(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
果皮を含む柑橘類原料を、乳化剤存在下（ただし、ジメチルスルホキシド非存在下）で、配糖体分解酵素で処理することを特徴とする、フラボノイドアグリコン含有果皮酵素処理物の製造方法。
【請求項２】
配糖体分解酵素がβ−グルコシダーゼ活性を有する酵素である、請求項１記載の果皮酵素処理物の製造方法。
【請求項３】
乳化剤のＨＬＢ値が１０〜２０である、請求項１又は２に記載の果皮酵素処理物の製造方法。
【請求項４】
ヘスペレチン、ナリンゲニン及びエリオジクチオールのうち１種以上のフラボノイドアグリコンを含む、請求項１〜３の何れか１項に記載の果皮酵素処理物の製造方法。
【請求項５】
固形分あたり０．６％以上のフラボノイドアグリコンを含む、請求項１〜４の何れか１項に記載の果皮酵素処理物の製造方法。
【請求項６】
請求項１〜５の何れか１項に記載の製造方法により得られる、固形分あたり０．６％以上のフラボノイドアグリコンを含む果皮酵素処理物。
【請求項７】
請求項１〜５の何れか１項に記載の製造方法により得られる、フラボノイドアグリコン含有果皮酵素処理物を含む飲食品の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、果皮酵素処理物及びその製造方法、並びに該果皮酵素処理物を用いた飲食品及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
柑橘類のフラボノイドは、一般的に果皮に多く存在し、ガン細胞のアポトーシス誘導作用、脂質代謝改善作用、抗炎症作用等の機能性を有することが報告されている。また、該フラボノイドは、柑橘類中では糖と結合した配糖体の形で存在しているが、体内では、摂取後に腸内細菌の酵素により分解されアグリコンとなって吸収される一方で、アグリコン生成能は、各人の腸内細菌叢の違いから、個人差が大きいことが知られている。
【０００３】
柑橘類中のフラボノイドの回収方法として、特許文献１には、柑橘類果実の搾汁粕に微生物あるいは酵素を加えて夾雑物を分解処理する工程を含む方法が示されており、酵素としてペクチナーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、プロテアーセ、リパーゼ等が例示されている。また、特許文献２には、フラボノイド配糖体或いはその共役体をフラボノイドアグリコンに酵素的に転化する方法が示されており、酵素としてグリコシダーゼ、β−グリコシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、β−グルクロニダーゼ、ペクチナーゼ、ヘスペリジナーゼ、アントシアナーゼ、ラムノジアスターゼ、ナリンジアナーゼ及びタカジアスターゼが例示されている。
【０００４】
一方、乳化剤を使用した抽出方法としては、ポリグリセリン脂肪酸エステルを使用し、エチルアルコールおよび水の抽出溶剤混合物を用いて油溶性原料（精油）を抽出し、最終的に香料を製造する方法が知られている（特許文献３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平０６−１１３８７１号公報
【特許文献２】特表２００４−５００３７４号公報
【特許文献３】特開２０１５−９８５４１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
一般的な方法で抽出した柑橘類のフラボノイドは、配糖体として抽出物中に存在しているため、機能性成分として効率的に利用するためには、吸収性に優れたフラボノイドアグリコンとすることが重要である。本発明は、前記に鑑みてなされたものであり、柑橘類のフラボノイドアグリコンを含む果皮酵素処理物及びその製造方法、並びに該果皮酵素処理物を用いた飲食品及びその製造方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明者らは、果皮を含む柑橘類原料を、乳化剤存在下で、配糖体分解酵素で処理することで、柑橘類のフラボノイドアグリコン含有量を高められることを見出し、それによって、フラボノイドアグリコンを含む果皮酵素処理物を効率的に製造できることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明は、以下の［１］〜［７］の態様に関する。
