(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
多発性骨髄腫（ＭＭ）を有する対象を治療するための医薬組成物であって、抗ＣＤ３８抗体を含み、前記抗ＣＤ３８抗体は、それぞれ配列番号６、７、及び８の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＨＣＤＲ１）、２（ＨＣＤＲ２）、及び３（ＨＣＤＲ３）配列と、それぞれ配列番号９、１０、及び１１の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１（ＬＣＤＲ１）、２（ＬＣＤＲ２）、及び３（ＬＣＤＲ３）配列とを含み、前記医薬組成物は、前記治療を必要とする前記対象に、該医薬組成物を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与する工程を含む方法において使用され、かつ、前記対象は、前記抗ＣＤ３８抗体によるか、又は少なくとも１つの化学療法剤及び前記抗ＣＤ３８抗体の組み合わせによる治療に対して耐性であるか、又は耐性を獲得した、医薬組成物。
【請求項２】
多発性骨髄腫（ＭＭ）を有する対象を治療するための医薬組成物であって、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて含み、前記抗ＣＤ３８抗体は、それぞれ配列番号６、７、及び８の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＨＣＤＲ１）、２（ＨＣＤＲ２）、及び３（ＨＣＤＲ３）配列と、それぞれ配列番号９、１０、及び１１の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１（ＬＣＤＲ１）、２（ＬＣＤＲ２）、及び３（ＬＣＤＲ３）配列とを含み、かつ、前記対象は、前記抗ＣＤ３８抗体によるか、又は少なくとも１つの化学療法剤及び前記抗ＣＤ３８抗体の組み合わせによる治療に対して耐性であるか、又は耐性を獲得した、医薬組成物。
【請求項３】
前記抗ＣＤ３８抗体が、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）によって、インビトロでＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記抗ＣＤ３８抗体が、インビトロでＣＤＣによって前記ＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記抗ＣＤ３８抗体が、インビトロでＡＤＣＣによって前記ＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記少なくとも１つの化学療法剤が、レナリドマイド、ボルテゾミブ、メルファラン、デキサメタゾン、又はサリドマイドである、請求項１から５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記少なくとも１つの化学療法剤が、レナリドマイド又はボルテゾミブである、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記抗ＣＤ３８抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプのものである、請求項１から７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記抗ＣＤ３８抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプのものである、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記抗体が、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）、及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する、請求項１から９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号１２のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１３のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号１２の重鎖、及び配列番号１３の軽鎖を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
多発性骨髄腫（ＭＭ）を有する対象を治療するための組み合わせ医薬であって、抗ＣＤ３８抗体および全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）を含み、前記抗ＣＤ３８抗体は、それぞれ配列番号６、７、及び８の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＨＣＤＲ１）、２（ＨＣＤＲ２）、及び３（ＨＣＤＲ３）配列と、それぞれ配列番号９、１０、及び１１の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１（ＬＣＤＲ１）、２（ＬＣＤＲ２）、及び３（ＬＣＤＲ３）配列とを含み、かつ、前記対象は、前記抗ＣＤ３８抗体によるか、又は少なくとも１つの化学療法剤及び前記抗ＣＤ３８抗体の組み合わせによる治療に対して耐性であるか、又は耐性を獲得した、組み合わせ医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗ＣＤ３８抗体及び全トランス型レチノイン酸（all-trans retinoic acid）による併用療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｂ細胞悪性疾患には、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、有毛細胞白血病、原発性滲出液リンパ腫、及びＡＩＤＳ関連非ホジキンリンパ腫が含まれる。Ｂ細胞悪性疾患は、診断されたリンパ腫のうちの８５％超を構成する。
【０００３】
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、低い増殖指数及び延長された寿命を伴う、骨髄中の分泌形質細胞の潜在性蓄積を特徴とするＢ細胞悪性疾患である。この疾患は、最終的に骨及び骨髄を攻撃し、骨格系の至るところで多数の腫瘍及び病変部をもたらす。全ての癌のうちのおよそ１％及び全ての血液系悪性疾患のうちの１０％強が、ＭＭに起因し得る。ＭＭの発生率は、高齢人口において増加し、このうち診断時年齢中央値が約６１歳である。
【０００４】
ＣＤ３８は、受容体媒介接着及びシグナル伝達における機能を有すると共に、そのエクト型酵素活性を介してカルシウム動員を媒介し、ＮＡＤ+からの環状ＡＤＰ−リボース（ｃＡＤＰＲ）の形成を触媒し、また、ｃＡＤＰＲをＡＤＰ−リボース（ＡＤＰＲ）へと加水分解するＩＩ型膜タンパク質である。ＣＤ３８は、サイトカインの分泌並びにリンパ球の活性化及び増殖を媒介し（Ｆｕｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４５：２３９０〜６、１９９０、Ｔｅｒｈｏｒｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ７７１〜８０、１９８１、Ｇｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３９８：７０〜３、１９９９）、そのＮＡＤグリコヒドラーゼ活性を介して、調節性のＴ細胞区画を調節することに関与するとされている細胞外ＮＡＤ+レベルを調節する（Ａｄｒｉｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１４：１２８４〜９２、２０１２、Ｃｈｉａｒｕｇｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １２：７４１〜５２、２０１２）。
【０００５】
ＣＤ３８は、ＭＭ悪性形質細胞上で発現され、様々な血液系悪性疾患に関与する。
【０００６】
現在ＭＭに使用可能な療法としては、化学療法、幹細胞移植、サロミド（登録商標）（サリドマイド）、レブリミド（登録商標）（レナリドマイド）、ベルケイド（登録商標）（ボルテゾミブ）、アレディア（登録商標）（パミドロネート）、及びゾメタ（登録商標）（ゾレドロン酸）が挙げられる。ビンクリスチン、ＢＣＮＵ、メルファラン、シクロホスファミド、アドリアマイシン、及びプレドニゾン若しくはデキサメタゾンなどの化学療法剤の併用を含む現行の治療プロトコールは、わずか約５％の完全寛解率をもたらすに過ぎない。生存期間中央値は、診断時からおよそ３６〜４８か月である。高用量の化学療法、その後の自家骨髄移植又は末梢血単核球移植を用いる近年の進歩は、完全緩解率及び寛解持続期間を増加させたが、全生存期間は、わずかに延長されただけで、治癒の証拠は得られていない。最終的には、インターフェロン−アルファ（ＩＦＮ−α）単独又はステロイドとの併用による維持療法下でも、全ＭＭ患者が再発する。したがって、多発性骨髄腫及びその他のＢ細胞悪性疾患の治療のための更なる療法が必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の一実施形態は、ＣＤ３８陽性の血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であり、該方法は、治療を必要とする患者に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含み、抗ＣＤ３８抗体は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）によって、インビトロでＣＤ３８発現細胞の殺傷（killing）を誘発する。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１Ａ】全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）が、多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞系におけるＣＤ３８の発現を用量依存的様式で増強させることを示す。ＭＭ細胞系ＲＰＭＩ８２２６、ＵＭ９、及びＸＧ１を、ＲＰＭＩ−１６４０培地単独で、又は０〜２５ｎＭのＡＴＲＡと共に４８時間インキュベートし、次いで、回収してフローサイトメトリーによってＣＤ３８発現を決定した。このグラフは、１つの代表的な実験の結果を示す。Ｙ軸は、ＣＤ３８の表面発現の平均蛍光強度（ＭＦＩ）の増加倍率を示す。
【図１Ｂ】ＡＴＲＡが、ＭＭ細胞系におけるＣＤ３８の発現を時間依存的様式で増強させることを示す。ＭＭ細胞系ＲＰＭＩ８２２６、ＵＭ９、及びＸＧ１を、ＲＰＭＩ−１６４０培地単独で、又は１０ｎＭのＡＴＲＡと共に２４、４８、７２又は９６時間インキュベートし、次いで、回収してフローサイトメトリーによってＣＤ３８発現を決定した。このグラフは、１つの代表的な実験の結果を示す。Ｙ軸は、ＣＤ３８の表面発現の平均蛍光強度（ＭＦＩ）の増加倍率を示す。
【図２】ＡＴＲＡが、エクスビボでＭＭ患者からの骨髄単核球（ＢＭ−ＭＮＣ）におけるＣＤ３８発現を増強させることを示す。２６人のＭＭ患者からのＢＭ−ＭＮＣを、ＲＰＭＩ−１６４０培地単独で、又は１０ｎＭのＡＴＲＡと共に４８時間インキュベートし、次いで、回収してフローサイトメトリーによってＣＤ３８発現を決定した。Ｙ軸は、ＣＤ３８表面発現のＭＦＩを示す。培地：０時間での培地。ｎｓ：有意差なし、***ｐ＜０．００１、****ｐ＜０．０００１。
【図３Ａ】１０μｇ／ｍｌのダラツムマブの存在下でＣＤＣ又はＡＤＣＣを行う前に、１０ｎＭのＡＴＲＡで４８時間前処理された、又は前処理されていないＭＭ  ＸＧ１細胞系におけるダラツムマブ誘発性補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）（上パネル）及び抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）（下パネル）を示す。Ｙ軸は、ＣＤＣ又はＡＤＣＣのパーセント（％）を示す。データは、少なくとも３つの実験の平均値及びＳＥＭを示す。示される群間のｐ値を、対応があるスチューデントのｔ検定を用いて算出した。Ｄａｒａ：ダラツムマブ、*ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．０１。
【図３Ｂ】１０μｇ／ｍｌのダラツムマブの存在下でＣＤＣ又はＡＤＣＣを行う前に、１０ｎＭのＡＴＲＡで４８時間前処理された、又は前処理されていないＭＭ  ＲＰＭＩ８２２６細胞系におけるダラツムマブ誘発性ＣＤＣ（上パネル）及びＡＤＣＣ（下パネル）を示す。Ｙ軸は、ＣＤＣ又はＡＤＣＣのパーセント（％）を示す。データは、少なくとも３つの実験の平均値及びＳＥＭを示す。示される群間のｐ値を、対応があるスチューデントのｔ検定を用いて算出した。Ｄａｒａ：ダラツムマブ、ｎｓ：有意差なし。
【図３Ｃ】１０μｇ／ｍｌのダラツムマブの存在下でＣＤＣ又はＡＤＣＣを行う前に、１０ｎＭのＡＴＲＡで４８時間前処理された、又は前処理されていないＭＭ  ＵＭ９細胞系におけるダラツムマブ誘発性ＣＤＣ（上パネル）及びＡＤＣＣ（下パネル）を示す。Ｙ軸は、ＣＤＣ又はＡＤＣＣのパーセント（％）を示す。データは、少なくとも３つの実験の平均値及びＳＥＭを示す。示される群間のｐ値を、対応があるスチューデントのｔ検定を用いて算出した。Ｄａｒａ：ダラツムマブ、*ｐ＜０．０５、ｎｓ：有意差なし。
【図４Ａ】原発性ＭＭ細胞の、１０ｎＭのＡＴＲＡでの４８時間の前処理が、原発性ＭＭ細胞のダラツムマブ媒介ＣＤＣを強化することを示す。ＭＭ細胞を、０〜１０μｇ／ｍｌの範囲のダラツムマブ濃度で、図に示されるように１０ｎＭのＡＴＲＡを用いて又は用いずに４８時間前処理した。グラフは、１６個の患者試料のプールした結果を示す。***ｐ＜０．００１、****ｐ＜０．０００１。ＤＡＲＡ：ダラツムマブ。
【図４Ｂ】原発性ＭＭ細胞の、１０ｎＭのＡＴＲＡでの４８時間の前処理が、原発性ＭＭ細胞のダラツムマブ媒介ＡＤＣＣを強化することを示す。ＭＭ細胞を、０〜１０μｇ／ｍｌの範囲のダラツムマブ濃度で、図に示されるように１０ｎＭのＡＴＲＡを用いて又は用いずに４８時間前処理した。グラフは、１３個の患者試料のプールした結果を示す。*ｐ＜０．０５。ＤＡＲＡ：ダラツムマブ。
【図５Ａ】１〜１０μｇ／ｍｌの範囲のダラツムマブ濃度で、図に示されるように１０ｎＭのＡＴＲＡを用いて又は用いずに４８時間前処理した、患者１及び患者２から単離された原発性ＭＭ細胞のインビトロでのＣＤＣの結果を示す。
【図５Ｂ】１〜１０μｇ／ｍｌの範囲のダラツムマブ濃度で、図に示されるように１０ｎＭのＡＴＲＡを用いて又は用いずに４８時間前処理した、患者３及び患者４から単離された原発性ＭＭ細胞のインビトロでのＣＤＣの結果を示す。
【図５Ｃ】１〜１０μｇ／ｍｌの範囲のダラツムマブ濃度で、図に示されるように１０ｎＭのＡＴＲＡを用いて又は用いずに４８時間前処理した、患者５及び患者６から単離された原発性ＭＭ細胞のインビトロでのＣＤＣの結果を示す。
【図５Ｄ】１〜１０μｇ／ｍｌの範囲のダラツムマブ濃度で、図に示されるように１０ｎＭのＡＴＲＡを用いて又は用いずに４８時間前処理した、患者７及び患者８から単離された原発性ＭＭ細胞のインビトロでのＣＤＣの結果を示す。
【図５Ｅ】１〜１０μｇ／ｍｌの範囲のダラツムマブ濃度で、図に示されるように１０ｎＭのＡＴＲＡを用いて又は用いずに４８時間前処理した、患者９及び患者１０から単離された原発性ＭＭ細胞のインビトロでのＣＤＣの結果を示す。
【図５Ｆ】１〜１０μｇ／ｍｌの範囲のダラツムマブ濃度で、図に示されるように、１０ｎＭのＡＴＲＡで４８時間前処理した、又は前処理を行わなかった患者１１及び患者１２から単離された原発性ＭＭ細胞のインビトロでのＣＤＣの結果を示す。
【図５Ｇ】１〜１０μｇ／ｍｌの範囲のダラツムマブ濃度で、図に示されるように１０ｎＭのＡＴＲＡを用いて又は用いずに４８時間前処理した、患者１３及び患者１４から単離された原発性ＭＭ細胞のインビトロでのＣＤＣの結果を示す。
【図５Ｈ】１〜１０μｇ／ｍｌの範囲のダラツムマブ濃度で、図に示されるように１０ｎＭのＡＴＲＡを用いて又は用いずに４８時間前処理した、患者１５及び患者１６から単離された原発性ＭＭ細胞のインビトロでのＣＤＣの結果を示す。
【図６Ａ】１〜１０μｇ／ｍｌの範囲のダラツムマブ濃度で、図に示されるように１０ｎＭのＡＴＲＡを用いて又は用いずに４８時間前処理した、患者３及び患者４から単離された原発性ＭＭ細胞のインビトロでのＡＤＣＣの結果を示す。
【図６Ｂ】１〜１０μｇ／ｍｌの範囲のダラツムマブ濃度で、図に示されるように、１０ｎＭのＡＴＲＡで４８時間前処理した、又は前処理を行わなかった患者７及び患者８から単離された原発性ＭＭ細胞のインビトロでのＡＤＣＣの結果を示す。
【図６Ｃ】１〜１０μｇ／ｍｌの範囲のダラツムマブ濃度で、図に示されるように１０ｎＭのＡＴＲＡを用いて又は用いずに４８時間前処理した、患者９及び患者１０から単離された原発性ＭＭ細胞のインビトロでのＡＤＣＣの結果を示す。
【図６Ｄ】１〜１０μｇ／ｍｌの範囲のダラツムマブ濃度で、図に示されるように１０ｎＭのＡＴＲＡを用いて又は用いずに４８時間前処理した、患者１４及び患者１５から単離された原発性ＭＭ細胞のインビトロでのＡＤＣＣの結果を示す。
【図６Ｅ】１〜１０μｇ／ｍｌの範囲のダラツムマブ濃度で、図に示されるように１０ｎＭのＡＴＲＡを用いて又は用いずに４８時間前処理した、患者１６及び患者１７から単離された原発性ＭＭ細胞のインビトロでのＡＤＣＣの結果を示す。
【図６Ｆ】１〜１０μｇ／ｍｌの範囲のダラツムマブ濃度で、図に示されるように１０ｎＭのＡＴＲＡを用いて又は用いずに４８時間前処理した、患者１８から単離された原発性ＭＭ細胞のインビトロでのＡＤＣＣの結果を示す。
【図７】１０ｎＭのＡＴＲＡの存在下での（黒色バー）又は存在下でない（白色バー）細胞のインキュベーションの前後の、ＭＭ患者から単離されたＢＭ−ＭＮＣ中のＣＤ３８発現レベルを示す。図４Ａ、４Ｂ、５、及び６に示されるものと同一の患者試料を、ＡＤＣＣ及びＣＤＣアッセイで用いた。
【図８Ａ】０〜２５ｎＭのＡＴＲＡとの細胞の４８時間のインキュベーション後の、ＲＰＭＩ８２２６細胞上のＣＤ５５、ＣＤ５９、及びＣＤ４６の発現のＡＴＲＡ誘発性減少を示す。ＭＦＩ；平均蛍光強度。ＣＤ５５、ＣＤ５９、及びＣＤ４６の発現を、フローサイトメトリーを用いて評価した。上パネル：ＭＦＩ、下パネル：対照と比較したときのＭＦＩの変化倍率。
【図８Ｂ】０〜２５ｎＭのＡＴＲＡとの細胞の４８時間のインキュベーション後の、ＵＭ９細胞上のＣＤ５５、ＣＤ５９、及びＣＤ４６の発現のＡＴＲＡ誘発性減少を示す。ＭＦＩ；平均蛍光強度。ＣＤ５５、ＣＤ５９、及びＣＤ４６の発現を、フローサイトメトリーを用いて評価した。上パネル：ＭＦＩ、下パネル：対照と比較したときのＭＦＩの変化倍率。
【図８Ｃ】０〜２５ｎＭのＡＴＲＡとの細胞の４８時間のインキュベーション後の、ＸＧ１細胞のＣＤ５５、ＣＤ５９、及びＣＤ４６の発現のＡＴＲＡ誘発性減少を示す。ＭＦＩ；平均蛍光強度。ＣＤ５５、ＣＤ５９、及びＣＤ４６の発現を、フローサイトメトリーを用いて評価した。上パネル：ＭＦＩ、下パネル：対照と比較したときのＭＦＩの変化倍率。
