(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含み、哺乳動物のＹ染色体精子に結合し、精子凝集反応を誘導する、抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項２】
前記重鎖可変領域は、配列番号９で表示されるポリヌクレオチド配列にコードされたアミノ酸配列によってなるＨＣＤＲ１、配列番号１０で表示されるポリヌクレオチド配列にコードされたアミノ酸配列によってなるＨＣＤＲ２、及び配列番号１１で表示されるポリヌクレオチド配列にコードされたアミノ酸配列によってなるＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１２で表示されるポリヌクレオチド配列にコードされたアミノ酸配列によってなるＬＣＤＲ１、配列番号１３で表示されるポリヌクレオチド配列にコードされたアミノ酸配列によってなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１４で表示されるポリヌクレオチド配列にコードされたアミノ酸配列によってなるＬＣＤＲ３を含むことを特徴とする請求項１に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項３】
前記抗体は、単一クローン抗体またはポリクローン抗体であることを特徴とする請求項１又は２に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項４】
配列番号７及び配列番号８からなるアミノ酸配列をコードする単離された核酸を含む請求項１又は２に記載の抗体の生産用発現ベクター。
【請求項５】
請求項４に記載の発現ベクターで試験管内で形質転換された宿主細胞。
【請求項６】
前記宿主細胞は、バクテリア（Ｅ．Ｃｏｌｉ）や酵母（ｙｅａｓｔ）などの微生物、ＣＨＯ細胞、Ｆ２Ｎ細胞、ＨＥＫ２９３細胞及び抗体生産ハイブリドーマ細胞からなる群から選択されたいずれか一つであることを特徴とする請求項５に記載の宿主細胞。
【請求項７】
請求項４に記載の発現ベクターを利用して、宿主細胞に感染させる段階を含む、請求項１又は２に記載の抗体の生産方法。
【請求項８】
請求項１又は２に記載の抗体または抗原結合フラグメント、請求項４に記載の発現ベクター、請求項５又は６に記載の宿主細胞、またはそれらの組み合わせを有効成分として含む精子性鑑別用組成物。
【請求項９】
前記宿主は、牛、マウス、犬及び馬からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする請求項８に記載の精子性鑑別用組成物。
【請求項１０】
配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含み、哺乳動物のＹ染色体精子に結合し、精子凝集反応を誘導する、抗体
を有効成分として含む、精子性鑑別用キット。
【請求項１１】
下記の段階を含む哺乳動物精子の性鑑別方法：
ａ）ヒトを除くオス個体から精液を採取する段階と、
ｂ）前記精液に、請求項１又は２に記載の、哺乳動物のＹ染色体精子に結合し、精子凝集反応を誘導する、抗体または抗原結合フラグメントを処理する段階と、
ｃ）前記精液内において、哺乳動物のＹ染色体精子に結合し、精子凝集反応を誘導する前記抗体または抗原結合フラグメントと特異的に結合された精子と非結合精子とを分離する段階。
【請求項１２】
前記哺乳動物は、牛、マウス、犬及び馬からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記段階ｃ）において、組成物と、特異的に結合された精子は、Ｙ染色体精子であり、非結合精子は、Ｘ染色体精子であることを特徴とする請求項１１又は１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記段階ｃ）は、流細胞分離技法、磁石分離技法、フィルタ分離法、パンニング分離方法、ナノ物質を利用した分離方法、及び直接投与技法からなる群から選択される方法を使用することを特徴とする請求項１１〜１３のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
選択された精子を使用して受精をおこなう段階を含む、請求項１１〜１４のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
選択された精子を、ヒトを除く哺乳動物の子宮に直接注入して、試験管内で受精または体内で人工授精させる、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
特定性の子をつくる段階を含む、請求項１１〜１６のうちいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、精子性鑑別用抗体及びその用途に係り、さらに具体的には、前記抗体を利用した精子性鑑別用組成物、性鑑別方法、及び特定性を有する動物の生産方法などに関する。
本研究は、農業、食糧および農業業務の省（MAFRA）が資金を提供している、技術商業化支援プログラム（またはプロジェクト）を通して、食糧、農業および森林の技術の計画および評価の韓国協会（IPET）による助成を受けた。（付与番号：817024 -3）
【背景技術】
【０００２】
精子性鑑別技術（sperm sexing biotechnology）は、所望性別の精子のみを分離して受精し、妊娠を誘導し、目的の性を有した産子を生産する技術であり、生産効率的な側面、管理的な側面、商業的な側面において非常に重要であり、技術開発の必要性がさらに大きくなっている。
【０００３】
特に、受精卵生産、人工受精のようなさまざまな生体内外プロトコルなどにおいて、所望性別選択は、大きい経済的利益をもたらす。例えば、乳牛の場合、牛乳を生産することができるメスの子牛を生産し、肉牛の場合、メスに比べ、成長速度及び増体量が多く、さらに多くの肉を効率的に生産することができるオス子牛を選別的に生産したり、高品質の肉牛を生産するための育種改良の目的のために、高能力牛のメス牛のみを選別的に大量生産したりすることができ、それを介して、畜産農家は、経営効率化、及びそれによる経済的利益を得ることができる。
【０００４】
