(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0006801835.tif 000018
［式中、
Ｒ１及びＲ３は独立に、リジン、グルタミン酸、チロシン、イソロイシン、アスパラギン、アルギニン、又はトレオニンの側鎖置換基であり；
Ｒ２及びＲ４は独立に、水素若しくはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、又はＲ１及びＲ２はそれらが結合している炭素原子と一緒にシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、若しくはシクロヘキシル基を形成しており、又はＲ１及びＲ２、Ｒ３及びＲ４はそれらが結合している炭素原子と一緒にシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、若しくはシクロヘキシル基を形成しており；
Ｙは水素、−ＮＯ２、−ＣＯＯＲ１４、−ＯＣ（Ｒ１４）３、−ＳＯ３Ｒ１４、及びＳＯ２Ｒ１４からなる群から選択され；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は独立に、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ１０は水素、メチル、ｔ−ブチル、又は保護基であり；
各Ｒ１４は水素、アルキル、又はアリールであり；
ＸはＯ、ＮＲ９、Ｓ、Ｐ、Ｓｅ、Ｃ１〜Ｃ６アルキレン、ＳＯ、ＳＯ２、及びＮＨからなる群から選択され；
ｎは０、１、２、３、４、又は５である］
のβ−ターンペプチド模倣環状化合物の塩の結晶形を調製する方法であって、
（ａ）式（ＩＶ）
【化２】
0006801835.tif 000019
［式中、
Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ１０は上記で定義される意味を有し；
Ｒ１１及びＲ１３は独立に、水素又は保護基であり；
Ｒ１２は保護基であり；
Ｗ１及びＷ３は独立に、官能基上の水素原子が１つ少ない、リジン、グルタミン酸、チロシン、イソロイシン、アスパラギン、アルギニン、又はトレオニンの側鎖置換基であり；
ＺはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択される］
の保護直鎖ペプチド模倣化合物を用意するステップと、
（ｂ）式（ＩＶ）の化合物を選択的に脱保護して式（ＩＩＩ）
【化３】
0006801835.tif 000020
［式中、
Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、Ｗ１、Ｗ３、Ｘ、Ｙ、Ｚ、及びｎは上記で定義される意味を有する］
の部分保護直鎖ペプチド模倣化合物を得るステップと、
（ｃ）分子内芳香族求核置換反応により式（ＩＩＩ）の部分保護直鎖ペプチド模倣化合物を環化させて式（ＩＩ）
【化４】
0006801835.tif 000021
［式中、
Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、Ｗ１、Ｗ３、Ｘ、Ｙ、Ｚ、及びｎは上記で定義される意味を有する］
の化合物を得るステップと、
（ｄ）式（ＩＩ）の化合物中のアミノ酸側鎖保護基を脱保護して式（Ｉ）のβ−ターンペプチド模倣環状化合物の塩を得るステップと、
（ｅ）式（Ｉ）のβ−ターンペプチド模倣環状化合物を結晶化させて結晶形である式（Ｉ）の化合物を得るステップと
を含み、
結晶化が、式（Ｉ）の化合物又は塩を塩基性のｐＨを有する塩基性溶液と接触させるステップと、酸性のｐＨを得るようにｐＨを低下させて式（Ｉ）の化合物又は塩を析出又は結晶化させるステップとを含む、方法。
【請求項２】
式（Ｉ）のβ−ターンペプチド模倣環状化合物が、環原子が１４〜１６個である大環状環を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒ１及びＲ３が独立に、グルタミン酸、リジン、イソロイシン、又はアルギニンの側鎖置換基である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ１及びＲ３が独立に、イソロイシン又はアルギニンの側鎖置換基である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
Ｒ１１及びＲ１３が独立に、トリフルオロアセチル、ホルミル、アセチル、ｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、シクロヘキシルオキシカルボニル、フルオレニル−９−メトキシ−カルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、Ｃｂｚ誘導体、トリフェニル、メチル、ベンジル、アリルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブチル、アルキルシラン、及びアリルからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
Ｒ１２がトリチル又はｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラン（ＴＢＤＭＳ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ＸがＯ、Ｓ、又はＮＨである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
Ｙが−ＮＯ２である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
環化が、ｔ−ＢｕＯＫ、ＣｓＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、又はそれらの混合物を含む塩基の存在下、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、又はそれらの混合物を含む極性非プロトン性溶媒中で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
環化が、約０．５％未満の水及び約０．５％未満のメタノール中で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
環化が、０．０５Ｍ未満の部分保護直鎖ペプチド模倣中間体（ＩＩＩ）の濃度で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
環化が、−２０℃〜１５℃の温度で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
塩がＨＣｌ塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
塩基性のｐＨが約８〜約１２である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
塩基性のｐＨを有する溶液を酸と混和することによってｐＨを低下させて酸性化溶液を得る、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
酸性のｐＨが約０〜約４である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
溶液を混和することが、約０℃〜約６０℃の温度で行われる、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
以下の構造：
【化５】
0006801835.tif 000022
を有するβ−ターンペプチド模倣環状化合物のＨＣｌ塩の結晶形を調製する方法であって、
（ａ）式（４ａ）の保護直鎖ペプチド模倣化合物
【化６】
0006801835.tif 000023
を用意するステップと、
（ｂ）式（４ａ）の化合物を選択的に脱保護して式（３ａ）の部分保護直鎖ペプチド模倣化合物
【化７】
0006801835.tif 000024
を得るステップと、
（ｃ）分子内芳香族求核置換反応により式（３ａ）の部分保護直鎖ペプチド模倣化合物を環化させて式（２ａ）
【化８】
0006801835.tif 000025
の化合物を得るステップと、
（ｄ）式（２ａ）の化合物中のアミノ酸側鎖保護基を脱保護してＤ３のＨＣｌ塩を得るステップと、
（ｅ）Ｄ３のＨＣｌ塩を結晶化させて結晶形であるＤ３のＨＣｌ塩を得るステップと
を含む、方法。
【請求項１９】
式（２ａ）の化合物を、ＨＣｌ溶液及びアセトニトリルの混合物中に化合物を懸濁させることにより脱保護するステップをさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
以下の構造：
【化９】
0006801835.tif 000026
を有するβ−ターンペプチド模倣環状化合物の塩の結晶形。
【請求項２１】
少なくとも６０％の水を含有する溶液から得られる、請求項２０に記載の結晶形。
【請求項２２】
水和物である、請求項２０に記載の結晶形。
【請求項２３】
６．７±０．２、９．１±０．２、４．４±０．２、５．１±０．２、２．６±０．２、１１．５±０．２、１５．３±０．２、１６．６±０．２、１７．７±０．２、１８．２±０．２、２０．２±０．２、２１．６±０．２、２２．１±０．２、２２．５±０．２、２３．２±０．２、２４．１±０．２から選択される回折角（°２θ）に２つ以上の特徴的なピークを有するＸＲＰＤパターンによって特徴づけられる、請求項２０に記載の結晶形。
【請求項２４】
６．７±０．２、９．１±０．２、４．４±０．２、５．１±０．２、及び２．６±０．２の回折角（°２θ）に特徴的なピークを有するＸＲＰＤパターンによって特徴づけられる、請求項２０に記載の結晶形。
【請求項２５】
不規則形状を有する結晶形ＩＶ、針状形状を有する結晶形Ｖ、又はそれらの混合物を含む、請求項２０に記載の結晶形。
【請求項２６】
以下の中間体：
【化１０】
0006801835.tif 000027
の一つ以上に由来する、請求項２０に記載の結晶形。
【発明の詳細な説明】
【相互参照】
【０００１】
[0001]この出願は２０１５年７月９日出願の米国特許仮出願第６２／１９０，５９６号の優先権の利益を主張し、その全体の内容は参照により本明細書に組み込まれている。
【発明の分野】
【０００２】
[0002]本開示はβ−ターン環状ペプチド模倣塩の結晶形を調製する方法に関する。
【序論】
【０００３】
[0003]β−ターン環状ペプチド模倣化合物のクラスにおけるいくつかの化合物の有望な薬理学的活性を考慮すると、規模拡張性及び／又は費用効率が高い製造を可能にする新しい合成法の開発の必要性が存在する。
【０００４】
[0004]したがって本発明の態様は、β−ターン環状ペプチド模倣化合物の調製のための新しい合成方法を提供することである。本発明のさらなる態様は、これらの化合物を製造するための商業的に実現可能な方法を提供することである。
【０００５】
[0005]これらの塩の改善された精製プロセス法を提供するために、β−ターン環状ペプチド模倣塩を結晶化させる又は析出させる方法を開発することが有利となる。さらに、β−ターン環状ペプチド模倣塩の結晶形又は高度に精製された析出形は、医薬組成物の処方において有用となる。したがって、結晶性の又は析出させたβ−ターン環状ペプチド模倣化合物又はその塩を製造する方法が必要とされている。
【発明の概要】
