(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
0006723264.tif 000038
の化合物、および／またはその薬学的に許容される塩
（式中、Ｒはハロゲン、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＨ３またはＣＮであり；およびＡは、ハロ−（Ｃ１〜６−アルキル）、ハロ−（Ｃ１〜３−アルキル）オキシ（Ｃ２〜４−アルキル）、またはハロ−（Ｃ１〜３−アルキル）オキシ（Ｃ２〜４−アルキル）オキシ（Ｃ２〜４−アルキル）から選択される少なくとも１つの置換基で置換されたピリジニル基またはオキサゾリル基である）。
【請求項２】
Ｒがハロゲンである、請求項１に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
Ａが１８Ｆ、１９Ｆ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２７Ｉまたは１３１Ｉの少なくとも１つを含有する、請求項１に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
【化２−１】
0006723264.tif 000039
【化２−２】
0006723264.tif 000040
からなる群から選択される化合物、および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
３Ｈ、１８Ｆ、１１Ｃまたは１４Ｃから選択される少なくとも１つの原子を含む、請求項４に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
請求項３または５に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む組成物であって、前記組成物は、
（ｉ）必要のあると認められた対象に、請求項３または５に記載の放射性標識された化合物またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと；
（ｉｉ）前記化合物の取り込みをインビボのＰＥＴイメージングまたはＳＰＥＣＴイメージングにより検出するステップとを含む、
前記対象においてオートタキシンを検出するための、方法において用いられる、組成物。
【請求項７】
請求項３または５に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む組成物であって、前記組成物は、
（ｉ）対象に、請求項３または５に記載の放射性標識された化合物またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと；
（ｉｉ）ステップ（ｉ）で投与された前記放射性標識された化合物の取り込みをインビボのＰＥＴイメージングまたはＳＰＥＣＴイメージングにより検出するステップと；
（ｉｉｉ）ステップ（ｉ）で投与した化合物が放射性崩壊してしまうように適切な時間量を経過させるステップと；
（ｉｖ）（ａ）放射性標識されていないオートタキシンリガンドの、または（ｂ）オートタキシン基質の内因性レベルに影響する放射性標識されていない薬剤のいずれかの有効量を、ステップ（ｉ）で規定の放射性標識された化合物またはその薬学的に許容される塩の同時投与をともなって投与するステップと；
（ｖ）ステップ（ｉｖ）で投与した前記化合物の取り込みを、インビボのＰＥＴイメージングまたはＳＰＥＣＴイメージングにより、検出するステップとを含む、
オートタキシンに結合するリガンドの投与後に前記対象における非結合オートタキシンの百分率または百分率の変化を定量化するための、方法において用いられる、組成物。
【請求項８】
請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物の少なくとも１つまたはその薬学的に許容される塩を含む、組成物。
【請求項９】
ＰＥＴイメージングでの使用に適する、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
【化３】
0006723264.tif 000041
である化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
【化４】
0006723264.tif 000042
である化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
【化５】
0006723264.tif 000043
である化合物またはその薬学的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
概要
本出願は、新規の化合物、特に新規の放射性化合物と、このような化合物の塩と、それらの調製と、酵素オートタキシンが媒介するおよび／またはこれに関連した疾患または障害、例えば線維形成、そう痒症、肝硬変、がん、神経因性疼痛および腎疾患の分野におけるイメージング技術用および診断ツール用の放射性トレーサー／マーカーとしてのこのような新規の放射性化合物の使用とに、関する。
【０００２】
オートタキシン（ＡＴＸ）は、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ（ＥＮＰＰ２）としても公知であり、リゾホスホリパーゼＤ活性を保有することが知られている、分泌性細胞外酵素であり（Umezu-Goto et al., 2002）、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）の加水分解による生理活性脂質メディエイターリゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）の産生を担っている（Tokumura et al., 2002）。ＬＰＡは、がん（Liu et al., 2009; Mills & Moolenaar, 2003）、神経因性疼痛（Inoue et al., 2004）および線維症（Tager et al., 2008）を含めて、いくつかの生理病理学的疾患の病因に大いに関与している。ＬＰＡの生成後、この脂質は、既知の７種のアイソフォームが存在する特異的な、Ｇタンパク質共役受容体に結合する（Noguchi et al., 2009）。ＬＰＡの結合は、細胞の遊走（van Dijk et al., 1998）、増殖および生存（Brindley, 2004）を含めて、複数のシグナル伝達経路を活性化する（Mills & Moolenaar, 2003）。他の細胞応答としては、平滑筋収縮、アポトーシスおよび血小板凝集が挙げられる（Tigyi & Parrill, 2003）。
【０００３】
ＡＴＸは当初、ヒトＡ２０５８黒色腫細胞からの単離された後に、細胞の運動性刺激因子と同定された（Stracke et al., 1992）。この酵素に関するその後の研究は、乳がんおよび腎臓がん（Stassar et al., 2001）、ホジキンリンパ腫（Baumforth et al., 2005）、濾胞性リンパ腫（Masuda et al., 2008）、ならびに肺および腎臓の線維症（Hama et al., 2004）を含めて、多くのがん種においてこれが異常に発現することから、運動性因子としてのその役割に向けて焦点を絞った。その発見から１０年後、ＡＴＸは、分泌性リゾホスホリパーゼ（ｌｙｓｏＰＬＤ）として特徴付けられた（Tokumura et al., 2002; Gesta et al., 2002）。それ以来、ＡＴＸ遺伝子ノックアウトマウスによって、ＡＴＸ−ＬＰＡシグナル伝達軸が心血管系および神経系の胚発生時に極めて重要な役割を果たしており（Tanaka et al., 2006; van Meeteren et al., 2006）、早期胚性致死がもたらされる（Bachner et al., 1999）ことが示された。
【０００４】
ＡＴＸは、遺伝子ＥＮＰＰによりコードされるヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ（ＮＰＰ）と称されるタンパク質ファミリーに属する。このファミリーは、脊椎動物内に保存された構造的に関連する７種の酵素（ＥＮＰＰ１〜７）からなり、これらの酵素はこれらの発見に従い番号付けされている。これらの酵素はもともと、インビトロで様々なヌクレオチドおよびヌクレオチド誘導体のピロホスフェート結合またはホスホジエステル結合を加水分解するこれらの能力により定義されたが（Stefan et al., 1999; Goding et al., 1998; Gijsbers et al., 2001）、ＥＮＰＰ２およびコリンリン酸エステル（ＥＮＰＰ６＆７）は他の細胞外非ヌクレオチド分子に対して特異的な活性を有する。ＥＮＰＰ２（ＡＴＸ）は、他のＥＮＰＰメンバーが膜貫通タンパク質（Stefan et al., 2005）であるのに対して、ＥＮＰＰ２が唯一の分泌性タンパク質であることから、ファミリーの中でも独特である。
【０００５】
実験動物、患者およびボランティアを含めて、生体対象の生理学および生化学について基本的および診断的情報を得るために、非侵襲的核イメージング技術が使用できる。このような技術は、生体対象に投与した放射性トレーサーから放出される放射線を検出できるイメージング装置の使用を必要とする。得られた情報を再構築して、平面のおよび断層の画像を提供することができ、この画像によって、時間の関数としての放射性トレーサーの分布および／または濃度が明らかとなる。
【０００６】
陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）は、全ての核医学イメージング様式の内で最高の空間的および時間的解像度を提供するとともに、これによって組織中のトレーサー濃度が正しく定量できることを可能とするというさらなる利点を有する、非侵襲的イメージング技術である。本技術は、陽電子放出放射性核種で標識された放射性トレーサーの使用を必要とするが、そのような放射性トレーサーは、生体組織における種々のプロセスの生理学または生化学に関するパラメータの測定を可能とするインビボ特性を有するように設計されている。
【０００７】
陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）は、体内の機能プロセスの３次元画像を制作する核医学機能イメージング技術である。このシステムは、陽電子放出放射性核種（トレーサー）によって間接的に放出されるガンマ線のペアを検出するが、このような核種は生物学的に活性な分子に乗せて身体中に導入される。次いで、体内のトレーサー濃度の３次元画像がコンピュータ解析によって構築される。現代のＰＥＴ−ＣＴスキャナーでは、同一の機械内で同一セッション中に患者に対して行われたＸ線ＣＴスキャンを用いて、３次元イメージングを行うことが多い。
