(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式：
Ｒ1−Ｚ−Ｒ2
を有する化合物であるアミリン類似体であって、ｈＡＭＹＲ１、ｈＡＭＹＲ２、およびｈＡＭＹＲ３のうち１個以上に対して作動薬活性を有するアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物：
式中、Ｒ1は水素、Ｃ1-4アシル、ベンゾイル、またはＣ1-4アルキル、あるいは半減期延長部分Ｍであり、ここでＭは必要に応じてリンカー部分Ｌを介してＺに結合されていてもよく；
Ｒ2はＯＨまたはＮＨＲ3であり、ここでＲ3は水素またはＣ1-3アルキルであり；かつ
Ｚは以下の式Ｉのアミノ酸配列：
【化１】
0006769984.tif 000048
（式中、
Ｘ３はＡｓｎ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、およびＧｌｎからなる群より選択され；
Ｘ１０はＧｌｎ、Ａｓｐ、およびＧｌｕからなる群より選択され；
Ｘ１４はＡｓｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、およびＡａｄからなる群より選択され；
Ｘ１７はＨｉｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｌｙｓ、およびＡａｄからなる群より選択され；
Ｘ１９−Ｘ２０はＳｅｒ−Ｓｅｒ、Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｓｅｒ−Ｖａｌ、およびＶａｌ−Ｓｅｒからなる群より選択されるかまたは存在せず；
Ｘ３１はＡｓｐ、Ｇｌｕ、およびＡｓｎからなる群より選択され；
Ｘ３５はＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、Ｏｒｎ、Ａａｄ、Ｇｌｙ、およびＴｈｒからなる群より選択され；
Ｘ３７はＰｒｏ、Ａｐｒ、およびＨｙｐからなる群より選択される）
であり；
ここで、前記化合物は、以下：
ＧｌｎであるＸ３；
Ｈｉｓ、Ａｓｎ、またはＡａｄであるＸ１４；
Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｔｈｒ、またはＡａｄであるＸ１７；
Ｖａｌ−ＳｅｒまたはＳｅｒ−ＶａｌであるＸ１９−Ｘ２０；および
Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、Ｏｒｎ、Ａａｄ、Ｇｌｙ、またはＴｈｒであるＸ３５
から選択される少なくとも１個の残基を有し、
前記アミノ酸配列Ｚの２位および７位のシステイン残基の間に形成された分子内ジスルフィド架橋を含む。
【請求項２】
Ｘ３１はＧｌｕである、請求項１に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項３】
Ｘ１９−Ｘ２０はＳｅｒ−Ｓｅｒであるか存在しない、請求項１または２に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項４】
Ｘ３７はＨｙｐまたはＰｒｏである、請求項１〜３のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項５】
Ｚは以下の式ＩＩのアミノ酸配列：
【化２】
0006769984.tif 000049
（式中、
Ｘ３はＡｓｎ、Ｇｌｙ、およびＧｌｎからなる群より選択され；
Ｘ１０はＧｌｎ、Ａｓｐ、およびＧｌｕからなる群より選択され；
Ｘ１４はＡｓｐ、Ｈｉｓ、およびＡａｄからなる群より選択され；
Ｘ１７はＨｉｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、およびＡａｄからなる群より選択され；
Ｘ１９−Ｘ２０はＳｅｒ−Ｓｅｒであるかまたは存在せず；
Ｘ３５はＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｏｒｎ、Ａａｄ、Ｇｌｙ、およびＴｈｒからなる群より選択され；かつ
Ｘ３７はＰｒｏおよびＨｙｐからなる群より選択される）
であり、
ここで、前記化合物は以下：
ＧｌｎであるＸ３；
ＨｉｓまたはＡａｄであるＸ１４；
Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、またはＡａｄであるＸ１７；および
Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、Ｏｒｎ、Ａａｄ、Ｇｌｙ、またはＴｈｒであるＸ３５
から選択される少なくとも１個の残基を有し、
前記アミノ酸配列Ｚの２位および７位のシステイン残基の間に形成された分子内ジスルフィド架橋を含む、請求項１に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項６】
Ｘ１７はＨｉｓおよびＧｌｎから選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項７】
Ｚは式ＩＩＩのアミノ酸配列：
【化３】
0006769984.tif 000050
式中、
Ｘ３はＡｓｎ、Ｇｌｙ、およびＧｌｎからなる群より選択され；
Ｘ１０はＧｌｎ、Ａｓｐ、およびＧｌｕからなる群より選択され；
Ｘ１４はＡｓｐ、Ｈｉｓ、およびＡａｄからなる群より選択され；
Ｘ１７はＨｉｓおよびＧｌｎからなる群より選択され；
Ｘ１９−Ｘ２０はＳｅｒ−Ｓｅｒであるかまたは存在せず；
Ｘ３５はＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａａｄ、およびＧｌｙからなる群より選択され；かつ
Ｘ３７はＰｒｏおよびＨｙｐからなる群より選択される）であり；
ここで、前記化合物は、以下：
ＧｌｎであるＸ３；
ＨｉｓまたはＡａｄであるＸ１４；
ＧｌｎであるＸ１７；および
ＡａｄであるＸ３５
から選択される少なくとも１個の残基を有し、
前記アミノ酸配列Ｚの２位および７位のシステイン残基の間に形成された分子内ジスルフィド架橋を含む、請求項１に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項８】
Ｘ１０はＧｌｎおよびＧｌｕから選択され；かつ／または
Ｘ３５はＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、およびＡａｄから選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項９】
Ｘ３はＡｓｎおよびＧｌｙから選択され、かつ／またはＸ１７はＧｌｎである、請求項１〜８のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項１０】
Ｘ３５はＡｓｎであり、かつ／またはＸ３７はＨｙｐである、請求項１〜９のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項１１】
Ｘ３はＧｌｎであり；
Ｘ１０はＧｌｕおよびＡｓｐから選択され；
Ｘ１４はＨｉｓおよびＡａｄから選択され；
Ｘ３５はＧｌｙおよびＡｓｎから選択され；かつ
Ｘ３７はＰｒｏおよびＨｙｐから選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項１２】
以下の残基：
ＧｌｙであるＸ３；
ＧｌｕおよびＡｓｐから選択されるＸ１０；
ＨｉｓおよびＡａｄから選択されるＸ１４；
ＧｌｙおよびＡｓｎから選択されるＸ３５；ならびに
ＰｒｏおよびＨｙｐから選択されるＸ３７
を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項１３】
以下の残基：
Ｇｌｙ３＋Ｇｌｕ１０；
Ａｓｎ３＋Ｇｌｕ１０；
Ｇｌｎ３＋Ｇｌｕ１０；
Ａｓｎ３＋Ｇｌｎ１０；または
Ｇｌｎ３＋Ａｓｐ１０を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項１４】
Ｘ１４はＨｉｓおよびＡａｄから選択され、かつ／またはＸ１７はＧｌｎである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項１５】
以下の残基：
Ｇｌｎ１７＋Ｇｌｕ３１＋Ｈｙｐ３７；
Ｇｌｙ３＋Ｇｌｕ１０＋Ｈｉｓ１４；
Ａｓｎ３＋Ｇｌｕ１０＋Ｈｉｓ１４；
Ｇｌｎ３＋Ｇｌｕ１０＋Ｈｉｓ１４；
Ｇｌｙ３＋Ｇｌｕ１０＋Ａａｄ１４；
Ｇｌｙ３＋Ｇｌｕ１０＋Ａｓｐ１４；
Ａｓｐ１０＋Ａａｄ１４；
Ｈｉｓ１４＋Ｇｌｕ３１＋Ｐｒｏ３７；
Ｈｉｓ１４＋Ｇｌｕ３１＋Ｈｙｐ３７；
Ａａｄ１４＋Ｇｌｕ３１＋Ｐｒｏ３７；
Ａａｄ１４＋Ｇｌｕ３１＋Ｈｙｐ３７；
Ｇｌｙ３＋Ｇｌｕ３１；または
Ｇｌｙ３＋Ｇｌｕ１０＋Ｇｌｕ３１＋Ａｓｎ３５＋Ｈｙｐ３７
を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項１６】
Ｘ１９−Ｘ２０はＳｅｒ−Ｓｅｒである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項１７】
以下の残基：
Ｇｌｙ３＋Ｓｅｒ１９＋Ｓｅｒ２０＋Ｇｌｕ３１または
Ｇｌｙ３＋Ｇｌｕ１０＋Ｓｅｒ１９＋Ｓｅｒ２０＋Ｇｌｕ３１＋Ａｓｎ３５＋Ｈｙｐ３７
を含む、請求項１６に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項１８】
Ｚは以下の配列：
【化４−１】
0006769984.tif 000051
【化４−２】
0006769984.tif 000052
【化４−３】
0006769984.tif 000053
【化４−４】
0006769984.tif 000054
であり、前記アミノ酸配列Ｚの２位および７位のシステイン残基の間に形成された分子内ジスルフィド架橋を含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項１９】
以下の式：
Ｒ1−Ｚ−Ｒ2
を有する化合物あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物であるアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物：
式中、Ｒ1は水素、Ｃ1-4アシル、ベンゾイル、またはＣ1-4アルキル、あるいは半減期延長部分Ｍであり、ここでＭは必要に応じてリンカー部分Ｌを介してＺに結合されていてもよく；
Ｒ2はＯＨまたはＮＨＲ3であり、ここでＲ3は水素またはＣ1-3アルキルであり；かつ
Ｚはアミノ酸配列：
RCNTATCATQRLADFLHRSSF-Gly(Me)-A-Ile(Me)-LSSTEVGSETPであり、
前記アミノ酸配列Ｚの２位および７位のシステイン残基の間に形成された分子内ジスルフィド架橋を含む。
【請求項２０】
Ｒ1はＭ−またはＭ−Ｌ−である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項２１】
Ｍはアルカノイル基である、請求項２０に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項２２】
Ｍは、１５−カルボキシ−ペンタデカノイル、１７−カルボキシ−ヘプタデカノイル、および１９−カルボキシ−ノナデカノイルから選択される、請求項２１に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項２３】
Ｒ1はＭ−Ｌ−であり、Ｌは、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、α−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ、ε−Ｌｙｓ、Ａｓｐ、β−Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇａｂａ、Ａｉｂ、β−Ａｌａ、４−アミノブタノイル、５−アミノペンタノイル、６−アミノヘキサノイル、７−アミノヘプタノイル、８−アミノオクタノイル、９−アミノノナノイル、１０−アミノデカノイル、および８Ａｄｏからなる群より選択されるアミノ酸の残基である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項２４】
Ｌはγ−Ｇｌｕ残基である、請求項２３に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項２５】
Ｒ2はＮＨ2である、請求項１〜２４のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項２６】
【化５−１】
0006769984.tif 000055
【化５−２】
0006769984.tif 000056
【化５−３】
0006769984.tif 000057
【化５−４】
0006769984.tif 000058
【化５−５】
0006769984.tif 000059
【化５−６】
0006769984.tif 000060
【化５−７】
0006769984.tif 000061
（ここで、［１９ＣＤ］は［１９−カルボキシノナデカノイル］を示す）からなる群より選択され、
前記アミノ酸配列の２位および７位のシステイン残基の間に形成された分子内ジスルフィド架橋を含む、請求項１に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩および溶媒和物。
【請求項２７】
[19CD]-isoGlu-RCNTATCATQRLADFLHRSSF-Gly(Me)-A-Ile(Me)-LSSTEVGSETP-NH2
であり、
前記アミノ酸配列の２位および７位のシステイン残基の間に形成された分子内ジスルフィド架橋を含む、請求項１９に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【請求項２８】
請求項１〜２７のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物を、医薬的に許容される担体、賦形剤、または溶媒と共に含む、医薬組成物。
【請求項２９】
請求項１〜２７のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物を含む、前記アミリン類似体を対象に送達するための装置。
【請求項３０】
請求項１〜２７のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物を含み、必要に応じて包装および使用説明書をさらに含む、キット。
【請求項３１】
抗糖尿病剤、抗肥満剤、メタボリック症候群の治療剤、抗脂質代謝異常剤、抗高血圧剤、プロトンポンプ阻害剤、または抗炎症剤をさらに含む、請求項２９に記載の装置または請求項３０に記載のキット。
【請求項３２】
請求項１〜２７のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物の合成方法。
【請求項３３】
固相法または液相法で前記アミリン類似体を合成する工程と、必要に応じて最終産物を単離および／または精製する工程を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
医学的処置方法で使用するための請求項１〜２７のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物を含む医薬組成物。
【請求項３５】
体重増加を治療、阻害、または低減し、体重減少を促進し、食物摂取量を減少し、かつ／または過体重を低減する方法で使用するための請求項１〜２７のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物を含む医薬組成物。
【請求項３６】
肥満症、病的肥満、術前肥満、肥満に関連する炎症、肥満に関連する胆嚢疾患、肥満による睡眠時無呼吸および呼吸器の問題、軟骨変性、変形性関節症、あるいは肥満症または過体重の生殖器合併症（不妊症など）を治療する方法で使用するための請求項１〜２７のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物を含む医薬組成物。
【請求項３７】
前記肥満症は、糖尿病（たとえば２型糖尿病）、高血圧症、脂質代謝異常、睡眠時無呼吸、および心血管疾患などの少なくとも１つの体重関連の合併症を伴う、請求項３６に記載の使用のためのアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物を含む医薬組成物。
【請求項３８】
