(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ酸配列ＬＴＬＲＫＥＰＡＳＥＩＡＱＳＩＬＥＡＹＳＱＮＧＷＡＮＲＲＳＧＧＫＲＰを含み、前記アミノ酸配列中のアミノ酸はＤ−アミノ酸残基である、ペプチド。
【請求項２】
請求項１に記載のペプチドと少なくとも９０％のアミノ酸配列相同性を有するペプチド又は請求項１に記載のペプチドの断片であって、前記ペプチド又は断片は、老化現象を示す細胞又は対照の細胞と比較してＦＯＸＯ４発現が増加しており、かつＳｅｒ１５リン酸化ｐ５３（ｐＳｅｒ１５−５３）を発現する細胞におけるアポトーシス誘導活性を示し、前記断片は、アミノ酸配列ＳＥＩＡＱＳＩＬＥＡＹＳＱＮＧＷを含み、前記アミノ酸配列中の又は前記断片中のアミノ酸の少なくとも９０％がＤ−アミノ酸残基である、ペプチド又はペプチドの断片。
【請求項３】
細胞移行ペプチド配列をさらに含む、請求項１又は２に記載のペプチド。
【請求項４】
前記細胞移行ペプチド配列はアミノ酸配列ＰＰＲＲＲＱＲＲＫＫＲＧを有する、請求項３に記載のペプチド。
【請求項５】
前記細胞移行ペプチド配列中のアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸残基である、請求項３又は４に記載のペプチド。
【請求項６】
前記細胞移行ペプチドが前記ペプチドのＣ末端部分に結合している、請求項３から５のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項７】
請求項１から６のいずれか一項に記載のペプチドを含む、医薬組成物。
【請求項８】
化学療法剤をさらに含む、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
請求項１から６のいずれか一項に記載のペプチドをコードする核酸。
【請求項１０】
請求項９に記載の核酸を含む、発現ベクター。
【請求項１１】
請求項９に記載の核酸を含む、宿主細胞。
【請求項１２】
薬剤として使用され、又は対照の細胞と比較してＦＯＸＯ４発現が増加しており、かつｐＳｅｒ１５−５３を発現している細胞の除去が有益な障害の治療で使用され、前記障害は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症を含む慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、１型及び２型糖尿病を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、心筋梗塞、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病を含む神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織の移植後の生着不全の抑制又は防止、再灌流障害、失禁、難聴を含む聴力低下、失明を含む視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛を含む疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良からなる加齢関連障害の群から選択される、請求項１から６のいずれか一項に記載のペプチド、請求項７又は８に記載の医薬組成物、又は請求項９に記載の核酸。
【請求項１３】
薬剤として使用され、又は老化現象を示す細胞の除去が有益な障害の治療で使用され、前記障害は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症を含む慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、１型及び２型を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、心筋梗塞、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病を含む神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織の移植後の生着不全の抑制又は防止、再灌流障害、失禁、難聴を含む聴力低下、失明を含む視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛を含む疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良からなる加齢関連障害の群から選択される、請求項１から６のいずれか一項に記載のペプチド、請求項７又は８に記載の医薬組成物、又は請求項９に記載の核酸。
【請求項１４】
ヒトである対象においてｐ２１ｃｉｐ１の発現への対抗に使用され、対象においてｐ１６ＩＮＫ４ａを発現する細胞の除去に使用され、及び／又は対象において核セリン−１５−リン酸化ｐ５３フォーカスへの対抗、若しくは核セリン−１５−リン酸化ｐ５３フォーカスの個数の抑制に使用され、前記対象は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症を含む慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、１型及び２型を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、心筋梗塞、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病を含む神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織の移植後の生着不全の抑制又は防止、再灌流障害、失禁、難聴を含む聴力低下、失明を含む視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛を含む疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良を患う、又は患うことが予期される、請求項１から６のいずれか一項に記載のペプチド、請求項７又は８に記載の医薬組成物、又は請求項９に記載の核酸。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬の分野に関する。より具体的には、それは老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態の治療の分野に関する。特に、本発明は、老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態、例えばがんの治療に使用される化合物に関する。また、本発明は、老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態を患う人、又は患うおそれのある人の治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アポトーシス（プログラム化された細胞死）及び細胞の老化（細胞増殖の永続的な停止）は、体内又は体外の様々な負の刺激による細胞の除去（アポトーシスの場合）、又はさらなる細胞増殖を停止（老化の場合）させることができるヒトの身体における仕組みである。例えば、ＤＮＡ損傷、熱、放射線、栄養枯渇、ウイルス感染、低酸素血症及び酸化的ストレスのすべてが細胞による細胞内アポトーシスシグナル放出のきっかけとなる。同様に、細胞の老化は、テロメアの短縮化、酸化的ストレス、ＤＮＡ損傷、クロマチン再構築、腫瘍抑制因子及びがん遺伝子誘導によって誘導されることが実証されている。アポトーシス及び細胞の老化は、ヒトの老化、老化関連疾患、及びがんの成長の加減において主要な役割を担う。
【０００３】
アポトーシスは、損傷した細胞を殺す。アポトーシスの最終段階を経た死にゆく細胞は、マクロファージ等の適した受容体を有する細胞による食作用のために、これら細胞を特徴付ける食作用分子を呈示する。また、分裂しない老化現象を示す細胞は免疫細胞によって除去されるが、この過程はほとんど役に立たない。結果として、アポトーシスは細胞を殺すが、老化現象を示す細胞は、組織から除去されず、代謝的に活性なままである。
【０００４】
老化現象を示す細胞は、加齢とともに、加齢関連病理の部位に蓄積することが示されている。さらに、老化現象を示す細胞は変異を獲得し、増殖状態に再び入ることができる。したがって、良性の老化病変でも極めて有害になる能力を保持している。
【０００５】
老化現象を示す細胞は−とりわけテロメア機能不全、ＤＮＡ損傷、酸化的損傷、クロマチン再構築、又はがん遺伝子変化への応答に関わらず−そのトランスクリプトームに大きな変化を示すことに注意することが重要である。結果として、老化現象を示す細胞は、炎症性サイトカイン又はケモカイン、成長因子及び／又はマトリクス分解性プロテアーゼを分泌することで組織の微環境及び潜在的に全身の環境に作用し、変化を加える。この表現型は、老化関連分泌表現型（ＳＡＳＰ）と言われる。最終的に、これは組織恒常性の低下につながり、老化関連疾患の発病と進展とを促進する。実際に、細胞の老化は、広範囲の加齢関連病理に関連している。
【０００６】
通常の及び変性の加齢表現型（機能喪失）及びがん（機能獲得）が因果的に細胞の老化及びＳＡＳＰと関係しているという証拠が増えてきている。例えば、（ｉ）老化現象を示す線維芽細胞が乳房での乳の産生低下に関与している、（ｉｉ）老化現象を示す肺動脈平滑筋細胞が肺高血圧に関与している、（ｉｉｉ）老化現象を示す皮膚細胞が表皮の菲薄化及びコラーゲン含量の低下に関連する、（ｉｖ）老化現象を示す星状膠細胞及びＳＡＳＰがアルツハイマー病及びパーキンソン病に関与する、（ｖ）老化現象を示す軟骨細胞及びＳＡＳＰが変形性関節症に関連する状態に至らせる。老化現象を示す細胞及びＳＡＳＰに関連する状態に至らせる病理は、さらにこの他、アテローム性動脈硬化症、肺気腫、糖尿病性潰瘍、腎疾患、後彎症、骨粗鬆症、黄斑変性症、ＣＯＰＤ及びインスリン抵抗性、糖尿病、肥満症、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群、ヘルニア、サルコペニア及び悪液質等のラミノパシー、関節炎、脊柱側彎症、及びがんをさらに含む。
【０００７】
遺伝学の方法での老化現象を示す細胞の除去が際立って健康を改善し、老化を早められたマウスモデルの老化パラメータを低下させることが最近になって示された。このマウスは後彎症（過度の骨の湾曲）、筋力、脂肪沈着及び白内障によって評価される老化の兆候を抑制することを示した。これは、細胞の老化及びＳＡＳＰが因果的に老化関連表現型及びがんに関係するという証拠をさらに与える（非特許文献１）。このコンセプトの証明のための証拠が、治療適用可能性に乏しい遺伝学の方法で得られた。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｂａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１．Ｎａｔｕｒｅ  ４７９（７３７２）：２３２−６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
細胞の老化が変性の（機能喪失）疾患及びがん（機能獲得）に関係があるため、老化現象を示す細胞のアポトーシスを選択的に誘導する化合物が本技術分野で必要とされていることが上記との関連で明らかである。現在、老化現象を示す細胞のアポトーシスを生体内で選択的に誘導できる治療適用可能な適切な化合物はない。本発明の目的は、老化現象を示す細胞を治療上の標的とし、細胞老化に関連する疾患の治療に使用できる新規の及び既存の化合物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
発明者は、本発明に係るペプチド及び本発明に係る使用のための阻害剤ＮＱＤＩ及びＲ４０６が老化現象を示す細胞においてアポトーシスを選択的に誘導し、結果として、これらが老化現象を示す細胞の存在に関連する疾患の治療に適用可能であるという予想できない自身の知見によって、この課題を解決した。発明者は、とりわけ、本発明に係る化合物が（ｉ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏでの老化現象を示す細胞の除去、（ｉｉ）急速に老化するマウスモデルで加齢及び加齢関連疾患の症状への対抗、（ｉｉｉ）化学療法でもたらされる毒性に関してｉｎ  ｖｉｖｏモデルで器官機能の保護、及び（ｉｖ）以前より抵抗性を示した、又は抵抗性を獲得した化学療法剤に対して抵抗性がんを感受性にすること、において有効であることを示した。
【００１１】
より具体的には、発明者は、アミノ酸配列ＬＴＬＴＬＲＫＥＰＡＳＥＩＡＱＳＩＬＥＡＹＳＱＮＧＷＡＮＲＲＳＧＧＫＲＰを含み、該アミノ酸配列中のアミノ酸がＤ−アミノ酸残基であるペプチドを提供することで、この課題を解決した。
【００１２】
また、請求項１に記載のペプチドと少なくとも７０％、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列相同性を有するペプチド又は請求項１に記載のペプチドの断片が提供され、該ペプチド又は断片は、老化現象を示す細胞におけるアポトーシス誘導活性を示し、好ましくは、当該断片はアミノ酸配列ＳＥＩＡＱＳＩＬＥＡＹＳＱＮＧＷを有し、前記アミノ酸配列中の又は前記断片中のアミノ酸の少なくとも９０％がＤ−アミノ酸残基である。
【００１３】
本発明のペプチドの好ましい実施の形態では、ペプチドが細胞移行ペプチド配列をさらに含み、好ましくは、該細胞移行ペプチド配列はアミノ酸配列ＰＰＲＲＲＱＲＲＫＫＲＧを有し、好ましくは当該細胞移行ペプチド配列中のアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸残基である。
【００１４】
本発明のペプチドの他の好ましい実施の形態では、細胞移行ペプチド配列をさら含み、該細胞移行ペプチドが上記ペプチドのＣ末端部分に結合している。
【００１５】
他の観点では、本発明は、本発明に係るペプチドを含む医薬組成物を提供する。
【００１６】
本発明の医薬組成物の好ましい実施の形態では、医薬組成物は、化学療法剤をさらに含む。
【００１７】
他の観点では、本発明は、フォークヘッドボックスタンパク質Ｏ４のレトロインベルソペプチド又はそのホモログ若しくは断片を提供し、好ましくは該フォークヘッドボックスタンパク質Ｏ４のアミノ酸配列は図１４又は図１５に示され、当該ホモログは、フォークヘッドボックスタンパク質Ｏ４のレトロインベルソアミノ酸配列と少なくとも７０％のアミノ酸配列相同性を有し、当該ホモログは、老化現象を示す細胞におけるアポトーシス誘導活性を示し、上記断片は、老化現象を示す細胞におけるアポトーシス誘導活性を有する。
【００１８】
他の観点では、本発明は、本発明に係るペプチドをコードする核酸を提供し、該核酸は、任意にベクターに含まれてもよい。
【００１９】
さらなる観点では、本発明は、本発明に係る核酸又はベクターを含む宿主細胞を提供する。
【００２０】
他の観点では、本発明は、薬剤として使用され、又は対照の細胞と比較してＦＯＸＯ４発現が増加しており、かつｐＳｅｒ１５−５３（活性ｐ５３シグナル）を発現している細胞の除去が有益な障害の治療で使用され、好ましくは、上記障害は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、１型及び２型を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織の移植後の生着不全の抑制又は防止、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良からなる加齢関連障害の群から選択される。
【００２１】
他の観点では、本発明は、薬剤として使用され、又は老化現象を示す細胞の除去が有益な障害の治療で使用され、好ましくは、前記障害は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、２型糖尿病を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織の移植後の生着不全の抑制又は防止、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良からなる加齢関連障害の群から選択される。
【００２２】
本発明に係る使用のためのペプチド、医薬組成物又は核酸の他の好ましい実施の形態では、上記障害はがんであって、当該使用は哺乳類の対象、好ましくはヒトに、該対象に放射線治療を受けさせる前、間及び／又は後に、及び／又は該対象に少なくとも１種の化学療法剤を投与する前、間又は後に投与するためである。
【００２３】
本発明に係る使用のためのペプチド、医薬組成物又は核酸のさらに他の好ましい実施の形態では、上記の障害はがんであって、がんは治療抵抗性である。
【００２４】
本発明に係る使用のためのペプチド、医薬組成物又は核酸のさらに他の好ましい実施の形態では、上記の障害はがんであって、がんは治療抵抗性であって、当該治療抵抗性のがんは、転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫、好ましくは転移性黒色腫であって、上記がんが抵抗性を示す上記の治療は、放射線治療及び／又はＲＡＦ、ＭＥＫ若しくはＥＲＫ阻害剤又は５’フルオロウラシル、ドキソルビシン及びシクロフォスファミド（ＦＡＣ）を化学療法剤として含む化学療法であって、好ましくは、上記ＲＡＦ、ＭＥＫ若しくはＥＲＫ阻害剤は、ＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ、コベミチニブ及び／又はトラメチニブ、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ、及びその組み合わせである。
【００２５】
他の観点では、本発明は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、２型糖尿病を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織の移植後の生着不全の抑制又は防止、虚血再灌流障害、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良を患う、又は患うことが予期されるヒトである対象において老化現象を示す細胞の除去に使用される、本発明に係るペプチド、医薬組成物、又は核酸を提供する。
【００２６】
他の観点では、本発明は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、２型糖尿病を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織の移植後の生着不全の抑制又は防止、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良を患う、又は患うことが予期されるヒトである対象においてｐ２１ｃｉｐ１の発現への対抗及び／又はｐ２１ｃｉｐ１を発現する細胞の除去に使用される、本発明に係るペプチド、医薬組成物、又は核酸を提供する。
【００２７】
他の観点では、本発明は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、２型糖尿病を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織の移植後の生着不全の抑制又は防止、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良を患う、又は患うことが予期される対象においてｐ１６ＩＮＫ４ａの発現への対抗及び／又はｐ１６ＩＮＫ４ａを発現する細胞の除去に使用される、本発明に係るペプチド、医薬組成物、又は核酸を提供する。
【００２８】
他の観点では、本発明は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、２型糖尿病を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織の移植後の生着不全の抑制又は防止、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良を患う、又は患うことが予期される対象において核セリン−１５−リン酸化ｐ５３フォーカスへの対抗、又は核セリン−１５−リン酸化ｐ５３フォーカスの個数の抑制に使用される、本発明に係るペプチド、医薬組成物、又は核酸を提供する。
【００２９】
さらに他の観点では、本発明は、本発明に係るペプチド又は核酸を含有する第１の容器と、化学療法剤を含有する第２の容器と、を備えるキットを提供する。
【００３０】
他の観点では、本発明は、老化現象を示す細胞の除去が有益な障害の治療に使用されるＡＳＫ１の阻害剤を提供する。
【００３１】
本発明に係る使用のためのＡＳＫ１の阻害剤の好ましい実施の形態では、ＡＳＫ１の阻害剤はＮＱＤＩである。
【００３２】
本発明に係る使用のためのＡＳＫ１の阻害剤の好ましい他の実施の形態では、上記の障害がアテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、２型糖尿病を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織の移植後の生着不全の抑制又は防止、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良からなる加齢関連障害の群から選択される。
【００３３】
本発明に係る使用のためのＡＳＫ１の阻害剤のさらに他の好ましい実施の形態では、上記の障害はがんであって、上記の使用は、哺乳類の対象、好ましくはヒトに、該対象に放射線治療を受けさせる前、間及び／又は後に、及び／又は該対象に少なくとも１種の化学療法剤を投与する前、間又は後に投与するためである。
【００３４】
本発明に係る使用のためのＡＳＫ１の阻害剤のさらに他の好ましい実施の形態では、上記の障害はがんであって、該がんは治療抵抗性である。
【００３５】
本発明に係る使用のためのＡＳＫ１の阻害剤のさらに他の好ましい実施の形態では、上記の障害はがんであって、該がんは治療抵抗性であって、当該治療抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫、好ましくは転移性黒色腫であって、当該がんが抵抗性を示す該治療は、ＲＡＦ、ＭＥＫ若しくはＥＲＫ阻害剤を化学療法剤として含む化学療法であって、好ましくは、該ＲＡＦ、ＭＥＫ若しくはＥＲＫ阻害剤は、ＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである、
【００３６】
他の観点では、本発明は、ＡＳＫ１の阻害剤、好ましくはＮＱＤＩと、化学療法剤と、を含む医薬的組み合わせを提供する。
【００３７】
他の観点では、本発明は、医薬として使用される、好ましくはがんの治療での使用されるキットを提供し、該キットは、ＡＳＫ１の阻害剤、好ましくはＮＱＤＩを含有する第１の容器と、化学療法剤を含有する第２の容器と、を備える。
【００３８】
他の観点では、本発明は、老化現象を示す細胞の除去が有益な障害の治療に使用されるＳＹＫの阻害剤を提供し、当該障害が、ぜんそく、免疫性血小板減少症、溶血性貧血、骨髄性白血病及び／又はリンパ腫ではなく、好ましくは、前記障害は、請求項１５に挙げられた障害である。
【００３９】
本発明に係る使用のためのＳＹＫの阻害剤の好ましい実施の形態では、ＳＹＫの阻害剤はＲ４０６である。
【００４０】
本発明に係る使用のためのＳＹＫの阻害剤の他の好ましい実施の形態では、上記の障害はがんであって、該がんがリンパ腫又は白血病ではない、好ましくはリンパ腫又は骨髄性白血病ではないという条件で、前記使用が哺乳類の対象、好ましくはヒトに、該対象に放射線治療を受けさせる前、間及び／又は後に、及び／又は該対象に少なくとも１種の化学療法剤を投与する前、間又は後に投与するためである。
【００４１】
本発明に係る使用のためのＳＹＫの阻害剤のさらに他の好ましい実施の形態では、上記の障害はがんであって、当該がんは治療抵抗性のがんである。
【００４２】
前の実施の形態に係る使用のためのＳＹＫの阻害剤のさらに他の好ましい実施の形態では、上記の治療抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫、好ましくは転移性黒色腫であって、当該がんが抵抗性を示す治療は、ＲＡＦ、ＭＥＫ若しくはＥＲＫ阻害剤を化学療法剤として含む化学療法であって、好ましくは、ＲＡＦ、ＭＥＫ若しくはＥＲＫ阻害剤は、ＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである。
【００４３】
他の観点では、本発明は、ＳＹＫの阻害剤、好ましくはＲ４０６と、化学療法剤と、を含む医薬的組み合わせを提供する。
【００４４】
他の観点では、本発明は、医薬として使用されるキットを提供し、該キットは、ＳＹＫの阻害剤、好ましくはＲ４０６を含有する第１の容器と、化学療法剤を含有する第２の容器と、を備える。
【００４５】
他の観点では、本発明は、がんの治療に使用されるキットを提供し、該がんは、リンパ腫又は白血病ではなく、好ましくはリンパ腫又は骨髄性白血病ではなく、当該キットは、ＳＹＫの阻害剤、好ましくはＲ４０６を含有する第１の容器と、化学療法剤を含有する第２の容器と、を備える。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】老化現象を示す細胞が遺伝子学的に除去された場合に、ｂｕｂｒ１Ｈ／Ｈ  ｉｎｋａｔｔａｃ−３早老マウスモデルの全体的な健康が顕著に改善されたことを示す（上のマウス：老化現象を示す細胞を除去（ｓｅｎｅｓｃｅｎｔ  ｃｅｌｌｓ  ｒｅｍｏｖｅｄ）、下のマウス：老化現象を示す細胞を有する（ｓｅｎｅｓｃｅｎｔ  ｃｅｌｌｓ  ｐｒｅｓｅｎｔ））。同時に、これらマウスは後彎症（過度の骨の湾曲）、筋力、脂肪沈着及び白内障によって評価される老化の兆候を抑制することを示した（非特許文献１）。したがって、老化は加齢と因果関係がある。