【０００８】
ＰＥＴスキャンに使用される放射性核種は典型的には、炭素−１１（約２０ｍｉｎ）、窒素−１３（約１０ｍｉｎ）、酸素−１５（約２ｍｉｎ）、フッ素−１８（約１１０ｍｉｎ）、またはルビジウム−８２（約１．２７ｍｉｎ）などの短半減期を有する同位体である。これらの放射性核種は、グルコース（またはグルコース類似体）、水、またはアンモニアなどの生体が通常使用する化合物に、あるいは受容体または他の薬物作用部位に結合する分子のいずれかに組み込まれる。このような標識化合物は放射性トレーサーとして公知である。その化合物がＰＥＴ同位体で放射標識が可能であることを条件として、生存しているヒト（多数の他の種も）において任意の化合物の生物学的経路をトレースするために、ＰＥＴ技術が使用可能である。したがって、ＰＥＴで探り得る特定のプロセスは事実上制限がない。
【０００９】
大部分の陽電子放出放射性同位体は半減期が短いため、その放射性トレーサーは従来、ＰＥＴイメージング施設に近接したサイクロトロンを使用して製造されてきた。フッ素−１８の半減期は、フッ素−１８で標識された放射性トレーサーが離れた場所で商業目的で製造され、イメージングセンターに出荷することが可能なほどに十分長い。
【００１０】
単光子放出コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）は、ＰＥＴに類似する核医学イメージング技術である。単光子放出コンピュータ断層撮影法はまた、放射活性標識トレーサーを使用するとともにガンマ線検出に基づいている。ＰＥＴとは対照的に、ＳＰＥＣＴで使用される放射活性標識、例えば１２３Ｉは、直接に測定されるガンマ線を放出する。オートラジオグラフィー法またはＰＥＴまたはＳＰＥＣＴなどの分子イメージング様式を使用して、インビトロでおよびインビボでオートタキシンを探索するために、ある特定の放射標識化合物が使用し得ることを、本発明者らは見い出した。本明細書に記載の化合物は、それらに限定されないが、３Ｈ、１３Ｎ、１１Ｃ、１４Ｃ、１８Ｆ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、および／または１３１Ｉを含めて、上に記載のものなどの電子を、陽電子をまたはガンマ線を放出する放射性同位体で標識することができる。
【００１１】
説明
第１の態様において、本出願は、一般式（Ｉ）
【００１２】
【化１】
0006723264.tif 000002
の化合物、および／またはその薬学的に許容される塩を提供する
（式中、Ｒはハロゲン、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＨ３またはＣＮであり；およびＡは、ハロ−（Ｃ１〜６−アルキル）、ハロ−（Ｃ１〜３−アルキル）オキシ（Ｃ２〜４−アルキル）、またはハロ−（Ｃ１〜３−アルキル）オキシ（Ｃ２〜４−アルキル）オキシ（Ｃ２〜４−アルキル）から選択される少なくとも１つの置換基で置換されたピリジニル基またはオキサゾリル基である）。
【００１３】
別の態様では、本出願は、３Ｈを任意選択で含有する式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００１４】
別の態様では、本出願は、Ｒが−ＣＦ３または−ＯＣＦ３であり、これらの基のそれぞれは少なくとも１つの１８Ｆを任意選択で含有し得る、式Ｉの化合物を提供する。
【００１５】
また別の態様では、本出願は、「ハロ」または「ハロゲン」はＦ、Ｂｒ、Ｃｌ、またはＩから選択される残基である、式Ｉの化合物を提供する。なお別の態様では、ハロまたはハロゲンは１８Ｆ、１９Ｆ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉまたは１３１Ｉから選択される。
【００１６】
さらなる一態様では、本出願は、「１」と番号付きの炭素原子は１１Ｃ、１２Ｃまたは１４Ｃから選択される、式Ｉの化合物を提供する。
【００１７】
本明細書に開示の化合物はオートタキシン阻害剤である。これらの非放射性形態（すなわち１２Ｃ、１９Ｆまたは１２７Ｉのみを含有する場合）では、このような化合物はオートタキシンが関与している疾患に対する治療剤として使用することができる。これらの放射性標識された形態では、本発明の化合物は、イメージング用のまたは放射線療法用の診断薬として使用することができる。より詳細には、３Ｈ−、１１Ｃ−、１４Ｃ−、１８Ｆ−、１２３Ｉ−、１２４Ｉ−、１２５Ｉ−または１３１Ｉ−放射性標識された形態では、本明細書に記載の化合物は、診断剤またはイメージング剤用に、または放射線療法剤として使用することができる。具体的には、３Ｈ−および１４Ｃ−放射性標識された誘導体は、インビトロおよびエキソビボ放射性リガンド結合アッセイまたはオートラジオグラフィー用に使用することができる。１１Ｃ−、１８Ｆ−、１２３Ｉ−および１２４Ｉ−放射性標識された誘導体は、ＳＰＥＣＴ（単光子コンピュータ断層撮影）またはＰＥＴ（陽電子放出断層撮影）を使用するインビボイメージングに、例えばオートタキシンタンパク質濃度を画像化するのに、またはオートタキシンに結合する分子による結合部位の占有率を測定するのに、さらに適しているとすることができる。１３１Ｉ−放射性標識された誘導体は、イメージング剤としておよび放射線療法用に、例えばオートタキシン発現腫瘍の治療用に適しているとすることができる。
【００１８】
放射性標識されたオートタキシンリガンドの用途としては、それらに限定されないが、組織中のオートタキシンタンパク質濃度を定量する、疾患の進行をステージ分類するまたはモニターする、あるいはオートタキシンタンパク質の発現に対する治療処置の影響を評価する、臨床研究が挙げられる（例えば、Hepatology 2012 56(4):1391-400 for the link between ATX expression and pruritus of cholestasisを参照されたい）。オートタキシンに結合する薬物の受容体占有率を決定するために、ならびにオートタキシン発現細胞に伴う腫瘍を、例えばヒト肝細胞癌を画像化するために（例えば、Molecular Cancer 2010, 9:71を参照されたい）、放射性標識されたオートタキシンリガンドをエキソビボでまたはインビボで使用することもできる。
【００１９】
これに伴い、本出願は、マーカーとして使用するための薬剤またはがんイメージング用の放射線療法剤、またはオートタキシンが関与する、例えば、胆汁うっ滞性そう痒症、肝硬変、糖尿病、腎疾患、疼痛、臓器の線維症、例えば特発性肺線維症において療法および疾患をモニタリングするのに使用する薬剤を提供する。
【００２０】
別の態様によれば、
（ｉ）必要のあると認められた対象に、本明細書の任意の場所に記載の式（Ｉ）の化合物を、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと；
（ｉｉ）前記化合物の取り込みをインビボのＰＥＴイメージングまたはＳＰＥＣＴイメージングにより検出するステップとを含む、前記対象においてオートタキシンを検出するための方法が提供される。本方法により、オートタキシンが関与する障害の診断および臨床研究において有用性を有する情報およびデータが提供されることになると考えられる。一実施形態では、対象は、オートタキシンが関与する障害を有するかまたはそれを有すると疑いのある、哺乳動物、最適にはヒトである。本方法は定量的に行うことができ、したがって、オートタキシンの量もしくはその量における変化、またはオートタキシンの密度もしくはその密度における変化を疾患の進行を診断するようにまたは追跡するように決定することができる。あるいは、インビボでオートタキシンの存在場所を確認するために、本方法が使用し得る。
【００２１】
別のさらなる態様では、
（ｉ）対象に、上に規定の式（Ｉ）の放射性標識された化合物を、またはその塩もしくは溶媒和物を投与するステップと；
（ｉｉ）ステップ（ｉ）で投与された式（Ｉ）の前記放射性標識された化合物の取り込みをインビボのＰＥＴイメージングまたはＳＰＥＣＴイメージングにより検出するステップと；
（ｉｉｉ）ステップ（ｉ）で投与した化合物が放射性崩壊してしまうように適切な時間量を経過させるステップと；次いで
（ｉｖ）（ａ）放射性標識されていないオートタキシンリガンドの、または（ｂ）オートタキシン基質の内因性レベルに影響する放射性標識されていない薬剤のいずれかの有効量を、ステップ（ｉ）で規定の式（Ｉ）の放射性標識された化合物またはその薬学的に許容される塩の同時投与をともなって投与するステップと；
（ｖ）ステップ（ｉｖ）で投与した式（Ｉ）の前記化合物の取り込みを、インビボのＰＥＴイメージングまたはＳＰＥＣＴイメージングにより、検出するステップとを含む、
オートタキシンに結合するリガンドの投与後に前記対象における非結合オートタキシンの百分率または百分率の変化を定量化するための、方法が提供される。
【００２２】
ステップ（ｉｉｉ）において経過させる時間が、適切には放射性同位体の半減期の４倍超であり、より適切には放射性同位体の半減期の少なくとも６倍であり、ステップ（ｉ）で投与した式（Ｉ）の放射性標識された化合物由来のＰＥＴまたはＳＰＥＣＴシグナルがもはや検出されないものであるのが、より適切である。
【００２３】
なおさらに一態様では：
（ｉ）必要のあると認められた対象に、本出願の任意の場所に記載の式（Ｉ）の放射性標識された化合物を、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと；
（ｉｉ）ステップ（ｉ）において投与した式（Ｉ）の前記放射性標識された化合物の取り込みをインビボのＰＥＴイメージングまたはＳＰＥＣＴイメージングにより検出するステップと；
（ｉｉｉ）（ａ）放射性標識されていないオートタキシンリガンドの、または（ｂ）オートタキシン基質の内因性レベルに影響する放射性標識されていない薬剤のいずれかの有効量を投与するステップと；
（ｉｖ）ステップ（ｉ）において投与した式（Ｉ）の前記化合物の取り込みをインビボのＰＥＴイメージングまたはＳＰＥＣＴイメージングにより検出するステップとを含む、
前記対象においてオートタキシンを検出するための、方法が提供される。
【００２４】
ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴイメージング試験により、未処置のもしくは前処置を行った動物対象またはヒト対象においてトレーサー注入（例えば、式Ｉの適切に標識された化合物）後の、放射能の分布の３次元画像が提供される。
【００２５】
