(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ  ）ＳＢＴ２０５５株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９５３）である乳酸菌及び／又はその培養物を有効成分とするインターフェロンλ誘導剤（ただし、循環器疾患用途を除く）。  
【請求項２】
腸管膜リンパ節のインターフェロンλを誘導することを特徴とする、請求項１に記載のインターフェロンλ誘導剤。  
【請求項３】
請求項１又は２に記載のインターフェロンλ誘導剤を含む、抗がん剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のインターフェロンλ誘導剤を含む、ウイルス感染予防または治療剤。  
【請求項５】
ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ  ）ＳＢＴ２０５５株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９５３）である乳酸菌及び／又はその培養物を有効成分とするインターフェロンλ誘導用栄養組成物、飲食品又は飼料（ただし、循環器疾患用途を除く）。
【請求項６】
ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ  ）ＳＢＴ２０５５株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９５３）である乳酸菌及び／又はその培養物を有効成分とする抗癌用の飲食品であって、飲食品が粉乳、乳飲料、乳酸菌  飲料、発酵乳、清涼飲料水、チーズ、マーガリン、クリーム、プリン、ゼリー、ウエハースのいずれかである、前記飲食品。  
【請求項７】
ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ  ）ＳＢＴ２０５５株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９５３）である乳酸菌及び／又はその培養物を有効成分とするウイルス感染予防又は治療用の飲食品であって、飲食品が粉乳、乳飲料、乳酸菌飲料、発酵乳、清涼飲料水、チーズ、マーガリン、クリーム、プリン、ゼリー、ウエハースのいずれかである、前記飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ラクトバチルス属に属する乳酸菌を有効成分とする、インターフェロンλ誘導剤、および、ラクトバチルス属に属する乳酸菌を有効成分とする、インターフェロンλ誘導剤を含有する栄養組成物、飲食品又は飼料に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫は、多くの動物に備わった生体防御機構であり、外部より侵入する細菌やウイルスなどの病原体や生体内で生じた腫瘍細胞を排除する役割を担う。免疫系には自然免疫系と獲得免疫系の２つのシステムが存在し、この両者が生体防御機能を担っている。自然免疫系は先天的に備わった免疫系であり、獲得免疫系は後天的に外来異物の刺激に応じて抗体産生能などが形成される免疫系である。細菌やウイルスなどの異物が体内に進入すると、まず自然免疫系を担うマクロファージ、ＮＫ細胞、樹状細胞が異物の除去に向けて働く。この自然免疫系の働きは、インターフェロンやインターロイキンといったサイトカインと呼ばれる物質によって制御されている。特にインターフェロンは抗ウイルス作用、抗腫瘍作用といった効果を持つことから、医療現場に欠かせない治療薬として使用されており、社会的にも関心が高い物質である。生体内におけるインターフェロンシステムはその特徴として、ウイルス感染などの刺激によって特異的かつ一過的に発現が誘導される。インターフェロンは大きく分けてＩ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型の３つの種類に分けられ、それぞれ異なる細胞内受容体と相互作用を及ぼしインターフェロン応答遺伝子の発現誘導を促して抗ウイルス及び抗腫瘍効果、免疫活性の制御を行う。
【０００３】
樹状細胞やマクロファージといった抗原提示細胞や感染細胞は、ウイルス感染時に、ウイルス由来ＲＮＡ鎖や表層に存在するエンベロープタンパクといった分子をＴｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒといったパターン認識受容体によって認識し、インターフェロンαやβに代表されるＩ型インターフェロンを産生することでウイルスへの抵抗性を強化している。一方、ウイルス感染時にウイルス由来分子を認識して末梢血単核球や樹状細胞から主に産生されることが知られているＩＩＩ型インターフェロンであるインターフェロンλは、インターフェロンλに特異的な受容体に作用することで抗ウイルス効果を発揮する（非特許文献１）。昨今の研究によりインターフェロンλによるウイルス感染の予防効果は、インフルエンザやＳＡＲＳ、ＲＳウイルスといった呼吸器系に感染するウイルス、Ｃ型やＢ型といった肝炎ウイルス、血液脳関門を通過する西ナイルウイルスに代表される脳炎ウイルス、そしてノロウイルスといった腸管での感染を行うウイルスらにおいて明らかにされている（非特許文献２）。特に肝炎ウイルス患者数は世界中に持続感染者を含めてＢ型で３億５千万人、Ｃ型で１億７千万人と推定され規模は大きく、慢性的な肝炎は肝硬変や肝臓癌へ発展することが分かっている。近年開発中のインターフェロンλ製剤の治験結果では、慢性的な肝炎ウイルスに対する高い治療効果が報告されている（非特許文献３）。またアトピー性皮膚炎に代表される乾癬症や、自己免疫疾患である関節リウマチ炎への関与も報告されている（非特許文献４）。