一方、家畜の性別決定について述べれば、妊娠した場合、その産子の性別は、性染色体対を構成する２つの染色体がいかなる組み合わせからなるかということによって決定され、結論としては、精子の染色体、すなわち、精子の性によって決定される。
【０００５】
具体的には、家畜の精液内に存在する精子は、メス（Ｘ染色体）またはオス（Ｙ染色体）の精子に分けられ、精巣組織に存在する二倍体の精母細胞から、一倍体染色体を有した成熟した精子に分化する。従って、精液内には、５０％比率のＸ性染色体を有した精子と、５０％比率のＹ性染色体を有した精子とが存在することになる。従って、性別決定は、精液内のＸ染色体またはＹ染色体を有した、いずれか１つの性染色体を有した精子が卵子（Ｘ染色体）との受精を介して、性染色体対（ＸＸまたはＸＹ）を構成するかということにより、産子の性別が決定されることになる。従って、一般的な自然状態での雌雄の仔の比率は、ほぼ雌雄の比率が５０：５０の割で生まれる。
【０００６】
実質的には、畜産を始めとする多くの分野において、性を調節することができる技術の重要性と必要性とがかなり前から認識されており、Ｘ染色体を有したＸ精子と、Ｙ染色体を有したＹ精子とを、物理的な方法や形態学的な方法によって分離する多様な技術開発が試みられてきた。
【０００７】
１９８２年、米国農林部、コロラド州立大学及び、英国ケンブリッジ大学の科学者らが、精子が有したＸ性染色体とＹ性染色体との染色体長が異なることによるＤＮＡ含量差を利用し、精子の性鑑別が可能であるという報告を発表して以来、現在までも、多角的な研究が進められている。一例として、精子の大きさ、質量、密度に基づき、遠心分離、玉（bead）層、多材質のカラムなどを通過させ、精子の遊泳による移動速度に基づいて分離する方法などが紹介されたが（韓国特許公開番号：１０−２００９−００２４０３４）、前記方法だけでは、所望性別を有した精子を高純度で得ることができないという問題点があった。
【０００８】
また、Ｘ染色体長とＹ染色体長との差を利用したSexing Technologies社（ＸＹＬＬＣ社から権利移転）の精子性鑑別技術が現在普遍的に使用されているが、それも、精子染色体を、蛍光化学染色剤で短時間染色した後、細胞分離機器に装着されたレーザによる散乱光を電気信号に転換して鑑別するか、あるいは高圧の分離装置を通過させて目的精子を分離する。
【０００９】
かような機器的な分離過程において、多くの精子が分離されずに損失され、長期間の分離過程、並びにレーザ及び電気的刺激によるストレスにより、卵子との受精に非常に重要な精子の運動性と生存率とに大きい影響を及ぼしてしまう。また、機器を使用して分離するために、非分離精液に比べ、約４倍以上高価に販売されており、市販される凍結精子ストローに保管された精子数も、非分離精子数に比べ、５倍から１０倍ほど少なく入っており、妊娠収率が落ちるという大きい原因として作用している。
【００１０】
また、本方法による精子分離のために、高価装備、及び専門的な人員が必要であり、量産のために、付帯施設と人力拡充とが絶対的に必要となるために、かような機器を利用した性鑑別精子分離の限界性によって、関連業界は、多くの困難さを訴えている。併せて、最も心配される事項は、前述の精子分離のために使用されている蛍光物質は、全ての染色体に非特異的に結合し、卵子との受精がなされる前に除去されていない状態で受精がなされるために、産子の遺伝的安全性についても、多くの疑い提起されている状態であり、最近、動物福祉を最優先視する欧州国家では、本精子分離方法を禁止しようとする論議が進められている実情である。
【００１１】
現在は、前述のように機器を利用した精子の分離方法が有している問題点を克服することができる新たな技術開発が切実な状況であり、Ｘ精子やＹ精子を区分することができるバイオマーカーを発掘するために、多くの科学者の研究がなされている。
【００１２】
本発明は、前述のような問題点を解決するために案出されたものであり、本発明者は、Ｙ染色体精子に特異的に結合する抗体を開発し、それを利用して、所望のＸ染色体精子またはＹ染色体精子を分離することにより、精子の性鑑別を可能にすることを確認し、それに基づいて、本発明の完成に至った。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
それゆえに、本発明の目的は、配列番号１で表示されるアミノ酸配列によってなるＨＣＤＲ１、配列番号２で表示されるアミノ酸配列によってなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３で表示されるアミノ酸配列によってなるＨＣＤＲ３からなる群から選択されるいずれか１以上を含む重鎖可変領域；並びに配列番号４で表示されるアミノ酸配列によってなるＬＣＤＲ１、配列番号５で表示されるアミノ酸配列によってなるＬＣＤＲ２、及び配列番号６で表示されるアミノ酸配列によってなるＬＣＤＲ３からなる群から選択されるいずれか１以上を含む軽鎖可変領域；を含む抗体を提供することである。
【００１４】
また、本発明の他の目的は、前記抗体を有効成分として含む、精子性分離のための鑑別用組成物及び／またはキットを含んだ関連製品及び／または適用方法を提供することである。
【００１５】
また、本発明のさらに他の目的は、配列番号７及び配列番号８からなるアミノ酸配列をコーディングする単離された核酸を含む、前記抗体生産用発現ベクター、それを介した試験管（in vitro）内形質転換された宿主細胞、及びそれを利用した抗体生産方法を提供することである。
【００１６】
また、本発明のさらに他の目的は、ａ）オス個体から精液を採取する段階と、ｂ）前記精液に前記抗体を処理する段階と、ｃ）前記精液内の抗体と、特異的に結合された精子と非結合精子とを分離する段階を含む、哺乳動物精子の性鑑別方法を提供することである。
【００１７】
また、本発明のさらに他の目的は、ａ）オス個体から精液を採取する段階と、ｂ）前記精液に前記抗体を処理し、精子の性を選別する段階と、ｃ）前記選別された精子を利用して受精させる段階と、ｄ）目的とする性の産子を生産する段階と、を含む、特定性を有する哺乳動物の生産方法を提供することである。
【００１８】
しかし、本発明がなす技術的課題は、前述の課題に制限されるものではなく、言及されていない他の課題は、以下の記載から当業者に明確に理解されるであろう。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