［１］果皮を含む柑橘類原料を、乳化剤存在下で、配糖体分解酵素で処理することを特徴とする、フラボノイドアグリコン含有果皮酵素処理物の製造方法。
［２］配糖体分解酵素がβ−グルコシダーゼ活性を有する酵素である、［１］記載の果皮酵素処理物の製造方法。
［３］乳化剤のＨＬＢ値が１０〜２０である、［１］又は［２］に記載の果皮酵素処理物の製造方法。
［４］ヘスペレチン、ナリンゲニン及びエリオジクチオールのうち１種以上のフラボノイドアグリコンを含む、［１］〜［３］の何れかに記載の果皮酵素処理物の製造方法。
［５］固形分あたり０．６％以上のフラボノイドアグリコンを含む、［１］〜［４］の何れかに記載の果皮酵素処理物の製造方法。
［６］［１］〜［５］の何れかに記載の製造方法により得られる、フラボノイドアグリコン含有果皮酵素処理物。
［７］［１］〜［５］の何れかに記載の製造方法により得られる、フラボノイドアグリコン含有果皮酵素処理物を含む飲食品の製造方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によって、柑橘類のフラボノイドアグリコンを固形分あたりに多く含む果皮酵素処理物を提供できる。さらに、柑橘類のフラボノイドアグリコン含有量を高めることができ、該フラボノイドアグリコンを多く含む果皮酵素処理物を簡便に製造できる製造方法を提供できる。また、該フラボノイドアグリコンは吸収性に優れているため、飲食品に含ませることで、体内に効率よく吸収され、機能性を効果的に発揮できうるフラボノイドアグリコン含有飲食品を提供できる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の製造方法は、果皮を含む柑橘類原料を、乳化剤存在下で、配糖体分解酵素で処理する工程を含む。例えば、果皮を含む柑橘類原料に乳化剤及び配糖体分解酵素を添加し、加熱する工程を含む製造方法を例示でき、乳化剤添加後及び／又は配糖体分解酵素添加後に混合する工程を含むのが好ましい。
【００１１】
本発明に記載の柑橘類は、カンキツ属、キンカン属及びカラタチ属に含まれる植物であれば、生食用品種、調理（加工）用品種又は観賞用品種の何れでもよく、温州ミカン、オレンジ、ネーブル、グレープフルーツ、ブンタン、夏ミカン、ハッサク、シークワーサー、レモン、ダイダイ、キンカン、ユズ、カボス等が例示でき、単独又は二種類以上を組み合わせて使用してもよい。柑橘類原料は、果実、果皮、搾汁粕、加工残渣等、果皮を含む柑橘類原料であればよく、切断、破砕、細砕、粉砕等の処理を行った原料でもよく、前記の原料を乾燥した原料でもよい。
【００１２】
本発明に記載の乳化剤は、フラボノイドアグリコン含有量が高められれば特に限定されず、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等、市販の食品用乳化剤を使用することができ、単独又は二種類以上を組み合わせて使用してもよい。ポリグリセリン脂肪酸エステル又はショ糖脂肪酸エステルが好ましく、ポリグリセリン脂肪酸エステルとしては、リョートー（登録商標）ポリグリエステル（三菱化学フーズ株式会社製）等、ショ糖脂肪酸エステルとしては、リョートーシュガーエステル（三菱化学フーズ株式会社製）等が例示できる。乳化剤のＨＬＢ値（Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｅ−Ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ  Ｂａｌａｎｃｅ  Ｖａｌｕｅ、親水性−親油性バランス）が１０〜２０が好ましく、下限は１１以上がより好ましく、上限は１８以下がより好ましい。
