(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体または抗体断片であって、
抗体または抗体断片が、配列番号３１および２５のアミノ酸配列を含むＶＨおよびＶＬ領域をそれぞれ含むものである、抗体または抗体断片。
【請求項２】
ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体または抗体断片であって、
抗体または抗体断片が、配列番号３１および２６のアミノ酸配列を含むＶＨおよびＶＬ領域をそれぞれ含むものである、抗体または抗体断片。
【請求項３】
ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体または抗体断片であって、
（ａ）配列番号１４および９のアミノ酸配列を含むＶＨおよびＶＬ領域をそれぞれ含む抗体または抗体断片と、
（ｂ）配列番号１５および９のアミノ酸配列を含むＶＨおよびＶＬ領域をそれぞれ含む抗体または抗体断片と
からなる群から選択される抗体または抗体断片。
【請求項４】
１０−８Ｍ未満のヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドについての二価結合親和性（ＫＤ）を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５】
ヒトガンマ１定常領域に融合している重鎖可変領域（ＶＨ）およびヒトカッパ定常領域に融合している軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む全長抗体である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６】
ヒトＦｃγＩＩＩＡ（ＣＤ１６）受容体への結合を増加させるアミノ酸置換を含むヒト重鎖定常領域を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片、および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
【請求項８】
（ａ）０．０５ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬの請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体；（ｂ）緩衝液系；および（ｃ）等張剤を６．５〜８のｐＨにおいて含む、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記ｐＨが７．４である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
それを必要とする患者における疾患の治療または予防のための医薬組成物であって、有効量の請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片、または請求項７〜９のいずれか一項に記載の組成物を含む、医薬組成物。
【請求項１１】
前記疾患が末梢Ｔ細胞リンパ腫である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記疾患が菌状息肉腫およびセザリー症候群から選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記疾患が炎症または自己免疫障害である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、改善された安定性を有する抗体を提供する。ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合し得る抗体が含まれる。抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞、特にＣＤ４＋Ｔ細胞により特徴づけられる障害、例として、悪性腫瘍、例えば、菌状息肉症およびセザリー症候群、ならびにＫＩＲ３ＤＬ２発現自己免疫障害の治療に好適である。
【０００２】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年３月１４日に出願された米国仮特許出願第６１／９５３，０３５号明細書の利益を主張し、その開示は任意の図面を含め、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【０００３】
配列表の参照
本出願は、電子フォーマットの配列表とともに出願されている。配列表は、２０１５年３月１１日に作出され、４９ＫＢサイズの標題「ＫＩＲ−５ＰＣＴ＿ＳＴ２５」のファイルとして提供される。配列表の電子フォーマット中の情報は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００４】
キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）は、Ｃ型レクチン受容体（ＣＤ９４−ＮＫＧ２）とともに、ＭＨＣクラスＩ分子を特異的に認識するためにヒトＮＫ細胞およびＴリンパ球サブセットにより使用される受容体のファミリーである。ある阻害および活性化ＫＩＲは、高度に類似する細胞外ドメインを有し、同一のモノクローナル抗体により認識され、例えばＫＩＲ２ＤＬ１およびＫＩＲ２ＤＳ１は両方ともＥＢ６により認識され、２ＤＬ２および２ＤＳ２はＧＬ１８３により認識される。３つの基準（細胞外Ｉｇ様ドメイン（ドメインＤ０、Ｄ１、Ｄ２）の数、細胞質テール長、および配列相似性）が、ＫＩＲタンパク質を１３のグループ、すなわち、ＫＩＲ３ＤＬ１〜２、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＬ１〜５、およびＫＩＲ２ＤＳ１〜５にカテゴライズするために使用されている。２つのドメインについての名称２Ｄまたは３つのドメインについての３Ｄは、Ｉｇ様ドメインの数を与え；長鎖または短鎖細胞質ドメインのいずれかを有する受容体は、さらにＬまたはＳとして分類される（非特許文献１）。阻害受容体は、そのＨＬＡクラスＩリガンドのＫＩＲエンゲージメント時にチロシンリン酸化されるカノニカルなＩＴＩＭを含有する長鎖（Ｌ）細胞質テール（すなわち、ＫＩＲ２ＤＬまたはＫＩＲ３ＤＬ）を有する。リン酸化されたＩＴＩＭは、Ｓｒｃホモロジー２ドメインを含有するタンパク質チロシンホスファターゼの、Ｓｒｃホモロジー２ドメイン含有ホスファターゼ１および／またはＳｒｃホモロジー２ドメイン含有ホスファターゼ２を動員し、それらが細胞基質を脱リン酸化し、したがってＮＫ活性化シグナルを中断させ、すなわち、適切な自己ＭＨＣクラスＩ発現を有する標的細胞を回避する。短鎖（Ｓ）細胞質テールを有する受容体は、ＩＴＩＭを欠く（すなわち、ＫＩＲ２ＤＳまたはＫＩＲ３ＤＳ）。これらの活性化ＫＩＲは、それらの膜貫通ドメイン内に荷電残基を含有し、それによりシグナリング鎖ＫＡＲＡＰ／ＤＡＰ１２との相互作用が容易となる。ＫＩＲ２ＤＳ受容体ファミリーのエンゲージメントは、ＫＡＲＡＰ／ＤＡＰ１２媒介シグナリングイベントのカスケードをもたらし、ＮＫ細胞の細胞溶解活性の増加および炎症促進性サイトカイン、例えばＩＦＮ−γの産生に至ることが示されている（非特許文献１）。成熟ＮＫ細胞は、一般に潜在的に自己反応性の活性化分子より機能的に優先する自己ＭＨＣクラスＩ分子に特異的な少なくとも１つの阻害受容体を獲得することが予測されている。ＮＫ細胞の応答は、ＫＩＲおよび他の受容体による活性化および阻害シグナリングの両方の統合された成果を表すことが提案されている。
【０００５】
ＫＩＲ３ＤＬ２は、ＫＩＲ３ＤＬ２受容体を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞、特にＣＤ４＋Ｔ細胞が関与する悪性腫瘍、例として、菌状息肉症およびセザリー症候群などの悪性腫瘍の治療のための標的として研究されてきた（例えば、（特許文献１）および（特許文献２）参照）。ＫＩＲ３ＤＬ２のリガンドＨＬＡ−Ｂ２７は、強直性脊椎炎（ＡＳ）に代表される消耗性炎症性関節炎障害のグループの脊椎関節炎（ＳｐＡ）と強く関連する。Ｂ２７ダイマーによるＫＩＲ３ＤＬ２ライゲーションは、Ｔｈ１７およびＮＫ細胞サブセットの生存を促進する（（非特許文献２）；（非特許文献３））。ＳｐＡを有する患者において、ＫＩＲ３ＤＬ２を発現する病原性Ｔｈ１７およびＮＫ細胞サブセットの比率の増加が存在することが示されている。研究は、ＫＩＲ３ＤＬ２−Ｂ２７相互作用がＳｐＡにおいて中心的な役割を担うこと、およびＫＩＲ３ＤＬ２が有望な治療標的であることを強く示唆している。
【０００６】
種々のＫＩＲ３Ｄポリペプチドに対して反応性の抗体の存在が報告されている。２つの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の存在：Ｑ２４１およびＱ６６が報告されている（非特許文献４）。しかしながら、これら２つの抗体はＩｇＭアイソタイプ（ペンタマー）のものであり、医薬使用に容易に適合されず；さらにそれらの可変領域が二価ＩｇＧ型抗体に関して配置された場合、それらの親和性は低いと予測される。さらなる抗体を産生する「ＡＺ１５８」と称される細胞が報告された（（非特許文献５）；（特許文献１））。抗体５．１３３は、Ｍｉｌｔｅｎｔｙ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ａｕｂｕｒｎ  ＣＡ）から入手可能である。抗体ＡＺ１５８および５．１３３は両方とも、ＫＩＲ３ＤＬ２およびＫＩＲ３ＤＬ１に結合する（さらに高度に相同性のＫＩＲ３ＤＳ１に結合する）。ＫＩＲ３ＤＬ２およびＫＩＲ３ＤＬ１は、比較的高いアミノ酸同一性を共有し、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合する種々のＨＬＡリガンドはＫＩＲ３ＤＬ１によっても認識される。ＡＺ１５８、Ｑ２４１およびＱ６６を生じさせた免疫化にかかわらず、治療および他の用途において改善された抗体が必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２０１０／０８１８９０号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０２／５０１２２号パンフレット
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｐａｓｃａｌ  Ｖ．ｅｔ  ａｌ．，２００７  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：１６２５−１６３３
【非特許文献２】Ｂｏｗｎｅｓｓ，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １８６：２６７２−２６８０
【非特許文献３】Ｃｈａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ５２：３５８６−３５９５
【非特許文献４】Ｐｅｎｄｅ，ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８４：５０５−５１８
【非特許文献５】Ｐａｒｏｌｉｎｉ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｉｎ  Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  ｔｙｐｉｎｇ  ＶＩＩ．Ｄ．Ｍａｓｏｎ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ．４１５−４１７
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
一態様において、高い親和性抗原結合および医薬配合物中の安定性の両方を有するヒトフレームワークを有する抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体が提供される。本発明者らは、様々な単一遺伝子およびモザイクヒトフレームワークを有する抗体を開発し、重鎖中の残基３９および軽鎖中の残基３８（Ａｂｎｕｍ）におけるあるアミノ酸が強く増加した物理的安定性を提供することを発見した。
【００１０】
例示的な抗体は、抗体２Ｂ１２および１０Ｇ５の抗原結合領域を使用して開発されてきた。抗体２Ｂ１２および１０Ｇ５  ＣＤＲは、２０１３年９月１７日に出願されたＰＣＴ出願第ＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９３０２号明細書に記載されている。抗ＫＩＲ３ＤＬ２  ｍＡｂの２Ｂ１２および１０Ｇ５は、密接に関連する（相同性による）ＫＩＲ３ＤＬ１に結合せず、ＫＩＲ３ＤＬ２内在化を引き起こさない有利な特性を有する。ＫＩＲ３ＤＬ２内在化は、ＡＤＣＣベースアプローチを強く妨げる。抗体は、適切なアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ１）の場合にＡＤＣＣを媒介し得るが、ＫＩＲ３ＤＬ２とのＫＩＲ３ＤＬ２−ＨＬＡ  Ｂ２７ダイマー相互作用の阻害もし得る。特に、リガンド遮断は、受容体内在化を引き起こさずに達成することができる。したがって、ＫＩＲ３ＤＬ２の１つ以上の天然リガンドを遮断する抗体が、枯渇または非枯渇ｍＡｂフォーマットのいずれかとして炎症障害の治療または予防に十分好適である。抗体により結合されるＫＩＲ３ＤＬ２上のエピトープは、決定されている。それというのも、抗体１０Ｇ５および２Ｂ１２の両方とも、残基Ｉ６０およびＧ６２における置換を有するＫＩＲ３ＤＬ２突然変異体への結合を損失するためである。抗体１０Ｇ５は、残基Ｐ１４、Ｓ１５およびＨ２３、ならびに残基Ｒ１３、Ａ２５およびＱ２７における置換を有するＫＩＲ３ＤＬ２突然変異体への結合をさらに損失する。抗体は、細胞の表面上で発現される天然立体構造でＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの結合について互いに競合する。
【００１１】
一実施形態において、本発明は、ヒト化２Ｂ１２または１０Ｇ５抗体を提供する。一実施形態において、本発明は、軽鎖および／または重鎖中のモザイクヒトフレームワークを有するヒト化２Ｂ１２または１０Ｇ５抗体を提供する。改善された特性、例えば、より低い免疫原性、改善された抗原結合もしくは他の機能的特性など、および／または改善された物理化学的特性、例えば、より良好な安定性などを有するこのようなヒト化抗体のフレームワーク領域（ＦＲ）中のアミノ酸置換のための例示的な相補性決定領域（ＣＤＲ）残基または配列および／または部位が提供される。一実施形態において、ヒトフレームワーク配列は、復帰突然変異を含む。
【００１２】
本明細書に提供されるフレームワークおよび可変領域は、２Ｂ１２および１０Ｇ５に、医薬配合物中で見られる条件下で高い物理的安定性および低い凝集傾向を付与する。特に、実質的にヒトフレームワーク領域を有する２Ｂ１２または１０Ｇ５の抗原結合領域を有する抗体であって、その重鎖中に３９位におけるグルタミン（Ｑ）およびその軽鎖中に３８位（Ａｂｎｕｍナンバリング）におけるグルタミンを含む抗体が提供される。理論により拘束されるものではないが、グルタミンが軽鎖中に残基３８（Ａｂｎｕｍナンバリング）において存在する場合、Ｈ結合がＶＨ＿Ｑ３９とＶＬ＿Ｑ３８との間に構築され（図１参照）、抗体のより大きい物理的安定性をもたらすことが考えられる。これら２つのＨ結合は、ｍＡｂの四次構造を安定化させ得、タンパク質凝集を担う疎水性部分の露出を防止する。
【００１３】
一実施形態において、抗体は、ヒトＶＨおよびＶＬアクセプターフレームワークを有し、抗体は、その重鎖中に残基３９におけるグルタミン残基およびその軽鎖中に残基３８におけるグルタミンを含む。ＶＨおよび／またはＶＬヒトアクセプターフレームワークは、天然存在ヒトアクセプターフレームワークと比較して復帰突然変異（例えば、１、２、３または４つ以上の、フレームワーク領域の１つ以上中の対応するドナー残基へのアミノ酸置換）を含み得る。任意選択的に、抗体は、抗体２Ｂ１２または１０Ｇ５と同一のエピトープに結合する。
【００１４】
一実施形態において、抗体は、ヒトＶＨ７サブグループに由来する重鎖フレームワーク１（ＦＷ１）および２（ＦＷ２）を含む。任意選択的に、抗体は、ヒトＶＨ７サブグループに由来する重鎖フレームワーク３（ＦＷ３）を含む。任意選択的に、抗体は、重鎖フレームワーク４（ＦＷ４）を含み、それはＪＨ６サブグループに由来する。一実施形態において、抗体は、任意選択的にＪＫ４サブグループと組み合わさったＶＫ１および／またはＶＫ４サブグループの軽鎖アクセプターフレームワークを含む。任意選択的に、抗体は、ヒトＶＫ１サブグループに由来する軽鎖ＦＷ１、ならびにヒトＶＫ４サブグループに由来する軽鎖ＦＷ２および軽鎖ＦＷ３を含む。任意選択的に、抗体は、ＪＫ４サブグループに由来する軽鎖ＦＷ４を含む。
【００１５】
一実施形態において、抗体２Ｂ１２の重鎖ＣＤＲ１、２および３ならびに任意選択的に、ＪＨ６サブグループと組み合わさったヒトＶＨ７サブグループのヒト重鎖アクセプターフレームワークを含む重鎖と、抗体２Ｂ１２の軽鎖ＣＤＲ１、２および３、任意選択的に、ＪＫ４サブグループと組み合わさったＶＫ１および／またはＶＫ４サブグループのヒト軽鎖アクセプターフレームワークを含む軽鎖とを含むＫＩＲ３ＤＬ２に結合する単離モノクローナル抗体が提供される。一実施形態において、重鎖フレームワークは、１つ以上の復帰突然変異を含む。一実施形態において、軽鎖フレームワークは、１つ以上の復帰突然変異を含む。一実施形態において、重鎖フレームワークは、（集合的に）１、２または３つの復帰突然変異を含む。一実施形態において、軽鎖フレームワークは、（集合的に）１または２つの復帰突然変異を含む。
【００１６】
一実施形態において、抗体は、抗体２Ｂ１２の重鎖ＣＤＲ１、２および３ならびにヒト重鎖アクセプターフレームワークを含む重鎖を含み、フレームワーク１（ＦＷ１）および２（ＦＷ２）は、ヒトＶＨ７サブグループに由来する。任意選択的に、フレームワーク３（ＦＷ３）は、ヒトＶＨ７サブグループに由来する。任意選択的に、フレームワーク４（ＦＷ４）は、ＪＨ６サブグループに由来する。任意選択的に、抗体は、抗体２Ｂ１２の軽鎖ＣＤＲ１、２および３ならびに任意選択的に、ＪＫ４サブグループと組み合わさったＶＫ１および／またはＶＫ４サブグループのヒト軽鎖アクセプターフレームワークを含む軽鎖を含む。任意選択的に、軽鎖ＦＷ１は、ヒトＶＫ１サブグループに由来し、軽鎖ＦＷ２および軽鎖ＦＷ３は、ヒトＶＫ４サブグループに由来する。任意選択的に、軽鎖ＦＷ４は、ＪＫ４サブグループに由来する。一実施形態において、重鎖フレームワークは、１つ以上の復帰突然変異を含む。一実施形態において、軽鎖フレームワークは、１つ以上の復帰突然変異を含む。一実施形態において、重鎖フレームワークは、（集合的に）１、２または３つの復帰突然変異を含む。一実施形態において、軽鎖フレームワークは、（集合的に）１または２つの復帰突然変異を含む。
【００１７】
一実施形態において、ＶＨ７サブグループ遺伝子は、ＩＧＨＶ７−４（例えば、ＩＧＨＶ７−４−１＊０２、配列番号５３に示されるアミノ酸配列をコードする遺伝子）である。一実施形態において、ＶＫ１サブグループ遺伝子は、ＩＧＫＶ１−３９、例えば、配列番号４４に示されるアミノ酸配列をコードする遺伝子である。一実施形態において、ＶＫ４サブグループ遺伝子は、ＩＧＫＶ４−１、例えば、配列番号４５に示されるアミノ酸配列をコードする遺伝子である。
【００１８】
一実施形態において、抗体１０Ｇ５の重鎖ＣＤＲ１、２および３ならびにヒトＶＨ１サブグループ（例えば、ＩＧＨＶ１−４６）に由来するヒト重鎖アクセプターフレームワークを含む重鎖と、抗体１０Ｇ５の軽鎖ＣＤＲ１、２および３ならびにＶＫ１サブグループ（例えば、ＩＧＫＶ１−ＮＬ１）に由来するヒト軽鎖アクセプターフレームワークを含む軽鎖とを含むＫＩＲ３ＤＬ２に結合する単離モノクローナル抗体が提供される。一実施形態において、重鎖フレームワークは、１つ以上の復帰突然変異を含む。一実施形態において、軽鎖フレームワークは、１つ以上の復帰突然変異を含む。
【００１９】
一実施形態において、抗体は、ＪＨ６サブグループと組み合わさったＶＨ１および／またはＶＨ７サブグループのヒト重鎖アクセプターフレームワーク、ならびにＪＫ４サブグループと組み合わさったＶＫ１および／またはＶＫ４サブグループのヒト軽鎖アクセプターフレームワークを含み、有する。
【００２０】
別の態様において、本発明は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合し、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３；ＶＨドメインの３９位におけるグルタミン（Ｑ）残基およびＶＬドメインの３８位におけるグルタミンを含む単離ヒト化抗体を提供する。３９位におけるグルタミン（Ｑ）残基は、ヒトＶＨフレームワーク領域配列中に天然に存在し得、またはアミノ酸置換もしくは他の配列の改変により導入することができる。
【００２１】
