(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）遊離形態または塩形態のＰＤＥ１阻害剤および（ｂ）遊離形態または塩形態のＰＤＥ２阻害剤を含む製剤であって、ＰＤＥ１阻害剤が、遊離形態または塩形態の(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−ピリジン−２−イル)−ベンジル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オンであり、ＰＤＥ２阻害剤が、遊離形態または塩形態の２−(３,４−ジメトキシベンジル)−７−{(１Ｒ)−１−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−４−フェニルブチル}−５−メチルイミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オン（ＢＡＹ６０−７５５０）である、製剤。
【請求項２】
遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤を医薬上許容される希釈剤または担体と一緒に含む医薬組成物であって、ＰＤＥ１阻害剤が、遊離形態または医薬上許容される塩形態の(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−ピリジン−２−イル)−ベンジル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オンであり、ＰＤＥ２阻害剤が、遊離形態または医薬上許容される塩形態の２−(３,４−ジメトキシベンジル)−７−{(１Ｒ)−１−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−４−フェニルブチル}−５−メチルイミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オン（ＢＡＹ６０−７５５０）である、医薬組成物。
【請求項３】
該組成物が、遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤が単一投与剤形である多剤混合型医薬組成物である、請求項２記載の医薬組成物。
【請求項４】
該組成物が、遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤が別々の投与剤形である多剤遊離型医薬組成物である、請求項２記載の医薬組成物。
【請求項５】
遊離形態または眼科的に許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤が、眼科的に許容される希釈剤または担体と組み合わせてまたは付随している、請求項２〜４いずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項６】
ｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰシグナル伝達疾患、障害または状態を治療するための医薬組成物であって、該疾患、障害または状態が、パーキンソン病、下肢静止不能振戦、ジスキネジア、ハンチントン病、アルツハイマー病、薬剤性運動障害、うつ状態、注意欠陥障害、注意欠陥多動障害、双極型疾患、不安、睡眠障害、ナルコレプシー、認知障害（例えば、学習、記憶、認識記憶、社会的相互作用および作業記憶）、認知症、トゥレット症候群、自閉症、脆弱Ｘ症候群、覚醒剤離脱、薬物依存、脳血管疾患、脳卒中、うっ血性心疾患、高血圧、肺高血圧症、肺動脈性高血圧症、性機能障害、喘息、慢性閉塞性肺疾患、アレルギー性鼻炎、自己免疫および炎症性疾患；女性性機能不全、運動性無月経、無排卵症、閉経、閉経期症状、月経前症候群、早期分娩、不妊症、不規則な月経周期、異常子宮出血、骨粗鬆症、多発性硬化症、前立腺肥大、前立腺癌、甲状腺機能低下症、エストロゲン誘導性子宮内膜増殖症またはエストロゲン誘導性子宮内膜癌、緑内障または眼内圧亢進、精神病（例えば、幻覚、偏執性妄想もしくは奇異な妄想のような精神病症状、または支離滅裂な会話および思考、例えば、統合失調症、統合失調感情障害、統合失調様障害、精神障害、妄想性障害、および急性躁病エピソードおよび双極性障害におけるような躁病）、外傷性脳損傷のいずれかである、請求項２〜５いずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項７】
該疾患、障害または状態が、パーキンソン病、統合失調症、ナルコレプシー、緑内障、女性性機能不全、認知障害（例えば、学習、記憶、認識記憶、社会的相互作用および作業記憶）、不安およびうつ状態からなる群から選択される、請求項６記載の医薬組成物。
【請求項８】
ｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰシグナル伝達疾患、障害または状態を治療するための製剤であって、該疾患、障害または状態が、パーキンソン病、下肢静止不能振戦、ジスキネジア、ハンチントン病、アルツハイマー病、薬剤性運動障害、うつ状態、注意欠陥障害、注意欠陥多動障害、双極型疾患、不安、睡眠障害、ナルコレプシー、認知障害（例えば、学習、記憶、認識記憶、社会的相互作用および作業記憶）、認知症、トゥレット症候群、自閉症、脆弱Ｘ症候群、覚醒剤離脱、薬物依存、脳血管疾患、脳卒中、うっ血性心疾患、高血圧、肺高血圧症、肺動脈性高血圧症、性機能障害、喘息、慢性閉塞性肺疾患、アレルギー性鼻炎、自己免疫および炎症性疾患；女性性機能不全、運動性無月経、無排卵症、閉経、閉経期症状、月経前症候群、早期分娩、不妊症、不規則な月経周期、異常子宮出血、骨粗鬆症、多発性硬化症、前立腺肥大、前立腺癌、甲状腺機能低下症、エストロゲン誘導性子宮内膜増殖症またはエストロゲン誘導性子宮内膜癌、緑内障または眼内圧亢進、精神病（例えば、幻覚、偏執性妄想もしくは奇異な妄想のような精神病症状、または支離滅裂な会話および思考、例えば、統合失調症、統合失調感情障害、統合失調様障害、精神障害、妄想性障害、および急性躁病エピソードおよび双極性障害におけるような躁病）、外傷性脳損傷のいずれかであり、遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤が、同時に（simultaneously）または連続してまたは同時期に（contemporaneously）投与される、請求項１記載の製剤。
【請求項９】
該疾患、障害または状態が、パーキンソン病、統合失調症、ナルコレプシー、緑内障、女性性機能不全、認知障害（例えば、学習、記憶、認識記憶、社会的相互作用および作業記憶）、不安およびうつ状態からなる群から選択される、請求項８記載の製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１４年１月８日に出願された米国仮出願第６１／９２５，０１５号に基づく優先権を主張する（各々、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、遊離形態または塩形態のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤で含む製剤（product）、遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤を含む医薬組成物、ならびにｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰ関連障害の治療用医薬としてのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）の１１種類のファミリーが同定されているが、唯一、ファミリー１のＰＤＦであるＣａ2+−カルモジュリン依存性ホスホジエステラーゼ（ＣａＭ−ＰＤＥ）は、カルシウムシグナル伝達経路と環状ヌクレオチド（例えば、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ）シグナル伝達経路の両方を媒介することが示されている。公知の３つのＣａＭ−ＰＤＥ遺伝子、ＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ１ＢおよびＰＤＥ１Ｃは、すべて、中枢神経系組織において発現する。ＰＤＥ１Ａは、脳全体にわたって発現し、海馬および小脳のＣＡ１〜ＣＡ３層においてより高く発現し、線条体においては低いレベルで発現する。ＰＤＥ１Ａは、また、肺および心臓においても発現する。ＰＤＥ１Ｂは、主に、線条体、歯状回、嗅索および小脳において発現し、その発現は、高レベルのドーパミン作動性神経支配を有する脳領域と相関する。ＰＤＥ１Ｂは主に中枢神経系において発現するが、心臓において検出され得る。ＰＤＥ１Ｃは、主に、嗅上皮、小脳顆粒細胞および線条体において発現する。ＰＤＥ１Ｃは、また、心臓および血管平滑筋においても発現する。
【０００４】
環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼは、環状ヌクレオチドｃＡＭＰおよびｃＧＭＰをそれぞれの不活性５'一リン酸（５'ＡＭＰおよび５'ＧＭＰ）に加水分解することによって細胞内ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰシグナル伝達を減少させる。ＣａＭ−ＰＤＥは、特に基底核または線条体として知られている脳の領域内で、脳細胞においてシグナル伝達を媒介する決定的役割を果たす。例えば、ＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体活性化および／またはドーパミンＤ２受容体活性化は、細胞内カルシウム濃度を増加させ、カルモジュリン依存性キナーゼＩＩ（ＣａＭＫＩＩ）およびカルシニューリンのようなエフェクターの活性化を導き、ＣａＭ−ＰＤＥの活性化を導き、その結果、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰを減少させる。他方では、ドーパミンＤ１受容体活性化は、ヌクレオチドシクラーゼの活性化を導き、その結果、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰを増加させる。これら環状ヌクレオチドは、次に、ＤＡＲＰＰ−３２（ドーパミンおよびｃＡＭＰ調節性リン酸化タンパク質）およびｃＡＭＰ応答配列結合タンパク質（ＣＲＥＢ）のようなシグナル伝達経路要素の下流でリン酸化するプロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ；ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼ）および／またはプロテインキナーゼＧ（ＰＫＧ；ｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼ）を活性化する。次に、リン酸化ＤＡＲＰＰ−３２は、プロテインホスファターゼ−１（ＰＰ−１）の活性を阻害し、それにより、プロゲステロン受容体（ＰＲ）のような基質タンパク質のリン酸化の状態が増大し、生理的反応の誘発を引き起こす。齧歯類での研究は、ドーパミンＤ１受容体またはプロゲステロン受容体の活性化を介するｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ合成の誘発が、いくつかの齧歯類において交尾に対する受容性に関連するロードシス反応を包含する様々な生理的反応に関連するプロゲステロンシグナル伝達を亢進することを示唆している。非特許文献１を参照（この内容は出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）。
【０００５】
したがって、ＣａＭ−ＰＤＥは、基底核（線条体）におけるドーパミン調節性細胞内シグナル伝達経路および他の細胞内シグナル伝達経路に影響を及ぼすことができ、これら他の細胞内シグナル伝達経路としては、一酸化窒素、ノルアドレナリン作動性、ニューロテンシン、ＣＣＫ、ＶＩＰ、セロトニン、グルタメート（例えば、ＮＭＤＡ受容体、ＡＭＰＡ受容体）、ＧＡＢＡ、アセチルコリン、アデノシン（例えば、Ａ２Ａ受容体）、カンナビノイド受容体、ナトリウム利尿ペプチド（例えば、ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰ）、ＤＡＲＰＰ−３２、およびエンドルフィン細胞内シグナル伝達経路が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０００６】
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）活性、特に、ホスホジエステラーゼ１（ＰＤＥ１）活性は、脳組織内で自発運動活性および学習および記憶の調節因子として機能する。ＰＤＥ１は、好ましくは神経系内で、細胞内シグナル伝達経路の調節のための治療標的であり、該細胞内シグナル伝達経路としては、ドーパミンＤ１受容体、ドーパミンＤ２受容体、一酸化窒素、ノルアドレナリン作動性、ニューロテンシン、ＣＣＫ、ＶＩＰ、セロトニン、グルタメート（例えば、ＮＭＤＡ受容体、ＡＭＰＡ受容体）、ＧＡＢＡ、アセチルコリン、アデノシン（例えば、Ａ２Ａ受容体）、カンナビノイド受容体、ナトリウム利尿ペプチド（例えば、ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰ）、エンドルフィン細胞内シグナル伝達経路およびプロゲステロンシグナル伝達経路が挙げられるが、これらに限定されるものではない。例えば、ＰＤＥ１Ｂの阻害は、ｃＧＭＰおよびｃＡＭＰが分解しないように保護することによってドーパミンＤ１アゴニストの効果を増強するように作用し、同様に、ＰＤＥ１活性を阻害することによってドーパミンＤ２受容体シグナル伝達経路を阻害する。細胞内カルシウム濃度の慢性的な上昇は、多くの障害、特にアルツハイマー病、パーキンソン病およびハンチントン病のような神経変性疾患、ならびに脳卒中および心筋梗塞を引き起こす循環器系の障害における細胞死に関連づけられる。したがって、ＰＤＥ１阻害剤は、パーキンソン病、下肢静止不能症候群、うつ状態、ナルコレプシーおよび認知障害のような、ドーパミンＤ１受容体シグナル伝達活性の低下によって特徴付けられる疾患において潜在的に有用である。ＰＤＥ１阻害剤は、また、女性性機能不全のようなプロゲステロンシグナル伝達の亢進によって寛解され得る疾患においても有用である。