前述のような本発明の目的を達成するために、本発明は、配列番号１で表示されるアミノ酸配列によってなるＨＣＤＲ１、配列番号２で表示されるアミノ酸配列によってなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３で表示されるアミノ酸配列によってなるＨＣＤＲ３からなる群から選択されるいずれか１以上を含む重鎖可変領域；並びに配列番号４で表示されるアミノ酸配列によってなるＬＣＤＲ１、配列番号５で表示されるアミノ酸配列によってなるＬＣＤＲ２、及び配列番号６で表示されるアミノ酸配列によってなるＬＣＤＲ３からなる群から選択されるいずれか１以上を含む軽鎖可変領域；を含む抗体を提供する。
【００２０】
本発明の一具現例として、前記重鎖可変領域は、配列番号７で表示されるアミノ酸配列によってもなり、前記軽鎖可変領域は、配列番号８で表示されるアミノ酸配列によってもなる。
【００２１】
本発明の他の具現例として、前記重鎖可変領域は、配列番号９で表示されるポリヌクレオチド配列によってなるＨＣＤＲ１、配列番号１０で表示されるポリヌクレオチド配列によってなるＨＣＤＲ２、及び配列番号１１で表示されるポリヌクレオチド配列によってなるＨＣＤＲ３からなる群から選択されるいずれか１以上を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１２で表示されるポリヌクレオチド配列によってなるＬＣＤＲ１、配列番号１３で表示されるポリヌクレオチド配列によってなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１４で表示されるポリヌクレオチド配列によってなるＬＣＤＲ３からなる群から選択されるいずれか１以上を含んでもよい。
【００２２】
本発明のさらに他の具現例として、前記重鎖可変領域は、配列番号１５で表示されるポリヌクレオチド配列によってもなり、前記軽鎖可変領域は、配列番号１６で表示されるポリヌクレオチド配列によってもなる。
【００２３】
本発明のさらに他の具現例として、前記抗体は、単一クローン抗体またはポリクローン抗体でもある。
【００２４】
また、本発明は、配列番号７及び配列番号８からなるアミノ酸配列をコーディングする単離された核酸を含む、抗体生産用発現ベクター、それを介した試験管（in vitro）内の形質転換された宿主細胞、及びそれを利用した抗体生産方法を提供する。
【００２５】
本発明のさらに他の具現例として、前記宿主細胞は、バクテリア（Ｅ．Ｃｏｌｉ）や酵母（yeast）などの微生物、ＣＨＯ細胞、Ｆ２Ｎ細胞、ＨＥＫ２９３細胞及び抗体生産ハイブリドーマ細胞からなる群から選択されたいずれか一つでもある。
【００２６】
また、本発明は、前記抗体を有効成分として含む、精子性分離のための鑑別用組成物及び／またはキットを含んだ関連製品及び／または適用方法を提供する。
【００２７】
本発明のさらに他の具現例として、前記抗体は、哺乳動物のＹ染色体精子に結合し、精子凝集反応を誘導することができ、前記哺乳動物は、牛、マウス、犬及び馬からなる群から選択されるいずれか一つでもあるが、それらに制限されるものではない。
【００２８】
また、本発明は、ａ）オス個体から精液を採取する段階と、ｂ）前記精液に前記抗体を処理する段階と、ｃ）前記精液内の抗体と、特異的に結合された精子と非結合精子とを分離する段階と、を含む、哺乳動物精子の性鑑別方法を提供し、前記哺乳動物は、牛、マウス、犬及び馬からなる群から選択されるいずれか一つでもあるが、それらに制限されるものではない。
【００２９】
本発明のさらに他の具現例として、前記段階ｃ）において、前記抗体と、特異的に結合された精子は、Ｙ染色体精子であり、非結合精子は、Ｘ染色体精子でもある。
【００３０】
本発明のさらに他の具現例として、前記段階ｃ）は、流細胞分離技法、磁石分離技法、フィルタ分離法、パンニング分離方法、ナノ物質を利用した分離方法、及び直接投与技法からなる群から選択される方法を使用することができる。
【００３１】
また、本発明は、ａ）オス個体から精液を採取する段階と、ｂ）前記精液に前記抗体を処理し、精子の性を選別する段階と、ｃ）前記選別された精子を利用して受精させる段階と、ｄ）目的とする性の産子を生産する段階と、を含む、特定性を有する哺乳動物の生産方法を提供し、前記哺乳動物は、牛、マウス、犬及び馬からなる群から選択されるいずれか一つでもあるが、それらに制限されるものではない。
【００３２】
本発明のさらに他の具現例として、前記（ｃ）段階は、選別された精子を試験管内で体外受精させることができる。
【００３３】
本発明のさらに他の具現例として、前記（ｃ）段階は、選別された精子を哺乳動物の子宮に直接注入して体内で人工受精させることができる。
【発明の効果】
【００３４】
本発明は、精子性鑑別用抗体及びその用途に係り、さらに具体的には、前記抗体を利用した精子性鑑別用組成物、性鑑別方法、及び特定性を有する動物の生産方法に関する。本発明において、前記抗体を処理することにより、Ｙ染色体精子の凝集反応を誘導し、Ｘ染色体精子とＹ染色体精子とを手軽に鑑別することができることを確認したが、特定性を有するあつらえ式動物を量産することができ、所望の性を有する家畜を選択的に生産することにより、計画繁殖、育種改良及び経営効率化に寄与すると期待される。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】乳牛精子を利用して、本発明の抗体タンパク質処理による精子との結合可否を確認した結果である。
【図２】韓牛精子を利用して、本発明の抗体タンパク質処理による精子との結合可否を確認した結果である。
【図３】本発明の抗体タンパク質と精子との結合部位を蛍光顕微鏡で確認した結果である。
【図４Ａ】本発明の抗体タンパク質処理による牛精子の精子凝集反応の誘導いかんを電子顕微鏡で確認した結果である。
【図４Ｂ】本発明の抗体タンパク質処理によるマウス精子の精子凝集反応の誘導いかんを電子顕微鏡で確認した結果である。
【図４Ｃ】本発明の抗体タンパク質処理による犬精子の精子凝集反応の誘導いかんを電子顕微鏡で確認した結果である
【図４Ｄ】本発明の抗体タンパク質処理による馬精子の精子凝集反応の誘導いかんを電子顕微鏡で確認した結果である。
【図５】流細胞分離器（flow cytometer）で分離された、本発明の抗体陽性精子及び抗体精子それぞれの染色体を、ＰＣＲを利用して確認した結果である。
【図６】現在市販されている乳牛用性鑑別精子を利用して、本発明の抗体タンパク質の性鑑別効能を検証した結果である。
