーベースのトランスフェクション、を含む。導入は、非ウイルス性であることが望ましい。
【００６５】
担体／高分子担体：本発明において担体とは典型的には、他の化合物（カーゴ）の輸送および／または複合化を促進する化合物のことであり得る。高分子担体は典型的にはポリマーの形の担体である。担体はそのカーゴと、共有結合性または非共有結合性の相互作用によって結びついていて良い。担体は、例えばＲＮＡやＤＮＡなどの核酸を、標的細胞まで届け得る。担体は―実施例によっては―、カチオン性化合物であり得る。
【００６６】
カチオン性化合物：「カチオン性化合物」という用語は典型的には、荷電した分子であって、典型的にはｐＨ値１から９までの正に荷電しており（カチオン）、ｐＨ値が９以下（例えば５から９）であることが、または８以下（例えば５から８）、または７以下（例えば５から７）であることが望ましく、生理的ｐＨ（例えば７．３から７．４）であることが最も望ましい。したがって、カチオン性化合物は、任意の正に荷電した化合物またはポリマーであり得、特にインビボの生理学的条件下で正に荷電したカチオン性ペプチドまたはタンパク質であることが望ましい。「カチオン性ペプチドまたはタンパク質」は、少なくとも一つの正に荷電したアミノ酸、または一つ以上の正に荷電したアミノ酸（例えば、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、ＬｙｓまたはＯｒｎから選択される）を含み得る。したがてって、「ポリカチオン性」化合物もまたこの範囲内であり、付与された条件下で１以上の正の電荷を示す。
【００６７】
ワクチン：ワクチンとは典型的には、少なくとも１つの抗原（望ましくは免疫原）を提供する生理的または治療的物質のことであると理解される。当該の抗原または免疫原は、ワクチン接種に好適な任意の物質から由来しうる。例えば、当該の抗原または免疫原は病原体から（例えば、細菌またはウイルス粒子などから）、あるいは癌組織または腫瘍性組織から由来し得る。当該の抗原または免疫原は身体の適応性免疫システムを刺激して、適応性免疫応答を提供する。
【００６８】
ビヒクル：ビヒクルとは典型的には、医薬的活性化合物などの化合物の貯蔵、輸送、および／または投与のために好適な物質のことであると理解される。例えば、ビヒクルは医薬的活性化合物の貯蔵、輸送、および／または投与のために生理的に受容可能な液体であり得る。
【００６９】
発明の詳細な説明
最初の側面において、本発明は、少なくとも１つのペプチドまたはタンパク質をコードする少なくとも一つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む修飾リボ核酸（ＲＮＡ）を提供し、当該ＲＮＡは、自身によりコードされるタンパク質またはペプチドの発現を促進する少なくとも一つの修飾を含む。前記のコードされるタンパク質またはペプチドの発現は、ジェット注射による当該修飾ＲＮＡの投与によって更に促進される。ここでの、ＲＮＡの当該の少なくとも一つの修飾に起因する、タンパク質生成における促進を、ここで「修飾に伴うタンパク質発現促進」と呼ぶ。
【００７０】
当該ＲＮＡのジェット注射に起因する、タンパク質生成における促進を、ここで、修飾ＲＮＡが使用されるか非修飾基準ＲＮＡが使用されるかに関係なく、「注射に伴うタンパク質発現促進」と呼ぶ。基準ＲＮＡ  「修飾に伴うタンパク質発現促進」という用語は、以下の状況のことも指す。すなわち、特定の時間の間に計測された、修飾ＲＮＡから生成されたタンパク質の総量が、当該修飾を欠く非修飾基準ＲＮＡから生成されるタンパク質の総量と比較して促進されている状況。または、特定の時点に計測された、当該修飾ＲＮＡから生成されたタンパク質レベルが、当該修飾を欠く非修飾基準ＲＮＡから生成されるタンパク質レベルと比較して促進されている状況である。
【００７１】
「注射に伴うタンパク質発現促進」という用語は、以下の状況のことも指す。すなわち、特定の時間の間に計測された、ジェット注射により投与されたＲＮＡから生成されたタンパク質の総量が、従来の針注射により投与された同じＲＮＡから生成されるタンパク質の総量と比較して促進されている状況。または、特定の時点に計測された、ジェット注射により投与されたＲＮＡから生成されたタンパク質レベルが、従来の針注射により投与された同じＲＮＡから生成されるタンパク質レベルと比較して促進されている状況である。
【００７２】
本発明によれば、当該修飾ＲＮＡの当該少なくとも一つの修飾と、ジェット注射による投与は、当該修飾ＲＮＡによりコードされるタンパク質またはペプチドの発現に対し相乗効果を有する。言い換えると、被験体／組織に非修飾基準ＲＮＡを投与するために従来の針注射を用いることにより得られる発現と比較した、被験体／組織に当該修飾ＲＮＡを投与するためにジェット注射を用いることにより得られる発現促進は、非修飾基準ＲＮＡと修飾ＲＮＡの両方を同じ様式で投与した場合の、非修飾基準ＲＮＡと比べた、修飾ＲＮＡを用いることにより得られる発現促進の量（「修飾に伴うタンパク質発現促進」）よりも大きく、また、ジェット注射以外の方法、特に従来の針注射により投与された同じ（非修飾）ＲＮＡと比べた、ジェット注射により投与された（非修飾）ＲＮＡにより得られる発現促進（「注射に伴うタンパク質発現促進」）よりも大きい。
【００７３】
ここにおいて、当発明者らは驚くべきことに、コードされるタンパク質のタンパク質発現を促進する少なくとも一つの修飾を含む修飾ＲＮＡの、ジェット注射による投与が、コードされるタンパク質の発現を、予想よりもずっと促進したことを発見した。ジェット注射による投与は、タンパク質発現において、修飾ＲＮＡおよび非修飾基準ＲＮＡに対して同じ効果を有するだろうと予想されていた。
【００７４】
本発明において、非修飾基準ＲＮＡと比べた場合、「修飾に伴うタンパク質発現」が発現の開始後の特定の時点において促進され得、または、発現の開始後の特定の期間の総タンパク質生成が促進され得る。従って、発現の開始後（またはそれぞれの修飾ＲＮＡの注射後）の特定の時点で、例えば、注射後６、１２、２４、４８、または７２時間後に観測されるタンパク質レベル、または、例えば６、１２、２４，４８または７２時間の期間中に生成されるタンパク質の総量は、非修飾基準ＲＮＡの場合の、発現の開始後（または注射後）の同時点で観測されるタンパク質レベル、または同期間中に生成されるタンパク質総量より高いことが望ましい。
【００７５】
望ましくは、ＲＮＡのみの修飾（すなわち、ジェット注射による当該修飾ＲＮＡの投与はせずに、例えば、従来の針注射などを用いること）は、当該のコードされるタンパク質の発現を引き起こすが、その発現は、相当する非修飾基準ＲＮＡの場合に観測されるタンパク質生成の、少なくとも１．５倍、より望ましくは少なくとも２倍、より望ましくは少なくとも５倍、更により望ましくは少なくとも１０倍、最も望ましくは少なくとも５０倍である。
【００７６】
当該ＲＮＡの従来の針注射と比べた場合、「注射に伴うタンパク質発現」は、発現の開始後（当該ＲＮＡの注射後）の特定の時点において促進され得、または、発現の開始後の特定の期間の総タンパク質生成が促進され得る。従って、発現の開始後（またはそれぞれの修飾ＲＮＡの注射後）の特定の時点で、例えば、注射後６、１２、２４、４８、または７２時間後に観測されるタンパク質レベル、または、例えば６、１２、２４，４８または７２時間の期間中に生成されるタンパク質の総量は、例えば針注射によってなど、従来の方法によって注射された同じＲＮＡの場合の、発現の開始後（または注射後）の同時点で観測されるタンパク質レベル、または同期間中に生成されるタンパク質総量より高いことが望ましい。
【００７７】
望ましくは、ジェット注射はタンパク質生成を、非修飾基準ＲＮＡから、わずかな程度（例えば１．５倍または２倍）促進する。
【００７８】
本発明によれば、少なくとも一つの修飾を含み、少なくとも一つのオープンリーディングフレームを含むＲＮＡによりコードされるタンパク質の発現は、ジェット注射により更に（相乗効果的に）促進される。従って、タンパク質発現は、などの参照（例えば、同じ修飾を有するＲＮＡで、従来の針注射により投与されるＲＮＡ）と比較して更に促進される。望ましくは、本発明による修飾ＲＮＡのジェット注射によって得られるタンパク質生成は、従来の方法（特に従来の針注射）により投与される非修飾基準ＲＮＡと比較して、少なくとも５倍、より望ましくは１０倍、更により望ましくは５０倍、および更により望ましくは１００倍、促進される。したがって、本発明による修飾ＲＮＡのジェット注射により得られるタンパク質生成における促進は、非修飾基準ＲＮＡのジェット注射により得られるタンパク質発現における促進と比較して、少なくとも１．５倍、より望ましくは少なくとも２倍、より望ましくは少なくとも３倍、より望ましくは少なくとも４倍、更により望ましくは少なくとも５倍、および最も望ましくは少なくとも１０倍である。望ましくは、このことは、発現の開始後の付与された時点でのタンパク質生成においても、また、
付与された期間中（例えば、発現の開始後またはＲＮＡの注射後６、１２、２４、４８または７２時間の期間中）の総タンパク質生成においても当てはまる。
【００７９】
「ジェット注射」という用語は、ここで用いられるように、針を使わない注射方法であって、少なくとも一つの修飾ＲＮＡおよび、選択的に、更に好適な賦形剤を含有する流体が流出口を通して強出され、それにより哺乳動物の皮膚あるいは、注射の設定によっては、皮下組織あるいは筋肉組織を貫通することができる高圧の超極微液流が生まれることを特徴とする方法を指す。原則的に、前記液流は皮膚に穴を形成し、その穴を通じて前記液流が標的組織内に押し出される。望ましくは、ジェット注射は本発明による修飾ＲＮＡの皮内、皮下、または筋肉内注射のために用いられる。
【００８０】
ジェット注射により流体が届けられる当該の標的組織または、組織の層は、使用される液流の特定の特性などのパラメータや、流体が投与される皮膚（および下部組織）の特定のタイプを定義する物理的パラメータに依存する。例えば、処置される組織のコラーゲン繊維の密度および全体的な弾性が、液体ジェットにより達成される貫通に影響を与え得る。いくつかの物理的パラメータが、ジェット注射により得られる結果に影響を与える。機械的な障壁（例えば浅筋膜など）によって隔てられる、組織の異なる層は特に、検討される当該の層の下に位置する前記機械的障壁を貫通せずに、皮膚または下部組織内に十分に深く貫通するために好適な液流を選択することによって扱うことができる。例えば、皮内投与は、浅筋膜を損傷することなく真皮内を貫通する液流の適用によって達成される。投与された液流は真皮中に水平に行き渡る。
【００８１】
液体ジェットを定義するいくつかのパラメータは、注射の効果に対し、および特に、貫通の深さに影響を与え得る。貫通の深さはそれぞれ、特定の組織層を標的とすることを意味する。かかるパラメータの一つは、液流が皮膚表面を打つ圧力である。この圧力は、他の要素の中でも、ジェット噴射口の速度（すなわち、ジェットが注射装置のノズルから出る速度）および、ノズルと、皮膚と、ノズルと皮膚の間の空間を構成する中間物（空気、液体）の間の距離に依存する。典型的には、ジェットの速度（およびジェットにより発揮される圧力）は、ジェットがノズルから出て前記スペースを通るに連れて減少する。皮膚の貫通はさらに、使用されるノズルの寸法によってあらかじめ決定されたジェット直径に依存する。特筆すべきは、パラメータの異なる組み合わせによって、組織貫通および流体配達の面で比較可能な結果が得られることがある。
【００８２】
皮膚を貫通するために、ＲＮＡを含む液流のジェット噴出速度は少なくとも６０ｍ／ｓであることが望ましく、少なくとも８０ｍ／ｓであることがより望ましく、少なくとも１００ｍ／ｓであることが更により望ましく、少なくとも１５０ｍ／ｓであることが最も望ましい。
【００８３】
ジェット注射において用いられるＲＮＡを含む液流は典型的にはとても微細であり、皮膚の貫通が実現可能なように選択される。望ましくは、液体ジェット直径は、望みの標的組織に応じて選択される。液体ジェット直径は望ましくは、ノズル開口部によって制御される。すなわち、ノズル開口部の直径が増大すると液体ジェット直径は増大する。望ましくは、液体ジェット直径がノズル開口部の直径と等しいか、ノズル開口部の直径よりわずかに大きくなるように液体ジェット直径が開口部直径に対応している。典型的には、定常的なジェット噴出速度において、組織中の貫通深度は、液体ジェット直径が大きい方が深くなる。
【００８４】
本発明の一つの実施例において、開口部の直径は２０μｍから６００μｍの間であり、１００μｍから３００μｍの間であることが望ましく、１２０μｍから２５０μｍの間であることがより望ましい。
【００８５】
さらに望ましい実施例において、開口部の直径は２０μｍから１５０μｍの間であり、３０μｍから１３０μｍの間であることが望ましく、４０μｍから１１０μｍの間であることがより望ましく、５０μｍから１００μｍの間であることが更により望ましい。
【００８６】
もう一つの実施例において、開口部の直径は７０μｍから３００μｍの間であり、８０μｍから２００μｍの間であることが望ましく、９０μｍから１８０μｍの間であることがよりのぞましく、１００μｍから１５０μｍの間であることが更により望ましい。
【００８７】
注射時間（すなわち、ジェットが最初に標的皮膚に接触してから、ジェット停止時点までの時間）は１．０秒以下であることが望ましく、０．７秒以下であることがより望ましく、０．３秒以下であることが更により望ましい。注射時間は０．１秒以下であることが最も望ましい。
【００８８】
望ましい実施例において、ジェット注射の工程は、異なるジェット速度によって特徴づけられる少なくとも２つの段階を含む。望ましくはジェット注射は、組織貫通を確実にするように第一ジェット速度が選択される第一段階から始まる。前記第一ジェット速度は多分に、噴出ジェット速度、すなわち液体ジェットが装置のノズルを出る速度に依存する。前記第一速度はさらに、望まれる注射深度に適合される。続いて、第二ジェット速度が、標的組織内に流体を届けるのに適切な第二段階において使用される。前記第二ジェット速度は典型的には第一速度よりも低く、組織の吸収容量を超過しないように選択される。
【００８９】
望ましい実施例において、本発明による修飾ＲＮＡの注射は３つの段階を含む。
【００９０】
最初の貫通段階は、ジェット注射プロセス全体の圧力プロファイルに関して最も高い圧力によって特徴づけられる（したがって、ピーク圧力段階とも呼ばれる）。前記貫通段階の時間は５０秒以下であることが望ましく、１０秒以下であることがより望ましく、５秒以下であることが更により望ましい。前記貫通段階の時間は１秒以下であることが最も望ましい。
【００９１】
前記ピーク圧力段階の後、前記配達段階において圧力は、標的組織内に液流を注射するために十分なレベルを保ちながら減少する。圧力レベルは前記配達段階のあいだ、一定であるか、徐々にのみ減少することが望ましい。前記配達段階の時間は０．８秒以下であることが望ましく、０．５秒以下であることがより望ましく、前記配達段階の時間は０．０１秒から０．３秒までであることが更により望ましく、０．０１から０．１秒であることが最も望ましい。
【００９２】
本発明のこの実施例によるジェット注射プロセスの最終段階は、
当該修飾ＲＮＡ含む液体に働く圧力を、付近の大気圧レベル付近のレベルにまで降下させることによって特徴づけられる（降下段階）。典型的には、圧力は前記配達段階の後、急激に降下する。降下段階の時間は０．３秒以下であることが望ましく、０．２秒以下であることがより望ましく、５０ミリ秒以下であることが更により望ましく、１０ミリ秒以下であることが最も望ましい。
【００９３】
処置される被験体、標的組織および特定の応用に依って、当該修飾ＲＮＡを含む液体の容積は選択される。本発明の望ましい実施例において、投与される液体の容積は０．０５μｌから１０００μｌの間であり、０．１μｌから５００μｌの間であることが望ましく、０．２μｌから２００μｌの間であることがより望ましい。当該修飾ＲＮＡを含む液体の容積は、１００μｌであることが最も望ましい。
【００９４】
ここでは、ジェット注射によって当該修飾ＲＮＡが皮内注射される場合は、当該修飾ＲＮＡを含む液体の容積は０．２から２００μｌの間であることが望ましく、１００μｌであることが最も望ましい。
さらに、ジェット注射により当該ＲＮＡが筋肉内注射される場合は、当該修飾ＲＮＡを含む液体の容積は１００から２０００μｌの間であることが望ましく、５００μｌであることが最も望ましい。
ジェット注射により当該修飾ＲＮＡを含む液体が皮下注射される場合は、当該修飾ＲＮＡを含む液体の容積は１００から２０００μｌの間であることが望ましく、５００μｌであることが最も望ましい。
【００９５】
本発明の意思においては、ここに定義したような配達のために好適な液体ジェットを生み出すことが可能である限り、任意の装置がジェット注射に用いられ得る。当該液体を加速する手段に関する制限はない。例えば、当該液体を放出するためのバネを用いるシステムや、ガスまたは他の推進剤を用いるシステムが使用され得る。さらに、定常的な液体ジェットが用いられてもよく、ここに記述したような少なくとも２つの段階における異なる少なくとも２つの速度を有することが望ましい。代わりに、パルスマイクロジェットが用いられてもよい。望ましくは、商業的に利用可能なジェット注射システムが用いられる。例えば、Ｓｔｒａｉｔｓ，Ｔｒｏｐｉｓ（共にＰｈａｒｍａｊｅｔより），Ｖｉｔａｊｅｔ，Ｂｉｏｊｅｃｔｏｒ  ２０００またはＢｉｏｊｅｃｔ  Ｚｅｔａｊｅｔ（３種ともすべてＢｉｏｊｅｃｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．より），Ｇｌｉｄｅ（Ｇｌｉｄｅ  Ｐｈａｒｍａより），ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒ  Ｖｉｓｉｏｎ（Ａｎｔａｒｅｓより），Ｓｕｍａｖａｌ  ＤｏｓｅＰｒｏ（Ｚｏｇｅｎｉｘより），ＳＱ  Ｐｅｎ（Ｂｅｓｐａｋより）,およびＩｎｊｅｘ（Ｅｑｕｉｄｙｎｅより）である。当該修飾ＲＮＡは、正確で再現可能な、選択前投与量の配達を可能にすることが望ましいシステムを用いることによって注射される。当該装置は、液体ジェットが皮膚内に注射されるための、皮膚の好適な張力を保証することが望ましい。望ましい実施例において、国際特許出願ＷＯ２０１３／０９０３１５中に開示されている装置の開示全体がここに含まれる。望ましくは、修飾ＲＮＡは、ＷＯ２０１３／０９０３１５の図１から図１７Ｃのいずれかに示される無針注射装置の個別の部材のうち少なくとも一つを含む装置を用いて注射され、前記装置は圧縮可能なメインスプリング、駆動ボタン、皮膚張力スプリング、プランジャー体、シールおよびハンマーから成る群から選択される部材を含むことが望ましい。より望ましくは、当該修飾ＲＮＡは、ＷＯ２０１３／０９０３１５の図１から図１０のいずれかに開示される、注射前に圧力が無針シリンジノズルに適用された場合に、メインスプリングが望ましくは当該注射装置のシリンジ末端から横に外れて動かされることが可能になっている装置を用いて注射される。特に望ましい実施例において、当該修飾ＲＮＡはＴｒｏｐｉｓ装置（Ｐｈａｒｍａｊｅｔ）を用いることによって注射される。
【００９６】
本発明によれば、少なくとも一つの修飾を含み、少なくとも一つのオープンリーディングフレームを含むＲＮＡは、ジェット注射によって皮内、筋肉内、または皮下に投与される。さらに望ましい実施例において、当該修飾ＲＮＡは皮内に投与され、ジェット注射は、直径が２０μｍから１５０μｍの間、望ましくは３０μｍから１３０μｍの間、より望ましくは４０μｍから１１０μｍの間、更により望ましくは５０μｍから１００μｍのノズルを用いることによって実行され、ジェット噴出速度は望ましくは少なくとも８０ｍ／ｓ、より望ましくは少なくとも１００ｍ／ｓ、更により望ましくは少なくとも１５０ｍ／ｓであり最も望ましくは少なくとも１９０ｍ／ｓであることを特徴とする。
【００９７】
望ましい実施例において、当該修飾ＲＮＡはＴＲＯＰＩＳ装置（Ｐｈａｒｍａｊｅｔ）を用いることによって皮内投与される。
【００９８】
典型的には、哺乳動物の真皮への、液体の成功した配達は、注射部位の膨疹（水泡とも呼ぶ）の形成によって査定することができる。望ましくは、当該膨疹の直径は少なくとも５ｍｍであり、より望ましくは少なくとも７ｍｍであり、更により望ましくは少なくとも９ｍｍであり最も望ましくは少なくとも１０ｍｍである。
【００９９】
本発明の意思において、「修飾ＲＮＡ」という用語は、特定の時点または特定の期間中に計測される、前記修飾ＲＮＡから生成されるタンパク質またはペプチドの量が、当該修飾を欠くＲＮＡ（非修飾基準ＲＮＡ）と比較して促進されているように修飾された、任意のタイプのリボ核酸を含む。発現におけるこの促進はここでは、上記に定義したように「注射に伴うタンパク質発現促進」という用語で呼ぶ。
【０１００】
本発明によれば、それぞれの、当該修飾を欠くＲＮＡ（「非修飾基準ＲＮＡ」）と比較した際の、当該のコードされたタンパク質の促進された発現によって特徴づけられる修飾ＲＮＡ分子が提供される。修飾ＲＮＡによるインビボのタンパク質生成を査定するために、当該のコードされたタンパク質の発現は標的細胞／組織内への当該修飾ＲＮＡの注射に続いて検定され、当該の非修飾基準ＲＮＡのタンパク質発現と比較される。タンパク質発現を検定するための量的方法は当該技術において公知である（例えば、Ｗｅｓｔｅｒｎ−Ｂｌｏｔ，ＥＬＩＳＡ，質量分析）。ここにおいて特に有用なのは、ルシフェラーゼまたは分泌されたアルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）などのレポータータンパク質の発現の検定である。従って、修飾ＲＮＡまたは非修飾基準ＲＮＡは標的組織内に、例えば従来の針注射またはジェット注射などを介して、望ましくは皮内、筋肉内または皮下注射される。発現の開始から、または当該ＲＮＡの注射から数時間または数日後（例えば６、１２、２４、４８または７２時間後）、注射部位から組織を採取し溶解する。その後、例えばＷｅｓｔｅｒｎ−Ｂｌｏｔ，ＥＬＩＳＡ，質量分析などいくつかの方法を用いて、あるいは、蛍光測定または発光測定により、当該溶解物を使って発現したタンパク質を検出および定量（および、従ってタンパク質発現の有効性を検定）することができる。
【０１０１】
したがって、特定の時点（例えば、発現の開始またはＲＮＡの注射の６、１２、２４、４８または７２時間後）において、修飾ＲＮＡからのタンパク質発現を非修飾基準ＲＮＡからのタンパク質発現と比較した場合、両方のＲＮＡが試験動物に別々に注射され、注射部位からの組織が特定の時点の後に採取され、タンパク質溶解物が、特定の検出方法（例えば、当該技術において公知のＷｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔ，ＥＬＩＳＡなど）のために調節された特定のプロトコルに従って調製され、そして、当該タンパク質は選択された検出方法により検出され、定量化される。
【０１０２】
特定の期間のタンパク質の総量が測定される場合、当該ＲＮＡの注射後のいくつかの時点（例えば、発現の開始またはＲＮＡの注射の６、１２、２４、４８または７２時間後に、通常異なる試験動物から）において、組織を採集することができ、時点ごとのタンパク質量を上述したように検定することができる。累積のタンパク質量を算出するために、タンパク質の総量の検定の数学的方法を用いることができる。例えば、曲線下面積（ａｒｅａ  ｕｎｄｅｒ  ｔｈｅ  ｃｕｒｖｅ：ＡＵＣ）は、以下の式によって検定することができる。
【０１０３】
【数１】
0006648019.tif 000002
【０１０４】
タンパク質の総量の曲線下面積を算出するために、発現曲線の式の各終点（ａおよびｂ）からの積分を算出する。
【０１０５】
本発明によれば、コードされたタンパク質の発現を高める（「修飾に伴うタンパク質発現促進」）ために、ＲＮＡ分子は構造的に修飾される。ここで、当該のコードされたタンパク質の発現が、ここに定義する非修飾基準ＲＮＡと比較して促進される限り、当該修飾はいかなる特定の構造にも限定されない。本発明において付与されるＲＮＡに適用できる、いくつかのＲＮＡ修飾が当該技術において公知である。
【０１０６】
化学修飾：ここで用いる「ＲＮＡ修飾」という語は、骨格修飾や糖修飾、または塩基修飾を含む化学修飾のことを指し得る。
【０１０７】
ここにおいて、ここに定義される当該の修飾ＲＮＡ分子は、例えば、骨格修飾、糖修飾または塩基修飾などの、ヌクレオチドアナログ／修飾を含み得る。本発明に関わる骨格修飾とは、ここに定義される核酸分子に含まれるヌクレオチドの骨格のリン酸塩が化学的に修飾されるという修飾である。本発明に関わる糖修飾とは、ここに定義される核酸分子のヌクレオチドの糖の化学修飾のことである。さらに、本発明に関わる塩基修飾とは、核酸分子の核酸分子のヌクレオチドの塩基部位の化学修飾のことである。ここにおいてヌクレオチドアナログまたは修飾は、転写および／または翻訳に適用可能なヌクレオチドアナログから選択されることが望ましい。
【０１０８】
糖修飾：
ここに記述される修飾ＲＮＡに組み込まれ得る当該修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、糖部位を修飾することもできる。例えば、２’ヒドロキシル群（ＯＨ）は多数の異なる「オキシ」または「デオキシ」置換基で修飾または置換することができる。「オキシ」２’ヒドロキシル群修飾の例は、アルコキシまたはアリルコキシ（−ＯＲ、例えば、Ｒ＝Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールまたは糖）、ポリエチレングリコール類（ＰＥＧ）、−０（ＣＨ２ＣＨ２ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＲ、２’ヒドロキシル基が、例えば、同じリボース糖の４’炭素へのメチレン架橋によって連結されている「ロックト」核酸（ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ：ＬＮＡ）、およびアミノ群（例えばＮＲＰなどのアミノ群はアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、またはジヘテロアリールアミノ、エチレンジアミン、ポリアミノであり得る、−Ｏ−アミノ）あるいはアミノアルコキシを含むが、これらに限定されない。
【０１０９】
「デオキシ」修飾は、水素、アミノ（例えばＮＨ２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジヘテロアリールアミノ、またはアミノ酸）を含み得る。または、当該アミノ群は当該の糖にリンカーを通して結びつき得、当該リンカーは一つまたはそれ以上のＣ、Ｎ、およびＯ原子を含むことを特徴としている。
【０１１０】
当該の糖群はまた、リボース中の対応する炭素の配置と反対の立体化学的配置を備える一つまたはそれ以上の炭素を含み得る。従って、修飾ＲＮＡは、例えば、糖としてアラビノースを含有するヌクレオチドを含み得る。
【０１１１】
骨格修飾：当該リン酸塩骨格は、修飾したヌクレオシドおよびヌクレオチド（ここに記述する当該修飾ＲＮＡに組み込まれていてもよい）を更に修飾してもよい。当該骨格のリン酸塩類は、一つまたはそれ以上の酸素原子を異なる置換基に置換することによって修飾することができる。さらに、当該の修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、非修飾リン酸部位の、ここに定義する修飾リン酸部位への全置換を含んでもよい。修飾リン酸部位群の例は、ホスホロチオエート、ホスホロセレネート類、ボランホスフェート類、ボランホスフェートエステル類、水素ホスホネート類、ホスホロアミデート類、アルキルまたはアリールホスホネート類およびホスホトリエステル類を含むが、これらに限定されない。ホスホロジチオエートは、硫黄で置換される両端非リンク酸素を有する。リン酸塩リンカーはまた、リンク酸素の、窒素（架橋ホスホロアミデート類）、硫黄（架橋ホスホロチオエート類）および炭素（架橋メチレンホスホネート）への置換によっても修飾され得る。
【０１１２】
塩基修飾：
当該修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチド（ここに記述する当該修飾ＲＮＡに組み込まれていてもよい）は更に、核塩基部位を修飾することもできる。ＲＮＡ中に見受けられる核塩基の例は、アデニン、グアニン、シトシンおよびウラシルを含むが、これらに限定されない。例えば、ここに記述するヌクレオシドおよびヌクレオチドは、主溝面上が化学的に修飾されてもよい。いくつかの実施例において、主溝の化学的修飾はアミノ群、チオニル群、アルキル群、ハロゲン群を含み得る。
【０１１３】
本発明の特に望ましい実施例において、当該ヌクレオチドアナログ／修飾は、望ましくは２−アミノ−６−クロロプリンリボサイド−５’−三リン酸、２−アミノプリン−リボサイド−５’−三リン酸、２−アミノアデノシン−５’−三リン酸、２−アミノ−２’−デオキシシチジン−三リン酸、２−チオシチジン−５’−三リン酸、２−チオウリジン−５’−三リン酸、２’−フルオロチミジン−５’−三リン酸、２’−Ｏ−メチルイノシン−５’−三リン酸  ４−チオウリジン−５’−三リン酸、５−アミノアリルシチジン−５’−三リン酸、５−アミノアリルウリジン−５’−三リン酸、５−ブロモシチジン−５’−三リン酸、５−ブロモウリジン−５’−三リン酸、５−ブロモ−２’−デオキシシチジン−５’−三リン酸、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン−５’−三リン酸、５−ヨードシチジン−５’−三リン酸、５−ヨード−２’−デオキシシチジン−５’−三リン酸、５−ヨードウリジン−５’−三リン酸、５−ヨード−２’デオキシウリジン−５’−三リン酸、５−メチルシチジン−５’−三リン酸、５−メチルウリジン−５’−三リン酸、５−プロピニル−２’−デオキシシチジン−５’−三リン酸、５−プロピニル−２’−デオキシウリジン−三リン酸、６−アザシチジン−５’−三リン酸、６−アザウリジン−５’−三リン酸、７−デアザグアノシン−５’−三リン酸、８−アザアデノシン−５’−三リン酸、ベンズイミダゾール−リボシド−５’−三リン酸、Ｎ１−メチルアデノシン−５’−三リン酸、Ｎ１−メチルグアノシン−５’−三リン酸、Ｎ６−メチルアデノシン−５’−三リン酸、Ｏ６−メチルグアノシン−５’−三リン酸、シュードウリジン−５’−三リン酸、またはプロマイシン−５’−三リン酸、キサントシン−５’−三リン酸から選択される塩基修飾から選択される。特に望ましいのは、５−メチルシチジン−５’−三リン酸、７−デアザグアノシン−５’−三リン酸、５−ブロモシチジン−５’−三リン酸、およびシュードウリジン−５’−三リン酸から成る塩基修飾ヌクレオチドの群から選択された、塩基修飾のためのヌクレオチドである。
【０１１４】
いくつかの実施例において、修飾ヌクレオチドは、ピリジン−４−一リボヌクレオシド、５−アザ−ウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオウリジン、４−チオ−シュードウリジン、２−チオ−シュードウリジン、５−ヒドロキシウリジン、３−メチルウリジン、５−カルボキシメチルウリジン、１−カルボキシメチル−シュードウリジン、５−プロピニル−ウリジン、１−プロピニル−シュードウリジン、５−タウリノメチルウリジン、１−タウリノメチル−シュードウリジン、５−タウリノメチル−２−チオウリジン、１−タウリノメチル−４−チオ−ウリジン、５−メチル−ウリジン、１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−１−メチルシュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、ジヒドロウリジン、ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−メトキシウリジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、および４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジンを含む。
【０１１５】
いくつかの実施例において、修飾ヌクレオチドは５−アザ−シチジン、シュードイソシチジン、３−メチルシチジン、Ｎ４−アセチルシチジン、５−ホルミルシチジン、Ｎ４−メチルシチジン、５−ヒドロキシメチルシチジン、１−メチル−シュードシチジン、ピロロ−シチジン、ピロロ−シュードイソシチジン、２−チオ−シチジン、２−チオ−５−メチル−シチジン、４−チオ−シュードシチジン、４−チオ−１−メチル−シュードシチジン、４−チオ−１−メチル−デアザ−シュードシチジン、１−メチル−１−デアザ−シュードイソシチジン、ゼブラリン、５−アザ−ゼブラリン、５−メチル−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ−ゼブラリン、２−チオ−ゼブラリン、２−メトキシ−シチジン、２−メトキシ−５−メチル−シチジン、４−メトキシ−シュードイソシチジン、および４−メトキシ−１−メチル−シュードイソシチジンを含む。
【０１１６】
他の実施例において、修飾ヌクレオチドは２−アミノプリン、２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−アデニン、７−デアザ−８−アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２−アミノプリン、７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミノプリン、１−メチルアデノシン、Ｎ６メチルアデノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、Ｎ６−（ｃｉｓ−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６（ｃｉｓ−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、Ｎ６−グリシニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６−スレオニルカルバモイルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−スレオニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデノシン、７−メチルアデニン、２−メチルチオ−アデニン、および２−メトキシ−アデニンを含む。
【０１１７】
他の実施例において、修飾ヌクレオチドはイノシン、１−メチル−イノシン、ワイオシン、ワイブトシン、７−デアザ−グアノシン、７−デアザ−８−アザ−グアノシン、６−チオ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−グアノシン、６−チオ−７−メチル−グアノシン、７−メチルイノシン、６−メトキシ−グアノシン、１−メチルグアノシン、Ｎ２−メチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２−メチル−６−チオ−グアノシン、およびＮ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシンを含む。
【０１１８】