【０００７】
ＰＤＥ２は、また、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの両方を高いＶｍａｘおよび低いＫｍをもって加水分解する。該酵素は、そのＧＡＦドメインのうちの１つに結合するｃＧＭＰによってアロステリックに刺激される。唯一の遺伝子ファミリーであるＰＤＥ２Ａは、ＰＤＥ２の３つのスプライスバリアント、すなわちＰＤＥ２Ａ１、ＰＤＥ２Ａ２およびＰＤＥ２Ａ３を有するＰＤＥ２をコードする。ＰＤＥ２Ａ１は、サイトゾル内に位置しているが、一方、ＰＤＥ２Ａ２およびＰＤＥ２Ａ３は膜結合型である。ＰＤＥ２は、神経発達、学習および記憶における治療可能性を有することが示されている。非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６；および非特許文献７。ＰＤＥ２Ａの阻害は、認識記憶、社会的相互作用および作業記憶（統合失調症においてすべてが欠いている）の改善を反映する認識能力の複数の前臨床モデルすべてで認知機能の亢進を示している。非特許文献８。ＰＤＥ２Ａ阻害は、また、加齢およびアルツハイマー病において発症する認知欠損を改善する。非特許文献９；非特許文献１０。ＰＤＥ２Ａ阻害は、また、不安およびうつ状態の前臨床モデルにおいて有効性を示すことが立証されている。非特許文献１１；非特許文献１２；非特許文献１３。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Mani, et al., Science (2000) 287: 1053
【非特許文献２】Van Staveren et al., Brain Res. (2001) 888:275
【非特許文献３】O'Donnell et al., J. Pharm. Exp. Ther. (2002) 302:249
【非特許文献４】Velardez et al., Eur. J. Endo. (2000) 143:279
【非特許文献５】Gallo-Payet et al., Endo.(1999) 140:3594
【非特許文献６】Allardt-Lamberg et al., Biochem. Pharm. (2000) 59:1133
【非特許文献７】Wakabayashi et al., Miner. Res. (2002) 17:249
【非特許文献８】Boess et al., Neuropharmacology (2004) 47(7):1081-92
【非特許文献９】Domek-Lopacinska et al., Brain Res. (2008) 1216:68-77
【非特許文献１０】Brandon et al., Annual Reports in Medicinal Chemistry (2007) 42:4-5
【非特許文献１１】Masood et al., JPET (2009) 331(2):690-699
【非特許文献１２】Masood et la., JPET (2008) 326(2):369-379
【非特許文献１３】Reierson et al., Neurosci. Lett. (2009) 466(3):149-53
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ＰＤＥ１およびＰＤＥ２は、有用な治療標的であることが示されている。かくして、遊離形態または塩形態の、ＰＤＥ１活性を選択的に阻害する化合物およびＰＤＥ２活性を選択的に阻害する化合物を含む製剤が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
一酸化窒素は、可溶性グアニリルシクラーゼ（ＧＣ）を刺激して、ｃＧＭＰのレベルを増加させる。環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼは、環状ヌクレオチドｃＡＭＰおよびｃＧＭＰをそれらの個々の不活性５'−モノホスフェート（５'ＡＭＰおよび５'ＧＭＰ）に加水分解することによってｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ細胞内シグナル伝達を減少させる。
本発明者らは、ＰＤＥ１およびＰＤＥ２の両方の阻害が行われた場合、この組合せは、脳における一酸化窒素シグナル伝達に対して相加効果を超える効果をもたらし、これにより、脳内の一酸化窒素刺激ｃＧＭＰ濃度を増加させることを見出した。したがって、第一の態様において、本発明は、遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤を含む製剤を提供する。例えば、（ａ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤および（ｂ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤を含む製剤が提供される。
【００１１】
第二の態様において、本発明は、遊離形態または医薬上許容される塩形態の本明細書に記載のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤を医薬上許容される希釈剤または担体と混合して含む医薬組成物（医薬組成物Ｉ）を提供する。ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、多剤混合型医薬組成物（fixed pharmaceutical composition）（ここで、ＰＤＥ１およびＰＤＥ２治療剤は単一投与剤形である）または多剤遊離型医薬組成物（free pharmaceutical composition）（ＰＤＥ１および治療剤は別々の投与剤形である）中に存在し得る。例えば、
（ａ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤、および
（ｂ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤
を医薬上許容される担体または希釈剤と混合して含む医薬組成物が提供される。該第二の態様の特定の実施態様において、本発明は、さらに、ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤を含む局所眼用医薬組成物；例えば、遊離形態または眼科的に許容される塩形態の本発明のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤を、眼科的に許容される希釈剤または担体と組み合わせてまたは付随して（in combination or association with）含む、点眼液、懸濁剤、クリーム剤または軟膏剤を提供する。
【００１２】
ＰＤＥ１およびＰＤＥ２阻害剤は、当該技術分野で公知である。本発明の特定の実施態様において、本発明のＰＤＥ１阻害剤としては、国際公開第２００６／１３３２６１号、国際公開第２００７／１４３７０５号、国際公開第２００８／０６３５０５号、国際公開第２００８／０７００９５号、国際公開第２００９／０７５７８４号、国際公開第２００９／０７３２１０号、国際公開第２０１０／０６５１５３号、国際公開第２０１０／０６５１４８号、国際公開第２０１０／０６５１５１号、国際公開第２０１０／０６５１４９号、国際公開第２０１０／０６５１４７号、国際公開第２０１０／０６５１５２号、国際公開第２０１０／０９８８３９号、国際公開第２０１０／１３２１２７号、国際公開第２０１１／１５３１２９号、国際公開第２０１１／１５３１３５号、国際公開第２０１１／１５３１３６号、国際公開第２０１１／１５３１３８号、国際公開第２０１２／１７１０１６号に記載されているものが挙げられる（各々の内容は、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）。別の特定の実施態様において、ＰＤＥ１阻害剤は、遊離形態または塩形態の(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−ピリジン−２−イル)−ベンジル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オンである。別の特定の実施態様において、ＰＤＥ１阻害剤は、遊離形態または塩形態の(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−(６−フルオロピリジン−２−イル)フェニル)メチル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オンである。
【００１３】
別の特定の実施態様において、本発明のＰＤＥ２阻害剤としては、国際公開第２０１０／０５４２６０号、国際公開第２０１０／０５４２５３号、国際公開第２０１２／１０４２９３号、国際公開第２０１３／０００９２４号、国際公開第２０１３／０３４７５５号、国際公開第２０１３／０３４７５８号、国際公開第２０１３／０３４７６１号、国際公開第２００６／０７２６１５号、国際公開第２００６／０２４６４０号、国際公開第２００６／０７２６１２号、国際公開第２０１２／１１４２２２号、国際公開第２０１２／１６８８１７号、国際公開第２００５／０４１９５７号、国際公開第２００５／０６１４９７号、国際公開第２０１１／０１１３１２号、欧州特許第１７４９８２４号、欧州特許第１５４８０１１号、欧州特許第１５５６０５５号、米国特許第４,７６６,１２２号、国際公開第２００２／０６８４２３号、国際公開第２００２／０５００７８号、国際公開第２００２／００９７１３号、国際公開第９８／３２７５５号、米国特許第５,８６１,３９６号、国際公開第２００４／０８９９５３号、米国特許第５,８６１,３９６号および米国特許第６,５７３,２６３号に記載されているものが挙げられる。特定の実施態様において、本発明のＰＤＥ２阻害剤は、遊離形態または塩形態の２−(３,４−ジメトキシベンジル)−７−{(１Ｒ)−１−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−４−フェニルブチル}−５−メチルイミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オン（ＢＡＹ６０−７５５０）である。
【００１４】
第三の態様において、本発明は、本発明の製剤を使用する方法を提供する。本発明の製剤は、例えばドーパミンおよび一酸化窒素（ＮＯ）のような環状ヌクレオチド合成誘導物質の阻害またはそのレベルの減少に起因するＰＤＥ１もしくはＰＤＥ２の発現の増加またはｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの発現の減少の結果としての、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ媒介経路の途絶または該経路へのダメージによって特徴付けられる疾患の治療において有用である。ＰＤＥ１およびＰＤＥ２によってｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの分解を防止し、これによってｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ（特に、ｃＧＭＰ）の細胞内レベルを増加させることによって、本発明の製剤および医薬組成物は、環状ヌクレオチド合成誘導物質の活性を増強する。したがって、本発明は、以下の状態：
（ｉ）パーキンソン病、下肢静止不能振戦、ジスキネジア、ハンチントン病、アルツハイマー病および薬剤性運動障害を包含する神経変性疾患；
（ｉｉ）うつ状態、注意欠陥障害、注意欠陥多動障害、双極型疾患、不安、睡眠障害、例えばナルコレプシー、認知障害、認知症、トゥレット症候群、自閉症、脆弱Ｘ症候群、覚醒剤離脱および薬物依存を包含する精神障害；
（ｉｉｉ）脳血管疾患、脳卒中、うっ血性心疾患、高血圧、肺高血圧症、肺動脈性高血圧症および性機能障害を包含する循環器および心血管障害；
（ｉｖ）喘息、慢性閉塞性肺疾患およびアレルギー性鼻炎を包含する呼吸器および炎症性障害、ならびに自己免疫および炎症性疾患；
（ｖ）ＰＤＥ１またはＰＤＥ２を発現する細胞中の低レベルのｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰ（またはｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰシグナル伝達経路の阻害）によって特徴付けられる疾患または状態；および／または
（ｖｉ）ドーパミンＤ１受容体シグナル伝達活性の低下によって特徴付けられる疾患または状態
のうち１つ以上の状態の治療方法であって、該治療を必要とするヒトまたは動物患者へ、本明細書に記載の遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤を医薬上許容される希釈剤または担体と混合して含む本発明の医薬組成物Ｉの有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【００１５】
医薬組成物Ｉは、多剤混合型医薬組成物（ＰＤＥ１治療剤とＰＤＥ２治療剤が単一の投与剤形である）または多剤遊離型医薬組成物（ＰＤＥ１治療剤とＰＤＥ２治療剤が別々の投与剤形である）として投与され得る。
【００１６】
一の実施態様において、本発明は、ナルコレプシーの治療方法または予防方法を提供する。この実施態様において、医薬組成物Ｉは、唯一の治療剤として用いることができるが、他の活性薬剤との併用または共投与に用いることもできる。かくして、本発明は、さらに、ナルコレプシーの治療方法であって、該治療を必要とするヒトまたは動物患者へ、
（ｉ）医薬組成物Ｉ、ならびに
（ｉｉ）遊離形態または医薬上許容される塩形態の、例えば（ａ）中枢神経刺激薬−アンフェタミンおよびアンフェタミン様化合物、例えば、メチルフェニデート、デキストロアンフェタミン、メトアンフェタミン、およびペモリン；（ｂ）モダフィニル、（ｃ）抗うつ薬、例えば、三環系（イミプラミン、デシプラミン、クロミプラミンおよびプロトリプチリンが挙げられる）および選択的セロトニン再取り込み阻害薬（フルオキセチンおよびセルトラリンが挙げられる）；および／または（ｄ）γヒドロキシ酪酸（ＧＨＢ）から選択される、覚醒を促進するかまたは睡眠を調節する化合物
