(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物およびヒトの膣疾患の治療において使用するための、および健康な膣細菌叢を回復するための、０．２〜１０μｍの粒度を有するクリノプチロライトを含む医薬であって、前記の膣疾患が膣真菌症または膣炎である、前記医薬。
【請求項２】
前記の膣疾患が細菌性膣症、外陰膣カンジダ症およびトリコモナス症からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
前記のクリノプチロライトが重金属を含まないことを特徴とする、請求項１または２に記載の医薬。
【請求項４】
１種または複数種の以下の添加物質：
−薬学的に許容可能な担体材料、
−生存可能な微生物および／またはその抽出物、
−健康な膣細菌叢のための栄養素、
−健康な膣細菌叢のために膣内環境に有利に影響を及ぼす物質、
を含むことを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１つに記載の医薬。
【請求項５】
以下の投与形態：
フォーム、坐剤、膣錠剤、膣坐剤、ゲル剤、エアゾール剤、散剤、洗浄、灌注、クリーム剤／軟膏、懸濁剤、
のうちの１つで局所的に使用されることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１つに記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、請求項１に従う、膣真菌症（Ｖａｇｉｎａｌｍｙｋｏｓｅｎ）、細菌性腟症（ｂａｋｔｅｒｉｅｌｌｅｎ  Ｖａｇｉｎｏｓｅｎ）および他の形態の膣炎（膣の炎症）の治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＷＯ００／６４５８６（特許文献１）から、鉱物材料を粉砕するための装置およびそれに関連する方法が公知であり、それらに関して引き続き、それらを成功裏に使用できる病気がぞんざいに列挙されているが、そこでは抜けている病気がほとんどない。発癌性の病気、肝臓疾患、糖尿病、多発性硬化症に関する試験に対していくつかの参照がなされているが、実施した組織に関する何らかの示唆、または何らかの詳細はない。更に記載された用途分野は、食品の、化粧品の、農薬の、タバコの製造および建設産業における材料である。記載された装置は、全ての粒子の９８％超を４．３μｍ未満に微細化することができ、ここで全粒子の２８％超が０．５μｍより小さい。これらの記載は、上記用途の記載とは関係がない。
【０００３】
同一の発明者によるＷＯ２００７／０５４０８５（特許文献２）は、抗ウイルス剤としての、特にインフルエンザ、風邪、咳、麻疹、おたふく風邪、風疹、伝染性紅斑、三日熱、水痘、Ｐｆｅｉｆｆｅｒ腺熱、ＳＡＲＳ、サイトメガロウイルス、下痢、肝炎、小児麻痺、口唇ヘルペス、イボ、狂犬病、ラッサ熱、エボラ、マールブルグ熱、ハンタウイルス熱、ＦＳＭＥ、ＲＳＳＥ、跳躍病脳炎、ポワッサン脳炎、キャサヌール森林熱、オムスク出血熱、コロラドダニ熱、黄熱、デング熱、日本脳炎、西ナイル熱、チクングニア熱、オニョンニョン熱、リフトバレー熱、サシチョウバエ熱、ロスリバー熱、シンドビス熱、マヤロ熱、マレー渓谷脳炎、セントルイス脳炎、ロシオ脳炎、カリフォルニア脳炎、ブニヤムウェラ熱、オロプーシェ熱、ＡＩＤＳ、陰部ヘルペスおよび／または単純ヘルペスの治療に使用するための、プロポリスおよび／またはコロストラムを含む、１００ナノメートル（０．１μｍに相当）未満に微細化したクリノプチロライトを開示している。また、ＡＩＤＳの一連の「治療」において生じる臨床的症状として、他の中でも特に、膣カンジダ症が挙げられている。臨床試験には言及されておらず、これらは全て純粋な希望的観測である。
【０００４】
本願の発明者のＷＯ２００８／００３１０１（特許文献３）は、重金属からのクリノプチロライトの精製のための方法を開示している。
【０００５】
ＷＯ２０１０／０５７８４９（特許文献４）は、アミンの濃度を減少させる、粉砕されたクリノプチロライトの適用による創傷治癒の改善を記載している。個々の使用に関する詳細な言及なしに、２〜１６μｍの粒度が記載されており、これらはまた、特定のゼータ電位および特定の比表面積を有していなければならないが、測定方法は述べられていない。例として、専ら、人工的に製造されたアミン含有水溶液を用いるｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験が記載されている。
【０００６】
ＥＰ  ９５６  ８５８（特許文献５）から、膣感染症の治療においてプロバイオティクス細菌が有用であることが公知である。
【０００７】
一般に以下のことが見られる：
通常の（健康な）場合、性が成熟した女性の膣細菌叢（ｖａｇｉｎａｌｅ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｍ）は、大部分が種々のラクトバチラス類（民族性に応じて、ラクトバチラス・クリスパタス、Ｌ．ガセリ、Ｌ．ｉｎｅｒｓ、Ｌ．ジェンセニイ）から構成され、これは特に、最適なｐＨを保ち、病原体の増殖を抑制する。種々の環境因子の影響下では、自然の膣内フローラは攻撃され、不均衡（ディスバイオシス）のために病原性細菌の蔓延が生じ得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】ＷＯ００／６４５８６
【特許文献２】ＷＯ２００７／０５４０８５
【特許文献３】ＷＯ２００８／００３１０１
【特許文献４】ＷＯ２０１０／０５７８４９
【特許文献５】ＥＰ  ９５６  ８５８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的および課題は、一方で病原性細菌とできるだけ有効に戦い、他方で有用なラクトバチラス類をできるだけ保護する治療を示すことである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明のこの課題は、請求項１に記載の特徴により解決され；すなわち、０．２〜１０μｍの粒度を有するクリノプチロライトが、哺乳動物およびヒトの、膣疾患、例えば細菌性膣症、外陰膣カンジダ症（Ｖｕｌｖｏｖａｇｉｎａｌｅｒ  Ｃａｎｄｉｄｏｓｅ）およびトリコモナス症の治療のために、および健康な膣細菌叢の回復のために、局所的に（外用的に）使用される。これが可能であるかまたは要求される管轄に関しては、本発明は、０．２〜１０μｍの粒度を有するクリノプチロライトを、始めに記載した疾患（単数または複数）の治療のための医薬の製造に使用することから構成される。