【０００４】
臨床において、先述の数々の疾患においてインターフェロン製剤が投与されているが、重篤な副作用として臓器非特異的な自己抗体の産生を促し、これにより甲状腺機能の低下や周期性四肢麻痺、間質性肺炎など重篤な合併症状を生じさせることが報告されている（非特許文献５）。したがって外的に直接インターフェロンを投与するのではなく、副作用の発症の恐れなく安全かつ日常的な体内摂取により生体内中でのインターフェロン量を増加させる技術が期待されていた。
【０００５】
そこで、生体内で産生されるインターフェロンλの量を増加させることができれば、重篤な副作用を起こすことなく上述のウイルス感染の予防を促すことのみならず、種々の炎症性疾患や癌といった重篤な病態リスクの回避が可能である。したがって、日常的に摂取することにより生体内でのインターフェロンλの産生を促すような安全性の高い食品成分が期待されていた。
【０００６】
従来技術として樹状細胞を用いた系でのＩ・II・III型インターフェロン（特許文献１）、脾臓細胞を用いた系でのII型インターフェロン（特許文献２）の産生が、乳酸菌の添加により亢進することが示されている。
しかし、細胞系でみられた現象が生体での現象と一致しない事例は数多く、先述の特許文献においても（特許文献１・２）、乳酸菌の摂取が生体内でのインターフェロンを介した免疫賦活効果に直結しているものと結論付けられないことが課題であった。
また、現在に至るまで経口での摂取により生体内でのインターフェロンλ量を増加させる効果を有する食品成分は示されていない。
【０００７】
従来技術にある細胞系でのインターフェロンλの産生亢進能力を示す乳酸菌は乳酸球菌に限られており（特許文献１）、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸桿菌を用いることで、これらを用いたより幅広い乳製品によって生体内でのインターフェロンλ量を増加させることが可能となる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】再表２０１２−９１０８１号公報
【特許文献２】特開２００９−２５４２３６号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｊａｎ  Ｖｉｌｃｅｋ：Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｌｏｇｙ２００３  １，８−９
【非特許文献２】Ｈｅｌｅｎ  Ｍ．Ｌａｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．：  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２０１５  ４３，１５−２８
【非特許文献３】Ａｎｄｒｅｗ  Ｊ  Ｍｕｉｒ  ｅｔ  ａｌ．：Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２０１４  ６１，１２３８−１２４６
【非特許文献４】Ｂｌａｚｅｋ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．：Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０１５  ２１２，８４５−８５３
【非特許文献５】Ｋｅｐｐｅｋｅ  ＧＤ  ｅｔ  ａｌ．：Ｗｏｒｌｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２０１６  ２２（６）  １９６６−１９７４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
上記の様に、インターフェロンλについての研究は進められているが、インターフェロンλ製剤の市販には至っていない。またインターフェロン治療による重篤な副作用や高額な治療費用といった問題も考慮しなくてはならないことから、健常人が予防的観点からインターフェロンλを服用することは困難であった。
そこで、本発明者らは、日常摂取しても安全であるものの中から、インターフェロンλの遺伝子発現量を生体内で増加させる因子を鋭意探索した結果、乳酸菌のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌を見出し、本発明を完成させるに至った。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
