(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のアンモニウム塩の結晶、化合物（Ｉ）のナトリウム塩の結晶、又は化合物（Ｉ）の結晶。
【化１】
0006767589.tif 000037
【請求項２】
（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のアンモニウム塩の結晶である、請求項１に記載の結晶。
【請求項３】
（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のジアンモニウム塩の結晶である、請求項２に記載の結晶。
【請求項４】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）８．３°に回折ピークを有する、請求項３に記載の結晶（結晶形１）。
【請求項５】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．４°、８．３°及び１６．６°に回折ピークを有する、請求項４に記載の結晶（結晶形１）。
【請求項６】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．４°、８．３°、１２．７°、１６．６°及び２５．４°に回折ピークを有する、請求項４に記載の結晶（結晶形１）。
【請求項７】
水和物である、請求項４〜６のいずれか一項に記載の結晶（結晶形１）。
【請求項８】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．０°に回折ピークを有する、請求項３に記載の結晶（結晶形２）。
【請求項９】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．０°、１５．４°及び２０．８°に回折ピークを有する、請求項８に記載の結晶（結晶形２）。
【請求項１０】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．０°、１５．４°、２０．８°、２４．０°及び３０．０°に回折ピークを有する、請求項８に記載の結晶（結晶形２）。
【請求項１１】
水和物である、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の結晶（結晶形２）。
【請求項１２】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）７．４°に回折ピークを有する、請求項３に記載の結晶（結晶形３）。
【請求項１３】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）７．４°、１６．０°及び２１．４°に回折ピークを有する、請求項１２に記載の結晶（結晶形３）。
【請求項１４】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．０°、７．４°、９．３°、１６．０°及び２１．４°に回折ピークを有する、請求項１２に記載の結晶（結晶形３）。
【請求項１５】
水和物である、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の結晶（結晶形３）。
【請求項１６】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．７°に回折ピークを有する、請求項３に記載の結晶（結晶形４）。
【請求項１７】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．７°、１４．０°及び２６．９°に回折ピークを有する、請求項１６に記載の結晶（結晶形４）。
【請求項１８】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．７°、１４．０°、１７．４°、２２．３°及び２６．９°に回折ピークを有する、請求項１６に記載の結晶（結晶形４）。
【請求項１９】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）２０．０°に回折ピークを有する、請求項３に記載の結晶（結晶形５）。
【請求項２０】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１０．９°、２０．０°及び２３．６°に回折ピークを有する、請求項１９に記載の結晶（結晶形５）。
【請求項２１】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１０．９°、１７．７°、１８．９°、２０．０°及び２３．６°に回折ピークを有する、請求項１９に記載の結晶（結晶形５）。
【請求項２２】
（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のモノアンモニウム塩の結晶である、請求項２に記載の結晶。
【請求項２３】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１７．０°に回折ピークを有する、請求項２２に記載の結晶（結晶形６）。
【請求項２４】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１７．０°、２１．６°及び２５．９°に回折ピークを有する、請求項２３に記載の結晶（結晶形６）。
【請求項２５】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１５．１°、１６．４°、１７．０°、２１．６°及び２５．９°に回折ピークを有する、請求項２３に記載の結晶（結晶形６）。
【請求項２６】
（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のナトリウム塩の結晶である、請求項１に記載の結晶。
【請求項２７】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．１°に回折ピークを有する、請求項２６に記載の結晶。
【請求項２８】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．１°、９．３°及び１６．６°に回折ピークを有する、請求項２７に記載の結晶。
【請求項２９】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．１°、９．３°、１５．９°、１６．６°及び２２．３°に回折ピークを有する、請求項２７に記載の結晶。
【請求項３０】
（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））の結晶である、請求項１に記載の結晶。
【請求項３１】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）５．６°に回折ピークを有する、請求項３０に記載の結晶。
【請求項３２】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）５．６°、１３．９°及び１６．８°に回折ピークを有する、請求項３１に記載の結晶。
【請求項３３】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）５．６°、８．９°、１１．４°、１３．９°及び１６．８°に回折ピークを有する、請求項３１に記載の結晶。
【請求項３４】
請求項１〜３３のいずれか一項に記載の結晶を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]本発明は、化合物の塩及びそれらの結晶に関する。
【背景技術】
【０００２】
[0002]ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子の刺激物質）は、細胞質でのｄｓＤＮＡに対する自然応答におけるシグナル伝達分子である。ＳＴＩＮＧの欠損は、多数のヒトがんにおいて報告されてきた。加えて、ヒトのがんにおけるＳＴＩＮＧシグナル伝達の脱調節もまた、黒色腫（Ｘｉａ  Ｔら、「Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  Ｌｏｓｓ  ｏｆ  ＳＴＩＮＧ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｍｅｌａｎｏｍａ  Ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  Ｖｉｒａｌ  Ｏｎｃｏｌｙｓｉｓ」  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１６）及び結腸がんで報告されてきた（Ｘｉａ  Ｔら、「Ｄｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＴＩＮＧ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  Ｃｏｎｓｔｒａｉｎｓ  ＤＮＡ  Ｄａｍａｇｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ａｎｄ  Ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  Ｗｉｔｈ  Ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ」  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ．２０１６；１４：２８２〜９７）。興味深いことに、これらの研究において、ゲノム解析の結果により、ＳＴＩＮＧの発現損失は遺伝子の欠損又は突然変異に起因するのではなく、エピジェネティックな変化によることが示された（Ｘｉａ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１６；Ｘｉａ、Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ．２０１６）。ＳＴＩＮＧのがん予防活性は、マウスモデル研究から得られた証拠によっても支持される。ＳＴＩＮＧノックアウトマウスによって、腫瘍制御の欠損が示された（Ｗｏｏ  ＳＲら「ＳＴＩＮＧ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ＤＮＡ  ｓｅｎｓｉｎｇ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ  ｔｕｍｏｒｓ」  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２０１４；４１：８３０〜４２）。
【０００３】
[0003]加えて、個体発生を保護するうえでのＳＴＩＮＧの役割が、神経膠腫（Ｏｈｋｕｒｉ  Ｔら、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＳＴＩＮＧ  ａｇａｉｎｓｔ  ｇｌｉｏｍａｇｅｎｅｓｉｓ：Ｒａｔｉｏｎａｌ  ｕｓｅ  ｏｆ  ＳＴＩＮＧ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｉｎ  ａｎｔｉ−ｇｌｉｏｍａ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ」  Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１５；４：ｅ９９９５２３）及び結腸がん（Ｚｈｕ  Ｑら、「Ｃｕｔｔｉｎｇ  ｅｄｇｅ：ＳＴＩＮＧ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ  ｂｙ  ｇｏｖｅｒｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ｍａｇｎｉｔｕｄｅ  ｏｆ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ」  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４；１９３：４７７９〜８２）を含めていくつかのマウス自然発症モデルで実証された。この抗腫瘍効果は、ＮＦ−ｋＢ及びＳＴＡＴ３の過剰活性化を打ち消すＳＴＩＮＧの能力に起因する可能性がある（Ｏｈｋｕｒｉ  ２０１５）。ＳＴＩＮＧ経路の活性化はまた、前臨床マウス腫瘍モデルでも強力な活性を示した（Ｗｏｏ  ２０１４；Ｃｈａｎｄｒａ  Ｄら、「ＳＴＩＮＧ  ｌｉｇａｎｄ  ｃ−ｄｉ−ＧＭＰ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｃａｎｃｅｒ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ」  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．２０１４；２：９０１〜１０；Ｃｏｒｒａｌｅｓ  Ｌら、「Ｄｉｒｅｃｔ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＴＩＮＧ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｕｍｏｒ  Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  Ｌｅａｄｓ  ｔｏ  Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｔｕｍｏｒ  Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ」  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ．２０１５；１１：１０１８〜３０；Ｃｕｒｒａｎ  Ｅら、「ＳＴＩＮＧ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ」  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ．２０１６；１５：２３５７〜６６；Ｔａｎｇ  ＣＨら、「Ａｇｏｎｉｓｔ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＴＩＮＧ  Ｉｎｄｕｃｅｓ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  Ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｂ  Ｃｅｌｌｓ」  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１６；７６：２１３７〜５２）。この抗腫瘍活性は、腫瘍の血管構造の破壊と、それに続く適応免疫応答の誘導とによる可能性が高い（Ｃｏｒｒａｌｅｓ  Ｌら、「Ｔｈｅ  ｈｏｓｔ  ＳＴＩＮＧ  ｐａｔｈｗａｙ  ａｔ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ」  Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２０１６；１２６：２４０４〜１１）。したがって、腫瘍微小環境においてアゴニストによってＳＴＩＮＧを直接に刺激することは、複数のがん腫を処置するための新規なアプローチを意味するであろう。
【発明の概要】
【技術的課題】
【０００４】
[0004]式（Ｉ）で表される化合物、すなわち、（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（以下、化合物（Ｉ）と呼ぶ）は、腫瘍の成長を抑制する。
【化１】
0006767589.tif 000002
【０００５】
[0005]一般に、医薬製品として使用される化合物、その塩及びそれらの結晶の物理的特性は、薬物のバイオアベイラビリティ、活性医薬成分の純度、調製の処方等に対して大きく影響を及ぼす。したがって、本発明の一目的は、医薬品の原薬として使用される可能性のある化合物（Ｉ）の塩又はそれらの結晶を提供することである。
【課題の解決】
【０００６】
[0006]本発明者は、医薬品の原薬として使用される可能性のある化合物（Ｉ）の塩又はそれらの結晶を見いだし、それにより本発明を完成させた。
【０００７】
[0007]詳細には、本発明は、以下の＜１＞〜＜５０＞を提供する。
＜１＞（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のアンモニウム塩、化合物（Ｉ）のナトリウム塩、又は化合物（Ｉ）の結晶。
【化２】
0006767589.tif 000003
＜２＞（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のアンモニウム塩の結晶である、＜１＞に記載の結晶。
＜３＞（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のジアンモニウム塩の結晶である、＜２＞に記載の結晶。
＜４＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）８．３°に回折ピークを有する、＜３＞に記載の結晶（結晶形１）。
＜５＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．４°、８．３°及び１６．６°に回折ピークを有する、＜４＞に記載の結晶（結晶形１）。
＜６＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．４°、８．３°、１２．７°、１６．６°及び２５．４°に回折ピークを有する、＜４＞に記載の結晶（結晶形１）。
＜７＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．４°、８．３°、１２．７°、１４．６°、１６．６°、１８．１°、２２．１°、２２．８°、２４．４°及び２５．４°に回折ピークを有する、＜４＞に記載の結晶（結晶形１）。
＜８＞図３に示される粉末Ｘ線回折パターンと実質的に同じ粉末Ｘ線回折パターンを有する、＜７＞に記載の結晶（結晶形１）。
＜９＞水和物である、＜４＞〜＜８＞のいずれか一項に記載の結晶（結晶形１）。
＜１０＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．０°に回折ピークを有する、＜３＞に記載の結晶（結晶形２）。
＜１１＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．０°、１５．４°及び２０．８°に回折ピークを有する、＜１０＞に記載の結晶（結晶形２）。
＜１２＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．０°、１５．４°、２０．８°、２４．０°及び３０．０°に回折ピークを有する、＜１０＞に記載の結晶（結晶形２）。
＜１３＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）７．０°、９．０°、１１．８°、１３．２°、１５．４°、１９．７°、２０．８°、２４．０°、３０．０°及び３１．１°に回折ピークを有する、＜１０＞に記載の結晶（結晶形２）。
＜１４＞図４に示される粉末Ｘ線回折パターンと実質的に同じ粉末Ｘ線回折パターンを有する、＜１３＞に記載の結晶（結晶形２）。
＜１５＞水和物である、＜１０＞〜＜１４＞のいずれか一項に記載の結晶（結晶形２）。
＜１６＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）７．４°に回折ピークを有する、＜３＞に記載の結晶（結晶形３）。
＜１７＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）７．４°、１６．０°及び２１．４°に回折ピークを有する、＜１６＞に記載の結晶（結晶形３）。
＜１８＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．０°、７．４°、９．３°、１６．０°及び２１．４°に回折ピークを有する、＜１６＞に記載の結晶（結晶形３）。
＜１９＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．０°、７．４°、９．３°、１２．６°、１６．０°、１６．６°、１８．１°、２１．４°、２２．０°及び２２．８°に回折ピークを有する、＜１６＞に記載の結晶（結晶形３）。
＜２０＞図５に示される粉末Ｘ線回折パターンと実質的に同じ粉末Ｘ線回折パターンを有する、＜１９＞に記載の結晶（結晶形３）。
＜２１＞水和物である、＜１６＞〜＜２０＞のいずれか一項に記載の結晶（結晶形３）。
＜２２＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．７°に回折ピークを有する、＜３＞に記載の結晶（結晶形４）。
＜２３＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．７°、１４．０°及び２６．９°に回折ピークを有する、＜２２＞に記載の結晶（結晶形４）。
＜２４＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．７°、１４．０°、１７．４°、２２．３°及び２６．９°に回折ピークを有する、＜２２＞に記載の結晶（結晶形４）。
＜２５＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）５．９°、７．６°、９．７°、１１．６°、１４．０°、１６．０°、１７．４°、２２．３°、２４．６°及び２６．９°に回折ピークを有する、＜２２＞に記載の結晶（結晶形４）。
＜２６＞図６に示される粉末Ｘ線回折パターンと実質的に同じ粉末Ｘ線回折パターンを有する、＜２５＞に記載の結晶（結晶形４）。
＜２７＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）２０．０°に回折ピークを有する、＜３＞に記載の結晶（結晶形５）。
＜２８＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１０．９°、２０．０°及び２３．６°に回折ピークを有する、＜２７＞に記載の結晶（結晶形５）。