【０００６】
[0006]様々な実施形態において、本発明はβ−ターン環状ペプチド模倣塩の合成方法を提供する。合成方法は図１（スキーム１）に示される実施形態において説明される。
【０００７】
[0007]本開示の特定の実施形態は、式（Ｉ）
【化１】
0006801835.tif 000002
［式中、
Ｒ１は水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリール、又は天然若しくは非天然アミノ酸のアミノ酸側鎖置換基であり；
Ｒ３は水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリール、又は天然若しくは非天然アミノ酸のアミノ酸側鎖置換基であり；
Ｒ２及びＲ４は独立に、水素若しくはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、又はＲ１及びＲ２はそれらが結合している炭素原子と一緒にシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、若しくはシクロヘキシル基を形成しており、又はＲ１及びＲ２、Ｒ３及びＲ４はそれらが結合している炭素原子と一緒にシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、若しくはシクロヘキシル基を形成しており；
Ｙは水素、−ＮＯ２、−ＣＯＯＲ１４、−ＯＣ（Ｒ１４）３、−ＳＯ３Ｒ１４、及び−ＳＯ２Ｒ１４からなる群から選択され；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は独立に、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ１０は水素、メチル、ｔ−ブチル、又は保護基であり；
各Ｒ１４は水素、アルキル、又はアリールであり；
ＸはＯ、ＮＲ９、Ｓ、Ｐ、Ｓｅ、Ｃ１〜Ｃ６アルキレン、ＳＯ、ＳＯ２、及びＮＨからなる群から選択され；
ｎは０、１、２、３、４、又は５である］
のβ−ターンペプチド模倣環状化合物の結晶塩を調製する方法であって、
（ａ）式（ＩＶ）
【化２】
0006801835.tif 000003
［式中、
Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ１０は上記で定義される意味を有し；
Ｒ１１及びＲ１３は独立に、水素又は保護基であり；
Ｒ１２は保護基であり；
Ｗ１及びＷ３は独立に、それぞれＲ１１及びＲ１３への結合点で水素原子が１つ少ない、天然若しくは非天然アミノ酸のアミノ酸側鎖置換基であり；
ＺはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択される］
の保護直鎖ペプチド模倣化合物を用意するステップと、
（ｂ）式（ＩＶ）の化合物を選択的に脱保護して式（ＩＩＩ）
【化３】
0006801835.tif 000004
［式中、
Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、Ｗ１、Ｗ３、Ｘ、Ｙ、Ｚ、及びｎは上記で定義される意味を有する］
の部分保護直鎖ペプチド模倣化合物を得るステップと、
（ｃ）分子内芳香族求核置換反応により式（ＩＩＩ）の部分保護直鎖ペプチド模倣化合物を環化させて式（ＩＩ）
【化４】
0006801835.tif 000005
［式中、
Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、Ｗ１、Ｗ３、Ｘ、Ｙ、Ｚ、及びｎは上記で定義される意味を有する］
の化合物を得るステップと、
（ｄ）式（ＩＩ）の化合物中のアミノ酸側鎖保護基を脱保護して式（Ｉ）のβ−ターンペプチド模倣環状化合物の塩を得るステップと、
（ｅ）式（Ｉ）のβ−ターンペプチド模倣環状化合物を結晶化させて式（Ｉ）の結晶塩を得るステップと
を含む、方法を提供する。
【０００８】
[0008]特定の実施形態において、本開示は式Ｄ３のβ−ターンペプチド模倣環状化合物の結晶性ＨＣｌ塩及びそれを調製する方法を提供する。
【０００９】
[0009]図面は、本発明の文書に記載される様々な実施形態を一般的に、例として説明するが、限定して説明するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】本開示の実施形態にしたがって式（Ｉ）のβ−ターンペプチド模倣環状化合物の塩の結晶形を調製するための合成方法の一般的な概略図である。
【図２】本開示の実施形態にしたがって構造Ｄ３のβ−ターンペプチド模倣環状化合物のＨＣｌ塩の結晶形を調製するための例示的な反応スキームの図である。
【図３】ゲル中に存在する不規則形から酸性溶液中に存在する針状結晶へのＤ３の結晶の結晶転移を示す顕微鏡像の図である。
【図４】様々な濃度のＨＣｌで処理した後の、結晶化の間の様々な時点における、本開示の実施形態にしたがって調製された式（Ｉ）のβ−ターンペプチド模倣環状化合物の塩の含量を示す棒グラフの図である。
【図５】本開示の実施形態による結晶化ステップの間に時間と共に生成される不純物の含量を示すグラフの図である。
【図６】本開示の実施形態による結晶化ステップの間に時間と共に生成される別の不純物の含量を示すグラフの図である。
【図７】本開示の実施形態による結晶化ステップの間に時間と共に生成されるさらに別の不純物の含量を示すグラフの図である。
【図８】本開示の実施形態による結晶化ステップにおける温度サイクルプロファイルの図である。
【図９】ゲル中に存在する不規則形から酸性溶液中に存在する針状結晶へのＤ３  ＨＣｌ塩の結晶の外観を示す顕微鏡像の図である。
【図１０】乾燥させた時の、結晶形Ｖから結晶形ＩＶへのＤ３  ＨＣｌ塩の結晶の結晶転移を示す顕微鏡像の図である。
【図１１】０．１Ｍ  ＨＣｌ溶液中の粗製Ｄ３  ＨＣｌ塩スラリーのＸＲＰＤ（Ｘ線粉末回折）分析の結果の図である。
【図１２】０．００１Ｍ  ＨＣｌ溶液中の粗製Ｄ３  ＨＣｌ塩スラリーのＸＲＰＤ分析の結果の図である。
【図１３ａ】安定性チェックのための３週間後の０．１Ｍ  ＨＣｌ溶液中の粗製Ｄ３  ＨＣｌ塩スラリー（上の曲線）、及び参照のＤ３  ＨＣｌ塩結晶形Ｖ（下の曲線）の、ＸＲＰＤ分析の結果の図である。
【図１３ｂ】参照Ｄ３  ＨＣｌ塩結晶形ＶのＸＲＰＤ分析の結果の図である。
【図１４】本開示の実施形態によるＤ３  ＨＣｌ塩の結晶形ＩＶを示す顕微鏡像の図である。
【図１５】Ｄ３試料のアモルファスＨＣｌ塩のＸＲＰＤ分析の結果の図である。
【図１６】Ｄ３のアモルファスＨＣｌ塩の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）の図である。
【図１７】Ｄ３のアモルファスＨＣｌ塩の熱重量分析（ＴＧＡ）の図である。
【図１８】時間の関数としてのパーセンテージとしての質量変化及び時間の関数としての目標Ｐ／Ｐｏ（すなわち、相対湿度設定値）を示す、Ｄ３のアモルファスＨＣｌ塩の動的蒸気収着（ＤＶＳ）の図である。
【図１９】質量変化対目標Ｐ／Ｐｏ（すなわち、相対湿度設定値）を示す、Ｄ３のアモルファスＨＣｌ塩の動的蒸気収着（ＤＶＳ）等温線プロットの図である。
【図２０】ＤＶＳ分析からのＤ３材料のアモルファスＨＣｌ塩の熱重量分析（ＴＧＡ）の図である。
【図２１】ＤＶＳの前及び後のＤ３試料のアモルファスＨＣｌ塩のＸＲＰＤ分析の結果の図である。
【図２２】デシケーター中で与えられる水蒸気による平衡後のＤ３のアモルファスＨＣｌ塩の熱重量分析（ＴＧＡ）の図である。
【図２３】水蒸気による平衡後のＤ３のアモルファスＨＣｌ塩のＸＲＰＤ分析の図である。
【発明の詳細な説明】
【００１１】
[0034]本明細書で使用する場合、「ａ」又は「ａｎ」という用語は、特許文書において一般的であるように、他のいかなる例とも無関係に、又は「少なくとも１つの」又は「１つ又は複数の」の使用とは無関係に、１つ又は１つを超えるものを含むように使用される。
【００１２】
[0035]本明細書で使用する場合、「約」という用語は、記載される量とおよそ、大体、ほぼ等しい、若しくは近い、又は記載される値と等しい量を指す。
【００１３】
[0036]本明細書で使用する場合、「粗製」という用語は、９０％未満の純度である化合物又はその塩を指す。
【００１４】
[0037]β−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩の純度は「パーセント純度」によって表される。純度の指標は結晶調製の結晶化度の指標ではない。純度は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、ガスクロマトグラフィー／質量分析法（ＧＣ／ＭＳ）、液体クロマトグラフィー／質量分析法（ＬＣ／ＭＳ）、又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を含めた任意の手段によって測定してもよい。
【００１５】
[0038]「結晶」は、β−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩の１つ又は複数の結晶を指す。結晶の測定は、光学顕微鏡法、電子顕微鏡法、粉末Ｘ線回折、固体核磁気共鳴（ＳＳＮＭＲ）、又は偏光顕微鏡法を含めた任意の手段によって行うことができる。顕微鏡法は、結晶長さ、直径、幅、サイズ、及び形状を決定するため、並びに結晶が単一の粒子として存在するか又は多結晶であるかを決定するために使用できる。
【００１６】
[0039]「結晶性物質」又は「結晶形」とは、結晶を含む化合物を指す。本発明の実施形態において、β−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩の結晶性物質又は結晶形は、β−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩の結晶を含む。一実施形態において、結晶性β−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩は、一定量のアモルファスβ−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩を含んでいてもよい。一実施形態において、結晶性β−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩は、５０重量％を超えるβ−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩の結晶を含む。別の実施形態において、結晶性β−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩は、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５重量％を超えるβ−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩の結晶を含む。結晶性β−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩は、５０〜６０％、６０〜７０％、７０〜８０％、８０〜９０％、又は９０〜９５重量％のβ−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩の結晶を含んでいてもよい。別の実施形態において、β−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩の結晶性物質は、９５重量％を超えるβ−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩の結晶、例えば、少なくとも９６％、９７％、９８％、若しくは９９重量％のβ−ターンペプチド模倣環状化合物若しくはその塩の結晶、又は１００重量％のβ−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩の結晶を含む。
