(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉ
【化１】
0006737443.tif 000015
の４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体、又はその薬学的に許容される塩を含む、癌の治療又は予防における使用のための医薬組成物
（式中、フェニル基Ａ及びＢのうちの少なくとも１つの少なくとも１個の水素原子は、０．２３超のハメット定数σｐを有する置換基ＲＨで置換されており、
フェニル基Ａ及びＢ各々の各更なる水素原子は、互いに独立に残基Ｒ１で置換されていてもよく、
各Ｒ１は独立に、ハロゲン、１〜７個の鎖員を有する飽和若しくは不飽和、直鎖若しくは分岐の脂肪族基、１〜８個の鎖員を有する飽和若しくは不飽和、直鎖若しくは分岐のアルカノール基、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＮＲ２２、ＣＯＲ２、ＣＯＯＲ２、ＯＲ２、ＳＲ２、ＮＲ２２、ＳＯ２ＮＲ２２、ＣＸ３、ＣＲ２Ｘ２、ＯＣＸ３、ＯＣＲ２Ｘ２又はフェニルであってよく、
各Ｒ２は独立に、水素、１〜７個の鎖員を有する飽和又は不飽和、ハロゲン化又は非ハロゲン化、直鎖又は分岐の脂肪族基、ベンジル、フェニル又はナフチル、ヘテロ原子Ｎ、Ｓ又はＯを有する飽和又は不飽和、モノ又はポリ複素環であり、上記基は各々独立に、フッ素、塩素、臭素、トリフルオロメチル、アルキル、アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、アミノアルキル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、ベンジル、フェニル又はナフチルで置換されていてもよく、
Ｘは独立にＦ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩである）。
【請求項２】
少なくとも１つの置換基ＲＨが、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ＣＢｒ３、ＯＣＦ３、ＯＣＣｌ３、ＯＣＢｒ３、ＣＨＦ２、ＣＨＣｌ２、ＣＨＢｒ２、ＯＣＨＣｌ２、ＣＨＯ、ＣＯＯＨ、ＣＯＭｅ、ＣＯＥｔ、ＣＯＯＭｅ又はＣＯＯＥｔである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
少なくとも１つの置換基ＲＨが、ＣＦ３又はＯＣＦ３である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
一般式ＩＩ
【化２】
0006737443.tif 000016
の４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体を含む、請求項１に記載の医薬組成物
（式中、置換基ＲＡ及びＲＢはそれぞれ独立に、水素、ハロゲン、１〜７個の鎖員を有する飽和若しくは不飽和、直鎖若しくは分岐の脂肪族基、１〜８個の鎖員を有する飽和若しくは不飽和、直鎖若しくは分岐のアルカノール基、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＮＲ２２、ＣＯＲ２、ＣＯＯＲ２、ＯＲ２、ＳＲ２、ＮＲ２２、ＳＯ２ＮＲ２２、ＣＸ３、ＣＲ２Ｘ２、ＯＣＸ３、ＯＣＲ２Ｘ２又はフェニルであってよく、
Ｒ２及びＸは、請求項１に定義されており、
置換基ＲＡ及びＲＢのうちの少なくとも１つが、０．２３超のハメット定数σｐを有する）。
【請求項５】
一般式ＩＩａ又はＩＩｂ
【化３】
0006737443.tif 000017
の４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体を含む、請求項１又は２に記載の医薬組成物
（式中、ＲＨは、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ＣＢｒ３、ＯＣＦ３、ＯＣＣｌ３、ＯＣＢｒ３、ＣＨＦ２、ＣＨＣｌ２、ＣＨＢｒ２、ＯＣＨＣｌ２、ＣＨＯ、ＣＯＯＨ、ＣＯＭｅ、ＣＯＥｔ、ＣＯＯＭｅ又はＣＯＯＥｔである）。
【請求項６】
ＲＨがＣＦ３又はＯＣＦ３である、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
次式
【化４】
0006737443.tif 000018
の４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体を含む、請求項５又は６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
細胞増殖抑制剤、抗生物質製剤、カルシウムチャネル阻害剤、グルクロン酸及び硫酸抱合体、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、及び／又はポルフィリンのうちの１種又は複数と併用する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
