(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
デバイスであって、
亜硝酸塩を含む抽出試薬で満たされた抽出チャンバーと、
ステムに取り付けられ、該ステムのサンプル収集帯において生体サンプルを得るように構成される吸収要素を有して成るスワブと、
前記生体サンプルからの被分析物の抽出後に抽出溶液との流体連通をもたらすように構成される検査ストリップとを有して成り、
前記吸収要素が不揮発性試薬を含んで成り、
前記不揮発性試薬が前記抽出溶液を形成するように前記抽出試薬と反応するように構成され、
前記抽出溶液が前記生体サンプルから被分析物を抽出するように構成され、
前記不揮発性試薬が前記生体サンプルと反応しないように構成され、
前記不揮発性試薬が酸性であり、
前記抽出溶液を形成するために、前記抽出試薬と流体連通する前記スワブの吸収要素を位置付けるように、該スワブが前記抽出チャンバー内に受け入れられるように構成され、
前記検査ストリップが、
サンプルを受け入れるように構成されるサンプル受け部と、
被分析物特異的標識試薬が組み込まれている前記検査ストリップ上の部位と、
アッセイ完了時に陽性または陰性の結果の表示をもたらすように、前記生体サンプルおよび前記被分析物特異的標識試薬から、前記被分析物を受け取るように構成される捕捉部分と、ならびに、
前記検査ストリップの遠位端に取り付けられ、過剰な抽出試薬に結合するように構成され、それにより該検査ストリップを横切る流れを可能とする吸着パッドとを有して成り、
前記サンプルが液体サンプルであり、ならびに、
前記サンプル受け部が、キャピラリー作用により前記検査ストリップを通るような前記液体サンプル中の前記被分析物の移動を可能とするように構成され、
前記被分析物特異的標識試薬が、前記生体サンプルからの前記被分析物を結合するように構成され、ならびに、
前記被分析物特異的標識試薬が、特異的に、また高い親和力で前記被分析物を結合する分子を含んで成り、および該被分析物特異的標識試薬が、前記被分析物の検出を可能にする標識で標識される、デバイス。
【請求項２】
前記被分析物が、Ａ群連鎖球菌の炭水化物抗原である、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
前記スワブおよび前記検査ストリップが、該スワブの吸収要素から該検査ストリップのサンプル受け部までキャピラリー・フローをもたらすように流体連通するように構成される、請求項１または２に記載のデバイス。
【請求項４】
前記ステムが、固体、ポーラス状もしくはそれらの組合せであり、ならびに／または前記ステムが、前記スワブの吸収要素のための機械的なサポートおよび該ステムのポーラス状コアを通るようなキャピラリー・フローを供するように構成される、請求項１〜３のいずれかに記載のデバイス。
【請求項５】
前記スワブの吸収要素が、ファイバー、ポリマー材の発泡体、吸収性物質、またはそれらのいずれかの組合せから成る、請求項１〜４のいずれかに記載のデバイス。
【請求項６】
前記酸性の不揮発性試薬が、前記スワブの吸収要素に、酸性の不揮発性試薬を含む溶剤をスプレーイング、ディッピング、もしくはディスパージングすること、および該溶剤を気化させることによって、該スワブの吸収要素に堆積され、ならびに／または前記酸性の不揮発性試薬の量が、２〜８００マイクロモルである、請求項１〜５のいずれかに記載のデバイス。
【請求項７】
前記酸性の不揮発性試薬が、前記抽出試薬に可溶である、請求項１〜６のいずれかに記載のデバイス。
【請求項８】
前記酸性の不揮発性試薬が、前記抽出試薬に不溶である、請求項１〜６のいずれかに記載のデバイス。
【請求項９】
前記酸性の不揮発性試薬が、前記抽出試薬とプロトンを交換するようになっており、ならびに／または
前記不溶性の酸性の不揮発性試薬が、前記吸収要素に付くように構成される領域内で前記スワブに堆積され、および前記不溶性の酸性の不揮発性試薬が、酸と対象物との間の直接的な接触を避けることをもたらすように、前記吸収要素の適用前に、ポリマー材の、メンブレンもしくはフィルムでコーティングされることによって、前記スワブに堆積される、請求項８に記載のデバイス。
【請求項１０】
前記酸性の不揮発性試薬が、有機物または無機物である、請求項１〜９のいずれかに記載のデバイス。
【請求項１１】
前記デバイスが、
前記スワブのステムによって、該スワブの吸収要素を取り付けるように構成される第１構造要素、
前記検査ストリップを収納するように構成される第２構造要素を有して成り、
前記吸収要素および前記検査ストリップのサンプル受け部が、第１構造要素と第２構造要素とを連結すると流体連通する、請求項１〜１０のいずれかに記載のデバイス。
【請求項１２】
（i）生体サンプルと反応しないように構成される第１不揮発性試薬を含んで成るスワブの収集範囲において該スワブを用いることによって、対象の生体サンプルを集めること、
（ii）前記不揮発性試薬が抽出試薬と反応することを可能とし、また抽出溶液を生成することをもたらすように、前記不揮発性試薬と反応するように構成される該抽出試薬を含むチャンバーに前記スワブを移動させること、
（iii）前記抽出溶液によって、前記対象の生体サンプルから被分析物を抽出すること、
（iv）前記抽出した被分析物を含む抽出溶液と、標識被分析物特異的試薬を含んで成る側方流動イムノクロマトグラフィー・アッセイ・デバイスとを接触させること、ならびに、
（v）前記対象の生体サンプル中で抽出した被分析物の陽性または陰性を判定することを含んで成り、
捕捉試薬への前記被分析物の結合によって、標識被分析物指標複合体を、側方流動イムノクロマトグラフィー・アッセイ・デバイスに、特異的に固定化することをもたらしており、また該捕捉試薬が該被分析物に特異的に結合するように構成される、方法。
【請求項１３】
（i）スワブの吸収要素によって、対象の生体サンプルを集めること、
（ii）前記スワブの吸収要素を、不揮発性試薬と反応するように構成される抽出試薬を含むチャンバーに移動させること、
（iii）前記生体サンプルから被分析物を抽出すること、
（iv）捕捉試薬への標識被分析物指標複合体の結合によって生じる信号を測定することによって、前記対象の生体サンプル中で抽出した被分析物の陽性または陰性を判定することを含んで成り、
前記スワブの吸収要素が、標識被分析物特異的試薬を含んで成る、側方流動イムノクロマトグラフィー・アッセイの検査ストリップのサンプル受け部と物理的に接触するように構成され、および
前記スワブの吸収要素が、それに組み込まれる前記不揮発性試薬を含み、該不揮発性試薬が前記生体サンプルと反応しないように構成され、
抽出溶液が、前記抽出試薬と前記スワブの吸収要素に組み込まれている付加的な不揮発性試薬との反応によって、インシチュで形成され、および、
前記抽出溶液が、前記対象の生体サンプルを抽出するように構成され、
前記捕捉試薬が、前記側方流動イムノクロマトグラフィー・アッセイ・デバイスに固定化され、および、
前記捕捉試薬が、前記被分析物を特異的に結合するように構成される、方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、２０１５年２月１７日に出願された米国特許仮出願６２／１１７，２１１「生体サンプルの収集および分析デバイスならびにその使用方法」の優先性を主張し、その全体があらゆる目的のために参照されることにより本明細書に組み込まれる。
【技術分野】
【０００２】
ある態様では、本発明はＡ群連鎖球菌（または化膿連鎖球菌、ＧＡＳ）に起因する細菌性咽頭炎の診断の補助に用いることができる診断検査である検出検査、およびその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
