(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
５つの、同一でないオーバーラップＴ細胞受容体γ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）ペプチドを含む組成物であって、該５つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドのアミノ酸配列は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８および配列番号９からなる、組成物。
【請求項２】
配列番号３からなるＴＡＲＰペプチドおよび配列番号４からなるＴＡＲＰペプチドを更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
薬学的に許容可能なキャリアを更に含む、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
アジュバントを更に含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＴＡＲＰペプチドを用いて負荷した抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記ＡＰＣは、樹状細胞である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
単位用量形態である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記ＴＡＲＰペプチドの凍結乾燥粉末を含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
被験体において免疫応答を誘発するための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物であって、該組成物の治療的有効量が該被験体へ投与され、それによって該被験体において免疫応答を誘発することを特徴とする、組成物。
【請求項１０】
前記免疫応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答、または両方を含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記免疫応答は、抗ＴＡＲＰ抗体応答を含む、請求項９または請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記被験体は、前立腺がん、乳がんまたは中皮腫を有する、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記免疫応答は、前記前立腺がん、乳がんまたは中皮腫の成長を阻害する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前立腺がん、乳がんまたは中皮腫を有する被験体を処置するための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物であって、該被験体が、ＴＡＲＰを発現する前立腺がん、乳がんまたは中皮腫を有し、該組成物の治療的有効量が、該被験体へ投与され、それによって該被験体を処置することを特徴とする、組成物。
【請求項１５】
前記組成物は、前記ＴＡＲＰペプチドを用いて負荷したＡＰＣを含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ＡＰＣは、樹状細胞である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ＡＰＣは、自家である、請求項１５または請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物の前記治療的有効量は、約１×１０６〜約３０×１０６の生存しているＡＰＣを含む、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物の前記治療的有効量は、約２０×１０６の生存しているＡＰＣを含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物が、皮内に投与されることを特徴とする、請求項１４〜１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記組成物が、静脈内、筋肉内または皮下に投与されることを特徴とする、請求項１４〜１９のいずれかに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連する出願への相互参照
本出願は、２０１３年１２月１３日に出願された米国仮出願第６１／９１５，９４８号の利益を主張し、その全体は、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
分野
本開示は、Ｔ細胞受容体γ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）ペプチド、およびＴＡＲＰ発現腫瘍細胞などのＴＡＲＰ発現細胞に対する免疫応答を刺激するためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
歴史的に、５つの区分のがん抗原が、免疫治療において利用されている：変異抗原（例えば、ｐ５３またはＲＡＳ）、過剰発現自己抗原（例えば、ＨＥＲ２／ｎｅｕまたはＭＵＣ−１）、分化抗原（例えば、ｇｐ１００、チロシナーゼ）、がん精巣抗原（例えば、ＭＡＧＥ、ＢＡＧＥまたはＣＡＧＥファミリー、ＮＹ−ＥＳＯ−１）およびウイルス抗原（例えば、ＨＰＶ１６Ｅ６またはＥ７、ＥＢＶ）（Ｃｈｅｅｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃ  Ｒｅｓ  １５：５３２３−５３３７，２００９）。タンパク質およびペプチドを利用する治療用がんワクチンの利点としては、生産の容易さならびに重大な安全性および規制上の課題が比較的存在しないことが挙げられる。
【０００４】
主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子を発現する全細胞は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または慢性的な持続する感染が悪性腫瘍の成長に関係しているウイルス（例えば、ヒト乳頭腫ウイルス、肝炎Ｂウイルスおよび肝炎Ｃウイルス）由来の短いペプチド（９−１１ｍｅｒ）を提示することができる。しかしながら、Ｔ細胞刺激および持続する効力の誘導に必須な共刺激シグナルならびに効果的な免疫応答は、特異的なＴ細胞補助の誘導の欠如のため、しばしばなくなっており、これは、樹状細胞（ＤＣ）を通じた適切なヘルパーＴ細胞媒介性シグナリングの欠如によって引き起こされる、準最適かつ一時的なＣＤ８＋  Ｔ細胞応答をもたらす（Ｚｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１４：１７７−２０１，２０１２）。加えて、拘束されたＭＨＣクラスＩ結合ペプチドを用いたワクチン接種は、腫瘍を制御する免疫よりむしろペプチド特異的な寛容の誘導に関係し得る（Ｔｏｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５６：３９１１−３９１８，１９９６；Ｔｏｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９３：７８５５−７８６０，１９９６）。更に、任意の所定のワクチンプラットフォーム内での限られた数のペプチドの使用は、免疫エスケープの発展を可能にし得る。治療用がんワクチン研究における最近の発展としては、ＴＡＡ合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）の使用（Ｑｕａｋｋｅｌａａｒ  ａｎｄ  Ｍｅｌｉｅｆ，Ａｄｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１４：７７−１０６，２０１２）、ならびにオーバーラップおよび／またはマルチエピトープペプチドワクチンの使用（Ｗａｌｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  １８：１２５４−１２６１，２０１２）が挙げられる。ＳＬＰは、２０〜５０アミノ酸の合成ペプチドであり、この長さのため、ＤＣによる内在化およびプロセシングを必要とする。臨床研究下のマルチエピトープペプチドがんワクチンプラットフォームの例としては、葉酸受容体アルファ（ＮＣＴ０１６０６２４１）ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（（ＮＣＴ０１６３２３３２、ＮＣＴ００２６６１１０、ＮＣＴ０００８８９８５）ペプチドおよびメラノーマ（ＮＣＴＩ００５８００６０、ＮＣＴ０００７１９８１、ＮＣＴ００４７１４７１、ＮＣＴ００７０５６４０、ＮＣＴＩ０００８５１３７）のペプチドを使用するワクチンプラットフォームが挙げられる。
【０００５】
ＴＡＲＰ（Ｔ細胞受容体γ代替リーディングフレームタンパク質）は、発現配列データベースを使用して同定された、５８アミノ酸タンパク質である（Ｍａｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７９：２４５６１−２４５６８，２００４）。そのｍＲＮＡは、ＴＣＲγのＪγ１エキソンにおいて開始され、そして発現されるタンパク質は、ＴＣＲγをコード配列のリーディングフレームとは別個の代替的なリーディングフレームにおいて開始される。先行研究では、ＴＡＲＰが、原発性前立腺がんと同様に転移性前立腺がんにおいてより高く発現すること；ＴＡＲＰが、グリーソンパターンの範囲で、前立腺がんにおいて発現すること；およびホルモン感受性前立腺がんと去勢抵抗性前立腺がんとの両方において発現することが示されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｃｈｅｅｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃ  Ｒｅｓ  １５：５３２３−５３３７，２００９
【非特許文献２】Ｚｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１４：１７７−２０１，２０１２
【非特許文献３】Ｔｏｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５６：３９１１−３９１８，１９９６
【非特許文献４】Ｔｏｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９３：７８５５−７８６０，１９９６
【非特許文献５】Ｑｕａｋｋｅｌａａｒ  ａｎｄ  Ｍｅｌｉｅｆ，Ａｄｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１４：７７−１０６，２０１２
【非特許文献６】Ｗａｌｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  １８：１２５４−１２６１，２０１２
【非特許文献７】Ｍａｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７９：２４５６１−２４５６８，２００４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
概要
本明細書中で提供されるのは、免疫原性ＴＡＲＰペプチドを含む組成物、およびＴＡＲＰを発現するがんの処置のためなどに、被験体において免疫応答を誘発するためのそれらの使用である。
【０００８】
いくつかの実施形態において、組成物は、少なくとも２つの同一でないオーバーラップＴＡＲＰペプチドを包含し、その少なくとも２つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドのアミノ酸配列は、配列番号１または配列番号２の１５〜２５の連続するアミノ酸配列からなり、かつその少なくとも２つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドのそれぞれは、別のオーバーラップＴＡＲＰペプチドと同一の５〜１５の連続するアミノ酸を含む。いくつかの例において、組成物は、３つ、４つ、５つ、６つまたは７つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドを包含する。１つの非限定的な実施形態において、組成物は、５つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドを含み、その５つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドのアミノ酸配列は、配列番号１の１８〜２０の連続するアミノ酸からなり、かつその５つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドのそれぞれは、少なくとも１つの他のオーバーラップＴＡＲＰペプチドと同一の１０の連続するアミノ酸を含み、かつその５つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドの組み合わせは、配列番号１の全５８アミノ酸を含む。いくつかの例において、組成物は、配列番号３および配列番号４のＴＡＲＰペプチドを更に含む。
【０００９】
いくつかの実施形態において、組成物は、ＴＡＲＰペプチドを用いて負荷した、樹状細胞などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、薬学的に許容可能なキャリアおよび／またはアジュバントを含む。
【００１０】
また提供されるのは、本明細書中に開示されるＴＡＲＰペプチド組成物の治療的有効量を被験体へ投与することによって、被験体において免疫応答を誘発する方法である。
【００１１】
更に提供されるのは、ＴＡＲＰを発現する前立腺がん、乳がんまたは中皮腫などの、ＴＡＲＰを発現するがんを有する被験体を選択すること、および本明細書中に開示されるＴＡＲＰペプチド組成物の治療的有効量を被験体へ投与することを含む、前立腺がん、乳がんまたは中皮腫などのＴＡＲＰを発現するがんを有する被験体を処置する方法である。いくつかの実施形態において、被験体は、ＴＡＲＰペプチドを用いて負荷したＡＰＣを投与される。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
少なくとも２つの、同一でないオーバーラップＴ細胞受容体γ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）ペプチドを含む組成物であって、該少なくとも２つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドのアミノ酸配列は、配列番号１または配列番号２の、１５〜２５の連続するアミノ酸からなり、該少なくとも２つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドのそれぞれは、少なくとも別のオーバーラップＴＡＲＰペプチドと同一の、５〜１５の連続するアミノ酸を含む、組成物。
（項目２）
３つ、４つ、５つ、６つまたは７つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドを含む、項目１に記載の組成物。
（項目３）
５つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドを含む項目１または項目２に記載の組成物であって、前記５つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドのアミノ酸配列は、配列番号１の、１８〜２０の連続するアミノ酸からなり、該５つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドのそれぞれは、少なくとも１つの他のオーバーラップＴＡＲＰペプチドと同一の、１０の連続するアミノ酸を含む、組成物。
（項目４）
前記５つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドの組み合わせは、配列番号１の全５８アミノ酸を含む、項目３に記載の組成物。
（項目５）
前記少なくとも２つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドは、それぞれ配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８および配列番号９から選択される、異なるアミノ酸配列からなる、項目１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目６）
配列番号３からなるＴＡＲＰペプチドおよび配列番号４からなるＴＡＲＰペプチドを更に含む、項目１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
（項目７）
配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８および配列番号９のＴＡＲＰペプチドを含む、項目６に記載の組成物。
（項目８）
薬学的に許容可能なキャリアを更に含む、項目１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
（項目９）
アジュバントを更に含む、項目１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１０）
前記ＴＡＲＰペプチドを用いて負荷した抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む、項目１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１１）
前記ＡＰＣは、樹状細胞である、項目１０に記載の組成物。
（項目１２）
単位用量形態である、項目１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１３）
前記ＴＡＲＰペプチドの凍結乾燥粉末を含む、項目１２に記載の組成物。
（項目１４）
被験体において免疫応答を誘発する方法であって、項目１〜１３のいずれか１項に記載の組成物の治療的有効量を該被験体へ投与することを含み、それによって該被験体において免疫応答を誘発する、方法。
（項目１５）
前記免疫応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答、または両方を含む、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記免疫応答は、抗ＴＡＲＰ抗体応答を含む、項目１４または項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記被験体は、前立腺がん、乳がんまたは中皮腫を有する、項目１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
前記免疫応答は、前記前立腺がん、乳がんまたは中皮腫の成長を阻害する、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前立腺がん、乳がんまたは中皮腫を有する被験体を処置する方法であって、ＴＡＲＰを発現する前立腺がん、乳がんまたは中皮腫を有する被験体を選択すること、および項目１〜１３のいずれか１項に記載の組成物の治療的有効量を、該被験体へ投与することを含み、それによって該被験体を処置する、方法。
（項目２０）
前記組成物は、前記ＴＡＲＰペプチドを用いて負荷したＡＰＣを含む、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記ＡＰＣは、樹状細胞である、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記ＡＰＣは、自家である、項目２０または項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記組成物の前記治療的有効量は、約１×１０６〜約３０×１０６の生存しているＡＰＣを含む、項目２０〜２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２４）