１種又は数種の他の有効成分をさらに含む、請求項８又は９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記１種又は数種の他の有効成分が、細胞増殖抑制剤である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療的処置での、特に、癌及びＨＩＶの治療のためのＢＣＲＰ阻害剤としての使用のための、４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体に関する。本発明のＢＣＲＰ阻害剤は、それ自体がＢＣＲＰの潜在的基質である、第２の医薬活性剤と併用される場合に、特に有効である。
【背景技術】
【０００２】
ＡＢＣＧ２とも称される、ＢＣＲＰトランスポーター（乳癌抵抗性タンパク質）は、Ｐ−ｇｐ及びＭＲＰ１トランスポーターと同様に、生体異物の配置及び分布に重要な役割を果たす（Ｒ．Ｗ．Ｒｏｂｅｙ等、Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．（２００７）２６、Ｓ．３９〜５７参照）。ＢＣＲＰは、このような物質が、脳、消化管及び腫瘍等の組織に浸透するのを防ぎ、また胆汁排泄及びある程度腎排泄に関わる、排出トランスポーターである。
【０００３】
ＢＣＲＰトランスポーターは、結腸、小腸、血液脳関門（ＢＢＢ）、胎盤及び肝臓小管膜等の組織関門で高度に発現し、関門機能の役割を示す。消化管、腎臓及び肝臓上皮の極性細胞において、ＢＣＲＰは頂端膜に局在化し、そこで、ＢＣＲＰは、臓器の内腔側への基質の一方向輸送に介在し、排出ポンプとして作用する。
【０００４】
【表１】
0006737443.tif 000002
【０００５】
ＢＣＲＰ（ＡＢＣＧ２）は、薬剤活性を有する様々な構造的に異なる分子を細胞外に輸送する、細胞トランスポーターであり、機構は、生理学的活性に匹敵する。これは、ミトキサントロン、カンプトテシン（トポテカン、イリノテカン、ＳＮ−３８）、フラボピリドール及びメトトレキセート等の細胞毒性剤を含むが、これらに限定されない。
【０００６】
ＢＣＲＰ（ＡＢＣＧ２）の阻害の作用は、化学療法での適用の点で特に興味深い。第１に、特に、癌細胞が、耐性機構としてのＢＣＲＰトランスポータータンパク質の発現の増加を示す場合、癌細胞内でのＢＣＲＰの阻害により、細胞増殖抑制剤の細胞内濃度が上昇し、それにより薬物活性が高まる。第２に、消化管でのＢＣＲＰの阻害により、経口投与された薬物のバイオアベイラビリティ及び吸収が増加し、それにより、血漿中薬物濃度が上昇する。血漿濃度の上昇及び／又は悪性細胞での高い局所薬物濃度は、療法で必要な総薬物用量を低減することができ、それにより副作用が低減されることが期待できる。
【０００７】
ＢＣＲＰ及びＰ−ｇｐ（例えば、グリブリド、イマチニブ、メトトレキセート、ミトキサントロン及びプラゾシン）間の基質特異性の重複は、排出トランスポーターの関門機能を高める。Ｐ−ｇｐは、一般に疎水性化合物を輸送し、ＢＣＲＰは、親和性が高い、親水性の抱合型有機アニオン、特に、硫酸塩を更に輸送する。
【０００８】
ＢＣＲＰは、抗癌剤を含む生体異物を積極的に輸送し、消化管腔及びＢＢＢからの基質の取り込みを制限する。癌細胞でのＢＣＲＰの発現は、白血病における薬物耐性を付与し、より高いレベルが、消化管、子宮内膜、肺及び黒色腫からの固形腫瘍で報告されているが、これに反して、乳癌腫瘍では発現が一般に低い。ＢＣＲＰ発現と、化学療法に対する腫瘍応答及び無進行生存との間には重要な関連性がある。非常に低いｍＲＮＡレベルにも関わらず、試験した患者の７０％において、ＢＣＲＰがミトキサントロンの排出に関与している。胎盤は、ＢＣＲＰ発現が高く、これは、胎児を保護するためと考えられる。例えば、抗糖尿病薬グリブリドでは、ＢＣＲＰによる排出により、胎児への浸透が制限される。トポテカン（基質）及びＧＦ１２０９１８（阻害剤）を共投与したＡＢＣＧ２欠損妊娠マウスにおいて、胎児血漿は、母親の２倍のレベルのトポテカンを含有していた。肝臓において、ＢＣＲＰは、胆汁排泄に重要な役割を果たすが、硫酸トログリタゾンの腸管輸送での役割は小さい。
【０００９】
Ｐ−ｇｐ（ＡＢＣＢ１）、ＭＲＰ１（ＡＢＣＣ１）及びＢＣＲＰ（ＡＢＣＧ２）の多剤耐性阻害剤又はモジュレーターは、３つの世代に分類される。他の治療的適用のために臨床的に既に用いられている化合物は、第１世代に属する（ベラパミル、シクロスポリンＡ及びキニジン等）。これらは、多剤耐性の逆転に必要とされる用量で適用されたとき、高い毒性を示した。より特異的で毒性が低い化合物の徹底的な探索は、次世代の多剤耐性阻害剤の開発につながった。第３世代の多剤耐性モジュレーターは、構造的特徴からなる新規な分子に相当し、構造活性関係に基づき予備選択され、次いで、薬理学的スクリーニングにかけられる。第２世代のＭＤＲモジュレーターとは対照的に、これらの阻害剤は、シトクロムＰ４５０  ３Ａ４基質ではなく、共投与薬の薬物動態プロファイルに顕著な影響を与えない。しかし、これらの阻害剤はいずれも、まだ市販されていない。
【００１０】
ＢＣＲＰ（ＡＢＣＧ２）は、様々な形態の癌治療での多剤耐性の発生において重要な役割を果たすことが示された。そのため、ＢＣＲＰ介在薬物耐性に対するモジュレーターの特定は大きな関心を集めている。しかし、これまでにＢＣＲＰ阻害剤として特定された特異的化合物はごくわずかである。
