(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩の結晶であって、
０．２度の回折角に対する許容誤差で、５．０°、１９．６°、１３．８°および１８．５°の回折角２シータでのＸ線回折スペクトラムにおけるピークにより特徴づけられる、結晶。
【請求項２】
アルツハイマー病を治療するための医薬組成物であって、請求項１に記載の結晶を含む、組成物。
【請求項３】
軽度認知機能障害からアルツハイマー病への進行を治療するための医薬組成物であって、請求項１に記載の結晶を含む、組成物。
【請求項４】
治療における使用のための、請求項１に記載の結晶。
【請求項５】
アルツハイマー病の治療における使用のための、請求項１に記載の結晶。
【請求項６】
軽度認知機能障害からアルツハイマー病への進行の治療における使用のための、請求項１に記載の結晶。
【請求項７】
１つ以上の薬剤的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、請求項１に記載の結晶を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトルエンスルホン酸（トシル酸）塩、当該トシル酸塩を含有する医薬組成物、生理学的障害を治療するための当該トシル酸塩の使用方法、ならびにその合成に有用な中間体及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、アルツハイマー病、ならびにアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ：ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ）の神経毒性があり高度に凝集性のペプチド断片であるアミロイドβ（Ａベータ）ペプチドが関与する他の疾患及び障害の治療分野に関する。アルツハイマー病は、世界で数百万人の患者が罹患している破壊的な神経変性性疾患である。現在承認されている市販薬は患者に一過性で対症療法的な効果しかもたらしていないことを鑑みると、アルツハイマー病の治療には大きなアンメットニーズが存在する。
【０００３】
アルツハイマー病は脳内のＡベータの生成、凝集、及び沈着により特徴づけられる。β−セクレターゼ（ＢＡＣＥ：アミロイド前駆体タンパク質βサイト切断酵素：β−ｓｉｔｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｌｅａｖｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ）の完全阻害または部分阻害は、マウスモデルにおいてプラーク関連の病態またはプラーク依存性の病態に対して著しい効果を有することが示されていることから、Ａベータペプチド値のわずかな低下であっても、プラーク量及びシナプス障害に長期間の大幅な低減をもたらし得、特にアルツハイマー病の治療において多大な治療利益をもたらし得ることが示唆される。
【０００４】
米国特許第８，８４１，２９３号は、たとえばアルツハイマー病などのＡベータペプチド介在性障害の治療のための特定のＢＡＣＥ阻害剤を開示しており、特にＢＡＣＥ阻害剤のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド、及びその対応する塩酸塩を開示している。
【発明の概要】
【０００５】
医薬処方物の製剤及び製造における有用性を高めるために、固形状態の安定性、及び化学的な安定性が改善された新規の形態のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドが所望されている。したがって、本発明は、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩を提供するものである。さらに、本発明は結晶質であるＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩を提供するものである。本発明はさらに、回析角に対し０．２°の許容誤差で、１９．６°、１３．８°、及び１８．５°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上と組み合わされた、５．０°の回析角２シータでのＸ線回析スペクトルの実質的なピークにより特徴づけられる、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩を提供するものである。
【０００６】
本発明はまた、有効量のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩を、かかる治療を必要としている患者に投与することを含む、患者のアルツハイマー病を治療する方法を提供する。本発明はさらに、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩の有効量を、かかる治療を必要としている患者に投与することを含む、患者の軽度認知機能障害からアルツハイマー病への進行を治療する方法を提供する。本発明はまた、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩の有効量をかかる治療を必要としている患者に投与することを含む、患者においてＢＡＣＥを阻害する方法を提供する。本発明はまた、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩の有効量をかかる治療を必要としている患者に投与することを含む、アミロイド前駆タンパク質のＢＡＣＥ介在性切断を阻害する方法を提供する。本発明はさらに、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩の有効量をかかる治療を必要としている患者に投与することを含む、Ａベータペプチドの産生を阻害する方法を提供する。
【０００７】
さらに本発明は、治療、特にアルツハイマー病の治療、または軽度認知機能障害からアルツハイマー病への進行の治療における使用のためのＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩を提供する。さらに本発明は、アルツハイマー病の治療のための医薬品の製造、または軽度認知機能障害のアルツハイマー病への進行の治療のための医薬品の製造のためのＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩の使用を提供する。
【０００８】
さらに本発明は、回析角に対し０．２°の許容誤差で、１９．６°、１３．８°、及び１８．５°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上と組み合わされた、５．０°の回析角２シータでのＸ線回析スペクトルの実質的なピークにより特徴づけられる、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩の有効量を、かかる治療を必要としている患者に投与することを含む、患者のアルツハイマー病を治療する方法を提供する。本発明はまた、治療、特にアルツハイマー病の治療、または軽度認知機能障害からアルツハイマー病への進行の治療における使用のための、回析角に対し０．２°の許容誤差で、１９．６°、１３．８°、及び１８．５°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上と組み合わされた、５．０°の回析角２シータでのＸ線回析スペクトルの実質的なピークにより特徴づけられる、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩を提供する。さらに本発明は、アルツハイマー病の治療のための医薬品の製造、または軽度認知機能障害のアルツハイマー病への進行の治療のための医薬品の製造のための、回析角に対し０．２°の許容誤差で、１９．６°、１３．８°、及び１８．５°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上と組み合わされた、５．０°の回析角２シータでのＸ線回析スペクトルの実質的なピークにより特徴づけられる、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩を提供する。
【０００９】
本発明はさらに、１つ以上の薬剤的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩を含有する医薬組成物を提供する。本発明はまた、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩の合成のための新規の中間体及び方法を包含する。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
軽度認知機能障害は、臨床所見、及び軽度認知機能障害を示す患者が徐々にアルツハイマー型認知症へと進行することに基づいた、アルツハイマー病に関連した認知症の潜在的な前駆期として定義されている。（Morris, et al., Arch. Neurol., 58, 397-405 (2001); Petersen, et al., Arch. Neurol., 56, 303-308 (1999)）。「軽度認知機能障害のアルツハイマー病への進行の治療」という用語は、患者において、軽度認知機能障害がアルツハイマー病へと進行することを遅延させること、食い止めること、または回復にむかわせることを含む。
【００１１】
本明細書において用いられる場合、「治療すること」（ｔｒｅａｔｉｎｇ、またはｔｏ  ｔｒｅａｔ）という用語は、既存の症状もしくは障害の進行または重症度を抑えること、遅延させること、食い止めること、または回復にむかわせることを含む。
【００１２】
本明細書において用いられる場合、「患者」という用語は、ヒトを指す。
【００１３】
「Ａベータペプチド生成の阻害」という用語は、患者において、Ａベータペプチドのｉｎ  ｖｉｖｏレベルの低下を意味すると解釈される。
【００１４】
本明細書において用いられる場合、「有効量」という用語は、診断を受けた患者または治療を受けている患者において、当該患者への単回投与または反復投与により所望される効果をもたらす、本発明化合物もしくはその薬剤的に許容可能な塩の量または投与量を指す。
【００１５】
有効量は、公知の技術を使用することにより、及び類似した環境下で得られた結果を観察することにより、当業者としての担当診断医によって容易に決定することができる。患者の有効量の決定において、限定されないが、患者の種；大きさ、年齢、及び一般健康状態；関与する具体的な疾患または障害；疾患もしくは障害の程度、または関与、または重症度；個々の患者の反応性；投与される特定の化合物；投与方法；投与される製剤のバイオアベイラビリティの特徴；選択される用法；併用薬の使用；及び他の関連状況をはじめとする多くの因子が担当診断医により考慮される。
【００１６】
本発明の化合物は、一般的に広範な用量域で有効である。たとえば、１日当たりの用量は通常、約０．０１〜約２０ｍｇ／体重ｋｇの範囲内にある。一部の例において、前述の範囲の下限値を下回る用量レベルがより適切である場合もあり、一方で他の場合においては、許容可能な副作用と共にさらに多量の投与量が用いられる場合がある。従って、上述の用量域は決して本発明の範囲を限定することを意図していない。
【００１７】
本発明化合物は、好ましくは、経口、経皮、及び非経口の経路をはじめとする、化合物が生体利用可能となる任意の経路により投与される医薬組成物として製剤化される。最も好ましくは、かかる組成物は経口投与用、または経皮投与用であり、経口投与が特に好ましい。かかる医薬組成物、及び同組成物の製剤方法は当分野に周知である。（たとえばRemington: The Science and Practice of Pharmacy (D.B. Troy, Editor, 21st Edition, Lippincott, Williams & Wilkins, 2006を参照のこと）。
【００１８】
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩は、本発明の治療方法に特に有用であるが、特定の形態が好ましい。以下の段落にかかる形態を記載する。これら好ましい実施形態は、本発明の医薬組成物、治療方法、及び新規化合物に適用可能であることが理解されるであろう。
【００１９】
回析角に対し０．２°の許容誤差で、１９．６°、１３．８°、及び１８．５°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上と組み合わされた、５．０°の回析角２シータでのＸ線回析スペクトルの実質的なピークにより特徴づけられる、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドの結晶トシル酸塩が特に好ましい。
【００２０】
当業者は、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドが、スキームＡに示される互変異性体で存在し得ることを認識するであろう。本明細書において、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドの特定の互変異性体のうちの１つに何らかの言及がされた場合、互変異性体及びそれらのすべての混合物の両方が包含されることを理解されたい。
スキームＡ
【化１】
0006723250.tif 000002
【００２１】
さらに、以下のスキームに記載される特定の中間体は、１つ以上の窒素保護基を含有してもよい。その可変保護基は、実施される特定の反応条件及び特定の変換に依存して、各場合で同じであっても、異なっていてもよい。保護条件及び脱保護条件は、当業者には周知であり、文献中に記載されている（例えば、“Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis”, Fourth Edition, by Peter G.M. Wuts and Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, Inc. 2007を参照のこと）。
【００２２】
明確性を目的として、以下のスキームにおいて、ある立体化学中心は特定されないままであり、ある置換基は省略されているが、決して当該スキームの教示を限定することは意図されていない。さらに個々の異性体、鏡像異性体、及びジアステレオマーは、本発明化合物の合成における任意の都合のよいポイントで、たとえば選択的結晶化技術またはキラルクロマトグラフィーなどの方法により、当業者により分離または分割されてもよい（たとえば、J. Jacques, et al., "Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981、及びE.L. Eliel and S.H. Wilen,” Stereochemistry of Organic Compounds”, Wiley-Interscience, 1994を参照のこと）。「異性体１」及び「異性体２」という記号はそれぞれ、キラルクロマトグラフィーから１番目、及び２番目に溶出する化合物を指し、キラルクロマトグラフィーが合成の早い段階で開始された場合、この同じ記号が、引き続く中間体及び実施例にも適用される。
