(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）ターゲットと特異的に結合する第１の抗体が結合された分析プラットホームを製造するステップと、
（ｉｉ）前記第１の抗体を含む分析プラットホームと複数個のターゲットを含む試料とを反応させて、ターゲット物質が結合された分析プラットホームを形成するステップと、
（ｉｉｉ）ターゲットと特異的に結合する第２の抗体と、前記第１の抗体とターゲットが結合された分析プラットホームを反応させるステップと、
（ｉｖ）前記第２の抗体が結合された物質を定量分析するステップと、
を含み、
前記第１の抗体が結合された分析プラットホームは、金属を含むコア及び前記コア表面をコーティングするシリカを含むシリカナノ粒子であり、
前記ターゲットは、Ｂ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  ｖｉｒｕｓ、ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ、ＨＣＶ）、及び人間免疫欠乏ウイルス（Ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ、ＨＩＶ）からなる群より２種以上選択され、
前記第１の抗体が結合された分析プラットホームは、金属の種類が異なるシリカナノ粒子を２種類以上含み、前記ターゲットがＨＢＶである場合、Ａｕを含むシリカナノ粒子、ＨＩＶである場合、Ｇｄを含むシリカナノ粒子、ＨＣＶである場合、Ｅｕを含むシリカナノ粒子を含むことを特徴とする複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法。
【請求項２】
前記第１の抗体と第２の抗体とは同一である請求項１に記載の複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法。
【請求項３】
前記第１の抗体は、単クローン抗体であり、第２の抗体は、多クローン抗体である請求項１に記載の複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法。
【請求項４】
(iv)前記第２の抗体が結合された物質を定量分析するステップは、
(iv−１)外部磁力を加えて前記第２の抗体が結合されたターゲット物質を捕集するステップと、
(iv−２)前記捕集された第２の抗体が結合されたターゲット物質を分光分析機で分析するステップと、
を含む請求項１に記載の複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法。
【請求項５】
(iv)前記第２の抗体が結合された物質を定量分析するステップは、
(iv−１)プレートの第１の抗体と結合された前記第２の抗体が結合された物質を分離するステップと、
(iv−２)前記プレートの第１の抗体と結合された前記第２の抗体が結合された物質だけを分光分析機で分析するステップと、
を含む請求項１に記載の複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法。
【請求項６】
前記（iv−２）の前記第２の抗体が結合されたターゲット物質又は前記第２の抗体が結合された物質を分光分析機で分析するステップでは、誘導結合プラズマ質量分析機または黒鉛炉原子吸収分光分析機を使用して分析する請求項４または５に記載の複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法に関し、より詳細には、既存の生物学的免疫反応である抗原抗体反応に基づいてナノ粒子技術を融合し、複数個の抗原抗体反応と複数個の金属ナノタグとを用いて、複数個のターゲット物質を同時診断することにより、診断効果を向上させた複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
血液や体液を介して伝播される主な病原性ウイルス、例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔiｔiｓ  Ｂ  ｖiｒｕｓ、ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔiｔiｓ  Ｃ  ｖiｒｕｓ、ＨＣＶ）、及び人間免疫欠乏ウイルス（Ｈｕｍａｎ  iｍｍｕｎｏｄｅｆiｃiｅｎｃｙ  ｖiｒｕｓ、ＨＩＶ）は、輸血用血液管理において極めて重要な事前診断項目である。
【０００３】
現在、これらの病源体の感染診断は、主に血液内に存在するＨＢＶの表面抗原（ＨＢｓＡｇ）またはＨＣＶ及びＨＩＶに対する抗体を探知してウイルス感染可否を選別することができる酵素免疫検査法（ｅｎｚｙｍｅ  ｌiｎｋｅｄ  iｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ、ＥＬＩＳＡ）により行われている。しかし、前記酵素免疫検査法は、ウイルス感染後、抗体が形成されるまでの潜伏期、免疫活性が異なるウイルスの感染、または感染者の免疫非活性状態では、正確度が低いという問題がある。