Ａ群連鎖球菌（化膿連鎖球菌）は、急性呼吸器感染症によって典型的に引き起こされる。Ａ群連鎖球菌性咽頭炎に対する早期診断および処置は、重篤化や合併症の発生（例えば、リウマチ熱および糸球体腎炎）を低減するために、また、まれに起こりうる死亡事例（毎年アメリカ合衆国単独で発生する、侵襲性疾患の９０００〜１１５００件のケース（１０万の人口に対して３．２〜３．９の割合）の１０％〜１５％は死に至る事例）を防ぐために重要である。Ａ群連鎖球菌の抗原を分析するために用いられる典型的な診断検査は、２つ以上の試薬を混合することが必要であり、および／または多くの時間と労力を要する検査特有のプロトコル（または手順、protocol）を用いる。
【発明の概要】
【０００４】
ある態様では、本発明はデバイスであって、ステムに取り付けられる吸収要素（absorptive component）を有するスワブ（または綿棒、swab）と、スワブを受け入れるように、また抽出試薬（extraction reagent）と流体連通するように構成されるスワブの吸収要素を位置付けるように構成される抽出チャンバー（extraction chamber）と、生体（biological）サンプルからの被分析物（または検体、もしくは被検物質、analyte）の抽出後に抽出試薬との流体連通をもたらすように構成される検査ストリップ（または試験ストリップ、test strip）と、を含み、吸収要素が不揮発性試薬（non-volatile reagent）を含み、抽出チャンバーが抽出試薬で満たされ、検査ストリップがサンプル（通常、液体サンプル）を受け入れるように構成され、また検査ストリップを通るような液体中の被分析物の移動（例えば限定されないが、キャピラリー作用、capillary action）を可能とするように構成されるサンプル受け部と、被分析物特異的標識試薬（analyte-specific labeled reagent）が組み込まれており、その試薬が生体サンプルからの被分析物を結合するように構成され、ならびに特異的および高い親和力で前記被分析物を結合する分子を含み、ならびに被分析物の検出を可能にする標識でさらに標識される、検査ストリップ上の部位と、分析完了時に陽性または陰性の結果の表示をもたらすために、生体サンプルおよび被分析物特異的標識試薬から、被分析物を受け取るように構成される捕捉部分と、ならびに、検査ストリップの遠位端（または末端部、distal end）に取り付けられ、また過剰な抽出試薬に結合するように構成され、それにより検査ストリップを横切る（または渡る、over）流れを可能とする吸着パッドと、を有するデバイスである。
【０００５】
ある態様では、被分析物はＡ群連鎖球菌の炭水化物抗原（または糖鎖抗原、Carbohydrate Antigen）である。ある態様では、抽出試薬は亜硝酸塩である。ある態様では、抽出試薬は０．２〜５Ｍの亜硝酸塩溶液である。ある態様では、不揮発性試薬は酸性である。
【０００６】
ある態様では、スワブおよび検査ストリップは、スワブの吸収要素から検査ストリップのサンプル受け部までキャピラリー・フローをもたらすために流体連通するように構成される。ある態様では、ステム（または細長い部分、stem）は、固体、ポーラス状（または浸透質、もしくは多孔質、porous）またはそれらの組合せであり得る。ある態様では、ステムは、スワブの吸収要素のための機械的なサポートおよびステムのポーラス状コアを通るようなキャピラリー・フローを供するように構成される。ある態様では、スワブの吸収要素は、ファイバー、ポリマー材の発泡体（または泡状物質、foam）、吸収性物質、またはそれらの組合せから成る。ある態様では、酸性の不揮発性試薬は、スワブの吸収要素に堆積される。つまり、スワブの吸収要素に、酸性の不揮発性試薬を含む溶剤をスプレーイング、ディッピング、またはディスパージングすること、および溶剤を気化させることによって堆積される。
【０００７】
ある態様では、酸性の不揮発性試薬の量は、２〜８００マイクロモルである。ある態様では、酸性の不揮発性試薬は、抽出試薬に可溶である。ある態様では、酸性の不揮発性試薬は、抽出試薬に不溶である。ある態様では、酸性の不揮発性試薬は、抽出試薬とプロトンを交換するようになっている。ある態様では、不溶性の酸性の不揮発性試薬が、吸収要素に付くように構成される領域内でスワブに堆積され、また不溶性の酸性の不揮発性試薬が、酸と対象物との間の直接的な接触を避ける結果となるように、吸収要素の適用前に、ポリマー材のメンブレン（または膜、membrane）またはフィルムでコーティングされることによって、スワブに堆積される。ある態様では、酸性の不揮発性試薬は、有機物である。ある態様では、酸性の不揮発性試薬は、無機物である。ある態様では、デバイスであって、スワブのステムによって、スワブの吸収要素を取り付けるように構成される第１構造要素と、検査ストリップを収納するように構成される第２構造要素とを有し、吸収要素および検査ストリップのサンプル受け部が、第１構造要素と第２構造要素とを連結するときに流体連通するデバイスである。
【０００８】
ある態様では、本発明は方法であって、（i）第１不揮発性試薬を含むスワブを用いることによって、対象の生体サンプルを集めること、（ii）不揮発性試薬が抽出試薬と反応することを可能とし、また抽出溶液を生成することをもたらすように、抽出試薬を含むチャンバーにスワブを移動させること、（iii）抽出溶液によって、対象の生体サンプルから被分析物を抽出すること、（iv）抽出した被分析物を含む抽出溶液と、標識被分析物特異的試薬を含む側方（または横方向、もしくは水平方向、lateral）流動イムノクロマトグラフィー・アッセイ・デバイス（immunochromatographic assay device）と、を接触させること、ならびに、（v）対象の生体サンプル中で抽出した被分析物の陽性または陰性を判定することを含み、捕捉試薬への被分析物の結合は、標識被分析物指標複合体を、側方流動イムノクロマトグラフィー・アッセイ・デバイスに固定化させ、また捕捉試薬が被分析物に特異的に結合するように構成される方法である。
【０００９】
ある態様では、本発明は方法であって、（i）スワブの吸収要素によって、対象の生体サンプルを集めること、（ii）スワブの吸収要素を、抽出試薬を含むチャンバーに移動させること、（iii）生体サンプルから被分析物を抽出すること、（iv）標識被分析物指標複合体の捕捉試薬への結合によって生じる信号を測定することによって、対象の生体サンプル中で抽出した被分析物の陽性または陰性を判定することを含み、スワブの吸収要素が、標識被分析物特異的試薬を含む側方流動イムノクロマトグラフィー・アッセイの検査ストリップのサンプル受け部と物理的に接触するように構成され、抽出溶液が、抽出試薬とスワブの吸収要素に組み込まれている第２不揮発性試薬との反応によって、インシチュ（またはその場、in-situ）で形成され、および、抽出溶液が、対象の生体サンプルを抽出するように構成され、捕捉試薬が、側方流動イムノクロマトグラフィー・アッセイ・デバイスに固定化され、および、捕捉試薬が、被分析物を特異的に結合するように構成される、方法である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
本発明は添付の図面を参照してさらに説明され、同様の構造はいくつかの図面を通して同様の参照番号によって参照される。示される図面は必ずしも正確な縮尺ではなく、その代わりに本発明の原理を説明することに、概して重点が置かれている。さらに、いくつかの特徴は、具体的な構成要素の詳細を示すために誇張されることがある。
【００１１】