【００１１】
好ましくは、クリノプチロライトは重金属を含まず、特に好ましくはＥＰ２０４０８３７または対応のＵＳ ８，１７３，１０１に記載の方法に相当する方法により重金属を含まない。これが可能である管轄に関しては、参照することによりこれらの文献の開示は本願の部分をなすものである。
【００１２】
本発明の物質の有効性が、種々の異なる微生物株での下記の試験および実験から示される。上記物質が代表的なカンジダ属において、および膣フローラの選択された細菌性の病原体において、増殖抑制作用を有するが、健康な膣フローラの代表的なものではむしろ増殖が促進されることが示される。
【００１３】
粒度と有効性の間の関連性を具体的に示すために、有効性を証明する試験の最後に、対応の比較試験を加える。
【００１４】
［ｎ］で記載された参照は、明細書の最後に挙げられた文献を参照する。結果を種々の表およびグラフにおいて図の形態で表す。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、Ｓａｂ−ブロスにおける、ゼオライトあり／なしでのカンジダ・アルビカンスの増殖を示す。
【図２】図２は、Ｓａｂｏｕｒａｕｄブロスにおけるカンジダ・アルビカンスの増殖に対するゼオライトの影響を示す。
【図３】図３は、３００分のインキュベーション後のカンジダ・アルビカンス培養液の細菌数に対するゼオライトの影響を示す。
【図４】図４は、Ｓａｂｏｕｒａｕｄブロスにおけるカンジダ・アルビカンスの増殖に対するゼオライトの影響を示す（Ｖｉａｌｉｇｈｔアッセイ）。
【図５】図５は、Ｓａｂｏｕｒａｕｄブロスにおけるカンジダ・パラプシローシスの増殖に対するゼオライトの影響を示す。
【図６】図６は、Ｓａｂｏｕｒａｕｄブロスにおけるカンジダ・パラプシローシスの増殖に対するゼオライトの作用を示す。
【図７】図７は、１５時間のインキュベーション後の、Ｖｉａｌｉｇｈｔアッセイによるガードネレラ・バジナリス生存性測定の増殖に対するゼオライトの影響を示す。
【図８】図８は、１５時間のインキュベーション後の、ＶｉａｌｉｇｈｔアッセイによるＧ．バジナリス生存性測定の増殖に対するゼオライトの影響を示す。
【図９】図９は、Ｌ．クリスパタスの増殖に対するゼオライトの影響を示す−６または２４時間のインキュベーション後のＡＴＰ測定。
【図１０】図１０は、コロニーのカウントにより算出された、２４時間のインキュベーション後のＬ．クリスパタス培養液の細胞数を示す。
【図１１】図１１は、２４時間のインキュベーション後のＬ．クリスパタスの培地および培養液のｐＨ値を示す。
【図１２】図１２は、３時間以内のＭＲＳブロスにおけるＬ．ジェンセニイの増殖に対するゼオライトの影響を示す。
【図１３】図１３は、４および７時間以内のＭＲＳブロスにおけるＬ．ジェンセニイの増殖に対するゼオライトの影響を示す。
【図１４】図１４は、ＭＲＳブロスにおけるラクトバチラス・カゼイの増殖に対するゼオライトの影響を示す  −レサズリンアッセイ。
【図１５】図１５は、ＭＲＳブロスにおけるラクトバチラス・カゼイの増殖に対するゼオライトの影響を示す  −Ｖｉａｌｉｇｈｔアッセイ。
【図１６】図１６は、６時間のインキュベーション後の種々の培養液および共培養液のラクテート含有量を示す。
【図１７】図１７は、種々の２４時間培養液および共培養液のラクテート含有量を示す。
【図１８】図１８〜２０は、種々の培養液を用いたアガープレートを示す。
【図１９】図１８〜２０は、種々の培養液を用いたアガープレートを示す。
【図２０】図１８〜２０は、種々の培養液を用いたアガープレートを示す。
【図２１】図２１〜２３は、比較試験で使用された粒度分布を示す。
【図２２】図２１〜２３は、比較試験で使用された粒度分布を示す。
【図２３】図２１〜２３は、比較試験で使用された粒度分布を示す。
【図２４】図２４および２５は、粒度分布に依存したＣ．アルビカンスの増殖を示す  −レサズリン測定。
【図２５】図２４および２５は、粒度分布に依存したＣ．アルビカンスの増殖を示す  −レサズリン測定。
【図２６】図２６〜２８は、Ｃ．グラブラータに関して同じものを示す。
【図２７】図２６〜２８は、Ｃ．グラブラータに関して同じものを示す。
【図２８】図２６〜２８は、Ｃ．グラブラータに関して同じものを示す。
【図２９】図２９は、粒度分布に依存したＣ．グラブラータの増殖を示す  −Ｖｉａｌｉｇｈｔアッセイ。
【００１６】
疾患およびそれらの治療：
膣真菌症：
膣真菌症は、細菌性膣症の次に、膣の感染の２番目に多い原因である。
【００１７】
確認されている感染に関して主要な原因となっているものは、カンジダ属の酵母であり、膣の真菌感染全体の８５〜９０％に関してカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）が原因である。
【００１８】
膣真菌症を促す危険因子は以下である：
妊娠
抗生物質の摂取
糖尿病
免疫抑制剤
癌療法の薬剤
コルチゾン含有薬剤
ストレスまたは精神的負荷
【００１９】
従来技術において推奨される治療は、ポリエン類（ナイスタチン）、イミダゾール類（ブトコナゾール、クロトリマゾール等）またはシクロピロクスオラミンのような種々の抗真菌剤の局所的な適用である。これらは、数多くの異なる調合物、例えば膣錠、膣坐剤（Ｏｖｕｌａ）または膣クリームで膣内投与される。治療期間は、１〜７日であることができる。さらなる可能性は、活性トリアゾール成分（フルコナゾール、イトラコナゾール）の単回適用である。抗真菌剤療法と並行して、プロバイオティクス（例えばＧｙｎｏｆｌｏｒ、Ｍｕｌｔｉ−Ｇｙｎ  Ｆｌｏｒａ  ｐｌｕｓおよびその他多数）の局所投与は、健康な膣のフローラの再形成および環境ｐＨ値の低下を支持することができる。これらの製品（膣錠、膣坐剤、ジェル、クリーム等）は、特に、生存可能なラクトバチラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）（いわゆる、「デーデルライン桿菌」）またはその溶解産物、ならびにエストロゲン誘導体として「健康な」粘膜環境の構築を促進するエストリオール、およびラクトバチラスのための栄養素としてのラクトース（乳糖）を含むことができる。
