(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
バリンを実質的に含まない、対象において成人Ｔ細胞白血病リンパ腫を処置することに用いるための経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤。
【請求項２】
投与対象が、成人Ｔ細胞白血病リンパ腫の患者である、請求項１に記載の経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤。
【請求項３】
経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤が、バリンを実質的に含まないことを除いては、継時的投与により少なくとも３週間の生命維持に十分な栄養素を供給可能なように設計された、請求項１または２に記載の経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤。
【請求項４】
経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤が、バリンを実質的に含まないことを除いては、完全栄養製剤として設計された、請求項１〜３のいずれか一項に記載の経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の経静脈栄養製剤。
【請求項６】
成人Ｔ細胞白血病リンパ腫に罹患した対象の体内の成人Ｔ細胞白血病リンパ腫の減少を検出する方法であって、
（ａ）処置前の対象から得られた末梢血サンプル中の成人Ｔ細胞白血病細胞数を計測することと、
（ｂ）処置中または処置後の該対象から得られた末梢血サンプル中の成人Ｔ細胞白血病細胞数を計測することと、
（ｃ）工程（ａ）で求められた細胞数と工程（ｂ）で得られた細胞数とを比較することとを含んでなり、
処置が、一定期間中、該対象にバリンを実質的に与えないことである、
方法。
【請求項７】
成人Ｔ細胞白血病リンパ腫に罹患した対象またはＨＴＬＶ−１ウイルスに感染した対象の体内のＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞の減少を検出する方法であって、
（ａ）処置前の対象から得られた末梢血サンプル中のＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞数を計測することと、
（ｂ）処置中または処置後の該対象から得られた末梢血サンプル中のＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞数を計測することと、
（ｃ）工程（ａ）で求められた細胞数と工程（ｂ）で得られた細胞数とを比較することとを含んでなり、
処置が、一定期間中、該対象にバリンを実質的に与えないことである、
方法。
【請求項８】
処置が、請求項１〜５のいすれか一項に記載の経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤の投与により行われる、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
処置が、一定期間中、対象にバリンを実質的に与えないことを特徴とする栄養療法である、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
成人Ｔ細胞白血病リンパ腫の治療のための抗がん剤であって、対象において成人Ｔ細胞白血病リンパ腫を処置することに用いるための医薬組成物であって、対象がバリンを含まない食事により栄養管理されている、または、栄養管理される予定である、抗がん剤。
【請求項１１】
バリン若しくはメチオニンまたはその両方を実質的に含まない、ＨＴＬＶ−１キャリアにおいてＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることに用いるための経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤。
【請求項１２】
ＨＴＬＶ−１ウイルスに感染した対象の体内のＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞の減少を検出する方法であって、
（ａ）処置前の対象から得られた末梢血サンプル中のＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞数を計測することと、
（ｂ）処置中または処置後の該対象から得られた末梢血サンプル中のＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞数を計測することと、
（ｃ）工程（ａ）で求められた細胞数と工程（ｂ）で得られた細胞数とを比較することとを含んでなり、
処置が、一定期間中、該対象にメチオニンを実質的に与えないことである、
方法。
【請求項１３】
処置が、請求項１１に記載の経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤の投与により行われる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
処置が、一定期間中、対象にメチオニンを実質的に与えないことを特徴とする栄養療法である、請求項１２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、成人Ｔ細胞白血病リンパ腫を処置することに用いるための組成物およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
成人Ｔ細胞白血病リンパ腫（Adult T cell Leukemia/Lymphoma, ATL）は、ＨＴＬＶ−１ウイルス感染者において発症する極めて予後不良の血液腫瘍である。主に出生時に経胎盤感染または母乳感染にてＨＴＬＶ−１に感染しＨＴＬＶ−１キャリアとなる。平均５０〜６０年の長い潜伏期間を経て、その中の約５％がＡＴＬを発症する。末梢血における異常リンパ球（ＨＴＬＶ−１感染細胞）の割合が５％を超えた場合にＡＴＬと診断される。ＡＴＬは下山分類により、くすぶり型、慢性型、リンパ腫型、急性型といった病期に分類されるが、予後不良な慢性型、リンパ腫型、および急性型には多剤併用化学療法（抗癌剤治療）が行われる。抗癌剤を多剤併用する事にて細胞毒性を強めているため副作用も強く、高度の貧血（ヘモグロビン濃度低下）や血小板数減少をもたらす事も少なく無い。加えて、ＡＴＬ細胞は化学療法抵抗性である。最近ではＡＴＬ細胞の細胞表面に発現する抗原であるＣＣＲ４を標的とした抗体療法（Mogamulizumab）も開発されたが、リンパ節や脾臓などへの効果が不十分であるのが問題である。全身のATL細胞を処置する有効な方法は知られていない。【０００３】
タンパク質を含まない餌で飼育されたマウスにおいて、重度の顆粒球減少症および貧血症が発症することが知られている（非特許文献１）。これら血球における異常は、１８％のカゼインおよび葉酸により回復した（非特許文献１）。【０００４】
栄養からバリンまたはシステインを除去すると造血幹細胞が減少することが報告されている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】ＷＯ２０１６／０８４８５０
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Kornberg A, Daft FS, Sebrell WH, Granulocytopenia and Anemia in Rats Fed Diets of Low Casein Content, Science, 1949, 103(2682):646-8
