(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
貯蔵寿命が向上した果実をもたらす変異キュウリ植物（ククミスサティバス）であって、
果実の貯蔵寿命を向上させる変異ステイグリーン遺伝子を含み、前記変異ステイグリーン遺伝子がホモ接合型で存在し、
前記変異ステイグリーン遺伝子が、配列番号２に示すアミノ酸配列、又は配列番号２に示すアミノ酸配列と９０％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含むクロロフィルデカルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードする野生型ステイグリーン遺伝子の制御領域又は非コード領域における１つ又は複数の変異を有し、前記変異ステイグリーン遺伝子の発現が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物におけるステイグリーン遺伝子の発現と比べて低下しているか、又は、
前記変異ステイグリーン遺伝子が、配列番号２に示すアミノ酸配列、又は配列番号２に示すアミノ酸配列と９０％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含むクロロフィルデカルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードする野生型ステイグリーン遺伝子のコード配列で変異しており、前記変異ステイグリーン遺伝子によってコードされたタンパク質の酵素活性が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物におけるステイグリーン遺伝子によってコードされたタンパク質の酵素活性と比べて低下している、変異キュウリ植物（ククミスサティバス）。
【請求項２】
前記酵素活性の低下が、トランケートされた又は非機能的なタンパク質をもたらす、前記野生型ステイグリーン遺伝子のコード配列における１つ又は複数の変異によって提供される、請求項１に記載の変異キュウリ植物（ククミスサティバス）。
【請求項３】
前記変異ステイグリーン遺伝子が前記野生型ステイグリーン遺伝子のコード配列で変異しており、これによって、１つ又は複数のアミノ酸置換、フレームシフト又は未成熟終止コドンがもたらされる、請求項１又は請求項２に記載の変異キュウリ植物（ククミスサティバス）。
【請求項４】
前記生じたアミノ酸置換が配列番号２の位置１５３に相当するロイシンの置換を含む、請求項３に記載の変異キュウリ植物（ククミスサティバス）。
【請求項５】
果実の貯蔵寿命を向上させる変異ステイグリーン遺伝子を含む変異キュウリ植物（ククミスサティバス）であって、前記変異ステイグリーン遺伝子が配列番号４に示すアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有するタンパク質をコードし、前記変異ステイグリーン遺伝子がホモ接合型で存在する、変異キュウリ植物（ククミスサティバス）。
【請求項６】
前記発現の低下が前記野生型ステイグリーン遺伝子の制御領域又は非コード配列における１つ又は複数の変異によって提供される、請求項１に記載の変異キュウリ植物（ククミスサティバス）。
【請求項７】
果実の貯蔵寿命を向上させる変異ステイグリーン遺伝子を含む変異キュウリ植物（ククミスサティバス）の種子、植物組織、果実又は植物部分であって、前記変異ステイグリーン遺伝子がホモ接合型で存在し、
前記変異ステイグリーン遺伝子が、配列番号２に示すアミノ酸配列、又は配列番号２に示すアミノ酸配列と９０％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含むクロロフィルデカルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードする野生型ステイグリーン遺伝子の制御領域又は非コード領域における１つ又は複数の変異を有し、前記変異ステイグリーン遺伝子の発現が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物におけるステイグリーン遺伝子の発現と比べて低下しているか、又は、
