(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
微生物の増殖又は貯蔵のためのデバイスであって、
ａ）第１層の表面の第１部分を含む第１層であって、前記部分に第１の粘土を含む第１の水膨潤性ゲル化剤が固着されており、前記第１の粘土は未変性ヘクトライト、有機変性ヘクトライト、又はこれらの組み合わせを含む、第１層と、
ｂ）前記第１層から分離可能であり、第２層の表面の第１部分を含む、第２層であって、前記部分に第２の水膨潤性ゲル化剤が固着されている、第２層と、を含む、デバイス。
【請求項２】
前記第１層が、前記表面の第２部分を更に含み、前記第１層の前記第２部分が、第１層、接着剤、剥離ライナー、ダム、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
前記第２の水膨潤性ゲル化剤が第２の粘土を含む、請求項１又は請求項２に記載のデバイス。
【請求項４】
前記第１の粘土が、少なくとも１種の小板形状を備える、請求項１〜３のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項５】
前記第１の水膨潤性ゲル化剤が接着剤によって前記第１層に固着され、前記接着剤は前記第１層の表面の第１部分のみに配置されている、請求項１〜４のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項６】
前記第１の粘土が、有機変性ヘクトライトを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項７】
第１層、第２層、又はその両方の上に配置された指示薬を更に含み、上記指示薬が、塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）を少なくとも０．５ｍｇ／ｃｍ２の量で含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項８】
微生物の増殖又は貯蔵のためのデバイスを製造する方法であって、
表面を備える第１層を提供する工程と、
第１の粘土を含む第１の水膨潤性ゲル化剤を前記第１層の表面の第１部分に固着する工程と、
表面を備える第２層を提供する工程と、
第２の水膨潤性ゲル化剤を前記第２層の表面の第１部分に固着する工程と、
前記第１層を前記第２層に積層する工程と、を含み、前記第１の水膨潤性ゲル化剤は、少なくとも部分的に前記第２の水膨潤性ゲル化剤と接触し、
前記第１の粘土は未変性ヘクトライト、有機変性ヘクトライト、又はこれらの組み合わせを含む、方法。
【請求項９】
前記第１の水膨潤性ゲル化剤を前記第１層に固着する工程が、接着剤の層を前記第１層の表面上に配置することと、前記第１の粘土より疎水性の高い材料を前記第１層の第２部分を覆って配置することと、前記接着剤層を前記第１の水膨潤性ゲル化剤でコーティングすることと、を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記第１の水膨潤性ゲル化剤を前記第１層に固着する工程が、接着剤の層を前記第１層の表面の前記第１部分上に配置することと、前記接着剤層を前記第１の水膨潤性ゲル化剤でコーティングすることと、を含み、
前記第１層の表面の第２部分上に配置された前記第１の水膨潤性ゲル化剤のうちの少なくともいくらかを除去する工程を更に含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記デバイスを除染又は滅菌する工程を更に含み、前記除染又は滅菌する工程が、１０ｋｇｙ〜５０ｋｇｙの線量の電離放射線への曝露を含む、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
試料中の少なくとも１種の微生物を検出及び計数する方法であって、
請求項１〜７のいずれか一項に記載のデバイスを提供する工程と、
前記第１層を前記第２層から分離する工程と、
少なくとも１種の微生物を含有する試料のアリコートを前記第１の水膨潤性ゲル化剤又は前記第２の水膨潤性ゲル化剤に添加して、接種されたデバイスを形成する工程と、
前記第１層を前記第２層に再度積層する工程と、
前記接種されたデバイスをインキュベートする工程と、を含む、方法。
【請求項１３】
前記アリコートの添加後、前記第１層を前記第２層に再度積層する前に、前記第１のゲル化剤が混合されない、請求項１２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、水膨潤性ゲル化剤を含む、微生物の増殖及び検出に有用なデバイスに関する。本開示は、上記デバイスの製造方法、キット、及びデバイスを使用して微生物を増殖又は貯蔵する方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
グアーガム又はその他の天然ガムを低温可溶性ゲル化剤として使用する脱水微生物培養デバイスが知られている。天然ガムは、ほとんどの用途で良好に作用し、他の低温可溶性ポリマーと比較して優れたゲル化特性を有する。天然ガム使用の欠点として、一部の生物が天然ガムの糖鎖を代謝することができ、プレートの少なくとも一部の液化を生じることが挙げられる。更に、天然ガムは、プレートを除染又は滅菌するために一般的に使用されるレベルの電離放射線の下で分解する傾向がある。
【０００３】
それ故、微生物代謝、電離放射線等に対する耐性増大のような特徴を提供する微生物の増殖又は貯蔵のためのデバイスが依然として必要とされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
微生物の増殖又は貯蔵のためのデバイス及び方法が提供される。第１の態様では、デバイスが提供される。より具体的には、第１層の表面の第１部分を有する第１層を含むデバイスが提供され、当該部分に第１の粘土を含む第１の水膨潤性ゲル化剤が固着されている。このデバイスは、第１層から分離可能で、第２層の表面の第１部分を有する第２層を更に含み、当該部分に第２の水膨潤性ゲル化剤が固着されている。
【０００５】
第２の態様では、デバイスの製造方法を提供する。当該方法は、表面を有する第１層を提供する工程と、第１の粘土を含む第１の水膨潤性ゲル化剤を第１層の表面の第１部分に固着する工程と、表面を有する第２層を提供する工程と、第２の水膨潤性ゲル化剤を第２層の表面の第１部分に固着する工程と、を含む。この方法は、第１層を第２層に積層する工程を更に含み、その際第１の水膨潤性ゲル化剤は、少なくとも部分的に第２の水膨潤性ゲル化剤と接触する。任意に、デバイスは、電離放射線を用いて除染又は滅菌される。
【０００６】
第３の態様において、試料中の少なくとも１種の微生物を検出及び計数する方法が提供される。当該方法は、第１の態様によるデバイスを提供する工程、第１層を第２層から分離する工程、少なくとも１種の微生物を含有する試料のアリコートを第１又は第２の水膨潤性ゲル化剤上に添加して、接種されたデバイスを形成する工程、第１層を第２層に再度積層する工程、及び接種されたデバイスをインキュベートする工程を含む。
【０００７】
第４の態様では、キットが提供される。キットは、第１の態様による少なくとも１つのデバイス並びに当該デバイス（複数可）を使用した少なくとも１種の微生物の検出及び計数に関する説明書を含む。
【０００８】
当該デバイス及び方法は、微生物の簡便かつ迅速な検出を可能にする。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】微生物増殖デバイスの代表的な実施形態の上面斜視図（部分的に断面図）である。
【図２】微生物増殖デバイスの代表的な実施形態の上面斜視図（部分的に断面図）である。
【図３】図１のデバイスの断面図である。
【図４】基材層上に印刷された格子パターンを示す図２のデバイスの平面図である。
【図５】微生物増殖デバイスの層の代表的な実施形態の上面斜視図である。
【図６】ゲル化したヘクトライト粘土の構造の概略図である。
【図７】微生物増殖デバイスの層の代表的な実施形態の平面図（部分的に断面図）である。
【図８Ａ】微生物増殖デバイスの代表的な実施形態の断面概略図である。
【図８Ｂ】微生物増殖デバイスの別の代表的な実施形態の断面概略図である。
【図８Ｃ】微生物増殖デバイスの更なる代表的な実施形態の断面概略図である。
【図８Ｄ】微生物増殖デバイスのなお更なる代表的な実施形態の断面概略図である。  上で識別された図面は、原寸大で描写されていない場合があるが、本開示の様々な実施形態を示している。また、［発明を実施するための形態］で言及されるように、他の実施形態も検討され得る。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
微生物を増殖又は貯蔵するためのデバイス及び方法、並びにキット及びデバイスの製造方法が提供される。
【００１１】
端点によるいずれの数値範囲の列挙も、その範囲の端点、その範囲内の全ての数、及び述べられた範囲内のいずれのより狭い範囲をも含むことが意図される（例えば、１〜５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８、４、及び５を含む）。本明細書及び実施形態で使用される量又は成分、特性の測定値などを表す全ての数は、別途記載のない限り、全ての場合において「約」という用語によって修正されることを理解されたい。したがって、特に指示がない限り、前述の明細書及び添付の実施形態の列挙において示す数値パラメータは、本開示の教示を利用して当業者が得ようとする所望の特性に依存して変化しうる。最低でも、請求項記載の実施形態の範囲への均等論の適用を限定する試みとしてではなく、報告される有効桁の数に照らして、通常の四捨五入を適用することにより、各数値パラメータは少なくとも解釈されるべきである。
