(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
がんの処置における使用のための、第１のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチを含む組成物であって、前記組成物は、第１のＣＡＲ−ＥＣと組み合わせて投与されることを特徴とし、
Ａ．前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、
ｉ．標的細胞上の第１の細胞表面分子に結合する第１のターゲティング部分と、
ｉｉ．エフェクター細胞上の第１のキメラ抗原受容体に結合する第１のペプチド抗原であって、前記第１のペプチド抗原が、前記第１のターゲティング部分にグラフトしているか、または融合している、第１のペプチド抗原と
を含み、
Ｂ．前記第１のＣＡＲ−ＥＣが、前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチの前記第１のペプチド抗原に結合するキメラ抗原受容体を含む、
組成物。
【請求項２】
ａ．前記第１のペプチド抗原が、天然に存在するペプチドに基づき、
（ｉ）前記第１のペプチド抗原が、非ヒトペプチドに基づくか、または
（ｉｉ）前記第１のペプチド抗原が、真核生物ペプチドに基づくか、または
（ｉｉｉ）前記第１のペプチド抗原が、ペプチドに基づき、前記ペプチドが、酵母によって発現されるか、または
（ｉｖ）前記第１のペプチド抗原が、酵母転写因子ＧＣＮ４に基づくか、あるいは
ｂ．前記第１のペプチド抗原が、天然に存在しないペプチドを含み、前記第１のペプチド抗原が、合成ペプチドタグを含むか、あるいは
ｃ．前記第１のペプチド抗原が、配列番号２〜７から選択される配列に基づくか、あるいは
ｄ．前記第１のペプチド抗原が、配列番号２〜３および５〜６から選択されるペプチド配列と少なくとも８５％同一の配列を含むか、あるいは
ｅ．前記第１のターゲティング部分が、第１のターゲティングペプチドを含むか、あるいは
ｆ．前記第１のターゲティング部分が、第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片を含み、
（ｉ）前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片が、免疫グロブリン、Ｆｃヌル免疫グロブリン、およびＦａｂ、ならびにこれらの断片からなる群から選択されるか、または
（ｉｉ）前記第１のターゲティング部分が、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、および抗ＣＳ１抗体、ならびにこれらの断片からなる群から選択されるか、または
（ｉｉｉ）前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片が、軽鎖および重鎖の対を含み、前記軽鎖および重鎖が、配列番号８および９；配列番号８および１０；配列番号１１および１２；配列番号１３および１４；配列番号１５および１６；配列番号１７および１８；ならびに配列番号１９および２０からなる群から選択される核酸配列対に基づく核酸配列によりコードされるか、または
（ｉｖ）前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片が、軽鎖および重鎖の対を含み、前記軽鎖および重鎖が、配列番号２１および２２；配列番号２３および２４；配列番号２５および２６；配列番号２７および２８；ならびに配列番号２７および２９からなる群から選択されるアミノ酸配列対に基づくか、または
（ｖ）前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、軽鎖および重鎖の対を含み、前記軽鎖および重鎖が、配列番号３０および２９；配列番号３６および２９；配列番号３１および２８；配列番号２７および３２；配列番号２７および３３；配列番号２７および３４；ならびに配列番号２７および３５からなる群から選択されるアミノ酸配列対に基づくか、または
（ｖｉ）前記第１のペプチド抗原が、前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片の末端と融合しているか、または
（ｖｉｉ）前記第１のペプチド抗原が、軽鎖のＮ末端、軽鎖のＣ末端、重鎖のＮ末端、Ｆａｂ重鎖のＣ末端、および定常領域重鎖のＣ末端からなる群から選択される前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片の領域と融合している、
請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記第１のペプチド抗原が、前記第１のターゲティング部分にグラフトしており、前記第１のターゲティング部分が、第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片を含み、
ａ．前記第１のペプチド抗原が、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＬドメイン、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、およびヒンジ領域から選択される前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片の領域にグラフトしており、前記第１のペプチド抗原が、前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片の１つまたは複数のアミノ酸と置き換わるか、もしくは前記第１のペプチド抗原が、アミノ酸を置き換えずに前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片にグラフトしているか、あるいは
ｂ．前記第１のペプチド抗原が、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＬドメイン、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、重鎖、軽鎖、およびヒンジ領域から選択される前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片の２つの領域の間にグラフトし、前記２つの領域が、隣接しており、前記第１のペプチド抗原が、前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片の１つまたは複数のアミノ酸と置き換わるか、もしくは前記第１のペプチド抗原が、アミノ酸を置き換えずに前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片にグラフトしているか、あるいは
ｃ．前記第１のペプチド抗原が、前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片のループにグラフトしており、前記第１のペプチド抗原が、前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片の定常ドメインのループにグラフトしており、前記第１のペプチド抗原が、前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片の１つまたは複数のアミノ酸と置き換わるか、もしくは前記第１のペプチド抗原が、アミノ酸を置き換えずに前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片にグラフトしているか、あるいは
ｄ．前記第１のペプチド抗原が、前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片の前記ヒンジ領域と重鎖定常ドメインとの間にグラフトしており、前記第１のペプチド抗原が、前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片の１つまたは複数のアミノ酸と置き換わるか、もしくは前記第１のペプチド抗原が、アミノ酸を置き換えずに前記第１のターゲティング抗体または第１の抗体断片にグラフトしている、
請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
ａ．前記第１のペプチド抗原と前記第１のターゲティング部分とを連結するリンカーをさらに含み、
（ｉ）前記リンカーが、前記第１のペプチド抗原と前記第１のターゲティング部分とを連結するペプチドであり、前記第１のターゲティング部分が、第１のターゲティングポリペプチドを含むか、または
（ｉｉ）前記リンカーが、１〜２０のアミノ酸を含むか、または
（ｉｉｉ）前記リンカーが、配列番号４０〜４４から選択される配列に基づく配列を含むか、あるいは
ｂ．前記第１のペプチド抗原が、酵母転写因子ＧＣＮ４またはその相同体を含み、前記第１のターゲティング部分が、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＤ１９抗体、および抗ＣＥＡ抗体、ならびにこれらの断片からなる群から選択されるか、あるいは
ｃ．前記標的細胞が、がん細胞であるか、あるいは
ｄ．前記第１の細胞表面分子が、腫瘍関連抗原であるか、あるいは
ｅ．前記第１の細胞表面分子が、分化クラスタータンパク質、受容体、統合膜タンパク質、および糖タンパク質からなる群から選択されるか、あるいは
ｆ．前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチの均質性が、少なくとも９０％である、
請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
ａ．ｉ．エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体に結合するペプチド抗原、および
ｉｉ．標的細胞上の細胞表面分子に結合するターゲティング部分
を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチと、
ｂ．前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチの前記ペプチド抗原に結合するキメラ抗原受容体を含む、ＣＡＲ−ＥＣと
を含むキット。
【請求項６】
ａ．前記ターゲティング部分が、ターゲティングペプチドを含むか、あるいは
ｂ．前記ターゲティング部分が、ターゲティング抗体または抗体断片を含むか、あるいは
ｃ．前記ペプチド抗原が、前記ターゲティング部分内にグラフトしているか、あるいは
ｄ．第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチを含み、前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、第１のペプチド抗原と第１のターゲティング部分とを含み、前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、第２のペプチド抗原と第２のターゲティング部分とを含み、（ｉ）前記第１のペプチド抗原と前記第２のペプチド抗原とが、同じであり、（ｉｉ）前記第１のターゲティング部分が、第１の標的細胞上の第１の細胞表面分子に結合し、前記第２のターゲティング部分が、第２の標的細胞上の第２の細胞表面分子に結合し、または（ｉｉｉ）前記第１の細胞表面分子と前記第２の細胞表面分子とが、異なるか、あるいは
ｅ．前記エフェクター細胞が、Ｔ細胞、エフェクターＢ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、およびこれらの前駆体から選択され、前記エフェクター細胞が、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ幹細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ８／ＣＤ４＋Ｔ細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、およびマクロファージから選択される、
請求項５に記載のキット。
【請求項７】
がんの処置における使用のための、ＣＡＲ−ＥＣを含む組成物であって、前記組成物が、ＣＡＲ−ＥＣスイッチと組み合わせて投与されることを特徴とし、
Ａ．前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、
ｉ．標的細胞上の細胞表面分子に結合するターゲティング部分と、
ｉｉ．エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体に結合するペプチド抗原であって、前記ペプチド抗原が、前記ターゲティング部分にグラフトしているかまたは融合している、ペプチド抗原と
を含み、
Ｂ．前記ＣＡＲ−ＥＣが、前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチの前記ペプチド抗原に結合するキメラ抗原受容体を含む、
組成物。
【請求項８】
前記キメラ抗原受容体が、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの前記ペプチド抗原に結合する抗体または抗体断片を含み、
ａ．前記抗体または抗体断片が、真核生物抗原に結合するか、あるいは
ｂ．前記抗体または抗体断片が、天然に存在しないペプチドに結合するか、あるいは
ｃ．前記抗体断片が、ｓｃＦｖであるか、あるいは
ｄ．前記抗体または抗体断片が、原核生物抗原に結合するか、あるいは
ｅ．前記キメラ抗原受容体が、配列番号１に基づくポリヌクレオチドによりコードされる、
請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
ａ．前記エフェクター細胞が、Ｔ細胞であるか、あるいは
ｂ．前記エフェクター細胞が、配列番号１に基づく１つまたは複数のポリヌクレオチドを含む、
請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、
ａ．エフェクター細胞上の抗ＧＣＮ４キメラ抗原受容体に結合する酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドを含むペプチド抗原であって、前記ＧＣＮ４ペプチドが、１２アミノ酸である配列番号２の一部を含む、ペプチド抗原と
ｂ．標的細胞上の細胞表面分子に結合するターゲティング部分であって、前記ペプチド抗原が前記ターゲティング部分にグラフトしているか、または融合している、ターゲティング部分と
を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ターゲティング部分が、ターゲティング抗体または抗体断片を含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ターゲティング抗体または抗体断片が、免疫グロブリン、Ｆｃヌル免疫グロブリン、およびＦａｂ、ならびにこれらの断片からなる群から選択される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ターゲティング部分が、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、および抗ＣＳ１抗体、ならびにこれらの断片からなる群から選択される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ターゲティング抗体または抗体断片が、軽鎖および重鎖の対を含み、前記軽鎖および重鎖が、配列番号８および９、配列番号８および１０、配列番号１１および１２、配列番号１３および１４、配列番号１５および１６、配列番号１７および１８、ならびに配列番号１９および２０からなる群から選択される核酸配列対に基づく核酸配列によってコードされる、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ターゲティング抗体または抗体断片が、軽鎖および重鎖の対を含み、前記軽鎖および重鎖が、配列番号２１および２２、配列番号２３および２４、配列番号２５および２６、配列番号２７および２８、配列番号２７および２９、配列番号３０および２９、配列番号３６および２９、配列番号３１および２８、配列番号２７および３２、配列番号２７および３３、配列番号２７および３４、ならびに配列番号２７および３５からなる群から選択されるアミノ酸配列対に基づく、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ペプチド抗原が、前記ターゲティング抗体または抗体断片の末端に融合している、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ペプチド抗原が、軽鎖のＮ末端、軽鎖のＣ末端、重鎖のＮ末端、Ｆａｂ重鎖のＣ末端、および定常領域重鎖のＣ末端からなる群から選択される前記ターゲティング抗体または抗体断片の領域に融合されている、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１８】
前記ペプチド抗原が、前記ターゲティング部分にグラフトされている、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ターゲティング部分が、ターゲティング抗体または抗体断片を含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ペプチド抗原とターゲティング部分とを連結するリンカーをさらに含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項２１】
前記標的細胞ががん細胞である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項２２】
がんの処置における使用のための、請求項１０に記載の組成物。
【請求項２３】
前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチの前記ＧＣＮ４ペプチド抗原に結合する抗ＧＣＮ４キメラ抗原受容体を含むＣＡＲ−ＥＣと組み合わせたがんの処置における使用のための、請求項１０に記載の組成物
【請求項２４】
請求項１０に記載の組成物と、薬学的に許容される塩、添加剤および／またはビヒクルとを含む、医薬組成物。
【請求項２５】
請求項１０に記載のＣＡＲ−ＥＣスイッチと、前記ＣＡＲ−ＥＣスイッチのペプチド抗原に結合するキメラ抗原受容体を含むＣＡＲ−ＥＣとを含むキット。
【請求項２６】
前記組成物が、さらに１つまたは複数の第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチと組み合わせて投与されることを特徴とし、各第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、
ａ．エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体に結合する第２の抗原と、
ｂ．前記標的細胞上の細胞表面分子に結合する第２のターゲティング部分とを含み、
各第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチの前記第２のターゲティング部分が、前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチに含まれる前記第１のターゲティング部分とは異なり、
前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチに含まれる前記第２の抗原が、
（ｉ）前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチに含まれる前記第１のペプチド抗原と同一であるか、または
（ｉｉ）前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチに含まれる前記第１のペプチド抗原とは異なり、
ただし、前記第２の抗原が、前記第１のペプチド抗原と異なる場合、前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチの前記第２の抗原に結合するキメラ抗原受容体を含む第２のＣＡＲ−ＥＣが、さらに投与される、請求項１または１０に記載の組成物。
【請求項２７】
（ｉ）前記第１のターゲティング部分が、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合部分を含み、前記第２のターゲティング部分が、抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分を含むか、あるいは（ｉｉ）前記第１のターゲティング部分が、抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分を含み、前記第２のターゲティング部分が、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合部分を含む、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチが、前記処置を必要する被験体が、前記第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチおよびＣＡＲ−ＥＣの組み合わせで処置された後にのみ投与される、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２９】
（ｉ）前記第１のターゲティング部分が、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合部分を含み、前記第２のターゲティング部分が、抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分を含むか、あるいは
（ｉｉ）前記第１のターゲティング部分が、抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合部分を含み、前記第２のターゲティング部分が、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合部分を含む、
請求項２８に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１３年１０月１５日に出願された米国仮出願第６１／８９１，３４７号；２０１３年１０月２５日に出願された米国仮出願第６１／８９５，７０４号；２０１４年６月６日に出願された米国仮出願第６２／００９，０５４号：２０１４年７月２９日に出願された米国仮出願第６２／０３０，５２６号；および２０１４年７月２９日に出願された米国仮出願第６２／０３０，５１４号の利益を請求し、これらはすべてその全体が参照によって援用される。
【背景技術】
【０００２】
遺伝子改変されたＴ細胞の養子移入を使用して、免疫系が、悪性腫瘍細胞を認識し、消失させるように「再教示する」免疫療法を含む免疫療法は、化学療法に対する魅力的な代替法となりつつある。遺伝子改変されたＴ細胞は、一般に、シグナル伝達エンドドメインと、ＣＤ３−ゼータ膜貫通ドメインと、標的悪性細胞上の腫瘍関連抗原に対する受容体特異性をもたらすモノクローナル抗体に由来する細胞外単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）とからなる、キメラ抗原受容体を発現させる。キメラ抗原受容体を介して、腫瘍関連抗原に結合すると、キメラ抗原受容体を発現させるＴ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）は、悪性細胞に対して細胞傷害性である免疫応答を引き起こす。このような療法は、化学療法抵抗性を回避することが可能であり、再発性／難治性疾患に対して活性である結果として、一部の慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）患者および急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）患者のための持続的寛解をもたらしうる。しかし、これらの療法により、血液標的の場合の毒性のリンパ球減少症（lymphophenia）、慢性の低ガンマグロブリン血症、充実性腫瘍標的の場合の致死性のオフターゲット細胞溶解、抗ＣＤ１９抗体を発現させるＣＡＲ  Ｔ細胞の使用に伴う遷延性のＢ細胞形成不全および、場合によって、死亡などである、望ましくない作用が引き起こされたので、これらに療法は、さらなる調査および最適化が要請されている。
【０００３】
ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性を制御するスイッチを導入すれば、新生物性細胞を消失させた後にＣＡＲ−Ｔ細胞の活性および関連する免疫応答をオフにすることが可能となり、Ｂ細胞の再増殖を可能とする。近年の前臨床研究では、ＣＡＲ−Ｔ細胞株は、抗体ベースのスイッチにより制御することが可能であり、ここで、抗体は、標的細胞（例えば、がん細胞）に結合し、ＣＡＲ  Ｔ細胞が標的細胞に結合することを遮断し、ＣＡＲ−Ｔ活性を「オフに切り替える」ことが可能となることが裏付けられている。これらの系は、概念上は、ＣＡＲ  Ｔ細胞を使用して、腫瘍の切り替え型ターゲティングを可能とするが、それらは、一連の限界を被る可能性もある。システインまたはリシンを使用する、抗体の非特異的標識化は、非機能的であり、薬物動態および／または免疫原性が予測不可能な場合があり、最適化が困難でありうる変異体を含む、異種の生成物（heterogeneous  product）をもたらす。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本明細書では、エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体に結合するペプチド抗原と、標的細胞上の細胞表面分子に結合するターゲティング部分とを含むキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチが開示される。ペプチド抗原は、天然に存在するペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ペプチド抗原は、非ヒトペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ペプチド抗原は、真核生物ペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ペプチド抗原は、ペプチドに基づきうるか、またはこれに由来し得、この場合、ペプチドは、酵母によって発現される。ペプチド抗原は、酵母転写因子ＧＣＮ４に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ペプチド抗原は、天然に存在しないペプチドを含みうる。ペプチド抗原は、合成ペプチドタグを含みうる。ペプチド抗原は、配列番号２〜７から選択される配列に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ペプチド抗原は、配列番号２〜７から選択されるペプチド配列と少なくとも約５０％相同な配列を含みうる。ターゲティング部分は、ターゲティングペプチドを含みうる。ターゲティング部分は、ターゲティング抗体または抗体断片を含みうる。ターゲティング抗体または抗体断片は、免疫グロブリン、Ｆｃヌル免疫グロブリン、およびＦａｂ、ならびにこれらの断片からなる群から選択することができる。ターゲティング部分は、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、および抗ＣＳ１抗体、ならびにこれらの断片からなる群から選択することができる。ターゲティング抗体または抗体断片は、軽鎖および重鎖の対を含むことが可能であり、この場合、軽鎖および重鎖は、配列番号８および９；配列番号８および１０；配列番号１１および１２；配列番号１３および１４；配列番号１５および１６；配列番号１７および１８；ならびに配列番号１９および２０からなる群から選択される核酸配列対に基づくか、またはこれらに由来する核酸配列によりコードされる。ターゲティング抗体または抗体断片は、軽鎖および重鎖の対を含むことが可能であり、この場合、軽鎖および重鎖は、配列番号２１および２２；配列番号２３および２４；配列番号２５および２６；配列番号２７および２８；ならびに配列番号２７および２９からなる群から選択されるアミノ酸配列対に基づくか、またはこれらに由来するアミノ酸配列によりコードされる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、軽鎖および重鎖の対を含むことが可能であり、この場合、軽鎖および重鎖は、配列番号３０および２９；配列番号３６および２９；配列番号３１および２８；配列番号２７および３２；配列番号２７および３３；配列番号２７および３４；ならびに配列番号２７および３５からなる群から選択されるアミノ酸配列対に基づくか、またはこれらに由来するアミノ酸配列によりコードされる。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片の末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、軽鎖のＮ末端、軽鎖のＣ末端、重鎖のＮ末端、Ｆａｂ重鎖のＣ末端、および定常領域重鎖のＣ末端からなる群から選択されるターゲティング抗体または抗体断片の領域と融合させることができる。ペプチド抗原は、ターゲティング部分にグラフトすることができる。ターゲティング部分は、ターゲティング抗体または抗体断片を含みうる。ペプチド抗原は、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＬドメイン、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、およびヒンジ領域から選択されるターゲティング抗体または抗体断片の領域にグラフトすることができる。ペプチド抗原は、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＬドメイン、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、重鎖、軽鎖、およびヒンジ領域から選択されるターゲティング抗体または抗体断片の２つの領域の間にグラフトすることができ、この場合、２つの領域は隣接している。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片のループにグラフトすることができる。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片の定常ドメインのループにグラフトすることができる。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片のヒンジ領域と重鎖定常ドメインとの間にグラフトすることができる。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片の１つまたは複数のアミノ酸と置き換わることができる。ペプチド抗原は、アミノ酸を置き換えずにターゲティング抗体または抗体断片にグラフトすることができる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞はさらに、ペプチド抗原とターゲティング部分とを連結するリンカーを含みうる。リンカーは、ペプチド抗原とターゲティング部分とを連結するペプチドであることが可能であり、この場合、ターゲティング部分は、ターゲティングポリペプチドを含む。リンカーは、約１〜約２０のアミノ酸を含みうる。リンカーは、配列番号３８〜４２から選択される配列に基づくか、またはこれに由来する配列を含みうる。ペプチド抗原は、酵母転写因子ＧＣＮ４またはその相同体を含むことが可能であり、ターゲティング部分は、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＥＡ抗体、およびこれらの断片からなる群から選択される。標的細胞は、がん細胞でありうる。細胞表面分子は、腫瘍関連抗原でありうる。細胞表面分子は、分化クラスタータンパク質（cluster  of  differentiation  protein）、受容体、統合膜タンパク質（integral  membrane  protein）、および糖タンパク質からなる群から選択することができる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチの均質性は、少なくとも約９０％でありうる。
【０００５】
本明細書ではさらに、エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体に結合するペプチド抗原と、標的上の細胞表面分子に結合するターゲティング部分とを含むキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチと、薬学的に許容される塩、添加剤、および／またはビヒクルとを含む医薬組成物が開示される。
【０００６】
本明細書では、エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体に結合するペプチド抗原と、標的細胞上の細胞表面分子に結合するターゲティング部分とを含むキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチと、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチのペプチド抗原に結合するキメラ抗原受容体を含む、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞とを含むキットが開示される。ターゲティング部分は、ターゲティングペプチドを含みうる。ターゲティング部分は、ターゲティング抗体または抗体断片を含む。ペプチド抗原は、ターゲティング部分内にグラフトされる。キットは、第１のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチおよび第２のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチを含むことが可能であり、この場合、第１のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、第１のペプチド抗原と第１のターゲティング部分とを含み、第２のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、第２のペプチド抗原と第２のターゲティング部分とを含む。第１のペプチド抗原と第２のペプチド抗原とは、同じでありうる。第１のターゲティング部分は、第１の標的細胞上の第１の細胞表面分子に結合することが可能であり、第２のターゲティング部分は、第２の標的細胞上の第２の細胞表面分子に結合することが可能であり、ここで、第１の細胞表面分子と第２の細胞表面分子とは、異なる。エフェクター細胞は、Ｔ細胞、エフェクターＢ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、およびこれらの前駆体から選択することができる。エフェクター細胞は、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ幹細胞（memory  stem  cell  T  cell）、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ８／ＣＤ４＋Ｔ細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージから選択することができる。
【０００７】
本明細書ではさらに、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチのペプチド抗原に結合する、キメラ抗原受容体が開示される。キメラ抗原受容体は、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチのペプチド抗原に結合する抗体または抗体断片を含みうる。抗体断片または抗体断片は、真核生物抗原に結合しうる。抗体または抗体断片は、天然に存在しないペプチドに結合しうる。抗体断片は、ｓｃＦｖでありうる。抗体または抗体断片は、抗酵母転写因子ＧＣＮ４抗体、抗ＦＬＡＧ（登録商標）抗体、抗ＨＴＰ抗体、およびこれらの断片から選択することができる。キメラ抗原受容体は、配列番号１に基づくか、またはこれに由来するポリヌクレオチドによりコードされうる。
【０００８】
本明細書では、キメラ抗原受容体を含むエフェクター細胞であって、キメラ抗原受容体が、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチのペプチド抗原に結合するエフェクター細胞が開示される。エフェクター細胞は、Ｔ細胞でありうる。エフェクター細胞は、配列番号１に基づくか、またはこれに由来する、１つまたは複数のポリヌクレオチドを含みうる。
【０００９】
本明細書ではさらに、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチをコードする配列を有するポリヌクレオチドを含むベクターであって、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチが、ペプチド抗原とターゲティング部分とを含み、ターゲティング部分が、ペプチドを含み、標的細胞上の細胞表面分子に結合するベクターが開示される。
【００１０】
