(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂肪酸含有廃水から脂肪酸を分解又は資化により除去する方法であって、
脂肪酸濃度が０．２〜５重量％の脂肪酸含有廃水中で、カンジダ・トロピカリスを脂肪酸に作用させることを特徴とする、脂肪酸除去方法。
【請求項２】
前記脂肪酸含有廃水が、油脂含有廃水をアシルグリセロールの加水分解処理に供することにより得られる脂肪酸含有廃水又はその濃縮液である、請求項１に記載の脂肪酸除去方法。
【請求項３】
下記第１工程及び第２工程を含む油脂含有廃水の処理方法：
油脂含有廃水に対して加水分解処理を行うことにより、油脂含有廃水に含まれるアシルグリセロールからグリセロールと脂肪酸を遊離させ、脂肪酸濃度が０．２〜５重量％の処理液を得る第１工程、
前記処理液をカンジダ・トロピカリスに作用させ、脂肪酸を分解又は資化により除去する第２工程。
【請求項４】
前記第１工程に供される油脂含有廃水が、グリーストラップによって油脂が０．０１〜２０重量％の濃度に濃縮された廃水である、請求項３に記載の処理方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂肪酸の除去方法に関する。より具体的には、本発明は、高濃度の脂肪酸含有液から酵母を利用して効率的に脂肪酸を除去する方法に関する。更に、本発明は、当該脂肪酸の除去方法を利用して、油脂含有廃水を処理する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
飲食店の厨房や食品工場等の事業施設からは、動植物性の油脂を含む廃水が排出される。このような廃水は、環境問題上、そのまま下水に放出することは好ましくなく、特に日本においては、水質汚濁防止法や下水道法、建築基準法等の法律の定める廃水基準により、環境に放出可能な廃水中のｎ−ヘキサン抽出物質の含有量が規制されている。なお、ｎ−ヘキサン抽出物質とは、動植物性の油脂や脂肪酸等の総称である。
【０００３】
従来、油脂含有廃水の処理方法として、リパーゼやアシルグリセロール分解性微生物を用いて、廃水中の油脂に含まれるアシルグリセロールをグリセロールと脂肪酸に加水分解した後に、脂肪酸を更に分解する方法が知られている。
【０００４】
例えば、特許文献１には、油脂を脂肪酸とグリセロールに分解するリパーゼ分泌微生物と、加水分解生成物を消費・資化する微生物との複合作用により、油脂を分解する油脂含有廃水処理方法が開示されている。また、特許文献１では、油脂を脂肪酸とグリセロールに分解し、更に脂肪酸を資化・消費する微生物として、真性細菌、酵母、及び糸状真菌類を使用できることが開示されている。
【０００５】
また、特許文献２には、脂肪酸が存在する条件下、又は油脂が脂肪酸とグリセロールに分解される条件下で、遊離脂肪酸を資化する酵母ヤロウィア・リポティカを作用させる油分解除去方法が報告されている。
【０００６】
更に、特許文献３には、グリーストラップ内の含油脂廃水の油脂を固定化リパーゼと有機物を資化する微生物との作用により分解処理する含油脂廃水処理方法が報告されている。
【０００７】
一方、近年、油脂を含む廃水の処理の効率化に対する要望が高まっており、この要望に追従するためにも、油脂含有廃水の処理を更に向上させる技術の開発が望まれている。
【０００８】
また、廃水処理以外の分野でも、脂肪酸を除去する技術が必要とされている。例えば、バイオディーゼルとして使用されている脂肪酸メチルエステルは、トリグリセリドを原料として生成されているが、トリグリセリドに脂肪酸が多く含まれていると、脂肪酸メチルエステルの収率が低下することが知られている。トリグリセリドは、劣化によって脂肪酸を遊離し、不純物となる脂肪酸量が増大するので、バイオディーゼルの製造効率を向上させる上で、トリグリセリドに混在する脂肪酸の除去が重要になる。また、ドライクリーニングの分野では、ドライクリーニング溶剤に溶解した脂肪酸がクリーニング後の衣服にニオイを付着させる原因となっているため、ドライクリーニング溶剤の脂肪酸価を低下させることが求められている。