【図７】Sexing Technologies社の、Ｘ染色体精子とＹ染色体精子との距離差による分離方法を利用して、本発明の抗体タンパク質の性鑑別効能を検証した結果である。
【図８】凍結精子を利用して、本発明の抗体タンパク質処理による精子凝集いかんを肉眼で確認した結果である。
【図９】本発明の抗体タンパク質を処理して精子凝集反応を誘導した後、メッシュ（mesh）フィルタを利用して、Ｘ精子分離効率を検証した結果である。
【図１０】本発明の抗体タンパク質処理による牛（韓牛）の性調節効果を確認した結果である。
【図１１】本発明の抗体タンパク質処理によるマウスの性調節効果を確認した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
本発明者は、Ｙ染色体精子頭部の細胞膜タンパク質と、特異的に結合する抗体を利用して、Ｙ染色体精子の凝集を誘導することができることを確認した。また、前記抗体のかような特性を利用して、さらに簡易にＸ染色体精子とＹ染色体精子とを分離し、人工受精などに活用することができることを確認し、それに基づいて本発明を完成した。
【００３７】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００３８】
本発明は、配列番号１で表示されるアミノ酸配列によってなるＨＣＤＲ１、配列番号２で表示されるアミノ酸配列によってなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３で表示されるアミノ酸配列によってなるＨＣＤＲ３からなる群から選択されるいずれか１以上を含む重鎖可変領域；並びに配列番号４で表示されるアミノ酸配列によってなるＬＣＤＲ１、配列番号５で表示されるアミノ酸配列によってなるＬＣＤＲ２、及び配列番号６で表示されるアミノ酸配列によってなるＬＣＤＲ３からなる群から選択されるいずれか１以上を含む軽鎖可変領域；を含む抗体または機能性変異体を提供する。
【００３９】
本発明の一具現例として、前記重鎖可変領域は、配列番号７で表示されるアミノ酸配列によってもなり、前記軽鎖可変領域は、配列番号８で表示されるアミノ酸配列によってもなる。
【００４０】
本発明の他の具現例として、前記重鎖可変領域は、配列番号９で表示されるポリヌクレオチド配列によってなるＨＣＤＲ１、配列番号１０で表示されるポリヌクレオチド配列によってなるＨＣＤＲ２、及び配列番号１１で表示されるポリヌクレオチド配列によってなるＨＣＤＲ３からなる群から選択されるいずれか１以上を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１２で表示されるポリヌクレオチド配列によってなるＬＣＤＲ１、配列番号１３で表示されるポリヌクレオチド配列によってなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１４で表示されるポリヌクレオチド配列によってなるＬＣＤＲ３からなる群から選択されるいずれか１以上を含んでもよい。
【００４１】
本発明のさらに他の具現例として、前記重鎖可変領域は、配列番号１５で表示されるポリヌクレオチド配列によってもなり、前記軽鎖可変領域は、配列番号１６で表示されるポリヌクレオチド配列によってもなる。
【００４２】
本明細書で使われる用語「抗体」は、免疫学的に特定抗原と結合反応性を有する免疫グロブリン分子を含み、ポリクローナル（polyclonal）抗体及びモノクローナル（monoclonal）抗体をいずれも含む。また、前記用語は、抗体、抗体断片、キメラ性抗体（例えば、ヒト化ミュリン抗体）及び異種結合抗体（例えば、二重特異性抗体）のような遺伝工学によって生産された形態を含む。
【００４３】
典型的には、抗体は、重鎖（heavy chain）及び軽鎖（light chain）を有し、それぞれの重鎖及び軽鎖は、不変領域及び可変領域（前記部位は、「ドメイン」とも知られている）を含む。該軽鎖及び該重鎖の可変領域は、「相補性決定領域」（ＣＤＲ：complementarity-determining region）と呼ばれる３個の多変可能な領域、及び４個の「構造領域」（framework region）を含む。前記ＣＤＲは、主に抗原のエピトープ（epitope）に結合する役割を行う。それぞれの鎖のＣＤＲは、典型的には、Ｎ末端から始め、順次にＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３と呼ばれ、また特定ＣＤＲが位置している鎖によって識別される。
【００４４】
本発明において、重鎖可変領域のＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）は、それぞれ配列番号１ないし３で表示されるアミノ酸からなり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）は、それぞれ配列番号４ないし６で表示されるアミノ酸からなり、前記配列番号１ないし６で表示されるアミノ酸配列と、それぞれ７０％以上、望ましくは、８０％以上、さらに望ましくは、９０％以上、最も望ましくは、９５％以上の配列相同性を有する塩基配列を含んでもよい。
【００４５】
重鎖可変領域のＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）は、それぞれ配列番号９ないし１１で表示されるポリヌクレオチドからなり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）は、それぞれ配列番号１２ないし１４で表示されるポリヌクレオチドからなり、前記配列番号９ないし１５で表示されるポリヌクレオチド配列と、それぞれ７０％以上、望ましくは、８０％以上、さらに望ましくは、９０％以上、最も望ましくは、９５％以上の配列相同性を有する塩基配列を含んでもよい。
【００４６】
また、重鎖可変領域は、配列番号７で表示されるアミノ酸からなり、軽鎖可変領域は、配列番号８で表示されるアミノ酸からなり、前記配列番号７及び８で表示されるアミノ酸配列と、それぞれ７０％以上、望ましくは、８０％以上、さらに望ましくは、９０％以上、最も望ましくは、９５％以上の配列相同性を有する塩基配列を含んでもよい。
【００４７】