【図９Ａ】示されるように１０ｎＭのＡＴＲＡを用いた（灰色バー）又は用いない（黒色バー）、細胞の４８時間のインキュベーション後の原発性ＭＭ細胞上のＣＤ５５発現のＡＴＲＡ誘発性減少を示す。*ｐ＝０．０１９。
【図９Ｂ】示されるように１０ｎＭのＡＴＲＡを用いた（灰色バー）又は用いない（黒色バー）、細胞の４８時間のインキュベーション後の原発性ＭＭ細胞上のＣＤ５９発現のＡＴＲＡ誘発性減少を示す。*ｐ＝０．００４７。
【図９Ｃ】示されるように１０ｎＭのＡＴＲＡを用いた（灰色バー）又は用いない（黒色バー）、細胞の４８時間のインキュベーション後の原発性ＭＭ細胞上のＣＤ４６発現に対するＡＴＲＡの効果を示す。ｎｓ：有意差なし。
【図１０Ａ】１０ｎＭのＡＴＲＡを用いた（黒色バー）又は用いない（白色バー）、細胞の４８時間のインキュベーション後の１６人のＭＭ患者から単離された原発性ＭＭ細胞上のＣＤ５５発現を示す。図５に示されるものと同一の患者試料を、ＣＤＣアッセイで用いた。
【図１０Ｂ】１０ｎＭのＡＴＲＡを用いた（黒色バー）又は用いない（白色バー）、細胞の４８時間のインキュベーション後の１６人のＭＭ患者から単離された原発性ＭＭ細胞上のＣＤ５９発現を示す。図５に示されるものと同一の患者試料を、ＣＤＣアッセイで用いた。
【図１０Ｃ】１０ｎＭのＡＴＲＡを用いた（黒色バー）又は用いない（白色バー）、細胞の４８時間のインキュベーション後の１６人のＭＭ患者から単離された原発性ＭＭ細胞上のＣＤ４６発現を示す。図５に示されるものと同一の患者試料を、ＣＤＣアッセイで用いた。
【図１１】ＡＴＲＡが、ヒト化多発性骨髄腫のマウスモデルにおいてダラツムマブに対する応答を改善することを示す。間葉系幹細胞（ＭＳＣ）被覆スキャフォールドを保有するＲａｇ２-/-γc-/-マウスに、ルシフェラーゼ形質導入ＸＧ１細胞を接種した。マウスを、対照、ＡＴＲＡ＋エフェクター細胞としてのＴ細胞枯渇ＰＢＭＣ（ＰＢＭＣ−Ｔ）、ダラツムマブ＋ＰＢＭＣ−Ｔ、又はダラツムマブ＋ＡＴＲＡ＋ＰＢＭＣ−Ｔで処置し、形質導入ＸＧ１細胞の増殖について、生物発光イメージング（ＢＬＩ）によって、毎週監視した。この図は、群当たり４匹のマウスで、各マウスが４つのスキャフォールドを有した状態で、処置群毎の腫瘍量を示す。ダラツムマブで処置されたマウスと、ダラツムマブに加えてＡＴＲＡで処置されたマウスとの間の統計的相違度を、マン・ホイットニーＵ検定を用いて算出した。*Ｐ＜０．０５、**Ｐ＜０．０１、***Ｐ＜０．００１、ｎｓ：有意差なし。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
「ＣＤ３８」とは、ヒトＣＤ３８タンパク質（別名：ＡＤＰ−リボシルシクラーゼ１、ｃＡＤＰｒヒドロラーゼ１、環状ＡＤＰ−リボースヒドロラーゼ１）を指す。ヒトＣＤ３８は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する。
【００１０】
本明細書で使用される「抗体」は、広義で意図され、ネズミ、ヒト、ヒト適合性、ヒト化及びキメラモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体、抗体断片、二重特異性抗体又は多重特異性抗体、二量体の、四量体の又は多量体の抗体、並びに一本鎖抗体を含む、免疫グロブリン分子を含む。
【００１１】
免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて５つの主なクラス、即ち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭに分類することができる。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプＩｇＡ1、ＩｇＡ2、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、及びＩｇＧ4に更に下位分類される。いずれの脊椎動物種の抗体軽鎖も、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて２つの明確に異なるタイプ、即ちカッパ（κ）及びラムダ（λ）のうちの一方に分類することができる。
【００１２】
本明細書で使用される「抗体断片」とは、重鎖及び／又は軽鎖抗原結合部位、例えば、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、２、及び３、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、２、及び３、重鎖可変領域（ＶＨ）、又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を保持する免疫グロブリン分子の一部を指す。抗体断片としては、Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨＩドメインからなる一価の断片、Ｆ（ａｂ）2断片、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって結合された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片、ＶＨ及びＣＨＩドメインからなるＦｄ断片；抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、ＶＨドメインからなるドメイン抗体（ｄＡｂ）（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４〜５４６、１９８９）が含まれる。ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、操作され、合成リンカーを介して一緒に連結して様々な種類の一本鎖抗体設計を形成することができ、ここでＶＨ／ＶＬドメインは、分子内で対合するか、又はＶＨドメイン及びＶＬドメインが別々の一本鎖抗体構築物によって発現される場合には分子間で対合して、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又はダイアボディなどの一価の抗原結合部位を形成する。これらは、例えば、国際特許公開第ＷＯ１９９８／４４００１号、同第ＷＯ１９８８／０１６４９号、同第ＷＯ１９９４／１３８０４号、及び同第ＷＯ１９９２／０１０４７号に記載されている。これらの抗体断片は、当業者に周知の技術を使用して得られ、これらの断片は全長抗体の場合と同一の方法で、有用性に関してスクリーニングされる。
【００１３】
本明細書で使用される「単離された抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない、抗体又は抗体断片を指す（例えば、ＣＤ３８に特異的に結合する抗体）。しかし、ヒトＣＤ３８に特異的に結合する単離された抗体は、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル）ＣＤ３８など、ヒトＣＤ３８のオルソログなどの他の抗原に対して交差反応性を有する可能性がある。更に、単離された抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まない場合もある。
【００１４】
抗体可変領域は、３つの「抗原結合部位」で隔てられた「フレームワーク」領域からなる。抗原部位は、様々な用語を用いて定義される：ＶＨ内に３つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）及びＶＬ内に３つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）ある、相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列可変性に基づき（Ｗｕ  ａｎｄ  Ｋａｂａｔ，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １３２：２１１〜５０，１９７０、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１）、ＶＨ内に３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ内に３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）ある、「超可変領域」、「ＨＶＲ」、又は「ＨＶ」は、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １９６：９０１〜１７，１９８７）によって定義されたような構造的に超可変である抗体可変ドメインの領域を指す。他の用語には、「ＩＭＧＴ−ＣＤＲ」（Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐａｒａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５〜７７、２００３）及び「特異性決定残基使用」（ＳＤＲＵ）（Ａｌｍａｇｒｏ，Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ、１７：１３２〜４３，２００４）が含まれる。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ＿ｉｍｇｔ＿ｏｒｇ）は、抗原結合部位の標準化番号付け及び定義を提供する。ＣＤＲ、ＨＶ、及びＩＭＧＴの表記間の対応関係については、Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐａｒａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５〜７７，２００３に記載されている。
【００１５】
本明細書で使用される「Ｃｈｏｔｈｉａ残基」は、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２７３：９２７〜４８，１９９７）に準じて番号付けされた抗体ＶＬ残基及びＶＨ残基である。
【００１６】
「フレームワーク」又は「フレームワーク配列」は、抗原結合部位として定義されたものを除く、可変領域の残りの配列である。
【００１７】
「ヒト化抗体」とは、抗原結合部位がヒト以外の種に由来しかつ可変領域フレームワークがヒト免疫グロブリン配列に由来する、抗体を指す。ヒト化抗体はフレームワーク内に置換を含む可能性があることから、当該フレームワークは、発現したヒト免疫グロブリン又は生殖細胞系列遺伝子配列の完全な複製物でなくてもよい。
【００１８】
「ヒト適応」抗体又は「ヒトフレームワーク適応（ＨＦＡ）」抗体は、米国特許公開第ＵＳ２００９／０１１８１２７号に記載される方法に準じて適応されたヒト化抗体を指す。ヒト適応抗体は、ＣＤＲ１及びＣＤＲ２ループ並びに軽鎖ＣＤＲ３ループの一部の、最大のＣＤＲ及びＦＲ類似性、長さ適合性、及び配列類似性に基づいて、アクセプターヒトフレームワークを選択することによってヒト化される。
【００１９】
「ヒト抗体」とは、フレームワーク及び抗原結合部位の両方がヒト起源の配列に由来する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を有する抗体を指す。抗体が定常領域を含有する場合、定常領域もヒト起源の配列に由来する。
【００２０】
ヒト抗体は、抗体の可変領域がヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られた場合のヒト起源の配列に「由来する」重鎖可変領域又は軽鎖可変領域を含む。そのような系は、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリ、及び本明細書に記載されるヒト免疫グロブリン遺伝子座を保有するマウスなど、トランスジェニックのヒト以外の動物を含む。「ヒト抗体」は、例えば天然に存在する体細胞突然変異又はフレームワーク又は抗原結合部位における意図した置換の導入により、ヒト生殖系列又は再編成された免疫グロブリン配列と比較したとき、アミノ酸の相違を含み得る。典型的には、「ヒト抗体」は、アミノ酸配列において、ヒト生殖系列又は再編成された免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である。いくつかの場合では、「ヒト抗体」は、例えばＫｎａｐｐｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２９６：５７〜８６，２０００）に記載されるヒトフレームワーク配列分析から得られたコンセンサスフレームワーク配列、又は例えばＳｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３９７：３８５〜９６，２０１０及び国際特許公開第ＷＯ２００９／０８５４６２号）に記載されるファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリに組み込まれた合成ＨＣＤＲ３を含有し得る。抗原結合部位がヒト以外の種に由来する抗体は、「ヒト抗体」の定義には含まれない。
【００２１】
単離されたヒト化抗体は合成であり得る。ヒト抗体は、ファージディスプレイ組み込み合成ＣＤＲ及び／若しくは合成フレームワークなどの系を用いて生成されてもよく、又は抗体特性を改善するためにインビトロ突然変異誘発を受けることができる。
【００２２】
本明細書で使用される「組換え抗体」は、ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニック若しくは染色体導入動物（例えば、マウス若しくはラット）又はそれから調製されたハイブリドーマ（下で更に説明される）から単離された抗体、抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から単離された抗体、組換えコンビナトリアル抗体ライブラリから単離された抗体、並びにヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライスすることを伴う任意の他の手段により調製、発現、作製、又は単離された抗体、あるいはＦａｂアーム交換を用いてインビトロで生成される抗体、例えば二重特性抗体などの組換え手段により調製、発現、作製、又は単離される全ての抗体を含む。
【００２３】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」は、単一分子組成の抗体分子の調製物を意味する。モノクローナル抗体組成物は、そのＶＨ、ＶＬ、及び／若しくはＶＨ／ＶＬ対を介しての単一結合部位及び特定のエピトープに対する親和性を提示し、又は二重特異性モノクローナル抗体の場合には、２つの別個のエピトープに対する二重結合特異性を提示する。
【００２４】
本明細書で使用される「エピトープ」とは、抗体が特異的に結合する抗原の一部を意味する。エピトープは通常、アミノ酸又は多糖類側鎖のような部位の化学的に活性な（極性、非極性又は疎水性など）表面基からなり、特定の３次元構造特性及び特定の電荷特性を有し得る。エピトープは、立体配座空間単位を形成する隣接した及び／又は隣接していないアミノ酸からなり得る。隣接していないエピトープについて、抗原の直鎖配列の異なる部分からのアミノ酸は、タンパク質分子の折り畳みを通じて、３次元空間において近接する。
【００２５】
本明細書で使用される「変種」は、１つ又は２つ以上の修飾、例えば、置換、挿入、又は欠失によって、基準ポリペプチド又は基準ポリヌクレオチドとは異なっている、ポリペプチド又はポリヌクレオチドを指す。
【００２６】
「相乗」、「相乗作用」又は「相乗的な」とは、組み合わせの予期された相加効果を超えることを意味する。
【００２７】
本明細書で使用する「と組み合わせて」は、２つ又は３つ以上の治療剤が、患者に混合物の状態で一緒に、単一の薬剤として同時に、又は単一の薬剤として任意の順番で順次に投与できることを意味する。
【００２８】
用語「治療する」又は「治療」とは、腫瘍又は腫瘍細胞の発生、増殖若しくは拡がりなどの、望まれない生理的変化若しくは疾患の鈍化（減少）、又は治療中の有益な若しくは所望の臨床転帰の提供を目的とする、治療的処置を指す。有益な若しくは所望の臨床転帰としては、検出可能であろうと又は検出不可能であろうと、症状の緩和、疾患の程度の軽減、安定した（すなわち、悪化しない）疾患状態、疾患の進行の遅延又は鈍化、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解（部分的であろうと又は全体的であろうと）が含まれる。「治療」はまた、対象が治療を受けていない場合に予想される生存期間と比較して、生存期間を延長させることを意味し得る。治療を必要とする対象としては、望まれない生理的変化又は疾患をすでに有している対象並びに生理的変化又は疾患を有する傾向がある対象が含まれる。
【００２９】
「増殖を阻害する」（例えば、腫瘍細胞などの細胞に言及する場合）は、当業者に周知の適切な対照条件で増殖された同一の細胞の増殖と比較して、治療又は治療若しくは薬剤の組み合わせと接触されるときのインビトロ又はインビボでの細胞増殖における測定可能な減少を指す。インビトロ又はインビボでの細胞の増殖の阻害は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％、又は１００％であり得る。細胞増殖の阻害は、様々な機構によって、例えば、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貧食作用（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、アポトーシス、壊死、又は細胞増殖の阻害によって起こり得る。
【００３０】
「治療的に有効な量」は、所望の治療結果を達成するために、必要な用量及び期間で、有効な量を意味する。治療的に有効な量は、個体の病態、年齢、性別、及び体重などの要因、並びに個体において所望の応答を引き出す治療剤又は治療剤の組み合わせの能力によって種々であってよい。有効な治療剤又は治療剤の組み合わせの例示の指標としては、例えば、患者の健康状態の改善、腫瘍量の減少、腫瘍の増殖の停止若しくは鈍化、及び／又は体内の他の場所への癌細胞の転移の不在が含まれる。
【００３１】
本発明は、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患を有する患者を、ＣＤ３８抗体及び全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）の組み合わせで治療する方法を提供する。本発明は、少なくとも一部は、ＡＴＲＡが、ＭＭ細胞上のＣＤ３８発現を増強することによって、低レベル、中間レベル又は高レベルのＣＤ３８を発現する原発性ＭＭ細胞のＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣによる抗ＣＤ３８抗体のダラツムマブ媒介溶解を増大させるという発見に基づく。ＡＴＲＡは、インビトロにおいてダラツムマブ媒介ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣに対して抵抗性であるか、又は二重不応性（レナリドマイド不応性及びボルテゾミブ不応性）疾患を有する多くの治療歴がある多発性骨髄腫患者から得られた原発性ＭＭ試料中でダラツムマブ媒介ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣを誘発することもできる。ＡＴＲＡが、ダラツムマブ媒介ＣＤＣをＡＤＣＣよりも高い程度まで増大させることは、ＡＴＲＡがまた補体阻害タンパク質ＣＤ５５及びＣＤ５９を下方制御するとの知見によって説明され得る。