【０００９】
このように、廃水処理の分野に限らず、バイオディーゼル、ドライクリーニング等の種々の分野において、脂肪酸を除去する技術が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２０１０−２２７８４９号公報
【特許文献２】特開２０１３−１４６６８９号公報
【特許文献３】特開２００６−３０５４７６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
従来、廃水処理の分野では、油脂に含まれるアシルグリセロールの加水分解によって生じた脂肪酸は、酵母を使用して除去されている。そこで、脂肪酸を高濃度の状態で分解除去できれば、脂肪酸除去に供される液量の低減、脂肪酸除去の効率化、処理施設の小型化等が図られ、油脂含有廃水の処理の効率化に資することが期待される。このような背景の下、本発明者は、高濃度の脂肪酸含有液に対して、酵母による脂肪酸の除去を試みたところ、脂肪酸の分解除去に通常使用されている酵母を、０．１重量％以上という高濃度の脂肪酸を含む液に対して作用させると、酵母による脂肪酸の除去能が低下し、却って脂肪酸含有液からの脂肪酸の除去効率が低下するという課題に直面した。
【００１２】
そこで、本発明は、酵母を利用して、高濃度の脂肪酸含有液から効率的に脂肪酸を除去する技術を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者は、前記課題を解決すべく、鋭意検討を行ったところ、酵母の中でも、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｏｒｏｐｉｃａｌｉｓ）を選択し、これを用いて、０．１重量％以上という高濃度の脂肪酸含有液に作用させると、脂肪酸を効率的に除去できることを見出した。本発明は、かかる知見に基づいて、更に検討を重ねることにより完成したものである。
【００１４】
即ち、本発明は、下記に掲げる態様の発明を提供する。
項１．  脂肪酸含有液から脂肪酸を除去する方法であって、
脂肪酸濃度が０．１重量％以上の脂肪酸含有液中で、カンジダ・トロピカリスを脂肪酸に作用させることを特徴とする、脂肪酸除去方法。
項２．  前記脂肪酸含有液が、脂肪酸含有廃水である、項１に記載の脂肪酸除去方法。
項３．  前記脂肪酸含有廃水が、油脂含有廃水をアシルグリセロールの加水分解処理に供することにより得られる脂肪酸含有廃水又はその濃縮液である、項２に記載の脂肪酸除去方法。
項４．  脂肪酸含有液の脂肪酸濃度が０．１〜１０重量％である、項１〜３のいずれかに記載の脂肪酸除去方法。
項５．  下記第１工程及び第２工程を含む油脂含有廃水の処理方法：
油脂含有廃水に対して加水分解処理を行うことにより、油脂含有廃水に含まれるアシルグリセロールからグリセロールと脂肪酸を遊離させる第１工程、
前記第１工程で遊離した脂肪酸を０．１重量％以上の濃度で、カンジダ・トロピカリスに作用させ、脂肪酸を除去する第２工程。
項６．  前記第１工程に供される油脂含有廃水が、グリーストラップによって油脂が０．０１〜２０重量％の濃度に濃縮された廃水である、項５に記載の処理方法。
項７．  前記第２工程が、脂肪酸濃度が０．１〜１０重量％の条件下で行われる、項５又は６に記載の処理方法。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の脂肪酸除去方法によれば、高濃度の脂肪酸に対してカンジダ・トロピカリスを作用させることにより、脂肪酸を効率的に除去できるので、例えば、廃水、バイオディーゼルの原料として使用されるトリグリセリド、ドライクリーニング溶剤等の脂肪酸含有液の除去処理において、脂肪酸除去に供される液量の低減、脂肪酸除去の効率化、処理施設の小型化等を図ることができる。