本明細書では、ターゲティング抗体または抗体断片の重鎖をコードする第１の配列を有する第１のポリヌクレオチドと、ターゲティング抗体または抗体断片の軽鎖をコードする第２の配列を有する第２のポリヌクレオチドと、ペプチド抗原をコードする第３の配列を有する第３のポリヌクレオチドとを含むベクターであって、ベクターの発現が、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチを生成するベクターが開示される。第３の配列は、第１の配列および第２の配列から選択される配列と隣接させることができる。第３の配列は、第１の配列および第２の配列から選択される配列内に配置することができる。
【００１１】
本明細書ではさらに、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチを生成する方法であって、１つまたは複数のポリヌクレオチドベクターから、ターゲティング抗体または抗体断片の重鎖をコードする第１の配列と、ターゲティング抗体または抗体断片の軽鎖をコードする第２の配列と、ペプチド抗原をコードする第３の配列とを発現させるステップを含み、ベクターの発現が、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチを生成する方法が開示される。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
ａ．エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体に結合するペプチド抗原と、
ｂ．標的細胞上の細胞表面分子に結合するターゲティング部分と
を含むキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目２）
前記ペプチド抗原が、天然に存在するペプチドに基づくか、またはこれに由来する、項目１に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目３）
前記ペプチド抗原が、非ヒトペプチドに基づくか、またはこれに由来する、項目２に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目４）
前記ペプチド抗原が、真核生物ペプチドに基づくか、またはこれに由来する、項目２に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目５）
前記ペプチド抗原が、ペプチドに基づくか、またはこれに由来し、前記ペプチドが、酵母によって発現される、項目２に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目６）
前記ペプチド抗原が、酵母転写因子ＧＣＮ４に基づくか、またはこれに由来する、項目２に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目７）
前記ペプチド抗原が、天然に存在しないペプチドを含む、項目１に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目８）
前記ペプチド抗原が、合成ペプチドタグを含む、項目７に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目９）
前記ペプチド抗原が、配列番号２〜７から選択される配列に基づくか、またはこれに由来する、項目１に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目１０）
前記ペプチド抗原が、配列番号２〜７から選択されるペプチド配列と少なくとも約５０％相同な配列を含む、項目１に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目１１）
前記ターゲティング部分が、ターゲティングペプチドを含む、項目１に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目１２）
前記ターゲティング部分が、ターゲティング抗体または抗体断片を含む、項目１に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目１３）
前記ターゲティング抗体または抗体断片が、免疫グロブリン、Ｆｃヌル免疫グロブリン、およびＦａｂ、ならびにこれらの断片からなる群から選択される、項目１２に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目１４）
前記ターゲティング部分が、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、および抗ＣＳ１抗体、ならびにこれらの断片からなる群から選択される、項目１２に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目１５）
前記ターゲティング抗体または抗体断片が、軽鎖および重鎖の対を含み、前記軽鎖および重鎖が、配列番号８および９；配列番号８および１０；配列番号１１および１２；配列番号１３および１４；配列番号１５および１６；配列番号１７および１８；ならびに配列番号１９および２０からなる群から選択される核酸配列対に基づくか、またはこれらに由来する核酸配列によりコードされる、項目１２に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目１６）
前記ターゲティング抗体または抗体断片が、軽鎖および重鎖の対を含み、前記軽鎖および重鎖が、配列番号２１および２２；配列番号２３および２４；配列番号２５および２６；配列番号２７および２８；ならびに配列番号２７および２９からなる群から選択されるアミノ酸配列対に基づくか、またはこれらに由来するアミノ酸配列によりコードされる、項目１２に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目１７）
前記キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチが、軽鎖および重鎖の対を含み、前記軽鎖および重鎖が、配列番号３０および２９；配列番号３６および２９；配列番号３１および２８；配列番号２７および３２；配列番号２７および３３；配列番号２７および３４；ならびに配列番号２７および３５からなる群から選択されるアミノ酸配列対に基づくか、またはこれらに由来するアミノ酸配列によりコードされる、項目１２に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目１８）
前記ペプチド抗原が、前記ターゲティング抗体または抗体断片の末端と融合している、項目１２に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目１９）
前記ペプチド抗原が、軽鎖のＮ末端、軽鎖のＣ末端、重鎖のＮ末端、Ｆａｂ重鎖のＣ末端、および定常領域重鎖のＣ末端からなる群から選択される前記ターゲティング抗体または抗体断片の領域と融合している、項目１２に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目２０）
前記ペプチド抗原が、前記ターゲティング部分にグラフトしている、項目１に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目２１）
前記ターゲティング部分が、ターゲティング抗体または抗体断片を含む、項目２０に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目２２）
前記ペプチド抗原が、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＬドメイン、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、およびヒンジ領域から選択される前記ターゲティング抗体または抗体断片の領域にグラフトしている、項目２１に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目２３）
前記ペプチド抗原が、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＬドメイン、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、重鎖、軽鎖、およびヒンジ領域から選択される前記ターゲティング抗体または抗体断片の２つの領域の間にグラフトし、前記２つの領域が隣接している、項目２１に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目２４）
前記ペプチド抗原が、前記ターゲティング抗体または抗体断片のループにグラフトしている、項目２１に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目２５）
前記ペプチド抗原が、前記ターゲティング抗体または抗体断片の定常ドメインのループにグラフトしている、項目２４に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目２６）
前記ペプチド抗原が、前記ターゲティング抗体または抗体断片の前記ヒンジ領域と重鎖定常ドメインとの間にグラフトしている、項目２１に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目２７）
前記ペプチド抗原が、前記ターゲティング抗体または抗体断片の１つまたは複数のアミノ酸と置き換わる、項目２２から２６のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目２８）
前記ペプチド抗原が、アミノ酸を置き換えずに前記ターゲティング抗体または抗体断片にグラフトしている、項目２２から２６のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目２９）
前記ペプチド抗原と前記ターゲティング部分とを連結するリンカーをさらに含む、項目１に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目３０）
前記リンカーが、前記ペプチド抗原と前記ターゲティング部分とを連結するペプチドであり、前記ターゲティング部分が、ターゲティングポリペプチドを含む、項目２９に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目３１）
前記リンカーが、約１〜約２０のアミノ酸を含む、項目２９に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目３２）
前記リンカーが、配列番号３８〜４２から選択される配列に基づくか、またはこれに由来する配列を含む、項目２９に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目３３）
前記ペプチド抗原が、酵母転写因子ＧＣＮ４またはその相同体を含み、前記ターゲティング部分が、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＤ１９抗体、および抗ＣＥＡ抗体、ならびにこれらの断片からなる群から選択される、項目１に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目３４）
前記標的細胞が、がん細胞である、項目１に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目３５）
前記細胞表面分子が、腫瘍関連抗原である、項目１に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目３６）
前記細胞表面分子が、分化クラスタータンパク質、受容体、統合膜タンパク質、および糖タンパク質からなる群から選択される、項目１に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目３７）
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチの均質性が、少なくとも約９０％である、項目１に記載のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチ。
（項目３８）
ａ．ｉ．エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体に結合するペプチド抗原、および
ｉｉ．標的上の細胞表面分子に結合するターゲティング部分
を含むキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチと、
ｂ．薬学的に許容される塩、添加剤、および／またはビヒクルと
を含む医薬組成物。
（項目３９）
ａ．ｉ．エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体に結合するペプチド抗原、および
ｉｉ．標的細胞上の細胞表面分子に結合するターゲティング部分を含むキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチと、
ｂ．前記キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチの前記ペプチド抗原に結合するキメラ抗原受容体を含む、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞と
を含むキット。
（項目４０）
前記ターゲティング部分が、ターゲティングペプチドを含む、項目３９に記載のキット。
（項目４１）
前記ターゲティング部分が、ターゲティング抗体または抗体断片を含む、項目３９に記載のキット。
（項目４２）
前記ペプチド抗原が、前記ターゲティング部分内にグラフトしている、項目３９に記載のキット。
（項目４３）
第１のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチおよび第２のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチを含み、前記第１のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチが、第１のペプチド抗原と第１のターゲティング部分とを含む、項目３９に記載のキットであって、前記第２のキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチが、第２のペプチド抗原と第２のターゲティング部分とを含む、キット。
（項目４４）
前記第１のペプチド抗原と前記第２のペプチド抗原とが同じである、項目４３に記載のキット。
（項目４５）
前記第１のターゲティング部分が、第１の標的細胞上の第１の細胞表面分子に結合し、前記第２のターゲティング部分が、第２の標的細胞上の第２の細胞表面分子に結合し、前記第１の細胞表面分子と前記第２の細胞表面分子とが異なる、項目４４に記載のキット。
（項目４６）
前記エフェクター細胞が、Ｔ細胞、エフェクターＢ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、およびこれらの前駆体から選択される、項目３９に記載のキット。
（項目４７）
前記エフェクター細胞が、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ幹細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ８／ＣＤ４＋Ｔ細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、およびマクロファージから選択される、項目４６に記載のキット。
（項目４８）
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチのペプチド抗原に結合する、キメラ抗原受容体。
（項目４９）
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチの前記ペプチド抗原に結合する抗体または抗体断片を含む、項目４８に記載のキメラ抗原受容体。
（項目５０）
前記抗体または抗体断片が、真核生物抗原に結合する、項目４９に記載のキメラ抗原受容体。
（項目５１）
前記抗体断片または抗体断片が、天然に存在しないペプチドに結合する、項目４９に記載のキメラ抗原受容体。
（項目５２）
前記抗体断片が、ｓｃＦｖである、項目４９に記載のキメラ抗原受容体。
（項目５３）
前記抗体または抗体断片が、真核生物抗原に結合する、項目４９に記載のキメラ抗原受容体。
（項目５４）
配列番号１に基づくか、またはこれに由来するポリヌクレオチドによりコードされる、項目４９に記載のキメラ抗原受容体。
（項目５５）
キメラ抗原受容体を含むエフェクター細胞であって、前記キメラ抗原受容体が、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチのペプチド抗原に結合する、エフェクター細胞。
（項目５６）
Ｔ細胞である、項目５５に記載のエフェクター細胞。
（項目５７）
配列番号１に基づくか、またはこれに由来する、１つまたは複数のポリヌクレオチドを含む、項目５５に記載のエフェクター細胞。
（項目５８）
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチをコードする配列を有するポリヌクレオチドを含むベクターであって、前記キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチが、ペプチド抗原とターゲティング部分とを含み、前記ターゲティング部分が、ペプチドを含み、標的細胞上の細胞表面分子に結合する、ベクター。
（項目５９）
ターゲティング抗体または抗体断片の重鎖をコードする第１の配列を有する第１のポリヌクレオチドと、ターゲティング抗体または抗体断片の軽鎖をコードする第２の配列を有する第２のポリヌクレオチドと、ペプチド抗原をコードする第３の配列を有する第３のポリヌクレオチドとを含むベクターであって、前記ベクターの発現が、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチを生成する、ベクター。
（項目６０）
前記第３の配列が、前記第１の配列および前記第２の配列から選択される配列に隣接する、項目５９に記載のベクター。
（項目６１）
前記第３の配列が、前記第１の配列および前記第２の配列から選択される配列内にある、項目５９に記載のベクター。
（項目６２）
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチを生成する方法であって、１つまたは複数のポリヌクレオチドベクターから、
ａ．ターゲティング抗体または抗体断片の重鎖をコードする第１の配列と、
ｂ．ターゲティング抗体または抗体断片の軽鎖をコードする第２の配列と、
ｃ．ペプチド抗原をコードする第３の配列と
を発現させるステップを含み、前記ベクターの発現が、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチを生成する、方法。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１Ａは、本明細書で開示されるスイッチによる、キメラ抗原受容体−Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）およびＣＡＲ  Ｔ細胞スイッチによる治療についての一般的概観を例示する図である。リンパ球は、被験体から単離し、その後、キメラ抗原受容体をコードする発現ベクターを、リンパ球へと導入して、キメラ抗原受容体を発現させる細胞を生成する。結果として得られる、操作されたリンパ球を、ＣＡＲ  Ｔ細胞スイッチと共に被験体に投与する。図１Ｂは、ＣＡＲ  Ｔ細胞のキメラ抗原受容体が結合するペプチドと、標的細胞に対して選択的なターゲティング抗体とを含むＣＡＲ  Ｔ細胞スイッチについて例示する図である。ＣＡＲ  Ｔ細胞スイッチが、ＣＡＲ  Ｔ細胞に結合すると、これもまたＣＡＲ  Ｔ細胞スイッチに結合する悪性細胞に対して細胞傷害性である、免疫応答が誘導される。
【００１３】
【図２】図２は、酵母転写因子ＧＣＮ４に由来するペプチド（７Ｐ−１４Ｐ）（ダークグレーは、ＧＣＮ４ペプチドを表す）に結合させた、アフィニティー成熟ｓｃＦｖ（ライトグレーおよびミディアムグレーは、軽鎖および重鎖を表す）についての、ＰＤＢによる１Ｐ４Ｂ結晶構造を描示する図である。
【００１４】
【図３】図３は、抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＣＬ１ＣＡＲ−ＥＣスイッチについての質量分析を示す図である。計算値：４９５３３、測定値：４９５３７．０９である。
【００１５】
【図４】図４は、ＧＣＮ４ペプチドを、抗ＣＤ１９抗体または抗ＣＤ１９抗体断片の多様な領域またはドメインにグラフトするか、または融合させた、多様な抗ＣＤ１９抗体または抗ＣＤ１９抗体断片を伴う抗ＧＣＮ４  ＣＡＲ  Ｔ細胞による細胞傷害性を示す図である。
【００１６】
【図５Ａ】図５Ａは、ＧＣＮ４ペプチドを、抗ＣＤ１９抗体または抗ＣＤ１９抗体断片の多様な領域またはドメインにグラフトするか、または融合させた、抗ＣＤ１９抗体または抗ＣＤ１９抗体断片についての、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す図である。
【００１７】
【図５Ｂ】図５Ｂは、ＧＣＮ４ペプチドを、抗ＣＤ１９抗体または抗ＣＤ１９抗体断片の多様な領域またはドメインにグラフトするか、または融合させた、抗ＣＤ１９抗体または抗ＣＤ１９抗体断片についての、還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す図である。
【００１８】
【図６】図６は、酵母ＧＣＮ４ペプチドの、抗ＣＤ１９Ｆａｂ（ＦＭＣ６３）内のグラフティング位置について描示する図である。
【００１９】
【図７】図７は、抗ＣＤ１９Ｆａｂ−ＧＣＮ４ペプチドＣＡＲ  Ｔ細胞スイッチおよび抗ＧＣＮ４  ＣＡＲ  Ｔ細胞の、異種移植腫瘍マウスモデルにおける、ｉｎ  ｖｉｖｏの有効性を示す図である。図７Ａは、非処置マウスにおける腫瘍の定量化を、処置マウスと対比して示す図である。図７Ｂは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける処置レジメン、および非処置マウスにおける、処置マウスと対比した腫瘍細胞の可視化について描示する図である。
【００２０】
【図８】図８は、抗ＧＣＮ４  ＣＡＲ  Ｔ細胞およびＣＡＲ  Ｔ細胞スイッチ（抗ＢＣＭＡ抗体−軽鎖定常ドメインにグラフトされたＧＣＮ４ペプチド）による、ＢＣＭＡ陽性細胞（ＯＰＭ２）に対する細胞傷害性を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
現行のキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）療法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞活性を制御する手段の欠如に起因して、信頼できない場合がある。本明細書では、キメラ抗原受容体Ｔ細胞を選択的に活性化および非活性化させる（deactivating）ための組成物および方法であって、現在調べられ、投与されている免疫療法より安全で多用途の免疫療法をもたらしうる組成物および方法が開示される。本明細書では、切り替え型キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）およびキメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチであって、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体が結合する第１の領域と、標的細胞上の細胞表面分子に結合する第２の領域とを有し、これにより、結合した標的細胞に対して細胞傷害性であるＣＡＲ−ＥＣからの免疫応答を刺激する、切り替え型ＣＡＲ−ＥＣおよびＣＡＲ−ＥＣスイッチが開示される。一般に、ＣＡＲ−ＥＣは、Ｔ細胞である。このように、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＣＡＲ−ＥＣ活性の「オンスイッチ」として作用しうる。活性は、スイッチの投与を低減または停止することにより「オフにする」ことができる。これらのＣＡＲ−ＥＣスイッチは、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣのほか、標的細胞が悪性細胞である、がんなどの疾患または状態を処置するための既存のＣＡＲ  Ｔ細胞と共に使用することもできる。本明細書では、このような処置を、切り替え型免疫療法（switchable  immunotherapy）と称することができ、これについての例示的な概略図による概観を図１に描示する。
【００２２】
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、標的細胞上の細胞表面分子に結合する第１の領域と、キメラ抗原受容体が結合する第２の領域とを含む。一般に、第１の領域は、ターゲティングポリペプチドである。ターゲティングポリペプチドは、標的細胞上の抗原に結合する、ターゲティング抗体または抗体断片でありうる。代替的に、または加えて、第１の領域は、非ペプチド低分子（例えば、ビタミン、代謝物）を含みうる。本明細書でキメラ抗原結合性ペプチド抗原（ＣＡＲ−ＢＰ）と称する第２の領域は、ペプチドを含む。簡略のため、本明細書では、キメラ抗原結合性ペプチド抗原という用語を、単に、ペプチド抗原と称する場合がある。一般に、ＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティングポリペプチドの末端と融合させるか、またはターゲティングポリペプチド内にグラフトする。ＣＡＲ−ＢＰを、ターゲティングポリペプチドと融合させることまたはグラフトすることは、第１の領域および第２の領域をコードする、１つまたは複数のポリヌクレオチドを、ポリヌクレオチドの発現ベクターへと、所望の順序または組合せでクローニングすることにより実行することができる。
【００２３】
疾患または状態を処置する方法であって、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与するステップを含む方法は、タイトレーション可能な応答、安全性の改善、および／またはＣＡＲ−ＥＣスイッチの投与を低減もしくは停止することによるＣＡＲ−ＥＣ活性の停止をもたらしうる。ＣＡＲ−ＥＣ活性を制御する他の手法であって、標的細胞表面分子と、ＣＡＲへの結合について競合することにより、ＣＡＲ−ＥＣ活性を「オフにする」手法とは対照的に、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチは一般に、ＣＡＲ−ＥＣ活性化因子または「オン」スイッチとして機能する。
【００２４】
本明細書ではさらに、複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチに結合することが可能であることから、１つまたは複数の種類の標的細胞（例えば、異種腫瘍の処置）の逐次的ターゲティングをもたらしうる、ユニバーサルキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むＣＡＲ−ＥＣスイッチおよびエフェクター細胞を含む、ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームが開示される。ＣＡＲは、スイッチに対する超高アフィニティー抗体または超高アフィニティー抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）を含みうる。本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成する方法は、ＣＡＲ−ＥＣ細胞活性の制御、オフターゲット反応性のタイトレーション、腫瘍崩壊症候群（ＴＬＳ）の抑止、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の緩和、ならびに／またはアフィニティー、価数、形状、長さ、および／もしくはＣＡＲ−ＥＣスイッチペプチド／ＣＡＲ−ＥＣスイッチ抗体の部位特異的グラフティング／融合を介する化学反応による、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの結合性の最適化をもたらすと有利でありうる。
【００２５】
そうでないことが明示されない限りにおいて、本明細書で使用される「スイッチ」および「ＣＡＲ−ＥＣスイッチ」という用語は、互換的に使用され、ペプチドスイッチを指す場合がある。ペプチド抗体スイッチの抗体部分は、抗体の少なくとも一部または全抗体を含みうる。例えば、ペプチド抗体スイッチの抗体部分は、重鎖の少なくとも一部、軽鎖の一部、可変領域の一部、定常領域の一部、相補性決定領域（ＣＤＲ）の一部、またはこれらの組合せを含みうる。ペプチド抗体スイッチおよび／またはハプテン抗体スイッチの抗体部分は、Ｆｃ（断片、結晶性）領域の少なくとも一部を含みうる。ペプチド抗体スイッチの抗体部分は、相補性決定領域（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３）の少なくとも一部を含みうる。ペプチド抗体スイッチの抗体部分は、Ｆａｂ（断片、抗原結合性）領域の少なくとも一部を含みうる。ペプチドスイッチは、ペプチド−Ｆａｂスイッチでありうる。
【００２６】
本方法、本キット、および本組成物についてより詳細に記載する前に、本発明は、このような方法、キット、または組成物は、当然ながら、変化しうるので、記載される特定の方法、キット、または組成物に限定されるものではないことを理解されたい。また、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲だけにより限定されるので、本明細書で使用される用語法は、特定の実施形態だけについて記載することを目的とするものであり、限定的であることを意図するものではないことも理解される。実施例は、当業者に、本発明をどのように実行し、使用するのかについての、完全な開示および記載をもたらすように示されるものであり、本発明者らが何を自らの発明であるとみなすのかについての範囲を限定するように意図するものでも、下記の実験が、実施される全ての実験または唯一の実験であることを表すように意図するものでもない。使用される数（例えば、量、温度など）に関して精度を確保するように努力がなされているが、いくらかの実験誤差および偏差が考慮されるべきである。そうでないことが指し示されない限りにおいて、部分は、重量部であり、分子量は、平均分子量であり、温度は、摂氏温度であり、圧力は、大気圧または大気圧近傍の圧力である。
【００２７】
値の範囲が提示される場合、文脈によりそうでないことが明確に指示されない限りにおいて、下限の単位の１０分の１まで、その範囲の上限と下限の間の各中間の値も具体的に開示されることが理解される。言明された範囲内の任意の言明された値または中間の値と、その言明された範囲内の他の任意の言明された値または中間の値の間の各小範囲も、本発明内に包含される。これらの小範囲の上限および下限は、独立で、範囲内に含まれる場合もあり、範囲から除外される場合もあるが、限界の一方もしくは両方が小範囲内に含まれる各範囲、または限界のいずれも含まれない各範囲もまた、本発明内に包含され、言明された範囲内の、任意の具体的に除外された限界下に置かれる。言明された範囲が、限界の一方または両方を含む場合、これらの含まれた限界の一方または両方を除外する範囲もまた、本発明内に含まれる。
【００２８】
そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書で記載される方法および材料と同様または同等な、任意の方法および材料を、本発明の実施または試行において使用しうるが、ここでは、一部の可能で好ましい方法および材料について記載される。本明細書で言及される全ての刊行物は、それらとの関連で刊行物が引用される方法および／または材料について開示および記載するように、参照により本明細書に組み込まれる。齟齬が生じる範囲では、本開示が、組み込まれた刊行物の任意の開示に優先されることが理解される。
【００２９】
本開示を読めば、当業者に明らかな通り、本明細書で記載され、例示される個々の実施形態の各々は、個別の構成要素および特徴を有するが、これらは、本発明の範囲または精神から逸脱しない限りにおいて、他の複数の実施形態のいずれかの特徴からたやすく分離することもでき、これらとたやすく組み合わせることもできる。列挙される任意の方法は、列挙される事象の順序で実行することもでき、論理的に可能な、他の任意の順序で実行することもできる。
【００３０】
本明細書内および添付の特許請求の範囲内で使用される通り、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈によりそうでないことが明確に指示されない限りにおいて、複数の指示対象を含むことに注意すべきである。したがって、例えば、「細胞（a  cell）」に対する言及は、複数のこのような細胞を含み、「ペプチド（the  peptide）」に対する言及は、１つまたは複数のペプチド、およびこれらの同等物、例えば、当業者に公知のポリペプチドなどに対する言及を含む。
【００３１】
本明細書で論じられる刊行物は、本出願の出願日以前にそれらが開示されたことだけのために提示される。本明細書内のいかなることがらも、本発明に、先行発明の理由でこのような刊行物に先行する権利がないということの容認としてはみなされないものとする。さらに、提示される公開日は、実際の公開日と異なる場合があり、これらは、独立に確認する必要がある。
【００３２】
エフェクター細胞を被験体における標的と一体とするのに使用される、ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームおよびＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成するための方法、キット、および組成物が提供される。これらの方法、キット、および組成物は、多くの疾患において治療のために使用される。例えば、異種腫瘍および血液細胞悪性腫瘍（例えば、急性リンパ芽球性白血病および慢性リンパ性白血病）は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ連結の長さ、価数、および配向性のほか、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの細胞ターゲティング部分が最適化される場合、ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームで、より効果的に処置することができる。異種腫瘍も、１つを超える腫瘍抗原を標的とする、複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチで、より効果的に処置することができる。下記でより完全に記載される、組成物および方法についての詳細を読めば、当業者には、本発明の利点および特徴が明らかである。
【００３３】
本明細書では、本発明の好ましい実施形態について示し記載しているが、当業者には、このような実施形態は、例だけを目的とするものであることが明らかである。今や、当業者は、本発明から逸脱せずに、多数の変化、変更、および置き換えに想到する。本発明を実施するには、本明細書で記載される、本発明の実施形態に対する多様な代替物を援用しうることを理解されたい。以下の特許請求の範囲により、本発明の範囲が規定され、これにより、これらの特許請求の範囲およびそれらの同等物の範囲内の方法および構造が包含されることを意図する。
【００３４】
ＩＡ．ペプチドスイッチ
本明細書では、エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体に結合するペプチド抗原と、標的上の細胞表面分子に結合するターゲティング部分とを含むキメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチが開示される。ターゲティング部分は、細胞表面分子に結合するターゲティングペプチドを含む、ターゲティングポリペプチドでありうる。ターゲティング部分は、ターゲティングペプチドを含む、ターゲティング抗体または抗体断片であることが可能であり、この場合、ターゲティングペプチドは、ターゲティング抗体または抗体断片の抗原結合性部位である。ターゲティングペプチドは、抗体断片の少なくとも一部であることが可能であり、細胞表面分子は、抗原でありうる。ターゲティング部分は、１つまたは複数の抗原を認識し、かつ／またはこれらに結合する、１つまたは複数のペプチドを含みうる。ターゲティング部分は、１つの抗原だけを認識し、かつ／またはこれに結合する、１つまたは複数のペプチドを含みうる。ペプチド抗原は、抗原を認識し、かつ／またはこれに結合する、抗体または抗体断片を含みえない。
【００３５】
本明細書ではさらに、エフェクター細胞上のＣＡＲに結合するペプチド抗原（ＣＡＲ−ＢＰ）と、標的細胞上の細胞表面分子に結合するターゲティングポリペプチドとを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチが開示される。ペプチド抗原は、ターゲティングポリペプチドの末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ターゲティングポリペプチドへと（例えば、ターゲティングポリペプチドの選択されたアミノ酸の間に）グラフトすることができる。ターゲティングポリペプチドは、ペプチド抗原の末端と融合させることができる。ターゲティングポリペプチドは、ペプチド抗原へと（例えば、ペプチド抗原の選択されたアミノ酸の間に）グラフトすることができる。
