(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＤＮａｓｅ酵素を含む、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法に関連する副作用を、がんに罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善するための組成物であって、前記ＤＮａｓｅ酵素は、ＤＮａｓｅ  Ｉ、ＤＮａｓｅ  γまたはＤＮａｓｅ  ＩＩであり、かつ前記化学療法の少なくとも１つの副作用を予防または改善するのに有効な量で前記対象に投与され、前記化学療法の副作用は、骨髄毒性、血液生化学における異化変化、心臓毒性、消化管のびらんまたは潰瘍、免疫抑制および好中球減少症からなる群より選択される、組成物。
【請求項２】
前記量のＤＮａｓｅ酵素は、前記対象において細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法の有効性を高めるのに有効である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記心臓毒性は心筋壊死である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記化学療法は、代謝拮抗物質、アルキル化剤、抗がん抗生物質、微小管標的薬、トポイソメラーゼ阻害剤、アルカロイド類および標的治療薬からなる群より選択される１種以上の化合物の投与を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記化学療法は、アントラサイクリン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、エトポシド、タキサンおよびシクロホスファミドからなる群より選択される１種以上の化合物の投与を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記ＤＮａｓｅ酵素は、前記化学療法の１サイクル中または１サイクル後に投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
ＤＮａｓｅ酵素を含む、放射線療法に関連する副作用を、がんに罹患しかつ放射線療法を受けている対象において予防または改善するための組成物であって、前記ＤＮａｓｅ酵素は、ＤＮａｓｅ  Ｉ、ＤＮａｓｅ  γまたはＤＮａｓｅ  ＩＩであり、かつ前記放射線療法の少なくとも１つの副作用を予防または改善するのに有効な量で前記対象に投与され、前記放射線療法の副作用は体重減少である、組成物。
【請求項８】
前記量のＤＮａｓｅ酵素は、前記対象において放射線療法の有効性を高めるのに有効である、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記放射線療法は、外照射療法または全身性ラジオアイソトープ療法である、請求項７または８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ＤＮａｓｅ酵素は、前記放射線療法の１サイクル中または１サイクル後に投与される、請求項７〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ＤＮａｓｅ  Ｉはヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＤＮａｓｅ酵素は延長された半減期を有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ＤＮａｓｅ酵素は、０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内の量で投与される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ＤＮａｓｅ酵素は、１．５〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内の量で投与される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ＤＮａｓｅ酵素は、１０〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内の量で投与される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ＤＮａｓｅ酵素は、静脈内、腹腔内または経腸投与される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ＤＮａｓｅ酵素は経口投与される、請求項１〜１５のいずれ一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記対象はヒトである、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、２０１４年６月１９日に出願され、その内容が参照により本明細書に全体として組み込まれる米国仮特許出願第６２／０１４，３４１号に対する優先権を主張する。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、様々な細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法化合物および放射線療法に関連する毒性を予防または改善するためのデオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
癌は、ヒトにおける極めて重要な死因の１つである。現時点で主要な癌療法は、手術、放射線療法ならびに細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法である。化学療法治療の分野における進歩にもかかわらず、大多数の公知の化学療法には、脊髄症、血液障害、消化系障害（例えば、悪心、嘔吐、食欲不振、下痢、便秘）、肺機能不全症、皮膚障害、神経系障害、内分泌障害、生殖器障害、心血管疾患、肝障害、膵臓疾患、腎症、膀胱の不調、高尿酸血症、免疫能力の低下、感染症、光線過敏症、脱毛などを含む重篤な副作用が関連している（２〜５）。これらの副作用は、生命を脅かす、または重篤に消耗性であり、化学療法に関連する重大な病的状態や死亡を引き起こす。
【０００４】
癌化学療法の主要な合併症の１つは、骨髄細胞の損傷または骨髄細胞機能の抑制である。詳細には、化学療法は、主として骨髄や脾臓において見いだされる造血前駆細胞を損傷または破壊し、新生血球（顆粒球、リンパ球、赤血球、単核白血球、血小板など）の産生を妨げる。多くの癌患者は、化学療法に続発する感染症または他の造血不全の結果のために死亡する。化学療法薬は、さらにまた血小板の標準に満たない形成を生じさせることがあり、これは出血傾向を生じさせる。赤血球産生の阻害は結果として貧血を生じさせることがある。さらに近年には、より広範囲の悪性腫瘍に対するはるかに強力な細胞傷害性療法やはるかに効果的な化学療法レジメンの開発が、腫瘍崩壊症候群（ＴＬＳ）と称される重篤な毒性有害事象の発生頻度を大きく高めることも認識されてきた（１６）。ＴＬＳは、リンパ腫および白血病に対する化学療法の状況において最も頻回に発生する、細胞増殖抑制性療法の投与の結果として起こる可能性があり、瀕死の細胞の分解生成物によって誘発される１群の代謝性合併症である。
【０００５】
化学療法が極めて消耗性であり、症状が極めて重篤である主要な理由は、化学療法薬が正常な健常細胞とそれらが標的とするべく設計されている腫瘍細胞とをしばしば識別できないことにある。化学療法に関連する毒性の原因となるもう一つの機序は、化学療法誘導性細胞死の結果としての壊死またはアポトーシスに陥っている細胞から遊離される細胞成分の毒性作用である。
【０００６】
化学療法薬に関連する副作用は、そのような薬物を投与できる頻度および用量を制限するので、有効性をより低下させる。
【０００７】
全身性細胞傷害性化学療法の概念が進化するにつれて、化学療法に関連する毒性を弱毒化することが可能なアプローチを同定するため、化学療法薬への患者の曝露の中断を回避するために数多くの研究努力が重ねられてきた。低毒性投与様式の開発を導く化学療法薬の投与およびスケジュール調整は、１つの可能性である（６）。他の研究者らは、例えば化学療法中および化学療法後の絶食または特定栄養素の制限など（７）；および患者の食事への数種の特定食事性アミノ酸の補足などの食事性アプローチを提案してきた（８）。例えば、ピリミジンヌクレオシドアナログによって誘導される毒性を予防するための特定の薬物特異的代謝性解毒剤、特にウリジンもしくはシチジンのアシル化誘導体の使用は、特許文献１に開示されている。アルキル化剤によって誘発される毒性を予防するためのクロマノールグリコシドの使用は、特許文献２に開示されている。アントラサイクリン誘導性心臓毒性を予防するための酸化防止剤の使用もまた提案されてきた（９）。化学療法薬の組織特異的毒性の弱毒化、特にα−インターフェロンもしくはβ−インターフェロンの局所投与を使用した粘膜炎の予防（特許文献３）；選択的グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）アナログを使用する胃および腸副作用の予防（特許文献４）；Ａ２Ｂアデノシン受容体アンタゴニストを使用する肝損傷の予防（特許文献５）およびＩＧＦＢＰ−１成長因子の阻害剤を使用する前立腺損傷の予防（特許文献６）もまた開示されている。化学療法の全身性毒性を改善するため、および化学療法を受けている哺乳動物における健常な筋組織および脂肪組織を維持するためのアルカリホスファターゼ酵素の使用は、特許文献７に開示されている。
【０００８】
化学療法に関連する毒性を予防または改善するための新規な組成物および方法の開発は、高度に望ましい。
【０００９】
癌を治療するための現行の放射線療法は、早期癌および放射線感受性癌を有する患者には大きな利益を提供するが、これらの利益は放射線抵抗性腫瘍（例えば、脳腫瘍または膵臓癌）を有する患者および末期癌の患者にとってはそれほど有意ではない。これらの患者にとっては、腫瘍を根絶するために必要とされる放射線は、非忍容性または致死性の放射線損傷を誘発する可能性がある。これは特に、急速に発達する正常組織が彼らの腫瘍よりもはるかに放射線感受性であることが多く、このため同一疾患を有する成人にとっては治癒的であろう照射療法を忍容することができない小児科患者に当てはまる。正常組織への損傷は、幼齢の癌患者、中枢神経系癌、放射線抵抗性の癌および大きな腫瘍を有する末期癌の患者に対する照射療法による治療の使用を制限する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許第７，７７６，８３８号明細書
【特許文献２】米国特許第７，４６２，６０１号明細書
【特許文献３】米国特許第５，０１７，３７１号明細書
【特許文献４】米国特許第８，６４２，７２７号明細書
【特許文献５】米国特許第８，１８８，０９９号明細書
【特許文献６】米国特許第８，２１１，７００号明細書
【特許文献７】米国特許第８，４６０，６５４号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
照射療法に関連する毒性を予防または改善するための新規な組成物および方法の開発が高度に望ましい。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
発明の背景に記載したように、当分野においては、化学療法および照射療法に関連する毒性を予防または改善するための新規な組成物および方法を開発するという大きな課題がある。本発明は、これやその他の課題をＤＮａｓｅ酵素に基づく組成物および方法を提供することにより解決する。
【００１３】
