(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉの化合物。
【化１】
0006667472.tif 000059
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ２は、Ｚ−（Ｙ）ｐ−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、１つ以上のヘテロ原子を含むアルキル基であり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１である。）
【請求項２】
請求項１に記載の化合物と、免疫原性担体とのコンジュゲート。
【請求項３】
前記免疫原性担体はタンパク質である、請求項２に記載のコンジュゲート。
【請求項４】
前記タンパク質は、キーホールリンペットヘモシアニン、オボアルブミン又はウシサイログロブリンである、請求項３に記載のコンジュゲート。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物と免疫原性担体とを接触させることを含む、請求項２に記載のコンジュゲートを製造するプロセス。
【請求項６】
前記免疫原性担体はタンパク質である、請求項５に記載のプロセス。
【請求項７】
前記タンパク質は、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシサイログロブリン、又はオボアルブミンである、請求項６に記載のプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１２年８月２１日に出願された米国特許仮出願第６１／６９１，４６９
号の出願の優先権の利益を主張する。上述の関連する米国特許出願の全開示は、全ての目
的において、本明細書中に参照として組み込まれる。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、ヒト体液中のリスペリドン及びパリペリドンの有無を決定するイムノアッセ
イの分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
精神分裂病は、世界人口の約０．４５〜１％が罹患する、慢性かつ消耗性の精神疾患で
ある（ｖａｎ  Ｏｓ，Ｊ．；Ｋａｐｕｒ，Ｓ．「Ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ」Ｌａｎｃ
ｅｔ  ２００９，３７４，６３５〜６４５）。治療の主要な目的は、精神病の症状の寛解
の持続性達成、再発の危険性及び影響を削減し、患者機能及び全体的な生活の質を向上す
ることである。精神分裂病の患者の多くは、入手可能な抗精神病薬によって症状の安定を
得ることができるが、再発の主な原因は、毎日服用する経口薬の服薬アドヒアランスの欠
如である。不遵守の結果を検討するいくつかの研究（Ａｂｄｅｌ−Ｂａｋｉ，Ａ．；Ｏｕ
ｅｌｌｅｔ−Ｐｌａｍｏｎｄｏｎ，Ｃ．；Ｍａｌｌａ，Ａ．「Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ
ａｐｙ  Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｆｉｒｓｔ−Ｅｐ
ｉｓｏｄｅ  Ｐｓｙｃｈｏｓｉｓ」Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｆｆｅｃｔｉｖｅ  Ｄｉｓ
ｏｒｄｅｒｓ  ２０１２，１３８，Ｓ３〜Ｓ１４）によって、定められたように服薬しな
い精神分裂病の患者では、再発率、入院率及び自殺率が高く、並びに死亡率が上昇するこ
とが示されている。精神分裂病の患者の４０〜７５％は、日常的な経口治療計画の遵守が
困難であると見込まれている（Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｊ．Ａ．；Ｓｔｒｏｕｐ，Ｔ．Ｓ．
；ＭｃＥｖｏｙ，Ｊ．Ｐ．；Ｓｗａｒｔｚ，Ｍ．Ｓ．；Ｒｏｓｅｎｈｅｃｋ，Ｒ．Ａ．；
Ｐｅｒｋｉｎｓ，Ｄ．Ｏ．；Ｋｅｅｆｅ，Ｒ．Ｓ．Ｅ．；Ｄａｖｉｓ，Ｓ．Ｍ．；Ｄａｖ
ｉｓ，Ｃ．Ｅ．；Ｌｅｂｏｗｉｔｚ，Ｂ．Ｄ．；Ｓｅｖｅｒｅ，Ｊ．；Ｈｓｉａｏ，Ｊ．
Ｋ．「Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｐｙｓｃｈｏｔｉｃ  Ｄｒｕｇｓ  
ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ」Ｎ
ｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００５，３５３（
１２），１２０９〜１２２３）。治療薬物モニタリング（ＴＤＭ）は、治療をモニタリン
グ及び最適化するための、抗精神病薬などの薬物の血清又は血漿濃度を定量化するもので
ある。かかるモニタリングによって、例えば、投薬計画を遵守しない患者、治療用量を達
成していない患者、治療用量において非反応である患者、認容性が最適ではない患者、薬
物動態学的な薬物−薬物間相互作用を有する患者、又は、不適切な血漿濃度をもたらす異
常代謝を呈する患者、の同定が可能となる。患者における抗精神病薬の吸収能力、分配能
力、代謝能力、及び排出能力には、大きな個体差がある。かかる違いは、併発症、年齢、
併用薬又は遺伝特性によって生じ得る。製剤の違いも、抗精神病薬の代謝に影響を与え得
る。ＴＤＭによって、個別の患者において用量の最適化が可能となり、治療転帰及び機能
的転帰が改善する。ＴＤＭによって、更に、処方する医師は、定められた服用量の服薬遵
守及び有効血清中濃度の達成を確保することができる。
【０００４】
今日まで、抗精神病薬の血清及び血漿濃度のレベルを決定する方法は、紫外線検出又は
質量分析検出による液体クロマトグラフィ（ＬＣ）、及びラジオイムノアッセイの使用を
含む（例えば、以下を参照のこと：Ｗｏｅｓｔｅｎｂｏｒｇｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９
０「Ｏｎ  ｔｈｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｓｏｍｅ  ｒｅｃｅｎｔｌｙ  ｄｅ
ｖｅｌｏｐｅｄ  ＲＩＡ’ｓ」ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｕｒｖｅｙｓ  
ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ２０：２４１〜２４６．
Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ，Ｉｎｃｌｕｄ
ｉｎｇ  Ａｎｔｉ−ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ  Ａｇｅｎｔｓ；Ｈｅｙｋａｎｔｓ  ｅｔ  ａｌ
．，１９９４「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  Ｒｉｓｐｅｒｉｄｏ
ｎｅ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎｓ：Ａ  Ｓｕｍｍａｒｙ」，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒ
ｙ  ５５／５，ｓｕｐｐｌ：１３〜１７；Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３「Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉ−ｐｓｙｃｈｏｔｉ
ｃ  ａｇｅｎｔ  ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｒｏｌａｃｔｉｎ  ｒｅ
ｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ」，Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃ
ｏｌ  Ｔｈｅｒ  ５４：２５７〜２６８）。ラジオイムノアッセイは、リスペリドン及び
パリペリドンのうちの１つ又は両方を検出する。Ｓａｌａｍｏｎｅらの米国特許第８，０
８８，５９４号は、リスペリドン及びパリペリドンの両方を検出するが、薬理学的に不活
性な代謝産物を検出しない抗体を使用するリスペリドンの競合的イムノアッセイを開示し
ている。競合的イムノアッセイに使用される抗体は、特定の免疫原に対して作製される。
ＩＤ  Ｌａｂｓ  Ｉｎｃ．（Ｌｏｎｄｏｎ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）は、別の抗
精神病薬であるオランザピン用のＥＬＩＳＡを販売しているが、これも競合的フォーマッ
トを利用している。この取扱説明書には、このアッセイはスクリーニングを目的として設
計されており、科学捜査又は研究における使用を意図し、特に治療用途を意図するもので
はないことが示されている。この説明書は、全陽性サンプルをガスクロマトグラフィー／
質量分析法（ＧＣ−ＭＳ）で確認すべきであることを推奨しており、使用される抗体は、
オランザピン及びクロザピンを検出することを示している（ＩＤ  Ｌａｂｓ  Ｉｎｃ．，
「Ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｓ  Ｆｏｒ  Ｕｓｅ  Ｄａｔａ  Ｓｈｅｅｔ  ＩＤＥＬ−Ｆ０
８３」，Ｒｅｖ．Ｄａｔｅ  Ａｕｇ．８，２０１１を参照のこと）。これらの方法のうち
のいくつか、すなわちＨＰＬＣ及びＧＣ／ＭＳは、高価で労働集約的でありうることから
、一般的に、適切な設備を有する大規模又は専門的研究室に限って行われる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
抗精神病薬のレベルを決定する他の方法、特に処方医の診療所（この場合は、個々の患
者の処置をより一層タイミングよく調節することができる）、及びＬＣ又はＧＣ／ＭＳ設
備がないか、又は迅速に試験結果を必要とする他の医療機関において実施することができ
る方法が必要である。
【０００６】
リスペリドンは：
【０００７】
【化１】
0006667472.tif 000002
である。
【０００８】
パリペリドンは：
【０００９】
【化２】
0006667472.tif 000003
である。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、抗精神病薬であるリスペリドンのレベルを決定するためのそのような改善さ
れた方法を可能にする化合物及びコンジュゲートを提供する。
【００１１】
本発明は、式Ｉの化合物：
【００１２】
【化３】
0006667472.tif 000004
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００１３】
【化４】
0006667472.tif 000005
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、
−Ｎ（Ｒ4）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ヘテロアルキル−、からなる群から選択され；
Ｒ4は、Ｈ、アルキル基、シクロアルキル基、アラルキル基又は置換若しくは非置換ア
リール基であり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）を含む。
【００１４】
本発明は、本発明の化合物とタンパク質などの免疫原性担体とのコンジュゲート、及び
本発明の化合物と免疫原性担体とを接触させるプロセスによって生成された生成物、を含
む。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ハイブリドーマ５−９から得られた競合的ＥＬＩＳＡの結果を示しており。
【図２】ハイブリドーマ５−９から得られた競合的ＥＬＩＳＡの結果を示しており。
【図３】リスペリドンクローン２Ａ５から得られた競合的ＥＬＩＳＡの結果を示しており。
【図４】ラテラルフローアッセイデバイスで使用される競合的イムノアッセイフォーマットを示しており。
【図５】リスペリドンクローン５−９から得られた典型的な用量反応曲線を示している。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、抗精神病薬のレベルの決定を可能にする化合物及びコンジュゲートを提供す
る。かかる方法によって、臨床医は、診察の際に、患者の症状悪化の原因が、服薬アドヒ
アランスの欠如でありうる可能性がどの程度かを客観的に評価することが可能となる。あ
るいは、遵守されている場合には、臨床医は異なる治療を選択することができる。かかる
方法によって可能となる治療薬物モニタリングは、最も有効な治療選択肢を特定する上で
鍵となる。更には、臨床医は、かかるＴＤＭは、患者との関係が全く異なったものに移行
する、すなわち、治療を遵守していないのではないかという仮定的な議論から、治療計画
を最適化するうえで患者に積極的に主導権をもたせることによって、より協力的な関係へ
と移行するのに役立つと考える。
【００１７】
この方法の開発には、タンパク質と連結する合成ハプテンを含む、いくつかの免疫原の
合成が第一に必要である。ハプテンは、タンパク質などの大きな担体に結合すると、免疫
応答を誘発することができる低分子である。ハプテンは、その大部分が低分子量であって
、タンパク質を含まない物質であり、単独では抗体形成を刺激することはできないが、抗
体と反応する。ハプテン−タンパク質コンジュゲートは、抗体の生成を刺激することがで
きる。低分子に対して特異的な抗体の産生は、イムノアッセイの開発において有用である
（Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．１９９２，９（１１）：１３７５〜９，Ａｎｎａｌｉ  Ｄｅｌｌ
'Ｉｓｔｉｔｕｔｏ  Ｓｕｐｅｒｉｏｒｅ  ｄｉ  Ｓａｎｉｔａ．１９９１，２７（１）
：１６７〜７４，Ａｎｎａｌｉ  Ｄｅｌｌ’Ｉｓｔｉｔｕｔｏ  Ｓｕｐｅｒｉｏｒｅ  ｄ