要約すると、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴイメージングに適した放射性同位体（例えば、１１Ｃ、１８Ｆまたは１２３Ｉ）による標識後、本発明の化合物を未処置のもしくは前処置を行った動物対象またはヒト対象の血液循環に注入する。分子の体内分布を可能とする任意選択の待機期間後、対象をＰＥＴまたはＳＰＥＣＴスキャナーの中にいれ、十分な数の崩壊事象を記録後に放射能分布の画像を再構築する。解釈の一助とするために、磁気共鳴映像法スキャンまたはＸ線コンピュータ断層映像法スキャンを、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴスキャンと並行して実施してもよい。標的発現を測定するために（例えば、オートタキシンが関与する疾患を研究するために、またはオートタキシン発現腫瘍を検出するために）、放射性標識された化合物を療法の前処置無しで注入することができる。オートタキシンに結合する薬物によるオートタキシン占有率を測定するために、またはオートタキシン発現に対する療法の効果を評価するために、放射性標識された化合物を薬物処置後または療法後に注入し、ベースライン、すなわち、療法の薬物処置前に観察された放射能シグナルと比較する。
【００２６】
加えて、式Ｉの標識化合物に由来する放射能の分布を、エキソビボまたはインビトロオートラジオグラフィーによって測定することができる。一般例として、動物に式Ｉの放射性標識された化合物を注入し（薬物または療法による前処置の有無にかかわらず）、続いてこれを殺処分する。次いで、全動物体または対象とする器官を凍結するかまたは包埋し、切片にし、放射線用フィルムまたはイメージングプレートに対して切片を適用した後に、例えば輝尽性蛍光体プレートを使用しておよびホスフォイメージャーで画像を作成して、画像が制作される。
【００２７】
実験部
実施例
以下の実施例は本発明を説明するものであって、これを制限するものと解釈されるべきではない。
【００２８】
一般条件：
質量スペクトルは、エレクトロスプレイオン化法、化学イオン化法および電子衝撃イオン化法を使用するＬＣ−ＭＳ、ＳＦＣ−ＭＳ、またはＧＣ−ＭＳシステムで、次の構成の装置範囲から得た：Ａｇｉｌｅｎｔ  ６１１０質量分析計を備えるＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣシステム。［Ｍ＋Ｈ］＋とは化学種のプロトン化分子イオンを指す。
【００２９】
ＮＭＲスペクトルは、ＴｏｐＳｐｉｎプログラム制御下で、ＩＣＯＮーＮＭＲを使用するＢｒｕｋｅｒ社ＡＶＡＮＣＥ  ４００ＭＨｚまたは５００ＭＨｚまたは６００ＭＨｚＮＭＲスペクトロメーターで得た。スペクトルは２９８Ｋにて測定し、特段示さない限り、溶媒共鳴に対して基準化した。
【００３０】
機器：
ＭＳ方法：Ａｇｉｌｅｎｔ  ６１１０質量分析計を備えるＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣシステム
２ｍｉｎＬｏｗｐＨｖ０３：
カラム：  Ｗａｔｅｒｓ社Ａｃｑｕｉｔｙ  ＣＳＨ  １．７μｍ、２．１×５０ｍｍ
温度：  ５０℃
移動相：  Ａ：水＋０．１％ギ酸  Ｂ：アセトニトリル＋０．１％ギ酸
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
勾配：０．０ｍｉｎ  ５％Ｂ、０．２〜１．８ｍｉｎ  ５〜９８％Ｂ、１．８〜２．１ｍｉｎ  ９８％Ｂ、２．１〜２．３ｍｉｎ  ９８％Ｂ
２ｍｉｎＬｏｗｐＨｖ０１：
カラム：  Ｗａｔｅｒｓ社Ａｃｑｕｉｔｙ  ＣＳＨ  １．７μｍ、２．１×５０ｍｍ
温度：  ５０℃
移動相：  Ａ：水＋０．１％ギ酸  Ｂ：アセトニトリル＋０．１％ギ酸
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
勾配：０．０ｍｉｎ  ５％Ｂ、０．２〜１．５５ｍｉｎ  ５〜９８％Ｂ、１．５５〜１．７５ｍｉｎ  ９８％Ｂ、１．７５〜１．８ｍｉｎ  ９８〜５％Ｂ
２ｍｉｎＬｏｗｐＨ：
カラム：  Ｗａｔｅｒｓ社Ａｃｑｕｉｔｙ  ＣＳＨ  １．７μｍ、２．１×５０ｍｍ
温度：  ５０℃
移動相：  Ａ：水＋０．１％ギ酸  Ｂ：アセトニトリル＋０．１％ギ酸
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
勾配：０．０ｍｉｎ  ５％Ｂ、０．２〜１．３ｍｉｎ  ５〜９８％Ｂ、１．３〜１．５５ｍｉｎ  ９８％Ｂ、１．５５〜１．６ｍｉｎ  ９８〜５％Ｂ
１０ｍｉｎＬｏｗｐＨ：
カラム：  Ｗａｔｅｒｓ社Ａｃｑｕｉｔｙ  ＣＳＨ  １．７μｍ、２．１×１００ｍｍ
温度：  ５０℃
移動相：  Ａ：水＋０．１％ギ酸  Ｂ：アセトニトリル＋０．１％ギ酸
流速：０．７ｍＬ／ｍｉｎ
勾配：０．０ｍｉｎ  ２％Ｂ、０．５〜８．０ｍｉｎ  ２〜９８％Ｂ、８．０〜９．０ｍｉｎ  ９８％Ｂ、９．０〜９．１ｍｉｎ  ９８〜２％Ｂ
２ｍｉｎＨｉｇｈｐＨｖ０３：
カラム：  Ｗａｔｅｒｓ社Ａｃｑｕｉｔｙ  ＣＳＨ  １．７μｍ、２．１×５０ｍｍ
温度：  ５０℃
移動相：  Ａ：水＋０．１％アンモニア  Ｂ：アセトニトリル＋０．１％アンモニア
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
勾配：０．０ｍｉｎ  ５％Ｂ、０．２〜１．８ｍｉｎ  ５〜９８％Ｂ、１．８〜２．１ｍｉｎ  ９８％Ｂ、２．１〜２．３ｍｉｎ  ９８〜５％Ｂ
２ｍｉｎ  最終分析：
カラム：  Ｗａｔｅｒｓ社Ａｃｑｕｉｔｙ  ＨＳＳ  １．８μｍ、２．１×５０ｍｍ
温度：  ６０℃
移動相：  Ａ：水＋０．０５％ギ酸  Ｂ：アセトニトリル＋０．０４％ギ酸
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
勾配：１．４ｍｉｎで５から９８％Ｂ
分析用ＨＰＬＣ：
カラム：  Ｚｏｒｂａｘ  ＸＤＢ−Ｃ１８  ５μ、１５０×４．６ｍｍ
温度：  ４０℃
移動相：  Ａ：水＋０．０１％ＴＦＡ  Ｂ：アセトニトリル／ＭｅＯＨ（１：１）
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
勾配：５ｍｉｎで５から９８％Ｂ
【００３１】
略語
ＢＯＣ：  第三級ブチルカルボキシ
ｂｒ：  ブロード
ｄ：  二重線
ｄｄ：  二重の二重線
ＤＣＭ：  ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ：  ジエチルイソプロピルアミン
ＤＭＡ：  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＥ：  １，４−ジメトキシエタン
ＤＭＦ：  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：  ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ：  酢酸エチル
ｈ：  時間
ＨＰＬＣ：  高速液体クロマトグラフィー
ＬＣＭＳ：  液体クロマトグラフー質量分析
ＭｅＯＨ：  メタノール
ＭＳ：  質量分析
ｍまたはｍｕｌｔ：  多重線
ｍｇ：  ミリグラム
ｍｉｎ：  分
ｍＬ：  ミリリットル
ｍｍｏｌ：  ミリモル
ＭＴＢＥ：  メチル第三級ブチルエーテル
ｍ／ｚ：  質量電荷比
ＮＭＲ：  核磁気共鳴
ｐｐｍ：  百万分率
ｒａｃ：  ラセミ
Ｒｔ：  保持時間
ｓ：  単一線
ｔ：  三重線
ＴＢＭＥ：  メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：  テトラヒドロフラン
【００３２】
中間体の調製
中間体Ａ
（Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
【００３３】
【化２】
0006723264.tif 000003
ステップ１：２−（２−ブロモ−５−クロロベンジル）−５−メチル−２Ｈ−テトラゾル
５−メチル−２Ｈ−テトラゾル（７７ｇ、９１３ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（４００ｍＬ）を有するフラスコ中に、氷浴を使用して０℃にて投入した。炭酸カリウム（１６８ｇ、１２１７ｍｍｏｌ）を小分けして添加し、これに続いて１−ブロモ−２−（ブロモメチル）−４−クロロベンゼン（１７３ｇ、６０８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４００ｍＬ）を滴下添加した。生成する混合物を室温にて２ｈ攪拌した。混合物を水中に注ぎ、生成する懸濁物をろ過により収集した。固形物をイソ−ヘキサンとともに微細化し、不溶性固形物をろ過により除去した。ろ液を、水中に懸濁した白色固形物が得られるように減圧下で濃縮し、そして一晩攪拌した。生成物をろ過し、水で洗浄して表題化合物を得た。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ  １．１５ｍｉｎ；ＭＳ  ｍ／ｚ  ２８９．０  「Ｍ＋Ｈ」＋；２ｍｉｎＬｏｗｐＨｖ０１
【００３４】
ステップ２：（Ｅ）−エチル３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）アクリレート
２−（２−ブロモ−５−クロロベンジル）−５−メチル−２Ｈ−テトラゾル（１５ｇ、５２．２ｍｍｏｌ）、トリ−ｏ−トリルホスフィン（０．７９４ｇ、２．６１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１０．５６ｇ、１０４ｍｍｏｌ）を乾燥し脱ガスしたＤＭＦ（８０ｍＬ）を有するフラスコ中に投与した。エチルアクリレート（７．８３ｇ、７８ｍｍｏｌ）を添加し、これに続いて、酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．５８６ｇ、２．６１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１００℃にて一晩攪拌した。混合物を冷却し、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、ろ過して固形物を除去した。反応混合物をＥｔＯＡｃと水との間で分割した。有機層を水とブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、ろ過し、溶媒を真空中で除去した。約７５％の溶媒が除去されたとき、沈殿した固形物をろ過により収集し乾燥して白色固形物として表題化合物を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.92 (1H, d), 7.89 (1H, d), 7.59  (1H, d), 7.51 (1H, dのd), 6.59 (1H, d), 6.09 (2H, s), 4.20 (2H, q), 2.41 (3H, s), 1.26 (3H, t).
