(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
樹脂粒子と、
前記樹脂粒子に固定化された複数の金属粒子と、
を有し、
前記樹脂粒子が、含窒素モノマーと多価ビニル化合物との共重合体であり、その重量組成比（含窒素モノマー：多価ビニル化合物）が４９：１〜３０：２０の範囲内である樹脂−金属複合体を備え、凝集法又はイムノクロマトグラフィー法に用いられる標識物質。
【請求項２】
前記金属粒子の担持量が樹脂−金属複合体の重量に対して５質量％〜７０質量％の範囲内であることを特徴とする、請求項１に記載の標識物質。
【請求項３】
前記金属粒子の６０質量％〜１００質量％が、前記樹脂粒子の表層部に存在する、請求項１又は２に記載の標識物質。
【請求項４】
前記金属粒子の平均粒子径が１〜８０ｎｍの範囲内であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の標識物質。
【請求項５】
平均粒子径が５０〜１０００ｎｍの範囲内であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の標識物質。
【請求項６】
前記金属粒子が、金粒子又は白金粒子である請求項１〜５のいずれか１項に記載の標識物質。
【請求項７】
前記複数の金属粒子が、樹脂粒子内に埋包された部位及び樹脂粒子外に露出した部位を有する金属粒子を含む請求項１〜６のいずれか１項に記載の標識物質。
【請求項８】
前記樹脂−金属複合体の表面に、抗原又は抗体を吸着させて使用するものである請求項７に記載の標識物質。
【請求項９】
請求項７又は８に記載の標識物質を用いることを特徴とする、免疫学的測定法。
【請求項１０】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の標識物質を備えた免疫学的測定用試薬。
【請求項１１】
試料中に含まれるアナライトを検出又は定量するアナライトの測定方法であって、
メンブレン、及び当該メンブレンに前記アナライトと特異的に結合する捕捉リガンドが固定されてなる判定部を含むラテラルフロー型クロマト用テストストリップを用い、下記工程(I)〜(III)；
工程(I)：試料に含まれる前記アナライトと、該アナライトに特異的に結合する抗体を、請求項１〜６のいずれか１項に記載の標識物質で標識した標識抗体と、を接触させる工程、
工程(II)：前記判定部にて、工程(I)において形成された、アナライトと標識抗体とを含む複合体を、捕捉リガンドに接触させる工程、
工程(III)：前記標識物質における樹脂−金属複合体の局在型表面プラズモン共鳴及び、電子遷移による光エネルギー吸収に由来する発色強度を測定する工程、
を含む工程を行うことを特徴とするアナライトの測定方法。
【請求項１２】
ラテラルフロー型クロマト用テストストリップを用いて、試料中に含まれるアナライトを検出又は定量するためのアナライト測定用キットであって、
メンブレン、及び当該メンブレンに、前記アナライトと特異的に結合する捕捉リガンドが固定されてなる判定部を含むラテラルフロー型クロマト用テストストリップと、
前記アナライトに特異的に結合する抗体を、請求項１〜６のいずれか１項に記載の標識物質で標識した標識抗体を含む検出試薬と、
を含むアナライトを検出又は定量するためのアナライト測定用キット。
【請求項１３】
試料中に含まれるアナライトを検出又は定量するためのラテラルフロー型クロマト用テストストリップであって、
メンブレンと、
前記メンブレンに、前記試料が展開する方向において、前記アナライトと特異的に結合する捕捉リガンドが固定されてなる判定部と、
当該判定部よりも上流側に、前記アナライトに特異的に結合する抗体を請求項１〜６のいずれか１項に記載の標識物質で標識した標識抗体が含まれる反応部と、
を含むラテラルフロー型クロマト用テストストリップ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば免疫学的測定における標識物質などに利用可能な樹脂−金属複合体、それを利用した標識物質、免疫学的測定法、免疫学的測定用試薬、アナライトの測定方法、アナライト測定用キット、及び、ラテラルフロー型クロマト用テストストリップに関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫学的測定法（イムノアッセイ）は、その測定原理により、様々な手法がある。例えば、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、放射性免疫測定法（ＲＩＡ）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、ラテックス等の凝集法（ＬＩＡ、ＰＡ）、イムノクロマトグラフィー法（ＩＣＡ）、赤血球凝集法（ＨＡ）、赤血球凝集抑制法（ＨＩ）等が挙げられる。
【０００３】
イムノアッセイは、抗原及び抗体が反応し複合体を形成した際の変化（抗原、抗体又は複合体の濃度変化）から、抗原又は抗体を定性的又は定量的に検出する。これらを検出する際に、抗体、抗原又は複合体に標識物質を結合させることで、検出感度が増大する。そのため、標識物質の標識能力は、イムノアッセイにおける検出能力を左右する重要な要素であるといえる。上記に例示したイムノアッセイにおいても、標識物質として、赤血球（ＨＡの場合）、ラテックス粒子（ＬＩＡの場合）、蛍光色素（ＦＩＡの場合）、放射性元素（ＲＩＡの場合）、酵素（ＥＩＡの場合）、化学発光物質（ＣＬＩＡの場合）等が用いられている。
【０００４】
ところで、標識物質として着色した微粒子を用いた場合、特別な分析装置を用いることなく目視により検出を確認することができるため、より簡便な測定ができることが期待される。このような着色した微粒子としては、金属及び金属酸化物のコロイド状粒子、色素で着色したラテックス粒子等が挙げられる（特許文献１、特許文献４等）。しかし、上記コロイド状粒子は、粒子径及び調製条件によって色調が決定されてしまうため、所望の鮮明な濃い色調のものを得難い、つまり視認性が不十分であるという問題がある。
また、上記着色したラテックス粒子は、色素による着色の効果が低く、目視判定性が不十分であるという問題がある。なお、この問題を解消するために色素の着色量を増やそうとすると、色素がラテックスの表面を覆い、ラテックス粒子本来の表面状態が損なわれるため、抗原又は抗体を結合させるのが困難になるという問題があった。また、メンブランフィルター等のクロマトグラフ媒体の細孔内に詰まったり、ラテックス粒子が非特異凝集を起こしたりして、色素の着色料を増やすことにより濃く着色することが、必ずしも、性能の向上に結び付かない、という問題もあった。
【０００５】
上記標識物質の視認性を向上させるために、標識物質が結合した抗体（標識抗体）と抗原が反応し複合体を形成した後に、これらの標識物質に対しさらに他の金属を修飾させることで標識物質の検出感度を増幅させるイムノクロマトグラフ方法が開示されている（特許文献２及び５）。
【０００６】
また、特許文献３では、標識物質として、ポリマー系ラテックス粒子の表面に結合した金ナノ粒子からなる着色ラテックスが提案されている。
【０００７】
また、特許文献４では、金属金で被覆されたポリマーラテックス粒子が開示され、顕微鏡検査法及びイムノアッセイ法に利用可能な試薬への適用が示唆されている。
【０００８】
また、非特許文献１では、ポリ−２−ビニルピリジンラテックス粒子に金ナノ粒子を担持させたマイクロゲルが開示され、マイクロゲルの粒径のｐＨ応答性を、金ナノ粒子の局在型表面プラズモン吸収の挙動の変化から確認している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開平５−１０９５０号公報
【特許文献２】特開２０１１−１１７９０６号公報
【特許文献３】特開２００９−１６８４９５号公報
【特許文献４】特開平３−２０６９５９号公報
【特許文献５】特開２００９−１９２２７０号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｋ．Ａｋａｍａｔｓｕ，Ｍ.Ｓｈｉｍａｄａ，Ｔ．Ｔｓｕｒｕｏｋａ，Ｈ．Ｎａｗａｆｕｎｅ，Ｓ．Ｆｕｊｉｉ  ａｎｄ  Ｙ．Ｎａｋａｍｕｒａ  Ｌａｎｇｍｕｉｒ２０１０，２６，１２５４−１２５９．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
免疫学的測定において、抗体、抗原又は被測定物質に対する標識物質の量が一定でない場合、被測定物質を定量的に把握することが困難になる。そのため、抗体、抗原又は被測定物質に対して、試薬中の標識物質を正確な量で適用することは、被測定物質の定量的な評価を行う上で大変重要である。しかしながら、標識物質として、平均粒子径が数百ｎｍ程度の微粒子を用いる場合、表面自由エネルギーが大きいため、凝集が発生したり、試薬容器の内壁面へ付着しやすくなったりする傾向がある。特に、試薬容器内で、標識物質が内壁面に付着したまま残留すると、試験に供される試薬中に含まれる標識物質の量が一定にならない。その結果、定量的評価に誤差が生じる原因となる。また、定性的な評価を行う場合でも、評価結果にバラつきが生じる恐れがある。特に、被測定物質が微小量である場合、その影響は大きい。
【００１２】
本発明の目的は、容器壁面への付着が少なく、免疫学的測定の標識物質として用いる場合、定量的な測定及び被測定物質が微小量である場合の定性的な測定においても精度の高い測定が可能な樹脂−金属複合体を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、鋭意研究を行った結果、樹脂−金属複合体を構成する樹脂成分の共重合比率を特定の範囲にすることで、上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成した。
【００１４】
すなわち、本発明の樹脂−金属複合体は、樹脂粒子と、前記樹脂粒子に固定化された複数の金属粒子と、を備え、前記樹脂粒子が、含窒素モノマーと多価ビニル化合物との共重合体であり、その重量組成比（含窒素モノマー：多価ビニル化合物）が４９：１〜３０：２０の範囲内である。
【００１５】
本発明の樹脂−金属複合体は、前記金属粒子の担持量が樹脂−金属複合体の重量に対して５質量％〜７０質量％の範囲内であってもよい。
【００１６】
本発明の樹脂−金属複合体は、前記金属粒子の６０質量％〜１００質量％が、前記樹脂粒子の表層部に存在してもよい。
【００１７】
本発明の樹脂−金属複合体は、前記金属粒子の平均粒子径が１〜８０ｎｍの範囲内であってもよい。
【００１８】
本発明の樹脂−金属複合体は、平均粒子径が５０〜１０００ｎｍの範囲内であってもよい。
【００１９】
本発明の樹脂−金属複合体は、前記金属粒子が、金粒子又は白金粒子であってもよい。
【００２０】
本発明の標識物質は、上記いずれかの樹脂−金属複合体を備えている。
【００２１】
本発明の標識物質は、前記樹脂−金属複合体の表面に、抗原又は抗体を吸着させて使用するものであってもよい。
【００２２】
本発明の免疫学的測定法は、上記いずれかの標識物質を用いるものである。
【００２３】
本発明の免疫学的測定用試薬は、上記いずれかの樹脂−金属複合体を備えている。
【００２４】
本発明のアナライトの測定方法は、試料中に含まれるアナライトを検出又は定量するアナライトの測定方法である。
本発明のアナライトの測定方法は、メンブレン、及び当該メンブレンに前記アナライトと特異的に結合する捕捉リガンドが固定されてなる判定部を含むラテラルフロー型クロマト用テストストリップを用いる。
そして、本発明のアナライトの測定方法は、下記工程(I)〜(III)；
工程(I)：試料に含まれる前記アナライトと、該アナライトに特異的に結合する抗体を、上記いずれかの樹脂−金属複合体で標識した標識抗体と、を接触させる工程、
工程(II)：前記判定部にて、工程(I)において形成された、アナライトと標識抗体とを含む複合体を、捕捉リガンドに接触させる工程、
工程(III)：前記樹脂−金属複合体の局在型表面プラズモン共鳴及び、電子遷移による光エネルギー吸収に由来する発色強度を測定する工程、
を含む工程を行うことを特徴とする。
【００２５】