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、成人Ｔ細胞白血病リンパ腫を処置することに用いるための組成物およびその製造方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、下記実施例に記載されるように、バリンまたはメチオニン非存在下においてＨＴＬＶ−１ウイルス感染Ｔ細胞、ＡＴＬ細胞株および患者のＡＴＬ細胞が増殖抑制を受けることを明らかにした。本発明者らはまた、バリンまたはメチオニンを与えずに栄養管理したヒトＡＴＬ移植モデルマウスにおいて、ＡＴＬの増殖が抑制を受けることを明らかにした。本発明者らはさらに、バリンまたはメチオニンを与えずに栄養管理したヒトＡＴＬ移植モデルマウスにおいて、ヘモグロビン濃度および血小板数において大きな影響が観察されないことを見出した。本発明はこのような知見に基づきなされたものである。【０００９】
すなわち、本願発明によれば、以下の発明が提供される。
（１）バリン若しくはメチオニンまたはその両方を実質的に含まない、経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤。【００１０】
（２）成人Ｔ細胞白血病リンパ腫を処置することに用いるための組成物であって、上記（１）に記載の栄養製剤を含み、バリン若しくはメチオニンまたはその両方を実質的に含まない、組成物。
（３）成人Ｔ細胞白血病リンパ腫を処置することに用いるための組成物であって、バリン若しくはメチオニンまたはその両方を実質的に含まず、バリン若しくはメチオニンまたはその両方を含まないことを除いては経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤としての組成を有する、組成物。
（４）投与対象が、成人Ｔ細胞白血病リンパ腫の患者またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染者である、上記（２）または（３）に記載の組成物。
（５）経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤が、バリン若しくはメチオニンまたはその両方を実質的に含まないことを除いては、継時的投与により少なくとも３週間の生命維持に十分な栄養素を供給可能なように設計された、上記（２）〜（４）のいずれかに記載の組成物。
（６）経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤が、バリン若しくはメチオニンまたはその両方を実質的に含まないことを除いては、完全栄養製剤として設計された、上記（２）〜（５）のいずれかに記載の組成物。
（７）経静脈投与のための、上記（２）〜（６）のいずれかに記載の組成物。【００１１】
（８）成人Ｔ細胞白血病リンパ腫に罹患した対象の体内の成人Ｔ細胞白血病リンパ腫の減少を検出する方法であって、
（ａ）処置前の対象から得られた末梢血サンプル中の成人Ｔ細胞白血病細胞数を計測することと、
（ｂ）処置中または処置後の該対象から得られた末梢血サンプル中の成人Ｔ細胞白血病細胞数を計測することと、
（ｃ）工程（ａ）で求められた細胞数と工程（ｂ）で得られた細胞数とを比較することとを含んでなり、
処置が、一定期間中、該対象にバリン若しくはメチオニンまたはその両方を実質的に与えないことである、
方法。
（９）成人Ｔ細胞白血病リンパ腫に罹患した対象またはＨＴＬＶ−１ウイルスに感染した対象の体内のＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞の減少を検出する方法であって、
（ａ）処置前の対象から得られた末梢血サンプル中のＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞数を計測することと、
（ｂ）処置中または処置後の該対象から得られた末梢血サンプル中のＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞数を計測することと、
（ｃ）工程（ａ）で求められた細胞数と工程（ｂ）で得られた細胞数とを比較することとを含んでなり、
処置が、一定期間中、該対象にバリン若しくはメチオニンまたはその両方を実質的に与えないことである、
方法。
（１０）処置が、上記（１）に記載の栄養剤または上記（２）〜（７）のいずれかに記載の組成物の投与により行われる、上記（９）に記載の方法。
（１１）処置が、一定期間中、対象にバリン若しくはメチオニンまたはその両方を実質的に与えないことを特徴とする栄養療法である、上記（９）に記載の方法。【００１２】
（１２）成人Ｔ細胞白血病リンパ腫を処置することに用いるための組成物を製造する方法であって、
組成物にバリン若しくはメチオニンまたはその両方が実質的に含まれないように生体に必須の栄養素を混合することを含む、
方法。
（１３）栄養素が、少なくとも、糖、必須アミノ酸、ビタミン類および必須微量元素である、上記（１２）に記載の方法。
（１４）組成物が、継時的投与により少なくとも３週間の生命維持に十分な量の栄養素を含む、上記（１２）に記載の方法。【００１３】
（１５）成人Ｔ細胞白血病リンパ腫を処置することに用いるための医薬組成物を製造するための栄養素の使用であって、栄養素がバリン若しくはメチオニンまたはその両方以外の栄養素である、使用。【００１４】
（１６）成人Ｔ細胞白血病リンパ腫の治療剤を含む、対象において成人Ｔ細胞白血病リンパ腫を処置することに用いるための医薬組成物であって、対象がバリン若しくはメチオニンまたはその両方を含まない食事により栄養管理されている、または、栄養管理される予定である、医薬組成物。【００１５】
本発明によれば、バリン若しくはメチオニンまたはその両方を含まない食事を与えることで対象（例えば、ヒト）においてＡＴＬを処置することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、実施例で用いた通常の培地（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ）、バリンを含まない培地（−Ｖａｌ）およびメチオニンを含まない培地（−Ｍｅｔ）のそれぞれのアミノ酸含量を示す。
【図２】図２は、ＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞株の増殖に対する、バリンまたはメチオニンを含まない培養条件の影響を示す。
【図３】図３は、ＡＴＬ細胞株の増殖に対する、バリンまたはメチオニンを含まない培養条件の影響を示す。
【図４Ａ】図４Ａは、急性型ＡＴＬ患者由来継代ＡＴＬ細胞の増殖に対する、バリンまたはメチオニンを含まない培養条件の影響を示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、急性型ＡＴＬ患者由来継代ＡＴＬ細胞の増殖に対する、バリンまたはメチオニンを含まない培養条件の影響を示す倒立顕微鏡写真を示す。
【図５】図５は、上記図４ＡまたはＢの細胞と共培養した間葉系細胞に対する、バリンまたはメチオニンを含まない培養条件の影響を示す。
【図６】図６は、実施例で用いた通常の餌（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ）、バリンを含まない餌（−Ｖａｌ）およびメチオニンを含まない餌（−Ｍｅｔ）のそれぞれの成分含量を示す。
【図７Ａ】図７Ａは、ヒトＡＴＬ細胞移植モデルに対する給餌計画を示す。
【図７Ｂ】図７Ｂは、ヒトＡＴＬ細胞移植モデルにおけるＡＴＬ細胞による腫瘤サイズに対するバリンまたはメチオニンを与えない栄養条件の影響を示す。
【図８Ａ】図８Ａは、ヒトＡＴＬ細胞移植新生児モデルに対する給餌計画を示す。
【図８Ｂ】図８Ｂは、ヒトＡＴＬ細胞移植新生児モデルにおける末梢血中のＡＴＬ細胞の増殖に対するバリンまたはメチオニンを与えない栄養条件の影響を示す。
【図８Ｃ】図８Ｃは、ヒトＡＴＬ細胞移植新生児モデルにおける末梢血中のヒトＣＤ４５陽性細胞（ＡＴＬ細胞）をバリンまたはメチオニンを与えない栄養条件により減少させることができることを示す。
【図８Ｄ】図８Ｄは、ヒトＡＴＬ細胞移植新生児モデルにおける末梢血中のＡＴＬ細胞数、ヘモグロビン（Ｈｂ）濃度、血小板（Ｐｌｔ）数に対するバリンまたはメチオニンを与えない栄養条件の影響を示す。
【図９】図９は、ヒトＡＴＬ細胞移植新生児モデルにおける各組織におけるＡＴＬ細胞の浸潤を評価するための免疫組織学染色を示す。
