(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＭＤ、シュタルガルト病および／または色素性網膜症の処置、防止および／または安定化における使用のための医薬組成物であって、式Ｉ：
【化１】
0006738412.tif 000019
の化合物を含み、式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立的に、水素、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アシルオキシ、アルキル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル、ニトロ、ニトリル、アミノから選択される基であり、但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件であり；
Ｒ６は、水素、ハロ、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アシルオキシ、アルキル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル、ニトロ、ニトリル、アミノから選択される基であり；
Ｒ７は、水素、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アシルオキシ、アルキル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル、ニトロ、ニトリル、アミノから選択される基であり；
Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、それぞれ独立的に、水素、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アシルオキシ、アルキル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル、ニトロ、ニトリル、アミノから選択される基であり、但し、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０またはＲ１１のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件であり；
Ｘ−は、鉱酸に由来するアニオン、有機酸に由来するアニオン、または硫酸基もしくはスルホン酸基に由来するアニオンから選択されるアニオンである、
医薬組成物。
【請求項２】
Ｘ−は、臭素アニオン、塩素アニオン、四フッ化ホウ素アニオンおよび過塩素酸アニオンから選択される鉱酸に由来するアニオン、または酢酸アニオン、ホウ酸アニオン、クエン酸アニオン、酒石酸アニオン、重硫酸アニオン、硫酸アニオンおよびリン酸アニオンから選択される有機酸に由来するアニオンである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
Ｒ６が水素原子である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記化合物が、式Ｉａ：
【化２】
0006738412.tif 000020
の化合物である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ１０およびＸ−は、請求項１で定義されるものである、
医薬組成物。
【請求項５】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立的に、水素、ヒドロキシルおよびアルコキシから選択される基であり、但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件であり；
Ｒ８およびＲ１０は、それぞれ独立的に、水素、ヒドロキシルおよびアルコキシから選択される基であり、但し、Ｒ８またはＲ１０のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件である、
請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記化合物が、式Ｉｂ：
【化３】
0006738412.tif 000021
の化合物である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ８およびＸ−は、請求項１で定義されるものである、
医薬組成物。
【請求項７】
Ｒ８が水素原子である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記化合物が、
２’，７−ジヒドロキシ−４’−メトキシ−フラビリウムクロリド；
２’，３’，７−トリヒドロキシ−４’−メトキシ−フラビリウムクロリド；
３’，７−ジヒドロキシ−４’−メトキシ−フラビリウムクロリド；
４’，５，７−トリヒドロキシ−フラビリウムクロリド；
３’，５，７−トリヒドロキシ−４’−メトキシ−フラビリウムクロリド；
３’，４’，５’，５，７−ペンタドロキシ−フラビリウムクロリド；および
３’，４’，５，７−テトラヒドロキシ−フラビリウムクロリド；
から選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
２’，７−ジヒドロキシ−４’−メトキシ−フラビリウムクロリド；
２’，３’，７−トリヒドロキシ−４’−メトキシ−フラビリウムクロリド；
から選択される、化合物。
【請求項１０】
請求項９に記載の化合物を医薬的に許容される担体とともに含む、医薬組成物。
【請求項１１】
請求項９に記載の化合物を含む、医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、眼疾患の処置、防止および／または安定化のための（特に、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、シュタルガルト病、色素性網膜症および／または糖尿病網膜症の処置、防止および／または安定化のための）、フラボノイドファミリーの化合物であるアントシアニジン（特に３−デオキシアントシアニジン）の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
先行技術
網膜色素上皮（ＲＰＥ）の細胞などの網膜細胞におけるリポフスチンの蓄積は、様々な眼疾患に関与し、加齢の過程で現れる。ＲＰＥ細胞のリポフスチンは、脂質と、タンパク質と、フルオロフォア（特にＡ２Ｅ（Ｎ−レチニル−Ｎ−レチニリデンエタノールアミン））の不均一な混合物と、を含む。
【０００３】
Ａ２Ｅは、視覚サイクル（図１）の副産物であり、光受容体の外節において、リン脂質に連結した前駆体の形態で生成される。視覚サイクルでは、１１−シス−レチナールは、光受容体において光の影響下で全トランス−レチナールに異性化される。ＲＰＥ細胞は、全トランス−レチナールから１１−シス−レチナールを再生することを可能にする。さらに、ＲＰＥ細胞は、その基部における新しい乳頭の再生を可能にするために、光受容体の外節の膜の一部を毎日吸収して分解する。しかし、全トランス−レチナールの全てが１１−シス−レチナールに再生されることはなく、一部は、２分子の全トランス−レチナールとエタノールアミンとの縮合によってＡ２Ｅに変換される。年齢とともに、Ａ２ＥはＲＰＥ細胞に漸進的に蓄積する。