本発明のアナライト測定用キットは、ラテラルフロー型クロマト用テストストリップを用いて、試料中に含まれるアナライトを検出又は定量するためのアナライト測定用キットである。
本発明のアナライト測定用キットは、メンブレン、及び当該メンブレンに、前記アナライトと特異的に結合する捕捉リガンドが固定されてなる判定部を含むラテラルフロー型クロマト用テストストリップと、
前記アナライトに特異的に結合する抗体を、上記いずれかの樹脂−金属複合体で標識した標識抗体を含む検出試薬と、
を含むものである。
【００２６】
本発明のラテラルフロー型クロマト用テストストリップは、
試料中に含まれるアナライトを検出又は定量するためのラテラルフロー型クロマト用テストストリップである。
本発明のラテラルフロー型クロマト用テストストリップは、
メンブレンと、
前記メンブレンに、前記試料が展開する方向において、前記アナライトと特異的に結合する捕捉リガンドが固定されてなる判定部と、
当該判定部よりも上流側に、前記アナライトに特異的に結合する抗体を上記いずれかの樹脂−金属複合体で標識した標識抗体が含まれる反応部と、
を含むものである。
【発明の効果】
【００２７】
本発明の樹脂−金属複合体は、樹脂粒子を構成する含窒素モノマーと多価ビニル化合物との共重合比率が特定の範囲内に制御されていることよって、凝集の発生と試薬容器の内壁面への付着が効果的に抑制されている。そのため、本発明の樹脂−金属複合体を標識物質として使用することにより、標識物質が容器内に残留して、抗体、抗原又は被測定物質に対する標識物質量が変動することに起因する測定誤差を生じさせることなく、精度の高い定量的な免疫学的測定が可能になる。従って、本発明の樹脂−金属複合体は、例えば、ＥＩＡ、ＲＩＡ、ＣＬＩＡ、ＦＩＡ、ＬＩＡ、ＰＡ、ＩＣＡ、ＨＡ、ＨＩ等の免疫学的測定用標識物質、免疫学的測定用試薬などの目的で好ましく適用できる。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】本発明の一実施の形態に係る樹脂−金属複合体の断面の構造を示す模式図である。
【図２Ａ】樹脂−金属複合体の一態様の断面の構造を示す模式図である。
【図２Ｂ】樹脂−金属複合体の別の態様の断面の構造を示す模式図である。
【図３】本発明の一実施の形態に係るラテラルフロー型クロマト用テストストリップを用いたアナライトの測定方法の概要を示す説明図である。
【図４】ＰＰ容器に対する付着試験結果を示す写真である。
【図５Ａ】ＰＣ容器に対する付着試験結果を示す写真である。
【図５Ｂ】ＰＣ容器に対する付着試験結果を示す写真である。
【図６】ＰＥＴ容器に対する付着試験結果を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
［樹脂−金属複合体］
以下、適宜図面を参照しながら、本発明の実施の形態について詳細に説明する。図１は、本発明の一実施の形態に係る樹脂−金属複合体の断面模式図である。樹脂−金属複合体１００は、樹脂粒子１０と、金属粒子２０と、を備えている。樹脂−金属複合体１００は、樹脂粒子１０に金属粒子２０が固定化されている。樹脂粒子１０は、金属粒子２０よりも相対的に大きな粒子である。つまり、樹脂−金属複合体１００では、大きな樹脂粒子１０に、相対的に小さな多数の金属粒子２０が固定されている。図１に示すように、樹脂−金属複合体１００全体の粒子径Ｄ１と、樹脂粒子１０の粒子径Ｄ２と金属粒子２０の粒子径Ｄ３との関係は、Ｄ１＞Ｄ２＞Ｄ３である。
【００３０】
また、樹脂−金属複合体１００は、金属粒子２０の一部が樹脂粒子１０の表層部６０において三次元的に分布していてもよい。この場合、三次元的に分布した金属粒子２０の一部が部分的に樹脂粒子１０外に露出していてもよく、残りの一部が樹脂粒子１０に内包されていてもよい。具体的には、図１に示すように、金属粒子２０には、樹脂粒子１０に完全に内包された金属粒子（以下、「内包粒子３０」ともいう。）、樹脂粒子１０内に埋包された部位及び樹脂粒子１０外に露出した部位を有する金属粒子（以下、「一部露出粒子４０」ともいう。）及び樹脂粒子１０の表面に吸着している金属粒子（以下、「表面吸着粒子５０」ともいう。）が存在していることが好ましい。
【００３１】
例えば、樹脂−金属複合体１００を免疫学的測定用標識物質又は免疫学的測定用試薬に使用する場合、樹脂粒子１０の表面又は一部露出粒子４０もしくは表面吸着粒子５０の表面に、抗体又は抗原を固定化して使用する。その際、一部露出粒子４０及び表面吸着粒子５０には、前記抗体又は抗原が固定化される一方で、内包粒子３０には、固定化されない。しかし、一部露出粒子４０、表面吸着粒子５０及び内包粒子３０のいずれも局在型表面プラズモン共鳴に加え、電子遷移による光エネルギー吸収を発現することから、一部露出粒子４０及び表面吸着粒子５０のみならず、内包粒子３０も、免疫学的測定用標識物質及び免疫学的測定用試薬の視認性向上に寄与する。さらに、一部露出粒子４０及び内包粒子３０は、表面吸着粒子５０と比較して樹脂粒子１０との接触面積が大きいことに加え、埋包状態によるアンカー効果等が奏されるため、物理的吸着力が強く、樹脂粒子１０から脱離しにくい。そのため、樹脂−金属複合体１００を使用した免疫学的測定用標識物質及び免疫学的測定用試薬の耐久性、安定性を優れたものにすることができる。
【００３２】
以下、樹脂−金属複合体１００を免疫学的測定用標識物質（以下、単に「標識物質」ともいう。）又は免疫学的測定用試薬（以下、単に「試薬」ともいう。）に適用する場合を例として説明する。
【００３３】
内包粒子３０は、その表面の全てが、樹脂粒子１０を構成する樹脂に覆われているものである。また、一部露出粒子４０は、その表面積の５％以上１００％未満が、樹脂粒子１０を構成する樹脂に覆われているものである。免疫学的測定用標識物質及び免疫学的測定用試薬の耐久性の観点から、その下限は、表面積の２０％以上であることが好ましく、３０％以上であることがより好ましい。また、表面吸着粒子５０は、その表面積の０％を超えて５％未満が、樹脂粒子１０を構成する樹脂に覆われていることが好ましい。
【００３４】
また、樹脂−金属複合体１００への金属粒子２０（内包粒子３０、一部露出粒子４０及び表面吸着粒子５０の合計）の担持量は、樹脂−金属複合体１００の重量に対して、５質量％〜７０質量％であることが好ましい。この範囲であれば、樹脂−金属複合体１００は、標識物質としての視認性、目視判定性及び検出感度に優れる。金属粒子２０の担持量が５質量％未満では、抗体又は抗原の固定化量が少なくなり、検出感度が低下する傾向がある。金属粒子２０の担持量は、より好ましくは、１５質量％〜７０質量％、さらに好ましくは、１５質量％〜６０質量％である。一方、７０質量％を超えると、樹脂−金属複合体の比重が大きくなり、水等の分散媒に対する分散性が悪化する傾向にある。
【００３５】
また、金属粒子２０の１０質量％〜９０質量％が、一部露出粒子４０及び表面吸着粒子５０であることが好ましい。この範囲であれば、金属粒子２０上への抗体又は抗原の固定化量が充分確保できるため、標識物質としての感度が高い。金属粒子２０の２０質量％〜８０質量％が一部露出粒子４０及び表面吸着粒子５０であることがより好ましく、免疫学的測定用標識物質及び免疫学的測定用試薬の耐久性の観点から、表面吸着粒子５０が２０質量％以下であることがさらに好ましい。
【００３６】
また、樹脂−金属複合体１００を免疫学的測定に使用する場合に、優れた検出感度を得るためには、金属粒子２０の６０質量％〜１００質量％、好ましくは、７５質量％〜１００質量％が、より好ましくは、８５質量％〜１００質量％が、表層部６０に、より好ましくは、樹脂粒子１０の表面から、深さ方向に粒子半径の４０％の範囲に存在することがよい。また、表層部６０に存在する金属粒子２０の５質量％〜９０質量％が、一部露出粒子４０又は表面吸着粒子５０であることが、金属粒子２０上への抗体又は抗原の固定化量が充分確保できるため、標識物質としての感度が高くなり好ましい。換言すれば、表層部６０に存在する金属粒子２０の１０質量％〜９５質量％が内包粒子３０であることがよい。
【００３７】
ここで、前記「表層部」とは、樹脂−金属複合体１００の最も外側の位置（つまり、一部露出粒子４０又は表面吸着粒子５０の突出端部）を基準にして、樹脂粒子１０の表面から、深さ方向に粒子半径の５０％の範囲を意味する。また、前記「三次元的に分布」とは、金属粒子２０が、樹脂粒子１０の面方向だけでなく、深さ方向にも分散されていることを意味する。
【００３８】
上記のとおり、内包粒子３０も局在型表面プラズモン共鳴に加え、電子遷移による光エネルギー吸収を発現することから、一部露出粒子４０及び表面吸着粒子５０のみならず、内包粒子３０も、免疫学的測定用標識物質及び免疫学的測定用試薬の視認性向上に寄与する。このような視認性向上という観点では、樹脂−金属複合体１００は、例えば図２Ａに示すように、内包粒子３０が、樹脂粒子１０の表面から深さ方向に一定の範囲内に集中して分布し、樹脂粒子１０の中心付近には内包粒子３０が存在しないことが好ましい。より具体的には、内包粒子３０による局在型表面プラズモン共鳴に加え、電子遷移による光エネルギー吸収を効果的に発現させるためには、樹脂粒子１０の表面から深さ方向に例えば０〜２００ｎｍの範囲内に内包粒子３０の７０質量％以上、好ましくは８０質量％以上、より好ましくは９０〜１００質量％が、存在していることがよい。特に、内包粒子３０の全て（１００質量％）が分布する領域（内包粒子分布領域）が、樹脂粒子１０の表面から例えば０〜１００ｎｍの範囲内である場合は、内包粒子３０による局在型表面プラズモン共鳴に加え、電子遷移による光エネルギー吸収の発現を最大化できるので好ましい。
【００３９】
また、樹脂−金属複合体１００は、内包粒子３０を有しなくもよい。例えば図２Ｂに示すように、樹脂−金属複合体１００において、金属粒子２０のすべてが、樹脂粒子１０の径方向に重なり合うことなく、樹脂粒子１０の表面に固定されていてもよい。この場合、金属粒子２０は、一部露出粒子４０と表面吸着粒子５０とから構成される。
【００４０】
［樹脂粒子］
樹脂粒子１０は、含窒素モノマーと多価ビニル化合物との共重合体である。ここで、含窒素モノマーとしては、例えば、芳香族アミン、脂肪族アミンが挙げられる。この含窒素モノマーと多価ビニル化合物とを重合させると、ポリアミン、ポリアミド、ポリペプチド、ポリウレタン、ポリ尿素、ポリイミド、ポリイミダゾール、ポリオキサゾール、ポリピロール、ポリアニリン、側鎖に窒素原子を有するアクリル樹脂、フェノール樹脂、エポキシ樹脂等において、多価ビニル化合物由来のモノマー単位を有する共重合体が得られる。好ましい含窒素モノマーは、ビニルピリジンである。ビニルピリジンとしては、例えば、２−ビニルピリジン、３−ビニルピリジン、４−ビニルピリジン等を用いることができる。従って、樹脂粒子１０を構成するポリマーの主鎖は、好ましくは、ポリ−２−ビニルピリジン、ポリ−３−ビニルピリジン、ポリ−４−ビニルピリジンである。
【００４１】
一方、多価ビニル化合物は、架橋剤として機能するものであり、例えば、ジビニルベンゼン、トリビニルベンゼン、ジビニルナフタレン、ジビニルビフェニルが挙げられる。好ましくは、架橋反応の反応性に優れる、ｏ−ジビニルベンゼン、ｍ−ジビニルベンゼン、ｐ−ジビニルベンゼンである。
【００４２】
含窒素モノマーと多価ビニル化合物との共重合体は、金属イオンを吸着することが可能な置換基を構造に有するポリマー粒子である。含窒素モノマーと多価ビニル化合物との共重合体中の窒素原子は、視認性に優れ、抗原又は抗体の固定化が容易な金、白金、パラジウムなどの金属粒子の前駆体であるアニオン性金属イオンを化学吸着しやすい。本実施の形態では、含窒素モノマーと多価ビニル化合物との共重合体中に吸着した金属イオンを還元し、金属ナノ粒子を形成する為、生成した金属粒子２０の一部は、内包金属粒子３０又は一部露出金属粒子４０となる。
【００４３】
樹脂粒子１０を構成する含窒素モノマーと多価ビニル化合物との共重合体におけるモノマー由来成分の重量組成比（含窒素モノマー：多価ビニル化合物）は、試薬容器の内壁への樹脂−金属複合体１００の付着抑制と、樹脂−金属複合体１００を標識物質として免疫学的測定を行う場合の検出感度の向上とを両立させる観点から、４９：１〜３０：２０の範囲内であり、４８：２〜３５：１５の範囲内が好ましく、４８：２〜４０：１０がより好ましく、４８：２〜４５：５の範囲内が最も好ましい。