ｉ  Ｓａｎｉｔａ．１９９１，２７（１）：１４９〜５４，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅ
ｔｔｅｒｓ．１９９１，２８（１）：７９〜８３）。
【００１８】
本発明は、式Ｉの化合物：
【００１９】
【化５】
0006667472.tif 000006
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００２０】
【化６】
0006667472.tif 000007
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、
−Ｎ（Ｒ4）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ヘテロアルキル−、からなる群から選択され；
Ｒ4は、Ｈ、アルキル基、シクロアルキル基、アラルキル基又は置換若しくは非置換ア
リール基であり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）を含む。
【００２１】
本発明は、式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００２２】
【化７】
0006667472.tif 000008
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり；
ここで、
ＺはＯであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）を含む。
【００２３】
本発明は、式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００２４】
【化８】
0006667472.tif 000009
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）を含む。
【００２５】
本発明は、式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００２６】
【化９】
0006667472.tif 000010
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは１であり；
ｒは２であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）を含む。
【００２７】
本発明は、式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００２８】
【化１０】
0006667472.tif 000011
又は
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈであり；
ここで、
ｒは２であり；
ｍは、１、２、３、又は４であり；
ｎは、１、又は２である）を含む。
【００２９】
本発明の別の実施形態では：
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨ；及び
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、又は
【００３０】
【化１１】
0006667472.tif 000012
であり；
ここで、ｒは２であり；
ｍは、１である。
【００３１】
本発明の別の実施形態は、以下の化合物である：
【００３２】
【化１２】
0006667472.tif 000013
【００３３】
本発明は、上述の化合物と免疫原性担体とのコンジュゲート、上述の化合物とタンパク
質とのコンジュゲート及び上述の化合物とキーホールリンペットヘモシアニン、オボアル
ブミン、及びウシサイログロブリンであるタンパク質とのコンジュゲート、並びに、本発
明の化合物と免疫原性担体とを接触させるプロセスによって生成される生成物を更に提供
する。
【００３４】
本発明の式Ｉの化合物：
【００３５】
【化１３】
0006667472.tif 000014
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００３６】
【化１４】
0006667472.tif 000015
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、
−Ｎ（Ｒ4）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ヘテロアルキル−、からなる群から選択され；
Ｒ4は、Ｈ、アルキル基、シクロアルキル基、アラルキル基又は置換若しくは非置換ア
リール基であり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）と、免疫原性担体とのコンジュゲートを含む。
【００３７】
本発明の式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００３８】
【化１５】
0006667472.tif 000016
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり；
ここで、
ＺはＯであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）と、免疫原性担体とのコンジュゲートを含む。
【００３９】
本発明の式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００４０】
【化１６】
0006667472.tif 000017
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）と、免疫原性担体とのコンジュゲートを含む。
【００４１】
本発明の式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００４２】
【化１７】
0006667472.tif 000018
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは１であり；
ｒは２であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）のコンジュゲートを含む。
【００４３】
本発明の式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００４４】
【化１８】
0006667472.tif 000019
又は
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈであり；
ここで、
ｒは２であり；
ｍは、１、２、３、又は４であり；
ｎは１、又は２である）と、免疫原性担体とのコンジュゲートを含む。
【００４５】
本発明の式Ｉの化合物：
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨ；及び
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、又は
【００４６】
【化１９】
0006667472.tif 000020
であり；
ここで、ｒは２であり；
ｍは１である）と、免疫原性担体とのコンジュゲートを含む。
本発明の式Ｉの化合物：
【００４７】
【化２０】
0006667472.tif 000021
と、免疫原性担体とのコンジュゲートを含む。
【００４８】
本発明の別の実施形態は、上述の式Ｉの化合物のいずれかとタンパク質とのコンジュゲ
ートである。
【００４９】
本発明の別の実施形態は、上述の式Ｉの化合物とタンパク質とのコンジュゲートであり
、このタンパク質は、キーホールリンペットヘモシアニン、オボアルブミン、又はウシサ
イログロブリンである。
【００５０】
本発明はまた、上述の化合物と免疫原性担体とを接触させるプロセスから生成される生
成物を提供する。
【００５１】
したがって、本発明の別の実施形態は、以下の式Ｉの化合物：
【００５２】
【化２１】
0006667472.tif 000022
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００５３】
【化２２】
0006667472.tif 000023
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、
−Ｎ（Ｒ4）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ヘテロアルキル−、からなる群から選択され；
Ｒ4は、Ｈ、アルキル基、シクロアルキル基、アラルキル基又は置換若しくは非置換ア
リール基であり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）と、免疫原性担体とを接触させるプロセスによっ
て生成される生成物である。
【００５４】
本発明の別の実施形態は、以下の式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００５５】
【化２３】
0006667472.tif 000024
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり；
ここで、
ＺはＯであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）と、免疫原性担体とを接触させるプロセスによっ
て生成される生成物である。
【００５６】
本発明の別の実施形態は、以下の式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００５７】
【化２４】
0006667472.tif 000025
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）と、免疫原性担体とを接触させるプロセスによっ
て生成される生成物である。
【００５８】
本発明の別の実施形態は、以下の式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００５９】
【化２５】
0006667472.tif 000026
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは１であり；
ｒは２であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）と、免疫原性担体とを接触させるプロセスによっ
て生成される生成物である。
【００６０】
本発明の別の実施形態は、以下の式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００６１】
【化２６】
0006667472.tif 000027
又は
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈであり；
ここで、
ｒは２であり；
ｍは、１、２、３、又は４であり；
ｎは１、又は２である）と、免疫原性担体とを接触させるプロセスによって生成される
生成物である。
【００６２】
本発明の別の実施形態は、以下の式Ｉの化合物：
Ｒ1は、Ｈ、又はＯＨ；及び
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、又は
【００６３】
【化２７】
0006667472.tif 000028
であり；
ここで、ｒは２であり；
ｍは１である）と、免疫原性担体とを接触させるプロセスによって生成される生成物で
ある。
【００６４】
本発明の別の実施形態は、以下の化合物である：
【００６５】
【化２８】
0006667472.tif 000029
と、免疫原性担体との接触である。
【００６６】
本発明の好ましい実施形態は、上述の式Ｉの化合物のいずれかとタンパク質である免疫
原性担体とを接触させるプロセスによって生成される生成物である。
【００６７】
本発明のより好ましい実施形態は、上述の式Ｉの化合物のいずれかと免疫原性担体とを
接触させるプロセスによって生成される生成物であって、ここで、タンパク質はキーホー
ルリンペットヘモシアニン、ウシサイログロブリン又はオボアルブミンである。
【００６８】
略語
本明細書中及び本出願を通して、以下の略語が使用され得る。
【００６９】
【表１】
0006667472.tif 000030
【００７０】
定義
用語「コンジュゲート」は、個別の部分が一緒に結合することで形成される任意の物質
を指す。本発明による代表的なコンジュゲートとしては、式Ｉの化合物などの低分子と、
担体又はポリアミンポリマー（特にタンパク質）などの高分子とを一緒に結合することで
形成されるものが挙げられる。コンジュゲートにおいて、低分子は、高分子上の１つ以上
の活性部位に結合し得る。
【００７１】
用語「ハプテン」は、部分的又は不完全な抗原を指す。ハプテンは、タンパク質非含有
物質であり、抗体形成を刺激することはできないが、抗体と反応する。抗体は、ハプテン
と高分子量の免疫原性担体とをカップリングした後、このカップリングした生成物（すな
わち、免疫原）をヒト又は動物被検体に注射することで形成される。
【００７２】
用語「免疫原」は、生物において免疫応答を誘発、生成、又は産生させることができる
物質を指す。
【００７３】
本明細書で使用するとき、「免疫原性担体」は、ハプテンと１つ以上の位置で結合する
ことによって、これらのハプテンに特異的に結合し得る抗体を生成できる、一般的にはタ
ンパク質である免疫原性物質である。免疫原性担体物質の例としては、限定されないが、
異物であると認識され、それによって宿主の免疫応答を誘発する、タンパク質、糖タンパ
ク質、ポリアミノ−多糖類複合体、粒子、及び核酸が挙げられる。ポリアミノ−多糖類は
、本調製においては従来の既知の任意の手段を使用して、多糖類から調製され得る。
【００７４】
免疫原性担体として、アルブミン、血清タンパク質、リポタンパク質などの様々な種類
のタンパク質を用い得るが、これらに限定されない。タンパク質の実例としては、ウシ血
清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、卵オボアルボミン、ウシサイログロ