【００２３】
以下のように、いくつかの略語を定義する。「アセトニトリル」とは、ＡＣＮを指す。「ＡＰＰ」とは、アミロイド前駆タンパク質を指す。「ＣＳＦ」とは、脳脊髄液を指す。「ＤＣＭ」とは、ジクロロメタンを指す。「ＤＩＰＥＡ」とは、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピル−プロパン−２−アミン、またはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを指す。「ＤＭＥＭ」とは、ダルベッコ変法イーグル培地を指す。「ＤＭＦ」とは、ジメチルホルムアミドを指す。「ＤＭＳＯ」とはジメチルスルホキシドを指す。「ＥＤＣＩ」とは、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を指す。「ｅｅ」とは、鏡像体過剰率を指す。「ＥｔＯＡｃ」とは、酢酸エチルを指す。「Ｅｘ」とは、実施例を指す。「Ｆ１２」とは、ハムＦ１２培地を指す。「ＦＢＳ」とは、ウシ胎児血清を指す。「ＦＲＥＴ」とは、蛍光共鳴エネルギー移動を指す。「ＨＥＫ」とは、ヒト胎児腎細胞を指す。「ＨＯＡｃ」とは、酢酸を指す。「ＨＯＢｔ」とは、１−ヒドロキシルベンゾトリアゾール水和物を指す。「ＨＰＬＣ」とは、高速液体クロマトグラフィーを指す。「ＩＣ５０」とは、その剤に可能な最大阻害反応の５０％を生じさせる薬剤の濃度を指す。「ｍｉｎ」とは、分（複数含む）を指す。「ＭＴＢＥ」とは、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルを指す。「ＰＤＡＰＰ」とは、血小板由来アミロイド前駆タンパク質を指す。「Ｐｒｅｐ」とは、製造を指す。「ＲＦＵ」とは、相対蛍光単位を指す。「ＳＣＸ」とは、強カチオン交換を指す。「Ｒｔ」とは、保持時間を指す。及び「ＴＨＦ」とは、テトラヒドロフランを指す。
【００２４】
当業者は、「トシル酸」、「トルエンスルホン酸」、「ｐ−トルエンスルホン酸」、及び「４−メチルベンゼンスルホン酸」という用語が、以下の構造の化合物を指すことを理解している。
【化２】
0006723250.tif 000003
【００２５】
したがって、当業者は、本明細書において、以下の名称のいずれかに対する言及が、以下の構造の塩を指すことを理解している：
「Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩」、
「Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド；トルエンスルホン酸」、
「Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド；ｐ−トルエンスルホン酸」、及び
「Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド；４−メチルベンゼンスルホン酸」。
【化３】
0006723250.tif 000004
【００２６】
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩は、当分野に公知の様々な方法により製造することができ、そのうちのいくつかを以下の製造及び実施例において例示する。さらに、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドの遊離塩基、及びその対応するＨＣｌ塩は、米国特許第８，８４１，２９３号に記載されるように、当業者により製造することができる。記載されている各経路の特定の製造工程は、異なる方法で組み合わされてもよく、または本発明化合物を製造するための異なる製造からの工程と併合されてもよい。各工程の生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、ろ過、粉砕、または結晶化をはじめとする当分野で周知の標準的な方法により回収することができる。試薬及び出発物質は当業者が容易に入手可能である。
【００２７】
製造１
２−ブロモ−１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）エタノン
【化４】
0006723250.tif 000005
Ｎ−ブロモスクシンイミド（９８４ｇ、５．５３モル）を、１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）エタノン（１０００ｇ、４．６モル）及びｐ−トルエンスルホン酸（１３１５ｇ、７．６４モル）のＤＣＭ溶液（７Ｌ）に３５℃で分割して加える。混合物を攪拌し、４時間、４０℃に加熱する。混合物を２４℃まで冷却し、７％ＮａＨＣＯ３（５Ｌ）を添加する。層を分離させ、有機層を１０％Ｎａ２ＳＯ３（５Ｌ）及び水（５Ｌ）を用いて洗浄する。有機層を２〜３体積まで濃縮し、表題化合物を得て、それをさらなる精製を行うことなく用いる。
【００２８】
別の製造１
１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）エタノン（８０ｇ、０．３７モル）をＤＣＭ（８００ｍＬ）に溶解し、１０℃まで冷却する。臭素（６３ｇ、０．３９モル）を、５時間かけてゆっくりと添加する。３０分後、追加の臭素（３．５ｇ、０．０６モル）を添加する。３０分後、混合物を室温まで加温し、有機層を、ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ）とＮａＨＣＯ３水溶液（４００ｍＬ）の混合溶液を用いて洗浄する。有機層を、ＮａＨＣＯ３水溶液（４００ｍＬ）、ＮａＨＳＯ３水溶液（２×４００ｍＬ）、及びＮａＣｌ水溶液を用いて連続的に洗浄する。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮して残留物を得る。この残留物を、ＤＣＭ（１００ｍＬ）と石油エーテル（５００ｍＬ）の混合溶液中に溶解する。この溶液を０．５時間、−５０℃に冷却し、固形物をろ過により集め、表題化合物を得る（８４ｇ、７７％）。1H NMR (CDCl3)δ4.46 (d, 2H), 7.07 (dd, 1H), 7.66 (m, 1H), 8.02 (dd, 1H)。
【００２９】
製造２
２−［アリル（ベンジル）アミノ］−１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）エタノン
【化５】
0006723250.tif 000006
２−ブロモ−１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）エタノン（２５．１ｇ、８４．８ミリモル）を、Ｎ−ベンジルプロパ−２−エン−１−アミン（１５．０ｇ、１０２ミリモル）のトルエン（２００ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（５９ｍＬ、３３８ミリモル）の溶液に室温で添加する。この混合物の表面下に窒素をスパージングしながら、１０分間、室温で攪拌することにより、この混合物を脱酸素化する。反応物を４０℃まで加熱し、２．５時間攪拌し、次いで追加のＮ−ベンジルプロ−２−エン−１−アミン（２．０ｇ、１３．６ミリモル）を添加する。反応物を４．５時間、４０℃で攪拌し、その後室温まで冷却する。この物質を、さらに精製を行うことなく使用する。この溶液を、以下のパラメータを使用するＨＰＬＣにより、表題化合物に関して解析する：ＬＣカラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｕｌｔｒａ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＵＰＬＣ（登録商標））Ｃ８２．１×１００ｍｍ  １．７μｍ；移動相Ａ：ＴＦＡ（４ｍＬ）とＡＣＮ（１０ｍＬ）を水（４Ｌ）に添加することにより調製される０．１％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）ＴＦＡ水溶液＋０．２％ＡＣＮ（ｖｏｌ／ｖｏｌ）、移動相Ｂ：ＴＦＡ（４ｍＬ）をＡＣＮ（４Ｌ）に添加することにより調製される０．１％ＴＦＡのＡＣＮ溶液。勾配：％Ａ＝１０分間にわたり、９５％〜５３．１％、流速０．８５ｍＬ／分、カラム温度：４５℃。Ｒｔ＝６．４３分（ＵＶ）。
【００３０】
製造３
５−アリル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−１−［（４−メトキシフェニル）メチル−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール
【化６】
0006723250.tif 000007
２−ブロモ−１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）エタノン（１３６３ｇ、４．６１モル）のトルエン溶液（１０Ｌ）に、ジアリルアミン（５３７ｇ、５．５３モル）及びＤＩＰＥＡ（２３８１ｇ、１８．４２モル）を添加する。この混合物を４０℃で４時間攪拌し、単離されていない１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−（ジアリルアミノ）エタノンを得る。粗１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−（ジアリルアミノ）エタノンを含有するこの混合物に、Ｎ−（４−メトキシベンジル）ヒドロキシルアミン（８４７ｇ、５．５３モル）とチタン（ＩＶ）イソプロポキシド（１９６５ｇ、６．９１モル）を添加する。この混合物を９０℃で２時間攪拌する。この混合物を２０℃まで冷却し、５０％クエン酸一水和物（４Ｌ）と飽和Ｎａ２ＣＯ３（４Ｌ）を加える。層を分離させ、ＭＴＢＥ（５Ｌ）を用いて水層を抽出する。有機抽出物を、水（５Ｌ）で洗浄し、珪藻土を通してろ過し、乾燥するまで濃縮する。この残留物にＥｔＯＡｃ（１０Ｌ）及びシュウ酸（５８０ｇ）を加え、固形物をろ過し、１Ｎ  ＮａＯＨ（１３Ｌ）に加える。ＭＴＢＥ（５Ｌ）を加え、この混合物を、珪藻土を通してろ過する。層を分離させ、有機層を２体積まで濃縮する。ヘプタン（３Ｌ）を加え、溶液を１０℃まで冷却する。得られた固形物をろ過し、表題化合物を得る（１３３０ｇ、６４％）。1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 2.51-2.49(m, 3H), 3.09-3.04(m, 3H), 3.78-3.41(m, 6H), 4.01(m, 1H), 5.24-5.01(m, 2H), 5.89-5.85(m, 1H), 6.82-6.80(m, 2H), 7.51-7.13(m, 3H), 7.63-7.62(m, 1H), 7.65-7.64(m, 1H)。
【００３１】
製造４
相対−（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール、シュウ酸
【化７】
0006723250.tif 000008
Ｎ−［（４−メトキシフェニル）メチル］ヒドロキシルアミン（１５．５ｇ、１０１ミリモル）を、２−［アリル（ベンジル）アミノ］−１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）エタノンの溶液に４０℃で加え、次いでチタン（ＩＶ）イソプロポキシド（５０．３ｍＬ、１６９ミリモル）を加えた。この混合物を５分間、システムを通して窒素をスパージングすることにより脱酸素化する。この混合物を攪拌しながら２時間、９０℃まで加熱する。この反応混合物をクエン酸（３６ｇ、１８６ミリモル）の水溶液（３６ｇ）を用いて洗浄し、室温で３０分間攪拌する。飽和水溶液として炭酸ナトリウム（１００ｇ、９３９ミリモル）を加え、ｐＨをおよそ９に調節する。この混合物を必要に応じて水及びトルエンで希釈し、層を分離させる。トルエンの層を水（２００ｍＬ）で希釈したＨＣｌの水溶液（５．１ｍＬの５Ｎ  ＨＣｌ）、次いで水（２００ｍＬ）を用いて洗浄する。トルエン層を粘性のある油状物にまで濃縮する。この油状物をＥｔＯＡｃ（３７５ｍＬ）に溶解し、ＥｔＯＡｃ（３７５ｍＬ）に溶解させたシュウ酸（１５．４ｇ、１６９ミリモル）の溶液を室温で攪拌しながら滴下して加える。この混合物を２日間室温で攪拌し、ろ過し、生成物のケークをＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で洗浄する。固形物を４０℃、真空内で一晩乾燥させ、シスラセミ混合物（４１．７ｇ、８４％）として表題化合物を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９８（Ｍ＋Ｈ）。
【００３２】
製造５
相対Ｎ−［３−［（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−６ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−２，２，２−トリフルオロ−アセトアミド
【化８】
0006723250.tif 000009
相対−（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール、シュウ酸（２３．６ｇ、４０．２ミリモル）を、ＤＣＭ（４００ｍＬ）と５Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（２００ｍＬ）の混合溶液に加える。この混合物を１０分間攪拌し、次いで層を分離させる。有機層を濃縮して、相対−（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール（２０．０ｇ、４０．２ミリモル）を得る。この物質をジメチルスルホキシド（３６０ｍＬ）、２、２、２−トリフルオロアセトアミド（７．８ｇ、６８ミリモル）、ヨウ化ナトリウム（１０．３ｇ、６８．６ミリモル）、炭酸カリウム（９．５４ｇ、６８．３ミリモル）、（１Ｒ、２Ｒ）−Ｎ、Ｎ’−ジメチル−１、２−シクロヘキサンジアミン（４．７ｇ、３２ミリモル）、及びヨウ化銅（Ｉ）（１．５３ｇ、８．０３ミリモル）へと加える。この混合物を１０分間、システムを通して窒素をスパージングすることにより脱酸素化する。この混合物を１１５℃まで加熱し、５．５時間攪拌し、室温まで冷却する。ＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）及び水（２００ｍＬ）を加え、得られた混合物を１０〜１５分間攪拌する。層を分離させ、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）を用いて水層を逆抽出する。混合有機層を、塩化アンモニウム２０ｗｔ％水溶液（１００ｍＬ）、次いで塩化リチウム２０ｗｔ％水溶液（１００ｍＬ）及び水（１００ｍＬ）を用いて洗浄する。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、乾固するまで濃縮し、シスラセミ混合物として粗表題化合物を得る（２３．６ｇ、１１１％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５３０（Ｍ＋Ｈ）。
【００３３】
製造６