【００１７】
[0040]β−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩の「アモルファス」形は、β−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩の結晶を少ししか含まない又は全く含まない、β−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩の調製物を指す。一実施形態において、アモルファスβ−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩は、２０％、１０％、５％、又は１重量％未満のβ−ターンペプチド模倣環状化合物又はその塩の結晶を含む。
【００１８】
[0041]本明細書で使用する場合、「塩」という用語は、沈殿剤として作用することができるイオン性化合物を指す。
【００１９】
[0042]本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される塩」という用語は、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸など；又は有機酸、例えばベンゼンスルホン酸、マレイン酸、シュウ酸、フマル酸、コハク酸、ｐ−トルエンスルホン酸、及びリンゴ酸などから選択される、適切な酸によって形成される酸付加塩化合物を指す。
【００２０】
[0043]本明細書で使用する場合、「非天然アミノ酸」という用語は、上記の天然アミノ酸ではないあらゆるアミノ酸を指す。そのようなアミノ酸としては、上記の天然アミノ酸である１９種の光学活性物質のいずれかのＤ−異性体及びグリシンが挙げられる。非天然アミノ酸としては、ホモセリン、ホモシステイン、シトルリン、２，３−ジアミノプロピオン酸、ヒドロキシプロリン、オルニチン、ノルロイシン、及びチロキシンも挙げられる。さらなる非天然アミノ酸は当業者に周知である。非天然アミノ酸はＤ−又はＬ−異性体であってもよい。非天然アミノ酸はまた、アルファアミノ酸、ベータアミノ酸、又はガンマアミノ酸であってもよい。非天然アミノ酸はまた、翻訳後修飾アミノ酸、例えばホスホリル化セリン、トレオニン、若しくはチロシン、アシル化リジン、又はアルキル化リジン若しくはアルギニンなどであってもよい。多くの形態の翻訳後修飾アミノ酸が公知である。
【００２１】
[0044]本明細書で使用する場合、「保護基」という用語は、多官能性化合物の別の反応性部位で反応を選択的に行うことができるように、特定の官能部位、例えば、Ｏ、Ｓ、又はＮが一時的にブロックされていることを意味する。
【００２２】
[0045]本明細書で使用する場合、「プロトン性溶媒」という用語は、ヒドロキシル基のように酸素に結合した水素、又はアミン基のように窒素に結合した水素を運ぶ溶媒を指す。そのような溶媒は、Ｈ＋（プロトン）を供与することができる。プロトン性溶媒の例としては、水、エタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、及びジエチルアミンが挙げられる。
【００２３】
[0046]本明細書で使用する場合、「非プロトン性溶媒」という用語は、ヒドロキシル基のように酸素に結合した水素、又はアミン基のように窒素に結合した水素を、わずかしか運ばない、又は全く運ばない溶媒を指す。
【００２４】
[0047]本明細書で使用する場合、「環」という用語は、原子が式中において環の形態で配置されている化合物を意味する。
【００２５】
[0048]本明細書で使用する場合、「アルキル」という用語は、指定される炭素原子の数を有する（すなわち、Ｃ１〜Ｃ６は１〜６個の炭素原子を意味する）、直鎖、環状、分岐、又はそれらの組み合わせであってもよい炭化水素基を意味する。アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ペンチル、ｉｓｏ−アミル、ヘキシル、オクチル、ノニルなどが挙げられる。アルキル基は、本明細書において定義されるように場合により置換されていてもよい。「アルキレン」という用語は、本明細書で使用する場合、２つ以上の位置で結合している直鎖又は分岐鎖飽和炭化水素に由来する飽和脂肪族基、例えばメチレン（−ＣＨ２−）などを指す。
【００２６】
[0049]本明細書で使用する場合、「アリル」という用語は、アリル基（すなわち、ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＨ２−）を含有する化合物を指す。
【００２７】
[0050]本明細書で使用する場合、「アリール」という用語は、一緒に側鎖状に結合していてもよい又は縮合していてもよい、１つ、２つ、又は３つの環を含有する炭素環芳香族系を意味する。「アリール」という用語は、芳香族基、例えばベンジル、フェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントリル、インダニル、インデニル、アヌレニル、アズレニル、テトラヒドロナフチル、及びビフェニルなどを包含する。アリール基は、本明細書において定義されるように場合により置換されていてもよい。「アリーレン」という用語は、１個の水素原子を取り除くことによってアリール（上記で定義されるものなど）から得られる任意の二価の基を示す。
【００２８】
[0051]基が「空白（ｎｕｌｌ）」であると定義される場合、これはその基が存在しないことを意味する。
【００２９】
[0052]基が置換されている場合、置換基としては、限定はされないが、以下の基：低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルカノイル、低級ヘテロアルキル、低級ヘテロシクロアルキル、低級ハロアルキル、低級ハロアルケニル、低級ハロアルキニル、低級ペルハロアルキル、低級ペルハロアルコキシ、低級シクロアルキル、フェニル、アリール、アリールオキシ、低級アルコキシ、低級ハロアルコキシ、オキソ、低級アシルオキシ、カルボニル、カルボキシル、低級アルキルカルボニル、シアノ、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキルアミノ、アリールアミノ、アミド、ニトロ、チオール、低級アルキルチオ、アリールチオ、低級アルキルスルフィニル、低級アルキルスルホニル、アリールスルフィニル、アリールスルホニル、アリールチオ、スルホナート、スルホン酸、三置換シリル、Ｎ３、ＳＨ、ＳＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、ピリジニル、チオフェン、フラニル、低級カルバマート、及び低級尿素から、又は特定の指定される１組の基から、単独で又は組み合わせで独立に選択される１つ又は複数の置換基を挙げることができる。
【００３０】
[0053]明確にするため、及び本発明を理解する助けとして、本明細書において開示され特許請求の範囲に記載される場合、以下の用語及び略称を下記のように定義する：
【００３１】
[0054]ＡｃＯＨ  −  酢酸
[0055]ＢＡＥＡ  −  ビスアミノエチルアミン（ジエチレントリアミン）
[0056]Ｂｏｃ  −  ｔ−ブチルオキシカルボニル
[0057]ｔＢｕ  −  ｔｅｒｔ−ブチル
[0058]Ｃｂｚ  −  ベンジルオキシカルボニル
[0059]ＣＴＣ  −  クロロトリチルクロリド
[0060]ＤＢＵ  −  １，８−ジアゾビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン
[0061]ＤＣＭ  −  ジクロロメタン
[0062]ＤＩＣ  −  １，３−ジイソプロピルカルボジイミド
[0063]ＤＩＰＥＡ  −  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
[0064]ＤＩＰＥ  −  ジイソプロピルエーテル
[0065]ＤＭＦ  −  ジメチルホルムアミド
[0066]ＥＤＣ  −  Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド
[0067]ＥｔＯＡｃ  −  酢酸エチル
[0068]Ｆｍｏｃ  −  ９−フルオレニルメトキシカルボニル
[0069]ＦＮＢＡ  −  ２−フルオロ−５−ニトロ安息香酸
[0070]Ｇｌｕ  −  グルタミン酸
[0071]Ｇｌｙ  −  グリシン
[0072]ＨＢＴＵ  −  Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート
[0073]ＨＳｅｒ  −  ホモセリン
[0074]ＨＭＰＢ−ＭＢＨＡ  −  ４−ヒドロキシメチル−３−メトキシフェノキシ酪酸ＭＢＨＡ、又は４−（４−ヒドロキシメチル−３−メトキシフェノキシ）−ブチリル−ｐ−メチル−ベンズヒドリルアミン
[0075]ＨＯＢｔ  −  Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
[0076]ＬＰＰＳ  −  液相ペプチド合成
[0077]Ｌｙｓ  −  リジン
[0078]ＭｅＣＮ  −  アセトニトリル
[0079]ＭｅＴＨＦ  −  ２−メチルテトラヒドロフラン
[0080]ＭＴＢＥ  −  メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル
[0081]Ｍｔｔ  −  メチルトリチル
[0082]Ｐｂｆ  −  ペンタメチルジヒドロベンゾフランスルホニル
[0083]ＳＰＰＳ  −  固相ペプチド合成
[0084]ＴＢＡＦ  −  フッ化テトラブチルアンモニウム
[0085]ＴＢＤＭＳ  −  ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラン
[0086]ｔＢｕ  −  ｔｅｒｔ−ブチルエステル
[0087]ＴＦＡ  −  トリフルオロ酢酸
[0088]ＴＨＦ  −  テトラヒドロフラン
[0089]ＴＩＳ  −  トリイロプロピルシラン
[0090]ＴＭＧ  −  テトラメチルグアニジン
[0091]Ｔｒｔ  −  トリチル
【００３２】
[0092]図１は、式（Ｉ）のβ−ターンペプチド模倣環状化合物の塩の結晶形を調製するための一般的経路を図示する、スキーム１を示しており、（ａ）式（ＩＶ）の保護直鎖ペプチド模倣化合物を用意するステップと、（ｂ）式（ＩＶ）の化合物を選択的に脱保護して式（ＩＩＩ）の部分保護直鎖ペプチド模倣化合物を得るステップと、（ｃ）分子内芳香族求核置換反応により式（ＩＩＩ）の部分保護直鎖ペプチド模倣化合物を環化させて式（ＩＩ）の化合物を得るステップと、（ｄ）式（ＩＩ）の化合物中のアミノ酸側鎖保護基を脱保護して式（Ｉ）のβ−ターンペプチド模倣環状化合物の塩を得るステップと、（ｅ）式（Ｉ）のβ−ターンペプチド模倣環状化合物の塩を結晶化させて結晶形の式（Ｉ）の化合物を得るステップとを含む。
【００３３】
