(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式(I)の化合物、又はそれらの塩もしくは同位体変種：
【化１】
0006700274.tif 000063
（式中：
R1は、ハロ、OR6又はNR6R7から選択された1以上の置換基により任意に置換されたC1-4アルキルであり；
ここで、R6及びR7の各々は、H又はC1-4アルキルから独立して選択され；
R2は、H、ハロ、又はOH又は保護されたOHであり、該保護されたOHは、OC(O)R14(ここでR14は下記に定義したR10である。)及びOSi(R16)3（ここで各R16は独立して下記に定義したR13である。）から選ばれるものであり；
Yは、結合、又は炭素原子1〜20個を有し、及び1以上の基R3により任意に置換された、アルキレン、アルケニレンもしくはアルキニレンであり；
各R3は、独立して、ハロ、OR8又はNR8R9であり；
ここで、R8及びR9の各々は、H又はC1-4アルキルから独立して選択され；並びに
R4は、C(O)OR10、OC(O)R10、C(O)NR10R11、OR10、OSi(R13)3、S(O)R10、SO2R10、OSO2R10、SO3R10、又はOSO3R10であり；
ここで、各R10及びR11は、独立して：
a.  水素、あるいは、
b.  そのいずれかは、ハロ、NO2、CN、OR19、SR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2、又はそのいずれもC1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、ハロ、NO2、CN、OR19、SR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2により任意に置換されている6〜14-員のアリールもしくは5〜14-員のヘテロアリール基から選択された1以上の置換基により任意に置換されている、C1-20アルキル、C2-20アルケニル、C2-20アルキニル、-O-C1-20アルキル、-O-C2-20アルケニル、又は-O-C2-20アルキニル；あるいは、
c.  そのいずれも、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、ハロ、NO2、CN、OR19、SR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2から選択された1以上の置換基により任意に置換されている、6〜14-員のアリールもしくは5〜14-員のヘテロアリール基；あるいは、
d.  ポリエチレングリコールであり；
各R19は、H、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、又はそのいずれも、ハロ、C1-6アルキルもしくはC1-6ハロアルキルにより任意に置換されている、6〜14-員のアリール、もしくは5〜14-員のヘテロアリール基から、独立して選択され；
各R13は、独立して、
a.  ハロ、NO2、CN、OR19、SR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2、そのいずれもC1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、ハロ、NO2、CN、OR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2により任意に置換されている6〜14-員のアリールもしくは5〜14-員のヘテロアリール基から選択された1以上の置換基により任意に置換されたC1-20アルキル、C2-20アルケニル、又はC2-20アルキニル；あるいは、
b.  そのいずれも、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、ハロ、NO2、CN、OR19、SR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2から選択された1以上の置換基により任意に置換されている、6〜14-員のアリール又は5〜14-員のヘテロアリール基：であり、
各R19は、H、C1-6アルキル、又はC1-6ハロアルキルから独立して選択され；
R5は、H又はOH又は保護されたOHであり、該保護されたOHは、OC(O)R14(ここでR14は先に定義したR10である。)及びOSi(R16)3（ここで各R16は独立して先に定義したR13である。）から選ばれるものである。）。
【請求項２】
一般式(I)の化合物が、一般式(IA)の化合物である、請求項１記載の化合物：
【化２】
0006700274.tif 000064
（式中、R1、R2、Y、R4及びR5は、一般式(I)について定義したものである。）。
【請求項３】
前記R1が、エチルである、請求項1又は2記載の化合物。
【請求項４】
前記Yが、炭素原子1〜8個を有し、且つ1以上の基R3により任意に置換されている、アルキレン又はアルケニレンであり、ここでR3は請求項1に定義されている、請求項1〜3のいずれか一項記載の化合物。
【請求項５】
独立して又はいずれかの組合せにおいて：
前記Yが、結合、又は炭素原子1〜3個を有し、且つ1又は2個のR3基により任意に置換されているアルキレンもしくはアルケニレン基であり；
R4が、C(O)OR10、SO3R10、又はOSO3R10であり、ここでR10は、先に定義したものであり；
並びに
R5が、H又はOHである、請求項1〜4のいずれか一項記載の化合物。
【請求項６】
独立して又はいずれかの組合せにおいて：
前記R1が、エチルであり；及び／又は
R2が、Hであり；及び／又は
Yが、結合、-CH2-、-CH2CH2-、-CH=CH-又は-CH=C(CH3)-であり；及び／又は
R4が、C(O)OR10であり、ここでR10は、H、C1-6アルキルもしくはベンジルであり；及び／又は
R5が、Hである、請求項5記載の化合物。
【請求項７】
前記R1がエチルであり、及び／又はR10がC1-6アルキルもしくはベンジルである、請求項6記載の化合物。
【請求項８】
(6β, 7α, 22E)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-オイック酸；
(6β, 7α)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-4-コレン-24-オイック酸；
並びにそれらのC1-6アルキルエステル及びベンジルエステル、並びにそれらの塩から選択される、請求項1記載の化合物。
【請求項９】
A.  一般式(II)の化合物：
【化３】
0006700274.tif 000065
（式中、R2、R4、R5及びYは、請求項1に定義したものである）；
の、有機金属試薬との選択的アルキル化；又は
B.  一般式(I)の化合物の別の一般式(I)の化合物への変換；
のどちらかを含む、請求項1〜8のいずれか一項記載の化合物の製造方法。
【請求項１０】
前記工程(A)において、有機金属試薬が、式(XXIV)のアルキルリチウム化合物：
R1-Li          (XXIV)
（式中、R1は、一般式(I)に定義したものである）；
と、銅(I)塩との反応により形成された、ギルマン試薬であるか；又は
前記有機金属試薬が、グリニャール試薬R1MgX（式中、R1は、一般式(I)に定義したものであり、及びXは、ハロゲン化物である）であり、並びにここで反応は、亜鉛(II)塩、及び触媒量の銅(I)もしくは銅(II)塩又は錯体の存在下で実行される、請求項9記載の方法。
【請求項１１】
一般式(XVIII)の化合物：
【化４】
0006700274.tif 000066
の製造方法であって：
（式中、R1及びR4は、請求項1において一般式(I)に定義したものであり；
R2は、H、ハロ、又はOHであり；R5aは、H又はOHであり；並びに
Y1は、結合、又は炭素原子1〜6個を有し、かつ1以上の基R3により任意に置換された、アルキレンであり；ここで、R3は、請求項1において一般式(I)に定義したものである）；
i.  請求項1〜8のいずれか一項記載の化合物を、還元剤を使用し還元し、一般式(XIX)の化合物を生じること：
【化５】
0006700274.tif 000067
（式中、R1、R2、R4及びR5は、請求項1において一般式(I)に定義したものであり；並びに
Y1は、一般式(XVIII)に定義したものである）；
ii.  一般式(XIX)の化合物を、酸化剤を使用し酸化し、一般式(XX)の化合物を生じること：
【化６】
0006700274.tif 000068
（式中、R1、R2、R4及びR5は、請求項1において一般式(I)に定義したものであり；並びに
Y1は、一般式(XVIII)に定義したものである）；
iii.  一般式(XX)の化合物をエピマー化し、一般式(XXI)の化合物を生じること：
【化７】
0006700274.tif 000069
（式中、R1及びR4は、請求項1において一般式(I)に定義したものであり； 
Y1は、一般式(XVIII)に定義したものであり；
R2は、H、ハロ又はOH又は保護されたOH基であるOSi(R16)3（ここで各R16は独立して請求項１で定義したものである。）あり；並びに
R5bは、H又はOH又は保護されたOH基であるOSi(R16)3（ここで各R16は独立して請求項１で定義したものである。）あり；並びに
(iv)  一般式(XXI)の化合物を、還元剤を使用し還元し、並びにここで、R2及び／又はR5bが保護されたOH基であるOSi(R16)3である場合、この保護基(複数可)を除去し、先に定義した一般式(XVIII)の化合物を生じ、ここで保護基の除去は、還元の前又は後に行うことができること；並びに任意に
(v)  一般式(XVIII)の化合物を別の一般式(XVIII)の化合物へ変換すること：を含む、製造方法。
【請求項１２】
前記工程(i)において、一般式(I)の化合物の一般式(XIX)の化合物への変換のための還元剤が、パラジウム/炭素、パラジウム/炭酸カルシウム、パラジウム/酸化アルミニウム、白金/パラジウム又はラネーニッケル触媒の存在下での、水素である、請求項11記載の方法。
【請求項１３】
前記工程(i)において、溶媒がアルコール系溶媒；酢酸エチル；ピリジン；酢酸；シクロペンチルメチルエーテル(CPME)又はN,N-ジメチルホルムアミド(DMF)であり、そのいずれかは任意に、アセトンもしくは水から選択される共溶媒及び／又は塩基と混合されてよい、請求項11又は12記載の方法。
【請求項１４】
前記工程(ii)において、酸化反応が、デス-マーチンペルヨージナン(1,1,1-トリアセトキシ-1,1-ジヒドロ-1,2-ベンゾヨードキソール)；酸性条件下でのヒポクロリット；希硫酸中の二クロム酸ナトリウム、もしくは三酸化クロムを使用する、ジョーンズ反応；又は、TEMPO((2,2,6,6-テトラメチル-ピペリジン-1-イル)オキシ)又はその誘導体を用いて実行される、請求項11〜13のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
前記工程(iii)のエピマー化反応において、一般式(XX)の化合物が、任意に水と混合された、アルコール系溶媒中に溶解され、かつ塩基と接触される、請求項11〜14のいずれか一項記載の方法。
【請求項１６】
前記一般式(XX)の化合物において、R4が、C(O)OR10であり、塩基が、水酸化ナトリウム又は水酸化カリウムであり、且つエピマー化が、加水分解を伴って一般式(XXI)の化合物(式中、R4は、C(O)OHである)を生じるか；並びに／又は
一般式(XX)の化合物において、R2及び／又はR5は、基OC(O)OR14であり、ここでR14は、C1-6アルキルもしくはベンジルであり；並びに、エピマー化工程は、一般式(XXI)の化合物（式中、R2及び／又はR5bはOHである）を生じるか；あるいは、
一般式(XX)の化合物において、R2及び／又はR5は、保護されたOH基であるOSi(R16)3（ここで各R16は独立して請求項１で定義したものである。）あり；並びに、
工程(iv)の前又は後に保護基を除去する工程を更に含む、請求項15記載の方法。
【請求項１７】
前記工程(iv)において、還元剤が水素化物である、請求項11〜16のいずれか一項記載の方法。
【請求項１８】
一般式(XVIII)の化合物(式中、R1はエチルであり、R2及びR5aは両方共Hであり、Y1は-CH2CH2-であり、並びにR4はC(O)OHである)の製造のための、請求項11〜17のいずれか一項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬理活性を伴う胆汁酸誘導体の合成における中間体である化合物に関する。特に、本発明は、オベチコール酸及びそのアナログの合成における中間体に関する。加えて、本発明は、これらの中間体を合成する方法、並びに本発明の化合物からオベチコール酸及びオベチコール酸アナログを製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
胆汁酸は、哺乳動物の胆汁中に認められるステロイド酸であり、且つコール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール酸及びデオキシコール酸などの化合物を含み、これらは全て、ヒトにおいて認められる。多くの胆汁酸は、ヒトを含む哺乳動物の肝臓及び小腸において発現されるファルネソイドX受容体(FXR)の天然のリガンドである。
【０００３】
胆汁酸は、ステロイド誘導体であり、それと同じ様式で番号付けされる。以下に、ステロイドの一般的番号付けシステム及びケノデオキシコール酸における炭素原子の番号付けを示す。
【０００４】
【化１】
0006700274.tif 000002
【０００５】
FXRのアゴニストは、原発性胆汁性肝硬変及び非アルコール性脂肪性肝炎を含む、胆汁うっ滞性肝障害の治療における用途があることがわかっている(Jonkerらによる文献、Journal of Steroid Biochemistry & Molecular Biology, 2012, 130, 147-158の総説を参照されたい)。
【０００６】
最初にクマの胆嚢から単離された胆汁酸であるウルソデオキシコール酸(UDCA)は、現在、胆汁うっ滞性肝障害の治療に使用されているが、これはFXRでは不活性であるように見える。
【０００７】
胆汁酸及びそれらの誘導体は、それらのFXRでの作用に加え、Gタンパク質共役受容体TGR5のモジュレーターでもある。これは、Gタンパク質共役受容体のロドプシン様スーパーファミリーの一員であり、且つ胆汁酸シグナル伝達ネットワークにおける重要な役割を有し、これはFXRの役割を補完する。
【０００８】
胆汁うっ滞性肝障害の治療においてFXRアゴニスト及びTGR5アゴニストは重要であるので、これらの受容体でアゴニスト活性を有する新規化合物の開発に努力が払われている。特に活性のある化合物のひとつは、オベチコール酸であり、これはFXR及びTGR5の両方の強力なアゴニストである。オベチコール酸は、WO 02/072598及びEP1568706に説明されており、これらは両方共、コール酸から誘導される7-ケトリトコール酸からのオベチコール酸の製造プロセスを説明している。オベチコール酸及びその誘導体製造の更なるプロセスは、WO 2006/122977、US 2009/0062256及びWO 2013/192097に説明されており、これらのプロセスも全て、7-ケトリトコール酸から出発している。
【０００９】
オベチコール酸化合物の合成は決して簡単ではなく、及び実際に現在使用されるコール酸から出発するプロセスは、12の工程及び低い全体収量を有することは、オベチコール酸製造のプロセスを示す数多くの特許公報から明らかである。
【００１０】
このプロセスの非効率性及び高い経費に加え、出発材料の経費及び入手可能性の問題点も存在する。オベチコール酸製造のための現在の出発材料であるコール酸は、通常ウシ及び他の動物の食肉処理から得られる天然の胆汁酸である。このことは、コール酸及び他の胆汁酸の入手可能性は、食肉処理のために利用される家畜の数により制限されることを意味している。胆汁うっ滞性肝疾患の発生率は、世界規模で増加しているので、オベチコール酸などの合成胆汁酸の需要も恐らく増大し、且つ天然由来の胆汁酸の供給は需要を満たすのに十分であり続けるかどうかは疑わしい。