【００１６】
特に、本発明の脂肪酸除去方法は、油脂含有廃水の処理における一工程として組み込むことによって、効率的な廃水の浄化が可能になり、廃水処理のトータルコストを低減させることもできる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】試験例４において、オレイン酸０．１〜１．０重量％の存在下で、カンジダ・トロピカリス及びカンジダ・マイコデルマによるオレイン酸除去能を評価した結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
１．脂肪酸除去方法
本発明の脂肪酸除去方法は、０．１重量％以上の脂肪酸を含有する液中で、カンジダ・トロピカリスを脂肪酸に作用させることを特徴とする。以下、本発明の脂肪酸除去方法について説明する。
【００１９】
使用微生物
本発明の脂肪酸除去方法では、脂肪酸を除去するための微生物としてカンジダ・トロピカリスを使用する。酵母には、脂肪酸を分解又は資化する能力を有していることが知られているが、一般的な酵母では、０．１重量％以上という高濃度の脂肪酸存在下では、脂肪酸資化・分解能や生育能等が減弱され、脂肪酸除去能の低下をきたすところ、カンジダ・トロピカリスを選択し、これを使用することにより、このような高濃度の脂肪酸存在下でも、効率的に脂肪酸を分解又は資化して除去することができる。
【００２０】
本発明において、カンジダ・トロピカリスは、自然界に存在するものを使用してもよく、また微生物株保存機関等で保存されている保存株を使用してもよい。微生物株保存機関で保存されているカンジダ・トロピカリスの保存株としては、例えば、ＪＣＭ１６２２、ＮＢＲＣ１４０２、ＮＢＲＣ１４０３（以上、ＲＩＫＥＮ  ＢＲＣ−ＪＣＭ、ＮＩＴＥ−ＮＢＲＣ）等が挙げられる。
【００２１】
本発明では、カンジダ・トロピカリスの内、単一の株を単独で使用してもよく、また２種以上の株を組み合わせて使用してもよい。
【００２２】
また、本発明の脂肪酸の除去方法では、本発明の効果を損なわない範囲で、必要に応じて、カンジダ・トロピカリスに加えて、脂肪酸を分解又は資化する能力を有する他の微生物を組み合わせて使用してもよい。このような微生物としては、例えば、カンジダ属（カンジダ・トロピカリス以外）、デバリオミセス属（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ）、ガラクトミセス属（Ｇａｌａｃｔｏｍｙｃｅｓ）、クルイベロマイセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、ミレロジマ属（Ｍｉｌｌｅｒｏｚｙｍａ）、ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）、ロドスポリジウム属（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、ロドトルラ属（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）、サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、トリコスポロン族（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ）、ウィッカーハモミセス属（Ｗｉｃｈｅｒｈａｍｏｍｙｃｅｓ）、ウィリオプシス属（Ｗｉｌｌｉｏｐｓｉｓ）、ヤロウィア属（Ｙａｒｒｏｗｉａ）、バークホルデリア属（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、アシネトバクター属（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）等に属する微生物が挙げられる。