重鎖可変領域は、配列番号１５で表示されるポリヌクレオチドからなり、軽鎖可変領域は、配列番号１６で表示されるポリヌクレオチドからなり、前記配列番号１５及び１６で表示されるポリヌクレオチド配列と、それぞれ７０％以上、望ましくは、８０％以上、さらに望ましくは、９０％以上、最も望ましくは、９５％以上の配列相同性を有する塩基配列を含んでもよい。
【００４８】
また、前記抗体の機能性変異体は、本明細書に記載された抗体配列の生物学的均等物を含む。例えば、抗体の結合親和度及び／またはその他生物学的特性をさらに改善させるために、抗体のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列にさらなる変化を与えることができる。かような変形は、抗体のアミノ酸配列残基の欠失、挿入及び／または置換を含み、アミノ酸側鎖置換体の相対的な類似性、例えば、疎水性、親水性、電荷サイズなどに基づいてなされる。該アミノ酸側鎖置換体の大きさ、形態及び種類に対する分析により、アルギニン、リシン及びヒスチジンは、いずれも正電荷を帯びた残基であり、アルラニン、グリシン及びセリンは、類似サイズを有し、フェニルアラニン、トリプトファン及びタイロシンは、類似形態を有するということが分かる。従って、かような考慮事項に基づいて、アルギニン、リシン及びヒスチジン；アルラニン、グリシン及びセリン；並びにフェニルアラニン、トリプトファン及びタイロシンは、生物学的に機能均等物であるといえる。
【００４９】
本発明の抗体は、哺乳動物のＹ染色体精子の細胞膜タンパク質と、特異的に結合し、Ｙ染色体精子の凝集反応を誘導することができる。前記抗体は、Ｙ染色体精子と異なり、Ｘ染色体精子とは特異的な結合をしないので、精子凝集反応が誘導されない。従って、かような性質を利用して、Ｙ染色体精子とＸ染色体精子とを手軽に鑑別または分離することができる。
【００５０】
また、本発明は、配列番号７及び配列番号８からなるアミノ酸配列をコーディングする単離された核酸を含む、抗体生産用発現ベクター、それを介した形質転換された宿主細胞、及びそれを利用した試験管（in vitro）内の抗体生産方法を提供する。
【００５１】
本発明で使われる用語「形質転換」は、本来の細胞が有していたところと異なる種類の外来遺伝子があるＤＮＡ鎖断片またはプラスミドが細胞間に浸透され、本来の細胞に存在していたＤＮＡと結合することにより、細胞の遺伝形質を変化させる分子生物学的技術を意味する。本発明の目的上、該形質転換は前記配列番号７及び配列番号８からなるアミノ酸配列をコーディングする単離された核酸が宿主細胞内に挿入され、本発明の抗体を生産することを意味する。
【００５２】
前記宿主細胞は、望ましくは、バクテリア（Ｅ．Ｃｏｌｉ）や酵母（yeast）などの微生物、ＣＨＯ細胞、Ｆ２Ｎ細胞、ＨＥＫ２９３細胞及び抗体生産ハイブリドーマ細胞からなる群から選択されたいずれか一つでもあるが、それらに制限されるものではない。
【００５３】
本発明の一実施例においては、本発明の抗体を含むタンパク質製剤と、Ｙ染色体精子とが結合することができるということを確認し、前記抗体タンパク質は、精子頭部の細胞膜タンパク質に結合することを確認した（実施例１及び２参照）。また、具体的には、前記抗体タンパク質と結合する精子は、Ｙ染色体精子であるということを確認し、かような結果を、現在市販されている乳牛用性鑑別精子、及びSexing Technologies社の分離方法を介して分離効能を検証し、実際の人工受精で利用される凍結精子を利用して、再びその効果を検証したが、本発明を利用して、簡易でありながらも、高い効率で精子の性を鑑別することができるということを確認した（実施例３ないし５参照）。
【００５４】
それにより、本発明は、前記抗体またはその抗原結合領域を含む断片を有効成分として含む、精子性分離のための鑑別用組成物及び／またはキットを含んだ関連製品及び／または適用方法を提供するものである。
【００５５】
本発明において、精子を採取して鑑別しようとする畜種の特性に合わせて製造した希釈液をさらに含んでもよい。希釈の目的は、ある程度の代謝抑制、低温衝撃防止、過密度防止、精子の生存性を増大し、有効精液量を増加させるためであり、必要によっては、運動促進剤、運動抑制剤、細菌抑制剤などを含み、外部環境において精子の生存を増進させることができる製剤であるならば、制限なしに含めることができる。
【００５６】
また、本発明は、ａ）オス個体から精液を採取する段階と、ｂ）前記精液に抗体を処理する段階と、ｃ）前記精液内の抗体と、特異的に結合された精子と非結合精子とを分離する段階と、を含む、哺乳動物精子の性鑑別方法を提供する。
【００５７】
本発明において「個体」とは、精子を採取しようとする対象を意味し、さらに具体的には、ヒトまたは非ヒトである霊長類、牛、マウス、犬及び馬などの哺乳動物を意味するが、それらに制限されるものではない。
【００５８】
本発明において、「牛」は、生産する子牛の目的によって、望ましくは、韓牛を含んだ非肉牛または乳牛を選択することができるが、生殖能力を有している牛であるならば、畜種に制限なしにも利用される。
【００５９】
また、本発明において、「マウス、犬及び馬」は、生産する産子の目的によって選択することができるが、生殖能力を有しているならば、畜種に制限なしにも利用される。
【００６０】
本明細書で使用される用語「精子の性鑑別」は、Ｘ染色体精子とＹ染色体精子とを分離または鑑別することを意味し、前記精子は、活動性や形態学的差だけでは区分が困難であるが、本発明においては、抗体による結合を介した精子分離方法、と抗体及び抗体断片を媒介にした精子凝集反応を利用して、両者を分離または鑑別しようとした。
【００６１】
本発明の一例として、本発明は、乳牛の効率的な生産のために、Ｘ染色体精子を得ることを目的にすることができるが、必要によっては、Ｙ染色体を分離し、オス牛生産にも利用される。また、韓牛を含んだ非肉牛の場合にも、メス牛のみを生産するための方法として、Ｘ染色体精子を得ることにも活用され、目的によっては、オス牛生産のためにも利用される。
【００６２】