即ち本発明は以下の構成を有する
（１）ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌及び／又はその培養物を有効成分とするインターフェロンλ誘導剤。
（２）前記乳酸菌がラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）であることを特徴とする、（１）に記載のインターフェロンλ誘導剤。
（３）前記ラクトバチルス・ガセリがラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５５株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９５３）であることを特徴とする、（２）に記載のインターフェロンλ誘導剤。
（４）腸管膜リンパ節のインターフェロンλを誘導することを特徴とする、（１）〜（３）のいずれかに記載のインターフェロンλ誘導剤。
（５）（１）〜（４）のいずれかに記載のインターフェロンλ誘導剤を含む、抗がん剤。
（６）（１）〜（４）のいずれかに記載のインターフェロンλ誘導剤を含む、ウイルス感染予防または治療剤。
（７）（１）〜（４）のいずれかに記載のインターフェロンλ誘導剤を含む、抗循環器疾患剤。
（８）（１）〜（７）のいずれかに記載の剤を含有する栄養組成物、飲食品又は飼料。
（９）（１）〜（３）のいずれかに記載のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌及び／又はその培養物を有効成分とする、飲食品が粉乳、乳飲料、乳酸菌飲料、発酵乳、清涼飲料水、チーズ、マーガリン、クリーム、プリン、ゼリー、ウエハースのいずれかである、抗癌用の飲食品。
（１０）（１）〜（３）のいずれかに記載のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌及び／又はその培養物を有効成分とする、飲食品が粉乳、乳飲料、乳酸菌飲料、発酵乳、清涼飲料水、チーズ、マーガリン、クリーム、プリン、ゼリー、ウエハースのいずれかである、ウイルス感染治療剤用の飲食品。
（１１）（１）〜（３）のいずれかに記載のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌及び／又はその培養物を有効成分とする、飲食品が粉乳、乳飲料、乳酸菌飲料、発酵乳、清涼飲料水、チーズ、マーガリン、クリーム、プリン、ゼリー、ウエハースのいずれかである、抗循環器疾患用の飲食品。
【発明の効果】
【００１２】
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌を摂取する事で、生体内でインターフェロンλ遺伝子の発現を誘導することにより、ガンや感染症からの予防及び／又は治療をすることが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】マウスにラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５５株菌体を１週間摂取させた後に、腸管膜リンパ節におけるインターフェロンλ遺伝子の発現量を比較した図である。
【図２】マウスにラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５５株培養物を１週間摂取させた後に、腸管膜リンパ節におけるインターフェロンλ遺伝子の発現量を比較した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明における乳酸菌としては、ラクトバチルス属に属する乳酸菌を用いることが出来る。ラクトバチルス属に属する乳酸菌としては、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス・へルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・デルブルッキー・亜種・ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ  ｓｓｐ．  