(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
妊娠非ヒト哺乳動物の血中ヘモグロビン濃度を増加させる方法であって、１０５ｇ／Ｌ以下の血中ヘモグロビンレベルを有する妊娠非ヒト哺乳動物が１用量当たり１８００ｍｇ以上の単体鉄の量での鉄−炭水化物複合体の１用量以上を投与される、方法。
【請求項２】
妊娠非ヒト哺乳動物からの死産仔の割合を減少させる方法であって、１０５ｇ／Ｌ以下の血中ヘモグロビンレベルを有する妊娠非ヒト哺乳動物が１用量当たり１８００ｍｇ以上の単体鉄の量での鉄−炭水化物複合体の１用量以上を投与される、方法。
【請求項３】
非ヒト哺乳動物がブタ、ウマ、ラクダ、ヒツジ、ヤギ又はウシである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
哺乳動物がブタである、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
２用量が投与され、初回用量は分娩予定日の１５から３週間前に投与され、２回目用量は分娩予定日の８から１週間前に投与される、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
用量が６ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ（体重）以上、例えば７ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、８ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、９ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１０ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１１ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１２ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１３ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１４ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１５ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１６ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１７ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１８ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１９ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２０ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２１ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２２ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２３ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２４ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２５ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２６ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２７ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２８ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２９ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、３０ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ又はそれより高い、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
鉄−炭水化物複合体がカルボキシマルトース鉄、鉄ポリグルコースソルビトールカルボキシメチルエーテル複合体、鉄マンニトール複合体、デキストラン鉄、水素化デキストラン鉄、カルボキシアルキル化還元オリゴ糖及び多糖鉄、スクロース鉄、グルコン酸鉄、デキストリン鉄、水素化デキストリン鉄、ポリマルトース鉄、水素化ポリマルトース鉄、ポリイソマルトース鉄、水素化ポリイソマルトース鉄、鉄サッカリド複合体、ピロリン酸鉄、ソルビトール鉄、グリコヘプタン酸鉄、酸化デキストリン鉄、酸化デキストラン鉄、酸化オリゴ及びポリサッカリド鉄又はそれらの混合物を含む群から選択される、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
鉄−炭水化物複合体が水素化デキストラン鉄である、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
鉄−炭水化物複合体の炭水化物成分の重量平均分子量が８００から５００００ダルトン、好ましくは８００から１００００ダルトンである、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