【００４４】
重量組成比（含窒素モノマー：多価ビニル化合物）において、４９：１を超えて含窒素モノマーの比率が多くなると、試薬容器の内壁に樹脂−金属複合体１００が付着しやすくなるため、樹脂−金属複合体１００を標識物質として免疫学的測定を行う場合に、定量的評価の精度と再現性が得られ難くなる。また、４９：１を超えて含窒素モノマーの比率が多くなると、多価ビニル化合物による架橋密度が相対的に低下するため、樹脂粒子１０が柔らかくなって金属イオンが内部に浸透しやすくなる。その結果、樹脂粒子１０の内部で金属粒子が生成し、内包金属粒子３０が多くなって、相対的に一部露出金属粒子４０や表面吸着金属粒子５０の比率が低下するとともに、その粒子径が小さくなる傾向がある。
【００４５】
一方、重量組成比（含窒素モノマー：多価ビニル化合物）において、３０：２０を超えて多価ビニル化合物の比率が多くなると、多価ビニル化合物による架橋密度が相対的に高くなって、樹脂粒子が硬くなるとともに、樹脂−金属複合体１００を標識物質として免疫学的測定を行う場合に、検出感度が低下する傾向となる。
【００４６】
［金属粒子］
金属粒子２０は、例えば、銀、ニッケル、銅、金、白金、パラジウム等が適用できる。好ましくは、視認性に優れ、抗原又は抗体の固定化が容易な金、白金及びパラジウムである。これらは、局在型表面プラズモン共鳴及び、電子遷移による光エネルギー吸収に由来する吸収を発現するため、好ましい。より好ましくは、保存安定性がよい金である。これらの金属は、単体もしくは合金等の複合体で使用することが可能である。ここで、例えば金合金としては、金と金以外の金属種からなり、金を１０重量％以上含有する合金を意味する。
【００４７】
［平均粒子径］
走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察により測長される金属粒子２０の平均粒子径（つまり、図１における粒子径Ｄ３の平均）は、例えば１〜８０ｎｍであることが好ましい。金属粒子２０の平均粒子径が、１ｎｍ未満の場合や８０ｎｍを超える場合は、局在型表面プラズモン共鳴及び、電子遷移による光エネルギー吸収が発現しにくくなるため感度が低下する傾向がある。金属粒子２０の平均粒子径は、金属粒子２０が金粒子である場合は、好ましくは、２０ｎｍ以上７０ｎｍ未満であり、より好ましくは、２２ｎｍ以上５０ｎｍ未満である。また、金属粒子２０が白金粒子である場合、その平均粒子径は、樹脂−金属複合体１００を免疫学的測定に用いる場合に高い検出感度を得る観点から、好ましくは１ｎｍ以上５０ｎｍ以下であり、より好ましくは１ｎｍ以上３０ｎｍ以下であり、さらに好ましくは１ｎｍ以上２０ｎｍ以下であり、最も好ましくは１ｎｍ以上１５ｎｍ以下である。白金粒子の平均粒子径が１５ｎｍ以下である場合、樹脂−金属複合体１００をイムノクロマトグラフの標識物質として使用する場合に特に優れた検出感度が得られる。
【００４８】
また、樹脂−金属複合体１００の平均粒子径（つまり、図１における粒子径Ｄ１の平均）は、例えば５０〜１０００ｎｍであることが好ましい。樹脂−金属複合体１００の平均粒子径が５０ｎｍ未満では、例えば、金属粒子の担持量が少なくなる傾向がある為、同サイズの金属粒子より着色が弱くなる傾向にあり、１０００ｎｍを超えると、標識物質又は試薬とした際に、メンブランフィルター等のクロマトグラフ媒体の細孔内に詰まりやすい傾向や、分散性が低下する傾向がある。樹脂−金属複合体１００の平均粒子径は、標識物質又は試薬とした際の分散性を向上させるとともに、樹脂−金属複合体１００を免疫学的測定に用いる場合に高い検出感度を得る観点から、金属粒子２０が金粒子である場合は、
好ましくは、１００ｎｍ以上７００ｎｍ未満であり、より好ましくは、３４０ｎｍ以上６５０ｎｍ未満である。金属粒子２０が白金粒子である場合は、好ましくは１００ｎｍ以上６００ｎｍ以下であり、より好ましくは２５０ｎｍ以上６００ｎｍ以下であり、最も好ましくは３００ｎｍ以上６００ｎｍ以下である。特に、樹脂−金属複合体１００の平均粒子径が３００ｎｍ以上であると、樹脂−金属複合体１００をイムノクロマトグラフの標識物質として使用する場合に安定して優れた検出感度が得られる。
ここで、樹脂−金属複合体１００の粒子径Ｄ１は、樹脂粒子１０の粒子径に、一部露出粒子４０又は表面吸着粒子５０の突出部位の長さを加えた値を意味し、レーザー回折／散乱法、動的光散乱法、又は遠心沈降法により測定することができる。
【００４９】
［樹脂−金属複合体の製造方法］
樹脂−金属複合体１００の製造方法は、特に限定されないが、例えば、乳化重合法により樹脂粒子１０を製造することができる。樹脂粒子１０の製造に際しては、試薬容器の内壁への樹脂−金属複合体１００の付着抑制と、樹脂−金属複合体１００を標識物質として免疫学的測定を行う場合の検出感度の向上とを両立させる観点から、含窒素モノマーと多価ビニル化合物との共重合体の原料モノマーである仕込み重量比率（含窒素モノマー：多価ビニル化合物）を４９：１〜３０：２０の範囲内、好ましくは４８：２〜３５：１５の範囲内、より好ましくは４８：２〜４０：１０、最も好ましくは４８：２〜４５：５の範囲内とする。
【００５０】
乳化重合は、例えば界面活性剤及び安定化剤の存在下、重合開始剤を用いて行うことが好ましい。ここで、好ましい界面活性剤としては、例えばＡｌｉｑｕａｔ  ３３６［アルドリッチ社製］、トリオクチルメチルアンモニウムクロリド、テトラブチルアンモニウムハイドロジェンスルフェート、テトラメチルアンモニウムクロリド、テトラメチルアンモニウムブロミド、ベンジルブチルアンモニウムクロリド、ベンジルトリメチルアンモニウムクロリド、ベンジルトリエチルアンモニウムクロリド、ｎ−オクチルトリメチルアンモニウムクロリド、メチルトリ−ｎ−オクチルアンモニウムクロリド、トリメチルフェニルアンモニウムクロリド、トリプロピルアンモニウムクロリド、トリメチルステアリルアンモニウムクロリドが挙げられる。また、好ましい安定化剤としては、例えばポリエチレングリコールメチルエーテルメタクリレート、ラウリルアクリレート、ステアリルアクリレート、イソステアリルアクリレート、ポリエチレングリコールメチルエチルアクリレート、ステアリルメタクリレート、イソステアリルアクリレート、ポリエチレングリコール変性ステアリルメタクリレート、メトキシポリエチレングリコールメタクリレートが挙げられる。好ましい重合開始剤としては、例えば、２，２−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）二塩酸塩、２,２’−アゾビス（イソブチロニトリル）、２,２’−アゾビス[２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン]ジヒドロクロリド、２,２’−アゾビス[２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン]ジスルフェートジヒドレート、２,２’−アゾビス[Ｎ−（２−カルボキシエチル）−２−メチルプロピオンアミジン]テトラハイドレート、２,２’−アゾビス[２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン]、２,２’−アゾビス（１−イミノ−１−ピリジノ−２−メチルプロパン）ジヒドロクロリド、２,２’−アゾビス[２−メチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）プロピオンアミド]、４,４’−アゾビス（４−シアノバレリックアシッド）が挙げられる。樹脂粒子１０の重合反応におけるｐＨは、有機化合物の乳化の観点から、例えばｐＨ５〜１０の範囲内に調節することが好ましく、反応温度は、重合開始剤の活性度の観点から、例えば３０〜９５℃の範囲内が好ましい。
【００５１】
次に、得られた樹脂粒子１０の分散液に、金属イオンを含有する溶液を加えて、金属イオンを樹脂粒子１０に吸着させる（以下、「金属イオン吸着樹脂粒子」という。）。さらに、前記金属イオン吸着樹脂粒子を還元剤溶液中に加えることで、金属イオンを還元して金属粒子２０を生成させ、樹脂−金属複合体１００を得る。
【００５２】
また、例えば、金属粒子２０として、金粒子を使用する場合、金属イオンを含有する溶液としては、塩化金酸（ＨＡｕＣｌ４）水溶液等が挙げられる。また、金イオンの代わりに金錯体を用いても良い。また、例えば白金イオンを含有する溶液としては、塩化白金酸（Ｈ２ＰｔＣｌ６）水溶液、塩化白金（ＰｔＣｌ２）溶液等が挙げられる。また、白金イオンの代わりに白金錯体を用いても良い。
【００５３】
また、金属イオンを含有する溶液の溶媒として、水の代わりに、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔ−ブタノール等の含水アルコール又はアルコール、塩酸、硫酸、硝酸等の酸等を用いても良い。
【００５４】
また、前記溶液に、必要に応じて、例えば、ポリビニルアルコール等の水溶性高分子化合物、界面活性剤、アルコール類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル等のエーテル類；アルキレングリコール、ポリアルキレングリコール、これらのモノアルキルエーテル又はジアルキルエーテル、グリセリン等のポリオール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類等の各種水混和性有機溶媒等の添加剤を添加してもよい。このような添加剤は、金属イオンの還元反応速度を促進し、また生成される金属粒子２０の大きさを制御するのに有効となる。
【００５５】
また、還元剤は、公知の物を用いることができる。例えば、水素化ホウ素ナトリウム、ジメチルアミンボラン、クエン酸、次亜リン酸ナトリウム、抱水ヒドラジン、塩酸ヒドラジン、硫酸ヒドラジン、ホルムアルデヒド、ショ糖、ブドウ糖、アスコルビン酸、エリソルビン酸、ホスフィン酸ナトリウム、ハイドロキノン、ロッシェル塩等が挙げられる。このうち、水素化ホウ素ナトリウム又は、ジメチルアミンボラン、クエン酸が好ましい。還元剤溶液には、必要に応じて界面活性剤を添加したり、溶液のｐＨを調整することができる。ｐＨ調整には、ホウ酸やリン酸等の緩衝剤、塩酸、硫酸等の酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ等を用いることができる。さらに、還元剤溶液の温度により、金属イオンの還元速度を調整することで、形成する金属粒子の粒径をコントロールすることができる。
【００５６】
また、前記金属イオン吸着樹脂粒子中の金属イオンを還元して金属粒子２０を生成させる際、前記金属イオン吸着樹脂粒子を還元剤溶液に添加しても良いし、還元剤を前記金属イオン吸着樹脂粒子に添加しても良いが、内包金属粒子３０及び一部露出金属粒子４０の生成しやすさの観点から、前者が好ましい。
【００５７】
また、樹脂−金属複合体１００の、水への分散性を保持するために、例えば、クエン酸、ポリ−Ｌ−リシン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルピリジン、ポリビニルアルコール、ＤＩＳＰＥＲＢＹＫ１９４、ＤＩＳＰＥＲＢＹＫ１８０、ＤＩＳＰＥＲＢＹＫ１８４（ビッグケミージャパン社製）等の分散剤を添加してもよい。
さらに、ホウ酸やリン酸等の緩衝剤、塩酸、硫酸等の酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリによりｐＨを調整し、分散性を保持することができる。
【００５８】
以上の構成を有する樹脂−金属複合体１００は、特に、金属粒子２０の表面に抗原又は抗体を吸着させることにより、標識物質として、例えばＥＩＡ、ＲＩＡ、ＣＬＩＡ、ＦＩＡ、ＬＩＡ、ＰＡ、ＩＣＡ、ＨＡ、ＨＩ等の免疫学的測定法に好ましく適用できる。また、特に、低濃度域（高感度領域）での目視判定性に優れた免疫学的測定用標識物質又は免疫学的測定用試薬の材料として好ましく適用できる。また、免疫学的測定用標識物質又は免疫学的測定用試薬の形態に特に限定はないが、例えば、樹脂−金属複合体１００を水もしくは、ｐＨを調整した緩衝液中に分散させた分散液として使用できる。
【００５９】