一実施形態において、抗体２Ｂ１２または１０Ｇ５の重鎖および軽鎖ＣＤＲ１、２および３を含むヒト化抗体が提供される。一実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチドに実質的に結合せずにＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合するヒトアクセプターフレームワークを含む抗体であって、抗体２Ｂ１２または１０Ｇ５の重鎖および軽鎖ＣＤＲ１、２および３を含み、ヒトフレームワーク領域の１つ以上は、アミノ酸置換を含む、抗体が提供される。任意選択的に、置換は、復帰突然変異である。任意選択的に、置換は、本明細書に開示の置換である。任意選択的に、抗体は、その重鎖中に残基３９におけるグルタミンおよびその軽鎖中に残基３８におけるグルタミンを含む。
【００２２】
一態様において、
（ａ）それぞれ配列番号１８（ＨＣＤＲ１）、配列番号１９（ＨＣＤＲ２）および配列番号２０（ＨＣＤＲ３）の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）と、
（ｂ）それぞれ配列番号２１、２２および２３の配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）と
を含むヒト化２Ｂ１２モノクローナル抗体が提供される。任意選択的に、抗体は、ＪＨ６サブグループと組み合わさったＶＨ１および／またはＶＨ７サブグループのヒト重鎖アクセプターフレームワーク、ならびにＪＫ４サブグループと組み合わさったＶＫ１および／またはＶＫ４サブグループのヒト軽鎖アクセプターフレームワークを有する。任意選択的に、ヒト軽鎖および／または重鎖アクセプターフレームワークは、置換（例えば、復帰突然変異）を含む。
【００２３】
任意選択的に、２Ｂ１２抗体の本明細書の任意の実施形態において、重鎖フレームワークは、残基２、３８、３９、４０、４３、４８、６８、７２ｃ、９および１０８（Ａｂｎｕｍナンバリング）（その任意の組合せを含む）からなる群から選択される位置における１つ以上の置換を有し得る。任意選択的に、２Ｂ１２抗体の本明細書の任意の実施形態において、軽鎖フレームワークは、残基３、８、９、２１、４３、７１、７８および１０４（Ａｂｎｕｍナンバリング）（その任意の組合せを含む）からなる群から選択される位置における１つ以上の置換を有する。一実施形態において、置換は、復帰突然変異である。
【００２４】
一実施形態において、
（ａ）２Ｂ１２−Ｈ０、−Ｈ１、−Ｈ２、−Ｈ３および−Ｈ４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）２Ｂ１２−Ｌ０、−Ｌ１、−Ｌ２、−Ｌ３および−Ｌ４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と
を含むヒト化２Ｂ１２モノクローナル抗体が提供される。
【００２５】
一実施形態において、
（ａ）配列番号２９〜３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号２４〜２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と
を含むヒト化２Ｂ１２モノクローナル抗体が提供される。
【００２６】
一実施形態において、
（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と
を含むヒト化２Ｂ１２モノクローナル抗体が提供される。
【００２７】
一実施形態において、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と
を含むヒト化２Ｂ１２モノクローナル抗体が提供される。
【００２８】
一実施形態において、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と
を含むヒト化２Ｂ１２モノクローナル抗体が提供される。
【００２９】
一実施形態において、
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と
を含むヒト化２Ｂ１２モノクローナル抗体が提供される。
【００３０】
一実施形態において、
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と
を含むヒト化２Ｂ１２モノクローナル抗体が提供される。
【００３１】
一実施形態において、重鎖可変領域は、そのフレームワーク領域の１、２、３または４つにおいて１つ以上の復帰突然変異を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、そのフレームワーク領域の１、２、３または４つにおいて１つ以上の復帰突然変異を含む。
【００３２】
一態様において、（ａ）約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの２Ｂ１２−Ｈ０、−Ｈ１、−Ｈ２、−Ｈ３および−Ｈ４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、２Ｂ１２−Ｌ０、−Ｌ１、−Ｌ２、−Ｌ３および−Ｌ４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むＩｇＧ抗体分子；（ｂ）緩衝液系、例えば、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム；（ｃ）等張剤、任意選択的に、ＮａＣｌ；および（ｄ）ポリソルベート８０を６．５〜８、任意選択的に、約７．４のｐＨにおいて含む薬学的に許容可能な活性配合物が提供される。一態様において、（ａ）約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの抗体；（ｂ）約１０ｍＭの緩衝液、例えば、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム；（ｃ）等張剤、任意選択的に、約９ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ；および（ｄ）ポリソルベート８０を６．５〜８、任意選択的に、約７．４のｐＨにおいて含む薬学的に許容可能な活性配合物が提供される。
【００３３】
一態様において、
（ａ）配列番号２（ＨＣＤＲ１）、配列番号３（ＨＣＤＲ２）および配列番号４（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）と、
（ｂ）配列番号５、６および７の配列をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）と
を含むヒト化１０Ｇ５モノクローナル抗体が提供される。任意選択的に、抗体は、ＪＨ６サブグループと組み合わさったＶＨ１サブグループの重鎖ヒトアクセプターフレームワーク、およびＪＫ２サブグループと組み合わさったＶＫ１サブグループの軽鎖ヒトアクセプターフレームワークを有する。任意選択的に、抗体は、置換（例えば、復帰突然変異）を含むヒトアクセプターフレームワークを有する重鎖を有する。
【００３４】
任意選択的に、１０Ｇ５抗体の本明細書の任意の実施形態において、重鎖フレームワークは、残基５、１１、１２、１３、２０、３８、４０、４８、６６、６７、６９、７１、７２ａおよび７５（Ａｂｎｕｍナンバリング）（その任意の組合せを含む）からなる群から選択される位置における１つ以上の置換を有し得る。任意選択的に、１０Ｇ５抗体の本明細書の任意の実施形態において、軽鎖フレームワークは、残基１７、１８、４０、４５、４８、７０、７６および１００（Ａｂｎｕｍナンバリング）（その任意の組合せを含む）からなる群から選択される位置における１つ以上の置換を有する。一実施形態において、置換は、復帰突然変異である。
【００３５】
一実施形態において、
（ａ）１０Ｇ５−Ｈ０、−Ｈ１、−Ｈ２、−Ｈ３、−Ｈ４、−Ｈ５および−Ｈ６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）１０Ｇ５−Ｌ０、−Ｌ１、−Ｌ２、−Ｌ３、−Ｌ４および−Ｌ５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と
を含むヒト化１０Ｇ５モノクローナル抗体が提供される。
【００３６】
一実施形態において、
（ａ）配列番号１３〜１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号８〜１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と
を含むヒト化１０Ｇ５モノクローナル抗体が提供される。
【００３７】
一実施形態において、
（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と
を含むヒト化１０Ｇ５モノクローナル抗体が提供される。
【００３８】
一実施形態において、
（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と
を含むヒト化１０Ｇ５モノクローナル抗体が提供される。
【００３９】
一実施形態において、
（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と
を含むヒト化１０Ｇ５モノクローナル抗体が提供される。
【００４０】
一態様において、（ａ）約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの１０Ｇ５−Ｈ０、−Ｈ１、−Ｈ２、−Ｈ３、−Ｈ４、−Ｈ５および−Ｈ６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、１０Ｇ５−Ｌ０、−Ｌ１、−Ｌ２、−Ｌ３、−Ｌ４および−Ｌ５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むＩｇＧ抗体分子；（ｂ）緩衝液系、例えば、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム；（ｃ）等張剤、任意選択的に、ＮａＣｌ；および（ｄ）ポリソルベート８０を６．５〜８、任意選択的に、約７．４のｐＨにおいて含む薬学的に許容可能な活性配合物が提供される。一態様において、（ａ）約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの抗体；（ｂ）約１０ｍＭ）緩衝液、例えば、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム；（ｃ）等張剤、任意選択的に、約９ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ；および（ｄ）ポリソルベート８０を６．５〜８、任意選択的に、約７．４のｐＨにおいて含む薬学的に許容可能な活性配合物が提供される。一実施形態において、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドアレル＊００２、＊００３、＊００５、＊００７、および／または＊００８の１、２、３、４または５つに結合する。任意選択的に、抗体は、それらの表面において特定のＫＩＲ３ＤＬ２アレル（例えば、アレル＿＊００１、＊００２、＊００３、＊００５、＊００７および／または＊００８）を発現するように作製された細胞への結合について５μｇ／ｍｌ以下、任意選択的に、３μｇ／ｍｌ以下、２μｇ／ｍｌ以下、１μｇ／ｍｌ以下または０．５μｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０を有する。一態様において、リガンド（ＨＬＡ）結合領域（例えば、ＨＬＡ結合ポケット）中でＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに、または少なくとも部分的にＫＩＲ３ＤＬ２タンパク質のＨＬＡ結合面上で結合する抗体が提供される。
【００４１】
一態様において、残基Ｉ６０および／もしくはＧ６２（配列番号１を参照）を含むエピトープに結合する抗体、ならびに／または残基Ｉ６０および／もしくはＧ６２における突然変異（配列番号１を参照、例えば、Ｉ６０Ｎ、Ｇ６２Ｓ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する抗体が提供される。一態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｒ１３、Ａ２５および／もしくはＱ２７を含むエピトープに結合し、ならびに／または残基Ｒ１３、Ａ２５および／もしくはＱ２７（配列番号１を参照）における突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する抗体が提供される。例えば、抗体は、突然変異Ｒ１３Ｗ、Ａ２５Ｔおよび／もしくはＱ２７Ｒを有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有し得る。任意選択的に、エピトープは、さらにまたは代替的に、残基Ｐ１４、Ｓ１５および／もしくはＨ２３（配列番号１を参照）の１つ以上を含み、ならびに／または抗体は、残基Ｐ１４、Ｓ１５および／もしくはＨ２３における突然変異（配列番号１を参照、例えば、Ｐ１４Ｓ、Ｓ１５Ａ、Ｈ２３Ｓ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低減した結合を有する。
【００４２】
他の態様において、本発明は、そのような薬剤および担体を含む医薬組成物、ならびに例えば、細胞毒性または検出可能な薬剤にコンジュゲートしているそのような薬剤を含むコンジュゲートを提供する。他の態様において、本発明は、そのような薬剤をコードする核酸およびベクター、ならびにそのような核酸および／またはベクターを含有する宿主細胞を提供する。核酸が産生されるようにそのような宿主細胞を培養することにより薬剤を産生する組換え法も提供される。他の態様において、本発明は、そのような薬剤を含む容器および患者中の障害、例えば、癌または自己免疫疾患を治療するように使用者に指示する説明書を含む製品を提供する。任意選択的に、物品は、別の薬剤を含有する別の容器を含み得、説明書は、薬剤との組合せの抗体により障害を治療するように使用者に指示する。本発明は、患者中の障害、例えば、癌、炎症障害または自己免疫障害の治療において本発明の薬剤を、任意選択的に、別の抗癌または抗炎症剤と同時に使用する方法も提供する。
【００４３】
本発明のこれらおよび追加の有利な態様および特徴を本明細書の他の箇所でさらに記載することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】残基３８における軽鎖および残基３９における重鎖中にグルタミンが存在する場合、Ｈ結合がＶＨ＿Ｑ３９とＶＬ＿Ｑ３８との間に構築され得ることを示す抗体構造のモデリングを示し、これはそのような抗体のより大きい物理的安定性を説明し得る。
【図２】Ｒａｊｉ−ＫＩＲ３ＤＬ２（高濃度）５ＭによりＩＶ移植され、用量応答の抗体２Ｂ１２−Ｈ２Ｌ１によりＩＰ処理されたＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスの生存曲線をとともに示す（ｎ＝８／群）。処理は１日目から開始した。実験終了は５８日目であった。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
導入
本開示の抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞、特にＣＤ４＋、ＫＩＲ３ＤＬ２＋Ｔ細胞を、他の細胞、例えばＫＩＲ３ＤＬ１＋細胞（またはＫＩＲ３ＤＬ２＋ＫＩＲ３ＤＬ１＋細胞、ＫＩＲ３ＤＳ１＋細胞；またはＫＩＲ３ＤＳ１  ＫＩＲ３ＤＬ２＋細胞）を標的化せずに直接および特異的に標的化し得、ＫＩＲ３ＤＬ２＋細胞中に内在化しない。ＫＩＲ３ＤＬ２の天然リガンドの結合（またはリガンド誘導ＫＩＲ３ＤＬ２シグナリング）を阻害する抗体も提供される。本開示は、そのような特性を有し、配列番号１の成熟ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドのアミノ酸残基１〜９８により定義されるドメイン０を含むＫＩＲ３ＤＬ２＋の領域への結合について互いに競合する抗体を提供する。
【００４６】
ＫＩＲ３ＤＬ２（ＣＤ１５８ｋ）は、開示が参照により本明細書に組み込まれるＰｅｎｄｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：５０５−５１８に記載の約１４０ｋＤの３Ｉｇドメイン分子のジスルフィド結合ホモダイマーである。ＫＩＲ３ＤＬ１（ＣＤ１５８ｅ１）は、Ｃｏｌｏｎｎａ  ａｎｄ  Ｓａｍａｒｉｄｉｓ（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６８（５２０９），４０５−４０８に記載の約７０ｋＤのモノマー分子であり；ＨＬＡ結合ポケットは、Ｖｉｖｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  ４７９：４０１−４０５に記載されている。ＫＩＲ３ＤＬ２の天然リガンドとしては、とりわけ、ＨＬＡ−ＡおよびＨＬＡ−Ｂポリペプチド、特にＨＬＡ−Ａ３およびＨＬＡ−Ａ１１（Ｈａｎｓａｓｕｔａ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４：１６７３−１６７９参照ならびにＨＬＡ−Ｂ２７が挙げられる。ＨＬＡ−Ｂ２７（例えば、ＨＬＡ−Ｂ２７遺伝子の組織化、配列および発現については、Ｗｅｉｓｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ  １７０（５）：３６７−３８０参照、ならびにＨＬＡ−Ｂ２７マルチマーおよびＨＬＡ−Ｂ２７２ホモダイマーについては、Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：５０４５−５０４８およびＫｏｌｌｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２００７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７：１３１３−１３２２参照。本明細書において使用される「ＫＩＲ３Ｄ」は、個々にまたは集合的に任意のＫＩＲ３Ｄ受容体（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＳ１）を指し、用語「ＫＩＲ３Ｄ」は、用語「ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２および／またはＫＩＲ３ＤＳ１」により代用することができる。同様に、「ＫＩＲ３ＤＬ」は、個々にまたは集合的に任意のＫＩＲ３ＤＬ受容体（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２）を指し、用語「ＫＩＲ３ＤＬ」は、用語「ＫＩＲ３ＤＬ１および／またはＫＩＲ３ＤＬ２」により代用することができる。用語「ＫＩＲ３Ｄ」、「ＫＩＲ３ＤＬ」、「ＫＩＲ３ＤＬ１」、「ＫＩＲ３ＤＬ２」、「ＫＩＲ３ＤＳ１」は、それぞれ、それらが指すＫＩＲ３Ｄ遺伝子またはコードされるタンパク質の任意のバリアント、誘導体、またはアイソフォームをさらに含む。いくつかのアレルバリアントが、ＫＩＲ３Ｄポリペプチド（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２）について報告されており、それらのそれぞれはそれぞれの用語により包含される。成熟ヒトＫＩＲ３ＤＬ２（アレル＊００２）のアミノ酸配列は、配列番号１に示され、２１アミノ酸残基リーダー配列が省略されたＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＡＢ５２５２０に対応し、ＩＰＤ  ＫＩＲデータベース（ＥＭＢＬ−ＥＢＩ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍにより公開）アクセッション番号ＫＩＲ０００６６に対応する。
【化１】
0006722110.tif 000002
【００４７】