前記変異ステイグリーン遺伝子が、配列番号２に示すアミノ酸配列、又は配列番号２に示すアミノ酸配列と９０％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含むクロロフィルデカルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードする野生型ステイグリーン遺伝子のコード配列で変異しており、前記変異ステイグリーン遺伝子によってコードされたタンパク質の酵素活性が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物におけるステイグリーン遺伝子によってコードされたタンパク質の酵素活性と比べて低下している、種子、植物組織、果実又は植物部分。
【請求項８】
果実の貯蔵寿命を向上させる変異ステイグリーン遺伝子を含む、請求項１〜６のいずれか一項で定義された変異キュウリ植物から入手可能な、種子、植物組織、果実又は植物部分であって、前記変異ステイグリーン遺伝子がホモ接合型で存在し、
前記変異ステイグリーン遺伝子が、配列番号２に示すアミノ酸配列、又は配列番号２に示すアミノ酸配列と９０％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含むクロロフィルデカルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードする野生型ステイグリーン遺伝子の制御領域又は非コード領域における１つ又は複数の変異を有し、前記変異ステイグリーン遺伝子の発現が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物におけるステイグリーン遺伝子の発現と比べて低下しているか、又は、
前記変異ステイグリーン遺伝子が、配列番号２に示すアミノ酸配列、又は配列番号２に示すアミノ酸配列と９０％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含むクロロフィルデカルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードする野生型ステイグリーン遺伝子のコード配列で変異しており、前記変異ステイグリーン遺伝子によってコードされたタンパク質の酵素活性が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物におけるステイグリーン遺伝子によってコードされたタンパク質の酵素活性と比べて低下している、種子、植物組織、果実又は植物部分。
【請求項９】
貯蔵寿命が向上した果実をもたらす変異キュウリ植物（ククミスサティバス）を提供する方法であって、変異ステイグリーン遺伝子をキュウリ植物（ククミスサティバス）に導入するステップを含み、前記変異ステイグリーン遺伝子がホモ接合型で存在し、
前記変異ステイグリーン遺伝子が、配列番号２に示すアミノ酸配列、又は配列番号２に示すアミノ酸配列と９０％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含むクロロフィルデカルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードする野生型ステイグリーン遺伝子の制御領域又は非コード領域における１つ又は複数の変異を有し、前記変異ステイグリーン遺伝子の発現が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物におけるステイグリーン遺伝子の発現と比べて低下しているか、又は、
前記変異ステイグリーン遺伝子が、配列番号２に示すアミノ酸配列、又は配列番号２に示すアミノ酸配列と９０％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含むクロロフィルデカルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードする野生型ステイグリーン遺伝子のコード配列で変異しており、前記変異ステイグリーン遺伝子によってコードされたタンパク質の酵素活性が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物におけるステイグリーン遺伝子によってコードされたタンパク質の酵素活性と比べて低下している、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、貯蔵寿命が向上した果実をもたらすキュウリ植物（ククミスサティバス（Ｃｕｃｕｍｉｓ  ｓａｔｉｖｕｓ））に関する。