の治療上有効量を投与すること、例えば、同時に（simultaneously）または連続してまたは同時期に（contemporaneously）投与することを含む、方法を含む。該医薬組成物Ｉは、唯一の治療剤として使用され得る（例えば、多剤混合型医薬組成物または多剤遊離型医薬組成物で）か、または別の活性薬剤との併用もしくは共投与に使用され得る。
【００１７】
別の実施態様において、本発明は、さらに、プロゲステロンシグナル伝達の亢進によって軽減され得る状態の治療方法または予防方法であって、該治療または予防を必要とするヒトまたは動物へ本発明の医薬組成物Ｉの有効量を投与することを含む方法を提供する。プロゲステロンシグナル伝達の亢進によって軽減され得る疾患または状態としては、女性性機能不全、続発性無月経（例えば、運動性無月経）、無排卵症、閉経、閉経期症状、甲状腺機能低下症、月経前症候群、早期分娩、不妊症、例えば反復流産に起因する不妊症、不規則な月経周期、異常子宮出血、骨粗鬆症、自己免疫疾患、多発性硬化症、前立腺肥大、前立腺癌および甲状腺機能低下症が挙げられるが、これらに限定されるものではない。例えば、プロゲステロンシグナル伝達を亢進することによって、ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、子宮の内膜に対する効果によって卵着床を促進するために、また、妊娠に対する免疫応答または低プロゲステロン機能に起因して流産しやすい女性において妊娠を維持するために用いられ得る。本明細書に記載のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、また、ホルモン補充療法の有効性を亢進するのにも有用であり、例えば、閉経後の女性、エストロゲン誘導性子宮内膜増殖症およびエストロゲン誘導性子宮内膜癌において、エストロゲン／エストラジオール／エストリオールおよび／またはプロゲステロン／プロゲスチンと併用投与され得る。本発明の方法はまた、動物交配（animal breeding）にも有用であり、例えば交配させようとする雌性非ヒト哺乳動物における性的受容性および／または発情を誘導するのにも有用である。
【００１８】
この実施態様において、ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、上記の治療方法または予防方法において唯一の治療剤として用いられ得るが、他の活性薬剤との併用または共投与に使用され得、例えばホルモン補充療法と併用され得る。かくして、本発明は、また、プロゲステロンシグナル伝達の亢進によって軽減され得る障害の治療方法であって、該治療を必要とするヒトまたは動物患者へ、
（ｉ）本発明の医薬組成物Ｉ、および
（ｉｉ）遊離形態または医薬上許容される塩形態の、ホルモン、例えばエストロゲンおよびエストロゲンアナログ（例えば、エストラジオール、エストリオール、エストリオールエステル）ならびにプロゲステロンおよびプロゲステロン（例えば、プロゲスチン）から選択されるホルモン
の治療上有効量を投与すること、例えば同時にまたは連続してまたは同時期に投与することを含む、方法を含む。
【００１９】
本発明は、また、細胞内または組織内のドーパミンＤ１細胞内シグナル伝達活性を亢進または増強する方法であって、該細胞または組織を、ＰＤＥ１およびＰＤＥ２活性を阻害するのに十分なＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤の有効量と接触させることを含む、方法を提供する。
【００２０】
本発明は、また、ＰＤＥ１および／またはＰＤＥ２関連障害、ドーパミンＤ１受容体細胞内シグナル伝達経路障害、またはプロゲステロンシグナル伝達経路の亢進によって軽減され得る障害の治療を必要とする患者における該障害の治療方法であって、該患者へ、本発明の医薬組成物Ｉの有効量を投与することを含む、方法（ここで、ＰＤＥ１およびＰＤＥ２活性がＤＡＲＰＰ−３２および／またはＧｌｕＲ１  ＡＭＰＡ受容体のリン酸化を調節する）を提供する。
【００２１】
別の態様では、本発明は、また、緑内障または眼内圧亢進の治療方法であって、該治療を必要とする患者の眼へ、眼科的に適合した担体中の本発明の医薬組成物Ｉの治療有効量を局所投与することを含む、方法を提供する。しかしながら、治療は、全身療法をも包含し得る。全身療法としては、血流に直接到達することができる治療、例えば経口投与法を包含する。
【００２２】
所望により、ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤を含む当該医薬組成物は、緑内障または眼内圧亢進の治療に有用な第３の薬物と連続してまたは同時に投与され得る。ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤を含む当該医薬組成物が他の薬剤と一緒に投与される場合、第３のまたはその後の薬剤の治療有効量は、単剤療法の場合に活性に要する量未満であり得る。したがって、閾値下の量（すなわち、単剤療法の場合に効力に必要なレベルよりも低い量）は、治療上有効であるということができるか、あるいは、有効量ということもできる。実際、異なる作用機序および異なる副作用プロファイルを有する種々の薬剤を投与する利点は、いずれかのまたは両方の薬剤の投与量および副作用を減少させること、ならびに、単剤療法の場合のそれらの活性を亢進または増強することであり得る。
【００２３】
かくして、本発明は、緑内障および眼内圧亢進から選択される状態の治療方法であって、該治療を必要とする患者へ、眼内圧を下げることが知られている薬剤の量とＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤の量が合わせて該状態を治療するのに有効であるように、眼内圧を下げることが知られている薬剤の有効量、例えば閾値下量を、遊離形態または医薬上許容される塩形態の本発明のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤の有効量、例えば閾値下量と付随して（concomitantly）または同時にまたは連続して投与することを含む、方法を提供する。
【００２４】
一の実施態様において、該薬剤の片方または両方が眼に局所的に投与される。かくして、本発明は、眼内圧を下げることが知られている薬剤の減少した量をＰＤＥ１阻害剤の有効量と付随してまたは同時にまたは連続して投与することによって緑内障または眼内圧亢進の治療の副作用を軽減する方法を提供する。しかしながら、全身療法的投与のような、局所投与以外の方法を利用することもできる。
【００２５】
本発明の医薬組成物Ｉと併用してもよいさらなる薬剤は、例えば、典型的にはプロスタグランジン、ピロカルピンもしくはエピネフリンの滴下注入（instillation）、または局所β遮断薬治療、例えばチモロールによる治療、ならびに全身投与炭酸脱水酵素阻害剤、例えばアセタゾラミドからなる既存の薬物から選択され得る。フィゾスチグミンおよびエコチオパートのようなコリンエステラーゼ阻害剤を使用することもでき、これらは、ピロカルピンと同様の効果を有する。緑内障の治療に現在使用されている薬物としては、例えば、
１．房水のぶどう膜強膜流出（uveoscleral outflow）を増加させる、ラタノプロスト（キサラタン）、ビマトプロスト（ルミガン）およびトラボプロスト（トラバタン（Travatan））のようなプロスタグランジンアナログ（ビマトプロストは、線維柱帯流出（trabecular outflow）をも増加させる）、
２．毛様体による房水産生を減少させる、チモロール、レボブノロール（ベータガン）、およびベタキソロールのような局所βアドレナリン受容体アンタゴニスト、
３．房水産生の減少およびぶどう膜強膜流出の増加の二重機構によって働く、ブリモニジン（アルファガン）のようなα２アドレナリン受容体アゴニスト、
４．β２アゴニスト作用によって、線維柱帯網を介し、かつ、おそらくぶどう膜強膜流出経路を介する房水の流出を増加させる、エピネフリンおよびジピベフリン（プロパイン）のような低選択性（less-selective）交感神経作動薬、
５．毛様体筋の収縮によって働き、線維柱帯網を締め、房水の流出の増加を可能にする、ピロカルピンのような縮瞳薬（副交感神経作動薬）、
６．毛様体内で炭酸脱水酵素を阻害することによって房水の分泌を低下させる、ドルゾラミド（トルソプド）、ブリンゾラミド（エイゾプト）、アセタゾラミド（ダイアモックス）のような炭酸脱水酵素阻害剤、
７．緑内障および胃排出遅延を治療するために使用することもできる、フィゾスチグミン
が挙げられる。
【００２６】
例えば、本発明は、本発明のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤、ならびに（ｉ）プロスタノイド、ウノプロストン、ラタノプロスト、トラボプロストまたはビマトプロスト；（ｉｉ）αアドレナリン受容体アゴニスト、例えばブリモニジン、アプラクロニジンまたはジピベフリン、および（ｉｉｉ）ムスカリンアゴニスト、例えばピロカルピンから選択される薬剤を含む医薬組成物を提供する。例えば、本発明は、遊離形態または眼科的に許容される塩形態の、本発明のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤を、ビマトプロスト、アブリモニジン（abrimonidine）、ブリモニジン、チモロールまたはその組合せと一緒に眼科的に許容される希釈剤または担体と組み合わせてまたは付随して含む眼科用製剤を提供する。しかしながら、組合せの選択に加えて、当業者は、適当な選択的受容体サブタイプアゴニストまたはアンタゴニストを選択することができる。例えば、αアドレナリン受容体アゴニストに関しては、α１アドレナリン受容体に対して選択的なアゴニスト、またはブリモニジンのようなα２アドレナリン受容体に対して選択的なアゴニストを選択することができる。βアドレナリン受容体アンタゴニストに関しては、適当な治療用途に応じて、β１またはβ２またはβ３のいずれかに対して選択的なアンタゴニストを選択することができる。Ｍ１−Ｍ５のような特定の受容体サブタイプに対して選択的なムスカリン受容体アゴニストを選択することができる。
【００２７】
ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、点眼液剤、クリーム剤または軟膏剤を包含する眼科用組成物の剤形で投与され得る。眼科用組成物は、さらに、眼内圧降下剤を含むことができる。
【００２８】
さらに別の例において、開示されているＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、ビマトプロスト点眼液、酒石酸ブリモニジン点眼液、または酒石酸ブリモニジン／マレイン酸チモロール点眼液であり得る眼内圧降下剤の閾値下量と併せることができる。
【００２９】
驚くべきことに、上記の方法に加えて、ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤が、精神病、例えば、幻覚、偏執性妄想もしくは奇異な妄想、または支離滅裂な会話および思考、例えば、統合失調症、統合失調感情障害、統合失調様障害、精神障害、妄想性障害、および急性躁病エピソードおよび双極性障害におけるような躁病などの精神病症状によって特徴付けられる状態の治療に有用であることも発見した。理論に縛られることなく、クロザピンのような定型および非定型の抗精神病薬は、主に、ドーパミンＤ２受容体においてそれらのアンタゴニスト活性を有すると考えられる。しかしながら、ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、主に、ドーパミンＤ１受容体におけるシグナル伝達を亢進する。Ｄ１受容体シグナル伝達を亢進することによって、ＰＤＥ１阻害剤は、さまざまな脳領域において、例えば、中隔側坐核ニューロンにおいて、および前頭前野において、ＮＭＤＡ受容体機能を増大させることができる。この機能亢進は、例えば、ＮＲ２Ｂサブユニットを含有するＮＭＤＡ受容体において見ることができ、例えばＳｒｃおよびプロテインキナーゼＡファミリーのキナーゼの活性化によって生じることがある。
【００３０】
したがって、本発明は、精神病、例えば、統合失調症、統合失調感情障害、統合失調様障害、精神障害、妄想性障害、ならびに急性躁病エピソードおよび双極性障害におけるような躁病の新しい治療方法であって、該治療を必要とする患者へ、本発明の医薬組成物Ｉ（例えば、遊離形態または医薬上許容される塩形態の、本発明のホスホジエステラーゼ−１（ＰＤＥ１）およびＰＤＥ２阻害剤組合せを含む）の治療有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【００３１】
ＰＤＥ１およびＰＤＥ２阻害剤組合せは、唯一の治療剤として上記の治療または予防方法において使用され得るが、他の活性薬剤との併用または共投与にも使用され得る。かくして、本発明は、さらに、精神病、例えば、統合失調症、統合失調感情障害、統合失調様障害、精神障害、妄想性障害または躁病の治療方法であって、該治療を必要とする患者へ、
（ｉ）本発明の医薬組成物Ｉ（例えば、遊離形態または医薬上許容される塩形態の、本発明のＰＤＥ１およびＰＤＥ２阻害剤組合せを含む）；および
（ｉｉ）遊離形態または医薬上許容される塩形態の、抗精神病薬、例えば、
定型抗精神病薬、例えば、
ブチロフェノン系、例えば、ハロペリドール（ハルドール、セレネース）、ドロペリドール（ドロレプタン)；
フェノチアジン系、例えば、クロルプロマジン（トラジン、ラルガクチル）、フルフェナジン（プロリキシン）、ペルフェナジン（トリラホン）、プロクロルペラジン（コンパジン）、チオリダジン（メラリル、メレリル）、トリフルオロペラジン（ステラジン）、メソリダジン、ペリシアジン、プロマジン、トリフルプロマジン（ベスプリン）、レボメプロマジン（ノジナン）、プロメタジン（フェネルガン）、ピモジド（オーラップ)；
チオキサンテン系、例えば、クロルプロチキセン、フルペンチキソール（デピキソール（Depixol）、フルアンキソール）、チオチキセン（ナーベン）、ズクロペンチキソール（クロピキソール、アキュフェーズ（Acuphase））；
非定型抗精神病薬、例えば、
