(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式I
【化１】
0006734380.tif 000004
又はその医薬的若しくは獣医学的に許容可能な塩、又は何れかの実体の医薬的又は獣医学的に許容可能な溶媒和化合物を含む、哺乳動物におけるCDKL5障害の処置に使用するための医薬: ここで、
R1及びR3は、ここでの使用で出現するごとに、H又はC1乃至C5アルキルをそれぞれ独立して表し、
R2は、ハロを表し、
R4及びR5は、それぞれ独立してHを表し、
R6は、-C(O)OR9を表し、
Xは、CH2、O、又はSを表し、
R9は、H又はC1乃至C5アルキルを表し、
mは、1以上6以下の整数である。
【請求項２】
式Iの化合物中のR1は、C1乃至C4アルキル基を表す、請求項1記載の医薬。
【請求項３】
式Iの化合物中のR2は、ハロを表す、請求項1又は2に記載の医薬。
【請求項４】
式Iの化合物中のR3は、Hを表す、請求項1乃至3の何れかに記載の医薬。
【請求項５】
式Iの化合物中のmは、2以上6以下の整数である、請求項1乃至4の何れかに記載の医薬。
【請求項６】
式Iの化合物は、チアネプチンであり、式Iの化合物において、R1はメチル、R2はクロロ、R3は水素、R4は水素、R5は水素、mは4である、請求項1記載の医薬。
【請求項７】
式Iの化合物は、チアネプチンのMC5代謝物であり、式Iの化合物において、R1はメチル、R2はクロロ、R3は水素、R4は水素、R5は水素、mは2である、請求項1記載の医薬。
【請求項８】
式Iの化合物は、アスタリスク(*)を付けた脂肪族炭素に関して(R)-エナンチオマー型であり、アスタリスク(*)を付けた脂肪族炭素に関して(S)-エナンチオマー型を実質的に含まない、請求項1乃至7の何れかに記載の医薬。
【請求項９】
式Iの化合物は、アスタリスク(*)を付けた脂肪族炭素に関して(S)-エナンチオマー型であり、アスタリスク(*)を付けた脂肪族炭素に関して(R)-エナンチオマー型を実質的に含まない、請求項1乃至7の何れかに記載の医薬。
【請求項１０】
請求項1乃至9の何れかに定めた式Iの化合物、又はその医薬的に許容可能な塩、又は何れかの実体の医薬的に許容可能な溶媒和化合物の治療有効量を、医薬的に許容可能なアジュバント、希釈剤、又は担体との混合物中に含む、ヒトにおけるCDKL5障害の処置に使用するための医薬組成物。
【請求項１１】
前記哺乳動物は、ヒトである、請求項1乃至9の何れかに記載の医薬。
【請求項１２】
請求項1乃至9の何れかに定めた式Iの化合物、又はその獣医学的に許容可能な塩、又は何れかの実体の獣医学的に許容可能な溶媒和化合物を、獣医学的に許容可能なアジュバント、希釈剤、又は担体との混合物中に含む、動物におけるCDKL5障害の処置に使用するための獣医学組成物。
【請求項１３】
CDKL5障害の処置が、CDKL5障害の低減又は抑制である、請求項1乃至9記載の医薬、請求項10記載の医薬組成物、又は請求項12記載の獣医学組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、CDKL5障害の処置において、こうした障害を有する対象(即ち、動物又はヒト等の哺乳動物、特にヒト)に用いる三環系ジベンゾチアゼピン型化合物に関する。特に、限定ではないが、本発明は、式Iの三環系ジベンゾチアゼピン型化合物により、医学的状態の結果として対象においてCDKL5障害を緩和することに関する。更に、本発明は、式Iの三環系ジベンゾチアゼピン型化合物を含む医薬組成物、及び薬剤としてのこのような組成物、特にヒト用薬剤としてのこのような組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
X=CH2である式Iの化合物には、仏国特許第2,104,728号に最初に記載されたチアネプチンが含まれ、神経変性病態、神経因性疼痛、線維筋痛症、慢性疲労症候群、及び過敏性腸症候群の処置に使用し得ることが報告されている。同様に、X=O又はSである式Iの化合物は、出典を明記することにより本願明細書の一部とするWO2012143703に記載されている。式Iの化合物のCDKL5障害に対する効果は、これまで記載されていない。
【０００３】
サイクリン依存性キナーゼ様5(CDKL5)は、脳内で高度に発現されるセリン/スレオニン(S/T)キナーゼである。X連鎖CDKL5遺伝子の突然変異は、早発型癲癇性脳症を引き起こす。CDKL5障害は、X連鎖MECP2遺伝子の突然変異により生じる神経発達障害であるRett症候群と共通する幾つかの特徴を有する、データを評価した最近の研究では、主に、その早発性、及び正常発達期間に続く臨床的後退の欠如から、別個の臨床的実体と見做すべきであるとされている(Fehr S, et al. (2013) Eur J Hum Genet 21 (3) 266-273)。更に、この2つの状態は、異なる遺伝子型により特徴付けられ、Rett症候群がMecp2の欠損に関連する一方、CDKL5障害は、Cdk15遺伝子の欠損を伴う。CDKL5障害の主な臨床的特徴は、若年期の発作、運動の硬直、ジスキネジア、常同性の手の動き、及び不十分な言語習得である。他の表現型の特徴には、学習能力の低下、記憶障害、呼吸機能障害、及び自閉症行動の側面が含まれる。一部の保因者では、消化器系の問題、歯ぎしり、及び特徴的な横目を含む、幾つかの追加の特徴が指摘されている(Bahi-Buisson N et al. (2008) Brain 131: 2647-2661)。障害は、ナンセンス変異又は推定される有害なミスセンス変異と最も頻繁に関連し、CDKL5機能の喪失により生じると考えられるが、突然変異の種類又は位置と症状の重症度との間の明確な関係は、報告されていない。