(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が０ｍｇ／１００ｇ以上２５０ｍｇ／１００ｇ以下である第１の卵黄リン脂質組成物と、
リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％を超え、かつ、アミノ酸の含有量が２５０ｍｇ／１００ｇ以上７００ｍｇ／１００ｇ以下である第２の卵黄リン脂質組成物と、
を混合して、
リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が５０ｍｇ／１００ｇ以上５００ｍｇ／１００ｇ以下である最終卵黄リン脂質組成物を得る工程を含む、卵黄リン脂質組成物の製造方法。
【請求項２】
リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％超３質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が５００ｍｇ／１００ｇ超である第１の原料卵黄リン脂質組成物に対して第１のイオン交換樹脂を用いて樹脂処理を行うことにより、リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が０ｍｇ／１００ｇ以上２５０ｍｇ／１００ｇ未満である第１の卵黄リン脂質組成物を得る第１の樹脂処理工程と、
リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％超３質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が５００ｍｇ／１００ｇ超である第２の原料卵黄リン脂質組成物に対して第２のイオン交換樹脂を用いて樹脂処理を行うことにより、リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％を超え、かつ、アミノ酸の含有量が２５０ｍｇ／１００ｇ以上５００ｍｇ／１００ｇ以下である第２の卵黄リン脂質組成物を得る第２の樹脂処理工程と、
前記第１の卵黄リン脂質組成物と、前記第２の卵黄リン脂質組成物とを混合して、リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が５０ｍｇ／１００ｇ以上５００ｍｇ／１００ｇ以下である最終卵黄リン脂質組成物を得る工程と、
を含む、卵黄リン脂質組成物の製造方法。
【請求項３】
請求項２において、
前記第１の樹脂処理工程において、卵黄リン脂質組成物中のアミノ酸の含有量の１分間あたりの低下速度が１００ｍｇ／１００ｇ以上２００ｍｇ／１００ｇ以下であり、
前記第２の樹脂処理工程において、卵黄リン脂質組成物中のアミノ酸の含有量の１分間あたりの低下速度が５ｍｇ／１００ｇ以上３０ｍｇ／１００ｇ以下である、卵黄リン脂質組成物の製造方法。
【請求項４】
請求項２または３において、
前記混合する工程において、前記第１の卵黄リン脂質組成物／前記第２の卵黄リン脂質組成物（質量比）が０．２以上５以下である、卵黄リン脂質組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、卵黄リン脂質組成物およびその製造方法、ならびに該卵黄リン脂質組成物を用いた脂肪乳剤およびリポ化製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
卵黄リン脂質は例えば、化粧品や医薬品の分野において、脂肪乳剤やリポ化製剤等の乳化剤として広く用いられている（特許文献１）。近年、卵黄リン脂質を用いた、高純度でかつ安定性に優れた乳化剤が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】国際公開第ＷＯ２００９／０９３６５０号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、高純度でかつ安定性に優れた乳化物の製造に用いられる卵黄リン脂質組成物およびその製造方法、ならびに該卵黄リン脂質組成物を用いた脂肪乳剤およびリポ化製剤を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本願発明者は、卵黄リン脂質中のリゾホスファチジルエタノールアミンの含有量およびアミノ酸の含有量を所定量に調整することで、高純度でかつ安定性に優れた乳化物を製造できることを見出し、本発明を完成するに至った。【０００６】
１．本発明の一態様に係る卵黄リン脂質組成物は、
リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が５０ｍｇ／１００ｇ以上５００ｍｇ／１００ｇ以下である。【０００７】
２．上記１に記載の卵黄リン脂質組成物において、前記アミノ酸におけるセリンおよびトレオニンの合計の割合が、該アミノ酸の総量を１００質量部とした場合、１０質量部以上であることができる。【０００８】
３．上記１または２に記載の卵黄リン脂質組成物において、前記アミノ酸におけるセリン、トレオニン、リジンおよびアルギニンの合計の割合が、該アミノ酸の総量を１００質量部とした場合、１０質量部以上であることができる。【０００９】
４．上記１ないし３のいずれかに記載の卵黄リン脂質組成物において、前記卵黄リン脂質の含有量に対する前記アミノ酸の含有量が、該卵黄リン脂質の総量を１００質量部とした場合、０．０６質量部以上０．６質量部以下であることができる。【００１０】
５．上記１ないし４のいずれかに記載の卵黄リン脂質組成物において、ホスファチジルコリンを含有し、前記ホスファチジルコリンの含有量を１００質量部とした場合、該ホスファチジルコリンに対する前記アミノ酸の含有量が０．１質量部以上０．８質量部以下であることができる。【００１１】
６．上記１ないし５のいずれかに記載の卵黄リン脂質組成物において、ホスファチジルエタノールアミンを含有し、前記ホスファチジルエタノールアミンの含有量を１００質量部とした場合、該ホスファチジルエタノールアミンの含有量に対する前記アミノ酸の含有量が０．２質量部以上１０質量部以下であることができる。【００１２】
７．上記１ないし６のいずれかに記載の卵黄リン脂質組成物において、ホスファチジルコリンを６５質量％以上含有し、ホスファチジルエタノールアミンを５質量％以上含有することができる。【００１３】
８．上記１ないし７のいずれかに記載の卵黄リン脂質組成物において、ホスファチジルエタノールアミンを含有し、前記ホスファチジルエタノールアミンの含有量を１００質量部とした場合、該ホスファチジルエタノールアミンの含有量に対する前記リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が３質量部以上１５質量部以下であることができる。【００１４】
