(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体試料を保持可能に構成されるマルチウェルマイクロプレートであって、
単一の列に配置された複数のウェルであって、各ウェルが長さｌ１を有する開口孔を含み、前記複数のウェルの開口孔が、前記単一の列の長手方向にて１つのウェル壁又は複数のウェル壁によって画定される、複数のウェルと、
前記複数のウェルの周囲に配置された堀と、
前記堀を横断し、かつ複数の区画を画定する複数の区画壁であって、各区画が、ｌ１よりも大きくかつ６ｌ１よりも小さな範囲から選択された長さｌ２を有する、複数の区画壁と
を画定するフレーム
を備え、
前記複数のウェルから成る単一の列の両側方にそれぞれ配置され、かつ前記単一の列における前記長手方向の各端部に配置された２つの区画が、前記単一の列に対して前記長手方向の外側に位置する平衡化溝を介して流体連通するように構成されており、
前記複数の区画壁が、前記単一の列の両側方に対称に分配され、
各区画壁が、前記１つのウェル壁又は前記複数のウェル壁のいずれか１つと前記長手方向にて一致するように配置され、
前記複数の区画は、これらの上端にそれぞれ位置する開口が前記複数のウェルの開口孔よりも下方に位置するように画定されている、マルチウェルマイクロプレート。
【請求項２】
前記ウェルの長さｌ１が、１ｍｍから９ｍｍまでの範囲から選択されたものとなっている、請求項１に記載のマルチウェルマイクロプレート。
【請求項３】
前記複数のウェルが８つのウェルを含んでいる、請求項１に記載のマルチウェルマイクロプレート。
【請求項４】
前記堀が８つの区画を含んでいる、請求項１に記載のマルチウェルマイクロプレート。
【請求項５】
前記平衡化溝を介して連通する前記２つの区画の深さが、これら２つの区画に隣接する区画の深さよりも小さくなっている、請求項１に記載のマルチウェルプレート。
【請求項６】
少なくとも１つの区画の深さが、前記複数のウェルのうち１つの深さよりも小さくなっている、請求項１に記載のマルチウェルマイクロプレート。
【請求項７】
前記少なくとも１つの区画の深さが、前記複数のウェルのうち１つの深さに対して５０％以下となっている、請求項６に記載のマルチウェルマイクロプレート。
【請求項８】
前記フレームの端部近くに配置された区画の深さが、前記フレームの中央部に配置された区画の深さよりも小さくなっている、請求項１に記載のマルチウェルマイクロプレート。
【請求項９】
前記複数の区画の全てが実質的に等しい長さを有している、請求項１に記載のマルチウェルマイクロプレート。
【請求項１０】
前記フレームの端部に画定された持上げ用タブをさらに備えている、請求項１に記載のマルチウェルマイクロプレート。
【請求項１１】
少なくとも１つのウェルが不透明な白色になっている、請求項１に記載のマルチウェルマイクロプレート。
【請求項１２】
少なくとも１つのウェルが不透明な黒色になっている、請求項１に記載のマルチウェルマイクロプレート。
【請求項１３】
前記フレームが、前記フレームの下側縁の凹部をさらに含んでいる、請求項１に記載のマルチウェルマイクロプレート。
【請求項１４】
請求項１に記載の複数のマルチウェルマイクロプレートを並列に保持するように構成された複数の領域を画定する本体を備え、
各領域が、この領域に保持される前記マルチウェルマイクロプレートにおける前記単一の列に配置された前記複数のウェルとそれぞれ対になるように構成された複数の開口孔を画定している、マルチウェルマイクロプレート用搬送体。
【請求項１５】
前記本体が、約５インチ×３．４インチの外側寸法に基づく基部占有面積を有している、請求項１４に記載のマルチウェルマイクロプレート用搬送体。
【請求項１６】
各領域が８つの開口孔を画定している、請求項１４に記載のマルチウェルマイクロプレート用搬送体。
【請求項１７】
前記本体が、３つのマルチウェルマイクロプレートを保持するように構成された３つの領域を画定している、請求項１４に記載のマルチウェルマイクロプレート用搬送体。
【請求項１８】
前記本体が、４つのマルチウェルマイクロプレートを保持するように構成された４つの領域を画定している、請求項１４に記載のマルチウェルマイクロプレート用搬送体。
【請求項１９】
請求項１に記載のマルチウェルマイクロプレートと対になるように構成されるカートリッジであって、
前記プレートに設けられる前記複数のウェルにおける各開口孔のうちいくつかに対応する複数の領域を有する実質的に平らな表面と、
前記カートリッジにおける複数の各領域に配置されたセンサ又はセンサの部分、及び開口部の少なくとも一方であって、
ウェル内の成分を分析するように構成されたセンサ又はセンサの部分、及び
センサを受け入れるように構成された開口部
の少なくとも一方と、
前記カートリッジに形成された少なくとも１つのポートであって、前記プレートにおける各ウェルに検査流体を送るように構成された少なくとも１つのポートと
を備えているカートリッジ。
【請求項２０】
前記マルチウェルマイクロプレートが８つのウェルを含み、
前記カートリッジが８つの領域を含んでいる、請求項１９に記載のカートリッジ。
【請求項２１】
液体の分析試料の準備をする方法であって、
マルチウェルマイクロプレートのフレームによって画定されたウェルに前記分析試料を送るステップと、
前記フレームによって画定された堀に流体を送る工程と
を含み、
（ｉ）前記フレームが、単一の列に配置された複数のウェルを画定し、各ウェルが長さｌ１を有する開口孔を含んでおり、前記複数のウェルの開口孔が、前記単一の列の長手方向にて１つのウェル壁又は複数のウェル壁によって画定され、
（ｉｉ）前記堀が、前記複数のウェルの周囲に配置されており、
（ｉｉｉ）複数の区画壁が前記堀を横断し、前記複数の区画壁が複数の区画を画定し、各区画が、ｌ１よりも大きくかつ６ｌ１よりも小さな範囲から選択された長さｌ２を有し、
（ｉｖ）前記複数のウェルから成る単一の列の両側方にそれぞれ配置され、かつ前記単一の列における前記長手方向の各端部に配置された２つの区画が、前記単一の列に対して前記長手方向の外側に位置する平衡化溝を介して流体連通するように構成されており、
（ｖ）前記複数の区画壁が、前記単一の列の両側方に対称に分配され、
（ｖｉ）各区画壁が、前記１つのウェル壁又は前記複数のウェル壁のいずれか１つと前記長手方向にて一致するように配置され、
（ｖｉｉ）前記複数の区画は、これらの上端にそれぞれ位置する開口が前記複数のウェルの開口孔よりも下方に位置するように画定されている、方法。
【請求項２２】