さらに、本発明は、キュウリ植物（ククミスサティバス）の種子、植物組織、果実又は植物部分に関する。本発明のさらなる態様は、貯蔵寿命が向上した果実をもたらすキュウリ植物（ククミスサティバス）を提供する方法に関する。さらに別の態様によれば、本発明は、本向上した貯蔵寿命形質に関係する核酸及びアミノ酸に関する。
【背景技術】
【０００２】
キュウリ植物は、少なくとも３，０００年にわたって既に栽培されており、いくつかの異なる栽培品種が出現しており、これらが生育され、世界市場で販売されている。キュウリ果実は未熟な緑色の形態で主に食べられており、これは熟した黄色の形態が通常苦く且つ酸っぱくなるからである。したがって、キュウリ果実は、通常、まだ緑色の間に収穫され、一般に、漬け物産業及び生鮮市場の両方で使用され、後者での利用は、農業者にとって最高の付加価値を有する。しかし、その比較的短い貯蔵寿命のために、新鮮なキュウリ果実の貯蔵及び輸送は、難しく且つ高くつく。新鮮な生産物の貯蔵寿命を延ばすために一般に使用される冷却は、キュウリ果実に適用することができなく、これは、冷却傷害が原因で、この果実が低温での貯蔵に適さないからである。
【０００３】
例えば、キュウリ果実を密閉ホイルに包むこと又は制御条件（＞１０℃）下で貯蔵することによって、キュウリ果実の貯蔵寿命を延ばすことが知られている。しかし、それ故に、さらなる処理ステップ又は特定の貯蔵対策がとられなければならい。さらに、この方法では、ホイルに包まれた又は上記特定の条件下で貯蔵された特定のキュウリでのみ貯蔵寿命が延ばされる。さらに、キュウリをホイルに包むことによって貯蔵寿命が延ばされるけれども、これらの包まれたキュウリは、約２週の期間内に黄色くなる。
【０００４】
上記のことを考えれば、貯蔵寿命が延びた果実をもたらすキュウリ植物が当技術分野において必要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、数ある目的の中でも、貯蔵寿命が延びた果実をもたらすキュウリ植物を提供することが本発明の一目的である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
数ある目的の中でも、この目的は、添付の請求項１に従ってキュウリ植物を提供することによって達成される。
【０００７】
特に、数ある目的の中でも、この目的は、貯蔵寿命が向上した果実をもたらすキュウリ植物（ククミスサティバス）を提供することによって達成され、上記植物は、果実の貯蔵寿命を向上させる遺伝子又はステイグリーン遺伝子を含み、上記遺伝子又はステイグリーン遺伝子は、配列番号２に示すアミノ酸配列、又は９０％を超える同一性、例えば、９１％、９２％若しくは９３％を超える、好ましくは９４％を超える同一性、例えば、９５％を超える、より好ましくは９６％を超える同一性、例えば、９７％を超える、さらにより好ましくは９８％を超える同一性若しくは９９％を超える同一性を有するアミノ酸配列を含むタンパク質をコードし、上記遺伝子又はステイグリーン遺伝子の発現が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物における上記遺伝子又はステイグリーン遺伝子の発現と比べて低下しているか、又は上記タンパク質の酵素活性が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物における上記タンパク質の酵素活性と比べて低下している。
【０００８】
本発明を導いた研究では、驚くべきことに、本遺伝子の発現の低下又は本タンパク質の酵素活性の低下は、キュウリの標準的な貯蔵条件下で貯蔵した場合、５週までの期間にわたって貯蔵寿命が延びた果実をもたらすことが分かった。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】収穫してから４週後の従来技術のキュウリ及び本発明によるキュウリを示す写真である。