【００２０】
局所的免疫不全の場合、治療の終了直後にもう再発が起こる。この慢性的に再発するカンジダ・アルビカンス外陰部膣炎に対して、代替がなければ、再発を防ぐために局所または経口の維持療法が推奨される。ここで、初期治療として、７〜１４日間、上記のような局所用製品が適用され、それと並行して最初の週に３ｘ２００ｍｇのフルコナゾールが経口で投与される。これに続いて、維持療法が、１５０ｍｇのフルコナゾールの毎週投与からなる。
【００２１】
明細書、特許請求の範囲および図面における全ての濃度表示は、特段の指示がない限り、ｍｇ／ｍｌとして、または％Ｍ／Ｖ［ｋｇ／リットル］としてみなされるべきである。
【００２２】
本発明においては、０．２〜１０μｍの粒度を有するクリノプチロライトを、１ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌ（Ｍがｋｇ、Ｖがリットルで表される場合に、０．１％Ｍ／Ｖ〜１％Ｍ／Ｖに対応する）の濃度で局所的に適用し、カンジダ・アルビカンスに関して以下の作用を有する：
【００２３】
１．試験：
カンジダ・アルビカンス（ＤＳＭ  Ｎｒ．１３８６）［４］を、ごく普通に多くの場合に使用される方法に従って、酵母グルコースクロラムフェニコール（ＹＧＣ）寒天上で培養し、その後液体培地（Ｓａｂｏｕｒａｕｄブロス）に移した。
【００２４】
トーマ血球計算盤を用いて細胞数を決定した後に、それぞれ１ｘ１０５個細胞／ｍｌの１２個の試験液（培養液）を調製し、ここで、４つの培養液にはゼオライト粉末を添加せず（コントロール）、４つの培養液には１ｍｇ／ｍｌの量でゼオライト粉末を添加し、別の４つの培養液には１０ｍｇ／ｍｌの量でゼオライト粉末を添加した。試験培養液を３７℃において好気条件下で振とうしながらインキュベートした。ブランク値の決定のために、全ての培地について細菌なしでも試験を行った。
【００２５】
６時間の期間にわたって、１時間毎に、培養液のアリコートを生存性試験（レサズリンアッセイ）［７］を用いる物質代謝活性の測定のために取り出した。
【００２６】
結果を図１に図示するが、ここからすぐに高い有効性がわかる。曲線上から下へ：０％；０．１％および１％ゼオライト。
【００２７】
２．試験：
上記の実験を以下の２点を変更して繰り返した：
−試験期間を７時間に延ばした
−培養液のアリコートを、５時間のインキュベーション後に、実際の細胞数の測定のために希釈し、Ｓａｂｏｕｒａｕｄ寒天上に播種し、インキュベーション後にコロニー数の計測により評価を行った。
【００２８】
図２は、レサズリンアッセイの結果を示す；図１におけるような曲線。上述の増殖実験の結果を確認することができた。図３に、試験群の実験的に計測した細菌数をグラフで示す（左から：０％、０．１％および１％ゼオライト）。
【００２９】
３．試験：
実験のさらなる繰り返しにおいて、上記試験結果を裏付けるために、代わりの物質代謝活性測定（Ｖｉａｌｉｇｈｔアッセイ）［８］を選択した。図４（柱；それぞれ左から０、０．１％および１％ゼオライト）は、３、４および５時間インキュベーション後の試験群を示す。見て分かるとおり、ここでもなお、本発明の物質を用いて、ブロス培養液におけるカンジダ・アルビカンスの物質代謝活性の低下を達成することができる。
【００３０】
続いて、本発明の物質の作用を、１０ｍｇ／ｍｌおよび５０ｍｇ／ｍｌの濃度で、カンジダ・パラプシローシス（社内単離；Ｓ０８１１−０１）［９］に関して試験した：
カンジダ・パラプシローシスを、ごく普通に多くの場合に使用される方法に従って、まずＹＧＣ寒天上で培養し、それに引き続いて液体培地（Ｓａｂｏｕｒａｕｄブロス）に移してインキュベートした。
【００３１】
血球計算盤を用いて細胞数を決定した後に、それぞれ１ｘ１０６個酵母細胞／ｍｌの９個の試験液（酵母培養液）を調製し、ここで、３つの培養液にはゼオライト粉末を添加せず（コントロール）、３つの培養液には１０ｍｇ／ｍｌの量でゼオライト粉末を添加し（１％Ｍ／Ｖ）、別の３つの培養液には５０ｍｇ／ｍｌの量でゼオライト粉末を添加した（５％Ｍ／Ｖ）。試験培養液を３０℃において振とうしながらインキュベートした：
３ｘ１２ｍｌ  Ｓａｂｏｕｒａｕｄブロス
３ｘ１２ｍｌ  Ｓａｂｏｕｒａｕｄブロス、１％ゼオライト
３ｘ１２ｍｌ  Ｓａｂｏｕｒａｕｄブロスおよび５％ゼオライト。
ブランク値の決定のために、全ての培地のアリコートについて細菌なしでもインキュベートし、試験を行った。
【００３２】
６０分後、１２０分後およびそれから全てについてさらに３０分後、それぞれの試験培養液の物質代謝活性を、慣用の生存性試験（レサズリンアッセイ）により間接的に決定した。同一条件の３つの液の測定値を平均し、標準偏差を含めて図５に示す（曲線；上から：０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌおよび５０ｍｇ／ｍｌ）。
【００３３】
見て分かるように、本発明物質の２つの使用した用量は、試験細菌の明確な増殖抑制をもたらす。
【００３４】
４．試験：
カンジダ・パラプシローシスに対する１ｍｇ／ｍｌおよび０．２ｍｇ／ｍｌの濃度の本発明物質の作用：
カンジダ・パラプシローシスを、ごく普通に多くの場合に使用される方法に従って、まずＹＧＣ寒天上で培養し、それに引き続いて液体培地（Ｓａｂｏｕｒａｕｄブロス）に移してインキュベートした。
【００３５】
ノイバウエル血球計算盤を用いて細胞数を決定した後に、それぞれ１ｘ１０６個酵母細胞／ｍｌの９個の試験液（酵母培養液）を調製し、ここで、３つの培養液にはゼオライト粉末を添加せず（コントロール）、３つの培養液には１ｍｇ／ｍｌの量でゼオライト粉末を添加し（０．１％Ｍ／Ｖ）、別の３つの培養液には０．２ｍｇ／ｍｌの量でゼオライト粉末を添加した（０．０２％Ｍ／Ｖ）。試験培養液を３０℃において振とうしながらインキュベートした：
３ｘ１２ｍｌ  Ｓａｂｏｕｒａｕｄブロス
３ｘ１２ｍｌ  Ｓａｂｏｕｒａｕｄブロス、０．１％ゼオライト
３ｘ１２ｍｌ  Ｓａｂｏｕｒａｕｄブロスおよび０．０２％ゼオライト。
ブランク値の決定のために、全ての培地のアリコートについて細菌なしでもインキュベートし、試験を行った。
【００３６】