前記ウェルに前記分析試料を送る工程が、ピペッタを使用することを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記堀に前記流体を送る工程が、ピペッタを使用することを含む、請求項２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願においては、２０１４年６月２日に出願された米国特許仮出願第６２／００６，５９３号であって、その全体を参照することによって本明細書に組み込むこととなるものの優先権の利益を主張する。
【０００２】
［発明の分野］
本発明は、典型的には、容器内の流体の特性を測定する装置に関し、詳細には、検査流体を取り扱うためのマイクロプレート及び搬送体（ｃａｒｒｉｅｒ、キャリア）に関する。
【背景技術】
【０００３】
細胞分析の分野では、一般的に、多くの状態を検査するために、マルチウェルマイクロプレート（ｍｕｌｔｉｗｅｌｌ  ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ、多穴マイクロプレート）に細胞を入れ、１回の実験で反復して測定を行う。２４ウェルプレート、９６ウェルプレート等の標準的なマイクロプレートは、ウェルの２次元配列構造体（ａｒｒａｙ、アレイ）となっている。このような配列構造体は、該配列構造体の境界又は縁に位置するいくつかのウェル、すなわち、最初の行、最初の列、最後の行、又は最後の列に位置するいくつかのウェルを含んでおり、境界のウェルと非境界のウェルとは異なる状態となり得る。このことは、一般的に「エッジ効果（ｅｄｇｅ  ｅｆｆｅｃｔ）」として知られるものに相当する。このような試験は、通常、哺乳類の体温（３７℃）にて実施され、境界のウェルは、外部環境により多く晒されるので、境界のウェル内の環境が、非境界のウェルの環境とは実質的に異なることがある。プレートの境界に隣接したウェルからの液体の蒸発は、非境界のウェルのそれよりも速い速度で起こる。そのため、蒸発冷却によって境界のウェル内の温度が下がり、その結果、液体中の溶質の濃度が増加することとなる。この温度差及び濃度差は共に、このようなタイプの試験におけるデータの一貫性欠如をもたらす。生細胞の試験は、当該試験の動的性質のために、及び活発に代謝する生きた細胞の感受性がその測定を実施する環境条件に対して高いことのために、これらの効果に対して特に影響を受け易くなっている。このようなタイプの試験の例としては、ＦＬＩＰＲカルシウムフラックス試験（ｃａｌｃｉｕｍ  ｆｌｕｘ  ａｓｓａｙ）、Ｃｏｒｎｉｇ  ＥＰＩＣラベルフリー（ｌａｂｅｌ−ｆｒｅｅ）試験、及び一種のハイコンテントイメージング試験（ｈｉｇｈ−ｃｏｎｔｅｎｔ  ｉｍａｇｉｎｇ  ａｓｓａｙ）が存在する。
【０００４】
このような問題に対処するためのいくつかの解決策が、上述のような標準的なマイクロプレートに対して提案され、かつ適用されている。１つの回避策としては、試験において境界のウェルを使用することを犠牲にすることが挙げられる。単純には、試験用ウェルと同じ高さまで境界のウェルに流体を入れることによって、境界のウェルが、湿度の緩衝領域をもたらすのである。かかる方策には、マイクロプレートの容量が著しく減少し、かつ２４ウェルプレートの場合には半分を超えるウェルが犠牲になるという重大な欠点がある。マイクロプレート内におけるウェルの配列部分のサイズが小さくなるに従って境界のウェルとなるウェルの割合は高くなる。極端なことを言えば、１次元配列構造体においては、全てのウェルが高い蒸発速度を有するのである。
【０００５】
別の回避策としては、試験用ウェルを油で覆うことによって、又はカバーを被せたプレートを、Ｂｅｍｉｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．から市販されているＰａｒａｆｉｌｍ  Ｍ（登録商標）のフィルム若しくは同種の材料等のようなプラスチックパラフィンフィルムでくるむことによって、ウェル又はプレートを密封することが挙げられる。かかる方法の１つの欠点としては、ガス交換性能が低下することが挙げられる。活発に代謝する細胞は酸素を必要とし、そのため、酸素の供給を制限することが、細胞にとって有害になるおそれがあり、かつ試験結果が変わることの原因になるおそれがある。
【０００６】
このような問題に対する既存の解決策としては、機器類を変更すること、又は細胞増殖容器、すなわち、マイクロプレート及びカバーを変更することが挙げられる。機器類に関する一部の製造業者は、マイクロプレートを置いた測定チャンバ内に湿度制御器を設置ことによって、これらの影響を低減することを試みている。しかしながら、高い湿度レベルは、機器の電子回路の問題を引き起こす原因となり得るので、一般的に、これらの選択肢が採用されることは稀である。
【０００７】
細胞増殖容器の変更としては、マイクロプレート及び蓋の構造変更が挙げられる。蓋の変更としては、水分保持層を蓋に追加することが挙げられる。しかしながら、試験途中に試薬を加えることを必要とする生細胞の試験の場合には、蓋又はカバーを使用することができない。
【０００８】
マイクロプレートに外周のウェル又は境界のウェルを追加することは、試験用ウェル及び周囲の実験室環境間の環境緩衝領域をもたらす。例えば、プレートに、ウェルの配列部分を取り囲む大きな縁の樋、例えば、４つの樋を設けることができる。各樋には流体を入れることができ、そのため、環境緩衝領域をもたらすことができる。かかる構造の潜在的な欠点としては、各樋の容積が大きくなることが挙げられる。また、ウェルプレートは浅いので、プレートを傾けるか又は実験室内にて移動させた場合に、境界における流体が揺動するおそれがある。加えて、樋の深さがウェルの深さと同じである場合には、かなりの量の流体、試験におけるウェルの容積の１０倍を超える流体を各樋に加えることが必要となることがある。そのため、作業者が、異なる器具（例えば、異なる容積のピペット）を使用することによって境界の樋及び試験用ウェルを満たすことが必要となる場合がある。
【０００９】
標準的なマイクロプレートの構造は蓋又はカバーを含んでおり、カバーの縁又は裾が、最大でプレート自体の高さの半分にまで及んで、プレートの壁から１〜２ミリメートル（「ｍｍ」）突き出ることがある。このことは、かかるプレートを取り扱っている間に問題になり得るが、これは、例えば、意図せずに蓋だけを持ち上げること、従って、意図せずにプレートの内容物を露出させることを防ぐように、プレートと蓋との両方を表面から連続的に持ち上げるためには、器用さが必要だからである。また、無菌状態に維持されなければならない細胞培養を扱う場合、現在のプレート及びカバーの組立体における構造は、培養の完全性に対して相当な危険性をもたらす。同様の危険性は、ウェルの内容物を周囲の光から保護しなければならない試験にも当てはまる。
【００１０】
