(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式の化合物：
【化１】
0006756925.tif 000013
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
化合物が、式
【化２】
0006756925.tif 000014
の化合物である、請求項１記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
化合物が、式
【化３】
0006756925.tif 000015
の化合物である、請求項１記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
請求項１または２記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む組成物。
【請求項５】
請求項１または２記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む、ＨＤＡＣ活性を阻害するための組成物。
【請求項６】
請求項１または２記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む、神経学的障害、記憶もしくは認知機能障害または機能障害、学習消去障害、真菌性疾患もしくは感染、炎症性疾患、血液疾患、精神障害、および新生物性疾患から選択される状態を治療するための組成物。
【請求項７】
前記状態が、
ａ．アルツハイマー病、ハンチントン病、発作による記憶喪失、統合失調症、ルビンスタインテイビー症候群、レット症候群、うつ病、脆弱性Ｘ、レビー小体型認知症、血管性認知症、前頭側頭葉変性症（前頭側頭型認知症、ＦＴＤ）、ＦＴＤ−ＧＲＮ、ＡＤＨＤ、失読症、双極性障害ならびに自閉症、外傷性頭部損傷、注意欠陥障害、不安障害、条件付き恐怖応答、パニック障害、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、恐怖症、社交不安障害、物質依存の回復、加齢関連性記憶障害（ＡＡＭＩ）、加齢関連性認知機能低下（ＡＲＣＤ）、運動失調症、パーキンソン病、もしくはパーキンソン病型認知症に関連する社会的障害、認知障害および学習障害に関連する認知機能障害または機能障害；または
ｂ．急性骨髄性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、および鎌状赤血球貧血から選択される血液疾患；または
ｃ．新生物性疾患；または
ｄ．恐怖消去および心的外傷後ストレス障害から選択される学習消去障害
である、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記状態が、アルツハイマー病、ハンチントン病、前頭側頭型認知症、フリードライヒ失調症、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、パーキンソン病、または物質依存の回復である、請求項７に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１７年１月１１日に出願された米国仮特許出願第６２／４４５，０２２号および２０１７年９月７日に出願された米国仮特許出願第６２／５５５，２９８号の優先権を主張する。これらの各々の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
連邦政府による資金提供を受けた研究開発に関する声明
【０００２】
本発明は、国立衛生研究所（ＮＩＨ）によって与えられた中小企業技術革新研究プログラム（ＳＢＩＲ）助成金１Ｒ４３ＡＧ０４８６５１−０１Ａ１の下で政府の支援を受けて行われた。政府は本発明において一定の権利を有する。
技術分野
【０００３】
ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）の阻害剤は、転写を調節し、かつ細胞成長の停止、分化およびアポトーシスを誘導することが示されている。ＨＤＡＣ阻害剤はまた、放射線治療薬および化学療法薬を含む、癌治療に使用される治療薬の細胞傷害作用を増強する。Ｍａｒｋｓ，Ｐ．，Ｒｉｆｋｉｎｄ、Ｒ．Ａ．，Ｒｉｃｈｏｎ、Ｖ．Ｍ．，Ｂｒｅｓｌｏｗ、Ｒ．，Ｍｉｌｌｅｒ，Ｔ．，Ｋｅｌｌｙ、Ｗ．Ｋ．Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ：ｃａｕｓｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ、１、１９４−２０２（２００１年）；およびＭａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．、Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．，Ｍｉｌｌｅｒ，Ｔ．，Ｋｅｌｌｙ，Ｗ．Ｋ．Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ａｄｖ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，９１，１３７−１６８（２００４年）。さらに、近年のエビデンスは、転写調節不全が、ハンチントン病、脊髄性筋萎縮症、筋萎縮性側索硬化症、および虚血などの特定の神経変性障害の分子病因に寄与し得ることを示している。Ｌａｎｇｌｅｙ，Ｂ．、Ｇｅｎｓｅｒｔ，Ｊ．Ｍ．、Ｂｅａｌ，Ｍ．Ｆ．、Ｒａｔａｎ，Ｒ．Ｒ．「Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｃｈｒｏｍａｔｉｎ  ａｎｄ  ｓｔｒｅｓｓ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ：  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｓ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｄ  ｂｒｏａｄｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔｓ」Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ＣＮＳ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｄｉｓｏｒｄ、４、４１−５０（２００５年）。近年のレビューは、異常なヒストンアセチル基転移酵素（ＨＡＴ）およびヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）活性が、神経変性に寄与する共通の基本的なメカニズムを表し得るというエビデンスをまとめている。さらに、うつ病のマウスモデルを使用して、Ｎｅｓｔｌｅｒは近年、うつ病におけるヒストン脱アセチル化阻害剤（ＨＤＡＣ５）の治療的可能性を強調した。Ｔｓａｎｋｏｖａ，Ｎ．Ｍ．、Ｂｅｒｔｏｎ，Ｏ．、Ｒｅｎｔｈａｌ，Ｗ．、Ｋｕｍａｒ，Ａ．、Ｎｅｖｅ，Ｒ．Ｌ．，、Ｎｅｓｔｌｅｒ，  Ｅ．Ｊ．「Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｃｈｒｏｍａｔｉｎ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  ａｃｔｉｏｎ」Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、９、５１９−５２５（２００６年）。
【０００４】
それらのアクセサリードメインの構造に基づいて４つのクラスに分類された、１８の既知のヒトヒストン脱アセチル化酵素が存在する。クラスＩは、ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、およびＨＤＡＣ８を含み、酵母菌Ｒｐｄ３に対して相同性を有する。ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７、およびＨＤＡＣ９は、クラスＩＩａに属し、酵母Ｈｄａ１に対して相同性を有する。ＨＤＡＣ６およびＨＤＡＣ１０は、２つの触媒部位を含み、クラスＩＩｂとして分類される。クラスＩＩＩ（サーチュイン）としては、ＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２、ＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ６、およびＳＩＲＴ７が挙げられる。ＨＤＡＣ１１は、ＨＤＡＣファミリーの近年同定された別のメンバーであり、クラスＩおよびクラスＩＩの両方の脱アセチル化酵素によって共有される保存された残基をその触媒中心に有し、クラスＩＶに配置されることもある。
【０００５】
ＨＤＡＣは、長期記憶プロセスの強力な負の調節因子であることが示されている。非特異的ＨＤＡＣ阻害剤は、シナプス可塑性ならびに長期記憶を増強する（Ｌｅｖｅｎｓｏｎら、２００４年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：４０５４５−４０５５９；Ｌａｔｔａｌら、２００７年、Ｂｅｈａｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  １２１：１１２５−１１３１；Ｖｅｃｓｅｙら、２００７年、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２７：６１２８；Ｂｒｅｄｙ、２００８年、Ｌｅａｒｎ  Ｍｅｍ  １５：４６０−４６７；Ｇｕａｎら、２００９年、Ｎａｔｕｒｅ  ４５９：５５−６０；Ｍａｌｖａｅｚら、２０１０年、Ｂｉｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ６７：３６−４３；Ｒｏｏｚｅｎｄａａｌら、２０１０年、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３０：５０３７−５０４６）。例えば、ＨＤＡＣの阻害は、長期記憶をもたらさない学習事象を、有意な長期記憶をもたらす学習事象に変換できる（Ｓｔｅｆａｎｋｏら、２００９年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０６：９４４７−９４５２）。さらに、ＨＤＡＣの阻害はまた、通常の記憶が持続できない点を超えて持続する、長期記憶の形態を生じさせ得る。ＨＤＡＣ阻害剤は、アルツハイマー病の遺伝モデルにおいて、認知欠損を改善することが示されている（Ｆｉｓｃｈｅｒら、２００７年、Ｎａｔｕｒｅ  ４４７：１７８〜１８２；Ｋｉｌｇｏｒｅら、２０１０年、Ｎｅｕｒｏｐｙｃｈｙｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ３５：８７０−８８０）。これらの論証は、ＨＤＡＣの阻害を介する記憶の調節が、多くの記憶および認知障害に対してかなりの治療的可能性を有することを示唆する。
