(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）からなる、または前記植物の抽出物からなる、または前記植物および前記植物の抽出物からなる混合物を含む、リンパ管過透過性に関連する病状を治療するための組成物。
【請求項２】
前記タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）は、前記混合物の１２％〜３３％からなり、前記ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）は、前記混合物の１２〜２５％からなり、前記ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ）は、前記混合物の６％〜２５％からなり、前記ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）および前記クミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）は、全体として、前記混合物の３５％〜５５％からなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の抽出物は、前記混合物の２３％〜３３％からなり、前記ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）の抽出物は、前記混合物の１２〜２５％からなり、前記ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ）の抽出物は、前記混合物の６％〜２５％からなり、前記ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）および前記クミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の抽出物は、全体として、前記混合物の３５％〜５５％からなる、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記病状は、リンパ管内皮の完全性の統制逸脱（deregulation of the integrity）を示す、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記病状は、特に肥満に関連する、慢性炎症、リンパ浮腫、脂肪性浮腫、および水分保持病理から選択される、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
唯一の有効成分として、
タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）からなる、またはタラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の抽出物からなる混合物、或いは
タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）からなる、またはタラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の抽出物からなる混合物と、
少なくとも１つの担体および／または１つの添加剤とを含む、リンパ管過透過性に関連する病状を治療するための組成物。
【請求項７】
前記タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）は、前記混合物の１２％〜３３％からなり、前記ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）は、前記混合物の１２〜２５％からなり、前記ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ）は、前記混合物の６％〜２５％からなり、前記ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）は、全体として、前記混合物の３５％〜５５％からなる、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の抽出物は、前記混合物の２３％〜３３％からなり、前記ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）の抽出物は、前記混合物の１２〜２５％からなり、前記ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ）の抽出物は、前記混合物の６％〜１２％からなり、前記ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）および前記クミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の抽出物は、全体として、前記混合物の３５％〜５５％からなる、請求項６または７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
少なくとも１つの天然香味料および／または１つの天然防腐剤をさらに含む、請求項６〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記少なくとも１つの担体または添加剤は、経口投与または局所投与に適している、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記経口使用のための組成物は、液体、ハーブティー、煎じ薬、浸軟物質、錠剤、顆粒、カプセル、懸濁剤、エマルション、溶液、粉末、蓋（ｏｐｅｒｃｕｌｕｍ）の形態であり、
前記局所使用のための投与に適した組成物は、液体、気化可能な溶液、クリーム、軟膏、ゲル、エマルションの形態である、請求項９または１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物は、経口使用のためであり、前記天然香味料および／または前記天然保存料は、オレンジ天然香味料、ブラックベリー天然香味料、甘草抽出物、オレンジピール、オレンジジュース、タンジェリンジュース、ジュース、グレープジュース、ブラックベリージュース、ニワトコの花ジュース、ブルーベリージュース、パイナップルジュース、グレープフルーツジュース、スグリジュース、ラズベリージュース、リンゴジュース、レモンジュースから選択される、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの添加剤または担体は、アラビアゴム、グアーガム、キサンタンガム；蜂蜜、褐色糖および精製糖、セルロース、コメデンプン、ジャガイモデンプンおよびコーンスターチ；カルナウバワックス、ミツロウ、スイートアーモンド油、ヒマワリ油、ショ糖のエステル、ステアリン酸のエステルの１つ以上から選択される、請求項６〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記病状は、リンパ管内皮の完全性の統制逸脱を示す、請求項６〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記病状は、特に肥満に関連する、慢性炎症、リンパ浮腫、脂肪性浮腫、および水分保持病理から選択される、請求項１４に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）からなる活性成分の混合物、または前記植物の抽出物からの混合物、または前記植物およびそれらの抽出物からの混合物、このような混合物を含む組成物、およびその使用に関する。本発明の混合物および組成物は、身体における生理学的浄化プロセスを促進し、特に肥満患者における水分保持の生理病理学の治療、特にリンパ管内皮の生理学的透過性を回復させるために特に提示される。本発明はまた、本発明の組成物の使用および本発明の組成物の投与による肥満患者における水分保持の生理病理学的治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
リンパ系は、組織における液体の恒常性を維持することに加えて、免疫防御においておよび代謝の維持において重要な役割を有する。したがって、それは、生物と周囲の環境の間の界面であり、そのチャネルおよびリンパ節によって、抗原の提示および認識並びに免疫応答の活性化のプロセスを行う免疫系の物理的基礎を形成する。
【０００３】
したがって、リンパ系は、組織内の体液の恒常性によって、腸内の脂質の吸収によって、および組織の大部分における隙間から脂質の除去によっても、免疫機能に必須である。
【０００４】
リンパ系は、食べ物に由来する脂肪の吸収、消化された脂質の同化（吸収および蓄積）および代謝を促進し、同時に、組織が死細胞、細菌、タンパク質、マトリックス断片、脂質および他の巨大分子をあふれさせる一種の「ごみ廃棄場」として挙動することを可能にし、肝臓、腎臓、皮膚、肺および大腸など、その除去のために意図される臓器に分配されるだろう。
【０００５】
リンパ系は、以下の機能を有する：
免疫系を維持し、調節する；
液体の恒常性を維持するために細胞外液を吸収し、再循環させる；
巨大分子を輸送する。
【０００６】