いくつかの実施例において、当該ヌクレオチドは主溝面上が修飾されていてもよく、ウラシルのＣ−５置換水素の、メチル群またはハロゲン群との置換を含んでいてもよい。
特定の実施例において、修飾ヌクレオチドは５’−０−（１−三リン酸）−アデノシン、５’−０−（１−三リン酸）−シチジン、５’−０−（１−三リン酸）−グアノシン、５’−０−（１−三リン酸）−ウリジンまたは５’−０−（１−三リン酸）−シュードウリジンである。
【０１１９】
さらに特定の実施例において、当該の修飾ＲＮＡは、６−アザ−シチジン、２−チオ−シチジン、α−チオ−シチジン、シュード−イソ−シチジン、５−アミノアリル−ウリジン、５−ヨードウリジン、Ｎ１−メチル−シュードウリジン、５，６−ジヒドロウリジン、α−チオ−ウリジン、４−チオ−ウリジン、６−アザ−ウリジン、５−ヒドロキシ−ウリジン、デオキシ−チミジン、５−メチル−ウリジン、ピロロ−シチジン、イノシン、α−チオ−グアノシン、６−メチル−グアノシン、５−メチル−シチジン、５−メチル−シチジン、８−オキソ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、Ｎ１−メチル−アデノシン、２−アミノ−６−クロロ−プリン、Ｎ６−メチル−２−アミノ−プリン、シュード−イソ−シチジン、６−クロロ−プリン、Ｎ６−メチル−アデノシン、α−チオ−アデノシン、８−アジド−アデノシン、７−デアザ−アデノシンから選択されるヌクレオシド修飾を含み得る。
【０１２０】
脂質修飾：
さらにある実施例によれば、ここに定義される当該の修飾ＲＮＡは、脂質修飾を含有し得る。かかる脂質修飾ＲＮＡは典型的にはここに定義されるＲＮＡを含む。ここに定義されるかかる脂質修飾ＲＮＡ分子は典型的には更に、少なくとも一つの、そのＲＮＡ分子と共有結合的に連結するリンカーおよび、少なくとも一つの、それぞれのリンカーと共有結合的に連結する脂質を含む。あるいは、当該の脂質修飾ＲＮＡ分子は少なくとも一つの、ここに定義されるＲＮＡ分子および、少なくとも一つの、そのＲＮＡ分子と（リンカーなしで）共有結合的に連結する（二官能性）脂質を含む。３番目の代替例によれば、当該脂質修飾ＲＮＡ分子は、ここに定義されるＲＮＡ分子、少なくとも一つの、そのＲＮＡ分子と共有結合的に連結するリンカー、および少なくとも一つの、それぞれのリンカーに共有結合的に結合する脂質、および少なくとも一つの、そのＲＮＡ分子と（リンカーなしで）共有結合的に連結する（二官能性）脂質を含む。ここにおいて、当該脂質修飾は直線ＲＮＡ配列の両末端に存在することが特に望ましい。
【０１２１】
当該修飾ＲＮＡの５’−末端の修飾
本発明のもう一つの望ましい実施例によれば、ここに定義される当該修飾ＲＮＡ分子は、いわゆる「５’キャップ構造」の付加によって修飾することができる。５’−キャップは、一般的には成熟ｍＲＮＡの５’−末端に「キャップをする」構成要素、典型的には修飾ヌクレオチドの構成要素である。５’−キャップは典型的には修飾ヌクレオチドにより、特にグアノシンヌクレオチドの誘導体により形成され得る。望ましくは、当該５’−キャップは５’−末端に、５’−５’−三リン酸リンケージを介して連結している。５’−キャップはメチル化されていてもよく、例えば、ｍ７ＧｐｐｐＮは、Ｎが当該５’キャップを有する核酸の末端５’ヌクレオチド（典型的にはＲＮＡの５’末端）である。ｍ７ＧｐｐｐＮは、ポリメラーゼＩＩにより転写されたｍＲＮＡ中にある天然に存在する５’キャップ構造であり、したがって本発明による修飾ＲＮＡに含まれる修飾としては見なされない。このことは、本発明による修飾ＲＮＡは、５’−キャップとしてｍ７ＧｐｐｐＮ
を含み得るが、加えて当該修飾ＲＮＡは更に少なくとももう一つの、ここに定義される修飾を含むということを意味する。
５’キャップ構造の更なる例は、グリセリル、逆デオキシ非塩基性残基（部位）、４’，５’メチレンヌクレオチド、１−（ベータ−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’−チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド、１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド、Ｌ−ヌクレオチド、α−ヌクレオチド、修飾塩基ヌクレオチド、スレオ−ペントフラノシルヌクレオチド、非環式３’，４’−セコヌクレオチド、非環式３，
４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド、非環式３，５ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、３’−３’−逆ヌクレオチド部位、３’−３’−逆非塩基部位、３’−２’−逆ヌクレオチド部位、３’−２’−逆非塩基性部位、１，４−ブタンジオールホスフェート、３’−ホスホルアミデート、ヘキシルホスフェート、アミノヘキシルホスフェート、３’−ホスフェート、３’ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、あるいは、架橋または非架橋メチルホスホネート部位を含む。これらの修飾５’−キャップ構造は、本発明による修飾ＲＮＡに含まれる少なくとも一つの修飾として見なされる。
特に望ましい修飾５’−キャップ構造は、ＣＡＰ１（ｍ７Ｇの隣接ヌクレオチドのリボースのメチル化）、ＣＡＰ２（ｍ７Ｇの下流の二番目のヌクレオチドのリボースのメチル化）、ＣＡＰ３（ｍ７Ｇの下流の三番目のヌクレオチドのリボースのメチル化）、ＣＡＰ４（ｍ７Ｇの下流の四番目のヌクレオチドのリボースのメチル化）、ＡＲＣＡ（ａｎｔｉ−ｒｅｖｅｒｃｅ ＣＡＰ ａｎａｌｏｇｕｅ：抗逆ＣＡＰアナログ）、修飾ＡＲＣＡ（例えば、ホスホチオエート修飾ＡＲＣＡ）、イノシン、Ｎ１−メチルグアノシン、２’−フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、および２−アジド−グアノシンである。
【０１２２】
オープンリーディングフレームの配列修飾：
Ｇ／Ｃ含有量の修飾：
本発明の特に望ましい実施例において、ここに定義される修飾の少なくとも一つのペプチドまたはタンパク質をコードするコード領域のＧ／Ｃ含有量は、その対応する野生型コード領域、すなわち非修飾コード領域のＧ／Ｃ含有量と比較して、修飾、特に促進される。当該コード領域のコードされるアミノ酸配列は、対応する野生型コード領域の、コードされたアミノ酸配列と比較して修飾されないことが望ましい。
【０１２３】
ここに定義される修飾ＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含有量の修飾は、翻訳される如何なるｍＲＮＡ領域の配列も、そのｍＲＮＡの効果的な翻訳のために重要であるという事実に基づく。従って、多様なヌクレオチドの構成物および配列が重要である。特に、促進されたＧ（グアノシン）／Ｃ（シトシン）含有量を有するｍＲＮＡ配列は、促進されたＡ（アデノシン）／Ｕ（ウラシル）含有量を有するｍＲＮＡ配列よりも安定的である。本発明によれば、当該コード領域のコドンはしたがって、促進されたＧ／Ｃヌクレオチドの量を含むように、当該の翻訳されたアミノ酸配列に残るが、その野生型コード領域と比べ多様である。いくつかのコドンが一つおよび同じアミノ酸をコードしている（いわゆる遺伝暗号の縮重）という事実について、安定性のための最も好ましいコドンが決定されることができる（いわゆる代替コドン使用）。
【０１２４】
ここで定義される修飾ＲＮＡのコード領域によりコードされるアミノ酸に依って、当該ＲＮＡ配列（例えば、コード領域）の修飾には、その野生型コード領域と比べて多様な可能性がある。もっぱらＧまたはＣヌクレオチドを含むコドンによりコードされるアミノ酸の場合は、当該コドンの修飾は必要でない。従って、Ｐｒｏのためのコドン（ＣＣＣまたはＣＣＧ）、Ａｒｇのためのコドン（ＣＧＣまたはＣＧＧ）、Ａｌａのためのコドン（ＧＣＣまたはＧＣＧ）およびＧｌｙのためのコドン（ＧＧＣまたはＧＧＧ）は、ＡおよびＵが存在するので、修飾を必要としない。
【０１２５】
対照的に、Ａおよび／またはＵヌクレオチドを含むコドンは、同じアミノ酸をコードするがＡおよび／またはＵを含まない他のコードの置換によって修飾されることができる。これらの例は、
Ｐｒｏのためのコドンは、ＣＣＵまたはＣＣＡから、ＣＣＣまたはＣＣＧに修飾され得る
Ａｒｇのためのコドンは、ＣＧＵまたはＣＧＡあるいはＡＧＡまたはＡＧＧから、ＣＧＣまたはＣＧＧに修飾され得る
Ａｌａのためのコドンは、ＧＣＵまたはＧＣＡから、ＧＣＣまたはＧＣＧに修飾され得る
Ｇｌｙのためのコドンは、ＧＧＵまたはＧＧＡから、ＧＧＣまたはＧＧＧに修飾され得る
他の事例において、ＡまたはＵヌクレオチドは当該コドンから排除されることはできないが、より低いＡおよび／またはＵヌクレオチドの含有量を含むコドンを用いることにより、ＡおよびＵ含有量を減少させることが可能である。これらの例は、
ＰｈｅのためのコドンはＵＵＵからＵＵＣに修飾され得る
ＬｅｕのためのコドンはＵＵＡ、ＵＵＧ、ＣＵＵまたはＣＵＡから、ＣＵＣまたはＣＵＧに修飾され得る
ＳｅｒのためのコドンはＵＣＵまたはＵＣＡあるいはＡＧＵから、ＵＣＣ、ＵＣＧまたはＡＧＣに修飾され得る
ＴｙｒのためのコドンはＵＡＵからＵＡＣに修飾され得る
ＣｙｓのためのコドンはＵＧＵからＵＧＣに修飾され得る
ＨｉｓのためのコドンはＣＡＵからＣＡＣに修飾され得る
ＧｌｎのためのコドンはＣＡＡからＣＡＧに修飾され得る
ＩｌｅのためのコドンはＡＵＵまたはＡＵＡから、ＡＵＣに修飾され得る
ＴｈｒのためのコドンはＡＣＵまたはＡＣＡから、ＡＣＣまたはＡＣＧに修飾され得る
ＡｓｎのためのコドンはＡＡＵからＡＡＣに修飾され得る
ＬｙｓのためのコドンはＡＡＡからＡＡＧに修飾され得る
ＶａｌのためのコドンはＧＵＵまたはＧＵＡから、ＧＵＣまたはＧＵＧに修飾され得る
ＡｓｐのためのコドンはＧＡＵからＧＡＣに修飾され得る
ＧｌｕのためのコドンはＧＡＡからＧＡＧに修飾され得る
停止コドンＵＡＡは、ＵＡＧまたはＵＧＡに修飾され得る
Ｍｅｔのためのコドン（ＡＵＧ）およびＴｒｐのためのコドン（ＵＧＧ）の事例においては一方、配列修飾の可能性はない。
【０１２６】
上に列挙した置換は、その対応する野生型コード領域（すなわち元の配列）と比べて、ここに定義される修飾ＲＮＡのコード領域Ｇ／Ｃ含有量を促進するために、個別に用いることもできるし、任意の可能な組み合わせにおいて用いることもできる。従って、例えば、当該の野生型配列中に存在する、Ｔｈｒのためのコドンは、ＡＣＣ（またはＡＣＧ）に修飾され得る。
【０１２７】
ここに定義される修飾ＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含有量は、野生型コード領域のＧ／Ｃ含有量と比べて望ましくは少なくとも７％、より望ましくは少なくとも１５％、特に望ましくは少なくとも２０％促進される。特定の実施例によれば、病原性の抗原あるいはフラグメントまたはその変異体または誘導体を含む、少なくとも一つのペプチドまたはタンパク質をコードするコード領域中の、置換可能なコドンの、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、より望ましくは少なくとも７０％、更により望ましくは少なくとも８０％そして最も望ましくは少なくとも９０％、９５％、更には１００％が置換され、前記コード領域Ｇ／Ｃ含有量を促進する。
【０１２８】
ここにおいて、ここに定義される修飾ＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含有量を、野生型コード領域と比べて、最大まで（すなわち、置換可能なコドンの１００％）促進することが特に望ましい。
【０１２９】
コドンの最適化：
本発明によれば、少なくとも１つの本書に規定される修飾ＲＮＡのペプチドまたはタンパク質をコードするコード領域の、さらなる好ましい修飾は、翻訳の効率は細胞内におけるｔＲＮＡの発生の頻度の違いによっても決定されるという発見に基づく。したがって、いわゆるレアコドンは、野生型ＲＮＡ配列のコード領域から拡大された範囲に存在する場合、ｍＲＮＡは比較的高頻度のｔＲＮＡをコードするコドンが存在する場合よりも少ない度合いで翻訳される。
【０１３０】
この文脈において、修飾ＲＮＡのコード領域は、野生型のコード領域と比較して好ましくは修飾されており、野生型配列の少なくとも1つの、細胞において比較的稀であるｔＲＮＡをコードするコドンが、細胞において比較的高頻度であるｔＲＮＡをコードするコドンに交換され、比較的稀であるｔＲＮＡと同一のアミノ酸を運搬する。この修飾により、本書に定義される修飾ＲＮＡのコード領域は修飾され、高頻度に生じるｔＲＮＡが得られるコドンが挿入される。言い換えれば、本発明によれば、この修飾により、細胞において比較的稀であるｔＲＮＡをコードする、野生型のコード領域の全てのコドンが、いずれの場合にも細胞において比較的高頻度であるｔＲＮＡをコードするコドンに交換され、いずれの場合にも比較的稀なｔＲＮＡと同一のアミノ酸を運搬する。
【０１３１】
どのｔＲＮＡが細胞において比較的高頻度に生じ、対照的にどのｔＲＮＡが比較的稀に生じるかは当業者にとって公知である。（例えばAkashi, Curr. Opin. Genet. Dev. 2001, 11(6): 660-666を参照）。特定のアミノ酸に使用するコドンおよび最も高頻度に生ずるｔＲＮＡ、例えば（ヒト）細胞において最も高頻度に生ずるｔＲＮＡを使用するＧｌｙコドンが特に好ましい。
【０１３２】
本発明によれば、本書において定義されるコード領域において増加、特に最大化する配列のＧ／Ｃ比を、コード領域のＲＮＡ配列がコードするペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列を修飾しない高頻度なコドンと関連付けることが好ましい。この好ましい実施形態により、本書に定義される特に高効率に翻訳され安定化（修飾）されたＲＮＡ配列が供給される。
修飾ＲＮＡの３’末端の修飾
加えて、少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含んでいる、ジェット注射によって投与するための修飾ＲＮＡにおいて、コード領域の３’領域は修飾、例えばアデニンまたはシトシン残基の複数回繰り返しの伸長の挿入または添加を受けてもよい。本発明の好ましい実施形態において、ＲＮＡ分子の３’末端は連続したアデニンヌクレオチド（ポリＡテール）の添加により修飾される。
【０１３３】
ポリＡテールの長さは、各構造の翻訳の効率に大きな影響を与える。効率良く翻訳されるため、外来性ｍＲＮＡのポリＡテールは少なくとも２０個のＡ残基からなるべきである。加えて、ｍＲＮＡ発現とポリＡテールの長さには正の相関があることが述べられている（Tavernier et al., J Control Release. 2011 Mar 30;150(3):238-47. PMID: 20970469)。この文脈において、Holtkamp et al.は、１２０ヌクレオチドの長さのポリＡテールは、より短いポリＡテールと比較して、ｍＲＮＡの安定性および翻訳の効率を向上させることを示している(Holtkamp et al., Blood. 2006 Dec 15;108(13):4009-17. PMID: 16940422)。本発明の一実施形態において、少なくとも３０個、好ましくは５０個、より好ましくは１００個、さらに好ましくは２００個にアデニンヌクレオチドを含んでいるポリＡテールを含んでいる（任意に他の修飾と組み合わされる）修飾ＲＮＡは、ジェット注射に使用される。最も好ましくは、ＲＮＡは６４個のアデニンヌクレオチドからなるポリＡテールを含んでいる。
【０１３４】
特定の実施形態において、ポリＡテールは、３０アデノシンより長い場合、好ましくは５０アデノシンより長い場合、より好ましくは１００アデノシンより長い場合、さらに好ましくは２００アデノシンより長い場合、本発明に基づく修飾ＲＮＡに含まれる少なくとも１つの修飾であると判断されるのみである。
【０１３５】
さらなる特定の実施形態において、ポリＡテールによる修飾は、本発明に基づく修飾ＲＮＡに含まれる少なくとも１つの修飾と判断されない。これは本発明に基づく修飾ＲＮＡは上述の定義のポリＡテールを含んでいるが、さらに少なくとも１つの本書に定義される修飾を含んでいてもよいことを意味する。
【０１３６】
好ましい実施形態において、少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含んでいる、ジェット注射に使用される修飾ＲＮＡは、（任意に他の修飾と組み合わせてもよい）ＲＮＡのコード領域の３’領域にポリＣ配列を含んでいる。ポリＣ配列は典型的には複数のシチジンヌクレオチドの伸長であり、典型的には約１０〜２００のシチジンヌクレオチド、より好ましくは約１０〜７０のシチジンヌクレオチド、さらに好ましくは約２０〜５０のシチジンヌクレオチド、さらに好ましくは約２０〜３０のシチジンヌクレオチドである。ポリＣ配列は好ましくは核酸に含まれるコード領域の３’に位置していてもよい。特定の好ましい実施形態において、ポリＣ配列はポリＡ配列の３’に位置している。
【０１３７】
さらなる好ましい実施形態において、本発明に基づく修飾ＲＮＡは、３’末端において、少なくとも１つの修飾として、ヒストンステムループを含む、またはコードする。本発明の文脈において、ヒストンステムループ配列は、好ましくは以下の式（Ｉ）または（ＩＩ）の少なくとも１つから選択される。
式（Ｉ）（ステム境界エレメントの無いステムループ配列）
【０１３８】
【化１】
0006648019.tif 000003
【０１３９】
式（ＩＩ）（ステム境界エレメントを有するステムループ配列）
【０１４０】
【化２】
0006648019.tif 000004
【０１４１】
上記式において：
ステム１またはステム２境界エレメントＮ１−６は、１〜６、好ましくは２〜６、より好ましくは２〜５、さらに好ましくは３〜５、最も好ましくは４〜５または５Ｎの連続した配列であり、各Ｎは他と独立に、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、またはそのヌクレオチドアナログであり；
ステム１[N0-2GN3-5]は要素ステム２の逆相補、または部分的逆相補であり、かつ５〜７のヌクレオチドの連続した配列であり；
Ｎ０−２は、０〜２、好ましくは０〜１、より好ましくは１Ｎの連続した配列であり、各Ｎは他と独立に、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、またはそのヌクレオチドアナログであり；
Ｎ３−５は、３〜５、好ましくは４〜５、より好ましくは４Ｎの連続した配列であり、各Ｎは他と独立に、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、またはそのヌクレオチドアナログであり；かつ
Ｇはグアノシンまたはそのアナログであり、任意にシチジンまたはそのアナログに置換され；
ループ配列 [N0-4(U/T)N0-4]は、要素ステム１およびステム２の間に位置し、３〜５ヌクレオチド、より好ましくは４ヌクレオチドの連続した配列であり；
画Ｎ０−４はそれぞれ他と独立に、０〜４、好ましくは１〜３、より好ましくは１〜２Ｎの連続した配列であり、各Ｎは他と独立に、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、またはそのヌクレオチドアナログであり；かつ
Ｕ／Ｔはウリジン、または任意にチミジンを表し；
ステム２[N3-5CN0-2]は   要素ステム１の逆相補、または部分的逆相補であり、かつ５〜７のヌクレオチドの連続した配列であり；
Ｎ３−５は、３〜５、好ましくは４〜５、より好ましくは４Ｎの連続した配列であり、各Ｎは他と独立に、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、またはそのヌクレオチドアナログであり；
Ｎ０−２は、０〜２、好ましくは０〜１、より好ましくは１Ｎの連続した配列であり、各Ｎは他と独立に、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、またはそのヌクレオチドアナログであり；かつ
Ｃはシチジンまたはそのアナログであり、任意にグアノシンまたはそのアナログに置換され；
ステム１およびステム２は互いに逆相補配列を形成し塩基対形成が可能であり、塩基対形成はステム１およびステム２の間で、例えばＡおよびＵ／Ｔ間またはＧおよびＣ間のワトソンクリック塩基対形成、もしくは例えばゆらぎ塩基対形成、逆ワトソンクリック塩基対形成、フーグスティーン塩基対形成、逆フーグスティーン塩基対形成等の非ワトソンクリック塩基対形成により生じる。または、ステム１およびステム２は、ステム１および２の片方のステムの、他のステムの相補的な配列空に１つ以上の相補的でない塩基があるために、ステム１およびステム２の間に不完全な塩基対形成を生じ得る部分的逆相補配列を形成し塩基対形成が可能である。
【０１４２】
本発明のさらなる好ましい実施形態において、本発明に基づく修飾ＲＮＡは、以下の特定の式（Ｉａ）または（ＩＩａ）の少なくとも１つから選択される少なくとも１つのヒストンステムループ配列を含む、またはコードしていてもよく：
式（Ｉａ）（ステム境界エレメントの無いステムループ配列）
【０１４３】
【化３】
0006648019.tif 000005
【０１４４】
式（ＩＩａ）（ステム境界領域を有するステムループ配列）
【０１４５】
【化４】
0006648019.tif 000006
【０１４６】
Ｎ、Ｃ、Ｇ、ＴおよびＵは上述の通り定義される。
【０１４７】
本発明のさらなるより好ましい実施形態によれば、修飾ＲＮＡは、以下の特定の式（Ｉｂ）または（ＩＩｂ）の少なくとも１つから選択される少なくとも１つのヒストンステムループ配列を含む、またはコードしていてもよく：
式（Ｉｂ）（ステム境界エレメントの無いステムループ配列）
【０１４８】
【化５】
0006648019.tif 000007
【０１４９】
式（ＩＩｂ）（ステム境界エレメントを有するステムループ配列）
【０１５０】
【化６】
0006648019.tif 000008
【０１５１】
Ｎ、Ｃ、Ｇ、ＴおよびＵは上述の通り定義される。
【０１５２】
本発明のさらに好ましい実施形態によれば、修飾ＲＮＡは、以下の特定の式（Ｉｃ）〜（Ｉｈ）、または（ＩＩｃ）〜（ＩＩｈ）の少なくとも１つから選択される少なくとも１つのヒストンステムループ配列を含む、またはコードしていてもよく、以下に説明するようにヒストンステムループ配列を表す、ステムループ構造または直線配列のいずれかで示され
実施例１：
式（Ｉｃ）（ステム境界エレメントの無い後生動物および原生動物ヒストンステムループ一致配列）
【０１５３】
【化７】
0006648019.tif 000009
【０１５４】
式（ＩＩｃ）（ステム境界エレメントを有する後生動物および原生動物ヒストンステムループ一致配列）
【０１５５】
【化８】
0006648019.tif 000010
【０１５６】
式（Ｉｄ）（ステム境界エレメント無し）
【０１５７】
【化９】
0006648019.tif 000011
【０１５８】
式（ＩＩｄ）（ステム境界エレメントを有する）
【０１５９】
【化１０】
0006648019.tif 000012
【０１６０】
式（Ｉｅ）（ステム境界エレメントの無い原生動物ヒストンステムループ一致配列）
【０１６１】
【化１１】
0006648019.tif 000013
【０１６２】
式（ＩＩｅ）（ステム境界エレメントを有する原生動物ヒストンステムループ配列）
【０１６３】
【化１２】
0006648019.tif 000014
【０１６４】
式（Ｉｆ）（ステム境界エレメントの無い後生動物ヒストンループ一致配列）
【０１６５】
【化１３】
0006648019.tif 000015
【０１６６】
式（ＩＩｆ）（ステム境界エレメントを有する後生動物ヒストンステムループ一致配列）
【０１６７】
【化１４】
0006648019.tif 000016
【０１６８】
式（Ｉｇ）（ステム境界エレメントの無い脊椎動物ヒストンステムループ一致配列）
【０１６９】
【化１５】
0006648019.tif 000017
【０１７０】
式（ＩＩｇ）（ステム境界エレメントを有する脊椎動物ヒストンステムループ一致配列）
【０１７１】
【化１６】
0006648019.tif 000018
【０１７２】
式（Ｉｈ）（ステム境界エレメントの無いヒトヒストンステムループ一致配列）
【０１７３】
【化１７】
0006648019.tif 000019
【０１７４】
式（ＩＩｈ）（ステム境界エレメントを有するヒトヒストンステムループ一致配列）
【０１７５】
【化１８】
0006648019.tif 000020
【０１７６】
式（Ｉｃ）〜（Ｉｈ）または（ＩＩｃ）〜（ＩＩｈ）それぞれにおいて：Ｎ、Ｃ、Ｇ、Ａ、ＴおよびＵは上述のように定義され；ＵはＴに置換されてもよく；ステム要素１および２における各（高度に）保存されたＧまたはＣは、その対応するステムにおける相補的なヌクレオチドが同様に相補的なヌクレオチドに置換される限り相補的なヌクレオチド塩基ＣまたはＧに置換されてもよく；および／またはＧ、Ａ、Ｔ、Ｕ、Ｃ、Ｒ、Ｙ、Ｍ、Ｋ、Ｓ、Ｗ、Ｈ、Ｂ、Ｖ、Ｄ，およびＮは以下の表に定義されるヌクレオチド塩基である：
【０１７７】
【表１】
0006648019.tif 000021
【０１７８】
本書の文脈において、本発明の式（Ｉ）または（Ｉａ）〜（Ｉｈ）または（ＩＩ）または（ＩＩａ）〜（ＩＩｈ）に基づくヒストンステムループ配列は、好ましくは天然に存在するヒストンステムループ配列、およびより好ましくは脊椎動物、および最も好ましくは哺乳類のヒストンステムループ配列、特にヒトヒストンステムループ配列から選択される。
【０１７９】
特に好ましい実施形態によれば、本発明の式（Ｉ）または（Ｉａ）〜（Ｉｈ）または（ＩＩ）または（ＩＩａ）〜（ＩＩｈ）に基づくヒストンステムループ配列は、各ヌクレオチドの位置における最も高頻度のヌクレオチド、または原生動物および後生動物、原生動物、後生動物、脊椎動物およびヒトにおける、天然に存在するヒストンステムループ配列において最も高頻度のヌクレオチドもしくは２番目に高頻度のヌクレオチドを含む。本書の文脈において、全ヌクレオチドの少なくとも８０％、好ましくは８５％、最も好ましくは９０％が、天然に存在するヒストンステムループ配列の最も高頻度のヌクレオチドと一致する。
【０１８０】
さらなる特定の実施形態において、本発明の特定の式（Ｉ）または（Ｉａ）〜（Ｉｈ）の少なくとも１つに基づくヒストンステムループ配列は、以下のヒストンステムループ配列から選択される（ステム境界エレメント無し）：
VGYYYYHHTHRVVRCB (配列番号:13  式（Ｉｃ）に基づく)
SGYYYTTYTMARRRCS (配列番号:14  式（Ｉｃ）に基づく)
SGYYCTTTTMAGRRCS (配列番号:15  式（Ｉｃ）に基づく)
DGNNNBNNTHVNNNCH (配列番号:16  式（Ｉｅ）に基づく)
RGNNNYHBTHRDNNCY (配列番号:17  式（Ｉｅ）に基づく)
RGNDBYHYTHRDHNCY (配列番号:18  式（Ｉｅ）に基づく)
VGYYYTYHTHRVRRCB (配列番号:19  式（Ｉｆ）に基づく)
SGYYCTTYTMAGRRCS (配列番号:20  式（Ｉｆ）に基づく)
SGYYCTTTTMAGRRCS (配列番号:21  式（Ｉｆ）に基づく)
GGYYCTTYTHAGRRCC (配列番号:22  式（Ｉｇ）に基づく)
GGCYCTTYTMAGRGCC (配列番号:23  式（Ｉｇ）に基づく)
GGCTCTTTTMAGRGCC (配列番号:24  式（Ｉｇ）に基づく)
DGHYCTDYTHASRRCC (配列番号:25  式（Ｉｈ）に基づく)
GGCYCTTTTHAGRGCC (配列番号:26  式（Ｉｈ）に基づく)
GGCYCTTTTMAGRGCC (配列番号:27  式（Ｉｈ）に基づく)。
【０１８１】
さらにこの背景において、特定の式（ＩＩ）または（ＩＩａ）〜（ＩＩｈ）のうちの１つに従う、以下のヒストンステムループ配列（ステム隣接要素を伴う）が、特に好まれる。
【０１８２】
Ｈ＊Ｈ＊ＨＨＶＶＧＹＹＹＹＨＨＴＨＲＶＶＲＣＢＶＨＨ＊Ｎ＊Ｎ＊（式（ＩＩｃ）に従う配列番号２８）
Ｍ＊Ｈ＊ＭＨＭＳＧＹＹＹＴＴＹＴＭＡＲＲＲＣＳＭＣＨ＊Ｈ＊Ｈ＊（式（ＩＩｃ）に従う配列番号２９）
Ｍ＊Ｍ＊ＭＭＭＳＧＹＹＣＴＴＴＴＭＡＧＲＲＣＳＡＣＨ＊Ｍ＊Ｈ＊（式（ＩＩｃ）に従う配列番号３０）
Ｎ＊Ｎ＊ＮＮＮＤＧＮＮＮＢＮＮＴＨＶＮＮＮＣＨＮＨＮ＊Ｎ＊Ｎ＊（式（ＩＩｅ）に従う配列番号３１）
Ｎ＊Ｎ＊ＨＨＮＲＧＮＮＮＹＨＢＴＨＲＤＮＮＣＹＤＨＨ＊Ｎ＊Ｎ＊（式（ＩＩｅ）に従う配列番号３２）
Ｎ＊Ｈ＊ＨＨＶＲＧＮＤＢＹＨＹＴＨＲＤＨＮＣＹＲＨＨ＊Ｈ＊Ｈ＊（式（ＩＩｅ）に従う配列番号３３）
Ｈ＊Ｈ＊ＭＨＭＶＧＹＹＹＴＹＨＴＨＲＶＲＲＣＢＶＭＨ＊Ｈ＊Ｎ＊（式（ＩＩｆ）に従う配列番号３４）
Ｍ＊Ｍ＊ＭＭＭＳＧＹＹＣＴＴＹＴＭＡＧＲＲＣＳＭＣＨ＊Ｈ＊Ｈ＊（式（ＩＩｆ）に従う配列番号３５）
Ｍ＊Ｍ＊ＭＭＭＳＧＹＹＣＴＴＴＴＭＡＧＲＲＣＳＡＣＨ＊Ｍ＊Ｈ＊（式（ＩＩｆ）に従う配列番号３６）
Ｈ＊Ｈ＊ＭＡＭＧＧＹＹＣＴＴＹＴＨＡＧＲＲＣＣＶＨＮ＊Ｎ＊Ｍ＊（式（ＩＩｇ）に従う配列番号３７）
Ｈ＊Ｈ＊ＡＡＭＧＧＣＹＣＴＴＹＴＭＡＧＲＧＣＣＶＣＨ＊Ｈ＊Ｍ＊（式（ＩＩｇ）に従う配列番号３８）
Ｍ＊Ｍ＊ＡＡＭＧＧＣＴＣＴＴＴＴＭＡＧＲＧＣＣＭＣＹ＊Ｍ＊Ｍ＊（式（ＩＩｇ）に従う配列番号３９）
Ｎ＊Ｈ＊ＡＡＨＤＧＨＹＣＴＤＹＴＨＡＳＲＲＣＣＶＨＢ＊Ｎ＊Ｈ＊（式（ＩＩｈ）に従う配列番号４０）
Ｈ＊Ｈ＊ＡＡＭＧＧＣＹＣＴＴＴＴＨＡＧＲＧＣＣＶＭＹ＊Ｎ＊Ｍ＊（式（ＩＩｈ）に従う配列番号４１）
Ｈ＊Ｍ＊ＡＡＡＧＧＣＹＣＴＴＴＴＭＡＧＲＧＣＣＲＭＹ＊Ｈ＊Ｍ＊（式（ＩＩｈ）に従う配列番号４２）
さらに好ましい実施形態により、修飾ＲＮＡは、特定の式（Ｉ）または（Ｉａ）〜（Ｉｈ）または（ＩＩ）または（ＩＩａ）〜（ＩＩｈ）のうちの少なくとも１つに従うヒストンステムループ配列における１００％までは達しない程度に保存されているヌクレオチドに対して、または、自然発生ヒストンステムループ配列に対して、少なくとも約８０％、好ましくは少なくとも約８５％、より好ましくは少なくとも約９０％、またはさらにより好ましくは少なくとも約９５％の配列同一性を示す、少なくとも１つのヒストンステムループ配列を含むまたはコードする。
【０１８３】
ヒストンステムループ配列について特に好ましい実施例は、配列番号４３（CAAAGGCTCTTTTCAGAGCCACCA）に従う配列、または配列番号４４（CAAAGGCUCUUUUCAGAGCCACCA）に従う対応しているＲＮＡ配列である。
【０１８４】
ＵＴＲ修飾：
好ましくは、本発明の修飾ＲＮＡは、少なくとも１つの修飾５’および／または３’ＵＴＲ配列（ＵＴＲ修飾）を有する。５’および／または３’非翻訳領域（ＵＴＲ）におけるこれらの修飾は、サイトゾルにおけるＲＮＡの半減期を増加させる効果を持つ可能性があり、または、翻訳効率を上げ、そのためコードされたタンパク質またはペプチドの発現を亢進する可能性がある。これらのＵＴＲ配列は、ウイルス、細菌および真核生物において発生する天然配列と１００％の配列同一性を持つ可能性があり、部分的または完全に合成であり得る。例えばヒトまたはツメガエルからの、（アルファ）またはベータグロビン遺伝子の非翻訳配列（ＵＴＲ）は、安定化ＲＮＡのために用いられ得る安定化配列の例として述べられ得る。安定化配列の別の例は、（アルファ）グロビン、Ｉ型−コラーゲン、１５−リポオキシゲナーゼまたはチロシンヒドロオキシダーゼ(cf. Holcik et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1997, 94: 2410 to 2414)をコードする、非常に安定したＲＮＡの３’ＵＴＲにおいて含まれる一般的な式、(C/U)CCANxCCC(U/A)PyxUC(C/U)CCを有する。特に本発明の背景において好まれるのは、本書において“ｍｕａｇ”としてもまた記される、以下の配列GCCCGaTGGG CCTCCCAACG GGCCCTCCTC CCCTCCTTGC ACCG（配列番号４５）（ヌクレオチドの下線部は、野生型配列と比較した突然変異を示している）を含んでいる（アルファ）グロビンの変異ＵＴＲである。もちろん、このような導入されたＵＴＲ配列は、個別に、または相互に組み合わせて用いられる可能性があり、また当業者に知られた他の配列修飾と組み合わせても用いられ得る。
【０１８５】
好ましくは、減衰信号は、本発明のＲＮＡの３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）から除かれる。特に、アデニル化ウリジレートリッチ領域（ＡＲＥｓ）は、安定ｍＲＮＡ（例えばアルファ−またはベータ−グロビンｍＲＮＡ）の３’ＵＴＲによって置換される(Tavernier et al., J Control Release. 2011 Mar 30;150(3):238-47. PMID: 20970469を概観)。
【０１８６】
この背景において、アルファグロビンｍＲＮＡの３’ＵＴＲは、アルファグロビンｍＲＮＡのよく知られた安定性のための重要な要素であり得る(Rodgers et al., Regulated アルファ-globin mRNA decay is a cytoplasmic event proceeding through 3’-to-5’ exosome-dependent decapping, RNA, 8, pp. 1526-1537, 2002)ことが示されている。アルファ・グロビンｍＲＮＡの３’ＵＴＲは、特定のリボ核タンパク質複合体であり、その存在がin vitroにおけるｍＲＮＡ安定性と関連している、アルファ複合体の構成と明らかに関係している(Wang et al., An mRNA stability complex functions with poly(A)-binding protein to stabilize mRNA in vitro, Molecularand Cellular biology, Vol 19, No. 7, July 1999, p. 4552-4560)。
【０１８７】
この背景において、特に好ましいのは、本発明の修飾ＲＮＡにおいて含まれているオープンリーディングフレームを含んでいる遺伝子の天然５’−および／または３’−ＵＴＲが、修飾ＲＮＡにおいて除かれることである。そのため、本発明の修飾ＲＮＡは、オープンリーディングフレームに対して異種であるＵＴＲを好ましくは含む（もし修飾ＲＮＡにおいて存在するのであれば）。
【０１８８】
好ましい実施形態において、ジェット注射によって投与される１つの修飾ＲＮＡにおいて、上記の修飾の２つまたはそれ以上の組み合わせが存在し、上記組み合わせは、少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含む。特に好ましい実施形態においては、少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含んでいるＲＮＡが、（異種）３’ＵＴＲ、ポリ（Ａ）テール、ポリ（Ｃ）配列およびヒストンステムループの導入によって修飾される。好ましくは、上記３’ＵＴＲが、配列GCCCGaTGGG CCTCCCAACG GGCCCTCCTC CCCTCCTTGC ACCG（配列番号４５；ｍｕａｇ；ヌクレオチドの下線部は、野生型配列と比較した突然変異を示している）を含んでいる（アルファ−）グロビンの変異ＵＴＲであり、ポリ（Ａ）テールは６４アデニンヌクレオチドからなり、ポリ（Ｃ）配列は３０シトシンヌクレオチドからなり、ヒストンステムループは、好ましくは配列番号４４(CAAAGGCUCUUUUCAGAGCCACCA)のＲＮＡ配列である、式（Ｉ）または（ＩＩ）の１つから選択される構造を有する。最も好ましくは、特定の実施形態のＲＮＡが、図４（配列番号４６；さらに実施例１を参照）において示されている配列修飾を含む。