【００１１】
更に、ＢＣＲＰ特異的阻害剤の有効性が、腫瘍治療において細胞増殖抑制剤と共に試験される、臨床試験は、まだ開始されていない。これまでに、臨床調査されたのは、広域スペクトル阻害剤（ＧＦ１２０９１８）だけである。Ｐ−ｇｐ／ＢＣＲＰデュアル阻害剤であるエラクリダール（ＧＦ１２０９１８）は、前臨床及び臨床試験で広く調査された。
【００１２】
ＢＣＲＰ特異的阻害剤に関して、アスペルギルスフミガタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）から単離された、マイコトキシンフミトレモルギンＣは、第１の極めて強力なＢＣＲＰ特異的阻害剤の一つとして発見された。
【００１３】
しかし、その顕著な神経毒性により、その使用がインビボに限定された。フミトレモルギンＣ誘導体のライブラリーを構築するために固相合成を使用して、フミトレモルギンＣと比較して細胞毒性が低い、高活性物質であると思われる、化合物Ｋｏ１３２及びＫｏ１４３が特定された。
【００１４】
これらの技術進歩にも関わらず、細胞及び神経毒性が低く、好ましくは、Ｐ−ｇｐトランスポーターに影響を与えない、有効で特異的なＢＣＲＰ阻害剤が依然として必要とされている。
【００１５】
ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体は、特にピコルナウイルス感染症等のウイルス感染症の治療のための強力な治療薬として最近発見された。例えば、欧州特許出願公開第２０４９５４０号は、４−アミノ−３−アリールアミノ−６−アリールピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体、及び抗ウイルス剤としてのその使用について開示している。欧州特許出願公開第２０４９５４０号の継続出願である、国際公開第２０１３／０５３９４２号において、各種のライノウイルス及びＣＶＢ３単離体に対して高い抗ウイルス活性を示す、特定群の非常に強力な４−アミノ−３−アリールアミノ−６−アリールピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンが特定された。しかし、これらの出願では、この化合物が、健康な哺乳動物の体内のタンパク質に対して阻害活性を有することについては示唆されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明の目的は、ＢＣＲＰ阻害剤、特にＢＣＲＰに対して高い特異性を有し、したがってＰ−ｇｐトランスポーターが好ましくは影響を受けない、ＢＣＲＰ阻害剤を特定することにある。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
この目的は、ＢＣＲＰ阻害剤としての使用のための、その薬学的に耐容される塩化合物を含む、一般式Ｉ
【化１】
0006737443.tif 000003
の特異的置換４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体により達成される
（式中、フェニル基Ａ及びＢのうちの少なくとも１つの少なくとも１個の水素原子は、０．２３超のハメット定数σｐを有する置換基ＲＨで置き換えられており、
フェニル基Ａ及びＢ各々の全ての更なる水素原子は、互いに独立に残基Ｒ１で置き換えられていてもよく、
そこで、各Ｒ１は独立に、ハロゲン、１〜７個の鎖員を有する飽和若しくは不飽和、直鎖若しくは分岐の脂肪族基、１〜８個の鎖員を有する飽和若しくは不飽和、直鎖若しくは分岐のアルカノール基、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＮＲ２２、ＣＯＲ２、ＣＯＯＲ２、ＯＲ２、ＳＲ２、ＮＲ２２、ＳＯ２ＮＲ２２、ＣＸ３、ＣＲ２Ｘ２、ＯＣＸ３、ＯＣＲ２Ｘ２又はフェニルであってよく、
各Ｒ２は独立に、水素、１〜７個の鎖員を有する飽和又は不飽和、ハロゲン化又は非ハロゲン化、直鎖又は分岐の脂肪族基、ベンジル、フェニル又はナフチル、ヘテロ原子Ｎ、Ｓ又はＯを有する飽和又は不飽和、モノ又はポリ複素環であり、上記基は各々、独立に、フッ素、塩素、臭素、トリフルオロメチル、アルキル、アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、アミノアルキル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、ベンジル、フェニル又はナフチルで置換されていてもよく、
Ｘは独立にＦ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩである）。
【００１８】
従属請求項において、特異的置換４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体の利点、及び具体的な用途を説明するが、本発明は何ら限定されない。
【００１９】
