(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
HLA-A2(ヒト白血球抗原A2)陽性患者のがんの処置における使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤であって、ペプチドaKXVAAWTLKAAa(配列番号10、X及びaは、それぞれシクロヘキシルアラニン及びd-アラニンを示す)並びに、ペプチドRLLQETELV(配列番号1)、ペプチドYLQLVFGIEV(配列番号2)、ペプチドLLTFWNPPV(配列番号3)、ペプチドKVFGSLAFV(配列番号4)、ペプチドKLBPVQLWV(配列番号5、Bはα-アミノイソ酪酸を示す)、ペプチドSMPPPGTRV(配列番号6)、ペプチドIMIGHLVGV(配列番号7)、ペプチドKVAEIVHFL(配列番号8)、及びペプチドYLSGADLNL(配列番号9)を含み、前記処置が、前記治療用ペプチドT特異的免疫療法剤を3回投与することからなる初回刺激期間を含み、前記治療用ペプチドT特異的免疫療法剤の1種又は数種のペプチドに対するセントラルメモリーT細胞応答を誘発する間に、前記治療用ペプチドT特異的免疫療法剤が3週間毎に投与され、初回刺激期間の後に、前記治療用ペプチドT特異的免疫療法剤の投与が、2〜8カ月毎に行われる維持期間が続く、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項２】
維持期間における前記治療用ペプチドT特異的免疫療法剤の投与が、2〜3カ月毎に行われる、請求項1に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項３】
維持期間における前記治療用ペプチドT特異的免疫療法剤の投与が、1年の間2カ月毎に行われ、その後1年の間3か月ごとに行われる、請求項1または2に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項４】
前記がんが、NSCLC(非小細胞肺がん)及び小細胞肺がん等の肺がん、メラノーマ、中皮腫、乳がん、原発性脳がん、卵巣がん、子宮癌、子宮体部及び/又は子宮頸部癌、頭部及び頸部がん、結腸又は結直腸がん、胃腸がん、腎臓がん、肉腫、胚細胞腫瘍、白血病、リンパ腫、精巣がん並びに膀胱がんからなる群から選択される、請求項1から3のいずれか一項に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項５】
前記がんが、NSCLC、結腸がん、乳がん、卵巣がん、並びに頭部及び/又は頸部のがんからなる群から選択される、請求項1から3のいずれか一項に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項６】
前記がんが、NSCLCである、請求項1から3のいずれか一項に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項７】
前記患者が、進行した又は後期のがんを患っている、請求項1から6のいずれか一項に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項８】
前記患者が、転移を患っている、請求項1から7のいずれか一項に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項９】
前記患者が、脳転移を患っている、請求項1から8のいずれか一項に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項１０】
前記患者が、悪性の胸水貯留を有する、請求項1から9のいずれか一項に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項１１】
前記患者がHTL(ヘルパーT細胞)陽性である、請求項1から10のいずれか一項に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項１２】
非経口的に投与される、請求項1から11のいずれか一項に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項１３】
皮下に投与される、請求項1から11のいずれか一項に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項１４】
ペプチドが、不完全フロイントアジュバント等に乳化されている、請求項1から13のいずれか一項に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項１５】
ペプチドが、Montanide ISA-51に乳化されている、請求項1から13のいずれか一項に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項１６】
ペプチドの用量が、注射用量当たり0.1から10mgの範囲のペプチドである、請求項1から15のいずれか一項に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項１７】
合計ペプチド用量が、各注射について5.0mgである、請求項16に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項１８】
前記患者が、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤による処置に先立って幾つかのラインの処置をすでに受けている、請求項1から17のいずれか一項に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項１９】
前記処置が、別の抗腫瘍薬及び/又は放射線療法による処置と組み合わせて使用される、請求項1から18のいずれか一項に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項２０】
前記処置が、チェックポイント阻害剤による処置と組み合わせて使用される、請求項1から19のいずれか一項に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項２１】
前記チェックポイント阻害剤が、CTLA-4及び/又はPD-1/PD-L1阻害剤である、請求項20に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【請求項２２】
前記CTLA-4及び/又はPD-1/PD-L1阻害剤が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、BMS936559、MEDI4736、AMP-224、AMP-514、MPDL328OAおよびアベルマブからなる群から選択される、請求項21に記載の使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医学の、特に腫瘍学の分野に関し、より特には、本発明はがんの処置に関する。
【背景技術】
【０００２】
メモリーT細胞は、それらの同起源の抗原に遭遇して応答した後、長期間持続する抗原特異的T細胞のサブセットである。メモリーT細胞は、それらの同起源の抗原への再曝露で多数のエフェクターT細胞に急速に拡大して、その結果、過去の感染並びにがん細胞に対する「メモリー」を有する免疫系を提供する。侵入者又はがん細胞との第2の遭遇で、メモリーT細胞は、最初の時より速くて強い免疫応答を開始することができる。メモリーT細胞は、2つのサブタイプ:セントラルメモリーT細胞(TCM細胞)及びエフェクターメモリーT細胞(TEM細胞)を含む。メモリー細胞は、CD4+又はCD8+のいずれであってもよい。
【０００３】
数種のヒトがんについて、高密度のエフェクターメモリーCD8+細胞傷害性T細胞がより長い全生存と関連することが最近確立された(Fridman W.ら、2012、Nat Rev Cancer、12(4)、298〜306頁)。しかしながら、セントラルメモリーT細胞は、インビボで存続する更により大きい能力を有するように思われ、それらの増大した増殖能力のために、保護免疫を媒介することに、より効率的でもある(Calarota SAら、2013、Clinical and Developmental Immunology、Article ID 637649)。
【０００４】
文献で、データは、鉱物油アジュバント中のペプチドワクチンによるCD8+T細胞応答の初期の適当な活性化が、これらのCD8+T細胞の長期の有効性を保証しないことを示す(Bijker MSら、2007、J Immunol、179: 5033〜5040頁)が、そのような長期の有効性は、がん等の慢性疾患の分野で非常に大きい関心事であるであろう。
【０００５】
Bijkerらは、がんワクチンの劣った長期の有効性を克服する長鎖ペプチドの使用に結びつく特異的戦略を記載した。しかしながら、この戦略は、Karkadaらにより信頼できないことが示された(Karkada Mら、2014、Biologics: Target and Therapy、8: 27〜38頁)。実際、そのような長鎖ペプチドを用いる免疫応答は、各時点で一定ではなく、最初の注射後減衰する。
【０００６】
したがって、可能な限り早くメモリーT細胞、特にセントラルメモリーT細胞を刺激することができるペプチドがんワクチンを用いる処置方法を開発する強い必要性が、現在なお存在する。
【０００７】