ブリン、フラクションＶヒト血清アルブミン、ウサギアルブミン、パンプキンシードグロ
ブリン、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、ボツリヌス毒素、サクシニル化タン
パク質、及びポリリジンなどの合成ポリ（アミノ酸）が挙げられる。
【００７５】
免疫原性担体はまた、単糖類の縮合を繰り返すことによって構築される高分子量ポリマ
ーであるポリアミノ−多糖類も含み得る。多糖類の例は、デンプン、グリコーゲン、セル
ロース、アラビアゴムなどの炭水化物ガム、寒天などである。多糖類は、ポリ（アミノ酸
）残基及び／又は脂質残基も含む。
【００７６】
免疫原性担体は、ポリ（核酸）単体でありうるか、又は、上述のポリ（アミノ酸）又は
多糖類のどちらか１つとコンジュゲートされていてもよい。
【００７７】
免疫原性担体は、固体粒子を含んでもよい。粒子の直径は、一般的には少なくとも約０
．０２マイクロメートル（μｍ）かつ約１００μｍ以下であり、通常約０．０５μｍ〜１
０μｍである。粒子は、有機又は無機、膨潤性又は非膨潤性で、多孔質又は非孔質、最適
には水に近い密度、一般的には約０．７〜１．５ｇ／ｍＬの粒子でありえて、透明である
か、部分的に透明又は不透明であり得る材料から構成されうる。粒子は、限定されないが
、赤血球、白血球、血小板、ハイブリドーマ、連鎖球菌、黄色ブドウ球菌、大腸菌、及び
ウィルスのような細胞及び微生物などの生体物質であり得る。粒子は、有機又は無機ポリ
マー、リポソーム、ラテックス、リン脂質小胞、又はリポタンパク質からもなり得る。
【００７８】
用語「誘導体」は、１つ以上の化学反応により親化合物から作製される化合物又は分子
を指す。
【００７９】
化合物の「類似体」という用語は、炭素原子の鎖及び参照化合物と同じ特定の官能基を
含有する化合物を指すが、類似体の炭素鎖は、参照化合物の炭素鎖よりも長いか、又は短
い。
【００８０】
「標識」「検出分子」、又は「リポーター」は、検出可能なシグナルを生成するか、生
成するのを誘導され得る。「標識」は、検体、免疫原、抗体、又はリガンド（特にハプテ
ン又は抗体）などの受容体と結合し得る受容体又は分子などの別の分子とコンジュゲート
され得る。標識の非限定的な例としては、放射能アイソトープ（例えば、１２５Ｉ）、酵
素（例えば、β−ガラクトシダーゼ、ペルオキシダーゼ）、酵素フラグメント、酵素基質
、酵素インヒビター、コエンザイム、触媒、蛍光物質（例えば、ローダミン、フルオレセ
インイソチオシアネート又はＦＩＴＣ、又はＤｙｌｉｇｈｔ  ６４９）、染料、化学発光
物質及び発光物質（例えば、ジオキセタン、ルシフェリン）、又は増感剤が挙げられる。
【００８１】
本明細書で使用するとき、「スペーサ」は、ハプテン、担体、免疫原、標識又は結合パ
ートナーなどの下部構造のうちの２つ以上と、官能性連結基を介して連結する化学構造の
一部分を指す。これらのスペーサは、典型的に有機化合物中で見られるような形で典型的
に存在して組み立てられる原子によって構成されるため、「有機スペーシング基」とも称
される。スペーサを組み立てるのに使用される化学的なビルディングブロックは、本出願
中、以下で記載されるであろう。その中で、好ましいスペーサは、直鎖状又は分枝状の飽
和又は不飽和の炭素鎖である。これらの炭素鎖は、鎖内に１つ以上のヘテロ原子を含んで
もよく、１つ以上のヘテロ原子は、鎖中又は鎖の末端の任意の炭素原子における１つ以上
の水素原子と代わる。「ヘテロ原子」は、酸素、窒素、リン及び硫黄からなる群から選択
される、炭素以外の原子を意味しており、窒素、リン及び硫黄は、任意の酸化状態で存在
してよく、炭素又は他のヘテロ原子が結合していてもよい。スペーサは、鎖の一部分とし
て、又は鎖中の原子の１つにおける置換体として、環式基又は芳香族基を含んでもよい。
【００８２】
スペーシング基中の原子数は、水素以外の原子を計数することで決定される。スペーシ
ング基内の鎖中の原子数は、連結される下部構造間の最短ルートに沿った水素以外の原子
数を計数することで決定される。好ましい鎖長は、１〜２０原子である。
【００８３】
「官能性連結基」は、ハプテン上に存在する反応基を指し、ハプテンと別の部分（標識
又は担体など）とのコンジュゲートを生成するための共有化学結合を形成することで、ハ
プテン部分が別の部分と連結され得る使用可能な反応部位を提供するのに使用され得る。
ハプテンは、このようにしてビオチンなどの部分と連結し、ハプテンの競合的結合パート
ナーを形成し得る。
【００８４】
スペーサ基は、ハプテンを担体に結合させるのに使用され得る。スペーサの長さが異な
ることによって、抗体形成プロセスが最適となるように免疫される動物又はヒトの免疫系
に提示されるように、担体から異なる距離でハプテンを結合させることが可能となる。ハ
プテン分子中の異なる位置で結合することで、ハプテン上の特異的部位を免疫系に提示す
る機会が与えられ、抗体認識に影響を及ぼす。スペーサは、水性媒体中でより可溶性が高
いハプテン誘導体を作成するために、親水性可溶化基を含有し得る。親水性可溶化基の例
としては、ポリオキシアルキルオキシ基、例えば、ポリエチレングリコール鎖、ヒドロキ
シル基、カルボキシレート基及びスルホネート基が挙げられるが、これらに限定されない
。
【００８５】
用語「求核基」又は「求核剤」は、反応において化学結合を形成する電子対を供与する
種を指す。用語「求電子基」又は「求電子物質」は、反応において化学結合を形成する電
子対を受容する種を指す。
【００８６】
用語「置換された」は、親分子上の任意の位置で炭素原子上の水素原子の代わりに原子
又は原子基が置換されることを指す。置換基の非限定的な例としては、ハロゲン原子、ア
ミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、アルキル、アリール、ヘテロアルキル、ヘテロアリール
、シアノ、アルコキシ、ニトロ、アルデヒド及びケトン基が挙げられる。
【００８７】
用語「アルキル」は、別途記載のない限り、最大で１２個の炭素原子の直鎖状及び分枝
鎖状ラジカルの両方を指し、特に、任意の度合い又はレベルの飽和を有するラジカルを含
むことを意図している。アルキルとしては、限定されないが、メチル、エチル、プロピル
、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、
イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、オクチル、２，２，４−トリメチル
ペンチル、ノニル、デシル、ウンデシル及びドデシルが挙げられる。用語「シクロアルキ
ル」は、３〜１０個の炭素原子から構成される、飽和又は部分的に飽和された単環式又は
二環式の炭化水素環ラジカルを指す。アルキル置換基は、環上に任意で存在し得る。例と
しては、シクロプロピル、１，１−ジメチルシクロブチル、１，２，３−トリメチルシク
ロペンチル、シクロヘキシル及びシクロヘキセニルが挙げられる。
【００８８】
用語「へテロ原子」は、任意の許容された酸化状態で存在しうる窒素原子、酸素原子、
リン原子又は硫黄原子を指す。
【００８９】
用語「ヘテロアルキル」は、鎖内に１つ以上のヘテロ原子を含むアルキル基を指し、１
つ以上のヘテロ原子は、鎖中又は鎖の末端の任意の炭素原子における１つ以上の水素原子
と代わる。
【００９０】
用語「ヘテロシクリル」は、３〜７個の炭素原子、及びＮ、Ｏ又はＳから選択される少
なくとも１つのヘテロ原子から構成される非芳香族（すなわち、飽和又は不飽和）環を指
す。アルキル置換基は、環上に任意で存在し得る。例としては、テトラヒドロフリル、ジ
ヒドロピラニル、ピペリジル、２，５−ジメチルピペリジル、モルホリニル、ピペラジニ
ル、チオモルホリニル、ピロリジニル、ピロリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、イ
ミダゾリジニル及びイミダゾリニルが挙げられる。
【００９１】
用語「ヒドロキシアルキル」は、アルキル鎖に沿った任意の炭素原子と結合する少なく
とも１つのヒドロキシル基を指す。
【００９２】
用語「アミノアルキル」は、アルキル鎖に沿った任意の炭素原子と結合する少なくとも
１つの第一級又は第二級アミノ基を指す。
【００９３】
用語「アルコキシアルキル」は、アルキル鎖に沿った任意の炭素原子と結合する少なく
とも１つのアルコキシ基を指す。
【００９４】
用語「ポリアルコキシアルキル」は、長鎖アルコキシ化合物を指し、及び単一分子量（
discreet）又は単分散サイズのポリエチレングリコールを含む。
【００９５】
用語「チオアルキルは」、アルキル鎖に沿った任意の炭素原子と結合する少なくとも１
つの硫黄基を指す。硫黄基は、任意の酸化状態であってよく、スルホキシド、スルホン及
びサルフェートを含む。
【００９６】
用語「カルボキシアルキル」は、アルキル鎖に沿った任意の炭素原子と結合する少なく
とも１つのカルボキシレート基を指す。用語「カルボキシレート基」としては、カルボン
酸及びアルキル、シクロアルキル、アリール又はアラルキルカルボキシレートエステルが
挙げられる。
【００９７】
用語「アルキルカルボニル」は、アルキル鎖に沿った任意の炭素原子と結合するカルボ
ニル基を有する基を指す。
【００９８】
用語「ヘテロアリール」は、５〜７員の単環式、又は８〜１０員の二環式芳香環ラジカ
ルを指し、これらの環はいずれも、Ｎ、Ｏ、又はＳから選択される１〜４個のヘテロ原子
からなり、窒素及び硫黄原子は、許容される任意の酸化状態で存在し得る。例としては、
ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンズオキサゾリル、フリル
、イミダゾリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、オキサゾリル、ピラジニル、ピラゾ
リル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリル、キノリニル、チアゾリル及びチエニルが挙げ
られる。
【００９９】
用語「ヘテロアルキル」は、ヘテロアリール置換基を有するＣ1〜6アルキル基を指す。
例として、フリルエチル及び２−キノリニルプロピルが挙げられる。
【０１００】
用語「アルコキシ」は、別途記載のない限り、酸素原子と結合する最大で１２個の炭素
原子の直鎖状又は分枝鎖状ラジカルを指す。例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキ
シ、イソプロポキシ及びブトキシが挙げられる。
【０１０１】
用語「アリール」は、環中に６〜１２個の炭素を含有する単環式又は二環式の芳香環ラ
ジカルを指す。アルキル置換基は、環上に任意で存在し得る。例としては、フェニル、ビ
フェニル及びナフタレンが挙げられる。
【０１０２】
用語「アラルキル」は、アリール置換基を含有するＣ1〜6アルキル基を指す。例として
、ベンジル、フェニルエチル又は２−ナフチルメチルが挙げられる。
【０１０３】
用語「ヘテロアルキル」は、ヘテロアリール置換基を含有するＣ1〜6アルキル基を指す
。例としては。フリルメチル及びピリジルプロピルが挙げられる。
【０１０４】
用語「アリールオキシ」は、アリール置換基と結合する酸素原子を指す。例としては、
フェノキシ及びベンジルオキシが挙げられる。
【０１０５】
用語「アリールアルコキシ」は、アリール置換基に結合するアルコキシ基を指す。例と
しては、フェニルメチルエーテルが挙げられる。
【０１０６】
用語「アシル」は、−Ｃ（Ｏ）Ｒaを指し、式中、Ｒaは、アルキル、アリール、ヘテロ
アリール及びヘテロアラルキルである。「アシル化剤」は、分子に、−Ｃ（Ｏ）Ｒa基を
付加する。
【０１０７】
用語「スルホニル」は、−Ｓ（Ｏ）2Ｒaを指し、Ｒaは、水素、アルキル、シクロアル
キル、ハロアルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロアラルキルである。「スルホ
ニル化剤」は、分子に、−Ｓ（Ｏ）2Ｒaを付加する。
【０１０８】
ハプテンの担体部分への結合において、反応性官能性連結基を担持するスペーサは、様
々な方法によって調製され得る。スペーサは、いずれかの末端の基によって異なるように
官能化されるか又は活性化され、これによってハプテン及び担体と選択的に連続反応する
ことができる基を用いて形成されうるが、両端で同じ反応部分を使用してもよい。ハプテ
ンと、担体に結合する官能性連結基との反応において選択される基は、ハプテンと、ハプ
テンが結合する担体における官能基の種類によって決定される。スペーサ並びにハプテン
及び担体との結合方法は、Ｂｒｉｎｋｌｅｙ，Ｍ．，Ａ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  
Ｃｈｅｍ．１９９２，３：２〜１３，Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇｒｅｇ  Ｔ．，Ｂｉｏｃｏ
ｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ
，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ，．２００８及びＴｈｅｒ
ｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉ
ｃａｌ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ；（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ３７４７  Ｎ  Ｍ
ｅｒｉｄｉａｎ  Ｒｄ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ  ＵＳＡ  ６１１０１，ｐｈ  ８００−
８７４−３７２３又は：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｉｅｒｃｅｎｅｔ．ｃｏｍ／からのダ
ウンロード又は印刷出力から入手可能）、及びその参考文献に記載されるものを含むが、
これらに限定されない。スペーサ基の形成において、異なるように活性化される多くの分