＜２９＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１０．９°、１７．７°、１８．９°、２０．０°及び２３．６°に回折ピークを有する、＜２７＞に記載の結晶（結晶形５）。
＜３０＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．０°、９．６°、１０．９°、１３．０°、１５．３°、１７．７°、１８．９°、２０．０°、２１．５°及び２３．６°に回折ピークを有する、＜２７＞に記載の結晶（結晶形５）。
＜３１＞図７に示される粉末Ｘ線回折パターンと実質的に同じ粉末Ｘ線回折パターンを有する、＜３０＞に記載の結晶（結晶形５）。
＜３２＞（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のモノアンモニウム塩の結晶である、＜２＞に記載の結晶。
＜３３＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１７．０°に回折ピークを有する、＜３２＞に記載の結晶（結晶形６）。
＜３４＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１７．０°、２１．６°及び２５．９°に回折ピークを有する、＜３３＞に記載の結晶（結晶形６）。
＜３５＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１５．１°、１６．４°、１７．０°、２１．６°及び２５．９°に回折ピークを有する、＜３３＞に記載の結晶（結晶形６）。
＜３６＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．９°、８．５°、１２．０°、１５．１°、１６．４°、１７．０°、２１．０°、２１．６°、２２．８°及び２５．９°に回折ピークを有する、＜３３＞に記載の結晶（結晶形６）。
＜３７＞図８に示される粉末Ｘ線回折パターンと実質的に同じ粉末Ｘ線回折パターンを有する、＜３６＞に記載の結晶（結晶形６）。
＜３８＞（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のナトリウム塩の結晶である、＜１＞に記載の結晶。
＜３９＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．１°に回折ピークを有する、＜３８＞に記載の結晶。
＜４０＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．１°、９．３°及び１６．６°に回折ピークを有する、＜３９＞に記載の結晶。
＜４１＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．１°、９．３°、１５．９°、１６．６°及び２２．３°に回折ピークを有する、＜３９＞に記載の結晶。
＜４２＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．１°、９．３°、１３．４°、１４．８°、１５．９°、１６．６°、２０．６°、２２．３°、２３．５°及び２４．４°に回折ピークを有する、＜３９＞に記載の結晶。
＜４３＞図９に示される粉末Ｘ線回折パターンと実質的に同じ粉末Ｘ線回折パターンを有する、＜４２＞に記載の結晶。
＜４４＞（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））の結晶である、＜１＞に記載の結晶。
＜４５＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）５．６°に回折ピークを有する、＜４４＞に記載の結晶。
＜４６＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）５．６°、１３．９°及び１６．８°に回折ピークを有する、＜４５＞に記載の結晶。
＜４７＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）５．６°、８．９°、１１．４°、１３．９°及び１６．８°に回折ピークを有する、＜４５＞に記載の結晶。
＜４８＞粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）５．６°、７．９°、８．９°、１１．４°、１３．９°、１６．８°、２２．１°及び２３．１°に回折ピークを有する、＜４５＞に記載の結晶。
＜４９＞図１０に示される粉末Ｘ線回折パターンと実質的に同じ粉末Ｘ線回折パターンを有する、＜４８＞に記載の結晶。
＜５０＞＜１＞〜＜４９＞のいずれか一項に記載の結晶を含む医薬組成物。
【発明の有利な効果】
【０００８】
[0008]本発明により提供される化合物（Ｉ）の塩及びそれらの結晶は、後述の実施例に示される吸湿性などの特性及び医薬品の原薬として使用される可能性を有する。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】化合物（Ｉ）のアンモニウム塩の１Ｈ  ＮＭＲスペクトログラフを示す図である。
【図２Ａ】化合物（Ｉ）のアンモニウム塩の結晶のＸ線結晶解析結果（ＯＲＴＥＰ図面）を示す図であり、非対称結晶単位で２つの分子が存在している。
【図２Ｂ】非対称結晶単位の第１の分子に関するＸ線結晶解析結果（ＯＲＴＥＰ図面）を示す図である。
【図２Ｃ】非対称結晶単位の第２の分子に関するＸ線結晶解析結果（ＯＲＴＥＰ図面）を示す図である。
【図３】実施例１で得られた、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形１）の粉末Ｘ線回折パターンを示す図である。横軸は回折角（２θ）を示し、縦軸はピーク強度を示す。
【図４】実施例２で得られた、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形２）の粉末Ｘ線回折パターンを示す図である。横軸は回折角（２θ）を示し、縦軸はピーク強度を示す。
【図５】実施例３で得られた、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形３）の粉末Ｘ線回折パターンを示す図である。横軸は回折角（２θ）を示し、縦軸はピーク強度を示す。
【図６】実施例４で得られた、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形４）の粉末Ｘ線回折パターンを示す図である。横軸は回折角（２θ）を示し、縦軸はピーク強度を示す。
【図７】実施例５で得られた、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形５）の粉末Ｘ線回折パターンを示す図である。横軸は回折角（２θ）を示し、縦軸はピーク強度を示す。
【図８】実施例６で得られた、化合物（Ｉ）のモノアンモニウム塩の結晶（結晶形６）の粉末Ｘ線回折パターンを示す図である。横軸は回折角（２θ）を示し、縦軸はピーク強度を示す。
【図９】実施例７で得られた、化合物（Ｉ）のナトリウム塩の結晶の粉末Ｘ線回折パターンを示す図である。横軸は回折角（２θ）を示し、縦軸はピーク強度を示す。
【図１０】実施例８で得られた、化合物（Ｉ）の結晶の粉末Ｘ線回折パターンを示す図である。横軸は回折角（２θ）を示し、縦軸はピーク強度を示す。
【図１１】実施例１で得られた、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形１）の吸湿性を示すグラフである。横軸は相対湿度を示し、縦軸は重量変化を示す。
【図１２】実施例２で得られた、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形２）の吸湿性を示すグラフである。横軸は相対湿度を示し、縦軸は重量変化を示す。
【図１３】実施例５で得られた、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形５）の吸湿性を示すグラフである。横軸は相対湿度を示し、縦軸は重量変化を示す。
【図１４】実施例６で得られた、化合物（Ｉ）のモノアンモニウム塩の結晶（結晶形６）の吸湿性を示すグラフである。横軸は相対湿度を示し、縦軸は重量変化を示す。
【図１５】実施例７で得られた、化合物（Ｉ）のナトリウム塩の結晶の吸湿性を示すグラフである。横軸は相対湿度を示し、縦軸は重量変化を示す。
【図１６】ＷＹ  ＳＴＩＮＧ（ｐＬｅｎｔｉ−ＷＴヒトＳＴＩＮＧ−Ｐｕｒｏ）の発現ベクターマップを示す図である。
【図１７】薬理試験実施例６に伴うものであり、ＣＴ２６二重腫瘍モデルにおける化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の治癒的効果を示す図である。
【図１８】薬理試験実施例６に伴うものであり、ＣＴ２６二重腫瘍モデルにおける化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の治癒的効果を示す図である。
【図１９】薬理試験実施例７に伴うものであり、処置腫瘍の腫瘍体積プロット及び生存曲線を示す図である。
【図２０】薬理試験実施例８に伴うものであり、処置腫瘍の腫瘍体積プロット及び生存曲線を示す図である。
【図２１】結晶（結晶形１）のＴＧ−ＤＴＡサーモグラムを示す図である。
【図２２】室温（下のパターン）及び６０℃超（上のパターン）での結晶（結晶形１）の粉末Ｘ線回折パターンを示す図である。
【図２３】粉末Ｘ線回折パターンの比較を示す図である：１）透過法により分析された結晶（結晶形１）パターン（下）、２）６０℃超に加熱された結晶（結晶形１）試料のパターン、この試料は反射法により分析されている（中央）、３）透過法により分析された結晶（結晶形２）パターン（上）。
【図２４】種々の温度での結晶（結晶形１）の粉末Ｘ線回折パターンを示す図である：１）室温（下のパターン）、２）６１〜７１℃（中央のパターン）、３）１２５〜１３４℃（上のパターン）。
【図２５】２５℃での結晶形１の吸着及び脱着等温線を示す図である。
【図２６】２５℃及び９４％ＲＨで４日間保管する、前（下のパターン）と後（上のパターン）との間の結晶形１のＰＸＲＤパターンの比較を示す図である。
【実施形態の説明】
【００１０】
[0010]本発明の化合物（Ｉ）の塩、その結晶、及びその製造方法について詳細に説明する。
【００１１】
[0011]本明細書で使用される場合、「塩」とは、酸性成分としての化合物（Ｉ）と、化合物（Ｉ）に対する特定の当量数の塩基と、から構成されている化学成分を指す。ここでは、「式（Ｉ）によって表される（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））と、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、エタノール中のアンモニア及び水酸化アンモニウム等からなる群から選択される塩基との塩」という用語は、「水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、エタノール中のアンモニア及び水酸化アンモニウム等からなる群から選択される塩基と共に形成された、式（Ｉ）によって表される（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））の塩」と同じ意味で使用される。
【００１２】
[0012]本明細書で使用される「塩」の例としては、無機塩基との塩が挙げられ、特に、薬学的に許容される塩が好ましい。
【００１３】
[0013]化合物（Ｉ）の塩はまた、溶媒和物であっても水和物であってもよい。本明細書で使用される場合、化合物（Ｉ）の塩の溶媒和物又は水和物とは、溶媒分子又は水分子と一緒に化合物（Ｉ）の塩から形成された固形物を意味する。溶媒和物の溶媒の例としては：ケトン溶媒、例えば、アセトン、メチルエチルケトン又はシクロヘキサノン；エステル溶媒、例えば、酢酸エチル又は酢酸メチル；エーテル溶媒、例えば、１，２−ジメトキシエタン又はメチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル；アルコール溶媒、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール又はイソプロパノール；極性溶媒、例えば、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシド、が挙げられる。
【００１４】
[0014]本明細書で使用される場合、「結晶」とは、化合物（Ｉ）の塩の結晶又は化合物（Ｉ）の結晶を指す。したがって、化合物（Ｉ）のアンモニウム塩の結晶とは、例えば、化合物（Ｉ）とアンモニア（又は水酸化アンモニア）との間で形成された塩の結晶を意味する。加えて、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶とは、例えば、化合物（Ｉ）の１分子とアンモニア（又は水酸化アンモニア）の２分子との間で形成された塩の結晶を意味する。
【００１５】
[0015]本明細書において好ましい結晶の例としては：
（ａ１）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）８．３°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形１）；
（ａ２）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）８．３°及び１６．６°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形１）；
（ａ３）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．４°、８．３°及び１６．６°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形１）；
（ａ４）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．４°、８．３°、１２．７°、１６．６°及び２５．４°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形１）；
（ａ５）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．４°、８．３°、１２．７°、１６．６°、２２．１°、２２．８°及び２５．４°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形１）；
（ａ６）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．４°、８．３°、１２．７°、１４．６°、１６．６°、１８．１°、２２．１°、２２．８°、２４．４°及び２５．４°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形１）；
（ｂ１）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．０°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形２）；
（ｂ２）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．０°及び１５．４°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形２）；
（ｂ３）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．０°、１５．４°及び２０．８°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形２）；
（ｂ４）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．０°、１５．４°、２０．８°、２４．０°及び３０．０°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形２）；
（ｂ５）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．０°、１１．８°、１５．４°、２０．８°、２４．０°、３０．０°及び３１．１°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形２）；
（ｂ６）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）７．０°、９．０°、１１．８°、１３．２°、１５．４°、１９．７°、２０．８°、２４．０°、３０．０°及び３１．１°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形２）；
（ｃ１）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）７．４°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形３）；
（ｃ２）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）７．４°及び１６．０°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形３）；
（ｃ３）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）７．４°、１６．０°及び２１．４°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形３）；
（ｃ４）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．０°、７．４°、９．３°、１６．０°及び２１．４°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形３）；
（ｃ５）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．０°、７．４°、９．３°、１２．６°、１６．０°、１６．６°及び２１．４°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形３）；
（ｃ６）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．０°、７．４°、９．３°、１２．６°、１６．０°、１６．６°、１８．１°、２１．４°、２２．０°及び２２．８°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形３）；
（ｄ１）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．７°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形４）；
（ｄ２）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．７°及び１４．０°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形４）；
（ｄ３）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．７°、１４．０°及び２６．９°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形４）；
（ｄ４）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．７°、１４．０°、１７．４°、２２．３°及び２６．９°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形４）；
（ｄ５）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）７．６°、９．７°、１４．０°、１７．４°、２２．３°、２４．６°及び２６．９°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形４）；
（ｄ６）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）５．９°、７．６°、９．７°、１１．６°、１４．０°、１６．０°、１７．４°、２２．３°、２４．６°及び２６．９°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形４）；
（ｅ１）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）２０．０°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形５）；
（ｅ２）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）２０．０°及び２３．６°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形５）；
（ｅ３）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１０．９°、２０．０°、及び２３．６°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形５）；
（ｅ４）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１０．９°、１７．７°、１８．９°、２０．０°及び２３．６°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形５）；
（ｅ５）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１０．９°、１３．０°、１７．７°、１８．９°、２０．０°、２１．５°及び２３．６°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形５）；