ＫＩＲ３ＤＬ２（アレル＊００２）のｃＤＮＡは、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｕ３０２７２に示される。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００２の前駆体アミノ酸配列（リーダー配列を含む）は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＡＢ５２５２０に示される。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００１のアミノ酸配列は、ＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ０００６５に示される。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００３のアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＡＢ３６５９３およびＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ０００６７に示される。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００４のアミノ酸配列は、ＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ０００６８に示される。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００５のアミノ酸配列は、ＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ０００６９に示される。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００６（成熟）のアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＡＫ３００５３およびＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ０００７０に示される。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００７（成熟）のアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＡＫ３００５２およびＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ０００７１に示される。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００８のアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＡＫ３００５４およびＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ０００７２に示される。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊００９のアミノ酸配列は、ＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ００４５７に示される。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２アレル＊０１１のアミノ酸配列は、ＩＰＤ  ＫＩＲデータベースアクセッション番号ＫＩＲ００５４４に示される。ＫＩＲ３ＤＬ１（ＣＤ１５８ｅ２）ポリペプチド（アレル＊００１０１）をコードするｃＤＮＡは、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｌ４１２６９に示され；コードされるアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＡＡ６９８７０に示される。リーダー配列が、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド配列を記載する特定の配列番号中に存在する場合、本明細書のアミノ酸残基位置への任意の参照は、成熟ＫＩＲ３ＤＬポリペプチドに対するものである。上記アクセッション番号を有するデータベース記録のそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。
【００４８】
抗原結合化合物を使用する方法；例えば、細胞増殖または活性を阻害する方法、分子を細胞中に（例えば、毒性分子、検出可能マーカーなど）送達する方法、細胞を標的化、同定または精製する方法、細胞を枯渇させ、殺滅し、または排除する方法、細胞増殖を低減させる方法であって、細胞、例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを発現するＴ細胞を、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する本開示の抗原結合化合物に曝露することを含む方法が提供される。本開示の目的のため、「細胞増殖」は、細胞の成長または増殖の任意の局面、例えば、細胞成長、細胞分裂、または細胞周期の任意の局面を指し得ることが認識される。細胞は、細胞培養物（インビトロ）または哺乳動物（インビボ）、例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２発現病変を罹患する哺乳動物中に存在し得る。ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを発現する細胞の死滅を誘導し、またはその細胞の増殖もしくは活性を阻害する方法であって、細胞を、細胞の死滅を誘導し、および／または細胞の増殖もしくは活性を阻害するために有効な量の毒性剤に結合しているＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗原結合化合物に曝露させることを含む方法も提供される。したがって、増殖疾患、およびＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを発現する細胞の病原性増殖または活性化により特徴づけられる任意の病態を罹患する哺乳動物を治療する方法であって、医薬有効量の本明細書に開示の抗原結合化合物を哺乳動物に投与することを含む方法が提供される。そのような病態の例としては、セザリー症候群、菌状息肉症、ＣＴＣＬ、末梢Ｔ細胞リンパ腫、標準内臓（ｏｒｔｈｏ  ｖｉｓｃｅｒａｌ）節外性ＰＴＣＬ（例えば、ＮＫ／Ｔリンパ腫または腸管症関連Ｔ細胞リンパ腫（ＥＡＴＬ））、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、ＰＴＣＬ−ＮＯＳ（未特定型）および自己免疫または炎症病態、例えば関節炎、強直性脊椎炎、心血管疾患が挙げられる。
【００４９】
ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の排除が有用である障害（例えば、癌、炎症および自己免疫障害）の治療に好適な抗体および他の化合物を産生および使用する方法が提供される。抗体、抗体誘導体、抗体断片、およびそれらを産生する細胞は、それを産生する方法ならびに抗体および化合物を使用して患者を治療する方法と同様に包含される。
【００５０】
本抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２に特異的であるため、それらは、一連の目的、例として、ＫＩＲ３ＤＬ２またはＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の精製、ＫＩＲ３ＤＬ２受容体のインビトロ、エクスビボもしくはインビボでのモジュレーション（例えば、活性化または阻害）、インビボでの破壊のためのＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の標的化、またはＫＩＲ３ＤＬ２のインビボ、エクスビボもしくはインビトロでの特異的標識／結合に、例として、イムノブロッティング、ＩＨＣ分析、すなわち、凍結生検物に対する分析、ＦＡＣＳ分析および免疫沈降などの方法に使用することができる。
【００５１】
定義
本明細書において使用される「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」は、１つ以上を意味し得る。特許請求の範囲において使用され、語「含む」とともに使用される場合、語「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」は、１つまたは２つ以上を意味し得る。本明細書において使用される「別の」は、少なくとも第２以上を意味し得る。
【００５２】
「含む」が使用される場合、これは、任意選択的に、「〜から本質的になる」または「〜からなる」により置き換えることができる。
【００５３】
本明細書において使用される用語「癌」および「腫瘍」は、制御不能および進行性の増殖を含む細胞または組織の新たな成長と定義される。具体的な実施形態において、自然経過時に癌は致命的である。具体的な実施形態において、癌は侵襲性、転移性、および／または未分化（分化ならびに互いおよびそれらの軸のフレームワークへの配向の損失）である。
【００５４】
「自己免疫」障害としては、自己を非自己またはその他から区別する能力の破壊に起因して免疫系が自己細胞または組織に対する反応を開始する任意の障害、病態、または疾患が挙げられる。自己免疫障害の例としては、関節リウマチ、リウマチ性血管炎、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、ウェゲナー肉芽腫症、脊椎関節炎などが挙げられる。「炎症障害」としては、不所望な免疫応答により特徴づけられる任意の障害が挙げられる。自己免疫および炎症障害は、免疫系の任意の構成要素が関与し得、体内の任意の細胞または組織型を標的化し得る。
【００５５】
本明細書において使用される用語「抗体」は、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体を指す。重鎖中の定常ドメインのタイプに応じて、抗体は、５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭの１つに割り当てられる。これらのいくつかは、サブクラスまたはアイソタイプ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４などにさらに分類される。例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、テトラマーを含む。それぞれのテトラマーは、２つの同一のポリペプチド鎖ペアから構成され、それぞれのペアは、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。それぞれの鎖のＮ末端は、主として抗原認識を担う約１００〜１１０以上のアミノ酸からなる可変領域を定義する。可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）という用語はそれぞれ、これらの軽鎖および重鎖を指す。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれ、「アルファ」、「デルタ」、「イプシロン」、「ガンマ」および「ミュー」と称される。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元立体構造は周知である。ＩｇＧおよび／またはＩｇＭは、それらが生理学的状況における最も一般的な抗体であるため、およびそれらが研究室の環境において最も容易に作製されるため、本明細書において用いられる好ましいクラスの抗体であり、ＩｇＧが特に好ましい。好ましくは、抗体は、モノクローナル抗体である。ヒト化、キメラ、ヒト、またはそれ以外ではヒトに好適な抗体が特に好ましい。「抗体」として、本明細書に記載の抗体のいずれかの任意の断片または誘導体も挙げられる。
【００５６】
用語「〜に特異的に結合する」は、抗体が、好ましくは、競合結合アッセイにおいて、タンパク質の組換え形態、その中のエピトープ、または単離標的細胞の表面上に存在する天然タンパク質のいずれかを使用して評価される場合、結合パートナー、例えばＫＩＲ３ＤＬ２に結合し得ることを意味する。競合結合アッセイおよび特異的結合を決定する他の方法は、下記にさらに記載され、当技術分野において周知である。
【００５７】
抗体が特定のモノクローナル抗体（例えば、２Ｂ１２、１０Ｇ５）「〜と競合する」と言われる場合、それは、その抗体が、組換えＫＩＲ３ＤＬ２分子または表面発現ＫＩＲ３ＤＬ２分子のいずれかを使用する結合アッセイにおいてそのモノクローナル抗体と競合することを意味する。例えば、試験抗体が、結合アッセイにおいてＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドまたはＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞への２Ｂ１２または１０Ｇ５の結合を低減させる場合、その抗体は、２Ｂ１２または１０Ｇ５とそれぞれ「競合する」と言われる。
【００５８】
本明細書において使用される用語「親和性」は、抗体のエピトープへの結合強度を意味する。抗体の親和性は、［Ａｂ］×［Ａｇ］／［Ａｂ−Ａｇ］（式中、［Ａｂ−Ａｇ］は抗体−抗原複合体のモル濃度であり、［Ａｂ］は未結合抗体のモル濃度であり、［Ａｇ］は未結合抗原のモル濃度である）として定義される解離定数Ｋｄにより与えられる。親和性定数Ｋａは、１／Ｋｄにより定義される。ｍＡｂの親和性を測定する方法の例は、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８）、Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２、１９９３）、およびＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９−６０１（１９８３）に見出すことができ、その参照文献は参照により全体として本明細書に組み込まれる。ｍＡｂの親和性を測定する当技術分野において周知の１つの標準的方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）スクリーニング（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）ＳＰＲ分析装置による分析によるもの）の使用である。
【００５９】
本明細書で使用される「決定基」は、ポリペプチド上での相互作用または結合の部位を指定する。
【００６０】
用語「エピトープ」は、抗原決定基を指し、抗体が結合する抗原上の区域または領域である。タンパク質エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基、および特異的抗原結合抗体またはペプチドにより有効に遮断されるアミノ酸残基、すなわち抗体の「フットプリント」内のアミノ酸残基を含み得る。それは、例えば、抗体または受容体と結合し得る複合抗原分子上の最も単純な形態または最小の構造区域である。エピトープは、直鎖または立体構造的／構造的であり得る。用語「直鎖エピトープ」は、アミノ酸の直鎖配列（一次構造）上で連続するアミノ酸残基から構成されるエピトープとして定義される。用語「立体構造的または構造的エピトープ」は、全てが連続しておらず、したがって、分子のフォールディング（二次、三次および／または四次構造）により互いに近接されるアミノ酸の直鎖配列の分離部分を表すアミノ酸残基から構成されるエピトープとして定義される。立体構造的エピトープは、三次元構造に依存する。したがって、用語「立体構造的」は、「構造的」と交換可能に使用されることが多い。
【００６１】
用語「細胞内内在化」または「内在化」は、そのように結合するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドおよび／または抗体を指す場合、細胞の細胞外表面から細胞の細胞内表面に分子をトランスロケートするプロセスと関連する分子、生化学物質および細胞イベントを指す。分子の細胞内内在化を担うプロセスは周知であり、とりわけ、細胞外分子（例えば、ホルモン、抗体、および有機小分子）；膜会合分子（例えば、細胞表面受容体）；および細胞外分子に結合している膜会合分子の複合体（例えば、膜貫通受容体に結合しているリガンドまたは膜会合分子に結合している抗体）の内在化を含み得る。したがって、「細胞内内在化を誘導し、および／または増加させる」は、細胞内内在化を開始させ、ならびに／または細胞内内在化の速度および／もしくは程度を増加させるイベントを含む。
【００６２】
ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞に関する用語「枯渇」は、殺滅し、排除し、溶解させ、またはそのような殺滅、排除もしくは溶解を誘導して試料または対象中に存在するＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の数を減らすように影響し得るプロセス、方法、または化合物を意味する。
【００６３】
用語「薬剤」は、本明細書において、化合物、化合物の混合物、生物学的巨大分子、または生物学的材料から作製された抽出物を示すために使用される。用語「治療剤」は、生物学的活性を有する薬剤を指す。
【００６４】
用語「毒性剤」および「細胞毒性剤」は、細胞の増殖を遅延、停止、もしくは反転させ、細胞の活性を任意の検出可能な手法で減少させ、または細胞を直接もしくは間接的に殺滅し得る任意の化合物を包含する。好ましくは、細胞毒性剤は、主として細胞の機能を直接干渉することにより細胞死を引き起こし、それとしては、限定されるものではないが、アルキル化剤、腫瘍壊死因子阻害剤、インターカレーター、微小管阻害剤、キナーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害剤およびトポイソメラーゼ阻害剤が挙げられる。本明細書において使用される「毒性ペイロード」は、細胞に送達された場合に細胞死をもたらす十分量の毒性剤を指す。毒性ペイロードの送達は、抗体または抗原結合断片および毒性剤を含む十分量のイムノコンジュゲートの投与により達成することができる。毒性ペイロードの送達は、抗体または抗原結合断片を認識し、それに結合する二次抗体またはその抗原結合断片を含む細胞毒性剤を含む十分量のイムノコンジュゲートの投与により達成することもできる。
【００６５】
本明細書の目的のため、「ヒト化」または「ヒト」抗体は、１つ以上のヒト免疫グロブリンに由来する定常および可変フレームワーク領域が、動物免疫グロブリンの結合領域、例えばＣＤＲと融合している抗体を指す。このような抗体は、結合領域が由来する非ヒト抗体の結合特異性を維持するが、非ヒト抗体に対する免疫反応を回避するように設計される。このような抗体は、結合領域が由来する非ヒト抗体の結合特異性を維持するが、非ヒト抗体に対する免疫反応を回避するように設計される。そのような抗体は、抗原チャレンジに応答して特異的ヒト抗体を産生するように「遺伝子操作」されたトランスジェニックマウスまたは他の動物から得ることができる（例えば、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ  ７：１３；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６；Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎ  ６：５７９参照、それらの全教示は参照により本明細書に組み込まれる）。完全ヒト抗体は、遺伝子または染色体形質移入（ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）法、およびファージディスプレイ技術により構築することもでき、それらは全て当技術分野において公知である（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３参照）。ヒト抗体は、インビトロで活性化されたＢ細胞により生成することもできる（例えば、米国特許第５，５６７，６１０号明細書および同第５，２２９，２７５号明細書参照、それらは参照により全体として組み込まれる）。
【００６６】
「キメラ抗体」は、（ａ）抗原結合部位（可変領域）が異なるもしくは変更されたクラス、エフェクター機能および／もしくは種の定常領域、もしくはキメラ抗体に新しい特性を付与する完全に異なる分子、例えば、酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物などに結合するように定常領域もしくはその一部が変更、置換、もしくは交換されている抗体分子；または（ｂ）可変領域、もしくはその一部が異なるもしくは変更された抗原特異性を有する可変領域により変更、置換、もしくは交換されている抗体分子である。
【００６７】
用語「Ｆｃドメイン」、「Ｆｃ部分」および「Ｆｃ領域」は、抗体重鎖、例えば、約アミノ酸（ａａ）２３０〜約ａａ４５０のヒトγ（ガンマ）重鎖、または他のタイプの抗体重鎖（例えば、ヒト抗体についてのα、δ、εおよびμ）におけるその相当配列、またはその天然存在アロタイプのＣ末端断片を指す。
【００６８】
用語「抗体依存性細胞媒介細胞毒性」または「ＡＤＣＣ」は、当技術分野において十分理解されている用語であり、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞毒性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応を指す。ＡＤＣＣを媒介する非特異的細胞毒性細胞としては、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、単球、好中球、および好酸球が挙げられる。
【００６９】
用語「単離された」、「精製された」または「生物学的に純粋な」は、通常、天然状態で見出される場合に材料に付随する構成要素を実質的にも本質的にも有さない材料を指す。純度および等質性は、典型的には、分析化学技術、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーを使用して決定される。調製物中に存在する優勢種であるタンパク質は、実質的に精製される。