【００１１】
更に、動物由来の出発材料の使用は、作業者に対し有害であるだけではなく、汚染を防止する工程がとられない場合、最終製品を汚染する可能性もある、ウイルス又はプリオンなどの感染性物質による、出発材料の汚染の可能性があることを意味している。
【００１２】
胆汁うっ滞性肝疾患患者の一部は、ウルソデオキシコール酸により治療され得るが、これも、天然の胆汁酸であり、且つ限定された入手可能性及び高い経費という同じ問題点に直面している。
【００１３】
本発明者らは、出発材料としての胆汁酸の使用に関連した問題点を解決することを試みて、出発材料として植物性ステロールを使用する、オベチコール酸などの合成胆汁酸誘導体の合成のプロセスを考案した。
【００１４】
本発明者らは、新規中間体を介して進行し、且つ現行のプロセスよりも著しく高い収量で最終生成物を提供する、合成胆汁酸の製造プロセスを開発した。このプロセスは、融通が利き、且つ動物、真菌及び植物のステロールを含む、多種多様な異なる出発材料を使用することができる。
【００１５】
出発材料として使用することができる好適な動物性ステロールは、デオキシコール酸、コール酸を含む一方で、真菌のステロールは、エルゴステロールを含む。
【００１６】
植物性ステロールは、胆汁酸よりも著しく低い経費で、広範に入手可能であり、且つ実際、他のプロセスの廃棄物であることが多い。出発材料として使用することができる好適な植物性ステロール及び植物性ステロール誘導体は、ビス-ノルコレノール(20-ヒドロキシメチルプレグン-4-エン-3-オンとしても公知)、アンドロステンジオン、アンドロステンジエンジオン、デヒドロエピアンドロステロン、スチグマステロール、ブラシカステロール、カンペステロール及びβ-シトステロールを含む。
【発明の概要】
【００１７】
本発明は、新規プロセスにおける中間体、並びに、この中間体を製造するプロセス及びそれらを所望の生成物に変換するプロセスに関する。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
従って、本発明の第一の態様において、一般式(I)の化合物、又はそれらの塩もしくは同位体変種：
【化２】
0006700274.tif 000003
（式中：
R1は、ハロ、OR6又はNR6R7から選択された1以上の置換基により任意に置換されたC1-4アルキルであり；
ここで、R6及びR7の各々は、H又はC1-4アルキルから独立して選択され；
R2は、H、ハロ、又はOH又は保護されたOHであり；
Yは、結合、又は炭素原子1〜20個を有し、及び1以上の基R3により任意に置換された、アルキレン、アルケニレンもしくはアルキニレンリンカー基であり；
各R3は、独立して、ハロ、OR8又はNR8R9であり；
ここで、R8及びR9の各々は、H又はC1-4アルキルから独立して選択され；並びに
R4は、C(O)OR10、OC(O)R10、C(O)NR10R11、OR10、OSi(R13)3、S(O)R10、SO2R10、OSO2R10、SO3R10、又はOSO3R10であり；
ここで、各R10及びR11は、独立して：
a.  水素、あるいは、
b.  そのいずれかは、ハロ、NO2、CN、OR19、SR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2、又はそのいずれもC1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、ハロ、NO2、CN、OR19、SR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2により任意に置換されている6〜14-員のアリールもしくは5〜14-員のヘテロアリール基から選択された1以上の置換基により任意に置換されている、C1-20アルキル、C2-20アルケニル、C2-20アルキニル、-O-C1-20アルキル、-O-C2-20アルケニル、又は-O-C2-20アルキニル；あるいは、
c.  そのいずれも、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、ハロ、NO2、CN、OR19、SR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2から選択された1以上の置換基により任意に置換されている、6〜14-員のアリールもしくは5〜14-員のヘテロアリール基；
d.  ポリエチレングリコール残基：であり；
各R19は、H、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、又はそのいずれも、ハロ、C1-6アルキルもしくはC1-6ハロアルキルにより任意に置換されている、6〜14-員のアリールもしくは5〜14-員のヘテロアリール基から、独立して選択され；
各R13は、独立して、
a.  ハロ、NO2、CN、OR19、SR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2、そのいずれもC1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、ハロ、NO2、CN、OR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2により任意に置換されている6〜14-員のアリールもしくは5〜14-員のヘテロアリール基から選択された1以上の置換基により任意に置換されたC1-20アルキル、C2-20アルケニル、又はC2-20アルキニル；あるいは、
b.  そのいずれもC1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、ハロ、NO2、CN、OR19、SR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2から選択された1以上の置換基により任意に置換されている6〜14-員のアリールもしくは5〜14-員のヘテロアリール基：であり、
各R19は、H、C1-6アルキル、又はC1-6ハロアルキルから独立して選択され；
R5は、H又はOH又は保護されたOHである。）が提供される。
【００１９】
一般式(I)の化合物は、オベチコール酸及びその誘導体などの、医薬活性化合物の合成における中間体である。
【００２０】
本明細書において、言い回し又は必要な含意を示すために文脈が別に必要とする場合を除き、語句「含む」、又は「含んでなる」もしくは「含んでいる」などの変形は、包括的意味で使用され、すなわち、本発明の様々な実施態様において、言及された特徴の存在を特定するが、更なる特徴の存在又は追加を除外することなく使用される。
【００２１】
本明細書に引用された特許、特許出願を含むが、これらに限定されるものではない、全ての刊行物は、各々個別の刊行物が、完全な言及を通じて引用により組み込まれていることが、具体的且つ個別に指摘されるように、引用により本明細書中に組み込まれている。
【００２２】
本出願において、用語「C1-20」アルキルは、炭素原子1〜20個を有する、線状又は分岐した完全に飽和された炭化水素基をいう。この用語は、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル及びt-ブチルを包含している。他のアルキル基、例えば、C1-20アルキル、C1-6アルキル又はC1-3アルキルは、先に定義したものであるが、異なる数の炭素原子を含む。
【００２３】
用語「C1-6ハロアルキル」は、炭素原子1〜6個を有し、且つ過ハロゲン置換まで、1個以上のハロ原子により置換された、先に定義したような線状又は分岐したアルキル基をいう。例としては、トリフルオロメチル、クロロエチル及び1,1-ジフルオロエチルが挙げられる。
【００２４】
用語「C2-20アルケニル」は、炭素原子2〜20個及び少なくとも1個の炭素-炭素二重結合を有する、線状又は分岐した炭化水素基をいう。例としては、エテニル、プロパ-1-エニル、ヘキサ-2-エニルなどが挙げられる。
【００２５】
用語「C2-20アルキニル」は、炭素原子2〜20個及び少なくとも1個の炭素-炭素三重結合を有する、線状又は分岐した炭化水素基をいう。例としては、エチニル、プロパ-1-イニル、ヘキサ-2-イニルなどが挙げられる。
【００２６】
用語「アルキレン」は、線状又は分岐した完全に飽和された炭化水素鎖をいう。アルキレン基の例としては、-CH2-、-CH2CH2-、CH(CH3)-CH2-、CH2CH(CH3)-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH(CH2CH3)-及び-CH2CH(CH2CH3)CH2-が挙げられる。
【００２７】
用語「アルケニレン」は、少なくとも1個の炭素-炭素二重結合を含む、線状又は分岐した炭化水素鎖をいう。アルケニレン基の例としては、-CH=CH-、-CH=C(CH3)-、-CH2CH=CH-、-CH=CHCH2-、CH2CH2CH=CH-、CH2CH=C(CH3)-及び-CH2CH=C(CH2CH3)-が挙げられる。
【００２８】
用語「アルキニレン」は、少なくとも1個の炭素-炭素三重結合を含む、線状又は分岐した炭化水素鎖をいう。アルケニレン基の例としては、-C≡C-、-CH2C≡C-、-C≡C-CH2-、CH2CH2C≡C-、CH2C≡CCH2-及び-CH2CH≡C-CH2CH2-が挙げられる。
【００２９】
用語「アリール」及び「芳香族」は、環炭素原子6〜14個を有し(別に指定しない限りは)、且つ最大3個の環を含む、芳香族の特徴を持つ環状基をいう。アリール基が2個以上の環を含む場合は、全てではないが環は、芳香族の特徴でなければならない。例としては、フェニル、ナフチル及びアントラセニル、並びに部分的に飽和された系、例えばテトラヒドロナフチル、インダニル及びインデニルが挙げられる。
【００３０】
用語「ヘテロアリール」及び「ヘテロ芳香族」は、環原子5〜14個を有し(別に指定しない限りは)、その少なくとも1個はN、O及びSから選択されたヘテロ原子であり、且つ最大3個の環を含む、芳香族の特徴を持つ環状基をいう。ヘテロアリール基が2個以上の環を含む場合は、全てではないが環は、特徴が芳香族でなければならない。ヘテロアリール基の例としては、ピリジン、ピリミジン、インドール、ベンゾフラン、ベンゾイミダゾール及びインドレンが挙げられる。
【００３１】
用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素をいい、並びに用語「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード基をいう。
【００３２】
用語「同位体変種」は、式(I)で言及されたものと同一であるが、実際には、1個以上の原子は、天然に最も普通に認められる原子質量もしくは質量数とは異なる原子質量もしくは質量数を有する原子により置き換えられるか、あるいは通常余り天然には認められない原子質量もしくは質量数を有する原子の割合が増加している、同位体-標識された化合物をいう(後者の概念は「同位体濃縮」と称される)。本発明の化合物に取り込まれ得る同位体の例としては、天然の又は非天然の同位体であることができる、2H(重水素)、3H、11C、13C、14C、18F、123I又は125I(例えば、3H、11C、14C、18F、123I又は125I)などの、水素、炭素、窒素、酸素、フッ素、ヨウ素、及び塩素の同位体が挙げられる。
【００３３】
ポリエチレングリコール(PEG)は、線状の形で、一般式H-[O CH2-CH2]n-OHを有する、ポリエーテル化合物である。ポリエチレングリコール残基は、末端Hが、それをその分子の残りに連結する結合により置き換えられている、PEGである。
【００３４】
超分岐型及び樹状型を含む分岐した形もまた、意図されており、且つこれらは一般に当該技術分野において公知である。典型的には、分岐したポリマーは、中心枝コア部分、及び中心枝コアに連結された複数の線状ポリマー鎖を有する。PEGは、一般に、グリセロール、グリセロールオリゴマー、ペンタエリスリトール及びソルビトールなどの、様々なポリオールへのエチレンオキシドの添加により調製することができる、分岐した形で使用される。中心枝部分はまた、リシンなどのいくつかのアミノ酸に由来することもできる。分枝したポリ(エチレングリコール)は、一般式R(-PEG-OH)m で表すことができ、ここでRは、グリセロール、グリセロールオリゴマー、ペンタエリスリトールなどのコア部分に由来し、並びにmは、アームの数を表す。US 5,932,462；US 5,643,575；US 5,229,490；US 4,289,872；US 2003/0143596；WO 96/21469；及びWO 93/21259に説明されたもののような、マルチ-アームPEG分子も、使用することができる。
【００３５】
PEGポリマーは、平均分子量、例えば、600〜2,000,000 Da、60,000〜2,000,000 Da、40,000〜2,000,000 Da、400,000〜1,600,000 Da、800〜1,200,000 Da、600〜40,000 Da、600〜20,000 Da、4,000〜16,000 Da、又は8,000〜12,000 Daを有してよい。
【００３６】
用語「保護されたOH」は、任意の好適な保護基により保護されたOH基に関連している。例えば、保護されたOHは、先に定義したような基R4であってよい。
【００３７】
好適な保護基は、例えば、R2及び／又はR5が保護されたOHである場合、R2及び／又はR5は独立して、基OC(O)R14であり、ここでR14は先に定義したような基R10であるような、エステルを含む。シリルエーテルも適しており、この場合、R2及び／又はR5は独立して基OSi(R16)3であり、ここで各R16は独立して先に定義したような基R13である。
【００３８】
OHに関する他の好適な保護基は、当業者に周知である(Wuts, PGM及びGreene, TWの文献、(2006)、「Greenの有機合成における保護基(Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis)」、第4版、John Wiley & Sons社、ホーボーケン、NJ、米国参照)。
【００３９】
塩基性条件において安定しているという保護基の言及は、この保護基は、塩基による処理で除去することができないことを意味している。
【００４０】
一般式(I)の化合物の好適な塩は、Paulekuhnらの文献、J. Med. Chem. 2007, 50, 6665-6672においてまとめられているか及び／又は当業者に公知であるように、塩基付加塩であり、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミニウム、亜鉛、マグネシウム及び他の金属の塩、並びにコリン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、エチルジアミン、メグルミン及び他の周知の塩基付加塩である。
【００４１】
いくつかの好適な化合物において、一般式(I)の化合物は、一般式(IA)の化合物：
【化３】
0006700274.tif 000004
（式中、R1、R2、Y、R4及びR5は、一般式(I)について定義したものである）である。
【００４２】
いくつかの好適な一般式(I)及び(IA)の化合物において：
R1は、ハロ、OR6又はNR6R7から選択された1以上の置換基により任意に置換されたC1-4アルキルであり；
ここで、R6及びR7の各々は、H又はC1-4アルキルから独立して選択され；
R2は、H、ハロ、又はOHであり；
Yは、結合、又は炭素原子1〜6個を有し、及び1以上の基R3により任意に置換された、アルキレン又はアルケニレンリンカー基であり；
各R3は、独立して、ハロ、OR8又はNR8R9であり；
ここで、R8及びR9の各々は、H又はC1-4アルキルから、独立して選択され；
R4は、C(O)OR10、C(O)NR10R11、S(O)R10、SO2R10、OSO2R10、SO3R10、又はOSO3R10であるか；あるいは、