【０１８９】
さらなる実施形態によって、本発明の修飾ＲＮＡは、以下の構造要素の少なくとも１つを好ましくは含む：５’−および／または３’−非翻訳領域要素（ＵＴＲ要素）、ＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲまたはその断片、ホモログまたはバリアント由来の核酸配列を含むまたは上記核酸配列からなる、特に５’−ＵＴＲ要素、または安定ｍＲＮＡを供する遺伝子またはホモログ由来であり得る５’−および／または３’−ＵＴＲ要素、その断片またはバリアント；ヒストン−ステムループ構造、好ましくは自身の３’非翻訳領域におけるヒストン−ステムループ；５’−キャップ構造；ポリ−Ａテール；またはポリ（Ｃ）配列。
【０１９０】
本発明の第一の態様の好ましい実施形態において、本発明の修飾ＲＮＡは、少なくとも１つの５’−または３’−ＵＴＲの要素を含む。この背景において、ＵＴＲ要素は、任意の自然発生遺伝子の５’−または３’−ＵＴＲ、断片、遺伝子の５’−または３’−ＵＴＲのホモログまたはバリアント由来の核酸配列を含むまたは上記核酸配列からなる。好ましくは、本発明に用いられる５’−または３’−ＵＴＲ要素は、本発明の修飾ＲＮＡの翻訳領域に対して異種である。もし天然遺伝子由来の５’−または３’−ＵＴＲ要素が好まれたとしても、本発明の背景において人工的に設計したＵＴＲ要素もまた用いられ得る。
【０１９１】
本発明の第一の態様の特に好ましい実施形態において、本発明の修飾ＲＮＡの配列は、ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ、またはＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲの断片、ホモログまたはバリアント由来の核酸配列を含む、または上記核酸配列からなり、少なくとも１つの５’−非翻訳領域要素（５’ＵＴＲ要素）を含む。
【０１９２】
５’ＵＴＲ要素が、上記に定義されたＴＯＰ−モチーフまたは５’ＴＯＰを含まないことが特に好ましい。
【０１９３】
いくつかの実施形態において、ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ由来の５’ＵＴＲ要素の核酸配列は、遺伝子の開始コドン（例えばＡ（Ｕ／Ｔ）Ｇ）の上流１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０に位置するヌクレオチドを伴う３’末端において、または由来したｍＲＮＡにおいて終了する。そのため、５’ＵＴＲ要素は、タンパク質コード領域の任意の部分を含まない。そのため、好ましくは、本発明の修飾ＲＮＡのタンパク質コード領域のみが、コード領域によって提供される。
【０１９４】
ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ由来の核酸配列は、真核性ＴＯＰ遺伝子、好ましくは植物または動物ＴＯＰ遺伝子、より好ましくは脊索動物ＴＯＰ遺伝子、さらにより好ましくは脊椎動物ＴＯＰ遺伝子、最も好ましくはヒトＴＯＰ遺伝子のような哺乳類ＴＯＰ遺伝子の由来である。
【０１９５】
例えば、５’ＵＴＲ要素は、その開示が参照によって本書に組み入れられている出願番号第２０１３／１４３７００の配列番号１−１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２からなる群から選択される核酸配列、ホモログの配列番号１−１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１４２２、そのバリアント、または好ましくは対応するＲＮＡ配列由来の核酸配列を含んでいるまたは上記核酸配列からなる、５’−ＵＴＲ要素から、好ましくは選択される。上記の用語“出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１−１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２のホモログ”は、出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１−１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２の配列と相同であるヒト以外の配列を述べている。
【０１９６】
好ましい実施形態において、５’ＵＴＲ要素は、出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１−１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２、および出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１−１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２のホモログ、そのバリアント、または対応するＲＮＡ配列から選択される核酸配列の、例えばＡＴＧ配列のすぐ５’側のヌクレオチドの部位である、５番目のヌクレオチド部位（すなわち配列において５番目に位置しているヌクレオチド）から開始コドン（配列の３’末端に位置する）のすぐ５’側のヌクレオチドの部位へと伸びている核酸配列由来の核酸配列を含む、または上記核酸配列からなる５’ＵＴＲ要素である。５’ＵＴＲ要素は、出願番号第２０１３／１４３７００の配列番号１−１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２からなる群から選択される核酸配列、出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１−１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２のホモログ、そのバリアント、または好ましくは対応するＲＮＡ配列から選択される核酸配列の、例えばＡＴＧ配列のすぐ５’側のヌクレオチドの部位である、５’ＴＯＰのすぐ３’側のヌクレオチドの部位から開始コドン（配列の３’末端に位置する）のすぐ５’側のヌクレオチドの部位へと伸びている核酸配列由来の５’ＵＴＲ要素であることが、特に好まれる。
【０１９７】
特に好ましい実施形態において、５’ＵＴＲ要素は、リボソームタンパク質をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ由来の核酸配列、またはリボソームタンパク質をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲのバリアント由来の核酸配列を含んでいる。例えば、５’ＵＴＲは、出願番号２０１３／１４３７００の任意の配列番号：６７、１７０、１９３、２４４、２５９、５５４、６５０、６７５、７００、７２１、９１３、１０１６、１０６３、１１２０、１１３８、および１２８４−１３６０の核酸配列の５’ＵＴＲ、対応するＲＮＡ配列、そのホモログ、または好ましくは５’ＴＯＰモチーフを欠いている本書に記載されたバリアント由来の核酸配列を含む、または上記核酸配列からなる５’ＵＴＲ要素である。上記に述べられたように、ＡＴＧ（配列の３’末端に位置する）のすぐ５’側のヌクレオチドへ、５から伸びている配列は、上記配列の５’ＵＴＲに対応する。
【０１９８】
好ましくは、５’ＵＴＲ要素は、リボソーム巨大タンパク質（ＲＰＬ）をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ由来の核酸配列、またはリボソーム巨大タンパク質（ＲＰＬ）をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲのホモログまたはバリアント由来の核酸配列を含む、または上記核酸配列からなる５’ＵＴＲ要素である。例えば、５’ＵＴＲ要素は、出願番号２０１３／１４３７００の任意の配列番号：６７、２５９、１２８４−１３１８、１３４４、１３４６、１３４８−１３５４、１３５７、１３５８、１４２１および１４２２の核酸配列の５’ＵＴＲ、対応するＲＮＡ配列、そのホモログ、または好ましくは５’ＴＯＰモチーフを欠いている本書で述べられているバリアント由来の核酸配列を含む、または上記核酸配列からなる５’ＵＴＲ要素である。
【０１９９】
特に好ましい実施形態において、５’ＵＴＲ要素は、リボソームタンパク質ラージ３２遺伝子の５’ＵＴＲ、好ましくは脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ３２（Ｌ３２）遺伝子、より好ましくは哺乳類のリボソームタンパク質ラージ３２（Ｌ３２）遺伝子、もっとも好ましくはヒトのリボソームタンパク質ラージ３２（Ｌ３２）遺伝子、またはリボソームタンパク質ラージ３２遺伝子の５’ＵＴＲのバリアント、好ましくは脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ３２（Ｌ３２）遺伝子、より好ましくは哺乳類のリボソームタンパク質ラージ３２（Ｌ３２）遺伝子、もっとも好ましくはヒトのリボソームタンパク質ラージ３２（Ｌ３２）遺伝子（ここで、好ましくは５’ＵＴＲ要素が、上記遺伝子の５’ＴＯＰを含んでいない）由来の核酸配列を含む、または上記核酸配列からなる５’ＵＴＲ要素である。
【０２００】
従って、特に好ましい実施形態において、５’ＵＴＲ要素は、配列番号５５（５’末端オリゴピリミジントラクトを欠いているヒトのリボソームタンパク質ラージ３２の５’−ＵＴＲ：GGCGCTGCCTACGGAGGTGGCAGCCATCTCCTTCTCGGCATC；出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１３６８に対応する）の核酸配列に対して、または好ましくは対応するＲＮＡ配列に対して、少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、さらにより好ましくは少なくとも約９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む、または上記核酸配列からなる５’ＵＴＲ要素であり、または、ここで少なくとも１つの５’ＵＴＲ要素は、配列番号５５の上記核酸配列に対して、またはより好ましくは対応するＲＮＡ配列であり、好ましくは上記の断片、すなわち全長５’ＵＴＲの少なくとも２０％等を表しているヌクレオチドの連続的な伸長となっている断片に対して、少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、さらにより好ましくは少なくとも約９５％、さらにより好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列の断面を含む、または上記核酸配列の断面からなる５’ＵＴＲ要素である。好ましくは、上記断片は、少なくとも約２０ヌクレオチドまたはそれ以上、好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチドまたはそれ以上、より好ましくは少なくとも約４０ヌクレオチドまたはそれ以上の長さを示す。好ましくは、断片は、本書で述べられている機能的断片である。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、本発明の修飾ＲＮＡは、ＲＰＳＡ、ＲＰＳ２、ＲＰＳ３、ＲＰＳ３Ａ、ＲＰＳ４、ＲＰＳ５、ＲＰＳ６、ＲＰＳ７、ＲＰＳ８、ＲＰＳ９、ＲＰＳ１０、ＲＰＳ１１、ＲＰＳ１２、ＲＰＳ１３、ＲＰＳ１４、ＲＰＳ１５、ＲＰＳ１５Ａ、ＲＰＳ１６、ＲＰＳ１７、ＲＰＳ１８、ＲＰＳ１９、ＲＰＳ２０、ＲＰＳ２１、ＲＰＳ２３、ＲＰＳ２４、ＲＰＳ２５、ＲＰＳ２６、ＲＰＳ２７、ＲＰＳ２７Ａ、ＲＰＳ２８、ＲＰＳ２９、ＲＰＳ３０、ＲＰＬ３、ＲＰＬ４、ＲＰＬ５、ＲＰＬ６、ＲＰＬ７、ＲＰＬ７Ａ、ＲＰＬ８、ＲＰＬ９、ＲＰＬ１０、ＲＰＬ１０Ａ、ＲＰＬ１１、ＲＰＬ１２、ＲＰＬ１３、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＰＬ１４、ＲＰＬ１５、ＲＰＬ１７、ＲＰＬ１８、ＲＰＬ１８Ａ、ＲＰＬ１９、ＲＰＬ２１、ＲＰＬ２２、ＲＰＬ２３、ＲＰＬ２３Ａ、ＲＰＬ２４、ＲＰＬ２６、ＲＰＬ２７、ＲＰＬ２７Ａ、ＲＰＬ２８、ＲＰＬ２９、ＲＰＬ３０、ＲＰＬ３１、ＲＰＬ３２、ＲＰＬ３４、ＲＰＬ３５、ＲＰＬ３５Ａ、ＲＰＬ３６、ＲＰＬ３６Ａ、ＲＰＬ３７、ＲＰＬ３７Ａ、ＲＰＬ３８、ＲＰＬ３９、ＲＰＬ４０、ＲＰＬ４１、ＲＰＬＰ０、ＲＰＬＰ１、ＲＰＬＰ２、ＲＰＬＰ３、ＲＰＬＰ０、ＲＰＬＰ１、ＲＰＬＰ２、ＥＥＦ１Ａ１、ＥＥＦ１Ｂ２、ＥＥＦ１Ｄ、ＥＥＦ１Ｇ、ＥＥＦ２、ＥＩＦ３Ｅ、ＥＩＦ３Ｆ、ＥＩＦ３Ｈ、ＥＩＦ２Ｓ３、ＥＩＦ３Ｃ、ＥＩＦ３Ｋ、ＥＩＦ３ＥＩＰ、ＥＩＦ４Ａ２、ＰＡＢＰＣ１、ＨＮＲＮＰＡ１、ＴＰＴ１、ＴＵＢＢ１、ＵＢＡ５２、ＮＰＭ１、ＡＴＰ５Ｇ２、ＧＮＢ２Ｌ１、ＮＭＥ２、ＵＱＣＲＢ、またはそのホモログまたはバリアントから選択された、例えばヒトＴＯＰ遺伝子、哺乳類等の、脊椎動物ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ由来の核酸配列を含む、または上記核酸配列からなる５’ＵＴＲ要素を含み、ここで好ましくは、上記５’ＵＴＲ要素は、ＴＯＰ−モチーフまたは上記遺伝子の５’ＴＯＰを含まず、ここで５’ＵＴＲ要素は任意で、５’末端オリゴピリミジントラクト（ＴＯＰ）の下流１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０において位置するヌクレオチドを伴うその５’末端において開始され、ここでＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ由来のさらなる任意の５’ＵＴＲ要素は、自身が由来する遺伝子の開始コドン（Ａ（Ｕ／Ｔ）Ｇ）の上流１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０において位置するヌクレオチドを伴うその３’末端において終了する。さらなる特に好ましい実施形態において、５’ＵＴＲ要素は、リボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（ＲＰＬ３２）の５’ＵＴＲ、リボソームタンパク質ラージ３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、リボソームタンパク質ラージ２１遺伝子（ＲＰＬ２１）、ＡＴＰ合成、Ｈ＋輸送、ミトコンドリアＦ１複合体、アルファサブユニット１、心筋（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、ヒドロキシステロイド（１７−ベータ）脱水素酵素４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、アンドロゲン−誘発１遺伝子（ＡＩＧ１）、チトクロムｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）、またはＮ−アシルスフィンゴシンアミノヒドラーゼ（酸性セラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）またはそのバリアント、好ましくは脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ２１遺伝子（ＲＰＬ２１）、脊椎動物のＡＴＰ合成、Ｈ＋輸送、ミトコンドリアＦ１複合体、アルファサブユニット１、心筋（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、脊椎動物のヒドロキシステロイド（１７−ベータ）脱水素酵素４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、脊椎動物アンドロゲン−誘発１遺伝子（ＡＩＧ１）、脊椎動物チトクロムｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）、または脊椎動物Ｎ−アシルスフィンゴシンアミノヒドラーゼ（酸性セラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）またはそのバリアント、より好ましくは哺乳類リボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、リボソームタンパク質ラージ３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、リボソームタンパク質ラージ２１遺伝子（ＲＰＬ２１）、哺乳類ＡＴＰ合成、Ｈ＋輸送、ミトコンドリアＦ１複合体、アルファサブユニット１、心筋（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、哺乳類ヒドロキシステロイド（１７−ベータ）脱水素酵素４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、哺乳類アンドロゲン−誘発１遺伝子（ＡＩＧ１）、哺乳類チトクロムｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）、または哺乳類Ｎ−アシルスフィンゴシンアミドヒドラーゼ（酸性セラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）またはそのバリアント、最も好ましくはヒトリボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、ヒトリボソームタンパク質ラージ３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、ヒトリボソームタンパク質ラージ２１遺伝子（ＲＰＬ２１）、ヒトＡＴＰ合成、Ｈ＋輸送、ミトコンドリアＦ１複合体、アルファサブユニット１、心筋（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、ヒトヒドロキシステロイド（１７−ベータ）脱水素酵素４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、ヒトアンドロゲン−誘発１遺伝子（ＡＩＧ１）、ヒトチトクロムｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）、またはヒトＮ−アシルスフィンゴシンアミノヒドラーゼ（酸性セラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）または、好ましくは５’ＵＴＲ要素は上記遺伝子の５’ＴＯＰを含んでいないそのバリアント由来の核酸配列を含む、または上記核酸配列からなる５’ＵＴＲ要素である。
【０２０２】
特に好ましい実施形態においては、５’ＵＴＲ要素は、ヒドロキシステロイド（１７−ベータ）脱水素酵素４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）の５’ＵＴＲ、好ましくは脊椎動物ヒドロキシステロイド（１７−ベータ）脱水素酵素４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、より好ましくは哺乳類ヒドロキシステロイド（１７−ベータ）脱水素酵素４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、最も好ましくはヒトヒドロキシステロイド（１７−ベータ）脱水素酵素４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）由来の核酸配列を含む、または上記核酸配列からなる５’ＵＴＲ要素である。好ましい実施形態においては、５’ＵＴＲ要素は、配列番号５４の核酸配列に含まれている５’ＵＴＲに対して、少なくとも約４０％，好ましくは少なくとも約５０％，好ましくは少なくとも約６０％，好ましくは少なくとも約７０％，より好ましくは少なくとも約８０％，より好ましくは少なくとも約９０％，さらにより好ましくは少なくとも約９５％，さらにより好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列を含む、または上記核酸配列からなる５’ＵＴＲ要素である。好ましくは、５’ＵＴＲは、配列番号５４の核酸配列に含まれているような５’ＵＴＲを含む、または上記５’ＵＴＲからなる５’ＵＴＲである。
【０２０３】
従って、特に好ましい実施形態において、５’ＵＴＲ要素は、出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１３６８，または配列番号１４１２−１４２０の核酸配列、あるいは対応するＲＮＡ配列に対して、少なくとも約４０％，好ましくは少なくとも約５０％，好ましくは少なくとも約６０％，好ましくは少なくとも約７０％，より好ましくは少なくとも約８０％，より好ましくは少なくとも約９０％，さらにより好ましくは少なくとも約９５％，さらにより好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列を含む、または上記核酸配列からなる５’ＵＴＲ要素であり、または、ここで少なくとも１つの５’ＵＴＲ要素は、配列番号１３６８の核酸配列または出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１４１２−１４２０に対して、少なくとも約４０％，好ましくは少なくとも約５０％，好ましくは少なくとも約６０％，好ましくは少なくとも約７０％，より好ましくは少なくとも約８０％，より好ましくは少なくとも約９０％，さらにより好ましくは少なくとも約９５％，さらにより好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列の断片を含む、または上記断片からなる５’ＵＴＲ要素であり、ここで好ましくは上記断片は、上記に述べられたように、全長５’ＵＴＲのすなわち少なくとも２０％等に相当するヌクレオチドの連続的な伸長である。好ましくは、断片は、少なくとも約２０ヌクレオチドまたはそれ以上、好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチドまたはそれ以上、より好ましくは少なくとも約４０ヌクレオチドまたはそれ以上の長さを示す。好ましくは、断片は、本書で述べられている機能的断片である。
【０２０４】
従って、特に好ましい実施形態において、５’ＵＴＲ要素は、配列番号５６（５’末端オリゴピリミジントラクトを欠いているＡＴＰ５Ａ１の５’−ＵＴＲ：GCGGCTCGGCCATTTTGTCCCAGTCAGTCCGGAGGCTGCGGCTGCAGAAGTACCGCCTGCG-GAGTAACTGCAAAG；出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１４１４に対応する）の核酸配列または好ましくは対応するＲＮＡ配列に対して、少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、さらにより好ましくは少なくとも約９５％、さらにより好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列を含む、または上記核酸配列からなる５’ＵＴＲ要素であり、またはここで少なくとも１つの５’ＵＴＲ要素は、配列番号２６の核酸配列またはより好ましくは対応するＲＮＡ配列に対して少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、さらにより好ましくは少なくとも約９５％、さらにより好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列の断片を含む、または上記断片からなる５’ＵＴＲ要素であり、ここで好ましくは上記断片は、上記に述べられたように、すなわち全長５’ＵＴＲの少なくとも２０％等に相当するヌクレオチドの連続的な伸長である。好ましくは、断片は、少なくとも約２０ヌクレオチドまたはそれ以上、好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチドまたはそれ以上、より好ましくは少なくとも約４０ヌクレオチドまたはそれ以上の長さを示す。好ましくは、断片は、本書で述べられている機能的断片である。
【０２０５】
より好ましい実施形態において、本発明の修飾ＲＮＡは、脊索動物遺伝子の３’ＵＴＲ、好ましくは脊椎動物遺伝子、より好ましくは哺乳類遺伝子、最も好ましくはヒト遺伝子、または脊索動物遺伝子の３’ＵＴＲのバリアント、好ましくは脊椎動物遺伝子、より好ましくは哺乳類遺伝子、最も好ましくはヒト遺伝子由来の核酸配列を含む、または上記核酸配列からなる少なくとも１つの３’ＵＴＲ要素をさらに含む。
【０２０６】
’３’ＵＴＲ要素’という用語は、３’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲのバリアント由来の核酸配列を含む、または上記核酸配列からなる核酸配列を指す。本発明の意図において３’ＵＴＲ要素は、ｍＲＮＡの３’ＵＴＲに相当し得る。そのため、本発明の意図において、好ましくは、３’ＵＴＲ要素は、ｍＲＮＡの３’ＵＴＲ、好ましくは人工ｍＲＮＡになり得、またはｍＲＮＡの３’ＵＴＲのための転写テンプレートになり得る。そのため、３’ＵＴＲ要素は、好ましくはｍＲＮＡの３’ＵＴＲに対応する、好ましくは遺伝子組み換えベクターコンストラクトの転写によって得られたｍＲＮＡ等の、人工ｍＲＮＡの３’ＵＴＲに対して対応する、核酸配列である。好ましくは、３’ＵＴＲ要素は、３’ＵＴＲの機能を満たす、または３’ＵＴＲの機能を満たす配列をコードする。
【０２０７】
好ましくは、本発明のｍＲＮＡは、例えば下記に定義され述べられている３’ＵＴＲ要素である、亢進された半減期（それは安定ｍＲＮＡを提供する）を有するｍＲＮＡに関連する遺伝子由来の３’ＵＴＲ要素を含む。
【０２０８】
特に好ましい実施形態において、３’ＵＴＲ要素は、アルブミン遺伝子、アルファ−グロビン遺伝子、ベータ−グロビン遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ遺伝子、リポオキシゲナーゼ遺伝子、およびコラーゲンアルファ１（Ｉ）遺伝子等のコラーゲンアルファ遺伝子、からなる群から選択される遺伝子の３’ＵＴＲ、またはアルブミン遺伝子からなる群から選択される遺伝子の３’ＵＴＲのバリアント、アルファ−グロビン遺伝子、ベータ−グロビン遺伝子、チロシン水酸化酵素遺伝子、リポオキシゲナーゼ遺伝子、および参照によって本書に組み入れられている開示、出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１３６９−１３９０のコラーゲンアルファ１（Ｉ）遺伝子等の、コラーゲンアルファ遺伝子由来の核酸配列を含む、または上記核酸配列からなる３’ＵＴＲ要素である。特に好ましい実施形態において、３’ＵＴＲ要素は、アルブミン遺伝子の３’ＵＴＲ、好ましくは脊椎動物アルブミン遺伝子、より好ましくは哺乳類アルブミン遺伝子、最も好ましくは配列番号５７のヒトアルブミン遺伝子由来の核酸配列を含む、または上記核酸配列からなる３’ＵＴＲ要素である。
ヒトアルブミン３’ＵＴＲ配列番号５７：
CATCACATTT AAAAGCATCT CAGCCTACCA TGAGAATAAG AGAAAGAAAA TGAAGATCAA AAGCTTATTC ATCTGTTTTT CTTTTTCGTT GGTGTAAAGC CAACACCCTG TCTAAAAAAC ATAAATTTCT TTAATCATTT TGCCTCTTTT CTCTGTGCTT CAATTAATAA AAAATGGAAA GAATCT（出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１３６９に対応）。
【０２０９】
この背景において、本発明の修飾ＲＮＡは、出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１３６９−１３９０の核酸由来の対応するＲＮＡ配列を有している３’−ＵＴＲ要素、または断片、ホモログまたはそのバリアントを含むことが特に好ましい。
【０２１０】
最も好ましくは、３’−ＵＴＲ要素は、配列番号５８のヒトアルブミン遺伝子の断片由来の核酸配列を含む。
アルブミン７３’ＵＴＲ
CATCACATTTAAAAGCATCTCAGCCTACCATGAGAATAAGAGAAAGAAAATGAAGATCAATAGCTTATTCATCTCTTTTTCTTTTTCGTTGGTGTAAAGCCAACACCCTGTCTAAAAAACATAAATTTCTTTAATCATTTTGCCTCTTTTCTCTGTGCTTCAATTAATAAAAAATGGAAAGAACCT（出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１３７６に対応する配列番号５８）。
【０２１１】
この背景において、本発明のｍＲＮＡの３’−ＵＴＲ要素は、配列番号５８の核酸配列の対応するＲＮＡ配列を含む、または上記対応するＲＮＡ配列からなることが特に好ましい。
【０２１２】
別の特に好ましい実施形態において、３’−ＵＴＲ要素は、アルファ−グロビン遺伝子の３’ＵＴＲ由来の核酸配列、好ましくは脊椎動物アルファ−またはベータ−グロビン遺伝子，より好ましくは哺乳類アルファ−またはベータ−グロビン遺伝子，最も好ましくは配列番号５９−６１のヒトアルファ−またはベータ−グロビン遺伝子：
ヒトヘモグロビンの３’−ＵＴＲ、アルファ１（ＨＢＡ１）
GCTGGAGCCTCGGTGGCCATGCTTCTTGCCCCTTGGGCCTCCCCCCAGCCCCTCCTCCCCTTCCTGCACCCGTACCCCCGTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCGGC（出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１３７０に対応する配列番号：５９）
ヒトヘモグロビンの３’−ＵＴＲ、アルファ２（ＨＢＡ２）
GCTGGAGCCTCGGTAGCCGTTCCTCCTGCCCGCTGGGCCTCCCAACGGGCCCTCCTCCCCTCCTTGCACCGGCCCTTCCTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCAG（出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１３７１に対応する配列番号６０）
ヒトヘモグロビンの３’−ＵＴＲ、ベータ（ＨＢＢ）
GCTCGCTTTCTTGCTGTCCAATTTCTATTAAAGGTTCCTTTGTTCCCTAAGTCCAACTACTAAACTGGGGGATATTATGAAGGGCCTTGAGCATCTGGATTCTGCCTAATAAAAAACATTTATTTTCATTGC（出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１３７２に対応する配列番号６１）
例えば、３’ＵＴＲ要素は、好ましくは配列番号６２のヒトアルファ−グロビン遺伝子等の、アルファ−グロビン遺伝子の３’ＵＴＲの中心、アルファ−複合体−結合部位を含み得る、または上記アルファ−複合体−結合部位からなり得る。
中心、アルファ−グロビン遺伝子の３’ＵＴＲのアルファ−複合体−結合部位（本書において“ｍｕａｇ”としてもあげられる）
GCCCGATGGGCCTCCCAACGGGCCCTCCTCCCCTCCTTGCACCG（出願番号２０１３／１４３７００の配列番号１３９３に対応する配列番号６２）。
【０２１３】
この背景において、本発明の修飾ＲＮＡの３’−ＵＴＲ要素は、配列番号６２の核酸配列の対応するＲＮＡ配列、またはホモログ、断片またはそのバリアントを含む、またはからなることが特に好ましい。
【０２１４】
“［…］遺伝子の３’ＵＴＲ由来の核酸配列”という用語は、アルブミン遺伝子の３’ＵＴＲ等においての［…］遺伝子またはその部分、アルファ−グロビン遺伝子、ベータ−グロビン遺伝子、チロシン水酸化酵素遺伝子、リポオキシゲナーゼ遺伝子、または好ましくはアルブミン遺伝子あるいはその部分の、コラーゲンアルファ１（Ｉ）遺伝子等の、コラーゲンアルファ遺伝子の３’ＵＴＲ配列に基づいた核酸配列を好ましくは指す。この用語は、すなわち遺伝子の全長３’ＵＴＲ配列、および遺伝子の３’ＵＴＲ配列の断片に対応する配列、アルブミン遺伝子、アルファ−グロビン遺伝子、ベータ−グロビン遺伝子、チロシン水酸化酵素遺伝子、リポオキシゲナーゼ遺伝子、または好ましくはアルブミン遺伝子である、コラーゲンアルファ１（Ｉ）遺伝子等の、コラーゲンアルファ遺伝子である、全３’ＵＴＲ配列に対応する配列を含む。
【０２１５】
“［…］遺伝子の３’ＵＴＲのバリアント由来の核酸配列”という用語は、アルブミン遺伝子の３’ＵＴＲのバリアント等の、遺伝子の３’ＵＴＲ配列のバリアント、アルファ−グロビン遺伝子、ベータ−グロビン遺伝子、チロシン水酸化酵素遺伝子、リポオキシゲナーゼ遺伝子、またはコラーゲンアルファ１（Ｉ）遺伝子あるいは上記に述べられたその部分等の、コラーゲンアルファ遺伝子に基づく核酸配列を好ましくは指す。この用語は、すなわち遺伝子の全長バリアント３’ＵＴＲ配列、および遺伝子のバリアント３’ＵＴＲ配列の断片に対応する配列の、遺伝子の３’ＵＴＲのバリアントの全配列に対応する配列を含む。この背景における断片は、全長バリアント３’ＵＴＲの、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、さらにより好ましくは少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、および最も好ましくは少なくとも９０％に相当する全長バリアント３’ＵＴＲにおけるヌクレオチドの連続的な伸長に対応しているヌクレオチドの連続的な伸長を好ましくは含む。本発明の意図において、バリアントのこのような断片は、好ましくは本書で述べられているバリアントの機能的断片である。
【０２１６】
好ましくは、少なくとも１つの５’ＵＴＲ要素および少なくとも１つの３’ＵＴＲ要素は、上記に述べられた本発明の修飾ＲＮＡからのタンパク質生成を相乗的に促進するために作用する。より好ましくは、少なくとも１つの５’ＵＴＲ要素および／または少なくとも１つの３’ＵＴＲ要素は、タンパク質生成を促進するために修飾ＲＮＡのジェット注射によって共に相乗的に作用する。
【０２１７】
さらなる特異的な実施形態において、本発明の修飾ＲＮＡは、少なくとも１つの修飾に加えて、例えば、修飾ＲＮＡ２つ、またはそれ以上のペプチドあるいはタンパク質をコードする場合、いくつかのオープンリーディングフレームを分離し得る、内部リボソーム導入部位（ＩＲＥＳ）配列またはＩＲＥＳ−モチーフをさらに含む。ＩＲＥＳ−配列は、ｍＲＮＡがバイまたはマルチシストロン性のＲＮＡである場合、特に有益になり得る。
【０２１８】
本発明の背景において用いられる場合、“ＲＮＡ”という用語は、制限することなく任意のリボ核酸を指す。そのため、ＲＮＡという用語は、例えば、ウイルスＲＮＡ、レプリコン、またはｍＲＮＡ、あるいは任意の型の人工ＲＮＡコンストラクトとして、コーディングＲＮＡとして機能するリボ核酸に、等しく適用される。