【図２】４週間が経った従来技術のキュウリ及び本発明によるキュウリを示す写真である。
【図３】Ｋｕｒｉｏｓ、ＷＴ、Ｈｅｔ及びＨｏｍの果実を収穫した後０日目、６日目、１３日目及び２０日目の味見評価の平均スコアを示すグラフである。
【図４】左から右に、新鮮なＫｕｒｉｏｓ、２８日間が経ったＫｕｒｉｏｓ、２８日間が経ったヘテロ接合性ＳＧＲ、２８日間が経ったホモ接合ＳＧＲを示す写真である。
【図５】左から右に、新鮮なＫｕｒｉｏｓ、２８日間が経ったＫｕｒｉｏｓ（野生型）、２８日間が経ったヘテロ接合ＳＧＲ、２８日間が経ったホモ接合ＳＧＲを示す写真である。
【図６】２週間貯蔵した子葉を示す写真である。
【図７】左から右に、野生型、ヘテロ接合ＳＧＲ及びホモ接合ＳＧＲの成熟葉を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本文脈で使用される場合、貯蔵寿命が向上したとは、収穫した未熟な緑色キュウリの貯蔵性の向上を意味し、ここでは、キュウリが、比較可能な標準的な収穫した未熟な緑色キュウリよりも長い期間にわたって緑色のままでいる。好ましくは、本キュウリは、４週又は５週までの期間にわたって緑色のままでいる。
【００１１】
本発明の植物は、標準的な貯蔵条件下で、キュウリ果実が緑色のままでいる期間を測定することによって、従来技術の植物と区別することができる。従来のキュウリ果実は、１又は２週以内に黄色くなるが、本発明によるキュウリ果実は、少なくとも４週又は少なくとも５週の期間後に黄色くなる。
【００１２】
さらに、本植物及び参照植物の発現レベルを、任意の適切な、一般に知られている分子生物学的技法、例えば、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）又はｍＲＮＡハイブリダイゼーションを使用して、決定することができる。
【００１３】
本発明によれば、酵素活性が、貯蔵寿命が延びたキュウリ果実をもたらさないキュウリ植物における本タンパク質の活性と比較して低下している。用語「貯蔵寿命が延びたキュウリ植物をもたらさない」は、適切な貯蔵性試験及び適切な参照植物、例えば親植物において測定した場合に、本発明のキュウリ果実について観察される貯蔵寿命より短い貯蔵寿命を示す。適切な参照植物は、親植物に加えて、市場性のあるキュウリ果実をもたらすと一般に指定される植物でもよい。
【００１４】
本タンパク質はクロロフィルデカルボキシラーゼ機能を有し、この場合、数ある反応の中でも、カルボキシル基が除去され、二酸化炭素が放出される。したがって、本活性低下は、酵素反応の出発化合物又は生成化合物のいずれかである化合物を測定するアッセイを使用して決定することができる。適切な代替法として、活性低下を本質的に示す、本タンパク質のタンパク質レベルを、例えば、両方とも当業者に一般に知られている技法であるＥＬＩＳＡ又はタンパク質ハイブリダイゼーションによって決定することができる。
【００１５】
本キュウリ植物は、キュウリ植物の変異誘発によって得ることができる。例えば、発現レベル又はタンパク質レベルのいずれかでの変異を、エチルメタンスルホネート（ＥＭＳ）などの変異原性化学物質を使用することによって、又はガンマ線若しくは高速中性子で植物材料を照射することによって、この植物に導入することができる。生じた変異は、定方向又はランダムであり得る。後者では、本遺伝子に変異を保有する変異誘発化植物を、ＴＩＬＬＩＮＧ（ゲノム中での標的化誘導性局所損傷（Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｌｏｃａｌ  Ｌｅｓｉｏｎｓ  ＩＮ  Ｇｅｎｏｍｅｓ））方法（ＭｃＣａｌｌｕｍら（２０００）Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｆｏｒ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８、４５５〜５７、及びＨｅｎｉｋｏｆｆら（２００４）ＴＩＬＬＩＮＧ．Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  ｍｅｅｔｓ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｇｅｎｏｍｉｃｓ．Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１３５、６３０〜６３６）を使用することによって、容易に同定することができる。手短に言えば、この方法は、Ｍ２世代における大規模コレクションの変異誘発化植物のゲノムＤＮＡから目的の遺伝子をＰＣＲ増幅することに基づく。ＤＮＡシークエンスによって、又はＣＥＬ−Ｉヌクレアーゼ（Ｔｉｌｌら（２００４）Ｍｉｓｍａｔｃｈ  ｃｌｅａｖａｇｅ  ｂｙ  ｓｉｎｇｌｅ−ｓｔｒａｎｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｎｕｃｌｅａｓｅｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３２、２６３２〜２６４１）などの一本鎖特異的ヌクレアーゼを使用する、点変異に対するスキャニングによって、本遺伝子に変異を有する個々の植物が同定される。
【００１６】
本発明のこの第１の態様の別の好ましい実施形態によれば、本向上した貯蔵寿命は、トランケートされた又は非機能的なタンパク質をもたらす、本遺伝子のコード配列における１つ又は複数の変異によって提供される。トランケートされたタンパク質は、ｍＲＮＡ又はｃＤＮＡレベルで遺伝子転写産物を解析することによって、容易に確認することができ、非機能的なタンパク質は、酵素アッセイにおいて又はコンフォメーション依存性抗体を使用して確認することができる。転写産物レベルでアッセイすることができる変異は、例えば、アミノ酸置換、フレームシフト又は未成熟終止コドンである。
【００１７】
本発明のこの第１の態様のさらに別の好ましい実施形態によれば、本向上した貯蔵寿命は、本遺伝子の制御領域又は非コード配列における１つ又は複数の変異によって提供される。本遺伝子の制御領域の例は、プロモーター及びターミネーター領域であり、非コード領域の例はイントロン、特に、その中のスプライシングに影響するモチーフである。
【００１８】
本発明のさらに好ましい実施形態では、本変異は、配列番号２の位置１５３のロイシン（又は「Ｌ」（Ｌｅｕ）と指定される）の置換を含むアミノ酸置換をもたらす。より好ましくは、配列番号２の位置１５３のロイシンはフェニルアラニン又は「Ｆ」（Ｐｈｅ）によって置換される。したがって、さらに好ましい実施形態では、本ステイグリーン遺伝子は、配列番号４に示すアミノ酸配列を含むタンパク質をコードする。本タンパク質をコードする遺伝子を含むキュウリ植物の果実について、少なくとも４週の貯蔵寿命の向上が観察されるので、配列番号４に示す本アミノ酸配列を含むこのタンパク質は、本発明の向上した貯蔵寿命形質と非常に相関する。
【００１９】
本発明のこの第１の態様のさらに別の好ましい実施形態によれば、本発現の低下は、本遺伝子の制御領域又は非コード配列における１つ又は複数の変異によって提供される。本遺伝子の制御領域の例はプロモーター及びターミネーター領域であり、非コード領域の例はイントロン、特に、その中のスプライシングに影響するモチーフである。
【００２０】
さらにより好ましい実施形態によれば、本ステイグリーン遺伝子はホモ接合型で存在し、それによって、キュウリ果実の貯蔵寿命を向上させる。或いは、本ステイグリーン遺伝子はヘテロ接合型で存在してもよく、それによって、中間の表現型をもたらす。
【００２１】
第２の態様によれば、本発明は、果実の貯蔵寿命を向上させるステイグリーン遺伝子を含むキュウリ植物（ククミスサティバス）の、或いは、本キュウリ植物から入手可能な又は本キュウリ植物に由来する、種子、植物組織、果実又は植物部分に関し、ステイグリーン遺伝子は、配列番号２に示すアミノ酸配列、又は９０％を超える同一性、好ましくは９４％を超える同一性、より好ましくは、９６％を超える同一性、さらにより好ましくは、９８％を超える同一性を有するアミノ酸配列をコードし、上記遺伝子の発現が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物における上記ステイグリーン遺伝子の発現と比べて低下しているか、又は上記タンパク質の酵素活性が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物における上記タンパク質の酵素活性と比べて低下している。
