(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分と、（ｂ）癌の治療において有効性を有するさらなる免疫療法薬とを、対象における固形腫瘍を治療する方法において組み合わせて使用するための、前記（ａ）の抗体またはその抗原結合部分及び／または前記（ｂ）のさらなる免疫療法薬を含む組成物であって、
ＣＤ４０に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合部分は、以下のＣＤＲ：
ＶＬ  ＣＤＲ１：ＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＮＶＹ    ［配列番号１］、
ＶＬ  ＣＤＲ２：ＧＮＩＮＲＰＳ                    ［配列番号２］、
ＶＬ  ＣＤＲ３：ＣＡＡＷＤＫＳＩＳＧＬＶ          ［配列番号３］、
ＶＨ  ＣＤＲ１：ＧＦＴＦＳＴＹＧＭＨ              ［配列番号４］、
ＶＨ  ＣＤＲ２：ＧＫＧＬＥＷＬＳＹＩＳＧＧＳＳＹＩＦＹＡＤＳＶＲＧＲ  ［配列番号５］、及び
ＶＨ  ＣＤＲ３：ＣＡＲＩＬＲＧＧＳＧＭＤＬ        ［配列番号６］
を含み、
前記さらなる免疫療法薬は、ＰＤ１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を遮断する抗ＰＤ−１抗体である、組成物。
【請求項２】
対象における固形腫瘍の治療において相乗的効果を提供するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記固形腫瘍は、腺腫、芽腫、癌腫、類腱腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、内分泌腺腫瘍、胚細胞腫瘍、リンパ腫、肉腫、ウィルムス腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、リンパ腫瘍、乳房腫瘍、及び黒色腫からなる群から選択される、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
ＣＤ４０に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合部分は、無傷抗体を含むか、またはそれからなる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
ＣＤ４０に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合部分は、Ｆｖフラグメント及びＦａｂ様フラグメントからなる群から選択される、抗原結合フラグメントを含むか、またはそれからなる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記抗体またはその抗原結合部分は、ヒトまたはヒト化である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
ＣＤ４０に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合部分は、
（ａ）配列番号７の軽鎖可変領域及び／または配列番号８の重鎖可変領域；
（ｂ）配列番号１１の軽鎖定常領域及び／または配列番号１２の重鎖定常領域；あるいは
（ｃ）配列番号７及び配列番号１１の軽鎖、ならびに／または配列番号８及び配列番号１２の重鎖
を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ランブロリズマブ、ピディリズマブ、及びＡＭＰ−２２４からなる群から選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
固形腫瘍を治療するための医薬品の調製における、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分の使用であって、
ＣＤ４０に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１、２、及び３の軽鎖ＣＤＲ配列ならびに配列番号４、５、及び６の重鎖ＣＤＲ配列を含み、
ＣＤ４０に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合部分は、癌の治療において有効性を有するさらなる免疫療法薬と組み合わせて使用するためのものであり、その薬剤は、ＰＤ１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を遮断する抗ＰＤ−１抗体である、使用。
【請求項１０】
（ａ）ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分と、（ｂ）癌の治療において有効性を有するさらなる免疫療法薬であって、その薬剤は、ＰＤ１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を遮断する抗ＰＤ−１抗体である、さらなる免疫療法薬と、を含む、薬学的組成物であって、ＣＤ４０に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合部分は、以下のＣＤＲ：
ＶＬ  ＣＤＲ１：ＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＮＶＹ    ［配列番号１］、