アルツハイマー病、糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、前糖尿病、インスリン抵抗症候群、耐糖能異常（ＩＧＴ）、血糖値上昇に関連する病状、メタボリック症候群などの代謝性疾患、高血糖症、高血圧症、アテローム性脂質代謝異常、肝脂肪症（「脂肪肝」）、腎不全、動脈硬化症（たとえばアテローム性動脈硬化症）、大血管疾患、微小血管疾患、糖尿病性心臓（糖尿病性心筋症、糖尿病の合併症としての心不全など）、冠動脈性心疾患、末梢動脈性疾患、または脳卒中、あるいはそれらの組み合わせを予防または治療する方法で使用するための、請求項１〜２７のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物を含む医薬組成物。
【請求項３９】
循環ＬＤＬ濃度を減少し、かつ／またはＨＤＬ／ＬＤＬ比を増加する方法で使用するための請求項１〜２７のいずれか一項に記載のアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物を含む医薬組成物。
【請求項４０】
前記アミリン類似体は、抗糖尿病剤、抗肥満剤、メタボリック症候群の治療剤、抗脂質代謝異常剤、抗高血圧剤、プロトンポンプ阻害剤、または抗炎症剤と組み合わせて投与される、請求項３４〜３９のいずれか一項に記載の使用のためのアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物を含む医薬組成物。
【請求項４１】
前記抗糖尿病剤は、メトホルミン、スルホニル尿素、グリニド、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、グリタゾン、ＧＬＰ−１受容体作動薬、ＳＧＬＴ２阻害剤、ＧＰＲ４０作動薬、インスリン、またはインスリン類似体である、請求項４０に記載の使用のためのアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物を含む医薬組成物を含む医薬組成物。
【請求項４２】
前記抗肥満剤は、ペプチドＹＹまたはその類似体、神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）またはその類似体、カンナビノイド受容体１拮抗薬、リパーゼ阻害剤、ヒトプロアイレットペプチド（ＨＩＰ）、メラノコルチン受容体４作動薬、ＧＬＰ−１受容体作動薬、Orlistat（商標）、Sibutramine（商標）、フェンテルミン、メラニン凝集ホルモン受容体１拮抗薬、ＣＣＫ、アミリン、プラムリンチド、あるいはレプチンである、請求項４０に記載の使用のためのアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物を含む医薬組成物。
【請求項４３】
前記抗高血圧剤は、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、利尿薬、β遮断薬、またはカルシウムチャネル遮断薬である、請求項４０に記載の使用のためのアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物を含む医薬組成物。
【請求項４４】
前記抗脂質代謝異常剤は、スタチン、フィブラート、ナイアシン、ＰＳＣＫ９（前駆タンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型）阻害剤、またはコレステロール吸収阻害剤である、請求項４０に記載の使用のためのアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物を含む医薬組成物。
【請求項４５】
前記プロトンポンプ阻害剤は、ベンズイミダゾール誘導体タイプまたはイミダゾピリジン誘導体タイプの薬剤である、請求項４０に記載の使用のためのアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物を含む医薬組成物。
【請求項４６】
前記抗炎症剤は、ステロイド剤または副腎皮質ステロイド剤、非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）ＩＩ阻害剤、５−アミノサリチル酸、またはメトホルミンである、請求項４０に記載の使用のためのアミリン類似体あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミリン受容体作動薬であるアミリン類似体と、様々な疾患、状態、または障害の治療および／または予防（食物の過剰摂取、肥満症および過体重、代謝性疾患、ならびに本明細書に記載のその他の状態および障害の治療および／または予防を含む）でのそれらの医療上の使用に関する。特に、本発明は、作用持続時間が長く液体製剤の形態での使用に十分に適した安定なアミリン類似体に関する。
【背景技術】
【０００２】
アミリンは、アミリン、カルシトニン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド、アドレノメジュリン、およびインテルメジン（ＡＦＰ−６ともいう）を含むペプチドホルモンファミリーの一種であり、様々な代謝性疾患および障害に関与している。ヒトアミリンは、２型糖尿病患者の膵島で最初に単離・精製され、アミロイド沈着物の主成分と特徴づけられた。
【０００３】
天然のヒトアミリンは３７個のアミノ酸からなるペプチドで、以下の式：
H-KC()NTATC()ATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTY-NH2
を有する。
【０００４】
式中、Ｎ末端のＨ−は水素原子を示し、Ｎ末端のアミノ酸残基（すなわち上の式で示す配列の配列位置番号１のリシン（Ｋ）残基）の遊離アミノ基の存在に対応し；Ｃ末端の−ＮＨ2はＣ末端のカルボキシ基がアミド形態であることを示し；配列位置番号２および７の２個のシステイン（Ｃ、Ｃｙｓ）残基に付けられた括弧「（）」は、これらの２個のＣｙｓ残基の間に分子内ジスルフィド架橋が存在することを示す。
【０００５】
アミリンは、糖尿病および／または肥満症などの代謝障害の治療に有益となる可能性がある。アミリンは胃内容排出を制御しグルカゴン分泌および食物摂取を抑制することにより、血液循環へのグルコース放出速度を制御すると考えられている。アミリンはインスリンの作用を補完すると考えられる。健常成人に比べて、１型糖尿病患者には循環アミリンがなく、２型糖尿病患者では食後のアミリン濃度が減少している。ヒトを対象とした試験では、式Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-Asn-Asn-Phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyrを有し、同様に２位と７位のＣｙｓ残基の間にジスルフィド架橋を有する、プラムリンチドとして知られるアミリン類似体（国際公開第９３／１０１４６号パンフレットに記載）が体重を減少し、または体重増加を低減することを示している。Ｎ−メチル化残基を含み細線維化傾向の低下した、ＩＡＰＰ−ＧＩと命名された代替アミリン類似体がYanらによって記述されている（PNAS, 103(7), 2046-2051, 2006）が、ＩＡＰＰ−ＧＩは天然アミリンよりも活性が低いようである。国際公開第２０１３／１５６５９４号、第２０１２／１６８４３０号、第２０１２／１６８４３１号、第２０１２／１６８４３２号、および第２００６／０４２７４５号パンフレットにはさらなるアミリン類似体またはプラムリンチド類似体が記載されている。
【０００６】
肥満症は、世界の主要な健康問題でますます増えている２型糖尿病の主な発症原因と考えられている。糖尿病を治療せずにおいた結果として発症する可能性のある疾患または障害としては、心血管および末梢動脈疾患、微小血管および大血管の合併症、脳卒中、ならびに特定の形態のがん（特に造血器のがん）が挙げられる。
【０００７】
当技術分野ではさらなるアミリン類似体の需要がある。たとえば、ｐＨが約７のときにより低い細線維化傾向および／または高い化学的安定性を示すアミリン類似体であれば、生理的ｐＨ周辺での製剤を可能にするかもしれない。さらに、アミリン受容体での作動薬活性レベルが高い、かつ／または血漿消失半減期が適切に長いアミリン類似体は、投与間隔を現在可能な間隔より延長する（たとえば週に１回またはそれよりも低頻度）ことで患者コンプライアンスを改善できる可能性がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、ヒトアミリンの類似体である化合物に関する。
第一の側面では、本発明は、以下の式：
Ｒ1−Ｚ−Ｒ2
を有する化合物あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物である、アミリン類似体を提供する。
【０００９】
式中、Ｒ1は水素、Ｃ1-4アシル、ベンゾイル、またはＣ1-4アルキル、あるいは半減期延長部分Ｍであり、ここでＭは必要に応じてリンカー部分Ｌを介してＺに結合されていてもよく；
Ｒ2はＯＨまたはＮＨＲ3であり、ここでＲ3は水素またはＣ1-3アルキルであり；かつ
Ｚは以下の式Ｉのアミノ酸配列である。
【００１０】
【化１】
0006769984.tif 000002
（式中、
Ｘ３はＡｓｎ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、およびＧｌｎからなる群より選択され；
Ｘ１０はＧｌｎ、Ａｓｐ、およびＧｌｕからなる群より選択され；
Ｘ１４はＡｓｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、およびＡａｄからなる群より選択され；
Ｘ１７はＨｉｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｌｙｓ、およびＡａｄからなる群より選択され；
【００１１】
Ｘ１９−Ｘ２０はＳｅｒ−Ｓｅｒ、Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｓｅｒ−Ｖａｌ、およびＶａｌ−Ｓｅｒからなる群より選択されるかまたは存在せず；
Ｘ３１はＡｓｐ、Ｇｌｕ、およびＡｓｎからなる群より選択され；
Ｘ３５はＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、Ｏｒｎ、Ａａｄ、Ｇｌｙ、およびＴｈｒからなる群より選択され；
Ｘ３７はＰｒｏ、Ａｐｒ、およびＨｙｐからなる群より選択される。
ここで、前記化合物は、以下：
ＧｌｎであるＸ３；
Ｈｉｓ、Ａｓｎ、またはＡａｄであるＸ１４；
Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｔｈｒ、またはＡａｄであるＸ１７；
Ｖａｌ−ＳｅｒまたはＳｅｒ−ＶａｌであるＸ１９−Ｘ２０；および
Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、Ｏｒｎ、Ａａｄ、Ｇｌｙ、またはＴｈｒであるＸ３５
から選択される少なくとも１個の残基を有する。
【００１２】
本明細書全体で、前記アミリン類似体のアミノ酸位置は上で示した配列を有するヒトアミリンでの対応する位置に従い番号付けされている。式Ｉ（および本明細書中のその他の式）の配列は、ヒトアミリンのＡｓｎ２１およびＡｓｎ２２の２個の残基に対応する２個のアミノ酸欠失を含む。そこで、アミリンの配列と比較しやすいように、Ｘ２０位のすぐＣ末端（下流）側にあるＰｈｅ残基を２３位とする。というのも、この残基はヒトアミリンのＰｈｅ２３と一致するからである。したがって、上の式Ｉおよび本明細書の他の箇所に記載のその他の式の任意の所与の残基の番号は、その配列と最適に整列させた場合のヒトアミリンでの対応する残基を反映し、特定の配列での直線位置を必ずしも反映しない。
【００１３】
（当然ながら、本明細書で提示される関連の式のいずれも、Ｘ２１およびＸ２２が存在しない位置に相当する位置に残基Ｘ２１〜Ｘ２２を含むように記載される場合がある。）
【００１４】
意外にも、Ｘ２１位およびＸ２２位の残基を同時に（さらにはＸ１９位およびＸ２０位も追加で）欠失させると活性で安定なアミリン類似体が得られることが見出されている。さらに、いかなる特定の理論にも拘束されることを意図するものではないが、これらの残基を欠失させると分子の化学的安定性（特に中性および／またはアルカリ性のｐＨ値で）を高めることができると考えられている。化合物の細線維化および沈殿も低減される可能性がある。したがって、この化合物は既存のアミリン類似体に比べて製剤のための特性に優れている。
【００１５】
さらに、本明細書に記載の化合物は、ＩＡＰＰ−ＧＩ（野生型アミリンよりも活性が低い）と同じ位置でメチル化されているにもかかわらず、野生型アミリンに比べて同様またはより高い活性（たとえば、ｈＡＭＹＲ３受容体および／またはｈＡＭＹＲ１受容体および／またはｈＣＴＲ２受容体での作動薬活性）を示す。
【００１６】
式Ｉの態様によっては、
Ｘ３１はＧｌｕであり；
Ｘ１９−Ｘ２０はＳｅｒ−Ｓｅｒであるかまたは存在せず；かつ／または
Ｘ３７はＨｙｐまたはＰｒｏである
ことが望ましい場合がある。
【００１７】
前記アミリン類似体はＨｉｓ１４、Ａｓｎ１４、Ａａｄ１４、Ｇｌｎ１７、およびＴｈｒ１７のうち少なくとも１個を含むことが望ましい場合がある。
【００１８】
Ｘ１４がＡｓｐである場合、Ｘ１７がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｔｈｒ、またはＡａｄであることが望ましい場合がある。
【００１９】
Ｘ１７がＧｌｎであることが特に好ましい場合がある。
【００２０】
状況によっては、Ｘ３５は疎水性残基（たとえばＰｈｅ）でないことが望ましい場合がある。このような残基は、製剤によっては細線維化傾向を高くする可能性がある。
Ｚは式ＩＩのアミノ酸配列であってもよい。
【００２１】
【化２】
0006769984.tif 000003
式中、
Ｘ３はＡｓｎ、Ｇｌｙ、およびＧｌｎからなる群より選択され；
Ｘ１０はＧｌｎ、Ａｓｐ、およびＧｌｕからなる群より選択され；
Ｘ１４はＡｓｐ、Ｈｉｓ、およびＡａｄからなる群より選択され；
Ｘ１７はＨｉｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、およびＡａｄからなる群より選択され；
Ｘ１９−Ｘ２０はＳｅｒ−Ｓｅｒであるかまたは存在せず；
Ｘ３５はＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｏｒｎ、Ａａｄ、Ｇｌｙ、およびＴｈｒからなる群より選択され；かつ
Ｘ３７はＰｒｏおよびＨｙｐからなる群より選択される。
ここで、前記化合物は以下：
ＧｌｎであるＸ３；
ＨｉｓまたはＡａｄであるＸ１４；
Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、またはＡａｄであるＸ１７；および
Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、Ｏｒｎ、Ａａｄ、Ｇｌｙ、またはＴｈｒであるＸ３５
から選択される少なくとも１個の残基を有する。
式ＩＩの態様によっては、Ｘ１７はＨｉｓおよびＧｌｎから選択されてもよい。
Ｚは式ＩＩＩのアミノ酸配列であってもよい。
【００２２】
【化３】
0006769984.tif 000004
式中、
Ｘ３はＡｓｎ、Ｇｌｙ、およびＧｌｎからなる群より選択され；
Ｘ１０はＧｌｎ、Ａｓｐ、およびＧｌｕからなる群より選択され；
Ｘ１４はＡｓｐ、Ｈｉｓ、およびＡａｄからなる群より選択され；
Ｘ１７はＨｉｓおよびＧｌｎからなる群より選択され；
Ｘ１９−Ｘ２０はＳｅｒ−Ｓｅｒであるかまたは存在せず；
Ｘ３５はＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａａｄ、およびＧｌｙからなる群より選択され；かつ
Ｘ３７はＰｒｏおよびＨｙｐからなる群より選択される。
ここで、前記化合物は、以下：
ＧｌｎであるＸ３；
ＨｉｓまたはＡａｄであるＸ１４；
ＧｌｎであるＸ１７；および
ＡａｄであるＸ３５
から選択される少なくとも１個の残基を有する。
【００２３】
上記の式のいずれかにおいて、
Ｘ１０はＧｌｎおよびＧｌｕから選択され；かつ／または
Ｘ３５はＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、およびＡａｄから選択される（たとえばＸ３５はＡｓｐおよびＡｓｎから選択される）ことが望ましい場合がある。
【００２４】
それに加えて、またはその代わりに、Ｘ３はＡｓｎおよびＧｌｙから選択され、かつ／またはＸ１７はＧｌｎであってもよい。Ｘ１７位のＧｌｎの存在は高い化学的・物理的安定性レベルと関連があると考えられる。
それに加えて、またはその代わりに、Ｘ３５はＡｓｎであり、かつ／またはＸ３７はＨｙｐである。
【００２５】
上記の式の態様によっては、
Ｘ３はＧｌｎであり；
Ｘ１０はＧｌｕおよびＡｓｐから選択され；
Ｘ１４はＨｉｓおよびＡａｄから選択され；
Ｘ３５はＧｌｙおよびＡｓｎから選択され；かつ