【００７０】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書において交換可能に使用される。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然存在アミノ酸の人工的な化学的模倣体である場合のアミノ酸ポリマー、ならびに天然存在アミノ酸ポリマーおよび非天然存在アミノ酸ポリマーに適用される。
【００７１】
用語「組換え体」は、例えば、細胞、または核酸、タンパク質、またはベクターに関して使用される場合、細胞、核酸、タンパク質またはベクターが、異種核酸もしくはタンパク質の導入もしくは天然核酸もしくはタンパク質の変更により改変されていること、または細胞がそのように改変された細胞に由来することを示す。したがって、例えば、組換え細胞は、天然（非組換え）形態の細胞内で見出されない遺伝子を発現し、または他に異常発現されるか、過少に発現されるか、もしくは全く発現されない天然遺伝子を発現する。
【００７２】
用語「改変」は、アミノ酸の配列を指す場合（例えば、「アミノ酸改変」）、ポリペプチド配列中のアミノ酸置換、挿入、および／または欠失を意味する。「改変」または「アミノ酸改変」は、ポリペプチド配列中のアミノ酸置換、挿入、および／または欠失を意味する。本明細書の「アミノ酸置換」または「置換」は、タンパク質配列中の所与の位置におけるアミノ酸の、別のアミノ酸による置き換えを意味する。例えば、置換Ｐ１４Ｓは、１４位におけるプロリンがセリンにより置き換えられている親ポリペプチドのバリアントを指す。ポリペプチドの「バリアント」は、参照ポリペプチド、典型的には、天然または「親」ポリペプチドと実質的に同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す。ポリペプチドバリアントは、天然アミノ酸配列内のある位置における１つ以上のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有し得る。
【００７３】
本明細書において使用される、ポリペプチドまたはエピトープに「結合する」抗体という用語は、特異性および／または親和性を示して前記決定基に結合する抗体を示す。
【００７４】
用語「同一性」または「同一である」は、２つ以上のポリペプチドの配列間の関係において使用される場合、２つ以上のアミノ酸残基の文字列間でのマッチの数によって決定された、ポリペプチド間の配列の関連性の程度を示す。「同一性」は、特定の数学モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち、「アルゴリズム」）により対処されるギャップアラインメント（存在する場合）を有する２つ以上の配列の小さい方の間での同一のマッチのパーセントの尺度である。関連するポリペプチドの同一性は、公知の方法により容易に計算することができる。このような方法としては、限定されるものではないが、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１；およびＣａｒｉｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．４８，１０７３（１９８８）に記載のものが挙げられる。
【００７５】
同一性を決定するための好ましい方法は、試験される配列間で最大マッチを与えるように設計される。同一性を決定するための方法は、公的に利用可能なコンピュータプログラムにおいて記述されている。２つの配列間の同一性を判定するための好ましいコンピュータプログラムの方法としては、ＧＣＧプログラムパッケージ、例としてＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１２，３８７（１９８４）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３−４１０（１９９０））が挙げられる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）および他のソース（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．、前掲）から公的に利用可能である。周知のＳｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを使用して同一性を決定することもできる。
【００７６】
抗体およびエピトープ
本発明は、部分的には、得られる抗ＫＩＲ３ＤＬ２可変領域がヒトＫＩＲ３ＤＬ２のＤ０ドメインに結合する能力を保持するように抗体ＣＤＲを取り込むことができる改変ヒトアクセプターフレームワーク配列の発見をベースとする。
【００７７】
このようなヒト化可変領域およびそれらを含有する抗体は、残基Ｉ６０および／またはＧ６２を含むＫＩＲ３ＤＬ２（配列番号１）のセグメントに結合し得る。任意選択的に、抗体は、残基Ｉ６０および／またはＧ６２の１つ以上を含むが、残基Ｒ１３、Ａ２５、および／またはＱ２７を含まないエピトープに結合する。任意選択的に、抗体は、残基Ｉ６０および／またはＧ６２の１つ以上ならびに残基Ｐ１４、Ｓ１５および／またはＨ２３の１つ以上を含むエピトープに結合する。
【００７８】
特に記載のない限り、免疫グロブリンについてのＡｂｎｕｍアミノ酸ナンバリング命名が、本開示全体を通して使用される（Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ，（２００８）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４５：３８３２−３８３９参照、その開示は参照により本明細書に組み込まれる）。Ａｂｎｕｍ系を使用する配列ナンバリングは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆｏ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ａｂｎｕｍにおいて自動的に生成することもできる。しかしながら、当業者は、代替的なナンバリング系を使用し、Ａｂｎｕｍナンバリングに対応する位置を同定することができることが認識される。それぞれの重鎖および軽鎖中の残基３８および３９について、Ａｂｎｕｍ位置は、Ｋａｂａｔナンバリング系（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）における同一位置に対応する。
【００７９】
抗体がＶＬドメイン配列中の残基３８におけるグルタミンを含む場合、好ましいヒトＶＨアクセプターフレームワークは、ＶＨドメイン配列中の残基３９におけるグルタミンを含む。
【００８０】
一実施形態において、ヒト化抗体は、ＪＨ６と一緒にヒトサブグループＶＨ１からの重鎖フレームワークを含み、任意選択的に、抗体は、ＩＧＨＪ６＊０１と一緒にＩＧＨＶ１−４６＊０３を含む。一実施形態において、ヒト化抗体は、ヒトサブグループＶＫ１からの軽鎖フレームワーク、任意選択的に、ＩＧＫＶ１−ＮＬ１＊０１を含む。
【００８１】
一実施形態において、ヒト化抗体は、ＪＨ６と一緒にヒトサブグループＶＨ１および／ＶＨ７からの重鎖フレームワークを含み、任意選択的に、抗体は、ＩＧＨＪ６＊０１と一緒にＩＧＨＶ７−４−１＊０２およびＩＧＨＶ１−ｃ＊０１を含む。一実施形態において、ヒト化抗体は、ＪＨ４、任意選択的に、ＩＧＫＪ４＊０１と一緒にヒトサブグループＶＫ１およびＶＫ４からの軽鎖フレームワーク、任意選択的に、ＩＧＫＶ４−１＊０１およびＩＧＫＶ１−３９＊０１を含む。
【００８２】
ヒト化抗体は、例えば、ヒト化抗体の親和性、安定性、または他の特性を向上させるためのヒトフレームワーク配列中の１つ以上の復帰突然変異をさらに含み得る。
【００８３】
別の態様において、２Ｂ１２または１０Ｇ５のヒト化バージョンである特定のヒト化抗体が提供される。このような抗体は、典型的には、ヒトフレームワーク配列中の２Ｂ１２または１０Ｇ５  ＣＤＲからのキーアミノ酸残基を含むことにより特徴づけられる。
【００８４】
抗体１０Ｇ５
抗体１０Ｇ５のヒト化ＶＨおよびＶＬアミノ酸配列の例は、配列番号１３〜１７および８〜１２にそれぞれ示される。一態様において、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する単離ヒト化抗体であって、配列番号２に記載のアミノ酸配列ＳＹＴＭＨ、またはその少なくとも３または４つのアミノ酸の配列を含むＨＣＤＲ１領域；配列番号３に記載のアミノ酸配列ＹＩＮＰＳＳＧＹＴＥＮＮＲＫＦ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９または１０の連続アミノ酸の配列を含むＨＣＤＲ２領域；配列番号４に記載のアミノ酸配列ＬＧＫＧＬＬＰＰＦＤＹ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９または１０の連続アミノ酸の配列を含むＨＣＤＲ３領域；配列番号５に記載のアミノ酸配列ＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９または１０の連続アミノ酸の配列を含むＬＣＤＲ１領域；配列番号６に記載のアミノ酸配列ＡＡＴＮＬＡＤ、またはその少なくとも３、４または５つの連続アミノ酸の配列を含むＬＣＤＲ２領域；配列番号７に記載のアミノ酸配列ＱＨＦＷＧＴＰＹＴ、またはその少なくとも５、６、７、または８つの連続アミノ酸の配列を含むＬＣＤＲ３領域を含む抗体が提供される。
【００８５】
一態様において、本発明は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する単離ヒト化１０Ｇ５抗体であって、
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；
（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；
（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；
（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；および
（ｇ）ヒトフレームワーク配列
を含む抗体を提供する。
【００８６】
一実施形態において、ヒト化抗体は、ＪＨ６と一緒にヒトサブグループＶＨ１からの重鎖フレームワークを含み、任意選択的に、抗体は、ＩＧＨＪ６＊０１と一緒にＩＧＨＶ１−４６＊０３を含む。一実施形態において、ヒト化抗体は、ヒトサブグループＶＫ１からの軽鎖フレームワーク、任意選択的に、ＩＧＫＶ１−ＮＬ１＊０１を含む。
【００８７】
任意選択的に、ヒトフレームワークは、１つ以上の突然変異、例えば、復帰突然変異を含む。実施例１は、フレームワークの同定および１０Ｇ５可変領域についての復帰突然変異を示す。キメラ１０Ｇ５と比較して、これらの試験突然変異体は、アッセイにおいて使用される２つのｍＡｂ濃度において同等の結合プロファイルを示した。したがって、本発明の実施形態は、Ａｂｎｕｍナンバリングを使用する以下の残基のいずれか１つ以上（または任意の組合せ）における復帰突然変異を有する復帰突然変異された１０Ｇ５重鎖バリアントを含む：
１０Ｇ５  ＶＨ：５、１１、１２、１３、２０、３８、４０、４８、６６、６７、６９、７１、７２ａ、７５。
【００８８】
したがって、本発明のさらなる実施形態は、以下の残基のいずれか１つ以上（または任意の組合せ）における復帰突然変異を有する復帰突然変異された１０Ｇ５軽鎖バリアントを含む：
１０Ｇ５  ＶＬ：１７、１８、４０、４５、４８、７０、７６、１００。
【００８９】
ヒト化抗体は、ヒト化抗体の親和性、安定性、または他の特性を向上させるためのヒトフレームワーク配列中の１つ以上の追加の突然変異（例えば、復帰突然変異）をさらに含み得る。
【００９０】
一態様において、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する単離ヒト化１０Ｇ５抗体であって、
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；
（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；
（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；
（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；および
（ｇ）ヒトフレームワーク配列
を含み、グルタミン（Ｑ）残基がＶＨドメインの３９位およびＶＬドメインの３８位に存在する抗体が提供される。任意選択的に、ヒトフレームワーク配列は、１つ以上の復帰突然変異をさらに含む。
【００９１】
３９位におけるグルタミン（Ｑ）残基は、ヒトＶＨフレームワーク配列中に天然に存在し得、またはアミノ酸置換もしくは配列の他の改変により導入することができる。
【００９２】
別の態様において、本発明は、配列番号１３〜１７の１０Ｇ５のＶＨドメインと少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％以上の同一性）を有するＶＨドメインを含むヒト化抗体を提供する。別の特定の態様において、本発明は、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合するヒト化抗体であって、（ａ）ヒトＶＨドメイン中に取り込まれる非ヒトＣＤＲ残基を含むＶＨドメイン（ＶＨドメインは、配列番号１３〜１７のヒト化１０Ｇ５ＶＨと少なくとも約８０％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％）同一である）、および（ｂ）（ａ）ヒトＶＬドメイン中に取り込まれる非ヒトＣＤＲ残基を含むＶＬドメイン（ＶＬドメインは、配列番号８〜１２のヒト化１０Ｇ５ＶＬと少なくとも約８０％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％）同一である）を含む抗体を提供する。
【００９３】
抗体２Ｂ１２
抗体２Ｂ１２のヒト化ＶＨおよびＶＬアミノ酸配列の例は、配列番号２４〜２８および２９〜３３にそれぞれ示される。一態様において、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する単離ヒト化抗体であって、配列番号１８に記載のアミノ酸配列ＴＡＧＭＱ、またはその少なくとも３もしくは４つの連続アミノ酸の配列を含むＨＣＤＲ１領域；配列番号１９に記載のアミノ酸配列ＷＩＮＳＨＳＧＶＰＫＹＡＥＤＦＫ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９または１０の連続アミノ酸の配列を含むＨＣＤＲ２領域；配列番号２０に記載のアミノ酸配列ＧＧＤＥＧＶＭＤＹ、またはその少なくとも５、６、７、または８つの連続アミノ酸の配列を含むＨＣＤＲ３領域；配列番号２１に記載のアミノ酸配列ＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９または１０の連続アミノ酸の配列を含むＬＣＤＲ１領域；配列番号２２に記載のアミノ酸配列ＷＴＳＴＲＨＴ、またはその少なくとも３、４または５つの連続アミノ酸の配列を含むＬＣＤＲ２領域；および／または配列番号２３に記載のアミノ酸配列ＱＱＨＹＳＴＰＷＴ、またはその少なくとも４、５、６、７、または８つの連続アミノ酸の配列を含むＬＣＤＲ３領域を含む抗体が提供される。
【００９４】
本明細書の実施形態のいずれかにおいて、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、２および３のいずれかは、少なくとも４、５、６、７、８、９または１０の連続アミノ酸の配列により、および／または対応する配列番号に列記される特定のＣＤＲもしくはＣＤＲのセットと少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％または９５％の配列同一性を共有するアミノ酸配列を有するとして特徴づけることができる。
【００９５】
一態様において、本発明は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する単離ヒト化２Ｂ１２抗体であって、
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；
（ｄ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；
（ｅ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；
（ｆ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；および
（ｇ）ヒトフレームワーク配列
を含む抗体を提供する。
【００９６】
一実施形態において、ヒト化抗体は、ＪＨ６と一緒にヒトサブグループＶＨ１および／またはＶＨ７からの重鎖フレームワークを含み、任意選択的に、抗体は、ＩＧＨＪ６＊０１と一緒にＩＧＨＶ７−４−１＊０２および／またはＩＧＨＶ１−ｃ＊０１を含む。一実施形態において、ヒト化抗体は、ＪＨ４、任意選択的に、ＩＧＫＪ４＊０１と一緒にヒトサブグループＶＫ１および／またはＶＫ４からの軽鎖フレームワーク、任意選択的に、ＩＧＫＶ４−１＊０１および／またはＩＧＫＶ１−３９＊０１を含む。
【００９７】
任意選択的に、ヒトフレームワークは、１つ以上の突然変異、例えば、復帰突然変異を含む。実施例１は、フレームワークの同定および２Ｂ１２可変領域中の復帰突然変異を示す。キメラ２Ｂ１２と比較して、これらの試験突然変異体は、アッセイにおいて使用される２つのｍＡｂ濃度において同等の結合プロファイルを示した。したがって、本発明の実施形態は、Ａｂｎｕｍナンバリングを使用する以下の残基のいずれか１つ以上（または任意の組合せ）における復帰突然変異を有する復帰突然変異された２Ｂ１２重鎖バリアントを含む：
２Ｂ１２  ＶＨ：２、３８、３９、４０、４３、４８、６８、７２ｃ、９１、１０８。
【００９８】
したがって、本発明のさらなる実施形態は、以下の残基のいずれか１つ以上（または任意の組合せ）における復帰突然変異を有する復帰突然変異された２Ｂ１２軽鎖バリアントを含む：
２Ｂ１２  ＶＬ：３、８、９、２１、４３、７１、７８、１０４。
【００９９】
ヒト化抗体は、例えば、ヒト化抗体の親和性、安定性、または他の特性を向上させるためのヒトフレームワーク配列中の１つ以上の追加の突然変異（例えば、復帰突然変異）をさらに含み得る。
【０１００】
一態様において、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する単離ヒト化２Ｂ１２抗体であって、
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；
（ｄ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；
（ｅ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；
（ｆ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；および
（ｇ）ヒトフレームワーク配列
を含み、グルタミン（Ｑ）残基がＶＨドメインの３９位およびＶＬドメインの３８位において存在する抗体が提供される。任意選択的に、ヒトフレームワーク配列は、１つ以上の復帰突然変異をさらに含む。
【０１０１】
別の態様において、本発明は、２Ｂ１２または配列番号２９〜３３のヒト化２Ｂ１２のＶＨドメインと少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％以上の同一性）を有するＶＨドメインを含むヒト化抗体を提供する。別の特定の態様において、本発明は、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合するヒト化抗体であって、（ａ）ヒトＶＨドメイン中に取り込まれる非ヒトＣＤＲ残基を含むＶＨドメイン（ＶＨドメインは、配列番号２９〜３３のヒト化２Ｂ１２ＶＨと少なくとも約８０％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％）同一である）、および（ｂ）（ａ）ヒトＶＬドメイン中に取り込まれる非ヒトＣＤＲ残基を含むＶＬドメイン（ＶＬドメインは、配列番号２４〜２８のヒト化２Ｂ１２ＶＬと少なくとも約８０％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％）同一である）を含む抗体を提供する。
【０１０２】
３９位におけるグルタミン（Ｑ）残基は、ヒトＶＨフレームワーク配列中に天然に存在し得、またはアミノ酸置換もしくは配列の他の改変により導入することができる。
【０１０３】
１０Ｇ５または２Ｂ１２抗体は、ヒトＩｇＧ定常ドメイン（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４）をさらに含み得る。任意選択的に、定常ドメインは、Ｆｃ受容体結合を増加させるための改変を含むＩｇＧ１ドメインである。任意選択的に、定常ドメインは、Ｆｃ受容体結合を減少させるための改変を含むＩｇＧドメイン（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４）である。
【０１０４】