短鎖ペプチドがんワクチンの古典的な投与レジメンは、ワクチンの少なくとも5〜6回の投与に頼る。Holmesらは、特定の短鎖ペプチドがんワクチンの投与の最適のスキームを、処置の各月にワクチンの6回の注射と規定している(Holmes JPら、2008、Cancer、113、1666〜1675頁)。フェーズ2の試験で、対象は、彼らがワクチンの少なくとも6回の投与を受けたなら、ワクチン接種プロトコルに効果的にかかわっていると考えていた(Walter Sら、2012、Nature Medicine、18、1254〜126頁)。他の人達によって、7から10回の短鎖ペプチドワクチン投与が、効果的な処置のために考えられた(Kantoff PWら、2010、Cancer J Clin Oncol、28: 1099〜1105頁;Schwartzentruber DJら、2011、N Engl J Med、364: 2119〜27頁)。
【０００８】
これらの短鎖ペプチドワクチン処置は、対象にとって苦痛であり得、副作用及び毒性が全くないものではない。それに加えて、医療コストの管理及びがん処置の最適化が、コストの上昇を考慮に入れた非常に重要な事項である。したがって、可能な限り早くメモリーT応答を得る一方で、注射の数を減少させるようにワクチンの投与のスキームを修正することを可能にする新しい方法を見出すことに強い必要性が存在する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】EP1620456
【特許文献２】EP735893
【特許文献３】米国特許出願第2014/01474790号
【特許文献４】WO2004/094454、図3A及び105〜106頁
【特許文献５】WO2009/143843
【特許文献６】WO2013/079174
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Fridman W.ら、2012、Nat Rev Cancer、12(4)、298〜306頁
【非特許文献２】Calarota SAら、2013、Clinical and Developmental Immunology、Article ID 637649
【非特許文献３】Bijker MSら、2007、J Immunol、179: 5033〜5040頁
【非特許文献４】Karkada Mら、2014、Biologics: Target and Therapy、8: 27〜38頁
【非特許文献５】Holmes JPら、2008、Cancer、113、1666〜1675頁
【非特許文献６】Walter Sら、2012、Nature Medicine、18、1254〜126頁
【非特許文献７】Kantoff PWら、2010、Cancer J Clin Oncol、28: 1099〜1105頁
【非特許文献８】Schwartzentruber DJら、2011、N Engl J Med、364: 2119〜27頁
【非特許文献９】Jennifer D Bassettら、2012、Molecular Therapy、20、860〜869頁
【非特許文献１０】S. M. Todrykら、2009、Immunology、128、83〜91頁
【非特許文献１１】Stitesら、IMMUNOLOGY、第8版、Lange Publishing、Los Altos、カリフォルニア州(1994)
【非特許文献１２】Pages, Fら、2005、N Engl J Med;353: 2654〜2666頁
【非特許文献１３】Shepherd FAら、2005、N Engl J Med.;353、123〜132頁
【非特許文献１４】M A Bareschino; J Thorac Dis 2011;3: 122〜133頁
【非特許文献１５】Julie Brahmerら、2015、New England Journal of Medicine 5月31日
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、早期のメモリーT細胞応答を可能にする短鎖ペプチドがんワクチンの新しい投与レジメンに関する。本発明において、本発明者らは、驚くべきことに、短鎖ペプチドの組合せの3回以下の投与が、メモリーT細胞を通したT特異的免疫応答を得るために十分であり、この免疫応答がより長い無増悪期間(TTP)と結びつくことを示した。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、HLA-A2(ヒト白血球抗原A2)陽性患者のがんの処置における使用のための治療用ペプチドT特異的免疫療法剤であって、ペプチドaKXVAAWTLKAAa(配列番号10、X及びaは、それぞれシクロヘキシルアラニン及びd-アラニンを示す)並びにRLLQETELV(配列番号1)、YLQLVFGIEV(配列番号2)、LLTFWNPPV(配列番号3)、KVFGSLAFV(配列番号4)、KLBPVQLWV(配列番号5、Bはα-アミノイソ酪酸を示す)、SMPPPGTRV(配列番号6)、IMIGHLVGV(配列番号7)、KVAEIVHFL(配列番号8)、及びYLSGADLNL(配列番号9)からなる群から選択される少なくとも4、5、6、7、8又は9種のペプチドを含み、前記処置が、前記治療用ペプチドT特異的免疫療法剤の2回から3回の投与からなる初回刺激期間を含み、それによりセントラルメモリーT細胞応答を誘発する、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤に関する。
【００１３】
好ましい実施形態では、該治療用ペプチドT特異的免疫療法剤は、以下のペプチドRLLQETELV(配列番号1)、YLQLVFGIEV(配列番号2)、LLTFWNPPV(配列番号3)、KVFGSLAFV(配列番号4)、KLBPVQLWV(配列番号5、Bはα-アミノイソ酪酸を示す)、SMPPPGTRV(配列番号6)、IMIGHLVGV(配列番号7)、KVAEIVHFL(配列番号8)、YLSGADLNL(配列番号9)、aKXVAAWTLKAAa(配列番号10、X及びaは、それぞれシクロヘキシルアラニン及びd-アラニンを示す)を含む(又はからなる)10種のペプチドの組合せ(本明細書ではOSE-2101と称する)である。
【００１４】
より具体的には、前記処置は、ペプチドT特異的がん免疫療法剤の2回から3回の投与からなる初回刺激期間を含み、それによりセントラルメモリーT細胞応答を誘発する。より好ましくは、該処置は、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤の3回の投与からなる初回刺激期間を含む。特定の実施形態では、初回刺激期間に、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤が、1〜4週間毎に、好ましくは2〜3週間毎に、より好ましくは3週間毎に投与される。
【００１５】
場合により、処置で、初回刺激期間に、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤の投与が1年を通して2〜8カ月毎に、好ましくは2〜3カ月毎に、より好ましくは2カ月毎に、次に1年を通して3カ月毎に行われる維持期間が続く。
【００１６】
好ましくは、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤は、非経口的に、好ましくは皮下に投与される。
【００１７】
好ましくは、ペプチドは、不完全フロイントアジュバント等、好ましくはMontanide ISA-51に乳化されている。
【００１８】
好ましくは、ペプチドの用量は、注射用量当たり0.1から10mgのペプチドの範囲である。場合により、合計ペプチド用量は、各注射について5.0mgである。
【００１９】
好ましくは、がんは、NSCLC(非小細胞肺がん)及び小細胞肺がん等の肺がん、メラノーマ、中皮腫、乳がん、原発性脳がん、卵巣がん、子宮癌、特に子宮体部及び/又は子宮頸部の癌、頭部及び頸部がん、結腸又は結腸直腸がん、胃腸がん、腎臓がん、肉腫、胚細胞腫瘍、白血病、リンパ腫、精巣がん並びに膀胱がんからなる群から選択されるがん、好ましくは、NSCLC、結腸がん、乳がん、卵巣がん、並びに頭部及び/又は頸部のがんからなる群から選択されるがん、より好ましくはNSCLCである。
【００２０】
患者は、HLA-A2陽性患者である。場合により、患者は、進行した又は後期のがんを患っている。場合により、患者は、転移、特に脳転移を患っている。場合により、患者は、悪性の胸水貯留を有する。場合により、患者は、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤による処置に先立って、幾つかのラインの処置をすでに受けている。
【００２１】
場合により、処置は、別の抗腫瘍薬及び/又は放射線療法、特にチェックポイント阻害剤、好ましくはCTLA-4及び/又はPD-1/PD-L1阻害剤、例えば、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、BMS936559、MEDI4736、AMP-224、AMP-514、MPDL328OA及びアベルマブを用いる処置と組み合わせて、より特には「非免疫原性Tメモリー」患者を「免疫原性Tメモリー」患者に変換するために使用される。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
