(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
基材を含み、前記基材が第１の主表面を有する基部と、
前記第１の主表面の少なくとも一部分に接着させた感圧接着剤と、
前記接着剤を介して前記基材に結合された、ポリマー及び粘着付与剤を含む複合フィルムであるポリマーカバーフィルムであって、前記複合フィルムが、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び前記粘着付与剤を含む、前記ポリマーカバーフィルムと、
前記基材と前記カバーフィルムとの間に配置され、複数の閉鎖区画の各区画が、前記複数の閉鎖区画のうちの少なくとも１つの他の区画との液体連通を防止する封止部によって画定されている、複数の閉鎖区画と、
前記閉鎖区画のうちの２つ以上の中に配置された水性液と
を含み、前記封止部が、前記カバーフィルムと前記感圧接着剤との間の接触によって形成されている、デバイス。
【請求項２】
前記カバーフィルムの弾性回復率が２０％以下である、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
液体試料を分析する方法であって、
予め定められた体積の液体を基材の第１の表面上に載せて、その液体試料が、
非水溶性の感圧接着剤で被覆された前記第１の表面と、
ポリマー及び粘着付与剤を含む複合フィルムであるポリマーカバーフィルムであって、前記複合フィルムが、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び前記粘着付与剤を含む前記ポリマーカバーフィルムと
の間に配置されるようにする工程と、
前記カバーフィルムに外部手段を付勢させて、カバーフィルムの個別領域を前記基材の前記感圧接着剤に接触させ、その結果、前記液体を前記基材と前記カバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程と、
前記複数の閉鎖区画のうちの少なくとも１つの閉鎖区画の定量的分析又は定性的分析を行う工程
を含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、開示が全体として本明細書に参照により組み込まれている、２０１４年８月２０日出願の米国仮特許出願第６２／０３９，６３８号に対する優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、液体試料中の微生物又は他の生体物質を分析、たとえば計数及び／又は検出する方法、並びにそのような方法で使用するために適合されたデバイスに関する。
【背景技術】
【０００３】
多くの業界で、試料中の生体物質を検出及び定量化することが必要とされており、たとえば、食品及び水中の微生物濃度の判定は、食品及び水の品質試験の重要な部分である。類似の需要は、食品、バイオテクノロジー、製薬、水処理業界を含む多数の業界から、また医学微生物学的診断、環境及び科学研究でも生じている。試料は一般に、たとえば生産環境、工程内管理、事後貯蔵、及び最終的な製品試験において微生物個体群を監視するために精査される。
【０００４】
典型的には、試料、特に液体試料を調査する従来の方法では、分析のためにインキュベーション時間又は反応時間が必要とされる。分析は、いくつかの異なる種類の化学的、生化学的、物理的、又は光学的な技法を伴い、インキュベーション及び後の分析のために数時間又は更には数日を必要とする可能性がある。試料の定量的及び定性的分析にかかる時間を短縮することは、品質及び工程管理動作において迅速な決定を下すために非常に重要である。
【０００５】
水性生体試料の試験に関しては、試料をアリコートに分割することが有利であり、その結果、所望の反応又は増殖が生じ、それは、元のより大きい体積で生じる同じ反応又は増殖と比べて、はるかに迅速に検出することができる。微生物試料及び分子生物学的試料などの生体試料は、多くの場合には、定性的及び／又は定量的に精密に分析するのにそのような分割を必要とする。
【０００６】
そのような方法及びデバイスには、まとめて水性試料が充填される一連の小さな区画が想定される。どの場合も、充填され、封止されると、所望の反応又は増殖が生じ、それは、元のより大きい体積で生じる同じ反応又は増殖と比べてはるかに迅速に検出することができる。
【発明の概要】
【０００７】
一般に、本開示は、液体試料（たとえば、水性液体試料）を分割するデバイス及び方法に関する。加えて、本開示は、このデバイスを使用して液体試料中の微生物及び／又は生体分子を検出する方法に関する。
【０００８】
一態様では、本開示は、効率的に、堅固に、かつ経済的に液体試料を多数のより小さな個別体積に分割する、時間を要さず、簡易で、利便なデバイスを提供する。
【０００９】
本開示は、効率的に、堅固に、かつ経済的に液体試料を多数のより小さな個別体積に分割するために使用できるパウチを更に提供する。有利には、パウチ内には、微生物を検出するための栄養素及び／又は指示薬を設けることができる。栄養素及び／又は指示薬は、液体（たとえば、水性液）がパウチ内へ分注されると溶解する乾燥粉末コーティングとして設けることができる。パウチは、複数の隔離された閉鎖区画内へ液体が分割されるデバイスを作製する方法で使用することができる。
【００１０】
有利には、本開示は、液体を容易に分割するデバイスを提供し、このデバイスは、２つのフィルムを含み、一方のフィルムは感圧接着剤で被覆され、他方のフィルムは、所望の仕切りの形状に沿うように変形可能であり、それにより、試料は、隣接する区画内の試料と混ざることなく小さい個別単位に分割される。
【００１１】
一態様では、本開示は、第１の主表面を有する基材を含む基部と、第１の主表面の少なくとも一部分に接着させた感圧接着剤と、接着剤を介して基材に結合されたポリマーカバーフィルムと、基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画と、閉鎖区画のうちの２つ以上の中に配置された水性液とを含むことができるデバイスを提供する。カバーフィルムは、ポリマー及び粘着付与剤を含む複合フィルムとすることができる。複合フィルムは、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含むことができる。複数の区画の各区画は、複数の区画のうちの別の区画との液体連通を防止する封止部によって画定することができる。封止部は、カバーフィルムと感圧接着剤との間の接触によって形成されている。
【００１２】
別の態様では、本開示は、第１の主表面を有する基材を含む基部と、第１の主表面の少なくとも一部分に接着させた感圧接着剤と、接着剤を介して基材に結合されたカバーフィルムと、基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画と、閉鎖区画のうちの２つ以上の中に配置された水性液とを含むことができるデバイスを提供する。カバーフィルムの弾性回復率は、２０％以下とすることができる。複数の区画の各区画は、複数の区画のうちの別の区画との液体連通を防止する封止部によって画定することができる。封止部は、カバーフィルムと感圧接着剤との間の接触によって形成されている。
【００１３】
本発明に開示されるデバイスには、分子生物学、生化学、バイオテクノロジー、及び微生物学の適用分野において、様々な用途がある。
【００１４】
有利には、本発明のデバイスは、使用が容易で時間を節約できるという利益に加えて、微生物の迅速な検出、分子特性解析、指標微生物試験、単一病原性微生物濃縮、最確数（most probable number、ＭＰＮ）式の試験形式、及び高処理量の濃縮後生化学的特性解析を含めて、結果を得るまでの時間の改善及び試験能力の容易な拡張を促進する。
【００１５】
更に別の態様では、本開示は、液体を分割する方法を提供する。この方法は、予め定められた体積の液体を、非水溶性の感圧接着剤で被覆された基材とポリマーカバーフィルムとの間に載せる工程と、カバーフィルムに外部手段を付勢させ、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程とを含むことができる。カバーフィルムは、ポリマー及び粘着付与剤を含む複合フィルムとすることができる。複合フィルムは、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含むことができる。
【００１６】
更に別の態様では、本開示は、液体を分割する方法を提供する。この方法は、予め定められた体積の液体を基材の第１の表面上に載せて、その液体試料が、非水溶性の感圧接着剤で被覆された第１の表面とポリマーカバーフィルムとの間に配置されるようにする工程と、カバーフィルムに外部手段を付勢させ、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程とを含むことができる。カバーフィルムの弾性回復率は、２０％以下とすることができる。
【００１７】
別の態様によれば、本開示は、液体試料をその定量的及び定性的な態様に関して分析する方法を提供する。この方法は、液体試料を基材の第１の表面上に載せて、その液体試料が、非水溶性の感圧接着剤で被覆された第１の表面とポリマーカバーフィルムとの間に配置されるようにする工程と、カバーフィルムに外部手段を付勢させ、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程と、複数の区画のうちの少なくとも１つの閉鎖区画の定量的分析又は定性的分析を行う工程とを含むことができる。カバーフィルムは、ポリマー及び粘着付与剤を含む複合フィルムとすることができる。複合フィルムは、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含むことができる。
【００１８】
別の態様によれば、本開示は、液体試料をその定量的及び定性的な態様に関して分析する方法を提供する。この方法は、液体試料を基材の第１の表面上に載せて、その液体試料が、非水溶性の感圧接着剤で被覆された第１の表面とポリマーカバーフィルムとの間に配置されるようにする工程と、カバーフィルムに外部手段を付勢させ、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程と、複数の区画のうちの少なくとも１つの閉鎖区画の定量的分析又は定性的分析を行う工程とを含むことができる。カバーフィルムの弾性回復率は、２０％以下とすることができる。
【００１９】
別の実施形態では、本開示は、嫌気性及び好気性の形態を含む微生物を隔離、検出、培養、及び濃縮する方法を提供する。
【００２０】
任意の実施形態では、微生物を検出及び計数するための分析は、本明細書に記載の手法によって実施され、それにより、水溶性指示薬類の使用が可能になり、現在の微生物学的分析で通例必要とされる数種類の希釈液の必要性が低減するか、又はなくなる。
【００２１】
更に別の態様では、本開示は、好気性又は嫌気性の微生物を培養する方法を提供する。この方法は、試料を液体栄養培地に混ぜ合わせて試料を液化する工程と、液化した試料を、非水溶性の感圧接着剤で被覆された基材の第１の表面上に載せて、その液体試料が、第１の表面とポリマーカバーフィルムとの間に配置されるようにする工程と、カバーフィルムに外部手段を付勢させ、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程と、微生物の少なくとも１回の細胞分裂を促進する条件下に、液化及び分割した試料をインキュベートする工程とを含むことができる。カバーフィルムは、ポリマー及び粘着付与剤を含む複合フィルムとすることができる。複合フィルムは、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含むことができる。
【００２２】
更に別の態様では、本開示は、好気性又は嫌気性の微生物を培養する方法を提供する。この方法は、試料を液体栄養培地に混ぜ合わせて試料を液化する工程と、液化した試料を基材の第１の表面上に載せて、その液体試料が、非水溶性の感圧接着剤で被覆された第１の表面とポリマーカバーフィルムとの間に配置されるようにする工程と、カバーフィルムに外部手段を付勢させ、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程と、微生物の少なくとも１回の細胞分裂を促進する条件下に、液化及び分割した試料をインキュベーションする工程とを含むことができる。カバーフィルムの弾性回復率は、２０％以下とすることができる。
【００２３】
本発明の別の態様は、液体試料を複数の個別区画内へ分割するキットを提供することである。このキットは、非水溶性の感圧接着剤層を接着させた第１の主表面を有する基材と、複合カバーフィルムとを含むことができる。複合フィルムは、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含むことができる。
【００２４】
本発明の別の態様は、液体試料を複数の個別区画内へ分割するキットを提供することである。このキットは、非水溶性の感圧接着剤層を接着させた第１の主表面を有する基材と、弾性回復率が２０％以下のポリマーカバーフィルムとを含むことができる。
【００２５】
キットの上記の実施形態のいずれかにおいて、基材及び／又はカバーフィルムは、実質的に平面とすることができる。キットの上記の実施形態のいずれかにおいて、感圧接着剤は、シリコーンポリウレアを含むことができる。キットの上記の実施形態のいずれかにおいて、基材は、接着剤の少なくとも一部分上に配置された二次コーティングを更に含むことができる。キットの上記の実施形態のいずれかにおいて、基材の第１の主表面にスペーサ要素が結合される。キットの上記の実施形態のいずれかにおいて、カバーフィルムは基材に取り付けられ、存在する場合、スペーサ要素は、基材とカバーフィルムとの間に配置される。
【００２６】
更に別の態様では、本開示は、キットを提供する。このキットは、非水溶性の感圧接着剤層を接着させた第１の主表面を有する基材と、複合ポリマーフィルムとを含むことができる。ポリマーフィルムは、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含むことができる。粘着付与剤は、低分子量ポリイソブテン、ポリテルペン、非晶質ポリプロピレン、及びマイクロクリスタリンワックスからなる群から選択することができる。キットの任意の実施形態では、複合ポリマーフィルムの弾性回復率は２０％以下である。
【００２７】
更に別の態様では、本開示は、キットを提供する。このキットは、非水溶性の感圧接着剤層を接着させた第１の主表面を有する基材と、弾性回復率が２０％以下のポリマーフィルムとを含むことができる。
【００２８】
キットの上記の実施形態のいずれかにおいて、基材及び／又はポリマーフィルムは、実質的に平面である。キットの上記の実施形態のいずれかにおいて、基材及び／又はポリマーフィルムは、実質的に平坦である。キットの上記の実施形態のいずれかにおいて、感圧接着剤は、シリコーンポリウレアを含む。キットの上記の実施形態のいずれかにおいて、基材は、接着剤の少なくとも一部分上に配置された二次コーティングを更に含んでいる。キットの上記の実施形態のいずれかにおいて、二次コーティングは、粉末状栄養素及び／又は複数のガラスバブルを含む。キットの上記の実施形態のいずれかにおいて、二次コーティングには実質的に水分がない。キットの上記の実施形態のいずれかにおいて、本明細書に上述したように、基材の第１の主表面にスペーサ要素が結合される。キットの上記の実施形態のいずれかにおいて、複合ポリマーフィルムは基材に取り付けられ、存在する場合、スペーサ要素は、基材とカバーフィルムとの間に配置される。
【００２９】