子は、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃなどの供給メーカーから市販されて
いる。
【０１０９】
アミノ基を担持するハプテンにおいて、スペーサとハプテンとの結合様式は、ハプテン
上のアミンと、ハロゲン化アシル又は活性エステルを担持するスペーサビルディングブロ
ックとの反応を含む。「活性エステル」は、安定した結合を形成する穏やかな条件下で、
例えばアミノ基のような求核基と反応するエステルとして定義される。安定した結合は、
例えば、後に続く合成工程のような更なる使用条件、免疫原としての使用、又は生化学ア
ッセイにおいて損傷を受けない結合として定義される。安定した結合の好ましい例は、ア
ミド結合である。活性エステル及び形成方法は、Ｂｅｎｏｉｔｏｎ，Ｎ．Ｌ．によって、
Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
，Ｔｈｉｅｍｅ  Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｖｏｌ  Ｅ２２  ｓｅｃｔｉ
ｏｎ  ３．２：４４３  ａｎｄ  Ｂｅｎｏｉｔｏｎ，Ｎ．Ｌ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏ
ｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔａｙｌｏｒ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｃｉｓ，Ｎ
Ｙ，２００６に記載されている。好ましい活性エステルとしては、ｐ−ニトロフェニルエ
ステル（ＰＮＰ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）及びテトラフルオ
ロフェニルエステル（ＴＦＰ）が挙げられる。ハロゲン化アシルは、例えば、カルボン酸
と塩化チオニル又は塩化オキサリルとの反応（Ｆｉｅｓｅｒ，Ｌ．Ｆ．ａｎｄ  Ｆｉｅｓ
ｅｒ，Ｍ．Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，ＮＹ，１９６７及びこの参考文献を参照のこと）のよ
うな、当業者に既知の多くの方法によって調製され得る。これらは、ＷｕらによるＯｒｇ
ａｎｉｃ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００４，６（２４）：４４０７に記載されるように、活性
二官能性スペーサにおいても使用され得るｐ−ニトロフェニルエステル（ＰＮＰ）などの
他の活性エステルに変換され得る。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルは
、国際特許第２０１２０１２５９５号の実施例３５に記載されるように、無水条件下で、
非プロトン性溶媒中トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミンなどの有機塩基の
存在下で、炭酸Ｎ，Ｎ−ジスクシンイミジル（ＣＡＳ  ７４１２４−７９−１）と化合物
のカルボン酸との反応によって、又は、無水条件下で、Ｎ−ヒドロスクシンイミド及びジ
シクロヘキシカルボジイミド（ＤＣＣ）又は他の脱水剤を使用することで調製され得る。
テトラフルオロフェニルエステル（ＴＦＰ）は、ＷｉｌｂｕｒらによってＢｉｏｃｏｎｊ
ｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，２００４，１５（１）：２０３で報告されるように、無水条件
下で、非プロトン性溶媒中、トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミンなどの有
機塩基の存在下で、カルボン酸と２，３，５，６−テトラフルオロフェニルトリフルオロ
酢酸塩との反応により調製され得る。当業者は、表１に示されるスペーサは、特に、既知
の方法を使用して得られ、反応条件のルーチンの最適化を用いてアミノ担持ハプテンと結
合することができることを認識するであろう。これらのスペーサによって、ハプテンと担
体上のチオール基の結合が可能となる。
【０１１０】
【表２】
0006667472.tif 000031
【０１１１】
カップリング剤の存在下、ハプテン上のアミンとスペーサビルディングブロック上のカ
ルボン酸官能基との直接的なカップリングは、１つの結合様式としても使用され得る。好
ましい試薬は、典型的にはペプチド合成に使用される試薬である。ペプチドカップリング
試薬としては、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチ
ルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ，ＣＡＳ  ＃１２５７００−６７−６）
（Ｐｒｕｈｓ，Ｓ．，Ｏｒｇ．Ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．２００６，１０：４４
１を参照のこと）；カルボジイミド脱水剤を含むＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（Ｈ
ＯＢＴ，ＣＡＳ  ＃２５９２−９５−２）（例えば、Ｎ−Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジ
イミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、又は１−エチル−３（３
−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ））（Ｋｏｎｉｇ  Ｗ．，Ｇ
ｅｉｇｅｒ，Ｒ．Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，１９７０，１０３（３）：７８８を参照のこと）
；３−（ジエトキシホスホリルオキシ）−１，２，３−ベンゾトラジン−４（３Ｈ）−オ
ン（ＤＥＰＢＴ，ＣＡＳ＃１６５５３４−４３−０）（Ｌｉｕ，Ｈ．ｅｔ．ａｌ．，Ｃｈ
ｉｎｅｓｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００２，１３（７）：６０１を参照
のこと）；ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド；ＢＯＰ−
Ｃｌ（ＣＡＳ  ＃６８６４１−４９−６）（Ｄｉａｇｏ−Ｍｅｓｅｇｕｅｒ，Ｊ，ｅｔ．
ａｌ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９８０，７：５４７〜５１を参照のこと）、及び他の、Ｂ
ｅｎｏｉｔｏｎｂによってＣｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓ
ｉｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，２００５，Ｃｈａｐｔｅｒ  
２に詳しく記載されており、技術告知は、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  Ｐｅ
ｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  （ａａｐｐｔｅｃ），６３０
９  Ｓｈｅｐａｒｄｓｖｉｌｌｅ  Ｒｄ．，Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ  ＫＹ  ４０２２８，
ｐｈ  ８８８  ６９２  ９１１１；ｗｗｗ．ａａｐｐｔｅｃ．ｃｏｍ，によって提供され
るもの、及びこれらの参考文献が挙げられるが、限定されない。これらの方法は、ハプテ
ンをスペーサに結合させる安定なアミド結合を生成する。既知の方法を使用して得られ、
上述及び引用される方法を用いて反応条件のルーチンの最適化を利用してアミノ担持ハプ
テンに結合され得るスペーサの例を表２に示すが、表２に示されるものに限定されない。
これらのスペーサによって、ハプテンと担体上のチオール基の結合が可能となる。
【０１１２】
【表３】
0006667472.tif 000032
【０１１３】
スペーサはまた、担体への結合が可能である官能性連結基の形成工程などの、適切な化
学基がハプテンに連続的に結合することによる、段階的な様式で構成され得る。以下の一
般的な反応スキームにおいて実例を参照のこと。
【０１１４】
更に、ハプテンが、例えば、チオール基、アミノ基又はヒドロキシル基のような、スペ
ーサとの結合位置になる求核基を有する際、スペーサは、チオール、アミン又はヒドロキ
シル基のアルキル化によっても構成され得る。アルキルハライド、又はスルホン酸エステ
ル（ｐ−トルエンスルホネートなど）のような、置換反応を受けることができる部分で適
切に置換される任意のアルキル基は、スペーサを結合させるのに使用され得る。アルキル
化反応の多くの例が当業者に既知であって、具体例は、一般的な化学文献中で見出され、
ルーチンな実験を通して最適化され得る。多くの参考文献におけるアルキル化反応の議論
は、Ｍａｒｃｈ'ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｍｉ
ｔｈ，Ｍ．Ｂ．，ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  ｓｏｎｓ，Ｉ
ｎｃ．ＮＹ，２００１のチャプター１０で見出すことができる。ハプテン上の例えばアミ
ンのような求核部分とイソシアネートとの反応による尿素の形成、又はイソチオシアネー
トとの反応によるチオ尿素結合の形成などの他の結合も用いられ得る（Ｌｉ，Ｚ．，ｅｔ
．ａｌ．，Ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ，Ｓｕｌｆｕｒ  ａｎｄ  Ｓｉｌｉｃｏｎ  ａｎｄ  ｔ
ｈｅ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，２００３，１７８（２）：２９３〜２９７を
参照のこと）。イソシアネート基との反応を介して、ヒドロキシル基を担持するハプテン
にスペーサを結合させて、カルバメート又はウレタン結合を形成してもよい。スペーサは
、一方の末端上のイソシアネート官能基、及び担体と反応することができる官能性連結基
によって異なるように活性化され得る（Ａｎｎｕｎｚｉａｔｏ，Ｍ．Ｅ．，Ｐａｔｅｌ，
Ｕ．Ｓ．，Ｒａｎａｄｅ，Ｍ．ａｎｄ  Ｐａｌｕｍｂｏ，Ｐ．Ｓ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ
ａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，１９９３，４：２１２〜２１８を参照のこと）。
【０１１５】
カルボン酸基を担持するハプテンにおいて、ハプテンへのスペーサ部分の結合様式には
、その調製が前述されているハロゲン化アシル又は活性エステル（その例を表３で示す）
としてのカルボン酸基の活性化の後に、スペーサ部分上のアミノ（−ＮＨ2−）、ヒドラ
ジノ（−ＮＨ−ＮＨ2−）、ヒドラジド（−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ2−）もしくはヒドロキ
シル基（−ＯＨ）との反応によるアミド、ヒドラジド、ジアシルヒドラジンもしくはエス
テル結合の形成、またはカルボン酸基とスペーサ部分上のアミノ基との直接カップリング
、又は前述のペプチドカップリング試薬及び／又はカルボジイミド脱水試薬（その例を表
４及び５で示す）による担体との直接カップリングが挙げられる。活性化エステルの形成
及びペプチドカップリング剤の使用に関して上記で引用された参考文献で見られる手順は
、反応条件のルーチンの最適化を用いて、カルボン酸担持ハプテンをスペーサビルディン
グブロック及び利用可能なアミノ基を含むタンパク質担体に結合させるために使用され得
る。
【０１１６】
【表４】
0006667472.tif 000033
【０１１７】
【表５】
0006667472.tif 000034
【０１１８】
【表６】
0006667472.tif 000035
【０１１９】
スペーサと結合させるために、他の求電子基、例えばハロゲン化スルホニル
【０１２０】
【化２９】
0006667472.tif 000036
又は求電子亜リン酸基、例えば：
【０１２１】
【化３０】
0006667472.tif 000037
【０１２２】
（Ｍａｌａｃｈｏｗｓｋｉ，Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｐ．，Ｃｏｗａｒｄ，Ｊａｍｅｓ  Ｋ．
，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９４，５９（２５
）：７６１６を参照のこと）
又は：
【０１２３】
【化３１】
0006667472.tif 000038
Ｒcはアルキル、シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキルである求電子
基がハプテン上に存在してもよい。
【０１２４】
Ａｌｉｏｕａｎｅ，Ｌ．，ｅｔ．ａｌ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，２
０１１，５２（２８）：８６８１を参照のこと。
【０１２５】
アルデヒド基又はケトン基を担持するハプテンは、限定されないが、スペーサ上のヒド
ラジド基Ｈ2Ｎ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−との反応によるアシルヒドラゾンの形成を含む方法を
使用してスペーサに結合され得る（Ｃｈａｍｏｗ，Ｓ．Ｍ．，Ｋｏｇａｎ，Ｔ．Ｐ．，Ｐ
ｅｅｒｓ，Ｄ．Ｈ．，Ｈａｓｔｉｎｇｓ，Ｒ．Ｃ．，Ｂｙｒｎ，Ｒ．Ａ．ａｎｄ  Ａｓｋ
ｅｎａｓｚｉ，Ａ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９２，２６７（２２）：１５９１
６を参照のこと）。担体上でチオール基と結合することが可能な二官能性ヒドラジドスペ
ーサの例が表６で示されている。
【０１２６】
【表７】
0006667472.tif 000039
【０１２７】