ヒト化抗体の組換え産生のため、ヒト化ＶＨおよびＶＬ領域、またはそのバリアントバージョンは、標準的な組換え法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９参照）によりヒト抗体からの全長またはトランケート定常領域をコードする発現ベクター中にクローニングすることができる。結果は、選択ＶＨおよびＶＬ領域ならびに定常領域を含む目的ヒト化抗体分子を発現および分泌する形質移入細胞系である。ヒト抗体の定常領域をコードするｃＤＮＡ配列が公知である。
【０１０５】
必要に応じて、ヒト化抗体のクラスは、公知の方法により「スイッチ」することもできる。クラススイッチング技術は、あるＩｇＧサブクラスを別のものに、例えば、ＩｇＧ１からＩｇＧ２に変換するために使用することができる。したがって、本発明の抗体のエフェクター機能は、例えば、種々の治療的使用のためにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４抗体へのアイソタイプスイッチングにより変化させることができる。
【０１０６】
ヒト化抗体の種々の形態（例えば、１０Ｇ５および２Ｂ１２）が企図される。例えば、ヒト化抗体は、抗体断片、例えば、Ｆａｂまたは本明細書に記載の他のタイプの断片であり得る。あるいは、ヒト化抗体は、全長またはインタクト抗体、例えば、全長またはインタクトＩｇＧ１またはＩｇＧ４抗体であり得る。定常領域は、公知の方法によりさらに改変することができる。例えば、ＩｇＧ４定常領域中で、残基Ｓ２４１は、ヒンジにおける完全なジスルフィド架橋形成を許容するようにプロリン（Ｐ）残基に突然変異させることができる（例えば、Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９３；３０：１０５−８参照）。
【０１０７】
一実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２遮断（例えば、そのＨＬＡリガンドによるＫＩＲ３ＤＬ２の結合の阻害）がＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の枯渇なし（例えば、ＣＤＣまたはＡＤＣＣを介して）で望まれる場合、ヒト化抗体は、全長ＩｇＧ４抗体またはその断片である。一実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の枯渇（例えば、ＣＤＣまたはＡＤＣＣを介して）が望まれる場合、ヒト化抗体は、全長ＩｇＧ１抗体またはＦｃ受容体（例えば、ＣＤ１６）に結合するＦｃ領域を含むその断片である。抗体は、例えば、Ｆｃ受容体結合を増加させるために改変を含むヒトＩｇＧ１定常ドメインをさらに含み得る。
【０１０８】
ＡＤＣＣおよびＣＤＣを誘導する抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体（特に、非内在化抗体）の能力の観点から、抗体は、エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞毒性、マスト細胞脱顆粒、および食作用、ならびに免疫調節シグナル、例えば、リンパ球増殖および抗体分泌の調節に影響を与え得るＦｃ受容体に結合するそれらの能力を増加させる改変により作製することもできる。典型的な改変は、少なくとも１つアミノ酸改変（例えば、置換、欠失、挿入）、および／または変更タイプのグリコシル化、例えば、低フコシル化を含む改変ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。このような改変は、Ｆｃ受容体との相互作用に影響を与え得：ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）は、活性化（すなわち、免疫系向上）受容体である一方、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）は、阻害（すなわち、免疫系減衰）受容体である。改変は、例えば、エフェクター（例えば、ＮＫ）細胞上のＦｃγＲＩＩＩａへのＦｃドメインの結合を増加させ得る。改変の例は、開示が参照により本明細書に組み込まれる、２０１３年９月１７日に出願されたＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９３０２号明細書に提供される。
【０１０９】
一部の実施形態において、バリアントＦｃ領域を含む抗体は、Ｆｃ領域中のＣＨ３ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９つ以上のアミノ酸改変を有する）を含む。他の実施形態において、バリアントＦｃ領域を含む抗体は、アミノ酸２３１〜３４１から伸長すると定義されるＦｃ領域のＣＨ２ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９つ以上のアミノ酸改変を有する）を含む。一部の実施形態において、抗体は、少なくとも２つのアミノ酸改変（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９つ以上のアミノ酸改変を有する）を含み、少なくとも１つのそのような改変は、ＣＨ３領域中に存在し、少なくとも１つのそのような改変は、ＣＨ２領域中に存在する。ヒンジ領域中のアミノ酸改変も包含される。一実施形態において、アミノ酸２１６〜２３０から伸長するとして定義されるＦｃ領域のＣＨ１ドメイン中のアミノ酸改変が包含される。Ｆｃ改変の任意の組合せ、例えば、米国特許第７，６３２，４９７号明細書；同第７，５２１，５４２号明細書；同第７，４２５，６１９号明細書；同第７，４１６，７２７号明細書；同第７，３７１，８２６号明細書；同第７，３５５，００８号明細書；同第７，３３５，７４２号明細書；同第７，３３２，５８１号明細書；同第７，１８３，３８７号明細書；同第７，１２２，６３７号明細書；同第６，８２１，５０５号明細書および同第６，７３７，０５６号明細書；ＰＣＴ出願公開の国際公開第２０１１／１０９４００号パンフレット；国際公開第２００８／１０５８８６号パンフレット；国際公開第２００８／００２９３３号パンフレット；国際公開第２００７／０２１８４１号パンフレット；国際公開第２００７／１０６７０７号パンフレット；国際公開第０６／０８８４９４号パンフレット；国際公開第０５／１１５４５２号パンフレット；国際公開第０５／１１０４７４号パンフレット；国際公開第０４／１０３２２６９号パンフレット；国際公開第００／４２０７２号パンフレット；国際公開第０６／０８８４９４号パンフレット；国際公開第０７／０２４２４９号パンフレット；国際公開第０５／０４７３２７号パンフレット；国際公開第０４／０９９２４９号パンフレットおよび国際公開第０４／０６３３５１号パンフレット；ならびにＬａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０３（１１）：４０５−４１０；Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３０（４）：４８７−４９０；Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６；２７７（３０）：２６７３３−２６７４０およびＳｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１−６６０４）に開示の異なる改変の任意の組合せを作製することができる。
【０１１０】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、バリアントＦｃ領域を含み得、バリアントＦｃ領域は、分子が野生型Ｆｃ領域を含む分子に対して向上したエフェクター機能が有するように、野生型Ｆｃ領域に対して少なくとも１つのアミノ酸改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９つ以上のアミノ酸改変を有する）を含み、任意選択的に、バリアントＦｃ領域は、２２１、２３９、２４３、２４７、２５５、２５６、２５８、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３００、３０１、３０３、３０５、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１６、３２０、３２２、３２６、３２９、３３０、３３２、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３３９、３４０、３５９、３６０、３７０、３７３、３７６、３７８、３９２、３９６、３９９、４０２、４０４、４１６、４１９、４２１、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８および／または４３９位のいずれか１つ以上における置換を含む。一実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、バリアントＦｃ領域を含み得、バリアントＦｃ領域は、分子が野生型Ｆｃ領域を含む分子に対して向上したエフェクター機能を有するように、野生型Ｆｃ領域に対して少なくとも１つのアミノ酸改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９つ以上のアミノ酸改変を有する）を含み、任意選択的に、バリアントＦｃ領域は、２３９、２９８、３３０、３３２、３３３および／または３３４位のいずれか１つ以上における置換（例えば、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２９８Ａ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｅ３３３Ａおよび／またはＫ３３４Ａ置換）を含む。
【０１１１】
一実施形態において、バリアントまたは野生型Ｆｃ領域を有する抗体は、抗体のＦｃ受容体結合能を増加させる変更グリコシル化パターンを有する。このような炭水化物改変は、例えば、変更グリコシル化機構を有する宿主細胞中で抗体を発現させることにより達成することができる。変更グリコシル化機構を有する細胞は、当技術分野において記載されており、組換え抗体を発現し、それにより変更グリコシル化を有する抗体を産生する宿主細胞として使用することができる。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０；Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１、ならびに欧州特許第１，１７６，１９５号明細書；ＰＣＴ出願公開の国際公開第０６／１３３１４８号パンフレット；国際公開第０３／０３５８３５号パンフレット；国際公開第９９／５４３４２号パンフレット参照、それらのそれぞれは参照により全体として本明細書に組み込まれる。一態様において、抗体は、それらの定常領域中で低フコシル化されている。このような抗体は、アミノ酸変更を含み得、またはアミノ酸変更を含み得ないが、そのような低フコシル化を生じさせる条件下で産生または処理することができる。一態様において、抗体組成物は、本明細書に記載のキメラ、ヒトまたはヒト化抗体を含み、組成物中の抗体種の少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７５、８５、９０、９５％または実質的に全ては、フコースを欠くコア炭水化物構造（例えば、複合体、ハイブリッドおよび高マンノース構造）を含む定常領域を有する。一実施形態において、フコースを有するコア炭水化物構造を含む抗体を有さない抗体組成物が提供される。コア炭水化物は、好ましくは、Ａｓｎ２９７における糖鎖である。
【０１１２】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の産生
抗体は、当技術分野において公知の種々の技術により産生することができる。典型的には、これらは、非ヒト動物、好ましくは、マウスの免疫化により産生され、免疫原は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを含む。抗体は、免疫グロブリンのコンビナトリアルライブラリーの選択により産生することもできる。
【０１１３】
本発明は、本明細書に記載の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体をコードする単離核酸、ならびにそのような核酸を含むベクターおよび宿主細胞も提供する。一態様において、本発明による薬剤をコードする核酸断片が提供される。一態様において、本発明による薬剤をコードする核酸断片、それはＤＮＡおよびＲＮＡ断片から選択される。組換え技術、例えば、核酸が発現され、ヒト化抗体が産生されるように、そのような核酸またはベクターを含む好適な宿主細胞の培養を使用してそのような抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を産生する方法も提供される。培養前、宿主細胞は、例えば、可変重鎖ドメインをコードする核酸を含むベクターと同時形質移入することができ、ベクターは、可変軽鎖ドメインをコードする核酸を含む。さらに、抗体は、公知の技術を使用して宿主細胞培養物から回収および／または精製することができる。有用なベクター、宿主細胞、および技術は、以下にさらに記載される。一般に、抗体の組換え産生のため、それをコードする核酸が単離され、典型的には１つ以上の発現制御エレメントと作動可能に結合させてさらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）のため、または発現のための複製可能なベクター中に挿入される。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、容易に単離され、慣用の手順を使用して配列決定される（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合し得るオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）。多くのベクターが公知であり、利用可能である。ベクター構成要素は、一般に、限定されるものではないが、以下の１つ以上を含む：シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列。
【０１１４】
ＫＩＲ３ＤＬ２、特にモノクローナル抗体１０Ｇ５または２Ｂ１２と特に実質的にまたは本質的に同一なエピトープに結合する１つ以上の抗体の同定は、抗体競合を評価することができる種々の免疫学的スクリーニングアッセイのいずれか１つを使用して容易に決定することができる。多くのそのようなアッセイは、定型的に実施され、当技術分野において周知である（例えば、米国特許第５，６６０，８２７号明細書参照）。実際に、本明細書に記載の抗体が結合するエピトープの決定が、本明細書に記載のモノクローナル抗体と同一または実質的に同一のエピトープに結合する抗体を同定するためにいかなる場合でも要求されないことが理解される。種々のアッセイのいずれかを使用してヒトＫＩＲ３ＤＬ２への抗体の結合を評価することができる。とりわけ、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ、ウエスタンブロッティング、ＢＩＡＣＯＲＥ、および他の競合アッセイをベースとするプロトコルが使用に好適であり、当技術分野において周知である。
【０１１５】
例えば、試験すべき試験抗体が異なる資源動物から得られ、または異なるＩｇアイソタイプのものでもある場合、対照（抗体、例えば、１０Ｇ５または２Ｂ１２）および試験抗体を混合し（または予備吸着させ）、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを含有する試料にアプライする単純競合アッセイを用いることができる。ウエスタンブロッティングおよびＢＩＡＣＯＲＥ分析の使用をベースとするプロトコルが、そのような競合研究における使用に好適である。
【０１１６】
ある実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原試料にアプライする前の一定期間、対照抗体（１０Ｇ５または２Ｂ１２）を変動量の試験抗体（例えば、約１：１０または約１：１００）と予備混合する。他の実施形態において、対照および変動量の試験抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原試料への曝露の間に単純に混合することができる。結合を遊離抗体（例えば、未結合抗体を排除するための分離または洗浄技術を使用することによる）から、および（１０Ｇ５または２Ｂ１２を試験抗体（例えば、種特異的またはアイソタイプ特異的二次抗体を使用することにより、または検出可能な標識による１０Ｇ５もしくは２Ｂ１２の特異的標識による）から区別し得る限り、試験抗体が抗原への１０Ｇ５または２Ｂ１２の結合を低減させるか否かを決定することができ、そのことは試験抗体が１０Ｇ５または２Ｂ１２と実質的に同一のエピトープを認識することを示す。完全に無関連の抗体の不存在下の（標識）対照抗体の結合は、対照の高い値として機能し得る。対照の低い値は、標識（１０Ｇ５または２Ｂ１２）抗体を正確に同一のタイプの未標識抗体（１０Ｇ５または２Ｂ１２）とインキュベートすることにより得ることができ、競合が生じ、標識抗体の結合を低減させる。試験アッセイにおいて、試験抗体の存在下の標識抗体反応性の有意な低減は、実質的に同一のエピトープを認識し、標識（１０Ｇ５または２Ｂ１２）抗体と「交差反応」または競合する試験抗体を示す。ＫＩＲ３ＤＬ２抗原への１０Ｇ５または２Ｂ１２の結合を、約１：１０〜約１：１００の１０Ｇ５または２Ｂ１２：試験抗体の任意の比において少なくとも約５０％だけ、例えば、少なくとも６０％だけ、またはより好ましくは、少なくとも約８０％または９０％（例えば、約６５〜１００％）だけ低減させる任意の試験抗体は、１０Ｇ５または２Ｂ１２と実質的に同一のエピトープまたは決定基に結合する抗体とみなされる。好ましくは、このような試験抗体は、少なくとも約９０％（例えば、約９５％）だけＫＩＲ３ＤＬ２抗原への１０Ｆ６の結合を低減させる。
【０１１７】
競合は、例えば、フローサイトメトリー試験により評価することもできる。このような試験において、所与のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを担持する細胞は、例えば、最初に１０Ｇ５または２Ｂ１２と、次いで蛍光色素またはビオチンにより標識された試験抗体とインキュベートすることができる。抗体は、飽和量の１０Ｇ５または２Ｂ１２とのプレインキュベーション時に得られる結合が、１０Ｇ５または２Ｂ１２とのプレインキュベーションなしの抗体により得られる結合（蛍光の平均により計測）の約８０％、好ましくは、約５０％、約４０％以下（例えば、約３０％、２０％または１０％）である場合に１０Ｆ６と競合すると言われる。あるいは、抗体は、飽和量の試験抗体とプレインキュベートされた細胞上の標識１０Ｇ５または２Ｂ１２抗体（蛍光色素またはビオチンによる）により得られる結合が、試験抗体とのプレインキュベーションなしで得られる結合の約８０％、好ましくは、約５０％、約４０％以下（例えば、約３０％、２０％または１０％）である場合に１０Ｇ５または２Ｂ１２と競合すると言われる。
【０１１８】
試験抗体を、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原が固定化された表面に飽和濃度において予備吸着およびアプライする単純競合アッセイを用いることもできる。単純競合アッセイにおける表面は、好ましくはＢＩＡＣＯＲＥチップ（または表面プラズモン共鳴分析に好適な他の媒体）である。次いで、対照抗体（例えば、１０Ｇ５または２Ｂ１２）を、ＫＩＲ３ＤＬ２飽和濃度において表面と接触させ、対照抗体のＫＩＲ３ＤＬ２および表面結合を計測する。対照抗体のこの結合を、試験抗体の不存在下での対照抗体のＫＩＲ３ＤＬ２含有表面への結合と比較する。試験アッセイにおいて、試験抗体の存在下での対照抗体によるＫＩＲ３ＤＬ２含有表面の結合の有意な低減は、試験抗体が対照抗体と実質的に同一のエピトープを認識し、その結果、試験抗体が対照抗体と「交差反応する」ことを示す。対照（例えば、１０Ｇ５または２Ｂ１２）抗体のＫＩＲ３ＤＬ２抗原への結合を少なくとも約３０％以上、好ましくは約４０％だけ低減させる任意の試験抗体を、対照（例えば、１０Ｇ５または２Ｂ１２）と実質的に同一のエピトープまたは決定基に結合する抗体であるとみなすことができる。好ましくは、そのような試験抗体は、対照抗体（例えば、１０Ｇ５または２Ｂ１２）のＫＩＲ３ＤＬ２抗原への結合を少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％以上）だけ低減させる。対照および試験抗体の順序は入れ替えることができ、すなわち、競合アッセイにおいて、最初に対照抗体を表面に結合させることができ、その後に試験抗体を表面と接触させることが認識される。好ましくは、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原についてより高い親和性を有する抗体を最初に表面に結合させる。それというのも、二次抗体について見られる結合の減少（抗体が交差反応していると想定）がより顕著な大きさであると予期されるためである。そのようなアッセイのさらなる例が、例えば、Ｓａｕｎａｌ（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８３：３３−４１に提供され、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１９】