上記金属粒子２０の表面に抗原又は抗体を吸着させる方法としては特に限定せず、公知の物理吸着及び化学吸着による方法を用いることができる。例えば、抗原又は抗体を含む緩衝液中に樹脂−金属複合体１００を浸漬させ、インキュベートする等の物理吸着や、抗原又は抗体にＳＨ基を導入し、樹脂−金属複合体１００と反応させてＡｕ−ＳＨ結合を形成する等の化学吸着が挙げられる。なかでも、金属粒子２０と抗原又は抗体との結合が強固となることから化学吸着が好ましい。
【００６０】
樹脂−金属複合体１００の免疫学的測定用標識物質又は免疫学的測定用試薬以外の用途としては、固体触媒、顔料、塗料、導電性材料、電極、センサー素子として好ましく適用できる。
【００６１】
次に、樹脂−金属複合体１００を標識物質として使用したアナライトの測定方法、ラテラルフロー型クロマト用テストストリップ及びアナライト検出・定量キットについて説明する。
【００６２】
［ラテラルフロー型クロマト用テストストリップ］
まず、図３を参照しながら、本発明の一実施の形態に係るラテラルフロー型クロマト用テストストリップ（テストストリップ）について説明する。このテストストリップ２００は、後述するように、本発明の一実施の形態のアナライトの測定方法に好ましく使用できるものである。
【００６３】
テストストリップ２００は、メンブレン１１０を備えている。メンブレン１１０には、試料の展開方向において順に、試料添加部１２０、判定部１３０及び吸液部１４０が設けられている。
【００６４】
＜メンブレン＞
テストストリップ２００に使用されるメンブレン１１０としては、一般的なテストストリップにおいてメンブレン材料として使用されるものを適用可能である。メンブレン１１０は、例えば毛管現象を示し、試料を添加すると同時に、試料が展開するような微細多孔性物質からなる不活性物質（アナライト１６０、各種リガンドなどと反応しない物質）で形成されているものである。メンブレン１１０の具体例としては、ポリウレタン、ポリエステル、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニリデン、ナイロン、セルロース誘導体等で構成される繊維状又は不織繊維状マトリクス、膜、濾紙、ガラス繊維濾紙、布、綿等が挙げられる。これらの中でも、好ましくはセルロース誘導体やナイロンで構成される膜、濾紙、ガラス繊維濾紙等が用いられ、より好ましくはニトロセルロース膜、混合ニトロセルロースエステル（ニトロセルロースと酢酸セルロースの混合物）膜、ナイロン膜、濾紙が用いられる。
【００６５】
テストストリップ２００は、操作をより簡便にするため、メンブレン１１０を支持する支持体を備えていることが好ましい。支持体としては、例えばプラスチック等を用いることができる。
【００６６】
＜試料添加部＞
テストストリップ２００は、アナライト１６０を含む試料を添加するための試料添加部１２０を有していてもよい。試料添加部１２０は、テストストリップ２００に、アナライト１６０を含む試料を受け入れるための部位である。試料添加部１２０は、試料が展開する方向において、判定部１３０よりも上流側のメンブレン１１０に形成されていてもよいし、あるいは、例えばセルロース濾紙、ガラス繊維、ポリウレタン、ポリアセテート、酢酸セルロース、ナイロン、綿布などの材料で構成された試料添加パッドがメンブレン１１０に設けられて試料添加部１２０を構成していてもよい。
【００６７】
＜判定部＞
判定部１３０には、アナライト１６０と特異的に結合する捕捉リガンド１３１が固定されている。捕捉リガンド１３１は、アナライト１６０と特異的な結合を形成するものであれば特に制限なく使用でき、例えばアナライト１６０に対する抗体などを好ましく用いることができる。捕捉リガンド１３１は、テストストリップ２００に試料を提供した場合においても、判定部１３０から移動することがないように不動化している。捕捉リガンド１３１は、物理的又は化学的な結合や吸着等によって、メンブレン１１０に直接的又は間接的に固定されていればよい。
【００６８】
また、判定部１３０は、標識抗体１５０とアナライト１６０とを含む複合体１７０が、アナライト１６０と特異的に結合する捕捉リガンド１３１に接触するような構成である限り特に限定されない。例えば、メンブレン１１０に、直接、捕捉リガンド１３１が固定されていてもよいし、あるいは、メンブレン１１０に固定されたセルロース濾紙、グラスファイバー、不織布等からなるパッドに捕捉リガンド１３１が固定されていてもよい。
【００６９】
＜吸液部＞
吸液部１４０は、例えば、セルロ−ス濾紙、不織布、布、セルロースアセテート等の吸水性材料のパッドにより形成される。添加された試料の展開前線（フロントライン）が吸液部１４０に届いてからの試料の移動速度は、吸液部１４０の材質、大きさなどにより異なるものとなる。従って、吸液部１４０の材質、大きさなどの選定により、アナライト１６０の検出・定量に最適な速度を設定することができる。なお、吸液部１４０は任意の構成であり、省略してもよい。
【００７０】
テストストリップ２００は、必要に応じて、さらに、反応部、コントロール部等の任意の部位を含んでいてもよい。
【００７１】
＜反応部＞
図示は省略するが、テストストリップ２００には、メンブレン１１０に、標識抗体１５０を含む反応部が形成されていてもよい。反応部は、試料が流れる方向において、判定部１３０よりも上流側に設けることができる。なお、図３における試料添加部１２０を反応部として利用してもよい。テストストリップ２００が反応部を有する場合、アナライト１６０を含む試料を、反応部又は試料添加部１２０に供すると、反応部において、試料に含まれるアナライト１６０と標識抗体１５０とを接触させることができる。この場合、試料を、単に反応部又は試料添加部１２０に供することで、アナライト１６０と標識抗体１５０とを含む複合体１７０を形成させることができるので、いわゆる１ステップ型のイムノクロマトグラフが可能になる。
【００７２】
反応部は、アナライト１６０と特異的に結合する標識抗体１５０を含む限り特に限定されないが、メンブレン１１０に、直接、標識抗体１５０が塗布されてなるものであってもよい。あるいは、反応部は、例えばセルロース濾紙、グラスファイバー、不織布等からなるパッド（コンジュゲートパッド）に標識抗体１５０を含浸したものを、メンブレン１１０に固定してなるものであってもよい。
【００７３】
＜コントロール部＞
図示は省略するが、テストストリップ２００は、メンブレン１１０に、試料が展開する方向において、標識抗体１５０と特異的に結合する捕捉リガンドが固定されてなるコントロール部が形成されていてもよい。判定部１３０とともに、コントロール部でも発色強度が測定されることにより、テストストリップ２００に供した試料が展開して、反応部及び判定部１３０に到達し、検査が正常に行われたことを確認することができる。なお、コントロール部は、捕捉リガンド１３１の代わりに、標識抗体１５０と特異的に結合する別の種類の捕捉リガンドを用いることを除いては、上述の判定部１３０と同様にして作製され、同様の構成を採ることができる。
【００７４】
［アナライトの測定方法］
次に、テストストリップ２００を用いて行われる本発明の一実施の形態のアナライト１６０の測定方法について説明する。
【００７５】
本実施の形態のアナライト１６０の測定方法は、試料中に含まれるアナライト１６０を検出又は定量するアナライト１６０の測定方法である。実施の形態のアナライト１６０の測定方法は、メンブレン１１０、及び当該メンブレン１１０にアナライト１６０と特異的に結合する捕捉リガンド１３１が固定されてなる判定部１３０を含むテストストリップ２００を用い、下記工程(I)〜(III)；
工程(I)：試料に含まれる前記アナライト１６０と、該アナライト１６０に特異的に結合する抗体を、樹脂粒子１０に複数の金属粒子２０が固定化された構造を有する樹脂−金属複合体１００で標識した標識抗体１５０と、を接触させる工程、
工程(II)：判定部１３０にて、工程(I)において形成された、アナライト１６０と標識抗体１５０とを含む複合体を、捕捉リガンド１３１に接触させる工程、
工程(III)：樹脂−金属複合体１００の局在型表面プラズモン共鳴及び、電子遷移による光エネルギー吸収に由来する発色強度を測定する工程、
を含むことができる。
【００７６】
工程(I)：
工程(I)は、試料に含まれるアナライト１６０を、標識抗体１５０に接触させる工程である。アナライト１６０と標識抗体１５０とを含む複合体１７０を形成する限り、接触の態様は特に限定されるものではない。例えば、テストストリップ２００の試料添加部１２０又は反応部（図示省略）に試料を供し、当該反応部においてアナライト１６０を標識抗体１５０に接触させてもよいし、テストストリップ２００に試料を供する前に、試料中のアナライト１６０を標識抗体１５０に接触させてもよい。
【００７７】
工程(I)で形成された複合体１７０は、テストストリップ２００上で展開して移動し、判定部１３０に至る。
【００７８】
工程(II)：
工程(II)は、テストストリップ２００の判定部１３０において、工程(I)において形成された、アナライト１６０と標識抗体１５０とを含む複合体１７０を、捕捉リガンド１３１に接触させる。複合体１７０を、捕捉リガンド１３１に接触させると、捕捉リガンド１３１は、複合体１７０のアナライト１６０に特異的に結合する。その結果、複合体１７０が判定部１３０において捕捉される。
【００７９】
なお、捕捉リガンド１３１は、標識抗体１５０には特異的に結合しないために、アナライト１６０と未結合の標識抗体１５０が判定部１３０に到達した場合、当該アナライト１６０と未結合の標識抗体１５０は、判定部１３０を通過する。ここで、テストストリップ２００に、標識抗体１５０に特異的に結合する別の捕捉リガンドが固定されたコントロール部（図示省略）が形成されている場合、判定部１３０を通過した標識抗体１５０は、展開を続け、コントロール部で当該別の捕捉リガンドと結合する。その結果、アナライト１６０と複合体１７０を形成していない標識抗体１５０は、コントロール部で捕捉される。
【００８０】
工程(II)の後、必要に応じて工程(III)の前に、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝液等の生化学検査で汎用される緩衝液で、テストストリップ２００を洗浄する洗浄工程を実施してもよい。洗浄工程によって、判定部１３０、又は、判定部１３０及びコントロール部に捕捉されなかった標識抗体１５０（アナライト１６０と結合しておらず、複合体１７０を形成していない標識抗体１５０）を除去することができる。
【００８１】
洗浄工程を実施することで、工程(III)において、判定部１３０、又は、判定部１３０及びコントロール部における樹脂−金属複合体１００の局在型表面プラズモン共鳴及び、電子遷移による光エネルギー吸収による発色を測定する際に、バックグラウンドの発色強度を低減させることができ、シグナル／バックグラウンド比を高め、一層、検出感度や定量性を向上させることができる。
【００８２】
工程(III)：
工程(III)は、樹脂−金属複合体１００の局在型表面プラズモン共鳴及び、電子遷移による光エネルギー吸収に由来する発色強度を測定する工程である。上記工程(II)又は必要に応じて洗浄工程を実施した後、テストストリップ２００において、樹脂−金属複合体１００の局在型表面プラズモン共鳴及び、電子遷移による光エネルギー吸収に由来する発色強度を測定する。
【００８３】
なお、テストストリップ２００にコントロール部が形成されている場合、工程(II)によって、コントロール部にて、標識抗体１５０が別の捕捉リガンドによって捕捉され複合体が形成される。そのため、工程(III)では、テストストリップ２００おいて、判定部１３０だけでなく、コントロール部においても局在型表面プラズモン共鳴及び、電子遷移による光エネルギー吸収による発色を生じさせることができる。このように、判定部１３０とともにコントロール部においても発色強度を測定することで、テストストリップ２００に供した試料が正常に展開して、反応部及び判定部１３０に到達したか否かを確認できる。
【００８４】
＜試料及びアナライト＞