[0093]特定の実施形態において、本発明は環原子が１４〜１６個である大環状環を有する式（Ｉ）の結晶性β−ターンペプチド模倣環状塩を調製する方法を提供する。
【００３４】
[0094]特定の実施形態において、この方法はＲ１及びＲ３がアミノ酸側鎖置換基である化合物を提供する。典型的には、Ｒ１及びＲ３が天然又は非天然アミノ酸に独立に由来している。例えば、Ｒ１及びＲ３が、いずれかのエナンチオマー立体配置である、２０種の天然タンパク質アミノ酸（天然）、又は修飾アミノ酸（非天然）に独立に由来していてもよい。２０種の天然アミノ酸は、グリシン（Ｇｌｙ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、リジン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、プロリン（Ｐｒｏ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、チロシン（Ｔｙｒ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、システイン（Ｃｙｓ）、及びメチオニン（Ｍｅｔ）を含めた、アルファ−アミノ酸である。アルファ−アミノ酸の一般構造は式Ａ：Ｈ２ＮＣＨ（Ｒ＊）ＣＯＯＨによって表される。Ｒ＊はアミノ酸の側鎖置換基を表し、本開示においてＲ１又はＲ３のいずれかとして呼ばれる。
【００３５】
[0095]非天然アミノ酸は典型的には、Ｒ＊基が２０種の天然アミノ酸において使用されるもの以外の任意の置換基である、式Ａを有する任意の構造である。例えば、２０種の天然アミノ酸の構造に関する、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｂｙ  Ｌ．Ｓｔｒｙｅｒ  ３１（第１版、１９８８）、Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照すること。非天然アミノ酸はまた、上記の２０種のアルファ−アミノ酸以外の天然の化合物であってもよい。
【００３６】
[0096]そのような非天然アミノ酸としては、上記の天然アミノ酸である１９種の光学活性物質のいずれかのＤ−異性体及びグリシンが挙げられる。非天然アミノ酸としては、ホモセリン、ホモシステイン、２，３−ジアミノプロピオン酸、シトルリン、ヒドロキシプロリン、オルニチン、ノルロイシン、及びチロキシンも挙げられる。さらなる非天然アミノ酸は当業者に周知である。非天然アミノ酸はＤ−又はＬ−異性体であってもよい。非天然アミノ酸はまた、式Ｂ：Ｈ２Ｎ（ＣＨ）ｎ（Ｒ＊）ＣＯＯＨを有するベータアミノ酸又はガンマアミノ酸であってもよく、式中、ｎは２又は３に等しく、Ｒ＊は２０種のタンパク質構成アミノ酸のいずれかの側鎖置換基、又は２０種の天然アミノ酸において使用されるもの以外の任意の置換基を表す。非天然アミノ酸はまた、翻訳後修飾アミノ酸、例えばホスホリル化セリン、トレオニン、若しくはチロシン、アシル化リジン、又はアルキル化リジン若しくはアルギニンなどであってもよい。多くの形態の翻訳後修飾アミノ酸が公知である。
【００３７】
[0097]特定の実施形態において、この方法は、Ｒ１及びＲ３が独立に２０種の異なるアミノ酸の側鎖置換基である化合物を提供する。そのような実施形態のいくつかにおいて、Ｒ１及びＲ３は独立に、リジン、グルタミン酸、チロシン、イソロイシン、アスパラギン、アルギニン、又はトレオニンの側鎖置換基である。特定の実施形態において、Ｒ１及びＲ３は独立に、グルタミン酸、リジン、イソロイシン、又はアルギニンの側鎖置換基である。一実施形態において、Ｒ１及びＲ３は独立に、グルタミン酸又はリジンの側鎖置換基である。別の実施形態において、Ｒ１及びＲ３は独立に、イソロイシン又はアルギニンの側鎖置換基である。
【００３８】
[0098]一般に、アミノ酸側鎖置換基（Ｒ１及びＲ３）は、本開示のβ−ターン環状ペプチド模倣化合物を調製する方法における環化ステップの前に、適切な保護基（それぞれＲ１１及びＲ１３）によって保護される。アミノ酸側鎖置換基Ｒ１及びＲ３が保護される場合、それらはそれぞれＷ１Ｒ１１及びＷ３Ｒ３３と表され、ここでＷ１及びＷ３は独立に、それぞれＲ１１及びＲ１３への結合点で水素原子が１つ少ない、天然又は非天然アミノ酸のアミノ酸側鎖置換基である。１つの水素原子は通常は、アミノ酸側鎖置換基のカルボン酸、アミン、チオール、アミド、ヒドロキシル、及びグアニジンなどの官能基において見られる。
【００３９】
[0099]本開示で記載される方法のいずれかのステップで合成に関与する任意の分子の、任意の他の感受性反応性基のアミノ酸側鎖保護は、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ及びＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  Ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  １９９１、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ−Ｙｏｒｋ）により；並びにＳｅｗａｌｄ及びＪａｋｕｂｋｅ（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２００２、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、Ｗｈｅｉｎｈｅｉｍ  ｐ．１４２）により記載されるものなどの、従来の保護基によって実現できる。例えば、アルファアミノ保護基としては、限定はされないが、アシル型保護基（例えば、トリフルオロアセチル、ホルミル、アセチル）、脂肪族ウレタン保護基（例えば、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、シクロヘキシルオキシカルボニル）、芳香族ウレタン型保護基（例えば、フルオレニル−９−メトキシ−カルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、Ｃｂｚ誘導体）、及びアルキル型保護基（例えば、トリフェニルメチル、ベンジル）が挙げられる。
【００４０】
[00100]アミノ酸側鎖保護基としては、セリン、トレオニン、及びチロシンに関してはｔｅｒｔ−ブチルエーテル；リジン、トリプトファン、及びヒスチジンに関してはＢｏｃ；セリン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、及びヒスチジンに関してはトリチル；アスパルタート及びグルタミマートに関してはｔｅｒｔ−ブチル又はアリルエステル；アルギニンに関してはＰｂｆ；トレオニン及びセリンに関してはベンジル；チロシン、トレオニン、セリン、アルギニン、及びリジンに関してはＣｂｚ；セリン及びトレオニンに関してはアルキルシラン；並びに当技術分野において公知のあらゆる他の保護基を挙げることができる。
【００４１】
[00101]特定の実施形態において、この方法は、Ｒ１１及びＲ１３が独立に、トリフルオロアセチル、ホルミル、アセチル、ｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、シクロヘキシルオキシカルボニル、フルオレニル−９−メトキシ−カルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、Ｃｂｚ誘導体、トリフェニル、メチル、ベンジル、アリルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブチル、アルキルシラン、及びアリルからなる群から選択される化合物を提供する。
【００４２】
[00102]特定の実施形態において、この方法は、Ｒ１がグルタミン酸の側鎖置換基であり、Ｒ１１がアリル又はｔｅｒｔ−ブチルである、化合物を提供する。そのような実施形態のいくつかにおいて、Ｒ１はグルタミン酸の側鎖置換基であり、Ｒ１１はｔｅｒｔ−ブチルである。
【００４３】
[00103]特定の実施形態において、この方法は、Ｒ３がリジンの側鎖置換基であり、Ｒ１３がベンジルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、又はｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）である、化合物を提供する。そのような実施形態のいくつかにおいて、Ｒ３はリジンの側鎖置換基であり、Ｒ１３はｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）である。
【００４４】
[00104]保護基は、当技術分野において公知の方法を使用して好都合なその後の段階で除去することができる。特定の実施形態において、アミノ酸側鎖Ｒ１及びＲ３の保護基は、固体支持体からペプチド模倣化合物を開裂させるのに使用されるのと同じ条件下では除去されない。そのような実施形態のいくつかにおいて、アミノ酸側鎖Ｒ１及びＲ３の保護基は、固体支持体からペプチド模倣化合物を開裂させるのに使用されるのと同じ酸性条件下では除去されない。
【００４５】
[00105]特定の実施形態において、この方法はＲ２及びＲ４が独立に水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルである化合物を提供する。
【００４６】
[00106]特定の実施形態において、この方法はＲ５、Ｒ６、及びＲ７が水素である化合物を提供する。
【００４７】
[00107]特定の実施形態において、この方法は、Ｗ１及びＷ３が独立に、官能基上の水素原子が１つ少ない２つの異なるアミノ酸の側鎖置換基である化合物を提供する。特定の実施形態において、Ｗ１及びＷ３は独立に、官能基上の水素原子が１つ少ない、リジン、グルタミン酸、チロシン、イソロイシン、アスパラギン、アルギニン、又はトレオニンの側鎖置換基である。特定の実施形態において、Ｗ１及びＷ３は独立に、グルタミン酸又はリジンの側鎖置換基である。特定の実施形態において、Ｗ１及びＷ３は独立に、イソロイシン又はアルギニンの側鎖置換基である。特定の実施形態において、Ｗ１は官能基の水素原子が１つ少ないグルタミン酸の側鎖置換基であり、Ｒ１１はアリル又はｔｅｒｔ−ブチルである。特定の実施形態において、Ｗ３はリジンの側鎖置換基であり、Ｒ１３はベンジルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、又はｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）である。
【００４８】
[00108]特定の実施形態において、この方法は、アミド基の結合点に対してメタ位でＹが式のベンゼン環に結合している化合物を提供する。特定の実施形態において、Ｙは−ＮＯ２である。
【００４９】
[00109]特定の実施形態において、この方法は、アミド基の結合点に対してオルト位でＺが式のベンゼン環に結合している化合物を提供する。特定の実施形態において、ＺはＦである。
【００５０】
[00110]特定の実施形態において、この方法はｎが１である化合物を提供する。
【００５１】