フェニル基Ａ及びＢのうちの少なくとも１つの少なくとも１個の水素原子が、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ＣＢｒ３、ＯＣＦ３、ＯＣＣｌ３、ＯＣＢｒ３、ＣＨＦ２、ＣＨＣｌ２、ＣＨＢｒ２、ＯＣＨＣｌ２、ＣＨＯ、ＣＯＯＨ、ＣＯＭｅ、ＣＯＥｔ、ＣＯＯＭｅ又はＣＯＯＥｔ、好ましくはＣＦ３又はＯＣＦ３から選択される、置換基ＲＨで置き換えられている、一般式Ｉの４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体が有利である。一方又は両方のフェニル基Ａ及びＢにおいて、１、２又は３個の水素原子が、置換基ＲＨで置き換えられていることが有利である。特別な実施形態において、フェニル基Ａ及びＢのうちの１つの正確に１個の水素原子が、置換基ＲＨで置き換えられている。置換基ＲＨは、フェニル環Ａ又はＢのパラ位にあってよい。
【００２０】
ＲＨに加えて、フェニル基Ａ及びＢは各々、互いに独立に、更なる残基Ｒ１を有し得る。フェニル基Ａ及びＢは、互いに独立に、０、１、２又は３個の更なる残基Ｒ１、好ましくは０又は１個の更なる残基Ｒ１を有することが有利である。
【００２１】
アルキルとしては、特に、直鎖又は分岐のＣ１〜７アルキル、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル及びブチルが、本発明に関連して考慮するに値する。本発明に関連して、同じことがアルカノール、アルキルアミン及びアルキルアミドにも当てはまる。
【００２２】
一般式Ｉの４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体は、好ましくは一般式ＩＩ
【化２】
0006737443.tif 000004
の誘導体である
（式中、各置換基ＲＡ、ＲＢは、独立に、水素、ハロゲン、１〜７個の鎖員を有する飽和若しくは不飽和、直鎖若しくは分岐の脂肪族基、１〜８個の鎖員を有する飽和若しくは不飽和、直鎖若しくは分岐のアルカノール基、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＮＲ２２、ＣＯＲ２、ＣＯＯＲ２、ＯＲ２、ＳＲ２、ＮＲ２２、ＳＯ２ＮＲ２２、ＣＸ３、ＣＲ２Ｘ２、ＯＣＸ３、ＯＣＲ２Ｘ２又はフェニルであってよく、Ｒ２及びＸは上に定義した通りであり、置換基ＲＡ、ＲＢのうちの少なくとも１つは、０．２３超のハメット定数σｐを有する）。
【００２３】
４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体が、一般式ＩＩａ又はＩＩｂ
【化３】
0006737443.tif 000005
の範囲内であることが更に好ましい
（式中、ＲＨは、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＦ３、ＣＣｌ３、ＣＢｒ３、ＯＣＦ３、ＯＣＣｌ３、ＯＣＢｒ３、ＣＨＦ２、ＣＨＣｌ２、ＣＨＢｒ２、ＯＣＨＣｌ２、ＣＨＯ、ＣＯＯＨ、ＣＯＭｅ、ＣＯＥｔ、ＣＯＯＭｅ又はＣＯＯＥｔ、好ましくはＣＦ３又はＯＣＦ３から選択される）。
【００２４】
ＢＣＲＰ阻害剤としての使用は、それが治療的使用である場合を除き、任意の当該制限の対象ではない。この文脈において、治療的という用語は、予防的使用を含む。好ましい治療的使用としては、癌、及びＨＩＶ等のウイルス感染症の治療を挙げることができる。
【００２５】
本発明のＢＣＲＰ阻害剤の有効性が、活性物質の細胞外への輸送を阻害する、ＢＣＲＰ活性の抑制に主に依存するため、本発明のＢＣＲＰ阻害剤の使用は、ＢＣＲＰ阻害剤の不在下では細胞で少量しか利用できない第２の医薬活性剤との組合せが最も有効である。したがって、本発明のＢＣＲＰ阻害剤を、それ自体がＢＣＲＰの潜在的基質である第２の医薬活性剤と併用することが好ましい。
【００２６】
所与の化合物が、ＢＣＲＰ基質に相当するか否かは、Ｃａｃｏ−２細胞アッセイでの化合物の排出比に基づき決定でき、そこで排出比は、１０μＭのフミトレモルギンＣ（ＦＴＣ）の存在下と不在下の両方で決定される（例えば、Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ（２０１０）Ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ  ｉｎ  ｄｒｕｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ  ９；２１５〜２３６頁参照）。このアッセイは、頂端から基底外側まで（及び逆もまた同様）の双方向輸送試験を使用する。Ｃａｃｏ−２細胞株は、ＢＣＲＰ基質を特定するための一般的なインビトロモデルである。細胞を、マルチスクリーン（Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ）（商標）プレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＭＡ、ＵＳＡ）に播種し、実験前にコンフルエントな単層を２０日かけて形成する。次いで、試験物質を、細胞のコンフルエントな単層の頂端又は基底外側のいずれかに添加し、１２０分後、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いて膜の反対側のその概観を監視することにより、透過性を測定する。