【００１２】
以下の用語集の定義された用語について、特許請求の範囲又は明細書の他の箇所で異なる定義が提供されない限り、これらの定義が本出願全体に適用されるものとする。
【００１３】
用語集
明細書及び特許請求の範囲の全体を通して特定の用語が使用されており、大部分は周知であるが、いくらか説明を必要とするものもある。本明細書で使用されるとき、以下のとおりであると理解すべきである。
【００１４】
用語「１つの（a）」、「１つの（an）」、及び「その（the）」は、「少なくとも１つの」と同義に使用され、記載される要素のうちの１つ以上を意味する。
【００１５】
用語「及び／又は（and/or）」は、一方又は両方を意味する。例えば、表現「Ａ及び／又はＢ」は、Ａ、Ｂ、又はＡとＢとの組み合わせを意味する。
【００１６】
「集塊した」とは、通常、電荷又は極性により互いに保持し合っている一次粒子又は凝集粒子の弱い結び付きを指す。集塊粒子は、通常、例えば、液体中の集塊粒子の分散中に遭遇したせん断力によって、より小さな存在物に分解され得る。用語「凝集した」及び「凝集体」とは、例えば、化学的残基処理、化学的共有結合、又は化学的イオン結合によって共に結合し合うことの多い、一次粒子の強い結び付きを指す。凝集体をより小さな単位へ更に分解することは、達成するのが非常に困難である。
【００１７】
「冷水溶解性」とは、室温（すなわち、約２５℃）で水溶液を形成する物質である。
【００１８】
「疎水性」は、その表面上において、９０°以上の水接触角を示す材料を指す。
【００１９】
「不透明」とは、最大１０％の光透過率を有する基材を指す。
【００２０】
「粉末」は、０．１マイクロメートルから最大４００マイクロメートルの範囲の平均直径を有する超微粒子状物質を指す。
【００２１】
「透明」とは、少なくとも９０％の光透過率を有する基材を指す。
【００２２】
生物代謝（例えば、液化細菌）、及び除染又は滅菌のための電離放射線（例えば、ガンマ線、電子線）に対する耐性の増大のような有利な特徴を有する、微生物の増殖及び／又は貯蔵のためのデバイスが提供される。
【００２３】
第１の態様では、デバイスが提供される。より具体的には、第１層の表面の第１部分を有する第１層を含むデバイスが提供され、当該部分に第１の粘土を含む第１の水膨潤性ゲル化剤が固着されている。このデバイスは、第１層から分離可能で、第２層の表面の第１部分を有する第２層を更に含み、当該部分に第２の水膨潤性ゲル化剤が固着されている。
【００２４】
図１は、微生物の増殖デバイスの例示的な実施形態を示す。デバイス１０は、上面１２ａ及び下面１２ｂを有する第１層（例えば、基材）１２を含む本体部材１１を含む。第１層は、典型的には自己支持型耐水性基材である。いくつかの実施形態では、第１層１２は、水を吸着しないか又は他の方法で水による影響を受けない、ポリエステル、ポリプロピレン、シリコーン、又はポリスチレン等の材料の比較的剛性のフィルムである。約１００マイクロメートル〜約１７８マイクロメートルの厚さを有するポリエステルフィルム、及び約１００マイクロメートル〜約２００マイクロメートルの厚さを有するポリプロピレンフィルム、並びに約３８０マイクロメートルの厚さを有するポリスチレンフィルムは、それぞれ、第１層１２に好適であることが見出されている。他の好適な基材には、ポリエチレン又は他の耐水性コーティングを有する紙が挙げられる。好適なポリエチレンコーティング紙基材の例は、「Ｓｃｈｏｅｌｌｅｒ  Ｔｙｐｅ  ＭＩＬ」写真印画紙（Ｓｃｈｏｅｌｌｅｒ  Ｐｕｌａｓｋｉ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）から市販）である。第１層１２は、使用者が細菌のコロニーを基材を介して見ることを望むか否かにより、透明又は不透明のどちらでもよい。図４に示す例示的な実施形態では、第１層１２は、細菌コロニーの計数を容易にするために下面１２ｂ上に印刷された正方形格子パターンを有する。
【００２５】
上面１２ａは第１部分１７を備え、当該部分に粘土を含む第１の水膨潤性ゲル化剤１６が固着されている。粘土は、典型的には、上面１２ａの第１部分１７に、水和し易いように均一層状に、接着剤１４の層を用いて固着されている。第１の水膨潤性ゲル化剤１６は、粘土及び任意に微生物増殖栄養素を含む（かつ、その他の添加剤を含んでもよい）。多くの実施形態において、第１の水膨潤性ゲル化剤は、粉末の形態で提供される。接着剤１４の層は、非水溶性であり、微生物の増殖を阻害しない。いくつかの実施形態では、接着剤１４は、接着剤でコーティングされたフィルムを通して細菌コロニーを見ることができるように濡れたとき十分に透明である。いくつかの実施形態では、接着剤１４は感圧性接着剤である。いくつかの他の実施形態では、より融点の低い物質がより融点の高い基材上にコーティングされている熱活性化接着剤を用いてもよい。ゴム糊等の水活性化接着剤も有用である場合がある。
【００２６】
粉末１６の均一層は、水和のために露出される十分な表面積を有することが望ましい。典型的に、約５マイクロメートル〜約５０マイクロメートルの厚さの接着剤層が好適である。
【００２７】
好適な接着剤は、水で濡らしたとき透明である。好適な接着剤の例としては、モル比９４：６又は９５：５のイソオクチルアクリレート／アクリルアミドのコポリマーのような感圧性接着剤が挙げられる。好適な接着剤には、米国特許第４，５６５，７８３号、同第５，０８９，４１３号、同第５，６８１，７１２号、及び同第５，２３２，８３８号に記載のものが挙げられる。いくつかの他の実施形態では、例えば、米国特許第７，６９５，８１８号及び同第７，３７１，４６４号に記載されているものなどのシリコーン感圧性接着剤を用いてもよい。
【００２８】
特定の実施形態では、例えば図１に示すように、第１層の上面の本質的に全てが接着剤でコーティングされる。他の実施形態では、第１層の第１部分は接着剤でコーティングされ、第１層の表面の第２部分は接着剤を本質的に含まない。図５を参照すると、第１層１２の上面１２ａの第１部分１７を有する例示的な第１層１２が提供される。第１層１２の上面１２ａの第２部分１９は、少なくとも部分的に第１部分１７を囲む。第１層１２は、第１層の４つの縁部（縁部１２ｃ、縁部１２ｄ、縁部１２ｅ、及び縁部１２ｆ）によって形成される外辺部を含む。この代表的な実施形態において、第１部分１７は、３辺を第２部分１９によって囲まれており、それ故第２部分１９は第１層１２の外辺部のうちの少なくともいくつか、すなわち、縁部１２ｄ、１２ｅ、及び１２ｆと接触する。接着剤１４は、接着剤のパターンコーティングのような技法を用いて、第１部分１７上にコーティングされるが第２部分１９上にコーティングされないようにすることができる。接着剤のパターンコーティングは、例えば、ＰＣＴ国際公開第９６／１５７１５号（Ｙａｓｉｓ  ｅｔ  ａｌ．）に記載のような、当該技術分野において既知のように実施されてもよい。特定の実施形態において、第１層の第２部分は、第１層の第１部分を実質的に囲む。例えば、第１部分は任意に、第１層の全外辺部と接触する第２部分に全体が収容された円、四辺形等のような（規則的又は不規則的）形状を有する。これは、例えば、図１に例示される。
【００２９】
再度図１を参照すると、デバイス１０は、第１層１２の上面１２ａの１つの縁部に取り外し可能に接着された第２層２２（例えば、カバーシート）を更に含む。本開示では、第２層２２は、通常、微生物コロニーの計数を容易にするために透明であるように選択され、典型的にはまた、細菌を透過せず、低い水蒸気透過速度を有するように選択される（すなわち、第２層２２は、デバイスの輸送、保管及び使用中の脱水培地の望ましくない汚染を防ぎ、インキュベーション期間中の微生物の増殖を支える環境を提供する）。いくつかの実施形態では、第２層２２は、第１層１２と同じ特性（例えば、剛性）を有するが、同様の剛性である必要はない。第２層２２は、増殖することが所望される微生物の種類に必要な酸素透過量を提供するように、選択することができる。例えば、いくつかのポリエステルフィルムは、低い酸素透過性を有し（厚さ２５マイクロメートル当たり５ｇ／６４５ｃｍ２／２４時間未満）、嫌気性細菌を増殖させるのに好適である。他方、いくつかのポリエチレンは、高い酸素透過性を有し（例えば、厚さ２５マイクロメートル当たり約５００ｇ／６４５ｃｍ２／２４時間）、好気性生物に好適である。第２層２２に好適な材料としては、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリエチレン、ポリスチレン、又はシリコーンが挙げられる。特定の実施形態では、第２層２２は、２軸配向ポリプロピレンのような配向ポリプロピレンを含み、これはいくつかの代表的な実施形態において、約４０マイクロメートルの厚さを有する。
【００３０】