【００１３】
本発明は、乳化剤存在下で配糖体分解酵素により処理できればよく、乳化剤は、該酵素処理前又は酵素処理中に添加すればよい。乳化剤の添加割合は、フラボノイドアグリコン含有量が高められれば特に限定されないが、果皮を含む柑橘類原料１００重量％に対して、０．２重量％以上が好ましく、０．３重量％以上がより好ましく、０．５重量％以上がさらに好ましく、０．８重量％以上が特に好ましい。また上限は、２０重量％以下が好ましく、１５重量％以下がより好ましい。
【００１４】
配糖体分解酵素は、配糖体のグリコシド結合を切断する活性を有するものであればよく、具体的には、グルコシダーゼ、プリメベロシダーゼ、キシロシダーゼ等を例示できる。中でもグルコシダーゼを好適に用いることができ、特にβ−グルコシダーゼ活性を有する酵素が好ましい。β−グルコシダーゼ活性を有する酵素は特に限定されるものではなく、ペニシリウム属、アスペルギルス属、シュードモナス属、リゾムコル属、クリプトコッカス属、ミクロバクテリウム属等の微生物由来の酵素が例示できる。酵素製剤としては、アロマーゼ（登録商標）（天野エンザイム株式会社製）、スミチーム（登録商標）ＢＧＡ（新日本化学工業株式会社製）、ラピダーゼ（登録商標）ＡＲ２０００（ディー・エス・エムジャパン株式会社製）等が使用できる。さらに、ペクチナーゼ、ナリンギナーゼ、ヘスペリジナーゼ等の他の酵素を併用してもよい。
【００１５】
酵素処理は水分存在下で実施すればよく、水分は、原料中の水分でもよく、又は添加してもよい。酵素処理時の水分含量は、本発明の酵素処理物が得られれば特に限定されないが、３０〜９９重量％が好ましく、４０〜９８重量％がより好ましい。原料に水分を添加する場合は、水性溶媒を使用でき、無機塩、エタノール等を含有する水溶液でもよいが、水が好ましい。水性溶媒がエタノールを含有する場合の含量は、溶媒全体の２０重量％以下が好ましく、１０重量％以下がより好ましく、５重量％以下がさらに好ましく、２重量％以下が特に好ましい。
【００１６】
酵素処理条件は、配糖体のグリコシド結合が切断される条件であれば特に限定されないが、例えば酵素添加量は、酵素製剤として、果皮を含む柑橘類原料を１００重量％とした場合に、好ましくは０．０１〜５重量％、より好ましくは０．０５〜３重量％である。また、処理条件は酵素の最適ｐＨ及び温度、並びにｐＨ及び温度安定性を考慮して適宜設定できるが、例えば、ｐＨ２〜８、１０〜７０℃での処理が例示でき、ｐＨ３〜７、２０〜６０℃が好ましい。処理時間は処理条件に応じて適宜調整できるが、例えば、５分間〜３０時間が例示でき、１０分間〜２４時間が好ましい。さらに、７０〜１２０℃、１分間〜６時間又は８０〜１００℃、３分間〜３時間の加熱工程を追加で行うのが好ましく、酵素の失活やフラボノイドアグリコン含有量を高めることができる。
【００１７】
本発明のフラボノイドアグリコン含有果皮酵素処理物は、フラボノイドアグリコンを固形分あたりに高含有していれば特に限定されず、そのままの形態でも利用することができるが、酵素処理後に不織布、メッシュ等を用いたろ過、遠心分離等により固液分離することで得られる液体として利用してもよいし、酵素処理物全体を乾燥させた乾燥物として利用してもよい。液体の場合はさらに濃縮及び／又は乾燥してもよい。乾燥は、ドラムドライ、エアードライ、スプレードライ、真空乾燥及び／又は凍結乾燥等により行うことができる。
【００１８】
上記に記載の方法により本発明のフラボノイドアグリコン含有果皮酵素処理物を製造することができる。本発明の酵素処理物は、柑橘類の果皮由来フラボノイドアグリコンを含んでいれば特に限定されないが、ヘスペレチン、ナリンゲニン及びエリオジクチオールのうちの１種以上を含むのが好ましい。本発明の酵素処理物は、乳化剤添加のみで配糖体分解酵素未処理の果皮抽出物又は配糖体分解酵素処理のみで乳化剤無添加の処理物より多くのフラボノイドアグリコンを含んでいればよく、フラボノイドアグリコン含有量は特に限定されないが、ヘスペレチン、ナリンゲニン、エリオジクチオール等のフラボノイドアグリコンの総量として、固形分あたり０．６０重量％以上含むのが好ましく、０．７０重量％以上含むのがより好ましく、０．８０重量％以上含むのがさらに好ましく、０．９０重量％以上含むのが特に好ましい。