この障害は、女性においてより頻繁に報告されており(8:1)、これは恐らく、女性よりも男性において優性X連鎖変異の結果が更に重大となるためである。最近では、CDKL5がニューロンの可塑性に関与していることを示す証拠がある。ニューロンの成熟に伴うCDKL5の調節は、シナプス前及びシナプス後発生のマーカであるシナプシン1及びGluR2を用いて測定されている(出典を明記することにより内容を本願明細書の一部とするMontanara et al, J Biol Chem. 2015; 290(7): 4512-4527を参照)。GluR2は、受容体の集合及び輸送に影響し、長期的なシナプス可塑性において中心的な役割を果たすAMPA受容体のサブユニットである。GluR2として、これは、CREB(cAMP応答配列結合タンパク質)応答性最初期遺伝子の1つである。GluR2は、シナプス後マーカでもある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】仏国特許第2,104,728号
【特許文献２】WO2012143703
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Fehr S, et al. (2013) Eur J Hum Genet 21 (3) 266-273
【非特許文献２】Bahi-Buisson N et al. (2008) Brain 131: 2647-2661
【非特許文献３】Montanara et al, J Biol Chem. 2015; 290(7): 4512-4527
【発明の概要】
【０００６】
第1の態様によれば、本発明は、CDKL5障害を有する対象(即ち、動物又はヒト等の哺乳動物、特にヒト)の運動障害の処置において使用するための、式Iの化合物、又はその医薬的若しくは獣医学的に許容可能な塩、又は何れかの実体の医薬的若しくは獣医学的に許容可能な溶媒和化合物、又はこれらの何れかを含む医薬組成物若しくは獣医学組成物を提供し、式Iの化合物は、
【化１】
0006734380.tif 000002
又はその医薬的若しくは獣医学的に許容可能な塩、又は何れかの実体の医薬的又は獣医学的に許容可能な溶媒和化合物を含み
ここで:
R1及びR3は、ここでの使用で出現するごとに、H又はC1乃至C5アルキルをそれぞれ独立して表し、
R2は、ハロを表し、
R4及びR5は、それぞれ独立してHを表し、
R6は、-C(O)OR9を表し、
Xは、CH2、O、又はSを表し、
R9は、H又はC1乃至C5アルキルを表し、
かつ、
mは、1以上6以下の整数である。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図1は、硫酸チアネプチンの投与が、CDKL5サイレンシングと、AMPA受容体サブユニットGluR2の発現及びリン酸化GluR2(セリン880でリン酸化)に対するその後の効果とに、どのように影響するかを示すウエスタンブロットである。
【図２】図2は、硫酸チアネプチンの投与がCDKL5サイレンシングと、AMPA受容体サブユニットGluR2の発現に対するその後の効果とに、どのように影響するかを調べる免疫蛍光研究の結果を示す。
【図３】図3は、2-(4-((3-クロロ-6-メチル-5,5-ジオキシド-6,11-ジヒドロジベンゾ[c,f][1,2]チアゼピン-11-イル)アミノ)ブトキシ)酢酸、HCl塩(TIOX)の投与が、CDKL5サイレンシングと、AMPA受容体サブユニットGluR2の発現及びリン酸化GluR2(セリン880でリン酸化)に対するその後の効果とに、どのように影響するかを示すウエスタンブロットである。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本明細書で使用する「処置」又は「処置する」という用語は、治療的(治癒的)、緩和的、及び予防的処置を供に含む。換言すれば、本明細書での使用において、処置という用語は、「予防」を含む。好適には、CDKL5障害の処置は、治療有効量の式Iの化合物、又はその薬理活性代謝物、又はその医薬的若しくは獣医学的に許容可能な塩、又は何れかの実体の医薬的又は獣医学的に許容可能な溶媒和化合物、又はこれらの何れかを含む医薬組成物若しくは獣医学組成物の投与により達成される。
【０００９】
本明細書で使用する「有効量」又は「治療有効量」という用語は、所望の治療効果を実現するのに十分な薬剤の量又は投与量を示す。このような量は、達成すべき効果、使用される薬剤、及び対象の体重に応じて変化し得る。一般に、投与されるべき式Iの化合物、又はその薬理活性代謝物、又はその医薬的若しくは獣医学的に許容可能な塩、又は何れかの実体の医薬的又は獣医学的に許容可能な溶媒和化合物の治療有効量は、2乃至約600mg/日、好ましくは約5乃至約400mg/日、より好ましくは約10乃至300mg/日である。投与量は、年齢、体重、及び性別等、多数の要素に応じて変化し、当業者により決定され得る。投与計画も、当業者が管理可能だが、例えば、式Iの化合物を1日1回若しくは2回、又はより規則的に1日3回、4回、若しくは5回(特に短時間作用化合物の場合)投与し得る。
【００１０】
好ましくは、式Iの化合物中のR1は、C1乃至C5アルキルを表し、より好ましくは、R1は、C1乃至C4アルキル、更により好ましくは直鎖C1乃至C4アルキルを表す。最も好ましくは、R1は、メチル基を表す。
【００１１】
好ましくは、式Iの化合物中のR2は、H、フルオロ、又はクロロ、より好ましくは、H又はクロロである。最も好ましくは、R2は、クロロである。
【００１２】
好ましくは、式Iの化合物中のR3は、H又はC1乃至C4アルキルを表す。より好ましくは、R3は、H又は直鎖C1乃至C4アルキルを表す。最も好ましくは、R3は、Hを表す。