【０００６】
長期記憶における個々のＨＤＡＣの役割は、近年の２つの研究において調査されている。Ｋｉｌｇｏｒｅら（２０１０年、Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ３５：８７０−８８０）は、酪酸ナトリウムなどの非特異的ＨＤＡＣ阻害剤が、クラスＩＩａ  ＨＤＡＣファミリーメンバー（ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ９）にはほとんど影響を与えることなく、クラスＩ  ＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、ＨＤＡＣ８）を阻害することを明らかにした。これは、クラスＩのＨＤＡＣを阻害することが、多くの研究において観察された認知の増強にとって重要であり得ることを示唆する。実際に、ＨＤＡＣ１ではなく、ＨＤＡＣ２の前脳およびニューロン特異的過剰発現が、樹状突起棘密度、シナプス密度、シナプス可塑性および記憶形成を減少させた（Ｇｕａｎら、２００９年、Ｎａｔｕｒｅ、４５９：５５−６０）。対照的に、ＨＤＡＣ２ノックアウトマウスは、ニューロンにおいてシナプス密度の増加、シナプス可塑性の増加、および樹状突起密度の増加を示した。これらのＨＤＡＣ２欠損マウスはまた、一連の学習行動パラダイムにおいて増強された学習および記憶を呈した。この研究は、ＨＤＡＣ２が、シナプス形成およびシナプス可塑性の重要な調節因子であることを論証する。さらに、Ｇｕａｎらは、ＳＡＨＡ（ＨＤＡＣ１、２、３、６、８阻害剤）によるマウスの慢性治療が、ＨＤＡＣ２欠損マウスで見られる効果を再現し、ＨＤＡＣ２過剰発現マウスにおける認知機能障害を救援することを示した。
【０００７】
ＨＤＡＣ２の阻害（選択的に、または他のクラスＩのＨＤＡＣの阻害と組み合わせて；一次標的として、または他のタンパク質との複合体の一部として）は、魅力的な治療標的である。選択的阻害は、ＨＤＡＣ２などの特定のＨＤＡＣアイソフォームを単独で、または機能的多タンパク質複合体の一部として標的化することによって達成され得る。こうした阻害は、神経細胞集団におけるシナプス密度および樹状突起密度を増大させることにより、認知を高める学習過程を促進する可能性を有する。さらに、ＨＤＡＣ２などの特定のＨＤＡＣの阻害はまた、様々な他の疾患および障害の治療において、治療上有用であり得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ＨＤＡＣ（例えば、ＨＤＡＣ２）の活性に関連する状態の治療に有用である、化合物およびその薬学的に許容される塩、ならびに医薬組成物が開示される（例えば、表の１および２を参照されたい）。
【０００９】
開示される化合物は、従来の阻害剤と比較した場合、血液学的安全性、ならびに効力、ＡＤＭＥおよびＰＫプロファイルの全体的なバランスにおいて利点を提供する。例えば、比較例Ｅと化合物２の間でのメチルへの水素の単なる置換は、ＣＹＰ２Ｄ６阻害の劇的な減少をもたらす。例えば、表２を参照されたい。また、この置換は、非置換ピリミジン類似体よりも明確なＰＫの利点をもたらし、より長い半減期、より低いクリアランス、より高いバイオアベイラビリティ、および５倍を超える脳への曝露を示す。例えば、表３を参照されたい。同様に、１つの追加のオルソ−フッ素原子の追加は、比較例Ｉと比較して化合物１について赤血球前駆細胞系列および骨髄前駆細胞系列の両方で有意な安全性の利益を実現した。
【００１０】
記載される化合物はまた、野生型マウスの背側海馬のＣＡ１領域において、樹状突起棘形態の変化を生じる。例えば、表７を参照されたい。樹状突起棘形態の尺度は、正常な認知機能を促進するか、または歪め、かつ認知機能障害に対して保護するか、または認知機能障害を悪化させる可能性が高い薬理学的剤を同定できる。
【００１１】
開示される化合物によって治療可能な状態としては、これらに限定されないが、神経学的障害、記憶または認知機能障害または機能障害、消去学習障害（ｅｘｔｉｎｃｔｉｏｎ  ｌｅａｒｎｉｎｇ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、真菌性疾患または感染症、炎症性疾患、血液疾患、新生物性疾患、精神障害、および記憶喪失が挙げられる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
１．化合物
【００１３】
次式の化合物が本明細書で提供される：
【００１４】
【化１】
0006756925.tif 000002
【００１５】
またはその薬学的に許容される塩。
２．定義
【００１６】
本明細書で使用される場合、用語「対象」および「患者」は、同義的に使用され得、治療を必要とする哺乳動物、例えばペット（例えば、イヌ、ネコなど）、家畜動物（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギなど）、および実験動物（例えば、ラット、マウス、モルモットなど）を意味する。典型的には、対象は、治療を必要とするヒトである。
【００１７】
本明細書に記載の化合物の薬学的に許容される塩および中和形態が含まれる。医薬品において使用する場合、本化合物の塩は、無毒の「薬学的に許容される塩」を指す。薬学的に許容される塩の形態としては、薬学的に許容される酸性／アニオン性または塩基性／カチオン性の塩が挙げられる。薬学的に許容される塩基性／カチオン性の塩としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、ジエタノールアミン、ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、Ｌ−リジン、Ｌ−アルギニン、アンモニウム、エタノールアミン、ピペラジンおよびトリエタノールアミンの塩が挙げられる。薬学的に許容される酸性／アニオン性の塩としては、例えば、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、酒石酸水素塩、炭酸塩、クエン酸塩、二塩化水素化物、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニレート、ヘキシルレゾルシン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、硝酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、およびトシル酸塩が挙げられる。
【００１８】
「薬学的に許容される担体」という用語は、それが共に配合される化合物の薬理学的活性を破壊しない、無毒性の担体、アジュバント、またはビヒクルを指す。本明細書に記載の組成物に使用され得る薬学的に許容される担体、アジュバントまたはビヒクルとしては、これらに限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質（ヒト血清アルブミンなど）、リン酸塩などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が挙げられる。
【００１９】
用語「治療」、「治療する」、および「治療すること」は、本明細書に記載されるように、疾患または障害、またはその１つ以上の症状の発達の可能性を逆転させる、軽減する、低下させる、またはそれらの進行を阻害することを指す。いくつかの実施形態では、治療は、１つ以上の症状が発現した後に施され、すなわち、治療的処置である。他の実施形態では、治療は症状のない状態で施されてよい。例えば、治療は症状の発症前に感受性のある個体に施され（例えば、症状の履歴の見地から、かつ／または遺伝的もしくは他の感受性因子の見地から）、すなわち予防的治療である。治療は、症状が解消した後も継続して、例えばそれらの再発を予防または遅延し得る。
【００２０】
用語「有効量」または「治療有効量」は、対象の生物学的または医学的応答を誘発する本明細書に記載の化合物の量を含む。
３．用途、配合および投与
【００２１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物および組成物は、ＨＤＡＣの活性に関連した状態を治療するのに有用である。こうした状態としては、例えば以下に記載のものが挙げられる。
【００２２】
近年の報告は、神経分化、記憶形成、薬物中毒、およびうつ病などの中枢神経系（「ＣＮＳ」）機能におけるヒストンアセチル化の重要性を詳述している（Ｃｉｔｒｏｍｅ、Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｂｕｌｌ．２００３年、３７，Ｓｕｐｐｌ．２，７４−８８；Ｊｏｈａｎｎｅｓｓｅｎ、ＣＮＳ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｖ．２００３年、９，１９９−２１６；Ｔｓａｎｋｏｖａら、２００６年、Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．９，５１９−５２５；Ｂｏｕｓｉｇｅｓら、２０１３年、ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ８（３）、ｅ５７８１６）。したがって、一態様では、提供される化合物および組成物は、神経学的障害を治療するのに有用であり得る。