標準的なマイクロプレートの構造は、プレート内に並べられたウェルの数によってウェルの容積が変化するように一定の高さ及び占有面積（ｆｏｏｔｐｒｉｎｔ）を有している。例えば、標準的な３８４ウェルプレートは、標準的な９６ウェルプレートの４倍のウェルを有するが、各ウェルの容積は約１／４になっている。同様に、ウェルの密度（すなわち、１プレート当たりのウェルの数）が小さくなるに従って１ウェル当たりの容積は大きくなっている。かかる構造は、標準的な占有面積を維持するためには都合がよいが、より低密度のプレートを使用する場合、研究者は、１つのウェル当たりにより多くの細胞及び試薬を使用しなければならなくなる。加えて、ウェル間の間隔も変化し、試験用プレートに試薬を加える場合、このことは不都合になることがある。
【００１１】
現在、少数のウェル上で試験を実施し、同時に標準的な容積及びウェル−ウェル間隔を維持するマイクロプレートは市販されていない。これらの特徴を維持し、ウェルの数を減らすためには、占有面積を小さくすることが必要となる場合がある。しかしながら、多くの標準的な実験室のワークフロー及び機器がこの規格に合わせて設計されているので、一種のアダプタ又は搬送体が必要となるであろう。標準的な占有面積のマイクロプレートを受け入れる機器の例としては、プレートリーダ、ハイコンテントイメージングシステム、遠心器、自動プレートハンドリングロボット等が存在する。
【００１２】
顕微鏡スライドは、研究室内における異なる規格に従っており、マイクロプレートのフォーマットとスライドのフォーマットとを橋渡しするいくつかの製品が存在する。市販されているいくつかのスライドは、ガラス顕微鏡スライドに融着された試験用ウェルを含んでおり、顕微鏡上での高分解能のイメージング向けに設計されたガラス底を有する試験用ウェルを提供するものとなっている。このようなスライドはウェルを提供するものの、ウェルの寸法は様々であり、ウェル−ウェル間隔に関しても、又は長さ及び幅寸法に関しても規格化されたものではない。
【００１３】
Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ（「ＳＬＡＳ」）のマイクロプレートの占有面積及び高さの規格に準拠した顕微鏡スライド用の市販の搬送体が、イメージング用途向けに設計されているが、搬送体内のスライドの配置は、ウェルの位置が何らかに変化することを許容し、その結果、自動分析が困難になるおそれがある。
【発明の概要】
【００１４】
一態様として、本発明の一実施形態が、液体試料を保持可能に構成されるマルチウェルマイクロプレートを含むことができる。かかるマルチウェルマイクロプレートは、単一の列に配置された複数のウェルであって、各ウェルが長さｌ１を有する開口孔を含む、複数のウェルと、前記複数のウェルの周囲に配置された堀と、この堀を横断する複数の壁とを画定するフレームを備えている。これらの壁は複数の区画を画定しており、これらの区画のそれぞれは、ｌ１よりも大きくかつ６ｌ１よりも小さな範囲から選択された長さｌ２を有している。
【００１５】
さらには、以下の１つ又は複数の特徴を含めることができる。ウェルの長さｌ１は、１ｍｍから９ｍｍまで（０．０４インチから０．３５インチまで）の範囲から選択することができる。前記複数のウェルは８つの穴を含むことができる。堀は８つの区画を含むことができる。
【００１６】
複数のウェルから成る単一の列の両側に配置された２つの区画を、平衡化溝（ｅｑｕａｌｉｚｅｒ  ｃｈａｎｎｅｌ）を介して流体連通させることができる。平衡化溝を介して連通する２つの区画の深さを、これら２つの区画に隣接する区画の深さよりも小さくすることができる。
【００１７】
少なくとも１つの区画の深さを、前記複数のウェルのうち１つの深さよりも小さくすることができ、例えば、少なくとも１つの区画の深さを、前記複数のウェルのうち１つの深さに対して５０％以下とすることができる。フレームの端部近くに配置された区画の深さを、フレームの中央部に配置された区画の深さよりも小さくすることができる。全ての区画が実質的に等しい長さを有することができる。
【００１８】
フレームの端部に持上げ用タブ（ｌｉｆｔｉｎｇ  ｔａｂ）を画定することができる。少なくとも１つのウェルを、不透明な白色又は不透明な黒色とすることができる。フレームは、当該フレームの下側縁に凹部（ｉｎｄｅｎｔ）を画定することができる。
【００１９】
別の態様としては、本発明の実施形態が、複数のマルチウェルマイクロプレートを並列に保持するように構成された複数の領域を画定する本体を有するマルチウェルマイクロプレート用搬送体を含むことができ、かかるマルチウェルマイクロプレートのそれぞれが、複数のウェルから成る単一の列を画定しており、これらの領域のそれぞれが、複数のウェルから成る単一の列と対になるように構成された複数の開口孔を画定することができる。
【００２０】
さらには、以下の１つ又は複数の特徴を含めることができる。本体は、約５インチ×３．４インチの外側寸法に基づく基部占有面積（ｂａｓｅ  ｆｏｏｔｐｒｉｎｔ）を有することができる。各領域は８つの開口孔を画定することができる。本体は、それぞれ３つ又は４つのマルチウェルマイクロプレートを保持するように構成された３つ又は４つの領域を画定することができる。
【００２１】
さらなる別の態様としては、本発明の実施形態が、本明細書に記載されたマルチウェルマイクロプレートと対になるように構成されるカートリッジを含むことができる。このカートリッジは、マルチウェルマイクロプレートに設けられる複数のウェルにおける各開口孔のいくつかに対応する複数の領域を有する実質的に平らな表面を含んでいる。カートリッジにおける複数の各領域にはさらに、ウェル内の成分を分析するように構成されたセンサ若しくはセンサの部分、及び／又はセンサを受け取るように構成された開口部が配置されている。プレートにおける各ウェルに検査流体を送るように構成された少なくとも１つのポートを、カートリッジに形成することができる。マルチウェルマイクロプレートは８つの穴を含むことができ、カートリッジは８つの領域を含むことができる。
【００２２】
また別の態様としては、本発明の実施形態が、液体分析試料の準備をする方法を含むことができる。かかる方法は、マルチウェルマイクロプレートのフレームによって画定されたウェルに分析試料を送ることを含む。フレームによって画定された堀に流体を送る。フレームは、単一の列に配置された複数のウェルを画定し、各ウェルが長さｌ１を有する開口孔を含んでいる。かかる堀は、前記複数のウェルの周囲に配置されている。この堀を複数の壁が横断し、これらの壁は複数の区画を画定し、これらの区画はそれぞれ、ｌ１よりも大きくかつ６ｌ１よりも小さな範囲から選択された長さｌ２を有する。
【００２３】