【図２】パネルＡ及びＢにＦＯＸＯ４  ＤＲＩの設計に用いたＦＯＸＯ４の配列及び３Ｄ構造を示す。ＦＯＸＯ４  ＤＲＩは配列（ｓｅｑｕｅｎｃｅ）：Ｈ−ｌｔｌｒｋｅｐａｓｅｉａｑｓｉｌｅａｙｓｑｎｇｗａｎｒｒｓｇｇｋｒｐｐｐｒｒｒｑｒｒｋｋｒｇ−ＯＨ（ＭＷ：５３５８．２）を有し、すべてのアミノ酸残基がＤ体、すなわちＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドは、すべてのアミノ酸がＬ体であるｇｒｋｋｒｒｑｒｒｒｐｐｐｒｋｇｇｓｒｒｎａｗｇｎｑｓｙａｅｌｉｓｑａｉｅｓａｐｅｋｒｌｔｌのＤ−レトロインベルソ型である。Ａ）で強調されたアミノ酸は、表示されたＦＯＸＯ４のＤＮＡ結合ドメインのＸ線構造において小さいかさ（ｈａｌｏ）として示された（３Ｌ２Ｃ  タンパク質データバンク）。Ａ）におけるアミノ酸ＰＲＫＧＧＳは、３Ｄ構造で示されていないが、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩ配列の一部である。Ｂ）における大きな球は、ＮＭＲによって同定されたようにｐ５３との相互作用でもっとも変化する、Ａ）において下線を付されたアミノ酸を示す。パネルＣは、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが老化現象を示す細胞の生存能力（ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）を選択的に抑制することを示す。老化現象を示すＩＭＲ９０（Ｓｅｎ）及び対照のＩＭＲ９０（Ｃｔｒｌ）がＦＯＸＯ４  ＤＲＩの用量を増加させてインキュベートされ、ＡＱｕｅｏｕｓＯｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、製造者の方法に従って６日後に細胞の生存能力が評価された。ＥＣ５０値に関する選択指数（Ｓ．Ｉ．）が曲線の非回帰解析（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）で決定された。パネルＤ）は、投与後（ａｆｔｅｒ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）３６時間で開始された時間での老化現象を示す細胞の密度（Ｃｅｌｌ  ｄｅｎｓｉｔｙ）の選択的な抑制を示す。実時間の細胞密度がｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ検出システム（ＡＣＥＡ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて評価された。評価の開始前に、１０％  ＦＣＳを含む５０μＬ  ＤＭＥＭがＥ−プレート  ｖｉｅｗ  １６（Ｒｏｃｈｅ）の各ウェルに加えられ、バックグラウンドのシグナルが決められた。続いて、老化現象を示さない（各ウェル２０００細胞）及び老化現象を示す（各ウェル５０００細胞）ＩＭＲ９０線維芽細胞が１５０μｌの培地でプレートに播かれた。１６時間後、Ｅ‐プレートがｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅリーダーに置かれ、細胞密度が３０分ごとに記録された。測定開始の８時間後に２５μＭのＦＯＸＯ４ペプチドで細胞が処理された。測定は示された時点の間継続した。パネルＥ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが用量依存的に老化現象を示す細胞を選択的に排除するが（それぞれ６．２５、１２．５及び２５μＭ）、Ｌ体で同じアミノ酸配列のペプチド及び関係がないＦＯＸＭ１  ＤＲＩペプチド（Ｋｒｕｉｓｗｉｊｋ  ｅｔ  ａｌ、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２０１５）は排除しないことを示す。示されたペプチドを用いることを除いて、図２Ｃに示されたような実験である。パネルＦ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩ（２５μＭ）が老化現象を示すＩＭＲ９０細胞において時間内にカスパーゼ（Ｃａｓｐａｓｅ）−３／７活性化を選択的に誘導するが、対照のＩＭＲ９０細胞では誘導しないことを示す。ガラス底がポ��−Ｌ−リジンで被覆された３５ｍｍ皿（Ｄ１４１４１０；Ｍａｔｓｕｍｉ、日本）に細胞が播かれ、ＮｕｃＶｉｅｗ４８８  カスパーゼ−３（４４４０；Ｅｓｓｅｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）とともにインキュベートされた。ＦＯＸＯ４  ＤＲＩ又はＰＢＳが添加され、ＬＳＭ５１０共焦点顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ）に接続された熱及びＣＯ２制御インキュベータに細胞が移された。添加の８時間後、実時間画像化が開始され、３０分ごとに３×３の格子の写真が結像された。画像化はさらに６日間続けられ、画像がＺｅｎ画像ソフトウェアを用いて連結された。パネルＧ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩ（２５μＭ）が細胞固有のアポトーシスを介して老化現象を示す細胞の生存能力を抑制することを示す。老化現象を示すＩＭＲ９０細胞が汎カスパーゼ阻害剤ＱＶＤ−ＯＰＨ又はＺＶＡＤ−ＦＭＫ（２０μＭ）とともにインキュベートされ、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩに暴露された。６日後、細胞の生存能力が図２Ｃ）に示されたように評価された。ＱＶＤ−ＯＰＨ及びＺＶＡＤ−ＦＭＫの両方がＦＯＸＯ４  ＤＲＩの影響を強く阻害し、老化現象を示す細胞の生存能力を抑制したことは、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがカスパーゼ−３／７を介したアポトーシスによって老化現象を示すＩＭＲ９０の細胞死を引き起こすことを示す。パネルＨ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが老化現象を示す通常のヒト細胞の類：ＩＭＲ９０、ＢＪ及びＷｉ−３８の生存能力を選択的に抑制するが、対照を抑制しないことを示す。図２Ｃに示されるような実験である（１２．５μＭ  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩ）。これは、老化現象を示す細胞を標的とするＦＯＸＯ４  ＤＲＩの効果がさらなる細胞の類に合致することを示す。Ｉ）ＦＯＸＯ４  ＤＲＩの低用量での間欠的な処理は、単回の高用量（ｄｏｓｅ）よりも老化現象を示す細胞を殺すことに関してより選択的であることが証明された。示された処理計画に従っていることを除いて図２Ｃに示されたような実験である。単回投与の代わりに、各時間において１／３の濃度で３回（間に１日おいて）の投与が行われた。３×１／３で投与された場合、ＥＣ７５での選択性が１×１よりも高かった。これは、マウスが低い用量を間に１日おいて３回受けるｉｎ  ｖｉｖｏ実験を行う際の基礎となる。パネルＪ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがＳＡＳＰタンパク質の発現量が高い細胞を選択的に殺すことを示す。左：図２Ｃに示された実験だが、ＩＬ−１α／βシグナル伝達を阻害するＩＬ−１α受容体アンタゴニスト（ＲＡ）、ＩＬ−６組換え体及びＩＬ−１α／β組換え体とともに１日１回、２日間、前処理された細胞のものである。老化現象を示す細胞を殺すことに関してＩＬ−１ＲＡはＦＯＸＯ４  ＤＲＩ（１２．５μＭ）の効果を抑制したが、ＩＬ−１α／β組換え体は効果を増強した。右：１日早く生存能力を測定したことを除いて左の図と同様の実験である。広範囲のＳＡＳＰ阻害剤コルチゾール及びラパマイシン及び抗ＩＬ−１α抗体は、老化現象を示す細胞の生存能力を低下させるＦＯＸＯ４  ＤＲＩの効果を抑制する一方で、一般的な炎症促進剤リポポリサッカライド（ＬＰＳ）がそれを改善する。これら２つの図をあわせて、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが２型糖尿病及び肥満症等のｉｎ  ｖｉｖｏでの多くの老化関連疾患の場合と同じく、Ｓ��ＳＰの発現が高いこれら老化現象を示す細胞を特異的に標的とすることが示される。パネルＫ）は、その細胞質ゾルへの再局在化に起因する活性を有する１５−リン酸化ｐ５３フォーカスの減少をＦＯＸＯ４  ＤＲＩが引き起こすことを示す。活性のある、Ｓ１５−リン酸化ｐ５３のフォーカスの増加を示す。老化現象を示すＩＭＲ９０細胞がカバースリップ上に播かれ、カバースリップから死細胞が剥がれることを防ぐための汎カスパーゼ阻害剤ＱＶＤ−ＯＰＨの存在下でｍｏｃｋ処理又は２５μＭ  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩとともにインキュベートされた。３日後、培地が新たなＱＶＤ−ＯＰＨを含むがＦＯＸＯ４  ＤＲＩを添加していない培地に交換された。ＦＯＸＯ４  ＤＲＩ暴露から５日後、細胞が固定され、Ｓｅｒ−１５−リン酸化ｐ５３及び細胞の核を示すためのＤＡＰＩが染色された。ＦＯＸＯ４  ＤＲＩによる細胞質ゾルへの位置移動を原因とする核内のＳｅｒ１５−ｐ５３のフォーカスの顕著な減少が明らかとなった。パネルＬ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが老化関連ｐ５３標的ｐ２１Ｃｉｐ１の発現を低下させることを示す。老化現象を示す細胞では、ｐ５３シグナル伝達が細胞周期停止及び生存促進性タンパク質ｐ２１Ｃｉｐ１の上方制御をもたらす。パネルＫ）のように老化現象を示す細胞を処理することで、ｐ２１Ｃｉｐ１の強い減少に至った。これは、活性のあるｐＳｅｒ１５−ｐ５３の濃度を核内で下げることで、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがｐ２１Ｃｉｐ１のような下流の標的の転写に関するその活性を減少させることを示唆している。パネルＭ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがアポトーシスに関連するｐ５３修飾、ｐＳｅｒ４６の強い上方制御を導くことを示す。図２Ｋに示されるような実験である。ｐＳｅｒ４６は老化現象を示す細胞に少し存在するが、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩは、このｐ５３の翻訳後修飾の強い上方制御を引き起こす。このため、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩは、ｐ２１Ｃｉｐ１のような生存促進性因子の発現を低下させるのみならず、ｐ５３によるアポトーシス促進性シグナル伝達の増加を導く。パネルＮ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩ（２５μＭ）がｐ５３依存的に老化現象を示す細胞の生存能力を抑制することを示す。図２ｃに示すような実験で、対照及び老化ＩＭＲ９０にｐ５３に対するｓｈＲＮＡ又は対照ｓｈＲＮＡ（ｓｈＧＦＰ）が安定に形質導入された。ｐ５３を欠くと、老化現象を示す細胞の生存抑制に関してＦＯＸＯ４  ＤＲＩの有効性が低下した。これらデータをあわせると、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがｐ５３を介したアポトーシスによって老化現象を示す細胞を殺すことが明らかである。
【図３】ｉｎ  ｖｉｖｏでｐ１６ＩＮＫ４Ａ−陽性の老化現象を示す細胞を検出するために用いられるコンストラクトの略図をパネルＡ）に示す。このコンストラクトでは、有名な老化遺伝子ｐ１６ＩＮＫ４Ａのプロモーター（Ｐｒｏｍｏｔｅｒ）が生物発光酵素ウミシイタケルシフェラーゼ（Ｒｅｎｉｌｌａ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ、ＲＬＵＣ）の発現を活発にする。このため、ＲＬＵＣの基質であるセレンテラジンをマウスに注射するとｉｎ  ｖｉｖｏでｐ１６ＩＮＫ４Ａ陽性の老化現象を示す細胞が特異的に可視化される。これが同様のマウスに行われると抗老化処置の効果を見るための手段となる。パネルＢ）は、ＲＬＵＣを有するＰ１６−３ＭＲモデルマウス（以下ではＰ１６：：３ＭＲともいう）と交配された急速に老化するＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウス（ｄｅ  Ｂｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ，１９９８及び２００２）老化検出モデルがｉｎ  ｖｉｖｏでｐ１６ｉｎｋ４Ａ陽性老化レベルの上昇を示すことを明らかにし、これによって老化の縦断的解析が可能となる。６匹の野生型とＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスが動物と交配され、老化の検出のために２６週齢でセレンテラジンを注射された。パネルＣ）は、普通に老化した高齢（１３０週齢）の野生型（Ｗｉｌｄ  ｔｙｐｅ）マウスと同様に、急速に老化するＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスがＦＯＸＯ４の発現上昇を呈することを示す。野生型及びＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスが示された週齢で犠牲にされ、腎臓がＦＯＸＯ４に関して染色された。ＦＯＸＯ４陽性の尿細管細胞（Ｔ）の個数が定量化された。この結果、ＦＯＸＯ４がＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスで増加し、老化レベルの上昇も示した。これによって、老化が影響を受けるかどうかを見るためにＦＯＸＯ４  ＤＲＩの試験を考慮する。パネルＤ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが２６週齢のＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスにおけるｐ１６ＩＮＫ４Ａ陽性の老化を強く抑制することを示す。上：ＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤにおけるＰ１６：：３ＭＲ陽性の老化レベルを取扱うための処置計画である。６匹のＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤ−Ｐ１６：：３ＭＲマウスに関して図３Ｂに示されたＲＬＵＣ発光の基準値が決定された。画像化手順から回復後（各動物で５〜２０日の間）、動物が３匹の動物からなる２つの群に分けられた。一方の群が１０ｍｇ／ｋｇのＦＯＸＯ４  ＤＲＩを４日連続で静脈に注射され、他方の群は溶媒（ＰＢＳ）を注射されたＭｏｃｋとした。ｐ１６ＩＮＫ４Ａ陽性老化（ＲＬＵＣ）における変化が最初に注射されてから１４日後に評価され、基準のシグナルと比較された。下の左に示されているのは、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩ処置前と処置後の代表的なＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤ−Ｐ１６：：３ＭＲ動物である。下の右には、両方の群に関するＲＬＵＣ発光における変化が表示されている。Ｐ＜０．０５はスチューデントのｔ検定である。加齢によってＭｏｃｋ処置及び画像化手順でＭｏｃｋ処置群のＲＬＵＣシグナルが上昇したが、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩ注射群ではそれが大きく低下したことに留意されたい。パネルＥ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが後彎症（Ｋｙｐｈｏｓｉｓ）（骨の湾曲（ｃｕｒｖａｔｕｒｅ））及びＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスの筋量（Ｍｕｓｃｌｅ  ｍａｓｓ）を改善することを示す事例を示す。図３Ｄに示されたように処置されたマウスの脊柱及び脛骨のＣＴ画像が、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩで処置される前と後でとられた。ＦＯＸＯ４  ＤＲＩは脊柱（ｓｐｉｎｅ）の湾曲を抑制し（上）、筋量を増加させた（下：定量化された赤い領域）。パネルＦ）は、血漿（ｐｌａｓｍａ）中の［尿素（Ｕｒｅａ）］の上昇を証拠に、高齢の野生型及び２６週齢（ｗ）の若いＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤが腎臓の濾過能の低下を示すことを明らかにする。４〜５匹の野生型又はＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスの血液試料が示された時点で採取され、腎臓の濾過能低下のマーカーとして血漿画分中の尿素が分析された。［尿素］が製造者の方法（Ｇｅｎｔａｕｒ）に従ってキットを用いて評価された。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。ボンフェローニ事後テスト補正で一元配置分散分析である（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）。時間内に野生型動物において血漿中の［尿素］が上昇したことに留意されたい。２６週齢の若いＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスが同様に腎臓の濾過能の喪失を示したことは、この週齢のＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスの腎機能喪失モデルとしての正当性を証明する。パネルＧ）は、障害のある回し車行動及び脱毛によって示される健康が低下したＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスを示す。左：６匹の野生型及びＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスが回し車ケージに入れられ、回転／日が４日間継続して測定された。表示されたのは、１日あたりのｋｍで示される各群が走行した絶対距離（Ｄｉｓｔａｎｃｅ  ｒｕｎ）である。＊Ｐ＜０．０１。スチューデントのｔ検定。右：２６週齢の野生型及びＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスの代表的な画像で、毛皮のコートにおける著しい全体的な違いを示す（定量化に関しては図３Ｋも参照）。パネルＨ）は、Ｍｏｃｋ又はＦＯＸＯ４  ＤＲＩ処置後の２６週齢の野生型及びＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスの臓器機能、回し車行動及び毛皮スコアに対処するための処置計画を示す。４〜５匹の野生型又はＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスが回し車ケージに入れられ、調整のための十分な時間の後、基準（Ｂａｓｅｌｉｎｅ）の末梢（頬）の血液試料（Ｂｌｏｏｄ  ｓａｍｐｌｅ）が採取された。回復のための５日経過後、０、２及び４日目に５ｍｇ／ｋｇのＦＯＸＯ４  ＤＲＩが静脈注射でマウスに投与された。初回の注射から２８日後に、血液試料が採取された直後に、マウスが犠牲にされた（Ｓａｃｒｉｆｉｃｅ）。パネルＩ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが急速に老化するＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスにおける自発的な腎臓の糸球体硬化症の発生を抑制し、腎臓の濾過能を改善したことを示す。２６週齢の野生型及びＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスがＨ）に示すように処置された。犠牲になった直後に腎臓組織がホルマリンで固定され、パラフィンで包埋された。５μｍの薄切片が過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）溶液で染色され、Ａｄａｍｃｓｚａｋ  ｅｔ  ａｌ，２００３，ＪＡＳＮに記載されたように糸球体硬化症に関して評価された。糸球体の硬化（Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）に関して０〜４段階で評価された。Ｍｏｃｋ又はＦＯＸＯ４  ＤＲＩ処置されたマウスの野生型及びＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤの糸球体の代表的な画像が示され（上）、定量化された（左）。＊Ｐ＜０．０５  ボンフェローニ事後テスト補正で一元配���分散分析。処置の前後で同じ動物から血漿の［尿素］濃度が評価された。比が計算され、濃度の変化が示された。＊Ｐ＜０．０５。スチューデントのｔ検定。ＦＯＸＯ４  ＤＲＩ処置されたＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスが血漿の［尿素］の減少を示したことが腎臓の機能改善を示すことに留意されたい（右）。パネルＪ）は、野生型マウスでは得られない、ＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤの回し車行動の改善をもたらすＦＯＸＯ４  ＤＲＩの代表的な例を示す。ＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスが回し車能力の大きな低下を示したため（図３Ｇ）、データが各動物の実験の開始時の回し車行動それぞれを１００％として正規化されていることに留意されたい。パネルＫ）は、Ｍｏｃｋ又はＦＯＸＯ４  ＤＲＩ処置後の野生型及びＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスの回し車行動における数量化された平均変化（Ｃｈｅｎｇｅ）を示す。図示されているのは、パネルＪ）においてオレンジ色で囲むことで標識された走行距離の比である。パネルＬ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスの脱毛に対抗することを示す。左のパネルは、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩでの処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）前後の同一（Ｓａｍｅ）のＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤ動物（ａｎｉｍａｌ）の代表的な画像である。右のパネルは、毛皮スコアの数量化された平均変化であって、野生型の毛皮が０として点数化される一方、４がもっとも悪化した毛皮を表す。負のスコアは、処置後の外見の改善を示す。すべての野生型動物がいずれも実験前又は後で０として評価されたわけではない。＊Ｐ＜０．０５  スチューデントのｔ検定。これらの結果をあわせると、ｉｎ  ｖｉｖｏでＦＯＸＯ４  ＤＲＩが強く加齢関連老化に対抗し、健康、腎機能及び脱毛の抑制で評価された健康寿命に多大に有益であることが明らかである。パネルＭ）及びＮ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが急速に老化するＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスに見られる体重減少を弱めることを示す。より具体的には、パネルＭ）は急速に老化するＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスが野生型の同腹の子（２６週齢）と比較して明らかに体重（ｂｏｄｙ  ｗｅｉｇｈｔ）が低下していることを示す。パネルＮ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが急速に老化するＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスで明確に体重を改善することを示す。Ａ）〜Ｌ）に示されるように処置されたマウスが実験の時間経過全体を通して体重変化に関して解析され、％変化（Ｃｈａｎｇｅ）が図示された。パネルＯ）〜Ｒ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが造血系に毒性をもたらさないことを示す。野生型及び急速に老化するＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスが図３Ｈ）〜Ｌ）に示すように処置され、示された血液パラメータが実験の最後に評価された。
【図４】パネルＡ）において、ドキソルビシン（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）がｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＭＲ９０細胞でのＳＡ−β−ＧＡＬの発現を誘導することを示す。ＩＭＲ９０細胞が０．５μＭのドキソルビシンに、間に１日おいて２回暴露された。ＳＡ−β−ＧＡＬ活性が７日後に評価された。パネルＢ）は、ドキソルビシンがｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＭＲ９０においてｐ１６ｉｎｋ４ａ及びＦＯＸＯ４の発現を誘導することを示す。パネルＣ）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでドキソルビシン誘導の老化現象を示す細胞の生存能力をＦＯＸＯ４  ＤＲＩが選択的に抑制することを示す。パネルＤ）は、ＳＡＳＰの増加の兆候であるＩＬ−６をドキソルビシンが誘導することを示す。この図は、ほぼ老化を示すマーカーであるＳＡ−β−Ｇａｌ及びｐ１６ｉｎｋ４ａと同様、ＳＡＳＰマーカーのＩＬ−６がドキソルビシンで増加することを示すことで図４Ａ及びＢを補う。パネルＥ）は、ドキソルビシンがｉｎ  ｖｉｖｏで老化現象を誘導することを示す。マウスが１０ｍｇ／ｋｇのドキソルビシンを腹腔内注射され、示された時点におけるＲＬＵＣについて解析された。５匹の動物におけるＲＬＵＣ強度の変化が注射後の示された時点について図示される。パネルＦ）は、図４Ｇに示されたマウスに対する処置計画を示す。ドキソルビシンの１回投与（１０ｍｇ／ｋｇ  腹腔内）の後に、マウスがＦＯＸＯ４  ＤＲＩ（ｎ＝６；４×１０ｍｇ／ｋｇ  静脈注射）又はＰＢＳ（ｎ＝４；４×Ｍｏｃｋ）で処置され、１４日後にＲＬＵＣ画像が撮像された。パネルＧ）は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがドキソルビシンに誘導される、老化を示すｐ１６ｉｎｋ４ａに制御されるＲＬＵＣの発現を低下させることを示す。図４Ｆに示されたように処置されたマウスが生物発光について解析された。ＦＯＸＯ４  ＤＲＩで処置された動物は、ＰＢＳ処置された動物と比較して、ドキソルビシンに誘導されるｐ１６ｉｎｋ４ａ陽性の老化の著しい抑制を示した。これは、自然発生の老化に関する図２におけるデータと同様に、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが化学療法によって誘導された老化をかなり弱めることを示す。Ｈ）健康寿命変化の評価の方法を改善するために、図４Ｆ）の処置レジメンがドキソルビシンの１回追加投与と、より穏やかなＦＯＸＯ４  ＤＲＩ処置とで拡張された。ドキソルビシンの２回投与（どちらも１０ｍｇ／ｋｇ  腹腔内投与）の後、マウス（各群ｎ＝３）がＰＢＳ又はＦＯＸＯ４  ＤＲＩ（３×５ｍｇ／ｋｇ、１日あけて）で続けて処置され、１４日後に健康寿命の変化が解析された。パネルＩ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがドキソルビシン処置後にｉｎ  ｖｉｖｏでＦＯＸＯ４のフォーカスの個数を減少させることを示す。図４Ｈに示すように処置され、ＦＯＸＯ４が染色されたマウス（各群ｎ＝２）由来の肝臓切片に対する事後分析である。ＦＯＸＯ４のフォーカスの個数がＩｍａｇｅＪを用いて客観的に定量化された。ヒストグラムは、２つの肝臓切片においてＦＯＸＯ４のフォーカスを３個以上含む肝細胞（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ）の個数を示す。これは、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがｉｎ  ｖｉｖｏで肝細胞におけるドキソルビシンで誘導されるＦＯＸＯ４のフォーカスの個数を減少させることを示す。パネルＪ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがｉｎ  ｖｉｖｏでドキソルビシン処置後のＩＬ−６発現を抑制することを示す。図４Ｉでの実験から得られた肝臓切片のＩＬ−６が染色された。これは、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがｉｎ  ｖｉｖｏで肝臓におけるドキソルビシン後のＩＬ−６による著しいＳＡＳＰ発現に対抗することを示す。パネルＫ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがドキソルビシンで誘導される全体重の減少を抑えることを示す。図４Ｈで説明されたように処置されたマウス（ＰＢＳがｎ＝９、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがｎ＝１１）がドキソルビシンに暴露された前と、ドキソルビシンに暴露された後にＰＢＳ又はＦＯＸＯ４  ＤＲＩで処置されて全体重に関して分析された。比が図示された。これはドキソルビシンが体重減少を引き起こし、その効果がＦＯＸＯ４  ＤＲＩによって中和されることを示す。パネルＬ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが血液［血漿］で評価された肝臓（ＡＳＡＴ）及び膵臓（アミラーゼ）の、ドキソルビシンに誘導される毒性（ｔｏｘｉｃｉｔｙ）を弱めることを示す。図４Ｈに示されるような実験である。群あたりｎ＝３の動物。患者と同様に、ドキソルビシンが臓器毒性（Ｍｉｒａｎｄａ  ｅｔ  ａｌ，２００３，Ｂｌｏｏｄ）を引き起こし、その効果がＦＯＸＯ４  ＤＲＩによって中和された。これは、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがｉｎ  ｖｉｖｏで化学療法（ドキソルビシン）暴露による肝臓（Ｌｉｖｅｒ）及び膵臓（Ｐａｎｃｒｅａｓ）における臓器毒性に対する有効な解決策を与えることを示す。