【図１】図１は本発明のデバイスの一態様を示す。図１はステムおよびチップ（即ち、吸収要素）を有して成り、試薬取り込み位置を示す、代表的なスワブの側面図である。図１Ａは、スワブのステムをコーティングすることによる試薬の適用を示す。図１Ｂは、サンプル収集帯から離れたスワブ・チップ（swab tip）のエリアへの試薬取り込みを示す。
【００１２】
【図２】図２は本発明のデバイスの一態様を示す。図２はスワブ、抽出チャンバーおよび検査ストリップを含む診断キットの側面図であり、各々の要素の相対位置を示す。
【００１３】
【図３】図３は本発明のデバイスの一態様を示す。図３は抽出チャンバーおよび一体化するスワブと検査ストリップのデバイスを含む診断キットの断面の斜視図であり、スワブ・チップの後位端を検査ストリップのサンプル・パッドに接続することで、両方のメディア（または媒体、media）間でキャピラリー液体連通（capillary liquid communication）が可能となる。つまり、一体化するデバイスは、シリンダー状の形をしたケーシングで囲まれ、そのケーシングはまた、一体化するデバイスのためのハンドル（または手でつかむ部分、handle）としての役割を有し、スワブのステムをグリップ力（またはつかみ部、grip）が供されるように置き換え、また同じ一体化するデバイス内でサンプルの収集および分析を可能とする。
【００１４】
【図４】図４は本発明の一体化するスワブと検査ストリップのデバイスの好ましい態様の詳細を示す。その態様とは、スワブと検査ストリップとの物理的な接触を供し、それによって、両部材間のキャピラリー液体連通を可能とする。図４Ａは一体化するデバイスの斜視図を示し、全ての主要な構成要素を表示する。図４Ｂは一体化するデバイス内でスワブ・チップの機械的な固定化のための追加の詳細を供する。図４Ｃは完全な一体化デバイスの組立図を示す。
【００１５】
図は本明細書の一部を構成し、また本発明の実施態様を含み、またそれらの種々の目的および特徴を説明する。さらに、図は必ずしも正確な縮尺ではなく、いくらかの特徴は特定の構成要素の詳細を示すために誇張されている場合がある。加えて、図に示された測定および詳述などは例示的なものであり、また限定されるものではない。したがって、本明細書で開示される特定の構造および機能の詳細は、限定的に解されるべきでなく、単に本発明を多様に用いるために、当業者に示すための代表的な基礎を成すものとして解されるべきである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
開示される利益および改善の中で、本発明の他の目的および利点は、添付図と併用される以下の説明から明らかとなるであろう。本発明の詳細な態様は本明細書に開示されている。しかしながら、開示される態様は単に例示にすぎず、種々の形態での態様であってよいと解される。加えて、本発明の種々の態様に関して供される各々の例は、例示を意図するものであり、限定されるものではない。
【００１７】
本明細書および特許請求の範囲を通して、文脈上明確に別段の指示がない限り、以下の用語は、本明細書に明示的に関連する意味を取る。本明細書で用いられる「一の態様では（“in one embodiment”）」および「ある態様では（“in some embodiments”）」という表現は、必ずしも同じ態様を示すものではなく、示すものであってもよい。さらに、本明細書で用いられる「別の態様では（“in another embodiment”）」および「ある他の態様では（“in some other embodiments”）」という表現は、必ずしも異なる態様を示すものではなく、示すものであってもよい。それゆえに、後述されるように、本発明の範囲または趣旨から逸脱しない限り、本発明の種々の態様は容易に組み合わせることができる。
【００１８】
さらに、本明細書で用いられる場合、文脈上明確に別段の指示がない限り、用語「または（“or”）」は、包括的な「または」の機能として用いられており、また「および／または（“and/or”）」という用語と同等である。文脈上明確に別段の指示がない限り、「に基づいて（“based on”）」という用語は排他的ではなく、記載されていない追加の要素に基づくことを斟酌する。加えて、本明細書を通して、「一の（“a”）、（“an”）」および「その（“the”）」の意味は、複数の参照を含む。「において（または中の、もしくはでは）（“in”）」の意味は、「において（“in”）」および「で（またはに）（“on”）」を含む。
【００１９】
本明細書で用いられる場合、「側方流動検査（“lateral flow test”）」は、特殊で高価なデバイスを必要とせずに、サンプル（マトリックス）での対象とする被分析物の陽性（または陰性）を検出することを目的とするイムノクロマトグラフィー・デバイスを示す。典型的に、これらの検査は、家庭用検査、ポイント・オブ・ケア検査、または実験用のいずれかの医療診断に用いられる。
【００２０】
本明細書で用いられる場合、「サンプル受け部（“sample receiving portion”）」または「流体受け部（“fluid receiving portion”）」は、サンプル（通常、液体／流体サンプル）を受け入れるように構成される検査ストリップの一部分を示し、検査ストリップを通る液体／流体中の被分析物の移動を可能にする（例えば限定されないが、キャピラリー作用）。
【００２１】
本明細書で用いられる場合、「被分析物特異的標識試薬（“analyte-specific labeled reagent”）」または「標識被分析物指標（“labeled analyte- specific indicator”）」は同義語であり、また「コンジュゲート（“conjugate”）」のように、診断に関する文献において一般的に知られているものを示す。コンジュゲートは、塩と糖のマトリクスでの生物活性粒子（bio-active particles）の乾燥形態であり、粒子の表面に固定化される、対象とする分子（例えば、被分析物）とその化学的パートナー（例えば、抗体）との間の最適化される化学反応を保証するためのすべてを含む。
【００２２】
本明細書で用いられる場合、「捕捉部分（“capture portion”）」または「捕捉帯（“capture zone”）」は検査ストリップの一部分を示し、かかる部分または帯において、被分析物試薬複合体が捕捉試薬（例えば限定されないが、被分析物特異的抗体）に結合する。
【００２３】
本明細書で用いられる場合、「吸着率（“sorptivity”）」は、キャピラリー作用によって、液体を吸収または脱着するための媒体のキャパシティー（または限度容量、capacity）の尺度を示す。
【００２４】
ある態様では、本発明のデバイスは、生体サンプル中のＡ群連鎖球菌抗体の陽性または陰性を測定するように構成される。ある態様では、デバイスは、（i）生体サンプルを集めることに用いるスワブ（例えばスロート・スワブ）、（ii）抽出試薬を含む抽出チャンバー、および（iii）検査ストリップ、を有して成る。ある態様では、スワブはステムおよびチップ（吸収要素）であり、チップは少なくとも１つの被分析物を抽出するように、または抽出を補助するように構成される不揮発性試薬を組み込んでいる。
【００２５】
ある態様では、抽出溶液は、抽出試薬中のスワブ・チップに組み込まれている不揮発性試薬の溶解によって形成され、被分析物を抽出する働きを持つ。
【００２６】