Ｘ３７はＰｒｏおよびＨｙｐから選択される。
【００２６】
上記の式のその他の態様では、
Ｘ３はＧｌｙであり；
Ｘ１０はＧｌｕおよびＡｓｐから選択され；
Ｘ１４はＨｉｓおよびＡａｄから選択され；
Ｘ３５はＧｌｙおよびＡｓｎから選択され；かつ
Ｘ３７はＰｒｏおよびＨｙｐから選択される。
【００２７】
記載されたアミリン類似体のいずれかに存在してよい特定の残基の組み合わせは、
Ｇｌｙ３＋Ｇｌｕ１０；
Ａｓｎ３＋Ｇｌｕ１０；
Ｇｌｎ３＋Ｇｌｕ１０；
Ａｓｎ３＋Ｇｌｎ１０；または
Ｇｌｎ３＋Ａｓｐ１０を含む。
【００２８】
態様によっては、Ｘ１４はＨｉｓおよびＡａｄから選択され、かつ／またはＸ１７はＧｌｎである。
【００２９】
たとえば、Ａａｄ１４とＧｌｎ１７の組み合わせは優れた活性を提供すると考えられる。
【００３０】
それに加えて、またはその代わりに、Ｘ１７はＧｌｎであってもよく、Ｘ３１はＧｌｕであってもよく、Ｘ３７はＨｙｐであってもよい。すなわち、前記類似体はＧｌｎ１７＋Ｇｌｕ３１＋Ｈｙｐ３７の組み合わせを含んでよい。
【００３１】
態様によっては、Ｘ１９−Ｘ２０はＳｅｒ−Ｓｅｒである。他の態様では、Ｘ１９−Ｘ２０は存在しない。
【００３２】
化学的安定性のため有利となり得る特定の残基の組み合わせとしては、
ＧｌｙであるＸ３と、ＧｌｕであるＸ１０と、ＨｉｓであるＸ１４；
ＡｓｎおよびＧｌｎから選択されるＸ３と、ＧｌｕであるＸ１０と、ＨｉｓであるＸ１４；
ＧｌｙであるＸ３と、ＧｌｕであるＸ１０と、ＡａｄおよびＡｓｐから選択されるＸ１４；
ＡｓｐであるＸ１０とＡａｄであるＸ１４；
ＡａｄおよびＨｉｓから選択されるＸ１４と、ＧｌｕであるＸ３１と、ＰｒｏおよびＨｙｐから選択されるＸ３７；ならびに
ＡａｄであるＸ１４と、ＧｌｕであるＸ３１と、ＨｙｐであるＸ３７
が挙げられる。
【００３３】
これらの組み合わせのうち、以下のものは追加として（または代替として）活性に対して有利な作用をもつ：
ＧｌｙであるＸ３と、ＧｌｕであるＸ１０と、ＡａｄおよびＡｓｐから選択されるＸ１４；
ＡａｄおよびＨｉｓから選択されるＸ１４と、ＧｌｕであるＸ３１と、ＰｒｏおよびＨｙｐから選択されるＸ３７；
ＡａｄであるＸ１４と、ＧｌｕであるＸ３１と、ＨｙｐであるＸ３７。
【００３４】
たとえば、前記化合物は以下の残基を含んでもよい：
Ｇｌｙ３＋Ｇｌｕ１０＋Ｈｉｓ１４；
Ａｓｎ３＋Ｇｌｕ１０＋Ｈｉｓ１４；
Ｇｌｎ３＋Ｇｌｕ１０＋Ｈｉｓ１４；
Ｇｌｙ３＋Ｇｌｕ１０＋Ａａｄ１４；
Ｇｌｙ３＋Ｇｌｕ１０＋Ａｓｐ１４；
Ａｓｐ１０＋Ａａｄ１４；
Ｈｉｓ１４＋Ｇｌｕ３１＋Ｐｒｏ３７；
Ｈｉｓ１４＋Ｇｌｕ３１＋Ｈｙｐ３７；
Ａａｄ１４＋Ｇｌｕ３１＋Ｐｒｏ３７；または
Ａａｄ１４＋Ｇｌｕ３１＋Ｈｙｐ３７。
【００３５】
さらなる望ましい残基の組み合わせとしては、
Ｇｌｙ３＋Ｇｌｕ３１；
Ｇｌｙ３＋Ｓｅｒ１９＋Ｓｅｒ２０＋Ｇｌｕ３１；
Ｇｌｙ３＋Ｇｌｕ１０＋Ｇｌｕ３１＋Ａｓｎ３５＋Ｈｙｐ３７；および
Ｇｌｙ３＋Ｇｌｕ１０＋Ｓｅｒ１９＋Ｓｅｒ２０＋Ｇｌｕ３１＋Ａｓｎ３５＋Ｈｙｐ３７が挙げられる。
【００３６】
上記の残基および残基の組み合わせのいずれも、互いに矛盾する場合を除き、組み合わせてよい。
【００３７】
本発明はさらに、以下の式：
Ｒ1−Ｚ−Ｒ2
を有する化合物あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物であるアミリン類似体を提供する。
【００３８】
式中、Ｒ1は水素、Ｃ1-4アシル、ベンゾイル、またはＣ1-4アルキル、あるいは半減期延長部分Ｍであり、ここでＭは必要に応じてリンカー部分Ｌを介してＺに結合されていてもよく；
Ｒ2はＯＨまたはＮＨＲ3であり、ここでＲ3は水素またはＣ1-3アルキルであり；かつ
Ｚは、
【化４】
0006769984.tif 000005
からなる群より選択されるアミノ酸配列である。
【００３９】
したがって、前記アミリン類似体は以下の式：
Ｒ1−Ｚ−Ｒ2
を有する化合物、あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物であってもよい。
【００４０】
式中、Ｒ1は水素、Ｃ1-4アシル、ベンゾイル、またはＣ1-4アルキル、あるいは半減期延長部分Ｍであり、ここでＭは必要に応じてリンカー部分Ｌを介してＺに結合されていてもよく；
Ｒ2はＯＨまたはＮＨＲ3であり、ここでＲ3は水素またはＣ1-3アルキルであり；かつ
Ｚは以下からなる群より選択されるアミノ酸配列である：
【化５−１】
0006769984.tif 000006
【化５−２】
0006769984.tif 000007
【化５−３】
0006769984.tif 000008
【化５−４】
0006769984.tif 000009
【００４１】
態様によっては、Ｒ1はＭまたはＭ−Ｌ−であり、かつ／またはＲ2はＮＨ2である。
【００４２】
本発明の特定のアミリン類似体としては、以下が挙げられる：
【化６−１】
0006769984.tif 000010
【化６−２】
0006769984.tif 000011
【化６−３】
0006769984.tif 000012
【化６−４】
0006769984.tif 000013
【化６−５】
0006769984.tif 000014
【化６−６】
0006769984.tif 000015
【化６−７】
0006769984.tif 000016
（ここで、［１９ＣＤ］は［１９−カルボキシノナデカノイル］を示す）；ならびに
その医薬的に許容される塩または溶媒和物。
【００４３】
上記の配列または化合物のいずれも、アミノ酸配列の２位および７位（Ｎ末端からＣ末端に向かって番号付けされており、ヒトアミリンの２位および７位に存在するシステイン残基に対応する）に存在するシステイン残基の間に形成された分子内ジスルフィド架橋を有してよい。一般に、化合物は患者への投与時にはこのようなジスルフィド架橋を有することが好ましい場合があるが、当然ながら、本発明はジスルフィド形成前の特定されたアミノ酸配列を有する化合物も包含する。配列中の関連する各システイン残基の後の括弧「（）」によってジスルフィドの存在を示す場合がある。したがって、上記の一般式および特定の式はすべてこの可能性を含むものとする。したがって、たとえば式Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩは以下のように表すことができる。
【化７】
0006769984.tif 000017
【００４４】
一方、上で列挙した特定の化合物は以下のように命名できる：
【化８−１】
0006769984.tif 000018
【化８−２】
0006769984.tif 000019
【化８−３】
0006769984.tif 000020
【化８−４】
0006769984.tif 000021
【化８−５】
0006769984.tif 000022
【化８−６】
0006769984.tif 000023
【化８−７】
0006769984.tif 000024
【化８−８】
0006769984.tif 000025
（ここで、［１９ＣＤ］は［１９−カルボキシノナデカノイル］を表す）；ならびに
その医薬的に許容される塩および溶媒和物。
【００４５】
特定の態様では、本発明のアミリン類似体は以下の式：
Ｒ1−Ｚ−Ｒ2
を有する化合物あるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物ではない。
【００４６】
式中、Ｒ1は水素、Ｃ1-4アシル、ベンゾイル、またはＣ1-4アルキル、あるいは半減期延長部分Ｍであり、ここでＭは必要に応じてリンカー部分Ｌを介してＺに結合されていてもよく；
Ｒ2はＯＨまたはＮＨＲ3であり、ここでＲ3は水素またはＣ1-3アルキルであり；かつ
Ｚは、以下からなる群より選択されるアミノ酸配列である：
【化９】
0006769984.tif 000026
【００４７】
たとえば、このような態様では、前記化合物は以下の化合物：
【化１０】
0006769984.tif 000027
（ここで、［１９ＣＤ］は［１９−カルボキシノナデカノイル］を示す）
ではなく、その医薬的に許容される塩および溶媒和物でもなく、
アミノ酸配列の２位および７位に存在するシステイン残基の間に形成された分子内ジスルフィド架橋を含む任意のこのような化合物でもない。
【００４８】
本発明はさらに、上記のアミリン類似体を含有する組成物を提供する。この組成物は医薬組成物であってよく、医薬的に許容される担体、賦形剤、または溶媒（ｖｅｈｉｃｌｅ）を含有してよい。
【００４９】
本発明はさらに、上記のアミリン類似体の合成方法を提供する。この方法は、固相法または液相法でペプチドを合成する工程と、必要に応じて最終産物を単離および／または精製する工程を含んでよい。この方法は、２位および７位のシステイン側鎖のチオール基の間にジスルフィド結合を形成する工程をさらに含んでよい。
【００５０】
本発明は、医学的処置方法で使用するための本発明のアミリン類似体をさらに提供する。
【００５１】
前記アミリン類似体は、食物摂取量の低減、体重減少の促進、および体重増加の阻害または低減に特に有用である。その結果、このようなアミリン類似体を患者の様々な状態、疾患、または障害の治療に使用できる。状態、疾患、または障害の例としては、肥満症や様々な肥満症関連の状態、疾患、または障害、たとえば、糖尿病（たとえば２型糖尿病）、高血圧症、脂質代謝異常、睡眠時無呼吸、および心血管疾患が挙げられるが、これらに限定されるものではない。患者は、糖尿病（たとえば２型糖尿病）、高血圧症、脂質代謝異常、睡眠時無呼吸、および心血管疾患などの少なくとも１つの体重関連の合併症を伴う肥満症の患者であってよい。したがって、当然ながら、このアミリン類似体は食欲制御不良またはそれ以外の過剰摂取を特徴とする状態（過食性障害およびプラダー・ウィリー症候群など）を有する対象に投与できる。この類似体は記載された状態の組み合わせの治療にも使用できることが明らかである。
【００５２】
したがって、本発明は、体重増加を治療、阻害、または低減し、体重減少を促進し、かつ／または過体重を低減する方法で使用するための本発明のアミリン類似体を提供する。治療は、たとえば食欲、摂食、食物摂取量、カロリー摂取量、および／またはエネルギー消費量の制御によって達成されてよい。
【００５３】
本発明はさらに、肥満症ならびにそれに関連する疾患、障害、および健康状態を治療する方法で使用するための本発明のアミリン類似体を提供する。このような疾患、障害、および健康状態の例としては、病的肥満、術前肥満、肥満に関連する炎症、肥満に関連する胆嚢疾患、肥満による睡眠時無呼吸および呼吸器の問題、軟骨変性、変形性関節症、肥満症または過体重の生殖器合併症（不妊症など）などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。患者は、糖尿病（たとえば２型糖尿病）、高血圧症、脂質代謝異常、睡眠時無呼吸、および心血管疾患などの少なくとも１つの体重関連の合併症を伴う肥満症の患者であってよい。
【００５４】
本発明はさらに、アルツハイマー病、糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、前糖尿病、インスリン抵抗症候群、耐糖能異常（ＩＧＴ）、血糖値上昇に関連する病状、メタボリック症候群などの代謝性疾患、高血糖症、高血圧症、アテローム性脂質代謝異常、肝脂肪症（「脂肪肝」；非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を含み、ＮＡＦＬＤは非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含む）、腎不全、動脈硬化症（たとえばアテローム性動脈硬化症）、大血管疾患、微小血管疾患、糖尿病性心臓（糖尿病性心筋症、糖尿病の合併症としての心不全など）、冠動脈性心疾患、末梢動脈性疾患、または脳卒中、あるいはそれらの組み合わせを予防または治療する方法で使用するための本発明のアミリン類似体を提供する。
【００５５】
本発明はさらに、循環ＬＤＬ濃度を減少し、かつ／またはＨＤＬ／ＬＤＬ比を増加する方法で使用するための本発明のアミリン類似体を提供する。
【００５６】
これらの状態に対するアミリン類似体の効果は、体重に対する効果と全体的または部分的に関連していてもよいし、それとは独立していてもよい。
【００５７】
本発明はさらに、体重増加を治療、阻害、または低減し、体重減少を促進し、かつ／または過体重を低減する薬剤の製造での本発明のアミリン類似体の使用を提供する。
【００５８】
本発明はさらに、肥満症ならびにそれに関連する疾患、障害、および健康状態を治療する薬剤の製造での本発明のアミリン類似体の使用を提供する。このような疾患、障害、および健康状態の例としては、病的肥満、術前肥満、肥満に関連する炎症、肥満に関連する胆嚢疾患、肥満による睡眠時無呼吸および呼吸器の問題、軟骨変性、変形性関節症、肥満症または過体重の生殖器合併症（不妊症など）などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。患者は、糖尿病（たとえば２型糖尿病）、高血圧症、脂質代謝異常、睡眠時無呼吸、および心血管疾患などの少なくとも１つの体重関連の合併症を伴う肥満症の患者であってよい。
【００５９】
本発明はさらに、アルツハイマー病、糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、前糖尿病、インスリン抵抗症候群、耐糖能異常（ＩＧＴ）、血糖値上昇に関連する病状、メタボリック症候群などの代謝性疾患、高血糖症、高血圧症、アテローム性脂質代謝異常、肝脂肪症（「脂肪肝」；非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を含み、ＮＡＦＬＤは非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含む）、腎不全、動脈硬化症（たとえばアテローム性動脈硬化症）、大血管疾患、微小血管疾患、糖尿病性心臓（糖尿病性心筋症、糖尿病の合併症としての心不全など）、冠動脈性心疾患、末梢動脈性疾患、または脳卒中、あるいはそれらの組み合わせを予防または治療する薬剤の製造での本発明のアミリン類似体の使用を提供する。
【００６０】
本発明はさらに、循環ＬＤＬ濃度を減少し、かつ／またはＨＤＬ／ＬＤＬ比を増加する薬剤の製造での本発明のアミリン類似体の使用を提供する。
【００６１】
本発明はさらに、治療上有効な量の本発明のアミリン類似体を患者に投与することを含む、患者の体重増加を治療、阻害、または低減し、体重減少を促進し、かつ／または過体重を低減する方法を提供する。
【００６２】
本発明はさらに、治療上有効な量の本発明のアミリン類似体を患者に投与することを含む、肥満症ならびにそれに関連する疾患、障害、および健康状態を治療する方法を提供する。このような疾患、障害、および健康状態の例としては、病的肥満、術前肥満、肥満に関連する炎症、肥満に関連する胆嚢疾患、肥満による睡眠時無呼吸および呼吸器の問題、軟骨変性、変形性関節症、肥満症または過体重の生殖器合併症（不妊症など）などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。患者は、糖尿病（たとえば２型糖尿病）、高血圧症、脂質代謝異常、睡眠時無呼吸、および心血管疾患などの少なくとも１つの体重関連の合併症を伴う肥満症の患者であってよい。
【００６３】
本発明はさらに、治療上有効な量の本発明のアミリン類似体を患者に投与することを含む、患者のアルツハイマー病、糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、前糖尿病、インスリン抵抗症候群、耐糖能異常（ＩＧＴ）、血糖値上昇に関連する病状、メタボリック症候群などの代謝性疾患、高血糖症、高血圧症、アテローム性脂質代謝異常、肝脂肪症（「脂肪肝」；非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を含み、ＮＡＦＬＤは非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含む）、腎不全、動脈硬化症（たとえばアテローム性動脈硬化症）、大血管疾患、微小血管疾患、糖尿病性心臓（糖尿病性心筋症、糖尿病の合併症としての心不全など）、冠動脈性心疾患、末梢動脈性疾患、または脳卒中、あるいはそれらの組み合わせを予防または治療する方法を提供する。
【００６４】
本発明はさらに、治療上有効な量の本発明のアミリン類似体を患者に投与することを含む、患者の循環ＬＤＬ濃度を減少し、かつ／またはＨＤＬ／ＬＤＬ比を増加する方法を提供する。
【００６５】
本発明はさらに、美容上（すなわち治療上でない）の体重減少の方法での上記アミリン類似体の使用を提供する。なお、アミリン類似体の治療用途、およびアミリン類似体の投与を含む方法について述べた場合、この組成物の使用および投与も同様に包含すると解釈してよい。