図７を参照すると、第１層１２と同様に、第２層２２は、第１部分２７を備える上面２２ａを含み、当該部分に、粘土を含む第２の水膨潤性ゲル化剤２６が固着されている。粘土は、典型的には、上面２２ａの第１部分２７に、水和し易いように均一層状に、接着剤２４の層を用いて固着されている。第２の水膨潤性ゲル化剤２６は、粘土及び任意に微生物増殖栄養素を含む（かつ、その他の添加剤を含んでもよい）。多くの実施形態において、第２の水膨潤性ゲル化剤は、粉末の形態で提供される。接着剤２４の層は、非水溶性であり、微生物の増殖を阻害しない。接着剤２４は、接着剤１４に関して上で論じられた好適な接着剤のいずれかである。接着剤２４は、典型的には、水膨潤性ゲル化剤２６の粒子が接着剤に完全に埋まることなく当該粒子を層に接着するように、第２の水膨潤性ゲル化剤２６の粒子の直径未満の厚さで第２層２２上にコーティングされている。水膨潤性ゲル化剤２６の均一層は、水和のために露出される十分な表面積を有することが望ましい。
【００３１】
いくつかの実施形態では、第２層２２の上面２２ａの本質的に全てが接着剤でコーティングされている。他の実施形態では、第２層２２の第１部分２７は接着剤でコーティングされ、第１層の表面の第２部分２９は接着剤を本質的に含まない。接着剤２４が第１部分２７上にコーティングされるが第２部分２９上にコーティングされない場合、これは接着剤のパターンコーティングのような技法を用いて達成できる。特定の実施形態では、第１層の第２部分は、第１層の第１部分を実質的に囲む。
【００３２】
第１層１２及び第２層２２のそれぞれについて、水膨潤性ゲル化剤１６、２６の層は、それぞれ接着剤層１４、２４に均一に接着される。水膨潤性ゲル化剤１６、２６は、粘土と、任意に、当該粘土に混合された微生物を増殖するための１種以上の微生物増殖栄養素と、を含む。特定の実施形態において、第１のゲル化剤１６は第２のゲル化剤２６と同じ粘土を含むのに対し、他の実施形態では、第２のゲル化剤２６は、第１のゲル化剤１６中の第１の粘土とは異なる第２の粘土を含む。本開示のデバイスで使用される水膨潤性ゲル化剤の冷水溶解性は、例えば、これら粉末に適切な粘土が含まれることに起因する場合がある。水膨潤性粉末１６に含まれる好適な粘土としては、室温で混合を必要とせずに水溶液を形成する天然及び合成の粘土が挙げられる。多くの実施形態において、粘土の粒子は、一般的に平坦な相対する主表面をもたらす１つ以上の積み重ねられた層を含む小板形状を有し、上記層はそれぞれ主に楕円形を有する。
【００３３】
合成及び天然ヘクトライトのような粘土は室温で水溶液を形成し、水膨潤性の粉末の提供に適したゲル化剤である。ヘクトライトはスメクタイト族に属し、式Ｎａ０．３（Ｍｇ，Ｌｉ）３Ｓｉ４Ｏ１０（ＯＨ）２を有する。いくつかの実施形態において、水膨潤性ゲル化剤１６は、未変性ヘクトライト及び／又は有機変性ヘクトライトを含み、これらのゲル化剤は個々に又は互いとの組み合わせで有用である。いくつかの好適な市販のヘクトライト粘土としては、全てＢＹＫ−Ｃｈｅｍｉｅ社（Ｗｅｓｅｌ，Ｇｅｒｍａｎｙ）より入手可能な、ＬＡＰＯＮＩＴＥ  ＥＰの商標名で入手可能な有機変性ヘクトライト、並びにＬＡＰＯＮＩＴＥ  ＲＤ及びＬＡＰＯＮＩＴＥ  ＸＬＧの商標名で入手可能な未変性合成ヘクトライトが挙げられる。多くの実施形態において、粘土はサブミクロンサイズの粒子を含む。より具体的には、サブミクロンサイズの粒子は、平均粒径（粒子の最大寸法の平均を指す）が、１０００ナノメートル以下、５００ナノメートル以下、２００ナノメートル以下、１００ナノメートル以下、７５ナノメートル以下、又は５０ナノメートル以下の粒子でありうる。平均粒径は、多くの場合、透過型電子顕微鏡を使用して求められるが、様々な光散乱法（例えば、レーザー回折法）も使用することができる。平均粒径は、典型的には、非集塊及び／又は非凝集の単一の粘土粒子の平均寸法を指す。
【００３４】
いくつかの実施形態において、水膨潤性ゲル化剤は粘土ゲル化剤のみを含んでもよい。製造時、デバイスが粘土ゲル化剤のみを含む粉末を含有する場合、エンドユーザは、典型的には、増殖させる微生物の種類に合った特別な栄養素を添加する。例えば、乾燥粉末栄養素を、エタノール等の迅速に蒸発する液体に懸濁させてもよい。他の例では、乾燥粉末栄養素は、水溶液に懸濁又は溶解していてもよい。液体のアリコートは、接着剤及びゲル化剤で予めコーティングされた第１層１２又は第２層２２の表面に添加される。次いで、液体を蒸発させ、ゲル化剤と共に十分な栄養素を残す。別の実施形態において、水膨潤性ゲル化剤１６、２６はデバイス内の微生物増殖に適した栄養素を含み、それは室温で水溶液を形成してもよい。
【００３５】
粘土鉱物（例えば、層状ケイ酸塩鉱物）は、粘土が流体（例えば、水）と十分にブレンドされてスラリーを形成し、オートクレーブ処理された後、ペトリ皿、試験管、又はその他の微生物培養に適した容器に注入された、培養デバイスに用いられる。（例えば、米国特許第１，５２０，２１７号の記載による）。粘土粒子がゲルに分散するために必要な時間は粘土によって異なる。ヘクトライト粒子は、粒子が「ハウス・オブ・カード（house of cards）」型構造を形成するように配置されたときにゲルを形成する。ヘクトライトの一般的なゲル構造の概略図を図６に示す。図中、１つの粒子の短辺はちょうど別の粒子の主表面上にあり、複数の粒子が集合的に、隣接する粒子の主表面間に空間を有する構造を形成する。本開示によるデバイスにおいて、基材に固着された特定の粘土は、水和されたときにゲルを形成し、水和後に粒子のゲル形成を誘発するたのいかなる混合又はその他の物理的分散（例えば、延展）も必要としないことが明らかとなった。対照的に、上記の本開示による基材に固着された特定のその他の粘土、例えば、モンモリロナイト、有機変性ベントナイト、又は無機変性合成ヘクトライトは、水和されたときにゲルを形成しない。
【００３６】
水和すると、粘土を含む水膨潤性ゲル化剤は、それが固着された基材の外辺部に向かって濡れ広がる（wick out）。粘土が、基材外辺部を超えて、デバイスの外で水和するのを最小限に抑えるため、多くの実施形態において、基材層の第２部分は水和粘土よりも疎水性の高い材料を含む。第２部分は、任意に、当該層自体の材料、層上の接着剤、剥離ライナー、ダム、又はこれらの組み合わせである。
【００３７】
図１に示す代表的な実施形態において、本体部材１１は、第１層１２の上面１２ａに適用された疎水性ダム１８を含む。疎水性ダム１８は、第１層１２の上面１２ａの第１部分１７上の第１の水膨潤性ゲル化剤１６を露出させるために、その中心を通って切断された円形開口部２０を有する。開口部２０及び第１部分１７は、第１層１２の上面１２ａ上で実質的に一致する。開口部２０の壁は、水和後に培地を封じ込めるための所定の寸法及び形状の領域を提供し、それによって、水和したゲル化剤の第１層の外辺部以遠への濡れ広がりを低減又は防止する。ダム１８は、所望の体積（例えば、１ミリリットル又は２ミリリットル）のウェルを形成するのに十分な厚さとすることができる。独立気泡ポリエチレン発泡体、ポリエチレン、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、又はポリスチレンが、典型的に、疎水性ダム１８に使用されるが、疎水性（すなわち、非水湿潤性）であり、微生物に対して不活性であり、かつ滅菌に耐えることができる任意の材料を使用してもよい。好適な別の疎水性材料は、ライナーであり、これは、デバイス内にウェルを提供せず、典型的には熱可塑性材料又は疎水性コーティング、例えば、シリコーン、フルオロシリコーン、ＰＴＦＥ、若しくはその他の代表的な剥離コーティングを有する紙でできている。
【００３８】
図１では、第２層２２は、その主表面に、接着剤２４の層及びコーティング組成物２６の層がコーティングされている。コーティング組成物２６の層を有する第２層２２の主表面は、基材１２の上面１２ａに面している。接着剤２４の層は、非水溶性であり、微生物の増殖を阻害せず、濡れたときに、接着剤でコーティングされたフィルムを通して気泡又は微生物コロニーを見ることができるように十分に透明である。いくつかの実施形態では、接着剤２４の層は、感圧性接着剤を含む。コーティング組成物２６の均一層は、水和のために十分な、露出した表面積を有することが望ましい。
【００３９】
図７を参照すると、代表的な実施形態において、疎水性ダム２８は第２層２２の上面２２ａに適用され、疎水性ダム２８は、第２層２２の上面２２ａの第１部分２７上の第２の水膨潤性ゲル化剤２６を露出するために、その中心を通って切り抜かれた円形開口部３０を有する。開口部３０及び第１部分２７は、第２層２２の上面２２ａ上で実質的に一致する。開口部３０の壁は、水和後に培地を封じ込めるための所定の寸法及び形状の領域を提供し、それによって、水和したゲル化剤の第２層の外辺部以遠への濡れ広がりを低減又は防止する。あるいは、疎水性ダム２８の代わりに剥離ライナーを使用できる。ダム及び剥離ライナーは、典型的には、第１層と共に使用されるダム及び剥離ライナーに関して上に開示された材料を含む。
【００４０】