相対−３−［（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−１−（４−メトキシフェニル）メチル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−６ａ−イル］−４−フルオロ−アニリン
【化９】
0006723250.tif 000010
相対Ｎ−［３−［（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−６ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−２，２，２−トリフルオロ−アセトアミド（２１．０ｇ、３９．７ミリモル）をメタノール（２５０ｍＬ）、５Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（１０５ｍＬ）、及びエタノール（１０５ｍＬ）に加え、得られた混合物を２時間、５０℃に加熱する。反応混合物を減圧下、３５〜４０℃で濃縮し、メタノールとエタノールを除去する。この物質を、ＭＴＢＥ（３２０ｍＬ）と水（３００ｍＬ）の混合溶液中に溶解する。層を分離させ、有機層を水（１００ｍＬ）、次いで水（４００ｍＬ）と１２Ｎ  ＨＣｌ水溶液（３．５ｍＬ）の混合溶液で洗浄する。水層を、ＭＴＢＥ（４００ｍＬ）、水（１００ｍＬ）、及び５Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（２５ｍＬ）の混合溶液に加え、層を分離させる。水層をＭＴＢＥ（１００ｍＬ）で洗浄する。有機層を１つにまとめ、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空内で濃縮して、シスラセミ混合物として表題化合物を得る（９．８ｇ、５７％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３５（Ｍ＋Ｈ）。
【００３４】
製造７
相対−Ｎ−３−［（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−６ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］アセトアミド
【化１０】
0006723250.tif 000011
相対−３−［（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−１−（４−メトキシフェニル）メチル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−６ａ−イル］−４−フルオロ−アニリン（９．４ｇ、２２ミリモル）をＤＣＭ（１１０ｍＬ）、４−ジメチルアミノピリジン（０．０８ｇ、０．６５ミリモル）、及びトリエチルアミン（６．１ｍＬ、４３ミリモル）に加え、反応物を０℃に冷却する。この溶液に無水酢酸（３．４ｇ、３３ミリモル）を滴下して加える。反応物を室温まで加温し、２時間攪拌する。反応物に水（１４０ｍＬ）を加え、混合物を室温で１０分間、攪拌する。層を分離させ、水層をＤＣＭ（１００ｍＬ）で洗浄する。混合有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、濃縮してシスラセミ混合物として表題化合物を得る（１０．１ｇ、１００％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４７７（Ｍ＋Ｈ）。
【００３５】
製造８
５−アリル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール塩酸塩
【化１１】
0006723250.tif 000012
ＴＦＡ（４Ｌ、５２．９モル）を、５−アリル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−１−［（４−メトキシフェニル）メチル−３、３ａ、４、６−テトラヒドロピロロ［３、４−ｃ］イソキサゾール（１９９０ｇ、４．４５モル）のＤＣＭ溶液（１２Ｌ）に、温度が３５℃未満に維持される速度で滴下して加える。添加が完了した後、混合物を３３〜４３℃に加温し、６時間攪拌する。ＮａＯＨ（２０％、１０Ｌ）を、温度が３５℃未満に維持される速度で添加する。層を分離させ、有機層を水（６Ｌ）で洗浄する。溶液を濃縮し、エタノール（１６Ｌ）を添加し、混合物を、珪藻土を通してろ過する。ろ液を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（１０Ｌ）を加える。４Ｍ  ＨＣｌのＥｔＯＡｃ溶液（８Ｌ）を加え、得られた固形物をろ過し、乾燥させて表題化合物を得る（１３８５ｇ、８５．６％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２７．１（Ｍ＋Ｈ）。
【００３６】
製造９
［１−アリル−４−アミノ−４−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）ピロリジン−３−イル］メタノール
【化１２】
0006723250.tif 000013
５−アリル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール塩酸塩（１４００ｇ、３．８５モル）のＤＣＭ溶液（７Ｌ）に、ｐＨ＞９となるよう炭酸ナトリウムの飽和水溶液を加える。層を分離させ、有機抽出物を１．５体積まで濃縮する。ＨＯＡｃ（１．３８Ｌ）を加え、溶液を２Ｌまで濃縮する。ＨＯＡｃ（７Ｌ）及び亜鉛粉末（２．５ｋｇ、３８．５モル）を加え、混合物を４０〜５０℃に加熱し、３時間攪拌する。ＥｔＯＡｃ（９．８Ｌ）を加え、混合物を、珪藻土を通してろ過する。ろ過ケークをＥｔＯＡｃ（４Ｌ）で洗浄する。ろ液を分離させ、水（７Ｌ）を混合有機物に加える。水酸化アンモニウムを、ｐＨ≧９になるように加える。層を分離させ、有機層を２Ｌまで濃縮する。エタノール（２．８Ｌ）を加え、溶液を２Ｌまで濃縮する。エタノール（１９Ｌ）を加え、混合物を、珪藻土を通してろ過し、表題化合物のエタノール溶液を得て、それをさらなる精製を行わずに使用する。
【００３７】
製造１０
［（３Ｓ，４Ｒ）−１−アリル−３−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３−イル］アンモニウム；（２Ｓ，３Ｓ）−４−ヒドロキシ−２，３−ビス［（４−メチルベンゾイル）オキシ］−４−オキソ−ブタン酸塩
【化１３】
0006723250.tif 000014
ジ−ｐ−トルオイル−Ｌ−酒石酸一水和物（１．０４ｋｇ、２．６９モル）を、［１−アリル−４−アミノ−４−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）ピロリジン−３−イル］メタノール（１２６４ｇ、３．８５ミリモル）のエタノール溶液（２１Ｌ）に加える。混合物を６５〜７５℃に加熱し、３時間攪拌する。混合物を５〜１０℃に冷却し、［（３Ｓ，４Ｒ）−１−アリル−３−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３−イル］アンモニウム；（２Ｓ，３Ｓ）−４−ヒドロキシ−２，３−ビス［（４−メチルベンゾイル）オキシ］−４−オキソ−ブタン酸塩の種晶（１．０ｇ）を加え、混合物を３時間攪拌する。固形物をろ過し、ろ過ケークを冷エタノール（１．４Ｌ）で洗浄する。ろ過ケークを乾燥し、白色固形物として表題化合物を得る。第二の溶出異性体のキラル解析：カラム：ＩＣ  Ｃｈｉｒａｌｐａｋ、４．６ｍｍ×２５０ｍｍ×５μｍ；溶離液：９０％ヘキサン（０．３％ジエチルアミン）：１０％エタノール（０．３％ジエチルアミン）；流速１．０ｍＬ／分、ＵＶ２７０ｎｍによって、鏡像異性的に富化された（９９％ｅｅ）、Ｒｔ＝７．４分の鏡像異性体を確認する。1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 2.40(s, 6H), 3.05-3.04(m, 1H), 3.57-3.31(m, 3H), 3.66-3.58(m, 4H), 3.75-3.74(m, 2H), 5.38-5.36(m, 1H), 5.50-5.46(m, 1H), 5.88(s, 2H), 5.97-5.91(m, 1H), 7.10-7.05(m, 1H), 7.29(d, J=8.0 Hz, 4H), 7.53-7.51(m, 1H), 7.80-7.78(m, 1H), 8.01(d, J=8.0 Hz, 4H)。
【００３８】
製造１１
相対−１−［３−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３−イル］−４−フルオロ−フェニル］プロパン−２−オン、ジ−トルエンスルホン酸
【化１４】
0006723250.tif 000015
相対−Ｎ−３−［（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−６ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］アセトアミド（５．０ｇ、１１．０ミリモル）を、水（７５ｍＬ）、１０％パラジウム炭素（２．５ｇ、２３ミリモル）、ｐ−トルエンスルホン酸（５．０ｇ、２６ミリモル）、及びエタノール（７５ｍＬ）に加え、混合物を、２０時間、室温で５０ｐｓｉの水素雰囲気下、水素化する。混合物を、珪藻土を通してろ過し、パッドをエタノール（１００ｍＬ）、次いでＤＣＭ（１００ｍＬ）で洗浄する。ろ液を濃縮し、定量粗収率（８．１ｇ、＞１００％）で、シスラセミ混合物として表題化合物を得る。この材料をさらなる精製を行うことなく直接使用する。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２６８（Ｍ＋Ｈ）。
【００３９】
製造１２
（（３Ｒ，４Ｓ）−１−アリル−４−アミノ−４−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）ピロリジン−３−イル）メタノール
【化１５】
0006723250.tif 000016
１Ｎ  ＨＣｌ（５００ｍＬ、５００ミリモル）を、［（３Ｓ，４Ｒ）−１−アリル−３−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３−イル］アンモニウム；（２Ｓ，３Ｓ）−４−ヒドロキシ−２，３−ビス［（４−メチルベンゾイル）オキシ］−４−オキソ−ブタン酸塩（１００ｇ、１３９．４ミリモル）の０℃のＥｔＯＡｃ溶液（５００ｍＬ）に加える。この混合物を１時間攪拌する。水層を分離させ、ｐＨを、１Ｎ  ＮａＯＨを用いて８に調節する。水層を、ＥｔＯＡｃ（３５０ｍＬ×２）を用いて抽出する。有機層を混合し、水（５００ｍＬ）で洗浄し、濃縮して表題化合物を得る（４０ｇ、８７％）。第二の溶出異性体のキラル解析：カラム：ＩＣ  Ｃｈｉｒａｌｐａｋ、４．６ｍｍ×２５０ｍｍ×５μｍ；溶離液：９０％ヘキサン（０．３％ジエチルアミン）：１０％エタノール（０．３％ジエチルアミン）；流速１．０ｍＬ／分、ＵＶ２７０ｎｍによって、鏡像異性的に富化された（９９．７％ｅｅ）、Ｒｔ＝７．４分の鏡像異性体を確認する。1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 2.78-2.70(m, 5H), 3.16-3.00(m, 3H), 3.87-3.75(m, 1H), 3.90-3.84(m, 1H), 5.24-5.11(m, 2H), 5.91-5.87(m, 1H), 6.95-6.91(m, 1H), 7.35-7.32(m, 1H), 7.67- 7.65 (m, 1H)。
【００４０】
製造１３
相対−Ｎ−［３−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−アミノ−１−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３−イル］−４−フルオロ−フェニル］アセトアミド
【化１６】
0006723250.tif 000017
相対−１−［３−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３−イル］−４−フルオロ−フェニル］プロパン−２−オン、ジ−トルエンスルホン酸（７．５グラム、１２．３ミリモル）を、ＡＣＮ（７５ｍＬ）に加える。２−クロロ−５−フルオロピリミジン（２．４４ｇ、１８．４ミリモル）及びＤＩＰＥＡ（７．５ｍＬ、４３ミリモル）を加え、混合物を２０時間、７０℃に加熱する。混合物を室温まで冷却し、濃縮する。水（５０ｍＬ）を加え、混合物を１時間、スラリー形態として攪拌する。混合物をろ過し、真空下、室温で乾燥させ、シスラセミ混合物として表題化合物を得る（３．０ｇ）。残りの水溶液は、クロロホルム（３×２０ｍＬ）を用いて抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、乾固するまで濃縮し、真空内で乾燥させ、さらに表題化合物を得る（１．８ｇ）。総粗収率（４．８ｇ、１１０％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６４（Ｍ＋Ｈ）。
【００４１】
製造１４
Ｎ−（（（３Ｓ，４Ｒ）−１−アリル−３−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３−イル）カルバモチオイル）ベンズアミド
【化１７】
0006723250.tif 000018
イソチオシアン酸ベンゾイル（１５．０ｇ、９１．９ミリモル）を、（（３Ｒ，４Ｓ）−１−アリル−４−アミノ−４−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）ピロリジン−３−イル）メタノール（３０ｇ、９１．１ミリモル）の０℃のＴＨＦ溶液（４００ｍＬ）に加える。溶液を２５℃まで加温し、１時間攪拌して、表題化合物のＴＨＦ溶液を得て、それをさらに精製することなく使用する。
【００４２】
製造１５
Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリル−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル）ベンズアミド、ジヒドロクロリド
【化１８】
0006723250.tif 000019
トリフェニルホスフィン（３６．８ｇ、１４０．３ミリモル）を、Ｎ−（（（３Ｓ，４Ｒ）−１−アリル−３−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３−イル）カルバモチオイル）ベンズアミド（９１．１ミリモル）のＴＨＦ溶液（４００ｍＬ）に加える。アゾジカルボン酸ジ−ｔ−ブチル（３１．６ｇ、１３７．２ミリモル）のＴＨＦ溶液（１００ｍＬ）を加える。混合物を２時間、２０〜３０℃で攪拌する。混合物を濃縮し、ＭＴＢＥ（４００ｍＬ）を加える。溶液を、珪藻土を通してろ過し、ケークをＭＴＢＥ（１３０ｍＬ）で洗浄する。ろ液を１つにまとめ、１Ｎ  ＨＣｌのＥｔＯＡｃ溶液（２００ｍＬ）を加える。混合物を２時間攪拌し、次いで５００ｍＬに濃縮する。ＭＴＢＥ（３２０ｍＬ）を加え、溶液をろ過し、ヘプタン（１３０ｍＬ）で洗浄する。固形物をＥｔＯＡｃ（６５０ｍＬ）中でスラリー化させ、２時間、５０〜６０℃で攪拌する。熱いスラリーをろ過し、固形物をＥｔＯＡｃ（１３０ｍＬ）及びヘプタン（１３０ｍＬ）で洗浄する。固形物をＥｔＯＡｃ（６５０ｍＬ）中で再スラリー化させ、２時間、５０〜６０℃で攪拌する。熱いスラリーをろ過し、ＥｔＯＡｃ（１３０ｍＬ）及びヘプタン（１３０ｍＬ）で洗浄する。固形物を乾燥させ、二ＨＣｌ塩として表題化合物を得る（４０ｇ、８０％、９９．５％ｅｅ）。第一の溶出異性体のキラル解析：カラム：ＩＣ  Ｃｈｉｒａｌｐａｋ、４．６ｍｍ×２５０ｍｍ×５μｍ；溶離液：８５％ヘキサン（０．１％ジエチルアミン）：１５％イソプロピルアルコール（０．１％ジエチルアミン）；流速１．０ｍＬ／分、ＵＶ２８２ｎｍによって、鏡像異性的に富化された（９９．５％ｅｅ）、Ｒｔ＝１２．５分の鏡像異性体を確認する。