【００２７】
透過係数（Ｐａｐｐ）を以下の等式
【数１】
0006737443.tif 000006
から計算する
（式中、ｄＱ／ｄｔは、細胞を通過する薬物の透過速度であり、Ｃ０は、ゼロ時でのドナー区画濃度であり、Ａは、細胞単層の面積である）。
【００２８】
排出比を、頂端から基底外側（Ａ−Ｂ）までのＰａｐｐデータと基底外側から頂端（Ｂ−Ａ）までのＰａｐｐデータの平均から計算する。
【数２】
0006737443.tif 000007
【００２９】
試験物質がＢＣＲＰ基質であることを確認するために、透過性をＦＴＣ（ＢＣＲＰ阻害剤）の存在下及び不在下で評価する。正味排出比が≧２であり、排出がフミトレモルギンＣで顕著に阻害されている（即ち、ＦＴＣなしで排出比５０％以下まで阻害されている）場合、試験物質は、ＢＣＲＰ基質と考えられる。
【００３０】
好ましい実施形態において、上記試験の第２の医薬活性剤は、５以上、特に１０以上、最も好ましくは２０以上のＦＴＣ非含有試料とＦＴＣ含有試料間での排出比の違いを示す。典型的なＢＣＲＰ基質としては、細胞増殖抑制剤、例えば、細胞増殖抑制アントラキノン（例えば、ミトキサントロン、ビサントレン、アザアントラピラゾール）、細胞増殖抑制アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、フラボピリドール又はミトキサントロン）、細胞増殖抑制代謝拮抗物質（例えば、メトトレキセート）、細胞増殖抑制カンプトテシン［例えば、９−アミノカンプトテシン（ルビテカン）、ホモカンプトテシン、イリノテカン、ＳＮ−３８（イリノテカンの活性代謝物）、ＳＮ−３８グルクロニド、トポテカン又はジフロモテカン］及び細胞増殖抑制エピポドフィロトキシン（例えば、エトポシド又はテニポシド）が挙げられるが、これらに限定されない。他のＢＣＲＰ基質としては、抗生物質、例えば、シプロフロキサシン、オフロキサシン、ノルフロキサシン、エリスロマイシン及びニトロフラントイン、カルシウムチャネル阻害剤、例えば、ジピリダモール、ニフェジピン及びニトレンジピン、グルクロン酸及び硫酸抱合体、例えば、ベンゾ［ａ］ピレン−３−サルフェート、ベンゾ［ａ］ピレン−３−グルクロニド、エストロン−３−サルフェート、デヒドロエピアンドロステロンサルフェート及び１７β−エストラジオールサルフェート、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、例えば、ロスバスタチン、ピタバスタチン及びセリバスタチン、ポルフィリン、例えば、ヘム、フェオホルビドａ，ピロフェオホルビドａメチルエステル、プロトポルフィリンＩＸ、フィトポルフィリン、抗ウイルス剤、特に、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、例えば、ジドブジン、ラミブジン、アバカビル及びそれらの組合せ、並びに物質、例えば、シメチジン、葉酸、メトトレキセート、リボフラビン、スルファサラジン、パントプラゾール、イマチニブメシレート（ＳＴＩ５７１）、インドカルバゾール及びプラゾシンが挙げられる。特に好ましい第２の医薬活性剤としては、トポテカン、及びアバカビル、ラミブジン及びジドブジンの組合せであるトリジビルがある。
【００３１】
上に言及した、４−アミノ−３−フェニル−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体の阻害特性の別の適用可能性としては、ＢＣＲＰトランスポーター活性を試験する方法への該化合物の導入がある。したがって、本出願は、ＢＣＲＰトランスポーターの活性を評価する方法での上に記載の４−アミノ−３−フェニル−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体の使用も包含する。
【００３２】
一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ又はＩＩｂによる４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体を含有する、医薬組成物も含まれる。このような医薬組成物は、更なる物質、例えば、薬学的に許容される賦形剤及び担体を含有し得る。特定の態様において、医薬組成物は、追加の有効成分、例えば、ＢＣＲＰの潜在的基質として上の項に列挙されたものを含む。医薬組成物が、上記の４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体と、細胞増殖抑制剤、抗生物質製剤、カルシウムチャネル阻害剤、グルクロン酸及び硫酸抱合体、特に、ベンゾ（ａ）ピレン、エストロン、デヒドロエピアンドロステロン及びエストラジオール、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ポルフィリン、並びに／又は抗ウイルス剤、特に、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤のうちの少なくとも１種又は複数との組合せである場合、特に好ましい。これらの追加の活性剤の中では、細胞増殖抑制剤、及び特にヌクレオシド逆転写酵素阻害剤の形態の抗ウイルス剤がとりわけ好ましい。