【００３６】
本明細書では、エフェクター細胞上のＣＡＲに結合するペプチド抗原（ＣＡＲ−ＢＰ）と、標的上の抗原に結合する、ターゲティング抗体または抗体断片とを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチが開示される。ターゲティング抗体または抗体断片は、免疫グロブリン、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびｓｃＦｖから選択することができる。ターゲティング抗体または抗体断片は、軽鎖を含みうる。ターゲティング抗体または抗体断片は、重鎖を含みうる。
【００３７】
ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片の軽鎖のＮ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片の軽鎖のＣ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片の重鎖のＮ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片の重鎖のＣ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片のＶＬドメインのＮ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片のＶＨドメインのＮ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片のＣＬドメインのＣ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片のＦｃドメインのＣ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ＩｇＧのＶＬドメインのＮ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ＩｇＧのＶＨドメインのＮ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ＩｇＧのＣＬドメインのＣ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ＩｇＧのＦｃドメインのＣ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ＦａｂのＶＬドメインのＮ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ＦａｂのＶＨドメインのＮ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ＦａｂのＣＬドメインのＣ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ＦａｂのＣＨ１ドメインのＣ末端と融合させることができる。
【００３８】
ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片の内部部位へと（例えば、ターゲティング抗体または抗体断片の選択されたアミノ酸の間に）グラフトすることができる。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片の重鎖にグラフトすることができる。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片の軽鎖にグラフトすることができる。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片の定常ドメイン／領域にグラフトすることができる。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片の可変ドメイン／領域にグラフトすることができる。ペプチド抗原は、Ｆａｂの内部部位にグラフトすることができる。ペプチド抗原は、免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ）の内部部位にグラフトすることができる。ペプチド抗原は、ＣＬドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、およびヒンジドメインから選択される、ターゲティング抗体またはその断片のドメインにグラフトすることができる。ペプチド抗原は、ＣＬドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、およびヒンジドメインから選択される、抗体またはその断片の２つのドメインの間にグラフトすることができ、この場合、２つのドメインは隣接している。ペプチド抗原は、抗体またはその断片のＣＬドメインにグラフトすることができる。ペプチド抗原は、抗体またはその断片のＣＨ１ドメインにグラフトすることができる。ペプチド抗原は、抗体またはその断片のヒンジドメインにグラフトすることができる。ペプチド抗原は、抗体またはその断片のループにグラフトすることができる。ペプチド抗原は、抗体またはその断片のＣＬドメインループにグラフトすることができる。
【００３９】
ＣＡＲ−ＢＰは、抗体または抗体断片のＣ末端にグラフトすることができ、このため、キメラ抗原受容体と標的との間の距離は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのサイズに依存して、実質的に異なりうる（ｓｃＦｖでは約４０Å、Ｆａｂでは７０Å、およびＩｇＧでは１２０Å）。大きな距離は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける有効性に負の影響を及ぼしうるが、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける全長抗体の貯留時間の延長には優れる場合がある。
【００４０】
ＣＡＲ−ＢＰはさらに、リンカーを含みうる。リンカーにより、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの可撓性、標的細胞上のＣＡＲ−ＥＣの相互作用または効果を促進するのに最適な長さまたは形状をもたらすことができる。ＣＡＲ−ＢＰはさらに、１つまたは複数のリンカーを含みうる。ＣＡＲ−ＢＰは、２つのリンカーを含みうる。リンカーは、ペプチドを含みうる。リンカーは、少なくとも約１、少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、または少なくとも約１０アミノ酸の長さでありうる。１つまたは複数のリンカーは、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約７０、約８０、約９０、または約１００のアミノ酸を含みうる。リンカーは、ＣＡＲ−ＢＰを、ターゲティングポリペプチドにグラフトするように、ＣＡＲ−ＢＰのＮ末端またはＣ末端に配置することができる。第１のリンカーは、ＣＡＲ−ＢＰのＮ末端と融合させることができ、第２のリンカーは、ＣＡＲ−ＢＰのＣ末端と融合させることができる。リンカーは、配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号４０）［配列中、ｎは、１、２、３、４、５、またはこれを超えうる］を含みうる。リンカーは、配列（ＧＧＳ）ｎ（配列番号４０）［配列中、ｎは、１、２、３、４、５、またはこれを超えうる］を構成しうる。ＣＡＲ−ＢＰは、ＣＡＲ−ＢＰの一方の端部においてリンカーを伴うターゲティングポリペプチドの内部部位にグラフトすることができる。リンカーは、配列番号４０〜４４から選択される配列を含みうる。
【００４１】
ペプチド抗原
ペプチド抗原（ＣＡＲ−ＢＰ）は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が結合するペプチドでありうる。ペプチド抗原は、ペプチド一般と比べて、タンパク質分解に対する安定性は高く、ヒトにおける免疫原性は低くすることができる。ＣＡＲ−ＢＰは、ホルモン、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、細胞接着分子、シグナル伝達ペプチド、受容体、細胞表面ペプチド、およびこれらの断片から選択することができる。ＣＡＲ−ＢＰは、ペプトイドでありうる。ＣＡＲ−ＢＰは、ペプチド核酸（ＰＮＡ）でありうる。ＣＡＲ−ＢＰは、リガンドまたはその断片でありうる。リガンドは、ホルモン性リガンドでありうる。リガンドは、ペプチドリガンドでありうる。ＣＡＲ−ＢＰは、環状ペプチドでありうる。ＣＡＲ−ＢＰは、直鎖状ペプチドでありうる。ＣＡＲ−ＢＰの長さは、約２〜約１０、約１０〜約２０、約２０〜約３０、約３０〜約４０、約４０〜約５０、約５０〜約６０、約６０〜約７０、約７０〜約８０、および約８０〜約９０アミノ酸の間でありうる。ＣＡＲ−ＢＰは、抗原でありうる。ＣＡＲ−ＢＰは、エピトープでありうる。ＣＡＲ−ＢＰは、非直鎖状エピトープでありうる。ＣＡＲ−ＢＰはさらに、第２のペプチドを含みうる。
【００４２】
ペプチド抗原は、抗体または抗体断片を含みえない。ペプチド抗原は、抗体または抗体断片の１０個未満のアミノ酸を含みうる。ペプチド抗原は、抗体または抗体断片の１２個未満のアミノ酸を含みうる。ペプチド抗原は、抗体または抗体断片の１５個未満のアミノ酸を含みうる。ペプチド抗原は、抗体または抗体断片の２０個未満のアミノ酸を含みうる。ペプチド抗原は、抗体または抗体断片の２２個未満のアミノ酸を含みうる。ペプチド抗原は、抗体または抗体断片の３０個未満のアミノ酸を含みうる。ペプチド抗原は、抗体または抗体断片のパラトープを含みえない。
【００４３】
本明細書では、ターゲティング部分とペプチド抗原とを含む、キメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチであって、ターゲティング部分が、ターゲティングポリペプチドであるスイッチが開示される。ターゲティングポリペプチドは、ターゲティング抗体または抗体断片を含みうる。ターゲティング抗体または抗体断片は、可変ドメインを含みうる。可変ドメインは、ＶＨドメインおよびＶＬドメインから選択することができる。ペプチド抗原は、ＶＨドメインのＮ末端またはその近傍に配置することができない。ペプチド抗原は、ＶＬドメインのＮ末端またはその近傍に配置することができない。
【００４４】
ペプチド抗原は、天然に存在しないペプチドを含みうる。ペプチド抗原は、合成ペプチドを含みうる。ペプチド抗原は、非動物ペプチド（例えば、動物では発現しないペプチド）を含みうる。ペプチド抗原は、非哺乳動物ペプチドを含みうる。ペプチド抗原は、非ヒトペプチドを含みうる。ペプチドは、植物、酵母、細菌、爬虫類、鳥類、または昆虫に由来するペプチドを含みうる。
【００４５】
ペプチド抗原は、ｍｙｃタグを含みうる。ペプチド抗原は、Ｈｉｓタグを含みうる。ペプチド抗原は、ＨＡタグを含みうる。ペプチド抗原は、ペリジニンクロロフィルタンパク質複合体を含みうる。ペプチド抗原は、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を含みうる。ペプチド抗原は、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）を含みうる。ペプチド抗原は、フィコエリトリン（ＰＥ）を含みうる。ペプチド抗原は、ストレプトアビジンを含みうる。ペプチド抗原は、アビジンを含みうる。ペプチド抗原は、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を含みうる。ペプチド抗原は、アルカリホスファターゼを含みうる。ペプチド抗原は、グルコースオキシダーゼを含みうる。ペプチド抗原は、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を含みうる。ペプチド抗原は、マルトース結合性タンパク質を含みうる。ペプチド抗原は、非限定的な例によれば、ｃ−ｍｙｃタグ、ポリヒスチジンタグ、Ｖ５、ＶＳＶＧ、ｓｏｆｔａｇ  １、ｓｏｆｔａｇ  ３、ｅｘｐｒｅｓｓタグ、Ｓタグ、パルミトイル化、ニトロシル化、ＳＵＭＯタグ、チオレドキシン、ポリ（ＮＡＮＰ）、ポリＡｒｇ、カルモジュリン結合性タンパク質、ＰｕｒＦ断片、ケトステロイドイソメラーゼ、ＰａＰ３．３０、ＴＡＦ１２ヒストンフォールドドメイン、ＦＫＢＰタグ、ＳＮＡＰタグ、Ｈａｌｏタグ、ＲＮアーゼＩに由来するペプチドでありうる。ペプチド抗原は、プロテアーゼ切断部位を含みうる。プロテアーゼ切断部位は、トロンビン、第Ｘａ因子、ＴＥＶプロテアーゼ、またはエンテロキナーゼにより認識されうる。
【００４６】
ペプチド抗原は、小型の直鎖状親水性ペプチドでありうる。小型の直鎖状親水性ペプチドは、リンカーを含みうる。小型の直鎖状親水性ペプチドは、親水性標的ペプチド（ＨＴＰ）でありうる。小型の直鎖状親水性ペプチドは、配列ＧＧＧＧＳＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号５）を含みうる。小型の直鎖状親水性ペプチドは、配列ＧＧＧＧＳＤＹＫＤＤＤＤＫＰ（配列番号６）を含みうる。小型の直鎖状親水性ペプチドは、配列ＧＧＧＧＳＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号５）から本質的になりうる。小型の直鎖状親水性ペプチドは、配列ＧＧＧＧＳＤＹＫＤＤＤＤＫＰ（配列番号６）から本質的になりうる。小型の直鎖状親水性ペプチドは、配列番号５または６と少なくとも約５０％相同でありうる。小型の直鎖状親水性ペプチドは、配列番号５または６と少なくとも約６０％相同でありうる。小型の直鎖状親水性ペプチドは、配列番号５または６と少なくとも約７０％相同でありうる。小型の直鎖状親水性ペプチドは、配列番号５または６と少なくとも約８０％相同でありうる。小型の直鎖状親水性ペプチドは、配列番号５または６と少なくとも約８５％相同でありうる。小型の直鎖状親水性ペプチドは、配列番号５または６と少なくとも約９０％相同でありうる。小型の直鎖状親水性ペプチドは、当技術分野で公知の他のペプチドと比べて、非特異的結合が低減されうる。小型の直鎖状親水性ペプチドは、本明細書で開示される他のペプチドと比べて、非特異的結合が低減され、融合タンパク質の不安定性が低減されうる。ペプチド抗原は、ＦＬＡＧ（登録商標）タグ（配列番号７）またはその誘導体もしくは相同体を含みうる。
【００４７】
ペプチドは、天然に存在するペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ペプチドは、ヒトペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ペプチドは、チンパンジー、サル、ラット、マウス、鳥類、魚類、ブタ、ウマ、ウシ、ヤギ、ニワトリ、ウサギ、およびモルモットから選択される動物において発現させたペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ペプチドは、哺乳動物ペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ペプチドは、非哺乳動物ペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ペプチドは、植物において発現させたペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ペプチドは、細菌において発現させたペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ペプチドは、原核生物ペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ペプチドは、真核生物ペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ペプチドは、酵母によって発現されたペプチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ペプチド抗原は、酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドまたはその誘導体もしくは相同体を含みうる。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列ＲＭＫＱＬＥＰＫＶＥＥＬＬＰＫＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬＶＧＥＲ（配列番号２）を含みうる。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ（配列番号３）を含みうる。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列ＲＭＫＱＬＥＰＫＶＥＥＬＬＰＫＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬＶＧＥＲ（配列番号２）から本質的になりうる。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ（配列番号３）から本質的になりうる。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列番号２の一部を含みうる。配列番号２の一部は、少なくとも４アミノ酸長でありうる。配列番号２の一部は、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、または約１３アミノ酸長でありうる。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列番号２または３と少なくとも約５０％相同でありうる。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列番号２または３と少なくとも約６０％相同でありうる。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列番号２または３と少なくとも約７０％相同でありうる。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列番号２または３と少なくとも約８０％相同でありうる。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列番号２または３と少なくとも約８５％相同でありうる。酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドは、配列番号２または３と少なくとも約９０％相同でありうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、酵母ＧＣＮ４ペプチドおよび１つまたは複数のリンカーを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、配列番号４を含みうる。
【００４８】
ターゲティング部分
ターゲティング部分は、標的上の細胞表面分子に結合しうる。細胞表面分子は、抗原を含みうる。細胞表面分子は、タンパク質、脂質部分、糖タンパク質、糖脂質、炭水化物、多糖、核酸、ＭＨＣ結合ペプチド、またはこれらの組合せから選択することができる。細胞表面分子は、細菌、ウイルス、および他の微生物の部分（例えば、コート、莢膜、細胞壁、鞭毛、線毛、および毒素）を含みうる。細胞表面分子は、標的細胞に発現させることができる。細胞表面分子は、標的細胞に発現させることができない。非限定的な例として述べると、細胞表面分子は、標的細胞ではない細胞が発現させるリガンド、および標的細胞または標的細胞の細胞表面分子が結合するリガンドでありうる。非限定的な例によれば、細胞表面分子はまた、標的細胞の細胞表面または細胞表面受容体に結合させた、毒素、外因性分子、またはウイルスタンパク質でもありうる。
【００４９】
ターゲティングポリペプチドは、ターゲティング抗体または抗体断片でありうる。ターゲティング抗体または抗体断片は、免疫グロブリン（Ｉｇ）でありうる。免疫グロブリンは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、その断片、またはその修飾物（modification）から選択することができる。免疫グロブリンは、ＩｇＧでありうる。ＩｇＧは、ＩｇＧ１でありうる。ＩｇＧは、ＩｇＧ２でありうる。ＩｇＧは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチに結合する内因性Ｔ細胞ＦｃＲをモジュレートするための、１カ所または複数カ所のＦｃ変異を有しうる。ＩｇＧは、ＦｃＲ陽性細胞のＦｃＲへのＦｃ結合能を除去するための、１カ所または複数カ所のＦｃ変異を有しうる。Ｆｃ結合能を除去することにより、ＣＡＲ−ＥＣが、ＦｃＲ陽性細胞へと架橋される可能性を低減することができ、この場合、ＣＡＲ−ＥＣが、ＦｃＲ陽性細胞へと架橋されれば、標的細胞の非存在下で、ＣＡＲ−ＥＣが活性化する。ＣＡＲ−ＥＣスイッチに結合する内因性Ｔ細胞ＦｃＲをモジュレートすること自体、有効でないかまたは望ましくない免疫応答を低減しうる。１カ所または複数カ所のＦｃ変異により、グリコシル化部位を除去することができる。１カ所または複数カ所のＦｃ変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｎ２９７Ｑ、およびこれらの任意の組合せから選択することができる。１カ所または複数カ所のＦｃ変異は、ＩｇＧ１内にありうる。１カ所または複数カ所のＩｇＧ１内のＦｃ変異は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、またはこれらの両方でありうる。代替的に、または加えて、１カ所または複数カ所のＩｇＧ１内のＦｃ変異は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、またはこれらの両方でありうる。代替的に、または加えて、１カ所または複数カ所のＩｇＧ１内のＦｃ変異は、Ｎ２９７Ａでありうる。代替的に、または加えて、１カ所または複数カ所の変異は、ＩｇＧ２内にありうる。１カ所または複数カ所のＩｇＧ２内のＦｃ変異は、Ｖ２３４Ａ、Ｖ２３７Ａ、またはこれらの両方でありうる。
【００５０】
ターゲティング抗体または抗体断片は、Ｆｃヌル免疫グロブリンまたはその断片でありうる。
【００５１】
本明細書で使用される「抗体断片」という用語は、全長形態以外の、抗体の任意の形態を指す。本明細書の抗体断片は、全長抗体内に存在する小型の構成要素である抗体、および操作された抗体を含む。抗体断片は、Ｆｖ、Ｆｃ、Ｆａｂ、および（Ｆａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディー、トリアボディー、テトラボディー、二官能性ハイブリッド抗体、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、ＣＤＲの組合せ、可変領域、フレームワーク領域、定常領域、重鎖、軽鎖、選択的な足場非抗体分子（alternative  scaffold  non-antibody  molecule）、および二重特異性抗体を含むがこれらに限定されない。そうでないことが具体的に言及されない限りにおいて、「「抗体（antibody）」または「抗体（antibodies）」という用語を使用する言明および特許請求の範囲は具体的に、「抗体断片（antibody  fragment）」および抗体断片（antibody  fragments）を含みうる。
【００５２】
ターゲティング抗体断片は、ヒト抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、ヒト操作抗体、非ヒト抗体、および／またはキメラ抗体でありうる。非ヒト抗体は、親の非ヒト親抗体の特異性およびアフィニティーを保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減するように、ヒト化することができる。キメラ抗体とは、元は別個の抗体をコードした、２つまたはこれを超える抗体遺伝子をつなぐことにより創出される抗体を指す場合がある。キメラ抗体は、第１の抗体に由来する少なくとも１つのアミノ酸と、第２の抗体に由来する少なくとも１つのアミノ酸とを含むことが可能であり、ここで、第１の抗体と第２の抗体とは異なる。抗体または抗体断片の少なくとも一部は、ウシ種、ヒト種、またはネズミ種に由来しうる。抗体または抗体断片の少なくとも一部は、ラット、ヤギ、モルモット、またはウサギに由来しうる。抗体または抗体断片の少なくとも一部は、ヒトに由来しうる。抗体または抗体断片の少なくとも一部は、カニクイザルに由来しうる。
【００５３】
ターゲティング抗体または抗体断片は、哺乳動物、鳥類、魚類、両生動物、爬虫類に由来する抗体または抗体断片に基づきうるか、またはこれに由来しうる。哺乳動物は、肉食動物、齧歯類、ゾウ、有袋類、ウサギ、コウモリ、霊長類、アザラシ、アリクイ、クジラ目動物、奇蹄目動物、および偶蹄目動物を含むがこれらに限定されない。哺乳動物は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウシ、ウマ、ヤギ、またはブタでありうる。
【００５４】
ターゲティング抗体または抗体断片は、非限定的な例によれば、ＣＤ１９、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ−１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＢＣＭＡまたはこれらの断片から選択される抗原を標的としうる。抗原は、野生型抗原を含みうる。抗原は、１カ所または複数カ所の変異を含みうる。
【００５５】
ターゲティング抗体または抗体断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片でありうる。ターゲティングポリペプチドは、抗ＣＤ２２抗体でありうる。ターゲティングポリペプチドは、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片でありうる。ターゲティングポリペプチドは、抗ＣＳ１抗体またはその断片でありうる。ターゲティングポリペプチドは、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体またはその断片でありうる。ターゲティングポリペプチドは、抗Ｈｅｒ２抗体またはその断片でありうる。ターゲティングポリペプチドは、抗ＣＤ２０抗体または抗体断片を含みうる。ターゲティングポリペプチドは、リツキシマブを含みうる。ターゲティングポリペプチドは、抗ＥＧＦＲ抗体または抗体断片を含みうる。ターゲティングポリペプチドは、抗ＣＥＡ抗体または抗体断片を含みうる。ターゲティングポリペプチドは、抗ＣＬＬ−１抗体または抗体断片を含みうる。ターゲティングポリペプチドは、抗ＣＤ３３抗体または抗体断片を含みうる。ターゲティングポリペプチドは、抗ＥｐＣＡＭ抗体またはその断片を含みえない。
【００５６】
ターゲティング抗体または抗体断片は、任意の市販の抗体から選択することができる。ターゲティング抗体または抗体断片は、アドゥ−トラスツズマブエムタンシン、アレムツズマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ゲムツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、イブリツモマブチウキセタン、パニツムマブ、セツキシマブ、Ｅｒｂｉｔｕｘ、リツキシマブ、トラスツズマブ、およびこれらの断片から選択することができる。
【００５７】
ターゲティング抗体または抗体断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片を含みうる。ターゲティング抗体またはその断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖を含みうる。抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖は、配列番号８に基づくか、またはこれに由来するヌクレオチド配列によりコードされうる。ヌクレオチド配列は、配列番号８と約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、または約２％相同でありうる。ターゲティング抗体またはその断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖を含みうる。抗ＣＤ１９抗体またはその断片の重鎖は、配列番号９に基づくか、またはこれに由来する配列によりコードされうる。ヌクレオチド配列は、配列番号９と約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、または約２％相同でありうる。
【００５８】
ターゲティング抗体または抗体断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片を含みうる。ターゲティング抗体またはその断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片の軽鎖を含みうる。抗ＣＤ１９抗体または断片の軽鎖は、配列番号２７に基づくか、またはこれに由来するアミノ酸配列を含みうる。アミノ酸配列は、配列番号２７と約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、または約２％相同でありうる。ターゲティング抗体またはその断片は、抗ＣＤ１９またはその断片の重鎖を含みうる。ターゲティング抗体またはその断片は、抗ＣＤ１９  ＩｇＧの重鎖を含みうる。抗ＣＤ１９  ＩｇＧの重鎖は、配列番号２８に基づくか、またはこれに由来する配列を含みうる。アミノ酸配列は、配列番号２８と約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、または約２％相同でありうる。ターゲティング抗体またはその断片は、抗ＣＤ１９  Ｆａｂの重鎖を含みうる。抗ＣＤ１９  Ｆａｂの重鎖は、配列番号２９に基づくか、またはこれに由来する配列を含みうる。アミノ酸配列は、配列番号２９と約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、または約２％相同でありうる。
【００５９】
ターゲティング抗体または抗体断片は、配列番号８〜２０から選択されるヌクレオチド配列を含みうる。ターゲティングポリペプチドは、配列番号８〜２０から選択されるヌクレオチドに基づきうるか、またはこれに由来しうる。ターゲティング抗体または抗体断片、配列番号２１〜２９から選択されるアミノ酸配列を含みうる。ターゲティングポリペプチドは、配列番号２１〜２９から選択されるアミノ酸配列に基づきうるか、またはこれに由来しうる。
【００６０】
本明細書では、ペプチド抗原と、標的細胞上の細胞表面分子に結合するターゲティング部分とを含む、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチが開示される。一般に、エフェクター細胞および標的細胞をＣＡＲ−ＥＣスイッチ構築物へと結合させることにより、標的細胞を、エフェクター細胞と近接させ、これにより、エフェクター細胞の活性が標的細胞に対して効果を有するのに十分な程度の近傍へと近接させる。例えば、Ｔ細胞および標的細胞を、ＣＡＲ−ＥＣスイッチに結合させると、Ｔ細胞は、標的細胞に対して細胞傷害性効果を有する免疫応答をもたらしうる。
【００６１】
ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、複数の標的細胞と相互作用しうる。標的細胞は、感染細胞でありうる。標的細胞は、病原体に感染した細胞でありうる。標的細胞は、罹患細胞でありうる。標的細胞は、遺伝子改変細胞でありうる。標的細胞は、宿主細胞でありえない。標的細胞は、侵入生物（例えば、酵母、蠕虫、細菌、真菌）に由来しうる。本明細書ではさらに、非細胞標的上の分子と相互作用するＣＡＲ−ＥＣスイッチが開示される。非細胞標的は、ウイルスまたはその一部でありうる。非細胞標的は、細胞の断片でありうる。非細胞標的は、細胞外マトリックスの構成要素またはタンパク質でありうる。
【００６２】
標的細胞は、組織に由来しうる。組織は、脳、食道、乳房、結腸、肺、神経膠、卵巣、子宮、精巣、前立腺、消化管、膀胱、肝臓、胸腺、骨、および皮膚から選択することができる。標的細胞は、１つまたは複数の内分泌腺に由来しうる。代替的に、または加えて、標的細胞は、１つまたは複数の内分泌腺に由来しうる。内分泌腺は、リンパ腺、下垂体、甲状腺、副甲状腺、膵臓、性腺、または松果腺でありうる。
【００６３】
標的細胞は、幹細胞、多能性細胞、造血幹細胞、または前駆細胞から選択することができる。標的細胞は、循環細胞でありうる。標的細胞は、免疫細胞でありうる。
【００６４】
標的細胞は、がん幹細胞でありうる。標的細胞は、がん細胞でありうる。がん細胞は、組織に由来しうる。組織は、非限定的な例として述べると、脳、食道、乳房、結腸、肺、神経膠、卵巣、子宮、睾丸、前立腺、消化管、膀胱、肝臓、甲状腺、および皮膚から選択することができる。がん細胞は、骨に由来しうる。がん細胞は、血液に由来しうる。がん細胞は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、単球、血小板、白血球、好中球、好酸球、好塩基球、リンパ球、造血幹細胞、または内皮前駆細胞（endothelial  cell  progenitor）に由来しうる。がん細胞は、ＣＤ１９陽性Ｂリンパ球に由来しうる。がん細胞は、幹細胞に由来しうる。がん細胞は、多能性細胞に由来しうる。がん細胞は、１つまたは複数の内分泌腺に由来しうる。内分泌腺は、リンパ腺、下垂体、甲状腺、副甲状腺、膵臓、性腺、または松果腺でありうる。
【００６５】
がん細胞は、ＣＤ１９陽性細胞でありうる。がん細胞は、ＣＤ１９陽性Ｂリンパ球でありうる。がん細胞は、Ｈｅｒ２陽性細胞でありうる。Ｈｅｒ２陽性細胞は、Ｈｅｒ２陽性乳がん細胞でありうる。標的細胞は、ＢＣＭＡ陽性細胞でありうる。がん細胞は、ＢＣＭＡ陽性多発性骨髄腫細胞でありうる。がん細胞は、ＣＳ１陽性細胞でありうる。ＣＳ１陽性細胞は、多発性骨髄腫細胞でありうる。がん細胞は、ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性細胞でありうる。がん細胞は、ＥＧＦＲｖＩＩＩ陽性神経膠芽細胞腫細胞でありうる。がん細胞は、ＣＤ２０陽性細胞でありうる。がん細胞は、ＣＤ２２陽性細胞でありうる。
【００６６】
細胞表面分子は、抗原でありうる。抗原は、細胞上の表面抗原または細胞表面マーカーの少なくとも一部でありうる。抗原は、細胞上の受容体または共受容体でありうる。抗原とは、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）を結合させ、Ｔ細胞受容体へと提示されうる、分子または分子断片を指す場合がある。「抗原」という用語はまた、免疫原も指す場合がある。免疫原は、それ自体で被験体に注射されると、適応免疫応答を引き起こしうる。免疫原は、それ自体で免疫応答を誘導しうる。抗原は、スーパー抗原、Ｔ細胞依存性抗原、またはＴ細胞非依存性抗原でありうる。抗原は、外因性抗原でありうる。外因性抗原は、外界から、例えば、吸入、摂取、または注射により、体内に侵入した抗原であることが典型的である。一部の抗原は、外因性抗原として生じ、後に内因性となりうる（例えば、細胞内ウイルス）。抗原は、内因性抗原でありうる。内因性抗原は、正常な細胞代謝の結果として、または病原体の感染（例えば、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、寄生虫感染）のために、細胞内に発生した抗原でありうる。抗原は、自己抗原でありうる。自己抗原は、特異的自己免疫疾患を患う患者の免疫系により認識される、正常タンパク質またはタンパク質の複合体（および、場合によって、ＤＮＡまたはＲＮＡ）でありうる。これらの抗原は、正常な状態下では、免疫系の標的となるべきではないが、これらの患者においては、遺伝的因子および／または環境因子に起因して、このような抗原に対する正常な免疫寛容が存在しない。抗原は、状態または疾患に起因して、存在するか、または過剰発現し得る。状態または疾患は、がんまたは白血病でありうる。状態は、炎症性疾患または状態でありうる。状態または疾患は、代謝性疾患でありうる。状態は、遺伝性障害でありうる。
【００６７】
細胞表面分子は、腫瘍抗原と呼ばれている抗原でありうる。腫瘍抗原またはネオ抗原は、腫瘍細胞の表面上のＭＨＣ  Ｉ分子またはＭＨＣ  ＩＩ分子により提示される抗原でありうる。これらの抗原は、場合によって、腫瘍細胞により提示される場合があるが、正常細胞によっては提示されない。この場合、これらは、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）と呼ばれ、一般に、腫瘍特異的変異から生じる。腫瘍細胞および正常な細胞により提示される抗原がより一般的であり、これらは、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）と呼ばれる。これらの抗原を認識する細胞傷害性Ｔリンパ球は、それらが増殖または転移する前に、腫瘍細胞を破壊することが可能でありうる。また、腫瘍抗原は、腫瘍の表面に、例えば、変異受容体の形態で存在する場合もあり、この場合、それらは、Ｂ細胞により認識されうる。そうでないことが明示されない限りにおいて、本明細書では、「腫瘍抗原」、「腫瘍特異的抗原」、および「腫瘍関連抗原」という用語は、互換的に使用される。
【００６８】