詳細には、１つの態様では、本発明は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法に関連する毒性を、癌に罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は、前記化学療法の少なくとも１つの副作用を予防または改善するのに有効である方法を提供する。また別の態様では、本発明は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法の有効性を、癌に罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において高める方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記化学療法の少なくとも１つの副作用を予防または改善するのに有効であり、ＤＮａｓｅの投与は前記化学療法に関連する毒性の予防または改善をもたらす方法を提供する。
【００１４】
上記の方法の１つの特定実施形態では、前記化学療法の副作用は、体重減少、骨髄毒性、血液生化学における異化変化、心筋壊死、消化管毒性、免疫抑制および好中球減少症からなる群より選択される。
【００１５】
また別の態様では、本発明は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法に関連する体重減少をもたらす異化状態を、癌に罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記化学療法に関連する体重減少をもたらす異化状態を予防または改善するのに有効である方法を提供する。１つの特定の実施形態では、化学療法は、アントラサイクリン含有療法である。
【００１６】
さらにまた別の態様では、本発明は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法に関連する骨髄毒性および／または血液生化学における異化変化を、癌に罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記化学療法に関連する骨髄毒性および／または血液生化学における異化変化を予防または改善するのに有効である方法を提供する。１つの特定の実施形態では、化学療法は、アントラサイクリン含有療法である。
【００１７】
また別の態様では、本発明は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法に関連する心臓毒性を、癌に罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記化学療法に関連する心臓毒性を予防または改善するのに有効である方法を提供する。１つの特定の実施形態では、心臓毒性は、心筋壊死である。１つの特定の実施形態では、化学療法は、アントラサイクリン含有療法である。
【００１８】
また別の態様では、本発明は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法に関連する消化管毒性を、癌に罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記化学療法に関連する消化管毒性を予防または改善するのに有効である方法を提供する。１つの特定の実施形態では、化学療法は、５−フルオロウラシル含有療法および／またはエトポシド含有療法である。
【００１９】
さらに別の態様では、本発明は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法に関連する免疫抑制を、癌に罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記化学療法に関連する免疫抑制を予防または改善するのに有効である方法を提供する。１つの特定の実施形態では、化学療法は、タキサン含有療法である。
【００２０】
さらに別の態様では、本発明は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法に関連する好中球減少症を、癌に罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記化学療法に関連する好中球減少症を予防または改善するのに有効である方法を提供する。１つの特定の実施形態では、化学療法は、シクロホスファミド含有療法である。
【００２１】
本発明の上記の方法のいずれかの１つの実施形態では、化学療法は、代謝拮抗物質、アルキル化剤、抗癌抗生物質、微小管標的薬、トポイソメラーゼ阻害剤、アルカロイド類および標的治療薬からなる群より選択される１種以上の化合物の投与を含む。
【００２２】
本発明の上記の方法のいずれかの１つの実施形態では、化学療法は、アントラサイクリン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、エトポシド、タキサンおよびシクロホスファミドからなる群より選択される１種以上の化合物の投与を含む。
【００２３】
本発明の上記の方法のいずれかの１つの実施形態では、ＤＮａｓｅ酵素は化学療法の１サイクル中に投与される。本発明の上記の方法のいずれかまた別の実施形態では、ＤＮａｓｅ酵素は化学療法の１サイクル後に投与される。
【００２４】
また別の態様では、本発明は、放射線療法に関連する毒性を、癌に罹患しかつ前記放射線療法を受けている対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記放射線療法の少なくとも１つの副作用を予防または改善するのに有効である方法を提供する。
【００２５】
また別の態様では、本発明は、放射線療法の有効性を、癌に罹患しかつ前記放射線療法を受けている対象において高める方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記放射線療法の少なくとも１つの副作用を予防または改善するのに有効であり、ＤＮａｓｅの投与は前記放射線療法に関連する毒性の予防または改善をもたらす方法を提供する。
【００２６】
上記の２つの方法の１つの実施形態では、放射線療法の副作用は、皮膚の刺激もしくは損傷、疲労、悪心、嘔吐、線維症、腸損傷、記憶喪失、不妊症および二次癌からなる群より選択される。
【００２７】
さらにまた別の態様では、本発明は、放射線療法に関連する体重減少を、癌に罹患しかつ前記放射線療法を受けている対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記放射線療法に関連する体重減少を予防または改善するのに有効である方法を提供する。
【００２８】
上記の３つの方法の１つの実施形態では、放射線療法は、外照射療法または全身性ラジオアイソトープ療法である。
【００２９】
上記の３つの方法の１つの実施形態では、ＤＮａｓｅ酵素は、放射線療法の１サイクル中に投与される。また別の実施形態では、ＤＮａｓｅ酵素は放射線療法の１サイクル後に投与される。
【００３０】
本発明の上記の方法のいずれかの１つの実施形態では、ＤＮａｓｅ酵素は、ＤＮａｓｅ  Ｉ（例えば、ヒトＤＮａｓｅ  Ｉもしくはウシ膵ＤＮａｓｅ  Ｉ）またはそれらのアナログ（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｘ、ＤＮａｓｅ  γもしくはＤＮＡＳ１Ｌ２）である。本発明の上記の方法のいずれかのまた別の実施形態では、ＤＮａｓｅ酵素は、ＤＮａｓｅ  ＩＩである。１つの実施形態では、ＤＮａｓｅ酵素は、延長された半減期を有する（例えば、ポリシアル酸と共役する、またはアクチン結合部位の修飾によってアクチンへの結合から保護される）。
【００３１】
本発明の上記の方法のいずれかの１つの実施形態では、ＤＮａｓｅ酵素の治療有効量は、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ／日もしくは少なくとも１，０００クニッツ単位（Ｋｕｎｉｔｚ  ｕｎｉｔｓ：ＫＵ）／ｋｇ／日、好ましくは少なくとも１．５ｍｇ／ｋｇ／日もしくは少なくとも３，０００ＫＵ／ｋｇ／日である。本発明の上記の方法のいずれかの１つの実施形態では、ＤＮａｓｅ酵素の治療有効量は、０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ／日もしくは１，０００〜２００，０００ＫＵ／ｋｇ／日、好ましくは０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ／日もしくは１，０００〜１００，０００ＫＵ／ｋｇ／日、より好ましくは１．５〜５０ｍｇ／ｋｇ／日もしくは３，０００〜１００，０００ＫＵ／ｋｇ／日、最も好ましくは１０〜５０ｍｇ／ｋｇ／日もしくは２０，０００〜１００，０００ＫＵ／ｋｇ／日である。
【００３２】
本発明の上記の方法のいずれかの１つの実施形態では、ＤＮａｓｅ酵素は、静脈内または腹腔内投与される。本発明の上記の方法のいずれかの１つの実施形態では、ＤＮａｓｅ酵素は、腸内（例えば、経口）投与される。
【００３３】
本発明の上記の方法のいずれかの１つの実施形態では、対象は、ヒトである。
【００３４】
本発明のこれらやその他の態様は、当業者には下記の説明、特許請求項および図面から明白であろう。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】ドキソルビシン（７．５ｍｇ／ｋｇ）の亜致死性ＩＶ投与、およびヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉ（１５ｍｇ／ｋｇ）の連日ＩＰ注射（黒色の棒）またはプラセボ（ＷＦＩ）の連日ＩＰ注射（斜線の棒）のいずれかを負荷投与された、死亡ラットにおける心筋壊死領域を示す棒グラフである。各心臓からの連続心筋顕微鏡検査サンプルは、壊死領域を定量するために自動ビデオアナライザを使用して分析した。壊死領域の総計（Ｓｎａ；ｎｍ２）は、各個別剖検心臓からの連続スライド３０枚中の壊死領域の総計として計算した（ｎ＝３、ＤＮａｓｅ  Ｉ処置ラット（黒色棒）；ｎ＝５、プラセボ処置ラット（斜線棒））。
【図２】エトポシド（２００ｍｇ／ｋｇ）および５−フルオロウラシル（５−ＦＵ；４００ｍｇ／ｋｇ）の経口投与、その後に（Ａ）ヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉ（５０ｍｇ／ｋｇ）によるＩＶ処置、または（Ｂ）プラセボ（ＷＦＩ）によるＩＶ処置を受けたラットの染色した胃の写真を示す。パネル（Ｂ）の胃には多数のびらんおよび潰瘍が見られるが、パネル（Ａ）の胃は肉眼的異常を全く有していない。
【図３】シクロホスファミド（２００ｍｇ／ｋｇ）の単回ＩＰ注射により好中球減少症が誘導され、その後に無処置（第Ｉ群）、あるいはヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉ（２５ｍｇ／ｋｇ）でのＩＶ処置（第ＩＩ群）またはヒト組換えＧＭ−ＣＳＦ（２００μｇ／ｋｇ）でのＳＣ処置（第ＩＩＩ群）を受けた、３つの実験群における白血球数（ＷＢＣ）の動態をまとめたグラフである。垂直軸は、１０９ＷＢＣ／Ｌの単位を用いてＷＢＣを表す。水平軸は、シクロホスファミド注射後の日数を表す。その図は、例えばシクロホスファミドなどのアルキル化剤により誘導される好中球減少症に対するＤＮａｓｅ処置の改善効果を示す。
【図４】癌を誘導するためにＬ１２１０白血病細胞が移植され、その後にシトシンアラビノシド（ＡｒａＣ）および／またはＤＮａｓｅ  ＩＩにより処置された動物についての生存試験データの概要を示す棒グラフである。６つの実験群が水平軸上に表示されている。第１群：陰性コントロール；第２群：ＡｒａＣ（陽性コントロール）；第３群：ＡｒａＣ＋ＤＮａｓｅ  ＩＩ（１５ｍｇ／ｋｇ）；第４群：ＡｒａＣ＋ＤＮａｓｅ  ＩＩ（４５ｍｇ／ｋｇ）；第５群：ＤＮａｓｅ  ＩＩ（１５ｍｇ／ｋｇ）；第６群：ＤＮａｓｅ  ＩＩ（４５ｍｇ／ｋｇ）。この図は、白血病のマウスの生存率に対するＤＮａｓｅおよびＡｒａＣ処置の相乗効果を証明している。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