以前には、CTLエフェクター細胞及びHTLエフェクター細胞応答のみが、腫瘍学におけるT細胞特異的免疫療法として、短鎖ペプチドのエピトープの元の組合せに従って同定されていた(EP1620456に、T応答のキー受容体に対する結合に基づく化学的最適化及び異なる性質のエピトープの元の組合せが記載されている)。全てのエピトープに対するCTL(細胞傷害性Tリンパ球)及びHTL(ヘルパーTリンパ球)両方の免疫応答は、異なる性質のエピトープ(固定されたアンカー、ヘテロクリティックな及び野生型のエピトープ)のそのような組合せの注射後のエフェクターT細胞に基づいた。そのような元の組合せを用いる免疫応答を記載する特許EP1620456は、HLA-A2トランスジェニックモデルでインビトロにおける拡大のないエフェクターT細胞アッセイを測定する標準的Elispotを使用していた。この標準的Elispotアッセイは、抗原/エピトープで刺激されるとIFN-γを即時型で分泌できるT細胞の測定を可能にする。これらの細胞は主としてエフェクターT細胞を表す。
【００２３】
メモリーT細胞の異なるサブセット(エフェクターメモリー(TEM)及びセントラルメモリー(TCM))への分類を、メモリー細胞のどのタイプが最適の保護を提供することができるかを調べる数通りの研究で研究した(Jennifer D Bassettら、2012、Molecular Therapy、20、860〜869頁)。
【００２４】
これらの測定を標準化するために、2回のElispotアッセイが、この2つの主要な集団を分離することを可能にする。標準的ELISPOTアッセイは、エフェクターメモリーT細胞を数量化するが、それに対して培養されたELISPOTアッセイは、セントラルメモリーT細胞に相当する拡大可能なメモリーT細胞を数量化する。標準的ELISPOTにより数量化される循環するエフェクターメモリーT細胞の測定と比較して、培養期間中にエフェクターT細胞に分化するT細胞の異なる集団、最もそれらしいセントラルメモリーT細胞が、培養されたELISPOTアッセイにより測定されることを証拠が示す(Calarotra S.A.ら、前出)。この培養されたELISPOTアッセイは、リンパ球を特異的抗原と共に、T細胞が抗原に対する応答で拡大することを可能にする10日間培養することにより実施される。次に、標準的ELISPOTの手順が、エフェクター機能を測定する10日の刺激期間の間に使用される対応する抗原に対する応答に適用される。
【００２５】
セントラルメモリーT細胞は、エフェクター機能を発揮するために抗原の再刺激を必要とする。培養されたELISPOTアッセイは、主にこれらのセントラルメモリーT細胞を含むが、その理由は、セントラルメモリーT細胞集団が枯渇すると、培養されたElispotにおける応答が完全になくなるからである(S. M. Todrykら、2009、Immunology、128、83〜91頁)。Todrykらは、培養されたELISPOTにおけるCD4+及びCD8+特異的応答を提供するセントラルメモリーT細胞の支配的な役割を説明している。セントラルメモリーT細胞は、エフェクターメモリーT細胞よりもインビボで存続する大きい能力を有し、それらの増大した増殖能力の故に、保護免疫の媒介でより効率的である。
【００２６】
下に記載する本発明は、腫瘍学、がん処置における早期のメモリーT細胞応答、好ましくは早期のセントラルメモリーT細胞応答、及びより特には早期の長期のメモリーT細胞応答を可能にする最適化された投与レジメンを提供するという未だ対処されていない必要性に応じる。
【００２７】
より特には、本発明は、多エピトープT特異的がん免疫療法剤に基づく短鎖ペプチドがん療法剤の新しい投与レジメンに関する。驚くべきことに、本発明者らは、短鎖ペプチド多エピトープ組合せの投与が、長期メモリーT細胞、特にセントラルメモリーT細胞を含む予想外の強い免疫応答をもたらすことを示した。更に、本発明者らは、3回の注射のみによる非常に短い投与レジメンが、この強くて長期の応答を誘発するために十分であることも発見した。
【００２８】
したがって、本発明は、HLA-A2(ヒト白血球抗原A2)陽性患者のがんの処置における使用のための本明細書で定義された治療用ペプチドT特異的免疫療法剤であって前記処置が、前記治療用ペプチドT特異的免疫療法剤の2回から3回の投与からなる初回刺激期間を含む、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤に関する。本発明は、本明細書で定義された、前記治療用ペプチドT特異的免疫療法剤OSE2101の2回から3回の投与からなる初回刺激期間を含む、それを必要とするHLA-A2(ヒト白血球抗原A2)陽性患者のがんを処置する方法にも関する。最終的に、本発明は、がん処置剤を製造するための、本明細書で定義された治療用ペプチドT特異的免疫療法剤OSE2101の使用であって、該治療用ペプチドT特異的免疫療法剤が、初回刺激期間中に2回から3回投与されるべきである、使用に関する。
【００２９】
定義
「エピトープ」は、免疫グロブリン、T細胞受容体又はHLA分子により認識される部位を一緒に形成する、一次、二次及び三次ペプチド構造、並びに電荷等の分子の総体的特徴である。或いは、エピトープは、特定の免疫グロブリンによる認識に関与する、又はT細胞に関するアミノ酸残基、T細胞受容体のタンパク質及び/又は主要組織適合性複合体(MHC)受容体による認識のために必要なこれらの残基の1組と定義することができる。エピトープは、天然に存在して、単離、精製するか又はヒトにより他の方法で調製若しくは誘導することができる。例えば、エピトープは、天然の供給源からの単離により調製することができ、又はそれらは、当技術分野における標準的プロトコルに従って合成することができる。本開示全体を通して、エピトープは、幾つかの場合に、ペプチド又はペプチドエピトープと称されることもある。
【００３０】
「ヒト白血球抗原」又は「HLA」は、ヒトのクラスI又はクラスII主要組織適合性複合体(MHC)タンパク質である(例えば、Stitesら、IMMUNOLOGY、第8版、Lange Publishing、Los Altos、カリフォルニア州(1994)を参照されたい)。HLA分子は、共有されるペプチド結合特異性に基づいてグループ化される。例えば、HLA-A2は、ある特定のアミノ酸モチーフを担持するペプチドに対する同様な結合親和性を共有する特定の型のHLA分子である。患者におけるHLA-A2状態を決定するための方法は、当業者により周知であり、得ることは容易である(即ち、血清試料)。
【００３１】
「ペプチドエピトープ」は、対立遺伝子に特異的なモチーフ又はスーパーモチーフを含むペプチドであり、その結果、該ペプチドがHLA分子に結合してCTL及び/又はHTL応答を誘発する。したがって、本発明のペプチドエピトープは、適当なHLA-A2分子に結合することができて、その後、該ペプチドに対する細胞傷害性Tリンパ球(CTL)応答、又はヘルパーTリンパ球(HTL)応答を誘発する。
【００３２】
「PanDRペプチド」又は「PADRE(登録商標)」ペプチドは、2種以上のHLAクラスII分子に結合する分子のファミリーのメンバーである。PADRE(登録商標)ファミリーの分子を定義するパターンは、HLAクラスIIスーパーモチーフと称することができる。PADRE(登録商標)分子は、HLAクラスII分子に結合してインビトロ及びインビボでヒトHTL応答を刺激する。PADREペプチドは、特許EP735893に記載されている。
【００３３】
「CTL及び/又はHTL応答」は、病原性抗原(例えば、感染性病原体からの抗原又は腫瘍抗原)から誘導された抗原に対する保護又は治療的免疫応答であり、それは、どうにかして、疾患症状、副作用又は進行を予防又は少なくとも部分的に抑制する。免疫応答は、ヘルパーT細胞の刺激により助長された抗体応答も含んでもよい。
【００３４】
本明細書において使用する、用語「メモリーT細胞」は、T細胞のCCR7-(エフェクターメモリーT細胞)及びCCR7+(セントラルメモリーT細胞)の両方の亜集団を含むことを意味する。この定義は、クラスIIに限定されたCD4メモリーT細胞及びクラスIに限定されたCD8メモリーT細胞の両方も含む。
【００３５】
がんの病期分類は、ヒトのがんの重症度を、サイズ及び/又は元の(原発性)腫瘍の程度(到達範囲)並びに身体に広がったかどうか(転移)に基づいて記述する。NSCLCの病期は、0からIVに付番する。IIIb期及びIV期は最も進行した病期である。
【００３６】
「ECOG(米国東部腫瘍共同研究グループ)のパフォーマンスステータス」は、医師及び調査員によって、患者の疾患が如何に進行しているか及び疾患が患者の毎日の生活能力にどのように影響しているかを査定するために使用される。ECOGのパフォーマンスステータスは0から5まで付番される。0のパフォーマンスステータスは、完全に活動的で全ての発病前の行動を制限なく続けることができる患者に適合する。1のパフォーマンスステータスは、身体的に激しい活動は制限されるが、歩行可能で軽い又は座業的な性質の作業、例えば、軽い家事、オフィスワークを実行できる患者に適合する。
【００３７】
用語「全生存」(OS)とは、処置の開始の日から患者が未だ生存している時間の長さを指す。臨床試験において、全生存を測定することは、新しい処置が如何に満足に作用しているかを見る1つの方法である。
【００３８】
治療用ペプチドT特異的免疫療法剤又はペプチドワクチン
本発明の多エピトープT特異的がん免疫療法剤は、免疫系が、長く続く腫瘍特異的効果を有し得る免疫メモリーを発達させることを助けることができる。