一般的に、哺乳動物の卵子は、性染色体としてＸ染色体のみを有する一方、精液内の精子は、約５０：５０の比率で、Ｘ染色体またはＹ染色体を有した精子を含んでおり、精子は、メス体内で卵子と出合い、受精時、受精卵の性を決定する役割を行う。従って、精子の性を鑑別または分離することにより、特定性を有する産子を生産することができる。従来Sexing Technologies社の精子の性鑑別技術は、Ｘ染色体長とＹ染色体長とによる蛍光化学物質の染色発光光度の差を利用した方法として、性鑑別精子が、ＤＮＡ蛍光染色剤（Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２）、ＵＶレーザ、高電圧のような物理的な刺激と共に、精子性鑑別分離のために、長期間の時間が要求され、精子の運動性と生存率とに影響を及ぼし、結果として、妊娠収率が低く示される（Duane, L. C., Theriogenology 65: 943-957 (2006)）。また、高価の装備及び熟練された専門人力を必要とし、性鑑別精子生産量増大のための関連付帯施設拡充など多くの問題点を有していた。特に、染色体性鑑別用製剤として使用される染色体蛍光物質染色剤（Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２）は、染色体に結合すれば、除去されないために、産子の遺伝子異常誘発可能性も提起されており、使用自制の状況である。
【００６３】
それにより、本発明は、タンパク質製剤である抗体を利用して、前記従来技術の問題点を解消しようとした。本発明の抗体は、Ｙ染色体精子の細胞膜タンパク質と、特異的に結合するので、簡便でありながらも、効果的に、Ｘ染色体精子またはＹ染色体精子を鑑別または分離することができる。本発明は、既存の蛍光物質による染色体結合を介した分離方法によって生じうる安全性の問題を解決することができ、染色体に影響を及ぼさず、安全に目的精子を分離することができる。また、外部的刺激なしに、短時間で簡易な方法で、抗体及び抗体断片によって誘導される精子凝集反応のみを利用して分離することにより、精子に加えられる物理的刺激を最小化し、本来の精子運動性と生存性とが保存された状態で分離が可能であり、それを利用して、高効率の体外受精用精子または人工受精用精子として活用することにより、高い受胎率を有するという長所を有している。
【００６４】
特に、抗体と非結合のＸ染色体精子は、精子自由運動による正常な受精能を有しているので、メス（ＸＸ）の生産収率をさらに増進させることができる。また、凝集されたＹ染色体精子のみを選択的に分離し、物理的な分離方法を介して確保された精子を利用して、オス（ＸＹ）の生産収率を高めるのにも活用される。
【００６５】
本発明において、抗体またはその抗原結合領域を含む断片と、特異的に結合されたＹ染色体精子と、非結合のＸ染色体精子とを分離するために、流細胞分離技法、抗体タンパク質に磁石（magnetic nano particle）を付けた後、磁石の原理によって分離させる磁石分離技法、精子凝集反応による沈殿物を、フィルタで分離するフィルタ分離法、または凍結精子に直接注入し、精子の凝集反応を誘発させる直接投与技法などを使用することができるが、凝集または非凝集の精子を分離することができる方法であるならば、制限なしに利用することができる。従来、Sexing Technologies社の牛精子の性鑑別技術は、ただ流細胞分離器を利用して分離した一方、本発明は、条件及び環境によって、多様な分離方法を選択的に活用することができるという長所がある。
【００６６】
本発明において、望ましくは、本発明の組成物及び／またはキットは、前記抗体またはその抗原結合領域を含む断片を含むバイアル（ガラス瓶）形態にも製造される。一例として、前記抗体またはその抗原結合領域を含む断片を含むバイアルに精液を添加して混合させ、凝集反応を誘導した後、Ｘ染色体精子またはＹ染色体精子を分離し、人工受精に利用することができる。
【００６７】
また、本発明は、ａ）オス個体から精子を採取する段階と、ｂ）前記精液に前記抗体を処理し、精子の性を選別する段階と、ｃ）前記選別された精子を利用して受精させる段階と、ｄ）目的とする性の産子を生産する段階と、を含む、特定性を有する哺乳動物の生産方法を提供する。
【００６８】
前記選別された精子を利用して受精させる段階は、試験管内で体外受精させるか、あるいは子宮に直接注入し、体内で人工受精させることができる。
【００６９】
本明細書に使用される用語「体外受精（in vitro fertilization）」は、屠殺場または過排卵処理メスから採取した卵子を利用して、試験管において、精子との培養を介して受精卵を得ることを意味する。本発明の目的上、試験管ですでに性分離した精子を利用して、試験管で受精を行って得られる性分離した受精卵を意味し、それを利用して、メスの体内注入を介した目的性を有した産子を生産することができる。
【００７０】
また、本明細書で使用される用語「人工受精（artificial insemination）」は、卵子と精子との結合を、自然交尾によらず、人為的にオス家畜の精液をメス家畜の生殖器内に注入して受胎させることを意味する。本発明の目的上、オスの精液をメスの生殖器に注入することにより、前述のように、性が選別された精子が卵子の細胞質に入り込むことを示し、それを介して、目的とする性の産子を生産することができる。
【００７１】
それにより、本技術は、特定性を有する精子を分離して得ることにより、人工受精用性鑑別精液及び受精卵を生産し、個体の改良、増殖、需給調節、及び農家の所得増大に寄与し、畜産業、特に、韓牛を含んだ非肉牛及び乳牛の育種改良を介した競争力向上に寄与することができる。
【００７２】
以下、本発明の理解の一助とすべく、望ましい実施例を提示する。しかし、下記実施例は、本発明をさらに容易に理解するために提供されるものであるのみ、下記実施例によって、本発明の内容が限定されるものではない。
【実施例】
【００７３】
実施例１．本発明タンパク質製剤の精子との特異的結合能確認
【００７４】
本発明の抗体を含むタンパク質製剤の精子との結合能を確認するために、下記のように実験した。
【００７５】
市販されている乳牛用及び韓牛用の凍結精液を３５℃で融解した後、精子を１，０００，０００個／ｍｌで精子希釈液に希釈し、分析用精子として利用した。本発明の抗体タンパク質の結合いかんを検証するために、それぞれ１０万個の精子を対象に、本発明の抗体タンパク質を添加した後、約２０分間一次結合反応をさせ、遠心分離を介して、結合されていない一次抗原タンパク質を除去した。一次の本発明抗体タンパク質結合精子を対象に、ＰＥ蛍光物質結合抗ラット抗体タンパク質で、常温で約２０分間染色を行った後、それを分析用サンプルとして利用した。流細胞分析を行う前、死んだ精子を除去するために、ＰＩ蛍光物質を添加した後、生きている精子のみを対象にし、各畜種の精子に対する対照群として、ラットisotype ＩｇＧタンパク質を添加した後、同一二次抗体で染色した。流細胞分析器の前方散乱（ＦＳＣ：forward scatter）と側傍散乱（ＳＳＣ：side scatter）を利用して、精子部分のみを選択した後、精子の集団のみを対象として、各畜種別精子での本発明抗体タンパク質との結合いかんを判別し、各精子当たり１万個の精子情報を保管して分析を実施した。
