(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（２）で表される少なくとも一種のエネルギードナー化合物と、下記式（２）で表される少なくとも一種のエネルギーアクセプター化合物と、粒子とを含有する、発光性粒子。
【化１】
0006679726.tif 000025
式（２）中、Ｙ１及びＹ２はそれぞれ独立にハロゲン原子を表す。Ｒ３は水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、又はアシル基を表し、これらは置換基を有していてもよい。Ａｒ３及びＡｒ４はそれぞれ独立にアリール基又はヘテロ環基を表し、これらは置換基を有していてもよい。Ｒ４〜Ｒ１１はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、アシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、又はアミノ基を表し、これらは置換基を有していてもよく、但し、Ｒ４〜Ｒ７の少なくとも一つが置換基を有していてもよいアリール基であり、かつＲ８〜Ｒ１１の少なくとも一つが置換基を有していてもよいアリール基であるか、Ｒ４〜Ｒ７の少なくとも一つがアルコキシ基であり、かつＲ８〜Ｒ１１の少なくとも一つがアルコキシ基である。
【請求項２】
Ｒ４〜Ｒ７の少なくとも一つが式（３）で表される基であり、Ｒ８〜Ｒ１１の少なくとも一つが式（３）で表される基である、請求項１に記載の発光性粒子。
【化２】
0006679726.tif 000026
式（３）中、Ｒ２０１〜Ｒ２０５は水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、アシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、又はアミノ基であり、Ｒ２０１及びＲ２０５の少なくとも一方は水素原子以外の基である。Ｒ２０１とＲ２０２は互いに連結して環を形成してもよく、Ｒ２０２とＲ２０３は互いに連結して環を形成してもよく、Ｒ２０３とＲ２０４は互いに連結して環を形成してもよく、Ｒ２０４とＲ２０５は互いに連結して環を形成してもよい。
【請求項３】
エネルギードナー化合物は、Ｒ４〜Ｒ７の少なくとも一つが式（３）で表される基であり、Ｒ８〜Ｒ１１の少なくとも一つが式（３）で表される基であるか、Ａｒ３およびＡｒ４の少なくとも一つが置換基を有するアリール基である、請求項１又は２に記載の発光性粒子。
【請求項４】
エネルギーアクセプター化合物は、Ｒ４〜Ｒ７の少なくとも一つがアルコキシ基であり、Ｒ８〜Ｒ１１の少なくとも一つがアルコキシ基であるか、Ａｒ３およびＡｒ４の少なくとも一つがアルコキシ基を有するアリール基である、請求項１から３の何れか一項に記載の発光性粒子。
【請求項５】
Ｙ１及びＹ２がフッ素原子である、請求項１から４の何れか一項に記載の発光性粒子。
【請求項６】
エネルギードナー化合物とエネルギーアクセプター化合物のモル比が１：１０〜１０：１である、請求項１から５の何れか一項に記載の発光性粒子。
【請求項７】
前記粒子に対するエネルギードナー化合物とエネルギーアクセプター化合物の総量が０．５質量％〜１０質量％である、請求項１から６の何れか一項に記載の発光性粒子。
【請求項８】
ドナー化合物とアクセプター化合物のストークスシフトが４０ｎｍ以上である、請求項１から７の何れか一項に記載の発光性粒子。
【請求項９】
前記粒子がラテックス粒子である、請求項１から８の何れか一項に記載の発光性粒子。
【請求項１０】
蛍光極大波長が６５０〜９００ｎｍである、請求項１から９の何れか一項に記載の発光性粒子。
【請求項１１】
励起極大波長が６００ｎｍ〜９００ｎｍである、請求項１から１０の何れか一項に記載の発光性粒子。
【請求項１２】
エネルギーアクセプター化合物の吸収の極大波長が、エネルギードナー化合物の吸収の波長より１０〜１００ｎｍ長波長側にある、請求項１から１１の何れか一項に記載の発光性粒子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特定構造を有するエネルギードナー化合物と、特定構造を有するエネルギーアクセプター化合物とを含む発光性粒子に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質、酵素又は無機化合物などを定量するための高感度かつ容易な測定法として蛍光検出法が広く用いられている。蛍光検出法は、特定波長の光により励起されて蛍光を発する測定対象物質を含むと考えられる試料に上記特定波長の励起光を照射した際に発する蛍光を検出することによって測定対象物質の存在を確認する方法である。測定対象物質が蛍光体でない場合には、例えば、測定対象物質と特異的に結合する物質を蛍光色素で標識した物質を、試料に接触させ、その後上記と同様にして、励起光を照射した際に発する蛍光を検出することにより、測定対象物質の存在を確認することができる。【０００３】
特許文献１には、標的物質を含む試料と微粒子標識プローブとを混合して、標的物質と微粒子標識プローブとの複合体を形成することを含む、蛍光標識方法が記載されている。特許文献１に記載の微粒子標識プローブは、ドナー色素とアクセプター色素とを有するポリマー微粒子であり、エネルギー移動が可能であり、ストークスシフトが生じることが記載されている。【０００４】
また特許文献２には、狭帯域モノマーを含む縮合発色団ポリマーを含むポリマードットであって、狭帯域モノマーが、ＢＯＤＩＰＹ誘導体であり、縮合発色団ポリマーが、約７０ｎｍ未満の半値全幅（ＦＷＨＭ）を有する発光スペクトルを有する、ポリマードットが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第５５７３９０９号公報
【特許文献２】特表２０１５−５１２９５５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
生体の窓領域（生体を透過しやすい近赤外波長域である６５０〜９００ｎｍ付近）を利用したイメージングには、高い量子収率、高い輝度及び大きなストークスシフトを有する発光性粒子を使用することが望ましい。ドナーの発光とアクセプターの吸収の重なりのある系ではエネルギー移動を利用することができ、ストークスシフトの増大が可能である。本発明は、高い量子収率、高い輝度及び大きなストークスシフトを有する発光性粒子を提供することを解決すべき課題とした。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討した結果、特定構造を有するエネルギードナー化合物と、特定構造を有するエネルギーアクセプター化合物とを用いて発光性粒子を製造することによって、高い量子収率、高い輝度及び大きなストークスシフトを有する発光性粒子を製造できることを見出し、本発明を完成するに至った。【０００８】