【図１０】図１０は、通常餌またはバリンを含まない餌（-Val）でそれぞれ４週間飼育したマウスの末梢血および骨髄中のアミノ酸の含量を調べた結果である。
【図１１】図１１は、通常餌またはバリンを含まない餌を４週間与えたマウスから得られた骨髄中の造血幹細胞とリンパ球系共通前駆細胞の存在頻度を示す。
【図１２Ａ】図１２Ａは、通常餌、バリンを含まない餌（-Val）で４週間飼育されたマウスの骨髄における造血幹細胞の展開図を示す。図１２Ｂは造血幹細胞の存在頻度を示す。
【図１２Ｂ】図１２Ａは、通常餌、バリンを含まない餌（-Val）で４週間飼育されたマウスの骨髄における造血幹細胞の展開図を示す。図１２Ｂは造血幹細胞の存在頻度を示す。
【発明の具体的な説明】
【００１７】
本明細書では、「対象」とは、動物、好ましくは哺乳動物、特にヒトを意味する。
【００１８】
本明細書では、「成人Ｔ細胞白血病リンパ腫」（以下、単に「ＡＴＬ」ということがある）とは、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１型（ＨＴＬＶ−１）の感染が原因となって惹起される白血病／リンパ腫である。ＡＴＬは、「成人Ｔ細胞白血病」又は「成人Ｔ細胞リンパ腫」とも呼ばれることがある。一般に末梢血の異常リンパ球割合が５％を越えるとＡＴＬと診断され得るが、本明細書では「ＡＴＬ細胞」とはＡＴＬを発症した患者体内においてモノクローナルに増殖するＨＴＬＶ−１感染細胞を意味する。
【００１９】
本明細書では、「ＨＴＬＶ−１キャリア」とは、ＨＴＬＶ−１ウイルスに感染した対象（温血動物、特にヒト）を意味する。対象がＨＴＬＶ−１に対する抗体を有している場合には、その対象はＨＴＬＶ−１キャリアと見なすことができる。
【００２０】
本明細書では、「処置」及びその派生語は、治療および予防を含む意味で用いられる。「処置」はまた、臓器浸潤を抑制することも含む意味で用いられる。
【００２１】
本明細書では、「予防する」及びその派生語は、ＡＴＬ発症前のＨＴＬＶ−１キャリアにおいてＡＴＬの発症率を低減することを意味する。
【００２２】
本明細書では、「治療する」及びその派生語は、ＡＴＬを発症した対象において、ＡＴＬの臨床症状の寛解、緩和及び／又は悪化の遅延を意味する。
【００２３】
本明細書では、「含む」または「含んでなる」は、「からなる」や「のみからなる」を包含する意味で用いられる。
【００２４】
従って、本明細書では、「ＡＴＬを処置する」及びその派生語は、ＡＴＬを治療することおよびＡＴＬを予防することの両方を含む。従って、本明細書では、「ＡＴＬを処置することに用いるための組成物」は、「ＡＴＬを治療することに用いるための組成物」と「ＨＴＬＶ−１キャリアにおいてＡＴＬを予防することに用いるための組成物」を含む意味で用いられる。その原理としては、ＡＴＬ細胞を減少させること、およびＨＴＬＶ−１ウイルス感染Ｔ細胞を減少させることであるから、「ＡＴＬを処置することに用いるための組成物」は、「ＡＴＬ細胞を減少させることに用いるための組成物」および「ＨＴＬＶ−１ウイルス感染Ｔ細胞を減少させることに用いるための組成物」に置き換えて読むことができる。
【００２５】
本発明者らは、下記実施例に記載されるように、バリンまたはメチオニンを与えないで動物を維持すると、動物体内においてＡＴＬ細胞を減少させることができることを見出した。従って、本発明によれば、バリン若しくはメチオニンまたはその両方を与えないで動物を維持することにより、動物体内においてＡＴＬ細胞若しくはＨＴＬＶ−１ウイルス感染Ｔ細胞を減少させる方法、またはその方法に用いるバリン若しくはメチオニンまたはその両方を含まない組成物が提供される。
【００２６】
ＡＴＬは、対象の臨床症状から医師により診断することができる。例えば、末梢血中の異常リンパ球（ＨＴＬＶ−１感染細胞）が５％を越えた患者をＡＴＬであると診断し得る。また、ＡＴＬは、ＨＴＬＶ−１がプロウイルスとしてゲノムに組込まれたＴ細胞がモノクローナルに増殖して生じる疾病であり、ＡＴＬの診断は、対象から得られたサンプル中のＡＴＬ細胞のＤＮＡにＨＴＬＶ−１プロウイルスがモノクローナルに組込まれていることをサザンブロット法またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）などにより検出することにより診断することができる。
【００２７】
対象がＨＴＬＶ−１キャリアであることを診断するための検査法としては、粒子凝集法（ＰＡ法）、化学発光法、ウイルス感染細胞を抗原とする間接蛍光抗体法、及びウェスタンブロットによる方法などが知られており、適宜用いることができる。ウェスタンブロット法では、対象から得られたサンプルにおいて、ウイルスのエンベロープタンパク質（ｇｐ４６）に対する抗体が陽性であり、かつ、３種類のコアタンパク質（ｐ１９、ｐ２４及びｐ５３）に対する抗体のうち１以上が陽性である場合に、当該対象はＨＴＬＶ−１キャリアであると診断することができる。あるいは、補助的にＨＴＬＶ−１のプロウイルスゲノムを増幅するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により対象がキャリアであるか否かを診断してもよい。
【００２８】
ＨＴＬＶ−１ウイルス感染Ｔ細胞は、免疫染色あるいはフローサイトメトリーにて、ＣＤ４ならびにＣＡＤＭ１（Ｃｅｌｌ  Ａｄｈｅｓｉｏｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  １）陽性細胞として検出することができる。また、それらのクローナリティーをＴ細胞受容体（ＴＣＲ）のレパトア多様性やＨＴＬＶ−１プロウィルスのゲノム組込み位置等を利用して調べ、モノクローナルである場合、検出された細胞をＡＴＬ細胞として同定することができる。
【００２９】
本発明によれば、対象は、バリン若しくはメチオニンまたはその両方を与えないよう栄養管理され得る。これにより、対象の体内のＡＴＬ細胞およびＨＴＬＶ−１ウイルス感染Ｔ細胞は減少する、すなわち、ＡＴＬを処置することができる。
【００３０】
ある態様では、ＡＴＬを処置することに用いるための組成物は、経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤を含むものであるが、バリン若しくはメチオニンまたはその両方を実質的に含まない組成物である。
本明細書では、「バリンを含まない」とは、「バリンを欠如した」と相互互換的に用いられる。本明細書では、「バリンを含まない」とは、含有ペプチド中にもバリンを含まないことを意味する。
本明細書では、「メチオニンを含まない」とは、「メチオニンを欠如した」と相互互換的に用いられる。本明細書では、「メチオニンを含まない」とは、含有ペプチド中にもメチオニンを含まないことを意味する。
本明細書では、「実質的に」とは、製造工程で避けることのできない程度の混入があってもよいことを意味する。
【００３１】
ここで、「経静脈栄養製剤」とは、静脈栄養法に用いられる栄養剤を意味する。経静脈栄養製剤としては、末梢静脈内に栄養素を投与する末梢静脈栄養製剤と、中心静脈内に栄養素を投与する中心静脈栄養製剤が挙げられる。通常は、腸が機能している場合には、栄養法としては、経腸栄養法が選択され、経腸栄養製剤が対象に投与されるが、経腸栄養が困難である場合は、経静脈栄養法が選択され、経静脈栄養製剤が対象に投与される。経静脈栄養製剤としては、末梢静脈栄養製剤と中心静脈栄養製剤が挙げられる。経静脈栄養製剤は、通常、輸液製剤であり、糖、電解質およびアミノ酸を含む水溶液であり、ビタミンをさらに含んでいてもよい。中心静脈栄養製剤は、通常は、糖、電解質およびアミノ酸に加えて、ビタミンおよび生体に必要な微量元素（例えば、輸液用ビタミン剤、輸液用総合ビタミン剤および輸液用微量元素製剤）を含む。
【００３２】
「経腸栄養製剤」とは、経腸栄養法に用いられる栄養剤を意味する。経腸栄養製剤としては、半消化態栄養剤、消化態栄養剤および成分栄養剤が挙げられる。半消化態栄養剤は、窒素源としてタンパク質を含み、消化態栄養剤は、窒素源として低分子ペプチドおよびアミノ酸を含み、成分栄養剤は、窒素源としてアミノ酸を含む。本発明では、経腸栄養製剤としては、成分栄養剤が好ましく用いられ得る。