【００３９】
効果的なペプチドT特異的がん免疫療法剤は、幅広いCTL特異性の誘発を必要とする。このことは、少なくとも5種の腫瘍抗原を標的とする多エピトープ組合せのような複数の腫瘍に関連する抗原(TAA)を標的とする最適化されたエピトープで最もよく達成することができて、エピトープの組合せに基づく。好ましくは、少なくとも5種の腫瘍抗原は、HER2/neu、CEA、MAGE2、MAGE3及びp53を含むか又はそれらの中から選択される。
【００４０】
多エピトープT特異的がん免疫療法剤は、野生型エピトープ及び改質されたエピトープ(ヘテロクリティックな及び固定されたアンカーエピトープ)であることができるエピトープの組合せを含む。好ましくは、多エピトープT特異的がん免疫療法剤は、少なくとも5種のエピトープを含む。好ましい実施形態では、エピトープの組合せは、米国特許出願第2014/01474790号(参照により本明細書に組み込まれている)の表6で開示されているものの中から選択される少なくとも5種のエピトープを含む。より好ましくは、多エピトープT特異的がん免疫療法剤は、以下の5種の腫瘍抗原: HER2/neu、CEA、MAGE2、MAGE3及びp53の組合せを標的とすることを可能にする少なくとも5種のエピトープを含む。例えば、多エピトープT特異的がん免疫療法剤は、米国特許出願第2014/01474790号の表6で開示されているものの中から選択される少なくとも5、6、7、8又は9種のエピトープを含むことができる。
【００４１】
ここで使用される独創的な組合せ(OSE-2101)は、野生型エピトープ及び改質されたエピトープ(ヘテロクリティックな及び固定されたアンカーエピトープ)により作製される。ヘテロクリティックな及び固定されたアンカーエピトープに関するより詳細な情報は、例えば特許EP1620456で見出すことができる。
【００４２】
OSE-2101は、10種の合成ペプチドで構成される多エピトープT特異的がん免疫療法剤である。該ペプチドのうち9種はTAAに対するCTL応答を誘発するように設計されている。より特には、T特異的免疫療法剤は、癌胚抗原(CEA)、p53、ヒト上皮性受容体-2/神経(HER-2/neu)並びにメラノーマ抗原2及び3(MAGE-2/3)に対して向けられたCTLを誘発するように患者に投与するために設計されている。これらのTAAは、疫学に基づいて選択されており、その理由は、それらが結腸がん、卵巣がん、乳がん及びNSCLCのような種々の進行がんでしばしば過剰発現されているからである。各CTLエピトープは、HLA-A2スーパーファミリーの主要組織適合性複合体クラスIの分子により制限されて、それにより一般集団の約45%の適用範囲を提供する。10番目の合成ペプチドは、pan-DRエピトープ(PADRE)という、CTL応答の大きさを増大させるためにのみ含まれる合理的に設計されたヘルパーTリンパ球(HTL)エピトープである。
【００４３】
OSE-2101組成物は、以下のペプチドを含むか又はそれらからなる:
RLLQETELV 配列番号1
YLQLVFGIEV 配列番号2
LLTFWNPPV 配列番号3
KVFGSLAFV 配列番号4
KLBPVQLWV 配列番号5、Bはα-アミノイソ酪酸を示す
SMPPPGTRV 配列番号6
IMIGHLVGV 配列番号7
KVAEIVHFL 配列番号8
YLSGADLNL 配列番号9
aKXVAAWTLKAAa 配列番号10、X及びaは、それぞれシクロヘキシルアラニン及びd-アラニンを示す。
【００４４】
それ故、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤は、ペプチドaKXVAAWTLKAAa(配列番号10、X及びaは、それぞれシクロヘキシルアラニン及びd-アラニンを示す)並びにRLLQETELV(配列番号1)、YLQLVFGIEV(配列番号2)、LLTFWNPPV(配列番号3)、KVFGSLAFV(配列番号4)、KLBPVQLWV(配列番号5、Bはα-アミノイソ酪酸を示す)、SMPPPGTRV(配列番号6)、IMIGHLVGV(配列番号7)、KVAEIVHFL(配列番号8)、及びYLSGADLNL(配列番号9)からなる群から選択される少なくとも4、5、6、7、8又は9種のペプチドを含む。
【００４５】
ペプチドは、適当な樹脂で出発する固相ペプチド合成のための標準的Boc又はFmoc化学を使用して合成して、標準的方法により精製することができる。或いは該ペプチドは、組換え細胞を用いて遺伝子操作により又はRNAにより、例えばインビトロ翻訳系により産生することができる。
【００４６】
多エピトープT特異的がん免疫療法組成物は、薬学的に許容される担体又は賦形剤を含むことができる。より好ましくは、薬学的に許容される担体は、水性担体、特に緩衝溶液である。特に、それは1種又は数種のアジュバントを含んでもよい。例えば、アジュバントは、不完全フロイントアジュバント、鉱物油アジュバント、水酸化アルミニウム、又はミョウバン、GM-CSFであってもよい。他の適当なアジュバントも当技術分野において周知である。
【００４７】
一実施形態では、多エピトープT特異的がん免疫療法剤は、樹状細胞等のペプチドパルス抗原提示細胞を含むことができる。
【００４８】
好ましくは、多エピトープT特異的がん免疫療法剤では、ペプチドは不完全フロイントアジュバント等に乳化されている。好ましい実施形態では、アジュバントは、Seppic SA社(パリ、フランス)により製作されて供給されている、不完全フロイントアジュバントと同様な鉱物油アジュバントである。最も好ましい実施形態では、アジュバントはMontanide(登録商標)ISA51である。
【００４９】
組成物の各ペプチドは、0.1mg/mlから1mg/ml、好ましくは0.5mg/mlの濃度で存在することができる。好ましくは、全てのペプチドは、組成物中に同じ濃度で存在する。
【００５０】
好ましくは、多エピトープT特異的がん免疫療法組成物は、10種のペプチドの滅菌されて、防腐剤を含まない、それぞれ0.5mg/mlの濃度のエマルションであり、Montanide(登録商標)ISA51アジュバントで1:1(w:w)の比で剤形化されて、ゴムで栓をされたガラスバイアル中に充填されて、2°から8℃で冷蔵される。
【００５１】
OSE-2101は無菌条件下で製作される。ペプチドは、3種の異なる溶媒に溶解され、滅菌濾過され、プールされて、次に制御された条件下で均質化によりアジュバント中に乳化される。製品の放出テストには、外見、エンドトキシン、無菌性、粘度、粒径、各ペプチドのペプチド濃度、体積、pH及び効能が含まれた。OSE-2101組成物の調製の詳細はWO2004/094454、図3A及び105〜106頁にあり、その開示は参照により本明細書に組み込まれている。
【００５２】
場合により、OSE-2101の10種のペプチドに加えて、本発明のペプチド組成物は、追加のペプチド、特に細胞傷害性T-リンパ球(CTL)応答を誘発し且つTAAを標的とするために使用されるペプチドエピトープを更に含むことができる。例えば、本発明のペプチド組成物は、WO2009/143843(その開示は参照により本明細書に組み込まれている)で開示されているペプチド、より特にはIDO5(配列番号11)を更に含むことができる。
【００５３】
治療用ペプチドT特異的免疫療法剤の投与レジメン
ワクチンの投与レジメンは、初回刺激期間及び場合により維持期間を含む。
【００５４】
用語「初回刺激期間」は、セントラルメモリーT細胞応答が、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤の1種又は数種のペプチドに対して誘発されるワクチン接種プロセスの期間を指す。
【００５５】
用語「維持期間」又は「追加刺激期間」は、初回刺激期間に続く、同じ治療用ペプチドT特異的免疫療法剤が投与されてTメモリー免疫応答が持続又は増強されるワクチン接種プロセスの期間を指す。
【００５６】
本発明の好ましい態様によれば、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤により処置中の対象の初回刺激期間は、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤又はワクチンの1回から3回の投与からなる。
【００５７】
更により好ましい実施形態では、初回刺激期間は、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤又はワクチンの3回の投与からなる。
【００５８】
この初回刺激期間中に、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤は、1〜4週間毎に、好ましくは2〜3週間毎に、より好ましくは3週間毎に投与される。
【００５９】
初回刺激期間は、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤の1種又は数種のペプチドに対する、好ましくは、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤の少なくとも2、3、4又は5種のペプチドに対するセントラルメモリーT細胞応答を誘発するために効率的である。
【００６０】
初回刺激期間に続く任意選択の維持期間中に、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤又はワクチンの1種又は数種の投与が実施される。この維持期間中に、ワクチンの投与は、2〜8カ月毎に、好ましくは2〜3カ月毎に、例えば1年又は2年を通して2カ月毎に、次に1年又は2年を通して3カ月毎に行われる。