即ち、本発明によれば、以下の発明が提供される。
［１］  下記式（１）で表される少なくとも一種のエネルギードナー化合物と、下記式（１）で表される少なくとも一種のエネルギーアクセプター化合物と、粒子とを含有する、発光性粒子。
【化１】
0006679726.tif 000002
式（１）中、ｍ１及びｍ２はそれぞれ独立に０〜４の整数を表す。Ｍは半金属原子又は金属原子を表す。Ｒ1、Ｒ2及びＲ3はそれぞれ独立に水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、アシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、又はアリールチオ基を表し、これらは置換基を有していてもよい。Ｙ1及びＹ2はそれぞれ独立にハロゲン原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、エテニル基、又はエチニル基を表し、これらは置換基を有していてもよく、Ｙ1及びＹ2は互いに連結して環を形成してもよい。Ａｒ1及びＡｒ2はそれぞれ独立に、置換基を有していてもよい芳香環を表す。Ｘ1及びＸ2はそれぞれ独立に、ハロゲン原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、アシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、又はアミノ基を表し、これらは置換基を有していてもよい。ｍ１が２以上である場合、複数のＸ1は同じ基でもそれぞれ異なる基でもよく、ｍ２が２以上である場合、複数のＸ2は同じ基でもそれぞれ異なる基でもよい。【０００９】
［２］  上記式（１）で表される化合物が、下記式（２）で表される化合物である、［１］に記載の発光性粒子。
【化２】
0006679726.tif 000003
式（２）中、Ｙ1及びＹ2はそれぞれ独立にハロゲン原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、エテニル基、又はエチニル基を表し、これらは置換基を有していてもよい。Ｒ3は水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、又はアシル基を表し、これらは置換基を有していてもよい。Ａｒ3及びＡｒ4はそれぞれ独立にアリール基又はヘテロ環基を表し、これらは置換基を有していてもよい。Ｒ4〜Ｒ11はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、アシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、又はアミノ基を表し、これらは置換基を有していてもよい。【００１０】
［３］  Ｒ4〜Ｒ11の少なくとも１つ以上が、置換基を有していてもよいアリール基である、［２］に記載の発光性粒子。
［４］  Ｒ4〜Ｒ11の少なくとも１つ以上が、式（３）で表される基である、［２］又は［３］に記載の発光性粒子。
【化３】
0006679726.tif 000004
式（３）中、Ｒ201〜Ｒ205は水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、アシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、又はアミノ基であり、Ｒ201及びＲ205の少なくとも一方は水素原子以外の基である。Ｒ201とＲ202は互いに連結して環を形成してもよく、Ｒ202とＲ203は互いに連結して環を形成してもよく、Ｒ203とＲ204は互いに連結して環を形成してもよく、Ｒ204とＲ205は互いに連結して環を形成してもよい。【００１１】
［５］  Ｒ4〜Ｒ11の少なくとも１つ以上が、式（４）で表される基である、［２］に記載の発光性粒子。
【化４】
0006679726.tif 000005
式（４）中、Ｒ101は、水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、又はアシル基を表し、これらは置換基を有していてもよい。Ａｒ101はアリール基、又はヘテロ環基を表し、これらは置換基を有していてもよい。Ａｒ101とＲ201は互いに連結して環を形成してもよい。【００１２】
［６］  Ｙ1及びＹ2がフッ素原子である、［１］から［５］の何れか一に記載の発光性粒子。
［７］  エネルギードナー化合物とエネルギーアクセプター化合物のモル比が１：１０〜１０：１である、［１］から［６］の何れか一に記載の発光性粒子。
［８］  上記粒子に対するエネルギードナー化合物とエネルギーアクセプター化合物の総量が０．５質量％〜１０質量％である、［１］から［７］の何れか一に記載の発光性粒子。【００１３】
［９］  ドナー化合物とアクセプター化合物のストークスシフトが４０ｎｍ以上である、［１］から［８］の何れか一に記載の発光性粒子。
［１０］  上記粒子がラテックス粒子である、［１］から［９］の何れか一に記載の発光性粒子。
［１１］  蛍光極大波長が６５０〜９００ｎｍである、［１］から［１０］の何れか一に記載の発光性粒子。
［１２］  励起極大波長が６００ｎｍ〜９００ｎｍである、［１］から［１１］の何れか一に記載の発光性粒子。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の発光性粒子は、高い量子収率、高い輝度及び大きなストークスシフトを有することから、各種のアッセイにおいて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、化合物Ｄ−１の1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図２】図２は、化合物Ｄ−２の1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３】図３は、化合物Ｄ−３の1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４】図４は、化合物Ｄ−４の1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図５】図５は、化合物Ｄ−５の1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図６】図６は、化合物Ｄ−６の1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図７】図７は、化合物Ｄ−７の1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。
本明細書において「〜」を用いて示された数値範囲は、「〜」の前後に記載される数値をそれぞれ最小値及び最大値として含む範囲を意味する。
【００１７】