【０００４】
ＲＰＥ細胞におけるリポフスチンの蓄積（特にＡ２Ｅの蓄積）はＲＰＥ細胞の死を増加させるということが示されている。実際、青色光の作用下および酸素の存在下において、Ａ２Ｅは、タンパク質、脂質およびＤＮＡへの損傷を引き起こす反応種を生じさせ、従って、老化するＲＰＥ細胞において相当な酸化ストレスを生じさせる（Ｓｐａｒｒｏｗ  ＪＲ  ａｎｄ  Ｃａｉ  Ｂ．，  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ，  ２００１，  ４２，  １３５６−１３６２；Ｓｐａｒｒｏｗ  ＪＲ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，  ２００３，  ２７８（２０），  １８２０７−１８２１３）。このようにして形成された老廃物は蓄積し、最終的にＲＰＥ細胞の死をあちこちで引き起こし、次いで、それらが結合していた光受容体の死を引き起こす。
【０００５】
例えばＡＭＤまたはシュタルガルト病など、様々な眼疾患が、ＲＰＥ細胞におけるリポフスチンの蓄積に関連付けられている。
【０００６】
ＡＭＤは、進行性で衰弱性の慢性網膜変性疾患であり、高齢の対象が罹患し、その原因は多因子性である。ＡＭＤは、（特にヨーロッパおよび北米において）高齢者集団における不可逆的な失明の原因である。
【０００７】
ＡＭＤは、黄斑と呼称される網膜の中央部分に影響を及ぼし、重度の視力障害および中心視野の不可逆的な喪失をもたらす。ＡＭＤの病態生理学的メカニズムは依然としてほとんど理解されていないが、リポフスチンの漸進的蓄積およびＲＰＥの老化が関与している可能性があるということが確立されている。
【０００８】
ＡＭＤの初期段階は、視力に僅かにしか影響しないドルーゼン沈着と呼称される沈着を特徴とする。この疾患の後期段階には、２種類の重症型のＡＭＤが包含される：地図状萎縮とも呼称される乾燥型、および滲出型または新生血管型という名称でも知られている湿潤型。乾燥型は湿潤型よりも頻度が高いが、現在のところ、後者しか処置の恩恵を受けない。
【０００９】
防止または処置の試みは、現在のところ、一般的な抗酸化化合物（例えば、亜鉛、ビタミンＡ、ＣおよびＥなど）を含む栄養補助食品に基づいているが、治療効果は限られている。
【００１０】
従って、ＡＭＤ（特に乾燥型ＡＭＤ）の処置、防止および／または安定化のための、さらには網膜細胞におけるリポフスチンの蓄積に関連付けられる眼疾患（シュタルガルト病など）の処置、防止および／または安定化のための、新しい活性化合物が必要とされている。
【００１１】
この目的のために、天然抽出物に由来するアントシアニンの使用が報告された（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．Ｎｕｔｒ．，  ２０１２，  １０８，  １６−２７；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ｓｃｉ．Ｆｏｏｄ  Ａｇｒｉｃ．，  ２０１５，  ９５，  ９３６−９４４）。
【００１２】
アントシアニンは、ポリフェノール化合物のクラスに属し、果実および花に天然に存在する色素の一部である。これらの化合物の構造は、グリコシドに連結したフラビリウムカチオンを含む（スキーム１）。本質的に、アントシアニンは、様々な糖（グルコース、ガラクトースおよびアラビノースが最も一般的である）に連結した６種の異なるアグリコンに基づいている。アントシアニンのアグリコン部分は、アントシアニジンと呼称される。
【００１３】
【化１】
0006738412.tif 000002
スキーム１．天然のアントシアニンの一般構造（式中、Ｒ１〜Ｒ５は、好ましくはＨまたはＯＨである）
【００１４】
Ｓｐａｒｒｏｗ  ｅｔ  ａｌ．（ＷＯ２００５／０７７１７６）も、ＲＰＥ細胞におけるＡ２Ｅの蓄積に関連付けられる眼疾患の処置または防止のためのアントシアニンの使用について記載した。特定のアントシアニンの活性が、それらの対応するアントシアニジンと比較された。特に、シアニジン、ペツニジンおよびマルビジン（表１）が評価され、対応するアントシアニンについて得られたものと同等の光保護活性を示し、青色光に曝露されたＲＰＥ細胞の細胞生存は、１００μＭの化合物とのインキュベーションの後では、３０〜７０％の範囲であった。
【００１５】
表１：その光保護活性について試験された天然のアントシアニジン
【表１】
0006738412.tif 000003
【００１６】
天然のアントシアニジンの使用がＲＰＥ細胞に対する光保護効果を有する可能性があるということが他の研究でも示されている（Ｔａｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．，  ２０１１，  ５９，  ５２８−５３６；Ｔａｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ２０１３，  ９２，  １７−２５；ＦＲ２９９６７７３）。特に、これらの研究ではシアニジン、デルフィニジン、ペオニジンおよびマルビジンが評価された。シアニジンおよびデルフィニジンは、マルビジンとは対照的に、光保護効果を有するようである。ペオニジンについては、相反する結果が得られた。
【００１７】
しかし、他の研究では、反対に、（特にシアニジン、デルフィニジン、ペオニジン、ペツニジンおよびマルビジンに関して）ＲＰＥ細胞の細胞生存に対してアントシアニジンは効果が無いと結論付けられている（Ｈａｎｎｅｋｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌ．Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉ．，  ２００６；  ４７（７），  ３１６４−３１７７；Ｍａｊｕｍｄａａｒ  ａｎｄ  Ｓｒｉｒａｎｇａｍ，  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，  ２０１０，  ６２，  ９５１−９６５）。
【００１８】
従って、先行技術は、ＲＰＥ細胞の光保護におけるアントシアニジンの有効性に関して、相反する結果を提示する。
【発明の概要】
【００１９】
既存の否定的な見解にもかかわらず、本出願人は、ＲＰＥ細胞の光保護についての天然および非天然のアントシアニジンの活性に関する詳細な研究を実施した。
【００２０】
驚くべきことに、本出願人は、環Ａと環Ｂに少なくとも１つのヒドロキシル基を含む３−デオキシアントシアニジンが非常に良好な光保護活性を有するということを見出した。特に、本発明は、ＡＭＤ、シュタルガルト病、色素性網膜症および／または糖尿病網膜症の処置、防止および／または安定化のための、式Ｉ：
【化２】
0006738412.tif 000004
の３−デオキシアントシアニジンの使用であって、式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＸ−は、以下で定義される通りであり、特に、Ｒ６はヒドロキシルではなく、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであり、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０またはＲ１１のうちの少なくとも１つはヒドロキシルである、