本明細書に記載するように、本発明にはいくつかの利点がある。第１に、これらの物品及び方法は、予め形成された区画を有するデバイスの使用をなくし、それによって操作者が使用時に様々な可能な分割構成（たとえば、区画の数、各区画の体積、試料の総体積）から選ぶことができるようになる。第２に、微小区画内で微小体積を使用することで、液体試験試料中の微生物を驚くほど迅速に検出及び計数することが可能になる。本発明は、大腸菌又は黄色ブドウ球菌などの特定の微生物を対象とする液体試験試料のＭＰＮ分析で特に有用である。本発明により、ＭＰＮ分析を別個のチューブではなく単一のデバイスの中で好都合に行うことが可能になり、有利には、検出可能な微生物の増殖に達するまでに必要とされるインキュベート時間がかなり短くなる。第３に、微小区画内で微小体積を使用することで、液体試験試料を比較的多数の試験体積に分離することが可能になる。概して、微小区画内で微小体積を使用することで、液体試料の試験をはるかに多い回数を実行又は反復できるようになる。ＭＰＮ分析の場合、微小区画内で微小体積を使用することで、より多数のデータ点が得られ、それらのデータ点からＭＰＮを計算することができ、それによって所与のＭＰＮ結果に対する９５％信頼限界が大幅に狭くなる。第４に、試料を多数の試験体積に分離することで、より高濃度の微生物を計数することが可能になり、それによって試料希釈液が低減されるか、又は不要になる。第５に、本発明では、指示薬及び／又は栄養素が直接被覆された単一のデバイスの中でＭＰＮ分析を行うことが可能になる。第６に、本発明により、ＭＰＮ分析を実行するときに幅広い計数範囲が可能になる。
【００３０】
上記は、本発明の最も関係のある目的のいくつかを略述した。これらの目的は、意図される本発明のより顕著な特徴及び用途のいくつかの単なる例示と解釈されるべきである。本発明は、以下に記載する又は以下の「発明を実施するための形態」から明らかになる他の特徴及び利点を含む。
【００３１】
「備える、含む（comprises）」という用語及びこれらの変形は、本説明及び特許請求の範囲に記載される場合、限定的な意味を有するものではない。
【００３２】
「及び／又は」という用語は、記載の要素の１つ若しくはすべて、又は記載の要素のうちいずれか２つ以上の組み合わせを意味する。
【００３３】
また本明細書では、端点による数値範囲の記述は、その範囲内に包含されるすべての数を含む（たとえば、１〜５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５などを含む）。
【００３４】
上記の発明の概要は、本発明の開示する各実施形態又はすべての実装形態について説明することを意図したものではない。以下の説明は、例示的な実施形態をより具体的に示す。本出願全体を通していくつかの箇所で、例の一覧によって指針が提供され、これらの例は、様々な組み合わせで使用することができる。いずれの場合も、記載する一覧は、代表的な群としての役割のみを果たすものであり、排他的な一覧と解釈されるべきではない。
【００３５】
上記その他の実施形態の追加の詳細は、添付の図面及び以下の説明に記載する。他の特徴、目的、及び利点は、説明及び図面並びに特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【００３６】
上記の発明の概要並びに以下の発明を実施するための形態は、添付の図面と併せて読めば、よりよく理解されよう。本発明の説明を助ける目的のため、現在好ましくかつ例示的であると考えられる実施形態を図面内に示す。しかし本発明は、本明細書に示す厳密な配置及び道具に限定されるものではないことを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１ａ】本開示による微生物を検出するデバイスの構成要素の一実施形態の部分断面平面図である。
【図１ｂ】アセンブリに植菌するためにカバーフィルムが開放位置にある、図１ａの構成要素を備えるアセンブリの斜視図である。
【図１ｃ】カバーフィルムが閉鎖位置にある、図１Ｂのアセンブリの横断面側面図である。
【図２ａ】図１ａの構成要素を使用して液体試料を分割し、スペーサ要素を備えるデバイスを製作する、本開示による一実施形態を示す様々な図である。
【図２ｂ】図１ａの構成要素を使用して液体試料を分割し、スペーサ要素を備えるデバイスを製作する、本開示による一実施形態を示す様々な図である。
【図２ｃ】図１ａの構成要素を使用して液体試料を分割し、スペーサ要素を備えるデバイスを製作する、本開示による一実施形態を示す様々な図である。
【図２ｄ】図１ａの構成要素を使用して液体試料を分割し、スペーサ要素を備えるデバイスを製作する、本開示による一実施形態を示す様々な図である。
【図２ｅ】コンプライアント部材を有する基部を備える、微生物を検出するデバイスの構成要素の一実施形態の横断面図側面図である。
【図３ａ】基材及びカバーフィルムを使用して液体試料を分割し、スペーサ要素のないデバイスを製作する、本開示による一実施形態を示す平面図である。
【図３ｂ】基材及びカバーフィルムを使用して液体試料を分割し、スペーサ要素のないデバイスを製作する、本開示による一実施形態を示す平面図である。
【図３ｃ】基材及びカバーフィルムを使用して液体試料を分割し、スペーサ要素のないデバイスを製作する、本開示による一実施形態を示す平面図である。
【図３ｄ】基材及びカバーフィルムを使用して液体試料を分割し、スペーサ要素のないデバイスを製作する、本開示による一実施形態を示す平面図である。
【図４ａ】試料を分析するパウチの構造の本開示による一実施形態を示す平面図である。
【図４ｂ】試料を分析するパウチの構造の本開示による一実施形態を示す平面図である。
【図４ｃ】試料を分析するパウチの構造の本開示による一実施形態を示す平面図である。
【図４ｄ】試料を分析するパウチの構造の本開示による一実施形態を示す平面図である。
【図４ｅ】試料を分析するパウチの構造の本開示による一実施形態を示す平面図である。
【図５ａ】図４ｅのパウチを使用して液体試料を分割する方法の一実施形態の平面図である。
【図５ｂ】図４ｅのパウチを使用して液体試料を分割する方法の一実施形態の平面図である。
【図５ｃ】図４ｅのパウチを使用して液体試料を分割する方法の一実施形態の平面図である。
【図５ｄ】図４ｅのパウチを使用して液体試料を分割する方法の一実施形態の平面図である。
【図６】図２ｄのデバイスを使用して微生物を検出する一実施形態の概略平面図である。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
次に本発明について、本明細書で以下により詳細に説明する。以下の発明を実施するための形態の目的のため、本発明では、そうでないことが明示的に指示される場合を除いて、様々な代替的変形形態及び工程順序を想定することができることを理解されたい。したがって、本発明について詳細に説明する前に、本発明は、具体的に例示するシステム又は実施形態に限定されるものではなく、当然ながら、これらのシステム又は実施形態は変動する可能性があることを理解されたい。本明細書に論じる任意の用語の例を含めて、本明細書のいずれの箇所における例の使用も例示のみを目的とし、本発明又は例示するあらゆる用語の範囲及び意味を一切限定しない。同様に、本発明は、本明細書に記載する様々な実施形態に限定されるものではない。
【００３９】
本開示のいずれかの実施形態について詳細に説明する前に、本発明は、以下の説明に記載し又は以下の図面に図示する構成要素の構造及び配置の詳細にその用途が限定されないことを理解されたい。本発明は、他の実施形態も可能であり、様々な様態で実行又は実施することが可能である。また、本明細書に使用する用語及び術語は、説明を目的とし、限定的と見なされるべきではないことを理解されたい。本明細書における「含む（including）」、「備える、含む（comprising）」、又は「有する（having）」、及びこれらの変形の使用は、以下に挙げる項目及びその均等物並びに追加の項目を包含することが意図される。特に指示又は限定がない限り、「接続（connected）」及び「結合（coupled）」という用語及びこれらの変形は広義に使用されるものであり、直接的及び間接的な接続及び結合を包含する。更に、「接続」及び「結合」は、物理的又は機械的な接続又は結合に制限されるものでない。本開示の範囲から逸脱することなく、他の実施形態を利用することができ、構造上又は論理上の変更を加えることもできることを理解されたい。更に、「前」、「後」、「上」、「下」などの用語は、互いに関係する要素について説明するためにのみ使用され、デバイスの特有の向きについて記述すること、デバイスの必要な若しくは必要とされる向きを指示若しくは示唆すること、又は本明細書に記載する本発明が使用の際にどのように使用され、取り付けられ、表示され、若しくは位置決めさせるかを指定することを一切意味しない。
【００４０】
本明細書では、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上そうでないことを明確に示さない限り、複数形の指示対象を含む。「及び／又は」という用語は、記載の要素の１つ若しくはすべて、又は記載の要素のうちいずれか２つ以上の組み合わせを意味する。
【００４１】
「好ましい（preferred）」及び「好ましくは（preferably）」という用語は、特定の状況下で特定の利益を与えることができる本発明の実施形態を指す。しかし、同じ又は他の状況下では、他の実施形態もまた好ましい可能性がある。更に、１つ以上の好ましい実施形態についての記述は、他の実施形態が有用でないことを示唆するものではなく、本発明の範囲から他の実施形態を除外することを意図するものでもない。
【００４２】
「約（about）」という用語は、範囲の値又は端点について説明するときに使用され、本開示は、特有の値と言及する端点との両方を含むと理解されるべきである。
【００４３】
本明細書では、「備える、含む（comprises）」、「備える、含む（comprising）」、「含む（includes）」、「含む（including）」、「含む（containing）」、「特徴とする（characterized by）」、「有する（having）」という用語、又はこれらの任意の他の変形は、排他的でない包含を含むことが意図される。
【００４４】
本明細書では、「平面（planar）」という用語は、２次元を含む平面を指す。
【００４５】
本明細書では、「実質的に平面（substantially planar）」という表現は、２次元の表面を指す。本発明の「実質的に平面の基材（substantially planar substrate）」（区画を形成する前）の材料は、クレームされる区画の最終の形状、サイズ、又は体積を定める３次元の構造を有するものではない。
【００４６】
本明細書では、「感圧接着剤（pressure sensitive adhesive）」という用語は、圧力を加えると接着面との接着をもたらす接着剤を指す。接着を生じさせるために、溶剤、水、又は熱は必要とされない。「感圧（pressure-sensitive）」という名称が示すように、接合度は、加えられる圧力の量によって影響される。
【００４７】
本明細書では、「疎水性（hydrophobicity）」という用語は、分子が、水又は水性培地に対する親和性をほとんど又はまったく持たない物理的特性を指す。疎水性分子は、無極性になる傾向があり、したがって他の中性分子及び無極性溶剤を好む。水中の疎水性分子は、多くの場合、ともに集まってミセルを形成する。疎水性表面上の水は、高い接触角を呈する。
【００４８】
本明細書では、「エラストマ（elastomer）」という用語は、粘弾性を有し（粘性と弾性の両方を有する）、分子間力が非常に弱いあらゆるポリマーを指し、概して他の材料と比較してヤング率が低く、歪みが高い。通常、結合してポリマーを形成する単量体はそれぞれ、炭素、水素、酸素、及び／又はケイ素から作られる。エラストマは、そのガラス転移温度を超えて存在する非晶質ポリマーであり、したがって相当なセグメント運動が可能である。本明細書では、「弾性回復率（elastic recovery）」という用語は、変形後の回復の割合を指し、伸長後の回復のパーセントとして定量化される。弾性回復率は、ポリマーが最初の弾性変形後に元の長さを回復する割合によって測定される。弾性回復の割合が大きければ大きいほど、最初の変形後にポリマーが元の寸法に回復する傾向も大きくなる。
【００４９】
本明細書では「閉鎖区画（closed compartment）」という用語は、各区画の内容物を隣接する区画の内容物と混ぜ合わせることなく隔離して保持する、画定された明確な空間を指す。本明細書では、「複数の閉鎖区画（plurality of closed compartments）」という表現は、本発明によるデバイスの基材とカバーフィルムとの間に配置されている２つ以上の閉鎖区画を指す。
【００５０】
本明細書では、「封止部（seal）」という用語は、ポリマーカバーフィルムと基材との間の接合を指す。この接合は、区画を形成し、漏れを防止し、区画（たとえば、隣接する区画）間の混ざり合いを防止し、かつ／又は外部環境からの汚染を防止する。
【００５１】
本明細書では、「粘着付与剤（tackifier）」という用語は、接着剤の表面の粘り気、すなわち粘着性を増大させるように接着剤を調合するために使用される化学化合物を指す。そのような化学化合物は、通常、高いガラス転移温度を有する低分子量の化合物である。そのような化学化合物は、歪み速度が低い場合に、より高い応力コンプライアンスを提供し、歪み速度が速くなるにつれてより堅くなる。
【００５２】
本明細書では、「融解係数（melt index）」という用語は、熱可塑性ポリマーの特性を解析するために使用される一般的な尺度である。融解係数は、融解したポリマーの粘性を示す、間接的な反比例する尺度である。温度、圧力、及び幾何形状の定義された条件下で所与の量の時間内にオリフィスを通って流れる融解ポリマーの質量が測定される。融解係数値が大きいほど、その粘性は低く、したがってポリマーの平均分子量も低くなる。同じ条件下では、ポリマーの分子量が高いほど、粘性がより高く、流量が少なくなり、したがって融解係数はより小さい数になる。融解係数は、典型的には、１０分間に流出するポリマーのグラム数、したがってｇ／１０分又はｄｇ／分で表される。
【００５３】
本明細書では、「比重（specific gravity）」という用語は、基準物質の密度（同じ単位体積の質量）に対する物質の密度の比を指す。
【００５４】
「光透過率（optical transmittance）」又は「鮮明度（clarity）」という用語は、プラスチックフィルム、シート、ガラスなどを通して見たときに物体が見える光学的な明瞭さを指す。鮮明度は、物質を通過する光線の線形性に依存し、小角散乱によって決定される。物質の通常の透過性は、光電検出器によって、物質を透過する光のパーセントを求めることによって測定される。
【００５５】
本明細書では、「液体試料（liquid sample）」という用語は、液状のあらゆる試料を指し、又は試料を液体中に溶解させて、液化試料若しくは液化された試料を形成することができる。
【００５６】
「試料（sample）」という用語は、当業者にはよく知られている廃水、食品、表面スワブ若しくは喉などの他の表面からのスワブ、又は他の試料など、あらゆる生体試料又は環境試料であってよい。この試料は、液体試料とすることができ、又は液体中に溶解させて液化した試料を形成することができる。上記のように、検出することができる生体物質は、微生物などの個別粒子を形成する任意の物質であり、インキュベーションプレートの各ウェル内でそのような生体物質の有無を判定することによって定量化することができる。
【００５７】
本明細書では、「嫌気性微生物（anaerobic microorganism）」又は「嫌気性生物（anaerobe）」という用語は、酸素に反応しやすく、酸素の存在下では増殖しない微生物を指す。嫌気性微生物又は嫌気性生物は、増殖のために酸素を必要としないあらゆる微生物である。嫌気性微生物は、偏性嫌気性生物と通性嫌気性生物の両方を含む。偏性嫌気性生物は、大気レベルの酸素に露出されると死滅する微生物である。通性嫌気性生物は、酸素が存在する場合は好気呼吸を行うことができるが、酸素がない場合は発酵又は嫌気呼吸に切り替えることが可能な微生物である。本発明の方法及びシステムは、偏性嫌気性生物と通性嫌気性生物の両方の濃縮及び検出に使用することができる。
【００５８】