本実施の形態のアナライトの測定方法における試料は、アナライト１６０として、蛋白質などの抗原となり得る物質を含むものである限り特に限定されるものではない。例えば、目的のアナライト１６０を含む生体試料（すなわち、全血、血清、血漿、尿、唾液、喀痰、鼻腔又は咽頭拭い液、髄液、羊水、乳頭分泌液、涙、汗、皮膚からの浸出液、組織や細胞及び便からの抽出液等）や食品の抽出液等が挙げられる。必要に応じて、標識抗体１５０及び捕捉リガンド１３１とアナライト１６０との特異的な結合反応が生じやすくするために、上記工程(I)に先立って、試料に含まれるアナライト１６０を前処理してもよい。ここで、前処理としては、酸、塩基、界面活性剤等の各種化学薬品等を用いた化学的処理や、加熱・撹拌・超音波等を用いた物理的処理が挙げられる。特に、アナライト１６０がインフルエンザウィルスＮＰ抗原等の、通常は表面に露出していない物質である場合、界面活性剤等による処理を行うことが好ましい。この目的に使用される界面活性剤として、特異的な結合反応、例えば、抗原抗体反応等のリガンドとアナライト１６０との結合反応性を考慮して、非イオン性界面活性剤を用いることができる。
【００８５】
また、前記試料は、通常の免疫学的分析法で用いられる溶媒（水、生理食塩水、又は緩衝液等）や水混和有機溶媒で適宜希釈されていてもよい。
【００８６】
前記アナライト１６０としては、例えば、腫瘍マーカー、シグナル伝達物質、ホルモン等のタンパク質（ポリペプチド、オリゴペプチド等を含む）、核酸（一本鎖又は二本鎖の、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ＰＮＡ（ペプチド核酸）等を含む）又は核酸を有する物質、糖（オリゴ糖、多糖類、糖鎖等を含む）又は糖鎖を有する物質、脂質などその他の分子が挙げられ、標識抗体１５０及び捕捉リガンド１３１に特異的に結合するものである限り特に限定されないが、例えば、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＨＥＲ２タンパク、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ＣＡ１９−９、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、免疫抑制酸性タンパク（ＩＡＰ）、ＣＡ１５−３、ＣＡ１２５、エストロゲンレセプター、プロゲステロンレセプター、便潜血、トロポニンＩ、トロポニンＴ、ＣＫ−ＭＢ、ＣＲＰ、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、梅毒抗体、インフルエンザウィルス、ヒトヘモグロビン、クラミジア抗原、Ａ群β溶連菌抗原、ＨＢｓ抗体、ＨＢｓ抗原、ロタウイルス、アデノウイルス、アルブミン、糖化アルブミン等が挙げられる。これらの中でも非イオン性界面活性剤により可溶化される抗原が好ましく、ウィルスの核タンパク質のように自己集合体を形成する抗原がより好ましい。
【００８７】
＜標識抗体＞
標識抗体１５０は、工程(I)において、試料に含まれるアナライト１６０に接触させて、アナライト１６０と標識抗体１５０とを含む複合体１７０を形成するために使用される。標識抗体１５０は、アナライト１６０に特異的に結合する抗体を、樹脂粒子１０に複数の金属粒子２０が固定化された構造を有する樹脂−金属複合体１００で標識化してなるものである。ここで、「標識化」とは、工程(I)〜(III)において、標識抗体１５０から樹脂−金属複合体１００が脱離しない程度に、抗体に樹脂−金属複合体１００が直接的に又は間接的に、化学的又は物理的な結合や吸着等で固定されていることを意味する。例えば、標識抗体１５０は、抗体に樹脂−金属複合体１００が直接結合してなるものであってもよいし、抗体と樹脂−金属複合体１００とが、任意のリンカー分子を介して結合してなるものや、それぞれが不溶性粒子に固定されてなるものであってもよい。
【００８８】
また、本実施の形態において、「抗体」としては、特に制限はなく、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、遺伝子組み換えにより得られた抗体のほか、抗原と結合能を有する抗体断片［例えば、Ｈ鎖、Ｌ鎖、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２等］などを用いることができる。また、免疫グロブリンとして、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤのいずれでもよい。抗体の産生動物種としては、ヒトをはじめ、ヒト以外の動物（例えばマウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ウマ等）でもよい。抗体の具体例としては、抗ＰＳＡ抗体、抗ＡＦＰ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗アデノウイルス抗体、抗インフルエンザウィルス抗体、抗ＨＣＶ抗体、抗ＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＥ抗体等が挙げられる。
【００８９】
＜標識抗体の好ましい作製方法＞
次に、標識抗体１５０の好ましい作製方法を挙げて説明する。標識抗体１５０の製造は、少なくとも、次の工程Ａ；
工程Ａ）樹脂−金属複合体１００を第１のｐＨ条件で抗体と混合して結合させることによって、標識抗体１５０を得る工程
を含み、好ましくは、さらに工程Ｂ； 
工程Ｂ）標識抗体１５０を第２のｐＨ条件で処理する工程
を含むことができる。
【００９０】
［工程Ａ］
工程Ａでは、樹脂−金属複合体１００を第１のｐＨ条件で抗体と混合して標識抗体１５０を得る。工程Ａは、固体状の樹脂−金属複合体１００を液相中に分散させた状態で抗体と接触させることが好ましい。第１のｐＨ条件は、樹脂−金属複合体１００における金属粒子２０の金属種によって異なる。
【００９１】
樹脂−金属複合体１００の金属粒子２０が金粒子（金合金粒子を含む；以下同様である）である場合には、第１のｐＨ条件は、抗体との結合は、樹脂−金属複合体１００の分散と抗体の活性を維持したまま樹脂−金属複合体１００と抗体を均一に接触させる観点から、ｐＨ２〜７の範囲内の条件が好ましく、さらに酸性条件、例えばｐＨ２．５〜５．５の範囲内がより好ましい。金属粒子２０が金粒子である場合、樹脂−金属複合体１００と抗体とを結合させるときの条件が、ｐＨ２未満では強酸性により抗体が変質し失活する場合があり、ｐＨ７を超えると樹脂−金属複合体１００と抗体を混合した際に凝集し分散が困難となる。ただし、強酸性により抗体が失活しない場合はｐＨ２未満においても処理が可能である。
【００９２】
また、樹脂−金属複合体１００の金属粒子２０が金以外の粒子、例えば白金、パラジウム又はそれらの合金等である場合には、第１のｐＨ条件は、抗体との結合は、樹脂−金属複合体１００の分散と抗体の活性を維持したまま樹脂−金属複合体１００と抗体を均一に接触させる観点から、ｐＨ２〜１０の範囲内の条件が好ましく、さらに例えばｐＨ５〜９の範囲内がより好ましい。金属粒子２０が金以外の粒子である場合、樹脂−金属複合体１００と抗体とを結合させるときの条件が、ｐＨ２未満では強酸性により抗体が変質し失活する場合があり、ｐＨ１０を超えると樹脂−金属複合体１００と抗体を混合した際に凝集し分散が困難となる。ただし、強酸性により抗体が失活しない場合はｐＨ２未満においても処理が可能である。
【００９３】
工程Ａは、第１のｐＨ条件に調整した結合用緩衝液（Binding  Buffer）中で行うことが好ましい。例えば、上記ｐＨに調整した結合用緩衝液に所定量の樹脂−金属複合体１００を混合し、十分に混和する。結合用緩衝液としては、例えば、所定濃度に調整したホウ酸溶液などを用いることができる。結合用緩衝液のｐＨの調整は、例えば塩酸、水酸化ナトリウムなどを用いて行うことができる。
【００９４】
次に、得られた混合液に、所定量の抗体を添加し、十分に撹拌、混合することによって、標識抗体含有液を得ることができる。このようにして得られた標識抗体含有液は、例えば遠心分離などの固液分離手段により、固形部分として標識抗体１５０のみを分取できる。
【００９５】
［工程Ｂ］
工程Ｂでは、工程Ａで得られた標識抗体１５０を第２のｐＨ条件で処理することによって、標識抗体１５０への非特異的な吸着を抑制するブロッキングを行う。この場合、固液分離手段によって分取しておいた標識抗体１５０を、第２のｐＨ条件で液相中に分散させる。このブロッキングの条件は、樹脂−金属複合体１００における金属粒子２０の金属種によって異なる。
【００９６】
樹脂−金属複合体１００の金属粒子２０が金粒子である場合には、第２のｐＨ条件は、抗体の活性を保ちかつ標識抗体１５０の凝集を抑制する観点から、例えばｐＨ２〜９の範囲内が好ましく、標識抗体１５０の非特異的な吸着を抑制する観点から、さらに酸性条件、例えばｐＨ２〜６の範囲内がより好ましい。ブロッキングの条件が、ｐＨ２未満では強酸性により抗体が変質し失活する場合があり、ｐＨ９を超えると標識抗体１５０が凝集してしまい分散が困難となる。
【００９７】
また、樹脂−金属複合体１００の金属粒子２０が金以外の粒子である場合には、第２のｐＨ条件は、抗体の活性を保ちかつ標識抗体１５０の凝集を抑制する観点から、例えばｐＨ２〜１０の範囲内が好ましく、標識抗体１５０の非特異的な吸着を抑制する観点から、ｐＨ５〜９の範囲内がより好ましい。ブロッキングの条件が、ｐＨ２未満では強酸性により抗体が変質し失活する場合があり、ｐＨ１０を超えると標識抗体１５０が凝集してしまい分散が困難となる。
【００９８】
工程Ｂは、第２のｐＨ条件に調整したブロック用緩衝液（Blocking  Buffer）を用いて行うことが好ましい。例えば、所定量の標識抗体１５０に上記ｐＨに調整したブロック用緩衝液を添加し、ブロック用緩衝液中で標識抗体１５０を均一に分散させる。ブロック用緩衝液としては、例えば、被検出物と結合しない蛋白質の溶液を用いることが好ましい。ブロック用緩衝液に使用可能な蛋白質としては、例えば牛血清アルブミン、卵白アルブミン、カゼイン、ゼラチンなどを挙げることができる。より具体的には、所定濃度に調整した牛血清アルブミン溶液などを用いることが好ましい。ブロック用緩衝液のｐＨの調整は、例えば塩酸、水酸化ナトリウムなどを用いて行うことができる。標識抗体１５０の分散には、例えば超音波処理などの分散手段を用いることが好ましい。このようにして標識抗体１５０が均一分散した分散液が得られる。
【００９９】
以上のようにして、標識抗体１５０の分散液が得られる。この分散液から、例えば遠心分離などの固液分離手段により、固形部分として標識抗体１５０のみを分取できる。また、必要に応じて、洗浄処理、保存処理などを実施することができる。以下、洗浄処理、保存処理について説明する。
【０１００】
（洗浄処理）
洗浄処理は、固液分離手段によって分取した標識抗体１５０に洗浄用緩衝液を添加し、洗浄用緩衝液中で標識抗体１５０を均一に分散させる。分散には、例えば超音波処理などの分散手段を用いることが好ましい。洗浄用緩衝液としては、特に限定されるものではないが、例えばｐＨ８〜９の範囲内に調整した所定濃度の、トリス（Ｔｒｉｓ）緩衝液、グリシンアミド緩衝液、アルギニン緩衝液などを用いることができる。洗浄用緩衝液のｐＨの調整は、例えば塩酸、水酸化ナトリウムなどを用いて行うことができる。標識抗体１５０の洗浄処理は、必要に応じて複数回を繰り返し行うことができる。
【０１０１】
（保存処理）
保存処理は、固液分離手段によって分取した標識抗体１５０に保存用緩衝液を添加し、保存用緩衝液中で標識抗体１５０を均一に分散させる。分散には、例えば超音波処理などの分散手段を用いることが好ましい。保存用緩衝液としては、例えば、洗浄用緩衝液に、所定濃度の凝集防止剤及び／又は安定剤を添加した溶液などを用いることができる。凝集防止剤としては、例えば、スクロース、マルトース、ラクトース、トレハロースに代表される糖類や、グリセリン、ポリビニルアルコールに代表される多価アルコールなどを用いることができる。安定剤としては、特に限定されるものではないが、例えば牛血清アルブミン、卵白アルブミン、カゼイン、ゼラチンなどの蛋白質を用いることができる。このようにして標識抗体１５０の保存処理を行うことができる。
【０１０２】
以上の各工程では、さらに必要に応じて、界面活性剤や、アジ化ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステルなどの防腐剤を用いることができる。