人体において、水および溶質、特に、血液循環中に存在するタンパク質が毛細血管を通して、間質腔にろ過され、この流れとの均衡をとるために、間質液およびその中に存在するタンパク質が血液に再侵入する。毎日、血漿タンパク質の約５０％は、血液毛細管からろ過され、小静脈によって再吸収されないが、リンパ系によってもっぱら移動され、全身循環にそれらを戻す仕事を有する。血漿タンパク質の血管外蓄積は、血管から間質への水の流れを引き起こし、浮腫を引き起こす。胸管に存在するリンパが、全身循環の代わりに適切な容器にそらされた場合、全ての血液は、短時間でリンパに変換されるだろう。これは、生命を脅かすものであり、毛細血管から失われたこれらのタンパク質および液体を血液に戻すリンパ系の大きな重要性を証明する。
【０００７】
間隙液は、健常人で、体重の約２０％を表し、構造変化、血管を介して作用する力の調整（例えば、浸透圧、膠質浸透圧および静水圧）およびリンパの流れを含む、様々な一時的機構によって調節される。
【０００８】
組織の大部分において、リンパ管は、毛細血管から出る血漿およびタンパク質を集める。体液およびタンパク質に加えて、腸間膜リンパ節におけるリンパは、腸の内腔から輸送され、腸絨毛に位置する中心リンパ毛細血管（初期リンパ毛細血管）によって収集された脂質を含む。
【０００９】
腸リンパにおける脂質の濃度は、約１〜２％であり、栄養の枠組みに大きく依存する。脂質を食べた後、腸リンパの流れは、著しく増加する。この作用は、脂質の増加した負荷に対する調整として、身体全体で分布するように、リンパ管を通してそれらを導く助けとして解釈することができる。最近の研究は、酸化低密度リポタンパク質（ｏｘ−ＬＤＬ）の存在下での腸間膜リンパ管の収縮性の上昇を示し、リンパ管収縮に対する脂質の直接的効果を示唆する。したがって、腸間膜リンパ管は、腸で吸収された脂質を除去し、消化恒常性を維持するための基礎をなす。
【００１０】
間質腔における体液の上昇は、皮膚および皮下組織の構造における変化、しばしば重大な変化をもたらす。リンパ停滞は、慢性化し、結果として生じる浮腫のために、浮腫において、線維芽細胞、脂肪細胞およびケラチノサイトの数の増大を有する傾向がある。組織の組成のそのような変化は、皮膚の肥厚および皮下組織の線維化につながるが、これらの事象は、十分に理解されていない。リンパ浮腫、すなわち、線維症に続く段階の場合、リンパ停滞および組織構造の障害に加えて炎症がある。
【００１１】
文献に記録された試験データは、組織におけるリンパの喪失が、脂質生成効果および炎症効果を有することを示している。
リンパ浮腫は、間質組織におけるリンパ液の蓄積であり、特に腕および脚のような四肢の重度の腫れを引き起こし、まれに体の他の部分の腫れも引きこす。リンパ浮腫は、原発性、すなわちリンパ系自体の変化によって引き起こされ得るか、または２次的に、乳房組織の除去に加えて、サテライトリンパ節も切除される乳腺切除など、外科的介入後のリンパ節の除去によって引き起こされ得る。
【００１２】
リンパ系の重度の悪化の場合、リンパ系自体の脱水能力を超えるだろうリンパ液の強い蓄積があり、未処理の場合、組織の酸素化を減少させ、瘢痕化プロセスに干渉し、細菌増殖のための地域を提供することができる、タンパク質の豊富な体液の回収が続いて起こり、リンパ管炎で臨床像を複雑にする。
【００１３】
リンパ浮腫は、静脈不全の場合に起こる浮腫とは異なるが、正しく処置されない場合、この場合にも静脈系とリンパ系の組み合わされた変化によって特徴付けられる障害に発展することができる。
【００１４】
リンパ浮腫は、何よりも下肢での脂肪の蓄積によって特徴付けられる病理学的状態であり、一般的に下方に表れ、肢部の上部から、すなわち臀部から下方に確立し、典型的な外観「乗馬の乗馬ズボン」を生じる。リンパ浮腫は、浮腫−線維硬化性（ｏｅｄｅｍａｔｏｕｓ−ｆｉｂｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ）脂肪織炎の発症により皮下結節の形成まで悪化することがある。あるケースでは、内部脂肪蓄積が、ひざ関節にみられることができる。
【００１５】
リンパ浮腫を有する対象は、組織が痛みを伴い、小さな外傷後に挫傷を受けやすいことがしばしば報告されている。
末梢微小血管障害は、リンパ浮腫組織に発生し、細胞外マトリックスで高いタンパク質含有量を有する液体の蓄積で血管の透過性の上昇を誘発する。液体の蓄積は、プレリンパチャネルの拡張を誘発し、その流出を減少させる。リンパ毛細管の形態学的および機能的変化、例えば、微小動脈瘤の形成も、経験される。
【００１６】
これに加えて、リンパ管（the lymphangion）（リンパ管コレクタの解剖学的機能単位、または１つの弁機構と他の弁機構との間に置かれるセグメントを表す）の駆動活性のかく乱が観察されている。皮膚は、色調が損なわれる傾向があり、血管および組織に関してより少ない作用があり、間質圧を高めるために、間質液のより多くの量が必要である。このようにして、リンパの排水の機能も損なわれ、結果として、浮腫の発生に対する受動的な防御メカニズムの意義が低下する。
【００１７】
歴史的データおよび最近の研究は、リンパ系および脂肪組織が解剖学的および機能的に関連していることを立証している。
解剖学的異常、病変、閉塞または感染によって引き起こされるリンパ管不全は、病変組織における間質液およびタンパク質および脂質の蓄積を引き起こす。
【００１８】
原発性および二次性のリンパ浮腫の両方で、解決しない場合、慢性炎症、線維症および脂肪組織の蓄積が起こり、１９世紀にもドイツの皮膚科医は、組織中の体液の停滞は、脂質の蓄積を引き起こすことができることを確認した。より最近では、Ｃｈｙマウスに関する研究が行われており、リンパは、脂肪細胞の分化の強力な刺激物質であり、リンパは、脂質生成を促進する場合、インスリンとの相乗効果を有することが立証されている。また、リンパ停滞は、アディポネクチンの発現を増加させ、これは、脂肪蓄積期間中に増加し、肥大および組織低酸素症の間に低下することが知られている。
【００１９】
リンパ管形成の上昇はまた、乾癬および気道の慢性炎症などの炎症性疾患に関連する：
１  慢性炎症は、シグナル伝達事象中に免疫細胞の活性化によって引き起こされる基本的なエネルギーの必要性を満たすために、脂肪組織質量の上昇を促進することがあり、
２  慢性炎症は、リンパ管形成の刺激によってより大きな脂肪生成を促進し、罹患した脂肪組織のリンパの放出を悪化させることがある。
【００２０】
図１０に示されるスキームは、肥満者の水分保持に関連する問題を要約する。
肥満の対象は、状態を悪化させる体液を蓄積する傾向があり、リンパ排液の低下およびリンパ管および血管の透過性が上昇し、それに伴い、その後に細胞外マトリックスの劣化、炎症および肥満者に存在するレニン−アンジオテンシン−アルドステロン系の障害も介して、腎臓からのＮａ＋の排泄の低下をもたらすことがこのスキームから明らかである。
【００２１】
肥満者の水分保持および浮腫の治療のための多数の生成物があるが、肥満に関連する複雑な生理病理学的画像を考慮する新しい組成物が望ましい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
本発明は、
ｉ）血管およびリンパ管の透過性といった組織の炎症を呈する、肥満者の血管およびリンパ管の透過性に作用して、リンパ系からおよび循環系からの体液の漏出（すなわち、生理学的排出と比較して過剰な排出）を減少させ、それによってリンパ管内皮を生理的状態に戻す；
ｉｉ）リンパ系における適切なチャネリングを回復させ、その中の体液および炎症性分子の適切な再吸収を可能にし、その結果、リンパ管脂肪生成に関連する悪循環も減少させる；
ｉｉｉ）利尿効果を有する
組成物を提供する。
【００２３】
本発明の組成物は、個々には、いくつかの有益な効果と他の負の効果を及ぼす植物の抽出物を含むが、適切に混合されて、上記の要求を満たす一般的な効果を発揮することができる。
【００２４】
本発明者らは、リンパ管細胞および血管細胞の健常細胞培養物の透過性に対する多くの植物抽出物の効果を評価するために、内皮の透過性に対する試験を行い、肥満者のリンパ管および血管の状況、すなわちそのような組織に慢性炎症が存在する状況を模倣するために、ＩＬ−１βなどの炎症剤で前処理されたリンパ管細胞および血管細胞の細胞培養物に対する試験を行った。
【００２５】
得られたデータは、望ましい利尿効果またはリンパ管の濃縮を刺激する効果を有する植物が、ＩＬ−１βで前処理されたリンパ管細胞または血管の適切な透過性を回復させるのに有効でなかったこと（すなわち、プラセボで処理されたそのようなタイプの細胞で観察される生理学的透過性と比較された血管の透過性の増加）を示し、そのような植物の使用は、個々に考えると、上記要求を満たさないことを意味する。
【００２６】
本発明者らは、上記要求を満たす組成物を提供することを目的として、混合抽出物が上記要求を満たす植物の群を特定した。但し、個々の植物の抽出物は、ＩＬ−１βなどの炎症剤で前処理された血液および／またはリンパ管の透過性の上昇など、上記で特定された要求を満たさない効果を示す。本発明の活性成分の混合物において、本発明者らは、適切な混合によって、その所望の効果のいくつかのために、且つ上記特定される要求を満たさないその副作用を制限するために、いくつかの植物を使用することができた。かくして、炎症剤によって損傷されたリンパ管内皮を生理学的透過性の状態に戻すことができる混合物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００２７】