【００３３】
本明細書では、「バリンを除いては経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤としての組成を有する」とは、バリン以外の組成は、経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤と同一であるか、またはバリン以外の組成が類似しており、かつ経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤としての機能を有することを意味する。
本明細書では、「メチオニンを除いては経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤としての組成を有する」とは、メチオニン以外の組成は、経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤と同一であるか、またはメチオニン以外の組成が類似しており、かつ経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤としての機能を有することを意味する。
【００３４】
本明細書では、「バリンを実質的に含まないことを除いては、完全栄養製剤として設計された」とは、完全栄養製剤として設計された栄養製剤の組成を有するが、その組成においてバリンを含まないことを意味する。すなわち、「バリンを実質的に含まないことを除いては、完全栄養製剤として設計された」組成物は、バリン以外の組成は、完全栄養製剤と同一とし得る。
本明細書では、「メチオニンを実質的に含まないことを除いては、完全栄養製剤として設計された」とは、完全栄養製剤として設計された栄養製剤の組成を有するが、その組成においてメチオニンを含まないことを意味する。すなわち、「メチオニンを実質的に含まないことを除いては、完全栄養製剤として設計された」組成物は、メチオニン以外の組成は、完全栄養製剤と同一とし得る。
【００３５】
本明細書では、「バリンを実質的に含まないことを除いては、継時的投与により少なくとも３週間の生命維持に十分な栄養素を供給可能なように設計された」または類似の表現は、継時的投与により少なくとも３週間の生命維持に十分な栄養素を供給可能なように設計された栄養製剤の組成を有するが、その組成においてバリンを含まないことを意味する。
本明細書では、「メチオニンを実質的に含まないことを除いては、継時的投与により少なくとも３週間の生命維持に十分な栄養素を供給可能なように設計された」または類似の表現は、継時的投与により少なくとも３週間の生命維持に十分な栄養素を供給可能なように設計された栄養製剤の組成を有するが、その組成においてメチオニンを含まないことを意味する。
【００３６】
医学的に対象の栄養管理が適切になされるよう、栄養管理法として経静脈栄養法または経腸栄養法が選択されることがある。上記経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤は、このような適切な栄養管理のために市販されている。経静脈栄養法または経腸栄養法では、上記経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤に加えて脂肪乳剤などのエネルギー摂取量を増加させる製剤が併用されてもよい。脂肪乳剤は、エネルギー供給のためや、脂肪酸欠乏の防止のために栄養製剤と併用投与され、一般的には脂肪酸の乳化物を含み、脂肪酸は例えば、大豆油由来であり得、乳化剤は卵黄由来のレシチンであり得る。但し、いずれの場合であっても、栄養管理においては、バリン若しくはメチオニンまたはその両方が実質的に対象に摂取されないように管理される。
【００３７】
本発明では、バリンを与えないで動物を維持することにより、対象動物体内においてＡＴＬ細胞およびＨＴＬＶ−１ウイルス感染Ｔ細胞を減少させることができるので、バリンを実質的に含まない経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤がＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染Ｔ細胞を減少させること、またはＡＴＬを処置することに好ましく用いられ得る。
本発明では、メチオニンを与えないで動物を維持することにより、対象動物体内においてＡＴＬ細胞およびＨＴＬＶ−１ウイルス感染Ｔ細胞を減少させることができるので、メチオニンを実質的に含まない経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤がＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染Ｔ細胞を減少させること、またはＡＴＬを処置することに好ましく用いられ得る。
また、バリンおよびメチオニンを実質的に含まない経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤は、ＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染Ｔ細胞を減少させるため、またはＡＴＬを処置することに好ましく用いられ得る。
【００３８】
ある態様では、本発明のＡＴＬを処置することに用いるための組成物は、２０種類のアミノ酸のうち、バリン以外のアミノ酸をすべて含んでいる。ある態様では、本発明のＡＴＬを処置することに用いるための組成物は、バリンを含むペプチドを実質的に含まない。また、ある態様では、本発明のＡＴＬを処置することに用いるための組成物は、２０種類のアミノ酸のうち、バリン以外のアミノ酸をすべて含み、かつ、糖、電解質、ビタミンおよび必須微量元素をさらに含む。ある態様では、本発明のＡＴＬを処置することに用いるための組成物は、２０種類のアミノ酸のうち、バリン以外のアミノ酸をすべて含み、かつ、糖、電解質、ビタミンおよび必須微量元素をさらに含み；かつ、脂肪乳剤と併用される。本発明のＡＴＬを処置することに用いるための組成物に含ませる各成分の量は、通常の経静脈栄養剤または経腸栄養剤に含ませる各成分の量と同等とすることができる。
【００３９】
ある態様では、本発明のＡＴＬを処置することに用いるための組成物は、２０種類のアミノ酸のうち、メチオニン以外のアミノ酸をすべて含んでいる。ある態様では、本発明のＡＴＬを処置することに用いるための組成物は、メチオニンを含むペプチドを実質的に含まない。また、ある態様では、本発明のＡＴＬを処置することに用いるための組成物は、２０種類のアミノ酸のうち、メチオニン以外のアミノ酸をすべて含み、かつ、糖、電解質、ビタミンおよび必須微量元素をさらに含む。ある態様では、本発明のＡＴＬを処置することに用いるための組成物は、２０種類のアミノ酸のうち、メチオニン以外のアミノ酸をすべて含み、かつ、糖、電解質、ビタミンおよび必須微量元素をさらに含み；かつ、脂肪乳剤と併用される。本発明のＡＴＬを処置することに用いるための組成物に含ませる各成分の量は、通常の経静脈栄養剤または経腸栄養剤に含ませる各成分の量と同等とすることができる。
【００４０】
ある態様では、本発明のＡＴＬを処置することに用いるための組成物は、２０種類のアミノ酸のうち、バリンおよびメチオニン以外のアミノ酸をすべて含んでいる。ある態様では、本発明のＡＴＬを処置することに用いるための組成物は、バリンまたはメチオニンを含むペプチドを実質的に含まない。また、ある態様では、本発明のＡＴＬを処置することに用いるための組成物は、２０種類のアミノ酸のうち、バリンおよびメチオニン以外のアミノ酸をすべて含み、かつ、糖、電解質、ビタミンおよび必須微量元素をさらに含む。ある態様では、本発明のＡＴＬを処置することに用いるための組成物は、２０種類のアミノ酸のうち、バリンおよびメチオニン以外のアミノ酸をすべて含み、かつ、糖、電解質、ビタミンおよび必須微量元素をさらに含み；かつ、脂肪乳剤と併用される。本発明のＡＴＬを処置することに用いるための組成物に含ませる各成分の量は、通常の経静脈栄養剤または経腸栄養剤に含ませる各成分の量と同等とすることができる。
【００４１】
経静脈投与の医薬組成物において、各栄養素は、薬学的に許容可能な成分からなる。