【００３２】
ＡＴＲＡ（ＣＡＳ  ３０２−７９−４）は、周知の分子構造を有する。
【００３３】
以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示される本発明の一実施形態は、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与する工程を含む、方法である。
【００３４】
以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示される本発明の一実施形態は、ＣＤ３８陽性の血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含み、抗ＣＤ３８抗体は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）によって、インビトロでＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する、方法である。
【００３５】
本発明の方法を用いて任意の分類に属する動物の対象を治療することができる。このような動物の例としては、ヒト、齧歯類、イヌ、ネコ、及び家畜などの哺乳動物が挙げられる。
【００３６】
以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示される本発明のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、インビトロでＣＤＣによって、ＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する。
【００３７】
「ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患」とは、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫を含む、ＣＤ３８を発現する腫瘍細胞の存在によって特徴付けられる血液系悪性疾患を指す。このようなＣＤ３８陽性血液系悪性疾患の例は、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫及びＢ細胞非ホジキンリンパ腫、急性前骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病並びに成熟Ｂ細胞腫瘍、例えばＢ細胞慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ球性白血病、Ｂ細胞前リンパ急性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）（鄭悪性度、中悪性度及び高悪性度ＦＬを含む）、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴ型、節性及び脾性型）、有毛細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、形質細胞腫、多発性骨髄腫（ＭＭ）、形質細胞白血病、移植後リンパ増殖性疾患、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、形質細胞白血病及び未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）である。
【００３８】
ＣＤ３８は、多発性骨髄腫、白血病、及びリンパ腫を含む様々な悪性血液系疾患、例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病、Ｔ細胞及びＢ細胞急性リンパ性白血病、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、原発性全身性アミロイド症、マントル細胞リンパ腫、前リンパ性／骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、濾胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、大顆粒リンパ球性（ＬＧＬ）白血病、ＮＫ細胞白血病及び形質細胞白血病で発現される。ＣＤ３８の発現は、前立腺の腺上皮、膵臓の島細胞、耳下腺を含む腺の導管上皮、気管支上皮細胞、精巣及び卵巣の細胞、並びに結腸直腸腺癌における腫瘍上皮を含む異なる起源の上皮／内皮細胞に関して記載されている。ＣＤ３８発現が関与し得るその他の疾患としては、例えば、肺の気管支上皮癌、乳癌（乳房の乳管及び小葉における上皮層悪性増殖から発生）、β−細胞（インスリノーマ）から発生する膵臓腫瘍、消化管の上皮から発生する腫瘍（例えば、腺癌及び扁平上皮癌）、前立腺における癌、及び睾丸セミノーマ並びに卵巣癌が含まれる。中枢神経系においては、神経芽細胞腫がＣＤ３８を発現する。
【００３９】
以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示される本発明の一実施形態において、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患は、多発性骨髄腫である。
【００４０】
以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示される本発明の一実施形態において、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。
【００４１】
以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示される本発明の一実施形態において、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患は、非ホジキンリンパ腫である。
【００４２】
以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示される本発明の一実施形態において、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である。
【００４３】
以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示される本発明の一実施形態において、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患は、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）である。
【００４４】
以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示される本発明の一実施形態において、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患は、バーキットリンパ腫（ＢＬ）である。
【００４５】
以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示される本発明の一実施形態において、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患は、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である。
【００４６】
以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示される本発明の一実施形態において、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患は、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、又はマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である。
【００４７】
Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の例は、リンパ腫様肉芽腫症、原発性滲出性リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、重鎖病（γ、μ、及びα病を含む）、免疫抑制剤による治療によって誘発されるリンパ腫、例えばシクロスポリン誘発性リンパ腫及びメトトレキサート誘発性リンパ腫である。
【００４８】
以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示される本発明の一実施形態において、ＣＤ３８を発現する細胞に関与する疾患は、ホジキンリンパ腫である。
【００４９】
ＣＤ３８を発現する細胞に関与する疾患の他の例としては、成熟Ｔ細胞及びＮＫ細胞腫瘍を含むＴ及びＮＫ細胞に由来する悪性疾患、例えば、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、Ｔ細胞大顆粒リンパ性白血病、アグレッシブＮＫ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻型、腸管症型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、菌状息肉腫／セザリー症候群、原発性皮膚ＣＤ３０陽性Ｔ細胞リンパ増殖性疾患（原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫Ｃ−ＡＬＣＬ、リンパ腫様丘疹症、境界病変）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、非特定型末梢性Ｔ細胞リンパ腫、及び未分化大細胞型リンパ腫が挙げられる。
【００５０】
骨髄系細胞に由来する悪性疾患の例としては、急性前骨髄球性白血病を含む急性骨髄性白血病、及び慢性骨髄性白血病を含む慢性骨髄増殖性疾患が挙げられる。
【００５１】
いずれの抗ＣＤ３８抗体も、以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示される本発明の方法において使用されてもよい。
【００５２】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）によって、ＣＤ３８発現細胞のインビトロ殺傷を誘発する。
【００５３】
抗ＣＤ３８抗体の可変領域は、既存の抗ＣＤ３８抗体から得ることができ、標準方法を用いて、全長抗体として又は様々な抗体様式及び断片にクローンすることができる。使用することができるＣＤ３８に結合する例示的な可変領域は、国際公開公報第ＷＯ０５／１０３０８３号、同第ＷＯ０６／１２５６４０号、同第ＷＯ０７／０４２３０９号、同第ＷＯ０８／０４７２４２号、同第ＷＯ１２／０９２６１２号、同第ＷＯ０６／０９９８７５号及び同第ＷＯ１１／１５４４５３Ａ１号に記載されている。
【００５４】
使用することができる例示的な抗ＣＤ３８抗体はダラツムマブである。ダラツムマブは、それぞれ配列番号４及び５に示される重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、それぞれ配列番号６、７及び８の重鎖ＣＤＲ  ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号９、１０及び１１の軽鎖ＣＤＲ  ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、ダラツムマブはＩｇＧ１／(サブタイプのものであり、米国特許第７，８２９，６９３号に記載されている。ダラツムマブ重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１２に示され、軽鎖のアミノ酸最列は、配列番号１３に示されている。
【００５５】
配列番号１
ＭＡＮＣＥＦＳＰＶＳＧＤＫＰＣＣＲＬＳＲＲＡＱＬＣＬＧＶＳＩＬＶＬＩＬＶＶＶＬＡＶＶＶＰＲＷＲＱＱＷＳＧＰＧＴＴＫＲＦＰＥＴＶＬＡＲＣＶＫＹＴＥＩＨＰＥＭＲＨＶＤＣＱＳＶＷＤＡＦＫＧＡＦＩＳＫＨＰＣＮＩＴＥＥＤＹＱＰＬＭＫＬＧＴＱＴＶＰＣＮＫＩＬＬＷＳＲＩＫＤＬＡＨＱＦＴＱＶＱＲＤＭＦＴＬＥＤＴＬＬＧＹＬＡＤＤＬＴＷＣＧＥＦＮＴＳＫＩＮＹＱＳＣＰＤＷＲＫＤＣＳＮＮＰＶＳＶＦＷＫＴＶＳＲＲＦＡＥＡＡＣＤＶＶＨＶＭＬＮＧＳＲＳＫＩＦＤＫＮＳＴＦＧＳＶＥＶＨＮＬＱＰＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧＲＥＤＳＲＤＬＣＱＤＰＴＩＫＥＬＥＳＩＩＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲＰＤＫＦＬＱＣＶＫＮＰＥＤＳＳＣＴＳＥＩ
【００５６】
配列番号２
ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ
【００５７】
配列番号３
ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ
【００５８】
配列番号４
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＴＦＮＳＦＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＫＤＫＩＬＷＦＧＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【００５９】
配列番号５
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
【００６０】
配列番号６
ＳＦＡＭＳ
【００６１】
配列番号７
ＡＩＳＧＳＧＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
【００６２】
配列番号８
ＤＫＩＬＷＦＧＥＰＶＦＤＹ
【００６３】
配列番号９
ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ
【００６４】
配列番号１０
ＤＡＳＮＲＡＴ
【００６５】
配列番号１１
ＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦ
【００６６】
配列番号１２
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＴＦＮＳＦＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＫＤＫＩＬＷＦＧＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【００６７】
配列番号１３
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【００６８】
使用することができる別の例示的な抗ＣＤ３８抗体は、米国特許第７，８２９，６９３号に記載される、それぞれ配列番号１４及び１５のＶＨ及びＶＬ配列を含むｍＡｂ００３である。ｍＡｂ００３のＶＨ及びＶＬは、ＩｇＧ１／κと表されてもよい。
【００６９】
配列番号１４
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＦＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＶＩＰＦＬＧＩＡＮＳＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＤＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＤＩＡＡＬＧＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳ
【００７０】
配列番号１５
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＥＫＡＰＫＳＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
【００７１】
使用することができる別の例示的な抗ＣＤ３８抗体は、米国特許第７，８２９，６９３号に記載される、それぞれ配列番号１６及び１７のＶＨ及びＶＬ配列を含むｍＡｂ０２４である。ｍＡｂ０２４のＶＨ及びＶＬは、ＩｇＧ１／κと表されてもよい。
【００７２】
配列番号１６
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＳＮＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＨＤＳＤＡＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＦＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＶＧＷＧＳＲＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ
【００７３】
配列番号１７
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
【００７４】
使用することができる別の例示的な抗ＣＤ３８抗体は、米国特許第８，０８８，８９６号に記載される、それぞれ配列番号１８及び１９のＶＨ及びＶＬ配列を含ＭＯＲ−２０２（ＭＯＲ−０３０８７）である。ＭＯＲ−２０２のＶＨ及びＶＬは、ＩｇＧ１／κと表されてもよい。
【００７５】
配列番号１８
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【００７６】
配列番号１９
ＤＩＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＳＣＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＤＳＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＴＹＴＧＧＡＳＬＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱ
【００７７】
使用することができる別の例示的な抗ＣＤ３８抗体は、米国特許第８，１５３，７６５号に記載される、それぞれ配列番号２０及び２１のＶＨ及びＶＬ配列を含むイサツキシマブである。イサツキシマブのＶＨ及びＶＬは、ＩｇＧ１／κと表されてもよい。
【００７８】