ある態様では、本発明の方法は、（i）スワブによって生体サンプルを集めること、（ii）そのスワブを、抽出試薬を含むチャンバーに移動させることであって、この抽出試薬がスワブ（例えば限定されないが、スワブのチップ）に組み込まれる付加的な／第２の試薬によって補完され、抽出試薬が、スワブに組み込まれる付加的な試薬と結合するとき、選択される生体サンプルを溶解させ、および／またはインシチュで反応させ、ならびに生体サンプルから抗原／被分析物を抽出するように構成され、（iii）抽出された被分析物を含む抽出溶液と、標識被分析物特異的指標を含む側方流動イムノクロマトグラフィー・アッセイ・デバイスと、を接触させること、ならびに、（iv）捕捉試薬への標識被分析物指標複合体の結合によって生じる信号（すなわち、信号の有無）を測定することによって、生体サンプル中で抽出した被分析物の陽性または陰性を判定することを含んで成り、捕捉試薬が、側方流動イムノクロマトグラフィー・アッセイ・デバイスに固定化され、ならびに、捕捉試薬が、被分析物を特異的に結合するように構成される、方法である。
【００２７】
ある態様では、本発明は、（i）スワブ、（ii）抽出試薬を含む抽出チャンバー、および（iii）検査ストリップを有して成り、生体サンプルまたは臨床（clinical）サンプルを収集および分析するためのデバイスである。ある態様では、スワブは、（i）固体またはポーラス状であり得るプラスチックまたは他の材料で作られるステムと、（ii）ステムの端部にコーティングまたはスパン（spun）またはさもなければ堆積されるポリマー材、もしくは他の吸収材のファイバーまたは発泡体で作られるステムの一端のチップと、を有して成り（ステムおよびチップを結合したものを「スワブ」と称する）、ステムは、スワブ・チップに機械的な支持を供するように構成され、またオプションとしては、ステムのポーラス状のコアを通るようなキャピラリー・フローを介して液体移送を促進するように構成される。ステムがポーラス状の材料から作られている場合、スワブ全体を同じ発泡体または他のポーラス状の材料から製造してもよく、それによって、その製造プロセスを単純化することができ、また（iii）スワブによって集められるサンプルを抽出するため、または抽出を補助するために用いる溶液の本質的な成分を含んで成る不揮発性試薬は（ａ）チップの下部にある（または内在する、underlying）エリアでスワブのステムにコーティングされている、または（ｂ）スワブ・チップの吸収材の中に組み込まれている。ある態様では、抽出チャンバーは細長いチューブを有して成り、チューブは、例えば限定されないが、（i）丸型、Ｖ型、または平坦な底部形状を有し、また（ii）４〜１０ｍｍの内径を有する。抽出チャンバーは、スワブ・チップと検査ストリップとの両方を実質的に同時に収容できるように構成されている。ある態様では、検査ストリップは、従来の側方流動イムノクロマトグラフィー・アッセイ・デバイスである。ある態様では、不揮発性材料は水溶性有機酸である。ある態様では、不揮発性材料は水溶性無機酸である。ある態様では、不揮発性材料は不溶性酸性ポリマーである。
【００２８】
ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、５０〜８００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、１００〜８００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、１５０〜８００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２００〜８００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２５０〜８００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、３００〜８００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、３５０〜８００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、４００〜８００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、４５０〜８００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、５００〜８００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、５５０〜８００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、６００〜８００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、６５０〜８００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、７００〜８００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、７５０〜８００マイクロモルの範囲である。
【００２９】
ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２〜７５０マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２〜７００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２〜６５０マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２〜６００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２〜５５０マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２〜５００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２〜４５０マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２〜４００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２〜３５０マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２〜３００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２〜２５０マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２〜２００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２〜１５０マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２〜１００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２〜５０マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、２〜１０マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、５〜１０マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、３〜５マイクロモルの範囲である。
【００３０】
ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、３０〜２００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、５０〜２００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、１００〜２００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、１５０〜２００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、３０〜１５０マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、３０〜１００マイクロモルの範囲である。ある態様では、不揮発性酸性物質の量は、３０〜５０マイクロモルの範囲である。
【００３１】
ある態様では、スワブ・チップの後位端部（すなわち、吸収要素）を検査ストリップのサンプル・パッドに接触させることにより、スワブおよび検査ストリップを単一のデバイスに一体化し、両方のメディア間のキャピラリー液体連通を可能にする。
【００３２】
ある態様では、本発明は、サンプルでの被分析物の陽性または陰性を判定する方法であり、以下の工程を含んで成る。つまり、本発明は（ａ）サンプル抽出溶液の成分を含んで成る不揮発性化合物を組み込んだスワブを用いて生体サンプルを集める工程、（ｂ）抽出試薬を含むアッセイ・チャンバー内でサンプルから被分析物を抽出する工程、（ｃ）抽出された被分析物を含む抽出溶液を側方流動イムノクロマトグラフィー・アッセイの検査ストリップと相互作用させる工程であって、かかる工程は（i）検査ストリップを抽出溶液に挿入すること、または（ii）バルブ、ピペットまたは他の一般的な流体移送手段によって抽出溶液の内容物をデバイスに移すことであり、（ｄ）側方流動デバイスを通るように流れる被分析物と、デバイスによって運ばれる被分析物特異的標識試薬との反応による被分析物標識試薬複合体の形成を可能にする工程、（ｅ）被分析物標識試薬複合体と側方流動デバイス検出帯に固定化される被分析物特異的捕捉試薬の結合によって形成される信号の陽性または陰性で、サンプル中の被分析物の陽性または陰性を判定する工程を含んで成る方法である。ある態様では、被分析物はＡ群連鎖球菌抗原である。ある態様では、抽出試薬は、０．２Ｍ〜５Ｍの亜硝酸塩溶液である。
【００３３】
ある態様では、抽出試薬は１Ｍ〜５Ｍの亜硝酸塩溶液である。ある態様では、抽出試薬は、２Ｍ〜５Ｍの亜硝酸塩溶液である。ある態様では、抽出試薬は、３Ｍ〜５Ｍの亜硝酸塩溶液である。ある態様では、抽出試薬は４Ｍ〜５Ｍの亜硝酸塩溶液である。ある態様では、抽出試薬は０．２Ｍ〜４Ｍの亜硝酸塩溶液である。ある態様では、抽出試薬は０．２Ｍ〜３Ｍの亜硝酸塩溶液である。ある態様では、抽出試薬は、０．２Ｍ〜２Ｍの亜硝酸塩溶液である。ある態様では、抽出試薬は、０．２Ｍ〜１Ｍの亜硝酸塩溶液である。ある態様では、抽出試薬は１Ｍ〜２Ｍの亜硝酸塩溶液である。ある態様では、抽出試薬は、１．５Ｍ〜２Ｍの亜硝酸塩溶液である。ある態様では、抽出試薬は、１Ｍ〜１．５Ｍの亜硝酸塩溶液である。ある態様では、抽出試薬は、３Ｍ〜４Ｍの亜硝酸塩溶液である。
【００３４】
ある態様では、本発明のデバイスは、典型的には実験技術における広範な訓練を欠いている個体によるアッセイ（または分析、もしくは化学分析、assay）実施前のＡ群連鎖球菌の炭水化物抗原の抽出を含むイムノアッセイに関する。ある態様では、分析を不要にするために、デバイスは、抽出されるサンプルをイムノアッセイ・デバイスに移送するように構成されている。ある態様では、本発明のデバイスは、少なくとも１つの被分析物抽出溶液成分を運ぶスワブの使用を可能とするように構成される。ある態様では、少なくとも１つの被分析物抽出溶液成分は、不揮発性の乾燥固体（例えば、クエン酸）であり、またスワブに組み込まれる。ある態様では、デバイスは、試薬溶液およびアッセイ・ステップの数を減らすことによって、被分析物抽出プロセスのステップを単純化するように構成される。ある態様では、（ａ）スワブに固定化される不揮発性試薬、および（ｂ）抽出チャンバーでの抽出試薬の量が、予めデバイスに分注される。ある態様では、本発明のデバイスは、誤った試薬分注、およびサンプル移送ステップに起因する誤差を低減する。ある態様では、本発明のデバイスは、スワブのサンプル（例えば、スロート・スワブのサンプル）中のＡ群連鎖球菌抗原の陽性または陰性を検出するように構成される。
【００３５】
典型的に、本発明のデバイスおよび方法は、サンプル抽出プロセスを簡素化し、またサンプル操作を低減しつつ、アッセイ実施前に抽出またはさもなければ化学的に操作する必要があるサンプル中の被分析物の検出を可能にする。
【００３６】
本発明のデバイスは、生体サンプルまたは臨床サンプルを収集するように構成されており、プラスチックのステムまたは類似の支持材、およびチップを有して成り、チップはステムの一端に位置し、ファイバーまたは発泡体またはコーティングまたはスパンされる他の吸収材で作られており、さもなければステムの端部に堆積される（ステムおよびチップは結合して「スワブ」を構成する）。ある態様では、堆積される不揮発性材は、チップの直接的な下部エリアのスワブのステムにコーティングされるか、またはステム・チップの吸収材の中に組み込まれる。ある態様では、不揮発性材は、スワブに収集された生体／臨床サンプルの抽出および／または処理に用いるように構成される。
【００３７】
ある態様では、本発明は、サンプル中のＡ群連鎖球菌抗原の陽性または陰性を判定する方法であって、以下の工程を含んで成る。つまり、本発明は（ａ）不揮発性酸を組み込んだスロート・スワブを用いて生体サンプルを集める工程、（ｂ）亜硝酸塩水溶液である抽出試薬を含むアッセイ・チャンバー内でサンプルから抗原を抽出する工程、（ｃ）抽出された被分析物（Ａ群連鎖球菌抗原）を含む抽出溶液と、側方流動イムノクロマトグラフィー・アッセイ・デバイスを相互作用させる工程であり、（i）側方流動検査ストリップを抽出溶液に挿入することによって、または（ii）バルブ、ピペット、キャピラリー・フォース（または毛細管力、capillary force）または流体移送の他の既知の手段によって、抽出溶液の内容物をアッセイ・デバイスに移すことによって、相互作用が可能となり、（ｄ）側方流動デバイスを通るように流れる被分析物と、側方流動デバイスによって運ばれる標識被分析物特異的試薬との反応によって、被分析物標識試薬複合体の形成を可能にする工程、（ｅ）側方流動デバイス検出帯に固定化される被分析物特異的捕捉試薬への被分析物標識試薬複合体の結合によって形成される信号の陽性または陰性によって、サンプル中の被分析物の陽性または陰性を判定する工程、またはそれらの組合せを含んで成る方法である。
【００３８】
ある態様では、本発明は、抽出されたＡ群連鎖球菌の炭水化物抗原のためのイムノアッセイを行うことを可能とするように構成されるデバイスである。ある態様では、分析のために抽出されるサンプル流体をイムノアッセイ・デバイスに移す必要はない。ある態様では、抽出溶液と診断ストリップとの間の接触は、アッセイ実施にとって十分である。ある態様では、本発明の側方流動イムノクロマトグラフィー・アッセイ方法は、市販の利用できる検査ストリップを用いて実施することができる。ある態様では、本発明のデバイスは、少なくとも１つの被分析物抽出溶液成分を運ぶスワブを用いるように構成され、被分析物抽出試薬成分は、組合せる方法によって、スワブに適用される不揮発性の乾燥固形物の形態とすることができる。ある態様では、デバイスは、被分析物抽出プロセスの複雑さを低減し、また必要な試薬およびアッセイ・ステップの数を低減する。ある態様では、デバイスは、単一の予め充填される抽出試薬を用いる単一のチャンバー内で被分析物の抽出および分析を可能にするように構成される。ある態様では、デバイスは、アッセイ実施のために抽出チャンバーからスワブまたは抽出溶液を除去する必要なく用いられるように構成される。
【実施例】