細胞表面分子は、受容体でありうる。受容体は、細胞外受容体でありうる。受容体は、細胞表面受容体でありうる。非限定的な例として述べると、受容体は、ホルモン、神経伝達物質、サイトカイン、成長因子、または細胞認識分子に結合しうる。受容体は、膜貫通受容体でありうる。受容体は、酵素連結受容体でありうる。受容体は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）でありうる。受容体は、成長因子受容体でありうる。非限定的な例として述べると、成長因子受容体は、表皮成長因子受容体、線維芽細胞成長因子受容体、血小板由来成長因子受容体、神経成長因子受容体、形質転換成長因子受容体、骨形成タンパク質成長因子受容体、肝細胞成長因子受容体、血管内皮成長因子受容体、幹細胞因子受容体、インスリン成長因子受容体、ソマトメジン受容体、エリスロポエチン受容体および相同体、およびこれらの断片から選択することができる。受容体は、ホルモン受容体でありうる。受容体は、インスリン受容体でありうる。非限定的な例として述べると、受容体は、エイコサノイド受容体、プロスタグランジン受容体、エストロゲン受容体、濾胞刺激ホルモン受容体、プロゲステロン受容体、成長ホルモン受容体、ゴナドトロピン放出ホルモン受容体、これらの相同体、およびこれらの断片から選択することができる。受容体は、アドレナリン作動性受容体でありうる。受容体は、インテグリンでありうる。受容体は、Ｅｐｈ受容体でありうる。受容体は、黄体形成ホルモン受容体でありうる。細胞表面分子は、黄体形成ホルモン受容体と少なくとも約５０％相同でありうる。受容体は、免疫受容体でありうる。非限定的な例として述べると、免疫受容体は、パターン認識受容体、ｔｏｌｌ様受容体、ＮＯＤ様受容体、キラー活性化受容体（killer  activated  receptor）、キラー阻害受容体（killer  inhibitor  receptor）、Ｆｃ受容体、Ｂ細胞受容体、補体受容体、ケモカイン受容体およびサイトカイン受容体から選択することができる。非限定的な例として述べると、サイトカイン受容体は、インターロイキン受容体、インターフェロン受容体、形質転換成長因子受容体、腫瘍壊死因子受容体、コロニー刺激因子受容体、これらの相同体、およびこれらの断片から選択することができる。受容体は、受容体キナーゼでありうる。受容体キナーゼは、チロシンキナーゼ受容体でありうる。受容体キナーゼは、セリンキナーゼ受容体でありうる。受容体キナーゼは、トレオニンキナーゼ受容体でありうる。非限定的な例として述べると、受容体キナーゼは、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＰＩ３Ｋ、タンパク質キナーゼＡ、タンパク質キナーゼＢ、タンパク質キナーゼＣ、ＡＫＴ、ＡＭＰＫ、ホスホリパーゼ、これらの相同体、およびこれらの断片から選択されるシグナル伝達タンパク質を活性化させうる。受容体キナーゼは、ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナル伝達経路を活性化させうる。受容体キナーゼは、Ｊａｋ、Ｓｔａｔ、またはＳｍａｄを活性化させうる。
【００６９】
細胞表面分子は、非受容体性細胞表面タンパク質でありうる。細胞表面分子は、分化クラスタータンパク質でありうる。非限定的な例として述べると、細胞表面分子は、ＣＤ３４、ＣＤ３１、ＣＤ１１７、ＣＤ４５、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１５、ＣＤ２４、ＣＤ１１４、ＣＤ１８２、ＣＤ１４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ９１、ＣＤ１６、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ８、ＣＤ３８、ＣＤ２２、ＣＤ６１、ＣＤ５６、ＣＤ３０、ＣＤ１３、ＣＤ３３、これらの断片、およびこれらの相同体から選択することができる。
【００７０】
細胞表面分子は、ペプチドを含まない分子でありうる。細胞表面分子は、脂質を含みうる。細胞表面分子は、脂質部分または脂質基を含みうる。脂質部分は、ステロールを含みうる。脂質部分は、脂肪酸を含みうる。抗原は、糖脂質を含みうる。細胞表面分子は、炭水化物を含みうる。
【００７１】
本明細書では、（ａ）酵母転写因子ペプチドに由来するペプチドを含むペプチド抗原に結合するキメラ抗原受容体と、（ｂ）ターゲティングポリペプチドとを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチが開示される。酵母転写因子ペプチドは、ＧＣＮ４ペプチドでありうる。ターゲティングポリペプチドは、ターゲティング抗体または抗体断片を含みうる。ターゲティング抗体または抗体断片は、抗体の重鎖を含みうる。ターゲティング抗体または抗体断片は、抗体の軽鎖を含みうる。ターゲティング抗体または抗体断片は、抗体のＦａｂを含みうる。ターゲティング抗体または抗体断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片を含みうる。ターゲティング抗体または抗体断片は、抗Ｈｅｒ２抗体またはその断片を含みうる。ターゲティング抗体または抗体断片は、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、抗ＣＤ３３抗体、およびこれらの断片から選択することができる。
【００７２】
本明細書ではさらに、（ａ）親水性標的ペプチド（ＨＴＰ）タグを含む、ＣＡＲ結合性領域と、（ｂ）ターゲティングポリペプチドとを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチが開示される。ターゲティングポリペプチドは、ターゲティング抗体または抗体断片を含みうる。ターゲティング抗体または抗体断片は、抗体の重鎖を含みうる。ターゲティング抗体または抗体断片は、抗体の軽鎖を含みうる。ターゲティング抗体または抗体断片は、抗体のＦａｂを含みうる。ターゲティング抗体または抗体断片は、抗ＣＤ１９抗体またはその断片を含みうる。ターゲティング抗体または抗体断片は、抗Ｈｅｒ２抗体またはその断片を含みうる。ターゲティング抗体または抗体断片は、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、抗ＣＤ３３抗体、およびこれらの断片から選択することができる。
【００７３】
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、および配列番号３８から選択される重鎖を含みうる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、および配列番号３８から選択される配列と少なくとも５０％相同な重鎖を含みうる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、および配列番号３８から選択される配列と少なくとも６０％相同な重鎖を含みうる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、および配列番号３８から選択される配列と少なくとも７０％相同な重鎖を含みうる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、および配列番号３８から選択される配列と少なくとも８０％相同な重鎖を含みうる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、および配列番号３８から選択される配列と少なくとも９０％相同な重鎖を含みうる。
【００７４】
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３６、および配列番号３７から選択される軽鎖を含みうる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３６、および配列番号３７から選択される配列と少なくとも５０％相同な軽鎖を含みうる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３６、および配列番号３７から選択される配列と少なくとも６０％相同な軽鎖を含みうる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３６、および配列番号３７から選択される配列と少なくとも７０％相同な軽鎖を含みうる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３６、および配列番号３７から選択される配列と少なくとも８０％相同な軽鎖を含みうる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３６、および配列番号３７から選択される配列と少なくとも９０％相同な軽鎖を含みうる。
【００７５】
キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号２９の重鎖と、配列番号３０の軽鎖とを含みうる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号２９の重鎖と、配列番号３６の軽鎖とを含みうる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号２８の重鎖と、配列番号３１の軽鎖とを含みうる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号３２の重鎖と、配列番号２７の軽鎖とを含みうる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号３３の重鎖と、配列番号２７の軽鎖とを含みうる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号３４の重鎖と、配列番号２７の軽鎖とを含みうる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号３５の重鎖と、配列番号２７の軽鎖とを含みうる。キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチは、配列番号３８の重鎖と、配列番号３７の軽鎖とを含みうる。
【００７６】
多価ＣＡＲ−ＥＣスイッチ
本明細書では、キメラ抗原受容体結合性ペプチド抗原（ＣＡＲ−ＢＰ）と、ターゲティングポリペプチドとを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチが例示される。しかし、当業者であれば、これらのスイッチが、さらなるターゲティングポリペプチドおよび／またはさらなるＣＡＲ−ＢＰをさらに含みうることを理解する。１つまたは複数のＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティングポリペプチドの１つまたは複数のグラフティング部位にグラフトすることができる。１つまたは複数のＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティングポリペプチドの１または複数の末端に融合させることができる。複数のグラフティング／融合部位は、ＣＡＲ−ＢＰの、ＣＡＲへの最適な結合をもたらすことが予測されうるので、これは有利でありうる。例えば、第１のＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティングポリペプチドの第１のドメインにグラフトすることができ、第２のＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティングポリペプチドの第２のドメインにグラフトすることができる。第１のドメインと第２のドメインとは、同じでありうる。第１のドメインと第２のドメインとは、異なりうる。非限定的な例として述べると、第１のＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティング抗体または抗体断片の軽鎖にグラフトすることができ、第２のＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティング抗体または抗体断片の重鎖にグラフトすることができる。第１のＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティングポリペプチドの第１の末端と融合させることができ、第２のＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティングポリペプチドの第２の末端と融合させることができる。非限定的な例として述べると、第１のＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティング抗体または抗体断片の軽鎖のＣ末端と融合させることができ、第２のＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティング抗体または抗体断片の重鎖のＮ末端と融合させることができる。第１のＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティングポリペプチドの末端と融合させることができ、第２のＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティングポリペプチドのドメイン内にグラフトすることができる。第１のＣＡＲ−ＢＰと第２のＣＡＲ−ＢＰとは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを、１つのＣＡＲを発現させるＣＡＲ−ＥＣ細胞と共に使用しうるように、同じでありうるか、または類似しうる。第１のＣＡＲ−ＢＰと第２のＣＡＲ−ＢＰとは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを、１つもしくは複数のＣＡＲを発現させるＣＡＲ−ＥＣ細胞、または異なるＣＡＲを発現させる複数のＣＡＲ−ＥＣ細胞と共に使用しうるように、異なりうる。
【００７７】
本明細書で開示されるペプチドスイッチは、１つまたは複数のＣＡＲ−ＢＰを含みうる。本明細書で開示されるペプチドスイッチは、２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＢＰを含みうる。本明細書で開示されるペプチドスイッチは、３つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＢＰを含みうる。本明細書で開示されるペプチドスイッチは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、またはこれを超えるＣＡＲ−ＢＰを含みうる。１つまたは複数のＣＡＲ−ＢＰは、１つまたは複数のリンカーを介して、ターゲティングポリペプチドと融合させるか、またはグラフトすることができる。したがって、本明細書で開示されるペプチドスイッチは、１つまたは複数のリンカー（例えば、Ｌ１、Ｌ２）を含みうる。本明細書で開示されるペプチドスイッチは、２つまたはこれを超えるリンカーを含みうる。本明細書で開示されるペプチドスイッチは、３つまたはこれを超えるリンカーを含みうる。本明細書で開示されるペプチドスイッチは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、またはこれを超えるリンカーを含みうる。
【００７８】
ＩＢ．ペプチド−低分子スイッチ
本明細書ではさらに、ＣＡＲ結合性領域と、ターゲティング部分とを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチであって、ＣＡＲ結合性領域が、ＣＡＲ結合性ペプチド抗原であり、ターゲティング部分が、非ペプチド性低分子であるＣＡＲ−ＥＣスイッチが開示される。非ペプチド性低分子は、細胞ターゲティング分子、化学リガンド、核酸、ビタミン、基質または基質類似体でありうる。非ペプチド性低分子は、アミド結合により接続された２つのアミノ酸を含みえない。ＣＡＲ−ＥＣスイッチはさらに、リンカーを含みうる。ＣＡＲ結合性ペプチド抗原（ＣＡＲ−ＢＰ）と低分子とは、部位特異的に連結することができる。ＣＡＲ結合性ペプチド抗原は、非天然アミノ酸を含みうる。ＣＡＲ結合性ペプチド抗原と低分子とは、非天然アミノ酸により、部位特異的に連結することができる。低分子は、標的細胞上の細胞表面分子に結合しうる。細胞表面分子は、抗原、タンパク質、ペプチド、脂質、ステロール、糖脂質、および細胞表面マーカーから選択することができる。ＣＡＲ結合性ペプチド抗原は、ＦＬＡＧ（登録商標）タグ、酵母転写因子ＧＣＮ４、および親水性標的ペプチド（ＨＴＰ）から選択することができる。低分子は、２−［３−（１，３−ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸でありうる。低分子は、葉酸（folate）でありうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチはさらに、リンカーを含みうる。
【００７９】
本明細書では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成する方法であって、ＣＡＲ結合性領域を、ターゲティング部分にコンジュゲートするステップを含み、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、ＣＡＲ結合性領域とターゲティング部分とを含み、ＣＡＲ結合性領域が、ＣＡＲ結合性ペプチド抗原であり、ターゲティング部分が、低分子である方法が開示される。方法はさらに、低分子を、リンカーにコンジュゲートして、低分子−リンカー中間体を作製するステップを含みうる。低分子または低分子−リンカー中間体は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチへの組み込みの前に、ＣＡＲ−ＢＰ上の相補的な反応性官能基と反応しうる、１つまたは複数の反応性官能基を含みうる。リンカーまたは低分子−リンカー中間体は、二官能性でありうる。リンカーまたは低分子−リンカー中間体は、ヘテロ二官能性でありうる。
【００８０】
低分子−リンカー中間体またはＣＡＲ−ＥＣスイッチは、その非限定的な例について、Kimら、Curr  Opin  Chem  Bio、１７巻：４１２〜４１９頁（２０１３年）において総説されている、生体直交型反応の生成物でありうる。低分子−リンカー中間体、リンカー、またはＣＡＲ−ＥＣスイッチは、オキシム、テトラゾール、ディールスアルダー付加物、ヘテロディールスアルダー付加物、芳香族置換反応生成物、求核置換反応生成物、エステル、アミド、カルバメート、エーテル、チオエーテル、またはミカエル反応生成物を含みうる。低分子−リンカー中間体、リンカー、またはＣＡＲ−ＥＣスイッチは、付加環化生成物、メタセシス反応生成物、金属媒介クロスカップリング反応生成物、ラジカル重合化生成物、酸化カップリング生成物、アシル転移反応生成物、または光クリック反応生成物でありうる。付加環化は、ヒュイスゲン付加環化でありうる。付加環化は、銅非含有［３＋２］ヒュイスゲン付加環化でありうる。付加環化は、ディールスアルダー反応でありうる。付加環化は、ヘテロディールスアルダー反応でありうる。低分子−リンカー中間体は、酵素媒介反応の生成物でありうる。低分子−リンカー中間体は、トランスグルタミナーゼ媒介反応の生成物であることが可能であり、その非限定的な例は、Linら、J.  Am.  Chem.  Soc.、１２８巻：４５４２〜４５４３頁（２００６年）およびＷＯ２０１３／０９３８０９において記載されている。低分子−リンカー中間体、リンカー、またはＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＰｏｌｙＴｈｅｒｉｃｓによるＴｈｉｏＢｒｉｄｇｅ（商標）技術など、２つのシステイン残基を接続するジスルフィド架橋を含みうる。低分子−リンカー中間体、リンカー、またはＣＡＲ−ＥＣスイッチは、２つのアミノ酸残基を接続するマレイミド架橋を含みうる。低分子−リンカー中間体、リンカー、またはＣＡＲ−ＥＣスイッチは、２つのシステイン残基を接続するマレイミド架橋を含みうる。
【００８１】
低分子−リンカー中間体またはリンカーは、１つまたは複数の末端において、アルコキシアミン（またはアミノオキシ）基、アジド基、および／またはシクロオクチン基を含みうる。低分子−リンカー中間体またはリンカーは、一方の端部において、アルコキシアミンを含むことが可能であり、他方の端部において、アジド基を含みうる。低分子−リンカー中間体またはリンカーは、一方の端部において、アルコキシアミン基を含むことが可能であり、他方の端部において、シクロオクチン基を含みうる。アルコキシアミンは、アミノ酸上のケトン基と共に、安定なオキシムを形成しうる。アルコキシアミンは、非天然アミノ酸上のケトン基と共に、安定なオキシムを形成しうる。ケトン基は、ｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦ）上にありうる。
【００８２】
ＩＩ．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本明細書では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現させる細胞の活性を調節するＣＡＲ−ＥＣスイッチが開示される。キメラ抗原受容体は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含みうる。細胞外ドメインは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのペプチド抗原（例えば、ＣＡＲ−ＢＰ）に結合しうる。細胞外ドメインは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのＣＡＲ−ＢＰに結合する抗体または抗体断片（ＣＡＲ抗体）を含みうる。ＣＡＲ抗体は、抗体の少なくとも一部を含みうる。場合によって、ＣＡＲ抗体は、全長抗体ではない。ＣＡＲ抗体は、免疫グロブリンの少なくとも一部またはその断片を含みうる。免疫グロブリンまたはその断片は、ｓｃＦｖ、ｄｉ−ｓｃＦｖ、ｂｉ−ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆｃ、Ｆ（ａｂ’）２、ｐＦｃ’、ナノボディー、アフィボディー、ＤＡＲＰｉｎ、ダイアボディー、ラクダ科動物抗体（camelid）、操作Ｔ細胞受容体およびモノボディーからなる群から選択することができる。免疫グロブリンは、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４からなる群から選択することができる。ＣＡＲ抗体は、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の少なくとも一部を含みうる。ＣＡＲ抗体は、ヒト抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、ヒト操作抗体、非ヒト抗体、および／またはキメラ抗体でありうる。
【００８３】
ＣＡＲ抗体の、ＣＡＲ−ＢＰに対する結合アフィニティーは、約０．０１ｐＭ、約０．０２ｐＭ、約０．０３ｐＭ、約０．０４ｐＭ、０．０５ｐＭ、約０．０６ｐＭ、約０．０７ｐＭ、約０．０８ｐＭ、約０．０９ｐＭ、約０．１ｐＭ、約０．２ｐＭ、０．３ｐＭ、約０．４ｐＭ、約０．５ｐＭ、約０．６ｐＭ、約０．７ｐＭ、約０．８ｐＭ、約０．９ｐＭ、あるいは約１ｐＭ、約２ｐＭ、約３ｐＭ、約４ｐＭ、約５ｐＭ、約６ｐＭ、約７ｐＭ、約８ｐＭ、約９ｐＭ、約１０ｐＭ、約０．０１ｎＭ、約０．０２ｎＭ、約０．０３ｎＭ、約０．０４ｎＭ、約０．０５ｎＭ、約０．０６ｎＭ、約０．０７ｎＭ、約０．０８ｎＭ、約０．０９ｎＭ、約０．１ｎＭ、約０．２ｎＭ、約０．３ｎＭ、約０．４ｎＭ、約０．５ｎＭ、約０．６ｎＭ、約０．７ｎＭ、約０．８ｎＭ、約０．９ｎＭ、約１ｎＭ、約２ｎＭ、約２．５ｎＭ、約３ｎＭ、約４ｎＭ、約５ｎＭ、約６ｎＭ、約７ｎＭ、約８ｎＭ、約９ｎＭ、約１０ｎＭ、約１２ｎＭ、約１４ｎＭ、約１６ｎＭ、約１８ｎＭ、約２０ｎＭ、約２２ｎＭ、約２４ｎＭ、約２６ｎＭ、約２８ｎＭまたは約３０ｎＭ未満でありうる。
【００８４】
ＣＡＲ抗体は、合成（天然に存在しない）ペプチドを認識しうる。ＣＡＲ抗体は、ＦＬＡＧ（登録商標）タグまたはその断片を認識する抗体または抗体断片を含みうる。ＣＡＲ抗体は、酵母転写因子ＧＣＮ４またはその断片を認識する抗体または抗体断片を含みうる。ＣＡＲ抗体は、抗ＨＴＰ抗体またはその断片を含みうる。
【００８５】
ＣＡＲの膜貫通ドメインおよび／または細胞内ドメインは、細胞質シグナル伝達ドメインの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ２８、および４−１ＢＢを含む群から選択されるシグナル伝達分子の少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、Ｆｃ受容体またはその一部を含みうる。Ｆｃ受容体またはその一部は、ＣＤ１６またはその一部でありうる。シグナル伝達分子は、ＣＤ３ゼータを含みうる。シグナル伝達分子は、ＣＤ２８を含みうる。シグナル伝達分子は、４−１ＢＢを含みうる。細胞内ドメインは、ＣＤ３ゼータの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＣＤ２８の少なくとも一部を含むことが可能であり、細胞内ドメインは、４−１ＢＢの少なくとも一部を含むことが可能であり、細胞内ドメインは、ＯＸ−４０の少なくとも一部を含むことが可能であり、細胞内ドメインは、ＣＤ３０の少なくとも一部を含むことが可能であり、細胞内ドメインは、ＣＤ４０の少なくとも一部を含むことが可能であり、細胞内ドメインは、ＣＤ２の少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＣＤ２７の少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＰＤ−１の少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＩＣＯＳの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）の少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＣＤ７の少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＬＩＧＨＴの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＮＫＧ２Ｃの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、Ｂ７−Ｈ３の少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、１つまたは複数のシグナル伝達分子に由来する細胞質シグナル伝達ドメインの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、２つまたはこれを超える細胞質シグナル伝達ドメインの少なくとも一部を含みうる。２つまたはこれを超える細胞質シグナル伝達ドメインは、２つまたはこれを超える異なるシグナル伝達分子に由来しうる。細胞内ドメインは、３つまたはこれを超える細胞質シグナル伝達ドメインの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、４つまたはこれを超える細胞質シグナル伝達ドメインの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、１つまたは複数のシグナル伝達分子に結合するリガンドの少なくとも一部を含みうる。細胞内ドメインは、ＣＤ８３に結合するリガンドの少なくとも一部を含みうる。
【００８６】
ＩＩＩ．キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）
本明細書で開示される方法、プラットフォーム、およびキットは、１つまたは複数のキメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）またはそれらの使用を含みうる。本明細書で開示されるキメラ抗原受容体エフェクター細胞は、キメラ抗原受容体を発現させる。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、本明細書で開示される任意のＣＡＲでありうる。方法、プラットフォーム、またはキットが、２つまたはこれを超えるエフェクター細胞を含む場合、２つまたはこれを超えるエフェクター細胞は、同じ細胞型のものでありうる。２つまたはこれを超えるエフェクター細胞は、異なる細胞型のものでありうる。２つまたはこれを超えるエフェクター細胞は、同じ細胞株統のものでありうる。２つまたはこれを超えるエフェクター細胞は、異なる細胞株統のものでありうる。２つまたはこれを超えるエフェクター細胞は、２つまたはこれを超える同一なＣＡＲを含みうる。２つまたはこれを超えるエフェクター細胞は、２つまたはこれを超える異なるＣＡＲを含みうる。２つまたはこれを超えるエフェクター細胞は、２つまたはこれを超える類似のＣＡＲを含みうる。
【００８７】
エフェクター細胞は、Ｔ細胞でありうる。エフェクター細胞は、Ｔ細胞株統の細胞でありうる。エフェクター細胞は、成熟Ｔ細胞でありうる。エフェクター細胞は、前駆体Ｔ細胞でありうる。エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞でありうる。エフェクター細胞は、ナイーブＴ細胞でありうる。エフェクター細胞は、メモリーＴ幹細胞（ＴＭＳＣ）でありうる。エフェクター細胞は、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）でありうる。エフェクター細胞は、エフェクターＴ細胞（ＴＥ）でありうる。エフェクター細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞でありうる。Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞でありうる。エフェクター細胞は、ＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞でありうる。エフェクター細胞は、アルファ−ベータＴ細胞でありうる。エフェクター細胞は、ガンマ−ベータＴ細胞でありうる。エフェクター細胞は、ナチュラルキラーＴ細胞でありうる。エフェクター細胞は、ヘルパーＴ細胞でありうる。
【００８８】
本開示の好ましい実施形態では、Ｔ細胞を含む、方法、キット、およびプラットフォームについて記載するが、当業者はまた、Ｔ細胞の代わりに他の細胞型を使用しうることも理解することができる。エフェクター細胞は、標的または標的細胞に近接させると、標的または標的細胞に対して効果を有するエフェクター細胞でありうる。エフェクター細胞は、標的または標的細胞に近接させると、標的または標的細胞に対して細胞傷害性効果を有する細胞でありうる。エフェクター細胞は、免疫細胞でありうる。エフェクター細胞は、Ｂ細胞、単球、血小板、白血球、好中球、好酸球、好塩基球、またはリンパ球から選択することができる。エフェクター細胞は、リンパ球でありうる。エフェクター細胞は、マクロファージでありうる。エフェクター細胞は、食細胞でありうる。エフェクター細胞は、エフェクターＢ細胞でありうる。エフェクター細胞は、ナチュラルキラー細胞でありうる。エフェクター細胞は、疾患または状態を患う被験体から単離または導出することができる。エフェクター細胞は、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチまたはＣＡＲ−ＥＣプラットフォームで処置される被験体に由来する細胞でありうる。
【００８９】
Ｔ細胞は、配列番号１に基づくか、またはこれに由来する、１つまたは複数のポリヌクレオチドによりコードされるキメラ抗原受容体を発現させうる。ポリヌクレオチドは、配列番号１に基づくか、またはこれに由来する、１つまたは複数のポリヌクレオチドと少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一でありうる。ポリヌクレオチドは、配列番号１に基づくか、またはこれに由来する、１つまたは複数のポリヌクレオチドと少なくとも約７０％同一でありうる。１つまたは複数のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドは、配列番号１に基づきうるか、またはこれに由来しうる。ポリペプチドは、配列番号１に基づくか、またはこれに由来する、１つまたは複数のポリヌクレオチドと少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一なポリヌクレオチドによりコードされうる。ポリヌクレオチドは、構成的に発現させることができる。ポリヌクレオチドは、条件的に発現させることができる。
【００９０】
本明細書では、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）を生成する方法であって、キメラ抗原受容体またはキメラ抗原受容体の複合体をコードする、１つまたは複数のポリヌクレオチドを、エフェクター細胞へと導入するステップを含む方法が開示される。エフェクター細胞は、Ｔ細胞でありうる。キメラ抗原受容体またはキメラ抗原受容体の複合体をコードする、１つまたは複数のポリヌクレオチドを、エフェクター細胞へと導入するステップは、エフェクター細胞に、１つまたは複数のポリヌクレオチドをトランスフェクトすることを含みうる。キメラ抗原受容体またはキメラ抗原受容体の複合体をコードする、１つまたは複数のポリヌクレオチドを、エフェクター細胞へと導入するステップは、エフェクター細胞に、本明細書で開示されるキメラ抗原受容体をコードする、１つまたは複数のポリヌクレオチドを含む、１つまたは複数のウイルスをウイルス感染させることを含みうる。ウイルスは、レンチウイルスでありうる。ウイルスは、アデノウイルスでありうる。ウイルスは、レトロウイルスでありうる。ウイルスは、アデノ随伴ウイルスでありうる。ウイルスは、自己相補型アデノ随伴ウイルス（ｓｃＡＡＶ）でありうる。ウイルスは、改変ヒト免疫不全（ＨＩＶ）ウイルスでありうる。ウイルスは、改変単純ヘルペス（ＨＳＶ）ウイルスでありうる。他のＣＡＲ−ＥＣを生成する方法は、キメラ抗原受容体をコードする、１つまたは複数のポリヌクレオチドを、細胞へと移入する方法であって、トランスポゾン、亜鉛フィンカーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮ、またはＣＲＩＳＰＲを、細胞へと付加するステップを含む方法を含みうる。トランスポゾンは、スリーピングビューティートランスポゾンでありうる。１つまたは複数のポリヌクレオチドは、配列番号１に基づきうるか、またはこれに由来しうる。
【００９１】
ＩＶ．ＣＡＲ−ＥＣプラットフォーム
本明細書では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドを含むエフェクター細胞と、ＣＡＲ結合性ペプチド抗原とターゲティングポリペプチドとを含むキメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチとを含み、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、標的細胞上の細胞表面分子に結合する、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）プラットフォームが開示される。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、任意の本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチから選択することができる。
【００９２】
ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームは、２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームは、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームは、２０を超える、２５を超える、３０を超える、３５を超える、４０を超える、４５を超える、または５０を超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチを含みうる。２つまたはこれを超えるスイッチは、本明細書で開示される１つまたは複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチ、またはこれらの組合せから選択することができる。
【００９３】
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣプラットフォームはさらに、第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチを含むことが可能であり、第１のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、第１のＣＡＲ−ＢＰと第１のターゲティングポリペプチドとを含み、第２のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、第２のＣＡＲ−ＢＰと第２のターゲティングポリペプチドとを含む。第１のＣＡＲ−ＢＰと第２のＣＡＲ−ＢＰとは、同じでありうる。第１のＣＡＲ−ＢＰと第２のＣＡＲ−ＢＰとは、異なりうる。第１のＣＡＲ−ＢＰと第２のＣＡＲ−ＢＰとは、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％相同でありうる。第１のターゲティングポリペプチドと第２のターゲティングポリペプチドとは、同じでありうる。第１のターゲティングポリペプチドと第２のターゲティングポリペプチドとは、異なりうる。第１のターゲティングポリペプチドと第２のターゲティングポリペプチドとは、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９２％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％または約２％相同でありうる。