特定の実施形態では、水膨潤性ゲル化剤は、粘土を唯一の水膨潤性ゲル化剤として含有するのに対し、他の実施形態では、水膨潤性ゲル化剤は、グアーガム、キサンタンガム、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリアクリルアミド、ローカストビーンガム及びアルギンのような１種以上の有機冷水溶解性剤を含有する。かかる有機冷水溶解性剤は、室温で水溶液を形成し、粘土と共に第１の水膨潤性ゲル化剤に含めるのに適したゲル化剤である。いくつかの実施形態では、有機冷水溶解性剤はグアーガム及びキサンタンガムであり、これらゲル化剤は、個別に又は互いとの組合せで、粘土と混合して有用である。いくつかの実施形態において、粉末化されたゲル化剤は、最大７５重量％の追加の水膨潤剤及び／又は有機冷水溶解性ゲル化剤、又は最大５０重量％、又は最大２５重量％の、追加の水膨潤剤及び／又は有機冷水溶解性ゲル化剤；例えば、１重量％〜７５重量％の追加の水膨潤剤及び／又は有機冷水溶解性ゲル化剤、又は５０重量％〜７５重量％、又は１０重量％〜５０重量％の追加の水膨潤剤及び／又は有機冷水溶解性ゲル化剤を含む。任意に、粉末化された水膨潤性ゲル化剤は、誘導物質、指示薬、又はこれらの組み合わせを更に含んでもよい。
【００４１】
本開示のデバイス内での微生物の増殖を維持するための栄養素、追加のゲル化剤、及びこれらの混合物の非限定例としては、米国特許第４，５６５，７８３号、同第５，０８９，４１３号、同第５，２３２，８３８号、同第５，３６４，７６６号、同第５，４４３，９６３号、同第５，４６２，８６０号、同第５，６０１，９９８号、同第５，６３５，３６７号及び同第５，６８１，７１２号に記載のものが挙げられ、上記の参照は、指示薬（例えば、検出試薬）及び誘導物質の、限定のない例示を含む。例えば、１つの好適な指示薬は、塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）である。ヘクトライト粘土はＴＴＣを吸着することが発見されており、そのため、高濃度のＴＴＣを、一般的に微生物に有害又は致死的な濃度、例えば、固着されている基材部分の１平方ｃｍにつき少なくとも０．５ｍｇの量で、指示薬として使用することができる。
【００４２】
したがって、特定の実施形態において、デバイス１０は、第１層１２の表面１２ａの第１部分１７を有する第１層１２を含み、当該部分に第１の粘土を含む第１の水膨潤性ゲル化剤１６が固着されている。デバイス１０は、第１層から分離可能で、第２層２２の表面２２ａの第１部分２７を有する第２層２２を更に含み、当該部分に第２の水膨潤性ゲル化剤２６が固着されている。
【００４３】
本開示によるデバイスの利点は、粘土が高エネルギー放射による損傷に耐え、それ故、デバイスを容易に除染又は滅菌できることである。特定の実施形態では、デバイスは電子線又はガンマ線のような電離放射線によって除染又は滅菌される。より具体的には、デバイスは、少なくとも１０キログレイ（ｋｇｙ）、又は少なくとも２０ｋｇｙ、又は少なくとも３０ｋｇｙ、又は少なくとも４０ｋｇｙ、又は１０ｋｇｙ〜５０ｋｇｙ、又は２０ｋｇｙ〜５０ｋｇｙ、又は最大５０ｋｇｙの線量の電離放射線に曝すことによって除染又は滅菌されてもよい。
【００４４】
第２の態様では、微生物の増殖又は貯蔵のためのデバイスを製造する方法が提供される。デバイスを製造する方法は、表面を有する第１層を提供する工程と、第１の粘土を含む第１の水膨潤性ゲル化剤を第１層の表面の第１部分に固着する工程と、表面を有する第２層を提供する工程と、第２の水膨潤性ゲル化剤を第２層の表面の第１部分に固着する工程と、を含む。この方法は、第１層を第２層に積層する工程を更に含み、その際第１の水膨潤性ゲル化剤は、少なくとも部分的に第２の水膨潤性ゲル化剤と接触する。
【００４５】
水膨潤性ゲル化剤は、任意の好適な方法によって、第１層及び第２層のそれぞれに固着される。いくつかの実施形態では、（第１又は第２の）水膨潤性ゲル化剤を（それぞれ、第１又は第２の）層に固着する工程は、接着剤の層を層の表面に配置すること、第１の粘土よりも疎水性の高い材料を層の第２部分を覆って配置すること、及び接着剤層を水膨潤性ゲル化剤でコーティングすることを含む。上記材料は、それ故、層の第２部分上への水膨潤性ゲル化剤のコーティングを防止するマスクとして作用する。この方法は、多くの場合、第１層を第２層に積層する前に、層の第２部分から材料を除去する工程を更に含むが、材料はデバイス内の第１層と第２層との間に残されてもよい。いくつかの実施形態では、（第１又は第２の）水膨潤性ゲル化剤を（それぞれ、第１又は第２の）層に固着する工程は、接着剤の層を当該層の表面の第１部分上に配置すること、及び接着剤層を水膨潤性ゲル化剤でコーティングすることを含む。この方法は、通常、層の表面の第２部分上に配置された水膨潤性ゲル化剤のうちの少なくともいくらかを除去する工程を更に含む。第２部分上に配置された水膨潤性ゲル化剤は、典型的には、第２部分上に接着剤がないために層の表面に固着されない。
【００４６】
第２の態様の方法によって作製されたデバイスは、有利には、水和したゲル化剤のデバイス縁部以遠への濡れ広がりを最小限に抑えるため、２つの基材層のうちの少なくとも１つの第２部分上に／として、疎水性材料を有するであろう。第１の態様に関して上に詳細に記載された材料、構成等は、第２の態様の方法によって作製されたデバイスにも好適である。
【００４７】
第３の態様では、試料中の少なくとも１種の微生物を検出及び計数する方法が提供される。当該方法は、第１の態様によるデバイスを提供する工程、第１層を第２層から分離する工程、少なくとも１種の微生物を含有する試料のアリコートを第１又は第２の水膨潤性ゲル化剤上に添加して、接種されたデバイスを形成する工程、第１層を第２層に再度積層する工程、及び接種されたデバイスをインキュベートする工程を含む。第１の態様に関して上に詳細に記載されたデバイスのいずれも、第３の態様の方法への使用に好適である。
【００４８】
例えば、微生物の検出及び計数のための本発明のデバイスの使用を、図１及び３のデバイスを具体的に参照して論じることができる。特定の実施形態では、第２層２２はカバーシートとして作用し、引き剥がされ、その後、所定の量の水又は水性試験試料を本体部材１１の第１層１２上に置く。接着剤１４によって第１層１２に接着されているゲル化剤１６の粒子は、速やかに水和又は溶解されて、ゲルが形成される。次いで、第２層２２を、気泡の封入を最小限に抑えるため、慎重に第１層１２上に再配置する。次いで、所定の時間デバイスをインキュベートする。接種されたデバイスは、典型的には、約４８時間まで、又は約２４時間まで、又は更には約１４時間までのインキュベートを含む。培地中で増殖する任意の細菌コロニーを、透明なカバーフィルムを通して検出し、任意に計数（例えば、カウント）することができる。いくつかの実施形態では、自動コロニーカウンターのような、自動化システムを用いて微生物をカウントすることができる。
【００４９】
一般的に、試料の１つのアリコートを第１の水膨潤性ゲル化剤又は第２の水膨潤性ゲル化剤に添加するが、必要であれば、１つを超えるアリコートを添加することが可能である。多くの実施形態において、ゲル化剤は、有利には、アリコートの添加後、第１層を第２層に再度積層する前に、混合されない。上記のように、粘土は、水和後に混合又は延展を必要とすることなくゲル化するように選択される。
【００５０】
第４の態様では、キットが提供される。キットは、第１の態様による少なくとも１つのデバイス並びに当該デバイス（複数可）を使用した少なくとも１種の微生物の検出及び計数に関する説明書を含む。第１の態様に関して上に詳細に記載されたデバイスのいずれも、第４の態様のキットへの使用に好適である。キットは、任意に、ユーザーがデバイスと共に使用するための、水又は緩衝溶液のような水性流体を更に含む。更に、キットは、１種以上の微生物増殖栄養素（複数可）、指示薬（複数可）、誘導物質（複数可）、又はこれらの組み合わせも含んでもよい。特に、ユーザーが、特定の微生物に合わせて微生物増殖栄養素を調整したい場合、例えば、微生物増殖栄養素をデバイスとは別にキットに提供することが簡便となり得る。
【００５１】
デバイス、キット、デバイスの製造方法、又は微生物を検出及び計数する方法である、種々の実施形態を記載する。
【００５２】
実施形態１は、微生物の増殖又は貯蔵のためのデバイスである。デバイスは、ａ）第１層の表面の第１部分を含む第１層であって、当該部分に第１の粘土を含む第１の水膨潤性ゲル化剤が固着されている、第１層を含む。デバイスは、ｂ）第１層から分離可能であり、第２層の表面の第１部分を含む、第２層であって、当該部分に第２の水膨潤性ゲル化剤が固着されている、第２層を更に含む。
【００５３】
実施形態２は、第１層が、表面の第２部分を更に含む、実施形態１に記載のデバイスである。
【００５４】
実施形態３は、第２層が、表面の第２部分を更に含む、実施形態１又は実施形態２に記載のデバイスである。
【００５５】
実施形態４は、第２の水膨潤性ゲル化剤が第２の粘土を含む、実施形態１〜３のいずれかに記載のデバイスである。
【００５６】
実施形態５は、第１の粘土と第２の粘土が同じ粘土である、実施形態４に記載のデバイスである。
【００５７】
実施形態６は、第１の粘土と第２の粘土とが異なる粘土である、実施形態４に記載のデバイスである。
【００５８】
実施形態７は、第１の粘土が、サブミクロンサイズの粒子を含む、実施形態１〜６のいずれかに記載のデバイスである。
【００５９】
実施形態８は、第１の粘土が、少なくとも１種の小板形状を備える、実施形態１〜７のいずれかに記載のデバイスである。
【００６０】
実施形態９は、第１のゲル化剤が、微生物増殖栄養素を更に含む、実施形態１〜８のいずれかに記載のデバイスである。
【００６１】
実施形態１０は、デバイスが除染される、実施形態１〜９のいずれかに記載のデバイスである。
【００６２】
実施形態１１は、デバイスが滅菌される、実施形態１〜１０のいずれかに記載のデバイスである。
【００６３】