[00111]特定の実施形態において、末端官能基Ｘは保護されていてもよい（すなわち、Ｒ１２が保護基である場合）。特定の実施形態において、ＸがＯである場合、Ｒ１２はトリチル（Ｔｒｔ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラン（ＴＢＤＭＳ）、又は式中に存在する他の保護基の脱保護を引き起こさない条件下、例えば弱酸性条件などで除去できる任意の保護基である。そのような実施形態のいくつかにおいて、ＸがＯである場合、Ｒ１２はトリチル（Ｔｒｔ）、又はｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラン（ＴＢＤＭＳ）である。特定の実施形態において、ＸはＳであり、Ｒ１２はトリチルである。特定の実施形態において、ＸはＮＨであり、Ｒ１２は４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）である。
【００５２】
[00112]部分脱保護
【００５３】
[00113]保護基Ｒ１２は、式（ＩＶ）の保護直鎖ペプチド模倣化合物を弱酸性溶液により、例えば約０．０１％〜約５０％（ｖ／ｖ）、０．１％〜１０％（ｖ／ｖ）、０．５％〜５％（ｖ／ｖ）、若しくは２％〜５％（ｖ／ｖ）の、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）などの酸を含有する溶液、又は酢酸（例えば、５０％〜９５％、若しくは６０％〜９０％（ｖ／ｖ））などにより処理することによって除去することができる。官能性アミノ酸側鎖は、そのような弱酸性条件下で開裂又は脱保護されないより安定な保護基を使用して保護される。そのような官能性アミノ酸側鎖は、官能基上で強酸に対して不安定な保護基により保護することができる。官能性アミノ酸側鎖上で使用される保護基は本明細書に記載されている。したがって、保護基Ｒ１２の除去は、式（ＩＶ）中に存在する任意の保護官能基Ｒ１１及びＲ１３の著しい脱保護を引き起こさない。
【００５４】
[00114]保護基Ｒ１２の除去は様々な溶媒系で行ってもよい。溶媒系は、有機溶媒又は有機溶媒の混合物である。溶媒系は、極性、非プロトン性溶媒、例えばジクロロメタン、アセトニトリル、又はテトラヒドロフラン、及びそれらの混合物などを含んでいてもよい。
【００５５】
[00115]捕捉剤は、反応中に生成するアルキル−カルベニウムイオンによるＸ基のアルキル化を防ぐために弱酸性溶液へ加えることができる。適切な捕捉剤としては、限定はされないが、トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）、チオアニソール、トリアルキルシラン（例えば、トリメチルシラン、トリエチルシラン）、又はそれらの混合物が挙げられる。一実施形態において、捕捉剤はトリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）である。
【００５６】
[00116]特定の実施形態において、弱酸性溶液は１０％、５％、又は３％未満の酸及び捕捉剤の混合物を含有する。保護基Ｒ１２の除去において使用される弱酸性溶液中の酸性物質対捕捉剤の体積の相対比は、約１：１〜約１：５、約１：１〜約１：３、又は約１：２であってもよい。一実施形態において、保護基Ｒ１２の除去は、約１：１〜約１：５の体積比であるＴＦＡ及びＴＩＳの１０％未満の混合物を含む溶液中で行われる。
【００５７】
[00117]環化
【００５８】
[00118]環化反応は、求核試薬Ｘによる芳香族求核置換反応によって行ってもよい。
【００５９】
[00119]環化反応は、極性非プロトン性溶媒中で、例えばアセトニトリル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサン、又はそれらの混合物などにおいて行ってもよい。一実施形態において、環化反応はＴＨＦ中で行われる。多量の水及びメタノールのような溶媒は、求核試薬として作用し環化を妨げることがあるので、避けるべきである。一実施形態において、環化反応は、約０．５％未満の水中で、又は水の非存在下で行われる。一実施形態において、環化反応は、約０．５％未満のメタノール中で、又はメタノールの非存在下で行われる。一実施形態において、環化反応は、約０．５％未満の水及び約０．５％未満のメタノール中で行われる。
【００６０】
[00120]特定の実施形態において、環化反応は塩基触媒環化反応である。環化反応における塩基の役割は、官能基Ｘの求核特性を高めることである。使用できる塩基の例は、ｔ−ＢｕＯＫ、ＣｓＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、又はそれらの混合物である。
【００６１】
[00121]環化ステップの重要な態様は、二量体副生成物の生成を防ぐために、反応の間に部分保護直鎖ペプチド模倣中間体（ＩＩＩ）の濃度を制御することである。部分保護直鎖ペプチド模倣中間体（ＩＩＩ）の濃度が高い、例えば０．０５Ｍを上回る状態で環化反応を行う場合、分子間反応の速度が増加し、そのため二量体副生成物の生成速度を加速させる。したがって、二量体の生成を防ぐために、環化反応は０．０５Ｍ未満の濃度で、特に０．０３Ｍ未満の濃度で、又は０．０２Ｍ未満の濃度で行うことができる。そのような低濃度（すなわち、高希釈）は、多量の溶媒を使用することによって実現してもよい。代替として、環化反応は、部分保護直鎖ペプチド模倣中間体（ＩＩＩ）を反応媒体へゆっくり添加することによって行ってもよく、これは多量の溶媒の使用を避けることができる。
【００６２】
[00122]環化反応は、−２０℃〜１５℃、−１０℃〜５℃、又は−８℃〜−１℃の温度で行ってもよい。室温での反応時間は、環サイズ、反応に関与する求核試薬、塩基、及び溶媒に応じて、５分〜５時間で様々であってもよい。特定の実施形態において、室温での環化反応時間は約５分〜約１時間、約５分〜約３０分、又は約１５分〜約２０分である。
【００６３】
[00123]部分保護直鎖ペプチド模倣中間体（ＩＩＩ）及び式（Ｉ）のβ−ターンペプチド模倣環状化合物は異なる保持時間、質量、及びＵＶプロファイルを有するので、反応を分析ＨＰＬＣ、ＬＣ−ＭＳ、又はＵＶによってモニタリングできる。
【００６４】
[00124]環化が完了したら、反応混合物を中和するために酸溶液を反応混合物へ加えてもよい。適切な酸としては、ＨＣｌ、ＫＨＳＯ４、ＡｃＯＨが挙げられる。例えば、酸水溶液を使用してもよい。酸溶液の濃度は、約０．１Ｍ〜約１Ｍ、又は約０．０５Ｎ〜約０．２Ｎで様々であってもよい。その後、有機溶媒を例えば蒸発によって除去して、粗製残渣スラリーを得ることができる。
【００６５】
[00125]代替として、粗製残渣スラリーをろ過して粗製物を収集してもよい。残渣又はフィルターは溶媒により、例えばＤＩＰＥ又はその混合物により洗浄してもよい。
【００６６】
[00126]粗生成物をＥｔＯＡｃ中で４０℃にて３０〜４０分間かけてスラリー化させ、０℃まで冷却し、ろ過して、生成物を収集することができる。
【００６７】
[00127]脱保護
【００６８】
[00128]アミノ酸側鎖保護基の最終脱保護のために、式（ＩＶ）の保護β−ターンペプチド模倣環状化合物を式に示される保護基の種類に応じた適切な試薬で処理する。特定の実施形態において、酸性溶液が使用される。いくつかの実施形態において、酸性溶液は濃度が１０％〜６０％、２０％〜５０％、又は３０％〜４０％であるＨＣｌ溶液を含む。ＨＣｌは水中又は有機溶媒中、例えばアセトニトリル中などに溶解させることができる。一実施形態において、酸性溶液は濃ＨＣｌ溶液（例えば、３０〜４０％）及びアセトニトリルを含む。
【００６９】
[00129]最終脱保護は、約５℃〜約２５℃、約１０℃〜約２０℃、又は約１２℃〜約１７℃の温度で行ってもよい。特定の実施形態において、式（ＩＶ）の保護β−ターンペプチド模倣環状化合物は、約５℃〜約２５℃、約１０℃〜約２０℃、又は約１２℃〜約１７℃の温度で（例えば、約１５℃で）酸性溶液中に懸濁させてもよい。
【００７０】
[00130]結晶化
【００７１】
[00131]特定の実施形態において、式（Ｉ）のβ−ターンペプチド模倣環状化合物は塩基性化−酸性化方法によって結晶化又は析出させてもよい。塩基性化−酸性化方法は、式（Ｉ）の化合物又は塩を塩基性のｐＨを有する塩基水溶液と接触させるステップと、酸性のｐＨを得るようにｐＨを低下させて式（Ｉ）の化合物又は塩を析出又は結晶化させるステップとを含む。
【００７２】
[00132]式（Ｉ）の化合物は、無機塩基、例えばＮａＯＨ、ＬｉＯＨ、ＫＯＨ、Ｍｇ（ＯＨ）２、又はそれらの混合物などを含有する塩基水溶液によって処理してもよい。塩基溶液は、約３０℃〜約７０℃、又は約４０℃〜約６０℃の温度まで加熱してもよい。塩基溶液の濃度は、約０．１Ｍ〜約５Ｍ、約１Ｍ〜約３Ｍ、又は約１．５Ｍ〜約２Ｍであってもよい。典型的には、粗製最終生成物（すなわち、式（Ｉ））に対して約２〜約８当量、約３〜約７当量、又は約３〜約５当量の無機塩基を使用してもよい。塩基性のｐＨは約９〜約１２、約９〜約１１、約８〜約１２とすることができる。
【００７３】
[00133]この方法は、塩基性溶液のｐＨを低下させる前に式（Ｉ）の化合物を含有する塩基溶液をろ過するステップをさらに含んでいてもよい。ろ過の目的は任意の不溶性材料を除去することである。ろ過は室温を超える温度、例えば、約４０℃〜約７０℃、又は約４５℃〜約６０℃で行ってもよい。
【００７４】
[00134]ろ液又は塩基性溶液混合物は、約０〜約４、約０〜約３、又は約０〜約２の酸性ｐＨを得るように塩基性溶液を酸と混和することによって酸性化してもよい。無機酸を使用して塩基性溶液を酸性化してもよい。無機酸の例としては、限定はされないが、ＨＣｌ、ＨＢｒ、硝酸、硫酸、リン酸、又はそれらの混合物が挙げられる。典型的には、式（Ｉ）の粗製最終生成物に対して約３〜約９当量、約４〜約８当量、又は約５〜約７当量の酸を使用してもよい。
【００７５】
[00135]塩の結晶（Ｖ型）を酸性化溶液から生成又は析出させることができる。酸性のｐＨはゲルの生成を促進させることがあり、その後結晶を含有するスラリー／懸濁溶液へ転換させる。酸が少なすぎるとゲルからスラリーへの転換が遅くなることがある。典型的には、粗製最終生成物（すなわち、式（Ｉ））に対して約３〜７当量、約４〜６当量、又は約５当量の酸を使用してもよい。特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物の結晶化を促進させるのに塩基に対して最低で２当量過剰の酸が必要である。針状結晶（Ｖ型）がいったん形成されると、それらはスラリー中で安定であり、室温で少なくとも３週間保存できる。
【００７６】
[00136]不純物生成を最小量にして結晶の成長又は析出を促進させるために、酸性化溶液を一定時間かき混ぜる若しくは撹拌してもよく、及び／又は約０℃〜約６０℃の温度下で維持してもよい。結晶化プロセスの間、試料を酸性化溶液から取り出し、結晶又は析出物の生成について顕微鏡検査によってモニタリングしてもよく、分光光学的に（例えば、ＨＰＬＣ）収率を追跡してもよい。結晶を生成させる間に不純物の生成を防ぎ結晶の成長又は析出を促進させるために、結晶化の間に温度プロファイルを使用してもよい。すなわち、酸性化溶液を１つ又は複数の温度範囲下でそれぞれ、特定の時間撹拌してもよい。例えば、１つ又は複数の温度は、第１の温度、第２の温度、第３の温度などを含んでいてもよく、各温度は、以下の温度範囲：約０℃〜約３０℃、約０℃〜約２０℃、約０℃〜約１０℃、約１０℃〜約４０℃、約１０℃〜約３０℃、約１０℃〜約２０℃、約２０℃〜約５０℃、約２０℃〜約４０℃、約２０℃〜約３０℃、約３０℃〜約６０℃、約３０℃〜約５０℃、約３０℃〜約４０℃、約４０℃〜約７０℃、約４０℃〜約６０℃、約４０℃〜約５０℃、約５０℃〜約７０℃、約５０℃〜約６０℃などのいずれかから独立に選択できる。酸性化溶液は、各温度範囲で一定時間撹拌してもよく、各時間は、以下の時間範囲：少なくとも５、１０、１５、若しくは６０分、又は１、２、３時間など、及び最大で１か月の期間のいずれかから独立に選択できる。特定の実施形態において、撹拌時間は約５分〜約２０時間、約１５分〜約１５時間、約３０分〜約１０時間、約１時間〜約５時間、約２時間〜約４時間などであってもよい。