R4は、C(O)OR10、C(O)NR10R11、S(O)R10、SO2R10、又はOSO2R10であり：
ここで、どちらの場合においても、各R10は、水素、又はそのどちらかは1以上のハロ置換基により任意に置換され得るC1-6アルキル又はベンジルであり、並びにR11は、水素、又はそのいずれかは1以上のハロ置換基により任意に置換され得るC1-6アルキル、ベンジル、-C1-4アルキレン-SO3Hもしくは-C1-4アルキレン-SO3(C1-4アルキル)である。
【００４３】
好適な一般式(I)及び(IA)の化合物において、R1は、ハロ、OR6又はNR6R7から選択された1以上の置換基により任意に置換されたC1-4アルキルであってよく、ここでR6及びR7は各々独立して、H、メチル又はエチル、特にH又はメチルである。
【００４４】
より好適には、R1は、非置換のC1-4アルキルである。
【００４５】
特に好適な化合物において、R1はエチルである。
【００４６】
いくつかの一般式(I)及び(IA)の化合物において、Yは結合である。
【００４７】
好適には一般式(I)及び(IA)の化合物において、Yは、炭素原子1〜15個、より好適には炭素原子1〜12個、1〜10個又は1〜8個を有し、及び先に定義したように1以上の基R3により任意に置換された、アルキレン又はアルケニレンリンカー基である。典型的には、各R3は独立して、ハロ、OR8又はNR8R9であり；ここで、R8及びR9の各々は、H、メチル又はエチルから、特にH又はメチルから、独立して選択される。
【００４８】
いくつかの好適な化合物において、Yは、炭素原子1〜15個、より好適には炭素原子1〜12個、1〜10個又は1〜8個を有する、非置換のアルキレン又はアルケニレンリンカーである。
【００４９】
いくつかの好適な一般式(I)の化合物において、R2は、Hである。
【００５０】
他の好適な一般式(I)の化合物において、R2はOHである。
【００５１】
更に別の好適な一般式(I)の化合物において、R2は、保護されたOH基である。R2が保護されたOH基である場合、これは、塩基による処理が保護されたOH基をOHに変換するよう、塩基性環境において、安定していない基であってよい。かかる基の例は、当該技術分野において周知であり、且つ先に定義したような基OC(O)R14を含み、ここでR14は、一般式(I)について先に定義したように基R10である。
【００５２】
特に好適なR14基は、以下にR10について定義したものである、
【００５３】
あるいは、R2は、塩基性環境において安定している、保護されたOH基であってよい。かかる基の例は、OSi(R16)3を含み、ここで各R16は独立して、先に定義したような基R13である。
【００５４】
特に好適なR16基は、以下にR13について定義したものである。
【００５５】
一般式(I)及び(IA)の化合物において、R4は、C(O)OR10、OC(O)R10、C(O)NR10R11、OR10、OSi(R13)3、S(O)R10、SO2R10、OSO2R10、SO3R10、又はOSO3R10である。
【００５６】
好適には、これは、C(O)OR10、OR10、SO3R10、又はOSO3R10である。
【００５７】
より好適には、R4は、C(O)OR10、SO3R10、又はOSO3R10である。
【００５８】
好適には、各R10及びR11は、独立して：
a.  水素、あるいは、
b.  そのいずれかは、先に説明したように1以上の置換基により任意に置換されている、C1-10アルキル、C2-10アルケニル、C2-10アルキニル、-O-C1-10アルキル、-O-C2-10アルケニル、又は-O-C2-10アルキニル；あるいは、
c.  先に説明したように1以上の置換基により任意に置換された、6〜10-員のアリールもしくは5〜10-員のヘテロアリール基；
d.  ポリエチレングリコール残基：である。
【００５９】
より好適には、各R10及びR11は、独立して：
a.  水素、あるいは、
b.  先に説明したように1以上の置換基により任意に置換された、C1-10アルキル、C2-10アルケニル、C2-10アルキニル、又は-O-C1-10アルキル；あるいは、
c.  先に説明したように1以上の置換基により任意に置換された、6〜10-員のアリール基：である。
【００６０】
好適には、各R13は、独立して：
a.  先に説明したように1以上の置換基により任意に置換された、C1-10アルキル、C2-10アルケニル、又はC2-10アルキニル；あるいは、
b.  先に説明したように1以上の置換基により任意に置換された、6〜10-員のアリールもしくは5〜10-員のヘテロアリール基：から選択される。
【００６１】
より好適には、各R13は、独立して：
a.  先に説明したように1以上の置換基により任意に置換された、C1-10アルキル、C2-10アルケニル、又はC2-10アルキニル；あるいは、
b.  先に説明したように1以上の置換基により任意に置換された、6〜10-員のアリール基：から選択される。
【００６２】
更により好適には、各R13は、独立して、そのいずれも、先に説明したように任意に置換されている、C1-10アルキル又はフェニルから選択される。
【００６３】
アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルケニルオキシ及びアルキニルオキシのR10及びR11基、並びにアルキル、アルケニル及びアルキニルのR13基に関する好適な置換基は、ハロ、NO2、CN、OR19、SR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2、又はそのいずれもC1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、ハロ、NO2、CN、OR19、SO2R19、SO3R19又はN(R19)2により任意に置換されている6〜10-員のアリールもしくは5〜14-員のヘテロアリール基を含み；ここで、R19は先に定義したものである。
【００６４】
これらのR10、R11及びR13基に関するより好適な置換基は、ハロ、OR19、N(R19)2、又は先に説明したように任意に置換された、より好適にはハロ、C1-4アルキル、C1-4ハロアルキル、-O-C1-4アルキル、-O-C1-4ハロアルキル、-NH(C1-4アルキル)もしくは-N(C1-4アルキル)2；例えば、フルオロ、クロロ、メチル、エチル、トリフルオロメチル、メトキシ、エトキシ、トリフルオロメトキシ、アミノ、メチルアミノ及びジメチルアミノにより任意に置換された、6〜10-員のアリール基を含む。
【００６５】
アリール及びヘテロアリールのR10、R11及びR13基に関する好適な置換基は、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、ハロ、NO2、CN、OR19、SR19又はN(R19)2を含む。
【００６６】
これらのR10、R11及びR13基に関するより好適な置換基は、C1-4アルキル、C1-4ハロアルキル、ハロ、OR19又はN(R19)2を含み；特に、ハロ、C1-4アルキル、C1-4ハロアルキル、-O-C1-4アルキル、-O-C1-4ハロアルキル、-NH(C1-4アルキル)又は-N(C1-4アルキル)2を含む。
【００６７】
アリール及びヘテロアリールのR10、R11及びR13基に関する置換基の具体例は、フルオロ、クロロ、メチル、エチル、トリフルオロメチル、メトキシ、エトキシ、トリフルオロメトキシ、アミノ、メチルアミノ及びジメチルアミノを含む。
【００６８】
先に述べたように、各R19は、H、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、又はそのいずれも1以上のハロ、C1-6アルキルもしくはC1-6ハロアルキル置換基により任意に置換された6〜14-員のアリールもしくは5〜14-員のヘテロアリール基から、独立して選択される。
【００６９】
好適には、R19は、H、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、又は1以上のハロ、C1-4アルキルもしくはC1-4ハロアルキル置換基により任意に置換された、6〜10-員のアリールもしくは5〜10-員のヘテロアリール基である。
【００７０】
より好適には、R19は、H、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、又は1以上のハロ、C1-4アルキルもしくはC1-4ハロアルキル置換基により任意に置換されたフェニルである。
【００７１】
R19の具体例は、H、メチル、エチル、トリフルオロメチル、又は1以上のフルオロ、クロロ、メチル、エチルもしくはトリフルオロメチル基により任意に置換されたフェニルを含む。
【００７２】
いくつかの好適な一般式(I)の化合物において、R5はHである。
【００７３】
他の好適な一般式(I)の化合物において、R5はOHである。
【００７４】
更に他の好適な一般式(I)の化合物において、R5は、保護されたOH基である。
【００７５】
更に他の好適な一般式(I)の化合物において、R5は、保護されたOH基である。R5が保護されたOH基である場合、これは、塩基による処理が、保護されたOH基をOHに変換するよう、塩基性環境において、安定していない基であってよい。かかる基の例は、当該技術分野において周知であり、且つ先に定義したような、基OC(O)R14を含み、ここでR14は、一般式(I)について先に定義したように基R10である。
【００７６】
特に好適なR14基は、先にR10について定義したものである、
【００７７】
あるいは、R5は、塩基性環境において安定している、保護されたOH基であってよい。かかる基の例は、OSi(R16)3を含み、ここで各R16は独立して、先に定義したように基R13である。
【００７８】
特に好適なR16基は、先にR13について定義したものである。
【００７９】
いくつかの好適な一般式(I)及び(IA)の化合物において、独立して又はいずれかの組合せにおいて：
Yは、結合、又は炭素原子1〜3個を有し、且つ1又は2個のR3基により任意に置換されているアルキレンもしくはアルケニレン基であり；
R4は、C(O)OR10、SO3R10、又はOSO3R10であり、ここでR10は、先に定義したものであるが、より好適にはH、C1-6アルキル又はベンジルであり；並びに
R5は、H又はOHである。
【００８０】
いくつかのより好適な化合物において、独立して又はいずれかの組合せにおいて：
R1は、エチルであり；及び／又は
R2は、Hであり；及び／又は
Yは、結合、-CH2-、-CH2CH2-、-CH=CH-又は-CH=C(CH3)-であり；及び／又は
R4は、C(O)OR10であり、ここでR10は、H、C1-6アルキルもしくはベンジルであり；及び／又は
R5は、Hである。
【００８１】
この型のいくつかの特に好適な化合物において、R1はエチルであり、及び／又はR10は、C1-6アルキルもしくはベンジルである。
【００８２】
特に好適な本発明の化合物は：
(6β, 7α, 22E)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸；
(6β, 7α)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-4-コレン-24-酸；
並びに、それらのC1-6アルキルエステル及びベンジルエステル、並びにそれらの塩、特にメチルエステル及びエチルエステルを含む。
【００８３】
一般式(I)及び(IA)の化合物は、一般式(II)の化合物：
【化４】
0006700274.tif 000005
（式中、R2、R4、R5及びYは、一般式(I)に定義したものである）；
から、有機金属試薬との選択的アルキル化により調製することができる。
【００８４】
好適な有機金属試薬は、式(XXIV)のアルキルリチウム化合物：
R1-Li          (XXIV)
（式中、R1は、一般式(I)に定義したものである）；
と、銅(I)塩、特にヨウ化銅(I)などの、ハロゲン化銅(I)の反応により形成された、ギルマン試薬を含む。
【００８５】
この反応は、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテルなどの他のエーテル、又はそれらの混合物などの有機溶媒中で実行されてよい。
【００８６】
あるいは、添加は、グリニャール試薬R1MgX（式中、R1は、一般式(I)に定義したものであり、及びXは、例えば臭化エチルマグネシウムなどの、ハロゲン化物である）を用いて実行することができ、並びにこの反応は好適には、例えば塩化亜鉛などの亜鉛(II)塩、及び触媒量の銅(I)又は銅(II)塩又は錯体、例えば、塩化第一銅、塩化第二銅、又は銅(I)もしくは銅(II)とアセチルアセトネート(acac)の錯体の存在下で実行される。
【００８７】
この反応は、有機溶媒中で、例えば、THF、2-メチルTHF、メチルtert-ブチルエーテル(tBME)、ジエチルエーテルなどのエーテルの中で実行されてよい。驚くべきことに、反応温度は、特に重要ではなく、場合によっては、この反応は、低温、例えば約-25〜0℃で実行されてよいが、最高約55℃の比較的高い温度でも、うまく実行される。
【００８８】
式(II)の化合物から式(I)の化合物を調製するプロセスは、新規であり、且つそれ自身本発明の一部を形成している。
【００８９】
この方法は、一般式(I)の化合物(式中、R4はC(O)OR10である)の、一般式(II)の化合物(式中、同じくR4はC(O)OR10であり、ここでR10は、先に定義したものであるが、特にH、C1-6アルキル又はベンジルである)からの調製に特に適している。
【００９０】
あるいは、式(I)の化合物は、他の一般式(I)の化合物から調製することができる。例えば、一般式(I)の化合物(式中、R4はC(O)OR10である)は、一般式(I)の化合物（式中、R4は、C(O)NR10R11、S(O)R10、SO2R10、OSO2R10、SO3R10、又はOSO3R10である）へ変換されてよい。
【００９１】
一般式(I)の化合物(式中、R4はSO3R10である)は、WO2008/002573、WO2010/014836及びWO2014/066819に開示された方法により、一般式(I)の化合物(式中、R4はC(O)OHである)から合成されてよい。
【００９２】
従って、式(I)の化合物(式中、R4はC(O)OHである)は、C1-6アルカノイルもしくはベンゾイルクロリドと、又はC1-6アルカン酸無水物と反応させ、OH基を保護することができる。この保護された化合物は、次に、カルボン酸基をOHへ還元するために、還元剤、例えば水素化物、好適には水素化リチウムアルミニウム、又は水素化ホウ素ナトリウムと反応されてよい。Classonらの文献、J. Org. Chem., 1988, 53, 6126-6130に説明されたトリフェニルホスフィン/イミダゾール/ハロゲン法を使用し、アルコール基は、ハロゲン、例えば、臭素又はヨウ素により置き換えられてよい。このハロゲン化された化合物は次に、アルコール系溶媒中で亜硫酸ナトリウムと反応させて、SO3- Na+ 置換基を持つ化合物を生じることができる。
【００９３】
一般式(I)の化合物(式中、R4はOSO3R10である)は、保護されたトリエチルアンモニウム塩を生じるための、トリエチルアミンなどの塩基の存在下での、クロロ硫酸による、先に説明した保護されたカルボン酸の還元から得られたアルコールとの反応により、得ることができる。保護基は、先に説明したように塩基の加水分解を用い、除去することができる。カルボン酸の還元、それに続く生じたアルコールのクロロ硫酸との反応は、一般式(I)の化合物(式中、R4はOSO2R10である)を生じる。
【００９４】
一般式(I)の化合物(式中、R4はC(O)NR10R11である)は、カルボン酸から、好適な溶媒中で加熱しながらの、式H-NR10R11のアミンとの反応により、調製することができる。一般式(I)の化合物(式中、R4はC(O)NR10R11又はOSO3R10である)はまた、Festaらの文献、J. Med. Chem., 2014, 57, 8477-8495に説明された方法に類似の方法により調製することもできる。