実施形態１２は、デバイスが電離放射線で滅菌される、実施形態１〜１１のいずれかに記載のデバイスである。
【００６４】
実施形態１３は、デバイスがガンマ線又は電子線で滅菌される、実施形態１２に記載のデバイスである。
【００６５】
実施形態１４は、第１層、第２層、又はその両方の上に配置された指示薬を更に含む、実施形態１〜１３のいずれかに記載のデバイスである。
【００６６】
実施形態１５は、上記指示薬が、塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）を少なくとも０．５ｍｇ／ｃｍ２の量で含む、実施形態１４に記載のデバイスである。
【００６７】
実施形態１６は、第１層、第２層、又はその両方の上に配置された誘導物質を更に含む、実施形態１〜１５のいずれかに記載のデバイスである。
【００６８】
実施形態１７は、第１の水膨潤性ゲル化剤が、接着剤によって第１層に固着されている、実施形態１〜１６のいずれかに記載のデバイスである。
【００６９】
実施形態１８は、第１の水膨潤性ゲル化剤が、感圧性接着剤によって第１層に固着されている、実施形態１〜１７のいずれかに記載のデバイスである。
【００７０】
実施形態１９は、接着剤が、第１層の表面の第１部分のみに配置されている、実施形態１７又は実施形態１８に記載のデバイスである。
【００７１】
実施形態２０は、第１層の第２部分が、第１の粘土よりも疎水性の高い材料を含む、実施形態２〜１９のいずれかに記載のデバイスである。
【００７２】
実施形態２１は、第１層の第２部分が、第１層、接着剤、剥離ライナー、ダム、又はこれらの組合せを含む、実施形態２〜２０のいずれかに記載のデバイスである。
【００７３】
実施形態２２は、第２の水膨潤性ゲル化剤が、接着剤によって第２層に固着されている、実施形態１〜２１のいずれかに記載のデバイスである。
【００７４】
実施形態２３は、第２の水膨潤性ゲル化剤が、感圧性接着剤によって第２層に固着されている、実施形態１〜２２のいずれかに記載のデバイスである。
【００７５】
実施形態２４は、接着剤が、第２層の表面の第１部分のみに配置されている、実施形態２２又は実施形態２３に記載のデバイスである。
【００７６】
実施形態２５は、第２層の第２部分が、第２層、接着剤、剥離ライナー、ダム、又はこれらの組合せを含む、実施形態３〜２４のいずれかに記載のデバイスである。
【００７７】
実施形態２６は、ダムが、ポリエチレン、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、又はポリスチレンを含む、実施形態２１又は実施形態２５に記載のデバイスである。
【００７８】
実施形態２７は、第１層が、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリスチレン、又はポリエチレンコート紙を含む、実施形態１〜２６のいずれかに記載のデバイスである。
【００７９】
実施形態２８は、第１層が、ポリエチレンコート紙を含む、実施形態２７に記載のデバイスである。
【００８０】
実施形態２９は、第２層が、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリエチレン、ポリスチレン、又はシリコーンを含む、実施形態１〜２８のいずれかに記載のデバイスである。
【００８１】
実施形態３０は、第２層が、配向ポリプロピレンを含む、実施形態２９に記載のデバイスである。
【００８２】
実施形態３１は、第２層に固着された第２の水膨潤性ゲル化剤が、微生物増殖栄養素を更に含む、実施形態１〜３０のいずれかに記載のデバイスである。
【００８３】
実施形態３２は、第１層が外辺部を更に含み、表面の第２部分が上記第１層の外辺部の少なくとも一部と接触する、実施形態２〜３１のいずれかに記載のデバイスである。
【００８４】
実施形態３３は、第１層の第２部分が第１層の第１部分を実質的に囲む、実施形態３２に記載のデバイスである。
【００８５】
実施形態３４は、第２層が外辺部を更に含み、表面の第２部分が上記第２層の外辺部の少なくとも一部と接触する、実施形態３〜３３のいずれかに記載のデバイスである。
【００８６】
実施形態３５は、第２層の第２部分が第２層の第１部分を実質的に囲む、実施形態３４に記載のデバイスである。
【００８７】
実施形態３６は、第１の粘土が、合成ヘクトライトを含む、実施形態１〜３５のいずれかに記載のデバイスである。
【００８８】
実施形態３７は、第１の粘土が、未変性ヘクトライト、有機変性ヘクトライト、又はこれらの組み合わせを含む、実施形態１〜３６のいずれかに記載のデバイスである。
【００８９】
実施形態３８は、第１の水膨潤性ゲル化剤、第２の水膨潤性ゲル化剤、又はその両方が、最大７５重量％の追加の水膨潤剤及び／又は冷水溶解性ゲル化剤を含む、実施形態１〜３７のいずれかに記載のデバイスである。
【００９０】
実施形態３９は、第１の水膨潤性ゲル化剤、第２の水膨潤性ゲル化剤、又はその両方が、最大５０重量％の追加の水膨潤剤及び／又は有機冷水溶解性ゲル化剤を含む、実施形態１〜３８のいずれかに記載のデバイスである。
【００９１】
実施形態４０は、第１の水膨潤性ゲル化剤、第２の水膨潤性ゲル化剤、又はその両方が、最大２５重量％の追加の水膨潤剤及び／又は有機冷水溶解性ゲル化剤を含む、実施形態１〜３９のいずれかに記載のデバイスである。
【００９２】
実施形態４１は、第１の水膨潤性ゲル化剤、第２の水膨潤性ゲル化剤、又はその両方が、１重量％〜７５重量％の追加の水膨潤剤及び／又は有機冷水溶解性ゲル化剤を含む、実施形態１〜３８のいずれかに記載のデバイスである。
【００９３】
実施形態４２は、第１の水膨潤性ゲル化剤、第２の水膨潤性ゲル化剤、又はその両方が、５０重量％〜７５重量％の追加の水膨潤剤及び／又は有機冷水溶解性ゲル化剤を含む、実施形態１〜３８のいずれかに記載のデバイスである。
【００９４】
実施形態４３は、第１の水膨潤性ゲル化剤、第２の水膨潤性ゲル化剤、又はその両方が、１０重量％〜５０重量％の追加の水膨潤剤及び／又は有機冷水溶解性ゲル化剤を含む、実施形態１〜３８のいずれかに記載のデバイスである。
【００９５】
実施形態４４は、微生物の増殖又は貯蔵のためのデバイスを製造する方法である。当該方法は、表面を備える第１層を提供する工程と、第１の粘土を含む第１の水膨潤性ゲル化剤を第１層の表面の第１部分に固着する工程と、表面を備える第２層を提供する工程と、第２の水膨潤性ゲル化剤を第２層の表面の第１部分に固着する工程と、を含む。上記方法は、第１層を第２層に積層する工程を更に含み、その際第１の水膨潤性ゲル化剤は、少なくとも部分的に第２の水膨潤性ゲル化剤と接触する。
【００９６】
実施形態４５は、第１の水膨潤性ゲル化剤を第１層に固着する工程が、接着剤の層を第１層の表面上に配置すること、第１の粘土より疎水性の高い材料を層の第１層の第２部分を覆って配置すること、及び接着剤層を第１の水膨潤性ゲル化剤でコーティングすること、を含む、実施形態４４に記載の方法である。
【００９７】
実施形態４６は、第１層を第２層に積層する前に、第１層の第２部分から材料を除去する工程を更に含む、実施形態４５に記載の方法である。
【００９８】
実施形態４７は、第１の水膨潤性ゲル化剤を第１層に固着する工程が、接着剤の層を第１層の表面の第１部分上に配置すること、及び接着剤層を第１の水膨潤性ゲル化剤でコーティングすること、を含む、実施形態４４に記載の方法である。
【００９９】
実施形態４８は、第１層の表面の第２部分上に配置された第１の水膨潤性ゲル化剤のうちの少なくともいくらかを除去する工程を更に含む、実施形態４７に記載の方法である。
【０１００】
実施形態４９は、第２の水膨潤性ゲル化剤を第２層に固着する工程が、接着剤の層を第２層の表面上に配置すること、第１の粘土よりも疎水性の高い材料を層の第２層の第２部分を覆って配置すること、及び接着剤層を第１の水膨潤性ゲル化剤でコーティングすること、を含む、実施形態４４〜４８のいずれかに記載の方法である。
【０１０１】
実施形態５０は、第１層を第２層に積層する前に、第２層の第２部分から材料を除去する工程を更に含む、実施形態４９に記載の方法である。
【０１０２】
実施形態５１は、第２の水膨潤性ゲル化剤を第２層に固着する工程が、接着剤の層を第２層の表面の第１部分上に配置すること、及び接着剤層を第２の水膨潤性ゲル化剤でコーティングすることを含む、実施形態４４〜５０のいずれかに記載の方法である。
【０１０３】
実施形態５２は、第２層の表面の第２部分上に配置された水膨潤性ゲル化剤のうちの少なくともいくらかを除去する工程を更に含む、実施形態５１に記載の方法である。
【０１０４】
実施形態５３は、デバイスを除染する工程を更に含む、実施形態４４〜５２のいずれかに記載の方法である。
【０１０５】
実施形態５４は、デバイスを滅菌する工程を更に含む、実施形態４４〜５２のいずれかに記載の方法である。
【０１０６】
実施形態５５は、除染又は滅菌する工程が、電離放射線への曝露を含む、実施形態５３又は実施形態５４に記載の方法である。
【０１０７】
実施形態５６は、除染又は滅菌する工程が、ガンマ線又は電子線放射を含む、実施形態５３〜５５のいずれかに記載の方法である。
【０１０８】
実施形態５７は、除染又は滅菌する工程が、少なくとも１０キログレイ（ｋｇｙ）の線量の電離放射線への曝露を含む、実施形態５３〜５６のいずれかに記載の方法である。
【０１０９】
実施形態５８は、除染又は滅菌する工程が、少なくとも２０ｋｇｙの線量の電離放射線への曝露を含む、実施形態５３〜５７のいずれかに記載の方法である。
