(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ａ）
【化１】
0006792256.tif 000096
［式中、Ｒ１およびＲ２は、同一または異なって、それぞれ水素原子またはＣ１−６アルキル基を示す。或いは、Ｒ１およびＲ２は、これらが結合する窒素原子と共に、ヘテロ原子を介してまたは介することなく、互いに結合して飽和の５〜８員単環を形成する。
Ｒ８はカルボキシ基またはアミノメチル基を示す。
ｎは０以上の整数を示す。
ｚは２または３を示す。
【化２】
0006792256.tif 000097
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表されるタモキシフェン化合物。
【請求項２】
Ｒ８がカルボキシ基である、請求項１に記載のタモキシフェン化合物。
【請求項３】
Ｒ８がアミノメチル基である、請求項１に記載のタモキシフェン化合物。
【請求項４】
請求項２に記載のタモキシフェン化合物の製造方法であって、下記一般式（Ｂ）    
【化３】
0006792256.tif 000098
［式中、Ｒ４はカルボキシル基の保護基である。
ｚは、請求項１において定義されるｚと同じである。
【化４】
0006792256.tif 000099
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表される化合物と、下記一般式（５）
【化５】
0006792256.tif 000100
［式中、Ｒ１、Ｒ２、およびｎは、請求項１において定義されるＲ１、Ｒ２、およびｎとそれぞれ同じである。
Ｒ５はハロゲン原子を示す。］
で表される化合物またはその塩とを、塩基の存在下で反応させる工程を含む、製造方法。
【請求項５】
請求項３に記載のタモキシフェン化合物の製造方法であって、下記一般式（Ｃ）
【化６】
0006792256.tif 000101
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、請求項１において定義されるＲ１、Ｒ２、ｎ、およびｚとそれぞれ同じである。
Ｒ９は水酸基の保護基である。
【化７】
0006792256.tif 000102
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表される化合物またはその塩を、還元する工程を含む、製造方法。
【請求項６】
（１）Ｒ８がカルボキシ基である請求項１に記載のタモキシフェン化合物と、
（２）配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、および配列番号５から選択されるいずれかのアミノ酸配列を有するペプチド、またはそのＣ末端がアミド化されたペプチドと、
がアミド結合した、複合体。
【請求項７】
（ｉ）Ｒ８がアミノメチル基である請求項１に記載のタモキシフェン化合物と、
（ｉｉ）配列番号１０３、配列番号１０４、および配列番号５４に記載のいずれかのアミノ酸配列を有するペプチド、またはそのＮ末端がアセチル化されたペプチドと、
がアミド結合した、複合体。
【請求項８】
請求項６に記載する複合体を製造する方法であって、下記一般式（Ａ）
【化８】
0006792256.tif 000103
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、請求項１にて定義される。Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚとそれぞれ同じである。Ｒ８は、カルボキシ基である。
【化９】
0006792256.tif 000104
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表されるタモキシフェン化合物またはその塩と、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、および配列番号５から選択されるいずれかのアミノ酸配列を有するペプチド、またはそのＣ末端がアミド化されたペプチドとを、脱水縮合剤の存在下で反応させることを特徴とする、製造方法。
【請求項９】
請求項７に記載する複合体を製造する方法であって、下記一般式（Ａ）
【化１０】
0006792256.tif 000105
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、請求項１にて定義される。Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚとそれぞれ同じである。Ｒ８は、アミノメチル基である。
【化１１】
0006792256.tif 000106
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表されるタモキシフェン化合物またはその塩と、配列番号１０３、配列番号１０４、および配列番号５４に記載のいずれかのアミノ酸配列を有するペプチド、またはそのＮ末端がアセチル化されたペプチドとを、脱水縮合剤の存在下で反応させることを特徴とする、製造方法。
【請求項１０】
請求項６、または７に記載する複合体を含むプロテアソーム阻害剤。
【請求項１１】
請求項１０に記載のプロテアソーム阻害剤を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はペプチドに関する。
【背景技術】
【０００２】
人の体は数十兆個の細胞から構成されており、これらの細胞は恒常性の維持、細胞増殖、代謝回転などの様々な細胞内プロセスを制御する手段として細胞内タンパク質分解系を利用している。細胞内で役目を終えたタンパク質、ミスフォールドタンパク質などの大半は、分解の目印としてユビキチンが付加され、プロテアソームと呼ばれる巨大なタンパク質複合体により分解される。
【０００３】
プロテアソームとは全ての真核生物から一部の古細菌にまで高度に保存されたタンパク質分解酵素複合体である。細胞内において構成的に発現する一般的なプロテアソームは２６Ｓプロテアソームと呼ばれている。これは、分解対象となる基質タンパク質の認識を担う１９Ｓ調節因子とプロテアーゼ活性を担う２０Ｓコア（２０Ｓプロテアソームとも呼ばれる。）とからなる、分子量２．５ＭＤａ、長さ４４ｎｍ、そして最大直径が２０ｎｍにも及ぶ巨大な粒子である。
【０００４】
プロテアソームとは細胞周期、シグナル伝達、免疫応答、アポトーシス、新生タンパク質の品質管理などの主要な生命現象の制御に関与しており、プロテアソームのプロテアーゼ様の活性を阻害することにより増殖性細胞内でアポトーシスが誘導される。よって、現在までに天然物および合成物を含め、多くのプロテアソーム阻害剤が、主に癌の治療を目的に開発されている。
【０００５】
癌の治療のために開発された最初のプロテアソーム阻害剤の成功例は、多発性骨髄腫治療薬のボルテゾミブ（商品名：ベルケード；治験コード：ＰＳ−３４１）である。多発性骨髄腫とは血液の悪性腫瘍の一つであり、悪性リンパ腫と同じく血液悪性腫瘍のなかでも比較的多くみられる難治性の癌である。
【０００６】
しかしながら、ボルテゾミブは２００３年に承認されて以降、薬剤耐性の症例、不応例などが臨床の分野で顕在化し、その耐性メカニズムは良くわかっておらず治療の選択肢が大きく制限されていた。
【０００７】
このような経緯の中で２０１２年に、プロテアソーム阻害剤であるカーフィルゾミブが新たに多発性骨髄腫の治療薬として認可された。カーフィルゾミブは、第二世代型プロテアソーム阻害剤に分類され、非拮抗阻害の作用様式で阻害効果を発揮する。カーフィルゾミブはエポキシケトンをファーマコフォアにもつペプチド骨格を有する阻害剤であり、ボルテゾミブに不応性を示す患者にも持続的奏効がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００６−１１７６４８号公報
【特許文献２】特開２００８−０９４８３６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
多発性骨髄腫に対する化学治療は、２００３年のボルテゾミブの承認を機に大きく前進した。ところが薬剤耐性、不応性などの問題が顕在化し、次世代のプロテアソーム阻害剤が求められた。そして、２０１２年にカーフィルゾミブの登場によってボルデゾミブ耐性の問題は改善された。
【００１０】
しかしながら、ボルデゾミブの不応性問題が現れたように、カーフィルゾミブに対して薬剤耐性問題が現れないとは限らない。
【００１１】
そこで、本発明者が抗がん剤のシードとなるような分子標的阻害物質の探索を行った。ここで抗エストロゲン剤であるタモキシフェンの誘導体の中から強いプロテソーム阻害活性のある化合物が見出された（特許文献１、２）。
【００１２】
タモキシフェン誘導体のなかでも、分子量５００程度の非ペプチド性の芳香族化合物であるＲＩＤ−Ｆは、安定な低分子有機化合物である。またＲＩＤ−Ｆは、既存のプロテアソーム阻害剤と比較して例を見ない非ペプチド構造の対称分子であるというユニークな新規構造を持っている。そこで、本発明者が精製２０Ｓプロテアソームに対する阻害実験をインビトロで行ったところ、優れた阻害効果を発揮することが明らかとなった（特許文献２）。
【００１３】
ところが本発明者らの研究によると、ＲＩＤ−Ｆによる精製２６Ｓプロテアソームに対するインビトロでの阻害活性は、精製２０Ｓプロテアソームに対するインビトロでの阻害活性よりもＩＣ５０値として比較した場合、大きくなることを確認されている。したがって、ＲＩＤ−Ｆをそのままインビボで用いたとしても、ＲＩＤ−Ｆがプロテアソーム阻害剤として有用であるとは言えない。
【００１４】
本発明の課題は、インビボで十分なプロテアソーム阻害活性を示す化合物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、斯かる課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、上記ＲＩＤ−Ｆが、β１サブユニット（ＰＧＰＨ様）には拮抗阻害様式で、β５サブユニット（ＣＴ−Ｌ様）には非拮抗阻害様式で阻害効果を発揮することを確認した。さらに、上記ＲＩＤ−Ｆの特定の部位に改変を加え、これを特定のアミノ酸配列を有するペプチドを用いて修飾したところ、精製２６Ｓプロテアソームに対しても顕著に優れた阻害活性を発揮することを見出した。
【００１６】
本発明は、これらの知見を基に完成されたものであり、以下に示す態様の発明を包含する。
【００１７】
I．ペプチド
本発明に係るペプチド(I)は、以下の(I-1)〜(I-13)に示す態様を包含する。
【００１８】
(I-1)  １９Ｓ調節因子に認識され、且つ、４個〜１０個のアミノ酸残基からなる、ペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
【００１９】
(I-2)  上記ペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチドのアミノ酸配列が、２０Ｓプロテアソームを構成するβ１サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列を含むものである、(I-1)に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
【００２０】
(I-3)  上記ペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチドのアミノ酸配列が、２０Ｓプロテアソームを構成するβ２サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列を含むものである、(I-1)に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
【００２１】
(I-4)  上記ペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチドのアミノ酸配列が、２０Ｓプロテアソームを構成するβ５サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列を含むものである、(I-1)に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
【００２２】
(I-5)  β１サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列が、少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含む、(I-2)に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
【００２３】
(I-6)  β２サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列が、少なくとも１つの塩基性側鎖を有するアミノ酸残基を含む、(I-3)に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
【００２４】
(I-7)  β５サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列が、少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含む、(I-4)に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
(I-8)  配列番号１〜５１のいずれかに示すアミノ酸配列からなる、上記(I-1)〜(I-7)のいずれか１項に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
【００２５】
(I-9)  配列番号１〜５のいずれかに示すアミノ酸配列からなる、上記(I-1)〜(I-8)のいずれか１項に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
【００２６】
(I-10)  プロテアソーム阻害剤の作用を増強させるために用いられる、上記(I-1)〜(I-9)のいずれか１項に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
【００２７】
(I-11)  プロテアソーム阻害剤が非ペプチド性化合物である、上記(I-10)に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
【００２８】
(I-12)  非ペプチド性化合物が、下記一般式（１）
【化１】
0006792256.tif 000002
【００２９】
［式中、Ｒ１およびＲ２は、同一または異なって、それぞれ水素原子またはＣ１−６アルキル基を示す。或いは、Ｒ１およびＲ２は、これらが結合する窒素原子と共に、ヘテロ原子を介してまたは介することなく、互いに結合して飽和の５〜８員単環を形成する。
ｎは０以上の整数を示す。
ｚは２または３を示す。
【化２】
0006792256.tif 000003
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表される化合物またはその塩である、上記(I-11)に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
【００３０】
(I-13)  プロテアソーム阻害剤が２０Ｓプロテアソームに特異的な阻害剤である、上記(I-10)〜(I-12)のいずれか１項に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
【００３１】
II．ペプチド結合化合物
本発明に係るペプチド結合化合物(II)は下記一般式（２）で表される化合物またはその塩である。
【化３】
0006792256.tif 000004
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、上記に同じである。
Ｒ３は上記ペプチド(I)の残基である。
当該ペプチド残基のアミド末端はカルボニル基とペプチド結合している。
【化４】
0006792256.tif 000005
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
【００３２】
III．製造方法
本発明に係る製造方法(III)は、上記ペプチド結合化合物（II）またはその塩の製造方法であって、下記一般式（３）
【化５】
0006792256.tif 000006
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、上記に同じである。
【化６】
0006792256.tif 000007
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表される化合物と、上記ペプチド(I)とを、脱水縮合剤の存在下で反応させる工程を含む、製造方法。
【００３３】
IV．化合物
本発明の化合物(IV)は、下記一般式（３）で表される化合物（またはその塩）である。
【００３４】
【化７】
0006792256.tif 000008
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、上記に同じである。
【化８】
0006792256.tif 000009
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
【００３５】
V．製造方法
本発明に係る製造方法(V)は、上記化合物（IV）またはその塩の製造方法であって、下記一般式（４）
【化９】
0006792256.tif 000010
【００３６】
［式中、Ｒ４はカルボキシル基の保護基である。
ｚは、上記一般式（１）において定義されるｚと同じである。
【００３７】
【化１０】
0006792256.tif 000011
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表される化合物またはその塩と、下記一般式（５）
【化１１】
0006792256.tif 000012
［式中、Ｒ１、Ｒ２、およびｎは、上記に同じである。
Ｒ５はハロゲン原子を示す。］
で表される化合物またはその塩とを、塩基の存在下で反応させる工程を含む、製造方法。
【００３８】
VI．プロテアソーム阻害剤
本発明に係るプロテアソーム阻害剤(VI)は、上記ペプチド結合化合物(II)を含む、以下の(VI-1)または(VI-2)に示す態様を包含する。
【００３９】
(VI-1)  上記ペプチド結合化合物(II)に記載の化合物またはその塩を含む、プロテアソーム阻害剤。
【００４０】
(VI-2)  プロテアソームが２６Ｓプロテアソームである、上記(VI-1)に記載のプロテアソーム阻害剤。
【００４１】
VII．医薬組成物
本発明に係る医薬組成物は、上記ペプチド結合化合物(II)またはその塩を含む、以下の（VII-1）または（VII-2）に示す態様を包含する。
【００４２】
(VII-1)  上記ペプチド結合化合物(II)またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物。
【００４３】
(VII-2)  癌、アミロイドーシス、または自己免疫疾患の治療または予防に使用される、(VII-1)に記載の医薬組成物。
【００４４】
また、本発明は下記の項１〜項１５に示す態様の発明を包含する。
【００４５】
〔項１〕  １９Ｓ調節因子に認識され、且つ、４個〜１０個のアミノ酸残基からなる、
ペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
〔項２〕  前記ペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチドのアミノ酸配列が、２０Ｓプロテアソームを構成するβ１サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列を含むものである、項１に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
〔項３〕  前記ペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチドのアミノ酸配列が、２０Ｓプロテアソームを構成するβ２サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列を含むものである、項１に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
〔項４〕  前記ペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチドのアミノ酸配列が、２０Ｓプロテアソームを構成するβ５サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列を含むものである、項１に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
〔項５〕  配列番号１〜５１のいずれかに示すアミノ酸配列からなる、項１〜項４のいずれか１項に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
〔項６〕  配列番号１〜５のいずれかに示すアミノ酸配列からなる、項１〜項５のいずれか１項に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
〔項７〕  プロテアソーム阻害剤の作用を増強させるために用いられる、項１〜項６のいずれか１項に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
〔項８〕  プロテアソーム阻害剤が非ペプチド性化合物である、項７に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
〔項９〕  非ペプチド性化合物が、下記一般式（１）
【化１２】
0006792256.tif 000013
［式中、Ｒ１およびＲ２は、同一または異なって、それぞれ水素原子またはＣ１−６アルキル基を示す。或いは、Ｒ１およびＲ２は、これらが結合する窒素原子と共に、ヘテロ原子を介してまたは介することなく、互いに結合して飽和の５〜８員単環を形成する。
ｎは０以上の整数を示す。
ｚは２または３を示す。
【化１３】
0006792256.tif 000014
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表されるタモキシフェン化合物またはその塩である、項８に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
〔項１０〕  下記一般式（２）
【化１４】
0006792256.tif 000015
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、上記に同じである。
Ｒ３は項１〜項９のいずれかに示すペプチドの残基である。
当該ペプチド残基のアミド末端がカルボニル基とペプチド結合している。
【化１５】
0006792256.tif 000016
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表されるペプチド結合化合物またはその塩。
〔項１１〕  項１０に記載のペプチド結合化合物またはその塩の製造方法であって、
下記一般式（３）
【化１６】
0006792256.tif 000017
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、上記に同じである。
【化１７】
0006792256.tif 000018
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表されるタモキシフェン化合物またはその塩と、項１〜項９のいずれかに示すペプチドとを、脱水縮合剤の存在下で反応させる工程を含む、製造方法。
〔項１２〕  下記一般式（３）
【化１８】
0006792256.tif 000019
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、上記に同じである。
【化１９】
0006792256.tif 000020
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表されるタモキシフェン化合物又はその塩。
〔項１３〕  項１２に記載のタモキシフェン化合物またはその塩の製造方法であって、
下記一般式（４）
【化２０】
0006792256.tif 000021
［式中、Ｒ４はカルボキシル基の保護基である。
ｚは上記に同じである。
【化２１】
0006792256.tif 000022
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表されるタモキシフェン化合物またはその塩と、下記一般式（５）
【化２２】
0006792256.tif 000023
［式中、Ｒ１、Ｒ２、およびｎは、上記に同じである。
Ｒ５はハロゲン原子を示す。］
で表される化合物またはその塩とを、塩基の存在下で反応させる工程を含む、製造方法。
〔項１４〕  項１０に記載のペプチド結合化合物を含む、プロテアソーム阻害剤。
〔項１５〕  項１０に記載のペプチド結合化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物。
【００４６】
また、本発明には以下の〔Ａ１〕〜〔Ａ１５〕に示す態様の発明も包含される。
【００４７】
〔Ａ１〕  下記一般式（Ａ）
【化２３】
0006792256.tif 000024