【００９５】
他のR4基を持つ一般式(I)の化合物は、当業者に熟知された方法により、先の一般式(I)の化合物から調製することができる。これらの方法も、本発明の態様を形成している。
【００９６】
一般式(II)の化合物は、式(III)の化合物：
【化５】
0006700274.tif 000006
(式中、R2、R4、R5及びYは、一般式(I)に定義したものである)；
から、例えば、ビス(モノペルオキシフタル酸エステル)六水和物(MMPP)又は3-クロロペルオキシ安息香酸(mCPBA)を使用する酸化により、調製することができる。
【００９７】
MMPPを使用する反応は、酢酸エチルなどの有機溶媒中で実行されてよく、並びにmCPBAが使用される場合、この反応は、ジクロロメタン又はトルエンなどの溶媒中で実行されてよい。好適には、この反応は、この溶媒の還流温度で又はその少し低い温度で実行される。
【００９８】
一般式(III)の化合物は、一般式(IV)の化合物：
【化６】
0006700274.tif 000007
（式中、R2、R4、R5及びYは、一般式(I)に定義したものである）；
から、クロルアニルなどの酸化剤との反応により、調製することができる。
【００９９】
この反応は、酸性条件下、例えば酢酸の存在下、及びトルエンなどの有機溶媒中で実行することができる。
【０１００】
一般式(II)、(III)及び(IV)の化合物のいくつかは、公知であり、且つ例えば、Uekawaらの文献、Biosci. Biotechnol. Biochem., 2004, 68, 1332-1337は、スチグマステロールからの(22E)-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステルの合成、それに続く下記式を有する、(22E)-3-オキソ-4,6,22-コラトリエン-24-酸エチルエステルへのその変換を説明している：
【化７】
0006700274.tif 000008
。
【０１０１】
その後Uekawaらは続けて、この化合物の、(6α, 7α, 22E)-6,7エポキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステルへの変換を説明し、これは一般式(II)の化合物(式中、R2及びR5はHであり、Yは-CH=CH-であり、並びにR4はC(O)OCH2CH3である)である。
【０１０２】
他の一般式(II)、(III)及び(IV)の化合物は、スチグマステロールに類似しているフィトステロールから類似の方法により調製することができる。
【０１０３】
スチグマステロール及び他のフィトステロールは、植物性ステロールであり、且つ容易に入手可能であるか、又は公知の経路により調製することができる。
【０１０４】
一般式(IV)の化合物はまた、一般式(Va)の化合物：
【化８】
0006700274.tif 000009
(式中、R2、R4、R5及びYは、一般式(I)に定義したものである)から、臭化リチウム及び炭酸リチウムなどの塩基との反応により、調製することができる。この反応は、N,N-ジメチルホルムアミド(DMF)などの溶媒中で、温度約120℃〜180℃で実行することができる。
【０１０５】
一般式(Va)の化合物は、一般式(V)の化合物：
【化９】
0006700274.tif 000010
(式中、R2、R4、R5及びYは、一般式(I)に定義したものである)の、例えば、酢酸中の臭素を使用する臭素化により得ることができる。
【０１０６】
一般式(V)の化合物は、一般式(VI)の化合物：
【化１０】
0006700274.tif 000011
(式中、R2、R4、R5及びYは、一般式(I)に定義したものである)から、典型的にはクロム-ベースの酸化剤による、又はナトリウムヒポクロリットによる酸化により、調製することができる。
【０１０７】
一般式(VI)の化合物(式中、R4はC(O)OR10であり、ここでR10はC1-6アルキル又はベンジルである)は、一般式(VI)の化合物(式中、R4はC(O)OHである)から、エステル化、典型的には酸性条件下での好適なアルコールとの反応により、調製することができる。
【０１０８】
一般式(VI)の化合物(式中、R4はC(O)OHであり、及びR5はHである)は、一般式(VII)の化合物：
【化１１】
0006700274.tif 000012
(式中、R2及びYは、一般式(I)に定義したものであり；
R4はC(O)OR10であり、ここでR10はC1-6アルキル又はベンジルであり；並びに
R12は保護されたOHである)から、塩基性条件下、及びアルコール系又はグリコール系の溶媒、例えば、ジエチレングリコール中で、還元剤、典型的にはヒドラジンとの反応により、調製することができる。
【０１０９】
R12が塩基性条件下で安定である保護されたOH基である場合、この反応には、OH基が残るように、保護基R12を除去する反応が続くことができる。
【０１１０】
OHの保護基は、先に考察されており、且つ例えば、R12は、基C(O)R14であることができ、ここでR14は先に定義したものであり、特に、C1-6アルキル又はベンジルである。シリルエーテルもまた適しており、且つこの場合、R2及び／又はR5は独立して、基Si(R16)3であり、ここでR16は先に定義したものであるが、しかし特にC1-6アルキル又はフェニルである。OHに関する他の好適な保護基は、当業者に周知である(Wuts, PGM及びGreene, TWの文献、(2006)、「Greeneの有機合成における保護基」、第4版、John Wiley & Sons社、ホーボーケン、NJ、米国を参照されたい)。
【０１１１】
特に好適なR12基は、塩基の存在下で安定していない基を含み、その理由はこれは、保護基を除去する追加の工程の必要がないからである。塩基性条件で安定していない基R12の例は、基C(O)R14であり、ここでR14は先に定義されており、且つ特にC1-6アルキル又はベンジルである。
【０１１２】
あるいはこの反応は、一般式(VII)の化合物を、一般式(XXXII)の化合物：
R20-NH-NH2          (XXXII)
(式中、R20は、トルエンスルホニル又はメタンスルホニルなどの脱離基である)と反応させ、一般式(XXXIII)の化合物：
【化１２】
0006700274.tif 000013
を生じ、それに続けて好適な還元剤により還元する、2工程で実行することができる。この反応で使用することができる還元剤の例は、水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、水素化リチウムアルミニウムなどの水素化物を含む。
【０１１３】
一般式(VII)の化合物は、一般式(VIII)の化合物：
【化１３】
0006700274.tif 000014
(式中、R2及びYは、一般式(I)に定義したものであり；
R4はC(O)OR10であり、ここでR10はC1-6 アルキル又はベンジルであり；並びに
R12は、先に定義したもの、特に-C(O)C1-6アルキルである)から、酸化剤、例えば、ナトリウムヒポクロリットとの反応により調製することができる。この反応は、酸性条件下で、例えば、酢酸の存在下で、酢酸エチルなどの有機溶媒中で、実行することができる。
【０１１４】
一般式(VIII)の化合物は、一般式(IX)の化合物：
【化１４】
0006700274.tif 000015
(式中、R2及びYは、一般式(I)に定義したものであり；
R4は、C(O)OR10であり、ここでR10はC1-6アルキル又はベンジルである)から、保護基R12の導入に適した試薬との反応により、調製することができる。例えばR12がC(O)R14である場合、一般式(IX)の化合物は、カルボン酸無水物又は酸クロリドと、ピリジンなどの弱塩基の存在下で、好適には4-ジメチルアミノピリジン(DMAP)により触媒され、反応することができる。この反応は、酢酸エチルなどの溶媒中で実行することができる。
【０１１５】
一般式(IX)の化合物は、一般式(X)の化合物：
【化１５】
0006700274.tif 000016
(式中、R2及びYは、一般式(I)に定義したものである)のエステル化により調製することができる。
【０１１６】
この反応は、一般式(X)の酸を、酸性条件下で好適なアルコールと反応することにより、実行することができる。
【０１１７】
一般式(X)の化合物は公知である。例えば、Yが-CH2CH2-であり、及びR2がHである一般式(X)の化合物は、デオキシコール酸であり、これは多くの供給業者から容易に入手することができる。
【０１１８】
Y及びR2の異なる値を伴う他の胆汁酸を、代わりの出発材料として使用することができる。
【０１１９】
一般式(IV)の化合物への代替経路は、スキーム1に示しており、ここでアンドロステンジオンは、一般式(IV)の化合物(式中、R2及びR5はHであり；R4は-C(O)OCH3であり、及びYは-CH2CH2-又は-CH=CH-のいずれかである)へ変換される。
【０１２０】
（スキーム1）
【化１６】
0006700274.tif 000017
【０１２１】
一般式(III)の化合物(式中、Yはアルケニレン基である)への代替経路は、オレフィン化反応の使用、例えば、一般式(XI)の化合物：
【化１７】
0006700274.tif 000018
(式中、R2及びR5は、一般式(I)について定義したものである)；
の、一般式(XII)の化合物：
【化１８】
0006700274.tif 000019
(式中、R10は、一般式(I)について定義されている)
を使用する、ホーナー・ワズワース・エモンス(HWE)オレフィン化の使用による。
【０１２２】
この反応は、標準のHWE条件下、例えば、水素化ナトリウムなどの塩基を使用し、実行することができる。
【０１２３】
一般式(XII)の化合物は、容易に入手可能であるか、又は当業者に公知の方法により調製することができる。
【０１２４】
テッベオレフィン化、ウィティッヒ反応又はジュリア・コシエンスキーオレフィン化などの、他のオレフィン化反応も、一般式(III)の化合物(式中、Yはアルケニレン基である)を生じるであろう。これらのオレフィン化反応は、当該技術分野の化学者は熟知している。
【０１２５】
一般式(XI)の化合物は、一般式(XIII)の化合物：
【化１９】
0006700274.tif 000020
(式中、R2及びR5は、一般式(I)に定義したものであり、且つR15はC1-6アルキルである)の、オゾンとの反応により調製することができる。
【０１２６】
この種の反応の例は、US 2,624,748に開示されている。
【０１２７】
一般式(XIII)の化合物は、一般式(XIV)の化合物：
【化２０】
0006700274.tif 000021
(式中、R2及びR5は、一般式(I)に定義したものであり、且つR15はC1-6アルキルである)の、メタノールなどの溶媒中での、酸との反応により調製することができる。
【０１２８】
一般式(XIV)の化合物は、一般式(XV)の化合物：
【化２１】
0006700274.tif 000022
(式中、R2及びR5は、一般式(I)に定義したものであり、且つR15はC1-6アルキルである)の、オッペンナウアー酸化を使用する、酸化により調製することができる。
【０１２９】
一般式(XV)の化合物から一般式(XIII)の化合物への変換の例は、Shepherdらの文献、J. Am. Chem. Soc. 1955, 77, 1212-1215及びGoldsteinの文献、J. Med. Chem. 1996, 39, 5092-5099に記載されている。
【０１３０】
一般式(XV)の化合物の一例は、エルゴステロールであり、これは真菌のステロールであり、且つ下記スキーム2は、エルゴステロールの、一般式(III)の化合物(式中、R2及びR5は両方ともHであり、YはCH=CH2であり、並びにR4はC(O)OR10であり、ここでR10はエチルである)への変換を示している。
【０１３１】
（スキーム2）
【化２２】
0006700274.tif 000023
【０１３２】
一般式(I)の化合物のように、一般式(II)から(X)、(Va)及び(XXXIII)の化合物(式中、R4は、C(O)R10、C(O)NR10R11、S(O)R10、SO3R10、又はOSO3R10である)は、当業者に周知の方法を用い、好適な試薬との反応により、対応する化合物(式中、R4はC(O)OR10である)から、調製することができる。例えば、これらの方法は、WO2008/002573及びWO2010/014836、又はClassonらの文献、J. Org. Chem., 1988, 53, 6126-6130、及びFestaらの文献、J. Med. Chem., 2014, 57, 8477-8495に説明された方法に類似した方法に説明された。
【０１３３】
一般式(I)の化合物は、一般式(XVIII)の化合物：
【化２３】
0006700274.tif 000024
(式中、R1及びR4は、一般式(I)に定義したものであり；
R2は、H、ハロ、又はOHであり；
R5aは、H又はOHであり；並びに
Y1は、結合、又は、炭素原子1〜20個を有し且つ1以上の基R3により任意に置換されたアルキレンリンカー基であり；ここで、R3は、一般式(I)に定義したものである)の合成における中間体である。
【０１３４】
一般式(I)の化合物は、一般式(XVIII)の化合物へ、以下に説明するような一般式(XIX)、(XX)及び(XXI)の中間体を介した、4工程プロセスで、変換されることができる。
【０１３５】
従って、本発明の更なる態様において、一般式(XVIII)の化合物の調製のプロセスが提供され、このプロセスは：
(i)  一般式(I)の化合物を、好適な還元剤を使用し還元し、一般式(XIX)の化合物を生じること：
【化２４】
0006700274.tif 000025
（式中、R1、R2、R4及びR5は、一般式(I)に定義したものであり；並びに
Y1は、一般式(XVIII)に定義したものである）；
(ii)  一般式(XIX)の化合物を、好適な酸化剤を使用し酸化し、一般式(XX)の化合物を生じること：
【化２５】
0006700274.tif 000026
（式中、R1、R2、R4及びR5は、一般式(I)に定義したものであり；並びに
Y1は、一般式(XVIII)に定義したものである）；
(iii)  一般式(XX)の化合物をエピマー化し、一般式(XXI)の化合物を生じること：
【化２６】
0006700274.tif 000027
（式中、R1及びR4は、一般式(I)に定義したものであり；並びに
Y1は、一般式(XVIII)に定義したものであり；
R2は、H、ハロ又はOHもしくは塩基性条件下で安定している保護されたOH基であり；並びに
R5bは、H又はOHもしくは塩基性条件で安定している保護されたOH基である）；並びに
(iv)  一般式(XXI)の化合物を、好適な還元剤を使用し還元し、並びに、R2及び／又はR5bは、保護されたOHである場合、この保護基(複数可)を除去し、先に定義した一般式(XVIII)の化合物を生じ、ここで保護基の除去は、還元の前又は後に行うことができること；並びに任意に
(v)  一般式(XVIII)の化合物を別の一般式(XVIII)の化合物へ変換すること：を含む。
【０１３６】
一般式(XVIII)の化合物は、FXR及びTGR5の強力なアゴニストであり、且つ式(XVIII)の化合物(式中、R1はエチルであり、R2及びR5aは両方共Hであり、Y1は-CH2CH2-であり、並びにR4はC(O)OHである)であるオベチコール酸を含む。
【０１３７】
一般式(XVIII)から(XXI)の化合物において、R1及びR4についてより適した値は、一般式(I)について定義したものである。
【０１３８】
一般式(XVIII)から(XXI)の化合物の一部において、Y1は結合である。
【０１３９】
他の一般式(XVIII)から(XXI)の化合物において、Y1は、炭素原子1〜15個、より好適には炭素原子1〜12個、1〜10個又は1〜8個を有し、且つ先に定義したように1以上の基R3により任意に置換された、アルキレンリンカー基である。典型的には各R3は独立して、ハロ、OR8、又はNR8R9であり；ここで、R8及びR9の各々は独立して、H、メチル又はエチル、特にH又はメチルから選択される。
