(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）マクロライドがアジスロマイシンである、マクロライド水和物と、
（ｉｉ）少なくとも１種の好適な溶媒であって、20〜60％（重量／重量）のカプリル酸トリグリセリド、またはカプリル酸／カプリン酸トリグリセリドおよび23〜70％（重量／重量）のトリアセチンを含む、少なくとも１種の好適な溶媒と、
（ｉｉｉ）15-ヒドロキシステアリン酸マクロゴールと
を含む、組成物であって、注射用の非水性溶液である、組成物。
【請求項２】
前記トリアセチンは、約３８．０％（重量／重量）の量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記溶媒は、約５４．０％（重量／重量）の量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
アジスロマイシンは、約７．０％（重量／重量）の量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
請求項１に記載の組成物の有効量を投与することを含む、体重約１００ポンド未満の非-ヒト対象における感染症の治療方法。
【請求項６】
請求項１に記載の前記組成物と併用して追加の抗生物質を投与することを更に含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記対象はネコ科動物である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記組成物は注射により投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
約５４．０％（重量／重量）のカプリル酸トリグリセリドと、約３８．０％（重量／重量）のトリアセチンと、15-ヒドロキシステアリン酸マクロゴールと、約７．０％（重量／重量）のアジスロマイシンＤＨとを含む、注射用に製剤化された組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で、２０１５年６月１０日出願の米国特許出願第６２／１７３，８５０号、２０１６年３月１１日出願の米国特許出願第６２／３０７，２８４号、及び２０１６年３月２３日出願の米国特許出願第６２／３１２，３８２号に対する優先権の利益を主張するものであり、この全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は一般に、注射可能な抗生物質製剤、より具体的には、毒性の低い、抗生物質であるマクロライド化合物の製剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景情報
本発明は、マクロライド系抗生物質の活性化合物を含有する独創的な組成物の発見に基づいており、当該活性化合物は特にアジスロマイシンを含み、小型の対象（約１００ポンド以下）、例えばネコ科動物への注射用に製剤化される。本発明の製剤により感染症に対する効果的な治療が可能となり、驚くべきことに、その他市販のマクロライド系製剤よりも毒性が低い。
【０００４】
アジスロマイシンは例えば、獣医学的対象（例えば、イヌ及びネコ）における、ある種の細菌感染症の治療をするために獣医師により用いられるが、細菌感染症としては、連鎖球菌（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ)、ブドウ球菌（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、バルトネラ・ヘンセラ（ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ  ｈｅｎｓｅｌａｅ）、数種のクラミジア（ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、ヘモフィルス属種（ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｐｐ）、マイコプラズマ属種（ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｓｐｐ）、ボレリア・ブルグドルフェリ（ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）及びその他が挙げられる。