【０１０３】
［アナライト検出・定量キット］
本発明の一実施の形態に係るアナライト測定用キットは、例えばラテラルフロー型クロマト用テストストリップ２００を用いて、本実施の形態のアナライトの測定方法に基づき、試料中に含まれるアナライト１６０の検出又は定量するためのキットである。
【０１０４】
本実施の形態のキットは、
メンブレン１１０と、
メンブレン１１０に、前記アナライト１６０と特異的に結合する捕捉リガンドが固定されてなる判定部１３０を含むラテラルフロー型クロマト用テストストリップ２００と、
アナライト１６０に特異的に結合する抗体を樹脂粒子１０に複数の金属粒子２０が固定化された構造を有する樹脂−金属複合体１００で標識した標識抗体１５０を含む検出試薬と、
を含んでいる。本実施の形態のキットは、必要に応じて、さらにその他の構成要素を含むものであってもよい。
【０１０５】
本発明に係るキットを使用するにあたっては、試料中のアナライト１６０と検出試薬中の標識抗体１５０とを接触させて工程(I)を実施した後、テストストリップ２００の反応部又は試料添加部１２０に試料を供して、工程(II)、工程(III)を順次実施してもよい。あるいは、テストストリップ２００の判定部１３０よりも上流側に、検出試薬を塗布して、適宜乾燥させて反応部を形成した後、形成された反応部あるいは該反応部よりも上流側の位置（例えば、試料添加部１２０）に試料を添加して、工程(I)〜(III)を順次実施してもよい。
【実施例】
【０１０６】
次に、本発明を実施例によって具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によって何ら限定されるものではない。以下の実施例、比較例において特にことわりのない限り、各種測定、評価は下記によるものである。
【０１０７】
＜樹脂−金属複合体の吸光度測定＞
樹脂−金属複合体の吸光度は、光学用白板ガラス製セル（光路長１０ｍｍ）に０．０１ｗｔ％に調製した樹脂−金属複合体分散液（分散媒：水）を入れ、瞬間マルチ測光システム（大塚電子社製、ＭＣＰＤ−３７００）を用いて、金の場合５７０ｎｍ、白金の場合４００ｎｍの吸光度を測定した。
【０１０８】
＜固形分濃度測定及び金属担持量の測定＞
磁製るつぼに濃度調整前の樹脂−金属複合体分散液１ｇを入れ、７０℃、３時間熱処理を行った。熱処理前後の重量を測定し、下記式により固形分濃度を算出した。
【０１０９】
固形分濃度（ｗｔ％）＝［乾燥後の重量（ｇ）／  乾燥前の重量（ｇ）］×１００
【０１１０】
また、上記熱処理後のサンプルを、さらに５００℃、５時間加熱処理を行い、加熱処理前後の重量を測定し、下記式より金属担持量を算出した。
金属担持量（ｗｔ％）＝
［５００℃加熱処理後の重量（ｇ）／５００℃加熱処理前の重量（ｇ）］×１００
【０１１１】
＜樹脂粒子及び樹脂−金属複合体の平均粒子径の測定＞
ディスク遠心式粒度分布測定装置（CPS  Disc  Centrifuge  DC24000  UHR、CPS  instruments,  Inc.社製）を用いて測定した。測定は、樹脂−金属複合体を水に分散させた状態で行った。
【０１１２】
＜金属粒子の平均粒子径の測定＞
樹脂−金属複合体分散液をカーボン支持膜付き金属性メッシュへ滴下して作成した基板を、電界放出形走査電子顕微鏡（ＦＥ−ＳＥＭ；日立ハイテクノロジーズ社製、ＳＵ−９０００）により観測した画像から、任意の１００個の金属粒子の面積平均径を測定した。
＜イムノクロマトグラフによる評価＞
各実施例等で作製した樹脂−金属複合体標識抗体分散液を用いて、下記に示すイムノクロマト法での測定を行い、樹脂−金属複合体の性能を評価した。
（評価方法）
評価は、インフルエンザＡ型評価用モノクロスクリーン（アドテック社製）を用い、５分後、１０分後、１５分後の発色レベルを比較した。性能評価において、抗原はインフルエンザＡ型陽性コントロール（ＡＰＣ）の２倍希釈列（１倍〜１０２４倍）を用いた（ＡＰＣ希釈前のウィルスの濃度は５０００ＦＦＵ／ｍｌ）。
（評価手順）
９６ウェルプレートの各ウェルに、樹脂−金属複合体標識抗体分散液を３μｌずつ入れ、ＡＰＣの２倍希釈列（１倍〜１０２４倍）及び陰性コントロールを、それぞれ１００μｌ混和した。次に、インフルエンザＡ型評価用モノクロスクリーンに、この混和した分散液を５０μｌ添加し、５分後、１０分後、１５分後の発色レベルを評価した。１５分後の発色レベルが０．５以上のものを「良好」と判定した。発色レベルは、金コロイド判定用色見本（アドテック社製）を用いて判定した。
【０１１３】
［実施例１］
＜樹脂粒子の合成＞
トリオクチルアンモニウムクロリド（１．２０ｇ）及びポリエチレングリコールメチルエーテルメタクリレート（１０．００ｇ）を３００ｇの純水に溶解した後、２−ビニルピリジン（４０．００ｇ）及びジビニルベンゼン（１０．００ｇ）を加え、窒素気流下において１５０ｒｐｍ、３０℃で５０分、次いで６０℃で３０分間撹拌した。撹拌後、１８．００ｇの純水に溶解した２，２−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）二塩酸塩（０．２５０ｇ）を約２分かけて滴下し、１５０ｒｐｍ、６０℃で３．５時間撹拌することで、平均粒子径３０７ｎｍの樹脂粒子Ａ−１を得た。遠心分離（９０００ｒｐｍ、４０分）により沈殿させ、上澄みを除去した後、純水に再度分散させる操作を３回行った後、透析処理により不純物を除去した。その後、濃度調整を行い１０ｗｔ％の樹脂粒子分散液Ｂ−１を得た。
【０１１４】
＜樹脂−金複合体の合成＞
実施例１で作製した１０ｗｔ％樹脂粒子分散液Ｂ−１（４．５７ｇ）に純水１１．２５ｇを加えた後、４００ｍＭ塩化金酸水溶液（７．３４ｇ）を加え、室温で３時間撹拌した。この混合液を２４時間静置させた後、遠心分離（８０００ｒｐｍ、２０分）により樹脂粒子Ａ−１を沈殿させ、上澄みを除去する作業を３回繰り返すことで余分な塩化金酸を除去した。その後、濃度調整を行い、２．５ｗｔ％金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−１を調製した。
【０１１５】
次に、純水１５８ｇに前記２．５ｗｔ％金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−１（４．３３ｇ）を加え、１５０ｒｐｍ、３℃で撹拌しながら、５２８ｍＭのジメチルアミンボラン水溶液（１．０ｇ）を２分かけて滴下した後、３℃で３時間、室温で２時間撹拌することで、平均粒子径３１０ｎｍの樹脂−金複合体Ｄ−１を得た。樹脂−金複合体Ｄ−１を遠心分離（８０００ｒｐｍ、１０分）により沈殿させ、上澄みを除去した後、１４０ｇの純水に再度分散させる作業を３回繰り返した後、透析処理により精製し、濃度調整することで１ｗｔ％の樹脂−金複合体分散液Ｅ−１を得た。樹脂−金複合体分散液Ｅ−１中の樹脂−金複合体Ｆ−１の吸光度は上記方法に従って測定した結果、１．０７であった。また、Ｆ−１における金粒子の平均粒子径は２２．７ｎｍ、金の担持量は４９．５ｗｔ％であった。
【０１１６】
＜イムノクロマトの評価＞
得られた樹脂−金複合体分散液Ｅ−１の１ｍｌ（０．１ｗｔ％）にインフルエンザ抗体を１００μｇ混合し、室温で約３時間攪拌して樹脂−金複合体Ｆ−１に抗体を結合させた。終濃度が１％となるように牛血清アルブミン溶液を添加し、室温にて２時間攪拌して樹脂−金複合体Ｆ−１表面をブロックした。１２０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離を行って回収し、０．２％牛血清アルブミンを含む緩衝液に懸濁して樹脂−金複合体標識抗体分散液Ｇ−１を作製した。
【０１１７】
作製した樹脂−金複合体標識抗体分散液Ｇ−１を用いて、イムノクロマト法での測定を行って当該樹脂−金複合体分散液Ｅ−１の性能を評価した。その結果を表１に示した。
【０１１８】
【表１】
0006761246.tif 000002
【０１１９】
上記表１から、樹脂−金複合体標識抗体分散液Ｇ−１は、６４倍希釈の抗原に対して、１５分後の発色レベルが０．５以上となり、良好な発色を示すことが確認された。
【０１２０】
［実施例２］
＜樹脂−白金複合体の合成＞
実施例１で作製した１０ｗｔ％樹脂粒子分散液Ｂ−１（４．５７ｇ）に純水１４ｇを加えた後、４００ｍＭ塩化白金酸水溶液（５．００ｇ）を加え、室温で３時間撹拌した。その後、２４時間静置させた後、遠心分離（８０００ｒｐｍ、２０分）により樹脂粒子Ａ−１を沈殿させ、上澄みを除去する作業を３回繰り返すことで余分な塩化白金酸を除去した。その後、濃度調整を行い、５ｗｔ％白金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−２を調製した。
【０１２１】
次に、純水１３９ｇに５ｗｔ％白金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−２（２．０６ｇ）を加え、１５０ｒｐｍ、３℃で撹拌しながら、１３２ｍＭのジメチルアミンボラン水溶液（４ｇ）を２０分かけて滴下した後、３℃で３時間、室温で２時間撹拌することで、平均粒子径３１０ｎｍの樹脂−白金複合体Ｄ−２を得た。樹脂−白金複合体Ｄ−２を遠心分離（８０００ｒｐｍ、１０分）により沈殿させ、上澄みを除去した後、１４０ｇの純水に再度分散させる作業を３回繰り返した後、透析処理により精製し、濃度調整することで１ｗｔ％の樹脂−白金複合体分散液Ｅ−２を得た。樹脂−白金複合体分散液Ｅ−２中の樹脂−白金複合体Ｆ−２の吸光度は上記方法に従って測定した結果、１．６２であった。また、樹脂−白金複合体Ｆ−２における白金粒子の平均粒子径は５．０ｎｍ未満、白金の担持量は３３．５ｗｔ％であった。
【０１２２】
＜イムノクロマトの評価＞
得られた樹脂―白金複合体分散液Ｅ−２の１ｍｌ（０．１ｗｔ％）にインフルエンザ抗体を１００μｇ混合し、室温で約３時間攪拌して樹脂−白金複合体Ｆ−２に抗体を結合させた。終濃度が１％となるように牛血清アルブミン溶液を添加し、室温にて２時間攪拌して樹脂−白金複合体Ｆ−２の表面をブロックした。１２０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離を行って回収し、０．２％牛血清アルブミンを含む緩衝液に懸濁して樹脂−白金複合体標識抗体分散液Ｇ−２を作製した。
【０１２３】
作製した樹脂−白金複合体標識抗体分散液Ｇ−２を用いて、イムノクロマト法での測定を行って当該樹脂−白金複合体分散液Ｅ−２の性能を評価した。その結果を表２に示した。
【０１２４】
【表２】
0006761246.tif 000003
【０１２５】
上記表２から、樹脂−白金複合体標識抗体分散液Ｇ−２は、１２８倍希釈の抗原に対して、１５分後の発色レベルが０．５以上となり、良好な発色を示すことが確認された。
【０１２６】
［実施例３］
トリオクチルアンモニウムクロリド（１．２０ｇ）及びポリエチレングリコールメチルエーテルメタクリレート（１０．００ｇ）を３００ｇの純水に溶解した後、２−ビニルピリジン（４８．００ｇ）及びジビニルベンゼン（２．００ｇ）を加え、窒素気流下において１５０ｒｐｍ、３０℃で５０分、次いで６０℃で３０分間撹拌した。撹拌後、１８．００ｇの純水に溶解した２，２−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）二塩酸塩（０．２５０ｇ）を約２分かけて滴下し、１５０ｒｐｍ、６０℃で３．５時間撹拌することで、平均粒子径３６１ｎｍの樹脂粒子Ａ−３を得た。遠心分離（９０００ｒｐｍ、４０分）により沈殿させ、上澄みを除去した後、純水に再度分散させる操作を３回行った後、透析処理により不純物を除去した。その後、濃度調整を行い１０ｗｔ％の樹脂粒子分散液Ｂ−３を得た。
＜樹脂−金複合体の合成＞
実施例３で作製した１０ｗｔ％樹脂粒子分散液Ｂ−３（９２．０ｇ）に純水２５５ｇを加えた後、４００ｍＭ塩化金酸水溶液（１４７ｇ）を加え、室温で３時間撹拌した。この混合液を２４時間静置した後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、３０分）により樹脂粒子Ａ−３を沈殿させ、上澄みを除去する作業を３回繰り返すことで余分な塩化金酸を除去した。その後、濃度調整を行い、２．５ｗｔ％金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−３を調製した。