【０１４０】
いくつかの好適な一般式(XVIII)から(XXI)の化合物において、Y1は、炭素原子1〜15個、より好適には炭素原子1〜12個、1〜10個又は1〜8個を有する、非置換のアルキレン又はアルケニレンリンカーである。
【０１４１】
先の工程(i)において、一般式(I)の化合物の一般式(XIX)の化合物への変換は、水素化、通常接触水素化により実行することができる。接触水素化のために好適な触媒は、パラジウム/炭素、パラジウム/炭酸カルシウム、パラジウム/酸化アルミニウム、白金/パラジウム又はラネーニッケル触媒を含む。この反応は、有機溶媒中で実行することができ、これは、メタノール、エタノール又はイソプロパノールなどのアルコール系溶媒；酢酸エチル；ピリジン；酢酸；シクロペンチルメチルエーテル(CPME)又はN,N-ジメチルホルムアミド(DMF)であってよい。この有機溶媒は、任意に、アセトン又は水などの共溶媒と混合することができるか、又はトリエチルアミンなどの塩基を添加することもできる。
【０１４２】
触媒及び溶媒の選択は、必要とされる一般式(XIX)の生成物：
【化２７】
0006700274.tif 000028
のその一般式(XXX)の異性体：
【化２８】
0006700274.tif 000029
に対する比に影響を及ぼす。
【０１４３】
同じく、これは、式(XXXI)の中間体：
【化２９】
0006700274.tif 000030
の生成物への変換率にも影響を及ぼす。
【０１４４】
より好適には、パラジウム/炭素、又はパラジウム/炭酸カルシウム触媒が、使用される。典型的には、この触媒中に、パラジウムは、マトリクス(ここで、マトリクスは、炭素、炭酸カルシウムなどである)の重量に対し、5〜10重量％の量で存在する。
【０１４５】
(XIX)：(XXX)の優れた比をもたらす溶媒は、メタノール、エタノール及びDMF、特にメタノール及びDMFである。
【０１４６】
メタノールが溶媒として使用される場合は、これは、単独で、又はトリエチルアミンなどの塩基の存在下で使用することができる。好適には、使用されるトリエチルアミンの量は、化学量論的な量を下回る量、典型的には一般式(I)の出発材料の量に関して0.1〜0.5当量である。
【０１４７】
トリエチルアミンの存在下のメタノールは、一般式(XIX)の必要とされる生成物の一般式(XXX)の異性体に対する特に高い比を生じる。
【０１４８】
溶媒としてのメタノールにより実施される反応は、温度約-30〜25℃で実行されてよく、且つこの温度は、(XIX)：(XXX)の比にほとんど影響を及ぼさない。
【０１４９】
溶媒としてDMFが使用される場合は、これは、アセトン、TBME、THF、アセトニトリル、又はアセトン/水などの共溶媒と混合することができる。任意に、この溶媒は、トリエチルアミンなどの塩基を、化学量論的な量を下回る量、典型的には一般式(I)の出発材料の量に関して0.1〜0.5当量で含む。
【０１５０】
溶媒としてDMFを用いて実施される反応は、メタノール中で実行される反応よりも、温度に対してより感受性があるように見え、且つ(XIX)：(XXX)の比は、温度の上昇により減少する。好適には、従ってこの反応は、温度-30〜0℃で、より好適には-20〜-10℃で実行される。
【０１５１】
水素圧は、その選択性にほとんど影響を及ぼさず、従って水素圧は約1気圧が適していることがわかっている。
【０１５２】
同様に希釈は、その選択性に大きな影響を持つようには見えず、従って溶媒は、いずれか好都合な量で使用することができる。
【０１５３】
式(I)の化合物の水素化はまた、リンカーYにおいて、存在するならば、任意のアルケン結合も還元するであろう。
【０１５４】
先に述べたプロセスの工程(ii)において、酸化反応は、いずれか好適な方法を用い実行することができる。ひとつの好適な方法は、デス-マーチンペルヨージナン(1,1,1-トリアセトキシ-1,1-ジヒドロ-1,2-ベンゾヨードキソール)酸化であり、これは、クロロホルム又はジクロロメタンなどの塩素化溶媒中で、温度約15〜25℃、好適には室温で実行することができる。
【０１５５】
代替の酸化方法は、例えば酢酸によりもたらされるような酸性条件下での、ヒポクロリット、例えば、ナトリウムヒポクロリットを使用する酸化である。この反応は、水性溶媒中で、温度0〜15℃で、より通常には約0〜10℃で実行することができる。
【０１５６】
他の酸化方法は、希硫酸中の二クロム酸ナトリウム、もしくはより通常には三酸化クロムを使用する、ジョーンズ反応を含む。このプロセスは、胆汁酸ヒドロキシル基の対応するケト誘導体への汚染のない(clean)変換について信頼できるものであることがわかっている(Bortoliniらの文献、J. Org. Chem., 2002, 67, 5802)。代わりの酸化は、TEMPO((2,2,6,6-テトラメチル-ピペリジン-1-イル)オキシ)又はその誘導体を用いて実行することができる。
【０１５７】
工程(iii)のエピマー化反応は、好適には、一般式(XX)の化合物の塩基による処理を含む。一般式(XX)の化合物は、任意に水と混合された、アルコール系溶媒中に溶解され、且つ塩基、例えば、水酸化ナトリウムもしくは水酸化カリウム、又はナトリウムもしくはカリウムアルコキシド、典型的にはエトキシドと接触されてよい。
【０１５８】
一般式(XX)の化合物(式中、R4はC(O)OR10であり、ここでR10はC1-6 アルキル又はベンジルである)で、水酸化ナトリウム又は水酸化カリウムなどの強塩基が使用される場合、工程(iii)のエピマー化反応は、加水分解を伴って、一般式(XXI)の化合物(式中、R4はC(O)OHである)を生じることができる。
【０１５９】
一般式(XX)の化合物において、R2及び／又はR5が、保護されたOH、例えば基OC(O)OR14(式中、R14は先に定義したものであるが、特にC1-6アルキル又はベンジルである)場合、これは、エピマー化工程の間に除去され、一般式(XXI)の化合物(式中、R2及び／又はR5bはOHである)を生じる。塩基性条件で安定している他の保護されたOH基(例えば、基OSi(R16)3(式中、各R16は独立して先に定義されているが、特にC1-6アルキル又はフェニルである)は、工程(iv)の前又は後に除去することができる。
【０１６０】
工程(iv)において、還元剤は典型的には、テトラヒドロフランと水の混合物などの溶媒中で使用することができる、水素化ホウ素ナトリウムなどの水素化物である。典型的には、この反応は、塩基性条件下、例えば水酸化ナトリウム又は水酸化カリウムなどの強塩基の存在下などで、温度約0〜110℃、より通常には60〜100℃で実行することができる。一般式(XVIII)の化合物(式中、R4はC(O)OHである)は、一般式(XXI)の化合物(式中、R4 はC(O)OHである)の還元により生成することができる。
【０１６１】
一般式(XVIII)から(XXI)の化合物(式中、R4は、C(O)R10、C(O)NR10R11、S(O)R10、SO2R10、又はOSO2R10である)は、対応する化合物(式中、R4はC(O)OR10である)から、当業者に周知の方法を用い、好適な試薬との反応により、調製することができる。
【０１６２】
一般式(XVIII)から(XXI)の化合物(式中、R4はSO3R10である)は、一般式(XVIII)から(XXI)の化合物(式中、R4はC(O)OHである)から、WO2008/002573、WO2010/014836及びWO2014/066819に示された方法により、合成することができる。
【０１６３】
従って、式(I)の化合物(式中、R4はC(O)OHである)は、C1-6アルカノイルもしくはベンゾイルクロリドと、又はC1-6アルカン酸無水物と反応させ、OH基を保護することができる。保護された化合物は次に、カルボン酸基をOHへ還元するために、水素化物、好適には水素化ホウ素ナトリウムなどの、還元剤と、反応させることができる。アルコール基は、Classonらの文献、J. Org. Chem., 1988, 53, 6126-6130に説明された、トリフェニルホスフィン/イミダゾール/ハロゲン法を使用し、例えば臭素又はヨウ素などのハロゲンにより置き換えることができる。ハロゲン化された化合物は次に、アルコール系溶媒中で亜硫酸ナトリウムと反応させて、SO3- Na+ 置換基を持つ化合物を生じることができる。
【０１６４】
一般式(XVIII)から(XXI)の化合物(式中、R4はOSO3R10である)は、保護されたトリエチルアンモニウム塩を生じるための、トリエチルアミンなどの塩基の存在下での、クロロ硫酸による保護されたカルボン酸の還元から得られたアルコールとの反応により得ることができる。保護基は、先に説明したように塩基の加水分解を使用し、除去することができる。カルボン酸の還元、それに続く得られたアルコールのクロロ硫酸との反応は、一般式(XVIII)から(XXI)の化合物(式中、R4はOSO2R10である)を生じる。
【０１６５】
一般式(XVIII)から(XXI)の化合物(式中、R4はC(O)NR10R11である)は、カルボン酸から、好適な溶媒中加熱しながらの、式H-NR10R11のアミンとの反応により調製することができる。一般式(XVIII)から(XXI)の化合物(式中、R4はC(O)NR10R11又はOSO3R10である)はまた、Festaらの文献、J. Med. Chem., 2014, 57 (20), 8477-8495に説明された方法と類似の方法によっても調製することができる。これらの方法も、本発明の態様を形成している。
【０１６６】
一般式(XVIII)から(XXI)の化合物(式中、R4はC(O)R10である)は、1当量の水素化ジイソブチルアルミニウム(DIBAL)を使用する、化合物(式中、R4はC(O)OR10である)の還元により得ることができ、アルデヒド(式中、R4はC(O)Hである)を生じる(例えば、WO2011/014661参照)。
【０１６７】
あるいはこのアルデヒドは、先に説明したように調製された保護された化合物(式中、R4はOHである)の酸化により調製することができる。この酸化は、塩化オキサリル及びジメチルスルホキシド、引き続きトリエチルアミンを使用して実行されるスワーン酸化であることができる(例えば、Xiang-Dong Zhouらの文献、Tetrahedron, 2002, 58, 10293-10299参照)。あるいは、この酸化は、Carnellらの文献(J. Med. Chem., 2007, 50, 2700-2707)に説明されたように、クロロクロム酸ピリジニウム(PCC)などの酸化剤を使用し、実行することができる。
【０１６８】
一般式(I)の化合物(式中、R4はC(O)R10であり、ここでR10は水素以外である)は、公知の方法により、例えば、アルデヒド(式中、R4はC(O)Hである)の好適なグリニャール試薬との反応、それに続く酸化により得ることができる。かかる方法は、当業者には周知である。
【実施例】
【０１６９】
本発明はここで、実施例を参照し、より詳細に説明される。
【０１７０】
本実施例において、下記の略号を使用する：
AcOH        酢酸
CPME        シクロペンチルメチルエーテル
DMF         N,N-ジメチルホルムアミド
EtOAc       酢酸エチル
EtOH        エタノール
IPA         イソプロピルアルコール
MeOH        メタノール
NEt3        トリエチルアミン
nBuOAc      酢酸n-ブチル
TBME        t-ブチルメチルエーテル
THF         テトラヒドロフラン
TLC         薄層クロマトグラフィー。
【０１７１】
（実施例1から4−スチグマステロールからの(6β, 5β, 7α)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-コラン-24-酸エチルエステルの合成）
（実施例1−(22E)-3-オキソ-4,6,22-コラトリエン-24-酸エチルエステルの合成）
【化３０】
0006700274.tif 000031
出発材料(22E)-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステルを、Uekawaらの文献(Biosci, Biotechnol, Biochem., 2004, 68, 1332-1337)に記載された方法に従い、スチグマステロールから調製した。
【０１７２】
(22E)-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステル(1.00kg, 2.509mol；1当量)を、反応容器に投入し、引き続きAcOH(3容積, 3.0L)及びトルエン(1容積, 1.0L)を攪拌しながら投入した。次にクロルアニル(0.68kg, 2.766mol；1.1当量)を投入し、反応混合物を100℃まで加熱し、この温度で1〜2時間維持した(シリカ上のTLCによるIPC、溶離液3：7のEtOAc：ヘプタン；出発材料：Rf 0.50、生成物：Rf 0.46；アニスアルデヒド染色により可視化)。次にこの混合物を、氷/水浴中で、10℃まで冷却し、生じた固形物を濾過した。フィルターケーキを、予め混合した3：1のAcOH：トルエン(4×0.5容積)により、5℃±4℃で洗浄し、濾液を真空において最高70℃で濃縮した。残渣を、アセトン(3容積)中に溶解し、次に3重量/重量％の水性NaOH(10容積)を、温度を30℃以下に維持し(発熱性)、攪拌しながら液滴で投入した。生じた懸濁液を、10〜15℃に冷却し、30分間攪拌した。固形物を濾過により収集し、フィルターケーキを、予め混合した1：1のアセトン：水(1×2容積、次に3×1容積)で洗浄した。このフィルターケーキ(褐色固形物)を、真空下、70〜75℃で乾燥させ、672g(収率68％)を得た。この化合物の特徴決定は、文献において公表されたデータと一致した。
【０１７３】
（実施例2−(6α, 7α, 22E)-6,7-エポキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステル）
【化３１】
0006700274.tif 000032
EtOAc(1.0L)中の(22E)-3-オキソ-4,6,22-コラトリエン-24-酸エチルエステル(58.0g, 146.3mmol)の溶液へ、還流しながら、80％MMPP(ビス(モノペルオキシフタル酸)マグネシウム六水和物、197.0g, 約318.6mmol)を、30分間隔で、4つの等量部分で、添加した。この懸濁液を、還流しながら5時間、及び外界温度で更に16時間、激しく攪拌した。次に反応物を、加熱して還流させ、更に6時間攪拌した。この混合物を、約50℃まで冷却し、固形物を濾過し、温EtOAc(200mL)ですすいだ。濾液を、20％水性NaHSO3(100mL)、1M水性NaOH(100mL、次に200mL)及び10％水性NaCl(250mL)で続けて洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。残渣(黄色固形物)を、最小容積のEtOAcにより60℃で晶出させ、エポキシド生成物をオフホワイト/淡黄色結晶(25.7g, 収率43％, 柱状)として生じた。この化合物の特徴決定は、文献において公表されたデータと一致した。
【０１７４】
（実施例3−(6β, 7α, 22E)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステルの合成）
【化３２】
0006700274.tif 000033
（方法1：）