【００７７】
[00137]本開示の方法は、少なくとも約３０モル％、又は約３５〜約４５モル％の収率を得ることができる。これらの収率は限界反応物質のモル、例えばＨＳｅｒ化合物のモルに基づいている。
【００７８】
[00138]特定の一態様において、本開示は、本明細書において単に「Ｄ３」とも呼ばれる、式Ｄ３のβ−ターンペプチド模倣環状化合物の結晶性ＨＣｌ塩、及びそれを調製する方法を提供する。Ｄ３のＨＣｌ塩の構造を以下に示す：
【化５】
0006801835.tif 000006
【００７９】
[00139]図２は、式Ｄ３のβ−ターンペプチド模倣環状化合物の結晶性ＨＣｌ塩を調製するための経路を図示する、例示的な反応スキーム（スキーム２）を示す。
【００８０】
[00140]実施形態において、本開示は、以下の構造：
【化６】
0006801835.tif 000007
を有するβ−ターンペプチド模倣環状化合物のＨＣｌ塩の結晶形を調製する方法であって、
（ａ）式（４ａ）の保護直鎖ペプチド模倣化合物；
【化７】
0006801835.tif 000008
を用意するステップと、
（ｂ）式（４ａ）の化合物を選択的に脱保護して式（３ａ）の部分保護直鎖ペプチド模倣化合物；
【化８】
0006801835.tif 000009
を得るステップと、
（ｃ）分子内芳香族求核置換反応により式（３ａ）の部分保護直鎖ペプチド模倣化合物を環化させて式（２ａ）
【化９】
0006801835.tif 000010
の化合物を得るステップと、
（ｄ）式（ＩＩ）の化合物中のアミノ酸側鎖保護基を脱保護してＤ３のＨＣｌ塩を得るステップと、
（ｅ）Ｄ３のＨＣｌ塩を結晶化させて結晶形であるＤ３のＨＣｌ塩を得るステップと
を含む、方法を提供する。
【００８１】
[00141]実施形態において、式（４ａ）の保護直鎖ペプチド模倣化合物は、Ｆｍｏｃ−Ｈｓｅｒ（Ｔｒｔ）−ＯＨをＨ−Ｇｌｙ−ＯｔＢｕ．ＨＣｌとカップリングさせ、それによりジペプチドＦｍｏｃ−Ｈｓｅｒ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ−ＯｔＢｕを形成するステップを含む液相ペプチド合成プロセスによって得ることができる。このプロセスは、ジペプチドＨ−Ｈｓｅｒ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ−ＯｔＢｕをＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨとカップリングさせ、それによりトリペプチドＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｈｓｅｒ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ−ＯｔＢｕを形成するステップをさらに含んでいてもよい。このプロセスは、トリペプチドＨ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｈｓｅｒ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ−ＯｔＢｕをＦｍｏｃ＝Ｇｌｕ（Ｏｔｂｕ）−ＯＨとカップリングさせ、それによりテトラペプチドＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｈｓｅｒ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ−ＯｔＢｕを形成するステップをさらに含んでいてもよい。
【００８２】
[00142]カップリングステップの１つ又は複数は、ジイソプロピルアミン（ＤＩＰＥＡ）及び縮合剤、例えばＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−テトラフルオロホウ酸塩（ＨＡＴＵ）、１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ．ＨＣｌ）、Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−リン酸塩（ＨＢＴＵ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＰｙＢＯＰ）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、ＴＢＴＵ（（ベンゾトリアゾリル）テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩）、ＴＡＴＵ（（７−アザベンゾトリアゾリル）テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩）、及びＣＯＭＵ（（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ−モルホリノ−カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩）、Ｏｘｙｍａ［エチル２−シアノ−２−（ヒドロキシイミノ）アセタート］、Ｋ−Ｏｘｙｍａ（２−シアノ−２−（ヒドロキシイミノ）酢酸エチルエステル、カリウム塩）、又はそれらの混合物などの存在下で行ってもよい。一実施形態において、縮合剤はＥＤＣ．ＨＣｌ／ＨＯＢｔである。Ｆｍｏｃ−Ｈｓｅｒ（Ｔｒｔ）−ＯＨのＨ−Ｇｌｙ−ＯｔＢｕ．ＨＣｌとのカップリングステップは、ＤＩＰＥＡ及びＥＤＣ．ＨＣｌ／ＨＯＢｔの存在下で行ってもよい。ジペプチドＨ−Ｈｓｅｒ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ−ＯｔＢｕのＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨとのカップリングステップは、ＤＩＰＥＡ及びＥＤＣ．ＨＣｌ／ＨＯＢｔの存在下で行ってもよい。トリペプチドＨ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｈｓｅｒ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ−ＯｔＢｕのＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔｂｕ）−ＯＨとのカップリングステップは、ＤＩＰＥＡ及びＥＤＣ．ＨＣｌ／ＨＯＢｔの存在下で行ってもよい。
【００８３】
[00143]ＢＡＥＡの存在下でペプチドのいずれかのＮ−末端Ｆｍｏｃ保護基を除去するステップを行ってＮ−末端遊離アミノ基を得てもよい。
【００８４】
[00144]特定の実施形態において、本開示の結晶形は、結晶形ＩＶ、結晶形Ｖ、又はそれらの混合物を含む。これらの結晶形は、本明細書に記載の方法により生成させることができ、他の結晶形（すなわち、結晶形ＩＶ又は結晶形Ｖ以外）を実質的に含まない。「実質的に含まない」という用語は、１０％以下の別の結晶形、例えば８％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％以下の別の結晶形の量を指す。本開示の結晶形は、粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）、示差走査熱量計（ＤＳＣ）及び熱重量分析（ＴＧＡ）による熱的データ、動的蒸気収着（ＤＶＳ）、及び／又は重量蒸気収着（ＧＶＳ）によって特性決定することができる。
【００８５】
[00145]一実施形態において、本開示は、式Ｄ３のβ−ターンペプチド模倣環状化合物のＨＣｌ塩の結晶形ＩＶを提供する。一実施形態において、本開示は、式Ｄ３のβ−ターンペプチド模倣環状化合物のＨＣｌ塩の結晶形Ｖを提供する。一実施形態において、本開示は式Ｄ３のβ−ターンペプチド模倣環状化合物のＨＣｌ塩の結晶形Ｖ及び結晶形ＩＶの混合物を含む結晶形を提供する。
【００８６】
[00146]特定の実施形態において、結晶形ＩＶは吸湿性である。特定の実施形態において、結晶形ＩＶは６０％〜１００％の相対湿度（ＲＨ）で約１０％〜約３０％の重量増加がある場合があり、ここで重量増加は水含量の重量増加に起因する。特定の実施形態において、結晶形における水の吸収又は脱着のプロセスは可逆である場合がある。特定の実施形態において、結晶形ＩＶは不規則形状を有する。特定の実施形態において、結晶形Ｖは針状の形態である。
【００８７】
[00147]本開示の結晶形の転移（結晶形ＩＶと結晶形Ｖの間）はＲＨを変化させる場合に生じる。例えば、結晶形ＩＶは高い相対湿度、例えば７５％〜１００％、８５％〜１００％、又は９５％〜１００％  ＲＨなどにさらすと、結晶形Ｖに転移させることができる。結晶形ＩＶは酸性溶液、例えば塩酸の水溶液（ここで塩化水素酸の濃度は約０．００１Ｍ〜約０．５Ｍ、約０．０１Ｍ〜約０．２Ｍ、約０．０５Ｍ〜約０．１Ｍ）で処理すると、結晶形Ｖに転移させることができる。結晶形ＩＶは、非常に薄い、例えば濃度が０．００１Ｍ未満である酸性溶液、又は純水（すなわち、酸又は塩基の非存在下）で処理すると、結晶形Ｖ及びいくつかの他の結晶形の混合物に転移させることができる。結晶形Ｖは、乾燥させると結晶形ＩＶへ転移させて戻すことができる。転移の速度は酸性溶液の濃度によって決まることがある。一般に、結晶形Ｖから結晶形ＩＶへの転移の速度は、結晶形Ｖがより高濃度の酸性溶液で処理されるとより速くなる。
【００８８】
[00148]特定の実施形態において、式Ｄ３のβ−ターンペプチド模倣環状化合物の結晶塩は針状結晶を含有する。
【００８９】
[00149]特定の実施形態において、式Ｄ３のβ−ターンペプチド模倣環状化合物の塩の結晶形は、少なくとも６０％の水を含有する溶液から得られる。
【００９０】
[00150]特定の実施形態において、式Ｄ３のβ−ターンペプチド模倣環状化合物の塩の結晶形は水和物である。
【００９１】
[00151]特定の実施形態において、Ｄ３のＨＣｌ塩の結晶形は、６．７±０．２及び９．１±０．２の回折角（０２θ）に特徴的なピークを有するＸＲＰＤパターンによって特徴づけられる。一実施形態において、Ｄ３のＨＣｌ塩の結晶形は、６．７±０．２、９．１±０．２、４．４±０．２、５．１±０．２、及び２．６±０．２の回折角（０２θ）に特徴的なピークを有するＸＲＰＤパターンによって特徴づけられる。
【００９２】
[00152]一実施形態において、Ｄ３のＨＣｌ塩の結晶形は、６．７±０．２、９．１±０．２、４．４±０．２、５．１±０．２、２．６±０．２、１１．５±０．２、１５．３±０．２、１６．６±０．２、１７．７±０．２、１８．２±０．２、２０．２±０．２、２１．６±０．２、２２．１±０．２、２２．５±０．２、２３．２±０．２、２４．１±０．２から選択される回折角（０２θ）に２つ以上、３つ以上、４つ以上、又は５つ以上の特徴的なピークを有するＸＲＰＤパターンによって特徴づけられる。
【００９３】
[00153]この態様の一実施形態において、図１３ｂに本質的に示されるような粉末Ｘ線回折パターンを有する結晶形が提供される。
【実施例】
【００９４】