９．上記１ないし８のいずれかに記載の卵黄リン脂質組成物において、コレステロールの含有量が１．５質量％以下であることができる。【００１５】
１０．上記１ないし９のいずれかに記載の卵黄リン脂質組成物において、遊離脂肪酸の含有量が１．０質量％以下であることができる。【００１６】
１１．本発明の一態様に係る脂肪乳剤は、上記１ないし１０のいずれかに記載の卵黄リン脂質組成物を含む乳化粒子と、該乳化粒子が分散された水相と、を含む。【００１７】
１２．本発明の一態様に係るリポ化製剤は、上記１ないし１０のいずれか１項に記載の卵黄リン脂質組成物および薬剤を含む乳化粒子と、該乳化粒子が分散された水相と、を含む。【００１８】
１３．本発明の一態様に係る卵黄リン脂質組成物の製造方法は、リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が０ｍｇ／１００ｇ以上２５０ｍｇ／１００ｇ以下である第１の卵黄リン脂質組成物と、リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％を超え、かつ、アミノ酸の含有量が２５０ｍｇ／１００ｇ以上５００ｍｇ／１００ｇ以下である第２の卵黄リン脂質組成物と、を混合して、リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が５０ｍｇ／１００ｇ以上７００ｍｇ／１００ｇ以下である最終卵黄リン脂質組成物を得る工程を含む。【００１９】
１４．本発明の一態様に係る卵黄リン脂質組成物の製造方法は、リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％超３質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が５００ｍｇ／１００ｇ超である第１の原料卵黄リン脂質組成物に対して第１のイオン交換樹脂を用いて樹脂処理を行うことにより、リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が０ｍｇ／１００ｇ以上２５０ｍｇ／１００ｇ未満である第１の卵黄リン脂質組成物を得る第１の樹脂処理工程と、リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％超３質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が５００ｍｇ／１００ｇ超である第２の原料卵黄リン脂質組成物に対して第２のイオン交換樹脂を用いて樹脂処理を行うことにより、リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％を超え、かつ、アミノ酸の含有量が２５０ｍｇ／１００ｇ以上５００ｍｇ／１００ｇ以下である第２の卵黄リン脂質組成物を得る第２の樹脂処理工程と、前記第１の卵黄リン脂質組成物と、前記第２の卵黄リン脂質組成物とを混合して、リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が５０ｍｇ／１００ｇ以上５００ｍｇ／１００ｇ以下である最終卵黄リン脂質組成物を得る工程と、を含む。【００２０】
１５．上記１４に記載の卵黄リン脂質組成物の製造方法において、前記第１の樹脂処理工程において、卵黄リン脂質組成物中のアミノ酸の含有量の１分間あたりの低下速度が１００ｍｇ／１００ｇ以上２００ｍｇ／１００ｇ以下であり、前記第２の樹脂処理工程において、卵黄リン脂質組成物中のアミノ酸の含有量の１分間あたりの低下速度が５ｍｇ／１００ｇ以上３０ｍｇ／１００ｇ以下であることができる。【００２１】
１６．上記１４または１５に記載の卵黄リン脂質組成物の製造方法において、前記混合する工程において、前記第１の卵黄リン脂質組成物／前記第２の卵黄リン脂質組成物（質量比）が０．２以上５以下であることができる。
【発明の効果】
【００２２】
上記１ないし１０のいずれかに記載の卵黄リン脂質組成物によれば、リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が５０ｍｇ／１００ｇ以上５００ｍｇ／１００ｇ以下であることにより、卵黄リン脂質中のアミノ酸の量が上記範囲に調整されているため、該卵黄リン脂質組成物を用いて、高純度でかつ安定性に優れた乳化物を製造することができる。【００２３】
上記１１に記載の脂肪乳剤は、上記１ないし１０のいずれかに記載の卵黄リン脂質組成物を含む乳化粒子と、該乳化粒子が分散された水相と、を含むことにより、高純度でかつ乳化安定性に優れている。【００２４】
上記１２に記載のリポ化製剤は、上記１ないし１０のいずれかに記載の卵黄リン脂質組成物および薬剤を含む乳化粒子と、該乳化粒子が分散された水相と、を含むことにより、高純度でかつ乳化安定性に優れている。【００２５】
上記１３に記載の卵黄リン脂質組成物の製造方法によれば、上記第１の卵黄リン脂質組成物と、上記第２の卵黄リン脂質組成物と、を混合することにより、リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が５０ｍｇ／１００ｇ以上７００ｍｇ／１００ｇ以下である最終卵黄リン脂質組成物を簡便でかつ効率的な方法で得ることができる。【００２６】
上記１４ないし１６のいずれかに記載の卵黄リン脂質組成物の製造方法によれば、上記第１の樹脂処理工程と、上記第２の樹脂処理工程と、上記最終卵黄リン脂質組成物を得る工程と、を含むことにより、リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が５０ｍｇ／１００ｇ以上５００ｍｇ／１００ｇ以下である卵黄リン脂質組成物を簡便でかつ効率的な方法にて製造することができる。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
以下、図面を参照しつつ、本発明を詳細に説明する。なお、本発明において、格別に断らない限り、「部」は「質量部」を意味し、「％」は「質量％」を意味する。
【００２８】
本発明の一実施形態に係る卵黄リン脂質組成物は、リゾホスファチジルエタノールアミン（以下、「ＬＰＥ」ともいう。）の含有量が１質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が５０ｍｇ／１００ｇ以上５００ｍｇ／１００ｇ以下である。
【００２９】
本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物によれば、ＬＰＥの含有量が１質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が５０ｍｇ／１００ｇ以上５００ｍｇ／１００ｇ以下であることにより、該卵黄リン脂質組成物を用いて、高純度でかつ安定性に優れた乳化物を製造することができる。