アジスロマイシンの作用機序は、それに感受性を有する上記微生物における５０ＳリボソームサブユニットのＰ部位に結合することにより、当該微生物のＲＮＡ依存性タンパク合成を阻害することである。アジスロマイシンは、エリスロマイシンから誘導される半合成のマクロライド系抗生物質である。イヌ及びネコの治療において、アジスロマイシンはエリスロマイシンよりも一般的な選択肢である。その理由としては、アジスロマイシンが長い半減期を有し、かつ両種において吸収性が良好であるということが挙げられる。
【０００５】
しかしながら、アジスロマイシンなどのマクロライドに関連する一般的な潜在的副作用が存在する。この副作用としては、腹部不快感、嘔吐及び下痢などの胃腸障害が挙げられる。血管性浮腫及び黄疸もまた、これらの薬剤を服用することにより生じ得る。より重篤な潜在的副作用としては、心臓不整脈、心室性頻拍症、ならびに、腎機能障害及び肝機能障害を挙げることができる。
【０００６】
上記薬剤は、ネコに用いる際に特に問題がある。とりわけアジスロマイシンはネコ科動物の組織から極めて徐々に消失することから、ネコにおいて、投与スケジュールは非常に好都合となるが毒性及び副作用のリスクは高くなる。したがって、様々な感染症治療のためのアジスロマイシンの広い有用性を考慮すると、とりわけネコ科動物に対して少なくとも同程度に強力かつ効果的であるが毒性の低い、アジスロマイシン含有組成物への要望が存在している。
【発明の概要】
【０００７】
本明細書では、以下を含む組成物を提供する：
（ｉ）マクロライドの水和形態、例えば、メクチンまたはマイシン、好ましくは、マクロライド一水和物またはマクロライド二水和物、例えば、アジリド（ａｚｉｌｉｄｅ）、最も特には、アジスロマイシン、
（ｉｉ）好適な溶媒、及び、
（ｉｉｉ）賦形剤。
【０００８】
特定の態様では、溶媒はトリアセチンである。特定の実施形態では、溶媒は、約３８．０％（重量／重量）の量で存在する。１つの態様では、溶媒は、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、またはカプリル酸トリグリセリドである。その他の実施形態では、トリグリセリド溶媒は、約５４．０％（重量／重量）の量で存在する。一部の態様では、組成物は更に、ヒマシ油、例えば、ＫＡＬＬＩＰＨＯＲ（商標）ＨＳ１５またはＲＨ４０（商標）を含む。特定の態様では、マクロライドは、約７．０％（重量／重量）の量で存在する。その他の態様では、組成物は、注射投与用に製剤化される。
【０００９】
本明細書ではまた、通常約１００ポンド以下の体重の動物または小柄なヒト対象における感染症の治療方法も提供し、本発明の組成物の単回注射を用いる。この方法は、感染症の最大１００％の消散のために単回注射による１回投与量のみを必要とする。感染症に対する追加の投与を必要としない（しかし勿論、別の感染症が生じた場合、再投与は可能である）。
【００１０】
動物はネコ科動物であってもよく、イエネコを含むがこれらに限定されない。本明細書で提供する方法には、以下を含む組成物の有効量を投与することが含まれる：（ｉ）マクロライド、例えば、アジスロマイシン、好ましくは、一水和物形態または二水和物形態のもの、（ｉｉ）好適な溶媒、及び、（ｉｉｉ）賦形剤。一部の態様では、方法は、本明細書で提供する組成物と同時投与される追加の抗生物質を更に含む。その他の態様では、組成物は、感染症治療のためネコ科動物に注射で投与される。
[本発明1001]
（ｉ）マクロライド水和物と、
（ｉｉ）少なくとも1種の好適な溶媒と、
（ｉｉｉ）賦形剤と
を含む、組成物。  
[本発明1002]
前記溶媒はトリアセチンである、本発明1001の組成物。
[本発明1003]
前記マクロライドはアジスロマイシンである、本発明1001の組成物。
[本発明1004]
前記溶媒は、約38．0％（重量／重量）の量で存在する、本発明1001の組成物。
[本発明1005]
界面活性剤を更に含む、本発明1001の組成物。