［式中、Ｒ１およびＲ２は、同一または異なって、それぞれ水素原子またはＣ１−６アルキル基を示す。或いは、Ｒ１およびＲ２は、これらが結合する窒素原子と共に、ヘテロ原子を介してまたは介することなく、互いに結合して飽和の５〜８員単環を形成する。
Ｒ８はカルボキシ基またはアミノメチル基を示す。
ｎは０以上の整数を示す。
ｚは２または３を示す。
【化２４】
0006792256.tif 000025
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表されるタモキシフェン化合物またはその塩。
〔Ａ２〕  Ｒ８がカルボキシ基である、Ａ１に記載のタモキシフェン化合物またはその塩。
〔Ａ３〕  Ｒ８がアミノメチル基である、Ａ１に記載のタモキシフェン化合またはその塩。
〔Ａ４〕  Ａ２に記載のタモキシフェン化合物またはその塩の製造方法であって、下記一般式（Ｂ）    
【化２５】
0006792256.tif 000026
［式中、Ｒ４はカルボキシル基の保護基である。
ｚは、上記に同じである。
【化２６】
0006792256.tif 000027
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表される化合物またはその塩と、下記一般式（５）
【化２７】
0006792256.tif 000028
［式中、Ｒ１、Ｒ２、およびｎは、それぞれ上記に同じである。
Ｒ５はハロゲン原子を示す。］
で表される化合物またはその塩とを、塩基の存在下で反応させる工程を含む、製造方法。
〔Ａ５〕  Ａ３に記載のタモキシフェン化合物またはその塩の製造方法であって、下記一般式（ｃ）
【化２８】
0006792256.tif 000029
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、ぞれぞれ上記に同じである。
Ｒ９は水酸基の保護基である。
【化２９】
0006792256.tif 000030
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表される化合物またはその塩を、還元する工程を含む、製造方法。
〔Ａ６〕  Ａ１〜Ａ３の何れかに記載のタモキシフェン化合物またはその塩と、
１９Ｓ調節因子に認識され、且つ、４個〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチド、またはその末端が修飾されたペプチドとがアミド結合した、
複合体。
〔Ａ７〕  前記ペプチド、またはその末端が修飾されたペプチドが、２０Ｓプロテアソームを構成するβ１サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列を含むものである、Ａ６に記載の複合体。
〔Ａ８〕  前記ペプチド、またはその末端が修飾されたペプチドが、２０Ｓプロテアソームを構成するβ２サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列を含むものである、Ａ６に記載の複合体。
〔Ａ９〕  前記ペプチド、またはその末端が修飾されたペプチドが、２０Ｓプロテアソームを構成するβ５サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列を含むものである、Ａ６に記載の複合体。
〔Ａ１０〕  前記ペプチド、またはその末端が修飾されたペプチドが、配列番号１〜１０２のいずれかに示すアミノ酸配列を含むものである、Ａ６〜Ａ９の何れかに記載の複合体。
〔Ａ１１〕  請求項２に記載のタモキシフェン化合物と、配列番号１〜５１に記載のペプチド、またはその末端が修飾されたペプチドとがアミド結合した、Ａ６〜Ａ１０の何れかに記載の複合体。
〔Ａ１２〕  請求項３に記載のタモキシフェン化合物と、配列番号５２〜１０４に記載のペプチド、またはその末端が修飾されるペプチドとがアミド結合した、Ａ６〜Ａ１０の何れかに記載の複合体。
〔Ａ１３〕  Ａ６〜Ａ１２の何れかに記載する複合体を製造する方法であって、下記一般式（Ａ）
【化３０】
0006792256.tif 000031
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ８、ｎ、およびｚは、それぞれ上記に同じである。
【化３１】
0006792256.tif 000032
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表されるタモキシフェン化合物またはその塩と、１９Ｓ調節因子に認識され、且つ、４個〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチド、またはその末端が修飾されるペプチドとを、脱水縮合剤の存在下で反応させることを特徴とする、製造方法。
〔Ａ１４〕  Ａ６〜Ａ１２の何れかに記載する複合体を含むプロテアソーム阻害剤。
〔Ａ１５〕  Ａ１４に記載のプロテアソーム阻害剤と、薬学的に許容される塩とを含む医薬組成物。
なお、上記の〔Ａ１〕〜〔Ａ１５〕に記載する、「末端が修飾されるペプチド」とは、
ペプチドのＮ末端がアセチル化されるか、またはペプチドのＣ末端がアミド化されることを意味する。
【００４８】
さらに、本発明には、以下の〔Ｂ１〕〜〔Ｂ１５〕に示す態様の発明も包含される。
【００４９】
〔Ｂ１〕  １９Ｓ調節因子に認識され、且つ、４個〜１０個のアミノ酸残基からなる、
ペプチドまたはそのアミド末端がアセチル化されてなるペプチド。
〔Ｂ２〕  前記ペプチドまたはそのアミド末端がアセチル化されてなるペプチドのアミノ酸配列が、２０Ｓプロテアソームを構成するβ１サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列を含むものである、Ｂ１に記載のペプチドまたはそのアミド末端がアセチル化されてなるペプチド。
〔Ｂ３〕  前記ペプチドまたはそのアミド末端がアセチル化されてなるペプチドのアミノ酸配列が、２０Ｓプロテアソームを構成するβ２サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列を含むものである、Ｂ１に記載のペプチドまたはそのアミド末端がアセチル化されてなるペプチド。
〔Ｂ４〕  前記ペプチドまたはそのアミド末端がアセチル化されてなるペプチドのアミノ酸配列が、２０Ｓプロテアソームを構成するβ５サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列を含むものである、Ｂ１に記載のペプチドまたはそのアミド末端がアセチル化されてなるペプチド。
〔Ｂ５〕  配列番号５２〜１０４のいずれかに示すアミノ酸配列からなる、Ｂ１〜Ｂ４のいずれか１項に記載のペプチドまたはそのアミド末端がアセチル化されてなるペプチド。
〔Ｂ６〕  配列番号５４のいずれかに示すアミノ酸配列からなる、Ｂ１〜Ｂ５のいずれか１項に記載のペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチド。
〔Ｂ７〕  プロテアソーム阻害剤の作用を増強させるために用いられる、項１〜項６のいずれか１項に記載のペプチドまたはそのアミド末端がアセチル化されてなるペプチド。
〔Ｂ８〕  プロテアソーム阻害剤が非ペプチド性化合物である、Ｂ７に記載のペプチドまたはそのアミド末端がアセチル化されてなるペプチド。
〔Ｂ９〕  非ペプチド性化合物が、下記一般式（１）
【化３２】
0006792256.tif 000033
［式中、Ｒ１およびＲ２は、同一または異なって、それぞれ水素原子またはＣ１−６アルキル基を示す。或いは、Ｒ１およびＲ２は、これらが結合する窒素原子と共に、ヘテロ原子を介してまたは介することなく、互いに結合して飽和の５〜８員単環を形成する。
ｎは０以上の整数を示す。
ｚは２または３を示す。
【化３３】
0006792256.tif 000034
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表されるタモキシフェン化合物またはその塩である、Ｂ８に記載のペプチドまたはそのアミド末端がアセチル化されてなるペプチド。
〔Ｂ１１〕  下記一般式（Ａ−１）
【化３４】
0006792256.tif 000035
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、上記に同じである。
【化３５】
0006792256.tif 000036
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表されるタモキシフェン化合物またはその塩のアミノメチル基と、Ｂ１〜Ｂ９に示すペプチドまたはそのアミド末端がアセチル化されてなるペプチドのカルボキシル基とが、ペプチド結合してなる複合体。
〔Ｂ１１〕  Ｂ１０に記載の複合体の製造方法であって、
下記一般式（Ａ−１）
【化３６】
0006792256.tif 000037
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、上記に同じである。
【化３７】
0006792256.tif 000038
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表される化合物またはその塩と、Ｂ１〜Ｂ９のいずれかに示すペプチドとを、脱水縮合剤の存在下で反応させる工程を含む、製造方法。
〔Ｂ１２〕  下記一般式（３）
【化３８】
0006792256.tif 000039
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、上記に同じである。
【化３９】
0006792256.tif 000040
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表されるタモキシフェン化合物またはその塩。
〔Ｂ１３〕  項１２に記載のタモキシフェン化合物またはその塩の製造方法であって、
下記一般式（ｃ）
【化４０】
0006792256.tif 000041
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、それぞれ上記に同じである。
Ｒ９は水酸基の保護基である。
【化４１】
0006792256.tif 000042
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表される化合物またはその塩を、還元する工程を含む、製造方法。
〔Ｂ１４〕  Ｂ１０に記載のペプチド結合化合物を含む、プロテアソーム阻害剤。
〔Ｂ１５〕  Ｂ１０に記載のペプチド結合化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物。
【発明の効果】
【００５０】
本発明のペプチド(I)またはペプチド（C）は、これと共に用いる物質を１９Ｓ調節因子に認識されることにより、２６Ｓプロテアソームを構成する２０Ｓプロテアソーム内部への侵入を積極的に許す現象を生じさせる効果を発揮する。
【００５１】
たとえば、本発明のペプチド(I)またはペプチド（C）は、これらと結合させた化合物（それぞれペプチド結合化合物(II)または複合体(B)）を、２０Ｓプロテアソーム内部への侵入を積極的に許す現象を生じさせる効果を発揮する。すなわち、本発明のペプチド結合化合物(II)または複合体(B)は、２６Ｓプロテアソームに対して顕著に優れた阻害活性を発揮する。
【００５２】
また、本発明の化合物(VI)またはタモキシフェン化合物(A)は、それぞれペプチド結合化合物(II)または複合体(B)を製造する上で有用である。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】ＲＩＤ−Ｆ−ＣＯ−ＧＬＬＥ−ＮＨ２（ＲＩＤ−Ｆ−ＧＬＬＥともいう）を示す図。
【図２】ＲＩＤ−Ｆ−ＣＯ−ＧＬＬＶＹ−ＮＨ２（ＲＩＤ−Ｆ−ＧＬＬＶＹともいう。）を示す図。
【図３】ＲＩＤ−Ｆ−ＣＯ−ＧＲＲＲＲＲＲＲＲ−ＮＨ２（ＲＩＤ−Ｆ−ＧＲＲＲＲＲＲＲＲ；ＧＲＲＲＲＲＲＲＲはＧＲ８ともいう。）を示す図。
【図４】ＲＩＤ−Ｆ−ＣＯ−ＧＲＲＲＲＲＲ−ＮＨ２（ＲＩＤ−Ｆ−ＧＲＲＲＲＲＲ；ＧＲＲＲＲＲＲはＧＲ６ともいう。）を示す図。
【図５】ＲＩＤ−Ｆ−ＣＯ−ＧＲＲＲＲ−ＮＨ２（ＲＩＤ−Ｆ−ＧＲＲＲＲ；ＧＲＲＲＲはＧＲ４ともいう）を示す図。
【図６】各種ペプチドで修飾されたＲＩＤ−Ｆ−ＣＯＯＨによる、プロテアソーム阻害活性実験の結果を示す図。（Ａ）は２０Ｓプロテアソームを用いた実験結果を示し、（Ｂ）は２６Ｓプロテアソームを用いた実験結果を示す。なお、図中のグラフの縦軸はＩＣ５０値を示す。
【図７】（Ａ）Ａｃ−ＬＬＥＧ−ＮＨＣＨ２−ＲＩＤ−Ｆ（ＬＬＥＧ−ＲＩＤ−Ｆともいう。）の化学構造式と、その製造方法を示す図。（Ｂ）Ａｃ−ＬＬＶＹＧ−ＮＨＣＨ２−ＲＩＤ−Ｆ（ＬＬＶＹＧ−ＲＩＤ−Ｆともいう。）の化学構造式と、その製造方法を示す図。（Ｃ）Ａｃ−Ｒ８Ｇ−ＮＨＣＨ２−ＲＩＤ−Ｆ（Ｒ８Ｇ−ＲＩＤ−Ｆともいう。）の化学構造式と、その製造方法を示す図。
【図８】ＭＴＴアッセイの結果を示す図。図中の縦軸は、ＤＭＳＯを加えたコントロールの数値を１００％としたときの相対値を示す。
【図９】（Ａ）Ｈｅｌａ細胞を用いた、Ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  ＧｌｏＴＭ  アッセイの実験結果を示す図。（Ｂ）ＲＰＭＩ８２２６細胞を用いたＰｒｏｔｅａｓｏｍｅ  ＧｌｏＴＭ  アッセイの実験結果を示す図。（Ａ）および（Ｂ）共に、図中の縦軸は、Ｃｅｌｌ  Ｏｎｌｙとしたコントロールにて得たれた蛍光値を１００％としたときの相対値を表す。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
I.  ペプチド
本発明のペプチド(I)は、ペプチドまたはそのカルボキシ末端がアミド化されてなるペプチドであり、これらのペプチドは１９Ｓ調節因子に認識され、且つ、４個〜１０個のアミノ酸残基からなる。ペプチド(I)を構成するアミノ酸残基の個数は、たとえば４個、５個、６個、７個、８個、９個、または１０個の中から適宜決定することができる。好ましくは５個〜９個のいずれかである。
【００５５】
なお、ペプチド(I)を構成するアミノ酸残基は、広義のアミノ酸残基とすることができる。用語「広義のアミノ酸残基」とは、コドンに支配された２０種類のアミノ酸に限らず、アミノ基およびカルボキシル基を少なくとも１つずつ有する、オルニチン、チロキシンなどの広義のアミノ酸から、アミノ基の水素原子および／またはカルボキシル基の水酸基のいずれかが取り除かれた構造をいう。なお、コドンに支配されるアミノ酸であるプロリンのようなイミノ酸も、広義のアミノ酸に含めることができ、この場合、上述のアミノ基に代えてイミノ酸のイミノ基から水素原子が取り除かれた構造を上述の広義のアミノ酸残基に含めるものとする。
【００５６】
また、用語「１９Ｓ調節因子に認識される」とは、生体内で２６Ｓプロテアソームの構成サブユニットである１９Ｓ調節因子に認識されることである。より詳細には、同じく２６Ｓプロテアソームを構成する２０Ｓプロテアソーム内部への侵入を積極的に許す現象を生じさせることを意味する。
【００５７】
よって、あるペプチドが１９Ｓ調節因子に認識されるかどうかを判断するには、下記の実施例で示すように、２６Ｓプロテアソームによるプロテアーゼ活性は阻害せず、逆に２０Ｓプロテアソームによるプロテアーゼ活性を阻害する化合物と、あるペプチドとを結合させた複合体を準備し、斯かる複合体をインビトロで２６Ｓプロテアソームに対して作用させることにより、２６Ｓプロテアソームによるプロテアーゼ活性を阻害することを確認する手段によって、当業者であれば容易に実施することができる。
【００５８】
なお、上述のような手段に代えて、インビボにおいて上記複合体が２６Ｓプロテアソームを阻害することを確認することによっても当業者であれば容易に実施することもできる。また、当業者であれば斯かる複合体を細胞に作用させることによって、斯かる細胞内でのアポトーシスが誘起されることを確認することによっても、容易にこれを実施することもできる。
【００５９】
ペプチド(I)は２０Ｓプロテアソームを構成するβ１サブユニット、β２サブユニット、β５サブユニットの活性に対する基質として認識されることを特徴とする。
【００６０】
すなわち、ペプチド(I)のアミノ酸配列は特に限定されず、たとえば、２０Ｓプロテアソームを構成するβ１サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列、２０Ｓプロテアソームを構成するβ２サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列、２０Ｓプロテアソームを構成するβ５サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列などを含むアミノ酸配列を挙げることができる。
【００６１】
これらのアミノ酸配列の１番目のアミノ酸残基は特に限定はされない。たとえば、アミノ酸残基の側鎖の分子的な大きさが小さいアミノ酸残基が好ましく、たとえばグリシン残基、アラニン残基などを挙げることができる。なお、１番目のアミノ酸残基とはアミノ酸配列のＮ末端に位置するアミノ酸残基を意味し、２番目、３番目との表記は順にＣ末端に向かって隣のアミノ酸残基であることを意味する。
【００６２】
上記の各サブユニットの活性に対する「基質」とは、各サブユニットがそれぞれプロテアーゼ様の活性を有していることから、これらによって分解される対象となるペプチドまたはペプチド断片を意味する。また、「基質として認識されるアミノ酸配列」とは、斯かるペプチドまたはペプチド断片のアミノ酸配列を意味する。
【００６３】
たとえば、β１サブユニットはＰＧＰＨ様のエンドプロテアーゼ活性を有し、主として酸性側鎖を有するアミノ残基近傍のペプチド結合の切断を触媒する。
【００６４】
したがって、ペプチド(I)のアミノ酸配列として、少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を挙げることができる。ここで、用語「酸性側鎖を有するアミノ酸残基」とは、アスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基に限らず、これら以外の広義のアミノ酸残基の側鎖に対して、カルボキシル基、スルホニル基などの酸性基が付与されるように修飾されてなるアミノ酸残基が広く包含される。なお、用語「広義のアミノ酸残基」とは上述の通りとすることができる。
【００６５】
このような、少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第１の態様として、４個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【００６６】
第１の態様のアミノ酸配列の２番目および３番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばロイシン残基とすることができる。
【００６７】
第１の態様のアミノ酸配列の４番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることができる。
【００６８】
この他に、第１の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、および４番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることもできる。
【００６９】
このような第１の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号６に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【００７０】
少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第２の態様として、５個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【００７１】
第２の態様のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基は特に限定されず、たとえばグリシン残基、ロイシン残基、またはチロシン残基とすることができる。
【００７２】
第２の態様のアミノ酸配列の３番目のアミノ酸残基は特に限定されず、たとえばフェニルアラニン残基またはロイシン残基とすることができる。
【００７３】
第２の態様のアミノ酸配列の４番目のアミノ酸残基は特に限定されず、たとえばアラニン残基、バリン残基、またはロイシン残基とすることができる。
【００７４】
第２の態様のアミノ酸配列の５番目のアミノ酸残基は特に限定されず、たとえばアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることができる。
【００７５】
この他に、第２の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることもできる。
【００７６】
このような第２の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号７、２７、または２８に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【００７７】
少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第３の態様として、６個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【００７８】
第３の態様のアミノ酸配列の２番目〜６番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば、２番目、３番目、４番目、５番目、および６番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることができる。
【００７９】
この他に、第３の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、４番目、５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とし、且つその６番目のアミノ酸残基をグリシン残基またはアラニン残基とすることもできる。
【００８０】
このような第３の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号８または２９に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【００８１】
少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第４の態様として、７個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【００８２】
第４の態様のアミノ酸配列の２番目〜７番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、および７番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることができる。
【００８３】
この他に、第４の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とし、且つその６番目および７番目の両アミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基とすることもできる。
【００８４】
このような第４の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号９または３０に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【００８５】
少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第５の態様として、８個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【００８６】
第５の態様のアミノ酸配列の２番目〜５番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【００８７】
第５の態様のアミノ酸配列の６番目〜８番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば６番目、７番目、および８番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【００８８】
この他に、第５の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、および８番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることもできる。
【００８９】
このような第５の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号１０または３１に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【００９０】
少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第６の態様として、９個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【００９１】
第６の態様のアミノ酸配列の２番目〜９番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、８番目、および９番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることができる。
【００９２】