【００６６】
本発明のさらなる側面および態様は、以下の開示内容から明らかである。
【発明を実施するための形態】
【００６７】
発明の詳細な説明
本明細書で特に定義しない限り、本明細書で使用する科学技術用語は当業者が一般に理解する意味を有するものとする。全般的に、本明細書に記載の化学、分子生物学、細胞生物学およびがん生物学、免疫学、微生物学、薬理学、ならびにタンパク質および核酸化学の技術に関連して使用する用語は、当技術分野で周知であり一般に用いられる用語である。
【００６８】
本願に記載するすべての刊行物、特許、および公開特許出願は、参照により本明細書に具体的に援用される。矛盾が生じた場合、具体的な定義も含めて本明細書が優先する。
【００６９】
本明細書全体で、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語またはその変化形（「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」など）は、指定の整数または構成要素、あるいは指定の整数群または構成要素群が包含されることを示すが、その他のいかなる整数または構成要素あるいは整数群または構成要素群も排除するという意味ではない。
【００７０】
文脈で明確に他の指示がない限り、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は複数形も含む。
【００７１】
「を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語は、「含むが、それらに限定されるものではない」という意味で使用され、これらの用語は互換的に用いられる。
【００７２】
「患者」、「対象」、および「個体」という用語は互換的に使用でき、ヒトを指す場合もヒト以外の動物を指す場合もある。対象は一般的に、ヒト、ヒト以外の霊長類（大型類人猿、旧世界ザル、および新世界ザルなど）、家畜動物（たとえばウシ、ブタ）、ペット（たとえばイヌ、ネコ）、齧歯類（たとえばマウスおよびラット）などの哺乳動物である。
【００７３】
本明細書で使用する場合、「医薬的に許容される塩」という用語は、その塩を投与された患者または対象にとって有害でない塩を指すものとする。これは、たとえば酸付加塩および塩基性塩の中から選択された塩であることが好適である。酸付加塩の例としては、塩化物塩、クエン酸塩、および酢酸塩が挙げられる。塩基性塩の例としては、陽イオンがアルカリ金属陽イオン（ナトリウムまたはカリウムイオンなど）、アルカリ土類金属陽イオン（カルシウムまたはマグネシウムイオンなど）、および置換アンモニウムイオン（Ｎ（Ｒ1）（Ｒ2）（Ｒ3）（Ｒ4）+型のイオンなど；ここで、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は独立して、一般には水素、置換されていてもよいＣ1-6アルキル、または置換されていてもよいＣ2-6アルケニルを指す）から選択される塩が挙げられる。関連するＣ1-6アルキル基の例としてはメチル基、エチル基、１−プロピル基、および２−プロピル基が挙げられる。関連する可能性のあるＣ2-6アルケニル基の例としては、エテニル、１−プロペニル、および２−プロペニルが挙げられる。医薬的に許容される塩のその他の例は、“Remington’s Pharmaceutical Sciences”, 17th edition, Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, USA, 1985（およびそのより新しい版）；“Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology”, 3rd edition, James Swarbrick (Ed.), Informa Healthcare USA (Inc.), NY, USA, 2007；およびJ. Pharm. Sci. 66:2(1977)に記載されている。
【００７４】
本発明に関連して、「溶媒和物」という用語は、溶質（この場合、本発明によるペプチドまたはその医薬的に許容される塩）と溶媒との間で形成される既定の化学量論の複合体を指す。本件でいう溶媒は、たとえば水、エタノール、あるいは別の医薬的に許容される（一般には低分子の）有機種（酢酸または乳酸などが挙げられるがこれらに限定されるものではない）であってよい。この溶媒が水である場合、このような溶媒和物を通常、水和物という。
【００７５】
本発明の文脈で使用する「作動薬」という用語は、対象となる受容体型を、一般にはそれと結合する（すなわちリガンドとして）ことによって活性化する物質を指す。
【００７６】
本明細書に記載される本発明の各態様は、単独で解釈してもよく本発明の１つ以上の他の態様と組み合わせて解釈してもよい。
【００７７】
本明細書全体で、天然アミノ酸を完全な名称（たとえば、アラニン、アルギニンなど）で記載しない限り、それらの従来の３文字または１文字の略称（たとえば、アラニンの場合はＡｌａまたはＡ、アルギニンの場合はＡｒｇまたはＲなど）で記載する。あまり一般的でないか非天然の特定のアミノ酸（すなわち、標準の哺乳動物の遺伝コードによってコードされる２０個のアミノ酸以外のアミノ酸）の場合、完全な名称（たとえば、サルコシン、オルニチンなど）で記載されない限り、それらの残基については、よく使用される３文字または４文字の記号を用いる（Ｏｒｎ（オルニチンすなわち２，５−ジアミノペンタン酸）、Ａｉｂ（αアミノイソ酪酸）、Ｄａｂ（２，４−ジアミノブタン酸）、Ｄａｐ（２，３−ジアミノプロパン酸）、Ｈａｒ（ホモアルギニン）、γ−Ｇｌｕ（γグルタミン酸）、Ｇａｂａ（γアミノブタン酸）、β−Ａｌａ（すなわち３−アミノプロパン酸）、８Ａｄｏ（８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸）など）。
【００７８】
特に示さない限り、対象となるアミノ酸のＬ異性体を記載する。
さらなる略語としては以下が挙げられる。
Ｇｌｙ（Ｍｅ）：Ｎ−メチルグリシン（サルコシン（Ｓａｒ）ともいう）
Ｉｌｅ（Ｍｅ）：Ｎ−メチルイソロイシン
Ａａｄ：２−アミノアジピン酸（たとえば（２Ｓ）−２−アミノアジピン酸（（２Ｓ）−２−アミノヘキサン二酸ともいう）；ホモグルタミン酸ともいう
Ａｐｒ：４−アミノプロリン（たとえば、（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノプロリン）
（（４Ｒ）−４−アミノ−Ｌ−プロリンともいう）
Ｈｙｐ：４−ヒドロキシプロリン（たとえば（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシプロリン）
（（４Ｒ）−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンともいう）
【００７９】
上記の本発明の治療方法またはその他の治療介入方法に関連して本明細書で使用する「治療上有効な量」という用語は、その治療またはその他の治療介入の対象である特定の疾患、障害、または状態の臨床症状を、たとえば確立された臨床エンドポイントまたは他のバイオマーカー（確立されたものまたは実験に基づくもの）により測定した場合に、治癒、改善、緩和または部分的停止に十分な量をいう。治療に適切な量は、治療または予防する徴候とその量を投与する対象に基づき、当業者が経験的に決定してよい。たとえば、当業者は、本明細書に記載の臨床的に関連のある生物活性指標（たとえば、血漿脂質値、血糖値、またはインスリン放出）のうち１つ以上を測定してもよい。当業者は、インビトロまたはインビボの測定によって臨床的に関連する量を決定してよい。他の尺度の例としては、体重増加、体重減少、および血圧の変化が挙げられる。
【００８０】
これらの効果のいずれかまたはすべてを達成するのに十分な量を治療上有効な量と定義する。投与量および投与方法は、最適な有効性が得られるよう調整できる。所与の目的に有効な量は特に、特定の治療または他の治療介入の対象である疾患、障害、または状態の重症度、その患者の体重および全身状態、食事、可能性のある併用投薬、ならびに医学分野の当業者に周知のその他の因子に依存する。本発明のペプチドあるいはその医薬的に許容される塩または溶媒和物のヒトへの投与に最も適した適切な用量サイズおよび投与計画の決定は、本発明によって得た結果から導いてよく、適切に設計した臨床試験で確認してもよい。効果的な用量サイズおよび治療プロトコールは、実験動物への低投与量から開始し、次いで効果を監視しながら用量を増やし、投与計画も系統的に変化させる、従来の手段によって決定できる。所与の対象に最適な用量を決定する際、臨床医は多くの因子を考慮してよく、そのような考慮は当業者に周知である。
【００８１】
本文脈で用いる場合、「治療」という用語およびその文法的変化形（たとえば、「治療する」、「治療した」、「治療される」）は、有益なまたは所望の臨床結果を得るための方法を指す。本発明の目的では、有益なまたは所望の臨床結果としては、検出できるかできないかにかかわらず、症状の緩和、疾患の程度の低減、疾患の状態の安定化（すなわち、悪化しない）、疾患の進行の遅延または減速、疾患の状態の改善または緩和、ならびに寛解（部分寛解・完全寛解にかかわらず）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。「治療」は、治療を受けていない場合に予想される生存期間に比べて生存期間を延長することを意味する場合もある。したがって、治療を必要とする対象（たとえばヒト）は、その疾患または障害に既にかかっている対象であってよい。「治療」という用語は、治療をしない場合に比べて病状または症状（たとえば、体重増加または高血糖症）の重症度の増加を阻害または低減することを含み、関連する疾患、障害、または状態を完全に停止することを必ずしも意味するものではない。
【００８２】
本文脈で用いる場合、「予防」という用語およびその文法的変化形（たとえば、「予防する」、「予防した」、「予防される」）は、ある状態、疾患、または障害の発症を阻害または防止するか、その病状を変化させるための方法を指す。したがって、「予防」は予防または防止のための処置を指す場合がある。本発明の目的では、有益なまたは所望の臨床結果としては、検出できるかできないかにかかわらず、疾患の症状、進行、または発症の予防または減速が挙げられるが、これらに限定されるものではない。したがって、「予防」を必要とする対象（たとえばヒト）は、その疾患または障害にまだかかっていない対象であってよい。このように、「予防」という用語は、治療をしない場合に比べて疾患の発症を阻害または減速することを含み、関連する疾患、障害、または状態を永久に予防することを必ずしも意味するものではない。
【００８３】
（アミリン類似体の合成）
本発明は、本発明のアミリン類似体の合成方法をさらに提供する。アミリン類似体（化合物またはペプチドともいう）は、標準の合成方法で適切に製造できる。したがって、ペプチドは、たとえば標準の固相法または液相法でペプチドを合成する（段階的でもフラグメントアセンブリ法でもよい）ことと、必要に応じて最終ペプチド産物を単離・精製することを含む方法によって合成できる。これに関しては、国際公開第９８／１１１２５号パンフレット、または特にFields, G.B. et al., “Principles and Practice of Solid-Phase Peptide Synthesis”, Synthetic Peptides, Gregory A. Grant (ed.), Oxford University Press (2nd edition, 2002)、および本明細書の合成例を参照してよい。この方法は、２位および７位のシステイン側鎖のチオール基の間にジスルフィド結合を形成する（たとえば酸化による環化によって）工程をさらに含んでもよい。固相合成の場合、環化は固相（たとえば樹脂）上でそのまま（すなわち固相からペプチドを除去する前に）行ってよい。
【００８４】
（Ｃ1-4アシル基）
本発明の化合物に関連してＲ1基として存在してよいＣ1-4アシル基としては、ホルミル基（すなわちメタノイル基）、アセチル基（すなわちエタノイル基）、プロパノイル基、１−ブタノイル基、および２−メチルプロパノイル基が挙げられる。
【００８５】
（Ｃ1-4アルキル基）
本発明の化合物に関連してＲ1基として存在してよいＣ1-4アルキル基としては、メチル、エチル、１−プロピル、または２−プロピルなどのＣ1-3アルキル基が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００８６】
（Ｃ1-3アルキル基）
本発明の化合物に関連してＲ3基として存在してよいＣ1-3アルキル基としては、メチル、エチル、１−プロピル、および２−プロピルが挙げられる。
【００８７】
（半減期延長部分Ｍ）
本明細書に記載の本発明の化合物のＮ末端部分Ｒ1は、必要に応じてリンカー部分Ｌを介してペプチド部分Ｚに結合（共有結合）されていてもよい半減期延長部分（文献では特に持続時間延長部分またはアルブミン結合部分と呼ぶ場合もある）であってよい。好適な半減期延長部分としては、特定の型の親油性置換基が含まれる。いかなる特定の理論にも拘束されることを意図するものではないが、このような親油性置換基（および他の種類の半減期延長部分）は血流中でアルブミンに結合して腎濾過および酵素分解から本発明の化合物を遮蔽することにより、おそらくインビボでの化合物の半減期を延長すると考えられる。この親油性置換基は、アミリン（カルシトニン）受容体に対する作動薬としての化合物の効力を調節することもできる。
【００８８】
親油性置換基は、エステル、スルホニルエステル、チオエステル、アミド、アミン、またはスルホンアミドを介してＮ末端アミノ酸残基またはリンカーＬに結合していてもよい。したがって、当然ながら、親油性置換基は、エステル、スルホニルエステル、チオエステル、アミド、アミン、またはスルホンアミドの一部を形成するアシル基、スルホニル基、Ｎ原子、Ｏ原子、またはＳ原子を含むことが好ましい。親油性置換基に含まれるアシル基は、アミノ酸残基またはリンカーと共にアミドまたはエステルの一部を形成することが好ましい。
【００８９】
親油性置換基は、１０〜２４個のＣ原子、たとえば１４〜２２個のＣ原子（たとえば１６〜２０個のＣ原子）を有する炭化水素鎖を含んでよい。親油性置換基は少なくとも１４個のＣ原子を有することが好ましく、２０個以下のＣ原子を有することが好ましい。たとえば、炭化水素鎖は、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、または２０個の炭素原子を含んでよい。炭化水素鎖は直鎖状でも分岐鎖状でもよく、飽和でも不飽和であってもよい。さらに、親油性置換基は親油性鎖の末端に、たとえばカルボン酸基（合成時に保護されていてもいなくてもよい）などの官能基を含むことができる。以上の記載から、炭化水素鎖はペプチド部分ＺのＮ末端アミノ酸残基またはリンカーＬへの結合の一部を形成する部分（たとえば、アシル基、スルホニル基、Ｎ原子、Ｏ原子、またはＳ原子）で置換されていることが好ましいことがわかる。
【００９０】
炭化水素鎖はアシル基で置換されていることが最も好ましく、したがって、この炭化水素鎖はアルカノイル基（たとえば、ドデカノイル基、２−ブチルオクタノイル基、テトラデカノイル基、ヘキサデカノイル基、ヘプタデカノイル基、オクタデカノイル基、ノナデカノイル基、またはエイコサノイル基）の一部であってもよい。官能基置換された炭化水素鎖の例は、１５−カルボキシ−ペンタデカノイル、１７−カルボキシ−ヘプタデカノイル、および１９−カルボキシ−ノナデカノイルである。
【００９１】
上記のように、親油性置換基ＭはリンカーＬを介してＺのＮ末端アミノ酸残基に結合されていてもよい。態様では、リンカー部分Ｌは、それ自体が１個、２個、３個、またはそれ以上の結合した副部分（ｓｕｂ−ｍｏｉｅｔｙ）Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3などを含んでもよい。リンカーＬがこのような部分を１個のみ含む場合、それは親油性置換基とＺのＮ末端アミノ酸残基に結合する。その場合、リンカーは、エステル結合、スルホニルエステル結合、チオエステル結合、アミド結合、アミン結合、またはスルホンアミド結合によって、独立して親油性置換基とＺのＮ末端アミノ酸残基に結合してよい。したがって、リンカーは、アシル、スルホニル、Ｎ原子、Ｏ原子、およびＳ原子から独立して選択される２個の部分を含んでよい。リンカーは、直鎖状または分岐鎖状のＣ1-10炭化水素鎖で構成されてよく、あるいは、直鎖状のＣ1-5炭化水素鎖で構成されるのがより好ましい。さらに、リンカーは、Ｃ1-6アルキル、アミノ（Ｃ1-6アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ1-6アルキル）、およびカルボキシ（Ｃ1-6アルキル）から選択される１個以上の置換基で置換されてもよい。