本発明者らは、以前に、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）酵素が癌を治療するための有用な物質であることを証明したが（例えば、米国特許出願公開第２０１０／０１５０９０３号明細書および米国特許第７，６１２，０３２号明細書を参照されたい）、これは数人の著者らによって近年確証されている特性である（１０〜１２）。しかし、ＤＮａｓｅには抗増殖性化学療法の忍容性への有意な影響が欠如すること（１５）、および化学療法の毒性増加の重大な一因になることさえあること（１７）も報告されてきた。
【００３７】
本発明は、ＤＮａｓｅ酵素が細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法の有効性を高めるだけではなく、さらに化学療法関連毒性も有意に低下させるという本発明者らによる予想外の発見に基づく。この発見は、化学療法の忍容性へのＤＮａｓｅの影響の欠如（１５）および化学療法の腎毒性の増加へのＤＮａｓｅの寄与（１７）に関する以前の報告に照らすと、特に驚くべきことである。ＤＮａｓｅの化学療法関連毒性を予防および／または改善する能力は、様々なタイプのＤＮａｓｅ酵素が共有しており、薬物および組織とは無関係に、ＤＮａｓｅを化学療法補助療法のための高度に望ましく強力な候補にしている。実際に、下記の実施例のセクションにおいて証明するように、様々なタイプのＤＮａｓｅ酵素（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｉ、ＤＮａｓｅ  γおよびＤＮａｓｅ  ＩＩ）を使用すると、ドキソルビシン（ＤＮＡを挿入することによって作用する代謝拮抗物質）、５−ＦＵ（チミジル酸シンターゼの阻害を通して作用する代謝拮抗物質）、エトポシド（トポイソメラーゼ阻害剤）、タキサン（微小管崩壊物質）およびシクロホスファミド（アルキル化剤）などの化学療法薬の毒性を改善することができる。
【００３８】
用語の定義
用語「細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法」および「化学療法」は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性薬を投与する工程を含む療法を意味するために本明細書では互換的に使用される。
【００３９】
用語「抗癌剤」および「抗癌化学療法薬」は、本明細書では癌を治療するために使用されるあらゆる化学的化合物を意味するために使用される。抗癌化学療法薬は、当分野において周知である（例えば、Ｇｉｌｍａｎ  Ａ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，８ｔｈ  Ｅｄ．，Ｓｅｃ  １２：１２０２−１２６３（１９９０）を参照されたい）。化学療法薬の特定の例は、本明細書を通して提供される。
【００４０】
本明細書で使用する用語「化学療法の副作用」は、化学療法の必ずしも予想外ではないが望ましくなく故意ではない結果を意味する。
【００４１】
本明細書で使用する用語「照射療法」、「放射線療法」および「ＲＴ」は、直接的、またはＤＮＡを損傷させる罹患細胞内の荷電粒子を作り出すことによってのいずれかで悪性腫瘍のＤＮＡを損傷させるための癌治療の一部としての電離放射線の医学的使用を意味するために互換的に使用される。本発明により含まれる放射線療法の一般に使用されるタイプには、例えば、外照射療法（ＥＢＲＴもしくはＸＲＴ）、近接照射療法／密封線源放射線療法および全身性ラジオアイソトープ療法／非密封線源照射療法が含まれる。
【００４２】
本明細書で使用する用語「照射療法の副作用」または「放射線療法の副作用」は、本明細書では、放射線療法の必ずしも予想外ではないが望ましくなく故意ではない結果を意味する。どのような副作用が発生するのかは、治療される身体の領域、１日当たり投与される用量、投与される総量、患者の一般病状および同時に実施される他の治療に依存し、例えば、皮膚の刺激もしくは損傷、疲労、悪心、嘔吐、線維症、腸損傷、記憶喪失、不妊症または二次癌を含む場合がある。
【００４３】
本明細書で使用する用語「異化状態」は、化学療法または化学放射線療法を背景にして発生する場合がある急速な体重減少ならびに脂肪および骨格筋質量の減少を特徴とする状態を意味する。関連する臨床事象には、例えば、免疫抑制、筋衰弱、肺塞栓症に罹患する傾向、血栓性静脈炎およびストレス応答の変化が含まれる。
【００４４】
本明細書で使用する用語「デオキシリボヌクレアーゼ」および「ＤＮａｓｅ」は、ＤＮＡ骨格内のホスホジエステル結合の加水開裂を触媒するあらゆる酵素を意味するために使用される。極めて種類豊富なデオキシリボヌクレアーゼが公知であり、本発明の方法において使用できる。本発明の方法において有用なＤＮａｓｅの非限定的な例には、例えば、ＤＮａｓｅ  Ｉ（例えば、ヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉもしくはウシ膵ＤＮａｓｅ  Ｉ）、ＤＮａｓｅ  Ｉのアナログ（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｘ、ＤＮａｓｅ  γおよびＤＮＡＳ１Ｌ２）、ＤＮａｓｅ  ＩＩ、ホスホジエステラーゼＩ、ラクトフェリンならびにアセチルコリンエステラーゼが含まれる。さらに本発明に含まれるのは、延長された半減期を有するＤＮａｓｅ酵素である（例えば、ポリシアル酸と共役する、またはアクチン結合部位の修飾によってアクチンへの結合から保護されるＤＮａｓｅ酵素；例えば、Ｇｉｂｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１５５，２４９−２５６を参照されたい）。ＤＮａｓｅ  Ｉは、ピリミジンヌクレオチドに隣接するホスホジエステル結合で優先的にＤＮＡを開裂し、３’位に遊離ヒドロキシル基を備える５’５’−ホスフェート末端ポリヌクレオチドを産生し、平均するとテトラヌクレオチドを産生する。ＤＮａｓｅ  Ｉは、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡおよびクロマチンに作用する。
【００４５】
用語「約」は、一部にはその数値がどのように測定または決定されるのか、すなわち測定系の限度に依存する、当業者であれば決定できる特定値に対する許容される誤差範囲内にあることを意味する。例えば「約」は、当分野における実践によって許容できる標準偏差内にあることを意味することができる。または、「約」は、所定の数値の±２０％まで、好ましくは±１０％まで、より好ましくは±５％まで、およびより好ましくは±１％までさえの範囲を意味することができる。または、特に生物学系もしくはプロセスに関して、この用語は数値の１桁分内、好ましくは２倍内の範囲内にあることを意味することができる。特定の数値が本出願および特許請求項に記載されている場合、他に特に記載されない限り、用語「約」は黙示的であり、この状況では特定の数値に対して許容される誤差範囲内にあることを意味する。
【００４６】
本発明の状況では、本明細書で言及した疾患状態のいずれかに関連する限りにおいて、用語「治療する」、「治療」などは、そのような状態に関連する少なくとも１つの症状を軽減もしくは緩和すること、またはそのような状態の進行を緩徐化もしくは逆転させることを意味する。本発明の意味において、用語「治療する」は、さらに発症を停止させる、遅延させる（すなわち、疾患の臨床発現前の期間）および／または疾患を発生もしくは悪化させるリスクを低下させることも意味する。例えば、癌に関連して、用語「治療する」は、患者の腫瘍負荷を排除もしくは減少させる、または転移などを予防、遅延もしくは阻害することを意味する場合がある。
【００４７】
本明細書で使用する、用量もしくは量に適用される用語「治療有効」は、それを必要とする対象への投与後の望ましい活性を生じさせるのに十分な化合物もしくは医薬組成物の量を意味する。本発明の文脈において、用語「治療有効」が細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法の副作用を改善または予防するためのデオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）の使用に関連して使用される場合、この用語はそのような細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法の少なくとも１つの副作用を改善または予防するのに有効であるＤＮａｓｅまたはＤＮａｓｅを含有する医薬組成物の量を意味する。有効成分の組合せ（例えば、化学療法の副作用を改善または予防するのに有効なＤＮａｓｅと他の化合物の組合せ）が投与される場合、この組合せの有効量は、別個に投与された場合に有効であったであろう各成分の量を含んでいても含んでいなくてもよい。
【００４８】
本発明の組成物と関連して使用される語句「医薬上許容される」は、対象（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与された場合に生理学的に忍容される、および典型的に厄介な反応を生じさせないそのような組成物の分子的実体および他の成分を意味する。好ましくは、本明細書で使用する用語「医薬上許容される」は、連邦政府もしくは州政府の規制官庁によって承認されたこと、または哺乳動物、およびより詳細にはヒトにおいて使用するための米国薬局方もしくは一般に認識された他の薬局方に列挙されていることを意味する。
【００４９】
用語「標的治療薬」は、癌が特定の分子標的を有する患者において有効な可能性があるが、そのような標的の非存在下では有効ではない可能性がある１クラスの化学的および生物学的化合物を意味するために使用される（１８）。
【００５０】
本明細書で使用する用語「対象」は、あらゆる哺乳動物を意味する。１つの好ましい実施形態では、対象は、ヒトである。
【００５１】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用するように、名詞は、状況が明白に他のことを指示していない限り、複数の対象を指す。
【００５２】
本発明によると、当分野の技術の範囲内に含まれる慣習的薬理学技術および分子生物学技術が使用されてよい。そのような技術は、文献において十分に説明されている。例えば、特に、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ  ＆  Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（本明細書では“Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９”）；ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ  ｅｄ．１９８５）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（ＭＪ．Ｇａｉｔ  ｅｄ．１９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ  ｅｄｓ．（１９８５））；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４））；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（１９８６）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９４）を参照されたい。
【００５３】
発明の治療方法