６０分後、１２０分後およびそれから全てについてさらに３０分後、それぞれの試験培養液の物質代謝活性を、慣用の生存性試験（レサズリンアッセイ）により間接的に決定した。同一条件の３つの液の測定値を平均し、標準偏差を含めて図６に示す（曲線；上から：０％、０．０２％および０．１％ゼオライト）。
【００３７】
使用した最も低い濃度（０．０２％）（図６の真ん中の線）においてさえ、本発明の物質は、カンジダ・パラプシローシスに対して増殖を遅らせるように作用する。
【００３８】
細菌性腟症
細菌性腟症は、膣炎の最も頻度の高い形態を示す。
【００３９】
これは、健康なＨ２Ｏ２産生膣フローラ（主にラクトバチラスの種々の代表的なもの）が、ディスバイオシスの中で主に好気性細菌によって置き換わられた時に起こる。これらには、主にガードネレラ・バジナリス（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）およびアトポビウム・ヴァギナ（Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ  ｖａｇｉｎａｅ）が含まれるが、メガスフェラ（Ｍｅｇａｓｐｈａｅｒａ）、ジアリスタ（Ｄｉａｌｉｓｔｅｒ）、モビルンカス（Ｍｏｂｉｌｕｎｃｕｓ）、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）属および他の属の代表的なものも含まれる。
【００４０】
細菌性膣症を促進する危険因子は特に以下である：
より低い社会経済学的状態（→ストレス）
頻繁な膣洗浄
喫煙
頻繁に相手が変わる避妊なしでの性交
子宮における避妊具
より高い用量の殺精子剤ノノキシノール−９の頻繁な使用
【００４１】
推奨治療法：
妊娠外に、メトロニダゾールで７日間治療する（２ｘ５００ｍｇ／日）。別の手段は、２％膣クリームの形態のメトロニダゾールまたはクリンダマイシンの局所投与からなる（期間：７日間）。７日間にわたる１日２回の５００ｍｇメトロニダゾールの局所投与のための膣錠の使用もまた可能である。さらに、クリンダマイシンの膣内使用のための膣坐剤もある（１日１回１００ｍｇ、３日間）。
【００４２】
しかしながら、上記治療法において、付着した細菌性バイオフィルムは除去されず、従って治癒率は３ヶ月後に６０〜７０％のみであり、６ヶ月後はさらにそれ以下である。特に膣のｐＨ値を低下させ、健康な膣フローラを促進するプロバイオティクスの使用により、ＢＶの再発率を、約半分減少させることができる（［２］：Ｓ１−Ｔｈｅｒａｐｉｅ  ｄｅｒ  Ｖａｇｉｎａｌｍｙｋｏｓｅ（膣真菌症のＳ１療法）参照）。
【００４３】
ガードネレラ・バジナリスの下記の試験および実験から、本発明の物質の有効性が示される：
【００４４】
５．試験：
ガードネレラ・バジナリスに対する１ｍｇ／ｍｌ（０．１％Ｍ／Ｖ）および１０ｍｇ／ｍｌ（１％Ｍ／Ｖ）の濃度の本発明物質の作用：
ガードネレラ・バジナリス（ＤＳＭ  Ｎｏ．４９４４）［５］を、ごく普通に多くの場合に使用される方法に従ってＣａｓｍａｎ寒天上で培養し、引き続き液体培地（ＴＳＢ＋５％  ウマ血清）に移した。
【００４５】
トーマ血球計算盤を用いて細胞数を決定した後に、それぞれ１ｘ１０５個細胞／ｍｌの１２個の試験液（培養液）を調製し、ここで、４つの培養液にはゼオライト粉末を添加せず（コントロール）、４つの培養液には１ｍｇ／ｍｌの量でゼオライト粉末を添加し、別の４つの培養液には１０ｍｇ／ｍｌの量でゼオライト粉末を添加した。試験培養液を３７℃において振とうしながら嫌気的条件下で１５時間インキュベートした。
【００４６】
ブランク値の決定のために、全ての培地について細菌なしでも試験を行った。
【００４７】
その後、培養液のアリコートを取り、生存性試験（Ｖｉａｌｉｇｈｔアッセイ）により物質代謝活性を決定した。
【００４８】
図７（バー；左から０、０．１％および１％ゼオライト）において、結果をグラフで示す。
【００４９】
６．試験：
さらに少ない開始細胞数（５ｘ１０４細胞／ｍｌ）を用いて増殖試験を繰り返し、比較結果を示した。図８参照（バー；左から０％、０．１％および１％ゼオライト）。
【００５０】
ラクトバチラス属の細菌で実施した下記の試験および実験から、健康な膣フローラの増殖の本発明物質による促進が示される：
【００５１】
７．試験：
ラクトバチラス・クリスパタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）（ＤＳＭ  Ｎｏ．２０５８４）［６］を、ごく普通に多くの場合に使用される方法に従ってＭａｎ  Ｒｏｇｏｓａ  Ｓｈａｒｐ（ＭＲＳ）寒天上で嫌気的に培養し、引き続き液体培地（ＭＲＳブロス）に移した。
【００５２】
トーマ血球計算盤を用いて細胞数を決定した後に、それぞれ１ｘ１０６個細胞／ｍｌの１２個の試験液（培養液）を調製し、ここで、４つの培養液にはゼオライト粉末を添加せず（コントロール）、４つの培養液には１ｍｇ／ｍｌ（０．１％Ｍ／Ｖ）の量でゼオライト粉末を添加し、別の４つの培養液には１０ｍｇ／ｍｌ（１％Ｍ／Ｖ）の量でゼオライト粉末を添加した。試験培養液を３７℃において振とうしながら嫌気的条件下でインキュベートした。
【００５３】
ブランク値の決定のために、全ての培地について細菌なしでも試験を行った。
【００５４】
６時間および２４時間後、培養液のアリコートを取り、生存性試験（Ｖｉａｌｉｇｈｔアッセイ）により物質代謝活性を決定した。図９参照（バー；左から０、０．１％および１％ゼオライト）。２４時間後、さらに培養液のアリコートを希釈し、ＭＲＳ寒天上に播種し（図１０参照：バー；左から０、０．１％および１％ゼオライト）；試験液のｐＨ値を試験の終わりにｐＨ電極により測定した。図１１参照（バー；それぞれ左：培地、右：培養液；それぞれ左から０％、０．１％および１％ゼオライト）。
【００５５】
コロニー数の計測の結果（図１０）により、生存性測定の確認を行った。図１１は、２４時間インキュベーション後の培養液のｐＨ値を示す。本発明物質を添加したか否かに拘らず、全ての場合に、細菌は環境のｐＨ値を３．８未満に低下させた。
【００５６】
８．試験：
ラクトバチラス・ジェンセニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｅｎｓｅｎｉｉ）（ＤＳＭ  Ｎｏ．２０５５７）［１２］を、ごく普通に多くの場合に使用される方法に従ってＭａｎ  Ｒｏｇｏｓａ  Ｓｈａｒｐ（ＭＲＳ）寒天上で嫌気的に培養し、引き続き液体培地（ＭＲＳブロス）に移した。