ＶＬ  ＣＤＲ２：ＧＮＩＮＲＰＳ                    ［配列番号２］、
ＶＬ  ＣＤＲ３：ＣＡＡＷＤＫＳＩＳＧＬＶ          ［配列番号３］、
ＶＨ  ＣＤＲ１：ＧＦＴＦＳＴＹＧＭＨ              ［配列番号４］、
ＶＨ  ＣＤＲ２：ＧＫＧＬＥＷＬＳＹＩＳＧＧＳＳＹＩＦＹＡＤＳＶＲＧＲ  ［配列番号５］、及び
ＶＨ  ＣＤＲ３：ＣＡＲＩＬＲＧＧＳＧＭＤＬ        ［配列番号６］
を含む、固形腫瘍を治療するための薬学的組成物。
【請求項１１】
前記抗体またはその抗原結合部分は、請求項４〜７のいずれか１項で定義される通りである、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
癌の治療において有効性を有する前記さらなる免疫療法薬は、請求項８で定義される通りである、請求項１０または１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
（ａ）ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分と、（ｂ）癌の治療において有効性を有するさらなる免疫療法薬であって、その薬剤は、ＰＤ１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を遮断する抗ＰＤ−１抗体である、さらなる免疫療法薬と、を含む、固形腫瘍を治療するためのキットであって、ＣＤ４０に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合部分は、以下のＣＤＲ：
ＶＬ  ＣＤＲ１：ＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＮＶＹ    ［配列番号１］、
ＶＬ  ＣＤＲ２：ＧＮＩＮＲＰＳ                    ［配列番号２］、
ＶＬ  ＣＤＲ３：ＣＡＡＷＤＫＳＩＳＧＬＶ          ［配列番号３］、
ＶＨ  ＣＤＲ１：ＧＦＴＦＳＴＹＧＭＨ              ［配列番号４］、
ＶＨ  ＣＤＲ２：ＧＫＧＬＥＷＬＳＹＩＳＧＧＳＳＹＩＦＹＡＤＳＶＲＧＲ  ［配列番号５］、及び
ＶＨ  ＣＤＲ３：ＣＡＲＩＬＲＧＧＳＧＭＤＬ        ［配列番号６］
を含む、キット。
【請求項１４】
前記抗体またはその抗原結合部分は、請求項４〜７のいずれか１項で定義される通りである、請求項１３に記載のキット。
【請求項１５】
癌の治療において有効性を有する前記さらなる免疫療法薬は、請求項８で定義される通りである、請求項１３または１４に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、対象における固形腫瘍を治療するための併用療法、ならびにその使用のための方法に関する。併用療法は、（ａ）ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントと、（ｂ）ＣＤ４０以外の免疫チェックポイント分子に特異的に結合するさらなる免疫療法薬とを含む。本発明はまた、本発明の併用療法を使用するキット及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌は、先進国において早死の主な原因である。癌の免疫療法の目的は、腫瘍、特に、固形腫瘍に対する身体による効果的な免疫応答を仕掛けることである。これは、例えば、腫瘍抗原に対する耐性を破壊し、抗腫瘍免疫応答を増強し、かつ腫瘍部位における局所サイトカイン応答を刺激することによって達成され得る。長期にわたる抗腫瘍免疫応答の主要なエフェクター細胞は、活性化された腫瘍特異的エフェクターＴ細胞である。例えば、樹状細胞によるエフェクターＴ細胞の不完全活性化が、Ｔ細胞アネルギーを引き起こす可能性があり、それが非効率的な抗腫瘍応答をもたらす一方で、樹状細胞による適切な誘導は、活性化されたエフェクターＴ細胞の強力な増殖をもたらす可能性があり、腫瘍に向かって免疫応答を再び方向付ける。
【０００３】
細胞表面ＣＤ４０受容体分子は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲ）のメンバーであり、かつ自然免疫応答及び適応免疫応答の両方において主要な調節因子である。それは、ヒト抗原提示細胞、具体的にはＢ細胞、樹状細胞、及びマクロファージ上に、ならびに線維芽細胞、平滑筋細胞、内皮細胞、及び上皮細胞などの正常細胞上に発現される。さらに、それは、Ｂリンパ腫、３０〜７０％の固形腫瘍、黒色腫、及び癌腫を含む幅広い範囲の腫瘍細胞上に発現される。
【０００４】
ＣＤ１５４またはＣＤ４０Ｌと指定されるＣＤ４０の天然リガンドは、主に成熟Ｔリンパ球上に発現される。ＣＤ４０Ｌ媒介性シグナル伝達は、免疫細胞活性化、増殖、ならびにサイトカイン及びケモカインの産生を含む、いくつかの生物学的事象を引き起こす。したがって、ＣＤ４０受容体を介した刺激は、細胞機能及び免疫機能を強化する。細胞媒介性免疫応答におけるその役割は、周知である。例えば、ＣＤ４０刺激を介した樹状細胞の活性化は、エフェクターＴ細胞の活性化を誘導する。したがって、ＣＤ４０アゴニストを用いた処置は、免疫応答を再び方向付け、腫瘍に向けられたエフェクターＴ細胞を増殖させるための手段を提供し得る。
【０００５】