【００９４】
Ｖ．キット、ベクター、およびポリヌクレオチド
本明細書では、本明細書で開示される１つまたは複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチを含むキットが開示される。キットはさらに、２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチを含みうる。キットは、３つのＣＡＲ−ＥＣスイッチを含みうる。キットは、約３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１２、１５、２０、２４、３０、３５、４８、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９６、１００、１２０、１５０、２００、３００、３８４、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１０００のＣＡＲ−ＥＣスイッチを含みうる。キットは、生物学的研究のために援用することができる。キットは、疾患または状態を診断するために使用することができる。キットは、疾患または状態を処置するために使用することができる。キットのＣＡＲ−ＥＣスイッチは、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣ細胞、または臨床で使用されるかもしくは調べられる、既存のＣＡＲ  Ｔ細胞と共に使用することができる。キットはさらに、１つまたは複数のエフェクター細胞を含みうる。キットはさらに、１つまたは複数のＣＡＲ−ＥＣ細胞を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣ細胞は、Ｔ細胞でありうる。Ｔ細胞は、１つまたは複数のＣＡＲを発現させうる。キットはさらに、１つまたは複数のＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含みうる。キットはさらに、１つまたは複数のＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含みうる。ＣＡＲは、本明細書で開示されるＣＡＲのうちのいずれかから選択することができる。キットは、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチまたはその部分（例えば、抗体、抗体断片、ペプチド）をコードする、１つまたは複数のポリヌクレオチドを含みうる。
【００９５】
本明細書ではさらに、ＣＡＲ−ＥＣスイッチまたはそれらの部分をコードするベクターおよびポリヌクレオチドであって、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、キメラ抗原受容体結合性ペプチド抗原と、ターゲティングポリペプチドとを含み、ターゲティングペプチドが、標的細胞上の細胞表面分子に結合する、ベクターおよびポリヌクレオチドが開示される。ポリヌクレオチドは、ＤＮＡでありうる。ポリヌクレオチドは、ＲＮＡでありうる。そうでないことが明示されない限りにおいて、本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」および「ベクター」という用語は、互換的に使用される。ターゲティングポリペプチドは、抗体または抗体断片でありうる。ベクターは、抗体または抗体断片の重鎖をコードする配列を含みうる。ベクターは、抗体または抗体断片の軽鎖をコードする配列を含みうる。ベクターは、抗体または抗体断片の軽鎖をコードする配列と、抗体または抗体断片の重鎖をコードする配列とを含みうる。軽鎖および重鎖は、同じベクターから発現させることができる。軽鎖および重鎖は、２つの個別のベクターから発現させることができる。
【００９６】
本明細書では、キメラ抗原受容体をコードするベクターおよびポリヌクレオチドであって、キメラ抗原受容体が、キメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチのペプチドに結合する細胞外ドメインを含む、ベクターおよびポリヌクレオチドが開示される。細胞外ドメインは、抗体または抗体断片を含みうる。抗体または抗体断片は、キメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチのペプチド抗原に結合しうる。ペプチド抗原は、酵母ペプチドでありうる。酵母ペプチドは、ＧＣＮ４でありうる。ｆａまたはその一部は、配列番号１に基づくか、またはこれに由来する、１つまたは複数のポリヌクレオチドによりコードされうる。ＣＡＲまたはその一部は、配列番号１に基づくか、またはこれに由来する、１つまたは複数のポリヌクレオチドと少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一なポリヌクレオチドによりコードされうる。ポリヌクレオチドによりコードされるＣＡＲまたはその一部は、配列番号１に基づくか、またはこれに由来する、１つまたは複数のポリヌクレオチドと少なくとも約７０％同一でありうる。本明細書では、配列番号１に基づくか、またはこれに由来する、１つまたは複数のポリヌクレオチドを含むベクターが開示される。
【００９７】
本明細書で開示される、キメラ抗原受容体および／またはキメラ抗原受容体エフェクター細胞スイッチ、ならびにこれらの部分をコードする配列を含むベクターは、任意の市販の発現ベクターから選択することができる。発現ベクターは、原核生物発現ベクターでありうる。発現ベクターは、真核生物発現ベクターでありうる。発現ベクターは、哺乳動物発現ベクターでありうる。発現ベクターは、ウイルス発現ベクターでありうる。発現ベクターは、ＣＡＲの構成的発現のための構成的プロモーターおよび／またはＣＡＲ−ＥＣスイッチコード配列を有しうる。発現ベクターは、ＣＡＲの条件的発現のための誘導的プロモーターおよび／またはＣＡＲ−ＥＣスイッチコード配列を有しうる。
【００９８】
ＶＩ．治療的使用
本明細書では、それを必要とする被験体における疾患または状態を処置する方法、プラットフォーム、およびキットが開示され、方法は、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチを、被験体に投与するステップを含み、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＣＡＲ結合性ペプチド抗原とターゲティング部分とを含む。本明細書では、それを必要とする被験体における疾患または状態を処置する方法が開示され、方法は、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチのうちのいずれか１つを投与するステップを含む。
【００９９】
方法は、ＣＡＲ−ＥＣ細胞および１つまたは複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与するステップを含みうる。方法は、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１２、１５、２０、２４、３０、３５、４８、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９６、１００、１２０、１５０、２００、３００、３８４、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００またはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与するステップを含みうる。方法は、２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与するステップを含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、同じＣＡＲ結合性ペプチド抗原を含みうる。２つまたはこれを超える（The  two  more）ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、同じ細胞ターゲティングポリペプチドを含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つまたは複数の異なるＣＡＲ結合性ペプチド抗原を含みうる。２つまたはこれを超えるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つまたは複数の異なる細胞ターゲティングポリペプチドを含みうる。方法は、複数のＣＡＲ−ＥＣ細胞および１つまたは複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチを含みうる。
【０１００】
本明細書では、それを必要とする被験体における疾患または状態を処置する方法であって、キメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチを、被験体に投与するステップを含み、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、キメラ抗原受容体結合性ペプチド抗原（ＣＡＲ−ＢＰ）と、標的上の抗原に結合するターゲティング部分とを含む方法が開示される。ＣＡＲ−ＢＰは、非限定的な例によれば、ＦＬＡＧ（登録商標）タグ、酵母転写因子ＧＣＮ４、および親水性標的ペプチド（ＨＴＰ）から選択することができる。ターゲティング部分は、非限定的な例によれば、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＢＣＭＡ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、および抗ＣＤ３３抗体から選択することができる。
【０１０１】
方法は、１つまたは複数のキメラ抗原受容体エフェクター細胞を投与するステップを含みうる。方法は、１つまたは複数のＴ細胞を投与するステップを含みうる。１つまたは複数のエフェクター細胞は、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ幹細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ８／ＣＤ４＋Ｔ細胞、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞から選択されるＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージから選択することができる。
【０１０２】
ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、エフェクター細胞を、標的細胞に近接させることに少なくとも部分的に依存する治療効果を有しうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの意図される適応に対する治療効果は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、エフェクター細胞を標的細胞へと動員することに少なくとも部分的に起因しうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの意図される適応に対する治療効果は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチが、エフェクター細胞を標的細胞へと動員することに主に起因しうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの治療効果は、ＣＡＲ−ＥＣ細胞における免疫応答を刺激することに少なくとも部分的に依存しうる。
【０１０３】
ＣＡＲ−ＥＣスイッチを投与することは、エフェクター細胞をさらに投与しなければ、いかなる治療効果も有しえない。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、エフェクター細胞をさらに投与しなければ、顕著な治療効果、所望の治療効果、および／または意図される治療効果を有しえない。ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、エフェクター細胞をさらに投与しなければ、ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームの意図される適応に対するいかなる治療効果も有しえない。ＣＡＲ−ＥＣスイッチ（例えば、ＣＡＲ−ＢＰまたはターゲティング部分）の部分または構成要素は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ（例えば、ＣＡＲ−ＢＰまたはターゲティング部分）の第２の部分または構成要素にコンジュゲートしなければ、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの意図される適応に対する治療効果を有しえない。ＣＡＲ−ＥＣスイッチ（例えば、ＣＡＲ−ＢＰまたはターゲティング部分）の部分または構成要素の用量であって、ＣＡＲ−ＥＣプラットフォームの一部として投与される場合に治療効果をもたらす用量は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの部分または構成要素が、その用量で、単独で投与される場合、治療効果を有しえない。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの部分または構成要素は、Ｔ細胞を、標的細胞へと動員すること以外のいかなる治療効果も有することを意図されない場合がある。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの部分または構成要素を単独で投与することが標的細胞に対して有しうる治療効果は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチおよびＣＡＲ−ＥＣ細胞を投与することによる治療効果と比べて無視しうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの部分または構成要素を投与することが標的細胞に対して有しうる治療効果は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチおよびＣＡＲ−ＥＣ細胞を投与することによる治療効果未満である。
【０１０４】
本明細書では、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチの使用であって、それを必要とする被験体における疾患または状態を処置する使用が開示される。本明細書ではさらに、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチの、疾患を処置するための医薬の製造における使用が開示される。
【０１０５】
本明細書では、エフェクター細胞上のＣＡＲに結合するペプチド抗原（ＣＡＲ−ＢＰ）と、標的上の抗原に結合するターゲティングポリペプチドとを含むスイッチの使用であって、それを必要とする被験体における疾患または状態を処置する使用が開示される。本明細書ではさらに、エフェクター細胞上のＣＡＲに結合するペプチド抗原（ＣＡＲ−ＢＰ）と、標的上の抗原に結合するターゲティングポリペプチドとを含むスイッチの、疾患を処置するための医薬の製造における使用が開示される。
【０１０６】
本明細書では、親水性標的ペプチド（ＨＴＰ）またはその誘導体を含むＣＡＲ−ＢＰと抗ＣＤ１９抗体またはその断片を含むターゲティングポリペプチドとを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチ；および抗ＨＴＰ抗体を含むＣＡＲを含むエフェクター細胞の使用であって、抗ＣＤ１９抗体またはその断片が、Ｂ細胞上のＣＤ１９に結合して、多発性骨髄腫を処置する使用が開示される。
【０１０７】
本明細書では、酵母転写因子ＧＣＮ４またはその誘導体を含むＣＡＲ−ＢＰと抗ＣＤ１９抗体またはその断片を含むターゲティングポリペプチドとを含むＣＡＲ−ＥＣスイッチ；および抗ＧＣＮ４抗体を含むＣＡＲを含むエフェクター細胞の使用であって、抗ＣＤ１９抗体またはその断片が、リンパ芽球上、リンパ球上、またはＢ細胞上のＣＤ１９に結合して、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、またはＢ細胞リンパ腫を処置する使用が開示される。
【０１０８】
疾患または状態は、細胞増殖性障害でありうる。細胞増殖性障害は、充実性腫瘍、リンパ腫、白血病、および脂肪肉腫から選択することができる。細胞増殖性障害は、急性の場合もあり、慢性の場合もあり、再発性の場合もあり、難治性の場合もあり、加速化している場合もあり、寛解している場合もあり、病期Ｉの場合もあり、病期ＩＩの場合もあり、病期ＩＩＩの場合もあり、病期ＩＶの場合もあり、若年性の場合もあり、成人の場合もある。細胞増殖性障害は、骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）白血病、リンパ芽球性白血病、骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）白血病、急性骨髄性白血病、骨髄単球性白血病、好中球性白血病、骨髄異形成症候群、Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、大細胞リンパ腫、混合細胞型リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、再発性小リンパ球性リンパ腫、有毛細胞白血病、多発性骨髄腫、好塩基球性白血病、好酸球性白血病、巨核芽球性白血病、単芽球性白血病、単球性白血病、赤白血病（ｅｒｙｔｈｒｏｌｅｕｋｅｍｉａ）、赤白血病（ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、および肝細胞癌から選択することができる。細胞増殖性障害は、血液悪性腫瘍を含みうる。血液悪性腫瘍は、Ｂ細胞悪性腫瘍を含みうる。細胞増殖性障害は、慢性リンパ性白血病を含みうる。細胞増殖性障害は、急性リンパ芽球性白血病を含みうる。細胞増殖性障害は、ＣＤ１９陽性バーキットリンパ腫を含みうる。
【０１０９】
疾患または状態は、がん、病原性感染症、自己免疫疾患、炎症性疾患、または遺伝性障害でありうる。
【０１１０】
場合によって、１つまたは複数の疾患は、がんを含む。がんは、再発性がんおよび／または難治性がんを含みうる。がんの例は、肉腫、癌、リンパ腫、または白血病を含むがこれらに限定されない。
【０１１１】
がんは、神経内分泌がんを含みうる。がんは、膵臓がんを含みうる。がんは、膵外分泌がんを含みうる。がんは、甲状腺がんを含みうる。甲状腺がんは、甲状腺髄様がんを含みうる。がんは、前立腺がんを含みうる。
【０１１２】
がんは、上皮がんを含みうる。がんは、乳がんを含みうる。がんは、子宮内膜がんを含みうる。がんは、卵巣がんを含みうる。卵巣がんは、間質性卵巣がんを含みうる。がんは、子宮頸がんを含みうる。
【０１１３】
がんは、皮膚がんを含みうる。皮膚がんは、血管新生性皮膚がん（neo-angiogenic  skin  cancer）を含みうる。皮膚がんは、黒色腫を含みうる。
【０１１４】
がんは、腎臓がんを含みうる。
【０１１５】
がんは、肺がんを含みうる。肺がんは、小細胞肺がんを含みうる。肺がんは、非小細胞肺がんを含みうる。
【０１１６】
がんは、結腸直腸がんを含みうる。がんは、胃がんを含みうる。がんは、結腸がんを含みうる。
【０１１７】
がんは、脳がんを含みうる。脳がんは、脳腫瘍を含みうる。がんは、神経膠芽細胞腫を含みうる。がんは、星状細胞腫を含みうる。
【０１１８】
がんは、血液がんを含みうる。血液がんは、白血病を含みうる。白血病は、骨髄性白血病を含みうる。がんは、リンパ腫を含みうる。リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫を含みうる。
【０１１９】
がんは、肉腫を含みうる。肉腫はユーイング肉腫を含みうる。
【０１２０】
肉腫とは、骨、軟骨、脂肪、筋肉、血管、または他の結合組織もしくは支持組織のがんである。肉腫は、骨がん、線維肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性神経鞘腫、両側前庭神経鞘腫、骨肉腫、軟組織肉腫（例えば、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、葉状嚢胞肉腫（cystosarcoma  phylloides）、皮膚線維肉腫、デスモイド腫瘍、類上皮肉腫、骨外性骨肉腫、線維肉腫、血管周囲細胞腫、血管肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、リンパ肉腫、悪性線維性組織球腫、神経線維肉腫、横紋筋肉腫、および滑膜肉腫）を含むがこれらに限定されない。
【０１２１】
癌とは、身体の表面を覆い、ホルモンを産生し、腺を構成する細胞である、上皮細胞内で始まるがんである。非限定的な例として述べると、癌は、乳がん、膵臓がん、肺がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、腎臓がん、膀胱がん、胃がん、前立腺がん、肝臓がん、卵巣がん、脳がん、膣がん、外陰がん、子宮がん、口腔がん、陰茎がん、精巣がん、食道がん、皮膚がん、ファローピウス管のがん、頭頸部がん、消化管間質がん、腺癌、皮膚または眼内黒色腫、肛門領域がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、尿道がん、腎盂がん、尿管がん、子宮内膜がん、子宮頸部がん、下垂体がん、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、脳幹神経膠腫、および脊髄腫瘍（spinal  axis  tumor）を含む。場合によって、がんは、基底細胞癌、扁平上皮癌（squamous）、黒色腫、非黒色腫、または紫外線（日光）角化症などの皮膚がんである。
【０１２２】
場合によって、がんは、肺がんである。肺がんは、気管から分岐し、肺（気管支）または肺の小空気嚢（肺胞）に供給する気道内で始まりうる。肺がんは、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌、および中皮腫（mesotheliomia）を含む。ＮＳＣＬＣの例は、扁平細胞癌、腺癌、および大細胞癌を含む。中皮腫は、肺および胸腔の内膜（胸膜）または腹部の内膜（腹膜）のがん性腫瘍でありうる。中皮腫は、アスベストへの曝露に起因しうる。がんは、神経膠芽細胞腫などの脳がんでありうる。
【０１２３】
代替的に、がんは、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍でありうる。ＣＮＳ腫瘍は、神経膠腫または非神経膠腫として分類することができる。神経膠腫は、悪性神経膠腫、高悪性度神経膠腫、びまん性内在性橋神経膠腫でありうる。神経膠腫の例は、星状細胞腫、希突起膠細胞腫（または希突起神経膠腫の要素と星状細胞腫の要素との混合状態）、および上衣腫を含む。星状細胞腫は、低悪性度星状細胞腫、未分化星状細胞腫、多形膠芽細胞腫、毛様細胞性星状細胞腫、多形黄色星状細胞腫、および上衣下巨細胞性星状細胞腫を含むがこれらに限定されない。希突起膠細胞腫は、低悪性度希突起膠細胞腫（または希突起星状細胞腫）および未分化希突起膠細胞腫を含む。非神経膠腫は、髄膜腫、下垂体腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、および髄芽腫を含む。場合によって、がんは、髄膜腫である。
【０１２４】
白血病は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、または慢性骨髄性白血病でありうる。さらなる白血病の種類は、有毛細胞白血病、慢性骨髄単球性白血病、および若年性骨髄単球性白血病を含む。
【０１２５】
リンパ腫とは、リンパ球のがんであり、Ｂリンパ球から発症する場合もあり、Ｔリンパ球から発症する場合もある。２つの主要なリンパ腫の種類は、ホジキン病として既に公知のホジキンリンパ腫、および非ホジキンリンパ腫である。ホジキンリンパ腫は、リード−シュテルンベルク細胞の存在を顕徴とする。非ホジキンリンパ腫とは、ホジキンリンパ腫以外の全てのリンパ腫である。非ホジキンリンパ腫は、低悪性度のリンパ腫および侵襲性のリンパ腫でありうる。非ホジキンリンパ腫は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、小細胞リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、節外性濾胞辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、およびリンパ腫様肉芽腫症を含むがこれらに限定されない。
【０１２６】
がんは、固形腫瘍を含みうる。がんは、肉腫を含みうる。がんは、膀胱がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、肺がん、黒色腫、骨髄腫、甲状腺がん、膵臓がん、神経膠腫、脳の悪性神経膠腫、神経膠芽細胞腫、卵巣がん、および前立腺がんからなる群から選択することができる。がんの抗原発現は、不均一でありうる。がんの抗原発現は、モジュレートされている可能性がある。抗原は、表面抗原でありうる。がんは、骨髄腫を含みえない。がんは、黒色腫を含みえない。がんは、結腸がんを含みえない。がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）でありうる。がんは、再発性ＡＬＬでありうる。がんは、難治性ＡＬＬでありうる。がんは、再発性難治性ＡＬＬでありうる。がんは、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）でありうる。がんは、再発性ＣＬＬでありうる。がんは、難治性ＣＬＬでありうる。がんは、再発性難治性ＣＬＬでありうる。
【０１２７】
がんは、乳がんを含みうる。乳がんは、トリプルポジティブ乳がん（エストロゲン受容体陽性、プロゲステロン受容体陽性、およびＨｅｒ２陽性）でありうる。乳がんは、トリプルネガティブ乳がん（エストロゲン受容体陰性、プロゲステロン受容体陰性、およびＨｅｒ２陰性）でありうる。乳がんは、エストロゲン受容体陽性乳がんでありうる。乳がんは、エストロゲン受容体陰性乳がんでありうる。乳がんは、プロゲステロン受容体陽性乳がんでありうる。乳がんは、プロゲステロン受容体陰性乳がんでありうる。乳がんは、Ｈｅｒ２陰性乳がんを含みうる。乳がんは、低発現Ｈｅｒ２乳がんを含みうる。乳がんは、Ｈｅｒ２陽性乳がんを含みうる。Ｈｅｒ２を発現させる細胞株は、臨床免疫組織化学による特徴付けを反映する抗原密度であって、悪性腫瘍を、０（細胞当たりのＨｅｒ２抗原＜２０，０００）、１＋（細胞当たりのＨｅｒ２抗原１００，０００）、２＋（細胞当たりのＨｅｒ２抗原５００，０００）、および３＋（細胞当たりのＨｅｒ２抗原＞２，０００，０００）として分類する抗原密度について、十分に特徴付けられている。本発明は、これらの分類による乳がんを処置する方法を提供する。乳がんは、Ｈｅｒ２  ０と分類される乳がんを含みうる。乳がんは、Ｈｅｒ２  １＋と分類される乳がんを含みうる。乳がんは、Ｈｅｒ２  ２＋と分類される乳がんを含みうる。乳がんは、Ｈｅｒ２  ３＋と分類される乳がんを含みうる。
【０１２８】
疾患または状態は、病原性感染症でありうる。病原性感染症は、１つまたは複数の病原体により引き起こされうる。場合によって、病原体は、細菌、真菌、ウイルス、または原虫である。
【０１２９】
例示的な病原体は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ属、Ｂｏｒｒｅｌｉａ属、Ｂｒｕｃｅｌｌａ属、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ属、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ属、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ属、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ属、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ属、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ属、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ属、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ属、Ｌｉｓｔｅｒｉａ属、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ属、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ属、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属、Ｓｈｉｇｅｌｌａ属、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ属、Ｖｉｂｒｉｏ属、またはＹｅｒｓｉｎｉａ属を含むがこれらに限定されない。場合によって、病原体により引き起こされる疾患または状態は、結核であり、不均質試料は、細菌であるＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに由来する外来分子と、被験体に由来する分子とを含む。場合によって、細菌により引き起こされる疾患または状態は、結核、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属およびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属などの細菌により引き起こされうる肺炎、Ｓｈｉｇｅｌｌａ属、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ属、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属などの細菌により引き起こされうる食物由来の病気、ならびに破傷風、腸チフス、ジフテリア、梅毒、およびハンセン病などの感染症である。疾患または状態は、天然に存在する細菌叢の不均衡により引き起こされる膣疾患である、細菌性膣症でありうる。代替的に、疾患または状態は、髄膜（例えば、脳および脊髄を覆う保護膜）の細菌性炎症である、細菌性髄膜炎である。細菌により引き起こされる、他の疾患または状態は、細菌性肺炎、尿路感染症、細菌性胃腸炎、および細菌性皮膚感染症を含むがこれらに限定されない。細菌性皮膚感染症の例は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓまたはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓにより引き起こされうる膿痂疹；リンパの拡散を伴う深部表皮の連鎖球菌感染により引き起こされうる丹毒；および正常な皮膚微生物叢または外因性細菌により引き起こされうる蜂巣炎を含むがこれらに限定されない。
【０１３０】
病原体は、Ｃａｎｄｉｄａ属、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ属、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ属、およびＳｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ属などの真菌でありうる。真菌により引き起こされる疾患または状態の例は、いんきんたむし、酵母感染症、白癬、および水虫を含むがこれらに限定されない。
【０１３１】
病原体は、ウイルスでありうる。ウイルスの例は、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、エプスタイン−バーウイルス、肝炎ウイルス（例えば、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス）、単純ヘルペスウイルス（１型および２型）、サイトメガロウイルス、ヘルペスウイルス、ＨＩＶ、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、パピローマウイルス、パラインフルエンザウイルス、ポリオウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、風疹ウイルス、および水痘帯状疱疹ウイルスを含むがこれらに限定されない。ウイルスにより引き起こされる疾患または状態の例は、風邪、インフルエンザ、肝炎、ＡＩＤＳ、水痘、風疹、ムンプス、麻疹、いぼ、および灰白髄炎を含むがこれらに限定されない。
【０１３２】
病原体は、Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ属（例えば、Ａ．ａｓｔｒｏｎｙｘｉｓ、Ａ．ｃａｓｔｅｌｌａｎｉｉ、Ａ．ｃｕｌｂｅｒｔｓｏｎｉ、Ａ．ｈａｔｃｈｅｔｔｉ、Ａ．ｐｏｌｙｐｈａｇａ、Ａ．ｒｈｙｓｏｄｅｓ、Ａ．ｈｅａｌｙｉ、Ａ．ｄｉｖｉｏｎｅｎｓｉｓ）、Ｂｒａｃｈｉｏｌａ属（例えば、Ｂ．ｃｏｎｎｏｒｉ、Ｂ．ｖｅｓｉｃｕｌａｒｕｍ）、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ属（例えば、Ｃ．ｐａｒｖｕｍ）、Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒａ属（例えば、Ｃ．ｃａｙｅｔａｎｅｎｓｉｓ）、Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ属（例えば、Ｅ．ｃｕｎｉｃｕｌｉ、Ｅ．ｈｅｌｌｅｍ、Ｅ．ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ）、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ属（例えば、Ｅ．ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、Ｅｎｔｅｒｏｃｙｔｏｚｏｏｎ属（例えば、Ｅ．ｂｉｅｎｅｕｓｉ）、Ｇｉａｒｄｉａ属（例えば、Ｇ．ｌａｍｂｌｉａ）、Ｉｓｏｓｐｏｒａ属（例えば、Ｉ．ｂｅｌｌｉ）、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ属（例えば、Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍ、Ｍ．ｃｅｙｌｏｎｅｎｓｉｓ）、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ属（例えば、Ｎ．ｆｏｗｌｅｒｉ）、Ｎｏｓｅｍａ属（例えば、Ｎ．ａｌｇｅｒａｅ、Ｎ．ｏｃｕｌａｒｕｍ）、Ｐｌｅｉｓｔｏｐｈｏｒａ属、Ｔｒａｃｈｉｐｌｅｉｓｔｏｐｈｏｒａ属（例えば、Ｔ．ａｎｔｈｒｏｐｏｐｈｔｈｅｒａ、Ｔ．ｈｏｍｉｎｉｓ）、およびＶｉｔｔａｆｏｒｍａ属（例えば、Ｖ．ｃｏｒｎｅａｅ）などの原虫でありうる。
【０１３３】
疾患または状態は、自己免疫疾患または自己免疫関連疾患でありうる。自己免疫障害は、身体にそれ自身の組織を攻撃させる、身体の免疫系の機能不全でありうる。自己免疫疾患および自己免疫関連疾患の例は、アジソン病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性心筋炎、ベーチェット病、セリアック病、クローン病、皮膚筋炎、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、若年性関節炎、糖尿病、若年性糖尿病、川崎症候群、ランバート−イートン症候群、ループス（ＳＬＥ）、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、多発性硬化症、重症筋無力症、天疱瘡、結節性多発動脈炎、Ｉ型多腺性自己免疫症候群、ＩＩ型多腺性自己免疫症候群、およびＩＩＩ型多腺性自己免疫症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発筋炎、乾癬、乾癬性関節炎、ライター症候群、再発性多発性軟骨炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、精液および精巣の自己免疫疾患、スティッフパーソン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症を含むがこれらに限定されない。
【０１３４】