【０１１０】
実施形態５９は、除染又は滅菌する工程が、１０ｋｇｙ〜５０ｋｇｙの線量の電離放射線への曝露を含む、実施形態５３〜５７のいずれかに記載の方法である。
【０１１１】
実施形態６０は、除染又は滅菌する工程が、最大５０ｋｇｙの線量の電離放射線への曝露を含む、実施形態５３〜５９のいずれかに記載の方法である。
【０１１２】
実施形態６１は、第２の水膨潤性ゲル化剤が、第２の粘土を含む、実施形態４４〜５９のいずれかに記載の方法である。
【０１１３】
実施形態６２は、第１の粘土と第２の粘土とが同じ粘土である、実施形態６１に記載の方法である。
【０１１４】
実施形態６３は、第１の粘土と第２の粘土とが異なる粘土である、実施形態６１に記載の方法である。
【０１１５】
実施形態６４は、第１の粘土が、サブミクロンサイズの粒子を含む、実施形態４４〜６３のいずれかに記載の方法である。
【０１１６】
実施形態６５は、第１の粘土が、少なくとも１種の小板形状を備える、実施形態３９〜５９のいずれかに記載の方法である。
【０１１７】
実施形態６６は、第１層の第２部分が、第１層、接着剤、剥離ライナー、ダム、又はこれらの組合せを含む、実施形態４５、４６、又は４８のいずれかに記載の方法である。
【０１１８】
実施形態６７は、第２層の第２部分が、第２層、接着剤、剥離ライナー、ダム、又はこれらの組合せを含む、実施形態４９、５０、又は５２のいずれかに記載の方法である。
【０１１９】
実施形態６８は、ダムが、ポリエチレン、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、又はポリスチレンを含む、実施形態６６又は実施形態６７に記載の方法である。
【０１２０】
実施形態６９は、第１層が外辺部を更に含み、表面の第２部分が上記第１層の外辺部の少なくとも一部と接触する、実施形態６６又は６８に記載の方法である。
【０１２１】
実施形態７０は、第１層の第２部分が第１層の第１部分を実質的に囲む、実施形態６９に記載の方法である。
【０１２２】
実施形態７１は、第２層が外辺部を更に含み、表面の第２部分が上記第２層の外辺部の少なくとも一部と接触する、実施形態６７又は実施形態６８に記載の方法である。
【０１２３】
実施形態７２は、第２層の第２部分が第２層の第１部分を実質的に囲む、実施形態７１に記載の方法である。
【０１２４】
実施形態７３は、第１のゲル化剤が、微生物増殖栄養素を更に含む、実施形態４４〜６７のいずれかに記載の方法である。
【０１２５】
実施形態７４は、デバイスが、第１層、第２層、又はその両方の上に配置された指示薬を更に含む、実施形態４４〜６８のいずれかに記載の方法である。
【０１２６】
実施形態７５は、上記指示薬が、塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）を少なくとも０．５ｍｇ／ｃｍ２の量で含む、実施形態７４に記載の方法である。
【０１２７】
実施形態７６は、第１層、第２層、又はその両方の上に配置された誘導物質を更に含む、実施形態４４〜７５のいずれかに記載の方法である。
【０１２８】
実施形態７７は、第１層が、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリスチレン、又はポリエチレンコート紙を含む、実施形態４４〜７６のいずれかに記載の方法である。
【０１２９】
実施形態７８は、第１層が、ポリエチレンコート紙を含む、実施形態７７に記載の方法である。
【０１３０】
実施形態７９は、第２層が、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリエチレン、ポリスチレン、又はシリコーンを含む、実施形態４４〜７８のいずれかに記載の方法である。
【０１３１】
実施形態８０は、第２層が、配向ポリプロピレンを含む、実施形態７９に記載の方法である。
【０１３２】
実施形態８１は、第２層に固着された第２の水膨潤性ゲル化剤が、微生物増殖栄養素を更に含む、実施形態４４〜８０のいずれかに記載の方法である。
【０１３３】
実施形態８２は、第１の粘土が、合成ヘクトライトを含む、実施形態４４〜８１のいずれかに記載の方法である。
【０１３４】
実施形態８３は、第１の粘土が、未変性ヘクトライト、有機変性ヘクトライト、又はこれらの組み合わせを含む、実施形態４４〜８２のいずれかに記載の方法である。
【０１３５】
実施形態８４は、第１の水膨潤性ゲル化剤、第２の水膨潤性ゲル化剤、又はその両方が、最大７５重量％の追加の水膨潤剤及び／又は有機冷水溶解性ゲル化剤を含む、実施形態４４〜８３のいずれかに記載の方法である。
【０１３６】
実施形態８５は、第１の水膨潤性ゲル化剤、第２の水膨潤性ゲル化剤、又はその両方が、最大５０重量％の追加の水膨潤剤及び／又は有機冷水溶解性ゲル化剤を含む、実施形態４４〜８４のいずれかに記載の方法である。
【０１３７】
実施形態８６は、第１の水膨潤性ゲル化剤、第２の水膨潤性ゲル化剤、又はその両方が、最大２５重量％の追加の水膨潤剤及び／又は有機冷水溶解性ゲル化剤を含む、実施形態４４〜８５のいずれかに記載の方法である。
【０１３８】
実施形態８７は、第１の水膨潤性ゲル化剤、第２の水膨潤性ゲル化剤、又はその両方が、１重量％〜７５重量％の追加の水膨潤剤及び／又は有機冷水溶解性ゲル化剤を含む、実施形態４４〜８４のいずれかに記載の方法である。
【０１３９】
実施形態８８は、第１の水膨潤性ゲル化剤、第２の水膨潤性ゲル化剤、又はその両方が、５０重量％〜７５重量％の追加の水膨潤剤及び／又は有機冷水溶解性ゲル化剤を含む、実施形態４４〜８４のいずれかに記載の方法である。
【０１４０】
実施形態８９は、第１の水膨潤性ゲル化剤、第２の水膨潤性ゲル化剤、又はその両方が、１０重量％〜５０重量％の追加の水膨潤剤及び／又は有機冷水溶解性ゲル化剤を含む、実施形態４４〜８４のいずれかに記載の方法である。
【０１４１】
実施形態９０は、実施形態１〜４３のいずれかによるデバイスを提供する工程と、第１層を第２層から分離する工程と、少なくとも１種の微生物を含有する試料のアリコートを第１の水膨潤性ゲル化剤又は第２の水膨潤性ゲル化剤に添加して、接種されたデバイスを形成する工程と、第１層を第２層に再度積層する工程と、接種されたデバイスをインキュベートする工程と、を含む、試料中の少なくとも１種の微生物を検出及び計数する方法である。
【０１４２】
実施形態９１は、接種されたデバイスをインキュベートする工程が、最長で約４８時間インキュベートすることを含む、実施形態９０に記載の方法である。
【０１４３】
実施形態９２は、接種されたデバイスをインキュベートする工程が、最長で約２４時間インキュベートすることを含む、実施形態９０又は実施形態９１に記載の方法である。
【０１４４】
実施形態９３は、接種されたデバイスをインキュベートする工程が、最長で約１４時間インキュベートすることを含む、実施形態９０〜９２のいずれかに記載の方法である。
【０１４５】
実施形態９４は、接種されたデバイス内の微生物コロニーを検出する工程を更に含む、実施形態９０〜９３のいずれかに記載の方法である。
【０１４６】
実施形態９５は、接種されたデバイスをインキュベートした後に接種されたデバイス内に存在する微生物コロニーを計数する工程を更に含む、実施形態９０〜９４のいずれかに記載の方法である。
【０１４７】
実施形態９６は、アリコートの添加後、第１層を第２層に再度積層する前に、第１のゲル化剤が混合されない、実施形態９０〜９５のいずれかに記載の方法である。
【０１４８】
実施形態９７は、アリコートの添加後、第１層を第２層に再度積層する前に、第２のゲル化剤が混合されない、実施形態９０〜９６のいずれかに記載の方法である。
【０１４９】
実施形態９８は、試料の１つのアリコートが第１の水膨潤性ゲル化剤又は第２の水膨潤性ゲル化剤に添加される、実施形態９０〜９７のいずれかに記載の方法である。
【０１５０】
実施形態９９は、実施形態１〜４３のいずれかによる少なくとも１つのデバイスと、上記少なくとも１つのデバイスを使用して試料中の少なくとも１種の微生物を検出及び計数するための説明書と、を含むキットである。
【０１５１】
実施形態１００は、水性流体を更に含む、実施形態９９に記載のキットである。
【０１５２】
実施形態１０１は、水性流体が水又は緩衝溶液を含む、実施形態１００に記載のキットである。
【０１５３】
実施形態１０２は、微生物増殖栄養素、指示薬、誘導物質、又はこれらの組み合わせを更に含む、実施形態９９〜１０１のいずれかに記載のキットである。
【０１５４】
実施形態１０３は、第１の水膨潤性ゲル化剤、第２の水膨潤性ゲル化剤、又はその両方が、粉末の形態で存在する、実施形態１〜３８のいずれかに記載のデバイスである。
【０１５５】
実施形態１０４は、第１の水膨潤性ゲル化剤、第２の水膨潤性ゲル化剤、又はその両方が、粉末の形態で存在する、実施形態４４〜９８のいずれかに記載の方法である。
【実施例】
【０１５６】
本発明の目的及び利点は、以下の実施例によって更に例示されるが、これらの実施例において列挙された特定の材料及びその量は、他の諸条件及び詳細と同様に、本発明を過度に制限するものと解釈されるべきではない。これらの実施例はあくまで説明を目的としたものであって、添付の特許請求の範囲を限定するためのものではない。
【０１５７】
材料