前記組成物の前記治療的有効量は、約２０×１０６の生存しているＡＰＣを含む、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記組成物を、皮内に投与することを含む、項目１８〜２３のいずれか１項に記載の方法。
（項目２６）
前記組成物を、静脈内、筋肉内または皮下に投与することを含む、項目１９〜２４のいずれかに記載の方法。
【００１２】
本発明の前述の目的および他の目的、特徴ならびに利点は、添付する図面への参照を伴い進行する、以下の詳細な記載からより明白となる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、治療用マルチエピトープＴＡＲＰがんワクチンフェーズＩＩ臨床試験の研究デザインを説明する概略図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
配列表
添付する配列表において列挙される核酸配列およびアミノ酸配列は、３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．１．８２２において定義されたように、ヌクレオチド塩基についての標準的な略字およびアミノ酸についての３文字コードを使用して示される。それぞれの核酸配列の一方の鎖のみが示されるが、相補鎖は、表示される鎖に対する任意の参照によって包含されるとして理解される。配列表は、２０１４年１２月９日に作成された４．６７ＫＢのＡＳＣＩＩテキストファイルとして提出され、これは、本明細書中に参考として援用される。添付する配列表において：
配列番号１は、４０番目にグリシンを含む、ヒトＴＡＲＰタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号２は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受け入れ番号ＡＡＧ２９３３７下に寄託された、ヒトＴＡＲＰのアミノ酸配列である。
配列番号３は、ＴＡＲＰ２７−３５ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号４は、ＴＡＲＰ２９−３７−９Ｖペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号５は、ＴＡＲＰ１−２０ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号６は、ＴＡＲＰ１１−３０ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号７は、ＴＡＲＰ２１−４０ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号８は、ＴＡＲＰ３１−５０ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号９は、ＴＡＲＰ４１−５８ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号１０は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受け入れ番号ＡＦ１５１１０３下に寄託された、ヒトＴＡＲＰのヌクレオチド配列である。
【００１５】
詳細な説明
Ｉ．略語
ＡＰＣ  抗原提示細胞
ｃＧＭＰ  現行の適正薬品製造基準
ＣＴＬ  細胞傷害性Ｔリンパ球
ＤＣ  樹状細胞
ＤＬＴ  用量制限毒性
ＤＭＳＯ  ジメチルスルホキシド
ＥＥ  エピトープエンハンスメントされた
ＧＭ−ＣＳＦ  顆粒球マクロファージコロニー刺激因子
ＨＬＡ  ヒト白血球抗原
ＩＣＳ  細胞内サイトカイン染色
ＩＦＮ  インターフェロン
ＩＬ  インターロイキン
ＫＬＨ  キーホールリンペットヘモシアニン
ＬＰＳ  リポ多糖
ＭＥ  マルチエピトープ
ＭＨＣ  主要組織適合遺伝子複合体
ＰＢＬ  末梢血リンパ球
ＰＢＭＣ  末梢血単核細胞
ＰＳＡ  前立腺特異抗原
ＰＳＡＤＴ  ＰＳＡ倍加時間
ＰＴＦＥ  ポリテトラフルオロエチレン
ｒｈ  リコンビナントヒト
ＳＬＰ  合成長鎖ペプチド
ＴＡＡ  腫瘍関連抗原
ＴＡＲＰ  Ｔ細胞受容体γ代替リーディングフレームタンパク質
ＴＦＡ  トリフルオロ酢酸
ＴＩＬ  腫瘍浸潤リンパ球
ＷＴ  野生型
【００１６】
ＩＩ．用語および方法
特段の記述がない限り、技術用語は、従来の用法に従って使用される。分子生物学における一般的な用語の定義は、Ｂｅｎｊａｍｉｎ  Ｌｅｗｉｎ，Ｇｅｎｅｓ  Ｖ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓにより出版，１９９４年（ＩＳＢＮ  ０−１９−８５４２８７−９）；Ｋｅｎｄｒｅｗ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｔｈｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｔｄ．により出版，１９９４年（ＩＳＢＮ  ０−６３２−０２１８２−９）；およびＲｏｂｅｒｔ  Ａ．  Ｍｅｙｅｒｓ（ｅｄ．），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ａ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．により出版，１９９５年（ＩＳＢＮ  １−５６０８１−５６９−８）において見出され得る。
【００１７】
本開示の種々の実施形態の概観を容易にするために、特定の用語についての以下の説明が提供される：
【００１８】
アジュバント：抗原が吸着される、鉱物（アルミニウム、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウム）の懸濁液；または抗原溶液が、ミネラルオイル中で乳化された油中水型エマルジョン（フロイント不完全アジュバント）、時には、更に免疫原性をエンハンスさせる（抗原の分解を阻害する、および／またはマクロファージの流入をもたらす）ために、死菌マイコバクテリアの封入を伴うエマルジョン（フロイント完全アジュバント）などの、抗原提示をエンハンスし、かつ免疫応答を刺激するために使用されるビヒクル。免疫刺激オリゴヌクレオチド（ＣｐＧモチーフを包含するオリゴヌクレオチドなど）もまた、アジュバントとして使用され得る（例えば、米国特許第６，１９４，３８８号；米国特許第６，２０７，６４６号；米国特許第６，２１４，８０６号；米国特許第６，２１８，３７１号；米国特許第６，２３９，１１６号；米国特許第６，３３９，０６８号；米国特許第６，４０６，７０５号；および米国特許第６，４２９，１９９号を参照）。１つの実施形態において、アジュバントは、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（登録商標）  ＩＳＡ  ５１  ＶＧに加えてＧＭ−ＣＳＦである。いくつかの実施形態において、アジュバントは、非天然型アジュバントである。
【００１９】
投与：選択された経路による被験体への組成物の導入。例えば、選択された経路が静脈注射である場合、組成物は、被験体の静脈にその組成物を導入することによって投与される。例示的な投与の経路としては、注射経路（皮下、筋肉内、皮内、腹腔内および静脈内）、経口経路、腺管内経路、舌下経路、直腸経路、経皮経路、鼻腔内経路、膣内経路、吸入経路が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書中に開示される特定の実施形態において、投与の経路は、皮内である。
【００２０】
抗体：特定のアミノ酸配列を伴って、Ｂリンパ系細胞によって産生される免疫グロブリン分子。抗体は、特定の抗原（免疫原）によって、ヒトまたは他の動物において誘発される。抗体は、いくつかの実証可能な方法で抗原と特異的に反応することによって特徴づけられ、抗体および抗原はそれぞれ、その他の面で定義される。「抗体応答を誘発する」とは、抗原または他の分子の、抗体の産生を誘導する能力をいう。
【００２１】
抗原：動物において、抗体の産生および／またはＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞応答を刺激することのできる、化合物、組成物または物質であり、動物に注射または吸収される組成物を包含する。抗原は、異種免疫原によって誘導される生成物を包含する、特定の体液性免疫または細胞性免疫の生成物と反応する。用語「抗原」は、すべての関連する抗原エピトープを包含する。「エピトープ」または「抗原決定基」とは、Ｂ細胞および／またはＴ細胞が応答する、抗原上の部位をいう。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、エピトープが、ＭＨＣ分子と結合して提示されるときに、エピトープに応答する。
抗原は、組織特異抗原または疾患特異抗原であり得る。これらの用語は、組織特異抗原がまた、疾患特異抗原にもなり得るため、相容れないものではない。組織特異抗原は、単一の組織などの限られた数の組織において発現する。疾患特異抗原は、疾患プロセスと一致して発現する。疾患特異抗原の特定の非限定的な例は、抗原の発現が、前立腺がんまたは乳がんなどの腫瘍形成と関連する、または前兆となる抗原である。ＴＡＲＰは、前立腺がん、乳がんおよび他の型のがんにおいて過剰発現する、疾患特異抗原の一例である。疾患特異抗原は、Ｔ細胞またはＢ細胞によって認識される抗原であり得る。
【００２２】
抗原提示細胞（ＡＰＣ）：細胞表面に主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）タンパク質と複合体化した抗原を提示する細胞の型。プロフェッショナルＡＰＣは、抗原を内在化すること、それをプロセシングすること、および次いで細胞膜表面上にＭＨＣ分子と結合した抗原の小さな断片（ペプチド）を提示することに非常に効率的である。３つの主要な型のプロフェッショナルＡＰＣとしては、ＤＣ、マクロファージおよびある種のＢ細胞が挙げられる。ＤＣは、抗原提示の最も広範な範囲を有し、かつＴ細胞受容体を使用して抗原−ＭＨＣ複合体を認識する、Ｔ細胞へ提示するための抗原のプロセシングにおいて最も重要なＡＰＣである。
【００２３】
自家（自家の）：同じ個体に由来すること。本開示の文脈において、被験体の処置のために使用される「自家の」ＡＰＣは、元々その被験体から得られたＡＰＣである。
【００２４】
乳がん：良性または悪性となり得る乳房組織の腫瘍性の状態。最も一般的な型の乳がんは、腺管がんである。非浸潤性乳管がんは、乳管の非浸潤性腫瘍性の状態である。小葉がんは、浸潤性の疾患ではないが、がん腫が発達し得る指標である。乳房の浸潤する（悪性の）がん腫は、ステージ（Ｉ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩＡ、ＩＩＩＢおよびＩＶ）に分けることができる。
【００２５】
がん：分化の消失、増加した成長速度、周辺組織の浸潤および転移する能力を有する、特徴的な退形成を受けた悪性新生物。例えば、前立腺がんは、前立腺組織内または前立腺組織から発生する悪性新生物であり、そして乳がんは、乳房組織内または乳房組織から発生する悪性新生物である（腺管がんなど）。残存がんは、がんを縮小させる、または根絶するために被験体へと与えられる、任意の形態の処置の後に、その被験体において残存するがんである。転移性がんは、その転移性がんが由来する元の（原発）がんの起点の部位以外の、体内の１つまたはそれより多い部位でのがんである。
【００２６】
ＣＤ４：ＭＨＣクラスＩＩ分子との相互作用を媒介する、Ｔ細胞表面タンパク質である、ＣＤ分類因子４。ＣＤ４はまた、ＨＩＶ感染の間、Ｔ細胞上でＨＩＶに対する一次受容体部位として機能する。ＣＤ４を発現する細胞は、しばしばヘルパーＴ細胞である。
【００２７】
ＣＤ８：ＭＨＣクラスＩ分子との相互作用を媒介する、Ｔ細胞表面タンパク質である、ＣＤ分類因子８。ＣＤ８を発現する細胞は、しばしば細胞傷害性Ｔ細胞である。
【００２８】
化学療法剤：異常な細胞増殖によって特徴づけられる疾患の処置において治療的有効性を有する、任意の細胞毒性化学剤。そのような疾患としては、腫瘍、新生物およびがん、ならびに乾癬などの過形成性増殖によって特徴づけられる疾患が挙げられる。１つの実施形態において、化学療法剤は、前立腺がん、乳がんまたは別の腫瘍の治療において有用な薬剤である。１つの実施形態において、化学療法剤は、放射性化合物である。当業者は、有用な化学療法剤を容易に識別することができる（例えば、Ｓｌａｐａｋ  ａｎｄ  Ｋｕｆｅ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ８６  ｉｎ  Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｐｅｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｃｈ．１７  ｉｎ  Ａｂｅｌｏｆｆ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２ｎｄ  ｅｄ．，（著作権）２０００  Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｉｎｃ；Ｂａｌｔｚｅｒ，Ｌ．，Ｂｅｒｋｅｒｙ，Ｒ．（ｅｄｓ）：Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｐｏｃｋｅｔ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，２ｎｄ  ｅｄ．Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏｓｂｙ−Ｙｅａｒ  Ｂｏｏｋ，１９９５；Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｄ．Ｓ．，Ｋｎｏｂｆ，Ｍ．Ｆ．，Ｄｕｒｉｖａｇｅ，Ｈ．Ｊ．（ｅｄｓ）：Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，４ｔｈ  ｅｄ．Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏｓｂｙ−Ｙｅａｒ  Ｂｏｏｋ，１９９３）。併用療法は、がんを処置するために、細胞毒性化合物、放射性化合物または免疫療法化合物などの１つより多い薬剤を投与することである。一例は、放射性化合物または細胞毒性化学化合物と組み合わせて使用される、ＴＡＲＰペプチドワクチンの投与である。
【００２９】
保存的バリアント：「保存的」アミノ酸置換は、ＴＡＲＰなどのタンパク質の活性または抗原性に実質的に影響を及ぼさない、または減少させないアミノ酸置換である。例えば、ＴＡＲＰポリペプチドは、最大で約１、最大で約２、最大で約５、最大で約１０または最大で約１５の保存的置換を包含し得、かつ元のＴＡＲＰポリペプチドと結合する抗体に特異的に結合し得る。保存的置換の特定の非限定的な例としては、以下の例が挙げられる：
【表１】
0006758185.tif 000002
保存的バリアントという用語はまた、未置換のもとのアミノ酸の場所における置換されたアミノ酸の使用も包含する。非保存的置換は、活性または抗原性を減少させる置換である。
【００３０】
縮重バリアント：遺伝暗号の結果として縮重している配列を包含する、ＴＡＲＰのエピトープをコードするポリヌクレオチド。２０の天然アミノ酸が存在し、それらの大部分は、１つより多いコドンによって指定される。それゆえ、すべての縮重ヌクレオチド配列は、そのヌクレオチド配列によってコードされるＴＡＲＰペプチドのアミノ酸配列が変化しない限り、本開示中に包含される。
【００３１】
樹状細胞（ＤＣ）：一次免疫応答に関係する、本質的プロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）。これらは、その組成の一部として、細胞表面上に共刺激分子を発現するため、ヘルパーＴ細胞応答の強力な活性化因子である。それらの主要な機能は、組織において抗原を獲得し、リンパ器官に移動し、そしてＴ細胞を活性化させるために抗原を提示することである。未成熟樹状細胞は、骨髄に由来し、そして未成熟細胞として末梢において存在する。樹状細胞亜型としては、形質細胞性樹状細胞および骨髄性樹状細胞が挙げられる。
【００３２】
連続する：中断なしに一続きで順々に続くこと。
【００３３】
接触する：直接的な物理的会合の状態に配置することであり、固体形状と液体形状との両方を包含する。
【００３４】
エピトープ：抗原決定基。これらは、抗原性である（すなわち特定の免疫応答を誘発する）分子上の特定の化学基またはペプチド配列である。抗体は、ポリペプチド上の特定の抗原エピトープに特異的に結合する。
【００３５】
融合タンパク質：２つの異なる（異種の）タンパク質の少なくとも一部をコードする核酸配列から設計された、核酸配列の発現によって生成されたタンパク質。融合タンパク質を作製するために、核酸配列は、同じリーディングフレーム中に存在し、内部のストップコドンを含有しないようにしなければならない。
【００３６】
異種（異種の）：別個の遺伝子源または種に由来すること。例えば、ＴＡＲＰに対して異種であるポリペプチドは、ＴＡＲＰをコードしない核酸に由来する。いくつかの実施形態において、異種のアミノ酸配列としては、β−ガラクトシダーゼアミノ酸配列、マルトース結合タンパク質アミノ酸配列、アルブミンアミノ酸配列または免疫グロブリンアミノ酸配列などのタンパク質タグが、挙げられる。
【００３７】
免疫応答：刺激に対するＢ細胞、Ｔ細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞またはナチュラルキラー細胞などの免疫系の細胞の応答。１つの実施形態において、応答は、特定の抗原に対して特異的であり（抗原特異的応答）、獲得免疫応答としても公知である。いくつかの実施形態において、獲得免疫応答は、ＣＤ４＋応答および／またはＣＤ８＋応答などのＴ細胞応答である。いくつかの実施形態において、獲得免疫応答は、Ｂ細胞応答であり、特定の抗体の産生をもたらす。
【００３８】
免疫原性ペプチド：ペプチドが、ＭＨＣ分子に結合し、そして免疫原性ペプチドに由来する抗原に対するＣＴＬ応答またはＢ細胞応答（例えば、抗体産生）を誘導するように、対立遺伝子特異的モチーフまたはＮ末端リピートなどの他の配列を含むペプチド。
１つの実施形態において、免疫原性ペプチドは、配列モチーフ、またはニューラルネットもしくは多項式決定などの、当該分野において公知である他の方法を使用して同定される。典型的に、アルゴリズムを使用してペプチドの「結合閾値」が決定され、特定のアフィニティーでのＭＨＣ結合の高い確率を与えるスコアとともに免疫原性であるペプチドが選択される。アルゴリズムは、特定の位置での特定のアミノ酸のＭＨＣ結合に対する効果、特定の位置での特定のアミノ酸の抗体結合に対する効果、またはモチーフ含有ペプチド中の特定の置換の結合に対する効果のいずれかに基づく。免疫原性ペプチドの文脈内で、「保存された残基」は、ペプチド中の特定の位置で、ランダムな配分によって予期されるよりも、有意に高い頻度で現れる残基である。１つの実施形態において、保存された残基は、ＭＨＣ構造が、免疫原性ペプチドとの接触点を提供し得る残基である。
【００３９】
免疫原性組成物：本開示の文脈においては、ＴＡＲＰポリペプチドを発現する細胞に対して測定可能なＣＴＬ応答を誘導する、および／またはＴＡＲＰポリペプチドに対して測定可能なＢ細胞応答（例えば、抗体の産生）を誘導するＴＡＲＰポリペプチドを含む組成物。免疫原性組成物とは更に、ＴＡＲＰポリペプチドを発現させるために使用され得る（そしてそれゆえ、このポリペプチドに対する免疫応答を誘発するために使用される）、ＴＡＲＰポリペプチドをコードする、単離された核酸分子をいう。インビトロ使用のために、免疫原性組成物は、単離されたタンパク質またはペプチドからなり得る。インビボ使用のために、免疫原性組成物は、典型的に薬学的に許容可能なキャリアおよび／または他の薬剤中にタンパク質またはペプチドを含む。任意の特定のペプチド、ＴＡＲＰポリペプチドまたはそのポリペプチドをコードする核酸は、当該分野で認識されるアッセイによってＣＴＬ応答またはＢ細胞応答を誘導する能力について、容易に試験され得る。免疫原性組成物は、当業者に周知のアジュバントを包含し得る。