配列番号２０：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＡＫＰＧＴＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＧＤＴＧＹＡＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＫＴＶＹＭＨＬＳＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＤＹＹＧＳＮＳＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
【００７９】
配列番号２１：
ＤＩＶＭＴＱＳＨＬＳＭＳＴＳＬＧＤＰＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＴＶＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＳＡＳＹＲＹＩＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＡＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＰＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
【００８０】
本発明の方法において使用することができる他の例示的な抗ＣＤ３８抗体としては、国際特許公開第ＷＯ０５／１０３０８３号、国際特許公開第ＷＯ０６／１２５６４０号、国際特許公開第ＷＯ０７／０４２３０９号、国際特許公開第ＷＯ０８／０４７２４２号、又は国際特許公開第ＷＯ１４／１７８８２０号に記載されているものが挙げられる。
【００８１】
以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示される本発明の方法で使用される抗ＣＤ３８抗体は、ファージ提示ライブラリから新たに選択されてもよく、このファージは、ヒト免疫グロブリン又はその一部（例えば、Ｆａｂ、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、又は対をなさない若しくは対をなす抗体可変領域）を発現するよう遺伝子操作を受けている（（Ｋｎａｐｐｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２９６：５７〜８６，２０００、Ｋｒｅｂｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ  ２５４：６７〜８４，２００１、Ｖａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：３０９〜３１４，１９９６、Ｓｈｅｅｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＩＴＡＳ（ＵＳＡ）９５：６１５７〜６１６２，１９９８、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２７：３８１，１９９１、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２２：５８１，１９９１）。ＣＤ３８結合可変ドメインは、例えば、Ｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３９７：３８５〜９６，２０１０及びＰＣＴ国際公開第ＷＯ０９／０８５４６２号）に記載されるバクテリオファージｐＩＸ被覆タンパク質との融合タンパク質として抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を発現するファージ提示ライブラリから単離され得る。抗体ライブラリをヒトＣＤ３８細胞外ドメインへの結合についてスクリーニングして、得られた陽性クローンの特徴付けを更に行い、Ｆａｂはクローンライセートから単離され、その後全長抗体としてクローンされる。ヒト抗体を単離するためのそのようなファージ提示法は、当技術分野にて確立されている。例えば、米国特許第５，２２３，４０９号、米国特許第５，４０３，４８４号、及び米国特許第５，５７１，６９８号、米国特許第５，４２７，９０８号、米国特許第５，５８０，７１７号、米国特許第５，９６９，１０８号、米国特許第６，１７２，１９７号、米国特許第５，８８５，７９３号、米国特許第６，５２１，４０４号、米国特許第６，５４４，７３１号、米国特許第６，５５５，３１３号、米国特許第６，５８２，９１５号、及び米国特許第６，５９３，０８１号を参照されたい。
【００８２】
抗体のＦｃ部分は、抗体依存性細胞媒介細胞障害性（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貧食作用（ＡＤＣＰ）又は補体依存性細胞障害性（ＣＤＣ）などの抗体のエフェクター機能を媒介することができる。このような機能は、ＦＣエフェクタードメイン（複数可）の貧食活性若しくは溶解活性を有する免疫細胞上のＦｃ受容体への結合によって又はＦｃエフェクタードメイン（複数可）の補体系の成分への結合によって、媒介され得る。通常、Ｆｃ結合細胞又は補体成分によって媒介される作用（複数可）は、標的細胞、例えばＣＤ３８発現細胞の阻害及び／又は枯渇をもたらす。ヒトＩｇＧアイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４は、エフェクター機能に関して特異的な能力を呈する。ＡＤＣＣは、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３によって媒介され得、ＡＤＣＰは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４によって媒介され得、ＣＤＣは、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３によって媒介され得る。
【００８３】
本明細書に記載される方法において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプのものである。
【００８４】
本明細書に記載される方法において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、ＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプのものである。
【００８５】
本明細書に記載される方法において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、ＡＤＣＣによるＣＤ３８発現細胞のインビトロ殺傷を誘発する。
【００８６】
本明細書に記載される方法において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤＣによるＣＤ３８発現細胞のインビトロ殺傷を誘発する。
【００８７】
本明細書に記載される方法において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、インビトロでＡＤＣＣ及びＣＤＣによるＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する。
【００８８】
「抗体依存性細胞障害性」若しくは「抗体依存性細胞媒介細胞障害性」又は「ＡＤＣＣ」は、エフェクター細胞で発現されるＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）を介しての、抗体被覆標的細胞の、ナチュラルキラー細胞、単球、マクロファージ、及び好中球などの溶解活性を有するエフェクター細胞との相互作用に依存する、細胞死を誘発するための機構である。例えば、ＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩａを発現し、一方単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩａを発現する。ＣＤ３８発現細胞などの抗体被覆標的細胞の死滅は、膜孔形成タンパク質及びプロテアーゼの分泌を通してのエフェクター細胞活性の結果として生じる。抗ＣＤ３８抗体のＡＤＣＣ活性をインビトロで評価するために、抗体は、抗原抗体複合体によって活性化されて標的細胞の細胞溶解をもたらし得る免疫エフェクター細胞と組み合わせて、ＣＤ３８発現細胞に添加されてもよい。細胞溶解は、通常、溶解した細胞からの標識（例えば、放射性基質、蛍光染料、又は天然細胞内タンパク質）の放出によって検出される。例えば、ＭＭなどのＢ細胞悪性疾患を有する患者から単離された原発性ＢＭ−ＭＮＣ細胞が、このアッセイに用いられてもよい。例示的なアッセイにおいて、ＢＭ−ＭＮＣは、抗ＣＤ３８抗体を用いて、０．３〜１０μｇ／ｍｌの濃度にて１時間処理されてもよく、原発性ＣＤ１３８+  ＭＭ細胞の生存は、ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｖｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ９６：２８４〜２９０，２００１又はｖａｎ  ｄｅｒ  Ｖｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  １（１０）：ｅ４１，２０１１に記載される技術を用いて、フローサイトメトリーによって決定することができる。ＭＭ細胞溶解の割合は、本明細書に記載されるアイソタイプ対照に対して決定することができる。本発明の方法において用いられる抗ＣＤ３８抗体は、ＡＤＣＣを対照の約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％まで誘発することができる。
【００８９】
「補体依存性細胞障害性」又は「ＣＤＣ」は、標的結合抗体のＦｃエフェクタードメインが補体成分Ｃ１ｑに結合してこれを活性化し、補体成分Ｃ１ｑが次に補体カスケードを活性化して、標的細胞の死滅をもたらす、細胞死を誘発するための機構を指す。補体の活性化はまた、標的細胞表面上の補体成分の沈着をもたらすことができ、これが白血球への補体受容体（例えば、ＣＲ３）の結合によって、ＡＤＣＣを容易にする。例示的なアッセイにおいて、Ｂ細胞悪性疾患を有する患者から単離された原発性ＢＭ−ＭＮＣ細胞は、抗ＣＤ３８抗体及び１０％のプールされたヒト血清に由来する補体を用いて、０．３〜１０μｇ／ｍｌの濃度にて１時間処理されてもよく、原発性ＣＤ１３８+  ＭＭ細胞の生存は、ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｖｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ９６：２８４〜２９０，２０１１、ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｖｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  １（１０）：ｅ４１，２０１１に記載される技術を用いて、フローサイトメトリーによって決定することができる。ＭＭ細胞溶解の割合は、本明細書に記載されるアイソタイプ対照に対して決定することができる。本発明の方法において用いられる抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤＣを約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％まで誘発することができる。
【００９０】
モノクローナル抗体のＡＤＣＣを誘発するための能力は、それらのオリゴ糖成分を遺伝子操作することによって増強させることができる。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３は、大部分のグリカンが周知の二分岐Ｇ０、Ｇ０Ｆ、Ｇ１、Ｇ１Ｆ、Ｇ２、又はＧ２Ｆ型である、Ａｓｎ２９７においてＮ−グリコシル化される。遺伝子操作されていないＣＨＯ細胞によって産生された抗体は、通常、少なくとも約８５％のグリカンのフコース含有量を有する。Ｆｃ領域に結合した二分岐の複合体型オリゴ糖からのコアフコースの除去は、抗原結合又はＣＤＣ活性を変更することなく、改善されたＦｃγＲＩＩＩａ結合を介して抗体のＡＤＣＣを増強する。このような抗体は、培地のオスモル濃度の制御（Ｋｏｎｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６４：２４９〜６５，２０１２）、変異体ＣＨＯ系Ｌｅｃ１３の宿主細胞系としての適用（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：２６７３３〜４０，２００２）、変異体ＣＨＯ系ＥＢ６６の宿主細胞系としての適用（Ｏｌｉｖｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＡｂｓ；２（４），２０１０、印刷に先立って電子公開、ＰＭＩＤ：２０５６２５８２）、ラットハイブリドーマ細胞系ＹＢ２／０の宿主細胞系としての適用（Ｓｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８：３４６６〜３４７３，２００３）、α  １，６−フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）遺伝子に対して特異的な低分子干渉ＲＮＡの導入（Ｍｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ８８：９０１〜９０８，２００４）、あるいはβ−１，４−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ及びゴルジα−マンノシダーゼＩＩ又は強力なアルファ−マンノシダーゼＩ阻害物質のキフネンシンの共発現（Ｆｅｒｒａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ２８１：５０３２〜５０３６，２００６、Ｆｅｒｒａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ９３：８５１〜８６１，２００６、Ｘｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ９９；６５２〜６５，２００８）などのＦｃオリゴ糖の二分岐の複合型を保有する脱フコシル化抗体の比較的高い発現をもたらすことが報告されている、様々な方法を用いて達成されてもよい。本発明の方法において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において用いられる抗ＣＤ３８抗体によって誘発されるＡＤＣＣはまた、抗体Ｆｃにおけるある特定の置換によって増強されてもよい。例示的な置換は、例えば、米国特許第６，７３７，０５６号に記載されるように、アミノ酸２５６、２９０、２９８、３１２、３５６、３３０、３３３、３３４、３６０、３７８、又は４３０位（残基の番号付けは、ＥＵインデックスに準じる）おける置換である。本発明の方法において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において用いられる抗ＣＤ３８抗体によって誘発されるＣＤＣはまた、抗体Ｆｃにおけるある特定の置換によって増強されてもよい。例示的な置換は、例えば、Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｂｓ  ２；１８１〜１８９，２０１０記載されるように、アミノ酸４２３���２６８、２６７、及び／又は１１３位（残基の番号付けは、ＥＵインデックスに準じる）おける置換である。
【００９１】
本明細書に記載されるいくつかの方法において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、抗体Ｆｃにおける置換を含む。
【００９２】
本明細書に記載されるいくつかの方法において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、アミノ酸２５６、２９０、２９８、３１２、３５６、３３０、３３３、３３４、３６０、３７８、及び／又は４３０位（残基の番号付けは、ＥＵインデックスに準じる）おける置換を含む。
【００９３】
本明細書に記載されるいくつかの方法において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、アミノ酸１１３、２６７、２６８、及び／又は４２３位（残基の番号付けは、ＥＵインデックスに準じる）おける置換を含む。
【００９４】
以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本発明の別の実施形態は、ＣＤ３８陽性の血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含み、抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤ３８への結合に関して、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体（ダラツムマブ）と競合する、方法である。
【００９５】
以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本発明の別の実施形態は、ＣＤ３８陽性の血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含み、抗ＣＤ３８抗体は、抗体依存性細胞媒介細胞障害性（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞障害性（ＣＤＣ）によって、インビトロでのＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発し、抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤ３８への結合に関して、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体（ダラツムマブ）と競合する、方法である。
【００９６】
抗体は、周知のインビトロ方法を用いて、ＣＤ３８への結合に関して、配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを有するダラツムマブとのそれらの競合について評価され得る。例示的な方法において、ＣＤ３８を組換え的に発現するＣＨＯ細胞が、非標識ダラツムマブと４℃にて１５分間インキュベートされ、その後、過剰の蛍光標識された試験抗体と、４℃にて４５分間インキュベートされ得る。ＰＢＳ／ＢＳＡ中での洗浄後に、標準法を用いて、フローサイトメトリーによって、蛍光を測定することができる。別の例示的な方法においては、ヒトＣＤ３８の細胞外部分が、ＥＬＩＳＡプレートの表面に被覆されてもよい。過剰の非標識ダラツムマブを、約１５分間添加することができ、その後ビオチン化試験抗体を添加することができる。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ中で洗浄後、試験ビオチン化抗体の結合を、西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ストレプトアビジンを用いて検出し、シグナルを標準法方法を用いて検出することができる。競合アッセイにおいて、ダラツムマブが標識され、試験抗体が標識されないことが可能であることは、容易に明らかである。ダラツムマブが、試験抗体の結合を阻害するとき、試験抗体はダラツムマブと競合し、あるいは試験抗体はダラツムマブの結合を８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％まで阻害する。試験抗体のエピトープは、例えば、ペプチドマッピング又は既知の方法を用いる水素／重水素保護によって、更に定義され得る。