【００７６】
その結果、図１及び図２に示されているように、乳牛及び韓牛のいずれも同一に、抗体タンパク質無添加対照群の場合、非結合精子として示されたが（図１及び図２の左側）、本発明の抗体タンパク質添加グループの場合、本発明の抗体陰性精子（本発明の抗体タンパク質非結合精子）、及び本発明の抗体陽性精子（本発明の抗体タンパク質結合精子）が５０：５０の比率で分離観察された（図１及び図２の右側）。
【００７７】
かような結果は、精液内の精子は、約５０：５０の比率で、Ｘ染色体またはＹ染色体を有するという点を考慮するとき、本発明の抗体タンパク質が、Ｘ染色体精子またはＹ染色体精子と、特異的に結合することができるということを示す。
【００７８】
実施例２．本発明タンパク質製剤の精子との結合部位、及び精子凝集反応確認
【００７９】
２−１．精子との結合部位確認
【００８０】
精子の構造は、大きく見て、核と尖体とを含んでいる頭部、頚部、及び主部と従部とを含む尾部に区分される。それにより、前記実施例１の結果を基に、本発明の抗体タンパク質が結合する精子の具体的な部位を確認するために、下記のように実験した。
【００８１】
精子の結合部位を検査するために、免疫染色を実施し、前記実施例１と同一方法で、牛精子に結合されている本発明抗体タンパク質を染色した後、蛍光顕微鏡を利用して、結合部位を確認した。
【００８２】
その結果、図３に示されているように、本発明の抗体タンパク質は、牛精子の頭部細胞膜に結合していることを確認した。
【００８３】
かような結果は、本発明の本発明の抗体タンパク質が、Ｘ染色体精子頭部またはＹ染色体精子頭部の細胞膜タンパク質に特異的に結合するということを示す。
【００８４】
２−２．精子凝集反応の確認
【００８５】
抗体タンパク質の構造は、１つの構造タンパク質ＦＣ部分と、２個の抗原結合部位とからなり、抗体タンパク質が抗原に結合すれば、それによる凝集反応が誘発される。それにより、本発明の抗体タンパク質と精子との結合による精子凝集反応いかんを確認するために、下記のように実験した。
【００８６】
融解された、乳牛、マウス、犬及び馬の精子が含まれた培養ディッシュに、本発明の抗体タンパク質を添加した後、３５℃で約１０分間培養させた後、電子顕微鏡を利用して観察した。対照群としては、本発明の抗体タンパク質を添加していない群を利用した。
【００８７】
その結果、図４に示されているように、乳牛の場合、本発明の抗体タンパク質を添加していない対照群では、精子の凝集反応が観察されない一方（図４Ａ左側）、本発明の抗体タンパク質を添加した群では、本発明の抗体タンパク質が、精子の頭部タンパク質と結合し、精子の頭部同士結合された精子凝集反応が誘導されることを確認した（図４Ａ右側）。また、マウス、犬及び馬の場合も同様に、本発明の抗体タンパク質が精子の頭部タンパク質と結合し、精子の頭部同士結合された精子凝集反応が誘導されることを確認した（図４Ｂないし図４Ｄ）。
【００８８】
かような結果は、本発明の抗体タンパク質が、Ｙ染色体精子頭部の細胞膜タンパク質に特異的に結合し、精子頭部間結合を促進し、精子凝集反応を誘導することを示す。
【００８９】
実施例３．Ｘ染色体精子またはＹ染色体精子の分離効能確認
【００９０】
本実施例においては、前記実施例１で区分された本発明陰性精子と本発明陽性精子とが、それぞれＸ染色体精子またはＹ染色体精子であるかということを確認するために、下記のように実験した。
【００９１】
染色体特異的なプライマー（ＢＳＰ primer、ＢＹ primer）を利用して、遺伝子増幅検査（ＰＣＲ）を行い、配列情報は下記表１に示した。
【００９２】
【表１】
0006669864.tif 000002
【００９３】
本発明の抗体タンパク質を染色した乳牛精子に対して、流細胞分離器（flowcytometer）で、本発明の抗体陽性精子と抗体陰性精子との１０万個をそれぞれ分離した後、１．５ｍｌチューブに入れ、遠心分離器で上澄み液を除去した。沈澱精子チューブに、５０μｌの蒸溜水（Ｄ．Ｗ）を添加した後、ＰＣＲ機器で、９９℃、１０分間加熱処理し、精子核を分離した。ＰＣＲ用酵素などが含有されたＰＣＲ premixtureチューブに、精子ＤＮＡ ２μｌに、牛染色体と結合するプライマー（ＢＳＰ primer）２μｌ、及びＹ染色体特異的なプライマー（ＢＹ primer）２μｌを添加した後、ＰＣＲ遺伝子検査を行った。ＰＣＲ反応は、初期変性段階である９５℃で５分間行った後、９５℃で２０秒、５２℃で２０秒、７２℃で１分ずつ総４５サイクルを実施し、７０℃で１０分間延長反応を行い、遺伝子増幅を施行した遺伝子を対象に、本発明の抗体陽性または陰性精子が、Ｘ染色体精子またはＹ染色体精子であるかということを調査した。
【００９４】
その結果、図５に示されているように、本発明の抗体陽性精子は、Ｙ染色体特異的なプライマー（ＢＹ primer）によって増幅されたが、Ｙ染色体精子であるということを確認し、本発明の抗体陰性精子が、Ｘ染色体精子であるということを確認した。前述の結果を総合してみるとき、本発明の抗体タンパク質は、Ｙ染色体精子頭部の細胞膜タンパク質に特異的に結合し、Ｙ染色体精子凝集反応を誘導するということが分かる。
【００９５】
実施例４．従来の精子性鑑別技術を利用した性鑑別効能検証
【００９６】
まず、現在市販されている乳牛用性鑑別精子を利用して、本発明の抗体タンパク質の性鑑別効能を検証するために、下記のように実験した。
【００９７】
（株）韓国セクシングバイオテックで分離して販売する性鑑別精子であって、既存のHoechst３３３４２蛍光化学物質を利用して、流細胞分離器で、Ｘ精子のみが分離した乳牛用性鑑別精子と、非性鑑別乳牛用精子とを、前記実施例１と同一方法で、本発明の抗体タンパク質を免疫染色した後、タンパク質の結合特性を分析した。
【００９８】