【００３９】
本発明の利点を容易に理解できるように、簡潔に上述した本開示のより詳細な記述は、添付する図面で説明される具体的な態様を参照することによって表されるであろう。本開示の図面は正確な縮尺ではない場合があり、単に図表の表現であり、本開示の特定のパラメータを表すものではない。これらの図面は、本開示の典型的な態様のみを示しており、それゆえ、その範囲を限定するものではないと解すべきであり、本開示は、添付図面の使用を介して、追加の特異性および詳細を伴って記述され、また説明されるであろう。
【００４０】
図１は、本発明のデバイスの態様を示しており、ステム（１）と、臨床サンプルを集めるための吸収材（２）で作られる丸みを帯びたチップを有して成るスワブを含み、チップは、サンプルからの効率的な被分析物の抽出のために本質的な不揮発性試薬を組み込んでいる。試薬の組み込み（３）は、スワブのステム（図１Ａ）、またはサンプル収集帯から離れたチップとステムの境界でスワブ・チップの後位端（図１Ｂ）をコーティングすることによって実施することができる。他の試薬組み込みスキーム（または組合せ、scheme）も可能であり、また一連の説明は単に好ましい組み込み部位を示す例として示される。
【００４１】
図２は、本発明のデバイスの一態様を示しており、Ａ群連鎖球菌抗原の抽出は、予め分注された亜硝酸塩の溶液（抽出試薬（５））を含んでいる抽出チャンバー（４）に、臨床サンプルを運ぶ改変スロート・スワブ（１−２）を挿入することによって実施される。スワブ・チップ中に取り込まれた酸（３）は、亜硝酸塩溶液に溶解して酸性化し、それによって亜硝酸溶液（抽出溶液）を生成する。このプロセスは、抽出溶液（５）においてスワブ・チップ（２）を完全に混合することによって、さらに増強される多糖類ベースのＡ群連鎖球菌抗原の抽出を促進する。抽出された被分析物を含む抽出溶液が側方流動ストリップ（６−９）と接触する間、スワブは抽出チャンバー（４）中に保持され得る。これは、抽出チャンバーからスワブを除去することなく、抽出溶液において検査ストリップ（８）のサンプル・パッドをディッピングすることによって達成することができる。検査ストリップのサンプル・パッドにオプションとして組み込まれたバッファー（または緩衝剤、buffer）は、被分析物を運ぶ酸性抽出溶液を中和するように作用する。抽出された被分析物は、検査ストリップのサンプル・パッドから被分析物特異的標識試薬が組み込まれたストリップ上の部位（９）にキャピラリー・フォースによって移動し、それによってこの試薬を可溶化し、標識被分析物試薬複合体を形成する。これらの複合体は、捕捉帯（７）に達するまでキャピラリー・フォースによって駆動され、検査ストリップを通るように流れ続け、固定化捕捉試薬（被分析物（Ｔ）または移動標識試薬自体（Ｃ）のいずれかに特異的な、通常、別の被分析物特異的試薬／抗体）に結合する。この結合事象は、捕捉帯での標識の蓄積をもたらし、その標識は視覚的に検出可能であり、または専用のリーダーの使用によってモニターすることができ、サンプル（Ｔ）における被分析物の存在、および検査の適切な実施（Ｃ）の指標を供する。余分な抽出溶液は、側方流動検査ストリップの遠位端に位置する吸着パッド（６）によって吸い取られ（または運ばれ、wicked）、検査ストリップのメンブレンに沿ってキャピラリー・フローを駆動する。ある態様では、スワブ・チップは、３つの異なる機能を供することができる。つまり、スワブ・チップは、（i）生体サンプルまたは臨床サンプル（例えば、患者の咽喉からの細菌コロニー（colonies））を集める機能、（ii）スワブ・チップに吸着された不揮発性試薬を組み込む機能、および（iii）生体／臨床サンプルおよびスワブに組み込まれた不揮発性試薬の両方を抽出試薬に同時移送することで、効率的な被分析物の抽出をもたらす機能、を供することができる。
【００４２】
一の態様では、抽出チャンバーの寸法、幾何学的形状および光学的特性は、抽出チャンバーから、抽出流体または抽出されたスワブいずれかを移送させることなく、抽出チャンバー内のアッセイ実施を可能にするように選択される。スワブ・チップの直径および検査ストリップの幅は一般的に４ｍｍに近い範囲（例えば限定されないが、３ｍｍ〜６ｍｍの範囲）にあるので、抽出チャンバーは、被分析物の抽出およびイムノクロマトグラフィー・アッセイの両方の実施のために４〜１０ｍｍの内径を有するように構成される。典型的に、市販のスワブ・チップの長さの範囲は１０〜３０ｍｍであり、また抽出流体の量はそれゆえ、被分析物の抽出を最適化するために、抽出試薬による十分なスワブ・チップの被覆（coverage）を可能にするように適切に調整されるべきである。例示的な態様では、内径５ｍｍのシリンダー状の抽出チャンバーと、１５ｍｍのスワブ・チップ（tipped swab）とを用いて、最小の抽出溶液体積は２５０μＬとすることができ、最適な被分析物の抽出のために十分なスワブ・チップの被覆を可能にする。ある態様では、本発明のデバイスは、２５０−５００ｕＬの市販のＡ群連鎖球菌検査に存在する典型的な抽出流体の量を使用することができ、単一チャンバー内で抽出およびアッセイ・ステップを両立して実施することができる。
【００４３】
ある態様では、抽出チャンバーの形状は、シリンダー状、長方形、またはスワブと検査ストリップの両方を適切に収容する他の形状とすることができる。ある態様では、デバイスは、分析すべく抽出された被分析物の最小限の結合を示す、ガラスおよび不活性プラスチック（例えば限定されないが、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリスチレン、ポリカーボネートなど、またはこれらのいずれかの組合せ）を含む材料を有して成る。ある態様では、検査結果の視覚化のために、抽出チャンバー壁には光学的に透明な材料が用いられる。ある態様では、抽出チャンバーの長さは、検査ストリップの結果読取エリアが抽出チャンバー開口から突出して結果を視覚化できるように調整することができる（図２）。ある態様では、抽出チャンバーの底部は、丸い、Ｖ字形の、平坦な、またはスワブ・チップおよび検査ストリップの両方を、単独でまたは併存するときに収容するように構成される他の形状とすることができる。ある態様では、丸いまたはＶ字形の幾何学的形状の使用は、最適なスワブ・チップの被覆に必要な体積を低減させる。ある態様では、丸いまたはＶ字形の幾何学的形状の使用は、検査ストリップおよびスワブ・チップの共存を改善する（図２参照）。ある態様では、抽出チャンバーはキャップされ、正確な量の抽出試薬によって予備充填を可能にし、検査が実施されるべき部位への診断キットの輸送を支援し、生体サンプルを運ぶスワブの導入前に、直ぐに抽出チャンバーのキャップを外す。
【００４４】
本発明のデバイスの別の態様では、抽出チャンバーの流体内容物は、バルブまたは他の重力による典型的な方法またはキャピラリー流体移送によって、側方流動デバイス中に含まれる検査ストリップに、分析のために移送することができる。
【００４５】