【００３３】
驚くべきことに、特定の薬物がＢＣＲＰトランスポーター分子を介して標的細胞外に輸送される症状の共治療での使用に、上記の化合物が適していることが確認された。これは、ＢＣＲＰ介在薬物耐性を克服し、特定の薬物のバイオアベイラビリティ及び有効性を高める化学療法に特に関連している。更に、本発明の化合物のＢＣＲＰ特異性は、広域スペクトル阻害剤（Ｐ−ｇｐ／ＭＲＰ１／ＢＣＲＰ又はＰ−ｇｐ／ＢＣＲＰ広域スペクトル阻害剤）の適用と比較して、癌治療での共薬物療法の安全性及び許容性に対して利点をもたらす。本発明の化合物のＢＣＲＰ特異的阻害は、Ｐ−ｇｐトランスポーターに影響を与えず、広域スペクトル阻害剤と比較して、共薬物療法の潜在的な薬物−薬物相互作用プロファイルに有益である。
【００３４】
更に、本発明の化合物の一部について、インビトロＤＭＰＫ分析において、調査した化合物が、ＣＹＰ４５０タンパク質、特にＣＹＰ３Ａ４の阻害を誘発せず、したがって、調査した化合物を、第３世代の多剤耐性モジュレーターとして使用することが期待できることも示された。
【００３５】
このため、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ又はＩＩｂの化合物を含有する、医薬調製物は、癌、及び特にＨＩＶ感染症等のウイルス感染症の治療に特に適している。
【００３６】
４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体は、０．２３超のハメット定数σｐを有する少なくとも１つの置換基ＲＨを一方又は両方のフェニル基上に有するという事実を特徴とする。この値０．２３は、ハロゲンの中でもパラ位について最高のハメット定数を示す、臭素のハメット定数σｐに相当する。
【００３７】
様々な置換基のハメット定数の決定は、ハメットの等式
σｘ＝ｌｏｇＫＸ−ｌｏｇＫＨ
による安息香酸のイオン化定数に基づく
（式中、ＫＨは、２５℃の水中の安息香酸のイオン化定数であり、ＫＸは、メタ又はパラ置換安息香酸の対応する定数である）。メタ位（σｍ）及びパラ位（σｐ）の様々な置換基のハメット定数を決定する方法、並びに様々な置換基の既に確認された値は、全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｈａｎｓｃｈ等、「Ａ  Ｓｕｒｖｅｙ  ｏｆ  Ｈａｍｍｅｔ  Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｎｔ  Ｃｏｎｓｔａｎｔｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ａｎｄ  Ｆｉｅｌｄ  Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ」、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ、１９９１．９７、１６５〜１９５の刊行物から引用できる。したがって、本発明の重要性は、少なくとも１つの置換基ＲＨが最終的に位置している位置に関わらず、専らパラ位の値σ（σｐ）各々にある。
【００３８】
本発明の例としては、その薬学的に耐容される塩化合物を含む、表２の化合物がある。
【００３９】
【表２】
0006737443.tif 000008
【００４０】
参照用途のための上記化合物は、以下に簡単に説明する合成法により調製できる。
以下の全体図は、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン１の合成を示し、［ビス（メチルチオ）メチレン］マロノニトリル２とフェニルアミン３とをアルコール中でフェニル誘導体４に縮合する、第１のステップを含む。後者を、各々単離して、更なる反応のために精製してもよく、又は精製せずにその後の反応（「ワンポット」反応）に直接使用してもよい。その後のステップにより、フェニル誘導体４とヒドラジン又はヒドラジン誘導体との相互作用がもたらされる。反応は、１〜４時間沸騰することにより起こり、高収率のピラゾール５が得られる。ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン１の合成の最終ステップは、ピラゾール５とフェニルアミジン６との酢酸、トリフルオロ酢酸又は酢酸ナトリウムの存在下での縮合である。
【００４１】
【化４】
0006737443.tif 000009
【００４２】
それにより、最後の合成ステップにおいて、溶媒の不在下で、２００〜２２０℃にて、過剰量の酢酸ナトリウムの存在下で、対応するベンズアミジン塩酸塩でピラゾール（５）を変換することにより、化合物を有利に得ることができる。
【００４３】
或いは、最後の合成ステップにおいて、マイクロ波照射を用いて、カリウム−ｔｅｒｔ−ブチレートの存在下で、対応するベンゾニトリル（大過剰）でピラゾール（５）を変換することにより、化合物を得てもよい。
【００４４】