本明細書では、微生物の「培養（culture）」又は「増殖（growth）」という用語は、微生物の増殖を促す条件下にある所定の培地内で微生物を増殖させることによって微生物の数を増大させる方法を指す。より具体的には、これは、微生物の少なくとも１回の細胞分裂を促進するのに好適な培地及び条件を提供する方法である。培地は固体、半固体、又は液体の培地であり、微生物の増殖にとって重要な物理的増殖パラメータに必要とされる栄養素をすべて含有する。
【００５９】
本開示のアセンブリ、デバイス、及び方法は、液体試料をパーチュリション（parturition）し、任意に生体分子及び／又は微生物の有無に関して試料を分析するために使用することができる。これらのアセンブリ、デバイス、及び方法は、微生物の存在及び数量に関して試料を分析する最確数（ＭＰＮ）方法で特に有用である。
【００６０】
最確数方法は、全体が参照により本明細書に組み込まれている、国際公開第９５／２３０２６号に記載されている。この方法では、ある体積の水試料がいくつかのチューブ内へ分注され（たとえば１０×１０本。１０本のチューブそれぞれが１０ｍＬを含む）、各チューブ内で細菌が増殖することを可能にする。特有の時間にわたって特有の温度でインキュベートした後、陽性のチューブの数が計数される。これらの実施形態における最確数は、式Ｉから判定することができる。
（式Ｉ）ＭＰＮ／１００ｍＬ＝（Ｐ×１００）／（ＮＴ）１／２
上記の式中、Ｐは陽性のチューブの数であり、Ｎは陰性のチューブ内の試料の体積（ｍＬ）であり、Ｔはすべてのチューブ内の試料の体積（ｍＬ）であり、ＭＰＮは最確数である。この方法の主な欠点は、少数のチューブしか使用しないときに、９５％信頼限界の範囲が大きくなることである。そのような信頼限界は、式ＩＩを使用して概略的に計算される。
（式ＩＩ）Ｌｏｇ（ＭＰＮ）±１．９６（０．５８／ｎ１／２）
上記の式中、ｎは試験数である。
【００６１】
当技術分野の現在のデバイス／方法にはすべて、小さな区画を簡単に効率的に充填する方法に関して問題がある。現在の解決策には、予め形成された区画を有するデバイスの使用、真空の印加、遠心分離、及び更には油乳濁液中の微小滴の形成が挙げられる。どの場合も、液体を分割するために必要とされる方法は非常に煩雑であり、食品などの粒子を含有する実際の試料は適合しない。従来知られている方法は、多数の様々な試料を迅速かつ容易に処理するための日常的な使用には不十分であるため、改善された方法及びデバイスが必要とされている。
【００６２】
本発明により、小さい体積の液体試料を多数のより小さい個別体積に分割するための現在使用されているシステムに関連する問題が解決される。一般に、本発明は、微小体積を使用すると検出速度が実質的に増大するという驚くべき結果に基づいて、微生物の迅速かつ正確な検出及び計数を行うデバイス及び方法を提供する。微生物は、細胞全体が直接検出されるときだけでなく、細胞片、細胞成分、細胞から導出された生体分子、又は細胞の副生成物の検出又は量子化などによってそのような細胞が間接的に検出されるときにも検出及び／又は計数される。
【００６３】
標準的な寒天平板上でも、ＰＥＴＲＩＦＩＬＭ（商標）プレート上でも、コロニーの自動的な検出及び計数は困難であり、また複数の制限がある。しかし、型押しプレート内の各ウェルの位置は固定されており、識別アルゴリズムを必要としないはずである。自動検出プラットホームが所与の区域内で蛍光を単に測定する必要があり、その蛍光が設定閾値を上回るかどうかを判定するだけでよいはずである。結果を得るまでの時間が可能な限り最速であることを必要としない顧客は、周囲光又は簡単な手持ち式の照明源（たとえば、ブラックライト）を使用して陽性の区画を観察（及び計数）することができ、それによって自動読取り器の必要がなくなるはずである。試料が多くのより小さい試料に分割されていると、任意の所与の区画内に存在するウイルス、ヌクレオチド、代謝産物などのような微生物又は他の生体分子の有効濃度が数桁増大し、反応化学の速度が増大し、検出時間が短縮される。
【００６４】
本発明のデバイスには、知られている固体培養技法に比べて別の顕著な利点がある。有利には、本発明の方法はそれほど労力を要さず、より良好な試料分注を可能にし、微生物濃度のより正確な推定を実現する。この理由は、それに対応して区画内の試料アリコートがより多くなることで、それに対応して信頼限界の間隔がより狭くなるからである。
【００６５】
本発明は、微小体積の液体試料の定性的及び定量的分析を必要とする様々な分野で多数の用途がある。適用分野としては、限定されるものではないが、微生物学、分子生物学、バイオテクノロジー、化学などを挙げることができる。
【００６６】
定性的及び定量的分析の例示的な微生物学における用途としては、限定されるものではないが、増殖評価、監視、単細胞集積培養、隔離、成長に適合しない二次試験の実施、異なるサイズの区画を使用する最確数（ＭＰＮ）式の試験が挙げられる。
【００６７】
限定的でない例示的な分子生物学的用途には、ヌクレオチド、アミノ酸、ペプチド、蛋白、代謝産物などの生体分子のポリメラーゼ連鎖反応アッセイ、検出、及び定量化が挙げられる。
【００６８】
図を参照すると、本発明のデバイスは、以下で詳細に説明するように構築される。
【００６９】
図１ａ〜図１ｃに示すように、本開示のデバイスは、基部１０及びカバーフィルム２０を含む構成要素から作ることができる。基部は、基材１２を含む。任意の実施形態では、基材１２は、実質的に平面である第１の表面１３を有する。任意の実施形態では、基材１２は、薄く（たとえば、厚さ５ｍｍ未満）、実質的に平坦（すなわち、シート状）とすることができる。任意の実施形態では、基材１２は、自立式とすることができる。任意に、基材１２は、光学的に半透明又は透明とすることができる。好ましくは、基材１２は、非水溶性であるか、又は第１の表面１３の少なくとも一部分上に非水溶性コーティング（図示せず）を有する。好ましくは、基材１２は、水性液（たとえば、水性試料）に接触したときに、いかなる化学物質（たとえば、微生物の増殖及び／又は活性（たとえば、微生物を検出するために使用される酵素活性）を抑制する可能性のある化学物質）も浸出させない。
【００７０】
任意の実施形態では、図１ｂに示すように、基部１０とカバーフィルム２０を組み合わせてアセンブリ１００にすることができる。カバーフィルム２０は、好適な取付け手段（たとえば、図示しないが感圧接着剤）を介して、基材１０及び／又はスペーサ要素３０に取り付けることができる。有利には、カバーフィルム２０を持ち上げて、試料を載せようとする区域（たとえば、図示の実施形態の接着剤１５及び二次コーティング１８（後述）を取り囲むスペーサ要素３０によって画定される）を露出させることによって、アセンブリ１００内に液体試料（図示せず）を簡単に載せることができる。
【００７１】
基材１２は、たとえば、ポリマーフィルム又は他の適当な材料から製造することができる。適当なポリマーとしては、限定されるものではないが、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリイミド、フルオロポリマー、ポリカーボネート、ポリウレタン、ポリスチレン、これらの誘導体、及びこれらの組み合わせが挙げられる。他の適当な材料としては、限定されるものではないが、アルミニウム箔、銅箔、鋼箔のような金属箔、積層箔、紙箔、及び板紙を挙げることができる。任意の実施形態では、基材１２は二軸延伸ポリプロピレンである。
【００７２】
基材１２の厚さは、少なくとも約０．０１ｍｍである。任意の実施形態では、基材１２の厚さは、５ｍｍより大きい、５ｍｍ以下、約２ｍｍ以下、約１ｍｍ以下である。好ましくは、基材１２は、検出の目的で用いられることがある蛍光又は色に基づく指示薬系に干渉する実質的な吸光特性（たとえば、紫外及び／又は可視波長内）を呈さない。
【００７３】
任意の実施形態では、基材は、電磁放射の可視波長、紫外波長、及び／又は赤外波長に対して光透過性とすることができる。
【００７４】
図１ａ〜１ｃを再び参照すると、第１の主表面１３の少なくとも一部分に、非水溶性の感圧接着剤（pressure sensitive adhesive、ＰＳＡ）層１５が接着されている。本明細書に記載するように本開示のデバイスが組み立てられたとき、ＰＳＡ層１５は、カバーフィルム２０に圧力を加えてカバーフィルム２０をＰＳＡ層１５に接触させると、カバーフィルム２０との接合を形成する。ＰＳＡ接着剤を活性化させるのに溶剤、水、又は熱を必要とせず、接合度は、接着剤１５をカバーフィルム２０に接触させるために使用される圧力の量（及び後述する外部手段のトポロジ）によって影響される。本発明のＰＳＡは、接着剤に実質的に干渉しない水性液及び特定の非水性液の存在下でも、接着特性を保持することが可能である。基材１２上へ被覆されるＰＳＡ層の厚さは、少なくとも約０．０２ｍｍである。任意の実施形態では、ＰＳＡ層の厚さは、約０．０２ｍｍ〜約０．１ｍｍの範囲内である。好適なＰＳＡには、限定されるものではないが、シリコーンポリウレア接着剤などが挙げられる。
【００７５】
好適なＰＳＡには、好適な粘着付与剤と混ぜ合わせたエラストマが挙げられる。感圧接着剤は、水性液（たとえば、水、水性培地、水性緩衝液）中で実質的に不溶性である。エラストマ化合物も粘着付与剤も、微生物の増殖及び／又は活性の実質的な抑制を引き起こすべきでない。任意の実施形態では、感圧接着剤は、電磁放射の可視波長、紫外波長、及び／又は赤外波長に対して光透過性とすることができる。
【００７６】
他の好適な組成物は、一群のシリコーン−ポリウレアベースの感圧接着剤に基づくことができる。そのような組成物は、それぞれ全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第５，４６１，１３４号（Ｌｅｉｒ  ｅｔ  ａｌ．）、米国特許第６，００７，９１４号（Ｊｏｓｅｐｈ  ｅｔ  ａｌ．）、国際公開第９６／３５４５８号（及びその関連する米国特許出願第０８／４２７，７８８号（１９９５年４月２５日出願）、第０８／４２８，９３４号（１９９５年４月２５日出願）、第０８／５８８，１５７号（１９９６年１月１７日出願）、及び第０８／５８８，１５９号（１９９６年１月１７日出願））、国際公開第９６／３４０２８号（及びその関連する米国特許出願第０８／４２８，２９９号（１９９５年４月２５日出願）、第０８／４２８，９３６号（１９９５年４月２５日出願）、第０８／５６９，９０９号（１９９５年１２月８日出願）、及び第０８／５６９，８７７号（１９９５年１２月８日出願））、並びに国際公開第９６／３４０２９号（及びその関連する米国特許出願第０８／４２８，７３５号（１９９５年４月２５日出願）及び第０８／５９１，２０５号（１９９６年１月１７日出願））に記載されている。
【００７７】
任意の実施形態では、基部１０は、任意に、基材１０に取り付けられたスペーサ部材３０を備える。任意に、スペーサ部材３０は、接着剤層１５に接着させることができる。スペーサ部材３０は、本明細書に後述するように、ＰＳＡ層１５のうち、本開示のデバイス内に区画を作製するために使用される区域の外周を画定する部分を露出させる開口３２を備える。
【００７８】
スペーサ部材３０に好適な材料には、たとえば、シート状で容易に入手可能な任意の天然又は合成の物質が挙げられる。好ましくは、スペーサ部材３０は、微生物の増殖又は活性を実質的に抑制せず、水性液を吸収しない（たとえば、疎水性材料から構築されるか、又は疎水性材料で被覆される）。ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタレート、及びポリスチレンは、好適な合成材料のいくつかの例である。特に、比較的安価な市販の発泡ポリスチレン及び発泡ポリエチレンが好ましい。金属、たとえば箔シート、木材などの天然物質は、それほど好ましくない代替品であり、任意に、疎水性コーティングで被覆される。
【００７９】
スペーサ部材３０の厚さは、所望の試料体積を保持するのに十分な大きさの内部容積をデバイス内に作り出すのに足りる厚さとするべきである。任意の実施形態では、スペーサ部材３０は、厚さ１ｍｍ未満、少なくとも厚さ約０．０２ｍｍ、少なくとも厚さ約１ｍｍ、少なくとも厚さ約１．５ｍｍ、又は少なくとも厚さ約２ｍｍとすることができる。
【００８０】
本発明の任意の実施形態では、一次ＰＳＡコーティング（すなわち、ＰＳＡ層１５）で被覆された基材は、二次コーティングを更に含むことができる。任意選択の二次コーティング１８には、限定されるものではないが、たとえば栄養素、脱水培地又は粉末状培地、選択剤（たとえば、抗生物質、塩）、化学物質、染料、蛋白、ペプチド、ヌクレオチド、酵素、及び抗体などの１つ以上の水溶性の試薬を挙げることができる。したがって、このタイプの二次コーティング１８が水性液に露出されると、水溶性の試薬が溶解し、それによって接着剤を露出させ、接着剤がカバーフィルム２０に接合して、本明細書に記載される区画を形成することが可能になる。
【００８１】
この別法又は追加として、二次コーティング１８は、直径が接着剤１５の厚さ以下である非水溶性の粒子（たとえば、中空若しくは中実のガラス微小球又はその断片）を含むことができる。このタイプの二次コーティング１８の場合、非水溶性の粒子を接着剤層１５内へ押し込むことができる（微小球の破壊の有無にかかわらない）（たとえば、本明細書に後述するように、カバーフィルムを通して圧力を加え、それによって接着剤を露出させ、カバーフィルムを接着剤に接合させることによる）。任意の実施形態では、微小球を接着剤層内へ押し込むことで、微小球の破壊を引き起こすことができる。有利には、任意の実施形態では、液体がアセンブリ１００内に載せられ、それによって二次コーティングを溶解させ（二次コーティング１８が水溶性の試薬を含む場合）、接着剤層を露出させるまで、又は、二次コーティングに圧力を加えて（二次コーティング１８が非水溶性の粒子を含む場合）、接着剤を露出させ、それによって接着剤をカバーフィルム２０に接合させるまで、二次コーティング１８は、接着剤層１５へのカバーフィルム２０の接着を一時的に防止する。
【００８２】
任意の実施形態では、本開示の二次コーティング１８は、実質的に水分がないものとすることができる。本明細書及び特許請求の範囲では、「実質的に水分がない（substantially water-free）」という語句は、周囲環境と平衡状態になった後の、脱水されたコーティングのおおよその含水量以下の含水量を有するコーティングを指す。
【００８３】
図１ａ〜図１ｃを参照すると、カバーフィルム２０は、弾性回復率が２０％以下である、非吸水性（たとえば、疎水性）の任意の弾性ポリマーフィルム材料から製造することができる。プラスチックフィルムの弾性回復率は、たとえば、全体が参照により本明細書に組み込まれている、ＡＳＴＭ  Ｄ５４５９−９５（２０１２）「Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｔｅｓｔ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｍａｃｈｉｎｅ  Ｄｉｒｅｃｔｉｏｎ  Ｅｌａｓｔｉｃ  Ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  Ｐｅｒｍａｎｅｎｔ  Ｄｅｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｔｒｅｓｓ  Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｔｒｅｔｃｈ  Ｗｒａｐ  Ｆｉｌｍ」，ＡＳＴＭ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｗｅｓｔ  Ｃｏｎｓｈｏｈｏｃｋｅｎ，ＰＡを使用して測定することができる。カバーフィルム２０は、好ましくは、たとえば、ＰＡＲＡＦＩＬＭ（登録商標）という商品名でＢｅｍｉｓ  Ｆｌｅｘｉｂｌｅ  Ｐａｃｋａｇｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｏｓｈｋｏｓｈ，ＷＩ）から入手利用可能な複合フィルムなど、自己封止式で成形可能な可撓性フィルムである。
【００８４】