【０２１９】
好ましい実施形態において、修飾ＲＮＡは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）または低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）ではない。好ましくは、修飾ＲＮＡは、抵抗性遺伝子に対するｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡではなく、好ましくはＭＤＲ１／Ｐ−ｇｐ等の多剤耐性遺伝子である。
【０２２０】
本発明によると、ＲＮＡは、ＲＮＡのコード領域によってコードされたペプチドまたはタンパク質の発現を促進する少なくとも１つの修飾を含む。好ましい実施形態において、本発明のＲＮＡは、本書に定義されている修飾の少なくとも１つの型を含む。別の好ましい実施形態において、本発明のＲＮＡは、ＲＮＡのコード領域によってコードされたペプチドまたはタンパク質の発現を促進する修飾の少なくとも２つの異なった型を含む。好ましくは、本発明のＲＮＡは、修飾の異なった型を少なくとも２、３、４、５、６、７、
８、９、１０、１１または１２含む。あるいは、修飾の他の型との組み合わせにおいて、３’ＵＴＲ、ヒストンステムループまたはポリＣ配列等の本書に定義されている特異的な修飾は、本発明の修飾ＲＮＡにおいて１つ以上の複写にもまた存在し得る。これは、特にバイまたはマルチシストロン性のＲＮＡについて正しい。本発明の修飾ＲＮＡは、例えば任意の５’ＵＴＲ、ポリＣ配列、ポリＡ配列、３’ＵＴＲまたはヒストンステムループとの組み合わせにおけるＧＣ−エンリッチ等の、いくつかの異なった修飾の組み合わせを含む可能性があり、ここで各異なった修飾は、ＲＮＡにつき単一の複写の型において、またはＲＮＡにつき複数の複写の型において存在し得る。
【０２２１】
本発明のＲＮＡの好ましい実施形態は、例えば、以下を含み得る、
５’−コード領域−ヒストンステムループ−３’；
５’−コード領域−ヒストンステムループ−ポリ（Ａ）／（Ｃ）配列−３’；または
５’−コード領域−ポリ（Ａ）／（Ｃ）配列−ヒストンステムループ−３’；または
５’−コード領域−ヒストンステムループ−ポリアデニレーションシグナル−３’；または
５’−コード領域−ポリアデニレーションシグナル−ヒストンステムループ−３’；または
５’−コード領域−ヒストンステムループ−ヒストンステムループ−ポリ（Ａ）／（Ｃ）配列−３’；または
５’−コード領域−ヒストンステムループ−ヒストンステムループ−ポリアデニレーションシグナル−３’；または
５’−コード領域−ポリ（Ａ）／（Ｃ）配列−ポリ（Ａ）／（Ｃ）配列−ヒストンステムループ−３’；など、
ここで、コード領域は、好ましくは本書に定義されているＧＣエンリッチ配列を含む、または上記ＧＣエンリッチ配列からなり、および
ここで、５’ＵＴＲ要素は、コード領域の５側において好ましくは存在し、および／または３’ＵＴＲ要素は、コード領域の３’末端とＲＮＡの３’終端との間に好ましくは存在する。
【０２２２】
修飾ＲＮＡの特異的実施形態は、例えば、以下に記載されている構造的な特徴と修飾との組み合わせの任意の１つを含み得る。
５’−コード領域−ポリ（Ａ）配列−３’；
５’−コード領域−ポリ（Ａ）配列−ポリ（Ｃ）配列−３’；
５’−コード領域−ポリ（Ａ）配列−ポリ（Ｃ）配列−ヒストンステムループ−３’；
５’−コード領域−３’ＵＴＲ−ポリ（Ａ）配列−３’；
５’−コード領域−３’ＵＴＲ−ポリ（Ａ）配列−ポリ（Ｃ）配列−３’；
５’−コード領域−３’ＵＴＲ−ポリ（Ａ）配列−ポリ（Ｃ）配列−ヒストンステムループ−３’；
５’−５’ＵＴＲ−コード領域−ポリ（Ａ）配列−３’；
５’−５’ＵＴＲ−コード領域−ポリ（Ａ）配列−ポリ（Ｃ）配列−３’；
５’−５’ＵＴＲ−コード領域−ポリ（Ａ）配列−ポリ（Ｃ）配列−ヒストンステムループ−３’；
５’−コード領域−３’ＵＴＲ−ポリ（Ａ）配列−３’；
５’−５’ＵＴＲ−コード領域−３’ＵＴＲ−ポリ（Ａ）配列−ポリ（Ｃ）配列−３’；
５’−５’ＵＴＲ−コード領域−３’ＵＴＲ−ポリ（Ａ）配列−ポリ（Ｃ）配列−ヒストンステムループ−３’；
ここでコード領域は、本書に定義されているＧＣエンリッチ配列を好ましくは含む、または上記ＧＣエンリッチ配列からなることが好ましい。
【０２２３】
コードされたタンパク質：
好ましい実施形態において、修飾ＲＮＡは、治療的タンパク質またはペプチドをコードする少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含む。別の実施形態において、抗原は、病原性抗原、腫瘍抗原、アレルゲン抗原または自己免疫抗原等の、少なくとも１つのオープンリーディングフレームによってコードされる。そこで、抗原をコードする修飾ＲＮＡの投与は、上記抗原に係る疾患に対して遺伝的ワクチン接種方法において
用いられる。
【０２２４】
代替的な実施形態において、抗体は、本発明の修飾ＲＮＡの少なくとも１つのオープンリーディングフレームによってコードされる。
【０２２５】
好ましい実施形態において、本発明の修飾ＲＮＡは、レポーター遺伝子またはマーカー遺伝子を含まない。好ましくは、本発明の修飾ＲＮＡは、例えば、ルシフェラーゼ；緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）およびそのバリアント（ｅＧＦＰ、ＲＦＰまたはＢＦＰ等）；アルファ−グロビン；ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ）；ベータ−ガラクトシダーゼ；ガラクトキナーゼ；アルカリフォスファターゼ；分泌型胚性アルカリフォスファターゼ（ＳＥＡＰ））または抵抗性遺伝子（ネオマイシン、ピュロマイシン、ハイグロマイシンおよびゼオシンに対する抵抗性遺伝子等）をコードしない。好ましい実施形態において、本発明の修飾ＲＮＡは、ルシフェラーゼをコードしない。別の実施形態において、本発明の修飾ＲＮＡは、ＧＦＰまたはそのバリアントをコードしない。
【０２２６】
抗原：
病原性抗原：
本発明の修飾ＲＮＡは、病原性抗原または断片、バリアントまたはその誘導体を含む、タンパク質またはペプチドをコードし得る。このような病原性抗原は、特に哺乳類被検体、とりわけヒトの、被検体における免疫反応を引き起こす、特に細菌性、ウイルス性または原生動物学的（多細胞）病原菌である病原菌由来である。より具体的には、病原性抗原は、例えばウイルスまたは細菌性あるいは原生動物学的有機体の表面において位置するタンパク質（またはタンパク質の断片、例えば表面抗原の外部）である、好ましくは表面抗原である。
【０２２７】
病原性抗原は、以下の病原体由来の抗原から好ましくは選択される、感染症に関連する病原体由来のペプチドまたはタンパク質抗原である；病原体アシネトバクター・バウアンニ、アナプラズマ属、アナプラズマファゴサイトフィルム、ブラジル鉤虫、ズビニ鉤虫、溶血性アルカノバクテリア、ヒトカイチュウ、コウジカビ、アストロウイルスファミリー、バベシア属、炭疽菌、セレウス菌、バルトネラ・ヘンセラ菌、ＢＫウイルス、ブラストシスチスホミニス、ブラストミセスデルマチジス、百日咳菌、ボレリア・ブルグドルフェリ、ボレリア属、ボレリアｓｐｐ、ブルセラ属、マレー糸状虫、ブニヤウイルスファミリー、バークホルデリアセパシアおよび他のバークホルデリア種、バークホルデリアマレイ、バークホルデリアシュードマレイ、カリシウイルスファミリー、カンピロバクター属、カンジダアルビカンズ、カンジダｓｐｐ、クラミジアトラコマティス、クラミドフィラニューモニエ、クラミドフィラシタッタ、ＣＪＤプリオン、肝吸虫、ボツリヌス菌、クロストリジウムディフィシレ、クロストリジウムパーフリンゲンス、クロストリジウムパーフリンゲンス、クロストリジウムｓｐｐ、クロストリジウムテタニ、コクシジオイデスｓｐｐ、コロナウイルス、コリネバクテリウムジフセリエ、コクシエラバーネッティ、クリミア−コンゴ出血熱ウイルス、クリプトコックスネオフォルマンス、クリプトスポリジウム属、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、デングウイルス（ＤＥＮ−１、ＤＥＮ−２、ＤＥＮ−３およびＤＥＮ−４）、２核アメーバ、エボラウイルス（ＥＢＯＶ）、エキノコックス属、エーリキアシャフェンシス、エーリキアエウィンギ（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｅｗｉｎｇｉｉ）、エーリキア属、赤痢アメーバ、エンテロコッカス属、エンテロウイルス属、エンテロウイルス、主にコクサッキ−Ａウイルスおよびエンテロウイルス７１（ＥＶ７１）、エピデルモフィトンｓｐｐ、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７、Ｏ１１１およびＯ１０４：Ｈ４、肝蛭および巨大肝蛭、ＦＦＩプリオン、フィラリア上ファミリースーパーファミリー、フラビウイルス、フランシセラツレランス、フソバクテリウム属、ゲオトリクムカンジドゥム、ランブル鞭毛、顎口虫ｓｐｐ、ＧＳＳプリオン、グアナリトウイルス、ヘモフィルスデゥクレイ、ヘモフィルスインフルエンザ、ヘリコバクターピロリ、ヘニパウイルス（ヘンドラウイルスニパウイルス）、肝炎Ａウイルス、肝炎Ｂウイルス（ＨＢＶ）、肝炎Ｃウイルス（ＨＣＶ）、肝炎Ｄウイルス、肝炎Ｅウイルス、単純ヘルペスウイルス１および２（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、ヒストプラズマカプスラーツム、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、ホルタエア・ウェルネキイ（Ｈｏｒｔａｅａｗｅｒｎｅｃｋｉｉ）、ヒトボカウイルス（ＨＢｏＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）およびヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ−７）、ヒトメタニューモウイルス（ｈＭＰＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、日本脳炎ウイルス、ＪＣウイルス、フニンウイルス、キンゲラキンゲ、クレブシエラ肉芽腫、クール−プリオン、ラッサウイルス、レジオネラニューモフィラ、リーシ���マニア属、レプトスピラ属、リステリアモノサイドジェネス、リンパ球性脈絡骨髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、マクポウイルス、マラセジアｓｐｐ、マールブルグウイルス、はしかウイルス、横川吸虫、微胞子虫門、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、ムンプスウイルス、マイコバクテリウムレプレおよびマイコバクテリウムらい腫、マイコバクテリウム結核、マイコバクテリウムウルセランス、マイコプラズマニューモニエ、ネグレリアフォーレリ、アメリカ鉤虫、淋菌、骨髄膜炎菌、ノカルジアアステロイデス、ノカルジアｓｐｐ、回旋糸状虫、オリエンティアツツガムシ、オルソミクソウイルスファミリー（インフルエンザ）、ブラジルパラコクシジオイデス、肺吸虫ｓｐｐ、ウエステルマン肺吸虫、パルボウイルスＢ１９、パスツレラ属、マラリア原虫属、ニューモシスチスジロベシ、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器多核体ウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルス、複数のライノウイルス、リケッチアアカリ、リケッチア属、発疹チフスリケッチア、斑点熱リケッチア、発疹熱リケッチア、リフトバレー熱ウイルス、ロタウイルス、風疹ウイルス、サビアウイルス、サルモネラ属、ヒゼンダニ、ＳＡＲＳコロナウイルス、住血吸虫属、赤痢菌属、シンノンブレウイルス、ハンタウイルス、スポロトリクスシェンキイ、スタフィロコッカス属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカスアガラクティエ、ストレプトコッカスニューモニエ、ストレプトコッカスピオゲネス、フン線虫、条虫属、有鉤条虫、ダニ媒介脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）、イヌ回虫またはネコ回虫、トキソプラズマゴンディ、梅毒トレポーマ、旋毛虫、膣トリコモナス、トリコフィトンｓｐｐ、ベンチュウ、トリパノソーマブルーセイ、トリパノソーマクルージ、ウレアプラズマウレアリチカム、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、大痘瘡または小痘瘡、ｖＣＪＤプリオン、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、コレラ菌、西ナイルウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、バンクロフト糸状虫、黄熱ウイルス、腸炎エルシニア、腸炎ペスティス、および腸炎シュードチューバローシス．
この背景において、特に好まれるのは、インフルエンザウイルス、呼吸系発疹ウイルス（ＲＳＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、マラリア原虫、スタフィロコッカスアウレウス、デング熱ウイルス、クラミジアトラコマティス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、肝炎Ｂウイルス（ＨＢＶ）、マイコバクテリウム結核、狂犬病ウイルス、および黄熱ウイルスから選択される病原体からの抗原である。
【０２２８】
好ましい実施形態において、本発明の修飾ＲＮＡは、狂犬病ウイルスタンパク質またはペプチドまたはその抗原性断片をコードする。好ましくは、本発明の修飾ＲＮＡは、糖タンパク質Ｇ（ＲＡＶ−Ｇ）、核タンパク質Ｎ（ＲＡＶ−Ｎ）、リンタンパク質Ｐ（ＲＡＶ−Ｐ）、マトリックスタンパク質Ｍ（ＲＡＶ−Ｍ）またはＲＮＡポリメラーゼＬ（ＲＡＶ−Ｌ）の狂犬病ウイルス、または断片、バリアントまたはその誘導体から成る群から選択される、抗原性タンパク質またはペプチドをコードする。
【０２２９】
別の好ましい実施形態において、本発明の修飾ＲＮＡは、呼吸系発疹ウイルス（ＲＳＶ）タンパク質またはペプチドまたはその抗原性断片をコードする。好ましくは、本発明の修飾ＲＮＡは、融合タンパク質Ｆ、糖タンパク質Ｇ、短い疎水性タンパク質ＳＨ、マトリックスタンパク質Ｍ、核タンパク質Ｎ、大きなＬポリメラーゼ、Ｍ２−１タンパク質、Ｍ２−２タンパク質、リンタンパク質Ｐ、非構造タンパク質ＮＳ１または呼吸系発疹ウイルス（ＲＳＶ）の非構造タンパク質ＮＳ２、または断片、バリアントあるいはその誘導体からなる群から選択される、抗原性タンパク質またはペプチドをコードする。
【０２３０】
腫瘍抗原：
さらなる実施形態において、本発明の修飾ＲＮＡは、腫瘍抗原、断片、バリアントまたは上記腫瘍抗原の誘導体を含んでいるペプチドまたはタンパク質を含む、タンパク質またはペプチドをコードする可能性があり、好ましくは、ここで腫瘍抗原は、メラニン細胞特有抗原、癌精巣抗原またはａ腫瘍特異抗原であり、好ましくはＣＴ−Ｘ抗原、非−ＸＣＴ−抗原、ＣＴ−Ｘ抗原または非−ＸＣＴ−抗原あるいは腫瘍特異抗原のための結合相手のための結合相手、より好ましくはＣＴ−Ｘ抗原、非−ＸＣＴ−抗原または腫瘍特異抗原または断片のための結合相手、バリアントまたは上記腫瘍抗原の誘導体；およびここで、各核酸配列は、相違するペプチドまたはタンパク質をコードし；およびここで少なくとも１つの核酸配列は、５Ｔ４、７０７−ＡＰ、９Ｄ７、ＡＦＰ、ＡｌｂＺＩＰＨＰＧ１、アルファ−５−ベータ−１−インテグリン、アルファ−５−ベータ−６−インテグリン、アルファ−アクチン−４／ｍ、アルファ−メチルアシル−コエンザイムＡラセマーゼ、ＡＲＴ−４、ＡＲＴＣ１／ｍ、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ−１、ＢＣＬ−２、ｂｃｒ／ａｂｌ、ベータ−カテニン／ｍ、ＢＩＮＧ−４、ＢＲＣＡ１／ｍ、ＢＲＣＡ２／ｍ、ＣＡ１５−３／ＣＡ２７−２９、ＣＡ１９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡ１２５、カルレチクリン、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＳＰ−８／ｍ、カテプシンＢ、カテプシンＬ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤＥ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＤＫＮ２Ａ／ｍ、ＣＥＡ、ＣＬＣＡ２、ＣＭＬ２８、ＣＭＬ６６、ＣＯＡ−１／ｍ、同時活性−類似タンパク質、コラーゲンＸＸＩＩＩ、ＣＯＸ−２、ＣＴ−９／ＢＲＤ６、Ｃｔｅｎ、シクリンＢ１、シクリンＤ１、ｃｙｐ−Ｂ、ＣＹＰＢ１、ＤＡＭ−１０、ＤＡＭ−６、ＤＥＫ−ＣＡＮ、ＥＦＴＵＤ２／ｍ、ＥＧＦＲ、ＥＬＦ２／ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｒｂＢ３、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１、ＥＺＨ２、ＦＧＦ−５、ＦＮ、Ｆｒａｕ−１、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ７ｂ、ＧＡＧＥ−８、ＧＤＥＰ、ＧｎＴ−Ｖ、ｇｐ１００、ＧＰＣ３、ＧＰＮＭＢ／ｍ、ＨＡＧＥ、ＨＡＳＴ−２、ヘプシン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＨＥＲＶ−Ｋ−ＭＥＬ、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１７Ｉ、ＨＬＡ−Ａ１１／ｍ、ＨＬＡ−Ａ２／ｍ、ＨＮＥ、ホメオボックスＮＫＸ３．１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−１４／ＳＣＰ−１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−８５、ＨＰＶ−Ｅ６、ＨＰＶ−Ｅ７、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、ｈＴＥＲＴ、ｉＣＥ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−１３Ｒａ２、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−５、未熟なラミニン受容体、カリクレイン−２、カリクレイン−４、Ｋｉ６７、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＩＡＡ０２０５／ｍ、ＫＫ−ＬＣ−１、Ｋ−Ｒａｓ／ｍ、ＬＡＧＥ−Ａ１、ＬＤＬＲ−ＦＵＴ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＭＡＧＥ−Ｂ２、ＭＡＧＥ−Ｂ３、ＭＡＧＥ−Ｂ４、ＭＡＧＥ−Ｂ５、ＭＡＧＥ−Ｂ６、ＭＡＧＥ−Ｂ１０、ＭＡＧＥ−Ｂ１６、ＭＡＧＥ−Ｂ１７、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｄ１、ＭＡＧＥ−Ｄ２、ＭＡＧＥ−Ｄ４、ＭＡＧＥ−Ｅ１、ＭＡＧＥ−Ｅ２、ＭＡＧＥ−Ｆ１、ＭＡＧＥ−Ｈ１、ＭＡＧＥＬ２、マンマグロビンＡ、ＭＡＲＴ−１／ｍｅｌａｎ−Ａ、ＭＡＲＴ−２、ＭＡＲＴ−２／ｍ、マトリックスタンパク質２２、ＭＣ１Ｒ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＥ１／ｍ、メソテリン、ＭＧ５０／ＰＸＤＮ、ＭＭＰ１１、ＭＮ／ＣＡＩＸ−抗原、ＭＲＰ−３、ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−２、ＭＵＭ−１／ｍ、ＭＵＭ−２／ｍ、ＭＵＭ−３／ｍ、ミオシンクラスＩ／ｍ、ＮＡ８８−Ａ、Ｎ−アセチルゴルコサミニルトランスフェラーゼ−Ｖ、Ｎｅｏ−ＰＡＰ、Ｎｅｏ−ＰＡＰ／ｍ、ＮＦＹＣ／ｍ、ＮＧＥＰ、ＮＭＰ２２、ＮＰＭ／ＡＬＫ、Ｎ−Ｒａｓ／ｍ、ＮＳＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＮＹ−ＥＳＯ−Ｂ、ＯＡ１、ＯＦＡ−ｉＬＲＰ、ＯＧＴ、ＯＧＴ／ｍ、ＯＳ−９、ＯＳ−９／ｍ、オステオカルシン、オステオポンチン、ｐ１５、ｐ１９０マイナーｂｃｒ−ａｂｌ、ｐ５３、ｐ５３／ｍ、ＰＡＧＥ−４、ＰＡＩ−１、ＰＡＩ−２、ＰＡＰ、ＰＡＲＴ−１、ＰＡＴＥ、ＰＤＥＦ、Ｐｉｍ−１−キナーゼ、Ｐｉｎ−１、Ｐｍｌ／ＰＡＲアルファ、ＰＯＴＥ、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＤＸ５／ｍ、ｐｒｏｓｔｅｉｎ、プロテイナーゼ−３、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＧＲ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ／ｍ、ＲＡＧＥ−１、ＲＢＡＦ６００／ｍ、ＲＨＡＭＭ／ＣＤ１６８、ＲＵ１、ＲＵ２、Ｓ−１００、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−２、ＳＡＲＴ−３、ＳＣＣ、ＳＩＲＴ２／ｍ、Ｓｐ１７、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２／ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０、ＳＳＸ−４、ＳＴＡＭＰ−１、ＳＴＥＡＰ−１、サバイビン、サバイビン−２Ｂ、ＳＹＴ−ＳＳＸ−１、ＳＹＴ−ＳＳＸ−２、ＴＡ−９０、ＴＡＧ−７２、ＴＡＲＰ、ＴＥＬ−ＡＭＬ１、ＴＧＦベータＴＧＦベータＲＩＩ、ＴＧＭ−４、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＡＧ−３、ＴＲＧ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２／６ｂ、ＴＲＰ／ＩＮＴ２、ＴＲＰ−ｐ８、チロシナーゼ、ＵＰＡ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ−２／ＦＬＫ−１、ＷＴ１、およびリンパ血球の免疫グロブリンイディオタイプ、またはリンパ血球のＴ細胞受容体イディオタイプ、または断片、バリアントあるいは上記腫瘍抗原の誘導体；好ましくはサバイビンまたはそのホモログ、ＭＡＧＥ−ファミリーからの抗原、その結合相手あるいは断片、バリアントまたは上記腫瘍抗原の誘導体をコードする。
【０２３１】
特に、この背景において好ましいのは、腫瘍抗原ＮＹ−ＥＳＯ−１、５Ｔ４、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、サバイビン、Ｍｕｃ−１、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＳＴＥＡＰおよびＰＡＰである。
【０２３２】
この背景において、本発明のジェット注射によって投与された少なくとも１つの修飾ＲＮＡは、抗原の以下の組み合わせのうち１つをコードすることが特に好ましい。
・  Ｍｕｃ−１、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、およびＳＴＥＡＰ
・  Ｍｕｃ−１、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、およびＰＡＰ
・  Ｍｕｃ−１、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＳＴＥＡＰおよびＰＡＰ
・  Ｍｕｃ−１、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＳＴＥＡＰおよびＰＡＰ
・  Ｍｕｃ−１、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＳＴＥＡＰおよびＰＡＰ
・  ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＳＴＥＡＰおよびＰＡＰ
・  Ｍｕｃ−１、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＳＴＥＡＰおよびＰＡＰ
別の実施形態において、本発明のジェット注射によって投与された少なくとも１つの修飾ＲＮＡは、抗原の以下の組み合わせのうち１つをコードすることが特に好ましい。
・  ＮＹ−ＥＳＯ−１、５Ｔ４、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、およびサバイビン
・  ＮＹ−ＥＳＯ−１、５Ｔ４、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、およびＭｕｃ−１
・  ＮＹ−ＥＳＯ−１、５Ｔ４、ＭＡＧＥ−Ｃ１、サバイビンおよびＭｕｃ−１
・  ＮＹ−ＥＳＯ−１、５Ｔ４、ＭＡＧＥ−Ｃ２、サバイビンおよびＭｕｃ−１
・  ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、サバイビンおよびＭｕｃ−１
・  ５Ｔ４、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、サバイビンおよびＭｕｃ−１
・  ＮＹ−ＥＳＯ−１、５Ｔ４、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、サバイビンおよびＭｕｃ−１
好ましい実施形態において、ジェット注射によって投与された修飾ＲＮＡは、治療的タンパク質または断片、バリアントまたはその誘導体を含む、タンパク質またはペプチドをコードする。
【０２３３】
本書に定義されている治療的タンパク質は、任意の遺伝疾患または後天性疾患の治療、または個人の状態を向上させるために有益なペプチドまたはタンパク質である。治療的タンパク質は、他の疾患の中で、特に、遺伝子のエラーの修正および修復、癌細胞または病原体感染細胞の破壊、免疫システム疾患の治療、代謝障害または内分泌疾患の治療が可能な治療薬の創造において大きな役割を演じる。例えば、エリスロポエチン（ＥＰＯ）である、タンパク質ホルモンは、腎臓の合併症の共通した原因である、赤血球欠乏症を有する患者の治療において利用され得る。さらに、アジュバントタンパク質である、治療的抗体は、治療タンパク質によって包含され、また、例えば、閉経期における女性の治療において用いられるホルモン補充療法も、治療タンパク質によって包含される。より最近の手法においては、患者の体細胞は、係争中の幹細胞療法に取って代わる多分化能性幹細胞に上記体細胞を再プログラムするために用いられる。また、体細胞の再プログラムまたは幹細胞の分化のために用いられたこれらのタンパク質は、治療タンパク質として本書に定義されている。さらに、治療タンパク質は、例えば外傷治癒、組織再生、血管新生などの他の目的のために用いられ得る。そのため、治療タンパク質は、例えば、遺伝的または後天的な場合独立して、感染症、腫瘍（例えば癌または腫瘍疾患）、血液および造血臓器の疾患、内分泌、栄養的および代謝の疾患、神経系の疾患、循環系の疾患、呼吸器系の疾患、消化管系の疾患、皮膚および皮下組織の疾患、筋骨格系および結合組織の疾患、および尿生殖器系の疾患のように、様々な疾患の治療を含んでいる様々な目的のために用いられ得る。
【０２３４】
この背景において、代謝または内分泌疾患の治療において特に用いられ得る特に好ましい治療タンパク質は、以下のものから選択される：酸性スフィンゴミエリナーゼ（ニーマンピック病）、アディポタイド（肥満）、アガルシダーゼ−ベータ（ヒトガラクトシダーゼＡ）（ファブリー病；腎臓および心循環系の合併症を導く脂質の蓄積の予防）、アルグルコシダーゼ（ポンぺ病（糖原病ＩＩ型））、アルファ−ガラクトシダーゼＡ（アルファ−ＧＡＬＡ、アガルシダーゼアルファ）（ファブリー病）、アルファ−グルコシダーゼ（糖原病（ＧＳＤ）、ポンぺ病）、アルファ−Ｌ−イズロニダーゼ（ムコ多糖症（ＭＰＳ）、ハーラー症候群、シャイエ症候群）、アルファ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（サンフィリッポ病）、アンフィレグリン（癌、代謝疾患）、アンジオポエチン（（Ａｎｇ１、Ａｎｇ２、Ａｎｇ３、Ａｎｇ４、ＡＮＧＰＴＬ２、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＧＰＴＬ５、ＡＮＧＰＴＬ６、ＡＮＧＰＴＬ７）（血管新生、安定化血管）、ベータセルリン（代謝疾患）、ベータ−グルクロニダーゼ（Ｓｌｙ症候群）、骨形成タンパク質ＢＭＰｓ（ＢＭＰ１、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８ａ、ＢＭＰ８ｂ、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ１５）（再生効果、骨関連の状態、慢性腎臓疾患（ＣＫＤ））、ＣＬＮ６タンパク質（ＣＬＮ６疾患−異常遅発性幼児期、遅発性バリアント若年期、神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ））、上皮増殖因子（ＥＧＦ）（外傷治癒、制御の細胞増殖、増殖、および分化）、エピゲン（代謝疾患）、エピレグリン（代謝疾患）、繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−９、ＦＧＦ−１０、ＦＧＦ−１１、ＦＧＦ−１２、ＦＧＦ−１３、ＦＧＦ−１４、ＦＧＦ−１６、ＦＧＦ−１７、ＦＧＦ−１７、ＦＧＦ−１８、ＦＧＦ−１９、ＦＧＦ−２０、ＦＧＦ−２１、ＦＧＦ−２２、ＦＧＦ−２３）（外傷治癒、血管新生、内分泌疾患、組織再生）、ガルスルファーゼ（ムコ多糖症ＶＩ）、グレリン（過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、肥満、プラダー・ウィリ症候群、ＩＩ型真性糖尿病）、グルコセレブロシダーゼ（ゴーシュ病）、ＧＭ−ＣＳＦ（再生効果、生成の白血球、癌）、ヘパリン−結合ＥＧＦ様増殖因子（ＨＢ−ＥＧＦ）（外傷治癒、心肥大および心臓発症および機能）、肝細胞増殖因子ＨＧＦ（再生効果、外傷治癒）、へプシジン（鉄代謝疾患、Β−サラセミア）、ヒトアルブミン（アルブミンの生成の減少（低タンパク質血症）、アルブミンの喪失の促進（ネフローゼ症候群）、血液量減少、高ビリルビン血症）、イデュルスルファーゼ（イゾロネット−２−スルファターゼ）（ムコ多糖症ＩＩ（ハンター症候群））、インテグリンアルファＶベータ３、アルファＶベータ５およびアルファ５ベータ１（マトリックス高分子およびプロテイナーゼを結合、血管新生）、イズロン酸スルファターゼ（ハンター症候群）、ラロニダーゼ（ハーラーおよびハーラーシャイエ型のムコ多糖症Ｉ）、Ｎ−アセチルガラクトサミン−４−スルファターゼ（ｒｈＡＳＢ；ガルスルファーゼ、アリルスルファターゼＡ（ＡＲＳＡ）、アリルスルフ���ターゼＢ（ＡＲＳＢ））（アリルスルファターゼＢ欠乏症、マロトー・ラミー症候群、ムコ多糖症ＶＩ）、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−スルファターゼ（サンフィリッポ病）、神経成長因子（ＮＧＦ、脳由来神経成長因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、およびニューロトロフィン４／５（ＮＴ−４／５）（再生効果、心循環系の疾患、冠動脈硬化、肥満、ＩＩ型糖尿病、代謝症候群、急性冠症候群、痴呆、うつ病、精神分裂病、自閉症、レット症候群、拒食症、過食嘔吐、外傷治癒、皮膚潰瘍、角膜潰瘍、アルツハイマー病）、ニューレグリン（ＮＲＧ１、ＮＲＧ２、ＮＲＧ３、ＮＲＧ４）（代謝疾患、精神分裂病）、ニューロピリン（ＮＲＰ−１、ＮＲＰ−２）（血管新生、軸索誘導、細胞生存、ミグレーション）、オベスタチン（過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、肥満、プラダー・ウィリ症候群、ＩＩ型真性糖尿病）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ（ＰＤＦＦ−Ａ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＰＤＧＦ−Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｄ）（再生効果、外傷治癒、血管新生における疾患、動脈硬化症、繊維症、癌）、ＴＧＦベータ受容体（エンドグリン、ＴＧＦ−ベータ１受容体、ＴＧＦ−ベータ２受容体、ＴＧＦ−ベータ３受容体）（腎臓繊維、腎臓疾患、糖尿病、最終的な末期腎臓疾患（ＥＳＲＤ）、血管新生）、トロンボポエチン（ＴＨＰＯ）（巨核細胞増殖および発生因子（ＭＧＤＦ））（血小板異常、輸血のための血小板、骨骨髄抑制性の化学療法後の血小板数の回復）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ（ＴＧＦ−ａ、ＴＧＦ−ベータ（ＴＧＦベータ１、ＴＧＦベータ２、およびＴＧＦベータ３）））（再生効果、外傷治癒、免疫、癌、心臓疾患、糖尿病、マルファン症候群、ロイス・ディーツ症候群）、ＶＥＧＦ（ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ＶＥＧＦ−ＦおよびＰＩＧＦ）（再生効果、血管新生、外傷治癒、癌、浸透性）、ネシリチド（急性非代償性うっ血性心不全）、トリプシン（褥瘡性潰瘍、静脈瘤性潰瘍、デブトドマンの痂皮、裂創、日焼け、胎便イレウス）、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）（“アディソン病、小細胞癌、副腎白質ジストロフィー、先天性副腎過形成、クッシング症候群、ネルソン症候群、店頭てんかん）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）（内分泌障害）、コレシストキニン（多様な）、ガストリン（ハイポガストリン血症）、レプチン（糖尿病、高トリグリセリド血症、肥満）、オキシトシン（哺乳、非進行の分娩への刺激）、ソマトスタチン（カルチノイド症候群の対症療法、急性静脈瘤出血、および先端巨大症、肝臓および腎臓の多発性嚢胞疾患、神経内分泌腫瘍に起因する先端巨大症および症状）、バソプレシン（抗利尿ホルモン）（尿崩症）、カルシトニン（閉経後骨粗鬆症、高カルシウム血症、パジェット病、骨転移、幻肢痛、脊髄狭窄）、エクセナチド（メトホルミンおよびスルホニルウレアを用いた治療に対して抵抗性であるＩＩ型糖尿病）、成長ホルモン（ＧＨ）、ソマトトロピン（ＧＨ欠乏症または慢性腎不全による成長不全、プラダー・ウィリ症候群、ターナー症候群、抗ウイルス性療法によるＡＩＤＳ消耗または悪液質）、インスリン（真性糖尿病、糖尿病性ケトアシドーシス、高カリウ���血症）、インスリン様増殖因子１ＩＧＦ−１（ＧＨ遺伝子欠損または重度主要ＩＧＦ１欠乏症を有する子供における成長不全、神経変性疾患、心循環系の疾患、心不全）、メカセルミンリンファバート、ＩＧＦ−１類似体（ＧＨ遺伝子欠損または重度主要ＩＧＦ１欠乏症を有する子供における成長不全、神経変性疾患、心循環系の疾患、心不全）、メカセルミンＩＧＦ−１類似体（ＧＨ遺伝子欠損または重度主要ＩＧＦ１欠乏症、神経変性疾患、心循環系の疾患、心不全を有する子供における成長不全）、ペグビソマント（先端巨大症）、プラムリンチド（インスリンとの組み合わせにおける真性糖尿病）、テリパラチド（ヒト上皮小体ホルモン残基１−３４）（重症骨粗鬆症）、べカプレルミン（糖尿病性潰瘍のためのデブリードマン補助）、ジボテルミン−アルファ（骨形成タンパク質２）（脊髄固定術、骨損傷修復）、ヒストリン酢酸塩（ゴナドロピン放出ホルモン；ＧｎＲＨ）（早期思春期）、オクトレオチド（先端巨大症、症状緩和のＶＩＰ−分泌腺腫および転移カルチノイド腫瘍）、およびパリフェルミン（ケラチノサイト増殖因子ＫＧＦ）（化学療法を経る患者における重症口腔粘膜炎、外傷治癒）。