１つの態様では、本発明は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法に関連する毒性を、癌に罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｉ（例えば、ヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉもしくはウシ膵ＤＮａｓｅ  Ｉ）、ＤＮａｓｅ  Ｉのアナログ（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｘ、ＤＮａｓｅ  γおよびＤＮＡＳ１Ｌ２）、ＤＮａｓｅ  ＩＩ、ホスホジエステラーゼＩ、ラクトフェリンならびにアセチルコリンエステラーゼ）を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記化学療法の少なくとも１つの副作用を予防または改善するのに有効である方法を提供する。
【００５４】
また別の態様では、本発明は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法の有効性を、癌に罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において高める方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｉ（例えば、ヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉもしくはウシ膵ＤＮａｓｅ  Ｉ）、ＤＮａｓｅ  Ｉのアナログ（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｘ、ＤＮａｓｅ  γおよびＤＮＡＳ１Ｌ２）、ＤＮａｓｅ  ＩＩ、ホスホジエステラーゼＩ、ラクトフェリンならびにアセチルコリンエステラーゼ）を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記化学療法の少なくとも１つの副作用を予防または改善するのに有効であり、ＤＮａｓｅの投与は前記化学療法に関連する毒性の予防または改善をもたらす方法を提供する。
【００５５】
本発明によると、ＤＮａｓｅ酵素を使用すると、広範囲の様々な化学療法薬の毒性を改善することができる。そのような薬剤の非限定的な例には、代謝拮抗物質、例えばピリミジンアナログ（例えば、５−フルオロウラシル［５−ＦＵ］、フロクスウリジン、カペシタビン、ゲムシタビンおよびシタラビン）およびプリンアナログ、葉酸アンタゴニストおよび関連阻害剤（例えば、メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチンおよび２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン））；ビンカアルカノイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビノレルビン）などの天然生成物を含む増殖抑制剤／有糸分裂阻害薬、微小管崩壊物質、例えばタキサン系（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロンおよびナベルビン、エピポドフィロトキシン類（例えば、エトポシド、テニポシド）、ＤＮＡ損傷剤（例えば、アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン類、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、ネダプラチン、シクロホスファミド、シトキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、アクラルビシン、プラルビシン（ｐｕｒａｒｕｂｉｃｉｎ）、ヘキサメチルメラミンオキサリプラチン、イフォスファミド、メルファラン、メクロレタミン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、ニムスチン、ラニムスチン、エストラムスチン、プリカマイシン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テニポシド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびエトポシド（ＶＰ１６））；抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、アントラサイクリン類、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、プレオマイシン、ペプロマイシン、マイトマイシン類（例えば、マイトマイシンＣ）、アクチノマイシン類（例えば、アクチノマイシンＤ）、ジノスタチンスチマラマー）；酵素類（例えば、Ｌ−アスパラギナーゼ）；ネオカルジノスタチン；抗血小板薬；抗増殖性／抗有糸分裂アルキル化剤、例えばナイトロジェンマスタード類（例えば、メクロレタミン、シクロホスファミドおよびアナログ、イミダゾールカルボキサミド、メルファラン、クロラムブシル、ナイトロジェンマスタード−Ｎ−オキシドヒドロクロライド、イフォスファミド）、エチレンイミン類およびメチルメラミン類（例えば、ヘキサメチルメラミン、チオテパ、カルボコン、トリエチレンチオホスファラミド）、アルキルスルホネート類（例えば、ブスルファン、イソプロスルファントシレート）、ニトロソウレア類（例えば、カルムスチン（ＢＣＮＵ）およびアナログ類、ストレプトゾシン）、トラゼネス−ダカルバジン（ＤＴＩＣ）；エポキシド型の化合物（例えば、ミトブロニトール）；抗増殖性／抗有糸分裂性代謝拮抗物質、例えば葉酸アナログ類（例えば、メトトレキセート）；白金配位錯体（例えば、シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、ミトテン、アミノグルテチミド；ホルモン類、ホルモンアナログ類（例えば、エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）およびアロマターゼ阻害剤（例えば、レトロゾール、アナストロゾール）；抗分泌薬（例えば、ブレフェルジン；免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）、シロリムス（ラパマイシン）、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル）；抗血管形成化合物（例えば、ＴＮＰ−４７０、ゲニステイン、ベバシズマブ）および成長因子阻害剤（例えば、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）阻害剤）；アンジオテンシン受容体ブロッカー類；一酸化窒素供与体；アンチセンスオリゴヌクレオチド類；抗体類（例えば、トラスツズマブ）；細胞周期阻害剤および分化誘導剤（例えば、トレチノイン）；ｍＴＯＲ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エニポシド、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、ミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン）；成長因子シグナル伝達キナーゼ阻害剤；ミトコンドリア機能障害誘導剤；クロマチン崩壊剤；ソブゾキサン；トレチノイン；ペントスタチン；フラタミド；ポルフィマーナトリウム；ファドロゾール；プロカルバジン；アセグラトン；放射免疫療法（ＲＩＴ）化合物（例えば、イブリツモマブチウキセタン、ヨウ素（１３１Ｉ）トシツモマブ）；および標的放射性核種療法（ＴＲＴ）化合物（例えば、サマリウム−１５３−ＥＤＴＭＰ、ストロンチウム−８９−クロライド）が含まれる。
【００５６】
本発明の方法によるＤＮａｓｅ酵素を投与する工程により予防または改善できる細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法の副作用の非限定的な例には、例えば、骨髄毒性、好中球減少症、脊髄症（例えば、白血球減少症、顆粒球減少症、リンパ球減少症、血小板減少症、赤血球減少症）；血球減少症（例えば、血漿フィブリノゲン減少症）；血液生化学における異化変化；消化管障害（例えば、悪心、嘔吐、食欲不振、体重減少、胃の重圧感、下痢、便秘、口内炎、食道炎）；肺動脈弁閉鎖不全症（例えば、慢性肺炎、肺線維症、ＡＲＤＳ、ＡＬＳ、肺塞栓症）；皮膚障害（例えば、角質化、皮膚肥厚、色素沈着症、脱毛、皮疹、爪の変化、癌誘導性脱毛症）；神経系障害（例えば、感覚異常症、うつ病、深部反射消失、神経麻痺、聴覚障害、錯話症、見当識障害、精神症状、小脳性運動失調、傾眠、昏睡、眩暈、尿意頻数、便意頻数）；内分泌障害（例えば、下垂体障害、副腎機能障害、高血糖症、低血糖症）；生殖器障害（例えば、性欲減退症、精子過少症、女性化乳房症、月経障害）；心血管障害（例えば、心筋壊死、心筋症、不整脈、低血圧、頻拍、心不全）；肝障害、膵臓障害、腎症、膀胱の不調、高尿酸血症、免疫能力の低下および感染症が含まれる。
【００５７】
また別の態様では、本発明は、放射線療法に関連する毒性を、癌に罹患しかつ前記放射線療法を受けている対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｉ（例えば、ヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉもしくはウシ膵ＤＮａｓｅ  Ｉ）、ＤＮａｓｅ  Ｉのアナログ（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｘ、ＤＮａｓｅ  γおよびＤＮＡＳ１Ｌ２）、ＤＮａｓｅ  ＩＩ、ホスホジエステラーゼＩ、ラクトフェリンならびにアセチルコリンエステラーゼ）を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記放射線療法の少なくとも１つの副作用を予防または改善するのに有効である方法を提供する。
【００５８】
さらに別の態様では、本発明は、放射線療法の有効性を、癌に罹患しかつ前記放射線療法を受けている対象において高める方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｉ（例えば、ヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉもしくはウシ膵ＤＮａｓｅ  Ｉ）、ＤＮａｓｅ  Ｉのアナログ（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｘ、ＤＮａｓｅ  γおよびＤＮＡＳ１Ｌ２）、ＤＮａｓｅ  ＩＩ、ホスホジエステラーゼＩ、ラクトフェリンならびにアセチルコリンエステラーゼ）を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記放射線療法の少なくとも１つの副作用を予防または改善するのに有効であり、ＤＮａｓｅの投与は前記放射線療法に関連する毒性の予防または改善をもたらす方法を提供する。
【００５９】
本発明によると、ＤＮａｓｅ酵素を使用すると、例えば外照射療法（ＥＢＲＴもしくはＸＲＴ）、近接照射療法／密封線源放射線療法および全身性ラジオアイソトープ療法／非密封線源照射療法を含む様々なタイプの放射線療法の毒性を改善し、有効性を高めることができる。
【００６０】
本発明の方法によるＤＮａｓｅ酵素を投与する工程によって予防または改善できる照射療法の副作用の非限定的な例には、例えば、皮膚の刺激もしくは損傷、疲労、悪心、嘔吐、線維症、腸損傷、記憶喪失、不妊症および二次癌が含まれる。
【００６１】