図３は、本発明の態様を示しており、組み込まれた不揮発性試薬を運ぶスワブ（１−３）および検査ストリップ（６−９）は、スワブ・チップ（２）の後位端を検査ストリップのサンプル・パッド（８）に接続することによって単一に一体化し、両方のメディア間のキャピラリー液体連通を可能にする。この一体化したデバイスは、スワブと診断ストリップを統一し、単一のデバイスでの臨床サンプルの収集と分析を可能にする。この構成は、被分析物の抽出に続く抽出チャンバーへの検査ストリップの付加の要件を除去することにより、診断手順の複雑さを低減する（図２に示す）。例示的な態様では、抽出チャンバー（４）に存在する抽出試薬（５）へのスワブ・チップ（２）の導入は、抽出試薬のスワブ・チップへの吸い取りをもたらす。これは、スワブ・チップによって運ばれる不揮発性試薬（３）の抽出試薬溶液への可溶化を導き、それによって、スワブ・チップに存在する被分析物の効率的なインシチュでの抽出のための最適条件を供し、また効率的な被分析物の抽出をもたらすための抽出試薬溶液中のスワブ・チップの攪拌の必要性を可能な限り低減する。次いで、抽出された被分析物は、キャピラリー・フォースによって、スワブのチップから検査ストリップのサンプル・パッド（８）に移動し、オプションとしては、検査ストリップのエリアに組み込まれたバッファーによって中和される。抽出された被分析物は、検査ストリップのサンプル・パッドから被分析物特異的標識試薬が組み込まれたストリップの部位（９）へキャピラリー・フォースによって移動し続け、それによって、被分析物と反応してこの試薬を可溶化し、標識被分析物試薬複合体を形成する。これらの複合体は、捕捉帯（７）に達するまでキャピラリー・フォースによって検査ストリップを通るように流れ続け、複合体は固定化捕捉試薬（被分析物（Ｔ）または標識試薬自体（Ｃ）のいずれかに特異的な、典型的に、別の被分析物特異的試薬／抗体）に結合することができる。この態様において、統合されたスワブと検査ストリップは、効率的な臨床サンプルの収集のためにスワブのステムを取り替えるハンドルおよび検査ストリップ用のカセットの両方として機能するケーシング（１０）に覆われる。このケーシングにおける窓（１１）は、単に開口部であってよく、または、例えば限定されないが、透明プラスチックフィルムから構成されていてもよく、検査結果を容易に読み取ることを可能とする。ケーシング（１０）および抽出チャンバー（４）は、ケーシングの外径と抽出チャンバーの内径とを一致させるように構成され、それによって、ケーシングが抽出チャンバーに嵌合し、またオプションとして、抽出チャンバーをキャップすることを可能とする。このようなキャッピングは、ケーシングで抽出チャンバーを閉塞することによって、もしくはねじジョイントまたは接合部を形成する他の典型的な手段によって作用させることができる。このようなキャッピングは、抽出チャンバーを密封し、また抽出チャンバーから抽出試薬の流出を防止するという追加の利点を有する。これはまた、結果の読み取りに続いて１つのユニットでの検査物の処分を単純化する。一の態様では、スワブ・チップは４つの機能の機能を供することができる。つまり、スワブ・チップは（i）生体サンプルまたは臨床サンプル（例えば、患者の咽喉からの細菌性コロニー）を集める機能、（ii）被分析物の抽出を補助するスワブのチップに吸着する不揮発性試薬を組み込む機能、（iii）抽出溶液を形成し、また効率的な被分析物の抽出をもたらすように、生体／臨床サンプルおよびスワブに組み込まれた不揮発性試薬の両方を抽出試薬に同時移送する機能、ならびに（iv）分析のために、検査ストリップのサンプル・パッドに抽出された被分析物溶液の効果的なキャピラリー・ウィッキング（capillary wicking）を可能とし、流体導管を供する機能、を供することができる。
【００４６】
図４Ａは、スワブ・チップと診断ストリップの一体化を可能にする１つの一体化したデバイス構成を示しており、２つの適合するインターロック・バルブ（１０ａ、ｂ）から成るケーシングを含む。バルブの１つであるカバー（１０ａ）は、ステム（１）を介してスワブ・チップ（２）を留める（または留め金で留める、clasp）ように構成され、もう一方のバルブである基部（１０ｂ）は検査ストリップ（６−９）を収容するように構成される。これらの２つのインターロック・バルブは、２つのバルブを接合する際にスワブ・チップ（２）と検査ストリップのサンプル・パッド（８）とを物理的に接触させるように設計される。ケーシング内の結果ウィンドウ（１１）により、診断テスト結果を直接視覚化することが可能となる。スワブ・チップを機械的損傷から保護するケーシング・キャップ（１２）は、臨床サンプル収集の直前にスワブのチップを露出させるために除去されている。図４Ｂは、ケーシング・カバー（１０ａ）とスワブのステム（１）との間の相互作用の詳細を示し、ケーシング・カバー内にスワブのステムのしっかりとした固定を供するカバー（１３）での突起を含む１つの可能なクラスピング・メカニズム（または留め金機構、clasping mechanism）を示す。図４Ｃは、完全に組み立てられた集積デバイスを示す。
【００４７】
本発明のデバイスのある態様では、抽出試薬は専ら溶剤（例えば限定されないが、水）から成る。他の態様では、抽出試薬は、０．２〜５Ｍの範囲の亜硝酸塩濃度を有する水溶液である。抽出試薬は、典型的に用いられる非イオン性界面活性剤（例えば限定されないが、ＮＯＮＩＤＥＴ Ｐ−４０、Ｔｗｅｅｎ−２０ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、ＣＨＡＰＳ、またはそれらのいずれかの組合せ）、ｐＨ緩衝化合物（例えば限定されないが、リン酸、トリス、ＨＥＰＥＳ、またはそれらのいずれかの組合せ）、キレート剤（例えば限定されないが、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、またはそれらの組合せ）、防腐剤（例えば限定的されないが、チメロサール、ジグルコネートクロルヘキシジン、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸カリウム、アジ化ナトリウム、ゲンタマイシンの硫酸塩、クロラムフェニコールおよびストレプトマイシン、プロテアーゼインヒビターまたはフェノール性化合物など、またはそれらのいずれかの組合せ）、ならびにスワブに組み込まれる、付加的な試薬の可溶化の際に、溶液の色を変化させるマーカー（例えば限定されないが、ピンクから淡黄色）を含んでも良い。ある態様では、サンプルからの被分析物の抽出は、スロート・スワブと、抽出チャンバー内に存在する１．２Ｍの亜硝酸ナトリウム溶液４００μＬとを接触させることによって実施される。ある態様では、チューブの側面に向けてスワブを回すことによって、スワブ・チップは抽出試薬中で撹拌される。ある態様では、サンプルを試薬と混合した後、十分な多糖類抗原の抽出を可能にするために、抽出を１０秒〜１２０秒間継続させる。ある態様では、十分な多糖類抗原の抽出を可能にするために、抽出を１０秒〜６０秒間継続させる。ある態様では、抽出を１０秒〜３０秒間継続させる。ある態様では、抽出を３０秒〜６０秒間継続させる。ある態様では、抽出を３０秒〜１２０秒間継続させる。一の態様では、検査ストリップが抽出チャンバーに導入されている間にスワブが抽出チャンバー内に残される（図２）。別の態様（図３）では、スワブのチップに組み込まれた不揮発性酸によって酸性化される抽出試薬が入ってくることによって、被分析物がスワブのチップにてインシチュで抽出される。ある態様では、構成は、抽出試薬と抗原抽出を最適化するスワブ・チップによって運ばれるサンプルとの間の付加的な接触時間を可能にするという利点を有する。
【００４８】
本発明のデバイスのある態様では、抗原の抽出後の亜硝酸溶液の中和は、側方流動イムノクロマトグラフィー・アッセイ・デバイス（検査ストリップ）のサンプル受け部（８）内に組み込まれるバッファー物質によって作用される。一の態様では、被分析物の抽出および検査は、スワブまたは流体の除去なしに同じチャンバー内で行われ、被分析物の抽出後の抽出チャンバーへの検査ストリップの導入は、検査ストリップ中に含まれるバッファーを抽出溶液に溶解させ、それによって、最適な側方流動イムノクロマトグラフィー・アッセイの実施を可能にする。
【００４９】