ハプテンは、担体がチオールと反応しうる基を提供するように修飾されている場合には
、担体と反応し得るチオール基を含有していてもよい。担体基は、担体上におけるアミノ
基とマレイミド酢酸Ｎ−スクシンイミジル（ＡＭＡＳ，ＣＡＳ＃  ５５７５０−６１−３
）、ヨード酢酸スクシンイミジル（ＣＡＳ＃  １５１１９９−８１−４）、又は表１で示
される二官能性スペーサ基のいずれかとの反応によるマレイミド官能基を含有する基の結
合、反応を受け得る基を組み込んでハプテンと担体との結合をもたらす方法によって修飾
され得るが、これに限定されない。
【０１２８】
担体との結合を形成することができる官能性連結基は、安定的な結合を形成することが
できる任意の基であってよく、担体上の多くの異なる基と反応性があってよい。官能性連
結基は、好ましくは、担体上のアミノ基、カルボン酸基、又はチオール基、又はその誘導
体と反応し得る。官能性連結基の非限定例としては、カルボン酸基、ハロゲン化アシル、
活性エステル（上記で定義した通りである）、イソシアネート、イソチオシアネート、ア
ルキルハライド、アミノ基、チオール基、マレイミド基、アクリレート基（Ｈ2Ｃ＝ＣＨ
−Ｃ（Ｏ）−）又はビニルスルホン基Ｈ2Ｃ＝ＣＨ−ＳＯ2−）があり、Ｐａｒｋ，Ｊ．Ｗ
．，ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，２０１２，２３（３）：３
５０を参照のこと。官能性連結基は、ハプテンと段階的に反応し得る異なるように活性化
されたスペーサビルディングブロックの一部として存在してもよく、生じたハプテン誘導
体が、その後に担体と反応し得る。あるいは、ハプテンは、後続反応によって官能性連結
基に変換され得る前駆体基を担持するスペーサによって誘導体化され得る。スペーサ上の
官能性連結基がアミン又はカルボン酸基である際、担体上のカルボン酸基又はアミンとの
カップリング反応は、これらの試薬に関して上記で引用される参考文献における手順に従
って、ペプチドカップリング試薬を用いることにより直接行われうる。
【０１２９】
特定のジスルフィド基（例えば、ピリジルジスルフィド）は、担体上でチオール基との
交換がなされ得るスペーサ上の官能性連結基として使用され、混合ジスルフィド結合が形
成され得る（Ｇｈｅｔｉｅ，Ｖ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ
．，１９９０，１：２４〜３１を参照のこと）。これらのスペーサは、アミン担持ハプテ
ンと、限定はされないが、その例が表７に示されるものであるピリジルジスルフィド基を
担持するスペーサに結合する活性エステルとの反応によって結合し得る。
【０１３０】
【表８】
0006667472.tif 000040
【０１３１】
ほとんどの場合、担体はタンパク質であり、リジン残基のε−アミノ基は、アミン反応
性官能性連結基との反応によって直接、あるいは、チオール含有基（Ｓ−アセチルチオ酢
酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＡＴＡ，ＣＡＳ  ７６９３１−９３−６）又はこれらの誘導
体など）による誘導化後に、アセテート基をヒドロキシルアミンで開裂し、ハプテン上で
官能性連結基と反応させるためにチオール基を露出することで、結合のために用いられう
る。チオール基は、また、タンパク質担体内のジスルフィド結合を、限定はしないが、２
−メルカプトエチルアミンなどの中程度の還元剤で還元することで担体に導入され得る（
Ｂｉｌａｈ，Ｍ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１０
，８０（１）：４９を参照のこと、ホスフィン試薬に関してはＫｉｒｌｅｙ，Ｔ．Ｌ．，
Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８９，１８０（２）：２３１  
ｏｒ  ｄｉｔｈｉｏｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌ  （ＤＴＴ，ＣＡＳ  ３４８３−１２−３）  
Ｃｌｅｌａｎｄ，Ｗ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９６４，３：４８０〜４８２を参
照のこと。
【０１３２】
一般的な反応スキーム
本発明の代表的な化合物は、以下に記載される一般的合成方法に従って合成することが
できる。式（Ｉ）の化合物は、当業者に既知の方法により調製することができる。以下の
反応スキームは、本発明の実施例を表すことのみを意味し、決して本発明の限定であるこ
とを意味しない。
【０１３３】
リスペリドンの親環状構造へのスペーサの結合は、その調製が実施例１に記載されるス
キーム１で示されるシリル保護開始化合物を使用して行われうる。Ｎ保護ハロアルキル誘
導体によるアルキル化は、実施例１にも記載されている。様々な鎖長のＮ保護ハロアルキ
ル誘導体は、市販されているか、又は当業者に既知の標準的な有機反応によって生成され
得る。ｒの好ましい値は、１〜５である。実施例１に記載される脱保護によって、アミノ
化合物が提供され、これを追加のスペーサ原子に結合するように更に合成してもよく、ま
たは担体に直接連結してもよい。最終生成物中にヒドロキシル基がないアミノ化合物の誘
導体は、実施例３に記載されるようにして生成され得る。
【０１３４】
【化３２】
0006667472.tif 000041
【０１３５】
リスペリドンのアルキル化はまた、Ｗａｎｇ，Ｊ．，Ｌ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｏｒ
ｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１０，２０：７１５９の
方法を使用して、例えば、３−メルカプトメチルプロピオネートのようなチオールを使用
して行ってもよく、この場合、スキーム２で示されるように、ＤＭＦ中でＫ2ＣＯ3を使用
した後にＮａＯＨのＴＨＦ水溶液による加水分解を行うと、末端のカルボキシ基にチオア
ルキル結合を担持するハプテンの類似体が得られ、これを担体に直接結合させてもよく、
またはスペーサー部分を伸長させるためにさらに合成してもよい。アミンによるアルキル
化もまた、スキーム２で示されるように、米国特許第２０１１０２４５２２４号の中間体
５３５を生成するのに使用される方法に従って行われうる。スキーム２のアミノアルキル
又はチオアルキル類似体（ここで、Ｒ１はＯＨ若しくはＨである）版は、当業者の化学者
が、上述の参考文献に教示される化学的手法をルーチンで最適化することによって生成さ
れ得る。
【０１３６】
【化３３】
0006667472.tif 000042
【０１３７】
スキーム３で示される開始物質のフェノール性ヒドロキシル基（式中、Ｒ1は、Ｈ若し
くはシリル保護アルコールのいずれかである）は、担体に結合するための官能性連結基を
担持する基の導入部位であり得る。フェノール化合物を、スキーム３に示され、米国特許
第２００６０２５１５９２号に記載されるように無水コハク酸と直接反応させて、カルボ
キシ担持中間体を得てもよく、又は、スキーム４に示されるように、本開示中の他所で提
供されるＡｎｎｕｎｚｉａｔｏの参考文献に従って、イソシアネート二官能性スペーサと
反応させて、チオール反応性リンカーを担持するハプテンを得てもよい。以下の実施例に
記載されるように、Ｒ1がシリル保護アルコールである場合、脱保護が必要である。
【０１３８】
【化３４】
0006667472.tif 000043
【０１３９】
スキーム５は、実施例１及び２などのアルキルアミン基を末端とするスペーサを有する
ハプテンが更にマレイミド基で官能化され得ることを示している。マレイミドは、当該技
術分野で既知の任意の方法によって組み込まれ得る。例えば、ジクロロメタンなどの溶媒
及びジイソプロピルエチルアミン及びシアノホスホン酸ジエチルなどのカップリング試薬
中、Ｎ−マレオイル置換アルキルアミノ酸との反応によって、ハプテン上にマレイミド官
能化されたスペーサーが生じる。ＤＭＦなどの溶媒中、トリブチルアミンなどの塩基の存
在下、室温で、１時間、リスペリドン由来アミンと、２，５−ジオキソピロリジン−１−
イル２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）酢酸塩など
のアルキルマレイミド官能基とを反応させることで、マレイミド官能化スペーサを有する
ハプテンが産生される。
【０１４０】
【化３５】
0006667472.tif 000044
【０１４１】
アルキルアミン基を末端とするスペーサを有するハプテンは、スキーム６で示されるよ
うに、無水コハク酸又は無水グルタル酸などの環状無水化合物との反応によって合成され
得る。反応は、ＴＨＦなどの溶媒中、室温で一晩行われ得る。
【０１４２】
【化３６】
0006667472.tif 000045
【０１４３】
マレイミド官能化ハプテンは、スキーム７に示される方法に従って、タンパク質とコン
ジュゲートされ得る。ε−窒素をＳ−アセチルチオ酢酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＡＴＡ
）でアシル化することによるタンパク質リジン残基の活性化後に、続くヒドロキシルアミ
ンによるＳ−アセチル基の加水分解により、求核性スルフヒドリル基が生成される。スル
フヒドリル活性化タンパク質とマレイミド誘導体化ハプテン（一般的なスキーム５で記載
したように調製した）とのコンジュゲーションは、マイケル付加反応を介して進行する。
好適なタンパク質は当業者に既知であり、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシサイ
ログロブリン、又はオボアルブミンが挙げられる。
【０１４４】
【化３７】
0006667472.tif 000046
【０１４５】
カルボン酸官能化ハプテンは、スキーム８に示される方法に従って、タンパク質とコン
ジュゲートされ得る。ＤＭＦなどの溶媒中、約２０℃の温度で約１８時間、Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミド、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）などの好適なカップリン
グ剤、並びにトリブチルアミンなどの塩基とを反応させることで、Ｎ−ヒドロキシスクシ
ンイミド脱離基を有するカルボン酸が活性化される。活性化スペーサ及びハプテンは、次
に、ｐＨ  ７．５のリン酸塩緩衝液などの溶媒中で、約２０℃で約２．５時間、タンパク
質とコンジュゲートされ得る。好適なタンパク質は当業者に既知であり、キーホールリン
ペットヘモシアニン、ウシサイログロブリン、又はオボアルブミンが挙げられる。
【０１４６】
抗体生成
上述のコンジュゲートは、それらが産生される抗精神病薬（リスペリドン）と結合する
抗体の生成に有用である。これらの抗体は、患者サンプル中の抗精神病薬の存在及び／又
は量を検出するアッセイに使用され得る。かかる検出によって、治療薬物モニタリングが
その利点を全て受けることが可能となる。抗精神病薬のレベルの検出は：パリペリドン、
クエチアピン、オランザピン、アリピプラゾール、及びこれらの代謝産物からなる群から
選択されるものなどである、他の抗精神病薬の検出と組み合わせた検出であって、かかる
検出は、これらの抗精神病薬を同時に測定することが可能である；規定の療法に対する患
者のアドヒアランス又は遵守の決定；患者を経口による抗精神病投薬計画から持続性注射
剤による抗精神病投薬計画に変更すべきかどうかを決定する決定ツールとしての使用；有
効又は安全な薬剤レベルを確実に達成又は維持するために、抗精神病薬抗精神病経口薬又
は注射剤の投与レベル又は投与間隔を増加又は減少させるべきかを決定する決定ツールと
しての使用；最小ｐＫレベルが得られるという証拠を提供することで、抗精神病薬による
療法の開始に役立つものとしての使用；複数の処方又は複数の源からの抗精神病薬の生物
学的同等性を決定するための使用；多剤併用及び薬剤−薬剤間の潜在的な相互作用による
影響を評価するための使用；並びに、患者を臨床治験から除外するか、又は参加させるか
の指標としての使用、次いで臨床治験における投薬要求に対するアドヒアランスのモニタ
リングに役立つものとしての使用；などの多くの目的において有用であり得る。
【０１４７】
本明細書中の化合物及び免疫原性担体を含む、本発明のコンジュゲートを提供すること
で、例えば、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、及びヒト化抗体のような、抗精
神病薬と結合する抗体が産生され得る。特に想定されるかかる抗体としては、モノクロー
ナル及びポリクローナル抗体並びにこれらのフラグメント、例えば、抗原結合ドメイン及
び／又はこれらの抗体に対する１つ以上の相補性決定領域を含有する組み換えタンパク質
が挙げられる。好ましくは、抗体は薬剤及び所望の薬理学的活性代謝産物と結合するであ
ろう。薬剤コンジュゲートにおいて、免疫原性担体の結合位置を変更することで、抗体に
対する代謝産物及び／又は関連薬剤の選択性及び交差反応性を操作することができる。リ
スペリドンに関して、９−ヒドロキシリスペリドン（パリペリドン、同様に抗精神病薬と
して投与される）、７−ヒドロキシリスペリドン、及びＮ−デアルキルリスペリドンなど
のリスペリドン代謝産物との交差反応性は妥当でありうるか、または妥当とは限らない。
７−ヒドロキシリスペリドン又はＮ−デアルキルリスペリドンとは反応しないが、リスペ
リドン及びパリペリドンに交差反応性がある抗体が妥当でありえて、リスペリドン及びそ
の主要な薬理学的に活性な代謝産物を検出することができる。あるいは、抗体は、薬理学
的に活性な代謝産物であるリスペリドン及びパリペリドンを個別に検出するが、不活性代
謝産物である７−ヒドロキシリスペリドン及びＮ−デアルキルリスペリドンを検出しない
ことが妥当でありうる。これらの薬剤及び／又は代謝産物のうちの複数のものを検出する
抗体が産生されるか、又は各々別個に検出する抗体が産生され得る（つまり、「特異的結
合」特性を有する抗体と定義する）。抗体は、１つ以上の化合物の結合が等モル又は実質