【０１２７】
次に、純水１５８０ｇに前記２．５ｗｔ％金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−３（４３．３ｇ）を加え、１５０ｒｐｍ、３℃で撹拌しながら、５２８ｍＭのジメチルアミンボラン水溶液（１０．０ｇ）を２分かけて滴下した後、３℃で３時間、室温で２時間撹拌することで、平均粒子径３６５ｎｍの樹脂−金複合体Ｄ−３を得た。樹脂−金複合体Ｄ−３を遠心分離（３０００ｒｐｍ、３０分）により沈殿させ、上澄みを除去した後、１６２０ｇの純水に再度分散させる作業を３回繰り返した後、透析処理により精製し、濃度調整することで１ｗｔ％の樹脂−金複合体分散液Ｅ−３を得た。樹脂−金複合体分散液Ｅ−３中の樹脂−金複合体Ｆ−３の吸光度は上記方法に従って測定した結果、０．９６であった。また、樹脂−金複合体Ｆ−３における金粒子の平均粒子径は２３．１ｎｍ、金の担持量は５４．１ｗｔ％であった。この樹脂−金複合体Ｆ−３において、金粒子は、樹脂粒子に完全に内包された内包金粒子と、樹脂粒子内に埋包された部位及び樹脂粒子外に露出した部位を有する一部露出金粒子と、樹脂粒子の表面に吸着している表面吸着金粒子と、を含んでおり、少なくとも一部の金粒子が、樹脂粒子の表層部において三次元的に分布していた。なお、金粒子は表層部に１００％存在していた。
【０１２８】
＜イムノクロマトの評価＞
得られた樹脂―金複合体分散液Ｅ−３の１ｍｌ（０．１ｗｔ％）にインフルエンザ抗体を１００μｇ混合し、室温で約３時間攪拌して樹脂−金複合体Ｆ−３に抗体を結合させた。終濃度が１％となるように牛血清アルブミン溶液を添加し、室温にて２時間攪拌して樹脂−金複合体Ｆ−３表面をブロックした。１２０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離を行って回収し、０．２％牛血清アルブミンを含む緩衝液に懸濁して樹脂−金複合体標識抗体分散液Ｇ−３を作製した。
【０１２９】
作製した樹脂−金複合体標識抗体分散液Ｇ−３を用いて、イムノクロマト法での測定を行って当該樹脂−金複合体分散液Ｅ−３の性能を評価した。その結果を表３に示した。
【０１３０】
【表３】
0006761246.tif 000004
【０１３１】
上記表３から、樹脂−金複合体標識抗体分散液Ｇ−３は、２５６倍希釈の抗原に対して、１５分後の発色レベルが０．５以上となり、良好な発色を示すことが確認された。
【０１３２】
［実施例４］
＜樹脂−白金複合体の合成＞
実施例３で作製した１０ｗｔ％樹脂粒子分散液Ｂ−３（１８．２ｇ）に純水５４ｇを加えた後、４００ｍＭ塩化白金酸水溶液（２０ｇ）を加え、３０℃で３時間撹拌した。この混合液を２４時間静置した後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、３０分）により樹脂粒子Ａ−３を沈殿させ、上澄みを除去する作業を３回繰り返すことで余分な塩化白金酸を除去した。その後、濃度調整を行い、５ｗｔ％白金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−４を調製した。
【０１３３】
次に、純水１３９２ｇに５ｗｔ％白金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−４（２０．６ｇ）を加え、１５０ｒｐｍ、３℃で撹拌しながら、１３２ｍＭのジメチルアミンボラン水溶液（４０ｇ）を２０分かけて滴下した後、３℃で３時間、室温で２時間撹拌することで、平均粒子径３６９ｎｍの樹脂−白金複合体Ｄ−４を得た。樹脂−白金複合体Ｄ−４を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分）により沈殿させ、上澄みを除去した後、１４００ｇの純水に再度分散させる作業を３回繰り返した後、透析処理により精製し、濃度調整することで１ｗｔ％の樹脂−白金複合体分散液Ｅ−４を得た。樹脂−白金複合体分散液Ｅ−４中の樹脂−白金複合体Ｆ−４の吸光度は上記方法に従って測定した結果、１．６１であった。また、樹脂−白金複合体Ｆ−４における白金粒子の平均粒子径は５．０ｎｍ未満、白金の担持量は４０．０ｗｔ％であった。
【０１３４】
＜イムノクロマトの評価＞
実施例２と同様の操作を行い、樹脂−白金複合体標識抗体分散液Ｇ−４を作製した。
【０１３５】
作製した樹脂−白金複合体標識抗体分散液Ｇ−４を用いて、イムノクロマト法での測定を行って当該樹脂−白金複合体分散液Ｅ−４の性能を評価した。その結果を表４に示した。
【０１３６】
【表４】
0006761246.tif 000005
【０１３７】
上記表４から、樹脂−白金複合体標識抗体分散液Ｇ−４は、５１２倍希釈の抗原に対して、１５分後の発色レベルが０．５以上となり、良好な発色を示すことが確認された。
【０１３８】
［実施例５］
トリオクチルアンモニウムクロリド（０．４０ｇ）及びポリエチレングリコールメチルエーテルメタクリレート（１０．００ｇ）を３００ｇの純水に溶解した後、２−ビニルピリジン（４８．００ｇ）及びジビニルベンゼン（２．００ｇ）を加え、窒素気流下において１５０ｒｐｍ、３０℃で５０分、次いで６０℃で３０分間撹拌した。撹拌後、１８．００ｇの純水に溶解した２，２−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）二塩酸塩（０．２５０ｇ）を約２分かけて滴下し、１５０ｒｐｍ、６０℃で３．５時間撹拌することで、平均粒子径４２８ｎｍの樹脂粒子Ａ−５を得た。遠心分離（９０００ｒｐｍ、４０分）により沈殿させ、上澄みを除去した後、純水に再度分散させる操作を３回行った後、透析処理により不純物を除去した。その後、濃度調整を行い１０ｗｔ％の樹脂粒子分散液Ｂ−５を得た。
＜樹脂−金複合体の合成＞
実施例５で作製した１０ｗｔ％樹脂粒子分散液Ｂ−５（４．５７ｇ）に純水１１．２５ｇを加えた後、４００ｍＭ塩化金酸水溶液（７．３４ｇ）を加え、室温で３時間撹拌した。この混合液を２４時間静置させた後、遠心分離（８０００ｒｐｍ、２０分）により樹脂粒子Ａ−５を沈殿させ、上澄みを除去する作業を３回繰り返すことで余分な塩化金酸を除去した。その後、濃度調整を行い、２．５ｗｔ％金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−５を調製した。
次に、純水１５８ｇに前記２．５ｗｔ％金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−５（４．３３ｇ）を加え、１５０ｒｐｍ、３℃で撹拌しながら、５２８ｍＭのジメチルアミンボラン水溶液（１．０ｇ）を２分かけて滴下した後、３℃で３時間、室温で２時間撹拌することで、平均粒子径４３８ｎｍの樹脂−金複合体Ｄ−５を得た。樹脂−金複合体Ｄ−５を遠心分離（８０００ｒｐｍ、１０分）により沈殿させ、上澄みを除去した後、１４０ｇの純水に再度分散させる作業を３回繰り返した後、透析処理により精製し、濃度調整することで１ｗｔ％の樹脂−金複合体分散液Ｅ−５を得た。樹脂−金複合体分散液Ｅ−５中の樹脂−金複合体Ｆ−５の吸光度は上記方法に従って測定した結果、１．０２であった。また、樹脂−金複合体Ｆ−５における金粒子の平均粒子径は２２．１ｎｍ、金の担持量は５１．１ｗｔ％であった。
【０１３９】
＜イムノクロマトの評価＞
得られた樹脂−金複合体分散液Ｅ−５の１ｍｌ（０．１ｗｔ％）にインフルエンザ抗体を１００μｇ混合し、室温で約３時間攪拌して樹脂−金複合体Ｆ−５に抗体を結合させた。終濃度が１％となるように牛血清アルブミン溶液を添加し、室温にて２時間攪拌して樹脂−金複合体Ｆ−５表面をブロックした。１２０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離を行って回収し、０．２％牛血清アルブミンを含む緩衝液に懸濁して樹脂−金複合体標識抗体分散液Ｇ−５を作製した。
【０１４０】
作製した樹脂−金複合体標識抗体分散液Ｇ−５を用いて、イムノクロマト法での測定を行って当該樹脂−金複合体分散液Ｅ−５の性能を評価した。その結果を表５に示した。
【０１４１】
【表５】
0006761246.tif 000006
【０１４２】
上記表５から、樹脂−金複合体標識抗体分散液Ｇ−５は、２５６倍希釈の抗原に対して、１５分後の発色レベルが０．５以上となり、良好な発色を示すことが確認された。
【０１４３】
［実施例６］
＜樹脂−白金複合体の合成＞
実施例５で作製した１０ｗｔ％樹脂粒子分散液Ｂ−５（４．５７ｇ）に純水１４ｇを加えた後、４００ｍＭ塩化白金酸水溶液（５．００ｇ）を加え、室温で３時間撹拌した。その後、２４時間静置させた後、遠心分離（８０００ｒｐｍ、２０分）により樹脂粒子Ａ−５を沈殿させ、上澄みを除去する作業を３回繰り返すことで余分な塩化白金酸を除去した。その後、濃度調整を行い、５ｗｔ％白金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−６を調製した。次に、純水１３９ｇに５ｗｔ％白金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−６（２．０６ｇ）を加え、１５０ｒｐｍ、３℃で撹拌しながら、１３２ｍＭのジメチルアミンボラン水溶液（４ｇ）を２０分かけて滴下した後、３℃で３時間、室温で２時間撹拌することで、平均粒子径４５９ｎｍの樹脂−白金複合体Ｄ−６を得た。樹脂−白金複合体Ｄ−６を遠心分離（８０００ｒｐｍ、１０分）により沈殿させ、上澄みを除去した後、１４０ｇの純水に再度分散させる作業を３回繰り返した後、透析処理により精製し、濃度調整することで１ｗｔ％の樹脂−白金複合体分散液Ｅ−６を得た。樹脂−白金複合体分散液Ｅ−６中の樹脂−白金複合体Ｆ−６の吸光度は上記方法に従って測定した結果、１．６６であった。また、樹脂−白金複合体Ｆ−６における白金粒子の平均粒子径は５．０ｎｍ未満、白金の担持量は３７．８ｗｔ％であった。
【０１４４】
＜イムノクロマトの評価＞
実施例２と同様の操作を行い、樹脂−白金複合体標識抗体分散液Ｇ−６を作製した。
【０１４５】
作製した樹脂−白金複合体標識抗体分散液Ｇ−６を用いて、イムノクロマト法での測定を行って当該樹脂−白金複合体分散液Ｅ−６の性能を評価した。その結果を表６に示した。
【０１４６】
【表６】
0006761246.tif 000007
【０１４７】
上記表６から、樹脂−白金複合体標識抗体分散液Ｇ−６は、１０２４倍希釈の抗原に対して、１５分後の発色レベルが０．５以上となり、良好な発色を示すことが確認された。
【０１４８】
［比較例１］
トリオクチルアンモニウムクロリド（３．００ｇ）及びポリエチレングリコールメチルエーテルメタクリレート（１０．００ｇ）を３００ｇの純水に溶解した後、２−ビニルピリジン（４９．５０ｇ）及びジビニルベンゼン（０．５０ｇ）を加え、窒素気流下において１５０ｒｐｍ、３０℃で５０分、次いで６０℃で３０分間撹拌した。撹拌後、１８．００ｇの純水に溶解した２，２−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）二塩酸塩（０．２５０ｇ）を約２分かけて滴下し、１５０ｒｐｍ、６０℃で３．５時間撹拌することで、平均粒子径３７０ｎｍの樹脂粒子Ａ−７を得た。遠心分離（９０００ｒｐｍ、４０分）により沈殿させ、上澄みを除去した後、純水に再度分散させる操作を３回行った後、透析処理により不純物を除去した。その後、濃度調整を行い１０ｗｔ％の樹脂粒子分散液Ｂ−７を得た。
【０１４９】
＜樹脂−金複合体の合成＞
比較例１で作製した１０ｗｔ％樹脂粒子分散液Ｂ−７（４．５７ｇ）に純水１１．２５ｇを加えた後、４００ｍＭ塩化金酸水溶液（７．３４ｇ）を加え、室温で３時間撹拌した。この混合液を２４時間静置させた後、遠心分離（８０００ｒｐｍ、２０分）により樹脂粒子Ａ−７を沈殿させ、上澄みを除去する作業を３回繰り返すことで余分な塩化金酸を除去した。その後、濃度調整を行い、２．５ｗｔ％金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−７を調製した。
【０１５０】