特許文献１には、複数種のＢＯＤＩＰＹ色素（ＢＯＤＩＰＹは、boron-dipyrrometheneの略称である）を使用したドナー色素及びアクセプター色素を含む粒子が記載されているが、高い量子収率、高い輝度及び大きなストークスシフトの観点では改善の余地があった。本発明においては、式（１）で表される特定構造を有するエネルギードナー化合物と、式（１）で表される特定構造を有するエネルギーアクセプター化合物とを組み合わせて使用することによって、高い量子収率、高い輝度及び大きなストークスシフトを有する発光性粒子を製造することが可能になった。上記した本発明の効果は、特許文献１及び特許文献２からは予想できない顕著な効果である。なお、本発明の発光性粒子が蛍光粒子である場合、輝度とは、蛍光強度のことである。
【００１８】
[本発明の発光性粒子]
本発明の発光性粒子は、下記式（１）で表される少なくとも一種のエネルギードナー化合物と、下記式（１）で表される少なくとも一種のエネルギーアクセプター化合物と、粒子とを含有する、発光性粒子である。
【化５】
0006679726.tif 000006
式（１）中の各記号の意味は、本明細書中に定義した通りである。
【００１９】
本明細書において、半金属原子とは、金属と非金属の中間の性質を示す物質を示し、ホウ素原子、ケイ素原子、ゲルマニウム原子、及びアンチモン原子が挙げられ、ホウ素原子が好ましい。
【００２０】
本明細書において、金属原子としては、銅、コバルト、鉄、アルミニウム、亜鉛等が挙げられる。
【００２１】
本明細書において、アルキル基とは、直鎖、分岐鎖、環状又はこれらの組み合わせの何れでもよく、直鎖又は分岐鎖アルキル基の炭素数は好ましくは１〜３６であり、より好ましくは１〜１８であり、さらに好ましくは１〜１２であり、特に好ましくは１〜６である。環状のアルキル基としては、例えば炭素数３〜８のシクロアルキルなどが挙げられる。アルキル基の具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｉｓｏ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−ヘプチル基、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基、ｎ−ウンデシル基、ｎ−ドデシル基、ｎ−トリデシル基、ｎ−テトラデシル基、ｎ−ペンタデシル基、ｎ−ヘキサデシル基、ｎ−ヘプタデシル基、ｎ−オクタデシル基、及びシクロヘキシル基などが挙げられる。
【００２２】
本明細書において、アリール基とは、炭素数が６〜４８のアリール基が好ましく、炭素数が６〜２４のアリール基がより好ましく、炭素数が６〜１４のアリール基がさらに好ましく、例えば、フェニル基、ナフチル基、アントリル基、ピレニル基、フェナントレニル基、ビフェニル基、フルオレニル基などが挙げられる。
【００２３】
本明細書において、ヘテロ環基としては、好ましくは５〜７員の置換もしくは無置換、飽和もしくは不飽和、芳香族もしくは非芳香族、単環もしくは縮環のヘテロ環基の何れでもよい。ヘテロ環基は、好ましくは、環構成原子が炭素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択され、かつ窒素原子、酸素原子及び硫黄原子のいずれかのヘテロ原子を少なくとも一個有するヘテロ環基であり、さらに好ましくは、炭素数３〜３０の５もしくは６員の芳香族のヘテロ環基である。ヘテロ環基としては、例えば、フリル基、ベンゾフリル基、ジベンゾフリル基、チエニル基、ベンゾチエニル基、ジベンゾチエニル基、ピリジル基、ピリミジニル基、キノリル基、イソキノリル基、アクリジニル基、フェナントリジニル基、プテリジニル基、ピラジニル基、キノキサリニル基、ピリミジニル基、キナゾリル基、ピリダジニル基、シンノリニル基、フタラジニル基、トリアジニル基、オキサゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、チアゾリル基、ベンゾチアゾリル基、イミダゾリル基、ベンゾイミダゾリル基、ピラゾリル基、インダゾリル基、イソオキサゾリル基、ベンゾイソオキサゾリル基、イソチアゾリル基、ベンゾイソチアゾリル基、オキサジアゾリル基、チアジアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、フリル基、チエニル基、ピロリル基、インドリル基、イミダゾピリジニル基、カルバゾリル基等が挙げられる。
【００２４】
本明細書において、アシル基としては、好ましくは炭素数２〜１５の直鎖、又は分岐アルカノイル基であり、例えば、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル基、ピバロイル基、ヘキサノイル基、ヘプタノイル基、ベンゾイル基などが挙げられる。
【００２５】
本明細書において、アルコキシ基としては、好ましくは、炭素数１〜２０のアルコキシ基であり、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ペンチルオキシ基、ヘキシルオキシ基、ヘプチルオキシ基などが挙げられる。
本明細書において、アリールオキシ基としては、好ましくは炭素数６〜１４のアリールオキシ基であり、例えば、フェノキシ基、ナフトキシ基、アントリルオキシ基などが挙げられる。
【００２６】
アルキルチオ基としては、好ましくは、炭素数１から３０のアルキルチオ基であり、例えば、メチルチオ基、エチルチオ基、ｎ−ヘキサデシルチオ基等が挙げられる。
アリールチオ基としては、好ましくは、炭素数６から３０のアリールチオ基であり、例えば、フェニルチオ基、ｐ−クロロフェニルチオ基、ｍ−メトキシフェニルチオ基等が挙げられる。
【００２７】
本明細書において、ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子及びヨウ素原子が挙げられる。
【００２８】
本明細書において、芳香環とは、ベンゼン環、ナフタレン環、アントラセン環、フェナンスレン環、ピレン環、ペリレン環及びテリレン環等の芳香族炭化水素環；インデン環、アズレン環、ピリジン環、ピラジン環、ピリミジン環、ピラゾール環、ピラゾリジン環、チアゾリジン環、オキサゾリジン環、ピラン環、クロメン環、ピロール環、ピロリジン環、ベンゾイミダゾール環、イミダゾリン環、イミダゾリジン環、イミダゾール環、ピラゾール環、トリアゾール環、トリアジン環、ジアゾール環、インドリン環、チオフェン環、チエノチオフェン環、フラン環、オキサゾール環、オキサジアゾール環、チアジン環、チアゾール環、インドール環、ベンゾチアゾール環、ベンゾチアジアゾール環、ナフトチアゾール環、ベンゾオキサゾール環、ナフトオキサゾール環、インドレニン環、ベンゾインドレニン環、ピラジン環、キノリン環及びキナゾリン環等のヘテロ芳香環；並びにフルオレン環及びカルバゾール環等の縮合型芳香環等が挙げられ、炭素数５〜１６の芳香環（芳香環及び芳香環を含む縮合環）が好ましい。