さらに、以下の１つ又は複数の特徴を含めることができる。ウェルに分析試料を送ることは、ピペッタ（ｐｉｐｅｔｔｏｒ）を使用することを含むことができる。堀に流体を送ることは、ピペッタを使用することを含むことができる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１ａ】図１ａは、本発明の一実施形態に係るマルチウェルマイクロプレートの正立側斜視図である。
【図１ｂ】図１ｂは、本発明の一実施形態に係るマルチウェルマイクロプレートの倒立側斜視図である。
【図１ｃ】図１ｃは、本発明の一実施形態に係るマルチウェルマイクロプレートの上面及び端面の機械製図図面であり、その図１ｃ１は上面図であり、その図１ｃ２は端面図である。
【図１ｄ１−１ｄ２】図１ｄ１〜図１ｄ２は、本発明の一実施形態に係るマルチウェルマイクロプレートの各種機械製図図面であり、それぞれ浅い堀及び深い堀の上面図である。
【図１ｄ３−１ｄ６】図１ｄ３〜図１ｄ６は、本発明の一実施形態に係るマルチウェルマイクロプレートの各種機械製図図面であり、図１ｄ３は、マルチウェルマイクロプレートの上面図であり、図１ｄ４〜図１ｄ６は、図１ｄ３のマルチウェルマイクロプレートの断面図である。
【図１ｄ７−１ｄ９】図１ｄ７〜図１ｄ９は、本発明の一実施形態に係るマルチウェルマイクロプレートの各種機械製図図面であり、図１ｄ７は、マルチウェルマイクロプレートの斜視図であり、図１ｄ８〜図１ｄ９は、図１ｄ７のマルチウェルマイクロプレートの断面図である。
【図２ａ】図２ａは、図１ａ及び１ｂのマルチウェルマイクロプレートと対になるように構成された本発明の一実施形態に係るカートリッジの正立側斜視図である。
【図２ｂ】図２ｂは、図１ａ及び１ｂのマルチウェルマイクロプレートと対になるように構成された本発明の一実施形態に係るカートリッジの倒立側斜視図である。
【図２ｃ】図２ｃは、本発明の一実施形態に係るカートリッジの上面及び端面の機械製図図面であり、その図２ｃ１は上面図であり、その図２ｃ２は端面図である。
【図３】図３は、マルチウェルマイクロプレートと対になった本発明の一実施形態に係るカートリッジの斜視図である。
【図４】図４は、図３におけるマルチウェルマイクロプレート及びカートリッジ用の本発明の一実施形態に係るカバーの斜視図である。
【図５ａ】図５ａは、本発明の一実施形態に係る搬送トレイの斜視図である。
【図５ｂ】図５ｂは、３つのマルチウェルマイクロプレート及びカバーと組み合わされた本発明の一実施形態に係る搬送トレイの斜視図である。
【図６】図６は、本発明の一実施形態に係る堀を有するマイクロウェルプレートを用いた場合における流体損失に対する影響を示す棒グラフ図である。
【図７】図７は、流体によって満たされた本発明の一実施形態に係る堀に係る保護されていない試験用ウェル内で蒸発速度が変化することに起因して生じる得る温度変化に対する測定の感度を示すテーブル図である。
【図８ａ−８ｄ】図８ａ−図８ｄは、本発明の一実施形態に係るマイクロプレートにおける満たされた堀又は空の堀の影響を試験するためにいくつかの条件下にて測定されたＣ２Ｃ１２細胞のベースライン代謝速度（ＯＣＲ及びＥＣＡＲ）の棒グラフ図である。
【図９】図９ａ及び図９ｂは、本発明の実施形態に係るマルチウェルマイクロプレートにおける時間の経過に伴うバックグランドＯＣＲ信号のウェル内部及びウェル間隙変動性を示すグラフ図である。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
マルチウェルマイクロプレートの周縁におけるウェルからの蒸発が、細胞播種、細胞プレート培養、及び試験の実施を含む様々な分析工程に対して負の影響をもたらすことがある。特に、付着した細胞（ａｄｈｅｒｅｎｔ  ｃｅｌｌ）を用いた細胞ベースの試験（ｃｅｌｌ−ｂａｓｅｄ  ａｓｓａｙ）（「ＣＢＡ」）は、細胞播種及び細胞プレート培養に起因するエッジ効果の影響を受け易くなっている。ラベルフリー測定、細胞外フラックス（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｆｌｕｘ）（「ＸＦ」）測定等のような生細胞の試験もまた、試験の実施中にエッジ効果の影響を受け易くなっている。水分補給流体（ｈｙｄｒａｔｉｏｎ  ｆｌｕｉｄ）、例えば、水又は細胞培地をマルチウェルプレートの縁及び／又は縁の近くに保持するための区画を設けた堀を有する本発明の実施形態に係るマルチウェルプレートの構造は、このようなエッジ効果を低減させるために役立ち、ウェルの上方の空気とプレートの外周の外側におけるより乾いた空気との間に加湿された緩衝領域をもたらすことによって、ウェルからの流体の蒸発を低減させることができる。
【００２６】
図１ａ及び図１ｂを参照すると、本発明の一実施形態に係るマルチウェルマイクロプレート１００は、複数のウェル１２０から成る単一の列を画定するフレーム１１０から形成されている。プレート内のウェル１２０の数は、２個から数千個までとすることができ、（１５３６個のウェルを有し、かつ１列に１２８個のウェルを設けた業界標準のウェルプレートに対応するように）最大１２８個とするとが好ましい。いくつかの実施形態では、かかるマルチウェルマイクロプレートは、４個、６個、又は１２個のウェルから成る列を有することができる。特定の実施形態では、このマルチウェルマイクロプレートが８つのウェル１２０を有している。８個のウェルを有する構成は、疾病状態及び正常状態、薬物処理状態及び天然状態、遺伝子ノックアウト状態及び野生状態等のような２つの条件を最大４個反復することを可能にし、かつ同時に小さな占有面積を維持可能とするので、特に、有利なことがある。さらに、多くの分析機器は、９６ウェルプレート（８×１２）等のような８つのウェルから成る複数の列を有するウェルプレートを取り扱うように構成されている。
【００２７】
一実施形態では、マルチウェルマイクロプレート１００が、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（米国国家規格協会）及びＳｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇの規格によって規定されるマイクロプレートのパターン及び寸法に関連する部分に準拠したウェルの１次元パターンを含んでいる。これらの規格は、Ｈｅｉｇｈｔ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｓ（ＡＮＳＩ／ＳＬＡＳ  ２−２００５、１０／１３／２０１１）、Ｗｅｌｌ  Ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｓ（ＡＮＳＩ／ＳＬＡＳ  ４／２００４、１０／１３／２０１１）、及びＦｏｏｔｐｒｉｎｔ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｓ（ＡＮＳＩ／ＳＬＡＳ  １−２００４、１０／１２／２０１１）を含んでおり、かかる規格は全て参照によって本明細書に組み込まれるものとする。