【００２３】
脂肪酸含有液
本発明の脂肪酸除去方法において、処理対象物は、脂肪酸を０．１重量％以上含有する脂肪酸含有液である。一般的な酵母では、脂肪酸を０．１重量％以上の存在下では、脂肪酸除去能の低下をきたすが、前述するカンジダ・トロピカリスを使用することによって、このような高濃度の脂肪酸存在下でも効率的に脂肪酸を除去することが可能になる。
【００２４】
脂肪酸含有液は、脂肪酸の除去が求められるものである限り、特に制限されないが、例えば、廃水、バイオディーゼルの原料として使用されるトリグリセリド液、ドライクリーニング溶剤等が挙げられる。これらの脂肪酸含有液の中でも、廃水は、環境負荷軽減の観点から、脂肪酸除去が強く求められており、本発明の適用対象として好適である。
【００２５】
脂肪酸を含有する廃水としては、具体的には、油脂含有廃水をアシルグリセロールの加水分解処理に供することにより得られる脂肪酸含有廃水又はその濃縮液が挙げられる。当該加水分解処理は、リパーゼ等の酵素や、アシルグリセロール分解能を有する微生物を用いて行うことができる。また、油脂含有廃水としては、具体的には、飲食店の厨房や食品工場等の事業施設からの産業廃水や家庭廃水、これらの廃水をグリーストラップ等によって油脂を濃縮させた廃水が挙げられる。
【００２６】
処理対象となる脂肪酸含有液における脂肪酸濃度については、０．１重量％以上であればよい。より一層効率的に脂肪酸の除去を行うという観点から、脂肪酸含有液における脂肪酸濃度として、好ましくは０．１〜１０重量％、より好ましくは０．２〜５重量％、より一層好ましくは０．３〜５重量％、更に好ましくは０．５〜５重量％、更に一層好ましくは０．７〜５重量％、特に好ましくは０．８〜５重量％、最も好ましくは１〜５重量％又は１〜４重量％が挙げられる。このように高い脂肪酸濃度では、一般的な酵母では資化又は分解能の低下が顕著になるが、本発明では、このように高い脂肪酸濃度であっても効率的に脂肪酸の除去を行うことができる。
【００２７】
処理対象となる脂肪酸含有液は、前記脂肪酸濃度を満たすことを限度として、予め脂肪酸が遊離している液であっても、また脂肪酸が前記濃度となるように生成して遊離する液であってもよい。具体的には、前者の例として、油脂を含む液に対してアシルグリセロールの加水分解を行うことにより得られた脂肪酸含有液、又はその濃縮液が挙げられる。また、後者の例として、油脂を含む液に対して、アシルグリセロールを加水分解できる微生物又は酵素が含まれている液が挙げられる。
【００２８】
処理対象となる脂肪酸含有液のＣ／Ｎ比については、特に制限されないが、カンジダ・トロピカリスの生育に適した環境にするという観点から、通常２５０以下、好ましくは５〜２００、更に好ましくは１０〜１５０、より好ましくは２０〜１００が挙げられる。脂肪酸含有液のＣ／Ｎ比の調節は、脂肪酸の含有量を換算した上で、炭素源及び／又は窒素源を適宜添加することによって行われる。
【００２９】
処理対象となる脂肪酸含有液のｐＨについては、カンジダ・トロピカリスの生育が可能であることを限度として特に制限されないが、例えば２〜１２、好ましくは３〜１１、更に好ましくは４〜１０が挙げられる。脂肪酸含有液のｐＨの調節は、酸やアルカリ等のｐＨ調整剤を適宜添加することによって行われる。
【００３０】
処理対象となる脂肪酸含有液は、カンジダ・トロピカリスの生育が可能な環境にするために、必要に応じて、炭素源、窒素源、微量金属等が添加されていてもよい。