なお、芳香環は置換基を有していてもよく、「芳香環」との用語は、置換基を有する芳香環、及び置換基を有さない芳香環の両方を意味する。芳香環が有する置換基としては、後記する置換基群Ａに記載の置換基が挙げられる。
【００２９】
本明細書において、アミノ基としては、アミノ基；モノ又はジメチルアミノ基、モノ又はジエチルアミノ基並びにモノ又はジ（ｎ−プロピル）アミノ基等のアルキル置換アミノ基；モノ又はジフェニルアミノ基並びにモノ又はジナフチルアミノ基等の芳香族残基で置換されたアミノ基；モノアルキルモノフェニルアミノ基等のアルキル基と芳香族残基が一つずつ置換したアミノ基；ベンジルアミノ基、アセチルアミノ基、フェニルアセチルアミノ基等が挙げられる。ここで芳香族残基とは、芳香環から水素原子１個を除いた基を意味し、芳香環は本明細書中上記した通りである。
【００３０】
Ｒ1、Ｒ2及びＲ3が表すアルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、アシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、又はアリールチオ基は置換基を有していてもよく、上記置換基としては、下記の置換基群Ａに記載の置換基が挙げられる。
【００３１】
置換基群Ａ：
スルファモイル基、シアノ基、イソシアノ基、チオシアナト基、イソチオシアナト基、ニトロ基、ニトロシル基、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アミノ基、メルカプト基、アミド基、アルコキシル基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、カルバモイル基、アシル基、アルデヒド基、カルボニル基、アリール基、アルキル基、ハロゲン原子で置換されたアルキル基、エテニル基、エチニル基、シリル基、及びトリアルキルシリル基（トリメチルシリル基等）。
【００３２】
Ｙ1及びＹ2が表すアルキル基、アリール基、ヘテロ環基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、エテニル基、又はエチニル基は置換基を有していてもよく、上記置換基としては、置換基群Ａに記載の置換基が挙げられる。
Ｘ1及びＸ2が表すアルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、アシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、又はアミノ基は置換基を有していてもよく、上記置換基としては、置換基群Ａに記載の置換基が挙げられる。
【００３３】
＜式（１）で表される化合物＞
式（１）中、ｍ１及びｍ２はそれぞれ独立に０〜４の整数を表す。Ｍは半金属原子又は金属原子を表す。Ｒ1、Ｒ2及びＲ3はそれぞれ独立に水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、アシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、又はアリールチオ基を表し、これらは置換基を有していてもよい。Ｙ1及びＹ2はそれぞれ独立にハロゲン原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、エテニル基、又はエチニル基を表し、これらは置換基を有していてもよく、Ｙ1及びＹ2は互いに連結して環を形成してもよい。Ａｒ1及びＡｒ2はそれぞれ独立に、置換基を有していてもよい芳香環を表す。Ｘ1及びＸ2はそれぞれ独立に、ハロゲン原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、アシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、又はアミノ基を表し、これらは置換基を有していてもよい。ｍ１が２以上である場合、複数のＸ1は同じ基でもそれぞれ異なる基でもよく、ｍ２が２以上である場合、複数のＸ2は同じ基でもそれぞれ異なる基でもよい。
【００３４】
式（１）中、ｍ１及びｍ２はそれぞれ独立に０〜４の整数を表し、好ましくは、ｍ１及びｍ２は共に１以上である。ｍ１及びｍ２は同一でも異なる整数でもよいが、好ましくは同一の整数である。好ましくは、ｍ１及びｍ２はそれぞれ独立に１又は２であり、より好ましくは、ｍ１及びｍ２は共に１又は２であり、特に好ましくはｍ１及びｍ２は共に１である。
【００３５】
式（１）中、Ｍは半金属原子又は金属原子を表し、好ましくは半金属原子を表し、特に好ましくは、ホウ素原子を示す。
【００３６】
式（１）中、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3はそれぞれ独立に水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、アシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、又はアリールチオ基を表し、これらは置換基を有していてもよい。
好ましくは、Ｒ1及びＲ2はそれぞれ独立に、アリール基又はヘテロ環基であり、これらは置換基を有していてもよい。
Ｒ1及びＲ2はそれぞれ同一でも異なっていてもよいが、好ましくは同一である。
Ｒ1及びＲ2は、連結して環を形成することはない。
好ましくは、Ｒ3は、水素原子、アルキル基、アリール基又はヘテロ環基であり、これらは置換基を有していてもよい。より好ましくは、Ｒ3は、水素原子である。
【００３７】
式（１）中、Ｙ1及びＹ2はそれぞれ独立にハロゲン原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、エテニル基、又はエチニル基を表し、これらは置換基を有していてもよく、Ｙ1及びＹ2は互いに連結して環を形成してもよい。
好ましくは、Ｙ1及びＹ2はそれぞれ独立に、ハロゲン原子、アルキル基、アリール基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、又はアリールオキシ基を表し、これらは置換基を有していてもよく、Ｙ1及びＹ2は互いに連結して環を形成してもよい。
より好ましくは、Ｙ1及びＹ2はそれぞれ独立に、ハロゲン原子である。
さらに好ましくは、Ｙ1及びＹ2はフッ素原子である。
Ｙ1及びＹ2はそれぞれ同一でも異なっていてもよいが、好ましくは同一である。
【００３８】
式（１）中、Ａｒ1及びＡｒ2はそれぞれ独立に、置換基を有していてもよい芳香環を表す。
好ましくは、Ａｒ1及びＡｒ2はベンゼン環を表す。
【００３９】
式（１）中、Ｘ1及びＸ2はそれぞれ独立に、ハロゲン原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、アシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、又はアミノ基を表し、これらは置換基を有していてもよい。ｍ１が２以上である場合、複数のＸ1は同じ基でもそれぞれ異なる基でもよく、ｍ２が２以上である場合、複数のＸ2は同じ基でもそれぞれ異なる基でもよい。