【００６１】
代替的実施形態では、初回刺激期間に維持期間が続くことはない。
【００６２】
初回刺激期間と維持期間とは、休止期間により分離することができて、休止期間は如何なる治療用ペプチドT特異的免疫療法剤投与も含まない。この休止期間は4から12週間継続することができる。
【００６３】
別の代替的実施形態では、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤により誘発されたメモリーT細胞は腫瘍環境に免疫原性を与えられるので、初回刺激期間にチェックポイント阻害剤を用いる処置が続く。
【００６４】
本発明は、HLA-A2陽性患者におけるがんを処置するための方法であって、本明細書で開示された治療有効量の治療用ペプチドT特異的免疫療法剤を投与することを含み、前記処置が、前記ペプチドワクチンの1回から3回の投与が実施される初回刺激期間を含む、方法に更に関する。該方法は、患者のHLA状態を決定する予備ステップ、HLA-A2陽性患者を選択するステップ及び本明細書で開示された治療用ペプチドT特異的免疫療法剤の治療有効量をHLA-A2陽性患者に投与するステップを更に含むことができる。該方法は、上で定義した維持期間を更に含むことができる。好ましくは、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤はOSE2101である。
【００６５】
投薬
本発明の関係で、用語「処置」又は「処置すること」は、治癒的、症候的、及び予防的処置を表す。本発明の医薬組成物及び製剤は、がん又は腫瘍が存在する、好ましくはがんの進行の後期にあるヒトに使用することができる。本発明の医薬組成物及び製剤は、がんを有する患者を必ずしも治癒させるとは限らないが、疾患の進行を遅らせるか若しくは遅くするか又はさらなる進行を防止し、それにより患者の状態を緩和する。特に、本発明の医薬組成物及び製剤は、腫瘍の発達を縮小し、及び/又は転移の発生若しくは発達及びがんの再発を予防する。がんの処置において、本発明の医薬組成物は、治療有効量で投与される。
【００６６】
「有効量」は、脳転移の有害な効果を予防、除去又は縮小する本発明の医薬組成物の量を意味する。投与される用量は、患者、病理、投与様式、その他に従って当業者により適合されてもよいことが理解される。投薬量及びレジメンは、処置されるべき疾患の病期及び重症度、患者の体重及び全身的健康状態並びに処方する医師の判断に依存する。より特には、「本明細書で開示された治療用ペプチドT特異的免疫療法剤の治療的に効率的な量」は、患者の全生存を増大させるために十分な量を意味する。特に、「本明細書で開示された治療用ペプチドT特異的免疫療法剤の治療的に効率的な量」は、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤の1種又は数種のペプチドに対するセントラルメモリーT細胞応答を誘発するために十分な量を意味する。
【００６７】
先のがん試験は、不完全フロイントアジュバントに乳化された注射用量当たり0.1から10mgの範囲のペプチドで、ペプチドの用量を上昇させてテストした。テストされた全ての用量で、ペプチド/不完全フロイントアジュバントによる処置は、重症の用量が関係する全身性毒性は報告されず、安全で十分耐えられると考えられた。
【００６８】
本明細書で開示された治療用ペプチドT特異的免疫療法剤は、任意の適当な経路により、特に皮下、皮内若しくは筋肉内経路等の非経口的経路により又はエアロゾル、経粘膜、胸膜内、若しくは髄腔内経路により投与することができる。最も好ましい実施形態では、ペプチド組成物は皮下に投与される。好ましくは、本明細書で開示された治療用ペプチドT特異的免疫療法剤は、皮下注射のために設計されている。
【００６９】
好ましくは、ペプチドの用量は、注射用量当たり0.1から10mgの範囲のペプチドである。好ましい実施形態では、各注射又は投与のための合計ペプチド用量は、5.0mgである(0.5mgの各ペプチドを含有する1mLの薬品)。
【００７０】
がん
本発明の好ましい態様によれば、OSE-2101組成物によるワクチン接種の対象は、がんの患者である。好ましい実施形態では、患者のがんは、以下のがんの1つに起因する: NSCLC(非小細胞肺がん)及び小細胞肺がん等のがん癌、メラノーマ、中皮腫、乳がん、原発性脳がん、卵巣、子宮癌、特に子宮体部及び/又は子宮頸部の癌、頭部及び頸部、結腸、胃腸、腎臓のがん、肉腫、胚細胞腫瘍、白血病、リンパ腫、精巣がん並びに膀胱がん、好ましくはNSCLC、結腸がん、乳がん、卵巣がん、並びに頭部及び/又は頸部のがん、より好ましくはNSCLC。
【００７１】
別の好ましい実施形態では、患者のがんは進行がんである。用語「進行がん」は、発達の進行した病期にあるがん、即ち、身体に広がったがん(転移)を指す。好ましくは、患者は脳転移を患っている。
【００７２】
或いは、患者は、悪性の胸水貯留、好ましくは、特に肺がん、乳がん、リンパ腫又は白血病と関連する転移性胸水貯留を有する。
【００７３】
場合により、患者は、該ペプチド組成物によるワクチン接種に先立って幾つかのラインの処置をすでに受けている。特定の実施形態では、患者は陽性HTL応答を有する。
【００７４】
別の抗腫瘍薬との組合せ
場合により、該処置は、別の抗腫瘍薬を用いる処置、特に化学療法、ホルモン療法及び/又は免疫療法と組み合わせて使用される。
【００７５】
例えば、化学療法剤は、シスプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、エトポシド、テニポシド、マイトマイシン、イリノテカン、ビノレルビン、エトポシド、イホスファミド、テモゾロミド、フルオロウラシル(5FU)、ドセタキセル、ペメトレキセド、ナベルビン、腫瘍血管成長(VEGF)を標的とする薬物、例えば、ベバシズマブ、ラムシルマブ;プレドニゾン;EGFRを標的とするチロシンキナーゼ阻害剤、例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ;ALK阻害剤、例えばクリゾチニブ;セリチニブ及び任意のそれらの組合せの中から選択することができる。
【００７６】
好ましい実施形態では、本発明のワクチン処置は、チェックポイント阻害剤、特にCTLA-4阻害剤及び/又はPD-1若しくはPD-L1阻害剤;IDO阻害剤と組み合わせて使用される。チェックポイント阻害剤を用いる処置は、本明細書で開示された治療用ペプチドT特異的免疫療法剤を用いる処置、特に初回刺激期間の処置の前に、それと同時に又はその後に実施することができる。
【００７７】
本発明は、特にがんの処置において、同時に、別々に又は逐次的に使用するための組み合わされた製剤としての、(a)治療有効量の、本明細書で開示された治療用ペプチドT特異的免疫療法剤;並びに(b)チェックポイント阻害剤、好ましくはCTLA-4阻害剤及び/又はPD-1若しくはPD-L1阻害剤を含むキット又は製品に関する。
【００７８】
好ましくは、治療用ペプチドT特異的免疫療法剤はOSE-2101である。
【００７９】
好ましい実施形態では、チェックポイント阻害剤を用いる処置は、本明細書で開示された治療用ペプチドT特異的免疫療法剤の治療有効量を用いる処置の初回刺激期間の後で実施される。
【００８０】
数種のPD-1/PD-L1阻害剤がすでに利用可能であるか又は臨床開発中である。例えば、PD-1/PD-L1阻害剤は、ペンブロリズマブ(Merk社)、ニボルマブ(Bristol Myers Squibb社)、ピジリズマブ(Cure Tech社)、BMS936559(Bristol Myers Squibb社)、MEDI4736(Astra Zeneca社)、AMP-224(Astra Zeneca社)、AMP-514(Astra Zeneca社)、MPDL328OA(Roche社)、アベルマブ(Merck KgA Serono/Pfizer社からのMSB0010718Cとしても知られる)を含む非網羅的リストの中から選択することができる。例えば、PD-1/PD-L1阻害剤は、WO2013/079174で開示されているものの中から選択することができる。例えば、CTLA-4阻害剤は、トレメリムマブ(Pfizer Medimmune社)及びイピリムマブ(BMS社)を含む非網羅的リストの中から選択することができる。
【００８１】
本発明のさらなる態様及び利点は、以下の実験のセクションで開示することとするが、それらは例示とみなされるべきであり、本出願の範囲を限定しない。
【図面の簡単な説明】
【００８２】
【図１】フェーズ1/フェーズ2の第9週、第18週にOSE2101によって誘発されたセントラルメモリーT細胞応答の大きさを示す図である。
【図２】フェーズ2において数種のエピトープについて用量の回数を通してOSE2101により誘発されたセントラルメモリーT細胞応答を示す図である。
【図３】OSE-2101に誘発されたPADRE HTL応答とCTL/セントラルメモリーT細胞応答の間の相互関係を示す図である。
【図４】TTPのカプランマイヤー推定を示す図である。
【実施例】
【００８３】
(実施例1)
セントラルメモリーT細胞の関与による早期の免疫応答