この他に、第６の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とし、且つその６番目、７番目、８番目、および９番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基とすることもできる。
【００９３】
このような第６の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号１１または３２に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【００９４】
少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第７の態様として、１０個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【００９５】
第７の態様のアミノ酸配列の２番目〜５番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、４番目、および５番目アミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることができる。
【００９６】
第７の態様のアミノ酸配列の６番目〜１０番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば６番目、７番目、８番目、９番目、および１０番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【００９７】
この他に、第７の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、８番目、９番目、および１０番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることもできる。
【００９８】
このような第７の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号１２または３３に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【００９９】
上述する少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の１例として、Ｃ末端から順に連続してリジン残基、リジン残基、バリン残基、およびアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基を含むアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１００】
これらの少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列として、配列番号１に示すアミノ酸配列が好ましい。
【０１０１】
他方、β２サブユニットはトリプシン様のエンドプロテアーゼ活性を有し、主として塩基性側鎖を有するアミノ残基近傍のペプチド結合の切断を触媒する。
【０１０２】
したがって、ペプチド(I)のアミノ酸配列の他の態様として、少なくとも１つの塩基性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を挙げることができる。ここで、用語「塩基性側鎖を有するアミノ酸残基」とは、リジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基に限らず、これら以外の広義のアミノ酸残基の側鎖に対して、アミド基、グアニジル基、イミダゾイル基などの塩基性基が付与されるように修飾されてなるアミノ酸残基が広く包含される。なお、用語「広義のアミノ酸残基」とは、上述の通りである。
【０１０３】
このような、少なくとも１つの塩基性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第１の態様として、４個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１０４】
第１の態様のアミノ酸配列の２番目〜４番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、および４番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１０５】
このような第１の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号１３または３４に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１０６】
少なくとも１つの塩基性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第２の態様として、５個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１０７】
第２の態様のアミノ酸配列の２番目〜５番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１０８】
このような第２の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号１４または３５に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１０９】
少なくとも１つの塩基性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第３の態様として、６個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１１０】
第３の態様のアミノ酸配列の２番目〜６番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、４番目、５番目、および６番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１１１】
この他に、第３の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とし、且つその６番目のアミノ酸残基をグリシン残基またはアラニン残基とすることができる。
【０１１２】
このような第３の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号１５または３６に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１１３】
少なくとも１つの塩基性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第４の態様として、７個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１１４】
第４の態様のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、プロリン残基とすることができる。
【０１１５】
第４の態様のアミノ酸配列の３番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばセリン残基とすることができる。
【０１１６】
第４の態様のアミノ酸配列の４番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばスレオニン残基とすることができる。
【０１１７】
第４の態様のアミノ酸配列の５番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基とすることができる。
【０１１８】
第４の態様のアミノ酸配列の６番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばリジン残基、アルギニン残基、ヒスチジン残基、またはイソロイシン残基とすることができる。
【０１１９】
第４の態様のアミノ酸配列の７番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばリジン残基、アルギニン残基、ヒスチジン残基、またはバリン残基とすることができる。
【０１２０】
この他に、第４の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、および７番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１２１】
このような第４の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号１６、３７、または３８に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１２２】
少なくとも１つの塩基性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第５の態様として、８個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１２３】
第５の態様のアミノ酸配列の２番目〜５番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１２４】
第５の態様のアミノ酸配列の６番目〜８番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば６番目、７番目、および８番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基とすることができる。
【０１２５】
この他に、第５の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、および８番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることもできる。
【０１２６】
このような第５の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号１７または３９に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１２７】
少なくとも１つの塩基性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第６の態様として、９個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１２８】
第６の態様のアミノ酸配列の２番目〜９番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、８番目、および９番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１２９】
この他に、第６の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とし、且つその６番目、７番目、８番目、および９番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基とすることもできる。
【０１３０】
このような第６の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号１８、４０、または４１に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１３１】
少なくとも１つの塩基性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第７の態様として、１０個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１３２】
第７の態様のアミノ酸配列の２番目〜５番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１３３】
第７の態様のアミノ酸配列の６番目〜１０番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば６番目、７番目、８番目、９番目、および１０番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１３４】
この他に、第７の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、８番目、９番目、および１０番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることもできる。
【０１３５】
このような第７の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号１９または４２に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１３６】
これらの少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列として、配列番号３〜５のいずれかに示すアミノ酸配列が好ましい。
【０１３７】
他方、β５サブユニットはキモトリプシン様のエンドプロテアーゼ活性を有し、主として疎水性側鎖を有するアミノ残基近傍のペプチド結合の切断を触媒する。
【０１３８】
したがって、ペプチド(I)のアミノ酸配列の他の態様として、少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を挙げることができる。ここで、用語「疎水性側鎖を有するアミノ酸残基」とは、アラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基に限らず、これら以外の広義のアミノ酸残基の側鎖に対して、Ｃ１−6低級アルキル基、インドリル基、フェニル基などの疎水性基が付与されるように修飾されてなるアミノ酸残基が広く包含される。なお、用語「広義のアミノ酸残基」とは、上述の通りである。
【０１３９】
このような、少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第１の態様として、４個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１４０】
第１の態様のアミノ酸配列の２番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばロイシン残基、スレオニン残基、またはプロリン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１４１】
第１の態様のアミノ酸配列の３番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばアスパラギン残基、メチオニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１４２】
第１の態様のアミノ酸配列の４番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばチロシン残基、ロイシン残基、またはフェニルアラニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１４３】
このような第１の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号２０、４３、４４、または４５に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１４４】
少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第２の態様として、５個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１４５】
第２の態様のアミノ酸配列の２番目〜４番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば、２番目、３番目、および４番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１４６】
第２の態様のアミノ酸配列の５番目のアミノ酸残基は特に限定されず、たとえばグリシン残基、アラニン残基、またはチロシン残基とすることができる。
【０１４７】
この他に、第２の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることもできる。
【０１４８】
このような第２の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号２１または４６に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１４９】
少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第３の態様として、６個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１５０】
第３の態様のアミノ酸配列の２番目〜４番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、および４番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１５１】
第３の態様のアミノ酸配列の５番目および６番目のアミノ酸残基は特に限定されず、たとえば両アミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基とすることができる。
【０１５２】
この他に、第３の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、４番目、５番目、および６番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１５３】
このような第３の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号２２または４７に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１５４】
少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第４の態様として、７個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１５５】
第４の態様のアミノ酸配列の２〜４番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、および４番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１５６】
第４の態様のアミノ酸配列の５〜７番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば５番目、６番目、および７番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基とすることができる。
【０１５７】
この他に、第４の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、および７番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることもできる。
【０１５８】
このような第４の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号２３または４８に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１５９】
少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第５の態様として、８個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１６０】
第５の態様のアミノ酸配列の２番目〜５番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、４番目、および５番目アミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１６１】
第５の態様のアミノ酸配列の６番目〜８番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば６番目、７番目、および８番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基とすることができる。
【０１６２】
この他に、第５の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、および８番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１６３】
このような第５の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号２４または４９に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１６４】
少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第６の態様として、９個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１６５】
第６の態様のアミノ酸配列の２番目〜９番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、８番目、および９番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１６６】
この他に、第６の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とし、且つその６番目、７番目、８番目、および９番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基とすることもできる。
【０１６７】
このような第６の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号２５または５０に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１６８】
少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第７の態様として、１０個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１６９】
第７の態様のアミノ酸配列の２番目〜５番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１７０】
第７の態様のアミノ酸配列の６番目〜１０番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば６番目、７番目、８番目、９番目、および１０番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０１７１】
この他に、第７の態様のアミノ酸配列の２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、８番目、９番目、および１０番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることもできる。
【０１７２】
このような第７の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号２６または５１に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１７３】
上述する少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の１例として、Ｃ末端から順に連続して、リジン残基、リジン残基、バリン残基、およびアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を挙げることができる。
【０１７４】
これらの少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列として、配列番号２に示すアミノ酸配列が好ましい。
【０１７５】
上記ペプチド(I)のアミノ酸配列は、繰り返し配列を有するものとすることができる。たとえば、３アミノ酸の繰り返しまたは４アミノ酸の繰り返しを挙げることができる。
【０１７６】
上述のペプチド(I)のアミノ酸配列として、配列番号１〜５のいずれかに示すアミノ酸配列が好ましい。
【０１７７】
上記ペプチド(I)は、上述のアミノ酸配列情報を基に、たとえば固相合成法などの慣用の方法を採用することにより、当業者であれば容易に製造することができる。また、ペプチドのカルボキシ末端のアミド化も、慣用の方法を用いることによって、当業者であれば容易に製造することができる。
【０１７８】
上記ペプチド(I)は、プロテアソーム阻害剤の作用を増強させるために好適に用いられる。
【０１７９】
このようなプロテアソーム阻害剤とは、プロテアソームに含まれる各サブユニットのいずれかによるプロテアーゼ様活性を阻害する範囲に限って特に限定はされない。たとえば、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ、Ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ、Ｅｐｏｘｏｍｉｃｉｎなどのペプチド性化合物、またはＭａｒｉｚｏｍｉｂ、ラクタシスチン、サリノスポラミドＡ、下記一般式（１）で表される化合物などの非ペプチド性化合物を含むプロテアソーム阻害剤などを挙げることができる。なかでも、非ペプチド性化合物が好ましく、下記一般式（１）で表されるタモキシフェン化合物がより好ましい。