（ｅ６）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）９．０°、９．６°、１０．９°、１３．０°、１５．３°、１７．７°、１８．９°、２０．０°、２１．５°及び２３．６°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形５）；
（ｆ１）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１７．０°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のモノアンモニウム塩の結晶（結晶形６）；
（ｆ２）、粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１７．０°及び２５．９°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のモノアンモニウム塩の結晶（結晶形６）；
（ｆ３）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１７．０°、２１．６°及び２５．９°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のモノアンモニウム塩の結晶（結晶形６）；
（ｆ４）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１５．１°、１６．４°、１７．０°、２１．６°及び２５．９°に回折を有する、化合物（Ｉ）のモノアンモニウム塩の結晶（結晶形６）；
（ｆ５）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）１２．０°、１５．１°、１６．４°、１７．０°、２１．６°、２２．８°及び２５．９°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のモノアンモニウム塩の結晶（結晶形６）；
（ｆ６）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．９°、８．５°、１２．０°、１５．１°、１６．４°、１７．０°、２１．０°、２１．６°、２２．８°及び２５．９°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のモノアンモニウム塩の結晶（結晶形６）；
（ｇ１）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．１°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のナトリウム塩の結晶；
（ｇ２）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．１°及び１６．６°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のナトリウム塩の結晶；
（ｇ３）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．１°、９．３°及び１６．６°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のナトリウム塩の結晶；
（ｇ４）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．１°、９．３°、１５．９°、１６．６°及び２２．３°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のナトリウム塩の結晶；
（ｇ５）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．１°、９．３°、１３．４°、１５．９°、１６．６°、２０．６°及び２２．３°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のナトリウム塩の結晶；
（ｇ６）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）６．１°、９．３°、１３．４°、１４．８°、１５．９°、１６．６°、２０．６°、２２．３°、２３．５°及び２４．４°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）のナトリウム塩の結晶；
（ｈ１）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）５．６°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）の結晶；
（ｈ２）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）５．６°及び１３．９°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）の結晶；
（ｈ３）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）５．６°、１３．９°及び１６．８°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）の結晶；
（ｈ４）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）５．６°、８．９°、１１．４°、１３．９°及び１６．８°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）の結晶；及び
（ｈ５）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．２°）５．６°、７．９°、８．９°、１１．４°、１３．９°、１６．８°、２２．１°及び２３．１°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）の結晶。
【００１６】
[0016]上記の粉末Ｘ線回折法におけるピークは、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形１）、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形２）、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形３）、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形４）、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形５）、化合物（Ｉ）のモノアンモニウム塩の結晶（結晶形６）、化合物（Ｉ）のナトリウム塩の結晶及び化合物（Ｉ）の結晶のそれぞれ毎に特徴的である。
【００１７】
[0017]一般に、粉末Ｘ線回折では±０．２°の範囲内で回折角（２θ）の誤差が発生する可能性があり、したがって、上記の回折角の値はおおよそ±０．２°の範囲内の数値も含むものと考える必要がある。したがって、粉末Ｘ線回折において回折角が完全に同じピークを有する結晶だけではなく、回折角がおおよそ±０．２°の誤差の範囲内のピークを有する結晶も、本発明に含まれる。よって、本明細書で使用される場合、「回折角（２θ±０．２°）８．３°に回折ピークを有する」とはつまり、例えば、「回折角（２θ）８．１°〜８．５°に回折ピークを有する」ということである。その他の回折角についても同様である。
【００１８】
[0018]一般に、粉末Ｘ線回折における回折角（２θ）のピーク強度及び半値幅は、結晶形態が同じあっても、測定条件の違い及び粉末結晶の各粒子の大きさや形状のばらつきにより各測定で異なり、必ずしも一定であるとは限らない。それゆえ、粉末Ｘ線回折パターンを比較する場合には、回折角（２θ）は同じであるが、ピーク強度、相対ピーク強度及び半値幅が違う場合、その違いは、測定した結晶形態が互いに異なることを含意するものではない。したがって、本発明の塩のある特定の結晶に特徴的な回折ピークに関連して、上述の違いを有する粉末Ｘ線回折パターンの塩の結晶とはつまり、当該結晶は本発明の塩の結晶と同一の結晶形態を有するということである。
【００１９】
[0019]本明細書で使用される場合、「図３に示す粉末Ｘ線回折パターンと実質的に同じ粉末Ｘ線回折パターンを有する」とはつまり、このことは、図３に示すのと完全に同じ粉末Ｘ線回折パターンを有する場合だけではなく、ピーク強度、相対ピーク強度及び半値幅が違う場合も、又は回折角がおおよそ±０．２°の誤差範囲内の特徴的ピークを有する場合も含まれるということである。したがって、かかる粉末Ｘ線回折パターンを有するあらゆる結晶はつまり、当該結晶は本発明の結晶と同一であるということである。
【００２０】
[0020]以下に、化合物（Ｉ）の塩及びその結晶を製造する方法について詳細に説明する。
【００２１】
[0021]（化合物（Ｉ）の製造）
化合物（Ｉ）は、下の製造実施例１又は製造実施例２において詳細に記載の通り合成することができる。
【００２２】
[0022]（化合物（Ｉ）の塩を製造する方法）
化合物（Ｉ）の塩は、塩を製造する従来の方法によって得ることができる。詳細には、化合物（Ｉ）の塩は、例えば、必要に応じて加熱しながら溶媒に化合物（Ｉ）を懸濁又は溶解することによって、次いで、得られた懸濁液又は溶液に塩基（例えば、ナトリウム塩については水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム；一又はジアンモニウム塩についてはエタノール中のアンモニア及び水酸化アンモニウム）を添加することによって、そして、結果として生じる懸濁液又は溶液を室温で又は氷浴冷却で数分〜数日の間、撹拌又は放置することによって、製造することができる。化合物（Ｉ）の塩は、この製造方法によって、結晶又は非結晶物質として得ることが可能である。これらの方法で使用される溶媒の例としては、アルコール溶媒、例えば、エタノール、１−プロパノール及びイソプロパノール；アセトニトリル；ケトン溶媒、例えば、アセトン及び２−ブタノン；エステル溶媒、例えば、酢酸エチル；飽和炭化水素溶媒、例えば、ヘキサン及びヘプタン；エーテル溶媒、例えば、ｔ−ブチルメチルエーテル、又は水が挙げられる。これら溶媒はそれぞれ、単独で使用してもよく、又は２種以上を混合し使用してもよい。
【００２３】
[0023]（化合物（Ｉ）の塩の結晶を製造する方法）
化合物（Ｉ）の塩の結晶は、化合物（Ｉ）の塩を製造する上記の方法によって、又は、溶媒に化合物（Ｉ）の塩を加熱溶解し、撹拌しながら冷却してこれを結晶化させることによって、製造することができる。
【００２４】
[0024]結晶化において使用される化合物（Ｉ）の塩は、任意の形態であってもよい：化合物（Ｉ）の塩は、溶媒和物、水和物、無水物、非晶質物質、結晶性物質（複数の結晶多形体からなるものを含む）又はそれらの組合わせとすることができる。
【００２５】
[0025]結晶化において使用される溶媒の例としては、アルコール溶媒、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール及び１−プロパノール；アセトニトリル；アミド溶媒、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；エステル溶媒、例えば、酢酸エチル；飽和炭化水素溶媒、例えば、ヘキサン及びヘプタン；ケトン溶媒、例えば、アセトン及び２−ブタノン；エーテル溶媒、例えば、ｔ−ブチルメチルエーテル、又は水が挙げられる。さらに、これらの溶媒それぞれは、単独で使用してもよく、又は２種以上を混合し使用してもよい。
【００２６】
[0026]使用される溶媒の量は適切に選択することができるが、ただし、下限は、化合物（Ｉ）の遊離形態若しくはその塩が加熱で溶解する量又は懸濁液を撹拌することができる量であり、上限は、結晶の収率が有意に低下しない量である。
【００２７】
[0027]種結晶（例えば、化合物（Ｉ）の所望の塩の結晶）については、結晶化中に添加しても、添加しなくてもよい。種結晶を添加する温度は特に限定されないが、０〜８０℃が好ましい。
【００２８】
[0028]化合物（Ｉ）の塩が加熱で溶解する場合に用いられる温度として、化合物（Ｉ）が溶解する温度を溶媒に応じて適切に選択することができるが、この温度は再結晶溶媒が還流し始める温度と５０℃との間の範囲内であることが好ましく、６５〜５５℃がより好ましい。
【００２９】
[0029]結晶化の過程で冷却することによって、急冷の場合では、様々な形態の結晶（多形体）を含有する物質が得られる可能性がある。したがって、結晶の品質、粒度等への冷却速度の影響を考慮し、適宜冷却速度を制御しながら冷却を実施することが望ましい。例えば、４０〜５℃／時間の冷却速度で冷却することが好ましい。例えば、２５〜５℃／時間の冷却速度で冷却するのがより好ましい。
【００３０】
[0030]さらに、最終的な結晶化温度は、結晶の収率、品質等に対して適切に選択することができるが、３０〜−２５℃であることが好ましい。
【００３１】
[0031]目的の結晶は、形成された結晶を従来のろ過手順を通じて分離し、必要に応じて溶媒でろ別した結晶を洗浄し、さらにそれを乾燥させることによって得ることができる。結晶を洗浄するのに使用される溶媒としては、結晶化の際と同じ溶媒を使用することができる。さらに、これらの溶媒それぞれは、単独で使用してもよく、又は２種以上を混合し使用してもよい。溶媒は、例えば、アセトン、２−ブタノン、酢酸エチル、ｔ−ブチルメチルエーテル、ヘキサン、又はヘキサン／２−ブタノンの混合溶媒であることが好ましい。
【００３２】
[0032]ろ過手順を通じて分離された結晶は、空気中に若しくは窒素流中にこれを放置することによって、又は加熱することによって、適切に乾燥させることができる。
【００３３】
[0033]乾燥時間としては、残留溶媒の量が所定の量未満になるまでの時間を、生産量、乾燥装置、乾燥温度等に応じて、適宜選択することができる。さらに、乾燥は、気流中又は減圧下で実施することができる。減圧の程度は、生産量、乾燥装置、乾燥温度等に応じて適宜選択することができる。得られた結晶は、乾燥後、求めるところにより、空気中に放置してもよい。
【００３４】
[0034]（化合物（Ｉ）の結晶を製造する方法）
化合物（Ｉ）の結晶は、上に示した通り、結晶を製造する従来の方法により得ることができる。
【００３５】
[0035]本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される添加剤を化合物（Ｉ）の塩又はその結晶と混合することによって調製することができるであろう。本発明の医薬組成物は、日本薬局方第１７版の製剤総則に記載の方法などの、既知の方法に準拠して調製することができるであろう。
【００３６】
[0036]本発明の医薬組成物は、剤形に適切に応じて患者に投与することができるであろう。
【００３７】
[0037]化合物（Ｉ）の塩又はその結晶はＳＴＩＮＧ経路を強力に活性化し、且つ、強力な抗腫瘍活性を示すことができるので、本発明の医薬組成物は、がんを処置するための治療剤として適用性を有する。がんの例としては、神経膠腫、黒色腫及び結腸がんが挙げられる。
【００３８】
[0038]化合物（Ｉ）の塩又はその結晶の投与量は、症状の程度、年齢、性別、体重、剤形、塩のタイプ、疾患の特定のタイプ等に応じて変動する。成人の場合、典型的には、それぞれの場合で、単回投与で又は分割投与で、１日当たり約３０μｇ〜１０ｇ、好ましくは１００μｇ〜５ｇ、より好ましくは１００μｇ〜１ｇが経口投与され、又は、１日当たり約３０μｇ〜１ｇ、好ましくは１００μｇ〜５００ｍｇ、より好ましくは１００μｇ〜３００ｍｇが注射によって投与される。
【実施例】
【００３９】
[0039]以下に、本発明を製造実施例及び実施例で詳細に説明する。しかし、本発明がこれらの実施例によって限定されることを意図するものではない。
【００４０】
[0040]以下の略語を、実施例全体を通じて使用することができる。
ＤＭＴ：４，４’−ジメトキシトリチル
（ＤＭＴＯ−：
【化３】
0006767589.tif 000004
Ｂｚ：ベンゾイル
ＣＥ：シアノエチル
【化４】
0006767589.tif 000005
ＤＥＡＤ：アゾジカルボン酸ジエチル
ＤＩＡＤ：アゾジカルボン酸ジイソプロピル
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＤＴＴ：Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ’−（３−チオキソ−３Ｈ−１，２，４−ジチアゾール−５−イル）ホルムイミドアミド
【化５】
0006767589.tif 000006
ＤＭＯＣＰ：２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３，２−ジオキサホスフィナン２−オキシド
【化６】
0006767589.tif 000007
ＴＢＳ：ｔ−ブチルジメチルシリル
３Ｈ−ベンゾ［ｃ］［１，２］ジチオール−３−オン：
【化７】
0006767589.tif 000008
ＭＴＢＥ：メチルｔ−ブチルエーテル
【００４１】
[0041]粉末Ｘ線回折
各結晶試料を粉末Ｘ線回折計の試料台に置き、以下の条件のうちの１つの下で分析を行った。
透過法の条件
装置：Ｘ’Ｐｅｒｔ  Ｐｒｏ  ＭＲＤ又はＥｍｐｙｒｅａｎ（Ｓｐｅｃｔｒｉｓ）
Ｘ線源：ＣｕＫα（４５ｋＶ、４０ｍＡ）
光学系：集束鏡
ソーラースリット：０．０２又は０．０４ラジアン
検出器：Ｘ’Ｃｅｌｅｒａｔｏｒ又はＰＩＸｃｅｌ１Ｄ検出器（半導体検出システム）
モード：透過
スキャン範囲：３°又は５°〜３５°又は４０°
ステップサイズ：０．０１３、０．０１７°又は０．０３３°
スキャンステップ時間：９、１９、３０５、１９７６、又は２０００秒
試料ホルダー：カプトン（Ｋａｐｔｏｎ）（登録商標）フィルム
【００４２】
[0042]反射法の条件
装置：ＲＩＮＴ  ＴＴＲ−ＩＩＩ（Ｒｉｇａｋｕ）
Ｘ線源：ＣｕＫα（５０ｋＶ、３００ｍＡ）
検出器：シンチレーションカウンター
モード：反射
スリット：０．５ｍｍ（発散スリット）、オープン（散乱スリット）、オープン（受光スリット）
スキャン速度：５°又は１０°／分
サンプリング間隔：０．０２°
スキャン範囲：３°又は５°〜３５°
試料ホルダー：アルミニウムホルダー
【００４３】
[0043]１Ｈ  ＮＭＲ：プロトン核磁気共鳴
結合定数をヘルツ（Ｈｚ）で記録する。分裂パターンの略語は以下の通りである：
ｓ：一重線、ｄ：二重線、ｔ：三重線、ｑ：四重線、ｍ：多重線、ｂｓ：広い一重線、ｂｒ  ｓ：広い一重線、ｄｄ：二重線の二重線、ｄｔ：三重線の二重線、ｂｒ  ｄ：広い二重線、ｂｒ  ｔ：広い三重線
特に明記しない限り、１Ｈ  ＮＭＲスペクトルはＢｒｕｋｅｒ  ３００ＭＨｚ又は４００ＭＨｚ  ＮＭＲで取り込んだ。
【００４４】
[0044]吸湿性
得られた結晶を試料カップに秤量し、試料カップを２５℃で等温チャンバー内部に置いた。相対湿度（ＲＨ）を、重量水蒸気吸着システムを使用して０％〜９５％に制御し、各ＲＨ段階での試料の重量を所定の時間間隔内で（例えば、２分毎）測定した。各ＲＨ段階での重量変化を段階的に評価し、次いで、次の基準の下で最終的に決定した。各測定で最大重量変化は、５分間で０．０１％（ｗ／ｗ）未満又は１分間で０．００２％（ｗ／ｗ）未満である。
【００４５】
[0045]製造実施例１：化合物（Ｉ）の合成
ステップＡ
【化８】
0006767589.tif 000009
ＴＨＦ（１．１Ｌ）中に、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−ベンズアミド−９Ｈ−プリン−９−イル）−２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）−４−フルオロテトラヒドロフラン−３−イル（２−シアノエチル）ジイソプロピルホスホロアミダイト（化合物（１））（リンのジアステレオマーの混合物；８０．０ｇ、９１．３３２ｍｍｏｌ、１ｅｑ．、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  カタログ＃ＡＮＰ−９１５１）と、アリルアルコール（９．６３ｍｌ、１４２ｍｍｏｌ、１．５５ｅｑ）と、トリフェニルホスフィン（３８．３ｇ、１４６ｍｍｏｌ、１．６０ｅｑ．）とを含む混合物に、ＤＥＡＤ（トルエン中の４０ｗｔ％溶液；５４．２ｍｌ、１３７ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ．）を、周囲温度で添加した。周囲温度で撹拌を続け、反応をＬＣ／ＭＳで監視した。完了次第（１９時間）、混合物を真空で濃縮し（３５℃）、結果として生じる混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（８００ｇ×２カラム、０．５％トリエチルアミンで緩衝化したｎ−ヘプタン中の４０〜６０％ＥｔＯＡｃ）で精製して、白色の泡状物として化合物（２）を得た（８４．２ｇ、定量的収率、リンのジアステレオマーの混合物）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３：２  リンのジアステレオマーの混合物，４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．１４〜１．２１（ｍ，１２Ｈ）、２．４０（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１．２Ｈ）、２．５９（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，０．８Ｈ）、３．２７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．５２〜３．６６（ｍ，５Ｈ）、３．７８（ｓ  ２．４Ｈ）、３．７９（ｓ  ３．６Ｈ）、４．２８〜４．３４（ｍ，１Ｈ）、４．８４〜４．９６（ｍ，０．４Ｈ）、４．９９（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ）、４．９５〜５．１０（ｍ，０．６Ｈ）、５．０５（ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ）、５．２２（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．６４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝５３．２Ｈｚ，０．６Ｈ）、５．７０（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝５１．６Ｈｚ，０．４Ｈ）、５．９６〜６．７５（ｍ，１Ｈ）、６．２０（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，０．６Ｈ）、６．２４（ｄ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ，０．４Ｈ）、６．７４〜６．７９（ｍ，４Ｈ）、７．０２〜７．０６（ｍ，２Ｈ）、７．１７〜７．２４（ｍ，８Ｈ）、７．３２〜７．３４（ｍ，２Ｈ）、７．４１〜７．４４（ｍ，２Ｈ）、８．１１（ｓ，１Ｈ）、８．５２（ｓ，０．４Ｈ）、８．５４（ｓ，０．６Ｈ）。