【００４２】
本発明のある態様では、本発明の組成物の投与対象はＡＴＬに罹患した対象またはＨＴＬＶ−１ウイルスに感染した対象である。
【００４３】
バリンを実質的に含まない経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤は、アミノ酸としてバリン以外のアミノ酸製剤を栄養剤の他の構成成分（糖および電解質など）と混合することによって得ることができる。
メチオニンを実質的に含まない経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤は、アミノ酸としてメチオニン以外のアミノ酸製剤を栄養剤の他の構成成分（糖および電解質など）と混合することによって得ることができる。
バリンおよびメチオニンを実質的に含まない経静脈栄養製剤または経腸栄養製剤は、アミノ酸としてバリンおよびメチオニン以外のアミノ酸製剤を栄養剤の他の構成成分（糖および電解質など）と混合することによって得ることができる。
【００４４】
本発明のＡＴＬを処置することに用いるための組成物は、継時的投与により少なくとも３週間の生命維持に十分な栄養素を供給可能なように設計されたものであればよく、好ましくは、４週間若しくは５週間またはそれ以上の生命維持に十分な栄養素を供給可能なように設計されたものとすることができる。
【００４５】
本発明によれば、対象にバリンまたはメチオニンを実質的に与えることなく、その他の栄養を与えると、対象の体内のＡＴＬ細胞およびＨＴＬＶ−１ウイルス感染Ｔ細胞が減少する。従って、本発明によれば、対象の体内のＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染Ｔ細胞を減少させる方法であって、対象にバリン若しくはメチオニンまたはその両方を実質的に与えないよう栄養管理する（栄養摂取させる）ことを含む、方法が提供される。栄養管理は、経腸栄養法または経静脈栄養法により行うことができる。栄養管理は、上記の経腸栄養製剤または経静脈栄養製剤を対象に投与することにより行ってもよい。
【００４６】
本発明によれば、成人Ｔ細胞白血病リンパ腫に罹患した対象の体内のＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染Ｔ細胞の減少を検出する方法であって、
（ａ）処置前の対象から得られた末梢血サンプル中のＡＴＬ細胞数またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染Ｔ細胞数を計測することと、
（ｂ）処置中または処置後の該対象から得られた末梢血サンプル中のＡＴＬ細胞数またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染Ｔ細胞数を計測することと、
（ｃ）工程（ａ）で求められた細胞数と工程（ｂ）で得られた細胞数とを比較することとを含んでなり、
処置が、一定期間中、該対象にバリン若しくはメチオニンまたはその両方を実質的に与えないことである、
方法が提供される。この方法では、工程（ｃ）において、工程（ａ）で求められた細胞数よりも工程（ｂ）で得られた細胞数が少ないときに、体内のＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染Ｔ細胞が減少したと判断することができる。ある態様では、処置は、経腸栄養法または経静脈栄養法による栄養療法である。ある態様では、処置は、上記の経腸栄養製剤または経静脈栄養製剤を対象に投与することにより行ってもよい。
【００４７】
本発明によれば、ＨＴＬＶ−１ウイルスに感染した対象の体内のＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞の減少を検出する方法であって、
（ａ）処置前の対象から得られた末梢血サンプル中のＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞数を計測することと、
（ｂ）処置中または処置後の該対象から得られた末梢血サンプル中のＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞数を計測することと、
（ｃ）工程（ａ）で求められた細胞数と工程（ｂ）で得られた細胞数とを比較することとを含んでなり、
処置が、一定期間中、該対象にバリン若しくはメチオニンまたはその両方を実質的に与えないことである、
方法が提供される。この方法では、工程（ｃ）において、工程（ａ）で求められた細胞数よりも工程（ｂ）で得られた細胞数が少ないときに、体内のＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞が減少したと判断することができる。ある態様では、処置は、経腸栄養法または経静脈栄養法による栄養療法である。ある態様では、処置は、上記の経腸栄養製剤または経静脈栄養製剤を対象に投与することにより行ってもよい。
【００４８】
本発明の対象の体内のＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞の減少を検出する方法では、一定期間は、好ましくは１日以上、２日以上、３日以上、４日以上、５日以上、６日以上、１週間以上、２週間以上、３週間以上または４週間以上であり、患者が死亡するほど長い期間であってはならない。本発明のある態様では、一定期間は、１日〜５週間、１週間〜４週間、または２週間〜３週間程度である。
【００４９】
本発明の対象の体内のＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞の減少を検出する方法では、対象は、哺乳動物とすることができ、好ましくはヒトとすることができる。本発明のある態様では、対象は、ＡＴＬ患者である。本発明のある態様では、対象は、ＴＨＬＶ−１に感染した対象である。
【００５０】
本発明によれば、ＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることに用いるための組成物、またはＡＴＬを処置することに用いるための組成物を製造する方法であって、組成物にバリン若しくはメチオニンまたはその両方が実質的に含まれないように栄養素を混合することを含む、方法が提供される。混合される栄養素は、糖、アミノ酸、ビタミン、電解質および必須の微量元素であり得る。ある態様では、混合されるアミノ酸は、トリプトファン、リジン、フェニルアラニン、トレオニン、ロイシン、イソロイシンおよびヒスチジンなどの必須アミノ酸から選択される１以上のアミノ酸またはすべてのアミノ酸である。経静脈栄養法により投与する組成物は、薬学的に許容可能な成分からなる。
【００５１】
体内に必要な微量元素としては、例えば、鉄、亜鉛、銅、セレン、クロム、コバルト、ヨウ素、マンガンおよびモリブデンが挙げられる。必須微量元素の投与量は、概ね以下の通りである。
鉄        ：２０〜２００μｇ／ｋｇ体重／日
亜鉛      ：４０〜６０μｇ／ｋｇ体重／日
銅        ：２０〜５０μｇ／ｋｇ体重／日
セレン    ：２〜７μｇ／ｋｇ体重／日
クロム    ：０．１〜０．２μｇ／ｋｇ体重／日
ヨウ素    ：１〜１５μｇ／ｋｇ体重／日
マンガン  ：１〜６０μｇ／ｋｇ体重／日
モリブデン：０．１〜０．５μｇ／ｋｇ体重／日
従って、上記必要量を目安にして本発明の組成物に必須微量元素を混入させることができる。
【００５２】
本発明によれば、ＡＴＬをその必要のある患者において処置する方法であって、
一定期間中、対象にバリンを実質的に与えないで（または、それ以外の栄養素を与えて）患者の生命を維持し、それにより、患者体内のＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることを含む、方法が提供される。本発明のＡＴＬを処置する方法は、ほかの治療、例えば、抗体療法、免疫療法、放射線療法、造血幹細胞移植療法またはＡＴＬの処置に用いられる抗癌剤による治療の前、後もしくは最中に行ってもよい。本発明のＡＴＬを処置する方法は、患者のＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞が実質的に除去されるまで、対象にバリンを実質的に与えないことをさらに含んでいてもよい。