【０１８０】
【化４２】
0006792256.tif 000043
【０１８１】
一般式（１）において、Ｒ１およびＲ２は、同一または異なって、それぞれ水素原子またはＣ１−６アルキル基である。或いは、Ｒ１およびＲ２は、これらが結合する窒素原子と共に、ヘテロ原子を介してまたは介することなく、互いに結合して飽和の５〜８員単環を形成する。
【０１８２】
Ｃ１−６アルキル基として、たとえばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル基などの炭素数が１〜６の直鎖または分岐鎖状アルキル基を挙げることができる。
【０１８３】
飽和の５〜８員単環とは特に限定はされない。このような単環として、たとえばピロリジン環、ピラゾリジン環、イミダゾリジン環、（イソ）チアゾリジン環、（イソ）オキサゾリジン環、ピペリジン環、ピペラジン環、モルフォリン環、チオモルフォリン環、アゼパン環、チオアゼパン環、オキサゼパン環などを挙げることができる。これらのなかでもアゼパン環がより好ましい。
【０１８４】
ｎは０以上の整数である。ｎの上限値は、たとえば１０とすることができ、好ましくは順に９、８、７、６、５、４、３、または２であり、１が最も好ましい。
【０１８５】
【化４３】
0006792256.tif 000044
【０１８６】
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。このような結合の違いに基づいて、式中のｚは、２または３である。
【０１８７】
すなわち、上記一般式（１）で表される化合物は、下記一般式（１−１）または（１−２）のいずれかで表される態様の化合物を包含する。好ましくは下記一般式（１−１）で表される態様の化合物である。
【０１８８】
【化４４】
0006792256.tif 000045
0006792256.tif 000046
【０１８９】
上記一般式（１）で示される化合物は、公知の方法を用いて製造することができる。具体的には上記特許文献１または２に記載の方法を参照することにより製造することができる。
【０１９０】
これらのプロテアソーム阻害剤は、２０Ｓプロテアソームの阻害剤または２６Ｓプロテアソームの阻害剤とすることができるが、２０Ｓプロテアソームに特異的な阻害剤とすることが好ましい。
【０１９１】
用語「特異的」とは、２以上の対象に対してある対象に影響を及ぼす可能性が高いことを意味し、何れかの対象に選択的であることを意味するものではない。上述のプロテアソーム阻害剤にこれを当てはめると、２０Ｓプロテアソームまたは２６Ｓプロテアソームの何れに対しても阻害効果を発揮するものの、２０Ｓプロテアソームに対して阻害効果を発揮しやすいことを意味する。
【０１９２】
II.  ペプチド結合化合物
本発明のペプチド結合化合物(II)は、下記一般式（２）で表される。
【０１９３】
【化４５】
0006792256.tif 000047
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、上記に同じである。
Ｒ３は上記ペプチド(I)の残基である。
当該ペプチド残基のアミド末端がカルボニル基とペプチド結合している。    
【化４６】
0006792256.tif 000048
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
【０１９４】
上記一般式（２）で表されるペプチド結合化合物(II)は、下記一般式（２−１）または（２−２）のいずれかで表される態様のペプチド結合化合物を包含する。好ましくは一般式（２−１）で表される態様のペプチド結合化合物である。
【０１９５】
【化４７】
0006792256.tif 000049
0006792256.tif 000050
【０１９６】
ペプチド結合化合物(II)はプロテアソームに対して特異的に阻害効果を発揮する一般式（１）で表される化合物の構造をその分子内に有していることから、プロテアソーム阻害剤として有用に用いることができる。また、ペプチド化合物(II)は、１９Ｓ調節因子に認識されるペプチド(I)も兼ね備えることから、２６Ｓプロテアソームに対する阻害剤としても有用である。
【０１９７】
III.  製造方法
本発明のペプチド結合化合物(II)の製造方法(III)は、下記一般式（３）に表されるタモキシフェン化合物と、上記ペプチド(I)とを、脱水縮合剤の存在下で反応させる工程を含む。
【０１９８】
【化４８】
0006792256.tif 000051
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、上記に同じである。
【化４９】
0006792256.tif 000052
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
【０１９９】
上記一般式（３）で表されるタモキシフェン化合物は、下記一般式（３−１）または（３−２）のいずれかで表される態様の化合物を包含する。好ましくは下記一般式（３−１）で表される態様の化合物である。
【０２００】
【化５０】
0006792256.tif 000053
0006792256.tif 000054
【０２０１】
脱水縮合剤とは特に限定はされない。たとえば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）などのカルボジイミド系化合物；Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）などのイミダゾール系化合物；トリアジン系化合物；ホスホニウム系化合物；ウロニウム系化合物などが挙げられる。好ましくはカルボジイミド系化合物であり、なかでもＥＤＣが特に好ましい。
【０２０２】
脱水縮合剤と共に、触媒を用いることもできる。具体的な触媒は限定されない。たとえば、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎーヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）１−ヒドロキシー７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）などを挙げることができる。好ましくはＨＯＢｔである。
【０２０３】
具体的な反応条件は、上記脱水縮合剤（要すれば触媒と共に）用いて、アミド結合またはペプチド結合を形成せしめる公知の条件であれば特に限定はされない。たとえばＤＭＦなどの溶媒中で、通常−６１℃〜１５３℃程度の反応温度を採用することができ、０℃〜９０℃とすることが好ましい。
【０２０４】
なお、反応物を慣用の精製工程に供して純度の高いペプチド結合化合物(II)を得ることもできる。
【０２０５】
IV.  化合物
本発明の化合物(IV)は、上記一般式（３）で表される。すなわち、上記のペプチド結合化合物(II)とは異なるタモキシフェン化合物である。化合物(IV)は、上記ペプチド結合化合物(II)の中間体であり、たとえば一般式（１）で表される化合物が有するプロテアソーム阻害効果を損なうことなく、これにペプチドを結合させることができる点で有用である。
【０２０６】
V.  製造方法
本発明の製造方法(V)は上記化合物(IV)の製造方法である。すなわち、一般式（３）で表されるタモキシフェン化合物の製造方法である。一般式（３）で表される化合物の製造方法は、たとえば、下記（反応式−１）に示す方法により製造できる。
【０２０７】
【化５１】
0006792256.tif 000055
【０２０８】
上記反応式−１に従った一般式（３）にて表されるタモキシフェン化合物の製造方法を以下に詳述する。
【０２０９】
一般式（３）で表されるタモキシフェン化合物の製造方法は、下記一般式（４）
【化５２】
0006792256.tif 000056
［式中、Ｒ４はカルボキシル基の保護基である。
ｚは、上記に同じである。  
【化５３】
0006792256.tif 000057
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表される化合物と、下記一般式（５）
【化５４】
0006792256.tif 000058
［式中、Ｒ１、Ｒ２、およびｎは、上記に同じである。
Ｒ５はハロゲン原子を示す。］
で表される化合物またはその塩とを、塩基の存在下で反応させる工程を含む。
【０２１０】
Ｒ４で定義されるカルボキシル基の保護基は特に限定はされず、公知のカルボキシル基の保護基を広く使用できる。たとえば、
【化５５】
0006792256.tif 000059
などで表される、アルキル基、ベンジルオキシアルキル基、アリールアルキル基などを挙げることができ、これらのなかでも
【化５６】
0006792256.tif 000060
で表される、ベンジル基が好ましい。
【０２１１】
Ｒ５で定義するハロゲン原子とは特に限定はされない。たとえば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などを挙げることができ、これらのなかでも塩素原子が好ましい。
【０２１２】
一般式（５）で表される化合物の塩とは特に限定はされない。たとえば、塩酸塩、臭化水素酸塩、炭酸塩、酢酸塩などを挙げることができ、これらのなかでも塩酸塩が好ましい。
【０２１３】
上記一般式（４）で表される化合物は、下記一般式（４−１）または（４−２）のいずれかで表される態様の化合物を包含する。好ましくは一般式（４−１）で表される態様の化合物である。
【０２１４】
【化５７】
0006792256.tif 000061
0006792256.tif 000062
【０２１５】
塩基とは特に限定はされない。たとえば、水素化ナトリウム、水素化カリウム、リチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）などを挙げることができ、これらのなかでも、水素化ナトリウムが好ましい。
【０２１６】
塩基の使用量は特に限定はされず、たとえば、一般式（４）で表される化合物に対して、通常は１当量〜１０当量程度、好ましくは３当量〜８当量程度、更に好ましくは５当量〜７当量程度である。
【０２１７】
一般式（４）で表される化合物と、一般式（５）で表される化合物との使用割合は特に限定はされない。たとえば、一般式（４）で表される化合物に対して、一般式（５）で表される化合物の使用量は、通常は２当量〜１０当量程度、好ましくは２当量〜５当量程度、更に好ましくは２当量〜４当量程度である。
【０２１８】
一般式（４）で表される化合物と、一般式（５）で表される化合物との反応条件は特に限定はされず、この種の反応の反応条件を適宜採用することができる。たとえば、ＤＭＦなどの溶媒中で一般式（４）で表される化合物と、一般式（５）で表される化合物と、３０℃〜７０℃程度、好ましくは４０℃〜６０℃程度に加温することにより、化学式（３）で表される化合物が製造される。
【０２１９】
一般式（３）で表されるタモキシフェン化合物のなかでも、たとえば上記一般式（３−４）で表される化合物を製造するには、上記一般式（３−１）〜（３−３）の何れかで表される化合物に対して、水素を付加する反応に供することで容易に実施できる。具体的な方法として、たとえば上記一般式（３−１）〜（３−３）の何れかで表される化合物と、水素分子とを触媒の存在下で混合し、通常０℃〜１００℃程度で反応させることにより実施できる。
【０２２０】
一般式（４）で表される化合物および一般式（５）で表される化合物は、何れも公知の化合物であるか、または公知の化合物から公知の方法に準じて容易に製造される化合物である。
【０２２１】
具体的な製造方法として、たとえば、一般式（３）で表される化合物のなかでも、一般式（３−１）で表される化合物を製造するために用いる上記化合物（４−１）であれば、下記一般式（６）
【化５８】
0006792256.tif 000063
［式中、Ｒ４は一般式（４）で定義したものと同じである。
Ｒ６は水酸基の保護基を示す。］
で表される化合物と、脱保護剤とを反応させる方法を挙げることができる。
【０２２２】
式中、水酸基の保護基とは特に限定はされない。たとえば、
【化５９】
0006792256.tif 000064
などのシリル系保護基を挙げることができ、これらのなかでも
【化６０】
0006792256.tif 000065
で表されるｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基が好ましい。
【０２２３】
脱保護剤とは、Ｒ４にて定義されるカルボキシル基の保護基に影響を与えない範囲に限り特に限定はされない。たとえば、フッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）、フッ化水素酸、塩酸、過塩素酸などを挙げることができ、これらのなかでもＴＢＡＦが好ましい。
【０２２４】
脱保護剤の使用量は特に限定はされない。たとえば、一般式（６）で表される化合物に対して、通常は１当量〜７当量程度、好ましくは２当量〜６当量程度、更に好ましくは３当量〜５当量程度である。
【０２２５】
一般式（６）で表される化合物を製造する反応条件は、この種の反応の反応条件を適宜採用することができ、特に限定はされない。たとえば、ＴＨＦなどの溶媒中で、０℃から室温程度に加温することによって製造される。室温とは１０℃〜４０℃程度である。
【０２２６】
一般式（６）で表される化合物は公知の化合物であるか、または公知の化合物から公知の方法に準じて容易に製造される化合物である。
【０２２７】
具体的な製造方法として、たとえば、下記一般式（７）
【化６１】
0006792256.tif 000066
［式中、Ｒ６は一般式（６）で定義したものと同じである。］
で表される化合物を酸化させ、次いで生成する酸化物とそのカルボキシル基に保護基を付与するための剤（以下、カルボキシル基保護剤とする。）とを、塩基の存在下で反応させる方法を挙げることができる。
【０２２８】
一般式（７）で表される化合物を酸化する方法は、一般式（７）で表される化合物中の水酸基がカルボキシル基にまで酸化される範囲に限り特に限定はされない（たとえば、下記一般式（７−１）で表される化合物とすることができる）。
【０２２９】
【化６２】
0006792256.tif 000067
［式中、Ｒ６は一般式（６）で定義したものと同じである。］。
【０２３０】
具体的には、三酸化硫黄およびピリジン錯体；ジメチルスルホオキシド（ＤＭＳＯ）および（ＣＯＣｌ）２；ＤＭＳＯおよびＤＣＣ；次亜塩素酸、デス・マーチン・ペルヨージナン（ＤＭＰ）などの酸化剤を用いることを挙げることができる。好ましくは次亜塩素酸、ＤＭＰなどである。
【０２３１】
このような酸化は水酸基がカルボキシル基にまで酸化される範囲において、たとえば２段階の酸化反応とすることができる。たとえば、下記一般式（７−２）で表される化合物を単離して、更に上述の酸化剤を用いて酸化反応に供する方法を挙げることができる。
【０２３２】
【化６３】
0006792256.tif 000068
［式中、Ｒ６は一般式（６）で定義したものと同じである。］。
【０２３３】
酸化剤の使用量は特に限定はされず、たとえば一般式（７）で表される化合物に対して、通常は１当量〜３当量程度、好ましくは１．５〜２．５当量である。
【０２３４】
酸化反応の条件は、この種の反応の反応条件を適宜採用することができ特に限定されない。たとえば、ジクロロメタン、ＴＨＦ、ブタノール、水などの溶媒を用いて室温（１０℃〜４０℃）程度に加温することで、酸化反応が実施できる。また、必要に応じて上記例示する溶媒を適宜混合したものを溶媒として用いることもできる。
【０２３５】
カルボキシル基保護剤は特に限定はされず、たとえば、一般式（４）で表される化合物のＲ４で定義する、カルボキシル基の保護基を付与するものとすることができる。好ましくは臭化ベンジルである。
【０２３６】
塩基は特に限定はされない。たとえば、水素化ナトリウム、水素化カリウム、ＬＤＡなどを挙げることができ、これらのなかでも、水素化ナトリウムが好ましい。
【０２３７】
塩基の使用量は特に限定はされず、たとえば、一般式（７）で表される化合物に対して、通常は１当量〜４当量程度、好ましくは２当量〜３当量程度である。
【０２３８】
カルボキシル基保護剤の使用量は特に限定はされず、たとえば、一般式（７）で表される化合物に対して、通常は０．５当量〜１．５当量程度、好ましくは０．８当量〜１．４当量程度である。
【０２３９】
酸化物とカルボキシル基保護剤との反応条件はこの種の反応の反応条件を適宜採用することができ、特に限定はされない。たとえば、ＤＭＦなどの溶媒中で、室温（１０℃〜４０℃。）程度に加温することで、一般式（６）で表される化合物が製造される。
【０２４０】
一般式（７）で表される化合物は公知の化合物であるか、または公知の化合物から公知の方法に準じて容易に製造される化合物である。
【０２４１】
具体的な製造方法として、たとえば、下記一般式（８）
【化６４】
0006792256.tif 000069
［式中、Ｒ６は一般式（６）で定義したものと同じである。
Ｒ７は、Ｒ６と異なる水酸基の保護基である。］
で表される化合物と、脱保護剤とを反応させる方法を挙げることができる。
【０２４２】
Ｒ７にて定義される水酸基の保護基は、Ｒ６よりも脱保護され易い保護基である限り特に限定はされない。たとえば
【化６５】
0006792256.tif 000070
などの基を挙げることができ、これらのなかでも
【化６６】
0006792256.tif 000071
で表されるｐ−メトキシベンジル基が好ましい。
【０２４３】
脱保護剤は、Ｒ６にて定義される水酸基の保護基に影響を与えない範囲に限り、特に限定はされない。たとえば、水素分子およびパラジウム炭素；２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−ｐ−ベンゾキノン（ＤＤＱ）、セリウムアンモニウムナイトレート（ＣＡＮ）などを挙げることができ、これらのなかでもＤＤＱが好ましい。
【０２４４】
脱保護剤の使用量は特に限定はされず、たとえば、一般式（８）で表される化合物に対して、通常は１当量〜３当量程度、好ましくは１．５当量〜２．５当量程度である。
【０２４５】
一般式（７）で表される化合物を製造する反応条件はこの種の反応の反応条件を適宜採用することができ、特に限定はされない。たとえば、ジクロロメタンを含む水などの溶媒中で室温（１０℃〜４０℃）程度に加温することにより、一般式（７）で表される化合物が製造される。
【０２４６】
一般式（８）で表される化合物は公知の化合物であるか、または公知の化合物から公知の方法に準じて容易に製造される化合物である。
【０２４７】
具体的な製造方法として、たとえば、下記一般式（９）
【化６７】
0006792256.tif 000072
［式中、Ｒ７は一般式（８）で定義したものと同じである。］
で表される化合物と、水酸基に保護基を付与するための剤（以下、水酸基保護剤という。）とを反応させる方法を挙げることができる。
【０２４８】
水酸基保護剤とは、一般式（６）で表される化合物のＲ６にて定義される、水酸基に対して保護基を付与するものとすることができる。好ましくはｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラン（ＴＢＳ）である。
【０２４９】
水酸基保護剤の使用量は特に限定されない。たとえば、一般式（９）で表される化合物に対して、通常は１当量〜６当量程度、好ましくは２当量〜５当量である。
【０２５０】
なお、一般式（８）で表される化合物を得るための反応には、触媒を用いることもできる。このような触媒は特に限定はされない。具体的には、Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン  Ｎ−オキシド（ＤＭＡＰＯ）、４−ピロリジノピリジン（ＰＰＹ）、フッ化セシウムなどが挙げられ、これらのなかでもＤＭＡＰが好ましい。
【０２５１】
触媒の使用量は特に限定はされず、一般式（９）で表される化合物に対して、通常は０．００５当量〜１当量程度、好ましくは０．０１当量〜０．１当量程度である。
【０２５２】
一般式（８）で表される化合物を製造するための反応条件はこの種の反応の反応条件を適宜採用することができ、特に限定はされない。たとえば、ＤＭＦなどの溶媒中で、０℃〜室温（１０℃〜４０℃）に加温することにより、一般式（８）で表される化合物が製造される。
【０２５３】
一般式（９）で表される化合物は公知の化合物であるか、または公知の化合物から公知の方法に準じて容易に製造される化合物である。
【０２５４】
具体的な製造方法として、たとえば、下記一般式（１０）
【化６８】
0006792256.tif 000073
［式中、Ｒ７は一般式（８）で定義したものと同じである。］
【０２５５】
で表される化合物と、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノンとを、ピナコールカップリング反応させる方法を挙げることができる。このようなカップリング反応のなかでも、亜鉛および四塩化チタンの存在下で反応させるマクマリー反応を採用することが好ましい。
【０２５６】
一般式（１０）で表される化合物と、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノンの使用割合は特に限定はされない。たとえば、一般式（１０）で表される化合物に対して、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノンが通常は１当量〜５当量程度、好ましくは２当量〜４当量程度、更に好ましくは２．５当量〜３．５当量程度である。
【０２５７】
亜鉛の使用量も、四塩化チタンの使用量も特に限定はされない。たとえば、亜鉛の使用量は、一般式（１０）で表される化合物に対して、通常は１０当量〜２０当量程度、好ましくは１１当量〜１８当量程度、更に好ましくは１３当量〜１５当量程度である。
【０２５８】
四塩化チタンの使用量は、一般式（１０）で表される化合物に対して、通常は２当量〜１０当量程度、好ましくは４当量〜９当量程度、更に好ましくは５当量〜７当量程度である。
【０２５９】
一般式（９）で表される化合物を製造する反応条件はこの種の反応の反応条件を適宜採用することができ、特に限定はされない。たとえば、ＴＨＦなどの溶媒中で、還流しながら反応する方法を挙げることができる。
【０２６０】
一般式（１０）で表される化合物および４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノンは、何れも公知の化合物であるか、または公知の化合物から公知の方法に準じて容易に製造される化合物である。
【０２６１】
一般式（１０）で表される化合物の具体的な製造方法として、たとえば、下記一般式（１１）
【化６９】
0006792256.tif 000074
［式中、Ｒ７は一般式（８）で定義したものと同じである。］
で表される化合物を酸化反応に供する方法を挙げることができる。酸化反応のなかでもＤＭＳＯを酸化剤とし、これと塩化オキサリル〔（ＣＯＣｌ）２〕とを併せて用いるＳｗｅｒｎ酸化を採用することが好ましい。
【０２６２】
より具体的には、たとえばジクロロメタン溶媒で一般式（１１）で表される化合物とＤＭＳＯおよび（ＣＯＣｌ）２と共にトリエチルアミンとを混合し、−８０℃〜０℃程度の反応温度にて酸化反応に供することが挙げられる。
【０２６３】
ＤＭＳＯ、（ＣＯＣｌ）２、およびトリエチルアミンの何れの使用量も特に限定はされない。たとえば、ＤＭＳＯの使用量は一般式（１１）で表される化合物に対して、通常は１当量〜４当量、好ましくは１．５当量〜３．５当量程度、更に好ましくは１．８当量〜３．０当量程度である。
【０２６４】
（ＣＯＣｌ）２の使用量は一般式（１１）で表される化合物に対して、通常は１〜２当量、好ましくは１．２〜１．９当量程度、更に好ましくは１．４当量〜１．７当量程度である。
【０２６５】
トリエチルアミンの使用量は一般式（１１）で表される化合物に対して、通常は１〜５当量、好ましくは２〜４当量程度、更に好ましくは２．５当量〜３．５当量程度である。
【０２６６】
一般式（１１）で表される化合物は公知の化合物であるか、または公知の化合物から公知の方法に準じて容易に製造される化合物である。
【０２６７】
具体的な製造方法として、たとえば、下記一般式（１２）
【化７０】
0006792256.tif 000075
［式中、Ｒ７は一般式（８）で定義したものと同じである。］
で表される化合物を酸化反応に供し、続いてエチル基を有する試薬を用いて、酸化反応物にエチル基を付与するエチル化反応に供する方法を挙げることができる。
【０２６８】
酸化反応とは、上述の一般式（１０）を製造する方法で詳述したＳｗｅｒｎ酸化と同様の方法にするか、適宜改変を加えた方法を採用することができる。
【０２６９】
ここで、一般式（１２）で表される化合物を酸化反応に供した後の反応物として、たとえば下記式（１３）で表される化合物を挙げることができる。
【０２７０】
【化７１】
0006792256.tif 000076
［式中、Ｒ７は一般式（８）で定義したものと同じである。］。
【０２７１】
エチル化反応に用いる試薬はエチル基を有する化合物である範囲にかぎり、たとえばグリニャール試薬などの特定の試薬には限定されない。たとえば、リチウム、亜鉛、マグネシウムなどの金属原子を含む有機金属化合物またはそのハロゲン化物などを挙げることができる。これらの金属原子のなかでもマグネシウムが好ましい。
【０２７２】
また、ハロゲン化物も特に限定はされない。たとえば、フッ素化物、塩素化物、臭素化物、ヨウ素化物などを挙げることができる。これらのなかでも臭素化物が好ましい。