【００９７】
以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示される本発明の別の実施形態において、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含む、方法である。
【００９８】
以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示される本発明の別の実施形態において、ＣＤ３８陽性の血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含み、抗ＣＤ３８抗体は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）によって、インビトロでＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する、方法である。抗体が、各領域内の少なくとも１つのアミノ酸残基と結合するとき、この抗体は、「領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する」。抗体は、配列番号２及び配列番号３の各領域内の、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４個のアミノ酸残基に結合してもよい。抗体は、任意に、配列番号２及び配列番号３の領域の外側の１つ又は２つ以上の残基に結合してもよい。結合は、突然変異誘発試験などの既知の方法によって、又は抗体との複合体中のＣＤ３８の結晶構造を解析することによって評価されてもよい。以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示されるいくつかの実施形態において、抗体エピトープは、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）における少なくとも１つのアミノ酸と、領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）における少なくとも１つのアミノ酸とを含む。以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示されるいくつかの実施形態において、抗体エピトープは、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）における少なくとも２つのアミノ酸と、領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）における少なくとも２つのアミノ酸とを含む。以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示されるいくつかの実施形態において、抗体エピトープは、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）における少なくとも３つのアミノ酸と、領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）における少なくとも３つのアミノ酸とを含む。以下に列挙される番号付けされた実施形態におけるものを含む、本明細書に開示されるいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）における少なくともＫＲＮと、領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）における少なくともＶＱＬＴ（配列番号２２）とを含むエピトープに結合する。
【００９９】
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）における少なくともＫＲＮと、領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）における少なくともＶＱＬＴ（配列番号２２）とを含むエピトープに結合する。
【０１００】
ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する、又は最小でも上で示される残基ＫＲＮ及びＶＱＬＴ（配列番号２２）に結合する例示的な抗体は、上述したある特定のＶＨ、ＶＬ、及びＣＤＲ配列を有するダラツムマブである。ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する抗体は、例えば、標準方法を用いてかつ本明細書に記載される通りに、マウスを、配列番号２及び３に示したアミノ酸配列を有するペプチドで免疫化することによって、生成することができる。抗体は、例えば、上述したように、ＣＤ３８に対する結合に関して、ダラツムマブと試験抗体との間の競合をアッセイすることによって、更に評価され得る。
【０１０１】
本明細書に記載される方法において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、ある範囲の親和性（ＫD）でヒトＣＤ３８に結合することができる。本発明による一実施形態において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、当業者により実施される表面プラズモン共鳴又は結合平衡除外（Ｋｉｎｅｘａ）法によって決定されるように、抗ＣＤ３８抗体は、高い親和性で、例えば、約１０-7Ｍ以下のＫDで、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、又は９×１０-8Ｍ、１×１０-9Ｍ、約１×１０-10Ｍ、約１×１０-11Ｍ、約１×１０-12Ｍ、約１×１０-13Ｍ、約１×１０-14Ｍ、約１×１０-15Ｍ、若しくはこれらのうちの任意の範囲又は値のＫDで、ＣＤ３８に結合する。１つの例示的な親和性は、１×１０-8Ｍ以下である。別の例示的な親和性は、１×１０-9Ｍ以下である。
【０１０２】
本明細書に記載されるいくつかの方法おいて、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、約０％〜約１５％の、例えば、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、又は０％のフコース含有量を有する二分岐グリカン構造を有する。
【０１０３】
本明細書に記載されるいくつかの方法おいて、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、約５０％、４０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、又は０％のフコース含有量を有する二分岐グリカン構造を有する。
【０１０４】
Ｆｃ中の置換及び減少したフコース含有量は、抗ＣＤ３８抗体のＡＤＣＣ活性を増強することができる。
【０１０５】
「フコース含有量」とは、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコース単糖類の量を指す。フコースの相対量は、全グリコ構造に対するフコース含有構造の割合である。グリコ構造は、複数の方法、例えば、１）国際特許公開第ＷＯ２００８／０７７５４６号に記載されるように、Ｎ−グリコシダーゼＦ処理試料のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（例えば、複合体、ハイブリッド及びオリゴ−並びに高マンノース構造）を用いること、２）Ａｓｎ２９７のグリカン酵素的放出、その後の誘導体化及び蛍光検出を備えたＨＰＬＣ（ＵＰＬＣ）及び／又はＨＰＬＣ−ＭＳ（ＵＰＬＣ−ＭＳ）による検出／定量によって、３）第１及び第２のＧｌｃＮＡｃ単糖類間を切断し、第１のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースを放出するＥｎｄｏ  Ｓ又は他の酵素によるＡｓｎ２９７のグリカンの処理を伴い、又はこの処理なしでの自然の又は低減されたｍＡｂの無傷のタンパク質分析、４）酵素消化（例えば、トリプシン又はエンドペプチダーゼＬｙｓ−Ｃ）によるｍＡｂの構成ペプチドへの消化、その後のＨＰＬＣ−ＭＳ（ＵＰＬＣ−ＭＳ）による分離、検出及び定量、あるいは５）Ａｓｎ２９７においてＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いる、特異的酵素脱グリコシル化によるｍＡｂタンパク質からのｍＡｂオリゴ糖の分離、によって特性評価かつ定量されてもよい。放出されるオリゴ糖は、フルオロフォアで標識され、グリカン構造の細かな特性評価を可能にする様々な補足的技術によって分離かつ特定することが可能であり、これらは、実験的質量の理論的質量との比較によるマトリックス支援レーザ誘起蛍光（ＭＡＬＤＩ）質量分析、イオン交換ＨＰＬＣ（ＧｌｙｃｏＳｅｐ  Ｃ）によるシアル化の程度の決定、順相ＨＰＬＣ（ＧｌｙｃｏＳｅｐ  Ｎ）による親水性の基準に準拠するオリゴ糖型の分離並びに定量、及び高性能キャピラリー電気泳動−レーザ誘起蛍光（ＨＰＣＥ−ＬＩＦ）によるオリゴ糖の分離並びに定量による。
【０１０６】
本出願で使用される「低フコース」又は「低フコース含有量」は、約０％〜１５％のフコース含有量を有する抗体を指す。
【０１０７】
本明細書で使用される「正常なフコース」又は「正常なフコース含有量」とは、約５０％を超える、通常約６０％、７０％、８０％を超える、又は８５％を超えるフコース含有量を有する抗体を指す。
【０１０８】
本明細書に記載されるいくつかの方法おいて、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、それぞれ配列番号６、７、及び８の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＨＣＤＲ１）、２（ＨＣＤＲ２）、及び３（ＨＣＤＲ３）配列を含む。
【０１０９】
本明細書に記載されるいくつかの方法おいて、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、それぞれ配列番号９、１０、及び１１の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１（ＬＣＤＲ１）、２（ＬＣＤＲ２）、及び３（ＬＣＤＲ３）配列を含む。
【０１１０】
本明細書に記載されるいくつかの方法おいて、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、それぞれ配列番号６、７、及び８の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＨＣＤＲ１）、２（ＨＣＤＲ２）、及び３（ＨＣＤＲ３）配列と、それぞれ配列番号９、１０、及び１１の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１（ＬＣＤＲ１）、２（ＬＣＤＲ２）、及び３（ＬＣＤＲ３）配列とを含む。
【０１１１】
本明細書に記載されるいくつかの方法おいて、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。
【０１１２】
本明細書に記載されるいくつかの方法おいて、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号１２の重鎖と、配列番号１３の軽鎖とを含む。
【０１１３】
本明細書に記載されるいくつかの方法おいて、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号１４の重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１５の軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。
【０１１４】
本明細書に記載されるいくつかの方法おいて、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号１６の重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１７の軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。
【０１１５】
本明細書に記載されるいくつかの方法おいて、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号１８の重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１９の軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。
【０１１６】
本明細書に記載されるいくつかの方法おいて、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号２０の重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号２１の軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。
【０１１７】
本明細書に記載されるいくつかの方法おいて、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、ＣＤ３８抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１３のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０１１８】
配列番号１２の重鎖及び配列番号１３の軽鎖を含む抗体と実質的に同一である抗体は、本明細書に記載される本発明のいくつかの方法おいて、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において使用されてもよい。本明細書で使用される「実質的に同一」は、比較される２つの抗体重鎖又は軽鎖のアミノ酸配列が同一であるか、又は「ごくわずかな相違」を有するということを意味する。ごくわずかな相違とは、抗体の特性に悪影響を及ぼさない抗体重鎖又は軽鎖における１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸の置換である。同一性パーセントは、例えば、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ  ｖ．９．０．０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）のＡｌｉｇｎＸモジュールの初期設定を使用するペアワイズアライメントによって決定することができる。本発明のタンパク質配列を問い合わせ配列として使用することで、例えば、近縁配列を確認するために公開データベース又は特許データベースでの検索を実行することができる。そのような検索を実行するために使用されるプログラム例は、初期設定を使用する、ＸＢＬＡＳＴ若しくはＢＬＡＳＴＰプログラム（ｈｔｔｐ＿／／ｗｗｗ＿ｎｃｂｉ＿ｎｌｍ／ｎｉｈ＿ｇｏｖ）、又はＧｅｎｏｍｅＱｕｅｓｔ（商標）（ＧｅｎｏｍｅＱｕｅｓｔ、Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）スイートである。本発明の方法において使用される抗ＣＤ３８抗体に対して行われ得る例示的な置換は、例えば、同様な電荷、疎水性、又は化学両論的特性を有するアミノ酸による保存的置換である。保存的置換はまた、例えば安定性又は親和性といった抗体の特性を向上させるために、又は抗体エフェクターの機能を改善するためにも行われ得る。１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換が、例えば、抗ＣＤ３８抗体の重鎖又は軽鎖に対して行われ得る。更に、アラニン・スキャニング変異導入法についてこれまでに述べられているように（ＭａｃＬｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．Ｓｕｐｐｌ．６４３、５５〜６７，１９９８；Ｓａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３５：１〜２４，１９９８）重鎖又は軽鎖内の任意の天然残基をアラニンで置換することもできる。所望のアミノ酸置換は、そのような置換が望まれる時点で当業者が決定してもよい。アミノ酸置換は、例えば、ＰＣＲ突然変異誘発（米国特許第４，６８３，１９５号）によって行うことができる。変異体のライブラリは、周知の方法を用いて、例えば、ランダムコドン（ＮＮＫ）又は非ランダムコドン、例えば１１個のアミノ酸（Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）をコードするＤＶＫコドンを用い、そして所望の特性を有する変異体のライブラリをスクリーニングすることで生成されてもよい。生成された変異体は、インビトロでのＣＤ３８へのそれらの結合、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、又はアポトーシスを誘発するそれらの能力に関して、本明細書に記載される方法を用いて試験することができる。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、二重特異性抗体である。既存の抗ＣＤ３８抗体のＶＬ及び／又はＶＨ領域又は上述された新たに特定されたＶＬ及びＶＨ領域は、遺伝子操作を受けて二重特異性の全長抗体にされてもよい。このような二重特異性抗体は、米国特許第７，６９５，９３６号、国際特許公開第ＷＯ０４／１１１２３３号、米国特許公開第ＵＳ２０１０／００１５１３３号、米国特許公開第ＵＳ２００７／０２８７１７０号、国際特許公開第ＷＯ２００８／１１９３５３号、米国特許公開第ＵＳ２００９／０１８２１２７号、米国特許公開第ＵＳ２０１０／０２８６３７４号、米国特許公開第ＵＳ２０１１／０１２３５３２号、国際特許公開第ＷＯ２０１１／１３１７４６号、国際特許公開第ＷＯ２０１１／１４３５４５号、又は米国特許公開第ＵＳ２０１２／０１４９８７６号に記載されているものなどの技術を用いて、２つの単一特異性抗体の重鎖間のＣＨ３相互作用を調整し、二重特異性抗体を形成することによって作製されてもよい。本発明の抗体のＶＬ領域及び／又はＶＨ領域が組み込まれる追加の二重特異性構造は、例えば、デュアル可変ドメイン免疫グロブリン（国際特許公開第ＷＯ２００９／１３４７７６号）、又は２つの抗体アームを異なる特異性と接続する、ロイシンジッパー又はコラーゲン二量体化ドメインのような様々な二量体化ドメインを含む構造（国際特許公開第ＷＯ２０１２／０２２８１１号、米国特許第５，９３２，４４８号、米国特許第６，８３３，４４１号）である。