アルゴンブランケット下で-78℃まで冷却した、ジエチルエーテル(10mL)中のCuI(1.40g, 7.35mmol)の懸濁液へ、EtLi(28.8mL, 14.4mmol, ベンゼン/シクロヘキサン中の0.5M溶液)を投入した。形成された粘稠な白色懸濁液を、0℃まで温め、5分間攪拌し(暗色溶液を形成する)、-78℃まで冷却した。ジエチルエーテル/THF(24mL, 3：1)中の(6α, 7α, 22E)-6,7-エポキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステル(1.00g, 2.42mmol)の溶液を調製し、有機クプラートを含む容器へ投入した。THF(1mL)を使用し、エポキシドの溶液を含む容器をすすぎ、これをまた有機クプラートへ投入した。この反応混合物を、30分かけて、-4℃まで温め、その後反応を、TLC(シリカ, 1：1 EtOAc：ヘプタン)により完了させた。約-4℃で更に30分間攪拌した後、水性飽和NH4Cl溶液を投入し、この混合物を30分間攪拌した。この混合物を、分液漏斗に移し、水相を、境界面に存在する固形物質と共に、除去した。有機相を、5重量％水性NaHCO3(2×50mL)及び水(1×50mL)により洗浄した。TBME(50mL)を使用し、反応からの当初の水相及び一緒にした洗浄液を抽出した。一緒にした有機相を濃縮し、残渣を、固定相としてシリカ(25g)を使用するクロマトグラフィーにより精製し(ヘプタン中の0〜30％EtOAcで勾配溶出)、(6β, 7α, 22E)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステル(0.63g, 59％)を生じた。
【化３３】
0006700274.tif 000034
【０１７５】
【化３４】
0006700274.tif 000035
HRMS (ESI-TOF) m/z: (M+H)+ C28H43O4の計算値：443.3161；実測値：443.3156。mp＝59.4〜62.9℃。
【０１７６】
（方法2）
ZnCl2(32.84g, 240.9mmol)を、180℃でゆっくり攪拌しながら、2時間かけて、真空下で乾燥した。このフラスコを、アルゴン大気下で、室温まで冷却し、残渣をTHF(520mL)中に溶解し、カニューレにより、機械攪拌子及び温度探子を装着した三首反応フラスコへ移した。この溶液を、氷浴中で、0〜3℃まで冷却し、Et2O中のEtMgBrの3M溶液(80mL, 240.0mmol)を、内部温度を10℃以下に維持しながら、20分間かけて滴加した。約1/3のグリニャール溶液の添加後、白色沈殿(活性亜鉛酸塩種)の形成が認められた。この混合物を、0℃で1.2時間攪拌した後、THF(300mL)中のエポキシド(6α, 7α, 22E)-6,7-エポキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステル(43.0g, 104.2mmol)の溶液を、内部温度を10℃以下に維持しながら、滴加した。次に固形のCuCl(1.03g, 0.104mmol)を、2つの等量部分で、激しく攪拌しながら添加した。10分後、冷却浴を取り外し、外界温度で更に1.2時間攪拌を継続した。飽和水性NH4Cl(800mL)の＜15℃での滴加により、反応をクエンチし、且つ0.5時間攪拌した。この混合物を濾過し、固形物をTBME(150mL)ですすいだ。これらの相を分離し、水相を、TBME 2×250mLで抽出した。一緒にした有機抽出液を、10％水性NaCl(2×200mL)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、粗(6β, 7α, 22E)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステル43.7gを黄色泡状物として生じた。
【０１７７】
（方法3）
THF中のZnCl2の溶液(0.5M, 8.7mL, 4.85mmol, 0.9当量)へ、無水THF(8.0mL)を投入し、次に内容物を-25℃まで冷却した。TBME中のEtMgBrの溶液(1.0M, 8.7mL, 8.70mmol, 1.8当量)を、30分かけて添加し、この混合物を-25℃で45分間攪拌した。固形CuCl(24mg, 0.49mmol, 0.05当量)を、一気に添加し、THF(8.0mL)中の(6α, 7α, 22E)-6,7-エポキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステル(2.0g, 4.85mmol)の溶液を、30分かけて滴加した。残りの固形CuCl(24mg, 0.49mmol, 0.05当量)を、(6α, 7α, 22E)-6,7-エポキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステルの添加の途中で添加した。この反応物を、-25℃で1時間攪拌し(TLC 1：1のヘプタン：EtOAc、UVにより可視化、及びモリブデン酸セリウムアンモニウム染色を使用し発色)、その後追加のTBME中のEtMgBr(1.0M, 2.9mL, 2.91mmol, 0.6当量)を10分間かけて添加した。この反応物を、-25℃で0.5時間攪拌し、その後温度を-5℃以下に維持しながら、飽和水性NH4Cl(5mL)の添加によりクエンチした。この無機塩を濾過し、TBMEですすぎ、濾液相を分離した。水層を、TBMEで抽出し、次に一緒にした有機抽出液を、飽和水性NH4Cl(3×5mL)及び10％ブライン(3×6mL)で洗浄した。有機相を、真空において、40℃で濃縮し、粗(6β, 7α, 22E)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステルを黄色泡状物(1.91g)として生じた。
【０１７８】
（方法4）
THF中のZnCl2の溶液(0.5M, 8.7mL, 4.85mmol, 0.9当量)へ、無水THF(8.0mL)を投入し、次に内容物を40℃まで加熱した。TBME中のEtMgBrの溶液(1.0M, 8.7mL, 8.70mmol, 1.8当量)を、30分かけて添加し、この混合物を40℃で45分間攪拌した。固形CuCl(24mg, 0.49mmol, 0.05当量)を、一気に添加し、THF(8.0mL)中の(6α, 7α, 22E)-6,7-エポキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステル(2.0g, 4.85mmol)の溶液を、30分かけて滴加した。残りの固形CuCl(24mg, 0.49mmol, 0.05当量)を、(6α, 7α, 22E)-6,7-エポキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステルの添加の途中で添加した。この反応物を、40℃で1時間攪拌し(TLC 1：1のヘプタン：EtOAc、UVにより可視化、及びモリブデン酸セリウムアンモニウム染色を使用し発色)、その後飽和水性NH4Cl(5mL)の添加によりクエンチした。この無機塩を濾過し、TBMEですすぎ、濾液相を分離した。水層を、TBMEで抽出し、次に一緒にした有機抽出液を、飽和水性NH4Cl(3×5mL)及び10％ブライン(3×6mL)で洗浄した。有機相を、真空において、40℃で濃縮し、粗(6β, 7α, 22E)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステルを黄色泡状物(2.08g)として生じた。
【０１７９】
（方法5）
THF中のZnCl2の溶液(0.5M, 8.7mL, 4.85mmol, 0.9当量)へ、無水THF(8.0mL)を投入し、次に内容物を-15℃まで冷却した。THF中のEtMgBrの溶液(1.0M, 8.7mL, 8.70mmol, 1.8当量)を、30分かけて添加し、この混合物を-15℃で45分間攪拌した。固形CuCl(24mg, 0.49mmol, 0.05当量)を、一気に添加し、THF(8.0mL)中の(6α, 7α, 22E)-6,7-エポキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステル(2.0g, 4.85mmol)の溶液を、30分かけて滴加した。残りの固形CuCl(24mg, 0.49mmol, 0.05当量)を、(6α, 7α, 22E)-6,7-エポキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステルの添加の途中で添加した。この反応物を、-15℃で1時間攪拌し(TLC 1：1のヘプタン：EtOAc、UVにより可視化、及びモリブデン酸セリウムアンモニウム染色を使用し発色)、次に追加のTHF中のEtMgBr(1.0M, 4.35mL, 4.36mmol, 0.9当量)を15分かけて添加し、その後飽和水性NH4Cl(5mL)の滴加によりクエンチした。この無機塩を濾過し、TBMEですすぎ、濾液相を分離した。水相をTBMEで抽出し、次に一緒にした有機抽出液を、飽和水性NH4Cl(3×5mL)及び10％ブライン(3×6mL)で洗浄した。有機相を、真空において、40℃で濃縮し、粗(6β, 7α, 22E)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステルを黄色泡状物(1.94g)として生じた。
【０１８０】
（実施例4−(6β, 5β, 7α)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-コラン-24-酸エチルエステルの合成）
【化３５】
0006700274.tif 000036
（方法1）
DMF(2mL)中の10重量％ Pd/C(50％湿潤, 20mg, 8.6mol％)の懸濁液へ、DMF(3mL)中の(6β, 7α, 22E)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステル(50mg, 0.11mmol)の溶液を添加し、この反応混合物を、0℃まで冷却した。このフラスコを脱気し、次に激しく攪拌しながら水素を3回充填した。3時間後、フラスコを脱気し、次にアルゴンを充填し、混合物を、シリンジフィルターにより濾過した。この混合物を、TBME(30mL)とH2O(20mL)の間で分配した。有機相を乾燥させ(Na2SO4)、真空で濃縮した。粗生成物(50mg)は、(6β, 5β, 7α)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-コラン-24-酸エチルエステルの5β対5α異性体の14：1混合物(1H NMRにより分析)であり、収率92％であった。
【０１８１】
【化３６】
0006700274.tif 000037
HRMS (ESI-TOF) m/z: (M-H2O+H)+ C28H45O3の計算値：429.3369；実測値：429.3363。
【０１８２】
（方法2）
(6β, 7α, 22E)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステル(20.0g)を、DMF(400mL)中に溶解し、アルゴン下で、固形10重量％Pd/C(50％湿潤、10.0g)へ添加した。この混合物を、氷-塩浴内でおよそ-15℃まで冷却し、フラスコを脱気し、次に激しく攪拌しながら水素を3回充填した。この混合物を水素大気下で6時間攪拌し、次にフラスコを脱気し、アルゴンを充填し、セライトパッドを通して濾過した。触媒を、400mLのTBMEですすいだ。濾液を、10％水性NaCl(400mL)で洗浄し、水相をTBME(400mL)で抽出した。一緒にした有機相を、10％水性NaCl(3×200mL)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、粗(6β, 5β, 7α)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-コラン-24-酸エチルエステル(20.0g、5Hβ：5Hαの比約28：1)の淡黄色油状物を生じた。
【０１８３】
（方法3）
10％Pd/Cを、ステンレス鋼製ジャケット付き反応容器へ、アルゴン大気下で投入し：DMFを添加し(20mL)、引き続きDMF(130mL)中の実施例3由来の粗(6β, 7α, 22E)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステル(およそ72.6mmol)の溶液を添加した。この反応混合物を、激しく攪拌(1200rpm)しながら、-25℃まで冷却した(およそ40分かけて)。反応容器を脱気し、水素(10〜12bar)を3回投入した。この混合物を、水素大気(10〜12bar)下で16時間攪拌した。容器を脱気し、アルゴンを掃流し、攪拌しながら20℃まで温めた。反応混合物のTLC(1：1ヘプタン：EtOAc、モリブデン酸セリウムアンモニウム又はバニリン浸漬を使用し発色、Rf値：出発材料＝0.42、生成物＝0.67)は、出発材料の完全な消費を示した。この懸濁液を、CH3CN(120mL)及びH2O(30mL)で希釈し、懸濁液を、二重のGFA濾紙により濾過し、フィルターケーキをCH3CN(60mL)ですすいだ。混合物を、更に精製することなく次工程に移した(telescoped)。混合物は、およそ5％の5Hα異性体を含んでいた。
【０１８４】
（最適化）
この実施例の水素化反応は、以下に示した中間体を介して進行し、且つ必要とされる5Hβ化合物及びその5Hα異性体の両方を生成する。溶媒及び触媒のスクリーニングを、最高収率及び5Hβ異性体の5Hα異性体に対する最高比に繋がる反応条件を決定するために、実行した。
【化３７】
0006700274.tif 000038
【０１８５】
溶媒スクリーニングは、10重量％Pd/C触媒を用いて実行し、且つ反応は、水素大気圧下で、室温で試行した。NEt3の存在下、MeOH中で試行した反応は、純MeOH中で試行した反応よりも、より選択的であったのに対し、10％H2Oの添加は、5βHの選択性を低下した。DMF中の反応は、最良のβ：α比をもたらした。ピリジン中の反応は、混合物中に主に出発材料及び中間体が存在し、必要な生成物への変換は悪かった。
【０１８６】
【表１】
0006700274.tif 000039
【０１８７】
DMF及びMeOH中の反応を、ある範囲の温度で試験した。DMF中で試行した反応に関して、温度は、選択性に対し実質的影響を有する(選択性は、温度が上昇するにつれて減少する)のに対し、MeOH中の反応は、ほとんど差異が認められなかった。
【０１８８】
DMF及びMeOH中の反応を、市販の炭素、炭酸カルシウム、硫酸バリウム及び酸化アルミニウム支持体上に担持されたPd触媒の5重量％及び10重量％の範囲で試験した。
【０１８９】
これらの反応は、大気圧の水素ガス下で、-15℃で、10容積の溶媒中で試行した。DMF中で試行した反応に関して、圧力は、温度よりも、選択性に対する影響が少なかった。選択性に対する希釈の作用は、無視できるものである。
【０１９０】
（実施例5から14−デオキシコール酸からの(6β, 5β, 7α)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-コラン-24-酸エチルエステルの合成）
（実施例5−(3α, 5β)-3-アセトキシ-12-オキソ-コラン-24-酸メチルエステルの合成）
【化３８】
0006700274.tif 000040
【０１９１】
MeOH(1.5L)中のデオキシコール酸(500g, 1.27mol)の溶液へ、H2SO4(0.68mL, 12.7mmol)を投入し、反応が完了するまで、64℃で加熱した。この反応物を55℃まで冷却し、ピリジン(2.06mL, 25.4mmol)を投入した。MeOH(800mL)を、蒸留により除去し、反応物を50℃まで冷却した。EtOAc(500mL)を投入し、蒸留を継続した。この共蒸発を、MeOH含量が＜0.5％となるまで繰り返した。この反応物を40℃まで冷却し、EtOAc(1.0L)を投入し、引き続きピリジン(134mL, 1.65mol)及びDMAP(1.1g, 8.89mmol)を投入した。無水酢酸(150mL, 1.58mmol)を滴加し、反応容器を、完了するまで、40℃で攪拌した。この反応物を、22℃まで冷却し、温度を25℃以下に維持しながら、2M水性H2SO4(1500mL)を添加した。水相を除去し、有機相を、水(1.2L)、飽和水性NaHCO3溶液(1.2L×2)及び水(1.2L)で洗浄した。この有機層へ、AcOH(1.0L)を、引き続きNaBr(6.6g, 63.5mmol)を投入した。水性の16.4％NaOCl溶液(958mL, 2.54mol)を、反応温度を25℃以下に維持しながら、液滴で投入した。反応が完了するまで攪拌し、次に10℃まで冷却し、90分間攪拌した。得られた固形物を、濾過により収集し、水(3×500mL)で洗浄し、フィルターケーキを、真空下、40℃で乾燥させた。固形物を、MeOH(10容積)から晶出させ、(3α, 5β)-3-アセトキシ-12-オキソ-コラン-24-酸メチルエステルをオフホワイトの固形物(268g)として生じた。