【００４３】
製造１６
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリル−７ａ−［２−フルオロ−５−［（２，２，２−トリフルオロアセチル）アミノ］フェニル］−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド
【化１９】
0006723250.tif 000020
１５％炭酸ナトリウム（４４０ｍＬ）を、Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリル−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル）ベンズアミド、ジヒドロクロリド（４９５ｇ、７１７．８８ミリモル）のＥｔＯＡｃ（３Ｌ）及び水（７８４ｍＬ）の溶液に加える。混合物を１〜２時間攪拌する。層を分離させ、有機層を、シリカゲル（４０ｇ）を通してろ過し、ＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）で洗浄する。ろ液を乾燥するまで濃縮し、Ｎ−（（４ａＲ、７ａＳ）−６−アリル−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４、４ａ、５、７−テトラヒドロピロロ［３、４−ｄ］［１、３］チアジン−２−イル）ベンズアミドを得る。トリフルオロアセトアミド（１３６．７ｇ、１．２１モル）、ＮａＩ（１８２．５ｇ、１．２２モル）、４Ａ分子篩（３４２ｇ）、及びＫ２ＣＯ３（１７０．９ｇ、１．２４モル）を、Ｎ−（（４ａＲ、７ａＳ）−６−アリル−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４、４ａ、５、７−テトラヒドロピロロ［３、４−ｄ］［１、３］チアジン−２−イル）ベンズアミド（３４１ｇ、４９４．５４ミリモル）のＤＭＳＯ（５２５ｍＬ）及び１、４−ジオキサン（１．０２５Ｌ）の溶液に加える。トランス−Ｎ、Ｎ’−ジメチルシクロヘキサン（８１．６ｇ、５７３．６６ミリモル）及びヨウ化銅（２７．３ｇ、１４３．３４ミリモル）のＤＭＳＯ溶液（５００ｍＬ）をこの反応混合物に加える。この混合物を５分間攪拌する。この混合物を１００℃まで加温し、８時間攪拌し、２４℃まで冷却する。水（５．９Ｌ）及びＤＣＭ（５．９ｌ）を加え、混合物をろ過し、層を分離させる。有機層を水（５．９Ｌ）で洗浄し、ＤＣＭ溶液で表題化合物を得て、それをさらなる精製を行うことなく使用する。
【００４４】
製造１７
相対−Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−５−（アセトアミド）−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド
【化２０】
0006723250.tif 000021
ＴＨＦ（３０ｍＬ）を、相対−Ｎ−［３−［（３Ｓ、４Ｒ）−３−アミノ−１−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３−イル］−４−フルオロ−フェニル］アセトアミド（４．１ｇ、１１．０ミリモル）に加える。この混合物を氷槽中で０℃まで冷却し、イソチオシアン酸ベンゾイル（１．５０ｍＬ、１１．０ミリモル）を加える。次いで、この混合物を３０分以上室温に加温させる。１、１’−カルボニルジイミダゾール（１．９ｇ、１１．０ミリモル）を加え、混合物を２時間、室温で攪拌する。次いで、この混合物を５５℃まで加熱し、さらに１８時間攪拌する。水（５０ｍＬ）を加え、混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出する。水層を、追加のＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）で抽出し、乾燥するまで濃縮する。粗残留物を、ＥｔＯＡｃ中、５０％ＤＣＭ、次いで１００％ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製する。適切な分画を濃縮し、真空下で乾燥させ、シスラセミ混合物として表題化合物を得る（１．３３ｇ、２６％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０９（Ｍ＋Ｈ）。
【００４５】
製造１８
Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリル−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル）ベンズアミド、塩酸塩
【化２１】
0006723250.tif 000022
ＮａＯＨ（２８．７ｇ）及び水（２．７Ｌ）を、Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリル−７ａ−［２−フルオロ−５−［（２，２，２−トリフルオロアセチル）アミノ］フェニル］−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（２５０ｇ、４９４．４ミリモル）のＤＣＭ溶液に加え、この混合物を２４℃で６８時間攪拌する。１Ｎ  ＨＣｌ（３．５Ｌ）を加え、ｐＨを１〜３とする。層を分離させ、水層をＤＣＭ（６８０ｍＬ）で洗浄する。ＤＣＭ（４Ｌ）を水層に加え、次いで２１％水酸化アンモニウムを加えて、ｐＨを８〜１０とする。層を分離させ、有機抽出物を１つにまとめ、シリカゲル（１７０ｇ）を通してろ過し、ＤＣＭ（１．４Ｌ）で洗浄する。溶媒を乾燥するまで濃縮し、ＥｔＯＡｃ（４Ｌ）で希釈する。１Ｎ  ＨＣｌのＥｔＯＡｃ溶液（７００ｍＬ）を２５℃未満の温度で加え、この混合物を１時間攪拌する。この混合物を７〜８体積まで濃縮し、ＥｔＯＡｃ（２．８Ｌ）を加える。得られた沈殿物をろ過し、ＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で洗浄する。固形物を乾燥させ、表題化合物を得る（２４６ｇ、５２％）。
【００４６】
製造１９
Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−６−アリル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル）ベンズアミド
【化２２】
0006723250.tif 000023
無水酢酸（２３．５ｇ、０．２３モル）を、Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリル−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル）ベンズアミド、塩酸塩（１００ｇ、０．１５３モル）及びトリエチルアミン（５４．３ｇ、０．５３５モル）のＤＣＭ溶液（８００ｍＬ）に加える。２０〜２５℃で１時間攪拌した後、飽和ＮａＨＣＯ３（７００ｍＬ）及び水（６００ｍＬ）を加える。層を分離させ、表題化合物を得て、それをＤＣＭ溶液としてさらなる精製を行うことなく使用する。
【００４７】
製造２０
Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル）ベンズアミド
【化２３】
0006723250.tif 000024
トリフェニルホスフィン（４．０ｇ、０．０１５モル）及び１、３−ジメチルバルビツール酸（１５．２ｇ、０．０９７モル）を、Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−６−アリル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル）ベンズアミド（０．１５３モル）のＤＣＭ溶液に加える。酢酸パラジウム（１．７ｇ、７．７ミリモル）を加え、この混合物を１時間、２０〜３０℃で攪拌する。２５％水酸化アンモニウムを加え、層を分離させる。有機層をＨＯＡｃ（５００ｍＬの水中、３．０当量）で洗浄し、２５％水酸化アンモニウムを用いてｐＨを８〜９に調節する。水層をＤＣＭ（２×５００ｍＬ）で抽出する。有機抽出物を１つにまとめ、３〜４体積に濃縮する。ＭＴＢＥ（１Ｌ）を加え、この混合物をろ過する。この混合物を濃縮し、ヘプタン（１Ｌ）を加える。得られた固形物をろ過し、回収し、乾燥させて表題化合物を得る（４８ｇ、７６％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.15 (s, 3H), 2.87-2.83(m, 1H), 3.43-3.23(m, 5H), 3.70-3.67(m, 1H), 7.12-7.07 (m, 1H), 7.28-7.27 (m, 1H), 7.52-7.41(m, 4H), 7.79(m, 1H), 8.18-8.16(m, 2H), ES/MS (m/z):  413.1 (M+H)。
【００４８】
製造２１
Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル）ベンズアミド
【化２４】
0006723250.tif 000025
２−クロロ−５−フルオロピリミジン（２８．９ｇ、２１８ミリモル）及び炭酸カリウム（３３．４６ｇ、２４２．１ミリモル）を、Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル）ベンズアミド（５０ｇ、１２１．２２ミリモル）のＤＭＦ溶液（１００ｍＬ）に加える。この混合物を８時間、８０〜８５℃に加熱する。この混合物を２４℃まで冷却し、ろ過し、ＤＭＦ（１００ｍＬ）で洗浄する。固形物を水（２Ｌ）中でスラリー化させ、ろ過し、表題化合物を得る（６８．５ｇ、９８％）。ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝５０９．２（Ｍ＋Ｈ）＋、1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm 1.22 (t, J = 7.28 Hz, 2 H) 1.92 - 2.07 (m, 6 H) 2.89 - 3.20 (m, 2 H) 3.36 - 3.44 (m, 1 H) 3.67 (t, J=9.54 Hz, 1 H) 3.84 (br. s., 1 H) 4.16 (br. s., 2 H) 7.23 (br. s., 2 H) 7.35 - 7.61 (m, 8 H) 7.77 (br. s., 2 H) 7.85 - 8.18 (m, 4 H) 8.48 (s, 4 H) 10.15 (br. s., 1 H) 10.46 - 10.59 (m, 1 H)。
【００４９】
製造２２
（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン
【化２５】
0006723250.tif 000026
水酸化リチウム（８．６ｇ、２０４．９ミリモル）を、Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル）ベンズアミド（８０ｇ、１５７．３ミリモル）のメタノール溶液（４００ｍＬ）に加える。この混合物を４時間、６０〜７０℃に加熱する。濃ＨＣｌ（１３２ｇ）を加え、この混合物を１８時間、５５℃で攪拌する。この混合物を３０℃まで冷却し、濃縮してメタノールを除去する。水を加え、水層をＤＣＭ（３×）で抽出し、９２０ｇの水溶液として表題化合物を得て、その総量の５．６％が表題化合物であり、それをさらなる精製を行うことなく使用する。
【００５０】
別の製造２２
硫酸（３３．４ｍｌ、６２６．６ミリモル）を、（４ａＲ、７ａＳ）−７ａ−（２−フルオロフェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４、４ａ、５、７−テトラヒドロピロロ［３、４−ｄ］［１、３］チアジン−２−アミン（４５．８ｇ、１２５、３ミリモル）のＴＦＡ溶液（６２６ｍＬ）に加える。この混合物を０℃に冷却し、２０分間攪拌する。発煙硝酸（６．２ｍＬ、１４４．１ミリモル）を加え、反応混合物を２２℃に加温し、その温度で３時間攪拌する。反応混合物を蒸発させ、ＭＴＢＥを加え（２５０ｍＬ）、２回蒸発させる。残留物を真空下で恒量まで乾燥させ、次いで水（１４７ｍＬ）及びエタノール（８８５ｍＬ）に溶解させ、１５分間、窒素を泡立てながら脱気する。溶液を耐圧反応容器に移し、１０％Ｐｄ／Ｃペーストタイプ８７Ｌ（６．６ｇ、６．２７ミリモル）を加える。この混合物を追加のエタノール（７００ｍＬ）で希釈し、１６時間、８０ｐｓｉで水素を用いて加圧する。この反応混合物をろ過し、次いで１０％Ｐｄ／Ｃペーストタイプ８７Ｌ（６．６ｇ、６．２７ミリモル）の第二の触媒充填を加え、混合物を８０ｐｓｉまで加圧し、耐圧反応容器中で３日間攪拌する。反応混合物に窒素をパージし、珪藻土を通してろ過する。ろ液を蒸発させ、残留物を水（２００ｍｌ）及びＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）の間で分割させる。水層を分離させ、５℃まで冷却し、水酸化アンモニウム１５％ｗ／ｗで中和する。水層を、ＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出する。有機層を１つにまとめ、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で蒸発させて、淡褐色の固形物として表題化合物を得る（４７．７ｇ、残留ＥｔＯＡｃ含有９９％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６３（Ｍ＋Ｈ）。
【００５１】
製造２３
Ｎ−アリル−Ｎ−（２，２−ジメトキシエチル）カルバミン酸ベンジル
【化２６】
0006723250.tif 000027
Ｎ−（２、２−ジメトキシエチル）カルバミン酸ベンジル（５０ｇ、２０８．９ミリモル）のトルエン溶液（１８０ｍＬ）を、窒素雰囲気下で固形状水酸化カリウム（５１．６ｇ、９１９．６９ミリモル）を用いて処置する。１０分後、塩化ベンジルトリエチルアンモニウム（０．８ｇ、３．１ミリモル）を加える。さらに１０分後、臭化アリル（３３ｇ、２７２．８ミリモル）のトルエン溶液（５０ｍＬ）を１０分にわたり滴下して加える。得られた混合物を４８時間、５０℃で攪拌する。混合物を室温まで冷却し、水でクエンチする。有機層を分離させ、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、乾固するまで濃縮し、表題化合物を得る（４４ｇ、７５％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８０（Ｍ＋Ｈ）。
【００５２】
製造２４
Ｎ−アリル−Ｎ−（２−オキソエチル）カルバミン酸ベンジル
【化２７】
0006723250.tif 000028