【０１２０】
本発明の別の実施形態は、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、治療を必要としている対象に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含み、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患は、多発性骨髄腫（ＭＭ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、又はマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である、方法である。
【０１２１】
本発明の別の実施形態は、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、治療を必要としている対象に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含み、抗ＣＤ３８抗体は、抗体依存性細胞媒介細胞障害性（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞障害性（ＣＤＣ）によるＣＤ３８発現細胞のインビトロでの殺傷を誘発し、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患は、多発性骨髄腫（ＭＭ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、又はマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である、方法である。
【０１２２】
本発明の別の実施形態は、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含み、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患は、多発性骨髄腫（ＭＭ）である、方法である。
【０１２３】
本発明の別の実施形態は、ＣＤ３８陽性の血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、治療を必要とする患者に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含み、抗ＣＤ３８抗体は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）によって、インビトロでＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発し、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患は、多発性骨髄腫（ＭＭ）である、方法である。
【０１２４】
本発明はまた、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含み、この対象は、抗ＣＤ３８抗体による治療に対して耐性であるか、又はこの治療に対して耐性を獲得した、方法を提供する。
【０１２５】
本発明はまた、ＣＤ３８陽性の血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、治療を必要とする患者に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含み、抗ＣＤ３８抗体は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）によって、インビトロでＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発し、この対象は、抗ＣＤ３８抗体による治療に対して耐性であるか、又はこの治療に対して耐性を獲得した、方法を提供する。
【０１２６】
本発明はまた、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含み、この対象は、少なくとも１つの化学療法剤による治療に対して耐性であるか、又はこの治療に対して耐性を獲得した、方法を提供する。
【０１２７】
本発明はまた、ＣＤ３８陽性の血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、治療を必要とする患者に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含み、抗ＣＤ３８抗体は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）によって、インビトロでＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発し、この対象は、少なくとも１つの化学療法剤による治療に対して耐性であるか、又はこの治療に対して耐性を獲得した、方法を提供する。
【０１２８】
本発明はまた、多発性骨髄腫を有する対象を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含み、この対象は、少なくとも１つの化学療法剤による治療に対して耐性であるか、又はこの治療に対して耐性を獲得した、方法を提供する。
【０１２９】
本発明はまた、多発性骨髄腫を有する対象を治療する方法であって、治療を必要とする患者に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含み、抗ＣＤ３８抗体は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）によって、インビトロでＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発し、この対象は、少なくとも１つの化学療法剤による治療に対して耐性であるか、又はこの治療に対して耐性を獲得した、方法を提供する。
【０１３０】
本発明のいくつかの実施形態において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１つの化学療法剤による治療に対して耐性であるか、又はこの治療に対して耐性を獲得しており、この少なくとも１つの化学療法剤は、レナリドマイド、ボルテゾミブ、メルファラン、デキサメタゾン、又はサリドマイドである。
【０１３１】
本発明のいくつかの実施形態において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１つの化学療法剤による治療に対して耐性であるか、又はこの治療に対して耐性を獲得しており、この少なくとも１つの化学療法剤は、レナリドマイド、ボルテゾミブ、メルファラン、デキサメタゾン、サリドマイド、シクロホスファミド、ヒドロキシダウノルビシン（ドキソルビシン）、バンクリスチン、又はプレドニゾンである。
【０１３２】
本発明のいくつかの実施形態において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１つの化学療法剤による治療に対して耐性であるか、又はこの治療に対して耐性を獲得しており、この少なくとも１つの化学療法剤は、レナリドマイド及び／又はボルテゾミブである。
【０１３３】
対象が抗ＣＤ３８抗体又は他の治療薬による治療に対して耐性であるか、耐性をすでに発症しているか、又は耐性を発症しやすいかを決定するために、様々な定性的及び／又は定量的方法を用いることができる。耐性に関連し得る症状としては、例えば、患者の健康状態の低下若しくはプラトー状態、腫瘍サイズの増加、癌細胞数の増加、腫瘍若しくは腫瘍細胞の増殖低減の停止若しくは増殖低減の緩徐化、及び／又は１つの場所から他の臓器、組織若しくは細胞への体内の癌性細胞の拡がりが含まれる。腫瘍に関する様々な症状の再発又は悪化もまた、対象が抗ＣＤ３８抗体又は他の治療薬に対する耐性を発症しているか、あるいは耐性を発症しやすいことの指標であり得る。癌に関連する症状は、癌の種類に応じて様々であり得る。例えば、Ｂ細胞悪性疾患に関連する症状は、首、足の付け根、脇の下のリンパ節肥大、発熱、ねあせ、せき、胸痛、原因不明の体重減少、腹部膨満若しくは痛み、又は膨満感を挙げることができる。悪性リンパ腫における寛解は、Ｃｈｅｓｏｎ基準（Ｃｈｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２５：５７９〜５８６，２００７）を用いて標準化されており、このガイドラインは、対象が抗ＣＤ３８抗体又は他の治療薬に対する耐性を発症しているかどうかを決定するために使用することができる。
【０１３４】
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患を有する対象は、ＣＤ１６の１５８位におけるフェニルアラニンに関して同型接合（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｖ遺伝子型）であるか、又はＣＤ１６の１５８位におけるバリン及びフェニルアラニンに関して異型接合（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｖ遺伝子型）である。ＣＤ１６は、Ｆｃガンマ受容体ＩＩＩａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）又は低親和性免疫グロブリンガンマＦｃ受容体ＩＩＩ−Ａアイソフォームとしても知られている。ＦｃγＲＩＩＩａタンパク質残基の１５８位におけるバリン／フェニルアラニン（Ｖ／Ｆ）多型性は、ヒトＩｇＧに対するＦｃγＲＩＩＩａ親和性に影響を及ぼすことが示されている。ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆ又はＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｖ多型性を有する受容体は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｖと比較するとき、Ｆｃ結合の低減を示し、したがってＡＤＣＣの低減を示す。ヒトＮ結合オリゴ糖状のフコースの欠如又は低量のフコースは、抗体のヒトＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６）への結合の改善に起因して、抗体のＡＤＣＣを誘発する能力を改善する（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：２６７３３〜４０，２００２）。日常的方法を用いて、患者をＦｃγＲＩＩＩａ多型性について分析することができる。
【０１３５】
本発明はまた、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含み、この対象は、ＣＤ１６の１５８位におけるフェニルアラニンに対して同型接合であるか、又はＣＤ１６の１５８位におけるバリン及びフェニルアラニンに対して異型接合である、方法を提供する。
【０１３６】
本発明はまた、ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与することを含み、抗ＣＤ３８抗体は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）によって、インビトロでＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発し、この対象は、ＣＤ１６の１５８位におけるフェニルアラニンに対して同型接合であるか、又はＣＤ１６の１５８位におけるバリン及びフェニルアラニンに対して異型接合である、方法を提供する。
【０１３７】
投与／医薬組成物
本発明の方法において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、抗ＣＤ３８抗体と医薬的に許容される担体とを含む好適な医薬組成物中で提供され得る。担体は、抗ＣＤ３８抗体と一緒に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルであってよい。そのようなビヒクルは、落花生油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などの、石油、動物、植物、又は合成物起源のものを含む、水及び油などの液体であってよい。例えば、０．４％生理食塩水及び０．３％グリシンを用いてもよい。これらの溶液は滅菌され、一般には粒子状物質を含まない。これらは、通常の周知の滅菌技術（例えば、濾過）によって滅菌することができる。この組成物は、生理学的条件に近づけるために必要とされる医薬的に許容される補助物質、例えばｐＨ調整剤及び緩衝剤、安定化剤、増粘剤、潤滑剤及び着色剤等を含有することができる。そのような医薬製剤中の本発明の分子又は抗体の濃度は幅広く異なってもよく、即ち約０．５重量％未満から、通常は少なくとも約１重量％まで、最大で１５又は２０重量％までであってよく、また、選択される特定の投与方法に従って、必要とされる用量、流体体積、粘度等に主に基づいて選択される。好適なビヒクル及び製剤（他のヒトタンパク質、例えばヒト血清アルブミンを含む）は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１st  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｒｏｙ，Ｄ．Ｂ．ｅｄ．，Ｌｉｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ  ２００６，Ｐａｒｔ  ５，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  ｐｐ  ６９１〜１０９２に記載され、特にｐｐ．９５８〜９８９を参照されたい。
【０１３８】
本発明の方法における抗ＣＤ３８抗体の投与方法は、当該技術分野において周知であるように、非経口投与、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内又は皮下、肺内、経粘膜（経口、鼻腔内、膣内、直腸）若しくは当業者に理解される他の手段などの任意の好適な経路であり得る。
【０１３９】
本発明の方法における、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態における抗ＣＤ３８抗体は、任意の好適な経路によって、例えば、静脈内（ｉ．ｖ．）注入若しくはボーラス注射、筋肉内又は皮下あるいは腹腔内によって非経口で患者に投与されてもよい。静脈内注入は、例えば、１５、３０、６０、９０、１２０、１８０、又は２４０分にわたって、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２時間与えられてもよい。
【０１４０】
ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患を有する患者に与えられる用量は、治療される疾患を緩和するか又は少なくとも部分的に停止するのに十分（「治療的に有効な量」）であり、時には、０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、又は約５ｍｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、又は約４ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、又は約２４ｍｇ／ｋｇ、あるいは、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０ｍｇ／ｋｇであってもよいが、更により高い量、例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００ｍｇ／ｋｇであってもよい。
【０１４１】
例えば、５０、１００、２００、５００、又は１０００ｍｇの固定単位用量が与えられるか、又は用量は、例えば、５００、４００、３００、２５０、２００、若しくは１００ｍｇ／ｍ2の患者の表面積に基づいてもよい。通常、１〜８の用量（例えば、１、２、３、４、５、６、７、又は８）がＣＤ３８陽性Ｂ細胞悪性疾患を治療するために投与されるが、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又はそれよりも高い用量を与えることが可能である。
【０１４２】
本発明の方法における、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態における抗ＣＤ３８抗体の投与は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、５週間、６週間、７週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、又はそれよりも長い期間の後に繰り返すことができる。治療過程を繰り返すことも可能であり、長期にわたる投与も同様に可能である。繰り返し投与は、同一用量であるか、又は異なる用量であってよい。例えば、本発明の方法における抗ＣＤ３８抗体は、８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇで１週間間隔で８週間にわたり投与され、８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇで２週間毎に更に１６週間の投与が続き、その後、８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇで４週間毎に静脈内注入による投与が続くことができる。
【０１４３】
本発明の方法における、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態における抗ＣＤ３８抗体は、例えば、１週間に１回、６ヶ月以上の期間にわたるなどの維持療法によって投与されてもよい。
【０１４４】
例えば、本発明の方法における、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態における抗ＣＤ３８抗体は、２４、１２、８、６、４、又は２時間毎の単回投与又は分割投与を用いて、若しくはこれらの組み合わせを用いて、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの量の１日用量として、例えば、１日当たり０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０又は１００ｍｇ／ｋｇで、治療開始後、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０日目のうちの少なくとも１日に、あるいは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０週目のうちの少なくとも１週に、あるいはこれらの組み合わせで提供されてもよい。
【０１４５】