【０１９２】
（実施例6−(3α, 5β)-3-アセトキシ-コラン-24-酸メチルエステルの合成）
【化３９】
0006700274.tif 000041
【０１９３】
(3α, 5β)-3-アセトキシ-12-オキソ-コラン-24-酸メチルエステル(268g, 0.6mol)を、アルゴン下で、反応容器に投入し、引き続きAcOH(1.8L)を投入した。次にトシルヒドラジド(190g, 1.02mol)を、反応温度を25℃に維持しながら、添加した。反応が完了するまで、攪拌し、次に温度を25℃以下に維持しながら、NaBH4(113.5g, 3.00mol)を、少量ずつ投入した。反応混合物を、完了するまで攪拌し、次に温度を25℃以下に維持しながら、水(1.34L)を滴加することにより、クエンチした。反応混合物を30分間攪拌し、生じる固形物を濾過により収集し、水(3×270mL)で洗浄し、固形物を、真空下、40℃で乾燥させた。固形物を、MeOH(3容積)から晶出させ、(3α, 5β)-3-アセトキシ-コラン-24-酸メチルエステルをオフホワイトの固形物(214.5g)として生じた。
【０１９４】
（実施例7−(3α, 5β)-3-ヒドロキシ-コラン-24-酸(リトコール酸)の合成）
【化４０】
0006700274.tif 000042
【０１９５】
IPA(536mL)中の(3α, 5β)-3-アセトキシ-コラン-24-酸メチルエステル(214.5g, 0.50mol)の溶液へ、水(536mL)及び50重量％NaOH(99g, 1.24mol)を投入した。この反応物を、50℃まで加熱し、完了するまで攪拌した。pH2〜3が得られるまで、激しく攪拌しながら、2M H2SO4をゆっくり投入し、次にこの反応物を、20℃まで冷却した。生じる固形物を、濾過により収集し、水(3×215mL)で洗浄し、生じた固形物を、真空下、40℃で乾燥させ、(3α, 5β)-3-ヒドロキシ-コラン-24-酸(176.53g)を生じた。
【０１９６】
（実施例8−(5β)-3-オキソコラン-24-酸エチルエステルの合成）
【化４１】
0006700274.tif 000043
【０１９７】
EtOH(50mL)中の(3α, 5β)-3-ヒドロキシ-コラン-24-酸(10g, 26.5mmol)の溶液へ、96％H2SO4(14μL, 0.27mmol)を投入し、次に反応混合物を加熱して16時間還流させた。次にピリジンを投入し、この混合物を30分間攪拌し、真空において、40℃で、濃縮した。残渣を、EtOAc(30mL)及びAcOH(10mL)に溶解し、且つ次にNaBr(136mg, 1.33mmol)を投入した。この溶液を、5℃まで冷却し、9％NaOCl(27mL, 39.8mmol)を温度を10℃以下に維持しながら、液滴で投入した。生じる懸濁液を、外界温度まで温め、1時間攪拌した。反応混合物を、0℃で10分間冷却し、固形物を濾過により収集し、水(3×3容積)で洗浄した。生じた固形物を、真空下、40℃で乾燥させ、(5β)-3-オキソコラン-24-酸エチルエステル(7.83g)を生じた。
【０１９８】
（実施例9−(4α, 5β)-3-オキソ-4-ブロモ-コラン-24-酸エチルエステルの合成）
【化４２】
0006700274.tif 000044
【０１９９】
AcOH(84mL)中の(5β)-3-オキソコラン-24-酸エチルエステル(8.0g, 19.9mmol)の溶液へ、AcOH中のBr2(16mL, 21.9mmol)を、15分間かけて滴加した。この反応混合物を10分間攪拌し、次にEtOAc(250mL)で希釈し、水(2×200mL)で洗浄し、真空において、40℃で濃縮した。この粗物質を、カラムクロマトグラフィー(30％ヘプタン：EtOAc)により精製し、真空において、40℃で濃縮し、(4α, 5β)-3-オキソ-4-ブロモ-コラン-24-酸エチルエステルを淡色結晶固形物(7.49g)として生じた。
【０２００】
（実施例10−3-オキソ-4-コレン-24-酸エチルエステルの合成）
【化４３】
0006700274.tif 000045
【０２０１】
DMF(40mL)中の(4α, 5β)-3-オキソ-4-ブロモ-コラン-24-酸エチルエステル(4.0g, 8.33mmol)の溶液へ、Li2CO3(4.0g, 1質量当量)及びLiBr(2.0g, 0.5質量当量)を投入した。この混合物を、150℃で2時間加熱し、次に外界温度まで冷却させ、水及び氷の混合物(200g, 50容積)及びAcOH(8mL)へと注いだ。生じる懸濁液を15分間攪拌し、固形物を濾過により収集し、次にカラムクロマトグラフィー(30％ヘプタン：EtOAc)により精製し、3-オキソ-4-コレン-24-酸エチルエステルを淡色結晶固形物(1.68g)として生じた。
【０２０２】
（実施例11−3-オキソ-4,6-コラジエン-24-酸エチルエステルの合成）
【化４４】
0006700274.tif 000046
【０２０３】
3-オキソ-4-コレン-24-酸エチルエステル(2.23g, 5.57mmol)を、反応容器に投入し、引き続きAcOH(6.7mL)及びトルエン(2.23mL)を投入した。クロルアニル(1.5g, 6.13mmol)を投入し、この反応混合物を100℃で2時間加熱した(TLCによるIPC、3：7 EtOAc：ヘプタン；アニスアルデヒド染色による可視化)。反応混合物を、10℃で10分間冷却し、生じる固形物を濾過により除去した。フィルターケーキを、DCM(9容積)で洗浄し、その後生じる濾液を、真空において、40℃で濃縮した。残渣を、アセトン(9容積)中に溶解し、次に3重量％水性NaOH(27容積)を、温度を30℃以下に維持しながら、滴加した。得られる混合物を、氷浴中で10分間冷却し、固形物を濾過により収集した。フィルターケーキを、水(2×9容積)及びアセトン：水 2：1(4容積)で洗浄した。カラムクロマトグラフィーによる精製(0〜30％ヘプタン：EtOAc)は、3-オキソ-4,6-コラジエン-24-酸エチルエステルを、淡色結晶固形物(1.45g)として生じた。
【０２０４】
（実施例12−(6α, 7α)-6,7-エポキシ-3-オキソ-4-コレン-24-酸エチルエステルの合成）
【化４５】
0006700274.tif 000047
【０２０５】
3-オキソ-4,6-コラジエン-24-酸エチルエステル(1.37g, 4.27mmol)を、反応容器に投入し、引き続き攪拌しながら、BHT(23mg, 0.13mmol)、EtOAc(11mL)及び水(3.4mL)を投入した。この溶液を、80℃まで加熱し、次にEtOAc(7.5mL)中のmCPBA 70％(1.5g, 7.51mmol)の溶液を、15分間かけて滴加した。反応混合物を、70℃で2時間攪拌し(TLCによるIPC、3：7 EtOAc：ヘプタン；アニスアルデヒド染色による可視化)、外界温度まで冷却し、次に1M水性NaOH(2×20mL)、引き続き10％水性NaS2O3：2％NaHCO3(3×20mL)により洗浄した。有機相を、Na2SO4上で乾燥させ、真空において、40℃で濃縮した。粗固形物を、EtOAc(3容積)から、60℃で晶出させ、オフホワイトの固形物を生じ、これを真空下、40℃で乾燥させ、(6α, 7α)-6,7-エポキシ-3-オキソ-4-コレン-24-酸エチルエステル(0.90g)を生じた。
【０２０６】
（実施例13−(6β,7α)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-4-コレン-24-酸エチルエステルの合成）
【化４６】
0006700274.tif 000048
【０２０７】
ZnCl2(600mg, 4.25mmol)を、反応容器へ投入し、真空下、180℃で1時間乾燥させた。この反応容器を外界温度まで冷却し、THF(15mL)を投入し、反応容器の内容物を、3℃まで冷却した。Et2O中の3M EtMgBr(1.5mL, 4.25mmol)の溶液を、反応容器へ、温度を5℃以下に維持しながら、40分かけて投入した。次にこの反応混合物を、1時間攪拌した。THF(6mL)中の(6α, 7α)-6,7-エポキシ-3-オキソ-4-コレン-24-酸エチルエステル(0.80g, 1.93mmol)を、温度を5℃以下に維持しながら、この反応容器へ、40分かけて投入した。CuCl(20mg, 0.19mmol)を、一気に投入し、反応物を、外界温度で16時間攪拌した(TLCによるIPC、3：7 EtOAc：ヘプタン；アニスアルデヒド染色による可視化)。反応混合物を、氷浴中で冷却し、飽和水性NH4Clを、温度を10℃以下に維持しながら、滴加した。反応混合物を濾過し、フィルターケーキを、TBME(12.5容積)で洗浄した。濾液の有機相を分離し、水相を、TBME(2×12.5容積)で抽出した。一緒にした有機相を、5％NaCl(3×12.5容積)で洗浄し、真空において、40℃で濃縮した。
【０２０８】
（実施例14−(6β, 5β, 7α)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-コラン-24-酸エチルエステルの合成）
【化４７】
0006700274.tif 000049
【０２０９】
10％Pd/C(70mg)を、アルゴン大気下、反応容器へ投入し、引き続きDMF(14.6mL)中の実施例13からの粗物質を投入した。この混合物を、-10℃まで冷却し、反応容器を脱気し、その後激しく攪拌しながら、水素を3回充填した。この混合物を、温度を-10℃で維持しながら、水素大気下で24時間攪拌し(TLCによるIPC、溶離液1：1 EtOAc：ヘプタン；アニスアルデヒド染色による可視化)、次にフラスコを脱気し、アルゴンを充填し、セライトパッドを通して濾過し、DMF(7mL)ですすいだ。10％Pd/C(70mg)を、アルゴン大気下で、反応容器へ再投入し、引き続きDMF反応混合物を投入した。この混合物を、およそ-10℃まで冷却し、反応容器を脱気し、その後激しく攪拌しながら水素を3回充填した。この混合物を、水素大気下で、-10℃で、24時間攪拌し(TLCによるIPC、1：1 EtOAc：ヘプタン；アニスアルデヒド染色による可視化)、その後フラスコを脱気し、アルゴンを充填し、セライトパッドを通して濾過し、TBME(62.5容積, 50mL)で洗浄した。濾液を、10％水性NaCl(4×25容積)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、真空において、40℃で濃縮した。カラムクロマトグラフィー(SiO2、0〜30％ヘプタン：EtOAc)による精製は、(6β, 5β, 7α)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-コラン-24-酸エチルエステル(0.17g)を生じた。この生成物は、植物起源から得られた物質(6β, 7α, 22E)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸エチルエステル(実施例4参照)と同一であった。
【０２１０】
（実施例15から17−(6β, 5β, 7α)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-コラン-24-酸エチルエステルの(3α, 5β, 6α, 7α)-6-エチル-3,7-ジヒドロキシ-コラン-24-酸への変換）
（実施例15−(6β, 5β)-3,7-ジオキソ-6-エチル-コラン-24-酸エチルエステルの合成）
【化４８】
0006700274.tif 000050
【０２１１】
（方法1）
H2SO4(1.4mL)中のCrO3(1.10g, 11mmol)から調製し水で5mLとしたジョーンズ試薬の溶液を、アセトン(10mL)中の(6β, 5β, 7α)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-コラン-24-酸エチルエステル(0.18g, 0.40mmol)の溶液へ、オレンジ色が持続するまで、液滴により投入した。反応混合物を、IPA(1mL)によりクエンチし、0.45μmナイロンシリンジフィルターを通して濾過し、フィルターをアセトン(10mL)により洗浄した。一緒にした濾液と洗浄液を濃縮し、残渣をEtOAc(20mL)に溶解し、水(2×10mL)で洗浄した。水相を、EtOAc(20mL)により抽出し、一緒にしたEtOAc相を濃縮し、残渣を溶解し、トルエン(20mL)、次にアセトン(20mL)から濃縮し、(6β, 5β, 7α)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3,7-ジオキソ-コラン-24-酸エチルエステル(185mg)を含有する透明な油状物を得た。
【化４９】
0006700274.tif 000051
HRMS (ESI-TOF) m/z: (M+H)+ C28H45O4の計算値：445.3318；実測値：445.3312；
【０２１２】
（方法2）
無水CH2Cl2(600mL)中の(6β, 5β, 7α)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-コラン-24-酸エチルエステル(41.0g 粗質量)の溶液へ、0℃で、固形DMP(34.0g, 80.2mmol)を少量ずつ、20分かけて添加した(発熱性)。この混合物を、0〜5℃で2時間攪拌し、その後DMP(4.0g, 9.4mmol)の更なる部分を添加し、反応物を0〜5℃で1時間攪拌した。この混合物を、GFAフィルターを通して濾過し、固形物をCH2Cl2(50mL)ですすぎ、濾液を、10％水性Na2S2O3及び2％水性NaHCO3(100mL)と共に、20分間激しく攪拌した。これらの相を分離し、水相(aq.)を、CH2Cl2(2×100mL)により抽出した。一緒にした有機抽出液を、1M NaOH(100mL)により洗浄した。この混合物を、CH2Cl2(300mL)で希釈し、相を分離した。有機層を、減圧下で濃縮し、残渣(濁った茶色の油状物)を、TBME(600mL)中に溶解し、1M NaOH(100mL)及びNaCl(3×100mL)により洗浄した。有機相を、真空において濃縮し、粗質量38.1gの暗黄色の粘性の低い油状物を生じた。この油状物を、EtOH(400mL)に溶解し、活性炭(10g)と共に50℃で攪拌し、その後この混合物を濾過し、活性炭をEtOH(200mL)ですすぎ、濾液を真空において濃縮し、(6β, 5β)-3,7-ジオキソ-6-エチル-コラン-24-酸エチルエステルを黄色油状物(35.9g)として得た。
【０２１３】
（方法3）
DMF(450ml)、CH3CN(540mL)及びH2O(90mL)中の(6β, 5β, 7α)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-コラン-24-酸エチルエステル(218mmol)の溶液を、2L容器の中に投入し、9℃に冷却し、次にAcOH(180mL)を投入し、引き続きNaBr(4.1g)を投入した。ナトリウムヒポクロリット(〜10.5重量/容量％, 450mL)の溶液を、内部温度を5〜6℃に維持しながら、1.5時間かけて滴加し、次に混合物を7℃で5時間攪拌した。反応混合物のTLCは、出発材料の完全な消費を示した(TLCによるIPC、溶離液EtOAc/ヘプタンの3：7；(6β, 5β, 7α)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-コラン-24-酸エチルエステルに関するRf＝0.34：(6β, 5β)-3,7-ジオキソ-6-エチル-コラン-24-酸エチルエステルに関するRf＝0.45)。水性10重量/容量％Na2SO3(360mL)の溶液を、激しく攪拌し、内部温度を8〜10℃に維持しながら、液滴で投入し、次にH2O(270mL)を滴加し、この混合物を、5℃で16時間攪拌した。固形物を濾過し、H2O(720mL)により洗浄した。この固形物を次に、TBME(1.1L)中に溶解し、引き続き水性NaHCO3(300mL)及び10％ブライン(300mL)により洗浄した。次に有機相を、活性炭(10g)と共に、40℃で20分間攪拌し、無水MgSO4(5g)により処理し、GFA濾紙により濾過し、フィルターケーキを、TBME(50mL)によりすすぎ、濾液を真空において濃縮し、(6β, 5β)-3,7-ジオキソ-6-エチル-コラン-24-酸エチルエステルを明茶色油状物として得、これを静置して固化させた(82.7g)。