フェーズ1/フェーズ2の臨床研究で、10種のペプチドにより強化されたエピトープの組合せ、OSE-2101の安全性及び免疫原性を、早期の結腸及びNSCLC患者で広い多エピトープCTL応答を誘発するように合理的に設計した。多エピトープの適用範囲に加えて、OSE-2101は、乳房、結腸及び非小細胞肺、卵巣の腫瘍で広範に発現される5種の腫瘍抗原(CEA、HER-2/neu、p53、MAGE2及びMAGE3)からのエピトープも標的として、この製品を、異なるがんの徴候に対する療法のために適するようにした。CTL誘発のためのT細胞ヘルパーの供給源として、普遍的なHTLエピトープPan DRエピトープも含まれて、鉱物油アジュバントがこのT特異的がん免疫療法剤の最終の剤形化のために使用された。
【００８４】
患者の適格性基準。OSE-2101を、組織学的に確認されたIIB/IIIA期のNSCLC又はIII期の結腸がんを有するHLA-A2+患者を登録する2つの疾患特異的フェーズI臨床試験でテストした。全ての患者が、標準的療法を受けた後、過去6カ月以内にNEDと診断された。患者は、血液化学及び白血球数について正常な検査室パラメーターを満たし、米国東部腫瘍共同研究グループの0又は1のパフォーマンスステータスを有した。試験参加の1カ月以内に免疫調節剤又は他のがん免疫療法剤で処置された場合には、彼らを除外した。皮膚の基底若しくは扁平上皮細胞癌又はin situ子宮頚がんを除いて、他の癌の病歴のある患者も、同時発生の急性病態又は指定された自己免疫疾患を有する患者も除外した。
【００８５】
ペプチド。全ての免疫モニタリングエピトープの免疫原性を、HLA-A2.1/Kbトランスジェニックマウスの処置により誘発されたCTLを、OSE-2101の前臨床ロットで刺激することにより確認した(標準的Elispotアッセイ)。
【００８６】
臨床研究の設計。OSE-2101免疫療法剤の安全性及び免疫原性を評価するために、フェーズ1/フェーズ2で、非盲検、多中心、単回用量、複数投与の研究として両方の試験を設計した。患者は、1mlのOSE-2101で3週間毎に、合計6用量で処置された。各用量は、三角筋又は上部大腿領域における同じ近傍の皮下に投与したが、局所的副作用が観察された場合には、反対側の部位に投与した。完了した各患者について研究継続時間は18週間であった。臨床応答又は患者生存は、フェーズ1/フェーズ2の研究のいずれでも測定しなかった。
【００８７】
臨床試料の処理。血液又は白血球除去血液を、予備処置中の患者から、第9週及び第18週の時点、OSE-2101の3回目及び6回目それぞれの用量の3週間後に得た。末梢血液の単核細胞(PBMC)を、試料から収集の24時間以内にFicoll-Paque密度勾配を使用して単離して、最適の凍結を確実にするように設計された容器(Mr. Frosty、Nalgene社)中で凍結保存した。使用するためには、細胞を37℃で急速に解凍して、次にワークアップのためにヒトAB血清を含有する培地に移した。
【００８８】
セントラルメモリーT細胞応答及びエフェクターメモリーT細胞の測定。合計16名の患者(10名が結腸がん及び6名がNSCLC)におけるCTL応答を、各エピトープに対する及びエピトープアナログの野生型エピトープに対するCTL応答についてモニターした。各患者について、第9週及び第18週の時点の予備処置を同じ実験でバッチテストして、予備処置の応答に対する後処置の応答の比較を同じ実験で可能にした。セントラルメモリーT細胞の応答を、各ワクチンエピトープを用いて10日間PBMCをインビトロで刺激した後、IFN-γ酵素結合免疫スポット(培養されたELISPOT)アッセイを使用して測定した。簡単に説明すると、各時点からのPBMCを、48ウェル培養プレートで(2×106PBMC/ウェル)、第0日に10μg/mlの各エピトープで個々に繰り返して刺激した。第1、第4及第7日に、全ての培養物にrIL-2(Endogen社、Woburn、マサチューセッツ州、10U/ml最終の濃度)を供給した。培養開始の10日後に、細胞を回収して、特定のワクチンペプチド及び対応するワクチンアナログの野生型ペプチドに対する活性を、TメモリーELISPOTアッセイでテストした。マウス抗ヒトIFN-γ抗体(Mabtech社、米国オハイオ州、Cincinnati)で予めコーティングしたミリポアIP 96ウェルプレートで細胞をテストした。各培養からの5×104細胞及び1.25×104細胞を、3連のウェルで105の照射された自家PBMC及び10μg/mlペプチドと一緒にプレーティングした。対照として、CTLを、関係のないHLA-A2.1-結合HBVペプチドに対してもテストした。20時間のインキュベーションの後、TメモリーELISPOTプレートを、ビオチン標識、ビオチン化抗ヒトIFN-γ抗体(Mabtech社、米国)、アビジン-ペルオキシダーゼ複合体(APC、Vector Laboratories社、Burlingame、カリフォルニア州)、及び3-アミノ-9-エチルカルバゾール(AEC)基質(Sigma Aldrich社、St. Louis、ミズーリ州)と逐次インキュベーションを実施することにより発色させた。スポットを形成する細胞(SFC)を、コンピューター援用画像解析系(Zeiss KS ELISPOTリーダー、Carl Zeiss MicroImaging社、Thornwood、ニュージャージー州)を使用して数えた。データを、関係のないHBVペプチドで誘発されたスポットを差し引いた後の正味の細胞5×104個当たりのSFCとして報告する。
【００８９】
セントラルTメモリー培養ELISPOTアッセイを、臨床試料をテストするために使用された同一の刺激条件下で、EBV BMLF1 CTLのエピトープ(配列、GLCTLVAML)に対してリコールTエフェクターメモリー応答を示した患者からのHLA-A2+PBMCを使用して数量化した。これらの供与体から生じた特異的応答を限界細胞用量で滴定して、線形応答を測定した(相関係数=0.99)。アッセイの検出下限を5SFC/ウェル及び上限を600SFCであると決定した。実験間の再現性を、別の日の陽性供与体から凍結保存された予備的ワクチン接種PBMC試料を7反復テストすることにより評価して、これらのアッセイにおいて変動係数(CV)は7〜12%の範囲であった。測定者間の再現性を査定するために、2名の測定者が異なる日における同じ患者からの予備処置PBMCをテストして、CVは最適の細胞用量で13〜16%であった。CV値は、変動性の許容される範囲内であると考えられ、臨床的免疫応答を分析するための本発明者らのアッセイの使用を強く支持した。
【００９０】
応答基準。各エピトープ及び関係のないHBV対照エピトープに対する予備処置応答の変動性を分析した後、将来を見越して、陽性応答基準を確立した。後処置試料における平均SFC応答を、それが以下の全てを満たせば、陽性エピトープで誘発されたメモリーT細胞の応答とみなした: 1)関係のないエピトープ応答より5SFCを超えて大きかった、2)関係のないエピトープ応答の平均SFCプラス2SDより大きかった、及び3)同じ患者からの予備処置試料におけるSFC応答プラス2SDより2倍大きかった。「プラス2標準偏差」の算入は、アッセイの変動性を取り入れるために使用して、基準をより厳格にすることに役立った。
【００９１】
結果
患者の特徴付け。試験に登録されたIII期の結腸がんを有する14名の患者及び6用量のOSE-2101を受けた後研究を完了した10名の患者。NSCLCの試験でIIB/IIIA期の疾患を有する10名の患者が登録されて、6名の患者が研究を完了した。
【００９２】
OSE-2101は安全と考えられ、2つの臨床試験において患者が耐用性を示し、鉱物油アジュバント中で調製されたペプチドに共通する典型的な副作用が観察された。
【００９３】
OSE-2101の免疫原性  6回のOSE-2101の用量の全コースを受けた合計16名の患者(10名が結腸がん及び6名がNSCLC)を、特異的免疫療法剤により誘発されたTAA特異的セントラルメモリーT細胞応答の頻度、幅及び大きさについて評価した。セントラルメモリーT細胞応答の検出を改善するために、PBMCをインビトロで10日間各エピトープにより刺激した。インビトロで拡大したPBMCのエフェクター活性を、それぞれのエピトープ及び関係のないHLA-A*0201-結合HBVエピトープに対するIFN-γELISPOTアッセイで測定した。エピトープがアナログであった場合には、対応する野生型エピトープもテストした。
【００９４】
16名の患者の免疫モニタリングからの結果は、OSE-2101は、患者における広い幅のセントラルメモリーT細胞応答を誘発することができたことを示した。結腸がんの試験では、10名の患者のうち8名が、驚くべきことに、4種以上のワクチンエピトープに対して第9週及び/又は第18週の時点でCTL応答を生じた(図1)。培養されたELISPOTの平均の大きさは、第9週と第18週の間で同じ範囲であった。
【００９５】
患者607は、セントラルメモリーT細胞応答の最も広い幅及び最高の大きさを示し、7種のエピトープに対して第9週の時点で、細胞5×104個当たり60〜200SFCの間の応答を示した。より重要なことには、この患者でTメモリー応答を誘発した7種のうち5種が野生型エピトープに対して向けられた。第18週の時点で、患者607は、セントラルメモリーT細胞応答を生じて、幾つかは、第9週で同じエピトープの6種に対して1000SFCを超えた。
【００９６】
5種以上のエピトープに対する、結腸がん患者601、603、604及び606で多エピトープ応答が、驚くべきことに第9週の時点で及び/又は第18週の時点でも観察されたことは、同様に注目に値する。
【００９７】