【００３０】
本発明者らは、本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物を用いて得られる乳化物を滅菌するための高温処理の際に生じるｐＨの低下が、ＬＰＥ除去時にＬＰＥと共に除去されるアミノ酸の含有量に起因することを見出した。ｐＨの低下は、該乳化物の安定性を低下させる因子の一つである。
【００３１】
より具体的には、本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物は、ＬＰＥの含有量が１質量％以下に抑えられており、かつ、アミノ酸の含有量が５０ｍｇ／１００ｇ以上５００ｍｇ／１００ｇ以下に調整されているため、本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物を用いた乳化物は、高純度でありながら、滅菌時の高温処理を経ても、該乳化物のｐＨの低下が少なく、安定性に優れている。
【００３２】
（卵黄リン脂質組成物）
本発明において、「卵黄リン脂質組成物」とは、卵黄由来のリン脂質を含むものをいう。
【００３３】
（リン脂質）
リン脂質としては、ホスファチジルコリン（以下、「ＰＣ」ともいう。）、ホスファチジルエタノールアミン（以下、「ＰＥ」ともいう。）、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルエチレングリコール、およびホスファチジルポリエチレングリコール、ホスファチジン酸、リゾホスフォスファチジルコリン、リゾホスフォスファチジルエタノールアミン、リゾホフファチジルグリセロール、これらのリゾ化物、ならびにスフィンゴミエリンが挙げられ、このうち１種または２種以上を含有することができる。これらはいずれも、卵黄由来のリン脂質である。
【００３４】
本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物における卵黄リン脂質の含有量（総量）は６５質量％以上１００質量％未満であり、通常９９．９５質量％以下であり、安定性により優れた乳化物を製造できる観点から、７５質量％以上であることが好ましく、一方、９９．５質量％以下であり、９５質量％以下であることがより好ましい。
【００３５】
なかでも、本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物は例えば、ＰＣを６５質量％以上（好ましくは６８質量％以上、より好ましくは７０質量％以上、また、好ましくは９９質量％以下、より好ましくは９５質量％以下、より好ましくは９０質量％以下）含有することができ、ＰＥを５質量％以上（好ましくは７質量％以上、より好ましくは１０質量％以上、また、好ましくは２０質量％以下）含有することができる。
【００３６】
本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物に含まれるＬＰＥの含有量は、１質量％以下であり、０．８質量％以下であるとよい。ＬＰＥの含有量が前記上限以下であることにより、高純度でかつ安定性の高い卵黄リン脂質組成物を得ることができる。ＬＰＥの含有量の下限値は、特に限定されないが、０．０１質量％以上、さらに０．１質量％以上であることにより、安定性の高い卵黄リン脂質組成物が得られやすい。
【００３７】
また、安定性により優れている点で、本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物はＰＥを含有し、該ＰＥの含有量を１００質量部とした場合、該ＰＥの含有量に対する前記ＬＰＥの含有量が２質量部以上１５質量部以下であることが好ましく、３質量部以上であることがより好ましく、１０質量部以下であることがより好ましい。
【００３８】
（アミノ酸）
本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物において、アミノ酸を２種以上含む場合、アミノ酸の含有量は、２種以上のアミノ酸の総量である。本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物において、安定性をより高めることができる観点から、アミノ酸の含有量（総量）は５０ｍｇ／１００ｇ以上であることが好ましく、また、リン脂質組成物の純度をより高めることができる観点から、５００ｍｇ／１００ｇ以下であることがより好ましく、一方、１００ｍｇ／１００ｇ以下であることが好ましく、４００ｍｇ／１００ｇ以下であることがより好ましい。
【００３９】
アミノ酸としては、必須アミノ酸（トリプトファン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、ヒスチジン）、非必須アミノ酸（アルギニン、システイン、チロシン、グリシン、アラニン、セリン、システイン、アスパラギン、グルタミン、プロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸）、または上記以外のアミノ酸が挙げられる。なかでも、より安定性に優れた乳化物を製造できる観点から、セリン、トレオニン、リジンおよびアルギニンから選ばれる少なくとも１種を含むことが好ましく、セリンおよび／またはトレオニンを含むことがより好ましい。
【００４０】
本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物において、より安定性に優れた乳化物を製造できる観点から、前記アミノ酸の総量を１００質量部とした場合、該アミノ酸におけるセリンおよびトレオニンの合計の割合が１０質量部以上であることがより好ましく、さらに２０質量部以上であることがより好ましい。一方、該アミノ酸におけるセリンおよびトレオニンの合計の割合の上限は特に制限されないが、例えば、含有量に見合った効果が得られ難いことから５０質量部以下とすることができる。
【００４１】
また、本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物において、安定性により優れた乳化物を製造できる観点から、前記アミノ酸の総量を１００質量部とした場合、該アミノ酸におけるセリン、トレオニン、リジンおよびアルギニンの合計の割合が１０質量部以上であることが好ましく、１５質量部以上であることがより好ましく、さらに２０質量部以上であることがより好ましい。一方、該アミノ酸におけるセリン、トレオニン、リジンおよびアルギニンの合計の割合の上限は特に制限されないが、含有量に見合った効果が得られ難いことから７０質量部以下であることが好ましい。
【００４２】