鉄−炭水化物複合体の見かけの分子量が５０００００ダルトン以下、例えば４０００００ダルトン以下である、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
非経口投与が筋肉内（ＩＭ）、皮下（ＳＣ）、及び静脈内（ＩＶ）投与からなる群の中で選択される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
鉄−炭水化物複合体を含む製剤中の生殖毒性を持つ保存剤の量が１ｇ／Ｌ以下である、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
生殖毒性を持つ保存剤がフェノールである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
用量が２分以内に投与される、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
液体獣医用組成物中の鉄−炭水化物複合体の濃度が５ｇ／１００ｍＬから２５ｇ／１００ｍＬの範囲である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、鉄−炭水化物複合体での妊娠非ヒト哺乳動物における貧血の治療に関する。本発明は、一般に、非ヒト哺乳動物のヘモグロビンレベル及び／又は仔で測定されるパラメーター、例えば死産率、授乳期における死亡率、ヘモグロビンレベルの上昇、及び授乳期における成長速度などを改善する。
【０００２】
先行技術
獣医師の診療ではめったに診断されないものの、いくつかの研究は、メス豚では貧血が非常に一般的であることを示唆している。最近のデンマークの調査では、大規模なデンマークの養豚群中のメス豚の５９％が１１０ｇ／ｌ未満の血中ヘモグロビン（Ｈｂ）濃度を有し（Jensen et al、2014）、これは妊娠メス豚の下限基準値と考えられる（Thorn, 2010）。
【０００３】
貧血の最も一般的な理由は、鉄欠乏症である。鉄は酸素の輸送に関与するため、ＤＮＡの合成並びに細胞の正常な構造及び機能を維持する他の多くのプロセスにおいて（Morris et al., 1995）、低鉄状態は、メス豚とその同腹仔豚の健康と出産に、可視及び不可視の色々な影響を及ぼす。
【０００４】
近年、妊娠中のメス豚の高ヘモグロビンレベルが死産仔豚の割合の低下と関連していることが示された（Jensen et al 2014）。メス豚のヘモグロビンレベルと死産率との関係は、現在の品種より多産ではないメス豚でこれより早く研究されている（Archibald and Hancock, 1939, Moore et al., 1965, Zaleski and Hacker, 1993）。
【０００５】
また、死産仔豚は出生仔豚よりもヘモグロビン値が低く（Svetinaら、2006; Zaleski and Hacker、1993）、死産仔豚の７５％が娩出中に死亡することが示されている（Glastonbury, 1977; Leenhouwers et al., 1999）。さらに、メス豚のヘモグロビンレベルは、その仔豚のヘモグロビンレベルと関連している（Jensen and Nielsen, 2013）。死産率に対する高ヘモグロビンレベルの認められる影響についての最も明白な説明としては、メス豚及び仔豚における低酸素症のリスクが低く、分娩時の仔豚の活力が高まることである。したがって、メス豚におけるヘモグロビンレベルの改善は、死産の減少のための効果的な手段を切り開く可能性がある。
【０００６】
デンマークでは、死産で同腹仔当たり平均１．７頭の仔豚が失われ（Vinther, 2013）、それにより養豚における深刻な経済上及び厚生上の問題が課されている。死産の数を減らすための群れの介入は、多くの場合適用が難しく、感染要因や管理上の要因にはほとんど寄与しない。
【０００７】
授乳期の仔豚に鉄を補うことは標準的な処置であり、業界標準は、生後初期の間に２００ｍｇの単体鉄を注射することである。その結果としてのヘモグロビン産生が得られるまで、仔豚は、母豚の子宮内の胎盤から妊娠期間中に得られた鉄にのみ依存する。
【０００８】
Ｇｌｅｐｔｏｓｉｌを分娩予定日の７週間前及び４週間前に２ｇの量で注射することによって、メス豚におけるヘモグロビンのレベルを上昇させる試みは成功しなかった（Auvigne, 2009）。血液中に１０７．７から１１７．３ｇ／Ｌのヘモグロビンを有するメス豚の場合、鉄−炭水化物の非経口投与は、血中ヘモグロビン濃度の増加をもたらさなかった。
【０００９】
高ヘモグロビンレベルで生まれた仔豚は、離乳までの生存の可能性が増す。そのため、本発明の目的は、メス豚のヘモグロビンレベルを上昇させることができ、かつ／又は同腹仔豚で測定されるパラメーターを改善することができる鉄補給を妊娠メス豚に与えることである。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、妊娠非ヒト哺乳動物の血中ヘモグロビン濃度を増加させる方法における使用のための鉄−炭水化物複合体に関し、１０５ｇ／Ｌ以下の血中ヘモグロビンレベルを有する妊娠非ヒト哺乳動物が１用量当たり１８００ｍｇ以上の量の単体鉄を含む鉄−炭水化物複合体の１用量以上を投与される。
【００１１】
別の態様では、本発明は、妊娠非ヒト哺乳動物からの死産仔の割合を減少させる方法における使用のための鉄−炭水化物複合体に関し、１０５ｇ／Ｌ以下の血中ヘモグロビンレベルを有する妊娠非ヒト哺乳動物が１用量当たり１８００ｍｇ以上の量の単体鉄を含む鉄−炭水化物複合体の１用量以上を投与される。
【００１２】