【０００４】
前記酵素免疫検査法の限界を克服しようとして、この数年間開発されてきた方法がＤＮＡまたはＲＮＡからなるウイルスの遺伝物質を直接感知する核酸検査法（Ｎｕｃｌｅiｃ  ａｃiｄ  ｔｅｓｔ、ＮＡＴ）である。核酸検査法は、ウイルス核酸に対する塩基配列特異度を有するオリゴプライマーを使用することにより、酵素免疫検査法より向上した敏感度でウイルス存在有無を分析することができる診断方法である。前記核酸検査法は、輸血などの血液事業や生物医薬品事業分野において、血液を介して伝染される病原性ウイルス等の探索に適宜活用され得ると期待されたが、当該検査法の導入及び活用のために使用される費用の問題のため、大量の検体を対象とした日常的な検査法として活用するには困難がある。
【０００５】
その他、同時に色々な種類のウイルスを探知する方法として、多重核酸検査法（ｍｕｌｔiｐｌｅｘ  ＮＡＴ）がある。前記多重核酸検査法は、導入の際、検査時間と努力を多少減らすという効果があるが、反応条件の最適化が保証されなければ、敏感度が低下する恐れがあり、偽陽性や偽陰性の余地があり、大量の検体を対象とした日常的な検査法として活用するには、依然として検査費用の側面で困難がある。
【０００６】
上記のように、ウイルス診断の色々な方法に対する長所及び短所にもかかわらず、現在、ウイルスを検出するために、臨床診断で主に使用されている技術は、抗原−抗体反応を基本とするＥＬＩＳＡ検査法である。ＥＬＩＳＡ検査法の場合、測定機械の作動が簡単であり、速かに試料を処理できるという点において普遍化されているが、使用可能な発色体または蛍光体の種類が制限的であり、タギング作業の困難、発色と関連した酵素の反応性、蛍光の場合、フォトブリーチング（ｐｈｏｔｏ  ｂｌｅａｃｈiｎｇ）及びクエンチング（ｑｕｅｎｃｈiｎｇ）などによる種々の測定の制約要件等が散在している。特に、定量的測定を要する応用分野においてはなおさらである。
【０００７】
したがって、様々なマトリックス（ｍａｔｒiｘ）で様々な種類の蛋白質などのターゲット物質を定量できるだけでなく、正確な測定及び定量を可能にする新しい技術に対する必要性が台頭されている。
【０００８】
このために、従来、ＥＬＩＳＡ検査法において蛍光体やその他の発色化合物の代りに、金属ナノタグを用い、前記金属の質量を測定することにより、正確に微量のウイルスまでも検出する方法が知られている。
【０００９】
しかし、従来、金属ナノタグを用いる方法の場合、１つの金属のみを含むので、複数個のターゲットを同時に検出し難いという問題点があった。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、上記のような従来技術の問題点を解決するために、複数個の抗体を含むことにより、複数個のターゲットを同時分析することができる新しい分析方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、上記のような課題を解決するために、
【００１２】
（i）ターゲットと特異的に結合する第１の抗体が結合された分析プラットホームを製造するステップと、
【００１３】
（ii）前記第１の抗体を含む分析プラットホームと複数個のターゲットを含む試料とを反応させて、ターゲット物質が結合された分析プラットホームを形成するステップと、
【００１４】
（iii）ターゲットと特異的に結合する第２の抗体と、前記第１の抗体とターゲットが結合された分析プラットホームを反応させるステップと、
【００１５】
（iv）前記第２の抗体が結合された物質を定量分析するステップとを含む複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法を提供する。
【００１６】
更に、本発明は、（ｉ）他ーゲットと特異的に結合する第１の抗体が結合された分析プラットホームを製造するステップと、
（ｉｉ）前記第１の抗体を含む分析プラットホームと複数個のターゲットを含む試料とを反応させて、ターゲット物質が結合された分析プラットホームを形成するステップと、
（ｉｉｉ）ターゲットと特異的に結合する第２の抗体と、前記第１の抗体とターゲットが結合された分析プラットホームを反応させるステップと、
（ｉｖ）前記第２の抗体が結合された物質を定量分析するステップと、
を含み、
前記第１の抗体が結合された分析プラットホームは、金属を含むコア及び前記コア表面をコーティングするシリカを含むシリカナノ粒子であり、