クロザピン（クロザリル）、オランザピン（ジプレキサ）、リスペリドン（リスペルダル）、クエチアピン（セロクエル）、ジプラシドン（ゲオドン）、アミスルプリド（ソリアン）、パリペリドン（インヴェガ）、アリピプラゾール（エビリファイ）、ビフェプルノックス；ノルクロザピン
の治療上有効量を投与すること、例えば同時にまたは連続してまたは同時期に投与することを含む、方法を含む。
【００３２】
本発明の製剤または医薬組成物は、唯一の治療剤として使用され得るか、または他の活性薬剤との併用もしくは共投与に使用され得る。例えば、ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、ドーパミンのようなＤ１アゴニストの活性を増強するので、それらは、例えばパーキンソン病患者の治療において、慣用のドーパミン作動薬（dopaminergic medication）、例えばレボドパおよびレボドパ補助剤（カルビドパ、ＣＯＭＴ阻害剤、ＭＡＯ−Ｂ阻害剤）、ドーパミン受容体アゴニスト、ならびに抗コリン作用薬と同時にまたは連続してまたは同時期に投与され得る。加えて、ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、例えば本明細書に記載されているように、また、エストロゲン／エストラジオール／エストリオールおよび／またはプロゲステロン／プロゲスチンと組み合わせて投与され得る。
【００３３】
本発明の製剤および医薬組成物は、特に、パーキンソン病、統合失調症、ナルコレプシー、緑内障、女性性機能不全、認知障害（例えば、学習、記憶、認識記憶、社会的相互作用および作業記憶）、不安およびうつ状態の治療に有効である。
【００３４】
特的の実施態様において、本発明の製剤および医薬組成物は、特に、統合失調症の治療または予防に有用である。
【００３５】
さらに別の態様において、本発明は、まつげの伸長または成長増強方法であって、該伸長または成長増強を必要とする患者の眼へ、プロスタグランジンアナログ、例えばビマトプロストの有効量を、本発明の製剤または医薬組成物の有効量と付随してまたは同時にまたは連続して投与することによる方法を提供する。
【００３６】
さらに別の態様において、本発明は、外傷性脳損傷の治療または予防方法であって、該治療または予防を必要とする患者へ本発明の医薬組成物Ｉの治療有効量を投与することを含む、方法を提供する。外傷性脳損傷（ＴＢＩ）には、一次損傷および二次損傷が包含され、局所性脳損傷およびびまん性脳損傷のどちらも包含される。二次損傷は、最初の(一次)損傷後の炎症性応答および進行が原因であるかまたはそれにより悪化する、個々の細胞内プロセス（例えば、活性酸素種に起因する毒性、グルタミン酸受容体の過剰刺激、カルシウム過剰流入および炎症性上方制御）に起因する複数の並行した相互作用する相互依存的な生物学的反応カスケードである。異常なカルシウム恒常性は、白質および灰白質のどちらにおいても二次損傷の進行の重要な要素であると考えられる。
【００３７】
本発明は、また、
（ｉ）上記した方法のいずれかまたは上記した疾患または状態の治療において用いるための、上記の本発明の製剤または医薬組成物、
（ｉｉ）上記の疾患または状態の治療のための（医薬の製造における）上記の本発明の製剤または医薬組成物の使用、
（ｉｉｉ）上記の疾患または状態の治療における使用のための上記の本発明の医薬組成物Ｉ
を提供する。
【００３８】
本発明は、また、以下の状態：
（ｉ）パーキンソン病、下肢静止不能振戦、ジスキネジア、ハンチントン病、アルツハイマー病および薬剤性運動障害を包含する神経変性疾患；
（ｉｉ）うつ状態、注意欠陥障害、注意欠陥多動障害、双極型疾患、不安、睡眠障害、例えばナルコレプシー、認知障害、認知症、トゥレット症候群、自閉症、脆弱Ｘ症候群、覚醒剤離脱および薬物依存を包含する精神障害；
（ｉｉｉ）脳血管疾患、脳卒中、うっ血性心疾患、高血圧、肺高血圧症、肺動脈性高血圧症および性機能障害を包含する循環器および心血管障害；
（ｉｖ）喘息、慢性閉塞性肺疾患およびアレルギー性鼻炎を包含する呼吸器および炎症性障害、ならびに自己免疫および炎症性疾患；
（ｖ）ＰＤＥ１またはＰＤＥ２を発現する細胞中の低レベルのｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰ（またはｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰシグナル伝達経路の阻害）によって特徴付けられる疾患または状態；および／または
（ｖｉ）ドーパミンＤ１受容体シグナル伝達活性の低下によって特徴付けられる疾患または状態
のうち１つ以上の状態の治療方法であって、該治療を必要とするヒトまたは動物患者へ、（ａ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤、および（ｂ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤の有効量を投与すること、例えば同時にまたは連続してまたは同時期に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施態様において、該ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、単一投与剤形である。他の実施態様においては、ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、別々の投与剤形である。
【００３９】
一の実施態様において、本発明は、ナルコレプシーの治療または予防方法を提供する。この実施態様において、遊離形態または医薬上許容される塩形態の該ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、唯一の治療剤として使用され得るが、他の活性薬剤との併用または共投与にも使用され得る。かくして、本発明は、また、ナルコレプシーの治療方法であって、該治療を必要とするヒトまたは動物患者へ、
（ｉ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤、
（ｉｉ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤、および
（ｉｉｉ）任意であるが、遊離形態または医薬上許容される塩形態の、覚醒を促進するかまたは睡眠を調節する化合物、例えば（ａ）中枢神経刺激薬−アンフェタミンおよびアンフェタミン様化合物、例えばメチルフェニデート、デキストロアンフェタミン、メトアンフェタミンおよびペモリン；（ｂ）モダフィニル、（ｃ）抗うつ薬、例えば三環系（イミプラミン、デシプラミン、クロミプラミンおよびプロトリプチリンを包含する）および選択的セロトニン再取り込み阻害薬（フルオキセチンおよびセルトラリンを包含する）；および／または（ｄ）γヒドロキシ酪酸（ＧＨＢ）から選択される化合物
の治療有効量を投与すること、例えば同時にまたは連続してまたは同時期に投与することを含む、方法を含む。該ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、唯一の治療剤として使用され得るか、または他の活性薬剤との併用もしくは共投与に用いることもできる。
【００４０】
別の実施態様において、本発明は、また、プロゲステロンシグナル伝達の亢進によって軽減され得る状態の治療または予防方法であって、該治療または予防を必要とするヒトまたは動物患者へ、（ａ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤、および（ｂ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤の有効量を投与することを含む、方法を提供する。プロゲステロンシグナル伝達の亢進によって軽減され得る疾患または状態としては、女性性機能不全、続発性無月経（例えば、運動性無月経）、無排卵症、閉経、閉経期症状、月経前症候群、早期分娩、不妊症、例えば反復流産に起因する不妊症、不規則な月経周期、異常子宮出血、骨粗鬆症、自己免疫疾患、多発性硬化症、前立腺肥大、前立腺癌、および甲状腺機能低下症が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００４１】
ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、唯一の治療剤として上記の治療または予防方法で使用され得るが、他の活性薬剤との併用または共投与に使用され得、例えばホルモン補充療法と併用され得る。かくして、本発明は、また、プロゲステロンシグナル伝達の亢進によって軽減され得る障害の治療方法であって、該治療を必要とするヒトまたは動物患者へ、
（ｉ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤、
（ｉｉ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤、および
（ｉｉｉ）遊離形態または医薬上許容される塩形態の、ホルモン、例えばエストロゲンおよびエストロゲンアナログ（例えば、エストラジオール、エストリオールエステル）ならびにプロゲステロンおよびプロゲステロンアナログ（例えば、プロゲスチン）から選択されるホルモン
の治療有効量を投与すること、例えば同時にまたは連続してまたは同時期に投与することを含む、方法を含む。
【００４２】
本発明は、また、ＰＤＥ１および／またはＰＤＥ２関連障害、ドーパミンＤ１受容体細胞内シグナル伝達経路障害、またはプロゲステロンシグナル伝達経路の亢進によって軽減され得る障害の治療を必要とする患者における当該治療方法であって、該患者へ、（ａ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤、および（ｂ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤の有効量を投与すること（ここで、ＰＤＥ１およびＰＤＥ２活性は、ＤＡＲＰＰ−３２および／またはＧｌｕＲ１  ＡＭＰＡ受容体のリン酸化を調節する）、例えば同時にまたは連続してまたは同時期に投与することを含む、方法も提供する。
【００４３】
一の別の態様において、本発明は、また、緑内障または眼内圧亢進の治療方法であって、該治療を必要とする患者の眼へ、眼科的に適合した担体中の（ａ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤、および（ｂ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤の治療有効量の局所投与を含む、方法を提供する。しかしながら、治療は、全身療法をも包含し得る。全身療法としては、血流に直接到達することができる治療、例えば経口投与法を包含する。
【００４４】
所望により、ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、緑内障または眼内圧亢進の治療に有用な第３の薬物と連続してまたは同時に投与され得る。ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤が他の薬剤と一緒に投与される場合、第３のまたはその後の薬剤の治療有効量は、単剤療法の場合に活性に要する量未満であり得る。したがって、閾値下の量（すなわち、単剤療法の場合に効力に必要なレベルよりも低い量）は、治療上有効であるということができるか、あるいは、有効量ということもできる。実際、異なる作用機序および異なる副作用プロファイルを有する種々の薬剤を投与する利点は、いずれかのまたは両方の薬剤の投与量および副作用を減少させること、ならびに、単剤療法の場合のそれらの活性を亢進または増強することであり得る。
【００４５】
本発明のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤との併用のための任意のさらなる薬剤は、例えば、典型的にはプロスタグランジン、ピロカルピンもしくはエピネフリンの滴下注入、または局所β遮断薬治療、例えばチモロールによる治療、ならびに全身投与炭酸脱水酵素阻害剤、例えばアセタゾラミドからなる既存の薬物から選択され得る。フィゾスチグミンおよびエコチオパートのようなコリンエステラーゼ阻害剤を使用することもでき、これらは、ピロカルピンと同様の効果を有する。緑内障の治療に現在使用されている薬物としては、例えば、
１．房水のぶどう膜強膜流出を増加させる、ラタノプロスト（キサラタン）、ビマプロスト（ルミガン）およびトラボプロスト（トラバタン）のようなプロスタグランジンアナログ（ビマトプロストは、線維柱帯流出をも増加させる）
２．毛様体による房水産生を減少させる、チモロール、レボブノロール（ベータガン）、およびベタキソロールのような局所βアドレナリン受容体アンタゴニスト
３．房水産生の減少およびぶどう膜強膜流出の増加の二重機構によって働く、ブリモニジン（アルファガン）のようなα２アドレナリン受容体アゴニスト
４．β２アゴニスト作用によって、線維柱帯網を介し、かつ、おそらくぶどう膜強膜流出経路を介する房水の流出を増加させる、エピネフリンおよびジピベフリン（プロパイン）のような低選択性交感神経作動薬、
５．毛様体筋の収縮によって働き、線維柱帯網を締め、房水の流出の増加を可能にする、ピロカルピンのような縮瞳薬（副交感神経作動薬）、
６．毛様体内で炭酸脱水酵素を阻害することによって房水の分泌を低下させる、ドルゾラミド（トルソプド）、ブリンゾラミド（エイゾプト）、アセタゾラミド（ダイアモックス）のような炭酸脱水酵素阻害剤、
７．緑内障および胃排出遅延を治療するために使用することもできる、フィゾスチグミン
が挙げられる。
【００４６】
本発明は、精神病、例えば、統合失調症、統合失調感情障害、統合失調様障害、精神障害、妄想性障害、ならびに急性躁病エピソードおよび双極性障害におけるような躁病の新しい治療方法であって、該治療を必要とする患者へ、（ａ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤、および（ｂ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤の治療有効量を投与すること、例えば同時にまたは連続してまたは同時期に投与することを含む、方法をも提供する。
【００４７】
ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、唯一の治療剤として上記の治療または予防方法において使用され得るが、他の活性薬剤との併用または共投与にも使用され得る。かくして、本発明は、さらに、精神病、例えば、統合失調症、統合失調感情障害、統合失調様障害、精神障害、妄想性障害または躁病の治療方法であって、該治療を必要とする患者へ、
（ｉ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤、
（ｉｉ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤、および
（ｉｉｉ）任意であるが、遊離形態または医薬上許容される塩形態の、抗精神病薬、例えば、
定型抗精神病薬、例えば、
ブチロフェノン系、例えば、ハロペリドール（ハルドール、セレネース）、ドロペリドール（ドロレプタン)；
フェノチアジン系、例えば、クロルプロマジン（トラジン、ラルガクチル）、フルフェナジン（プロリキシン）、ペルフェナジン（トリラホン）、プロクロルペラジン（コンパジン）、チオリダジン（メラリル、メレリル）、トリフルオロペラジン（ステラジン）、メソリダジン、ペリシアジン、プロマジン、トリフルプロマジン（ベスプリン）、レボメプロマジン（ノジナン）、プロメタジン（フェネルガン）、ピモジド（オーラップ)；
チオキサンテン系、例えば、クロルプロチキセン、フルペンチキソール（デピキソール、フルアンキソール）、チオチキセン（ナーベン）、ズクロペンチキソール（クロピキソール、アキュフェーズ)；
非定型抗精神病薬、例えば、
クロザピン（クロザリル）、オランザピン（ジプレキサ）、リスペリドン（リスペルダル）、クエチアピン（セロクエル）、ジプラシドン（ゲオドン）、アミスルプリド（ソリアン）、パリペリドン（インヴェガ）、アリピプラゾール（エビリファイ）、ビフェプルノックス；ノルクロザピン
の治療上有効量を投与すること、例えば同時にまたは連続してまたは同時期に投与することを含む、方法を含む。
【００４８】
さらに別の態様において、本発明は、まつげの伸長または成長増強方法であって、該伸長または成長増強を必要とする患者の眼へ、プロスタグランジンアナログ、例えばビマトプロストの有効量を（ａ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤、および（ｂ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤の有効量と付随してまたは同時にまたは連続して投与することによる方法を提供する。
【００４９】
さらに別の態様において、本発明は、外傷性脳損傷の治療または予防方法であって、該治療または予防を必要とする患者へ（ａ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤、および（ｂ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤の治療有効量を投与することを含む、方法を提供する。外傷性脳損傷（ＴＢＩ）には、一次損傷および二次損傷が包含され、局所性脳損傷およびびまん性脳損傷のどちらも包含される。二次損傷は、最初の(一次)損傷後の炎症性応答および進行が原因であるかまたはそれにより悪化する、個々の細胞内プロセス（例えば、活性酸素種に起因する毒性、グルタミン酸受容体の過剰刺激、カルシウム過剰流入および炎症性上方制御）に起因する複数の並行した相互作用する相互依存的な生物学的反応カスケードである。異常なカルシウム恒常性は、白質および灰白質のどちらにおいても二次損傷の進行の重要な要素であると考えられる。異常なカルシウム恒常性は、白質および灰白質のどちらにおいても二次損傷の進行の重要な要素であると考えられる。異常なカルシウム恒常性は、白質および灰白質のどちらにおいても二次損傷の進行の重要な要素であると考えられる。
【００５０】
本発明は、また、
（ｉ）上記の疾患または状態の治療方法のいずれかまたは治療における、（ａ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤、および（ｂ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤の、例えば単一投与剤形または別々の投与剤形での使用、
（ｉｉ）上記の疾患または状態の治療のための（ａ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤、および（ｂ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤の（医薬の製造における）使用
をも提供する。
【００５１】
本発明は、また、（ａ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤、および（ｂ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤を含むキットを提供する。
本発明は、また、
（ｉ）上記の疾患または状態の治療方法のいずれかまたは治療における、（ａ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤、および（ｂ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤を、例えば単一投与剤形または別々の投与剤形で含むキットの使用、
（ｉｉ）上記の疾患または状態の治療のための、（ａ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤、および（ｂ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤を含むキットの使用
をも提供する。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】（原文に記載なし）
【発明を実施するための形態】
【００５３】
発明の詳細な説明
ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、当該技術分野で公知である。本発明の特定の実施態様において、本発明のＰＤＥ１阻害剤としては、国際公開第２００６／１３３２６１号、国際公開第２００７／１４３７０５号、国際公開第２００８／０６３５０５号、国際公開第２００８／０７００９５号、国際公開第２００９／０７５７８４号、国際公開第２００９／０７３２１０号、国際公開第２０１０／０６５１５３号、国際公開第２０１０／０６５１４８号、国際公開第２０１０／０６５１５１号、国際公開第２０１０／０６５１４９号、国際公開第２０１０／０６５１４７号、国際公開第２０１０／０６５１５２号、国際公開第２０１０／０９８８３９号、国際公開第２０１０／１３２１２７号、国際公開第２０１１／１５３１２９号、国際公開第２０１１／１５３１３５号、国際公開第２０１１／１５３１３６号、国際公開第２０１１／１５３１３８号、国際公開第２０１２／１７１０１６号に記載のものが挙げられる（出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）。別の特定の実施態様において、ＰＤＥ１阻害剤は、遊離形態または塩形態の(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−ピリジン−２−イル)−ベンジル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オンである。別の特定の実施態様において、ＰＤＥ１阻害剤は、遊離形態または塩形態の(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−(６−フルオロピリジン−２−イル)フェニル)メチル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オンである。
【００５４】
別の特定の実施態様において、本発明のＰＤＥ２阻害剤としては、国際公開第２０１０／０５４２６０号、国際公開第２０１０／０５４２５３号、国際公開第２０１２／１０４２９３号、国際公開第２０１３／０００９２４号、国際公開第２０１３／０３４７５５号、国際公開第２０１３／０３４７５８号、国際公開第２０１３／０３４７６１号、国際公開第２００６／０７２６１５号、国際公開第２００６／０２４６４０号、国際公開第２００６／０７２６１２号、国際公開第２０１２／１１４２２２号、国際公開第２０１２／１６８８１７号、国際公開第２００５／０４１９５７号、国際公開第２００５／０６１４９７号、国際公開第２０１１／０１１３１２号、欧州特許第１７４９８２４号、欧州特許第１５４８０１１号、欧州特許第１５５６０５５号、米国特許第４,７６６,１２２号、国際公開第２００２／０６８４２３号、国際公開第２００２／０５００７８号、国際公開第２００２／００９７１３号、国際公開第９８／３２７５５号、米国特許第５,８６１,３９６号、国際公開第２００４／０８９９５３号、米国特許第５,８６１,３９６号および米国特許第６,５７３,２６３号に記載のものが挙げられる。特定の実施態様において、本発明のＰＤＥ２阻害剤は、遊離形態または塩形態の２−(３,４−ジメトキシベンジル)−７−{(１Ｒ)−１−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−４−フェニルブチル}−５−メチルイミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オン（ＢＡＹ６０−７５５０）である。
【００５５】
本明細書において、特記しない限り、本発明のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、あらゆる形態、例えば遊離形態または酸付加塩形態または該化合物が酸性置換基を含む場合には塩基付加塩形態の化合物を包含すると解されるべきである。ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、医薬としての使用が意図されており、したがって、医薬上許容される塩が好ましい。医薬用途に不適切な塩は、例えば該遊離化合物またはそれらの医薬上許容される塩の単離または精製に有用であり得、したがって、包含される。
【００５６】
本発明のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、場合によってはプロドラッグ形態で存在し得る。ＰＤＥ１またはＰＤＥ２阻害剤のプロドラッグ形態は、体外では不活性であるかまたはあまり活性ではなくてもよく、体内でそれぞれ活性なＰＤＥ１またはＰＤＥ２阻害性化合物に変わる。例えば、本発明のＰＤＥ１またはＰＤＥ２阻害剤がヒドロキシ置換基またはカルボキシ置換基を含有する場合、この置換基は、生理学的に加水分解性でかつ許容されるエステルを形成し得る。本明細書で用いる場合、「生理学的に加水分解性でかつ許容されるエステル」とは、生理学的条件下で加水分解して酸（ヒドロキシ置換基を有する本発明のＰＤＥ１またはＰＤＥ２阻害剤の場合）またはアルコール（カルボキシ置換基を有する本発明のＰＤＥ１またはＰＤＥ２阻害剤の場合）を生じることができ、投与される量で自体生理学的に耐容性である本発明のＰＤＥ１またはＰＤＥ２阻害剤のエステルを意味する。したがって、本発明のＰＤＥ１またはＰＤＥ２阻害剤がヒドロキシ基を含有する場合、例えば化合物−ＯＨである場合、該化合物のアシルエステルプロドラッグ、例えば化合物−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ１−４アルキルは、体内で加水分解して、一方では生理学的に加水分解性のアルコール（化合物−ＯＨ）を、他方では酸（例えば、ＨＯＣ(Ｏ)−Ｃ１−４アルキル）を形成することができる。別法としては、本発明の化合物がカルボン酸を含有する場合、例えば化合物−Ｃ(Ｏ)ＯＨである場合、該化合物の酸エステルプロドラッグ、例えば化合物−Ｃ(Ｏ)Ｏ−Ｃ１−４アルキルは、加水分解して、化合物−Ｃ(Ｏ)ＯＨとＨＯ−Ｃ１−４アルキルを形成する。理解されるように、かくして、該用語は慣用の医薬プロドラッグ形態を包含する。
【００５７】
本発明のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、それらのエナンチオマー、ジアステレオ異性体およびラセミ体、ならびにそれらの多形体、水和物、溶媒和物および複合体を含む。本発明の範囲内のいくつかの個々の化合物は、二重結合を含有し得る。本発明における二重結合の表示は、二重結合のＥ異性体とＺ異性体の両方を包含することを意味する。加えて、本発明の範囲内のいくつかの化合物は、１つ以上の不斉中心を含有し得る。本発明は光学的に純粋な立体異性体のいずれかおよび立体異性体の組合せのいずれかの使用を包含する。
【００５８】
当業者に理解されるように、本発明のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、ケト−エノール互変異性体を示し得る。したがって、本発明において定義される発明は、本明細書に記載の構造とそれらの互変異性体の両方を包含すると解されるべきである。
【００５９】
また、本発明のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤がそれらの安定な同位体および不安定な同位体を包含することが意図される。安定な同位体は、同種（すなわち、元素）の豊富な核種と比較して、さらなる中性子を１個含有する非放射性同位体である。このような同位体を含む化合物の活性は保持されろと予想され、このような化合物は非同位体アナログの薬物動態の測定に対する有用性もある。例えば、本発明の化合物の特定の位置にある水素原子を重水素（非放射性である安定な同位体）と置き換えることができる。公知の安定な同位体の例としては、重水素、１３Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏが挙げられるが、これらに限定されるものではない。別法として、同種（すなわち、元素）の豊富な核種と比較して、さらなる中性子を複数含有する放射性同位体である不安定な同位体、例えば１２３Ｉ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、１１Ｃ、１８Ｆを、対応する豊富な核種、例えばそれぞれＩ、ＣおよびＦと置き換えることができる。本発明の化合物の有用な同位体の別の例は１１Ｃ同位体である。これらの放射性同位体は、本発明の化合物の放射線画像診断および／または薬物動態試験に有用である。国際公開第２０１１／０４３８１６号（出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に記載のＰＤＥ１阻害剤の同位体の製造方法を本発明の化合物の同位体の製造に使用できる。