任意の実施形態では、カバーフィルムは、電磁放射の可視波長、紫外波長、及び／又は赤外波長に対して光透過性とすることができる。
【００８５】
カバーフィルム２０は、たとえば、ポリマーフィルム又は他の適当な材料から製造することができる。好適なポリマーフィルムは、全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第４，４２５，２６８号に開示されている。ポリマーフィルムは、ポリマーと粘着付与剤の適当な複合物とすることができる。適当なポリマーには、限定されるものではないが、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体を挙げることができる。適当な粘着付与剤には、限定されるものではないが、低分子量ポリイソブテン、ポリテルペン、非晶質ポリプロピレン、及びマイクロクリスタリンワックスを挙げることができる。有利には、カバーフィルム２０は、エチレンと酢酸ビニルの高分子量共重合体及びエチレンと高級アルケンの線状共重合体の組成物を使用して製造される。
【００８６】
高分子量共重合体の融解係数は、約０．１〜約４．０である。線状共重合体の比重は、約０．９１７〜約０．９４５である。任意の実施形態では、カバーフィルム２０の厚さは、０．０２ｍｍ〜０．５ｍｍの範囲内、好ましくは０．１〜０．２５ｍｍの範囲内、より好ましくは０．１〜０．１５ｍｍの範囲内である。このカバーフィルム２０を引き伸ばすと、層の厚さは、約０．０１ｍｍ〜０．２５ｍｍまで減少することができる。そのようにカバーフィルム２０を引き伸ばすとフィルムの厚さが減少し、それが、封止された区画とその外部環境との間の効率的なガス交換に寄与することができるが、湿気は通さない。カバーフィルム２０は透水性が低く、水蒸気の影響を受けにくい。有利には、カバーフィルム２０及びデバイスのこれらの特性は、概して、本発明の一実施形態に示されるように好気性及び嫌気性微生物の効率的な培養に役立つ。
【００８７】
図面に戻ると、図２ａ〜図２ｄは、本開示による検出デバイス（たとえば、図２ｄの検出デバイス１０００）を形成する方法の一実施形態を示す。検出デバイス１０００は、本明細書に記載するように、アセンブリ１００（図２ｂ）から形成される。カバーフィルム２０が基部１０から少なくとも部分的に分離された状態で（図２ａに示す）、アセンブリの基部１０に（たとえば、ピペットで）水性試料４０を付着させる。試料４０は、存在する場合は二次コーティング１８に付着されるか、又はスペーサ部材３０の開口３２によって画定される区域内の感圧接着剤１５に付着される。スペーサ部材３０は、試料４０を収容するとともに、試料４０の漏出又は浸出を防止するように機能する。試料区域を画定するのに適当なスペーサ部材３０としては、限定されるものではないが、バンパ、スペーサ、ロッド、及び金属リムを挙げることができる。液体試料４０は、試料区域内へ分注され、カバーフィルム２０を試料４０及び基部１０に接触させることによってカバーフィルム２０で覆われる。本開示のデバイスは、様々な体積の試料を収容するように寸法設定することができることが、当業者には理解されよう。たとえば、試料体積は、約５０μＬの小ささ又は約１００ｍＬ以上の大きさとすることができる。好ましくは、試料体積全体が、本開示によるデバイスの区画内へ分注される。本明細書に開示するように、二次コーティング１８が水溶性の試薬である場合、水性試料４０と二次コーティング１８との接触がコーティングを溶解させ、それによって、図２ｂに示すように接着剤層１５を試料４０と流体連通させる。
【００８８】
図２ｂに示すように、カバーフィルム２０を基部１０の方へ付勢させることで（図２ａに矢印「Ａ」で示す）試料４０を展延し、基材１２及びスペーサ部材３０によって画定される基部１０内の利用可能な容積を満たす。また、カバーフィルム２０を基部に押し当てることで、アセンブリ１００から実質的にすべての空気を追い出す。液体試料の効率的な展延は、たとえば、カバーフィルムをスペーサ部材３０上へ「圧延」すること（たとえば、アセンブリ１００の一方の縁部から他方の縁部へ）、ローラ、金属スプレッダ、ポリマースプレッダ、曲げガラスロッドなどの展延工具を使用すること、デバイスを傾けること、又はカバーフィルムに手で圧力を加えることなど、当技術分野では知られている方法を使用して、任意数の様態で行うことができる。
【００８９】
基部１０とカバーフィルム２０を組み合わせて、液体試料４０が配置されたアセンブリ１００を形成した後、複数の区画を形成して検出デバイス１０００（図２ｄ）を製作する。任意の実施形態では、これらの区画は、所定の容積を有する。任意の実施形態では、複数の区画の各区画の容積は、他の区画それぞれの容積とほぼ等しい。カバーフィルム１０と基材１２上に被覆された感圧接着剤１５との間の接触点で複数の区画を封止することは、外部手段で圧力を加えて、カバーフィルム２０が基部１０の接着剤層１５に接触するときに予め定められたパターンの封止部を作り出すことによって実現される。カバーフィルム２０及び／又は基部１０のＰＳＡ層１５の疎水性は、隣接する区画内に閉じ込められた液体の相互汚染を防止するのを助ける。
【００９０】
外部手段は、カバーフィルム２０を指定の区域で基部１０の感圧接着剤１５に接触させるために用いられる。これは、実現することが所望される区画のサイズ、形状、及び数に応じて、所望のパターン付き表面（すなわち、予め定められたパターンの空洞を有する表面）を有する任意の工具又はデバイス（たとえば、図２ｃの工具５０）を使用して実現される。工具５０は、成形可能な表面上に工具５０が押し付けられたときにその表面上に相補形のパターンが付いた構造を形成するために使用できる複数の所定のリッジ及び空洞を有する、任意のパターン付きデバイス（たとえば、９６穴又は３８４穴のマイクロタイタープレート）とすることができる。このプロセスで形成される区画のサイズ、形状、及びしたがって容積は、少なくとも部分的に型押し工具５０によって左右され、数ナノリットルから数ミリリットルの範囲で変動する可能性がある。その結果得られるデバイス（たとえば、図２ｄのデバイス１０００）は、任意の所望の数の区画６０を含むことができる。
【００９１】
一実施形態では、リッジ５４及び空洞５６を有する工具５０がアセンブリ１００のカバーフィルム２０に押し付けられて（図２ｃに矢印Ｂで示す）、ウェル（図２ｄの区画６０）のパターンを残し、各区画６０は、図２ｄに示すように、元の試料（すなわち、図２ｃの断面図に部分的に示すデバイス１００の試料４０）のうち所与の（たとえば、予め定められた）部分を保持する。加えて、各区画６０は封止部６２によって囲まれており、封止部６２は、試料のうち区画６０内に収容された部分を、試料のうち他の区画６０内に収容された部分から流体的に隔離する。
【００９２】
図２ｃの図示の実施形態では、工具５０は、スペーサ要素５０の開口３２にサイズ及び形状が類似する区域を画定する外周リッジ５２を備える。有利には、外周リッジは、デバイス１０００の外周を封止し、それによってデバイス１０００からの試料物質の漏れを防止する。
【００９３】
外部手段（たとえば、工具５０）は、限定されるものではないが、油圧式、空気圧式、機械式、及び電気式のタイプから構成されるプレス工具を含む任意の方式で、カバーフィルム上に付勢させることができる。任意の実施形態では、外部手段をカバーフィルムに手で付勢させることができる。
【００９４】
本発明の方法を使用すると、単一のデバイス１０００上に比較的多数の区画６０が製造される。好ましくは、デバイス１０００は、２〜２０００個の区画、より好ましくは約１０〜約１０００個の区画、更により好ましくは約５０〜約５００個の区画、最も好ましくは約１００〜約３００個の区画を備える。デバイス１０００は、図２ｄに示すように、均一なサイズの区画の集まりを有することができる。
【００９５】
任意の実施形態では、本開示のデバイス内の複数の区画のうちの１つ以上の容積を、約２００ｎＬ〜約１０ｍＬとすることができる。たとえば、複数の区画のうちの１つ以上の容積を、約２００ｎＬ、約５００ｎＬ、約１μＬ、約１０μＬ、約５０μＬ、約１００μＬ、約２５０μＬ、約５００μＬ、約１ｍＬ、約２ｍＬ、約５ｍＬ、又は約１０ｍＬとすることができる。
【００９６】
一実施形態では、デバイスは、それぞれが特定の容積の区画を含む、すなわちデバイス全体にわたって均一でない、複数のレーン又は他のグループ分けを含むことができる。たとえば、米国特許第６，６９６，２８６号（全体が参照により本明細書に組み込まれる）の図２に示されている工具を使用して、本開示のデバイスを形成することができる。対応するデバイスは、数組（たとえば、数列）の区画を有することになり、容積は一組の区画内では一定であるが、組と組の間では変動する。これらの容積は、数組の区画の並びにわたって漸進的に変動してもよく、たとえば、より小さい区画は１マイクロリットル未満の容積を保持し、より大きい区画は数マイクロリットルの容積を保持する。デバイス内の最も大きい区画は、たとえば最大でミリリットル単位の容積を保持する区画を含むことすら可能である。この特徴により、単一のデバイス内で液体試験試料を異なる試験体積サイズに分配することが可能になる。最確数（ＭＰＮ）のような計数アッセイの場合、高度に濃縮された試料に対して適当な体積サイズを選択することができ、一連の希釈液の必要なく単一のデバイス内で単一の分割工程を使用してＭＰＮ分析を実行することができることから、この特徴は有益で有利になるはずである。
【００９７】
本発明のデバイスは、液体試験試料を比較的多数の試験微小体積に個別に分離することを可能にする。液体試料を区画に分離し、区画間の相互汚染なく定量的及び定性的分析を実行する能力は、本デバイスの主な利点である。しかし、後述するように、様々な追加の製造方法を使用して、区画の有用性を更に高めることができる。
【００９８】
本開示による方法の任意の実施形態では、外部手段をカバーフィルムに付勢させながら、本開示のデバイスの基部をコンプライアント（すなわち、可撓性で曲がりやすい）表面上に配置することができる。有利には、コンプライアント表面により、外部手段の様々な接触点／表面とカバーフィルムの表面との間で実質的に均一の接触（及び実質的に均一な力の分配）が促進される。この均一な接触により、このプロセスで複数の区画を確実に封止することができる。好適なコンプライアント表面としては、それだけに限定されるものではないが、可撓性ポリマー（たとえば、ゴム）の層、独立気泡若しくは連続気泡発泡体（たとえば、ポリウレタン）の層など、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００９９】
その別法又は追加として、任意の実施形態では、本開示のデバイスの基部は、コンプライアント部材を更に備える。コンプライアント部材は、限定されるものではないが、前述の可撓性ポリマー層、発泡体層、及びこれらの組み合わせを含むことができる。図２ｅは、基部１２に結合されたコンプライアント部材１４を備える基部１１の一実施形態を示す。コンプライアント部材１４は、たとえば接着剤、ステープル、クランプ、リベット、及び融着を含む任意の好適な手段（図示せず）を介して、基材に結合することができる。
【０１００】
任意の実施形態では、本開示のデバイスは、液体試料を分割する方法を介して形成される。デバイスは、スペーサ要素を含む必要はない。スペーサ要素を持たないデバイス内で水性試料を複数の区画内へ分割する方法の一実施形態の工程を、図３ａ〜図３ｄに示す。基部１０が、本明細書に記載するように、感圧接着剤層１５で被覆された第１の主表面１３を有する基材１２を含む。基部１０は、接着剤層１５が上向きになるように、表面（好ましくは、平坦で実質的に水平の表面）上に配置することができる。図３ａに示すように、予め定められた体積の分割すべき水溶液（図３ａの試料４０）が、接着剤層１５上に直接分与される。
【０１０１】
水性試料４０を基材上に載せた後、本明細書に記載するカバーフィルム２０が試料４０及び基部１０上に配置され、それにより試料４０がカバーフィルム２０と基部１０の接着剤層１５との間に配置される。任意に、液体試料４０は、カバーフィルム２０と基部１０の接着剤層１５との間に配置された液体試料４０を取り囲む外周封止部を形成することによって、カバーフィルム２０と基部１０の接着剤層１５との間に封止される。外周封止部（たとえば、図３ｃに示す外周封止部９２）は、カバーフィルム２０のうちの予め定められた部分を接着剤層１５に付勢させることによって形成される。これは、たとえば空洞５７を取り囲むリッジ５６を有する工具５５など、任意の好適な外周形成用の外部手段を使用して行うことができる。空洞５７は、水性試料４０の体積と少なくとも同程度、好ましくはほぼ等しい容積を画定するべきである。したがって、工具５５は、カバーフィルムに付勢させると、基部１０の予め定められた区域全体に試料４０を分配する。工具５５のリッジ５６は、カバーフィルム２０に付勢させると、カバーフィルム２０と接着剤層１５との間に接触をもたらし、それによって、試料保持部（すなわち、チャンバ９０）を画定する外周封止部９０を形成する。任意の実施形態では、チャンバ９０は、工具５５の空洞５７によって画定される所定の容積を有する。空洞５７の容積が液体試料４０の体積にほぼ等しいとき、外周封止部９２の形成中に空気は実質的に遮断される。外周封止部９２を形成するのに好適な工具５５の一実施形態は、３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）から入手可能なＰＥＴＲＩＦＩＬＭ酵母及びカビ用スプレッダなどのプラスチック展延デバイスである。
【０１０２】
代替実施形態（図示せず）では、外周封止部９２は、尖っていない物体（たとえば、鉛筆の先、消しゴムの先）をカバーフィルムに付勢させて液体試料の周りに外周封止部を描くことによって、手で形成することができる。外周封止部９２は、限定されるものではないが、円形、楕円形、多角形、正方形、長方形、六角形、八角形、及び長楕円を含む様々な形状のいずれか１つの形態をとることができることが企図される。
【０１０３】
任意選択の外周封止部９２が形成された後、区画形成用の外部手段（たとえば、図３ｃの工具５０）をカバーフィルム２０に付勢させて、カバーフィルム２０の予め定められた部分を接着剤層１５に接触させて複数の区画６０を形成する。カバーフィルム２０の予め定められた部分が接着剤層１５に接触するところに封止部６２が形成される。これらの封止部は、区画間の液体連通を実質的に防止する。区画６２を形成するのに好適な外部手段の非限定的な例には、プラスチックの３８４穴マイクロタイタープレート（Ｕｎｔｒｅａｔｅｄ  ｂｌａｃｋ  ＃２４２７６４，Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ；Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）がある。外部手段は、たとえば、手の圧力を使用して、又はエアプレス（たとえば、Ｊａｎｅｓｖｉｌｌｅ  Ｔｏｏｌ  ａｎｄ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，Ｉｎｃ．；Ｍｉｌｔｏｎ，ＷＩから入手可能なＭｏｄｅｌ  Ａ−００１９のエアプレス）を使用して、カバーフィルム２０に付勢させることができる。封止部を形成するために使用される力の量は、カバーフィルムと接着剤層との間の接触が封止部を形成するのに足りることを確実にするのに十分な力とするべきである。
【０１０４】
好ましくは、チャンバ９０とほぼ同じ形状及び寸法を有する外部手段を使用することで、この方法によって作製される複数の区画の各区画が予め定められた（任意に、実質的に均一の）容積を確実に有するようにすることができる。しかし、図３ａ〜図３ｄに示すように、これは必須ではない。
【０１０５】
別の態様では、本開示は、液体試料（たとえば、水性液体試料）を分割するパウチを提供する。図４ａは、本開示によるパウチを作製するために使用される構成要素のうちいくつかの部分断面平面図を示す。任意の実施形態では、実質的に平面の基材１２が、主表面上に被覆された層又は感圧接着剤１５を有する。好適な基材１２及び接着剤１５については、本明細書に上述した。接着剤１５上にコーティングを付着させる前に、シート状のマスク７０を基材１２上の接着剤１５に付着（たとえば、積層）させる。マスク７０は、周縁部７２と、中心開口７４と、開口７４から周縁部７２へ延びる間隙７６とを有する。基材１２上に配置されると、開口７４及び間隙７６は、接着剤１５の一部分を露出させる。円形の形状を有するものとして示すが、開口７４は、複数の好適な形状（たとえば、円形、正方形、楕円形、長円形、方形、多角形など）のいずれを有してもよいことが企図される。