好ましくは、ＫＩＲ３ＤＬ２エピトープを認識するモノクローナル抗体は、かなりの割合またはさらには全ての関連細胞、例えば、悪性腫瘍ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＳＳまたはＭＦ患者からの細胞上に存在するエピトープと反応するが、他の細胞、すなわち、ＫＩＲ３ＤＬ２を発現しない細胞と有意に反応しない。一態様において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合するが、ＫＩＲ３ＤＬ１および／またはＫＩＲ３ＤＳ１に結合しない。
【０１２０】
一部の実施形態において、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞の発現により特徴づけられる疾患を有する１つまたは複数の個体、すなわち、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を使用する本明細書に記載の方法の１つによる治療についての候補である個体からのＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞に結合する。したがって、細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２を特異的に認識する抗体を得たら、それを、ＳＳまたはＭＦなどの障害を有する患者から採取されたＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞（例えば、悪性腫瘍ＣＤ４＋Ｔ細胞）に結合するその能力について試験することができる。特に、患者を本抗体の１つにより治療する前に、その患者から採取された例えば血液試料中の悪性腫瘍細胞に結合する抗体の能力を試験して治療が患者において有益になる確率を最大化することが有益である。
【０１２１】
一実施形態において、抗体は、イムノアッセイにおいてバリデートしてＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞、例えば、悪性腫瘍ＣＤ４＋Ｔ細胞、炎症促進性ＣＤ４＋細胞に結合するそれらの能力を試験する。例えば、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を複数の患者から採取し、ＣＤ４＋Ｔ細胞をＰＢＬから、例えば、関連抗体を使用するフローサイトメトリーにより濃縮し（悪性腫瘍ＣＤ４＋細胞について、例えば、開示が参照により本明細書に組み込まれるＢａｇｏｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｂｌｏｏｄ  ９７：１３８８−１３９１参照）、またはＣＤ４＋ＣＤ２８−細胞分画をＭＡＣＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）上で磁気分離により単離する。次いで、細胞に結合する所与の抗体の能力を、当技術分野において周知の標準的な方法を使用して評価する。個体または患者のかなりの割合（例えば、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％以上）からのＫＩＲ３ＤＬ２を発現することが公知の細胞、例えば、Ｔ細胞のかなりの割合（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％以上）に結合することが見出される抗体は、患者中の悪性腫瘍Ｔ細胞の存在もしくはレベルを決定するための診断目的のための本明細書の使用、または本明細書に記載の治療方法における使用、例えば、悪性腫瘍Ｔ細胞の数もしくは活性を増加もしくは減少させるための使用の両方に好適である。細胞への抗体の結合を評価するため、抗体は、直接または間接的に標識することができる。間接的に標識する場合、典型的には、二次標識抗体を添加する。次いで、細胞への抗体の結合を、例えば、細胞蛍光分析（例えば、ＦＡＣＳｃａｎ）を使用して検出することができる。このような方法は、当業者に周知である。
【０１２２】
抗体がエピトープ領域内で結合するか否かの決定は、当業者に公知の手法において実施することができる。このようなマッピング／特徴決定方法の一例として、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体についてのエピトープ領域を、ＫＩＲ３ＤＬ２タンパク質中の露出アミン／カルボキシルの化学修飾を使用するエピトープ「フットプリンティング」により決定することができる。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ  Ｈ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．２６７（２）ｐｐ．２５２−２５９（１９９９）Ｅｎｇｅｎ，Ｊ．Ｒ．ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｌ．（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３，２５６Ａ−２６５Ａ参照。好適なエピトープ同定技術の別の例は核磁気共鳴エピトープマッピング（ＮＭＲ）である。例えば、Ｅｒｎｓｔ  Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｒｅｓ  Ｆｏｕｎｄ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ．２００４；（４４）：１４９−６７；Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２８１（１）ｐｐ．６１−６７（１９９８）；およびＳａｉｔｏ  ａｎｄ  Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９９６  Ｊｕｎ；９（３）：５１６−２４参照。エピトープマッピング／特徴決定は、質量分析法を使用して実施することもできる。例えば、Ｄｏｗｎｗａｒｄ，Ｊ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．２０００  Ａｐｒ；３５（４）：４９３−５０３およびＫｉｓｅｌａｒ  ａｎｄ  Ｄｏｗｎａｒｄ，Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ．１９９９  Ｍａｙ  １；７１（９）：１７９２−８０１参照。部位特異的突然変異誘発は、結合エピトープの解明に有用な別の技術である。例えば、「アラニンスキャニング」において、タンパク質セグメント内のそれぞれの残基をアラニン残基により置き換え、結合親和性についての結果を計測する。例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９５；２６７：３８３−３８６；およびＷｅｌｌｓ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １９９６；９３：１−６参照。エピトープ評価のための「ラベルフリー」アッセイの他の形態としては、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ、ＢＩＡＣＯＲＥ）および反射干渉分光法（ＲｉｆＳ）が挙げられる。例えば、Ｆａｅｇｅｒｓｔａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  １９９０；３：２０８−１４；Ｎｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．１９９３；６４６：１５９−１６８；Ｌｅｉｐｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．１９９８；３７：３３０８−３３１１；Ｋｒｏｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ  ２００２；１７：９３７−９４４参照。
【０１２３】
本明細書に記載の抗体と同一のまたは実質的に同一のエピトープに結合する抗体は、２０１３年９月１７日に出願されたＰＣＴ出願第ＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９３０２号明細書に記載の例示的な競合アッセイまたはＫＩＲ３ＤＬ２突然変異ポリペプチドへの結合についてのアッセイの１つ以上において同定することができることも留意すべきである。ＫＩＲ３ＤＬ２突然変異体により形質移入された細胞への抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の結合を計測し、野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（配列番号１）に結合する抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の能力と比較する。本明細書において使用される抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と、突然変異ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドとの間の結合の低減は、結合親和性（例えば、公知の方法、例えば、特定の突然変異体を発現する細胞のＦＡＣＳ試験により、または突然変異ポリペプチドへの結合のＢｉａｃｏｒｅ試験により計測）の低減および／または抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の総結合キャパシティーの低減（例えば、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体濃度対ポリペプチド濃度のプロットにおけるＢｍａｘの減少により証明）が存在することを意味する。結合の有意な低減は、突然変異残基が抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体への結合に直接的に関与し、または抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体がＫＩＲ３ＤＬ２に結合している場合に結合タンパク質に近接することを示す。したがって、抗体エピトープは、好ましくは、そのような残基を含み、そのような残基に隣接する追加の残基を含み得る。
【０１２４】
典型的には、本明細書の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドについての約１０４〜約１０１１Ｍ−１（例えば、約１０８〜約１０１０Ｍ−１）の範囲の親和性を有する。例えば、抗体は、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）スクリーニング（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）ＳＰＲ分析装置による分析による）により測定される場合、ＫＩＲ３ＤＬ２に関して１×１０−９Ｍ未満の平均解離定数（Ｋｄ）を有し得る。より特定の例示的態様において、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２についての約１×１０−８Ｍ〜約１×１０−１０Ｍ、または約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１１ＭのＫｄを有し得る。
【０１２５】
抗体は、例えば、約１００、６０、１０、５、または１ナノモル濃度（すなわち、それらよりも良好な親和性）以下の平均Ｋｄにより特徴づけることができる。Ｋｄは、例えば、例えば、組換え産生ヒトＫＩＲ３ＤＬ２タンパク質をチップ表面上に固定化し、次いで溶液中の試験すべき抗体をアプライすることにより測定することができる。
【０１２６】
抗原結合化合物を得たら、それを一般に、ＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞中への内在化（抗体は、好ましくは、内在化しない）、および／またはＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞中へのＫＩＲ３ＤＬ２内在化を引き起こしてＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞に対するＡＤＣＣもしくはＣＤＣを誘導し、ＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞の炎症促進活性および／もしくは増殖を阻害し、ならびに／もしくはその排除を引き起こすその能力について評価する。内在化し、またはＡＤＣＣ、ＣＤＣを誘導し、または一般にＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞の活性の排除もしくは阻害をもたらす抗原結合化合物の能力の評価は、例えば、本明細書に提供される実施例におけるように本方法の任意の好適な段階において実施することができる。この評価は、治療的使用予定の抗体（または他の化合物）の同定、産生および／または開発に関与する種々のステップの１つ以上において有用であり得る。
【０１２７】
本明細書において使用される、「内在化」されない、または「内在化」しない抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、哺乳動物細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２（すなわち、細胞表面ＫＩＲ３ＤＬ２）への結合時に細胞により実質的に吸収されない（細胞に流入しない）抗体である。非内在化抗体としては、当然のことながら、抗体断片、ヒトまたはヒト化抗体および抗体コンジュゲートが挙げられる。
【０１２８】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体が、哺乳動物細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２への結合時に内在化するか否か、またはＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドが細胞内内在化を受けるか否か（例えば、抗体により結合されている時）は、種々のアッセイ、例として開示が参照により本明細書に組み込まれる、２０１３年９月１７日に出願されたＰＣＴ出願第ＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９３０２号明細書に記載の実験実施例に記載されるものにより決定することができる。
【０１２９】
ＡＤＣＣの試験は、典型的には、結合した抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を有するＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞（例えば、Ｃｏｕ−Ｌ細胞、セザリー症候群細胞またはその表面においてＫＩＲ３ＤＬ２を発現するように作製された任意の細胞）がＦｃ受容体を担持するエフェクター細胞により補体の関与なしで認識される細胞媒介細胞毒性を評価することを含む。ＫＩＲ３ＤＬ２抗原を発現しない細胞を任意選択的に対照として使用することができる。ＮＫ細胞の細胞毒性の活性化は、サイトカイン産生（例えば、ＩＦＮ−γ産生）または細胞毒性マーカー（例えば、ＣＤ１０７動員）の増加を計測することにより評価する。好ましくは、抗体は、標的細胞の存在下で対照抗体（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合しない抗体、ネズミ定常領域を有するＫＩＲ３ＤＬ２抗体）と比較して少なくとも２０％、５０％、８０％、１００％、２００％または５００％のサイトカイン産生、細胞毒性マーカーの発現、または標的細胞溶解の増加を誘導する。別の例において、標的細胞の溶解は、例えば、クロム放出アッセイにおいて検出し、好ましくは、抗体は、標的細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％または５０％の溶解を誘導する。抗原結合化合物を、（ａ）両方のＡＤＣＣを誘導するその能力ならびに（ｂ）ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞中に内在化し、および／またはＫＩＲ３ＤＬ２内在化を誘導するその能力の両方について試験する場合、アッセイは任意の順序で実施することができる。
【０１３０】
他の実施形態において、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへのＫＩＲ３ＤＬ２のＨＬＡリガンド（例えば、Ｂ２７ダイマー（Ｂ２７２）テトラマー）の結合を干渉するそれらの能力について試験される。例えば、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９３０２号明細書に記載のアッセイ参照。
【０１３１】
医薬配合物
一態様において、医薬物として使用される本発明による薬剤が提供される。一態様において、悪性新生物、炎症障害、または自己免疫疾患の治療において医薬物として使用される本発明による薬剤が提供される。
【０１３２】
一態様において、ヒト患者中のＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を排除し、または枯渇させるための医薬物として使用される本発明による薬剤が提供される。
【０１３３】
一実施形態において、本発明は、１つ以上の担体と一緒に本明細書に記載の抗体を含む医薬組成物を提供する。
【０１３４】
したがって、本発明の１つの対象は、１ｍｇ／ｍｌ〜５００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在するそのような抗体を含む医薬配合物であって、２．０〜１０．０のｐＨを有する組成物を提供することである。配合物は、緩衝液系、保存剤、等張剤、キレート剤、安定剤および界面活性剤をさらに含み得る。一実施形態において、医薬配合物は、水性配合物、すなわち、水を含む配合物である。このような配合物は、典型的には、液剤または懸濁液である。さらなる実施形態において、医薬配合物は、水溶液である。用語「水性配合物」は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む配合物として定義される。同様に、用語「水溶液」は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む溶液として定義され、用語「水性懸濁液」は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む懸濁液として定義される。
【０１３５】
別の実施形態において、医薬配合物は、医師または患者が溶媒および／または希釈剤を使用前に添加するフリーズドライ配合物である。
【０１３６】
別の実施形態において、医薬配合物は、いかなる事前の溶解もなしでそのまま使用される乾燥配合物（例えば、フリーズドライまたは噴霧乾燥されたもの）である。
【０１３７】
さらなる態様において、医薬配合物は、そのような抗体の水溶液、および緩衝液を含み、抗体は、１ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で存在し、前記配合物は、約６．０〜約８．０のｐＨを有する。
【０１３８】
一実施形態において、配合物のｐＨは、少なくとも約６であり、約８未満（より一般的には、約７．７、７．６、または７．５未満）が使用される（例えば、６〜７．４の範囲内、例えば、６〜７．４、例えば、６〜７、６．２〜７、６．４〜７．４、６．５〜７．５、６．７〜７．７、または約７、約７．４など）。
【０１３９】
さらなる実施形態において、緩衝液は、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸、グリシルグリシン、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、トリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン、ビシン、トリシン、リンゴ酸、コハク酸塩、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸またはそれらの混合物からなる群から選択される。これらの規定の緩衝液のそれぞれの１つは、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【０１４０】