安定性により優れた乳化物を製造できる観点から、本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物において、ＰＣの含有量を１００質量部とした場合、該ＰＣの含有量に対する前記アミノ酸の含有量が０．１質量部以上０．８質量部以下であることが好ましく、０．２質量部以上であることがより好ましく、一方、０．７質量部以下であることがより好ましい。
【００４３】
安定性により優れている点で、本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物では、ＰＥを含有し、該ＰＥの含有量を１００質量部とした場合、該ＰＥの含有量に対する前記アミノ酸の含有量が０．２質量部以上１０質量部以下であることが好ましく、０．５質量部以上であることがより好ましく、５質量部以下であることがより好ましい。
【００４４】
また、この場合、安定性により優れた乳化物を製造できる観点から、本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物において、前記卵黄リン脂質（総量）の含有量を１００質量部とした場合、該卵黄リン脂質（総量）の含有量に対する前記アミノ酸の含有量が０．０６質量部以上０．６質量部以下であることが好ましく、０．１質量部以上であることがより好ましく、０．５質量部以下であることがより好ましい。
【００４５】
（コレステロール）
本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物において、安定性により優れた乳化物を製造できる観点から、コレステロール（以下、「ＣＨ」ともいう。）の含有量が１．５質量％以下であることができ、１．０質量％以下であることが好ましく、０．８質量％以下であることがより好ましく、一方、０．０１質量％以上とすることができる。
【００４６】
本発明において、コレステロールの含有量は、以下の方法により測定された値である。
【００４７】
１０ｍＬ共栓付試験管に、サンプル０．５ｇを量り、クロロホルムにて溶解後、１０ｍＬにメスアップする。これをイアトロスキャンＴＨ−１０により、操作手順にしたがって展開し、測定する。脂質組成により感度が異なるため、トリグリセライド、コレステロールについては、面積値（ＡＲＥＡ）に以下の係数を乗じて、修正面積値を得る。
トリグリセライド×０．９
コレステロール×０．５
得られた修正面積値をもとに、コレステロールの面積百分率をもとめ、コレステロールの含有量を算出する。
【００４８】
（遊離脂肪酸）
本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物において、ｐＨの低下を抑制でき、これにより、安定性により優れた乳化物を製造できる観点から、遊離脂肪酸の含有量が１．０質量％以下であることができ、０．８質量％以下であることが好ましい。
【００４９】
本発明において、遊離高級脂肪酸には、植物油やリン脂質を構成する脂肪酸エステルの形態のものを含まない。高級脂肪酸は例えば、直鎖状または分岐状の炭素数６−２２個（好ましくは１２−２０個）の飽和または不飽和脂肪酸である。高級脂肪酸としては、例えば、オレイン酸、ステアリン酸、リノール酸、パルミチン酸、リノレン酸、ミリスチン酸が挙げられ、オレイン酸が好ましい。
【００５０】
本発明において、遊離脂肪酸の含有量は、以下の方法により確認する。サンプル１．０ｇにイソプロパノールを加えて溶かし、正確に２５ｍLとした試料溶液を調製する。また、パルミチン酸をヘプタンに溶かすことによりパルミチン酸を１．０質量％もしくは０．８質量％含む標準溶液を調製する。前記調製した試料溶液および標準溶液から、１ｍLを試験管へ量りとったところへ、イソプロパノール：ヘプタン：０．５ｍｏｌ／Ｌ硫酸を４０：１０：１で混合した混合液５．０ｍＬをメスピペットで加え、１分間振り混ぜてから１０分間放置する。その後、試料溶液にはヘプタン３ｍＬと蒸留水３ｍＬを、標準溶液にはヘプタン２ｍＬと蒸留水４ｍＬを加え、密栓して混合し、１５分間以上放置して分層させる。それぞれの上層液３ｍＬを正確に共栓付試験管に測り、ナイルブルー試薬１ｍＬを加える。直ちに窒素ガスを吹き込んで試験管内を窒素で置換してから０．０１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液で液が紫色に変わるまで滴定する。試料溶液の滴定に要した水酸化ナトリウム溶液の量が、標準溶液の滴定に要した水酸化ナトリウム溶液の量よりも少ないことで、サンプル中の脂肪酸含有量が１．０質量％もしくは０．８質量％であるとする。
【００５１】
安定性により優れている点で、本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物のｐＨは６．５以上１０以下であることが好ましく、７．０以上であることがより好ましく、一方、９．５以下であることがより好ましい。
【００５２】
（作用効果）
本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物を用いて調製された脂肪乳剤は、滅菌時にｐＨが低下しにくい性質を有する。本発明者らは、ＬＰＥの含有量が１質量％以下でありながら、アミノ酸の含有量が５０ｍｇ／１００ｇ以上５００ｍｇ／１００ｇ以下である卵黄リン脂質組成物を含有する脂肪乳剤が、滅菌時にｐＨの低下が起こりにくいことを見出した。
【００５３】
本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物を含有する脂肪乳剤が滅菌時にｐＨの低下が起こりにくいのは、該卵黄リン脂質組成物に含まれるアミノ酸に起因すると推測される。より具体的には、上記に規定される量の該アミノ酸を含有することにより、該アミノ酸が該脂肪乳剤のｐＨ低下を抑制するため、これにより、該脂肪乳剤の乳化安定性を保持できるためと推測される。
【００５４】
２．卵黄リン脂質組成物の製造方法
本発明の一実施形態に係る卵黄リン脂質組成物の製造方法は、
ＬＰＥの含有量が１質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が０ｍｇ／１００ｇ以上２５０ｍｇ／１００ｇ以下である第１の卵黄リン脂質組成物（以下、単に「第１の卵黄リン脂質組成物」ともいう。）と、ＬＰＥの含有量が１質量％を超え、かつ、アミノ酸の含有量が２５０ｍｇ／１００ｇ以上７００ｍｇ／１００ｇ以下である第２の卵黄リン脂質組成物（以下、単に「第２の卵黄リン脂質組成物」ともいう。）とを混合して、リゾホスファチジルエタノールアミンの含有量が１質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が５０ｍｇ／１００ｇ以上５００ｍｇ／１００ｇ以下である最終卵黄リン脂質組成物（「上記実施形態に係る卵黄リン脂質組成物」、以下、単に「最終卵黄リン脂質組成物」ともいう。）を得る工程を含む。