[00154]以下の実施例は単に本開示を説明するものであり、本開示及び添付の特許請求の範囲を踏まえてこれらの実施例及びこれらの他の等価物が当業者にとって明らかとなるので、決して本発明の範囲を限定するものと考えるべきではない。本出願で使用されるすべてのパーセンテージは特に断りのない限り重量／重量（ｗ／ｗ）パーセントである。
実施例１
【００９５】
[00155]図２（スキーム２）は、式（Ｉ）のβ−ターンペプチド模倣環状化合物の一実施形態である、Ｄ３のＨＣｌ塩の合成を示す。
【００９６】
[00156]化合物４ａの合成は、標準的な段階的ＬＰＰＳ（液相ペプチド合成）手順によって行うことができる。例えば、Ｌ．Ａ．Ｃａｒｐｉｎｏら、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＆  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ２００３、７、２８〜３７）を参照のこと。
【００９７】
[00157]（ａ）ジペプチドＨ−Ｈｓｅｒ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ−ＯｔＢｕの合成
【化１０】
0006801835.tif 000011
【００９８】
[00158]Ｆｍｏｃ−Ｈｓｅｒ（Ｔｒｔ）ＯＨ（３７．５ｇ）、ＨＣｌ×Ｈ−ＧｌｙＯｔＢｕ（１２ｇ）、及びＨＯＢｔ（１０．８ｇ）を入れた容器へ、ＥｔＯＡｃ（２２７ｍｌ）及びＤＭＦ（４５ｍｌ）を加えた。混合物を５℃で撹拌した。ＤＩＰＥＡ（１２．５ｍｌ）及びＥＤＣ×ＨＣｌ（１５ｇ）を加えた。混合物を２０℃で撹拌して転化を完了させた（通常は＜２時間）。完了したら、反応混合物をＮａＣｌ（２３％、１１３ｍｌ）で２回洗浄した。反応器中に水性相が残っていないこと、洗浄後に有機層が一切捨てられていないことを確実にした。
【００９９】
[00159]有機溶液へＤＭＦ（４５ｍｌ）及びＢＡＥＡ（３４．５ｍｌ）を加えた。Ｆｍｏｃ基を完全に除去するために混合物を２０℃で３０分撹拌した。完了したら、反応混合物をＮａＣｌ（２３％、１１３ｍｌ）で１回、ＮａＨＣＯ３（４．８％、１１３ｍｌ）で２回抽出した。有機溶液は次のカップリングができる状態となった。反応器中に水性相が残っていないこと、洗浄後に有機層が一切捨てられていないことを確実にした。
【０１００】
[00160]（ｂ）トリペプチドＨ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｈｓｅｒ（Ｔｒｔ）−ＧｌｙＯｔＢｕの合成
【化１１】
0006801835.tif 000012
【０１０１】
[00161]ジペプチドを含有する有機溶液をＤＭＦ（２２７ｍｌ）で希釈し、５℃で撹拌した。この溶液へ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）ＯＨ（３０ｇ）、ＨＯＢｔ（１０．８ｇ）、並びにＥＤＣ×ＨＣｌ（１５ｇ）及びＥｔＯＡｃ（４５ｍｌ）を加えた。混合物を２０℃で撹拌して転化を完了させた（通常は＜１時間）。完了したら、Ｆｍｏｃ基を完全に除去するために、ＢＡＥＡ（３４．５ｍｌ）を加え、混合物を３０分撹拌した。完了したら、反応混合物をＮａＣｌ（２３％、１７０ｍｌ）及び水（１５０ｍｌ）の混合物で１回、ＮａＨＣＯ３（４．８％、１１３ｍｌ）で２回洗浄した。有機層をＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）で希釈し、次のカップリングができる状態とした。反応器中に水性相が残っていないこと、洗浄後に有機層が一切捨てられていないことを確実にした。
【０１０２】
[00162]（ｃ）テトラペプチドＨ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｈｓｅｒ（Ｔｒｔ）−ＧｌｙＯｔＢｕの合成
【化１２】
0006801835.tif 000013
【０１０３】
[00163]トリペプチドを含有する有機溶液をＤＭＦ（２２７ｍｌ）で希釈し、５℃で撹拌した。この溶液へ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）ＯＨ（２８．５ｇ）、ＨＯＢｔ（１０．８ｇ）、及びＥＤＣ×ＨＣｌ（１５ｇ）を加えた。混合物を２０℃で撹拌して転化を完了させた（通常は＜２時間）。完了したら、Ｆｍｏｃ基を完全に除去するために、ＢＡＥＡ（３４．５ｍｌ）を加え、混合物を３０分撹拌した。完了したら、反応混合物をＮａＣｌ（２３％、１１３ｍｌ）及び水（４９ｍｌ）の混合物で洗浄した。有機溶液をＤＭＦ（１６９ｍｌ）及びＥｔＯＡｃ（１１３ｍｌ）で希釈し、次いで４０℃まで加熱した。溶液をＮａＣｌ（２３％、１１３ｍｌ）及び水（３８ｍｌ）の混合物で４０℃にて洗浄した。相分離後、有機層をＮａＣｌ（２３％、５６ｍｌ）及び水（５６ｍｌ）の混合物で４０℃にて洗浄した。ＫＨＳＯ４（１Ｍ）により水性層のｐＨをｐＨ５〜５．５（指示薬スティック）に調整し、相を分離した。有機溶液は次のカップリングができる状態となった。反応器中に水性相が残っていないこと、洗浄後に有機層が一切捨てられていないことを確実にした。
【０１０４】
[00164]（ｄ）テトラペプチドＦＮＢＡ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＨＳｅｒ（Ｔｒｔ）−Ｇ１ｙ−ＯｔＢｕの合成、化合物４ａ
【化１３】
0006801835.tif 000014
【０１０５】
[00165]テトラペプチドを含有する有機溶液をＤＭＦ（２２７ｍｌ）で希釈し、５℃で撹拌した。この溶液へ、ＦＮＢＡ（１４．３ｇ）、ＥＤＣ×ＨＣｌ（１５ｇ）、及びＤＩＰＥＡ（１３．４ｍｌ）を加えた。混合物を２０℃で撹拌して転化を完了させた（通常は＜５時間）。完了したら、反応混合物をＭｅＴＨＦ（４５０ｍｌ）、ＮａＣｌ（２３％、１１３ｍｌ）、及びＮａＨＣＯ３（４．８％、１１３ｍｌ）と共に撹拌した。層を分離し、有機層を４０℃まで加熱し、その後この温度でＮａＨＣＯ３（４．８％、２２６ｍｌ）により洗浄し、最後に水（２２６ｍｌ）により洗浄した。反応器中に水性相が残っていないこと、洗浄後に有機層が一切捨てられていないことを確実にした。
【０１０６】
[00166]有機層を４０℃にて真空下で約２２６ｍｌまで濃縮した。残渣へＭｅＴＨＦ（２２６ｍｌ）を加え、次いで約２２６ｍｌまでの濃縮を繰り返した。残渣へＭｅＴＨＦ（２２６ｍｌ）及びＭＴＢＥ（４５０ｍｌ）を加え、スラリーを２０℃で５時間撹拌した。固体生成物をろ紙上で収集し、ＭＴＢＥ（２２６ｍｌ）で２回洗浄し、２０℃にて真空下で乾燥させた。乾燥生成物の化合物４ａ（５５．６ｇ）が得られ、収率は８５．５％、分析補正あり。ＨＰＬＣ：９０．６％、ジベンゾフルベン：９％。
【０１０７】
[00167]（ｅ）ペンタペプチドの部分脱保護（脱トリチル）、化合物３ａ
【化１４】
0006801835.tif 000015
【０１０８】
[00168]ペンタペプチド（５５．２ｇ）を５〜７回に分けて４０℃の酢酸（４５０ｍｌ）及び水（５０ｍｌ）の混合物へ加えた。添加後、白色懸濁液を７〜９時間撹拌して転化を完了させた（＞９８％）。完了したら、反応混合物を２０℃まで冷却し、次いでＭＴＢＥ（５５２ｍｌ）、ＮａＣｌ（２３％、２７６ｍｌ）、及び水（１１０ｍｌ）の混合物で抽出した。有機層を２０℃でＫＨＳＯ４（１Ｍ、２７６ｍｌ）により２回、４０℃でＮａＨＣＯ３（４．８％、２７６ｍｌ）により３回、水（２７６ｍｌ）により１回抽出した。反応器中に水性相が残っていないこと、洗浄後に有機層が一切捨てられていないことを確実にした。有機層を２０℃まで冷却し、一晩撹拌して生成物を析出させた。ヘプタン（５５２ｍｌ）をスラリーへ加え、これを１時間撹拌した（さらに生成物が析出した）。固体生成物をろ紙上で収集し、ヘプタンで２回（２×２７６ｍｌ）、ＤＩＰＥで２回（２×４１４ｍｌ）洗浄した。真空内で乾燥後（５２℃、４時間）、３９．４ｇの所望の部分脱保護直鎖ペプチドである化合物３ａが得られ、収率は９３％、分析補正なし。
【０１０９】
[00169]（ｆ）環化
【化１５】
0006801835.tif 000016
【０１１０】
[00170]ＴＨＦ（１９６ｍｌ）中のｔ−ＢｕＯＫ（８．１３ｇ）のスラリーを、ＴＨＦ（１５６０ｍｌ）中の部分脱保護直鎖ペプチド（３９．４ｇ）の低温（−８〜−１℃）溶液へ加えた。混合物を１５〜２０分撹拌して（内部温度は４℃まで上昇した）転化を完了させた。完了したら、ＨＣｌ水溶液（０．１Ｎ、１８９ｍｌ）を反応混合物へ加えた。ＴＨＦを真空蒸発により４０℃で除去した。残渣を水（２００ｍｌ）で希釈し、約３分撹拌した。固体粗生成物をろ紙上で収集し、水で２回（２×２００ｍｌ）、ＤＩＰＥで２回（２×２００ｍ１）、４５℃にて真空下で２時間乾燥させた。乾燥させた粗生成物（３６．１ｇ）をＥｔＯＡｃ（７８８ｍｌ）中に懸濁させた。懸濁液を４０℃で約４０分撹拌し、次いで０℃まで冷却し、２時間撹拌を続けた。固体生成物である化合物２ａをろ紙上で収集し、ろ紙上でＤＩＰＥにより２回（２×２００ｍｌ）洗浄した。乾燥後、３４．６ｇの精製環状ペプチドが得られ、収率は７８．６％、分析補正あり、ＨＰＬＣ  ９６．８％。
【０１１１】
[00171]（ｇ）最終脱保護
【０１１２】
[00172]環化ステップで得られた精製環状ペプチド（３３．３ｇ）をＭｅＣＮ（３３０ｍｌ）及び濃ＨＣｌ（３７％、５４ｍｌ）の混合物中で懸濁させた。懸濁液を１５℃で１時間撹拌した。懸濁液は溶液となり、次いで再びスラリーとなった。完了したら、ＭｅＣＮ（３３０ｍｌ）を加え、混合物を１時間撹拌した。粗生成物であるＤ３のＨＣｌ塩をろ紙上で収集し、ＭｅＣＮで２回（２×３３０ｍｌ）洗浄し、２０℃にて真空下で乾燥させた。収量：２４．５ｇ。
【０１１３】
[00173]（ｈ）結晶化
【０１１４】
[00174]塩基性化−酸性化方法：
【０１１５】
[00175]粗生成物（２４．５ｇ）を水（２４５ｍｌ）中で懸濁させ、５０℃まで加熱した。この懸濁液（ゲルのように見える場合がある）へＮａＯＨ（２Ｍ、４７．６ｍｌ）を加えた。溶液が得られるまで（濁っている場合がある）混合物を５０℃で１時間撹拌した。この溶液を高温でろ過して不溶性材料を除去した。容器を水（７４ｍｌ）ですすぎ、すすぎ液をろ紙に通し、ろ液を合わせた。合わせたろ液を別の容器へ移し、効率的に撹拌しながら５０℃まで加熱した。この温溶液へＨＣｌ（４Ｍ、４７．６ｍｌ）を加えた。最初にゲルが形成された。５０℃で４０分、４０℃で５０分、３０℃で約１４時間、及び１℃で８時間撹拌を続けて白色スラリーを得た。精製した最終生成物（白色針状物）をろ紙上で収集し、ＨＣｌ（１Ｍ、５０ｍｌ）で洗浄し、２０℃にて真空下で乾燥させた。収量：２１ｇ、分析：８５．６６％。ＨＰＬＣ：９８．９％。Ｆｍｏｃ−Ｈｓｅｒ（Ｔｒｔ）ＯＨから出発した全収率：５３．６％、分析補正あり。
【０１１６】
[00176]最終生成物はｐＨ２〜８でゲルを形成する傾向があったが、ｐＨ＞９では透明溶液のろ過に適した安定な溶液を形成した。透明溶液を３７％  ＨＣｌによりｐＨ≦０まで酸性化した後、最終生成物であるＨＣｌ塩は最初にゲルを形成し、次いでゲルは高純度の微細な針状物（図３を参照）へ転移した。
実施例２
【０１１７】
[00177]結晶化プロセスの最適化
【０１１８】
[00178]結晶化の間の不純物の生成を避けるため、及び大スケールで堅固なプロセスを得るために、一連の実験を行った。温度及びＨＣｌの濃度を変化させ、下記の表１にまとめた。特定の時間：２時間、４時間、８時間、及び２２時間で各実験から試料を取り出した。試料中の最終生成物及び３種の主な不純物の含量をＨＰＬＣによりモニタリングした（図４〜７）。