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・ラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・アニマリス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｉｍａｌｉｓ）、ラクトバチルス・ラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・サリバリウス・亜種・サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  ｓｓｐ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、ラクトバチルス・ケフィラノファシエンス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｋｅｆｉｒａｎｏｆａｃｉｅｎｓ）、ラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバチルス・ケフィラノファシエンス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｋｅｆｉｒａｎｏｆａｃｉｅｎｓ）、ラクトバチルス・デルブルッキー・亜種・ラクティス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ  ｓｓｐ．ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルス・アミロボラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｖｏｒｕｓ）、ラクトバチルス・ブクネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）、ラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）、ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・クリスパタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）等、ラクトバチルス属に属する乳酸菌を用いることができる。特に、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）に属する乳酸菌が好ましく、更に好ましいのはラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９５３）、ＳＢＴ１２６５Ｔ（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１４８２５）、ＳＢＴ１０２３９（ＦＥＲＭ  Ｐ−１６６３９）、ＳＢＴ１７０３（ＦＥＲＭ  Ｐ−１７７８５）、ＳＢＴ１０２４１（ＦＥＲＭ  Ｐ−１７７８６）、ＳＢＴ１０８０１（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８１３７）、ＳＢＴ２０５６（ＦＥＲＭ  Ｐ−１１０３８）、ＳＢＴ０２７４（ＦＥＲＭ  Ｐ−１１０３９として寄託）であり、最も好ましいのはラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９５３）であるが、これらに限定されるものではない。
【００１５】
これらの乳酸菌は、単独で用いる事もできるし、適宜２種以上の乳酸菌を組み合わせて用いてもよい。
ラクトバチルス属に属する乳酸菌は、乳酸菌培養の常法に従って培養することができる。培養培地には、乳培地又は乳成分を含む培地、これを含まない半合成培地など種々の培地を用いることができる。このような培地としては、還元脱脂乳培地などを例示することができる。
【００１６】
得られた培養物から遠心分離などの集菌手段によって分離された菌体をそのまま本発明の有効成分として用いることができる。濃縮、乾燥、凍結乾燥などした菌体を用いることもできるし、加熱乾燥などにより死菌体にしてもよい。
菌体として純粋に分離されたものだけでなく、培養物、懸濁物、その他の菌体含有物や、菌体を酵素や物理的手段を用いて処理した細胞質や細胞壁画分も用いることができる。
培養物などの形態としては、合成培地であるＭＲＳ培地（ＤＩＦＣＯ社製）、還元脱脂乳培地など一般的に乳酸菌の培養に用いられる培地を用いた培養物だけでなく、チーズ、発酵乳、乳製品乳酸菌飲料などの乳製品などを例示することができるが特に限定されるものではない。
【００１７】
さらに、得られた培養物から遠心分離、濾過操作などの方法を用いて、乳タンパク質沈殿や菌体成分を除去することによって調製した培養上清なども用いることができる。固形分が少ない上清であるため、飲食品などへの適用範囲が広くなる。例えば、還元脱脂乳培養物を５，０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離することにより培養上清を調製することができる。
【００１８】
本発明のインターフェロンλ誘導剤の製剤化に際しては、製剤上許可されている賦型剤、安定剤、矯味剤などを適宜混合して濃縮、凍結乾燥するほか、加熱乾燥して死菌体にしてもよい。これらの乾燥物、濃縮物、ペースト状物も含有される。また、ラクトバチルス属に属する乳酸菌のインターフェロンλ誘導作用を妨げない範囲で、賦型剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、懸濁剤、コーティング剤、その他の任意の薬剤を混合して製剤化することもできる。剤形としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、シロップ剤などが可能であり、これらを経口的に投与することが望ましい。