【００４０】
疾患を抑止するまたは処置する：例えば、腫瘍（例えば、前立腺腫瘍または乳房腫瘍）などの疾患の危険性がある被験体において、疾患または状態の完全な発展を抑止すること。「処置」とは、疾患または病的状態が発展し始めた後に、疾患または病的状態の徴候または症状を緩和する治療的介入をいう。本明細書中で使用される場合、疾患または病的状態に関して、用語「緩和する」とは、処置のあらゆる観察可能な有益な効果をいう。有益な効果は、例えば、感受性の被験体における疾患の臨床症状の遅延された開始、疾患のいくつかのまたは全ての臨床症状の重症度における減少、疾患のより遅い進行、転移の数における減少、被験体の全体的な健康または幸福における改善、または、特定の疾患に対して特異的な、当該分野において周知の他のパラメーターによって、証明され得る。「予防的」処置は、発展している病理の危険性を減少させる目的のために、疾患の徴候を示さない、または早期の徴候のみを示す被験体へ施される処置である。
【００４１】
単離（単離された）：「単離された」生体成分（核酸またはタンパク質またはオルガネラなど）は、当該成分が天然に生じる生物の細胞中の、他の染色体ＤＮＡおよび染色体外ＤＮＡおよびＲＮＡ、タンパク質ならびにオルガネラなどの他の生体成分から実質的に分離されているか、または精製されている。「単離された」核酸およびタンパク質としては、標準的な精製方法によって精製された核酸およびタンパク質が挙げられる。この用語はまた、宿主細胞におけるリコンビナント発現によって調製された核酸およびタンパク質も化学的に合成された核酸も含む。
【００４２】
ラベル：抗体またはタンパク質などの別の分子の検出を容易にするために、その分子に直接的にまたは間接的に結合された、検出可能な化合物または組成物。ラベルの特定の非限定的な例としては、蛍光タグ、酵素的連結および放射性同位体が挙げられる。
【００４３】
リンカー：２つの核酸分子または（融合タンパク質などにおける）２つのペプチドの間などの２分子間のスペーサーとして機能する、１つまたはそれより多いヌクレオチドまたはアミノ酸。
【００４４】
主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）：異なる種において記載された組織適合性抗原系を含むことを意味する総称であり、ヒト白血球抗原（「ＨＬＡ」）を包含する。用語「モチーフ」または「エピトープ」とは、特定のＭＨＣ対立遺伝子によって認識される、通常は約８〜約１１アミノ酸の定義された長さのペプチド中の残基のパターンをいう。ペプチドモチーフまたはエピトープは、典型的にそれぞれのＭＨＣ対立遺伝子について異なり、そして高度に保存された残基および陰性の結合残基のパターンにおいて異なる。
【００４５】
中皮腫：内臓を覆う厚い層として増殖する、胸膜および腹膜のライニング細胞に由来し、かつ立方状細胞によって覆われた腺様の空間を囲い得る、紡錘細胞または線維組織からなる新生物の型。中皮腫は、しばしば肺、心臓または腹部を覆う組織に由来する。いくつかの場合において、中皮腫は、アスベストへの曝露によって生じる。
【００４６】
作動可能に連結された：第一の核酸配列が、第二の核酸配列と機能的に関連して配置されるとき、第一の核酸配列は、第二の核酸配列と作動可能に連結されている。例えば、プロモーターが、コード配列の転写または発現に影響を及ぼす場合、プロモーターは、コード配列に作動可能に連結されている。通常、作動可能に連結されたＤＮＡ配列は、隣接しており、２つのタンパク質コード領域を繋げる必要がある場合、同じリーディングフレームにある。
【００４７】
オーバーラップペプチド：別のペプチドとアミノ酸配列において、少なくとも部分的にオーバーラップするペプチド。本開示の文脈において、「オーバーラップＴＡＲＰペプチド」は、ヒトＴＡＲＰのアミノ酸配列（配列番号１）の一部を含むペプチドであり、それぞれのオーバーラップＴＡＲＰペプチドは、オーバーラップするペプチドの任意の所定の組において、少なくとも１つの他のオーバーラップＴＡＲＰペプチドと同一の、約５〜約１５の連続するアミノ酸を含有する。いくつかの実施形態において、ＴＡＲＰペプチドは、長さが１５〜２５アミノ酸であり、かつ配列番号１の１５〜２５の連続するアミノ酸からなるアミノ酸配列を有する。特定の例において、オーバーラップＴＡＲＰペプチドの組は、配列番号１の全５８アミノ酸残基を含有する。
【００４８】
ペプチドまたはポリペプチド：長さまたは翻訳後修飾（グリコシル化またはリン酸化など）にかかわらない、任意のアミノ酸の鎖。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、長さが５アミノ酸と１００アミノ酸との間であり、長さが５〜５８アミノ酸、５〜５０アミノ酸、５〜３０アミノ酸、８〜２０アミノ酸、８〜１０アミノ酸または１８〜２０アミノ酸が挙げられる。特定の例において、ＴＡＲＰポリペプチドは、長さが８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸、１８アミノ酸または２０アミノ酸である。
「ＴＡＲＰポリペプチド」または「ＴＡＲＰペプチド」は、ＴＡＲＰタンパク質由来の一連の連続するアミノ酸残基である。１つの例において、ＴＡＲＰペプチドを含む免疫原性組成物に関して、その用語は更に、これらのペプチドのバリエーションが、ペプチドの、Ｂ細胞応答を産生する能力、または、ＭＨＣクラスＩ分子に結合したときに、野生型ＴＡＲＰタンパク質を発現する細胞に対して細胞傷害性Ｔリンパ球を活性化させる能力を、約２０％より大きく変化させない（約１％未満、約５％未満または約１０％未満など）限り、アミノ酸の保存的置換のある当該バリエーションをいう。合成ペプチドおよびＣＴＬ細胞傷害性アッセイを使用するＣＴＬの誘導は、例えば、米国特許第５，６６２，９０７号において教示される。
「残基」とは、アミド結合またはアミド結合模倣型によってポリペプチドに取り込まれた、アミノ酸またはアミノ酸模倣体をいう。
【００４９】
ペプチド修飾またはポリペプチド修飾：ＴＡＲＰペプチドは、本明細書中に記載されるペプチドの合成的な実施形態を包含する。加えて、これらタンパク質の類似体（非ペプチド有機分子）、誘導体（開示されるペプチド配列から開始して得られた化学的官能化ペプチド分子）およびバリアント（ホモログまたはパラログ）を、本明細書中に記載される方法において利用することができる。それぞれのポリペプチドは、Ｌ−アミノ酸および／またはＤ−アミノ酸、天然に生じるものおよびそれ以外のいずれかであり得る、アミノ酸の配列からなる。
ペプチドは、本質的に未修飾ペプチドと同じ活性を有し、そして必要に応じて他の望ましい特性を有する誘導体を生産するために、種々の化学技術によって修飾され得る。例えば、カルボキシル末端または側鎖のいずれかの、タンパク質のカルボン酸の化学基は、薬学的に許容可能なカチオンの塩の形態で提供され得、またはＣ１−Ｃ１６エステルを形成するようにエステル化され得、あるいは式ＮＲ１Ｒ２のアミド（Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立してＨまたはＣ１−Ｃ１６アルキルである）へ転換され得、あるいは五員環もしくは六員環などの複素環を形成するために化合され得る。アミノ末端または側鎖のいずれかの、ペプチドのアミノ基は、ＨＣｌ塩、ＨＢｒ塩、酢酸塩、安息香酸塩、トルエンスルホン酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩および他の有機塩などの、薬学的に許容可能な酸付加塩の形態であり得、あるいはＣ１−Ｃ１６アルキルもしくはジアルキルアミノへと修飾され得、または更にアミドへと転換され得る。
ペプチド側鎖の水酸基は、十分に認識された技術を使用して、Ｃ１−Ｃ１６アルコキシまたはＣ１−Ｃ１６エステルへと転換され得る。ペプチド側鎖のフェニル環およびフェノール環は、フッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素などの１つまたはそれより多いハロゲン原子、またはＣ１−Ｃ１６アルキル、Ｃ１−Ｃ１６アルコキシ、カルボン酸類およびそれらのエステル類、もしくはそのようなカルボン酸類のアミドで置換され得る。ペプチド側鎖のメチレン基は、同族体Ｃ２−Ｃ４アルキレンへと延長され得る。チオールは、アセトアミド基などの多数の十分に認識された保護基のいずれか１つを用いて保護され得る。当業者はまた、構造に対してエンハンスされた安定性をもたらす高次構造的な制約を選択、および提供するために、ＴＡＲＰペプチドへ環状構造を導入するための方法を認識する。
ペプチド模倣体（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）および有機模倣体（ｏｒｇａｎｏｍｉｍｅｔｉｃ）の実施形態が想起され、それによって、そのようなペプチド模倣体および有機模倣体の化学的構成要素の三次元配置が、ペプチド骨格およびアミノ酸側鎖成分の三次元配置を模倣し、測定可能またはエンハンスされた免疫応答を生成する能力を有する、そのようなＴＡＲＰポリペプチドのペプチド模倣体および有機模倣体をもたらす。コンピューターモデリング応用について、ファーマコフォアは、生物学的活性の構造的要件に関する、理想化された、三次元的定義である。ペプチド模倣体および有機模倣体は、現行のコンピューターモデリングソフトウェア（コンピューター支援薬物設計またはＣＡＤＤを使用する）を用いてそれぞれのファーマコフォアに合うように設計され得る。ＣＡＤＤにおいて使用される技術の記載については、Ｗａｌｔｅｒｓ，”Ｃｏｍｐｕｔｅｒ−Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ”，ｉｎ  Ｋｌｅｇｅｒｍａｎ＆Ｇｒｏｖｅｓ，ｅｄｓ．，１９９３，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｕｆｆａｌｏ  Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ，ｐｐ．１６５〜１７４およびＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｍｕｎｓｏｎ（ｅｄ．）１９９５，Ｃｈ．１０２を参照。また包含されるのは、そのような技術を使用して調製された模倣体である。
ポリペプチド修飾はまた、ポリペプチドのＭＨＣ分子への結合アフィニティーを変化させる置換などのアミノ酸置換を包含する。ＭＨＣ結合アフィニティーを変化させるための例示的なアミノ酸置換は、当該分野において記載されている（例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １（３）：２０９−２１９，２００１を参照）。
【００５０】
薬学的に許容可能なキャリア：使用する薬学的に許容可能なキャリアは、従来的である。Ｅ．Ｗ．ＭａｒｔｉｎによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１５版，１９７５年は、本明細書中に開示されるタンパク質のような、タンパク質の薬学的輸送に適切な組成物および製剤を記載している。
通常、キャリアの性質は、使用される特定の投与の様式に依存する。例えば、非経口製剤は通常、水、生理食塩水、平衡塩溶液、水性デキストロース、グリセロールまたはビヒクルと同様のものなどの、薬学的におよび生理学的に許容可能な流動体を包含する注射可能な流動体を含む。固体組成物（例えば、粉末形態、丸薬形態、錠剤形態またはカプセル形態）については、従来の無毒性固体キャリアとしては、例えば、薬学的等級のマンニトール、ラクトース、澱粉またはステアリン酸マグネシウムを挙げることができる。生物学的に中性のキャリアに加えて、投与される医薬組成物は、湿潤剤または乳化剤、防腐剤ならびにｐＨ緩衝剤、およびそれと同様のもの（例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレート）などの、少量の無毒性補助物質を含有し得る。いくつかの実施形態において、薬学的キャリアは、特に注射可能な形態における場合、無菌である。いくつかの実施形態において、薬学的キャリアは、非天然型である。
【００５１】
ポリヌクレオチド：ポリヌクレオチドまたは核酸配列という用語とは、長さが少なくとも１０塩基のヌクレオチドの重合体形態をいう。リコンビナントポリヌクレオチドは、コード配列が由来する生物の天然型ゲノムにおいて直接的に連続している両方のコード配列（５’末端に一方および３’末端に一方）に直接的に連続していない、ポリヌクレオチドを包含する。それゆえ、当該用語は、例えば、ベクター；自己複製プラスミドもしくはウイルス；または原核生物もしくは真核生物のゲノムＤＮＡに取り込まれたリコンビナントＤＮＡ、または他の配列に非依存的な単独の分子（例えば、ｃＤＮＡ）として存在するリコンビナントＤＮＡを包含する。ヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチドまたはいずれかのヌクレオチドの修飾された形態であり得る。当該用語は、ＤＮＡの一本鎖および二本鎖形態を包含する。
【００５２】
プロモーター：プロモーターは、核酸の転写を指向する、核酸制御配列のアレイである。プロモーターとしては、ポリメラーゼＩＩ型プロモーター（ＴＡＴＡエレメント）の場合などにおける、転写の開始部位の近傍の、必須の核酸配列が挙げられる。プロモーターはまた、必要に応じて、転写の開始部位から数千塩基対程度に位置し得る、遠位エンハンサーエレメントまたはリプレッサーエレメントを包含する。構成的プロモーターと誘導性プロモーターとの両方が、包含される（例えば、Ｂｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １５３：５１６−５４４，１９８７を参照）。
プロモーターの特定の非限定的な例としては、哺乳類細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳類ウイルスに由来するプロモーター（例えば、レトロウイルス長鎖末端反復；アデノウイルス後期プロモーター；牛痘ウイルス７．５Ｋプロモーター）が挙げられ、使用され得る。リコンビナントＤＮＡまたは合成技術によって生産されたプロモーターもまた使用され得る。ポリヌクレオチドは、宿主の挿入された遺伝子配列の効率的な転写を促進するプロモーター配列を含有する、発現ベクターまたはウイルスベクターに挿入され得る。発現ベクターは、典型的に、複製起点、プロモーター、および形質転換された細胞の表現型選択を可能にする特定の核酸配列を含有する。
【００５３】
前立腺がん：前立腺の、通常は腺に由来する、悪性腫瘍。前立腺がんとしては、腺がんおよび小細胞がんが挙げられる。多くの前立腺がんは、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、ＰＳＭＡ（前立腺特異膜抗原）、前立腺性酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）およびその他の腫瘍抗原を発現する。
【００５４】
精製（精製された）：精製という用語は、絶対的な純度を必要としない；むしろ、それは、相対的な用語として意図される。それゆえ、例えば、精製されたペプチド調製物は、ペプチドまたはタンパク質が、細胞内の天然環境におけるペプチドまたはタンパク質よりも富化された調製物である。１つの実施形態において、調製物は、タンパク質またはペプチドが、当該調製物の総ペプチド含有量または総タンパク質含有量の少なくとも５０％に相当するように精製される。実質的に精製されたタンパク質は、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の純度である。それゆえ、１つの特定の非制限的な例において、精製されたタンパク質は、他のタンパク質または細胞成分の９０％がない。本明細書中に開示されるＴＡＲＰポリペプチドは、当該分野において公知である手段のいずれかによって精製され得る（例えば、Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｅｄ．Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，１９９０；およびＳｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８２を参照）。
【００５５】
リコンビナント：リコンビナント核酸またはタンパク質は、天然に生じない配列、または２つの異なる別個の配列セグメントの人工的な組み合わせによって作製された配列を有する核酸またはタンパク質である。この人工的な組み合わせは、しばしば化学合成または単離された核酸のセグメントの人工操作（例えば、遺伝子操作技術）によって成し遂げられる。
【００５６】
配列同一性：アミノ酸配列間の相同性は、配列間の相同性という面で表され、他には、配列同一性として参照される。配列同一性は、往々にして同一性パーセンテージ（または相同性またはホモロジー）という面で測定される；パーセンテージが高いほど、２つの配列は、より類似している。ＴＡＲＰポリペプチドのホモログまたはバリアントは、標準的な方法を使用して整列させたときに、比較的高い程度の配列同一性を有する。
配列の比較のためのアラインメントの方法は、当該分野において周知である。種々のプログラムおよびアラインメントアルゴリズムが、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．  ２：４８２，１９８１；Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  ４８：４４３，１９７０；Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８５：２４４４，１９８８；Ｈｉｇｇｉｎｓ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ，Ｇｅｎｅ  ７３：２３７，１９８８；Ｈｉｇｇｉｎｓ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ，ＣＡＢＩＯＳ  ５：１５１，１９８９；Ｃｏｒｐｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １６：１０８８１，１９８８；およびＰｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８５：２４４４，１９８８において記載されている。加えて、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．  ６：１１９，１９９４は、配列アラインメント法およびホモロジー計算の詳細な考察を提示する。
ＮＣＢＩのＢａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  ２１５：４０３，１９９０）は、配列解析プログラムｂｌａｓｔｐ、ｂｌａｓｔｎ、ｂｌａｓｔｘ、ｔｂｌａｓｔｎおよびｔｂｌａｓｔｘに関連して使用するために、いくつかの供給元から入手可能であり、その供給元としては、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ、ベセスダ、ＭＤ）およびインターネット上が挙げられる。このプログラムを使用して配列同一性を決定する方法の記載は、インターネット上のＮＣＢＩウェブサイト上で入手可能である。