【００４６】
[0046]ステップＢ
【化９】
0006767589.tif 000010
アセトニトリル（３０ｍｌ）中に化合物（２）（３．００ｇ、３．２８ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）を含む溶液に、水（０．１１８ｍｌ、６．５５ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ．）及びピリジントリフルオロ酢酸塩（０．７５９ｇ、３．９３ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）を添加した。周囲温度で１分間撹拌した後、ｔｅｒｔ−ブチルアミン（１４．５ｇ、２１．０ｍｌ、０．２０ｍｏｌ、６０ｅｑ．）を添加した。シアノエチル基の開裂が完了次第（ＬＣ／ＭＳで監視）、反応混合物を真空で濃縮し、アセトニトリルと２回共沸した。粗混合物をＤＣＭ（４５．０ｍｌ）に溶解し、水（０．１１８ｍｌ、６．５５ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ．）及びＮａＨＳＯ４−ＳｉＯ２（１．１８ｇ、６．５５ｍｍｏｌ、２ｅｑ．）で周囲温度で処理した。ＤＭＴ基の開裂が完了次第（ＬＣ／ＭＳで監視、おおよそ１時間）、反応混合物をろ過し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９／１、２０ｍｌ）で２回すすいだ。合わせたろ液を真空で濃縮し、ｎ−ヘプタン／トルエン１：１混合物（およそ３０ｍｌ）で処理した。最上層をデカンテーションにより除去した。同じ操作をｎ−ヘプタン／トルエン（１／１、３０ｍｌ）でもう１回繰り返し、下層をアセトニトリルと２回共沸して、化合物（３）を得た（理論収率１００％を想定）。生成物をさらに精製することなく次のステップで使用した。
【００４７】
[0047]ステップＣ
【化１０】
0006767589.tif 000011
アセトニトリル（３０ｍｌ）中に、化合物（３）（１．５６ｇ、３．２７ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）と化合物（１）（３．００ｇ、３．２８ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）とを含む混合物に、ピリジントリフルオロ酢酸塩（ピリジンと共沸乾燥；０．７６０ｇ、３．９４ｍｍｏｌ、１．２５ｅｑ．）を添加した。５分後、ＤＤＴＴ（０．８４０ｇ、４．０９ｍｍｏｌ、１．３０ｅｑ．、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  カタログ＃ＲＮ−１５８８）を添加し、硫化が完了次第（ＬＣ／ＭＳで監視）、反応混合物を真空で濃縮した。残渣をＤＣＭ（３０ｍｌ）に溶解し、水（０．５７ｍｌ、３２ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）及びＤＣＭ（３０ｍｌ）中の６％ジクロロ酢酸（１．５６ｍｌ、１８．９ｍｍｏｌ、６．０ｅｑ．）で処理した。２０分後、ピリジン（２０ｍｌ）で反応をクエンチし、真空で濃縮した。残渣をピリジンと共沸し、化合物（４）を得た（３．２２ｇ、理論収率１００％を想定）。生成物をさらに精製することなく次のステップで使用した。
【００４８】
[0048]ステップＤ
【化１１】
0006767589.tif 000012
ピリジン（１００ｍｌ）中に化合物（４）（３．２２ｇ、３．１５ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）を含む溶液に、ＤＭＯＣＰ（１．４５ｇ、７．８８ｍｍｏｌ、２．５０ｅｑ．）を周囲温度で添加した。大環状化が完了次第（ＬＣ／ＭＳで監視）、水（１．７ｍｌ、９４．５ｍｍｏｌ、ＤＭＯＣＰに対して×１０倍）を、続いて、３Ｈ−ベンゾ［ｃ］［１，２］ジチオール−３−オン（０．７９５ｇ、４．７３ミリｍｍｏｌ、１．５ｅｑ．）を添加した。硫化が完了次第（おおよそ４０分）、反応混合物を真空でおおよそ１５ｍｌに部分的に濃縮し、飽和水性ＮａＨＣＯ３（５０ｍｌ）と水（３０ｍｌ）との混合物に注いだ。周囲温度で１０分撹拌した後、混合物をＥｔＯＡｃ／ＭＴＢＥ１：１混合物で抽出した（６０ｍｌ×３回）。有機層を合わせ、ブライン（２５ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、真空で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜２０％ＭｅＯＨ）で精製し、茶色の油状物として化合物（５）を得た（３．３１ｇ、３．２０ｍｍｏｌ、理論収率１００％を想定）。生成物をさらに精製することなく次のステップで使用した。
【００４９】
[0049]ステップＥ
【化１２】
0006767589.tif 000013
アセトニトリル（６６．２ｍｌ）中に化合物（５）（３．３１ｇ、３．２０ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）を含む溶液に、２−ニトロベンジルブロミド（２．４２ｇ、１１．２ｍｍｏｌ、３．５０ｅｑ．）及びトリエチルアミン（１．７８ｍｌ、１２．８ｍｍｏｌ、４．００ｅｑ．）を添加した。反応が完了次第（ＬＣ／ＭＳで監視、周囲温度でおおよそ２０時間）、反応混合物を真空で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（６０％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン〜１００％酢酸エチル）で精製してリンのジアステレオマーの混合物として生成物０．５６８ｇを得た。ジアステレオマーの分取ＨＰＬＣ分離により、化合物（６）（ＳＲ異性体；０．２２５ｇ、０．１８０ｍｍｏｌ、化合物（２）からの全収率５．６％）及び化合物（７）（ＲＲ異性体；０．１８７ｇ、０．１４９ｍｍｏｌ、化合物（２）からの全収率４．７％）を得た。
化合物（６）（ＳｐＲｐ）１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：８．６３（ｓ，１Ｈ）、８．６１（ｓ，１Ｈ）、８．０４〜８．００（ｍ，２Ｈ）、７．９９（ｓ，１Ｈ）、７．９０（ｓ，１Ｈ）、７．６５〜７．４４（ｍ，８Ｈ）、７．４０〜７．３１（ｍ，４Ｈ）、７．２５〜７．２１（ｍ，４Ｈ）、６．１５〜５．８９（ｍ，５Ｈ）、５．６１（ｄｄ，Ｊ＝５２．０，５．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．５５（ｄｄｄ，Ｊ＝５１．２，４．７，２．７Ｈｚ，１Ｈ）、５．５１〜５．４２（ｍ，１Ｈ）、５．３１〜５．２２（ｍ，２Ｈ）、５．１１（ｄｄ，Ｊ＝３．９，９．８Ｈｚ，２Ｈ）、５．０４〜４．９５（ｍ，４Ｈ）、４．５５〜４．３７（ｍ，７Ｈ）、４．２９〜４．１２（ｍ，３Ｈ）。
化合物（７）（ＲｐＲｐ）１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：８．６５（ｓ，２Ｈ）、８．０６（ｄｄ，Ｊ＝１．４，８．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．９８（ｓ，２Ｈ）、７．５７〜７．５２（ｍ，６Ｈ）、７．４７〜７．３２（ｍ，６Ｈ）、７．２５〜７．２１（ｍ，４Ｈ）、６．１５（ｄ，Ｊ＝１８．７Ｈｚ，２Ｈ）、６．０９〜５．９９（ｍ，２Ｈ）、５．８２〜５．７６（ｍ，２Ｈ）、５．６０（ｄｄ，Ｊ＝５１．８，４．９Ｈｚ，２Ｈ）、５．２７（ｄｄ，Ｊ＝１．２，１７．２Ｈｚ，２Ｈ）、５．１２（ｄｄ，Ｊ＝１．０，１０．４Ｈｚ，２Ｈ）、５．０６〜４．９６（ｍ，４Ｈ）、４．５５〜４．４０（ｍ，４Ｈ）、４．３６〜４．２４（ｍ，４Ｈ）、４．２１〜４．０２（ｍ，２Ｈ）。
【００５０】
[0050]
【表１】
0006767589.tif 000014
【００５１】
[0051]ステップＦ
【化１３】
0006767589.tif 000015
トルエン（５１９ｍｌ）中に化合物（６）（５１９ｍｇ、０．４１４ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）を含む加熱（９０℃）溶液に、ホベイダ−グラブス触媒（Ｈｏｖｅｙｄａ−Ｇｒｕｂｂｓ  Ｃａｔａｌｙｓｔ）（商標）第２世代（（１，３−Ｂｉｓ−（２，４，６−トリメチルフェニル）−２−イミダゾリジニリデン）ジクロロ（ｏ−イソプロポキシフェニルメチレン）ルテニウム；シグマ−アルドリッチ（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＴＣＨ）（登録商標）カタログＮｏ．５６９７５５で入手可能；ＣＡＳ  ３０１２２４−４０−８；９１ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、０．３５ｅｑ．）及びキノン（０．１０２ｍｌ、１．２４３ｍｍｏｌ、３．０ｅｑ．）を添加した。混合物を加熱還流し、反応の進行をＬＣ／ＭＳで監視した。３時間後、さらなる触媒を添加し（９１ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、０．３５ｅｑ．）、反応をさらに３時間続けた。冷却後、混合物をＤＭＳＯ（０．５９ｍｌ、８．３ｍｍｏｌ、２０ｅｑ．）で周囲温度で１５時間処理し、真空で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２  ２５ｇ、ｎ−ヘプタン中６６％酢酸エチル〜１００％酢酸エチル）で精製して、茶色の乾燥泡状物として化合物（８）を得た（２００ｍｇ、０．１６３ｍｍｏｌ、収率３９％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：８．１９（ｓ，１Ｈ）、８．１２（ｄｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１．９Ｈｚ，１Ｈ）、８．１０（ｓ，１Ｈ）、８．０２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．８９（ｓ，１Ｈ）、７．６３（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．５３〜７．４１（ｍ，１０Ｈ）、７．３５〜７．３０（ｍ，２Ｈ）、７．２５〜７．２０（ｍ，４Ｈ）、６．２３（ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．１４（ｄ，Ｊ＝１８．８Ｈｚ，１Ｈ）、５．８６〜５．７５（ｍ，１Ｈ）、５．７５（ｄｔ，Ｊ＝１５．３，５．０Ｈｚ，１Ｈ）、５．６７（ｄｔ，Ｊ＝１５．３，４．７Ｈｚ，１Ｈ）、５．６０（ｄｄ，Ｊ＝５２．０，３．９Ｈｚ．１Ｈ）、５．４８（ｄｄ，Ｊ＝５０．４，３．９Ｈｚ．１Ｈ）、５．５０〜５．３９（ｍ，１Ｈ）、４．９１〜４．６４（ｍ，４Ｈ）、４．５７〜４．２５（ｍ，９Ｈ）、４．１５（ｄ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ，１Ｈ）、４．１１（ｄ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ，１Ｈ）。
【００５２】
[0052]ステップＧ
【化１４】
0006767589.tif 000016
１，４−ジオキサン（１．７６ｍｌ）中に化合物（８）（８８ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）を含む溶液に、チオフェノール（０．８８ｍＬ、８．５５ｍｍｏｌ、１１９ｅｑ．）及びトリエチルアミン（０．８８ｍＬ、６．３１ｍｍｏｌ、８８ｅｑ）を添加した。その結果得られる混合物を周囲温度で撹拌した。反応が完了次第（ＬＣ／ＭＳで監視、１３時間）、メタノール（５．２８ｍｌ）及び２８％水酸化アンモニウム（３．５２ｍｌ）を添加し、結果として生じる混合物を５０℃に加熱した。反応が完了次第（ＬＣ／ＭＳで監視、５時間）、混合物を周囲温度に冷却し、結果として生じる茶色がかったスラリーをろ過し、水（１５ｍｌ）ですすいだ。ろ液を再度ろ過して、さらなる固形物を除去した。最終的なろ液を、トルエンとｎ−ヘプタンとの１：１混合物（３０ｍｌ）で２回抽出した。水層を真空で濃縮し、次いで、水（６ｍｌ）に再懸濁した。その結果得られる固形物をろ別し、ろ液を分取ＨＰＬＣに供して、白色の固形物として化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩（化合物（１ａ）とも呼ばれる）（３９ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ、収率７０％）を得た。
化合物（１ａ）（ＳｏＲｐ、ｔｒａｎｓ）１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：９．０５（ｓ，１Ｈ）、８．３３（ｓ，１Ｈ）、８．２５（ｓ，１Ｈ）、８．１２（ｓ，１Ｈ）、６．３４（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、５．８８（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、５．６６（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝５１．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．５９（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝５２．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．０１（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、４．６８〜４．３４（ｍ，６Ｈ）、４．０７〜３．８２（ｍ，２Ｈ）、３．７９〜３．５５（ｍ，２Ｈ）；
３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：５５．４８（ｓ，１Ｐ）、５５．１６（ｓ，１Ｐ）。
【００５３】
[0053]
【表２】
0006767589.tif 000017
【００５４】
[0054]製造実施例２：（化合物（１ａ）の代替合成）
段階１
【化１５】
0006767589.tif 000018
化合物（２０１）（５７０ｇ、１．５３ｍｏｌ、１ｗｔ、１ｖｏｌ、１ｅｑ．）をピリジン（２．８５Ｌ、３５．２ｍｏｌ、４．８９ｗｔ、５．０ｖｏｌｓ、２３ｅｑ．）に溶解した。混合物を２．６℃に冷却し、４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（ＤＭＴＣｌ；５４３ｇ、１．６０ｍｏｌ、０．９５３ｗｔ、１．０５ｅｑ．）で処理した。混合物を０〜５℃で２時間撹拌し、次いで、周囲温度に温めた。反応をＬＣ／ＭＳで監視し、一晩撹拌した後、完全な転換を確認した。反応混合物を５℃未満に冷却し、ＭｅＯＨ（１２４ｍｌ、３．０５ｍｏｌ、０．１７２ｗｔ、０．２１７ｖｏｌ、２．０ｅｑ．）で１５分間処理することによりクエンチした。混合物をトルエン（２．００Ｌ、３．０４ｗｔ、３．５１ｖｏｌ）と真空下で同時蒸発させ、次いでＥｔＯＡｃ（２．８５０Ｌ、４．５ｗｔ、５．０ｖｏｌ）とｎ−ヘプタン（２．８５Ｌ、３．４２ｗｔ、５．０ｖｏｌ）との混合物で希釈した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３（９ｗｔ％水溶液；２．０Ｌ、３．５ｖｏｌ）で洗浄した。さらなるＥｔＯＡｃ（２．８５Ｌ、４．５ｗｔ、５．０ｖｏｌ）を添加して、粗生成物を完全に溶解した。５分間撹拌した後、２つの層が分離した。有機層を水（２．０Ｌ、３．５ｗｔ、３．５ｖｏｌ）で洗浄した。有機層から固形物がゆっくりと沈殿し始めた。水層を分離した。次いで、有機層をおおよそ１ｖｏｌに濃縮した。粗生成物を、ｎ−ヘプタン（２．００Ｌ、２．４０ｗｔ、３．５１ｖｏｌ）とトルエン（０．５０Ｌ、０．７６ｗｔ、０．８８ｖｏｌ）との混合物でスラリー化した。１５分間撹拌した後、淡黄色の固形物を真空ろ過により収集した。ろ過ケーキを：（１）ｎ−ヘプタン（０．６０Ｌ、０．７２ｗｔ、１．０５ｖｏｌ）とトルエン（０．３０Ｌ、０．４６ｗｔ、０．５３ｖｏｌ）との混合物、次いで、（２）ｎ−ヘプタン（３．００Ｌ、３．６ｗｔ、５．２６ｖｏｌ）、で連続的にすすいだ。固形物を加熱せずに３０分間乾燥させ、次いで５０℃で真空オーブン中で一晩乾燥させるためにトレイに移して、淡黄色固形物として化合物（２０２）を得た（９９６．７ｇ、１．４７ｍｏｌ、１．７５ｗｔ、収率９７％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ（ｐｐｍ）：８．９９（ｓ，１Ｈ）、８．７６（ｓ，１Ｈ）、８．２１（ｓ，１Ｈ）、８．０４〜８．００（ｍ，２Ｈ）、７．６４〜７．５９（ｍ，１Ｈ）、７．５７〜７．５０（ｍ，２Ｈ）、７．４１〜７．３６（ｍ，２Ｈ）、７．３２〜７．１５（ｍ，７Ｈ）、６．８３〜６．７６（ｍ，４Ｈ）、６．３１（ｄｄ，Ｊ＝２．５，１７．０Ｈｚ，１Ｈ）、５．６８（ｄｄｄ，Ｊ＝２．３，４．７，５２．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．８８〜４．７７（ｍ，１Ｈ）、４．２６〜４．２１（ｍ，１Ｈ）、３．７７（ｓ，６Ｈ）、３．５７（ｄｄ，Ｊ＝３．１，１０．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．４３（ｄｄ，Ｊ＝４．１，１０．７Ｈｚ，１Ｈ）、２．６０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）。
【００５５】
[0055]段階１’
【化１６】
0006767589.tif 000019
化合物（２０１）（４３０ｇ、１．１５ｍｏｌ、１ｗｔ、１ｖｏｌ、１ｅｑ．）及びイミダゾール（１１８ｇ、１．７３ｍｏｌ、０．２７４ｗｔ、１．５０ｅｑ．）をＤＭＦ（１．７２Ｌ、３．７８ｗｔ、４．０ｖｏｌ）に溶解し、結果として生じる混合物を５℃に冷却した。ＴＢＳ−Ｃｌ（１９１ｇ、１．２７ｍｏｌ、０．４４４ｗｔ、１．１０ｅｑ．）を添加した。混合物を０〜１１℃で２時間撹拌し、周囲温度にゆっくり温めた（ＬＣＭＳで進行を監視）。ＴＢＳ−Ｃｌを添加して６時間後に反応が完了したが、周囲温度でさらに２０時間撹拌した。混合物を２℃に冷却し、メタノール（９３ｍｌ、７４ｇ、２．３ｍｏｌ、０．１７ｗｔ、０．２２ｗｔ、２．０ｅｑ．）で１０分間処理した。反応混合物をＭＴＢＥ（１．７２Ｌ、１．２３ｋｇ、２．９６ｗｔ、４．０ｖｏｌ）とＥｔＯＡｃ（１．７２Ｌ、１．５５ｋｇ、３．６０ｗｔ、４．０ｖｏｌ）との混合物で、続いて、飽和ＮＨ４Ｃｌ（２８ｗｔ％水溶液；２．１５Ｌ、５．０ｖｏｌ）で、希釈した。固形物が溶液からゆっくりと落ち始めた。混合物を２４℃に温め、水（１．０８Ｌ、１．０８ｋｇ、２．５ｗｔ、２．５ｖｏｌ）を混合物（Ｔ内部＝２２℃）に添加した。より多くの固形物が混合物から沈殿し始めた。さらなる水（１．０８Ｌ、１．０８ｋｇ、２．５ｗｔ、２．５ｖｏｌ）及びＭＴＢＥ（１．４０Ｌ、１．０４ｋｇ、２．４ｗｔ、３．３ｖｏｌ）を混合物に添加した。オフホワイトの固形物を真空ろ過により収集した。反応器を水（３２０ｍｌ、０．７４ｖｏｌ）で、次いでＭＴＢＥ（１．８０Ｌ、１．３３ｋｇ、３．１０ｗｔ、４．１９ｖｏｌ）ですすいで、残っている任意の固形物をフィルターに移した。ろ過ケーキを：（１）水（１．８０Ｌ、１．８０ｋｇ、４．２ｗｔ、４．２ｖｏｌ）、（２）水（１．８０Ｌ、１．８０ｋｇ、４．２ｗｔ、４．２ｖｏｌ）、（３）ＭＴＢＥ（０．９０Ｌ、０．６７ｋｇ、１．５ｗｔ、２．１ｖｏｌ）とｎ−ヘプタン（０．９０Ｌ、０．６２ｋｇ、１．４ｗｔ、２．１ｖｏｌ）との混合物、（４）ＭＴＢＥ（０．９０Ｌ、０．６７ｋｇ、１．５ｗｔ、２．１ｖｏｌ）とｎ−ヘプタン（０．９０Ｌ、０．６２ｋｇ、１．４ｗｔ、２．１ｖｏｌ）との混合物、で連続的にすすいだ。回収した固形物を真空下で４０℃で２日かけて乾燥させて、白色固形物として化合物（２０３）を得た（４８３ｇ、０．９９１ｍｏｌ、１．１２ｗｔ、収率８６％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ（ｐｐｍ）：８．９７（ｓ，１Ｈ）、８．８２（ｓ，１Ｈ）、８．３６（ｓ，１Ｈ）、８．０４〜８．００（ｍ，２Ｈ）、７．６４〜７．５８（ｍ，１Ｈ）、７．５６〜７．５１（ｍ，２Ｈ）、６．４０（ｄｄ，Ｊ＝２．３，１６．０Ｈｚ，１Ｈ）、５．４５（ｄｄｄ，Ｊ＝２．７，４．３，５３．１Ｈｚ，１Ｈ）、４．７５〜４．６６（ｍ，１Ｈ）、４．２２〜４．１７（ｍ，１Ｈ）、４．０７（ｄｄ，Ｊ＝２．３，１１．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．９１（ｄｄ，Ｊ＝２．７，１１．７Ｈｚ，１Ｈ）、２．３８（ｄｄ，Ｊ＝２．７，７．０Ｈｚ，１Ｈ）、０．９２（ｓ，９Ｈ）、０．１１（ｓ，３Ｈ）、０．１１（ｓ，３Ｈ）。
【００５６】
[0056]段階２
【化１７】