多エピトープに対するセントラルメモリーT細胞応答は、NSCLC患者においても、驚くべきことに第9週の時点で及び/又は第18週の時点でも観察された。記載する全てのデータは、PBMC試料がインビトロで10日間個々のOSE-2101エピトープと共に培養されて拡大し、CTLがインビボで初回刺激された後、ELISPOTアッセイでテストされて、セントラルメモリーT細胞応答が測定され、培養されたElispotがエピトープに対する応答を見るために必要なので、インビトロの刺激ステップが行われる試験プロトコルを利用した。
【００９８】
異なるエピトープクラスの免疫原性。CTL応答の頻度及び大きさの分析は、生成物中で提示された大部分のエピトープ及び全てのエピトープクラスが患者において免疫原性であったことを示した。全体として、9種のワクチンエピトープのうち8種が少なくとも1名の結腸がん患者でセントラルメモリーT細胞応答を誘発し、6種のワクチンエピトープが少なくとも1名のNSCLC患者で免疫原性であった。3種の固定された-アンカーアナログ(CEA.24V9(配列番号3)、HER2.369V2V9(配列番号4)及びp53.139L2B3(配列番号5))並びに2種のヘテロクリティックなアナログ(CEA.691H5(配列番号7)及びCEA.605D6(配列番号9))が、結腸がん患者の60〜80%に特に免疫原性であり、HLA-A*0201-型NSCLC患者の40〜80%がアナログの各々に応答した(Table 1A(表1)及び1B(表2))の第9週又は第18週の応答)。アナログの高められた免疫原性も、結腸がん患者(Table 1A(表1))における第9週の70〜180SFC及び第18週の90〜315SFC並びにNSCLC患者(Table 1B(表2))における第18週の60〜138SFCの範囲の平均応答大きさにより示された。
【００９９】
処置を完了した16名の結腸がん及びNSCLC患者の免疫学的テストは、OSE-2101が個々の患者で3回の注射後間もなく、数種のエピトープに対して向けられたCTL特異性の同時の誘発により特徴付けられる広い幅のCTL及びメモリーT細胞の応答を誘発することに成功したことを示した。CTLだけでなくセントラルメモリーT細胞の広い応答が、両方のコホート中の個々の患者で観察されたことは、早期及び後期患者における免疫療法について有望な長期の効力を示した。むしろ、CTL及びセントラルメモリーT細胞の同時の応答はがん免疫療法剤に対する多エピトープ手法の長期の臨床的恩恵を指し示している。
【０１００】
【表１】
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【０１０１】
【表２】
0006654207.tif 000003
【０１０２】
(実施例2)
フェーズ2で確認された早期のメモリーT細胞の関与
培養されたElispotによって測定されるCTLの免疫応答。免疫原性は、フェーズ2臨床試験で、各テスト試料からの凍結保存されたPBMCについて、30μg/ml DNAアーゼを含有する5%ヒト培養培地(25mM HEPESを含み、5%ヒトAB血清、4mM L-グルタミン、0.5mMピルビン酸ナトリウム、0.1mM MEM非必須アミノ酸、100μg/mlストレプトマイシン、及び100U/mlペニシリンで補完されたRPMI-1640培地)中で解凍して測定した。1200rpmで5分間遠心分離した後、細胞ペレットを5%ヒト培養培地に再懸濁して2回洗浄した。セントラルメモリーT細胞の培養されたELISPOTアッセイのために、2×106/mlのPBMCを48ウェルプレート中のウェルに反復で入れ、10μg/mlの各ペプチドで10日間刺激した。陽性対照として、PBMCをリコールウイルスペプチドのプールでも刺激した。ヒトrIL2(10U/ml)を、第1日、第4日及び第7日に、ペプチドで刺激された培養物に加えた。10日後に、刺激された細胞を回収して5×104/ウェルの濃度でプレーティングした。アッセイウェルには、照射された自家PBMC(1×105/ウェル)及び10μg/mlのペプチド、ワクチンペプチド、関係のないペプチド又は陽性対照ペプチドのいずれかも入れた。インビトロで各アナログエピトープにより刺激された細胞も、対応する野生型エピトープに対してテストした。
【０１０３】
標準的Elispotにより測定されるHTLの免疫応答。PADREエピトープに対するTヘルパー応答を測定するHTL ELISPOTアッセイのために、4×106/mlのPBMCを、終夜培養するために12ウェルのプレートに入れた。次に細胞を回収して、抗IFN-γモノクローナル抗体(mAb)(10μg/ml、クローン1-D1K、Mabtech社)で予めコーティングされた平底96ウェルニトロセルロースプレートに、2×105/ウェルで入れた。6ウェルに反復で入れられた細胞を、10μg/mlのPADREペプチドで又は関係のないマラリアSSP2ペプチドで刺激した。37℃で20時間のインキュベーションの後、アッセイプレートをPBS/0.05%Tween-20で洗浄して、100μl/ウェルのビオチン化抗IFN-γmAb(2μg/ml、クローン7-B6-1、Mabtech社)をウェルに加えた。プレートを2時間37℃でインキュベートして、次に6回洗浄した。最終的に、IFN-γを分泌する細胞からのスポットを、ウェルをVectastain ABC及び3-アミノ-9-エチルカルバゾール(AEC)溶液と逐次インキュベートすることにより発色させた。スポットをコンピューター援用画像解析リーダー(Zeiss KS ELISPOTリーダー)によって数えた。
【０１０４】
データ分析及び許容基準。反復ウェルにおけるスポットの平均及び標準偏差(SD)は、各実験からの粗ELISPOTデータをExcelベースのコンピュータープログラムに移すことにより、全てのアッセイで計算した。陽性ワクチンで誘発されたT細胞応答を下で説明する基準に従って決定した。
【０１０５】
セントラルメモリーT細胞を通じてペプチドにより誘発された特異的T細胞応答に対する許容基準: CTL応答のためにフェーズ2試験で使用された陽性基準は、患者における各ワクチンエピトープ及び関係のないHBV対照エピトープに対する予備処置応答の変動性を分析した後、将来を見越して確立されたフェーズ1/フェーズ2試験における基準と同一であった。所与のエピトープに対する陽性ペプチドで誘発されたCTL/Tメモリー応答は、以下の条件の全てを満たした: 1)関係のないエピトープ応答より5SFC超えて大きかった、2)関係のないエピトープ応答の平均SFCプラス2SDより大きかった、及び3)同じ患者からの予備的ワクチン接種試料におけるSFC応答プラス2SDより2倍大きかった。「プラス2標準偏差」の算入は、アッセイ変動性を取り入れるために使用されて、基準の厳格性を増すために役立った。
【０１０６】
PBMCの先立つ拡大がなくて測定されたHTL PADREエピトープに対する陽性HTL応答のための基準は以下の通りであった: 1)PADRE特異的応答が、バックグラウンドを差し引いた後細胞2×105個当たり正味で5SFCを超える、2)6ウェルの反復でテストされた各試料について、関係のないHLA-DR結合マラリアペプチドで刺激されたウェルからのSFCに対して、PADREペプチドで刺激されたウェルからのSFCを比較したときに、t-検定のp値<0.05、及び3)ワクチン接種前試料のPADREペプチドによる刺激により誘発されたSFCに対して、ワクチン接種後試料を比較したときに、t-検定のp値<0.05。HTL応答がOSE-2101ワクチン接種によって誘発されたとみなされる前に、3つの基準が全て満たされなければならなかった。
【０１０７】
結果
患者の登録及び免疫モニタリングの基準。IIIB期、IV期又はフェーズ2試験における再発NSCLCの合計64名のHLA-A2+患者を、少なくとも1用量のOSE-2101で処置した。33名の患者が3週間間隔で投与された6用量のOSE-2101からなる研究の初期フェーズを完了して、エピトープにより誘発されたT細胞/メモリーT細胞応答についてモニターされた。この患者コホートからのテスト結果を、第9週(3回の注射の後)及び第18週(6回の注射の後)における早期の応答に特別の注意をして、下に記載する。
【０１０８】
11名の最初の患者の各々で誘発されたCTL/セントラルメモリーT細胞応答の幅及び個々のワクチンエピトープの免疫原性プロファイルは、疾患の苦痛の比較的小さい早期のNSCLC及び結腸がん患者におけるフェーズ1/フェーズ2試験と非常に似ていた。
【０１０９】
処置された患者におけるCTLエフェクター/セントラルメモリーT細胞応答の大部分は、初期の3から6用量/18週の処置期の間に誘発され、驚くべきことに3週間(3用量)後に早くも誘発された。好ましくは、野生型エピトープに向けられたものを含むこの期間に誘発されたCTL/セントラルメモリーT細胞応答は、2〜3カ月間隔でOSE-2101の皮下注射で継続される追加刺激により維持されなければならない。
【０１１０】
白血球除去輸血及び免疫原性試験を有し得る残る22名の患者について、全体的データは、製品(CEA.24V9(配列番号3)、CEA.605D6(配列番号9)、HER2.369V2V9(配列番号4)、MAGE3.112I5(配列番号8)及びMAGE2.157(配列番号2))における5種のより免疫原的に関係するエピトープに対する試料の免疫モニタリングが、T細胞及びセントラルメモリーT細胞の免疫原性を決定するために十分であったことを示した。バッチ試験のために選択された臨床時点は、予備処置、第9週、第18週及び第30週の時点であったが、その理由は、テストされた最初の11名の患者の間で観察された大部分のCTL/セントラルメモリーT細胞の応答が、すでに第9週及び第18週までに誘発されて、一部は第30週で維持されていたからである。