【表１】
0006801835.tif 000017
【０１１９】
[00179]図４は、様々な条件（すなわち、様々な温度及びＨＣｌの濃度（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及びＦとラベリングされている））で、結晶化の間の２時間、４時間、８時間、及び２２時間における、最終生成物のＨＰＬＣの面積パーセントを示す棒グラフである。開始時の純度は９６．２％であった。
【０１２０】
[00180]図５は、２２時間にわたる経時的な、結晶化の間の不純物Ｄｅｓ−Ｇｌｙの生成を示すグラフである。以下の結論を出すことができる：（ａ）４０℃において、最終生成物は５及び７当量のＨＣｌの存在下で２２時間安定である；（ｂ）５０℃において、最終生成物は５及び７当量のＨＣｌの存在下で４時間安定である；（ｃ）６０℃において、最終生成物は２時間後に分解し始める。
【０１２１】
[00181]図６は、１２時間にわたる経時的な、結晶化の間の未知の不純物の生成を示すグラフである。ＨＰＬＣにより測定される、０．９３の相対保持時間（ＲＲＴ０．９３）で不純物を溶離させた。以下の結論を出すことができる：（ａ）４０℃において、５当量のＨＣｌが加えられたか又は７当量のＨＣｌが加えられたかには関係なく、ＲＴ０．９３の生成は非常に遅い；（ｂ）５０℃において、ＲＴ０．９３の生成は８時間以内では４０℃におけるよりもわずかに多い。８時間後に加速され、５当量のＨＣｌと比較して７当量のＨＣｌを使用するとより多くのＲＴ０．９３が生成する；（ｃ）６０℃において、ＲＴ０．９３の生成は急速に増加する。
【０１２２】
[00182]図７は、１２時間にわたる経時的な、結晶化の間の未知の不純物の生成を示すグラフである。ＨＰＬＣにより測定される、１．１１の相対保持時間（ＲＲＴ１．１１）で不純物を溶離させた。以下の結論を出すことができる：（ａ）４０℃において、５当量のＨＣｌが加えられたか又は７当量のＨＣｌが加えられたかには関係なく、ＲＲＴ１．１１の生成は非常に遅い；（ｂ）５０℃において、ＲＲＴ１．１１の生成は４時間以内では４０℃におけるよりもわずかに多い。４時間後に加速され、５当量のＨＣｌの使用よりも７当量のＨＣｌを使用するとより多くの未知の不純物が生成する；（ｃ）６０℃において、ＲＲＴ１．１１の生成は急速に増加する。
実施例３
【０１２３】
[00183]結晶化の間の温度サイクル
【０１２４】
[00184]結晶化プロセスを理解するために、温度を５０℃から２０℃まで低下させることによって結晶化の間に温度を循環させ、次いで温度を５０℃まで上昇させ２０℃まで再び低下させた。温度サイクルの図を図８に示す。スラリーから周期的に試料を取り出し、顕微鏡法によって分析した。図９は顕微鏡分析下での最終生成物の結晶転移を示す。
【０１２５】
[00185]ゲルは４０℃で１４時間後に結晶性（針状）スラリーへ転移した。これらの針状物は５℃での長時間の冷却を含めた全体で４７時間の温度サイクルの間に損傷されなかった。このことは、この結晶形がこれらの条件下で安定であり転移が長時間を要したことを意味する。結晶化方法の開発を通して、いくつかの実験は粗製最終生成物の純度がゲルから結晶性物質への転移速度に影響を与えることを示した。結晶化後、ＨＰＬＣにより測定される結晶生成物の純度は９７％を超えた（例えば、９７．２％〜９９．１％）。結晶生成物は、ろ過時間が比較的長かったが、ゲルよりもろ過するのが容易であった。乾燥後、針状物は一定の結晶化度を有する不規則な固体へ転移した。図１０は顕微鏡分析下でのろ紙上の結晶転移を示す。
実施例４
【０１２６】
[00186]結晶形の転移の研究
【０１２７】
[00187]考えられる転移を調べるために、Ｄ３試料の粗製バッチを０．１Ｍ  ＨＣｌ溶液、０．００１Ｍ  ＨＣｌ溶液中でスラリー化した。およそ６０ｍｇの粗製Ｄ３試料を０．６ｍｌ溶液中でスラリー化した。スラリーを室温で磁気撹拌したままにした。０．１Ｍ  ＨＣｌスラリーにおいて、１〜２日後に針状物が得られた。スラリーを多孔性プレート上でＸＲＰＤにより分析した（図１１を参照）。結晶形は結晶形Ｖに相当し、すなわち、結晶形ＩＶから結晶形Ｖへの速い転移が生じている。純水中では転移ははるかに遅く、分析は２週間後に行われた。スラリーは結晶形Ｖを主に含むが、他の結晶形の存在を示し得るいくつかの余分なピークがある。粗製材料はｐＨに影響を与える過剰量のＨＣｌを含有していた可能性があることに注目すべきである。純水スラリー中のｐＨはおよそ３であった。
【０１２８】
[00188]０．００１Ｍ  ＨＣｌ溶液中で、転移はやはり遅く、分析は２週間後に行われた。ＸＲＰＤ（図１２を参照）は、結晶性物質が生成したことを示す。純水（すなわち、１００％の水）スラリーとの多くの類似点があり、すなわち、結晶形Ｖ及び何らかの他の結晶形の混合物であるように見える。
【０１２９】
[00189]０．１Ｍ  ＨＣｌスラリーを３週間後の２回目に分析した。図１３ａを参照のこと。これは依然として結晶形Ｖに相当しており、すなわちスラリーは多形体に関して非常に安定であるように見える。
実施例５
【０１３０】
[00190]Ｄ３のアモルファス形の特性決定
【０１３１】
[00191]図１４は、Ｄ３のアモルファスのＨＣｌ塩の乾燥試料の顕微鏡像を示し、これは結晶化しているが結晶化前に得られたその結晶化度を乾燥時に失っている。
【０１３２】
[00192]Ｄ３試料のアモルファスＨＣｌ塩をＸＲＰＤにより分析した（図１５を参照）。材料は主にアモルファスであるが結晶形ＩＶであることを結論づけられる。２θ＝３２°のピークは材料中の塩化ナトリウムに相当する。
【０１３３】
[00193]Ｄ３のアモルファスＨＣｌ塩のＤＳＣを図１６に示す。６０℃付近で小さい吸熱、１８０〜１９０℃付近で弱い発熱の事象、それに続いて２２０℃付近で吸熱がある。結晶形ＩＶは主にアモルファスであるので、熱事象はより小さくあまり明確ではないことが予測される。
【０１３４】
[00194]Ｄ３のアモルファスＨＣｌ塩の熱重量分析（ＴＧＡ）を図１７に示し、これは１００〜１１０℃までにおよそ１．７％の重量減少を示す。
【０１３５】
[00195]Ｄ３試料のアモルファスＨＣｌ塩を動的蒸気収着（ＤＶＳ）により分析した（図１８を参照）。相対湿度９５％まで３２％の重量増加に相当する連続的な水の吸収がある。２０％  ＲＨ（相対湿度）では、質量変化は４％であり、４０％  ＲＨではおよそ７％である。多量の水の吸収にもかかわらず、プロセスは完全に可逆であるように見え、ほとんどヒステリシス効果がない、すなわち重量の吸収及び低下はほとんど同一である（図１９を参照）。両方のサイクルはほとんど同一であることに注目する。
【０１３６】
[00196]ＤＶＳ分析後のＤ３試料のアモルファスＨＣｌ塩をＴＧＡにより分析した（図２０を参照）。３．９％の重量減少があり、これはＲＨ＝２０％での水の吸収と良く一致している。
【０１３７】
[00197]Ｄ３試料のアモルファスＨＣｌ塩をＸＲＰＤにより再び分析し（図２１を参照）、これは材料が依然として出発物質と非常に類似していたことを示す。
【０１３８】
[00198]非常に高いＲＨ（１００％近く）での挙動を調べるために、Ｄ３試料のアモルファスＨＣｌ塩を顕微鏡スライドへ加え、水蒸気で飽和させたデシケーター中に入れた。試料を一晩放置し、次いでＴＧＡにより迅速に分析した（図２２を参照）。ＴＧＡ分析はおよそ３０％の水分低下を示した。試料は依然として固体状であること、すなわち潮解性がないことに注目すべきである。試料はＸＲＰＤによっても分析した（図２３を参照）。解析は、試料が出発物質（図２１）よりも結晶性が高く、結晶形Ｖと高い類似性があることを示している。参照結晶形Ｖのピークはより小さい２θ値に向かって、すなわちより大きいｄ値に向かってシフトする。これは水が構造体に加えられると膨張することを示唆するものである。ＸＲＰＤ分析はＺＢＨ上で行われ、したがって多孔性基材に由来する２θ＝２６、３５、及び３８の強いピークが見られないことに注意する。
実施例６
【０１３９】
[00199]方法
【０１４０】
[00200]ＤＳＣ及びＴＧＡ
【０１４１】
[00201]Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＤＳＣ  ｍｏｄｅｌ  ８２２でＤＳＣ分析を行った。Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＴＧＡ／ＳＤＴＡ  ８５１でＴＧＡ分析を行った。
【０１４２】
[00202]ＤＶＳ分析
【０１４３】
[00203]ＤＶＳ  ＡｄＶａｎｔａｇｅ（表面測定システム）でＤＶＳ分析を行った。
【０１４４】
[00204]ＸＲＰＤ
【０１４５】
[00205]銅の放射線を使用して、ＰＩＸｃｅｌ検出器、自動発散及び散乱防止スリット、ソラースリット及びＮｉフィルターを備えたＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ  Ｘ’Ｐｅｒｔ  ＰＲＯ回折計でＸ線粉末回折パターンを収集した。ＸＲＰＤの標準的技法により乾燥試料をＺＢＨに塗布した。溶媒効果の一部を排除するために多孔性Ａｌ２Ｏ３プレートを使用してウェット試料を分析した。
【０１４６】
[00206]顕微鏡
【０１４７】
[00207]顕微鏡下で写真を撮影してＭａｌｖｅｒｎの結果と比較した。乾燥試料を顕微鏡スライド上に塗布し、いくらかのＭｉｇｌｙｏｌを加えた。スラリー試料は、そのまま又はＭｉｇｌｙｏｌを１滴加えて分析した。
【０１４８】
[00208]装置
【０１４９】
[00209]磁気撹拌を使用して４ｍｌバイアル中でスラリーの実験を行った。
【０１５０】
[00210]本発明は、本発明の実施可能な実施形態を参照して説明され詳細に示されているが、当業者は本発明の精神から逸脱せずに様々な変更、修正、置き換え、及び省略を行うことができることを理解することになる。したがって、本発明は以下の特許請求の範囲内にあるそれらの等価物を包含することを意図している。
【図１】
0006801835.tif 000028
【図２】
0006801835.tif 000029
【図３】
0006801835.tif 000030
【図４】
0006801835.tif 000031
【図５】
0006801835.tif 000032
【図６】
0006801835.tif 000033
【図７】
0006801835.tif 000034
【図８】
0006801835.tif 000035
【図９】
0006801835.tif 000036
【図１０】
0006801835.tif 000037
【図１１】
0006801835.tif 000038
【図１２】
0006801835.tif 000039
【図１３Ａ】
0006801835.tif 000040
【図１３Ｂ】
0006801835.tif 000041
【図１４】
0006801835.tif 000042
【図１５】
0006801835.tif 000043
【図１６】
0006801835.tif 000044
【図１７】
0006801835.tif 000045
【図１８】
0006801835.tif 000046
【図１９】
0006801835.tif 000047
【図２０】
0006801835.tif 000048
【図２１】
0006801835.tif 000049
【図２２】
0006801835.tif 000050
【図２３】
0006801835.tif 000051