【０２３５】
（かっこの中は、治療において用いられる治療タンパク質のための特定の疾患である）。これらのおよび他のタンパク質は、治療的なものとして理解され、十分な量において機能的タンパク質のその不完全な内在生成を取って代わることによって被検体を治療する。したがって、このような治療タンパク質は、特定のヒトタンパク質における典型的な哺乳類である。
【０２３６】
血液疾患、循環系の疾患、呼吸器系の疾患、癌または腫瘍疾患、感染症または免疫不全の治療のために、以下の治療タンパク質が用いられ得る：アルテプラーゼ（組織プラスミノーゲン活性化剤；ｔＰＡ）（肺塞栓症、心筋梗塞、急性虚血発作、閉塞の中心静脈アクセス機器ｓ）、アニストプラーゼ（血栓溶解）、抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴ−ＩＩＩ）（遺伝性ＡＴ−ＩＩＩ欠乏症、血栓塞栓症）、ビバリルジン（冠動脈形成術およびヘパリン起因性血小板減少症における血液凝固リスクの減少）、ダルベポエチン−アルファ（慢性腎不全および慢性腎不全（＋／−分離）を有する患者における貧血の治療）、ドロトレコギン−アルファ（活性化タンパク質Ｃ）（死亡の高リスクを伴う重症敗血症）、エリスロポエチン、エポエチン−アルファ、エリスロポエチン（ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｅｔｉｎ）、エリスロポエチン（ｅｒｔｈｒｏｐｏｙｅｔｉｎ）（慢性疾患の貧血、脊髄形成異常症、腎不全または化学療法による貧血、手術前の準備）、第ＩＸ因子（血友病Ｂ）、第ＶＩＩａ因子（血友病ＡまたはＢを有する患者における出血、および第ＶＩＩＩ因子または第ＩＸ因子に対する阻害薬）、第ＶＩＩＩ因子（血友病Ａ）、レピルジン（ヘパリン起因性血小板減少症）、タンパク質Ｃ濃縮物（静脈血栓、電撃性紫斑病）、レテプラーゼ（ｔＰＡの欠失ムテイン）（急性心筋梗塞の管理、心室機能の向上）、ストレプトキナーゼ（急性発生貫壁性心筋梗塞、肺塞栓症、深部静脈血栓、心房血栓症または塞栓、動脈カニューレの塞栓）、テネクテプラーゼ（急性心筋梗塞）、ウロキナーゼ（肺塞栓症）、アンジオスタチン（癌）、抗ＣＤ２２免疫毒（再発ＣＤ３３＋急性骨髄性白血病）、デニロイキンジフトチクス（皮膚Ｔ−細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ））、イムノシアニン（膀胱および前立腺癌）、ＭＰＳ（メタロパンスティムリン）（癌）、アフリバーセプト（非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、転移大腸癌（ｍＣＲＣ）、ホルモン抵抗性転移前立腺癌、滲出型変斑変性）、エンドスタチン（癌、クローン病と同様リウマチ症関節炎のような炎症性疾患、  糖尿病網膜症、乾癬、および子宮内膜症）、コラゲナーゼ（デブリードマンの慢性皮膚潰瘍およびｓｅｖｅｒｅｌｙやけど箇所、デュピュイトラン拘縮、ぺペイロニー病）、ヒトデオキシリボヌクレアーゼＩ、ドルナーゼ（嚢胞性繊維症；予測の４０％よりも大きいＦＶＣを有する選択された患者における呼吸器官系感染の減少）、ヒアルロニダーゼ（注射薬の吸収および分散を促進するためのアジュバントとして用いられ、眼外科および特定のイメージング剤において特に麻酔薬として用いられる）、パパイン（褥瘡、静脈瘤および糖尿病性潰瘍、やけど、術後創、毛巣嚢胞傷、カルブンケル、および他の傷等、急性および慢性病変において、壊死組織のデブリードマンまたは脱落組織の液化）、Ｌ−アスパラギナーゼ（増殖のために外因性アスパラギンを必要とする、急性リンパ腫白血病）、Ｐｅｇ−アスパラギナーゼ（増殖のために外因性アスパラギンを必要とする、急性リンパ腫白血病）、ラスブリカーゼ（腫瘍溶解症候群を引き起こし得る抗癌療法を経る白血病、リンパ腫、および固体腫瘍を有する小児患者）、ヒト絨毛性ゴナドロピン（ＨＣＧ）（アシスト生殖）、ヒト卵���刺激ホルモン（ＦＳＨ）（アシスト生殖）、ルトロピン−アルファ（黄体ホルモン欠乏症を伴う不妊）、プロラクチン（低プロラクチン血症、血清プロラクチン欠乏症、女性における卵巣機能不全、不安症、血管原性インポテンス、早漏、精子減少症、精子無力症、精嚢の機能低下、男性における低アンドロゲン）、アルファ−１−プロテアーゼ阻害剤（先天性抗トリプシン欠乏症）、ラクターゼ（ガス、張り、ラクトース消化不全による急激な腹痛および下痢）、膵酵素（リパーゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ）（嚢胞性繊維症、慢性膵炎、膵不全、ビルロートＩＩバイパス手術後、膵管閉塞、脂肪便、消化不良、ガス、張り）、アデノシンデアミナーゼ（ウシペガデマーゼ、ＰＥＧ−ＡＤＡ）（アデノシンデアミナーゼ欠乏症による重症複合型疾患）、アバタセプト（関節リウマチ（特にＴＮＦａ抑制に対して抵抗性の場合））、アルファセプト（尋常性乾癬）、アナキンラ（関節リウマチ）、エタネルセプト（関節リウマチ、多関節経過若年性リウマチ症関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、尋常性乾癬、強直性脊椎炎）、インターロイキン−１（ＩＬ−１）受容体拮抗薬、アナキンラ（リウマチ症関節炎に関連する炎症および軟骨分解）、チムリン（神経変性疾患、リウマチ、拒食症）、ＴＮＦ−アルファ拮抗薬（リウマチ症関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、乾癬、化膿性汗腺炎、難治性喘息等の自己免疫疾患）、エンフビルチド（ＨＩＶ−１感染）、およびチモシンアルファ１（肝炎ＢおよびＣ）。
【０２３７】
（かっこの中は、治療において用いられる治療タンパク質のための特定の疾患である）。
【０２３８】
さらに、アジュバントまたは免疫刺激タンパク質もまた、治療タンパク質という用語のなかに包含される。アジュバントまたは免疫刺激タンパク質は、特有の疾患を治療するために個人において免疫反応を誘発、変化、または向上させるため、または個人の状態を改善するためにこの背景において用いられ得る。
【０２３９】
この背景において、アジュバントタンパク質は、例えばＴＬＲに外性ＴＬＲリガンドを結合する反応のような、自然免疫反応（哺乳動物において）を引き出すことを可能にする、任意のヒトタンパク質またはペプチドを概して含む、特定のヒトアジュバントタンパク質において、哺乳類から選択され得る。より好ましくは、ヒトアジュバントタンパク質は、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１；ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ＮＯＤ３、ＮＯＤ４、ＮＯＤ５、ＮＡＬＰ１、ＮＡＬＰ２、ＮＡＬＰ３、ＮＡＬＰ４、ＮＡＬＰ５、ＮＡＬＰ６、ＮＡＬＰ６、ＮＡＬＰ７、ＮＡＬＰ７、ＮＡＬＰ８、ＮＡＬＰ９、ＮＡＬＰ１０、ＮＡＬＰ１１、ＮＡＬＰ１２、ＮＡＬＰ１３、ＮＡＬＰ１４、ｌＩＰＡＦ、ＮＡＩＰ、ＣＩＩＴＡ、ＲＩＧ−Ｉ、ＭＤＡ５およびＬＧＰ２を含んでいるＴＬＲ、ＮＬＲおよびＲＬＨ、例えばＴｒｉｆおよびＣａｒｄｉｆを含んでいるアダプタータンパク質を含んでいるＴＬＲシグナリングのトランスデューサー信号；低分子ＧＴＰアーゼシグナリング（ＲｈｏＡ、Ｒａｓ、Ｒａｃ１、Ｃｄｃ４２、Ｒａｂ等）の成分、ＰＩＰシグナリング（ＰＩ３Ｋ、Ｓｒｃ−カイネース等）の成分、ＭｙＤ８８依存シグナリング（ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＲＡＫ４、ＴＩＲＡＰ、ＴＲＡＦ６等）の成分、ＭｙＤ８８独立シグナリング（ＴＩＣＡＭ１、ＴＩＣＡＭ２、ＴＲＡＦ６、ＴＢＫ１、ＩＲＦ３、ＴＡＫ１、ＩＲＡＫ１等）の成分；例えばＡｋｔ、ＭＥＫＫ１、ＭＫＫ１、ＭＫＫ３、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ＭＫＫ７、ＥＲＫ１、ＥＲＫ２、ＧＳＫ３、ＰＫＣカイネース、ＰＫＤカイネース、ＧＳＫ３カイネース、ＪＮＫ、ｐ３８ＭＡＰＫ、ＴＡＫ１、ＩＫＫ、およびＴＡＫ１を含んでいる活性化カイネース；例えばＮＦ−ｋＢ、ｃ−Ｆｏｓ、ｃ−Ｊｕｎ、ｃ−Ｍｙｃ、ＣＲＥＢ、ＡＰ−１、Ｅｌｋ−１、ＡＴＦ２、ＩＲＦ−３、ＩＲＦ−７を含んでいる活性化転写因子を含んでいるパターン認識受容体のシグナリングネットワークの成分およびリガンドである、タンパク質から成る群から選択される。
【０２４０】
哺乳類、特にヒトアジュバントタンパク質は、ＨＳＰ１０、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ７５およびＨＳＰ９０、ｇｐ９６、フィブリノーゲン、フィブロネクチンのＩＩＩ型反復エキストラドメインＡ；またはＣ１ｑ、ＭＢＬ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ２ｂ、Ｂｂ、Ｄ、ＭＡＳＰ−１、ＭＡＳＰ−２、Ｃ４ｂ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、Ｃ３ａ、Ｃ４ａ、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、ＣＲ１、ＣＲ２、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｃ１ｑＲ、Ｃ１ＩＮＨ、Ｃ４ｂｐ、ＭＣＰ、ＤＡＦ、Ｈ、Ｉ、ＰおよびＣＤ５９を含んでいる補体系の構成要素、または例えばベータ−デフェンシン、細胞表面タンパク質を含んでいる誘導標的遺伝子；またはｔｒｉｆ、ｆｌｔ−３リガンド、Ｇｐ９６またはフィブロネクチン等を含んでいるヒトアジュバントタンパク質、または任意の上記ヒトアジュバントタンパク質の任意のホモログ種など、熱ショックタンパク質から成る群からさらに選択され得る。
【０２４１】
哺乳類、特にヒトアジュバントタンパク質は、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ１ベータＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＴＮＦアルファ、ＩＦＮアルファ、ＩＦＮベータＩＦＮγ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ；ＩＬ−８、ＩＰ−１０、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１アルファ、ＲＡＮＴＥＳ、エオタキシン、ＣＣＬ２１を含んでいるケモキナーゼ；ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２およびＴＮＦ−アルファ；ならびにＩＬ−１Ｒ１およびＩＬ−１アルファを含んでいる、マクロファージから放出したサイトキナーゼを含んでいる、自然免疫反応を誘発または亢進するサイトキナーゼをさらに含み得る。
【０２４２】
血液疾患、循環系の疾患、呼吸器系の疾患、癌または腫瘍疾患、感染症または免疫不全またはアジュバントタンパク質の治療のための治療タンパク質は、通常哺乳類起源、好ましくはヒト起源のタンパク質であり、どの動物を治療するかに依存する。例えば、ヒト被検体は、ヒト起源の治療タンパク質によって好ましくは治療される。
【０２４３】
病原性アジュバントタンパク質は、自然免疫反応（哺乳類における）を引き出すことが可能な病原性アジュバントタンパク質を一般的に含み、より好ましくは、細菌、原性動物、ウイルス、または菌類等、例えば細菌性（アジュバント）タンパク質、原性動物（アジュバント）タンパク質（例えばトキソプラズマゴンディのプロフィリンのようなタンパク質）、ウイルス性（アジュバント）タンパク質、または真菌（アジュバント）タンパク質等由来の病原性アジュバントタンパク質から選択される。
【０２４４】
特に、細菌性（アジュバント）タンパク質は、Ｈｓｐ６０、Ｈｓｐ７０、Ｈｓｐ９０、Ｈｓｐ１００；グラムネガティブ細菌からのＯｍｐＡ（外膜タンパク質）；細菌性ポリン、ＯｍｐＦ；細菌毒素、Bordetella pertussisからの百日咳毒素（ＰＴ）、Bordetella pertussisからの百日咳アデニル酸シクラーゼ毒素ＣｙａＡおよびＣｙａＣ、百日咳毒素からのＰＴ−９Ｋ／１２９Ｇ変異体、Bordetella pertussisからの百日咳アデニル酸シクラーゼ毒素ＣｙａＡおよびＣｙａＣ、コレラ毒素（ＣＴ）、コレラ毒素からのコレラ毒素Ｂ−サブユニットＣＴＫ６３変異体、ＣＴからのＣＴＥ１１２Ｋ変異体、Escherichia coli易熱性毒素（ＬＴ）、減少した毒性を有する易熱性毒素（ＬＴＢ）Escherichia coli易熱性毒素変異体からのＢサブユニット、ＬＴＫ６３、ＬＴＲ７２；フェノール溶解モジュリン；ヘリコバクターピロリからの好中球活性化タンパク質（ＨＰ−ＮＡＰ）；界面活性タンパク質Ｄ；Borrelia burgdorferiからの外表面タンパク質Ａリポタンパク質、Mycobacterium tuberculosisからのＡｇ３８（３８ｋＤａ抗原）；細菌性繊毛からのタンパク質；コレラ菌のエンテロトキシンＣＴ、グラムネガティブ細菌からの線毛からのピリン、および界面活性タンパク質Ａ；等、または任意の上記細菌性（アジュバント）タンパク質の任意のホモログ種を含んでいる、細菌性熱ショックタンパク質またはシャペロンから成る群から選択され得る。
【０２４５】
細菌性（アジュバント）タンパク質はまた、細菌性フラジェリンを有し得る。本発明の背景において、細菌性フラジェリンは、以下の有機体からのフラジェリンから選択され得るが、それらに限定されることはない。Agrobacterium、Aquifex、Azospirillum、Bacillus、Bartonella、Bordetella、Borrelia、Burkholderia、Campylobacter、Caulobacte、Clostridium、Escherichia、Helicobacter、Lachnospiraceae、Legionella、Listeria、Proteus、Pseudomonas、Rhizobium、Rhodobacter、Roseburia、Salmonella、Serpulina、Serratia、Shigella、Treponema、Vibrio、Wolinella、Yersinia。より好ましくは、以下の種を含むフラジェリンから選択され得るが、それらに限定されることはない。Agrobacterium tumefaciens、Aquifex pyrophilus、Azospirillum brasilense、Bacillus subtilis、Bacillus thuringiensis、Bartonella bacilliformis、Bordetella bronchiseptica、Borrelia burgdorferi、Burkholderia cepacia、Campylobacter jejuni、Caulobacter crescentus、Clostridium botulinum strain Bennett clone 1、Escherichia coli、Helicobacter pylori、Lachnospiraceae bacterium、Legionella pneumophila、Listeria monocytogenes、Proteus mirabilis、Pseudomonas aeroguinosa、Pseudomonas syringae、Rhizobium meliloti、Rhodobacter sphaeroides、Roseburia cecicola、Roseburis hominis、Salmonella typhimurium、Salmonella bongori、Salmonella typhi、Salmonella enteritidis、Serpulina hyodysenteriae、Serratia marcescens、Shigella boydii、Treponema phagedenis、Vibrio alginolyticus、Vibrio cholerae、Vibrio parahaemolyticus、Wolinella succinogenesおよびYersinia enterocolitica。
【０２４６】
原生動物（アジュバント）タンパク質は、病原性アジュバントタンパク質のさらなる実施例である。原生動物（アジュバント）タンパク質は、アジュバント特性を示している任意の原性動物タンパク質からこの背景において選択され得、より好ましくは、以下のものから成る群から選択され得るが、これらに限定はされない。トリパノソーマクルージからのＴｃ５２、トリパノソマゴンディからのＰＦＴＧ、原生動物熱ショックタンパク質、リーシュマニアｓｐｐ．からのＬｅＩＦ、トキソプラズマゴンディからのプロファイリングのようなタンパク質、等。
【０２４７】
ウイルス（アジュバント）タンパク質は、病原性アジュバントタンパク質の別の実施例である。この背景において、ウイルス性（アジュバント）タンパク質は、アジュバント特性を示している任意のウイルス性タンパク質から選択され得、より好ましくは、以下のものから成る群から選択され得るが、これらに限定はされない。呼吸器多核体ウイルス融合糖タンパク質（Ｆ−タンパク質）、ＭＭＴウイルスからのエンベロープタンパク質、マウス白血病ウイルスタンパク質、野生型はしかウイルスのヘマグルチニンタンパク質、等。
【０２４８】
真菌（アジュバント）タンパク質は、病原性アジュバントタンパク質のさらなる実施例である。本発明の背景において、真菌（アジュバント）タンパク質は、アジュバント特性を示している任意の真菌タンパク質から選択され得、より好ましくは、真菌免疫修飾性タンパク質（ＦＩＰ；ＬＺ−８）等のから成る群から選択され得る。
【０２４９】
最後に、アジュバントタンパク質は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ＯｓｐＡ、等から成る群からさらに選択され得る。
【０２５０】
さらなる実施形態において、治療タンパク質は、特に閉経期における女性の療法のため、ホルモン補充療法のために用いられ得る。これらの治療タンパク質は、エストロゲン、プロゲステロンまたはプロゲスチン、および時折テストステロンから好ましくは選択される。
【０２５１】
さらに、治療タンパク質は、体細胞を、多量または万能幹細胞に再プログラムするために用いられ得る。この目的の為に、特にＯｃｔ−３／４、Ｓｏｘ遺伝子ファミリー（Ｓｏｘ１、Ｓｏｘ２、Ｓｏｘ３、およびＳｏｘ１５）、Ｋｌｆファミリー（Ｋｌｆ１、Ｋｌｆ２、Ｋｌｆ４、およびＫｌｆ５）、Ｍｙｃファミリー（ｃ−ｍｙｃ、Ｌ−ｍｙｃ、およびＮ−ｍｙｃ）、Ｎａｎｏｇ、およびＬＩＮ２８である、いくつかの因子が記載されている。
【０２５２】
上記のように、治療的抗体もまた、治療タンパク質として本書に定義されている。これらの治療的抗体は、例えば、１３１Ｉ−トシツモマブ（濾胞性リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、白血病）、３Ｆ８（神経芽腫）、８Ｈ９、アバゴボマブ（Ａｂａｇｏｖｏｍａｂ）（卵巣癌）、アデカツムマブ（Ａｄｅｃａｔｕｍｕｍａｂ）（前立腺および乳癌）、アフツヅマブ（リンパ腫）、アラシズマブペゴル（Ａｌａｃｉｚｕｍａｂｐｅｇｏｌ）、アレムツズマブ（Ｂ細胞慢性リンパ腫白血病、Ｔ−細胞−リンパ腫）、アマツキシマブ（Ａｍａｔｕｘｉｍａｂ）、ＡＭＥ−１３３ｖ（濾胞性リンパ腫、癌）、ＡＭＧ１０２（進行腎細胞癌）、アナツモマブマフェナトクス（Ａｎａｔｕｍｏｍａｂ  ｍａｆｅｎａｔｏｘ）（非小細胞肺癌）、アポリズマブ（Ａｐｏｌｉｚｕｍａｂ）（固体腫瘍、白血病、非ホジキンリンパ腫、リンパ腫）、バビツキシマブ（Ｂａｖｉｔｕｘｉｍａｂ）（癌、ウイルス性感染）、ベクツモマブ（Ｂｅｃｔｕｍｏｍａｂ）（非ホジキンリンパ腫）、べリムマブ（Ｂｅｌｉｍｕｍａｂ）（非ホジキンリンパ腫）、ベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）（結腸癌、乳癌、脳および中枢神経腫瘍、肺癌、肝細胞癌、腎癌、乳癌、膵癌、膀胱癌、肉腫、黒色腫、食道癌；胃癌、転移性腎細胞癌；腎癌、膠芽腫、肝臓癌、増殖性糖尿病性網膜症、黄斑変性）、ビバツズマブメルタンシン（Ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）（扁平上皮癌）、ビリナツモマブ（Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ）、ブレンキシマブべドチン（血液の癌）、カンツズマブ（結腸癌、胃癌、膵癌、ＮＳＣＬＣ）、カンツズマブメルタンシン（結腸直腸癌）、カンツズマブラブタンシン（Ｃａｎｔｕｚｕｍａｂ  ｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）（癌）、カプロマブペンデチド（前立腺癌）、カルルマブ（Ｃａｒｌｕｍａｂ）、カツマキソマブ（Ｃａｔｕｍａｘｏｍａｂ）（卵巣癌、卵管腫瘍、腹膜腫瘍）、セツキシマブ（転移性大腸癌および頭頸部）、シタツズマブボガトクス（Ｃｉｔａｔｕｚｕｍａｂ  ｂｏｇａｔｏｘ）（卵巣癌および他の固体腫瘍）、シクツムマブ（Ｃｉｘｕｔｕｍｕｍａｂ）（固形腫瘍）、シリバツズマブテトラキセタン（Ｃｌｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）（膵癌）、ＣＮＴＯ３２８（Ｂ−細胞非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、キャッスルマン病、卵巣癌）、ＣＮＴＯ９５（黒色腫）、コナツムマブ（Ｃｏｎａｔｕｍｕｍａｂ）、ダセツズマブ（血液の癌）、ダロツズマブ（Ｄａｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、デノスマブ（Ｄｅｎｏｓｕｍａｂ）（骨髄腫、骨巨細胞腫、乳癌、前立腺癌、骨粗鬆症）、デツモマブ（Ｄｅｔｕｍｏｍａｂ）（リンパ腫）、デロジツマブ（Ｄｒｏｚｉｔｕｍａｂ）、エクロメキシマブ（Ｅｃｒｏｍｅｘｉｍａｂ）（悪性黒色腫）、エデレコロマブ（Ｅｄｒｅｃｏｌｏｍａｂ）（結腸直腸癌）、エロツズマブ（Ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ）（多発性骨髄腫）、エルシリモマブ（Ｅｌｓｉｌｉｍｏｍａｂ）、エナバツズマブ（Ｅｎａｖａｔｕｚｕｍａｂ）、エンシツキシマブ（Ｅｎｓｉｔｕｘｉｍａｂ）、エプラツズマブ（Ｅｐｒａｔｕｚｕｍａｂ）（自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス、非ホジキンリンパ腫、白血病）、エルツマキソマブ（Ｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ）（乳癌）、エル��マキソマブ（Ｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ）（乳癌）、エタラシズマブ（Ｅｔａｒａｃｉｚｕｍａｂ）（黒色腫、前立腺癌、卵巣癌）、ファルレツズマブ（Ｆａｒｌｅｔｕｚｕｍａｂ）（卵巣癌）、ＦＢＴＡ０５（慢性リンパ腫白血病）、フィクラツズマブ（Ｆｉｃｌａｔｕｚｕｍａｂ）（癌）、フィギツムマブ（副腎皮質癌、非小細胞肺癌）、フランボツマブ（Ｆｌａｎｖｏｔｕｍａｂ）（黒色腫）、ガリキシマブ（Ｇａｌｉｘｉｍａｂ）（Ｂ細胞リンパ腫）、ガリキシマブ（Ｇａｌｉｘｉｍａｂ）（非ホジキンリンパ腫）、ガガニツマブ（Ｇａｎｉｔｕｍａｂ）、ＧＣ１００８（進行腎細胞癌；悪性黒色腫、肺繊維症）、ゲムツズマブ（白血病）、ゲムツズマブオゾガマイシン（急性骨髄性白血病）、ギレンツシマブ（Ｇｉｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ）（腎明細胞癌）、グレムバツムマブベドチン（Ｇｌｅｍｂａｔｕｍｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）（黒色腫、乳癌）、ＧＳ６６２４（特発性肺繊維症および固体腫瘍）、ＨｕＣ２４２−ＤＭ４（結腸癌、胃癌、膵癌）、ＨｕＨＭＦＧ１（乳癌）、ＨｕＮ９０１−ＤＭ１（骨髄腫）、イブリツモマブ（再発または難治性低悪性、濾胞性、または形質転換Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））、イクルクマブ（Ｉｃｒｕｃｕｍａｂ）、ＩＤ０９Ｃ３（非ホジキンリンパ腫）、インダツキシマブラブタンシン（Ｉｎｄａｔｕｘｉｍａｂ  ｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）、イノツズマブオゾガマイシン、インテツムマブ（Ｉｎｔｅｔｕｍｕｍａｂ）（固形腫瘍（前立腺癌、黒色腫））、イピリムマブ（肉腫、黒色腫、肺癌、卵巣癌白血病、リンパ腫、脳および中枢神経腫瘍、精巣癌、前立腺癌、膵癌、乳癌）、イラツムムマブ（Ｉｒａｔｕｍｕｍａｂ）（ホジキンリンパ腫）、ラベツズマブ（Ｌａｂｅｔｕｚｕｍａｂ）（結腸直腸癌）、レキサツムマブ（Ｌｅｘａｔｕｍｕｍａｂ）、リンツズマブ（Ｌｉｎｔｕｚｕｍａｂ）、ロルボツズマブ（Ｌｏｒｖｏｔｕｚｕｍａｂ）メルタンシンルカツムマブ（Ｌｕｃａｔｕｍｕｍａｂ）（多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫）、ルミリキシマブ（Ｌｕｍｉｌｉｘｉｍａｂ）（慢性リンパ腫白血病）、マパツムマブ（Ｍａｐａｔｕｍｕｍａｂ）（結腸癌、骨髄腫）、マツズマブ（Ｍａｔｕｚｕｍａｂ）（肺癌、子宮頚癌、食道癌）、ＭＤＸ−０６０（ホジキンリンパ腫、リンパ腫）、ＭＥＤＩ５２２（固体腫瘍、白血病、リンパ腫、小腸癌、黒色腫）、ミツモマブ（Ｍｉｔｕｍｏｍａｂ）（小細胞肺癌）、モガムリズマブ（Ｍｏｇａｍｕｌｉｚｕｍａｂ）、ＭＯＲａｂ−００３（卵巣癌、卵管癌、腹膜癌）、ＭＯＲａｂ−００９（膵癌、中皮腫、卵巣癌、非小細胞肺癌、卵管癌、腹腔癌）、モキサツモマブパスドトックス（Ｍｏｘｅｔｕｍｏｍａｂ  ｐａｓｕｄｏｔｏｘ）、ＭＴ１０３（非ホジキンリンパ腫）、ナコロマブタフェトックス（Ｎａｃｏｌｏｍａｂ  ｔａｆｅｎａｔｏｘ）（結腸直腸癌）、ナプツモマブエスタフェナトクス（非小細胞肺癌、腎臓細胞癌）、ナマツマブ（Ｎａｒｎａｔｕｍａｂ）、ネシツムマブ（非小細胞肺癌）、ニモツムマブ（扁平上皮癌、頭頸部、上咽頭癌、神経膠腫）、ニモツムマブ（扁平上皮癌、神経膠腫、固体腫瘍、肺癌）、オララツマブ（Ｏｌａｒａｔｕｍａｂ）、オナルツズマブ（Ｏｎａｒｔｕｚｕｍａｂ）（癌）、オパツズマブモナトックス（Ｏｐｏｒｔｕｚｕｍａｂｍｏｎａｔｏｘ）、オレゴボマブ（卵巣癌）、オレゴボマブ（卵巣癌、卵管癌、腹腔癌）、ＰＡＭ４（膵癌）、パニツムマブ（結腸癌、肺癌、乳癌；膀胱癌；卵巣癌）、パトリツマブ（Ｐａｔｒｉｔｕｍａｂ）、ペムツモマブ（Ｐｅｍｔｕｍｏｍａｂ）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）（乳癌、卵巣癌、肺癌、前立腺癌）、ペリツムマブ（Ｐｒｉｔｕｍｕｍａｂ）（脳癌）、ラコツモマブ（Ｒａｃｏｔｕｍｏｍａｂ）、ラドレツマブ（Ｒａｄｒｅｔｕｍａｂ）、ラムシルマブ（固形腫瘍）、リロツムマブ（Ｒｉｌｏｔｕｍｕｍａｂ）（固形腫瘍）、リツキシマブ（じんましん、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、慢性限局性脳炎、非ホジキンリンパ腫、リンパ腫、慢性リンパ性白血病）、ロバツムマブ、サマリズマブ、ＳＧＮ−３０（ホジキンリンパ腫、リンパ腫）、ＳＧＮ−４０（非ホジキンリンパ腫、骨髄腫、白血病、慢性リンパ性白血病）、シブロツマブ（Ｓｉｂｒｏｔｕｚｕｍａｂ）、シルツキシマブ（Ｓｉｌｔｕｘｉｍａｂ）、タバルマブ（Ｔａｂａｌｕｍａｂ）（Ｂ細胞癌）、タカツズマブテトラキセタン（Ｔａｃａｔｕｚｕｍａｂｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）、タピルツモマブパプトックス（Ｔａｐｌｉｔｕｍｏｍａｂｐａｐｔｏｘ）、テナツモマブ（Ｔｅｎａｔｕｍｏｍａｂ）、テプロツムマブ（Ｔｅｐｒｏｔｕｍｕｍａｂ）（血液の腫瘍）、ＴＧＮ１４１２（慢性リンパ腫白血病、リウマチ症関節炎）、ティシリムマブ（Ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ）（＝トレメリムマブ（ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ））、ティガツズマブ（Ｔｉｇａｔｕｚｕｍａｂ）、ＴＮＸ−６５０（ホジキンリンパ腫）、トシツモマブ（濾胞性リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、白血病、骨髄腫）、トラツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）（乳癌、子宮内膜癌、固体腫瘍）、ＴＲＢＳ０７（黒色腫）、トレメリムマブ（Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ）、ＴＲＵ−０１６（慢性リンパ腫白血病）、ＴＲＵ−０１６（非ホジキンリンパ腫）、ツコツズムマブセルモレウキン（Ｔｕｃｏｔｕｚｕｍａｂｃｅｌｍｏｌｅｕｋｉｎ）、ウブリツキシマブ（Ｕｂｌｉｔｕｘｉｍａｂ）、ウレルマブ（Ｕｒｅｌｕｍａｂ）、ベルツズマブ（Ｖｅｌｔｕｚｕｍａｂ）（非ホジキンリンパ腫）、ベルツズマブ（Ｖｅｌｔｕｚｕｍａｂ）（ＩＭＭＵ−１０６）（非ホジキンリンパ腫）、ボロシキシマブ（Ｖｏｌｏｃｉｘｉｍａｂ）（腎細胞癌、膵癌、黒色腫）、ボツムマブ（Ｖｏｔｕｍｕｍａｂ）（結腸直腸腫瘍）、ＷＸ−Ｇ２５０（腎細胞癌）、ザルツムマブ（Ｚａｌｕｔｕｍｕｍａｂ）（頭頸部癌、扁平上皮癌）、およびザノリムマブ（Ｚａｎｏｌｉｍｕｍａｂ）（Ｔ−細胞−リンパ腫）；
免疫疾患の治療のために、特に用いられる抗体は以下のものがある。例えば、エファリズマブ（Ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ）（乾癬）、エプラツズマブ（Ｅｐｒａｔｕｚｕｍａｂ）（自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス、非ホジキンリンパ腫、白血病）、エトロリズマブ（Ｅｔｒｏｌｉｚｕｍａｂ）（炎症性腸疾患）、フォントリズマブ（Ｆｏｎｔｏｌｉｚｕｍａｂ）（クローン病）、イキセキズマブ（Ｉｘｅｋｉｚｕｍａｂ）（自己免疫疾患）、メポリズマブ（Ｍｅｐｏｌｉｚｕｍａｂ）（過好酸性−症候群、喘息、好酸球性胃腸炎、チャーグ・ストラウス症候群、好酸球性食道炎）、ミラツズマブ（Ｍｉｌａｔｕｚｕｍａｂ）（多発性骨髄腫および他の血液系腫瘍）、プール免疫グロビン（原発性免疫不全）、ピリリキシマブ（Ｐｒｉｌｉｘｉｍａｂ）（クローン病、多発性硬化症）、リツキシマブ（じんましん、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、慢性限局性脳炎、非ホジキンリンパ腫、リンパ腫、慢性リンパ性白血病）、ロンタリズマブ（Ｒｏｎｔａｌｉｚｕｍａｂ）（全身性狼瘡エリテマトーデス）、ルプリズマブ（Ｒｕｐｌｉｚｕｍａｂ）（リウマチ性疾患）、サリルマブ（Ｓａｒｉｌｕｍａｂ）（関節リウマチ、強直性脊椎炎）、ベドリズマブ（Ｖｅｄｏｌｉｚｕｍａｂ）（クローン病、潰瘍性大腸炎）、ビジリズマブ（Ｖｉｓｉｌｉｚｕｍａｂ）（クローン病、潰瘍性大腸炎）、レスリズマブ（Ｒｅｓｌｉｚｕｍａｂ）（気道、皮膚および消化管の炎症）、アダリムマブ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）（関節リウマチクローン病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎）、アセリズマブ（Ａｓｅｌｉｚｕｍａｂ）（重症患者）、アティヌマブ（Ａｔｉｎｕｍａｂ）（神経システムの治療）、アテリズマブ（Ａｔｌｉｚｕｍａｂ）（関節リウマチ、全身性若年性突発性関節炎）、ベルティリムマブ（Ｂｅｒｔｉｌｉｍｕｍａｂ）（重度アレルギー疾患）、ベシレソマブ（Ｂｅｓｉｌｅｓｏｍａｂ）（炎症性病変および転移）、ＢＭＳ−９４５４２９、ＡＬＤ５１８（癌および関節リウマチ）、ブリアキヌマブ（Ｂｒｉａｋｉｎｕｍａｂ）（乾癬、リウマチ症関節炎、炎症性腸疾患、多発性硬化症）、ブロダルマブ（Ｂｒｏｄａｌｕｍａｂ）（炎症性疾患）、カナキヌマブ（Ｃａｎａｋｉｎｕｍａｂ）（関節リウマチ）、カナキヌマブ（Ｃａｎａｋｉｎｕｍａｂ）（クリオピン関連同期性症候群（キャップＳ）、リウマチ症関節炎、慢性閉塞性肺疾患）、セルトリズマブペゴル（Ｃｅｒｔｏｌｉｚｕｍａ  ｂｐｅｇｏｌ）（クローン病）、エリズマブ（Ｅｒｌｉｚｕｍａｂ）（心臓発作、卒中、外傷性ショック）、フェザキヌマブ（Ｆｅｚａｋｉｎｕｍａｂ）（関節リウマチ、乾癬）、ゴリムマブ（Ｇｏｌｉｍｕｍａｂ）（関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎）、ゴミリキシマブ（Ｇｏｍｉｌｉｘｉｍａｂ）（アレルギー性喘息）、インフリキシマブ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）（関節リウマチクローン病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、尋常性乾癬、モーバス  べクテル（ＭｏｒｂｕｓＢｅｃｈｔｅｒｅｗ）、潰瘍性結腸炎）、マブリリムマブ（Ｍａｖｒｉｌｉｍｕｍａｂ）（関節リウマチ）、ナタリズマブ（Ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ）（多発性硬化症）、オクレリズマブ（Ｏｃｒｅｌｉｚｕｍａｂ）（多発性硬化症、リウマチ症��節炎、狼瘡エリテマトーデス、血液系癌）、オデゥリモマブ（Ｏｄｕｌｉｍｏｍａｂ）（予防の臓器移植後拒絶反応、免疫疾患）、オファツムマブ（Ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）（慢性リンパ腫白血病、濾胞性非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、リウマチ症関節炎、再発寛解多発性硬化症、リンパ腫、Ｂ−細胞慢性リンパ性白血病）、オゾラリズマブ（Ｏｚｏｒａｌｉｚｕｍａｂ）（炎症）、ペキシリズマブ（Ｐｅｘｅｌｉｚｕｍａｂ）（減少の副作用の心臓手術）、ロベリズマブ（Ｒｏｖｅｌｉｚｕｍａｂ）（出血性ショック）、ＳＢＩ−０８７（関節リウマチ）、ＳＢＩ−０８７（全身性狼瘡エリテマトーデス）、セクキヌマブ（Ｓｅｃｕｋｉｎｕｍａｂ）（ぶどう膜炎、リウマチ症関節炎乾癬）、シルクマブ（Ｓｉｒｕｋｕｍａｂ）（関節リウマチ）、タリズマブ（Ｔａｌｉｚｕｍａｂ）（アレルギー反応）、トシリズマブ（Ｔｏｃｉｌｉｚｕｍａｂ）（関節リウマチ、全身性若年性突発性関節炎、キャッスルマン病）、トラリズマブ（Ｔｏｒａｌｉｚｕｍａｂ）（関節リウマチ、狼瘡ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）、ＴＲＵ−０１５（関節リウマチ）、ＴＲＵ−０１６（自己免疫疾患および炎症）、ウステキヌマブ（Ｕｓｔｅｋｉｎｕｍａｂ）（多発性硬化症、乾癬、乾癬性関節炎）、ウステキヌマブ（Ｕｓｔｅｋｉｎｕｍａｂ）（ＩＬ−１２／ＩＬ−２３遮断薬）（尋常性−乾癬、乾癬性関節炎、多発性硬化症、サルコイドーシス、the latter versus)、ベパリモマブ（Ｖｅｐａｌｉｍｏｍａｂ）（炎症）、ゾリモマブ  アリトックス（Ｚｏｌｉｍｏｍａｂａｒｉｔｏｘ）（全身性狼瘡エリテマトーデス、移植片対宿主病）、シファリムマブ（Ｓｉｆａｌｉｍｕｍａｂ）（ＳＬＥ、皮膚筋炎、多発性筋炎）、ルミリキシマブ（Ｌｕｍｉｌｉｘｉｍａｂ）（アレルギー）、およびＲｈｏ（Ｄ）免疫グロブリン（Ｒｈ血液型不適合）；または抗体は、以下の感染症の治療のために用いられる抗体から選択される。例えばアフェリモマブ（Ａｆｅｌｉｍｏｍａｂ）（化膿症）、ＣＲ６２６１（感染症／インフルエンザＡ）、エドバコマブ（Ｅｄｏｂａｃｏｍａｂ）（グラムネガティブ細菌によって引き起こされる化膿症）、エフングマブ（Ｅｆｕｎｇｕｍａｂ）（侵襲性カンジダ症）、エクスビビルマブ（Ｅｘｂｉｖｉｒｕｍａｂ）（肝炎Ｂ）、フェルビズマブ（Ｆｅｌｖｉｚｕｍａｂ）（呼吸系発疹ウイルス感染）、フォラビルマブ（Ｆｏｒａｖｉｒｕｍａｂ）（狂犬病（予防））、イバリズマブ（Ｉｂａｌｉｚｕｍａｂ）（ＨＩＶ感染）、リビビルマブ（Ｌｉｂｉｖｉｒｕｍａｂ）（肝炎Ｂ）、モタビズマブ（Ｍｏｔａｖｉｚｕｍａｂ）（呼吸系発疹ウイルス（予防））、ネバクマブ（Ｎｅｂａｃｕｍａｂ）（化膿症）、ツビルマブ（Ｔｕｖｉｒｕｍａｂ）（慢性肝炎Ｂ）、ウルトキサズマブ（Ｕｒｔｏｘａｚｕｍａｂ）（大腸菌によって引き起こされる下痢）、バビツキシマブ（Ｂａｖｉｔｕｘｉｍａｂ）（多様なウイルス性感染）、パギバキシマブ（Ｐａｇｉｂａｘｉｍａｂ）（化膿症（例えばスタフィロコッカス））、パリビズマブ（Ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ）（高リスク小児患者における呼吸系発疹ウイルス感染の予防）、パノバクマブ（Ｐａｎｏｂａｃｕｍａｂ）（緑膿菌感染）、ＰＲＯ１４０（ＨＩＶ感染）、ラフィビルマブ（Ｒａｆｉｖｉｒｕｍａｂ）（狂犬病（予防））、ラキシバクマブ（Ｒａｘｉｂａｃｕｍａｂ）（炭疽菌（予防および治療））、レガバイルマブ（Ｒｅｇａｖｉｒｕｍａｂ）（サイトメガロウイルス感染）、セビルマブ（Ｓｅｖｉｒｕｍａｂ）（サイトメガロウイルス感染）、スビズマブ（Ｓｕｖｉｚｕｍａｂ）（ウイルス性感染）、およびテフィバズマブ（Ｔｅｆｉｂａｚｕｍａｂ）（スタフィロコッカスアウレウス感染）；