代替合成法としては、水酸化ナトリウムの存在下でのマロノニトリルとアリールイソチオシアネートとの「ワンポット」反応、及び反応混合物のヨウ化メチル又は硫酸ジメチルでのその後の処理がある。該方法において、大量のエナミンが生成される。ここでもやはり、ピラゾール５とアリールアミジン６との酸、例えば、酢酸又はトリフルオロ酢酸又はそれらの塩（酢酸塩）の存在下での縮合が、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン１を製造するための最終の合成ステップとなる。
【００４５】
特に高収率でのピラゾール（５）のピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンへの変換が、遊離塩基としてベンズアミジン成分を使用することにより行うことができ、反応が、極性溶媒中で行われることが示された。この方法の一つの利点は、分離しにくい副産物の割合を最小化できることでもある。この反応は、以下の反応図による、置換５−アミノ−４−シアノ−３−フェニルアミノピラゾール（５）と遊離塩基としての任意選択置換ベンズアミジン（６）から４−アミノ−３−（フェニルアミノ）−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（１）への反応に基づき行われ得る。
【００４６】
【化５】
0006737443.tif 000010
残基ＲＡ及びＲＢは、Ｒ１について上に定義した置換基である。
【００４７】
上記変換は、フェニル基Ａ及びＢのうちの少なくとも１つの少なくとも１個の水素原子が、ハメット定数σｐ＞０．２３を有する、置換基ＲＨで置き換えられている、上記一般式（Ｉ）の４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体の製造に特に適しているが、該方法は、このような置換基を有さない、即ち、この残基が、水素、又は式Ｉに関連して上に定義した残基Ｒ１に相当する、４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンの製造にも使用できる。
【００４８】
上の反応図に示した反応は、不活性、極性有機溶媒中で行われる。不活性極性有機溶媒としては、例えば、エーテル、例えば、ジエチルエーテル、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、グリコールジエチルエーテル若しくはジエチレングリコールジメチルエーテル、環状エーテル、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフラン、炭化水素、例えば、エチルベンゼン、キシレン、トルエン、又はアルコール、例えば、エタノール、プロパノール、ブタノール、イソブタノール及びイソプロパノールがある。溶媒としてｎ−ブタノールを使用することにより、特に純粋な生成物が得られる。ｎ−ブタノールは、ピラゾール誘導体の初期値に対して１〜１０、特に好ましくは１．５〜３のモル比で用いられるべきである。
【００４９】
本発明の範囲内で、ベンズアミジン（６）が、塩基形態で（遊離塩基として）新たに調製される場合、特に有用であることが明らかになった。合成は、対応する利用可能な塩から通常の方法を用いて行われる。ピラゾール誘導体（５）に対して１〜１．５のモル比でベンズアミジン（６）を使用するのが最良である。
【００５０】
反応は、６０〜１１０℃、好ましくは８５〜９５℃の温度で、１０〜３０時間、好ましくは１８〜２０時間にわたって行われる。
【００５１】
この方法で得られたアミノ−３−（フェニルアミノ）−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（１）を、再結晶化により洗浄する。このために、テトラヒドロフラン、又はテトラヒドロフランと水若しくは有機溶媒、特に好ましくはトルエンとの混合物を使用することが好ましい。その代わりに、テトラヒドロフランと水又は有機溶媒、好ましくはトルエン中の熱溶液からの沈殿により、アミノ−３−（フェニルアミノ）−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンを洗浄してもよい。
【００５２】
以下の実施例では、癌、及びＨＩＶ等のウイルス感染症の治療での使用に好ましくは適した、一般式（Ｉ）の特別な化合物が列挙されている。これらの化合物を、静脈内、皮下若しくは筋肉内注射による局所若しくは非経口適用のため、又は経鼻内投与のために、薬学的に許容される水性、有機又は水性−有機媒体中の溶液又は懸濁液に調製してもよく、経口投与のための従来の担体を用いる錠剤、カプセル若しくは水性懸濁液の形態で、又は坐剤として開発してもよい。
【００５３】
したがって、式（Ｉ）で示される化合物は、０．１〜１０００ｍｇ／体重１ｋｇの用量で使用できる。
【実施例】
【００５４】
４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体の製造及び分析
本発明の化合物の構造解析を、合成、元素分析、ＮＭＲ分光法及び質量分析の型で行う。
【００５５】
原材料：