前記ターゲットは、Ｂ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  ｖｉｒｕｓ、ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ、ＨＣＶ）、及び人間免疫欠乏ウイルス（Ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ、ＨＩＶ）からなる群より２種以上選択され、
前記第１の抗体が結合された分析プラットホームは、金属の種類が異なるシリカナノ粒子を２種類以上含み、前記ターゲットがＨＢＶである場合、Ａｕを含むシリカナノ粒子、ＨＩＶである場合、Ｇｄを含むシリカナノ粒子、ＨＣＶである場合、Ｅｕを含むシリカナノ粒子を含むことを特徴とする複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法を提供する。
【００１７】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法において、分析されるターゲット分子は生体分子でありうる。生体分子は、生体内で排出されるか、分離される物質であって、生体で生成される物質だけでなく、生体に投入されて所定時間残留する物質を含むことができる。例えば、生体分子は、抗生剤、核酸、ホルモン、酵素、細胞、腫瘍、癌細胞、細菌、ウイルス、及びこれらの分泌物などを含むことができる。抗生剤の例としては、サリノマイシン、エンロフロキサシン、シプロフロキサシン、ペニシリン、セパロスポリン、カルバペネム、アンピシリン、セパロスポリン、ネオマイシン、ゲンタマイシン、イセパマイシン、シソマイシン、エリトロマイシン、クラリスロマイシン、ハンコマイシン、テイコプラニン、リンコマイシン、スルファチアゾール、テトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、スルファメラジンなどを挙げることができ、細胞分泌物の例としては、前立腺細胞で合成される蛋白質である前立腺特異抗原などを挙げることができる。ただし、これに制限されるものではない。
【００１８】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法において、前記第１の抗体が結合された分析プラットホームは、複数個の種類の抗体を含むことを特徴とする。
【００１９】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法において、前記第１の抗体が結合された分析プラットホームは、金属を含むコア及び前記コア表面をコーティングするシリカを含むシリカナノ粒子であるか、または、複数種類の第１の抗体が結合されたプレートであることが可能である。本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法において、前記第１の抗体が結合された分析プラットホームが金属を含むコア及び前記コア表面をコーティングするシリカを含むシリカナノ粒子である場合を図１に示し、前記第１の抗体が結合された分析プラットホームが複数種類の第１の抗体が結合されたプレートである場合を図２に示した。
【００２０】
【００２１】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法において、前記それぞれのシリカナノ粒子は、１種類の金属を含み、前記抗体が結合された分析プラットホームは、金属の種類が異なるシリカナノ粒子を２種類以上含むことを特徴とする。本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法は、含まれた金属の種類が異なる複数個のシリカナノ粒子に各々種類を異ならせる第１の抗体を付着して分析することにより、第１の抗体の種類によるターゲットの種類を多様化でき、シリカナノ粒子に含まれた金属の種類を異ならせることにより、後で誘導結合プラズマ質量分析機を用いた定量分析の際、２つの種類の金属を同時に分析することが可能になることを特徴とする。
【００２２】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法において、前記シリカナノ粒子に含まれる金属は、Ａｕ、Ａｇ、Ｐｔ、Ｐｄ、Ｉｒ、Ｒｈ、Ｒｕ、Ａｌ、Ｃｕ、Ｔｅ、Ｂi、Ｐｂ、Ｆｅ、Ｃｅ、Ｍｏ、Ｎｂ、Ｗ、Ｓｂ、Ｓｎ、Ｖ、Ｍｎ、Ｎi、Ｃｏ、Ｚｎ、Ｌａ、Ｃｅ、Ｐｒ、Ｎｄ、Ｐｍ、Ｓｍ、Ｅｕ、Ｇｄ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｔｍ、Ｙｂ、Ｌｕ、Ｓｃ、Ｙ、及びＴiからなる群より選ばれることを特徴とする。
【００２３】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法において、前記第１の抗体が結合された分析プラットホームは、Ａｕを含むシリカナノ粒子、Ｇｄを含むシリカナノ粒子、Ｙを含むシリカナノ粒子、及びＥｕを含むシリカナノ粒子からなる群より選ばれる２個以上の複数個のシリカナノ粒子を含むことを特徴とする。