本発明のインターフェロンλ誘導剤はどのような飲食品に配合しても良く、飲食品の製造工程中に原料に添加しても良い。飲食品の例としては、チーズ、発酵乳、乳製品乳酸菌飲料、乳酸菌飲料、バター、マーガリンなどの乳製品、乳飲料、果汁飲料、清涼飲料などの飲料、ゼリー、キャンディー、プリン、マヨネーズなどの卵加工品、バターケーキなどの菓子・パン類、さらには、各種粉乳の他、乳幼児食品、栄養組成物などを挙げることができるが特に限定されるものではない。
【００１９】
本発明のインターフェロンλ誘導剤は、これを有効成分とする免疫賦活剤、ウイルス感染予防または治療剤、免疫寛容誘導剤、または抗炎症剤として利用することができる。
さらに、本発明のインターフェロンλ誘導剤を飼料に配合することができる。前記飲食品と同様にどのような飼料に配合しても良く、飼料の製造工程中に原料に添加しても良い。
【００２０】
ラクトバチルス属に属する乳酸菌の菌体又は培養物を配合して、インターフェロンλ誘導剤あるいは、インターフェロンλ誘導用飲食品、栄養組成物、飼料などの素材又はそれら素材の加工品に配合させて使用する場合、ラクトバチルス属に属する乳酸菌の配合割合は特に限定されず、製造の容易性や好ましい一日投与量にあわせて適宜調節すればよい。投与対象者の症状、年齢などを考慮してそれぞれ個別に決定されるが、通常成人の場合、ラクトバチルス・ガセリの培養物などを１０〜２００ｇ、あるいはその菌体自体を０．１〜５，０００ｍｇ摂取できるように配合量などを調整すればよい。このようにして摂取することにより所望の効果を発揮することができる。
インターフェロンλは３つのアイソフォーム（インターフェロンλ１、λ２、λ３）からなる。「Ｔｉｍｏｔｈｙ  Ｊ．  Ｎｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．：Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１５  ３４７，２６９−２７３」に記載の通り、インターフェロンλの増減を評価する場合には、インターフェロンλ２及びインターフェロンλ３の合計値（インターフェロンλ２／３とも示す）の増減を評価する事により可能である。
【００２１】
以下に、実施例及び試験例を示し、本発明についてより詳細に説明するが、これらは単に例示するのみであり、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
【実施例】
【００２２】
＜試験例１＞
ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５５株菌体によるマウスのインターフェロンλ遺伝子発現誘導作用
１−１．試験方法
（１）ラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５株菌体の調製
ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５５株を液体培地ＭＲＳｂｒｏｔｈ（Ｄｉｆｃｏ）で１６時間培養した後、遠心分離により菌体を分離した。菌体は滅菌生理食塩水で２回、超純水で１回洗浄した後、凍結乾燥した。凍結乾燥粉末は１０ｍｇ／ｍＬとなるようにＰＢＳ（１０ｍＭリン酸緩衝生理食塩水）  に懸濁した後、使用するまで−２０℃で保存した。
（２）試験手順
２４匹のＣ５７ＢＬ／６Ｎマウス（７週齢、雄）をｃｏｎｔｒｏｌ群とＳＢＴ２０５５群の２群（ｎ＝１２）に分けた。ｃｏｎｔｒｏｌ群にはトレハロース２５％Ｗ／Ｖ溶液を、ＳＢＴ２０５５群にはラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５５株を５×１０９ｃｆｕ／ｍｌとなるように懸濁したトレハロース２５％Ｗ／Ｖ溶液を一日一回、胃ゾンデ法により各投与溶液０．２ｍＬを経口投与した。摂取開始から１週間後に解剖し、腸間膜リンパ節を摘出しＴＲＩｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を１ｍｌ添加し、ビーズ破砕し均一化した細胞液を得た。細胞液を１．５ｍｌ容のチューブに回収し、０．２ｍｌのクロロホルムを添加して十分に攪拌した後、二層に分離した上層（水層）を新たな１．５ｍｌ容のチューブに回収した。回収液に０．５ｍｌの２−プロピルアルコールを添加し、１０分間静置後、１５，０００ｒｐｍ、４℃の条件にて１５分間遠心分離し、ｔｏｔａｌ  ＲＮＡの沈殿物を得た。得られたｔｏｔａｌ  ＲＮＡからＲｅｖｅｒＴｒａ  Ａｃｅ（登録商標）（ＴＯＹＯＢＯ）を  用いてｃＤＮＡを合成し、ＫＡＰＡ  ＳＹＢＲ（登録商標）Ｆａｓｔ  ｑＰＣＲ  Ｋｉｔ（Ｋａｐａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用したｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲを行いインターフェロンλ２／３、ＲＰＬ１９内部標準遺伝子の発現量を測定し、前者を後者で除した値を発現量として図１に示した。