【００１９】
本発明のフラボノイドアグリコン含有果皮酵素処理物は、そのまま喫食しても良いが、各種飲食品に添加することにより、フラボノイドアグリコン含有果皮酵素処理物を含む、飲食品を製造できる。これにより、該酵素処理物が有する各種機能性成分を容易に各種飲食品に付加することができる。各飲食品への添加量は特に限定されないが、好ましくは０．１〜２０％、より好ましくは０．５〜１５％、さらに好ましくは１．０〜１０％である。添加する飲食品は特に限定されないが、清涼飲料、ジュース、アルコール飲料等の飲料、ケーキ、キャンデー、チョコレート等の菓子、健康食品、調味料等が例示できる。
【実施例】
【００２０】
以下、実施例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明は以下の例によって限定されるものではない。尚、本発明において、％は別記がない限り全て重量％である。
【００２１】
［実施例１］
（シークワーサー果皮酵素処理物：乳化剤及び配糖体分解酵素添加）
粉砕処理したシークワーサー果皮１００ｇに、水道水５０ｇ及び乳化剤としてポリグリセリン脂肪酸エステルであるリョートー（登録商標）ポリグリエステルＯ−１５Ｄ（ＨＬＢ：１３、三菱化学フーズ株式会社製）２ｇを加えて混合した後、ペクチナーゼ製剤であるスミチーム（登録商標）ＡＰ２（新日本化学工業株式会社製）を０．１ｇ及び配糖体分解酵素としてβ−グルコシダーゼ製剤であるアロマーゼ（登録商標）（天野エンザイム株式会社製）を０．５ｇ添加して、６０℃で２時間酵素処理を行った。次いで、８０℃で１５分間酵素失活処理を行った後、不織布を用いて搾汁することで、実施品１を１２０ｇ得た。
【００２２】
［実施例２］
（各ポリグリセリン脂肪酸エステル（ＨＬＢ１０以上）におけるシークワーサー果皮酵素処理物）
粉砕処理したシークワーサー果皮１００ｇに、水道水５０ｇ及び乳化剤としてポリグリセリン脂肪酸エステルであるリョートーポリグリエステルＬ−７Ｄ（ＨＬＢ：１７、三菱化学フーズ株式会社製（実施例２−１））、リョートーポリグリエステルＭ−１０Ｄ（ＨＬＢ：１５、三菱化学フーズ株式会社製（実施例２−２））又はリョートーポリグリエステルＳ−２４Ｄ（ＨＬＢ：１０、三菱化学フーズ株式会社製（実施例２−３））を２ｇ加えて混合した後、ペクチナーゼ製剤であるスミチームＡＰ２を各０．１ｇ及び配糖体分解酵素としてβ−グルコシダーゼ製剤であるアロマーゼを各０．５ｇ添加して、６０℃で２時間酵素処理を行った。次いで、８０℃で１５分間酵素失活処理を行った後、不織布を用いて搾汁することで、実施品２−１〜２−３を各１２０ｇ得た。
【００２３】
［実施例３］
（各ショ糖脂肪酸エステル（ＨＬＢ１１以上）におけるシークワーサー果皮酵素処理物）
粉砕処理したシークワーサー果皮１００ｇに、水道水５０ｇ及び乳化剤としてショ糖脂肪酸エステルであるリョートーシュガーエステルＳ−１６７０（ＨＬＢ：１６、三菱化学フーズ株式会社製（実施例３−１））、リョートーシュガーエステルＳ−１５７０（ＨＬＢ：１５、三菱化学フーズ株式会社製（実施例３−２））又はリョートーシュガーエステルＳ−１１７０（ＨＬＢ：１１、三菱化学フーズ株式会社製（実施例３−３））を２ｇ加えて混合した後、ペクチナーゼ製剤であるスミチームＡＰ２を各０．１ｇ及び配糖体分解酵素としてβ−グルコシダーゼ製剤であるアロマーゼを各０．５ｇ添加して、６０℃で２時間酵素処理を行った。次いで、８０℃で１５分間酵素失活処理を行った後、不織布を用いて搾汁することで、実施品３−１〜３−３を各１２０ｇ得た。
【００２４】
［実施例４］
（ポリグリセリン脂肪酸エステル各添加量におけるシークワーサー果皮酵素処理物）