好ましくは、Ｘ1及びＸ2は、それぞれ独立に、置換基を有していてもよいアリール基を表す。
より好ましくは、Ｘ1及びＸ2は、それぞれ独立に、フェニル基、ナフチル基、又はアントリル基を表し、これらは置換基を有していてもよい。
好ましくは、ｍ１が２以上である場合、複数のＸ1は同じ基である。
好ましくは、ｍ２が２以上である場合、複数のＸ2は同じ基である。
式（１）で表される化合物は、分子内に、カルボン酸基、リン酸基、スルホ酸基などの酸性基を有さないことが好ましい。
【００４０】
＜式（２）で表される化合物について＞
式（１）で表される化合物の好ましい例としては、下記式（２）で表される化合物が挙げられる。
【化６】
0006679726.tif 000007
【００４１】
式（２）中、Ｙ1及びＹ2はそれぞれ独立にハロゲン原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、エテニル基、又はエチニル基を表し、これらは置換基を有していてもよい。
好ましくは、Ｙ1及びＹ2はそれぞれ独立にハロゲン原子を表す。
特に好ましくは、Ｙ1及びＹ2はフッ素原子である。
【００４２】
式（２）中、Ｒ3は水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、又はアシル基を表し、これらは置換基を有していてもよい。
好ましくは、Ｒ3は、水素原子、アルキル基、アリール基又はヘテロ環基であり、これらは置換基を有していてもよい。
より好ましくは、Ｒ3は、水素原子である。
【００４３】
式（２）中、Ａｒ3及びＡｒ4はそれぞれ独立にアリール基又はヘテロ環基を表し、これらは置換基を有していてもよい。上記置換基としては、置換基群Ａに記載の置換基が挙げられる。
【００４４】
式（２）中、Ｒ4〜Ｒ11はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、アシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、又はアミノ基を表し、これらは置換基を有していてもよい。
【００４５】
式（２）中、好ましくは、Ｒ4〜Ｒ11の少なくとも１つ以上が、置換基を有していてもよいアリール基である。
さらに好ましくは、Ｒ4〜Ｒ7の少なくとも１つ以上が、置換基を有していてもよいアリール基であり、Ｒ8〜Ｒ11の少なくとも１つ以上が、置換基を有していてもよいアリール基である。
【００４６】
より好ましくは、Ｒ4〜Ｒ11の少なくとも１つ以上が、式（３）で表される基である。  さらに好ましくは、Ｒ4〜Ｒ7の少なくとも１つ以上が、式（３）で表される基であり、Ｒ8〜Ｒ11の少なくとも１つ以上が、式（３）で表される基である。
【化７】
0006679726.tif 000008
式（３）中、Ｒ201〜Ｒ205は水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、アシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、又はアミノ基であり、Ｒ201及びＲ205の少なくとも一方は水素原子以外の基である。Ｒ201とＲ202は互いに連結して環を形成してもよく、Ｒ202とＲ203は互いに連結して環を形成してもよく、Ｒ203とＲ204は互いに連結して環を形成してもよく、Ｒ204とＲ205は互いに連結して環を形成してもよい。
【００４７】
別の好ましい態様によれば、Ｒ4〜Ｒ11の少なくとも１つ以上が、式（４）で表される基である。さらに好ましくは、Ｒ4〜Ｒ7の少なくとも１つ以上が、式（４）で表される基であり、Ｒ8〜Ｒ11の少なくとも１つ以上が、式（４）で表される基である。
【化８】
0006679726.tif 000009
式（４）中、Ｒ101は、水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、エテニル基、エチニル基、又はアシル基を表し、これらは置換基を有していてもよい。Ａｒ101はアリール基、又はヘテロ環基を表し、これらは置換基を有していてもよい。Ａｒ101とＲ201は互いに連結して環を形成してもよい。
式（２）で表される化合物は、分子内に、カルボン酸基、リン酸基、スルホ酸基などの酸性基を有さないことが好ましい。
【００４８】
＜式（１）で表される化合物の具体例＞
式（１）で表される化合物の具体例を以下に記載する。Ｍｅはメチル基を示し、Ｂｕはｎ−ブチル基を示し、Ｐｈはフェニル基を示す。
【００４９】
【化９】
0006679726.tif 000010
【００５０】
【化１０】
0006679726.tif 000011
【００５１】
【化１１】
0006679726.tif 000012
【００５２】
【化１２】
0006679726.tif 000013
【００５３】
【化１３】
0006679726.tif 000014
【００５４】
【化１４】
0006679726.tif 000015
【００５５】
【化１５】
0006679726.tif 000016
【００５６】
【化１６】
0006679726.tif 000017
【００５７】
＜エネルギードナー化合物とエネルギーアクセプター化合物の組み合わせについて＞
本発明においては、式（１）で表される少なくとも一種のエネルギードナー化合物と、式（１）で表される少なくとも一種のエネルギーアクセプター化合物を使用する。即ち、本発明においては、選択された化合物がそれぞれエネルギードナー化合物とエネルギーアクセプター化合物となるように、式（１）で表される化合物の中からエネルギードナー化合物（ドナーとも略記する）とエネルギーアクセプター化合物（アクセプターとも略記する）の組み合わせを選択して使用する。
上記に示した化合物Ｅ−１〜Ｅ−６５についての、ドナーとアクセプターの組み合わせの具体例を以下に記載する。
【００５８】
【表１】
0006679726.tif 000018
【００５９】
エネルギードナー化合物とエネルギーアクセプター化合物の選択に関しては、吸収が短波長の化合物がエネルギードナー化合物であり、吸収が長波長の化合物がエネルギーアクセプター化合物であり、エネルギードナー化合物の発光とエネルギーアクセプター化合物の吸収が少しでも重なっている場合には、本発明の発光性粒子において使用できる可能性がある。エネルギーアクセプター化合物の吸収の極大波長が、エネルギードナー化合物の吸収の波長より１０〜１００ｎｍ程度長波長側にある場合が好ましい。エネルギーアクセプター化合物の吸収の極大波長が、エネルギードナー化合物の吸収の波長より１０〜５０ｎｍ長波長側にある場合がより好ましい。
【００６０】