したがって、本発明は、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）からなる混合物、
タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の抽出物からなる混合物、並びに
タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）、並びにタラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の抽出物からなる混合物に関する。
【００２８】
本発明はまた、唯一の有効成分として、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）からなる混合物と、少なくとも１つの賦形剤または添加剤とを含む組成物に関する。
本発明はまた、唯一の有効成分として、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の抽出物からなる混合物と、少なくとも１つの賦形剤または添加剤とを含む組成物に関する。
【００２９】
本発明はまた、唯一の有効成分として、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）、並びにタラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の抽出物からなる混合物を含む組成物に関する。
【００３０】
したがって、本発明は、上記で定義されるような、以下に及び特許請求の範囲でさらに詳細に定義されるような混合物または組成物の、リンパ管過透過性に関連する病状の治療における使用に関する。特に、得られ報告されたデータは、リンパ管内皮の完全性の統制逸脱を示すリンパ管過透過性に関連する病状における使用のための本発明の混合物または組成物の適合性を証明する。
【００３１】
しかしながら、本発明はまた、リンパ管過透過性に関連する病状であって、特に肥満に関連する、慢性炎症、リンパ浮腫、脂肪性浮腫、および水分保持から選択される病状において使用するための、本明細書で記載および請求されるような混合物または組成物に関する。
【００３２】
すなわち、本発明はまた、さらには、リンパ管内皮をその生理学的透過性に戻すために、炎症剤の作用に供されたリンパ管内皮の治療で使用のための前記混合物または前記組成物に関する。
【００３３】
本発明はまた、特に肥満に関連する水分保持の生理病理学を治療するための方法であって、これを必要する対象に、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）またはそれらの抽出物からなる混合物、または前記植物およびそれらの抽出物、または唯一の活性成分として、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）からなる混合物、またはタラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の抽出物からなる混合物、或いはタラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）並びにタラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の抽出物からなる混合物の治療有効量と、少なくも１つの薬学的に許容可能な賦形剤および／または添加剤との投与を含む、方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】図１は、本発明者らによって、肥満者（および血管およびリンパ管が、炎症剤の作用に供される個体）で血管またはリンパ管の内皮に対する様々な試験抽出物の効果の透過性試験および研究を行うために使用されたモデルを概略的に示す。  図１のボックスＡに示されているのは、細胞が厳密に互いに結合されず、ＦＩＴＣＨ−デキストラン分子が、細胞上の培地に挿入される場合、培地に存在する成分の通過を可能にするために、上記の培地および以下の前記膜の存在を用いて、リンパ管または血管内皮細胞が、半透膜上の培養で測定されるモデルを示す。  ＦＩＴＣＨ−デキストラン複合体の蛍光による定量化は、内皮の透過性の測定を提供する。  成分の活性を確認するために、細胞がコンフルエンスに達したら、培地を除去し、サンプル（粉末、混合物の１つの抽出物）を添加し、１８時間接触させる。細胞培地を変更することなく、ＩＬ１β（１０ｎｇ／ｍｌ、１時間）を添加した。刺激時間が経過したら、培地を除去し、ＦＩＴＣＨ−デキストラン３μＭを添加する。  図１のボックスＢにおいて、ＩＬ−１βなどの炎症剤への内皮細胞の曝露は、その後の内皮の透過性の上昇と共に細胞間のギャップを誘導することを見ることができる。  本発明のモデルにおいて、ＰｒｏｍｏＣｅｌｌから市販されている細胞「ヒト皮膚リンパ管内皮細胞（ＨＤＬＥＣ）成人ドナー」カタログ番号Ｃ−１２２１７を使用した。
【００３５】
【図２】図２は、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）の抽出物で前処理され、次にＩＬ１βで処理されたリンパ管内皮細胞に対して実施された透過性試験の結果を示す。図は、ＩＬ−１βで処理された内皮細胞が、どのように１００％（健常細胞に慣習によって起因する）から約１６０％の透過性に上昇するか、および抽出物単独がどのようにより高い試験濃度でのみ基底値に近い値に透過性を戻すことができることを示し、本発明の混合物のより弱い保護効果を証明する。
【００３６】
【図３】図３は、クミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の抽出物で前処理され、次にＩＬ１βで処理されたリンパ管内皮細胞に対して実施された透過性試験の結果を示す。図は、この抽出物が、どのようにしてより低い濃度によって健常な細胞の透過性と等しい透過性を回復することができる試験された唯一の抽出物であるが、より高い濃度で、どのようにして細胞の透過性のレベルを通常の状況（１００％として、慣習的に定義される）以下にまで低下させるかを示しており、約８０％で停止した。
【００３７】
【図４】図４は、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）の抽出物で前処理され、次にＩＬ１βで処理されたリンパ管内皮細胞に対して実施された透過性試験の結果を示す。図は、この抽出物がどのようにして健常な細胞の透過性と等しい透過性を回復することができず、実質的に内皮透過性にいかなる影響もないことを示す。
【００３８】
【図５】図５は、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の共抽出物（共抽出前の３：１）で前処理され、次にＩＬ１βで処理されたリンパ管内皮細胞に対して実施された透過性試験の結果を示す。図は、共抽出物が、どのように健常細胞の透過性に等しい透過性を回復することができず、より大きな濃度でこの共抽出物が、どのように最初の炎症を起こした内皮の透過性に対する悪影響をも有するかを示す。
【００３９】
【図６】図６は、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の抽出物で前処理され、次にＩＬ１βで処理されたリンパ管内皮細胞に対して実施された透過性試験の結果を示す。図は、この抽出物がどのように健常細胞の透過性と等しい透過性を回復することができないかを示す。
【００４０】
【図７】図７は、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）の抽出物で前処理され、次にＩＬ１βで処理されたリンパ管内皮細胞に対して実施された透過性試験の結果を示す。図は、この抽出物がどのように健常細胞の透過性と等しい透過性を回復することができないか、およびどのように抽出物が、両方の濃度でＩＬ１βの効果を最小限に影響するかを示す。
【００４１】
【図８】図８は、本発明に係る抽出物の混合物で前処理され、次にＩＬ１βで処理されたリンパ管内皮細胞に対して実施された透過性試験の結果を示す。図は、この混合物が、驚くべきことに、どのように健常細胞の透過性と等しい透過性を回復することができるかを示す。
【００４２】