粉砕処理したシークワーサー果皮１００ｇに、水道水５０ｇ及び乳化剤としてポリグリセリン脂肪酸エステルであるリョートーポリグリエステルＭ−１０Ｄ（ＨＬＢ：１５）１０ｇ（実施例４−１）、５ｇ（実施例４−２）、２ｇ（実施例４−３）、１ｇ（実施例４−４）、０．５ｇ（実施例４−５）又は０．２ｇ（実施例４−６）を加えて混合した後、ペクチナーゼ製剤であるスミチームＡＰ２を各０．１ｇ及び配糖体分解酵素としてβ−グルコシダーゼ製剤であるアロマーゼを各０．５ｇ添加して、６０℃で２時間酵素処理を行った。次いで、８０℃で１５分間酵素失活処理を行った後、不織布を用いて搾汁することで、実施品４−１〜４−６を各１２０ｇ得た。
【００２５】
［実施例５］
（ショ糖脂肪酸エステル各添加量におけるシークワーサー果皮酵素処理物）
粉砕処理したシークワーサー果皮１００ｇに、水道水５０ｇ及び乳化剤としてショ糖脂肪酸エステルであるリョートーシュガーエステルＰ−１５７０（ＨＬＢ：１５）５ｇ（実施例５−１）、２ｇ（実施例５−２）、１ｇ（実施例５−３）、０．５ｇ（実施例５−４）又は０．２ｇ（実施例５−５）を加えて混合した後、ペクチナーゼ製剤であるスミチームＡＰ２を各０．１ｇ及び配糖体分解酵素としてβ−グルコシダーゼ製剤であるアロマーゼを各０．５ｇ添加して、６０℃で２時間酵素処理を行った。次いで、８０℃で１５分間酵素失活処理を行った後、不織布を用いて搾汁することで、実施品５−１〜５−５を各１２０ｇ得た。
【００２６】
［実施例６］
（レモン果皮酵素処理物：乳化剤及び配糖体分解酵素添加）
粉砕処理したレモン１２０ｇに乳化剤としてポリグリセリン脂肪酸エステルであるリョートーポリグリエステルＭ−１０Ｄ（ＨＬＢ：１５）６ｇを加えて混合した後、ペクチナーゼ製剤であるスミチームＡＰ２を０．１２ｇ及び配糖体分解酵素としてβ−グルコシダーゼ製剤であるアロマーゼを０．６ｇ添加して、６０℃で２時間酵素処理を行った。次いで、８０℃で１５分間酵素失活処理を行った後、ナイロンメッシュ（１００メッシュ）を用いて搾汁することで、実施品６を８０ｇ得た。
【００２７】
［実施例７］
（ユズ果皮酵素処理物：乳化剤及び配糖体分解酵素添加）
粉砕処理したユズ果皮７０ｇに、水道水３５ｇ及び乳化剤としてポリグリセリン脂肪酸エステルであるリョートーポリグリエステルＭ−１０Ｄ（ＨＬＢ：１５）３．５ｇを加えて混合した後、ペクチナーゼ製剤であるスミチームＡＰ２を０．０７ｇ及び配糖体分解酵素としてβ−グルコシダーゼ製剤であるアロマーゼを０．３５ｇ添加して、６０℃で１時間酵素処理を行った。次いで、８０℃で１５分間酵素失活処理を行った後、不織布を用いて搾汁することで、実施品７を７５ｇ得た。
【００２８】
［実施例８］
（グレープフルーツ果皮酵素処理物：乳化剤及び配糖体分解酵素添加）
粉砕処理したグレープフルーツ果皮７０ｇに、水道水３５ｇ及び乳化剤としてショ糖脂肪酸エステルであるリョートーシュガーエステルＰ−１５７０（ＨＬＢ：１５）１．４ｇを加えて混合した後、ペクチナーゼ製剤であるスミチームＡＰ２を０．０７ｇ及び配糖体分解酵素としてβ−グルコシダーゼ製剤であるアロマーゼを０．３５ｇ添加して、６０℃で２時間酵素処理を行った。次いで、８０℃で１５分間酵素失活処理を行った後、凍結真空乾燥することで、実施品８（乾燥品）を１０ｇ得た。
【００２９】
［比較例１］
（シークワーサー果皮抽出物：乳化剤及び配糖体分解酵素無添加）
粉砕処理したシークワーサー果皮１００ｇに、水道水５０ｇを加えて混合した後、ペクチナーゼ製剤であるスミチームＡＰ２を０．１ｇ添加して、６０℃で２時間酵素処理を行った。次いで、８０℃で１５分間酵素失活処理を行った後、不織布を用いて搾汁することで、比較品１を１２０ｇ得た。
【００３０】
［比較例２］
（シークワーサー果皮抽出物：乳化剤添加及び配糖体分解酵素無添加）
粉砕処理したシークワーサー果皮１００ｇに、水道水５０ｇ及び乳化剤としてポリグリセリン脂肪酸エステルであるリョートーポリグリエステルＯ−１５Ｄ（ＨＬＢ：１３）２ｇを加えて混合した後、ペクチナーゼ製剤であるスミチームＡＰ２を０．１ｇ添加して、６０℃で２時間酵素処理を行った。次いで、８０℃で１５分間酵素失活処理を行った後、不織布を用いて搾汁することで、比較品２を１２０ｇ得た。