エネルギードナー化合物の発光が吸収のどの程度長波長に出るか（ストークスシフトの大きさ）は化合物によって異なるため、一概には言えないが、式（１）で表される化合物では吸収極大波長＋３０ｎｍ程度に発光の極大があり、そこから＋１００ｎｍ程度までは発光スペクトルが存在するため、その付近に吸収を持つアクセプター化合物を併用することによりエネルギー移動の系が実現できることが想定される。
【００６１】
なお、各化合物の吸収波長に関しては、化合物を合成して測定するだけでなく、Ｇａｕｓｓｉａｎ等による計算から予測することも可能であり、計算値の関係から、エネルギードナー化合物とエネルギーアクセプター化合物の組み合わせを推定することもできる。
【００６２】
本発明においては、ストークスシフトの大きさが、好ましくは２５ｎｍ以上であり、より好ましくは３０ｎｍ以上であり、より一層好ましく３５ｎｍ以上であり、さらに好ましく４０ｎｍ以上であり、さらに一層好ましくは４５ｎｍ以上であり、特に好ましくは５０ｎｍ以上である。ストークスシフトの大きさの上限は特に限定されないが、一般的には、１５０ｎｍ以下である。
【００６３】
＜式（１）で表される化合物の使用量＞
本発明で用いる粒子（即ち、式（１）で表される化合物を添加する前の粒子）に対する式（１）で表されるエネルギードナー化合物と式（１）で表されるエネルギーアクセプター化合物の総量は、本発明の効果を損なわない限り特に限定されないが、好ましくは０．１質量％〜２０質量％であり、より好ましくは０．２質量％〜２０質量％であり、さらに好ましくは０．３質量％〜１５質量％であり、特に好ましくは０．５質量％〜１０質量％である。
【００６４】
エネルギードナー化合物とエネルギーアクセプター化合物のモル比は、１：１０〜２０：１であることが好ましく、１：５〜１０：１であることがより好ましい。
【００６５】
本発明の発光性粒子においては、エネルギードナー化合物として式（１）で表される少なくとも一種の化合物を使用し、エネルギーアクセプター化合物として、式（１）で表される少なくとも一種の化合物を使用するが、エネルギーアクセプター化合物として二種以上の式（１）で表される化合物を使用してもよく、またエネルギーアクセプター化合物として二種以上の式（１）で表される化合物を使用してもよい。上記の場合、使用される式（１）で表される化合物の合計量が、上記の範囲内となることが好ましい。
【００６６】
＜式（１）で表される化合物の製造方法＞
式（１）で表される化合物は、例えば、以下に示す合成スキームにより製造することができる。
【００６７】
【化１７】
0006679726.tif 000019
【００６８】
上記合成スキームにおけるＲ1及びＸ1の定義は、式（１）におけるＲ1及びＸ1の定義と同義である。
化合物Ａ−１０と化合物Ａ−２０とのＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２０１０、４３、１９３−２００に記載の方法に従って反応させることにより、化合物Ａ−３０を合成することができる。次いで、化合物Ａ−３０、式：Ｘ1−Ｂ（ＯＨ）2で表される化合物、及びフッ化セシウム（ＣｓＦ）をジメトキシエタン（ＤＭＥ）と水の混合溶液に加え、真空引き、窒素置換を繰り返して脱気を行う。酢酸パラジウム（Ｐｄ（ＯＡｃ）2）、及び２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’、６’−ジメトキシビフェニル（Ｓｐｈｏｓ）を加え、昇温し、還流下、所定の時間（例えば、２〜２４時間）反応させることにより、化合物Ｄ−１０を製造することができる。
【００６９】
化合物Ｄ−１０は、式（１）で表される化合物の定義の範囲内である。化合物Ｄ−１０以外の式（１）で表される化合物についても、化合物Ａ−１０、化合物Ａ−２０、及び式：Ｘ1−Ｂ（ＯＨ）2で表される化合物の何れか一種以上の化合物を、対応する化合物に置き換えることによって、製造することができる。
【００７０】
＜粒子＞
本発明の発光性粒子は、粒子を含む。粒子の材質及び形態は特に限定されず、例えば、ポリスチレンビーズなどの有機高分子粒子、又はガラスビーズ等の無機粒子を用いることができる。粒子の材質の具体例としては、スチレン、メタクリル酸、グリシジル（メタ）アクリレート、ブタジエン、塩化ビニル、酢酸ビニルアクリレート、メチルメタクリレート、エチルメタクリレート、フェニルメタクリレート、又はブチルメタクリレートなどのモノマーを重合させたホモポリマー、並びに２種以上のモノマーを重合させたコポリマーなどが挙げられ、上記のホモポリマー又はコポリマーを均一に懸濁させたラテックスでもよい。また、粒子としては、その他の有機高分子粉末、無機物質粉末、微生物、血球、細胞膜片、リポソーム、マイクロカプセルなどが挙げられる。粒子としては、ラテックス粒子が好ましい。
【００７１】
ラテックス粒子を使用する場合、ラテックスの材質の具体例としては、ポリスチレン、スチレン−アクリル酸共重合体、スチレン−メタクリル酸共重合体、スチレン−グリシジル（メタ）アクリレート共重合体、スチレン−スチレンスルホン酸塩共重合体、メタクリル酸重合体、アクリル酸重合体、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン共重合体、塩化ビニル−アクリル酸エステル共重合体、ポリ酢酸ビニルアクリレートなどが挙げられる。ラテックスとしては、単量体としてスチレンを少なくとも含む共重合体が好ましく、スチレンと、アクリル酸又はメタクリル酸との共重合体が特に好ましい。ラテックスの作製方法は特に限定されず、任意の重合方法により作製することができる。但し、本発明の発光性粒子に抗体を標識して使用する場合には、界面活性剤が存在すると抗体固定化が困難となるため、ラテックスの作製には、無乳化剤乳化重合、即ち界面活性剤などの乳化剤を用いない乳化重合が好ましい。
【００７２】
＜発光性粒子＞
本発明の発光性粒子は、式（１）で表されるエネルギードナー化合物と、式（１）で表されるエネルギーアクセプター化合物とを含むことにより、高い量子収率、高い輝度及び大きなストークスシフトとを同時に達成している。
【００７３】
発光性粒子の励起極大波長とは、励起スペクトルで蛍光強度の最も大きい波長である。発光性粒子の蛍光極大波長とは、蛍光スペクトルで蛍光強度の最も大きい波長のことである。また、励起スペクトルとは、蛍光強度の励起波長依存性を示し、蛍光スペクトルは、蛍光強度の蛍光波長依存性を示す。
本発明の発光性粒子の励起極大波長は、好ましくは６００ｎｍ〜９００ｎｍであり、より好ましくは６５０ｎｍ〜９００ｎｍである。
本発明の発光性粒子の蛍光極大波長は、好ましくは６５０ｎｍ〜９００ｎｍであり、より好ましくは６８０ｎｍ〜９００ｎｍである。
【００７４】
発光性粒子の蛍光強度とは、ある測定条件で測定した際の発光の強度のことであり、測定条件に依存するため一般的には相対的な比較をするために用いられる。
【００７５】