【００６０】
「本発明のＰＤＥ１阻害剤」という記載は、遊離形態または（医薬的）塩形態の本明細書に記載の全ての化合物を包含する。好ましくは、本発明のＰＤＥ１阻害剤は、ｃＧＭＰのホスホジエステラーゼ媒介（例えば、ＰＤＥ１媒介）加水分解を、例えば実施例３に記載されるように、例えば固定化金属親和性粒子試薬ＰＤＥアッセイにおいて１００ｎＭ未満のＩＣ５０をもって阻害する。好ましくは、本発明のＰＤＥ１阻害剤は、遊離形態または塩形態の(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−ピリジン−２−イル)−ベンジル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オンまたは(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−(６−フルオロピリジン−２−イル)フェニル)メチル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オンである。
【００６１】
「本発明のＰＤＥ２阻害剤」という記載は、遊離形態または（医薬的）塩形態の本明細書に記載の全ての化合物を包含する。好ましくは、本発明のＰＤＥ２阻害剤は、ｃＧＭＰのホスホジエステラーゼ媒介（例えば、ＰＤＥ２媒介）加水分解を、例えば実施例５に記載されるように、例えば固定化金属親和性粒子試薬ＰＤＥアッセイにおいて１００ｎＭ未満のＩＣ５０をもって阻害する。好ましくは、本発明のＰＤＥ２阻害剤は、遊離形態または塩形態の２−(３,４−ジメトキシベンジル)−７−{(１Ｒ)−１−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−４−フェニルブチル}−５−メチルイミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オン（ＢＡＹ６０−７５５０）である。
【００６２】
「治療」および「治療する」という用語は、したがって、疾患の症状の予防および治療または寛解ならびに該疾患の原因の治療を包含すると解されるべきである。
【００６３】
治療方法については、「有効量」という用語は、特定の疾患または障害を治療することができる治療有効量を包含することを意図される。
【００６４】
「患者」という用語は、ヒトまたは非ヒト（すなわち、動物）患者を包含する。特定の実施態様において、本発明は、ヒトおよび非ヒトのどちらも包含する。別の実施態様において、本発明は、非ヒトを包含する。別の実施態様において、該用語は、ヒトを包含する。
【００６５】
本明細書で用いられる場合、「含む」という用語は、オープンエンドであることが意図され、さらなる未記載の要素または方法工程を除外しない。
【００６６】
本発明の製剤および医薬組成物は、特に、パーキンソン病、統合失調症、ナルコレプシー、緑内障、女性性機能不全、認知障害（例えば、学習、記憶、認識記憶、社会的相互作用および作業記憶）、不安およびうつ状態の治療に有用である。
【００６７】
本発明の実施に際して用いられる投与量は、もちろん、例えば、治療されるべき特定の疾患または状態、使用される特定のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤、投与様式、ならびに所望の治療法に応じて変化する。ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、経口、非経口、経皮または吸入を包含する適切な経路によって投与され得るが、好ましくは経口投与される。一般に、例えば上記の疾患の治療について、満足のいく結果は、約０.０１〜３.０ｍｇ／ｋｇ程度の投与量の経口投与で得られることが示される。したがって、大型動物、例えばヒトにおいて経口投与のために指摘される日用量は、約０.７５〜１５０ｍｇの範囲であり、好都合には１日１回もしくは２〜４回に分割して投与されるか、または持続放出形態で投与される。かくして、経口投与用の単位投与剤形（unit dosage form）は、例えば、ＰＤＥ１阻害剤またはＰＤＥ２阻害剤約０.２〜７５または１５０ｍｇ、例えば約０.２または１.０または２.０〜５０、７５または１００ｍｇを医薬上許容される希釈剤または担体と一緒に含み得る。ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、単一投与剤形（single dosage form）または別々の投与剤形（separate dosage forms）であってよい。ＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤は、同じ量であっても異なる量であってもよい。
【００６８】
本発明の化合物を含む医薬組成物は、慣用の希釈剤または賦形剤および製剤分野（galenic art）で公知の技術を用いて調製され得る。かくして、経口投与剤形としては、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤などが挙げられる。
【実施例】
【００６９】
本発明のＰＤＥ１阻害剤およびそれらの医薬上許容される塩は、国際公開第２００６／１３３２６１号、国際公開第２００７／１４３７０５号、国際公開第２００８／０６３５０５号、国際公開第２００８／０７００９５号、国際公開第２００９／０７５７８４号、国際公開第２００９／０７３２１０号、国際公開第２０１０／０６５１５３号、国際公開第２０１０／０６５１４８号、国際公開第２０１０／０６５１５１号、国際公開第２０１０／０６５１４９号、国際公開第２０１０／０６５１４７号、国際公開第２０１０／０６５１５２号、国際公開第２０１０／０９８８３９号、国際公開第２０１０／１３２１２７号、国際公開第２０１１／１５３１２９号、国際公開第２０１１／１５３１３５号、国際公開第２０１１／１５３１３６号、国際公開第２０１１／１５３１３８号、国際公開第２０１２／１７１０１６（各々の記載内容は出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に記載および例示の方法またはそれと類似の方法を用いて製造され得る。本発明のＰＤＥ２阻害剤は、国際公開第２０１０／０５４２６０号、国際公開第２０１０／０５４２５３号、国際公開第２０１２／１０４２９３号、国際公開第２０１３／０００９２４号、国際公開第２０１３／０３４７５５号、国際公開第２０１３／０３４７５８号、国際公開第２０１３／０３４７６１号、国際公開第２００６／０７２６１５号、国際公開第２００６／０２４６４０号、国際公開第２００６／０７２６１２号、国際公開第２０１２／１１４２２２号、国際公開第２０１２／１６８８１７号、国際公開第２００５／０４１９５７号、国際公開第２００５／０６１４９７号、国際公開第２０１１／０１１３１２号、欧州特許第１７４９８２４号、欧州特許第１５４８０１１号、欧州特許第１５５６０５５号、米国特許第４,７６６,１２２号、国際公開第２００２／０６８４２３号、国際公開第２００２／０５００７８号、国際公開第２００２／００９７１３号、国際公開第９８／３２７５５号、米国特許第５,８６１,３９６号、国際公開第２００４／０８９９５３号、米国特許第５,８６１,３９６号および米国特許第６,５７３,２６３号（各々の記載内容は出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に記載および例示の方法またはそれと類似の方法を用いて製造され得る。これらの方法の出発物質は、商業的に入手できない場合、公知化合物の合成と同様または類似の技術を用いて化学技術から選択される手順によって製造され得る。
【００７０】
特に、遊離形態または塩形態の(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−ピリジン−２−イル)−ベンジル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オンおよび(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−(６−フルオロピリジン−２−イル)フェニル)メチル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オンの合成方法は、下記の実施例１および２に記載の手順またはそれと同様の手順を使用して製造され得る。
【００７１】
実施例１  (６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−ピリジン−２−イル)−ベンジル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オン
この化合物は、国際公開第２００６／１３３２６１号に記載のとおり、またはそれと同様に製造され得る。
工程（ａ）  ７−(４−メトキシベンジル)−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン：
イソチオシアン酸フェニル（３.９ｍＬ、３２.７ｍｍｏｌ）を６−ヒドラジニル−１−(４−メトキシベンジル)−３−メチルピリミジン−２,４(１Ｈ,３Ｈ)−ジオン（０.４５ｇ、１.６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１２ｍＬ）中懸濁液に添加する。該反応混合物を１２０℃で４０時間加熱し、次に、減圧下にて蒸発させて溶媒を除去する。残留物をヘキサンで洗浄し、次に、ＭｅＯＨ（１２５ｍＬ）で処理し、−１５℃で２日間貯蔵して、結晶性固体を得る。該固体をＣＨ３ＯＨ−ＥｔＯＡｃから再結晶して生成物２.５ｇを得る。
【００７２】
工程（ｂ）  ５−メチル−３−(フェニルアミノ)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン：
ＡｌＣｌ３（０.７３３ｇ、５.５０ｍｍｏｌ）をアルゴン下で７−(４−メトキシベンジル)−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン（０.６９２ｇ、１.８３ｍｍｏｌ）およびアニソール（４０μＬ、０.３６７ｍｍｏｌ）の１,２−ジクロロエタン（１０ｍＬ）中溶液に添加する。該反応混合物を室温で３０分間撹拌し、次に、冷却しながら水でクエンチする。得られた懸濁液をセライトの層で濾過し、該セライトをＭｅＯＨ（２０ｍＬ）で洗浄する。大量のＴＨＦでセライトから生成物を溶離させる。ＴＨＦ溶出液を蒸発させて生成物０.４７ｇを得る。
【００７３】
工程（ｃ）  ６−クロロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン：
５−メチル−３−(フェニルアミノ)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン（４５０ｍｇ、１.７５ｍｍｏｌ）をＰＯＣｌ３（２０ｍＬ）中にて６０時間還流させ、該混合物を蒸発乾固させる。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、白色固体として生成物１２２ｍｇを得、出発物質２０７ｍｇを回収する。
【００７４】
工程（ｄ）  ６−((１Ｒ,２Ｒ)−２−ヒドロキシシクロペンチルアミノ)−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン：
６−クロロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（７５.８ｍｇ、０.２７５ｍｍｏｌ）、(１Ｒ,２Ｒ)−２−アミノ−シクロペンタノール（０.５５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１４４μＬ、０.８２５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液を１１０℃で一夜加熱する。反応混合物を減圧下にて蒸発させてＤＭＦを除去する。次に、残留物をクロマトグラフィーによって精製して所望の生成物を得る。
【００７５】
工程（ｅ）  (６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オン：
塩化チオニルのＣＨ２Ｃｌ２中２.０Ｍ溶液（２６７μＬ、０.５３４ｍｍｏｌ）を６−((１Ｒ,２Ｒ)−２−ヒドロキシシクロペンチルアミノ)−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（３０ｍｇ、０.０８８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）およびＴＨＦ（１.５ｍＬ）中溶液に添加する。該反応混合物を室温で一夜撹拌し、次に、２８％ＮＨ４ＯＨ  ２９μＬでクエンチする。得られた混合物を濃縮し、クロマトグラフィーによって精製して、白色固体として生成物２６ｍｇを得る。
【００７６】
工程（ｆ）  (６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−ピリジン−２−イル)−ベンジル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オン：
(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オン（２２ｍｇ、０.０６８ｍｍｏｌ）、２−(４−(ブロモメチル)フェニル)ピリジン（１６.９ｍｇ、０.０６８ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（９.４ｍｇ、０.０６８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２.５ｍＬ）中混合物をアルゴン下にて室温で一夜撹拌する。該反応混合物を半分取ＨＰＬＣによって精製して最終生成物を得る。