【００２８】
このようなマルチウェルマイクロプレートは、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート、又は他の適切な材料等のような成形プラスチックから形成することができる。ウェルの底は透明とすることができ、１つのウェルから別のウェルへの光のやり取りを低減させるため、側面は黒色とすることができる。例えば、ルミネセンス測定と共に使用するいくつかの実施形態では、ウェルを白色にすることができる。いくつかの実施形態、例えば、高分解能イメージング用途で使用する実施形態では、ウェルの底として用いられるガラスと、プレートの側面及びウェルの壁を形成するプラスチックポリマーとを用いてプレートを形成することができる。
【００２９】
各ウェルは、長さｌ１の開口孔を有する頂部と、円柱形又は正方形に形成される底部とを有することができ、徐々に狭まる側壁もまた有することができる。バリア（ｂａｒｒｉｅｒ）（図２ａ及び図２ｂに関するカートリッジの記述を参照されたい）に配置されたセンサを積極的に止める働きをする着座面が設けられてもよい。参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第７，２７６，３５１号にて述べられるように、かかる着座面は、局所的に減少した体積の培地を形成することを可能にする。一実施形態においては、着座面が、ウェルの底面における一段高い複数のドット部、例えば、３つのドット部によって画定されてもよい。ウェルの長さｌ１は任意の寸法とすることができ、１ｍｍから９ｍｍまでの範囲から選択されると好ましく、例えば、６ｍｍとすることができる。複数のウェルは互いに、それらの中心同士の間で測定される間隔、例えば、３ｍｍ〜１８ｍｍの等しい間隔、より好ましくは、９ｍｍの等しい間隔で配置されると好ましい。マイクロウェルプレート内の各ウェルは、同じウェル長ｌ１及びウェル長と等しい幅を有するような実質的に同じ寸法を含むことができる。しかしながら、いくつかの実施形態では、ウェルが、異なるウェル長ｌ１を有する異なる寸法を含むことができる。ウェルの深さは、１ｍｍから１６ｍｍまでの範囲又はそれ以上とすることができ、約１５ｍｍであると好ましい。
【００３０】
また、複数のウェルの外周に沿って堀１３０が延びており、複数の壁１４０が堀を横断している。壁１４０は、複数の区画１５０を画定している。壁１４０は、マイクロプレートに剛性を与えるために十分に厚く、かつ歪みを生じることなく射出成形されるように十分に薄くなっていると好ましい。従って、壁の厚さは０．５ｍｍから１．５ｍｍまでの範囲とすることができ、約１ｍｍであると好ましい。各区画は長さｌ２を有し、長さｌ２は、好ましくは、ｌ１の倍数であり、６ｌ１よりも小さく、好ましくは、約２ｌ１であり、６ｍｍ以上であるとよい。例えば、ウェル開口孔の長さｌ１が９ｍｍである場合には、隣接する区画の長さｌ２を１８ｍｍとすることができる。長さが６ｍｍ未満（ウェル−ウェル間隔は９ｍｍ）である場合、区画への充填が難しくなるおそれがある。全ての区画は、実質的に等しい縦方向の長さを有することができる。すなわち、１つの端壁から反対側の端壁までの長さは２５％を超えて変化しない。
【００３１】
好ましい一実施形態では、堀が８個の区画及び８個のウェルを有し、１つ又は複数の区画が、実質的に２つのウェルにおける開口孔の長さの和にこれらのウェルにおける開口孔を画定する１つ又は複数の壁の厚さを加えたものに略等しい長さを有する。
【００３２】
複数のウェルから成る単一の列の両側に配置された２つの区画は、平衡化溝１６０を介して流体連通させることができる。堀は、マルチウェルマイクロプレートの各端部に１つずつ、合計２つの平衡化溝１６０を含むことができる。堀の区画の容積を等しくすべく、平衡化溝を介して連通する２つの区画の深さを、これらの区画に隣接する区画の深さよりも小さくすることができる。好ましい一実施形態では、平衡化溝が、マルチウェルマイクロプレートの端部に配置され、平衡化溝の幅が０．０８インチであり、深さが０．２５インチであるとよい。平衡化溝の寸法は、プレート全体のサイズに対する溝の幅の影響を小さくするために十分に小さくなっていると好ましいが、表面張力に打ち勝ち、かつ選択された流体により溝を満たすことを可能にするために十分幅広になっていると好ましい。好ましい一実施形態では、流体の表面張力を打ち破って、流体をより小さな体積にて自動的に充填可能にする構造１６５（例えば、図１ｄに示されるような表面張力ブレーカ１６５）が、溝に設けられている。鋭い角部は流体の表面張力を打ち破ることができるので、平衡化溝における幅の狭い開口孔を通り抜ける流体の流れを刺激すべく、１つ又は複数の鋭い縁を設けることができる。
【００３３】
少なくとも１つの区画の深さを、１つのウェルの深さよりも小さくすることができ、例えば、かかる少なくとも１つの区画の深さを、１つのウェルの深さの５０％以下とすることができる。
【００３４】
フレームの端部の近くに配置された区画の深さを、これよりもフレームの中央部の近くに配置された区画の深さよりも小さくすることができる。好ましい一実施形態では、平衡化溝によって接続された端側区画内には８００μｌの流体が入り、かつ内側区画内には４００μｌの流体が入るような全ての区画に渡って一定の流体高さを維持するために、内側区画を外側区画よりも０．０５５インチ深くすることができる。
【００３５】
堀の幅は、少なくとも０．２インチとし、かつ０．５インチ以下とすることができ、約０．２６５インチであると好ましい。狭過ぎる幅の堀は、ウェルと乾いた外気との間に水分補給バリアをもたらすという利点を最小化するおそれがあり、その一方で、広過ぎる幅の堀は、試験用ウェルの流体揺動及び汚染の危険性をもたらし得る。
【００３６】
全ての区画が実質的に等しい長さを有することができる。例えば、長さの変化を２５％以下とすることができる。
【００３７】