神経学的障害の例としては、以下が挙げられる：（ｉ）慢性神経変性疾患、例えば、前頭側頭葉変性症、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、ＦＴＤ−ＧＲＮ、家族性および孤発性筋萎縮性側索硬化症（それぞれ、ＦＡＬＳおよびＡＬＳ）、家族性および孤発性パーキンソン症候群、パーキンソン症候群認知症、ハンチントン病、家族性および孤発性アルツハイマー病、多発性硬化症、筋ジストロフィー症、オリーブ橋小脳萎縮、多系統萎縮症、ウィルソン病、進行性核上性麻痺、びまん性レビー小体病、大脳皮質基底核変性症、進行性家族性間代性筋痙攣、線條体黒質変成症、捻転ジストニー、家族性振戦、ダウン症侯群、ジルドラトゥレット症候群、ハレルフォルデンスパッツ症候群、糖尿病性末梢性ニューロパチー、パンチドランカー、ＡＩＤＳ認知症、年齢関連性認知症、年齢関連性記憶障害、および孤発関連神経変性症、例えば、伝染性海綿状脳症に関連するプリオンタンパク質（ＰｒＰ）に起因するもの（クロイツフェルト−ヤコプ病、ゲルストマン−シュトロイスラー症候群、スクレイピー、およびクールー）、およびシスタチンＣの過剰蓄積によるもの（遺伝性シスタチンＣ血管障害）；ならびに（ｉｉ）外傷性脳損傷などの急性神経変性障害（例えば、手術関連脳外傷）、脳水腫、末梢神経損傷、脊髄外傷、リー病、ギランバレー症候群、リソソーム蓄積症、例えば、脂褐素症、アルパーズ病、不穏下肢症候群、ＣＮＳ逆行変性の結果としての眩暈；慢性アルコール中毒または薬物乱用により生じる症状、例えば、青斑および小脳の神経の逆行変性、薬剤誘発運動疾患；認知機能障害および運動機能障害をもたらす小脳神経および皮質神経の変性などの年齢により生じる症状；ならびに運動機能障害をもたらす基底核神経の変性など慢性アンフェタミン乱用により生じる症状；限局性外傷の結果生じる病理的変化、例えば、卒中、限局性虚血、血管性機能不全、低酸素性虚血性脳障害、過血糖症、低血糖、または直接外傷；治療薬および治療の副作用として生じる病理（例えば、ＮＭＤＡクラスのグルタミン酸受容体の拮抗薬の抗けいれん薬用量に応答した帯状および嗅内皮質ニューロンの変性）、ならびにヴェルニッケ−コルサコフ関連認知症。感覚ニューロンに影響を及ぼす神経学的障害としては、フリードライヒ運動失調症、糖尿病、末梢神経障害、および網膜ニューロン変性が挙げられる。他の神経学的障害としては、神経損傷または脊髄損傷に伴う外傷が挙げられる。辺縁系および皮質系の神経学的障害としては、脳アミロイドーシス、ピック萎縮、およびレット症候群���挙げられる。別の態様では、神経学的障害としては、情動障害および不安症などの気分障害；性格障害および人格障害などの社会的行動障害（ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｏｆ  ｓｏｃｉａｌ  ｂｅｈａｖｉｏｒ）；精神遅滞および認知などの学習、記憶、および知能の障害が挙げられる。このため、一態様において、開示される化合物および組成物は、統合失調症、せん妄、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、分裂−情動精神疾患、アルツハイマー病、血管系認知症、ルービンスタイン−テイビー症候群、うつ病、狂躁、注意欠損障害、薬物依存、認知症、ＢＰＳＤ症状などの認知症、不穏、無関心、不安、精神病、人格異常、双極性障害、一極性感情障害、強迫性障害、摂食障害、外傷後ストレス障害、過敏性、青年期行動障害および脱抑制の治療で有用であり得る。それらはまた、自発性、有毒性、新生物性、外傷後および感染後の耳鳴りおよび嗅覚障害に対しても有用であり得る。
【００２３】
転写は、長期記憶形成のための重要なステップであると考えられる（Ａｌｂｅｒｉｎｉ、２００９年、Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．８９、１２１−１４５）。転写は、ヒストンアセチル化などの、特定のクロマチン修飾によって促進され、特定のクロマチン修飾はヒストン−ＤＮＡ相互作用を調節し（Ｋｏｕｚａｒｉｄｅｓ、２００７、Ｃｅｌｌ、１２８：６９３−７０５）、および転写因子−ＤＮＡ相互作用を調節する。ヒストンアセチル基転移酵素（ＨＡＴ）およびヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）などの修飾酵素は、ヒストンテイルでのアセチル化の状態を調節する。一般に、ヒストンアセチル化は遺伝子発現を促進し、その一方で、ヒストン脱アセチル化は遺伝子サイレンシングをもたらすが、ＨＤＡＣ阻害剤による治療は、特定の遺伝子の発現レベルの上方制御および下方制御の両方をもたらし得る。多数の研究は、効力のあるＨＡＴであるｃＡＭＰ応答エレメント結合タンパク質（ＣＲＥＢ）−結合タンパク質（ＣＢＰ）が長期にわたる形態のシナプス可塑性および長期記憶に必要であることを示している（レビューについては、Ｂａｒｒｅｔｔ、２００８年、Ｌｅａｒｎ  Ｍｅｍ１５：４６０〜４６７を参照されたい）。したがって、一態様では、提供される化合物および組成物は、認知機能を促進しかつ学習および記憶形成を増強するのに有用であり得る。
【００２４】
本明細書に記載の化合物および組成物はまた、真菌性疾患または感染症を治療するためにも使用され得る。
【００２５】
別の態様において、本明細書に記載の化合物および組成物は、卒中、慢性関節リウマチ、エリテマトーデス、潰瘍性大腸炎および外傷性脳損傷などの炎症性疾患を治療するために使用され得る（Ｌｅｏｎｉら、ＰＮＡＳ、９９（５）；２９９５−３０００（２００２年）；Ｓｕｕｒｏｎｅｎら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．８７；４０７−４１６（２００３年）およびＤｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ、１０：１９７−２０４（２００５年）。
【００２６】
さらに別の態様では、本明細書に記載の化合物および組成物は、新生物細胞の増殖によって引き起こされる癌を治療するために使用され得る。こうした癌としては、例えば、固形腫瘍、新生物、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫などが挙げられる。一態様においては、本明細書に記載の化合物および組成物によって治療され得る癌としては、これらに限定されないが、心臓癌、肺癌、胃腸癌、尿生殖路癌、肝癌、神経系癌、婦人科癌、血液癌、皮膚癌、および副腎癌が挙げられる。一態様においては、本明細書に記載の化合物および組成物は、肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫および奇形腫から選択される心臓癌の治療で有用である。別の態様では、本明細書に記載の化合物および組成物は、気管支癌（扁平上皮細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（気管支）癌、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨腫、過誤腫、および中皮腫から選択される肺癌の治療で有用である。一態様では、本明細書に記載の化合物および組成物は、食道（扁平上皮癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌腫、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵（管状腺癌、膵島細胞腺腫、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド、ビポーマ）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、および大腸（腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）から選択される胃腸癌の治療で有用である。一態様では、本明細書に記載の化合物および組成物は、腎（腺癌、ウィルムス腫瘍［腎芽細胞腫］、リンパ腫、白血病）、膀胱および尿道（扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌）、前立腺癌（腺癌、肉腫）、ならびに精巣（精上皮腫、奇形腫、胎生癌、奇形癌腫、絨毛癌、肉腫、間質細胞癌、線維腫、線維腺腫、類腺腫瘍、脂肪腫）から選択される尿生殖路癌の治療で有用である。一態様では、本明細書に記載の化合物および組成物は、肝癌（肝細胞癌）、胆管癌、肝芽細胞腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、および血管腫から選択される肝癌の治療で有用である。
【００２７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網肉腫）、多発（性）骨髄腫、悪性巨細胞腫脊索腫、骨軟骨腫（骨軟骨外骨腫）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液性線維腫、類骨骨腫および巨細胞腫から選択される骨癌を治療することに関する。
【００２８】
一態様では、本明細書に記載の化合物および組成物は、頭蓋骨（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫）、脳（星状細胞腫、髄芽細胞腫、神経膠腫、上衣腫、胚細胞腫［松果体腫］、多形膠芽腫、乏突起膠腫、神経鞘腫、網膜芽腫、先天性腫瘍）、および脊髄（神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）から選択される神経系癌の治療で有用である。
【００２９】
一態様において、本明細書に記載の化合物および組成物は、子宮（子宮内膜癌）、子宮頸癌（ｃｅｒｖｉｘ、ｃｅｒｖｉｃａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腫瘍前頸部異形成）、卵巣（卵巣癌［漿液性嚢胞腺癌、粘液性嚢胞腺癌、未分類癌］、顆粒膜−莢膜細胞腫瘍、セルトリ−ライディッヒ細胞腫、胚細胞腫、悪性奇形腫）、外陰（扁平上皮癌）、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、メラノーマ）、膣（明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫（胎児性横紋筋肉腫）、および卵管（癌腫）から選択される婦人科癌の治療で有用である。
【００３０】
一態様において、本明細書に記載の化合物および組成物は、悪性メラノーマ、基底細胞癌、扁平上皮癌、カルポジ肉腫、異形成母斑（ｍｏｌｅｓ  ｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  ｎｅｖｉ）、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイドおよび乾癬から選択される皮膚癌の治療で有用である。
【００３１】
一態様では、本明細書に記載の化合物および組成物は、神経芽細胞腫から選択される副腎癌の治療で有用である。
【００３２】