ＴＡＲＰポリペプチドのホモログおよびバリアントは、典型的に、既定のパラメーターに設定したｇａｐｐｅｄ  ｂｌａｓｔｐである、ＮＣＢＩ  ＢＬＡＳＴ２．０を使用して、ＴＡＲＰまたはＴＡＲＰパラログのアミノ酸配列を用いて全長アラインメントにわたり計数した、少なくとも約７５％（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％）の配列同一性を有することによって特徴づけられる。約３０アミノ酸より多いアミノ酸配列の比較のために、Ｂｌａｓｔ２の配列機能は、既定のパラメーター（ギャップ存在コストが１１、および１残基あたりのギャップコストが１）に設定した既定のＢＬＯＳＵＭ６２行列を使用して利用される。短いペプチド（およそ３０アミノ酸より少ない）を整列する場合、アラインメントは、既定のパラメーター（開始ギャップペナルティーが９、伸長ギャップペナルティーが１）に設定したＰＡＭ３０行列を利用する、Ｂｌａｓｔ２の配列機能を使用して行われるべきである。参照配列に対して一層高い相同性を有するタンパク質は、この方法によって評価した場合、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性などの、増大する同一性パーセンテージを示す。全体の配列よりも少ないものが配列同一性について比較される場合、ホモログおよびバリアントは、典型的に、１０〜２０アミノ酸のショートウィンドウ上で少なくとも８０％の配列同一性を有し、参照配列との相同性に依存して、少なくとも８５％または少なくとも９０％または９５％の配列同一性を有し得る。そのようなショートウィンドウ上の配列同一性を決定するための方法は、インターネット上のＮＣＢＩウェブサイトで入手可能である。当業者は、これらの配列同一性の範囲が、単なる指標のために提供されることを理解している；提供された範囲からは外れる、非常に有意なホモログが得られ得ることは、大いにあり得る。
【００５７】
被験体：ヒトおよび非ヒト哺乳動物を包含する、ヒト被験体と獣医学的被験体との両方を包含する区分である、生きている多細胞性脊椎動物。
【００５８】
合成（合成の）：実験室において人工的な手段によって生産されることであり、例えば、合成核酸または合成ペプチドは、実験室において化学的に合成され得る。
【００５９】
Ｔ細胞：免疫応答に対して重大な意味をもつ白血球。Ｔ細胞としては、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。ＣＤ４＋Ｔリンパ球は、その表面に「ＣＤ分類４」（ＣＤ４）として公知のマーカーを保持する免疫細胞である。これらの細胞は、ヘルパーＴ細胞としても公知であり、抗体応答およびキラーＴ細胞応答が挙げられる、免疫応答の統合を補助する。別の実施形態において、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＤ２５およびＦｏｘｐ３もまた発現する制御性Ｔ細胞である（「ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞またはＴｒｅｇ」）。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、「ＣＤ分類８」（ＣＤ８）マーカーを保持する。１つの実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球である。
【００６０】
Ｔ細胞受容体γ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）：Ｔ細胞受容体γ遺伝子の型から翻訳されるポリペプチド。ＴＡＲＰは、前立腺がん、乳がんおよび中皮腫が挙げられる、いくつかの異なる型のがんにおいて、発現または過剰発現することが公知である。ＴＡＲＰは、ＰＣＴ公開番号国際公開第０１／０４３０９号において開示され、本明細書中に参考として援用される。ヒトＴＡＲＰアミノ酸配列および核酸配列は、本明細書中に、配列番号１および配列番号２（タンパク質）ならびに配列番号１０（核酸）として示される。ＴＡＲＰはまた、ＣＤ３Ｇ、ＴＣＲＧ、ＴＣＲＧＣ１、ＴＣＲＧＣ２、Ｔ細胞受容体ガンマ鎖定常領域およびＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質として公知である。
【００６１】
治療的有効量：指定された薬剤を用いて処置される被験体、細胞または培養物において、所望の効果を達成するのに十分な、当該薬剤の量。本開示の文脈において、ＴＡＲＰペプチドの治療的有効量は、臨床応答（例えば、免疫細胞の集団における増加、ペプチドに特異的に結合する抗体の産生、または腫瘍量の測定可能な減少）によって測定されるような、免疫応答の誘導を引き起こすＴＡＲＰペプチドの量である。１つの実施形態において、ＴＡＲＰペプチドの治療的有効量は、被験体において、免疫応答を生成するか、またはがん（乳がん、中皮腫または前立腺がんなど）を処置するために使用される量である。
【００６２】
導入された：導入された細胞は、分子生物学技術によって核酸分子を導入された細胞である。本明細書中で使用される場合、導入という用語は、核酸分子がそのような細胞に導入され得る全ての技術を含み、ウイルスベクターを用いるトランスフェクション、プラスミドベクターを用いる形質転換、ならびに電気穿孔法、リポフェクションおよびパーティクルガン加速によるネイキッドＤＮＡの導入が挙げられる。
【００６３】
単位用量：単一用量または複数の事前選択された用量として投与される、錠剤（ｔａｂｌｅ）、カプセル、粉末もしくは溶液などの、単一または定量用量の形態の、薬物または医薬組成物。本開示の文脈において、単位用量形態のＴＡＲＰペプチド組成物は、ＴＡＲＰを発現する腫瘍細胞に対して免疫応答を誘発するのに必要な量などの、単一用量、または複数の事前選択された定量用量の１つに適切な、事前選択された治療的量のペプチドを含有する。いくつかの例において、単位用量は、無菌のバイアルに含まれる液体、または液体をバイアルに導入することによって、投与のために再構成させることのできる、無菌のバイアル中の粉末である。他の例において、単位投薬形態は、例えば、被験体への注射などの投与に適した注射器において提供される。
【００６４】
ベクター：ベクターは、宿主細胞において、当該ベクターの複製する能力および／またはインテグレートする能力を妨害することなく、外来核酸の挿入を可能にする核酸分子である。ベクターは、複製起点などの、宿主細胞での複製を可能にする核酸配列を包含し得る。ベクターは、１つまたはそれより多い選択可能なマーカー遺伝子および他の遺伝子エレメントを包含し得る。発現ベクターは、挿入された遺伝子（単数または複数）の転写および翻訳を可能にする、必須の制御性配列を含有するベクターである。いくつかの実施形態において、ベクターは、プラスミドベクターである。他の実施形態において、ベクターは、ウイルスベクターである。
【００６５】
生存している（細胞）：生きており、かつ増殖および／または生物学的機能（抗原提示、サイトカイン産生など）が可能であること。
【００６６】
特段の説明がない限り、本明細書中で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する分野の当業者によって、一般的に理解されるものと同じ意味を有する。単数形の用語「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が、明確にそれ以外を指示しない限り、複数形の指示対象を包含する。「ＡまたはＢを含む」は、ＡもしくはＢ、またはＡおよびＢを包含することを意味する。核酸またはポリペプチドについて与えられる、すべての塩基サイズまたはアミノ酸サイズ、およびすべての分子量値または分子質量値は、近似であり、記載のために提供されることが、更に理解される。本明細書中に記載される方法および物質と類似の、または等価の方法および物質が、本開示の実施または試験において使用され得るが、適切な方法および物質は、以下に記載される。本明細書中で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、その全体が、参照により援用される。矛盾する場合において、用語の説明を含め、本明細書が支配する。加えて、物質、方法および例は、単なる例証であり、限定することを意図しない。
【００６７】
ＩＩＩ．マルチエピトープＴＡＲＰペプチド組成物
Ｔ細胞受容体γ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）は、Ｔ細胞受容体γ遺伝子の型から翻訳されるポリペプチドである。ＴＡＲＰは、数種の型のがんにおいて過剰発現することが公知であり、前立腺がん、乳がんおよび中皮腫が挙げられる。特に、ＴＡＲＰは、原発性前立腺がんおよび転移性前立腺がん、ならびにホルモン感受性前立腺がんと去勢抵抗性前立腺がんとの両方において高度に発現する。加えて、ＴＡＲＰ発現は、好ましくない腫瘍動態およびより進行性の腫瘍動態に関連する。それゆえ、ＴＡＲＰは、がんワクチンにおける使用のための理想的な腫瘍抗原である。
【００６８】
１つの実施形態において、ＴＡＲＰタンパク質は、
【化１】
0006758185.tif 000003
として示される配列を有する。
【００６９】
別の実施形態において、ＴＡＲＰタンパク質は、
【化２】
0006758185.tif 000004
として示される配列を有する。
【００７０】
他の実施形態において、ＴＡＲＰは、配列番号１または配列番号２に対して、少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する（例えば、配列番号１または配列番号２に対して、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一である）。さらなるＴＡＲＰバリアントは、記載されている（本明細書中に参考により援用される、ＰＣＴ公開番号国際公開第０１／０４３０９号を参照）。
【００７１】
いくつかの実施形態において、ＴＡＲＰは、配列番号１０として示される配列を有する核酸によってコードされる。
【００７２】
いくつかの実施形態において、本明細書中で提供されるＴＡＲＰペプチド組成物は、
【化３】
0006758185.tif 000005
から選択される、少なくとも１つ（２つまたはそれより多いなど）のオーバーラップＴＡＲＰペプチドを含む。
【００７３】
上に列挙されるオーバーラップＴＡＲＰペプチドは、長さが１８または２０アミノ酸であり、ＨＬＡ非拘束性である。
【００７４】
いくつかの実施形態において、オーバーラップＴＡＲＰペプチドは、ＴＡＲＰ２７−３５（ＦＶＦＬＲＮＦＳＬ；配列番号３）および／またはエピトープエンハンスメントされたＴＡＲＰ２９−３７−９Ｖ（ＦＬＲＮＦＳＬＭＶ；配列番号４）との組み合わせで投与され、その両方は、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１に結合する９ｍｅｒのペプチドである。
【００７５】
ＴＡＲＰ２７−３５（配列番号３）ペプチド、およびＴＡＲＰ２９−３７−９Ｖ（配列番号４）ペプチドを利用した、第一世代ＴＡＲＰペプチドワクチンの前向き無作為化パイロット試験は、以前に、ステージＤ０前立腺がん（内臓または骨の転移性疾患の形跡がない、ＰＳＡの生化学的再発）を有するＨＬＡ−Ａ＊０２０１陽性男性において行われた。ＴＡＲＰワクチン接種は、免疫原性であり、安全であり、そして十分に許容され、注射部位の反応に限定された有害事象を伴うことが見出された。ＴＡＲＰワクチン接種はまた、ワクチン接種前のベースラインと比較して、低減した傾斜のｌｏｇ  ＰＳＡ（ｓｌｏｐｅ  ｌｏｇ  ＰＳＡ）に関連し、被験体の７２％で２４週に及び、被験体の７４％で４８週に及ぶ。ＰＳＡの傾斜または速度は、測定すべき肉眼的な腫瘍のないステージＤ０前立腺がんにおいて、腫瘍成長の有効な測定法である。ＴＡＲＰワクチン接種はまた、計算された腫瘍成長レート定数において、５０％の減少をもたらす。ＴＡＲＰ特異的インターフェロン（ＩＦＮ）−γ  ＥＬＩＳＰＯＴ応答は、被験体の大部分において検出されたが、ｓｌｏｐｅ  ｌｏｇ（ＰＳＡ）における減少には関連しなかった。
【００７６】
本明細書中で開示されるマルチエピトープＴＡＲＰペプチドワクチンアプローチは、以前に報告されたＴＡＲＰペプチドワクチンに勝るいくつかの別個の利点を有する。５つすべてのオーバーラップＴＡＲＰペプチドが使用される場合、当該ペプチドは、ＴＡＲＰペプチド全体をカバーし、単一のＨＬＡ型に限定されない、多価の抗ＴＡＲＰ免疫応答の誘導についての可能性をもたらす。加えて、より長いオーバーラップＴＡＲＰペプチド（長さが１８〜２０アミノ酸）は、エンハンスされた機能的アビディティおよび長期性を有する改善されたＣＤ８＋Ｔ細胞応答の生成、ならびに体液性抗ＴＡＲＰ抗体応答の誘導を可能にする、ＴＡＲＰ特異的ＭＨＣクラスＩＩＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞エピトープを包含する。
【００７７】
本明細書中で提供されるのは、少なくとも２つの同一でないオーバーラップＴＡＲＰペプチドを含む組成物である。いくつかの実施形態において、少なくとも２つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドのアミノ酸配列は、配列番号１または配列番号２の１５〜２５の連続するアミノ酸からなり、そしてその少なくとも２つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドのそれぞれは、少なくとも別のオーバーラップＴＡＲＰペプチドと同一の５〜１５の連続するアミノ酸を含む（例えば、少なくとも２つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドのそれぞれは、少なくとも別のオーバーラップＴＡＲＰペプチドの５〜１５の連続するアミノ酸と同一の５〜１５の連続するアミノ酸を含む）。いくつかの例において、少なくとも２つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドは、配列番号１または配列番号２の１６〜２２または１８〜２０の連続するアミノ酸からなる。特定の例において、少なくとも２つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドは、配列番号１または配列番号２の１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５の連続するアミノ酸からなる。いくつかの例において、オーバーラップＴＡＲＰペプチドは、少なくとも別のオーバーラップＴＡＲＰペプチドと同一の８〜１２または９〜１１の連続するアミノ酸を含む。特定の例において、少なくとも２つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドは、少なくとも１つの他のオーバーラップＴＡＲＰペプチドと同一の５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０の連続するアミノ酸からなる。
【００７８】
１つの非限定的な例において、少なくとも２つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドは、配列番号１または配列番号２の１８または２０の連続するアミノ酸からなり、そしてその少なくとも２つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドのそれぞれは、少なくとも別のオーバーラップＴＡＲＰペプチド（他のオーバーラップＴＡＲＰペプチドの１つまたは２つなど）と同一の１０の連続するアミノ酸を含む。
【００７９】
いくつかの実施形態において、組成物は、３つ、４つ、５つ、６つまたは７つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドを含む。特定の例において、組成物は、５つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドを含む。
【００８０】
いくつかの実施形態において、３つ、４つ、５つ、６つまたは７つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドの組み合わせは、配列番号１または配列番号２の全５８アミノ酸を含む。
【００８１】
１つの非限定的な例において、組成物は５つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドを含み、その５つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドのアミノ酸配列は、配列番号１の１８〜２０（１８または２０など）の連続するアミノ酸からなり、かつその５つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドのそれぞれは、少なくとも１つの他のオーバーラップＴＡＲＰペプチドと同一の１０の連続するアミノ酸を含み、かつその５つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドの組み合わせは、配列番号１の全５８アミノ酸を含む。
【００８２】
いくつかの例において、ＴＡＲＰペプチド組成物は、少なくとも２つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドを含み、それぞれのペプチドは、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８および配列番号９から選択される異なるアミノ酸配列からなる。
【００８３】
いくつかの実施形態において、ＴＡＲＰペプチド組成物は、更に、配列番号３からなるＴＡＲＰペプチド、および／または配列番号４からなるＴＡＲＰペプチドを包含する。いくつかの例において、組成物は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８および配列番号９のＴＡＲＰペプチドを含む。
【００８４】
また本明細書中で提供されるのは、本明細書中で開示されるＴＡＲＰペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む組成物である。そのような組成物は、本明細書中で開示される任意の組み合わせのＴＡＲＰペプチドをコードするポリヌクレオチドを包含し得る。いくつかの実施形態において、組成物は、配列番号１または配列番号２の１５〜２５の連続するアミノ酸からなるアミノ酸配列を有する、少なくとも２つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドをコードするポリヌクレオチド（単数または複数）を含み、その少なくとも２つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドのそれぞれは、少なくとも１つの他のオーバーラップＴＡＲＰペプチドと同一の５〜１５の連続するアミノ酸を含む。いくつかの例において、組成物は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８および配列番号９から選択される、少なくとも２つのオーバーラップＴＡＲＰペプチドをコードするポリヌクレオチド（単数または複数）を含む。いくつかの例において、組成物は、更に、配列番号３のペプチドおよび／または配列番号４のペプチドをコードするポリヌクレオチド（単数または複数）を包含する。特定の例において、ポリヌクレオチドは、配列番号１０のヌクレオチド配列の少なくとも一部を含む。いくつかの例において、ポリヌクレオチドは、プラスミドベクターまたはウイルスベクターなどのベクターを含む。例示的なウイルスベクターとしては、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクターおよびレンチウイルスベクターが挙げられる。
【００８５】
ポリヌクレオチドは、目的のペプチドをコードする、ＤＮＡ配列、ｃＤＮＡ配列およびＲＮＡ配列を包含する。免疫原性ＴＡＲＰペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ベクター、自己複製プラスミドもしくはウイルス、または原核生物もしくは真核生物のゲノムＤＮＡに取り込まれたリコンビナントＤＮＡ、あるいは他の配列に非依存的な単独の分子（例えば、ｃＤＮＡ）として存在するリコンビナントＤＮＡを包含する。ヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチドまたはいずれかのヌクレオチドの修飾された形態であり得る。当該用語は、ＤＮＡの一本鎖および二本鎖形態を包含する。