さらに別の態様では、本発明は、出生及び／又は離乳から３日以内に同腹仔の血中ヘモグロビン濃度を増加させる方法における使用のための鉄−炭水化物複合体に関し、１０５ｇ／Ｌ以下の血中ヘモグロビンレベルを有する妊娠非ヒト哺乳動物が１用量当たり１８００ｍｇ以上の量の単体鉄を含む鉄−炭水化物複合体の１用量以上を投与される。
【００１３】
さらに別の態様では、本発明は、非ヒト哺乳動物のその後の産歴における産仔数を増やす方法における使用のための鉄−炭水化物複合体に関し、１０５ｇ／Ｌ以下の血中ヘモグロビンレベルを有する妊娠非ヒト哺乳動物が１用量当たり１８００ｍｇ以上の量の単体鉄を含む鉄−炭水化物複合体の１用量以上を投与される。
【００１４】
妊娠中の鉄欠乏性貧血は、胎児の成長に伴う血液量の損失増及び代謝の変化に起因し、大半の哺乳動物にとって共通の問題であると理解される。それは詳細に研究されており、ヒトにおいては一般的に治療されている。非ヒト哺乳動物の中では、鉄欠乏性貧血はブタで最もよく理解されており、大部分の研究は全乳食の仔豚の鉄欠乏性貧血に焦点を当てている。大部分の他の非ヒト哺乳動物とは異なり、妊娠メス豚でも鉄欠乏性貧血及びその治療が研究されており、したがって本発明は、例示的な妊娠非ヒト哺乳動物としてのメス豚に基づいている。本明細書においては、例示的な非ヒト哺乳動物としてブタを用いて本発明を記載しているが、任意の非ヒト哺乳動物で本発明が実施可能であることは当業者には明らかであろう。本発明の特定の態様において、非ヒト哺乳動物は、ブタ、ウマ、ラクダ、ヒツジ、ヤギ又はウシである。
【００１５】
血中ヘモグロビンレベルが１０５ｇ／Ｌ以下に低下する早期の兆候は、フェリチン濃度レベルの低下である。なぜなら、フェリチンレベルは生物体の鉄貯蔵を表すからである。したがって、本発明はまた、妊娠非ヒト哺乳動物が本発明の方法に従って治療されない場合に、血中ヘモグロビンレベルの１０５ｇ／Ｌ以下への低下を予測する、低フェリチンレベルを有する妊娠非ヒト哺乳動物の予防的治療も包含する。
【００１６】
本発明の文脈における用量は、同じ日に実施される単回投与又は２回以上の投与であり得る。あるいは、２回以上の投与を、５日以内、例えば４日、３日又は２日以内に非ヒト哺乳動物に実施することができる。各投与は、経腸経路又は非経口経路のいずれかによってなされ得る。本発明の好ましい態様では、用量は、非経口的に投与される。好ましい非経口投与は、注射又は注入による。特定の実施態様では、２回注射又は注入が、同じ日に非ヒト哺乳動物の頸部の各側に投与される。
【００１７】
本発明によれば、非ヒト哺乳動物は、妊娠中に１以上の用量、例えば２、３、４、５、６又はそれより高い用量を投与される。さらに、２以上の用量が投与される場合、各用量間の時間間隔は、１週間以上、例えば２週間、３週間、４週間、５週間、６週間又はそれより長い。２用量を投与する場合、初回用量は、分娩予定日の１５から３週間前に投与され、２回目用量は、分娩予定日の８から１週間前に投与される。
【００１８】
本発明の鉄−炭水化物複合体は、貧血の非哺乳動物（メス豚など）の血中ヘモグロビンを増加させると考えられる。このこと自体、前記複合体がメス豚の健康及び一般的な福祉を改善することから、重要である。さらに特定の実施態様において、本発明者らは、本発明の鉄−炭水化物複合体を妊娠中の貧血メス豚に投与することがその仔豚にも影響を及ぼすことを見出した。したがって、妊娠中の貧血メス豚に鉄−炭水化物複合体をメス豚の分娩前に１回以上投与すると、その投与によりその仔豚の血中ヘモグロビンレベルも上昇するであろう。
【００１９】
第一の効果として、母豚への投与は、死産仔豚の割合を減少させるであろう。死産とは、肺が膨張していることを意味する。別の実施態様では、ミイラ化した子豚の割合が低下する。ミイラ化した仔豚は、肺が膨張していない仔豚と定義される。したがって、同腹仔のより高い割合が出生するであろう。産仔数という用語が使用される場合、それは、死産仔豚及び出生仔豚の全規模又は総数として理解される。さらに、母豚への投与は、離乳までの同腹仔豚の血中ヘモグロビン濃度、生存率、健康及び／又は成長を増加させ得る。本発明の好ましい態様において、死産仔の平均割合は、１２％以下、例えば１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％又はそれ未満である。本発明の別の態様では、離乳までの平均生存率は、８０％以上、例えば８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれより高い。平均生存率は、出生仔豚、すなわち死産仔豚又ミイラ化した仔豚を差し引いた仔豚の総数と離乳時に生きている仔豚とを基にして計算される。
【００２０】
したがって、妊娠中の貧血メス豚に鉄−炭水化物複合体が投与されない状況と比較して、出生から離乳まで、より多くの同腹仔豚が生存するであろう。さらに、仔豚は離乳時にさらに健康になるであろう。それは例えば、体重又は血中ヘモグロビン濃度の増加などの健康パラメーターで表される。鉄−炭水化物複合体を妊娠中の貧血メス豚に投与すると、妊娠中の貧血メス豚に鉄−炭水化物複合体を投与しなかった場合よりも、その仔豚は離乳するまでに体重及び／又は血中ヘモグロビン濃度が増加しているであろう。特定の実施態様では、本発明者らは、鉄−炭水化物複合体を本発明に従って妊娠中の貧血メス豚に投与すると、その授乳期の仔豚に追加の鉄を経腸的に又は非経口的に投与する必要性が低下することを観察した。したがって、本発明は、養豚業者の仕事を単純化し、かつ母豚とその仔豚の両方の一般的な健康を改善する。
【００２１】