【００７７】
実施例２  (６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−(６−フルオロピリジン−２−イル)フェニル)メチル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オン
この化合物は、国際公開第２００７／１４３７０５号、国際公開第２０１３／１９２５５６号、米国仮出願第６１／８３８,１０５号および米国仮出願第６１／９１９,４２４号（各々の記載内容は出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に記載のとおり、またはそれと同様に製造され得る。
【００７８】
実施例３  ＩＭＡＰホスホジエステラーゼアッセイキットを使用するインビトロでのＰＤＥ１阻害の測定
ホスホジエステラーゼ１Ｂ（ＰＤＥ１Ｂ）は、環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）を５'−グアノシン一リン酸（５'−ＧＭＰ）に変換するカルシウム／カルモジュリン依存性ホスホジエステラーゼ酵素である。ＰＤＥ１Ｂはまた、蛍光分子ｃＧＭＰ−フルオレセインのような修飾ｃＧＭＰ基質を、対応するＧＭＰ−フルオレセインへ変換することができる。ｃＧＭＰ−フルオレセインからのＧＭＰ−フルオレセインの生成は、例えばＩＭＡＰ（Molecular Devices, Sunnyvale, CA）固定化金属親和性粒子試薬を使用して、定量化され得る。
【００７９】
すなわち、ＩＭＡＰ試薬は、ＧＭＰ−フルオレセインにおいて見られるがｃＧＭＰ−フルオレセインにおいては見られない遊離５'−リン酸に高い親和性もって結合する。得られたＧＭＰ−フルオレセイン-ＩＭＡＰ複合体は、ｃＧＭＰ−フルオレセインと比較して大きい。大きくてゆっくりと回転する複合体と密接に関係する小フルオロフォアを未結合フルオロフォアと区別できる。これは、それらが蛍光を発するときに放出する光子が、蛍光の励起に使用した光子と同じ極性を維持しているからである。
【００８０】
ホスホジエステラーゼアッセイにおいて、ＩＭＡＰと結合できず、したがって蛍光偏光をほとんど維持できないｃＧＭＰ−フルオレセインを、ＩＭＡＰと結合すると蛍光偏光（Δｍｐ）を大きく増加させるＧＭＰ−フルオレセインに変換する。ホスホジエステラーゼ阻害は、それ故に、Δｍｐの減少として検出される。
【００８１】
酵素アッセイ
材料：  Molecular Devices（Sunnyvale, CA）から入手可能であるＩＭＡＰ試薬（反応緩衝液、結合緩衝液、ＦＬ−ＧＭＰおよびＩＭＡＰビーズ）以外の全ての化学物質はSigma-Aldrich（St. Louis, MO）から入手可能である。
アッセイ：  ３’,５’−環状−ヌクレオチド−特異的ウシ脳ホスホジエステラーゼ（Sigma, St. Louis, MO）を５０％グリセロールで２.５Ｕ／ｍｌに再構成する。酵素１ユニットは、ｐＨ７.５にて３０℃で１分間につき１.０μｍｏｌの３’,５’−ｃＡＭＰを５’−ＡＭＰに加水分解する。酵素（１部）を反応緩衝液（３０μＭ  ＣａＣｌ２、１０Ｕ／ｍｌのカルモジュリン（Ｓｉｇｍａ  Ｐ２２７７）、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７.２、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０.１％ＢＳＡ、０.０５％ＮａＮ３）（１９９９部）に添加して、最終濃度１.２５ｍＵ／ｍｌとする。希酵素溶液９９μｌを平底９６ウェルポリスチレンプレートの各ウェルに添加し、１００％ＤＭＳＯに溶解した試験化合物１μｌを添加する。選択された本発明の化合物を混合し、該酵素と室温で１０分間プレインキュベートする。
【００８２】
３８４ウェルマイクロタイタープレート中で、酵素と阻害剤との混合物（４部）を基質溶液（０.２２５μＭ）（１部）と合わせることにより、ＦＬ−ＧＭＰ変換反応を開始させる。反応物を暗所にて室温で１５分間インキュベートする。３８４ウェルプレートの各ウェルに、結合試薬（１：１８００希釈の消泡剤を添加した結合緩衝液による１：４００希釈のＩＭＡＰビーズ）６０μｌを添加することにより、反応を停止させる。プレートを室温で１時間インキュベートして、ＩＭＡＰ結合を完了するまで進行させ、次に、Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチモードマイクロプレートリーダー（PerkinElmer, Shelton, CT）に入れて、蛍光偏光（Δｍｐ）を測定する。
【００８３】
Δｍｐの減少として測定されたＧＭＰ濃度低下は、ＰＤＥ活性の阻害の指標である。０.００３７ｎＭ〜８０,０００ｎＭの範囲の８〜１６種類の濃度の化合物の存在下で酵素活性を測定し、次に、非線形回帰ソフトウェア（ＸＬＦｉｔ；IDBS, Cambridge, MA）を使用してＩＣ５０値の推定を可能にする薬物濃度対ΔｍＰをプロットすることによって、ＩＣ５０値を決定する。
【００８４】
ＰＤＥ１阻害活性について本明細書に記載されるとおりに、またはそれと同様に、ＰＤＥ１阻害が選択され、アッセイにおいて試験される。本実施例に記載の手順またはそれと同様の手順で、実施例１の化合物は、１０５±１０.９ｐＭのＩＣ５０値を有する。
【００８５】
実施例４  ２−(３,４−ジメトキシベンジル)−７−{(１Ｒ)−１−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−４−フェニルブチル}−５−メチルイミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オン（ＢＡＹ６０−７５５０）
本実施例の化合物は、米国特許第６,５７３,２６３号（その内容は出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に記載のとおりに、またはそれと同様に製造され得る。詳細は、以下のとおりである：
【００８６】
化合物４Ａ：  ２−(３,４−ジメトキシベンジル)−７−[１−(１−ヒドロキシエチル)−４−フェニルブチル]−５−メチルイミダゾ−[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オン：
７−(１−アセチル−４−フェニルブチル)−２−(３,４−ジメトキシベンジル)−５−メチルイミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オン１１０ｍｇ（０.２２ｍｍｏｌ）をエタノール５ｍｌに溶解し、ホウ素化水素ナトリウム２０ｍｇ（０.５３ｍｍｏｌ）で数回に分けて処理して、２−(３,４−ジメトキシベンジル)−７−[１−(１−ヒドロキシエチル)−４−フェニルブチル]−５−メチルイミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オンを得る。
【００８７】
溶離液としてアセトニトリル／水（１／１、ｖ／ｖ）を使用して、逆相条件下のクロマトグラフィー（Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  Ｃ３０、５μｍ）によって化合物４Ａを２つのジアステレオマー化合物に分ける。対応するエナンチオマー的に純粋な化合物（下記の実施例４Ｂ、４Ｃ、４Ｄおよび４Ｅ）は、シリカゲルキラル固定相上でのラセミジアステレオマー（racemic diastereomers）のクロマトグラフィー分離によって得ることができる。
【００８８】
該ラセミ体の分離に特に好適なポリアミドシリカゲルキラル固定相（ＣＳＰ）は、例えば溶離液として酢酸エチルを使用する、モノマーであるＮ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシン−ｄ−メンチルアミドまたはＮ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシン−１−メンチルアミド（欧州特許出願公開第０３７９９１７号を参照）に基づくものである。
【００８９】
実施例４Ａからの最初に溶出するジアステレオマーのクロマトグラフィー分割によって、２つのエナンチオマー化合物４Ｂ［２−(３,４−ジメトキシベンジル)−７−{(１Ｒ)−１−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−４−フェニルブチル}−５−メチルイミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オン（ＢＡＹ６０−７５５０）］および化合物４Ｃ［２−(３,４−ジメトキシベンジル)−７−{(１Ｓ)−１−[(１Ｓ)−１−ヒドロキシエチル]−４−フェニルブチル}−５−メチル−イミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オン］が得られる。これと同様に、後から溶出するジアステレオマーから２つのエナンチオマー化合物４Ｄ［２−(３,４−ジメトキシベンジル)−７−{(１Ｒ)−１−[(１Ｓ)−１−ヒドロキシエチル]−４−フェニルブチル}−５−メチルイミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オン］および化合物４Ｅ［２−(３,４−ジメトキシベンジル)−７−{(１Ｓ)−１−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]４−フェニルブチル}−５−メチルイミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オン］が得られる。後から溶出するジアステレオマーから出発するエナンチオマー化合物４Ｄおよび化合物４Ｅの分離は、化合物４Ｂと同様に行われる。
【００９０】
さらにまた、化合物４Ｂおよび化合物４Ｃは、好ましくは、７−(１−アセチル−４−フェニルブチル)−２−(３,４−ジメトキシベンジル)−５−メチルイミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オンのジアステレオ選択的還元法によって得ることもできる。これについては、７−(１−アセチル−４−フェニルブチル)−２−(３,４−ジメトキシ−ベンジル)−５−メチルイミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オン１９０ｍｇ（０.４１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン／メタノール（１００／１）２０ｍｌに溶解し、塩化亜鉛６.１０ｍｇ（０.４５ｍｍｏｌ）で処理し、室温で３０分間撹拌する。０℃に冷却した後、水素化ホウ素ナトリウム３０ｍｇを数回に分けて添加し、次に、該混合物を氷浴で冷却しながら２.５時間撹拌する。次に、該バッチを、２Ｎ塩酸数滴を使用して中和し、真空濃縮し、ジクロロメタン／メタノール（８０／１および４０／１）溶離液を使用してクロマトグラフィー処理する。次に、該ジアステレオマー混合物を、実施例４Ｂに記載したように逆相クロマトグラフィー条件下で精製し、キラル固定相上でクロマトグラフィーによって純粋なエナンチオマーに分離する。
【００９１】
実施例５  インビトロでのＰＤＥ２阻害の測定
ＰＤＥ２の阻害は、ＰＤＥ１酵素に代えてＰＤＥ２酵素（ヒト組換え）を使用し、基質として蛍光−ｃＡＭＰを使用し、該酵素を刺激するためにｃＧＭＰ（１μＭ）を使用すること以外は、実施例３に記載と同様のアッセイを使用することによって測定され得る。
【００９２】
別法として、ＰＤＥ２阻害は、Boess et al., Neuropharmacology, Volume 47, Issue 7, December 2004, Pages 1081-1092（記載内容は出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に記載のとおり、またはそれと同様に測定され得る。Boess et al.に記載の手順またはそれと同様の手順を用いて、例示化合物４Ｂ（Ｂａｙ−６０−７５５０）は、２.０ｎＭ（ウシ）および４.７ｎＭ（ヒト）のＩＣ５０値を有することが報告される。
【００９３】
実施例６  脳内での一酸化窒素シグナル伝達に対するＰＤＥ１およびＰＤＥ２阻害剤の効果
動物：  動物の取り扱いおよび使用は、全て、ＮＩＨガイドラインに従って、コロンビア大学の動物実験委員会（Institutional Animal Care and Use Committee）（ＩＡＣＵＣ）によって承認されたプロトコルに従う。雄性Ｃ５７  ＢＬ／６マウス（７〜８週齢）をJackson Laboratoryから入手する。１つのケージにつき最大５匹までのマウスを収容し、標準的なＰｕｒｉｎａ  ｒｏｄｅｎｔ  ｃｈｏｗおよび水を自由に摂取可能にして１２時間明暗サイクル下に維持する。
【００９４】
スライス調製：スライス調製は、下記のとおり、またはNishi et al., J. Neuroscience (2008) 28:10460-71（記載内容は出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に記載と同様に、行うことができる。６〜８週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスをJapan SLCから購入する。使用される全てのマウスは、ヘルシンキ宣言（Declaration of Helsinki）および米国国立衛生研究所（National Institutes of Health）によって採用され公表されているGuide for the Care and Use of Laboratory Animalsに従って取り扱われ、詳細なプロトコルは久留米大学医学部の動物実験委員会（Institutional Animal Care and Use Committee）によって承認されている。雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスを断頭によって屠殺する。脳を素早く取り出し、氷冷酸素化クレブス−ＨＣＯ３−バッファー［ＮａＣｌ  １２４ｍＭ、ＫＣｌ  ４ｍＭ、ＮａＨＣＯ３  ２６ｍＭ、ＣａＣｌ２  １.５ｍＭ、ＫＨ２ＰＯ４  １.２５ｍＭ、ＭｇＳＯ４  １.５ｍＭ、およびＤ−グルコース  １０ｍＭ、ｐＨ７.４］中に入れる。従前に記載されているように（Nishi et al., PNAS (2005) 102:1199-1204）、振動刃ミクロトーム（vibrating blade microtome）、ＶＴ１０００Ｓ（Leica Microsystems）を使用して、冠状スライス（３５０μｍ）を調製する。氷冷クレブス−ＨＣＯ３−バッファー中にて該スライスから線条体を切り出す。