【００５５】
なお、第１の卵黄リン脂質組成物と、後述する第１の原料卵黄リン脂質組成物とを混合して、最終卵黄リン脂質組成物を得ることもできる。
【００５６】
また、前記第１の卵黄リン脂質組成物と、前記第２の卵黄リン脂質組成物に加えて、本発明の効果を損なわない範囲で、別に処理した卵黄リン脂質組成物やアミノ酸等の他の成分をさらに混合して、最終リン脂質組成物を得ることもできる。
【００５７】
本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物の製造方法によれば、前記第１の卵黄リン脂質組成物と前記第２の卵黄リン脂質組成物とを混合して、前記最終卵黄リン脂質組成物を得る工程を含むことにより、微量の（すなわち、アミノ酸の含有量が５０ｍｇ／１００ｇ以上５００ｍｇ／１００ｇ以下である）アミノ酸を含み、かつ、ＬＰＥの含有量が１質量％以下と低減された、滅菌時にｐＨが低下しにくい最終卵黄リン脂質組成物を簡便でかつ効率的な方法にて製造することができる。
【００５８】
前記第１の卵黄リン脂質組成物は、市販のアミノ酸と市販の卵黄リン脂質とを混合することにより調製されたものであってもよいし、または、後述する第１の樹脂処理工程によって調製されたものであってもよい。
【００５９】
このうち、ＬＰＥの含有量およびアミノ酸の含有量が所定の範囲内に低減されている点で、前記第１の卵黄リン脂質組成物は、後述する第１の樹脂処理工程によって調製されたものであることが好ましい。
【００６０】
また、前記第２の卵黄リン脂質組成物は、市販のアミノ酸と市販の卵黄リン脂質とを混合することにより調製されたものであってもよいし、または、後述する第２の樹脂処理工程によって調製されたものであってもよいし、あるいは、後述する第２の樹脂処理工程によって調整したものと市販のアミノ酸および／または市販の卵黄リン脂質とをと混合することにより調製されたものであってもよい。
【００６１】
ＬＰＥの含有量およびアミノ酸の含有量が所定の範囲内に低減されている点で、前記第２の卵黄リン脂質組成物は、後述する第２の樹脂処理工程によって調製されたものであることが好ましい。
【００６２】
（樹脂処理を用いた本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物の製造方法の一例）
本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物の製造方法の一例は、後述する第１の樹脂処理工程と、後述する第２の樹脂処理工程と、前記第１の卵黄リン脂質組成物と、前記第２の卵黄リン脂質組成物とを混合して最終卵黄リン脂質組成物（上記実施形態に係る卵黄リン脂質組成物）を得る工程（以下、単に「混合する工程」ともいう。）と、を含む。
【００６３】
本発明者らは、ＬＰＥを樹脂処理により低減した卵黄リン脂質組成物を用いた脂肪乳剤は滅菌時にｐＨが低下しやすいこと、その原因として、樹脂処理の際にＬＰＥとともに卵黄リン脂質組成物中のアミノ酸が除去されること、ならびに、樹脂処理の際に、ＬＰＥよりもアミノ酸が優先して除去される傾向があることを見出した。
【００６４】
これに対して、本例に係る卵黄リン脂質組成物の製造方法によれば、上記第１の樹脂処理工程と、上記第２の樹脂処理工程と、上記最終卵黄リン脂質組成物を得る工程とを含むことにより、微量のアミノ酸を含み、かつ、ＬＰＥの含有量が１質量％以下と低減された、滅菌時にｐＨが低下しにくい最終卵黄リン脂質組成物を簡便でかつ効率的な方法にて製造することができる。
【００６５】
すなわち、上記第１の樹脂処理工程によって、アミノ酸（例えば、アミノ酸およびＬＰＥ）の含有量がより少ない第１の卵黄リン脂質組成物を得、上記第２の樹脂処理工程によって、アミノ酸（例えば、アミノ酸およびＬＰＥ）の含有量がより多い第２の卵黄リン脂質組成物を得、該第１の卵黄リン脂質組成物と該第２の卵黄リン脂質組成物とを混合することにより、最終卵黄リン脂質組成物を簡便でかつ効率的な方法にて製造することができる。
【００６６】
（第１の樹脂処理工程）
上記第１の樹脂処理工程は、ＬＰＥの含有量が１質量％超３質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が５００ｍｇ／１００ｇ超である第１の原料卵黄リン脂質組成物に対して第１のイオン交換樹脂を用いて樹脂処理を行うことにより、前記第１の卵黄リン脂質組成物を得る工程である。
【００６７】
上記第１の樹脂処理工程および後述する第２の樹脂処理工程において、樹脂処理の方法は特に限定されないが、例えば、樹脂と原料卵黄リン脂質組成物の溶液とを溶媒中で混合することにより行ってもよいし、あるいは、樹脂を筒状の容器に充填し、該容器に原料卵黄リン脂質組成物の溶液を通過させることによって行ってもよい。
【００６８】
上記第１の樹脂処理の時間は例えば１〜３０分間であり、１分間以上１０分間未満であることが好ましく、該第１の樹脂処理の時間は、後述する第２の樹脂処理の時間より短いことが好ましい。また、上記第１の樹脂処理の温度は例えば２０〜４０℃で行われる。
【００６９】
上記第１の樹脂処理工程によれば、後述する第２の樹脂処理工程と比較して、アミノ酸（さらにはＬＰＥ）の除去能が高いため、アミノ酸（さらにはＬＰＥ）が低減された第１の卵黄リン脂質組成物を短時間で得ることができる。
【００７０】
（第２の樹脂処理工程）
上記第２の樹脂処理工程は、ＬＰＥの含有量が１質量％超３質量％以下であり、かつ、アミノ酸の含有量が５００ｍｇ／１００ｇ超である第２の原料卵黄リン脂質組成物に対して第２のイオン交換樹脂を用いて樹脂処理を行うことにより、前記第２の卵黄リン脂質組成物を得る工程である。
【００７１】
上記第２の樹脂処理の時間は例えば１０分間〜１時間であり、２０分間以上４０分間未満であることが好ましい。また、上記第２の樹脂処理の温度は例えば２０〜４０℃で行われる。
【００７２】
上記第２の樹脂処理工程によれば、上記第１の樹脂処理工程と比較して、アミノ酸さらにはＬＰＥの除去能が低いため、第１の卵黄リン脂質組成物と比較して、アミノ酸（さらにはＬＰＥ）の含有量が多い第２の卵黄リン脂質組成物を得ることができる。
【００７３】
（原料卵黄リン脂質組成物）
（第１および第２の）原料卵黄リン脂質組成物は通常、卵黄リン脂質（総量）を８０質量％以上９９質量％以下含有するものであり、例えば、原料卵黄リン脂質組成物では、卵黄リン脂質（総量）におけるＰＣの含有割合が６０質量％以上８０質量％以下であり、ＰＥの含有割合が５質量％以上２０質量％以下である。
【００７４】