【００２２】
第３の態様によれば、本発明は、貯蔵寿命が向上した果実をもたらすキュウリ植物（ククミスサティバス）を提供する方法に関し、上記方法は、配列番号２に示すアミノ酸配列を含むタンパク質をコードするステイグリーン遺伝子、又は元の（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）配列番号２と９０％を超える配列同一性、好ましくは９４％を超える配列同一性、より好ましくは、９６％を超える配列同一性を有する遺伝子をキュウリ植物（ククミスサティバス）に導入するステップを含み、上記遺伝子の発現が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物における上記遺伝子の発現と比べて低下しているか、又は上記タンパク質の酵素活性が、貯蔵寿命が向上した果実をもたらさないキュウリ植物における上記タンパク質の酵素活性と比べて低下している。
【００２３】
第４の態様によれば、本発明は、貯蔵寿命が向上した果実、又は好ましくは少なくとも４週又は５週の期間にわたる貯蔵の間に緑色のままでいる果実をもたらすキュウリ植物（ククミスサティバス）を提供するための、配列番号２に示すアミノ酸配列を含むタンパク質をコードする遺伝子若しくはそのｃＤＮＡ配列、又は元の配列番号２と９０％を超える配列同一性、好ましくは９４％を超える配列同一性、より好ましくは、９６％を超える配列同一性を有するタンパク質をコードする遺伝子の使用に関する。
【００２４】
第５の態様によれば、本発明は、配列番号４に示すアミノ酸配列を含むタンパク質に関する。
【００２５】
第６の態様によれば、本発明は、配列番号３を含む核酸、好ましくは単離核酸に関する。
【００２６】
第７の態様によれば、本発明は、配列番号４を含むアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子又はステイグリーン遺伝子に関する。
【００２７】
第８の態様によれば、本発明は、配列番号３を含む核酸配列を含む遺伝子又はステイグリーン遺伝子に関する。
【００２８】
第９の態様によれば、本発明は、上記で定義された遺伝子又はステイグリーン遺伝子に関し、すなわち、上記遺伝子又はステイグリーン遺伝子は、配列番号２に示すアミノ酸配列、又は９０％を超える同一性、例えば、９１％、９２％若しくは９３％を超える、好ましくは９４％を超える同一性、例えば、９５％を超える、より好ましくは、９６％を超える同一性、例えば、９７％を超える、さらにより好ましくは、９８％を超える同一性若しくは９９％を超える同一性を有するアミノ酸配列を含むタンパク質をコードし、上記遺伝子は変異をコード配列に含み、これによって、配列番号２に示すアミノ酸配列を含むタンパク質をコードする未変異遺伝子と比較して１つ又は複数のアミノ酸置換がもたらされる。
【００２９】
本発明を、以下の例示的な実施例でさらに説明する。実施例では、以下の図を参照する。
【実施例】
【００３０】
実施例１
キュウリ（ククミスサティバス）ハイブリッドＫｕｒｉｏｓの２０００個の種子を０．７５％（Ｗ／Ｖ）のエチルメタンスルホネート（ＥＭＳ）で１６時間処理した。この種子を数回水洗した後、ピートブロックに種子を蒔いた。初生葉が出現した後、頂端分裂組織を除去して、側生分裂組織の発達を誘導した。この手順を繰り返して、側生分裂組織の第１サイドシュートの成長を誘導した。この発達しているシュートの頂部から試料を得て、さらなる分子解析、すなわち、ＥＰ１９２９０３９にＶａｎ  Ｅｉｊｋ及びＶａｎ  Ｔｕｎｅｎによって記載されている、候補遺伝子の変異の検出を行った。
【００３１】
配列番号３を含む、ＥＭＳ処理に由来する植物を温室で生育させ、ここでキュウリ果実を収穫した。以下のスケールを使用して、果実の貯蔵寿命を貯蔵性試験において４週間測定した：（１）良い色（緑色）、（２）許容可能な色（ある程度、より薄い緑色）、（３）許容不可能な色（黄変の最初の発生）、（４）許容不可能な色（黄変）、（５）許容不可能な色（極度な黄変）。配列番号３を含まない植物に由来する従来のキュウリ果実も同じ貯蔵性試験において４週間測定した。
【００３２】