【００１３】
好ましくは、式Iの化合物中のmは、1以上6以下、より好ましくは2以上6以下、特に4以上6以下の整数である。最も好ましくは、mは、4である。
【００１４】
特に好適な、式Iの化合物は、チアネプチン(7-[(3-クロロ-6,1'-ジヒドロ-6-メチル-ジベンゾ[c,f][1,2]チアゼピン-11-イル)アミノ]ヘプタン酸S,S-ジオキシド)であり、式Iの化合物において、R1はメチル、R2はクロロ、R3は水素、R4は水素、R5は水素、mは4であり、又はチアネプチンの薬理活性代謝物で、「MC5代謝物」と呼ばれるもの(7-[(3-クロロ6,1'ジヒドロ-6-メチルジベンゾ[c,f][1,2]チアゼピン-11-イル)アミノ]ペンタン酸S,S-ジオキシド)であり、式Iの化合物において、R1はメチル、R2はクロロ、R3は水素、R4は水素、R5は水素、mは2である。
【００１５】
一部の実施形態において、式Iの化合物は、2-(4-((3-クロロ-6-メチル-5,5-ジオキシド-6,11-ジヒドロジベンゾ[c,f][1,2]チアゼピン-11-イル)アミノ)ブトキシ)酢酸HCl塩(TIOX、式1において、X=O、m=4、R6=CO2H、R4、R5=H、R2=Cl、R1、R3=Me)である。
【００１６】
チアネプチンは、系統名7-[(3-クロロ-6,1'-ジヒドロ-6-メチル-ジベンゾ[c,f][1,2]チアゼピン-11-イル)アミノ]ヘプタン酸S,S-ジオキシドを有し、ジベンゾチアゼピン型の三環系抗鬱剤である。チアネプチンのナトリウム塩は、現在、Stablon(登録商標)の商標で欧州において市販されている。チアネプチンは、精神刺激、抗鬱、鎮痛、鎮咳、抗ヒスタミン、及び胃液分泌抑制の特性を有することが知られている。チアネプチンの推奨1日投与量は、37.5mgであり、作用持続時間が短いことから、1日3回に分けた用量で投与する。チアネプチンのヒトでの血漿内半減期は、2.5±1.1時間である。
【００１７】
本明細書での定義において、R1及びR3がそれぞれ独立して表し得る「C1乃至C5アルキル」という用語は、特に明記しない限り、十分な数の炭素原子が存在する場合、直鎖又は分岐、環式、非環式、又は部分環式/非環式である。好ましくは、アルキル基は非環式アルキル基、より好ましくは直鎖アルキル基である。アルキル基の代表的な例には、限定ではないが、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、sec-ブチル、イソブチル、tert-ブチル、n-ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、及びヘキシルが含まれる。
【００１８】
「ハロ」という用語は、本明細書での使用において、フルオロ、クロロ、ブロモ、及びヨードを含む。
【００１９】
疑義を避けるために明記すると、本明細書で言及する各R1、R2、及びR3基は、それぞれ他のR1、R2、及びR3基とは独立している。例えば、R1及びR3の両方がC1乃至C5アルキルを表す場合、2つの個別のアルキル置換基は互いに独立しており、必ずしも同一ではない(ただし、この可能性は排除されない)。
【００２０】
式Iの化合物は、1つ以上の不斉炭素原子を含み、したがって、2つ以上の立体異性体の形態で存在する。式Iの化合物において、アスタリスク(*)を付けた脂肪族炭素は、不斉炭素原子を示し、その炭素に関する絶対配置は、カーン・インゴルド・プレローグ体系に従い(R)-又は(S)-と指定し得る。本発明は、アスタリスク(*)を付けた脂肪族炭素及びその混合物(例えば、ラセミ体)に関して、個別の(R)-及び(S)-エナンチオマー型の式Iの化合物を含む。好適な実施形態によれば、本発明は、アスタリスク(*)を付けた脂肪族炭素に関して、個別の(R)-及び(S)-エナンチオマー型の式Iの化合物を含む。したがって、このような個別の(R)-及び(S)-エナンチオマー型は、光学活性を有する。
【００２１】
本明細書での使用において、ラセミ体の個別のエナンチオマー型は、実質的に単一の立体異性体からなる組成物、即ち、他の立体異性体を実質的に含まない組成物を示し、このような単一の立体異性体を少なくとも80重量%、好ましくは少なくとも90重量%、より好ましくは少なくとも95重量%、更により好ましくは少なくとも98重量%含むものを示す。したがって、「(S)-エナンチオマー型を実質的に含まない(R)-エナンチオマー型」という用語は、少なくとも80重量%以上の(R)-エナンチオマー(好ましくは少なくとも90重量%、より好ましくは少なくとも95重量%、更により好ましくは少なくとも98重量%の(R)-エナンチオマー)を含み、同様に20重量%以下の(S)-エナンチオマー(好ましくは10重量%未満、より好ましくは5重量%未満、更により好ましくは2重量%未満の(S)-エナンチオマー)を混入物として含有する化合物を意味する。「(R)-エナンチオマー型を実質的に含まない(S)-エナンチオマー」とは、少なくとも80重量%以上の(S)-エナンチオマー(好ましくは少なくとも90重量%、より好ましくは少なくとも95重量%、更により好ましくは少なくとも98重量%の(S)-エナンチオマー)を含み、同様に20重量%以下の(R)-エナンチオマー(好ましくは10重量%未満、より好ましくは5重量%未満、更により好ましくは2重量%未満の(R)-エナンチオマー)を混入物として含有する化合物を意味する。
【００２２】
本明細書での使用において、「光学活性」は、材料が平面偏光の平面を回転させる特性を示す。光学的に活性な化合物は、その鏡像上に重ね合わせることができない。本明細書での使用において、物体をその鏡像上に重ね合わせできない性質は、「キラリティ」と呼ばれる。キラリティを発生させる最も一般的な構造的特徴は、不斉炭素原子、即ち、4個の非等価な基が結合した炭素原子である。