【図９】図９は、３回の試験で得られたデータを示し、大部分の場合、前の図に既に示されているものを確認し、また図８で報告された結果が、どのように試験された全ての濃度についてＩＬ−１βへの曝露によって引き起こされる障害に関して重要であり、どのように抽出物の混合物が、その減少または増加のいずれかによって、健常細胞の透過性を有意に変化させないかを示す。これの実験において、ＩＬ−１βで処理された細胞および試験されるべき生成物に関するデータに加えて、ＩＬ−１βでの処理なしで、試験されるべき生成物（本発明の抽出物または混合物）のみの細胞に関するデータも分析した。  特に、図９Ａにおいて、ＩＬ−１βおよびソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）の抽出物で処理されたまたは処理なしのＨＤＬＥＣ細胞で得られたデータを報告する。この抽出物が、どのように最も高い試験された濃度でのみ基底値に近い値に透過性を回復することができるかを図９Ａから見られることができ、本発明の混合物と比較してより弱い保護効果を証明する。しかしながら、同じ濃度が、ＩＬ−１βで処理されなかった細胞に対する基底透過性の低下の効果を有することは明らかであるとも思われ、これは望ましくない効果である。図９Ｂは、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）で得られたデータ（図６でデータと一致する）を示し、また重要なデータを示し、これは、基底透過性の１μｇ／ｍｌの有意な低下が観察されることであり、これは、望ましくない効果である。図９Ｃは、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）で得られたデータを示し、細胞の透過性に対するこれらの抽出物の効果の妥当な変動性を証明し、これらの抽出物が、統計的に有意な方法で、未処理のサンプルの透過性などの透過性を回復することができないいずれかの場合において、前記データはまた、ＩＬ−１βでの処理に供されないリンパ管内皮の透過性を増加させる傾向を示す。  図９Ｄは、図５で報告されたデータに準拠して、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）で得られたデータを示し；図はまた、そのような抽出物は、ＩＬ−１βでの処理に供されないリンパ管内皮細胞の透過性を有意に増加させ、よって望ましくない効果を生じることを示す。  図９Ｅは、本発明の混合物で得られたデータを示し、これは、任意の試験された濃度で、インターロイキンに曝露された細胞の透過性を完全に正規化する効果を有する。図はまた、混合物は、どのように混合物単独で処理されたリンパ管内皮の透過性において、実質的にいかなる変化も誘導しないかを示す。図９Ｆはまた、陽性対照としてルチン（５μｍｇ／ｍｌ）で細胞を処理して得られたデータを示し、図９Ｇは、本発明の混合物でＨＤＢＥＣ細胞を処理して得られたデータを示し、血管の内皮細胞上でも、混合物の正規化効果を証明する。  記号＊は、基底の優位性を示し、記号＃は、０＋ＩＬ１βの優位性を示す。
【００４３】
【図１０】図１０は、肥満者の水分保持に関連する問題を要約する図式である。
【００４４】
【図１１】図１１は、以下の刺激で処理されたコンフルエントなＨＤＬＥＣ（Ａ）およびＨＤＢＥＣ（Ｂ）細胞におけるオクルディン（上のボックス）およびタンパク質ＺＯ−１（下のボックス）の免疫蛍光分析のデータを報告する；刺激なし、ＩＬ−１β単独（１０ｎｇ／ｍｌ、１時間）、本発明単独の混合物（１０μｇ／ｍｌの１８時間）；本発明の混合物（１８時間）＋ＩＬ−１β（１時間）。共焦点像を、６０倍拡大、スケールバー＝１０μｍで撮影した。  オクルディンおよびＺＯ−１を、タイトな内皮接合部を表すマーカーとして評価した。コンフルエントな細胞は、これらのマーカーを発現するが、それらは、ＩＬ−１βでの以下の処理を減少する。本発明の混合物とのプレインキュべーションは、この処理は、ＩＬ−１βとの処理後でさえ、細胞間接触を無傷に保つことを可能にする。
【００４５】
【図１２】図１２は、ＨＤＬＥＣ細胞をＮＯＳ、Ｌ−ＮＭＭＡの阻害剤で処理して得られたデータを示す。図１２Ａは、ＩＬ−１β（１０ｎｇ／ｍｌの１時間）、Ｌ−ＮＭＭＡ１００μＭおよび本発明の混合物（１０μｇ／ｍｌの１８時間）を有するおよび有しないＩＬ−１β＋Ｌ−ＮＭＭＡとのＨＤＬＥＣ細胞の透過性に対する効果を示す。図１２Ｂは、本発明の混合物（１０μｇ／ｍｌの１８時間）への曝露後のＨＤＬＥＣ細胞におけるｅＮＯＳの生成に対するウェスタンブロットによる分析データを示す。グラフは、Ａ．Ｄ．Ｕ．に関してアクチンと比較した目的のタンパク質の定量化を報告する。
【００４６】
【図１３】図１３は、本発明の混合物に曝露後のＨＤＬＥＣ細胞における、ｉＮＯＳおよびＣＯＸ−２（それぞれボックスＡおよびＢ）の生成物に関連するデータを示し、Ａ．Ｄ．Ｕ．はまだ１０μｇ／ｍｌの１８時間である。
【００４７】
【図１４】図１４は、本発明の混合物１０μｇ／ｍｌの１８時間への曝露後のＨＤＬＥＣ細胞において、それぞれＳＯＤ−１、カタラーゼおよびｐ２２ｐｈｏｘの生成に関連するデータをボックスＡＢおよびＣで報告する。基底と比較して＊＊Ｐ＜０．０１。定量化は、アクチンと比較して行われ、データは、Ａ．Ｄ．Ｕ．で報告される。ボックスＤ、本発明の混合物（１０μｇ／ｍｌの１８時間）を有するまたは有しないＩＬ−１β（１時間の間１０ｎｇ／ｍｌ）で刺激した細胞におけるＲＯＳ生成物。データは、基底と比較した相対蛍光（ＲＦＵ）／細胞数（ｎ＝３）、＊Ｐ＜０．０５および＊＊＊Ｐ＜０．００１の単位として表される。ＩＬ−１βと比較した＃＃＃Ｐ＜０．００１（図１２Ｂ、１３および１４の全ての実験について、データは、Ａ．Ｄ．Ｕ．およびｎ＝３である）。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
図２〜９および１１〜１４で述べたように、結果は、各試験化合物について３回実施された実験の結果である。
【００４９】
図面および本文において使用される略語
ＦＢＳウシ胎仔血清、ＣＯＸ−２シクロオキシゲナーゼ２、ｅＮＯＳ内皮一酸化窒素シンターゼ、ＨＤＬＥＣヒト皮膚リンパ管内皮細胞、ＨＤＢＥＣヒト皮膚血液内皮細胞、ｉＮＯＳ誘導性一酸化窒素シンターゼ、ＩＬ−１βインターロイキンβ、Ｌ−ＮＭＭＡＬ−ＮＧ−モノメチルアルギニン、ＲＯＳ活性酸素種、ＳＯＤ−１スーパーキシドジムスターゼ１、ＴＮＦα腫瘍壊死因子α、ＺＯ−１密着帯１。
【００５０】
発明の詳細な説明
本発明者らは、利尿作用（例えば、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ））、またはリンパ管（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｎ）の基底単位の収縮を誘導する活性（例えば、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）などの所望の活性を有する様々な植物のリンパ管および血管の透過性についての効果を評価するために、（炎症性脂肪細胞によって生成された肥満者に存在するリンパ管および血管などの）炎症剤に曝露されリンパ管および血管の細胞モデルを使用した。
【００５１】
肥満者において、そのような管の透過性の上昇、その後のそのような管からの体液の非生理学的放出、および当該血管およびリンパ管を透過した体液および炎症性分子を再吸収し適切に振り分ける能力の欠陥が観察され、その後、リンパ管から排出される体液の脂肪生成効果を伴い、したがって、肥満に関連する水分保持の生理病理学に関連する様々な悪循環が確立することが、実際に知られている。
【００５２】
したがって、本発明者らは、リンパ管の収縮の刺激（リンパ管の収縮およびリンパ液のチャネリングの可能性のある改善）または利尿の観点から潜在的に有益である植物抽出物によってもたらされるリンパ管および血管の透過性に対する効果に注目した。
【００５３】
そこで、本発明者らは、血管またはリンパ管の内皮に対する様々な植物抽出物の効果を試験するために、図１で概略的に示されたモデルを使用した。図１で示されるように、（肥満者に存在する炎症の条件下のように）サイトカインへの内皮細胞の曝露は、血管内皮の完全性を変化させ、これは、体液の通過に対してより透過性になる。透過性の程度は、それぞれ、血管の内腔（半透膜の上）および間質（半透膜の下）の２つの区分を分ける内皮バリアを横切る蛍光プローブの量を測定することによって実験によって決定された。
【００５４】
様々な植物の抽出物をその量を増加して半透膜上の培地に導入し、内皮透過性に対するその効果を調べた。同じ実験を、本発明の混合物で行った。サイトカインに曝露されていない健常細胞で観察された値と等しい値を１００％と等しい透過性値として設定すると、クミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）のみが、１０μｇ／ｍｌの濃度で少なくとも１００％まで、リンパ管内皮の透過性を低下させるのに成功したが（図３）、より高い用量では、この透過性は低下し過ぎてしまい、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）と共抽出された場合、リンパ管内皮の透過性に対する正の効果はなく（図５）、他の単一抽出物は、透過性を１００％に戻すことができない（図２、４、６および７）ことを見ることができる。本発明者によって得られたデータは、むしろ、驚くべきことに、本発明の混合物（クミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）およびソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）が、共抽出物としても存在する）がどのように任意の試験された濃度でリンパ管内皮透過性を１００％に戻すことができるかを示す（図８および図９Ｅ）。
【００５５】
換言すると、本発明者らは、本発明の混合物は、それぞれ個別に試験された成分よりもすぐれた形で任意の試験された濃度でリンパ管内皮の過透過性を低下させることができることを証明し、選択された組み合わせは、最適かつ不断の方法で、リンパ管内皮の適切な透過性を保護することを示す。本発明者らはまた、大部分の単一抽出物と対照的に、本発明の混合物が、サイトカイン炎症剤の非存在下でどのようにしてリンパ管内皮透過性の改変をもたらされないかを証明しており、したがって、そのような混合物がどのようにして健常な内皮への望ましくない副作用を有さないことを示す。
【００５６】