【００５７】
トーマ血球計算盤を用いて細胞数を決定した後に、それぞれ５ｘ１０５個細胞／ｍｌの１２個の試験液（培養液）を調製し、ここで、４つの培養液にはゼオライト粉末を添加せず（コントロール）、４つの培養液には１ｍｇ／ｍｌ（０．１％Ｍ／Ｖ）の量でゼオライト粉末を添加し、別の４つの培養液には１０ｍｇ／ｍｌ（１％Ｍ／Ｖ）の量でゼオライト粉末を添加した。試験培養液を３７℃において振とうしながら嫌気的条件下でインキュベートした。
【００５８】
ブランク値の決定のために、全ての培地について細菌なしでも試験を行った。
【００５９】
３時間後、培養液のアリコートを取り、生存性試験（Ｖｉａｌｉｇｈｔアッセイ）により物質代謝活性を決定した。図１２に、実験の結果をグラフで示す。本発明の物質でのインキュベーションにより、物質代謝能力の上昇が示される。
【００６０】
９．試験：
増殖実験を、インキュベーション期間を延ばして繰り返した。物質代謝活性の測定（Ｖｉａｌｉｇｈｔアッセイ）を、上記と同様の方法において４および７時間後に実施した。図１３に、測定結果の評価をグラフで示す。本発明物質のＬ．ジェンセニイに対する増殖促進効果は、試験８における３時間後よりもさらに明確に見られる。
【００６１】
１０．試験：
ラクトバチラス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）（ＤＳＭ  Ｎｏ．２００１１）［１１］を、ごく普通に多くの場合に使用される方法に従ってＭａｎ  Ｒｏｇｏｓａ  Ｓｈａｒｐ（ＭＲＳ）寒天上で嫌気的に培養し、引き続き液体培地（ＭＲＳブロス）に移した。
【００６２】
トーマ血球計算盤を用いて細胞数を決定した後に、それぞれ５ｘ１０５個細胞／ｍｌの１２個の試験液（培養液）を調製し、ここで、４つの培養液にはゼオライト粉末を添加せず（コントロール）、４つの培養液には１ｍｇ／ｍｌ（０．１％Ｍ／Ｖ）の量でゼオライト粉末を添加し、別の４つの培養液には１０ｍｇ／ｍｌ（１％Ｍ／Ｖ）の量でゼオライト粉末を添加した。試験培養液を３７℃において振とうしながら嫌気的条件下でインキュベートした。
【００６３】
ブランク値の決定のために、全ての培地について細菌なしでも試験を行った。
【００６４】
１、３および５時間後、培養液のアリコートを取り、生存性試験（レサズリンアッセイおよびＶｉａｌｉｇｈｔアッセイ）により物質代謝活性を決定した（図１４および図１５参照；２つのバー、左から０、０．１％および１％ゼオライト）。
【００６５】
図１４および１５における結果は、驚くべきことに、試験期間内において、試験用細菌の物質代謝活性に対して本発明の物質が全く作用を有しないことを示す。レサズリンアッセイでも、ＡＴＰアッセイでも、試験の大部分において個々の条件の間で有意な差を測定することはできなかった。
【００６６】
本発明の物質が、明確かつ完全に特異的に健康な膣フローラに関連する種Ｌ．クリスパタスおよびＬ．ジェンセニイの増殖を促進し、しかしながら同時に膣フローラに関連しない種Ｌ．カゼイの増殖には影響を及ぼさないことは驚くべきことである。
【００６７】
以下の研究および実験は、本発明の物質が膣内ラクトバチラス株と組み合わされて健康な膣環境の再生を促進するか、または膣の病気の主要な病原体であるガードネレラ・バジナリスに増殖抑制的に作用することを証明している。
【００６８】
１１．試験：
ラクトバチラス・クリスパタス（ＤＳＭ  Ｎｏ．２０５８４）［６］およびガードネレラ・バジナリス（ＤＳＭ  Ｎｏ．４９４４）［５］を、ごく普通に多くの場合に使用される方法に従って、最初に純粋培養において培養した。
【００６９】
トーマ血球計算盤を用いて培養前の細胞数を決定した後に、それぞれ５ｘ１０５個細胞／ｍｌで１２個の試験液（培養液または共培養液）を混合培地（ＴＳＢ＋ＨＳおよびＭＲＳ、７＋３の比で）中に調製した：
１ｘ１０ｍｌ培地（７ｍｌＴＳＢ＋５％ウマ血清および３ｍｌＭＲＳブロス）
１ｘＧ．バジナリス
１ｘＧ．バジナリス＋０．５％ゼオライト
１ｘＬ．クリスパタス
１ｘＬ．クリスパタス＋０．５％ゼオライト
１ｘＬ．クリスパタス＋Ｇ．バジナリス（５：１）Ａ
１ｘＬ．クリスパタス＋Ｇ．バジナリス＋０．５％ゼオライト（５：１）Ａ
１ｘＬ．クリスパタス＋Ｇ．バジナリス（５：１）Ｂ
１ｘＬ．クリスパタス＋Ｇ．バジナリス＋０．５％ゼオライト（５：１）Ｂ
１ｘＬ．クリスパタス＋Ｇ．バジナリス（１０：１）Ａ
１ｘＬ．クリスパタス＋Ｇ．バジナリス＋０．５％ゼオライト（１０：１）Ａ
１ｘＬ．クリスパタス＋Ｇ．バジナリス（１０：１）Ｂ
１ｘＬ．クリスパタス＋Ｇ．バジナリス＋０．５％ゼオライト（１０：１）Ｂ
【００７０】
試験液を、３７℃で嫌気性条件下、オービタルシェーカーでインキュベートした。６時間および２４時間後、培養液のアリコートを遠心分離し（５分、１５０００ｇ）、上清を８０℃で１５分間水浴中において不活性化し、酵素的な乳酸定量化［１３］に付した。膣内ラクトバチラスにより産生された乳酸は、健康な膣環境の主要因子の１つを示す。
【００７１】
６時間のインキュベーション後の測定結果を図１６にグラフで示す。共培養液の値をそれぞれグラフのために平均した。
【００７２】
図１６から、共培養への本発明の物質の添加がＬ．クリスパタスの乳酸産生を促進することが明らかである。
【００７３】
２４時間のインキュベーション時間後の飽和した培養において、全ての共培養が、Ｌ．クリスパタス純粋培養とほぼ同様に高いラクテート含有量を有し（図１７参照）、これはこの細菌が環境決定因子であったことを示す。
【００７４】
１２．試験：
ラクトバチラス・クリスパタス（ＤＳＭ  Ｎｏ．２０５８４）［６］およびＬ．ジェンセニイ（ＤＳＭ  Ｎｏ．２０５５７）［１２］を、ごく普通に多くの場合に使用される方法に従って、液体培地において嫌気的に培養した。栄養培地として本発明の物質（１０ｍｇ／ｍｌ）を添加しない、および当該物質を添加したＭＲＳブロスを使用し、これらを実験の前に同一の培地中で予め馴化した。飽和した培養液のアリコートを遠心分離し、上清を下記のようにガードネレラ・バジナリスに対するそれらの増殖抑制作用に関して試験した。
【００７５】