特に記載のない限り、実施例及び本明細書の残りの部分における全ての部、百分率、及び比率などは、重量による。特に記載のない限り、全ての化学物質は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）などの化学物質供給業者から入手可能である。
【０１５８】
実施例１：デバイス構造
図８Ａ〜８Ｃを参照すると、塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）を含有するイソオクチルアクリレート／アクリルアミド感圧性接着剤（ＰＳＡ）１４、２４がコーティングされた１．６ｍｉｌの２軸配向ポリプロピレン（ＢＯＰＰ）フィルム１２、２２を、米国特許第５，４０９，８３８号の実施例１に記載のように作製した。直径６ｃｍの円を取り除いたシリコーンコート紙剥離ライナー（例えば、Ｄ＃６３  ＢＬ  ＫＦＴ  Ｈ／Ｏ  ５４８４４０／０００；Ｌｏｐｒｅｘ  ＧｍｂＨ（Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ））を使用して、それぞれ第１層１２及び第２層２２のシート上の接着剤１４、２４を覆った。露出した接着剤に、粘土（例えば、ＬＡＰＯＮＩＴＥ  ＥＰ、ＢＹＫ  Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ  Ｉｎｃ．（Ｇｏｎｚａｌｅｓ，ＴＸ））１６、２６を粉末コーティングした。粉末を均一に塗布し、余分な粉末を、フィルムを手で振盪することによって接着剤層から除去し、続いて剥離ライナーを除去した。図８Ａのデバイスに関しては、それ以上何も行わなかった。８Ｂのデバイスでは、直径６１ｍｍの円形開口部を有する発泡体スペーサ（ポリスチレンフォーム；幅７６ｍｍ×長さ１０２ｍｍ×厚さ０．５７ｍｍ）１８を、第１層１２の接着剤コーティング側に接着積層し、８Ｃのデバイスでは、直径６１ｍｍの円形開口部を有する新しいシリコーンコート紙剥離ライナー（例えば、Ｄ＃６３  ＢＬ  ＫＦＴ  Ｈ／Ｏ  ５４８４４０／０００；Ｌｏｐｒｅｘ  ＧｍｂＨ（Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ））１３を、剥離側を外にして第１の接着剤被覆層１２の上に配置した。上記の構造のそれぞれにおいて、デバイスの縁部に向かう試料の濡れ広がりは、第２のフィルム２２上の露出された疎水性接着剤２４によって停止され、発泡体ダム１８（図８Ｂ）又は剥離ライナー１３（図８Ｃ）によっても停止される。図８Ｄは、図８Ａ〜８Ｃと同じフィルム（１．６ｍｉｌのＢＯＰＰ）１２、２２及び接着剤（イソオクチルアクリレート／アクリルアミドＰＳＡ）１４、２４を使用して作製した、パターンコーティングされた接着剤層を図示する。次いで、パターンコーティングされた接着剤１４、２４に、ゲル化剤（ＬＡＰＯＮＩＴＥ  ＥＰ、ＢＹＫ  Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ  Ｉｎｃ．（Ｇｏｎｚａｌｅｓ，ＴＸ））１６、２６を粉末コーティングした。接着剤のない領域上の粉末を、ブラシで払い取った。図８Ｄの構造は、発泡体ダム又は剥離ライナーを用いた複雑な構造を必要としない。
【０１５９】
実施例２  ＬＡＰＯＮＩＴＥデバイスでの微生物の増殖及び検出
ＬＡＰＯＮＩＴＥをベースとした培養デバイスを、図８Ａのように構築した。黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）（Ｘｅｎ２９、パーキンエルマー）を、３７℃で振盪しながらＴＳＢ（バクトトリプチックソイブロス、Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ））中で一晩増殖させた。ＴＳＢで１０倍段階希釈を実施し、各希釈液１ｍＬを、別々のＬＡＰＯＮＩＴＥをベースとする培養デバイスに入れた。３７℃で２４時間のインキュベーション後、細菌によるＴＴＣの還元によって生じる赤色のコロニーは認められなかった。更に詳しく調べると、黄色ブドウ球菌（S. aureus）のコロニーは、小さなクリーム色〜黄色の不規則な円として肉眼で見ることができ、これらはＴＴＣを転換しなかった。実験を、大腸菌（Escherichia coli）ＡＴＣＣ＃２５９２２（ＥＺ−ＣＦＵ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（Ｓｔ．Ｃｌｏｕｄ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ））増殖を用いて繰り返し、黄色ブドウ球菌（S. auresus）と同様に希釈及び接種し、希釈液に４０ｕｇ／ｍＬのＴＴＣ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））を添加した。赤色のコロニー（ＴＴＣ還元）は、この場合も認められず、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のコロニーを肉眼ではっきりと見ることができた。所要の希釈液におけるコロニー数は、黄色ブドウ球菌（S. aureus）及び大腸菌（E. coli）の両方について、１ｍＬの希釈液を生菌数測定用（Aerobic Count、ＡＣ）ペトリフィルム（３Ｍ  ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ））に接種することによって得られた数とほぼ同じであった。実施例２は、本開示によるデバイスによって微生物が増殖及び検出され得ることを実証する。
【０１６０】
実施例３  薄膜培養デバイスにおけるゲル化剤としての種々の粘土の試験
ＬＡＰＯＮＩＴＥベースの培養デバイスを、多くの種類の市販の粘土（表１）を使用して図８Ｃのように構築し、本用途に好適な粘土組成物を決定した。各デバイスの上部シートを下部シートから剥がし、１ｍＬのＴＳＢ（バクトトリプチックソイブロス、Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ））を下部シートの円の中央にアプライした。次いで、上部シートを下部シートを覆う位置に戻した。湿潤性を評価し、「優良な湿潤性」は、追加の外力、例えば、プラスチック製の延展デバイス（ペトリフィルムカビ・酵母測定用プレートスプレッダー、３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ））を必要とすることなく、粘土表面を完全に被覆することとして定義した。被覆所要時間は測定しなかったが、速度に注意した。ゲル化時間は、接種したデバイスを５分間静置した後、シートの縁部を持ち上げ、水が粘土領域から流れ出るか否かを確認することによって評価した。「優良なゲル化時間」は、粘土表面から流れる水が認められないこととして定義した。後剥離は、いったん形成されたゲルスラブの一体性を決定するために、調査した。上部シートを再度下部から剥離することによって、粘土表面が目に見えて乱れない場合、その後剥離は優良と定義した。
【表１】
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【０１６１】
実施例４  インドキシルベースの指示薬を使用したＬＡＰＯＮＩＴＥデバイスにおける微生物の増殖及び検出
ＬＡＰＯＮＩＴＥ培養デバイスは、（１）下部フィルム１２を疎水性の紙（耐水性ポリマー層でコーティングした漂白クラフト紙）に置き換えたこと、及び（２）粘土粉末コートが１６．６重量％の粉末微生物栄養素（好適な配合物は、米国同時係属出願第６１／９４９６３１号の表７に見ることができる）を含有したこと、を除いて、図８Ｃのように構築した。大腸菌（Escherichia coli）ＡＴＣＣ  ＃２５９２２（ＥＺ−ＣＦＵ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（Ｓｔ．Ｃｌｏｕｄ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ））を、３７℃で振盪しながらＴＳＢ（バクトトリプチックソイブロス、Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ））中で一晩増殖させた。大腸菌（E. coli）の１０倍段階希釈を、バターフィールド緩衝液（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ））の９ｍＬ管で実施し、そこに４０ｕｇ／ｍＬの５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（Ｘ−ｇａｌ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））を添加した。各希釈液１ｍＬをＬＡＰＯＮＩＴＥデバイスに接種し、１ｍＬを従来の生菌数測定用（ＡＣ）ＰＥＴＲＩＦＩＬＭ（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ））に接種し、３７℃で２４時間インキュベートした。コロニーは淡青〜暗青色の斑点（Ｘ−ｇａｌ転換の代謝産物）としてはっきりと見ることができ、所与の希釈液のコロニー数は、ＬＡＰＯＮＩＴＥデバイスとＡＣ  ＰＥＴＲＩＦＩＬＭとの間でほぼ同じであった。次いで、上記の実験を、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）株１５９８１（Ｖａｌｌｅ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ.  Ｍｏｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００３  Ｍａｙ；４８（４）１０７５−８７）を使用し、Ｘ−ｇａｌを１００ｕｇ／ｍＬの５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−アセテート（Ｂｉｏｓｙｎｔｈ（Ｓｔａａｄ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））で置き換えたことを除いて、まったく同様に繰り返した。上記のように、コロニーは淡青〜暗青色の斑点としてはっきりと見ることができ、所与の希釈液のコロニー数は、ＬＡＰＯＮＩＴＥデバイスとＡＣ  ＰＥＴＲＩＦＩＬＭとの間でほぼ同じであった。