【００９２】
態様によっては、リンカーは、たとえば、任意の天然または非天然アミノ酸の残基であってもよい。たとえば、リンカーは、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、α−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ、ε−Ｌｙｓ、Ａｓｐ、β−Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇａｂａ、Ａｉｂ、β−Ａｌａ（すなわち３−アミノプロパノイル）、４−アミノブタノイル、５−アミノペンタノイル、６−アミノヘキサノイル、７−アミノヘプタノイル、８−アミノオクタノイル、９−アミノノナノイル、１０−アミノデカノイル、または８Ａｄｏ（すなわち、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノイル）の残基であってもよい。
【００９３】
γ−Ｇｌｕ、ε−Ｌｙｓ、およびβ−Ａｓｐと記載した場合、側鎖のカルボキシまたはアミン官能基を介して結合に関与するアミノ酸の残基を指す。したがって、γ−Ｇｌｕおよびβ−Ａｓｐは、そのアミノ基と側鎖カルボキシ基を介して結合に関与し、ε−Ｌｙｓは、そのカルボキシ基と側鎖アミノ基を介して関与する。
【００９４】
特定の態様では、リンカーは、Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ、ε−Ｌｙｓ、β−Ａｌａ、４−アミノブタノイル、８−アミノオクタノイル、または８Ａｄｏの残基である。本発明の文脈では、γ−ＧｌｕとｉｓｏＧｌｕは互換的に使用される。
【００９５】
親油性部分ＭおよびリンカーＬを含む親油性置換基の例を以下の式に示す。
【化１１】
0006769984.tif 000028
【００９６】
ここで、Ａｒｇ残基の主鎖の窒素は、アミド結合によってγ−Ｇｌｕリンカー（Ｌ）に共有結合している。１９−カルボキシ−ノナデカノイル基は、アミド結合によってγ−Ｇｌｕリンカーに共有結合している。Ａｒｇ残基に結合した親油性部分とリンカーのこの組み合わせを「［１９ＣＤ］−ｉｓｏＧｌｕ−Ｒ」という略記で示す場合がある（たとえば、特定の化合物の式中に示す場合）。
【００９７】
当業者は、本発明に関連して使用する化合物を調製するための好適な技術がよく分かっている。好適な化学の例については、たとえば、国際公開第９８／０８８７１号、第００／５５１８４号、および第００／５５１１９号パンフレット、Madsen et al (J. Med. Chem. 2007, 50, 6126-32)、ならびにKnudsen et al. 2000 (J. Med Chem. 43, 1664-1669)を参照のこと。
【００９８】
親油性置換基に含まれる炭化水素鎖はさらに置換されていてもよく、たとえば、ＮＨ2、ＯＨ、およびＣＯＯＨから選択される最大３個の置換基でさらに置換されていてもよい。炭化水素鎖がさらに置換されている場合、１個の置換基のみでさらに置換されていることが好ましい。あるいは、またはさらに、炭化水素鎖は、たとえば以下に示すようなシクロアルカンまたはヘテロシクロアルカン部分を含んでもよい：
【化１２】
0006769984.tif 000029
【００９９】
態様によっては、このシクロアルカンまたはヘテロシクロアルカン部分は６員環（たとえばピペリジン環）である。
【０１００】
本発明の別の態様では、本発明の化合物のＺのＮ末端アミノ酸は、必要に応じてリンカー部分Ｌを介して、ビオチニル置換基に結合（共有結合）されていてもよい。いかなる特定の理論にも拘束されることを意図するものではないが、このようなビオチニル置換基は血流中でアルブミンに結合して酵素分解から本発明の化合物を遮蔽することにより、おそらくインビボでの化合物の半減期を延長すると考えられる。リンカーは、存在する場合、ペプチド部分Ｚとビオチニル置換基の間に空間をもたらすことができる。
【０１０１】
ビオチニル置換基は、マレイミドエステル結合、スルホニルエステル結合、チオエステル結合、アミド結合、アミン結合、またはスルホンアミド結合を介してＮ末端アミノ酸残基またはリンカーに結合されてもよい。したがって、当然ながら、ビオチニル置換基は、そのエステル、スルホニルエステル、チオエステル、アミド、アミン、またはスルホンアミド結合の一部を形成する、マレイミド基、アシル基、スルホニル基、Ｎ原子、Ｏ原子、またはＳ原子を含むことが好ましい。
ビオチニル置換基の例としては、
【化１３】
0006769984.tif 000030
が挙げられる。
【０１０２】
ビオチンはビタミンＨまたは補酵素Ｒと呼ばれ、水溶性のビタミンＢ複合体（ビタミンＢ７）で、特定の薬物の経口摂取量を増加することが示されている。
【０１０３】
（化合物の有効性）
本発明の化合物はアミリン受容体作動薬であり、すなわち、ヒトアミリンの生理学的受容体とされる１個以上の受容体または受容体複合体に結合してシグナル伝達を誘導することができる。この受容体または受容体複合体としては、ヒトカルシトニン受容体ｈＣＴＲ２、さらにはヒトカルシトニン受容体ｈＣＴＲ２と、ｈＲＡＭＰ１、ｈＲＡＭＰ２、ｈＲＡＭＰ３と呼ばれるヒト受容体活性修飾タンパク質のうち少なくとも１個を含む複合体が挙げられる。ｈＣＴＲ２とｈＲＡＭＰ１、ｈＲＡＭＰ２、およびｈＲＡＭＰ３との複合体は、それぞれｈＡＭＹＲ１、ｈＡＭＹＲ２、およびｈＡＭＹＲ３（すなわち、ヒトアミリン受容体１、２、および３）と呼ばれる。
【０１０４】
理論に拘束されることを意図するものではないが、化合物がｈＡＭＹＲ１、ｈＡＭＹＲ２、およびｈＡＭＹＲ３のうち１個以上に対して（たとえば、ｈＡＭＹＲ１および／またはｈＡＭＹＲ３に対して（たとえばｈＡＭＹＲ３に対して））作動薬活性を有する場合、その化合物をアミリン受容体作動薬と考えることができる。
【０１０５】
一般には、アミリン受容体作動薬は、ｈＲＡＭＰ１、ｈＲＡＭＰ２、およびｈＲＡＭＰ３の非存在下で発現した場合、ｈＣＴＲ２にも作動薬活性を有する。一般には、この作動薬は、同等の試験で、ｈＣＴＲ２（ｈＲＡＭＰ１、ｈＲＡＭＰ２、およびｈＲＡＭＰ３の非存在下で発現した場合）に対し、ｈＡＭＹＲ１、ｈＡＭＹＲ２、およびｈＡＭＹＲ３のいずれか１つに対する活性（すなわち、上記受容体全体に対する活性）の１０倍未満の活性を有する。ｈＣＴＲ２への作動薬活性は、ｈＡＭＹＲ１、ｈＡＭＹＲ２、およびｈＡＭＹＲ３への作動薬活性の５倍未満であるか、ｈＡＭＹＲ１、ｈＡＭＹＲ２、およびｈＡＭＹＲ３への作動薬活性と実質的に同等（たとえば、±１０％）であるか、ｈＡＭＹＲ１、ｈＡＭＹＲ２、およびｈＡＭＹＲ３への作動薬活性よりも低くてよい。これに関して、ｈＣＴＲ２とｈＡＭＹＲ３の間で活性を比較するだけで十分だと考えられる。
【０１０６】
関連する受容体または受容体複合体に結合した結果としてｃＡＭＰ形成を誘導する（すなわち、アデニル酸シクラーゼ活性を誘導する）能力は、一般に作動薬活性の指標と考えられる。他の細胞内シグナル伝達経路または事象もアミリン受容体作動薬活性の測定値として使用できる。これらの例としては、カルシウムの放出、βアレスチンの動員、受容体の内部移行、キナーゼの活性化または不活性化、リパーゼの活性化、イノシトールリン酸の放出、ジアシルグリセロールの放出、または核内転写因子の移行が挙げられる。
【０１０７】
好適な同等試験形式では、ｈＣＴＲ２を発現し、ｈＲＡＭＰ１、ｈＲＡＭＰ２、およびｈＲＡＭＰ３の発現のみが異なる細胞を用いる。たとえば、ｈＣＴＲ２、ｈＲＡＭＰ１、ｈＲＡＭＰ２、およびｈＲＡＭＰ３のいずれも発現しない「基本」細胞株を操作して、（ｉ）ｈＣＴＲ２を発現する細胞と（ｉｉ）ｈＡＭＹＲ１、ｈＡＭＹＲ２、およびｈＡＭＹＲ３の１つ（すなわち、ｈＣＴＲ２に加えてｈＲＡＭＰ１、ｈＲＡＭＰ２、およびｈＲＡＭＰ３の１つ；たとえばｈＡＭＹＲ３）を発現する細胞を作製してよい。基本細胞は、一般には哺乳動物細胞であり、霊長類細胞であってよい。それらは、ヒト以外の霊長類の細胞であってよい。基本細胞は、ＣＴＲ２、ＲＡＭＰ１、ＲＡＭＰ２、またはＲＡＭＰ３のいずれも発現しない（ヒト由来のものでも、基本細胞がヒト以外の細胞である場合にはその基本細胞本来のものでも）ことが好ましい。基本細胞は線維芽細胞であってもよい。好適なヒト以外の線維芽由来の基本細胞としては、天然のＣＴＲ２もＲＡＭＰも発現しないアフリカミドリザル由来のＣＯＳ７細胞が挙げられる。
【０１０８】
比較した場合の活性は、以下に記載するＥＣ50値の決定などの任意の好適な手段によって測定できる。当然ながら、両方の受容体型に対して同じ生物学的測定値でなければならない。
【０１０９】
本発明の化合物は、ヒトアミリンや既存のヒトアミリン類似体（プラムリンチド、ＩＡＰＰ−ＧＩ、ならびに国際公開第２０１２／１６８４３０号、第２０１２／１６８４３１号、および第２０１２／１６８４３２号パンフレットに記載の類似体など）に比べて多くの有利な性質を示す可能性がある。ヒトアミリンまたはそれらの類似体のいずれかと比較して、本発明の化合物は、たとえば改善された有効性（受容体ｈＣＴＲ２、ｈＡＭＹＲ１、ｈＡＭＹＲ２、またはｈＡＭＹＲ３のうち１個以上に対する改善されたインビトロ活性または効力という形で）を示す可能性がある。それに加えて、またはその代わりに、本発明の化合物は、特にｐＨ値が４〜７．５の範囲、またはこの範囲に含まれるｐＨ値の範囲の水性媒体への改善された溶解性を示す可能性がある。それに加えて、またはその代わりに、本発明の化合物は、特にｐＨ値４〜７の範囲、またはこの範囲に含まれるｐＨ値の範囲の医薬的に適切な水性媒体中で細線維化傾向が低下する可能性がある。それに加えて、またはその代わりに、本発明の化合物は、特にｐＨ値が４〜９の範囲、またはこの範囲に含まれるｐＨ値の範囲の水性媒体での改善された化学的安定性（すなわち、化学分解傾向の低下）を示す可能性がある。
【０１１０】
したがって、本発明の化合物は、酸性（たとえばｐＨ値が４）の媒体および中性かほぼ中性（たとえばｐＨ値が７または７．４）の媒体での製剤に十分に適している。したがって、たとえば中性のｐＨ値の医薬的に適切な水性媒体では一般に低い化学的安定性と急速な細線維化を示すプラムリンチドとは対照的に、本発明の化合物は、たとえばインスリン、様々なインスリン類似体、および／または中性かほぼ中性の製剤ｐＨ値を必要とするその他の治療（たとえば抗糖尿病または抗肥満）薬との同時製剤に十分に適合できる。
【０１１１】
一般に、上記のように、関連受容体への化合物の結合によって起こる細胞内シグナル伝達を測定する生物学的試験を使用するのが好ましい。本発明の化合物（受容体の作動薬として作用する）によるカルシトニン／アミリン受容体の活性化は、ｃＡＭＰ形成と他の細胞内シグナル伝達経路および事象の活性化を誘導する。したがって、受容体を発現する好適な細胞でのｃＡＭＰ産生または他の任意の好適なパラメータを用いて受容体への作動薬活性を監視できる。
【０１１２】
当業者は好適な試験形式をよく知っているが、以下にその例を示す。たとえば、試験は、一次登録番号ＧＩ：４５０２５４７（ＮＰ＿００１７３３．１）のヒトカルシトニン受容体（ｈＣＴＲ２）、またはｈＡＭＹＲ３受容体（後述の実施例２を参照のこと）を利用してもよい。なお、前駆体タンパク質の配列が記載されている場合も、試験はシグナル配列のない成熟タンパク質を利用してよい。
【０１１３】
ＥＣ50値は、ある受容体での作動薬の効力の数値的尺度として使用できる。ＥＣ50値は、ある特定の試験で化合物の最大活性の半分を達成するのに必要なその化合物の濃度の測定値である。したがって、たとえばある特定の試験で、天然アミリンまたはプラムリンチドのＥＣ50［ｈＣＴＲ２］より低いＥＣ50［ｈＣＴＲ２］を有する化合物は、その受容体に対しアミリンまたはプラムリンチドよりも高い効力または活性をそれぞれ有すると考えられる。
【０１１４】
本発明の化合物の態様によっては、ｈＣＴＲ２に対するＥＣ50値は１．４ｎＭ未満である。
【０１１５】
本発明の化合物の態様によっては、ｈＣＴＲ２に対するＥＣ50値は０．８ｎＭ未満である。
【０１１６】
本発明の化合物の態様によっては、ｈＣＴＲ２に対するＥＣ50値は０．４ｎＭ未満である。
【０１１７】
本発明の化合物の態様によっては、ｈＣＴＲ２に対するＥＣ50値は０．２ｎＭ未満である。
【０１１８】
本発明の化合物の態様によっては、ｈＣＴＲ２に対するＥＣ50値は０．１ｎＭ未満である。
【０１１９】
ｈＣＴＲ２に対するＥＣ50値は約０．２（±１０％）以下であることが好適であり得る。ｈＣＴＲ２に対するＥＣ50値は、食物摂取量、体重増加、および／または体重減少に対する化合物の効果の指標となることができる。ｈＣＴＲ２に対するＥＣ50値がより低い化合物は、これらのパラメータに対してより高い効果を有する可能性がある。
本発明の化合物の態様によっては、ｈＡＭＹＲ３に対するＥＣ50値は１ｎＭ未満である。
【０１２０】
本発明の化合物の態様によっては、ｈＡＭＹＲ３に対するＥＣ50値は０．５ｎＭ未満である。
【０１２１】
本発明の化合物の態様によっては、ｈＡＭＹＲ３に対するＥＣ50値は０．４ｎＭ未満である。
【０１２２】
本発明の化合物の態様によっては、ｈＡＭＹＲ３に対するＥＣ50値は０．３ｎＭ未満である。
【０１２３】
本発明の化合物の態様によっては、ｈＡＭＹＲ３に対するＥＣ50値は０．２ｎＭ未満である。
【０１２４】
たとえば、ｈＣＴＲ２に対するＥＣ50値（ｈＲＡＭＰ１、ｈＲＡＭＰ２、およびｈＲＡＭＰ３の非存在下で発現した場合）は、ｈＡＭＹＲ１、ｈＡＭＹＲ２、およびｈＡＭＹＲ３のいずれかまたはすべて（たとえばｈＡＭＹＲ３）に対するＥＣ50値の１０分の１未満であってよい。
【０１２５】
ｈＣＴＲ２に対するＥＣ50値（ｈＲＡＭＰ１、ｈＲＡＭＰ２、およびｈＲＡＭＰ３の非存在下で発現した場合）は、ｈＡＭＹＲ１、ｈＡＭＹＲ２、およびｈＡＭＹＲ３のいずれかまたはすべて（たとえばｈＡＭＹＲ３）に対するＥＣ50値の５分の１未満であってよい。
【０１２６】
ｈＣＴＲ２に対するＥＣ50値（ｈＲＡＭＰ１、ｈＲＡＭＰ２、およびｈＲＡＭＰ３の非存在下で発現した場合）は、ｈＡＭＹＲ１、ｈＡＭＹＲ２、およびｈＡＭＹＲ３のいずれかまたはすべて（たとえばｈＡＭＹＲ３）に対するＥＣ50値と実質的に同等（たとえば±５０％）であってよい。
【０１２７】
ｈＣＴＲ２に対するＥＣ50値（ｈＲＡＭＰ１、ｈＲＡＭＰ２、およびｈＲＡＭＰ３の非存在下で発現した場合）は、ｈＡＭＹＲ１、ｈＡＭＹＲ２、およびｈＡＭＹＲ３のいずれかまたはすべて（たとえばｈＡＭＹＲ３）に対するＥＣ50値よりも高くてもよい。
このような試験は、実施例２および３に記載の条件で実施してもよい。
【０１２８】
それに加えて、またはその代わりに、本発明の化合物は、優れた溶解性を示す可能性がある。たとえば、本発明の化合物は、たとえば実施例４に記載の条件で、たとえば２５℃で、ｐＨ値が４、５、６、７、および／または７．５のとき、１ｍｇ／ｍｌ以上の溶解度を示す可能性がある。
【０１２９】
それに加えて、またはその代わりに、本発明の化合物は、細線維化への優れた耐性を示す可能性がある。たとえば、本発明の化合物は、たとえば実施例５に記載の条件で、たとえば４０℃で、ｐＨ値が４．０および／または７．０のとき、９６時間後でも検出できるほどの細線維化を示さない可能性がある。
【０１３０】
それに加えて、またはその代わりに、本発明の化合物は、優れた化学的安定性（すなわち溶液中での分解に対する耐性）を示す可能性がある。たとえば、本発明の化合物は、たとえば実施例６に記載の条件で、ｐＨ値を４、７．５、および／または９にして４０℃で７日間保温した後も、少なくとも７０％の純度、少なくとも７５％の純度、少なくとも８０％の純度、少なくとも８５％の純度、少なくとも９０％の純度、または少なくとも９５％の純度を保持する可能性がある。
【０１３１】
（治療用途）
本発明の化合物は、特に食物摂取量の減少、体重減少の促進、および体重増加の阻害または低減に有用である。したがって、本発明の化合物は、特に、肥満症、さらには過体重によって引き起こされるか、過体重を特徴とするか、過体重に関連する代謝性疾患に対する好適な治療選択肢を提供できる。
【０１３２】
したがって、本化合物は、体重増加を治療、阻害、または低減し、体重減少を促進し、食物摂取量を減少し、かつ／または過体重を低減する方法に使用できる。治療は、たとえば食欲、摂食、食物摂取量、カロリー摂取量、および／またはエネルギー消費量の制御によって達成されてよい。
【０１３３】