【図５】パネルＡ）において生存能力評価を示し、３種の異なる転移性黒色腫細胞株におけるＢＲＡＦＶ６００Ｅ−阻害剤べムラフェニブ（Ｖｅｍｉｒａｆｅｎｉｂ）に対する感受性の違いを示している。べムラフェニブに対して、Ｍａｌｍｅ−３Ｍは感受性があり、Ａ３７５が中間の感受性で、ＬＯＸ−ＩＭＶＩが抵抗性である。べムラフェニブの用量を増加させた図２Ｃに示すような評価である。パネルＢ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがＭＥ１５７、Ｍａｌｍｅ−３Ｍ及びＩＦ−６を強力に殺すが、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ転移性黒色腫細胞は殺さないことを示す。この結果は、ＦＯＸＯ４  ＤＩＲが有効な抗黒色腫活性を有することを示す。しかし、ＬＯＸ−ＩＭＶＩは抵抗性である。パネルＣ−Ｅ）は、抵抗性ＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞のべムラフェニブ処置がｍＲＮＡ（Ｂ）及びタンパク質レベル（ＣとＤ）でＦＯＸＯ４の上方制御を起こすことを示す。べムラフェニブそれ自体のみがこの細胞株にわずかな影響を示すがＦＯＸＯ４を上方制御するため、ＬＯＸ−ＩＭＶＩがＦＯＸＯ４  ＤＲＩの効果の研究のための見込みある標的として特定される。パネルＦ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが治療抵抗性ＬＯＸ−ＩＭＶＩに対してＲＡＦ／ＭＥＫ阻害剤とともに合成致死性を示すことを明らかにする。図２Ｃに示されたような実験だが、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩのみ、ＲＡＦＶ６００Ｅ−阻害剤べムラフェニブ若しくはダブラフェニブ（Ｄａｂｒａｆｅｎｉｂ）、又はＭＥＫ阻害剤トラメチニブ（Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ）のみ、又はその組み合わせで処置されたＬＯＸ−ＩＭＶＩに関する。この結果は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩ又はＲＡＦ／ＭＥＫ阻害剤自体ではＬＯＸ−ＩＭＶＩの生存能力に大きくは影響しない一方で、組み合わせは強い致死性を示すことを明らかにする。パネルＧ）は、べムラフェニブとＦＯＸＯ４  ＤＲＩとの組み合わせによる生存能力の低下がアポトーシス（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）によって導かれることを示す。ＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞がＦＯＸＯ４  ＤＲＩ又はべムラフェニブのみ又は組み合わせとともにインキュベートされた。カスパーゼ依存の細胞死を阻止するために、細胞が汎カスパーゼ阻害剤ＱＶＤ−ＯＰＨとともに処置された。３日後、培地がＱＶＤ−ＯＰＨを含むがＦＯＸＯ４  ＤＲＩ又はべムラフェニブを欠く新しい培地に交換された。最初の処置から５日目に、細胞が固定され、シトクロムＣが染色された。シトクロムＣは生存している細胞のミトコンドリアに存在し、アポトーシスが活性化された場合に細胞質ゾルに放出される。シトクロムＣの放出（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ−Ｃ  ｒｅｌｅａｓｅ）を示す細胞の個数が図示される。これは、べムラフェニブが抵抗性細胞でアポトーシスを誘導できないのに対して、ＦＯＸＯ４がこの抵抗性を乗り越えて、べムラフェニブとの強い相乗作用をもたらし、アポトーシスを誘導することを示す。パネルＧ）の右は、べムラフェニブとＦＯＸＯ４  ＤＲＩとの組み合わせによる生存能力の低下が細胞密度の減少を導くことを示す。べムラフェニブ又はＦＯＸＯ４  ＤＲＩのみ又はその組み合わせで処置されたＬＯＸ−ＩＭＶＩに関して図２Ｄに示されるような実験である。パネルＨ）は、べムラフェニブ処置は、それ自体の抵抗を促進する。べムラフェニブの１回投与で前処置された中間の感受性を有するＡ３７５を用いた、図２Ｄに示されるような実験である。生存している細胞及び親の、暴露されていない細胞がべムラフェニブの新たな期間の後、生存能力に関して比較された。最初の期間を生存した細胞は、親の株よりも２回目の期間において、より抵抗性であった。このため、臨床で見られるのと同様に（Ｂｅｒｎａｒｄ’ｓ  ｌａｂ  Ｎａｔｕｒｅ，２０１４の論文参照）、治療抵抗がこの方法で再現できる。パネルＩ）は、第２の薬剤としてＭＥＫ阻害剤トラメチニブを用いた以外同様の実験を示す。臨床ではＲＡＦ阻害剤に続けてＭＥＫ阻害剤がよく使用される。また、トラメチニブを使用した際、べムラフェニブによるＢＲＡＦ阻害に対してまず生き残った細胞は、親の株よりもより抵抗性であると判明した。パネルＪ）は、べムラフェニブが、表面結合ＩＬ１αによって特徴づけられるＳＡＳＰの活性化を引き起こすことを示す。基礎の条件下では、Ａ３７５は核ＩＬ１αを発現し、これはべムラフェニブで速やかに下方制御される。しかし、６日後には活性のあるＳＡＳＰを示す表面結合ＩＬ１αが現れる。図２と３からのデータをあわせると、治療生存Ａ３７５が、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがその生存能力を選択的に低下させるかどうかを試験するための候補であることをこれは示唆する。パネルＫ）は、べムラフェニブに対する抵抗を獲得したＡ３７５及びべムラフェニブに対して本質的に抵抗性を有するＬＯＸ−ＩＭＶＩがＦＯＸＯ４  ＤＲＩによってこれら薬剤に対する感受性を再び与えられた。親のＡ３７５、べムラフェニブ抵抗性Ａ３７５（３週間の慢性的なべムラフェニブ暴露に生き残った）及び本質的に抵抗性のＬＯＸ−ＩＭＶＩがべムラフェニブ又はＦＯＸＯ４  ＤＲＩのみ又は組み合わせで処置された。正規のＡ３７５が両方の薬剤それぞれに感受性を示した一方で、べムラフェニブ抵抗性Ａ３７５及びＬＯＸ−ＩＭＶＩはべムラフェニブに対する抵抗を示した。興奮したことに、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩはべムラフェニブに対してこれら抵抗性株を強く再び感受性にした。要するに、これらの結果は、ＦＯＸＯ４が多くの場合で強い抗黒色腫薬であるが、それが直接それらを殺せない場合には、それは最も一般的な化学療法の抗黒色腫薬べムラフェニブ及び他のＲＡＦ／ＭＥＫ阻害剤とともに少なくとも合成致死機能を示すことを明らかにする。パネルＬ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩの有効性がＲＯＳのような反応性化学種によって増強されることを示す。ＦＯＸＯ４  ＤＲＩ、酸化ストレス阻害剤Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）又は酸化ストレス要因であるＨ２Ｏ２存在下で、ＬＯＸ−ＩＭＶＩが生存能力に関して評価された。ＦＯＸＯ４  ＤＲＩ及びＨ２Ｏ２は、独立してＬＯＸ−ＩＭＶＩの生存能力にわずかに影響しただけであったが、それらは、合わさると合成致死性を示した。この結果は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが過度のＲＯＳに関する状態及び疾患に対して有効であることを示唆する。この結果は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが、がん又はパーキンソン病のような過剰なＲＯＳが存在するあらゆる状態に対して有用であることを示す。パネルＭ及びＮは、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが新たな患者由来の黒色腫を標的とする場合にべムラフェニブとともに強い相乗作用をもたらすことを示す。３Ｄ黒色腫オルガノイド培養物（メラノイド）が文献（Ｋｒｕｉｓｗｉｊｋ  ｅｔ  ａｌ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２０１５）のように調製され、生存能力（Ｍ）に関して図５Ｆのように処置されるか、あるいは製造者の手順（Ｒｏｃｈｅ）に従ってＴＵＮＥＬ（Ｎ）を用いてアポトーシスに関して染色された。これらの結果は、細胞株においてだけではなく、新たなヒト黒色腫組織においても、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがべムラフェニブによる治療への感受性を増強する強い効果を有することを示す。
【図６】パネルＡ及びＢにおいて、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが黒色腫に対してのみならず、乳がん及びグリア芽腫に対しても有効であることを示す。Ａ）Ｔ４７Ｄ乳がん（ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ）細胞は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩとインキュベートされると生存能力が大きく損なわれる。Ｂ）放射線抵抗性ＧＬ２６１グリア芽腫（Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ）がＦＯＸＯ４  ＤＲＩの添加によって治療に対して再び感受性を示す。ＧＬ２６１細胞に放射線が当てられ（８Ｇｙ）、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩとともにインキュベートされ、組み合わせた処置に暴露された。パネルＣ）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがＦＡＣで生存したＭＣＦ７細胞のアポトーシスを強く及び選択的に誘導することを示す。ＭＣＦ７細胞がＦＡＣで処置された。１週間後、ＦＡＣ生存（Ｓｕｒｖｉｖｏｒ）細胞及び親のＭＣＦ７細胞に新たにＦＡＣ又はＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドが投与された。アポトーシスが５日後にシトクロムＣ放出によって評価された。ＦＡＣで前処置された細胞は、親株よりもＦＡＣに対してより抵抗性であったが、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩに感受性であったことに留意されたい。ＦＡＣは、臨床的に使用される、５’フルオロオラシル、ドキソルビシン（アドリアマイシン）及びシクロフォスファミドを含む乳がんカクテルを表す。ＦＯＸＯ４発現が（ｉ）通常の乳房組織よりも浸潤した乳がんで増加する、及び（ｉｉ）乳がんの原発部位よりも転移した乳がんで増加することが見出されたことが背景として一般に知られている。さらに、同じ背景で、５年以内の乳がんの再発がＦＯＸＯ４発現の増加に関係する。
【図７】ＦＯＸＯ４  ＤＲＩがＡＢＴ−７３７（いわゆる老化現象を示す細胞を除去する化合物）よりも老化現象を示さない細胞にとって安全で、かつ老化現象を示す細胞の除去に関してより効果が高いことを示す。Ａ）対照ＩＭＲ９０及び１０Ｇｙ  ＩＲを用いて老化が誘導されたＩＭＲ９０が９６ウェルプレートで、各条件につき３ウェルでインキュベートされた。翌日、示された用量のＡＢＴ−７３７又はＦＯＸＯ４  ＤＲＩとともに細胞がインキュベートされた。６日後、製造者の使用説明書に従ってＡｑｕｅｏｕｓＯｎｅ  ＣｅｌｌＴｉｔｅｒアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で生存能力が評価された。Ｂ）低い用量においてＡ）の対照及び老化現象を示すＩＭＲ９０の生存能力の倍率が老化現象を示す細胞の除去への効果を示す。また、対照細胞において、ＡＢＴ−７３７が毒性の証拠となる生存能力への影響を示すことに留意されたい。Ｃ）Ｂ）と同様であるが、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩに関する。ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが対照の細胞に毒性を示さない用量で、それらの老化現象を示す細胞に対して有効であることに留意されたい。
【図８】図７に示される実験と同様であるが、化合物が間に３日おいて１／３で３回添加されたものである（ドキソルビシンが使用されているが計画に関しては下記の図１０も参照されたい）。ここでも、ＡＢＴ−７３７の老化現象を示さない細胞に対する毒性が実証され、老化現象を示す細胞を殺す限定的な効果のみを示したが、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩは、老化現象を示さない細胞に対して安全であることが実証され、老化現象を示す細胞の除去に有効である。
【図９】図７と８と同様であるが、ＩＲの代わりに化学療法（２×０．５μＭのドキソルビシン）によって老化を誘導されたＩＭＲ９０細胞を用いている。同じ結論が図７と８に適用される。
【図１０】細胞が２日あけて示された用量の１／３で３回処置されたことを除いて、図９に示された同様の実験の結果を示す。この実験に関しても、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩが老化現象を示さないＩＭＲ９０に対して安全でＡＢＴ−７３７が低用量でもその生存能力を低下させることが明らかである。さらに、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩは老化現象を示す（ｓｅｎｅｓｃｅｎｔ）細胞にはＥＣ７０及びＥＣ５０で高い選択性を示すが、老化現象を示さない細胞には選択性を示さない。
【図１１】報告された化合物クエルセチン及びダサチニブが老化現象を示すＩＭＲ９０の除去に関して無効であることを示す。図７に示すような実験だが、細胞が示された濃度のクエルセチンのみ（上）、又は０．１μＭのクエルセチンに加えて示された用量のダサチニブとの組み合わせ（下）とともにインキュベートされた。老化現象を示す細胞と老化現象を示さない細胞に関してこれら化合物の生存能力における明らかな違いはなかった。
【図１２】ＡＳＫ１阻害剤が老化現象を示す細胞のアポトーシスを選択的に誘導することを示す。Ａ）示されたのは、Ｍｏｃｋ処置された老化現象を示すＩＭＲ９０細胞及び老化現象を示さないＩＭＲ９０細胞に対してＮＱＤＩ処置の％生存能力である。ＡＳＫ１阻害剤ＮＱＤＩは、老化現象を示すＩＭＲ９０線維芽細胞の細胞生存能力を明らかに抑制するが、老化現象を示さないＩＭＲ９０線維芽細胞の細胞生存能力を抑制しない。老化現象を示す及び示さないＩＭＲ９０線維芽細胞が示された濃度のＮＱＤＩとともにインキュベートされ、６日後に細胞の生存能力がＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６（商標）  ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙを用いて評価された。Ｂ）ＮＱＤＩが続けられる期間で、老化現象を示す細胞の除去におけるその効果が増強される。老化現象を示す及び示さないＩＭＲ９０線維芽細胞がｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ  ｓｙｓｔｅｍ（ＡＣＥＡ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．、サンディエゴ、カリフォルニア州）を用いた縦断的な細胞密度測定に関して図示された。基準値の測定が行われてから、細胞が２μＭのＮＱＤＩとともに連続３日間インキュベートされた（それぞれ２４、４８及び７２時間）。プレートに播いた後の細胞密度が示されたように追跡された。図は、実験開始時の条件での密度に対して正規化された細胞密度データを示す。Ｃ）ヒストグラムは、基準値を超えた測定の最後（９６時間）での定量化した細胞密度の変化を示す。
【図１３】ＳＹＫ阻害剤がｉｎ  ｖｉｔｒｏで老化現象を示す細胞のアポトーシスを選択的に誘導することを示す。グラフは、Ｍｏｃｋ処置された老化現象を示す及び示さない（Ｎｏｎ−ｓｅｎｅｓｃｅｎｔ）ＩＭＲ９０細胞に対する％生存能力を示す。ＳＹＫ阻害剤Ｒ４０６は、老化現象を示す細胞の生存能力を選択的に低下させた。実験は、図１２に記載されたものと同様の方法で行われた。
【図１４】ＦＯＸＯ４タンパク質のアイソフォーム１のアミノ酸配列を示す図である。
【図１５】ＦＯＸＯ４タンパク質のアイソフォーム２のアミノ酸配列を示す図である。
【図１６】ＦＯＸＯ４遺伝子の転写産物バリアント１の塩基配列を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
定義
本明細書で使用された場合、用語“ペプチド”は、合成的に合成されたペプチド、好ましくはペプチド模倣薬、より好ましくはＤ−ペプチドを意味する。用語“ペプチド”は、例えば体内でペプチドがより安定になるように、又は細胞により移行できるように修飾されたペプチド類似体を包含する。このような修飾は、限定されないがＮ末端修飾、Ｃ末端修飾、限定されないがＣＨ２−ＮＨ、ＣＨ２−Ｓ、ＣＨ２−Ｓ＝０、０＝Ｃ−ＮＨ、ＣＨ２−０、ＣＨ２−ＣＨ２、Ｓ＝Ｃ−ＮＨ、ＣＨ＝ＣＨ又はＣＦ＝ＣＨ及び主鎖修飾等のペプチド結合修飾等である。ペプチド模倣化合物の調製方法は、本技術分野でよく知られており、例えばＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，Ｃ．Ａ．Ｒａｍｓｄｅｎ  Ｇｄ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  １７．２，Ｆ．Ｃｈｏｐｌｉｎ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ（１９９２）に記載されている。本明細書で使用された場合、用語“ペプチド”は、好ましくは２００個未満のアミノ酸残基、より好ましくは１００個未満のアミノ酸残基、最も好ましくは５０個又は４０個未満のアミノ酸残基を有するペプチドに関する。本発明に係るペプチドは、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１又は２０個未満のアミノ酸残基からなるものでもよい。好ましくは、本発明のペプチドは、少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０個又はそれ以上のアミノ酸残基を含む。用語ペプチドは、該ペプチドがレトロインベルソペプチドであると明示されない限り、レトロインベルソペプチドを意味しない。本発明に係るペプチドは、アミノ酸配列ＰＰＲＲＲＱＲＲＫＫＲＧ等のペプチドの細胞への侵入を促進するアミノ酸配列をさらに含んでもよい。
【００４８】
本明細書で使用された場合、略称“ＤＲＩ”は、Ｄ−レトロインベルソアイソフォームを意味し、そのアミノ酸配列が逆であり、Ｌ−アイソフォームの代わりにＤ−アイソフォームとなっており、特にＦＯＸＯ４タンパク質又はそのペプチドフラグメントに関して使用される。
【００４９】
本明細書で使用された場合、用語“Ｄ−アイソフォーム”は、少なくとも一部のアミノ酸残基が“Ｄ”（ラテン語ｄｅｘｔｅｒは右を意味する）と言われる分子の空間配置を有するアミノ酸配列を意味する。本発明のペプチドは、好ましくは少なくとも１個の、より好ましくは少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０個又はそれ以上のＤ−アミノ酸残基を含む。本発明のペプチドは、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも７５％、さらに好ましくは少なくとも９０、９５、９８又は９９％、最も好ましくは１００％Ｄ−アミノ酸残基を含む。当業者は、本発明に係るＤＲＩペプチドがＬ−アミノ酸残基及びＤ−アミノ酸残基の組み合わせを含んでもよく、又は全体がＤ−アミノ酸残基からなるものであってもよいことを理解する。
【００５０】
用語“％配列相同性”は本明細書において、最大のパーセント配列相同性になるように、配列をアラインし、必要に応じて任意にギャップを挿入した後の関心のある核酸配列又はアミノ酸配列それぞれにおけるヌクレオチド及びアミノ酸と同一である、核酸配列におけるヌクレオチド又はアミノ酸配列におけるアミノ酸の割合として定義される。アライメントの方法及びコンピュータプログラムが当技術分野でよく知られている。配列相同性は、関心のあるアミノ酸配列の実質的に全長、好ましくは（完全に）全長に渡って計算される。当業者は、１つのアミノ酸配列における連続したアミノ酸残基が他のアミノ酸配列における連続したアミノ酸残基と比較されることを理解する。好ましくは、アミノ酸残基の配置、例えばＤ又はＬは、アミノ酸配列の相同性の評価には関係がない。例えば、Ｄ−Ｖａｌは、本発明の関連では、Ｌ−Ｖａｌと配列相同性を示す。
【００５１】
本明細書で使用された場合、用語“アポトーシス”は、細胞の収縮、クロマチンの凝縮、及び食作用によって除去される膜結合体への細胞の断片化で特徴づけられる、単一細胞に影響する細胞死の仕組みを意味する。用語“アポトーシス”は、用語“プログラム細胞死”と同意語としてよく使われる。
【００５２】
本明細書において、用語“アポトーシス誘導活性”は、内的又は外的刺激による（ｉ）特定の細胞の型及び／又は（ｉｉ）成長又は分化の特定のステージの細胞においてアポトーシスを選択的に引き起こす化合物に本来備わっている性質を意味する。当業者は、例えば、細胞質のシトクロムＣの濃度（アポトーシスのマーカー）及びＴＵＮＥＬの濃度（アポトーシスのマーカー）を評価する試験等の、細胞培養でアポトーシスの程度を評価するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏの標準アッセイがあることを知っている。上記の標準アッセイを用いることで、当業者は、様々な細胞の型又は様々な成長ステージの細胞、例えば老化現象を示す細胞に対する老化現象を示さない細胞に関する様々な化合物のアポトーシス誘導活性を容易に評価し比較することができる。他の標準のアポトーシスアッセイは、アネキシンＶアッセイ及びクリーブドカスパーゼ−３染色である。本質的にアポトーシスと反対の細胞の生存能力を検出するために、ＭＴＴアッセイ（細胞の生存能力を評価するための比色分析）、ＡＴＰ検出アッセイ、リアルタイム細胞密度（例としてｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ）アッセイ又はコロニー形成アッセイが用いられる。
【００５３】
本明細書で使用された場合、用語“老化現象を示す細胞”は、細胞性老化との関連において解釈されるべきである。用語“老化現象を示す細胞”は、本質的に永続的な成長停止を有することで特徴づけられる細胞を含む。老化現象を示す細胞は、増殖刺激に本質的に反応しない。老化現象を示す細胞の認識又は検出に関して、分子マーカーが用いられる。老化現象を示す細胞に関するいくつかのマーカーが開発されている。本明細書で用いられる場合、用語“老化現象を示す細胞”は、次の少なくとも１種のマーカー、すなわち（ｉ）好ましくは増殖マーカー（例えばサイクリンＡ、ＭＡＭ−３及び／又はＰＣＮＡ）の喪失及び成長刺激に対する非感受性によって示される本質的に永続的な成長停止、（ｉｉ）老化関連β−ガラクトシダーゼ（ＳＡ−Ｂ−Ｇａｌ）、（ｉｉｉ）ｐ１６ＩＮＫ４ａ活性化及び／又は発現、（ｉｖ）ｐ２１ｃｉｐ１、好ましくはｐ５３／ｐ２１ｃｉｐ１の活性化及び／又は発現、（ｖ）老化関連ヘテロクロマチン形成（ＳＡＨＦ）、（ｖｉ）一部が前骨髄球性白血病タンパク質（ＰＭＬ）核小体と共局在化することが多いＤＮＡ−ＳＣＡＲＳ（老化を促進するクロマチン変化を伴うＤＮＡ断片）（ｖｉｉ）ＦＯＸＯ４活性化及び／又は発現、（ｖｉｉｉ）好ましくは老化現象を示さない細胞又は当該老化現象を示す細胞にかなり近い細胞と比較してＩＬ１、ＩＬ６及び／又はＩＬ８等のＳＡＳＰマーカー量が増加（＞２倍）することで特徴づけられる老化関連分泌表現型（ＳＡＳＰ）、及び／又は（ｉｘ）非ＳＡＳＰアラーミンＨＭＧＢ１の核外移行、によって特徴づけられる細胞を含む。当業者は、細胞がいつ本質的に永続的な成長停止になったとみなせるかを知っており、例えばＥｄＵ取り込み及び／又はＫｉ６７陽性の評価による。老化現象は、通常の細胞の増殖性が存続する期間の最後に、あるいは例えば化学療法剤、放射線、ＤＮＡ損傷又は他の細胞傷害への応答において通常の細胞又は腫瘍細胞で起こる。したがって、当業者は、上記の老化現象を示す細胞の特性を一般に有していない、とりわけ最終分化した細胞と老化現象を示す細胞とを見分けることができる。好ましくは、老化現象を示す細胞は、本質的に永続的な又は永続的な成長停止を有することで特徴づけられ、好ましくは成長因子の存在下で増殖マーカーを欠くことで示される。より好ましくは、老化現象を示す細胞は、（ｉ）好ましくは成長因子の存在下で増殖マーカーを欠くことで示される、本質的に永続的な又は永続的な成長停止を有すること、（ｉｉ）ｐ１６ＩＮＫ４ａ活性化及び／又は発現、及び／又はｐ２１ｃｉｐ１、好ましくはｐ５３／ｐ２１ｃｉｐ１の活性化及び／又は発現、及び／又は（ｉｉｉ）ＦＯＸＯ４活性化及び／又は発現によって特徴づけられる。最も好ましくは、老化現象を示す細胞は、（ｉ）本質的に永続的な又は永続的な成長停止を有すること、（ｉｉ）ｐ１６ＩＮＫ４ａ活性化及び／又は発現及び／又はｐ２１ｃｉｐ１、好ましくはｐ５３／ｐ２１ｃｉｐ１の活性化及び／又は発現、（ｉｉｉ）ＳＡ−Ｂ−Ｇａｌの発現及び／又は（ｉｖ）ＦＯＸＯ４活性化及び／又は発現によって特徴づけられる。この段落に関しては、用語“発現”は、老化現象を示さない細胞と比較した場合の遺伝子発���産物（ＲＮＡ）の増加又はタンパク質産物の増加を意味する。老化現象を示さない細胞と比較した場合の発現の増加は、好ましくは、少なくとも１．０５、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０倍又はそれ以上である。当業者は、遺伝子及びタンパク質の発現量を評価する方法を知っている。例えば、ＳＡ−Ｂ−Ｇａｌは、老化現象を示す細胞のリソソームにおける内因性の酵素を用いた酵素アッセイを適用することで評価される。このようなアッセイは、新しい材料を用いて酸性条件下で通常は行われる（Ｄｉｍｒｉ  ｅｔ  ａｌ，ＰＮＡＳ，ｖｏｌ．９２，ｐ．９３６３−９３６７（１９９５））。さらに例示すると、ｐ１６ＩＮＫ４ａ及びｐ２１ｃｉｐ１発現は、抗体（例えば、抗ＤＫＮ２Ａ／ｐ１６ＩＮＫ４ａ抗体ＤＣＳ５０．１、ａｂ１６１２３、Ａｂｃａｍ、英国；及び抗ｐ２１抗体、ａｂ７９６０、Ａｂｃａｍ、英国）を用いた免疫組織化学で評価できる。本技術分野では、老化現象を示す細胞は、それぞれが非増殖状態を誘導し、維持するのに個々に十分であると言われるｐ５３−ｐ２１ｃｉｐ１又はｐ１６ＩＮＫ４ａの独立した活性を介して細胞周期から離脱したものであると説明される（Ｒｏｄｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １９２：５４７−５５６（２０１１））。