[本発明1006]
前記界面活性剤はヒマシ油である、本発明1005の組成物。
[本発明1007]
前記ヒマシ油はｋａｌｌｉｐｈｏｒ  ＨＳ15を含む、本発明1005の組成物。
[本発明1008]
前記溶媒は、カプリル酸トリグリセリド、またはカプリル酸／カプリン酸トリグリセリドである、本発明1001の組成物。
[本発明1009]
前記溶媒は、約54．0％（重量／重量）の量で存在する、本発明1008の組成物。
[本発明1010]
アジスロマイシンは、約7．0％（重量／重量）の量で存在する、本発明1001の組成物。
[本発明1011]
前記溶媒は、トリアセチン及び、カプリル酸トリグリセリド、カプリル酸またはカプリン酸トリグリセリドである、本発明1001の組成物。
[本発明1012]
前記トリグリセリドはＣ8トリグリセリドである、本発明1008または本発明1011の組成物。
[本発明1013]
注射用に製剤化される、本発明1001の組成物。
[本発明1014]
本発明1001の組成物の有効量を投与することを含む、体重約100ポンド未満の対象における感染症の治療方法。
[本発明1015]
本発明1001の前記組成物と併用して追加の抗生物質を投与することを更に含む、本発明1014の方法。
[本発明1016]
前記対象はネコ科動物である、本発明1014の方法。
[本発明1017]
前記組成物は注射により投与される、本発明1014の方法。
[本発明1018]
約54．0％（重量／重量）のカプリル酸トリグリセリドと、約38．0％（重量／重量）のトリアセチンと、ＫＡＬＬＩＰＨＯＲ（商標）ＨＳ15と、約7．0％（重量／重量）のアジスロマイシンＤＨとを含む、注射用に製剤化された組成物。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
発明の詳細な説明
以下の用語、定義及び略語を使用する。本明細書で使用する略語は、化学的及び生物学的分野におけるその通常の意味を有する。
【００１２】
用語「患者」は、本開示の方法を用いて治療される生物のことを意味する。このような生物としては、ネコ科動物、例えば、イエネコが挙げられるが、これらに限定されない。本開示の文脈においては、用語「対象」は通常、以下で説明する治療（例えば、本開示の組成物及び所望により１種以上の追加の治療剤を投与することが挙げられる）を受けるまたは受けた個体のことを意味する。
【００１３】
用語「治療に有効な量」は、患者または組織における生物学的または医学的応答を誘発する、化合物または医薬組成物の量のことを意味する。上記応答とは、研究者、獣医師、医師またはその他臨床医が調査するものである。
【００１４】
「医薬的に許容される」とは、担体、希釈剤または賦形剤が製剤のその他成分と相溶性を示し、かつそのレシピエントに害を及ぼしてはならないということを意味する。
【００１５】
用語、化合物「の投与」及び／または化合物「を投与すること」は、本開示の化合物または医薬組成物を、治療を必要とする対象へと提供することを意味すると理解されるべきである。
【００１６】
本開示ではまた、疾患の治療に有効な量の、少なくとも１種の活性化合物を含む医薬組成物、及び、医薬的に許容される溶媒または希釈剤を提供する。活性化合物は、マクロライド系抗生物質であり、メクチン（制限はないが、ドキシメクチン（ｄｏｘｉｍｅｃｔｉｎ）及びアビメクチン（ａｂｉｍｅｃｔｉｎ）を含む）及びマイシン（制限はないが、ロキシスロマイシン、クラリスロマイシン、ツラスロマイシン、ガミスロマイシン、ジリスロマイシン、フィダキソマイシン、メガロマイシン、エリスロマイシンなどを含む）を含み、潜在的にアジリドであり、最も好ましくはアジスロマイシンである。活性剤は、最も好ましくは水和物であり、例えば、一水和物形態または二水和物形態の分子である。本開示の組成物は、アジスロマイシン以外のその他治療剤を含有していてもよく、また医薬品製剤技術分野において周知の技術に従い、例えば、通常の固体または液体の溶媒または希釈剤に加え、所望の投与方法に適したタイプの医薬品添加物（例えば、賦形剤、結合剤、防腐剤、安定剤、風味剤など）を用いて製剤化されていてもよい。
【００１７】