本発明によるキュウリは、連続的なスコア（１）をともなって、４週の期間の間に緑色のままでいた。従来のキュウリは、４週の試験期間の間のクロロフィルの分解の結果、通常の黄色がかった色を示し、４週後にスコア４に達する。図１は、左側に黄色がかった色を有する４週間が経った従来のキュウリがあり、右側に完全に緑色を有する４週間が経った本発明によるキュウリがある、写真を示す。さらに、配列番号３の存在は、キュウリ果実の果肉の色にも影響を及ぼした。４週間が経った従来のキュウリは、本発明の植物から収穫されたキュウリ（図２、右側を参照されたい）と比較して、通常のより薄い色を示す（図２、左側を参照されたい）。
【００３３】
実施例２
配列番号３を含むＥＭＳ処理由来植物を、未処理の種子（野生型／ＷＴ）に由来する植物及び参照品種のＫｕｒｉｏｓとともに温室で生育させた。本ステイグリーン遺伝子を保有する植物から、ヘテロ接合（Ｈｅｔ）型及びホモ接合（Ｈｏｍ）型の両方を植えた。
【００３４】
４つの異なる植物タイプの果実を０日目に収穫し、１７℃のクレート中に４週間貯蔵した。新鮮さ、水分、酸味／甘味、後味、色、臭い及び全体的な印象に注目して、味パネルによって果実の味を評価した。評価は、果実を収穫した後０日目、６日目、１３日目及び２０日目に行った。対照として、味見の日に、参照品種Ｋｕｒｉｏｓの新鮮な果実も収穫して、評価した。スケール１〜５を使用して、スコアを図３に示す。味見の４時点（０日目、６日目、１３日目、２０日目）で、４つの異なるタイプ（Ｋｕｒｉｏｓ、ＷＴ、Ｈｅｔ、Ｈｏｍ）の味の間にほとんど差がないと結論することができる。
【００３５】
４週の貯蔵後に、果実の写真を撮った。写真を図４及び５に示す。
【００３６】
２８日後のホモ接合ＳＧＲタイプの果実の外部の色が、摘み取った新鮮なＫｕｒｉｏｓ果実と少なくとも同程度に濃いことは明らかである。また、ホモ接合ＳＧＲタイプの果実の内部の色は、摘み取った新鮮なＫｕｒｉｏｓの果実、野生型及びヘテロ接合型より濃い。また、貯蔵寿命の他の態様（いぼ（ｂｌｉｓｔｅｒｓ）、穏やかなくびれ（ｓｏｆｔ  ｎｅｃｋ）など）はステイグリーン遺伝子の存在によって変化しないことが、図４及び５から結論することができる。
【００３７】
実施例３
ホモ接合型又はヘテロ接合型のいずれかで本ステイグリーン遺伝子を有する植物の種子を子葉段階まで生育させた。子葉を小植物から取り、ガラスプレートで覆ったプラスチック容器中に置いた。容器の内容物と環境の間で、起こり得る空気交換がなかったと考えられ得る。２週間の貯蔵の後、図６に示す写真が見られた。
【００３８】
ホモ接合型でステイグリーンを有する植物から収穫した種子の植物の子葉をグリッドＡ１〜Ｃ１１に配置した。ヘテロ接合型でステイグリーン遺伝子を有する植物から収穫した種子の植物の子葉をグリッドＤ１〜Ｆ１１に置いた。グリッドＤ１〜Ｆ１１には、（グリッドＡ１〜Ｃ１１と同様に）ホモ接合型でステイグリーン遺伝子を発現している８枚の子葉、及びこの発現を欠く２２枚の子葉が存在する。これらの子葉は、ステイグリーン遺伝子を欠くか、ステイグリーン遺伝子をヘテロ接合型で有するかのいずれかであり得る。８／２２の比は、単一の劣性遺伝子について期待される比を確証し、これは、本ステイグリーン遺伝子がホモ接合型で存在することを意味するものである。
【００３９】
実施例４
植物の下部にあるキュウリ植物の葉は、上部の葉に覆われているときに、古くなり、黄色くなり、そして崩壊し始めることは周知の事柄である。葉の崩壊は、中でも、クロロフィルの不活性によって引き起こされる。クロロフィルは葉に緑色を与えている。
（本ステイグリーン遺伝子を欠く）野生型植物、ヘテロ接合型で本ステイグリーン遺伝子を有する植物及びホモ接合型で本ステイグリーン遺伝子を有する植物を温室に植えた。植物の成熟段階（すなわち１０週後）で、下部の葉を摘み取り、並べて配置した。結果を図７に示す。
【００４０】
ホモ接合型で本ステイグリーン遺伝子を有する植物は、クロロフィルをより長期間維持できることが明らかである。同様に、ホモ接合型でこの遺伝子を含む植物は、より長期間にわたって光合成的に活性であり得ることが期待される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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