【００８６】
免疫原性ＴＡＲＰペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、発現制御配列と作動的に連結され得る。コード配列に作動的に連結された発現制御配列は、コード配列の発現が、発現制御配列と両立される条件下で達成されるように、結合される。発現制御配列としては、適切なプロモーター、エンハンサー、転写ターミネーター、タンパク質をコードする遺伝子の前の開始コドン（すなわち、ＡＴＧ）、イントロンについてのスプライシングシグナル、ｍＲＮＡの適正な翻訳を可能にする遺伝子の正しいリーディングフレームのメンテナンス、および終止コドンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８７】
免疫原性ＴＡＲＰペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、発現ベクターに挿入され得、この発現ベクターとしては、配列の挿入または取り込みを可能にするように操作され得、かつ宿主細胞において発現され得る、プラスミド、ウイルスまたは他のビヒクルが挙げられるが、これらに限定されない。原核生物において、真核生物の配列またはウイルスの配列を有するＤＮＡ配列を発現する方法は、当該分野において周知である。宿主において発現および複製の可能な、生物学的に機能的なウイルスベクターおよびプラスミドＤＮＡベクターは、当該分野において公知である。
【００８８】
いくつかの実施形態において、組成物は、更に、薬学的に許容可能なキャリアを包含する。いくつかの実施形態において、組成物は、更に、アジュバントを包含する。いくつかの例において、特に投与される組成物が単離されたペプチドを含む場合、アジュバントは、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（登録商標）ＩＳＡ  ５１  ＶＧであり、そして更にＧＭ−ＣＳＦを包含し得る。他の例において、アジュバントは、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣを含む。
【００８９】
いくつかの実施形態において、組成物は、ＴＡＲＰペプチドを用いて負荷した抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む。いくつかの例において、ＡＰＣは、プロフェッショナルＡＰＣである。特定の例において、ＡＰＣは、樹状細胞である。ＴＡＲＰペプチドを用いて負荷したＡＰＣは、例えば、ＡＰＣをＴＡＲＰペプチドを用いてパルスすること、またはＡＰＣをＴＡＲＰペプチドと共培養することによって生成され得る。代替的に、ＡＰＣは、ＴＡＲＰペプチドをコードするベクターを用いて導入され得る。ＴＡＲＰペプチドはその後、発現され、そしてＡＰＣ表面上での提示のために、ＡＰＣによって処理される。
【００９０】
いくつかの実施形態において、組成物は単位用量形態である。いくつかの例において、単位用量形態での組成物は、ＴＡＲＰペプチドの凍結乾燥粉末を含む。
【００９１】
免疫原性ＴＡＲＰペプチドは、標準的な方法によって化学的に合成され得る。所望の場合には、ポリペプチドはまた、新興技術によって化学的に合成され得る。そのようなプロセスの１つは、Ｗ．Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．  ４２９：３１−３５，１９９８において記載される。ポリペプチドはまた、発現ベクターにＴＡＲＰまたはそのエピトープをコードする核酸を挿入し、宿主細胞に発現ベクターを導入し、そしてポリペプチドを単離することなどによる、分子遺伝学的技術を使用して生産され得る。
【００９２】
ＩＶ．ＴＡＲＰペプチド組成物の投与および使用
本明細書中に開示される免疫原性ＴＡＲＰペプチドは、免疫応答を生成するために、被験体へ投与され得る。それゆえ、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に開示されるＴＡＲＰペプチド組成物の治療的有効量を被験体へ投与することによって、当該被験体において免疫応答を誘発する方法である。いくつかの例において、免疫応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答、または両方を含む。免疫応答はまた、抗ＴＡＲＰ抗体応答を包含し得る。いくつかの実施形態において、組成物は、皮内、筋肉内、または皮下に投与される。
【００９３】
本明細書中に開示されるＴＡＲＰペプチド組成物は、前立腺がん、中皮腫、乳がん、またはＴＡＲＰを発現するいずれかの他の腫瘍などの、ＴＡＲＰを発現するがんを処置するために被験体へ投与され得る。それゆえ、いくつかの実施形態において、被験体は、前立腺がん、乳がんもしくは中皮腫、またはＴＡＲＰを発現するか、または過剰発現することが認められるいずれかの他のがんを有する。１つの例において、乳がんを有する被験体は、トリプルネガティブ乳がんを有する。１つの例において、前立腺がんを有する被験体は、ホルモン感受性前立腺がんを有する。別の例において、前立腺がんを有する被験体は、去勢抵抗性前立腺がんを有する。いくつかの例において、がんは、転移性である。いくつかの例において、免疫応答は、ＴＡＲＰを発現するがんの成長を阻害する。いくつかの症例において、被験体は、外科手術、化学療法、または放射線治療が挙げられる、他のがん特異的処置を受けたか、または受ける。
【００９４】
また提供されるのは、ＴＡＲＰを発現するがんを有する被験体を選択すること、および本明細書中に開示されるＴＡＲＰペプチド組成物の治療的有効量を被験体へ投与することによって、がんを有する被験体を処置する方法である。いくつかの実施形態において、ＴＡＲＰを発現するがんは、前立腺がん、乳がん、または中皮腫である。いくつかの実施形態において、組成物は、皮内、静脈内、筋肉内、または皮下に投与される。
【００９５】
例示的な適用において、開示される組成物は、前立腺がん、中皮腫、乳がん、またはＴＡＲＰを発現するいずれかの他のがんを罹患している患者へ、ＴＡＲＰ発現細胞への免疫応答を上昇させるのに十分な量で投与される。投与は、そのようながん細胞の増殖を遅延させること、またはそれらの成長を阻害すること、または腫瘍の徴候もしくは症状を減少させるのに十分な免疫応答を誘導する。この使用のための効果的な量は、疾患の重症度、患者の健康の通常の状態、および患者の免疫系のロバストさに依存する。組成物の治療的有効量は、症状（単数または複数）の主観的軽減、または臨床医もしくは他の資格を与えられた観察者によって記載される、客観的に認められる改善（ＰＳＡ値の変化の速度論などの、検査パラメーターの変化が挙げられる）のいずれかを提供する量である。
【００９６】
いくつかの実施形態において、被験体は、ＨＬＡ−Ａ２陽性である。他の実施形態において、被験体は、ＨＬＡ−Ａ２陰性である。
【００９７】
いくつかの実施形態において、組成物は、ＴＡＲＰペプチドを用いて負荷された、樹状細胞などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む。いくつかの例において、ＡＰＣは、自家の細胞である。他の例において、ＡＰＣは、同種異系である。これらの方法において、ＡＰＣは、インビトロで免疫原性ＴＡＲＰペプチドを用いてパルスされるか、または免疫原性ＴＡＲＰペプチドと共培養され得る。代替的に、ＡＰＣは、免疫原性ＴＡＲＰペプチドをコードするベクターを用いて導入され得、これは、ペプチドのプロセシング、およびペプチドのＭＣＨとの複合体での提示を導く。ＴＡＲＰペプチドを用いて負荷したＡＰＣを生成するために使用される方法にかかわらず、ＡＰＣの治療的有効量はその後、被験体へ投与され得る。いくつかの例において、組成物の治療的有効量は、約１×１０６〜約３０×１０６の生存しているＡＰＣ（約５×１０６〜約２５×１０６の生存しているＡＰＣ、または約１０×１０６〜約２０×１０６の生存しているＡＰＣなど）を含む。非限定的な例において、組成物の治療的有効量は、約１×１０６、約２×１０６、約３×１０６、約４×１０６、約５×１０６、約６×１０６、約７×１０６、約８×１０６、約９×１０６、約１０×１０６、約１５×１０６、約２０×１０６、約２５×１０６または約３０×１０６の生存しているＡＰＣを含む。いくつかの場合において、複数のペプチドが、ＡＰＣを使用して被験体へ投与されるとき、細胞の個別のプールは、それぞれ１つのペプチドを用いてパルスされ、そして続けて投与のために一緒にプールされる。プールされたＡＰＣは、１回の注射、または複数回の注射（２回の注射など）で投与され得る。ほとんどの場合において、ペプチドで負荷したＡＰＣは、皮内に注射されるが、皮下、静脈内、または筋肉内などの、免疫応答を生成するためのいずれかの適切な経路を使用して投与され得る。
【００９８】
上記で議論されたように、免疫原性ＴＡＲＰペプチド（単数または複数）は、当該分野において公知である任意の方法によって、樹状細胞または樹状細胞前駆体へと送達され得、この方法としては、抗原を用いて直接的に樹状細胞をパルスすること、または広範な抗原送達ビヒクル（例えば、リポソーム、または抗原を細胞へと送達することが公知である他のベクターなど）を利用することが挙げられるが、これらに限定されない。１つの特定の非限定的な例において、抗原性製剤は、約０．１μｇ〜約１，０００μｇ、または約１μｇ〜約１００μｇの選択された免疫原性ＴＡＲＰペプチドを包含する。免疫原性ＴＡＲＰペプチドはまた、樹状細胞成熟を促進する薬剤と一緒に投与され得る。有用な薬剤の特定の非限定的な例は、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、エンドトキシン／リポ多糖（ＬＰＳ）、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）またはｆｌｔ−３リガンド（ｆｌｔ−３Ｌ）である。調製物はまた、他の構成要素の中で、緩衝剤、賦形剤および防腐剤を含有し得る。
【００９９】
１つの実施形態において、成熟抗原提示細胞は、免疫原性ＴＡＲＰペプチド（単数または複数）を提示するために生成される。これらの樹状細胞はその後、前立腺がん、中皮腫または乳がんなどの、ＴＡＲＰを発現する腫瘍を有する被験体へ、単独で投与される。別の実施形態において、成熟樹状細胞は、化学療法剤、または抗ＣＬＡ−４（細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４）、抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）または抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死１リガンド１）などの負の制御を標的とする、他の免疫に基づく治療と関連して投与される。
【０１００】
代替的に、ＡＰＣは、前立腺腫瘍、中皮腫腫瘍もしくは乳房腫瘍（または別の型のがん）由来の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）などのＣＤ８＋細胞を感作するために使用される。ＴＩＬまたはＰＢＬは、処置される同じ被験体（自家）由来であり得る。代替的に、ＴＩＬまたはＰＢＬは、異種であり得る。しかしながら、それらは、少なくとも被験体の保持するＨＬＡ型に拘束されるＭＨＣクラスＩであるべきである。感作された細胞の有効量は、その後被験体へ投与される。
【０１０１】
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、ＣＴＬ前駆体のレスポンダー細胞源として使用され得る。適切な抗原提示細胞は、ペプチドとインキュベートされ、その後ペプチドで負荷した抗原提示細胞は、次いで最適化された培養条件で、レスポンダー細胞集団とインキュベートされる。陽性のＣＴＬ活性化は、培養物をＣＴＬの存在についてアッセイすることによって決定され得、このＣＴＬは、特定のペプチドでパルスした標的と、ＴＡＲＰ（例えば、配列番号１または配列番号２）などのペプチド配列が由来する抗原の、内在的に処理された形態を発現する標的細胞との両方の、放射性標識された標的細胞を殺傷する。
【０１０２】
細胞は、ＴＡＲＰを発現する腫瘍の細胞の増殖を阻害するために、被験体へ投与され得る。これらの適用において、活性化抗原提示細胞または活性化リンパ球の治療的有効量は、疾患を罹患している被験体へ、ＴＡＲＰ発現細胞への免疫応答を上昇させるのに十分な量で投与される。結果として生じる免疫応答は、そのようながん細胞の増殖を遅延させること、またはそれらの成長を阻害すること、または腫瘍の徴候もしくは症状を減少させるのに十分である。
【０１０３】
他の実施形態において、単離されたＴＡＲＰペプチドを含む組成物は、被験体へ投与される。免疫原性ＴＡＲＰペプチドは、皮内注射、筋肉内注射、皮下注射または静脈内注射などによる、当業者に公知である任意の手段（Ｂａｎｇａ，Ａ．，「Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，」  ｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｔｅｃｈｎｏｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｉｎｃ．，Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，ＰＡ，１９９５を参照）によって投与され得る。１つの実施形態において、投与は、皮内注射または筋肉内注射によるものである。ペプチド（単数または複数）が、応答を刺激するために利用可能な時間を延長するために、ペプチド（単数または複数）は、インプラント、油性注射または微粒子系として提供され得る。微粒子系は、微粒子、マイクロカプセル、マイクロスフェア、ナノカプセルまたは同様の粒子であり得る。合成ポリマーに基づく微粒子キャリアは、免疫応答をエンハンスさせるアジュバントとして機能することに加えて、制御された放出を提供することが示されている。アルミニウム塩はまた、免疫応答を産生するためのアジュバントとして使用され得る。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、免疫原性ＴＡＲＰペプチド組成物は、免疫応答を細胞性の応答（すなわち、ＣＴＬ応答）へと指向する様式で投与される。インビトロとインビボとの両方で、細胞性の応答を誘導するための多数の手段は、公知である。脂質は、インビボで種々の抗原に対するＣＴＬのプライミングを補助することのできる薬剤として認められている。例えば、米国特許第５，６６２，９０７号において記載されるように、パルミチン酸残基は、リジン残基のアルファアミノ基およびイプシロンアミノ基に結合され得、そして次いで免疫原性ペプチドに連結され得る（例えば、グリシン、グリシン−グリシン、セリン、セリン−セリンまたは同様のものなどの、１つまたはそれより多い連結残基を介して）。脂質付加されたペプチドは、次いで、リポソームに取り込まれたか、またはアジュバントにおいて乳化された、ミセル形態で直接的に注射され得る。別の例として、トリパルミトイル−Ｓ−グリセリルシステイニルセリル−セリン（ｔｒｉｐａｌｍｉｔｏｙｌ−Ｓ−ｇｌｙｃｅｒｙｌｃｙｓｔｅｉｎｌｙｓｅｒｙｌ−ｓｅｒｉｎｅ）などのＥ．ｃｏｌｉリポタンパク質は、適切なペプチドに共有結合したときに、腫瘍特異的ＣＴＬをプライミングするために使用され得る（Ｄｅｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：５６１，１９８９）。更に、中和抗体の誘導がまた、適切なエピトープを提示するペプチドに結合した同じ分子を用いてプライミングされ得るため、２つの組成物は、望ましいと考えられる場所で、体液性応答と細胞媒介性応答との両方を誘発するために組み合わされ得る。
【０１０５】
別の実施形態において、免疫原性ＴＡＲＰペプチド組成物へのＣＴＬ応答を誘導するために、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ヘルパーＴエピトープは、ＣＴＬ前駆細胞を活性化するための微小環境において、サイトカインを分泌するためのヘルパーＴ細胞を誘導するために、免疫原性ＴＡＲＰポリペプチドに添加される。本明細書中で開示されるオーバーラップＴＡＲＰペプチドは、ヘルパーＴ細胞を誘導するためのＭＨＣクラスＩＩエピトープを包含する。当該技術は、更に、抗原を注射の部位に局在させ、そしてある期間にわたって樹状細胞または他の「プロフェッショナル」抗原提示細胞への近接性をエンハンスさせるために、コンストラクトを数日の間注射の部位に維持するための単鎖脂質分子を添加することを含む（Ｃｈｅｓｎｕｔ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ−Ｂａｓｅｄ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ−Ｃｅｌｌ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｔｏ  Ｔｒｅａｔ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，」ｉｎ  Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ，ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９５を参照）。
【０１０６】
免疫原性ＴＡＲＰペプチドを包含する医薬組成物は、本明細書中に提供される。１つの実施形態において、免疫原性ＴＡＲＰペプチドは、安定界面活性剤（ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ  ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）、ミセル形成剤および／または油剤を含有するアジュバントと混合される。１つの実施形態において、アジュバントは、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（登録商標）  ＩＳＡ  ５１  ＶＧであり、そして更に顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を包含し得る。適切な安定界面活性剤、ミセル形成剤および油剤は、米国特許第５，５８５，１０３号；米国特許第５，７０９，８６０号；米国特許第５，２７０，２０２号；および米国特許第５，６９５，７７０号において詳述される。安定界面活性剤は、エマルジョンの成分が、安定なエマルジョンとして残ることを可能にする、任意の界面活性剤である。そのような界面活性剤としては、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ）（ソルビタン−モノ−９−オクタデセノエート−ポリ（オキシ−１，２−エタンジイル）；ＩＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥにより製造）、ＴＷＥＥＮ  ４０（登録商標）、ＴＷＥＥＮ  ２０（登録商標）、ＴＷＥＥＮ  ６０（登録商標）、ＺＷＩＴＴＥＲＧＥＮＴ（登録商標）  ３−１２、ＴＥＥＰＯＬ  ＨＢ７（登録商標）およびＳＰＡＮ  ８５（登録商標）が挙げられる。これらの界面活性剤は、通常およそ０．０５％〜０．５％（約０．２％など）の量で提供される。ミセル形成剤は、ミセル様の構造が形成されるように、他の成分と形成されたエマルジョンを安定化させることのできる薬剤である。そのような薬剤は、一般的に細胞性の応答をエンハンスさせるためのマクロファージをリクルートするために、注射の部位にいくらかの刺激を生じさせる。そのような薬剤の例としては、ＢＡＳＦ  Ｗｙａｎｄｏｔｔｅ刊行物（例えば、Ｓｃｈｍｏｌｋａ，Ｊ．Ａｍ．Ｏｉｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．  ５４：１１０，１９７７，ならびにＨｕｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １２９：１２４４，１９８１，ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）  Ｌ６２ＬＦ，Ｌ１０１およびＬ６４，ＰＥＧ１０００およびＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）  １５０１，１５０Ｒ１，７０１，９０１，１３０１ならびに１３０Ｒ１）によって記載されたポリマー表面活性剤（ｐｏｌｙｍｅｒ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ）が挙げられる。そのような薬剤の化学構造は、当該分野において周知である。１つの実施形態において、薬剤は、Ｈｕｎｔｅｒ  ａｎｄ  Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．  １３３：３１６７，１９８４によって定義されたように、０と２との間の親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）を有するように選択される。薬剤は、例えば、０．５％と１０％との間の有効量、または１．２５％と５％との間の量で提供され得る。