本発明によれば、その必要のある患者においてＡＴＬを処置する方法であって、
一定期間中、対象にメチオニンを実質的に与えないで（または、それ以外の栄養素を与えて）患者の生命を維持し、それにより、患者体内のＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることを含む、方法が提供される。本発明のＡＴＬを処置する方法は、ほかの治療、例えば、抗体療法、免疫療法、放射線療法、造血幹細胞移植療法またはＡＴＬの処置に用いられる抗癌剤による治療の前、後もしくは最中に行ってもよい。本発明のＡＴＬを処置する方法は、患者のＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞が実質的に除去されるまで、対象にメチオニンを実質的に与えないことをさらに含んでいてもよい。
本発明によれば、その必要のある患者においてＡＴＬを処置する方法であって、
一定期間中、対象にバリンおよびメチオニンを実質的に与えないで（または、それ以外の栄養素を与えて）患者の生命を維持し、それにより、患者体内のＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることを含む、方法が提供される。本発明のＡＴＬを処置する方法は、ほかの治療、例えば、抗体療法、免疫療法、放射線療法、造血幹細胞移植療法またはＡＴＬの処置に用いられる抗癌剤による治療の前、後もしくは最中に行ってもよい。本発明のＡＴＬを処置する方法は、患者のＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞が実質的に除去されるまで、対象にバリンおよびメチオニンを実質的に与えないことをさらに含んでいてもよい。
本発明者らは、対象にバリンを与えないと対象における造血幹細胞数が減少することを見出した。すなわち、バリンを与えないで一定期間栄養管理されることにより、ＡＴＬ患者は、過剰な抗がん剤の投与を回避でき（場合によっては、抗がん剤の投与そのものを回避でき）、かつ、造血幹細胞を低減させるために従来行われてきた化学療法や放射線療法の程度を低減、または化学療法や放射線療法そのものを回避でき、治療による副作用を大幅に低減することができる。したがって、本発明のＡＴＬを処置する方法は、処置後、対象に造血幹細胞を移植することをさらに含んでいてもよい（造血幹細胞数を低減させる他の方法を用いなくてもよい）。あるいは、本発明のＡＴＬを処置する方法は、造血幹細胞移植を受けるＡＴＬ患者において、その前処置として（または前処置を代替する方法として）実施することができる。また、本発明の組成物や栄養製剤は、造血幹細胞移植を受けるＡＴＬ患者に摂取させることができ、これによりＡＴＬ患者の体内でＡＴＬ細胞を減少させ、かつ、造血幹細胞数を減少させることができる。従って、本発明のＡＴＬを処置する方法または組成物若しくは栄養製剤は、造血幹細胞移植を受けるＡＴＬ患者において、ＡＴＬを処置するために、および／または、造血幹細胞を減少させるために、実施または使用することができる。
従って、本発明の組成物または栄養製剤は、造血幹細胞移植を受けるＡＴＬ患者に投与することに用いるための組成物または栄養製剤とすることができる。本発明の方法ではまた、ＡＴＬ患者においてＡＴＬを処置する方法であって、該患者にバリンを与えないで一定期間（例えば、３週間以上、４週間以上）栄養管理することと、その後、該患者体内における造血幹細胞数を測定することと、造血幹細胞数が十分に減少した後で該患者体内に造血幹細胞を移植することとを含む方法｛ここで、ＡＴＬ患者は造血幹細胞移植において該患者体内の造血幹細胞を減少させるための他の前処置を受けないでもよい｝が提供され
る。
【００５３】
本発明によれば、成人Ｔ細胞白血病リンパ腫の治療剤を含む、対象において成人Ｔ細胞白血病リンパ腫を処置することに用いるための医薬組成物であって、対象がバリン若しくはメチオニンまたはその両方を含まない食事により栄養管理されている、医薬組成物が提供される。ある態様では、上記医薬組成物において、対象がバリン若しくはメチオニンまたはその両方を含まない食事により１、２もしくは３週間以上の期間にわたって栄養管理されている対象、または１、２もしくは３週間以上の期間にわたって栄養管理される予定である対象である。この態様は、成人Ｔ細胞白血病リンパ腫の治療剤と本発明のＡＴＬを処置する方法との併用療法である。
【００５４】
本発明によれば、ＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることに用いるための組成物、またはＡＴＬを処置することに用いる組成物を製造するための栄養素の使用であって、栄養素がバリン若しくはメチオニンまたはその両方以外の栄養素である、使用に関する。使用される栄養素は、糖、アミノ酸、ビタミン、電解質および必須の微量元素であり得る。
【００５５】
本発明によれば、ＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることに用いるための組成物、またはＡＴＬを処置することに用いる組成物を製造するための栄養素の使用であって、栄養素がバリン以外の栄養素である、使用に関する。使用される栄養素は、糖、アミノ酸、ビタミン、電解質および必須の微量元素であり得る。
ある態様では、使用されるアミノ酸は、トリプトファン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、ロイシン、イソロイシンおよびヒスチジンなどの必須アミノ酸から選択される１以上のアミノ酸または上記必須アミノ酸から選択されるすべてのアミノ酸である。ある態様では、栄養素はアミノ酸としてバリン以外のすべてのアミノ酸を含む。
【００５６】
本発明によれば、ＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることに用いるための組成物、またはＡＴＬを処置することに用いる組成物を製造するための栄養素の使用であって、栄養素がメチオニン以外の栄養素である、使用に関する。使用される栄養素は、糖、アミノ酸、ビタミン、電解質および必須の微量元素であり得る。
ある態様では、使用されるアミノ酸は、バリン、トリプトファン、リジン、フェニルアラニン、トレオニン、ロイシン、イソロイシンおよびヒスチジンなどの必須アミノ酸から選択される１以上のアミノ酸または上記必須アミノ酸から選択されるすべてのアミノ酸である。ある態様では、栄養素はアミノ酸としてメチオニン以外のすべてのアミノ酸を含む。
【００５７】
本発明によれば、ＡＴＬ細胞またはＨＴＬＶ−１ウイルス感染細胞を減少させることに用いるための組成物、またはＡＴＬを処置することに用いる組成物を製造するための栄養素の使用であって、栄養素がバリンおよびメチオニン以外の栄養素である、使用に関する。使用される栄養素は、糖、アミノ酸、ビタミン、電解質および必須の微量元素であり得る。
ある態様では、使用されるアミノ酸は、トリプトファン、リジン、フェニルアラニン、トレオニン、ロイシン、イソロイシンおよびヒスチジンなどの必須アミノ酸から選択される１以上のアミノ酸または上記必須アミノ酸から選択されるすべてのアミノ酸である。ある態様では、栄養素はアミノ酸としてバリンおよびメチオニン以外のすべてのアミノ酸を含む。
【００５８】
ある態様では、使用されるアミノ酸は、すべてのアミノ酸（バリンを除く）である。従って、ある態様では、使用される栄養素は、糖、アミノ酸、ビタミン、電解質および必須の微量元素であり、アミノ酸は、トリプトファン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、ロイシン、イソロイシンおよびヒスチジンなどの必須アミノ酸から選択される１以上のアミノ酸または上記必須アミノ酸から選択されるすべてのアミノ酸である。