【００２３】
本明細書での使用において、「エナンチオマー」は、光学活性を有する純粋な化合物の重ね合わせできない2種類の異性体のそれぞれを指す。単一のエナンチオマーは、不斉炭素に結合した4個の基を順位付けるための周知の優先規則群であるカーン・インゴルド・プレローグ体系により指定される。例えば、March, Adv Org Chem 4th Ed., (1992), p. 109を参照されたい。
【００２４】
本明細書で使用する「ラセミ体」又は「ラセミ化合物」は、2種類のエナンチオマーの50-50混合物で、その混合物が平面偏光を回転させないようにしたものを示す。
【００２５】
式Iの化合物、特にアスタリスク(*)を付けた脂肪族炭素に関する式Iの化合物の個別のエナンチオマーは、対応する光学的に純粋な中間体から、又は適切なキラル支持体を用いたラセミ体のHPLCによる分割、若しくは、適切な場合には、ラセミ体と適切な光学活性酸又は塩基との反応により形成されたジアステレオ異性体の塩の分別結晶化による分割により、調製し得る。
【００２６】
本発明の化合物が、置換基R1、R2、R3、R4、及びR5のそれぞれの素性(identity)に応じて、式Iの化合物においてアスタリスク(*)を付けた脂肪族炭素に加えて、1個以上の不斉炭素原子を更に含み得ることは理解されよう。疑義を避けるために明記すると、式Iの化合物の全ての立体異性体及びジアステレオ異性体は、本発明の範囲内に含まれる。
【００２７】
したがって、好適な実施形態によれば、式Iの化合物は、上記で定義したチアネプチン、特に、式Iの化合物中のアスタリスク(*)を付けた炭素に関して、対応する(S)-エナンチオマー型を実質的に含まない(R)-チアネプチン、又は式Iの化合物中のアスタリスク(*)を付けた炭素に関して、対応する(R)-エナンチオマー型を実質的に含まない(S)-チアネプチンを表す。
【００２８】
更に好適な実施形態によれば、式Iの化合物は、上記で定義したチアネプチン、特に、式Iの化合物中のアスタリスク(*)を付けた炭素に関して、対応する(S)-エナンチオマー型を実質的に含まない(R)-チアネプチン、又は式Iの化合物中のアスタリスク(*)を付けた炭素に関して、対応する(R)-エナンチオマー型を実質的に含まない(S)-チアネプチンのMC5代謝物を表す。
【００２９】
チアネプチンの個別の(R)-及び(S)-エナンチオマーを単離するには、ラセミ体を分割する必要がある。この分割は、ラセミ体チアネプチンを一対のジアステレオマーに変換すること、例えば、光学活性部分との共有結合、又は光学活性塩基若しくは酸との塩形成により、達成することができる。何れの方法も、分子に第2のキラル中心をもたらすため、一対のジアステレオマーが生成される。その後、ジアステレオマー対は、結晶化又はクロマトグラフィー等の従来の方法により分離することができる。
【００３０】
ラセミ体チアネプチンは、ジアステレオマーを形成せずに、例えばクロマトグラフィー(例えば、HPLC)カラムのキラル固定相での差分吸収により、エナンチオマーに分離することもできる。ジアステレオマー分離に適した分取HPLCカラムは、広範囲の分離用途に適した様々な充填材料と共に市販されている。チアネプチンの分割に適した固定相には、(i)3つのポケット又は空洞を囲む18のキラル中心を含むシリカ結合バンコマイシン等の大環状グリコペプチド、(ii)キラルα1酸糖タンパク質、(iii)ヒト血清アルブミン、及び(iv)セロビオヒドロラーゼ(CBH)が含まれる。
【００３１】
チアネプチン及びそのMC5代謝物等の式Iの化合物は、例えば仏国特許第2,104,728号、英国特許出願第1,269,551号、全てMalenらの米国特許第4,766,114号、第3,758,528号、及び第3,821,249号、並びにBlanchardらの米国特許第6,441,165号に記載されているような公知の合成手順により調製し得る。X=O又はSである式Iの化合物は、WO2012143703に記載の方法により調製することができる。
【００３２】
式Iの化合物の医薬的又は獣医学的に許容可能な塩は、例えば、無機酸又は有機酸により形成される非毒性酸付加塩、又は塩基付加塩である。適切な無機酸には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、炭酸、硫酸、及びリン酸が含まれる。適切な有機酸には、脂肪族、脂環式、芳香族、芳香脂肪族、複素環式、カルボン酸、及びスルホン酸クラスの有機酸、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルクロン酸、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、安息香酸、アントラニル酸、メシル酸、サリチル酸、4-ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸、エンボン酸(パモ酸)、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パントテン酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルファニル酸、シクロヘキシルアミノスルホン酸、ステアリン酸、アルギン酸、β-ヒドロキシ酪酸、ガラクタル酸、及びガラクツロン酸が含まれる。
【００３３】
式Iの化合物の適切な医薬的に許容可能な塩基付加塩には、カルシウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、及び亜鉛から作られた金属塩、又はN,N'-ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン(N-メチルグルカミン)、アルギニン、及びプロカインから作られた有機塩が含まれる。