本発明の治療により、平均産仔数は、その後の産歴で平均産仔数が１３以上、例えば１４、１５、１６、１７又はそれより多いレベルまで増加し得る。さらに、妊娠中のメス豚の平均ヘモグロビン濃度は、１％以上、例えば２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％又はそれより高く増加する。さらに、本発明の好ましい態様において、死産仔の平均割合は、１％以上、例えば２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％又はそれより多く減少する。本発明の特定の実施態様では、離乳時までの同腹仔の平均血中ヘモグロビン濃度は、１％以上、例えば２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％又はそれより高く増加する。本発明の一態様では、妊娠メス豚のその後の産歴における平均産仔数は、１％以上、例えば２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％又はそれより多く増加する。
【００２２】
本発明に従って治療されたメス豚は、背脂肪厚によって反映される様々な健康状態であり得る。好ましい態様において、メス豚は、１７ｍｍ、１６ｍｍ、１５ｍｍ、１４ｍｍ、１３ｍｍ、１２ｍｍ、１１ｍｍ、１０ｍｍ又はそれ未満の背脂肪厚を有する。また、メス豚には一又は複数の産歴があった可能性も考えられ、好ましくは、治療されたメス豚の場合、その産歴は、２、３、４、５、６、７、８、９産目又はそれより多い。
【００２３】
本発明の文脈では、鉄−炭水化物複合体は、ブタに投与するのに適した、Ｆｅ３＋及び／又はＦｅ２＋を含む鉄イオン若しくは鉄粒子と炭水化物との任意の複合体である。本発明の特定の態様において、鉄−炭水化物複合体は、メス豚の胎盤に浸透し、それにより胎児に進入し得るのが好ましい。鉄−炭水化物複合体は、当業者に周知であり、適切な鉄−炭水化物複合体の特定の選択は、当業者の知識の範囲内である。好ましい実施態様において、鉄−炭水化物複合体は、炭水化物と複合体化される単体鉄の含有量が５〜２５％（ｗ／ｖ）、例えば５０〜２５０ｇ／Ｌである注射可能な獣医用組成物として製剤化される。獣医用組成物は、この分野で通常適用される助剤を含むことができる。さらに、鉄−炭水化物複合体を含む獣医用組成物は、フェノールなどの保存剤を１〜１０ｇ／Ｌの量で含有してもしなくてもよい。特定の実施態様では、フェノールの量は、１ｇ／Ｌ未満である。必要であれば、代わりの方法で滅菌が得られる。
【００２４】
鉄−炭水化物複合体は、様々な異なる物質から選択することができる。好ましくは、鉄−炭水化物複合体は、カルボキシマルトース鉄、鉄ポリグルコースソルビトールカルボキシメチルエーテル複合体、鉄マンニトール複合体、デキストラン鉄、水素化デキストラン鉄、カルボキシアルキル化還元オリゴ糖及び多糖、スクロース鉄、グルコン酸鉄、デキストリン鉄、水素化デキストリン鉄、ポリマルトース鉄、水素化ポリマルトース鉄、ポリイソマルトース鉄、水素化ポリイソマルトース鉄、鉄サッカリド複合体、ピロリン酸鉄、ソルビトール鉄、グリコヘプタン酸、酸化デキストリン、酸化デキストラン、酸化オリゴ及びポリサッカリド又はそれらの混合物を含む群から選択される。特定の実施態様では、鉄は、デキストラングルコヘプトン酸と複合体化される。この鉄−炭水化物複合体は、グレプトフェロン（Gleptoferron)としても知られており、例えばＧｌｅｐｔｏｓｉｌ（英国、ヨーク市のＡｌｓｔｏｅ  Ｌｉｍｉｔｅｄ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈ）、Ｕｒｓｏｆｅｒｒａｎ（ドイツ、ベルンブルク市のＳｅｒｕｍｗｅｒｋ  Ｂｅｒｎｂｕｒｇ  ＡＧ）として入手可能である。別の実施態様では、鉄は、水素化デキストランと複合体化される。市販の鉄−水素化デキストラン複合体は、デンマーク、ホルベック市のＰｈａｒｍａｃｏｓｍｏｓ  Ａ／Ｓから入手可能なＵｎｉｆｅｒｏｎ、ＣｏｓｍｏＦｅｒ、ＭｏｎｏＦｅｒ、及びＤｉａＦｅｒである。
【００２５】
本発明の鉄−炭水化物複合体の炭水化物成分は、任意の適切な分子量を有することができる。鉄−炭水化物複合体の炭水化物成分の重量平均分子量（ＭＷ）が８００から８００００ダルトン、好ましくは８００から１００００ダルトンである分子量を有する炭水化物成分を使用することが一般に好ましい。この範囲の重量平均分子量は、妊娠メス豚から胎児へと、より運搬し易い。好ましい態様では、鉄−炭水化物複合体の見かけの分子量は、５０００００ダルトン以下、例えば４０００００ダルトン以下である。
【００２６】
鉄−炭水化物複合体の用量は、一般に単体鉄に基づいて計算され、通常１８００ｍｇから１００００ｍｇの範囲である。ある実施態様では、前記用量は、１９００ｍｇ、２０００ｍｇ、２１００ｍｇ、２２００ｍｇ、２３００ｍｇ、２４００ｍｇ、２５００ｍｇ、２６００ｍｇ、２７００ｍｇ、２８００ｍｇ、２９００ｍｇ、３０００ｍｇ、３１００ｍｇ、３２００ｍｇ、３３００、３４００ｍｇ、３５００ｍｇ、３６００ｍｇ、３７００ｍｇ、３８００ｍｇ、３９００ｍｇ、４０００ｍｇ、４１００ｍｇ、４２００ｍｇ、４３００ｍｇ、４４００ｍｇ、４５００ｍｇ、４６００ｍｇ、４７００ｍｇ、４８００ｍｇ、４９００ｍｇ、５０００ｍｇ、５１００ｍｇ、５２００ｍｇ、５３００ｍｇ、５４００ｍｇ、５５００ｍｇ、５６００ｍｇ、５７００ｍｇ、５８００ｍｇ、５９００ｍｇ、６０００ｍｇ、６１００ｍｇ、６２０  ０ｍｇ、６３００ｍｇ、６４００ｍｇ、６５００ｍｇ、６６００ｍｇ、６７００ｍｇ、６８００ｍｇ、６９００ｍｇ、７０００ｍｇ、７１００ｍｇ、７２００ｍｇ、７３００ｍｇ、７４００ｍｇ、７５００ｍｇ、７６００ｍｇ、７７００ｍｇ、７８００ｍｇ、７９００ｍｇ、８０００ｍｇ、８１００ｍｇ、８２００ｍｇ、８３００ｍｇ、８４００ｍｇ、８５００ｍｇ、８６００ｍｇ、８７００ｍｇ、８８００ｍｇ、８９００ｍｇ、９０００ｍｇ、９１００ｍｇ、９２００ｍｇ、９３００ｍｇ、９４００ｍｇ、９５００ｍｇ、９６００ｍｇ、９７００ｍｇ、９８００ｍｇ、９９００ｍｇ、１００００ｍｇ又はそれより高い。特定の状況では、１６５０ｍｇ、例えば１７００ｍｇ、例えば１７５０ｍｇ以上の用量の単体鉄を投与することが適切であり得る。