【０２７３】
エチル化反応に用いる試薬の使用量は特に限定はされず、たとえば、上記一般式（１２）で表される化合物に対して、通常は１〜２当量程度とすることができる。
【０２７４】
エチル化反応の条件は特に限定はされず、たとえば、ＴＨＦなどの溶媒中で、一般式（１２）で表される化合物の酸化反応物として例示される一般式（１３）で表される化合物と、エチル化反応に用いる試薬とを室温（１０℃〜４０℃程度）で反応させる方法を挙げることができる。
【０２７５】
一般式（１２）で表される化合物の入手方法は公知の化合物であるか、または公知の化合物から公知の方法に準じて容易に製造される化合物である。
【０２７６】
具体的な製造方法として、たとえば、１，３−フェニレンジメタノールに対して、塩基の存在下で水酸基保護剤を反応させる方法を挙げることができる。
【０２７７】
塩基とは特に限定はされない。たとえば、水素化ナトリウム、水素化カリウム、ＬＤＡなどを挙げることができ、これらのなかでも、水素化ナトリウムが好ましい。
【０２７８】
塩基の使用量は、特に限定はされない。たとえば、１，３−フェニレンジメタノールに対して、通常は０．５当量〜１．５当量程度、好ましくは０．８当量〜１．２当量程度である。
【０２７９】
水酸基保護剤とは、一般式（７）にて表される化合物のＲ７で定義する、水酸基の保護基を付与するものとすることができる。好ましくはＰＭＢである。
【０２８０】
１，３−フェニレンジメタノールに対する水酸基保護剤の使用量は特に限定されない。たとえば、たとえば、１，３−フェニレンジメタノールに対して、通常は０．５当量〜１．５当量程度、好ましくは０．８当量〜１．２当量である。
【０２８１】
なお、一般式（１２）で表される化合物を得るための反応には、触媒を用いることもできる。このような触媒は特に限定はされない。具体的には、ヨウ化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＩ）、臭化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＢ）、塩化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＣ）、クラウンエーテルなどが挙げられ、これらのなかでもＴＢＡＩが好ましい。
【０２８２】
触媒の使用量は特に限定はされず、１，３−フェニレンジメタノールの１当量に対して、通常は０．０５〜０．２当量程度、好ましくは０．０８当量〜０．１２当量程度である。
【０２８３】
一般式（１２）で表される化合物を製造する反応条件は、この種の反応の反応条件を適宜採用することができ、特に限定はされない。たとえば、ＴＨＦなど溶媒中で、０℃〜６０℃程度に加温して反応させることによって、一般式（１２）にて表される化合物が製造される。なお、１，３−フェニレンジメタノールは２つの水酸基を有するものであるが、一般式（１３）で表される化合物はそのうち一方の水酸基のみが保護された構造を有する。
【０２８４】
これを単離するには、カラムクロマトグラフィーなどの公知の方法に供するすることによって実施することができる。
【０２８５】
なお、上述の各工程において、反応終了後に目的の生成化合物を純度よく得るために、慣用の単離および／または精製工程を適宜組み合わせながら採用することができる。具体的な単離または精製工程として、たとえばクロマトグラフィー、再結晶、抽出、蒸留などを挙げることができる。
【０２８６】
VI.  プロテアソーム阻害剤
本発明のプロテアソーム阻害剤(VI)はペプチド結合化合物(II)を含む。よって、上記ペプチド(I)で詳述したプロテアソーム阻害剤とは異なる。
【０２８７】
プロテアソームとは特に限定はされず、２６Ｓプロテアソームとすることもできるし２０Ｓプロテアソームとすることもできる。好ましくは２０Ｓプロテアソームである。
【０２８８】
プロテアソーム阻害剤(VI)中のペプチド結合化合物(II)の含有量は、特に限定はされない。たとえば、１００重量部のプロテアソーム阻害剤(VI)あたり、ペプチド結合化合物(II)を、通常は０．００１重量部〜１００重量部程度の含有量とすることができる。すなわち、ペプチド結合化合物(II)そのものをプロテアソーム阻害剤(VI)とすることもできる。
【０２８９】
プロテアソーム阻害剤(VI)はインビボであっても、インビトロであっても、プロテアソームに含まれる各サブユニットのいずれかによるプロテアーゼ様活性を阻害する効果を発揮する。よって、プロテアソーム阻害剤(VI)は実験試薬として有用に用いることがきる。また、プロテアソーム阻害剤(VI)またはこれに含まれるペプチド結合化合物(II)は、プロテアソームに含まれる各サブユニットのいずれかによるプロテアーゼ様活性の阻害を発症機序とする疾患の医薬組成物の有効成分として有用である。
【０２９０】
VII.  医薬組成物
本発明の医薬組成物(VII)は、ペプチド結合化合物(II)またはその薬学的に許容される塩を含む。
【０２９１】
医薬組成物(VII)はペプチド結合化合物(II)またはその薬学的に許容される塩だけからなるものすることもでき、あるいは薬学的に許容可能な任意の担体、添加剤などと組み合わせて、公知の投与方法といった所望の用途に適した形態に調製したものとすることもできる。
【０２９２】
医薬組成物(VII)の投与方法は、特に限定はされない。たとえば、経口投与、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、くも膜下腔内投与、皮内投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、肺内投与、眼内投与、腟内投与、頸部内投与、直腸内投与、皮下投与などを挙げることができる。
【０２９３】
医薬組成物(VII)の剤形は、上述の投与方法に応じて薬学的に許容される慣用の担体と共に調製することができ、具体的に限定されるものではない。たとえば錠剤、散剤、シロップ剤、ハップ剤、注射剤、点滴剤などを挙げることができ、注射剤または点滴剤とすることが好ましい。このような注射剤や点滴剤は、水性、非水性、または懸濁性のいずれかとすることができる。また、用時調製型の剤型とすることもできる。
【０２９４】
医薬組成物中(VII)に配合されるペプチド結合化合物(II)またはその薬学的に許容される塩の量は特に限定はされない。たとえば、ペプチド結合化合物(II)およびその薬学的に許容される塩を合計した量が、１００重量部の医薬組成物(VII)に対して、通常は０.００１重量部〜９９重量部程度、好ましくは０．０１重量部〜５０重量部程度、より好ましくは０．０５重量部〜１０重量部程度の範囲で適宜調製することができる。
【０２９５】
医薬組成物(VII)の投与対象は、疾患に罹患した患者であっても、罹患する可能性があるヒトであってもよい。すなわち、医薬組成物(VII)は疾患の治療または予防のために用いることができる。
【０２９６】
医薬組成物(VII)の治療対象となる疾患は特に限定はされない。たとえば癌、アミロイドーシス、自己免疫疾患などが挙げられる。癌のなかでも、胃癌、大腸癌、肝臓癌、食道癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、子宮体癌、子宮頸癌、前立腺癌、脳腫瘍、悪性リンパ腫、胆道癌、腎臓癌、膀胱癌、卵巣癌、甲状腺癌、頭頸部癌、骨肉腫、多発性骨髄腫などが挙げられ、これらのなかでも骨髄腫が好ましい。
【０２９７】
医薬組成物(VII)の投与量は、投与対象の、疾患の程度、投与による所望効果の程度、体重、性別、年齢、動物種などの各条件によって区々であり一概に決定することができない。但し、薬学的に有効な量のペプチド結合化合物(II)またはその薬学的に許容される塩が投与されることが好ましい。
【０２９８】
具体的な投与量として、たとえば、ペプチド結合化合物(II)およびその薬学的に許容される塩を合計した量に換算して、１日当たり、通常は５ｍｇ〜５００ｍｇ程度とすることができ、好ましくは５ｍｇ〜２５０ｍｇ程度、好ましくは５ｍｇ〜１００ｍｇ程度、好ましくは５ｍｇ〜５０ｍｇ程度、更に好ましくは１日当たり５０ｍｇ未満程度である。
【０２９９】
医薬組成物(VII)の投与スケジュールもその投与量と同様に、投与対象の疾患の程度などの各条件によって区々であり一概に決定することができない。たとえば、上記の１日当たりの投与量で、１日〜１月ごとに１回投与されることが好ましい。
【０３００】
(C).  ペプチド
本発明に係るペプチド(C)は、１９Ｓ調節因子に認識されるペプチドまたはそのＮ末端がアセチル化されてなるペプチドであり、４個〜１０個のアミノ酸残基からなるものである。ペプチド(C)を構成するアミノ酸残基の個数は、たとえば４個、５個、６個、７個、８個、９個、または１０個の中から適宜決定することができる。好ましくは５個〜９個のいずれかである。
【０３０１】
ペプチド(C)を構成するアミノ酸残基は、上記のペプチド(I)と同様にすることができる。
【０３０２】
なお、用語「１９Ｓ調節因子に認識される」とは、上記のペプチド(I)の説明と同様にすることができる。
【０３０３】
ペプチド(C)は、２０Ｓプロテアソームを構成するβ１サブユニット、β２サブユニット、β５サブユニットの活性に対する基質として認識されることを特徴とする。
【０３０４】
すなわち、ペプチド(C)のアミノ酸配列は特に限定されず、たとえば、２０Ｓプロテアソームを構成するβ１サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列、２０Ｓプロテアソームを構成するβ２サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列、２０Ｓプロテアソームを構成するβ５サブユニットの活性に対する基質として認識されるアミノ酸配列などを含むアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３０５】
これらのアミノ酸配列の最後のアミノ酸残基は特に限定はされない。たとえば、アミノ酸残基の側鎖の分子的な大きさが小さいアミノ酸残基が好ましく、たとえばグリシン残基、アラニン残基などを挙げることができる。なお、最後のアミノ酸残基とはアミノ酸配列のＣ末端に位置するアミノ酸残基を意味し、最後から２番目、最後から３番目との表記はＣ末端のアミノ酸残基からＮ末端に向かって順に、隣のアミノ酸残基であることを意味する。
【０３０６】
上記の各サブユニットの活性に対する「基質」とは、上記のペプチド(I)と同様とすることができる。
【０３０７】
たとえば、β１サブユニットはＰＧＰＨ様のエンドプロテアーゼ活性を有し、主として酸性側鎖を有するアミノ残基近傍のペプチド結合の切断を触媒する。
【０３０８】
したがって、ペプチド(C)のアミノ酸配列として、少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を挙げることができる。ここで、用語「酸性側鎖を有するアミノ酸残基」とは、アスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基に限らず、これら以外の広義のアミノ酸残基の側鎖に対して、カルボキシル基、スルホニル基などの酸性基が付与されるように修飾されてなるアミノ酸残基が広く包含される。なお、用語「広義のアミノ酸残基」とは上述の通りとすることができる。
【０３０９】
このような、少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第１の態様として、４個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３１０】
第１の態様のアミノ酸配列の最後から２番目および３番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばロイシン残基とすることができる。
【０３１１】
第１の態様のアミノ酸配列の最後から４番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることができる。
【０３１２】
この他に、第１の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、および４番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることもできる。
【０３１３】
このような第１の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号５７に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３１４】
少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第２の態様として、５個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３１５】
第２の態様のアミノ酸配列の最後から２番目のアミノ酸残基は特に限定されず、たとえばグリシン残基、ロイシン残基、またはチロシン残基とすることができる。
【０３１６】
第２の態様のアミノ酸配列の最後から３番目のアミノ酸残基は特に限定されず、たとえばフェニルアラニン残基またはロイシン残基とすることができる。
【０３１７】
第２の態様のアミノ酸配列の最後から４番目のアミノ酸残基は特に限定されず、たとえばアラニン残基、バリン残基、またはロイシン残基とすることができる。
【０３１８】
第２の態様のアミノ酸配列の最後から５番目のアミノ酸残基は特に限定されず、たとえばアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることができる。
【０３１９】
この他に、第２の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることもできる。
【０３２０】
このような第２の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号５８、７８、または７９に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３２１】
少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第３の態様として、６個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３２２】
第３の態様のアミノ酸配列の最後から２番目〜６番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば、最後から２番目、３番目、４番目、５番目、および６番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることができる。
【０３２３】
この他に、第３の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、４番目、５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とし、且つその６番目のアミノ酸残基をグリシン残基またはアラニン残基とすることもできる。
【０３２４】
このような第３の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号５９または８０に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３２５】
少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第４の態様として、７個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３２６】
第４の態様のアミノ酸配列の最後から２番目〜７番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば最後から２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、および７番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることができる。
【０３２７】
この他に、第４の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とし、且つその最後から６番目および７番目の両アミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基とすることもできる。
【０３２８】
このような第４の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号６０または８１に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３２９】
少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第５の態様として、８個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３３０】
第５の態様のアミノ酸配列の２番目〜５番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３３１】
第５の態様のアミノ酸配列の最後から６番目〜８番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば最後から６番目、７番目、および８番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３３２】
この他に、第５の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、および８番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることもできる。
【０３３３】
このような第５の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号６１または８２に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３３４】
少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第６の態様として、９個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３３５】
第６の態様のアミノ酸配列の最後から２番目〜９番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば最後から２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、８番目、および９番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることができる。
【０３３６】
この他に、第６の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸
残基またはグルタミン酸残基とし、且つその最後から６番目、７番目、８番目、および９番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基とすることもできる。
【０３３７】
このような第６の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号６２または８３に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３３８】
少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第７の態様として、１０個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３３９】
第７の態様のアミノ酸配列の最後から２番目〜５番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば最後から２番目、３番目、４番目、および５番目アミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることができる。
【０３４０】
第７の態様のアミノ酸配列の最後から６番目〜１０番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば最後から６番目、７番目、８番目、９番目、および１０番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３４１】
この他に、第７の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、８番目、９番目、および１０番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基とすることもできる。
【０３４２】
このような第７の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号６３または８４に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３４３】
上述する少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の１例として、Ｎ末端から順に連続してリジン残基、リジン残基、バリン残基、およびアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基を含むアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３４４】
これらの少なくとも１つの酸性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列として、配列番号５２に示すアミノ酸配列が好ましい。
【０３４５】
他方、β２サブユニットはトリプシン様のエンドプロテアーゼ活性を有し、主として塩基性側鎖を有するアミノ残基近傍のペプチド結合の切断を触媒する。
【０３４６】
したがって、ペプチド(C)のアミノ酸配列の他の態様として、少なくとも１つの塩基性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を挙げることができる。ここで、用語「塩基性側鎖を有するアミノ酸残基」とは、リジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基に限らず、これら以外の広義のアミノ酸残基の側鎖に対して、アミド基、グアニジル基、イミダゾイル基などの塩基性基が付与されるように修飾されてなるアミノ酸残基が広く包含される。なお、用語「広義のアミノ酸残基」とは、上述の通りである。
【０３４７】
このような、少なくとも１つの塩基性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第１の態様として、４個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３４８】
第１の態様のアミノ酸配列の最後から２番目〜４番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば最後から２番目、３番目、および４番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３４９】
このような第１の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号６４または８５に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３５０】
少なくとも１つの塩基性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第２の態様として、５個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３５１】
第２の態様のアミノ酸配列の最後から２番目〜５番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば最後から２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３５２】
このような第２の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号６５または８６に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３５３】
少なくとも１つの塩基性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第３の態様として、６個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３５４】
第３の態様のアミノ酸配列の最後から２番目〜６番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば最後から２番目、３番目、４番目、５番目、および６番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３５５】
この他に、第３の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とし、且つその最後から６番目のアミノ酸残基をグリシン残基またはアラニン残基とすることができる。
【０３５６】