【００５４】
本明細書で使用された場合、用語“老化現象を示さない細胞”は、“通常の”細胞、すなわち成長因子への応答では分裂可能であるが、成長因子がない場合は分裂しない細胞を意味する。後者は、がん細胞を含む。老化現象を示す細胞は、本質的に増殖刺激に非応答性である。老化現象を示さない細胞は、若年のヒトＩＭＲ９０肺線維芽細胞（ＡＴＣＣ（商標）  ＣＣＬ−１８６（商標）、好ましくは５０集団倍加より低い）又は処置される対象由来の通常の若しくは健常の細胞である。対照は、異なる対象又は該対象の群、例えば年齢１８から３０歳の間の対象又は対象の群由来である。対照は、好ましくは同じ組織及び／又は器官由来である。
【００５５】
また、本明細書に記載され、その記載に基づいて提供される医薬用途の関連では、本発明に係るペプチド、医薬組成物又は核酸が、ＦＯＸＯ４発現及びｐ５３の発現の増加で特徴づけられる細胞を除去し、排除し又は殺すのに特に有効である。この段落の関連では、用語“増加”は、対照と比べた場合の遺伝子発現産物（ＲＮＡ）の増加又はタンパク質産物の増加を意味する。対照と比較した発現の増加は、好ましくは少なくとも１．０５、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０倍又はそれ以上である。当業者は、遺伝子及びタンパク質の発現量を評価する方法を知っている。好ましくは、ｐ５３の発現は、活性型ｐＳｅｒ１５−ｐ５３の発現であって、とりわけ免疫蛍光及び／又は免疫組織化学によって検出及び定量化される。図から明らかなように、活性型ｐＳｅｒ１５−ｐ５３が老化現象を示す細胞の核内フォーカスにおいて蓄積し、これが本発明に係るペプチドによって対抗される。ｐＳｅｒ１５−ｐ５３に対する抗体が市販されている（ホスホ−Ｓｅｒ１５  ｐ５３（９２８６）、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．、Ｄａｎｖｅｒｓ、マサチューセッツ州、米国）。対照は、好ましくは、成長因子に応答して分裂可能であるが、成長因子がない場合は分裂しない通常又は健常細胞である。このような対照細胞は、ヒトＩＭＲ９０肺線維芽細胞（ＡＴＣＣ（商標）  ＣＣＬ−１８６（商標））又は処置される対象由来の細胞である。対照は、処置される対象とは異なる対象又は該対象の群、例えば年齢１８から３０歳の間の対象又は対象の群由来である。対照は、好ましくは同じ組織及び／又は器官由来である。好ましくは、この文脈で記載される標的細胞は、さらに酸化ストレスを有することで特徴づけられ、酸化ストレスで活性化されるマーカー、例えばスーパーオキシドジスムターゼＳＯＤ１（抗スーパーオキシドジスムターゼ１抗体、ａｂ２０９２６、Ａｂｃａｍ、英国）及びＳＯＤ２（抗ＳＯＤ２抗体、Ｓｔｒｅｓｓｇｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｖｉｃｔｏｒｉａ、ＢＣ）、カタラーゼ（抗カタラーゼ抗体、ａｂ１６７３１、Ａｂｃａｍ、英国）及び／又はリン酸化ＪＮＫ（ホスホＴｈｒ１８３／Ｔｙｒ１８５−ＪＮＫ、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．）によって検出可能である。酸化ストレスがあるかどうかの評価に関して、上述のような対照を用いることができる。さらに、この段落に記載されたような標的細胞が本明細書に記載された１種以上の老化マーカーをさらに有する。
【００５６】
本明細書で使用された場合、用語“医薬組成物”は、哺乳類、好ましくはヒトへの投与に適した条件下で製造される、すなわちＧＭＰ条件下で製造される組成物を意味する。本明細書に係る医薬組成物は、薬学的に許容される添加剤、例えば限定されないが安定化剤、充填剤、緩衝剤、担体、希釈剤、媒体、可溶化剤及び結合剤を含んでもよい。当業者は、適した添加剤の選択が、投与経路と投与形態に加え、有効成分及び他の因子に依存することを理解する。本発明に係る医薬組成物は、好ましくは非経口投与に適応される。
【００５７】
本明細書で使用された場合、用語“化学療法剤”は、細胞の生存能力及び／又は機能を阻害又は妨げる、及び／又は細胞の破壊（細胞死）を引き起こす、及び／又は抗腫瘍／抗増殖効果を及ぼす、例えば、腫瘍細胞の成長、成熟又は広がりを直接的に又は間接的に妨げる化合物を意味する。また、この用語は単なる細胞毒性効果ではなく、細胞増殖抑制効果のみを引き起こす薬剤を含む。用語“化学療法剤”は、プラチナ剤（例えばシスプラチン、カルボプラチン、及びオキサリプラチン）のようなアルキル化剤、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ）、クラドリビン、クロファラビン、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ）、ヒドロキシ尿素及びメトトレキサート等の代謝拮抗物質、抗腫瘍抗生物質、好ましくはドキソルビシン、トポイソメラーゼ阻害剤、分裂抑制剤、コルチコステロイド、血管新生阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、タンパク質キナーゼＡ阻害剤、サイトカインファミリーのいずれか、放射性同位体、限定されないが、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、Ｒａｆ２６５、セルメチニブ及びトラメチニブ等のＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫファミリーのキナーゼ阻害剤、及びベムラフェニブ、ダブラフェニブ、Ｒａｆ２６５、セルメチニブ及びトラメチニブ等の黒色腫、好ましくは転移性黒色腫の治療に広く用いられる薬剤等である。ベムラフェニブ、ダブラフェニブ及びＲａｆ２６５はＲＡＦ阻害剤である。トラメチニブ及びセルメチニブはＭＥＫ阻害剤である。本発明の関連では、化学療法剤としてパクリタキセル又はドクセタキセル等のタキサンも含まれる。
【００５８】
用語“老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態”、“老化現象を示す細胞の存在に関連する疾患及び状態”及び“老化現象を示す細胞の除去が有益な障害”は、代替可能に使用される。
【００５９】
本明細書で使用された場合、用語“老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態”は、哺乳類、好ましくはヒトである対象の任意の疾患又は状態であって、当該疾患又は状態を患っている対象にとって老化現象を示す細胞の除去、排除又はその生存能力の抑制が有益な任意の疾患又は状態を意味する。この用語は、老化現象を示す細胞が疾患の単独又は唯一の原因である状態を包含する。さらにこの用語は、老化現象を示す細胞が将来、上記対象の疾患又は状態の原因となり得る状態に関連する。好ましくは、老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態の治療は、老化現象を示す細胞の除去によって防止される、あるいは防止可能な疾患又は状態である。例えば、化学療法剤及び放射線治療が細胞の老化を誘導することが知られている。細胞の老化に関連する疾患又は状態の発症を防ぐために、この老化現象を示す細胞を除去することが有利となる。さらにこの用語は、老化現象を示す細胞の除去が疾患又は状態の症状を緩和又は抑制する疾患又は状態を包含する。とりわけ疾患又は状態が治癒され、防止され得るか、疾患又は状態の症状が抑制又は緩和され得るのであれば、上記老化現象を示す細胞の除去が有益であることが当業者には明らかである。当業者は、本発明に係るペプチド及び阻害剤が老化現象を示す細胞におけるアポトーシス誘導活性を有することを理解する。老化現象を示す細胞の除去は、本発明に係るペプチド及び阻害剤のアポトーシス誘導活性と結びつく。より好ましくは、本発明に係るペプチド又は阻害剤は、哺乳類、好ましくはヒトである対象の老化現象を示す細胞の、好ましくは哺乳類、好ましくはヒトである対象の器官又は組織における老化現象を示す細胞の、少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０又は８０％を除去し、殺し、取り除き、又はその生存能力を抑制する。当業者は、多数の疾患が老化現象を示す細胞に関係し、当該疾患の治療に老化現象を示す細胞の除去が有効であることを理解する。老化現象を示す細胞の除去が有益である疾患又は状態は、当該疾患又は障害を患っていない対象と比較して、対象における反応性酸素種又は反応性窒素種、好ましくはＨ２Ｏ２のような反応性酸素種の濃度が増加したことに関連する疾患又は状態である。当該疾患又は障害は、がん、好ましくは黒色腫、より好ましくは転移性黒色腫、アルツハイマー病又はパーキンソン病等の慢性炎症性疾患又は神経疾患を含むリストから好ましくは選択される。本発明に係るペプチド、医薬組成物又は核酸のアポトーシス誘導活性が上述の反応種によって強められることが見出された（図５Ｌ参照）。対象の疾患表現型を示す試料、例えばがんサンプルにおける反応性酸素種及び／又は反応性窒素種の濃度の増加は、好ましくは少なくとも１．０５、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０倍又はそれ以上である。当業者は、反応種の濃度を評価するための方法及び手段を知っている。好ましくは、老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良を含む群から選択される。老化現象を示す細胞の除去が有益な特に好ましい疾患又は状態は、哺乳類、好ましくはヒトである対象における炎症、好ましくは慢性炎症に関連又は関係する疾患又は状態であって、該炎症は老化現象を示す細胞によってもたらされるか仲介される。好ましくは、当該炎症をもたらすか仲介する上記老化現象を示す細胞は、上記の疾患又は状態の影響を受ける器官、好ましくは組織と同じ器官、より好ましくは同じ組織に少なくとも部分的に共局在化する。
【００６０】
本明細書で使用された場合、用語“老化現象を示す細胞の存在に関連する疾患又は状態”は、哺乳類、好ましくはヒトである対象における老化現象を示す細胞の存在又は細胞老化の存在が当該対象の上記疾患又は状態に関係する、哺乳類、好ましくはヒトである対象におけるあらゆる疾患又は状態を意味する。本明細書で使用された場合、用語“関連する”又は“関係する”は、老化現象を示す細胞の存在又は細胞老化の存在と、上記疾患又は状態との関連性を意味する。上記においては、“関連する”又は“関係する”は、とりわけ（ｉ）疾患又は状態の少なくとも部分的な原因として、又は（ｉｉ）疾患又は障害の症状としての老化現象を示す細胞又は細胞老化を意味する。好ましくは老化現象を示す細胞の存在に関連する疾患又は状態は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良を含む群から選択される。老化現象を示す細胞の除去が有益な特に好ましい疾患又は状態は、哺乳類、好ましくはヒトである対象における炎症、好ましくは慢性炎症に関連又は関係する疾患又は状態であって、該疾患は老化現象を示す細胞によってもたらされるか仲介される。好ましくは、当該炎症をもたらすか仲介する上記老化現象を示す細胞は、上記の疾患又は状態の影響を受ける器官、好ましくは組織と同じ器官、より好ましくは同じ組織に少なくとも部分的に共局在化する。
【００６１】
老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は障害に関して本明細書で使用された場合、用語“状態”は、とりわけ睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び健康不良を意味する。本明細書で使用された場合、用語“変性疾患”は、組織又は器官の機能及び／又は構造が時間とともに次第に−通常は加齢とともに−崩壊し、いわゆる“機能喪失”になる疾患又は状態に関する。当業者は、変性疾患が遺伝性疾患又は不健康な生活様式の結果、若い人、例えば十代及び若年成人で起こり得ることを理解する。また、用語“変性疾患”は、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び健康不良等の加齢に関連する状態を含む。
【００６２】
本明細書で使用された場合、用語“投与”又は“投与すること”は、ペプチド、阻害剤、好ましくはＮＱＤＩ又はＲ４０６、又は医薬組成物、本発明に係るすべてを、哺乳類の対象、好ましくはヒトに、薬学的に許容される形態かつ薬学的な有効量で、（ｉ）好ましくは錠剤、カプセル、シロップ、懸濁液等の形態での経口投与、（ｉｉ）好ましくは水等の液体で、例えば静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、動脈内、大脳内等の非経口投与の形態での注射投与、（ｉｉｉ）好ましくは例えばクリーム、ゼリー、粉末又はパッチの形態での局所投与による経皮投与、（ｉｖ）例えば吸入粉末、噴霧、懸濁液等の形態の吸入、及び（ｖ）直腸のような投与経路で導入することを意味する。ペプチド、阻害剤、医薬組成物又はキット、本発明に係るすべてが、好ましくは、例えば水等の液体又は流体で、非経口で投与される。
【００６３】
本明細書で使用された場合、用語“アジュバント”は、薬理学的に活性な化合物、好ましくは他の薬理学的に活性な化合物、好ましくは化学療法剤と共投与される、いずれも本発明に係るペプチド又は阻害剤を意味する。アジュバントは、主な治療をもたらす薬理学的に活性な化合物による副作用に対抗する、副作用を緩和する又は抑制するために投与されてもよい。
【００６４】
本明細書で使用された場合、用語“共投与される”は、本発明に係るペプチド又は阻害剤を、単一投与形態（例えば本発明に係る医薬組成物）の一部として又は複数投与形態、例えば別々の物質が一緒にパッケージ化されているが、例えば異なる容器に入っている別個に製剤化された複数の単位用量として、化学療法剤とともに投与することを意味する。また、本発明に係るペプチド又は阻害剤は、化学療法剤の投与に先行して、あるいはその前に、連続して又は間に、又は続けて、若しくは後で投与されてもよい。このような組み合わせの治療では、本発明に係るペプチド又は阻害剤及び化学療法剤が上記のいずれかの経路を介して投与され、さらに、好ましくは全体的な相乗効果及び／又は所望の効果をもたらすような方法で投与される。
【００６５】
本明細書で使用された場合、用語“単一投与形態”は、すべての化合物が単一の製剤、調合又は組成物、例えば１個の容器に含まれる投与形態を意味する。
【００６６】
本明細書で使用された場合、用語“複数投与形態”は、少なくとも２種の異なる−そして分離された−投与形態を意味する。例えば、本発明に係るキットに関して、特に好ましい複数投与形態は、別々の化合物が一緒にパッケージ化されているが、例えば異なる容器に入っている別個に製剤化された複数の単位用量である。
【００６７】
本明細書で使用された場合、用語“対象”は、動物、好ましくはヒト又はイヌ等の哺乳類、最も好ましくは老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態の治療を必要とする、又は老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態を患っている若しくは患うと疑われるヒトを意味する。好ましくは、対象は、少なくとも３０歳、又は少なくとも４０歳である。より好ましくは、対象は少なくとも５０歳である。
【００６８】
本明細書で使用された場合、用語“薬学的又は治療上の有効量”は、治療効果を奏する量又は対象において治療効果をもたらすのに必要な量を意味する。例えば、本発明に係るペプチド若しくは阻害剤又は本発明の医薬組成物の治療上の又は薬学的な有効量は、臨床試験の結果、モデル動物研究及び／又はｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究によって判断されるような所望の治療効果をもたらすのに必要な量である。薬学的な有効量は、いくつかの因子、限定されないが、対象の特性（例えば身長、体重、性別、年齢及び病歴）、特異的疾患及び使用される化合物の特定の種類に依存する。
【００６９】
本明細書で使用された場合、用語“放射線治療”は、電離放射線に、例えば、外部ビーム放射療法、Ｘ線等の光子放射線療法、電子放射線療法、陽子放射線療法、炭素イオン放射線療法、リチウムイオン放射線療法、ケイ素イオン放射線療法、ヘリウムイオン放射線療法、放射性同位体療法、注射可能同位体、例えば任意の種類のマトリックスに付着した又は取り込まれた又は混合された同位体等に好ましくは治療的に暴露されることを意味する。放射線治療は、好ましくはＸ線等の光子放射線療法である。
【００７０】
本明細書で使用された場合、用語“がん”は、副腎皮質がん、肛門がん、虫垂がん、星細胞腫、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳幹グリオーマ、脳腫瘍、乳がん、気管支腫瘍、カルチノイド腫瘍、心臓腫瘍、中枢神経腫瘍、子宮頸がん、脊索腫、結腸がん、大腸がん、頭蓋咽頭腫、腺管がん、胚芽腫、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、鼻腔神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、眼がん、卵管がん、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、胚細胞腫瘍、頭頸部がん、肝細胞（肝）がん、下咽頭がん、腎がん、肺がん、唇及び口腔がん、男性乳がん、転移性頸部扁平上皮がん、口腔がん、副鼻腔及び鼻腔がん、卵巣がん、膵がん、副甲状腺がん、陰茎がん、前立腺がん、直腸がん、唾液腺がん、皮膚がん、小腸がん、胃がん、甲状腺がん、リンパ腫、尿道がん、膣がん、及び／又は外陰がん等のがんである。特に好ましいがんは、ＦＯＸＯ４の発現量が高いがんである。好ましくは、ＦＯＸＯ４発現は、非がん細胞、好ましくはがんではない、又は健康な、健常な細胞、より好ましくは上記がんの近辺のがんではない、又は健康な、健常な細胞でのＦＯＸＯ４発現よりも少なくとも１．０５倍、好ましくは１．１倍、より好ましくは１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、３．０、４．０、５．０倍又は６．０倍以上高い。
【００７１】
用語“抵抗性がん”は、用語“治療抵抗性がん”と代替可能に使用され、（ｉ）抵抗性が上記少なくとも１種の化学療法剤で処置された後に獲得される、少なくとも１種の化学療法剤に抵抗性を示すがん、すなわち抵抗性獲得がん、及び（ｉｉ）抵抗性を上記少なくとも１種の化学療法剤での処置の前から有する、抵抗性が初めからある、すなわちデノボ（ｄｅ  ｎｏｖｏ）抵抗性がんの両方を意味する。用語“抵抗性がん”は、通常の、非抵抗性がん細胞が細胞毒性、細胞死又は細胞老化の兆候のいずれかを示すのに対して、少なくとも１種の化学療法剤があっても生存できるがん細胞を意味する。当業者は、がんが抵抗性がんであるかを簡単に評価でき、すなわちそれは、対象由来のがんに適切な化学療法剤を接触させた後で細胞の生存能力又はアポトーシス誘導活性を評価することによる。当業者は、ＭＴＴアッセイ、ＡＴＰ測定及び／又はＴＵＮＥＬ、シトクロムＣ放出又はクリーブドカスパーゼ３アッセイ等のアポトーシスアッセイのような、抵抗性がんをスクリーニングするための標準的な試験があることを知っている。本発明に係るペプチド又はＡＳＫ１の阻害剤に関しては、抵抗性がんはリンパ腫であってもよい。ＳＹＫの阻害剤に関しては、抵抗性がんは、リンパ腫又は骨髄性白血病ではないほうが好ましい。より好ましくは、抵抗性がんは、抵抗性の副腎皮質がん、肛門がん、虫垂がん、星細胞腫、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳幹グリオーマ、脳腫瘍、乳がん、気管支腫瘍、カルチノイド腫瘍、心臓腫瘍、中枢神経腫瘍、子宮頸がん、脊索腫、結腸がん、大腸がん、頭蓋咽頭腫、腺管がん、子宮内膜がん、胚芽腫、上衣腫、食道がん、鼻腔神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、グリア芽腫、眼がん、卵管がん、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、胚細胞腫瘍、頭頸部がん、肝細胞（肝）がん、下咽頭がん、腎がん、肺がん、唇及び口腔がん、男性乳がん、転移性頸部扁平上皮がん、口腔がん、副鼻腔及び鼻腔がん、卵巣がん、膵がん、副甲状腺がん、陰茎がん、前立腺がん、直腸がん、唾液腺がん、皮膚がん、小腸がん、胃がん、甲状腺がん、尿道がん、膣がん、及び／又は外陰がんである。最も好ましくは、抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫である。本発明に関して、当該抵抗性がんは、上述のように、好ましくは転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫、より好ましくは転移性黒色腫であって、少なくとも１種の化学療法剤、好ましくはＲＡＦ２６５等のＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブでの治療に抵抗性を示す。抵抗性がんが抵抗性乳がんである場合、当該がんが抵抗性を示す化学療法剤は、好ましくは５’フルオロウラシル、ドキソルビシン（アドリアマイシン）及びシクロフォスファミド（ＦＡＣ）を含む化学療法組成物である。抵抗性がんと少なくとも１種の化学療法剤、好ましくはＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤との可能なすべての組み合わせが本明細書で想定される。特に好ましい抵抗性がんは、ＦＯＸＯ４発現量が増加したがんである。抵抗���がんはＦＯＸＯ４発現量が増加しており、そのＦＯＸＯ４の発現量は非抵抗性がんのＦＯＸＯ４発現量よりも少なくとも１．０５、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０倍又はそれ以上である。この段落に関しては、用語“発現”は、好ましくは遺伝子発現産物（ＲＮＡ）又はタンパク質産物を意味する。当業者は、発現した産物の量を評価するための方法をよく知っている。
【００７２】
本明細書で使用された場合、用語“対抗する”は、対象での症状又は現象に反対の、対象での症状又は現象を弱める、阻害する、阻止する、遅らせる、又は抑制する効果を意味する。好ましくは、“対抗する”は、“弱める”ことを意味する。
【００７３】
本明細書で使用された場合、用語“感受性にする”は、抵抗性がん細胞が化学療法剤の影響を受けやすくする一連の変化を意味する。当該用語は、がん細胞が少なくとも１種の化学療法剤があっても生存することができる状態から、上記の少なくとも１種の化学療法剤の影響の結果としてそれが細胞毒性、細胞死及び／又は細胞老化の兆候を示す状態にがん細胞が移行する一連の変化を意味する。用語“感受性にする”は、“再び感受性にする”を包含し、好ましくは該用語に関連し、後者は抵抗性を獲得したがんを感受性にすることに関して使用される。好ましくは、用語“感受性にする”は、少なくとも１種の化学療法剤に対する対象における抵抗性がんの影響の受けやすさが増加することを意味し、当該がんは上記少なくとも１種の化学療法剤の投与に対して抵抗性を示し、上記抵抗性がんの細胞の生存能力は、少なくとも１種の化学療法剤で処置された当該抵抗性がんに相当する感受性にされていない抵抗性がんの細胞の生存能力と比較して、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０又は９０％だけ低下させる。細胞の生存能力は、ＭＴＴアッセイ、ＡＴＰ検出アッセイ、細胞密度アッセイ又はコロニー形成アッセイによって評価可能である。また、用語“感受性にする”は、少なくとも１種の化学療法剤に対する対象における抵抗性がんの影響の受けやすさが増加することを意味し、当該がんは上記少なくとも１種の化学療法剤の投与に対して抵抗性を示し、アポトーシスの程度は、少なくとも１種の化学療法剤で処置された当該抵抗性がんに相当する感受性にされていない抵抗性がんの細胞におけるアポトーシスの程度と比較して、少なくとも２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、２００又は３００％だけ増加させる。
【００７４】
本明細書で使用された場合、用語“化合物”は、あらゆる種類の分子、好ましくは本発明に係るペプチド又は阻害剤等の薬学的に活性な分子又は化学療法剤を意味する。
【００７５】
本明細書で使用された場合、用語“容器”は、化合物、好ましくは薬学的に許容される形態で製剤化された化合物（本発明に係るペプチド又は阻害剤又は化学療法剤）を保持又は保存するのに適合された容器を意味する。好ましい製剤は、非経口投与に適合された製剤である。容器としては、小瓶、瓶、大口瓶、又は柔軟な包装が適している。
【００７６】
本発明に係るキットに関して使用される場合、用語“含有する”は、容器が本発明に係るペプチド又は阻害剤又は化学療法剤のみを含む、又は本発明に係るペプチド又は阻害剤又は化学療法剤からなると解釈されるべきではない。容器は、本発明に係るペプチド又は阻害剤又は化学療法剤の他に他の化合物又は物質を適切に含有してもよい。
【００７７】
本明細書で使用された場合、用語“阻害剤”は、遺伝子産物の活性を抑制し得る、あらゆる化合物、天然物又は合成物を意味する。このため、阻害剤は、遺伝子によってコードされるタンパク質の活性を直接的又は間接的のいずれかで阻害してもよい。直接的な阻害は、例として、タンパク質に結合した結果、タンパク質が標的（例えば結合相手）と結合することを妨げるか、タンパク質の活性（例えば酵素活性）を妨げることでなされる。間接的な阻害は、例えば結合相手のようなタンパク質の対象とする標的と結合した結果、タンパク質の活性を阻止又は抑制することでなされる。好ましくは、阻害剤は、ＡＳＫ１阻害剤又はＳＹＫ阻害剤である。より好ましくは、上記ＡＳＫ１阻害剤及びＳＹＫ阻害剤は、キナーゼ阻害剤、すなわちＡＳＫ１及びＳＹＫのキナーゼ活性を阻害する。上記ＡＳＫ１阻害剤及びＳＹＫ阻害剤が老化現象を示す細胞のアポトーシス誘導活性も示すキナーゼ阻害剤であることが特に好ましい。ＡＳＫ阻害剤ＮＱＤＩ及びＳＹＫ阻害剤Ｒ４０６が最も好ましい。当業者は、標準の阻害アッセイをよく知っており、該アッセイではＡＳＫ１阻害剤及びＳＹＫ阻害剤等の標的化合物がスクリーニングされる。上述のように、アポトーシス誘導活性を評価するための標準アッセイは当業者が知っている一般知識の範囲内である。好適な実施の形態では、ＡＳＫ１阻害剤又はＳＹＫ阻害剤は、ＡＳＫ１又はＳＹＫのタンパク質発現を阻害する干渉ＲＮＡ分子、好ましくはｓｉＲＮＡである。他の実施の形態では、ＡＳＫ１の又はＳＹＫの阻害剤は、モルフォリノオリゴマーである。