【０１０６】
マスク７０は、たとえば、紙又はプラスチックフィルムのシートを含む様々な材料から製造することができる。好ましくは、マスク７０は、接着剤１５に接して配置される側が、低接着性バックサイズで被覆される。低接着性バックサイズ（図示せず）は、接着剤１５と基材１２との間の接合を妨げることなく接着剤１５からマスクを取り除くのを容易にする。マスク７０が接着剤１５に付着された後、二次コーティング１８（たとえば、本明細書に上述した試薬又は粒子などの粉末材料のコーティング）を、露出した接着剤１８に付着させる。図４ｃは、接着剤のうちマスク７０によって覆われていない部分に二次コーティング１８が接着していることを示す。任意の実施形態では、二次コーティング１８は、本明細書に記載するように、水溶性の試薬を含んでいる。任意の実施形態では、二次コーティングは、平均粒径が接着剤層１８の厚さ以下である複数の粒子（たとえば、３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ；Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮから入手可能なＫ３７ガラスバブルなどのガラスバブル）を含む。
【０１０７】
二次コーティング１８を付着させた後、任意に、余分な粉末を（たとえば、振動により）取り除くことができ、マスク７０が取り除かれる。マスク７０を取り除くことで、図４ｄに示すように、基材１２上に残っている接着剤１５を露出させる。本開示によるパウチ５００の作製を完了させるために、図４ｅに示すように、露出した接着剤１５を覆うように寸法設定されたカバーフィルム２０が、接着剤に積層される（たとえば、図示しないがローラを使用する）。パウチ５００は内部リザーバ５０２を備え、パウチ５００の縁部に沿ってポート５０４（すなわち、開口）を通ってリザーバ５０２内へ液体試料（図示せず）が導入される。
【０１０８】
本開示によるパウチ５００は、試料を分割する方法で使用することができる。図５ａ〜図５ｄは、図４ｅのパウチ５００を使用して液体試料を分割するために使用される工程の一実施形態を示す。
【０１０９】
図５ａに示すように、液体試料４０（たとえば、生体物質（たとえば、微生物又は生体分子）を含有する可能性がある水性試料）が、パウチ５００のリザーバ５０２内へ導入される（たとえば、ピペットを介して）。リザーバ５０２内の二次コーティング（図示せず）が水溶性の試薬を含んでいる場合、液体試料４０を導入することで試薬が溶解し、接着剤（図示しないが、パウチ５０２のカバーフィルムに接合することができる）を露出させる。任意に、図５ｂに示すように、展延デバイス５５（たとえば、３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ；Ｓｔ．Ｐａｕｌ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａから入手可能なＰＥＴＲＩＦＩＬＭ酵母及びカビ用プレートスプレッダ）をパウチ５００のカバーフィルムに付勢させ、リザーバ５０２全体にわたって液体を展延し、リザーバ５０２から空気を押し出し（ポートを介して）、単一の液体充填チャンバ９０の周りに外周封止部９２を形成することができる。上記のように、外部手段（たとえば、工具５０）を、液体充填リザーバ（図示せず）又は液体充填区画９０（図５ｃに示す）に付勢させて、図５ｄに示すデバイス２０００を形成する。デバイス２０００は、複数の液体充填区画４０を備え、各区画は、本明細書に記載する工具５０によって定められるリッジ５４のパターンに応じて、１つ以上の封止部４２を介して隣接する区画から隔離される。
【０１１０】
したがって、本発明は、試験試料中の微生物を検出する方法を提供する。好適な試験試料の非限定的な例には、固体、半固体、ゼラチン状の物質、粒子懸濁液、溶液、液体、及びこれらの組み合わせが挙げられる。固体又は半固体の試料は、本開示のデバイス又はパウチ内へ導入する前に、水性培地（たとえば、滅菌水、緩衝液、栄養培地）中で均質化及び／又は懸濁させることができる。液体又は液化した試験試料は、接着剤及び任意に二次コーティングが被覆された基材上へ直接載せることができる。本明細書に記載するように、試料が展延され、デバイスが形成され、その結果、ＰＳＡを利用して上部及び基材を効率的に封止することによって、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する。分割された試料の定性的及び定量的分析は、当業者には知られている方法を使用して、少なくとも１つの区画で行うことができる。
【０１１１】
定量的分析としては、限定されるものではないが、試料中の微生物又は生体分子の計数、定量化、計数、及び測定が挙げられる。生体分子としては、限定されるものではないが、多糖類、脂質、核酸、ＤＮＡ、ＲＮＡ、代謝産物、ビタミン、ホルモン、及びアミノ酸を挙げることができる。定性的分析としては、限定されるものではないが、微生物又は生体分子の検出、培養、隔離、識別、及び精製が挙げられる。
【０１１２】
別の実施形態では、本発明は、液体試験試料中で微生物を培養する方法に関する。この方法は、分割された試料が栄養成長培地を含み、微生物の少なくとも１回の細胞分裂を促進するのに十分な時間にわたって条件下に試料をインキュベートできるようにすることを除いて、上記の方法に類似している。嫌気性微生物を培養するには、区画内で嫌気性の環境を維持するために、分割された試料を有するデバイスを嫌気性チャンバ内で保存することができる。
【０１１３】
試料を区画内へ分注した後、所望の用途に応じて、様々なアッセイを実施することができる。微生物の検出又は計数には、微生物の少なくとも１回の細胞分裂周期を可能にするのに十分な時間にわたってアッセイデバイスをインキュベートすることができる。これらの目的には、デバイスは、概して、約２５℃〜約４５℃、より好ましくは約３０℃〜約３７℃でインキュベートされる。微生物検出のためのインキュベート時間は変動する。検出時間もまた、増殖速度、使用される検出システム（たとえば、指示薬）、及び試料中に存在する微生物の数に応じて変動する。
【０１１４】
液体試験試料は、任意の供給源から得る任意の対象試料とすることができる。液体試験試料は、対象微生物に対する選択的栄養増殖培地、及び／又は増殖している微生物の存在下でシグナルを生じさせる指示物質を含むことができる。好ましくは、栄養増殖培地は、ある体積の液体試験試料が基材上へ分配されるときに所望の濃度を実現するのに十分な量で、基材上のコーティングとして存在する。そのようなコーティングは、たとえば、栄養培地の溶液を基材上へ配置又は分配し、溶液を乾燥させて、栄養培地のコーティング又は堆積物をフィルム上に製作することによって実現することができる。培地の成分は、基材上に被覆される接着剤中に存在することもできる。培地は、液体試料に接触したとき、最終的に試料中へ拡散する。
【０１１５】
多種多様な対象微生物に対する多種多様な選択的増殖培地が、多種多様な微生物に対する多種多様な指示物質と同様に知られており、これらの培地又は指示物質はいずれも、本発明の方法で使用するのに好適である。本発明の利点は、封止された区画内に水性生体試料を閉じ込めることによって拡散が防止されるため、可溶性の指示薬を使用することができることである。
【０１１６】
他の実施形態では、これらの区画は、栄養培地のコーティングを含むことができ、栄養培地は、少なくとも１つの指示物質を更に含むことができる。あるいは、液体試験試料は、少なくとも１つの指示物質を含むことができる。いずれの場合も、指示物質は、液体試験試料中に検出可能なシグナルを提供することが可能な任意の指示物質とすることができる。そのような指示薬には、それだけ限定されるものではないが、発色性の指示薬、蛍光性の指示薬、発光性の指示薬、及び電気化学的な指示薬が挙げられる。本出願の目的のため、「電気化学（electrochemical）」という用語は、微生物と反応すると試料の抵抗又はコンダクタンスを変化させる化学指示薬を意味する。
【０１１７】
アッセイ試薬は、当業者に知られている固体の基材上でアッセイ試薬を固定化する多数の方法のいずれかによって、基材内に固定化することができる。そのような方法には、たとえば、アッセイ試薬含有液を乾燥させることが含まれ、他の方法は、生体分子及び他のアッセイ試薬を固体の基材に非共有結合的に取り付けることである。あるいは、当業者にはよく知られている方法によってアッセイ試薬を基材に共有結合的に取り付けるために、様々な方法を用いることができる。
【０１１８】
比較的低い濃度で検出される蛍光性指示薬を好適に用いることができる。好適な指示薬には、リン酸４−メチルウンベリフェリル、及び４−メチルウンベリフェリル−Ｂ−Ｄ−グルコピラノシド、Ｌ−フェニルアラニン−７−アミド−４−メチルクマリンが挙げられる。他の指示薬には、酢酸４−メチルウンベリフェリル及び硫酸４−メチルウンベリフェリルを挙げることができる。
【０１１９】
別の態様では、デバイスのためのキットが製造される。任意の実施形態では、キットは、以下の構成要素、すなわち（ｉ）非水溶性の感圧接着剤層で被覆された第１の主表面を有する基材と、（ｉｉ）複合ポリマーフィルムとを含む。基材は、本明細書に記載するデバイスに好適な任意の基材とすることができる。複合ポリマーフィルムは、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含む。粘着付与剤は、低分子量ポリイソブテン、ポリテルペン、非晶質ポリプロピレン、及びマイクロクリスタリンワックスからなる群から選択される。任意の実施形態では、複合ポリマーフィルムの弾性回復率は２０％以下である。
【０１２０】
任意の実施形態では、キットは、以下の構成要素、すなわち本明細書に記載するように、（ｉ）非水溶性の感圧接着剤層を接着させた第１の主表面を有する基材であって、基材及び接着剤が本明細書に記載するものである、基材と、（ｉｉ）弾性回復率が２０％以下のポリマーフィルムとを含む。
【０１２１】
キットの任意の実施形態では、基材及び／又はポリマーフィルムは、実質的に平面である。キットの任意の実施形態では、基材及び／又はポリマーフィルムは、実質的に平坦である。キットの任意の実施形態では、感圧接着剤は、シリコーンポリウレアを含む。キットの任意の実施形態では、基材は、接着剤の少なくとも一部分上に配置された二次コーティングを更に含んでいる。キットの任意の実施形態では、二次コーティングは、粉末状栄養素及び／又は複数のガラスバブルを含む。キットの任意の実施形態では、二次コーティングには実質的に水分がない。キットの任意の実施形態では、本明細書に上述したように、基材の第１の主表面にスペーサ要素が結合されている。キットの任意の実施形態では、複合ポリマーフィルムは基材に取り付けられ、存在する場合、スペーサ要素は、基材とカバーフィルムとの間に配置される。
【０１２２】
本開示による任意のキットの追加の構成要素は、様々なサイズ及び形状の試料展延工具、試料区域画定物、及び型押し工具を備えることができる。このキットは、容易に使用するための取扱説明書を更に備えることができる。
【０１２３】
意図される本発明をうまく実行することを同様に可能にする様々な代替技法及び手順が、当業者には利用可能である。後述する特有の材料及び方法はすべて、全体又は一部が、本発明の範囲内に入る。これらの特有の組成物、材料、及び方法は、本発明を限定するものではなく、本発明の範囲内に入る特有の実施形態を示すにすぎない。当業者であれば、独創力を行使しなくても、本発明の範囲から逸脱することなく、同等の材料及び方法を開発することができる。本発明の範囲内に留まったまま、本明細書に記載する手順に多くの変更を加えることができることが理解されよう。そのような変更が本発明の範囲内に含まれることは、本発明者らの意図である。
【０１２４】
例示的な実施形態
実施形態Ａは、
基材を含み、基材が第１の主表面を有する基部と、
第１の主表面の少なくとも一部分に接着させた感圧接着剤と、
接着剤を介して基材に結合された、ポリマー及び粘着付与剤を含む複合フィルムであるポリマーカバーフィルムであって、その複合フィルムが、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含む、カバーフィルムと、
基材とカバーフィルムとの間に配置され、複数の区画の各区画が、複数の区画のうちの少なくとも１つの他の区画との液体連通を防止する封止部によって画定されている、複数の閉鎖区画と、
閉鎖区画のうちの２つ以上の中に配置された水性液とを含み、
封止部が、カバーフィルムと感圧接着剤との間の接触によって形成されている、デバイスである。
【０１２５】
実施形態Ｂは、粘着付与剤が、低分子量ポリイソブテン、ポリテルペン、非晶質ポリプロピレン、及びマイクロクリスタリンワックスからなる群から選択される、実施形態Ａのデバイスである。
【０１２６】
実施形態Ｃは、カバーフィルムの弾性回復率が２０％以下である、実施形態Ａ又は実施形態Ｂのデバイスである。
【０１２７】
実施形態Ｄは、
基材を含み、基材が第１の主表面を有する基部と、
第１の主表面の少なくとも一部分に接着させた感圧接着剤と、
接着剤を介して基材に結合された、弾性回復率が２０％以下のポリマーカバーフィルムと、
基材とカバーフィルムとの間に配置され、複数の区画の各区画が、複数の区画のうちの少なくとも１つの他の区画との液体連通を防止する封止部によって画定されている、複数の閉鎖区画と、
閉鎖区画のうちの２つ以上の中に配置された水性液とを含み、封止部がカバーフィルムと感圧接着剤との間の接触によって形成されている、デバイスである。
【０１２８】
実施形態Ｅは、基材が非水溶性である、上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１２９】
実施形態Ｆは、封止部が、複数の区画のうちのいずれか２つの区画間の液体連通を防止する上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１３０】
実施形態Ｇは、第１の主表面が実質的に平面である、上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１３１】
実施形態Ｈは、基材の厚さが少なくとも約０．０２ｍｍである、上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１３２】
実施形態Ｉは、基材の厚さが５ｍｍ以下である、実施形態Ｈのデバイスである。
【０１３３】
実施形態Ｊは、基材の厚さが２ｍｍ以下である、実施形態Ｈのデバイスである。
【０１３４】
実施形態Ｋは、基材が、ポリプロピレン、ポリウレタン、ポリエチレン、ポリエステル、ポリイミド、フルオロポリマー、ポリカーボネート、ポリスチレン、上記の材料のいずれか１つの誘導体、及び上記材料のいずれか２つ以上の組み合わせからなる群から選択される材料から作られている、上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１３５】
実施形態Ｌは、材料がポリプロピレンであり、ポリプロピレンが二軸延伸ポリプロピレンである、実施形態Ｋのデバイスである。
【０１３６】
実施形態Ｍは、基材が金属箔を含んでいる、上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１３７】
実施形態Ｎは、金属箔がアルミニウム、銅、又は鋼鉄を含んでいる、実施形態Ｍのデバイスである。
【０１３８】
実施形態Ｏは、金属箔が金属箔ポリマー積層体を含んでいる、実施形態Ｍ又は実施形態Ｎのデバイスである。
【０１３９】
実施形態Ｐは、感圧接着剤が、水性液に接触したときに接着特性を保持する、上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１４０】