使用に関する。
【００２１】
本出願人は、これらの化合物が、ＲＰＥの初代培養に対してＡ２Ｅによる処理と青色光による照射処理とを合わせることによって誘発される光毒性の細胞モデルにおいて有効であるということを示した。本出願人はまた、これらの化合物がインビボモデルにおいて光保護をもたらすということも示した。
【００２２】
概要
【００２３】
従って、本発明は、ＡＭＤ、シュタルガルト病、色素性網膜症および／または糖尿病網膜症の処置、防止および／または安定化におけるその使用のための式Ｉ：
【化３】
0006738412.tif 000005
の化合物であって、式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立的に、水素、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アシルオキシ、アルキル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル、ニトロ、ニトリル、アミノから選択される基であり、但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件であり；
Ｒ６は、水素、ハロ、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アシルオキシ、アルキル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル、ニトロ、ニトリル、アミノから選択される基であり；
Ｒ７は、水素、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アシルオキシ、アルキル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル、ニトロ、ニトリル、アミノから選択される基であり；
Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、それぞれ独立的に、水素、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アシルオキシ、アルキル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル、ニトロ、ニトリル、アミノから選択される基であり、但し、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０またはＲ１１のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件であり；
Ｘ−は、鉱酸に由来するアニオン（例えば、臭素アニオン、塩素アニオン、四フッ化ホウ素アニオンまたは過塩素酸アニオンなど）、有機酸に由来するアニオン（例えば、酢酸アニオン、ホウ酸アニオン、クエン酸アニオン、酒石酸アニオン、重硫酸アニオン、硫酸アニオンまたはリン酸アニオンなど）、または硫酸基もしくはスルホン酸基に由来するアニオンから選択されるアニオンである、
化合物に関する。
【００２４】
一実施形態によれば、式Ｉの化合物において、Ｒ６は水素原子である。
【００２５】
一実施形態によれば、式Ｉの化合物は、式Ｉａ：
【化４】
0006738412.tif 000006
の化合物であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ１０およびＸ−は、上記で定義される通りである。
【００２６】
一実施形態によれば、本発明の化合物において、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立的に、水素、ヒドロキシルおよびアルコキシから選択される基であり、但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件であり；
Ｒ８およびＲ１０は、それぞれ独立的に、水素、ヒドロキシルおよびアルコキシから選択される基であり、但し、Ｒ８またはＲ１０のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件である。
【００２７】
一実施形態によれば、式Ｉの化合物は、式Ｉｂ：
【化５】
0006738412.tif 000007
の化合物であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ８およびＸ−は、上記で定義されるものである。
【００２８】
一実施形態によれば、本発明の化合物において、Ｒ８は水素原子である。
【００２９】
一実施形態によれば、本発明による使用のための化合物は、
２’，７−ジヒドロキシ−４’−メトキシ−フラビリウムクロリド；
２’，３’，７−トリヒドロキシ−４’−メトキシ−フラビリウムクロリド；
３’，７−ジヒドロキシ−４’−メトキシ−フラビリウムクロリド；
４’，５，７−トリヒドロキシ−フラビリウムクロリド；
３’，５，７−トリヒドロキシ−４’−メトキシ−フラビリウムクロリド；
３’，４’，５’，５，７−ペンタドロキシ−フラビリウムクロリド；
３’，４’，５，７−テトラヒドロキシ−フラビリウムクロリド；
から選択される。
【００３０】
本発明はまた、
２’，７−ジヒドロキシ−４’−メトキシ−フラビリウムクロリド；
２’，３’，７−トリヒドロキシ−４’−メトキシ−フラビリウムクロリド；
から選択される化合物にも関する。
【００３１】
本発明はまた、２’，７−ジヒドロキシ−４’−メトキシ−フラビリウムクロリドおよび２’，３’，７−トリヒドロキシ−４’−メトキシ−フラビリウムクロリドから選択される化合物を医薬的に許容される担体とともに含む医薬組成物にも関する。
【００３２】
本発明はまた、２’，７−ジヒドロキシ−４’−メトキシ−フラビリウムクロリドおよび２’，３’，７−トリヒドロキシ−４’−メトキシ−フラビリウムクロリドから選択される化合物を含む医薬品にも関する。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
定義
本発明において、以下の用語は、次のように定義される。
【００３４】
「アシルオキシ」は、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−アルキル基に関する。
【００３５】
「アルケニル」は、少なくとも１つの二重結合を有する任意選択で置換されていてもよい２〜１２個の炭素原子（好ましくは２〜６個の炭素原子）の任意の直鎖状または分枝状の炭化水素鎖（例えば、ビニルまたはアリルなど）に関する。
【００３６】
「アルキルアリール」は、アルキル−アリール−基に関する。
【００３７】
「アルキル」は、１〜１２個の炭素原子の直鎖状または分枝状の飽和炭化水素、好ましくは１〜６個の炭素原子の直鎖状または分枝状の飽和炭化水素、より好ましくはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、に関する。
【００３８】