的に等モルで行われる場合、１つ以上の化合物に特異的に結合する。
【０１４８】
かかる抗体の生成方法には、本発明の特徴を具体化するコンジュゲート（化合物及び免
疫原である免疫原性担体）を接種することを含む。好適な宿主としては、限定はされない
が、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ニワトリ、ロバ、ウマ、サル、
チンパンジー、オランウータン、ゴリラ、ヒト、及び、成熟免疫応答を開始することがで
きる任意の種が挙げられる。免疫手順は、当該技術分野において確立しており、多くの学
術論文及びＤａｖｉｄ  Ｗｉｌｄによって編集された（Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉ
ｎｇ  Ｇｒｏｕｐ，２０００）「Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ（
第２版）」などの刊行物及び本明細書で引用される参照文献に記述されている。
【０１４９】
好ましくは、本発明の特徴を具体化する免疫原は、アジュバントと組み合わせて、例え
ば、動物又はヒトのような宿主被検体に投与される。好適なアジュバンドとしては、限定
されないが、フロイントアジュバント、粉末水酸化アルミニウム（ミョウバン）、百日咳
菌を加えた水酸化アルミニウム、及びモノホスホリル脂質Ａ合成トレハロースジコリノミ
コレート（ＭＰＬ−ＴＤＭ）が挙げられる。
【０１５０】
ポリクローナル抗体は、任意でアジュバントと一緒に投与され得る１回以上の免疫原の
注射によって、哺乳類宿主中で作製され得る。典型的には、免疫原又は免疫原とアジュバ
ントとの組み合わせを、１回又は複数回の皮下注射又は腹腔内注射によって哺乳類宿主に
注射する。好ましくは、免疫プログラムは、少なくとも１週間にわたって、より好ましく
は２週間以上にわたって実行される。このようにして生成されたポリクローナル抗体は、
当該技術分野で周知の方法を用いて単離及び精製され得る。
【０１５１】
モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎの確立されたハイブリドー
マ法（例えば、Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５〜４９７（１９７５））によって生成され
得る。ハイブリドーマ法は、典型的には、宿主又は宿主のリンパ球を免疫すること、モノ
クローナル抗体分泌リンパ球または分泌能を有するリンパ球を採取すること、リンパ球を
不死化細胞に融合すること、及び所望のモノクローナル抗体を分泌する細胞を選択するこ
とを含む。
【０１５２】
宿主を免疫すると、免疫原に対して特異的な抗体を生成するか、又は生成することがで
きるリンパ球を誘発することができる。あるいは、リンパ球をインビトロで免疫すること
ができる。ヒト細胞が望ましい場合、末梢血リンパ球が使用され得るが、脾臓細胞又は他
の哺乳類源からのリンパ球が好ましい。
【０１５３】
リンパ球を不死化細胞株と融合するとハイブリドーマ細胞を形成することができ、その
プロセスは、例えばポリエチレングリコールのような融合剤を使用することで促進され得
る。実例として、形質転換によって不死化された変異体げっ歯類、ウシ、又はヒト骨髄腫
細胞が使用され得る。非融合不死化細胞とは対照的に、実質的に純粋なハイブリドーマ細
胞の集団が好ましい。したがって、融合後、例えば、酵素ヒポキサンチングアニンホスホ
リボシルトランスファーゼ（ＨＧＰＲＴ）を欠いた変異体骨髄腫細胞を使用することで、
非融合の不死化細胞の成長又は生存を阻害する好適な培地で細胞は成長することができる
。このような例において、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを培地（ＨＡ
Ｔ培地）に添加すると、ＨＧＰＲＴ−欠損細胞の成長が阻止されつつも、ハイブリドーマ
の成長は可能となる。
【０１５４】
好ましくは、効果的に融合した不死化細胞は、ＨＡＴなどの培地中での選択によって混
合集団から単離され、安定した高レベルでの抗体発現を支持することができる。好ましい
不死化細胞株としては、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔ
ｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡから入手可能な骨髄腫細胞株が挙げられる。
【０１５５】
ハイブリドーマ細胞は、典型的には抗体を細胞外に分泌することから、培地を抗精神病
薬に対して特異的なモノクローナル抗体の存在に関してアッセイすることができる。例え
ば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又は酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）酵素結
合のようなインビトロ結合アッセイによる免疫沈降は、モノクローナル抗体の結合特異性
を測定するのに使用され得る。
【０１５６】
モノクローナル抗体分泌ハイブリドーマ細胞は、限界希釈法及び継代培養することで、
単一クローンとして単離され得る。好適な培地としては、限定されないが、ダルベッコ変
法イーグル培地、ＲＰＭＩ−１６４０、及び、例えばＵｌｔｒａ  ＤＯＭＡ  ＰＦ又はＨ
Ｌ−１のようなポリペプチド非含有、ポリペプチド還元された、又は無血清の培地（Ｂｉ
ｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤから入手可能）が挙げられる。
又は、ハイブリドーマ細胞は、生体内で腹水として成長し得る。
【０１５７】
モノクローナル抗体は、限定はされないが、ポリペプチドＡ−セファロース、ヒドロキ
シルアパタイトクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析、硫酸アンモニウム沈殿、及びア
フィニティクロマトグラフィなどの従来の免疫グロブリン（Ｉｇ）精製法によって培養培
地又は腹水から単離及び／又は精製され得る。
【０１５８】
モノクローナル抗体は、米国特許第４，１６６，４５２号に記載されるような組み換え
法によっても生成され得る。好ましくは、抗精神病薬に対して特異的な抗体を分泌するモ
ノクローナル抗体ハイブリドーマ細胞株から単離されたＤＮＡをプロービングするために
、従来の手順を使用して、例えば、ネズミの重鎖及び軽鎖抗体遺伝子、と特異的に結合す
るオリゴヌクレオチドプローブを使用して、モノクローナル抗体をコードするＤＮＡを単
離及びシークエンスすることができる。
【０１５９】
イムノアッセイ
このようにして生成された抗体は、抗精神病薬を認識／結合し、それによって患者サン
プル中の薬剤の存在及び／又は量を検出することができるイムノアッセイに使用され得る
。好ましくは、アッセイフォーマットは、競合的イムノアッセイフォーマットである。か
かるアッセイフォーマット及び他のアッセイは、他所でも記載されている（Ｈａｍｐｔｏ
ｎら（Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕ
ａｌ，ＡＰＳ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ  １９９０）及びＭａｄｄｏｘら（Ｊ
．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５８：１２１１１，１９８３））。
【０１６０】
上述されるように、抗体を含む試薬キットも提供され得る。代表的な試薬キットは、抗
精神病薬であるとリスペリドンに結合する抗体、標識部分に連結された抗精神病薬の類似
体又はそれらの誘導体を含む複合体を含み、既知の量の抗精神病薬又は関連標準物質を含
む１つ以上のキャリブレータを１つ以上含んでもよい。
【０１６１】
上述のように、試薬キットは、測定される既知量の検体を含むキャリブレータ及び／又
は対照物質を含み得る。検体の濃度は、サンプルについて得られた結果と、標準物質につ
いて得られた結果とを比較することで算出され得る。較正曲線を作成して、これを用いて
、一連の結果を関連付けて、サンプル中の検体の濃度を決定することができる。
【０１６２】
例えば、抗精神病薬のような検体を含有すると思われる任意のサンプルは、現状好まし
い実施形態の方法に従って、分析され得る。所望であれば、サンプルは前処理されてよく
、アッセイに影響を与えない任意の従来の培地で調製され得る。好ましくは、サンプルは
、宿主からの体液などの水性媒体、最も好ましくは血漿または血清を含む。
【０１６３】
以下の同時継続出願：題目「Ｈａｐｔｅｎｓ  ｏｆ  Ａｒｉｐｉｐｒａｚｏｌｅ」（代
理人整理番号：ＰＲＤ３２６５ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｒｅｍｍｅｒｉｅ）、題目
「Ｈａｐｔｅｎｓ  ｏｆ  Ｏｌａｎｚａｐｉｎｅ」（代理人整理番号：ＰＲＤ３２６６Ｕ
ＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｒｅｍｍｅｒｉｅ）、題目「Ｈａｐｔｅｎｓ  ｏｆ  Ｐａｌ
ｉｐｅｒｉｄｏｎｅ」（代理人整理番号：ＰＲＤ３２６７ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：
Ｒｅｍｍｅｒｉｅ）、題目「Ｈａｐｔｅｎｓ  ｏｆ  Ｑｕｅｔｉａｐｉｎｅ」（代理人整
理番号：ＰＲＤ３２６８ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｒｅｍｍｅｒｉｅ）、題目「Ｈａ
ｐｔｅｎｓ  ｏｆ  Ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ  ａｎｄ  Ｐａｌｉｐｅｒｉｄｏｎｅ」（代
理人整理番号：ＰＲＤ３２６９ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｒｅｍｍｅｒｉｅ）、題目
「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ａｒｉｐｉｐｒａｚｏｌｅ  Ｈａｐｔｅｎｓ  ａｎｄ  
Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１２８ＵＳＰＳＰ号、代表発明者
名：Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｏｌａｎｚａｐｉｎ
ｅ  Ｈａｐｔｅｎｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１
３２ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅ
ｓ  ｔｏ  Ｐａｌｉｐｅｒｉｄｏｎｅ  Ｈａｐｔｅｎｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏ
ｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１２６ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｈｒｙｈｏｒｅｎ
ｋｏ）、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｑｕｅｔｉａｐｉｎｅ  Ｈａｐｔｅｎｓ  
ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１３４ＵＳＰＳＰ号、代
表発明者名：Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｒｉｓｐｅ
ｒｉｄｏｎｅ  Ｈａｐｔｅｎｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号：
ＣＤＳ５１３０ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名；Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）、題目「Ａｎｔｉ
ｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ａｒｉｐｉｐｒａｚｏｌｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（
代理人整理番号：ＣＤＳ５１２９ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）
、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｏｌａｎｚａｐｉｎｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅ
ｒｅｏｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１３３ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｈｒｙｈｏ
ｒｅｎｋｏ）、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｐａｌｉｐｅｒｉｄｏｎｅ  ａｎｄ
Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１２７ＵＳＰＳＰ号、代表発明
者名：Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｑｕｅｔｉａｐｉ
ｎｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１３５ＵＳＰＳＰ
号、代表発明者名：Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｒｉ
ｓｐｅｒｉｄｏｎｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１
３１ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）は、全て本明細書と同時に出