本発明者らはまた、クミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）およびソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）の共抽出物は、２つの植物の単一抽出物の単純な追加から得られる利尿作用と比較して、より良好な利尿作用を有する共抽出物を提供することを見出した。
【００５７】
また、本発明者らは、本明細書に記載され、特許請求されるように、それらによって選択された混合物は、タイトな接合の完全性を促進することによって細胞透過性に及ぼす効果を提供し、また、内皮ＮＯＳ（ｅＮＯＳ）を変化させずに、誘導可能な一酸化窒素シンセターゼ（ｉＮＯＳ）およびシクロオキシゲナーゼ２（ＣＯＸ−２）などの炎症要素の発現を低下させることを証明し、したがって、当外混合物がまた、どのようにして改変リンパ循環状態を改善し、リンパ管内皮の生理学的機能性を支持するのに有用かを証明する。
【００５８】
よって、本発明者らによって行われた抽出物の選択は、以下に列挙された全ての要求を満たす混合物を提供する。すなわち、それは、
ｉ）血管およびリンパ管といった組織の炎症を呈する肥満者の血管およびリンパ管の透過性に作用して、リンパ系からのおよび循環系からの体液の漏出（すなわち、生理学的排出と比較して過剰な排出）を軽減し；
ｉｉ）リンパ系における適切なチャンネリングを回復させ、体液およびその中の炎症性分子の適切な再吸収を可能にし、続いてリンパ脂質生成に関連する悪循環も減少させ；
ｉｉｉ）利尿作用を有し
且つ、同時に、特にリンパ管内皮の透過性に関して、本発明の混合物を形成する植物の単一抽出物に関連する望ましくない副作用を有しない。
【００５９】
よって、本発明は、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）からなる混合物、または前記植物の抽出物からなる混合物、または前記植物および前記植物の抽出物からなる混合物に関する。
【００６０】
本発明の目的のために、用語「タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）」は、前記植物の根を意味するか、または用語タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の抽出物は、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の根の水アルコール抽出物（エタノール／水４０〜７０％、例えば６０％など）を意味する。
【００６１】
本発明の目的のために、用語「ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）」は、前記植物の葉を意味するか、または用語ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）の抽出物は、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）の葉の水アルコール抽出物（エタノール／水４０〜８０％、例えば７０％など）を意味する。
【００６２】
本発明の目的のために、用語「ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）」は、前記植物の頂部を意味するか、または用語ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）の抽出物は、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）の頂部の抽出物（エタノール／水３０〜６０％、例えば４０％など）を意味する。
【００６３】
本発明の目的のために、用語「クミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）」は、前記植物の葉を意味するか、または用語クミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の抽出物は、クミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の葉の抽出物（エタノール／水４０〜７０％、例えば５０％など）を意味する。
【００６４】
本発明の目的のために、用語「ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）」は、前記植物の根茎および／または根を意味するか、または用語ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）の抽出物は、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）の根茎または根の抽出物（エタノール／水４０〜８０％、例えば７０％など）を意味する。
植物の部分は、新鮮であることも、または乾燥されていることもある。
【００６５】
本発明の目的のために、用語ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の共抽出物は、同じ溶媒に各植物の適切な部分を入れることによって生成されたソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）の頂部およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の葉の抽出物、例えば、１：１または２：１または３：１の比のソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）の葉とミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の葉を意味し、水アルコール抽出物（エタノール／水４０〜７０％、例えば７０％など）を得るために標準的な方法に従って抽出を行なう。
上記抽出物のそれぞれは、凍結乾燥形態であってもよい。
【００６６】
好ましい態様において、本発明は、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の抽出物からなる混合物に関し、別の実施形態において、本発明は、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、クミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）およびソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）からなる混合物に関し、また別の実施形態において、本発明は、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）、並びにタラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、クミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）およびソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）の抽出物からなる混合物に関し、全ての３つの混合物は、リンパ管過透過性に関連する病状の治療で使用するためのものである。特に、得られ報告されたデータは、リンパ管過透過性に関連する病状、特に、リンパ管内皮の完全性の統制逸脱を示し、例えば、慢性炎症、リンパ浮腫、脂肪性浮腫、および水分保持病理から選択することができ、特に、例えば肥満者において、循環停滞、リンパ浮腫、および／または組織の炎症に関連する場合を示す病状における使用のための本発明の混合物の適格性を示す。本発明の１つの実施形態において、混合物は、前記内皮を健常な（生理学的な）リンパ管内皮のものと同等または等しい透過性の状態に戻すために、炎症剤の作用に供されるリンパ管内皮の治療で使用することが意図される。
【００６７】
本発明によると、ある成分が、本発明の混合物のｘ％〜ｙ％からなるという事実に言及する場合、これは、前記成分は、好ましくは乾燥重量で、本発明の混合物のｘ重量％〜ｙ重量％からなることを意味する。
【００６８】
１つの実施形態において、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）は、本発明の混合物の１２％〜３３％からなり、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）は、本発明の混合物の６％〜２５％からなり、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）は、全体として、本発明の混合物の３５％〜５５％からなる。
ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）は、好ましくは１：１、２：１または３：１または４：１、より好ましくは３：１の比である。
【００６９】