実施形態Ｑは、感圧接着剤がエラストマ及び粘着付与剤を含んでいる、上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１４１】
実施形態Ｒは、感圧接着剤がシリコーンポリウレア接着剤である、実施形態Ａ〜Ｐのいずれか１つのデバイスである。
【０１４２】
実施形態Ｓは、感圧接着剤の厚さが少なくとも約０．０２ｍｍである、上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１４３】
実施形態Ｔは、感圧接着剤の厚さが０．２ｍｍ以下である、実施形態Ｓのデバイスである。
【０１４４】
実施形態Ｕは、カバーフィルムがポリマー及び粘着付与剤を含む複合フィルムである、上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１４５】
実施形態Ｖは、カバーフィルムが自己封止式の成形可能な可撓性フィルムである、上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１４６】
実施形態Ｗは、カバーフィルムの少なくとも一部分の厚さが０．０１ｍｍ〜０．５ｍｍである、上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１４７】
実施形態Ｘは、カバーフィルムの少なくとも一部分の厚さが０．１０ｍｍ〜０．２５ｍｍである、実施形態Ｗのデバイスである。
【０１４８】
実施形態Ｙは、引き伸ばされたときのカバーフィルムの少なくとも一部分の厚さが０．０１ｍｍ〜０．２０ｍｍである、上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１４９】
実施形態Ｚは、水性液が生体試料を含んでいる、上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１５０】
実施形態ＡＡは、生体試料が微生物学的分析又は生化学的分析のためのものである、実施形態Ｚのデバイスである。
【０１５１】
実施形態ＡＢは、生体試料が食品試料、臨床試料、環境試料、又は廃水試料である、実施形態Ｚのデバイスである。
【０１５２】
実施形態ＡＣは、各区画内の水性液の体積が２００ｎＬ〜１０ｍＬである、上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１５３】
実施形態ＡＤは、すべての区画内の水性液の総体積が５０μＬ〜１００ｍＬの範囲内である、上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１５４】
実施形態ＡＥは、基材とカバーフィルムとの間に配置されたスペーサ要素を更に備える、上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１５５】
実施形態ＡＦは、スペーサ要素が基材に取り付けられる、実施形態ＡＥのデバイスである。
【０１５６】
実施形態ＡＧは、感圧接着剤の少なくとも一部分上に配置された二次コーティングを更に含んでいる、上記実施形態のいずれか１つのデバイスである。
【０１５７】
実施形態ＡＨは、二次コーティングが乾燥粉末から本質的になる、実施形態ＡＧのデバイスである。
【０１５８】
実施形態ＡＩは、二次コーティングが、栄養素、化学物質、染料、蛋白、酵素、及び抗体からなる群から選択される、実施形態ＡＧ又は実施形態ＡＨのデバイスである。
【０１５９】
実施形態ＡＪは、液体を分割する方法であって、
予め定められた体積の液体を、非水溶性の感圧接着剤で被覆された基材と、ポリマー及び粘着付与剤を含む複合フィルムであるポリマーカバーフィルムとの間に載せる工程であって、その複合フィルムがエチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含む、前記工程と、
カバーフィルムに外部手段を付勢させて、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程とを含む方法である。
【０１６０】
実施形態ＡＫは、粘着付与剤が低分子量ポリイソブテン、ポリテルペン、非晶質ポリプロピレン、及びマイクロクリスタリンワックスからなる群から選択される、実施形態ＡＪの方法である。
【０１６１】
実施形態ＡＬは、カバーフィルムの弾性回復率が２０％以下である、実施形態ＡＪ又は実施形態ＡＫの方法である。
【０１６２】
実施形態ＡＭは、液体を分割する方法であって、
予め定められた体積の液体を基材の第１の表面上に載せて、その液体試料が、非水溶性の感圧接着剤で被覆された第１の表面と、弾性回復率が２０％以下であるポリマーカバーフィルムとの間に配置されるようにする工程と、
カバーフィルムに外部手段を付勢させ、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程とを含む方法である。
【０１６３】
実施形態ＡＮは、外部手段をカバーフィルムに付勢させる前、基材及び／又はカバーフィルムが実質的に平坦である、実施形態ＡＪ〜ＡＭのいずれか１つの方法である。
【０１６４】
実施形態ＡＯは、外部手段が、複数の空洞を有するパターン付き表面を含む、実施形態ＡＪ〜ＡＮのいずれか１つの方法である。
【０１６５】
実施形態ＡＰは、基材が、接着剤上に配置された二次コーティングを更に含んでいる、実施形態ＡＪ〜ＡＯのいずれか１つの方法である。
【０１６６】
実施形態ＡＱは、二次コーティングが、栄養素、化学物質、染料、蛋白、酵素、及び抗体からなる群から選択される、実施形態ＡＰの方法である。
【０１６７】
実施形態ＡＲは、液体試料を分析する方法であって、
予め定められた体積の液体を基材の第１の表面上に載せて、その液体試料が、非水溶性の感圧接着剤で被覆された第１の表面と、ポリマー及び粘着付与剤を含む複合フィルムであるポリマーカバーフィルムであって、その複合フィルムが、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含む前記ポリマーカバーフィルムとの間に配置されるようにする工程と、
カバーフィルムに外部手段を付勢させ、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程と、
複数の区画のうちの少なくとも１つの閉鎖区画の定量的分析又は定性的分析を行う工程とを含む方法である。
【０１６８】
実施形態ＡＳは、粘着付与剤が、低分子量ポリイソブテン、ポリテルペン、非晶質ポリプロピレン、及びマイクロクリスタリンワックスからなる群から選択される、実施形態ＡＲの方法である。
【０１６９】
実施形態ＡＴは、カバーフィルムの弾性回復率が２０％以下である、実施形態ＡＲ又は実施形態ＡＳの方法である。
【０１７０】
実施形態ＡＵは、液体試料を分析する方法であって、
液体試料を基材の第１の表面上に載せて、その液体試料が、非水溶性の感圧接着剤で被覆された第１の表面と、弾性回復率が２０％以下であるポリマーカバーフィルムとの間に配置されるようにする工程と、
（ｉｉ）カバーフィルムに外部手段を付勢させ、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程と、
複数の区画のうちの少なくとも１つの閉鎖区画の定量的分析又は定性的分析を行う工程とを含む方法である。
【０１７１】
実施形態ＡＶは、カバーフィルムに外部手段を付勢させる前、基材及び／又はカバーフィルムが実質的に平坦である、実施形態ＡＲ〜ＡＵのいずれか１つの方法である。
【０１７２】
実施形態ＡＷは、定量的分析が、試料中の微生物又は生体分子の計数を含む、実施形態ＡＲ〜ＡＶのいずれか１つの方法である。
【０１７３】
実施形態ＡＸは、生体分子が、蛋白、多糖類、脂質、核酸、ＤＮＡ、ＲＮＡ、代謝産物、ビタミン、ホルモン、及びアミノ酸からなる群から選択される、実施形態ＡＷの方法である。
【０１７４】
実施形態ＡＹは、定性的分析が、試料中の微生物又は生体分子の検出、培養、隔離、識別、又は精製を含む、実施形態ＡＲ〜ＡＸのいずれか１つの方法である。
【０１７５】
実施形態ＡＺは、微生物を培養する方法であって、
予め定められた体積の液体を基材の第１の表面上に載せて、その液体試料が、非水溶性の感圧接着剤で被覆された第１の表面と、ポリマー及び粘着付与剤を含む複合フィルムであるポリマーカバーフィルムであって、その複合フィルムが、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含む前記ポリマーカバーフィルムとの間に配置されるようにする工程と、
カバーフィルムに外部手段を押し付けて、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程と、
微生物の少なくとも１回の細胞分裂を促進する条件下に、液化及び分割した試料をインキュベートする工程とを含む方法である。
【０１７６】
実施形態ＢＡは、粘着付与剤が、低分子量ポリイソブテン、ポリテルペン、非晶質ポリプロピレン、及びマイクロクリスタリンワックスからなる群から選択される、実施形態ＡＺの方法である。
【０１７７】
実施形態ＢＢは、カバーフィルムの弾性回復率が２０％以下である、実施形態ＡＺ又は実施形態ＢＡの方法である。
【０１７８】
実施形態ＢＣは、微生物を培養する方法であって、
試料を液体栄養培地に混ぜ合わせて試料を液化する工程と、
液化した試料を基材の第１の表面上に載せて、その液体試料が、非水溶性の感圧接着剤で被覆された第１の表面と、弾性回復率が２０％以下であるポリマーカバーフィルムとの間に配置されるようにする工程と、
カバーフィルムに外部手段を押し付けて、カバーフィルムの個別領域を基材の感圧接着剤に接触させ、その結果、液体を基材とカバーフィルムとの間に配置された複数の閉鎖区画内へ分割する工程と、
微生物の少なくとも１回の細胞分裂を促進する条件下に、液化及び分割した試料をインキュベートする工程とを含む方法である。
【０１７９】
実施形態ＢＤは、カバーフィルムに外部手段を付勢させる前、基材及び／又はカバーフィルムが実質的に平坦である、実施形態ＡＺ〜ＢＣのいずれか１つの方法である。
【０１８０】
実施形態ＢＥは、微生物が好気性又は嫌気性である、実施形態ＡＺ〜ＢＤのいずれか１つの方法である。
【０１８１】
実施形態ＢＦは、
非水溶性の感圧接着剤層が被覆された第１の主表面を有する基材と、
複合ポリマーフィルムとを含み、
ポリマーフィルムが、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含み、
粘着付与剤が、低分子量ポリイソブテン、ポリテルペン、非晶質ポリプロピレン、及びマイクロクリスタリンワックスからなる群から選択される、キットである。
【０１８２】
実施形態ＢＧは、複合ポリマーフィルムの弾性回復率が２０％以下である、実施形態ＢＦのキットである。
【０１８３】
実施形態ＢＨは、
非水溶性の感圧接着剤層を接着させた第１の主表面を有する基材と、
弾性回復率が２０％以下のポリマーフィルムとを含むキットである。
【０１８４】
実施形態ＢＩは、基材及び／又はポリマーフィルムが実質的に平面である、実施形態ＢＦ〜ＢＨのいずれか１つのキットである。
【０１８５】
実施形態ＢＪは、感圧接着剤がシリコーンポリウレアを含む、実施形態ＢＦ〜ＢＩのいずれか１つのキットである。
【０１８６】
実施形態ＢＫは、基材が、接着剤の少なくとも一部分上に配置された二次コーティングを更に含んでいる、実施形態ＢＦ〜ＢＪのいずれか１つのキットである。
【０１８７】
実施形態ＢＬは、二次コーティングが粉末状栄養素及び／又は複数のガラスバブルを含む、実施形態ＢＫのキットである。
【０１８８】
実施形態ＢＭは、基材の第１の主表面にスペーサ要素が結合されている、実施形態ＢＦ〜ＢＬのいずれか１つのキットである。
【０１８９】
実施形態ＢＮは、
ポリマーフィルムが基材に取り付けられ、
存在する場合、スペーサ要素が、基材とカバーフィルムとの間に配置されている、実施形態ＢＦ〜ＢＭのいずれか１つのキットである。
【０１９０】
実施形態ＢＯは、
基材と、
基材に取り付けられた複合ポリマーフィルムと、
第１の層と第２の層との間に配置されたリザーバと、
リザーバ内へそれを通して液体を導入することができるポートとを備え、
リザーバ内で、基材が、基材に接着させた感圧接着剤層と、接着剤層上へ被覆された実質的に水分がない二次層とを含み、
二次層が、接着剤と複合ポリマーフィルムとの間の接着を防止し、
ポリマーフィルムが、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレンと高級アルケンの線状共重合体、及び粘着付与剤を含み、
粘着付与剤が、低分子量ポリイソブテン、ポリテルペン、非晶質ポリプロピレン、及びマイクロクリスタリンワックスからなる群から選択される、パウチである。
【０１９１】
実施形態ＢＰは、複合ポリマーフィルムの弾性回復率が２０％以下である、実施形態ＢＯのパウチである。
【０１９２】
実施形態ＢＱは、
基材と、
基材に取り付けられたポリマーフィルムと、
基材とポリマーフィルムとの間に配置されたリザーバと、
リザーバ内へそれを通して液体を導入することができるポートとを備え、
リザーバ内で、基材が、基材に接着させた感圧接着剤層と、接着剤層上へ被覆された実質的に水分がない二次層とを含み、
二次層が、接着剤と複合ポリマーフィルムとの間の接着を防止し、
ポリマーフィルムの弾性回復率が２０％以下である、パウチである。
【０１９３】
実施形態ＢＲは、二次コーティングが粉末を含む、実施形態ＢＯ〜ＢＱのいずれか１つのパウチである。
【０１９４】
実施形態ＢＳは、二次コーティングが、栄養素、微生物の増殖を示す試薬、又は選択剤を含む、実施形態ＢＯ〜ＢＲのいずれか１つのパウチである。
【０１９５】
実施形態ＢＴは、二次コーティングが複数の非水溶性粒子を含む、実施形態ＢＮ〜ＢＳのいずれか１つのパウチである。
【０１９６】
実施形態ＢＵは、非水溶性粒子がガラスバブルを含む、実施形態ＢＴのパウチである。
【０１９７】
実施形態ＢＶは、非水溶性粒子が平均直径を有し、接着剤層が厚さを有し、その平均直径がその厚さ以下である、実施形態ＢＴ又は実施形態ＢＵのパウチである。
【０１９８】
実施形態ＢＷは、実施形態ＢＱ〜ＢＸのいずれか１つのパウチを備えるキットである。
【実施例】
【０１９９】
本発明の目的及び利点を以下の実施例によって更に示すが、これらの実施例に示す特定の材料及び量並びに他の条件及び詳細は、本発明を不当に限定すると解釈されるべきでない。特に指示がない限り、すべての部分及び割合は重量に基づき、すべての水は蒸留水であり、すべての分子量は重量平均分子量である。
【０２００】
実施例１：封止されたデバイスの準備及び封止されたデバイス内での水性試料の分割
基材及びカバーフィルムの準備
実質的に平面の第１の表面を有する厚さ０．０５ｍｍ（２ミル）の二軸延伸ポリプロピレン（Biaxially oriented polypropylene、ＢＯＰＰ、０．０５ｍｍ（２ミル））を、基材として使用した。第１の表面上で、フィルムを厚さ０．０５ｍｍ（２ミル）の非水溶性のシリコーンベースの感圧接着剤、シリコーンポリウレアで被覆した。非水溶性のシリコーンポリウレア接着剤は、どちらも全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第５，４６１，１３４号及び第６，００７，９１４号に記載されている方法に従って準備した。
【０２０１】
疎水性カバーフィルムには、厚さ０．１ｍｍのプラスチックパラフィンフィルム（ＰＡＲＡＦＩＬＭ  Ｍの４ミル（０．１ｍｍ）のフィルム、Ｂｅｍｉｓ  Ｆｌｅｘｉｂｌｅ  Ｐａｃｋａｇｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ；Ｏｓｈｋｏｓｈ，ＷＩ）を使用した。
【０２０２】
区画内への水性試料の分割