「アルコキシ」は、−Ｏ−アルキル基に関する。
【００３９】
「アミノ」は、−ＮＨ２基を指すか、あるいは、置換されているか置換されていない脂肪族または芳香族の有機基での１つまたは複数の水素原子の置換によって−ＮＨ２から生じる任意の基を指す。好ましくは、−ＮＨ２から生じる基はアルキルアミノ基（すなわちＮ−アルキルの基）であり、これらにはモノアルキルアミノ基およびジアルキルアミノ基が包含される。
【００４０】
「アラルキル」は、アリール−アルキル−基に関する。
【００４１】
「アリール」は、１つまたは複数の芳香環を有する５〜２０個（好ましくは６〜１２個）の炭素原子の単環系または多環系に関し、その中でも、フェニル基、ビフェニル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基、テトラヒドロナフチル基、インダニル基およびビナフチル基を挙げることができる。アリール基は、ヒドロキシル基、１、２、３、４、５もしくは６つの炭素原子を含む直鎖状もしくは分枝状のアルキル基（特にメチル、エチル、プロピル、ブチル）、アルコキシ基またはハロゲン原子（特に臭素、塩素およびヨウ素）から互いに独立的に選択される１〜３つの置換基で置換されていてよい。
【００４２】
「アリールオキシ」は、−Ｏ−アリール基に関する。
【００４３】
「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを指す。
【００４４】
「ヘテロアリール」は、１つまたは複数の炭素原子がヘテロ原子（好ましくはＮ、ＯまたはＳ）で置き換えられている、１つまたは複数の芳香環を有する５〜２０個（好ましくは５〜１２個）の炭素原子の単環式または多環式の基に関し、ここで、窒素および硫黄のヘテロ原子は任意選択で酸化されていてもよく、窒素のヘテロ原子は任意選択で四級化されていてもよい。そのような環は、アリール基、シクロアルキル基、ヘテロアリール基またはヘテロシクリル基に縮合されていてよい。そのようなヘテロアリール基の非限定的な例は次のものである：ピロリル、フラニル、チオフェニル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、オキサトリアゾリル、チアトリアゾリル、ピリジニル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、オキサジニル、ジオキシニル、チアジニル、トリアジニル、イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３］チアゾリル、チエノ［３，２−ｂ］フラニル、チエノ［３，２−ｂ］チオフェニル、チエノ［２，３−ｄ］［１，３］チアゾリル、チエノ［２，３−ｄ］イミダゾリル、テトラゾロ［１，５−ａ］ピリジニル、インドリル、インドリジニル、イソインドリル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、イソベンゾチオフェニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、１，３−ベンズオキサゾリル、１，２−ベンズイソキサゾリル、２，１−ベンズイソキサゾリル、１，３−ベンゾチアゾリル、１，２−ベンゾイソチアゾリル、２，１−ベンゾイソチアゾリル、ベンゾトリアゾリル、１，２，３−ベンズオキサジアゾリル、２，１，３−ベンズオキサジアゾリル、１，２，３−ベンゾチアジアゾリル、２，１，３−ベンゾチアジアゾリル、チエノピリジニル、プリニル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル、６−オキソ−ピリダジン−１（６Ｈ）−イル、２−オキソ−ピリジン−１（２Ｈ）−イル、６−オキソ−ピルダジン−１（６Ｈ）−イル、２−オキソ−ピリジン−１（２Ｈ）−イル、１，３−ベンゾジオキソリル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル。
【００４５】
「ヘテロアリールオキシ」は、−Ｏ−ヘテロアリール基に関する。
【００４６】
「対象」は、動物（ヒトを含む）を指す。本発明に関しては、対象は、「患者」（すなわち、医療を受けている人間、医学的処置を受けているか受けたことがある人間、または疾患の発症をモニタリングされている人間）であってよい。
【００４７】
「処置」は、疾患の少なくとも１つの望ましくない影響または症状を防止、低減または減弱することを意味する。
【００４８】
「疾患の防止」は、疾患の少なくとも１つの望ましくない影響または症状の発生を防止することを意味する。本発明では、「防止」なる用語は、二次的防止（すなわち、症状の再発の防止または疾患の再発の防止）を指してよい。
【００４９】
「疾患を安定化する」は、疾患の少なくとも１つの望ましくない影響または症状の悪化を停止または鈍化させることを意味する。「疾患を安定化する」はまた、一度確立した疾患の結果を低減する作用を指してもよい。
【００５０】
「有効量」は、疾患または障害の１つまたは複数の症状の進行、悪化または増悪を鈍化または停止させるのに、あるいは疾患または状態の症状の緩和に、あるいは疾患または障害の治癒に、必要かつ十分な活性薬剤の量を指す。
【００５１】
「医薬的に許容される担体」は、動物（好ましくはヒト）に投与される場合に望ましくないアレルギー反応または他の反応を何ら生じさせない賦形剤を指す。「医薬的に許容される担体」には、溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤、吸収遅延剤ならびに同様の化合物の全てが包含される。ヒトでの投与の場合、調製物は、規制機関（例えば、ＦＤＡまたはＥＭＡなど）が要求するような、無菌性、一般的な安全性および純度についての基準を満たさなければならない。
【００５２】
「投与」は、症状または疾患が処置または防止されなければならない対象に活性薬剤を単独で、または医薬的に許容される組成物の一部として、与えることを意味する。
【００５３】
詳細な説明
【００５４】
化合物
本発明は、式Ｉ：
【化６】
0006738412.tif 000008
の３−デオキシアントシアニジンに関し、式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立的に、水素、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アシルオキシ、アルキル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル、ニトロ、ニトリル、アミノから選択される基であり、但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件であり；
Ｒ６は、水素、ハロ、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アシルオキシ、アルキル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル、ニトロ、ニトリル、アミノから選択される基であり；
Ｒ７は、水素、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アシルオキシ、アルキル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル、ニトロ、ニトリル、アミノから選択される基であり；
Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、それぞれ独立的に、水素、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アシルオキシ、アルキル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル、ニトロ、ニトリル、アミノから選択される基であり、但し、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０またはＲ１１のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件であり；
Ｘ−は、鉱酸に由来するアニオン（例えば、臭素アニオン、塩素アニオン、四フッ化ホウ素アニオンまたは過塩素酸アニオンなど）、有機酸に由来するアニオン（例えば、酢酸アニオン、ホウ酸アニオン、クエン酸アニオン、酒石酸アニオン、重硫酸アニオン、硫酸アニオンまたはリン酸アニオンなど）、または硫酸基もしくはスルホン酸基に由来するアニオンから選択されるアニオンである。
【００５５】
特定の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立的に、水素、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アシルオキシから選択される基であり、但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件であり、好ましくは、Ｒ１、Ｒ２またはＲ３のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件である。
【００５６】
特定の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立的に、水素、ヒドロキシル、アルコキシから選択される基であり、但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件であり、好ましくは、Ｒ１、Ｒ２またはＲ３のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件である。好ましくは、アルコキシ基はメトキシ基である。
【００５７】
特定の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立的に、水素、ヒドロキシル、メトキシから選択される基であり、但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件であり、好ましくは、Ｒ１、Ｒ２またはＲ３のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件である。
【００５８】
特定の実施形態において、Ｒ１は水素またはヒドロキシルであり、好ましくは、Ｒ１は水素である。
【００５９】
特定の実施形態において、Ｒ１は水素またはヒドロキシルである。
【００６０】
特定の実施形態において、Ｒ３はヒドロキシルまたはアルコキシである。特定の実施形態において、Ｒ３はヒドロキシルである。特定の実施形態において、Ｒ３はアルコキシであり、好ましくはメトキシである。
【００６１】
特定の実施形態において、Ｒ４は水素である。特定の実施形態において、Ｒ５は水素である。特定の実施形態において、Ｒ４およびＲ５は水素である。
【００６２】
特定の実施形態において、Ｒ６は水素、アルキル、アルコキシまたはアリールである。特定の実施形態において、Ｒ６は水素である。
【００６３】
特定の実施形態において、Ｒ７は水素、ヒドロキシルまたはアルコキシであり、好ましくは、Ｒ７は水素である。
【００６４】
特定の実施形態において、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、それぞれ独立的に、水素、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アシルオキシから選択される基であり、但し、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０またはＲ１１のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件であり、好ましくは、少なくともＲ８またはＲ１０はヒドロキシルであるという条件である。
【００６５】
特定の実施形態において、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、それぞれ独立的に、水素、ヒドロキシル、アルコキシから選択される基であり、但し、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０またはＲ１１のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件であり、好ましくは、少なくともＲ８またはＲ１０はヒドロキシルであるという条件である。好ましくは、アルコキシ基はメトキシ基である。
【００６６】
特定の実施形態において、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、それぞれ独立的に、水素、ヒドロキシルから選択される基であり、但し、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０またはＲ１１のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件であり、好ましくは、少なくともＲ８またはＲ１０はヒドロキシルであるという条件である。
【００６７】
特定の実施形態において、Ｒ８は水素、ヒドロキシルまたはアルコキシである。特定の実施形態において、Ｒ８は水素である。特定の実施形態において、Ｒ８はヒドロキシルである。特定の実施形態において、Ｒ６およびＲ８は水素である。
【００６８】
特定の実施形態において、Ｒ９は水素、ヒドロキシルまたはアルコキシである。特定の実施形態において、Ｒ９は水素である。
【００６９】
特定の実施形態において、Ｒ１０は水素、ヒドロキシルまたはアルコキシである。特定の実施形態において、Ｒ１０はヒドロキシルである。
【００７０】
特定の実施形態において、Ｒ１１は水素、ヒドロキシルまたはアルコキシである。特定の実施形態において、Ｒ１１は水素である。
【００７１】
特定の実施形態において、Ｒ９およびＲ１１は水素である。特定の実施形態において、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１１は水素である。
【００７２】
特定の実施形態において、Ｒ８およびＲ１０はヒドロキシルである。
【００７３】
特定の実施形態において、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１１は水素であり、Ｒ１０はヒドロキシルである。特定の実施形態によれば、Ｒ９およびＲ１１は水素であり、Ｒ８およびＲ１０はヒドロキシルである。