Ｎ−アリル−Ｎ−（２，２−ジメトキシエチル）カルバミン酸ベンジル（３０ｇ、１０７ミリモル）のギ酸（３６．８ｍＬ、８６０ミリモル）及び水（４．８４ｍＬ）の溶液を室温で一晩攪拌する。混合物を濃縮し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１：２）及び水で希釈する。有機層を分離させ、ｐＨ＝６までブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥する。溶媒を蒸発させ、表題化合物を得る（２５ｇ、９９％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２３４（Ｍ＋Ｈ）。
【００５３】
製造２５
Ｎ−アリル−Ｎ−［２−ヒドロキシイミノエチル］カルバミン酸ベンジル
【化２８】
0006723250.tif 000029
Ｎ−アリル−Ｎ−（２−オキソエチル）カルバミン酸ベンジル（２５ｇ、１０７ミリモル）のＡＣＮ溶液（１５０ｍＬ）を、ヒドロキシルアミン塩酸塩（９．６８ｇ、１３９ミリモル）、及び酢酸ナトリウム三水和物（１６ｇ、１１７．９ミリモル）の水溶液（７５ｍＬ）で処理する。混合物を室温で一晩攪拌する。ＡＣＮを蒸発させ、水溶液をＥｔＯＡｃで抽出する。有機層を分離させ、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空下で濃縮して表題化合物を得る（２４ｇ、９０％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２４９（Ｍ＋Ｈ）。
【００５４】
製造２６
３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−５−カルボン酸ベンジル
【化２９】
0006723250.tif 000030
Ｎ−アリル−Ｎ−［２−ヒドロキシイミノエチル］カルバミン酸ベンジル（２４ｇ、９６．６ミリモル）のＤＣＭ溶液（３３８ｍＬ）を、５％ｗ／ｗの次亜塩素酸ナトリウム水溶液（１０６．０８ミリモル、１４３．０６ｍＬ）を用いて１０分にわたり、滴下して処理する。得られた混合物を室温で一晩攪拌する。４０％重亜硫酸ナトリウム（７ｇ）の水溶液で反応をクエンチする。有機層を分離させ、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空下で濃縮する。粗生成物を、ヘキサン中、５％ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲル上で精製し、表題化合物を得る（１８ｇ、７５％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４７（Ｍ＋Ｈ）。
【００５５】
製造２７
６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−５−カルボン酸ベンジル
【化３０】
0006723250.tif 000031
ｎ−ブチルリチウム（２５．４ｍＬ、４０．６ミリモル）の１．６Ｍヘキサン溶液を、−７８℃の４−ブロモ−１−フルオロ−２−ヨードベンゼン（１２．２２ｇ、４０．６ミリモル）のＴＨＦ溶液（６０ｍＬ）に滴下して加え、黄色溶液を得て、それを１５分間、−７８℃で攪拌する。三フッ化ホウ素エーテラート（５．１４ｍＬ、４０．６ミリモル）を、別の−７８℃の３、３ａ、４、６−テトラヒドロピロロ［３、４−ｃ］イソキサゾール−５−カルボン酸ベンジル（５ｇ、２０．３ミリモル）のＴＨＦ溶液（６０ｍＬ）に加え、この混合物を５分間、−７８℃で攪拌する。この溶液を、前もって調製された−７８℃の有機リチウム混合物にカニューレを介して加える。混合された混合物を３０分間、−７８℃で攪拌する。この混合物を、飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチし、室温に加温する。この混合物をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出し、有機抽出物を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空内で溶媒を除去する。粗生成物を、３５分で、ヘキサン中、５％〜１００％ＥｔＯＡの勾配のシリカゲル上で精製し、表題化合物を得る（２．２７ｇ、２７％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）４２１／４２３（Ｍ＋Ｈ）。
【００５６】
製造２８
１−（ベンゾイルカルバモチオイル）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−５−カルボン酸ベンジル
【化３１】
0006723250.tif 000032
イソチオシアン酸ベンゾイル（２．８７ｍＬ、２１．２８ミリモル）を、６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−５−カルボン酸ベンジル（５．９７７ｇ、１４．２ミリモル）のＴＨＦ溶液（９５ｍＬ）に滴下して加え、窒素雰囲気下で一晩攪拌する。溶媒を真空内で除去する。粗生成物を、３０分で、ヘキサン中、５％〜１００％ＥｔＯＡｃ勾配のシリカゲル上で精製し、表題化合物を得る（６．０５ｇ、７３％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）５８４／５８６（Ｍ＋Ｈ）。
【００５７】
製造２９
３−（ベンゾイルカルバモチオイルアミノ）−３−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸ベンジル
【化３２】
0006723250.tif 000033
１−（ベンゾイルカルバモチオイル）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−５−カルボン酸ベンジル（６．０５ｇ、１０．４ミリモル）と亜鉛（亜鉛末、＜１０ミクロン）（６．７７ｇ、１０３．５ミリモル）の混合物を、窒素雰囲気下、一晩、室温で、ＨＯＡｃ（５２ｍＬ）中で攪拌する。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、珪藻土を通してろ過する。溶媒を真空内で除去し、残留物をＥｔＯＡｃ、水及び飽和重炭酸ナトリウム水溶液で希釈する。この混合物をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出し、混合有機層を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、溶媒を真空内で除去する。粗生成物を、３０分で、ヘキサン中、５％〜１００％ＥｔＯＡｃ勾配のシリカゲル上で精製し、表題化合物を得る（５．２２２ｇ、８６％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）５８６／５８８（Ｍ＋Ｈ）。
【００５８】
製造３０
２−ベンズアミド−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボン酸ベンジル
【化３３】
0006723250.tif 000034
１、１’−カルボニルジイミダゾール（２．８７ｇ、１７．７ミリモル）を、３−（ベンゾイルカルバモチオイルアミノ）−３−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸ベンジル（５．１９８ｇ、８．８６ミリモル）のＴＨＦ溶液（５２ｍＬ）に加える。この混合物を室温で１．５時間攪拌し、次いで反応物を一晩、窒素雰囲気下で加熱還流する。反応物を冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出する。有機層を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、溶媒を真空で除去する。粗生成物を、３０分で、ヘキサン中、５％〜１００％ＥｔＯＡｃ勾配のシリカゲル上で精製し、表題化合物を得る（２．９３ｇ、５８％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）．５６８／５７０（Ｍ＋Ｈ）。
【００５９】
製造３１
Ｎ−［７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド
【化３４】
0006723250.tif 000035
ヨードトリメチルシラン（２．２１ｍＬ、１５．４６ミリモル）を、室温の２−ベンズアミド−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボン酸ベンジル２．９３ｇ、５．１５ミリモル）のＡＣＮ溶液（４４ｍＬ）に滴下して加える。反応物を２時間、室温で攪拌し、溶媒を真空で除去する。粗生成物を、３：１のＤＣＭ：メタノール、次いでメタノール中、２：１のＤＣＭ：７Ｎ  アンモニアを用いたＳＣＸカラムで精製し、表題化合物を得る（２．０９８ｇ、９４％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）４３４／４３６（Ｍ＋Ｈ）。
【００６０】
製造３２
２−ベンズアミド−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化３５】
0006723250.tif 000036
ジ−ｔ−ブチルジカルボン酸（１．１６ｇ、５．３１ミリモル）及びトリエチルアミン（１．０１ｍＬ、７．２５ミリモル）を、Ｎ−［７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（２．０９８ｇ、４．８３ミリモル）のＤＣＭ溶液（４８ｍＬ）に加える。反応物を窒素雰囲気下で１時間、室温で攪拌する。溶媒を真空で除去し、粗生成物を、３０分で、ヘキサン中、５％〜１００％ＥｔＯＡｃ勾配のシリカゲル上で精製し、表題化合物を得る（２．５５６ｇ、９９％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）５３４／５３６（Ｍ＋Ｈ）。
【００６１】
製造３３
７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−２−ベンズアミド−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化３６】
0006723250.tif 000037
２−ベンズアミド−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．５５６ｇ、４．８ミリモル）とトランス−Ｎ、Ｎ’−ジメチル−１、２−シクロヘキサンジアミン（１５０ｍｇ、１．１ミリモル）のエタノール溶液（５０ｍＬ）を、アジ化ナトリウム（９３３ｍｇ、１４．３ミリモル）で処理する。Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム塩（０．６６Ｍ、３．２ｍＬ、２．１ミリモル）及び水（１ｍＬ）の水溶液を加え、フラスコの上部を窒素でパージする。この混合物を硫酸銅（ＩＩ）五水和物（０．３３Ｍ、３．２ｍＬ、１．１ミリモル）の水溶液で処理し、この混合物を、前もって８０℃に加熱されたホットプレート上で直ちに１．５時間、窒素雰囲気下で加熱する。均一な混合物は加熱を行うことで得られる。反応物を冷却し、氷水で希釈し、混合物をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出する。有機抽出物を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで乾燥さし、ろ過し、溶媒を真空で除去して粗アジ化生成物を得る。この粗アジ化生成物を、冷エタノール（１５０ｍＬ）中、１０％パラジウム炭素と混合させ、真空／窒素、次いで真空／水素を用いて混合物をパージする。この混合物を５時間、３０ｐｓｉの水素下、室温で攪拌する。反応物をベントし、珪藻土を通してろ過し、ろ過ケークをＤＣＭでリンスする。真空内でろ液から溶媒を除去し、粗生成物を、ＤＣＭ中、５０％ＥｔＯＡｃのシリカゲル上で精製し、表題化合物を得る（２．０１４ｇ、８９％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４７１（Ｍ＋Ｈ）。
【００６２】
製造３４
Ｎ−［７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド
【化３７】
0006723250.tif 000038
ＴＦＡ（１０ｍＬ）を、７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−２−ベンズアミド−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．０１３ｇ、４．２８ミリモル）のＤＣＭ溶液（３０ｍＬ）に加え、混合物を４時間、窒素雰囲気下、室温で攪拌する。溶媒を真空内で除去し、粗生成物を、３：１のＤＣＭ：メタノール、次いでメタノール中、２：１のＤＣＭ：７Ｎ  アンモニアを用いたＳＣＸカラムで精製し、表題化合物を得る（１．５５５ｇ、９８％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３７１（Ｍ＋Ｈ）。
【００６３】
製造３５
ラセミ体Ｎ−［７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド
【化３８】
0006723250.tif 000039
Ｎ−［７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（７０５ｍｇ、１．９０ミリモル）、５−フルオロ−２−クロロピリミジン（１．０１ｇ、７．６１ミリモル）、及びＤＩＰＥＡ（１．６６ｍＬ、９．５２ミリモル）の溶液を、１、４−ジオキサン（２０ｍＬ）中で４時間、窒素雰囲気下で加熱還流する。反応物を冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出する。有機層を１つにまとめ、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、真空で溶媒を除去し、粗生成物を得る。この粗生成物を、２５分で、ヘキサン中、５％〜１００％ＥｔＯＡｃ勾配のシリカゲル上で精製し、表題化合物を得る（５９０ｍｇ、６６％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６７（Ｍ＋Ｈ）。
【００６４】
製造３６
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド、（異性体１）
【化３９】
0006723250.tif 000040
ラセミ体Ｎ−［７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（１．６９４ｇ、３．６３ミリモル）を、キラルＨＰＬＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＪ、８ｘ３５ｃｍ；溶離液：９０％メタノール（０．２％ジメチルエチルアミン）及び１０％ＡＣＮ；流速４００ｍＬ／分、ＵＶ２８０ｎｍ）により精製する。最初に溶出された異性体の解析（カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＪ−Ｈ０．４６ｘ１５ｃｍ；溶離液：１０：９０のＡＣＮ：メタノール（０．２％ジメチルエチルアミン含有）；流速：０．６ｍＬ／分、ＵＶ２８０ｎｍ）により、鏡像異性的に富化された（９９％ｅｅ）、Ｒｔ＝６．７０分の鏡像異性体を確認する（７２３ｍｇ、４３％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６７（Ｍ＋Ｈ）。