５−アミノ−４−シアノ−３−フェニルアミノピラゾールを、Ｔｏｍｉｎａｇａ  Ｙ等（Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９０、２７、７７５〜７７９）の、図１に示される方法、及び説明に従って合成した。アリールアミジンを、対応するシアン源化合物から公知の先行技術に従って合成する（Ｂｏｅｒｅ，ＲＴ等：Ｊ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．、１９８７，、３３１、１６１〜１６７；Ｇａｒｉｇｉｐａｔｉ  ＲＳ：Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．、１９９０、３１、１９６９〜１９７８；Ｄａｎｎ  Ｏ等：Ｊｕｓｔｕｓ  Ｌｉｅｂｉｇｓ  Ａｎｎ．Ｃｈｅｍ．、１９８２、１８３６〜１８３９）。
【００５６】
実施例１：４−アミノ−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）アミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（ＯＢＲ−５−３４０）
（６−フェニル−３−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３，４−ジアミン）
ベンズアミジン塩酸塩水和物３．０ｇ（１７．２４ｍｍｏｌ）及び酢酸ナトリウム２．２ｇ（２３．０ｍｍｏｌ）を撹拌しながら５−アミノ−４−シアノ−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）アミノピラゾール２．３ｇ（１１．５ｍｍｏｌ）に添加する。反応混合物を２２０℃で３０分間加熱する。得られた材料を５０ｍｌの水で処理し、濾過し、２０ｍｌの冷メタノール及び２０ｍｌの冷エステルで洗浄する。生成物をＤＭＦ／水からの結晶化により洗浄する。
【００５７】
【化６】
0006737443.tif 000011
【００５８】
実施例２：４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−［４−（トリフルオロメトキシ）フェニル］ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（ＭＳ−１１２）
（３−Ｎ−フェニル−６−［４−（トリフルオロメトキシ）フェニル］−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３，４−ジアミン）
対応する置換前駆体化合物を用いて、実施例１に記載のように製造した。
【００５９】
【化７】
0006737443.tif 000012
【００６０】
ＯＢＲ５−３４０及びＭＳ１１２のインビトロでの吸収についてのＡＤＭＥ−Ｔｏｘ試験
ＯＢＲ５−３４０及びＭＳ１１２のＩＣ５０値を、Ｐａｔｕｒｉ  Ｄ．Ｋ等による、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．（２０１０）、３８４：３２〜３８に記載の方法に従って決定した。決定に使用した資源は、ヒト組み換えＣＨＯ−Ｋ１細胞であり、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２（５μｍ）を基質として使用した。細胞を３７℃で２０分間インキュベートし、蛍光分析で検出した。
【００６１】
蛍光分析による阻害アッセイ：
対照のパーセントを以下の等式
【数３】
0006737443.tif 000013
を用いて計算する。
【００６２】
この式において、「化合物」は、試験化合物の存在下での個々の示度である。「Ｔ１」は試験化合物の不在下での平均示度である。バックグラウンドは、最も高い有効濃度の参照阻害剤の存在下での平均示度である。
【００６３】
阻害のパーセントは、１００から対照のパーセントを引くことにより計算される。ＩＣ５０値（対照値の最大の２分の１の阻害を起こす濃度）を、ヒルの等式を用いた濃度反応曲線の非線形回帰分析により決定する。
【００６４】
ＩＣ５０測定の結果を以下の表３に示す。
【表３】
0006737443.tif 000014
【００６５】
Ｐ−ｐｇトランスポーターに対する化合物ＯＢＲ−５−３４０及びＭＳ１１２の阻害作用についての同様の調査では、任意の結合は示されなかった（濃度反応曲線では、最も高い有効試験濃度で２５％未満の作用が示された）。
【００６６】
更なる試験設定において、ＯＢＲ−５−３４０が、シトクロムＰ４５０との好ましくない相互作用を示す可能性があるか否かを、ＤＰＭＫ試験で評価した。これらの調査では、ＯＢＲ−５−３４０が、ＣＹＰ１Ａ、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６及びＣＹＰ３Ａを阻害しないことが証明できた。ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｂ６及びＣＹＰ３Ａ４の誘発も確認できなかった。このデータは、ＯＢＲ−５−３４０が、共投与薬の薬物動態プロファイルに顕著な影響を与えないことを意味する。これらの結果に基づき、ＯＢＲ−５−３４０を、ＢＣＲＰの極めて強力な第３世代多剤耐性阻害剤として示すことができた。