【００３１】
処理対象となる脂肪酸含有液は、脂肪酸が乳化状態で存在していてもよく、また懸濁状態で存在していてもよい。
【００３２】
処理条件
本発明の脂肪酸除去方法では、前記脂肪酸含有液中でカンジダ・トロピカリスを脂肪酸に作用させることにより、脂肪酸が資化又は分解されて除去される。
【００３３】
脂肪酸含有液中で脂肪酸とカンジダ・トロピカリを共存させるには、脂肪酸含有液にカンジダ・トロピカリスを添加する方法、カンジダ・トロピカリスを含む液中に脂肪酸又はそれを含む液を添加する方法等によって行われる。
【００３４】
脂肪酸含有液中でのカンジダ・トロピカリスの菌濃度については、脂肪酸の濃度、処理方式、処理時間等に応じて適宜設定すればよい。例えば、回分形式で処理を行う場合であれば、処理開始時において、カンジダ・トロピカリスが１×１０4〜１×１０11ｃｅｌｌｓ／ｍｌ、好ましくは１×１０5〜１×１０10ｃｅｌｌｓ／ｍｌ、更に好ましくは１×１０6〜１×１０9ｃｅｌｌｓ／ｍｌとなるように設定すればよい。また、連続形式で処理を行う場合であれば、定常状態において、カンジダ・トロピカリスが１×１０4〜１×１０11ｃｅｌｌｓ／ｍｌ、好ましくは１×１０5〜１×１０10ｃｅｌｌｓ／ｍｌ、更に好ましくは１×１０6〜１×１０9ｃｅｌｌｓ／ｍｌとなるように設定すればよい。
【００３５】
また、カンジダ・トロピカリスを脂肪酸に作用させる際の温度条件については、カンジダ・トロピカリスが生育可能であることを限度として特に制限されないが、例えば、２０〜５０℃、好ましくは２５〜４５℃、更に好ましくは３０〜４１℃、より好ましくは３４〜３７℃が挙げられる。
【００３６】
また、カンジダ・トロピカリスを脂肪酸に作用させる時間については、脂肪酸の濃度、処理方式等に応じて異なるが、例えば、１〜７２時間、好ましくは４〜４８時間、更に好ましくは８〜３６時間、より好ましくは１０〜２４時間が挙げられる。本発明の脂肪酸除去方法を連続形式で処理を行う場合であれば、滞留時間が前記範囲を充足するように設定すればよい。
【００３７】
また、カンジダ・トロピカリスを脂肪酸に作用させる際の圧力については、特に制限されず、脂肪酸の濃度、処理方式等に応じて適宜設定すればよく、カンジダ・トロピカリスの生育が可能であることを限度として、減圧下又は過圧下であってもよい。当該圧力として、具体的には、常圧〜５０ＭＰａ、好ましくは常圧〜０．２ＭＰａが挙げられる。
【００３８】
カンジダ・トロピカリスを脂肪酸に作用させる際には、必要に応じて撹拌してもよい。撹拌を行う場合の撹拌速度等については、処理対象となる脂肪酸含有液の量、使用する槽の大きさ等に応じて適宜設定すればよい。
【００３９】
カンジダ・トロピカリスを脂肪酸に作用させる際の曝気については、カンジダ・トロピカリスが生育できることを限度として特に制限されないが、カンジダ・トロピカリスは好気性微生物であり、曝気によりカンジダ・トロピカリスの生育の向上が図られ、ひいては脂肪酸の除去効率の向上が図られるので、曝気を行っておくことが望ましい。
【００４０】
曝気は、脂肪酸含有液の上面を空気に晒した状態で、必要に応じて撹拌することにより、脂肪酸含有液の上面から空気を供給する方法；脂肪酸含有液の内部に空気を直接供給する方法等によって行うことができる。
【００４１】
カンジダ・トロピカリスを脂肪酸に作用させる際の処理形式については、特に制限されず、回分式、流加式、連続式のいずれであってもよい。ここで、「回分式」とは、
処理終了時まで、新たな脂肪酸含有液の投入及び処理液の排出を行うことなく処理する形式を指す。「流加式」とは、処理終了時まで、新たな脂肪酸含有液を連続的又は間欠的に投入しながら、処理液の排出を行うことなく処理する形式を指す。「連続式」とは、新たな脂肪酸含有液を連続的又は間欠的に投入しつつ、処理液の排出を連続的又は間欠的に排出しながら処理する形式を指す。