【００７８】
本明細書で使用された場合、用語“干渉ＲＮＡ分子”は、ＲＩＳＣと相互作用し、遺伝子発現におけるＲＩＳＣを介した変化に関わることができるすべてのＲＮＡ又はＲＮＡ様分子を意味する。ＲＩＳＣと相互作用し得る干渉ＲＮＡの例は、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、一本鎖ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、及びダイサー基質（ｄｉｃｅｒ−ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）２７ｍｅｒ二本鎖等である。
【００７９】
本明細書で使用された場合、用語“モルフォリノオリゴマー”は、遺伝子の窒素塩基、アデニン、グアニン、シトシン及びチミンのポリマーを意味し、該窒素塩基は、ＲＮＡ又はＤＮＡにおけるリボース又はデオキシリボースとは対照的に、６員モルフォリン環と結合している。
【００８０】
用語“フォークヘッドボックスＯ４（ＦＯＸＯ４）遺伝子”は、遺伝子ＩＤ４３０３（Ｇｅｎｂａｎｋ  ２０１４年１２月７日）を有するタンパク質をコードする遺伝子を意味し、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＣ＿００００２３．１１で７３８６個のヌクレオチドからなり、ＡＦＸ、ＡＦＸ１又はＭＬＬＴ７としても知られる。
【００８１】
用語“ＦＯＸＯ４ペプチド”及び“ＦＯＸＯ４タンパク質”は、本明細書では交換可能な用語であり、フォークヘッドボックスタンパク質Ｏ４遺伝子の転写産物から翻訳されるタンパク質を意味し、フォークヘッドボックスタンパク質Ｏ４とも呼ばれる。このタンパク質のアイソフォーム１（図１４）はＦＯＸＯ４遺伝子の転写産物バリアント１によってコードされている（図１６）。アイソフォーム２（図１５）は転写産物バリアント２によってコードされている。用語“ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチド”は、“ＦＯＸＯ４ペプチド”の逆インベルソペプチド又はタンパク質を意味し、必ずしもではないが、好ましくはすべてＤアミノ酸構造で、好ましくはアイソフォーム１タンパク質の形態である。
【００８２】
本明細書で使用された場合、用語“ＡＳＫ１”は、哺乳類、好ましくはヒトのアポトーシスシグナル制御キナーゼ１（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ｋｉｎａｓｅ  １）（ＡＳＫ１）を意味し、これはマイトジェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼキナーゼ５（ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｋｉｎａｓｅ  ５）（ＭＡＰ３Ｋ５）としても知られる。ＡＳＫ１はＭＡＰキナーゼであって、これがｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ）を活性化すると言われている。ヒト及びマウスのＡＳＫ１のアミノ酸配列が本技術分野で知られている。例えば、ヒトＡＳＫ１はアクセッション番号ＮＰ＿００５９１４（２０１４年５月３日）でＧｅｎｂａｎｋにアクセス可能である。
【００８３】
本明細書で使用された場合、用語“ＳＹＫ”は、哺乳類、好ましくはヒトの脾臓チロシンキナーゼを意味する。ＳＹＫはチロシンキナーゼのＳｙｋファミリーの１つである。ヒト及びマウスのＡＳＫ１のアミノ酸配列が本技術分野で知られている。例えば、ヒトＳＹＫのアミノ酸配列はアクセッション番号Ｐ４３４０５（２０１４年１１月２６日）でＧｅｎｂａｎｋにアクセス可能である。
【００８４】
本明細書で使用された場合、用語“ＮＱＤＩ”は、分子を意味し、広くは化学名２，７−ジヒドロ−２，７−ジオキソ−３Ｈ−ナフト［１，２，３−デ］キノリン−１−カルボン酸エチルエステルを有する“ＮＱＤＩ１”とも言われ、次の構造を有する。
【化１】
0006707549.tif 000002
ＮＱＤＩは市販されている（例えばＴｏｃｒｉｓ、ＮＱＤＩ  １、カタログ番号４４２９）。ＮＱＤＩは、好ましくは薬学的に許容可能に、より好ましくは非経口投与に適合された薬学的に許容される形態で製剤化される。
【００８５】
本明細書で使用された場合、用語“Ｒ４０６”は、ＳＹＫ阻害剤を意味する。また、Ｒ４０６は、６−（５−フルオロ−２−（３，４，５−トリメトキシフェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）−２，２−ジメチル−２Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］［１，４］オキサジン−３（４Ｈ）−オンベンゼンスルホナートとも言われ、次の構造を有する。
【化２】
0006707549.tif 000003
Ｒ４０６は、市販されており（例えば米国のＳｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍを介して）、利用可能である。Ｒ４０６は、好ましくは薬学的に許容される、より好ましくは非経口投与に適合された薬学的に許容される形態で製剤化される。具体的には、Ｒ７８８（フォスタマチニブとも言われる）はＲ４０６のプロドラッグである。Ｒ４０６は、Ｒ７８８の肝臓分解産物である。当業者は、Ｒ４０６の代わりにＲ７８８も哺乳類の、好ましくはヒトの対象に、Ｒ４０６を該対象に与えるために投与されてもよいことを理解する。機能的観点から、当業者は、用語“Ｒ４０６”は、“Ｒ７８８”、又は対象に投与された後に哺乳類の、好ましくはヒトの対象との相互作用によってＲ４０６を放出するあらゆる他のプロドラッグと交換可能であることを理解する。用語“Ｒ４０６”の代わりに、本出願で使用される場合、用語Ｒ７８８が用いられてもよい。Ｒ７８８は市販されており（例えばＳａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ＣＡＳ  ９０１１１９−３５−５）、利用可能であって、次の化学名６−（５−フルオロ−２−（３，４，５−トリメトキシフェニルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）−２，２−ジメチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロピリド［３，２−ｂ］［１，４］オキサジン−４−イル）メチルリン酸二水素塩で知られている。Ｒ７８８の構造式は、
【化３】
0006707549.tif 000004
である。
【００８６】
好ましい実施の形態の説明
細胞老化と疾患とのつながり
細胞老化は、広範な加齢に関する病理に関連する。細胞老化と加齢関連病理との間のつながりに関してかなりの証明がなされている。興奮することに、急速に老化するマウスモデルにおいて、遺伝的な方法での老化現象を示す細胞の除去が健康を大きく改善し、加齢の指標を低下させることが最近になって示された（Ｂａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１、上記参照、図１）。これらのマウスは、後彎症（骨の過度の湾曲）、筋力、脂肪沈着及び白内障によって評価される加齢の兆候の抑制を示した。これは、細胞老化及びＳＡＳＰが加齢関連表現型及びがんに因果的に関係することのさらなる証拠となる。ＳＡＳＰが炎症性のサイトカイン又はケモカイン、成長因子及び／又はマトリクス分解性プロテアーゼの分泌によって、組織の微小環境及び潜在的に全身の環境に影響し、変化させ得ることは広く受け入れられている。概してＳＡＳＰは、ＩＬ−６及びＩＬ−８、種々の単球遊走因子及びマクロファージ炎症性タンパク質、及び顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子等の炎症制御タンパク質のような因子によって形成される。様々な老化現象を示す細胞のＳＡＳＰにおいて高度に保存されている特徴は、炎症誘発性のサイトカインである。それは、少なくとも局所的な、そして場合によると全身における慢性炎症を引き起こす上記の因子の分泌である。慢性炎症が実質的にはあらゆる主要な加齢関連疾患、変性（機能喪失）及びがんの両方の原因であり、又は重要な一因であることが広く受け入れられている。
【００８７】
本発明のペプチド
本発明は、とりわけアミノ酸配列ＳＥＩＡＱＳＩＬＥＡＹＳＱＮＧＷ又はＬＴＬＲＫＥＰＡＳＥＩＡＱＳＩＬＥＡＹＳＱＮＧＷＡＮＲＲＳＧＧＫＲＰを有するペプチドに少なくとも５０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む若しくはからなるペプチド、又はアミノ酸配列ＳＥＩＡＱＳＩＬＥＡＹＳＱＮＧＷを含む若しくはからなる上記ペプチドの断片に関し、上記ペプチド、好ましくは上記アミノ酸配列及び上記断片は、少なくとも１種のＤ−アミノ酸残基を含み、好ましくはすべてがＤで、上記ペプチド、好ましくは上記アミノ酸配列及び上記断片は、老化現象を示す細胞に対してアポトーシス誘導活性を示す。本発明は、本発明のペプチドに係るペプチド模倣薬も想定する。
【００８８】
また、本発明はアミノ酸配列ＬＴＬＲＫＥＰＡＳＥＩＡＱＳＩＬＥＡＹＳＱＮＧＷＡＮＲＲＳＧＧＫＲＰＰＰＲＲＲＱＲＲＫＫＲＧを有するペプチドに少なくとも５０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む若しくはからなるペプチド、又はアミノ酸配列ＳＥＩＡＱＳＩＬＥＡＹＳＱＮＧＷを含む若しくはからなる上記ペプチドの断片に関し、上記ペプチド、好ましくは上記アミノ酸配列及び上記断片は、少なくとも１種のＤ−アミノ酸残基を含み、好ましくはすべてがＤで、上記ペプチド、好ましくは上記アミノ酸配列及び上記断片は、老化現象を示す細胞に対してアポトーシス誘導活性を示す。
【００８９】
理論に縛られることを望まないが、アミノ酸配列ＳＥＩＡＱＳＩＬＥＡＹＳＱＮＧＷで下線を付された残基Ｌ、Ｙ及びＧＷ、並びに上記ｌ残基のアミノ末端側の残基がｐ５３と相互作用すると考えられる。相互作用の結果として、ＦＯＸＯ４とｐ５３腫瘍抑制タンパク質との間の老化に好都合な相互作用が阻害され、細胞老化よりもアポトーシスに有利に働くと考えられる。
【００９０】
実施例で使用されるＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドのような本発明に係るペプチドは、アポトーシス誘導活性を有するペプチド配列の細胞への移行を促進する配列“ＰＰＲＲＲＱＲＲＫＫＲＧ”等のＦＯＸＯ４ペプチド（又はＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチド、その中にない配列を意味する）由来ではないアミノ酸配列さらに含んでもよい。当業者は、細胞へのペプチドの移行を促進する任意の他のアミノ酸配列でこのアミノ酸配列が置換されてもよいことを理解する。言い換えると、当該アミノ酸配列は、いかなるアポトーシス誘導活性も有していないことを意味する。当該アミノ酸配列は、好ましくは少なくとも１種のＤ−アミノ酸残基を含み、より好ましくは該アミノ酸配列におけるすべてのアミノ酸残基がＤ−アミノ酸残基である。
【００９１】
好ましくは、本発明に係るペプチドは、老化現象を示す細胞においてアポトーシス誘導活性を選択的に示し、すなわち老化現象を示さない細胞ではアポトーシス誘導活性を示さない。本発明に係るペプチドは、老化現象を示さない細胞のアポトーシスよりも、少なくとも１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．５、３、４、５倍又はそれ以上だけ、老化現象を示す細胞のアポトーシスに有利に働く。本発明に係るペプチドは好ましくは単離されている。
【００９２】
一般知識を用いて、当業者は、本発明に係るペプチドが老化現象を示す細胞でアポトーシス誘導活性を示すかどうかを標準のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験で評価できる。まず、例えば細胞培養を電離放射線又は化学療法剤にさらして得られる老化現象を示す細胞、及び老化現象を示さない細胞の細胞培養が行われる。老化現象を示す細胞をもたらす他の方法は、（ｉ）複製老化が起こる（テロメアの短縮化）までの継続的な継代、（ｉｉ）Ｈ２Ｏ２及びロテノンのような酸化ストレス剤（ｉｉｉ）二酪酸ナトリウムのようなクロマチン再構築剤、又は（ｉｖ）ＲＡＳＧ１２Ｖ又はＢＲＡＦＶ６００Ｅ等の過剰活性化したがん遺伝子の発現、の使用を介してである。老化現象を示す細胞の存在は、ＳＡ−Ｂ−ＧＡＬに関する試験によって確かめることができる。第２のステップは、本発明に係るペプチドを両方の細胞培養に投与し、（ｉ）細胞質のシトクロムＣの染色又は（ｉｉ）ＴＵＮＥＬの染色等の１種以上のアポトーシスマーカーを評価することである。シトクロムＣに関して、シトクロムＣがミトコンドリアから細胞質ゾルに放出された細胞（ＤＡＰＩが細胞を示すために使用されてもよい）の個数、あるいは（後の段階で）完全に消失した細胞の個数を計数することでデータが定量化される。まさにアポトーシスを受けようとしている（細胞質ゾルへのシトクロムＣの放出で示される）細胞がカスパーゼを必要とする実際の死とならないように、このアッセイは、カスパーゼ阻害剤の存在下で行われてもよい。このアッセイの利点は、数日（例えば５日）に渡って老化の程度に関して累積して計数できることである。ＴＵＮＥＬの染色に関して、ＴＵＮＥＬに陽性染色された核（ＤＡＰＩ陽性）の割合が計数される。これは、目視で容易に行えるが、それを客観的に行えるＣｅｌｌｐｒｏｆｉｌｅｒ（フリーウェア）と呼ばれるソフトウェア・ツールを用いることも可能である。
【００９３】
本発明に係るペプチドは、それが老化現象を示す細胞を殺す、除去する又は取り除く場合、老化現象を示す細胞に対してアポトーシス誘導活性を示すと考えられる。好ましくは、本発明に係るペプチドは、それが殺す、除去する、取り除く、あるいは老化現象を示す細胞培養における細胞の生存能力の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０又は８０％を抑制する場合、老化現象を示す細胞に対してアポトーシス誘導活性を示すと考えられる。
【００９４】
本発明に係るペプチドは、好ましくはアミノ酸配列ＳＥＩＡＱＳＩＬＥＡＹＳＱＮＧＷ、ＬＴＬＲＫＥＰＡＳＥＩＡＱＳＩＬＥＡＹＳＱＮＧＷＡＮＲＲＳＧＧＫＲＰ又はＬＴＬＲＫＥＰＡＳＥＩＡＱＳＩＬＥＡＹＳＱＮＧＷＡＮＲＲＳＧＧＫＲＰＰＰＲＲＲＱＲＲＫＫＲＧを有するペプチドに対して少なくとも５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９又は１００％の配列相同性を示すアミノ酸配列を含む、あるいはからなり、当該ペプチドは、少なくとも１種のＤ−アミノ酸残基を含み、当該ペプチドは、老化現象を示す細胞におけるアポトーシス誘導活性を示す。
【００９５】
より好ましくは、上記アミノ酸配列は上記ペプチドと、少なくとも９０％、最も好ましくは１００％の配列相同性を有する。
【００９６】
好ましくは、本発明に係る上記ペプチド又は該ペプチドの断片は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２７、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９又は１００個のＤ−アミノ酸残基からなる。より好ましくは、本発明に係る上記ペプチドにおけるすべてのアミノ酸残基がＤ−アミノ酸残基である。最も好ましくは、本発明に係るペプチドは、ＤＲＩ−ペプチド、すなわちＤ−アミノ酸誘導体からなり、ＦＯＸＯ４ペプチドと逆の配列を有する、ＦＯＸＯ４ペプチドのレトロインベルソ又はＤ−レトロ光学異性体であって、好ましくは天然のヒトＦＯＸＯ４タンパク質又はそのペプチド断片に関する。
【００９７】
用語“Ｄ−アミノ酸誘導体”は、本明細書で定義されたような（上記で定義されたＦＯＸＯ４ペプチドの逆のアミノ酸配列を有する、Ｃ末端及びＮ末端がないペプチド断片を含む）ＦＯＸＯ４誘導体を意味し、それは、少なくともＤ体を好ましくは２５％超のＤアミノ酸残基、より好ましくは５０％超のＤアミノ酸残基、さらに好ましくは７５％超のＤアミノ酸残基、さらに好ましくは８５％超のＤアミノ酸残基、さらに好ましくは９５％超のＤアミノ酸残基を含む。これらＤ−アミノ酸誘導体の特別な部類は、Ｄアミノ酸だけで構成されるペプチドである（すなわちＬアミノ酸が存在しない）。この特別な部類が、本明細書においてＤ−のみの誘導体として定義される。
【００９８】
本発明に係るペプチドがｉｎ  ｖｉｔｒｏで老化現象を示す細胞においてアポトーシスを誘導し得る一方で、老化現象を示さない細胞を無傷のままにしておくことが予想外に見出された。発明者は、加速された速度で細胞老化が進み、急速に加齢する表現型を示すマウスモデル（ＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスモデル、マウスモデルはとりわけ国際公開第２０１３／１５２０３８号、例えば段落［０１３５］、［０１６１］及び［０２４４］）においてこれらの発見も確認した。このマウスモデルでは、健康不良、脱毛及び脊椎湾曲等の加齢関連表現型が本発明に係るペプチドの投与によって対抗された（図３）。現在、化合物がそれのみで、又は単独の治療上活性な化合物として治療的組成物の形態で投与された場合に、治療効果等をもたらすことができる、すなわち老化現象を示す細胞にアポトーシスを誘導し、加齢関連表現型又は疾患に対抗するのに利用可能な化合物はない。理論に縛られるわけではないが、本発明に係るペプチドはＦＯＸＯ４とｐ５３腫瘍抑制タンパク質との間の老化に有利な相互作用を阻害することによって、細胞老化の代わりにアポトーシスに好都合なその機能を示す。
【００９９】
さらに本発明は、本発明に係るペプチドを含む医薬組成物に関する。本発明の医薬組成物は、ドキソルビシン等の化学療法剤を含んでもよい。医薬組成物において本発明に係るペプチドと化学療法剤とを組み合わせる、すなわち単一投与形態にすることは有利である。化学療法剤が細胞老化を誘導し、本発明に係るペプチドが老化現象を示す細胞を選択的に除去し、殺し、又はその生存能力を抑制できることが証明された。そのような方法で、化学療法剤のオフターゲット効果が防がれるか無効化された（図４参照）。さらに予想外なことに、本発明に係るペプチドが抵抗性がんを化学療法剤に対して感受性にすることが見出された。本発明に係る医薬組成物は、治療上の有効量で製剤化される。好ましくは本発明に係る医薬組成物又はペプチドは、特別な投与経路を介した投与に適合された薬学的に許容される形態である。本発明に係る医薬組成物又はペプチドは、最も好ましくは非経口で投与される。あるいは、本発明は、同時の又は連続の投与のための、本発明に係るペプチド及び化学療法剤を含む組み合わせに関する。
【０１００】
本発明は、本発明のペプチドをコードするＤＮＡ配列を有する核酸をさらに提供する。当業者は、本発明のペプチドのアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列をもたらす方法及び一般に知られた組み換えＤＮＡ技術を用いて上記ＤＮＡ配列を有する核酸分子を製造及び単離する方法を理解でするであろう。
【０１０１】
また、本発明は、発現ベクター、好ましくは本発明の核酸分子を含むウイルス発現ベクターを提供する。本明細書では、ウイルス発現ベクターが遺伝子治療での使用に適していることが想定される。
【０１０２】
本発明に係るペプチド又は本発明に係る医薬組成物が薬剤として使用されることが強調される。より好ましくは、本発明に係るペプチド又は本発明に係る医薬組成物は、老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態の治療で使用される。また、本発明に係るペプチド又は本発明に係る医薬組成物は、老化現象を示す細胞を取り除き、除去し、又は殺すために使用される。ヒトで“老化関連分泌表現型（ＳＡＳＰ）”を有し、好ましくは野生型ｐ５３腫瘍抑制遺伝子を有する老化現象を示す細胞に関連するあらゆる疾患が本明細書に記載された治療に感受性を示すか応答することが本明細書では想定される。当業者は、ＩＬ１ａ又はＩＬ６等のＳＡＳＰ因子が高い濃度で発現することがわかっている疾患をよく知っている。これら疾患は、本明細書に記載されたような治療に特に感受性を示すか反応し、さらに具体的にはＷＴ  ｐ５３と組み合わせて“ＳＡＳＰ”を有する。
【０１０３】
また、本発明は、薬剤、好ましくは老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態を治療するための薬剤の製造のための、本発明に係るペプチド、医薬組成物又は核酸の使用を提供する。
【０１０４】
好ましくは、上記の疾患又は状態は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、２型糖尿病を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織移植後の生着不全の抑制又は防止、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良を含む群から選択される。
【０１０５】
好ましくは、器官又は組織移植後の生着不全は、上記器官又は組織の移植前に本発明のペプチド、組成物又は核酸をドナー対象に投与することで抑制又は防止される。また、それは、採取された器官又は組織を本発明のペプチド、組成物又は核酸にさらすことで抑制又は防止される。あるいはそれは、上記の器官又は組織の移植後に本発明のペプチド、組成物又は核酸をレシピエントに投与することで抑制又は防止される。
【０１０６】
好ましくは、本発明に係るペプチド又は医薬組成物は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良を患う、又は患うことが予期されるヒトである対象における老化現象を示す細胞を除去し、取り除き、又は殺すことに使用される。
【０１０７】
好ましくは、本発明に係るペプチド又は医薬組成物は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良を患う、又は患うことが予期されるヒトである対象におけるｐ２１ｃｉｐ１発現に対抗することに使用される。好ましくは、ｐ２１ｃｉｐ１発現が老化現象を示す細胞で対抗される。本発明に係るペプチドがｐ２１ｃｉｐ１の発現に対抗することが図２に示されている。ヒト遺伝子ｐ２１ｃｉｐ１はサイクリン依存キナーゼ阻害剤１Ａ（ＣＤＫＮ１Ａ）又はＰ２１、ＣＩＰ１、ＳＤＩ１、ＷＡＦ１、ＣＡＰ２０、ＣＤＫＮ１又はＭＤＡ−６としても知られており、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ番号１０２６で示される。
【０１０８】
好ましくは、本発明に係るペプチド又は医薬組成物は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良を患う、又は患うことが予期される対象においてｐ１６ＩＮＫ４ａを発現する細胞を除去し、殺し、又は取り除くことに使用される。本発明に係るペプチドがｐ１６ＩＮＫ４ａを発現する細胞を除去し、殺し、又は取り除くことが図に示されている。ヒトｐ１６ＩＮＫ４ａ遺伝子は、サイクリン依存キナーゼ阻害剤２Ａとしても知られており、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ番号１０２９で示される。
【０１０９】
好ましくは、本発明に係るペプチド又は医薬組成物は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良を患う、又は患うことが予期される対象において核セリン−１５−リン酸化ｐ５３フォーカスの個数に対抗し、又は該個数を減らすことに使用される。
【０１１０】
本発明に係るペプチド又は医薬組成物は、好ましくは単一投与形態で連続して投与される。より好ましくは、それは毎日（１２時間又は２４時間に１回）、１日以上、好ましくは連続した日、少なくとも連続２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４日、より好ましくは連続３日の間投与される。また、上記のペプチド又は医薬組成物は、１週間に１回投与される。また、当該投与レジメンは、本出願で言及された他の化合物、例えば使用のための阻害剤又は本発明に係る阻害剤を含む医薬組成物にも適用され得る。
【０１１１】
本発明に係る使用のための、ペプチド又は本発明に係るペプチドを含む医薬組成物の好ましい実施の形態では、老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態はがんである。使用のためのペプチド又は使用のための医薬組成物は、好ましくはアジュバントとして、哺乳類の、好ましくはヒトの対象に対する投与のためであって、該対象が放射線治療を受ける前、間及び又は後、及び／又は該対象に化学療法剤を投与する前、間及び又は後に投与される。好ましくは、使用のためのペプチド又は本発明に係るペプチドを含む医薬組成物の投与は、放射線治療による又は化学療法剤での治療の結果として老化現象を示すようになった細胞を取り除き、殺し、又はその生存能力を抑制するのに適合される。意外にも、ペプチド又は本発明に係るペプチドを含む医薬組成物が器官毒性を抑制することによって、器官の機能の改善を導く現在の化学療法剤のオフターゲット効果を抑制し得ることが見出された。また、本発明のペプチドががんを殺し、除去し、又は取り除く可能性があることが見出された。このため、１つの実施の形態では、本発明に係るペプチドは、がん、好ましくは黒色腫、乳がん、前立腺がん又はグリア芽腫の治療での使用に適している。
【０１１２】
前の段落に関して、さらに好ましいのは、がんが抵抗性がんである状況である。意外なことに、本発明のペプチド又は本発明に係るペプチドを含む医薬組成物が、以前はがんが抵抗性だった化学療法剤又は放射線療法に対して抵抗性がん細胞を感受性にし得ることが見出された（図５、６参照）。好ましくは、抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん、又はグリア芽腫、好ましくは転移性黒色腫又はグリア芽腫であって、化学療法剤が単独の、又は放射線療法と組み合わせた、ＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ等のＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ、又は本明細書に開示された薬剤である。意外にも、本発明に係るペプチドが、すなわち単独で（化学療法剤非存在下で）、がん、好ましくは抵抗性がんを殺し、除去し、又は取り除くことが見出された。このため、特に好ましい実施の形態は、本発明に係るペプチドは、がん、好ましくは抵抗性がんの治療に使用される。
【０１１３】
好ましくは、本発明に係るペプチド又は医薬組成物は、後彎症、脊柱側彎症、サルコペニア、悪液質、硬化症又は腎不全を患う、又は患うことが予期される対象の治療に使用される。また、本発明に係るペプチド又は医薬組成物は、硫黄欠乏性毛髪発育異常症を患う、又は患うことが予期される対象における、硫黄欠乏性毛髪発育異常症の少なくとも１つの症状の緩和、又は治療で使用される。好ましくは、少なくとも１つの症状は、後彎症、脱毛症、健康低下、脊柱側彎症、サルコペニア、悪液質、硬化症及び腎不全を含む又はからなる群から選択される。