堀の様々な特徴は、Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ（「ＳＢＳ」）規格のマイクロプレート向けマルチチャネルピペッタの構成を用いた堀への充填を容易にする。適切なマルチチャネルピペッタには、それぞれＥｐｐｅｎｄｏｒｆ  ＡＧ及びＭｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．から入手可能なＥｐｐｅｎｄｏｒｆ  ３１２２００００５１及びＭｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ  Ｌ８−２００ＸＬＳ＋が含まれる。区画を画定する壁は、マルチチャネルピペッタのピペット先端の邪魔にならないように配置される。このようなマルチチャネルピペッタは、９ｍｍの標準先端−先端間隔を有し、そのため、好ましくは、堀における複数の区画は、それぞれの区画の中に等しい数のピペット先端をアクセス可能にするように構成される。端部の平衡化溝は、側部区画から流体を引き抜くことを可能にし、これによって、水分補給流体が端部ウェルを取り囲むことが可能になる。マイクロウェルプレート外への液体の飛び散り、又は水分補給液による試験用ウェルの汚染を低減させるべく、区画の長さは、ウェル１つ分よりも大きく、ウェル６つ分よりも小さいと好ましい。最後に、必要な水分補給液の体積を減らすために、及び細胞ピペッタと同じサイズのピペッタの使用を可能にするために、堀の深さをウェルの深さの５０％以下とすると好ましい。
【００３８】
フレームの一方又は両方の端部に持上げ用タブ１７０を画定することができる。この持上げ用タブは、０．３インチから０．５５インチまでの長さ、例えば、０．４３５インチの長さｌ３を有することができる。持上げ用タブは、カバー又はカートリッジを取り外さずに、マルチウェルマイクロプレートとカバーとを持ち上げること、又はマイクロプレートとカートリッジとを持ち上げることを容易にする。
【００３９】
フレームの下側縁は、１つ又は複数の凹部１８０を画定することができる。この凹部は、フレームの端部及び／又は側部に配置することができる。１つ又は複数の凹部を組み込むことによって、搬送トレイ内に配置された場合にフレームが安定する。さらに、この凹部がないと、搬送体内に着座したフレームの高さが高くなり、これによって、異なる機器類内でのフレームの使用が妨げられる可能性がある。１つのマルチウェルマイクロプレートの高さは、搬送体なしで、約０．５インチから０．９インチまでであることが好ましく、０．６８５インチ（１７．４ｍｍ）であるとより好ましい。例えば、サイドローディング式のプレートリーダは１６ｍｍから２８ｍｍのプレートアクセス高を有する。この凹部は、追加される高さを最小限（０インチから０．０５インチまで、すなわち、０ｍｍから１ｍｍまで）に抑えて、搬送体内にプレートを置くことを可能にする。好ましい一実施形態では、搬送体が、プレートの高さに０．００１インチ未満の高さを加えるとよい。
【００４０】
区画内の流体とウェル内の流体との相対的な表面積は、ウェル内での蒸発の低減に対する堀の影響に関連する。区画内の流体の表面積が小さ過ぎる場合、ウェル内での蒸発の低減が極僅かになるおそれがある。区画内の流体の表面積が、所望の影響をもたらすために必要な表面積よりも大きい場合、マルチウェルマイクロプレートが、必要な程度までコンパクトにならない可能性があり、ウェルに充填するために使用するピペットと同じピペットを用いて区画に充填する際に困難が生じる可能性がある。
【００４１】
好ましい実施形態は、ウェル及び区画に流体が導入されたときに、表１に示された表面積及び容積をもたらすことができる。本発明の実施形態は、少なくとも±２５％以上の好ましい値の範囲を含み、ウェルの容積と区画の容積との比並びにウェルの表面積と区画の表面積との比は、示された値に実質的に等しいと好ましく、すなわち、±５０％であると好ましい。好ましい一実施形態では、細胞培養条件及び試験条件に関して、区画の２つの底上げ寸法間の差が０．０５５インチであるとよい。かかる深さの差の結果、全ての区画の流体高さが、プレートの頂面に対して一定の深さ（すなわち、０．１８０インチ）となる。この差は平衡化溝の分を補填する。
【００４２】
【表１】
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【００４３】
「カートリッジ」
図２ａ及び２ｂを参照すると、カートリッジ２００は、マルチウェルマイクロプレート１００と対になるように構成されている。カートリッジ２００は、全体的に平らな表面２０５であって、例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート、又は他の適切な材料等のような成形プラスチックから作製されたカートリッジフレームを含む表面２０５を有している。平らな表面２０５は、マルチウェルマイクロプレート１００内に画定された複数のウェル１２０それぞれにおける開口孔のいくつかに対応する複数の領域２１０、すなわち、このような開口孔に対して整列するか又は対になる複数の領域２１０を画定している。図示された実施形態においては、これらの領域２１０のそれぞれにて、平らな表面が、検査化合物リザーバの役目を果たす第１、第２、第３、及び第４のポート２３０と、スリーブ２４０に至る中心開口部２１５とを画定している。各ポートは、検査流体を保持し、必要に応じて、検査流体を、その下の対応するウェル１２０のそれぞれに放出するように構成されている。ポート２３０は、４つのポートから成るグループをそれぞれのウェル１２０の上に配置し、かつ４つのポートのうち１つから対応するそれぞれのウェル１２０に検査流体を送ることができるようなサイズ及び配置関係を有している。他の実施形態では、各領域におけるポートの数を４つよりも少なくし、又は４つよりも多くすることができる。横方向の移動に適合することによってポート２３０及びスリーブ２４０がマイクロプレート内にピッタリと納まることができるように、ポート２３０及びスリーブ２４０は、マルチウェルマイクロプレート１００に適合して装着することができる。このような適合する領域を含むカートリッジの構造は、より緩やかな許容値にてカートリッジを製造することを可能にし、カートリッジを、寸法をわずかに異にするマイクロプレートと一緒に使用することを可能にする。かかる適合性は、例えば、各領域におけるフレーム２００とスリーブ及びポートとの間の相対運動を可能にするために、エラストマーポリマーを用いて平らな要素２０５を形成することによって達成することができる。
【００４４】
各ポート２３０は、円筒形、円錐形、又は立方体の形状を有することができる。各ポート２３０は、その頂部を平らな表面２０５の箇所にて開くように形成され、通常は、底面の中央に位置する小さな孔、すなわち、毛管開口を除いて、その底部にて閉じられるように形成されている。この毛管開口は、正圧差力、負圧差力、又は遠心力等のような外力がない場合には、例えば、表面張力によって、検査流体をポートの中に保持するように構成されている。各ポートは、検査化合物を通さないポリマー材料、又は任意の他の適切な固体材料、例えば、アルミニウムから作製することができる。マルチウェルマイクロプレート１００と一緒に使用するように構成されている場合、各ポートに含まれる液体の体積は、５００μｌから僅か２μｌまでの範囲とすることができる。しかしながら、かかる範囲外の体積を利用することもできる。