ＢＡＣＴＯ（商標）Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ  Ｓｏｙ  Ｂｒｏｔｈ（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ；Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）中にＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ（ＡＴＣＣ  ＃２５９２２，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ；Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ）を一晩培養したものを、０．５ｍｇ／ｍＬの４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−グルクロニド（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏｒｐ．；Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で希釈することによって、水溶液を準備した。この試験溶液は、１マイクロリットル当たり約１〜１００の細菌を有した。
【０２０３】
水性試料を区画内へ分割するプロセス内の工程を図３ａ〜３ｄに示す。図３ａに示すように、接着剤で被覆された基材（すなわち、図３ａの基部１０）を平坦な表面上に、接着剤１５が上向きになるように配置し、１ｍＬの試験水溶液（図３ａの試料４０）を、接着剤で被覆された基部上へ直接分与した。
【０２０４】
基材上へ水性試料を加えた後、試料４０と基部１０の上にカバーフィルム２０を慎重に配置し、プラスチック展延デバイス（ＰＥＴＲＩＦＩＬＭ酵母及びカビ用プレートスプレッダ、３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ；Ｓｔ．Ｐａｕｌ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）をカバーフィルム２０に付勢させ（図３ｂに矢印Ｂで示す）、液体を展延し、カバーフィルム２０と基部との間の直径６ｃｍの円形チャンバ（図３ｃのチャンバ９０）内へ液体を封止した。チャンバ９０は、カバーフィルム２０を基部１０に接合させる外周封止部９２によって境界を付けた。
【０２０５】
プラスチックの３８４穴マイクロタイタープレート（Ｕｎｔｒｅａｔｅｄ  ｂｌａｃｋ  ＃２４２７６４，Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ；Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）（図３ｃの工具５０）を培養デバイス上に、ウェルの開口が下向きになるように配置し、エアプレス（Ｍｏｄｅｌ  Ａ−００１９，Ｊａｎｅｓｖｉｌｌｅ  Ｔｏｏｌ  ａｎｄ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，Ｉｎｃ．；Ｍｉｌｔｏｎ，ＷＩ）を使用して、適度な力（すなわち、カバーフィルムと接着剤層との間の接触を確実にするのにちょうど十分な力）でマイクロタイタープレートを押し下げ、カバーフィルムを上に変形させてマイクロタイタープレートの空洞に入れ、この区域においてウェル間でカバーフィルムを基材に封止し、それによって図３ｄの植菌された分割デバイス２０００を形成した。
【０２０６】
区画６０（図３ｄ）は、カバーフィルムと基部の感圧接着剤との間の接触区域に封止部６２を作製することによって形成した。その結果得られた封止部６２は、漏れない区画を形成した。
【０２０７】
型押し後、各デバイスは、約１４０個の個々に封止されたウェルを含み、各ウェルは、５〜１０マイクロリットルの試料を収容した。カバーフィルムの変形は非常に均一であるように見え、９５％を超えるウェルが完全に液体で充填され、目に見える気泡はなかった。その後、型押しされた培養デバイスを３８４穴プレートから取り除いた。
【０２０８】
実施例２：アクリレート系接着剤で被覆されたアルミニウム箔を下層として有する区画
以下の段落に記載の内容を除いて、上記の実施例１に記載した通り培養デバイスを構築した。
【０２０９】
基材には、９７９２Ｒ箔テープ（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）を使用した。この箔（厚さ０．０３６ｍｍ）は、片側が３Ｍ選択診断アクリレート系接着剤で被覆された極軟アルミニウム箔である。接着剤は厚さ約０．０２７ｍｍである。箔は不透明で穿孔可能であり、接着剤はバイオアッセイに非常に適合している。
【０２１０】
カバーフィルムは、実施例１に記載したＰＡＲＡＦＩＬＭ  Ｍプラスチックパラフィンフィルムを使用して製造した。このデバイスの構造では、個々の区画（図示せず）のいずれかからの試料を抽出するために、箔テープを貫通して１μＬのキャピラリーピペットを挿入することができた。有利には、これにより、特定の区画の内容物の少なくとも一部分を使用して後の試験（たとえば、生化学的試験、免疫試験、酵素試験）を実行できるようにすることができる。
【０２１１】
実施例３：細菌増殖の検出−定性的分析
区画内の微生物のインキュベート及び増殖の検出
【０２１２】
封止された区画内に分割された試料を有する実施例１の型押し培養デバイスを、２４時間にわたって３７℃でインキュベートした。
【０２１３】
生菌数測定（Aerobic count、ＡＣ）ＰＥＴＲＩＦＩＬＭプレート（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ；Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）を比較器として使用し、製造者の説明書に従って１ｍＬの同じ試験溶液をフィルム上へ植菌し、展延し、２４時間にわたって３７℃でインキュベートした。
【０２１４】
インキュベーション後、デバイスをＵＶ照明下に配置したときに１つ以上の区画内の蛍光によって明示される細菌の増殖があるかどうか、液体充填区画を観察した。大腸菌β−グルクロニダーゼによる非蛍光性４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−グルクロニド（methylumbelliferyl-β-D-glucuronide、MUG）の蛍光体への酵素開裂は、区画内の増殖が陽性であることを示した。立体顕微鏡を使用して、４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−グルクロニド（ＭＵＧ）蛍光性基材の加水分解を検出した。励起光源（３６５ｎｍ）及びエミッションフィルタ（長さ４００ｎｍの通過域）を備えた立体顕微鏡（Ａｘｉｏｃａｍ  ＭＲｃ５を有するＺｅｉｓｓ  Ｌｕｍｉｎａｒ．Ｖ１２）を使用して、陽性の区画を視覚化した。これらの結果を表１に示す。
【０２１５】
ここに示す実施例を選択した理由は、１つのみの微生物が元の水性試験溶液から各ウェルに分割されて、それが陽性の蛍光シグナルをもたらした可能性が統計的に高い（ｐ＜０．０５）ためである。
【表１】
0006722657.tif 000002
ａ各「増殖が陽性」の区画で、蛍光が陽性であり、観察可能な気泡がないことを、増殖の証拠とした。区画内の蛍光は、区画内の細菌の増殖が陽性と見なした。
【０２１６】
蛍光性指示薬を使用したことに加えて、インキュベーション期間中に非蛍光性のウェルで小さい気泡が蓄積したのに対して、フロレセント（florescent）ウェル（増殖が陽性）では気泡が蓄積しなかったことを認識した。区画内に気泡がないことは、区画内の細菌増殖に相関した。
【０２１７】
実施例４：細菌の酸化還元活性及び増殖の検出
実施例１に従って型押し培養デバイスを準備したが、０．５ｍｇ／ｍＬのＭＵＧ（４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−グルクロニド）ではなく、０．１又は０．０１ｍｇ／ｍＬのリザズリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏｒｐ．；Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用した。リザズリンの添加は、細菌の酸化還元活性の検出を可能にし、ＭＵＧのように、微生物の活性を検出するのに特有の酵素活性（β−Ｄ−グルクロニダーゼ）に依拠しない。
【０２１８】
上記で実施例２に示したように、型押しした培養デバイスをインキュベーションした。生菌数測定（ＡＣ）ＰＥＴＲＩＦＩＬＭプレートを比較器として使用し、１ｍＬの同じ試験試料を用いた。
【０２１９】
液体充填区画の目視検査により、細菌増殖の検出を行った。濃いピンク色のウェルは、細菌増殖が陰性であると見なし、薄いピンク色から透明の区画は、細菌増殖が陽性であると見なした。これらの結果を表２に示す。上記の実施例２と同様に、区画内に小さい気泡がないこともまた、細菌増殖を正確に指示するものであった。
【表２】
0006722657.tif 000003
ａ実施例３の各「増殖が陽性」の区画で、色が変化し、観察可能な気泡がないことを、増殖の証拠とした。
【０２２０】
実施例５：細菌の連続増殖の検出に対する結果を得るまでの時間
ＣＯＬＩＬＥＲＴ（登録商標）細菌学的培地（ＩＤＥＸＸ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ，Ｍａｉｎｅ）を使用し、実施例１と同様に培養デバイスを構築して植菌したが、ＭＵＧがＣＯＬＩＬＥＲＴ培地内にすでに含有されているため、４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−グルクロニド（ＭＵＧ）は添加しなかった。
【０２２１】
デバイスは、カバーフィルムによって形成される区画がプラスチックの３８４穴マイクロタイタープレート（Ｕｎｔｒｅａｔｅｄ  ｂｌａｃｋ  ＃２４２７６４，Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ；Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）のウェルの中を向くように位置決めした。その後、このアセンブリをＴｅｃａｎ  ＩＮＦＩＮＩＴＥ（登録商標）Ｍ２００プレートリーダ（Ｔｅｃａｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）の読取りトレイ内に配置し、蛍光があるかどうかを走査した。この構成内では、デバイスの上に光源及び検出器が位置し、その結果、励起及び放出光が培養デバイスの基材を通過した。
【０２２２】
プレートリーダチャンバは、３７℃の温度を保持するように設定し、３６５ｎｍの励起波長及び４７０±１０ｎｍのエミッションフィルタを使用して、２４時間にわたって２０分ごとに蛍光測定値を得た。その結果得られた蛍光曲線を、時間の関数としてグラフ化した。培養デバイスの区画は、任意の所与の時点での蛍光がその区画にの最初の１８時点（６時間）の平均より２．５倍大きいときに、増殖が陽性であると判定した。各区画内で陽性の増殖を観察した時点（３７℃でインキュベーションした時間（分））を表３に報告する。
【０２２３】
表３．検出時間
この表は、本開示の型押し培養デバイスの各区画内で陽性の増殖を観察するまでに必要としたインキュベーション時間（分）を報告する。「ＮＧ」は増殖がない（すなわち、その区画内の蛍光が微生物の増殖を判定するための記載の閾値を超過しなかった）ことを示す。
【表３】
0006722657.tif 000004
【０２２４】
区画の行及び列を、それぞれ左側及び上部に示す。実施例４に略述したように、この表の各セル内の数字は、検出時間を分単位で示す。ＮＧは、そのウェルに関して２４時間にわたって検出可能な増殖がなかったことを示し、「−」は、主に型押し区域の形状が円形であったため、ウェルが充填されていなかったことを示す。
【０２２５】
全部で、１３１個のうち６５個のウェルで増殖が陽性であり、平均検出時間は７４７±１１分であった。誤差計算は、平均の標準誤差を反映している。検出時間の中間値及び最頻値は、それぞれ７４０及び７００分であり、その範囲は６４０〜１１４０分であった。ＣＯＬＩＬＥＲＴ培地を使用した単一の大腸菌に対する製造者指定の検出時間は、１００ｍＬの試料中で２４時間であり、ＱＵＡＮＴＩ−ＴＲＡＹ（登録商標）ＭＰＮシステム（ＩＤＥＸＸ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ，Ｍａｉｎｅ）を使用すると１８時間である。
【０２２６】
実施例６：パウチ状物品の製造及びパウチ状物品内での液体試料の分割
パウチの準備
パウチを準備するプロセスを図４ａ〜図４ｅに示す。実施例１に記載したように、二軸延伸ポリプロピレンから構成した基材１２を、シリコーンベースの感圧接着剤（接着剤１５、図４ａ）で被覆した。
【０２２７】
一片のポリエチレンテレフタレート（polyethylene terephthalate、ＰＥＴ）剥離ライナを低接着性フルオロシリコーンバックサイズ（Ｓｉｌｉｃｏｎａｔｕｒｅ  ＵＳＡ；Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬから入手可能）で被覆して、マスク（図４ａのマスク７０）を構築した。マスク７０は、直径６ｃｍの円形の開口７４と、マスクの外周７２の片側に位置する幅１ｃｍの間隙７６とを有した。図４ｂに示すように、マスク７０の低接着性側を、基材１２上に被覆された接着剤１５上に配置した。
【０２２８】
ガラスパスツールピペット及びシリコーンバルブを使用して、ガラスバブル（Ｋ３７ガラスバブル、３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ；Ｓｔ．Ｐａｕｌ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）の二次コーティング１８を接着剤上へ分配した。フィルムをひっくり返して軽くたたくことによって、余分なガラスバブルを取り除き、その結果、図４ｃに示す被覆された物品２００を得た。次いで、図４ｄに示すように、マスク７０を取り除き、マスク７０によって覆われていた接着剤１５を露出させた。実施例１に記載したように、ＰＡＲＡＦＩＬＭ  Ｍプラスチックパラフィンフィルムから作られたカバーフィルム２０を、後述するように、露出させた接着剤１５に接着させた。
【０２２９】
ゴムローラを使用して、接着剤がガラスバブルで粉末被覆されていない区域内で、カバーフィルムと基材をともに封止した。これにより、片側に植菌ポート５０４のある円形のリザーバ５０２（図４ｅ）を有するパウチ５００を効果的に形成した。ガラスバブルを接着剤上へ被覆した箇所では、カバーフィルムと基材との間の接着が効果的に防止された。
【０２３０】
パウチ物品内での試料の植菌及び分割
実施例１に記載したように、４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−グルクロニド蛍光性指示薬を有する細菌学的培地（ＣＯＬＩＬＥＲＴ培地、ＩＤＥＸＸ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ，Ｍａｉｎｅ）及びＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ＃２５９２２（ＥＺ−ＣＦＵ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃｓ；Ｓｔ．Ｃｌｏｕｄ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）を含む試験溶液を準備した。
【０２３１】
植菌の際、植菌ポートが上向きになるようにパウチを垂直に保持した。植菌ポートを通してパウチ（図５ａに示す）内へ１ｍＬの試験溶液を直接分注し、パウチの下部に沈降させた。
【０２３２】