ある態様では、使用されるアミノ酸は、すべてのアミノ酸（メチオニンを除く）である。従って、ある態様では、使用される栄養素は、糖、アミノ酸、ビタミン、電解質および必須の微量元素であり、アミノ酸は、トリプトファン、リジン、バリン、フェニルアラニン、トレオニン、ロイシン、イソロイシンおよびヒスチジンなどの必須アミノ酸から選択される１以上のアミノ酸または上記必須アミノ酸から選択されるすべてのアミノ酸である。
ある態様では、使用されるアミノ酸は、すべてのアミノ酸（バリンおよびメチオニンを除く）である。従って、ある態様では、使用される栄養素は、糖、アミノ酸、ビタミン、電解質および必須の微量元素であり、アミノ酸は、トリプトファン、リジン、フェニルアラニン、トレオニン、ロイシン、イソロイシンおよびヒスチジンなどの必須アミノ酸から選択される１以上のアミノ酸または上記必須アミノ酸から選択されるすべてのアミノ酸である。
【００５９】
ある態様では、使用される栄養素は、糖、アミノ酸、ビタミン、電解質および必須の微量元素であり、アミノ酸は、アスパラギン、アスパラギン酸、セリン、トレオニン、グルタミン、グルタミン酸、プロリン、グリシン、メチオニン、ロイシン、イソロイシン、チロシン、フェニルアラニン、ヒスチジン、アラニン、リジン、トリプトファンおよびアルギニンである。
ある態様では、使用される栄養素は、糖、アミノ酸、ビタミン、電解質および必須の微量元素であり、アミノ酸は、アスパラギン、アスパラギン酸、セリン、トレオニン、グルタミン、グルタミン酸、プロリン、グリシン、バリン、ロイシン、イソロイシン、チロシン、フェニルアラニン、ヒスチジン、アラニン、リジン、トリプトファンおよびアルギニンである。
ある態様では、使用される栄養素は、糖、アミノ酸、ビタミン、電解質および必須の微量元素であり、アミノ酸は、アスパラギン、アスパラギン酸、セリン、トレオニン、グルタミン、グルタミン酸、プロリン、グリシン、ロイシン、イソロイシン、チロシン、フェニルアラニン、ヒスチジン、アラニン、リジン、トリプトファンおよびアルギニンである。
【００６０】
ある態様では、使用される栄養素は、糖、アミノ酸、ビタミン、電解質および必須の微量元素であり、アミノ酸は、アスパラギン、アスパラギン酸、セリン、トレオニン、グルタミン、グルタミン酸、プロリン、グリシン、メチオニン、ロイシン、イソロイシン、チロシン、フェニルアラニン、ヒスチジン、アラニン、リジン、トリプトファン、システインおよびアルギニンである。
ある態様では、使用される栄養素は、糖、アミノ酸、ビタミン、電解質および必須の微量元素であり、アミノ酸は、アスパラギン、アスパラギン酸、セリン、トレオニン、グルタミン、グルタミン酸、プロリン、グリシン、バリン、ロイシン、イソロイシン、チロシン、フェニルアラニン、ヒスチジン、アラニン、リジン、トリプトファン、システインおよびアルギニンである。
ある態様では、使用される栄養素は、糖、アミノ酸、ビタミン、電解質および必須の微量元素であり、アミノ酸は、アスパラギン、アスパラギン酸、セリン、トレオニン、グルタミン、グルタミン酸、プロリン、グリシン、ロイシン、イソロイシン、チロシン、フェニルアラニン、ヒスチジン、アラニン、リジン、トリプトファン、システインおよびアルギニンである。
【００６１】
使用される各栄養素の含量は、投与対象に応じて当業者により適宜決定することができる。例えば、使用される各栄養素の含量は、経静脈栄養剤または経腸栄養剤における各栄養素の含量と同等とすることができる。
【実施例】
【００６２】
実施例１：細胞培養培地におけるアミノ酸欠損の細胞増殖に与える影響
２０アミノ酸のうち１アミノ酸を欠損させた細胞培養培地を作製し、各アミノ酸が欠損することによる細胞の増殖に対する影響を調べた。【００６３】
細胞としては、ＨＴＬＶ−１感染Ｔ細胞株（ＭＴ−２）と、成人Ｔ細胞白血病細胞株（ＴＬ−Ｏｍ１）、および急性型ＡＴＬ患者由来継代ＡＴＬ細胞を調べた。急性型ＡＴＬ患者由来継代ＡＴＬ細胞は、急性型ＡＴＬと診断されたヒト患者検体からフローサイトメトリー・ソーティングを用いてＡＴＬ細胞のみを純化した上で継代し、モノクローナルであることを確認して得た。
培地は、図１に示される、ＤＭＥＭ／Ｆ１２培地（「通常」と呼ばれる）、バリン欠失培地（−Ｖａｌ）およびメチオニン欠失培地（−Ｍｅｔ）を用いた。いずれの培地も、無血清で用いた。また、いずれの培地にも、最終濃度が０．５重量／容積％となるようにウシ血清アルブミンを添加して用いた。【００６４】
（１）ＨＴＬＶ−１感染細胞の増殖に対する効果
ＨＴＬＶ−１感染Ｔ細胞株（ＭＴ−２）を図１に記載の培地で培養し、２週間後に細胞数を測定した。通常の培地（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ）を用いたときの細胞数を１００％として、バリン欠失培地（−Ｖａｌ）およびメチオニン欠失培地（−Ｍｅｔ）を用いたときの細胞数をそれぞれ相対値で示した。結果は、図２に示される通りであった。【００６５】
図２に示されるように、ＨＴＬＶ−１感染Ｔ細胞株（ＭＴ−２）は、バリンまたはメチオニンのいずれかを欠失した培地では、増殖が大きく抑制されることが明らかとなった。【００６６】
成人Ｔ細胞白血病は、ＨＴＶＬ−１感染したヒト（キャリアともいう）の一部から発症することが知られている。本実施例の結果は、バリンまたはメチオニンを栄養から欠失させることにより、発症前のキャリアにおいて、ＨＴＬＶ−１感染細胞の増殖を抑制できる、すなわち、成人Ｔ細胞白血病を予防でき得ることを示唆する結果である。【００６７】
（２）成人Ｔ細胞白血病細胞株および急性型ＡＴＬ患者由来継代ＡＴＬ細胞の増殖に対する効果
成人Ｔ細胞白血病細胞株（ＴＬ−Ｏｍ１）、および急性型ＡＴＬ患者由来継代ＡＴＬ細胞を間葉系細胞株（ＭＳ−５）と共に、図１に示される組成の培地中で２週間共培養した。通常の培地（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ）を用いたときの細胞数を１００％として、バリン欠失培地（−Ｖａｌ）およびメチオニン欠失培地（−Ｍｅｔ）を用いたときの細胞数をそれぞれ相対値で示した。結果は、図３、４Ａおよび４Ｂに示される通りであった。【００６８】
図３に示されるように、成人Ｔ細胞白血病細胞株（ＴＬ−Ｏｍ１）は、バリンまたはメチオニンのいずれかを欠失した培地では、増殖が大きく抑制されることが明らかとなった。
また、図４Ａに示されるように、急性型ＡＴＬ患者由来継代ＡＴＬ細胞についても同様であり、バリンまたはメチオニンのいずれかを欠失した培地では、増殖が大きく抑制されることが明らかとなった。図４Ｂは、２週間培養後の急性型ＡＴＬ患者由来継代ＡＴＬ細胞の顕微鏡写真を示す。通常の培地を用いた場合と比較して、バリンまたはメチオニンのいずれかを欠失した培地では、細胞数が非常に少ないことが視覚的にも明らかであった。【００６９】
これに対して、共培養した間葉系細胞の数を測定したところ、図５に示されるように、
間葉系細胞に対しては、バリンまたはメチオニンの欠失の影響は観察されなかった。【００７０】
実施例２：生体内におけるＡＴＬ細胞の増殖にバリンまたはメチオニン欠失餌が与える影響
実施例１では、培養条件下においてバリンまたはメチオニン欠失の影響を調べた。本実施例では、ＡＴＬ患者由来細胞を移植したマウスに対して、バリンまたはメチオニンを欠失した餌を与え、生体内でのＡＴＬ細胞の増殖に対する影響を調べた。【００７１】
給餌する餌の組成は、図６に示される通りの製品番号および組成を有し、Research Diet社から購入した。であった。成体NOG(NOD/Shi-scid,IL-2RγKO)マウス（１２週齢、メス、ｎ＝９）に急性型ＡＴＬ患者由来継代ＡＴＬ細胞を１０万個腹腔内投与（ｉ．ｐ．）にて移植した。図７Ａに示されるように、移植後６週間は通常の餌で飼育し、移植後６週より餌をバリン欠損餌、メチオニン欠損餌、または通常餌に変え、移植後１０週後に解剖して、腹膜腫瘤の長径を比較した。結果は、図７Ｂに示される通りであった。【００７２】
図７Ｂに示されるように、バリン欠損餌を与えたマウスでは、肉眼上明らかな腫瘤は観察されなかった。これに対して、メチオニン欠損餌を与えたマウスでは、腫瘤は観察されたが、その長径は通常餌を与えられたマウス中で見出される腫瘤の長径と比較して小さくなっていた。【００７３】