【００３１】
［比較例３］
（シークワーサー果皮酵素処理物：乳化剤無添加及び配糖体分解酵素添加）
粉砕処理したシークワーサー果皮１００ｇに、水道水５０ｇを加えて混合した後、ペクチナーゼ製剤であるスミチームＡＰ２を０．１ｇ及び配糖体分解酵素としてβ−グルコシダーゼ製剤であるアロマーゼを０．５ｇ添加して、６０℃で２時間酵素処理を行った。次いで、８０℃で１５分間酵素失活処理を行った後、不織布を用いて搾汁することで、比較品３を１２０ｇ得た。
【００３２】
［比較例４］
（各ポリグリセリン脂肪酸エステル（ＨＬＢ９以下）におけるシークワーサー果皮酵素処理物）
粉砕処理したシークワーサー果皮１００ｇに、水道水５０ｇ及び乳化剤としてポリグリセリン脂肪酸エステルであるリョートーポリグリエステルＳ−２８Ｄ（ＨＬＢ：９、三菱化学株式会社製（比較例４−１））又はリョートーポリグリエステルＯ−５０Ｄ（ＨＬＢ：７、三菱化学株式会社製（比較例４−２））を２ｇ加えて混合した後、ペクチナーゼ製剤であるスミチームＡＰ２を各０．１ｇ及び配糖体分解酵素としてβ−グルコシダーゼ製剤であるアロマーゼを各０．５ｇ添加して、６０℃で２時間酵素処理を行った。次いで、８０℃で１５分間酵素失活処理を行った後、不織布を用いて搾汁することで、比較品４−１及び４−２を各１２０ｇ得た。
【００３３】
［比較例５］
（各ショ糖脂肪酸エステル（ＨＬＢ９以下）におけるシークワーサー果皮酵素処理物）
粉砕処理したシークワーサー果皮１００ｇに、水道水５０ｇ及び乳化剤としてショ糖脂肪酸エステルであるリョートーシュガーエステルＳ−９７０（ＨＬＢ：９、三菱化学株式会社製（比較例５−１））、リョートーシュガーエステルＳ−７７０（ＨＬＢ：７、三菱化学株式会社製（比較例５−２））又はリョートーシュガーエステルＳ−５７０（ＨＬＢ：５、三菱化学株式会社製（比較例５−３））を２ｇ加えて混合した後、ペクチナーゼ製剤であるスミチームＡＰ２を各０．１ｇ及び配糖体分解酵素としてβ−グルコシダーゼ製剤であるアロマーゼを各０．５ｇ添加して、６０℃で２時間酵素処理を行った。次いで、８０℃で１５分間酵素失活処理を行った後、不織布を用いて搾汁することで、比較品５−１〜５−３を各１２０ｇ得た。
【００３４】
［比較例６］
（レモン果皮抽出物：乳化剤添加及び配糖体分解酵素無添加）
粉砕処理したレモン１２０ｇに、乳化剤としてポリグリセリン脂肪酸エステルであるリョートーポリグリエステルＭ−１０Ｄ（ＨＬＢ：１５）６ｇを加えて混合した後、ペクチナーゼ製剤であるスミチームＡＰ２を０．１２ｇ添加して、６０℃で２時間酵素処理を行った。次いで、８０℃で１５分間酵素失活処理を行った後、ナイロンメッシュ（１００メッシュ）を用いて搾汁することで、比較品６を８０ｇ得た。
【００３５】
［比較例７］
（ユズ果皮酵素処理物：乳化剤後添加及び配糖体分解酵素添加）
粉砕処理したユズ果皮７０ｇに、水道水３５ｇを加えて混合した後、ペクチナーゼ製剤であるスミチームＡＰ２を０．０７ｇ及び配糖体分解酵素としてβ−グルコシダーゼ製剤であるアロマーゼを０．３５ｇ添加して、６０℃で１時間酵素処理を行った。次いで、８０℃で１５分間酵素失活処理を行い、続いて乳化剤としてポリグリセリン脂肪酸エステルであるリョートーポリグリエステルＭ−１０Ｄ（ＨＬＢ：１５）３．５ｇを加えて混合し、６０℃で１時間処理した後、不織布を用いて搾汁することで、比較品７を７５ｇ得た。
【００３６】
［比較例８］
（ユズ果皮酵素処理物：乳化剤無添加及び配糖体分解酵素添加）
粉砕処理したユズ果皮７０ｇに、水道水３５ｇを加えて混合した後、ペクチナーゼ製剤であるスミチームＡＰ２を０．０７ｇ及び配糖体分解酵素としてβ−グルコシダーゼ製剤であるアロマーゼを０．３５ｇ添加して、６０℃で１時間酵素処理を行った。次いで、８０℃で１５分間酵素失活処理を行った後、不織布を用いて搾汁することで、比較品８を７５ｇ得た。
【００３７】
［比較例９］
（グレープフルーツ果皮酵素処理物：乳化剤無添加及び配糖体分解酵素添加）