Ｇ．バジナリスを、ＴＳＢ＋５％ウマ血清において一晩培養し、ＢＨＩ＋５％ウマ血清寒天プレート上に密に播種した。引き続き、滅菌したピペットチップを用いて、それぞれ３つの穴をプレートに打ち抜いた。寒天プレートのこれらのブランクに、ラクトバチラス培養液の上清をピペッティングした。ポジティブコントロールとして、抗生物質（ペニシリン／ストレプトマイシン）のミックスを使用し、ネガティブコントロールとして培地（遠心分離したＭＲＳブロス）を使用した。Ｇ．バジナリス叢の成長（Ｒａｓｅｎｗａｃｈｓｔｕｍ）が認められるまで、プレートを嫌気的に３７℃でインキュベートした。空気中の湿度を高めるために、湿った布をインキュベーション容器に追加した。
【００７６】
評価において、培養上清を有するブランクの周りに丸くみられる抑制領域の形態で、ガードネレラ・バジナリスの増殖の抑制が明らかとなった。この効果は、２つのラクトバチラス試験株の場合に、本発明物質の添加を伴う上清でも、伴わない上清でも確認することができるが、Ｌ．クリスパタスの場合にＬ．ジェンセニイの場合よりも強力に際立っている。以下の図（図１８、１９および２０）は、一例として、試験評価の時点での寒天プレートを示す。ガードネレラ・バジナリスの密な細菌叢が、ラクトバチラス培養液（およびポジティブコントロールとして伴う抗生物質）の上清の周りに丸く残る。
【００７７】
まとめると、一方では、潜在的に病原性である膣内細菌の増殖の抑制または当該増殖への負の影響を本発明の物質によって示すことができることを確認できる。他方では、健康な膣細菌叢の関連細菌の増殖は妨げられずに、それどころか促進されることを、はっきりと示すことができる。同時に健康な膣細菌叢の傾向的かつ特異的な促進を伴う、病原性膣内細菌に対する本発明物質のこの増殖抑制作用は、驚くべきことであり、新規であるとみなすことができる。  
【００７８】
本発明におけるゼオライト粉末の粒度分布の作用に関して、下記の比較試験のために３つの異なるバッチを調製した。ここで、図２１に相当する分布を「超微細ゼオライト粉末」、図２２に相当する分布を「標準ゼオライト粉末」、図２３に相当する分布を「粗ゼオライト粉末」と呼ぶ。これに関する表のデータは、以下の通りである：
【００７９】
【表１】
0006792420.tif 000002
【００８０】
【表２】
0006792420.tif 000003
【００８１】
【表３】
0006792420.tif 000004
【００８２】
従って、「超微細ゼオライト粉末」は、より低い本発明の範囲に相当し、「標準ゼオライト粉末」は、より高い本発明の範囲に相当し、「粗ゼオライト粉末」は、その質量の約５０％が本発明の範囲の外側（上側）にある。
【００８３】
試験手順は以下のとおりである：
カンジダ・アルビカンスを、ごく普通に多くの場合に使用される方法に従って、液体培地（Ｓａｂｏｕｒａｕｄブロス）で培養した。トーマ血球計算盤を用いて細胞数を決定した後に、それぞれ１ｘ１０５個細胞／ｍｌの１２個の試験液（培養液）を調製し、ここで、３つの培養液にはゼオライト粉末を添加せず（コントロール）、３つの培養液には１０ｍｇ／ｍｌの量で標準のサイズ分布のゼオライト粉末を添加し、別の３つの培養液には１０ｍｇ／ｍｌの量で超微細ゼオライト粉末を添加し、さらに３つの培養液には１０ｍｇ／ｍｌの量で粗ゼオライト粉末を添加した。試験培養液を３７℃において好気条件下で振とうしながらインキュベートした。
【００８４】
ブランク値の決定のために、全ての培地について細菌なしでも試験を行った。
【００８５】
７時間の期間にわたって、１時間ごとに、生存性試験（レサズリンアッセイ）による物質代謝活性の測定のために、培養液のアリコートを採取した。レサズリンアッセイは、物質の細胞毒性の測定のために生物医学的研究において頻繁に使用される試験である。酸化還元指示薬であるレサズリンを培養サンプルに添加すると、細胞の物質代謝において生成するＮＡＤＨにより、蛍光性のレゾルフィンに還元され、その濃度を蛍光光度法により測定する［７］。
【００８６】
図２４に結果をグラフで示す。試験細菌の増殖に対するゼオライト粉末の作用が、粒子サイズに強く依存することが明らかに認められる。従って、超微細ゼオライト粉末（点線曲線、右側のグラフ領域の一番下）および標準ゼオライト粉末（短い破線の曲線、超微細ゼオライト曲線のすぐ上）を有する試験液は、粗い粒度フラクション（長い破線の曲線、同様にその上）よりも、有意に強い物質代謝の抑制を示す。ここで、コントロール群に相当する一番上の曲線は、より著しく速く指数関数的増殖相（より強力に際立ってもいる）に到達する。
【００８７】
図２５は、５、６および７時間のインキュベーション後の測定値を棒グラフの形態で示す。ここで、それぞれ左から右へ、粗ゼオライト粉末、標準ゼオライト粉末、超微細ゼオライト粉末およびコントロール群が配置される。見て明らかなように、粗い粒度フラクション（一番左）の値が、ゼオライトなしのコントロールの値（一番右）に最も近い。
【００８８】
使用したゼオライト粒度の異なる作用を、カンジダ属の他の膣内病原体に関しても示すことができるかどうかを調べるために、以下の実験を外陰膣カンジダ症の別の細菌であるカンジダ・グラブラータ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ）［ＡＴＣＣ  ２００１］で実施した：
試験手順は以下の通りであった：
カンジダ・グラブラータを、ごく普通に多くの場合に使用される方法に従って、液体培地（Ｓａｂｏｕｒａｕｄブロス）で培養した。トーマ血球計算盤を用いて細胞数を決定した後に、それぞれ６ｘ１０５個細胞／ｍｌの１２個の試験液（培養液）を調製し、ここで、３つの培養液にはゼオライト粉末を添加せず（コントロール）、３つの培養液には１０ｍｇ／ｍｌの量で標準のサイズ分布のゼオライト粉末を添加し、別の３つの培養液には１０ｍｇ／ｍｌの量で超微細ゼオライト粉末を添加し、さらに３つの培養液には１０ｍｇ／ｍｌの量で粗ゼオライト粉末を添加した。試験培養液を３７℃において好気条件下で振とうしながらインキュベートした（１１０ｒｐｍ）。
【００８９】
ブランク値の決定のために、全ての培地について細菌なしでも試験を行った。
【００９０】
７時間の期間にわたって、１時間ごとに、生存性試験（レサズリンアッセイ）による物質代謝活性の測定のために、培養液のアリコートを上述のように採取した。
【００９１】
図２６に結果をグラフで示す。Ｃ．グラブラータに関しても、ゼオライト粉末の増殖抑制作用が、粒度に強く影響されることが明らかに認められる。再度、超微細ゼオライト粉末（点線曲線、右側において下から２番目）および標準ゼオライト粉末（短い破線の曲線、右側において一番下）を有する試験液は、粗い粒度フラクション（長い破線の曲線、上から２番目の曲線）よりも、物質代謝パフォーマンスの非常に強い抑制を示す。