本発明の方法は、有害な副作用を生じさせる抗癌化学療法治療を受けている、広範囲の癌に罹患している対象において使用できる。関連する癌の非限定的な例には、例えば、乳癌、前立腺癌、多発性骨髄腫、移行上皮癌、肺癌（例えば、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ））、腎臓癌、甲状腺癌、白血病（例えば、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ球性白血病）、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫）、頭頸部癌、食道癌、胃癌、結腸癌、腸癌、結腸直腸癌、直腸癌、膵臓癌、肝臓癌、胆管癌、胆嚢癌、卵巣癌、子宮内膜癌、膣癌、子宮頸癌、膀胱癌、神経芽腫、肉腫、骨肉腫、悪性黒色腫、扁平上皮癌、原発性骨肉腫（例えば、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、アダマンチノーム、巨細胞腫および脊索腫）および続発性（転移性）骨肉腫の両方を含む骨肉腫、軟組織肉腫、基底細胞癌、血管肉腫、血管内皮種、粘液肉腫、脂肪肉腫、骨原性肉腫、血管肉腫、血管内皮種、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜種、精巣癌、子宮癌、消化管癌、中皮腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、ワルデンストレーム・マクログロブリン血症、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、気管支原性癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、上皮癌、神経膠腫、膠芽細胞腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏枝神経膠腫、髄膜腫、網膜芽細胞腫、髄様癌、胸腺腫、肉腫などが含まれる。
【００６２】
１つの実施形態では、本発明は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法（例えば、ドキソルビシン療法）に関連する体重減少をもたらす異化状態を、癌に罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｉ（例えば、ヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉもしくはウシ膵ＤＮａｓｅ  Ｉ）、ＤＮａｓｅ  Ｉのアナログ（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｘ、ＤＮａｓｅ  γおよびＤＮＡＳ１Ｌ２）、ＤＮａｓｅ  ＩＩ、ホスホジエステラーゼＩ、ラクトフェリンならびにアセチルコリンエステラーゼ）を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記化学療法に関連する体重減少をもたらす異化状態を予防または改善するのに有効である方法を提供する。
【００６３】
また別の実施形態では、本発明は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法（例えば、ドキソルビシン療法）に関連する骨髄毒性および／または血液生化学における異化変化を、癌に罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｉ（例えば、ヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉもしくはウシ膵ＤＮａｓｅ  Ｉ）、ＤＮａｓｅ  Ｉのアナログ（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｘ、ＤＮａｓｅ  γおよびＤＮＡＳ１Ｌ２）、ＤＮａｓｅ  ＩＩ、ホスホジエステラーゼＩ、ラクトフェリンならびにアセチルコリンエステラーゼ）を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記化学療法に関連する骨髄毒性および／または血液生化学における異化変化を予防または改善するのに有効である方法を提供する。
【００６４】
さらに別の実施形態では、本発明は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法（例えば、ドキソルビシン療法）に関連する心臓毒性（例えば、心臓壊死）を、癌に罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｉ（例えば、ヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉもしくはウシ膵ＤＮａｓｅ  Ｉ）、ＤＮａｓｅ  Ｉのアナログ（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｘ、ＤＮａｓｅ  γおよびＤＮＡＳ１Ｌ２）、ＤＮａｓｅ  ＩＩ、ホスホジエステラーゼＩ、ラクトフェリンならびにアセチルコリンエステラーゼ）を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記化学療法に関連する心臓毒性を予防または改善するのに有効である方法を提供する。
【００６５】
また別の実施形態では、本発明は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法（例えば、５−フルオロウラシル／エトポシド併用化学療法）に関連する消化管毒性を、癌に罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｉ（例えば、ヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉもしくはウシ膵ＤＮａｓｅ  Ｉ）、ＤＮａｓｅ  Ｉのアナログ（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｘ、ＤＮａｓｅ  γおよびＤＮＡＳ１Ｌ２）、ＤＮａｓｅ  ＩＩ、ホスホジエステラーゼＩ、ラクトフェリンならびにアセチルコリンエステラーゼ）を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記化学療法に関連する消化管毒性を予防または改善するのに有効である方法を提供する。
【００６６】
また別の実施形態では、本発明は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法（例えば、タキサン療法）に関連する免疫抑制を、癌に罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素（例えば、ＤＮａｓｅ（例えば、ヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉもしくはウシ膵ＤＮａｓｅ  Ｉ）、ＤＮａｓｅ  Ｉのアナログ（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｘ、ＤＮａｓｅ  γおよびＤＮＡＳ１Ｌ２）、ＤＮａｓｅ  ＩＩ、ホスホジエステラーゼＩ、ラクトフェリンならびにアセチルコリンエステラーゼ）を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記化学療法に関連する免疫抑制を予防または改善するのに有効である方法を提供する。
【００６７】
さらに別の実施形態では、本発明は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法（例えば、シクロホスファミド療法）に関連する好中球減少症を、癌に罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｉ（例えば、ヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉもしくはウシ膵ＤＮａｓｅ  Ｉ）、ＤＮａｓｅ  Ｉのアナログ（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｘ、ＤＮａｓｅ  γおよびＤＮＡＳ１Ｌ２）、ＤＮａｓｅ  ＩＩ、ホスホジエステラーゼＩ、ラクトフェリンならびにアセチルコリンエステラーゼ）を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記化学療法に関連する好中球減少症を予防または改善するのに有効である方法を提供する。
【００６８】
さらにまた別の態様では、本発明は、放射線療法に関連する体重減少を、癌に罹患しかつ前記放射線療法を受けている対象において予防または改善する方法において、対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｉ（例えば、ヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉもしくはウシ膵ＤＮａｓｅ  Ｉ）、ＤＮａｓｅ  Ｉのアナログ（例えば、ＤＮａｓｅ  Ｘ、ＤＮａｓｅ  γおよびＤＮＡＳ１Ｌ２）、ＤＮａｓｅ  ＩＩ、ホスホジエステラーゼＩ、ラクトフェリンならびにアセチルコリンエステラーゼ）を投与する工程を含み、前記の量のＤＮａｓｅ酵素は前記放射線療法に関連する体重減少を予防または改善するのに有効である方法を提供する。
【００６９】
上記の方法のいずれかの１つの実施形態では、ＤＮａｓｅ酵素の治療有効量は、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ／日もしくは少なくとも１，０００ＫＵ／ｋｇ／日、好ましくは少なくとも１．５ｍｇ／ｋｇ／日もしくは少なくとも３，０００ＫＵ／ｋｇ／日である。上記の方法のいずれかの１つの実施形態では、ＤＮａｓｅ酵素の治療有効量は、０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ／日もしくは１，０００〜２００，０００ＫＵ／ｋｇ／日、好ましくは０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ／日もしくは１，０００〜１００，０００ＫＵ／ｋｇ／日、より好ましくは１．５〜５０ｍｇ／ｋｇ／日もしくは３，０００〜１００，０００ＫＵ／ｋｇ／日、最も好ましくは１０〜５０ｍｇ／ｋｇ／日もしくは２０，０００〜１００，０００ＫＵ／ｋｇ／日である。
【００７０】
本発明の方法のいずれかの１つの実施形態では、対象はヒトである。
【００７１】
ＤＮａｓｅおよびＤＮａｓｅ組成物を投与する方法
本発明の方法では、ＤＮａｓｅ酵素は、化学療法薬の投与前、投与中および／または投与後に、または放射線療法の投与前、投与中または投与後に投与することができる。好ましくは、（ｉ）ＤＮａｓｅ酵素および化学療法薬（もしくは放射線療法）は同時に投与される、および／または（ｉｉ）ＤＮａｓｅ酵素は、化学療法薬（もしくは放射線療法）の投与の直後に投与される。ＤＮａｓｅは、患者に１回または一連の治療を通して、１日１回または数回投与することができる。
【００７２】
本発明の方法において有用なＤＮａｓｅ用量は、治療対象の化学療法もしくは放射線療法の副作用のタイプ、これらの副作用の重症度および経過、以前の療法、患者の臨床歴および化学療法（もしくは放射線療法）およびＤＮａｓｅへの応答ならびに主治医の裁量に依存する。有用な用量範囲の非限定的な例には、０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ／日もしくは１，０００〜２００，０００ＫＵ／ｋｇ／日、好ましくは０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ／日もしくは１，０００〜１００，０００Ｋｕｎｉｔｚ  ｕｎｉｔｓ（ＫＵ）／ｋｇ／日、より好ましくは１．５〜５０ｍｇ／ｋｇ／日もしくは３，０００〜１００，０００ＫＵ／ｋｇ／日、最も好ましくは１０〜５０ｍｇ／ｋｇ／日もしくは２０，０００〜１００，０００ＫＵ／ｋｇ／日が含まれる。
【００７３】
本発明の方法によるＤＮａｓｅ酵素の投与は、全身性投与ならびに疾患の部位（例えば、原発性腫瘍）への直接的投与を含む任意の好適な経路によって実施できる。有用な投与経路の特定の非限定的な例には、静脈内（ＩＶ）、皮下（ＳＣ）、腹腔内（ＩＰ）、経口または吸入が含まれる。