本化合物は、肥満症ならびにそれに関連する疾患、障害、および健康状態を治療する方法で使用できる。このような疾患、障害、および健康状態の例としては、病的肥満、術前肥満、肥満に関連する炎症、肥満に関連する胆嚢疾患、肥満による睡眠時無呼吸および呼吸器の問題、軟骨変性、変形性関節症、肥満症または過体重の生殖器合併症（不妊症など）などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１３４】
本化合物はさらに、アルツハイマー病、糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、前糖尿病、インスリン抵抗症候群、耐糖能異常（ＩＧＴ）、血糖値上昇に関連する病状、メタボリック症候群などの代謝性疾患、高血糖症、高血圧症、アテローム性脂質代謝異常、肝脂肪症（「脂肪肝」；非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を含み、ＮＡＦＬＤは非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含む）、腎不全、動脈硬化症（たとえばアテローム性動脈硬化症）、大血管疾患、微小血管疾患、糖尿病性心臓（糖尿病性心筋症、糖尿病の合併症としての心不全など）、冠動脈性心疾患、末梢動脈性疾患、または脳卒中を予防または治療する方法で使用できる。
【０１３５】
本化合物はさらに、循環ＬＤＬ濃度を減少し、かつ／またはＨＤＬ／ＬＤＬ比を増加するのに有用である可能性がある。
【０１３６】
本化合物の上記の効果は、体重に対する効果と全体的または部分的に関連していてもよいし、それとは独立していてもよい。
【０１３７】
メタボリック症候群は、一人のヒトが一群の代謝危険因子を有することを特徴とし、腹部肥満（腹部の内臓周辺の過剰な脂肪組織）、アテローム性脂質代謝異常（高トリグリセリド、低ＨＤＬコレステロール、および／または高ＬＤＬコレステロールを含む血中脂肪障害で、動脈壁内のプラーク蓄積を促進する）、血圧上昇（高血圧症）、インスリン抵抗性および耐糖能障害、血栓形成促進性の状態（たとえば、血中のフィブリノーゲンまたはプラスミノーゲン活性化因子阻害因子１が高い状態）、ならびに炎症誘発性の状態（たとえば、血中のＣ反応性タンパク質の上昇）を含む。
【０１３８】
メタボリック症候群を有する個体は、冠動脈性心疾患、さらには動脈硬化症のその他の症状（たとえば、脳卒中および末梢血管疾患）に関連する他の疾患のリスクが高い。この症候群の主要な根本的危険因子は腹部肥満であると考えられる。
【０１３９】
（医薬組成物）
本発明は、アミリン類似体を含む組成物（医薬組成物など）も含む。なお、本発明のすべての側面と同様、アミリン類似体について記載した場合、医薬的に許容される塩および溶媒和物についての記載も含むものとする。
【０１４０】
本発明のアミリン類似体は、投与に適し（貯蔵されてもされなくてもよい）、かつ一般的に治療上有効な量の本発明の少なくとも１個のペプチドを医薬的に許容される担体、賦形剤、または溶媒と共に含む、医薬組成物として製剤できる。
【０１４１】
「医薬的に許容される担体」という用語は、標準的な医薬担体のうちの任意の担体を含む。治療用途のための医薬的に許容される担体は医薬分野で周知であり、たとえば"Remington’s Pharmaceutical Sciences", 17th edition, Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company（米国、ペンシルベニア州、イーストン）（１９８５年）に記載されている。たとえば、弱酸性のｐＨ値または生理学的ｐＨ値の滅菌食塩水およびリン酸緩衝化食塩水を使用できる。好適なｐＨ緩衝剤は、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、重炭酸アンモニウム、ジエタノールアミン、ヒスチジン、アルギニン、リシン、または酢酸塩（たとえば酢酸ナトリウムとして）、あるいはその混合物でもよい。この用語はさらに、米国薬局方に記載されている、ヒトを含む動物で使用するための任意の担体物質をさらに包含する。
【０１４２】
本発明の医薬組成物は、単位剤形であってもよい。このような剤形では、組成物は、適切な量の有効成分を含む単位用量に分割される。単位剤形は、個別量の製剤を含む包装された製剤、たとえば、包装された錠剤、カプセル剤、およびバイアルまたはアンプルに入った散剤として提示されてもよい。この単位剤形はさらに、それ自体がカプセル剤、カシェ剤、または錠剤でもよく、または適切な数のこれらの剤のいずれかを包装した形態であってもよい。この単位剤形はさらに、一回投与量の注射形態で、たとえば、液相（一般には水相）である組成物の入ったペン型装置の形態で提供されてもよい。組成物は、任意の好適な投与経路および投与手段のために製剤できる。医薬的に許容される担体または希釈剤としては、たとえば、経口投与、硝子体内投与、直腸投与、膣投与、経鼻投与、局所投与、経腸投与、または非経口投与（皮下（ｓｃ）投与、筋肉内（ｉｍ）投与、静脈内（ｉｖ）投与、皮内投与、および経皮投与など）あるいは吸入投与に適した製剤に使用されるものが挙げられる。この製剤は、単位剤形で提供できて好都合であり、医薬製剤の技術分野で周知の方法のいずれかによって調製できる。
【０１４３】
場合によっては、皮下投与または経皮投与方式が本発明のペプチドに好適である可能性がある。
【０１４４】
さらなる態様は、本発明の医薬製剤を送達するのに用いられる装置、投与形態、およびパッケージに関する。したがって、本明細書に記載の安定なまたは保存された製剤または溶液に含まれる少なくとも１個のペプチドは、本発明に従って様々な送達方法により患者に投与でき、送達方法の例としては皮下（ｓｃ）または筋肉内（ｉｍ）注射による送達、あるいは経皮投与、経肺投与、または経粘膜投与による送達、または移植による送達、または浸透圧ポンプ、カートリッジ、マイクロポンプ、または当業者が知っているその他の手段による送達が挙げられる。
【０１４５】
さらなる態様は、経口製剤および経口投与に関する。経口投与用の製剤は、腸壁の透過性を人為的に高めるアジュバント（たとえば、レゾルシノールおよび／または非イオン性界面活性剤（ポリオキシエチレンオレイルエーテルおよびｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテルなど））の共投与、および／または酵素分解を阻害する酵素阻害剤（たとえば膵臓トリプシン阻害剤、ジイソプロピルフルオロホスファート（ＤＦＦ）、またはトラジロール）の共投与に依存してもよい。経口投与用の固体剤形の活性成分化合物を、スクロース、ラクトース、セルロース、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、マルチトール、デキストラン、デンプン、寒天、アルギン酸塩、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントゴム、アラビアゴム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成ポリマーまたは半合成ポリマー、あるいはグリセリドなどの少なくとも１種の添加剤と混合してもよい。これらの剤形は、他の種類の添加剤、たとえば、反応不活性な希釈剤、潤滑剤（ステアリン酸マグネシウムなど）、パラベン、保存剤（ソルビン酸、アスコルビン酸、またはαトコフェロールなど）、抗酸化剤（システインなど）、崩壊剤、結合剤、増粘剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、甘味剤、香味剤、または芳香剤を含むこともできる。
【０１４６】
（用量）
本発明に関連して用いられるアミリン類似体の一般的な用量は、１日に体重１ｋｇあたり約０．０００１〜約１００ｍｇの範囲であり（１日に体重１ｋｇあたり約０．０００５〜約５０ｍｇ、１日に体重１ｋｇあたり約０．００１〜約１０ｍｇなど；たとえば、１日に体重１ｋｇあたり約０．０１〜約１ｍｇ）、１回以上（１〜３回の投与など）投与されてよい。使用される正確な用量は、特に、治療する疾患または障害の性質および重症度、治療を受ける対象の性別、年齢、体重、および全身状態、可能性のある、治療中または治療する予定の他の併存疾患または障害、さらには当業者に既知のその他の因子に依存する。
【０１４７】
本発明のアミリン類似体は、当業者が特定の対象に対して選択した所望の用量と医薬組成物に応じて、対象に継続的に投与されてもよい（たとえば、静脈内投与または他の継続的な薬物投与方法によって）し、間隔を空けて（一般には規則的な時間間隔で）投与されてもよい。規則的な投与間隔としては、たとえば、１日１回、１日２回、２日、３日、４日、５日、または６日に１回、週１回または２回、月１回または２回などが挙げられる。たとえば長期の慢性投与中などの特定の状況では、このような規則的なペプチド投与計画を、投薬を受ける対象がその薬物のレベルを下げるか服薬を中止するように、一時期の間中断するのが有利な場合がある（「休薬」と呼ばれることが多い）。休薬は、たとえば、特に長期慢性治療中に薬物に対する感受性を維持または回復するため、あるいはその薬物で対象に長期慢性治療を行うことによる望ましくない副作用を低減するために有用である。休薬のタイミングは規則的な投与計画のタイミングと休薬の目的（たとえば、薬物感受性の回復、および／または継続的な長期投与による望ましくない副作用の低減）に依存する。態様によっては、休薬は薬物の用量の減少（たとえば、特定の時間間隔の間、治療上有効な量よりも少なくする）であってもよい。他の態様では、薬物の投与を、同一または異なる（たとえば、投与量および／または投与頻度を下げるか上げた）投与計画で投与を再開するまで特定の時間間隔の間、停止する。したがって、本発明の休薬は、広範囲の期間および投与計画から選択してよい。例示的な休薬は、２日以上、１週間以上、または１ヶ月以上、最大約２４ヶ月の休薬である。したがって、たとえば、本発明のペプチドを用いた規則的な１日１回の投与計画を、たとえば１週間または２週間または４週間の休薬によって中断し、その後に前述の規則的な投与計画（たとえば、１日１回または週１回の投与計画）を再開してもよい。他の様々な休薬計画も本発明のペプチドの投与に有用であると想定される。
【０１４８】
したがって、各休薬期によって分けられた２回以上の投与期を含む投与計画でペプチドを送達してもよい。
【０１４９】
各投与期の間、ペプチドは、所定の投与パターンに従い、治療上有効な量で対象患者に投与される。投与パターンは、投与期の継続期間にわたる対象患者への薬物の継続投与を含んでよい。あるいは、投与パターンは対象患者への複数回のペプチドの投与を含んでもよく、ここで、前記投与は投与間隔で隔てられる。
【０１５０】
投与パターンは、投与期毎に少なくとも２回の投与、投与期毎に少なくとも５回の投与、投与期毎に少なくとも１０回の投与、投与期毎に少なくとも２０回の投与、投与期毎に少なくとも３０回の投与、またはそれ以上の投与を含んでもよい。
【０１５１】
前記投与間隔は、ペプチドの特定の製剤、生物学的利用能、および薬物動態学的特性に応じて、上記のような規則的な投与間隔（１日１回、１日２回、２日、３日、４日、５日、または６日に１回、週１回または２回、月１回または２回など）であってもよく、あるいは規則的でさらに低頻度の投与間隔であってもよい。
【０１５２】
投与期は、少なくとも２日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、またはそれ以上の継続期間を有してよい。
【０１５３】
投与パターンが複数回の投与を含む場合、可能性のあるその後の休薬期の継続期間は、その投与パターンで用いられる投与間隔よりも長い。投与間隔が不規則な場合、休薬期の継続期間は、投与期中の投与間の平均間隔よりも長くてもよい。あるいは、休薬期の継続期間は、投与期中の連続した投与間の最長間隔より長くてもよい。
【０１５４】
可能性のある休薬期の継続期間は、関連する投与間隔（またはその平均）の少なくとも２倍、関連する投与間隔またはその平均の少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍であってよい。
【０１５５】
これらの制約の範囲内で、休薬期は、前の投与期中の投与パターンに応じ、少なくとも２日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、またはそれ以上の継続期間を有してよい。
【０１５６】
休薬の使用を伴う投与計画は少なくとも２回の投与期を含む。連続する投与期は各休薬期によって分けられる。したがって、投与計画は、それぞれ各休薬期によって分けられた少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも１０回、少なくとも１５回、少なくとも２０回、少なくとも２５回、または少なくとも３０回、またはそれ以上の投与期を含んでよい。
【０１５７】
連続する投与期は同じ投与パターンを利用してもよいが、これは必ずしも望ましくない、または必要ではない可能性がある。しかし、他の薬物または活性薬剤を本発明のペプチドと組み合わせて投与する場合、一般的には薬物または活性薬剤の同じ組み合わせを連続する投与期で与える。特定の態様では、対象患者はヒトである。
【０１５８】
（併用療法）
本発明のアミリン類似体は、対象である疾患または障害を治療するための別の活性薬剤（たとえば、抗糖尿病剤、抗肥満剤、メタボリック症候群の治療剤、抗脂質代謝異常剤、抗高血圧剤、プロトンポンプ阻害剤、または抗炎症剤）との併用療法の一部として投与されてもよい。このような場合、この２種の活性薬剤は共に投与されてもよいし、別々に投与されてもよい（たとえば、同じ医薬組成物または製剤の成分として、あるいは別個の製剤として）。
【０１５９】
したがって、本発明のペプチドは、公知の種類の抗糖尿病剤と組み合わせて投与された場合に何らかの利点を有する可能性がある。抗糖尿病剤としては、メトホルミン、スルホニル尿素、グリニド、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、グリタゾン、ＧＬＰ−１受容体作動薬（ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１類似体；エキセンディン−４またはエキセンディン−４類似体；他の任意のＧＬＰ−１受容体作動薬、たとえばリラグルチド（Saxenda（商標）、Victoza（商標））、デュラグルチド、またはアルビグルチド）；あるいはグルカゴンとＧＬＰ−１に対する二重作動薬（たとえば、国際公開第２００８／１０１０１７号、第２００８／１５２４０３号、第２０１０／０７０２５２号、第２０１０／０７０２５３号、第２０１０／０７０２５５号、第２０１０／０７０２５１号、第２０１１／００６４９７号、第２０１１／１６０６３０号、第２０１１／１６０６３３号、第２０１３／０９２７０３号、および第２０１４／０４１１９５号パンフレットに記載））、ＳＧＬＴ２阻害剤（すなわち、ナトリウム・グルコース輸送の阻害剤；たとえば、エンパグリフロジン、カナグリフロジン、ダパグリフロジン、またはイプラグリフロジンなどのグリフロジン）、ＧＰＲ４０作動薬（ＦＦＡＲ１／ＦＦＡ１作動薬；たとえばファシグリファム）、あるいはインスリンまたはインスリン類似体が挙げられるが、これらに限定されるものではない。適切なインスリン類似体の例としては、Lantus（商標）、Novorapid（商標）、Humalog（商標）、Novomix（商標）、Actraphane（商標）HM、Levemir（商標）、Degludec（商標）、およびApidra（商標）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。本件に関連する他の適切な抗糖尿病剤としては、エキセナチド（エキセンディン−４）（Byetta（商標）、Bydureon（商標）、およびByetta LAR（商標））、リキシセナチド（Lyxumia（商標））、ならびにリラグルチド（Victoza（商標））などのＧＬＰ−１受容体作動薬が挙げられる。
【０１６０】
さらに、本発明のペプチドは、公知の種類の抗肥満剤と併用してもよい。抗肥満剤としては、ペプチドＹＹまたはその類似体、神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）またはその類似体、カンナビノイド受容体１拮抗薬、リパーゼ阻害剤、ヒトプロアイレットペプチド（ＨＩＰ）、メラノコルチン受容体４作動薬、ＧＬＰ−１受容体作動薬（ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１類似体；エキセンディン−４またはエキセンディン−４類似体；他の任意のＧＬＰ−１受容体作動薬、たとえばリラグルチド（Saxenda（商標）、Victoza（商標））、デュラグルチド、またはアルビグルチド）；あるいはグルカゴンとＧＬＰ−１に対する二重作動薬（たとえば、国際公開第２００８／１０１０１７号、第２００８／１５２４０３号、第２０１０／０７０２５２号、第２０１０／０７０２５３号、第２０１０／０７０２５５号、第２０１０／０７０２５１号、第２０１１／００６４９７号、第２０１１／１６０６３０号、第２０１１／１６０６３３号、第２０１３／０９２７０３号、および第２０１４／０４１１９５号パンフレットに記載））、Orlistat（商標）、Sibutramine（商標）、フェンテルミン、メラニン凝集ホルモン受容体１拮抗薬、ＣＣＫ、アミリン、プラムリンチド、およびレプチン、さらにはそれらの類似体が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１６１】