本発明の方法における、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態における抗ＣＤ３８抗体は、癌の発症のリスクを低減するために、癌進行の事象の発生の開始を遅延させるために、及び／又は癌が寛解状態にあるとき、再発のリスクを低減するために、予防的に投与されてもよい。これは、他の生物学的要因のために、存在することが知られている腫瘍の位置を特定することが難しい患者において特に有用であり得る。
【０１４６】
本発明の方法における、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態における抗ＣＤ３８抗体は、保管用に凍結乾燥され、使用の前に、好適な担体中で再構成されてもよい。この技術は、通常のタンパク調製物に関して有効であることが示されており、周知の凍結乾燥法及び再構成技術を用いることができる。
【０１４７】
本発明の方法における、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態における抗ＣＤ３８抗体は、全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与され得る。
【０１４８】
ＡＴＲＡは、４５ｍｇ／ｍ2／日経口投与（ＰＯ）又は２５ｍｇ／ｍ2／日経口投与の薬用量として提供されてもよい。
【０１４９】
本発明の方法における、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態における抗ＣＤ３８抗体は、全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）及び第３の治療薬と組み合わせて投与されてもよい。
【０１５０】
本発明の方法において、及び以下に列挙される番号付けされたありとあらゆる実施形態のうちのいくつかの実施形態において、第３の治療薬は、メルファラン、メクロレタミン、チオエパ、クロラムブシル、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、プロカルバジン、マイトマイシンＣ、シスプラチン、及び他の白金誘導体（例えば、カルボプラチン、サリドマイド若しくはサリドマイド類似体、レナリドマイド、又はＣＣ４０４７）、プロテアゾーム阻害薬（例えば、ボルテゾミブ）又はビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン）、あるいはアントラサイクリン（例えばドキソルビシン）であってもよい。
【０１５１】
本発明は一般論として記述されてきているが、本発明の実施形態は、特許請求の範囲を限定するように解釈されるべきではない以下の実施例で更に開示される。
【０１５２】
詳細な説明
以下に、本明細書の他の箇所に記載した開示に従った本発明の更なる特定の実施形態を列挙する。本明細書に開示される本発明に関連するものとして上述された本発明の実施形態の特徴は、これらの番号付けされた更なる実施形態のありとあらゆるものにもまた関係する。
１．ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患を有する患者の治療において使用するための、全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わされる、抗ＣＤ３８抗体。
２．ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患を有する患者の治療において使用するための、抗ＣＤ３８抗体と組み合される、全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）。
３．ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患を有する患者の治療において使用するための抗ＣＤ３８抗体とＡＴＲＡとの組み合わせ。
４．抗ＣＤ３８抗体が、インビトロで、
ａ．抗体依存性細胞媒介細胞障害性（ＡＤＣＣ）によって、
ｂ．補体依存性細胞障害性（ＣＤＣ）によって、あるいは
ｃ．ＡＤＣＣ及びＣＤＣの両方によって、ＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する、実施形態１に記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２に記載の使用のためのＡＴＲＡ、又は実施形態３に記載の使用のための組み合わせ。
５．抗ＣＤ３８抗体が、インビトロでＡＤＣＣによってＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する、実施形態１に記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２に記載の使用のためのＡＴＲＡ、又は実施形態３に記載の使用のための組み合わせ。
６．ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患が、多発性骨髄腫（ＭＭ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、又はマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である、実施形態１、４、若しくは５に記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２、４、若しくは５に記載の使用のためのＡＴＲＡ、又は実施形態３〜５に記載の使用のための組み合わせ。
７．ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患がＭＭである、実施形態１、４〜６に記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２、４〜６に記載の使用のためのＡＴＲＡ、又は実施形態３〜６に記載の使用のための組み合わせ。
８．対象が、少なくとも１つの化学療法剤、及び抗ＣＤ３８抗体、又は少なくとも１つの化学療法剤と抗ＣＤ３８抗体との組み合わせに対して耐性であるか、又は耐性を獲得した、実施形態１、４〜７に記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２、４〜７に記載の使用のためのＡＴＲＡ、又は実施形態３〜７に記載の使用のための組み合わせ。
９．少なくとも１つの化学療法剤が、レナリドマイド、ボルテゾミブ、メルファラン、デキサメタゾン、又はサリドマイドである、実施形態１、４〜８に記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２、４〜８に記載の使用のためのＡＴＲＡ、又は実施形態３〜８に記載の使用のための組み合わせ。
１０．少なくとも１つの化学療法剤が、レナリドマイド又はボルテゾミブである、実施形態１、４〜９に記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２、４〜９に記載の使用のためのＡＴＲＡ、又は実施形態３〜９に記載の使用のための組み合わせ。
１１．ａ．抗ＣＤ３８抗体が、
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである、
ｂ．抗ＣＤ３８抗体が、ＣＤ３８への結合に関して配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体と競合する、
ｃ．抗ＣＤ３８抗体が、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）、及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する、
ｄ．抗ＣＤ３８抗体が、それぞれ配列番号６、７、及び８の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＨＣＤＲ１）、２（ＨＣＤＲ２）、及び３（ＨＣＤＲ３）配列を含む、
ｅ．抗ＣＤ３８抗体が、それぞれ配列番号９、１０、及び１１の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１（ＬＣＤＲ１）、２（ＬＣＤＲ２）、及び３（ＬＣＤＲ３）配列を含む、
ｆ．抗ＣＤ３８抗体が、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、
ｇ．抗ＣＤ３８抗体が、配列番号１２のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１３のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、
ｈ．抗ＣＤ３８抗体が、配列番号１２の重鎖、及び配列番号１３の軽鎖を含む、
ｉ．抗ＣＤ３８抗体が、配列番号１４のＶＨ、及び配列番号１５のＶＬを含む、
ｊ．抗ＣＤ３８抗体が、配列番号１６のＶＨ、及び配列番号１７のＶＬを含む、
ｋ．抗ＣＤ３８抗体が、配列番号１８のＶＨ、及び配列番号１９のＶＬを含む、あるいは
ｌ．抗ＣＤ３８抗体が、配列番号２０のＶＨ、及び配列番号２１のＶＬを含む、実施形態１、４〜１０に記載の使用のための抗ＣＤ３８抗体、実施形態２、４〜１０に記載の使用のためのＡＴＲＡ、又は実施形態３〜１０に記載の使用のための組み合わせ。
ｍ．
【実施例】
【０１５３】
実施例１  一般法
抗体及び試薬
以前に記載されたように（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｖｅｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ９６；２８４〜２９０，２０１１；ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｖｅｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  １：ｅ４１，２０１１）、無害な抗原に対するヒトｍＡｂ（ＨＩＶ−１ｇｐ１２０）をアイソタイプ対照として用いた。全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）を、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入し、ＤＭＳＯ中で希釈した。
【０１５４】
ルシフェラーゼ（ＬＵＣ）導入ＭＭ細胞系を用いる生物発光イメージング（ＢＬＩ）ベースのＡＤＣＣアッセイ
乳白色９６ウェル平底プレート（Ｃｏｓｔａｒ）において、ＬＵＣ導入ＭＭ細胞系を、エフェクター細胞（健康なドナーから新たに単離したＰＢＭＣ）と、１：２５のエフェクター対標的比で、ダラツムマブ（０．００１、０．０１、０．１、及び１．０μｇ／ｍＬ）の存在下で、４時間にわたって共培養した。基質のルシフェリン（１２５μｇ／ｍＬ；Ｐｒｏｍｅｇａ）の添加後１０分で、ＬＵＣ+−ＭＭ細胞の生存をＢＬＩによって決定した。ＭＭ細胞の溶解を、次の式：溶解％＝１−（エフェクター細胞及びダラツムマブの存在下での平均ＢＬＩシグナル）／エフェクター細胞及び対照抗体の存在下での平均ＢＬＩシグナル）×１００％を用いて決定した。
【０１５５】
ルシフェラーゼ（ＬＵＣ）導入ＭＭ細胞系を用いるＢＬＩベースのＣＤＣアッセイ
ダラツムマブ（０、０．０３、０．１、０．３、１．０、及び３．０μｇ／ｍＬ）を、プールしたヒト血清（１０％；Ｓａｎｑｕｉｎ）又は熱不活性化ヒト血清を補充した培地中で、ＭＭ細胞系に添加した。３７℃で１時間のインキュベーション後に、ルシフェリン（１２５μｇ／ｍｌ）を添加して１０分で、細胞溶解をＢＬＩによって決定し、次の式：溶解％＝１−（天然ヒト血清の存在下での平均ＢＬＩシグナル）／熱不活性化血清の存在下での平均ＢＬＩシグナル）×１００％を用いて算出した。
【０１５６】
ＢＭ−ＭＮＣにおけるフローサイトメトリーベースのエクスビボＡＤＣＣ及びＣＤＣアッセイ
フローサイトメトリーで決定した２〜５７％の悪性形質細胞を含有する新たに単離したＢＭ−ＭＮＣを、すぐにエクスビボ実験で使用した。ＡＤＣＣ実験については、悪性形質細胞を含有するＢＭ−ＭＮＣ、並びに患者自身のエフェクター細胞を、ダラツムマブ（０．０１〜１０μｇ／ｍＬ）と共に、９６ウェル平底プレートで、ＲＰＭＩ＋１０％のウシ胎児血清中で、完全に加湿したインキュベータ内において、３７℃、５％ＣＯ2の空気混合物で４８時間にわたってインキュベートした。インキュベーションにおける試料生存率は、ＴｏＰｒｏ−３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を用いて評価したとき、９８％超であった。ＣＤＣアッセイについては、フローサイトメトリー分析の前に、ＢＭ−ＭＮＣをダラツムマブ（０．３〜１０μｇ／ｍＬ）及び補体で１時間処理した。プールしたヒト血清（１０％）を補体源として用いた。ＢＭ−ＭＮＣ中の原発性ＣＤ１３８+ＭＭ細胞の生存を、以前に記載されたように（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｖｅｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ９６；２８４〜２９０，２０１１、ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｖｅｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  １：ｅ４１，２０１１）、フローサイトメトリーによって決定した。生存するＭＭ細胞を、Ｆｌｏｗ−Ｃｏｕｎｔ蛍光粒子（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）の存在下で、ＣＤ１３８+細胞の単一プラットフォームフローサイトメトリー分析（ＣＤ１３８−ＰＥ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｍｉａｍｉ，ＦＬ，ＵＳＡ）を用いて）によって計数し、細胞の絶対数を決定した。異なる処理条件におけるＭＭ細胞の割合を、次の式：溶解細胞％＝１−（処理ウェル中の生存するＣＤ１３８+細胞の絶対数／対照ウェル中の生存するＣＤ１３８+細胞の絶対数）×１００％を用いて、対照抗体（ダラツムマブに対するＩｇＧ１対照抗体としてＩｇＧ１−ｂ１２）で処理されたウェルのＭＭの生存に対して決定した。
【０１５７】
フローサイトメトリーによる免疫表現型検査
数種の細胞表面タンパク質の発現を、ＦＩＴＣ−、ＰＥ−、Ｐｅｒ−ＣＰ−、又はＡＰＣ結合モノクローナル抗体を用いて、フローサイトメトリーによって決定した。抗ＣＤ３８、抗ＣＤ１３８、及び抗ＣＤ５６は、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒから購入し、抗ＣＤ３、抗ＣＤ１６、抗ＣＤ５５、抗ＣＤ５９は、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入し、抗ＣＤ４６は、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄから購入した。フローサイトメトリーは、ＦＡＣＳ−Ｃａｌｉｂｕｒ装置（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて行い、データをＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェアを用いて解析した。
【０１５８】
統計値
統計解析は、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ，バージョン５）を用いて行った。変数間の比較は、両側の対応のあるスチューデントｔ検定を用いて実施した。変数間の相関は、スピアマンの順位相関係数を用いて行い、０．０５未満のｐ値を有意と見なした。
【０１５９】
実施例２  ＡＴＲＡは、ＭＭ細胞系及び原発性ＭＭ細胞におけるＣＤ３８発現を増加させる
ＣＤ３８発現レベルにおける増加は、ダラツムマブのＡＤＣＣ又はＣＤＣを介してのＭＭ細胞を殺傷することの有効性を増強させ得る。ＡＴＲＡと核レチノイン酸受容体との相互作用は、ＣＤ３８の発現の誘発を含む標的遺伝子の発現変化をもたらす（Ｍａｌａｖａｓｉ  Ｆ．Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ  ９０：２１７〜２１９，２０１１、Ｄｒａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５４：１７４６〜１７５２，１９９４）。したがって、ＡＴＲＡのＭＭ細胞系ＲＰＭＩ８２２６、ＵＭ９、及びＸＧ１に及ぼす効果を研究した。ＭＭ細胞を、ＲＰＭＩ−１６４０培地単独と、又は０〜２５ｎＭの範囲のＡＴＲＡと共に４８時間インキュベートし（図１Ａ）、あるいは１０ｎＭのＡＴＲＡと共に、２４、４８、７２、又は９６時間インキュベートし（図１Ｂ）、その後回収して、ＦＡＣＳ−Ｃａｌｉｂｕｒ装置（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）及び抗ＣＤ３８抗体（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いてフローサイトメトリーによってＣＤ３８発現を決定した。データをＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェアを用いて解析した。
【０１６０】
最低１０ｎＭのＡＴＲＡが、ＭＭ細胞系ＲＰＭＩ８２２６、ＵＭ９、及びＸＧ１上のＣＤ３８発現における１．９〜４．４倍の増加を誘発するのに十分であった。より高い用量のＡＴＲＡでは、ＣＤ３８発現をそれ以上増強しなかった（図１Ａ）。ＣＤ３８発現の最大の増強は、４８時間で起こった（図１Ｂ）。したがって、１０ｎＭのＡＴＲＡで４８時間の条件を、全ての後続の実験に用いた。
【０１６１】
２６人の患者からの原発性ＭＭ細胞のエクスビボでのＡＴＲＡの暴露（１０ｎＭ、４８時間）も研究した。これらの実験においては、２６人のＭＭ患者からのＢＭ−ＭＮＣを、ＲＰＭＩ−１６４０培地単独で、又は１０ｎＭのＡＴＲＡと共に４８時間インキュベートし、ＦＩＴＣ結合ＣＤ３８抗体（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）で４℃で２０分間インキュベートし、次いで、回収してフローサイトメトリーによってＣＤ３８発現を決定した。フローサイトメトリー分析は、ＦＡＣＳ−Ｃａｌｉｂｕｒ装置（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて行い、データをＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェアを用いて解析した。
【０１６２】
ＡＴＲＡは、ＣＤ３８発現を誘発した（増加中央値１．７倍、範囲１．０〜２６．５倍）（図２）。ＣＤ１３８発現レベルの有意な上方制御もあり（増加中央値：２．０倍）、これはＭＭ細胞分化の特徴である。これとは対照的に、ＨＬＡ  Ａ／Ｂ／Ｃ又はＣＤ５６などの他の形質細胞抗原の発現における有意な変化は、ＡＴＲＡに応答して観察されなかった。
【０１６３】