本開示の化合物はまた、天然形態または塩形態の治療用組成物へと製剤化されていてもよい。医薬的に許容される非毒性塩としては、塩基付加塩（遊離カルボキシル基またはその他アニオン性基から形成される）が挙げられ、当該塩基付加塩は、無機塩基（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウムまたは水酸化第二鉄など）、及び有機塩基（例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなど）から誘導されてもよい。このような塩はまた、任意の遊離カチオン性基を有する酸付加塩として形成されてもよく、また通常、無機酸（例えば、塩酸、硫酸またはリン酸など）または有機酸（例えば、酢酸、クエン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸など）から形成されてもよい。本開示の塩としては、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸など）を用いたアミノ基のプロトン化により形成されたアミン塩が挙げられる。本開示の塩としてはまた、好適な有機酸（例えば、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸など）を用いたアミノ基のプロトン化により形成されたアミン塩が挙げられる。
【００１８】
本開示内容を実施する際に使用が意図される追加の賦形剤は、当業者が入手可能な賦形剤、例えば、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  Ｖｏｌ．ＸＸＩＩ及びＮａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ  Ｖｏｌ．ＸＶＩＩ（Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．）（１９８９）に記載されている賦形剤であり、その関連内容は参照により本明細書に組み込まれる。更に、化合物の多形体、水和物及び溶媒和物は本開示に含まれ、水和物が特に好ましい。水和物分子は医薬組成物に水を付与するが、他に水の供給源が含まれないことが最も好ましいという点に留意すべきである。
【００１９】
開示する医薬組成物は、非毒性で医薬的に許容される溶媒または希釈剤を含有する投与単位剤形を用いて、任意の好適な手段により、例えば、経口で、舌下で、バッカルで、非経口で（例えば、皮下、静脈内、筋肉内、硬膜内または槽内への注射または注入手法により（例えば、注射可能な滅菌非水性溶液または懸濁液として））、経鼻で（吸入スプレーなどにより）、局所で（例えば、クリームまたは軟膏形態で）、あるいは直腸で（例えば、坐剤形態で）投与され得る。しかしながら、投与は、注射または注入、例えば、静脈内、皮下または筋肉内の投与経路によることが好ましい。
【００２０】
本実施形態の化合物を投与するための医薬組成物は、単独またはその他薬剤との併用のいずれかで用いられる。その他薬剤としては、例えば、抗炎症剤、鎮痛剤、その他抗生物質、抗菌剤、抗ウイルス剤及びその他医薬的に活性な成分が挙げられる。しかしながら、この組成物は、マクロライド水和物、好ましくは、アジリド、最も好ましくは、アズリスロマイシン（ａｚｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）を唯一の含有活性剤として、感染症に対して効果を有する。
【００２１】
組成物は、単位投与剤形で都合よく提供されてもよく、また製薬技術分野において周知の方法のいずれかにより調製されてもよい。全ての方法は、活性成分を、１種以上の補助成分を構成する担体へと結合させる工程を含む。一般的に医薬組成物は、活性成分を、注射に用いるのに好適な担体へと均一かつ密接に結合させることにより調製される。目的の活性化合物は、医薬組成物中に、疾患の経過または症状に所望の影響を及ぼすのに十分な量で含まれる。
【００２２】
医薬組成物は、好ましくは、注射可能な滅菌油性溶液または懸濁液の形態である。組成物は、上述した好適な分散剤または湿潤剤及び懸濁剤を用いた周知の技術に従い製剤化されてもよく、好ましくは、水を含有しない。懸濁剤で使用される溶媒は、好ましくは、中鎖トリグリセリド界面活性剤、好ましくはＣ８トリジルセリド（ｔｒｉｇｙｌｃｅｒｉｄｅ）と混和できる溶媒である。