【０１６２】
実施例５  蛍光指示薬を使用したＬＡＰＯＮＩＴＥ培養デバイスにおける微生物の増殖及び検出
ＬＡＰＯＮＩＴＥ培養デバイスは、粉末微生物栄養素を添加せずに、実施例４のように構築した。大腸菌（Escherichia coli）ＡＴＣＣ  ＃２５９２２（ＥＺ−ＣＦＵ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（Ｓｔ．Ｃｌｏｕｄ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ））を、３７℃で振盪しながらＴＳＢ（バクトトリプチックソイブロス、Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ））中で一晩増殖させた。大腸菌（E. coli）の１０倍段階希釈を、大腸菌（E. Coli）用蛍光指示薬（４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−グルクロニド、濃度は機密）を含有する細菌用培地であるＣｏｌｉｌｅｒｔ（ＩＤＥＸＸ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ，Ｍａｉｎｅ））で実施した。各希釈液１ｍＬをＬＡＰＯＮＩＴＥデバイスに接種し、約１４時間後、実体顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ  Ｌｕｍｉｎａｒ．Ｖ１２にＡｘｉｏｃａｍ  ＭＲｃ５を使用）を３６５ｎｍの励起線及び４００ｎｍのロングパスフィルタ−と共に使用してプレートを画像化した。コロニーは、大量の蛍光が中心に隔離された個別のゾーンとして見ることができた。４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−グルクロニドの細菌転換の蛍光生成物（４−メチルウンベリフェロン）は、可溶性であり、プレート全体に自由に拡散することから、明白に画定された中心を有する個別の蛍光ゾーンが可視化されたことは、意外であった。
【０１６３】
実施例６  電離放射線処理後のＬＡＰＯＮＩＴＥ培養デバイスの機能
天然ガムは、製造物品を滅菌するために必要なレベルの電離放射線（例えば、ガンマ線又は電子線［電子ビーム］）に曝露すると分解することが知られている。照射された天然ガムは、鎖切断を起こし、水和したときに所与の粘土のゲルを形成する能力を失う。粘土は、他方、電離放射線に非常に耐性があることが知られている。培養デバイスを、実施例５のように構築し、ホイルパウチに封入して、ガンマ線（１０、２０、３０、４０、及び５０ｋｇｙ）に曝露した。大腸菌（Escherichia coli）ＡＴＣＣ  ＃２５９２２（ＥＺ−ＣＦＵ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（Ｓｔ．Ｃｌｏｕｄ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ））を、３７℃で振盪しながらＴＳＢ（バクトトリプチックソイブロス、Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ））中で一晩増殖させた。大腸菌（E. coli）の１０倍段階希釈を、ＴＳＢ（バクトトリプチックソイブロス、Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ））の９ｍＬ管で実施し、そこに１００ｕｇ／ｍＬの５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニド（Ｘ−ｇｌｕｓ（Ｓｔａａｄ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））を添加した。各希釈液１ｍＬをＬＡＰＯＮＩＴＥデバイスに接種し、１ｍＬを従来の生菌数測定用（ＡＣ）ＰＥＴＲＩＦＩＬＭ（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ））に接種し、３７℃で２４時間インキュベートした。コロニーは淡青〜暗青色の斑点（Ｘ−ｇａｌ転換の代謝産物）としてはっきりと見ることができ、所与の希釈液のコロニー数は、ＬＡＰＯＮＩＴＥデバイスとＡＣ  ＰＥＴＲＩＦＩＬＭとの間でほぼ同じであった。ＬＡＰＯＮＩＴＥベースの培養デバイスのゲル化は、５０ｋｇｙ以下のガンマ線量によって影響を受けなかった。
【０１６４】
実施例７  高レベルのＴＴＣを使用したＬＡＰＯＮＩＴＥ培養デバイスにおける微生物培養の検出
コーティング後に接着剤が１．５９ｍｇ／ｉｎ２を含有するように、大量のＴＴＣを添加したことを除き、米国特許第５，４０９，８３８号の実施例１のように、疎水性の紙（耐水性ポリマー層がコーティングされた漂白クラフト紙）を塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）を含有するイソオクチルアクリレート／アクリルアミド感圧性接着剤（ＰＳＡ）でコーティングすることによって、下部フィルムを作製した。下部フィルムを、次に、グアーガム（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））と１６．６重量％の粉末微生物栄養素（好適な配合物は、米国同時係属出願第６１／９４９６３１号の表７に見ることができる）との混合物でコーティングした。粉末コーティングの前に、接着剤上にマスクを置かなかった。上部フィルムを、図８Ａ〜Ｃの上部フィルムのように構築し、１００％のＬＡＰＯＮＩＴＥ  ＥＰ（ＢＹＫ  Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ（Ｗｅｓｅｌ，Ｇｅｒｍａｎｙ））でコーティングした。粉末コーティングの前に、接着剤上にマスクを置かなかった。この構造では、下部フィルムにコーティングされたグアーが、試料を培養デバイス内に維持するのに十分なほど試料濡れ広がりを遅くすることから、円内の粉末コーティングと接着剤をマスクする必要はない。大腸菌（Escherichia coli）ＡＴＣＣ  ＃２５９２２及び黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）ＡＴＣＣ  ＃２５９２３（ＥＺ−ＣＦＵ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（Ｓｔ．Ｃｌｏｕｄ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ））を、３７℃で振盪しながらＴＳＢ（バクトトリプチックソイブロス、Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ））中で一晩増殖させた。各生物の１０倍段階希釈を、バターフィールド緩衝液（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ））の９ｍＬ管で実施し、各希釈液１ｍＬをＬＡＰＯＮＩＴＥデバイスに接種し、上部フィルムを単純に閉じ、スプレッダーは使用しなかった。比較のため、複製試料を、生菌数測定用（ＡＣ）ＰＥＴＲＩＦＩＬＭ（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ））に接種した。プレートを、３７℃で２４時間培養した。高レベルのＴＴＣを用いたＬＡＰＯＮＩＴＥデバイスで得られたコロニー数は、生菌数測定用（ＡＣ）ＰＥＴＲＩＦＩＬＭ（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ））のコロニー数とほぼ同じであった。図７は、ヘクトライト粘土がＴＴＣを吸収し、そのため、高濃度のＴＴＣを、微生物に有害又は致死的となると一般的に考えられる濃度で指示薬として使用できるという驚くべき結果を示す。
【０１６５】
本明細書では、特定の例示的実施形態が詳細に説明されてきたが、当業者には、上述の説明を理解した上で、これらの実施形態の代替物、変更物、及び等価物を容易に想起することができる点が、理解されるであろう。更には、本明細書で参照される全ての刊行物及び特許は、個々の刊行物又は特許を参照により組み込むことが、詳細かつ個別に指示されている場合と同じ程度で、それらの全容が参照により組み込まれる。様々な例示的実施形態が説明されてきた。これらの実施形態及び他の実施形態は、以下の特許請求の範囲に含まれるものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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