実施例３  ＣＤ３８のＡＴＲＡ媒介上方制御は、ＭＭ細胞に対するダラツムマブ媒介ＡＤＣＣ及びＣＤＣのどちらも増強させる
ＣＤ３８のＡＴＲＡ誘発上方制御のダラツムマブ誘発ＡＤＣＣ及びＣＤＣに及ぼす可能な効果を、ＭＭ細胞系ＸＧ−１、ＲＰＭＩ８２２６、及びＵＭ９において、及び原発性ＭＭ細胞において試験した。
【０１６４】
ＭＭ細胞系については、ＣＤＣ及びＡＤＣＣを、上述した生物発光イメージング（ＢＬＩ）ベースのＡＤＣＣ及びＣＤＣアッセイを用いて評価した。原発性ＭＭ細胞については、ＣＤＣ及びＡＤＣＣを、上述したＢＭ−ＭＮＣにおけるフローサイトメトリーベースのエクスビボＡＤＣＣ及びＣＤＣアッセイを用いて評価した。これらのアッセイにおいて、細胞を１０ｎＭのＡＴＲＡ又は溶媒対照で４８時間、前処理し、続いて、ＡＤＣＣの評価のためにエフェクター細胞としてのＰＢＭＣの存在下で、あるいはＣＤＣの分析のための補体源としてのヒト血清の存在下で、ダラツムマブと共に又はダラツムマブなしでインキュベーションを行った。アイソタイプ対照を、１０μｇ／ｍｌで添加し、１０％の熱不活性化血清を、ＣＤＣ用の対照として用いた。
【０１６５】
図３Ａ、図３Ｂ、及び図３Ｃは、それぞれ、ＸＧ１、ＲＰＭＩ８２２６、及びＵＭ９細胞系におけるダラツムマブ誘発ＣＤＣ及びＡＤＣＣの結果を示す。
【０１６６】
１０ｎＭのＡＴＲＡの単独では、ＭＭ細胞溶解を誘発しなかった。１０ｎＭのＡＴＲＡによるＭＭ細胞系の前処理は、溶媒対照（図３Ａ）と比較して、ダラツムマブ媒介ＣＤＣを、ＸＧ−１において（図３Ａ）、及びＡＤＣＣをＸＧ−１において（図３Ａ）、またＵＭ９（図３Ｃ）細胞において有意に増加させた。ＲＰＭＩ８２２６細胞においては、ダラツムマブ媒介ＡＤＣＣ及びＣＤＣにおける有意な改善はなかった。ＡＴＲＡ反応性におけるこれらの差は、一部は、ＡＴＲＡがＣＤ３８発現をＸＧ−１では２．９倍増強し、ＵＭ９において４．４倍増強したが、一方ＲＰＭＩ８２２６細胞においては上方制御がわずか１．９倍であった（図１Ａ及び１Ｂ）という事実によって説明される。
【０１６７】
実施例４  ＣＤ３８のＡＴＲＡ媒介上方制御は、原発性ＭＭ細胞に対するダラツムマブ媒介ＡＤＣＣ及びＣＤＣのどちらも増強させる
原発性ＭＭ細胞を、ＣＤ３８発現のＡＴＲＡ媒介誘発のダラツムマブ感受性に及ぼす効果を更に探求するために評価した。
【０１６８】
図４Ａ及び図４Ｂは、１０ｎＭのＡＴＲＡで４８時間前処理された、又は前処理されていない原発性ＭＭ細胞における、それぞれダラツムマブ誘発ＣＤＣ及びＡＤＣＣの結果を示す。図４Ａ及び図４Ｂのグラフは、それぞれ、１６人又は１３人の患者の試料のプールされた結果を表す。
【０１６９】
原発性ＭＭ細胞においては、ＡＴＲＡによる４８時間の前処理は、１６人の患者のうち１３人で、それらのダラツムマブ媒介ＣＤＣに対する感受性の有意な増加（データ図示せず）並びに１１人の患者のうちの８人でダラツムマブ媒介ＡＤＣＣに対する感受性の有意な増加（データ図示せず）をもたらした。これらの患者のプールされた結果は、ＡＴＲＡが、１０μｇ／ｍＬのダラツムマブ中央値によって媒介されたＣＤＣを１６．１％から４３．９％まで改善し（Ｐ＜０．０００１）（図４Ａ）、及び１０μｇ／ｍＬのダラツムマブ中央値によって媒介されたＡＤＣＣをＡＴＲＡによって２５．１％から３９．５％まで改善した（Ｐ＝０．０３１５）（図４Ｂ）ことを示している。
【０１７０】
図５は、各患者からの原発性ＭＭ細胞におけるダラツムマブ誘発ＣＤＣの結果を示す。図５Ａは、患者１及び患者２からの原発性ＭＭ細胞におけるダラツムマブ誘発ＣＤＣを示す。図５Ｂは、患者３及び患者４からの原発性ＭＭ細胞におけるダラツムマブ誘発ＣＤＣを示す。図５Ｃは、患者５及び患者６からの原発性ＭＭ細胞におけるダラツムマブ誘発ＣＤＣを示す。図５Ｄは、患者７及び患者８からの原発性ＭＭ細胞におけるダラツムマブ誘発ＣＤＣを示す。図５Ｅは、患者９及び患者１０からの原発性ＭＭ細胞におけるダラツムマブ誘発ＣＤＣを示す。図５Ｆは、患者１１及び患者１２からの原発性ＭＭ細胞におけるダラツムマブ誘発ＣＤＣを示す。図５Ｇは、患者１３及び患者１４からの原発性ＭＭ細胞におけるダラツムマブ誘発ＣＤＣを示す。図５ｈは、患者１５及び患者１６からの原発性ＭＭ細胞におけるダラツムマブ誘発ＣＤＣを示す。ＡＴＲＡは、インビトロでダラツムマブ単独に対して応答性ではない（例えば患者１、４、８、１２、１３、１５、及び１６）原発性ＭＭ細胞におけるダラツムマブ媒介ＣＤＣを誘発した。これらの原発性ＭＭ細胞は、表１に表示される不応性又は二重不応性疾患を有する患者から単離されたものである。一部の患者の原発性ＭＭ細胞試料において、ＡＴＲＡは、ダラツムマブ媒介ＣＤＣを増強する追加的な効果を有さなかった（例えば、患者６、７、及び１４を参照）。
【０１７１】
図６は、各患者からの原発性ＭＭ細胞におけるダラツムマブ誘発ＡＤＣＣの結果を示す。図６Ａは、患者３及び患者４からの原発性ＭＭ細胞におけるダラツムマブ誘発ＣＤＣを示す。図６Ｂは、患者７及び患者８からの原発性ＭＭ細胞におけるダラツムマブ誘発ＣＤＣを示す。図６Ｃは、患者９及び患者１０からの原発性ＭＭ細胞におけるダラツムマブ誘発ＣＤＣを示す。図６Ｄは、患者１４及び患者１５からの原発性ＭＭ細胞におけるダラツムマブ誘発ＣＤＣを示す。図６Ｅは、患者１６及び患者１７からの原発性ＭＭ細胞におけるダラツムマブ誘発ＣＤＣを示す。図６Ｆは、患者１８からの原発性ＭＭ細胞におけるダラツムマブ誘発ＣＤＣを示す。ＡＴＲＡは、試験された大部分の原発性ＭＭ細胞でダラツムマブ媒介ＡＤＣＣを誘発した。これらの原発性ＭＭ細胞は、表１に表示される不応性又は二重不応性疾患を有する患者から単離されたものである。
【０１７２】
ＣＤ３８の表面発現も、ＢＭ−ＭＮＣをＲＰＭＩ−１６４０培地単独と、又は１０ｎＭのＡＴＲＡと共に４８時間インキュベートして、これらの試験された原発性ＭＭ細胞の全てで評価した（図７）。
【０１７３】
全体的な結果は、ＡＴＲＡが、ＭＭ細胞系において、及びダラツムマブ媒介ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣに対して難治性であるＭＭ細胞を含む、原発性ＭＭ細胞においてＣＤ３８発現及びダラツムマブ活性を改善するために魅力的な戦略であることを示唆している。
【０１７４】
表１は、試験された１９人のＭＭ患者のＢＭ−ＭＮＣのベースライン特性を示す。この表において、*レナリドマイド−及び／又はボルテゾミブ不応性疾患は、多発性骨髄腫に関する国際統一効果判定基準（International Uniform Response Criteria for Multiple Myeloma）に準拠して、レナリドマイド−及びボルテゾミブ−治療に対する進行性疾患として、レナリドマイド−及びボルテゾミブ−治療に対して応答なし（部分応答未満の）として、又はレナリドマイド含有及びボルテゾミブ含有レジメンを停止後６０日以内での進行性疾患として定義される。
【０１７５】
【表１】
0006707531.tif 000002
【０１７６】
【表２】
0006707531.tif 000003
【０１７７】
【表３】
0006707531.tif 000004
ＢＭ−ＭＮＣ、骨髄単核球。ＭＭ、多発性骨髄腫。Ｍ、男性。Ｆ、女性。Ｋ、カッパ。Ｌ、ラムダ
【０１７８】
実施例５  ＡＴＲＡは、原発性ＭＭ細胞におけるＣＤ５５及びＣＤ５９発現を下方制御する
行われた実験は、ＭＭ細胞のＡＴＲＡによる前処理が、これらの細胞をダラツムマブ媒介ＡＤＣＣ及びＣＤＣに対してより感受性にすることを明らかにした。ＣＤＣにおける改善は、ＡＤＣＣの増強よりも顕著であった。観察についての分子的機序を評価した。
【０１７９】
ＡＴＲＡのエフェクター細胞に及ぼす効果を評価した。ＡＴＲＡは、ヒトＭＭ細胞系Ｌ３６３−ＣＤ３８、ＬＭＥ−１、ＲＰＭＩ８２２６、及びＵＭ９に対してＡＤＣＣを誘発するための健康なドナーからのＰＢＭＣの能力に及ぼす効果を有することはなく、又は最小の効果を有するに過ぎなかった（データ図示せず）。それどころか、ＡＴＲＡは、ＭＭ細胞系及び原発性ＭＭ細胞での補体阻害タンパク質ＣＤ５５、ＣＤ５９、及びＣＤ４６の発現レベルを低下させた。ＲＰＭＩ８２２６（図８Ａ）、Ｌ３６３（図８Ｂ）、及びＸＧ−１（図８Ｃ）細胞において、ＡＴＲＡは、ＣＤ５５、ＣＤ５９、及びＣＤ４６の発現レベルを低下させた。１６人の患者に由来する原発性ＭＭ細胞においては、ＡＴＲＡは、ＣＤ５５の発現（平均低下率２１．３％、Ｐ＝０．０１９）（図９Ａ）及びＣＤ５９の発現（平均低下率３７．５％、Ｐ＝０．００４７）（図９Ｂ）を有意に低下させたが、一方ＡＴＲＡは、ＣＤ４６発現レベルには有意に影響を及ぼさなかった（データ図示せず）。試験された１６人の患者からのＣＤ４６、ＣＤ５５、及びＣＤ５９発現レベルを、図１０Ａ（ＣＤ５５）、図１０Ｂ（ＣＤ５９）、及び図１０Ｃ（ＣＤ４６）に示す。この実験において、細胞は、１０ｎＭのＡＴＲＡと共に、又はＡＴＲＡなしで、ＲＰＭＩ−１６４０培地中で３７℃で４８時間培養し、その後、適切な結合抗体パネルと共に４℃で２０分間インキュベートした。フローサイトメトリー分析は、ＦＡＣＳ−Ｃａｌｉｂｕｒ装置（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて行い、データをＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェアを用いて解析した。
【０１８０】
実施例６  ヒト化微小環境内で増殖するＭＭ腫瘍に対するＡＴＲＡ及びダラツムマブの組み合わせのインビトロ有効性
３つの２〜３ｍｍの二相性リン酸カルシウム粒子からなるハイブリッドスキャフォールドを、ヒト間葉系間質細胞（ＭＳＣ；２×１０5細胞／スキャフォールド）を用いて、インビトロで被覆した。骨形成性培地中でのインビトロ培養の１週間後に、ヒト化スキャフォールドを、ＲＡＧ２-/-γc-/-マウスに、以前に記載されたように皮下移植した（Ｇｒｏｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１９；１２０：ｅ９〜ｅ１６，２０１２；ｄｅ  Ｈａａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９：５５９１〜５６０１，２０１３）。
【０１８１】
移植後８週目に、マウスを致死量以下で照射し（３Ｇｙ、２００ｋＶ、４ｍＡ）、ルシフェラーゼ形質導入ＸＧ１細胞をスキャフォールドに直接注射した（１×１０6細胞／スキャフォールド）。接種後３週間で、生物発光イメージング（ＢＬＩ）によってスキャフォールド中の目に見える腫瘍増殖が確認されたとき、マウスの異なる群を、１）ビヒクル、２）ＡＴＲＡ＋Ｔ細胞枯渇ＰＢＭＣ（エフェクター細胞として）（ＰＢＭＣ−Ｔ）、３）ダラツムマブ＋ＰＢＭＣ−Ｔ、及び４）ダラツムマブ＋ＡＴＲＡ＋ＰＢＭＣ−Ｔで処置した。ダラツムマブ（８ｍｇ／ｋｇ）は、２３、３０、及び３７日目に腹腔内で与え、ＰＢＭＣ−Ｔ（８×１０6細胞／マウス）は、２４、３１、及び３８日目に静脈内で与え、ＡＴＲＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）は、２１〜２４日目、２８〜３１日目、及び３５〜３８日目に腹腔内注射を介して与えた。ＰＢＭＣ−Ｔは、バフィーコートのＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離、その後のＥａｓｙＳｅｐ（商標）技術（ＳＴＥＭＣＥＬＬ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いるＣＤ３−ビーズによるＴ細胞の枯渇によって調製した。腫瘍の増殖を、以前に記載されたように、毎週のＢＬＩ測定によって監視した（Ｇｒｏｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１９；１２０：ｅ９〜ｅ１６，２０１２）。全ての動物実験は、動物実験に関する地元の倫理委員会の許可を取得した後に行い、オランダの動物実験法を遵守した。マウス実験における異なる処置群間の統計的有意差を、マン・ホイットニー検定を用いて算出した。０．０５未満のｐ値を有意と見なした。
【０１８２】
ルシフェラーゼ形質導入ＸＧ１多発性骨髄腫細胞を、ＭＳＣ被覆セラミックスキャフォールドの皮下移植によって生成されたヒト化骨髄微小環境において、骨免疫不全ＲＡＧ２-/-γc-/-マウスの浸潤性腫瘍中に展開させた。ダラツムマブ及びＡＴＲＡの効果を最適に評価するために、ＲＡＧ２-/-γc-/-マウスは、ＮＫ細胞を欠如しているために、マウスに、健康なドナーのＮＫ細胞富化（Ｔ細胞枯渇）ＰＢＭＣをダラツムマブ及び／又はＡＴＲＡと組み合わせて同時注入した。腫瘍の増殖物を追跡するために、ＢＬＩを週１回、５週間にわたって行った。図１１に示すように、ダラツムマブは、腫瘍の進行を著しく鈍化させたが、一方ＡＴＲＡは単一薬剤としては効果を有さなかった。ＡＴＲＡはまた、このモデルにおいて、ダラツムマブの抗ＭＭ効果を有意に増強させた。
本発明は、以下の態様を包含し得る。
［１］
ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、前記治療を必要とする前記対象に、抗ＣＤ３８抗体を全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）と組み合わせて投与する工程を含む、方法。
［２］
前記抗ＣＤ３８抗体が、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）によって、インビトロでＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する、上記［１］に記載の方法。
［３］
前記抗ＣＤ３８抗体が、インビトロでＣＤＣによって前記ＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する、上記［２］に記載の方法。
［４］
前記抗ＣＤ３８抗体が、インビトロでＡＤＣＣによって前記ＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する、上記［２］に記載の方法。
［５］
前記ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患が、多発性骨髄腫（ＭＭ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、又はマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である、上記［１］、［２］、［３］、又は［４］のいずれか一項に記載の方法。
［６］
前記ＣＤ３８陽性血液系悪性疾患がＭＭである、上記［５］に記載の方法。
［７］
前記対象が、少なくとも１つの化学療法剤、抗ＣＤ３８抗体、又は少なくとも１つの化学療法剤及び抗ＣＤ３８抗体の組み合わせによる治療に対して耐性であるか、又は耐性を獲得した、上記［６］に記載の方法。
［８］
前記少なくとも１つの化学療法剤が、レナリドマイド、ボルテゾミブ、メルファラン、デキサメタゾン、又はサリドマイドである、上記［７］に記載の方法。
［９］
前記少なくとも１つの化学療法剤が、レナリドマイド又はボルテゾミブである、上記［８］に記載の方法。
［１０］
前記抗ＣＤ３８抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプのものである、上記［１］、［２］、［３］、又は［４］に記載の方法。
［１１］
前記抗ＣＤ３８抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプのものである、上記［１０］に記載の方法。
［１２］
前記抗ＣＤ３８抗体が、ＣＤ３８への結合に関して配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体と競合する、上記［１］に記載の方法。
［１３］
前記抗体が、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）、及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する、上記［１２］に記載の方法。
［１４］
前記抗ＣＤ３８抗体が、それぞれ配列番号６、７、及び８の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＨＣＤＲ１）、２（ＨＣＤＲ２）、及び３（ＨＣＤＲ３）配列を含む、上記［１３］に記載の方法。
［１５］
前記抗ＣＤ３８抗体が、それぞれ配列番号９、１０、及び１１の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１（ＬＣＤＲ１）、２（ＬＣＤＲ２）、及び３（ＬＣＤＲ３）配列を含む、上記［１４］に記載の方法。
［１６］
前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、上記［１５］に記載の方法。
［１７］
前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号１２のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１３のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、上記［１］に記載の方法。
［１８］
前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号１２の重鎖、及び配列番号１３の軽鎖を含む、上記［１］に記載の方法。
［１９］
前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号１４のＶＨ、及び配列番号１５のＶＬを含む、上記［１］に記載の方法。
［２０］
前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号１６のＶＨ、及び配列番号１７のＶＬを含む、上記［１］に記載の方法。
［２１］
前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号１８のＶＨ、及び配列番号１９のＶＬを含む、上記［１］に記載の方法。
［２２］
前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号２０のＶＨ、及び配列番号２１のＶＬを含む、上記［１］に記載の方法。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図５Ｆ】
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【図５Ｇ】
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【図５Ｈ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図６Ｆ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１】
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【配列表】
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