【００２３】
特定の態様では、溶媒は、トリアセチン（グリセリルトリアセテートまたはグリセロールトリアセテート）である。特定のこのような実施形態では、溶媒は、約２３〜７０％、３０〜６０％、４０〜５５％、３４〜４５％、及び好ましくは、約３８．０％（重量／重量）の量で存在する。別の態様では、溶媒は、カプリル酸／カプリン酸（Ｃ１０及び／またはＣ８）トリグリセリドまたはカプリル酸（Ｃ８）トリグリセリドであり、最も好ましくは、Ｃ８トリグリセリドである。このような実施形態では、トリグリセリド溶媒は、約２０〜６０％、４０〜５５％、及び好ましくは、約５４．０％（重量／重量）の量で存在する。その他の好適な溶媒は、ベンジルアルコール、２−エトキシ（２−エトキシ）エタノール、エチルオレエート、エチルアセテート、エタノール、エチルベンゾエート、ベンジルベンゾエート、２−ピロリドン、ＤＭＳＯ、ならびに、２−メチル−２ピロリドン及び２−ピロリドンであってもよい。
【００２４】
組成物は、最も好ましくは、少なくとも１種の溶媒及び１種の界面活性剤を含み、最も好ましくは、トリアセチン及びＣ８トリグリセリドを含む。一部の態様では、組成物は、界面活性剤、例えば、ヒマシ油または硬化ヒマシ油、例えば、ＫＡＬＬＩＰＨＯＲ（商標）ＨＳ１５またはＲＨ４０、あるいはＴＰＧＳ、ポリソルベート（例えば、２０及び８０）または、レシテン（ｌｅｃｉｔｈｅｎ）を含む。本発明の組成物においては、デポーを形成しない。
【００２５】
製剤はまた、その他不活性成分、例えば、酸化防止剤または防腐剤を含有することができる。酸化防止剤、例えば、プロピルガレート、ＢＨＡ（ブチル化ヒドロキシアニソール）、ＢＨＴ（ブチル化ヒドロキシトルエン）モノチオグリセロール、トリエチルシトレート、クエン酸、ＴＢＨＱ（ｔｅｒｔ−ブチルヒドロキノン）などを本製剤に添加してもよい。酸化防止剤は通常、約０．０１〜約２．０％（重量／体積）の量で製剤に添加される。防腐剤、例えば、パラベン（メチルパラベン及び／またはプロピルパラベン）は、製剤中で、約０．０１〜約２．０重量／体積の範囲の量で好適に用いられる。
【００２６】
本発明の製剤は、アセチル化モノグリセリド、プロピルジカプリル酸／ジカプリン酸、またはカプリル酸／カプリン酸トリグリセリド中に分散させた硬化ヒマシ油を、治療剤を含む溶液へと添加することによって調製されてもよい。製剤は注射用途であるため、滅菌することが望ましい。驚くべきことに、マクロライド系治療剤の安定性または効力に悪影響を及ぼすことなく、加熱滅菌法を用いて本発明の製剤を製造することができる。
【００２７】
本明細書に記載される方法において、適切な投与濃度は通常、約０．０１〜約５０ｍｇ／ｋｇ、例えば、１日あたり０．２５〜約１５ｍｇ／ｋｇ、例えば、１日あたり２．５〜約１４ｍｇ／ｋｇである。投与量（全て単回注射方式）は、この範囲内であれば、０．２５〜０．５、０．２５〜１４ｍｇ／ｋｇ、７〜１０ｍｇ／ｋｇ（あらゆる中間投与量、例えば、７．１、７．２、７．３ｍｇ／ｋｇなどを含む）であってもよく、好ましくは、約７ｍｇ／ｋｇである。この方式では、感染症を臨床的に最大１００％除去まで消散させるために、全治療期間中において１回、化合物を単回注射により投与するだけで十分である。
【００２８】
しかしながら、任意の個々の患者における具体的な投与濃度及び投与頻度は、それぞれ異なる可能性があり、以下の内容を含む様々な要因に依存することは理解されるであろう。それら要因としては、用いる特定化合物の活性、当該化合物の代謝安定性及び作用距離、年齢、体重、全身健康、性別、食事、投与方式及び投与期間、排出速度、併用薬剤、特定の症状における重症度、ならびに、患者が受ける治療法が挙げられる。
【実施例】
【００２９】
実施例１
有効性及び安全性
本試験では、ネコの皮膚及び軟組織の感染症（膿瘍）治療に用いる、トリグリセリドアジスロマイシン製剤の単回注射における有効性及び野外安全性について評価した。
【００３０】
２２匹のネコを、２ヵ所の試験拠点における試験に登録した。２２匹全てのネコに対して治験中の獣医学製品（ＩＶＰ）で治療を実施し、うち２０匹を有効性評価に組み込んだ。