血液疾患の治療のために、特に用いられる抗体は以下のものがある。例えば、アビシキシマブ（Ａｂｃｉｘｉｍａｂ）（経皮的冠動脈形成術）、アトロリムマブ（Ａｔｏｒｏｌｉｍｕｍａｂ）（新生児の溶血性疾患）、エクリズマブ（Ｅｃｕｌｉｚｕｍａｂ）（発作性夜間ヘモグロビン尿症）、メポリズマブ（Ｍｅｐｏｌｉｚｕｍａｂ）（過好酸性−症候群、喘息、好酸球性胃腸炎、チャーグ・ストラウス症候群、好酸球性食道炎）、およびミラツズマブ（Ｍｉｌａｔｕｚｕｍａｂ）（多発性骨髄腫および他の血液系腫瘍）；
免疫調節の治療のために、特に用いられる抗体は以下のものがある。例えば、抗胸腺細胞グロブリン（急性腎移植拒絶反応、再生不良性貧血）、バシリキシマブ（Ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ）（シクロスポリンおよび副腎皮質ステロイドを含んでいる免疫抑制レジメンを受けている、腎移植患者における同種移植片拒絶に対する予防）、セデリズマブ（Ｃｅｄｅｌｉｚｕｍａｂ）（臓器移植後拒絶反応の予防、自己免疫疾患の処置、）、ダクリズマブ（Ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）（腎移植を受けている患者における急性同種移植片拒絶に対する予防、多発性硬化症）、ガビリモマブ（Ｇａｖｉｌｉｍｏｍａｂ）（移植片対宿主病）、イノリモマブ（Ｉｎｏｌｉｍｏｍａｂ）（移植片対宿主病）、ムロモナブ（Ｍｕｒｏｍｏｎａｂ）−ＣＤ３（臓器移植後拒絶反応の予防）、ムロモナブ（Ｍｕｒｏｍｏｎａｂ）−ＣＤ３（急性腎臓同種移植片拒絶、またはステロイド−対抗性心臓病あるいは移植肝拒絶反応）、オデゥリモマブ（Ｏｄｕｌｉｍｏｍａｂ）（臓器移植後拒絶反応の予防、免疫疾患）、およびシプリズマブ（Ｓｉｐｌｉｚｕｍａｂ）（乾癬、移植片対宿主病（予防））；
糖尿病の治療のために用いられる抗体は、以下のものがある。例えば、ゲボキズマブ（Ｇｅｖｏｋｉｚｕｍａｂ）（糖尿病）、オテリキシズマブ（Ｏｔｅｌｉｘｉｚｕｍａｂ）（Ｉ型真性糖尿病）、およびテプリズマブ（Ｔｅｐｌｉｚｕｍａｂ）（Ｉ型真性糖尿病）；
アルツハイマー病の治療のために用いられる抗体は、以下のものがある。例えば、バピネウズマブ（Ｂａｐｉｎｅｕｚｕｍａｂ）、クレネズマブ（Ｃｒｅｎｅｚｕｍａｂ）、ガンテネルマブ（Ｇａｎｔｅｎｅｒｕｍａｂ）、ポネズマブ（Ｐｏｎｅｚｕｍａｂ）、Ｒ１４５０、およびソラネズマブ（Ｓｏｌａｎｅｚｕｍａｂ）；
ぜんそくの治療のために用いられる抗体は、以下のものがある。例えば、ベンラリズマブ（Ｂｅｎｒａｌｉｚｕｍａｂ）、エノキズマブ（Ｅｎｏｋｉｚｕｍａｂ）、ケリキシマブ（Ｋｅｌｉｘｉｍａｂ）、レブリキズマブ（Ｌｅｂｒｉｋｉｚｕｍａｂ）、オマリズマブ（Ｏｍａｌｉｚｕｍａｂ）、オキセルマブ（Ｏｘｅｌｕｍａｂ）、パソコリズマブ（Ｐａｓｃｏｌｉｚｕｍａｂ）、およびトラロキヌマブ（Ｔｒａｌｏｋｉｎｕｍａｂ）；
そして、多様な疾患の治療のために用いられる抗体は、以下のものがある。例えば、ブロソズマブ（Ｂｌｏｓｏｚｕｍａｂ）（骨粗鬆症）、ＣａｒｏＲｘ（う歯）、フレソリムマブ（Ｆｒｅｓｏｌｉｍｕｍａｂ）（突発性肺繊維症、巣状分節性糸球体硬化症、癌）、フルラヌマブ（Ｆｕｌｒａｎｕｍａｂ）（苦痛）、ロモソズマブ（Ｒｏｍｏｓｏｚｕｍａｂ）（骨粗鬆症）、スタムルマブ（Ｓｔａｍｕｌｕｍａｂ）（筋ジストロフィー）、タネズマブ（Ｔａｎｅｚｕｍａｂ）（苦痛）、およびラニビズマブ（Ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ）（新生血管加齢黄斑変性）。
【０２５３】
本発明の修飾ＲＮＡのコード領域は、１つ、２つまたはそれ以上のタンパク質またはペプチドのコード領域を運搬する、モノ（ｍｏｎｏ−）、ジ（ｄｉ−）、またはさらにマルチシストロン性のＲＮＡ、すなわちＲＮＡとして起こり得る。ジ（ｄｉ−）、またはさらにマルチシストロン性のＲＮＡにおけるこのようなコーディング配列は、例えば本書で述べられている、少なくとも１つの内部リボソーム導入部位（ＩＲＥＳ）配列によって、またはいくつかのタンパク質またはペプチドを含む、結果として生じたポリペプチドの開裂を誘発するシグナルペプチドによって、分離され得る。
【０２５４】
医薬組成物：
加えて、別の態様に従い、本発明は、本書に定義されている修飾ＲＮＡの使用にも関連しており、および本発明は、例えば、好ましくは本書に定義されている疾患を治療するため、例えば、本書に述べられている修飾ＲＮＡ、または細胞（例えば宿主細胞または体細胞発現）、好ましくは裸形態または錯化形である組織または有機体、またはジェット注射によって本書で述べられている医薬組成物に定義されている複数の修飾ＲＮＡ分子の適用または投与である、特に遺伝子療法または遺伝的ワクチン接種における使用のためにコードされたペプチドまたはタンパク質の発現を促進するための医薬的組成物の調製のため本書に定義されている複数の修飾ＲＮＡ分子を含んでいる組成物にも関連している。
【０２５５】
従って、特定の好ましい態様において、本発明はまた、本書に定義されている修飾ＲＮＡを含んでいる医薬的組成物、または本書に定義されている複数の修飾ＲＮＡを含んでいる組成物および任意でジェット注射による投与のための医薬的に受容可能なキャリアおよび／またはビヒクルを提供する。
【０２５６】
第一の材料として、医薬的組成物は、本書に定義されている少なくとも１つの修飾核酸を含む。
【０２５７】
第二の材料として、医薬的組成物は、少なくとも１つのさらなる医薬的に活性の成分を任意で含み得る。この点における医薬的に活性の成分は、本書で述べた特定の徴候または疾患を、治癒、改善、または予防する治療的効果を有する化合物である。このような化合物は、任意の限定を示唆することなく、以下のものを含む、好ましくは本書に定義されているペプチドまたはタンパク質、好ましくは本書に定義されている核酸、（治療的に活性の）低分子量有機または無機化合物（分子量５０００未満、好ましくは１０００未満、好ましくは本書に定義されている糖、抗原、または抗体、先行技術においてすでに知られている治療薬、抗原性細胞、抗原性細胞断片、細胞画分；好ましくは本書に定義されている細胞壁成分（例えば多糖）、修飾、弱毒または不活性化（例えば化学的にまたは放射線照射法によって）病原体（ウイルス、細菌等）、アジュバント、等。
【０２５８】
さらに、医薬的組成物は、医薬的に受容可能なキャリアおよび／またはビヒクルを含み得る。本発明の背景において、医薬的に受容可能なキャリアは、本発明の医薬的組成物の液体または非液体ベースを概して含む。キャリアは概して、パイロジェンフリー水、例えばリン酸塩、クエン酸塩等の等張生理食塩水または緩衝（水溶性）溶剤、緩衝液になり得る。注入緩衝液は、特定の基準媒体に関して高浸透圧性、等張または低浸透圧性になる可能性があり、すなわち緩衝液は、特定の基準媒体に関して高い、同一、または低い塩分を有する可能性があり、ここで好ましくは、浸透または他の濃度効果により細胞の損傷を導くことのない、前述された塩のこのような濃度が用いられ得る。基準媒体は、例えば、血液、リンパ、サイトゾル液、または他の体液などの、“in vivo”方法において発生する液体であり、または例えば一般的な緩衝液または液体など、“in vitro”方法において、基準媒体として用いられ得る液体である。このような一般的な緩衝液または液体は、当業者に知られている。リンガー乳酸液は、液体ベースとして特に好ましい。
【０２５９】
しかし、１つまたはそれ以上の、互換性のある固体または液体充てん機または希釈液または封入化合物は、治療される患者への投与のために好適な、医薬的組成物のために同様に用いられ得る。ここで用いられる“互換性のある”という用語は、医薬的組成物のこれらの構成物質は、典型的な使用状態下において医薬的組成物の医薬的有効性を実質上低減する相互作用が起こることがないように、本書に定義されている修飾ＲＮＡと混合することが可能であるということを意味する。
【０２６０】
複合体形成：
さらに、医薬的組成物は、修飾ＲＮＡのためのキャリアを含み得る。このようなキャリアは、生理学的に受容可能な液体中での溶解の媒介、医薬的に活性な修飾ＲＮＡ分子の輸送および細胞取り込みのために好適になり得る。したがって、このようなキャリアは、本発明の修飾ＲＮＡの貯蔵および運搬のために好適な成分であり得る。このような成分は、例えば、トランスフェクションまたは複合体形成薬として機能し得る、カオチンまたはポリカオチンキャリアまたは化合物になり得る。
【０２６１】
この背景において特に好ましいトランスフェクションまたは複合体形成薬は、ＨＩＶ−結合ペプチド、ＨＩＶ−１Ｔａｔ（ＨＩＶ）、Ｔａｔ−由来ペプチド、ペネトラチン、ＶＰ２２由来または類似体ペプチド、ＨＳＶＶＰ２２（単純ヘルペス）、ＭＡＰ、ＫＡＬＡまたはタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤｓ）、ＰｐＴ６２０、プロリン−リッチペプチド、アルギニン−リッチペプチド、リジン−リッチペプチド、ＭＰＧ−ペプチド、Ｐｅｐ−１、Ｌ−オリゴマー、カルシトニンペプチド、アンテナペディア−由来ペプチド（特にＤｒｏｓｏｐｈｉｌａａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａから）、ｐＡｎｔｐ、ｐＩｓｌ、ＦＧＦ、ラクトフェリン、トランスポータン、ブフォリン−２、Ｂａｃ７１５−２４、ＳｙｎＢ、ＳｙｎＢ（１）、ｐＶＥＣ、ｈＣＴ−由来ペプチド、ＳＡＰ、またはヒストン、を含んでいるポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）、ポリ−アルギニン、塩基性ポリペプチド、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰｓ）などである、プロタミンヌクレオリン、スペルミンまたはスペルミジン、または他のカオチンペプチドまたはタンパク質を含んでいる、カオチンまたはポリカオチン化合物である。
【０２６２】
さらに、このようなカオチンまたはポリカオチン化合物またはキャリアは、少なくとも１つの−ＳＨ部分を好ましくは含むまたは含むようにさらに修飾された、カオチンまたはポリカオチンペプチドまたはタンパク質であり得る。好ましくは、カオチンまたはポリカオチンキャリアは、以下の総和式（ＩＩＩ）を有しているカオチンペプチドから選択される。
【０２６３】
｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ｝；  式（ＩＩＩ）
ここで、お互い独立したｌ＋ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｘ＝３〜１００、およびｌ、ｍ、ｎまたはｏは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１〜３０、３１〜４０、４１〜５０、５１〜６０、６１〜７０、７１〜８０、８１〜９０および９１〜１００から選択される任意の数であり、Ａｒｇ（アルギニン）、Ｌｙｓ（リジン）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）およびＯｒｎ（オルニチン）の総含有量は、オリゴペプチドの全てのアミノ酸の少なくとも１０％を示しており；およびＸａａは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、ＨｉｓまたはＯｒｎを除く天然（＝自然発生）または非天然アミノ酸から選択される任意のアミノ酸であり；ｘは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１〜３０、３１〜４０、４１〜５０、５１〜６０、６１〜７０、７１〜８０、８１〜９０から選択される任意の数であり、Ｘａａの総含有量は、オリゴペプチドの全てのアミノ酸の９０％を超えないことを示している。任意のアミノ酸、Ａｒｇ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，ＯｒｎおよびＸａａは、ペプチドの任意の場所に位置し得る。この背景において、７〜３０個のアミノ酸の範囲におけるカオチンペプチドまたはタンパク質が、特に好ましい。
【０２６４】
さらに、カオチンまたはポリカオチンペプチドまたはタンパク質は、上記に示された式｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ｝（式（ＩＩＩ））に従って定義され、少なくとも１つの−ＳＨ部分を含むまたは含むようにさらに修飾された場合、副式（Ｉａ）から選択され、それに制限されることはない：
｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ’）ｘ（Ｃｙｓ）ｙ｝  副式（ＩＩＩａ）
ここで、本書に定義されている（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏは；Ｘａａ’は、天然（＝自然発生）またはＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、ＯｒｎまたはＣｙｓを除く非天然アミノ酸から選択される任意のアミノ酸であり、およびｙは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１〜３０、３１〜４０、４１〜５０、５１〜６０、６１〜７０、７１〜８０および８１〜９０から選択される任意の数であり、Ａｒｇ（アルギニン）、Ｌｙｓ（リジン）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）およびＯｒｎ（オルニチン）の総含有量は、オリゴペプチドの全てのアミノ酸の少なくとも１０％を示している。さらに、カオチンまたはポリカオチンペプチドは、副式（ＩＩＩｂ）から選択され得る：
Ｃｙｓ１｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ｝Ｃｙｓ２  副式（ＩＩＩｂ）
ここで、実験式｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ｝（式（ＩＶ））は、本書に述べられており、（半実験的）式（ＩＶ）に従ってアミノ酸配列のコアを形成し、ここでＣｙｓ１およびＣｙｓ２は、（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘの近位または末端にあるシステンである。
【０２６５】
トランスフェクションまたは複合体形成薬に用いられ得る、さらに好ましいカオチンまたはポリカオチン化合物は、例えばＤＯＴＭＡ：１−（２、３−シオレイロキシイ（ｓｉｏｌｅｙｌｏｘｙ））プロピル）−Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライドであるカオチン脂質、ＤＭＲＩＥ、ジ（ｄｉ−）Ｃ１４−アミジン、ＤＯＴＩＭ、ＳＡＩＮＴ、ＤＣ−Ｃｈｏｌ、ＢＧＴＣ、ＣＴＡＰ、ＤＯＰＣ、ＤＯＤＡＰ、ＤＯＰＥ：ジオレイルホスファチジルエタノール−アミン、ＤＯＳＰＡ、ＤＯＤＡＢ、ＤＯＩＣ、ＤＭＥＰＣ、ＤＯＧＳ：ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン、ＤＩＭＲＩ：ジミリスト−オキシプロピルジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロマイド、ＤＯＴＡＰ：ジオレオイルオキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン、ＤＣ−６−１４：Ｏ、Ｏ−ジテトラデカノイル−Ｎ−（アルファ−トリメチルアンモニオアセチル）ジエタノールアミンクロライド、ＣＬＩＰ１：ｒａｃ−［（２、３−ジオクタデシルオキシプロピル）（２−ヒドロキシエチル）］−ジメチルアンモニウムクロライド、ＣＬＩＰ６：ｒａｃ−［２（２、３−ジヘキサデシルオキシプロピル−オキシメチルオキシ）エチル］トリメチルアンモニウム、ＣＬＩＰ９：ｒａｃ−［２（２、３−ジヘキサデシルオキシプロピル−オキシサクシニルオキシ）エチル］−トリメチルアンモニウム、オリゴフェクタミン、または、ベータ−アミノ酸−ポリマーもしくは反転型ポリアミド等、などである、例えば修飾ポリアミノ酸である、カオチンもしくはポリカオチン性ポリマー、ＰＶＰ（ポリ（Ｎ−エチル−４−ビニルピリジニウムブロマイド））等、などである、修飾ポリエチレン、ｐＤＭＡＥＭＡ（ポリ（ジメチルアミノエチルメチルアクリル酸））等、などである、修飾アクリル酸、ｐＡＭＡＭ（ポリ（アミドアミン））等、などである、修飾アミドアミン、ジアミン末端修飾１、４ブタンジオールジアクリレート−ｃｏ−５−アミノ−１−ペンタノールポリマー等、などである、修飾ポリベータアミノエステル（ＰＢＡＥ）、ポリプロピルアミンデンドリマーまたはｐＡＭＡＭ基デンドリマー等、などである、デンドリマー、ＰＥＩ：ポリ（エチレンイミン）、ポリ（プロピレンイミン）等、などである、ポリイミン、シクロデキストリン基ポリマー、デキストラン基ポリマー、キトサン等、などである、ポリアリルアミン、糖骨格基ポリマー、ＰＭＯＸＡ−ＰＤＭＳコポリマー等、などである、シラン骨格基ポリマー、１つまたはそれ以上のカオチン性ブロック（例えば上記のカオチンポリマーから選択される）、および１つまたはそれ以上の親水性または疎水性ブロック（例えばポリエチレングリコール）の組み合わせからなるブロックポリマー；等である、例えばキトサン、ポリブレン、例えばポリエチレンイミンである（ＰＥＩ）カオチン性ポリマーである、カオチン多糖が含まれ得る。
【０２６６】
この背景において、修飾ＲＮＡ分子は、好ましくはカオチンタンパク質またはペプチドである、カオチンまたはポリカオチン化合物と、少なくとも部分的に複合体化していることが特に好ましい。「部分的に」は、修飾ＲＮＡ分子の一部のみがカオチンまたはポリカオチン化合物と複合体化しており、残りの修飾ＲＮＡ分子は、非複合体の形態（“遊離”）であることを意味している。遊離修飾ＲＮＡに対する複合体化修飾ＲＮＡの好ましい比は、約５：１（ｗ／ｗ）から約１：１０（ｗ／ｗ）の範囲、より好ましくは約４：１（ｗ／ｗ）から約１：８（ｗ／ｗ）の範囲、さらにより好ましくは約３：１（ｗ／ｗ）から約１：５（ｗ／ｗ）または１：３（ｗ／ｗ）の範囲から選択され、および最も好ましい遊離核酸に対する複合核酸の比は、約１：１（ｗ／ｗ）の比から選択される。
【０２６７】
特定の実施形態に従い、医薬的組成物は、アジュバントを有し得る。この背景において、アジュバントは任意の化合物として理解され得、上記アジュバントは、すなわち非特異的免疫反応である、先天性免疫システムの免疫反応を開始するまたは促進するために好適である。言い換えれば、本発明の医薬的組成物は、投与されたとき、任意で含まれているアジュバントにより自然免疫反応を好ましくは誘発する。好ましくは、このようなアジュバントは、当業者によって知られており現ケースに好適なアジュバントから選択され得る（例えば、上記に定義されたアジュバントタンパク質または以下に定義されるアジュバントであり、すなわち哺乳類における自然免疫反応を誘導するもの）。
【０２６８】
貯蔵および輸送のために好適な、特に好ましいアジュバントは、ビヒクル、トランスフェクションまたは複合体形成薬としての修飾ＲＮＡのために上記に定義された、カオチンまたはポリカオチン化合物である。
【０２６９】
さらに、本発明の医薬的組成物において含まれ得る添加剤は、例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）などの乳化剤である；例えば、ラウリル硫酸ナトリウム；着色料；呈味賦与剤、医薬的キャリア；造粒剤；安定剤；抗酸化剤；保存剤などの湿潤剤。
【０２７０】
医薬的組成物は、ヒトＴｏｌｌ様受容体ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０に対するその結合親和性（リガンドとして）に起因して、またはマウスＴｏｌｌ様受容体ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２またはＴＬＲ１３に対するその結合親和性（リガンドとして）に起因して、免疫賦活性であるとして知られている任意のさらなる化合物を追加で含み得る。
【０２７１】
医薬的組成物は、好ましくは、ジェット注射によって皮下、筋肉内または皮内に投与され得る。医薬的組成物の滅菌注射剤型は、水溶性または油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、好適な分散剤、または湿潤剤および懸濁剤を用いり、当技術分野で知られた技術に従い調製され得る。
【０２７２】
医薬的組成物は、特に本書に定義されている修飾ＲＮＡである、医薬的組成物の成分の“安全および効果的な量”を概して含む。本書で用いられているように、“安全および効果的な量”は、本書に定義されている疾患または障害のポジティブ修飾を有意に誘発するために十分な、本書に定義されている修飾ＲＮＡの量を意味する。同時に、しかしながら“安全および効果的な量”は、深刻な副作用を避け利益とリスクとの間の賢明な関係を可能にするために十分なほど少ない。これらの制限の決定は、概して賢明な医学判断の範囲内に存在する。
【０２７３】
本発明は、本書に定義されている複数の修飾ＲＮＡ分子を含んでいる組成物、本書に定義されている修飾ＲＮＡまたは同様のものを含んでいるキットを含んでいる医薬的組成物の、本書に定義されている修飾ＲＮＡのいくつかの適用および使用をさらに提供する。
【０２７４】
１つの特定の態様に従い、本発明は、本書に定義されている本発明の修飾ＲＮＡの第一の医療用途へと向けられており、または、本発明は、好ましくは本書に定義されている疾患の治療のため特に遺伝子療法または遺伝的ワクチンにおいて薬物として本書に定義されている、複数の本発明のＲＮＡ分子を含んでいる本発明の組成物の第一の医療用途へと向けられている。
【０２７５】
別の態様に従い、本発明は、本書に定義されている本発明の修飾ＲＮＡの第二の医療用途へと、または本書に定義されている疾患の治療のため本書に定義されている複数の本発明の修飾ＲＮＡ分子を含んでいる本発明の組成物の第二の医療用途へと向けられ、好ましくは本発明は、本書に定義されている本発明の修飾ＲＮＡの使用、本書に定義されている複数の本発明の修飾ＲＮＡ分子を含んでいる本発明の組成物の使用、本書に定義されている疾患の予防、処置および／または改善のための薬物の調製のため、同様のものを含んでいる医薬的組成物または同様のものを含んでいるキットの使用に向けられている。好ましくは、医薬的組成物は、この目的のために上記医薬的組成物を必要としている患者に使用または投与される。
【０２７６】
好ましくは、本書に述べられている疾患は、感染症、腫瘍（例えば癌または腫瘍疾患）、血液および造血臓器の疾患、内分泌、栄養的および代謝疾患、神経系の疾患、循環系の疾患、呼吸器系の疾患、消化管系の疾患、皮膚および皮下組織の疾患、筋骨格系および結合組織の疾患、および尿生殖器系の疾患から好ましくは選択される。
【０２７７】
疾患
感染症疾患：
好ましくは、本書で述べた感染症は、好ましくはウイルス性、細菌性、プロト動物学的およびプリオン感染症から選択される。このような感染症は、以下のものからなる一覧から概して選択される。アシネトバクター感染、アフリカ睡眠病（アフリカトリパノソーマ病）、エイズ（後天性免疫不全症候群）、アメーバ症、アナプラズマ症、炭疽病、虫垂炎、溶血性アルカノバクテリア感染、アルゼンチン出血熱、回虫症、アスペルギルス症、アストロウイルス感染、水虫、バベシア症、セレウス菌感染、細菌性髄膜炎、細菌性肺炎、細菌性膣症（ＢＶ）、Ｂバクテロイデス感染症、バランチジウム症、回虫上科、ビルイルチア病、ＢＫウイルス感染、黒色砂毛、ブラストシスチス  ホミニス感染、ブラストミセス症、ボリビア出血熱、ボレリア感染（ボレリア症）、ボツリヌス中毒症（および乳児ボツリヌス症）、ウシサナダムシ、ブラジル出血熱、ブルセラ病、バークホルデリア感染、ブルーリ潰瘍、カリシウイルス感染（ノロウイルスおよびサポウイルス）、カンピロバクター症、カンジダ症（Ｃａｎｄｉｄｏｓｉｓ）、イヌサナダムシ感染、ネコひっかき病、シャガス病（アメリカトリパノソーマ症）、軟性下疳、水ぼうそう、クラミジア感染、クラミジアトラコマティス感染、クラミドフィラニューモニエ感染、コレラ、黒色分芽菌症、鼠径リンパ肉芽腫、肝吸虫症、クロストリジウムディフィシレ感染、コクシジオイデス症、かぜ、コロラドダニ熱（ＣＴＦ）、感冒（急性ウイルス性鼻咽頭炎；急性鼻炎）、尖圭コンジローマ、結膜炎、クロイツフェルトヤコブ疾患（ＣＪＤ）、クリミア−コンゴ出血熱（ＣＣＨＦ）、クリプトコッカス症、クリプトスポリジウム症、皮膚幼虫移行症（ＣＬＭ）、皮膚リーシュマニア症、シクロスポラ症、嚢虫症、サイトメガロウイルス感染、デング熱、皮膚糸状菌症、二核アメーバ症、ジフテリア、裂頭条虫症、ドノヴァン症、メジナ虫症、初夏髄膜脳炎（ＦＳＭＥ）、エボラ出血熱、エキノコックス症、エーリキア症、蟯虫症（蟯虫感染）、エンテロコッカス感染、エンテロウイルス感染、発疹チフス、喉頭蓋炎、エプスタイン−バーウイルス感染単核球症、伝染性紅斑（第５疾患）、突発性発疹、肥大吸虫症、肝蛭症、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）、第５疾患、フィラリア症、魚類中毒（シガテラ）、魚類サナダムシ、インフルエンザ、クロストリジウムパーフリンゲンスによる食中毒、キツネサナダムシ、自由生活アメーバ感染、フソバクテリウム感染、ガス壊疽、ゲオトリウム症、ゲルシュトマン・シュトロイスラー・シャインカー病（ＧＳＳ）、ジアルジア病、鼻疽病、顎口虫症、淋病、鼠径部肉芽腫（Ｄｏｎｏｖａｎｏｓｉｓ）、Ａ群連鎖球菌感染症、Ｂ群連鎖球菌感染症、ヘモフィルスインフルエンザ感染、手足口病（ＨＦＭＤ）、ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ）、ヘリコバクターピロリ感染、溶血性尿毒疽症候群（ＨＵＳ）、腎臓症候群（ＨＦＲＳ）による出血熱、ヘニパウイルス感染、肝炎Ａ、肝炎Ｂ、肝炎Ｃ、肝炎Ｄ、肝炎Ｅ、単純ヘルペス、単純ヘルペスＩ型単純ヘルペスＩＩ型、帯状疱疹、ヒトプラズマ症、凹みイボ、鉤虫感染、ヒトボカウイルス感染、ヒトエールリヒア症、ヒト顆粒アナプラズマ症（ＨＧＡ）、ヒトメタニューモウイルス感染、ヒト単���エールヒリア症、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染、ヒトパラインフルエンザウイルス感染、膜様条虫疽、インフルエンザ、イソスポーラ症、日本脳炎、川崎病、角膜炎、キンゲラキンゲ感染、クール−、ランブル鞭毛虫症（Ｇｉａｒｄｉａｓｉｓ）、ラッサ熱、レジオネラ症（レジオネラ疾患、ポンティアック熱）、リーシュマニア症、らい病、レプトスピラ症、シラミ、リステリア症、ライムボレリア症、ライム病、リンパ管フィラリア症（象牙病）、リンパ球性脈絡骨髄膜炎、マラリア、マールブルグ出血熱（ＭＨＦ）、マールブルグウイルス、はしか、類鼻疽（ホワイトモア（Ｗｈｉｔｍｏｒｅ’ｓ）疾患）、髄膜炎、髄膜炎菌性疾患、横川吸虫症、微胞子虫疽、小型サナダムシ、流産（前立腺炎症）、伝染性軟属腫（ＭＣ）、単核球症、ムンプス、発疹熱（エンデミック・タイフス）Ｅｎｄｅｍｉｃｔｙｐｈｕｓ）、菌腫、マイコプラズマホミンス、マイコプラズマ肺炎、ハエ幼虫症、オムツ皮膚炎、新生児結膜炎（新生児眼炎）、新生児敗血症（絨毛羊膜炎）、ノカルジア症、水癌、ノーウォークウイルス感染、オンコセルカ症（河川盲目症）、骨髄炎、中耳炎、パラコクシジオイデス症（アメリカブラストミセス症）、肺吸虫症、パラチフス、パスツレラ症、アタマジラミ寄生疽（アタマジラミ）、コロモジラミ寄生症（コロモジラミ）、ケジラミ症（ケジラミ、クラブ・ライス（Ｃｒａｂｌｉｃｅ））、骨盤内炎症性疾患（ＰＩＤ）、百日咳（百日ぜき）、パイファー腺熱、疫病、肺炎球菌感染、ニューモシスチス肺炎（ＰＣＰ）、肺炎、ポリオ（幼児はこう）、灰自髄炎、ブタサナダムシ、プレボテラ感染、原発性アメーバ性髄膜脳炎（ＰＡＭ）、進行性多巣性白質脳症、仮性クループ、オウム病、Ｑ熱、野兎熱、狂犬病、鼠咬症、ライター症候群、呼吸器多核体ウイルス感染（ＲＳＶ）、リノスポリジウム症、ライノウイルス感染、リケッチアｌ感染、リケッチアｌｐｏｘ、リフトバレー熱（ＲＶＦ）、ロッキー山紅斑熱（ＲＭＳＦ）、ロタウイルス感染、風疹、サルモネラパラチフス、サルモネラチフス、サルモネラ症、ＳＡＲＳ（重症急性呼吸器症候群）、疥癬、しょうこう熱、住血吸血症（ビルイルチア病）、ツツガムシ病、化膿症、細菌性赤痢（バシリアリー・ダイセンテリー（Ｂａｃｉｌｌａｒｙｄｙｓｅｎｔｅｒｙ））、帯状疱疹、天然痘（痘瘡）、軟性下疳、スポロトリコーシス、ブドウ球菌食中毒、ブドウ球菌感染、糞腺虫症、梅毒、条虫症、破傷風、３日熱、ダニ媒介脳炎、白癬性毛瘡（毛嚢炎）、頭部白癬（頭部の白癬）、体部白癬（体の白癬）、股部白癬（頑癬）、手白癬（手の白癬）、黒癬、足白癬（水虫）、爪白癬（爪真菌症）、変色白癬（でん風）、トキソカラ症（眼幼虫移行症（ＯＬＭ）および内臓幼虫移行症（ＶＬＭ））、トキソプラズマ症、施毛虫症、トリコモナス症、鞭虫症（鞭虫感染）、トリッパ−、トリパノソーマ症（睡眠病）、ツツガムシ疾患、結核、ツラレミア、発疹チフス、発疹チフス熱、ウレアプラズマウレアリチカム感染、膣炎（膣の炎症）、異型クロイツフェルトヤコブ疾患（ｖＣＪＤ、ｎｖＣＪＤ）、ベネズエラウマ脳炎、ベネズエラ出血熱、ウイルス肺炎、内臓リーシュマニア症、いぼ、西ナイル熱、西部ウマ脳炎、白色砂毛（白白癬）、百���ぜき、酵母菌スポット、黄熱、腸炎シュードチューバローシス感染、エルシニア症、および接合菌症。
【０２７８】
癌疾患
好ましくは、本書で述べた疾患は、好ましくは以下のものを含む癌または腫瘍疾患から選択される。例えば、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、エイズ関連癌、エイズ関連リンパ腫、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨肉腫／悪性繊維性組織球腫、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、上衣腫、髄芽細胞、テント上原性神経外胚葉性腫瘍、視覚路および視床下部神経膠腫、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、バーキットリンパ腫、小児癌腫瘍、消化管カルチノイド腫瘍、不明な癌、中枢神経系リンパ腫、小児小脳星状細胞腫、小児大脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、子宮頚癌、小児癌、慢性リンパ腫白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、皮膚Ｔ−細胞リンパ腫、繊維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング腫瘍におけるユーイング肉腫、小児頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外の細胞腫瘍、肝臓外胆管癌、眼内黒色腫、網膜芽細胞腫、胆のう癌、胃（腹部）癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、頭蓋外、性腺外、または卵巣胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛腫瘍、脳幹の神経膠腫、小児大脳星状細胞腫、小児視覚路および視床下部神経膠腫、胃カルチノイド、有毛細胞白血病、頭部および頸部癌、心臓癌、肝細胞（肝臓）癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、小児視床下部および視覚路神経膠腫、眼内黒色腫、膵島細胞癌（膵内分泌部）、カポジ肉腫、腎癌（腎臓細胞癌）、喉頭癌、白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ腫白血病、慢性骨髄性白血病、有毛細胞白血病、口唇および口腔癌、脂肪肉腫、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、バーキットリンパ腫、皮膚Ｔ−細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、骨／骨肉腫の悪性繊維性組織球腫、小児髄芽腫、黒色腫、眼内（眼）黒色腫、メルケル細胞癌、成人悪性中皮腫、小児中皮腫、潜在性原発を伴う転移性扁平上皮頸部癌、口こう癌、小児多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫／プラズマ細胞腫瘍、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、慢性骨髄性白血病、成人急性骨髄白血病、小児急性骨髄白血病、多発性骨髄腫（骨髄の癌）、慢性骨髄増殖性疾患、鼻腔および副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽腫、口腔癌、中咽頭癌、骨肉腫／悪性繊維性組織球腫の骨、卵巣癌、上皮性卵巣癌（表面上皮−間質腫瘍）、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵癌、膵島細胞膵癌、副鼻腔および鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果腺星状細胞腫、松果腺胚腫、小児松果体芽腫およびテント上原性神経外胚葉性腫瘍、下垂体腺腫、プラズマ細胞腫瘍／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、中枢神経系原発リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌（腎臓癌）、腎うおよび尿管の癌、網膜芽細胞腫、小児横紋筋肉腫、唾液腺癌、ユーイング腫瘍の肉腫、カポジ肉腫、軟部組織肉腫、子宮肉腫、セザリー症候群、皮膚癌（非黒色腫性）、皮膚癌（黒色腫性）、メルケル細胞皮膚癌、小腸癌、扁平上皮癌、潜在性原発を伴う転移性扁平上皮頸部癌、小児テント上原性神経外胚葉性腫瘍、精巣癌、咽頭癌、小児胸腺腫、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺癌、小児甲状腺癌、腎うおよび尿管の移行細胞癌、妊娠性絨毛腫瘍、尿道癌、子宮内膜子宮癌、子宮肉腫、膣癌、小児視覚路および視床下部神経膠腫、外陰癌、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、および小児ウィルムス腫瘍（腎臓癌）。