【００２７】
この範囲の用量は、約２５０ｋｇの体重（ＢＷ）を有する典型的なサイズのメス豚に適用可能である。メス豚の重さは品種及び栄養によって変化するため、前記用量は、いくつかの実施態様においてメス豚の体重に基づいてよりよく表すことができる。したがって、鉄、すなわち単体鉄の用量は、６ｍｇ／ｋｇ  ＢＷから３０ｍｇ／ｋｇ  ＢＷの範囲、例えば７ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、８ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、９ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１０ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１１ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１２ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１３ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１４ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１５ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１６ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１７ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１８ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、１９ｍｇ／ｇ  ＢＷ、２０ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２１ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２２ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２３ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２４ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２５ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２６ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２７ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２８ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、２９ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ、３０ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ又はそれより高くてもよい。
【００２８】
本発明の鉄−炭水化物複合体は、１０５ｇ／Ｌ以下の血中ヘモグロビンレベルを有するメス豚に鉄−炭水化物複合体を注射する方法における使用適している。しかし、鉄−炭水化物複合体は血液ヘモグロビンレベルにかかわらず、すべてのメス豚に対して所望の効果を有するであろうことが考えられる。したがって、鉄−炭水化物複合体はまた、メス豚が約１１０ｇ／Ｌ以下、例えば１０９ｇ／Ｌ、１０８ｇ／Ｌ、１０７ｇ／Ｌ、１０６ｇ／Ｌ又はそれ未満の血中ヘモグロビンレベルを有する場合にも有効であると考えられる。一般に、治療されたメス豚は、１０５ｇ／Ｌ以下、例えば１０４ｇ／Ｌ、１０３ｇ／Ｌ、１０２ｇ／Ｌ、１０１ｇ／Ｌ、１００ｇ／Ｌ、９５ｇ／Ｌ、９０ｇ／Ｌ、８０ｇ／Ｌ、７５ｇ／Ｌ、７０ｇ／Ｌ、６５ｇ／Ｌ、６０ｇ／Ｌ、５５ｇ／Ｌ、５０ｇ／Ｌ、４５ｇ／Ｌ、４０ｇ／Ｌ又はそれ未満の血中ヘモグロビンレベルを有する。これらのレベルの血中ヘモグロビンを有するメス豚は、一般的に「貧血」と呼ばれることがある。
【００２９】
鉄−炭水化物複合体で治療されるメス豚は、通常は産歴が２産目又はそれより多い。メス豚の血中ヘモグロビンレベルは産歴が増えるにつれて低下することが一般に認められており（Normand et al.,2012）、本発明者らは驚くべきことに、本発明の鉄−炭水化物複合体が２産目又はそれ以上の産歴、例えば３産目の産歴、４産目の産歴、５産目の産歴、６産目の産歴、７産目の産歴、８産目の産歴、９産目又はそれ以上の産歴のメス豚に投与する場合に特に有効であることを見出した。しかしながら、鉄−炭水化物複合体は、１産目の産歴の貧血メス豚に投与しても有効であると考えられる。
【００３０】
本発明の好ましい態様において、本発明の鉄−炭水化物複合体は、注射による非経口投与、例えば筋肉内（ＩＭ）、皮下（ＳＣ）又は静脈内（ＩＶ）注射用である。ＩＭ注射は、場合によってボーラス注入としてが好ましい。分娩の予定時刻は、当業者に周知であり、授精又は受胎の日から計算することができる。したがって、投与タイミングの決定は、授精又は受胎日から計算される。
【００３１】