0006767589.tif 000020
化合物（２０２）（９９３ｇ、１．４７ｍｏｌ、１ｗｔ、１ｖｏｌ、１ｅｑ．）及びイミダゾール（１５０ｇ、２．２０ｍｏｌ、０．１５１ｗｔ、１．５ｅｑ．）をＤＭＦ（３．４８Ｌ、３．２８ｋｇ、３．３ｗｔ、３．５ｖｏｌ）に溶解し、混合物を５℃に冷却した。ＴＢＳ−Ｃｌ（２４４ｇ、１．６２ｍｏｌ、０．２４５ｗｔ、１．１０ｅｑ．）を添加した。反応を０〜５℃で２時間撹拌し、周囲温度にゆっくり温め、ＬＣＭＳで監視した。１７時間後、さらなるイミダゾール（１００ｇ、１．４７ｍｏｌ、０．１０ｗｔ、１．０ｅｑ．）及びＴＢＳ−Ｃｌ（１１１ｇ、７３５ｍｍｏｌ、０．１１２ｗｔ、０．５０ｅｑ．）を添加し、周囲温度で２時間及び３５℃で２時間撹拌を続けた。その結果得られる混合物を１３．６℃に冷却し、ＭｅＯＨ（１１９ｍｌ、２．９４ｍｏｌ、２ｅｑ．）で１０分間処理した。別個の反応器に氷（５ｋｇ、５ｗｔ）及び飽和ＮＨ４Ｃｌ（２８ｗｔ％水溶液、５．０Ｌ、５ｖｏｌ）を添加した。反応混合物を氷／ＮＨ４Ｃｌ混合物に添加した。オフホワイトの固形物が即座に溶液から沈殿し始めた。さらなる２ｋｇの氷（２ｋｇ、２ｗｔ）及び水（３．０Ｌ、３ｖｏｌ）を混合物に添加した。反応フラスコを水（０．５０Ｌ、０．５ｖｏｌ）ですすぎ、すすぎ液を混合物に添加した。ｎ−ヘプタン（２．００Ｌ、２ｖｏｌ）を混合物に添加し、撹拌を１０分間続けた。オフホワイトの固形物を真空ろ過により収集した。ろ過ケーキを：（１）水（４．０Ｌ、４．０ｖｏｌ）、（２）水（４．０Ｌ、４．０ｖｏｌ）、（３）ｎ−ヘプタン（４．０Ｌ、４．０ｖｏｌ）、（４）ｎ−ヘプタン（４．０Ｌ、４．０ｖｏｌ）ですすいだ。回収固形物を真空下で４５℃で４日間乾燥させて、オフホワイトの固形物として化合物（２０４）を得た（１．０９５ｋｇ、１．３９ｍｏｌ、１．１０ｗｔ、収率９４％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ（ｐｐｍ）：９．０９（ｓ，１Ｈ）、８．７８（ｓ，１Ｈ）、８．２８（ｓ，１Ｈ）、８．０２（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、７．６３〜７．５９（ｍ，１Ｈ）、７．５５〜７．５０（ｍ，２Ｈ）、７．３７（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、７．２９〜７．１７（ｍ，７Ｈ）、６．７９（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，４Ｈ）、６．２９（ｄｄ，Ｊ＝２．９，１６．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．６０（ｄｄｄ，Ｊ＝２．７，３．９，５３．１Ｈｚ，１Ｈ）、４．７８（ｄｄｄ，Ｊ＝４．７，６．４，１５．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．２６〜４．２２（ｍ，１Ｈ）、３．７７（ｓ，６Ｈ）、３．５８（ｄｄ，Ｊ＝３．１，１０．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．２６（ｄｄ，Ｊ＝３．７，１０．７Ｈｚ，１Ｈ）、０．８５（ｓ，９Ｈ）、０．１０（ｓ，３Ｈ）、０．０２（ｓ，３Ｈ）。
【００５７】
[0057]段階３
【化１８】
0006767589.tif 000021
化合物（２０４）（１０００ｇ、１．２７ｍｏｌ、１ｗｔ、１ｖｏｌ、１ｅｑ．）及びｔｒａｎｓ−２−ブテン−１，４−ジオール（オレフィン幾何は１Ｈ−ＮＭＲで確認；３３５ｇ、３．８０ｍｏｌ、０．３３５ｗｔ、３．０ｅｑ．）をＴＨＦ（３．０Ｌ、３．０ｖｏｌ）と２回共沸した。残渣をＴＨＦ（１０Ｌ、１０ｖｏｌ）とトルエン（１５Ｌ、１５ｖｏｌ）との混合物に溶解した。トリフェニルホスフィン（４３２ｇ、１．６５ｍｏｌ、０．４３２ｗｔ、１．３ｅｑ．）を添加し、次いで、反応混合物を−５℃に冷却した。Ｔ−内部を５℃未満に保ちながら、ＤＩＡＤ（０．３２０Ｌ、１．６５ｍｏｌ、３３３ｇ、０．３３３ｗｔ、０．３２０ｖｏｌ、１．３ｅｑ．）を２０分かけてゆっくりと添加した。反応を０〜５℃で１時間撹拌し、ＬＣＭＳで監視した。氷浴を取り外し、混合物を室温に温めた。一晩撹拌した後（１７時間）、トリフェニルホスフィン（８３ｇ、０．３２ｍｏｌ、０．０８３ｗｔ、０．２５ｅｑ．）及びＤＩＡＤ（６２ｍｌ、０．３２ｍｏｌ、６４ｇ、０．０６４ｗｔ、０．０６２ｖｏｌ、０．２５ｅｑ．）を添加した。室温でさらに１時間後、反応混合物をＭＴＢＥ（１０Ｌ、１０ｖｏｌ）で希釈し、半飽和ＮａＣｌ（１８ｗｔ％水溶液；２×４Ｌ）で２回洗浄し、真空で濃厚な油状物に濃縮した。混合物をＭＴＢＥ（４．００Ｌ、４ｖｏｌ）とｎ−ヘプタン（０．５０Ｌ、０．５ｖｏｌ）との混合物に再溶解し、次いで０℃に冷却した。トリフェニルホスフィンオキシドの種結晶を溶液に添加した。溶液から固形物がゆっくりと沈殿し始め、一晩撹拌した。白色固形物を真空ろ過により収集し、ＭＴＢＥ（２Ｌ、２ｖｏｌ）ですすいで、トリフェニルホスフィンオキシド５４０ｇを分離した。ろ液を濃縮し、Ｂｉｏｔａｇｅ  １５０Ｌ  ＫＰ−Ｓｉｌ（ＳｉＯ２５ｋｇ；ヘプタン／ＥｔＯＡｃ中の１％ＴＥＡで前処理；溶離液：ｎ−ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（１％ＴＥＡを含む３３％ＥｔＯＡｃ４８Ｌ、１％ＴＥＡを含む５０％ＥｔＯＡｃ２４Ｌ、１％ＴＥＡを含む６６％ＥｔＯＡｃ２４Ｌ）→１％ＴＥＡを含む１００％ＥｔＯＡｃ）により精製した。カラムをＴＬＣ（２：１  ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘプタン）で監視した。清浄な生成物画分を合わせ、真空下で濃縮して、淡白色の泡状固形物として化合物（２０５）を得た（６３４ｇ、ＤＩＡＤ由来副生成物１４ｗｔ％を含有、正味５４５ｇ、０．６３ｍｏｌ、調整収率５０％）。混合物画分を合わせ、真空下で濃縮して淡黄色の泡状固形物を得（７５０ｇ）、これを、Ｂｉｏｔａｇｅ  １５０Ｍ  ＨＰ−Ｓｐｈｅｒｅ（ＳｉＯ２２．５ｋｇ；ヘプタン／ＥｔＯＡｃ中の１％ＴＥＡで前処理；トルエン溶離液で試料をロード：ｎ−ヘプタン／ＥｔＯＡｃ／１％ＴＥＡ（１％ＴＥＡを含む５０％ＥｔＯＡｃ１２Ｌ、１％ＴＥＡを含む６６％ＥｔＯＡｃ１６Ｌ）→１％ＴＥＡを含むＥｔＯＡｃ）により再精製に供した。カラムをＴＬＣ（２／１／０．０３  ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘプタン／ＴＥＡ）で監視した。清浄な生成物画分を合わせ、真空下で濃縮して、淡白色の泡状固形物としてさらなる化合物（２０５）を得た（２０６ｇ、０．２４ｍｏｌ、収率１８％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ（ｐｐｍ）：８．５８（ｓ，１Ｈ）、８．１０（ｓ，１Ｈ）、７．４３〜７．３７（ｍ，２Ｈ）、７．３２〜７．２８（ｍ，２Ｈ）、７．２４〜７．１５（ｍ，８Ｈ）、７．０３〜６．９８（ｍ，２Ｈ）、６．７８〜６．７３（ｍ，４Ｈ）、６．１８（ｄｄ，Ｊ＝２．７，１７．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．８８（ｔｄ，Ｊ＝５．５，１５．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．７７（ｔｄ，Ｊ＝５．１，１５．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．６０（ｄｄｄ，Ｊ＝２．７，４．３，５３．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．０３〜４．９６（ｍ，２Ｈ）、４．９１（ｄｄｄ，Ｊ＝４．５，６．６，１６．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．１８〜４．１４（ｍ，１Ｈ）、３．８８〜３．８２（ｍ，２Ｈ）、３．７８（ｓ，６Ｈ）、３．５２（ｄｄ，Ｊ＝２．７，１０．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．１４（ｄｄ，Ｊ＝３．５，１０．９Ｈｚ，１Ｈ）、０．８５（ｓ，９Ｈ）、０．１０（ｓ，３Ｈ）、０．０１（ｓ，３Ｈ）。
【００５８】
[0058]段階４
【化１９】
0006767589.tif 000022
化合物（２０５）（８００ｇ、０．９３０ｍｏｌ、１ｗｔ、１ｖｏｌ、１ｅｑ．）及び化合物（２０３）（５２２ｇ、１．０７ｍｏｌ、０．６５２ｗｔ、１．１５ｅｑ．）をＴＨＦ（２×３Ｌ、２×３．８ｖｏｌ）と共沸乾燥させ、ＴＨＦ（９．６０Ｌ、８．４５ｋｇ、１２．０ｖｏｌ）に室温で再溶解した。トリフェニルホスフィン（３１７ｇ、１．２１ｍｏｌ、０．３９６ｗｔ、１．３０ｅｑ．）を添加し、混合物を−５℃未満に冷却した。ＤＩＡＤ（２２６ｍｌ、１．１６ｍｏｌ、２３５ｇ、０．２９４ｗｔ、０．２８３ｖｏｌ、１．２５ｅｑ．）をＴ−内部７℃未満で添加した。反応をゆっくりと室温に温めた。反応をＬＣＭＳで監視した。２１時間後、反応混合物を真空で濃厚な油状物に濃縮し、ｎ−ヘプタン（２．００、１．３７ｋｇ、１．７１ｗｔ、２．５０ｖｏｌ）と共沸し、次いでＭＴＢＥ（２．４０Ｌ、１．７８ｋｇ、２．２ｗｔ、３．０ｖｏｌ）とｎ−ヘプタン（８００ｍｌ、５４７ｇ、０．６８ｗｔ、１．０ｖｏｌ）との混合物に再溶解した。溶液にトリフェニルホスフィンオキシドで種をまき、５℃に冷却し、ｎ−ヘプタン（４００ｍｌ、２７４ｇ、０．３４ｗｔ、０．５０ｖｏｌ）で希釈し、５℃で３０分間撹拌した。真空ろ過により白色固形物沈殿物を収集し、ＭＴＢＥとｎ−ヘプタンとの２：１（ｖ／ｖ）混合物（１．８Ｌ）ですすいで、トリフェニルホスフィンオキシドを得た（４５５ｇ）。ろ液を真空下で濃縮し、Ｂｉｏｔａｇｅ  １５０Ｌ  ＫＰ−Ｓｉｌ（ＳｉＯ２  ５ｋｇ；１％ＴＥＡで前処理；トルエン溶離液に溶解して試料をロード：９：１  ｎ−ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（１６Ｌ）及び１５  ＴＥＡ、３．６：１（４６Ｌ）、２：１（２０Ｌ）及び１％ＴＥＡ、１：１（３０Ｌ）及び１％ＴＥＡ、並びに１００％ＥｔＯＡｃ（１６Ｌ）及び１％ＴＥＡ）により精製した。合わせた清浄な生成物画分を真空下で濃縮して、オフホワイトの固形泡状物として化合物（２０６）を得た（６６２．２ｇ）。混合物画分を合わせ、真空下で濃縮した（４８０ｇ）。Ｂｉｏｔａｇｅ  １５０Ｌにロードする前にトルエン（３００ｍｌ）で希釈することにより形成された白色の不溶性固形物を真空ろ過により除去した。トルエン可溶性の材料を、Ｂｉｏｔａｇｅ  １５０Ｍ  ＨＰ−Ｓｐｈｅｒｅ（ＳｉＯ２  ２．５ｋｇ（１％ＴＥＡで前処理）；トルエンで試料をロード；溶離液：２：１  ｎ−ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（２６Ｌ）ｗ／  １％ＴＥＡ、１：１（２５Ｌ）ｗ／  １％ＴＥＡ、１：４（３４Ｌ）ｗ／  １％ＴＥＡ）により精製した。カラムをＴＬＣ（１：１  ｎ−ヘプタン／ＥｔＯＡｃ）で監視した。合わせた清浄な生成物画分を真空下で濃縮して、オフホワイトの固形泡状物としてさらなる化合物（２０６）を得た（１６５．５ｇ。合計６６２．２＋１６５．５ｇ＝８２７．７ｇ、９３０ｍｍｏｌ、１．０３ｗｔ、収率６７％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ（ｐｐｍ）：８．４７（ｓ，１Ｈ）、８．３９（ｓ，１Ｈ）、８．２０（ｓ，１Ｈ）、８．０１（ｓ，１Ｈ）、７．３８〜７．３１（ｍ，５Ｈ）、７．２７〜７．１９（ｍ，６Ｈ）、７．１４〜７．０６（ｍ，３Ｈ）、６．９３〜６．８７（ｍ，２Ｈ）、６．７６（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，４Ｈ）、６．２６（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１６．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．１５（ｄｄ，Ｊ＝２．７，１７．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．８６（ｄｄ，Ｊ＝４．７，１５．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．８０（ｄｄ，Ｊ＝４．７，１５．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．５１（ｄｄｄ，Ｊ＝２．７，４．３，５２．８Ｈｚ，１Ｈ）、５．３１（ｄｄｄ，Ｊ＝２．０，４．３，５２．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．８７（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，２Ｈ）、４．８５〜４．８１（ｍ，１Ｈ）、４．７９（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，２Ｈ）、４．７１〜４．５９（ｍ，１Ｈ）、４．２０〜４．１３（ｍ，２Ｈ）、４．０６（ｄｄ，Ｊ＝２．７，１１．３Ｈｚ，１Ｈ）、３．９０（ｄｄ，Ｊ＝２．７，１１．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．７７（ｓ，６Ｈ）、３．５２（ｄｄ，Ｊ＝３．１，１０．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．１８（ｄｄ，Ｊ＝３．９，１０．９Ｈｚ，１Ｈ）、０．９２（ｓ，９Ｈ）、０．８４（ｓ，９Ｈ）、０．１０（ｓ，３Ｈ）、０．０９（ｓ，６Ｈ）、０．０７（ｓ，３Ｈ）。
【００５９】
[0059]段階５〜６
【化２０】
0006767589.tif 000023
ピリジン（１．２３Ｌ、１．２１ｋｇ、１５．２ｍｏｌ、２．９ｗｔ、３．０ｖｏｌ、４９ｅｑ．）中に化合物（２０６）（４１０．７ｇ、３０９ｍｍｏｌ、１ｗｔ、１ｖｏｌ、１ｅｑ．）を含む溶液に、亜リン酸ジフェニル（９０ｍｌ、１０９ｇ、０．４６ｍｏｌ、０．２６ｗｔ、０．２２ｖｏｌ、１．５ｅｑ．）を添加した。反応を室温で撹拌し、ＬＣＭＳで監視した。２時間後（８０％転換）、さらなる亜リン酸ジフェニル（２９．９ｍｌ、３６．２ｇ、１５５ｍｍｏｌ、０．０８８ｗｔ、０．０７３ｖｏｌ、０．５０ｅｑ．）を添加した。さらに１時間後、追加の亜リン酸ジフェニル（６．０ｍｌ、７．２ｇ、３１ｍｍｏｌ、０．０１８ｗｔ、０．０１５ｖｏｌ、０．１０ｅｑ．）を添加し、反応をさらに０．５時間続けた（９８％転換）。反応混合物を、Ｔ−内部を４．７〜１２℃に保ちながら、飽和ＮａＨＣＯ３（９ｗｔ％水溶液；２．１Ｌ、５ｖｏｌ）と水（１．０ｍＬ、２．５ｖｏｌ）との混合物に添加した。反応器を少量のＥｔＯＡｃですすいだ。撹拌を室温で３０分間続け、ＬＣＭＳで反応を監視した（１００％転換）。反応混合物をＥｔＯＡｃとＭＴＢＥとの１：１混合物で２回抽出した（２×８．２Ｌ、２×２０ｖｏｌ）。合わせた有機層を水（４．１Ｌ、１０ｖｏｌ）で洗浄し、真空で濃縮し、ピリジンを除去するためにトルエン（３×４．１Ｌ、３×１０ｖｏｌ；連続供給）と共沸して、化合物（２０７）を得た（ピリジン０．５５ｅｑ．が残った）。
【００６０】
[0060]段階６
粗化合物（２０７）をジクロロメタン（３．０８Ｌ、４．０７ｋｇ、９．９ｗｔ、７．５ｖｏｌ）に周囲温度で溶解した。水（５５．７ｍｌ、０．１３６ｖｏｌ、１０ｅｑ．）を、続いて、内部Ｔを２５℃未満に保ちながら、ＤＣＭ（３．０８Ｌ、７．５ｖｏｌ）中にジクロロ酢酸（７７ｍｌ、１２０ｇ、０．９３ｍｏｌ、０．２９ｗｔ、０．１９ｖｏｌ、３．０ｅｑ．）を含む溶液を、添加した（オレンジ色の溶液に変化した）。３０分後、トリエチルシラン（Ｅｔ３ＳｉＨ；４９４ｍｌ、３５９ｇ、３．０９ｍｏｌ、０．８７５ｗｔ、１．２０ｖｏｌ、１０．０ｅｑ．）（Ｔ−内部は１８．２℃から１７℃になった）を添加し、２０分間撹拌を続けた。トリエチルアミン（４３１ｍｌ、３１３ｇ、３．０９ｍｏｌ、０．７６２ｗｔ、１．０５ｖｏｌ、１０．０ｅｑ．）を添加した（Ｔ−内部は１７．８℃から２２℃になった）。混合物を１．５５ｋｇ（３．８ｗｔ）に濃縮し、ＥｔＯＡｃ（６．２Ｌ、５．５ｋｇ、１４ｗｔ、１５ｖｏｌ）に再溶解し、（１）水（１．０Ｌ、２．５ｖｏｌ）及び飽和ＮａＨＣＯ３（９ｗｔ％水溶液、０．８２Ｌ、２．０ｖｏｌ）で、連続的に洗浄した。粗生成物のＥｔＯＡｃ溶液を−２０℃で一晩保存した；翌日、溶液を真空で２５℃で濃縮した。このようにして得られた粗混合物（６５４ｇ）を、（１）ｎ−ヘプタン（３．０１Ｌ、７．５ｖｏｌ）、（２）ｎ−ヘプタン（２．４６Ｌ、６．０ｖｏｌ）とトルエン（０．８２Ｌ、２．０ｖｏｌ）との混合物で練和した。溶液部分（上澄み液）をデカントし、底に残った固形物をアセトニトリル（４．１Ｌ、１０ｖｏｌ）に溶解した。混合物を真空で２５℃で濃縮し、アセトニトリルと２回共沸して化合物（２０８）を得た。生成物を精製することなく次の段階に使用した（理論的１００％収率を想定）。
【００６１】
[0061]段階７
【化２１】
0006767589.tif 000024
【００６２】
[0062]段階７ａ
化合物（２０８）（３３７ｇ、３０９ｍｍｏｌ、１ｗｔ、１ｖｏｌ、１ｅｑ．）を無水ピリジン（１３．５Ｌ、１３．２ｋｇ、３９ｗｔ、４０ｖｏｌ）に室温で溶解した。トリエチルアミン（１２９ｍｌ、９２７ｍｍｏｌ、９４ｇ、０．２８ｗｔ、０．３８ｖｏｌ、３．０ｅｑ．）を、続いて、２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３，２−ジオキサホスフィナン２−オキシド（ＤＭＯＣＰ；１０３ｇ、５５６ｍｍｏｌ、０．３１ｗｔ、１．８０ｅｑ．）を、添加した。結果として生じる混合物を周囲温度で３０分間撹拌し、ＬＣＭＳで監視して（１００％転換）、化合物（２０９）を作出した。
【００６３】
[0063]段階７ｂ
ＴＥＡ（１２９ｍｌ、９２７ｍｍｏｌ、９４ｇ、０．２８ｗｔ、０．３８ｖｏｌ、３．０ｅｑ．）、水（１００ｍｌ、５．５６ｍｏｌ、０．３０ｗｔ、０．３０ｗｔ、１８ｅｑ）及び硫黄（３４．７ｇ、１．０８ｍｏｌ、０．１０ｗｔ、３．５ｅｑ）を、化合物（２０９）の前段の混合物に添加した。９０分後（１００％転換）、Ｔ−内部を３０℃未満（１６．６℃〜２７℃）に保ちながら、ＮａＨＣＯ３（９ｗｔ％水溶液；３．３７Ｌ、１０ｖｏｌ）を添加した。結果として生じる混合物を、塩を除去するためにろ過した。ろ液を混合物に真空で濃縮し、ＭＴＢＥ（５．１Ｌ、１５ｖｏｌ）で希釈し、ＮａＣｌ（３０ｗｔ％水溶液；２×１．３５Ｌ、２×４ｖｏｌ）で２回洗浄した。不溶性固形物をろ別し、ろ液を真空で濃縮し、トルエン（４．０Ｌ、１２ｖｏｌ）と共沸した。その結果得られる固形物をろ過により除去し、粗混合物をトルエンに溶解し、Ｂｉｏｔａｇｅ  １５０Ｌ  ＫＰ−Ｓｉｌ（ＳｉＯ２  ５ｋｇ；ｎ−ヘプタン／ＥｔＯＡｃ／ＴＥＡ（１．５／１．５／０．０３ＣＶ）で前処理；ＥｔＯＡｃ／ＴＥＡ（３／０．０３ＣＶ）、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ／ＴＥＡ（４／０．２／０．０４ＣＶ）、ＥｔＯＡＣ／ＭｅＯＨ／ＴＥＡ（２／０．２／０．０２ＣＶ）で溶出）により精製した。カラムをＴＬＣ（ＥｔＯＡＣ／ＭｅＯＨ／ＴＥＡ＝９／１／０．１）で監視した。Ｓｐ異性体を含有する画分を合わせ、真空下で濃縮して、淡いピンク色の泡状固形物として化合物（２１０）を得た（Ｓｐ異性体；１５４ｇ、１２８ｍｍｏｌ、０．４６ｗｔ、収率４１．３％）。Ｒｐ異性体を含有する画分を合わせ、真空下で濃縮して、淡いピンク色の泡状固形物として化合物（２１２）を得た（Ｒｐ異性体；６４ｇ、５３ｍｍｏｌ、０．１９ｗｔ、収率１７％）。
化合物（２１０）（ＳＰ異性体）：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ（ｐｐｍ）：８．５１（ｓ，１Ｈ）、８．５０（ｓ，１Ｈ）、８．２２（ｓ，１Ｈ）、８．１４（ｓ，１Ｈ）、７．４９〜７．４４（ｍ，２Ｈ）、７．３８〜７．２７（ｍ，４Ｈ）、７．２５〜７．２１（ｍ，２Ｈ）、７．１４（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、６．４４（ｄｄ，Ｊ＝２．５，１３．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．１８（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．７８（ｔｄ，Ｊ＝６．３，１５．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．６９（ｔｄ，Ｊ＝４．７，１５．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．５６（ｄｄ，Ｊ＝３．９，５０．８Ｈｚ，１Ｈ）、５．２０〜５．０６（ｍ，１Ｈ）、４．９５〜４．７９（ｍ，４Ｈ）、４．６９（ｄｄ，Ｊ＝４．３，１６．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．５４〜４．３８（ｍ，３Ｈ）、４．３５（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．３２〜４．２９（ｍ，１Ｈ）、４．０５（ｄｄ，Ｊ＝１．６，１１．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．９１（ｄｄ，Ｊ＝３．１，１１．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．１４〜３．０６（ｍ，６Ｈ）、１．３０（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，９Ｈ）、０．９１（ｓ，９Ｈ）、０．９０（ｓ，９Ｈ）、０．１２（ｓ，３Ｈ）、０．０８（ｓ，３Ｈ）、０．０６（ｓ，３Ｈ）、０．０５（ｓ，３Ｈ）
化合物（２１２）（ＲＰ異性体）