【００７４】
特定の実施形態では、ＤＮａｓｅ酵素は、医薬上許容される担体または賦形剤を用いて医薬組成物に処方される。
【００７５】
本発明の方法において使用する調製物は、便宜的にも単一剤形で提示されてよく、当分野において公知の方法によって調製することができる。単一剤形を生成するために担体物質と組み合わせることのできる有効成分の量は、治療される宿主および特定の投与方式に依存して変動するであろう。単一剤形を生成するために担体物質と組み合わせることのできる有効成分の量は、一般には治療効果を生じる化合物の量であろう。
【００７６】
一般に、調製物は液体担体もしくは微粒固体担体またはその両方を用いて調製することができ、その後、必要であれば製品をシェーピングすることができる。
【００７７】
非経口投与のために好適な医薬組成物は、酸化防止剤、バッファー、静菌剤、調製物を予定されるレシピエントの血液と等張性にさせる溶質を含有していてよい、使用直前に無菌注射溶液もしくは分散液に再建できる１種以上の医薬上許容される無菌等張性水溶液もしくは非水溶液、分散剤、懸濁もしくはエマルジョンまたは無菌粉末と組み合わせて、１種以上の有効成分（ＤＮａｓｅおよび任意選択的に細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法の副作用または放射線療法の副作用を改善または予防するのに有効な他の化合物）を含むことができる。本開示の医薬組成物中に使用できる好適な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール類（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）ならびにそれらの好適な混合物、植物油、例えばオリーブ油および注射用有機エステル、例えばオレイン酸エチルが含まれる。適正な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料を使用することによって、分散剤の場合は必要とされる粒径を維持することによって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。
【００７８】
これらの組成物は、さらに保存料、湿潤剤、乳化剤および分散剤を含有することができる。微生物の作用の予防は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などを包含することによって保証できる。さらに、例えば糖類、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物中に含めることが望ましい場合がある。さらに、注射用医薬形の持続的吸収は、モノステアリン酸アルミニウムやゼラチンなどの吸収を遅延させる物質の包含によって引き起こすことができる。
【００７９】
注射用デポー形は、ポリラクチド−ポリグリコライドなどの生分解性ポリマー中の１種以上の有効成分のマイクロカプセル型マトリックスを形成することによって作成できる。有効成分対ポリマーの比率および使用される特定ポリマーの性質に依存して、有効成分の遊離速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）類およびポリ（アンヒドライド）類が含まれる。注射用デポー調製物は、さらに身体組織と適合性であるリポソームまたはマイクロエマルジョン中に有効成分を封入する工程によっても調製される。
【００８０】
経口投与のための調製物は、カプセル剤、カシェ剤、ピル剤、錠剤、散剤、顆粒剤、または水性もしくは非水性液体（例えば、マウスウォッシュ、嚥下すべき組成物または浣腸剤として）中の液剤もしくは懸濁剤として、または各々が規定量の１種以上の有効成分を含有している水中油型もしくは油液中水型エマルジョンとしての形態にあってよい。
【００８１】
経口投与のための固体剤形（カプセル剤、錠剤、ピル剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤など）では、１種以上の有効成分は、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウムなどの１種以上の医薬上許容される担体および／または以下：（１）充填剤もしくは増量剤、例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよび／またはシリル酸；（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシア；（３）保湿剤、例えばグリセロール；（４）崩壊剤、例えば寒天、炭酸カルシウム、馬鈴薯もしくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のシリケート類および炭酸ナトリウム；（５）溶解遅延剤、例えばパラフィン；（６）吸収促進剤、例えば第４級アンモニウム化合物；（７）湿潤剤、例えばセチルアルコールおよびグリセロールモノステアレート；（８）吸着剤、例えばカオリンおよびベントナイト粘土；（９）潤滑剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびそれらの混合物ならびに（１０）着色剤のいずれかと混合することができる。カプセル剤、錠剤およびピル剤の場合、医薬組成物は緩衝剤をさらに含むことができる。類似タイプの固体組成物もまた、例えばラクトースもしくは乳糖などの賦形剤ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどを使用して軟質および硬質充填ゼラチンカプセル中の充填剤として使用することができる。
【００８２】
懸濁剤は、１種以上の有効成分に加えて、例えばエトキシル化イソステアリルアルコール類、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル類、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天およびトラガカントならびにそれらの混合物を含有することができる。
【００８３】
散剤およびスプレー剤は、１種以上の有効成分に加えて、ラクトース、タルク、シリル酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウムおよびポリアミド粉末またはこれらの物質の混合物を含有することができる。スプレー剤は、追加して慣習的噴射促進剤、例えばクロロフルオロ炭化水素類および揮発性未置換炭化水素類、例えばブタンおよびプロパンを含有することができる。
【実施例】
【００８４】
本発明を下記の実施例によってさらに説明して具体的に示す。しかし、本明細書のいずれかの場所でのこれらやその他の実施例の使用は、単に例示するためであり、決して本発明またはいずれか例示した用語の範囲および意味を限定するものではない。同様に、本発明は、本明細書に記載したいずれか特定の好ましい実施形態には限定されない。実際に、本発明の多数の修飾および変形は、本明細書を読めば当業者には明白であり、そのような変形は本発明の精神および範囲から逸脱せずに作成することができる。このため本発明は、本発明の特許請求項が権利を与えられている同等物の全範囲に沿って添付の特許請求項によってのみ限定される。
【００８５】
実施例１：ラットにおける急性ドキソルビシン毒性の改善
材料および方法
この実験では、４２匹のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（１８０〜２００ｇ）（Ｓｔｏｌｂｏｖａｙａ  ｎｕｒｓｅｒｙ  ｏｆ  Ｒｕｓｓｉａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓから入手）を使用した。動物は、自由に飼料と飲料水を摂取できる標準条件下で維持した。下記のように動物を７群（各群６匹）に無作為割り付けした：
１．第Ｉ群：コントロール群（ドキソルビシンなし、ＤＮａｓｅなし）；
２．第ＩＩ群：５日間にわたる３．７５ｍｇ／ｋｇ／日の用量でのドキソルビシン（ＬＥＮＳ）の連日静脈内（ＩＶ）注射＋１５ｍｇ／ｋｇ／日（３０，０００ＫＵ／ｋｇ／日）の用量でのヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉ（Ｐｈａｒｍｓｙｎｔｈｅｚ  ＯＪＳＣ）の連日腹腔内（ＩＰ）注射によって処置した動物；ドキソルビシンとＤＮａｓｅ  Ｉ注射は同時に投与した；
３．第ＩＩＩ群：５日間にわたる３．７５ｍｇ／ｋｇ／日の用量でのドキソルビシン（ＬＥＮＳ）の連日ＩＶ注射＋プラセボ（注射用水［ＷＦＩ］）の連日ＩＰ注射によって処置した動物；
４．第ＩＶ群：５日間にわたる７．５ｍｇ／ｋｇ／日の用量でのドキソルビシン（ＬＥＮＳ）の連日ＩＶ注射＋１５ｍｇ／ｋｇ／日（３０，０００ＫＵ／ｋｇ／日）の用量でのヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉ（Ｐｈａｒｍｓｙｎｔｈｅｚ  ＯＪＳＣ）の連日ＩＰ注射によって処置した動物；ドキソルビシンとＤＮａｓｅ  Ｉ注射は同時に投与した；
５．第Ｖ群：５日間にわたる７．５ｍｇ／ｋｇ／日の用量でのドキソルビシン（ＬＥＮＳ）の連日ＩＶ注射＋プラセボ（ＷＦＩ）の連日ＩＰ注射によって処置した動物；
６．第ＶＩ群：５日間にわたる１０．０ｍｇ／ｋｇ／日の用量でのドキソルビシン（ＬＥＮＳ）の連日ＩＶ注射＋１５ｍｇ／ｋｇ／日（３０，０００ＫＵ／ｋｇ／日）の用量でのヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉ（Ｐｈａｒｍｓｙｎｔｈｅｚ  ＯＪＳＣ）の連日ＩＰ注射によって処置した動物；ドキソルビシンとＤＮａｓｅ  Ｉ注射は同時に投与した；
７．第ＶＩＩ群：５日間にわたる１０．０ｍｇ／ｋｇ／日の用量でのドキソルビシン（ＬＥＮＳ）の連日ＩＶ注射＋プラセボ（ＷＦＩ）の連日ＩＰ注射によって処置した動物。
【００８６】
実験開始から２週間にわたり生存および体重について動物を監視した。
【００８７】
結果
【表１】
0006761857.tif 000002
【００８８】
表１に要約した結果は、ＤＮａｓｅが、ドキソルビシンの致死性を抑制し、亜致死用量のドキソルビシンが負荷投与されたラットの寿命を延ばすことを証明している。生存している動物数によって測定した致死性の抑制は、用量依存的な様式で生じた。
【００８９】
【表２】
0006761857.tif 000003
【００９０】
表２に要約した結果は、ＤＮａｓｅ処置が、３．７５ｍｇ／ｋｇのＬＤ５０用量での急性ドキソルビシン負荷投与を生残したラットにおける体重減少を改善することを証明している。
【００９１】
【表３】
0006761857.tif 000004
【００９２】
表３に要約した結果は、ＤＮａｓｅ処置が、３．７５ｍｇ／ｋｇのＬＤ５０用量での急性ドキソルビシン負荷投与を生残したラットにおける骨髄毒性および血液生化学における異化変化を改善することを示している。
【００９３】
（第ＩＶ群および第Ｖ群）からの亜致死用量のドキソルビシン（７．５ｍｇ／ｋｇ）を負荷投与された心臓死したラットを剖検した。各心臓からの連続心筋顕微鏡検査サンプルを、壊死領域（面積）を定量するために自動ビデオアナライザを使用して分析した。壊死領域の総計（Ｓｎａ；ｎｍ２）は、各個別剖検心臓からの連続スライド３０枚中の壊死領域の総計として計算した（ｎ＝３、第ＩＶ群に関して（図１、黒色棒）；ｎ＝５、第Ｖ群に関して（図１、斜線棒））。第ＩＶ群は１５ｍｇ／ｋｇ用量でヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉの連日ＩＰ注射を受けたが、第Ｖ群はプラセボ（ＷＦＩ）の連日ＩＰ注射を受けた。
【００９４】
図１に提示した結果は、ＤＮａｓｅ処置が、亜致死用量のドキソルビシンを負荷投与されたラットにおける心筋壊死を減少させることを証明している。
【００９５】