さらなる実施形態において、配合物は、薬学的に許容可能な保存剤をさらに含む。保存剤は、例えば、フェノール、ｏ−クレゾール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、メチルｐ−ヒドロキシベンゾエート、プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート、２−フェノキシエタノール、ブチルｐ−ヒドロキシベンゾエート、２−フェニルエタノール、ベンジルアルコール、クロロブタノール、およびチオメロサール（ｔｈｉｏｍｅｒｏｓａｌ）、ブロノポール、安息香酸、イミドウレア、クロロヘキシジン、デヒドロ酢酸ナトリウム、クロロクレゾール、エチルｐ−ヒドロキシベンゾエート、塩化ベンゼトニウム、クロルフェネジン（３ｐ−クロルフェノキシプロパン−１，２−ジオール）またはそれらの混合物からなる群から選択することができる。保存剤は、例えば、０．１ｍｇ／ｍｌ〜２０ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ〜５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌ、または１０ｍｇ／ｍｌ〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在し得る。これらの規定の保存剤のそれぞれの１つは、本発明の代替的な実施形態を構成する。医薬組成物中の保存剤の使用は、当業者に周知である。便宜的に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５が参照される。
【０１４１】
さらなる実施形態において、配合物は、等張剤をさらに含む。等張剤は、例えば、塩（例えば、塩化ナトリウム）、糖または糖アルコール、アミノ酸（例えば、Ｌ−グリシン、Ｌ−ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、トレオニン）、アルジトール（例えば、グリセロール（グリセリン）、１，２−プロパンジオール（プロピレングリコール）、１，３−プロパンジオール、１，３−ブタンジオール）ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００）、またはそれらの混合物からなる群から選択することができる。任意の糖、例えば、単糖、二糖、もしくは多糖、または水溶性グリカン、例として、例えば、フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプンおよびカルボキシメチルセルロース−Ｎａを使用することができる。一実施形態において、糖添加剤は、スクロースである。糖アルコールは、少なくとも１つの−−ＯＨ基を有するＣ４〜Ｃ８炭化水素として定義され、それとしては、例えば、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、ズルシトール、キシリトール、およびアラビトールが挙げられる。一実施形態において、糖アルコール添加剤は、マンニトールである。上記の糖または糖アルコールは、個々にまたは組合せで使用することができる。糖または糖アルコールが液体調製物中で可溶性であり、本発明の方法を使用して達成される安定化効果に悪影響を与えない限り、使用量に固定制限は存在しない。糖または糖アルコール濃度は、例えば、糖または糖アルコール濃度は、例えば、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌであり得る。等張剤は、例えば、１ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ〜７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ〜２４ｍｇ／ｍｌ、または２５ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在し得る。これらの規定の等張剤のそれぞれの１つは、本発明の代替的な実施形態を構成する。医薬組成物中の等張剤の使用は、当業者に周知である。便宜的に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５が参照される。
【０１４２】
さらなる実施形態において、配合物は、キレート剤も含む。キレート剤は、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸、およびアスパラギン酸の塩、ならびにそれらの混合物から選択することができる。キレート剤は、例えば、０．１ｍｇ／ｍｌ〜５ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ〜２ｍｇ／ｍｌ、または２ｍｇ／ｍｌ〜５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在し得る。これらの規定のキレート剤のそれぞれの１つは、本発明の代替的な実施形態を構成する。医薬組成物中のキレート剤の使用は、当業者に周知である。便宜的に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５が参照される。
【０１４３】
配合物は、安定剤を含んでも含まなくてもよい。医薬組成物中の安定剤の使用は、当業者に周知である。便宜的に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５が参照される。より特定すると、本発明の組成物は、治療有効構成要素が液体医薬組成物中の貯蔵の間に凝集物形成を示すと考えられるポリペプチドを含む安定化液体医薬組成物であり得る。「凝集物形成」は、可溶性のままであり得るオリゴマー、または溶液から沈殿する大きい可視的凝集物の形成をもたらすポリペプチド分子間の物理的相互作用を意図する。「貯蔵の間」は、１回調製されたら、対象に直ちに投与されない液体医薬組成物または配合物を意図する。むしろ、調製後、それは貯蔵のために液体形態で、凍結状態で、または液体形態への後の再構成のために乾燥形態で、また対象への投与に好適な他の形態で包装される。「乾燥形態」は、液体医薬組成物または配合物がフリーズドライ（すなわち、凍結乾燥）、噴霧乾燥、または空気乾燥のいずれかにより乾燥していることを意図する。液体医薬組成物の貯蔵の間のポリペプチドによる凝集物形成は、そのポリペプチドの生物学的活性に悪影響を与え得、医薬組成物の治療効力の損失をもたらす。さらに、凝集物形成は、ポリペプチド含有医薬組成物が注入系を使用して投与される場合に他の問題、例えば、管類、膜、またはポンプの遮断を引き起こし得る。
【０１４４】
本発明の医薬組成物は、組成物の貯蔵の間のポリペプチドによる凝集物形成を減少させるために十分なある量のアミノ酸塩基をさらに含んでも含まなくてもよい。「アミノ酸塩基」は、任意の所与のアミノ酸がその遊離塩基形態またはその塩形態のいずれかで存在するアミノ酸またはアミノ酸の組合せを意図する。アミノ酸の組合せが使用される場合、アミノ酸の全ては、それらの遊離塩基形態で存在し得、全ては、それらの塩形態で存在し得、または一部がそれらの遊離塩基形態で存在し得る一方、他のものがそれらの塩形態で存在し得る。一実施形態において、本発明の組成物の調製において使用するためのアミノ酸は、荷電側鎖を担持するもの、例えば、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸である。特定のアミノ酸（例えば、メチオニン、ヒスチジン、イミダゾール、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、トレオニンおよびそれらの混合物）の任意の立体異性体（すなわち、Ｌ、Ｄ、またはその混合物）またはそれらの立体異性体の組合せが、特定のアミノ酸がその遊離塩基形態またはその塩形態のいずれかで存在する限り、本発明の医薬組成物中に存在し得る。一実施形態において、Ｌ−立体異性体が使用される。本発明の組成物は、それらのアミノ酸のアナログを用いて配合することもできる。
【０１４５】
本発明のさらなる実施形態において、メチオニン（または他の硫黄アミノ酸またはアミノ酸アナログ）を添加し、治療剤として作用するポリペプチドが酸化を受けやすい少なくとも１つのメチオニン残基を含むポリペプチドである場合にメチオニン残基のメチオニンスルホキシドへの酸化を阻害することができる。「阻害する」は、経時的なメチオニン酸化種の最小の蓄積を意図する。メチオニン酸化の阻害は、ポリペプチドのその適切な分子形態のより大きい保持をもたらす。メチオニンの任意の立体異性体（ＬまたはＤ）またはそれらの組合せを使用することができる。添加すべき量は、メチオニンスルホキシドの量が規制機関に受け入れられるようにメチオニン残基の酸化を阻害するために十分な量であるべきである。典型的には、これは、組成物が約１０％〜約３０％以下のメチオニンスルホキシドを含有することを意味する。一般に、これは、添加されるメチオニンとメチオニン残基との比が約１：１〜約１０００：１、例えば、１０：１〜約１００：１の範囲であるようにメチオニンを添加することにより達成することができる。
【０１４６】
さらなる実施形態において、配合物は、高分子量ポリマーまたは低分子化合物からなる群から選択される安定剤をさらに含む。本発明のさらなる実施形態において、安定剤は、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ３３５０）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、カルボキシ−／ヒドロキシセルロースまたはその誘導体（例えば、ＨＰＣ、ＨＰＣ−ＳＬ、ＨＰＣ−ＬおよびＨＰＭＣ）、シクロデキストリン、硫黄含有物質、例えば、モノチオグリセロール、チオグリコール酸および２−メチルチオエタノール、および様々な塩（例えば、塩化ナトリウム）から選択される。これらの規定の安定剤のそれぞれの１つは、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【０１４７】
医薬組成物は、その中の治療有効ポリペプチドの安定性をさらに向上させる追加の安定化剤も含み得る。本発明に特に興味深い安定化剤としては、限定されるものではないが、メチオニン酸化からポリペプチドを保護するメチオニンおよびＥＤＴＡ、ならびに冷凍−解凍または機械的剪断に伴う凝集からポリペプチドを保護する非イオン性界面活性剤が挙げられる。さらなる実施形態において、配合物は、界面活性剤をさらに含む。界面活性剤は、例えば、洗浄剤、エトキシ化ヒマシ油、ポリグリコール化グリセリド、アセチル化モノグリセリド、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンブロックポリマー（例えば、ポロキサマー、例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８、ポロキサマー１８８および４０７、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンおよびポリエチレン誘導体、例えば、アルキル化およびアルコキシル化誘導体（ｔｗｅｅｎ、例えば、Ｔｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−４０、Ｔｗｅｅｎ−８０およびＢｒｉｊ−３５）、モノグリセリドまたはそのエトキシ化誘導体、ジグリセリドまたはそのポリオキシエチレン誘導体、アルコール、グリセロール、レクチンおよびリン脂質（例えば、ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ジホスファチジルグリセロールおよびスフィンゴミエリン）、リン脂質（例えば、ジパルミトイルホスファチジン酸）およびリゾリン脂質（例えば、パルミトイルリゾホスファチジル−Ｌ−セリンおよびエタノールアミン、コリン、セリンまたはトレオニンの１−アシル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸エステル）の誘導体ならびにリゾホスファチジルおよびホスファチジルコリンのアルキル、アルコキシル（アルキルエステル）、アルコキシ（アルキルエーテル）誘導体、例えば、リゾホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリンのラウロイルおよびミリストイル誘導体、ならびに極性頭部基の修飾、すなわち、コリン、エタノールアミン、ホスファチジン酸、セリン、トレオニン、グリセロール、イノシトール、および正荷電ＤＯＤＡＣ、ＤＯＴＭＡ、ＤＣＰ、ＢＩＳＨＯＰ、リゾホスファチジルセリンおよびリゾホスファチジルトレオニン、ならびにグリセロリン脂質（例えば、セファリン）、グリセロ糖脂質（例えば、ガラクトピラノシド）、スフィンゴ糖脂質（例えば、セラミド、ガングリオシド）、ドデシルホスホコリン、鶏卵リゾレシチン、フシジン酸誘導体（例えば、タウロジヒドロフシジン酸ナトリウムなど）、長鎖脂肪酸およびその塩Ｃ６〜Ｃ１２（例えば、オレイン酸およびカプリル酸）、アシルカルニチンおよび誘導体、リジン、アルギニンもしくはヒスチジンのＮα−アシル化誘導体、またはリジンもしくはアルギニンの側鎖アシル化誘導体、リジン、アルギニンもしくはヒスチジンおよび中性または酸性アミノ酸の任意の組合せを含むジペプチドのＮα−アシル化誘導体、中性アミノ酸および２つの荷電アミノ酸の任意の組合せを含むトリペプチドのＮ−アシル化誘導体、ＤＳＳ（ドキュセートナトリウム、ＣＡＳ登録番号［５７７−１１−７］）、ドキュセートカルシウム、ＣＡＳ登録番号［１２８−４９−４］）、ドキュセートカリウム、ＣＡＳ登録番号［７４９１−０９−０］）、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウムまたはラウリル硫酸ナトリウム）、カプリル酸ナトリウム、コール酸またはその誘導体、胆汁酸およびその塩ならびにグリシンまたはタウリンコンジュゲート、ウルソデオキシコール酸、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、Ｎ−ヘキサデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホネート、アニオン性（アルキル−アリール−スルホネート）一価界面活性剤、両性イオン界面活性剤（例えば、Ｎ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホネート、３−コラミド−１−プロピルジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホネート、カチオン性界面活性剤（第４級アンモニウム塩基）（例えば、臭化セチル−トリメチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム）、非イオン性界面活性剤（例えば、ドデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド）、エチレンジアミンへのプロピレンオキシドおよびエチレンオキシドの逐次付加に由来する四官能性ブロックコポリマーであるポロキサミン（例えば、Ｔｅｔｒｏｎｉｃのもの）から選択することができ、または界面活性剤は、イミダゾリン誘導体、もしくはその混合物からなる群から選択することができる。これらの規定の界面活性剤のそれぞれの１つは、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【０１４８】
さらなる実施形態において、配合物は、プロテアーゼ阻害剤、例えば、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）およびベンズアミジンＨＣｌをさらに含むが、他の市販のプロテアーゼ阻害剤を使用することもできる。プロテアーゼ阻害剤の使用は、自己触媒作用を阻害するためにプロテアーゼの酵素原を含む医薬組成物において特に有用である。他の成分が本発明のペプチド医薬配合物中に存在し得ることが考えられる。このような追加の成分としては、湿潤剤、乳化剤、酸化防止剤、増量剤、等張性改変剤、キレート剤、金属イオン、油性ビヒクル、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチンまたはタンパク質）および両性イオン（例えば、アミノ酸、例えば、ベタイン、タウリン、アルギニン、グリシン、リジンおよびヒスチジン）を挙げることができる。このような追加の成分は、当然のことながら、本発明の医薬配合物の全体安定性に悪影響を与えるべきでない。本発明による抗体を含有する医薬組成物は、そのような治療が必要とされる患者にいくつかの部位において、例えば、局所部位において、例えば、皮膚および粘膜部位、吸収を迂回する部位、例えば、動脈内、静脈内、心臓内投与、および吸収が関与する部位、例えば、皮膚内、皮下、筋肉内、または腹部内投与において投与することができる。
【０１４９】
本発明による医薬組成物の投与は、そのような治療が必要とされる対象に、いくつかの投与経路のいずれか、例えば、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、舌、舌下、バッカル、口腔内、経口、胃腸内、鼻腔、肺、例えば、細気管支および肺胞またはそれらの組合せを介して、上皮、皮膚、経皮、膣、直腸、眼、例えば、結膜を介して、尿管、および非経口を介し得る。
【０１５０】
本発明の組成物は、いくつかの剤形のいずれかで、例えば、液剤、懸濁液、エマルジョン、マイクロエマルジョン、マルチプルエマルジョン、フォーム剤、軟膏、ペースト剤、プラスター剤、軟膏剤、錠剤、コーティング錠、リンス剤、カプセル剤、例えば、硬ゼラチンカプセル剤および軟ゼラチンカプセル剤、坐剤、直腸カプセル剤、滴剤、ゲル剤、噴霧剤、散剤、エアロゾル、吸入剤、点眼剤、眼軟膏剤、眼リンス剤、膣ペッサリー、膣リング、膣軟膏剤、注射液、インサイチュ変換液剤、例えば、インサイチュゲル化、インサイチュ硬化、インサイチュ沈殿、インサイチュ結晶化、輸液剤、ならびにインプラントとして投与することができる。本明細書に記載の態様のいずれかによる配合物の安定性は、とりわけ、高分子量の不純物（例えば、配合物中の抗体分子の凝集（マルチマー）を示唆する不純物）の欠落に基づき特徴づけることができる。一態様において、本発明による配合物は、少なくとも１日間、例えば、少なくとも約１週間、例えば、少なくとも約２週間、少なくとも約１ヵ月、少なくとも約２ヵ月、またはさらには少なくとも約３ヵ月の約５℃における貯蔵の間、約１０％未満（例えば、約５％以下）の高分子量（ＨＭＷ）不純物含有率を有するとして特徴づけることができる。
【０１５１】
本発明の一実施形態において、抗体を含む医薬配合物は、１年超、任意選択的に、２年の貯蔵の間、任意選択的に、３年の貯蔵の間、安定的である。本発明の別の実施形態において、抗体を含む医薬配合物は、４週間超の使用の間、および３年超の貯蔵の間、安定的である。本発明のさらなる実施形態において、抗体を含む医薬配合物は、４週間超の使用の間、および２年超の貯蔵の間、安定的である。本発明のいっそうさらなる実施形態において、抗体を含む医薬配合物は、２週間超の使用の間、および２年超の貯蔵の間、安定的である。
【０１５２】
一態様において、本発明は、等張性改変剤としての塩化ナトリウムを含む配合物を提供する。
【０１５３】
一実施形態において、本発明は、リン酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム（塩基）緩衝液が配合物中に取り込まれる配合物を提供する。
【０１５４】
一実施形態において、本発明は、ポリソルベート８０が界面活性剤として配合物中に取り込まれる配合物を提供する。
【０１５５】
本発明の態様のいずれかによる配合物は、任意の好適な濃度の抗体を有し得る。典型的には、濃度は、約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ（例えば、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬ）である。１つの例示的な態様において、配合物は、例えば、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度を有する投与（典型的には、静脈内投与または直接的な非経口注射による）前に希釈すべき配合物であり得る比較的濃縮された抗体配合物として提供される。別の例示的な態様において、配合物は、比較的希薄な配合物、例えば、配合物中の抗体の濃度が約０．０５ｍｇ／ｍＬまたは約０．１ｍｇ／ｍＬである即時注入／注射用である配合物として提供される。
【０１５６】
一態様において、配合物は、約１ｍｇ／ｍＬの抗体濃度を有する。
【０１５７】
例示的な態様において、本発明は、（ａ）配合物中の抗体の濃度が約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬになるような量の本開示のＩｇＧ抗体分子；（ｂ）リン酸ナトリウム（例えば、二塩基性リン酸ナトリウム／一塩基性リン酸カリウム）、クエン酸ナトリウム（例えば、クエン酸ナトリウム／クエン酸）またはホウ酸ナトリウム（ホウ酸ナトリウム／ホウ酸）；（ｃ）塩化ナトリウム；ならびに（ｅ）ポリソルベート８０を含み、約６．７〜７．７、または約７．４のｐＨを有する、成分の混合物から調製された薬学的に許容可能な活性配合物を提供する。
【０１５８】
さらなる態様および利点を以下の実験セクションに開示し、それは、説明としてみなすべきであり、本出願の範囲を限定するものとみなすべきではない。
【実施例】