一態様において、本明細書に記載の化合物および組成物は、これらに限定されないが、急性白血病、慢性白血病などの白血病、例えば、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）およびヘアリー細胞白血病；リンパ腫、例えば、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、非皮膚末梢Ｔ細胞リンパ腫、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ）関連リンパ腫、例えば、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ）、ホジキン病、および非ホジキンリンパ腫、大細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）；バーキットリンパ腫；中皮腫、中枢神経系（ＣＮＳ）原発リンパ腫；多発性骨髄腫；小児固形腫瘍、例えば、脳腫瘍、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、ウィルムス腫瘍、骨腫瘍、および軟部肉腫、成人の一般的な固形腫瘍、例えば、頭頸部癌（例えば、口腔、喉頭および食道）、泌尿器癌（例えば、前立腺、膀胱、腎、子宮、卵巣、精巣、直腸および大腸）、肺癌、乳癌、膵癌、メラノーマおよび他の皮膚癌、胃癌、脳腫瘍、肝癌、および甲状腺癌などの癌の治療で有用である。
【００３３】
一態様では、本明細書に記載の化合物および組成物は、神経学的障害、記憶または認知障害または機能障害、消去学習障害、真菌性疾患または感染症、炎症性疾患、血液疾患、精神障害、および新生物性疾患から選択される、対象における状態の治療で有用である。別の態様では、本明細書に記載の化合物および組成物は、ａ）アルツハイマー病、ハンチントン病、発作による記憶喪失、統合失調症、ルビンスタインテイビー症候群、レット症候群、脆弱性Ｘ、レビー小体型認知症、血管性認知症、前頭側頭葉変性症（前頭側頭型認知症、ＦＴＤ）、ＦＴＤ−ＧＲＮ、ＡＤＨＤ、失読症、双極性障害、ならびに自閉症、外傷性頭部損傷、注意欠陥障害、不安障害、条件付き恐怖応答、パニック障害、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、恐怖症、社交不安障害、物質依存の回復、加齢関連性記憶障害（ＡＡＭＩ）、加齢関連性認知機能低下（ＡＲＣＤ）、運動失調症、またはパーキンソン病に関連する社会的障害、認知障害および学習障害に関連する認知機能障害または機能障害；ｂ）急性骨髄性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、および鎌状赤血球貧血から選択される血液疾患；ｃ）新生物性疾患；ならびにｄ）恐怖消去および心的外傷後ストレス障害から選択される消去学習障害から選択される症状を治療することにおいて有用である。一態様では、本明細書に記載の化合物および組成物によって治療される状態は、アルツハイマー病、ハンチントン病、前頭側頭型認知症、フリードライヒ失調症、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、パーキンソン病、うつ病、または物質依存の回復である。
【００３４】
一態様では、本開示は、本明細書に記載の化合物もしくは薬学的に許容される塩、またはその組成物の有効量を対象に投与することを含む、本明細書に記載の状態を治療する方法を提供する。
【００３５】
本明細書に記載の状態を治療するための、本明細書に記載の１つ以上の化合物、その薬学的に許容される塩、または提供される組成物の使用も提供される。
【００３６】
本明細書に記載の状態を治療するための医薬品を製造するための、本明細書に記載の１つ以上の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供される。
【００３７】
対象はまた、１つ以上の記載の化合物、または薬学的に許容される塩もしくは組成物による治療の前に、記載の状態の１つ以上に罹患しているように選択されてもよい。
【００３８】
本開示はまた、本明細書に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、薬学的に許容される組成物、および薬学的に許容される担体を提供する。これらの組成物は、上記の状態の１つ以上を治療するために使用され得る。
【００３９】
本明細書に記載の組成物は、経口的に、非経口的に、吸入スプレーにより、局所的に、直腸的に、経鼻的に、頬側的に、経膣的に、または埋め込まれたリザーバーを介して投与され得る。本明細書で使用される「非経口」という用語は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、髄腔内、肝内、病巣内および頭蓋内注射または注入技術を含む。液体剤形、注射用製剤、固体分散剤形、および化合物の局所または経皮投与用の剤形が本明細書に含まれる。
【００４０】
単一剤形の組成物を製造するために担体材料と組み合わされ得る、提供される化合物の量は、治療される患者および特定の投与様式に応じて変わる。いくつかの実施形態において、提供される組成物は、提供される化合物の投薬量０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、例えば０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日などが、これらの組成物を受けている患者に投与され得るように、配合されてよい。
【００４１】
任意の特定の患者のための具体的な用量および治療レジメンは、年齢、体重、全身健康状態、性別、食事、投与時間、排泄速度、薬物の組み合わせ、治療担当医師の判断、および治療される特定の病気の重症度を含む、様々な要因によって異なることもまた理解されたい。組成物中において提供される化合物の量はまた、組成物中の特定の化合物によっても異なる。
【実施例】
【００４２】
例示
【００４３】
スポットを、ＵＶ光（２５４ｎｍおよび３６５ｎｍ）によって可視化した。精製を、シリカゲルを用いてカラムおよびフラッシュクロマトグラフィー（２００〜３００メッシュ）により行った。溶媒系を、溶媒の比率として報告する。
【００４４】
ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ４００（４００ＭＨｚ）分光計で記録した。１Ｈ化学シフトを、内部標準としてテトラメチルシラン（ＴＭＳ、＝０．００ｐｐｍ）を用いてδ値（単位ｐｐｍ）で報告する。例えば、表１に提供されるデータを参照されたい。
【００４５】
ＬＣＭＳスペクトルを、ＥＳＩ（＋）イオン化モードによりＡｇｉｌｅｎｔ１２００シリーズ６１１０または６１２０質量分析計で得た。例えば、表１に提供されるデータを参照されたい。
実施例１
【００４６】
【化２】
0006756925.tif 000003
【００４７】
ＳＭ−Ａの合成。
【００４８】
ジオキサン／Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ／１０ｍＬ）中の６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−アミン（４．５８ｇ、２６．４ｍｍｏｌ）、２，４−ジフルオロフェニルボロン酸（５．００ｇ、３１．７ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（２５．７３ｇ、７９．２ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ２雰囲気下でＰｄ（ＰＰｈ３）４（１．１０ｇ、０．９５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２時間、１００℃で撹拌し、次いで、真空濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に溶解し、溶液をブラインで洗浄（１００ｍＬｘ３）した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、次いで真空濃縮した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝７：１〜５：１）、ＳＭ−Ａ（４．０ｇ、６１％）を黄色の固形物として得た。MS 252.1[M+H]+。
【００４９】
ＳＭ−Ｂの合成。
【００５０】
ピリジン（６０ｍＬ）中のＳＭ−Ａ（４．０グラム、１５．９４ミリモル）の撹拌溶液に、Ｏ℃で、フェニルカルボノクロリデート（７．５０グラム、４７．８１ｍｍｏｌ）を滴下した。添加完了後、混合物を５０℃で４時間攪拌した。混合物を真空濃縮した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＤＣＭ＝３：２〜１：１）、ＳＭ−Ｂ（７．１ｇ、９１％）を黄色の固形物として得た。MS 492.1[M+H]+。
【００５１】
１６７２−１の合成。
【００５２】
反応混合物を氷浴で冷却しながら、ＤＣＭ溶液（１００ｍＬ）中のプロプ−２−イン−１−アミン（５．０ｇ、９０．９ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（１８．４ｇ、１８１．８ｍｍｏｌ）に、（Ｂｏｃ）２Ｏ（２３．８ｇ、１０９．１ｍｍｏｌ）を滴下した。添加完了後、得られた混合物を氷浴から取り出し、次いで室温で１６時間撹拌した。反応完了後、混合物をＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、ブライン（１００ｍＬｘ３）で洗浄し、次いで有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、次いで真空濃縮した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１００：１〜１０：１）、無色油状物として１６７２−１（１０ｇ、７１％）を得たMS 178.3[M+23]+、100.3[M-56]+。
【００５３】
１６７２−２の合成。
【００５４】