その際、表１に示した検出プライマーを用いた。インターフェロンλ２／３の測定には配列表配列番号１，２、ＲＰＬ１９の測定には配列表配列番号３，４の塩基配列を用いた。
【００２３】
【表１】
0006767157.tif 000002
【００２４】
１−２．試験結果
図１より、ＳＢＴ２０５５群はｃｏｎｔｒｏｌ群と比較して腸間膜リンパ節におけるインターフェロンλ２／３遺伝子の発現量が１７．２５倍高いことが分かった。すなわち、ラクトバチルス・ガセリ菌体の摂取によって、細胞のインターフェロンλの発現が誘導されることが示された。
【００２５】
＜試験例２＞
ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ    ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５５株培養物によるマウスのインターフェロンλ遺伝子発現誘導作用
２−１．試験方法
（１）ラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５株培養物の調製
ラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５株菌体をＭＲＳ液体培地（Ｄｉｆｃｏ社）にて培養した。対数増殖期にある各培養液を、０．３％の酵母エキスを添加した１０％還元脱脂乳（１１５℃、２０分滅菌）に１％接種し、各々マザーカルチャーを作製した。これに１０％の還元脱脂乳を添加して、１００℃にて１０分間加熱したヨーグルトミックスに２．５％％添加して調製した。３７℃で発酵を行い、乳酸酸度０．８５％に到達した時点で冷却し、発酵を終了させた。得られた発酵乳を凍結乾燥してラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５株発酵培養物の粉末を得た。
（２）試験手順
（１）で得られたラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５５株の培養物を用いてインターフェロンλ遺伝子誘導試験を行った。試験方法は試験例１に準じて行った。対照群にはＰＢＳ溶液を、ＳＢＴ２０５５群には実施例１で調製した培養物を２５０ｍｇ／ｍｌとなるように懸濁したＰＢＳ溶液を一日一回、胃ゾンデ法により各投与溶液０．２ｍＬを経口投与した。試験例１と同様の手順にて、腸間膜リンパ節のインターフェロンλ２／３遺伝子発現量を測定した結果を図２に示した。
【００２６】
２−２．試験結果
図２より、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５５株の培養物を添加した群（ＳＢＴ２０５５群）の方が、添加しない群（コントロール群）よりもインターフェロンλ遺伝子発現量が高いことが分かった。すなわち、ラクトバチルス・ガセリ菌体培養物の摂取によって、細胞のインターフェロンλの発現が誘導されることが示された。
【実施例１】
【００２７】
インターフェロンλ誘導剤（顆粒）の製造
ラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５株を食用可能な合成培地（０．５％酵母エキス、０．１％トリプチケースペプトン添加）に５重量％接種し、３８℃で１５時間培養後、遠心分離で菌体を回収した。回収した菌体を凍結乾燥し、前記菌体の凍結乾燥粉末を得た。この凍結乾燥粉末１ｇを乳糖５ｇと混合し、顆粒状に成形して本発明のインターフェロンλ誘導剤を得た。
【実施例２】
【００２８】
インターフェロンλ誘導剤（顆粒）の製造
ラクトバチルス・ガセリＳＢＴ１０８０１（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８１３７）株を食用可能な合成培地（０．５％酵母エキス、０．１％トリプチケースペプトン添加）に５重量％接種し、３８℃で１５時間培養後、遠心分離で菌体を回収した。回収した菌体を凍結乾燥し、前記菌体の凍結乾燥粉末を得た。この凍結乾燥粉末１ｇを乳糖５ｇと混合し、顆粒状に成形して本発明のインターフェロンλ誘導剤を得た。
【実施例３】
【００２９】
インターフェロンλ誘導剤（散剤）の製造
第１３改正日本薬局方解説書製剤総則「散剤」の規定に準拠し、上記実施例１で得られたラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５株の凍結乾燥粉末１０ｇに乳糖（日局）４００ｇ、バレイショデンプン（日局）６００ｇを加えて均一に混合し、本発明のインターフェロンλ誘導剤を製造した。
【実施例４】
【００３０】
インターフェロンλ誘導剤（散剤）の製造
第１３改正日本薬局方解説書製剤総則「散剤」の規定に準拠し、上記実施例２で得られたラクトバチルス・ガセリＳＢＴ１０８０１（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８１３７）の凍結乾燥粉末１０ｇに乳糖（日局）４００ｇ、バレイショデンプン（日局）６００ｇを加えて均一に混合し、本発明のインターフェロンλ誘導剤を製造した。