【００３１】
試験に登録したネコは、皮膚及び軟組織の感染症がある状態で来院した。０日目に理学的検査を実施した。この検査には外傷臨床スコアを付与することが含まれ、外傷臨床スコアは最低５（滲出物スコアは最低２）である必要があった。外傷（閉塞膿瘍をランセットで切開後）からスワブを採取し、細菌培養用に、それぞれの研究者の優先契約ラボへと輸送した。スワブ採取後に外傷管理処置を実施することも可能であったが、許容される洗浄剤は、生理食塩水または水道水のみであった。血液及び血清サンプルを採取し、診療所内において血液及び血清の化学分析を実施した。
【００３２】
約７ｍｇ／ｋｇの組成物（７％アジスロマイシンＤＨ（二水和物）、５４％カプリル酸（Ｃ８）トリグリセリド、３８％トリアセチン、及び１％ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（商標）ＨＳ−１５からなる）を、皮下注射でネコに投与し、この時点で注射時の疼痛の観察を行った。
投与表
0006777734.tif 000002
【００３３】
注射後最初の４時間にわたって１時間ごとに観察を実施し、注射後４時間時点において、注射部位を観察し体温を測定した。注射後約２４時間時点において、再度体温及び注射部位の評価を実施した。
【００３４】
７日目（±２日）の中間観察日において、外傷臨床スコアを付与し、あらゆる異常について注射部位を検査した。１４日目（±２日）の最終観察日において、理学的検査を実施し、外傷臨床スコアを付与してから、あらゆる異常について注射部位を評価した。更に、最後の血液及び血清の化学分析用に、血液及び血清サンプルを採取した。
【００３５】
成功症例を、最終的な外傷スコアが３つの変数のうち少なくとも２つにおいて１であったネコ、及び、少なくとも１つの変数において改善がみられたか、あるいは、３番目の変数においてスコアが１であったネコと定義した。全て成功症例であったため、１４日目のスワブサンプルを培養用に採取することはなかった。
【００３６】
外傷臨床スコアに基づき、有効性解析における２０匹中２０匹のネコは成功症例であるとみなされ、有効性は結果として１００％となった。
0006777734.tif 000003
【００３７】
実施例２
投与量試験
実施例１に記載の活性剤投与量を半分とし、低い投与濃度での有効性が達成可能であるかを確認した。詳細には、本試験では、陰性コントロールである滅菌生理食塩水（ＣＶＰ）と比較して２倍の投与濃度で投与した際の、ネコの皮膚感染症（外傷及び膿瘍）治療のためのアジスロマイシン注射可能製剤（ＩＶＰ）の単回投与における安全性及び有効性について評価した。
【００３８】
２１匹のネコを、２ヵ所の試験拠点における試験に登録した。７匹のネコを投与量割合７ｍｇ／ｋｇのＩＶＰで治療し（Ｃ群）、７匹のネコを投与量割合３．５ｍｇ／ｋｇのＩＶＰで治療し（Ｂ群）、また７匹のネコをＣＶＰで治療した（コントロール、Ａ群）。２１匹のネコ全てを安全性評価に組み込み、一方で１８匹を有効性評価に組み込んだ。
【００３９】
試験に登録したネコは、皮膚感染症がある状態で来院した。０日目に理学的検査を実施した。この検査には、腫脹、疼痛及び滲出物に基づいて外傷臨床スコアを付与することが含まれる。試験に組み込むためには、外傷臨床スコアは最低５（滲出物スコアは最低２）である必要があった。外傷（閉塞膿瘍をランセットで切開後）からスワブを採取し、細菌培養用に、それぞれの研究者の優先契約ラボへと輸送した。スワブ採取後に外傷管理処置を実施することも可能であったが、許容される洗浄剤は、生理食塩水または水道水のみであった。
【００４０】
ネコに皮下注射で投薬し、注射部位を記録した。３日目（−１日）の最初の中間観察日において、理学的検査を実施し、臨床スコアを付与してから、異常について注射部位を検査した。臨床スコアに改善が認められない場合、あるいは、滲出物スコアが３である場合（化膿性滲出物がある）、そのネコを試験から除外し、細菌培養用にスワブサンプルを採取した。
【００４１】