ＤＭＦ溶液（２００ｍＬ）中の１６７２−１（１０ｇ、６４．５ｍｍｏｌ）に、氷浴下でＮａＨ（鉱油中６０％）（２．８４ｇ、７１ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。得られた混合物を室温で１時間撹拌した後、３−ブロモプロプ−１−イン（９．２ｇ、７７．４ｍｍｏｌ）を上記混合物に加え、次いで反応混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を水（５００ｍＬ）でクエンチし、次いでｔ−ＢｕＯＭｅ（２５０ｍＬｘ３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２００ｍＬｘ３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した後、真空濃縮した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１００：１〜１０：１）、１６７２−２（１２ｇ、９６％）を黄色油状物として得た。ＭＳ１３８．１［Ｍ−５６］＋。
【００５５】
１６７２−３の合成。
【００５６】
ＤＣＥ溶液（４０ｍＬ）中の２−クロロアセトニトリル（３．１３ｇ、４１．４ｍｍｏｌ）および［Ｃｐ＊ＲｕＣｌ（ｃｏｄ）］（３９４ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）に、ＤＣＥ溶液（８０ｍＬ）中の１６７２−２（４．０ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）を、Ｎ２雰囲気下にて、３０分間かけて滴下した。得られた混合物を１６時間、４０℃で撹拌した。溶媒を真空除去し、残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１〜２：１）で精製して、１６７２−３（２．１ｇ、２２％）をカーキ色の固形物として得た。MS 269.3[M+H]+。
【００５７】
１６７２−４の合成。
【００５８】
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）溶液に、氷浴でＮａＨ（鉱油中６０％）（９４０ｍｇ、２３．５ｍｍｏｌ）を加え、３０分間撹拌した。その後、１６７２−Ｃ（２．１ｇ、７．８ｍｍｏｌ）を上記混合物に添加し、１６時間、３５℃で撹拌した。混合物を水（３０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（１０ｍＬｘ３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬｘ３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した後、真空濃縮した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１００：１〜１０：１）、１６７２−４（１．８ｇ、９４％）を黄褐色の固形物として得た。MS 265.1[M+H]+。
【００５９】
１６７２−５の合成。
【００６０】
氷浴で冷却した、ＤＣＭ溶液（６ｍＬ）中の１６７２−４（１２０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）に、ＴＦＡ（２ｍＬ）を滴下した。得られた反応混合物を室温で１時間撹拌し、その際に溶媒を真空除去して１６７２−５を粗生成物として得、これをさらに精製することなく、次のステップに供した。MS 165.1[M+H]+。
【００６１】
１６７２−６の合成。
【００６２】
ＤＭＳＯ（１０ｍＬ）中の１６７２−５（０．４５ｍｍｏｌ、すぐ前の工程からの粗生成物）およびＳＭ−Ｂ（１５０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎａ２Ｃ３（２５９ｍｇ、３．４４ｍｍｏｌ）を添加し、得られた反応混合物を２時間、２５℃で撹拌した。次いで混合物を水（３０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬｘ３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬｘ３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した後、真空濃縮した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製して（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１００：１〜３０：１）、１６７２−６（１２０ｍｇ、８９％）を黄色の固形物として得た。MS 442.1[M+H]+。
【００６３】
化合物１の合成。
【００６４】
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の１６７２−６（１２０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（１２０ｍｇ）の混合物を、Ｈ２雰囲気下で、室温にて１時間撹拌した。次いで、Ｐｄ／Ｃを、セライトを通して濾過することにより除去した。ろ液を濃縮し、残渣を分取ＴＬＣで精製して（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１５：１）、化合物１（７０ｍｇ、７０％）を黄色の固形物として得た。MS 412.1[M+H]+、434.1[M+23]+。
実施例２
【００６５】
【化３】
0006756925.tif 000004
【００６６】
１５６−Ａの合成。
【００６７】
ジオキサン／Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ／２０ｍＬ）中の６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−アミン（１０．００ｇ、５７．６ｍｍｏｌ）、チオフェン−２−イルボロン酸（８．１２ｇ、６３．４ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（３７．５６ｇ、１１５．２ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ２雰囲気下でＰｄ（ＰＰｈ３）４（２．４４ｇ、２．８８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２時間、９５℃で撹拌し、次いで、真空濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に溶解し、溶液をブラインで洗浄（１００ｍＬｘ３）した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、次いで真空濃縮した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５：１〜３：１）、１５６−Ａ（１０．０ｇ、７９％）を黄色の固形物として得た。
【００６８】
１５６−Ｂの合成。
【００６９】
ピリジン（２０ｍＬ）中の１５６−Ａ（１．３０ｇ、５．８８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、フェニルカルボノクロリデート（２．２９ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）を滴下した。添加完了後、混合物を５０℃に加熱し、４時間撹拌した。次いで混合物を真空濃縮し、残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝８：１〜３：１）、１５６−Ｂ（２．４ｇ、８９％）を黄色の固形物として得た。
【００７０】
２１３−Ａの合成。
【００７１】
ＴＨＦ溶液（１５００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル３−オキソピロリジン−１−カルボキシレート（１５０．０ｇ、８０９．８ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ−ＤＭＡ（２８９．５ｇ、２．４ｍｏｌ）を、１６時間、７０℃で撹拌した。溶液を真空濃縮して２１３−Ａを粗生成物として得、これをさらに精製することなく次の工程で直接使用した。
【００７２】
２１３−Ｂの合成。
【００７３】
ＥｔＯＨ溶液（１０００ｍＬ）中の２１３−Ａ（８０９．８ｍｍｏｌ、すぐ前の工程からの粗生成物）に、Ｅｔ３Ｎ（４０９．７ｇ、４．０ｍｏｌ）およびアセトイミドアミド塩酸塩（３０６．２ｇ、３．２ｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を２４時間、８０℃で撹拌した。混合物を室温に冷却した後、混合物を水（５００ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（５００ｍＬｘ３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５００ｍＬｘ３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した後、真空濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＣＭ＝１０：１〜１：２）、褐色の固形物として２１３−Ｂ（１０５．０ｇ、５５％）を得た。
【００７４】
２１３−Ｃの合成。
【００７５】
ＤＣＭ溶液（１０００ｍＬ）中の２１３−Ｂ（１０５．０ｇ、４４６．３ｍｍｏｌ）に、ＴＦＡ（３３３ｍＬ）を滴下した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、その後溶液を真空濃縮して２１３−Ｃを粗生成物として得、これを次の工程で直接使用した。
【００７６】
２１３−Ｄの合成。
【００７７】
ＤＭＳＯ（７５０ｍＬ）中の２１３−Ｃ（３２５．１ｍｍｏｌ、最終工程からの粗生成物）および１５６−Ｂ（７５．０ｇ、１６２．５ｍｍｏｌ）の混合物を室温で１０分間撹拌し、次いでＮａ２ＣＯ３（１３７．８ｇ、１．３ｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、混合物を水（１０００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬｘ３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５００ｍＬｘ３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した後、真空濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１〜１：２）、２１３−Ｄ（４４．０ｇ、７１％）を黄色の固形物として得た。