仔豚に対する最良の効果を得るために、最後の用量投与は分娩の遅くとも１週間前、好ましくは２〜４週間前に実施するべきであると一般に考えられている。妊娠の最後の２０日間のうちに、胎児は体重を２倍にすると予想される。初回用量は、一般に分娩の１５週間前に送達されるべきである。ただし、上記の指示は単なるガイド的なものであり、分娩の１５週間から２週間前の好ましい期間以外に投与された鉄−炭水化物複合体も貴重な効果を提供し得る。
【００３２】
鉄−炭水化物複合体の投与量は、妊娠中の貧血メス豚に対して、妊娠中の１以上の時点、例えば２、３、４、５、６回又はそれより多い回数で、好ましくはメス豚の分娩の１５週間前から２週間前の期間内に投与される。したがって、各投与時には、鉄−炭水化物複合体として製剤化された単体鉄１８００ｍｇから１００００ｍｇが、例えばＩＭ、ＳＣ又はＩＶで、妊娠中の貧血メス豚に投与される。各投与時の用量は、同じであってもよいし、用量が異なってもよい。例えば、初回の注射は、２回目の注射よりも例えば５００ｍｇ、１０００ｍｇ、１５００ｍｇ、２０００ｍｇ多くてもよく又はその逆であってもよい。通常、分娩の９週間前から３週間前の期間内に２回投与すれば十分である。各投与間の時間間隔は、１週間以上、例えば２週間、３週間、４週間、５週間、６週間又はそれより長くてもよい。
【００３３】
鉄−炭水化物複合体は、他の獣医用医薬と共に投与することができる。他の獣医用医薬類の例には、ＰＲＲＳワクチンなどのワクチンが含まれる。抗生物質もまた、鉄−炭水化物複合体と共に投与することができる。抗生物質の例には、アミカシン、アミノペニシリン、アモキシシリン、アジスロマイシン、セファロスポリン（ceohalospirin）、シプロフロキサシン、クリンダマイシン（clinamycin）、ドキシサイクリン、エンロフロキサシン、エリスロマイシン、ペニシリン、ゲンタマイシン、カナマイシン、リンコマイシン、マルボフロキサシン、メトロニダゾール、ノボビオシン、オルビフロキサシン、ペニシリンＧ、ペニシリナーゼ耐性ペニシリン、スルファジメトキシン、テトラサイクリン、チアベンダゾール、ネオマイシン、デキサメタゾン、トリメトプリム、及びタイロシンが含まれる。特定の態様において、鉄−炭水化物複合体は、エリスロポエチンと共に投与され、血液細胞の産生を刺激する。
【００３４】
単体鉄として計算される鉄−炭水化物複合体の総量は、少なくとも１８００ｍｇ以上の単体鉄である。好ましい実施態様において、単体鉄の総量は、２０００ｍｇ、２５００ｍｇ、３０００ｍｇ、３５００ｍｇ、４０００ｍｇ、４５００ｍｇ、５０００ｍｇ、６０００ｍｇ、７０００ｍｇ、８０００ｍｇ、９０００ｍｇ、１００００ｍｇの単体鉄又はそれより多い。また、鉄の総量は、１８００ｍｇ／Ｌ未満を含むことがある複数の投与に分割することもできると考えられる。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
本発明は、血中ヘモグロビン濃度を増加させる方法における使用のため、死産仔豚の割合を減少させる方法における使用のため、離乳時までの同腹仔豚の生存、健康及び／若しくは成長を増進させる方法における使用のため、又は産仔数を増やす方法における使用のための鉄−炭水化物複合体に関する。
【００３６】
以下、本発明をサポートする実験プロトコールを説明する。
【００３７】
１  材料及び方法
１．１  対象及び試験集団
本試験は、大量生産のメス豚の群れで実施される。このような群れは、デンマークにおける集約的なメス豚の群れの典型である。試験集団は、低ヘモグロビン値を有する妊娠メス豚及び離乳までのそれらの同腹仔からなる。妊娠メス豚は、妊娠の６０日〜８０日目に、試験のために選抜される。
【００３８】
１．２  試験設計
本試験は、無作為化臨床試験である。試験の開始前に、デンマークの動物実験検査官（Danish Animal Experiments Inspectorate）及びデンマーク医薬品庁（Danish Medical Agency）からの承認を取得する。本試験は、プロトコールに従って実施される。
【００３９】
１．３  試験単位
試験単位は、メス豚及びその同腹仔豚である。
【００４０】
１．４  群れの選抜
ブタ専門獣医の協力で、デンマークメス豚における貧血の有病率調査を実施する。高い貧血有病率を有する群れが、本試験のために選抜される。
【００４１】
１．４．１  群れの選抜基準
１．  少なくともメス豚１０００頭の群れサイズ
２．  群れデータの良好な記録保持
３．  意欲的な、群れの所有者
４．  ４日目のみ、２００ｍｇのデキストラン鉄を注射することによる仔豚の鉄補給
【００４２】
１．４．２  群れの除外基準
１．  経口又は注射による、メス豚への余分な鉄の供給（飼料配合中は除く）
２．  繁殖中の群れ
３．  例えばプロスタグランジンによる分娩誘導
４．  死産になりやすい、明らかな感染症又は管理上の問題
【００４３】
１．５  試料サイズ
有病率を推定するために必要な試料サイズは、以下の通りである。
Ｎ＝（Ｚ（１−ａ／２）２ｓ２）／Ｌ２（J.P.T.M et al., 2001）
Ｎ＝採取された試料の数
ａ＝０．０５（信頼水準９５％）＝＞Ｚ（１−０．０５／２）＝Ｚ０．９７５＝１．９６
ｓ＝標準偏差
Ｌ＝予測絶対誤差
５０％のメス豚が貧血（ヘモグロビン＜１００ｇ／Ｌ）に罹患している群では、許容誤差±１３％で有病率を決定するのに５０頭の試料サイズで十分である。
【００４４】
１．６  臨床試験のためのメス豚の識別
２００頭に相当する十分な数の群れから２回以上出産経験のあるすべてのメス豚を、妊娠の６０〜８０日目で毎週識別する。１産目の産歴のメス豚は除外する。
２００頭のメス豚におけるヘモグロビンの初回測定を、ＨｅｍｏＣｕｅ測定により実施する。１００ｇ／ｌ未満のヘモグロビンを有する健康なメス豚については、試験に含める。