本発明の発光性粒子の励起極大波長、蛍光極大波長、及び蛍光強度は、市販の蛍光分光光度計を使用して測定することができ、例えば、島津製作所製の蛍光分光光度計ＲＦ−５３００ＰＣを使用して測定することができる。
【００７６】
発光性粒子の量子収率とは、発光性粒子が吸収した光子数に対する蛍光として発光した光子数の割合のことである。
本発明の発光性粒子が示す量子収率は、好ましくは０．２５以上であり、より好ましくは０．３０以上であり、さらに好ましくは０．３５以上であり、特に好ましくは０．４０以上である。量子収率の上限は特に限定されないが、一般的には、１．０以下である。
本発明の発光性粒子の量子収率は、市販の量子収率測定装置を使用して測定することができ、例えば、浜松ホトニクス社製の絶対ＰＬ量子収率測定装置Ｃ９９２０−０２を使用して測定することができる。
【００７７】
（発光性粒子の平均粒径（平均粒子径）の測定方法）
本発明の発光性粒子の平均粒径は、粒子の材質や被検物質を測定する濃度範囲、測定機器などによって異なるが、０．００１〜１０μｍ（より好ましくは０．０１〜１μｍ）の範囲が好ましい。本発明に用いることが可能な発光性粒子の平均粒径は、市販の粒度分布計等で計測することができる。粒度分布の測定方法としては、光学顕微鏡法、共焦点レーザー顕微鏡法、電子顕微鏡法、原子間力顕微鏡法、静的光散乱法、レーザー回折法、動的光散乱法、遠心沈降法、電気パルス計測法、クロマトグラフィー法、超音波減衰法等が知られており、それぞれの原理に対応した装置が市販されている。これらの測定方法のうち、粒子径範囲及び測定の容易さから、動的光散乱法を用いて発光性粒子の平均粒径を測定することが好ましい。動的光散乱を用いた市販の測定装置としては、ナノトラックＵＰＡ（日機装（株））、動的光散乱式粒径分布測定装置ＬＢ−５５０（（株）堀場製作所）、濃厚系粒径アナライザーＦＰＡＲ−１０００（大塚電子（株））等が挙げられる。本発明では、平均粒径は、２５℃にて、粘度０．８８７２ＣＰ、水の屈折率１．３３０の条件で測定したメジアン径（ｄ＝５０）として求めるものとする。
【００７８】
＜発光性粒子の製造方法＞
本発明の発光性粒子の製造方法は特に限定されないが、式（１）で表される少なくとも一種のエネルギードナー化合物と、式（１）で表される少なくとも一種のエネルギーアクセプター化合物と粒子とを混合することによって製造することができる。例えば、ラテックス粒子などの粒子に、エネルギードナー化合物とエネルギーアクセプター化合物を添加することによって、本発明の発光性粒子を作製することができる。より具体的には、水及び水溶性有機溶剤（テトラヒドロフラン、メタノール等）の何れか一種以上を含む粒子の溶液に、エネルギードナー化合物とエネルギーアクセプター化合物を含む溶液を添加して攪拌することにより、本発明の発光性粒子を製造することができる。
【００７９】
本発明の発光性粒子は、分散液の形態で使用してもよい。
分散液は、本発明の発光性粒子を分散媒に分散することにより製造することができる。分散媒としては、水、有機溶媒、又は水と有機溶媒との混合物等が挙げられる。有機溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロパノール等のアルコール、テトラヒドロフラン等のエーテル系溶媒などを使用することができる。
分散液における発光性粒子の固形分濃度は特に限定されないが、一般的には０．１〜２０質量％であり、好ましくは０．５〜１０質量％であり、より好ましくは１〜５質量％である。
【００８０】
＜発光性粒子の利用＞
本発明の発光性粒子は、具体的な蛍光検出法の一例としては、タンパク質、酵素又は無機化合物などを定量するための蛍光検出法において使用することができる。
【００８１】
以下に、本発明の実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。なお、以下の実施例に示される材料、使用量、割合、処理内容、処理手順等は、本発明の趣旨を逸脱しない限り適宜変更することができる。したがって、本発明の範囲は以下に示す具体例により限定的に解釈されるべきものではない。
【実施例】
【００８２】
用語は以下の意味を示す。
ＭＳ：質量分析 (mass spectrometry)
ＥＳＩ：エレクトロスプレーイオン化（electrospray ionization）
ＮＭＲ：核磁気共鳴（nuclear magnetic resonance）
Ｍｅ：メチル基
Ｅｔ：エチル基
Ｂｕ：ｎ−ブチル基
ＰＬ：フォトルミネッセンス
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン【００８３】
（化合物Ｄ−1の合成）
【化１８】
0006679726.tif 000020
【００８４】
化合物Ｄ−１は上記のスキームに従って合成した。化合物Ａ−１はＢｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００４、１２、２０７９−２０９８に記載の方法に従って合成した。化合物Ａ−２はＡｌｆａ  Ａｅｓａｒ社の市販品を使用した。化合物Ａ−１と化合物Ａ−２を出発原料としてＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２０１０、４３、１９３−２００に記載の方法にしたがって化合物Ａ−３を合成した。化合物Ａ−３は質量分析により同定した。
ＭＳ（ＥＳＩ+）ｍ／ｚ：７９７．０（[Ｍ＋Ｈ]+）【００８５】
上記で合成した化合物Ａ−３を用いて、化合物Ｄ−１を以下の通り合成した。
化合物Ａ−３（６００ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）、２，４，６−トリメチルフェニルボロン酸（４９４ｍｇ、３．０１ｍｍｏｌ）、及びフッ化セシウム（１．１４ｇ、７．５０ｍｍｏｌ）をジメトキシエタン（ＤＭＥと略記する：３０ｍＬ）と水（３ｍＬ）の混合溶液に加え、真空引き、窒素置換を繰り返して脱気を行った。そこに、酢酸パラジウム（Ｐｄ（ＯＡｃ）2と略記する。３４ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’、６’−ジメトキシビフェニル（Ｓｐｈｏｓ、１２３ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を加え、昇温した。還流下、１２時間反応させた後、放冷し、水を加え抽出を行った。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過、濃縮し粗体を得た。得られた粗体をシリカゲルカラム（５０容量％クロロホルム／ヘキサン）で精製し、化合物Ｄ−１（３９６ｍｇ、収率６７％）を得た。得られた化合物Ｄ−１は1Ｈ  ＮＭＲスペクトル、及び質量分析により同定した。1Ｈ  ＮＭＲスペクトルは図１に示す。
ＭＳ（ＥＳＩ+）ｍ／ｚ：７８１．１（[Ｍ＋Ｈ]+）【００８６】
（化合物Ｄ−２の合成）