【００７４】
特定の実施形態において、Ｘ−は、鉱酸に由来するアニオン（例えば、臭素アニオン、塩素アニオン、四フッ化ホウ素アニオンまたは過塩素酸アニオンなど）であり、好ましくは、Ｘ−は、塩素イオンまたは臭素イオンであり、より好ましくは、Ｘ−は、塩素イオンである。
【００７５】
特定の実施形態において、Ｘ−は、有機酸に由来するアニオン（例えば、酢酸アニオン、ホウ酸アニオン、クエン酸アニオン、酒石酸アニオン、重硫酸アニオン、硫酸アニオンまたはリン酸アニオンなど）である。
【００７６】
特定の実施形態において、Ｘ−は、硫酸基またはスルホン酸基に由来するアニオンである。
【００７７】
一実施形態によれば、式Ｉの化合物は、式Ｉ’：
【化７】
0006738412.tif 000009
の化合物であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＸ−は、式Ｉにおいて定義されるものである。
【００７８】
一実施形態によれば、式Ｉの化合物は、式Ｉａ：
【化８】
0006738412.tif 000010
の化合物であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ１０およびＸ−は、上記で定義されるものである。
【００７９】
特定の実施形態によれば、式Ｉａにおいて、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立的に、水素、ヒドロキシルおよびアルコキシから選択される基であり、但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件であり；
Ｒ８およびＲ１０は、それぞれ独立的に、水素、ヒドロキシルおよびアルコキシから選択される基であり、但し、Ｒ８またはＲ１０のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件である。
【００８０】
一実施形態によれば、式Ｉの化合物は、式Ｉｂ：
【化９】
0006738412.tif 000011
の化合物であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８およびＸ−は、上記で定義されるものである。
【００８１】
特定の実施形態によれば、式Ｉｂにおいて、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立的に、水素、ヒドロキシルおよびアルコキシから選択される基であり、但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３またはＲ４のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件であり；
Ｒ８は、水素、ヒドロキシルおよびアルコキシから選択される基である。
【００８２】
特定の実施形態によれば、式Ｉｂにおいて、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立的に、水素、ヒドロキシルおよびメトキシから選択される基であり、但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３またはＲ４のうちの少なくとも１つはヒドロキシルであるという条件であり；
Ｒ８は水素またはヒドロキシルである。
【００８３】
一実施形態によれば、式Ｉの化合物は、以下の表に列挙されるものである。
【００８４】
【表２】
0006738412.tif 000012
0006738412.tif 000013
【００８５】
特定の実施形態によれば、式Ｉの化合物は、化合物番号１および２である。
【００８６】
一実施形態によれば、式Ｉの化合物は、天然起源の化合物（例えば、アピゲニニジン、ジオスメチニジン、トリセチニジンまたはルテオリジン（luteolidin）など）である。天然起源の化合物は、天然産物から（特に植物および／または果実から）抽出できるか、あるいは、全合成によるものであろうと天然化合物（例えば、対応するアントシアニンなど）を用いた半合成によるものであろうと化学合成によって得ることができる。
【００８７】
別の実施形態によれば、式Ｉの化合物は、非天然化合物である。非天然化合物は、全合成または半合成のいずれかによる化学合成によって得ることができる。
【００８８】
式Ｉの化合物は、当業者に公知の反応によって調製できる。
【００８９】
使用
本発明は、式Ｉの化合物と生理学的に許容される担体とを含む組成物に関する。一実施形態によれば、本発明の組成物は、式Ｉの化合物を医薬的に許容される担体とともに含む医薬組成物である。
【００９０】
本発明は、式Ｉの化合物を含む医薬品に関する。
【００９１】
以下で説明される使用は、本発明による、式Ｉの化合物の使用、医薬組成物の使用または医薬品の使用に関する。
【００９２】
本発明は、眼疾患の処置、防止および／または安定化のための、式Ｉの化合物の使用に関する。一実施形態によれば、本発明は、網膜細胞におけるリポフスチンの蓄積に関連付けられる眼疾患の処置、防止および／または安定化のための（特に、ＡＭＤまたはシュタルガルト病の処置、防止および／または安定化のための）、式Ｉの化合物の使用に関する。
【００９３】
一実施形態によれば、本発明は、ＡＭＤ、シュタルガルト病、色素性網膜症および／または糖尿病網膜症の処置、防止および／または安定化のための、式Ｉの化合物の使用に関する。
【００９４】
一実施形態によれば、本発明は、ＡＭＤの処置、防止および／または安定化のための、式Ｉの化合物の使用に関する。特定の実施形態によれば、本発明は、ＡＭＤの中間型の処置、防止および／または安定化のための、式Ｉの化合物の使用に関する。「中間型」なる用語は、視力に僅かにしか影響しないドルーゼン沈着と呼称される沈着を特徴とする、ＡＭＤの初期段階を指す。特定の実施形態によれば、本発明は、ＡＭＤの重症型（特に、ＡＭＤの乾燥型および／または湿潤型）の処置、防止および／または安定化のための、式Ｉの化合物の使用に関する。特定の実施形態によれば、本発明は、乾燥型ＡＭＤの処置、防止および／または安定化のための、式Ｉの化合物の使用に関する。特定の実施形態によれば、本発明は、湿潤型ＡＭＤの処置、防止および／または安定化のための、式Ｉの化合物の使用に関する。
【００９５】
一実施形態によれば、本発明は、シュタルガルト病の処置、防止および／または安定化のための、式Ｉの化合物の使用に関する。
【００９６】
一実施形態によれば、本発明は、色素性網膜症の処置、防止および／または安定化のための、式Ｉの化合物の使用に関する。
【００９７】
一実施形態によれば、本発明は、糖尿病網膜症の処置、防止および／または安定化のための、式Ｉの化合物の使用に関する。
【００９８】
本発明はまた、青色放射への曝露によって網膜に引き起こされ得る損傷を防止するための、式Ｉの化合物の使用にも関する。「青色放射」なる用語は、可視光スペクトルの青帯域（すなわち、４３５〜４９０ｎｍの波長）に該当する放射を意味する。
【００９９】
一実施形態によれば、本発明は、網膜色素上皮（ＲＰＥ）の細胞死を減少させるための、式Ｉの化合物の使用に関する。
【０１００】