【００６５】
製造３７
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド、異性体１
【化４０】
0006723250.tif 000041
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド、（異性体１）（０．３６１ｇ、０．７７ミリモル）を、ＤＣＭ（４ｍＬ）とＤＭＦ（０．５ｍＬ）の混合液中に溶解させる。５−メトキシピラジン−２−カルボン酸（２４０ｍｇ、１．５５ミリモル）、ＨＯＢＴ（２１０ｍｇ、１．５５ミリモル）及びＥＤＣＩ（３００ｍｇ、１．５５ミリモル）をこの混合液に加え、この混合液を室温で一晩攪拌する。反応溶液を１２ｇのシリカゲルローディングカラム上に直接加え、４０ｇのシリカゲルカラムを用いて、０〜１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配で溶出して精製する。生成物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）中に溶解させ、１Ｎ  ＮａＯＨ（２×５０ｍＬ）とブライン（１×５０ｍＬ）で洗浄する。シリカゲル精製を上述のように繰り返し、表題化合物を得る（３５０ｍｇ、７４％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：６０３（Ｍ＋Ｈ）。
【００６６】
製造３８
５−アリル−６ａ−（２−フルオロフェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール
【化４１】
0006723250.tif 000042
フローケミストリー反応工程：３４３ｍｌのシームレスなステンレススチールの菅型反応装置（ＯＤ＝１／８インチ）をＧＣオーブン内に配置し、２０分間、２０ｍＬ／分で、トルエンでフラッシュする。窒素背圧（７２０ｐｓｉｇ）を印加し、ＧＣの温度を２１０℃に設定する。温度が２１０℃に達した後、２−（ジアリルアミノ）−１−（２−フルオロフェニル）エタノンオキシム（４８０．５１ｇ、１．７４モル）のトルエン溶液（５．８１Ｌ）を、連続モードで作動する高圧シリンジポンプのペアを用いて、２２．８６６ｍＬ／分で、反応装置にポンプで送り出し、１５分の滞留時間を得る。すべての原液が消費された後、反応装置を３０分間、２２．８６６ｍＬ／分でトルエンを用いてフラッシュする。ＧＣオーブンの温度を２５℃に設定し、完了溶液を集め、真空下で濃縮する。溶媒を蒸発させ、残留物をＤＣＭ（２．５Ｌ）及び水（５Ｌ）に溶解させる。ＨＣｌを用いてｐＨを１に調節し、水層を分離させ、ＮａＯＨを用いて中和し、ｐＨを１０に調節する。水層を、ＭＴＢＥ（３×２．５Ｌ）を用いて抽出する。有機抽出物を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、乾固するまで蒸発させ、粗表題化合物を得て（２４８ｇ、４７％）、それをさらなる精製を行うことなく使用する。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４９（Ｍ＋Ｈ）。
【００６７】
製造３９
１−アリル−４−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−３−イル]メタノール
【化４２】
0006723250.tif 000043
亜鉛末（５９０ｇ、９モル）を、５−アリル−６ａ−（２−フルオロフェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール（３５５９ｇ、１．２９モル）の、メタノール（２．８５Ｌ）と飽和塩化アンモニウム水溶液（３．５６Ｌ）の混合溶液に添加し、この混合溶液を１６時間、７０℃で加熱する。反応溶液を６０℃に冷却し、ＴＨＦ（２．８５Ｌ）で希釈し、熱いうちに珪藻土を通してろ過する。ろ液を蒸発して有機溶媒を取り除き、水性混合物をクエン酸１０％ｗ／ｗ水溶液（４Ｌ）とＥｔＯＡｃ（３．５Ｌ）で希釈する。有機層を分離させ、水層をＥｔＯＡｃ（２×２Ｌ）で洗浄する。水層をＮａＯＨ  ５０％ｗ／ｗｔで中和し、ｐＨを１０に調節して、次いでＥｔＯＡｃ（２×１．５Ｌ）で抽出する。有機抽出物を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、乾燥するまで蒸発させ、粗表題化合物を得る（２９９ｇ、９２％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２５１（Ｍ＋Ｈ）。
【００６８】
製造４０
［（３Ｒ，４Ｓ）−１−アリル−４−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］メタノール；２，３−ビス［（４−メチルベンゾイル）オキシ］ブタン二酸
【化４３】
0006723250.tif 000044
ジ−ｐ−トルオイル−Ｌ−酒石酸（３４８．６ｇ、８８４ミリモル）の１−メトキシ−２−プロパノール溶液（１．１３Ｌ）を、前もって４０℃に加熱されていた［（３Ｒ、４Ｓ）−１−アリル−４−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］メタノール（２２５．９ｇ、９０２ミリモル）の１−メトキシ−２−プロパノール溶液（１．１３Ｌ）に加える。反応物を２２℃に冷却し、１８時間攪拌する。白色固形物をろ過により集め、１−メトキシ−２−プロパノール（６００ｍｌ）で洗浄する。集めた固形物を乾燥させ、表題化合物を得る（１８３．０１ｇ、３１．８％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２５１（Ｍ＋Ｈ）。
【００６９】
製造４１
［（３Ｒ，４Ｓ）−１−アリル−４−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］メタノール
【化４４】
0006723250.tif 000045
［（３Ｒ，４Ｓ）−１−アリル−４−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］メタノール；２，３−ビス［（４−メチルベンゾイル）オキシ］ブタン二酸（２１１ｇ、３３１ミリモル）を水（２．１Ｌ）とＥｔＯＡｃ（２．３Ｌ）に溶解させる。ＨＣｌ ３５％ｗ／ｗを加え、ｐＨを１に調節する。水層を分離させ、ＮａＯＨ ５０％ｗ／ｗを用いてｐＨを１０に調節し、ＥｔＯＡｃ（２×）を用いて抽出する。水層のｐＨを、ＮａＯＨ水溶液を用いて１０に調節し、水溶液のｐＨもｐＨ＝１０に維持しながらＭＴＢＥ（３×）を用いて抽出する。有機抽出物を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、乾燥するまで濃縮し、粗表題化合物を得る（７３ｇ、８８％、９４．８％ｅｅ）。この生成物をキラルクロマトグラフィー：カラムＡＳ−Ｈ、溶離液１０％イソプロピルアルコール、２％イソプロピルアミン；流速３ｍＬ／分、ＵＶ２２０；圧力は１００バール、３５℃、により解析し、２番目に溶出する異性体として表題化合物を得る。Ｒｆ＝２．２６分。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２５１（Ｍ＋Ｈ）。
【００７０】
製造４２
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリル−７ａ−（２−フルオロフェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド
【化４５】
0006723250.tif 000046
［（３Ｒ，４Ｓ）−１−アリル−４−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］メタノール（１２９．７ｇ、４１４ミリモル）のＴＨＦ溶液（２、３Ｌ）を窒素雰囲気下で０℃に冷却する。イソチオシアン酸ベンゾイル（６１．５ｍＬ、４５６ミリモル）を、５℃未満の温度を維持しながら加える。反応物を３時間にわたり室温に加温し、１、１’−カルボニルジイミダゾール（８７．４ｇ、５３８．９ミリモル）を加え、反応物を１時間、２２℃で攪拌し、次いで１６時間、７０℃に加熱する。反応混合物を２２℃に冷却し、溶媒を蒸発させる。残留物を、ＥｔＯＡｃ（１Ｌ）及び水（１Ｌ）で分割させる。有機層を分離させ、水層をＥｔＯＡｃ（２×４００ｍＬ）で抽出する。有機層を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、乾固するまで蒸発させ、粗表題化合物を得る。粗生成物を、０〜４０％のＤＣＭのＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、残留溶媒を含有する淡黄色の固形物として表題化合物を得る（１７０ｇ、９９％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９６（Ｍ＋Ｈ）。
【００７１】
製造４３
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（２−フルオロフェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド
【化４６】
0006723250.tif 000047
２−メルカプト−安息香酸（１２２ｇ、７９３ミリモル）、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（４．１５ｇ、７．２１ミリモル）、及び１、４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（３．１４ｇ、７．２１ミリモル）を、窒素雰囲気下でＮ−［（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリル−７ａ−（２−フルオロフェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（１７８．２１ｇ、３６０ミリモル）の無水２−メチルテトラヒドロフラン（１．９６Ｌ）溶液に加える。この溶液を、真空／窒素サイクルを３回行うことにより脱気し、次いで、この反応物に１５分間、窒素を泡立たせる。この反応物に窒素を泡立たせながら、反応混合物を４０℃に加熱する。反応物が４０℃に達した時点で、泡立てることを止め、反応混合物を窒素雰囲気下で３時間、４０℃で攪拌する。反応物を２２℃に冷却し、水（２Ｌ）で希釈する。ＨＣｌ（５Ｍ）溶液を加えてｐＨを１に調節する。水層を分離させ、追加のＥｔＯＡｃ（２×８００ｍＬ）で洗浄する。水層のｐＨを、ＮａＯＨ５０％ｗ／ｗを用いて１０に調節し、次いでＥｔＯＡｃ（１０Ｌ）を用いて抽出する。水層を追加のＥｔＯＡｃ（２×７５０ｍＬ）で洗浄する。有機抽出物を１つにまとめ、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、乾固するまで蒸発させ、淡黄色の固形物として粗表題化合物を得る（１２４．７ｇ、９７％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５６（Ｍ＋Ｈ）。
【００７２】
製造４４
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（２−フルオロフェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド
【化４７】
0006723250.tif 000048
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（２−フルオロフェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（１２４．７ｇ、２５６ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（６７ｍＬ）、５−フルオロ−２−クロロピリミジン（２９．３ｍｌ、３０７ミリモル）のＮ−メチルピロリドン溶液（９９７ｍＬ）を１６時間、１００℃に加熱する。反応物を２２℃に冷却し、１５℃未満の温度を維持しながら、１０℃に冷却された水（１０Ｌ）へと注ぐ。淡いクリーム状の固形物をろ過により集め、追加の水で洗浄する。湿った固形物をＥｔＯＡｃ（２Ｌ）に溶解させ、分離漏斗に移す。塩化ナトリウム水溶液５％ｗ／ｗ（１Ｌ）を加え、有機層を分離させ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を減圧下で蒸発させる。生成物を、０〜４０％ＥｔＯＡｃ／イソヘキサンの勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、淡黄色の固形物として表題化合物を得る（１１６ｇ、７０％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５２（Ｍ＋Ｈ）。
【００７３】
製造４５
（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（２−フルオロフェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン
【化４８】
0006723250.tif 000049
水酸化リチウム（９．２６ｇ、３８６ミリモル）を、Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（２−フルオロフェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（１５８．６ｇ、３５１．６ミリモル）のメタノール混合物（１．６Ｌ）に加える。この混合物を４時間、７０℃に加熱し、次いで２２℃に冷却する。反応混合物を真空下で黄色残留物になるまで蒸発させる。この残留物を水（１Ｌ）及びＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）で分割させる。ＨＣｌ（５Ｍ水溶液）を加え、ｐＨを１に調節する。水層を分離させ、有機層をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で洗浄する。水層のｐＨをＮａＯＨ５０％ｗ／ｗ水溶液を用いて、ｐＨ＝１０に調節し、ＥｔＯＡｃ（３×１Ｌ）を用いて抽出する。有機抽出物を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発させ、淡黄色固形物として粗表題化合物を得る（１３３．３ｇ、９９％、１２％の残留ＥｔＯＡｃを含有）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３４８（Ｍ＋Ｈ）。
【００７４】
製造４６
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化４９】
0006723250.tif 000050