【００４５】
１．７  血液採取
メス豚を拘束し、試験開始時（妊娠１１週目）及び分娩予定日の１週間前に、頸静脈から５ｍＬの血液をＥＤＴＡ入り無地のバキュテナーチューブに採取する。試料は、完全な血液学的検査によって、セクション４．６．３及び４．８に記載のように血清鉄、ＴＩＢＣ、及び血清フェリチンについて分析される。トランスフェリン飽和度も、セクション４．９に記載のようにして算出される。
【００４６】
１．８  メス豚の血液学的検査
２００個すべてのＥＤＴＡ安定化血液試料には、ＨｅｍｏＣｕｅによるヘモグロビン濃度の検査を最初に実施する。この検査に必要な装置は、Ｐｈａｒｍａｃｏｓｍｏｓにより提供される。１００頭の貧血メス豚の選抜は、この検査に基づいて行われる。
選抜された１００頭のメス豚の試料は、コペンハーゲン大学で完全な血液学的検査（ベースライン測定）に供される。
血液試料は、赤血球数（ＲＢＣ）、白血球数（総白血球数及び白血球百分率）、血小板、平均血小板容積（ＭＰＶ）、赤血球分布幅（ＲＤＷ）、ヘモグロビン濃度（Ｈｂ）、ヘモグロビン分布幅（ＨＤＷ）、ヘマトクリット（ＨＣＴ）、平均細胞容積（ＭＣＶ）、平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）、及び平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）について分析される。網状赤血球数（絶対及び相対）、網状赤血球ヘモグロビン含量（Ｃｈｒ）、網状赤血球の平均ヘモグロビン濃度（ＣＨＣＭｒ）、平均網状赤血球細胞容積（ＭＣＶｒ）、網状赤血球分布幅（ＲＤＷｒ）、及び網状赤血球ヘモグロビン分布幅（ＨＤＷｒ）を含む網状赤血球指数も分析される。
血清試料は、臨床試験のための試験メス豚を識別するまで保存される。
【００４７】
１．９  メス豚データの記録
各メス豚について、次の記録がなされる：メス豚の年齢、初回授精の年齢、過去の産歴での死産及び出生仔豚の数、授精日、メス豚の分娩日及び産歴。
【００４８】
２．  臨床試験の試料サイズの算出
動物群間の差異を計算するために必要な各群の試料サイズは、以下の方程式により算出する（Graat et al., 2001）。
Ｎ＝２×（Ｚa＋Ｚb）２＊ＳＤ２／Δ２
式中、
Ｎ＝各群に必要なメス豚の頭数
Ｚa，Ｚb＝特定の信頼水準及び検出力での標準正規分布値
ＳＤ＝標準偏差
Δ＝推定差分
定数２は、ＳＤが両方の群で等しいことを意味する。
aが０．０５、Ｚ０．０５＝１．９６、かつ８０％の検出力、Ｚ０．２０＝０．８４での両側検定を仮定する。
２群間のヘモグロビン差（Δ）は、１０ｇ／Ｌと仮定し、ＳＤは、過去の研究に基づいて１５ｇ／Ｌに設定する。
治療群とコントロール群との間のヘモグロビン濃度差が９ｇ／Ｌであると仮定すると、群当たり５０頭のメス豚が必要である。
【００４９】
２．１  凍結試料の実験室分析
可能であれば、選抜した１００頭のメス豚（治療群５０頭及びコントロール群５０頭）から得られた血清試料の血清鉄、総鉄結合能（ＴＩＢＣ）、及び血清フェリチンについて分析する。血清鉄及び総鉄結合能は、コペンハーゲン大学中央研究所で分析され、血清フェリチン測定は、ルートヴィヒ・マクシミリアン大学ミュンヘン獣医学部Ｒｉｔｚｍａｎｎｓ教授の研究室で実施される。
【００５０】
２．２  トランスフェリン飽和度（ＴｆＳ）の算出
トランスフェリン飽和度は、式：ＴｆＳ（％）＝血清鉄／ＴＩＢＣ×１００を使用して、すべての血液試料について算出する。
【００５１】
２．３  背脂肪厚の測定
メス豚のベースライン背脂肪測定は、超音波装置を用いて行う。測定は、メーカーのガイドラインに従って、背中の正中線の左右７ｃｍ、最も下側の浮動肋骨のところで行う。背脂肪測定は、試験開始時、分娩時、及び離乳直前に行う。
【００５２】
２．４  メス豚の無作為化
選抜したメス豚を二つの群に無作為に振り分ける。
１．  コントロール群
２．  治療群
無作為化は、メス豚の耳タグ番号のくじを使用して行う。
【００５３】
２．５  メス豚の治療
試験及びコントロール物質の調製並びに注射用装置は、Ｐｈａｒｍａｃｏｓｍｏｓにより提供される。
−  初回投与
妊娠７０日目（分娩の６週間前）、治療群のメス豚の頚部に、１２．５ｍＬ（２５００ｍｇ）の鉄の筋肉内注射（Ｕｎｉｆｅｒｏｎ）を投与する。同日、コントロール群には、頚部に１２．５ｍＬの等張性生理食塩水を筋肉内投与する。鉄注射に起因するいかなる反応にも注意し、適宜治療する。
−  ２回目の投与
鉄を最初に投与してから２週間後の８４日目（分娩４週間前）に、前記メス豚は、２回目の投与として１２．５ｍＬ（２５００ｍｇ）の鉄の筋肉内注射（Ｕｎｉｆｅｒｏｎ）を頸部に受ける。また、コントロールメス豚は、等張性生理食塩水の２回目の投与を受ける。
【００５４】
２．６  仔豚のメス豚の管理
すべてのメス豚は、試験期間中、農場で標準的な手順に従って管理される。
【００５５】
２．７  死産仔豚の記録と分類
同腹で完全に成熟したすべての死亡仔豚は、分娩時に収集する。死亡した仔豚を剖検し、肺を検査する。肺が水に沈めば、その仔豚は死産とみなされる。死産仔豚は、以下のように分類される。
１．  非新生児死産：茶色の肌、腐敗の兆候を示す−このような仔豚は、おそらく分娩開始の１週間以上前に死亡（Randall and Penny 1967）。
２．  分娩直前の死産：外見上は腐敗の兆候は見られないが、溶血及び自己融解によりすべての腹部臓器が同じ赤れんが色になっている−このようなブタは、分娩日の直前に子宮内で死亡（Bille et al., 1974）。
３．  分娩時の死産：腹部臓器の色は正常だが、気管内に粘液及び／又は胎便が存在し、分娩中の仔豚の死亡を示す。