【００９２】
結果をより良好に説明するために、図２７に、５および６時間のインキュベーション後の測定値を棒グラフの形態で示す。粗い粒度フラクション（グラフの一番右のバー）の値が、ゼオライトなしのコントロールの値（グラフの一番左のバー）に最も近い。標準ゼオライト群を内側の左に、超微細ゼオライト群を内側の右に示す。
【００９３】
上記の調査結果を確認するために、上記のような増殖試験を実施し、ただし今回は播種細胞の数を約１ｘ１０４個細胞／ｍｌに減少し、そのために一方でインキュベーション時間を１６ｈに延ばした。図２８から明らかなように、前述のものと非常に良好に一致する結果が得られた。
【００９４】
実験的に測定されたデータをさらにまた確認するために、上記のような増殖試験を実施し、ただし今回は使用ゼオライト粉末の作用濃度を５０ｍｇ／ｍｌに増加させ、Ｖｉａｌｉｇｈｔアッセイで、物質代謝活性の測定のための第２の方法を使用した。この試験は、細胞の物質代謝において生成するアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の生物発光の測定による定量化に基づき、ＡＴＰの分解の際に、酵素ルシフェラーゼにより発光する。［８］  
図２９の増殖曲線に基づいてわかるように、標準製品を用いたこれらの試験条件下でも（一番下の短い破線の曲線）、粗ゼオライト粉末（上から２番目の長い破線の曲線）を用いた場合よりも明らかに強力な増殖抑制効果が達成される。  
【００９５】
まとめると、使用した「粗ゼオライト粉末」も本発明のサイズ範囲からの顕著なフラクションを有し、従って、本発明の上部に非常に良好な有効性の境界線があることが考えられる。「超微細ゼオライト粉末」の有効性は、粒子の微細性によりおそらくゼオライトの構造が損傷を受けるかまたは部分的に損傷を受ける、下部の境界線を明らかにする。
【００９６】
粒度の測定は決定的ではなく、それは好ましくはＭａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＧｍｂＨ製のＭａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ２０００を用いて行われる。この装置は、レーザービームの回折の原理に従って光学的なベースに基づいて操作される。ここで、分散し連続的に動く粒子サンプルを通過するレーザービームの散乱光の強度を測定する。比較により、測定した粒度が実際に存在するものと一致することが示された。
【００９７】
しかしながら、評価されるべき組成物に存在するが、上記のおよび特許請求の範囲に記載の粒度範囲内にない粒子は、存在しないとみなされ、考慮に入れられない。
【００９８】
本発明の物質はいずれの薬学的に問題のない組成物において使用することができ、例えば、特に１種または複数種の以下の添加物質を使用することができる：薬学的に許容可能な担体材料；生存可能な微生物および／またはその抽出物；健康な膣細菌叢のための栄養素（例えば乳酸など）；健康な膣細菌叢のために膣内環境に有利に影響を及ぼす物質、例えばエストラジオール、有機酸など。
【００９９】
適用は特に、クリーム剤、軟膏、ゲル剤、坐剤、膣錠剤、膣坐剤（Ｏｖｕｌｉ）、坐薬（Ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｉｅｎ）、フォーム、エアゾール剤、散剤、洗浄（Ｓｐｕｅｌｕｎｇｅｎ）、灌注（Ｉｎｔｉｍｂａｅｄｅｒｎ）、懸濁剤等の形態で行うことができる。
【０１００】
両方の形態において、使用可能な材料および方法は、従来技術から知られており、治療されるべき疾患（適用）のおよび本発明の常識に基づいて薬学者により問題なく選択され、実施されることができる。
なお、本願は特許請求の範囲に記載の発明に関するものであるが、他の態様として以下も包含し得る。
１．哺乳動物およびヒトの膣疾患、例えば細菌性膣症、外陰膣カンジダ症およびトリコモナス症の治療において使用するための、および健康な膣細菌叢を回復するための、０．２〜１０μｍの粒度を有するクリノプチロライト。
２．重金属を含まないことを特徴とする、上記１に記載のクリノプチロライト。
３．１種または複数種の以下の添加物質：
−薬学的に許容可能な担体材料、
−生存可能な微生物および／またはその抽出物、
−健康な膣細菌叢のための栄養素（例えば乳糖など）、
−健康な膣細菌叢のために膣内環境に有利に影響を及ぼす物質（例えばエストラジオール、有機酸など）、
と使用することを特徴とする、上記１または２に記載のクリノプチロライト。
４．以下の投与形態：
フォーム、坐剤、膣錠剤、膣坐剤、ゲル剤、エアゾール剤、散剤、洗浄、灌注、クリーム剤／軟膏、懸濁剤、
のうちの１つで局所的に使用されることを特徴とする、上記１〜３のいずれか１つに記載のクリノプチロライト。
【０１０１】
参照：
［１］  Ｈａｉｎｅｒ，  Ｂ．，Ｌ．  （２０１１）  Ｖａｇｉｎｉｔｉｓ：  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ；  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｏｎｏｍａ．ｅｄｕ／ｕｓｅｒｓ／ｗ／ｗｉｌｋｏｓｚ／ｎ５４０ａ−０７／ＶａｇｉｎｉｔｉｓＤＸ  ａｎｄ  ＴＸ．ｐｄｆ
［２］  ＡＷＭＦ  ｏｎｌｉｎｅ：  Ｓ１−Ｌｅｉｔｌｉｎｉｅ：  Ｂａｋｔｅｒｉｅｌｌｅ  Ｖａｇｉｎｏｓｅ  （ＢＶ）  ｉｎ  Ｇｙｎａｅｋｏｌｏｇｉｅ  ｕｎｄ  Ｇｅｂｕｒｔｓｈｉｌｆｅ；  ＡＷＭＦ  −  Ｌｅｉｔｌｉｎｉｅｎ−Ｒｅｇｉｓｔｅｒ  Ｎｒ．  ０１５／２８；  ａｋｔｕｅｌｌｅｒ  Ｓｔａｎｄ：  ０７／２０１３．
［３］  ＡＷＭＦ  ｏｎｌｉｎｅ：  Ｓ２ｋ−Ｌｅｉｔｌｉｎｉｅ：  Ｖｕｌｖｏｖａｇｉｎａｌｋａｎｄｉｄｏｓｅ；  ＡＷＭＦ−Ｒｅｇｉｓｔｅｒ  Ｎｒ．  ０１５／０７２；  Ｓｔａｎｄ  １２／２０１３．
［４］  Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ  ＤＳＭ  Ｎｒ．  １３８６