【００４２】
斯くして脂肪酸が除去されて得られた処理液は、そのまま、又は必要に応じてカンジダ・トロピカリスやその他の固形分をろ過や遠心分離等の除去処理に供した後に、下水道への放流等によって処理することができる。
【００４３】
２．油脂含有廃水の処理方法
前記脂肪酸の除去方法は、油脂含有廃水の処理方法に組み込むことにより、効率的な油脂の除去処理が可能になる。
より具体的には、前記脂肪酸の除去方法を利用した油脂含有廃水の処理方法として、下記第１工程及び第２工程を含む処理方法が挙げられる。
第１工程：油脂含有廃水に対して加水分解処理を行うことにより、油脂含有廃水に含まれるアシルグリセロールからグリセロールと脂肪酸を遊離させる工程、
第２工程：前記第１工程で遊離した脂肪酸を０．１重量％以上の濃度で、カンジダ・トロピカリスに作用させ、脂肪酸を除去する工程。
【００４４】
前記第１工程に供される油脂含有廃水とは、油脂が含まれ、油脂を分解することが求められるものであることを限度として、特に制限されないが、好適な一例として、油脂を含む廃水が挙げられる。油脂を含む廃水としては、例えば、前述する産業廃水や家庭廃水等の廃水自体であってもよいが、脂肪酸が高濃度となるように遊離させて第２工程を簡便に実施するという観点から、前述する産業廃水や家庭廃水等の廃水をグリーストラップ等によって油脂を０．０１〜２０重量％（特に、０．１〜１０重量％）に濃縮させた廃水が好ましい。また、油脂含有廃水は、植物性油脂、動物性油脂、水産油脂等の内、少なくとも１種の油脂に由来するアシルグリセロールが含まれているものであればよいが、アシルグリセロールの他に、脂肪酸が含まれていてもよい。
【００４５】
また、前記第１工程において、油脂をグリセロールと脂肪酸に加水分解処理するには、例えば、リパーゼ等のアシルグリセロール加水分解酵素を用いた酵素処理や、アシルグリセロール加水分解能を有する微生物を用いた微生物処理を行えばよく、これらの処理方法は、当該技術分野で採用されている一般的な条件に従って行うことができる。
【００４６】
前記第２工程における具体的手法、好ましい脂肪酸濃度等については、前記「１．脂肪酸除去方法」の欄に記載の通りである。
【００４７】
また、前記第１工程で得られた処理液の脂肪酸濃度が０．１重量％を下回っている場合には、前記第２工程を行うに際し、前記第１工程で得られた処理液を濃縮、前記第１工程で得られた処理液に対する高濃度の脂肪酸含有液の添加等を行って、第２工程に供される液中の脂肪酸濃度を０．１重量％以上に調整すればよい。
【００４８】
また、本発明の油脂含有廃水の処理方法では、前記第１工程及び第２工程を同一の処理槽又は別の処理槽で順次行ってもよいが、処理槽内で遊離している脂肪酸の濃度が０．１重量％以上となる条件を維持できる場合には、前記第１工程及び第２工程を同一の処理槽内で同時に行ってもよい。第１工程及び第２工程を同一の処理槽内で同時に行うには、油脂含有廃水と、リパーゼ等のアシルグリセロール加水分解酵素及び／又はアシルグリセロール加水分解能を有する微生物と、カンジダ・トロピカリスとを、前記第１工程及び第２工程が進行可能な条件下で、同一槽内で共存させればよい。
【００４９】
前記第２工程後に、濾過や遠心処理、沈降等の公知の分離手法にカンジダ・トロピカリス等の固形分を除去すれば、前記第２工程後に得られた処理物は、下水道への放流等によって処理することができる。
【実施例】
【００５０】
以下、実施例等を挙げて、本発明について具体的に説明するが、本発明は、以下の実施例等に限定して解釈されるものではない。
【００５１】
試験例１：１重量％脂肪酸存在下での酵母の脂肪酸除去能（３０℃）の検証