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド、異性体１（０．３５０ｇ、０．５８ミリモル）をＴＨＦ（２ｍＬ）に溶解させ、次いでメタノール（４ｍＬ）及びエタノール（４ｍＬ）を加える。Ｏ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（４９５ｍｇ、５．８１ミリモル）及びピリジン（４７０μＬ、５．８１ミリモル）をこの混合物に加え、反応物を５０℃に加温し、一晩攪拌する。シリカゲル（約１０ｇ）を反応物に加え、混合物を濃縮する。シリカゲル上で乾燥されたサンプルを空のカートリッジにロードし、ＤＣＭ中、７Ｎ  アンモニアメタノールの０〜１０％勾配で溶出して精製する。生成物は、３：１のＤＣＭ：メタノール、次いでメタノール中、２：１のＤＣＭ：７Ｎアンモニアを用いたＳＣＸカラムで二度目の精製を行う。生成物に、ＤＣＭ中、７Ｎアンモニアメタノールの０％〜１０％勾配を用いたシリカゲル上で最終的な精製を行い、表題化合物の遊離塩基を得る。この物質をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解させ、１Ｍ  ＨＣｌのジエチルエーテル溶液（０．２０ｍＬ、６６０μモル）を加える。溶媒を真空内で除去して表題化合物を得る（７１ｍｇ、２３％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９８（Ｍ＋Ｈ）。
【００７５】
粉末Ｘ線回析（ＸＲＤ）
結晶質固形物のＸＲＤパターンは、３５ｋＶ及び５０ｍＡで作動する、ＣｕＫａ線λ＝１．５４０６０Åを備えたＢｒｕｋｅｒ  Ｄ４  Ｅｎｄｅａｖｏｒ粉末Ｘ線回析装置及びＶａｎｔｅｃ検出器で得る。サンプルは、工程サイズが２θの０．００９°、及びスキャン速度が０．５秒／工程で、２θで４〜４０°の間で、ならびに０．６ｍｍの発散（ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ）、５．２８の固定アンチスキャッター（ａｎｔｉ−ｓｃａｔｔｅｒ）、及び９．５ｍｍの検出スリットで、スキャンされる。乾燥粉末は石英の試料容器上にパックされ、ガラススライドを用いて滑面を得る。結晶形の回析パターンはを周囲温度及び相対湿度で集める。結晶学の分野において、任意の所与の結晶形に関し、回析ピークの相対強度は、たとえば結晶形態及び傾向などの因子に起因する優先される方向性によって変化しうることは周知である。優先される方向性の効果が存在する場合、ピーク強度は変化するが、多形体の特徴的なピーク位置は変化しない。たとえば、The United States Pharmacopeia #23, National Formulary #18, pages 1843-1844, 1995を参照のこと。さらに、結晶学分野において、任意の所与の結晶形に関し、角度のピーク位置は若干変化し得ることも周知である。たとえば、ピーク位置は、試料が分析される温度もしくは湿度の変動、試料の移動、または内部標準の有無によって変わり得る。本件の場合、２θで±０．２のピーク位置の変動性は、指定された結晶形の明確な特定を阻害することなく、これらの潜在的な変化を考慮している。結晶形の確認は、特徴的なピーク（°２θの単位）、典型的にはより突出したピークの任意の固有の組み合わせに基づき行われ得る。大気温度及び相対湿度で集められた結晶形回析パターンは、８．８５３及び２６．７７４度２シータでのＮＩＳＴ６７５標準ピークに基づき調節される。  
【００７６】
製造４７
結晶形２  Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド（水和物）
塩化オキサリル（８８８μＬ、１０．２ミリモル）を、５−メトキシピラジン−２−カルボン酸（１．６ｇ、１０．２ミリモル）のＡＣＮ（５３ｍＬ）及びＤＭＦ（８４８μＬ）の溶液に加える。１５分後、新たに調製した溶液を、前もって５０℃に加熱された（４ａＲ、７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４、４ａ、５、７−テトラヒドロピロロ［３、４−ｄ］［１、３］チアジン−２−アミン（２．６５ｇ、７．３ミリモル）の水（５３ｍＬ）及びエタノール（５３ｍＬ）の混合溶液に加える。反応混合物を１時間、５０℃で攪拌し、２２℃に冷却し、次いでこの温度で一晩攪拌する。有機溶媒を真空下で蒸発させ、水性混合物をＮａＯＨ５０％ｗ／ｗ水溶液で処理し、ｐＨ＝１０に調節する。淡いクリーム状の固形物を単離させ、追加の水で洗浄する。固形物をイソプロピルアルコール（２×）で希釈し、溶媒を蒸発させる。粗物質を、アンモニア処理メタノール（２Ｎ）／ＤＣＭの勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより精製する。所望の生成物を含有する分画を１つにまとめ、溶媒を蒸発させて、オフホワイトの固形物として表題化合物を得る（１．９ｇ、５２％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９９（Ｍ＋Ｈ）。
【００７７】
結晶形２  Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド（水和物）の別の調製法
ＡＣＮ（５００ｍＬ）をＤＭＦ（１９．２ｍＬ、２４８．９ミリモル）に加える。塩化オキサリル（３９．３ｇ、３０９．６３ミリモル）、次いで５−メトキシピラジン−２−カルボン酸（４６．０ｇ、２９８．４ミリモル）をこのＤＭＦ／ＡＣＮ溶液に加える。別のフラスコで、（４ａＲ、７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４、４ａ、５、７−テトラヒドロピロロ［３、４−ｄ］［１、３］チアジン−２−アミン（５６．８ｇ、１５６．７５ミリモル）の水溶液をＡＣＮ（５００ｍＬ）に加え、水酸化アンモニウム（９５ｍＬ）を用いてｐＨを９に調節する。この混合物を、次いで、５０〜５５℃に加熱する。塩化オキサリル溶液を滴下して加え、混合物を３時間攪拌する。水酸化アンモニウムを用いてｐＨを８〜９に調節する。得られた沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥させて表題化合物を得る（１２３ｇ）。固形物をアセトン（２５０ｍＬ）中で１．５時間スラリー化させ、ろ過する。湿性ケークをアセトンで洗浄し、表題化合物を得る（１１０ｇ、ＨＰＬＣによる純度は９０．５％）。ＴＨＦ（１Ｌ）及び活性炭（９ｇ）をこの固形物に加え、混合物を一晩加熱還流する。混合物を、珪藻土を通してろ過し、ＴＨＦ（１５０ｍＬ）で洗浄する。有機溶液を１０体積まで濃縮し、６０℃に加熱する。水（４３０ｍＬ）を加え、混合物を８時間、６０℃で攪拌する。混合物を室温まで冷却し、１０時間攪拌する。得られた固形物をろ過し、ＴＨＦ／水（７：６）で洗浄し、乾燥させて表題化合物を得る（６９ｇ、８８％）ＬＣ−ＭＳ：（ｍ／ｚ）４９９（Ｍ＋Ｈ）、純度：９８．３％。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δppm 2.99 - 3.07 (m, 2 H) 3.07 - 3.14 (m, 1 H) 3.58 - 3.67 (m, 1 H) 3.68 - 3.76 (m, 1 H) 3.76 - 3.84 (m, 1 H) 4.02 (s, 3 H) 4.07 (d, J=10.92 Hz, 1 H) 6.08 (s, 2 H) 7.19 (dd, J=11.98, 8.72 Hz, 1 H) 7.78 - 7.89 (m, 2 H) 8.41 (s, 1 H) 8.44 (s, 2 H) 8.88 (s, 1 H) 10.60 (s, 1 H)。
【００７８】
結晶形２  Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド（水和物）の一般的な製造手順
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドを、約７１ｍｇ／ｍＬ溶媒の濃度、約２３℃で、ＴＨＦ中でスラリー化させる。約６０℃〜約６３℃で発生する溶解まで、このスラリーを攪拌しながら加熱する。約９５：５のＴＨＦ：水の溶媒比率を得るよう、この熱い溶液に水を加える。Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドの結晶形２の種晶を加える（約３重量％の投入量）。得られた薄いスラリーを、約２０分間、約６０℃〜約６３℃に維持し、次いで約２〜約４時間にわたり、約５．３〜約５．５体積の水を加え、約６９：３１のＴＨＦ：水の溶媒比率とする。次いでこのスラリーを約３０分間、約６０℃〜約６３℃に維持し、その後、約１時間にわたり約２３℃に冷却し、次いで、約８〜１２時間、攪拌する。次いでこのスラリーをろ過し、ＴＨＦ：水（３５：６５）を用いて軽くリンスし、低真空下、約４０℃で約８〜１２時間乾燥させ、水和された所望の結晶形２のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドを得る。
【００７９】
結晶形２のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドの調製試料は、以下の表１に記載されるように、回析ピーク（２シータ値）を有するとして、ＣｕＫａ線を用いたＸＲＤパターンにより特徴解析される。具体的には、このパターンは、０．２度の回析角に対する許容誤差で、１８．６°、１９．３°、及び２６．７°からなる群から選択されるピークのうち１つ以上と組み合わせて、１１．８°でピークを有する。
表１：結晶形２の粉末Ｘ線回析ピーク
【表１】
0006723250.tif 000051
【００８０】
結晶形２のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドは、室温及び約１５％超の相対湿度で安定な結晶形である。
【００８１】
製造４８
結晶形３のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドを熱重量分析のパンにロードし、約１７０℃に加熱して、約５分間、１７０℃で維持する。この混合物を室温に冷却し、表題化合物を得る。
【００８２】
結晶形３のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドの別の製造。
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド（１２１ｍｇ）とＡＣＮ（５ｍＬ）をバイアル中で混合し、９０℃の攪拌プレート上で加熱する。約３０分後、固形物のほとんどが溶解し、濁った溶液を得る。結晶形３の種晶を加え、試料を約９０℃で約１時間、攪拌する。加熱器を取り除き、混合物を攪拌して、明白色の固形物を得る。固形物を真空ろ過により単離し、約１０分間、エアースチーム下で乾燥させ、次いで約８〜１２時間、約８０℃、低真空下で乾燥させ、表題化合物を得る。
【００８３】
結晶形３のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドの製造試料は、以下の表２に記載されるように、回析ピーク（２シータ値）を有するとして、ＣｕＫａ線を用いたＸＲＤパターンにより特徴解析される。具体的には、当該パターンは、０．２度の回析角に対する許容誤差で、１８．１°、２７．０°、及び１９．７°からなる群から選択されるピークのうち１つ以上と組み合わせて、１５．７°でピークを有する。
表２：結晶形３の粉末Ｘ線回析ピーク
【表２】
0006723250.tif 000052
【００８４】
実施例１
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド：トルエンスルホン酸
【化５０】
0006723250.tif 000053
水和された結晶形２のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド（１４９．１５ｍｇ）を酢酸エチル（２ｍＬ）に加える。試料を８０℃の温度、１０００ｒｐｍで攪拌する。ｐ−トルエンスルホン酸（７０ｍｇを酢酸エチル（１ｍＬ）に溶解）を、この攪拌溶液に加え、それを一晩、８０℃で攪拌して、白色固形物のスラリーを生成し、それを真空ろ過により単離して、表題化合物を得る。
【００８５】
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド：トルエンスルホン酸の別の製造Ａ
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド（９．５ｇ、１９ミリモル）及びｐ−トルエンスルホン酸（３．８０ｇ、１９．８ミリモル）をテトラヒドロフラン（３１ｍＬ）、水（７．９ｍＬ）、及び２−プロパノール（８．６ｍＬ）に加える。この溶液を４０℃に加熱する。加温された溶液に、およそ３時間かけて２−プロパノール（２００．０ｍＬ）を加える。２−プロパノールの添加開始後すぐに、この混合物に表題化合物の一部（５００ｍｇ、０．７５ミリモル）を播種する。溶媒添加が完了した後、この混合物を１〜３時間かけておよそ２０℃にまで冷却する。およそ２０℃からおよそ５５℃にまで、２時間の目標時間をかけてこの混合物を加熱する。１時間、５５℃に温度を維持し、次いでおよそ４時間かけて約２０℃まで冷却する。少なくとも１０時間、およそ２０℃でスラリーを攪拌する。このスラリーをろ過し、湿性ケークを水（５７ｍＬ）で洗浄する。生成物を４５℃、真空で少なくとも１０時間乾燥させ、表題化合物を得る（１０．４ｇ、８１％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５００（Ｍ＋Ｈ）。
【００８６】
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド：トルエンスルホン酸の別の製造Ｂ
水和されたＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド（２０．７ｇ）を、窒素バブラー、テフロン(登録商標)バナナ刃を有するガラスシャフトに付加されたＩＫＡ（登録商標）機械電動機／撹拌機、及びプログラム可能Ｊ−ＫＥＭ（登録商標）温度制御装置に連結された熱電温度計を備えた５００ｍＬの三つ首丸底フラスコ中に、６０：４０のＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（８５ｍＬ）中、１７０ｒｐｍでスラリー化させる。ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（７．６ｇ、１．０３当量）を、６０：４０のＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）の混合液中に溶解させ、この溶液を、攪拌中のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのスラリーに２３℃で、一度にすべて加え、ほぼ瞬時に澄んだ赤色調の褐色溶液とさせる。次いで攪拌速度を１５分かけて２００ｒｐｍに上げ、水（２２ｍＬ）をこの溶液に加え、次いでＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドトルエンスルホン酸（７５０ｍｇ、３ｗｔ％の種投入量）を用いてそれに播種し、次いでさらに１５分間、２３℃で攪拌する。６時間かけて、水（２２６ｍＬ、総溶媒量は３５３ｍＬ；または１３．６体積。最終溶媒比率は１７．５：８２．５のＴＨＦ：Ｈ２Ｏ）をスラリーに加え、次いでそれを一晩（２２時間）、２３℃で攪拌する。スラリーを、バキュームを介してろ過し、１５：８５のＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（２×２０ｍＬ）を用いてリンスし、次いで２０分間、生成物の湿性ケーク中に形成される亀裂を手でぴったりと押しながらバキューム上に置く。湿性固形物を約７２時間、真空下、４０℃で乾燥させ、白色結晶質固形物として表題化合物を得る（２４．０７ｇ、９０．０ｗｔ％）。