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ（ｐｐｍ）：８．５４（ｓ，１Ｈ）、８．３８（ｓ，１Ｈ）、８．３３（ｓ，１Ｈ）、８．０１（ｓ，１Ｈ）、７．３９〜７．０９（ｍ，１０Ｈ）、６．３９（ｄｄ，Ｊ＝２．３，１４．１Ｈｚ，１Ｈ）、６．１３（ｄ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．７２（ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，２Ｈ）、５．６８（ｄｄ，Ｊ＝４．３，５１．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．４３〜５．２９（ｍ，１Ｈ）、５．１０〜４．９６（ｍ，３Ｈ）、４．９０〜４．８３（ｍ，２Ｈ）、４．７８〜４．７２（ｍ，１Ｈ）、４．５２（ｄｄｄ，Ｊ＝３．９，６．６，１７．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．４４〜４．３５（ｍ，２Ｈ）、４．３１〜４．２６（ｍ，１Ｈ）、４．２０〜４．１２（ｍ，２Ｈ）、３．８７（ｄｄ，Ｊ＝３．５，１１．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．７９〜３．７７（ｍ，１Ｈ）、３．１５〜３．０９（ｍ，６Ｈ）、１．３３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，９Ｈ）、０．９４（ｓ，９Ｈ）、０．８９（ｓ，９Ｈ）、０．１３（ｓ，３Ｈ）、０．１２（ｓ，３Ｈ）、０．１０（ｓ，３Ｈ）、０．０９（ｓ，３Ｈ）。
【００６４】
[0064]段階８
【化２２】
0006767589.tif 000025
化合物（２１０）（２２１ｇ、１８３ｍｍｏｌ、１ｗｔ、１ｖｏｌ、１ｅｑ）を、ピリジン（５３０ｍｌ、６．５６ｍｏｌ、５１９ｇ、２．３ｗｔ、２．４ｖｏｌ）とＴＥＡ（２．６５Ｌ、１９．０ｍｏｌ、１．９３ｋｇ、８．７ｗｔ、１２ｖｏｌ、１０４ｅｑ．）との混合物に溶解した。トリエチルアミン三フッ化水素酸塩（２６４ｍｌ、１．６２ｍｏｌ、２６２ｇ、１．２ｗｔ、１．２ｖｏｌ、錯体として８．９ｅｑ．、２７ｅｑ．ＨＦ）を添加し、転換をＬＣＭＳで監視しながら、混合物を室温で撹拌した。３時間後（転換９７％）、メトキシトリメチルシラン（ＴＭＳＯＭｅ；１．４０Ｌ、１０．２ｍｏｌ、１．０６ｋｇ、４．８ｗｔ、６．３ｖｏｌ、５５ｅｑ．）を添加し、撹拌を３０分間続けた。粘着性の固形物が反応器を覆った。溶液部分（上澄み液）をデカントした。固形物をトルエンで２回練和した（２×２．２Ｌ、２×１０ｖｏｌ；上澄みをデカントした）。反応器に残った粗固形物をジクロロメタン（２．２Ｌ、１０ｖｏｌ）に溶解し、ＮＨ４Ｃｌ（２８ｗｔ％水溶液；２．２Ｌ、１０ｖｏｌ）で洗浄した。水層をジクロロメタン（２．２Ｌ、１０ｖｏｌ）で逆抽出した。合わせた有機層をＮａＣｌ（３６ｗｔ％水溶液；１．１Ｌ、５ｖｏｌ）と水（１．１Ｌ、５ｖｏｌ）との混合物で洗浄し、次いで真空下で濃縮して、黄褐色の乾燥泡状物として化合物（２１１）を得た（１５２ｇ、１５５ｍｍｏｌ、０．７０ｗｔ、収率８５％）。粗生成物を精製せずに次の段階へと取った。
【００６５】
[0065]段階９
【化２３】
0006767589.tif 000026
化合物（２１１）（１５０ｇ、１５３ｍｍｏｌ、１ｗｔ、１ｖｏｌ、１ｅｑ．）をアセトニトリル（４Ｌ、２７ｖｏｌ）と共沸し、次いで、アセトニトリル（１．０５Ｌ、０．８３ｋｇ、５．５ｗｔ、７．０ｖｏｌ）に室温で再溶解した。２−ニトロベンジルブロミド（４４．４ｇ、２０５ｍｍｏｌ、０．３０ｗｔ、１．３４ｅｑ）を室温で添加し、反応をＬＣＭＳで監視した。２３時間後（１００％転換）、ＥｔＯＡｃ（１．５０Ｌ、１０ｖｏｌ）、ＮＨ４Ｃｌ（２８ｗｔ％水溶液；３００ｍｌ、２ｖｏｌ）及び水（３００ｍｌ、２ｖｏｌ）を添加し（ｐＨ＝６）、結果として生じる混合物を、真空下で２５℃で重量１．１１ｋｇに部分的に濃縮した。ＥｔＯＡｃ（２．２５Ｌ、１５ｖｏｌ）を添加し、混合物を５分間撹拌した。２つの層が分離した。水層を酢酸エチル（７５０ｍｌ、５ｖｏｌ）で抽出した。合わせた有機層を：（１）ＮａＣｌ（３６ｗｔ％水溶液；３００ｍｌ、２ｖｏｌ）と水（３００ｍｌ、２ｖｏｌ）との混合物及び（２）水（６００ｍｌ、４ｖｏｌ）、で連続的に洗浄した。次いで、有機層を真空下で濃縮し、ｎ−ヘプタン（１．５０Ｌ、１０ｖｏｌ）と共沸した。ＭＴＢＥ（０．９５Ｌ、６．３ｖｏｌ）を粗固形物に添加し、混合物を４０℃で加熱した。混合物をＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ、２ｖｏｌ）で希釈し、ゆっくりと０℃に冷却した。高密度の固形物を沈降させ、上澄み液をフィルターフリットチューブを通してポンプで汲みだした。固形物をＭＴＢＥで２回すすぎ（２×３００ｍｌ、２×２ｖｏｌ；上澄みを、フィルターフリットチューブを通して毎回ポンプで汲みだした）、真空下で４０℃で一晩乾燥させて、淡黄色固形物として化合物（２１２）を得た（１５６ｇ）。ろ液を真空下で濃縮し、茶色の油状物を得（１７．８ｇ）、この油状物を、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｓｎａｐ−Ｕｌｔｒａ  ３４０ｇ（溶離液：ＥｔＯＡｃ中の０〜５％ＭｅＯＨ）による精製に供して、淡黄色の固形物としてさらなる化合物（２１２）を得た（５．８ｇ）。合計１５６ｇ＋５．８ｇ＝１６１．８ｇ（正味１５２ｍｍｏｌ、純度９５％、収率９９％）
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ（ｐｐｍ）；８．４６（ｓ，１Ｈ）、８．１５（ｓ，１Ｈ）、８．１０（ｓ，１Ｈ）、８．０９〜８．０６（ｍ，１Ｈ）、７．８９（ｓ，１Ｈ）、７．５４〜７．５１（ｍ，１Ｈ）、７．４９〜７．４５（ｍ，４Ｈ）、７．３７〜７．２８（ｍ，３Ｈ）、７．２４〜７．１９（ｍ，３Ｈ）、７．１６〜７．１１（ｍ，２Ｈ）、６．２２（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．１４（ｄｄ，Ｊ＝２．７，１７．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．８３〜５．６１（ｍ，３Ｈ）、５．６０〜５．４８（ｍ，１Ｈ）、５．０７（ｄｄ，Ｊ＝３．５，５１．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．０６〜４．９６（ｍ，１Ｈ）、４．７９（ｄｄ，Ｊ＝４．９，１５．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．６９（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）、４．６７〜４．５６（ｍ，１Ｈ）、４．４８〜４．４０（ｍ，３Ｈ）、４．３７〜４．３０（ｍ，１Ｈ）、４．２７（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）、４．１９〜４．１３（ｍ，１Ｈ）、３．９３〜３．８５（ｍ，１Ｈ）、３．８５〜３．７８（ｍ，１Ｈ）
【００６６】
[0066]段階１０〜１１
【化２４】
0006767589.tif 000027
【００６７】
[0067]段階１０
化合物（２１２）（純度９５％、正味７３．２ｇ、７２．３ｍｍｏｌ、１ｗｔ、１ｖｏｌ、１ｅｑ．）及び２−シアノエチルＮ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（２５．３ｍｌ、７９．５ｍｍｏｌ、０．３３ｗｔ、０．３５ｖｏｌ、１．１０ｅｑ．）を無水アセトニトリルと３回共沸し（３×２Ｌ）、ジクロロメタン（０．７３Ｌ、１０ｖｏｌ）に再溶解し、０〜５℃に冷却した。ジイソプロピルアンモニウムテトラゾライド（６．１９ｇ、３６．１ｍｍｏｌ、０．０８５ｗｔ、０．５０ｅｑ．）を添加した。その結果得られる反応混合物を０℃で１０時間撹拌し、１０℃に２時間かけて温め、１０℃で１０時間保持し、室温に２時間かけて温めた。反応をＬＣＭＳ及びＴＬＣ（０．５％ＴＥＡを含むＥｔＯＡｃ）で監視した。１８時間後、無水アセトニトリル（０．７３Ｌ、１０ｖｏｌ）を添加し、混合物を−２０℃で３日かけて貯蔵した。
【００６８】
[0068]段階１１ａ
段階１０からの混合物を、周囲温度に温め、滴下漏斗を介して小分けして（３０分毎に１００ｍＬ、９時間かけて）ピリジントリフルオロ酢酸塩（事前にピリジンと２回共沸；４１．９ｇ、２１７ｍｍｏｌ、０．５７ｗｔ、３．０ｅｑ．）とアセトニトリル（５．８５Ｌ、８０ｖｏｌ）との混合物に添加した。反応をＬＣＭＳで監視した。１３時間後、アセトニトリル（２４ｍＬ）中に２−シアノエチルＮ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（５．８ｍＬ、１８ｍｍｏｌ、０．２５ｅｑ．）を含む溶液を、４時間かけて添加した。さらなる試薬の量については、残っている化合物（２１２）に基づいて決定した（ＬＣＭＳに基づいておよそ３０％）。６時間後、ジオールのより多くの転換が観察された。
【００６９】
[0069]段階１１ｂ
（（ジメチルアミノメチリデン）アミノ）−３Ｈ−１，２，４−ジチアゾリン−３−チオン（ＤＤＴＴ；２０．８ｇ、１０１ｍｍｏｌ、０．２８ｗｔ、１．４ｅｑ．）を添加し、撹拌を１時間続けた。反応混合物をおよそ８００ｍＬに部分的に濃縮し、ＭＴＢＥ（１．４６Ｌ、２０ｖｏｌ）、ＮａＨＣＯ３（９ｗｔ％水溶液；１．１Ｌ、１５ｖｏｌ）及び水（０．３７Ｌ、５ｖｏｌ）で希釈した。ｐＨ＝８。層が分離し、水層をＭＴＢＥ（１．４６Ｌ、２０ｖｏｌ）とＥｔＯＡｃ（１．１０Ｌ、１５ｖｏｌ）との混合物で抽出した。合わせた有機層を３０％ａｑ．ＮａＣｌ（２×０．７３Ｌ、２×１０ｖｏｌ）で２回洗浄し、真空下で３５℃で濃縮し、トルエン（１．４６Ｌ、２０ｖｏｌ）と共沸した。ＬＣＭＳ及びＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）によって、化合物（２１５）（ＳｐＲｐ、望ましい）：化合物（２１７）（ＳｐＳｐ）＝５：１、が示された。
粗生成物をＢｉｏｔａｇｅ  １５０Ｍ  ＫＰ−Ｓｉｌ、（ＳｉＯ２  ２．５  ｋｇ；溶離液：ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘプタン：２：１（４ＣＶ）、３：１（２．５ＣＶ）、４：１（２．５ＣＶ）、１００％ＥＡ（３ＣＶ）、ＥＡ中の５〜１０％ＭｅＯＨ  ４ＣＶ）により精製して、化合物（２１５）を得た（３６ｇ、３１．５ｍｍｏｌ、収率４４％）。
化合物（２１５）（ＳｐＲｐ）：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ（ｐｐｍ）：８．５９（ｓ，１Ｈ）、８．１０（ｓ，１Ｈ）、８．０３〜７．９９（ｍ，１Ｈ）、７．９１（ｓ，１Ｈ）、７．５６〜７．５３（ｍ，２Ｈ）、７．４９〜７．４０（ｍ，５Ｈ）、７．３５〜７．２８（ｍ，２Ｈ）、７．２４〜７．１６（ｍ，４Ｈ）、６．９２（ｓ，１Ｈ）、６．２９（ｄ，Ｊ＝１４．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．０８（ｄ，Ｊ＝２０．７Ｈｚ，１Ｈ）、５．９７〜５．８３（ｍ，１Ｈ）、５．７６（ｔｄ，Ｊ＝４．７，１５．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．６１〜５．５１（ｍ，２Ｈ）、５．４０（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ）、５．２９〜５．１７（ｍ，１Ｈ）、４．９１（ｄｄ，Ｊ＝７．４，１４．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．８６〜４．７５（ｍ，３Ｈ）、４．６３（ｄｄ，Ｊ＝３．７，９．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．５８〜４．４３（ｍ，５Ｈ）、４．３４〜４．１９（ｍ，４Ｈ）、２．７９（ｔｄ，Ｊ＝５．９，１６．８Ｈｚ，１Ｈ）、２．６６（ｔｄ，Ｊ＝６．３，１６．８Ｈｚ，１Ｈ）。
化合物（２１７）（ＳｐＳｐ）：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ（ｐｐｍ）：８．１１（ｓ，１Ｈ）、８．０３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．９４（ｓ，１Ｈ）、７．９０（ｓ，１Ｈ）、７．６１（ｓ，１Ｈ）、７．５６〜７．４０（ｍ，７Ｈ）、７．３３〜７．２８（ｍ，２Ｈ）、７．２３〜７．１７（ｍ，４Ｈ）、６．２２（ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．１５（ｄ，Ｊ＝１８．８Ｈｚ，１Ｈ）、５．８５（ｄｄ，Ｊ＝３．５，５１．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．７５〜５．４５（ｍ，５Ｈ）、４．９５〜４．２３（ｍ，１４Ｈ）、２．８２（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ）。
【００７０】
[0070]段階１２
【化２５】
0006767589.tif 000028
化合物（２１５）（７１．６ｇ、６２．６ｍｍｏｌ、１ｗｔ、１ｖｏｌ、１ｅｑ．）を１，４−ジオキサン（０．４３Ｌ、６ｖｏｌ）に溶解した。チオフェノール（２１５ｍｌ、２．０９ｍｏｌ、２３０ｇ、３．２ｗｔ、３ｖｏｌ、＞３０ｅｑ．）を、続いて、トリエチルアミン（２１５ｍｌ、１．５４ｍｏｌ、１５６ｇ、２．２ｗｔ、３ｖｏｌ）を添加した。いくらかの発熱が観察され（Ｔ−内部はおよそ７℃だけ上昇した）、したがって、水／氷浴を使用してＴ−内部を２７℃未満に冷却及び制御した。反応をＬＣＭＳで監視した。２時間後、ＭｅＯＨ（０．５７Ｌ、８ｖｏｌ）及びＮＨ４ＯＨ（２８ｗｔ％；１５ｍｏｌ、０．５７Ｌ、８ｖｏｌ、＞２００ｅｑ．）を添加した。その結果得られる混合物を５０℃で５時間加熱し、室温に冷却し、一晩撹拌した。１４時間後、水（０．７２Ｌ、１０ｖｏｌ）を添加し（固形物は観察されない）、混合物をｎ−ヘプタンとトルエンとの１：１（ｖ／ｖ）混合物（３×０．８６Ｌ、３×１２ｖｏｌ）で３回、続いて、トルエン（０．５７Ｌ、８ｖｏｌ）で、抽出した。水層を真空で４０〜５０℃で濃縮し、水（１．０７Ｌ、１５ｖｏｌ）で希釈した。その結果得られるスラリーを室温で一晩保った。その結果得られる固形物をろ別し、水（０．３６Ｌ、５ｖｏｌ）ですすいだ。ろ液はまだ濁っており、セライト及びＫｕｎｏフィルターに通してろ過した。曇りがまだ存在していた。ＨＣｌ（１．０Ｍ水溶液；１３２ｍｌ、１３２ｍｍｏｌ、２．１ｅｑ．）を１時間かけて添加し、ｐＨをチェックした（ｐＨ＜２）。撹拌を室温で１時間続け、混合物をろ過した。ろ過ケーキを水（８×０．２０Ｌ）ですすぎ、真空オーブンで３５℃で２日間、及び加熱無しで１日間乾燥させて、淡いオレンジ色の固形物として化合物（Ｉ）を得た（４４．８８ｇ、６０．１ｍｍｏｌ、０．６３ｗｔ、収率９６％）。
【００７１】
[0071]段階１３
【化２６】
0006767589.tif 000029
遊離酸化合物（Ｉ）（２２．４２ｇ、３０．０３ｍｍｏｌ、１ｗｔ、１ｖｏｌ、１ｅｑ．）に、アンモニア（ＭｅＯＨ中の２．０Ｍ溶液；２２０ｍｌ、４４０ｍｍｏｌ、１０ｖｏｌ、１５ｅｑ．）を添加した。ＥｔＯＨ（５５ｍｌ、２．５ｖｏｌ）を添加し、その結果得られる溶液をＫｕｎｏフィルター（０．４５ミクロン、ＰＴＦＥ）に通してろ過し、ＭｅＯＨとＥｔＯＨとの１：１（ｖ／ｖ）混合物（９０ｍＬ、４ｖｏｌ）ですすいだ。ろ液を真空で３０℃で濃縮し、オフホワイトの固形物を得、この固形物を室温で一晩乾燥させ、スパチュラですりつぶし（壊れやすい）、真空で室温でさらに乾燥した。次いで、分離された固形物をトルエン（２５０ｍｌ）に懸濁し、室温で３０分間撹拌した。次いで、固形物を真空ろ過により収集し、トルエンで２回（２×５０ｍｌ）すすいだ。次いで、固形物を真空下で真空オーブン内で乾燥させて、化合物（１ａ）（化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩）２２．４ｇを得た。
【００７２】
[0072]再結晶化
化合物（１ａ）（化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩）（２２．１４ｇ、２８．３６ｍｍｏｌ、１ｗｔ、１ｖｏｌ、１ｅｑ．）を水（６６４ｍｌ、３０ｖｏｌ）と水酸化アンモニウム（２８ｗｔ％、２．５ｍｌ、１８ｍｍｏｌ、０．６３ｅｑ．）（ｐＨ＝９〜１０）との混合物に溶解し、トルエンで３回（３×３００ｍｌ、３×１４ｖｏｌ）、ＥｔＯＡｃで３回（３×２００ｍｌ、３×９ｖｏｌ）、及びトルエンで３回（３×３００ｍｌ、３×１４ｖｏｌ）、抽出した。その結果得られる水層をＨＣｌ（１．０Ｍ水溶液；９０ｍｌ、９０ｍｍｏｌ、３．２ｅｑ．）で３．５時間かけて処理した（ｐＨ２以下）。混合物を３０分間撹拌し、次いで固形物沈殿物を真空ろ過により収集した。ろ過ケーキを水で３回（３×２００ｍｌ、３×９ｖｏｌ）洗浄し、真空で一晩乾燥させた。アンモニア（ＭｅＯＨ中の２．０Ｍ溶液；２５０ｍｌ、５００ｍｍｏｌ、１７．６ｅｑ．）及びエタノール（１００ｍｌ）を固形物に添加し、その結果得られる混合物を、結晶が出現するまで真空で濃縮し（およそ１００ｍｌ）、その時点で濃縮を停止し、混合物を２０分間撹拌した。エタノール（４５ｍＬ）を添加し、混合物を部分的に濃縮した（４５ｍＬを除去）。同じ操作をさらにもう２回繰り返し、次いで混合物を０℃に冷却し、３．５時間撹拌した。白色固形物を真空ろ過により収集し、冷エタノール（２０ｍｌ）で、続いて、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で、洗浄した。白色固形物を真空下で室温で３日間乾燥させて、白色固形物として化合物（１ａ）（化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩）を得た（１６．６ｇ、２１．３ｍｍｏｌ、０．７５ｗｔ、収率７５％）。ろ液を真空下で濃縮し、真空下で室温で３日間乾燥させて、オフホワイトの固形物として化合物（１ａ）（化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩）を得た（４．１６ｇ、５．３ｍｍｏｌ、収率１８％）。
【００７３】
[0073]分析実施例１．２−化合物（Ｉ）のアンモニウム塩の１Ｈ  ＮＭＲ分析
化合物（Ｉ）のアンモニウム塩の１Ｈ  ＮＭＲスペクトログラフを図１に示す。その結果得られるスペクトルは：
１Ｈ−ＮＭＲ  スペクトル（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，δＨ  ２．４９  ｐｐｍ，８０℃）
δ（ｐｐｍ）：８．５９（１Ｈ，ｂｒ  ｓ）、８．３６（１Ｈ，ｂｒ  ｓ）、８．１４（１Ｈ，ｓ）、８．１３（１Ｈ，ｓ）、６．２９（１Ｈ，ｍ）、６．２６（１Ｈ，ｍ）、５．７８（１Ｈ，ｍ）、５．７６（２Ｈ，ｓ）、５．２２（１Ｈ，ｍ）、４．５３〜４．６８（２Ｈ，ｍ）、４．３８（１Ｈ，ｍ）、４．２８（１Ｈ，ｍ）、４．２１〜４．２４（２Ｈ，ｍ）、３．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２，４Ｈｚ）、３．７０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３，５Ｈｚ）、３．０５〜３．１３（４Ｈ，ｍ）。
であった。
【００７４】
[0074]分析実施例１．３−化合物（Ｉ）のアンモニウム塩のＸ線分析
化合物（Ｉ）のアンモニウム塩約２ｍｇを水６００μＬに溶解した。この溶液１２０μＬを別のガラス製バイアルに入れ、次いで、このバイアルを、ＭｅＣＮ３ｍＬを有する固定容器に室温で１週間貯蔵した。これは、試料調製に関するＨ２Ｏ／ＭｅＣＮ蒸気拡散法である。
【００７５】
[0075]結晶化溶液に見られた無色のブロック単結晶（０．１×０．１×０．１ｍｍ）を液体Ｐａｒａｂａｒ  １０３１２に分散させ、デュアル−シックネスミクロマウント（Ｄｕａｌ−Ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ  ＭｉｃｒｏＭｏｕｎｔ）（商標）（ＭｉＴｅＧｅｎ）に搭載した。ＸｔａＬＡＢ  ＰＲＯ  Ｐ２００  ＭＭ００７ＨＦ（Ｒｉｇａｋｕ）で−１６０℃で、多層膜ミラー単色Ｃｕ−Ｋα放射を使用したω軸振動法で、回折データを収集した。
【００７６】
[0076]図２Ａに、化合物（Ｉ）のアンモニウム塩の結晶のＯＲＴＥＰ図を示すが、この場合、２つの分子がいくつかの不規則な水分子と共に非対称単位で存在する。図２Ｂに、図２Ａからの非対称単位である２つの分子のうちの一方のＯＲＴＥＰ図を示す。図２Ｃに、図２Ａからの非対称単位である他方の分子のＯＲＴＥＰ図を示す。
【００７７】
[0077]化合物（Ｉ）のアンモニウム塩の結晶構造は、０．１３５４の最終的なＲ因子で解けた。Ｆｌａｃｋパラメータはほぼゼロ（０．０８３（１７））であり、化合物（Ｉ）のアンモニウム塩の絶対配置が（Ｒ、Ｓ）であることを示している。結晶構造解析により、いくつかの水分子が、化合物（Ｉ）のアンモニウム塩の大きなチャネルに存在することも示されたが、このことにより、水分子がチャネルから簡単に抜け出すことができることが示された。分析により、非対称単位である結晶学的に独立した両方の分子の立体配座がほぼ同じであることも確認された。
【００７８】
[0078]
【表３】
0006767589.tif 000030
【００７９】
[0079]実施例１
（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のジアンモニウム塩の結晶（結晶形１）の調製
酢酸イソプロピル（２．７６９ｍＬ）中に化合物（Ｉ）（１３８．５ｍｇ）を含む懸濁液に、２８％アンモニア水溶液（６２μＬ）と、酢酸イソプロピル（０．６９３ｍＬ）と、２−プロパノール（０．１３８ｍＬ）との混合物を添加し、その結果得られるスラリーを室温で一晩撹拌した。沈殿物をろ過により収穫し、酢酸イソプロピル（０．８ｍＬ）ですすぎ、得られた固形物を減圧下で室温で２時間乾燥させて、表題結晶を得た（１２６．８ｍｇ）。表題の結晶は水和物と確認された。
【００８０】
[0080]実施例１−２
（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のジアンモニウム塩の結晶（結晶形１）の調製