ミイラ化した胎児は記録するが、試験には含めない。各死産仔豚及び出生仔豚について、性別を記録し、実務上可能であれば、個々の体重を入手する。
【００５６】
２．８  仔豚の血液学的検査
同腹当たり二匹の出生仔豚のサブセットの前大静脈から血液を採取する。これらの仔豚は、その特定の同腹のすべての仔豚の中から無作為に選抜する。同腹当たり２匹の死産仔豚の血液を、Ｒｏｏｔｗｅｌｔらの２０１２年のガイドラインに従って採取する。
血液は、セクション１．８及び２．１に記載されている通り、血清鉄、ＴＩＢＣ、及び血清フェリチンを含めた完全な血液学的検査に供される。各仔豚の乳酸も測定される。
【００５７】
２．９  メス豚における有害反応
試験中、離乳時にメス豚の２０％が淘汰されることが予想される。これらのメス豚の中で、１０頭が注射部位反応の試験のために選抜される。注射部位を巨視的に評価し、注射による組織損傷の程度を決定する。組織学的検査用の試料は、ホルマリンで固定する。
治療動物における出生仔豚の総数をコントロールのそれと比較する。離乳が近いメス豚の背脂肪厚を記録する。
【００５８】
３  統計分析
データ分析にはＳＡＳ  ９．３を用いる。ＳＡＳのＰＲＯＣ  ＧＬＭプロシジャを使用し、鉄注射の前後のメス豚の血液学的な比較を一般線形モデルによって行う。ＰＲＯＣ  ＧＬＭプロシジャを使用し、コントロールメス豚と治療メス豚間の血液学的相違を一般線形モデルによって算出する。説明要因には、ベースラインのＨｂ値、出生仔豚の総数、及びメス豚の産歴が含まれるであろう。ＰＲＯＣ  ＬＯＧＩＳＴＩＣプロシジャを使用し、各コントロール及び治療メス豚における仔豚が死産となる確率を一般化線形モデルにより算出する。このプロシジャにおいて、Ｈｂのベースライン測定値、出生仔豚の総数、メス豚の産歴、仔豚の性別が、分析のために考慮される説明変数である。
偶然要因としてメス豚を用いたＰＲＯＣ  ＭＩＸＥＤプロシジャを使用し、線形混合モデルによって生存仔豚と死産仔豚間の血液学的相違を明らかにする。その他の説明変数には、産仔数、メス豚の産歴、及びメス豚のヘモグロビンが含まれる。
【実施例】
【００５９】
実施例１
高い貧血罹患率を示す群れから１００頭のメス豚を選抜した。実務的理由から、本試験は二回に分けて実施された。すべてのデータをプールした。
頸静脈から５ｍｌの血液を、試験の開始時（すなわち妊娠８週目）、分娩予定日の約１週間前、及び分娩の４週間後にＥＤＴＡ中に採取した。血液試料は、それぞれＨｂ＿Ｓ１、Ｈｂ＿Ｓ２、及びＨｂ＿Ｓ３をマークされた。試料を分析し、血液ヘモグロビン濃度（Ｈｂ）を決定した。
選抜したメス豚を二つの群に無作為に振り分ける。
１．  コントロール群（Ｃ）
２．  治療群（Ｔ）
無作為化は、メス豚の耳タグ番号のくじを使用して行う。各群には５０頭のメス豚が含まれる。
妊娠７０日目（分娩の６週間前）、治療群のメス豚の頸部に、５００ｍｇの鉄に相当する初回用量のデキストラン鉄（Ｕｎｉｆｅｒｏｎ、２０％）１２．５ｍｌを筋肉内送達した。同日、コントロール群には、頚部に１２．５ｍＬの等張性生理食塩水を筋肉内投与した。鉄注射に起因するいかなる反応にも注意し、適宜治療する。
鉄を最初に投与してから２週間後の８４日目（分娩４週間前）に、前記メス豚は、２回目の投与として１２．５ｍＬ（２５００ｍｇ）の鉄の筋肉内注射（Ｕｎｉｆｅｒｏｎ）を頸部に受けた。また、コントロールメス豚は、等張性生理食塩水の２回目の投与を受けるであろう。
【００６０】
0006680777.tif 000002
同腹で完全に成熟したすべての死亡仔豚は、分娩時に収集する。死亡した仔豚を剖検し、肺を検査する。肺が水に沈めば、その仔豚は死産とみなされる。
ミイラ化した胎児は記録するが、試験には含めない。各死産仔豚及び出生仔豚について、性別を記録し、実務上可能であれば、個々の体重を入手する。
0006680777.tif 000003
表１に示すメス豚のヘモグロビン濃度は、１０５ｇ／ｌより低いベースラインＨｂを有するメス豚について増加することに留意されたい。具体的には、１０５ｇ／ｌ未満の低いベースラインＨｂを有する貧血メス豚は、試験開始から分娩予定日の１週間前まででは、コントロール群の０．２８ｇ／ｌと比較して１．４０ｇ／ｌの増加、開始から分娩後４週まででは、コントロール群の０．２２と比較して１．６６ｇ／ｌの増加を経験する。この結果は、貧血の妊娠メス豚が鉄−炭水化物複合体の投与から恩恵を受けることを示している。１０５ｇ／ｌを超えるベースラインＨｂを有するメス豚のΔ（Ｈｂ＿Ｓ１，Ｈｂ＿Ｓ２）及びΔ（Ｈｂ＿Ｓ１，Ｈｂ＿Ｓ３）はマイナスであり、これらの動物が本発明の治療の恩恵を受けないことを示している。
表２の死産率は、１０５ｇ／ｌ未満のベースラインを有するメス豚が鉄−炭水化物複合体で治療される場合、コントロール群の７．９％から治療群の６．６％に低下している。この結果は、鉄−炭水化物複合体の投与によって死産仔の割合が低下することを示している。逆に、死産率は、ベースラインＨｂが１０５ｇ／ｌを超える場合、コントロール群の６．６％から治療群の６．４％への低下であり、このメス豚の群の死産率の改善は得られないことを示している。
【００６１】
参照文献
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Bille, N., Nielsen, N.C., Larsen, J.L., Svendsen, J., 1974. Preweaning mortality in pigs. 2. The perinatal period. Nordisk veterinaermedicin, 26, 294-313.
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