【００３５】
ステップ３：（Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）アクリル酸
（Ｅ）−エチル３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）アクリレート（８．７５ｇ、２８．５ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ（１００ｍＬ）を有するフラスコ中に投入した。２Ｍ  ＮａＯＨ（５７．１ｍＬ、１１４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温にて一晩攪拌した。エタノールを真空中で除去し、反応混合物を２Ｍ  ＨＣｌ水溶液で酸性化した。生成する沈殿物をろ過により収集し、水で洗浄し乾燥して白色固形物として表題化合物を得た。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ  ０．９９ｍｉｎ；ＭＳ  ｍ／ｚ  ２７９．２  「Ｍ＋Ｈ」＋；方法  ２ｍｉｎＬｏｗｐＨｖ０１
【００３６】
ステップ４：（Ｒ，Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）アクリロイル）−３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート
（Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）アクリル酸（１．２９ｇ、４．６３ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（１５ｍＬ）にＨＡＴＵ（２．１１２ｇ、５．５５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温にて５分間攪拌した。（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（０．９２７ｇ、４．６３ｍｍｏｌ）、これに続いて、ＤＩＰＥＡ（１．６１７ｍＬ、９．２６ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温にて２ｈ攪拌した。反応混合物を水中に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機部を水、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、水、ブライン、で洗浄し、相分離器にかけて脱水した。溶媒を減圧下で除去した。粗生成物をイソ−ヘキサン中０から１００％へのＥｔＯＡｃ勾配を使用するシリカでのクロマトグラフィーで精製することによって、表題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｒｔ＝１．２３ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋  ４６１．３、方法  ２ｍｉｎＬｏｗｐＨ。
【００３７】
ステップ５：（Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
（Ｒ，Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル−４−（３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）アクリロイル）−３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（２．１ｇ、４．５６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２２ｍＬ）に、ＴＦＡ（４．２１ｍＬ、５４．７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温にて４ｈ攪拌した。溶媒を減圧下で除去した。生成する残留物をＩｓｏｌｕｔｅ（登録商標）ＳＣＸ−２カートリッジに充填し、ＭｅＯＨで、これに続いて、ＭｅＯＨ中の２Ｍ  ＮＨ３で溶出した。複数の画分を減圧下で濃縮して、表題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｒｔ＝２．４０ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋＝３６１．６、方法  １０ｍｉｎＬｏｗｐＨ。
【００３８】
中間体Ｂ
（Ｒ，Ｅ）−３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１−（２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
【００３９】
【化３】
0006723264.tif 000004
ステップ１：２−（２−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）ベンジル）−５−メチル−２Ｈ−テトラゾル
５−メチル−２Ｈ−テトラゾル（１９．４４ｇ、２３１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ攪拌溶液（１５４ｍＬ）にＫ２ＣＯ３（４２．６ｇ、３０８ｍｍｏｌ）をＮ２中で１０℃にて添加した。生成する懸濁液を−２℃に冷却し（氷塩浴）、１−ブロモ−２−（ブロモメチル）−４−（トリフルオロメチル）ベンゼン（４９ｇ、１５４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（６６ｍＬ）を、内部温度を５℃未満に維持しながら３０ｍｉｎかけて滴下添加した。添加が完了すると、混合物を室温まで温め、生成する白色懸濁液を一晩攪拌した。水（４００ｍＬ）を混合物にゆっくりと添加し、次いで混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（２×５００ｍＬ）。合わせた有機抽出物をブライン（５００ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮して、無色の油状物を得た。イソ−ヘキサン（１５０ｍＬ）を添加し、生成するスラリーをろ過し、固形物をイソ−ヘキサン（２×５０ｍＬ）で洗浄した。ろ液を真空中で濃縮して無色の油状物を得た。イソ−ヘキサン中０〜５０％ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーで精製することによって、表題化合物を得た。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ  １．３０ｍｉｎ；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２１．３  「Ｍ＋Ｈ」＋；方法  ２ｍｉｎＬｏｗｐＨｖ０３
【００４０】
ステップ２：（Ｅ）−エチル−３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−（トリフルオロメチル）フェニル）アクリレート
２−（２−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）ベンジル）−５−メチル−２Ｈ−テトラゾル（１７ｇ、５２．９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ攪拌溶液（７６ｍＬ）に、トリ−ｏ−トリルホスフィン（０．８０６ｇ、２．６５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１４．７６ｍＬ、１０６ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を、これにＮ２を発泡させて２０ｍｉｎ脱ガスした。Ｐｄ（ＯＡｃ）２（０．５９４ｇ、２．６５ｍｍｏｌ）およびエチルアクリレート（８．６６ｍＬ、７９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をＮ２中９０℃に加熱した。室温に冷却後、混合物を水（１５０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）との間で分割した。両相を分離させ、水層をさらなるＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２×２５０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮して、橙色油状物として表題化合物を得た。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ  １．３６ｍｉｎ；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３４１．５  「Ｍ＋Ｈ」＋；方法  ２ｍｉｎＬｏｗｐＨｖ０３
【００４１】
ステップ３：（Ｅ）−３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−（トリフルオロメチル）フェニル）アクリル酸
粗（Ｅ）−エチル３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−（トリフルオロメチル）フェニル）アクリレート（１８．０２ｇ、５３．０ｍｍｏｌとする）のＥｔＯＨ攪拌溶液（２１２ｍＬ）に、２Ｍ  ＮａＯＨ水溶液（７９ｍＬ、１５９ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。生成する橙色溶液を室温にて一晩攪拌した。生成する混合物を真空中で容積１００ｍｌに濃縮し、次いでろ過した。５Ｍ  ＨＣｌ（３８ｍＬ）をゆっくりと添加してｐＨを２に調整したところ、固形物が溶液から晶析し始めた。混合物を室温にて２ｈ攪拌して完全に結晶化させた。生成するスラリーをろ過し、ろ過物を５０％ＥｔＯＨ水溶液（２×２０ｍＬ）で洗浄した。固形物を真空中４０℃にて一晩乾燥して、表題化合物を得た。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ  １．１４ｍｉｎ；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３１３．４「Ｍ＋Ｈ」＋；方法  ２ｍｉｎＬｏｗｐＨｖ０３
【００４２】
ステップ４：（Ｒ，Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−メチル−４−（３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−（トリフルオロメチル）フェニル）アクリロイル）ピペラジン−１−カルボキシレート
Ｔ３Ｐ（登録商標）５０％の酢酸エチル（４．５ｍＬ、７．７ｍｍｏｌ）を、（Ｅ）−３−（４−（ジフルオロメチル）−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）アクリル酸（２ｇ、６．４１ｍｍｏｌ）と、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（２．０ｇ、６．４ｍｍｏｌ）と、ＴＥＡ（３．６ｍＬ、２５．６ｍｍｏｌ）とのＤＣＭ溶液（２０ｍＬ）に添加し、生成する混合物を室温にて１ｈ攪拌した。反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で希釈した。この水溶液を酢酸エチルで抽出した（３×１００ｍＬ）。合わせた有機溶液を水（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、真空中で濃縮した。イソ−ヘキサンから酢酸エチルの勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製を行った。生成物の画分を合わせ、真空中で蒸発させて、白色固形物を得た。
ＬＣ  ＭＳ：Ｒｔ  １．３９ｍｉｎ；「Ｍ−１００＋Ｈ」＋  ３９５．３、方法  ２ｍｉｎＬｏｗｐＨｖ０３
【００４３】
ステップ５：（Ｒ，Ｅ）−３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１−（２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
ＴＦＡ（１０ｍＬ）を、（Ｒ，Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−メチル−４−（３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−（トリフルオロメチル）フェニル）アクリロイル）ピペラジン−１−イル）アセテート（２．７ｇ、５．４６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（１０ｍＬ）に添加し、生成する混合物を１ｈ攪拌した。トルエン（１００ｍＬ）を添加し、反応物を真空中で濃縮した。生成するガム状物をジエチルエーテル（２５０ｍｌ）中で攪拌し、水（１ｍＬ）を添加し、生成する固形物をろ過で収集し、エーテルで洗浄し、真空中で乾燥して、トリフルオロ酢酸塩として表題化合物を得た。
ＬＣ  ＭＳ：Ｒｔ  ０．７４ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋  ３９５．０、３９７．５、方法  ２ｍｉｎＬｏｗｐＨｖ０３
【００４４】
中間体Ｃ：
５−（２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ）ピコリンアルデヒド
【００４５】
【化４】
0006723264.tif 000005
ステップ１：２−（２−（（６−メチルピリジン−３−イル）オキシ）エトキシ）エタノール
６−メチルピリジン−３−オール（１．５ｇ、１３．７５ｍｍｏｌ）、ジエチレングリコールモノクロロヒドリン（５．８３ｍＬ、５５．０ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２．８５ｇ、２０．６２ｍｍｏｌ）およびＮａＩ（０．１１ｇ、０．７６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ懸濁液（１８．６ｍＬ）をアルゴン雰囲気中８５℃にて１６ｈ攪拌した。反応混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、水で２回洗浄した。水層をＤＣＭ／ｉ−ＰｒＯＨ（４／１）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、相分離器にかけて脱水し、濃縮した。合わせた有機層を乾燥し、濃縮して、紫色の油状物として粗生成物を得、これをフラッシュクロマトグラフィーＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１００／０から９０／１０）で精製して褐色の油状物５．０ｇを得た。
ＬＣ  ＭＳ：Ｒｔ  ０．３２ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋  １９８．１；２ｍｉｎ最終分析