このことから、バリンおよびメチオニンのいずれか１つを欠失させることで、ＡＴＬがインビボで処置できることが明らかとなった。【００７４】
実施例３：患者ＡＴＬモデルでの腫瘍抑制
出生より４８時間以内の新生児NOG(NOD/Shi-scid,IL-2RγKO)マウスに、急性型ＡＴＬ患者末梢血よりフローサイトメトリー＆ソーティングを用いて純化し細胞分離したＡＴＬ細胞（ＣＤ４陽性ＣＡＤＭ１陽性分画）を３万個ずつ経静脈移植（ｉ．v．）した。図８Ａに示されるように、移植後４週より離乳と共に餌を図６に記載のバリン欠損餌、メチオニン欠損餌、または通常餌に変えた。移植後、フローサイトメトリーを用いて末梢血のＡＴＬ細胞割合の変化を定期的に評価した。【００７５】
結果は、図８Ｂに示される通りであった。図８Ｂに示されるように、バリンおよびメチオニンのいずれか１つを欠失させることで、ＡＴＬ細胞の、マウス白血球に対する比率が低下することが明らかとなった。特に、バリン欠失餌を与えたときにＡＴＬ細胞の比率が大きく低下した。【００７６】
さらに、移植８週後に末梢血をフローサイトメトリーにて解析した。結果は図８Ｃに示される通りであった。図８Ｃの通常餌を与えたマウスの結果から分かるように、上記ＡＴＬモデルマウスの末梢血に認められるヒト細胞（ヒトＣＤ４５陽性細胞）はいずれもＣＤ４＋ＣＡＤＭ１＋であり、ＡＴＬ細胞であった。
これに対して、バリン欠損餌を与えたマウスでは、通常餌を与えた場合の細胞数と比較して、明らかにＣＤ４陽性ＣＡＤＭ１陽性細胞の数が減少していた（図８Ｃ、−Ｖａｌ餌参照）。また、メチオニン欠損餌を与えたマウスでも、通常餌を与えた場合の細胞数と比較して、ＣＤ４陽性ＣＡＤＭ１陽性細胞の数が減少していた（図８Ｃ、−Ｍｅｔ餌）。【００７７】
さらに解析を行った。上記のそれぞれのマウスで移植８週後の時点で、末梢血中のＡＴＬ細胞数、ヘモグロビン（Ｈｂ）濃度、および血小板数（Ｐｌｔ）を調べた。結果は図８Ｄに示される通りであった。【００７８】
図８Ｄの上段パネルで示されるように、ＡＴＬ細胞は、バリンおよびメチオニンのいずれか１つを欠失した餌を与えることで、減少した。
図８Ｄの中段パネルおよび下段パネルで示されるように、ヘモグロビン濃度および血小板数については、バリンおよびメチオニンを欠損させたことによって大きな変化は見られなかった。【００７９】
さらに、移植８週後のマウスの皮膚、肝臓および脾臓へのＡＴＬ細胞の浸潤の程度について、組織切片により、通常餌を与えたマウスとバリン欠損餌を与えたマウスとで比較した。具体的には、各マウスから作製された組織切片に対して、ヘマトキシリン・エオシン（ＨＥ）染色と抗ヒトＣＤ４抗体を用いた免疫組織学染色（ＣＤ４陽性のＡＴＬ細胞が褐色で示される）により、組織を観察した。結果は図９に示される通りであった。【００８０】
図９に示されるように、通常餌を与えたマウスでは、皮膚、肝臓および脾臓のいずれの組織にもＡＴＬ細胞が大量に浸潤している様子が観察された（組織の大部分が褐色に染色される）。一方でバリン欠損餌を与えたマウスでは、いずれの組織においてもＡＴＬ細胞の浸潤の量が大幅に低減された（褐色の染色像がまばらにしか見られない）。【００８１】
このことから、バリンやメチオニンを与えないでいると、ＡＴＬ細胞の細胞数が減少するだけでなく、組織への浸潤が低下し、ＡＴＬ細胞の臓器浸潤も抑制できることが示された。【００８２】
以上の通り、バリンおよびメチオニンがそれぞれＨＴＬＶ−１感染Ｔ細胞、ＡＴＬ細胞の増殖に必要であることが明らかとなった。また、栄養源からバリンおよびメチオニンを除くことにより、これらの細胞の増殖が実際に抑制されることも明らかとなった。【００８３】
実施例４：バリンを与えないことによる造血幹細胞数の低減
ＡＴＬ患者に造血幹細胞移植療法をおこない治療する場合には、ＡＴＬ細胞の削減に加えて、移植片（ドナー）に含まれる造血幹細胞の、患者（レシピエント）骨髄への生着を成功させる必要がある。そのためには、レシピエント造血幹細胞を低減しドナー造血幹細胞の生着するスペースを空けると同時に、免疫による移植片拒絶を防ぐためリンパ球系細胞も低減する前処置が必要である。本実施例では、造血幹細胞移植療法を受けるＡＴＬ患者に本発明の方法を適用した場合の前記患者体内における造血幹細胞の状況を評価するため、バリンを含まない餌を与えられたマウスにおける造血幹細胞ならびにリンパ球系前駆細胞の低減を評価した。【００８４】
餌は、図６に記載の通りの製品番号および組成を有し、Research Diet社から購入した。まず、通常の餌またはバリンを含まない餌で４週間飼育したマウスの末梢血および骨髄における各アミノ酸の含量を測定した。【００８５】
アミノ酸含量の測定用の末梢血サンプルは、眼窩からサンプリングした血液を遠心分離して細胞成分を除去した後に、Amicon Ultra-0.5 mL Centrifugal Filter（Merck Millipore社製）を用いてタンパク質成分を除去して得た。アミノ酸含量の測定用の骨髄サンプルは、骨髄を水で溶出させてからAmicon Ultra-0.5 mL Centrifugal Filterを用いてタンパク質を除去して得た。これらのサンプル中の各アミノ酸含量は、Prominence Amino Acid Analysis System (Shimadzu社製)を用いて測定した。【００８６】
結果は、図１０に示される通りであった。図１０に示されるように、バリンを含まない餌を４週間与えたマウスでは、末梢血においても、骨髄においても、バリン含量が低減していた。【００８７】
さらに、バリンを含まない餌を４週間与えたマウスにおける造血幹細胞の数を調べた。造血系幹細胞としてＣＤ１５０＋ＣＤ４１−ＣＤ４８−のＫＳＬ細胞を以下の方法で取得した。まず、バリンを含まない餌を４週間与えたＢ６マウスから骨髄細胞を採取した。細胞を上記リニエージマーカーカクテル、ＡＰＣコンジュゲート抗ｃ−ｋｉｔ抗体、パシフィックブルーコンジュゲート抗Ｓｃａ１抗体、ＦＩＴＣ−コンジュゲート抗ＣＤ４１抗体、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８コンジュゲート抗ＣＤ４８抗体、およびＰＥコンジュゲート抗ＣＤ１５０抗体並びにストレプトアビジン−ＡＰＣ−ｅＦｌｕｏｒ７８０抗体で染色した。【００８８】
細胞数の計測は、ＦＡＣＳ  ＡｒｉａＩＩ  ＳＯＲＰ（BD Biosciences社製）により行い、FlowJo Software（Tree Star社製）を用いて解析した。【００８９】
その結果、図１１に示されるように、バリンを含まない餌を与えられたマウスでは造血幹細胞の頻度が大きく減少した。また、バリンを含まない餌を与えられたマウスではリンパ球系共通前駆細胞（ＣＬＰ）の頻度においても大きな減少が見られた。【００９０】
さらに、ＣＤ３４−のＫＳＬの造血幹細胞の頻度を確認したところ、バリンを含まない餌で４週間飼育したマウスでは、図１２Ａの展開例に示されるようにＣＤ３４−のＫＳＬの造血幹細胞分画が少なく、図１２Ｂに示されるように造血幹細胞の割合も減少していた。このことから、バリンを与えないことにより、造血幹細胞移植の前処置として十分なレベルで造血幹細胞を低減させることが可能であることが明らかとなった。【００９１】
以上の通り、栄養源からバリンを除くことにより、ＡＴＬ患者に造血幹細胞移植を施行する前に必要な、造血幹細胞の低減を図れることが明らかとなった。
すなわち、ＡＴＬ患者は、バリンを与えないで一定期間栄養管理されることにより、体内におけるＡＴＬ細胞の低減が図れる上に、造血幹細胞移植の前処置として十分なレベルで体内の造血幹細胞を低減させることができる。従って、バリンを与えないで一定期間栄養管理されることにより、ＡＴＬ患者は、過剰な抗がん剤の投与を回避でき（場合によっては、抗がん剤の投与そのものを回避でき）、かつ、造血幹細胞を低減させるために従来行われてきた化学療法や放射線療法の程度を低減、または化学療法や放射線療法そのものを回避でき、治療による副作用を大幅に低減することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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