また、原料卵黄リン脂質組成物におけるＬＰＥの含有量は、１質量％超であることが好ましく、一方、３質量％以下であることが好ましく、また、アミノ酸の含有量は通常５００ｍｇ／１００ｇ超である。上記範囲内であれば、第１の原料卵黄リン脂質組成物および第２の原料卵黄リン脂質組成物は、同じものを用いても良く、また、異なるものを用いても良い。
【００７５】
なお、原料卵黄リン脂質組成物は、セリン、トレオニン、リジンおよびアルギニンから選ばれる少なくとも１種を含有することが好ましく、セリンおよび／またはトレオニンを含有することがより好ましい。なお、本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物に含まれるアミノ酸は、原料卵黄リン脂質組成物に元来含まれているものであってもよいし、あるいは、イオン交換樹脂を用いた処理を行って得られる卵黄リン脂質組成物に添加されたものであってもよいが、原料卵黄リン脂質組成物に元来含まれているものとすることができる。
【００７６】
（原料卵黄リン脂質組成物の製造）
本実施形態に係る卵黄リン脂質組成物の製造方法において、前記原料卵黄リン脂質組成物は、卵黄をアルコール抽出した後、該アルコールを除去し、次いで前記卵黄リン脂質の１８倍以上の容量のアセトンを添加した後、該アセトンを除去して得られたものである。
【００７７】
アルコール抽出に使用するアルコールとしては、特に限定されないが、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブチルアルコール、２−ブチルアルコール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコールが挙げられ、このうち、炭素原子数１以上３以下の低級アルコールを使用することが好ましい。該アルコール抽出により、卵黄のアルコール抽出物が得られる。また、ＬＰＥの除去効率により優れている点で、抽出溶媒におけるアルコールの濃度は９５質量％超であると好ましく、９６質量％以上であるとより好ましい。
【００７８】
また、卵黄のアルコール抽出物からアルコールを除去した後、前記原料卵黄リン脂質組成物の１８倍以上の容量のアセトンを添加し、該アセトンを除去することにより、コレステロール含有量が低減された卵黄リン脂質組成物を得ることができる。この場合、コレステロール含有量をより低減できる点で、添加するアセトンの量は２０倍以上であることが好ましい。
【００７９】
（イオン交換樹脂）
上記第１の樹脂処理工程および上記第２の樹脂処理工程で使用される第１および第２のイオン交換樹脂としては、例えば、強酸性或いは弱酸性陽イオン交換樹脂（Amberlite IR120B、IR124、200CT、252、FPC3500、IRC76）、または、強塩基性或いは弱塩基性陰イオン交換樹脂（IRA400J、IRA402BL、IRA404J、IRA458RF、IRA67）が挙げられる。これらを単独でまたは複数組み合わせて使用すればよく、陽イオン交換樹脂と陰イオン交換樹脂とを併用することが好ましく、陽イオン交換樹脂と陰イオン交換樹脂とを１／１（ｖ／ｖ）を超え１／３（ｖ／ｖ）以下の割合で使用することがより好ましい。
【００８０】
（アミノ酸の低下速度）
上記第１の樹脂処理工程は、上記第２の樹脂処理工程よりも、卵黄リン脂質組成物中のアミノ酸（さらにはＬＰＥ）の低下速度が高い。したがって、上記第１の樹脂処理工程で得られる上記第１の卵黄リン脂質組成物は、上記第２の樹脂処理工程で得られる上記第２の卵黄リン脂質組成物よりもアミノ酸（例えば、アミノ酸およびＬＰＥ）の含有量が少ない。すなわち、上記第１の樹脂処理工程によって、上記第２の卵黄リン脂質組成物よりもアミノ酸（例えば、アミノ酸およびＬＰＥ）の含有量が少ない上記第１の卵黄リン脂質組成物を得ることができる。
【００８１】
より具体的には、上記第１の樹脂処理工程において、卵黄リン脂質組成物中のアミノ酸の含有量の１分間あたりの低下速度は、１００ｍｇ／１００ｇ以上２５０ｍｇ／１００ｇ以下であることが好ましく、１５０ｍｇ／１００ｇ以上であることがより好ましく、一方、２００ｍｇ／１００ｇ以下であることがより好ましい。
【００８２】
また、上記第２の樹脂処理工程において、卵黄リン脂質組成物中のアミノ酸の含有量の１分間あたりの低下速度が３ｍｇ／１００ｇ以上３０ｍｇ／１００ｇ以下である５ｍｇ／１００ｇ以上であることがより好ましく、一方、
２５ｍｇ／１００ｇ以下であることがより好ましい。
【００８３】
上記第１の卵黄リン脂質組成物および上記第２の卵黄リン脂質組成物が得られるように、例えば、上記第１の樹脂処理工程および上記第２の樹脂処理工程におけるアミノ酸（さらにはＬＰＥ）の低下速度が上述した範囲になるように、上記イオン交換樹脂の種類および量を調整することが好ましい。
【００８４】
上記第１の樹脂処理工程および上記第２の樹脂処理工程において、イオン交換樹脂を用いて原料卵黄リン脂質組成物を処理する場合、例えば、原料卵黄リン脂質組成物の１〜５倍量の極性溶媒（例えば、メタノール、エタノール等のアルコール、水）、または、上記極性溶媒と上記極性溶媒以外との混合溶媒（例えば、ジクロロメタン，クロロホルム等のハロゲン系溶媒、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン系溶媒、酢酸エチル等のエステル系溶媒、ｎ−ヘキサン、ｎ−ペンタン等の炭化水素系溶媒、ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒）に該原料卵黄リン脂質を溶解させ、該溶解液をイオン交換樹脂に接触させた後、該溶媒を減圧留去する方法が挙げられる。この場合、上記極性溶媒及び混合溶媒を単独でまたは複数組み合わせて使用することができる。
【００８５】
イオン交換樹脂は、架橋した三次元の高分子母体に、スルホン酸基や四級アンモニウム基のような官能基を導入した構造を持つ合成樹脂である。効率的な樹脂処理を行うためには、水等で樹脂自体を含水させることにより、構造中に間隙を形成させ樹脂の比表面積を大きくして使用することが一般的である。
【００８６】
一方で、イオン交換樹脂を用いて原料卵黄リン脂質組成物を処理する場合、原料卵黄リン脂質組成物を上述したように極性溶媒又は混合溶媒へ溶解させることとなる。このような極性溶媒又は混合溶媒に晒されると、経時的にイオン交換樹脂が脱水されることが経験的に知られている。
【００８７】
イオン交換樹脂が脱水されると、含水時に存在していた間隙が縮小もしくは閉口してしまい、特にＬＰＥのように、分子量が比較的大きな成分は、イオン交換樹脂の間隙に存在する官能基と効率的に接触することができず、ＬＰＥ除去能が低下してしまう。そのため、経時的にイオン交換樹脂が脱水されてしまう条件下で、ＬＰＥのような比較的分子量の大きな成分を対象とする場合、間隙が十分に存在する状態、つまりより体積の大きなイオン交換樹脂を用いることが望ましい。