【００２４】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法において、前記第１の抗体が結合された分析プラットホームは、分析しようとするターゲットによって適切な金属を選択でき、具体的には、分析しようとするターゲットが血液内のＨＢＶである場合、Ａｕを含むシリカナノ粒子、ＨＩＶである場合、Ｇｄを含むシリカナノ粒子、ＨＣＶである場合、Ｅｕを含むシリカナノ粒子を使用することが好ましく、このようなシリカナノ粒子を２個以上同時に使用することが可能である。
【００２５】
【００２６】
本発明の他の実施形態による場合、図２に示すように、前記第１の抗体が結合された分析プラットホームは、複数種類の第１の抗体が結合されたプレートであり、複数種類の第１の抗体が結合されたという点を除いては、従来のＥＬＩＳＡ方法をそのまま使用することが可能である。
【００２７】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法において、複数種類の第１の抗体が結合されたプレートを分析プラットホームとする場合、前記第２の抗体は、金属を含むコア及び／又は前記コア表面をコーティングするシリカを含むシリカナノ粒子に結合されることを特徴とする。
【００２８】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法において、前記第２の抗体が結合されるシリカナノ粒子のコアは、Ａｕ、Ａｇ、Ｐｔ、Ｐｄ、Ｉｒ、Ｒｈ、Ｒｕ、Ａｌ、Ｃｕ、Ｔｅ、Ｂi、Ｐｂ、Ｆｅ、Ｃｅ、Ｍｏ、Ｎｂ、Ｗ、Ｓｂ、Ｓｎ、Ｖ、Ｍｎ、Ｎi、Ｃｏ、Ｚｎ、Ｌａ、Ｃｅ、Ｐｒ、Ｎｄ、Ｐｍ、Ｓｍ、Ｅｕ、Ｇｄ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｔｍ、Ｙｂ、Ｌｕ、Ｓｃ、Ｙ、及びＴiからなる群より選ばれる２個以上の金属を含むことを特徴とする。
【００２９】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法において、前記第２の抗体が結合されるシリカナノ粒子のコアは、Ａｕを含むことを特徴とする。
【００３０】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法において、前記第１の抗体は、単クローン抗体であることを特徴とする。
【００３１】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法において、前記第１の抗体と第２の抗体とは、同じものを使用することが可能である。
【００３２】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法において、前記第１の抗体は単クローン抗体であり、第２の抗体は、多クローン抗体であることが可能である。
【００３３】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法において、（iv）前記第２の抗体が結合された物質を定量分析するステップは、
【００３４】
（iv−１）外部磁力を加えて前記第２の抗体が結合されたターゲット物質を捕集するステップと、
【００３５】
（iv−２）前記捕集された第２の抗体が結合されたターゲット物質を分光分析機で分析するステップとを含むことを特徴とする。すなわち、第１の抗体が結合された分析プラットホームとしてシリカナノ粒子を使用する場合には、第２の抗体が結合されたターゲットを、外部磁力を加えて第２の抗体に連結されるシリカナノ粒子に含まれる磁性ナノ粒子の磁性により分離し、分離された第２の抗体まで結合されたターゲットのタグされた金属を定量分析してターゲットを分析するようになる。
【００３６】
本発明の他の実施形態によって第１の抗体が結合された分析プラットホームとしてプレートに結合された第１の抗体を使用する場合、（iv）前記第２の抗体が結合された物質を定量分析するステップは、
【００３７】
（iv−１）プレートの第１の抗体と結合された前記第２の抗体が結合された物質を分離するステップと、
【００３８】
（iv−２）前記プレートの第１の抗体と結合された前記第２の抗体が結合された物質だけを分光分析機で分析するステップとを含むことを特徴とする。すなわち、第２の抗体まで結合されるターゲットがプレートに固定されているので、単純に分離後に第２の抗体に結合されたタグされた金属を定量分析して、結果的に複数個のターゲットを定量分析することが可能となる。
【００３９】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法において、前記（ｉｖ−２）の前記第２の抗体が結合されたターゲット物質又は前記第２の抗体が結合された物質を分光分析機で分析するステップでは、誘導結合プラズマ質量分析機または黒鉛炉原子吸収分光分析機を使用して分析することを特徴とする。