本発明の１つの実施形態において、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の前記抽出物は、本発明の混合物の２３％〜３３％からなり、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）の前記抽出物は、本発明の混合物の１２〜２５％からなり、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）の前記抽出物は、本発明の混合物の６％〜１２％からなり、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ）の前記抽出物は、全体として、本発明の混合物の３５％〜５５％からなる。本発明の好ましい態様において、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の抽出物は、同じ溶媒に各植物の適切な部分、例えば、１：１、２：１または３：１の比のソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）の葉およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）葉を入れ、上記のように標準的な方法論に従って抽出を行なうことによって提供される。この場合において、記載されるような抽出物はまた、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の共抽出物として、本発明で、本明細書で定義される。
【００７０】
しかしながら、本発明の１つの実施形態において、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の前記抽出物は、本発明の混合物の２３％〜３３％からなり、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）の前記抽出物は、本発明の混合物の１２〜２５％からなり、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）の前記抽出物は、本発明の混合物の６％〜１２％からなり、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の前記抽出物は、本発明の混合物の３５％〜５５％を形成する共抽出物の形態である。
さらなる態様において、活性成分は、上記に示したような植物の混合物および上記に示したような抽出物の混合物を含み得る。
【００７１】
本明細書によると、パーセンテージ範囲として示される値は、正確には、極値を含めて範囲の一端から他端までのすべの整数および全ての少数を含む。したがって、本発明の明細書において「２３％〜３３％」と記載されている場合、これは、記載の任意のポイントで、および混合物または混合物を含む組成物の任意の実施形態において：２３％；２３．５％ ２４％；２４．５％；２５％；２５．５％；２６％；２６．５％；２７％；２７．５％；２８％；２８．５％；２９％；２９．５％；３０％；３０．５％；３１％；３１．５％；３２％；３２．５％；３３％；およびそれらの間に含まれる他の小数も意味する。
【００７２】
同様に、本発明の明細書において「１２％〜２５％」と記載されている場合、これは、記載の任意のポイントで、および混合物または混合物を含む組成物の任意の実施形態において：１２％；１２．５％；１３％；１３．５％；１４％；１４．５％；１５％；１５．５％；１６％；１６．５％；１７％；１７．５％；１８％；１８．５％； １９％；１９．５％；２０％；２０．５％；２１％；２１．５％；２２％；２２．５％；２３％；２３．５％； ２４％； ２４．５％； ２５％；およびそれらの間に含まれる他の小数も意味する。
本発明の明細書において「６％〜１２％」と記載されている場合、これは、記載の任意のポイントで、および混合物または混合物を含む組成物の任意の実施形態において：６％；６．５％；７％；７．５％；８％；８．５％；９％；９．５％；１０％；１０．５％；１１％；１１．５％；１２％；およびそれらの間に含まれる他の小数も意味する。
【００７３】
最後に、本発明の明細書において「３５％〜５５％」と記載されている場合、これは、記載の任意のポイントで、および混合物または混合物を含む組成物の任意の実施形態において：３５％；３５．５％；３６％；３６．５％；３７％；３７．５％；３８％；３８．５％；３９％；３９．５％；４０％；４０．５％；４１％；４１．５％；４２％；４２．５％；４３％；４３．５％；４４％；４４．５％；４５％；４５．５％；４６％；４６．５％；４７％；４７．５％；４８％；４８．５％；４９％；３９．５％；５０％；５０．５％；５１％；５１.５％；５２％；５２．５％；５３％；５３．５％；５４％；５４．５％；５５およびそれらの間に含まれる他の小数も意味する。
【００７４】
本発明はまた、すでに言及したように、唯一の有効成分として、上述した実施形態のいずれか１つに従って、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、クミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）およびソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）の抽出物と、少なくとも１つの賦形剤または添加剤とからなる混合物を含む組成物に関し、別の実施形態において、本発明はまた、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）、クミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）およびソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）と、少なくとも１つの賦形剤または添加剤とからなる混合物に関し、さらなる実施形態において、本発明は、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）、クミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）およびナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）並びにタラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）、クミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）およびナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）の抽出物からなる混合物に関する。
【００７５】
したがって、そのような組成物は、唯一の活性成分として、本発明の混合物を形成する植物または抽出物を含み、また本発明の組成物において、クミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）およびソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）の抽出物は、共抽出物の形態であり得る。
【００７６】
混合物について上記のように、本発明の組成物は、リンパ管過透過性に関連する病状の治療における使用に適している。特に、得られ、報告されたデータは、リンパ管過透過性に関連する病状、特に、リンパ管内皮の完全性の統制逸脱を示し、例えば、慢性炎症、リンパ浮腫、脂肪性浮腫、および水分保持病理から選択することができ、特に、例えば、肥満者において、循環停滞、リンパ浮腫および／または組織の炎症に関連する病状において使用のための本発明の混合物の適格性を示す。
【００７７】
したがって、本発明の１つの実施形態において、上記および請求される組成物は、肥満に関連する水分保持の生理病理学の治療における使用に適している。本発明の組成物は、本発明の混合物と同様に、組織排液、特に肥満に関連し、リンパ管内皮の炎症によって、および炎症剤の結果として分裂（過透過性）によって引き起こされるその透過性の増加によって引き起こされる、水分保持病理に伴うリンパ系の廃液のプロセスの適切な機能性を再びバランスをとることにより、体重減少の生理学的プロセスを補助することを望む過体重者／肥満者を特に標的とする。
【００７８】
本発明に係る組成物は、例えば、生薬（ｐｈｙｔｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）組成物、特別な医療目的のための食品、または栄養補助食品であり得る。
【００７９】
したがって、本発明によると、発明の組成物は、タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の前記抽出物は、活性成分の混合物の２３％〜３３％からなり、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）の前記抽出物は、活性成分の混合物の１２〜２５％からなり、ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）の前記抽出物は、活性成分の混合物の６％〜１２％からなり、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の前記抽出物は、全体として、活性成分の混合物の３５％〜５５％からなる組成物であり得る。既に上述したように、ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の前記抽出物は、本発明の混合物の３５％〜５５％を形成する共抽出物の形態であることができる。
【００８０】