本発明のペプチドはさらに、公知の種類の抗高血圧剤と併用してもよい。抗高血圧剤としては、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、利尿薬、β遮断薬、およびカルシウムチャネル遮断薬が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１６２】
本発明のペプチドはさらに、公知の種類の抗脂質代謝異常剤と併用してもよい。抗脂質代謝異常剤としては、スタチン、フィブラート、ナイアシン、ＰＳＣＫ９（前駆タンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型）阻害剤、およびコレステロール吸収阻害剤が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１６３】
本発明のペプチドはさらに、公知の種類のプロトンポンプ阻害剤（すなわち、Ｈ+／Ｋ+−ＡＴＰアーゼ阻害剤としての薬理活性を有する薬剤）と併用してもよい。プロトンポンプ阻害剤としては、ベンズイミダゾール誘導体タイプまたはイミダゾピリジン誘導体タイプの薬剤、たとえばOmeprazole（商標）、Lansoprazole（商標）、Dexlansoprazole（商標）、Esomeprazole（商標）、Pantoprazole（商標）、Rabeprazole（商標）、Zolpidem（商標）、Alpidem（商標）、Saripidem（商標）、およびNecopidem（商標）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１６４】
また、抗炎症治療に関して、本発明のペプチドは、公知の種類の抗炎症剤と組み合わせて投与した場合に有益である可能性がある。抗炎症剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１６５】
ステロイド剤および副腎皮質ステロイド剤（ベクロメタゾン、メチルプレドニゾロン、ベタメサゾン、プレドニゾン、デキサメタゾン、およびヒドロコルチゾンなど）；
【０１６６】
非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）（プロピオン酸誘導体（たとえばアルミノプロフェン、ベノキサプロフェン、ブクロキシ酸、カルプロフェン、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドプロフェン、ケトプロフェン、ミロプロフェン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピルプロフェン、プラノプロフェン、スプロフェン、チアプロフェン酸、およびチオキサプロフェン）；酢酸誘導体（たとえばインドメタシン、アセメタシン、アルクロフェナック、クリダナク、ジクロフェナク、フェンクロフェナク、フェンクロジン酸、フェンチアザク、フロフェナック、イブフェナック、イソキセパック、オクスピナック、スリンダク、チオピナク、トルメチン、ジドメタシン、およびゾメピラック）；フェナム酸誘導体（たとえばフルフェナム酸、メクロフェナム酸、メフェナム酸、ニフルム酸、およびトルフェナム酸）；ビフェニルカルボン酸誘導体（たとえばジフルニサルおよびフルフェニサール）；オキシカム（たとえばイソキシカム、ピロキシカム、スドキシカム、およびテノキシカム）；サリチル酸塩（たとえばアセチルサリチル酸およびスルファサラジン）；ならびにピラゾロン（たとえばアパゾン、ベズピペリロン、フェプラゾン、モフェブタゾン、オキシフェンブタゾン、およびフェニルブタゾン）など）；
【０１６７】
シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）ＩＩ阻害剤（ロフェコキシブおよびセレコキシブ；インターフェロンβ（たとえばインターフェロンβ−１ａまたはインターフェロンβ−１ｂ）など）；
【０１６８】
ならびに他の特定の化合物（５−アミノサリチル酸、そのプロドラッグおよび医薬的に許容される塩など）。
【０１６９】
メトホルミンは抗炎症性も有することが示されており（たとえば、Haffner et al., Diabetes 54: 1566-1572 (2005)を参照のこと）、したがって、本発明の化合物（ペプチド）との併用に有用である可能性がある。
【０１７０】
（装置およびキット）
態様によっては、本発明は、本発明のアミリン類似体または医薬組成物を含む、前記類似体を対象に送達するための装置に関する。このような装置によって様々な送達方法でアミリン類似体を患者に投与でき、送達方法の例としては、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射、または腹腔内注射；経口投与；経皮投与；経肺投与または経粘膜投与；移植、浸透圧ポンプ、カートリッジ、またはマイクロポンプによる投与；あるいは当業者が認識しているその他の手段による方法が挙げられる。
【０１７１】
態様によっては、本発明は、本発明のアミリン類似体または本発明の医薬組成物を含むキットに関する。特定の態様では、このキットは包装および／または使用説明書をさらに含む。
【０１７２】
この装置またはキットは上記の併用療法に有用である可能性がある。したがって、この装置またはキットは、たとえば上記の抗糖尿病剤、抗肥満剤、メタボリック症候群の治療剤、抗脂質代謝異常剤、抗高血圧剤、プロトンポンプ阻害剤、または抗炎症剤などのさらなる活性薬剤、あるいはこのような活性薬剤を含む医薬組成物をさらに含んでよい。
【実施例】
【０１７３】
以下の実施例は、本発明の特定の具体的な態様を示す。以下の実施例は、特に詳細な説明のある場合を除き、当業者に周知かつ一般的な標準の技術を用いて実施した。なお、これらの実施例は単に例示目的に過ぎず、本発明の条件または範囲を完全に定義することを意図するものではない。したがって、以下の実施例はいかなる形でも本発明の範囲を限定すると理解されるべきではない。
【０１７４】
実施例で用いる略語として以下が挙げられる。
Ａｃｍ：アセトアミノメチル
ＣＯＭＵ（商標）：ヘキサフルオロリン酸（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ−モルホリノ−カルベニウム
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＨＡＴＵ：ヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＯＤＴ：３，６−ジオキサ−１，８−オクタンジチオール
ＥｔＯＨ：エタノール
Ｅｔ2Ｏ：ジエチルエーテル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＲＰ−ＨＰＬＣ：逆相高速液体クロマトグラフィー
ＭＳ：質量分析
ＥＳＩ−ＭＳ：エレクトロンスプレーイオン化質量分析
ＩＢＭＸ：３−イソブチル−１−メチルキサンチン
ＢＳＡ：ウシ血清アルブミン
ｃＡＭＰ：環状アデノシン一リン酸塩
ＤＭＥＭ：ダルベッコ改変イーグル培地
ＦＣＳ：ウシ胎仔血清
ＨＥＰＥＳ：Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸
ｐ−ＥＲＫ：リン酸化細胞外調節キナーゼ
ＰＢＳ：リン酸塩緩衝生理食塩水
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメトキシカルボニル
Ｔｒｔ：トリチル（すなわちトリフェニルメチル）
ＮＥＰ：Ｎ−エチルピロリドン
ＮＭＰ：Ｎ−メチルピロリドン
ｖ／ｖ：体積／体積
ｗ／ｖ：重量／体積
【０１７５】
以下の実施例は本発明の特定の態様を例示するために記載され、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【０１７６】
（生理学的パラメータの測定）
特に示さない限り、全血糖値は、Biosen（EKF Diagnostic（ドイツ））を用いて酵素電極法により尾静脈血液試料で測定した。血液試料の糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）はCobas c111分析計（Roche Diagnostics（ドイツ、マンハイム））で分析した。血漿インスリン濃度はMeso Scale Discovery社（ＭＳＤ；米国メリーランド州、ロックビル）の装置で測定した。肝臓の脂肪含有量は、Echo Systems社のＭＲスキャナで磁気共鳴（ＭＲ）走査により決定した。脂肪貯蔵量は、切除した脂肪の重量測定によって測定した。
【０１７７】
（実施例１：化合物の合成）
以下の化合物を合成した。
【化１４−１】
0006769984.tif 000031
【化１４−２】
0006769984.tif 000032
【化１４−３】
0006769984.tif 000033
【化１４−４】
0006769984.tif 000034
【化１４−５】
0006769984.tif 000035
【化１４−６】
0006769984.tif 000036
【化１４−７】
0006769984.tif 000037
【化１４−８】
0006769984.tif 000038
【０１７８】
（［１９ＣＤ］−ｉｓｏＧｌｕは、イソグルタミン酸リンカーを介してＮ−アルギニン残基の遊離αアミノ基に結合した［１９−カルボキシノナデカノイル］基を表す）。
対照として用いるため、さらに以下を合成した：
プラムリンチド：H-KC()NTATC()ATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY-NH2
【０１７９】
ＮＮ９６：Ｎ−α−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）ブチリル］−［Ａｒｇ１，Ｇｌｕ１４，Ｈｉｓ１７，Ｐｒｏ３７］−プラムリンチド−ＮＨ2
【０１８０】
（ＮＮ９６は、国際公開第２０１２／１６８４３０号パンフレットに開示されており、アミノ酸配列：RC()NTATC()ATQRLAEFLHHSSNNFGPILPPTNVGSNTPを有する）；
【化１５】
0006769984.tif 000039
【０１８１】
化合物９７は、２１位および２２位のＡｓｎ残基が欠失している以外はＮＮ９６と同じ配列を有する。
【０１８２】
化合物９８、９９、および１００は、２１位および２２位にＡｓｎ残基が挿入されている以外は、化合物５５、化合物５７、および化合物８９とそれぞれ同じ配列を有する。
【０１８３】
括弧「（）」は、関連するアミノ酸配列の２位および７位のシステイン残基の側鎖の間の分子内ジスルフィド架橋を示す。
【０１８４】
特に示さない限り、以下で用いた試薬および溶媒は、標準の実験用試薬または分析グレードで市販されており、それ以上精製することなく用いた。
合成のための好適な一般的手順は以下を含む。
【０１８５】
（固相ペプチド合成の一般的手順）
CEM Liberty Peptide Synthesizerを用いて、標準のＦｍｏｃ化学を利用した。TentaGel（商標）S Ram樹脂（１ｇ；０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）を使用前にＤＭＦ（１０ｍｌ）で膨潤させ、ＤＣＭおよびＤＭＦによって管と反応槽の間に移した。適切な場合にはシュードプロリン（すなわちペプチド合成時の凝集を最少にするため用いられるジペプチド）（Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ψ−Ｍｅ，Ｍｅ−Ｐｒｏ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ（ψ−Ｍｅ，Ｍｅ−Ｐｒｏ）−ＯＨ、およびＦｍｏｃ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ（ψ−Ｍｅ，Ｍｅ−Ｐｒｏ）−ＯＨなど）を使用し、一般的手順は変更せずに非天然アミノ酸および他の好適な基本単位を使用した。
【０１８６】
特定のアミノ酸（非天然アミノ酸を含む）の以下の光学異性体を化合物の合成に使用した：
Ａｐｒ：（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノプロリン（（４Ｒ）−４−アミノ−Ｌ−プロリンともいう）；
Ｈｙｐ：（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシプロリン（（４Ｒ）−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンともいう）；
Ａａｄ：（２Ｓ）−２−アミノアジピン酸
【０１８７】
カップリング
CEM Discoverマイクロ波装置に入れた樹脂に、Ｆｍｏｃ−アミノ酸をＤＭＦ／ＤＣＭに溶解した液（２：１；０．２Ｍ；５ｍｌ）をＣＯＭＵ／ＤＭＦ（０．５Ｍ；２ｍｌ）およびＤＩＰＥＡ／ＤＭＦ（２．０Ｍ；１ｍｌ）と共に添加した。このカップリング混合物を、窒素通気しながら５分間かけて７５℃に加熱した。次いで樹脂をＤＭＦで洗浄し（４回×１０ｍｌ）。あるいは、加熱せず、反応時間を６０分に延長してこのカップリングを行った。
【０１８８】
カップリングが難しい場合（たとえば、Ｎ−メチル化アミノ酸残基のすぐ後の残基、または当業者の知る他の立体障害のあるアミノ酸残基のカップリング）、カップリングを１回以上繰り返す。
【０１８９】
脱保護
初期の脱保護を行うため、ピペリジン／ＤＭＦ（１：４、すなわちピペリジン１体積部に対しＤＭＦ４体積部；１０ｍｌ）を樹脂に添加し、この混合物をマイクロ波加熱した（４０℃；３０秒）。反応槽を排液し、ピペリジン／ＤＭＦをさらに（１：４；１０ｍｌ）加え、再び過熱した（７５℃；３分）。次いで樹脂をＤＭＦで洗浄した（６回×１０ｍｌ）。
【０１９０】
酸化による環化
Ａｃｍ−脱保護とジスルフィド形成を同時に行う工程で、１６３ｍｇのトリフルオロ酢酸タリウム（ＩＩＩ）［Ｔｌ（ＴＦＡ）3］を５ｍＬのＮＭＰに溶解した液を用いて、まだ樹脂に結合しているペプチドで２位および７位のＣｙｓ残基（Ａｃｍ保護されたシステインの形で最初にカップリングされている）の間の分子内環形成（ジスルフィド架橋形成）を行った。
【０１９１】
切断
樹脂をＥｔＯＨで洗浄して（３回×１０ｍｌ）Ｅｔ2Ｏで洗浄し（３回×１０ｍｌ）、室温（ｒ．ｔ．）で恒量になるまで乾燥した。ＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ2Ｏ（９０：５：５；４０ｍｌ；２時間；室温）またはＴＦＡ／ＤＯＤＴ（９５：５；４０ｍｌ；２時間；室温）で処理することにより、粗製ペプチドを樹脂から切断した。減圧下でＴＦＡの大部分を除去し、粗製ペプチドを沈殿させ、Ｅｔ2Ｏで３回洗浄し、室温で恒量になるまで乾燥した。
【０１９２】
精製および特性評価
粗製ペプチドを、PerSeptive Biosystems VISION WorkstationまたはGilson system（ポンプ：「Pump 305」、「331 Pump」、「332 Pump」、「402 Syringe Pump」；カラム切り替え装置「Valvemate（登録商標）II」；ＵＶ検出器「UV/Vis-155」；および好適なカラムとフラクションコレクターを備えたフラクションコレクター「GX 281」）を用いて、緩衝液Ａ（０．１％ＴＦＡ水溶液）と緩衝液Ｂ（ＴＦＡ０．１％、ＭｅＣＮ９０％、水）の濃度勾配で分取逆相ＨＰＬＣを実施することにより精製した。画分を分析用ＨＰＬＣおよびＭＳで分析し、関連する画分をプールし凍結乾燥した。最終産物をＨＰＬＣおよびＭＳで特性評価した。
【０１９３】
当業者はペプチド合成の標準方法で本発明の化合物を生成できることをよく理解している。
【０１９４】
（実施例２）
（ｉ）ヒトカルシトニン受容体（ｈＣＴＲ２）発現細胞株および（ｉｉ）ヒト受容体活性化修飾タンパク質３（ｈＲＡＭＰ３）とｈＣＴＲ２の共発現で構成されるヒトアミリン受容体３（ｈＡＭＹＲ３）発現細胞株の作製
【０１９５】
アフリカミドリザルの腎臓線維芽細胞由来のＣＯＳ７細胞株を用いて、以下に記載の安定細胞株を確立した。ＣＯＳ７細胞はＲＡＭＰの影響を受けていないため、単量体ｈＣＴＲの試験や個々のＲＡＭＰの導入によって機能的に生成された様々なヘテロ二量体アミリン受容体サブタイプの試験に利用可能な最良の系となることから、この細胞背景を使用した。