【００８７】
結晶質のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド；トルエンスルホン酸は、以下の表３に示されるように回析ピーク（２シータ値）を有するとして、特に、０．２度の回析角に対する許容誤差で、１９．６°、１３．８°、及び１８．５°からなる群から選択されるピークのうち１つ以上と組み合わせて、５．０°の回析角２シータでピークを有するとして、ＣｕＫａ線を用いたＸＲＤパターンにより特徴解析される。
表３：実施例１の結晶の粉末Ｘ線回析ピーク
【表３】
0006723250.tif 000054
【００８８】
約１５％未満の相対湿度では、結晶形１のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドの遊離塩基が存在し、一方で約１５％を超える相対湿度では、結晶形２のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドが優勢を占めることが判明している。このような物理的不安定さは特に原薬または医薬品にとって望ましいものではなく、その両方とも固形状態の剤型に関し、調節管理下におかれなければならない。遊離塩基の結晶形とは対照的に、トシル酸塩は、広範な相対湿度（５〜９５％）にわたり改善された物理的安定性を有している。したがって、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩は、本質的に、その対応する遊離塩基の結晶形と関連した湿度依存性の相変態を回避する。さらにＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩は、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのＨＣｌ塩に保持される溶媒が約７．７％であるのに比較し、結晶形に保持される溶媒の量は約１．３％とかなり低い量であることが判明している。遊離塩基が長期間の保存の間に相転移を経る可能性が増大することによって、例えば溶解性または溶出速度などの特性に変動が生じ得、医薬品の性能を損なう場合がある。また、結晶構造（複数含む）が非晶形へと崩壊するさらなるリスク、または欠陥及び障害が蓄積するさらなるリスクをもたらし、これによって化学的不安定さが生じ、製剤の保存可能期限が低下する。
【００８９】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの手順
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏの酵素アッセイ及び細胞アッセイを行うために、被験化合物をＤＭＳＯ中で調製し、１０ｍＭのストック溶液を作製する。このストック溶液を９６ウェルの丸底プレート中、ＤＭＳＯで連続希釈し、最終化合物濃度は１０ｍＭ〜０．０５ｎＭの範囲で１０点の希釈曲線を得て、その後にｉｎ  ｖｉｔｒｏ酵素アッセイ及び全細胞アッセイを行う。
【００９０】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏプロテアーゼ阻害アッセイ
ヒトＢＡＣＥ１の発現
ヒトＢＡＣＥ１（アクセッション番号：ＡＦ１９０７２５）は、全脳ｃＤＮＡからＲＴ−ＰＣＲによりクローニングされる。アミノ酸配列番号１〜４６０に対応するヌクレオチド配列を、ヒトＩｇＧ１（Ｆｃ）ポリペプチドをコードするｃＤＮＡへと挿入する（Vasser, et al., Science, 286, 735-741 (1999)）。このＢＡＣＥ１（１〜４６０）とヒトＦｃの融合タンパク質を、ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃと名付け、ｐＪＢ０２ベクター中に構築させる。ヒトＢＡＣＥ１（１〜４６０）：Ｆｃ（ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃ）を、ＨＥＫ２９３細胞中で一過性発現させる。各構築物のｃＤＮＡ２５０μｇをＦｕｇｅｎｅ６と混合し、１リットルのＨＥＫ２９３細胞に添加する。トランスフェクションの４日後、精製のために馴化培地を回収する。
【００９１】
ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃの精製
ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃは、プロテインＡクロマトグラフィーにより精製される。酵素は、小分注物において、−８０℃で保存される。
【００９２】
ＢＡＣＥ１  ＦＲＥＴ分析
被験化合物の連続希釈は上述のように調製される。ＫＨ２ＰＯ４緩衝液中で化合物はさらに２０倍に希釈される。各希釈の１０μＬを、反応混合液（２５μＬの５０ｍＭＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ４．６、１ｍＭ  ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００、１ｍｇ／ｍＬ  ウシ血清アルブミン、及び１５μＭのＦＲＥＴ基質）を含有する、対応するタンパク質低結合黒色プレートのＡ列〜Ｈ列の各ウェルに加える（Yang, et. al., J. Neurochemistry, 91(6) 1249-59 (2004)を参照のこと）。内容物を１０分間、プレート振とう器上で良く混合する。ＫＨ２ＰＯ４緩衝液に溶解した２００ｐＭ  ヒトＢＡＣＥ（１〜４６０）：Ｆｃ（Vasser, et al., Science, 286, 735-741 (1999)を参照のこと）の１５μＬを、基質と被験化合物を含有するプレートに加え、反応を開始させる。０時点での混合物のＲＦＵを、プレート振とう器上で軽く混合した後、励起波長３５５ｎｍ、及び発光波長４６０ｎｍで記録する。反応プレートをアルミホイルで覆い、１６〜２４時間、室温で、加湿された暗いオーブン内で維持する。インキュベーション終了時のＲＦＵを、０時点で用いられたものと同じ励起及び発光の設定で記録する。０時点と、インキュベーション終了時のＲＦＵの差は、化合物処置下でのＢＡＣＥ１活性を表す。ＲＦＵの差は、阻害剤濃度に対してプロットされ、曲線は、４パラメーターロジスティック方程式に適合され、ＥＣ５０値及びＩＣ５０値を得る（Sinha, et al., Nature, 402, 537-540 (2000)を参照のこと）。
【００９３】
製造４６の化合物は、原則的に上述のように検証され、０．６１５ｎＭのＢＡＣＥ１  ＩＣ５０（±０．１０１、ｎ＝５）［平均±ＳＥＭ；ＳＥＭ＝平均標準誤差］を示した。このデータは、製造４６の化合物が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで精製組み換えＢＡＣＥ１酵素活性を阻害したことを示す。
【００９４】
ＰＤＡＰＰ初代神経細胞分析
また、確証的全細胞分析を、ＰＤＡＰＰトランスジェニック胎児マウスから作製された初代神経細胞培養中で行う。初代皮質神経細胞は、胎児１６日目のＰＤＡＰＰの胚から調製され、９６ウェルプレート中で培養される（１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）中、１５ｘ１０４細胞／ウェル）。ｉｎ  ｖｉｔｒｏで２日後、培養培地を、Ｂ２７サプリメント及び２μＭ（最終）のＡｒａ−Ｃ（Ｓｉｇｍａ社、Ｃ１７６８）を含有する無血清ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）と置き換える。ｉｎ  ｖｉｔｒｏで５日目、神経細胞を３７℃で２４時間、所望される濃度の阻害剤（ＤＭＳＯ希釈されている）の存在下／非存在下でインキュベートする。インキュベーション終了時、馴化培地を、たとえばＡベータペプチドの分析により、ベータ−セクレターゼ活性の兆候に関して分析する。総Ａベータペプチド（Ａベータ  １−ｘ）を、捕捉抗体としてモノクローナル抗体２６６を、及び報告抗体としてビオチニル化３Ｄ６を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡにより計測する。あるいは、Ａベータ１〜４０ペプチド及びＡベータ１〜４２ペプチドを、Ａベータ１〜４０に対する捕捉抗体としてモノクローナル抗体２Ｇ３を、Ａベータ１〜４２に対する捕捉抗体としてモノクローナル抗体２１Ｆ１２を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡにより計測する。Ａベータ１〜４０及びＡベータ１〜４２の両方のＥＬＩＳＡとも、報告抗体としてビオチニル化３Ｄ６を使用する。化合物処置後の馴化培地中に放出されたＡベータの濃度は、かかる条件下でのＢＡＣＥ１活性に相当する。１０点阻害曲線をプロットし、及び４パラメーターロジスティック方程式に適合させることにより、Ａベータ低減効果に対するＥＣ５０値及びＩＣ５０値が得られる。製造４６の化合物は原則的に上述のように検証され、Ａベータ低減効果に関し以下の活性を示した。
表４
【表４】
0006723250.tif 000055
平均±ＳＥＭ；ＳＥＭ＝平均の標準誤差。
【００９５】
これらのデータから、製造４６の化合物は全細胞において、Ａベータ産生を阻害することが示される。
【００９６】
ベータ−セクレターゼのＩｎ  ｖｉｖｏ阻害
マウス、モルモット、イヌ、及びサルをはじめとする数種類の動物モデルを用いて、化合物処置後のベータ−セクレターゼ活性のｉｎ  ｖｉｖｏでの阻害に関しスクリーニングを行ってもよい。本発明に用いられる動物は、野生型動物であっても、トランスジェニック動物であっても、または遺伝子ノックアウト動物であってもよい。たとえば、Games et al., Nature 373, 523-527 (1995)に記載されるように作製されるＰＤＡＰＰマウスモデル、ならびに他の非トランスジェニック動物または遺伝子ノックアウト動物が、阻害化合物の存在下での、Ａベータ及びｓＡＰＰベータ産生のｉｎ  ｖｉｖｏ阻害の解析に有用である。一般的に、２〜１２か月齢のＰＤＡＰＰマウス、遺伝子ノックアウトマウス、または非トランスジェニック動物に、たとえばトウモロコシ油、シクロデキストラン、リン酸緩衝液、ＰＨＡＲＭＡＳＯＬＶＥ（登録商標）、または他の適切なビヒクルなどのビヒクル内に製剤化された化合物が投与される。化合物投与の１〜２４時間後、動物は殺処分され、脳ならびに脳脊髄液及び血漿が、Ａベータ、Ｃ９９、及びｓＡＰＰ断片の解析のために回収される（May, et al., Journal of Neuroscience, 31, 16507-16516 (2011)参照）。
【００９７】
標準的なｉｎ  ｖｉｖｏ薬理学的実験に対し、動物は、様々な濃度の化合物を用いて投与され、同時に投与されたビヒクル処置対照群と比較される。基準値を確立するための０時点から始まり、実験経過の間、脳組織、血漿、または脳脊髄液が選択された動物から採取される。化合物または適切なビヒクルが、他の群に投与され、投与後、様々な時点で殺処分される。脳組織、血漿、または脳脊髄液は選択された動物から採取され、Ａベータペプチド、ｓＡＰＰベータ、及び他のＡＰＰ断片をはじめとするＡＰＰ開裂産物の存在に関し、たとえば特異的サンドイッチＥＬＩＳＡ分析などにより解析される。検証期間の終了時に動物は殺処分され、必要に応じて、脳組織、血漿または脳脊髄液がＡベータペプチド、Ｃ９９、及びｓＡＰＰベータの存在に関し解析される。ＡＰＰトランスジェニック動物の脳組織もまた、化合物処置後のベータ−アミロイドプラークの量に関し解析されてもよい。本明細書において用いられる場合、「Ａベータ  １−ｘペプチド」とは、１残基から始まり、２８残基超のＣ末端で終わるＡベータ種の総和を指す。これによりＡベータ種の大部分が検出され、しばしば、「総Ａベータ」とも呼称される。
【００９８】
阻害化合物を投与される動物（ＰＤＡＰＰもしくは他のＡＰＰトランスジェニックマウス、または非トランスジェニックマウス）は、ビヒクル処置対照またはゼロ時対照と比較し、脳組織、血漿、または脳脊髄液中で、ＡベータまたはｓＡＰＰベータの低下を示すことができ、及び脳組織におけるベータアミロイドプラークの減少を示すことができる。製造４６に関し、０．３、１、または３ｍｇ／ｋｇの化合物の経口投与の３時間後、Ａベータ  １−ｘペプチド値は、ビヒクル処置マウスと比較し、それぞれ脳の海馬においておよそ３１％、３９％、及び６１％低下し、大脳皮質においておよそ２８％、４２％、及び６４％低下する。
【００９９】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＢＡＣＥ酵素に対する製造４６の活性を考慮すると、これらＡベータ低減効果はｉｎ  ｖｉｖｏでのＢＡＣＥ阻害と一致しており、さらには、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのＣＮＳ浸透が示唆される。
本発明は、以下の態様を含む。
［１］
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩である化合物。
［２］
結晶質である［１］に記載のトシル酸塩。
［３］
０．２度の回析角に対する許容誤差で、１９．６°、１３．８°、及び１８．５°からなる群から選択されるピークのうち１つ以上と組み合わせて、５．０°の回析角２シータでのＸ線回析スペクトラムにおける実質的なピークにより特徴づけられる、［１］または［２］のいずれかに記載のトシル酸塩。
［４］
［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物の有効量を、かかる治療を必要としている患者に投与することを含む、患者のアルツハイマー病を治療する方法。
［５］
［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物の有効量を、かかる治療を必要としている患者に投与することを含む、患者の軽度認知機能障害からアルツハイマー病への進行を治療する方法。
［６］
治療における使用のための、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物。
［７］
アルツハイマー病の治療における使用のための、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物。
［８］
軽度認知機能障害からアルツハイマー病への進行の治療における使用のための、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物。
［９］
１つ以上の薬剤的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物を含む、医薬組成物。