【０１０７】
組成物に包含される油剤は、抗原の水中油型エマルジョンにおける維持（すなわち、所望の抗原のためのビヒクルを提供すること）を促進するように選択され、そしてエマルジョンが、室温（約２０℃〜約２５℃）、または一度エマルジョンの温度が室温まで下がったときのいずれかで形成されるように、６５℃より低い融解温度を有し得る。そのような油剤の例としては、スクアレン、スクアラン、ＥＩＣＯＳＡＮＥ（登録商標）、テトラテトラコンタン、グリセロールおよび落花生油または他の野菜油が挙げられる。１つの特定の非限定的な例において、油剤は、１％と１０％との間または２．５％と５％との間の量で提供される。油剤は、生体が、経時的に分解でき、かつ肉芽腫などの有害事象が油剤の使用で明らかでないように、生分解性と生体適合性の両方であるべきである。
【０１０８】
アジュバントは、組成物に包含され得る。１つの実施形態において、アジュバントは、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（登録商標）  ＩＳＡ  ５１  ＶＧに加えてＧＭ−ＣＳＦである。他の実施形態において、アジュバントは、ＰＲＯＶＡＸ（登録商標）（Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の名前のもとに入手可能な、安定界面活性剤、ミセル形成剤および油剤の混合物である。アジュバントはまた、ＣｐＧモチーフを包含する核酸などの免疫刺激性核酸であり得る。
【０１０９】
別の実施形態において、ＴＡＲＰ組成物は、１つまたはそれより多い免疫原性ペプチドをコードする、１つまたはそれより多い核酸を包含する。ＴＡＲＰペプチド（単数または複数）をコードする核酸（単数または複数）の治療的有効量は、免疫応答を生成するために被験体へ投与され得る。１つの特定の非限定的な例において、核酸（単数または複数）の治療的有効量は、前立腺がん、中皮腫もしくは乳がん、またはＴＡＲＰを発現するいずれかの他の腫瘍を処置するために、被験体へ投与される。被験体への核酸の投与のための１つのアプローチは、哺乳動物発現プラスミドなどのプラスミドＤＮＡを用いる直接免疫化である。免疫原性ＴＡＲＰペプチドをコードするヌクレオチド配列は、当該分子の発現を増大されるために、プロモーターの制御下に配置される。
【０１１０】
核酸コンストラクトによる免疫化は、当該分野において周知であり、例えば、米国特許第５，６４３，５７８号（細胞媒介性応答または体液性応答を誘発するために、所望の抗原をコードするＤＮＡを導入することによって、脊椎動物を免疫化する方法を記載する）ならびに米国特許第５，５９３，９７２号および米国特許第５，８１７，６３７号（抗原をコードする核酸配列を、発現を可能にする制御配列に作動可能に連結することを記載する）において教示される。米国特許第５，８８０，１０３号は、免疫原性ペプチドまたは他の抗原をコードする核酸の生物への送達の数種の方法を記載する。方法としては、核酸（またはそれらの合成ペプチド）のリポソーム送達、および免疫刺激コンストラクト、またはコレステロールとＱＵＩＬ  Ａ（登録商標）（ｓａｐｏｎｉｎ）とを混合する上で自然に形成される、サイズが３０〜４０ｎｍの負に荷電したかご様の構造である、ＩＳＣＯＭＳ（登録商標）が挙げられる。防御免疫は、ＩＳＣＯＭＳ（登録商標）を抗原についての送達ビヒクルとして使用する、多様な感染の実験モデル（トキソプラズマ症およびエプスタイン・バーウイルス誘導性腫瘍が挙げられる）において生成される（Ｍｏｗａｔ  ａｎｄ  Ｄｏｎａｃｈｉｅ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １２：３８３，１９９１）。ＩＳＣＯＭＳ（登録商標）でカプセルに包まれた１μｇと少ない抗原の用量は、ＭＨＣクラスＩ媒介性のＣＴＬ応答を産生することが見出されている（Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４４：８７３，１９９０）。
【０１１１】
核酸を免疫化のために使用する別のアプローチにおいて、免疫原性ＴＡＲＰペプチドは、弱毒化ウイルス宿主、またはベクター、または細菌ベクターによって発現させることができる。リコンビナント牛痘ウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、レトロウイルスベクターまたは他のウイルスベクターは、ペプチドを発現するために使用され得、これによりＣＴＬ応答を誘発する。例えば、免疫化プロトコルにおいて有用な牛痘ベクターおよび方法は、米国特許第４，７２２，８４８号において記載される。ＢＣＧ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ  Ｇｕｅｒｉｎ）は、ペプチドの発現のための別のベクターを提供する（Ｓｔｏｖｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３５１：４５６−４６０，１９９１を参照）。
【０１１２】
１つの実施形態において、１つまたはそれより多い免疫原性ＴＡＲＰペプチドをコードする、１つまたはそれより多い核酸は、細胞へ直接的に導入される。例えば、核酸（単数または複数）は、標準的な方法によって金マイクロスフェアへ装填され得、そしてＢｉｏ−ＲａｄのＨＥＬＩＯＳ（登録商標）  Ｇｅｎｅ  Ｇｕｎなどの装置によって、皮膚へ導入され得る。核酸は、強力なプロモーターの制御下にあるプラスミドからなる「ネイキッド」であり得る。典型的に、ＤＮＡは、筋肉へ注射されるが、それはまた、転移に近接した組織を包含する、他の部位へ直接的に注射され得る。注射のための投与量は、通常概ね０．５μｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇであり、典型的には約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇである（例えば、米国特許第５，５８９，４６６号を参照）。
【０１１３】
組成物（例えば、ＴＡＲＰペプチド、ＴＡＲＰペプチドを用いて負荷したＡＰＣ、またはＴＡＲＰペプチドをコードする核酸もしくはベクター）は、治療的処置のために投与され得る。治療的適用において、組成物の治療的有効量は、前立腺がん、中皮腫または乳がん、またはＴＡＲＰを発現するいずれかの他のがんなどの疾患を罹患している被験体へ投与される。組成物の１回または複数回の投与は、被験体によって必要とされ、かつ許容される投与量および頻度に依存して施される。１つの実施形態において、組成物は、複数用量（２用量、３用量、４用量、５用量、６用量、７用量または８用量など）で投与される。一般的に、用量は、被験体への許容可能でない毒性をもたらさずに、疾患の徴候または症状を処置するか、または緩和するのに十分である。全身投与または局所投与が、利用され得る。それぞれの用量について、組成物は、１回の注射（単一部位の注射）を使用して投与され得、または２回もしくはそれより多い注射（２つまたはそれより多い部位の注射）を使用して投与され得る。特定の例において、ＴＡＲＰペプチド組成物は、２回の注射（それぞれの腕において１回など）を使用して投与され得る。他の場合において、特に単離されたＴＡＲＰペプチドが投与される場合（すなわち、ＡＰＣの非存在下で投与される）、ペプチドごとに一部位が必要とされ得る。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、上記で議論されたいずれかの免疫療法は、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＧＭ−ＣＳＦもしくはインターフェロン、または２つもしくはそれより多いサイトカインの組み合わせ（２、３、４、５、６、７またはそれより多いサイトカインなど）などのサイトカインの投与によって増大される。
【０１１５】
本明細書中で開示される免疫原性ＴＡＲＰペプチド組成物の投与はまた、他の抗がん剤または治療的処置（腫瘍の外科的切除など）の実施を伴い得る。任意の適切な抗がん剤が、本明細書中で開示される組成物と組み合わせて投与され得る。例示的な抗がん剤としては、例えば、細胞分裂阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗物質、インターカレート抗生物質、成長因子阻害剤、細胞周期阻害剤、酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、抗生存剤、生体応答調節剤、抗ホルモン（例えば、抗アンドロゲン）および抗血管新生剤などの細胞毒性化学療法剤が挙げられるが、これらに限定されない。他の抗がん処置としては、放射線治療、がん細胞を特異的に標的とする抗体、またはＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１もしくはＴＧＦ−β（トランスフォーミング増殖因子−β）などの他の免疫調節タンパク質に対する抗体が挙げられる。
【０１１６】
アルキル化剤の非限定的な例としては、ナイトロジェンマスタード類（メクロレタミン、シクロホスファミド、メルファラン、ウラシルマスタードまたはクロラムブシルなど）、アルキルスルホネート類（ブスルファンなど）、ニトロソウレア類（カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾシンまたはダカルバジンなど）が挙げられる。
【０１１７】
代謝拮抗物質の非限定的な例としては、葉酸類似体（メトトレキサートなど）、ピリミジン類似体（５−ＦＵまたはシタラビンなど）、およびメルカプトプリンまたはチオグアニンなどのプリン類似体が挙げられる。
【０１１８】
天然物の非限定的な例としては、ビンカアルカロイド類（ビンブラスチン、ビンクリスチンまたはビンデシン）、エピポドフィロトキシン類（エトポシドまたはテニポシド）、抗生物質（ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシンまたはマイトマイシンＣなど）および酵素（Ｌ−アスパラギナーゼなど）が挙げられる。
【０１１９】
雑多な薬剤の非限定的な例としては、白金錯体化合物（シスプラチンとしても公知である、シス−ジアミン−ジクロロ白金ＩＩ）、置換尿素（ヒドロキシウレアなど）、メチルヒドラジン誘導体（プロカルバジンなど）および副腎皮質抑制剤（ａｄｒｅｎｏｃｒｏｔｉｃａｌ  ｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔｓ）（ミトタンおよびアミノグルテチミドなど）が挙げられる。
【０１２０】
ホルモンおよびアンタゴニストの非限定的な例としては、副腎皮質ステロイド類（プレドニゾンなど）、プロゲスチン類（カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロンおよび酢酸メゲステロール（ｍａｇｅｓｔｒｏｌ  ａｃｅｔａｔｅ）など）、エストロゲン類（ジエチルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオールなど）、抗エストロゲン類（タモキシフェンなど）およびアンドロゲン類（プロピオン酸テストステロン（ｔｅｓｔｅｒｏｎｅ  ｐｒｏｐｒｉｏｎａｔｅ）およびフルオキシメステロンなど）が挙げられる。最も一般的に使用される化学療法薬物の例としては、アドリアマイシン、アルケラン、Ａｒａ−Ｃ、ＢｉＣＮＵ、ブスルファン、ＣＣＮＵ、カルボプラチン（Ｃａｒｂｏｐｌｕｔｉｎｕｍ）、シスプラチン（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎｕｍ）、サイトキサン、ダウノルビシン、ＤＴＩＣ、５−ＦＵ、フルダラビン、ハイドレア、イダルビシン、イホスファミド、メトトレキサート、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ナイトロジェンマスタード、タキソール（またはドセタキセルなどのタキサン）、ベルバン、ビンクリスチン、ＶＰ−１６が挙げられ、そのうえいくつかのより新しい薬物としては、ゲムシタビン（ジェムザール）、ハーセプチン（登録商標）、イリノテカン（カンプトサール、ＣＰＴ−１１）、ロイスタチン、ナベルビン、リツキサン、ＳＴＩ−５７１、タキソテール、トポテカン（ハイカムチン）、ゼローダ（カペシタビン）、ゼヴァリン（Ｚｅｖｅｌｉｎ）およびカルシトリオールが挙げられる。
【０１２１】
使用され得る免疫調節剤の非限定的な例としては、ＡＳ−１０１（Ｗｙｅｔｈ−Ａｙｅｒｓｔ  Ｌａｂｓ．）、ブロピリミン（Ｕｐｊｏｈｎ）、ガンマインターフェロン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＧＭ−ＣＳＦ（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、ＩＬ−２（Ｃｅｔｕｓ  ｏｒ  Ｈｏｆｆｍａｎ−ＬａＲｏｃｈｅ）、ヒト免疫グロブリン（Ｃｕｔｔｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、ＩＭＲＥＧ（Ｉｍｒｅｇ  ｏｆ  Ｎｅｗ  Ｏｒｌｅａｎｓ，Ｌａ．から）、ＳＫ＆Ｆ  １０６５２８、ＴＮＦ（腫瘍壊死因子；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）および抗ＣＴＬＡ−４（イピリムマブ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）が挙げられる。
【０１２２】
いくつかの型のがんについての別の一般的な処置は、外科的な処置であり、例えば、がんまたはその一部の外科的切除である。処置の別の例は、放射線治療であり、例えば、外科的切除の前に、腫瘍を根絶するか、または退縮することを補助するための、腫瘍部位への放射性の物質またはエネルギー（外部照射治療など）の実施である。
【０１２３】
特定の実施形態において、前立腺がんを有する被験体は、放射線治療、近接照射療法または凍結療法との組み合わせで、本明細書中で開示されるＴＡＲＰペプチド組成物を投与される。他の特定の実施形態において、前立腺がん（転移性去勢抵抗性前立腺がんなど）を有する被験体は、化学療法との組み合わせで、本明細書中で開示されるＴＡＲＰペプチド組成物を投与される。
【０１２４】
他の実施形態において、ＴＡＲＰを発現するがん（前立腺がんなど）を有する被験体は、免疫系の負の制御を標的とする薬剤（抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１または抗ＴＧＦβなど）との組み合わせで、本明細書中で開示されるＴＡＲＰペプチド組成物を投与される。
【０１２５】
Ｖ．がんワクチンとしての野生型およびエピトープエンハンスメントされたＴＡＲＰペプチド
細胞溶解性Ｔ細胞応答を産生する２つのＨＬＡ−Ａ２エピトープは、以前に同定されている（Ｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６４：２６１０−２６１８，２００４）。これらの配列は、ヒトＴＡＲＰ（配列番号２）のアミノ酸２７〜３５および２９〜３７に位置する。ＴＡＲＰ２７−３５は、ＴＡＲＰ２９−３７のアフィニティーよりも１０倍大きいアフィニティーで、結合することが見出された。両方のペプチドは、当該ペプチドまたは当該ペプチドをコードするＤＮＡを用いてパルスした樹状細胞を用いてＡ２Ｋｂトランスジェニックマウス（ヒトＨＬＡ−Ａ*０２０１を発現する）を免疫化することによって、免疫原性であることが示された。樹状細胞免疫化は、ＤＮＡ免疫化より高いレベルの免疫をもたらし、そしてより高い結合アフィニティーにより予期されたように、ＴＡＲＰ２７−３５は、ＴＡＲＰ２９−３７より高いレベルのＣＤ８＋Ｔ細胞応答をもたらした。
【０１２６】
Ａ．エピトープエンハンスメント
エピトープのアミノ酸配列の修飾（一般的に、エピトープエンハンスメントとして参照される）は、数種の手段：（１）ペプチドのＭＨＣ分子へのアフィニティーを増大させること；（２）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）トリガリングを増大させること；または（３）血清ペプチダーゼによるペプチドのタンパク質分解を阻害することによりワクチンの効果を改善することができる。サブドミナントなエピトープは、通常、寛容性を誘導しないが、エピトープエンハンスメントによってより高い免疫原性にされ得るため、エピトープエンハンスされたサブドミナントなペプチドは、自己寛容を無視することができる。
【０１２７】
ＴＡＲＰペプチドのエピトープエンハンスメントは、当該ペプチドを用いて産生され得た免疫のレベルを増大するために、以前に行われた。米国特許第７，５４１，０３５号および米国特許第８，０４３，６２３号（本明細書中に参考により援用される）において記載されたように、ＴＡＲＰ２７−３５ペプチドにおけるアミノ酸置換は、結合アフィニティーを増大させなかったが、ＴＡＲＰ２９−３７における２つのアミノ酸置換は、より高い結合アフィニティーのペプチドをもたらした。ＴＡＲＰ２９−３７について、３番目のＡｒｇおよび９番目のＬｅｕは、それぞれＡｌａ（ＴＡＲＰ２９−３７−３Ａ）およびＶａｌ（ＴＡＲＰ２９−３７−９Ｖ）で置換された。ＴＡＲＰ２９−３７において、３番目をＡｌａで置換することは、ペプチドの結合アフィニティーにおいて最も高い増大をもたらした。ＴＡＲＰ２９−３７−９Ｖは、ＴＡＲＰ２９−３７−３Ａより低いＨＬＡ−Ａ２への結合アフィニティーを示したが、９番目のＬｅｕのＶａｌでの置換は、野生型ペプチドＴＡＲＰ２９−３７と比較すると、結合アフィニティーをエンハンスした。これらのペプチドの免疫原性をＡ２Ｋｂトランスジェニックマウスにおいて評価したとき、エピトープエンハンスメントされたペプチドの両方は、野生型配列より高いＴＡＲＰ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージをもたらした。エピトープエンハンスメントされたＴＡＲＰ２９−３７の配列を用いて生成されたＴ細胞は、マウスにおいて、野生型ＴＡＲＰ２９−３７ペプチドを用いてパルスした標的と反応することもまた示された。
【０１２８】
ヒト細胞におけるこれらのペプチドの研究は、ＴＡＲＰ２９−３７、ＴＡＲＰ２９−３７−３ＡおよびＴＡＲＰ２９−３７−９Ｖが、ヒトＴ細胞において免疫原性であることを示した。ＴＡＲＰ２９−３７−９Ｖ特異的Ｔ細胞は、３つ全てのペプチドを用いてパルスした標的を、同等に十分に認識したが、一方でＴＡＲＰ２９−３７−３Ａ特異的Ｔ細胞は、ＴＡＲＰ２９−３７−３Ａを用いてパルスした標的のみを認識した。これは、ＴＡＲＰ２９−３７−３Ａペプチドは、ヒトにおける免疫化について適切ではないが、一方でＴＡＲＰ２９−３７−９Ｖのほうが、野生型配列を認識するＴ細胞を生成する可能性が高いことを示唆する。ＴＡＲＰ２７−３５に特異的なヒトＴ細胞は、当該配列を用いてパルスした標的を認識した。ＴＡＲＰペプチドを用いてパルスした標的を殺傷する能力に加えて、ＴＡＲＰペプチドに特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＨＬＡ−Ａ２陽性であり、かつＴＡＲＰ配列を発現するヒト腫瘍標的を殺傷することができ、ＴＡＲＰは、ヒト腫瘍細胞において内在的にプロセシングされること、および提示されることが確認される。ＴＡＲＰに特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞と反応する四量体の有効性は、ＴＡＲＰペプチドに対する免疫を刺激する能力を評価する単純な手段を提供する。１つの調査において、四量体陽性細胞は、健常対照における０．０１％〜０．６％と比較して、前立腺がん患者および乳がん患者において、ＣＤ８＋Ｔ細胞の０．６６％〜３．９％にわたる。