一実施形態によれば、本発明は、ＲＰＥ細胞におけるリポフスチンの蓄積を低減または防止するための、式Ｉの化合物の使用に関する。一実施形態において、リポフスチンは、Ａ２Ｅおよび／またはＡ２Ｅの異性体もしくは酸化型を含む。
【０１０１】
一実施形態によれば、本発明は、ＲＰＥ細胞の膜を安定化するための、式Ｉの化合物の使用に関する。一実施形態において、細胞の膜は、細胞膜、リソソーム膜、核膜またはミトコンドリア膜であってよい。
【０１０２】
一実施形態によれば、上記で言及される使用は、式Ｉの化合物、または複数の式Ｉの化合物の混合物に関する。
【０１０３】
一実施形態によれば、上記で言及される使用は、別の活性薬剤と組み合わされた１つまたは複数の式Ｉの化合物に関する。特に、活性薬剤は、抗酸化剤（例えば、亜鉛またはビタミンＡ、ＣもしくはＥなど）であってよい。
【０１０４】
本発明はまた、眼疾患を処置および／または防止するための方法であって、前記眼疾患を改善および／または防止するのに有効な量で本発明による式Ｉの化合物を対象に投与することを含む方法にも関する。一実施形態によれば、本発明は、網膜細胞におけるリポフスチンの蓄積に関連付けられる眼疾患の処置、防止および／または安定化のための（より具体的には、ＡＭＤまたはシュタルガルト病の処置、防止および／または安定化のための）方法であって、前記眼疾患を改善および／または防止するのに有効な量で本発明による式Ｉの化合物を対象に投与することを含む方法に関する。
【０１０５】
一実施形態によれば、本発明は、ＡＭＤ、シュタルガルト病、色素性網膜症および／または糖尿病網膜症を処置および／または防止するための方法に関する。
【０１０６】
本発明はまた、眼疾患の処置、防止および／または安定化のための医薬品の調製のための、式Ｉの化合物の使用にも関する。一実施形態によれば、本発明は、網膜細胞におけるリポフスチンの蓄積に関連付けられる眼疾患の処置、防止および／または安定化のための（より具体的には、ＡＭＤまたはシュタルガルト病の処置、防止および／または安定化のための）医薬品の調製のための、式Ｉの化合物の使用に関する。
【０１０７】
一実施形態によれば、本発明は、ＡＭＤ、シュタルガルト病、色素性網膜症および／または糖尿病網膜症の処置、防止および／または安定化のための医薬品の調製のための、式Ｉの化合物の使用に関する。
【０１０８】
一実施形態によれば、対象は動物であり、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。
【０１０９】
一実施形態によれば、患者は、ＡＭＤ、シュタルガルト病、色素性網膜症および／または糖尿病網膜症と診断される。別の実施形態によれば、対象は、ＡＭＤ、シュタルガルト病、色素性網膜症および／または糖尿病網膜症を発症するリスクがある。一実施形態によれば、対象は、ＡＭＤ、シュタルガルト病、色素性網膜症および／または糖尿病網膜症を発症する遺伝的素因を有する。
【０１１０】
一実施形態によれば、本発明の式Ｉの化合物は、眼内経路で投与される。「眼内経路」なる用語は、化合物を眼の内部に直接投与することを指す。眼の内部としては、特に、前眼房、後眼房、硝子体、脈絡膜、黄斑、網膜、眼の後部領域で血管形成するか眼の後部領域を神経支配する血管と神経が挙げられる。一実施形態によれば、式Ｉの化合物は、後眼部に眼内経路で投与される。一実施形態によれば、式Ｉの化合物は、硝子体内に投与される。別の実施形態によれば、式Ｉの化合物は、眼の網膜下コンパートメントに投与される。別の実施形態によれば、式Ｉの化合物は、結膜下に投与される。
【０１１１】
一実施形態によれば、式Ｉの化合物は、局所投与される。点眼または浸漬が用いられてよい。また、本発明の化合物の眼内への局所的吸収を促進するために、当業者に公知のイオン導入法が用いられてもよい。
【０１１２】
一実施形態によれば、式Ｉの化合物は、経口投与されない。
【０１１３】
一実施形態によれば、式Ｉの化合物は、注射できる形態に製剤化される。一実施形態において、式Ｉの化合物は、溶液の形態（例えば、無菌水溶液、分散系、エマルジョン、懸濁液など）に、あるいは液体の添加による溶液または懸濁液の調製に適した固体形態に、製剤化される。
【０１１４】
一実施形態によれば、式Ｉの化合物は、持続放出および／または制御放出が起こり得るような様式で製剤化される。特に、式Ｉの化合物は、インプラントの形態に、あるいは生体吸収型マトリックスに、製剤化されてよい。生体吸収型マトリックスには、カルボマーまたはポリマーが包含され得る。ポリマーは、生分解性ミクロスフェアであってよい。あるいは、式Ｉの化合物は、リポソームの形態に製剤化されてよい。当業者に知られている、活性物質の持続放出および／または制御放出を得ることを可能にする任意の眼用製剤が使用されてよい。
【０１１５】
一実施形態によれば、式Ｉの化合物は、多くて１ヵ月に１回、好ましくは２ヵ月に１回、より好ましくは４ヵ月に１回、さらにより好ましくは６ヵ月に１回、という頻度で投与される。
【０１１６】
一実施形態によれば、式Ｉの化合物は、片眼あたり０．０１ｍｇ〜１ｍｇ（好ましくは片眼あたり０．１ｍｇ〜０．５ｍｇ）の範囲の用量での毎日の放出を可能にする形態で硝子体内に投与される。
【図面の簡単な説明】
【０１１７】
【図１】図１は、視覚サイクルの主なステップを要約するスキームである。
【図２】図２および図３は、光毒性の誘発から１週間後のマウスの網膜電図を示すグラフである。波Ａ（図２）は、光受容体の電気的活動を示し、波Ｂ（図３）は、内網膜の細胞の電気的活動を示す。データは、分散の分析に続くＤｕｎｎｅｔｔ検定によって統計的に分析された。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図３】図２および図３は、光毒性の誘発から１週間後のマウスの網膜電図を示すグラフである。波Ａ（図２）は、光受容体の電気的活動を示し、波Ｂ（図３）は、内網膜の細胞の電気的活動を示す。データは、分散の分析に続くＤｕｎｎｅｔｔ検定によって統計的に分析された。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図４】図４は、ジオスメチニジンの硝子体内注射の後の、視神経からの距離に応じた光受容体の層の数を示すグラフである。
【実施例】
【０１１８】
非限定的に本発明を示す以下の実施例を閲覧すれば、本発明をより理解するであろう。
【０１１９】
実施例１：本発明の化合物の合成
【０１２０】
化合物１．
２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（６９ｍｇ）および２’−ヒドロキシ−４’−メトキシ−アセトフェノン（８３ｍｇ−１当量）を５００μＬのエタノールに入れて溶液にする。４０μＬの塩化チオニルをこの反応媒体中に直接添加すると、すぐに高度に着色する。１時間の撹拌の後、反応媒体を蒸発させ、残渣を酢酸エチル中で沈殿させ、濾過し、乾燥させて、最終化合物を得る（７７ｍｇ−収率５０％）。
【０１２１】
化合物２．