【００９５】
スライス処理：  各スライスを、アデノシンデアミナーゼ（１０μｇ／ｍｌ）を含有する新しいクレブス−ＨＣＯ３−バッファー２ｍｌが入っているポリプロピレンインキュベーションチューブ中に入れる。該スライスを９５％Ｏ２／５％ＣＯ２による継続的酸素化条件下にて３０℃で６０分間プレインキュベートする。３０分間プレインキュベートした後にバッファーを新しいクレブス−ＨＣＯ３−バッファーと取り替える。スライスをＰＤＥ１阻害剤のみ、ＰＤＥ２阻害剤のみ、ＰＤＥ２阻害剤と併せたＰＤＥ１阻害剤、または対照（ＰＤＥ１阻害剤もＰＤＥ２阻害剤も含まないＤＭＳＯビヒクル）で４５分間処理する。１μＭのＰＤＥ１阻害剤化合物(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−ピリジン−２−イル)−ベンジル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オン（実施例１）を使用する。０.１μＭの２−(３,４−ジメトキシベンジル)−７−{(１Ｒ)−１−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−４−フェニルブチル}−５−メチルイミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オン（ＢＡＹ６０−７５５０または実施例４Ｂ）を使用してＰＤＥ２を遮断する。前処理に続いて、該スライスを、アデノシンデアミナーゼを含まない所定のクレブス中、５μＭのＮＯドナー、ジエチルアンモニウム(Ｚ)−１−(Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ)ジアゼン−１−イウム−１,２−ジオレート（ＤＥＡ／ＮＯ）で４分間刺激する。ＤＥＡ／ＮＯは、ｃＧＭＰレベルの用量依存性変化を引き起こす能力のために使用される。０.１Ｎ  ＮａＯＨの貯蔵液中のＤＥＡ／ＮＯを調製し、各スライスに使用する直前にクレブスバッファーで０.５μＭまたは５μＭに希釈する。刺激の直後に、該クレブスを除去して５％トリクロロ酢酸と取り替え、超音波処理する。サンプルを氷上で保存した後、４℃にて１５,０００×ｇで２０分間遠心分離する。上清を環状ヌクレオチド酵素イムノアッセイのために確保しておき、沈殿しているタンパク質ペレットをレムリ（Ｌａｅｍｍｌｉ）サンプルバッファー６０μｌに再懸濁させる。各々、使用するまで−８０℃で貯蔵する。
【００９６】
酵素イムノアッセイ：  確保しておいた上清を５倍容量のエチルエーテルで３回洗浄して、ＴＣＡを除去する。次に、該サンプルを室温で真空乾燥させる（Ｓｐｅｅｄｖａｃ、Ｓａｖａｎｔ  ＳＰＤ１１１Ｖ）。ｃＧＭＰまたはｃＡＭＰ酵素イムノアッセイ（Cayman Chemical Co., Ann Arbor, MI）のための調製において、それらをＥＩＡバッファー１００μＬに再懸濁させる。該サンプルをアセチル化し、キットの取扱説明書に従って添付されている標準と比較して分析する。比色アッセイの結果をＳｏｆｔＭａｘ  ４.８ソフトウエア（Molecular Devices, Sunnyvale, CA）によって記録する。各データポイントをＢ／Ｂ０％（１００ × [(サンプルまたは標準ＯＤ − 平均非特異的結合) ／ (平均Ｂ０ − 平均非特異的結合)]）に変換する。標準はプロットされ、４パラメータロジスティック方程式に適合する。サンプルの濃度は、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  ＥｘｃｅｌおよびＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｚｍを使用して標準曲線から補間される。この実験の結果を図１に示す。この実験は、ＰＤＥ１およびＰＤＥ２の阻害の組合せが刺激の条件下での線条体内のｃＧＭＰレベルに対する相加効果よりも大きいことを示す。低濃度のＤＥＡ／ＮＯ（０.５μＭ）ではＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤の効果は相加的であるが、最大のＤＥＡ／ＮＯ（５.０μＭ）では相加効果よりも明らかに大きく、阻害剤の併用によって得られるｃＧＭＰのレベルは各阻害剤単独の効果の合計よりも大きい。
本発明は、以下の態様および実施態様を含む。
［発明１］
（ａ）遊離形態または塩形態のＰＤＥ１阻害剤および（ｂ）遊離形態または塩形態のＰＤＥ２阻害剤を含む製剤。
［発明２］
ＰＤＥ１阻害剤が、遊離形態または塩形態の(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−ピリジン−２−イル)−ベンジル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オン、または遊離形態または塩形態の(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−(６−フルオロピリジン−２−イル)フェニル)メチル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オンである、発明１記載の製剤。
［発明３］
ＰＤＥ２阻害剤が、遊離形態または塩形態の２−(３,４−ジメトキシベンジル)−７−{(１Ｒ)−１−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−４−フェニルブチル}−５−メチルイミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オン（ＢＡＹ６０−７５５０）である、発明１または２記載の製剤。
［発明４］
遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤を医薬上許容される希釈剤または担体と一緒に含む医薬組成物。
［発明５］
該組成物が、ＰＤＥ１治療剤およびＰＤＥ２治療剤が単一投与剤形である多剤混合型医薬組成物である、発明４記載の医薬組成物。
［発明６］
該組成物が、ＰＤＥ１治療剤およびＰＤＥ２治療剤が別々の投与剤形である多剤遊離型医薬組成物である、発明４記載の医薬組成物。
［発明７］
遊離形態または眼科的に許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤およびＰＤＥ２阻害剤が、眼科的に許容される希釈剤または担体と組み合わせてまたは付随している、発明４〜６いずれか１項記載の医薬組成物。
［発明８］
ＰＤＥ１阻害剤が、遊離形態または医薬上許容される塩形態の(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−ピリジン−２−イル)−ベンジル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オン、または遊離形態または医薬上許容される塩形態の(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−(６−フルオロピリジン−２−イル)フェニル)メチル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オンである、発明４〜７いずれか１項記載の医薬組成物。
［発明９］
ＰＤＥ２阻害剤が、遊離形態または医薬上許容される塩形態の２−(３,４−ジメトキシベンジル)−７−{(１Ｒ)−１−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−４−フェニルブチル}−５−メチルイミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オン（ＢＡＹ６０−７５５０）である、発明４〜８いずれか１項記載の医薬組成物。
［発明１０］
パーキンソン病、下肢静止不能振戦、ジスキネジア、ハンチントン病、アルツハイマー病、薬剤性運動障害、うつ状態、注意欠陥障害、注意欠陥多動障害、双極型疾患、不安、睡眠障害、ナルコレプシー、認知障害（例えば、学習、記憶、認識記憶、社会的相互作用および作業記憶）、認知症、トゥレット症候群、自閉症、脆弱Ｘ症候群、覚醒剤離脱、薬物依存、脳血管疾患、脳卒中、うっ血性心疾患、高血圧、肺高血圧症、肺動脈性高血圧症、性機能障害、喘息、慢性閉塞性肺疾患、アレルギー性鼻炎、自己免疫および炎症性疾患；女性性機能不全、運動性無月経、無排卵症、閉経、閉経期症状、月経前症候群、早期分娩、不妊症、不規則な月経周期、異常子宮出血、骨粗鬆症、多発性硬化症、前立腺肥大、前立腺癌、甲状腺機能低下症、エストロゲン誘導性子宮内膜増殖症またはエストロゲン誘導性子宮内膜癌、緑内障または眼内圧亢進、精神病（例えば、幻覚、偏執性妄想もしくは奇異な妄想のような精神病症状、または支離滅裂な会話および思考、例えば、統合失調症、統合失調感情障害、統合失調様障害、精神障害、妄想性障害、および急性躁病エピソードおよび双極性障害におけるような躁病）、外傷性脳損傷、ＰＤＥ１またはＰＤＥ２を発現する細胞中の低レベルのｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰ（またはｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰシグナル伝達経路の阻害）によって特徴付けられる疾患または状態、および／またはドーパミンＤ１受容体シグナル伝達活性の低下によって特徴付けられる疾患または状態、プロゲステロンシグナル伝達の亢進によって軽減され得る疾患または状態のいずれかを治療する方法であって、該治療を必要とする患者へ発明４〜９いずれか１項記載の医薬組成物の有効量を投与することを含む、方法。
［発明１１］
該状態が、パーキンソン病、統合失調症、ナルコレプシー、緑内障、女性性機能不全、認知障害（例えば、学習、記憶、認識記憶、社会的相互作用および作業記憶）、不安およびうつ状態からなる群から選択される、発明１０記載の方法。
［発明１２］
発明１０〜１１に記載の状態のいずれかの治療または予防的治療のための（例えば、医薬の製造における）発明１〜３いずれか１項記載の製剤または発明４〜９いずれか１項記載の医薬組成物の使用。
［発明１３］
発明１０〜１１のいずれか１項記載の疾患または状態の治療に用いるための、発明４〜９いずれか１項記載の医薬組成物。
［発明１４］
パーキンソン病、下肢静止不能振戦、ジスキネジア、ハンチントン病、アルツハイマー病、薬剤性運動障害、うつ状態、注意欠陥障害、注意欠陥多動障害、双極型疾患、不安、睡眠障害、ナルコレプシー、認知障害（例えば、学習、記憶、認識記憶、社会的相互作用および作業記憶）、認知症、トゥレット症候群、自閉症、脆弱Ｘ症候群、覚醒剤離脱、薬物依存、脳血管疾患、脳卒中、うっ血性心疾患、高血圧、肺高血圧症、肺動脈性高血圧症、性機能障害、喘息、慢性閉塞性肺疾患、アレルギー性鼻炎、自己免疫および炎症性疾患；女性性機能不全、運動性無月経、無排卵症、閉経、閉経期症状、月経前症候群、早期分娩、不妊症、不規則な月経周期、異常子宮出血、骨粗鬆症、多発性硬化症、前立腺肥大、前立腺癌、甲状腺機能低下症、エストロゲン誘導性子宮内膜増殖症またはエストロゲン誘導性子宮内膜癌、緑内障または眼内圧亢進、精神病（例えば、幻覚、偏執性妄想もしくは奇異な妄想のような精神病症状、または支離滅裂な会話および思考、例えば、統合失調症、統合失調感情障害、統合失調様障害、精神障害、妄想性障害、および急性躁病エピソードおよび双極性障害におけるような躁病）、外傷性脳損傷、ＰＤＥ１またはＰＤＥ２を発現する細胞中の低レベルのｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰ（またはｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰシグナル伝達経路の阻害）によって特徴付けられる疾患または状態、および／またはドーパミンＤ１受容体シグナル伝達活性の低下によって特徴付けられる疾患または状態、プロゲステロンシグナル伝達の亢進によって軽減され得る疾患または状態のいずれかを治療する方法であって、該治療を必要とする患者へ（ａ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ１阻害剤、および（ｂ）遊離形態または医薬上許容される塩形態のＰＤＥ２阻害剤の有効量を投与することを含む、方法。
［発明１５］
該状態が、パーキンソン病、統合失調症、ナルコレプシー、緑内障、女性性機能不全、認知障害（例えば、学習、記憶、認識記憶、社会的相互作用および作業記憶）、不安およびうつ状態からなる群から選択される、発明１４記載の方法。
［発明１６］
ＰＤＥ１阻害剤が、遊離形態または医薬上許容される塩形態の(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−ピリジン−２−イル)−ベンジル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オン、または遊離形態または医薬上許容される塩形態の(６ａＲ,９ａＳ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−２−((４−(６−フルオロピリジン−２−イル)フェニル)メチル)−シクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オンである、発明１４または１５記載の方法。
［発明１７］
ＰＤＥ２阻害剤が、遊離形態または医薬上許容される塩形態の２−(３,４−ジメトキシベンジル)−７−{(１Ｒ)−１−[(１Ｒ)−１−ヒドロキシエチル]−４−フェニルブチル}−５−メチルイミダゾ[５,１−ｆ][１,２,４]トリアジン−４(３Ｈ)−オン（ＢＡＹ６０−７５５０）である、発明１４〜１６いずれか１項記載の方法。
【図１】
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