【００３４】
式Iの化合物の医薬的に許容可能な酸付加塩は、従来の方法で調製し得る。例えば、遊離塩基の溶液を適切な酸により直接又は適切な溶媒中で処理し、生じた塩を濾過又は反応溶媒の真空下での蒸発により単離する。医薬的に許容可能な塩基付加塩は、式Iの化合物の溶液を適切な塩基で処理することにより、類似した方法で得ることができる。両方の種類の塩は、イオン交換樹脂手法を用いて形成又は相互変換することができる。適切な医薬用の塩の説明については、Berge et. al., J. Pharm., Sci., 66, 1-19, 1977を参照されたい。非常に好適な塩は、ナトリウム塩である。
【００３５】
式Iの化合物の医薬的又は獣医学的に許容可能な溶媒和化合物は、その水和物を含む。
【００３６】
生物学的研究に適した式Iの化合物の放射性標識及び同位体標識誘導体も本発明に含まれる。このような誘導体の例には、限定ではないが、2H、3H、11C、13C、14C、15N、17O、18O、18F、35S、及び36Clが含まれる。
【００３７】
特定の式Iの化合物は、複数の結晶又は非晶形態で存在し得る。全ての物理的形態及び多形体は、本発明の範囲内に含まれる。
【００３８】
式Iの化合物の特定の誘導体は、それ自体が薬理学的活性を有していなくても、特定の場合に経口又は非経口投与され、その後体内で代謝されて薬理活性を有する式Iの化合物を形成し得ることは、当業者に理解されよう。そのため、このような誘導体は、「プロドラッグ」と記載し得る。更に、式Iの特定の化合物は、式Iの他の化合物のプロドラッグとして機能し得る。式Iの化合物の全てのプロドラッグは、本発明の範囲内に含まれる。
【００３９】
更に、式Iの化合物は、対象の体内で代謝されて活性代謝物を形成し得る。運動障害を処置するためのこのような代謝物の投与も、本発明の範囲内にあると考えられる。チアネプチンは、代謝されて7-[(3-クロロ-6,1'-ジヒドロ-6-メチル-ジベンゾ[c,f][1,2]チアゼピン-11-イル)アミノ]ペンタン酸S,S-ジオキシド、即ち「MC5代謝物」として知られる活性代謝物となる。したがって、好適な態様によれば、本発明は、動物又はヒト等の哺乳動物、特にヒトにおける運動障害の処置のための、チアネプチン及びそのMC5代謝物、又は何れかの実体の医薬的若しくは獣医学的に許容可能な溶媒和化合物、又はこれらの何れかを含む医薬組成物若しくは獣医学組成物の使用にまで及ぶ。
【００４０】
医療用途
【００４１】
式Iの化合物は、対象(即ち、哺乳動物、特にヒト)におけるCDKL5障害の処置に対する薬理学的活性を有するため有用である。したがって、これらは医薬品となること、更に動物及びヒトにおけるCDKL5障害を低減又は抑制するための動物用医薬品として使用されることが示唆される。
【００４２】
本明細書での使用において「低減する」又は「抑制する」という用語は、式Iの化合物、好ましくはチアネプチンの存在下において、このような化合物の非存在下でのCDKL5障害のレベルと比較して、対象におけるCDKL5障害が低減することを示す。
【００４３】
本明細書での使用において「対象」という用語は、動物及びヒト、特にヒトを含む「哺乳動物」を意味する。したがって、「哺乳動物」という用語は、非ヒト霊長類、ウマ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウサギ、マウス、ラット等の家畜哺乳動物及び一般的な実験哺乳動物を含み得る。最も好適な哺乳動物は、ヒトである対象となる。
【００４４】
本発明の方法及び組成物は、CDKL5障害を有する対象に向けたものである。したがって、本発明は、CDKL5障害の処置(例えば、低減又は抑制)を、このような処置を必要とする対象(即ち、哺乳動物)において行う方法であって、対象に対して、本明細書に定めた式Iの化合物、又はその医薬的若しくは獣医学的に許容可能な塩、又は何れかの実体の医薬的若しくは獣医学的に許容可能な溶媒和化合物、又はこれらの何れかを含む医薬組成物若しくは獣医学組成物の治療有効量を投与することを含む方法を提供する。好ましくは、式Iの化合物は、チアネプチン又はそのMC5代謝物である。
【００４５】
したがって、本発明は、更に、対象(即ち、哺乳動物)におけるCDKL5障害の処置のための、式Iの化合物、又はその医薬的若しくは獣医学的に許容可能な塩、又は何れかの実体の医薬的若しくは獣医学的に許容可能な溶媒和化合物、又はこれらの何れかを含む医薬組成物若しくは獣医学組成物の使用を提供する。好ましくは、式Iの化合物は、チアネプチン若しくはそのMC5代謝物、又はR1及びR3がそれぞれメチルを表し、R2がクロロを表し、R4及びR5がそれぞれ独立してHを表し、R6が-C(O)OHを表し、XがOを表し、mが4である式Iの化合物である。
【００４６】
医薬製剤
【００４７】
式Iの化合物は、通常、経口的に、又は任意の非経口経路により、活性成分を含む医薬製剤の形態で投与され、場合により、非毒性有機又は無機酸又は塩基付加塩の形態で、医薬的に許容可能な剤形で投与される。処置対象の障害及び患者、並びに投与経路に応じて、組成物は、様々な用量で投与し得る。
【００４８】
当業者は、対象の大きさ、体重、年齢、及び性別、疾患の浸透率又は持続の程度及び症状の重症度、及び投与の経路等の要因を考慮に入れて、投与すべき式Iの化合物の有効量を容易に決定することができる。一般に、対象に投与されるチアネプチン等の式Iの化合物の有効量は、約2乃至約600mg/日、好ましくは約5乃至約400mg/日、より好ましくは約10乃至300mg/日である。これより高い用量又は低い用量も考えられる。