粉砕処理したグレープフルーツ果皮７０ｇに、水道水３５ｇを加えて混合した後、ペクチナーゼ製剤であるスミチームＡＰ２を０．０７ｇ及び配糖体分解酵素としてβ−グルコシダーゼ製剤であるアロマーゼを０．３５ｇ添加して、６０℃で２時間酵素処理を行った。次いで、８０℃で１５分間酵素失活処理を行った後、凍結真空乾燥することで、比較品９（乾燥品）を９ｇ得た。
【００３８】
［評価試験］
実施品１、２−１〜２−３、３−１〜３−３、４−１〜４−６、５−１〜５−５及び６〜８、並びに比較品１〜３、４−１、４−２、５−１〜５−３及び６〜９について、果皮を含む柑橘類原料に対する乳化剤添加割合（％）、ペクチナーゼ製剤添加割合（％）及び配糖体分解酵素添加割合（％）を表１〜８に示した。また、実施品及び比較品中の固形分を常圧加熱乾燥法により測定し、さらに、ＨＰＬＣを用いてフラボノイドアグリコン（ヘスペレチン、ナリンゲニン及びエリオジクチオール）含有量を下記測定条件にて測定し、固形分あたりの値として表１〜８に示した。なお、表１〜５記載の試料は何れもナリンゲニン及びエリオジクチオールは不検出だった。また、表７記載の試料は何れもエリオジクチオールは不検出で、表８記載の試料は何れもヘスペレチン及びエリオジクチオールは不検出だった。
【００３９】
＜ＨＰＬＣ測定条件：ヘスペレチン、ナリンゲニン又はエリオジクチオール＞
検出器：ＵＶ検出器（紫外波長２６０ｎｍ）
カラム：ＩｎｅｒｔＳｕｓｔａｉｎ  Ｃ１８（内径４．６ｍｍ、長さ２５０ｍｍ）
移動相Ａ：１５容量％アセトニトリル水溶液（０．１容量％リン酸含有）
移動相Ｂ：４０容量％アセトニトリル水溶液（０．１容量％リン酸含有）
グラジエント：移動相Ａから移動相Ｂへのグラジエント（４５分間）
流速：１．０ｍｌ／分
カラム温度：４０℃
標品：ヘスペレチン（東京化成工業株式会社製）、ナリンゲニン（和光純薬工業株式会社製）又はエリオジクチオール（和光純薬工業株式会社製）を８０％アセトニトリル水溶液に溶解した後、適宜希釈し、各検量線を作成した。
検体：各試料を８０％アセトニトリル水溶液で、適宜希釈したもの。
【００４０】
【表１】
0006793306.tif 000002
【００４１】
表１より、シークワーサー果皮について、乳化剤及び配糖体分解酵素無添加で処理した比較品１、並びに乳化剤添加及び配糖体分解酵素無添加で処理した比較品２は何れもヘスペレチンが不検出だったのに対し、配糖体分解酵素を添加して処理した実施品１及び比較品３ではヘスペレチンが検出された。さらに、乳化剤存在下で配糖体分解酵素により処理した実施品１の固形分あたりのヘスペレチン含有量は、乳化剤非存在下で配糖体分解酵素により処理した比較品３に比べて約２倍高かった。よって、シークワーサー果皮について、乳化剤存在下で配糖体分解酵素により処理することで、フラボノイドアグリコン含有量を高めることができることが分かった。
【００４２】
【表２】
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【００４３】
表２より、シークワーサー果皮について、乳化剤として、ＨＬＢが１０〜１７のポリグリセリン脂肪酸エステルを用いた実施品２−１〜２−３の固形分あたりのヘスペレチン含有量は、ＨＬＢが７又は９のポリグリセリン脂肪酸エステルを用いた比較品４−１又は４−２に比べて約１．５〜２．４倍高かった。よって、シークワーサー果皮について、乳化剤として、ＨＬＢが１０以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを用いることで、フラボノイドアグリコン含有量を高めることができることが分かった。
【００４４】
【表３】
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【００４５】