【０１２９】
Ｂ．野生型（ＷＴ）およびエピトープエンハンスメントされた（ＥＥ）ＴＡＲＰペプチドを利用する、治療的ワクチン接種（ＮＣＩ  ０９−Ｃ−０１３９）
ＮＣＩ  ０９−Ｃ−０１３９は、ステージＤ０前立腺がん（内臓または骨の転移性疾患の形跡がない、ＰＳＡの生化学的再発）を有する、ＨＬＡ−Ａ*０２０１陽性男性において、ＴＡＲＰワクチン接種を試験する、前向き無作為パイロット臨床試験である。がんを有する患者におけるペプチドワクチンを用いた治療的免疫化のための最適な方法は不明であるため、患者は、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（登録商標）  ＩＳＡ  ５１  ＶＧアジュバントに加えてＧＭ−ＣＳＦにおいてＴＡＲＰペプチドを用いるワクチン接種（腕Ａ）、またはＴＡＲＰペプチドでパルスした樹状細胞（ＤＣ）ワクチンを、自家移植として受けるように無作為化された。最初の目的は、ＴＡＲＰワクチン接種の安全性および免疫原性（ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴ、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）および四量体アッセイによって測定される）を決定することであった。第二の目的は、ＴＡＲＰペプチドワクチン接種の、ＰＳＡ倍加時間（ＰＳＡＤＴ）（Ａｒｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｕｒｏｌ  １７９：２１８１−２１８６，２００８）、ならびにＰＳＡ増殖速度定数および縮小速度定数への影響を決定することであった。すべての試験参加者は、３ヶ月より長く、かつ１５ヶ月以下のベースラインＰＳＡＤＴ（試験開始の１２ヶ月以内でのＰＳＡ値を使用して計算された）を有さなければならなかった。
【０１３０】
ＴＡＲＰワクチンは、３週、６週、９週、１２週および１５週に、必要に応じて、２４週でのＰＳＡＤＴにおける変化（ワクチン接種前のＰＳＡＤＴよりも５０％以上の増加）または免疫パラメーター（少なくとも２つの時点で、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴによって測定されたＴＡＲＰ特異的反応性において３倍の増加）に基づき、３６週に６回目のワクチン用量を伴って、深部皮下注射によって（腕Ａ）、または皮内に（腕Ｂ、２０×１０６生存細胞／ワクチン）投与された。ＴＡＲＰワクチン接種は、安全であり、そして十分に許容され、グレード２以下の注射部位反応に限定された有害事象を伴うことが見出された。ワクチン接種に関連した全身性もしくは急性過敏性反応、または検査異常はなかった。ＴＡＲＰワクチン接種はまた、臨床結果、および患者がどれほどよくなっているかについての代用マーカーである、ＰＳＡ倍加時間（ＰＳＡＤＴ）またはｓｌｏｐｅ  ｌｏｇ（ＰＳＡ）として計測された、ＰＳＡレベルの上昇（ＰＳＡ速度）における遅延に関連することが示された。統計的に非常に有意な低減は、ｓｌｏｐｅ  ｌｏｇ  ＰＳＡにおいて観察された（すなわち、３〜２４週と３〜４８週との両方で、ワクチン接種前のベースラインと比較して、どれほど速く患者のＰＳＡが上昇したかにおいて有意な遅延があった）。加えて、この３〜２４週での低減したｓｌｏｐｅ  ｌｏｇ（ＰＳＡ）／ＰＳＡ速度における遅延の効果は、継時的に有意に衰微せず、かつ３６週での追加のワクチン用量によって影響されなかった。
【０１３１】
Ｃ．マルチエピトープ（ＭＥ）ＴＡＲＰワクチンデザイン
第二世代ＭＥ  ＴＡＲＰワクチンは、ＴＡＲＰタンパク質全体のアミノ酸配列（配列番号１）に基づく。ワクチンプラットフォームは、ＮＣＩ  ０９−Ｃ−０１３９において利用された、２つの元の９ｍｅｒのＨＬＡ−Ａ*０２０１結合ＴＡＲＰペプチドエピトープ（ＷＴ  ＴＡＲＰ２７−３５およびＥＥ  ＴＡＲＰ２９−３７−９Ｖ）、ならびにＴＡＲＰ配列全体にわたる合計が７つのペプチドのための、１０アミノ酸によってオーバーラップする追加の５つの２０ｍｅｒのＴＡＲＰペプチドを包含する。
【０１３２】
ＳＬＰは、２０〜５０アミノ酸の合成ペプチドであり、この長さのため、ＤＣによる内在化およびプロセシングを必要とする。これらのプロフェッショナル抗原提示細胞によるプロセシングは、免疫の代わりに寛容を誘導し得る可能性のある、非プロフェッショナル抗原提示細胞による提示を回避する。オーバーラップＳＬＰは、ＣＤ４エピトープとＣＤ８エピトープとの両方を含有し、これは、ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞との両方の並行する刺激をもたらし、そしてより強力であり、より効果的な免疫応答をもたらす。加えて、オーバーラップＳＬＰは、個体のＭＨＣ型を考慮しない全ての可能性のあるエピトープを含有するため、ＳＬＰの使用は、米国のヒト集団などの遺伝的に多様なヒト集団において、任意の所定のワクチンの治療的適用可能性を最大化するための、非常に魅力的なアプローチである。タンパク質ワクチン接種は、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答および抗体の誘導に非常に適切であるが、ドミナントなエピトープに対する応答とＣＤ８＋Ｔ細胞免疫との両方を誘導する長鎖ペプチドとは対照的に、通常、ドミナントなエピトープに対する応答を誘導し、そしてしばしば適正かつ効果的なＣＤ８＋Ｔ細胞免疫を誘導しない。加えて、ＤＣによるＳＬＰのプロセシングおよび取り込みのほうが、インタクトなタンパク質のプロセシングおよび取り込みと比較してより効果的である。これらの理由のため、ＳＬＰおよびマルチエピトープワクチンは、より広範なレパートリーのＴ細胞応答を誘導することができ、これにより抗腫瘍エフェクター機能に関連する可能性のあるエピトープの多様性を最大化し、一方で腫瘍抗原エスケープの危険性を最小化する。
【０１３３】
本明細書中で開示されるマルチエピトープＴＡＲＰペプチドワクチンプラットフォームの利点は、オーバーラップエピトープがＴＡＲＰタンパク質全体をカバーし、ＨＬＡ拘束性についての必要性を除外し、それゆえ、ＴＡＲＰを発現する腫瘍を有する、いずれかのまたはすべての患者集団が、治療的ワクチン接種の候補者となることを可能にすることである。加えて、これらのより長い合成ペプチドは、改善された機能的アビディティおよび長期性、ならびに体液性抗ＴＡＲＰ抗体応答を伴う、よりよいＣＤ８＋Ｔ細胞応答の生成を可能にする、ＭＨＣクラスＩＩＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞エピトープを包含する。タンパク質全体を含むペプチド配列は、いずれかのＨＬＡ分子によって提示され得る、すべての可能性のあるエピトープを有し、それゆえ、前立腺がん患者の集団全体へのワクチン接種に適切であり、相応の治験登録（ａｃｃｒｕａｌ）を実行可能とする。１０残基によりオーバーラップする２０ｍｅｒなどのオーバーラップ長鎖ペプチドは、タンパク質全体のすべての可能性のあるエピトープを含有するため、当該ペプチドは、当該タンパク質の全体に相当するように使用されているが、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞へのクラスＩ  ＨＬＡ提示とクラスＩＩ  ＨＬＡ提示との両方についてのプロセシングに対して、より影響を受けやすい（Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ  ２４：６３５６−６３６５，２００６；Ｍｉｒｓｈａｈｉｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ  ２７：１８２５−１８３３，２００９；Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ  ２３：３６３０−３６３３，２００５；Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８４：９１８４−９１９１，２００９）。
【０１３４】
以下の実施例は、ある特定の特徴および／または実施形態を説明するために提供される。これらの実施例は、本開示を、記載される特定の特徴または実施形態に限定するように解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１３５】
実施例１：ステージＤ０前立腺がんを有する男性における、マルチエピトープＴＡＲＰ（ＭＥ  ＴＡＲＰ）ペプチド自家樹状細胞ワクチン接種の、無作為化プラセボ対照フェーズＩＩ試験
試験デザイン
図１に概説されるように、最初の６人の患者のリードインコホートにおいて、安全性および免疫原性を１２週にわたって確立させた後に、適格な患者を、自家のＴＡＲＰマルチエピトープＤＣワクチンまたは自家の水簸された単球ワクチンプラセボのいずれかを受けるように、２：１に前向きに無作為化する。このリードインコホートの登録は、第一の３人の患者について安全性評価のための３週間の間隔を与えるために３週ごとに調整し、これは、次に登録される患者が、１回目の用量のＭＥ  ＴＡＲＰワクチンを受けるように予定される前である。これらの第一の３人の患者において、有害な安全性シグナルが認められない場合、残り３人のリードイン被験体の登録、およびその後の試験被験体の無作為化は、第一の試験被験体が、１回目のＭＥ  ＴＡＲＰワクチン用量を受けた後の９週目または９週後、かつ第三の試験被験体が、１回目のＭＥ  ＴＡＲＰワクチン用量を受けて３週後に実施する。すべての患者は、３、６、９、１２、１５および２４週に、皮内に送達される、合計が６用量のワクチン（２０×１０６生存細胞／用量）を受ける。すべての患者は、ステージＤ０疾患の持続を確認するために、４８週および９６週に再び段階分類を受ける。図１に概説されるように、臨床評価、検査およびイメージング試験の試験モニタリング予定は、すべての患者について同一である。
【０１３６】
すべての患者は、図１に示される試験週来院で行われる、病歴および身体検査、慣例のモニタリング検査、ＰＳＡレベルおよびテストステロンレベルを有する。ＰＳＡ倍加時間（ＰＳＡＤＴ）およびｓｌｏｐｅ  ｌｏｇ（ＰＳＡ）は、ＰＳＡＤＴ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎｅ  Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  ｎｏｍｏｇｒａｍ（オンラインで入手可能）を使用して、試験来院ごとに計算される。マルチエピトープＴＡＲＰペプチドワクチン接種への免疫学的応答（ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴ、ＩＣＳおよび四量体アッセイ、抗ＴＡＲＰ抗体）は、以下の時点で検査される：０週、１２週、１８週、２４週、４８週、７２週および９６週。
【０１３７】
ワクチン投与
すべての患者は、０週来院において、樹状細胞調製のために末梢血単球を除去するため、ならびにフローサイトメトリーおよび免疫学的試験のために末梢血単核細胞を除去するために、１５Ｌ〜１８Ｌの成分採血を受ける。その後の樹状細胞成熟のために使用される細胞は、最初の成分採血の間に凍結された単球に由来する。適格な被験体は、３週において開始する、自家のＭＥ  ＴＡＲＰ樹状細胞または水簸された単球プラセボワクチンを受ける。活性のあるＭＥ  ＴＡＲＰ  ＤＣワクチンを受ける患者については、それぞれのペプチドは、当該ペプチドの相応の結合を保証するために別個に樹状細胞にパルスされ、そして細胞は、パルス後に遊離のペプチドを除去するために、洗浄されない。成熟樹状細胞確認マーカーおよび出荷基準の実証に次いで、別個にペプチドでパルスした樹状細胞は、投与のために再び組み合わされる。
・自家のＭＥ  ＴＡＲＰ  ＤＣおよび水簸された単球プラセボワクチン調製物は、患者へのワクチン投与についてのリリースの前に、出荷基準（有核細胞内容物および濃度、外観、ＤＣ確認マーカーのフローサイトメトリー実証、６０％以上の生存率ならびに生成物の滅菌状態および安全性試験）について評価する。
・両方の群について、ワクチンは、注射あたり０．５ｍｌの最大量で、前腕での２つのワクチン接種部位において、皮内に投与される。ワクチン接種は、それぞれのワクチン接種に伴って、左前腕と右前腕との間で交互にされる。すべての患者は、３週、６週、９週、１２週、１５週、および２４週に送達される、合計が６用量のワクチン（２０×１０６生存細胞／用量）を受け、そしてステージＤ０疾患の維持を確認するために、４８週および９６週に再び段階分類を受ける。
・患者は、１回目のＴＡＲＰペプチドワクチン用量のあとの１時間の間、急性有害事象ワクチン反応についてモニターされる。有害反応が、１回目のワクチン接種に伴って観察されない場合、患者は、その後のすべてのワクチン接種について１５分間モニターされる。
・有害反応が、１回目のワクチンのあとに観察される場合、当該反応は、特徴づけられ、そしてそれが、用量制限毒性（ＤＬＴ）として見なされるか否かについての決定がなされる。有害反応が、ＤＬＴではないと決定される場合、その後のワクチン接種についてワクチン接種後にモニタリングする期間は、最初のワクチン反応の重症度に依存して臨床的に指示されるように決定される。
・すべての患者は、ＭＥ  ＴＡＲＰ  ＤＣワクチン記録カードを与えられ、そしてそれぞれのＭＥ  ＴＡＲＰ  ＤＣまたはプラセボワクチン用量のあとに、記入する方法について教えられる。
【０１３８】
このプロトコルは、ヒトにおけるマルチエピトープＴＡＲＰワクチン接種に初めて関係するため、無作為化された被験体の登録は、１２週にわたって安全性および免疫原性が、最初に調整された６人の患者の登録リードインにおいて確立されるまで開始しない。これらの６人の患者において、１回目のワクチン接種のあとの１２週にわたって、有害事象が観察されない場合、追加の患者の登録は、ロジスティックに実行可能な限り早く進行し得る。
【０１３９】
自家のマルチエピトープ（ＭＥ）ＴＡＲＰ樹状細胞ワクチンの説明
第二世代ＭＥ  ＴＡＲＰワクチンは、ＴＡＲＰタンパク質全体のアミノ酸配列（配列番号１）に基づく。ワクチンプラットフォームは、ＮＣＩ  ０９−Ｃ−０１３９において利用された、２つの元の９ｍｅｒのＨＬＡ−Ａ*０２０１結合ＴＡＲＰペプチドエピトープ（ＷＴ  ＴＡＲＰ２７−３５およびＥＥ  ＴＡＲＰ２９−３７−９Ｖ）、およびＴＡＲＰ配列全体にわたる、合計が７つのペプチドのための、１０アミノ酸によってオーバーラップする、追加の５つの２０ｍｅｒのＴＡＲＰペプチドを包含する。
ＴＡＲＰ２７−３５：ＦＶＦＬＲＮＦＳＬ（配列番号３；ＨＬＡ−Ａ＊０２０１拘束性）
ＴＡＲＰ２９−３７−９Ｖ：ＦＬＲＮＦＳＬＭＶ（配列番号４；ＨＬＡ−Ａ＊０２０１拘束性）
ＴＡＲＰ１−２０：ＭＱＭＦＰＰＳＰＬＦＦＦＬＱＬＬＫＱＳＳ（配列番号５；ＨＬＡ非拘束性）
ＴＡＲＰ１１−３０：ＦＦＬＱＬＬＫＱＳＳＲＲＬＥＨＴＦＶＦＬ（配列番号６；ＨＬＡ非拘束性）
ＴＡＲＰ２１−４０：ＲＲＬＥＨＴＦＶＦＬＲＮＦＳＬＭＬＬＲＧ（配列番号７；ＨＬＡ非拘束性）
ＴＡＲＰ３１−５０：ＲＮＦＳＬＭＬＬＲＧＩＧＫＫＲＲＡＴＲＦ（配列番号８；ＨＬＡ非拘束性）
ＴＡＲＰ４１−５８：ＩＧＫＫＲＲＡＴＲＦＷＤＰＲＲＧＴＰ（配列番号９；ＨＬＡ非拘束性）
【０１４０】
自家ＭＥ  ＴＡＲＰ  ＤＣワクチンおよび自家の水簸された単球プラセボワクチンは、実施例２に概説されるように、現行の適正薬品製造基準（ｃＧＭＰ）を利用して生成される。
【０１４１】
試験薬物
インターロイキン−４  ＣＥＬＬＧＥＮＩＸ（登録商標）
製品説明：本試験において使用されるインターロイキン−４（ＩＬ−４）は、ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ（フライベルク、ドイツ）によって製造され、供給される。それは、インビトロで樹状細胞を成熟させるための補助的な製品として使用され、患者へ直接的に投与されない。ＩＬ−４は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、好酸球、造血前駆細胞、内皮細胞に重要な効果を及ぼし、樹状細胞の成熟を促進する。Ｅ．Ｃｏｌｉにおいて発現させた場合、相補的ＤＮＡクローン（ｃＤＮＡ）は、分子量が１４，９５７ダルトンの１２９アミノ酸タンパク質を生ずる。ＩＬ−４は、高度に精製された（９５％以上のクロマトグラフィー純度）、滅菌の、水溶性のタンパク質である。
【０１４２】
製剤化および調製：注射のためのｒｈＩＬ−４滅菌粉末は、グリシン、ヒト血清アルブミン、クエン酸およびクエン酸ナトリウムと一緒に製剤化された滅菌凍結乾燥粉末として、１００ｍｃｇおよび２００ｍｃｇのバイアルで（総量が、それぞれ１２０ｍｃｇおよび２４０ｍｃｇのＩＬ−４を含有する）供給される。再構成されていないＩＬ−４は、２〜８℃で冷蔵保存する。注射ＵＳＰのための１．２ｍＬの滅菌水を、注射のためにそれぞれのｒｈＩＬ−４滅菌粉末のバイアルに添加する。粉末を完全に溶かすためにバイアルを緩やかに振とうし、そして使用の前に、変色および微粒子について視覚的に検査する。
【０１４３】
安定性および保存：再構成された製品は、２〜８℃で冷蔵し、２４時間以内に使用する。
【０１４４】
投与手順：樹状細胞培養において使用されるため、患者へ直接的に投与されない。
【０１４５】
ＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）
製品説明：Ｓｔｅｌｌａｒ  ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙのＫＬＨは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈによって製造される、効力のある臨床的グレードの形態である。それは、ジャイアントキーホールリンペット（Ｍｅｇａｔｈｕｒａ  ｃｒｅｎｕｌａｔａ）のヘモシアニンから精製される。ＫＬＨの変性型サブユニットは、分子量が４００〜４５０，０００ダルトンの糖タンパク質である。ＫＬＨの天然形態は、十二量体であり、これは、分子量が６〜９０００．０００ダルトンの２０（２０）サブユニットのＫＬＨからなる。ヘモシアニンにおいて、少なくとも５０％のＫＬＨは、十二量体として存在し、そしてその残りは、十二量体凝集体として見出され得る。Ｓｔｅｌｌａｒ  ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙのＫＬＨは、高分子量を有する天然分子として精製され、ＫＬＨ−ＨＭＷとして示される。
【０１４６】
製剤化および調製：Ｓｔｅｌｌａｒ  ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙのＫＬＨは、１０ｍＭ  リン酸ナトリウム、１３５ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２および０．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２により構成される緩衝溶液において、可溶性形態で提供される。それは、製造者によって５ｍｇ／ｍＬで６００ｍｇ容器において提供される。それは、２ｍｇ／ｍＬ、２５０マイクロリットル／バイアルで、単回使用バイアルに再バイアル化される。
【０１４７】
安定性および保存：ＫＬＨ−ＨＭＷは、２〜８℃で保存される場合、少なくとも１２ヶ月安定である。
【０１４８】
投与手順：ＫＬＨ−ＨＭＷは、樹状細胞の生成のために、インビトロで１０ｍｃｇ／ｍＬの濃度で使用する。細胞を、投与の前に大量洗浄する。