このような第３の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号６６または８７に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３５７】
少なくとも１つの塩基性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第４の態様として、７個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３５８】
第４の態様のアミノ酸配列の最後から２番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、プロリン残基とすることができる。
【０３５９】
第４の態様のアミノ酸配列の最後から３番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばセリン残基とすることができる。
【０３６０】
第４の態様のアミノ酸配列の最後から４番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばスレオニン残基とすることができる。
【０３６１】
第４の態様のアミノ酸配列の最後から５番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基とすることができる。
【０３６２】
第４の態様のアミノ酸配列の最後から６番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばリジン残基、アルギニン残基、ヒスチジン残基、またはイソロイシン残基とすることができる。
【０３６３】
第４の態様のアミノ酸配列の最後から７番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばリジン残基、アルギニン残基、ヒスチジン残基、またはバリン残基とすることができる。
【０３６４】
この他に、第４の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、および７番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３６５】
このような第４の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号６７、８８、または８９に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３６６】
少なくとも１つの塩基性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第５の態様として、８個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３６７】
第５の態様のアミノ酸配列の最後から２番目〜５番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば最後から２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３６８】
第５の態様のアミノ酸配列の最後から６番目〜８番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば最後から６番目、７番目、および８番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基とすることができる。
【０３６９】
この他に、第５の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、および８番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることもできる。
【０３７０】
このような第５の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号６８または９０に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３７１】
少なくとも１つの塩基性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第６の態様として、９個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３７２】
第６の態様のアミノ酸配列の最後から２番目〜９番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、８番目、および９番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３７３】
この他に、第６の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とし、且つその最後から６番目、７番目、８番目、および９番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基とすることもできる。
【０３７４】
このような第６の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号６９、９１、または９２に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３７５】
少なくとも１つの塩基性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第７の態様として、１０個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３７６】
第７の態様のアミノ酸配列の最後から２番目〜５番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば最後から２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３７７】
第７の態様のアミノ酸配列の最後から６番目〜１０番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば最後から６番目、７番目、８番目、９番目、および１０番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３７８】
この他に、第７の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、８番目、９番目、および１０番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれリジン残基、アルギニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることもできる。
【０３７９】
このような第７の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号７０または９４に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３８０】
他方、β５サブユニットはキモトリプシン様のエンドプロテアーゼ活性を有し、主として疎水性側鎖を有するアミノ残基近傍のペプチド結合の切断を触媒する。
【０３８１】
したがって、ペプチド(C)のアミノ酸配列の他の態様として、少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を挙げることができる。ここで、用語「疎水性側鎖を有するアミノ酸残基」とは、アラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基に限らず、これら以外の広義のアミノ酸残基の側鎖に対して、Ｃ１−6低級アルキル基、インドリル基、フェニル基などの疎水性基が付与されるように修飾されてなるアミノ酸残基が広く包含される。なお、用語「広義のアミノ酸残基」とは、上述の通りである。
【０３８２】
このような、少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第１の態様として、４個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３８３】
第１の態様のアミノ酸配列の最後から２番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばロイシン残基、スレオニン残基、またはプロリン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３８４】
第１の態様のアミノ酸配列の最後から３番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばアスパラギン残基、メチオニン残基、またはヒスチジン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３８５】
第１の態様のアミノ酸配列の最後から４番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえばチロシン残基、ロイシン残基、またはフェニルアラニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３８６】
このような第１の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号７１、９４、９５、または９６に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３８７】
少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第２の態様として、５個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３８８】
第２の態様のアミノ酸配列の最後から２番目〜４番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば、２番目、３番目、および４番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３８９】
第２の態様のアミノ酸配列の最後から５番目のアミノ酸残基は特に限定されず、たとえばグリシン残基、アラニン残基、またはチロシン残基とすることができる。
【０３９０】
この他に、第２の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることもできる。
【０３９１】
このような第２の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号７１または９７に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３９２】
少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第３の態様として、６個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３９３】
第３の態様のアミノ酸配列の最後から２番目〜４番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、および４番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３９４】
第３の態様のアミノ酸配列の最後から５番目および６番目のアミノ酸残基は特に限定されず、たとえば両アミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基とすることができる。
【０３９５】
この他に、第３の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、４番目、５番目、および６番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３９６】
このような第３の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号７３または９８に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３９７】
少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第４の態様として、７個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０３９８】
第４の態様のアミノ酸配列の最後から２〜４番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、および４番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０３９９】
第４の態様のアミノ酸配列の最後から５〜７番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば５番目、６番目、および７番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基とすることができる。
【０４００】
この他に、第４の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、および７番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることもできる。
【０４０１】
このような第４の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号７４または９９に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０４０２】
少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第５の態様として、８個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０４０３】
第５の態様のアミノ酸配列の最後から２番目〜５番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば２番目、３番目、４番目、および５番目アミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０４０４】
第５の態様のアミノ酸配列の最後から６番目〜８番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば６番目、７番目、および８番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基とすることができる。
【０４０５】
この他に、第５の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、および８番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０４０６】
このような第５の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号７５または１００に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０４０７】
少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第６の態様として、９個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０４０８】
第６の態様のアミノ酸配列の２番目〜９番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば最後から２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、８番目、および９番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０４０９】
この他に、第６の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とし、且つその最後から６番目、７番目、８番目、および９番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基とすることもできる。
【０４１０】
このような第６の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号７６または１０１に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０４１１】
少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の第７の態様として、１０個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を挙げることができる。
【０４１２】
第７の態様のアミノ酸配列の２番目〜５番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば最後から２番目、３番目、４番目、および５番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０４１３】
第７の態様のアミノ酸配列の最後から６番目〜１０番目のアミノ酸残基は特に限定はされず、たとえば最後から６番目、７番目、８番目、９番目、および１０番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基またはグリシン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることができる。
【０４１４】
この他に、第７の態様のアミノ酸配列の最後から２番目、３番目、４番目、５番目、６番目、７番目、８番目、９番目、および１０番目のアミノ酸残基を、同一または異なって、それぞれアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基とすることもできる。
【０４１５】
このような第７の態様のアミノ酸配列として、たとえば配列番号７７または１０２に示すアミノ酸配列を挙げることができる。
【０４１６】
上述する少なくとも１つの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列の１例として、Ｎ末端から順に連続して、リジン残基、リジン残基、バリン残基、およびアラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基、またはメチオニン残基のいずれかのアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を挙げることができる。
【０４１７】
上記ペプチド(C)のアミノ酸配列は、繰り返し配列を有するものとすることができる。たとえば、３アミノ酸の繰り返しまたは４アミノ酸の繰り返しを挙げることができる。
【０４１８】
上記ペプチド(C)は、上述のアミノ酸配列情報を基に、たとえば固相合成法などの慣用の方法を採用することにより、当業者であれば容易に製造することができる。また、ペプチドのアミド末端のアセチル化も、慣用の方法を用いることによって、当業者であれば容易に製造することができる。
【０４１９】
上記ペプチド(C)は、プロテアソーム阻害剤の作用を増強させるために好適に用いられる。      
【０４２０】
(A).  タモキシフェン化合物またはその塩
本発明のタモキシフェン化合物またはその塩は、下記一般式(A-1)
【化７２】
0006792256.tif 000077
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、上記に同じである。
【化７３】
0006792256.tif 000078
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表される。
【０４２１】
タモキシフェン化合物(A-1)の製造方法
上記タモキシフェン化合物またはその塩（化合物(A-1)）は、例えば、下記のスキーム（反応式１−２）に従って製造することができる。
【化７４】
0006792256.tif 000079
【０４２２】
上記反応式１−２に従って、化合物(A-1)にて表されるタモキシフェン化合物またはその塩の製造方法を以下に詳述する。
【０４２３】
化合物(A-1)の製造方法は、下記式(c)
【化７５】
0006792256.tif 000080
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、それぞれ上記に同じである。
Ｒ９は水酸基の保護基である。
【化７６】
0006792256.tif 000081
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表される化合物またはその塩を、還元する工程を含む。
【０４２４】
Ｒ９で定義される水酸基の保護基は特に限定はされず、公知の水酸基の保護基を広く使用できる。たとえば、メチル基、ベンジル基、アセチル基、メタンスルホニル基、パラトルエンスルホニル基などを挙げることができ、これらのなかでも、ベンジル基が好ましい。
【０４２５】
上記反応に用いる還元剤は特に限定はされない。たとえば、ジイソブチルアルミニウムヒドリド、リチウムアルミニウムヒドリド、トリブチルスズヒドリドなどを挙げることができ、これらのなかでも、リチウムアルミニウムヒドリドが好ましい。
【０４２６】
還元剤の使用量は特に限定はされず、たとえば、一般式(c)で表される化合物に対して、通常は１当量〜１０当量程度、好ましくは２当量〜５当量程度、更に好ましくは３当量〜４当量程度である。
【０４２７】
一般式(c)で表される化合物を還元する反応条件は特に限定はされず、この種の反応の反応条件を適宜採用することができる。たとえば、テトラヒドロフランなどの溶媒中で一般式(c)で表される化合物と還元剤とを混合し、次いで０℃〜８０℃程度、好ましくは室温〜５０℃程度に加温することにより、化学式(A-1)で表されるタモキシフェン化合物またはその塩が製造される。なお、室温とは１０℃〜４０℃程度である。  
【０４２８】
一般式(c)で表される化合物は、公知の化合物であるか、または公知の化合物から公知の方法に準じて容易に製造される化合物である。
【０４２９】
具体的な製造方法として、例えば、一般式(b)
【化７７】
0006792256.tif 000082
［式中、Ｒ９は一般式(c)で定義したものと同じである。］
で表される化合物と、下記一般式（５）
【化７８】
0006792256.tif 000083
［式中、Ｒ１、Ｒ２、およびｎは、上記に同じである。
Ｒ５はハロゲン原子を示す。］
で表される化合物またはその塩とを、塩基の存在下で反応させる工程を含む。
【０４３０】
一般式（５）については、上記と同様とすることができる。
【０４３１】
塩基とは特に限定はされない。たとえば、トリエチルアミン、水素化ナトリウム、ターシャルブトキシカリウムなどを挙げることができ、これらのなかでも、水素化ナトリウムが好ましい。
【０４３２】
塩基の使用量は特に限定はされず、たとえば、一般式（ｂ）で表される化合物に対して、通常は１当量〜５０当量程度、好ましくは２当量〜２０当量程度、更に好ましくは５当量〜１０当量程度である。
【０４３３】
一般式(b)で表される化合物と、一般式（５）で表される化合物との使用割合は特に限定はされない。たとえば、一般式(b)で表される化合物に対して、一般式（５）で表される化合物の使用量は、通常は２当量〜１０当量程度、好ましくは２．５当量〜５当量程度、更に好ましくは３当量〜４当量程度である。
【０４３４】
一般式(b)で表される化合物と、一般式（５）で表される化合物との反応条件は特に限定はされず、この種の反応の反応条件を適宜採用することができる。たとえば、ＤＭＦなどの溶媒中で一般式(b)で表される化合物と、一般式（５）で表される化合物とを混合して、室温〜１００℃程度、好ましくは４０℃〜８０℃程度に加温することにより、化学式(c)で表される化合物が製造される。なお、室温とは１０℃〜４０℃程度である。
【０４３５】
一般式(b)にて表される化合物は公知の化合物であるか、または公知の化合物から公知の方法に準じて容易に製造される化合物である。
【０４３６】
具体的な製造方法として、たとえば、下記一般式(a)
【化７９】
0006792256.tif 000084
［式中、Ｒ６は一般式（６）で定義したものと同じである。
Ｒ９は、一般式(c)で定義したものと同じである。］
で表される化合物と、脱保護剤とを反応させる方法を挙げることができる。
【０４３７】
脱保護剤とは、Ｒ9にて定義される水酸基の保護基に影響を与えない範囲に限り特に限定はされない。たとえば、フッ化水素酸、テトラブチルアンモニウムフルオリド、塩化水素などを挙げることができ、これらのなかでも、テトラブチルアンモニウムフルオリドが好ましい。
【０４３８】
脱保護剤の使用量は特に限定はされない。たとえば、一般式(a)で表される化合物に対して、通常は２当量〜１０当量程度、好ましくは２．５当量〜５当量程度、更に好ましくは３当量〜４当量程度である。
【０４３９】
一般式(b)で表される化合物を製造する反応条件は、この種の反応の反応条件を適宜採用することができ、特に限定はされない。たとえば、テトラヒドロフランなどの溶媒中で、０℃から５０℃程度に加温することによって製造される。
【０４４０】
一般式(a)で表される化合物は公知の化合物であるか、または公知の化合物から公知の方法に準じて容易に製造される化合物である。
【０４４１】
具体的な製造方法として、たとえば、下記一般式（７−２）