疾患または状態は、炎症性疾患でありうる。炎症性疾患の例は、肺胞炎、アミロイドーシス、血管炎、強直性脊椎炎、阻血性壊死、バセドウ病、ベル麻痺、滑液包炎、手根管症候群、セリアック病、胆管炎、膝蓋軟骨軟化症、慢性活動性肝炎、慢性疲労症候群、コーガン症候群、先天性股関節形成異常、肋軟骨炎、クローン病、嚢胞性線維症、ドケルバン腱炎、糖尿病関連関節炎、びまん性特発性骨増殖症、円板状ループス、エーラス−ダンロス症候群、家族性地中海熱、筋膜炎、線維炎／線維筋痛症、有痛性肩拘縮症、ガングリオン嚢胞、巨細胞性動脈炎、痛風、グレーブス病、ＨＩＶ関連リウマチ性疾患症候群、副甲状腺機能亢進関連関節炎、感染性関節炎、炎症性腸症候群／刺激性腸症候群、若年性関節リウマチ、ライム病、マルファン症候群、ミクリッツ病、混合性結合組織病、多発性硬化症、筋筋膜痛症候群、骨関節炎、骨軟化症、骨粗鬆症およびコルチコステロイド誘導性骨粗鬆症、ぺージェット病、回帰性リウマチ、パーキンソン病、プランマー病、リウマチ性多発筋痛症、多発筋炎、偽性痛風、乾癬性関節炎、レイノー現象／症候群、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、坐骨神経痛（腰椎神経根障害）、強皮症、壊血病、鎌状細胞関節炎、シェーグレン症候群、脊椎管狭窄症、脊椎すべり症、スティル病、全身性エリテマトーデス、高安（脈なし）病、腱炎、テニス肘／ゴルフ肘、甲状腺関連関節炎、ばね指、潰瘍性大腸炎、ウェゲナー肉芽腫症、およびウィップル病を含むがこれらに限定されない。
【０１３５】
本明細書で開示される処置法は、サイトカインレベルにより測定されるオフターゲット活性を含みうる。方法により、サイトカインレベルにより測定されるオフターゲット活性を、他のＣＡＲ−ＥＣ療法と比較して低減することができる。方法により、インターフェロンガンマレベルにより測定されるオフターゲット活性を低減することができる。低減されうる他のオフターゲット活性は、毒性のリンパ球減少症、固形腫瘍標的による致死性の細胞溶解、および血液標的についての慢性低ガンマグロブリン血症を含む。本明細書で開示される処置法および組成物を使用して、ＣＤ１９介在性Ｂ細胞形成不全を含むがんを処置することができる。方法および組成物により、ＣＤ１９介在性Ｂ細胞形成不全を最小化することができる。方法により、長期にわたるＢ細胞形成不全を回避することができる。
【０１３６】
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣプラットフォーム、方法、および組成物を使用して、それを必要とする被験体における異種腫瘍または異種血液細胞悪性腫瘍を処置することができる。「汎Ｂ細胞」マーカーであるＣＤ２０は、Ｂ細胞新生物について最も広く標的とされる抗原であり、ＦＤＡにより承認されている抗体であるリツキシマブは、多くの白血病およびリンパ腫の処置において、極めて重要な構成要素である。しかし、ＣＤ２０抗原の発現のモジュレーションに関連する抵抗性機構が、顕著な数の患者において生じる。ＣＤ１９抗原またはＣＤ２０抗原単独によるターゲティングは、根治療法に不十分なことが明らかである。本明細書で開示される方法は、特異性の異なる２つまたはこれを超えるスイッチ（例えば、抗ＣＤ１９抗体によるＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび抗ＣＤ２０抗体によるＣＡＲ−ＥＣスイッチ）の構築および投与をもたらす。本明細書で開示される方法は、特異性の異なる２つまたはこれを超えるスイッチ（例えば、抗ＣＤ１９抗体によるＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび抗ＣＤ２２抗体によるＣＡＲ−ＥＣスイッチ）の構築および投与をもたらす。この方法は、持続性のＢ細胞の喪失を回避しながら、臨床における再発への傾向に対して顕著な利点をもたらしうる。異種腫瘍または異種血液細胞悪性腫瘍はまた、抗ＣＤ１９抗体によるＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび抗ＣＤ２２抗体によるＣＡＲ−ＥＣスイッチで処置することができる。１つまたは複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチは、逐次的に投与することもでき、同時に投与することもできる。
【０１３７】
ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つまたは複数のさらなる治療剤と共に投与することができる。１つまたは複数のさらなる治療剤は、免疫療法、化学療法、およびステロイドからなる群から選択することができる。１つまたは複数のさらなる治療剤は、化学療法薬でありうる。化学療法薬は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、トポイソメラーゼ阻害剤、有糸分裂阻害剤、コルチコステロイド、または分化誘導剤でありうる。化学療法薬は、アクチノマイシンＤ、ブレオマイシン、アルトレタミン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルボプラチン、カペシタビン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、エストラムスチン、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ）、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ）、イキサベピロン、Ｌ−アスパラギナーゼ、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ）、ペメトレキセド、ペントスタチン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、テニポシド、チオグアニン、チオテパ、トポテカン（Ｈｙｃａｍｔｉｎ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、レチノイド、トレチノイン（ＡＴＲＡまたはＡｔｒａｌｉｎ（登録商標））、ベキサロテン（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））および三酸化ヒ素（Ａｒｓｅｎｏｘ（登録商標））から選択することができる。化学療法は、嚥下用の丸薬として投与することもでき、筋肉または脂肪組織への注射、静脈内注射、局所注射、または体腔への直接的な注射として投与することもできる。
【０１３８】
１つまたは複数のさらなる治療剤は、血管新生阻害剤を含みうる。血管新生阻害剤は、ベバシズマブ、イトラコナゾール、カルボキシアミドトリアゾール、ＴＮＰ−４７０、ＣＭ１０１、ＩＦＮアルファ、ＩＬ−１２、血小板因子４、スラミン、ＳＵ５４１６、トロンボスポンディン、ＶＥＧＦＲアンタゴニスト、ヘパリンを伴う血管新生抑制性ステロイド、軟骨（ＣＡＲ−ＥＣｉｌａｇｅ）由来血管新生阻害因子、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、アンギオスタチン、エンドスタチン、ソラフェニブ、スニチニブ、パゾパニブ、エベロリムス、２−メトキシエストラジオール、テコガラン、テトラチオモリブデート、サリドマイド、プロラクチン、αｖβ３阻害剤、リノマイド、タスキニモド、可溶性ＶＥＧＦＲ−１、可溶性ＮＲＰ−１、アンギオポエチン２、バソスタチン、カルレチクリン、ＴＩＭＰ、ＣＤＡＩ、Ｍｅｔｈ−１、Ｍｅｔｈ−２、インターフェロン−アルファ、インターフェロン−ベータ、インターフェロン−ガンマ、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−４、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、プロトロンビン、アンチトロンビンＩＩＩ断片、プロラクチン、ＶＥＧＩ、ＳＰＡＲＣ、オステオポンチン、マスピン、カンスタチン、プロリフェリン関連タンパク質、およびレスチンから選択することができる。
【０１３９】
１つまたは複数のさらなる治療剤は、ホルモン療法を含みうる。ホルモン療法は、抗エストロゲン（例えば、フルベストラント（Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標））、タモキシフェン、トレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）））；アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、エキセメスタン（Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標））、レトロゾール（Ｆｅｍａｒａ（登録商標）））；プロゲスチン（例えば、酢酸メゲストロール（Ｍｅｇａｃｅ（登録商標）））；エストロゲン；抗アンドロゲン（例えば、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、ニルタミド（Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（登録商標）））；ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）または黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニストまたはＬＨＲＨ類似体（例えば、ロイプロリド（Ｌｕｐｒｏｎ（登録商標））、ゴセレリン（Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標）））から選択することができる。
【０１４０】
１つまたは複数のさらなる治療剤は、ステロイドを含みうる。ステロイドは、コルチコステロイドでありうる。ステロイドは、コルチゾールまたはその誘導体でありうる。ステロイドは、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン（Ｓｏｌｕｍｅｄｒｏｌ（登録商標））、またはデキサメタゾンから選択することができる。
【０１４１】
ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つまたは複数のさらなる療法と共に投与することができる。１つまたは複数のさらなる療法は、レーザー療法を含みうる。１つまたは複数のさらなる療法は、放射線療法を含みうる。１つまたは複数のさらなる療法は、手術を含みうる。
【０１４２】
本明細書では、被験体における疾患または状態を処置するためのプラットフォーム、キット、および方法が開示される。被験体は、健常被験体でありうる。被験体は、疾患または状態を患っている可能性がある。被験体は、１つを超える疾患または状態を患っている可能性がある。被験体は、慢性リンパ性白血病を患っている可能性がある。被験体は、急性リンパ芽球性白血病を患っている可能性がある。被験体は、動物でありうる。被験体は、哺乳動物でありうる。哺乳動物は、ヒト、チンパンジー、ゴリラ、サル、ウシ、ウマ、ロバ、ラバ、イヌ、ネコ、ブタ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ラット、ハムスター、モルモット、またはマウスでありうる。被験体は、鳥類またはニワトリでありうる。被験体は、ヒトでありうる。被験体は、小児でありうる。小児は、急性リンパ芽球性白血病を患っている可能性がある。被験体は、６カ月齢未満でありうる。被験体は、約１歳、約２歳、約３歳、約４歳、約５歳、約６歳、約７歳、約８歳、約９歳、約１０歳、約１１歳、約１２歳、約１３歳、約１４歳、約１５歳、約１８歳、約２０歳、約２５歳、約３０歳、約３５歳、約４０歳、約４５歳、約５０歳、約５５歳、約６０歳、約６５歳、約７０歳、約７５歳、約８０歳、約８５歳、約９０歳、約９５歳、約１００歳、または約１０５歳でありうる。
【０１４３】
ＶＩＩ．エフェクター細胞を除去する方法
本明細書ではさらに、被験体におけるＣＡＲ−ＥＣ細胞を除去する方法であって、ＣＡＲ−ＥＣオフスイッチを投与するステップを含む方法が開示される。ＣＡＲ−ＥＣオフスイッチは、エフェクター細胞上の細胞表面マーカーを標的とする抗体または抗体断片を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣオフスイッチは、ＣＡＲ−ＥＣのＣＡＲが結合するペプチドを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣオフスイッチは、ＣＡＲ−ＥＣのＣＡＲが結合するＣＡＲ−ＢＰを含みうる。
【０１４４】
ＣＡＲ−ＥＣオフスイッチの抗体、抗体断片、またはペプチドは、薬物または毒素にコンジュゲートすることができる。薬物または毒素は、メイタンシン（maytasine）（例えば、ＤＭ１、ＤＭ４）、モノメチルアウリスタチンＥ、モノメチルアウリスタチンＦ、Ｋｉ−４．ｄｇＡ、ドラスタチン１０、カリケアミシン、ＳＮ−３８、デュオカルマイシン、イリノテカン、リシン、サポリン、ゲロニン、ヨウシュヤマゴボウの抗ウイルス性タンパク質、ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ外毒素Ａ、またはジフテリア毒素から選択することができる。毒素は、毒物、細菌性毒素（例えば、破傷風、ジフテリアを引き起こす細菌性毒素）、植物毒素、または動物毒素を含みうる。毒素は、ヘビ毒でありうる。毒素は、ビンブラスチンを含みうる。毒素は、アウリスタチンを含みうる。毒素は、リポソーム膜で覆われた小胞内に含有されうる。毒素が、リポソーム膜で覆われた小胞内に含有される場合、抗体は、小胞に結合している。
【０１４５】
細胞表面マーカーは、ウイルスタンパク質またはその断片でありうる。代替的に、または加えて、エフェクター細胞は、細胞表面マーカーではない、ウイルスタンパク質またはその断片を発現させる。ウイルスタンパク質またはその断片を発現させるエフェクター細胞は、薬物でターゲティングすることができる。エフェクター細胞が、ウイルスタンパク質またはその断片を含む場合、薬物は、アバカビル、アシクロビル、アシクロビル、アデフォビル、アマンタジン、アンプレナビル、アンプリゲン、アルビドール、アタザナビル、アトリプラ、バラビル、ボセプレビル、シドフォビル、コンビビル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エドクスジン、エファビレンツ、エムトリシタビン、エンフビルチド、エンテカビル、侵入阻害剤、ファムシクロビル、固定用量の組合せによる抗レトロウイルス薬、フォミビルセン、フォサンプレナビル、フォスカルネット、フォスフォネット、融合阻害剤、ガンシクロビル、イバシタビン、イムノビル、イドクスウリジン、イミキモド、インジナビル、イノシン、インテグラーゼ阻害剤、ＩＩＩ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン、ラミブジン、ロピナビル、ロビリド、マラビロク、モロキシジン、メチサゾン、ネルフィナビル、ネビラピン、ネキサビル、ヌクレオシド類似体、オセルタミビル、ペグインターフェロンアルファ−２ａ、ペンシクロビル、ペラミビル、プレコナリル、ポドフィロトキシン、プロテアーゼ阻害剤（protease  inhibiro）、ラルテグラビル、逆転写酵素阻害剤、リバビリン、リマンタジン、リトナビル、ピラミジン、サキナビル、ソフォスブビル、スタブジン、相乗作用増強レトロウイルス薬、ティーツリー油、テラプレビル、テノホビル、テノホビルジソプロシキル、チプラナビル、トリフルリジン、トリジビル、トロマンタジン、ツルバダ、バラシクロビル、ビクリビロック、ビダラビン、ビラミジン、ザシタビン、ザナミビル、またはジドブジンを含む群から選択することができる。薬物は、ガンシクロビルでありうる。薬物は、アシクロビルでありうる。
【０１４６】
ＶＩＩＩ．医薬組成物
本明細書では、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチのうちの１つまたは複数を含む医薬組成物が開示される。組成物はさらに、１つまたは複数の薬学的に許容される塩、添加剤、またはビヒクルを含みうる。本医薬組成物における使用のための、薬学的に許容される塩、添加剤、またはビヒクルは、担体、添加剤、賦形剤（ｄｉｌｕｅｎｔ）、抗酸化剤、保存剤、着色剤、香味剤、および希釈剤（ｄｉｌｕｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、充填剤、増量剤、バッファ（ｂｕｆｆｅｒ）、送達媒体、等張剤、共溶媒、湿潤剤、錯化剤、緩衝剤（ｂｕｆｆｅｒｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、抗微生物剤、および界面活性剤を含む。
【０１４７】
血清アルブミンと混合された中性緩衝食塩液または食塩液は、例示的な適切な担体である。医薬組成物は、アスコルビン酸などの抗酸化剤；低分子量のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；ならびに／またはＴｗｅｅｎ、プルロニック、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含みうる。これもまた、例として述べると、適切な等張性増強剤は、アルカリ金属のハロゲン化物（好ましくは塩化ナトリウムまたは塩化カリウム）、マンニトール、ソルビトールなどを含む。適切な保存剤は、塩化ベンザルコニウム、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸などを含む。また、過酸化水素も、保存剤として使用することができる。適切な共溶媒は、グリセリン、プロピレングリコール、およびＰＥＧを含む。適切な錯化剤は、カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ−シクロデキストリン、またはヒドロキシ−プロピル−ベータ−シクロデキストリンを含む。適切な界面活性剤または湿潤剤は、ソルビタンエステル、ポリソルベート８０などのポリソルベート、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポール（tyloxapal）などを含む。バッファは、酢酸バッファ、ホウ酸バッファ、クエン酸バッファ、リン酸バッファ、重炭酸バッファ、またはトリス−ＨＣｌバッファなど、従来のバッファでありうる。酢酸バッファは、約ｐＨ４〜５．５であることが可能であり、トリスバッファは、約ｐＨ７〜８．５でありうる。さらなる医薬剤については、「Remington's  Pharmaceutical  Sciences」、１８版、A.  R.  Gennaro編、Mack  Publishing  Company、１９９０年に示されている。
【０１４８】
組成物は、液体形態、あるいは凍結乾燥形態または冷凍乾燥形態であり得、１つまたは複数の凍結乾燥保護剤、添加剤、界面活性剤、高分子量の構造（structural  additive）および／または増量剤（例えば、米国特許第６，６８５，９４０号、同第６，５６６，３２９号、および同第６，３７２，７１６号を参照されたい）を含みうる。一実施形態には、スクロース、ラクトース、またはトレハロースなどの非還元糖である、凍結乾燥保護剤が含まれる。一般に含まれる凍結乾燥保護剤の量は、再構成すると、結果として得られる製剤が等張性となるような量であるが、また、高張性またはわずかに低張性の製剤も適しうる。加えて、凍結乾燥保護剤の量は、凍結乾燥の際に、タンパク質の容認できない量の分解および／または凝集を防止するのに十分な量でもあるべきである。例示的な凍結乾燥保護剤濃度は、あらかじめ凍結乾燥させた製剤中の糖（例えば、スクロース、ラクトース、トレハロース）では、約１０ｍＭ〜約４００ｍＭである。別の実施形態には、例えば、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０）；ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）；ポリ（エチレングリコール）フェニルエーテル（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ）；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；ラウリル硫酸ナトリウム（sodium  laurel  sulfate）；オクチルグリコシドナトリウム；ラウリルスルホベタイン、ミリスチルスルホベタイン、リノレイルスルホベタイン、またはステアリルスルホベタイン；ラウリルサルコシン、ミリスチルサルコシン、リノレイルサルコシン、またはステアリルサルコシン；リノレイルベタイン、ミリスチルベタイン、またはセチルベタイン；ラウロアミドプロピルベタイン、コカミドプロピルベタイン、リノレアミドプロピルベタイン、ミリスタミドプロピルベタイン、パルミドプロピルベタイン、またはイソステアラミドプロピルベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）；ミリスタミドプロピルジメチルアミン、パルミドプロピルジメチルアミン、またはイソステアラミドプロピルジメチルアミン；ナトリウムメチルココイル−タウレート、または二ナトリウムメチルオフェイル−タウレート（disodium  methyl  ofeyl-taurate）；ならびにＭＯＮＡＱＵＡＴ（商標）シリーズ（Ｍｏｎａ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｐａｔｅｒｓｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、ポリエチレングリコール（polyethyl  glycol）、ポリプロピレングリコール（polypropyl  glycol）、およびエチレングリコールとプロピレングリコールとのコポリマー（例えば、プルロニック、ＰＦ６８など）などの非イオン性界面活性剤およびイオン界面活性剤など、界面活性剤が含まれる。あらかじめ凍結乾燥させた製剤中に存在しうる界面活性剤の例示的な量は、約０．００１〜０．５％である。高分子量の構造添加物（例えば、充填剤、結合剤）は、例えば、アカシア、アルブミン、アルギン酸、リン酸カルシウム（二塩基性）、セルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶セルロース、デキストラン、デキストリン、デキストレート、スクロース、チロース、アルファ化デンプン、硫酸カルシウム、アミロース、グリシン、ベントナイト、マルトース、ソルビトール、エチルセルロース、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二ナトリウム、ピロ亜硫酸二ナトリウム、ポリビニルアルコール、ゼラチン、ブドウ糖、グアーガム、液体グルコース、圧縮糖、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、マルトデキストリン、ポリエチレンオキシド、ポリメタクリレート、ポビドン、アルギン酸ナトリウム、トラガントガム、微結晶セルロース、デンプン、およびゼインを含みうる。高分子量の構造添加物の例示的な濃度は、０．１重量％〜１０重量％である。他の実施形態には、増量剤（例えば、マンニトール、グリシン）が含まれうる。
【０１４９】
組成物は、非経口投与に適しうる。例示的な組成物は、動物への、当業者に利用可能な任意の経路であって、関節内経路、皮下経路、静脈内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、脳内（実質内）経路、脳室内経路、筋肉内経路、眼内経路、動脈内経路、または病変内経路などの経路による注射または注入に適する。非経口製剤は、任意選択で、薬学的に許容される保存剤を含有する、滅菌、発熱物質非含有、等張性の水溶液であることが典型的である。
【０１５０】
非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルである。水性担体は、水、アルコール溶液／水溶液、エマルジョン、または食塩液および緩衝媒体を含む懸濁液を含む。非経口ビヒクルは、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸加リンゲル液、または固定油を含む。静脈内ビヒクルは、リンゲルデキストロースに基づく補充剤など、流体補充剤および栄養物補充剤、電解質補充剤などを含む。また、例えば、抗微生物剤、抗酸化剤、キレート化剤、不活性ガスなどのような、保存剤および他の添加物も、存在しうる。一般に、Remington’s  Pharmaceutical  Science、１６版、Mack  Eds.、１９８０年を参照されたい。
【０１５１】
本明細書で記載される医薬組成物は、生成物の局所濃度（例えば、ボーラス効果、デポ剤効果）および／または特定の局所環境内の安定性もしくは半減期の増加をもたらす様式で、制御送達または持続送達のために製剤化することができる。組成物は、本明細書で開示される、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ、ポリペプチド、核酸、またはベクターの製剤であって、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸などのポリマー化合物の粒子状調製物、ならびに生分解性マトリックス、注射用マイクロスフェア、マイクロカプセル状粒子、マイクロカプセル、生体浸食性粒子ビーズ、リポソーム、および活性剤の制御放出または持続放出をもたらし、これにより、デポ注射として送達されうる、植え込み用送達デバイスなどの媒介物（agent）などを伴う製剤を含みうる。このような持続送達手段または制御送達手段を製剤化するための技法は、公知であり、様々なポリマーが、薬物の制御放出および制御送達のために開発および使用されている。このようなポリマーは、生分解性および生体適合性であることが典型的である。鏡像異性ポリマーセグメントまたは鏡像異性ポリペプチドセグメントと、ハイドロゲルとの複合体化により形成されるポリマーハイドロゲルを含み、温度感受性またはｐＨ感受性を有するポリマーハイドロゲルは、生体活性のタンパク質薬剤（例えば、極めて長鎖のＣＤＲ３を含む抗体）の封入に関与する温和な水性条件のために、薬物のデポ効果をもたらすために望ましい場合がある。例えば、医薬組成物の送達のための、制御放出用多孔性ポリマー微粒子についての、ＷＯ９３／１５７２２における記載を参照されたい。この目的に適する材料には、ポリラクチド（例えば、米国特許第３，７７３，９１９号を参照されたい）、ポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８Ａ）などのポリ−（ａ−ヒドロキシカルボン酸）のポリマー、Ｌ−グルタミン酸とガンマエチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー（Sidmanら、Biopolymers、２２巻：５４７〜５５６頁（１９８３年））、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）（Langerら、J.  Biomed.  Mater.  Res.、１５巻：１６７〜２７７頁（１９８１年）；およびLanger、Chem.  Tech.、１２巻：９８〜１０５頁（１９８２年））、エチレン酢酸ビニル、またはポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。他の生分解性ポリマーは、ポリ（ラクトン）、ポリ（アセタール）、ポリ（オルトエステル）、およびポリ（オルトカーボネート）を含む。持続放出組成物はまた、当技術分野で公知の複数の方法（例えばEppsteinら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、８２巻：３６８８〜９２頁（１９８５年）を参照されたい）のいずれかにより調製しうる、リポソームを含みうる。担体それ自体またはその分解生成物は、標的組織内で非毒性であるべきであり、状態をさらに悪化させるべきでない。これは、標的障害の動物モデルにおける日常的なスクリーニングにより決定することもでき、このようなモデルが利用可能でない場合は、正常な動物において決定することもできる。持続放出のための、組換えタンパク質のマイクロカプセル化は、ヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、ヒトインターフェロン（ｒｈＩＦＮ）、インターロイキン−２、およびＭＮ  ｒｇｐ１２０に対して実施されて成功している。Johnsonら、Nat.  Med.、２巻：７９５〜７９９頁（１９９６年）；Yasuda、Biomed.  Ther.、２７巻：１２２１〜１２２３頁（１９９３年）；Horaら、Bio/Technology、８巻：７５５〜７５８頁（１９９０年）；Cleland、「Design  and  Production  of  Single  Immunization  Vaccines  Using  Polylactide  Polyglycolide  Microsphere  Systems」、Vaccine  Design中:  The  Subunit  and  Adjuvant  Approach、PowellおよびNewman編（Plenum  Press:  New  York、１９９５年）、４３９〜４６２頁；ＷＯ９７／０３６９２、ＷＯ９６／４００７２、ＷＯ９６／０７３９９；ならびに米国特許第５，６５４，０１０号。これらのタンパク質の持続放出製剤は、その生体適合特性および広範にわたる生分解特性のために、ポリ乳酸ポリグリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）を使用して開発した。ＰＬＧＡの分解生成物である、乳酸およびグリコール酸は、ヒト体内で速やかにクリアランスされうる。さらに、このポリマーの分解可能性は、その分子量および組成にも依存しうる（Lewis、「Controlled  release  of  bioactive  agents  from  lactide/glycolide  polymer」、M.  ChasinおよびR.  Langer（編）中、Biodegradable  Polymers  as  Drug  Delivery  Systems（Marcel  Dekker:  New  York、１９９０年）、１〜４１頁）。持続放出組成物のさらなる例は、例えば、ＥＰ５８，４８１Ａ、米国特許第３，８８７，６９９号、ＥＰ１５８，２７７Ａ、カナダ特許第１１７６５６５号、U.  Sidmanら、Biopolymer、２２巻、５４７頁［１９８３年］、R.  Langerら、Chem.  Tech.、１２巻、９８頁［１９８２年］、Sinhaら、J.  Control.  Release、９０巻、２６１頁［２００３年］、Zhuら、Nat.  Biotechnol.、１８巻、２４頁［２０００年］；ならびにDaiら、Colloids  Surf  B  Biointerfaces、４１巻、１１７頁［２００５年］を含む。
【０１５２】
また、生体接着性ポリマーも、本開示の組成物中の使用または本開示の組成物を伴う使用のために想定される。生体接着物質とは、長期にわたり生体基材に接着することが可能な、合成材料および天然に存在する材料である。例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌおよびポリカルボフィルはいずれも、ポリ（アクリル酸）の合成架橋誘導体である。天然に存在する物質に基づく生体接着性送達系は、例えば、ヒアルロナンとしてもまた公知のヒアルロン酸を含む。ヒアルロン酸とは、Ｄ−グルクロン酸およびＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの残基からなる、天然に存在するムコ多糖である。ヒアルロン酸は、脊椎動物の細胞外組織マトリックス内であって、結合組織内、ならびに滑液中および眼の硝子体液中および房水中を含む組織マトリックス内で見出される。ヒアルロン酸のエステル化誘導体は、生体適合性であり、かつ、生分解性である送達における使用のためのマイクロスフェアを生成するのに使用されている（例えば、Cortivoら、Biomaterials（１９９１年）、１２巻：７２７〜７３０頁；ＥＰ５１７，５６５；ＷＯ９６／２９９９８；Illumら、J.  Controlled  Rel.、（１９９４年）、２９巻：１３３〜１４１頁を参照されたい）。
【０１５３】
生分解性ポリマーマトリックスおよび非生分解性ポリマーマトリックスのいずれも、本開示の組成物を送達するのに使用することができ、このようなポリマーマトリックスは、天然または合成のポリマーを含みうる。生分解性マトリックスが好ましい。放出が生じる間の期間は、ポリマーの選択に基づく。数時間〜３〜１２カ月間の範囲の期間にわたる放出が最も所望されることが典型的である。生分解性送達系を形成するのに使用しうる、例示的な合成ポリマーは、乳酸およびグリコール酸のポリマー、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、ポリアルキレンテレフタレート（terepthalate）、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリビニルハライド、ポリビニルピロリドン、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリ酸無水物、ポリウレタンおよびそのコポリマー、ポリ（酪酸（butic  acid））、ポリ（吉草酸）、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、アクリル酸エステルおよびメタクリル酸エステルのポリマー、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシルエチルセルロース、三酢酸セルロース、硫酸セルロースナトリウム塩、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ酢酸ビニル、ポリビニルクロリド、ポリスチレン、およびポリビニルピロリドンを含む。例示的な天然のポリマーは、アルギネート、ならびにデキストランおよびセルロースを含む他の多糖、コラーゲン、これらの化学的誘導体（化学基、例えば、アルキル、アルキレンの置換、付加、ヒドロキシル化、酸化、および当業者により日常的に施される他の修飾）、アルブミンおよび他の親水性タンパク質、ゼインおよび他のプロラミン、ならびに疎水性タンパク質、コポリマー、ならびにこれらの混合物を含む。一般に、これらの材料は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける酵素的加水分解または水への曝露により、表面またはバルクにおける浸食により分解される。ポリマーは、任意選択で、その重量の最大約９０％までの水を吸収することが可能であり、さらに、任意選択で、多価イオンまたは他のポリマーにより架橋される、ハイドロゲルの形態である（例えば、ＷＯ０４／００９６６４、ＷＯ０５／０８７２０１、Sawhneyら、Macromolecules、１９９３年、２６巻、５８１〜５８７頁を参照されたい）。
【０１５４】
送達系はまた、コレステロール、コレステロールエステルなどのステロール、および脂肪酸、またはモノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリドなどの中性脂肪を含む脂質である非ポリマー系；ハイドロゲル放出系；シラスティック系；ペプチドベースの系；蝋によるコーティング；従来の結合剤および添加剤を使用する圧縮錠；部分的に融合させた埋没物（implant）なども含む。具体例は、（ａ）生成物が、米国特許第４，４５２，７７５号、同第４，６７５，１８９号、および同第５，７３６，１５２号において記載されているマトリックスなどのマトリックス内の形態で含有される浸食系；ならびに（ｂ）生成物が、米国特許第３，８５４，４８０号、同第５，１３３，９７４号、および同第５，４０７，６８６号において記載されているポリマーなどのポリマーから、制御された速度で浸み広がる拡散系を含むがこれらに限定されない。生成物を含有するリポソームは、例えば、ＤＥ３，２１８，１２１；Epsteinら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、８２巻：３６８８〜３６９２頁（１９８５年）；Hwangら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、７７巻：４０３０〜４０３４頁（１９８０年）；ＥＰ５２，３２２；ＥＰ３６，６７６；ＥＰ８８，０４６；ＥＰ１４３，９４９；ＥＰ１４２，６４１；ＪＰ８３−１１８００８；米国特許第４，４８５，０４５号、および同第４，５４４，５４５号；およびＥＰ１０２，３２４など、公知の方法（methods  known  methods）により調製することができる。
【０１５５】
代替的に、または加えて、組成物は、罹患領域への、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを吸収させるかまたは封入した、膜、スポンジ、または他の適切な材料の植え込みを介して、局所投与することができる。植え込みデバイスを使用する場合、デバイスは任意の適切な組織または器官へと植え込むことができ、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチ、核酸、またはベクターの送達は、ボーラスによる、または持続投与による、または持続注入を使用するカテーテルによるデバイスを介した直接的送達の場合もある。
【０１５６】
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを含む医薬組成物は、例えば、乾燥粉末など、吸入用に製剤化することができる。吸入溶液はまた、エアゾール送達のための液化噴霧体中でも製剤化することができる。さらに別の製剤では、溶液は、噴霧化することもできる。肺内投与用のさらなる医薬組成物は、例えば、化学修飾されたタンパク質の肺内送達について開示する、ＷＯ９４／２００６９において記載されている医薬組成物を含む。肺内送達では、粒子サイズは、肺の遠位部への送達に適するべきである。例えば、粒子サイズは、１μｍ〜５μｍであり得るが、例えば、各粒子が多孔性に富む場合は、より大きな粒子も使用することができる。