【０１４９】
ＴＡＲＰ２７−３５（野生型）ペプチドＮＳＣ＃７４０７０３
製品説明：ＴＡＲＰ２７−３５は、腫瘍関連タンパク質ＴＡＲＰの、合成ＨＬＡ−Ａ２拘束性９アミノ酸エピトープである。
【０１５０】
アミノ酸配列：フェニルアラニン−バリン−フェニルアラニン−ロイシン−アルギニン−アスパラギン−フェニルアラニン−セリン−ロイシン（ＦＶＦＬＲＮＦＳＬ；配列番号３）。
【０１５１】
分子量：１１４２．４。
【０１５２】
製剤化および調製：当該ペプチドは、ＮｅｏＭＰＳ，Ｉｎｃ．（サンディエゴ、ＣＡ）によって製造される。当該ペプチドは、滅菌白色凍結乾燥粉末を含有する、５ｍＬのシリコン処理された滅菌の琥珀色に形成されたガラスバイアルとしてバイアル化される。それぞれのバイアルは、１．１ｍｇのＴＡＲＰ２７−３５ペプチドおよびマンニトールを含有する。
【０１５３】
安定性および保存：完成した注射可能な投与量形態は、長期間保存については冷凍庫（−７０℃）において保存する。インタクトなバイアルは、制御された室温（１５℃〜３０℃）または冷蔵庫（２℃〜８℃）において保存される場合、少なくとも６ヶ月間安定であり、冷凍庫（−１０℃〜−２５℃および−７０℃）において保存される場合、少なくとも３６ヶ月間安定である。当該ペプチドバイアルは、防腐剤を包含しない；一度当該ペプチドバイアルが移入される（ｅｎｔｅｒ）と、未使用のペプチド溶液は、３時間後に廃棄する。
【０１５４】
投与手順：自家のペプチドでパルスした樹状細胞ワクチンは、凍結保存された患者の単球から、ＧＭＰ条件のもとに調製する。解凍後、単球をｒｈＩＬ−４およびｒｈＧＭ−ＣＳＦと一緒に５日培養に置いて未成熟樹状細胞を生成し、次いでＫＬＨを用いてパルスし、リポ多糖（ＬＰＳ）およびＩＦＮ−γを用いて成熟させる。自家樹状細胞の画分を、ＴＡＲＰ２７−３５ペプチドを用いて別個にパルスする。ペプチドでパルスする培地を除去した後に、樹状細胞の個々の画分を組み合せ、注入培地（熱で非働化した自家の血漿を１０％含有するＰｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ  Ａ）において４０×１０６細胞／ｍｌまで濃縮する。最終の、ペプチドを用いて負荷し、容量を減少させた成熟樹状細胞生成物は、皮内への新鮮投与のために、滅菌シリンジにおいて調製する。
【０１５５】
ＴＡＲＰ２９−３７−９Ｖペプチド（エピトープエンハンスメントされた）ＮＳＣ＃７４０７０４
製品説明：ＴＡＲＰ２９−３７−９Ｖは、その結合アフィニティーおよび免疫原性を上昇させるための単一アミノ酸置換（ロイシンの代わりに、３７番目にバリン）を伴う、腫瘍関連タンパク質ＴＡＲＰの、合成ＨＬＡ−Ａ２拘束性９アミノ酸エピトープである。
【０１５６】
アミノ酸配列：フェニルアラニン−ロイシン−アルギニン−アスパラギン−フェニルアラニン−セリン−ロイシン−メチオニン−バリン（ＦＬＲＮＦＳＬＭＶ；配列番号４）。
【０１５７】
分子量：１１２６．４。
【０１５８】
製剤化および調製：当該ペプチドは、ＮｅｏＭＰＳ，Ｉｎｃ．（サンディエゴ、ＣＡ）によって製造される。当該ペプチドは、０．５ｍＬの滅菌透明溶液を含有する、テフロン（登録商標）で覆われたストッパーを伴う、５ｍＬのシリコン処理された滅菌の琥珀色の１型ガラスバイアルとしてバイアル化される。１ｍＬあたり、２．２ｍｇのＴＡＲＰ２９−３７（３７Ｖ）ペプチドおよび０．５ｍｃＬの０．０５％  ｖ／ｖのトリフルオロアセテートを含有する。
【０１５９】
安定性および保存：完成した注射可能な投与量形態は、長期間保存については冷凍庫（−７０℃）において保存する。インタクトなバイアルは、制御された室温（１５℃〜３０℃）で保存される場合、少なくとも６ヶ月間安定であり、冷蔵庫（２℃〜８℃）において保存される場合、少なくとも９ヶ月間安定であり、冷凍庫（−１０℃〜−２５℃および−７０℃）において保存される場合、少なくとも３６ヶ月間安定である。当該ペプチドバイアルは、防腐剤を包含しない；一度当該ペプチドバイアルが導入されると、未使用のペプチド溶液は、３時間後に廃棄する。
【０１６０】
投与手順：自家のペプチドでパルスした樹状細胞ワクチンは、凍結保存された患者の単球から、ＧＭＰ条件のもとに調製する。解凍後、単球をｒｈＩＬ−４およびｒｈＧＭ−ＣＳＦと一緒に５日培養に置いて未成熟樹状細胞を生成し、次いでＫＬＨを用いてパルスし、ＬＰＳおよびＩＦＮ−γを用いて成熟させる。自家樹状細胞の画分を、ＴＡＲＰ２９−３７−９Ｖペプチドを用いて別個にパルスする。ペプチドでパルスする培地を除去した後に、樹状細胞の個々の画分を組み合わせ、注入培地（熱で非働化された自家の血漿を１０％含有するＰｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ  Ａ）において４０×１０６細胞／ｍｌまで濃縮する。最終の、ペプチドを用いて負荷し、容量を減少させた成熟樹状細胞生成物は、皮内への新鮮投与のために、滅菌シリンジにおいて調製する。
【０１６１】
ＴＡＲＰ１−２０ペプチド
アミノ酸配列：Ｈ−Ｍｅｔ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙｎ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−ＯＨアセテート（ＭＱＭＦＰＰＳＰＬＦＦＦＬＱＬＬＫＱＳＳ；配列番号５）。
【０１６２】
製剤化および調製：当該ペプチドは、ＮｅｏＭＰＳ，Ｉｎｃ．（サンディエゴ、ＣＡ）によって製造される。当該ペプチドは、１３ｍｍの灰色のクロロブチル、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）「テフロン（登録商標）」で覆われたストッパー、および１３ｍｍのアルミニウムのフリップオフシールを伴う、２ｍＬの透明１型ホウケイ酸ガラスバイアルとしてバイアル化される。バイアルは、０．１％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含むジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）において、１．２ｍＬの１ｍｇ／ｍＬのＴＡＲＰ１−２０ペプチド（ＭＰＳ−４７９）の滅菌溶液を含有する。
【０１６３】
保存：ペプチドは、−７０℃で保存される。
【０１６４】
投与手順：自家のペプチドでパルスした樹状細胞ワクチンは、凍結保存された患者の単球から、ＧＭＰ条件のもとに調製する。解凍後、単球をｒｈＩＬ−４およびｒｈＧＭ−ＣＳＦと一緒に５日培養に置いて未成熟樹状細胞を生成し、次いでＫＬＨを用いてパルスし、ＬＰＳおよびＩＦＮ−γを用いて成熟させる。自家樹状細胞の画分を、ＴＡＲＰ１−２０ペプチドを用いて別個にパルスする。ペプチドでパルスする培地を除去した後に、樹状細胞の個々の画分を組み合わせ、注入培地（熱で非働化された自家の血漿を１０％含有するＰｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ  Ａ）において４０×１０６細胞／ｍｌまで濃縮する。最終の、ペプチドを用いて負荷し、容量を減少させた成熟樹状細胞生成物は、皮内への新鮮投与のために、滅菌シリンジにおいて調製する。
【０１６５】
ＴＡＲＰ１１−３０ペプチド
アミノ酸配列：Ｈ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＯＨアセテート（ＦＦＬＱＬＬＫＱＳＳＲＲＬＥＨＴＦＶＦＬ；配列番号６）。
【０１６６】
製剤化および調製：当該ペプチドは、ＮｅｏＭＰＳ，Ｉｎｃ．（サンディエゴ、ＣＡ）によって製造される。当該ペプチドは、１３ｍｍの灰色のクロロブチル、ＰＴＦＥ「テフロン（登録商標）」で覆われたストッパー、および１３ｍｍのアルミニウムのフリップオフシールを伴う、２ｍＬの透明１型ホウケイ酸ガラスバイアルとしてバイアル化される。バイアルは、０．１％  ＴＦＡを含むＤＭＳＯにおいて、１．２ｍＬの１ｍｇ／ｍＬのＴＡＲＰ１１−３０ペプチド（ＭＰＳ−４８０）の滅菌溶液を含有する。
【０１６７】
保存：ペプチドは、−７０℃で保存される。
【０１６８】
投与手順：自家のペプチドでパルスした樹状細胞ワクチンは、凍結保存された患者の単球から、ＧＭＰ条件のもとに調製する。解凍後、単球をｒｈＩＬ−４およびｒｈＧＭ−ＣＳＦと一緒に５日培養に置いて未成熟樹状細胞を生成し、次いでＫＬＨを用いてパルスし、ＬＰＳおよびＩＦＮ−γを用いて成熟させる。自家樹状細胞の画分を、ＴＡＲＰ１１−３０ペプチドを用いて別個にパルスする。ペプチドでパルスする培地を除去した後に、樹状細胞の個々の画分を組み合わせ、注入培地（熱で非働化された自家の血漿を１０％含有するＰｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ  Ａ）において４０×１０６細胞／ｍｌまで濃縮する。最終の、ペプチドを用いて負荷し、容量を減少させた成熟樹状細胞生成物は、皮内への新鮮投与のために、滅菌シリンジにおいて調製する。
【０１６９】
ＴＡＲＰ２１−４０ペプチド
アミノ酸配列：Ｈ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−ＯＨアセテート（ＲＲＬＥＨＴＦＶＦＬＲＮＦＳＬＭＬＬＲＧ；配列番号７）。
【０１７０】
製剤化および調製：当該ペプチドは、ＮｅｏＭＰＳ，Ｉｎｃ．（サンディエゴ、ＣＡ）によって製造される。当該ペプチドは、１３ｍｍの灰色のクロロブチル、ＰＴＦＥ「テフロン（登録商標）」で覆われたストッパー、および１３ｍｍのアルミニウムのフリップオフシールを伴う、２ｍＬの透明１型ホウケイ酸ガラスバイアルとしてバイアル化される。バイアルは、注射のための滅菌水において、１．２ｍＬの１ｍｇ／ｍＬのＴＡＲＰ２１−４０ペプチド（ＭＰＳ−４８１）の滅菌溶液を含有する。
【０１７１】
保存：ペプチドは、−７０℃で保存される。
【０１７２】
投与手順：自家のペプチドでパルスした樹状細胞ワクチンは、凍結保存された患者の単球から、ＧＭＰ条件のもとに調製する。解凍後、単球をｒｈＩＬ−４およびｒｈＧＭ−ＣＳＦと一緒に５日培養に置いて未成熟樹状細胞を生成し、次いでＫＬＨを用いてパルスし、ＬＰＳおよびＩＦＮ−γを用いて成熟させる。自家樹状細胞の画分を、ＴＡＲＰ２１−４０ペプチドを用いて別個にパルスする。ペプチドでパルスする培地を除去した後に、樹状細胞の個々の画分を組み合わせ、注入培地（熱で非働化された自家の血漿を１０％含有するＰｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ  Ａ）において４０×１０６細胞／ｍｌまで濃縮する。最終の、ペプチドを用いて負荷し、容量を減少させた成熟樹状細胞生成物は、皮内への新鮮投与のために、滅菌シリンジにおいて調製する。
【０１７３】
ＴＡＲＰ３１−５０ペプチド
アミノ酸配列：Ｈ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＯＨアセテート（ＲＮＦＳＬＭＬＬＲＧＩＧＫＫＲＲＡＴＲＦ；配列番号８）。
【０１７４】
製剤化および調製：当該ペプチドは、ＮｅｏＭＰＳ，Ｉｎｃ．（サンディエゴ、ＣＡ）によって製造される。当該ペプチドは、１３ｍｍの灰色のクロロブチル、ＰＴＦＥ「テフロン（登録商標）」で覆われたストッパー、および１３ｍｍのアルミニウムのフリップオフシールを伴う、２ｍＬの透明１型ホウケイ酸ガラスバイアルとしてバイアル化される。バイアルは、注射のための滅菌水において、１．２ｍＬの１ｍｇ／ｍＬのＴＡＲＰ３１−５０ペプチド（ＭＰＳ−４８２）の滅菌溶液を含有する。
【０１７５】
保存：ペプチドは、−７０℃で保存される。
【０１７６】
投与手順：自家のペプチドでパルスした樹状細胞ワクチンは、凍結保存された患者の単球から、ＧＭＰ条件のもとに調製する。解凍後、単球をｒｈＩＬ−４およびｒｈＧＭ−ＣＳＦと一緒に５日培養に置いて未成熟樹状細胞を生成し、次いでＫＬＨを用いてパルスし、ＬＰＳおよびＩＦＮ−γを用いて成熟させる。自家樹状細胞の画分を、ＴＡＲＰ３１−５０ペプチドを用いて別個にパルスする。ペプチドでパルスする培地を除去した後に、樹状細胞の個々の画分を組み合わせ、注入培地（熱で非働化された自家の血漿を１０％含有するＰｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ  Ａ）において４０×１０６細胞／ｍｌまで濃縮する。最終の、ペプチドを用いて負荷し、容量を減少させた成熟樹状細胞生成物は、皮内への新鮮投与のために、滅菌シリンジにおいて調製する。
【０１７７】
ＴＡＲＰ４１−５８ペプチド
アミノ酸配列：Ｈ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＯＨアセテート（ＩＧＫＫＲＲＡＴＲＦＷＤＰＲＲＧＴＰ；配列番号９）。
【０１７８】
製剤化および調製：当該ペプチドは、ＮｅｏＭＰＳ，Ｉｎｃ．（サンディエゴ、ＣＡ）によって製造される。当該ペプチドは、１３ｍｍの灰色のクロロブチル、ＰＴＦＥ「テフロン（登録商標）」で覆われたストッパー、および１３ｍｍのアルミニウムのフリップオフシールを伴う、２ｍＬの透明１型ホウケイ酸ガラスバイアルとしてバイアル化される。バイアルは、注射のための滅菌水において、１．２ｍＬの１ｍｇ／ｍＬのＴＡＲＰ４１−５８ペプチド（ＭＰＳ−４８３）の滅菌溶液を含有する。
【０１７９】
保存：ペプチドは、−７０℃で保存される。
【０１８０】
投与手順：自家のペプチドでパルスした樹状細胞ワクチンは、凍結保存された患者の単球から、ＧＭＰ条件のもとに調製する。解凍後、単球をｒｈＩＬ−４およびｒｈＧＭ−ＣＳＦと一緒に５日培養に置いて未成熟樹状細胞を生成し、次いでＫＬＨを用いてパルスし、ＬＰＳおよびＩＦＮ−γを用いて成熟させる。自家樹状細胞の画分を、ＴＡＲＰ４１−５８ペプチドを用いて別個にパルスする。ペプチドでパルスする培地を除去した後に、樹状細胞の個々の画分を組み合わせ、注入培地（熱で非働化され自家の血漿を１０％含有するＰｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ  Ａ）において４０×１０６細胞／ｍｌまで濃縮する。最終の、ペプチドを用いて負荷し、容量を減少させた成熟樹状細胞生成物は、皮内への新鮮投与のために、滅菌シリンジにおいて調製する。
【０１８１】
抗ＴＡＲＰ抗体および細胞応答の検出
自家のマルチエピトープＴＡＲＰ樹状細胞ワクチン接種の免疫原性を決定するために、定量的抗ＴＡＲＰ抗体試験を０週、１２週、１８週、２４週、４８週、７２週および９６週に行った。免疫原性は、抗ＴＡＲＰ抗体濃度（ｍｃｇ／ｍｌとして測定される）における３倍の増加、または抗体希釈タイターにおいて、ベースラインよりも４倍の増加によって示される。
【０１８２】
ワクチンが誘導する抗ＴＡＲＰ抗体プロファイルおよび抗ＰＳＡ抗体プロファイルもまた、０週、１２週、１８週、２４週、４８週、７２週および９６週にペプチドマイクロアレイによって評価する。
【０１８３】
０週、１２週、４８週、２４週および４８週に、ＴＡＲＰ特異的細胞応答を評価する。ＣＦＳＥ増殖、ＩＣＳ、ＥＬＩＳＰＯＴ（ＩＦＮ−γ、グランザイムＢ、パーフォリン）および四量体アッセイを行う。
【０１８４】
実施例２：樹状細胞ワクチン調製
ＭＥ  ＴＡＲＰワクチン調製
自家細胞採取
血液回収は、標準的なリンパ球除去による；１５〜１８リットルの血液全体を、末梢血単核細胞（ＭＮＣ）を、少なくとも２．２×１０９単球の目標数で回収するために処理する。リンパ球もまた、凍結保存する。成分採血は、承認された標準的な操作手順を使用して行う。両側末梢静脈アクセスは、可能なときに成分採血のために使用する。代替的に、指示される場合には、成分採血の日での回収のために、外来患者として一時的な大腿部中心静脈カテーテル（ＣＶＬ）を行う。予防的静脈内ＣａＣｌ２およびＭｇＳＯ４注入を、シトラートの毒性を処置するか、または妨げるために、成分採血の間に施し得る。
【０１８５】
マルチエピトープＴＡＲＰペプチドでパルスした樹状細胞
末梢血単球から調製した自家の樹状細胞を、以下の７つの異なるＴＡＲＰに由来するペプチドを用いて負荷する。
【化４】
0006758185.tif 000006
【０１８６】
自家の樹状細胞の異なる画分を、これらのペプチドの１つのみを用いて個々にパルスし、７つの画分を患者への投与の前に組み合わせる。
【０１８７】
ＭＥ  ＴＡＲＰ  ＤＣワクチンの製剤化および調製
自家のペプチドでパルスした樹状細胞ワクチンを、元々の０週成分採血の間に得られた、凍結保存された患者の単球から、ｃＧＭＰ条件のもとに調製する。樹状細胞培養のための自家の単球を、カウンターフロー水簸によって、末梢血ＭＮＣ成分採血回収物から富化し、約３３３×１０６細胞／バイアルで少なくとも８バイアルに等分し、将来の樹状細胞生成物の調製のために凍結保存する。解凍後、単球をｒｈＩＬ−４およびｒｈＧＭ−ＣＳＦと一緒に５日培養に置いて未成熟樹状細胞を生成し、次いでＫＬＨを用いてパルスし、ＬＰＳおよびＩＦＮ−γを用いて成熟させ、そしてＴＡＲＰペプチドを用いてパルスする。ペプチドでパルスする培地を除去した後に、樹状細胞を注入培地（熱で非働化された自家の血漿を１０％含有するＰｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ  Ａ）において４０×１０６細胞／ｍｌまで濃縮する。最終の、ペプチドを用いて負荷し、容量を減少させた成熟樹状細胞生成物は、皮内への新鮮投与のために、滅菌シリンジにおいて調製する。
【０１８８】
水簸された単球プラセボワクチン調製
自家細胞採取
血液回収は、標準的なリンパ球除去による；１０〜１５リットルの血液全体を、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を回収するために処理する。リンパ球もまた凍結保存する。成分採血は、承認された標準的な操作手順を使用して行う。両側末梢静脈アクセスは、可能なときに成分採血のために使用する。代替的に、指示される場合、成分採血の日での回収のために、外来患者として一時的な大腿部中心静脈カテーテル（ＣＶＬ）を行う。予防的静脈内ＣａＣｌ２およびＭｇＳＯ４注入を、シトラートの毒性を処置するか、または妨げるために、成分採血の間に施し得る。
【０１８９】
水簸された単球プラセボワクチンの製剤化および調製
自家の水簸された単球プラセボ細胞ワクチンは、元の０週成分採血の間に得られた、凍結保存された患者のＰＢＭＣから、ｃＧＭＰ条件のもとに調製し、約３３３×１０６細胞／バイアルで少なくとも８バイアルに等分し、将来の水簸された単球プラセボ細胞生成物の調製のために凍結保存する。水簸された単球は、ワクチン送達が予定される朝に解凍する。解凍後、水簸された単球を、注入培地（熱で非働化された自家の血漿を１０％含有するＰｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ  Ａ）において４０×１０６細胞／ｍｌまで濃縮する。最終の、容量を減少させた水簸された単球生成物は、皮内への新鮮投与のために、滅菌シリンジにおいて調製する。
【０１９０】
安定性および保存
自家のＭＥ  ＴＡＲＰペプチドでパルスした樹状細胞ワクチンを、５日培養生成物から採取し、自家の水簸された単球プラセボワクチンを、単一の日に解凍した生成物から採取する。両方を、同じ日に新鮮投与のために包装する。２０×１０６生存細胞／０．２５ｍｌまたは０．５ｍｌの用量に調製された、自家のＭＥ  ＴＡＲＰペプチドでパルスした樹状細胞または水簸された単球プラセボワクチンを、臨床現場での受領の直後に投与する。包装後試験は、当該製品が少なくとも２時間安定であることを示す。
【０１９１】
開示される発明の原理が適用され得る、多くの可能性のある実施形態を考慮して、説明された実施形態が、本発明の単なる好ましい例であることが、認識されるべきであり、本発明の範囲を限定するものとしてみなされるべきではない。むしろ、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって定められる。本出願人はそれゆえ、これらの特許請求の範囲の範囲および主旨に入るものすべてを本出願人の発明として主張する。
【図１】
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【配列表】
0006758185000001.app