【００４９】
式Iの化合物は、任意の経路、例えば、経腸(例えば、経口、直腸、鼻腔内等)及び非経口投与により、対象に投与することができる。非経口投与は、例えば、静脈内、筋肉内、動脈内、腹腔内(ip)、膣内、嚢内(例えば、膀胱内)、皮内、局所、又は皮下投与を含む。更に本発明の範囲内に含まれると考えられるものは、対象の体内への式Iの化合物の点滴であって、例えば、経時的に又は後の時点で化合物の全身又は局所放出が生じる放出制御製剤におけるものである。好ましくは、式Iの化合物、例えば、チアネプチンは、血液循環又は胃腸管等の局所部位への制御放出用のデポ剤において局在させる。
【００５０】
式Iの化合物、例えば、チアネプチンは、医薬的又は獣医学的に許容可能な担体と共に投与することができる。医薬製剤は、0.1乃至99.99重量%の式Iの化合物、例えば、チアネプチンを含むことができる。医薬組成物は、医薬製剤の分野における標準的技法により製剤化することができる。Alphonso Gennaro, ed., Remington's Pharmaceutical Sciences. 18th Ed., (1990) Mack Publishing Co., Easton, Paを参照されたい。適切な剤形は、例えば、錠剤、カプセル、溶液、非経口溶液、トローチ、座薬、又は懸濁液を含むことができる。
【００５１】
「医薬的に許容可能な担体」とは、組成物の他の成分と適合し、受容者にとって有害ではない任意の希釈剤又は賦形剤を意味する。医薬的に許容可能な担体は、標準的薬務に従い、所望の投与経路を基に選択することができる。
【００５２】
非経口投与用の医薬組成物は、水性又は非水性の溶液、分散液、懸濁液、又は乳液の形態を取ることができる。非経口投与用の医薬組成物の調製において、式Iの化合物、例えば、チアネプチンは、水、油(特に植物油)、エタノール、食塩溶液(例えば、生理食塩水)、水性デキストロース(グルコース)、及び関連する糖溶液、グリセロール、又はプロピレングリコール若しくはポリエチレングリコール等のグリコール類といった、医薬的に許容可能な適切な担体と混合することができる。非経口投与用の医薬組成物は、好ましくは、式Iの化合物、例えば、チアネプチンの、水溶性塩を含有する。安定剤、酸化防止剤、及び防腐剤も、非経口投与用の医薬組成物に添加することができる。適切な酸化防止剤には、亜硫酸塩、アスコルビン酸、クエン酸、及びその塩と、EDTAナトリウムとが含まれる。好適な防腐剤には、塩化ベンザルコニウム、メチル又はプロピルパラベン、及びクロロブタノールが含まれる。
【００５３】
経口投与用の医薬組成物の調製において、式Iの化合物、例えば、チアネプチンは、1つ以上の固体又は液体不活性成分と組み合わせて、錠剤、カプセル、丸薬、粉末、顆粒、又は他の適切な経口剤形を形成することができる。例えば、式Iの化合物、例えば、チアネプチンは、溶媒、充填剤、結合剤、保湿剤、崩壊剤、溶液遅延剤、吸収促進剤、湿潤剤吸収剤、又は潤滑剤等、少なくとも1つの医薬的に許容可能な担体と組み合わせることができる。一実施形態において、式Iの化合物、例えば、チアネプチンは、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、及びデンプンと組み合わせ、従来の打錠法により錠剤に成形される。
【００５４】
一実施形態において、放出制御医薬組成物(controlled-release pharmaceutical composition)は、式Iの化合物、例えば、チアネプチンと、制御放出成分とを含む。好ましくは、放出制御医薬組成物は、所定の期間、実質的に一定の薬理活性を維持するように、式Iの化合物、例えば、チアネプチンを所望の速度で対象内に放出することができる。本明細書での使用において、「制御放出成分(controlled-release component)」は、特定の生理学的化合物又は状態への暴露時に、式Iの化合物、例えば、チアネプチンの対象内への制御放出を引き起こす、ポリマー、ポリマーマトリックス、ゲル、透過膜、リポソーム、及び/又はミクロスフェア等の化合物である。例えば、制御放出成分は、生分解性にすることが可能であり、特定のpH又は温度への暴露、水性環境への暴露、又は酵素への暴露により活性化させることができる。ある温度への暴露により活性化される放出制御成分の例は、ゾルゲルである。本実施形態において、チアネプチンは、室温で固体となるゾルゲルマトリックスに組み込まれる。このゾルゲルマトリックスは、ゾルゲルマトリックスのゲル形成を誘発するのに十分な高さの体温を有する対象に埋め込まれ、これにより対象内に活性成分が放出される。適切な放出制御製剤は、例えば、米国特許第5,674,533号(液体剤形)米国特許第5,591,767号(液体貯留経皮パッチ)、米国特許第5,120,548号(膨潤性ポリマーを含む装置)、米国特許第5,073,543号(ガングリオシド-リポソームビヒクル)、米国特許第5,639,476号(疎水性アクリルポリマーで被覆された安定固形製剤)、及び米国特許第5,888,542号(経口経路による投与後のチアネプチンのナトリウム塩の持続放出を可能にするマトリックス錠剤)に記載されている。また、生分解性微粒子を用いて、例えば、米国特許第5,354,566号及び第5,733,566号に記載のように、適切な制御放出医薬組成物を製剤化することができる。
【００５５】
一般に、ヒトにおいては、式Iの化合物を医薬製剤の形態で経口又は静脈内投与することが好適な経路となる。
【００５６】