【化８０】
0006792256.tif 000085
と、ホルミル基保護剤とを反応させる工程を含む。
【０４４２】
ホルミル基保護剤とは、特に限定されない。例えば、Ｏ−メチルヒドロキシルアミン、Ｏ−ベンジルヒドロキシルアミン、アニリンなどを挙げることができ、これらのなかでも、Ｏ−ベンジルヒドロキシルアミンが好ましい。
ホルミル基保護剤の使用量は、特に限定はされず、たとえば、一般式（７−２）で表される化合物に対して、通常は１当量〜５当量程度、好ましくは１．０５当量〜３当量程度、更に好ましくは１．１当量〜２当量程度である。
【０４４３】
一般式（a）で表される化合物を合成する反応条件は特に限定はされず、この種の反応の反応条件を適宜採用することができる。たとえば、メタノールなどの溶媒中で一般式（７−２）で表される化合物とホルミル基保護剤とを混合し、次いで０℃〜８０℃程度、好ましくは室温〜５０℃程度に加温することにより、一般式(a)の化合物が製造される。なお、室温とは１０℃〜４０℃程度である。
【０４４４】
なお、上述の各工程において、反応終了後に目的の生成化合物を純度よく得るために、慣用の単離および／または精製工程を適宜組み合わせながら採用することができる。具体的な単離または精製工程として、たとえばクロマトグラフィー、再結晶、抽出、蒸留などを挙げることができる。
【０４４５】
(B).  複合体
本発明の複合体(B)は、下記一般式（Ａ−１）
【化８１】
0006792256.tif 000086
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、上記に同じである。
【化８２】
0006792256.tif 000087
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表されるタモキシフェン化合物またはその塩のアミノメチル基と、本発明のペプチド(C)のカルボキシル末端とが、ペプチド結合してなる複合体(B)である。
上記のタモキシフェン化合物はプロテアソーム阻害活性を有しているため、本発明の複合体もプロテアソーム阻害剤として有用である。
【０４４６】
(D).  プロテアソーム阻害剤
よって、本発明のプロテアソーム阻害剤(D)は、上記の本発明の複合体(B)を含む。プロテアソームとは特に限定はされず、２６Ｓプロテアソームとすることもできるし２０Ｓプロテアソームとすることもできる。好ましくは２０Ｓプロテアソームである。
【０４４７】
プロテアソーム阻害剤(D)中の複合体(B)の含有量は、特に限定はされない。たとえば、１００重量部のプロテアソーム阻害剤(D)あたり、通常は０．００１重量部〜１００重量部程度のペプチド(C)を含有させることができる。すなわち、本発明の複合体(B)そのものを、本発明のプロテアソーム阻害剤(D)とすることもできる。
【０４４８】
本発明のプロテアソーム阻害剤(D)とはインビボであっても、インビトロであっても、プロテアソームに含まれる各サブユニットのいずれかによるプロテアーゼ様活性を阻害する効果を発揮する。よって、本発明のプロテアソーム阻害剤(D)は実験試薬として有用に用いることがきる。また、本発明のプロテアソーム阻害剤(D)は、プロテアソームに含まれる各サブユニットのいずれかによるプロテアーゼ様活性の阻害を発症機序とする疾患の医薬組成物の有効成分として有用である。
【０４４９】
複合体(B)の製造方法は、下記一般式（A−１）
【化８３】
0006792256.tif 000088
［式中、Ｒ１、Ｒ２、ｎ、およびｚは、上記に同じである。
【化８４】
0006792256.tif 000089
で構成される２箇所の二重線は、何れかの片方が単結合を示し、その他方は２重結合を示す。］
で表される化合物またはその塩と、上記ペプチド(C)とを、脱水縮合剤の存在下で反応させる工程を含む。
【０４５０】
上記一般式（A−１）で表されるタモキシフェン化合物は、下記一般式（A−1a）または（A−1b）のいずれかで表される態様の化合物を包含する。好ましくは下記一般式（A−1a）で表される態様の化合物である。
【０４５１】
【化８５】
0006792256.tif 000090
0006792256.tif 000091
【０４５２】
脱水縮合剤とは特に限定はされない。たとえば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）などのカルボジイミド系化合物；Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）などのイミダゾール系化合物；トリアジン系化合物；ホスホニウム系化合物；ウロニウム系化合物などが挙げられる。好ましくはカルボジイミド系化合物であり、なかでもＥＤＣが特に好ましい。
【０４５３】
脱水縮合剤と共に、触媒を用いることもできる。具体的な触媒は限定されない。たとえば、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎーヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）１−ヒドロキシー７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）などを挙げることができる。好ましくはＨＯＢｔである。
【０４５４】
具体的な反応条件は、上記脱水縮合剤（要すれば触媒と共に）用いて、アミド結合またはペプチド結合を形成せしめる公知の条件であれば特に限定はされない。たとえばＤＭＦなどの溶媒中で、通常−６１℃〜１５３℃程度の反応温度を採用することができ、０℃〜９０℃とすることが好ましい。
【０４５５】
なお、反応物を慣用の精製工程に供して純度の高い複合体(C)を得ることもできる。
【０４５６】
(E).  医薬組成物
本発明の医薬組成物(E)は、複合体(C)またはその薬学的に許容される塩を含む。
【０４５７】
医薬組成物(E)は複合体(C)またはその薬学的に許容される塩だけからなるものすることもでき、あるいは薬学的に許容可能な任意の担体、添加剤などと組み合わせて、公知の投与方法といった所望の用途に適した形態に調製したものとすることもできる。
【０４５８】
医薬組成物(E)の投与方法、剤形、有効成分の含有量、投与対象、投与スケジュールなどは特に限定はされない。具体的には上記の医薬組成物(VII)と同様にすることができる。
【０４５９】
なお、本明細書に記載の「その塩」とは、特に限定はされない。例えば、薬学的に許容される塩とすることができる。
【実施例】
【０４６０】
以下に、本発明をより詳細に説明するための実施例を示す。なお、本発明が以下に示す実施例に限定されないのは言うまでもない。
【０４６１】
＜製造例１＞
ＲＩＤ−Ｆ−ＣＯＯＨの合成
ＲＩＤ−Ｆ−ＣＯＯＨは、出発原料として１，３−フェニレンジメタノールを使用し、下記の反応スキームに従って製造した。
【化８６】
0006792256.tif 000092
【０４６２】
上記反応スキームにおいて略号は以下のものを意味する。
ＰＭＢ：保護基であるｐ−メトキシベンジル基、
ＴＢＡＩ：触媒であるヨウ化テトラブチルアンモニウム、
ＴＢＳ：保護基であるｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラ二ル基、
ＤＭＡＰ：触媒であるＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン、
ＤＤＱ：脱保護剤であるジクロロジシアノベンゾキノン、
ＤＭＰ：酸化剤であるデス・マーチン・ペルヨージナン、
ＴＢＡＦ：脱保護剤であるフッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム。
【０４６３】
上記反応スキーム中で表される各化合物の製造方法を以下に詳述する。
【０４６４】
化合物１
1,3-ベンゼンジメタノール(3.51 g, 25.4 mmol)をTHF(84.4 mL)に懸濁し、0 ℃で撹拌した後、55%水素化ナトリウム(1.11 g, 25.4 mmol)を加えた。さらに4-メトキシベンジルクロリド(3.43 mL, 25.4 mmol)を滴下した後、テトラブチルアンモニウムヨージド(1.00 g, 2.71 mmol)を加え室温で1時間、60 ℃に加熱してさらに3時間撹拌した。冷却後、反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。有機層を集合して無水硫酸ナトリウムで乾燥し、これを濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=6/1)で精製すると目的の化合物が得られた(2.15 g, 33%)。
【０４６５】
化合物３
DMSO (1.16 mL, 17.7 mmol)を塩化メチレン(78.0 mL)に溶解させ、−78 ℃に冷却した後塩化オキサリル(1.15 mL, 13.2 mmol)を加えて20分撹拌した。ここに化合物1 (2.15 g, 8.32 mmol)/塩化メチレン溶液(10.0 mL)を加えて15分撹拌した。さらにトリエチルアミン(3.68 mL, 26.4 mmol)を加えて室温で3時間撹拌した。冷却後、水を加えて反応を停止し、塩化メチレンで抽出した。有機層を集合して水と飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させてこれを濃縮すると目的の化合物2を含む粗生成物が得られた。これをTHF (17.6 mL)に溶解させ、0 ℃に冷却した後別途調製したエチルマグネシウムブロミド(1.0 M, 13.2 mL, 13.2 mmol)を加えて室温で2時間撹拌した。冷却後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。有機層を集合して飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させてこれを濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=10/1)で精製すると目的の化合物が得られた(2.38 g, 86%)。
【０４６６】
化合物４
DMSO (0.45 mL, 6.88 mmol)を塩化メチレン(29.4 mL)に溶解させ、−78 ℃に冷却した後塩化オキサリル(0.45 mL, 5.16 mmol)を加えて15分撹拌した。ここに化合物3 (937 mg, 3.27 mmol)/塩化メチレン溶液(5.0 mL)を加えて15分撹拌した。さらにトリエチルアミン(1.44 mL, 10.3 mmol)を加えて室温で2時間撹拌した。冷却後、水を加えて反応を停止し、塩化メチレンで抽出した。有機層を集合して水と飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させてこれを濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=6/1)で精製すると目的の化合物が得られた(930 mg, 96%)。
【０４６７】
化合物５
−10 ℃に冷却した反応容器に亜鉛粉末(2.76 g, 42.2 mmol)、THF(21.1 mL)を入れ撹拌し、続いて四塩化チタン(2.1 mL, 19.1 mmol)をゆっくり滴下した。THF(5.0 mL)を加え室温に戻した後、加熱還流を2時間行った。その後反応溶液を室温まで放冷し、さらに0 ℃に冷却した。次に4,4’-ジヒドロキシベンゾフェノン(2.15 g, 10.0 mmol)と化合物4 (890 mg, 3.13 mmol)のTHF溶液(54.0 mL)を添加し、遮光下で2時間加熱還流を行った。反応後、室温に放冷し氷冷下で10%炭酸カリウム水溶液を加えて反応を停止した。セライトろ過を行い金属塩を除去した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。これを濃縮し、残渣を薄層クロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=6/1)で精製すると目的の化合物が得られた(756 mg, 52%)。
【０４６８】
化合物６
化合物5 (38.1 mg, 0.0817 mmol)をDMF (2.04 mL)に溶解させ、0 ℃に冷却した後、イミダゾール(44.5 mg, 0.654 mmol)、tert-ブチルジメチルクロロシラン(49.2 mg, 0.326 mmol)およびジメチルアミノピリジン(0.20 mg, 1.64 μmol)を加えて室温で14時間半撹拌した。冷却後、水を加えて反応を停止し、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を集合して、1 N水酸化ナトリウム水溶液、水および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させてこれを濃縮した。残渣を薄層クロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル= 9/1)で精製すると目的物が得られた(46.6 mg, 82%)。
【０４６９】
化合物７
化合物6 (182 mg, 0.262 mmol)を塩化メチレン/バッファーpH 7溶液=9/1 (6.55 mL)に溶解させ、0 ℃に冷却した後DDQ (119 mg, 0.524 mmol)を加えて室温下で1時間半撹拌した。冷却後、反応混合物にバッファーpH 7を加えて反応を停止し、塩化メチレンで抽出した。有機層を集合して飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥してこれを濃縮した。残渣を薄層クロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル= 3/1)で精製すると目的物が得られた(109 mg, 72%)。
【０４７０】
化合物８
化合物7 (99.4 mg, 0.173 mmol)を塩化メチレン(3.46 mL)に溶解させ、デス-マーチンペルヨージナン(117 mg, 0.277 mmol)を加えて室温下で2時間撹拌した。冷却後、反応混合物にジエチルエーテルを加えて希釈し、10%チオ硫酸ナトリウム水溶液と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の体積比が1/1の混合液を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を集合して飽和食塩水で2回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥してこれを濃縮した。残渣を薄層クロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル= 10/1)で精製すると目的物が得られた(93.1 mg, 94%)。
【０４７１】
化合物１０
化合物8 (16.0 mg, 0.0279 mmol)をTHF (0.47 mL)に溶解させ、2-メチル-2-ブテン(0.030 mL, 0.279 mmol)、tert-ブチルアルコール(0.47 mL)および亜塩素酸ナトリウム(6.3 mg, 0.0559 mmol)とリン酸二水素ナトリウム(16.6 mg, 0.140 mmol)の水溶液(0.47 mL)を加えて室温で3時間半撹拌した。冷却後、飽和食塩水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を集合して、無水硫酸ナトリウムで乾燥させてこれを濃縮すると目的の化合物9を含む粗生成物が得られた。これをDMF (1.00 mL)に溶解させ、55%水素化ナトリウム(2.9 mg, 0.0670 mmol)およびベンジルブロミド(3.98 μL, 0.0335 mmol)を加えて室温で11時間半撹拌した。冷却後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。有機層を集合して水と飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させてこれを濃縮した。残渣を薄層クロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル= 4/1)で精製すると目的物が得られた(15.2 mg, 80%)。
【０４７２】
化合物１１
化合物10 (52.1 mg, 0.0767 mmol)をTHF (2.5 mL)に溶解させ、0 ℃に冷却した後、フッ化テトラ-n-ブチルアンモニウム/ THF溶液(1.0 M, 0.30 mL, 0.300 mmol)を加えて室温で1時間撹拌した。冷却後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。有機層を集合して無水硫酸ナトリウムで乾燥させてこれを濃縮した。残渣を薄層クロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル= 1/2)で精製すると目的物が得られた(21.0 mg, 61%)。
【０４７３】
RID-F-COOH
化合物11 (21.0 mg, 0.0466 mmol)をDMF (1.2 mL)に懸濁し、55%水素化ナトリウム (12.2 mg, 0.280 mmol)を加えて50 ℃で15分撹拌した。これにN-(2-クロロエチル)ヘキサヒドロ-1H-アゼピン塩酸塩(30.5 mg, 0.154 mmol)を加えて50 ℃で3時間撹拌した。冷却後、反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止し、塩化メチレンで抽出した。有機層を集合して無水硫酸ナトリウムで乾燥してこれを濃縮した。残渣を薄層クロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール/アンモニア= 90/10/2)で精製し、RID-F-COOHを含む混合物(96.4 mg)を得た。混合物から析出した結晶(57.6 mg)を除いた後に残渣をトルエン共沸すると目的の化合物が得られた(22.1 mg, 77%)。
【０４７４】
上記スキーム中で表される各化合物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルデータを以下に示す。
【０４７５】
化合物１：
1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ7.37-7.28 (6H, m, Ar), 6.92-6.87 (2H, m, Ar), 4.71 (2H, s, 1-H), 4.53 (2H, s, Bn), 4.51 (2H, s, Bn), 3.81 (3H, s, OCH3).
化合物３：
1H NMR (CDCl3, 500 MHz): δ7.35-7.28 (6H, m, Ar), 6.91-6.88 (2H, m, Ar), 4.61 (1H, td, J = 6.25, 3.50 Hz, 1-H), 4.53 (2H, s, Bn), 4.50 (2H, s, Bn), 3.81 (3H, s, OCH3), 1.87-1.71 (3H, m, 2-H and OH), 0.92 (3H, t, J = 7.25 Hz, 3-H).
化合物４：
1H NMR (CDCl3, 500 MHz): δ 7.94 (1H, s, Ar), 7.90-7.88 (1H, m, Ar), 7.57-7.55 (1H, m, Ar), 7.46-7.42 (1H, m, Ar), 7.32-7.28 (2H, m, Ar), 6.92-6.88 (2H, m, Ar), 4.57 (2H, s, Bn), 4.52 (2H, s, Bn), 3.82 (3H, s, OCH3), 3.01 (2H, q, J = 7.20 Hz, 2-H), 1.23 (3H, t,J = 7.20 Hz, 3-H).
化合物５：
1H NMR (CD3OD, 300 MHz): δ7.20-7.15 (3H, m, Ar), 7.10-7.06 (3H, m, Ar), 7.04-7.00 (2H, m, Ar) 6.90-6.84 (2H, m, Ar), 6.78-6.74 (2H, m, Ar), 6.68-6.64 (2H, m, Ar), 6.42-6.37 (2H, m, Ar), 4.37 (2H, s, Bn), 4.23 (2H, s, Bn), 3.77 (3H, s, OCH3), 2.48 (2H, q, J = 7.50 Hz, 3-H), 0.90 (3H, t, J = 7.50 Hz, 4-H).
化合物６：
1H NMR (CDCl3, 500 MHz): δ7.24-7.21 (2H, m, Ar), 7.15-7.12 (1H, m, Ar), 7.10-7.07 (4H, m, Ar), 7.03-7.01 (1H, m, Ar), 6.89-6.86 (2H, m, Ar), 6.82-6.79 (2H, m, Ar), 6.72-6.69 (2H, m, Ar), 6.47-6.44 (2H, m, Ar), 4.40 (2H, s, Bn), 4.31 (2H, s, Bn), 3.81 (3H, s, OCH3), 2.48 (2H, q, J = 7.50 Hz, 3-H), 1.00 (9H, s, TBS), 0.92 (3H, t, J = 7.50 Hz, 4-H), 0.89 (9H, s, TBS), 0.22 (6H, s, TBS), 0.06 (6H, s, TBS).
化合物７：
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ7.16-7.00 (6H, m, Ar), 6.82-6.80 (2H, m, Ar), 6.71-6.67 (2H, m, Ar), 6.48-6.45 (2H, m, Ar), 4.53 (2H, d, J = 5.6 Hz, CH2O), 2.49 (2H, q, J = 7.3 Hz, 3-H), 0.99 (9H, s, TBS), 0.94-0.91 (12H, 4-H and TBS), 0.22 (6H, s, TBS), 0.09 (6H, s, TBS).
化合物８:
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz): δ 9.87 (1H, s, CHO), 7.62-7.60 (2H, m, Ar), 7.35-7.29 (2H, m, Ar), 7.11-7.08 (2H, m, Ar), 6.83-6.80 (2H, m, Ar), 6.71-6.68 (2H, m, Ar), 6.49-6.46 (2H, m, Ar), 2.54 (2H, q, J = 7.5 Hz, 3-H), 1.00 (9H, s, TBS), 0.93 (3H, t, J = 7.5 Hz, 4-H), 0.90 (9H, s, TBS), 0.23 (6H, s, TBS), 0.08 (6H, s, TBS).
化合物１０：
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz): δ7.87-7.87 (1H, m, Ar), 7.81-7.79 (1H, m, Ar), 7.44-7.33 (6H, m, Ar), 7.24-7.22 (1H, m, Ar), 7.18-7.15 (1H, m, Ar), 7.10-7.07 (2H, m, Ar), 6.82-6.79 (2H, m, Ar), 6.70-6.67 (2H, m, Ar), 6.48-6.45 (2H, m, Ar), 5.32 (2H, s, Bn), 2.52 (2H, q, J = 7.5 Hz, 3-H), 1.00 (9H, s, TBS), 0.93-0.90 (12H, m, 4-H and TBS), 0.22 (6H, s, TBS), 0.07 (6H, s, TBS).
化合物１１：
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz): δ7.88-7.87 (1H, m, Ar), 7.82-7.80 (1H, m, Ar), 7.43-7.33 (5H, m, Ar), 7.26-7.24 (1H, m, Ar), 7.21-7.18 (1H, m, Ar), 7.10-7.08 (2H, m, Ar), 6.81-6.79 (2H, m, Ar), 6.70-6.68 (2H, m, Ar), 6.46-6.43 (2H, m, Ar), 5.32 (2H, s, Bn), 2.51 (2H, q, J = 7.5 Hz, 3-H), 0.90 (3H, t, J = 7.5 Hz, 4-H).
ＲＩＤ−Ｆ−ＣＯＯＨ：
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz): δ 11.59 (1H, br s, COOH), 7.90 (1H, s, Ar), 7.79 (1H, d, J = 7.5 Hz, Ar), 7.17-7.10 (3H, m, Ar), 7.06-7.04 (1H, m, Ar), 6.86-6.83 (2H, m, Ar), 6.76-6.74 (2H, m, Ar), 6.48-6.46 (2H, m, Ar), 4.31 (2H, t, J = 4.5 Hz, OCH2), 4.16 (2H, t, J = 4.5 Hz, OCH2), 3.37-3.33 (4H, m, NCH2), 3.23-3.21 (8H, m, azepinyl), 2.48 (2H, q, J = 7.2 Hz, 3-H), 1.88-1.83 (8H, m, azepinyl), 1.69-1.65 (8H, m, azepinyl), 0.89 (3H, t, J = 7.2 Hz, 4-H).