酢酸イソプロピル（１８．０ｍＬ）中に化合物（Ｉ）（９００ｍｇ）を含む懸濁液に、２８％アンモニア水溶液（４００μＬ）と、酢酸イソプロピル（４．５ｍＬ）と、２−プロパノール（０．９０ｍＬ）との混合物を添加し、その結果得られるスラリーを室温で一晩撹拌した。沈殿物をろ過により収穫し、酢酸イソプロピル（４．５ｍＬ）ですすぎ、得られた固形物を減圧下で室温で５時間乾燥させ、相対湿度５０％中に室温で一晩保つことにより水分を連続的に吸収させて、表題結晶を得た（９４２ｍｇ）。表題の結晶は水和物と確認された。
【００８１】
[0081]実施例２
（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のジアンモニウム塩の結晶（結晶形２）の調製
化合物（Ｉ）（１４３．６ｍｇ）に２８％アンモニア水溶液（１．７２４ｍＬ）及びエタノール（１．７１８ｍＬ）を添加し、その結果得られる溶液を約０．８６ｍＬまでに減圧下で４０℃で濃縮した。残渣にエタノール（１ｍＬ）を添加し、溶液を約０．８６ｍＬまでに減圧下で４０℃で濃縮した。残渣にエタノール（１ｍＬ）を添加し、その結果得られる溶液を０．８９ｇまでに減圧下で４０℃で濃縮した。残渣溶液を室温で０．５時間撹拌して、それから沈殿物が溶液から落ちた。スラリーに酢酸イソプロピル（１．２ｍＬ）を１０分間徐々に滴下添加し、その結果得られるスラリーを室温で一晩撹拌した。沈殿物をろ過により収穫し、得られた固形物を減圧下で室温で３．３時間乾燥させて、表題結晶を得た（１４４ｍｇ）。表題の結晶は水和物と確認された。
【００８２】
[0082]実施例３
（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のジアンモニウム塩の結晶（結晶形３）の調製
化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩の結晶（結晶形１）おおよそ１０ｍｇを２５℃インキュベーター内のデシケーターに置いたが、この場合、湿度条件を飽和硝酸カリウム溶液を使用して９４％ＲＨに制御した。固形物試料を４日間貯蔵して、表題の結晶を得た（おおよそ１０ｍｇ）。表題の結晶は水和物と確認された。
【００８３】
[0083]実施例４
（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のジアンモニウム塩の結晶（結晶形４）の調製
アンモニア２ｍｏｌ／Ｌのメタノール（２．１５２ｍＬ）中に化合物（Ｉ）（２１７．２２ｍｇ）を含む溶液に、エタノール（０．８６９ｍＬ）を添加し、溶液を約１．１ｇまでに減圧下で５０℃で濃縮した。残渣を室温で０．８時間撹拌して、それから沈殿物が溶液から落ちた。スラリーにエタノール（０．４３４ｍＬ）を添加し、混合物を約０．８ｇまでに５０℃の減圧下で濃縮した。残渣にエタノール（０．４３４ｍＬ）を添加し、混合物を約１．２ｇまでに減圧下で５０℃で濃縮した。その結果得られるスラリーに水（４０μＬ）を添加し、混合物を室温で１時間及び氷冷しながら１．８時間撹拌した。沈殿物をろ過により収穫し、エタノール（０．２ｍＬ）及び酢酸エチル（０．２ｍＬ）で連続的にすすぎ、得られた固形物を減圧下で室温で１時間乾燥させて、表題結晶を得た（２１．２２ｍｇ）。
【００８４】
[0084]実施例５
（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のジアンモニウム塩の結晶（結晶形５）の調製
２−プロパノール（５ｍＬ）中に化合物（Ｉ）（２０１．６２ｍｇ）を含む懸濁液に２８％アンモニア水溶液（３６μＬ）を添加し、その結果得られる溶液を６０℃で撹拌した。この溶液に２８％アンモニア水溶液（１０８μＬ）を添加して、それから沈殿物が溶液から落ちた。温度が自然に室温に低下した後、沈殿物をろ過により収穫して、表題結晶を得た（１６０ｍｇ）。
【００８５】
[0085]実施例６
（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のモノアンモニウム塩の結晶（結晶形６）の調製
実施例５で得られた、化合物（Ｉ）のジアンモニウム塩（８５．２４ｍｇ）にエタノール（４ｍＬ）を添加し、その結果得られるスラリーを室温で一晩撹拌した。次いで、沈殿物をろ過により収穫して、表題結晶（４０．９３ｍｇ）を得た。
【００８６】
[0086]実施例７
（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオンのナトリウム塩の結晶の調製
化合物（Ｉ）（２０１．５８ｍｇ）にメタノール（５ｍＬ）を添加し、その結果得られるスラリーを室温で撹拌した。スラリーに１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（０．５４ｍＬ）を添加し、その結果得られる溶液を６０℃でほぼ１時間撹拌した。温度が自然に室温に低下した後、溶液を窒素ガス流中で撹拌しながら濃縮した。溶媒が徐々に除去されるにつれて、結晶化が開始した。得られた固形物を減圧下で室温で乾燥させて、表題結晶を得た（２２７ｍｇ）。
【００８７】
[0087]実施例８
（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオンの結晶の調製
エタノール（２．５ｍＬ）と、エタノール中の２ｍｏｌ／Ｌアンモニア（２．５ｍＬ）と、水（２．５ｍＬ）との混合物中に化合物（Ｉ）（５００ｍｇ）を含む溶液に、酢酸（０．５７２ｍＬ）を滴下添加し、溶液を室温で撹拌した。この溶液に、以下の実施例８−２と同じような方法で得られた、化合物（Ｉ）の種結晶を添加した。次いで、混合物を室温で１０分間撹拌して、それから沈殿物が溶液から落ちた。スラリーに酢酸（１．１４４ｍＬ）を４５分間徐々に滴下添加し、その結果得られるスラリーを室温で一晩撹拌した。沈殿物をろ過により収穫し、冷６７％水性エタノール（３．０ｍＬ）及びｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（２．０ｍＬ）で連続的にすすいだ。得られた固形物を減圧下で室温で５時間乾燥させて、収率８３．４％で表題の結晶を得た（４１７ｍｇ）。
【００８８】
[0088]実施例８−２
（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオンの結晶の調製
化合物（Ｉ）（４９７．５ｍｇ）にエタノール（１．０ｍＬ）及びエタノール中の２ｍｏｌ／Ｌアンモニア（２．０ｍＬ）を添加し、混合物を室温で撹拌して溶解した。その結果得られる溶液を綿パッドに通してろ過し、パッドをエタノール中の２ｍｏｌ／Ｌアンモニア（０．５ｍＬ）及びエタノール（１．５ｍＬ）ですすぎ、この溶液に水（２．５ｍＬ）を添加した。その結果得られる溶液に酢酸（０．５７ｍＬ）を室温で３０分間徐々に滴下添加して、それから沈殿物が溶液から落ち、スラリーを室温で３７分間撹拌した。スラリーに酢酸（０．８５ｍＬ）を３２分間徐々に滴下添加し、その結果得られるスラリーを室温で一晩撹拌した。沈殿物をろ過により収穫し、冷６７％水性エタノール（４．０ｍＬ）及び水（４．０ｍＬ）で連続的にすすいだ。得られた固形物を減圧下で室温で一晩及び３０℃で３時間、乾燥させて、収率８６．９％で表題の結晶を得た（４３２．４ｍｇ）。
【００８９】
[0089]実施例９
結晶（結晶形１）の熱重量−示差熱分析（ＴＧ−ＤＴＡ）
結晶（結晶形１）試料おおよそ５ｍｇをアルミニウム皿に正確に秤量し、次いで以下の条件で分析を実施した。ＴＧサーモグラムでは、脱水による重量損失が、室温〜１３０℃の範囲で観察された。
測定条件
雰囲気：窒素ガス流１００ｍＬ／分
基準皿：空のアルミニウム皿
加熱速度：１０℃／分
サンプリング間隔：１秒
温度範囲：室温〜３００℃
【００９０】
[0090]実施例１０
種々の温度での粉末Ｘ線回折
結晶（結晶形１）試料を粉末Ｘ線回折計の試料台に置き、分析を室温及び６０℃超で実施したが、ここでは、脱水による著しい重量損失が結晶（結晶形１）のＴＧ−ＤＴＡサーモグラムで観察された。測定条件は次の通りである。
反射法の条件
装置：ＲＩＮＴ  ＴＴＲ−ＩＩＩ（Ｒｉｇａｋｕ）
Ｘ線源：ＣｕＫα（５０ｋＶ、３００ｍＡ）
検出器：シンチレーションカウンター
モード：反射
スリット：０．５ｍｍ（発散スリット）、オープン（散乱スリット）、オープン（受光スリット）
スキャン速度：１０°／分
サンプリング間隔：０．０２°
スキャン範囲：５°〜３５°
試料ホルダー：アルミニウムホルダー
【００９１】
[0091]結晶（結晶形１）のＴＧ−ＤＴＡサーモグラム（図２１）では、脱水による著しい重量損失が、吸熱ピークを伴って、１３０℃までの温度範囲で観察された。結晶（結晶形１）を加熱すると、６０℃超で粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンに著しい変化が見られた（図２２）。図２３に示すように、変化したＰＸＲＤパターンは結晶（結晶形２）のＰＸＲＤパターンに匹敵した。次いで、結晶（結晶形２）のＰＸＲＤパターンは、１２５℃以上で別のパターンにさらに変化した（図２４）。これらの発見が示したことは、結晶（結晶形１）及び結晶（結晶形２）は水和物であると思われることであった。
【００９２】
[0092]実施例１１
２５℃での、ＲＨ範囲３０％〜９５％における結晶（結晶形１）の吸湿性測定では、図２５に示すように、吸脱着過程の間にヒステリシスループが観察された。吸着過程では、重量変化レベルは、８０％ＲＨまで１．７％に徐々に増加し、次いで９５％ＲＨでおおよそ１９％に最終的に達した。吸湿性測定の前後でＰＸＲＤパターンに変化は観察されなかった。対照的に、２５℃及び９４％ＲＨで４日間貯蔵された結晶（結晶形１）試料のＰＸＲＤパターンは、図２６に記載のように初期パターンと異なった。変化したＰＸＲＤパターンの結晶形態は、結晶形３と定義した。このことから、結晶（結晶形３）が水和物であることが証明されている。
【００９３】
[0093]薬理試験実施例
化合物（１ａ）の薬理効果を試験するために、以下の試験実施例を行った。
【００９４】
[0094]薬理試験実施例１：ＨＡＱ  ＳＴＩＮＧアゴニスト活性のレポーターアッセイ
ＴＨＰ１−デュアル（ＴＨＰ１−Ｄｕａｌ）（商標）細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、カタログ＃ｔｈｐｄ−ｎｆｉｓ）をＥＣ５０決定に適用した。ＴＨＰ１−デュアル（商標）細胞は、ベンダーであるＩｎｖｉｖｏｇｅｎによってＨＡＱ  ＳＴＩＮＧ遺伝子型を持っていると特徴付けられてきた（Ｉｎｓｉｇｈｔ  ２０１４０２−１）。細胞を、製造業者が推奨する条件下で増殖及び維持した。ＥＣ５０の決定については、製造業者のマニュアルに記載のインターフェロン調節因子（ＩＲＦ）経路の誘導に従った。手短に述べれば、細胞を播種し、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートしながら、様々な濃度の化合物で２０時間処理した。細胞を再懸濁し、ＱＵＡＮＴＩ−Ｌｕｃ（商標）溶液（カタログ＃：ｒｅｐ−ｑｌｃ１）を添加した。結果として得られる発光をルミノメーター（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で測定した。得られたシグナルをプロットし、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ７ソフトウェアでＥＣ５０を計算した。ＥＣ５０値を、下の表１に報告する。
【００９５】
[0095]
【表４】
0006767589.tif 000031
化合物（１ａ）のヒトＳＴＩＮＧ  ＥＣ５０（μＭ）を表１で測定した。
【００９６】
[0096]薬理試験実施例２：ＳＴＩＮＧバリアントの特異的レポーターアッセイ
ヒトＳＴＩＮＧは、ＷＴ、ＨＡＱ、ＲＥＦ、及びＡＱの各バリアントを含めて、主要な４つのバリアントを有する。Ｒ２３２Ｈとも呼ばれるＲＥＦ−ＳＴＩＮＧは、例えば、人口の約１４％に生じる。野生型の対立遺伝子と比較して、Ｒ２３２Ｈは細菌及び後生動物の環状ジヌクレオチドに対する応答が低下している。これらの主要な４つのバリアント並びにその他のレアバリアントの詳細については、Ｙｉ  Ｇら、「Ｓｉｎｇｌｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ＳＴＩＮＧ  ｃａｎ  ａｆｆｅｃｔ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｃｙｃｌｉｃ  ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１３；８：ｅ７７８４６によって報告されている。ＳＴＩＮＧバリアントの特異的レポーター細胞株を、ＴＨＰ１−デュアル（商標）ＫＯ−ＳＴＩＮＧ細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、カタログ＃ｔｈｐｄ−ｋｏｓｔｇ）及び３種のＳＴＩＮＧバリアントタンパク質発現ベクターを使用することによって確立した。ＷＴ  ＳＴＩＮＧの発現ベクターマップを図１６に示す。他の２つの発現ベクターについては、ＷＴ  ＳＴＩＮＧを適切なヌクレオチド配列に置き換えて、当該ベクターにおいて異なるＳＴＩＮＧバリアント配列を使用した。
ＷＴ−ＳＴＩＮＧ、ＲＥＦ−ＳＴＩＮＧ、及びＡＱ−ＳＴＩＮＧのＳＴＩＮＧバリアント発現ベクターを調製し、ＴＨＰ１−デュアル（商標）ＫＯ−ＳＴＩＮＧ細胞に安定的にトランスフェクトして、それぞれ、ＷＴ−ＳＴＩＮＧ、ＲＥＦ−ＳＴＩＮＧ及びＡＱ−ＳＴＩＮＧについての、ＳＴＩＮＧバリアントの特異的レポーターを調製した。ＥＣ５０値については、ＨＡＱ  ＳＴＩＮＧアゴニスト活性のレポーターアッセイに関する薬理試験実施例１で上記の通り決定した。結果を下の表２に示す。これらのＳＴＩＮＧバリアントに使用したＤＮＡ配列を、配列番号１（ＷＴヒトＳＴＩＮＧのヌクレオチド配列）、配列番号２（ＲＥＦヒトＳＴＩＮＧのヌクレオチド配列）、及び配列番号３（ＡＱヒトＳｔｉｎｇのヌクレオチド配列）に示す。
【００９７】
[0097]ＷＴヒトＳＴＩＮＧ：
atgccccactccagcctgcatccatccatcccgtgtcccaggggtcacggggcccagaaggcagccttggttctgctgagtgcctgcctggtgaccctttgggggctaggagagccaccagagcacactctccggtacctggtgctccacctagcctccctgcagctgggactgctgttaaacggggtctgcagcctggctgaggagctgcgccacatccactccaggtaccggggcagctactggaggactgtgcgggcctgcctgggctgccccctccgccgtggggccctgttgctgctgtccatctatttctactactccctcccaaatgcggtcggcccgcccttcacttggatgcttgccctcctgggcctctcgcaggcactgaacatcctcctgggcctcaagggcctggccccagctgagatctctgcagtgtgtgaaaaagggaatttcaacgtggcccatgggctggcatggtcatattacatcggatatctgcggctgatcctgccagagctccaggcccggattcgaacttacaatcagcattacaacaacctgctacggggtgcagtgagccagcggctgtatattctcctcccattggactgtggggtgcctgataacctgagtatggctgaccccaacattcgcttcctggataaactgccccagcagaccggtgaccgggctggcatcaaggatcgggtttacagcaacagcatctatgagcttctggagaacgggcagcgggcgggcacctgtgtcctggagtacgccacccccttgcagactttgtttgccatgtcacaatacagtcaagctggctttagccgggaggataggcttgagcaggccaaactcttctgccggacacttgaggacatcctggcagatgcccctgagtctcagaacaactgccgcctcattgcctaccaggaacctgcagatgacagcagcttctcgctgtcccaggaggttctccggcacctgcggcaggaggaaaaggaagaggttactgtgggcagcttgaagacctcagcggtgcccagtacctccacgatgtcccaagagcctgagctcctcatcagtggaatggaaaagcccctccctctccgcacggatttctcttga（配列番号１）。
【００９８】
[0098]ＲＥＦヒトＳＴＩＮＧ：
atgccccactccagcctgcatccatccatcccgtgtcccaggggtcacggggcccagaaggcagccttggttctgctgagtgcctgcctggtgaccctttgggggctaggagagccaccagagcacactctccggtacctggtgctccacctagcctccctgcagctgggactgctgttaaacggggtctgcagcctggctgaggagctgcgccacatccactccaggtaccggggcagctactggaggactgtgcgggcctgcctgggctgccccctccgccgtggggccctgttgctgctgtccatctatttctactactccctcccaaatgcggtcggcccgcccttcacttggatgcttgccctcctgggcctctcgcaggcactgaacatcctcctgggcctcaagggcctggccccagctgagatctctgcagtgtgtgaaaaagggaatttcaacgtggcccatgggctggcatggtcatattacatcggatatctgcggctgatcctgccagagctccaggcccggattcgaacttacaatcagcattacaacaacctgctacggggtgcagtgagccagcggctgtatattctcctcccattggactgtggggtgcctgataacctgagtatggctgaccccaacattcgcttcctggataaactgccccagcagaccggtgaccatgctggcatcaaggatcgggtttacagcaacagcatctatgagcttctggagaacgggcagcgggcgggcacctgtgtcctggagtacgccacccccttgcagactttgtttgccatgtcacaatacagtcaagctggctttagccgggaggataggcttgagcaggccaaactcttctgccggacacttgaggacatcctggcagatgcccctgagtctcagaacaactgccgcctcattgcctaccaggaacctgcagatgacagcagcttctcgctgtcccaggaggttctccggcacctgcggcaggaggaaaaggaagaggttactgtgggcagcttgaagacctcagcggtgcccagtacctccacgatgtcccaagagcctgagctcctcatcagtggaatggaaaagcccctccctctccgcacggatttctcttga（配列番号２）
【００９９】
[0099]ＲＥＦヒトＳＴＩＮＧ：
atgccccactccagcctgcatccatccatcccgtgtcccaggggtcacggggcccagaaggcagccttggttctgctgagtgcctgcctggtgaccctttgggggctaggagagccaccagagcacactctccggtacctggtgctccacctagcctccctgcagctgggactgctgttaaacggggtctgcagcctggctgaggagctgcgccacatccactccaggtaccggggcagctactggaggactgtgcgggcctgcctgggctgccccctccgccgtggggccctgttgctgctgtccatctatttctactactccctcccaaatgcggtcggcccgcccttcacttggatgcttgccctcctgggcctctcgcaggcactgaacatcctcctgggcctcaagggcctggccccagctgagatctctgcagtgtgtgaaaaagggaatttcaacgtggcccatgggctggcatggtcatattacatcggatatctgcggctgatcctgccagagctccaggcccggattcgaacttacaatcagcattacaacaacctgctacggggtgcagtgagccagcggctgtatattctcctcccattggactgtggggtgcctgataacctgagtatggctgaccccaacattcgcttcctggataaactgccccagcagaccgctgaccgagctggcatcaaggatcgggtttacagcaacagcatctatgagcttctggagaacgggcagcgggcgggcacctgtgtcctggagtacgccacccccttgcagactttgtttgccatgtcacaatacagtcaagctggctttagccgggaggataggcttgagcaggccaaactcttctgccagacacttgaggacatcctggcagatgcccctgagtctcagaacaactgccgcctcattgcctaccaggaacctgcagatgacagcagcttctcgctgtcccaggaggttctccggcacctgcggcaggaggaaaaggaagaggttactgtgggcagcttgaagacctcagcggtgcccagtacctccacgatgtcccaagagcctgagctcctcatcagtggaatggaaaagcccctccctctccgcacggatttctcttga（配列番号３）
【０１００】
[0100]薬理試験実施例３：マウスＳＴＩＮＧアゴニスト活性のレポーターアッセイ
ＲＡＷ−ルチア（ＲＡＷ−Ｌｕｃｉａ）（商標）ＩＳＧ細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、カタログ＃ｒａｗｌ−ｉｓｇ）をマウスＳＴＩＮＧアゴニストのレポーターアッセイに使用した。ＥＣ５０値については、ＨＡＱ  ＳＴＩＮＧアゴニスト活性のレポーターアッセイの薬理試験実施例１で上記の通り決定した。結果を下の表２に示す。