【００４６】
ステップ２：２−（２−（（６−メチルピリジン−３−イル）オキシ）エトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネート
２−（２−（（６−メチルピリジン−３−イル）オキシ）エトキシ）エタノール（２．３５ｇ、４．０５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２攪拌溶液（１０ｍＬ）に、ｐ−トリルスルホニルクロライド（１．８７ｇ、９．７２ｍｍｏｌ）をゆっくり添加し、これに続いて、アルゴン中０℃にてトリエチルアミン（２．８２ｍＬ、２０．２６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温にて１６ｈ攪拌した。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２および水で希釈した。有機層をブラインで洗浄し、相分離器にかけて脱水し、濃縮して、褐色の油状物として粗生成物を得、これをフラッシュクロマトグラフィー（シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ、１００／０から０／１００へ）で精製して黄色の油状物として所望の生成物１．０２ｇを得た。
ＬＣ  ＭＳ：Ｒｔ  ０．８５ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋  ３５２．４；２ｍｉｎ最終分析
【００４７】
ステップ３：５−（２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ）−２−メチルピリジン
２−（２−（（６−メチルピリジン−３−イル）オキシ）エトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネート（１．０２ｇ、２．４８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（１５．７ｍＬ）に、ＴＢＡＦ（ＴＨＦ中１Ｍ）（１２．４０ｍＬ、１２．４０ｍｍｏｌ）を添加し、生成する溶液を６５℃にて３０ｍｉｎ攪拌した。溶媒を蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃに取り、水で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、相分離器にかけて脱水し、濃縮して、褐色の油状物として粗生成物を得、これをフラッシュクロマトグラフィー（シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１００／０から０／１００）で精製して橙色の油状物として表題化合物を得た（４６５ｍｇ）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2.41 (s, 3H) 3.64 - 3.72 (m, 1H) 3.76 - 3.83 (m, 3H) 4.16 (dd, J=5.44, 3.73 Hz, 2H) 4.45 - 4.53 (m, 1H) 4.61 - 4.64 (m, 1H) 7.18 (d, J=8.56 Hz, 1H) 7.31 (dd, J=8.50, 3.00 Hz, 1H) 8.17 (d, J=2.93 Hz, 1H)
ＬＣ  ＭＳ：Ｒｔ  ０．４４ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋  ２００．１；２ｍｉｎ最終分析
【００４８】
ステップ４：５−（２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ）−２−メチルピリジン１−オキシド
５−（２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ）−２−メチルピリジン（４６５ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）のＣＨＣｌ３溶液（１０．６ｍＬ）に、ｍ−クロロ過安息香酸（４３５ｍｇ、２．５２ｍｍｏｌ）を０℃にて添加した。生成する混合物を０℃にて３ｈ攪拌した。反応混合物をＮａ２ＣＯ３飽和溶液でクエンチングさせ、ＣＨ２Ｃｌ２で２回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、相分離器にかけて脱水し、濃縮して、黄色の油状物として粗生成物５６２ｍｇを得た。
ＬＣ  ＭＳ：Ｒｔ  ０．４８ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋  ２１６．１；２ｍｉｎ最終分析
【００４９】
ステップ５：（５−（２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ）ピリジン−２−イル）メチルアセテート
無水酢酸（２０１８μｌ、２１．３９ｍｍｏｌ）に８０℃にて５−（２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ）−２−メチルピリジン１−オキシド（５６２ｍｇ、１．６４５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１３０℃に加熱し、３０ｍｉｎ攪拌した。生成する混合物を氷水中に注ぎ、次いで、室温にて１５ｍｉｎ攪拌した。生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗浄した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を相分離器にかけて脱水し、濃縮して、褐色の油状物として粗生成物を得、これをフラッシュクロマトグラフィー（シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ、１００／０から６０／４０）で精製して黄色の油状物として表題化合物３５２ｍｇを得た。
ＬＣ  ＭＳ：Ｒｔ  ０．７１ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋  ２５８．１；２ｍｉｎ最終分析
【００５０】
ステップ６：（５−（２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ）ピリジン−２−イル）メタノール
（５−（２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ）ピリジン−２−イル）メチルアセテート（３５２ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（４．７ｍＬ）と水（０．８２ｍＬ）との溶液にＮａＯＨ（８６ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）を添加した。生成する反応混合物を１ｈ還流攪拌した。溶媒を蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を相分離器にかけて脱水し、濃縮して、橙色の油状物として粗生成物２８２ｍｇを得た。
ＬＣ  ＭＳ：Ｒｔ  ０．４３ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋  ２１６．１；２ｍｉｎ最終分析
【００５１】
ステップ７：５−（２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ）ピコリンアルデヒド
（５−（２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ）ピリジン−２−イル）メタノール（２８２ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（４．０ｍＬ）にＭｎＯ２（９１１ｍｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を添加した。生成する反応混合物を室温にて２日間攪拌した。反応混合物をセライトにかけてろ過し、ＥｔＯＡｃで３回洗浄した。ろ液を蒸発乾固させて、黄色の油状物として粗生成物１８５ｍｇを得た。
ＬＣ  ＭＳ：Ｒｔ  ０．６５ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋  ２１４．０；２ｍｉｎ最終分析
【００５２】
中間体Ｄ
２−（フルオロメチル）オキサゾール−４−カルバルデヒド
【００５３】
【化５】
0006723264.tif 000006
ステップ１：メチル２−（フルオロメチル）オキサゾール−４−カルボキシレート
メチル２−（クロロメチル）オキサゾール−４−カルボキシレート（１．０ｇ、５．７０ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ溶液（２８．５ｍＬ）に、ＴＢＡＦ（ＴＨＦ中１Ｍ）（１７．０９ｍＬ、１７．０９ｍｍｏｌ）を室温にて添加した。生成する緑色溶液をアルゴン中室温にて２１ｈ攪拌した。反応混合物を水に注いで、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、相分離器にかけて脱水し、濃縮して、橙色の油状物として粗生成物を得た。粗生成物を分取用ＨＰＬＣで精製した（Ｗａｔｅｒｓ社ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８ＯＤＢ、５μｍ、３０ｘ１００、溶離液：２０ｍｉｎで１％ＭｅＣＮ／９９％Ｈ２Ｏから３０％ＭｅＣＮ／７０％Ｈ２Ｏ、Ｈ２ＯはＴＦＡ０．１％を含有する、流量４０ｍＬ／ｍｉｎ）。所望の生成物を含有する画分を合わせ、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、相分離器にかけて脱水し、濃縮して、白色固形物２９１ｍｇを得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.76 (s, 3 H) 5.43 (s, 1 H) 5.55 (s, 1 H) 8.91 (d, J=1.34 Hz, 1 H)
ＬＣ  ＭＳ  Ｒｔ  ０．４９ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋  １６０．０；２ｍｉｎ最終分析
【００５４】
ステップ２：（２−（フルオロメチル）オキサゾール−４−イル）メタノール
メチル２−（フルオロメチル）オキサゾール−４−カルボキシレート（２９１ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（３．６ｍＬ）に、アルゴン中−７８℃にて、ＤＩＢＡＬ−Ｈ（ＴＨＦ中に１Ｍ）（３．２２ｍＬ、３．２２ｍｍｏｌ）を滴下添加した。次いで、反応混合物を−７８℃にて３ｈ攪拌し、室温にて１６ｈ攪拌した。ＵＰＬＣ／ＭＳは出発物質がまだ残存していることを示し、したがって反応混合物を−７８℃に冷却し、ＤＩＢＡＬ−Ｈ（ＴＨＦ中に１Ｍ）（３．２２ｍＬ、３．２２ｍｍｏｌ）を添加し、−７８℃にて３ｈ攪拌した。生成する混合物を−７８℃にてＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、次いで、ＭｅＯＨ／水／２Ｍ  ＮａＯＨ水溶液でクエンチングさせ、１５ｍｉｎ攪拌した。Ｎａ２ＳＯ４を室温にて添加し、懸濁液を１５ｍｉｎ攪拌した。塩をろ過により除去し、ろ液を真空中で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ：１００／０から９５／５へ）で精製して黄色の油状物として表題化合物を得た（７９ｍｇ）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.31 - 4.34 (m, 2H) 5.32 (s, 1H) 5.44 (s, 1H) 7.84 - 8.03 (m, 1H)
ＬＣ  ＭＳ  Ｒｔ  ０．３２ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋  １３２．０；２ｍｉｎ最終分析
【００５５】
ステップ３：２−（フルオロメチル）オキサゾール−４−カルバルデヒド
（２−（フルオロメチル）オキサゾール−４−イル）メタノール（７８ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（６ｍＬ）に、ＭｎＯ２（５１７ｍｇ、５．９５ｍｍｏｌ）を添加した。生成する混合物を室温にて２日間攪拌した。反応混合物をセライトにかけてろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２で３回洗浄した。ろ液を蒸発乾固させて、粗生成物３２ｍｇを得た。粗生成物をさらに精製することなく次のステップで使用した。
ＬＣ  ＭＳ  Ｒｔ  ０．３４ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋  １３０．０；２ｍｉｎ最終分析
【００５６】
実施例の調製
実施例１：
（Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
【００５７】
【化６】
0006723264.tif 000007
ステップ１：（Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（４−（（５−ヒドロキシピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
（Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン（中間体Ａ）（３．０ｇ、８．３ｍｍｏｌ）のＤＣＥ攪拌溶液（６０ｍＬ）を、５−ヒドロキシピリジン−２−カルボキシアルデヒド（２．０ｇ、１６．６ｍｍｏｌ）、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（３．５ｇ、１６．６２ｍｍｏｌ）および酢酸（０．９５ｍＬ）で０℃にて処理した。生成する混合物を、室温にて１７ｈ攪拌した。溶媒を蒸発させ、残留物に水を添加し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、ろ過し、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製した。
ＨＬＰＣ  Ｒｔ：５．７ｍｉｎ（分析用ＨＰＬＣ）
【００５８】
ステップ２：（Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
（Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（４−（（５−ヒドロキシピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン（１．５ｇ、３．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１５ｍＬ）に、Ｎ２中、Ｃｓ２ＣＯ３（１．５３ｇ、４．８ｍｍｏｌ）を、これに続いて、１−ブロモ−２−フルオロエタン（４８８ｍｇ、３．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温にて１６ｈ攪拌した。反応混合物を水で希釈し、水溶液を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機溶液を硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、真空中で濃縮した。粗生成物を分取用ＨＰＬＣで精製した。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 100℃) δ ppm 1.26 - 1.31 (m, 4 H) 2.09 (d, J=3.26 Hz, 1 H) 2.24 (dd, J=11.36, 3.83 Hz, 1 H) 2.44 (s, 3 H) 2.72 (d, J=11.29 Hz, 1 H) 2.82 - 2.90 (m, 1 H) 3.10 - 3.24 (m, 1 H) 3.52 - 3.65 (m, 2 H) 4.02 - 4.17 (m, 1 H) 4.29 - 4.34 (m, 1 H) 4.36 - 4.42 (m, 1 H) 4.46 - 4.58 (m, 1 H) 4.66 - 4.74 (m, 1 H) 4.78 - 4.86 (m, 1 H) 5.96 (s, 2 H) 7.03 (d, J=15.43 Hz, 1 H) 7.42 (d, J=1.76 Hz, 2 H) 7.44 - 7.51 (m, 2 H) 7.71 (d, J=15.31 Hz, 1 H) 7.81 (d, J=8.41 Hz, 1 H) 8.26 (t, J=1.76 Hz, 1 H)
ＬＣ  ＭＳ：Ｒｔ  ０．８７ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋  ５１４．１；２ｍｉｎ最終分析
【００５９】
実施例２：（Ｒ，Ｅ）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−（トリフルオロメチル）フェニル）プロパ−２−エン−１−オン
【００６０】
【化７】
0006723264.tif 000008
表題化合物を、実施例１に類似の方法により、ただし、（Ｒ，Ｅ）−３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１−（２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン（中間体Ｂ）から調製した。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 100℃) δ ppm 1.29 (d, J=6.78 Hz, 3H) 2.00 - 2.14 (m, 1H) 2.21 - 2.29 (m, 1H) 2.44 (s, 3H) 2.66 - 2.76 (m, 1H) 2.84 - 2.92 (m, 1H) 3.12 - 3.25 (m, 1H) 3.60 (d, J=10.67 Hz, 2H) 4.06 - 4.17 (m, 1H) 4.28 - 4.34 (m, 1H) 4.35 - 4.42 (m, 1H) 4.45 - 4.58 (m, 1H) 4.66 - 4.74 (m, 1H) 4.78 - 4.87 (m, 1H) 6.06 (s, 2H) 7.11 (d, J=15.43 Hz, 1H) 7.42 (d, J=1.88 Hz, 2H) 7.77 (d, J=5.65 Hz, 3H) 7.92 - 8.04 (m, 1H) 8.26 (s, 1H)
ＬＣ  ＭＳ：Ｒｔ  ０．９２ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋  ５４８．０；２ｍｉｎ最終分析
【００６１】
実施例３：
（Ｒ）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−（トリフルオロメチル）フェニル）プロパン−１−オン
【００６２】
【化８】
0006723264.tif 000009
（Ｒ，Ｅ）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−（３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−（トリフルオロメチル）フェニル）プロパ−２−エン−１−オン（４６ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）とＰｄ／Ｃ（１０％）（５．７２ｍｇ、５．３８μｍｏｌ）とのＥｔＯＨ溶液（４．００ｍＬ）を水素中で室温にて１８ｈ攪拌した。反応混合物をセライトにかけてろ過し、濃縮した。残留物を、ＭｅＯＨ１ｍＬ中に取り、分取用ＨＰＬＣで精製した（Ｗａｔｅｒｓ社ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８ＯＤＢ、５μｍ、３０ｘ１００、溶離液：２０ｍｉｎで５％ＭｅＣＮ／９５％Ｈ２Ｏから５０％ＭｅＣＮ／５０％Ｈ２Ｏ、Ｈ２ＯはＴＦＡ０．１％を含有する、流量４０ｍＬ／ｍｉｎ）。生成物を含有する画分を合わせ、一晩凍結乾燥した。生成する白色粉末をＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＨＣＯ３飽和溶液で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃで抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、相分離器にかけて脱水し、濃縮し、真空中で乾燥して表題化合物を得た（２２ｍｇ、４７％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.16 - 1.22 (m, 3H) 1.27 - 1.31 (m, 1H) 1.92 - 2.13 (m, 2H) 2.46 (s, 3H) 2.55 - 2.85 (m, 4H) 3.04 - 3.07 (m, 3H) 3.48 - 3.62 (m, 2H) 3.78 - 4.03 (m, 1H) 4.28 - 4.41 (m, 2H) 4.66 - 4.85 (m, 2H) 5.96 - 6.08 (m, 2H) 7.35 - 7.44 (m, 2H) 7.53 - 7.71 (m, 3H) 8.21 - 8.29 (m, 1H)
ＬＣ  ＭＳ：Ｒｔ  ０．８９ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋  ５５０．１；２ｍｉｎ最終分析
【００６３】
実施例４：
（Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（４−（（５−（２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
【００６４】
【化９】
0006723264.tif 000010
（Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン（中間体Ａ）（８０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２．０ｍＬ）に、ＡｃＯＨ（０．２ｍＬ）および５−（２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ）ピコリンアルデヒド（中間体Ｃ）（９３ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を添加した。５ｍｉｎ攪拌後、２−ピコリンボラン（４４．２ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温にて２０ｈ攪拌した。揮発物質を蒸発させ、残留物を分取用ＨＰＬＣで精製した（Ｗａｔｅｒｓ社ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８ＯＤＢ、５μｍ、３０ｘ１００、溶離液：２０ｍｉｎで５％ＭｅＣＮ／９５％Ｈ２Ｏから５０％ＭｅＣＮ／５０％Ｈ２Ｏ、Ｈ２ＯはＴＦＡ０．１％を含有する、流量４０ｍＬ／ｍｉｎ）。所望の画分を濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃに取り、ＮａＨＣＯ３飽和溶液で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、相分離器にかけて脱水し、濃縮して、黄色の油状物６３ｍｇを得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 100℃) δ ppm 1.28 (d, J=6.78 Hz, 3H) 2.01 - 2.15 (m, 1H) 2.25 (dd, J=11.48, 3.07 Hz, 1H) 2.44 (s, 3H) 2.73 (d, J=11.42 Hz, 1H) 2.88 (d, J=11.29 Hz, 1H) 3.17 (br. s., 1H) 3.52 - 3.66 (m, 2H) 3.70 - 3.76 (m, 1H) 3.78 - 3.88 (m, 3H) 4.12 (d, J=12.55 Hz, 1H) 4.18 - 4.28 (m, 2H) 4.44 - 4.56 (m, 2H) 4.57 - 4.65 (m, 1H) 5.96 (s, 2H) 7.03 (d, J=15.31 Hz, 1H) 7.40 (d, J=1.76 Hz, 2H) 7.44 - 7.51 (m, 2H) 7.71 (d, J=15.31 Hz, 1H) 7.81 (d, J=8.41 Hz, 1H) 8.24 (t, J=1.69 Hz, 1H)
ＬＣ  ＭＳ  Ｒｔ  ０．８７ｍｉｎ；「Ｍ」＋  ５５８．２、５６０．１；２ｍｉｎ最終分析
【００６５】
実施例５：
（Ｒ，Ｅ）−１−（４−（（５−（２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−（トリフルオロメチル）フェニル）プロパ−２−エン−１−オン
【００６６】
【化１０】
0006723264.tif 000011
表題化合物を、実施例４に類似の方法により、（Ｒ，Ｅ）−３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１−（２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン（中間体Ｂ）および５−（２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ）ピコリンアルデヒド（中間体Ｃ）から調製した。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.29 (d, J=6.65 Hz, 3 H) 2.09 (td, J=11.67, 3.14 Hz, 1 H) 2.24 (dd, J=11.36, 3.70 Hz, 1 H) 2.40 - 2.46 (m, 3 H) 2.72 (d, J=11.29 Hz, 1 H) 2.88 (d, J=11.17 Hz, 1 H) 3.12 - 3.27 (m, 1 H) 3.50 - 3.64 (m, 2 H) 3.70 - 3.75 (m, 1 H) 3.78 - 3.87 (m, 3 H) 4.12 (d, J=13.80 Hz, 1 H) 4.19 - 4.26 (m, 2 H) 4.43 - 4.54 (m, 2 H) 4.57 - 4.65 (m, 1 H) 6.06 (s, 2 H) 7.11 (d, J=15.43 Hz, 1 H) 7.40 (d, J=1.13 Hz, 2 H) 7.69 - 7.84 (m, 3 H) 7.99 (d, J=8.53 Hz, 1 H) 8.24 (s, 1 H)
ＬＣ  ＭＳ  Ｒｔ  ０．９２ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋  ５９２．２；２ｍｉｎ最終分析
【００６７】
実施例６：
（Ｒ，Ｅ）−１−（４−（（２−（フルオロメチル）オキサゾール−４−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−（トリフルオロメチル）フェニル）プロパ−２−エン−１−オン
【００６８】
【化１１】
0006723264.tif 000012
表題化合物を、実施例４に類似の方法により、（Ｒ，Ｅ）−３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１−（２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン（中間体Ｂ）および２−（フルオロメチル）オキサゾール−４−カルバルデヒド（中間体Ｄ）から調製した。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.27 (d, J=6.97 Hz, 3H) 2.05-2.11 (m, 1H) 2.23-2.27 (m, 1H) 2.44 (s, 3H) 2.76-2.80 (m, 1H) 2.90-2.95 (m, 1H) 3.10-3.20 (m, 1H) 3.5 (s, 2H) 4.1 (d, 1H) 4.5 (s, 1H) 4.45 (d, 2H) 6.06 (s, 2H) 7.1 (d, 1H) 7.70 - 7.80 (m, 4H) 7.98-8.01 (m, 1H)
ＬＣ  ＭＳ  Ｒｔ  ０．８９ｍｉｎ；「Ｍ＋Ｈ」＋  ５０８．３；２ｍｉｎ最終分析
【００６９】
実施例７：（Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（４−（（５−（２−［１８Ｆ］フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
【００７０】
【化１２】
0006723264.tif 000013
ステップ１：（Ｒ，Ｅ）−２−（（６−（（４−（３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）アクリロイル）−３−メチルピペラジン−１−イル）メチル）ピリジン−３−イル）オキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネートの合成
【００７１】
【化１３】
0006723264.tif 000014