【０１５９】
実施例１
ＣＤＲ移植によるヒト化抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の生成
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を、２０１３年９月１７日に出願されたＰＣＴ出願第ＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９３０２号明細書においてヒト化のための候補物として得た。
【０１６０】
最初にヒト化を重鎖および軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）移植と、それに続く復帰突然変異の導入により実施した。モデリングおよび設計に使用されるマウス親遺伝子およびヒト遺伝子を以下の表１に列記する。抗体は、ＣＨＯ細胞を使用して産生した。
【０１６１】
【表１】
0006722110.tif 000003
【０１６２】
抗体１０Ｇ５
１０Ｇ５軽鎖のヒト化タンパク質配列を以下にアラインする。１０Ｇ５−ＬＣを配列番号３４に示す。ＩＧＫＶ１−ＮＬ１を配列番号３５に示す。Ｈｕｍ２Ｃ４を配列番号３６に示す。３ＲＫＤを配列番号３７に示す。ＣＤＲを１０Ｇ５−ＬＣ中で下線で示し、復帰突然変異を−Ｌ１〜−Ｌ５バリアント中で下線で示す。
【化２】
0006722110.tif 000004
【０１６３】
ヒト化抗体２Ｃ４（抗ＥｒｂＢ２；ｐｄｂ  １Ｓ７８および１Ｌ７Ｉ）およびマウス抗体８Ｃ１１（抗Ｅ型肝炎ウイルスカプシドタンパク質；ｐｄｂ  ３ＲＫＤ）を、構造予測評価のためのテンプレートとして使用した。親ＪＫセグメントを、親フレームワーク２（ＦＷ２）（隣接フランキング残基を含む）のＶｅｒｎｉｅｒゾーン残基と同様に未改変のままにした。したがって、Ｌ２軽鎖を追加の復帰突然変異のための基礎出発テンプレートとして使用した。
【０１６４】
最終的に、４つの軽鎖Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４およびＬ５を抗体生成のために選択した。
【０１６５】
１０Ｇ５重鎖のヒト化タンパク質配列を以下にアラインする。１０Ｇ５−ＨＣを配列番号３８に示す。ＩＧＨＶ１−４６を配列番号３９に示す。１ｉ９ｒを配列番号４０に示す。１ｉｔ９を配列番号４１に示す。１Ｅ６０を配列番号４２に示す。ＣＤＲを１０Ｇ５−ＨＣ配列中で下線で示し、復帰突然変異を−Ｈ１〜−Ｈ６バリアント中で下線で示す。
【化３】
0006722110.tif 000005
【０１６６】
ヒト化抗Ｆａｓ抗体ＨＦＥ７Ａ（ｐｄｂ  １ＩＴ９）、ヒト化抗ＣＤ４０−Ｌ抗体５Ｃ８（ｐｄｂ  １Ｉ９Ｒ）およびマウス抗ＨＩＶ−１カプシドタンパク質ｐ２４抗体１３Ｂ５（ｐｄｂ  １Ｅ６Ｏ）を、構造予測評価のためのテンプレートとして使用した。三次元構造実験に基づき、５つのＦＷ３Ｖｅｒｎｉｅｒゾーン残基の３つを未改変のままにした。ＦＷ２のＶｅｒｎｉｅｒゾーン残基はいずれも改変しなかった。したがって、Ｈ３重鎖を追加の復帰突然変異のための基礎出発テンプレートとして使用した。４つの重鎖Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５およびＨ６を抗体生成のために選択した。
【０１６７】
抗体２Ｂ１２
２つのヒトＶＫ遺伝子を、モザイクアプローチによるＣＤＲ移植に使用した。ＦＷ１はＩＧＫＶ１−３９に由来し、ＦＷ２およびＦＷ３はＩＧＫＶ４−１に由来した。
【０１６８】
ヒト化軽鎖タンパク質配列を以下にアラインする。２Ｂ１２−ＬＣを配列番号４３に示す。ＩＧＫＶ１−３９を配列番号４４に示す。ＩＧＫＶ４−１を配列番号４５に示す。１ＮＣＡを配列番号４６に示す。１ＺＡ６を配列番号４７に示す。１ＰＧ７を配列番号４８に示す。１ｂ２ｗを配列番号４９に示す。１ｆｖｄを配列番号５０に示す。２ｆｇｗを配列番号５１に示す。ＤＲを２Ｂ１２−ＬＣ配列中で下線で示し、復帰突然変異を−Ｌ０〜−Ｌ４バリアント中で下線で示す。
【化４】
0006722110.tif 000006
【０１６９】
ヒト化抗−ＴＡＧ−７２抗体ＣＣ４９（ｐｄｂ  １ＺＡ６）、ヒト化抗組織因子抗体Ｄ３Ｈ４４（ｐｄｂ  １ＰＧ７）、ヒト化抗ｐ１８５ＨＥＲ２抗体４Ｄ５（ｐｄｂ  １ＦＶＤ）、ヒト化抗ガンマインターフェロン抗体（ｐｄｂ  １Ｂ２Ｗ）、ヒト化抗ＣＤ１８抗体（ｐｄｂ  ２ＦＧＷ）およびインフルエンザウイルスサブタイプＮ９からのマウス抗ノイラミニダーゼ抗体ＮＣ４１（ｐｄｂ  １ＮＣＡ）を、構造予測評価のためのテンプレートとして使用した。ＦＷ３のＶｅｒｎｉｅｒ帯域残基を未改変のままにした。したがって、Ｌ１軽鎖を追加の復帰突然変異のための基礎出発テンプレートとして使用した。最終的に、４つの軽鎖Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４を抗体生成に選択した。
【０１７０】
２つのヒトＶＨ遺伝子を、モザイクアプローチによるＣＤＲ移植に使用した。ＦＷ１およびＦＷ３はＩＧＨＶ７−４−１＊０２に由来し、ＦＷ２はＩＧＨＶ１−ｃ＊０１に由来した。
【０１７１】
ヒト化重鎖タンパク質配列を以下にアラインする。２Ｂ１２−ＨＣを配列番号５２に示す。ＩＧＨＶ７を配列番号５３に示す。ＩＧＨＶ１−ｃを配列番号５４に示す。１ＢＪ１−Ｈを配列番号５５に示す。９０４６−Ｈを配列番号５６に示す。ＣＤＲを２Ｂ１２−ＨＣ配列中で下線で示し、復帰突然変異を−Ｈ１〜−Ｈ４バリアント中で下線で示す。
【化５】
0006722110.tif 000007
【０１７２】
ヒト化抗ＶＥＧＦ中和抗体（ｐｄｂ  １ＢＪ１）、およびシタツズマブボガトクス（ｃｉｔａｔｕｚｕｍａｂ  ｂｏｇａｔｏｘ）抗体（９０４６−Ｈ）を、それぞれ、構造予測評価および一次配列比較のためのテンプレートとして使用した。１ＢＪ１三次元構造実験に基づき、ＦＷ２  ＶＨ／ＶＬ界面残基Ｌｙｓ３９を、最後のＣｙｓのすぐ上流に局在するＦＷ３  Ｐｈｅと同様に未改変のままにした。したがって、Ｈ１重鎖を追加の復帰突然変異ならびにＨ３およびＨ４バリアントの生成のための基礎出発テンプレートとして使用した。あるいは、ＩＧＨＶ７−４−１の３つのＦＷを保持するバリアントも含めた（Ｈ２）。
【０１７３】
４つの２Ｂ１２重鎖Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３およびＨ４を最終的に抗体生成に選択した。
【０１７４】
産生された２Ｂ１２および１０Ｇ５軽鎖および重鎖可変領域についてのアミノ酸配列を以下に示す（Ｌは軽鎖を示し、Ｈは重鎖を示す）。
【化６】
0006722110.tif 000008
【化７】
0006722110.tif 000009
【化８】
0006722110.tif 000010
【０１７５】
親キメラバージョンと比較して異なる復帰突然変異（ヒトフレームワーク残基に代えてネズミ起源のアミノ酸）を含有する抗体２Ｂ１２および１０Ｇ５のそれぞれの１６個のヒト化バリアントを構築した。全ての抗体バリアントを、表２および３に以下に示される組合せでヒトＩｇＧ１抗体としてＣＨＯ細胞中で良好に産生した。
【０１７６】
【表２】
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【０１７７】
【表３】
0006722110.tif 000012
【０１７８】
抗体バリアントを精製し、ＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞系を使用してフローサイトメトリー力価測定により分析した。手短に述べると、ＲＡＪＩ−ＫＩＲ３ＤＬ２細胞系をトリパンブルーでカウントした。細胞を１ｍｌ当たり百万個において調整した。上記懸濁液の１００μｌを９６ウェルＵ底マイクロプレート（ウェル当たり１０００００個の細胞）中に移した。細胞を１００μｌ／ウェルのＳｔａｉｎｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（ＳＢ）により１回洗浄し、４００ｇにおいて２分間スピンダウンした。１／３における希釈範囲は、それぞれの精製抗体について１００μｇ／ｍｌ〜２．１０−３μｇ／ｍｌで実施した。それぞれの希釈物の５０μｌをそれぞれのウェルに添加した。細胞を４℃において１時間インキュベートした。細胞をＳＢ（１００μｌ）中で３回洗浄し、４００ｇにおいて２分間スピンダウンした。１／２００において希釈されたヤギ抗ヒトＰＥ（Ｆｃ特異的）をプレートに添加し、細胞を４℃において３０分間インキュベートした。細胞を２回洗浄し、ＦＡＣＳ  ＣＡＮＴＯ血球計算器上で直ちに分析した。全ての上清はそのアッセイにおいて陽性であり、全てのヒト化バリアントが標的抗原への結合を保持することを示した。
【０１７９】
２Ｂ１２および１０Ｇ５抗体について、全てのバリアントが親キメラバージョンとして標的細胞に同等に十分に結合し、そのアッセイにおいて互いにおよびキメラ抗体と区別不能と考えられる。
【０１８０】
比較により、ヒト化された別の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体について、親和性の全体的な損失が観察された。このクローンの一部のバリアント、例えば、Ｈ４Ｌ１、Ｈ４Ｌ２およびＨ４Ｌ３について、ヒトフレームワーク配列中へのネズミ残基の再導入（復帰突然変異）は、細胞表面抗原への見かけの結合をわずかに改善したが、完全な結合活性を復元しなかった。
【０１８１】
実施例２
減少した凝集傾向を有するヒト化抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の同定
ヒトＩｇＧ１フォーマットで産生された２Ｂ１２および１０Ｇ５のヒト化バリアントの凝集傾向を、それらの配合物のｐＨに関して研究した。それぞれのｍＡｂについて、凝集傾向アッセイは、約１ｍｇの精製材料を要求した。
【０１８２】
以下のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を研究した：２Ｂ１２−Ｈ１Ｌ１；２Ｂ１２−Ｈ１Ｌ２；２Ｂ１２−Ｈ２Ｌ１；２Ｂ１２−Ｈ２Ｌ２；１０Ｇ５−Ｈ３Ｌ２；および１０Ｇ５−Ｈ４Ｌ２。
【０１８３】
これらのｍＡｂの凝集傾向を、それらの配合物ｐＨに応じて評価した。ｐＨ５．５〜８の範囲の合計５つの薬学的に許容可能な緩衝溶液を選択し；したがって、それぞれのｍＡｂを５つの配合物中で表４〜８に示される１ｍｇ／ｍＬの最終濃度において調製した。
【０１８４】
【表４】
0006722110.tif 000013
【０１８５】
【表５】
0006722110.tif 000014
【０１８６】
【表６】
0006722110.tif 000015
【０１８７】
【表７】
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【０１８８】
【表８】
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【０１８９】
それぞれの精製ｍＡｂの初期溶液をＰＢＳ１×配合物中で供給し、他の配合物を透析により緩衝液交換を介して得た。
【０１９０】
それぞれのｍＡｂ配合物の凝集傾向を、それらの凝集温度（Ｔａｇｇ）の計測および比較により実験的に評価した。Ｔａｇｇは、熱シフト安定性アッセイ（Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｓｈｉｆｔ  Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ）法（ＴＳＳＡ）を使用して計測した。ＴＳＳＡは、「ＰｒｏｔｅｏＳｔａｔ（登録商標）Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｓｈｉｆｔ  Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ」キット（Ｅｎｚｏ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ，ＮＹから入手可能）を使用して水溶液中のペプチドおよびタンパク質の凝集温度を計測する。分析すべき試料を０℃から１００℃に加熱し、蛍光を温度増加として読み取る。凝集温度に到達した場合に、試料蛍光の高い増加が検出される。この蛍光計測は、４８０ｎｍの励起分子回転プローブを使用する。これは広いｐＨ範囲（４〜１０）と適合性であり、通常濃度において存在する界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０に耐性である。
【０１９１】
結果
結果を以下の表９に示す。初回精製％を、それぞれのｍＡｂについてＰＢＳ１×＋ポリソルベート８０、０．１ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ＝７．４の配合物についてＳＥ−ＨＰＬＣにより計測する。キャンセルとして示されるランは、研究プロトコルによりそれらの値が平均から外れすぎたためである。ｐＨ５．５における２Ｂ１２−Ｈ２Ｌ１のラン１中断が停止され、結果が異常であったことが考えられる。それというのも、ＴＡｇｇ値が極めて高いと思われたためである。結果は、実際は正常であったが、３回目の有効なランを実施するために十分なｍＡｂ産物が残留しなかった。
【０１９２】
【表９】
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【０１９３】
全ての抗体は、長期貯蔵の間のｍＡｂの化学的分解リスクを回避する配合物と調和するｐＨ値における安定性を実証した。抗体は、血中ｐＨと等しいｐＨ＝７．４において安定性を示し、長期貯蔵の間のｍＡｂの化学的分解リスクはより低い。全ての試験バリアントについて、ゲルＩＥＦにより計測される実験的ｐＩ値が、塩基性ｐＨ範囲（ｐＨ９超）中に見出される。結果的に、２Ｂ１２および１０Ｇ５抗体は、全ての試験ｐＨ条件において正味陽性電荷を担持する。実験的ｐＩ値をかなり下回る選択ｐＨ条件（ｐＨ７．０または７．４）も、両方のバリアントについて高い水中溶解度を確保する。
【０１９４】
凝集傾向に関して、２Ｂ１２のＨ１Ｌ１またはＨ１Ｌ２およびＨ２Ｌ１またはＨ２Ｌ２バリアント間に驚くべき大きいギャップが存在する。Ｈ２Ｌ１またはＨ２Ｌ２は、Ｈ１Ｌ１またはＨ１Ｌ２よりもかなり高い凝集温度を有し、したがって、かなりより良好な物理的安定性を有するはずである。これは、３９位（Ａｂｎｕｍナンバリング）のＨ２重鎖上のグルタミン（Ｑ）の存在により説明することができる。実際、２つのＨ結合が、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｔｕｄｉｏソフトウェアを用いるｍＡｂのモデリングにより図１Ａおよび１Ｂに示されるとおりＶＨ＿Ｑ３９とＶＬ＿Ｑ３８との間に構築される。これらの２つのＨ結合は、ｍＡｂの四次構造を安定化し、タンパク質凝集を担い得る特定の疎水性区域の露出を妨げると考えられる。
【０１９５】
２Ｂ１２バリアントと類似して、同様にＶＨ＿Ｑ３９とＶＬ＿Ｑ３８との間に構築された２つのＨ結合を有するｍＡｂ１０Ｇ５のＨ３Ｌ２およびＨ４Ｌ２バリアントについて、高い凝集温度が観察された。これらも良好な物理的安定性を実証した。
【０１９６】
実施例３
Ｒａｊｉ−ＫＩＲ３ＤＬ２（高濃度）によりＩＶで移植されたＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスモデルにおける２Ｂ１２−Ｈ２Ｌ１用量応答の効力
この研究の目的は、抗体２Ｂ１２−Ｈ２Ｌ１が、Ｒａｊｉ−ＫＩＲ３ＤＬ２ヒトＢ腫瘍細胞により静脈内（ＩＶ）移植されたＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスの寿命を用量依存的に増加させ得るか否かを評価することであった。
【０１９７】
細胞がそれらの表面上でＫＩＲ３ＤＬ２を発現し、２Ｂ１２−Ｈ２Ｌ１抗体を結合させることを確認した後、４８匹のＳＣＩＤマウスを、５ＭのＲａｊｉ−ＫＩＲ３ＤＬ２（高濃度）細胞によりＩＶ移植した（５世代継代および９７％の生存率）。ＩＰ処理は、移植の１日後に開始し、抗体を０．０１、０．１、１μｇおよび１０μｇ／マウスの用量において１回投与した。
【０１９８】
６つの群を実施した（ｎ＝８）。
・アイソタイプ対照（ＩＣ）を１０μｇ／マウスにおいて注射した対照群
・２Ｂ１２−Ｈ２Ｌ１を０．０１μｇ／マウスにおいて注射した処理群
・２Ｂ１２−Ｈ２Ｌ１を０．１μｇ／マウスにおいて注射した処理群
・２Ｂ１２−Ｈ２Ｌ１を１μｇ／マウスにおいて注射した処理群
・２Ｂ１２−Ｈ２Ｌ１を１０μｇ／マウスにおいて注射した処理群
【０１９９】
Ｒａｊｉ−ＫＩＲ３ＤＬ２（高濃度）細胞のＩＶ移植後、アイソタイプ対照により処理されたマウスの群は早く死亡し、生存期間中央値は２０日間であった（表１０）。
【０２００】
【表１０】
0006722110.tif 000019
【０２０１】
２Ｂ１２により処理された群の生存曲線および生存期間中央値は、全ての用量において、対照群と比較して有意な増加を示した（図２）。しかしながら、寿命増加（ＩＬＳ）の割合は、マウスを１および１０μｇのｍＡｂにより処理した場合にかなり高く、０．０１および０．１μｇのｍＡｂにより処理した場合は高くなかった（表１０）。２Ｂ１２は、低濃度においてもＡＤＣＣを誘導し得た。
【０２０２】
結果を図２に示す。Ｒａｊｉ−ＫＩＲ３ＤＬ２（高濃度）５ＭによりＩＶ移植され、用量応答の２Ｂ１２によりＩＰ処理されたＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスの生存曲線（ｎ＝８／群）。処理は、１日目から開始した。実験の終了は５８日目であった。
【０２０３】
この研究は、２Ｂ１２による処理が低用量においてもＩＶモデルのＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスの生存率を有意に延長することを示した。
【０２０４】
全ての見出しおよび小見出しは、本明細書において便宜的に使用されるにすぎず、決して本発明を限定するものとして解釈すべきではない。上記要素のその全ての考えられる変形形態における任意の組合せは、本明細書に特に記載されず、または特に文脈と明らかに矛盾しない限り、本発明により包含される。本明細書の値の範囲の記述は、本明細書に特に記載のない限り、その範囲内に含まれるそれぞれの別個の値を個別に参照する略記方法として機能するものにすぎず、それぞれの別個の値は、あたかもそれが本明細書において個々に記述されるように、本明細書に組み込まれる。特に記載のない限り、本明細書に提供される全ての正確な値は、対応する近似値を代表する（例えば、特定の因子または計測値に関連して提供される全ての正確な例示値は、適宜「約」により修飾される、対応する近似測定値も提供するものとみなすことができる）。
【０２０５】
本明細書に記載の全ての方法は、本明細書に特に記載されず、または特に文脈と明らかに矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施することができる。
【０２０６】
本明細書に提供される任意および全ての例、または例示的な文言（例えば、「例えば」）の使用は、本発明をより良好に説明するものにすぎず、特に記載のない限り、本発明の範囲を限定するものではない。本明細書中の文言は、そのように明示されない限り、任意の要素が本発明の実施に不可欠であることを示すものとして解釈すべきでない。
【０２０７】
本明細書の特許文献の引用および組込みは、便宜的に行われるにすぎず、そのような特許文献の有効性、特許性および／または権利行使可能性に関するいかなる見解も反映するものではない。１つまたは複数の要素に対する参照などの用語を使用する本発明の任意の態様または実施形態の本明細書の記載は、特に記載されず、または文脈と明らかに矛盾しない限り、その特定の１つまたは複数の要素「からなる」、「本質的にその要素からなる」またはその要素を「実質的に含む」本発明の類似の態様または実施形態へのサポートを提供するものとする（例えば、特定の要素を含む本明細書に記載の組成物は、特に記載されず、または文脈と明らかに矛盾しない限り、その要素からなる組成物も記載するものとして理解すべきである）。
【０２０８】
本発明は、適用可能な法律により許容される最大の程度まで、本明細書に提示される態様または特許請求の範囲に記載される主題の全ての改変形態および均等物を含む。
【０２０９】
本明細書に引用される全ての刊行物および特許出願は、それぞれの個々の刊行物または特許出願が、あたかも参照により組み込まれることが個別にかつ具体的に示されるように、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【０２１０】
上記の本発明を、理解を明確にすることを目的として、説明および例として、いくらか詳細に記載したが、本発明の教示に照らして添付の特許請求の範囲の趣旨または範囲から逸脱することなく、それに対する特定の変更形態および改変形態をなし得ることは当業者に容易に明らかである。
【図１】
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【図２】
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【配列表】
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