いくつかの抗ＣＤ４０抗体に関して抗腫瘍効果が報告されており、いくつかの機構が特定されている。抗原提示細胞の活性化、具体的には腫瘍特異的細胞傷害性Ｔリンパ球及びナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）による活性の増加を伴う、間接的な効果が、ＣＤ４０陰性腫瘍に関して観察される。間接的及び直接的抗腫瘍機構の両方が、ＣＤ４０陽性腫瘍に関して観察され、腫瘍細胞に結合するＣＤ４０抗体は、細胞アポトーシスを誘導する。抗腫瘍活性のためのこれらの機構は、抗体媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）によって補完され得る。しかしながら、抗ＣＤ４０抗体の投与はまた、サイトカイン放出症候群などの有害な副作用と関連している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
それに応じて、改善された癌療法、具体的には、固形腫瘍の治療で使用するのに好適な抗ＣＤ４０抗体、及びその併用療法の必要性が残る。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の第１の態様は、（ａ）ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分と、（ｂ）癌の治療において有効性を有するさらなる免疫療法薬であって、その薬剤は、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントではない、さらなる免疫療法薬とを含む、対象における固形腫瘍の治療で使用するための併用療法を提供し、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＣＤ４０への結合に対して、配列番号７の軽鎖可変領域及び配列番号８の重鎖可変領域を含む抗体と競合し、さらなる免疫療法薬は、ＣＤ４０以外の免疫チェックポイント分子に特異的に結合する。
【０００８】
一実施形態では、固形腫瘍は、腺腫、芽腫、癌腫、類腱腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、内分泌腺腫瘍、胚細胞腫瘍、リンパ腫、肉腫、ウィルムス腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、リンパ腫瘍、乳房腫瘍、及び黒色腫からなる群から選択される。例えば、固形腫瘍は、転移性黒色腫などの黒色腫であってもよい。
【０００９】
一実施形態では、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、無傷抗体を含むか、またはそれからなる。
【００１０】
代替の実施形態では、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、Ｆｖフラグメント（一本鎖Ｆｖフラグメントまたはジスルフィド結合Ｆｖフラグメントなど）、及びＦａｂ様フラグメント（Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、またはＦ（ａｂ）２フラグメントなど）からなる群から選択される、抗原結合フラグメントを含むか、またはそれからなる。
【００１１】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、ヒトまたはヒト化である。
【００１２】
一実施形態では、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１、２、３、４、５、及び６から選択される少なくとも１つのＣＤＲ、またはその「コア」ＣＤＲ配列を含む（配列の詳細に関して以下の実施例１を参照されたい）。
【００１３】
したがって、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１、２、及び３ならびに／もしくは配列番号４、５、及び６のＣＤＲ配列、またはその「コア」ＣＤＲ配列を含む。
【００１４】
例えば、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、配列番号７の軽鎖可変領域及び／または配列番号８の重鎖可変領域を含む。
【００１５】
一実施形態では、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１１の軽鎖定常領域及び／または配列番号１２の重鎖定常領域を含む。
【００１６】
したがって、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、配列番号７及び配列番号１１の軽鎖、ならびに／または配列番号８及び配列番号１２の重鎖を含むか、またはそれからなる。
【００１７】
本発明の併用療法は、加えて、ＣＤ４０以外の免疫チェックポイント分子に特異的に結合する、癌の治療において効果的なさらなる免疫療法薬を含む。さらなる免疫療法薬の治療効果が、阻害免疫チェックポイント分子の機能を軽減することによって、及び／または刺激免疫チェックポイント分子の機能を活性化することによって媒介され得ることが理解されるであろう。
【００１８】
別の実施形態では、さらなる免疫療法薬は、
（ａ）ＰＤ−１と結合する免疫療法薬、
（ｂ）ＣＴＬＡ−４と結合する免疫療法薬、
（ｃ）ＯＸ４０と結合する免疫療法薬、及び
（ｄ）ＣＤ１３７と結合する免疫療法薬からなる群から選択される。
【００１９】