願され、その内容は全て本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０１６４】
本発明の代表的な化合物は、以下に記載される一般的合成方法に従って合成することが
できる。式（Ｉ）の化合物は、当業者に既知の方法により調製することができる。以下の
実施例は、本発明の実施例を表すことのみを意味し、決して本発明を限定することを意図
しない。
【０１６５】
（実施例１）
工程Ａ
９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（２−クロロエチル）−２
−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４
−オン
【０１６６】
【化３８】
0006667472.tif 000047
【０１６７】
３−（２−クロロエチル）−９−ヒドロキシ−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒ
ドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（１．０ｇ、４．１２ミリモル
）のＤＭＦ溶液（５ｍＬ）を、１Ｈ−イミダゾール（７０１．２４ｍｇ、６４．６６ミリ
モル）で処理した後、ｔ−ブチルジメチルクロロシラン（６８３．１２ｍｇ、４．５３ミ
リモル）のＤＭＦ溶液（１ｍＬ）で処理した。１８時間室温で撹拌した後、真空下で溶媒
を除去し、残渣をスパチュラ１杯の炭酸カルシウムを含むジクロロメタン／水（１０ｍＬ
／１０ｍＬ）に溶解した。ジクロロメタンで水層を抽出（１０ｍＬで３回）した。合わせ
た有機分画をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、溶媒を真空下で除去した。粗混合物を、更に
精製せずに次の工程に使用した。（ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）３５７）
【０１６８】
工程Ｂ
９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（２−（４−（６−ヒドロ
キシベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メ
チル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オ
ン
【０１６９】
【化３９】
0006667472.tif 000048
【０１７０】
上述の工程に記載されるようにして調製した、９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリ
ル）オキシ）−３−（２−クロロエチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ
−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（０．５ｇ、１．４０ミリモル）の
メタノール（２５ｍＬ）及びジイソプロピルエチルアミン（７３２．８３μＬ、４．２０
ミリモル）の溶液を、３−（ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−
オール塩酸塩（３７４．６２ｍｇ、１．４７ミリモル）で処理し、反応混合物をアルゴン
下で１７時間６０℃で撹拌した。ジイソプロピルエチルアミン（７３２．８３μＬ、４．
２０ミリモル）を加え、混合物を更に４時間６０℃で撹拌した。反応混合物を真空下で蒸
発させて、残渣を水（２５ｍＬ）に溶解し、クロロホルムで抽出（３×２５ｍＬ）した。
合わせた有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、溶媒を真空下で除去した。残渣をシリカ
ゲルクロマトグラフィーで精製（ジクロロメタン／メタノール（９８／２）で溶出）し、
表題化合物を得た（ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）５３９）。
【０１７１】
工程Ｃ
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（（３−（１−（２−（９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシ
リル）オキシ）−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリ
ド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］
イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）カルバメート
【０１７２】
【化４０】
0006667472.tif 000049
【０１７３】
上述の工程に記載されるようにして調製した、９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリ
ル）オキシ）−３−（２−（４−（６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−３−イ
ル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４
Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（５０ｍｇ、０．０９３ミリモル）のア
セトン溶液（０．５ｍＬ）とＤＭＦ（０．５ｍＬ）を、炭酸カリウム（３３．３ｍｇ、０
．２４ミリモル）及びＮ−Ｂｏｃ−２−ブロモアミノエタン（２７ｍｇ、０．１２ミリモ
ル）で処理し、反応混合物をアルゴン下で１７時間６０℃で撹拌した。反応混合物を４０
℃の減圧下で蒸発させ、水（１０ｍＬ）に溶解し、ジクロロメタンで抽出（３×１０ｍＬ
）した。有機層を合わせて、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、溶媒を蒸発させて粗表題化合
物を生成した。（ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）６８２）
【０１７４】
工程Ｄ
３−（２−（４−（６−（２−アミノエトキシ）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−３−イ
ル）ピペリジン−１−イル）エチル）−９−ヒドロキシ−２−メチル−６，７，８，９−
テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
【０１７５】
【化４１】
0006667472.tif 000050
【０１７６】
上述の工程に記載されるようにして調製したｔｅｒｔ−ブチル（２−（（３−（１−（
２−（９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−メチル−４−オキソ−
６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エ
チル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル
）カルバメート（７０ｍｇ、０．１０３ミリモル）のＨＣｌ／イソプロパノール溶液（１
０ｍＬ、５Ｎ）を１時間６０℃で撹拌した。反応混合物を４０℃の減圧下で蒸発させ、飽
和重炭酸ナトリウム水溶液（５ｍＬ）にゆっくりと溶解し、ジクロロメタンで抽出（３ｘ
１０ｍＬ）した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、４０℃の減圧下で蒸発
させた。水層には生成物がまだ含まれており、４０℃の減圧下で水層を蒸発乾固させるこ
とでて回収した。水層から生じた残渣を水で再溶解し、調整したＷａｔｅｒｓ  Ｏａｓｉ
ｓを使用するＳＰＥ（６ｃｃ）カラムにかけ、続けてメタノールで溶出した。メタノール
溶出分画をジクロロメタン抽出の残渣と合わせて、４０℃の減圧下で蒸発乾固して表題化
合物とともに副生成物を生成した（ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）４６８；副生成物は、５％の
９−ヒドロキシ−３−（２−（４−（６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−３−
イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−
４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンである（Ｍ＋１）４２５）。混合物は
、更に精製することなく次の工程で使用した。
【０１７７】
（実施例２）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−
（（３−（１−（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テ
トラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−
４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド
【０１７８】
【化４２】
0006667472.tif 000051
【０１７９】
実施例１に記載されるようにして調製した３−（２−（４−（６−（２−アミノエトキ
シ）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−９−ヒ
ドロキシ−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピ
リミジン−４−オン（４．０ｍｇ、８．５μモル）のＤＭＦ（２１５μＬ）及びトリブチ
ルアミン（４．３μＬ）の溶液に、Ｎ−（α−マレイミドアセトキシ）スクシンイミドエ
ステル（ＡＭＡＳ、１０ｍｇ／ｍＬ、２．１ｍｇ、８．５μモル）のＤＭＦ溶液（２１４
μＬ）を加えた。生じた溶液を２０℃で６０分間撹拌した後、チオール活性化タンパク質
とのコンジュゲーション反応にそのまま使用した。
【０１８０】
（実施例３）
工程Ａ
３−（２−（４−（６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−３−イル）ピペリジ
ン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［
１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
【０１８１】
【化４３】
0006667472.tif 000052
【０１８２】
３−（２−クロロエチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリ
ド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（１４．４ｇ、０．０５ミリモル）、３−（ピペ
リジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−オール（１４．０ｇ、０．０５ミ
リモル）、炭酸ナトリウム（１６．０ｇ、０．１５ミリモル）及びヨウ化カリウム（スパ
チュラの先端分）のＤＭＦ溶液（１５０ｍＬ）を８０℃で５時間撹拌した。混合物を室温
まで放冷し、水を加えた。沈殿物を濾過で除去し、濾液をクロロホルムで抽出（３×１０
０ｍＬ）した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、及び濃縮した。残渣をイ
ソプロピルアルコール（７０ｍＬ）で結晶化し、濾過し、イソプロパノール／ジイソプロ
ピルエーテル５０／５０混合物（１０ｍＬ）で洗浄した。残渣を１００℃で一晩乾燥させ
て、表題化合物を生成し、それを更に精製することなく次の工程に使用した。
【０１８３】
工程Ｂ
３−（２−（４−（６−（２−アミノエトキシ）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−３−イ
ル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４
Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
【０１８４】
【化４４】
0006667472.tif 000053
【０１８５】
上述の工程に記載されるようにして調製した３−（２−（４−（６−ヒドロキシベンゾ
［ｄ］イソオキサゾル−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，
７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（６．６
ｇ、０．０１５ミリモル）のＤＭＦ（５０ｍＬ）及びアセトン（５０ｍＬ）の溶液を、炭
酸カリウム（３．０ｇ、０．０３ミリモル）及びエチル（２−ブロモエチル）カルバメー
ト（２．４ｇ、０．０１５ミリモル）で処理した。６０℃で一晩撹拌した後、反応混合物
を水（１５０ｍＬ）に注入し、クロロホルムで抽出（３×１００ｍＬ）した。合わせた有
機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製（ジ
クロロメタン／メタノール（９０／１０）で溶出）した。合わせた分画をＨＢｒ（１５０
ｍＬ、４８％）で処理し、３０分間加熱還流した。混合物を室温まで放冷し、水酸化アン
モニウム（２８％  ＮＨ3（Ｈ2Ｏ））で塩基性として、クロロホルムで抽出（３×１００
ｍＬ）した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマ
トグラフィーで精製し（ジクロロメタン／メタノール（９０／１０〜５０／５０の溶出勾
配））、生じた固体をイソプロパノール（５０ｍＬ）に溶解し、イソプロパノール／ＨＣ
ｌで処理した。沈殿物を濾過で除去し、ｉＰｒＯＨ／ジイソプロピルエーテル（５０／５
０、３×２０ｍＬ）で洗浄した。沈殿物を減圧下で乾燥し、表題化合物を生成した（ＥＳ
Ｉ−ＭＳ（Ｍ＋１）４５２）。1Ｈ  ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  ｐｐｍ