【実施例５】
【００３１】
スティック状栄養健康食品の製造
ビタミンＣ４０ｇまたはビタミンＣとクエン酸の等量混合物４０ｇ、グラニュー糖１００ｇ、コーンスターチと乳糖の等量混合物６０ｇに、上記実施例１で得られたラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５株の凍結乾燥粉末４０ｇを加えて混合した。混合物を袋に詰め、本発明のスティック状栄養健康食品を１５０袋製造した。
【実施例６】
【００３２】
飼料の製造
大豆粕１２ｋｇ、脱脂粉乳１４ｋｇ、大豆油４ｋｇ、コーン油２ｋｇ、パーム油２３．２ｋｇ、トウモロコシ澱粉１４ｋｇ、小麦粉９ｋｇ、ふすま２ｋｇ、ビタミン混合物５ｋｇ、セルロース２．８ｋｇ、ミネラル混合物２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間殺菌して、実施例１で得られたラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５株１０ｋｇを配合して、本発明の飼料を製造した。
【実施例７】
【００３３】
飲料の製造
上記実施例１で得られたラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５株１ｇを６９９ｇの脱イオン水に溶解した後、４０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ  Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、９，５００ｒｐｍで２０分間撹拌混合した。マルチトール１００ｇ、酸味料２ｇ、還元水飴２０ｇ、香料２ｇ、脱イオン水１７６ｇを添加した後、１００ｍｌのガラス瓶に充填し、９５℃、１５秒間殺菌後、密栓し、本発明の飲料１０本（１００ｍｌ入り）を製造した。
【実施例８】
【００３４】
粉乳の製造
上記実施例２で得られたラクトバチルス・ガセリＳＢＴ１０８０１株１００ｇ、脱脂粉乳９．２ｋｇ、脱イオン水９０ｋｇを混合し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ  ＲＯＢＯ  ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合した。この溶液を噴霧乾燥して本発明の粉乳１０ｋｇを製造した。
【実施例９】
【００３５】
乳飲料の製造
上記実施例１で得られたラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５株４０ｇ、牛乳９．９６ｋｇを混合し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ  ＲＯＢＯ  ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合した。１３０℃で２秒間、加熱殺菌した後、１０℃以下まで冷却して本発明の乳飲料１０ｋｇを製造した。
【実施例１０】
【００３６】
発酵乳の製造
上記実施例２で得られたラクトバチルス・ガセリＳＢＴ１０８０１株５ｇ、脱脂粉乳１７００ｇ、グルコース３００ｇ、脱イオン水７６９５ｇを混合し、９５℃で２時間保持することで加熱殺菌した。これを３７℃まで冷却し、乳酸菌スターター（Ｌｂ．ｃａｓｅｉ）を３００ｇ植菌し、攪拌混合後、３７℃に保持したインキュベーター内でｐＨ４．０まで発酵させた。ｐＨ４．０到達後１０℃以下まで冷却し、本発明の発酵乳１０ｋｇを製造した。
【実施例１１】
【００３７】
乳酸菌飲料の製造
脱脂粉乳１７００ｇ、グルコース３００ｇ、脱イオン水７７００ｇを混合し、９５℃で２時間保持することで加熱殺菌した。これを３７℃まで冷却し、乳酸菌スターター（Ｌｂ．ｃａｓｅｉ）を３００ｇ植菌し、攪拌混合後、３７℃に保持したインキュベーター内でｐＨ４．０まで発酵させた。ｐＨ４．０到達後、攪拌しながら１０℃以下まで冷却し、発酵ベースを得た。また、上記実施例２で得られたラクトバチルス・ガセリＳＢＴ１０８０１株５０ｇ、上白糖１８００ｇ、酸味料２０ｇ、香料１０ｇ、脱イオン水８１２０ｇを混合し、９０℃で１０分間殺菌後１０℃以下まで冷却し、糖液を得た。前述の発酵ベース２０００ｇと糖液８０００ｇを混和し、均質機で組織を滑らかにし、２００ｍｌ入り紙容器５０本に分注後、アルミ蓋で密封し、本発明の乳酸菌飲料１０ｋｇを製造した。
【実施例１２】
【００３８】
清涼飲料水の製造
上記実施例１で得られたラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５株２００ｍｇ、５０％乳酸０．７５ｋｇ、エリスリトール５．７ｋｇ、香料１ｋｇ、脱イオン水４２．５５ｋｇを混合し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ  ＲＯＢＯ  ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合した。この溶液を９０℃で１０分間殺菌後１０℃以下まで冷却することで、本発明の清涼飲料水５０ｋｇを製造した。