【発明の効果】
【００４０】
本発明に係る金属ナノタグを用いたターゲット物質分析方法は、既存の生物学的免疫反応にナノ技術を融合して、多量の血液試料を取扱う血液管理事業や血液製剤及びウイルス検証診断、その他、生物医薬品事業において検査費用の負担無しで正確に微量のウイルスまでも検出できるようにする。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】及び
【図２】本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法を示す模式図である。
【００４２】
【図３】及び
【図４】本発明の一実施形態によって血液内で誘導結合プラズマ質量分析機で分析した結果を示す。
【発明を実施するための最善の形態】
【００４３】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法は、
【００４４】
（i）ターゲットと特異的に結合する第１の抗体が結合された分析プラットホームを製造するステップと、
【００４５】
（ii）前記第１の抗体を含む分析プラットホームと複数個のターゲットを含む試料とを反応させて、ターゲット物質が結合された分析プラットホームを形成するステップと、
【００４６】
（iii）ターゲットと特異的に結合する第２の抗体と、前記第１の抗体とターゲットが結合された分析プラットホームを反応させるステップと、
【００４７】
（iv）前記第２の抗体が結合された物質を定量分析するステップとを含むことができる。
【００４８】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法において、前記第１の抗体が結合された分析プラットホームは、複数個の種類の抗体を含むことができる。
【００４９】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法において、前記第１の抗体が結合された分析プラットホームは、金属を含むコア及び前記コア表面をコーティングするシリカを含むシリカナノ粒子でありうる。前記シリカナノ粒子は、１種類の金属を含み、前記抗体が結合された分析プラットホームは、金属の種類が異なるシリカナノ粒子を２種類以上含むことができる。前記シリカナノ粒子に含まれる金属は、Ａｕ、Ａｇ、Ｐｔ、Ｐｄ、Ｉｒ、Ｒｈ、Ｒｕ、Ａｌ、Ｃｕ、Ｔｅ、Ｂi、Ｐｂ、Ｆｅ、Ｃｅ、Ｍｏ、Ｎｂ、Ｗ、Ｓｂ、Ｓｎ、Ｖ、Ｍｎ、Ｎi、Ｃｏ、Ｚｎ、Ｌａ、Ｃｅ、Ｐｒ、Ｎｄ、Ｐｍ、Ｓｍ、Ｅｕ、Ｇｄ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｔｍ、Ｙｂ、Ｌｕ、Ｓｃ、Ｙ、及びＴiからなる群より選ばれることができる。前記第１の抗体が結合された分析プラットホームは、Ａｕを含むシリカナノ粒子、Ｇｄを含むシリカナノ粒子、Ｙを含むシリカナノ粒子、及びＥｕを含むシリカナノ粒子からなる群より選ばれる２個以上の複数個のシリカナノ粒子を含むことができる。前記第２の抗体は、磁性金属を含むコア及び前記コア表面をコーティングするシリカを含むシリカナノ粒子に結合されることができる。
【００５０】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法において、前記第１の抗体が結合された分析プラットホームは、複数種類の第１の抗体が結合されたプレートでありうる。
【００５１】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法において、前記第２の抗体は、金属を含むコア及び前記コア表面をコーティングするシリカを含むシリカナノ粒子に結合されることができる。
【００５２】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法において、前記第２の抗体に結合されたシリカナノ粒子のコアは、Ａｕ、Ａｇ、Ｐｔ、Ｐｄ、Ｉｒ、Ｒｈ、Ｒｕ、Ａｌ、Ｃｕ、Ｔｅ、Ｂi、Ｐｂ、Ｆｅ、Ｃｅ、Ｍｏ、Ｎｂ、Ｗ、Ｓｂ、Ｓｎ、Ｖ、Ｍｎ、Ｎi、Ｃｏ、Ｚｎ、Ｌａ、Ｃｅ、Ｐｒ、Ｎｄ、Ｐｍ、Ｓｍ、Ｅｕ、Ｇｄ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｔｍ、Ｙｂ、Ｌｕ、Ｓｃ、Ｙ、及びＴiからなる群より選ばれる２個以上の金属を含むことができる。
【００５３】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法において、前記第２の抗体に結合されたシリカナノ粒子のコアは、Ａｕを含むことができる。
【００５４】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法において、前記第１の抗体と第２の抗体とは、同一でありうる。