２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（２７６ｍｇ）および２’，３’−ジヒドロキシ−４’−メトキシ−アセトフェノン（３６４ｍｇ−１当量）を２ｍＬのエタノールと２ｍＬの酢酸エチルに入れて溶液にする。５００μＬの塩化チオニルをこの反応媒体中に直接添加すると、すぐに高度に着色する。１時間の撹拌の後、反応媒体を蒸発させ、残渣を酢酸エチル中で沈殿させ、濾過し、乾燥させる。この固体を最小限のメタノールに入れて溶液にし、等体積のｔｅｒｔｉｏ−ブチル−メチル−エーテル（ＴＢＭＥ）を添加することによって沈殿させる。固体を濾過し、乾燥させる。純度が的確になるまで、この手順を繰り返す。最終的な収率は６０％である。
【０１２２】
得られた化合物は９５％超の純度（ＨＰＬＣ）を有し、それらの同一性は、ＭＳおよびＮＭＲ分光法によって確認した。高分解能質量スペクトルは、ＮＳＩソース（ｎａｎｏ−ＥＳＩ）を備えたＬＴＱ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ−ＸＬ分光計（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）において実施した。プロトン（１Ｈ）の核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）は、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＤＰＸ３００装置においてＤＭＳＯ−ｄ６＋１％ＣＦ３ＣＯＯＤ中で実施した（３００．１６ＭＨｚ）。
【０１２３】
ＨＲＭＳ（Ｏｒｂｉｔｒａｐ）
化合物１：ｍ／ｚ  ２６９．０８０９（Ｍ）＋、Ｃ１６Ｈ１３Ｏ４は計算上２６９．０８０８、Δ＝０．０５４ｐｐｍ。
化合物２：ｍ／ｚ  ２８５．０７５７  （Ｍ）＋、Ｃ１６Ｈ１３Ｏ５は計算上２８５．０７５７、Δ＝−０．１０５ｐｐｍ
【０１２４】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（δ  ｐｐｍ）
【表３】
0006738412.tif 000014
【０１２５】
実施例２：光保護活性のインビトロアッセイ
【０１２６】
方法
ＲＰＥの初代培養に対してＡ２Ｅによる処理と青色光による照射処理とを合わせることによって誘発される光毒性の細胞モデルを使用し、この細胞モデルにおいて細胞生存を測定した。このモデルは、成体ブタの網膜色素上皮の初代培養を使用する。
【０１２７】
このモデルは、特に、ＡＭＤの乾燥型の処置のための新しい候補の発見を目的とした分子のスクリーニングを行うことを可能にする。このモデルは、文献で一般に使用されている細胞株よりも「生理学的」状態に近い。なぜなら、使用される細胞が、動物の食餌によってもたらされる保護物質を含有しているので「欠乏」の状態にないため、および、それらの撹乱が、培地へのＡ２Ｅの添加によって引き起こされるためである。
【０１２８】
９６ウェルプレートで培養された細胞を、最終濃度が５または２０μＭとなるようにした試験化合物（５ｍＭのＤＭＳＯ溶液）で４８時間処理し、その最後の１９時間は、Ａ２Ｅ（最終濃度３０μＭ）の存在下であった。次いで、この前処理された細胞を、９６  ＬＥＤ  Ｗ７１１３ＰＢＣ／Ｈ（Ｋｉｎｇｂｒｉｇｈｔ）による青色光（４７０ｎｍ）で５０分間照射する（ビーム角度１６°；８．６ｍＡの電流の下において１４４０ｍｃｄ（ミリカンデラ）で照射）。２４時間後に細胞生存を測定する。
【０１２９】
Ｈｏｅｃｈｓｔ（核のマーカー）およびエチジウム（死細胞の核のマーカー）で細胞を着色することによって、光毒性の誘発から２４時間後に細胞の生存および死を検出する。Ｍｅｔａｍｏｒｐｈソフトウェアによって制御される電動ステージを備えた蛍光顕微鏡で各ウェルの画像を取得し、専用の定量化プログラムによって細胞の生存を定量化する。実験は、９６ウェルマイクロプレートにおいて四連で実施し、各実験を少なくとも４回再現する。
【０１３０】
結果は、試験される分子で処理されたウェル中の生細胞の数を（Ａ２Ｅを含まない希釈媒体で処理された）対照ウェル中の生細胞の数で割って１００を掛けた比率で表す。Ａ２Ｅで処理されるが分子では処理されない対照の値は、３９．７±３．７である。
【０１３１】
結果
本発明の化合物は、２０μＭならびに５μＭにおいて、非常に高い細胞生存パーセンテージを得ることを可能にする（表２）。
【０１３２】
表２：細胞生存：本発明の化合物
【表４】
0006738412.tif 000015
【０１３３】
比較のために、３−ヒドロキシ−アントシアニジンを試験した（表３）。
【０１３４】
表３：試験された３−ヒドロキシ−アントシアニジン
【表５】
0006738412.tif 000016
【０１３５】
３−ヒドロキシ−アントシアニジンの存在下での細胞生存の結果を表４に示す。
【０１３６】
表４：細胞生存：３−ヒドロキシ−アントシアニジン
【表６】
0006738412.tif 000017
【０１３７】
これらの結果は、アントシアニジンの３位にヒドロキシル基が存在することが光保護の有効性を大幅に低下させるということを示す。シアニジンだけが、２０μＭにおいて相当な光保護効果を有する。しかし、低濃度では、その有効性は大幅に低下し、これは本発明の化合物とは対照的である。
【０１３８】
比較のために、環Ａと環Ｂに少なくとも１つのフリーのヒドロキシルを有さない３−デオキシアントシアニジンも試験した（表５）。
【０１３９】
表５：細胞生存：環Ａまたは環Ｂに少なくとも１つのヒドロキシルを有さない３−デオキシアントシアニジン
【表７】
0006738412.tif 000018
【０１４０】
２０μＭで取得された細胞生存のパーセンテージは５０％未満であり、従って、５μＭの濃度は試験しなかった。
【０１４１】
得られた結果は、環Ａおよび環Ｂの各々に少なくとも１つのヒドロキシル基が存在しない場合、本発明の化合物の場合よりも光保護の有効性が遥かに低いということを明確に示す。
【０１４２】
実施例３：マウスにおける光保護活性のインビボアッセイ
【０１４３】
Ｍａｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．（Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．，  ２００９，  ５０，  ４９１７−４９２５）によって開発された遺伝子組換えマウスモデルを用いて、本発明の化合物の光保護活性を試験した。
【０１４４】
このマウスモデルでは、視色素サイクルに関与する２つの遺伝子（ＡＢＣＡ４およびＲｄｈ８；図１を参照のこと）が不活性化されており、これが、眼におけるＡ２Ｅの早期蓄積をもたらす。従って、この動物モデルは、ヒトでの病態を表すものである。
【０１４５】
７週齢のマウスを用いて、ＤＭＳＯ中の可溶化ジオスメチニジン（５０μＭ）をＰＢＳで希釈（１．２：１００）したものを片側の硝子体内に注射し、１００〜１３０μＭという硝子体内濃度を得た。ＰＢＳで希釈したＤＭＳＯを対照の動物に注射した。暗所に２４時間置いた後、マウスを青色光に曝露させた（４０００ルクス、１時間）。
【０１４６】
７日後に実施した網膜電図はジオスメチニジンの保護効果を示し、ジオスメチニジンの存在は、有意な電気的活動（図２および図３）および光受容体の良好な生存（図４）を維持することを可能にした。
【図１】
0006738412.tif 000022
【図２】
0006738412.tif 000023
【図３】
0006738412.tif 000024
【図４】
0006738412.tif 000025