【実施例１３】
【００３９】
チーズの製造
ゴーダチーズ９ｋｇ、チェダーチーズ９ｋｇ、アサリむき身１ｋｇ、上記実施例２で得られたラクトバチルス・ガセリＳＢＴ１０８０１株１００ｇ、クエン酸ナトリウム２００ｇ、脱イオン水７００ｇを混合し、８５℃で乳化した。乳化後にチーズをカルトンに充填して２昼夜、５℃で冷却して、本発明のチーズ２０ｋｇを製造した。
【実施例１４】
【００４０】
マーガリンの製造
大豆硬化油２ｋｇ、大豆白絞油４ｋｇ、パーム油２．５ｋｇ、グリセリン脂肪酸エステル５０ｇを混合して油層を調製した。次に、上記実施例１で得られたラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５株８ｇ、乳酸１０ｇ、脱イオン水１４３２ｇを混合し、油層へ添加して油中水型乳化物を得た、この乳化物をマーガリン製造機で冷却、固化および練圧して、本発明のマーガリン１０ｋｇを製造した。
【実施例１５】
【００４１】
クリームの製造
ナタネ硬化油４．５ｋｇ、レシチン４０ｇ、モノグリセリン脂肪酸エステル１０ｇ、ソルビタン脂肪酸エステル１０ｇを混合し、油相を調製した。次に、上記実施例２で得られたラクトバチルス・ガセリＳＢＴ１０８０１株８ｇ、脱脂粉乳４００ｇ、カゼインナトリウム１０ｇ、シュガーエステル２０ｇ、リン酸塩１０ｇ、キサンタンガム５ｇ、脱イオン水４．９８７ｋｇを混合して、水相を調製した。水相を６５℃に加温し、７０℃に加温した油相を少量ずつ攪拌しながら添加し、ＴＫホモミクサー（ＴＫ  ＲＯＢＯ  ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合した。これを均質機で均質処理して本発明のクリーム１０ｋｇを製造した。
【実施例１６】
【００４２】
プリンの製造
はちみつ２０００ｇ、上記実施例１で得られたラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５株７０ｇ、脱脂粉乳８００ｇ、マスカルポーネ３００ｇ、液状水飴７００ｇ、グラニュー糖５００ｇ、生クリーム２５０ｇ、バター２００ｇ、加糖卵黄４００ｇ、ゼラチン４０ｇ、寒天１５ｇ、ローカストビーンガム１２０ｇ、脱イオン水４６０５ｇを混合して、プリンミックスとした。このプリンミックスをＴＫホモミクサー（ＴＫ  ＲＯＢＯ  ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合し、６０℃に加熱して溶解した後、１００ｇずつ容器へ充填して冷却することで、本発明のプリン１００個を製造した。
【実施例１７】
【００４３】
ゼリーの製造
上記実施例２で得られたラクトバチルス・ガセリＳＢＴ１０８０１株２０ｇ、果糖２０００ｇ、グラニュー糖１５００ｇ、水飴５００ｇ、寒天１００ｇ、香料１０ｇ、脱イオン水５８７０ｇを混合し、ＴＫホモミクサー（ＴＫ  ＲＯＢＯ  ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合し、５０℃に加熱して溶解した後、１００ｇずつ容器へ充填して冷却することで、本発明のゼリー１００個を製造した。
【実施例１８】
【００４４】
ウエハースの製造
上記実施例１で得られたラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５株０．０２ｋｇ、小麦粉８．５ｋｇ、コーンスターチ１．２１ｋｇ、パーム油０．２２ｋｇ、膨張剤０．０５ｋｇを混合した後、脱イオン水を適量加えてバッターを調製した後、ウエハース焼成機で焼成して、本発明のウエハース１０ｋｇを製造した。
【産業上の利用可能性】
【００４５】
ラクトバチルス属に属する乳酸菌、該乳酸菌を含有する発酵乳または乳酸菌飲料を摂取する事で、腸管のインターフェロンλ遺伝子の発現を誘導することにより、ガンの増殖を抑制するとともに、感染症の予防、治療をすることができ、免疫疾患に有効な医薬品となる。
【受託番号】
【００４６】
［寄託生物材料への言及］
ラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５
イ  当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人  産業技術総合研究所  特許生物寄託センター
日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６（郵便番号３０５−８５６６）
ロ  イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成８年３月２７日
ハ  イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９５３
【図１】
0006767157.tif 000003
【図２】
0006767157.tif 000004
【配列表】
0006767157000001.app