【０１１４】
さらに、本発明に係るペプチド又は医薬組成物は、好ましくは、対象における化学療法によって引き起こされた体重減少に対抗し、又は体重減少を治療するのに使用される。好ましくは、体重減少は、ドキソルビシンの投与によって誘導される。
【０１１５】
また、本発明は、哺乳類の、好ましくはヒトの対象において、抵抗性がんを、少なくとも１種の化学療法剤、好ましくは該抵抗性がんが抵抗性を示した又は抵抗性を示す少なくとも１種の化学療法剤に対して、感受性にするのに使用されるための本発明に係るペプチドを提供する。好ましくは、上記抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん、又はグリア芽腫であって、上記の少なくとも１種の化学療法剤は、ＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ等のＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである。
【０１１６】
他には、本発明は、哺乳類の、好ましくはヒトの対象において抵抗性がんの治療に用いるための本発明に係るペプチドを提供し、当該ペプチドは、化学療法剤、好ましくは上記の抵抗性がんが抵抗性を示す化学療法剤と共投与されるためのものである。
【０１１７】
さらに、本発明は、本発明に係るペプチドを含有する第１の容器と、化学療法剤を含有する第２の容器とを備えるキットに関する。キットは、哺乳類の、好ましくはヒトの対象への投与に関する説明書を適切に含む。好ましくは、ヒトである対象は、がん、例えば抵抗性がんを患う、又は患う疑いがある。
【０１１８】
本発明に係るペプチドを含有する第１の容器を備える本発明に係るキットは、好ましくは哺乳類の、好ましくはヒトの対象のがんの治療に使用される。本発明のペプチド及び化学療法剤は、単一投与形態、例えば医薬組成物に製剤化され得るが、それは好ましくは複数の投与形態に製剤化され、本発明のペプチドが１つの容器に入れられ、化学療法剤が他の容器に入れられる。本発明に係る使用のためのキットでは、本発明のペプチド及び化学療法剤が、好ましくは共投与される。好ましくは、上記ペプチドは、上記化学療法剤の投与の後又は投与に続けて投与されるためのものである。好ましくは、本発明のペプチドは化学療法剤での治療の結果、老化現象を示すようになった細胞を除去し、殺し、又はその生存能力を抑制するようにアジュバントとして投与される。意外にも、本発明に係るペプチドが現在の化学療法剤のオフターゲット効果を抑制できることが見出された。好ましくは、本発明に係るキットは、本発明に係るペプチドと化学療法剤の最適な組み合わせ効果が得られる投与レジメンに関する説明書を備える。
【０１１９】
他の観点では、本発明は、老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態を患う、又は患う疑いがある対象の治療方法を提供し、該方法は、ａ）老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態を患う、又は患う疑いがある対象に本発明に係るペプチド又は医薬組成物を投与することを含む。本発明の好ましい方法では、上記疾患又は状態はがんであって、上記対象に化学療法剤を投与する、及び／又は上記対象に放射線療法を受けさせるステップｂ）をさらに含む。本発明の他の好ましい方法では、本発明のペプチド又は医薬組成物が上記対象に化学療法剤を投与する前、間、又は後に、及び／又は上記対象に放射線療法を受けさせる前、間、又は後に、好ましくはアジュバントとして投与される。上述の本発明のいずれかの方法のより好ましい実施の形態では、上記疾患又は状態ががんであって、がんは、抵抗性がんである。上述の本発明のいずれかの方法のさらに好ましい実施の形態では、上記疾患又は状態ががんであって、がんは、抵抗性がんである。上述の方法のさらにより好ましい実施の形態では、上記疾患又は状態ががんであって、がんは、黒色腫、好ましくは転移性黒色腫であって、化学療法剤がＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ等のＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである。
【０１２０】
他の観点では、本発明は哺乳類の、好ましくはヒトの対象における抵抗性がんを、当該がんが抵抗性を示す化学療法剤に対して感受性にする方法を提供し、該方法は、ａ）上記対象に本発明のペプチド又は医薬組成物を投与することを含む。がんを感受性にする方法の好ましい実施の形態では、上記抵抗性がんが転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫、好ましくは転移性黒色腫であって、化学療法剤がＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ等のＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである。
【０１２１】
他の観点では、本発明は、哺乳類の、好ましくはヒトの対象における抵抗性がんを治療する方法を提供し、該方法は、ａ）抵抗性がんを患う、又は患う疑いがある哺乳類の、好ましくはヒトの対象に本発明に係るペプチド又は医薬組成物を投与し、ｂ）化学療法剤、好ましくは上記の抵抗性がんが前に抵抗性を示した化学療法剤を、上記対象に投与することを含む。本発明に係る上記ペプチド又は医薬組成物は、好ましくは化学療法剤と共投与される。抵抗性がんを治療する方法の好ましい実施の形態では、抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫、好ましくは転移性黒色腫であって、化学療法剤がＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ等のＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである。
【０１２２】
他の観点では、本発明は、対照において化学療法で誘導される毒性、好ましくは細胞毒性に対抗するのに使用する本発明に係るペプチド又は組成物を提供する。好ましくは、毒性は好ましくはＡＳＡＴの血漿中濃度の測定によって評価される肝毒性、又は好ましくはアミラーゼの血漿中濃度の測定によって評価される膵臓毒性である。当業者は、肝毒性及び膵臓毒性の評価のための方法と手段とをよく知っている。
【０１２３】
ＡＳＫ１の阻害剤
本発明は、老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態の治療に用いるためのＡＳＫ１の阻害剤にさらに関する。好ましくはＡＳＫ１の阻害剤は、老化現象を示す細胞におけるＡＳＫ１のＭＡＰキナーゼ活性を阻害する。老化現象を示す細胞におけるＡＳＫ１のＭＡＰキナーゼ機能を選択的に阻害した場合、アポトーシスが誘導されることが意外にも見出された。このため、ＡＳＫ１阻害剤は、老化現象を示す細胞を選択的に取り除き、殺し、又はその生存能力を抑制するための使用に適している（図１２参照）。特に好ましいのはＡＳＫ１阻害剤ＮＱＤＩである。理論に縛られたくないが、ＡＳＫ１のＭＡＰキナーゼシグナルは細胞老化の維持及びアポトーシスの誘導を妨げにおいて重要であると考えられる。また、本発明は老化現象を示す細胞を取り除き、除去し、又は殺すのに使用されるＡＳＫ１の阻害剤に関する。
【０１２４】
好ましくは、老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、肥満、メタボリック症候群、サルコペニア、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良を含む群から選択される。本発明に係る使用のためのＡＳＫ１の阻害剤は、単一投与形態で連続して投与される。より好ましくは、それは１日以上、好ましくは少なくとも連続３日等の連続した日の間、毎日（１２時間又は２４時間に１回）投与される。一連の期間のＮＱＤＩの投与によってその老化現象を示す細胞を取り除く効果が増強されることが見出された。また、ＡＳＫ１の上記阻害剤は、１週間に１回、単一投与形態で投与されてもよい。
【０１２５】
本発明に係る使用のためのＡＳＫ１の阻害剤は、薬学的に許容される形態に、治療上有効な量で製剤化される。好ましくは、阻害剤は、特定の投与経路を介した投与に適合させた薬学的に許容される形態である。本発明に係る使用のためのＡＳＫ１の阻害剤は、最も好ましくは非経口で投与される。
【０１２６】
本発明に係る使用のためのＡＳＫ１の阻害剤の好ましい実施の形態では、老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態はがんであって、ＡＳＫ１の阻害剤は、哺乳類の、好ましくはヒトの対象に、該対象に放射線療法を受けさせる前、間、又は後に、及び／又は上記対象に化学療法剤を投与する前、間、又は後に、好ましくはアジュバントとして投与され、又は投与のためのものである。好ましくは、本発明に係る使用のためのＡＳＫ１の阻害剤の投与は、放射線治療による又は化学療法剤での治療の結果として老化現象を示すようになった細胞を取り除き、殺し、又はその生存能力を抑制するのに適合される。本発明に係るＡＳＫ１阻害剤が現在の化学療法剤のオフターゲット効果を抑制することが意外にも見出された。
【０１２７】
前の段落に関して、さらにより好ましいのは、がんが化学療法剤に抵抗性を有する抵抗性がんである状況である。より好ましくは、上記抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫、好ましくは転移性黒色腫であって、上記の化学療法剤がＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ等のＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである。
【０１２８】
また、本発明は、医薬に使用されるＡＳＫ１の阻害剤、ＡＳＫ１の阻害剤を含む医薬組成物、又はキットを提供し、キットは、ＡＳＫ１の阻害剤を含有する第１の容器を備え、本発明に係るこれらすべてが、哺乳類の、好ましくはヒトの対象における抵抗性がんを、少なくとも１種の化学療法剤、好ましくは上記抵抗性がんが抵抗性を示す少なくとも１種の化学療法剤に感受性にするのに使用される。好ましくは、上記の抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫であって、上記の少なくとも１種の化学療法剤は、ＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ等のＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである。
【０１２９】
他には、本発明は、医薬に使用されるＡＳＫ１の阻害剤、ＡＳＫ１の阻害剤を含む医薬組成物、又はキットを提供し、キットは、ＡＳＫ１の阻害剤を含有する第１の容器を備え、本発明に係るこれらすべてが、哺乳類の、好ましくはヒトの対象における抵抗性がんの治療に使用され、上記のＡＳＫ１の阻害剤、ＡＳＫ１の阻害剤を含む医薬組成物、又はキットが医薬に使用され、キットは、化学療法剤、好ましくは上記の抵抗性がんが抵抗性を示す化学療法剤とともに投与される、ＡＳＫ１の阻害剤を含有する第１の容器を備える。
【０１３０】
さらに本発明は、ＡＳＫ１の阻害剤、好ましくはＮＱＤＩを含む医薬組成物と、化学療法剤とを含む医薬組成物に関する。本発明に係る医薬組成物は、治療上有効な量で製剤化される。好ましくは、本発明に係る医薬組成物は、特定の投与経路を介した投与に適合させた薬学的に許容される形態である。本発明に係る医薬組成物は、最も好ましくは非経口で投与される。ＡＳＫ１の阻害剤は、化学療法剤のオフターゲット効果を軽減するため、ＡＳＫ１の阻害剤及び化学療法剤の単一投与形態での組み合わせは有利である。本発明に係る医薬組成物は、がん、好ましくは抵抗性がんの治療に使用されるのが好ましい。本発明に係る医薬組成物は、好ましくは単一投与形態で連続して投与される。より好ましくは、それは毎日、２４時間に１回、１日以上、好ましくは連続した日、例えば少なくとも連続２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４日、より好ましくは少なくとも連続３日の間投与される。一連の期間のＮＱＤＩの投与によってその老化現象を示す細胞を取り除く効果が増強されることが見出された。また、ＡＳＫ１の上記阻害剤は、１週間に１回、単一投与形態で投与されてもよい。また、本発明は、同時又は続けて投与されるＡＳＫ１阻害剤及び化学療法剤を含む混合調製物に関する。
【０１３１】
また、本発明は医薬に使用されるキットに関し、キットは、ＡＳＫ１の阻害剤、好ましくはＮＱＤＩを含有する第１の容器と、化学療法剤を含有する第２の容器と、を備える。キットは、哺乳類の、好ましくはヒトの対象への投与に関する説明書を適切に備えてもよい。ヒトである対象は、好ましくはがんを患う、又は患う疑いがある。
【０１３２】
好ましい実施の形態では、上記のキットは、がん、好ましくは抵抗性がんの治療に使用される。ＡＳＫ１の阻害剤及び化学療法剤は、好ましくは複数の投与形態に製剤化され、ＡＳＫ１の阻害剤が１つの容器に入れられ、化学療法剤が他の容器に入れられる。本発明に係る使用のためのキットでは、ＡＳＫ１の阻害剤及び化学療法剤が好ましくは共投与される。好ましくは本発明に係るＡＳＫ１の阻害剤は、化学療法剤での治療の結果、老化現象を示すようになった細胞を除去し、殺し、又はその生存能力を抑制するようにアジュバントとして投与される。本発明に係るキットは、好ましくはＡＳＫ１阻害剤と化学療法剤の最適な組み合わせ効果が得られる投与レジメンに関する説明書を備える。
【０１３３】
他の観点では、本発明は、老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態を患う、又は患う疑いがある対象を治療する方法に関し、ａ）老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態を患う、又は患う疑いがある対象にＡＳＫ１の阻害剤、好ましくはＮＱＤＩを投与することを含む。本発明の好ましい方法では、上記の疾患又は状態はがんであって、ｂ）上記対象に化学療法剤を投与する、及び／又は上記対象に放射線療法を受けさせるステップをさらに含む。本発明の他の好ましい方法では、ＡＳＫ１の阻害剤が、上記対象に化学療法剤を投与する前、間、又は後に、及び／又は上記対象に放射線療法を受けさせる前、間、又は後に、好ましくはアジュバントとして投与される。上記のような本発明の方法のより好ましい実施の形態では、上記の疾患又は状態はがんであって、がんは上記の化学療法剤に抵抗性を有する抵抗性がんである。上記のような本発明の方法のさらに好ましい実施の形態では、上記疾患又は状態は抵抗性がんであって、抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫、好ましくは転移性黒色腫であって、化学療法剤がＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ等のＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである。
【０１３４】
他の観点では、本発明は哺乳類の、好ましくはヒトの対象における抵抗性がんを、当該がんが抵抗性を示した、又は示す化学療法剤に対して感受性にする方法を提供し、該方法は、ａ）上記対象にＡＳＫ１の阻害剤を投与することを含む。がんを感受性にする方法の好ましい実施の形態では、上記抵抗性がんが転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫、好ましくは転移性黒色腫であって、化学療法剤がＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ等のＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである。
【０１３５】
他の観点では、本発明は、哺乳類の、好ましくはヒトの対象における抵抗性がんを治療する方法を提供し、該方法は、ａ）抵抗性がんを患う、又は患う疑いがある哺乳類の、好ましくはヒトの対象にＡＳＫ１の阻害剤を投与し、ｂ）化学療法剤、好ましくは上記の抵抗性がんが抵抗性を示す化学療法剤を、上記対象に投与することを含む。上記ＡＳＫ１の阻害剤は、好ましくは化学療法剤と共投与される。抵抗性がんを治療する方法の好ましい実施の形態では、抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫、好ましくは転移性黒色腫であって、化学療法剤がＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ等のＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである。
【０１３６】
ＳＹＫの阻害剤
本発明は、老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態の治療に用いるためのＳＹＫの阻害剤にさらに関する。当該疾患又は状態は、ぜんそく、免疫性血小板減少症、溶血性貧血、骨髄性白血病及び／又はリンパ腫ではなく、好ましくは、当該疾患又は状態は、ぜんそく、免疫性血小板減少症、貧血、白血病及び／又はリンパ腫ではなく、より好ましくは、当該疾患又は状態は、肺疾患、出血性疾患、白血病及び／又はリンパ腫ではない。また、本発明は、老化現象を示す細胞を除去し、取り除き、又は殺すのに使用されるＳＹＫの阻害剤に関する。好ましくは、ＳＹＫの阻害剤は、老化現象を示す細胞におけるＳＹＫのチロシンキナーゼ活性を阻害する。老化現象を示す細胞におけるＳＹＫのチロシンキナーゼ機能を選択的に阻害した場合、アポトーシスが誘導されることが意外にも見出された。このため、ＳＹＫ阻害剤は、老化現象を示す細胞を選択的に取り除き、殺し、又はその生存能力を抑制するための使用に適している（図１３参照）。特に好ましいのはＳＹＫ阻害剤Ｒ４０６である。理論に縛られたくないが、ＳＹＫのチロシンキナーゼシグナルは細胞老化の維持及びアポトーシスの誘導の妨げにおいて重要であると考えられる。
【０１３７】
また、本発明は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、変形性関節炎、認知症、（心臓）血管疾患、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、サルコペニア、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、腎不全、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル、健康不良の治療、及び／又は副腎皮質がん、肛門がん、虫垂がん、星細胞腫、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳幹グリオーマ、脳腫瘍、乳がん、気管支腫瘍、カルチノイド腫瘍、心臓腫瘍、中枢神経腫瘍、子宮頸がん、脊索腫、結腸がん、大腸がん、頭蓋咽頭腫、腺管がん、胚芽腫、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、鼻腔神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、眼がん、卵管がん、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、胚細胞腫瘍、頭頸部がん、肝細胞（肝）がん、下咽頭がん、腎がん、肺がん、唇及び口腔がん、男性乳がん、転移性頸部扁平上皮がん、口腔がん、副鼻腔及び鼻腔がん、卵巣がん、膵がん、副甲状腺がん、陰茎がん、前立腺がん、直腸がん、唾液腺がん、皮膚がん、小腸がん、胃がん、甲状腺がん、尿道がん、膣がん、及び／又は外陰がんを含む群から選択されるがんの治療に使用されるＳＹＫの阻害剤に関する。上に挙げた疾患において、リンパ腫及び白血病が明らかに除外される。
【０１３８】
本発明に係る使用のためのＳＹＫの阻害剤は、薬学的に許容される形態に、治療上有効な量で製剤化される。好ましくは、阻害剤は、特定の投与経路を介した投与に適合させた薬学的に許容される形態である。本発明に係る使用のためのＳＹＫの阻害剤は、最も好ましくは非経口で投与される。ＳＹＫの阻害剤は、好ましくは毎日、１２時間又は２４時間に１回、１日以上、好ましくは連続した日、例えば少なくとも連続２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４日、好ましくは少なくとも連続３日の間投与される。また、ＳＹＫの上記阻害剤は、１週間に１回、単一投与形態で投与されてもよい。
【０１３９】
本発明に係る使用のためのＳＹＫの阻害剤の好ましい実施の形態では、老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態はがんであって、ＳＹＫの阻害剤は、哺乳類の、好ましくはヒトの対象に、該対象に放射線療法を受けさせる前、間、又は後に、及び／又は上記対象に化学療法剤を投与する前、間、又は後に、好ましくはアジュバントとして投与され、又は投与のためのものであって、がんは、リンパ腫又は骨髄性白血病ではなく、好ましくは白血病ではなく、がんは副腎皮質がん、肛門がん、虫垂がん、星細胞腫、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳幹グリオーマ、脳腫瘍、乳がん、気管支腫瘍、カルチノイド腫瘍、心臓腫瘍、中枢神経腫瘍、子宮頸がん、脊索腫、結腸がん、大腸がん、頭蓋咽頭腫、腺管がん、胚芽腫、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、鼻腔神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、眼がん、卵管がん、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、胚細胞腫瘍、頭頸部がん、肝細胞（肝）がん、下咽頭がん、腎がん、肺がん、唇及び口腔がん、男性乳がん、転移性頸部扁平上皮がん、口腔がん、副鼻腔及び鼻腔がん、卵巣がん、膵がん、副甲状腺がん、陰茎がん、前立腺がん、直腸がん、唾液腺がん、皮膚がん、小腸がん、胃がん、甲状腺がん、尿道がん、膣がん、及び／又は外陰がんを含む群から選択される。上述の選択されたがんには、リンパ腫及び白血病が含まれないことが意図される。
【０１４０】
前の段落に関して、さらにより好ましいのは、がんが化学療法剤に抵抗性を有する抵抗性がんである状況である。より好ましくは、抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫、好ましくは転移性黒色腫であって、化学療法剤がＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ等のＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである。
【０１４１】
好ましくは、本発明に係る使用のためのＳＹＫの阻害剤の投与は、放射線治療による又は化学療法剤での治療の結果として老化現象を示すようになった細胞を取り除き、殺し、又はその生存能力を抑制するのに適合される。本発明に係るＳＹＫ阻害剤が現在の化学療法剤のオフターゲット効果を抑制することが意外にも見出された。
【０１４２】
また、本発明は、医薬に使用されるＳＹＫの阻害剤、ＳＹＫの阻害剤を含む医薬組成物、又はキットを提供し、キットは、ＳＹＫの阻害剤を含有する第１の容器を備え、本発明に係るこれらすべてが、哺乳類の、好ましくはヒトの対象における抵抗性がんを、少なくとも１種の化学療法剤、好ましくは上記抵抗性がんが抵抗性を示した又は示す少なくとも１種の化学療法剤に感受性にするのに使用される。好ましくは、上記の抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫であって、上記の少なくとも１種の化学療法剤は、ＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ等のＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである。
【０１４３】
他には、本発明は、医薬に使用されるＳＹＫの阻害剤、ＳＹＫの阻害剤を含む医薬組成物、又はキットを提供し、キットは、ＳＹＫの阻害剤を含有する第１の容器を備え、本発明に係るこれらすべてが、哺乳類の、好ましくはヒトの対象における抵抗性がんの治療に使用され、上記のＳＹＫの阻害剤、ＳＹＫの阻害剤を含む医薬組成物、又はキットが医薬として使用され、キットは、化学療法剤、好ましくは上記の抵抗性がんが抵抗性を示す又は示した化学療法剤とともに投与される、ＳＹＫの阻害剤を含有する第１の容器を備える。
【０１４４】
さらに本発明は、ＳＹＫの阻害剤、好ましくはＲ４０６を含む医薬組成物と、化学療法剤とを含む医薬組成物に関する。本発明に係る医薬組成物は、治療上有効な量で製剤化される。好ましくは、本発明に係る医薬組成物は、特定の投与経路を介した投与に適合させた薬学的に許容される形態である。本発明に係る医薬組成物は、最も好ましくは非経口で投与される。ＳＹＫの阻害剤は、化学療法剤のオフターゲット効果を軽減するため、ＳＹＫの阻害剤及び化学療法剤の単一投与形態での組み合わせは有利である。本発明に係る医薬組成物は、がんの治療に使用されるのが好ましい。本発明に係る医薬組成物は、好ましくは単一投与形態で連続して投与される。より好ましくは、それは毎日、１２時間又は２４時間に１回、１日以上、好ましくは連続した日、少なくとも連続２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４日、より好ましくは少なくとも連続４日の間投与される。また、上記のＳＹＫの阻害剤は、１週間に１回、単一投与形態で投与されてもよい。
【０１４５】
また、本発明は、同時又は続けて投与されるＳＹＫの阻害剤及び化学療法剤を含む混合調製物に関する。
【０１４６】
また、本発明は医薬に使用されるキットに関し、キットは、ＳＹＫの阻害剤、好ましくはＲ４０６を含有する第１の容器と、化学療法剤を含有する第２の容器と、を備える。キットは、哺乳類の、好ましくはヒトの対象への投与に関する説明書を適切に備えてもよい。ヒトである対象は、好ましくはがんを患う、又は患う疑いがある。好ましくは、キットは、骨髄性白血病及び／又はリンパ腫の治療に用いられない。
【０１４７】
本発明に係るキットは、好ましくはがんの治療に用いられ、より好ましくは白血病又はリンパ腫ではないがんの治療に用いられる。ＳＹＫの阻害剤及び化学療法剤は、好ましくは複数の投与形態に製剤化され、ＳＹＫの阻害剤が１つの容器に入れられ、化学療法剤が他の容器に入れられる。本発明に係る使用のためのキットでは、ＳＹＫの阻害剤及び化学療法剤が好ましくは共投与される。好ましくは本発明に係るＳＹＫの阻害剤は、化学療法剤での治療の結果、老化現象を示すようになった細胞を除去し、殺し、又はその生存能力を抑制するようにアジュバントとして投与される。本発明に係るキットは、好ましくはＳＹＫの阻害剤と化学療法剤の最適な組み合わせ効果が得られる投与レジメンに関する説明書を備える。
【０１４８】