植菌させたパウチは、４５°の角度でアルミニウムブロック上に配置し、プラスチック展延デバイス（ＰＥＴＲＩＦＩＬＭ酵母及びカビ用プレートスプレッダ、３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ；Ｓｔ．Ｐａｕｌ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）を手でパウチに（適度な手の圧力で）押し付け、液体を展延し、カバーフィルムと基材との間に配置された円形（直径６ｃｍ）のチャンバ（図５ｂに示すように、外周封止部９２によって境界を付けたチャンバ９０）内へ液体を封止した。必ずしも必要ではないが、４５°の角度で展延することで、パウチ基材がスプレッダによってカバーフィルムに押し付けられるため、円形チャンバの空気の排出及び均一の充填が容易になった。スプレッダは、カバーフィルムをガラスバブル（図示せず）に押し付けて、ガラスバブルを接着剤に入れ、それによって接着剤をカバーフィルムに接触させて、基材とカバーフィルムとの間に外周封止部９２を形成することができた。
【０２３３】
プラスチックの３８４穴マイクロタイタープレート（Ｕｎｔｒｅａｔｅｄ  ｂｌａｃｋ  ＃２４２７６４，Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ；Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ、図５ｃの工具５０）を封止されたパウチ上に、ウェルの開口が下向きになるように配置し、エアプレス（Ｍｏｄｅｌ  Ａ−００１９，Ｊａｎｅｓｖｉｌｌｅ  Ｔｏｏｌ  ａｎｄ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，Ｉｎｃ．；Ｍｉｌｔｏｎ，ＷＩ）を使用して、マイクロタイタープレートを押し下げ、カバーフィルムを上に変形させてマイクロタイタープレートの空洞に入れ、カバーフィルムを基材に封止して、液体試料が分配された複数の区画６０を有する分割デバイス２０００を形成した。各区画６０は、１つ以上の封止部６２によって他の区画から流体的に隔離されていた。
【０２３４】
立体顕微鏡を使用したウェル間の封止された区域の調査により、ガラスバブルが接着剤層内へ押し下げられて、カバーフィルムが感圧接着剤に接触できるようになったことが明らかになった。
【０２３５】
実施例７：代替パウチ状物品の製造及び代替パウチ状物品内における液体試料の分割
パウチの準備
ガラスバブルではなく粉末状細菌学的培地（ＢＡＣＴＯ  Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ  Ｓｏｙ  Ｂｒｏｔｈ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ））を二次コーティングとして使用したことを除いて、実施例６に記載した通りパウチ状物品を準備した。
【０２３６】
実施例６に記載したように、ゴムローラを使用して、細菌学的培地で粉末被覆されていない区域内で、カバーフィルムと基材をともに封止した。これにより、実施例６に記載したように、一方の縁部に沿って植菌ポートを有する円形のパウチを効果的に形成した。粉末状細菌学的培地を接着剤上へ被覆した箇所では、カバーフィルムと基材との間の接着が効果的に防止された。
【０２３７】
試料の植菌及び分割
植菌の際、粉末被覆された植菌ポートが上向きになるようにパウチを垂直に保持した。１ｍＬの試験溶液（４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−グルクロニド蛍光性指示薬を有する細菌学的培地（ＣＯＬＩＬＥＲＴ細菌学的培地、ＩＤＥＸＸ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ，Ｍａｉｎｅ）及びＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ＃２５９２２を含む）をパウチ内へ直接分注し、下部に沈降させた。
【０２３８】
植菌させたパウチは、実施例６に記載したように、プラスチック展延デバイス（ＰＥＴＲＩＦＩＬＭ酵母及びカビ用プレートスプレッダ、３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ；Ｓｔ．Ｐａｕｌ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）を使用して封止した。
【０２３９】
実施例６に記載したように、プラスチックの３８４穴マイクロタイタープレート（Ｕｎｔｒｅａｔｅｄ  ｂｌａｃｋ  ＃２４２７６４，Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ；Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）を使用して、複数の区画を備える培養デバイスの形成を完了した。
【０２４０】
押し付ける前のパウチを目視検査し、押し付けた後に立体鏡を使用してウェル間の封止された区域を調査することで、試験試料の添加によって粉末状培地が溶解され、接着剤を再び露出させ、基材上に被覆された感圧接着剤にカバーフィルムが接触することが可能になったことが明らかになった。
【０２４１】
型押し培養デバイスは、３７℃のインキュベータ内に配置した。
【０２４２】
実施例８：型押し培養デバイスの区画内の好気性微生物の増殖−定量的及び定性的分析
実施例１に従って、培地、従属栄養細菌数（Ｈｅｔｅｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  Ｐｌａｔｅ  Ｃｏｕｎｔ、ＨＰＣ、ＱＵＡＮＴＩ−ＴＲＡＹ培地用）（ＩＤＥＸＸ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ，Ｍａｉｎｅ）を使用し、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＡＴＣＣ  ＃１５４４２（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ；Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ）を試験微生物として使用して、型押し培養デバイスを準備した。
【０２４３】
実施例１〜３に記載したように、培養デバイスに植菌し、２４時間にわたって３７℃でインキュベートした。生菌数測定（ＡＣ）ＰＥＴＲＩＦＩＬＭプレート（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ；Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）を比較器として使用し、１ｍＬの同じ試験溶液をＰＥＴＲＩＦＩＬＭプレート上へ植菌し、展延し、２４時間にわたって３７℃でインキュベートした。
【０２４４】
２４時間インキュベーションした後、細菌の増殖があるかどうか、型押し培養デバイスの区画を評価した。上記のように、励起光源（３６５ｎｍ）及びエミッションフィルタ（長さ４００ｎｍの通過域）を備えた立体顕微鏡（Ａｘｉｏｃａｍ  ＭＲｃ５を有するＺｅｉｓｓ  Ｌｕｍｉｎａｒ．Ｖ１２）を使用して、蛍光があるかどうか各区画を観察した。これらの結果を表４に示す。
【表４】
0006722657.tif 000005
ａ実施例８の各「増殖が陽性」の区画で蛍光が陽性であることを、増殖の証拠とした。
【０２４５】
このデータは、型押し培養デバイス内の好気性細菌の増殖及び計数を実証する。
【０２４６】
実施例９：型押し培養デバイスの区画内の嫌気性微生物の増殖−定量的及び定性的分析
実施例１に従って、培地、３７ｇ／ＬのＢｒａｉｎ  Ｈｅａｒｔ  Ｉｎｆｕｓｉｏｎ  Ｂｒｏｔｈ、５ｇ／ＬのＢＡＣＴＯ  Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ；Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）、０．５ｇ／Ｌのシステイン塩酸塩、０．５ｇ／Ｌの亜硫酸ナトリウム、及び０．５ｇ／Ｌの硫酸鉄（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ；Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用して、型押し培養デバイスを準備した。
【０２４７】
嫌気性雰囲気システムとともに型押し培養デバイス内で嫌気性微生物の成長を実証するための微生物として、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ  ＡＴＣＣ  ＃５３８４（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ；Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ）を選択した。
【０２４８】
培養デバイスに植菌し、活性化されたＧＡＳＰＡＫ（商標）ＥＺ  Ａｎａｅｒｏｂｅ  Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｓａｃｈｅｔ  ｗ／Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ；Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）を有する封止されたボックス内で、２４時間にわたって３７℃でインキュベートした。
【０２４９】
生菌数測定（ＡＣ）ＰＥＴＲＩＦＩＬＭプレート（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ；Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）を比較器として使用し、１ｍＬの同じ試験溶液をフィルム上へ植菌し、展延し、型押し培養デバイスと同じ嫌気性のコンテナ内で２４時間にわたって３７℃でインキュベートした（表５）。
【０２５０】
インキュベート期間後、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ  ＡＴＣＣ  ＃５３８４によって生じた硫化水素と培地中に存在する鉄との反応から黒い沈澱物を含んでいる型押し培養デバイス内の区画は、増殖が陽性であると見なした（表５）。表５に示すように、型押し培養デバイス内で嫌気性細菌の良好な増殖があることを観察した。図６は、複数の区画６０を有する型押し培養デバイス１０００の概略上面図を示す。陰付きの区画６０ａは、指示物質（たとえば、実施例９の培地中に存在する鉄）との観察可能な（たとえば、目に見える色の変化）反応を示す。陰のない区画６０ｂは、指示物質との観察可能な反応がないことを示す。
【表５】
0006722657.tif 000006
ａ実施例９の各「増殖が陽性」の区画内に黒い沈澱物があることを、増殖の証拠とした。
【０２５１】
実施例１０：二次生化学的試験の実施
実施例２．１に記載したように、型押し培養デバイスを準備し、ＨＰＣ培地を植菌した。１組のデバイスにＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＡＴＣＣ  ＃１５４４２を植菌し、別の組の培養デバイスにＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＡＴＣＣ  ＃２５９２２を植菌した。どちらの組も、２４時間にわたって３７℃でインキュベートした。
【０２５２】
インキュベート後、増殖を検出するために、紫外照明下で各培養デバイスの区画を観察した。各培養デバイスの少なくともいくつかの区画内で、陽性の蛍光（増殖）が観察された（すなわち、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ試料とＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ試料の両方から蛍光陽性の区画を得た）。
【０２５３】
３０％のＨ２Ｏ２を含むキャピラリーピペット（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）で、各培養デバイスからの代表的な蛍光陽性の区画を穿孔した。いくつかのウェルは、（箔）基材を通って穿孔した。他のウェルには、カバーフィルムを通って穿孔した。すべての場合で、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａが植菌されたデバイス内の蛍光陽性の区画は、過酸化水素水との活発な泡立ち反応を示した。対照的に、すべての場合で、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉが植菌されたデバイス内の蛍光陽性の区画は、区画内へ過酸化水素水を導入したときにいかなる観察可能な泡立ち反応も示さなかった。
【０２５４】
本明細書に引用したすべての特許、特許出願、及び刊行物、並びに電子的に入手可能な資料の完全な開示が、参照により組み込まれている。本出願の開示と参照により本明細書に組み込まれている文献の開示との間に何らかの不整合が存在する場合、本出願の開示が優先するものとする。上記の発明を実施するための形態及び実施例は、理解を簡単にするためにのみ示した。そこから不必要な限定がないことを理解されたい。当業者には明らかな変形形態が、特許請求の範囲によって定義される本発明内に包含されるため、本発明は、図示及び記載する正確な詳細に限定されるものではない。
【０２５５】
すべての項目名は、読み手の便宜のためのものであり、そのように指示がない限り、項目名に続く本文の意味を限定するために使用されるべきでない。
【０２５６】
本明細書に例示的に記載する本発明は、本明細書に具体的に開示しない何らかの要素がなくても好適に実行することができる。したがって、たとえば、本明細書ではいずれの場合も、「備える、含む（comprising）」、「から本質的になる（consisting essentially of）」、及び「からなる（consisting of）」という用語のいずれかを、他の２つの用語のいずれかに置き換えることができる。用いた用語及び表現は、限定ではなく説明の用語として使用したものであり、そのような用語及び表現を使用する際、図示及び記載する特徴又はその一部分の何らかの均等物を除外する意図はなく、クレームされる本発明の範囲内で様々な修正形態が可能であることが理解される。したがって、好ましい実施形態及び任意選択の特徴によって、本発明について具体的に開示したが、本明細書に開示する概念の修正形態及び変形形態を、当業者であれば用いることができ、そのような修正形態及び変形形態は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内であると見なされることを理解されたい。
【図１ａ】
0006722657.tif 000007
【図１ｂ】
0006722657.tif 000008
【図１ｃ】
0006722657.tif 000009
【図２ａ】
0006722657.tif 000010
【図２ｂ】
0006722657.tif 000011
【図２ｃ】
0006722657.tif 000012
【図２ｄ】
0006722657.tif 000013
【図２ｅ】
0006722657.tif 000014
【図３ａ】
0006722657.tif 000015
【図３ｂ】
0006722657.tif 000016
【図３ｃ】
0006722657.tif 000017
【図３ｄ】
0006722657.tif 000018
【図４ａ】
0006722657.tif 000019
【図４ｂ】
0006722657.tif 000020
【図４ｃ】
0006722657.tif 000021
【図４ｄ】
0006722657.tif 000022
【図４ｅ】
0006722657.tif 000023
【図５ａ】
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【図５ｂ】
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【図５ｃ】
0006722657.tif 000026
【図５ｄ】
0006722657.tif 000027
【図６】
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