したがって、さらなる免疫療法薬は、ＰＤ１機能を阻害することが可能な抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合フラグメントなどのＰＤ１阻害剤であってもよい（例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ランブロリズマブ、ピディリズマブ、及びＡＭＰ−２２４）。あるいは、ＰＤ１阻害剤は、ＰＤ１機能を阻害することが可能な抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれからなってもよい（例えば、ＭＥＤＩ−４７３６及びＭＰＤＬ３２８０Ａ）。
【００２０】
別の実施形態では、さらなる免疫療法薬は、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合部分などのＣＴＬＡ−４阻害剤である。
【００２１】
さらなる実施形態では、さらなる免疫療法薬は、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合部分などのＯＸ４０を活性化する。
【００２２】
なおさらなる実施形態では、さらなる免疫療法薬は、アゴニスト抗ＣＤ１３７抗体またはその抗原結合部分などのＣＤ１３７を活性化する。
【００２３】
２つの活性剤（上記で詳述されるような）の存在が、対象における固形腫瘍の治療において相乗的な効果を提供し得ることが、当業者によって理解されるであろう。「相乗的な」とは、組み合わせた２つの薬剤の治療効果（例えば、腫瘍の増殖速度及びサイズへの参照によって決定されるような）が、単独で投与される２つの薬剤の相加的治療効果よりも大きいことを含む。そのような相乗作用は、固形腫瘍の関連細胞株モデルにおいて活性剤を単独で、及び組み合わせて試験することによって特定され得る。
【００２４】
任意に、併用療法は、癌の治療において有効性を有する第３の免疫療法薬をさらに含む。
【００２５】
例えば、併用療法は、（ａ）ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分と、（ｂ）ＰＤ１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分と、（ｃ）ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分とを含んでもよい。
【００２６】
本発明の第２の態様は、固形腫瘍を治療する方法で使用するための、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分を提供し、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＣＤ４０への結合に対して、配列番号７の軽鎖可変領域及び配列番号８の重鎖可変領域を含む抗体と競合し、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、癌の治療において有効性を有するさらなる免疫療法薬と併用するためのものであり、その薬剤は、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントではない。
【００２７】
一実施形態では、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、本発明の第１の態様に関して上記で考察されるようなものである。
【００２８】
一実施形態では、癌の治療において有効性を有するさらなる免疫療法薬は、本発明の第１の態様に関して上記で考察されるようなものである。
【００２９】
本発明の関連した第３の態様は、固形腫瘍を治療するための医薬品の調製における、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分の使用を提供し、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＣＤ４０への結合に対して、配列番号７の軽鎖可変領域及び配列番号８の重鎖可変領域を含む抗体と競合し、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、癌の治療において有効性を有するさらなる免疫療法薬と併用するためのものであり、その薬剤は、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントではない。
【００３０】
一実施形態では、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、本発明の第１の態様に関して上記で考察されるようなものである。
【００３１】
一実施形態では、癌の治療において有効性を有するさらなる免疫療法薬は、本発明の第１の態様に関して上記で考察されるようなものである。
【００３２】
本発明の第４の態様は、（ａ）ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分と、（ｂ）癌の治療において有効性を有するさらなる免疫療法薬であって、その薬剤は、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントではない、さらなる免疫療法薬と、を含む、薬学的組成物を提供し、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＣＤ４０への結合に対して、配列番号７の軽鎖可変領域及び配列番号８の重鎖可変領域を含む抗体と競合する。