他の観点では、本発明は、老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態を患う、又は患う疑いがある対象の治療方法を提供し、該方法は、ａ）老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態を患う、又は患う疑いがある対象にＳＹＫの阻害剤、好ましくはＲ４０６を投与することを含む。当該疾患又は状態は、ぜんそく、免疫性血小板減少症、溶血性貧血、骨髄性白血病及び／又はリンパ腫ではなく、好ましくは、当該疾患又は状態は、ぜんそく、免疫性血小板減少症、貧血、白血病及び／又はリンパ腫ではなく、より好ましくは、当該疾患又は状態は、肺疾患、出血性疾患、白血病及び／又はリンパ腫ではない。また、本発明は、老化現象を示す細胞の除去が有益な疾患又は状態を患う、又は患う疑いがある対象の治療方法を提供し、該方法は、ａ）アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、変形性関節炎、認知症、（心臓）血管疾患、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、サルコペニア、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、腎不全、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル、健康不良、及び／又は副腎皮質がん、肛門がん、虫垂がん、星細胞腫、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳幹グリオーマ、脳腫瘍、乳がん、気管支腫瘍、カルチノイド腫瘍、心臓腫瘍、中枢神経腫瘍、子宮頸がん、脊索腫、結腸がん、大腸がん、頭蓋咽頭腫、腺管がん、胚芽腫、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、鼻腔神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、眼がん、卵管がん、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、胚細胞腫瘍、頭頸部がん、肝細胞（肝）がん、下咽頭がん、腎がん、肺がん、唇及び口腔がん、男性乳がん、転移性頸部扁平上皮がん、口腔がん、副鼻腔及び鼻腔がん、卵巣がん、膵がん、副甲状腺がん、陰茎がん、前立腺がん、直腸がん、唾液腺がん、皮膚がん、小腸がん、胃がん、甲状腺がん、尿道がん、膣がん、及び／又は外陰がんを含む群から選択されるがんを患う、又は患う疑いがある対象にＳＹＫの阻害剤、好ましくはＲ４０６を投与することを含む。上記の発明の方法の好ましい実施の形態では、上記の疾患又は状態はがんであって、上記方法は、さらにｂ）上記の対象に化学療法剤を投与する及び／又は上記の対象に放射線療法を受けさせるステップを含む。上述の本発明の方法の他の好ましい実施の形態では、疾患又は状態はがんであって、ＳＹＫの阻害剤が上記対象に化学療法剤を投与する前、間、又は後に、及び／又は上記対象に放射線療法を受けさせる前、間、又は後に、好ましくはアジュバントとして投与され、又は投与のためのものである。本発明の方法のさらに好ましい実施の形態では、上記疾患又は状態ががんであって、がんは、上記の化学療法剤に抵抗性を有する抵抗性がんである。上述の本発明の方法のさらに好ましい実施の形態では、上記疾患又は状態ががんであって、上記の抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん、又はグリア芽腫であって、化学療法剤がＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ等のＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである。
【０１４９】
他の観点では、本発明は哺乳類の、好ましくはヒトの対象における抵抗性がんを、当該がんが抵抗性を示した、又は示す化学療法剤に対して感受性にする方法を提供し、該方法は、ＳＹＫの阻害剤、好ましくはＲ４０６を上記の対象に投与することを含む。抵抗性がんを感受性にする方法の好ましい実施の形態では、抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん、又はグリア芽腫であって、少なくとも１つの化学療法剤がＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ等のＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである。
【０１５０】
他の観点では、本発明は、哺乳類の、好ましくはヒトの対象における抵抗性がんを治療する方法を提供し、該方法は、ａ）抵抗性がんを患う、又は患う疑いがある哺乳類の、好ましくはヒトの対象にＳＹＫの阻害剤を投与し、ｂ）化学療法剤、好ましくは上記の抵抗性がんが抵抗性を示した又は示す化学療法剤を、上記対象に投与することを含む。上記ＳＹＫの阻害剤は、好ましくは化学療法剤と共投与される。抵抗性がんを治療する方法の好ましい実施の形態では、抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫、好ましくは転移性黒色腫であって、化学療法剤がＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ等のＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである。
【実施例】
【０１５１】
実施例１  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドは選択的に老化細胞を除去する。
老化現象を示さない（＝“通常の”、増殖する）ＩＭＲ９０細胞（ＡＴＣＣ＃  ＣＣＬ−１８６、胎児肺組織由来の接着性のある２倍体初代ヒト線維芽細胞株）が１０Ｇｙガンマ−ＩＲで放射線を照射された（ＩＲ＝照射）。７日後、これらの細胞は老化現象を示し、それらの放射線を照射されていない（＝老化現象を示さない）同等の細胞と比較する実験に用いることができる。老化現象を示すＩＭＲ９０線維芽細胞及び老化現象を示さないＩＭＲ９０線維芽細胞がｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ  ｓｙｓｔｅｍ（ＡＣＥＡ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．、サンディエゴ、カリフォルニア州）を用いた縦断的な細胞密度測定のためにプレートに播かれた。基準値が測定されると、細胞がｍｏｃｋ処理（ＰＢＳ）されるか、又はＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチド（５０μＭ）に暴露され、この処理の後で細胞密度が示された時間に測定された。３６時間後にＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドが選択的に、そして徐々に老化現象を示す細胞の細胞密度を低下させたことに留意されたい。ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドは、オランダ、レリスタットのＰｅｐＳｃａｎ  Ｐｒｅｓｔｏ  ＢＶから得た。Ｄ−レトロインベルソアイソフォームでのアミノ酸配列のＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドは、老化現象を示すＩＭＲ９０線維芽細胞の細胞生存能力を選択的に低下させるが、老化現象を示さないＩＭＲ９０線維芽細胞の時間内の細胞の生存能力を低下させない。
【０１５２】
実施例２  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドは疾患の治療に有効である。
硫黄欠乏性毛髪発育異常症は、脱毛、神経学的異常、骨異常及び適応能力の低下を導くヒト早老症である。発明者の部は、Ｘｐｄ遺伝子の変異に基づくマウスモデル、ＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスモデルを作製し、該モデルマウスは上記の特徴のほとんどを有する。発明者は、このマウスモデルが老化の表現型と併せて、加速されたペースで老化が進むことを見出した。ＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスは、公的に入手可能で、とりわけ文献に記載されている（Ｄｅ  Ｂｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ，１（７），ｐ．９８１−９９０（１９９８），Ｄｅ  Ｂｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９（１４）：３４８９−９４（１９９９）及びＤｅ  Ｂｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９６（５５７１）：１２７６−９（２００２））。このマウスモデルが、すべてのアミノ酸がＤアミノ酸であるアミノ酸配列ＬＴＬＲＫＥＰＡＳＥＩＡＱＳＩＬＥＡＹＳＱＮＧＷＡＮＲＲＳＧＧＫＲＰＰＰＲＲＲＱＲＲＫＫＲＧを有するＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドのアポトーシス誘導活性の評価に用いられた。
【０１５３】
野生型（ｃ５７ｂ１／６）又はＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスが３、４、５及び６日目に投与量１０ｍｇ／ｋｇの静脈注射でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与された。１日目と２日目は基準値（コントロール、未処理）を測定した。後彎症の評価のためにマウスの脊柱の湾曲を証明するためにＣｔ走査が用いられた。筋肉量がＣｔ走査に続く３Ｄ体積レンダリングによって評価された。
【０１５４】
急速に老化するマウスは、野生型とほぼ同じ程度の一過性で再現性のある運動行動の増加を示した。また、これらのマウスの有害な体重減少がＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドで補われた。ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの投与後、もっとも低い椎骨ともっとも高い椎骨との間の距離が長くなったのは後彎症の抑制を示していることに留意されたい。結論として、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでの治療後に生じる加齢によるＸｐｄＴＴＤ／ＴＴＤマウスモデルの生体における老化に関する体重減少、脱毛、後彎症の正常化、筋肉量の増加、及び適応能力の改善が起こった。
【０１５５】
実施例３  ＡＳＫ１阻害剤ＮＱＤＩは老化細胞を除去する。
５０００個の老化現象を示す（上記のように取得された）ＩＭＲ９０線維芽細胞及び２０００個の老化現象を示さないＩＭＲ９０線維芽細胞が９６穴プレートに播かれ、０〜２０μＭの濃度のＮＱＤＩとともにインキュベートされた。６日後、製造者の使用説明書に従ってＡｑｕｅｏｕｓＯｎｅ  ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ（ＭＴＴ）アッセイで細胞の生存能力が評価された。
【０１５６】
老化現象を示すＩＭＲ９０線維芽細胞及び老化現象を示さないＩＭＲ９０線維芽細胞が、実施例１で記載されたようにｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ  ｓｙｓｔｅｍを用いた縦断的な細胞密度測定のためにプレートに播かれ、２μＭ  ＮＱＤＩとともに３日連続でインキュベートされた（それぞれ２４、４８及び７２時間）。プレートに播いた後の細胞密度が記録された。ＡＳＫ１阻害剤ＮＱＤＩは、老化現象を示すＩＭＲ９０線維芽細胞では細胞生存能力を抑制したが、老化現象を示さないＩＭＲ９０線維芽細胞では抑制しなかった。ＮＱＤＩの結果として、老化細胞の除去に関してその効果が高まる（図１２）。老化現象を示さない細胞は２０μＭ  ＮＱＤＩの影響を受けていないので、ＮＱＤＩは高用量でさえも明らかに安全である。
【０１５７】
実施例４  ＳＹＫ阻害剤Ｒ４０６は、老化細胞を除去する。
５０００個の老化現象を示す（上記のように取得された）ＩＭＲ９０線維芽細胞及び２０００個の老化現象を示さないＩＭＲ９０線維芽細胞が９６穴プレートに播かれ、１６、３２、６４〜１２８ｎＭの濃度のＲ４０６とともにインキュベートされた。６日後、製造者の使用説明書に従ってＡｑｕｅｏｕｓＯｎｅ  ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  （ＭＴＴ）アッセイで細胞の生存能力が評価された。ＳＹＫ阻害剤Ｒ４０６は、老化現象を示す細胞の生存能力を選択的に抑制することがわかった（図１３）。
【０１５８】
実施例５  化学療法（ドキソルビシン）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドで弱められるｉｎ  ｖｉｔｒｏでの老化を誘導する。
健常者のＩＭＲ９０線維芽細胞が１０Ｇｙの電離放射線に暴露されるか、０．５μＭのドキソルビシンで３回処理された（１日に２回）。７日後、それらはＳＡ−β−Ｇａｌ染色され、老化現象を示す細胞が可視化された。１×１０Ｇｙの電離放射線に暴露されるか、０．５μＭのドキソルビシンで３回処理された（１日に２回）細胞について免疫蛍光検査法が行われ、ＦＯＸＯ４（赤）とｐ１６ｉｎｋ４ａ（緑）とが検出された。ＤＡＰＩが対比染色に用いられ、核が可視化された。細胞が上述のように処理されるか、ｍｏｃｋ処理を受けるか、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドで処理された。６日後、製造者の使用説明書に従ってＡｑｕｅｏｕｓＯｎｅ  ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ（ＭＴＴ）アッセイで細胞の生存能力が評価された。ヒストグラムは、示された条件での％生存能力を示す。
【０１５９】
ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドは、放射線治療（ＩＲ）又は化学療法（ドキソルビシン）によって老化が誘導された細胞の生存能力を選択的に標的とする。
【０１６０】
実施例６  化学療法（ドキソルビシン）は、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチド及びＲ４０６で弱められるｉｎ  ｖｉｖｏでの老化を誘導する。
発明者の老化検出モデルは、ｐ１６ｉｎｋ４ａのプロモーターがいわゆる三峰性レポーター（３ＭＲ）を発現させるコンストラクトを使用し、該コンストラクトはｐ１６：：３ＭＲと呼ばれる。３ＭＲレポーターは、ウミシイタケルシフェラーゼ（ＲＬＵＣ）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）及び単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ（ＴＫ）からなるキメラタンパク質を含む。ＲＬＵＣ及びＲＦＰによって、それぞれ生物発光及び蛍光を介して老化現象を示す細胞を実時間で可視化できる。チミジンキナーゼによって、化合物ガンシクロビル（ＧＣＶ）を介した様式でアポトーシスを誘導させることができる。０日において、ｐ１６：：３ＭＲマウス（補足の実験方法を含めて、Ｄｅｍａｒｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｃｅｌｌ，３１：６  ｐ．７２２−７３３（２０１４））に１０ｍｇ／ｋｇでドキソルビシンが腹腔内注射され、老化の評価としてＲＬＵＣ活性が、示された時点で測定された。
【０１６１】
１１、１２、１３及び１４日に、ＰＢＳ（Ｍｏｃｋ）、１０ｍｇ／ｋｇ  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチド（ＴＡＳＣ処理）又はＲ４０６（ＴＡＳＣ処理）がそれらに１日１回静脈注射された。１１日（ＴＡＳＣ処理の前）及び２１日（ＴＡＳＣ処理の１０日後）に示されたように、老化の評価としてＲＬＵＣ活性を検出するための生物発光の画像化が行われた。
【０１６２】
ドキソルビシンがｉｎ  ｖｉｖｏで１６ｉｎｋ４ａを介した老化を誘導することがわかった。ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチド及びＲ４０６がｉｎ  ｖｉｖｏでドキソルビシン誘導性の老化を抑制することが腎臓において生物発光が減少し、ＳＡ−ベータ−ＧＡＬ沈殿が減少したことによって示された。
【０１６３】
予想外なことに、ドキソルビシンで処理されたｐ１６：：３ＭＲマウスを犠牲にしたところ、それぞれ肝毒性及び膵臓毒性を示すＡＳＡＴ及びアミラーゼの値がＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドで処理したマウスの血漿で低下していた。一方、ＰＢＳ処理されたマウスは、ドキソルビシン処理の結果として毒性レベルの増加を示した。
【０１６４】
ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドは単体で、すなわち化学療法なしでがん細胞をある程度殺すことができることも実証された。
【０１６５】
実施例７  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドは、転移性黒色腫にベムラフェニブ／トラメチニブに対する感受性を与える。
ベムラフェニブ及びトラメチニブの使用量増加に対する３種のヒト転移性黒色腫細胞株であるＭａｌｍｅ−３Ｍ、Ａ３７５及びＬＯＸ−ＩＭＶＩの感受性が実証された。ＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞は、基礎条件下でＦＯＸＯ４の発現量が高い。実験が実施例１に記載したように、すなわち製造者の使用説明書に従ってＡｑｕｅｏｕｓＯｎｅ  ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ＭＴＴアッセイで行われた。
【０１６６】
ＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞が（ｉ）ＡｑｕｅｏｕｓＯｎｅ  ＭＴＴアッセイによる実施例１での細胞生存評価、（ｉｉ）シトクロムＣ放出によるアポトーシス、（ｉｉｉ）縦断的な細胞密度評価のためにプレートに播かれ、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチド、ベムラフェニブ／トラメチニブ、又はその組み合わせとともにそれぞれインキュベートされた。シトクロムＣ放出実験によるアポトーシスに関して、２０，０００個のＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞が２４穴プレートのウェルにおけるガラスカバースリップ上に播かれた。翌日、これらがカスパーゼを介した細胞死を防ぐために２０ｎＭのカスパーゼ阻害剤ＱＶＤ−ＯＰＨの存在下で、ＰＢＳ（Ｍｏｃｋ）又はＰＢＳと、２μＭのベムラフェニブ若しくは１０ｎＭのトラメチニブとを組み合わせた５０μＭのＦＯＸＯ４とともにインキュベートされた。２日後に２０ｎＭのＱＶＤ−ＯＰＨを含む新しい培地が細胞に補給され、３日後に細胞が固定され、シトクロムＣの免疫蛍光検出に供された。カスパーゼ阻害剤によってカバースリップから剥がれなかった死細胞は、ミトコンドリアから細胞質へのシトクロムＣの放出又は完全にシトクロムＣを有していないことを示す一方で、生存細胞は、ミトコンドリアの染色のみを示す。シトクロムＣを放出した細胞の％が記録された。
【０１６７】
縦断的な細胞密度評価は、老化現象を示す細胞及び老化現象を示さない細胞に関する上述のｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ実験である。５０００個のＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞が使用され、１０μＭのＲｏｃｋ阻害剤（Ｙ−２７６３２）がアノイキスを避けるために用いられた場合においてのみ、電極への細胞の良好な付着を確実にした。
【０１６８】
ベムラフェニブによって誘導されるＦＯＸＯ４の量がＱＰＣＲ（ｍＲＮＡ）、ウエスタンブロット（タンパク質）及び免疫蛍光（タンパク質の発現及び局在）によって評価された。ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドは、ベムラフェニブ及びトラメチニブが治療抵抗性ＬＯＸ−ＩＭＶＩ黒色腫細胞を殺す能力をかなり高める。
【０１６９】
がんにおけるＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの個々の効果を実証するために、上述のようにＭＴＴアッセイのために細胞がプレートに播かれた。細胞はＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチド又はＭｏｃｋとともにインキュベートされ、６日間そのままの状態で置かれ、その後、生存能力が記録された。試験された、いくつかの細胞株において、ペプチドが明らかにがん細胞を殺した。
【０１７０】
実施例８  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでのアテローム性動脈硬化症患者の治療
アテローム性動脈硬化症を患う患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、アテローム性動脈硬化症の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドがアテローム性動脈硬化症の治療に有効であるということである。アテローム性動脈硬化症の疾患パラメータは、とりわけ、コレステロール、グルコース等の測定を含む血液検査、心電図、血管造影、コンピュータ断層撮影及び／又は検眼鏡検査で評価された。
【０１７１】
実施例９  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでの関節炎患者の治療
関節炎を患う患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、関節炎の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドが関節炎の治療に有効であるということである。評価される関節炎の疾患パラメータは、とりわけ、腫れ、痛み、こわばり及び可動域の低下等の関節症状である。
【０１７２】
実施例１０  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでの転移性黒色腫患者の治療
転移性黒色腫を患っており、かつＲＡＦ、ＭＥＫ又はＥＲＫ阻害剤に抵抗性の患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、転移性黒色腫の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドが転移性黒色腫の治療に有効であるということである。評価される転移性黒色腫の疾患パラメータは、とりわけ、腫瘍サイズ及び／又は転移の減少である。
【０１７３】
実施例１１  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでの抵抗性乳がん患者の治療
抵抗性乳がんを患っており、かつＦＡＣに抵抗性の患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、抵抗性乳がんの疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドが抵抗性乳がんの治療に有効であるということである。評価される抵抗性乳がんの疾患パラメータは、とりわけ、腫瘍サイズ及び／又は転移の減少である。
【０１７４】
実施例１２  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでの放射線療法抵抗性グリア芽腫患者の治療
抵抗性グリア芽腫を患っており、かつ放射線療法に抵抗性の患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、放射線療法を受け、第２の患者群は、放射線療法を受けたがＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与されなかった（すなわち未処置又はプラセボを投与された）。処置の１ヶ月後、抵抗性グリア芽腫の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドが抵抗性グリア芽腫の治療に有効であるということである。評価される抵抗性グリア芽腫の疾患パラメータは、とりわけ、腫瘍サイズ及び／又は転移の減少である。
【０１７５】
実施例１３  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでの変形性関節症患者の治療
変形性関節症を患う患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、変形性関節症の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドが変形性関節症の治療に有効であるということである。評価される変形性関節症の疾患パラメータは、とりわけ、関節痛、赤み、こわばり及び／又は腫れ、関節可動域、骨棘に対するＸ線及び／又はＭＲＩ、血液検査及び他の要因を排除するための関節液分析である。
【０１７６】
実施例１４  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでの糸球体硬化症患者の治療
糸球体硬化症を患う患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、糸球体硬化症の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドが糸球体硬化症の治療に有効であるということである。評価される糸球体硬化症の疾患パラメータは、とりわけ、手足の腫れ、体重増加、タンパク尿による尿の変化、生検での血液を濾過する糸球体における小さい毛細血管の歪み又は圧縮、及び血漿［尿素］又は血漿［タンパク質］、血圧、糸球体の濾過率、及び／又は腎超音波である。
【０１７７】
実施例１５  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでの２型糖尿病患者の治療
２型糖尿病を患う患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、２型糖尿病の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドが２型糖尿病の治療に有効であるということである。
【０１７８】
評価される２型糖尿病の疾患パラメータは、とりわけ、基礎の血糖値、所定期間にわたる平均血糖値（２〜３ヶ月；Ａ１Ｃ検査）、空腹時血漿グルコース、経口ブドウ糖負荷試験、血漿グルコース試験である。
【０１７９】
注意  １型に関して、これは高血糖、尿中のグルコース及びケトン、経口ブドウ糖負荷試験、Ａ１Ｃ試験である。
【０１８０】
実施例１６  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでの後彎症患者の治療