したがって、本発明は、更に、ヒトにおけるCDKL5障害の処置に使用するための医薬組成物であって、本明細書に定めた式Iの化合物、又はその医薬的に許容可能な塩、又は何れかの実体の医薬的に許容可能な溶媒和化合物を、医薬的に許容可能なアジュバント、希釈剤、又は担体との混合物中に含むものを提供する。好適には、本発明は、このような医薬組成物をヒトに投与することにより、ヒトにおけるCDKL5障害の抑制又は低減等の処置を行う方法にも及ぶ。好適には、本発明は、ヒトにおけるCDKL5障害を処置するための、このような医薬組成物の使用に及ぶ。
【００５７】
したがって、他の態様によれば、本発明は、ヒトにおけるCDKL5障害の処置に使用する薬剤の製造における、本明細書に定めた式Iの化合物、又はその医薬的に許容可能な塩、又は何れかの実体の医薬的に許容可能な溶媒和化合物の使用を提供する。
【００５８】
本発明の他の態様によれば、動物におけるCDKL5障害の処置に使用するための獣医学組成物であって、式Iの化合物、又はその獣医学的に許容可能な塩、又は何れかの実体の獣医学的に許容可能な溶媒和化合物を、獣医学的に許容可能なアジュバント、希釈剤、又は担体との混合物中に含むものが提供される。好適には、本発明は、このような獣医学組成物を動物に投与することにより、動物におけるCDKL5障害の抑制又は低減等の処置を行う方法にも及ぶ。好適には、本発明は、動物におけるCDKL5障害を処置又は予防するための、このような獣医学組成物の使用に及ぶ。
【００５９】
したがって、他の態様によれば、本発明は、ヒトにおけるCDKL5障害の処置に使用するための医薬組成物であって、医薬的に許容可能なアジュバント、希釈剤、又は担体との混合された、本明細書に定めた式Iの化合物、又はその医薬的に許容可能な塩、又は何れかの実体の医薬的に許容可能な溶媒和化合物の医薬組成物を提供する。好ましくは、このような医薬組成物は経口投与用である。
【００６０】
ヒト患者への経口及び非経口投与用として、式Iの化合物又はその塩若しくは溶媒和化合物の1日投与量レベルは、通常、2乃至約600mg/日、好ましくは約5乃至約400mg/日、より好ましくは約10乃至300mg/日である。
【００６１】
したがって、例えば、式Iの化合物又はその塩若しくは溶媒和化合物の錠剤又はカプセルは、必要に応じて、一度に1回又は2回以上投与するための活性化合物2.5mg乃至250mgを含有し得る。何れの場合も、医師が個々の患者に最適な実際の投与量を決定し、これは特定の患者の年齢、体重、及び応答に応じて変化する。上記投与量は、平均的な場合の例である。当然ながら、個々の事例では、より高い又はより低い投与量範囲となる場合があり、このような事例も本発明の範囲内に含まれる。
【００６２】
次に、本発明を以下の非限定的な実施例により例示する。
【実施例】
【００６３】
実施例1:錠剤製剤
【００６４】
一般に、錠剤製剤は、約2.5mg乃至250mgの式Iの化合物(又はその塩)を含有可能となり、錠剤充填重量は、50mg乃至1000mgの範囲となり得る。250mgの錠剤用の製剤例を示す。
【００６５】
【表１】
0006734380.tif 000003
【００６６】
実施例2:CDKL5遺伝子サイレンシング実験
【００６７】
方法
【００６８】
ニューロン培養  -  膣栓日をE0とした胎生17日目(E17)CD1マウス胚の海馬から初代海馬培養物を調製した。簡単に説明すると、10%ウマ血清(HS、Life  Technologies)を含むDMEM中で、ニューロンを穏やかに粉砕して分離し、ポリ-L-リジンをコーティングした皿又はカバーガラス上で、2%B27サプリメント及び2mMグルタミンを含むNeurobasalに播種し、37℃、5%CO2でインキュベートした。ニューロンの密度は、ウエスタンブロット及び免疫染色において3.7×104/cm2である。
【００６９】
CDKL5ノックダウン  -  CDKL5の発現は、プレーティング前にレンチウイルス粒子をニューロンに添加することによりサイレンシングした。レンチウイルスベクターは、pLentiLox 3.7(pLL 3.7)のHpaI及びXhoI部位にクローニングされたshRNAコード配列を含む。shRNAの標的配列は以下の通りである:shCDKL5#1:CTATGGAGTTGTACTTAA、shCDKL5#2:GCAGAGTCGGCACAGCTAT、LacZに対するshRNAを対照として用いた。構築物は、感染したニューロンの可視化を可能にする独立したプロモーターからGFPを発現する。
【００７０】
ウェスタンブロッティング  -  AMPA-Rの発現を18乃至21日間インビトロ(DIV)で分析した。ニューロンをレムリ緩衝液中に採取し、略10μgに相当する量の抽出物をSDS-PAGE(8%)により分離する。以下の抗体を用いて、CDKL5のサイレンシングを確認し、GluR1/GluR2の発現及びGluR2-Ser880のリン酸化を分析する:CDKL5  1:1000(Sigma  Aldrich  HPA002847)、GluR1  1:1000(Abcam、ab86141)、GluR2  1:1000(Millipore、MAB397)、GluR2  phospho-Ser880  1:500(Biorbyt  orb256572)、及びTubulinβ3  1:10000(Biolegend、811801)。
【００７１】