表３より、シークワーサー果皮について、乳化剤として、ＨＬＢが１１〜１６のショ糖脂肪酸エステルを用いた実施品３−１〜３−３の固形分あたりのヘスペレチン含有量は、ＨＬＢが５〜９のショ糖脂肪酸エステルを用いた比較品５−１〜５−３に比べて約１．３〜２．４倍高かった。よって、シークワーサー果皮について、乳化剤として、ＨＬＢが１１以上のショ糖脂肪酸エステルを用いることで、フラボノイドアグリコン含有量を高めることができることが分かった。
【００４６】
【表４】
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【００４７】
表４より、シークワーサー果皮について、原料に対して乳化剤として０．２％〜１０％のポリグリセリン脂肪酸エステル（ＨＬＢ：１５）を添加することで、何れもヘスペレチンが検出されることが分かった。さらに、０．２％〜１０％のポリグリセリン脂肪酸エステル（ＨＬＢ：１５）を添加した実施品４−１〜４−６の固形分あたりのヘスペレチン含有量は、乳化剤非存在下で配糖体分解酵素により処理した表１の比較品３に比べて約１．２〜２．１倍高かった。よって、シークワーサー果皮について、乳化剤として、原料に対して０．２％以上のポリグリセリン脂肪酸エステル（ＨＬＢ：１５）を添加することで、フラボノイドアグリコン含有量を高めることができることが分かった。
【００４８】
【表５】
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【００４９】
表５より、シークワーサー果皮について、原料に対して乳化剤として０．２％〜５％のショ糖脂肪酸エステル（ＨＬＢ：１５）を添加することで、何れもヘスペレチンが検出されることが分かった。さらに、０．２％〜５％のショ糖脂肪酸エステル（ＨＬＢ：１５）を添加した実施品５−１〜５−５の固形分あたりのヘスペレチン含有量は、乳化剤非存在下で配糖体分解酵素により処理した表１の比較品３に比べて約１．２〜１．６倍高かった。よって、シークワーサー果皮について、乳化剤として、原料に対して０．２％以上のショ糖脂肪酸エステル（ＨＬＢ：１５）を添加することで、フラボノイドアグリコン含有量を高めることができることが分かった。
【００５０】
【表６】
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【００５１】
表６より、レモンについて、乳化剤存在下で配糖体分解酵素無添加で処理した比較品６はヘスペレチン、ナリンゲニン及びエリオジクチオールが不検出だったのに対し、乳化剤存在下で配糖体分解酵素を添加して処理した実施品６ではヘスペレチン、ナリンゲニン及びエリオジクチオールが検出された。よって、レモンについて、乳化剤存在下で配糖体分解酵素により処理することで、フラボノイドアグリコン含有量を高めることができることが分かった。
【００５２】
【表７】
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【００５３】
表７より、ユズ果皮について、乳化剤存在下で配糖体分解酵素により処理した実施品７の固形分あたりのヘスペレチン及びナリンゲニンの合計含有量は、乳化剤非存在下で配糖体分解酵素により処理し、酵素を失活させた後に乳化剤を添加した比較品７及び乳化剤非存在下で配糖体分解酵素により処理した比較品８に比べて約１．６倍高かった。よって、ユズ果皮について、乳化剤存在下で配糖体分解酵素により処理することで、フラボノイドアグリコン含有量を高めることができることが分かった。
【００５４】
【表８】
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【００５５】
表８より、グレープフルーツ果皮について、乳化剤存在下で配糖体分解酵素により処理した実施品８の固形分あたりのナリンゲニンの含有量は、乳化剤非存在下で配糖体分解酵素により処理した比較品９に比べて約２．２倍高かった。よって、グレープフルーツ果皮について、乳化剤存在下で配糖体分解酵素により処理することで、フラボノイドアグリコン含有量を高めることができることが分かった。さらに、酵素処理物を搾汁せず乾燥させた乾燥品においてもフラボノイドアグリコンを高含有することが分かった。