【０１５７】
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを含有する、ある特定の製剤は、経口投与することができる。このようにして投与される製剤は、錠剤およびカプセル剤など、固体剤形の調合で通常使用される担体を伴い製剤化することもでき、これらを伴わずに製剤化することもできる。例えば、カプセル剤は、消化管内で、バイオアベイラビリティーが最大化され、全身循環以前の分解が最小化される時点において、製剤の活性部分を放出するようにデザインすることができる。さらなる薬剤も、選択的結合剤（binding  agent）の吸収を容易とするように組み入れることができる。また、賦形剤、香味剤、融点の低い蝋、植物油、滑沢剤、懸濁化剤、錠剤崩壊剤、および結合剤（binder）も、用いることができる。
【０１５８】
別の調製物は、錠剤の製造に適する非毒性の添加剤を伴う混合物中に有効量の、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを伴いうる。錠剤を滅菌水中または別の適切なビヒクル中に溶解させることにより、溶液は、単位用量形態で調製することができる。適切な添加剤は、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムもしくは重炭酸ナトリウム、ラクトース、またはリン酸カルシウムなど、不活性の賦形剤；あるいはデンプン、ゼラチン、またはアカシアなどの結合剤；あるいはステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、または滑石などの滑沢剤を含むがこれらに限定されない。
【０１５９】
適切な医薬製剤および／または好ましい医薬製剤は、意図される投与経路、送達フォーマット、および所望の投与量に応じて、本開示および製剤化技術についての一般的知見に照らして決定することができる。投与方式に関わらず、有効用量は、患者の体重、体表面積、または器官のサイズに従い計算することができる。本明細書で記載される製剤の各々を伴う処置に適する投与量を決定するための計算のさらなる精緻化は、当技術分野で日常的になされており、当技術分野で日常的に実施される作業の範囲内にある。適切な投与量は、適切な用量反応データの使用により確認することができる。
【０１６０】
ＩＸ．ＣＡＲ−ＥＣスイッチの生成方法
本明細書では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成する方法であって、１つまたは複数のポリペプチドを、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチまたはその部分をコードする、１つまたは複数の配列を有する１つまたは複数のポリヌクレオチドを含む、１つまたは複数のベクターから発現させるステップを含み、キメラ抗原受容体−エフェクター細胞スイッチが、ペプチド抗原（ＣＡＲ−ＢＰ）と、ターゲティングポリペプチドとを含む方法が開示される。ターゲティング部分は、ターゲティングポリペプチドを含みうる。一般に、方法は、ＣＡＲ−ＢＰをコードするポリヌクレオチドを、ターゲティングポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと融合させるか、またはそれとグラフトするステップを含む。融合させるか、またはグラフトするステップは、当業者に公知の、任意の標準的なクローニング方法により実行することができる。ＣＡＲ−ＢＰおよびターゲティングポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを融合させるか、またはグラフトするステップは、ポリヌクレオチドの酵素消化、ポリヌクレオチドのライゲーション、および／またはポリヌクレオチドの増幅を含みうる。
【０１６１】
ペプチド抗原は、ターゲティングポリペプチドのＮ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ターゲティングポリペプチドのＣ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ターゲティングポリペプチド内にグラフトすることができる。ターゲティングポリペプチドは、ターゲティング抗体または抗体断片を含みうる。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片のＮ末端と融合させることができる。ペプチド抗原は、ターゲティング抗体または抗体断片のＣ末端と融合させることができる。
【０１６２】
本明細書で使用される「融合させた」という用語は、ＣＡＲ−ＢＰの末端を、ターゲティングポリペプチドの末端と接合させることを指す場合がある。ＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティングポリペプチドの任意のアミノ酸を置き換えるか、または除去せずに、ターゲティングポリペプチドの末端と融合させることができる。ＣＡＲ−ＢＰを、ターゲティングポリペプチドの末端と融合させることは、アミノ酸を、ターゲティングポリペプチドの末端において除去するか、または置き換えることを含みうる。アミノ酸を、ターゲティングポリペプチドの末端において除去するか、または置き換えることは、約１〜約２０のアミノ酸を、ターゲティングポリペプチドの末端において除去するか、または置き換えることを含みうる。ＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティングポリペプチドの末端へと、リンカーを介して融合させることができる。リンカーを、ＣＡＲ−ＢＰと融合させて、ＣＡＲ−ＢＰ−リンカー中間体を生成することができる。リンカーを、ＣＡＲ−ＢＰのＮ末端と融合させて、ＣＡＲ−ＢＰ−リンカー中間体を生成することができる。リンカーを、ＣＡＲ−ＢＰのＣ末端と融合させて、ＣＡＲ−ＢＰ−リンカー中間体を生成することができる。ＣＡＲ−ＢＰ−リンカー中間体は、ターゲティングポリペプチドと融合させることができる。ＣＡＲ−ＢＰ−リンカー中間体は、ターゲティングポリペプチドのＮ末端と融合させることができる。ＣＡＲ−ＢＰ−リンカー中間体は、ターゲティングポリペプチドのＣ末端と融合させることができる。第１のＣＡＲ−ＢＰリンカー中間体は、ターゲティングポリペプチドのＮ末端と融合させることが可能であり、第２のＣＡＲ−ＢＰリンカー中間体は、ターゲティングポリペプチドのＣ末端と融合させることができる。第１のＣＡＲ−ＢＰリンカー中間体のＣＡＲ−ＢＰは、第２のＣＡＲ−ＢＰリンカー中間体のＣＡＲ−ＢＰと同じまたは同様でありうる。第１のＣＡＲ−ＢＰリンカー中間体のＣＡＲ−ＢＰは、第２のＣＡＲ−ＢＰリンカー中間体のＣＡＲ−ＢＰと異なりうる。
【０１６３】
本明細書で使用される「グラフトされた」という用語は、ＣＡＲ−ＢＰを、ターゲティングポリペプチド内に（例えば、ターゲティングポリペプチドの２つのアミノ酸の間に）挿入することを指す場合がある。ＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティングポリペプチドの任意のアミノ酸を置き換えるか、または除去せずに、ターゲティングポリペプチド内にグラフトすることができる。ＣＡＲ−ＢＰを、ターゲティングポリペプチド内にグラフトすることは、アミノ酸を、ターゲティングポリペプチド内で除去するか、または置き換えることを含みうる。アミノ酸を、ターゲティングポリペプチド内で除去するか、または置き換えることは、約１〜約２０のアミノ酸を、ターゲティングポリペプチド内で除去するか、または置き換えることを含みうる。ＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティングポリペプチド内に１つのリンカーを介してグラフトすることができる。ＣＡＲ−ＢＰは、ターゲティングポリペプチド内に２つのリンカーを介してグラフトすることができる。リンカーを、ＣＡＲ−ＢＰのＮ末端と融合させて、ＣＡＲ−ＢＰ−リンカー中間体を生成することができる。リンカーを、ＣＡＲ−ＢＰのＣ末端と融合させて、ＣＡＲ−ＢＰ−リンカー中間体を生成することができる。第１のリンカーを、ＣＡＲ−ＢＰのＮ末端と融合させ、第２のリンカーを、ＣＡＲ−ＢＰのＣ末端と融合させて、ＣＡＲ−ＢＰ−リンカー中間体を生成することができる。ＣＡＲ−ＢＰリンカー中間体は、ターゲティングポリペプチド内にグラフトすることができる。第１のＣＡＲ−ＢＰリンカー中間体は、ターゲティングポリペプチド内にグラフトすることができ、第２のＣＡＲ−ＢＰリンカー中間体は、ターゲティングポリペプチド内にグラフトすることができる。第１のＣＡＲ−ＢＰリンカー中間体は、ターゲティングポリペプチドの第１のドメイン内にグラフトすることができ、第２のＣＡＲ−ＢＰリンカー中間体は、ターゲティングポリペプチドの第２のドメイン内にグラフトすることができる。ターゲティングポリペプチドの第１のドメインは、ターゲティングポリペプチドの第２のドメインと同じでありうる。ターゲティングポリペプチドの第１のドメインは、ターゲティングポリペプチドの第２のドメインと異なりうる。第１のＣＡＲ−ＢＰリンカー中間体のＣＡＲ−ＢＰは、第２のＣＡＲ−ＢＰリンカー中間体のＣＡＲ−ＢＰと同じまたは同様でありうる。第１のＣＡＲ−ＢＰリンカー中間体のＣＡＲ−ＢＰは、第２のＣＡＲ−ＢＰリンカー中間体のＣＡＲ−ＢＰと異なりうる。そうでないことが明示されない限りにおいて、本明細書で使用される「〜をグラフトする」および「〜を挿入する」という用語は、互換的に使用される。
【０１６４】
ターゲティング部分は、抗体または抗体断片を含みうる。抗体または抗体断片は、重鎖および軽鎖またはその断片を含みうる。方法は、重鎖を発現させるステップを含むことが可能であり、この場合、ペプチド抗原は、重鎖の末端と融合する。方法は、重鎖を発現させるステップを含むことが可能であり、この場合、ペプチド抗原は、重鎖内にグラフトする。方法は、軽鎖を発現させるステップを含むことが可能であり、この場合、ペプチド抗原は、軽鎖の末端と融合する。方法は、軽鎖を発現させるステップを含むことが可能であり、この場合、ペプチド抗原は、軽鎖内にグラフトする。
【０１６５】
方法はさらに、ターゲティングポリペプチドおよび／またはペプチド抗原をコードする、１つまたは複数のポリヌクレオチドを、発現ベクターへとクローニングするステップを含みうる。方法はさらに、ターゲティングポリペプチドおよび／またはペプチド抗原をコードする、１つまたは複数のポリヌクレオチドの、発現ベクターへのライゲーションを含みうる。発現ベクターは、原核生物発現ベクターでありうる。発現ベクターは、真核生物発現ベクターでありうる。発現ベクターは、哺乳動物発現ベクターでありうる。発現ベクターは、ウイルス発現ベクターでありうる。方法はさらに、ターゲティングポリペプチドおよび／またはペプチド抗原をコードする、１つまたは複数のポリヌクレオチドの、発現ベクターへのクローニングを検証するステップであって、発現ベクターを配列決定すること、ベクターのゲル電気泳動を行うこと、ならびに／またはターゲティングポリペプチドおよび／もしくはペプチド抗原をＳＤＳ  ｐａｇｅゲル上で検査することを含むステップを含みうる。
【０１６６】
方法はさらに、ターゲティングポリペプチドおよび／またはペプチド抗原をコードするポリヌクレオチドを増幅し、ターゲティングポリペプチドおよび／またはペプチド抗原を、発現ベクターへとクローニングするステップを含みうる。ターゲティングポリペプチドおよび／またはペプチド抗原をコードするポリヌクレオチドを増幅するステップは、遺伝子と少なくとも部分的に相補的なオリゴヌクレオチドを合成することを含みうる。オリゴヌクレオチドは、ポリヌクレオチドにアニールするのに十分な程度に、遺伝子と相補的でありうる。オリゴヌクレオチドは、リンカー配列を含みうる。リンカー配列は、配列番号４０〜４４から選択することができる。
【０１６７】
方法はさらに、細胞に発現ベクターをトランスフェクトするステップ、または細胞に発現ベクターを感染させるステップを含みうる。方法はさらに、ターゲティングポリペプチドおよび／またはペプチド抗原を、細胞内で発現させるステップを含みうる。方法はさらに、ターゲティングポリペプチドおよび／またはペプチド抗原を、無細胞株内で発現させるステップを含みうる。方法はさらに、発現ベクターを含むウイルスを生成するステップを含みうる。方法はさらに、ウイルスを増殖させるステップを含みうる。方法はさらに、細胞に発現ベクターを含むウイルスを感染させるステップを含みうる。方法はさらに、細胞を増殖させるステップを含みうる。
【０１６８】
本明細書では、抗体または抗体断片、ペプチド抗原またはターゲティングペプチドをグラフトして、ＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成する方法が開示される。方法は、ＣＡＲ−ＢＰを、抗体または抗体断片にグラフトするステップを含みうる。方法は、ＣＡＲ−ＢＰを、抗体または抗体断片のＮ末端、Ｃ末端、または内部部位にグラフトするステップを含みうる。ＣＡＲ−ＢＰは、抗体または抗体断片のＣＬドメインにグラフトすることができる。ＣＡＲ−ＢＰは、抗体または抗体断片のＣＬドメインのループにグラフトすることができる。方法は、抗体または抗体断片を、ＣＡＲ−ＢＰにグラフトするステップを含みうる。方法は、抗体または抗体断片を、ＣＡＲ−ＢＰのＮ末端、Ｃ末端、または内部部位にグラフトするステップを含みうる。方法は、ＣＡＲ−ＢＰを、ターゲティングペプチドにグラフトするステップを含みうる。方法は、ＣＡＲ−ＢＰを、ターゲティングペプチドのＮ末端、Ｃ末端、または内部部位にグラフトするステップを含みうる。方法は、ターゲティングペプチドを、ＣＡＲ−ＢＰにグラフトするステップを含みうる。方法は、ターゲティングペプチドを、ＣＡＲ−ＢＰのＮ末端、Ｃ末端、または内部部位にグラフトするステップを含みうる。
【０１６９】
ＣＡＲ−ＢＰ、ターゲティングペプチド、抗体または抗体断片は、１つまたは複数のリンカーを含むことが可能であり、この場合、リンカーは、ＣＡＲ−ＢＰ、ターゲティングペプチド、抗体または抗体断片のＮ末端および／またはＣ末端に配置される。方法は、抗体もしくは抗体断片、ＣＡＲ−ＢＰ、またはターゲティングペプチドを、リンカーによりグラフトするステップを含みうる。リンカーは、（ＧＳＳＳＳ）ｎを含みうる。
【０１７０】
グラフトするステップは、ＣＡＲ−ＥＣスイッチをコードする核酸を生成することを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチをコードする核酸を生成することは、１つまたは複数のポリメラーゼ連鎖反応を含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチをコードする核酸を生成することは、１つまたは複数の核酸酵素消化を含みうる。酵素消化は、部位特異的でありうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチをコードする核酸を生成することは、１つまたは複数のライゲーションを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成する方法は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチをコードする核酸を、ＣＡＲ−ＥＣスイッチベクターへと組み込むステップを含みうる。ベクターは、発現ベクターでありうる。発現ベクターは、構成的プロモーター、誘導的プロモーター、および／または条件的プロモーターを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチをコードする核酸またはＣＡＲ−ＥＣスイッチベクターは、細胞内で発現させることができ、結果として得られるＣＡＲ−ＥＣスイッチは、単離および精製することができる。細胞は、原核生物細胞でありうる。細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉでありうる。細胞は、真核生物細胞でありうる。細胞は、哺乳動物細胞でありうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチをコードする核酸またはＣＡＲ−ＥＣスイッチベクターは、無細胞株内で発現させることができる。代替的に、または加えて、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、遊離アミノ酸から合成することができる。
【０１７１】
ＣＡＲ−ＥＣスイッチおよびその部分の精製
本明細書では、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを精製する方法であって、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを、ＣＡＲ−ＥＣスイッチ生成系の構成要素（例えば、細胞破砕物、遊離アミノ酸）から分離するステップを含む方法が開示される。ＣＡＲ−ＥＣスイッチを精製するステップは、１つまたは複数の濃縮用カラム、電気泳動、濾過、遠心分離、クロマトグラフィー、またはこれらの組合せの使用を含みうる。クロマトグラフィーは、サイズ排除クロマトグラフィーを含みうる。さらなるクロマトグラフィー法は、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、金属結合クロマトグラフィー、イムノアフィニティークロマトグラフィー、および高速液体クロマトグラフィーまたは高圧液体クロマトグラフィーを含むがこれらに限定されない。電気泳動は、変性電気泳動または非変性電気泳動を含みうる。
【０１７２】
ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、１つまたは複数のペプチドタグを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチを精製する方法は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの１つまたは複数のペプチドタグを、捕捉剤（capturing  agent）に結合させるステップを含みうる。捕捉剤は、抗体、カラム、ビーズ、およびこれらの組合せから選択することができる。１つまたは複数のタグは、１つまたは複数のプロテアーゼにより切断されうる。タグの例は、ポリヒスチジン、ＦＬＡＧ（登録商標）タグ、ＨＡ、ｃ−ｍｙｃ、Ｖ５、キチン結合タンパク質（ＣＢＰ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、およびグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を含むがこれらに限定されない。ペプチドタグは、ＣＡＲ−ＢＰでありうる。ペプチドタグは、ＨＴＰでありうる。ペプチドタグは、酵母転写因子ＧＣＮ４でありうる。
【０１７３】
方法はさらに、ＣＡＲ−ＢＰ、ターゲティングポリペプチド、および／またはＣＡＲ−ＥＣスイッチの凍結乾燥または超遠心分離を含みうる。
【０１７４】
ＣＡＲ−ＢＰ、ターゲティングポリペプチド、および／またはＣＡＲ−ＥＣスイッチの純度は、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはこれを上回る％と同等でありうるか、または５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはこれを上回る％を超えうる。ＣＡＲ−ＢＰ、ターゲティングポリペプチド、および／またはＣＡＲ−ＥＣスイッチの純度は、８５％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。ＣＡＲ−ＢＰ、ターゲティングポリペプチド、および／またはＣＡＲ−ＥＣスイッチの純度は、９０％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。ＣＡＲ−ＢＰ、ターゲティングポリペプチド、および／またはＣＡＲ−ＥＣスイッチの純度は、９５％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。ＣＡＲ−ＢＰ、ターゲティングポリペプチド、および／またはＣＡＲ−ＥＣスイッチの純度は、９７％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。
【０１７５】
本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成する方法は、構造的に均質なＣＡＲ−ＥＣスイッチを生成するステップを含みうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチを、ポリヌクレオチドから生成する方法は、１つまたは複数のＣＡＲ−ＥＣスイッチであって、形態、特徴、結合アフィニティー（例えば、ＣＡＲまたは標的に対する）、形状、および／またはサイズが同じであるかまたは類似するスイッチを結果としてもたらしうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの均質性は、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはこれを上回る％と同等でありうるか、または５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはこれを上回る％を超えうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの均質性は、８５％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの均質性は、９０％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの均質性は、９５％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。ＣＡＲ−ＥＣスイッチの均質性は、９７％と同等でありうるか、またはこれを超えうる。均質性は、構造的均質性でありうる。均質性は、細胞を被験体に投与する前の構造的均質性でありうる。均質性は、細胞活性によるＣＡＲ−ＥＣスイッチへの修飾（メチル化、アセチル化、グリコシル化など）の前の構造的均質性でありうる。これらの高百分率の均質性は、ＣＡＲ−ＥＣスイッチの効果の予測可能性の増大をもたらしうる。これらの高百分率の均質性は、被験体における状態を処置するように、ＣＡＲ−ＥＣと組み合わされた場合の、ＣＡＲ−ＥＣスイッチのオフターゲット効果の減少をもたらしうる。
【実施例】
【０１７６】
以下の例示的な例は、本明細書で記載されるソフトウェアアプリケーション、システム、および方法についての実施形態を表すものであり、いかなる形でも限定的であることを意図するものではない。
【０１７７】
（実施例１）
切り替え型ＣＡＲ−Ｔプラットフォームの生成および評価
ＣＡＲ−ＥＣスイッチペプチド抗原の選択では、開発される抗体の溶解性、安定性、アフィニティー、およびヒトプロテオーム内の交差反応性エピトープの潜在性について研究した。これらの基準に基づき、酵母転写因子ＧＣＮ４に由来する直鎖状アミノ酸エピトープ（７Ｐ１４Ｐ）を選択した。アフィニティーが２．６ｎＭ〜５．２ｐＭと様々である単鎖抗体は、結合キネティクスによるＣＡＲ−ＥＣの最適化を可能とする。加えて、これらの抗体は、直鎖状のエピトープに対してアフィニティーが最も高い抗ペプチド単鎖抗体の中のものである。選択されたＧＣＮ４エピトープ（７Ｐ１４Ｐ）であって、ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ（配列番号３）の配列を有するエピトープと、ＧＣＮ４結合性ｓｃＦｖ（５２ＳＲ４）との解離定数（Ｋｄ）は、５．２ｐＭである。
【０１７８】
小型の親水性標的ペプチド（ＨＴＰ）は、一般に使用されるＦＬＡＧ（登録商標）タグに基づき開発した。ＦＬＡＧ（登録商標）は、抗原性が小さく、溶解性が高く、タンパク質のフォールディングまたは安定性に対してほとんど影響を及ぼさずに、多数のタンパク質への融合がなされている。ＨＴＰのＦＬＡＧによる修飾では、タンパク質分解に対する安定性を増大させる試みにおいて、末端リシンの後に、プロリン残基を組み込んだ。このエピトープに対する抗体は、従来のマウスの免疫および後続のヒト化によるか、またはヒトライブラリーのファージパニングにより開発される。記載される通りに、作り出されたｓｃＦｖの結合キネティクスを完全に特徴付け、ペプチド−ＣＡＲ−ＥＣを作製し、オフターゲット特異性について調べる。
【０１７９】
異種移植モデルにおける切り替え型ＣＡＲ−Ｔプラットフォームの評価
有効性について評価するため、マウス異種移植モデルを使用して、これらの切り替え型プラットフォームを、ＣＡＲ−Ｔスイッチプラットフォームにより既に開発されているプラットフォームと比較する。この目的のために、ＲＳ４；１１細胞株、ＮＡＬＭ−６細胞株、Ｒａｊｉ細胞株、または他のＣＤ１９陽性細胞株を使用して、非肥満型糖尿病−重症複合型免疫不全症（ＮＯＤ−ＳＣＩＤ−γ−／−、ＮＳＧ）マウスにおいて腫瘍モデルを確立する。ＣＡＲ−Ｔは、静脈内投与により送達する。用量範囲調査を、ペプチド抗ＣＤ１９スイッチについて実行し、野生型のＣＤ１９  Ｆａｂ対照と比較する。有効性は、腫瘍負荷および全生存に基づき判定する。マウスは、末梢血中のＣＡＲ−ＥＣの増殖についてモニタリングするため、毎週の採血によりモニタリングする。ＣＡＲ−ＥＣについての、詳細な免疫表現型による特徴付けは、マルチチャネルフローサイトメトリーを使用して、標準的な表現型パラメータに従い規定される、エフェクター表現型、メモリー表現型、老化（終末分化）表現型、またはアネルギー化表現型に焦点を当てる。
【０１８０】
ＦａｂベースのスイッチおよびＩｇＧベースのスイッチを、観察されるＰＫデータに従う適切な投与量で送達し、それらの有効性を比較する。ＩｇＧは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるその長い貯留時間のために、このモデルにおいて最も効果的である。この考えについてのさらなる調査は、同系モデルに対して実行する。
【０１８１】
原発性患者（primary  patient）由来ＡＬＬ試料または原発性患者由来ＣＬＬ試料を得て、ＮＳＧマウスにおける異種移植モデルを作製する。フローサイトメトリーにより、原発性試料（primary  sample）を、ＣＤ１９の発現について特徴付ける。治療を施す前に、２〜３週間にわたり、マウスにおいて、白血病を確立する。ＣＡＲ−Ｔ−１９と対比した有効性は、末梢血中のＣＤ１９＋ＡＬＬ芽球カウントについてモニタリングすることにより判定する。白血病がコントロールされていないか、または消失していない場合は、増殖した芽球について免疫表現型解析する（具体的には、ＣＤ１９抗原発現の喪失について調査するが、さらなる研究については、下記を参照されたい（vida  infra））。また、ＣＡＲ−ＥＣの存続についてもモニタリングする（後者は、ＲＳ４；１１ベースの異種移植片と実質的に異ならないと予測されるが）。
【０１８２】
同系モデルにおけるにおける切り替え型ＣＡＲ−Ｔプラットフォームの評価
免疫不全マウスにおける異種移植モデルは、切り替え型プラットフォームの有効性の測定は可能とするが、このモデルは、ＣＡＲ−Ｔ−１９療法と関連する、長期にわたるリンパ球減少症を緩和するための方法を評価するのには最適でない。切り替え型ＣＡＲ−ＥＣを、免疫保全Ｂ細胞リンパ腫マウスモデルにおいて、Ｂ細胞形成不全を逆転する能力について調べる。マウスサロゲートＣＡＲ−Ｔを作製するために、操作されたペプチドベースのキメラ受容体をモロニーマウス白血病ウイルスベースのレトロウイルスベクターへとクローニングして、マウス脾臓細胞へ形質導入する。マウス由来のシグナル伝達ドメインである、ＣＤ２８およびＣＤ３ｚを使用する。抗ヒトＣＤ１９抗体は、マウスＣＤ１９と交差反応しないので、ラット抗マウスＣＤ１９ハイブリドーマである１Ｄ３を得（ＡＴＣＣから）、可変領域を配列決定する。この配列を、ペプチド融合のための発現ベクターへとクローニングして、スイッチを作製し、キメラ抗原受容体へとクローニングして、ＣＡＲ−Ｔ−１９マウスサロゲートを作製する。
【０１８３】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける形質導入の最適化および有効性の評価の後で、Ｍｙｃ５−ＣＤ１９細胞株を使用して、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、Ｂ細胞リンパ腫を確立する。ＣＡＲ−ＥＣおよびスイッチは、異種移植研究およびサロゲート系によるｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイに基づく投与スケジュールにより投与する。このモデルで特に興味深いのは、ＦａｂベースのスイッチおよびＩｇＧベースのスイッチを、Ｍｙｃ５−ＣＤ１９の消失速度およびＢ細胞の除去速度について比較することである。異種移植研究と同様に、ＣＡＲ−Ｔの増殖についてモニタリングし、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて、免疫表現型による特徴付けを実行する。リンパ腫細胞の根絶の後で、スイッチ投与を停止させ、末梢血中のＢ細胞の再増殖についてモニタリングする。サロゲートＣＡＲ−Ｔ−１９およびサロゲート切り替え型ＣＡＲ−Ｔのいずれも、長期にわたる寛解を可能とすることが予測されるが、Ｂ細胞の再増殖を可能とするのは、切り替え型プラットフォームに限られる。所定のコホートに対する組織学的検査を介して、ＣＡＲ−Ｔの、主要な器官への浸潤についてモニタリングし、治療後に、細胞解析を実行する。刺激の非存在下における、ＣＡＲ−ＥＣの長期にわたる存続について追跡する。
【０１８４】
異種がんモデルにおける切り替え型ＣＡＲ−Ｔプラットフォームの評価
単一の養子導入ＣＡＲ−Ｔを使用して、ＣＡＲ−Ｔ−１９療法における、ＣＤ１９エスケープ変異体に帰せられるＡＬＬの再発に対抗しようと試みる中で、抗ＣＤ１９ターゲティング抗体を含有する第１のスイッチ、および抗ＣＤ２０ターゲティング抗体であるリツキシマブを含有する第２のスイッチを、同じ患者における異なる抗原を逐次的に、または同時にターゲティングするのに使用する。
【０１８５】
抗ＣＤ２０スイッチは、実施例３で決定された最適な特徴を使用して、抗ＣＤ１９スイッチと類似の様式で作製する。リツキシマブに基づくＣＡＲ−Ｔ−２０を、比較のために構築する。ＣＤ２０陽性ＩＭ−９細胞株およびＤａｕｄｉ細胞株に対する有効性について、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで調べる。異種Ｂ細胞性リンパ芽球を作製するため、レンチウイルスベクターを使用して、慢性骨髄性白血病由来Ｋ５６２細胞株（これは、ＣＤ２０およびＣＤ１９について陰性である）に、ＣＤ１９抗原を安定的に形質導入する。均質なＣＤ１９発現を伴う集団を得るように、フローソーティングを介して単一細胞クローンを得る。次いで、この細胞株に、ＣＤ２０を形質導入し、高レベルの抗原発現（ＣＤ２０ｈｉ）または低レベルの抗原発現（ＣＤ２０ｌｏｗ）により分取する。ＣＤ１９＋ＣＤ２０−と、ＣＤ１９＋ＣＤ２０ｈｉまたはＣＤ１９＋ＣＤ２０ｌｏｗとの混合物に対する切り替え型ＣＡＲ−Ｔの活性化ならびに細胞傷害性について、ＣＤ１９スイッチおよびＣＤ２０スイッチ（同時的投与または逐次的投与）を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて評価する。方法は、集団内の百分率が最低のＣＤ２０ｈｉ細胞またはＣＤ２０ｌｏｗ細胞であって、リツキシマブスイッチでＣＡＲ−Ｔを刺激する必要がある細胞について研究する機会をもたらす。これは、均質集団よりも生理学的にあてはまりうる。次いで、この系について、異種移植マウスモデルにおいて調べる。ＣＤ１９＋ＣＤ２０−とＣＤ１９＋ＣＤ２０＋との混合物を使用して、異種移植モデルを確立する。代替的に、本発明者らによる初期異種移植研究において、ＣＤ１９発現またはＣＤ２０発現について不均質であることが判明する場合は、原発性患者由来のＡＬＬ試料を、この実験に使用する。抗ＣＤ２０スイッチを伴う切り替え型ＣＡＲ−ＥＣを投与して、ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋集団を消失させ、ＣＤ１９＋ＣＤ２０−細胞の増殖を可能とする。同じＣＡＲ−Ｔを再ターゲティングすることの実行可能性を裏付けるため、その後、抗ＣＤ１９スイッチを投与し、残りの異種移植片の成長についてモニタリングする。腫瘍を、屠殺されたマウスのコホートにおける抗原発現または原発性芽球内の抗原発現について評価する。また、同時的ターゲティングについても評価する。処置を、ＣＡＲ−Ｔ−１９、ＣＡＲ−Ｔ−２０、またはこれらの両方について同時に比較する。
【０１８６】
（実施例２）
ＣＡＲの構築
ＣＡＲは、以下の通りに構築した。
【０１８７】
ＬＶ−ＥＦ１ａ−ＧＣＮ４−ＢＢＺは、酵母転写因子ＧＣＮ４（配列ＲＭＫＱＬＥＰＫＶＥＥＬＬＰＫＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬＶＧＥＲ（配列番号２）［配列中、下線を付したアミノ酸は、ＰＤＢによる１Ｐ４Ｂ結晶構造において、ｃ１１Ｌ３２Ｓｅｒ  ｓｃＦｖに結合することが示されている］の７Ｐ１４Ｐエピトープを標的とするようにデザインした。ｓｃＦｖは、参考文献：Zahnd,  C.、Spinelli,  S.、Luginbuhl,  B.、Amstutz,  P.、Cambillau,  C.、およびPluckthun,  A.（２００４年）、「Directed  in  vitro  evolution  and  crystallographic  analysis  of  peptide-binding  single  chain  antibody  fragment  (scFv)  with  low  picomolar  affinity」、The  Journal  of  Biological  Chemistry、２７９巻、１８８７０〜１８８７７頁による、５２ＳＲ４（ｃ１１Ｌ３２Ｓｅｒと類似の配列を伴う高アフィニティーの変異体）抗体のｓｃＦｖから構築した。
【０１８８】
（実施例３）
抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＨＣ１のクローニング、発現、および精製
クローニング：ＣＤ１９Ｆａｂ重鎖の哺乳動物発現ベクターは、増幅されたＣＤ１９Ｆａｂ重鎖（ＶＨおよびＣＨ１）を、Ｆｃ断片を伴わないｐＦｕｓｅ−ｈＩｇＧ１−Ｆｃ骨格ベクター（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、ＣＡ）へとライゲーションすることにより生成した。抗体ＣＤ１９軽鎖をコードする遺伝子は増幅して、ｈＩｇＧ１  Ｆｃ断片を伴わないｐＦｕｓｅベクターへとクローニングした。ＧＣＮ４をコードする遺伝子（ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ＝配列番号３）は、オリゴヌクレオチドとして合成した。その後、抗ＣＤ１−Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＨＣ１融合タンパク質は、ＧＣＮ４を、ＣＤ１９Ｆａｂ重鎖のＳ１３５に後続するＣＤ１９  Ｆａｂの成熟重鎖にグラフトすることにより作製した。結果として得られる哺乳動物発現ベクターは、ＤＮＡ配列決定により確認した。
【０１８９】
発現および精製：抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＨＣ１は、製造業者のプロトコールに従い、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞への、ＣＤ１９−Ｆａｂ軽鎖およびＧＣＮ４−ＣＤ１９−ＨＣ１の発現ベクターの、一過性トランスフェクションにより発現させた。略述すると、細胞３×１０７個を含有する、２８ｍＬのＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞を、１２５ｍＬの振盪フラスコ内に播種した。１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地中で希釈された、１５μｇの軽鎖プラスミドおよび１５μｇの重鎖プラスミドを、６０μＬの２９３ｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ）を含有する１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ中に添加した。プラスミドを、２９３ｆｅｃｔｉｎと共に、３０分間にわたりインキュベートした後で、リポプレックス混合物を、細胞懸濁液へと添加した。次いで、細胞を、５％のＣＯ２環境内、３７℃、１２５ｒｐｍで振盪した。分泌されたタンパク質を含有する培養培地を、トランスフェクションの４８および９６時間後に採取した。抗ＣＤ１−Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＨＣ１は、プロテインＧクロマトグラフィー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＩＬ）により精製した。精製されたタンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにより解析した。図５Ａおよび５Ｂは、それぞれ、非還元条件下および還元条件下（５０ｍＭのＤＴＴを伴う）における、抗ＣＤ１−Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＨＣ１（レーン７）についてのＳＤＳゲル画像を示す。