【０１９６】
カルシトニン受容体細胞株
ヒトカルシトニン受容体（ｈＣＴＲ２）発現細胞株を安定なクローンとしてＣＯＳ７細胞背景で作製した。簡潔に述べると、ｈＣＴＲ２（ＧＩ：４５０２５４７）を、サブクローニング用の末端制限部位をコードするプライマーを用いたＰＣＲで増幅した。効率的な翻訳を確実にするため、５’末端側のプライマーは付近のコザックコンセンサス配列をさらにコードするものにした。受容体をコードするＤＮＡの忠実度をＤＮＡ配列決定によって確認した。受容体をコードするＰＣＲ産物を、ネオマイシン（Ｇ４１８）耐性マーカーを含む哺乳動物発現ベクターにサブクローニングした。受容体をコードする哺乳動物発現ベクターを標準的なリポソームトランスフェクション法でＣＯＳ７細胞にトランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後、培地で細胞を限界希釈クローニングのために播種し、１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８で選択した。３週間後、ｈＣＴＲ２発現細胞の生存コロニーを採取し、増殖させ、以下の実施例３に記載のアミリンの有効性試験で試験した。１つのｈＣＴＲ２発現クローンを化合物プロファイリングのため選択した。
【０１９７】
アミリン受容体細胞株
ヒトアミリン受容体３（ｈＡＭＹＲ３）発現細胞株を安定なクローンとしてＣＯＳ７細胞背景で作製した。簡潔に述べると、ｈＣＴＲ２（ＧＩ：４５０２５４７）およびｈＲＡＭＰ３（ＧＩ：１１８５７２５８６）を、サブクローニング用の末端制限部位をコードするプライマーを用いたＰＣＲで増幅した。効率的な翻訳を確実にするため、５’末端側のプライマーは付近のコザックコンセンサス配列をさらにコードするものにした。受容体をコードするＤＮＡの忠実度をＤＮＡ配列決定により確認した。受容体をコードするＰＣＲ産物を、ＲＡＭＰ３、ｈＣＴＲ２、およびネオマイシン（Ｇ４１８）耐性マーカーを含む独自のトリシストロニックな（＝３種類のタンパク質を発現する）哺乳動物発現ベクターにサブクローニングした。受容体をコードする哺乳動物発現ベクターを標準的なリポソームトランスフェクション法でＣＯＳ７細胞にトランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後、培地で細胞を限界希釈クローニングのために播種し、１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８で選択した。３週間後、ｈＡＭＹＲ３発現細胞の生存コロニーを採取し、増殖させ、以下の実施例３に記載のアミリン効能試験で試験した。効能試験でアミリンへの有効性反応が単量体カルシトニン受容体の場合に比べて左側へ移動したことにより、アミリン受容体表現型が機能的に得られたことを確認し、１つのｈＡＭＹＲ３発現クローンを化合物プロファイリングのため選択した。
【０１９８】
（実施例３）
ｈＣＴＲ２およびｈＡＭＹＲ３の試験
受容体を刺激した後のｃＡＭＰの誘導をAlphaScreen（登録商標）cAMP Assay kit（Perkin-Elmer）で測定することにより、ｈＣＴＲ２およびｈＡＭＹＲ３受容体に対する試験ペプチドのインビトロでの活性を評価した。
【０１９９】
簡潔に述べると、０．０１％のポリ−Ｌ−リシンをコートした９６ウェルマイクロタイタープレートにｈＣＴＲ２発現ＣＯＳ７細胞（上記の実施例２を参照）を播種し（３０〜４０，０００細胞／ウェル）、１００μｌの増殖培地［ＤＭＥＭ、１０％ＦＣＳ、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）］で１日培養した。分析の日、増殖培地を除去し、細胞を２００μｌのタイロード緩衝液［タイロード塩（９．６ｇ／ｌ）、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４］で１回洗浄した。より高濃度の試験ペプチドと１００μＭのＩＢＭＸと０．１％のカゼインを含有する１００μｌのタイロード緩衝液中で、細胞を３７℃で１５分間保温した。化合物／緩衝液媒体を慎重に除去して溶解／検出緩衝液（８０μｌ、０．１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ、５ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．３％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０を脱イオン水に溶解した液）に置き換えることで反応を停止した。室温で１０分間保温した後、得られた細胞可溶化液のｃＡＭＰ含有量を、AlphaScreen（登録商標）cAMP Assayの製造者による説明書に従い評価した。コンピュータを使ったカーブフィッティングにより、ＥＣ50値を４つのパラメータによるロジスティック（４ＰＬ）非線形モデルで評価した。
【０２００】
インビトロでの活性の結果（ＥＣ50値で表す）を下の表１に要約する。
【０２０１】
（実施例４）
溶解性の評価
ＨＣｌでｐＨ２．５に調整した脱塩水に試験ペプチド（２ｍｇ／ｍｌ；ペプチドの秤量重量から測定）を溶解した原液を調製し、一定分量を１００ｍＭの酢酸塩緩衝液（ｐＨ４．０およびｐＨ５．０）、１００ｍＭのヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０およびｐＨ７．０）、および１００ｍＭのリン酸塩緩衝液（ｐＨ６．０、ｐＨ７．０、およびｐＨ７．５）でそれぞれ希釈（１：１）し、標準的な平底の非滅菌９６ウェルＵＶマイクロプレートに充填した。２８０ｎｍおよび３２５ｎｍでの試料（単一試料、ｎ＝１）の吸光度を、環境温度（一般的に２５℃）に予熱した吸光度に基づくプレートリーダーで測定した。ペプチドの溶解性が１ｍｇ／ｍｌ以上であるための濁度吸光度基準は、３２５ｎｍでの吸光度が０．０２以下（吸光度単位）（プレート内の８個の緩衝液試料の標準偏差の５〜６倍）であることであった。
【０２０２】
化合物１〜１７、１９、２７〜３８、４９〜６９、および７１〜８７について測定した。ｐＨ６．０の化合物１０、ｐＨ７．０および７．５の化合物３１、ならびにｐＨ６．０および７．５の化合物３８を除き、すべての試験化合物はすべての試験緩衝液で１ｍｇ／ｍｌ以上の溶解度を示した。
【０２０３】
（実施例５）
物理的安定性の評価
細線維形成の形での凝集を、アミロイドに特異的な色素チオフラビンＴ（ＴｈＴ）で検出した。この色素は溶液中の細線維の存在を示すのによく使用される（たとえば、Groenning, M., J. Chem. Biol. 3(1) (2010), pp. 1-18；Groenning et al., J. Struct. Biol. 158 (2007) pp. 358-369；およびLevine, H., III, Protein Sci. 2 (1993) pp. 404-410を参照のこと）。ＨＣｌでｐＨ２．５に調整した脱塩水に、試験ペプチド（２ｍｇ／ｍｌ）を環境温度（一般的に２５℃）で溶解した。（ｉ）１ｍｇ／ｍｌの試験ペプチド、４０μＭのＴｈＴ、および５０ｍＭのリン酸塩（Ｐｈ）緩衝液（ｐＨ７．０）を含む溶液、（ｉｉ）１ｍｇ／ｍｌの試験ペプチド、４０μＭのＴｈＴ、および５０ｍＭのヒスチジン（Ｈｉｓ）緩衝液（ｐＨ７．０）を含む溶液、ならびに（ｉｉｉ）１ｍｇ／ｍｌの試験ペプチド、４０μＭのＴｈＴ、および５０ｍＭの酢酸塩（Ａｃ）緩衝液（ｐＨ４．０）を含む溶液を、９６ウェル黒色蛍光プレート（底は透明）各３枚に充填した。４０℃で９６時間の間、１０分間の一定間隔でデータを収集し、各間隔の前には３００秒間の自動混合（撹拌）を行った。細線維形成の遅延時間（時間）で表される物理的安定性を、初期の安定相と増殖相を表す２つの線形回帰の間の交差と定義した。データを下の表１に要約する。
【０２０４】
（実施例６）
化学的安定性の評価
各試験ペプチドの試料をMilliQ（商標）水に溶解し、ＨＣｌまたはＮａＯＨを用いて溶液のｐＨ値をそれぞれｐＨ４、ｐＨ６、ｐＨ７．５またはｐＨ９に調整した。最終ペプチド濃度を０．２ｍｇ／ｍｌとした。この試料をガラス製のバイアルに入れ、４０℃で保温した。この試料を、Ｃ８カラムでギ酸アンモニウム／水の溶出系を用いた勾配溶出法、あるいはＣ１８カラムでトリフルオロ酢酸／水の溶出系を用いた勾配溶出法を含むＲＰ−ＨＰＬＣにより分析した。保温時間Ｔ＝ｔ後の主要ピークの面積百分率（面積％）（時間Ｔ＝０に対する相対値）を２２０ｎｍでＵＶ分光法により測定した。
純度を最初に以下のように決定した：
純度（面積％）＝（主要ピークの面積／全ピークの総面積）×１００。
【０２０５】
次に、以下のように、所与のペプチドの各ｐＨ値について０時間後（Ｔ＝０）から１００時間後までの純度を設定することによって純度を時点間で正規化した：
ｔ時間後（Ｔ＝ｔ）の正規化した面積％＝［面積％（Ｔ＝ｔ）／面積％（Ｔ＝０）］×１００。
【０２０６】
化学的安定性評価の結果（正規化した純度値の形）を表１（下）に要約する。表１の正規化した純度値は、７日間保温した後に決定した。
【表１−１】
0006769984.tif 000040
【表１−２】
0006769984.tif 000041
【表１−３】
0006769984.tif 000042
【０２０７】
（実施例７）
ラット体内での薬物動態学的（ＰＫ）特性
化合物６、７、９、１１、１３、１５、２８、３４、３６、４９、５５、５７、および７１のラット体内での薬物動態学的特性を試験した。
【０２０８】
以下に明記するように、雄のスプラーグドーリーラットに各試験ペプチドを１回、皮下的に（ｓｃ）大量投与した。
化合物を３０ｎｍｏｌ／ｋｇの投与量で投与した。投与前と投与の２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後、および１６８時間後に、尾静脈から血液試料を採取した。血液試料は各時点で２匹のラットから採取し、ラット１匹につき２つの血液試料のみを採取した。すなわち、各化合物に１０匹のラットを使用した。最後の採血の直後にラットを脳震盪と頸椎脱臼により安楽死させた。
【０２０９】
各試験ペプチドに使用した投与用溶媒はマンニトール含有ヒスチジン緩衝液（ｐＨ７．０）であった。血漿試料をエタノールで沈殿させた後、液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）で分析した。平均血漿濃度を用いて、Phoenix WinNonlin 6.3で非コンパートメント法によって薬物動態パラメータを計算した。
【０２１０】
血漿終末消失半減期（ｔ1/2）をｌｎ（２）／λｚとして求めた（ここで、λｚは、終末期の濃度対時間の対数プロファイルの対数線形回帰の勾配の大きさである）。見かけのクリアランス（ＣＬ／Ｆ）を投与量／ＡＵＣinf（ｓｃ）（ここで、ＡＵＣinfは、無限大に外挿した血漿濃度対時間曲線下面積である）として求めた（ＡＵＣinf＝ＡＵＣlast＋Ｃlast／λｚ（Ｃlastは最後に観測した血漿濃度）。
【０２１１】
結果
下の表２に示すように、試験したすべてのペプチドについて、血漿終末消失半減期は１４．１時間〜３６．７時間の範囲であると決定し、見かけのクリアランス値は０．００４０６〜０．０１４６リットル／時間／ｋｇの範囲であると決定した。
【表２】
0006769984.tif 000043
【０２１２】
（実施例８）
正常なスプラーグドーリーラットの短期食物摂取量および体重に対する効果
化合物６、７、９、１１、１３、１５、２８、３４、３６、４９、５５、５７、５９、７１、および７９を、ラットの食物摂取量および体重に対する効果について試験した。
【０２１３】
スプラーグドーリー（ＳＤ）ラットをTaconic A/S（デンマーク）から入手した。実験条件に順化させるため、動物は実験開始の少なくとも７日前に到着した。ラットは、到着後から実験の間、照明、温度、および湿度を管理した（１２時間／１２時間の逆転させた明暗サイクル（すなわち日中は照明を消し、夜間は照明をつける）；温度２０〜２２℃；相対湿度５０〜８０％）部屋で２匹ずつの群（ｎ＝２）で飼育した。全実験期間中、動物は自由に食物（Altromin（商標）1324, Brogaarden A/S（デンマーク、ゲントフテ））と水（家庭用水道水にクエン酸を添加しｐＨ約３．６にしたもの）にたどり着くことができた。ラットの層別化は体重（ＢＷ）に基づいてケージごとの基準で行った。ケージごとの平均ＢＷを基準に、４つのケージを組み合わせて１つの群（各群ｎ＝８）にした。各試験セットには溶媒投与群と陽性対照群が含まれていた。朝、照明を消す直前にラットに体重補正した投与量（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）の試験ペプチドを用いて、皮下（ｓｃ）投与を１回行った。投与体積は５ｍｌ／ｋｇであった。ｔ＝−２４時間および０時間のとき（投与前）と投与後のｔ＝２４時間、４８時間、７２時間、および９６時間のときに食物摂取量を手作業で記録した。体重を毎日測定した。
【０２１４】
統計分析はGraphPad（商標）Prism（バージョン５）を用いて実施した。測定したパラメータを、一方向ＡＮＯＶＡの後にダネットの多重比較検定を行うことにより比較した。ｐ値＜０．０５の場合に統計的に有意な差とみなした。
【０２１５】
結果
下の表３に示すように、投与の４８時間後、各試験化合物は、明らかで統計的に有意な食物摂取の阻害（溶媒補正済み、％）を起こした。この食物摂取量の減少は、処置を受けたラットで投与の４日後（９６時間後）に観測された体重減少（溶媒補正済み、％）に反映されていた（図示せず）。その後、正常な食事行動が再開した。
【表３】
0006769984.tif 000044
【０２１６】
（実施例９）
ラットでの経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）
雄のスプラーグドーリーラット［Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ）、到着時の体重２６０〜２８０ｇ］を２匹ずつ（ｎ＝２）または３匹ずつ（ｎ＝３）の群で飼育した。動物を１２時間／１２時間の明暗サイクルで維持した。動物は、最初の１週間の順化期間中、標準的な飼料と水道水（家庭用水道水）まで自由にたどり着くことができた。
【０２１７】
絶食したラット（７時間絶食）を試験に使用した。ラットをあらかじめ無作為に２つの群に分け、それぞれ試験群、対照群とした。各群の動物の数は合計で１０匹であった（ｎ＝１０）。
【０２１８】
次いで、溶媒（対照群；溶媒は５０ｍＭのヒスチジン緩衝液（ｐＨ７）および２００ｍＭのマンニトール）または化合物７を溶媒に溶解した液（試験群；投与量は体重１ｋｇあたり３０ｎｍｏｌ（２ｍｌ／ｋｇ））の皮下注射を１回、各動物に行った。次いで、溶媒または化合物の投与の１６時間後、すべてのラットに経口的にグルコースの大量投与（２ｇ／ｋｇ）を行った。グルコース投与の２０分前（時間０、基準）とその後のグルコース投与の１５分後、３０分後、６０分後、９０分後、１２０分後、１８０分後に、尾の血液試料の血糖値を血糖値計（GlucoSmart Swing（商標）；MSP Bodmann GmbH（ドイツ））で測定した。
【０２１９】
基準血糖値は本質的には試験群と対照群で同じであったが、１８０分間の測定時間にわたる血糖値の上昇は、試験群では対照群に比べて有意に低下していた。表４（下）は、測定した血糖値を時間の関数として作成したプロットを基にｔ＝１５分〜ｔ＝１８０分の間に対して決定した血糖値ＡＵＣ（曲線下面積）をまとめたものである。データは平均値±標準誤差として表す。両側独立スチューデントｔ検定を用いて試験群と対照群を統計的に比較した。
【表４】
0006769984.tif 000045
【０２２０】
この結果から、試験化合物によって試験群では対照群に比べて耐糖能が有意に改善したことが明らかである。
【０２２１】
（実施例１０）
２１位および２２位の欠失による効果
実施例６に記載の化学的安定性の評価を、それぞれ２１位および２２位のＡｓｎ−Ａｓｎ（Ｎ−Ｎ）対の有無のみが異なる４対の化合物について繰り返した。
【表５】
0006769984.tif 000046
【０２２２】
２１位および２２位のＡｓｎ−Ａｓｎ対の欠失によって中性からアルカリ性のｐＨ範囲での化学的安定性が高まる傾向があることが分かる。
【０２２３】
実施例３に記載のように、ヒトカルシトニン（ｈＣＴＲ２）およびアミリン（ｈＡＭＹＲ３）での活性も測定した。表６に示すように、欠失は、両方の受容体、特にメチル化アミノ酸残基を含む化合物での活性を増加させる傾向がある。
【表６】
0006769984.tif 000047
【配列表】
0006769984000001.app