次に、純水１５８ｇに前記２．５ｗｔ％金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−７（４．３３ｇ）を加え、１５０ｒｐｍ、３℃で撹拌しながら、５２８ｍＭのジメチルアミンボラン水溶液（１．０ｇ）を２分かけて滴下した後、３℃で３時間、室温で２時間撹拌することで、平均粒子径３９３ｎｍの樹脂−金複合体Ｄ−７を得た。樹脂−金複合体Ｄ−７を遠心分離（８０００ｒｐｍ、１０分）により沈殿させ、上澄みを除去した後、１４０ｇの純水に再度分散させる作業を３回繰り返した後、透析処理により精製し、濃度調整することで１ｗｔ％の樹脂−金複合体分散液Ｅ−７を得た。樹脂−金複合体分散液Ｅ−７中の樹脂−金複合体Ｆ−７の吸光度は上記方法に従って測定した結果、０．９２であった。また、樹脂−金複合体Ｆ−７における金粒子の平均粒子径は１２．３ｎｍ、金の担持量は５５．９ｗｔ％であった。
【０１５１】
＜イムノクロマトの評価＞
得られた樹脂―金複合体分散液Ｅ−７の１ｍｌ（０．１ｗｔ％）にインフルエンザ抗体を１００μｇ混合し、室温で約３時間攪拌して樹脂−金複合体Ｆ−７に抗体を結合させた。終濃度が１％となるように牛血清アルブミン溶液を添加し、室温にて２時間攪拌して樹脂−金複合体Ｆ−７表面をブロックした。１２０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離を行って回収し、０．２％牛血清アルブミンを含む緩衝液に懸濁して樹脂−金複合体標識抗体分散液Ｇ−７を作製した。
【０１５２】
作製した樹脂−金複合体標識抗体分散液Ｇ−７を用いて、イムノクロマト法での測定を行って当該樹脂−金複合体分散液Ｅ−７の性能を評価した。その結果を表７に示した。
【０１５３】
【表７】
0006761246.tif 000008
【０１５４】
上記表７から、樹脂−金複合体標識抗体分散液Ｇ−７は、６４倍希釈の抗原に対して、１５分後の発色レベルが０．５以上となり、良好な発色を示すことが確認された。
【０１５５】
［比較例２］
＜樹脂−白金複合体の合成＞
比較例１で作製した１０ｗｔ％樹脂粒子分散液Ｂ−７（４．５７ｇ）に純水１４ｇを加えた後、４００ｍＭ塩化白金酸水溶液（５．００ｇ）を加え、室温で３時間撹拌した。その後、２４時間静置させた後、遠心分離（８０００ｒｐｍ、２０分）により樹脂粒子Ａ−７を沈殿させ、上澄みを除去する作業を３回繰り返すことで余分な塩化白金酸を除去した。その後、濃度調整を行い、５ｗｔ％白金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−８を調製した。
次に、純水１３９ｇに５ｗｔ％白金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−８（２．０６ｇ）を加え、１５０ｒｐｍ、３℃で撹拌しながら、１３２ｍＭのジメチルアミンボラン水溶液（４ｇ）を２０分かけて滴下した後、３℃で３時間、室温で２時間撹拌することで、平均粒子径３８２ｎｍの樹脂−白金複合体Ｄ−８を得た。樹脂−白金複合体Ｄ−８を遠心分離（８０００ｒｐｍ、１０分）により沈殿させ、上澄みを除去した後、１４０ｇの純水に再度分散させる作業を３回繰り返した後、透析処理により精製し、濃度調整することで１ｗｔ％の樹脂−白金複合体分散液Ｅ−８を得た。樹脂−白金複合体分散液Ｅ−８中の樹脂−白金複合体Ｆ−８の吸光度は上記方法に従って測定した結果、１．５０であった。また、樹脂−白金複合体Ｆ−８における白金粒子の平均粒子径は５．０ｎｍ未満、白金の担持量は３８．４ｗｔ％であった。
【０１５６】
＜イムノクロマトの評価＞
実施例２と同様の操作を行い、樹脂−白金複合体標識抗体分散液Ｇ−８を作製した。
【０１５７】
作製した樹脂−白金複合体標識抗体分散液Ｇ−８を用いて、イムノクロマト法での測定を行って当該樹脂−白金複合体分散液Ｅ−８の性能を評価した。その結果を表８に示した。
【０１５８】
【表８】
0006761246.tif 000009
【０１５９】
上記表８から、樹脂−白金複合体標識抗体は、５１２倍希釈の抗原に対して、１５分後の発色レベルが０．５以上となり、良好な発色を示すことが確認された。
【０１６０】
［比較例３］
トリオクチルアンモニウムクロリド（１．５０ｇ）及びポリエチレングリコールメチルエチルエーテルメタクリレート（１０．００ｇ）を３００ｇの純水に溶解した後、２−ビニルピリジン（４９．５０ｇ）及びジビニルベンゼン（０．５０ｇ）を加え、窒素気流下において１５０ｒｐｍ、３０℃で５０分、次いで６０℃で３０分間撹拌した。撹拌後、１８．００ｇの純水に溶解した２，２−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）二塩酸塩（０．５０ｇ）を約２分かけて滴下し、１５０ｒｐｍ、６０℃で３．５時間撹拌することで、平均粒子径４３０ｎｍの樹脂粒子Ａ−９を得た。遠心分離（９０００ｒｐｍ、４０分）により沈殿させ、上澄みを除去した後、純水に再度分散させる操作を３回行った後、透析処理により不純物を除去した。その後、濃度調整を行い１０ｗｔ％の樹脂粒子分散液Ｂ−９を得た。
【０１６１】
＜樹脂−金複合体の合成＞
比較例３で作製した１０ｗｔ％樹脂粒子分散液Ｂ−９（４．５７ｇ）に純水１１．２５ｇを加えた後、４００ｍＭ塩化金酸水溶液（７．３４ｇ）を加え、室温で３時間撹拌した。この混合液を２４時間静置させた後、遠心分離（８０００ｒｐｍ、２０分）により樹脂粒子Ａ−９を沈殿させ、上澄みを除去する作業を３回繰り返すことで余分な塩化金酸を除去した。その後、濃度調整を行い、２．５ｗｔ％金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−９を調製した。
【０１６２】
次に、純水１５８ｇに前記２．５ｗｔ％金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−９（４．３３ｇ）を加え、１５０ｒｐｍ、３℃で撹拌しながら、５２８ｍＭのジメチルアミンボラン水溶液（１．０ｇ）を２分かけて滴下した後、３℃で３時間、室温で２時間撹拌することで、平均粒子径４４２ｎｍの樹脂−金複合体Ｄ−９を得た。樹脂−金複合体Ｄ−９を遠心分離（８０００ｒｐｍ、１０分）により沈殿させ、上澄みを除去した後、１４０ｇの純水に再度分散させる作業を３回繰り返した後、透析処理により精製し、濃度調整することで１ｗｔ％の樹脂−金複合体分散液Ｅ−９を得た。樹脂−金複合体分散液Ｅ−９中の樹脂−金複合体Ｆ−９の吸光度は上記方法に従って測定した結果、１．２６であった。また、樹脂−金複合体Ｆ−９における金粒子の平均粒子径は１６．１ｎｍ、金の担持量は５３．９ｗｔ％であった。
【０１６３】
＜イムノクロマトの評価＞
得られた樹脂―金複合体分散液Ｅ−９の１ｍｌ（０．１ｗｔ％）にインフルエンザ抗体を１００μｇ混合し、室温で約３時間攪拌して樹脂−金複合体Ｆ−９に抗体を結合させた。終濃度が１％となるように牛血清アルブミン溶液を添加し、室温にて２時間攪拌して樹脂−金複合体Ｆ−９表面をブロックした。１２０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離を行って回収し、０．２％牛血清アルブミンを含む緩衝液に懸濁して樹脂−金複合体標識抗体分散液Ｇ−９を作製した。
【０１６４】
作製した樹脂−金複合体標識抗体分散液Ｇ−９を用いて、イムノクロマト法での測定を行って当該樹脂−金複合体分散液Ｅ−９の性能を評価した。その結果を表９に示した。
【０１６５】
【表９】
0006761246.tif 000010
【０１６６】
上記表９から、樹脂−金複合体標識抗体分散液Ｇ−９は、２５６倍希釈の抗原に対して、１５分後の発色レベルが０．５以上となり、良好な発色を示すことが確認された。
【０１６７】
［比較例４］
＜樹脂−白金複合体の合成＞
比較例３で作製した１０ｗｔ％樹脂粒子分散液Ｂ−９（４．５７ｇ）に純水１４ｇを加えた後、４００ｍＭ塩化白金酸水溶液（５．００ｇ）を加え、室温で３時間撹拌した。その後、２４時間静置させた後、遠心分離（８０００ｒｐｍ、２０分）により樹脂粒子Ａ−９を沈殿させ、上澄みを除去する作業を３回繰り返すことで余分な塩化白金酸を除去した。その後、濃度調整を行い、５ｗｔ％白金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−１０を調製した。
【０１６８】
次に、純水１３９ｇに５ｗｔ％白金イオン吸着樹脂粒子分散液Ｃ−１０（２．０６ｇ）を加え、１５０ｒｐｍ、３℃で撹拌しながら、１３２ｍＭのジメチルアミンボラン水溶液（４ｇ）を２０分かけて滴下した後、３℃で３時間、室温で２時間撹拌することで、平均粒子径４５４ｎｍの樹脂−白金複合体Ｄ−１０を得た。樹脂−白金複合体Ｄ−１０を遠心分離（８０００ｒｐｍ、１０分）により沈殿させ、上澄みを除去した後、１４０ｇの純水に再度分散させる作業を３回繰り返した後、透析処理により精製し、濃度調整することで１ｗｔ％の樹脂−白金複合体分散液Ｅ−１０を得た。樹脂−白金複合体分散液Ｅ−１０中の樹脂−白金複合体Ｆ−１０の吸光度は上記方法に従って測定した結果、１．４５であった。また、樹脂−白金複合体Ｆ−１０における白金粒子の平均粒子径は５．０ｎｍ未満、白金の担持量は３７．７ｗｔ％であった。
【０１６９】
＜イムノクロマトの評価＞
実施例２と同様の操作を行い、樹脂−白金複合体標識抗体分散液Ｇ−１０を作製した。
【０１７０】
作製した樹脂−白金複合体標識抗体分散液Ｇ−１０を用いて、イムノクロマト法での測定を行って当該樹脂−白金複合体分散液Ｅ−１０の性能を評価した。その結果を表１０に示した。
【０１７１】
【表１０】
0006761246.tif 000011
【０１７２】
上記表１０から、樹脂−白金複合体標識抗体分散液Ｇ−１０は、１０２４倍希釈の抗原に対して、１５分後の発色レベルが０．５以上となり、良好な発色を示すことが確認された。
【０１７３】
［付着試験］
実施例１〜３及び比較例１、２で得た樹脂−金属複合体の分散液（濃度  １質量％；分散媒  水）を、下記示す材質の容器に入れ、２４時間後に容器の内壁面への金属-樹脂複合体の付着を目視で観察し、付着なしを「○」、付着ありを「×」と判定した。その結果を表１１に示した。表１１中の重量組成比は、ビニルピリジンとジビニルベンゼンとの共重合体における重量組成比（ビニルピリジン：ジビニルベンゼン）を意味する。
＜容器材質＞
ＰＰ：ポリプロピレン
ＰＣ：ポリカーボネート
ＰＥＴ：ポリエチレンテレフタレート
【０１７４】
【表１１】
0006761246.tif 000012
【０１７５】
また、ＰＰ容器、ＰＣ容器、ＰＥＴ容器に対する付着試験の結果を示す写真を、それぞれ図４、図５Ａ・５Ｂ及び図６に示した。なお、図４、図５Ａ・５Ｂ、図６中では、Ａが比較例１、Ｂが実施例３、Ｃが実施例１、Ｄが比較例２、Ｅが実施例４、Ｆが実施例２を示している。
【０１７６】
表１１及び図４〜６より、免疫学的測定の試薬容器として汎用されているＰＰ容器、ＰＣ容器、ＰＥＴ容器において、ビニルピリジンとジビニルベンゼンとの共重合体における重量組成比がコントロールされた実施例では、容器内壁への樹脂−金属複合体の付着がなかった。一方、ビニルピリジンとジビニルベンゼンとの共重合体における重量組成比が４９．５：０．５である比較例１、２では、ＰＰ容器、ＰＣ容器、ＰＥＴ容器のいずれにおいても、容器内壁への樹脂−金属複合体の付着が観察された。
【０１７７】
以上、本発明の実施の形態を例示の目的で詳細に説明したが、本発明は上記実施の形態に制約されることはない。
【符号の説明】
【０１７８】
１０…樹脂粒子、２０…金属粒子、３０…内包金属粒子、４０…一部露出金属粒子、５０…表面吸着金属粒子、６０…表層部、１００…樹脂−金属複合体、１１０…メンブレン、１２０…試料添加部、１３０…判定部、１３１…捕捉リガンド、１４０…吸液部、１５０…標識抗体、１６０…アナライト、１７０…複合体、２００…テストストリップ
【図１】
0006761246.tif 000013
【図２Ａ】
0006761246.tif 000014
【図２Ｂ】
0006761246.tif 000015
【図３】
0006761246.tif 000016
【図４】
0006761246.tif 000017
【図５Ａ】
0006761246.tif 000018
【図５Ｂ】
0006761246.tif 000019
【図６】
0006761246.tif 000020