さらに本発明によると、組成物は、前記タラクサクム・オフィシナリス（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）は、前記混合物の１２％〜３３％からなり、前記ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）は、前記混合物の１２〜２５％からなり、前記ナギイカダ（Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕ）は、前記混合物の６％〜２５％からなり、前記ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）およびクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）は、全体で、前記混合物の３５％〜５５％からなる組成物であり得る。
【００８１】
好ましい態様において、前記組成物は、経口投与に適しており、液体、ハーブティー、煎じ薬、浸軟物質、懸濁液、溶液、顆粒、粉末、錠剤、蓋（ｏｐｅｒｃｕｌｕｍ）、固体ゼラチン、軟ゼラチンの形態である。
さらなる態様によると、本発明の組成物は、局所使用に適しており、したがって、液体、気化可能な溶液、クリーム、軟膏、ゲル、エマルションの形態であり得る。
【００８２】
本発明によると、以下の成分の１つ以上は、添加剤および／または賦形剤として使用されることができる：天然ガム、例えば、アラビアゴム、ガーガム、キサンタンンガム；天然および人工甘味料（蜂蜜、褐色糖および精製糖）；多糖類（セルロース、コメデンプン、ジャガイモデンプン、コーンスターチ）；カルナウバワックス、蜜蝋、甘いアーモンド油、ヒマワリ油などの天然油、天然起源のエマルション（スクロースエステル、ステアリン酸のエステル）を含む天然ワックス、および本発明の技術を実施することなく、当業者によって先行技術から選択されることができる任意の他の添加剤。
【００８３】
また、本発明の組成物はまた、記載される態様の任意の１つに従って、少なくとも１つの天然香味料および／または天然防腐剤を含み得る。
【００８４】
前記天然香味料および／または前記天然保存料は、経口使用のための組成物を提供するのに適する当業者に公知の任意の天然香味料および／また保存剤であることができ、天然オレンジ香味料、天然ブラックベリー香味料、甘草抽出物、オレンジピール、オレンジジュース、タンジェリンジュース、ジュース、グレープジュース、ブラックベリージュース、ニワトコの花ジュース、ブルーベリージュース、パイナップルジュース、グレープフルーツジュース、スグリジュース、ラズベリージュース、リンゴジュース、レモンジュースから選択されることができるが、これらに限定されない。
【００８５】
したがって、本発明の混合物について今までに記載されていることは、変更すべきところは変更して、本発明の組成物について、明らかに適用される。
【実施例】
【００８６】
例および方法
本発明の組成物の態様の非限定的な例およびその投与のための適切な用量の非限定的な例を、本明細書で提供する。
【００８７】
１．組成物例１
液体、単回投与約１０〜２０ｇ
【表１】
0006712273.tif 000002
【００８８】
上記組成物中の天然香味料および／または保存料は、例えば、オレンジジュース、ぶどうジュース、りんごジュース、レモンジュースからの１つ以上（任意に、前記ジュースの１つ以上は、濃縮されることができる）、オレンジパウダー、ブラックベリーパウダー、レモンパウダー、タンジェリンパウダー、シトラスパウダー、パイナップルパウダー、イチゴパウダー、チェリーパウダー、ブラックベリー、混合ベリーパウダーの形態の天然香味料であることができる。
【００８９】
そのような生成物の１日用量は、１０〜２０ｇに等しい。
あるいは、上記組成物は、約３：１の比でソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）の抽出物とクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の抽出物の混合物を含み得る。
【００９０】
２．組成物例２
使用された植物の大まかに刻まれた部分、１．５〜２．５ｇの単回投与による注入によって調製される。
【表２】
0006712273.tif 000003
【００９１】
組成物２は、任意に、本明細書による抽出物の混合物の約２％〜８％を含み得る。
上記組成物中の天然香味料および／または保存量は、例えば、オレンジピール、甘草根、レモンピールからの１つ以上であることができる。
そのような生成物の１日用量は、１．５〜２．５ｇに等しい。
【００９２】
３．組成物例３
経口固体（粉末、顆粒、カプセル、錠剤）の形態で、８０〜１００ｍｇの単回投与。
【表３】
0006712273.tif 000004
【００９３】
上記組成物中の天然香味料および／または保存料は、例えば、オレンジパウダー、ブラックベリーパウダー、レモンパウダーの形態で天然香味料の１つ以上であることができる。
そのような生成物の１日用量は、１．０〜１．４ｇに等しい。
【００９４】
以下に報告され図面で示された実験で得られたデータは、適切な透過性を維持することに加えて、どのように本発明の混合物とのリンパ管内皮の治療は、内皮の保護を提供する全ての特徴を積極的に調節するかを示すが、細胞障害および炎症性表現型に対する活性で含まれる重要な酵素は、混合物によって副調節され、したがって、炎症性の攻撃に反応するリンパ管内皮を調製する。
【００９５】
４．血管透過性試験
詳細な材料と方法
細胞培養
商業的供給源から得られるリンパ管内皮細胞（腸）および血管（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ、ドイツから入手可能な「ヒト皮膚リンパ管内皮細胞（ＨＤＬＥＣ）」および「ヒト皮膚血管内皮細胞（ＨＤＢＥＣ）」）を使用した。細胞を培養し、完全内皮細胞基礎培地ＭＶ２（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、ドイツ）で、３７℃で、ＣＯ２５％で、ＦＢＳ１０％でベンダーによって推奨されるように培養を維持し、１週間に２回、１０回目まで１：３に分けた。
【００９６】
処理
サンプルが損傷を受けていない細胞上でサンプル自体においてなんらかの効果を有するか、および試験された物質がＩＬ１βによって誘導される透過性の上昇を逆転させることができるかを理解するために、サンプルを、未処理および１Ｌ１β（１０ｎｇ／ｍｌ）で処理された細胞培養上で、２〜３濃度対賦形剤で評価した。
したがって、各細胞培養物および各抽出物について、評価されるべき点は、次の通りである：未処理対照、賦形剤を有する対照、抽出物用量Ａ、抽出物用量Ｂ、ＩＬ１β、ＩＬ１β＋用量Ａ、ＩＬ１β＋用量Ｂ、それぞれを３回繰りかえした。
【００９７】
内皮透過性（スクリーニング当たり）
完全培地（１０％血清）を有するプレートに保持された内皮細胞を、トリプシン／ＥＤＴＡで分離し、トランスウェルプレートに、８×１０４細胞／トランスウェルの密度で、１２ウェルマルチプレートに収容される０．４ミクロンの直径を有する孔を有するＰＥＴにプレートした。細胞を７２時間増殖させて、倒立顕微鏡下で評価されることができる完全な単層を形成させた。コンフルエンスに到達したら、培地を除去し、抽出物を１８時間添加した。細胞培地を変更せずに、ＩＬ１β（１０ｎｇ／ｍｌ、１時間）を、プロトコルに示されているところに添加した。刺激時間が経過したら、培地を除去し、５００μｌのＦＩＴＣＨ−デキストラン（３ｋＤａ、ＰＢＳ中で希釈された１０μＭ）をトランスウェル中で添加し、１．５ｍｌのＰＢＳを、下のマルチプレートのウェルに導入した。１５分後ごとに、１００μｌ×３（三重）を、マルチプレートのウェルからサンプリングし、蛍光分光光度計測定値を採った（４８５ｎｍ励起、５３５ｎｍ発光）。これは、内皮細胞によって形成されるバリアを通過したＦＩＴＣ−デキストランを測定することを可能にする。結果は、測定された蛍光の相対値として表される。
【００９８】
上記の試験は、各植物の抽出物および３：１の比でソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）とクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）の共抽出物を使用して、本発明の混合物を形成する各植物に対して実施された。
試験はまた、本発明に係る抽出物の混合物で実施された。
【００９９】
図２〜９で示される得られたデータは、どのようにサイトカインに曝露されたリンパ管の透過性を、最も低い試験濃度でクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）（図３）以外の全ての単一抽出物を用いて健常な内皮の透過性よりも大きいままにし（したがって、負の効果）、しかしながら、より高い濃度では、基底値以下の透過性のレベルを低下させ、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）（図９Ａ）、これは、最も高い試験された濃度でのみ基底レベルに近い値に透過性を戻し、本発明の混合物と比較して、より弱い保護効果を証明する。リンパ管の透過性は、代わりに、本発明の混合物によって健常な内皮のレベルと等しいレベルで保持される。さらに、データは、本発明の混合物は、試験された炎症剤に曝露されていない内皮に何ら望ましくない効果を有さないことを示す。
【０１００】