実施例２：５−フルオロウラシル／エトポシド併用化学療法の消化管毒性の改善
材料および方法
この実験では、６４匹のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（１７０〜２００ｇ）（Ｓｔｏｌｂｏｖａｙａ  ｎｕｒｓｅｒｙ  ｏｆ  Ｒｕｓｓｉａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓから入手）を使用した。動物は、自由に飼料と飲料水を摂取できる標準条件下で維持した。１日目に、エトポシド（ＬＡＮＣＥ）２００ｍｇ／ｋｇおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ；ＥＢＥＷＥ）４００ｍｇ／ｋｇを５００μＬの９％グルコース溶液中において、供給用ニードルを介して経口投与した。動物を各群１６匹のラットごとの４群に分けた。エトポシド／５−ＦＵ負荷投与の２時間後に、ラットを以下のように処置した：
１．第Ｉ群：ＩＶプラセボ（ＷＦＩ）；
２．第ＩＩ群：１．５ｍｇ／ｋｇ（３，０００ＫＵ／ｋｇ）用量のＩＶでのヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉ（Ｐｈａｒｍｓｙｎｔｈｅｚ  ＯＪＳＣ）；
３．第ＩＩＩ群：５０ｍｇ／ｋｇ（１００，０００ＫＵ／ｋｇ）用量のＩＶでのヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉ（Ｐｈａｒｍｓｙｎｔｈｅｚ  ＯＪＳＣ）；
４．第ＩＶ群：５０ｍｇ／ｋｇ用量のＩＶでのシメチジン溶液（Ｇｅｄｅｏｎ  Ｒｉｃｈｔｅｒ）。
【００９６】
３６時間後、全動物を安楽死させ、胃を切除し、自動ビデオアナライザシステムを使用してびらんおよび出血の存在について分析した。
【００９７】
結果
【表４】
0006761857.tif 000005
【００９８】
表４に要約した結果は、ＤＮａｓｅが、エトポシドおよび５−ＦＵで処置した動物において用量依存的な様式で化学療法誘導性潰瘍を抑制し、消化管びらんを示さない動物数を増加させることを証明している。５０ｍｇ／ｋｇのＤＮａｓｅ  Ｉ用量は、１．５ｍｇ／ｋｇのＤＮａｓｅ  Ｉ用量および５０ｍｇ／ｋｇ用量のシメチジンの両方と比較して、達成される保護に関して有意に優れていた。
【００９９】
図２は、第ＩＩＩ群からのラット（Ａ）および第Ｉ群からのラット（Ｂ）の染色した胃を示している。第Ｉ群動物からの胃には多数のびらんおよび潰瘍が見られるが、第ＩＩＩ群の動物からの胃は肉眼的異常を全く有していない。
【０１００】
実施例３：タキサン誘導性免疫抑制の改善
材料および方法
１０匹の６週齢の雄性（ＣＢＡｘＣ５７Ｂｌ６）Ｆ１マウス（Ｒａｐｐｏｌｏｖｏ  ａｎｉｍａｌ  ｈｏｕｓｅから入手）に単回の２０ｍｇ／ｋｇ用量のパクリタキセル（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ−Ｔｅｖａ）をＩＶ投与した。１時間後に、１群５匹のパクリタキセル処置マウスに、２ｍｇ／ｋｇ用量ＩＰで組換えマウスＤＮａｓｅ  γ（ＵＳＣＮ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｃ．）をＩＰ注射した。１群５匹の非処置マウスには、コントロールとして機能させるために１ｍｌのプラセボ（ＷＦＩ）を同時にＩＰ注射した。全マウスを、頸椎脱臼によって２４時間後に致死させた。各群からの胸腺を収集し、セパレータ内の１０％ウシ胎児血清添加ＲＰＭＩ  １６４０培地中でホモジナイズした。胸腺細胞の懸濁液を濾過し、２分間にわたり４００×ｇで遠心機内で沈殿させ、次に同一培地を用いて再懸濁させた。胸腺細胞を、９６ウエルプレートに播種し（１ウエル当たり、２００μＬの１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ））添加ＲＰＭＩ  １６４０中の９００，０００ｃｅｌｌｓ）、３７℃、湿度１００％および５％  ＣＯ２雰囲気下で３２時間にわたりインキュベートした。次に各ウエルに３Ｈチミジン（１μＣ／１０μｌ／ウエル）およびコンカナバリンＡ（Ｃｏｎ  Ａ；５０μＬ；１．２５μｇ／ｍＬ）を添加した。さらに２４時間のインキュベーション後、胸腺細胞を採取して乾燥させた。標識３Ｈチミジン取込みを、ベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）シンチレーションカウンタを使用して測定した。Ｃｏｎ  Ａ誘導性リンパ球幼若化に関するデータを下記の表５に要約した。
【０１０１】
結果
【表５】
0006761857.tif 000006
【０１０２】
表５に要約した結果は、ＤＮａｓｅが、胸腺細胞の増殖活性のタキサン誘導性抑制を改善することを証明している。
【０１０３】
実施例４：シクロホスファミド誘導性好中球減少症の改善
材料および方法
この実験では、３０匹の１０〜１２週齢の雌性ＢＡＬＢ／Ｃマウス（Ｒａｐｐｏｌｏｖｏ  ａｎｉｍａｌ  ｈｏｕｓｅから入手）を使用した。動物は、自由に飼料と飲料水を摂取できる標準条件下で維持した。１日目に、２００μＬのＷＦＩ中の２００ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミド（Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｎｕｍ−ＬＡＮＳ）の単回ＩＰ注射によって好中球減少症を誘導した。２日目に開始して、その後以下のように処置した：
１．第Ｉ群（ｎ＝１０）：コントロール（処置なし）；
２．第ＩＩ群（ｎ＝１０）：２〜５日目に２５ｍｇ／ｋｇ／日（５０，０００ＫＵ／ｋｇ／日）の用量でヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉ（Ｐｈａｒｍｓｙｎｔｈｅｚ  ＯＪＳＣ）をＩＶ注射して動物を処置した；
３．第ＩＩＩ群（ｎ＝１０）：２〜５日目に２００μｇ／ｋｇ／日の用量でヒト組換えＧＭ−ＣＳＦ（Ｎｅｏｓｔｉｍ、Ｐｈａｒｍｓｙｎｔｈｅｚ  ＯＪＳＣ）を皮下（ＳＣ）注射して動物を処置した。
【０１０４】
各動物における白血球数（ＷＢＣ）を、血球計数装置を使用して１０日間の実験の間毎日監視した。
【０１０５】
結果
図３のグラフは、３つの実験群における白血球数（ＷＢＣ）の動態を要約している。垂直軸は、１０９ＷＢＣ／Ｌの単位を用いてＷＢＣを表す。水平軸は、シクロホスファミド注射後の日数を表す。
【０１０６】
図３に示した結果は、ＤＮａｓｅが、例えばシクロホスファミドなどのアルキル化剤により誘導された好中球減少症を改善することを証明している。特に重要なのは、ＤＮａｓｅ処置はＷＢＣ数の典型的な初期減少を防止するが、ＧＭ−ＣＳＦ処置は初期減少を防止できないことである。
【０１０７】
実施例５：ＤＮａｓｅ処置と抗癌化学療法との相乗作用
材料および方法
ＤＮａｓｅとヌクレオシドアナログ化学療法薬であるシトシンアラビノシド（ＡｒａＣ）とを併用した場合に起こりうる相乗作用を評価するために、ＤＢＡ２マウス（８〜１０週齢；２４〜２６ｇ；Ｒａｐｐｏｌｏｖｏ  ａｎｉｍａｌ  ｈｏｕｓｅから入手）に、癌を誘導するために０日目にＬ１２１０白血病細胞（１ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／マウス；Ｐｅｔｒｏｖ  Ｉｎｓｔｉｔｉｔｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手した細胞）をＩＰ移植した。ＤＮａｓｅおよびＡｒａＣによる処置は、実験１日目に開始した。シトシンアラビノシド（ＡｒａＣ；Ｃｙｔｏｓａｒ；Ｐｆｉｚｅｒ）は、２、５および８日目に１，０００ｍｇ／ｋｇの用量でＩＰ注射した。注射した用量は、以前の実験（１３〜１４）に基づき、そのモデルおよび注射経路に関して適切であると考えられた。ＤＮａｓｅ  ＩＩ（Ｗｏｒｎｉｎｇｔｏｎ）は、１、３、５、８、１０、１２、１５、１７および１９日目に１５ｍｇ／ｋｇ／日および４５ｍｇ／ｋｇ／日の用量でＩＰ注射した。
【０１０８】
下記のように動物を６群（各群６匹）に無作為割り付けした：
１．第Ｉ群：陰性コントロール（処置なし）；
２．第ＩＩ群：陽性コントロール（ＡｒａＣにより処置した動物）；
３．第ＩＩＩ群：ＡｒａＣおよび１５ｍｇ／ｋｇのＤＮａｓｅにより処置した動物；
４．第ＩＶ群：ＡｒａＣおよび４５ｍｇ／ｋｇのＤＮａｓｅにより処置した動物；
５．第Ｖ群：ＡｒａＣを使用せずに１５ｍｇ／ｋｇのＤＮａｓｅにより処置した動物；
６．第ＶＩ群：ＡｒａＣを使用せずに４５ｍｇ／ｋｇのＤＮａｓｅにより処置した動物
【０１０９】
結果
生存データを図４に要約した。図４の垂直軸は、Ｌ１２１０白血病細胞の移植後の日数で測定した生存性を表している。６つの実験群が水平軸上に示されている：第１群−陰性コントロール；第２群−ＡｒａＣ（陽性コントロール）；第３群−ＡｒａＣ＋ＤＮａｓｅ  ＩＩ（１５ｍｇ／ｋｇ）；第４群−ＡｒａＣ＋ＤＮａｓｅ  ＩＩ（４５ｍｇ／ｋｇ）；第５群−ＤＮａｓｅ  ＩＩ（１５ｍｇ／ｋｇ）；第６群−ＤＮａｓｅ  ＩＩ（４５ｍｇ／ｋｇ）。
【０１１０】
図４に要約した結果は、ＡｒａＣ単独（第ＩＩ群）およびＤＮａｓｅ  ＩＩ単独（第Ｖ群および第ＶＩ群）による処置がいずれも、非処置マウス（第Ｉ群）と比較して優れた生存率を生じさせることを示している。しかしながら、ＡｒａＣとＤＮａｓｅの併用は、いずれかの処置単独と比較して明白な生存率の利点を生じさせる。生存率に対するこの併用処置の相乗作用は、ＤＮａｓｅの用量増加に対して用量依存性であった。
【０１１１】
実施例６：ＤＮａｓｅ処置は有効性を増加させ、癌照射療法の毒性を低下させる
材料および方法
ＤＮａｓｅと放射線療法を併用した場合に起こりうる相乗作用を評価するために、６０匹のＳＨＲマウス（１２〜１４週齢；２８〜３２ｇ；Ｒａｐｐｏｌｏｖｏ  ａｎｉｍａｌ  ｈｏｕｓｅから入手）に、腹水腫瘍増殖を誘導するために０日目にエールリヒ（Ｅｒｌｉｃｈ）癌細胞（１ｘ１０６ｃｅｌｌｓ／マウス；Ｐｅｔｒｏｖ  Ｉｎｓｔｉｔｉｔｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手した細胞）をＩＰ移植した。照射療法は、コバルト６０遠隔治療装置を使用して実施した。マウスの腹部領域を外部照射によって処置した。分割照射線量は、５日間にわたり１日当たり２００ｃＧｙであった。動物を、以下のように処置した６群に分けた：第１群：照射療法単独（５日間にわたり、１日当たり外部照射２００ｃＧｙ）；第２群：１日２回２０ｍｇ／ｋｇ／日での組換えヒトＤＮＡｓｅ  １（Ｐｈａｒｍｓｙｎｔｈｅｚ）の筋肉内投与；第３群：１日２回４０ｍｇ／ｋｇ／日での組換えヒトＤＮＡｓｅ  １（Ｐｈａｒｍｓｙｎｔｈｅｚ）の筋肉内投与；第４群：照射療法（５日間にわたる外部照射で１日当たり２００ｃＧｙ）＋１日２回２０ｍｇ／ｋｇ／日での組換えヒトＤＮＡｓｅ  Ｉ（Ｐｈａｒｍｓｙｎｔｈｅｚ）の筋肉内投与；第５群：照射療法（５日間にわたる外部照射で１日当たり２００ｃＧｙ）＋１日２回４０ｍｇ／ｋｇ／日での組換えヒトＤＮＡｓｅ  Ｉ（Ｐｈａｒｍｓｙｎｔｈｅｚ）の筋肉内投与。第６群は、プラセボ（注射用水）を摂取したコントロール群であった。
【０１１２】
結果
エールリヒ癌の移植後１６日目の動物の生存率および体重の動態を表６に要約した。
【表６】
0006761857.tif 000007
【０１１３】
表６に要約した結果は、放射線療法単独（第１群）およびＤＮａｓｅ  Ｉ単独（第２群および第３群）での処置がいずれも、非処置マウス（第６群）と比較して優れた生存率を生じさせることを示している。しかしながら、放射線療法とＤＮａｓｅの併用は、いずれかの処置単独と比較して明白な生存率の利点を生じさせる。生存率に対するこの併用処置の相乗作用は、ＤＮａｓｅの用量増加に対して用量依存性であった。ＤＮａｓｅ処置は、放射線療法により誘導される体重減少も明白に防止する。
【０１１４】