表１〜３に示す各酵母について、１重量％脂肪酸存在下での脂肪酸除去能を検証した。なお、表１〜３に示す各酵母の保存番号は、微生物保存機関で保存されている菌株番号、又は天野エンザイム株式会社にて保存している菌株番号（AMANO-から始まる菌株番号）である。
【００５２】
具体的には、先ず、表１〜３に示す各酵母を、ソイビーン・カゼイン・ダイジェスト（ＳＣＤ）培地１ｍｌに植菌し、３７℃で４８時間振とうしながら前培養を行った。次いで、オレイン酸１重量％、コースティープリカー０．１重量％、尿素０．０５重量％、水残部を含む脂肪酸含有液に、前記前培養液５０μｌを接種し、３０℃で４８時間振とう培養を行った。培養２４時間後及び４８時間後に、培養液中の脂肪酸濃度の測定を行った。脂肪酸濃度の測定は、サンプリングした培養液に、０．５重量％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ水溶液を添加して２１倍に希釈し、ＮＥＦＡ  Ｃ−テストワコー（和光純薬工業社製）を用いて酵素法により行った。
【００５３】
得られた結果を表１〜３に示す。この結果、カンジダ・トロピカリス以外の酵母では、１重量％脂肪酸存在下で脂肪酸の除去率は培養２４時間後で５０％未満であり、脂肪酸を十分に除去できていなかったが、カンジダ・トロピカリスでは、培養２４時間後で９０％以上、培養４８時間後で９５％以上の除去率で脂肪酸を除去できていた。以上の結果から、カンジダ・トロピカリスには、高濃度の脂肪酸存在下で、脂肪酸を効率的に除去する能力があることが明らかとなった。
【００５４】
【表１】
0006723725.tif 000002
【００５５】
【表２】
0006723725.tif 000003
【００５６】
【表３】
0006723725.tif 000004
【００５７】
試験例２：１重量％脂肪酸存在下での酵母の脂肪酸除去能（３７℃）の検証
前記試験例１において、３０℃の温度条件にて１重量％脂肪酸存在下での脂肪酸除去能が認められたカンジダ・トロピカリスを用いて、３７℃での温度条件にて１重量％脂肪酸存在下での脂肪酸除去能を評価した。具体的な試験方法は、培養条件を３７℃に変更したこと以外は、前記試験例１と同条件で行った。
【００５８】
得られた結果を表４〜６に示す。この結果から、３７℃の温度条件であっても、カンジダ・トロピカリスには、１重量％脂肪酸存在下で脂肪酸を効率的に除去できることが確認された。また、カンジダ・トロピカリス以外の酵母を用いて、同様に３７℃での温度条件にて試験を行ったところ、前記試験例１の結果と同様、脂肪酸の除去率は低い結果になった。
【００５９】
【表４】
0006723725.tif 000005
【００６０】
【表５】
0006723725.tif 000006
【００６１】
【表６】
0006723725.tif 000007
【００６２】
試験例３：脂肪酸濃度と酵母の脂肪酸除去能の検証１
前記試験例１及び２において、カンジダ・トロピカリスは１重量％の脂肪酸存在下で脂肪酸を効率的に除去できることが確認されたので、本試験では、０．０３重量％、０．５重量％、及び１重量％の濃度の脂肪酸存在下におけるカンジダ・トロピカリスの脂肪酸除去能について検証した。
【００６３】
具体的には、カンジダ・トロピカリス（ＮＢＲＣ１４０２株）を、ＳＣＤ培地（日水製薬株式会社製、「トリトソーヤブイヨン(ＳＣＤブイヨン)」）１ｍｌに植菌し、３０℃で４８時間振とうしながら前培養を行った。食品工場から排出された排水５０ｍｌに対して、尿素が０．０５重量％、コーンスティープリカーが０．１重量％、オレイン酸が０．０３重量％、０．５重量％、又は１．０重量％となるように添加し、脂肪酸含有液を調製した。この脂肪酸含有液５０ｍｌをｐＨを６．８に調整し、これに前記前培養液２．５ｍｌを接種して３７℃で２４時間振とう培養を行った。培養後の培養液中のオレイン酸濃度を前記試験例１と同様の方法で測定した。培養前後の脂肪酸濃度の測定結果から、培養後のオレイン酸残存率を算出した。また、培養前後において、培養液中の微生物数について血球計算盤を使用して顕微鏡下で計測した。