【０４７６】
また、ＲＩＤ−Ｆ−ＣＯＯＨ（Ｃ３９Ｈ５０Ｎ２Ｏ２）のＥＳＩ  ＭＳによって測定した質量ピーク値は、理論値［Ｍ＋Ｈ＋］が６１１．３８４９（Ｃ３９Ｈ５１Ｎ２Ｏ２）であり、測定値［Ｍ＋Ｈ＋］が６１１．３８５６であった。
【０４７７】
＜製造例２＞
ＲＩＤ−Ｆ−ペプチドの合成
配列番号１〜５に示すアミノ酸配列からなり、そのＣ末端がアミド化されたペプチドで修飾された、各種ＲＩＤ−Ｆ−ＣＯＯＨ（ＲＩＤ−Ｆ−ＣＯＮＨ−ＧＬＬＥ〔配列番号１〕−ＮＨ２、ＲＩＤ−Ｆ−ＣＯＮＨ−ＧＬＬＶＹ〔配列番号２〕−ＮＨ２、ＲＩＤ−Ｆ−ＣＯＮＨ−ＧＲＲＲＲＲＲＲＲ〔配列番号３〕−ＮＨ２、ＲＩＤ−Ｆ−ＣＯＮＨ−ＧＲＲＲＲＲＲ〔配列番号４〕−ＮＨ２、およびＲＩＤ−Ｆ−ＣＯＮＨ−ＧＲＲＲＲ〔配列番号５〕−ＮＨ２）を製造した（図１〜５）。
【０４７８】
配列番号１〜５に示すアミノ酸配列からなり、そのＣ末端アミド化されたペプチドは、シグマアルドリッチ社の受託合成を利用して得た。
【０４７９】
１００ｎｍｏｌの上記ＲＩＤ−Ｆ−ＣＯＯＨをＤＭＦに十分に溶解させ、これに２００ｎｍｏｌの１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）および２００ｎｍｏｌの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を加え、４０℃で３時間インキュベートした。
【０４８０】
次いで、２００ｎｍｏｌの上記各種ペプチドをインキュベート後の溶液に添加し、４０℃で３時間で脱縮合反応に供した。その後、不純物を除去するために逆相ＨＰＬＣにＯＤＳカラム（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ  ５Ｃ１８−ＡＲ−ＩＩ；４．６×１５０ｍｍ；ナカライテスク社製）を装着したＨＰＬＣシステム（株式会社日立ハイテクノロジーズ）を用い、２８０ｎｍ波長の紫外吸収を測定することにより溶出ピークを検出し精製を行った。
【０４８１】
溶媒には、０．０５％のＴＦＡ／Ｈ２Ｏおよび０．０５％のＴＦＡ／アセトニトリルを用いた。初期条件２０％のアセトニトリル濃度から流速１ｍｌ／ｍｉｎで５０分間、終濃度８０％まで直線濃度勾配をかけて溶出した。上記の各種ペプチドを用いたＲＩＤ−Ｆ−ＣＯＯＨのペプチド修飾物の生成の確認は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳにより質量ピーク値を測定することで行った。結果を下記表１に示す。
【０４８２】
【表１】
0006792256.tif 000093
【０４８３】
＜実施例１＞
プロテアソーム阻害活性実験
９６ｗｅｌｌマイクロプレートに測定用の緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ〔ｐＨ７．５〕、４０ｍＭのＫＣｌ、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．５ｍＭのＡＴＰ、０．０５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、および１ｍＭのＤＴＴを含む）を添加した。
【０４８４】
ここに、それぞれ濃度を振ってＤＭＳＯに溶解させた上記の各種ペプチド修飾ＲＩＤ−Ｆを１μｌ（ＤＭＳＯ終濃度０．２％）になるように加え、更に精製ヒト２０Ｓｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ（Ｅｎｚｏ社）または精製ヒト２６Ｓｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ（Ｅｎｚｏ社）を終濃度１００ｎｇ／ｗｅｌｌになるように加えた。これらを混合した後、蛍光基質ペプチドを終濃度５０μＭになるように添加し、特定の波長（励起波長３８０ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍ）で１時間の測定時間の間１０分おきに蛍光強度測定を記録した。結果を図６に示す。
【０４８５】
なお、用いた蛍光基質は以下のとおりである。全て株式会社ペプチド研究所から入手した。
・β１サブユニット（ＰＧＰＨ様活性）に対して
Ｚ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−ＭＣＡ
・β２サブユニット（トリプシン様〔Ｔ−Ｌ〕活性）に対して
Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＭＣＡ
・β５サブユニット（キモトリプシン様〔ＣＴ−Ｌ〕活性）に対して
Ｓｕｃ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ＭＣＡ
【０４８６】
図６に示すように、ＲＩＤ−ＦおよびＲＩＤ−ＦーＣＯＯＨは、２０ＳプロテアソームのＣＴ−ＬおよびＰＧＰＨ様活性に対して優位に阻害効果を発揮するものの、２６Ｓプロテアソームに対しては阻害効果を発揮しなかった。ところが、ＲＩＤ−ＦーＣＯＯＨにＧＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号３）を結合させたペプチド修飾ＲＩＤ−Ｆ（図中のＲＩＤ−ＦーＧＲ８）は２６ＳプロテアソームのＴ−Ｌ活性を顕著に阻害することが明らかとなった。
【０４８７】
同様に、ＲＩＤ−ＦーＣＯＯＨにＧＬＬＶＹ（配列番号２）を結合させたペプチド修飾ＲＩＤ−Ｆ（図中のＲＩＤ−ＦーＧＬＬＶＹ）は２６ＳプロテアソームのＣＴ−Ｌ活性およびＰＧＰＨ様活性を阻害することも明らかとなった。
【０４８８】
また、ＲＩＤ−ＦーＣＯＯＨにＧＬＬＥ（配列番号１）を結合させたペプチド修飾ＲＩＤ−Ｆ（図中のＲＩＤ−ＦーＧＬＬＥ）は２６ＳプロテアソームのＣＴ−Ｌ活性を阻害することも明らかとなった。
【０４８９】
よって、これらのペプチドは２６Ｓプロテアソーム内でのプロテアーゼ活性を阻害できるように、１９Ｓ調節因子に認識されることが強く示唆される。
【０４９０】
＜製造例３＞
ＲＩＤ−Ｆ−ＣＨ２ＮＨ２の合成
ＲＩＤ−Ｆ−ＣＨ２ＮＨ２は、上記化合物８を出発原料とし、下記の反応スキームに従って製造した。
【化８７】
0006792256.tif 000094
【０４９１】
上記反応スキームにおいて略号は以下のものを意味する。
ＴＢＳ：保護基であるｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラ二ル基、
ＴＢＡＦ：脱保護剤であるフッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム。
【０４９２】
上記反応スキーム中で表される各化合物の製造方法を以下に詳述する。
【０４９３】
化合物ａ
化合物８(56.0 mg, 97.7 μmol)をメタノール(0.98 mL)に溶解し、O-ベンジルヒドロキシルアミン(13.2 mg, 0.107 mmol)を加え室温で18時間撹拌した。冷却後、反応混合物にブラインを加えて反応を停止し、反応混合溶液を酢酸エチルで抽出した。有機層を集合し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後、これを濃縮した。残渣を薄層クロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=10/1)で精製すると化合物а(51.5 mg, 77.8 %)が得られた。
【０４９４】
化合物ｂ
化合物а(16.3 mg, 24.0 μmol)をTHF(0.6 mL)に溶解させ、0 ℃に降温し、テトラブチルアンモニウムフロリドのテトラヒドロフラン溶液(1.0 M)(72.1 μL, 72.1 μmol)を加えた後、室温で30分撹拌した。冷却後、反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。有機層を集合し、無水硫酸ナトリウムで乾燥してこれを濃縮した。残渣を薄層クロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=2/1)で精製すると無色油状の化合物ｂが得られた(9.5 mg, 87.8%)。
【０４９５】
化合物ｃ
化合物ｂ(8.5 mg, 18.9 μmol)をDMF (0.4 mL)に溶解し、55%水素化ナトリウム(8.3 mg, 0.189 mmol)を加えて50 ℃で15分撹拌した。これにN-(2-クロロエチル)ヘキサヒドロ-1H-アゼピン塩酸塩(18.7 mg, 94.5 μmol)を加えて50 ℃で12時間撹拌した。冷却後、反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止し、塩化メチレンで抽出した。有機層を集合して無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、これを濃縮した。残渣を薄層クロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール/アンモニア=90/3/2)で精製すると化合物ｃが得られた(10.2 mg, 75%)。
【０４９６】
ＲＩＤ−Ｆ−ＣＨ２ＮＨ２
化合物ｃ(67.7 mg, 0.25 mmol)のTHF溶液(1.2 mL)を0 °Cに降温した後、水素化アルミニウムリチウムのTHF溶液(1 M)(40.6 μL)を加えて、室温で3時間撹拌した。冷却後、反応混合物に飽和ロッシェル塩水溶液を加えて反応を停止し、塩化メチレンで抽出した。有機層を集合して無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、これを濃縮した。残渣を薄層クロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール/アンモニア=90/3/2)で精製すると目的の化合物であるＲＩＤ−Ｆ−ＣＨ２ＮＨ２が得られた(6.4 mg, 80.0%)。
【０４９７】
上記スキームで表される各化合物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルデータを以下に示す。
【０４９８】
化合物а：
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.00 (s, 1H, 5-H), 7.44-7.31 (m, 7H, Ar), 7.14-7.04 (m, 4H, Ar), 6.83-6.80 (m, 2H, Ar), 6.72-6.69 (m, 2H, Ar), 6.50-6.47 (m, 2H, Ar), 5.19 (s, 2H, Bn), 2.51 (q, J = 7.6 Hz, 2H, 3-H), 1.01 (s, 9H, TBS), 0.95-0.92 (m, 12H, TBS and 4-H), 0.23 (s, 6H, TBS), 0.10 (s, 6H, TBS); 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 154.4, 153.7, 149.2, 143.2, 140.1, 138.8, 137.5, 136.5, 136.1, 131.9, 131.7, 131.6, 130.5, 128.5, 128.4, 128.1, 127.9, 124.4, 119.5, 119.0, 76.3, 28.7, 25.7, 18.2, 14.6; HR MS: calcd for C42H56NO3SiNa (M + Na+) 678.3793, found 678.3815.
化合物ｂ：
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.03 (s, 1H, 5-H), 7.43-7.30 (m, 7H, Ar), 7.15-7.05 (m, 4H, Ar), 6.82-6.78 (m, 2H, Ar), 6.73-6.70 (m, 2H, Ar), 6.47-6.44 (m, 2H, Ar), 5.19 (s, 2H, Bn), 2.48 (q, J = 7.6 Hz, 2H, 3-H), 0.92 (t, J = 7.6 Hz, 3H, 4-H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 154.4, 153.5, 149.4, 143.1, 140.3, 138.3, 137.5, 136.1, 135.6, 132.1, 131.72, 131.67, 130.7, 128.42, 128.38, 128.2, 128.0, 124.6, 115.0, 114.4, 76.3, 28.8, 13.6.
化合物ｃ：
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.42-7.24 (m, 9H, Ar), 7.12-6.87 (m, 2H, Ar), 6.73-6.73 (m, 2H, Ar), 6.57-6.55  (m, 2H, Ar), 4.54 (s, 2H, Bn), 4.08 (t, J = 6.4 Hz, 2H, OCH2), 3.94 (t, J = 6.4 Hz, 2H, OCH2), 2.97 (t, J = 6.2 Hz, 2H, NCH2), 2.88 (t, J = 6.4 Hz, 2H, NCH2), 2.80-2.69 (m, 8H, azepinyl 2-H), 2.49 (q, J = 7.2 Hz, 2H, 3-H), 1.67-1.59 (m, 16H, azepinyl 3-H and 4-H), 0.92 (t, J = 7.4 Hz, 3H, 4-H).
ＲＩＤ−Ｆ−ＣＨ２ＮＨ２：
1H NMR (400 MHz, CDCl3): 7.23-7.05 (m, 8H, Ar), 6.89-6.75 (m, 6H, Ar), 6.52 (m, 2H, Ar), 4.09 (t, J = 6.0 Hz, 2H, OCH2), 3.93 (t, J = 6.0 Hz, 2H, OCH2), 3.70 (s, 2H, 5-H), 2.98 (t, J = 6.0 Hz, 2H, NCH2), 2.87 (t, J = 6.0 Hz, 2H, NCH2), 2.80 (q, azepinyl 2-H), 2.73 (q, azepinyl 2-H), 2.49 (q, J = 7.2 Hz, 2H, 3-H), 1.68-1.56 (m, 16H, azepinyl 3-H and 4-H), 0.93 (t, J = 7.4 Hz, 3H, 4-H); HR MS: calcd for C39H54N3O2 (M + H+) 596.4211, found 596.4207.
【０４９９】
＜製造例４＞
ペプチド−ＲＩＤ−Ｆの合成
配列番号５４、１０３、および１０４に示すアミノ酸配列からなり、そのＮ末端がアセチル化されたペプチドで修飾された、各種ＲＩＤ−Ｆ（Ａｃ−ＬＬＥＧ〔配列番号１０３〕−ＣＯＮＨＣＨ２−ＲＩＤ−Ｆ、Ａｃ−ＬＬＶＹＧ〔配列番号１０４〕−ＣＯＮＨＣＨ２−ＲＩＤ−Ｆ、およびＡｃ−ＲＲＲＲＲＲＲＲＧ〔配列番号５４〕−ＣＯＮＨＣＨ２−ＲＩＤ−Ｆ；ＲＲＲＲＲＲＲＲＧはＲ８Ｇともいう。）を製造した（図７）。
【０５００】
配列番号５４、１０３、および１０４に示すアミノ酸配列からなり、そのＮ末端がアセチル化されたペプチドは、シグマアルドリッチ社の受託合成を利用して得た。
【０５０１】
１００ｎｍｏｌの上記ＲＩＤ−Ｆ−ＣＯＯＨをＤＭＦに十分に溶解させ、これに２００ｎｍｏｌの１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）および２００ｎｍｏｌの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を加え、４０℃で３時間インキュベートした。
【０５０２】
次いで、２００ｎｍｏｌの上記各種ペプチドをインキュベート後の溶液に添加し、４０℃で３時間で脱縮合反応に供した。その後、不純物を除去するために逆相ＨＰＬＣにＯＤＳカラム（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ  ５Ｃ１８−ＡＲ−ＩＩ；４．６×１５０ｍｍ；ナカライテスク社製）を装着したＨＰＬＣシステム（株式会社日立ハイテクノロジーズ）を用い、２８０ｎｍ波長の紫外吸収を測定することにより溶出ピークを検出し精製を行った。
【０５０３】
溶媒には、０．０５％のＴＦＡ／Ｈ２Ｏおよび０．０５％のＴＦＡ／アセトニトリルを用いた。初期条件２０％のアセトニトリル濃度から流速１ｍｌ／ｍｉｎで５０分間、終濃度８０％まで直線濃度勾配をかけて溶出した。上記の各種ペプチドを用いたＲＩＤ−Ｆ−ＣＯＯＨのペプチド修飾物の生成の確認は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳにより質量ピーク値を測定することで行った。結果を下記表２に示す。
【０５０４】
【表２】
0006792256.tif 000095
【０５０５】
＜実施例２＞
ＭＴＴアッセイ
ＲＩＤ−Ｆペプチド付加体の細胞作用を測定するためにＨｅＬａ細胞を用いてＭＴＴアッセイを行った。ＨｅＬａ細胞は、１０％ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ、ペニシリンーストレプトマイシン混合溶液（１００ｕｎｉｔ／ｍｌ）（ナカライテスク（株））入りのＲＰＭＩ１６４０培地にて培養した。最初に、９６ＷｅｌｌプレートへＨｅＬａ細胞を５０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ播種し、２４時間インキュベートしプレート底面に定着させた。
【０５０６】
その後、化合物をＤＭＳＯ終濃度０．５％となるように添加し２４時間インキュベートする。培養後、５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ／ＰＢＳ（−）（シグマアルドリッチ）を１０μｌ／ｗｅｌｌ加え、３時間インキュベートし、ホルマザンを生成させた。反応後、培地をすべて捨て、ウェル中に細胞可溶化液として０．０４ｍｏｌ／ｌの塩酸イソプロパノールを１００μｌ加え強く撹拌し細胞を溶かした。
【０５０７】
プレートリーダーＦｕｓｉｏｎＴＭα−ＦＰ（パーキンエルマージャパン（株））により５６０ｎｍと７５０ｎｍの吸光度を測定した５６０ｎｍがホルマザン精製量の比色量であり７５０ｎｍがｂａｃｋの値となるので、ＯＤ５６０−ＯＤ７５０の値を活性値として、ＤＭＳＯのみの活性値を分母に各化合物添加時の％細胞生存率を算出した。結果を図８に示す。
【０５０８】
図８に示すように、ＣＴ−Ｌ活性様基質を持つと考えられるＲＩＤ−Ｆ−ＧＬＬＶＹとＬＬＶＹＧ−ＲＩＤ−Ｆを終濃度２．５、７．５、および２０μMの３点で検証した所、細胞生存率への影響は確認されなかった。
【０５０９】
次に、細胞膜透過配列を含むＲＩＤ−Ｆ−ＧＲ８とＲ８Ｇ−ＲＩＤ−Ｆとを比較したところ、ＲＩＤ−Ｆの付加方向がペプチドのＣ末端の時、すなわちＲ８Ｇ−ＲＩＤ−Ｆの時に、より強い生育阻害を示した。よってペプチドの付加方向は、細胞レベルでの作用に影響することが明らかとなった。
【０５１０】
＜実施例３＞
Ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  ＧｌｏＴＭ  アッセイ
上記のＭＴＴアッセイによって細胞に対して作用を示すことが明らかとなった、細胞膜透過配列を含むペプチド付加ＲＩＤ−Ｆ化合物（Ｒ８Ｇ−ＲＩＤ−Ｆ）の細胞内プロテアソームの活性部位別の阻害活性を、Ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ−ＧｌｏＴＭＣｅｌｌ−ｂａｓｅｄ  ａｓｓａｙ（プロメガ（株））を用いて評価した。
【０５１１】
血清を含まないペニシリンーストレプトマイシン混合液（１００ｕｎｉｔ／ｍｌ）を含むＲＰＭＩ１６４０培地を用いて、９６ｗｅｌｌプレートに５０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌのＨｅＬａ細胞を播種した。プレート底面に定着させるために３時間培養し、その後、終濃度１０μＭとなるように、各種化合物（ＲＩＤ−Ｆ、ＲＩＤ−Ｆ−ＧＲ８、Ｒ８Ｇ−ＲＩＤ−Ｆ、およびＥｐｏｘｏｍｉｃｉｎ）を添加し、２時間または２４時間インキュベートした（ＤＭＳＯ終濃度０．５％）。
【０５１２】
インキュベート後、測定する活性サイトに対応した基質（Ｓｕｃ−ＬＬＶＹ−ＧｌｏＴＭ〔ＣＴ−Ｌ〕、Ｚ−ｎＬＰｎＬＤ−ＧｌｏＴＭ〔ＰＧＰＨ〕、およびＺ−ＬＲＲ−ＧｌｏＴＭ〔Ｔ−Ｌ〕）を添加し１５分反応させ、Ｌｕｃｉｆｅｒｉｎの発光をプレートリーダーＦｕｓｉｏｎＴＭα−ＦＰを用いて測定した。結果を図９（Ａ）に示す。
【０５１３】
同様に、骨髄腫細胞ＲＰＭＩ８２２６の実験には、１％ペニシリンストレプトマイシン混合液（１００ｕｎｉｔ／ｍｌ）を含むＲＰＭＩ１６４０培地を用いた。まず、透明９６ｗｅｌｌプレートに５０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように細胞を播種する。その後３時間培養し、顕微鏡観察によって細胞がプレート底面に定着したのを確認した。次に、終濃度１０μＭとなるように各化合物を添加し、添加から２ｈ，６ｈ，１０ｈ，２４ｈインキュベートする（ＤＭＳＯ終濃度０．５％）。反応後、測定する活性サイトに対応した基質（Ｓｕｃ−ＬＬＶＹ−ＧｌｏＴＭ，Ｚ−ｎＬＰｎＬＤ−ＧｌｏＴＭ，Ｚ−ＬＲＲ−ＧｌｏＴＭ：ＣＴ−Ｌ，ＰＧＰＨ，Ｔ−Ｌ）を添加しプレートミキサーで混合し、１５分反応させる。測定のために白色の９６ｗｅｌｌプレートに反応溶液を１００μｌ移し、Ｌｕｃｉｆｅｒｉｎの発光をプレートリーダーＦｕｓｉｏｎＴＭ  α−ＦＰ（（株）パーキンルマージャパン）を用いて測定した。結果を図９（Ｂ）に示す。
【０５１４】
薬剤添加を行い後の時間経過による阻害度を確認した。図９（Ａ）に示すＨｅｌａ細胞の結果からは、Ｒ８Ｇ−ＲＩＤ−Ｆの添加から２時間では阻害が確認されなかった。一方で、Ｒ８Ｇ−ＲＩＤ−Ｆの添加から２４時間では、コントロールのＲＩＤ−Ｆと比較して阻害が確認された。このようなＧｌｏアッセイの結果より、Ｒ８Ｇペプチドに対するＲＩＤ−Ｆの付加方向は阻害活性に差を与え、ペプチドのＣ末端にＲＩＤ−Ｆを付加したＲ８Ｇ−ＲＩＤ−Ｆの阻害活性の方が優れていることが明らかとなった。またＲ８Ｇ−ＲＩＤ−Ｆの阻害活性は、３種のプロテアソームの活性のすべてに阻害効果を示した。
【０５１５】
また、図９（Ｂ）に示すＲＰＭＩ８２２６細胞の結果からは、ＲＩＤ−Ｆ−ＧＲ８、Ｒ８Ｇ−ＲＩＤ−Ｆのいずれの添加においても、２時間で阻害効果が確認されたが、Ｒ８Ｇ−ＲＩＤ−Ｆのほうが、ＲＩＤ−Ｆ−ＧＲ８と比較して、より高く阻害した。また、添加から２４時間において、これらの阻害効果はより強まった。
【０５１６】
図９（Ａ）と図９（Ｂ）を比較すると、ＨｅＬａ細胞よりも、ＲＰＭＩ８２２６細胞のほうが、阻害の程度が大きいことが明らかとなった。
【０５１７】
以下に、本明細書で表示するアミノ酸配列を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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