また、前記実施例１と同一方法で染色を実施した精子に、５μｇ／ｍｌ濃度のHoechst３３３４２（Bismenzimide）を添加した後、３４℃のＣＯ２培養基で、３０分間培養を介して蛍光染色を実施した。前記蛍光染色実施後、ＵＶレーザが装着された流細胞分離器（ＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ）を利用して、Sexing Technologies社製品と同一方法で、ＵＶレーザによる蛍光波長を、Aria（Ａ）とWide（Ｗ）とに分析し、Hoechst３３３４２が少なく染色されたＹ染色体精子と、多く染色されたＸ染色体精子とを区分した。
【００９９】
その結果、図６に示されているように、Ｘ染色体精子とＹ染色体精子とのいずれも含まれた非性鑑別精子においては、本発明の抗体陽性精子と、本発明の抗体陰性精子とが５０：５０の比率で観察された一方（図６左側）、性鑑別精子においては、８：９２の比率で観察された（図６右側）。また、図７に示されているように、本発明の抗体タンパク質は、Ｙ染色体精子がゲーティング部分には結合されている一方、Ｘ染色体精子は、ゲーティング部分には、結合されていないことを確認した。
【０１００】
かような結果は、本発明の抗体タンパク質は、Ｙ染色体精子にだけ特異的に結合するということを意味する。
【０１０１】
実施例５．凍結精子を利用した性鑑別効能検証
【０１０２】
実際の人工受精に、本技術の活用いかんを確認するために、実際の人工受精で使用されている凍結精子を利用して、性鑑別効能を検証すべく下記のように実験した。
【０１０３】
人工受精に先立ち、凍結精子を融解した後、本発明の抗体タンパク質が添加されたチューブに添加した。その後、３５℃で約１０分以上培養を行い、凝集いかんを肉眼で観察した。対照群としては、本発明の抗体タンパク質を添加していない群を利用した。また、前述のように、精子凝集反応を誘導した後、１８μＭサイズのメッシュ（mesh）フィルタを利用して、Ｘ精子分離効率を検証した。
【０１０４】
その結果、図８に示されているように、本発明の抗体タンパク質を添加していない対照群においては、精子凝集反応が起こらない一方（図８左側）、本発明の抗体タンパク質を添加した群においては、精子凝集反応が進み、チューブ下端に沈澱していることを確認した（図８右側）。さらに、図９に示されているように、前記本発明の抗体タンパク質処理を介して、分離前、５０：５０の比率で存在したＸ染色体精子とＹ染色体精子とに対して、フィルタを利用して、Ｘ染色体精子のみを分離した結果、９５％以上の高分離効率が観察された。
【０１０５】
実施例６．本発明タンパク質製剤の臨床効能確認
【０１０６】
本発明による抗体タンパク質による性調節効果を確認するために下記のように実験した。
【０１０７】
６−１．牛（韓牛）に対する性調節効果
【０１０８】
韓牛飼育農家を対象に、人工受精時、冷凍保管された精子を温水で融解した後、精子ストローに、注射器を利用して、直接抗体タンパク質を注入するか、あるいは抗体タンパク質が入っているバイアル容器に、人工受精用精液を添加した後、室温または温水で約２０−３０分間反応を行わせ、Ｙ精子の凝集反応を誘導させた。反応後、発情が誘発されたメス牛の子宮に注入し、人工受精を実施した。抗体タンパク質が処理された精子によって生まれた子牛を対象に、肉眼検査を介して、メス子牛とオス子牛との性比を検査した。
【０１０９】
その結果、図１０に示されているように、抗体タンパク質を処理した牛において、雌雄の性比率がそれぞれ８２．４：１７．６であることが確認された。
【０１１０】
６−２．マウスに対する性調節効果
【０１１１】
性調節用抗体タンパク質５μｇを、発情期メスマウス子宮に事前注入し、６時間後にオスマウスとの交配を実施した。正常な交配がなされた妊娠マウスを選別し、分娩後、４週齢の子マウスを対象に、肉眼検査を介して、メスマウスとオスマウスとの性比を検査した。
【０１１２】
その結果、図１１に示されているように、対照群のマウスは、雌雄の性比率がそれぞれ５６：４４の比率を示したが、抗体タンパク質を処理したマウスにおいては、雌雄の性比率がそれぞれ９３．３：６．７であるということが確認された。
【０１１３】
かような結果は、抗体タンパク質処理によって、Ｙ染色体精子の凝集反応が誘導され、それにより、Ｘ染色体精子が分離受精されたことを意味する。
【０１１４】
それにより、バイアル瓶に、本発明の抗体タンパク質が添加された形態のキット（Whoemom）を製造して活用し、人工受精前、凍結精液と反応させることにより、簡便にＸ染色体精子が分離されて利用することができるということを確認した。また、凝集されたＹ染色体精子のみを回収し、凝集された精子に何回かのピペッティングを実施する場合、凝集されたＹ染色体精子が分離されるが、前記方法を介して、オス生産用精子として活用が可能であろう。
【０１１５】
前述の本発明の説明は、例示のためのものであり、本発明が属する技術分野の当業者であるならば、本発明の技術的思想や必須な特徴を変更せずとも、他の具体的な形態に、容易に変形が可能であるということを理解することができるであろう。従って、前述の実施例は、全ての面で例示的なものであって、限定的ではないと理解しなければならない。
【産業上の利用可能性】
【０１１６】
本発明は、精子性鑑別用抗体及びその用途に係り、該抗体を処理することにより、Ｙ染色体精子の凝集反応を誘導し、Ｘ染色体精子とＹ染色体精子とを手軽に鑑別することができるということを確認したが、特定性を有するあつらえ式動物を量産することができ、所望の性を有する家畜を選択的に生産することにより、計画繁殖、育種改良及び経営効率化に寄与すると期待される。
【図１】
0006669864.tif 000003
【図２】
0006669864.tif 000004
【図３】
0006669864.tif 000005
【図４Ａ】
0006669864.tif 000006
【図４Ｂ】
0006669864.tif 000007
【図４Ｃ】
0006669864.tif 000008
【図４Ｄ】
0006669864.tif 000009
【図５】
0006669864.tif 000010
【図６】
0006669864.tif 000011
【図７】
0006669864.tif 000012
【図８】
0006669864.tif 000013
【図９】
0006669864.tif 000014
【図１０】
0006669864.tif 000015
【図１１】
0006669864.tif 000016
【配列表】
0006669864000001.app