【００６４】
また、比較のために、カンジダ・マイコデルマ（ＨＵＴ  ７５１５）及びピキア・パストリス（ＡＴＣＣ  ２０８６４）を用いて、同様の条件で試験を行った。更に、脂肪酸含有液に対して酵母未接種の場合についても、同様の条件で試験を行った。
【００６５】
得られた結果を表７に示す。この結果から、カンジダ・トロピカリスを使用した場合には、オレイン酸濃度が０．５重量％及び１．０重量％の場合において、効率的にオレイン酸を除去できていた。また、カンジダ・トロピカリスは、オレイン酸濃度が０．５重量％及び１．０重量％の場合には、培養終了後の微生物数が増加しており、オレイン酸による生育阻害を受けることがないことも確認された。これに対して、カンジダ・マイコデルマ及びピキア・パストリスを使用した場合では、オレイン酸が０．０３重量％という低濃度の場合には、カンジダ・トロピカリスよりもオレイン酸を効率的に除去できていたが、オレイン酸濃度が０．５重量％及び１．０重量％の場合には、オレイン酸の除去能が著しく低下していた。また、カンジダ・マイコデルマ及びピキア・パストリスでは、オレイン酸濃度が０．５重量％及び１．０重量％の場合には、培養終了後の微生物数が、培養開始前に比べて低下しており、オレイン酸による生育阻害を受けていることも明らかとなった。
【００６６】
【表７】
0006723725.tif 000008
【００６７】
試験例４：脂肪酸濃度と酵母の脂肪酸除去能の検証２
前記試験例１〜３において、カンジダ・トロピカリスは０．５〜１重量％の脂肪酸存在下で脂肪酸を効率的に除去できることが確認されたので、本試験では、１重量％以下の濃度の脂肪酸存在下におけるカンジダ・トロピカリスの脂肪酸除去能について、より詳細に検証した。
【００６８】
具体的な試験方法については、脂肪酸含有液中のオレイン酸濃度を０．１〜１．０重量％の範囲で０．１重量％毎に設定したこと以外は、前記試験例３と同様である。また、本試験では、カンジダ・トロピカリスとカンジダ・マイコデルマを使用して行った。
【００６９】
得られた結果を図１に示す。カンジダ・トロピカリスを使用した場合には、オレイン酸濃度が０．１〜１重量％の範囲において、オレイン酸を効率的に除去できていた。これに対して、カンジダ・マイコデルマでは、前記試験例３においてオレイン酸濃度が０．０３重量％の場合には効率的にオレイン酸を除去できていたにもかかわらず、オレイン酸濃度が０．１重量％以上、特に０．２重量％になると、オレイン酸の除去能が低下していた。
【００７０】
試験例５：脂肪酸濃度と酵母の脂肪酸除去能の検証３
前記試験例１〜４において、カンジダ・トロピカリスは０．１〜１重量％の脂肪酸存在下で脂肪酸を効率的に除去できることが確認されたので、本試験では、３重量％以上の濃度の脂肪酸存在下におけるカンジダ・トロピカリスの脂肪酸除去能について検証した。
【００７１】
具体的な試験方法については、脂肪酸含有液中のオレイン酸濃度を３重量％、４重量％、及び５重量％に設定したこと以外は、前記試験例３と同様である。
【００７２】
得られた結果を表８に示す。この結果から、カンジダ・トロピカリスを使用した場合には、オレイン酸濃度が２〜５重量％であっても、オレイン酸による生育阻害を受けることなく、オレイン酸を効率的に除去できていた。これに対して、カンジダ・マイコデルマ及びピキア・パストリスを使用した場合では、オレイン酸濃度が２〜５重量％では、生育が阻害されており、オレイン酸を効率的に除去できていなかった。
【００７３】
【表８】
0006723725.tif 000009
【図１】
0006723725.tif 000010