【０１９０】
（実施例４）
抗ＣＤ１９−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ＨＣ１のクローニング、発現、および精製
クローニング：ＣＤ１９  ＩｇＧ重鎖の哺乳動物発現ベクターは、増幅されたＣＤ１９Ｆａｂ重鎖（ＶＨおよびＣＨ１）の、ｐＦｕｓｅ−ｈＩｇＧ１−Ｆｃ骨格ベクター（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、ＣＡ）へのインフレームライゲーションにより生成した。抗体ＣＤ１９軽鎖をコードする遺伝子は増幅して、ｈＩｇＧ１  Ｆｃ断片を伴わないｐＦｕｓｅベクターへとクローニングした。ＧＣＮ４をコードする遺伝子（ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ＝配列番号３）は、オリゴヌクレオチドとして合成した。その後、抗ＣＤ１９−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ＨＣ１融合タンパク質は、ＧＣＮ４を、ＣＤ１９  ＩｇＧの成熟重鎖のＳ１３５に続いて挿入することにより作製した。結果として得られる哺乳動物発現ベクターは、ＤＮＡ配列決定により確認した。
【０１９１】
発現および精製：抗ＣＤ１９−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ＨＣ１は、製造業者のプロトコールに従い、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞への、ＣＤ１９−ＩｇＧ軽鎖およびＧＣＮ４−ＣＤ１９重鎖の発現ベクターの、一過性トランスフェクションにより発現させた。略述すると、細胞３×１０７個を含有する、２８ｍＬのＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞を、１２５ｍＬの振盪フラスコ内に播種した。１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地中で希釈された、１５μｇの軽鎖プラスミドおよび１５μｇの重鎖プラスミドを、６０μＬの２９３ｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ）を含有する１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ中に添加した。プラスミドを、２９３ｆｅｃｔｉｎと共に、３０分間にわたりインキュベートした後で、リポプレックス混合物を、細胞懸濁液へと添加した。次いで、細胞を、５％のＣＯ２環境内、３７℃、１２５ｒｐｍで振盪した。分泌されたタンパク質を含有する培養培地を、トランスフェクションの４８および９６時間後に採取した。ＧＣＮ４−ＣＤ１９重鎖は、プロテインＧクロマトグラフィー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＩＬ）により精製した。精製されたタンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにより解析した。図５Ａおよび５Ｂは、それぞれ、非還元条件下および還元条件下（５０ｍＭのＤＴＴを伴う）における、抗ＣＤ１９−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ＨＣ１（レーン３）についてのＳＤＳゲル画像を示す。
【０１９２】
（実施例５）
抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４Ｃ−ｔｅｒｍのクローニング、発現、および精製
クローニング：ＣＤ１９Ｆａｂ重鎖の哺乳動物発現ベクターは、増幅されたＣＤ１９Ｆａｂ重鎖（ＶＨおよびＣＨ１）を、Ｆｃ断片を伴わないｐＦｕｓｅ−ｈＩｇＧ１−Ｆｃ骨格ベクター（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、ＣＡ）へとライゲーションすることにより生成した。抗体ＣＤ１９軽鎖をコードする遺伝子は増幅して、ｈＩｇＧ１  Ｆｃ断片を伴わないｐＦｕｓｅベクターへとクローニングした。ＧＣＮ４をコードする遺伝子（ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ＝配列番号３）であって、ＧＣＮ４のＮ末端にＧＧＧＧＳ（配列番号４０［配列中、ｎ＝１］）リンカーを伴う遺伝子は、オリゴヌクレオチドとして合成した。その後、抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４Ｃ−ｔｅｒｍ融合タンパク質は、リンカー−ＧＣＮ４を、Ｃ２２３において、Ｆａｂ重鎖のＣ末端と融合させることにより作製した。結果として得られる哺乳動物発現ベクターは、ＤＮＡ配列決定により確認した。
【０１９３】
発現および精製：抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４Ｃ−ｔｅｒｍは、製造業者のプロトコールに従い、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞への、ＣＤ１９−Ｆａｂ軽鎖および抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４Ｃ−ｔｅｒｍの発現ベクターの、一過性トランスフェクションにより発現させた。略述すると、細胞３×１０７個を含有する、２８ｍＬのＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞を、１２５ｍＬの振盪フラスコ内に播種した。１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地中で希釈された、１５μｇの軽鎖プラスミドおよび１５μｇの重鎖プラスミドを、６０μＬの２９３ｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ）を含有する１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ中に添加した。プラスミドを、２９３ｆｅｃｔｉｎと共に、３０分間にわたりインキュベートした後で、リポプレックス混合物を、細胞懸濁液へと添加した。次いで、細胞を、５％のＣＯ２環境内、３７℃、１２５ｒｐｍで振盪した。分泌されたタンパク質を含有する培養培地を、トランスフェクションの４８および９６時間後に採取した。抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４Ｃ−ｔｅｒｍは、プロテインＧクロマトグラフィー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＩＬ）により精製した。精製されたタンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにより解析した。図５Ａおよび５Ｂは、それぞれ、非還元条件下および還元条件下（５０ｍＭのＤＴＴを伴う）における、抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４Ｃ−ｔｅｒｍ（レーン９）についてのＳＤＳゲル画像を示す。
【０１９４】
（実施例６）
抗ＣＤ１９−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ｈｉｎｇｅのクローニング、発現、および精製
クローニング：ＣＤ１９  ＩｇＧ重鎖の哺乳動物発現ベクターは、増幅されたＣＤ１９Ｆａｂ重鎖（ＶＨおよびＣＨ１）の、ｐＦｕｓｅ−ｈＩｇＧ１−Ｆｃ骨格ベクター（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、ＣＡ）へのインフレームライゲーションにより生成した。抗体ＣＤ１９軽鎖をコードする遺伝子は増幅して、ｈＩｇＧ１  Ｆｃ断片を伴わないｐＦｕｓｅベクターへとクローニングした。ＧＣＮ４をコードする遺伝子（ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ＝配列番号３）であって、ＧＣＮ４のＮ末端にＧＧＧＧＳ（配列番号４０［配列中、ｎ＝１］）リンカーを伴い、ＧＣＮ４のＣ末端にＧＧＳ（配列番号４２［配列中、ｎ＝１］）を伴う遺伝子（「リンカー−ＧＣＮ４−リンカー」）は、オリゴヌクレオチドとして合成した。その後、抗ＣＤ１９−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ｈｉｎｇｅ融合タンパク質は、リンカー−ＧＣＮ４−リンカーを、Ｃ２２３のＦａｂ重鎖のＣ末端とヒンジ領域との間にグラフトすることにより作製した。したがって、リンカー−ＧＣＮ４−リンカーは、ＩｇＧのヒンジ領域を伸長させ、伸長したヒンジ領域を有するＩｇＧ３構造を模倣する。結果として得られる哺乳動物発現ベクターは、ＤＮＡ配列決定により確認した。
【０１９５】
発現および精製：抗ＣＤ１９−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ｈｉｎｇｅは、製造業者のプロトコールに従い、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞への、ＣＤ１９−ＩｇＧ軽鎖およびＧＣＮ４−ＣＤ１９ｈｉｎｇｅ重鎖の発現ベクターの、一過性トランスフェクションにより発現させた。略述すると、細胞３×１０７個を含有する、２８ｍＬのＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞を、１２５ｍＬの振盪フラスコ内に播種した。１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地中で希釈された、１５μｇの軽鎖プラスミドおよび１５μｇの重鎖プラスミドを、６０μＬの２９３ｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ）を含有する１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ中に添加した。プラスミドを、２９３ｆｅｃｔｉｎと共に、３０分間にわたりインキュベートした後で、リポプレックス混合物を、細胞懸濁液へと添加した。次いで、細胞を、５％のＣＯ２環境内、３７℃、１２５ｒｐｍで振盪した。分泌されたタンパク質を含有する培養培地を、トランスフェクションの４８および９６時間後に採取した。ＧＣＮ４−ＣＤ１９ヒンジＩｇＧは、プロテインＧクロマトグラフィー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＩＬ）により精製した。精製されたタンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにより解析した。図５Ａおよび５Ｂは、それぞれ、非還元条件下および還元条件下（５０ｍＭのＤＴＴを伴う）における、抗ＣＤ１９−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ｈｉｎｇｅ（レーン５）についてのＳＤＳゲル画像を示す。
【０１９６】
（実施例７）
抗ＣＤ１９−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ＣＬ１のクローニング、発現、および精製
クローニング：ＣＤ１９  ＩｇＧ重鎖の哺乳動物発現ベクターは、増幅されたＣＤ１９Ｆａｂ重鎖（ＶＨおよびＣＨ１）の、ｐＦｕｓｅ−ｈＩｇＧ１−Ｆｃ骨格ベクター（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、ＣＡ）へのインフレームライゲーションにより生成した。抗体ＣＤ１９軽鎖をコードする遺伝子は増幅して、ｈＩｇＧ１  Ｆｃ断片を伴わないｐＦｕｓｅベクターへとクローニングした。ＧＣＮ４をコードする遺伝子（ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ＝配列番号３）であって、両方の端部にＧＧＧＧＳ（配列番号４０［配列中、ｎ＝１］）リンカーを伴う遺伝子は、オリゴヌクレオチドとして合成した。その後、抗ＣＤ１９−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ＣＬ１融合タンパク質は、ＣＤ１９軽鎖のＣＬ領域内のＫ１６９を、両方の端部にリンカー配列を伴うＧＣＮ４で置き換えることにより作製した。結果として得られる哺乳動物発現ベクターは、ＤＮＡ配列決定により確認した。
【０１９７】
発現および精製：抗ＣＤ１９−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ＣＬ１は、製造業者のプロトコールに従い、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞への、ＣＤ１９−ＩｇＧ重鎖およびＧＣＮ４−ＣＤ１９−ＣＬ１軽鎖の発現ベクターの、一過性トランスフェクションにより発現させた。略述すると、細胞３×１０７個を含有する、２８ｍＬのＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞を、１２５ｍＬの振盪フラスコ内に播種した。１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地中で希釈された、１５μｇの軽鎖プラスミドおよび１５μｇの重鎖プラスミドを、６０μＬの２９３ｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ）を含有する１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ中に添加した。プラスミドを、２９３ｆｅｃｔｉｎと共に、３０分間にわたりインキュベートした後で、リポプレックス混合物を、細胞懸濁液へと添加した。次いで、細胞を、５％のＣＯ２環境内、３７℃、１２５ｒｐｍで振盪した。分泌されたタンパク質を含有する培養培地を、トランスフェクションの４８および９６時間後に採取した。抗ＣＤ１９−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ＣＬ１は、プロテインＧクロマトグラフィー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＩＬ）により精製した。精製されたタンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにより解析した。図５Ａおよび５Ｂは、それぞれ、非還元条件下および還元条件下（５０ｍＭのＤＴＴを伴う）における、抗ＣＤ１９−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ＣＬ１（レーン４）についてのＳＤＳゲル画像を示す。
【０１９８】
（実施例８）
抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＣＬ１のクローニング、発現、および精製
クローニング：ＣＤ１９Ｆａｂ重鎖の哺乳動物発現ベクターは、増幅されたＣＤ１９Ｆａｂ重鎖（ＶＨおよびＣＨ１）を、Ｆｃ断片を伴わないｐＦｕｓｅ−ｈＩｇＧ１−Ｆｃ骨格ベクター（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、ＣＡ）へとライゲーションすることにより生成した。抗体ＣＤ１９軽鎖をコードする遺伝子は増幅して、ｈＩｇＧ１  Ｆｃ断片を伴わないｐＦｕｓｅベクターへとクローニングした。ＧＣＮ４をコードする遺伝子（ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ＝配列番号３）であって、両方の端部にＧＧＧＧＳ（配列番号４０［配列中、ｎ＝１］）リンカーを伴う遺伝子は、オリゴヌクレオチドとして合成した。その後、抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＣＬ１融合タンパク質は、ＣＤ１９軽鎖のＣＬ領域内のＫ１６９を、両方の端部にリンカー配列を伴うＧＣＮ４で置き換えることにより作製した。結果として得られる哺乳動物発現ベクターは、ＤＮＡ配列決定により確認した。
【０１９９】
発現および精製：抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＣＬ１は、製造業者のプロトコールに従い、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞への、ＣＤ１９−Ｆａｂ重鎖およびＧＣＮ４−ＣＤ１９−ＣＬ軽鎖の発現ベクターの、一過性トランスフェクションにより発現させた。略述すると、細胞３×１０７個を含有する、２８ｍＬのＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞を、１２５ｍＬの振盪フラスコ内に播種した。１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地中で希釈された、１５μｇの軽鎖プラスミドおよび１５μｇの重鎖プラスミドを、６０μＬの２９３ｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ）を含有する１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ中に添加した。プラスミドを、２９３ｆｅｃｔｉｎと共に、３０分間にわたりインキュベートした後で、リポプレックス混合物を、細胞懸濁液へと添加した。次いで、細胞を、５％のＣＯ２環境内、３７℃、１２５ｒｐｍで振盪した。分泌されたタンパク質を含有する培養培地を、トランスフェクションの４８および９６時間後に採取した。抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＣＬ１は、プロテインＧクロマトグラフィー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＩＬ）により精製した。精製されたタンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにより解析した。図５Ａおよび５Ｂは、それぞれ、非還元条件下および還元条件下（５０ｍＭのＤＴＴを伴う）における、抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＣＬ１（レーン８）についてのＳＤＳゲル画像を示す。
【０２００】
（実施例９）
抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＬＣ１−Ｎ−ｔｅｒｍのクローニング、発現、および精製
クローニング：ＣＤ１９Ｆａｂ重鎖の哺乳動物発現ベクターは、増幅されたＣＤ１９Ｆａｂ重鎖（ＶＨおよびＣＨ１）を、Ｆｃ断片を伴わないｐＦｕｓｅ−ｈＩｇＧ１−Ｆｃ骨格ベクター（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、ＣＡ）へとライゲーションすることにより生成した。抗体ＣＤ１９軽鎖をコードする遺伝子は増幅して、ｈＩｇＧ１  Ｆｃ断片を伴わないｐＦｕｓｅベクターへとクローニングした。ＧＣＮ４をコードする遺伝子（ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ＝配列番号３）であって、ＧＣＮ４のＣ末端にＧＧＧＧＳ（配列番号４０［配列中、ｎ＝１］）リンカーを伴う遺伝子は、オリゴヌクレオチドとして合成した。その後、抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＬＣ１−Ｎ−ｔｅｒｍ融合タンパク質は、リンカー−ＧＣＮ４を、Ｆａｂ軽鎖のＮ末端と融合させることにより作製した。結果として得られる哺乳動物発現ベクターは、ＤＮＡ配列決定により確認した。
【０２０１】
発現および精製：抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＬＣ１−Ｎ−ｔｅｒｍは、製造業者のプロトコールに従い、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞への、ＣＤ１９−Ｆａｂ軽鎖およびＧＣＮ４−ＣＤ１９−Ｃ−ｔｅｒｍの発現ベクターの、一過性トランスフェクションにより発現させた。略述すると、細胞３×１０７個を含有する、２８ｍＬのＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞を、１２５ｍＬの振盪フラスコ内に播種した。１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地中で希釈された、１５μｇの軽鎖プラスミドおよび１５μｇの重鎖プラスミドを、６０μＬの２９３ｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ）を含有する１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ中に添加した。プラスミドを、２９３ｆｅｃｔｉｎと共に、３０分間にわたりインキュベートした後で、リポプレックス混合物を、細胞懸濁液へと添加した。次いで、細胞を、５％のＣＯ２環境内、３７℃、１２５ｒｐｍで振盪した。分泌されたタンパク質を含有する培養培地を、トランスフェクションの４８および９６時間後に採取した。抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＬＣ１−Ｎ−ｔｅｒｍは、プロテインＧクロマトグラフィー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＩＬ）により精製した。精製されたタンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにより解析した。図５Ａおよび５Ｂは、それぞれ、非還元条件下および還元条件下（５０ｍＭのＤＴＴを伴う）における、抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＬＣ１−Ｎ−ｔｅｒｍ（レーン１０）についてのＳＤＳゲル画像を示す。
【０２０２】
（実施例１０）
抗ＣＤ１９  Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＣＬ１、抗ＣＤ１９  ＩｇＧＦｃＮｕｌｌ−ＧＣＮ４および抗ＣＤ１９  Ｆａｂ−ＧＣＮ４Ｃ−ｔｅｒｍＣＡＲ−ＥＣスイッチによる細胞傷害性
ペプチドＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＧＣＮ４酵母転写因子ペプチド配列である７Ｐ１４Ｐのうちの１４アミノ酸（Zahndら（２００４年）、「Directed  in  vitro  evolution  and  crystallographic  analysis  of  peptide-binding  single  chain  antibody  fragment  (scFv)  with  low  picomolar  affinity」、The  Journal  of  Biological  Chemistry、２７９巻、１８８７０〜１８８７７頁において規定されている）を融合させることにより作製した。１４アミノ酸は、ｓｃＦｖ  ｃ１１Ｌ３２Ｓｅｒを伴うＧＣＮ４ペプチドである７Ｐ１４Ｐの結晶構造である１Ｐ４Ｂにおいて規定されたアミノ酸に基づき選択した。スイッチは、ＧＣＮ４ペプチド配列を、Ｆａｂ抗体の重鎖のＣ末端と融合させるか、またはＧＣＮ４ペプチド配列をＦａｂまたはＩｇＧ抗体の軽鎖のＣＬループ内で融合させることにより構築した。全ての発現は、ＣＨＯ細胞内またはＨＥＫ細胞内で実行した。
【０２０３】
グラフトされたＧＣＮ４ペプチドベースの抗ＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔスイッチ（配列番号３０）を作製するため、酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチド（７Ｐ１４Ｐ）ＲＭＫＱＬＥＰＫＶＥＥＬＬＰＫＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬＶＧＥＲ（配列番号２）に由来する結晶構造（ＰＤＢ：１Ｐ４Ｂ）（図２を参照されたい）に従い、最小の結合性エピトープであることが示唆されている、ペプチドＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ（配列番号３）を、マウス抗ヒトＣＤ１９  ＦａｂクローンであるＦＭＣ６３にグラフトした。グラフトは、軽鎖のＫ６３（定常領域のＮ末端からカウントした場合であり、成熟タンパク質のＮ末端からカウントすれば、Ｋ１６９である）を、配列ＧＧＧＧＳＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬＧＧＧＧＳ（配列番号４）（ＧＧＧＧＳリンカー（配列番号４０［配列中、ｎ＝１］）で挟んだＧＣＮ４エピトープ）で置き換えることにより実行した。抗ＣＤ１９  ＦａｂＣＬ１−ＧＣＮ４についての質量分析を下記に提示する（図３）。代替的に、ペプチドは、重鎖（配列番号２９）へもグラフトされる。
【０２０４】
抗ＣＤ１９  ＦａｂＣＬ１−ＧＣＮ４スイッチの細胞傷害活性は、ＣＡＲ−Ｔ−ＧＣＮ４を作製するようにＬＶ−ＥＦ１ａ−ＧＣＮ４（５２ＳＲ４）を形質導入したヒトＰＢＭＣを、１０：１のＥ：Ｔ比として、２４時間にわたるインキュベーションにより評価した。活性は、ＮＡＬＭ−６（ＣＤ１９＋）、ＲＳ４；１１（ＣＤ１９＋）、またはＲＰＭＩ−８２２６（ＣＤ１９−）に対して評価した（表１）。ＩｇＧ（Ｆｃヌル）スイッチの活性は、ＲＳ４；１１（ＣＤ１９＋）またはＫ５６２（ＣＤ１９−）に対して評価した（表２）。Ｃ末端スイッチの活性は、ＲＳ４；１１（ＣＤ１９＋）またはＫ５６２（ＣＤ１９−）に対して評価した（表３）。
【表１】
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【表２】
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【表３】
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【０２０５】
（実施例１１）
ＧＣＮ４を抗ＣＤ１９抗体または抗ＣＤ１９抗体断片の異なる領域にグラフト／融合している、多様な抗ＣＤ１９−ＧＣＮ４  ＣＡＲ−ＥＣスイッチによる細胞傷害性
抗ＣＤ１９  ＦＭＣ６３抗体または抗体断片の異なる領域にグラフト／融合している、多様な抗ＣＤ１９−ＧＣＮ４  ＣＡＲ−ＥＣスイッチの細胞傷害活性は、ＣＡＲ−Ｔ−ＧＣＮ４を作製するようにＬＶ−ＥＦ１ａ−ＧＣＮ４（５２ＳＲ４）を形質導入したヒトＰＢＭＣを、１０：１のＥ：Ｔ比として、２４時間にわたるインキュベーションにより評価した。被験スイッチは、抗ＣＤ１９  ＦａｂＣＬ１−ＧＣＮ４（「ＣＬ１  Ｆａｂ」）、抗ＣＤ１９−ＧＣＮ４ＦａｂＣ−ｔｅｒｍ（「Ｃ末端Ｆａｂ」）、抗ＣＤ１９  ＩｇＧＨＣ１−ＧＣＮ４（「ＨＣ１  ＩｇＧ」）、抗ＣＤ１９  ＩｇＧＣＬ１−ＧＣＮ４（「ＣＬ１  ＩｇＧ」）、抗ＣＤ１９  ＩｇＧＨｉｎｇｅ−ＧＣＮ４（「ヒンジＩｇＧ」）、抗ＣＤ１９  ＩｇＧＷＴ−ＧＣＮ４（「Ｗｔ  ＩｇＧ」）、抗ＣＤ１９  ＦａｂＨＣ１−ＧＣＮ４（「ＨＣ１  Ｆａｂ」）、および抗ＣＤ１９  ＦａｂＮ−ｔｅｒｍ  ＬＣ１−ＧＣＮ４（「Ｎ末端ＬＣ１  Ｆａｂ」）であった。活性は、ＲＳ４；１１（ＣＤ１９＋）に対して評価した（図４、表４）。図６は、本実施例において記載されるスイッチのグラフティング位置について描示する。ＣＬ１およびＨＣ１のグラフティング位置は、ＦａｂフォーマットおよびＩｇＧフォーマットのいずれにも適用した。Ｎ末端グラフティングは、軽鎖にグラフトしているグラフティングとして示されるが、Ｎ末端グラフティングは、軽鎖またはＦａｂに制約されるものではなく、また、重鎖ならびにＩｇＧフォーマットへもグラフトすることができる。Ｆａｂ上のＣ末端位置は、ヒンジＩｇＧと同所（isosteric）である。この文脈では、全てのＦａｂ構築物は、一価であり、全てのＩｇＧ構築物は、二価であるが、これらは、一般にＣＡＲ−ＥＣスイッチに必要な要件ではない。
【表４】
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【０２０６】
（実施例１２）
異種移植腫瘍マウスモデルにおける、抗ＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４ＣＬ１  ＣＡＲ−ＥＣスイッチおよび抗ＧＣＮ４  ＣＡＲ  Ｔ細胞（ｓｗｉＣＡＲ  Ｔ細胞）のｉｎ  ｖｉｖｏの有効性
ｓｗｉＣＡＲ−Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を評価するために、ルシフェラーゼ標識された（luciferized）ＮＡＬＭ−６細胞に基づく正所性（液性）異種移植腫瘍モデルによるパイロット研究を実行した。このモデルでは、ｓｗｉＣＡＲ  Ｔ細胞は、０．５ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ１９（ＧＣＮ４）ＣＬ１  Ｆａｂによる、わずか５日間にわたる毎日の処置後において、退縮を裏付けた。ｓｗｉＣＡＲ  Ｔ細胞を伴う野生型抗ＣＤ１９  Ｆａｂによる処置は、腫瘍の退縮を媒介することが可能ではなかった（一元ＡＮＯＶＡにより、有意ではなかった）。これらの結果は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてｓｗｉＣＡＲ  Ｔ細胞を再指向させる（redirect）能力を裏付ける。実験の詳細：ルシフェラーゼ標識されたＮＡＬＭ−６細胞１０６個を、非肥満型糖尿病−重症複合型免疫不全症（ＮＯＤ−ＳＣＩＤ−γ−／−、ＮＳＧ）マウスへとＩ．Ｖ．注射した。６日間後に、ｓｗｉＣＡＲ  Ｔ細胞またはＣＡＲＴ−１９細胞（５０％の形質導入された）３０×１０６個をＩ．Ｖ．注入した。αＣＤ１９−Ｆａｂ−ＧＣＮ４−ＣＬ１（Ｉ．Ｖ．）の投与を、同じ日に、毎日０．５ｍｇ／ｋｇで開始した。投与の５日後（１１日目）に、マウスにルシフェリンを注射し、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングシステム（ＩＶＩＳ）で画像化した（ｎ＝３または４、プロットされた平均放射輝度（ｐ／ｓ／ｃｍ２／ｓｒ）は、マウスごとに測定し、平均値±ＳＥＭとしてプロットした、＊＊一元ＡＮＯＶＡによるｐ≦０．０５）。処置なしと、ｓｗｉＣＡＲ−Ｔ＋ＷＴ  Ｆａｂとの間の差違は、統計学的に有意ではない。結果を、図７Ａに示す。
【０２０７】
（実施例１３）
抗ＢＣＭＡ−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ＣＬ１のクローニング、発現、および精製
クローニング：ＣＤ１９  ＩｇＧ重鎖の哺乳動物発現ベクターは、増幅された抗ＢＣＭＡ  ＩｇＧ重鎖（ＶＨおよびＣＨ１）の、ｐＦｕｓｅ−ｈＩｇＧ１−Ｆｃ骨格ベクター（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、ＣＡ）へのインフレームライゲーションにより生成した。抗体のＢＣＭＡ軽鎖をコードする遺伝子は増幅して、ｈＩｇＧ１  Ｆｃ断片を伴わないｐＦｕｓｅベクターへとクローニングした。ＧＣＮ４をコードする遺伝子（ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ＝配列番号３）であって、両方の端部にＧＧＧＧＳ（配列番号４０［配列中、ｎ＝１］）リンカーを伴う遺伝子は、オリゴヌクレオチドとして合成した。その後、抗ＢＣＭＡ−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ＣＬ１融合タンパク質は、両方の端部においてリンカー配列を伴うＧＣＮ４を、抗ＢＣＭＡ軽鎖のＣＬ領域にグラフトすることにより作製した。結果として得られる哺乳動物発現ベクターは、ＤＮＡ配列決定により確認した。
【０２０８】
発現および精製：抗ＢＣＭＡ−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ＣＬ１は、製造業者のプロトコールに従い、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞への、ＢＣＭＡ−ＩｇＧ重鎖およびＧＣＮ４−ＢＣＭＡ−ＣＬ１軽鎖の発現ベクターの、一過性トランスフェクションにより発現させた。略述すると、細胞３×１０７個を含有する、２８ｍＬのＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＨＥＫ  ２９３細胞を、１２５ｍＬの振盪フラスコ内に播種した。１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地中で希釈された、１５μｇの軽鎖プラスミドおよび１５μｇの重鎖プラスミドを、６０μＬの２９３ｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ）を含有する１ｍＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ中に添加した。プラスミドを、２９３ｆｅｃｔｉｎと共に、３０分間にわたりインキュベートした後で、リポプレックス混合物を、細胞懸濁液へと添加した。次いで、細胞を、５％のＣＯ２環境内、３７℃、１２５ｒｐｍで振盪した。分泌されたタンパク質を含有する培養培地を、トランスフェクションの４８および９６時間後に採取した。抗ＢＣＭＡ−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ＣＬ１は、プロテインＧクロマトグラフィー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＩＬ）により精製した。
【０２０９】
（実施例１４）
ＧＣＮ４を抗ＢＣＭＡ抗体または抗体断片の軽鎖にグラフトしている、抗ＢＣＭＡ−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ＣＬ１ＣＡＲ−ＥＣスイッチによる細胞傷害性
抗ＢＣＭＡ−ＩｇＧ−ＧＣＮ４ＣＬ１ＣＡＲ−ＥＣスイッチの細胞傷害活性は、ＣＡＲ−Ｔ−ＧＣＮ４を作製するようにＬＶ−ＥＦ１ａ−ＧＣＮ４（５２ＳＲ４）を形質導入したヒトＰＢＭＣを、１０：１のＥ：Ｔ比として、２４時間にわたるインキュベーションにより評価した。ＰＢＭＣの形質導入効率は、約５０％であった。活性は、ＯＰＭ２（ＢＣＭＡ＋）に対して、標的細胞の細胞溶解に起因する乳酸デヒドロゲナーゼを定量することにより評価した（図８、表５）。
【表５】
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【０２１０】
本明細書では、本発明の好ましい実施形態について示し記載しているが、当業者には、このような実施形態は、例だけを目的とするものであることが明らかである。今や、当業者は、本発明から逸脱せずに、多数の変化、変更、および代替に想到する。本発明を実施するには、本明細書で記載される、本発明の実施形態に対する多様な代替物を援用しうることを理解されたい。
【表６−１】
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【表６−２】
0006734774.tif 000008
【表６−３】
0006734774.tif 000009
【表６−４】
0006734774.tif 000010
【表６−５】
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【表７】
0006734774.tif 000012
【表８−１】
0006734774.tif 000013
【表８−２】
0006734774.tif 000014
【表８−３】
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【表８−４】
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【表８−５】
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【表８−６】
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【表９−１】
0006734774.tif 000019
【表９−２】
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【表１０−１】
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【表１０−２】
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【表１０−３】
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【表１１−１】
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【表１１−２】
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【表１１−３】
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【表１１−４】
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【表１２】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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