【０１０１】
[0101]
【表５】
0006767589.tif 000032
【０１０２】
[0102]薬理試験実施例４：示差走査蛍光光度（ＤＳＦ）アッセイ
ＤＳＦアッセイを用いて、化合物と組換えＳＴＩＮＧタンパク質との間の物理的相互作用を測定した。切断組換えＳＴＩＮＧタンパク質（ａ．ａ．１５５〜３４１）（配列番号４）を、下記の通りに、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現させ、アッセイ向けに分離した。アッセイマトリックスを、３８４−ウェルプレート中に、１μＭの組換えＳＴＩＮＧタンパク質（ａ．ａ．１５５〜３４１）（配列番号４）、１００ｍＭのＫＣｌを補った１００ｍＭのＰＢＳ  ｐＨ７．４、５Ｘ  ＳＹＰＲＯオレンジ色素及び５０μＭの化合物からなる最終体積１０μＬ毎ウェルに調製した（最終ＤＭＳＯ濃度０〜１％）。アッセイについては、０．０５℃／分の速度で２５℃から９５℃までの温度勾配、並びに、それぞれ、４７０ｎｍ及び５８６ｎｍの励起フィルター及び発光フィルターを使用して、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ  １２Ｋ  ＦｌｅｘリアルタイムＰＣＲシステムで実施した。アプライドバイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）（登録商標）のＰｒｏｔｅｉｎ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｓｈｉｆｔソフトウェア（アルゴリズムバージョン１．３．）によって設定された蛍光微分曲線に従い、非結合及びリガンド結合組換えＳＴＩＮＧタンパク質の熱融解（Ｔｍ）並びに熱融解の差（ｄＴｍ  Ｄ）を計算した。
一般に、０超のΔＴｍ値を持つ化合物は、被試験タンパク質と物理的な相互作用を有すると考えられ、ΔＴｍの値は化合物の結合親和性と正の関連がある。ここで、化合物（１ａ）はΔＴｍ  １７．６を示し（上記表２）、ＳＴＩＮＧタンパク質との物理的相互作用があることが示された。
【０１０３】
[0103]薬理試験実施例５：Ｅｘ  ｖｉｖｏヒトＰＢＭＣ刺激アッセイ
５人の健常なドナー由来のヒト血液を、１０．０ｍＬ  ＢＤ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒナトリウムヘパリンチューブ（カタログ＃３６７８７４）を使用して収集した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の分離は、製造業者が提供するプロトコルを使用して、ＳＩＧＭＡ  ＡＣＣＵＳＰＩＮ  ５０ｍｌチューブ（カタログ＃Ａ２０５５）及びｓｉｇｍａ  ＡＣＣＵＳＰＩＮ  システム−ＨＩＳＴＯＰＡＱＵＥ−１０７７（カタログ＃Ａ７０５４）を使用して行った。ＰＢＭＣ層を採取し、Ｓｉｇｍａが推奨する通りに１ｘリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。ＰＢＭＣをカウントし、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ｇｉｂｃｏ  カタログ＃２０１４０．７９）を補ったＲＰＭＩ（ｃｏｒｎｉｎｇ  カタログ＃１０−０４１−ＣＶ）に１×１０ｅ６／ｍｌで最終的に懸濁させた。細胞（１×１０ｅ６）１ｍｌをＦａｌｃｏｎの５ｍＬ丸底ポリプロピレン試験管（カタログ＃３５２０６３）に移し、５％ＣＯ２インキュベーターで３７℃で２４時間、様々な濃度（０、０．１、１、１０μＭ）で刺激した。
２４時間のインキュベーション後、チューブを１４００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上澄み液を採取した。上澄み液を、その後のＩＦＮβ測定のために−８０℃で保存した。ＩＦＮβの測定は、ヒトＩＦＮ−βベースキット（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  カタログ＃Ｋ１５１ＡＤＡ）を使用して行い、製造業者によって提供されたプロトコルを使用した。ＩＦＮ−βの推定は、ＭＥＳＯ  ＳＥＣＴＯＲ  Ｉｍａｇｅｒ  ２４００でアッセイプレートを読み取ることによって、ＭＳＤ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈ  ４．０プログラムを使用することによって、行った。２４時間後、ＩＦＮβタンパク質を分析した。結果は、化合物（１ａ）によって、用量依存的に一次ヒトＰＢＭＣ  ＩＦＮβタンパク質産生を誘導し得ることを示した。表３に示す結果は、異なる５人のドナーを使用して実施した測定の平均を表す。
【０１０４】
[0104]
【表６】
0006767589.tif 000033
【０１０５】
[0105]ＩＦＮβｍＲＮＡの定量の場合、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ、ドイツ）を使用して、製造業者のプロトコルに従って全ＲＮＡを分離した。ＩＦＮβｍＲＮＡをｑＰＣＲアッセイによって定量した。手短に述べれば、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＶＩＬＯ  ＭａｓｔｅｒＭｉｘ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、米国）を使用して、６０μｌの反応容量で全ＲＮＡ（４００ｎｇ〜１０００ｎｇ）をｃＤＮＡに転換した。その後、ＩＦＮＢ１（Ｈｓ０１０７７９５８＿ｓ１）及びＧＡＰＤＨ（Ｈｓ９９９９９９０５＿ｍ１）に対するＲＮＡ特異的プライマーを使用したアプライドバイオシステムズのＴａｑＭａｎ発現アッセイを使用して、得られたｃＤＮＡ（１０ｎｇ）を増幅した。アプライドバイオシステムズのＱｕａｎｔｓｔｕｄｉｏ  １２Ｋ  ＦｌｅｘリアルタイムＰＣＲシステムで、５０℃での最初の２分ステップ、続いて９５℃で２秒、９５℃で１秒及び６０℃で２０秒の４０サイクルで、ＴａｑＭａｎ  Ｆａｓｔ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、米国）を用いて、ｑＰＣＲ分析を実施した。相対遺伝子発現は、２−ΔΔＣＴ法を使用して、参照遺伝子ＧＡＰＤＨに対する正規化後に計算した。計算は、アプライドバイオシステムズのＱｕａｎｔｓｔｕｄｉｏ  １２Ｋ  Ｆｌｅｘソフトウェアｖ１．２．２を使用して行った。ＩＦＮβｍＲＮＡのフォールド変化対媒体処理試料を表４にまとめた。結果は、化合物（１ａ）によって用量依存的及び時間依存的に一次ＰＢＭＣのＩＦＮβｍＲＮＡを誘導し得ることを示した。表４に、異なる５人のドナーより計算した平均を表す。
【０１０６】
[0106]
【表７】
0006767589.tif 000034
【０１０７】
[0107]薬理試験実施例６：ＣＴ２６二重腫瘍モデルに対する化合物（１ａ）の抗がん効果
化合物（１ａ）について、マウスの結腸がんモデルであるＣＴ２６二重腫瘍モデルで、化合物（１ａ）の抗がん活性に関して試験した。５〜６週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃＪマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｍａｉｎｅ）に、ＣＴ２６腫瘍細胞を各動物の両側に、各側で１０５細胞を皮下移植した。研究Ａでは、平均腫瘍がおおよそ１００ｍｍ３に達した、腫瘍を移植して５日後に処置を開始した（１．２５ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇ）。研究Ｂでは、平均腫瘍がおおよそ１２０ｍｍ３に達した、腫瘍を移植して８日後に処置を開始した（０．６ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇ）。治療スキームを表５及び表６に記載する。
【０１０８】
[0108]
【表８】
0006767589.tif 000035
【０１０９】
[0109]
【表９】
0006767589.tif 000036
【０１１０】
[0110]
研究においてマウス全てが、２つの皮下ＣＴ２６腫瘍を有する。「処置腫瘍」とは、化合物の直接投与を伴う腫瘍を示し、一方、「未処置腫瘍」とは、化合物の直接投与を伴わない腫瘍を示す。実験全体を通して腫瘍体積をフォローした。処置開始後、１週間に２回腫瘍体積を測定する。腫瘍量をキャリパ測定値から長球面の体積に関する式（ＬｘＷ２）／２（式中、Ｌ及びＷはそれぞれ直交長さ及び幅の測定値（ｍｍ）である）により計算する。
化合物（１ａ）は、ＣＴ２６二重腫瘍モデルにおいて強力な且つ治癒的効果を示した（図１７及び図１８）。処置腫瘍の場合、研究で試験された最低用量でも治癒率２０％が検出された（図１８、０．６ｍｇ／ｋｇ用量）。同時に、最高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）によると、研究の終わりに当該腫瘍の動物１００％を治癒した。未処置腫瘍の場合、用量依存的な抗腫瘍効果がまた明らかであった。高用量群（１０ｍｇ／ｋｇ）は治癒効果８０％を示した；より低い用量も全て腫瘍成長阻害活性を示した。したがって、化合物（１ａ）について０．６ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの治療域が観察され、注入されていない遠位腫瘍部位での効果を基準にすると、局所的だけでなく全身的にも抗腫瘍活性が見られた。結論として、これらの結果は、化合物（１ａ）の局所投与によって局所及び全身の（遠達の）抗がん活性の両方を誘導し得ることを示している。
【０１１１】
[0111]薬理試験実施例７：ＣＴ２６肝転移モデルに対する化合物（１ａ）の抗がん効果
化合物（１ａ）について、ＣＴ２６肝転移モデルで化合物（１ａ）の抗がん活性に関して試験した。麻酔した５〜６週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃＪマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｍａｉｎｅ）に、ルシフェラーゼ発現ＣＴ２６腫瘍細胞（マウス１匹当たり５×１０５細胞）を脾臓内に移植した。その後の１０分の待機時間で、腫瘍細胞を動物の肝臓に流した。次いで、脾臓を取り出し、動物を縫合し、回復させた。３日後、ＣＴ２６腫瘍細胞（マウス１匹当たり１０５個の細胞）を、ここでは右前肢領域の下に皮下（ｓｃ）で、再び移植して、化合物投与に向け腫瘍塊の発達を可能にした。脾臓内注入の９日後、化合物（１０ｍｇ／ｋｇ）をｓｃ腫瘍に単回、腫瘍内投与した。
化合物の局所的な抗がん効果は、ｓｃ腫瘍に対する化合物の効果として測定し、一方、化合物の遠達効果は、各マウス肝臓で成長している腫瘍塊の有害な効果を基準として、媒体処置の対照マウスと比較して、処置マウスの全生存率によって評価した。化合物（１ａ）は、局所ｓｃ腫瘍に向けて強力な活性も、１０匹の処置動物のうち９匹で治癒的全身活性も両方とも示した（図１９）。これらの結果は、化合物（１ａ）の局所投与によって、肝臓内などの深部病変を含めて局所抗がん活性も全身の（遠達の）抗がん活性も両方とも誘導し得ることを示している。
【０１１２】
[0112]薬理試験実施例８：ＧＬ２６１脳同所性モデルに対する化合物（１ａ）の抗がん効果
化合物（１ａ）について、ＧＬ２６１脳同所性モデルで化合物（１ａ）の抗がん活性に関して試験した。ＧＬ２６１はネズミ神経膠腫細胞株である。ルシフェラーゼ発現性のＧＬ２６１マウス神経膠腫細胞（２×１０４細胞／マウス）を、５〜６週齢の雌Ｂ６アルビノマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｍａｉｎｅ）に頭蓋内で移植した。３〜４日後、ＧＬ２６１細胞を右前肢領域の下に皮下移植して（１０６細胞／マウス）、化合物投与向けに腫瘍塊の発達を可能にした。頭蓋内腫瘍細胞移植の１０日後、化合物（１０ｍｇ／ｋｇ）をｓｃ腫瘍に単回、腫瘍内で投与した。
化合物の局所的な抗がん効果は、ｓｃ腫瘍に対する化合物の効果として測定し、一方、化合物の遠達効果は、各マウス脳で成長している腫瘍塊の有害な効果を基準として、媒体処置の対照マウスと比較して、処置マウスの全生存率によって評価した。化合物（１ａ）は、局所ｓｃ腫瘍で強力な活性も、８匹の処置動物のうち５匹で治癒的全身活性も両方とも示した（図２０）。これらの結果は、化合物（１ａ）の局所投与によって、脳内などの深部病変を含めて局所の抗がん活性も全身の（遠達の）の抗がん活性も両方とも誘導し得ることを示している。
【０１１３】
[0113]
配列表
配列番号１（ＷＴヒトＳＴＩＮＧ）：
atgccccactccagcctgcatccatccatcccgtgtcccaggggtcacggggcccagaaggcagccttggttctgctgagtgcctgcctggtgaccctttgggggctaggagagccaccagagcacactctccggtacctggtgctccacctagcctccctgcagctgggactgctgttaaacggggtctgcagcctggctgaggagctgcgccacatccactccaggtaccggggcagctactggaggactgtgcgggcctgcctgggctgccccctccgccgtggggccctgttgctgctgtccatctatttctactactccctcccaaatgcggtcggcccgcccttcacttggatgcttgccctcctgggcctctcgcaggcactgaacatcctcctgggcctcaagggcctggccccagctgagatctctgcagtgtgtgaaaaagggaatttcaacgtggcccatgggctggcatggtcatattacatcggatatctgcggctgatcctgccagagctccaggcccggattcgaacttacaatcagcattacaacaacctgctacggggtgcagtgagccagcggctgtatattctcctcccattggactgtggggtgcctgataacctgagtatggctgaccccaacattcgcttcctggataaactgccccagcagaccggtgaccgggctggcatcaaggatcgggtttacagcaacagcatctatgagcttctggagaacgggcagcgggcgggcacctgtgtcctggagtacgccacccccttgcagactttgtttgccatgtcacaatacagtcaagctggctttagccgggaggataggcttgagcaggccaaactcttctgccggacacttgaggacatcctggcagatgcccctgagtctcagaacaactgccgcctcattgcctaccaggaacctgcagatgacagcagcttctcgctgtcccaggaggttctccggcacctgcggcaggaggaaaaggaagaggttactgtgggcagcttgaagacctcagcggtgcccagtacctccacgatgtcccaagagcctgagctcctcatcagtggaatggaaaagcccctccctctccgcacggatttctcttga
配列番号２（ＲＥＦヒトＳＴＩＮＧ）：
atgccccactccagcctgcatccatccatcccgtgtcccaggggtcacggggcccagaaggcagccttggttctgctgagtgcctgcctggtgaccctttgggggctaggagagccaccagagcacactctccggtacctggtgctccacctagcctccctgcagctgggactgctgttaaacggggtctgcagcctggctgaggagctgcgccacatccactccaggtaccggggcagctactggaggactgtgcgggcctgcctgggctgccccctccgccgtggggccctgttgctgctgtccatctatttctactactccctcccaaatgcggtcggcccgcccttcacttggatgcttgccctcctgggcctctcgcaggcactgaacatcctcctgggcctcaagggcctggccccagctgagatctctgcagtgtgtgaaaaagggaatttcaacgtggcccatgggctggcatggtcatattacatcggatatctgcggctgatcctgccagagctccaggcccggattcgaacttacaatcagcattacaacaacctgctacggggtgcagtgagccagcggctgtatattctcctcccattggactgtggggtgcctgataacctgagtatggctgaccccaacattcgcttcctggataaactgccccagcagaccggtgaccatgctggcatcaaggatcgggtttacagcaacagcatctatgagcttctggagaacgggcagcgggcgggcacctgtgtcctggagtacgccacccccttgcagactttgtttgccatgtcacaatacagtcaagctggctttagccgggaggataggcttgagcaggccaaactcttctgccggacacttgaggacatcctggcagatgcccctgagtctcagaacaactgccgcctcattgcctaccaggaacctgcagatgacagcagcttctcgctgtcccaggaggttctccggcacctgcggcaggaggaaaaggaagaggttactgtgggcagcttgaagacctcagcggtgcccagtacctccacgatgtcccaagagcctgagctcctcatcagtggaatggaaaagcccctccctctccgcacggatttctcttga
配列番号３（ＡＱヒトＳＴＩＮＧ）：
Atgccccactccagcctgcatccatccatcccgtgtcccaggggtcacggggcccagaaggcagccttggttctgctgagtgcctgcctggtgaccctttgggggctaggagagccaccagagcacactctccggtacctggtgctccacctagcctccctgcagctgggactgctgttaaacggggtctgcagcctggctgaggagctgcgccacatccactccaggtaccggggcagctactggaggactgtgcgggcctgcctgggctgccccctccgccgtggggccctgttgctgctgtccatctatttctactactccctcccaaatgcggtcggcccgcccttcacttggatgcttgccctcctgggcctctcgcaggcactgaacatcctcctgggcctcaagggcctggccccagctgagatctctgcagtgtgtgaaaaagggaatttcaacgtggcccatgggctggcatggtcatattacatcggatatctgcggctgatcctgccagagctccaggcccggattcgaacttacaatcagcattacaacaacctgctacggggtgcagtgagccagcggctgtatattctcctcccattggactgtggggtgcctgataacctgagtatggctgaccccaacattcgcttcctggataaactgccccagcagaccgctgaccgagctggcatcaaggatcgggtttacagcaacagcatctatgagcttctggagaacgggcagcgggcgggcacctgtgtcctggagtacgccacccccttgcagactttgtttgccatgtcacaatacagtcaagctggctttagccgggaggataggcttgagcaggccaaactcttctgccagacacttgaggacatcctggcagatgcccctgagtctcagaacaactgccgcctcattgcctaccaggaacctgcagatgacagcagcttctcgctgtcccaggaggttctccggcacctgcggcaggaggaaaaggaagaggttactgtgggcagcttgaagacctcagcggtgcccagtacctccacgatgtcccaagagcctgagctcctcatcagtggaatggaaaagcccctccctctccgcacggatttctcttga
配列番号４（ＷＴ  ＳＴＩＮＧ残基１５５〜３４１）：
VAHGLAWSYYIGYLRLILPELQARIRTYNQHYNNLLRGAVSQRLYILLPLDCGVPDNLSMADPNIRFLDKLPQQTGDRAGIKDRVYSNSIYELLENGQRAGTCVLEYATPLQTLFAMSQYSQAGFSREDRLEQAKLFCRTLEDILADAPESQNNCRLIAYQEPADDSSFSLSQEVLRHLRQEEKEEV
【要約】  本発明は、（１Ｒ，３Ｒ，１５Ｅ，２８Ｒ，２９Ｒ，３０Ｒ，３１Ｒ，３４Ｒ，３６Ｒ，３９Ｓ，４１Ｒ）−２９，４１−ジフルオロ−３４，３９−ビス（スルファニル）−２，３３，３５，３８，４０，４２−ヘキサオキサ−４，６，９，１１，１３，１８，２０，２２，２５，２７−デカアザ−３４λ５，３９λ５−ジホスファオクタシクロ［２８．６．４．１３，３６．１２８，３１．０４，８．０７，１２．０１９，２４．０２３，２７］ドテトラコンタ−５，７，９，１１，１５，１９，２１，２３，２５−ノナエン−３４，３９−ジオン（化合物（Ｉ））のアンモニウム塩、化合物（Ｉ）のナトリウム塩、又は化合物（Ｉ）の結晶であって、医薬品の原薬として使用される可能性を有する結晶を提供する。
【化１】
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【選択図】  なし【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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