特に、共抽出物ソリダゴ・ヴィルガウレア（Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ）とクミスクチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｓｔａｍｉｎｅｕｓ）を含む混合物を提供する図８および９Ｅは、どのように本発明の混合物の成分の選択が、健常なリンパ管内皮のレベルと同様のレベルで血管透過性を保持する最適な相乗効果を得ること可能にするかを示す。
【０１０１】
５．利用活性試験
動物を、代謝ケージ（３匹マウス／ケージ）に入れ、食物および飲料水（市販のオリゴミネラルウォーター）に自由に接近させることを可能にした。水和の同様の生理学的状態を得るために、２．５％体重のオリゴミネラルウォーターのチューブによる栄養補給を、実験の２時間前の動物の全ての群に投与した。
【０１０２】
次に、以下の処理スキームに従って、動物をグループ（９匹のマウス／群）に無作為に分けた：
１．Ｕｎｔｒ：未処理群
２．Ｈ２Ｏ：１００μｌ／マウスのオリゴミネラルＨ２Ｏを、ｔ＝０で胃グローブによって投与した（陰性対照）
３．フロセミド：１００μｌ／マウスのフロセミドを、ｔ＝０で胃グローブによってオリゴミネラルウォーター中で１０ｍｇ／ｋｇで投与した（陽性対照）
４．ゴールデンロッド：１００μｌ／マウスのゴールデンロッド抽出物（オリゴミネラルウォーター中２００ｍｇ／ｋｇ体重）を、ｔ＝０で胃グローブによって投与した
５．クミスチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ）：クミスチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ）の抽出物の１００μｌ／マウス（オリゴミネラルウォーター中２００ｍｇ／ｋｇ体重）を、ｔ＝０で投与した
６．ゴールデンロッド：クミスチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ）（３：１）：１００μｌ／マウスの共抽出物ゴールデンロッド＋クミスチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ）（オリゴミネラルウォーター中２００ｍｇ／ｋｇ体重）を、ｔ＝０で胃グローブによって投与した。
【０１０３】
化合物の利尿活性を評価するために、尿のサンプルをメスシリンダーに採取し、その体積を２時間間隔で、合計８時間まで記録した。
動物の体重とは独立して、尿排出量を、総利尿を投与された総液体量で割ったものとして計算した。
尿排出量＝総利尿の体積（ｍｌ／１００ｇ体重）／消費された総液体
【０１０４】
得られたデータは、２ｍｌのゴールデンロッドの２００ｍｇ／ｋｇ、２．２５ｍｌのクミスチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ）の２００ｍｇ／ｋｇおよび３：１の比で３ｍｌの２００ｍｇ／ｋｇゴールデンロッド＋クミスチン（Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ）共抽出物と等しい８時間後の尿排出量を示す。
未処理マウスにおける尿排出量は約１．９ｍｌであり、オリゴミネラルウォーターのみで処理されたマウスにおいて、それは約２．２５ｍｌであり、１０ｍｇ／ｋｇのフロセミド処理されたマウスにおいて、それは約３．９ｍｌであった。
【０１０５】
６．ＲＯＳ分析
ＲＯＳ分析を、９６ウェルプレートでＨＤＬＥＣ細胞１．５×１０３を置くことによって実施し、前記細胞を、接着後、１８時間、本発明の混合物の１０μｇ／ｍｌで、次に、フェノールレッドなしの培地でＩＬ−１β（１時間１０ｎｇ／ｍｌ）で前処理した。ＤＣＦＨ２−ＤＡ（２．７−ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテートＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ, Ｍｉｌａｎ、イタリア）を３０分間、１０μＭの量で加え、ＲＯＳの細胞レベルを、マイクロプレートリーダー（励起／発光  ４９５／５２７、ＳｐｅｃｔｒａＦｌｕｏｒ、Ｔｅｃａｎ）を使用して、光度的に評価した。結果を、接触した細胞の数に対して補正されたＲＦＵ（相対蛍光単位）として記録した。
【０１０６】
７．免疫蛍光分析
細胞表面上に発現される閉塞密着および密着帯１（ＺＯ−１）のタンパク質を、共焦点分析を使用して視覚化した。細胞を、１ｃｍの円形ガラススライド上に５×１０４置いた。２４時間後、細胞を洗浄し、上記の刺激で処理した。免疫蛍光分析を、Ｍｏｎｔｉら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｓ ２０１３； ７６：１７１−８１の材料および方法で報告されるように実施した。
【０１０７】
８．ウエスタンブロット法
細胞（３×１０５／プレート６ｃｍ）、９０％コンフルエンスを、本発明の混合物（１０μｇ／ｍｌ、１８時間）で処理または処理しなかった。炎症経路（ｉＮＯＳ、ｅＮＯＳ、ＣＯＸ−２）のマーカーの発現および抗酸化剤／酸化促進剤酵素系（ＳＯＤ−１、カタラーゼ、ｐ２２  ｐｈｏｘ）のマーカーの発現を、Ｔｅｒｚｕｏｌｉら、２０１４年の材料および方法で記載されるように、ウエスタンブロット法によって評価した。ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ９：ｅ８４３５８、Ｍｏｎｔｉら、２０１４年 Ｊ ＰｈａｒｍａｃｏｌＥｘｐ Ｔｈｅｒ.；３５１（３）：５００−９。データを、対照として使用したβ−アクチンと比較して、標的タンパク質の任意の濃度単位（Ａ．Ｄ．Ｕ．）として記録した。
【０１０８】
材料および試薬
細胞培養のための試薬、すなわち、ルチンおよびＬ−ＮＭＭＡは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ. Ｌｏｕｉｓ, ＭＯ, ＵＳＡ）であった。ウシ胎仔血清は、Ｈｙｃｌｏｎｅ（Ｅｕｒｏｃｌｏｎｅ, Ｍｉｌａｎ, イタリア）であった。３ｋＤａのＦＩＴＣ−デキストランは、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｒｌｓｂａｄ, ＣＡ, ＵＳＡ）であった。抗ＺＯ−１および抗ｅ−ＮＯＳは、ＢＤ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ, Ｍｉｌａｎ, イタリアであった。抗オクルディンは、Ｚｙｍｅｄ− Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｒｌｓｂａｄ, ＣＡ, ＵＳＡ）であった。抗ｉＮＯＳおよび抗ｐ２２  ｐｈｏｘは、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ, Ｉｎｃ. （Ｄａｌｌａｓ, ＴＸ, ＵＳＡ）であった。抗ＣＯＸ−２は、Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ （Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ, ＭＩ, ＵＳＡ）であった。抗ＳＯＤ−１は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ （Ｔｅｍｅｃｕｌａ, ＣＡ, ＵＳＡ）であった。抗カタラーゼおよび抗βアクチンは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ （Ｓｔ. Ｌｏｕｉｓ, ＭＯ, ＵＳＡ）であった。
【０１０９】
データおよび統計的手順の分析
結果を、各サンプルについて３回実施した少なくとも３つの独立した実験を代表するか、または平均した。統計分析を、ＡＮＯＶＡ検定、続いて適切な場合にはボンフェローニ検定およびｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定を使用して行った（ＧｒａｐｈＰａｄ）。Ｐ＜０．０５は、統計的に有意であると考えられた。
【図１】
0006712273.tif 000005
【図２】
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【図３】
0006712273.tif 000007
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
0006712273.tif 000011
【図８】
0006712273.tif 000012
【図９Ａ】
0006712273.tif 000013
【図９Ｂ】
0006712273.tif 000014
【図９Ｃ】
0006712273.tif 000015
【図９Ｄ】
0006712273.tif 000016
【図９Ｅ】
0006712273.tif 000017
【図９Ｆ】
0006712273.tif 000018
【図９Ｇ】
0006712273.tif 000019
【図１０】
0006712273.tif 000020
【図１１】
0006712273.tif 000021
【図１２】
0006712273.tif 000022
【図１３】
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【図１４】
0006712273.tif 000024