【００４５】
図２ｂを参照すると、カートリッジ２００の各領域のポート２３０間に、１つ又は複数のポート２３０に関連付けられた状態で沈めることができるセンサ用スリーブ２４０又はバリアが配置されており、センサ用スリーブ２４０又はバリアは、対応するウェル１２０内に配置されるように構成されている。センサ用スリーブ２４０は、ウェル１２０内の培地に挿入するためにスリーブの下面２５５に配置された１つ又は複数のセンサ２５０を有することができる。この目的のためのセンサの一例としては、シリコーンゴム等のような酸素透過性物質に埋め込まれた酸素消光フルフォロフォア（ｏｘｙｇｅｎ−ｑｕｅｎｃｈｅｄ  ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅ）等の蛍光インジケータが挙げられる。フルフォロフォアは、ウェル１２０内の成分の有無及び／又は濃度に応じた蛍光特性を有する。電気化学センサ、クラーク電極等のように既知の他タイプのセンサを使用することもできる。センサ用スリーブ２４０は、センサを受け入れるように構成された開口部及び内部容積を画定するとよい。
【００４６】
カートリッジ２００は、センサ用スリーブに取り付けることができ、又は独立して移動可能となるように取り付けられずにスリーブの近くに配置することができる。カートリッジ２００は、単一のユニットに組み立てられ、センサ用スリーブの同様の配列構造に関連付けられた化合物貯蔵及び送達ポートの配列構造を含むことができる。
【００４７】
図３を参照すると、カートリッジ２００は、マルチウェルマイクロプレート１００と対になるサイズ及び形状を有している。そのため、マイクロプレートが８つのウェルを有する実施形態では、カートリッジが８つのスリーブを有している。
【００４８】
「カバー」
図４を参照すると、かかる装置はさらに、カートリッジ２００及び／又はマルチウェルマイクロプレート１００用の取り外し可能なカバー４００を備えることができる。カバー４００は、カートリッジ２００上にピッタリと嵌合し、これによって、カートリッジのポート２３０内に配置された流体の可能な汚染又は蒸発を低減させるように構成することができる。マイクロプレート１００がカートリッジ２００に対して接触しないか又は対になっていない場合にウェル及び区画の内容物を保護することを補助するため、マルチウェルマイクロプレート１００上に直接的にピッタリと嵌合するようにカバー４００を構成することもできる。
【００４９】
「搬送トレイ」
図５ａ及び５ｂを参照すると、マルチウェルマイクロプレート用搬送トレイ５００は、いくつかの単一列マルチウェルマイクロプレート、例えば、３個又は４個の単一列マルチウェルマイクロプレートを、ＡＮＳＩ／ＳＬＡＳ  １−２００４規格に準拠した９６ウェル標準マイクロプレート向けに構成された機器の中に設置した状態で測定することを可能にする。そのため、搬送トレイは、（５．０２９９インチ±０．００９８インチ）×（３．３６５４インチ±０．００９８インチ）、すなわち、約５インチ×３インチ又は約１２７ｍｍ×８４ｍｍの外側寸法を有することができる。他の実施形態では、単一列マイクロプレート内のウェルの数及び測定を実施する機器に応じて、搬送トレイの外側寸法を拡大又は縮小することができる。
【００５０】
好ましい一実施形態では、搬送体が、各マルチウェルマイクロプレート１００の複数のウェルに対して整列すると共に対になるように構成された複数の開口孔５２０を画定する３つの領域５１０を有している。好ましい一実施形態では、使用時、マルチウェルマイクロプレートにおけるウェルの列が、９６ウェルマイクロプレートの列３，７，及び１１に対応する位置に配置されている。開示されたマルチウェルマイクロプレートのウェルは、ＡＮＳＩ／ＳＬＡＳ規格によって規定された位置に配置されるので、プレートリーダの変更を必要としない。マイクロプレートがカートリッジ内に設置されると、カラー５３０が、マイクロプレートの各ウェルの底領域を取り囲む。各カラーは、位置決め及び光の遮断をもたらす円形の開口孔を形成する。カラーは、ウェル内の蛍光シグナリング分子からのクロストーク光を遮断するために黒く着色することができ、又はルミネセンスマーカからの放出光を増幅するために白くすることができる。搬送体は、マルチウェルマイクロプレート上の凹部に対応する溝穴５４０を含むことができる。隣接する２つのマイクロプレートの裾部がそれぞれの溝穴にピッタリとはまることができる。波形に切られた縁部５５０は、必要に応じて、ユーザがマイクロプレートを容易に取り外すことを可能にし、その一方で、搬送体に剛性を与えることを可能にする。
【００５１】
好ましい一実施形態では、この搬送体の開口孔によって、マイクロプレートが、あたかもプレートが搬送体内にはないかのように、同じ高さで搬送体内に着座することができる。すなわち、プレートの高さが、プレートと搬送体との組立体の高さに等しくなっている。
【００５２】
上述のように、マイクロプレート１００上にカートリッジ２００及びカバー４００を載置することができる。マルチウェルマイクロプレート及びカートリッジは、一般的に、参照によって本明細書に組み込まれている米国特許第７，２７６，３５１号及び８，６５８，３４９号に記載されるように使用できる。さらに、個々のウェル、バリア、及びポートは、これらの特許に記載されるウェル、バリア、及びポートの特性及び特徴のうち任意の特性又は特徴を有することができる。
【００５３】
使用時において、マルチウェルマイクロプレート１００のフレームによって画定されたウェルに分析試料を送り、かつフレームにより画定された堀１３０に流体を送ることによって、液体分析試料の準備をすることができる。かかる分析試料は、例えば、培地中の細胞とすることができる。この流体は、同じ培地とすることができ、又は水等のような別の液体とすることもできる。分析試料及び流体は共にピペッタによって送ることができる。いくつかの実施形態では、試料及び流体を同じピペッタによって送ることができる。
【実施例】
【００５４】
［実施例１］
堀に水分補給流体を入れたカバーを被せたマルチウェルマイクロプレート内における蒸発と、このような流体を入れずにカバーを被せたマルチウェルマイクロプレート内における蒸発とを比較するために、培養器蒸発試験を実施した。６個のプレートのそれぞれについて、各ウェルに８０マイクロリットルの液体を入れ、これらのプレートのうち３つについて、堀の各区画に４００マイクロリットルの液体を入れた。堀に液体を入れずにカバーを被せた３個のマルチウェルマイクロプレート（「ドライ」）と、堀に液体を入れずにカバーを被せた３個のマルチウェルマイクロプレートを、１０％ＣＯ２雰囲気にあると共に加湿された３７℃の培養器内にて一晩培養した。さらに、各ウェルに残った液体の体積を測定して、以下の値を得た。