Ｃｓ２ＣＯ３（４４６ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を、エチレンジ（ｐ−トルエンスルホネート）（４７５ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（２０ｍＬ）にアルゴン中室温にて添加し、これに続いて、（Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（４−（（５−ヒドロキシピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン（２００ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）を１ｈにわたって添加した。反応混合物を室温にて２ｈ攪拌した。反応混合物を水で希釈し、水溶液を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機溶液を脱水し（相分離器）、濃縮した。粗生成物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製して（シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １００：０から０：１００）、無色の油状物として所望の生成物を得た（１８０ｍｇ、６２％）。1H NMR (400 MHz, 300℃, DMSO-d6) δ ppm 1.12-1.27 (m, 3H), 1.97 (s, 1H), 2.11 (s, 1H), 2.40 (d, J=4.0 Hz, 6H), 2.64 (d, J=11.3 Hz, 1H) 2.80 (d, J=11.0 Hz, 1H), 3.27 (s, 1H), 3.44-3.59 (m, 2H), 4.01 (q, J=7.1 Hz, 1H), 4.22 (dd, J=5.3, 2.8 Hz, 2H), 4.34 (dd, J= 5.3, 2.8 Hz, 2H), 4.4 (s, 1H), 6.03-5.91 (m, 2H), 7.11 (d, J=15.2 Hz, 1H), 7.29 (dd, J=8.6, 2.9 Hz, 1H), 7.35 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.43-7.51 (m, 4H), 7.70 (d, J=15.2 Hz, 1H), 7.78 (d, J=8.3 Hz, 2H), 7.87 (d, J=9.1 Hz, 1H), 8.07 (d, J=2.8 Hz, 1H);ＬＣ  ＭＳ：Ｒｔ  １．０６ｍｉｎ；「Ｍ」＋  ６６６．５；方法：２ｍｉｎ最終分析。
【００７２】
ステップ２：実施例７の合成
（Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（４−（（５−（２−［１８Ｆ］フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
【００７３】
【化１４】
0006723264.tif 000015
密封反応バイアル中で、［１８Ｆ］ＫＦ／Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ  ２２２の無水ＤＭＳＯを（Ｒ，Ｅ）−２−（（６−（（４−（３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）アクリロイル）−３−メチルピペラジン−１−イル）メチル）ピリジン−３−イル）オキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネートに添加し、１４０℃にて１０ｍｉｎ加熱した。標識生成物を半分取用ＨＰＬＣで精製した（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）、２５０ｘ１０ｍｍ、溶離液：ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／ＮＥｔ３（５０／５０／０．１）；流量４ｍＬ／ｍｉｎ）。ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ社ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８、１５０ｘ４．６ｍｍ；ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＮＥｔ３（７０／３０／０．０８）１ｍＬ／ｍｉｎ）による分析では、保持時間６．３７分であった。非放射性レファレンス（cold reference）のＨＰＬＣトレース（６．２８分）と比較することで、生成物は実施例７であることを確認し、これは減衰補正放射化学収率（decay-corrected radiochemical yield）８％で得られた。
【００７４】
実施例８：（Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（（２Ｒ）−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ−１，２−ｔ２）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
【００７５】
【化１５】
0006723264.tif 000016
ステップ１：［３Ｈ］２−２−フルオロエチル４−（ｐ−トリル）ベンゼンスルホネートの合成：
（Ｅ）−２−フルオロビニル４‘−メチル−［１，１’−ビフェニル］−４−スルホネート６．１５ｍｇ（２１．０μｍｏｌ）およびクラブトリー触媒（Ｓｔｒｅｍ社  ７７−９５００）７．０７ｍｇ（８．７８μｍｏｌ；０．４２ｅｑ．）を、ジクロロメタン（Ｆｌｕｋａ社  ６６７４０）０．７５ｍＬに溶解した。深橙色の溶液を、高真空マニホールドにて３回脱ガスを行い、トリチウムガス（８．７Ｃｉ）雰囲気中で室温にて３．５ｈ攪拌した。溶媒がなお凍結している場合、初期圧は３４７ｍｂａｒとしたが、室温での最大圧は９６２ｍｂａｒとした。溶媒を真空中で除去し、不安定なトリチウムをメタノール（Ｆｌｕｋａ社  ６５５４３）１ｍＬを添加することにより交換し、溶液を攪拌し、真空中で再度溶媒を除去した。このプロセスを３回繰り返した。最終的に、乾燥固形物をＴＨＦ５ｍＬで抽出した。粗生成物の活性は１００３ｍＣｉ（３７．１ＧＢｑ）であった。放射化学的純度（ＲＣＰ）は、次のＨＰＬＣシステムを使用して、７４％であると決定された：Ｍａｃｈｅｒｅｙ＋Ｎａｇｅｌ社Ｎｕｃｌｅｏｄｕｒ  Ｇｒａｖｉｔｙ  Ｃ１８（５μｍ、４．６ｘ１５０ｍｍ）；溶媒：Ａ、１０ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃ水溶液；Ｂ、ＭｅＣＮ；勾配：０ｍｉｎ  ４０％Ｂ；１０ｍｉｎ  １００％Ｂ；１４．５ｍｉｎ  １００％Ｂ；１５  ｍｉｎ  ４０％Ｂ：検出  ２５４ｎｍにて；流速  １．０ｍＬ／ｍｉｎ；３０℃。粗生成物をさらに精製することなく次のステップで使用した。
【００７６】
実施例８の合成：
粗［３Ｈ］２−２−フルオロエチル４−（ｐ−トリル）ベンゼンスルホネート（０．５ｍｌ、２．１μｍｏｌ）１００ｍＣｉ（３．７ＧＢｑ）を蒸発乾固させ、（Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（４−（（５−ヒドロキシピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン３．０４ｍｇ（６．５μｍｏｌ；３．１ｅｑ．）のＤＭＦ溶液０．２５ｍＬを添加した。次いで、この溶液を炭酸セシウム４．３６ｍｇ（１３．４μｍｏｌ；６．４ｅｑ．）で処理し、水浴中で５０℃にて２．２ｈ攪拌した。ＨＰＬＣ（前記条件）によると反応対照は、標識出発物質の定量的な転換を示し、ＲＣＰは６３％であると決定された。反応混合物を、次の条件を使用するＨＰＬＣによって精製した：Ｍａｃｈｅｒｅｙ＋Ｎａｇｅｌ社Ｎｕｃｌｅｏｄｕｒ  Ｇｒａｖｉｔｙ  Ｃ１８、５μｍ、８ｘ１５０ｍｍ；溶媒：Ａ、１０ｍＭＮＨ４ＯＡｃ；Ｂ、ＭｅＣＮ；勾配：０ｍｉｎ  ４８．５％Ｂ；８ｍｉｎ  ４８．５％Ｂ；８．５ｍｉｎ  ９５％Ｂ；１２．５ｍｉｎ  ９５％Ｂ；１３ｍｉｎ  ４８．５％Ｂ．；検出  ２５４ｎｍおよび２３０ｎｍにて；流速  ３．１ｍＬ／ｍｉｎ；２０℃。所望の化合物は６．７ｍｉｎ後に溶出した。
【００７７】
所望の生成物を固相抽出によりＨＰＬＣ溶媒混合物から単離した。当該画分の容積をロータリーエバポレーターにて部分的に減少させ、生成物を、エタノール１０ｍＬで溶出させるＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社ＳｔｒａｔａＸ  ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（３ｍＬ、１００ｍｇ）を用いて抽出した。活性４０．５ｍＣｉ（１．５０ＧＢｑ）を有する抽出生成物は、＞９９％のＲＣＰを示した。比活性は３８．５Ｃｉ／ｍｍｏｌ（１．４３ＴＢｑ／ｍｍｏｌ）であると決定した。非放射性レファレンスのＨＰＬＣトレースと比較することで、生成物の同一性を確認した。ＨＰＬＣ条件：Ｍａｃｈｅｒｅｙ＋Ｎａｇｅｌ社Ｎｕｃｌｅｏｄｕｒ  Ｇｒａｖｉｔｙ  Ｃ１８、４．６ｘ１５０ｍｍ（５μｍ）；移動相：Ａ、１０ｍＭＮＨ４ＯＡｃ；Ｂ、ＭｅＣＮ；勾配：０ｍｉｎ  ３５％Ｂ；１０ｍｉｎ  ９０％Ｂ；１４．５ｍｉｎ  ９５％Ｂ；１５ｍｉｎ  ３５％Ｂ；流速  １．０ｍＬ／ｍｉｎ。レファレンス保持時間（ＵＶ検出）：７．１４ｍｉｎ；生成物保持時間（放射能検出）：７．２５ｍｉｎ。ＵＶと放射シグナルとの間の遅延は連続的な検出システムによるものである。
【００７８】
１）  （Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（４−（（５−（２−（２−［１８Ｆ］フルオロエトキシ）エトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン
【００７９】
【化１６】
0006723264.tif 000017
前駆物質（Ｒ，Ｅ）−２−（２−（（６−（（４−（３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）アクリロイル）−３−メチルピペラジン−１−イル）メチル）ピリジン−３−イル）オキシ）エトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネートを、化合物４に類似の方法により、（Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン（中間体Ａ）および２−（２−（（６−ホルミルピリジン−３−イル）オキシ）エトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネートから調製することができる。
【００８０】
（Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（４−（（５−（２−（２−［１８Ｆ］フルオロエトキシ）エトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オンの合成を、（Ｒ，Ｅ）−２−（２−（（６−（（４−（３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）アクリロイル）−３−メチルピペラジン−１−イル）メチル）ピリジン−３−イル）オキシ）エトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネートを、ＤＭＦ、ＤＭＳＯまたはＣＨ３ＣＮなどの極性非プロトン性溶媒中で、［１８Ｆ］ＫＦ／Ｋ２２２または［１８Ｆ］ＴＢＡＦで処理することで、行うことができる。
【００８１】
【化１７】
0006723264.tif 000018
【００８２】
２）  （Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）［カルボニル−１１Ｃ］プロパ−２−エン−１−オンの合成
【００８３】
【化１８】
0006723264.tif 000019
第１のステップにおいて、放射性標識用の前駆物質を下記のように調製することができる：
【００８４】
【化１９】
0006723264.tif 000020
ナトリウムトリアセトキシボロヒドリドおよび酢酸を使用する（Ｒ）−ベンジル２−メチルピペラジン−１−カルボキシレートでの５−ヒドロキシピコリンアルデヒドの還元的アミノ化により、（Ｒ）−ベンジル４−（（５−ヒドロキシピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシレートを用意することができる。この中間体を炭酸カリウムなどの塩基の存在中で２−フルオロエチル−トシレートとさらに反応させて、これに続いて、カーボン上のパラジウムおよび水素ガスを使用する水素化を行うことによって、（Ｒ）−１−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−３−メチルピペラジンをもたらすことができる。
【００８５】
【化２０】
0006723264.tif 000021
【００８６】
（Ｅ）−２−（２−（２−ブロモビニル）−５−クロロベンジル）−５−メチル−２Ｈ−テトラゾルを、Ｎ−ブロモスクシンイミドおよび酢酸リチウムの触媒量の存在中で（Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）アクリル酸をマイクロ波照射することによって調製することができる。生成するアリールビニルブロミドをＴＨＦ中のマグネシウムを使用して（Ｅ）−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）スチリル）マグネシウムブロミドに転換することができる。
【００８７】
【化２１】
0006723264.tif 000022
【００８８】
表題化合物を、（Ｅ）−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）スチリル）マグネシウムブロミドを［１１Ｃ］ＣＯ２で処理して、［１１Ｃ］ハロゲン化カルボキシマグネシウム（carboxymagnesium）を形成し、次いで、［１１Ｃ］カルボン酸に転換させることによって調製することができる。これは、次いで、酸塩化物に転換し、（Ｒ）−１−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−３−メチルピペラジンで処理して、所望のアミドを得ることができる。
【００８９】
３）  （Ｒ）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−［１８Ｆ］（トリフルオロメチル）フェニル）プロパ−２−エン−１−オン
【００９０】
【化２２】
0006723264.tif 000023
前駆物質（Ｒ，Ｅ）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−３−（４−ヨード−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）プロパ−２−エン−１−オンを、５−メチル−２Ｈ−テトラゾルおよび１−ブロモ−２−（ブロモメチル）−４−ヨードベンゼンから出発として、実施例１に類似のプロトコールに準拠して、得ることができる。
【００９１】
【化２３】
0006723264.tif 000024
【００９２】