【００７８】
化合物２の合成。
【００７９】
ＭｅＯＨ（２５０ｍＬ）およびＤＣＭ（２５０ｍＬ）中の２１３−Ｄ（４４．０ｇ、１１５．１ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（２２．０ｇ）の混合物を、Ｈ２雰囲気下にて、室温で１時間撹拌した。Ｐｄ／Ｃを、セライトを通して濾過することにより除去した。ろ液を真空濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５０：１〜１５：１）、化合物２（２６．０ｇ、６４％）を淡黄色の固形物として得た。
【００８０】
【表１】
0006756925.tif 000005
【００８１】
一般的なアッセイ方法
ＨＤＡＣ２およびＨＤＡＣ１酵素アッセイ
【００８２】
以下は、酵素ＨＤＡＣ２またはＨＤＡＣ１によるペプチド基質の脱アセチル化を測定するためのアッセイプロトコルを記載する。
【００８３】
すべての組換えヒトＨＤＡＣは、ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入した。基質ＦＡＭ−ＴＳＲＨＫ（ＡＣ）ＫＬ−ＣＯＮＨは、ＮａｎｏＳｙｎで合成した。最終アッセイ反応物は、１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、５０ｍＭ  ＫＣｌ、０．１％ＢＳＡ、０．０１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、１％ＤＭＳＯ、１μＭ基質および５ｎＭＨＤＡＣ酵素を含んだ。酵素および化合物は、２５℃で５時間、プレインキュベートし、反応は、基質の添加により開始した。１０μＬの反応物を２５℃で１７時間インキュベートし、１００ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、０．１％のＢＳＡ、０．０１％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００および０．０５％のＳＤＳを含有する４０μＬの緩衝液を添加することによって終結させた。各サンプル中に存在する基質および生成物ペプチドを、ＬａｂＣｈｉｐ３０００キャピラリー電気泳動装置を用いる電気泳動により分離した。基質および生成物ピークの相対蛍光強度の変化は、酵素活性を反映する。反応の進行を、生成物対合計比（ＰＳＲ）：Ｐ／（Ｓ＋Ｐ）として決定し、この式において、Ｐは、生成物ペプチドのピーク高さであり、Ｓは、基質ペプチドのピーク高さである。反応は、１２の濃度にて二連で行った（３０μＭで開始する３ｘ段階希釈）。ＩＣ５０値は、４パラメーターロジスティックモデルを用いて計算した。
ＨＤＡＣ−Ｇｌｏ２基質を用いるＳＹ５Ｙ細胞溶解物中のＨＤＡＣ２酵素阻害アッセイ
細胞培養および阻害剤処置
【００８４】
ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞（Ｓｉｇｍａ）を、１０％ウシ胎児血清およびｐｅｎ／ｓｔｒｅｐを補充したＥａｇｌｅの修正必須培地中で培養した。化合物投与の２４時間前に、２０μＬの細胞を１，５００細胞／ウェルの密度で白色の３８４ウェルプレートに播種した。化合物を純ＤＭＳＯで連続希釈し、次いでＦＢＳを含まない培地で１：１００ｖ／ｖに希釈し混合した。播種した細胞から培地を除去し、無血清培地（１％ｖ／ｖ最終ＤＭＳＯ）中の希釈化合物を添加し、３７℃で５時間インキュベートした。０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含む１０μＬのＨＤＡＣ−Ｇｌｏ２試薬を次に加え、プレートを混合し、室温で１００分間進展させた。次いでプレートを、積分時間０．４秒を用いるＳｐｅｃｔｒａｍａｘ  ＬＭａｘ  ルミノメーターで読み取った。用量反応曲線を、１００μＭでのＣＩ−９９４を１００％阻害と定義しＤＭＳＯ単独を０％阻害と定義する正規化データを用いて構築した。
赤血球および骨髄ＣＦＵアッセイ
【００８５】
化合物を、コロニー形成細胞アッセイを用いて、ヒト赤血球前駆細胞および骨髄前駆細胞に対する潜在的な影響を評価するために試験した。ヒト赤血球（ＣＦＵ−Ｅ、ＢＦＵ−Ｅ）、顆粒球−単球（ＣＦＵ−ＧＭ）および多能性（ＣＦＵ−ＧＥＭＭ）系列のクローン原性前駆体を、ｒｈＩＬ−３（１０ｎｇ／ｍＬ）、ｒｈＧＭ−ＳＣＦ（１０ｎｇ／ｍＬ）、ｒｈＳＣＦ（５０ｎｇ／ｍＬ）、およびＥｐｏ（３Ｕ／ｍＬ）を含有する半固体メチルセルロース系培地配合物中で評価した。
細胞
【００８６】
正常な骨髄（ＮｏｒＣａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）に由来しＲｅａｃｈＢｉｏで認定された正常なヒト骨髄光密度細胞を、アッセイに必要とされるまで液体窒素の気相（−１５２℃）で保存した。実験当日、細胞を急速解凍し、各バイアルの内容物を、１０％ウシ胎児血清（ＩＭＤＭ＋１０％ＦＢＳ）を含む１０ｍＬのＩｓｃｏｖｅの改変ダルベッコ培地で希釈し、遠心分離（約１２００ｒｐｍ、１０分間、室温）により洗浄した。上清を廃棄し、細胞ペレットを既知量のＩＭＤＭ＋１０％ＦＢＳに再懸濁した。細胞数（３％氷酢酸）および生存率評価（トリパンブルー排除試験）を骨髄サンプルに対して実施した。
化合物
【００８７】
実験日に、化合物を１０ｍＭのストック濃度にＤＭＳＯ中で溶解した。段階希釈物をストック濃度から調製して、２ｍＭおよび０．４ｍＭの濃度を達成した。メチルセルロース系培地に１：１０００（ｖ／ｖ）で添加して、１０μＭ、２μＭ、および０．４μＭの最終試験濃度を達成した。さらに、５−ＦＵを、１．０μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬおよび０．０１μｇ／ｍＬで評価した。
方法概要
【００８８】
ヒト赤血球（ＣＦＵ−ＥおよびＢＦＵ−Ｅ）および骨髄（ＣＦＵ−ＧＭ）系列のクローン原性前駆体を、上記のメチルセルロース系培地配合物中に設定した。すべての化合物を培地に添加して、所望の最終濃度（１０μＭ、２μＭ、および０．４μＭ）を得た。５−フルオロウラシル（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を前駆体増殖（コロニー成長の阻害）の陽性対照として使用し、１．０μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ、および０．０１μｇ／ｍＬでヒト骨髄培養物に導入した。溶媒対照培養物（化合物を含まないが、０．１％ＤＭＳＯを含む）ならびに標準対照（化合物もＤＭＳＯも含まない）もまた開始した。
【００８９】
ヒト骨髄前駆体アッセイおよび赤血球前駆体アッセイを、１培養物あたり２．０ｘ１０４細胞で開始した。培養１４日後、骨髄コロニーおよび赤血球コロニーを顕微鏡により評価し、訓練を受けた担当者がスコア付けを行った。コロニーを、サイズおよび形態に基づいて以下のカテゴリーに分けた：ＣＦＵ−Ｅ、ＢＦＵ−Ｅ、ＣＦＵ−ＧＭ、およびＣＦＵ−ＧＥＭＭ。
ＣＦＣ番号の統計分析
【００９０】
３つの複製培養物の平均±１標準偏差を、各カテゴリー（ＣＦＵ−Ｅ、ＢＦＵ−Ｅなど）の前駆細胞について計算した。両側ｔ検定を実施して、溶媒対照培養物と処置された培養物の間に生じたコロニー数の差の有無を評価した。コロニーの計数は主観的である可能性があるため、０．０１未満のｐ値を有意と見なす。各化合物についてコロニー成長の５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を算出するために、用量応答曲線を、ＸＬｆｉｔソフトウェア（ＩＤＢＳ）を用いて対照コロニー増殖の百分率に対する化合物濃度の対数をプロットして作成した。コロニー成長の５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を、用量反応、一部位モデル式を使用するシグモイド曲線フィッティングに基づいて算出した：ｙ＝Ａ＋［（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ））］。上式において、Ａ＝初期値（ベースライン応答）、Ｂ＝最大反応、Ｃ＝中心（ＡとＢの中間の応答を引き起こす薬物濃度）、およびＤ＝中点での曲線の傾き。さらに、プロットおよび追加の用量反応曲線を、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ７．０を使用して作成した。
コロニーの形態学的評価
【００９１】
様々な系列からの代表的な造血前駆体由来のコロニーの写真を撮影し、溶媒対照の存在下でのコロニーおよび試験化合物の存在下でのコロニーを示した。
【００９２】
赤血球（ＣＦＵ−ＥおよびＢＦＵ−Ｅ）、骨髄（ＣＦＵ−ＧＭ）、および多能性（ＣＦＵ−ＧＥＭＭ）コロニーの計数を、訓練された人員によって行った。コロニータイプの分布、ならびに一般的なコロニーおよび細胞形態を分析した。統計分析のために、化合物により処置された培養物中のコロニー数を、溶媒対照培養物と比較した。５−ＦＵを、これらのアッセイで毒性についての陽性対照として使用し、この化合物に関して得られた阻害効果は、まさに予想通りであった。この実験を用いて、メチルセルロース系培地中のヒト赤血球および骨髄前駆細胞の増殖に対する試験化合物の潜在的効果を評価した。ＩＣ５０値を、ＸＬｆｉｔから計算した。赤血球および骨髄毒性の用量応答曲線を、ＸＬｆｉｔにより作成した。最後に、非線形回帰曲線フィッティングおよびＩＣ５０±９５％ＣＩを、Ｐｒｉｓｍ７．０−ＧＥＭＭによって算出した。
ＣＹＰ阻害アッセイ
【００９３】
化合物を、ヒト肝ミクロソームを用いてＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ３Ａ４（ミダゾラム）に対するそれらの阻害能力を評価するために試験した。ヒト肝ミクロソームをＢＤ  Ｇｅｎｔｅｓｔから入手し、各化合物を二連で行った。
【００９４】
試験化合物および参照阻害剤（２Ｄ６についてはキニジン、３Ａ４についてはケトコナゾール）を、ＤＭＳＯ中の８μＬの１０ｍＭストック化合物溶液を１２μＬのアセトニトリルに移すことによって９６ウェルプレートに播種した。個々の阻害剤スパイク溶液を、ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ３Ａ４用（１２μＬのアセトニトリルに加えた８μＬのＤＭＳＯストック）に調製した。次に０．２ｍｇ／ｍＬのＨＬＭの４００μＬをアッセイウェルに添加し、次いで４００ｘ試験化合物２μＬを氷上で指定されたウェルに添加した。次に、２００μＬの０．２ｍｇ／ｍＬＨＬＭをアッセイウェルに添加し、次いで１μＬの参照阻害剤溶液を指定のウェルに添加した。以下の溶液を、氷上の９６ウェルアッセイプレートに（二重に）加えた：試験化合物および参照阻害剤（２Ｄ６についてはキニジン、３Ａ４についてはケトコナゾール）を、以下の実験手順を用いて試験した：