【００５５】
【表２】
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【００５６】
［実施例２］
細胞外フラックス分析機器内で模擬的な試験（約９０分）を実施した後、カバーを被せていないマイクロウェルプレートにおけるウェルからの液体の蒸発を測定した。図６を参照すると、満たされた堀を有するマイクロウェルプレートにて失われた流体の平均損失率％は３．７５％であり、空の堀を有するマイクロウェルプレートにて流体の約１５．８％が失われた。蒸発によって、細胞培地の温度及びイオン強度が変化し、これによって、試験データが変化するので、蒸発は低減させることが好ましい。
【００５７】
［実施例３］
図７を参照する。堀に水分補給流体が入れられている場合と水分補給流体が入れられていない場合とにおいて、培地中に置かれた細胞を観察した。鍵となる代謝パラメータである酸素消費速度（ｏｘｙｇｅｎ  ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ  ｒａｔｅ）（ＯＣＲ）及び細胞外酸性化速度（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｃｉｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ）（ＥＣＡＲ）を各ウェルにて監視した。乾いた堀を有するプレートのウェル−ウェル変動性（ＣＶ６０〜９５％）は、満たされた堀を有するプレートの試験用ウェルにて観察された変動性（２０〜６５％）よりもかなり高かった。良好な検定成果を得るためには、ＯＣＲ及びＥＣＡＲの両方における信号の低いウェル−ウェル変動性が必要である。ＯＣＲ測定は、温度変化に特に敏感であり、この温度変化は、流体にて満たされた堀によって保護されていない試験用ウェル内で蒸発速度が変化することによって引き起こされ得る。
【００５８】
［実施例４］
図８ａ〜図８ｄを参照する。満たされた堀又は空の堀の影響を試験するため、等しい密度で播種されたＣ２Ｃ１２細胞のベースライン代謝速度（ＯＣＲ及びＥＣＡＲ）をいくつかの条件下で測定した。図８ａ及び図８ｂでは、細胞播種時に、規定どおりに堀を満たした（１区画当たり４００μｌ）。刻み目付きの棒グラフによって表されたプレートについては、ＸＦ機器により試験を実施する前に堀を空にした。図８ｃ及び８ｄでは、堀に流体を入れない状態で細胞を播種し、一晩培養した。図８ｃ及び図８ｄでは、塗りつぶされた棒グラフによって表されたプレートの堀には、試験を実施する前に流体を加えた。全てのプレートについてＯＣＲ及びＥＣＡＲの両方を測定した。播種時に堀の中に流体が存在することがＯＣＲ測定値に対して影響することを評価するため、図８ａを図８ｃと比較する。堀に流体を入れたプレートにて播種された細胞のＯＣＲ値は８０〜１２０の範囲にあり、乾いた堀を有するプレートにて播種された細胞のＯＣＲ値は０〜６０の範囲にあった。ＯＣＲは、代謝に関する細胞の健康状態の尺度である。低いＯＣＲ値は、細胞の代謝が活発でなかったことを示している。ＥＣＡＲ測定に関する図８ｂと図８ｄとを比較した場合にも同様の結果が見られる。プレートに細胞が播種され、堀が満たされていない場合、ＥＣＡＲによって測定された代謝速度も非常に低く、細胞の健康状態がよくないことを示している。そのため、細胞播種時及び一晩培養中に堀に流体が存在することは、単一列マイクロプレート内の細胞の健康状態を良好にするための重要な要件であることが示されている。
【００５９】
［実施例５］
図９ａ及び図９ｂを参照する。時間の経過に伴うバックグラウンドＯＣＲ信号のウェル内部及びウェル間隙変動性を、堀に流体を入れていないプレートと堀に流体を入れたプレートとで比較した。試験する各プレートについて、各ウェルに培地を入れ、プレートを機器内に１５分間放置して平衡させ、次いで、３０分に渡って測定を実施した。堀に流体を入れていないプレートでは、バックグラウンドＯＣＲ信号がウェル間隙にて、−３７から＋５までとかなり変化し（範囲は４２）、３０分間の間に１０〜２０単位上昇した。堀が満たされている場合、信号ははるかに安定しており、全体範囲は−１４から＋７であり（範囲は２１）、この期間中に約７単位上昇した。そのため、堀に流体が存在することは、この試験における安定したバックグラウンドレベルのためには必要であることが示されている。
【００６０】
本発明は、その趣旨又は必須の特性を逸脱しない他の特定の形態にて実施することができる。そのため、上記の実施形態は、あらゆる点で、本明細書に記載された発明の例であると考えるべきである。当業者には明白なことであろうが、異なる実施形態の様々な特徴及び要素を、様々に組み合わせて、また、様々に並べ替えて使用することができる。従って、本発明の範囲は、上記の説明によって示されるのではなく、添付された特許請求の範囲によって示される。よって、特許請求の範囲と等価であることの意味及び範囲に含まれる全ての変更は本明細書に包含されることが意図されている。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
0006739351.tif 000005
【図１ｃ】
0006739351.tif 000006
【図１ｄ１−１ｄ２】
0006739351.tif 000007
【図１ｄ３−１ｄ６】
0006739351.tif 000008
【図１ｄ７−１ｄ９】
0006739351.tif 000009
【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図２ｃ】
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【図３】
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【図４】
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【図５ａ】
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【図５ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８ａ−８ｄ】
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【図９】
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