【０１１１】
OSE2101の免疫原性は、フェーズ2の進行した患者(侵襲的又は転移性の進行した病期の、少なくともファーストラインの療法の不成功の後のNSCLCのHLA A2陽性患者)においても、患者で誘発されたCTL+/セントラルメモリーT細胞応答の全体的幅及び個々のエピトープの免疫原性のレベルに関して、2つのフェーズ1/フェーズ2試験で前に観察された免疫原性と同様であり、したがって、異なる患者集団における製品の全体的効能が確認された。OSE-2101処置で、5種の代表的免疫原性エピトープのうち少なくとも3種に対する応答により定義される多エピトープのCTL+/セントラルメモリーT細胞応答が、フェーズ2試験でモニターされた33名の患者のうち22名(67%)で観察されて、早くも第9週で達成された。
【０１１２】
【表３】
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【０１１３】
最初の11名の患者は、全ての9種のペプチドエピトープでテストして、残る22名の患者は、5種のシェードされた(shaded)ペプチドエピトープ(CEA24(配列番号3)、CEA605(配列番号9)、HER2.369(配列番号4)、MAGE2.157(配列番号2)及びMAGE3.112(配列番号8))でテストした。結果は図2にも示す。
【０１１４】
早期の第9週の応答は、第18週の応答と同じレベルにあって、長期応答は、白血球除去輸血を受けることができる患者については1年後でも依然としてあった。長期応答は、追加注射によって維持されていた。
【０１１５】
HTL応答を、インビトロにおける拡大ステップなしで標準的Elispotにより、PBMCで測定した。PBMCを解凍して、終夜培地中で休息させ、2*105PBMC/ウェルを、インターフェロンガンマELISPOTアッセイにおいて、10μg/mLのPan DRエピトープ(HTL)又は関係のないマラリアペプチドで刺激した。
【０１１６】
PADREに対してIFN-γを産生するヘルパーT細胞が、ペプチドによるPBMCの短期のインビトロにおける拡大なしで、テストされた33名の患者のうち18名(55%)で検出され、第9週又は第18週で同じ範囲にあり、エピトープの組合せに対して早期のHTL応答を示した。
【０１１７】
次に、OSE-2101で誘発されたPADRE HTL応答とCTL/セントラルメモリーT細胞応答との間の相関は存在する(図3)。この分析に対する相関係数は0.405である。
【０１１８】
(実施例3)
早期のメモリーT細胞の関与による無増悪期間(TTP)に対する影響。
少なくともファーストラインの不成功の後の進行したNSCLCにおける短鎖ペプチド組合せのTTP結果(OSE2101フェーズ2データの内部報告)。腫瘍学で臨床的に、免疫組織学化学的に評価された浸潤メモリーT細胞の高いレベルの存在は、切除された結腸直腸がんの959個の検体における早期の転移性侵襲の徴候の不在、比較的進行していない病理学的病期、及び増大した生存率と相関した(Pages, Fら、2005、N Engl J Med;353: 2654〜2666頁)。TTPは、長期及び無病生存について、整合した代理薬がエフェクターメモリーT細胞と相関したので、興味深い。
【０１１９】
HLA-A2であってOSE-2101を受けた63名の患者は、無増悪期間(TTP)の分析に含まれる。28名の患者は、文書で疾患進行と記録されていた。カプランマイヤーの推定量を使用して、無増悪期間の中央値は285日であると決定した。
【０１２０】
短鎖ペプチド組合せOSE-2101後の無増悪期間の中央値(TTP中央値)は、285日即ち9.4カ月(SD86日)であった。この重要な臨床的事項は、エフェクターメモリーCD8+細胞傷害性T細胞の早期の刺激に関係する(TTPは無作為化から目標の腫瘍の進行までの時間と定義される;TTPは死亡を含まない。PFSは、無作為化から目標の腫瘍の進行又は死亡までの時間と定義される)。
【０１２１】
同じ型の進行したNSCLC集団(侵襲的又は転移性)で、少なくともファーストラインの不成功の後(セカンドラインの処置)、エルロチニブのようなチロシンキナーゼ阻害剤を用いて、無増悪生存期間(PFS)が2.2カ月と記載されている(Shepherd FAら、2005、N Engl J Med.;353、123〜132頁)。
【０１２２】
2種の化学療法剤、ドセタキセル及びペメトレキセド、並びにエルロチニブがNSCLC患者のセカンドラインの処置のために現在承認されている。2つの臨床フェーズ3でドセタキセルについて観察されたTTPは、10.6週間と26週間の間であった。ペメトレキセドのフェーズ3の結果から、PFSの中央値は2.9カ月であった(M A Bareschino; J Thorac Dis 2011;3: 122〜133頁)。扁平上皮NSCLCにおけるニボルマブのフェーズ3の研究で、PFSの中央値は、3.5カ月であった(Julie Brahmerら、2015、New England Journal of Medicine 5月31日)。
【０１２３】
OSE-2101ワクチンの腫瘍抗原からの短いエピトープ配列によるセントラルメモリーT細胞の誘発を通したCTL誘発の予想外の早期の結果により、エピトープ組合せの臨床的有用性が、がんに対するT特異的免疫療法剤として確立され、予後不良のがん患者に長期効力を提供する短期のTメモリー免疫応答について特別の関心事である。
【０１２４】
(実施例4)
悪性の胸水貯留(MPE)を有する進行がん患者における結果
【０１２５】
患者は、非常に進行したがんの合併症として又は潜在する悪性腫瘍の初期発現として、MPEを呈する。MPEを惹起する共通のがんのタイプは、リンパ腫、中皮腫、並びに乳房、肺、胃腸、及び卵巣の癌を含む。米国における悪性の胸水貯留の年間発生は150,000症例を超えると推定される。SEERデータベースから、胸水貯留を有する(即ち、IIIB期)非小細胞肺がん(NSCLC)の8,000名を超える患者についての生存曲線は、長期生存はこの群では稀であることを示した。生存期間の中央値は約3カ月である。胸水貯留は、呼吸を制限して肺組織の圧縮並びに反転した横隔膜の異常な動きにより進行性の息切れを惹起する。腫瘍の胸膜沈着は胸膜疼痛の原因となる。
【０１２６】
胸水貯留は、脳、骨、及び他の器官への転移;生理的障害;栄養不良;衰弱;並びに他の共存症をしばしば有する進行期の腫瘍を有する患者でより一般的に起こる。これらの多数の臨床的及び病理学的変動性があるので、胸水貯留のある患者で前向きの試験を実施することは困難である。同じ理由で、複数の相互に関係する臨床的問題を有する特定の患者について、可能性のある処置の結果又は予想される生存の持続時間を予測することはしばしば困難である。悪性の胸水貯留のある209名の患者の41%で胸水貯留が癌の最初の症状であり、男性における肺がん(42%)及び女性における卵巣がん(27%)が最も普通であった。
【０１２７】
胸膜液及び/又は壁側胸膜における悪性の細胞の発見は、がん患者における播種性又は進行した疾患及び減少した期待余命を意味する。
【０１２８】
フェーズ2のがん患者で発見されるセントラルメモリーT細胞の役割を理解するために、本発明者らは、悪性の胸水貯留を呈する患者のサブグループを遡及的に分析した。HLA-A2陽性であった進行したNSCLC(IIIb期及びIV期)の患者で、OSE-2101の安全性、効力(応答及び生存)、及び免疫原性を評価するように研究を設計した。多エピトープの組合せを、皮下に最初の15週間は3週間毎に、次に1年目を通して2カ月毎に、次に2年目を通して3カ月毎に5mgの用量で投与した。
【０１２９】
5名の患者のサブグループは胸水貯留を呈し、2名の患者がNSCLCのIIIB期であり、3名の患者がNSCLCのIV期で転移性であった。
【０１３０】
文献によれば、悪性の胸水貯留(MPE)を有する患者は、胸郭内の及び胸郭外の悪性腫瘍を有して重症の予後を呈する。MPEの診断後の生存の中央値は3〜4カ月の間である。これらの患者は、生存期間がより短いと推測され、したがって、研究中に間もなく最初に死亡すると推測された。
【０１３１】
MPEを有するこれらの5名の患者は、OSE-2101T特異的免疫療法剤を受けた後、長期間進行しないで非常に長期生存も達成していた。
【０１３２】
【表４】
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【０１３３】
【表５】
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【０１３４】
そのような不良予後のMPE集団で達成された無増悪期間は、6カ月を超える中央値(3から20カ月)で印象的である。達成された生存の中央値は18カ月である(6から26カ月)。これらの長期臨床の結果は、初期の初回刺激の3回の注射に関係するが、エフェクター細胞CD8+T細胞を動員するセントラルメモリーT細胞の早期の関与がある。それに加えて、5名中3名の患者が4種のエピトープに対して強い陽性応答を呈している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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