化合物Ｄ−２は、２，４，６−トリメチルフェニルボロン酸の代わりに１−ナフタレンボロン酸を用いたこと以外は化合物Ｄ−１と同様の方法で合成した。得られた化合物Ｄ−２は1Ｈ  ＮＭＲスペクトル、及び質量分析により同定した。1Ｈ  ＮＭＲスペクトルは図２に示す。
ＭＳ（ＥＳＩ+）ｍ／ｚ：７９７．３（[Ｍ＋Ｈ]+）【００８７】
（化合物Ｄ−３の合成）
化合物Ｄ−３は、２，４，６−トリメチルフェニルボロン酸の代わりに９−アントラセンボロン酸を用いたこと以外は化合物Ｄ−１と同様の方法で合成した。得られた化合物Ｄ−３は1Ｈ  ＮＭＲスペクトル、及び質量分析により同定した。1Ｈ  ＮＭＲスペクトルは図３に示す。
ＭＳ（ＥＳＩ+）ｍ／ｚ：８９７．３（[Ｍ＋Ｈ]+）【００８８】
（化合物Ｄ−４の合成）
化合物Ｄ−４は、化合物Ａ−２の代わりにｐ−メトキシベンゾヒドラジンを用いたこと以外は化合物Ｄ−１と同様の方法で合成した。得られた化合物Ｄ−４は1Ｈ  ＮＭＲスペクトル、及び質量分析により同定した。1Ｈ  ＮＭＲスペクトルは図４に示す。
ＭＳ（ＥＳＩ+）ｍ／ｚ：７４１．３（[Ｍ＋Ｈ]+）【００８９】
（化合物Ｄ−５の合成）
化合物Ｄ−５は、化合物Ａ−２の代わりにｐ−メトキシベンゾヒドラジンを用い、２，４，６−トリメチルフェニルボロン酸の代わりに２，４−ジメトキシフェニルボロン酸を用いたこと以外は化合物Ｄ−１と同様の方法で合成した。得られた化合物Ｄ−５は1Ｈ  ＮＭＲスペクトル、及び質量分析により同定した。1Ｈ  ＮＭＲスペクトルは図５に示す。
ＭＳ（ＥＳＩ+）ｍ／ｚ：７７７．３（[Ｍ＋Ｈ]+）【００９０】
（化合物Ｄ−６の合成）
化合物Ｄ−６は、化合物Ａ−２の代わりにｐ−メトキシベンゾヒドラジンを用い、２，４，６−トリメチルフェニルボロン酸の代わりに２，４−ジブトキシフェニルボロン酸を用いたこと以外は化合物Ｄ−１と同様の方法で合成した。得られた化合物Ｄ−６は1Ｈ  ＮＭＲスペクトル、及び質量分析により同定した。1Ｈ  ＮＭＲスペクトルは図６に示す。
ＭＳ（ＥＳＩ+）ｍ／ｚ：９４５．５（[Ｍ＋Ｈ]+）【００９１】
（化合物Ｄ−７の合成）
化合物Ｄ−７は、化合物Ａ−２の代わりに化合物Ａ−６を用いたこと以外は化合物Ｄ−１と同様の方法で合成した。得られた化合物Ｄ−７は1Ｈ  ＮＭＲスペクトル、及び質量分析により同定した。1Ｈ  ＮＭＲスペクトルは図７に示す。
ＭＳ（ＥＳＩ+）ｍ／ｚ：８４１．４（[Ｍ＋Ｈ]+）【００９２】
化合物Ａ−６は下記スキームに従って、以下の通り合成した。
【化１９】
0006679726.tif 000021
【００９３】
化合物Ａ−４（１５．０ｇ、７４，２ｍｍｏｌ）をメタノール（ＭｅＯＨとも表記する。２００ｍＬ）に加え、そこに硫酸（７．２７ｇ、７４．２ｍｍｏｌ）を滴下した。加熱還流させて５時間反応させ、放冷した後に析出した固体をろ過し、メタノールで洗浄することで化合物Ａ−５（１４．７ｇ、収率９２％）を得た。
化合物Ａ−５（６．００ｇ、２７．７ｍｍｏｌ）をエタノール（ＥｔＯＨとも表記する。１４０ｍＬ）に加え、ヒドラジン一水和物（８．３２ｇ、１６６ｍｍｏｌ）を滴下した。加熱還流させて９時間反応させ、放冷した後に析出した固体をろ過し、メタノールで洗浄することで化合物Ａ−６（３．６０ｇ、収率６０％）を得た。【００９４】
化合物Ｄ−８〜Ｄ−１０は米国特許第５４３３８９６号に記載の方法に従って合成した。
比較化合物Ｒ−１はＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ２００４，１２６，１０６１９−１０６３１に記載の方法に従って合成した。
比較化合物Ｒ−２はＡｌｄｒｉｃｈ社の市販品を使用した。【００９５】
化合物Ｄ−１〜Ｄ−１０及び比較化合物Ｒ−１〜Ｒ−２の構造を以下に示す。【００９６】
【化２０】
0006679726.tif 000022
【００９７】
【化２１】
0006679726.tif 000023
【００９８】
（蛍光ラテックス分散液の作製）
蛍光ラテックス粒子の作製を行った。ラテックス粒子としてはスチレンとアクリル酸の９／１（質量比）混合物を水中に分散させた状態で重合させて作製した、平均粒径１５０ｎｍの粒子を用いた。平均粒径は動的光散乱法を用いて測定した。上記で作製した固形分２％のラテックス粒子分散液（ラテックス分散液）（２５ｍＬ、固形５００ｍｇ）に対してＴＨＦ（５ｍＬ）を滴下して１０分攪拌した。そこに、化合物Ｄ−１〜Ｄ−１０及び比較化合物Ｒ−１〜Ｒ−２から選択した２種の化合物（種類は、下記表に示す通り）を含むＴＨＦ溶液（２．５ｍＬ）を１５分間かけて滴下した。各試料に用いた化合物の量は下記表にまとめた。表中の化合物量のμｍｏｌ／ｇはラテックスの固形１ｇに対する使用した化合物のモル数、質量％はラテックスの固形１ｇに対する使用した化合物の質量％を表す。化合物の滴下終了後、３０分攪拌した後、減圧濃縮してＴＨＦを除去した。その後、遠心分離して粒子を沈殿させた後、超純水を加えて再度分散させることで固形分濃度２％の蛍光ラテックス分散液を製造した。【００９９】
（蛍光ラテックス分散液の評価）
上記で製造した固形分濃度２質量％の蛍光ラテックス分散液の蛍光量子収率の評価を行った。ラテックス分散液を超純水２００倍に希釈したものを用い、励起極大波長、蛍光極大波長、蛍光強度の測定には島津製作所製の蛍光分光光度計ＲＦ−５３００ＰＣを使用し、量子収率の測定には浜松ホトニクス社製の絶対ＰＬ量子収率測定装置Ｃ９９２０−０２を使用して評価を行った。評価結果は下記表にまとめた。ストークスシフトは、蛍光極大と励起極大との差である。蛍光強度は、試料番号１７の化合物Ｒ−１の測定値を基準とした相対値で表した。なお、この評価において蛍光強度は１．５以上が好ましく、２．０以上がより好ましく、３．０以上がさらに好ましい。【０１００】
【表２】
0006679726.tif 000024
【０１０１】
上記の結果から、本発明の発光性粒子は、比較例の発光性粒子よりも量子収率が高いことが分かる。一般的には化合物の量を増加させると量子収率が低下する。しかし、試料番号５と試料番号１７〜１９との対比からも分かるように、本発明の発光性粒子によれば、比較例よりも多い化合物量の場合でも高い量子収率を維持できる。また、化合物Ｄ−１と、化合物Ｄ−４〜Ｄ−７の何れかを組み合わせた試料番号１〜７においては、特に蛍光強度が高かった。
上記した本発明の発光性粒子はいずれも２９ｎｍ以上のストークスシフトを有し、蛍光極大波長を６９０ｎｍより長波長に有する。本発明の発光性粒子は、特に生体の窓領域（生体を透過しやすい近赤外波長域である６５０〜９００ｎｍ付近）を利用したイメージングに有用な粒子である。
【図１】
0006679726.tif 000027
【図２】
0006679726.tif 000028
【図３】
0006679726.tif 000029
【図４】
0006679726.tif 000030
【図５】
0006679726.tif 000031
【図６】
0006679726.tif 000032
【図７】
0006679726.tif 000033