［１８Ｆ］フッ化物からの（ヘテロ）アレーンの後期ステージ［１８Ｆ］トリフルオロメチル化に関するHuiban et al（Nature Chemistry, 2013）によって報告されたプロトコールにしたがって、本例では、（Ｒ）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−（３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−［１８Ｆ］（トリフルオロメチル）フェニル）プロパ−２−エン−１−オンを作製するための可能性のある合成経路について示す。［１８Ｆ］ＣＦ３Ｃｕをメチルクロロジフルオロアセテート、ＣｕＩ、ＴＭＥＡＤからインサイチュで作製することができ、［１８Ｆ］フッ化物を（Ｒ，Ｅ）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−３−（４−ヨード−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）プロパ−２−エン−１−オンと反応させて、表題化合物を用意することができる。
【００９３】
４）  （Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（４−（（５−（２−フルオロ［３Ｈ２］エトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オンの合成
【００９４】
【化２４】
0006723264.tif 000025
［３Ｈ］２−フルオロエチル−４−メチルベンゼンスルホネートの合成についてはCochrane et al（Journal of Labelled Compounds, 2013, 56, 447-450）により報告された。表題化合物は、（Ｒ，Ｅ）−３−（４−クロロ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）−１−（４−（（５−ヒドロキシピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オンを、炭酸セシウムなどの塩基の存在中で［３Ｈ］２−フルオロエチル−４−メチルベンゼンスルホネートで処理することにより得ることができる。
【００９５】
【化２５】
0006723264.tif 000026
【００９６】
５）  ［１１Ｃ］ＣＮ含有例、例えば（Ｒ，Ｅ）−４−（３−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−３−オキソプロパ−１−エン−１−イル）−３−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）ベンゾニトリル、の合成
【００９７】
【化２６】
0006723264.tif 000027
［１１Ｃ］ＣＮ基を、（Ｒ，Ｅ）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−３−（４−イソシアノ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）プロパ−２−エン−１−オンに、パラジウム媒介シアノ化反応により導入することができる。［１１Ｃ］ＨＣＮを、［１１Ｃ］ＣｕＣＮに転換することができ、（Ｒ，Ｅ）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−３−（４−ヨード−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）プロパ−２−エン−１−オンと、ローゼンムント−フォンブラウン反応により反応させることができる。
【００９８】
【化２７】
0006723264.tif 000028
【００９９】
６）  ［１１Ｃ］ＯＣＨ３例、例えば（Ｒ，Ｅ）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−３−（４−［１１Ｃ］メトキシ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）プロパ−２−エン−１−オン、の合成
【０１００】
【化２８】
0006723264.tif 000029
表題化合物の前駆物質、（（Ｒ，Ｅ）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−３−（４−ヒドロキシ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）プロパ−２−エン−１−オン）を、相応するアルコールおよび５−メチル−２Ｈ−テトラゾルから調製した（３−ブロモ−４−（ブロモメチル）フェノキシ）トリイソプロピルシランを使用して、実施例１に示した合成スキームに従い入手して、（Ｒ，Ｅ）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）フェニル）プロパ−２−エン−１−オンを用意することができる。ＴＨＦ中のＴＢＡＦを使用してフェノールを続いて脱保護することにより、所要の前駆物資を用意することができる。
【０１０１】
（Ｒ，Ｅ）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−３−（４−ヒドロキシ−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）プロパ−２−エン−１−オンを、塩基の存在中で［１１Ｃ］ＣＨ３Ｉを使用してメチル化することにより、表題化合物をもたらすことができる。
【０１０２】
７）  ［１２３Ｉ］−、［１２４Ｉ］−または［１３１Ｉ］−含有例、例えば（Ｒ，Ｅ）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−３−（４−［１２３Ｉ］ヨード−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）プロパ−２−エン−１−オン、の合成
【０１０３】
【化２９】
0006723264.tif 000030
スタンナン前駆物質については、（Ｒ，Ｅ）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−３−（４−ヨード−２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）フェニル）プロパ−２−エン−１−オンを、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４などのパラジウム触媒の存在中でビス（トリブチルスズ）と反応させることにより、調製することができる。
【０１０４】
【化３０】
0006723264.tif 000031
【０１０５】
（Ｒ，Ｅ）−１−（４−（（５−（２−フルオロエトキシ）ピリジン−２−イル）メチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）−３−（２−（（５−メチル−２Ｈ−テトラゾル−２−イル）メチル）−４−（トリブチルスタンニル）フェニル）プロパ−２−エン−１−オンを、クロラミン−Ｔなどの酸化剤の存在中で［１２３Ｉ］ＮａＩ、［１２４Ｉ］ＮａＩまたは［１３１Ｉ］ＮａＩで処理することにより、表題化合物を得ることができる（＊Ｉ＝［１２３Ｉ］、［１２４Ｉ］または［１３１Ｉ］）。
【０１０６】
【化３１】
0006723264.tif 000032
【０１０７】
生物学的データ
本明細書に記載の化合物は、ＡＴＸ阻害剤であり、以下のアッセイにおいて試験し得る。
【０１０８】
試薬−  ＬＰＣ（ｏｌｅｏｙｌ（１８：１））はＡｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ社（Ａｌａｂａｓｔｅｒ、ＡＬ）から購入し、２０ｍＭにメタノール中で可溶化させた。Ａｍｐｌｅｘ  ＲｅｄはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社（Ｐａｉｓｌｅｙ、ＵＫ）から入手し、１０ｍＭにＤＭＳＯ中に溶解させた。コリンオキシダーゼおよびセイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）はＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社（Ｄｏｒｓｅｔ、ＵＫ）から入手し、それぞれ、２０Ｕ／ｍＬおよび２００Ｕ／ｍＬにＨＢＳＳ中に溶解させた。全ての試薬は単回使用分量で−２０℃にて保存した。全ての実験測定は使用直前に作ったアッセイバッファ中で行った（ＨＢＳＳ、本質的に脂肪酸フリーの０．０１％ＢＳＡ）。
【０１０９】
タンパク質−  組換えヒトＡＴＸは、ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）細胞標品中でＮｏｖａｒｔｉｓ社（Ｂａｓｅｌ、ＣＨ）において調製し、−８０℃にて保存した２６ｍｇ／ｍｌ（２６μＭ）ストックの単回使用分量で保存した。
【０１１０】
方法−  全ての実験測定は、ブラックの３８４ウエルポリスチレン（低ボリューム、ラウンドボトム、Ｃｏｒｎｉｎｇ社（３６７６））プレート中で行うこととする。ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社ＥｎＶｉｓｉｏｎ（蛍光強度／吸光度モノクロメーター）またはＴｅｃａｎ社Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  ２００  ＰＲＯシリーズプレートリーダーを使用して、蛍光強度の変化を検出した。
【０１１１】
ＡＴＸ阻害の評価−  ＡＴＸ活性を、ＡＴＸ（１０ｎＭ）、コリンオキシダーゼ（０．１Ｕ／ｍｌ）、ＨＲＰ（１００Ｕ／ｍｌ）、アンプレックスレッド（５０μＭ）およびＬＰＣ  １８：１（１０μＭ）を含有する反応物において放出されるコリンを測定することにより決定した。本発明の化合物は、１μＭからの１０ポイント段階希釈として二連で調製し、残りの試薬添加前に３７℃にて２０分間ＡＴＸとプレインキュベートした。遊離したコリンは、３７℃にて４０分の期間にわたり２分毎に生成物レゾルフィン（resurofin）の蛍光強度の変化（λｅｘ  ５３０ｎｍ、λｅｍ  ５９０ｎｍ）から測定した。ＡＴＸ活性は経過曲線の直線部分の、通常１４から２４分の間の傾きで測定した。
【０１１２】
データ解析−  傾きデータはＧｒａｐｈｐａｄ  ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ  ｓｏｆｔｗａｒｅ社、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）にエクスポートし、データを式１にフィッティングさせた。
式１：
Ｙ＝Ｂｏｔｔｏｍ＋（Ｔｏｐ−Ｂｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０−Ｘ）＊ＨｉｌｌＳｌｏｐｅ））
【０１１３】
ＩＣ５０値は、全活性を５０％低下させた化合物の濃度から決定し、ｎ≧２の平均値を表す。
【０１１４】
【表１−１】
0006723264.tif 000033
【０１１５】
【表１−２】
0006723264.tif 000034
以下の態様を包含し得る。
［１］  一般式（Ｉ）
【化３２】
0006723264.tif 000035
の化合物、および／またはその薬学的に許容される塩
（式中、Ｒはハロゲン、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨ３、−ＣＨ３またはＣＮであり；およびＡは、ハロ−（Ｃ１〜６−アルキル）、ハロ−（Ｃ１〜３−アルキル）オキシ（Ｃ２〜４−アルキル）、またはハロ−（Ｃ１〜３−アルキル）オキシ（Ｃ２〜４−アルキル）オキシ（Ｃ２〜４−アルキル）から選択される少なくとも１つの置換基で置換されたピリジニル基またはオキサゾリル基である）。
［２］  ３Ｈを含有する、上記［１］に記載の化合物。
［３］  Ｒが−ＣＦ３または−ＯＣＦ３である、上記［１］に記載の化合物。
［４］  少なくとも１つの１８Ｆを含有する、上記［３］に記載の化合物。
［５］  Ｒがハロゲンである、上記［１］に記載の化合物。
［６］  Ｒが１８Ｆ、１９Ｆ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２７Ｉまたは１３１Ｉから選択される、上記［５］に記載の化合物。
［７］  Ａが１８Ｆ、１９Ｆ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２７Ｉまたは１３１Ｉの少なくとも１つを含有する、上記［１］に記載の化合物。
［８］  「１」と番号付きの炭素原子が１１Ｃ、１２Ｃまたは１４Ｃから選択される、上記［１］に記載の化合物。
［９］
【化３３−１】
0006723264.tif 000036
【化３３−２】
0006723264.tif 000037
から選択される、上記［１］に記載の化合物、および／またはその薬学的に許容される塩。
［１０］  ３Ｈ、１８Ｆ、１１Ｃまたは１４Ｃから選択される少なくとも１つの原子を含む、上記［９］に記載の化合物。
［１１］  （ｉ）必要のあると認められた対象に、式（Ｉ）の放射性標識された化合物を、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと；
（ｉｉ）前記化合物の取り込みをインビボのＰＥＴイメージングまたはＳＰＥＣＴイメージングにより検出するステップとを含む、
前記対象においてオートタキシンを検出するための、方法。
［１２］  （ｉ）対象に、上記［１］から［１０］のいずれか一項に記載の放射性標識された化合物を、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと；
（ｉｉ）ステップ（ｉ）で投与された前記放射性標識された化合物の取り込みをインビボのＰＥＴイメージングまたはＳＰＥＣＴイメージングにより検出するステップと；
（ｉｉｉ）ステップ（ｉ）で投与した化合物が放射性崩壊してしまうように適切な時間量を経過させるステップと；
（ｉｖ）（ａ）放射性標識されていないオートタキシンリガンドの、または（ｂ）オートタキシン基質の内因性レベルに影響する放射性標識されていない薬剤のいずれかの有効量を、ステップ（ｉ）で規定の式（Ｉ）の放射性標識された化合物またはその薬学的に許容される塩の同時投与をともなって投与するステップと；
（ｖ）ステップ（ｉｖ）で投与した式（Ｉ）の前記化合物の取り込みを、インビボのＰＥＴイメージングまたはＳＰＥＣＴイメージングにより、検出するステップとを含む、
オートタキシンに結合するリガンドの投与後に前記対象における非結合オートタキシンの百分率または百分率の変化を定量化するための、方法。
［１３］  ステップ（ｉｉｉ）において経過させる時間が放射性同位体の半減期の４倍超である、上記［１２］に記載の方法。
［１４］  ステップ（ｉｉｉ）において経過させる時間が放射性同位体の半減期の少なくとも６倍である、上記［１２］に記載の方法。
［１５］  上記［１］から［１０］のいずれか一項に記載の化合物の少なくとも１つまたはその薬学的に許容される塩を含む、組成物。
［１６］  ＰＥＴイメージングでの使用に適する、上記［１５］に記載の組成物。