【０２１４】
（実施例16−(6α, 5β)-3,7-ジオキソ-6-エチル-コラン-24-酸の合成）
【化５０】
0006700274.tif 000052
【０２１５】
500mLフラスコへ、0.5M NaOH(9mL)の0.5容積、引き続き実施例15からの(6β, 5β)-3,7-ジオキソ-6-エチル-コラン-24-酸エチルエステル(18.00g, 1当量)、次にIPA(180mL, 10容積)を投入した(最初のNaOH投入は、C3-ケタール形成の可能性を回避するためであった)。この混合物を、60±2℃まで温め、溶液が得られるまで静置した(10〜15分間)。残りの0.5M NaOH溶液(171mL, 9.5容積)を、20分間かけて投入し、次にこの反応物を、更に3.5時間、60±2℃で攪拌した。IPAを、真空下、60℃で除去し、次に2M HCl(8mL)を、pH9となるまで投入した。EtOAcを、投入し(90mL, 5容積)、引き続き2M HCl(54mL)をpH1となるまで投入した。激しく混合し、続けて相分離させた。水相を、追加のEtOAc(90mL, 5容積)により逆抽出し、次に一緒にした有機相を、水(54mL, 3容積)、引き続き10％水性NaCl(3×54mL, 3×3容積)の3つの部分で洗浄した。有機相を、活性炭(100メッシュ粉末、3.37g、〜0.20質量当量)で12分間処理し、次にGF/Bを通して濾過した。真空における50℃での濃縮は、(6α, 5β)-3,7-ジオキソ-6-エチル-コラン-24-酸を、定量的収量で明黄色泡状物として生じた。
【０２１６】
【化５１】
0006700274.tif 000053
【０２１７】
【化５２】
0006700274.tif 000054
HRMS (ESI-TOF) m/z: (M+H)+ C26H41O4に関する理論値：417.3005；実測値：417.2997；mp＝71.2〜75.9℃。
【０２１８】
（実施例17−(3α, 5β, 6α, 7α)-6-エチル-3,7-ジヒドロキシ-コラン-24-酸の合成）
【化５３】
0006700274.tif 000055
【０２１９】
H2O(260mL)及び50％NaOH(15.2mL)中の粗(6α, 5β)-6-エチル-3,7-ジオキソ-コラン-24-酸(21.7g 粗質量)の溶液へ、90℃で、水性NaOH(25mLのH2O及び0.8mLの50％NaOHから調製)中のNaBH4(4.4g, 116.3mmol)の溶液を滴加した。この混合物を、加熱して還流させ、3時間攪拌した。次に混合物を60℃まで冷却し、HClの2M溶液(200mL)を、激しく攪拌しながら滴加した。次にnBuOAc(100mL)を、この反応フラスコへ投入し、この混合物を更に20分間攪拌した。これらの相を分離し、水相(pH＝1/2)を、nBuOAc (100mL)により抽出した。一緒にした有機相を、2M HCl(50mL)及び10％水性NaCl(100mL)で洗浄した。有機溶媒を、減圧下、70〜80℃で蒸留除去した。残渣(濃厚な油状物)を、nBuOAc(60mL)中に70℃で溶解させ、穏やかに室温まで冷却し、次に6℃で2時間貯蔵した。この固形物を、濾過により収集し、冷nBuOAc(20mL)によりすすぎ、その後真空下、70℃で5時間乾燥させ、(3α, 5β, 6α, 7α)-6-エチル-3,7-ジヒドロキシ-コラン-24-酸を白色固形物(8.2g)として得た。 
本件出願は、以下の構成の発明を提供する。
（構成１）
一般式(I)の化合物、又はそれらの塩もしくは同位体変種：
（化１）
0006700274.tif 000056
（式中：
R1は、ハロ、OR6又はNR6R7から選択された1以上の置換基により任意に置換されたC1-4アルキルであり；
ここで、R6及びR7の各々は、H又はC1-4アルキルから独立して選択され；
R2は、H、ハロ、又はOH又は保護されたOHであり；
Yは、結合、又は炭素原子1〜20個を有し、及び1以上の基R3により任意に置換された、アルキレン、アルケニレンもしくはアルキニレンリンカー基であり；
各R3は、独立して、ハロ、OR8又はNR8R9であり；
ここで、R8及びR9の各々は、H又はC1-4アルキルから独立して選択され；並びに
R4は、C(O)OR10、OC(O)R10、C(O)NR10R11、OR10、OSi(R13)3、S(O)R10、SO2R10、OSO2R10、SO3R10、又はOSO3R10であり；
ここで、各R10及びR11は、独立して：
a.  水素、あるいは、
b.  そのいずれかは、ハロ、NO2、CN、OR19、SR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2、又はそのいずれもC1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、ハロ、NO2、CN、OR19、SR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2により任意に置換されている6〜14-員のアリールもしくは5〜14-員のヘテロアリール基から選択された1以上の置換基により任意に置換されている、C1-20アルキル、C2-20アルケニル、C2-20アルキニル、-O-C1-20アルキル、-O-C2-20アルケニル、又は-O-C2-20アルキニル；あるいは、
c.  そのいずれも、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、ハロ、NO2、CN、OR19、SR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2から選択された1以上の置換基により任意に置換されている、6〜14-員のアリールもしくは5〜14-員のヘテロアリール基；
d.  ポリエチレングリコール残基：であり；
各R19は、H、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、又はそのいずれも、ハロ、C1-6アルキルもしくはC1-6ハロアルキルにより任意に置換されている、6〜14-員のアリール、もしくは5〜14-員のヘテロアリール基から、独立して選択され；
各R13は、独立して、
a.  ハロ、NO2、CN、OR19、SR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2、そのいずれもC1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、ハロ、NO2、CN、OR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2により任意に置換されている6〜14-員のアリールもしくは5〜14-員のヘテロアリール基から選択された1以上の置換基により任意に置換されたC1-20アルキル、C2-20アルケニル、又はC2-20アルキニル；あるいは、
b.  そのいずれも、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、ハロ、NO2、CN、OR19、SR19、SO2R19、SO3R19もしくはN(R19)2から選択された1以上の置換基により任意に置換されている、6〜14-員のアリール又は5〜14-員のヘテロアリール基：であり、
各R19は、H、C1-6アルキル、又はC1-6ハロアルキルから独立して選択され；
R5は、H又はOH又は保護されたOHである。）。
（構成２）
一般式(I)の化合物が、一般式(IA)の化合物である、構成１記載の化合物：
（化２）
0006700274.tif 000057
（式中、R1、R2、Y、R4及びR5は、一般式(I)について定義したものである。）
（構成３）
前記R1が、エチルである、構成1又は2記載の化合物。
（構成４）
前記Yが、炭素原子1〜8個を有し、且つ1以上の基R3により任意に置換されている、アルキレン又はアルケニレンリンカー基であり、ここでR3は構成1に定義されている、構成1〜3のいずれか１記載の化合物。
（構成５）
独立して又はいずれかの組合せにおいて：
前記Yが、結合、又は炭素原子1〜3個を有し、且つ1又は2個のR3基により任意に置換されているアルキレンもしくはアルケニレン基であり；
R4が、C(O)OR10、SO3R10、又はOSO3R10であり、ここでR10は、先に定義したものであるがより好適にはH、C1-6アルキル又はベンジルであり；並びに
R5が、H又はOHである、構成1〜4のいずれか１記載の化合物。
（構成６）
独立して又はいずれかの組合せにおいて：
前記R1が、エチルであり；及び／又は
R2が、Hであり；及び／又は
Yが、結合、-CH2-、-CH2CH2-、-CH=CH-又は-CH=C(CH3)-であり；及び／又は
R4が、C(O)OR10であり、ここでR10は、H、C1-6アルキルもしくはベンジルであり；及び／又は
R5が、Hである、構成5記載の化合物。
（構成７）
前記R1がエチルであり、及び／又はR10がC1-6アルキルもしくはベンジルである、構成6記載の化合物。
（構成８）
(6β, 7α, 22E)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-4,22-コラジエン-24-酸；
(6β, 7α)-6-エチル-7-ヒドロキシ-3-オキソ-4-コレン-24-酸；
並びにそれらのC1-6アルキルエステル及びベンジルエステル、並びにそれらの塩、特にメチルエステル及びエチルエステルから選択される、構成1記載の化合物。
（構成９）
A.  一般式(II)の化合物：
（化３）
0006700274.tif 000058
（式中、R2、R4、R5及びYは、構成1に定義したものである）；
の、有機金属試薬との選択的アルキル化；又は
B.  一般式(I)の化合物の別の一般式(I)の化合物への変換；
のどちらかを含む、構成1〜8のいずれか１記載の化合物の製造方法。
（構成１０）
前記工程(A)において、有機金属試薬が、式(XXIV)のアルキルリチウム化合物：
R1-Li          (XXIV)
（式中、R1は、一般式(I)に定義したものである）；
と、銅(I)塩、特にヨウ化銅(I)などの、ハロゲン化銅(I)の反応により形成された、ギルマン試薬であるか；又は
前記有機金属試薬が、グリニャール試薬R1MgX（式中、R1は、一般式(I)に定義したものであり、及びXは、ハロゲン化物である）であり、並びにここで反応は、例えば塩化亜鉛などの亜鉛(II)塩、及び触媒量の銅(I)もしくは銅(II)塩又は錯体の存在下で実行される、構成9記載の方法。
（構成１１）
一般式(XVIII)の化合物：
（化４）
0006700274.tif 000059
の製造方法であって：
（式中、R1及びR4は、構成1において一般式(I)に定義したものであり；
R2は、H、ハロ、又はOHであり；R5aは、H又はOHであり；並びに
Y1は、結合、又は炭素原子1〜6個を有し、及び1以上の基R3により任意に置換された、アルキレンリンカー基であり；ここで、R3は、構成1において一般式(I)に定義したものである）；
i.  構成1〜8のいずれか１記載の化合物を、好適な還元剤を使用し還元し、一般式(XIX)の化合物を生じること：
（化５）
0006700274.tif 000060
（式中、R1、R2、R4及びR5は、構成1において一般式(I)に定義したものであり；並びに
Y1は、一般式(XVIII)に定義したものである）；
ii.  一般式(XIX)の化合物を、好適な酸化剤を使用し酸化し、一般式(XX)の化合物を生じること：
（化６）
0006700274.tif 000061
（式中、R1、R2、R4及びR5は、構成1において一般式(I)に定義したものであり；並びに
Y1は、一般式(XVIII)に定義したものである）；
iii.  一般式(XX)の化合物をエピマー化し、一般式(XXI)の化合物を生じること：
（化７）
0006700274.tif 000062
（式中、R1及びR4は、構成1において一般式(I)に定義したものであり；並びに
Y1は、一般式(XVIII)に定義したものであり；
R2は、H、ハロ又はOH又は塩基性条件下で安定している保護されたOH基であり；並びに
R5bは、H又はOH又は塩基性条件下で安定している保護されたOH基である）；
(iv)  一般式(XXI)の化合物を、好適な還元剤を使用し還元し、並びにここで、R2及び／又はR5bが、保護されたOHである場合、この保護基(複数可)を除去し、先に定義した一般式(XVIII)の化合物を生じ、ここで保護基の除去は、還元の前又は後に行うことができること；並びに任意に
(v)  一般式(XVIII)の化合物を別の一般式(XVIII)の化合物へ変換すること：を含む、製造方法。
（構成１２）
前記工程(i)において、一般式(I)の化合物の一般式(XIX)の化合物への変換のための還元剤が、パラジウム/炭素、パラジウム/炭酸カルシウム、パラジウム/酸化アルミニウム、白金/パラジウム又はラネーニッケル触媒の存在下での、水素である、構成11記載の方法。
（構成１３）
前記工程(i)において、溶媒が、メタノール、エタノール又はイソプロパノールなどのアルコール系溶媒；酢酸エチル；ピリジン；酢酸；シクロペンチルメチルエーテル(CPME)又はN,N-ジメチルホルムアミド(DMF)であり、そのいずれかは任意に、アセトンもしくは水などの共溶媒及び／又はトリエチルアミンなどの塩基と混合されてよい、構成11又は12記載の方法。
（構成１４）
前記工程(ii)において、酸化反応が、デス-マーチンペルヨージナン(1,1,1-トリアセトキシ-1,1-ジヒドロ-1,2-ベンゾヨードキソール)；酸性条件下での、ヒポクロリット、例えば、ナトリウムヒポクロリット；希硫酸中の二クロム酸ナトリウム、もしくはより通常は三酸化クロムを使用する、ジョーンズ反応；又は、TEMPO((2,2,6,6-テトラメチル-ピペリジン-1-イル)オキシ)又はその誘導体を用いて実行される、構成11〜13のいずれか１記載の方法。
（構成１５）
前記工程(iii)のエピマー化反応において、一般式(XX)の化合物が、任意に水と混合された、アルコール系溶媒中に溶解され、且つ塩基、例えば水酸化ナトリウムもしくは水酸化カリウム、又はナトリウムもしくはカリウムアルコキシド、典型的にはエトキシドと接触される、構成11〜14のいずれか１記載の方法。
（構成１６）
前記一般式(XX)の化合物において、R4が、C(O)OR10であり、塩基が、水酸化ナトリウム又は水酸化カリウムであり、且つエピマー化が、加水分解を伴って一般式(XXI)の化合物(式中、R4は、C(O)OHである)を生じるか；並びに／又は
一般式(XX)の化合物において、R2及び／又はR5は、基OC(O)OR14であり、ここでR14は、C1-6アルキルもしくはベンジルであり；並びに、エピマー化工程は、一般式(XXI)の化合物（式中、R2及び／又はR5bはOHである）を生じるか；あるいは、
一般式(XX)の化合物において、R2及び／又はR5は、塩基性条件下で安定している保護されたOHであり、並びに、工程(iv)の前又は後に保護基を除去する工程を更に含む、構成15記載の方法。
（構成１７）
前記工程(iv)において、還元剤が、水素化ホウ素ナトリウムなどの水素化物である、構成11〜16のいずれか１記載の方法。
（構成１８）
一般式(XVIII)の化合物(式中、R1はエチルであり、R2及びR5aは両方共Hであり、Y1は-CH2CH2-であり、並びにR4はC(O)OHである)の製造のための、構成11〜17のいずれか１記載の方法。