【００５５】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法において、前記第１の抗体は、単クローン抗体であり、第２の抗体は、多クローン抗体でありうる。
【００５６】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法において、
【００５７】
（iv）前記第２の抗体が結合された物質を定量分析するステップは、
【００５８】
（iv−１）外部磁力を加えて前記第２の抗体が結合されたターゲット物質を捕集するステップと、
【００５９】
（iv−２）前記捕集された第２の抗体が結合されたターゲット物質を分光分析機で分析するステップとを含むことができる。
【００６０】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法において、
【００６１】
（iv）前記第２の抗体が結合された物質を定量分析するステップは、
【００６２】
（iv−１）プレートの第１の抗体と結合された前記第２の抗体が結合された物質を分離するステップと、
【００６３】
（iv−２）前記プレートの第１の抗体と結合された前記第２の抗体が結合された物質だけを分光分析機で分析するステップとを含むことができる。
【００６４】
本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いた複数個のターゲットの同時分析方法において、
【００６５】
前記（ｉｖ−２）の前記第２の抗体が結合されたターゲット物質又は前記第２の抗体が結合された物質を分光分析機で分析するステップでは、誘導結合プラズマ質量分析機または黒鉛炉原子吸収分光分析機を使用して分析することでありうる。
【発明を実施するための形態】
【００６６】
以下では、本発明を実施例によってさらに詳細に説明する。しかし、本発明が以下の実施例によってさらに限定されるものではない。
【００６７】
【００６８】
＜実施例１＞第１の抗体を含む分析プラットホームとしてプレートを使用する場合
【００６９】
プレートに第１の抗体としてＨｕｍａｎ  ａｎｔi−ｐ２４  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ抗体を付着させた後、第２の抗体としてＨＢｓＡｇが付着され、Ａｕ粒子を含むシリカナノ粒子を金ナノ粒子標識キット（Ｇｏｌｄ  ｎａｎｏ  ｐａｒｔiｃｌｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔiｏｎ  ｋiｔ）を使用して製造用意した。
【００７０】
血液サンプルをプレートに流して第１の抗体と血液サンプル内のターゲットと反応を導いた後、洗浄によって反応しない不純物を除去した。ここに、前記ＨＢｓＡｇが付着され、Ａｕ粒子を含む第２の抗体と反応させた。
【００７１】
その後、硝酸との反応によって第２の抗体まで結合された結合体を分離回収した後、誘導結合プラズマ質量分析法（ＩＣＰ−ＭＳ）にて検量し、その結果を図３に示した。
【００７２】
【００７３】
＜実施例２＞第１の抗体を含む分析プラットホームとしてシリカナノ粒子を使用する場合
【００７４】
第１の抗体を含む分析プラットホームとしてガドリニウムがドーピングされたシリカナノ粒子、イットリウムがドーピングされたシリカナノ粒子、及びユウロピウムがドーピングされたシリカナノ粒子を各々合成した。
【００７５】
前記合成されたシリカナノ粒子に第１の抗体として各々Ｈｕｍａｎ  ａｎｔi−ｐ２４  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ抗体を付着し、混合してシリカナノ粒子分析プラットホームを製作した。
【００７６】
磁性ナノ粒子として鉄ナノ粒子を製造し、ここに、第２の抗体としてＨｕｍａｎ  ａｎｔi−ｐ２４  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ抗体を付着して製造した。
【００７７】
前記ガドリニウムがドーピングされたシリカナノ粒子、イットリウムがドーピングされたシリカナノ粒子、及びユウロピウムがドーピングされたシリカナノ粒子が混合されたシリカナノ粒子をターゲット物質を含む試料と反応させた。未反応物質を除去した後、硝酸との反応によって第２の抗体まで結合された結合体を分離回収し、誘導結合プラズマ質量分析法（ＩＣＰ−ＭＳ）にて検量し、その結果を図４に示した。
【００７８】
図４において、本発明に係る複数個の金属ナノタグを用いたターゲットの同時分析方法を使用する場合、複数のターゲットを定量的に分析できるということが分かる。
【図１】
0006647392.tif 000002
【図２】
0006647392.tif 000003
【図３】
0006647392.tif 000004
【図４】
0006647392.tif 000005