１．７６〜１．８５（ｍ，１Ｈ）１．８７〜１．９６（ｍ，１Ｈ）２．１９（ｄ，Ｊ＝
１２．８１Ｈｚ，１Ｈ）２．３７〜２．４８（ｍ，４Ｈ）２．９８〜３．１０（ｍ，３Ｈ
）３．１０〜３．２８（ｍ，５Ｈ）３．３７〜３．４６（ｍ，３Ｈ）３．７２（ｄ，Ｊ＝
１１．３４Ｈｚ，３Ｈ）３．７９〜３．８５（ｍ，２Ｈ）４．３１（ｔ，Ｊ＝４．９４Ｈ
ｚ，１Ｈ）７．０５（ｄｄ，Ｊ＝８．７８，１．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．３５〜７．３９（
ｍ，１Ｈ）８．０８（ｄ，Ｊ＝８．７８Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１８６】
（実施例４）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−
（（３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ
−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ
［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド
【０１８７】
【化４５】
0006667472.tif 000054
【０１８８】
実施例３に記載されるようにして調製した３−（２−（４−（６−（２−アミノエトキ
シ）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メ
チル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オ
ン（３．４ｍｇ、７．５８μモル）のＤＭＦ（１８５μＬ）及びトリブチルアミン（３．
７μＬ）の溶液に、Ｎ−（α−マレイミドアセトキシ）スクシンイミドエステル（ＡＭＡ
Ｓ、１０ｍｇ／ｍＬ、１．９ｍｇ、７．５８μモル）のＤＭＦ溶液（１９０μＬ）を加え
た。生じた溶液を２０℃で９０分間撹拌した後チオール活性化タンパク質とのコンジュゲ
ーション反応にそのまま使用した。
【０１８９】
（実施例５）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−
（（３−（１−（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テ
トラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−
４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド−キ
ーホールリンペットヘモシアニン−コンジュゲート
【０１９０】
工程Ａ
キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ、１８．０ｍｇ、０．１８μモル）の１０
０ｍＭリン酸緩衝液溶液（０．４６Ｍ塩化ナトリウム、ｐＨ  ７．４）（４．２２ｍＬ）
に、Ｓ−アセチルチオ酢酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＡＴＡ、２５ｍｇ／ｍＬ、２．１ｍ
ｇ、９．０μモル）のＤＭＦ溶液（８３．２μＬ）を加えた。生じた溶液を２０℃で１時
間、ローラー式攪拌機でインキュベートした。反応液を、１００ｍＭリン酸緩衝液（０．
４６Ｍ塩化ナトリウム、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ  ６．０）を使用してＳｅｐｈａｄｅｘ
Ｇ−２５カラムで精製した。
【０１９１】
工程Ｂ
工程Ａに記載されるようにして調製したＫＬＨ−ＳＡＴＡ溶液（１７．１ｍｇ、０．１
７１μモル）（９．３７ｍＬ）に、２．５Ｍヒドロキシルアミン（５０ｍＭ  ＥＤＴＡ（
ｐＨ  ７．０））（９３７μＬ）を加えた。生じた溶液を２０℃で４０分間、ローラー式
攪拌機でインキュベートした。この反応を、マレイミド活性化ハプテンとのコンジュゲー
ション反応においてそのまま使用した。
【０１９２】
工程Ｃ
工程Ｂに記載されるようにして調製した、生じたＫＬＨ−ＳＨ溶液のアリコート（３．
４ｍＬ、０．０５８μモル）に、実施例２に記載されるようにして調製した２−（２，５
−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−
（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４
Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベン
ゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド溶液のアリコート（
２８２．８μＬ、５．０μモル）を加えた。生じた混濁混合物を２０℃で３時間、ローラ
ー式攪拌機でインキュベートした。反応液を、０．２μｍシリンジフィルターを通して濾
過した後、１００ｍＭリン酸緩衝液（０．４６Ｍ塩化ナトリウム、ｐＨ  ７．４）を使用
してＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラムで精製した。
【０１９３】
（実施例６）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−
（（３−（１−（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テ
トラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−
４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド−ウ
シサイログロブリン−コンジュゲート
【０１９４】
工程Ａ
ウシサイログロブリン（ＢＴＧ、９．３ｍｇ、０．０１４μモル）の１００ｍＭリン酸
緩衝溶液（ｐＨ  ７．５）（１．０ｍＬ）に、Ｓ−アセチルチオ酢酸Ｎ−スクシンイミジ
ル（ＳＡＴＡ、２５ｍｇ／ｍＬ、３．３ｍｇ、１４．１μモル）のＤＭＦ溶液（１３２μ
Ｌ）を加えた。生じた溶液を２０℃で１時間、ローラー式攪拌機でインキュベートした。
反応液を、１００ｍＭリン酸緩衝液（５ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ  ６．０）を使用して、Ｓ
ｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラムで精製した。
【０１９５】
工程Ｂ
工程Ａに記載されるようにして調製したＢＴＧ−ＳＡＴＡ溶液（７．４ｍｇ、０．０１
１μモル）（２．１１ｍＬ）に２．５Ｍヒドロキシルアミン（５０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ
７．０）（２１１μＬ）を加えた。生じた溶液を２０℃で６０分間、ローラー式攪拌機
でインキュベートした。この反応を、マレイミド活性化ハプテンとのコンジュゲーション
反応においてそのまま使用した。
【０１９６】
工程Ｃ
工程Ｂに記載されるようにして調製した、生じたＢＴＧ−ＳＨ溶液のアリコート（２．
３ｍＬ、０．０１１μモル）に、実施例２に記載されるようにして調製した２−（２，５
−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−
（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４
Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベン
ゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド溶液のアリコート（
２８０．４μＬ、５．５μモル）を加えた。生じた混濁混合物を２０℃で２．５時間、ロ
ーラー式攪拌機でインキュベートした。反応液を、０．２μｍシリンジフィルターを通し
て濾過した後、１００ｍＭリン酸緩衝液（０．１４Ｍ塩化ナトリウム、ｐＨ  ７．４）を
使用してＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラムで精製した。
【０１９７】
（実施例７）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−
（（３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ
−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ
［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド−キーホールリンペッ
トヘモシアニン−コンジュゲート
実施例５の工程Ｂに記載されるようにして調製した、生じたＫＬＨ−ＳＨ溶液のアリコ
ート（１．５ｍＬ、０．０２５μモル）に、実施例４に記載されるようにして調製した２
−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−（（
３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピ
リド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ
］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド溶液のアリコート（１１３
μＬ、２．２６μモル）を加えた。生じた混濁混合物を２０℃で２．５時間、ローラー式
攪拌機でインキュベートした。反応液を、０．２μｍシリンジフィルターを通して濾過し
た後、１００ｍＭリン酸緩衝液（０．４６Ｍ塩化ナトリウム、ｐＨ  ７．４）を使用して
Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラムで精製した。
【０１９８】
（実施例８）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−
（（３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ
−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ
［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド−ウシサイログロブリ
ン−コンジュゲート
実施例６の工程Ｂに記載されるようにして調製した、生じたＢＴＧ−ＳＨ溶液のアリコ
ート（０．６３ｍＬ、０．００３３μモル）に、実施例４に記載されるようにして調製し
た２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−
（（３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ
−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ
［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド溶液のアリコート（８
０μＬ、１．６μモル）を加えた。生じた混濁混合物を２０℃で２．５時間、ローラー式
攪拌機でインキュベートした。反応液を、０．２μｍシリンジフィルターを通して濾過し
た後、１００ｍＭリン酸緩衝液（０．１４Ｍ塩化ナトリウム、ｐＨ  ７．４）を使用して
Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラムで精製した。
【０１９９】
（実施例９）
リスペリドンの競合的イムノアッセイ
リスペリドン免疫原による一連の免疫後、マウス尾出血を、ＥＬＩＳＡを使用して、反
応性に関して試験した。ハイブリドーマ上清も試験を行い、以下の表１及び表２で示され
るＥＬＩＳＡのデータは、いくつかのハイブリドーマの反応性を示している（融合パート
ナーは、ＮＳＯ細胞であった）。表２に示されるように、ハイブリドーマ２Ａ５及び５Ｇ
１１の反応性が認められた。
【０２００】
【表９】
0006667472.tif 000055
0006667472.tif 000056
0006667472.tif 000057
【０２０１】
【表１０】
0006667472.tif 000058
【０２０２】
ＥＬＩＳＡ反応性によってクローンを同定した後、類似の化合物との親和性及び交差反
応性を近似するために競合的ＥＬＩＳＡを行った。図１及び２は、ハイブリドーマサブク
ローン５＿９から得られたＥＬＩＳＡ交差反応性を示している。データは、リスペリドン
、並びに代謝産物であるパリペリドン及び７−ヒドロキシリスペリドンに対する反応性を
示している。
【０２０３】
次に、競合的ＥＬＩＳＡによって上清も試験し、シグナルが、リスペリドン若しくはパ
リペリドンのいずれに特異的であるかを決定した。図３は、ハイブリドーマサブクローン
２Ａ５から得られた結果を示している。データは、リスペリドン及びパリピリドンの両方
に対する反応性を示している。
【０２０４】
図４は、ラテラルフローアッセイデバイスに使用される競合的イムノアッセイフォーマ
ットを示しており、このデバイスにおいて、捕捉抗体であるリスペリドンクローン５−９
がフルオロフォアにコンジュゲートされたリスペリドンからなる検出コンジュゲートと共
にチップに入っている。図４で示されるこの競合的フォーマットにおいて、検体（リスペ
リドン）のレベルが低いと高いシグナルを生じ、検体（リスペリドン）のレベルが高いと
低いシグナルを生じる。サンプル中のリスペリドンの量は、薬剤が存在しない対照サンプ
ルと比較した蛍光の喪失によって算出され得る。リスペリドンクローン５−９について得
られた典型的な用量反応曲線を図５に示す。
【図１】
0006667472.tif 000060
【図２】
0006667472.tif 000061
【図３】
0006667472.tif 000062
【図４】
0006667472.tif 000063
【図５】
0006667472.tif 000064