１．試験化合物および参照阻害剤（４００倍）を９６ウェルプレート中に準備する。
１．１．８μＬの１０μＭ試験化合物を１２μＬのＡＣＮに移す。
１．２．ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｄ６用の個々の阻害剤スパイク溶液を調製する：８μＬのＤＭＳＯストック対１２μＬのＡＣＮ。
２．４ｘＮＡＤＰＨ補因子（１０ｍＬの０．１ＭＫ緩衝液中の６６．７ｍｇのＮＡＤＰＨ、ｐＨ７．４）を調製する。
３．４ｘ基質（各アイソフォームにつき２ｍＬ）を、以下の表に示すように調製する（必要に応じて、氷上でＨＬＭを添加する）。
４．０．２ｍｇ／ｍＬのＨＬＭ溶液（９９０μＬの０．１ＭＫ緩衝液に１０μＬの２０ｍｇ／ｍＬ）を氷上で調製する。
５．４００μＬの０．２ｍｇ／ｍＬ  ＨＬＭをアッセイウェルに添加し、次いで２μＬの４００ｘ試験化合物を、氷上で指定されたウェルに添加する。
６．２００μＬの０．２ｍｇ／ｍＬのＨＬＭをアッセイウェルに添加し、次いで１μＬの参照阻害剤溶液を、氷上で指定のウェルに添加する。
７．以下の溶液を、氷上で９６ウェルアッセイプレートに加える（二重に）：
７．１．０．２ｍｇ／ｍＬのＨＬＭ溶液中の３０μＬの２ｘ試験化合物および参照化合物を添加する。
７．２．１５μＬの４ｘ基質溶液を加える。
８．９６ウェルアッセイプレートおよびＮＡＤＰＨ溶液を３７℃で５分間プレインキュベートする。
９．１５μＬの予熱した８ｍＭＮＡＤＰＨ溶液をアッセイプレートに加えて反応を開始する。
１０．アッセイプレートを３７℃で、３Ａ４では５分間、２Ｄ６では１０分間、インキュベートする。
１１．反応を、内部標準液を含む１２０μＬのＡＣＮを加えて停止させる。ＣＹＰ３Ａ４の場合、内部標準液は、１‘ＯＨ−ミダゾラム−Ｄ４である（１００μＬの内部標準ストックを１０ｍＬ  ＡＣＮに添加することによって、１０μＭの溶液を０．１μＭの最終濃度に希釈する）。ＣＹＰ２Ｄ６の場合、内部標準液は、１−ＯＨ−ブフラロールマレイン酸−［Ｄ９］である（２０μＬの内部標準ストックを１０ｍＬ  ＡＣＮに添加することによって、４９μＭ溶液を０．１μＭの最終濃度に希釈する）。
１２．クエンチ後、プレートをバイブレーター（ＩＫＡ、ＭＴＳ２／４）で１０分間振盪し（６００ｒｐｍ／分）、次いで５５９４ｇで１５分間遠心分離する（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｍｕｌｔｉｆｕｇｅｘ３Ｒ）。
１３．各ウェルからの５０μＬの上清を、ＬＣ／ＭＳ分析のために５０μＬの超純水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＺＭＱＳ５０Ｆ０１）を含む９６ウェルサンプルプレートに移す。
【００９５】
ＣＹＰアイソフォーム阻害に関する評価は、アッセイ結果に基づいて以下のとおりである：ＣＹＰ阻害の割合が５０％より高い場合、強力な阻害を示す。ＣＹＰ阻害の割合が３０〜５０％である場合、わずかな阻害を示す。ＣＹＰ阻害の割合が３０％未満である場合、わずかな阻害であること、または全く阻害がないことを示す。ＣＹＰ阻害の割合が約３０％未満である場合、化合物がこのアイソフォームのある種の活性化を有し得ることを示す。
水性動的溶解度測定
【００９６】
化合物を、緩衝液中または水中でのそれらの動的溶解度について評価した。８μＬの参照化合物ストック溶液および試験化合物ストック溶液（ＤＭＳＯ中１０ｍＭ）のアリコートを、７９２μＬの１００ｍＭリン酸緩衝液（０．１ＭＮａＰＯ４、ｐＨ７．４）に添加した。最終ＤＭＳＯ濃度は１％である。試料管を室温で１時間振盪した（１０００ｒｐｍ）。検量線を、ＭｅＯＨ／ＡＣＮ（４：１）中の３００μＭスパイク溶液（ＳＳ）を用いて作成した（ＳＳ＝１９４μＬのＭｅＯＨ／ＡＣＮ（４：１）に６μＬの１０ｍＭ化合物を加える）。サンプルを１０分間（１２０００ｒｐｍ）遠心分離して、未溶解粒子を沈殿させ、上清を新しいチューブまたはプレートに移した。上清を１００ｍＭ緩衝液で１０倍および１００倍希釈した。サンプルを次いで、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる分析用に調製した（５μＬの化合物サンプル（未希釈、１０倍希釈および１００倍希釈）および標準曲線サンプルを、内部標準を含む９５μＬのＡＣＮに添加する）。使用される内部標準液は、プロプラノロール、ケトコナゾール、およびタモキシフェンである。
マウスへの静脈内（ＩＶ）および経口（ＰＯ）投与後の化合物に対する脳および血漿の曝露の評価
【００９７】
化合物をマウスに、１０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇＰＯのいずれかで投与し、１ｍｇ／ｋｇＩＶで投与した。３匹の動物において、血漿について、０．２５時間、０．５時間、１時間、４時間、１２時間および２４時間での出血により、各時点で採集する。０．２５時間、０．５時間、１時間、４時間、１２時間および２４時間での血漿の最終出血および脳のサンプリング（また、脳曝露時点群ごとに３匹の動物）。血漿については合計６時点、脳については合計６時点。
【００９８】
サンプルの収集：
【００９９】
血漿：動物を、指定された時点にて手動で拘束し、約１５０μＬ血液／時点を、イソフルランを用いる麻酔下で後眼窩穿刺または心臓穿刺によりＫ２ＥＤＴＡチューブに集めた。血液サンプルを採血後３０分以内に遠心分離（２０００ｇ、４℃、５分）して血漿を生成した。
【０１００】
脳：指定された時点で、動物の頭皮に正中線切開を施し、皮膚を収縮させた。小型骨カッタおよび骨鉗子を用いて、脳を覆っている頭蓋骨を取り外した。スパチュラを使用して脳を取り除き、冷たい生理食塩水ですすぐ。スクリュートップチューブ中に脳を置き、そのチューブを、分析まで−７０℃で保存した。
化合物１および２の特定の利点
【０１０１】
創薬の観点からは、化合物が、様々なパラメータにわたり許容できる薬物様プロファイルを有することが重要である。インビトロ効力のみでなく、インビトロでの予測吸収、分布、排泄および代謝（ＡＤＭＥ）研究およびインビボでの薬物動態（ＰＫ）実験において、化合物をプロファイリングすることが典型的である。場合によっては、化合物は、予測的インビトロ安全性試験でもプロファイルされる。ＰＫデータとともに、インビトロＡＤＭＥおよび安全性データを収集することは、特定の構造的特徴の利点を識別するのに役立ち、かつインビボでのプロファイリングのために最適化された薬物様プロファイルを有する化合物を設計するための構造活性相関（ＳＡＲ）の最適化を可能にする。本化合物は、血液学的安全性において利点を提供するのみでなく、効力、ＡＤＭＥおよびＰＫプロファイルの全体的なバランスも提供する。
【０１０２】
表２の比較例Ａおよび比較例Ｂなどのアミノアニリン尿素化合物は、これまでに国際公開第２０１７／００７７５５号、および国際公開第２０１７／００７７５６号に記載された（これらの各々の内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。ヒト骨髄細胞のインビトロコロニー形成単位（ＣＦＵ）アッセイにおいてスクリーニングし、赤血球および骨髄前駆細胞を観察し（好中球減少症の予測）、かつマッチドペアアミノピリジン尿素化合物比較例Ｂと比較した場合、比較例Ｂのジアミノピリジン尿素コアにおける単一原子の変化は、比較例Ａのアミノアニリン足場の尿素と比較して、赤血球系列および骨髄系列の両方において予測される安全性の有意な改善をもたらす。表２を参照されたい。先に進むと、比較例Ｂの４−フルオロフェニル基がチオフェン基に置換される（比較例Ｃ）が、尿素のピロロピラジン成分は同じに保たれる場合、アミノアニリン尿素比較例Ａと比較して、予測安全性プロファイルにおいて同様の改善が達成される。これは、同一のピロリジン尿素成分を有するジアミノピリジン化合物の尿素が、対応するアミノアニリン尿素より安全であることを証明する。
【０１０３】
ピロロピラジン尿素化合物、比較例Ｂおよび比較例Ｃは、インビトロ効力アッセイにおいて良好な効力を示したが、インビトロＣＦＵアッセイからの値は、依然として改善を必要とする。骨髄系列のＩＣ５０＞５μＭ（１０μＭでの残存率＞３０％にほぼ相当）は、臨床的好中球減少症の低い可能性を予測し、したがって許容される安全性の目標閾値である（参考文献：Ｐｅｓｓｉｎａら、Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２００３年、７５、３５５−３６７；Ｃｌａｒｋｅら、Ｇｅｎ．Ｅｎｇ．＆Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｎｅｗｓ  ２０１０年、１４−１５）。ピロロピラジンをピロロピリミジンに変えることによって、有意に改善されたインビトロ安全性プロファイルが達成されることが見出された。マッチドペア比較例Ｂ（ピロロピラジン）を比較例Ｄ（ピロロピリミジン）と比較すると、ＣＦＵ赤血球および骨髄前駆細胞の両方において有意な改善が観察される。これはまた、チオフェンフットポケット、比較例Ｃ（ピロロピラジン）および比較例Ｅ（ピロロピリミジン）を有するアミノピリジン尿素マッチドペアについても当てはまる。ピリミジンは改善された安全性プロファイルをもたらしたが、非置換ピリミジン化合物比較例Ｄおよび比較例Ｅは両方とも、１０μＭでＣＹＰ２Ｄ６の有意な阻害を示した。しかし、窒素原子間の位置でピリミジン環を置換しても、化合物２（メチル置換ピロロピリミジン）は、１０μＭでＣＹＰ２Ｄ６またはＣＹＰ３Ａ４のいずれの有意な阻害も示さなかった。
【０１０４】
これらの結果は、比較例ＢおよびＤにおいて窒素原子をある環上の１つの位置に移動させることおよび水素をメチルに置換すること（比較例Ｅおよび化合物２）などの、わずかな化学修飾が、劇的な安全性の上昇をもたらすことを証明する。
【０１０５】
【表２】
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【０１０６】