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１１．  Ｃｏｏｌｓ−Ｌａｒｔｉｇｕｅ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．２０１３；１２３（８）：３４４６−３４５８．
１２．  Ｔｒｅｊｏ−Ｂｅｃｅｒｒｉｌ  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１２；７（１２）：ｅ５２７５４．
１３．  Ｃｈａｂｏｔ，Ｇ．ａｎｄ  Ｍｏｍｐａｒｉｅｒ，Ｒ．Ｌ．，Ｃａｎｃｅｒ．Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｐ．１９８４；６８：１４８３−１４８７．
１４．  Ｌｅｃｈ−Ｍａｒａｎｄａ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ，２０００；８５：５８８−５９４．
１５．  Ｈａｌｌ  ＩＨ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．１９７４；６３（４）：６２５−６．
１６．  ＭｃＢｒｉｄｅ  Ａ．，ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｏｎｃｏｌ．２０１２；５：７５
１７．  Ｂａｓｎａｋｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．２００５；１６：６９７−７０２
１８．  Ｇｅｒｂｅｒ  Ｄ．，Ａｍ  Ｆａｍ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ，２００８；７７（３）：３１１−３１９
【０１１５】
本発明は、本明細書に記載した特定の実施形態により範囲を限定することは意図されていない。実際に、本明細書に記載した形態に加えた本発明の様々な修飾は、上述の説明から当業者には明白になるであろう。そのような修飾は、添付の特許請求項の範囲内に含まれることが意図されている。
【０１１６】
本明細書で言及した全ての特許、出願、刊行物、試験方法、文献およびその他の物質は、あたかも本明細書に物理的に存在するかのように、全体として参照により本明細書に組み込まれる。
他の実施形態
１．細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法に関連する毒性を、がんに罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法であって、前記対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記量のＤＮａｓｅ酵素は、前記化学療法の少なくとも１つの副作用を予防または改善するのに有効である、方法。
２．細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法の有効性を、がんに罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において高める方法であって、前記対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記量のＤＮａｓｅ酵素は、前記化学療法の少なくとも１つの副作用を予防または改善するのに有効であり、前記ＤＮａｓｅの投与は前記化学療法に関連する毒性の予防または改善をもたらす、方法。
３．前記化学療法の副作用は、体重減少、骨髄毒性、血液生化学における異化変化、心筋壊死、消化管毒性、免疫抑制および好中球減少症からなる群より選択される、実施形態１または２に記載の方法。
４．細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法に関連する体重減少をもたらす異化状態を、がんに罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法であって、前記対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記量のＤＮａｓｅ酵素は、前記化学療法に関連する体重減少をもたらす異化状態を予防または改善するのに有効である、方法。
５．細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法に関連する骨髄毒性および／または血液生化学における異化変化を、がんに罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法であって、前記対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記量のＤＮａｓｅ酵素は、前記化学療法に関連する骨髄毒性および／または血液生化学における異化変化を予防または改善するのに有効である、方法。
６．細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法に関連する心臓毒性を、がんに罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法であって、前記対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記量のＤＮａｓｅ酵素は、前記化学療法に関連する心臓毒性を予防または改善するのに有効である、方法。
７．前記心臓毒性は心筋壊死である、実施形態６に記載の方法。
８．細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法に関連する消化管毒性を、がんに罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法であって、前記対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記量のＤＮａｓｅ酵素は、前記化学療法に関連する消化管毒性を予防または改善するのに有効である、方法。
９．細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法に関連する免疫抑制を、がんに罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法であって、前記対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記量のＤＮａｓｅ酵素は、前記化学療法に関連する免疫抑制を予防または改善するのに有効である、方法。
１０．細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性化学療法に関連する好中球減少症を、がんに罹患しかつ前記化学療法を受けているかまたは受けると考えられる対象において予防または改善する方法であって、前記対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記量のＤＮａｓｅ酵素は、前記化学療法に関連する好中球減少症を予防または改善するのに有効である、方法。
１１．前記化学療法は、代謝拮抗物質、アルキル化剤、抗がん抗生物質、微小管標的薬、トポイソメラーゼ阻害剤、アルカロイド類および標的治療薬からなる群より選択される１種以上の化合物の投与を含む、実施形態１〜１０のいずれかに記載の方法。
１２．前記化学療法は、アントラサイクリン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、エトポシド、タキサンおよびシクロホスファミドからなる群より選択される１種以上の化合物の投与を含む、実施形態１〜１０のいずれかに記載の方法。
１３．前記化学療法は、アントラサイクリン含有療法である、実施形態１〜７のいずれかに記載の方法。
１４．前記化学療法は、５−フルオロウラシルおよび／またはエトポシド含有療法である、実施形態１〜３および８のいずれかに記載の方法。
１５．前記化学療法は、タキサン含有療法である、実施形態１〜３および９のいずれかに記載の方法。
１６．前記化学療法は、シクロホスファミド含有療法である、実施形態１〜３および１０のいずれかに記載の方法。
１７．前記ＤＮａｓｅ酵素は、前記化学療法の１サイクル中に投与される、実施形態１〜１６のいずれかに記載の方法。
１８．前記ＤＮａｓｅ酵素は、前記化学療法の１サイクル後に投与される、実施形態１〜１６のいずれかに記載の方法。
１９．放射線療法に関連する毒性を、がんに罹患しかつ前記放射線療法を受けている対象において予防または改善する方法であって、前記対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記量のＤＮａｓｅ酵素は前記放射線療法の少なくとも１つの副作用を予防または改善するのに有効である、方法。
２０．放射線療法の有効性を、がんに罹患しかつ前記放射線療法を受けている対象において高める方法であって、前記対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記量のＤＮａｓｅ酵素は前記放射線療法の少なくとも１つの副作用を予防または改善するのに有効であり、前記ＤＮａｓｅの投与は前記放射線療法に関連する毒性の予防または改善をもたらす、方法。
２１．前記放射線療法の副作用は、皮膚の刺激もしくは損傷、疲労、悪心、嘔吐、線維症、腸損傷、記憶喪失、不妊症および二次がんからなる群より選択される、実施形態１９または２０に記載の方法。
２２．放射線療法に関連する体重減少を、がんに罹患しかつ前記放射線療法を受けている対象において予防または改善する方法であって、前記対象に治療有効量のＤＮａｓｅ酵素を投与する工程を含み、前記量のＤＮａｓｅ酵素は、前記放射線療法に関連する体重減少を予防または改善するのに有効である、方法。
２３．前記放射線療法は、外照射療法または全身性ラジオアイソトープ療法である、実施形態１９〜２２のいずれかに記載の方法。
２４．前記ＤＮａｓｅ酵素は、前記放射線療法の１サイクル中に投与される、実施形態１９〜２３のいずれかに記載の方法。
２５．前記ＤＮａｓｅ酵素は、前記放射線療法の１サイクル後に投与される、実施形態１９〜２３のいずれかに記載の方法。
２６．前記ＤＮａｓｅ酵素は、ＤＮａｓｅ  Ｉまたはそのアナログである、実施形態１〜２５のいずれかに記載の方法。
２７．前記ＤＮａｓｅ  Ｉ酵素アナログは、ＤＮａｓｅ  γである、実施形態２６に記載の方法。
２８．前記ＤＮａｓｅ  Ｉ酵素は、ヒト組換えＤＮａｓｅ  Ｉである、実施形態２６に記載の方法。
２９．前記ＤＮａｓｅ酵素は、ＤＮａｓｅ  ＩＩである、実施形態１〜２６のいずれかに記載の方法。
３０．前記ＤＮａｓｅ酵素は、延長された半減期を有する、実施形態１〜２６のいずれかに記載の方法。
３１．前記ＤＮａｓｅ酵素の治療有効量は、０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内にある、実施形態１〜３０のいずれかに記載の方法。
３２．前記ＤＮａｓｅ酵素の治療有効量は、１．５〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内にある、実施形態１〜３０のいずれかに記載の方法。
３３．前記ＤＮａｓｅ酵素の治療有効量は、１０〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内にある、実施形態１〜３０のいずれかに記載の方法。
３４．前記ＤＮａｓｅ酵素は、静脈内または腹腔内投与される、実施形態１〜３３のいずれかに記載の方法。
３５．前記ＤＮａｓｅ酵素は、経腸投与される、実施形態１〜３３のいずれかに記載の方法。
３６．前記ＤＮａｓｅ酵素は、経口投与される、実施形態３５に記載の方法。
３７．前記対象はヒトである、実施形態１〜３６のいずれかに記載の方法。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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