本発明のデバイスのある態様では、スワブ中に取り込まれる酸の量は２〜８００マイクロモルである。当業者には明らかであるように、スワブ・チップに組み込まれる必要がある酸の量は、効果的なＡ群連鎖球菌の抗原抽出を可能にするために、いくつかの因子に依存する。その因子は、限定されないが、（i）酸性度（ｐＫａ）、（ii）酸可溶化速度、（iii）酸性化されるべき抽出試薬の体積および濃度、（iv）アッセイ実施スキームおよび詳細（スワブ除去を伴うかまたは伴わないか、もしくは一体化したデバイスを使用して、など）を含む。上記の因子の各組合せは、最適なＡ群連鎖球菌の抗原抽出を保証する（または確実にする、assure）ために実験的に検査される必要がある。最適な抽出のガイドラインは、典型的な急速Ａ群連鎖球菌の診断検査に含まれる２つの個々の試薬溶液を混合することによって生じるバッファーのｐＨ範囲（典型的には４．５〜４．７のｐＨ範囲）を供し得る。ある態様では、酸は食用または通常安全な（ＧＲＡＳ）不揮発性有機酸から選択することができる（例えば限定されないが、クエン酸、アスコルビン酸など）。ある態様では、酸は、スワブを咽喉組織と直接接触するように用いることを可能とする。ある態様では、スワブは、咽喉組織と直接接触しない位置に不揮発性酸の堆積またはコーティングを有するように構成することができ、例えば、チップの直接的な下部に位置するエリアにおけるスワブのステムであり、または咽喉組織と接触するように構成されるエリアから離れたステム・チップの吸収材である（図１）。ある態様では、不揮発性酸は、抽出バッファーへの酸溶解を改善するために、他の不活性物質（例えば、デキストロース）と一緒に組み込むことができる。ある態様では、不揮発性酸は、味を改善するために他の不活性物質（例えば、甘味料、人工香料）、または着色するために他の不活性物質（例えば、食品着色料）を、一緒に組み込むことができる。ある態様では、不揮発性酸は、サンプルの粘度を低下させるために、粘液溶解剤（例えば、Ｎ−アセチルシステイン）と一緒に組み込むことができる。ある態様では、堆積する不揮発性酸はポリマー（例えば限定されないが、ポリスチレンスルホン酸、ナフィオンなど）とすることができ、また抽出試薬において不溶性とすることができる。ある態様では、酸性ポリマーと抽出試薬との間のイオン交換は、酸性ポリマーの溶解を伴わずに後者の酸性化をもたらす。
【００５０】
ある態様では、本発明は、生体サンプル収集に用いられるスワブを含むデバイスであって、スワブは、例えば限定されないが、ポリエステル・ファイバー（または他のポリマー材のファイバー）でコーティングされるスワブ、オープンセル・ポリウレタン（例えば限定されないが、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ発泡体スワブ）またはフロック（または短繊維、flocked）・スワブ（例えば限定されないが、コパン製のスワブ）を含んで成る発泡体スワブを有して成ることができる。ある態様では、アッセイ感度を高めるために、スワブ・チップは、検査ストリップのサンプル・パッドに結合されると、最小量の被分析物を吸着し、また最小限の流体容量を保持するように構成され、それゆえ、分析のために検査ストリップに移送されるサンプル量を最大化する。ある態様では、これは、適切な選択および以下のパラメータの最適化によって達成される。そのパラメータとは、スワブ・チップの構造材料（例えば限定されないが、ポリエステル・ファイバー）、チップ・ファイバー直径（例えば限定されないが、５〜２０μｍの径）、ファイバーの表面特性（例えば限定されないが、親水性コーティング）、チップ間隙率（または孔隙率、porosity）（例えば限定されないが、７０〜９０％の間隙率）、チップの長さおよび直径（典型的には、限定されないが、それぞれ１５〜２０ｍｍの長さおよび４〜６ｍｍの径）、およびチップ吸着率である。ある態様では、抽出溶液からスワブ・チップへ、およびスワブ・チップから検査ストリップのサンプル・パッドへの迅速かつ定量的なキャピラリー流体の移送を可能とするように、チップ吸着率を選択することができる。このようなキャピラリー流体移送は、重力によって妨げられても、妨げられなくてもよい（すなわち、スワブおよび検査ストリップを組み込んだデバイスは、垂直位置または水平位置のいずれかで動作し得る）。側方流動に基づく検査ストリップを構築するために用いられるスワブ・チップ、検査ストリップのサンプル・パッド、および追加のメンブレンの、それぞれの吸着率および間隙率を選択および／または調整することで、スワブ・チップから検査ストリップのサンプル・パッドに、およびそこから残りの検査ストリップの構成要素に、効率的かつ連続的な液体流動を可能にし、最適なデバイス動作を可能とする。デバイスの構成要素の間隙率および吸着率の選択および／または調整は、垂直方向に対する水平方向の位置決めに関してデバイスの意図される用途を考慮すべきであり、例えば限定されないが、デバイス構成要素内で作用するキャピラリー・フォースを増加させることで、直立状態で動作するように設計されたデバイスにおいて、外部の重力に対抗させることができる。
【００５１】
ある態様では、スワブは、揮発性溶剤における酸の溶液をディッピング、スプレーイング、またはさもなければディスパージングさせ、その後溶剤を蒸発させることによって、不揮発性酸を有するように調製することができる。ある態様では、酸性ポリマーを用いる場合、スワブのステムの一端（チップを構成する部分）は、ファイバー（例えば限定されないが、羊毛、綿、ポリエステル、または他のファイバー質、またはさもなければ、他の吸収材（例えば限定されないが、スポンジ））またはチップを生成するための発泡体マトリックス（図１）の適用前に、酸性ポリマー材のメンブレンまたはフィルムで予め包むまたはコーティングすることができる。ある態様では、そのような構成は、スワブによって運ばれる酸性ポリマーと診断のために咽喉組織から取り出される生体サンプルとの間の直接の物理的接触を回避する。
【００５２】
ある態様では、本発明は、市販の側方流動ベースの検査ストリップを用いるように構成されるワンステップ・イムノクロマトグラフィー・アッセイ・デバイスである。ある態様では、イムノクロマトグラフィー・アッセイ・デバイスは、ポーラス状の材料を含んで成るサンプル受け領域を含むことができ、サンプル受け領域から被分析物の検出エリアへの抽出された被分析物を含むサンプルの側方流動を可能とするように構成される。ある態様では、サンプル受け領域および被分析物の検出エリアは、単一のポーラス状の部材に存在することができ、または側方流動接触の少なくとも２つの別個のポーラス状の部材を有して成ることができる。ある態様では、サンプル受け領域は、乾燥した被分析物特異的標識試薬を含むことができ、かかる試薬は抽出試薬によって可溶化され、被分析物標識試薬複合体の形成を可能にする。ある態様では、標識被分析物試薬複合体は、固定化捕捉試薬、典型的には別の被分析物特異的抗体（すなわち、結合事象）に結合する捕捉帯に到達するまで、キャピラリー・フォースによってデバイスを通って流れるように構成される。ある態様では、結合事象は、サンプル中の被分析物の存在の指標を供するように構成される捕捉帯での標識の蓄積によって、視覚的に、または専用リーダーの使用による検出が可能となる。
【００５３】
本発明の多くの態様を説明してきたが、これらの態様は例示にすぎず、限定的ではなく、また多くの変更があり得ることは通常の当業者には明らかとなり得る。さらに、種々の工程は、いずれの所望の順序で実行することができる（およびいずれの所望のステップを追加することができ、および／またはいずれの所望のステップを排除することができる）。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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