後彎症を患う患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、後彎症の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドが後彎症の治療に有効であるということである。評価される後彎症の疾患パラメータは、とりわけ、Ｘ線、ＣＴ及び／又はＭＲＩによる脊椎湾曲の評価である。
【０１８１】
実施例１７  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでの脊柱側彎患者の治療
脊柱側彎を患っている患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、脊柱側彎の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドが脊柱側彎の治療に有効であるということである。評価される脊柱側彎の疾患パラメータは、とりわけ、脊柱、肋骨、臀部及び肩の身体検査及び／又は骨の湾曲を評価するためのＸ線、ＣＴ及び／又はＭＲＩである。
【０１８２】
実施例１８  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでの肝不全患者の治療
肝不全を患っている患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、肝不全の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドが肝不全の治療に有効であるということである。評価される肝不全の疾患パラメータは、とりわけ、血液のＡＳＴ値及びＡＬＴ値である。
【０１８３】
実施例１９  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでの肝硬変患者の治療
肝硬変を患っている患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、肝硬変の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドが肝硬変の治療に有効であるということである。評価される肝硬変の疾患パラメータは、とりわけ、血液凝固因子及び血液凝固の国際標準化比、核磁気共鳴弾性率計測法による肝臓の堅さ、ＣＴ及び／又はＭＲＩによる肝臓画像、身体検査、ビリルビン及びクレアチニンに関する血液検査、及び／又は肝臓障害に関する肝臓生検分析である。
【０１８４】
実施例２０  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでのハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）患者の治療
ＨＧＰＳを患っている患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、ＨＧＰＳの疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドがＨＧＰＳの治療に有効であるということである。評価されるＨＧＰＳの疾患パラメータは、とりわけ、促進老化、脱毛（脱毛症）、老化様皮膚、関節異常、及び皮下脂肪の損失である。
【０１８５】
実施例２１  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでの（心臓）血管疾患患者の治療
（心臓）血管疾患を患っている患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、（心臓）血管疾患の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドが（心臓）血管疾患の治療に有効であるということである。評価される（心臓）血管疾患の疾患パラメータは、とりわけ、心室駆出期画分、血管の堅さ及び血圧である。
【０１８６】
実施例２２  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでの肥満患者の治療
肥満疾患を患っている患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、肥満の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドが肥満の治療に有効であるということである。評価される肥満の疾患パラメータは、とりわけ、体重、体格指数（ＢＭＩ）、胴囲、胴囲と尻周りの比率、皮下脂肪厚、及び生体電気インピーダンス、磁気共鳴映像法及び／又は二重エネルギーＸ線吸収法である。
【０１８７】
実施例２３  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでの肺気腫患者の治療
肺気腫を患っている患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、肺気腫の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドが肺気腫の治療に有効であるということである。評価される肺気腫の疾患パラメータは、とりわけ、息切れ、胸部の大きさ、聴診器を介した呼吸音の減少、指先の形状、呼吸の状態、低酸素血症、高炭素症、チアノーゼ、栄養不良障害、肺の体積、肺吐出容量、肺の死容量、気管支拡張剤投与後の空気の流れの変化、胸部Ｘ線及び胸部のＣＴ走査及び赤血球数である。
【０１８８】
実施例２４  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでのボタン熱患者の治療
ボタン熱を患っている患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、ボタン熱の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドがボタン熱の治療に有効であるということである。評価されるボタン熱の疾患パラメータは、とりわけ、ワイル−フェリックス試験（プロテウス  ＯＸ株の凝集）、ＥＬＩＳＡ、又は病変の生検に対する免疫蛍光評価である。
【０１８９】
実施例２５  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでのアルツハイマー病患者の治療
アルツハイマー病を患っている患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、アルツハイマー病の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドがアルツハイマー病の治療に有効であるということである。評価されるアルツハイマー病の疾患パラメータは、とりわけ、日常活動の実行能力における変化、及び行動及び性格の変化、記憶の検査、問題解決、注意、計数及び言語、血液及び尿の検査、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）又は陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）等の脳の走査、及び／又はバイオマーカー分析である。
【０１９０】
実施例２６  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでのパーキンソン病患者の治療
パーキンソン病を患っている患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、パーキンソン病の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドがパーキンソン病の治療に有効であるということである。評価されるパーキンソン病の疾患パラメータは、とりわけ、震え、手足又は首の凝り、全身の状態及び平衡及び／又は運動機能である。
【０１９１】
実施例２７  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでのＣＯＰＤ病患者の治療
ＣＯＰＤを患っている患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、ＣＯＰＤの疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドがＣＯＰＤの治療に有効であるということである。評価されるＣＯＰＤの疾患パラメータは、とりわけ、肺活量測定、及び息切れ、胸部の大きさ、聴診器を介した呼吸音の減少、指先の形状、呼吸の状態、低酸素血症、高炭素症、チアノーゼ、栄養不良障害、肺の体積、肺吐出容量、肺の死容量、気管支拡張剤投与後の空気の流れの変化、胸部Ｘ線及び胸部のＣＴ走査及び赤血球数等の肺気腫に関して記載したような肺機能検査である。
【０１９２】
実施例２８  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでの腎不全患者の治療
腎不全を患っている患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、腎不全の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドが腎不全の治療に有効であるということである。評価される腎不全の疾患パラメータは、とりわけ、血圧、心臓／肺の音分析、神経系検査、タンパク質含量に関する尿検査、糸球体濾過値及び血中尿素窒素の濃度、ＣＴ、ＭＲＩ及び／又は腹部と腎臓との超音波検査、損傷分析のための腎臓生検である。
【０１９３】
実施例２９  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでのうつ病患者の治療
うつ病を患っている患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、うつ病の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドがうつ病の治療に有効であるということである。評価されるうつ病の疾患パラメータは、とりわけ、身体検査、１日の大半にわたる悲壮感又は憂鬱感、体重の大きな変化、不眠症又は過眠、１日の大半にわたる倦怠感又はエネルギー喪失、絶望感又は無価値に感じること又は過度の罪悪感、集中力又は意思決定の問題、死又は自殺について繰り返し考えることである。
【０１９４】
実施例３０  ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドでのメタボリック症候群患者の治療
メタボリック症候群を患っている患者の２つの群（各ｎ＝１０）が形成された。第１の患者群は、治療上有効な投与量（すなわち薬学的な有効量）でＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドの単回投与注射を用いた静脈投与によってＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドを投与され、第２の患者群は、未処置又はプラセボを投与された。処置の１ヶ月後、メタボリック症候群の疾患パラメータが両方の患者群で評価され、ａは処置された患者の結果で、ｂは未処置の対照患者の結果であって、ａがｂと異なる場合、ＦＯＸＯ４  ＤＲＩペプチドがメタボリック症候群の治療に有効であるということである。評価されるメタボリック症候群の疾患パラメータは、とりわけ、肥満に関する評価（上記参照、例えば胴囲）、トリグリセリドの血中濃度、ＨＤＬコレステロール、血圧、空腹時血糖である。
【０１９５】
（付記）
（付記１）
アミノ酸配列ＬＴＬＲＫＥＰＡＳＥＩＡＱＳＩＬＥＡＹＳＱＮＧＷＡＮＲＲＳＧＧＫＲＰを含み、前記アミノ酸配列中のアミノ酸はＤ−アミノ酸残基である、ペプチド。
【０１９６】
（付記２）
付記１に記載のペプチドと少なくとも７０％、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列相同性を有するペプチド又は付記１に記載のペプチドの断片であって、前記ペプチド又は断片は、老化現象を示す細胞又は対照の細胞と比較してＦＯＸＯ４発現が増加しており、かつＳｅｒ１５リン酸化ｐ５３（ｐＳｅｒ１５−５３）を発現する細胞におけるアポトーシス誘導活性を示し、好ましくは、前記断片は、アミノ酸配列ＳＥＩＡＱＳＩＬＥＡＹＳＱＮＧＷを有し、前記アミノ酸配列中の又は前記断片中のアミノ酸の少なくとも９０％がＤ−アミノ酸残基である、ペプチド又はペプチドの断片。
【０１９７】
（付記３）
細胞移行ペプチド配列をさらに含み、好ましくは、該細胞移行ペプチド配列はアミノ酸配列ＰＰＲＲＲＱＲＲＫＫＲＧを有し、好ましくは前記細胞移行ペプチド配列中のアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸残基である、付記１又は２に記載のペプチド。
【０１９８】
（付記４）
前記細胞移行ペプチドが前記ペプチドのＣ末端部分に結合している、付記３に記載のペプチド。
【０１９９】
（付記５）
付記１から４のいずれか一つに記載のペプチドを含む、医薬組成物。
【０２００】
（付記６）
化学療法剤をさらに含む、付記５に記載の医薬組成物。
【０２０１】
（付記７）
フォークヘッドボックスタンパク質Ｏ４のレトロインベルソペプチド、又はそのホモログ若しくは断片であって、好ましくは該フォークヘッドボックスタンパク質Ｏ４のアミノ酸配列は図１４又は図１５に示され、前記ホモログは、前記フォークヘッドボックスタンパク質Ｏ４のレトロインベルソアミノ酸配列と少なくとも７０％のアミノ酸配列相同性を有し、前記ホモログは、老化現象を示す細胞又は対照の細胞と比較してＦＯＸＯ４発現が増加しており、かつｐＳｅｒ１５−５３を発現している細胞におけるアポトーシス誘導活性を示し、前記断片は、老化現象を示す細胞又は対照の細胞と比較してＦＯＸＯ４発現が増加しており、かつｐＳｅｒ１５−５３を発現している細胞におけるアポトーシス誘導活性を有する、フォークヘッドボックスタンパク質Ｏ４のレトロインベルソペプチド、又はそのホモログ若しくは断片。
【０２０２】
（付記８）
付記１から４、７のいずれか一つに記載のペプチドをコードする核酸であって、任意に発現ベクターに含まれている、核酸。
【０２０３】
（付記９）
付記８に記載の核酸を含む、宿主細胞。
【０２０４】
（付記１０）
薬剤として使用され、又は対照の細胞と比較してＦＯＸＯ４発現が増加しており、かつｐＳｅｒ１５−５３を発現している細胞の除去が有益な障害の治療で使用され、好ましくは、前記障害は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、１型及び２型糖尿病を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、心筋梗塞、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織の移植後の生着不全の抑制又は防止、再灌流障害、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良からなる加齢関連障害の群から選択される、付記１から４、７のいずれか一つに記載のペプチド、付記５又は６に記載の医薬組成物、又は付記８に記載の核酸。
【０２０５】
（付記１１）
薬剤としての使用のための、又は老化現象を示す細胞の除去が有益な障害の治療での使用のための、好ましくは、前記障害は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、１型及び２型を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、心筋梗塞、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織の移植後の生着不全の抑制又は防止、再灌流障害、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良からなる加齢関連障害の群から選択される、付記１から４、７のいずれか一つに記載のペプチド、付記５又は６に記載の医薬組成物、又は付記８に記載の核酸。
【０２０６】
（付記１２）
前記障害はがんであり、かつ前記使用は哺乳類の対象、好ましくはヒトである、該対象に放射線治療を受けさせる前、間及び／若しくは後に、並びに／又は該対象に少なくとも１種の化学療法剤を投与する前、間若しくは後に投与するためである、付記１０又は１１に記載の使用のためのペプチド、組成物又は核酸。
【０２０７】
（付記１３）
前記がんが治療抵抗性のがんである、付記１２に記載の使用のためのペプチド、組成物又は核酸。
【０２０８】
（付記１４）
前記治療抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫、好ましくは転移性黒色腫であって、前記がんが抵抗性を示す前記治療は、放射線治療、又はＲＡＦ、ＭＥＫ若しくはＥＲＫ阻害剤又は５’フルオロウラシル、ドキソルビシン及びシクロフォスファミド（ＦＡＣ）を化学療法剤として含む組成物を関与させる化学療法であって、好ましくは、前記ＲＡＦ、ＭＥＫ若しくはＥＲＫ阻害剤は、ＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである、付記１３に記載の使用のためのペプチド、組成物又は核酸。
【０２０９】
（付記１５）
アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、１型及び２型を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、心筋梗塞、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織の移植後の生着不全の抑制又は防止、再灌流障害、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良を患う、又は患うことが予期されるヒトである対象において老化現象を示す細胞の除去に使用される、付記１から４、７のいずれか一つに記載のペプチド、付記５又は６に記載の医薬組成物、又は付記８に記載の核酸。
【０２１０】
（付記１６）
アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、１型及び２型を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、心筋梗塞、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織の移植後の生着不全の抑制又は防止、再灌流障害、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良を患う、又は患うことが予期されるヒトである対象においてｐ２１ｃｉｐ１の発現への対抗に使用される、付記１から４、７のいずれか一つに記載のペプチド、付記５又は６に記載の医薬組成物、又は付記８に記載の核酸。
【０２１１】
（付記１７）
アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、１型及び２型を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、心筋梗塞、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織の移植後の生着不全の抑制又は防止、再灌流障害、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良を患う、又は患うことが予期される対象においてｐ１６ＩＮＫ４ａを発現する細胞の除去に使用される、付記１から４、７のいずれか一つに記載のペプチド、付記５又は６に記載の医薬組成物、又は付記８に記載の核酸。
【０２１２】
（付記１８）
アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、１型及び２型を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、心筋梗塞、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織の移植後の生着不全の抑制又は防止、再灌流障害、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良を患う、又は患うことが予期される対象において核セリン−１５−リン酸化ｐ５３フォーカスへの対抗、又は核セリン−１５−リン酸化ｐ５３フォーカスの個数の抑制に使用される、付記１から４、７のいずれか一つに記載のペプチド、付記５又は６に記載の医薬組成物、又は付記８に記載の核酸。
【０２１３】
（付記１９）
付記１から４、７のいずれか一つに記載のペプチド、又は付記８に記載の核酸を含有する第１の容器と、化学療法剤を含有する第２の容器と、を備える、キット。
【０２１４】
（付記２０）
老化現象を示す細胞の除去が有益な障害の治療に使用される、ＡＳＫ１の阻害剤。
【０２１５】
（付記２１）
ＮＱＤＩである、付記２０に記載の使用のための阻害剤。
【０２１６】
（付記２２）
前記障害は、アテローム性動脈硬化症、関節炎又は関節症等の慢性炎症性疾患、がん、変形性関節炎、糸球体硬化症、１型及び２型を含む糖尿病、糖尿病性潰瘍、後彎症、脊柱側彎症、肝不全、肝硬変、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（ＨＧＰＳ）、ラミノパシー、骨粗鬆症、認知症、（心臓）血管疾患、心筋梗塞、肥満、メタボリック症候群、急性心筋梗塞、気腫、インスリン感受性、ボタン熱、サルコペニア、アルツハイマー病、ハンチントン病又はパーキンソン病等の神経変性疾患、白内障、貧血、高血圧、線維症、加齢性黄斑変性症、ＣＯＰＤ、ぜんそく、腎不全、器官又は組織の移植後の生着不全の抑制又は防止、再灌流障害、失禁、難聴等の聴力低下、失明等の視力低下、睡眠障害、関節痛又は下肢痛等の疼痛、平衡失調、恐怖感、うつ病、息切れ、体重減少、脱毛、筋量低下、骨密度低下、フレイル及び／又は健康不良からなる加齢関連障害の群から選択される、付記２１に記載の使用のための阻害剤。
【０２１７】
（付記２３）
前記障害は、がんであって、前記使用が哺乳類の対象、好ましくはヒトに、該対象に放射線治療を受けさせる前、間及び／又は後に、及び／又は該対象に少なくとも１種の化学療法剤を投与する前、間又は後に投与するためである、付記２１又は２２に記載の使用のための阻害剤。
【０２１８】
（付記２４）
前記がんは、治療抵抗性がんである、付記２３に記載の使用のための阻害剤。
【０２１９】
（付記２５）
前記治療抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫、好ましくは転移性黒色腫であって、前記がんが抵抗性を示す前記治療は、ＲＡＦ、ＭＥＫ若しくはＥＲＫ阻害剤を化学療法剤として含む化学療法であって、好ましくは、前記ＲＡＦ、ＭＥＫ若しくはＥＲＫ阻害剤は、ＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである、付記２４に記載の使用のための阻害剤。
【０２２０】
（付記２６）
ＡＳＫ１の阻害剤、好ましくはＮＱＤＩと、化学療法剤と、を含む医薬的組み合わせ。
【０２２１】
（付記２７）
ＡＳＫ１の阻害剤、好ましくはＮＱＤＩを含有する第１の容器と、化学療法剤を含有する第２の容器と、を備える、好ましくはがんの治療での使用のための医薬に使用されるキット。
【０２２２】
（付記２８）
老化現象を示す細胞の除去が有益な障害の治療での使用のためのＳＹＫの阻害剤であって、前記障害が、ぜんそく、免疫性血小板減少症、溶血性貧血、骨髄性白血病及び／又はリンパ腫ではなく、好ましくは、前記障害は、付記１６に挙げられた障害である、阻害剤。
【０２２３】
（付記２９）
前記ＳＹＫの阻害剤は、Ｒ４０６である、付記２８に記載の使用のための阻害剤。
【０２２４】
（付記３０）
前記障害はがんであり、かつ前記がんはリンパ腫又は白血病ではない、好ましくはリンパ腫又は骨髄性白血病ではないという条件で、前記使用が哺乳類の対象、好ましくはヒトである、該対象に放射線治療を受けさせる前、間及び／若しくは後に、並びに／又は該対象に少なくとも１種の化学療法剤を投与する前、間若しくは後に投与するためである、付記２８又は２９に記載の使用のための阻害剤。
【０２２５】
（付記３１）
前記がんは、治療抵抗性がんである、付記３０に記載の使用のための阻害剤。
【０２２６】
（付記３２）
前記治療抵抗性がんは、転移性黒色腫、乳がん又はグリア芽腫、好ましくは転移性黒色腫であり、かつ前記がんが抵抗性を示す前記治療は、ＲＡＦ、ＭＥＫ若しくはＥＲＫ阻害剤を化学療法剤として関与させる化学療法であって、好ましくは、前記ＲＡＦ、ＭＥＫ若しくはＥＲＫ阻害剤は、ＲＡＦ２６５、トラメチニブ、ダブラフェニブ、セルメチニブ、ベムラフェニブ及び／又はトラメチニブ、より好ましくはベムラフェニブ及び／又はトラメチニブである、付記３１に記載の使用のための阻害剤。
【０２２７】
（付記３３）
ＳＹＫの阻害剤、好ましくはＲ４０６と、化学療法剤と、を含む医薬的組み合わせ。
【０２２８】
（付記３４）
ＳＹＫの阻害剤、好ましくはＲ４０６を含有する第１の容器と、化学療法剤を含有する第２の容器と、を備える、医薬に使用されるキット。
【０２２９】
（付記３５）
ＳＹＫの阻害剤、好ましくはＲ４０６を含有する第１の容器と、化学療法剤を含有する第２の容器と、を備える、がんの治療で使用されるキットであって、前記がんは、リンパ腫又は白血病ではなく、好ましくはリンパ腫又は骨髄性白血病ではない、キット。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図３−４】
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【図３−５】
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【図３−６】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図４−４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図５−３】
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【図５−４】
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【図５−５】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図７Ａ）】
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【図７Ｂ）】
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【図７Ｃ）】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ）】
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【図１２Ｂ）】
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【図１２Ｃ）】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【配列表】
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