【００８８】
また、イオン交換樹脂の体積は一般に、官能基と対になるイオンの種類に左右される。具体的には、陰イオン交換樹脂の場合、ＯＨ−よりもＣｌ−が多い程、より体積が小さくなる傾向がみられる。
【００８９】
以上の内容に鑑み、上記第１の樹脂工程では、ＬＰＥの除去能を高めるために、体積がより大きなイオン交換樹脂を用いることが好ましいとの観点から、上記第１の樹脂処理工程に用いる陰イオン交換樹脂としては、官能基に結合する陰イオンにおけるＣｌ−の割合が０．２当量％以下であることが好ましく、一方、上記第２の樹脂工程では、ＬＰＥの除去効率を制御するために、上記第１の樹脂処理工程よりも体積が小さいイオン交換樹脂を用いることが好ましいとの観点から、上記第２の樹脂処理工程に用いる陰イオン交換樹脂としては、官能基に結合する陰イオンにおけるＣｌ−の割合が０．２当量％超であることが好ましい。
【００９０】
なお、上記第１の樹脂処理工程および上記第２の樹脂処理工程において、上記イオン交換樹脂に代えて、または上記イオン交換樹脂とともに、アルミナを使用することもできる。
【００９１】
（混合する工程）
上記混合する工程は、前記第１の卵黄リン脂質組成物と、前記第２の卵黄リン脂質組成物とを混合して、前記最終卵黄リン脂質組成物（上記実施形態に係る卵黄リン脂質組成物）を得る工程である。
【００９２】
前記混合する工程において、上記実施形態に係る卵黄リン脂質組成物（最終卵黄リン脂質組成物）を容易に得ることができる点で、前記第１の卵黄リン脂質組成物／前記第２の卵黄リン脂質組成物（質量比）は通常０．２以上５以下であり、０．５以上であることが好ましく、一方、４以下であることが好ましい。
【００９３】
３．脂肪乳剤
本発明の一実施形態に係る脂肪乳剤は、上記実施形態に係る卵黄リン脂質組成物を含む乳化粒子と、該乳化粒子が分散された水相と、を含む。
【００９４】
本実施形態に係る脂肪乳剤は、上記実施形態に係る卵黄リン脂質組成物を含む乳化粒子と、該乳化粒子が分散された水相と、を含むことにより、高純度でかつ乳化安定性に優れている。
【００９５】
（平均粒子径）
本実施形態に係る脂肪乳剤において、乳化粒子の平均粒子径は通常、０．１μｍ以上０．５μｍ以下であり、安定性により優れている観点から、好ましくは０．３μｍ以下である。
【００９６】
（油相）
本実施形態に係る脂肪乳剤において、乳化粒子を構成する油相は、例えば、大豆油、ゴマ油、ナタネ油、サフラワー油、オリーブ油、ヒマシ油、コーン油、綿実油、米油、ヒマワリ油、グレープシード油、小麦胚芽油などの植物油や、中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）が挙げられる。植物油は精製植物油であることが好ましい。
【００９７】
（脂肪乳剤の組成）
本実施形態に係る脂肪乳剤は例えば、水相６５質量％以上９０質量％以下と、油相１０質量％以上３０質量％以下との乳化物であることが好ましい。
【００９８】
（脂肪乳剤の製造）
例えば、所定量の油相に卵黄リン脂質およびその他の添加剤（例えばグリセリン）などを常用のホモジナイザーにて混合および均質化し、次いで、これに必要量の水を加えた後、前記ホモジナイザーで再び均質化を行って水中油型乳剤（乳化物）に変換することにより、本実施形態に係る脂肪乳剤を製造することができる。
【００９９】
(リポ化製剤)
上記実施形態に係るリポ化製剤は、上記実施形態に係る卵黄リン脂質組成物および薬剤を含む乳化粒子と、該乳化粒子が分散された水相と、を含むことにより、高純度でかつ乳化安定性に優れている。
【０１００】
本実施形態に係るリポ化乳剤において、乳化粒子の平均粒子径は通常、０．１μｍ以上０．５μｍ以下であり、安定性により優れている観点から、好ましくは０．３μｍ以下である。
【０１０１】
本実施形態に係るリポ化製剤を構成する油相としては、例えば、上記実施形態に係る乳化粒子を構成する油相として例示したものを使用することができる。
【０１０２】
本実施形態に係るリポ化乳剤を構成する薬剤としては、限定されないが、例えば親油性の薬剤であることが好ましく、現状上市されているものとしては、プロスタグランジン（ＰＧＥ１），ステロイド（パルミチン酸デキサメタゾン），ＮＳＡＩＤＳ（フルルビプロフェンアキセチル），プロポフォールが挙げられ、その他、より具体的には、例えば、ジアゼパム、クレビジピン酪酸、インドメタシン等が挙げられる。
【０１０３】
本実施形態に係るリポ化製剤は例えば、水相６５質量％以上９０質量％以下と、油相１０質量％以上３０質量％以下との乳化物であることが好ましく、薬剤の含有量は例えば５μｇ／ｍL以上１０質量％以下である。
【０１０４】
（リポ化製剤の製造）
例えば、所定量の油相に、卵黄リン脂質、薬剤およびその他の添加剤（例えばグリセリン）などを常用のホモジナイザーにて混合および均質化し、次いで、これに必要量の水を加えた後、前記ホモジナイザーで再び均質化を行って水中油型乳剤（乳化物）に変換することにより、本実施形態に係るリポ化製剤を製造することができる。
【実施例】
【０１０５】
４．実施例
以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は実施例に限定されない。【０１０６】
［実施例１］
乾燥卵黄からアルコール（９６質量％エタノール含有エタノール−水混合液）抽出した後、減圧下で溶媒を除去し、さらに２０倍量のアセトンで処理して、下記組成を有する原料卵黄リン脂質組成物（第１の原料卵黄リン脂質組成物・第２の原料卵黄リン脂質組成物）を得た。
ＰＣ        ７５質量％
ＰＥ        １８質量％
ＬＰＥ    ２．５質量％
ＣＨ      ０．８質量％
アミノ酸  ０．６質量％【０１０７】
上記原料卵黄リン脂質組成物１００ｇを溶媒（ヘキサン−メタノール（８０：２０）３００ｍｌに溶解させたうえで、第１のイオン交換樹脂（製品名：Amberlite IR120B(陽イオン交換樹脂：Ｈ型)１２ｍＬ、Amberlite IRA400(陰イオン交換樹脂：ＯＨ型)２４ｍＬ）を入れた容器に添加して、撹拌を行うことにより、樹脂処理（温度：２０〜４０℃、時間：４分間）を行った。これにより、ＬＰＥの含有量が０．５質量％であり、かつ、アミノ酸の含有量が１０ｍｇ／１００ｇである第１の卵黄リン脂質組成物を得た（第１の樹脂処理工程）。前記第１の樹脂処理工程において、卵黄リン脂質組成物中のアミノ酸の含有量の１分間あたりの低下速度は１５０ｍｇ／１００ｇであった。【０１０８】