７日目（±１日）の第２の中間観察日において、理学的検査を実施し、臨床スコアを付与してから、異常について注射部位を検査した。臨床スコアに基づいて治療失敗症例となった場合（成功＝最終的な臨床スコアが３つの変数のうち少なくとも２つにおいて１であること、及び、０日目の臨床スコアと比較して少なくとも１つの変数において改善がみられたか、あるいは、３番目の変数においてスコアが１であること）、その症例を試験から除外し、細菌培養用にスワブサンプルを採取した。
【００４２】
７日目時点で治療に成功したネコに対して、１４日目（±２日）に最終観察を実施した。臨床スコアを付与した。また再発症例がなかったため、１４日目の最後のスワブサンプルを細菌培養用に採取することはなかった。
【００４３】
外傷臨床スコアに基づいて、Ｃ群の６匹中６匹のネコを成功症例とみなし、Ｂ群の７匹中６匹のネコを成功症例とみなし、またＡ群の５匹中２匹のネコを成功症例とみなした。その結果、アジスロマイシン７ｍｇ／ｋｇ投与量の有効性は１００．０％であるのに対し、アジスロマイシン３．５ｍｇ／ｋｇ投与量の有効性は８５．７％であり、コントロール群の有効性は４０．０％であった。
【００４４】
実施例３
毒性評価
コントロール、実施例１の組成で調製したアジスロマイシン活性剤７ｍｇ／ｋｇ  １回（０日目）及び３５ｍｇ／ｋｇ  １回（０日目）の投与濃度について、ネコ科動物における副作用を評価した。
【００４５】
上記実施例に記載のとおり、ネコの右側肩甲骨背面領域へと皮下（ＳＱ）注射で投与した。注射部位を、馴化中に１回、投与後４時間時点において、および１日目〜７日目において１日１回、評価した。直腸温を、投与後４時間時点において測定し、投与後１日１回測定し、その後、直腸温が試験施設の基準範囲内を維持していたので投与後３日目時点で中止した。試験の−７日目、３日目及び７日目において、臨床病理学用（血液及び臨床化学）に全てのネコから血液を採取した。それぞれのネコから、馴化中、０日目の投与後２時間時点、１日目の投与後２４時間時点、またその後７日目にそれぞれ１回、標準６誘導及びリズムストリップによる心電図（ＥＣＧ）を得た。
【００４６】
試験中、ネコは良好な全身健康を維持した。試験中に観察された全ての有害事象（ＡＥ）は、軽度かつ自己限定的であった。試験薬投与に関連したＡＥは、以下のとおりであった。重篤な有害事象は認められなかった。注射部位に紅斑、熱感、または腫脹は認められなかった。投与後４時間時点で、Ｔ５群の１匹のネコに疼痛が認められた。次回の定期観察まで、その部位に疼痛は認められなかった。
【００４７】
血清化学及び血液パラメータに軽微な異常が認められた。クレアチニンホスホキナーゼ及び乳酸デヒドロゲナーゼに認められた上昇は、採血中のハンドリングストレスと一致した。試験中多数のネコにおいて、その他いくつかの臨床化学パラメータが試験施設の基準範囲外であると認められた。これら異常のいずれも、臨床学的または毒性学的懸念ではなかった。
【００４８】
心臓病専門医が心電図を精査したところ、心臓病態の証拠は認められなかった。２匹のネコにＥＣＧの軽微な異常が認められた。Ｔ１群の１匹のネコに多数の心室性期外収縮が認められ、またＴ５群の１匹のネコに頻繁な補充収縮を伴う洞不整脈が認められた。これらの両方は、７日目のＥＣＧに認められた。どちらのネコにおいても、馴化中または試験中において、理学的検査における心血管異常は認められなかった。心疾患のその他臨床的徴候がないこと、及びこれら所見の独立した性質から、これら有害事象に臨床学的または毒性学的関連性はなく、それゆえ、試験薬投与とは無関係である。
【００４９】
直腸温は、全試験期間にわたり試験施設の基準範囲内を維持した。臨床化学、血液、ＥＣＧ、直腸温、理学的検査、体重、及び摂食量の結果において、投与群には影響が認められなかった。
【００５０】
結論として、アジスロマイシン７％注射は、プラセボコントロールと比較して推奨表示用量の１倍及び５倍でネコにＳＱ投与した際、臨床化学、血液、ＥＣＧ、直腸温、または摂食量に対して臨床学的または毒性学的に関連するいかなる結果とも関係していなかった。
【００５１】
本発明では、上記の説明を参照して記載してきたが、変更及び変形形態が本発明の趣旨及び範囲に包含されることは理解されるであろう。それゆえ、本発明は添付の特許請求の範囲によってのみ制限される。