【０２７９】
アレルギー
好ましくは、本書で述べた疾患は、好ましくは以下のものを含むアレルギーから選択される。例えば、花粉アレルギー（草花粉に対するアレルギー、樹木花粉（例えば花粉のハシバミ、カバノキ、ハンノキ、トネリコ）、花の花粉、ハーブ花粉（例えば花粉のヨモギ））、ほこりダニアレルギー、かびアレルギー（例えばアクレモニウム属、アスペルギルス、クラドスポリウム、フサリウム、ケカビ、アオカビ類、クモノスカビ属、スタキギトリス属、トリコデルマ属、またはアルテルナリア属に対するアレルギー）、ペットアレルギー（動物に対するアレルギー；例えばネコ、イヌ、ウマに対して）、食品アレルギー（例えば魚に対してのアレルギー（例えばバス、タラ、フラウンダー）、魚介類（例えばカニ、ロブスター、エビ）、卵、小麦、ナッツ（例えばピーナッツ、アーモンド、カシュー、クルミ）、大豆、牛乳、等）または咬虫アレルギー（昆虫毒に対するアレルギー、例えばジガバチ、ミツバチ、スズメバチ、蟻、蚊、またはダニ）。
【０２８０】
特に好ましい実施形態において、少なくとも１つの修飾および少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含んでいるＲＮＡは、前立腺癌の治療において用いられる。
【０２８１】
自己免疫疾患
別の特定の実施形態に従い、本書に定義されている疾患は、以下において定義される自己免疫疾患を含む。自己免疫疾患は、好ましくは以下のものから選択される。アディソン病（自己免疫性副腎疾患、アディソン病）、四形脱毛症、ビタミンＢ１２欠乏性貧血（悪性貧血）、自己免疫溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、冷型の自己免疫溶血性貧血（ＡＩＨＡ）（寒冷血球凝集素、寒冷自己免疫溶血性貧血（ＡＩＨＡ）（寒冷凝集素疾患）、（ＣＨＡＤ））、自己免疫溶血性貧血（ＡＩＨＡ）の温型（温式ＡＩＨＡ、温式自己免疫溶血性貧血（ＡＩＨＡ））、自己免疫溶血性ドランドランドシュタイナー貧血（発作性寒冷ヘモグロビン尿症）、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、アテローム性動脈硬化、自己免疫関節炎、側頭動脈炎、高安動脈炎（高安疾患、大動脈弓疾患）、側頭動脈／巨大細胞動脈炎、自己免疫慢性胃炎、自己免疫不妊、自己免疫内耳疾患（ＡＩＥＤ）、バセドウ疾患（バセドウ病）、ベヒテレフ疾患（ベヒテレフ病、強直性脊椎炎、強直性脊椎炎）、ベーチェット症候群（ベーチェット病）、自己免疫炎症性腸疾患を含んでいる腸疾患（潰瘍性結腸炎を含む（クローン病、クローン疾患）、心筋症、特に自己免疫心筋症、突発性拡張型心筋症（ＤＣＭ）、セリアックスプルー皮膚炎（グルテン媒体腸疾患）、慢性疲労免疫機能不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、慢性ポリ関節炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、ＣＲＥＳＴ症候群（皮膚結石を伴う症候群、レイノー現象、食道の運動障害、スクレロダクテリア（ｓｋｌｅｒｏｄａｋｔｙｌｉａ）および毛細血管拡張）、クローン病（クローン病、潰瘍性結腸炎）、ジューリング疱疹状皮膚炎、皮膚病学的自己免疫疾患、皮膚筋炎、糖尿病、真性糖尿病Ｉ型（Ｉ型糖尿病、インスリン依存型真性糖尿病）、ＩＩ型真性糖尿病（ＩＩ型糖尿病）、特質混合クリオグロブリン血症、特質混合クリオグロブリン血症、繊維筋痛症、繊維筋炎、グッドパスチャー症候群（抗ＧＢＭ媒体糸球体腎炎）、移植片対宿主病、ギランバレー症候群（ＧＢＭ、ポリｒａｄｉｋｕｌｏｎｅｕｒｉｔｉｓ）、血液性自己免疫疾患、橋本甲状腺炎、血友病、後天的な血友病、肝炎、自己免疫肝炎、特に自己免疫型の慢性肝炎、突発性肺繊維症（ＩＰＦ）、突発性肺繊維症、免疫−肺繊維症（ウェルホフ病；ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、不妊、自己免疫不妊、若年性リウマチ症関節炎（スティル病、スティル症候群）、ランバート・イートン症候群、扁平苔癬、硬化性苔癬、狼瘡エリテマトーデス、全身性狼瘡エリテマトーデス（ＳＬＥ）、狼瘡エリテマトーデス（円盤型）、ライム関節炎（ライム病、ボレリア関節炎）、メニエール疾患（メニエール病）；混合した結合組織疾患（ＭＣＴＤ）、多発性硬化症（ＭＳ、散在脳脊髄炎、シャルコー疾患）、重症筋無力症（筋無力症、ＭＧ）、筋炎、多発性筋炎、神経性自己免疫疾患、神経皮膚炎、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、傷形成類天疱瘡；結節性多発動脈炎（結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎（軟骨膜炎）、多腺性（自己免疫）症候群（ＰＧＡ症候群、シュミット症候群）、リウマチ性多発筋痛症、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変ＰＢＣ、主要自己免疫胆管炎）、進行性全身性硬化症（ＰＳＳ）、乾癬、尋常性乾癬、レイノー現象、ライター症候群（ライター病、尿道結合滑膜症候群））、リウマチ症関節炎（ＲＡ、慢性ポリ関節炎、関節のリウマチ性疾患、リウマチ性熱）、サルコイドーシス（ベック病、ベニエー・ベック・シャウマン疾患）、スティッフマン症候群、皮膚硬化症、強皮症、シューグレン症候群、交感性眼炎；一時的グルテン不耐性、移植器官拒否、ぶどう膜炎、自己免疫ぶどう膜炎、血管炎、白斑、（白膚、まだら皮膚）、およびウェグナー疾患（ウェグナー病、ウェグナー肉芽腫症）。
【０２８２】
この背景において、特に好ましいのは、以下のものから選択される遺伝病である：１ｐ３６欠失症候群；１８ｐ欠失症候群；２１−ヒドロキシラーゼ欠乏症；４５、Ｘ（ターナー症候群）；４７、ＸＸ、＋２１（ダウン症候群）；４７、ＸＸＸ（トリプルＸ症候群）；４７、ＸＸＹ（クラインフェルター症候群）；４７、ＸＹ、＋２１（ダウン症候群）；４７、ＸＹＹ症候群；５−ＡＬＡデヒドロターゼ−欠乏ポルフィリア（ＡＬＡデヒドロターゼ欠乏症）；５−アミノレブリンデヒドロターゼ欠乏症ポルフィリア（ＡＬＡデヒドロターゼ欠乏症）；５ｐ欠失症候群（ネコなき）５ｐ−症候群（ネコなき）；Ａ−Ｔ（血管拡張性失調症）；ＡＡＴ（アルファ−１抗トリプシン欠乏症）；精管の不在（先天性両側不在の精管）；管の不在（先天性両側不在の精管）；無セルロプラスミン血症；ＡＣＧ２（ＩＩ型軟骨性発生症）；ＡＣＨ（軟骨無形性症）；ＩＩ型軟骨性発生症；軟骨無形性症；酸ベータ−グルコシダーゼ欠乏症（Ｉ型ゴーシェ病）；尖頭合指症（アペール）（アペール症候群）；尖頭合指症、Ｖ型（パイフェル症候群）；尖頭症（アペール症候群）；急性大脳ゴーシュ病（ＩＩ型ゴーシュ病）；急性間欠性ポルフィリア；ＡＣＹ２欠乏症（カナバン疾患）；ＡＤ（アルツハイマー病）；アデレイド型頭蓋骨癒合症（ムエンケ（Ｍｕｅｎｋｅ）症候群）；大腸腺腫症（家族性大腸腺腫症）；結腸の大腸腺腫症（家族性大腸腺腫症）；ＡＤＰ（ＡＬＡデヒドロターゼ欠乏症）；アデニロコハク酸リアーゼ欠乏症；副腎腺疾患（２１−ヒドロキシラーゼ欠乏症）；副腎性器症候群（２１−ヒドロキシラーゼ欠乏症）；副腎白質ジストロフィー；ＡＩＰ（急性間欠性ポルフィリア）；ＡＩＳ（男性ホルモン非感受性症候群）；ＡＫＵ（アルカプトン尿症）；ＡＬＡデヒドロターゼポルフィリア（ＡＬＡデヒドロターゼ欠乏症）；ＡＬＡ−Ｄポルフィリア（ＡＬＡデヒドロターゼ欠乏症）；ＡＬＡデヒドロターゼ欠乏症；アルカプトン尿（アルカプトン尿症）；アレキサンダー病；アルカプトン尿症；アルカプトン尿症オクロノーシス（アルカプトン尿症）；アルファ−１抗トリプシン欠乏症；アルファ１プロテイナーゼ阻害剤（アルファ−１抗トリプシン欠乏症）；アルファ−１関連気腫（アルファ−１抗トリプシン欠乏症）；アルファガラクトシダーゼＡ欠乏症（ファブリー病）；ＡＬＳ（筋委縮性側索硬化症）；アルストレム症候群；ＡＬＸ（アレキサンダー病）；アルツハイマー疾患；遺伝性エナメル質形成不全症；アミノレブリン酸デヒドロターゼ欠乏症（ＡＬＡデヒドロターゼ欠乏症）；アミノアシラーゼ２欠乏症（カナバン疾患）；筋委縮性側索硬化症；アンダーソン−ファブリー病（ファブリー病）；男性ホルモン非感受性症候群；貧血；貧血、遺伝性鉄芽性（Ｘ染色体連鎖鉄芽性貧血）；貧血、伴性低色素鉄芽性（Ｘ染色体連鎖鉄芽性貧血）；貧血、脾臓、家族性（ゴーシェ病）；エンジェルマン症候群；びまん性体部被角血管腫（ファブリー病）；びまん性角化血管腫（ファブリー病）；網膜血管腫症（フォンヒッペルリンダウ病）；ＡＮＨ１（Ｘ染色体連鎖鉄芽性貧血）；ＡＰＣレジスタンス、ライデン型（Ｖ因子ライデン栓友病）；アペール症候群；ＡＲ欠乏症（男性ホルモン非感受性症候群）；ＡＲ−ＣＭＴ２ｅｅ（シャルコーマリートゥース疾患、ＩＩ型）；クモ指症（マルファン症候群）；ＡＲＮＳＨＬ（非症候性難聴＃常染色体劣性）；関節眼疾患、遺伝的進行性（スティックラー症候群＃ＣＯＬ２Ａ１）；先天性多発関節弛緩症（エーラース・ダンロス症候群＃関節弛緩型）；ＡＳ（エンジェルマン症候群）；Ａｓｐ欠乏症（カナバン疾患）；Ａｓｐａ欠乏症（カナバン疾患）；アルパルトシラーゼ欠乏症（カナバン疾患）；血管拡張性失調症；レット症候群（Ｒｅｔｔ症候群）；常染色体優勢若年性ＡＬＳ（筋委縮性側索硬化症、ＩＶ型）；常染色体優勢ｏｐｉｔｚＧ／ＢＢＢ症候群（２２ｑ１１．２欠失症候群）；常染色体劣性型の若年性ＡＬＳＩＩＩ型（筋委縮性側索硬化症＃ＩＩ型）；常染色体劣性非症候性難聴（非症候性難聴＃常染色体劣性）；常染色体劣性感音難聴および甲状腺腫（ペンドレッド症候群）；ＡｘＤ（アレキサンダー病）；アイエルザ症候群（原発性肺高血圧）；ＢバリアントのヘキサミニダーゼＧＭ２ガングリオシドシス（サンドオフ疾患）；ＢＡＮＦ（神経線維腫症２）；ベーレ・スティーブンソン脳回状頭皮症候群；良性発作性腹膜炎（地中海熱、家族性）；ベンジャミン症候群；ベータサラセミア；ＢＨ４欠乏（テトラヒドロビオプテリン欠乏症）；両側性聴神経線維腫症（神経線維腫症２）；ビオチニダーゼ欠乏症；膀胱癌；出血障害（Ｖ因子ライデン栓友病）；ブロッホ・ズルツベルガー症候群（色素失調症）；ブルーム症候群；骨疾患；骨髄疾患（Ｘ染色体連鎖鉄芽性貧血）；ブルタヴィーユ−ウルリッチ症候群（ターナー症候群）；ブルタヴィーユ疾患（結節硬化症）；ブルタヴィーユ母斑症（結節硬化症）；脳疾患（プリオン疾患）；乳癌；バート・ホッグ・デューベ症候群；骨形成不全疾患（骨形成不全）；幅広親指−母趾症候群（ルビンシュタイン・テイゼ症候群）；青銅糖尿病（ヘモクロマトーシス）；青銅硬変（ヘモクロマトーシス）；球脊髄性筋委縮症、Ｘ染色体連鎖（ケネディ疾患）；ビュルガー・グリュッツ症候群（リポタンパク質リパーゼ欠乏症、家族性）；ＣＡＤＡＳＩＬ；ＣＧＤ慢性肉芽腫；湾曲肢異形成症；カナバン疾患；癌；癌症候群の家族（遺伝性非ポリポーシス大腸癌）；乳房の癌（乳癌）；膀胱の癌（膀胱癌）；カルボオシキラーゼ欠乏、多発性、遅発性（ビオチニダーゼ欠乏症）；心筋症（ヌーナン症候群）；ネコ鳴き症候群（ネコなき）；ＣＡＶＤ（先天性両側不在の精管）；カイラー心臓面症候群（２２ｑ１１．２欠失症候群）；ＣＢＡＶＤ（先天性両側不在の精管）；セリアック病；ＣＥＰ（先天性赤血球生成性ポルフィリン症）；セラミドトリヘキソシダーゼ欠乏症（ファブリー病）；小脳網膜血管腫症、家族性（フォンヒッペルリンダウ病）；皮質下梗塞および白質脳症を伴う大脳動脈症（ＣＡＤＡＳＩＬ）；皮質下梗塞および白質脳症を伴う大脳常染色体優勢動脈症（ＣＡＤＡＳＩＬ）を伴う；大脳硬化症（結節硬化症）；大脳委縮性高アンモニア血症（レット症候群）；セレブロシードリピドーシス症候群（ゴーシェ病）；ＣＦ（嚢胞性線維症）；ＣＨ（先天性甲状腺機能低下症）；シャルコー病（筋委縮性側索硬化症）；シャルコー・マリー・トゥース病；軟骨形成異常症（軟骨無形性症）；軟骨発育不全症候群（軟骨無形性症）；感音難聴を伴う軟骨発育不全（軟骨形成不全による小人症）；軟骨形成不全（軟骨性発生症ＩＩ型）；コレオアテトーシス自傷高尿酸血症症候群（レッシュ・ナイハン病）；典型ガラクトース血症（ガラクトース血症）；典型的エーラース・ダンロス症候群（エーラース・ダンロス症候群＃典型型）；典型的フェニルケトン尿症（フェニルケトン尿症）；口唇口蓋裂（スティックラー症候群）；致死性低身長症を伴うクローバ型頭蓋（致死性骨異形成症＃ＩＩ型）；ＣＬＳ（コフィンローリー症候群）；ＣＭＴ（シャルコーマリートゥース疾患）；コケーン症候群；コフィンローリー症候群；コラーゲン異常症、ＩＩ型およびＸＩ型；結腸癌、家族性非ポリポーシス（遺伝性非ポリポーシス大腸癌）；結腸癌、家族性（家族性大腸腺腫症）；結腸直腸癌；完全ＨＰＲＴ欠乏症（レッシュ・ナイハン病）；完全ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ欠乏症（レッシュ・ナイハン病）；圧迫性ニューロパチー（圧迫性まひへの罹病性を伴う遺伝的ニューロパチー）；先天性副腎過形成（２１−ヒドロキシラーゼ欠乏症）；先天性両側不在の精管（精管の先天性不在）；先天性赤血球生成性ポルフィリン症先天性心臓疾患；先天性ミエリン形成不全（シャルコーマリートゥース疾患＃Ｉ型／シャルコーマリートゥース疾患＃ＩＶ型）；先天性甲状腺機能低下症；先天性メトヘモグロビン血症（メトヘモグロビン血症＃先天性メトヘモグロビン血症）；先天性骨硬化（軟骨無形性症）；先天性鉄芽性貧血（Ｘ染色体連鎖鉄芽性貧血）；結合組織疾患；円錐動脈異常顔症候群（２２ｑ１１．２欠失症候群）；クーリー貧血（ベータサラセミア）；銅蓄疾患（ウィルソン疾患）；銅輸送疾患（メンクス疾患）；コプロポルフィリア、遺伝的（遺伝的コプロポルフィリア）；コプロポリフィリアオキシダーゼ欠乏（遺伝的コプロポルフィリア）；カウデン症候群；ＣＰＯ欠乏症（遺伝的コプロポルフィリア）；ＣＰＲＯ欠乏症（遺伝的コプロポルフィリア）；ＣＰＸ欠乏症（遺伝的コプロポルフィリア）；頭蓋顔面関節異常（クルーゾン症候群）；頭蓋顔面骨形成栓（クルーゾン症候群）；クレチン病（先天性甲状腺機能低下症）；クロイツフェルトヤコブ疾患（プリオン疾患）；ネコなき（クローン病、繊維性狭窄疾患）；クルーゾン症候群；黒色表皮腫を伴うクルーゾン症候群（クルーゾン皮膚骨格症候群）；クルーゾン皮膚骨格症候群；ＣＳ（コケーン症候群）（カウデン症候群）；クルシュマンバッテンステイナー症候群（筋強直性ジストロフィー）；ベーレ・スティーブンソンの脳回状頭皮症候群（ベーレ・スティーブンソン脳回状頭皮症候群）；染色体突然変異疾患；Ｄ−グリセラート脱水素酵素欠乏（高シュウ酸尿症、原発性）；まだら骨幹端症候群（脊椎骨端骨幹端異形成、ストラドウィック型）；ＤＡＴ−アルツハイマー型認知症（アルツハイマー疾患）；遺伝的高カルシウム尿症（デント疾患）；ＤＢＭＤ（筋ジストロフィー、デマシエンヌおよびベッカー型）；甲状腺腫を伴う難聴（ペンドレッド症候群）；難聴−色素性網膜炎症候群（アッシャー症候群）；欠乏症患者、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ（フェニルケトン尿症）；進行性神経性疾患；ド・グルーシー症候群１（ド・グルーシー症候群）；デジュリーヌ・ソッタス症候群（シャルコーマリートゥース疾患）；デルタ−アミノレブリン酸デヒドロターゼ欠乏症ポルフィリア（ＡＬＡデヒドロターゼ欠乏症）；痴呆（ＣＡＤＡＳＩＬ）；デミエリノジェニック（ｄｅｍｙｅｌｉｎｏｇｅｎｉｃ）白質ジストロフィー（アレキサンダー病）；デルマトスパラティック（Ｄｅｒｍａｔｏｓｐａｒａｃｔｉｃ）型のエーラース・ダンロス症候群（エーラース・ダンロス症候群＃デルマトスパラキシス型）；デルマトスパラキシス（エーラース・ダンロス症候群＃デルマトスパラキシス型）；発達障害；ｄＨＭＮ（筋委縮性側索硬化症＃ＩＶ型）；ＤＨＭＮ−Ｖ（遠位型脊髄性筋委縮症、Ｖ型）；ＤＨＴＲ欠乏症（男性ホルモン非感受性症候群）；拡散グロボイド体硬化症（クラッベ疾患）；デイジョージ症候群；ジヒドロテストステロン受容体欠乏症（男性ホルモン非感受性症候群）；遠位型脊髄性筋委縮症、Ｖ型ＤＭ１（筋緊張性ジストロフィー＃Ｉ型）；ＤＭ２（筋緊張性ジストロフィー＃ＩＩ型）；ダウン症候群；ＤＳＭＡＶ（遠位型脊髄性筋委縮症、Ｖ型）；ＤＳＮ（シャルコーマリートゥース疾患＃ＩＶ型）；ＤＳＳ（シャルコーマリートゥース疾患、ＩＶ型）；デマシエンヌ／ベッカー筋ジストロフィー（筋ジストロフィー、デマシエンヌおよびベッカー型）；低身長症、軟骨形成不全（軟骨無形性症）；低身長症、致死性（致死性骨異形成症）；低身長症；低身長症−網膜萎縮−難聴症候群（コケーン症候群）；ミエリン形成不良白質ジストロフィー（アレキサンダー病）；筋緊張性ジストロフィー（筋強直性ジストロフィー）；ジストロフィー網膜色素−骨形成不全症候群（アッシャー症候群）；早発性家族性アルツハイマー疾患（ＥＯＦＡＤ）（アルツハイマー疾患）；ＥＤＳ（エーラース・ダンロス症候群）；エーラース・ダンロス症候群；エクマン−ロブスタイン疾患（骨形成不全）；捕捉ニューロパチー（圧迫性まひへの罹病性を伴う遺伝的ニューロパチー）；結節性硬化症（結節硬化症）；ＥＰＰ（赤血球生産プロトポルフィリン症）；赤芽球貧血（ベータサラセミア）；肝骨髄プロトポルフィリン症（赤血球生産プロトポルフィリン症）；赤血球５−アミノレブリン酸合成酵素欠乏症（Ｘ染色体連鎖鉄芽性貧血）；赤血球生産ポルフィリン症（先天性赤血球生成性ポルフィリン症）；赤血球生産プロトポルフィリン症；赤血球生産ウロポルフィリン症（先天性赤血球生成性ポルフィリ
ン症）；眼癌（網膜芽細胞腫ＦＡ−フリードライヒ失調症）；ファブリー病；顔面損傷および疾患；Ｖ因子ライデン栓友病；ＦＡＬＳ（筋委縮性側索硬化症）；家族性聴神経腫瘍（神経線維腫症ＩＩ型）；家族性大腸腺腫症；家族性アルツハイマー疾患（ＦＡＤ）（アルツハイマー疾患）；家族性筋委縮性側索硬化症（筋委縮性側索硬化症）；家族性自律神経障害；家族性脂肪誘発高トリグリセリド血症（リポタンパク質リパーゼ欠乏症、家族性）；家族性ヘモクロマトーシス（ヘモクロマトーシス）；家族性ＬＰＬ欠乏症（リポタンパク質リパーゼ欠乏症、家族性）；家族性非ポリポーシス結腸癌（遺伝性非ポリポーシス大腸癌）；家族性発作性多漿膜炎（地中海熱、家族性）；家族性ＰＣＴ（晩発性皮膚ポルフィリン症）；家族性感圧ニューロパチー（圧迫性まひへの罹病性を伴う遺伝的ニューロパチー）；家族性原発性肺高血圧（ＦＰＰＨ）（原発性肺高血圧）；家族性ターナー症候群（ヌーナン症候群）；家族性導管白質脳症（ＣＡＤＡＳＩＬ）；ＦＡＰ（家族性大腸腺腫症）；ＦＤ（家族性自律神経障害）；女性仮性−ターナー症候群（ヌーナン症候群）；フェロケタラーゼ欠乏症（赤血球生産プロトポルフィリン症）；フェロポーチン疾患（ヘモクロマトーシス＃ＩＶ型）；熱（地中海熱、家族性）；ＦＧ症候群；ＦＧＦＲ３−関連コロナ骨癒合（ムエンケ（Ｍｕｅｎｋｅ）症候群）；星状細胞の類繊維素変性（アレキサンダー病）；膵臓の繊維嚢胞性疾患（嚢胞性線維症）；ＦＭＦ（地中海熱、家族性）；フォーリング病（フェニルケトン尿症）；脆弱（Ｘ）症候群（脆弱Ｘ染色体症候群）；脆弱Ｘ染色体症候群；骨脆弱（骨形成不全）；ＦＲＡＸＡ症候群（脆弱Ｘ染色体症候群）；ＦＲＤＡ（フリードライヒ失調症）；フリードライヒ失調症（フリードライヒ失調症）；フリードライヒ失調症；ＦＸＳ（脆弱Ｘ染色体症候群）；Ｇ６ＰＤ欠乏症；ガラクトキナーゼ欠乏症疾患（ガラクトース血症）；ガラクトース−１−リン酸塩ウリジル−トランスフェラーゼ欠乏症疾患（ガラクトース血症）；ガラクトース血症；ガラクトシルセラミド欠乏症疾患（クラッベ疾患）；ガラクトシルセラミドリピドーシス（クラッベ疾患）；ガラクトシスセレブロシド欠乏症（クラッベ疾患）；ガラクトシルスフィンゴシンリピドーシス（クラッベ疾患）；ＧＡＬＣ欠乏症（クラッベ疾患）；ＧＡＬＴ欠乏症（ガラクトース血症）；ゴーシェ病；ゴーシェ−様疾患（仮性−ゴーシェ病）；ＧＢＡ欠乏症（Ｉ型ゴーシェ病）；ＧＤ（ゴーシュ病）；遺伝的脳疾患；遺伝的気腫（アルファ−１抗トリプシン欠乏症）；遺伝的ヘモクロマトーシス（ヘモクロマトーシス）；巨大細胞肝炎、新生児（新生児ヘモクロマトーシス）；ＧＬＡ欠乏症（ファブリー病）；膠芽腫、網膜（網膜芽細胞腫）；神経膠腫、網膜（網膜芽細胞腫）；グロボイド細胞白質ジストロフィー（ＧＣＬ、ＧＬＤ）（クラッベ疾患）；グロボイド細胞白質脳症（クラッベ疾患）；グルコセレブロシダーゼ欠乏症（ゴーシェ病）；グルコセレブロシドーシス（ゴーシェ病）；グルコシルセレブロシドリピドーシス（ゴーシェ病）；グルコシルセラミド欠乏症（ゴーシェ病）；グルコシルセラミドベータ−グルコシダーゼ欠乏症（ゴーシェ病）；グルコシルセラミドリピドーシス（ゴーシェ病）；グリセリン酸性尿（高シュウ酸尿症、原発性）；グリシン脳症（非ケトーシス型高グリシン血症）；グリコール酸性尿（高シュウ酸尿症、原発性）；ＧＭ２ガングリオシドシスＩ型（ティ・サックス疾患）；甲状腺腫−難聴症候群（ペンドレッド症候群）；グレーフェ−アッシャー症候群（アッシャー症候群）；グレンブラッド−ストランドベリー症候群（弾力繊維性仮性黄色腫）；ギュンターポルフィリン症（先天性赤血球生成性ポルフィリン症）；ガンサー疾患（先天性赤血球生成性ポルフィリン症）；ヘモクロマトーシス（ヘモクロマトーシス）；ハルグレン症候群（アッシャー症候群）；ハーレクイン魚鮮癬；ＨｂＳ疾患（鎌状赤血球貧血）；ＨＣＨ（軟骨低形成症）；ＨＣＰ（遺伝的コプロポルフィリン症）；頭部および脳奇形；聴覚障害および難聴；小児における聴覚問題；ＨＥＦ２Ａ（ヘモクロマトーシス＃ＩＩ型）；ＨＥＦ２Ｂ（ヘモクロマトーシス＃ＩＩ型）；ヘマトポルフィリン症（ポルフィリン症）；ヘム合成酵素欠乏症（赤血球生産プロトポルフィリン症）；（ヘモクロマトーシス）；ヘモクロマトーシス；ヘモグロビンＭ疾患（メトヘモグロビン血症＃ベータ−グロビン型）；ヘモグロビンＳ疾患（鎌状赤血球貧血）；血友病；ＨＥＰ（骨髄肝性ポルフィリン症）；肝臓ＡＧＴ欠乏症（高シュウ酸尿症、原発性）；骨髄肝性ポルフィリン症；肝レンズ核変性症候群（ウィルソン疾患）；遺伝性関節−眼疾患（スティックラー症候群）；遺伝性コプロポルフィリン症遺伝性異所性リピドーシス（ファブリー病）；遺伝性ヘモクロマトーシス（ＨＨＣ）（ヘモクロマトーシス）；遺伝性封入体ミオパチー（骨格筋変性）；遺伝性鉄−負荷性貧血（Ｘ染色体連鎖鉄芽性貧血）；遺伝性運動および感覚ニューロパチー（シャルコーマリートゥース疾患）；遺伝性運動神経細胞障害（脊柱筋委縮症）；遺伝性運動神経細胞障害Ｖ型（遠位型脊髄性筋委縮症、Ｖ型）；遺伝性多発性外骨腫；遺伝性非ポリポーシス大腸癌；遺伝性周期熱症候群（地中海熱、家族性）；遺伝性ポリポーシス大腸菌（家族性大腸腺腫症）；遺伝性肺気腫（アルファ−１抗トリプシン欠乏症）；活性化タンパク質Ｃに対する遺伝的耐性（Ｖ因子ライデン栓友病）；遺伝性感覚および自律ニューロパチーＩＩＩ型（家族性自律神経障害）；遺伝性痙性まひ（幼児−徴候上行性遺伝的痙性まひ）；遺伝性脊柱運動失調（フリードライヒ失調症）；遺伝性脊柱硬化症（フリードライヒ失調症）；へリック貧血（鎌状赤血球貧血）；ヘテロ接合性ＯＳＭＥＤ（ウィッセンバチャー・ツウェイミュラー（Ｗｅｉｓｓｅｎｂａｃｈｅｒ−Ｚｗｅｙｍｕｌｌｅｒ）症候群）；ヘテロ接合性軟骨形成不全による小人症（ウィッセンバチャー・ツウェイミュラー（Ｗｅｉｓｓｅｎｂａｃｈｅｒ−Ｚｗｅｙｍｕｌｌｅｒ）症候群）；ＨｅｘＡ欠乏症（ティ・サックス疾患）；ヘキサミニダーゼＡ欠乏症（ティ・サックス疾患）；ヘキサミニダーゼアルファ−サブユニット欠乏（バリアントＢ）（ティ・サックス疾患）；ＨＦＥ−関連ヘモクロマトーシス（ヘモクロマトーシス）；ＨＧＰＳ（早老症）；ヒッペル−リンダウ疾患（フォンヒッペルリンダウ病）；ＨＬＡＨ（ヘモクロマトーシス）；ＨＭＮＶ（遠位型脊髄性筋委縮症、Ｖ型）；ＨＭＳＮ（シャルコーマリートゥース疾患）；ＨＮＰＣＣ（遺伝性非ポリポーシス大腸癌）；ＨＮＰＰ（圧迫性まひへの罹病性を伴う遺伝的ニューロパチー）；ホモシスチン尿症；ホモゲンチジン酸オキシダーゼ欠乏（アルカプトン尿症）；ホモゲンチジン酸（アルカプトン尿症）；ホモ接合性晩発性皮膚ポルフィリン症（骨髄肝性ポルフィリン症）；ＨＰ１（高シュウ酸尿症、原発性）；ＨＰ２（高シュウ酸尿症、原発性）；ＨＰＡ（高フェニルアラニン血症）；ＨＰＲＴ−ヒポキサンチン−グアニンホスホルボシルトランスフェラーゼ欠乏症（レッシュ・ナイハン病）；ＨＳＡＮＩＩＩ型（家族性自律神経障害）；ＨＳＡＮ３（家族性自律神経障害）；ＨＳＮ−ＩＩＩ（家族性自律神経障害）；ヒトデルマトスパラキシス（エーラース・ダンロス症候群＃デルマトスパラキシス型）；ハンチントン病；ハッチンソン・ギルフォード・早老症候群（早老症）；高アンドロゲン症、非典型型、２１−ヒドロキシラーゼ欠乏症（２１−ヒドロキシラーゼ欠乏症）による；高カイロミクロン血症、家族性（リポタンパク質リパーゼ欠乏症、家族性）；ケトアシドーシスおよび白血球減少症を伴う高グリシン血症（プロピオン酸血症）；高リポタンパク白血症Ｉ型（リポタンパク質リパーゼ欠乏症、家族性）；高シュウ酸尿症、原発性；高フェニルアラニン血症（高フェニルアラニン血症）；高フェニルアラニン血症；軟骨異形性（軟骨低形成症）；軟骨低形成症；軟骨低形成症；低色素性貧血（Ｘ染色体連鎖鉄芽性貧血）；低銅血症、先天性メンクス症候群）；ヒポキサンチンホスホルボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）欠乏症（レッシュ・ナイハン病）；ＩＡＨＳＰ（幼児−徴候上行性遺伝的痙性まひ）；突発性ヘモクロマトーシス（ヘモクロマトーシス、ＩＩＩ型）；突発性新生児ヘモクロマトーシス（ヘモクロマトーシス、新生児）；突発性肺高血圧（原発性肺高血圧）；免疫系障害（Ｘ連鎖性複合免疫不全病）；色素失調症；小児大脳ゴーシュ病（ＩＩ型ゴーシュ病）；小児ゴーシェ病（ＩＩ型ゴーシュ病）；幼児−徴候上行性遺伝的痙性まひ；不妊；遺伝性気腫（アルファ−１抗トリプシン欠乏症）；遺伝性ヒト伝達性海綿状脳症（プリオン疾患）；圧迫性まひへの遺伝傾向（圧迫性まひへの罹病性を伴う遺伝的ニューロパチー）；インスレイ−アスレイ（Ｉｎｓｌｅｙ−Ａｓｔｌｅｙ）症候群（軟骨形成不全による小人症）；間欠性急性ポルフィリン症症候群（急性間欠性ポルフィリン症）；腸ポリープ症−皮膚色素沈着症候群（ポイツ−イエガース症候群）；ＩＰ（色素失調症）；鉄貯蔵病（ヘモクロマトーシス）；イソディセントリック（Ｉｓｏｄｉｃｅｎｔｒｉｃ）１５（ｉｄｉｃ１５）；孤立難聴（非症候性難聴）；ジャクソンワイス症候群；ＪＨ（ヘモクロマトーシス＃ＩＩ型）；シュベール症候群；ＪＰＬＳ（若年性原発性側索硬化症）；若年性筋委縮性側索硬化症（筋委縮性側索硬化症＃ＩＩ型）；若年性痛風、舞踏病アテトーゼ、精神遅滞症候群（レッシュ・ナイハン病）；若年性高尿酸血症症候群（レッシュ・ナイハン病）；ＪＷＳ（ジャクソンワイス症候群）；ＫＤ（Ｘ連鎖性球脊髄性筋委縮症）；ケネディ疾患（Ｘ連鎖性球脊髄性筋委縮症）；ケネディ球脊髄性筋委縮症（Ｘ連鎖性球脊髄性筋委縮症）；ケラシン組織球増殖症（ゴーシェ病）；ケラシンリポイド症（ゴーシェ病）；ケラシン蓄積症（ゴーシェ病）；ケトン性グリシン血症（プロピオン酸血症）；ケトン性高グリシン血症（プロピオン酸血症）；腎疾患（高シュウ酸尿症、原発性）；クラインフェルター症候群；クラインフェルター症候群；クニースト骨異形成症；クラッベ疾患；まだら痴呆（ＣＡＤＡＳＩＬ）；ランガーサルディーノ軟骨性発生症（軟骨性発生症ＩＩ型）；ランガーサルディーノ骨異形成症（軟骨性発生症ＩＩ型）；遅発性アルツハイマー疾患（アルツハイマー疾患＃ＩＩ型）；遅発性家族性アルツハイマー疾患（ＡＤ２）（アルツハイマー疾患＃ＩＩ型）；遅発性クラッベ疾患（ＬＯＫＤ）（クラッベ疾患）；学習疾患（学習障害）；多発性黒子症候群、口周囲（ポイツ−イエガース症候群）；レッシュ・ナイハン病；白質ジストロフィー；ローゼンタール繊維を伴う白質ジストロフィー（アレキサンダー病）；白質ジストロフィー、海綿状（カナバン疾患）；ＬＦＳ（リー・フラウメニ症候群）；リー・フラウメニ症候群；リパーゼＤ欠乏症（リポタンパク質リパーゼ欠乏症、家族性）；ＬＩＰＤ欠乏症（リポタンパク質リパーゼ欠乏症、家族性）；リピドーシス、セレブロシド（ゴーシェ病）；リピドーシス、ガングリオシド、幼児（ティ・サックス疾患）；リポイド組織球増殖症（ケラシン型）（ゴーシェ病）；リポタンパク質リパーゼ欠乏症、家族性；肝臓疾患（ガラクトース血症）；ルー・ゲーリッグ疾患（筋委縮性側索硬化症）；ルイ・バー症候群（血管拡張性失調症）；リンチ症候群（遺伝性非ポリポーシス大腸癌）；リジル−ヒドロキシラーゼ欠乏症（エーラース・ダンロス症候群＃脊柱後側弯症型）；マシャド・ジョセフ病（脊髄小脳失調＃ＩＩＩ型）；男性乳癌（乳癌）；男性性器疾患；男性ターナー症候群（ヌーナン症候群）；乳房の悪性腫瘍（乳癌）；乳房の悪性腫瘍（乳癌）；膀胱の悪性腫瘍（膀胱癌）；乳房の癌（乳癌）；マルファン症候群１５；脆弱Ｘ症候群（脆弱Ｘ染色体症候群）；マーチン・ベル症候群（脆弱Ｘ染色体症候群）；マキューン−オルブライト症候群；マクラウド症候群；ＭＥＤＮＩＫ；地中海貧血（ベータサラセミア）；地中海熱、家族性；メガ−骨端低身長症（軟骨形成不全による小人症）；Ｍｅｎｋｅａ症候群（メンケア症候群）；メンクス症候群；骨軟骨異常を伴う精神遅滞（コフィンローリー症候群）；代謝疾患；メタトロピック低