ピロロピリミジン化合物のＣＹＰ阻害プロファイルを改善するピリミジン窒素原子間の置換に加えて、化合物２のＰＫプロファイルもまた非置換比較例Ｅと比較して、改善される。表３を参照されたい。化合物２のメチル−ピリミジンは、非置換ピリミジン類似体よりも明らかなＰＫ利益を提供し、より長い半減期、より低いクリアランス、より高いバイオアベイラビリティ、および５倍を超えるより高い脳曝露を示す。これらの結果は、わずかな化学的修飾はまたＰＫに実質的な利益をもたらすことを証明する。
【０１０７】
【表３】
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【０１０８】
同様の利点が、ジアミノピリジンのピロロピリジン尿素に対する位置異性体および置換パターンの効果を調査することによって得られた。例えば、ピロロピリジン化合物比較例Ｆは、良好なインビトロ効力を示し、一方でそれは高レベルのＣＹＰ２Ｄ６阻害および極めて低い溶解度を示した。表４を参照されたい。ピロロピリジンのピリジン窒素を移動させること（比較例Ｇ）は、溶解度を改善することが判明した。しかし、ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ３Ａ４の両方は、高いレベルで阻害された。ピロロピリジンのピリジン窒素に隣接するメチル置換基を追加することは、効力および溶解性を維持しながら、ＣＹＰ阻害プロファイルを２Ｄ６および３Ａ４に向かって若干改善することが見出された（比較例Ｈ）。ピリジン窒素に隣接する電子求引性メトキシメチル置換（比較例Ｈ）は、ＣＹＰ２Ｄ６および３Ａ４阻害プロファイルをさらにより改善し、ここでも望ましい効力および溶解度プロファイルを維持した。同様の結果が、比較例Ｉおよび化合物１のモノフルオロおよびジ−フルオロ類似体の間に見出され、化合物１はわずかに減少した溶解度を示した。表４を参照されたい。
【０１０９】
しかし、化合物１は、ハロゲン原子が一つ異なるのみであるにもかかわらず、インビトロでの安全性について比較例Ｉをはるかに上回った。表５を参照されたい。有意な利益が、比較例Ｉと比較して、２，４−ジフルオロ置換化合物１で処置すると、赤血球前駆細胞系列および骨髄性前駆細胞系列の両方において実現された。
【０１１０】
【表４】
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【０１１１】
【表５】
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【０１１２】
下記の表６は、マウスにおける化合物の静脈内（ＩＶ）および経口（ＰＯ）投与後の脳および血漿曝露からの結果を示す。
【０１１３】
【表６】
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【０１１４】
野生型マウスの背側海馬（ＣＡ１）における樹状突起棘形態に及ぼす低用量化合物による１４日間の経口処置の影響
【０１１５】
化合物を、亜慢性処置が野生型（ＷＴ）マウスの背側海馬のＣＡ１領域において樹状突起棘形態の変化を生じ得るかを決定するために、評価した。化合物を、野生型マウスに１４日間毎日経口投与した。用量を、薬物動態学的データ、脳への曝露、および効力に基づいて選択した。背側海馬のＣＡ１領域における樹状突起棘形態に対する化合物処置の効果を次いで評価した。
方法：生存中
【０１１６】
雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（７〜８週齢、ｎ＝７／群）に、１４日間毎日ロダン化合物またはビヒクル（２０％ＨＰβＣＤ）を経口投与した。化合物の用量を、薬物動態実験の曝露データに基づいて選択した。いくつかの化合物の用量を選択して、化合物２（用量１、３、６および２０ｍｇ／ｋｇ／日）、化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ／日）での処置後の樹状突起棘密度の増加を示す初期の研究の延長として、非有効用量を決定した。マウスを最後の投与から２４時間後に屠殺し、脳サンプルの調製のために経心的灌流を行った。
灌流および脳サンプリング方法
【０１１７】
マウスを抱水クロラール（生理食塩水中４％抱水クロラール、１０ｍｌ／ｋｇ）で麻酔し、その後１ｘＰＢＳ（ｐＨ７．４、室温）中の４％ＰＦＡで、２０ｍＬ／分にて５４秒間、経心的灌流を行った。灌流直後に、マウスを断頭し、それらの脳を摘出した。脳を、４％ＰＦＡ（５〜１０ｍｌ）の入ったシンチレーションバイアル中で４分間後固定した。脳を、組織ビブラトーム（ＬｅｉｃａＶＴ１０００）を用いて切片化して、各脳の前端から後端までの切片（厚さ３００μｍ）を収集した。
Ｂａｌｌｉｓｔｉｃ染料標識および顕微鏡
【０１１８】
超解像レーザー走査共焦点顕微鏡検査（ＺｅｉｓｓＬＳＭ８８０、Ａｉｒｙｓｃａｎ）を、６３Ｘ対物レンズ（１．４２ＮＡ）を用いて行って、個々に標識されたニューロンを高分解能で走査した（走査分解能＝０．０６μｍ／ピクセル；軸分解能＝０．０６μｍ／焦点ステップ）。標的ニューロンを、解剖学的位置および細胞形態を用いる落射蛍光ナビゲーションによって目的の脳領域で同定した。顕微鏡検査を、実験条件に対してブラインドで行った。最低７匹のマウスを各実験条件において試験した。マウス１匹あたり最小５つのサンプル（範囲＝５〜６）を、各切片について測定した。
ＥＳＰ樹状突起スパイン解析および樹状膜の完全性の評価。
【０１１９】
ブラインドデコンボリューション（ＡｕｔｏＱｕａｎｔ）を三次元生デジタル画像に適用し、それを次いで、訓練を受けた分析者が棘密度および形態について分析した。個々の棘を、特注のＡｆｒａｘｉｓＥＳＰソフトウェアを使用して画像Ｚスタックから（ａ）頭部直径、（ｂ）長さ、および（ｃ）首の太さについて手動で測定した。各樹状突起を、３名（平均）の各分析者によって分析した。自動画像割り当てソフトウェアが無作為化様式で分析者に画像を配布し、各分析者が各群あたりほぼ同数の樹状突起の測定を実行することを確実にした。分析者を、すべての実験条件（治療、脳領域、細胞型など）に対してブラインドにした。各樹状突起についての分析者間のばらつきの統計分析をオンラインで調査し、分析者間信頼性基準を満たしていない樹状突起を排除するために使用した。棘密度および棘形態学的分類について、分析者らのデータを平均して、各樹状突起のデータとして報告した。
樹状サンプリング位置：
ｄＨＩＰＰ、ＣＡ１アピカル２°（０〜５０μｍ）：
脳領域：背側海馬（ｄＨＩＰＰ）
細胞型：ＣＡ１錐体ニューロン（ＣＡ１）
分枝の種類：アピカル
分岐次数：二次（２°）
サンプル位置：分岐点から０〜５０μｍ
【０１２０】
同定された各樹状突起棘を、（ａ）棘長、（ｂ）棘頭部直径、および（ｃ）頸部幅について測定した。各測定値の母集団分布を、各樹状サンプルについてまとめ、グループごとにプールした。生の樹状突起棘形態計測値（棘長、頭部直径、頸部幅）を、古典的な棘の表現型（例えば、きのこ型、隆起型（ｓｔｕｂｂｙ）など）を記述するために使用されるスキームにまとめた。総棘密度もまた、すべてのサブクラスの密度の合計として報告した。
結果：
【０１２１】
一般的な観察。組織処理は、試験した脳領域内の体細胞膜の異常な破壊、樹状突起状突起、または標的細胞型または他の細胞型の樹状突起直径の異常な修正を含む、観察可能な病理学的徴候を示さなかった。比較を研究するための適切な研究のために、全棘密度データをビヒクルレベル％に対して正規化した。
１）％ビヒクル＝（（棘密度またはＳＶ２Ａ点））／（平均ビヒクル棘密度またはＳＶ２Ａ点）ｘ１００
データを次いで、全棘密度の平均＋／−ＳＥＭ（ビヒクルからの増加％）として報告した。結果を表７に報告する。
【０１２２】
【表７】
0006756925.tif 000011
【０１２３】
本出願全体において引用されたすべての参考文献（参考文献、発行された特許、公開特許出願、および同時係属中の特許出願など）の内容は、参照によりその全体が本明細書に明確に組み込まれる。他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術的および科学的用語は、当業者に一般的に知られている意味に一致する。
発明の態様
［態様１］次式の化合物：
【化４】
0006756925.tif 000012
またはその薬学的に許容される塩。
［態様２］態様１記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む組成物。
［態様３］対象においてＨＤＡＣ活性を阻害する方法であって、有効量の態様１に記載の化合物もしくはその薬学的に許容される塩、または態様２に記載の組成物をそれを必要とする前記対象に投与する工程を含む、方法。
［態様４］神経学的障害、記憶もしくは認知機能障害または機能障害、学習消去障害、真菌性疾患もしくは感染、炎症性疾患、血液疾患、精神障害、および新生物性疾患から選択される対象における状態を治療する方法であって、有効量の態様１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、または態様２に記載の組成物をそれを必要とする前記対象に投与することを含む、方法。
［態様５］前記状態が、
ａ．アルツハイマー病、ハンチントン病、発作による記憶喪失、統合失調症、ルビンスタインテイビー症候群、レット症候群、うつ病、脆弱性Ｘ、レビー小体型認知症、血管性認知症、前頭側頭葉変性症（前頭側頭型認知症、ＦＴＤ）、ＦＴＤ−ＧＲＮ、ＡＤＨＤ、失読症、双極性障害ならびに自閉症、外傷性頭部損傷、注意欠陥障害、不安障害、条件付き恐怖応答、パニック障害、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、恐怖症、社交不安障害、物質依存の回復、加齢関連性記憶障害（ＡＡＭＩ）、加齢関連性認知機能低下（ＡＲＣＤ）、運動失調症、パーキンソン病、もしくはパーキンソン病型認知症に関連する社会的障害、認知障害および学習障害に関連する認知機能障害または機能障害；または
ｂ．急性骨髄性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、および鎌状赤血球貧血から選択される血液疾患；または
ｃ．新生物性疾患；または
ｄ．恐怖消去および心的外傷後ストレス障害から選択される学習消去障害
である、態様４に記載の方法。
［態様６］前記状態が、アルツハイマー病、ハンチントン病、前頭側頭型認知症、フリードライヒ失調症、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、パーキンソン病、または物質依存の回復である、態様５に記載の方法。