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｓｍｚ．ｄｅ／ｃａｔａｌｏｇｕｅｓ／ｄｅｔａｉｌｓ／ｃｕｌｔｕｒｅ／ＤＳＭ−１３８６．ｈｔｍｌ？ｔｘ＿ｄｓｍｚｒｅｓｏｕｒｃｅｓ＿ｐｉ５％５ＢｒｅｔｕｒｎＰｉｄ％５Ｄ＝３０４
［５］  Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ  ＤＳＭ  Ｎｒ．  ４９４４
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｓｍｚ．ｄｅ／ｃａｔａｌｏｇｕｅｓ／ｄｅｔａｉｌｓ／ｃｕｌｔｕｒｅ／ＤＳＭ−４９４４．ｈｔｍｌ？ｔｘ＿ｄｓｍｚｒｅｓｏｕｒｃｅｓ＿ｐｉ５％５ＢｒｅｔｕｒｎＰｉｄ％５Ｄ＝３０４
［６］  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｒｉｓｐａｔｕｓ  ＤＳＭ  Ｎｒ．  ２０５８４
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｓｍｚ．ｄｅ／ｃａｔａｌｏｇｕｅｓ／ｄｅｔａｉｌｓ／ｃｕｌｔｕｒｅ／ＤＳＭ−２０５８４．ｈｔｍｌ？ｔｘ＿ｄｓｍｚｒｅｓｏｕｒｃｅｓ＿ｐｉ５％５ＢｒｅｔｕｒｎＰｉｄ％５Ｄ＝３０４
［７］  Ｒａｍｐｅｒｓａｄ，  Ｓ．，  Ｎ．  （２０１２）  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ａｌａｒｍ  Ｂｌｕｅ  ａｓ  ａｎ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ  ｏｆ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｈｅａｌｔｈ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｂｉｏａｓｓａｙｓ；  Ｒｅｖｉｅｗ，  Ｓｅｎｓｏｒｓ  ２０１２，  １２，  １２３４７−１２３６０．
［８］  ＶｉａｌｉｇｈｔＴＭ  ＭＤＡ  ｐｌｕｓ  -  Ｈｉｇｈ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｋｉｔ  ｗｉｔｈ  ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ｓｉｇｎａｌ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ；  Ｌｏｎｚａ  ＬＴ０７−１２２．
［９］  Ｐｒｏｔｏｋｏｌｌ  ｚｕｒ  ｍｉｋｒｏｂｉｏｌｏｇｉｓｃｈｅｎ  Ｕｎｔｅｒｓｕｃｈｕｎｇ  Ｓ０８１１−０１
［１０］  Ｐｒｏｔｏｋｏｌｌ  ｚｕｒ  ｍｉｋｒｏｂｉｏｌｏｇｉｓｃｈｅｎ  Ｕｎｔｅｒｓｕｃｈｕｎｇ  Ｓ０９０３−１９
［１１］  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ  ＤＳＭ  Ｎｒ．  ２００１１
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｓｍｚ．ｄｅ／ｃａｔａｌｏｇｕｅｓ／ｄｅｔａｉｌｓ／ｃｕｌｔｕｒｅ／ＤＳＭ−２００１１．ｈｔｍｌ？ｔｘ＿ｄｓｍｚｒｅｓｏｕｒｃｅｓ＿ｐｉ５％５ＢｒｅｔｕｒｎＰｉｄ％５Ｄ＝３０４
［１２］  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｅｎｓｅｎｉｉ  ＤＳＭ  Ｎｒ．  ２０５５７
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｓｍｚ．ｄｅ／ｃａｔａｌｏｇｕｅｓ／ｄｅｔａｉｌｓ／ｃｕｌｔｕｒｅ／ＤＳＭ−２０５５７．ｈｔｍｌ？ｔｘ＿ｄｓｍｚｒｅｓｏｕｒｃｅｓ＿ｐｉ５％５ＢｒｅｔｕｒｎＰｉｄ％５Ｄ＝３０４
［１３］  ＥｎｚｙｔｅｃＴＭ  Ｄ／Ｌ  Ｍｉｌｃｈｓａｅｕｒｅ  Ａｒｔ．Ｎｒ．  Ｅ１２５５  −  Ｇｅｂｒａｕｃｈｓａｎｌｅｉｔｕｎｇ；  ｒ−Ｂｉｏｐｈａｒｍ．
［１４］  Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ  ＡＴＣＣ  Ｎｒ．  ２００１
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／〜／ｐｓ／２００１．ａｓｈｘ
【図１】
0006792420.tif 000005
【図２】
0006792420.tif 000006
【図３】
0006792420.tif 000007
【図４】
0006792420.tif 000008
【図５】
0006792420.tif 000009
【図６】
0006792420.tif 000010
【図７】
0006792420.tif 000011
【図８】
0006792420.tif 000012
【図９】
0006792420.tif 000013
【図１０】
0006792420.tif 000014
【図１１】
0006792420.tif 000015
【図１２】
0006792420.tif 000016
【図１３】
0006792420.tif 000017
【図１４】
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【図１５】
0006792420.tif 000019
【図１６】
0006792420.tif 000020
【図１７】
0006792420.tif 000021
【図１８】
0006792420.tif 000022
【図１９】
0006792420.tif 000023
【図２０】
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【図２１】
0006792420.tif 000025
【図２２】
0006792420.tif 000026
【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
0006792420.tif 000029
【図２６】
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【図２７】
0006792420.tif 000031
【図２８】
0006792420.tif 000032
【図２９】
0006792420.tif 000033