身長症ＩＩ型（クナイエスト骨異形成症）；メタトロピック骨異形成症ＩＩ型（クナイエスト骨異形成症）；メトヘモグロビン血症＃ベータ−グロビン型；メチルマロン酸血症；ＭＦＳ（マルファン症候群）；ＭＨＡＭ（カウデン症候群）；ＭＫ（メンクス症候群）；マイクロ症候群；小頭症；ＭＭＡ（メチルマロン酸血症）；ＭＮＫ（メンクス症候群）；モノソミー１ｐ３６症候群（１ｐ３６欠失症候群）；モノソミーＸ（ターナー症候群）；運動ニューロン疾患、筋委縮性側索硬化症（筋委縮性側索硬化症）；運動障害；モワット−ウィルソン症候群；ムコ多糖症（ＭＰＳＩ）；ムコビシドーシス（嚢胞性線維症）；ムエンケ（Ｍｕｅｎｋｅ）症候群；多発脳梗塞性認知症（ＣＡＤＡＳＩＬ）；複合カルボキシラーゼ欠乏症、遅発性（ビオチニダーゼ欠乏症）；多発性過誤腫症候群（カウデン症候群）；多発性神経線維腫症（神経線維腫症）；筋ジストロフィー；筋ジストロフィー、デマシエンヌおよびベッカー型；萎縮性ミオトニー（筋強直性ジストロフィー）；筋緊張性ジストロフィー（筋強直性ジストロフィー）；筋強直性ジストロフィー；粘液水腫、先天性（先天性甲状腺機能低下症）；ナンス−インスレイ（Ｎａｎｃｅ−Ｉｎｓｌｅｙ）症候群（軟骨形成不全による小人症）；ナンス−スウィーニィー（Ｎａｎｃｅ−Ｓｗｅｅｎｅｙ）軟骨異形成症（軟骨形成不全による小人症）；ＮＢＩＡ１（パントテン酸キナーゼ−関連神経変性症）；ニール・デリングウォール症候群（コケーン症候群）；神経芽腫、網膜（網膜芽細胞腫）；脳鉄蓄積Ｉ型を伴う神経変性（パントテン酸キナーゼ−関連神経変性症）；神経線維腫Ｉ型；神経線維腫ＩＩ型；神経性疾患；神経筋疾患；神経細胞障害、遠位型遺伝的運動、Ｖ型（遠位型型脊柱筋委縮症＃Ｖ型）；神経細胞障害遠位型遺伝的運動、ピラミッド型の特徴を伴う（筋委縮性側索硬化症＃ＩＶ型）；ＮＦ（神経線維腫症）；ニーマンピック（ニーマンピック病）；ノアック（Ｎｏａｃｋ）症候群（パイフェル症候群）；非ケトーシス型高グリシン血症（グリシン脳症）；非−神経障害性ゴーシェ病（Ｉ型ゴーシェ病）；非−フェニルケン尿症高フェニルアラニン血症（テトラヒドロビオプテリン欠乏症）；非症候性難聴ヌーナン症候群；ノールボッテンゴーシェ病（ゴーシェ病ＩＩＩ型）；オクロノーシス（アルカプトン尿症）；オークロノティック（Ｏｃｈｒｏｎｏｔｉｃ）関節炎（アルカプトン尿症）；ＯＩ（骨形成不全）；ＯＳＭＥＤ（軟骨形成不全による小人症）；骨形成不全；骨脆弱症（骨形成不全）；先天性骨硬化症（軟骨無形性症）；耳−脊椎−メガ骨端異形成症（軟骨形成不全による小人症）；軟骨形成不全による小人症；シュウ酸症（高シュウ酸尿症、原発性）；シュウ酸塩尿、原発性（高シュウ酸尿症、原発性）；パントテン酸キナーゼ−関連神経変性症；パトー症候群（トリソミー１３）；ＰＢＧＤ欠乏症（急性間欠性ポルフィリン症）；ＰＣＣ欠乏症（プロピオン酸血症）；ＰＣＴ（晩発性皮膚ポルフィリン症）；ＰＤＭ（筋緊張性ジストロフィー＃ＩＩ型）；ペンドレッド症候群；周期性疾患（地中海熱、家族性）；周期性腹膜炎（地中海熱、家族性）；口周囲多発性黒子症症候群（ポイツ−イエガース症候群）；末梢神経疾患（家族性自律神経障害）；末梢神経線維腫症（神経線維腫症１）；腓骨筋委縮症（シャルコーマリートゥース疾患）；ペルオキシソームアラニン：グリオキシールアミノトランスフェラーゼ欠乏症（高シュウ酸尿症、原発性）；ポイツ−イエガース症候群；パイフェル症候群；フェニルアラニンヒドロキシラーゼ欠乏症疾患（フェニルケトン尿症）；フェニルケトン尿症；褐色細胞腫（フォンヒッペルリンダウ病）；胎児軟骨異形成症を伴うピエールロバン症候群（ウィッセンバチャー・ツウェイミュラー（Ｗｅｉｓｓｅｎｂａｃｈｅｒ−Ｚｗｅｙｍｕｌｌｅｒ）症候群）；色素性硬変（ヘモクロマトーシス）；ＰＪＳ（ポイツ−イエガース症候群）；ＰＫＡＮ（パントテン酸キナーゼ−関連神経変性症）；ＰＫＵ（フェニルケトン尿症）；プルモボポルフィリン（Ｐｌｕｍｂｏｐｏｒｐｈｙｒｉａ）症（ＡＬＡ欠乏症ポルフィリン症）；ＰＭＡ（シャルコーマリートゥース疾患）；多骨繊維性骨異形成症（マキューン−オルブライト症候群）；ポリポーシスｃｏｌｉ（家族性大腸腺腫症）；ポリポーシス、腸過誤腫性（ポイツ−イエガース症候群）；ポリポーシス、腸、ＩＩ（ポイツ−イエガース症候群）；ポリプスアンドスポット（ｐｏｌｙｐｓ−ａｎｄ−ｓｐｏｔｓ）症候群（ポイツ−イエガース症候群）；ポルホビリノーゲンシンターゼ欠乏症（ＡＬＡ欠乏症ポルフィリン症）；ポルフィリン症；ポルフィリン疾患（ポルフィリン症）；ＰＰＨ（原発性肺高血圧）；ＰＰＯＸ欠乏症（多様性ポルフィリン症）；プラダー・ランバート・ウィリ（Ｐｒａｄｅｒ−Ｌａｂｈａｒｔ−Ｗｉｌｌｉ）症候群（プラダー・ウィリ症候群）；プラダー・ウィリ症候群；初老および老年痴呆（アルツハイマー疾患）；原発性ヘモクロマトーシス（ヘモクロマトーシス）；原発性高尿酸血症症候群（レッシュ・ナイハン病）；原発性肺高血圧；原発性老年変性痴呆（アルツハイマー疾患）；プリオン疾患；プロコラーゲン型ＥＤＳＶＩＩ、変異体（エーラース・ダンロス症候群＃関節弛緩型）；早老症（ハッチンソン・グリフォード早老症症候群）；早老症様症候群（コケーン症候群）；早老性低身長症（コケーン症候群）；進行性舞踏病、慢性遺伝的（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ）（ハンチントン病）；進行性筋委縮症（脊柱筋委縮症）；通常強膜を伴う進行性変形骨形成不全（骨形成不全症＃ＩＩＩ型）；ＰＲＯＭＭ（筋緊張性ジストロフィー＃ＩＩ型）；プロピオンアカデミア（ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ  ａｃａｄｅｍｉａ）；プロピオニル−ＣｏＡカルボキシラーゼ欠乏症（プロピオン酸血症）；タンパク質Ｃ欠乏症；タンパク質Ｓ欠乏症；プロトポルフィリン症（赤血球生産プロトポルフィリン症）；プロトポリフィリアオキシダーゼ欠乏（多様性ポルフィリン症）；近位型筋強直性ジストロフィー（筋緊張性ジストロフィー＃ＩＩ型）；近位型筋緊張性ミオパチー（筋緊張性ジストロフィー＃ＩＩ型）；仮性−ゴーシェ病；仮性−ウルリッチ−ターナー症候群（ヌーナン症候群）；弾力繊維性仮性黄色腫；サイコシンリピドーシス（クラッベ疾患）；肺動脈性高血圧（原発性肺高血圧）；肺高血圧（原発性肺高血圧）；ＰＷＳ（プラダー・ウィリ症候群）；ＰＸＥ−弾力繊維性仮性黄色腫（弾力繊維性仮性黄色腫）；Ｒｂ（網膜芽細胞腫）；レックリングハウ���ン疾患、神経性（神経線維腫症１）；再発多漿膜炎（地中海熱、家族性）；網膜疾患；網膜炎色素−難聴症候群（アッシャー症候群）；網膜芽細胞腫；レット症候群；ＲＦＡＬＳＩＩＩ型（筋委縮性側索硬化症＃ＩＩ型）；リッカー症候群（筋緊張性ジストロフィー＃ＩＩ型）；ライリー・デイ症候群（家族性自律神経障害）；ルシ−・レビー症候群（シャルコーマリートゥース疾患）；ＲＳＴＳ（ルビンシュタイン・テイゼ症候群）；ＲＴＳ（レット症候群）（ルビンシュタイン・テイゼ症候群）；ＲＴＴ（レット症候群）；ルビンシュタイン・テイゼ症候群；サック・バラバス症候群（エーラース・ダンロス症候群、導管型）；ＳＡＤＤＡＮ；リーアンドフラウメニ（Ｌｉ  ａｎｄ  Ｆｒａｕｍｅｎｉ）の肉腫ファミリー症候群（リー・フラウメニ症候群）；肉腫乳房、白血病、および副腎（ＳＢＬＡ）症候群（リー・フラウメニ症候群）；ＳＢＬＡ症候群（リー・フラウメニ症候群）；ＳＢＭＡ（Ｘ連鎖性球脊髄性筋委縮症）；ＳＣＤ（鎌状赤血球貧血）；シュワン腫、聴覚、両側（神経線維腫症２）；ＳＣＩＤＸ１（Ｘ連鎖性複合免疫不全病）；結節性硬化症（結節硬化症）；ＳＤＡＴ（アルツハイマー疾患）；先天性ＳＥＤ（先天性脊椎骨端骨異形成症）；ＳＥＤストラドウィック（脊椎骨端骨幹端異形成、ストラドウィック型）；ＳＥＤｃ（先天性脊椎骨端骨異形成症）；ＳＥＭＤ、ストラドウィック型（脊椎骨端骨幹端異形成、ストラドウィック型）；老年痴呆（アルツハイマー疾患＃ＩＩ型）；発達遅延および黒色表皮腫（ＳＡＤＤＡＮ）を伴う重度軟骨無形性症；シュプリンツェン症候群（２２ｑ１１．２欠失症候群）；鎌状赤血球貧血；骨格−皮膚−脳症候群（ＳＡＤＤＡＮ）；皮膚色素沈着疾患；ＳＭＡ（脊柱筋委縮症）；ＳＭＥＤ、ストラドウィック型（脊椎骨端骨幹端異形成、ストラドウィック型）；ＳＭＥＤ、Ｉ型（脊椎骨端骨幹端異形成、ストラドウィック型）；スミス・レムリ・オピッツ症候群；南アフリカ遺伝的ポルフィリン症（多様性ポルフィリン症）；けい性まひ、幼児徴候上行性（幼児−徴候上行性遺伝的けい性まひ）；スピーチおよび伝達疾患；スフィンゴリピドーシス、ティ・サックス（ティ・サックス疾患）；球脊椎性筋委縮症；脊柱筋委縮症；脊柱筋委縮症、遠位型Ｖ型（遠位型型脊柱筋委縮症＃Ｖ型）；脊柱筋委縮症、上肢優勢を伴う遠位型（遠位型型脊柱筋委縮症＃Ｖ型）；脊髄小脳失調症；脊椎骨端骨幹端異形成、ストラドウィック型；脊椎骨端骨異形成症先天性；脊椎骨端骨異形成症（コラーゲン異常症、ＩＩ型およびＸＩ）；先天性脊椎メタ骨端形成異常、ストラドウィック型（脊椎骨端骨幹端異形成、ストラドウィック型）；脊椎骨幹端骨異形成症（ＳＭＤ）（脊椎骨端骨幹端異形成、ストラドウィック型）；脊椎骨幹端骨異形成症、ストラドウィック型（脊椎骨端骨幹端異形成、ストラドウィック型）；中枢神経の海綿状変性（カナバン疾患）；脳の海綿状変性（カナバン疾患）；初期における白質の海綿状変性（カナバン疾患）；散在性原発性肺高血圧（原発性肺高血圧）；ＳＳＢ症候群（ＳＡＤＤＡＮ）；剛毛症候群（メンクス症候群）；ステイナート（Ｓｔｅｉｎｅｒｔ）疾患（筋強直性ジストロフィー）；ステイナート（Ｓｔｅｉｎｅｒｔ）筋強直性ジストロフィー症候群（筋強直性ジストロフィー）；スティックラー症候群；卒中（ＣＡＤＡＳＩＬ）；ストラドウィック症候群（脊椎骨端骨幹端異形成、ストラドウィック型）；亜急性神経障害性ゴーシェ病（ゴーシェ病ＩＩＩ型）；スウェーデン遺伝的ポルフィリン症（急性間欠性ポルフィリン症）；スウェーデンポルフィリン症（急性間欠性ポルフィリン症）；スイスチーズ軟骨骨異形成症（クナイエスト骨異形成症）；ティ・サックス疾患；ＴＤ−致死性低身長症（致死性骨異形成症）；ストレート大腿およびクローバ型頭蓋を伴うＴＤ（致死性骨異形成症＃ＩＩ型）；毛細血管拡張症、小脳−眼皮膚（血管拡張性失調症）；精巣性女性化症候群症候群（男性ホルモン非感受性症候群）；テトラヒドロビオプテリン欠乏症；ＴＦＭ−精巣性女性化症候群症候群（男性ホルモン非感受性症候群）；中間型サラセミア（ベータサラセミア）；重症型サラセミア（ベータサラセミア）；致死性骨異形成症；真性糖尿病および感音難聴を伴うチアミン反応性巨赤芽球性貧血；活性化タンパク質Ｃのための補因子の欠乏による血栓形成傾向、ライデン型（Ｖ因子ライデン栓友病）；甲状腺疾患；ソーセージ様ニューロパチー（圧迫性まひへの罹病性を伴う遺伝的ニューロパチー）；総ＨＰＲＴ欠乏症（レッシュ・ナイハン病）；総ヒポキサンチン−グアニンホスホルボシルトランスフェラーゼ欠乏症（レッシュ・ナイハン病）；トゥレット症候群；伝達性認知症（プリオン疾患）；伝達性海綿状脳症（プリオン疾患）；トリーチャー・コリンズ症候群；脆弱性骨三徴候（骨形成不全＃Ｉ型）；トリプルＸ症候群；トリプロ（Ｔｒｉｐｌｏ）Ｘ症候群（トリプルＸ症候群）；トリソミー２１（ダウン症候群）；トリソミーＸ（トリプルＸ症候群）；トロアジュハノットシャウファード（Ｔｒｏｉｓｉｅｒ−Ｈａｎｏｔ−Ｃｈａｕｆｆａｒｄ）症候群（ヘモクロマトーシス）；ＴＳ（ターナー症候群）；ＴＳＤ（ティ・サックス疾患）；ＴＳＥｓ（プリオン疾患）；結節性硬化症（結節硬化症）；結節硬化症；ターナー症候群；Ｘ染色体を有する女性におけるターナー症候群（ヌーナン症候群）；ターナー表現型、正常核型（ヌーナン症候群）；ターナー（ターナー’ｓ）症候群（ターナー症候群）；ターナー様症候群（ヌーナン症候群）；ＩＩ型ゴーシェ病（ＩＩ型ゴーシュ病）；ＩＩＩ型ゴーシェ病（ゴーシェ病ＩＩＩ型）；ＵＤＰ−ガラクトース−４−エピメラーゼ欠乏症疾患（ガラク
トース血症）；ＵＤＰグルコース４−エピメラーゼ欠乏症疾患（ガラクトース血症）；ＵＤＰグルコースヘキソース−１−リン酸塩ウリジルｙｌトランスフェラーゼ欠乏症（ガラクトース血症）；ウルリッチ−ヌーナン症候群（ヌーナン症候群）；ウルリッチ−ターナー症候群（ターナー症候群）；未分化難聴（非症候性難聴）；ＵＰＳ欠乏症（急性間欠性ポルフィリン症）；膀胱癌（膀胱癌）；ＵＲＯＤ欠乏症（晩発性皮膚ポルフィリン症）；ウロポルフィリノーゲンデカルボシキシラーゼ欠乏症（晩発性皮膚ポルフィリン症）；ウロポルフィリノーゲンシンターゼ欠乏症（急性間欠性ポルフィリン症）；ＵＲＯＳ欠乏症（先天性赤血球生成性ポルフィリン症）；アッシャー症候群；ＵＴＰヘキソース−１−リン酸塩ウリジルｙｌトランスフェラーゼ欠乏症（ガラクトース血症）；バンボガート・バントランド（Ｖａｎ  Ｂｏｇａｅｒｔ−Ｂｅｒｔｒａｎｄ）症候群（カナバン疾患）；バンデルヘーベ症候群（骨形成不全＃Ｉ型）；多様性ポルフィリン症；口蓋心臓顔面症候群（２２ｑ１１．２欠失症候群）；ＶＨＬ症候群（フォンヒッペルリンダウ病）；視覚障害および盲目（アルストレム症候群）；バンボガートバートランド（Ｖｏｎ  Ｂｏｇａｅｒｔ−Ｂｅｒｔｒａｎｄ）疾患（カナバン疾患）；フォンヒッペルリンダウ病；フォン・レックリングハウゼン−アップルバウム（Ｖｏｎ  Ｒｅｃｋｌｅｎｈａｕｓｅｎ−Ａｐｐｌｅｂａｕｍ）疾患（ヘモクロマトーシス）；フォン・レックリングハウゼン疾患（神経線維腫症１）；ＶＰ（多様性ポルフィリン症）；フロリク病（骨形成不全）；ワーデンブルグ症候群；ワーバーグ・シジョ・フレデリウス（Ｗａｒｂｕｒｇ  Ｓｊｏ  Ｆｌｅｄｅｌｉｕｓ）症候群（マイクロ（Ｍｉｃｒｏ）症候群）；ＷＤ（ウィルソン疾患）；ウィッセンバチャー・ツウェイミュラー（Ｗｅｉｓｓｅｎｂａｃｈｅｒ−Ｚｗｅｙｍｕｌｌｅｒ）症候群；ウィルソン疾患；ウィルソン（Ｗｉｌｓｏｎ’ｓ）疾患（ウィルソン疾患）；ウォルフ・ヒルシュホーン症候群；ウォルフ周期性疾患（地中海熱、家族性）；ＷＺＳ（ウィッセンバチャー・ツウェイミュラー（Ｗｅｉｓｓｅｎｂａｃｈｅｒ−Ｚｗｅｙｍｕｌｌｅｒ）症候群）；色素性乾皮症；Ｘ染色体連鎖精神遅滞および巨精巣症（脆弱Ｘ染色体症候群）；Ｘ染色体連鎖原発性高尿酸血症（レッシュ・ナイハン病）；Ｘ染色体連鎖重度複合型Ｘ染色体連鎖鉄芽性貧血Ｘ連鎖性球脊髄性筋委縮症（ケネディ疾患）；Ｘ染色体連鎖尿の酸性尿酵素欠陥（レッシュ・ナイハン病）；Ｘ−ＳＣＩＤ（Ｘ連鎖性複合免疫不全病）；ＸＬＳＡ（Ｘ染色体連鎖鉄芽性貧血）；ＸＳＣＩＤ（Ｘ連鎖性複合免疫不全病）；ＸＸＸ症候群（トリプルＸ症候群）；ＸＸＸＸ症候群（４８、ＸＸＸＸ）；ＸＸＸＸＸ症候群（４９、ＸＸＸＸＸ）；ＸＸＹ症候群（クラインフェルター症候群）；ＸＸＹｔｒｉｓｏｍｙ（クラインフェルター症候群）；ＸＹＹｋａｒｙｏ型（４７、ＸＹＹ症候群）；ＸＹＹ症候群（４７、ＸＹＹ症候群）；およびＹＹ症候群（４７、ＸＹＹ症候群）。
【０２８３】
さらなる好ましい態様において、本書に定義されている修飾ＲＮＡまたは本書に定義されている複数の修飾ＲＮＡを含んでいる組成物は、医薬的組成物の調製のために使用され得、特に本書に定義されている目的のために、好ましくは本書に定義されている疾患の治療において遺伝子療法または遺伝的ワクチン接種において使用され得る。
【０２８４】
医薬的組成物はさらに、特に、好ましくは本書に定義されている疾患または障害の治療において、遺伝子療法または遺伝的ワクチン接種において使用され得る。
【０２８５】
さらなる態様に従い、本発明はまた、キット、特にパーツのキットを提供する。特にパーツのキットである、このようなキットは概して、成分のみを含んでおり、または本書に定義されているさらなる成分と共に、本書に定義されている少なくとも１つの修飾ＲＮＡ、修飾ＲＮＡを含んでいる医薬的組成物またはワクチンを含んでいる。本書に定義されている少なくとも１つの修飾ＲＮＡは、本書に定義されているさらなる成分との任意の組み合わせであり、ここで少なくとも１つの本発明の修飾ＲＮＡは、１つまたはそれ以上の他の成分を含んでいるキットの、少なくとも１つの他のパーツとは別に提供される（キットの最初のパート）。医薬的組成物は、キットの１つまたは異なるパーツにおいて例えば発生し得る。実施例として、例えばキットの少なくとも１つのパーツは、本書に定義されている少なくとも１つの修飾ＲＮＡ、およびキットの少なくとも１つのさらなるパーツ、本書に定義されている少なくとも１つの他の成分を含むことが可能であり、例えばキットの少なくとも１つの他のパーツは、少なくとも１つの医薬的組成物またはそのパーツを含むことが可能であり、例えばキットの少なくとも１つのパーツは、本書に定義されている修飾ＲＮＡ、キットの少なくとも１つのさらなるパーツ、本書に定義されている少なくとも１つの他の成分、キットの少なくとも１つのさらなるパーツ、医薬的組成物の少なくとも１つの成分、または全体としての医薬的組成物、および例えば少なくとも１つの医薬的キャリアまたはビヒクル、等であるキットの少なくとも１つのさらなるパーツを含むことが可能である。キットまたはパーツのキットが複数の修飾ＲＮＡ分子を含んでいる場合、キットの１つの成分は、キットにおいて含まれている１つのみ、いくつか、または全ての修飾ＲＮＡ分子を含み得る。代替的な実施形態において、全ての／各修飾ＲＮＡは、キットのパーツを各成分が形成するように、キットの異なる／分離した成分において含まれ得る。また、１つ以上の修飾ＲＮＡは、キットのパーツとして最初の成分において含まれることが可能であり、ここで１つまたはそれ以上の他の（第２、第３等）成分（キットの１つまたはそれ以上の他のパーツを提供している）は、最初の成分と同一または部分的に同一または異なり得る、１つまたはそれ以上の修飾ＲＮＡどちらかを含み得る。キットまたはパーツのキットは、修飾ＲＮＡの投与および適用量における技術使用説明書、例えばキットがパーツのキットとして調製された場合、医薬的組成物または上記医薬的組成物の任意の成分またはパートをさらに含み得る。
【０２８６】
好ましくは本発明のキットは、修飾ＲＮＡを含んでおり、好ましくは凍結乾燥形態および修飾ＲＮＡの再構成のために好適なベクターとして含んでいる。好ましい実施形態において、修飾ＲＮＡは容器において提供され、上記修飾ＲＮＡは、好ましくは容器内において再溶解される。好ましくは、上記容器は、例えば無針注射装置の使い捨て型注射器を充填するために、無針注射装置に接続され得る。
【０２８７】
さらに、本発明は、ジェット注射によって本書に定義されている修飾ＲＮＡを投与することを含んでいる、（哺乳類の）真皮または筋肉においてＲＮＡにコードされたペプチドまたはタンパク質の（局在化）発現を亢進するための方法に関する。
【０２８８】
さらに、本発明は、特にヒト患者である、本書に定義されている修飾ＲＮＡを必要としている被検体へ、疾患または障害を治療または予防するために、ジェット注射による上記修飾ＲＮＡの投与を含んでいる方法を提供する。
【０２８９】
本発明に従う疾患を治療または予防する方法は、好ましくは前述されたワクチン接種方法および／または遺伝子療法方法である。
【０２９０】
実施例
以下に示されている実施例は、単に例示的なものであり、本発明をさらなる方法において記載したものである。これらの実施例は、本発明を制限するように構成されてはいない。
【０２９１】
１．in vivoにおけるルシフェラーゼの発現
ＤＮＡテンプレートの作製
in vitro転写のためのベクターを、Photinus pyralisルシフェラーゼ（ＰｐＬｕｃ（ＧＣ））、アルファグロビンの変異３’−ＵＴＲ（ｍｕａｇ）、Ａ６４ポリ（Ａ）配列、ポリ（Ｃ）配列（Ｃ３０）およびヒストンステムループ配列（ヒストンＳＬ）をコードしているＧＣ−エンリッチ配列が続くＴ７プロモーターを含むように作製した：
配列番号４６（図４）：  ＰｐＬｕｃ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ６４−Ｃ３０−ヒストンＳＬ（Ｒ１２６５）
比較として、ベクターを、Photinus pyralisルシフェラーゼ（ＰｐＬｕｃ（ｗｔ））およびＡ３０ポリ（Ａ）配列をコードする野生型配列が続くＴ７プロモーターを含むように作製した：
配列番号４７（図５）：  ＰｐＬｕｃ（ｗｔ）−Ａ３０（Ｒ２６５２）
用いられた修飾の効果を測定するために、以下のベクターを作製した：
配列番号４８（図６）：  ＰｐＬｕｃ（ｗｔ）−Ａ６４（Ｒ３４５４）
配列番号４９（図７）：  ＰｐＬｕｃ（ＧＣ）−Ａ６４−Ｃ３０−ヒストンＳＬ（Ｒ２４６２）
配列番号５０（図８）：  ＰｐＬｕｃ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ６４−Ｃ３０（Ｒ１２５６）
配列番号５１（図９）：  ＰｐＬｕｃ（ｎａｔ）−ｍｕａｇ−Ａ６４−Ｃ３０−ヒストンＳＬ（Ｒ２３９３）
さらなる実験のために、狂犬病ウイルスのＧタンパク質（ＲＡＶ−Ｇ）をコードしている以下のベクターを作製した：
同様に、ルシフェラーゼをコードしているベクターＰｐＬｕｃ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ６４−Ｃ３０−ヒストンＳＬ（Ｒ１２６５）、狂犬病ウイルスのＧタンパク質をコードしているＧＣ−エンリッチ配列が続くＴ７プロモーターを含むＲＡＶ−Ｇ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ６４−Ｃ３０−ヒストンＳＬ（Ｒ２４０３）、アルファグロビン（ｍｕａｇ）の変異３’−ＵＴＲ、Ａ６４ポリ（Ａ）配列、ポリ（Ｃ）配列（Ｃ３０）およびヒストンステムループ配列（ヒストンＳＬ）：
配列番号５２（図１０）：      ＲＡＶ−Ｇ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ６４−Ｃ３０−ヒストンＳＬ（Ｒ２４０３）
さらなる実験のために、マウスＥＰＯをコードしている以下のベクターを作製した：
in vitro転写のためのベクターを、ＥＰＯ（ＥＰＯ（ＧＣ））、アルブミン（アルブミン７）の３’−ＵＴＲ配列、Ａ６４ポリ（Ａ）配列、ポリ（Ｃ）配列（Ｃ３０）およびヒストンステムループ配列（ヒストンＳＬ）をコードしているＨＳＤ１７Ｂ４の５’−ＴＯＰ−ＵＴＲ配列、ＧＣ−エンリッチ配列が続くＴ７プロモーターを含むように作製した：
配列番号５４（図１２）：ＨＳＤ１７Ｂ４−ＥＰＯ（ＧＣ）−アルブミン７−Ａ６４−Ｃ３０−ヒストンＳＬ（Ｒ３１３５）
比較として、ベクターを、ＥＰＯ（ＥＰＯ（ｗｔ））およびＡ３０ポリ（Ａ）配列をコードする野生型配列が続くＴ７プロモーターを含むように作製した：
配列番号５３（図１１）：ＥＰＯ（ｗｔ）−Ａ３０（Ｒ３５１３）
In vitro転写
実施例１に従うＤＮＡテンプレートを、Ｔ７−ポリメラーゼを用いてin vitroにおいて直線化および転写した。そして該ＤＮＡテンプレートを、ＤＮアーゼ処理によって消化した。ｍＲＮＡ転写物は、余剰のＮ７−メチル−グアノシン−５’−三リン酸−５’−グアノシンを転写反応に添加することにより得られた５’−ＣＡＰ構造（ｍＣａｐ）を含んだ。そして得たｍＲＮＡを、精製および水中において再懸濁した。
【０２９２】
in vivoにおけるルシフェラーゼの発現
in vivoにおけるルシフェラーゼ発現を測定するために、ｎａｋｅｄ  ｍＲＮＡの指定量を、ジェット注射によってモルモットの皮内に注射した。
【０２９３】
２４時間後、上記動物を殺処分し、試料（耳、背中からの皮膚または筋肉）を回収し、−７８℃において冷凍し、組織ライザー（Ｑｉａｇｅｎ，Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）において最高速度で３分間溶解した。その後、６００μｌの溶解バッファ（２５ｍＭＴｒｉｓ、ｐＨ７．５（ＨＣｌ）、２ｍＭＥＤＴＡ、１０％グリセリン、１％トリトンＸ−１００、２ｍＭＤＴＴ，１ｍＭＰＭＳＦ）を添加し、結果として生じた溶剤を、組織ライザーにおいて最高速度で再び６分間溶解した。４℃における１３，５００ｒｐｍでの１０分間の遠心分離の後、上清をルシフェリンバッファ（２５ｍＭグリシルグリシン、１５ｍＭＭｇＳＯ４、５ｍＭＡＴＰ、６２，５μＭルシフェリン）と混合し、発光をルミノメーター（ＬｕｍａｔＬＢ９５０７（ＢｅｒｔｈｏｌｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＢａｄＷｉｌｄｂａｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ））を用いて検出した。
【０２９４】
結果：
第一の結果として、従来の皮内針注射と比較し、ジェット注射をされたモルモットにおいて、修飾ｍＲＮＡによってコードされたルシフェラーゼの発現が大きく亢進していることが分かった（図１を参照）。
【０２９５】
さらに、驚くべきことに、針注射器によって慣例的に注射したｍＲＮＡと比較し、ジェット注射によって発現の飽和度を促進し得ることが分かった（図２）。
【０２９６】
意外なことに、修飾ｍＲＮＡ（ＰｐＬｕｃ（ＧＣ））からのルシフェラーゼの発現が、非修飾基準ｍＲＮＡ（ＰｐＬｕｃ（ｗｔ）；図３を参照）からのルシフェラーゼの発現よりも、ジェット注射によって有意により亢進していることがさらに示された。
【０２９７】
【表２】
0006648019.tif 000022
【０２９８】
そのため、ＲＮＡによってコードされたタンパク質の発現の促進において、ＲＮＡの修飾およびジェット注射による上記修飾ＲＮＡの投与が、相乗的に働く（表１を参照）。
【０２９９】
さらなる実験において、非修飾基準ＲＮＡの使用と比較したとき（表２を参照；Ｒ２６５２）、本発明の修飾ＲＮＡ（下記の表２を参照：例えば．Ｒ１２６５、Ｒ２４６２、Ｒ１２５６、Ｒ２３９３）を用いたジェット注射によって達成される発現のさらなる促進が、１つまたはそれ以上のいくつかの異なった修飾をそれぞれ含む、異なった修飾ＲＮＡを用いることによって達成されることを発見した。表２は、プロテイン発現を正常化した指定ＲＮＡ（例えばＲ１２６５）の投与によって達成される、タンパク質発現におけるフォールド増加が、針を用いた従来の皮内注射によるそれぞれのＲＮＡの投与によって達成されることを示している。例えば、修飾ＲＮＡＲ１２６５の発現が、ジェット注射によって８．２３倍（針注射後に得られた発現と比較したとき）増加し、一方非修飾基準ＲＮＡ（Ｒ２６５２）の発現は、２倍のみ増加する。この実施例において、本書に記載されているＲＮＡの修飾によって達成される発現促進は、非修飾基準ＲＮＡに対して４倍である。
【０３００】
【表３】
0006648019.tif 000023
【０３０１】
２．ヒトにおけるＲＡＶ−ＧｍＲＮＡワクチンによる体液性免疫応答の誘導
免疫化
進行中の臨床治験（Ｉ期）において得られる一次結果は、本発明のワクチンの安全性および有効性を示している。臨床研究において、志願者のヒトに、０、７、および２８日においてＴｒｏｐｉｓ機器を用いて、ジェット注射を介してＲＡＶ−ＧｍＲＮＡワクチンＲ２４０３を皮内に注射した。本書の実施例１において記載されているように、すなわち２：１（ｗ／ｗ）の比においてプロタミンと複合体化したｍＲＮＡを、等しい量の遊離ｍＲＮＡと混合し、ｍＲＮＡを作製した。３日のワクチン接種のそれぞれの日において、８０μｇのｍＲＮＡを投与した。
【０３０２】
本発明のワクチンの安全プロフィールを査定するために、投与後被検体を監視した（二度目および三度目の注射後の、バイタルサイン、ワクチン接種部位耐薬査定、血液学的な分析）。本発明のｍＲＮＡによる免疫化は、ヒトにおいて十分に耐性があることを、進行中の臨床研究において得られた一次結果は示唆している。
【０３０３】
免疫化の有効性を、６人の被検体からの血清において、ウイルス中和滴定量（ＶＮＴ）の測定により分析した。この目的のために、血液試料を、ベースラインとして０日目および４２日目に回収した。血清を、以下に記載したように蛍光抗体ウイルス中和（ＦＡＶＮ）試験において、ウイルス中和抗体について分析した。
【０３０４】
ウイルス中和試験
ウイルス中和抗体反応（特異的Ｂ細胞免疫反応）の検出を、ウイルス中和測定によって行った。上記測定の結果は、ウイルス中和滴定量（ＶＮＴ）として記した。ＷＨＯ標準によると、もし各ＶＮＴが少なくとも０．５ＩＵ／ｍｌであるならば、抗体価はプロテクティブであると考える。ＯＩＥ（国際獣疫事務局）によって推奨されたように、およびCliquet F., Aubert M. & Sagne L. (1998); J. Immunol. Methods, 212, 79-87において初めに記載されたように、上記に記載されたように得た血清を、狂犬病ウイルスの細胞培養に適合した攻撃ウイルス株（ＣＶＳ）を用いる蛍光抗体ウイルス中和（ＦＡＶＮ）試験において使用した。間もなく、熱失活血清を、５０μｌの量においてＣＶＳのＴＣＩＤ５０（組織培養感染量５０％）の１００倍量を中和する潜在力について、４倍として系列２倍希釈において４倍として試験する。そのため、血清希釈を、３７℃において１時間ウイルスと共にインキュベートし（５％ＣＯ２による湿度インキュベーターにおいて）、引き続いてトリプシン処理したＢＨＫ−２１細胞を添加（４ｘ１０５細胞／ｍｌ；ウェルにつき５０μｌ）する。感染細胞培養を、３７°Ｃおよび５％ＣＯ２において湿度インキュベーター内で４８時間インキュベートする。細胞の感染を、ＦＩＴＣ抗狂犬病抱合体を用いて、室温において８０％アセトンを用いて、細胞の固定化後分析する。プレートを、ＰＢＳを用いて２回洗浄し、超過のＰＢＳを取り除いた。細胞培養は、狂犬病ウイルスの存在についてポジティブまたはネガティブを記録する。ウェルにおいて処理した血清においてネガティブを記録した細胞は、狂犬病ウイルスの中和を示す。各ＦＡＶＮ試験は、測定の標準化のために基準として機能するＷＨＯまたはＯＩＥ標準血清（ポジティブ基準血清）を含む。試験血清の中和活性を、ＷＨＯによって供される標準血清を基準として計算し、国際単位／ｍｌ（ＩＵ／ｍｌ）として表示する。結果を、表３において要約する。
【０３０５】
結果：
【０３０６】
【表４】
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【０３０７】
６人の被検体のうち５人（被検体番号１、２、４、５および６）において、少なくとも０．５ＩＵ／ｍｌのウイルス中和滴定量を、４２日目において検出した。ＷＨＯ標準によれば、プロテクティブ抗体反応がこれらの被検体において達成され、本発明のｍＲＮＡを用いた免疫化の有効性を示している。
【０３０８】
結論
進行中の臨床治験からの一次結果によれば、ヒト被検体の免疫化のための本発明のｍＲＮＡの使用は、有望な安全プロフィールを有する。前記方法の有効性は、６人の研究された被検体のうち５人において、４２日目に達成したプロテクティブ抗体反応（ＶＮＴ≧０．５ＩＵ／ｍｌ）を伴うこれらの一次研究によって示されている。
【０３０９】
３．in vivoにおけるＥＰＯの発現
in vivoにおけるエリスロポエチン発現を測定するために、モルモットに、従来の針注射またはジェット注射（群につき３個体の動物、注射部位につき８０μｇのＲＮＡの注射をそれぞれ３回与える）によって、ｎａｋｅｄ  ｍＲＮＡを皮内に注射した。２４時間後、伏在静脈から採血をした。血清中のエリスロポエチンレベルを、ＥＬＩＳＡ（Ｍｏｕｓｅ  Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｅｔｉｎ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって測定した。
【０３１０】
結果：モルモットにおいて、修飾ｍＲＮＡ（ＨＳＤ１７Ｂ４−ＥＰＯ（ＧＣ）−アルブミン７−Ａ６４−Ｃ３０−ヒストンＳＬ（Ｒ３１３５））によってコードされたＥＰＯの発現は、従来の皮内針注射と比較しジェット注射によって大きく亢進する（図１３を参照）。
【０３１１】
意外なことに、修飾ｍＲＮＡ（ＨＳＤ１７Ｂ４−ＥＰＯ（ＧＣ）−アルブミン７−Ａ６４−Ｃ３０−ヒストンＳＬ（Ｒ３１３５））からのＥＰＯの発現は、非修飾基準ｍＲＮＡ（ＥＰＯ（ｗｔ）−Ａ３０（Ｒ３５１３））からのＥＰＯの発現よりもジェット注射によって有意により亢進する（図３を参照）。
【０３１２】
４．モルモットにおける体液性免疫応答の誘導のための、ＲＳＶ−ＦｍＲＮＡワクチンの従来の注射およびジェット注射の比較
ＤＮＡおよびｍＲＮＡコンストラクトの作製：
本実施例のために、ＲＳＶロング株（ＡＴＣＣＶＲ−２６）のＲＳＶ−Ｆタンパク質をコードしているＤＮＡ配列を作製し、後のin vitro転写反応のために用いた。
【０３１３】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣＶＲ−２６ロングの融合タンパク質（配列番号６３のアミノ酸配列）：
MELPILKANA ITTILAAVTF CFASSQNITE EFYQSTCSAV SKGYLSALRT GWYTSVITIE LSNIKENKCN GTDAKVKLIN QELDKYKNAV TELQLLMQST TAANNRARRE LPRFMNYTLN NTKKTNVTLS KKRKRRFLGF LLGVGSAIAS GIAVSKVLHL EGEVNKIKSA LLSTNKAVVS LSNGVSVLTS KVLDLKNYID KQLLPIVNKQ SCRISNIETV IEFQQKNNRL LEITREFSVN AGVTTPVSTY MLTNSELLSL INDMPITNDQ KKLMSNNVQI VRQQSYSIMS IIKEEVLAYV VQLPLYGVID TPCWKLHTSP LCTTNTKEGS NICLTRTDRG WYCDNAGSVS FFPQAETCKV QSNRVFCDTM NSLTLPSEVN LCNVDIFNPK YDCKIMTSKT DVSSSVITSL GAIVSCYGKT KCTASNKNRG IIKTFSNGCD YVSNKGVDTV SVGNTLYYVN KQEGKSLYVK GEPIINFYDP LVFPSDEFDA SISQVNEKIN QSLAFIRKSD ELLHHVNAGK STTNIMITTI IIVIIVILLS LIAVGLLLYC KARSTPVTLS KDQLSGINNI AFSN
初めの作製に従い、上記のｍＲＮＡをコードしているＤＮＡ配列を作製した。ＲＮＡ配列Ｒ２５１０（配列番号６４）をコードしているＤＮＡコンストラクトを、配列番号５５のリボソームタンパク質３２Ｌから派生した５’−ＴＯＰ−ＵＴＲを導入し、安定化のためにＧＣ−最適化配列を導入することによって野生型コード配列を修飾することによって作製し、続いて、アルブミン−３’−ＵＴＲ（配列番号５８のアルブミン７），６４アデノシン（ポリ（Ａ）−配列）のストレッチ，３０シトシン（ポリ（Ｃ）−配列）のストレッチ，および配列番号４４のヒストンステムループから派生した配列を安定化した。図１４において、対応しているｍＲＮＡ（Ｒ２５１０；配列番号６４）の配列が示されている。
【０３１４】
In vitro転写：
段落１に従って作製された各ＤＮＡプラスミドを、キャップ類似体（ｍ７ＧｐｐｐＧ）の存在下でＴ７ポリメラーゼを用いてin vitroにおいて転写した。続いて、上記ｍＲＮＡを、Ｐｕｒｅ  Ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ（登録商標）（ＣｕｒｅＶａｃ，Ｔｕｂｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ；ＷＯ２００８／０７７５９２Ａ１）を用いて精製した。
【０３１５】
試薬：
複合化試薬：プロタミン
ワクチンの調製
ｍＲＮＡを、比（１：２）（ｗ／ｗ）（補佐剤成分）においてｍＲＮＡへのプロタミンの添加によってプロタミンと複合体化した。１０分間のインキュベーションの後、抗原生成ＲＮＡとして用いた同様の量の遊離ｍＲＮＡを添加した。
【０３１６】
ＲＳＶ−Ｆロングワクチン（Ｒ２５１０）：２：１（ｗ／ｗ）の比においてプロタミンと複合体化している、配列番号６３によってＲＳＶＦタンパク質ロング（Ｒ２５１０）をコードしているｍＲＮＡから成る補佐剤成分、および配列番号６３によってＲＳＶＦタンパク質ロング（Ｒ２５１０）をコードしている抗原生成遊離ｍＲＮＡ（比１：１；複合ＲＮＡ：遊離ＲＮＡ）を含んでいる。
【０３１７】
免疫化
０日目において、メスのモルモット（ｎ＝８／群）に、上記のようにＲＳＶ−ＦｍＲＮＡワクチンを皮内に（ｉ．ｄ．）注射し（８０μｇのＲ２５１０／マウス／ワクチン接種日）、表４に示したように１ｘ１００μｌを従来の針注射（ｉ．ｄ．）で，４ｘ２５μｌを針注射（ｉ．ｄ．）で，および１ｘ１００μｌをジェット注射（ｉ．ｄ．）で注射した。コントロール群（ｎ＝２）に、不活化ＲＳＶロング（２ｘ５０μｌ）の２０μｇを筋肉内針注射（ｉ．ｍ．）した。不活化“呼吸器多核体ウイルス抗原”（不活化ＲＳＶロング）を、ＩＮＳＴＩＴＵＴ  ＶＩＲＩＯＮ／ＳＥＲＩＯＮ  ＧｍｂＨ−ＳＥＲＩＯＮ  ＩＭＭＵＮＤＩＡＧＮＯＳＴＩＣＡ  ＧｍｂＨから購入した。不活化ウイルスを、０．２μｇ／μＬの最終濃度を達成できるように無菌ＰＢＳ中に希釈した。全ての動物は、１４日目および２８日目にブースト注射を受けた。血液試料を、抗ＲＳＶＦ抗体滴定量の測定のために、−３日目（最初のワクチン接種の３日前）、７日目、２１日目、および４２日目において回収した。
【０３１８】
【表５】
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【０３１９】
ＥＬＩＳＡによる抗ＲＳＶ  Ｆタンパク質抗体の測定
ＥＬＩＳＡプレートを、不活化ＲＳＶ−ロング（ビリオン／セリオン，最終濃度５μｇ／ｍＬ）（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．）を用いてコートした。コートプレートを、指定された希釈液（５ｘ希釈液段階において１：５０から１：３９０６２５０）を用いてモルモット血清と共にインキュベートし、ストレプトビジン−ＨＲＰ（ホースラディッシュ・ペルオシキダーゼ）、２，２’−アジノビス［３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸］−ジアンモニウム塩（ＡＢＴＳ）基質と組み合わせたビオチン化アイソタイプ特異的抗モルモットＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ抗体を用いて、Ｆタンパク質に対する特異的抗体の結合を検出した。
【０３２０】
ＲＳＶ中和抗体滴定量（ＶＮＴｓ）
血清を、ウイルス中和滴定量（ＶＮＴｓ）を測定することによって分析した。簡潔には，血清試料を、イーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）を用いて１：１０で希釈し、熱不活化し、さらに１：４に段階希釈した。希釈された血清試料を、室温において１時間ＲＳＶ（２５−５０ＰＦＵ）と共にインキュベートし、２４ウェルプレート内で集密的なＨＥｐ−２細胞単層上に繰り返し接種した。５％ＣＯ２インキュベーターにおける３７℃での１時間のインキュベーション後、ウェルに０．７５％メチルセルロース媒体を積層した。インキュベーションの４日後、重層を取り除き、細胞を１時間０．１％クリスタルバイオレット染色に結合させ、そしてすすいで風乾した。対応する相互中和抗体滴定量を、ウイルスコントロールの６０％還元終点において測定した。
【０３２１】
結果
図１５Ａおよび図１５Ｂにおいて示されているように、ＲＳＶ−ＦｍＲＮＡワクチンは、ワクチンがジェット注射（１ｘ１００μｌ）によって投与されたとき、２１日目（１４日における初めのブーストワクチン接種の後の１週間後）において、ＩｇＧ１サブクラス（Ａ）およびＩｇＧ２ａサブクラス（Ｂ）の抗Ｆタンパク質抗体を既に誘発した。同等の抗体滴定量は、従来の針注射（４ｘ２５μｌ）によって投与されたとき、４２日目（２８日における次のブーストワクチン接種の後の２週間後）においての誘発が達成されたのみであった。そのため、ジェット注射によって投与されたＲＳＶ−ＦｍＲＮＡワクチンは、従来の針注射の投与と比較し、ＲＳＶ−Ｆタンパク質に対する体液性免疫応答をより速く動的に誘発した。
【０３２２】
図１６に示されているように、示差的なＲＳＶ中和滴定量を、ワクチンがジェット注射（１００μｌ）によって投与されたとき、４２日目においてのみ測定した。そのため、ジェット注射を用いたワクチン接種は、従来の針注射よりも免疫反応のより速い開始を導く。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６】
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【配列表】
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