免疫蛍光  -  ニューロンをDIV18で4%パラホルムアルデヒド/PBSにより15分間固定し、室温で1時間、非透過化条件においてブロッキング溶液(PBS中の5%ウマ血清)と共にインキュベートし、その後、一次抗体と共に(4℃で一晩)ブロッキング溶液中でインキュベートした。GluR2の細胞外エピトープに対する一次抗体を用いて、細胞表面発現GluR2の定量を行った。その後、抗MAP2を透過溶液(0.2%Triton  X-100を含むブロッキング溶液)に加えた。3回濯いだ後、細胞を二次抗体(Molecular  Probes)と共に室温で1時間インキュベートした。カバースリップを取り付け、ProLong  Gold  Antifade試薬(Molecular  Probes、P36930)を用いた顕微鏡検査を行った。抗体は、以下の濃度で使用した:GluR2  1:100(Millipore、MAB397)、MAP2  1:1000(Abcam、ab11267)、GFP  1:1000(Millipore、AB16901)。顕微鏡分析は、Retiga  R1(QImaging)CCDカメラを備えたOlympus  BX51蛍光顕微鏡において行った。表面発現GluR2の定量は、Image  Jソフトウェアを用いて、GFP-及びMAP2-陽性神経突起のセグメントに対して行った。
【００７２】
薬理学的処置  -  チアネプチン及び2-(4-((3-クロロ-6-メチル-5,5-ジオキシド-6,11-ジヒドロジベンゾ[c,f][1,2]チアゼピン-11-イル)アミノ)ブトキシ)酢酸[HCl塩]のニューロン培養物への添加(最終濃度10μM)を、DIV11に開始し、一日おき(DIV13、15、及び17)に補充して、DIV18、膣栓日をE0とした胎生17日目(E17)CD1マウス胚まで行った。簡単に説明すると、10%ウマ血清(HS、Life  Technologies)を含むDMEM中で、ニューロンを穏やかに磨り潰して分離し、ポリ-L-リジンをコーティングした皿又はカバーガラス上で、2%B27サプリメント及び2mMグルタミンを含むNeurobasalに播種し、37℃、5%CO2でインキュベートした。ニューロンの密度は、ウエスタンブロット及び免疫染色において3.7×104/cm2である。
【００７３】
結果
【００７４】
図1から、硫酸チアネプチン(10μM)のDIV11乃至DIV18(DIV11-13-15-17)の隔日投与により、CDKL5サイレンシングの、AMPA受容体サブユニットGluR2の発現及びリン酸化GluR2(セリン880でリン酸化)に対する効果が、ウェスタンブロッティングによる判定で逆転したことが分かる。
【００７５】
図2から、硫酸チアネプチン(10μM)のDIV11乃至DIV18(DIV11-13-15-17)の隔日投与により、CDKL5サイレンシングの、AMPA受容体サブユニットGluR2の発現に対する効果が、斑点の数に関して、免疫蛍光による判定で逆転したことが分かる。
【００７６】
図3から、2-(4-((3-クロロ-6-メチル-5,5-ジオキシド-6,11-ジヒドロジベンゾ[c,f][1,2]チアゼピン-11-イル)アミノ)ブトキシ)酢酸[HCl塩](TIOX)(10 μM)のDIV15乃至18(DIV15-17)又はDIV11乃至DIV18(DIV11-13-15-17)の隔日投与により、CDKL5サイレンシングの、AMPA受容体サブユニットGluR2の発現及びリン酸化GluR2(セリン880でリン酸化)に対する効果が、ウェスタンブロッティングによる判定で逆転したことが分かる。GluR2も、シナプス後マーカであり、このタンパク質におけるCDKL5の調節による欠損は、本発明の化合物を用いて対処されることが示された。
【００７７】
要約すると、チアネプチン及びTIOXは、共にCDKL5遺伝子サイレンシングの効果を逆転したため、これらの化合物(及び本発明の範囲内の類似体)は、CDKL5障害の治療に有用であると予想される。
【００７８】
実施例3:CDKL5障害の動物モデルにおける運動協調性の改善
【００７９】
Cdk15ノックアウトマウスの生成及び運動協調性のロータロッド評価は、Wang, I.-T.J et al. (2012) PNAS 109: 21516-21521に記載の方法に従って以下のように実施することができる。
【００８０】
簡単に説明すると、運動能力の評価を、Cdkl5ノックアウトマウスの別個のコホートにおいて行い、チアネプチンの投与は、症状のあるマウスでの効果を評価するために6週齢で、主要な運動障害発症前における効果を評価するために3週齢で開始する。試験した第1の群では、6週齢のCdkl5ノックアウトマウス及び野生型(WT)マウス(n=7乃至8/群)に4週間、チアネプチンを投与する。運動性能は、処置1週間前(ベースライン)及び処置中1週間に1回、ロータロッドを用いて評価し、後者の試験は、先行するチアネプチン注射の18時間後に行う。結果は次のように予想される:ビヒクル処置Cdk15ノックアウトマウスは、出生後6週間までに実質的なロータロッド障害を示す。4週間の処置及び試験後、チアネプチンにより処置したCdk15ノックアウトマウスのスコアは、ビヒクルを与えたCdk15ノックアウトマウスのスコアより高いが、WT値を下回る。したがって、運動障害発症後に開始された4週間のチアネプチン処置により、Cdk15ノックアウトマウスにおける運動協調性及びバランスの試験でのスコアが改善される。同様に、運動障害発症前、3週齢で処置されたCdk15ノックアウトマウスにおいて、チアネプチンは、ロータロッドに費やされる時間を、未処置マウスと比較して増加させることができる。
【符号の説明】
【００８１】
[図1B]
Relative GluR2 levels (a.u.): 相対GluR2レベル(a.u.)
S880P/total GluR2(a.u.): S880P/合計GluR2(a.u.)
[図2A]
Merge: マージ
[図2B]
Number of GluR2 positive puncta: GluR2陽性斑点の数
GluR2 punctae/100μm: GluR2斑点/100μm
【図１】
0006734380.tif 000005
【図２】
0006734380.tif 000006
【図３】
0006734380.tif 000007