上記原料卵黄リン脂質組成物１００ｇを溶媒（ヘキサン−メタノール（８０：２０）３００ｍｌに溶解させたうえで、第２のイオン交換樹脂（製品名：Amberlite IR120B(陽イオン交換樹脂：Ｈ型)  ６ｍＬ、Amberlite IRA404(陰イオン交換樹脂：ＯＨ型)１０ｍＬ）を入れた容器に添加して、撹拌を行うことにより、樹脂処理（温度：２０〜４０℃、時間：２０分間）を行った。これにより、ＬＰＥの含有量が１．５質量％であり、かつ、アミノ酸の含有量が４００ｍｇ／１００ｇである第２の卵黄リン脂質組成物を得た（第２の樹脂処理工程）。前記第２の樹脂処理工程において、卵黄リン脂質組成物中のアミノ酸の含有量の１分間あたりの低下速度は１０ｍｇ／１００ｇであった。【０１０９】
次に、前記第１の卵黄リン脂質組成物／前記第２の卵黄リン脂質組成物（質量比）が１／１となるように混合して、下記組成を有する実施例１の最終卵黄リン脂質組成物を得た。なお、得られた卵黄リン脂質組成物中の遊離脂肪酸の含有量は０．２質量％であった。
ＰＣ        ７５質量％
ＰＥ        １８質量％
ＬＰＥ    １．０質量％
ＣＨ      ０．８量％
アミノ酸  ０．４質量％【０１１０】
［実施例２］
上記実施例１の第２の樹脂処理工程において、イオン交換樹脂の代わりにアルミナ１００ｇ（製品名：活性アルミナ（和光純薬工業製））を用いた以外は上記実施例１と同様の処理を行うことにより、下記組成を有する実施例２の卵黄リン脂質組成物を得た。なお、得られた卵黄リン脂質組成物中の遊離脂肪酸の含有量は０．２質量％であった。
ＰＣ        ８０質量％
ＰＥ          ８質量％
ＬＰＥ    ０．５質量％
ＣＨ      ０．８質量％
アミノ酸  ０．２質量％【０１１１】
［試験例１］
前述した実施例１において、樹脂の量および反応時間を変えてアミノ酸含量の異なる５種の卵黄リン脂質組成物(試験番号１〜５)を調製した（表１）。各リン脂質について高圧ホモジェナイザーを用いて脂肪乳剤を製造した。【０１１２】
試験例１の各脂肪乳剤のｐＨは６．５以上１０以下であり、平均粒子径は０．１μｍ以上０．５μｍ以下であった。なお、本実施例において、平均粒子径の測定にはＢＥＣＫＭＡＮ  ＣＯＵＬＴＥＲ製 粒度分布測定装置（型名：Ｎ４  ＰＬＵＳ）を用いた。【０１１３】
これらの試料を水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ９．５に調整し、１２１℃２０分間滅菌して、ゼータ電位およびｐＨを測定した。その結果を表１に示す。【０１１４】
なお、本実施例において、脂肪乳剤のゼータ電位はＭａｌｖｅｒｎ製 ゼータサイザー ナノＺを用いて測定し、脂肪乳剤のｐＨは株式会社堀場製作所製 ｐＨメーター（型名Ｆ−５２）を用いて測定した。【０１１５】
【表１】
0006738899.tif 000002
【０１１６】
表１によれば、本実施例に係る卵黄リン脂質組成物（試験番号２〜５）を用いることにより、ｐＨの低下が少ない（具体的には２．５以下の低下）、安定性に優れた脂肪乳剤を得ることができることが理解できる。【０１１７】
また、試験番号２〜５は、ゼータ電位が低く保たれており、このため加熱滅菌時のｐＨ低下が小さいものと考えられる。【０１１８】
さらに、実施例２より、アルミナを用いた場合も同様の効果が得られることが理解できる。【０１１９】
［試験例２］
前述した試験例１で調整された試験番号１の卵黄リン脂質組成物に対して、セリン（Ser）、トレオニン（Thr）、バリン、ロイシン、イソロイシンを添加した後に凍結乾燥し、超音波ホモジェナイザーを用いて脂肪乳剤を調製した（試験番号６〜８）。これらの試料を水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ９．５に調整し、１２１℃２０分間滅菌して、ｐＨを測定した。その結果を表２に示す。試験例２の各脂肪乳剤のｐＨは６．５以上１０以下であり、平均粒子径は０．１μｍ以上０．５μｍ以下であった。【０１２０】
【表２】
0006738899.tif 000003
【０１２１】
表２によれば、アミノ酸におけるセリンおよびトレオニンの合計の割合が、該アミノ酸の総量を１００質量部とした場合、１０質量部以上であることにより、加熱滅菌後によるｐＨの低下が少ない、安定性に優れた脂肪乳剤が得られやすいことができることが理解できる。【０１２２】
［試験例３］
前述した試験例１で調整した試料１に対して、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、バリン、ロイシン、イソロイシンを添加した後に凍結乾燥し、超音波ホモジェナイザーを用いて脂肪乳剤を調製した。これらの試料を水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ９．５に調整し、１２１℃２０分間滅菌してｐＨを測定した。その結果を表３に示す。試験例３の各脂肪乳剤のｐＨは６．５以上１０以下であり、平均粒子径は０．１μｍ以上０．５μｍ以下であった。【０１２３】
【表３】
0006738899.tif 000004
【０１２４】
表３によれば、アミノ酸におけるセリン、トレオニン、アルギニン及びリジンの合計の割合が、該アミノ酸の総量を１００質量部とした場合、１０質量部以上であることにより、加熱滅菌後によるｐＨの低下が少ない、安定性に優れた脂肪乳剤が得られやすいことができることが理解できる。【０１２５】
［試験例４］
実施例１の卵黄リン脂質組成物６ｇおよび大豆油１００ｇを高速攪拌して分散させた中に、蒸留水３８４ｇおよびグリセリン１０ｇを添加した後、租乳化（攪拌速度：１０，０００ｒｐｍ、攪拌時間：４０分間）を行った後、精乳化（高圧乳化：５００ｋｇ／ｃｍ２，１０〜２０回繰り返し通液した。）を行った。その後、ｐＨ調整および濾過を行った後、ガラス製バイアル瓶に充填して、試験例４の脂肪乳剤（２０質量％大豆油含有Ｏ／Ｗエマルジョン）を得た。【０１２６】
得られた脂肪乳剤を１２１℃２０分間滅菌した後、瓶を開封して、該脂肪乳剤の平均粒子径およびｐＨを測定したところ、試験例４の脂肪乳剤は、滅菌前後の平均粒子径の変化が少なく、滅菌後のｐＨの低下が抑えられており、安定性が高いものであった。【０１２７】
［試験例５］
実施例１の卵黄リン脂質組成物６ｇ、大豆油５０ｇおよび薬剤（インドメタシン）１０ｇを高速攪拌して分散させた中に、蒸留水４２４ｇおよびグリセリン１０ｇを添加した後、租乳化（攪拌速度：１０，０００ｒｐｍ、攪拌時間：４０分間）を行った後、精乳化（高圧乳化：５００ｋｇ／ｃｍ２，１０〜２０回繰り返し通液した。）を行った。その後、ｐＨ調整および濾過を行った後、ガラス製バイアル瓶に充填して、試験例５のリポ化製剤（１０質量％大豆油含有Ｏ／Ｗエマルジョン）を得た。【０１２８】
得られたリポ化製剤を１２１℃２０分間滅菌した後、瓶を開封して、リポ化製剤の平均粒子径およびｐＨを測定したところ、試験例５のリポ化製剤は、滅菌前後の平均粒子径の変化が少なく、滅菌後のｐＨの低下が抑えられており、安定性が高いものであった。