【００３３】
一実施形態では、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、本発明の第１の態様に関して上記で考察されるようなものである。
【００３４】
一実施形態では、癌の治療において有効性を有するさらなる免疫療法薬は、本発明の第１の態様に関して上記で考察されるようなものである。
【００３５】
本発明の第５の態様は、（ａ）ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分と、（ｂ）癌の治療において有効性を有するさらなる免疫療法薬であって、その薬剤は、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントではない、さらなる免疫療法薬と、を含む、固形腫瘍を治療するためのキットを提供し、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＣＤ４０への結合に対して、配列番号７の軽鎖可変領域及び配列番号８の重鎖可変領域を含む抗体と競合する。
【００３６】
一実施形態では、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、本発明の第１の態様に関して上記で考察されるようなものである。
【００３７】
一実施形態では、癌の治療において有効性を有するさらなる免疫療法薬は、本発明の第１の態様に関して上記で考察されるようなものである。
【００３８】
本発明の第６の態様は、対象における固形腫瘍を治療するための方法を提供し、本方法は、対象に、治療有効量の（ａ）対象に、ＣＤ４０に特異的に結合する治療有効量の抗体またはその抗原結合部分を投与することと、（ｂ）対象に、癌の治療において有効性を有する治療有効量のさらなる免疫療法薬であって、その薬剤は、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントではない、さらなる免疫療法薬を投与することと、を投与することを含み、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＣＤ４０への結合に対して、配列番号７の軽鎖可変領域及び配列番号８の重鎖可変領域を含む抗体と競合する。
【００３９】
一実施形態では、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、本発明の第１の態様に関して上記で考察されるようなものである。
【００４０】
一実施形態では、癌の治療において有効性を有するさらなる免疫療法薬は、本発明の第１の態様に関して上記で考察されるようなものである。
【００４１】
さらなる実施形態では、ステップ（ａ）及び（ｂ）は、同時に実施されるか、またはステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）の２４時間〜２週間後、ステップ（ａ）の２４時間〜１週間後、ステップ（ａ）の２４時間〜７２時間後、もしくはステップ（ａ）の２４時間〜４８時間後に実施される。
【００４２】
一実施形態では、ステップ（ａ）は、腫瘍部位への抗体の局所投与を含む。
【００４３】
一実施形態では、ステップ（ａ）において投与される抗体の量の少なくとも３０％が、投与の４時間後に腫瘍部位において保持され、好ましくは、該量の少なくとも４０％が、投与の４時間後に腫瘍部位において保持される。
【００４４】
一実施形態では、ステップ（ｂ）の追加の治療薬は、全身投与に好適な組成物として、少なくとも１つの薬学的に許容される希釈剤または担体と共に製剤化される。
【００４５】
一実施形態では、ステップ（ａ）は、複数の別々の時機に実施され、ステップ（ｂ）は、追加の治療薬への対象の曝露が本方法の継続時間にわたって連続的であるように実施される。
【００４６】
一実施形態では、対象はヒトである。
【００４７】
本発明者らはまた、驚くべきことに、ある特定の抗ＣＤ４０抗体が、対象への投与後に固形腫瘍部位において保持されることも示している。したがって、わずかな割合の抗体のみが対象の腫瘍部位から血管またはリンパ循環に逃げる。
【００４８】
これは、高度に効果的な治療、ならびに副作用の低減をもたらし、より低用量の抗体が使用されることを可能にする。これらの利点は、そのような抗体が対象の腫瘍部位に局所投与されるときに特に明らかであるが、抗体が全身投与されるときも明らかであり得る。
【００４９】
しかしながら、抗ＣＤ４０抗体がまた対象に全身（例えば、静脈内または皮下）投与され得ることが、当業者に理解されるであろう。
【００５０】
本発明者らはまた、驚くべきことに、腫瘍部位において保持される抗ＣＤ４０抗体の投与を、対象への追加の治療薬の全身投与と組み合わせることが、抗ＣＤ４０抗体単独の投与と比較して、治療効果の改善をもたらすことを示している。
【００５１】
したがって、本発明は、対象における固形腫瘍を治療するための方法を提供し、本方法は、（ａ）対象に、ＣＤ４０に特異的に結合し、かつ投与後に腫瘍部位において保持される、治療有効量の抗体を投与することと、任意に（ｂ）対象に、治療有効量の追加の治療薬を全身投与することと、を含む。ステップ（ａ）及び（ｂ）は、同時に実施されてもよい。あるいは、ステップ（ａ）及び（ｂ）は、ステップ（ａ）がステップ（ｂ）に先行するという条件で、順次に実施されてもよい。ステップ（ａ）において、抗ＣＤ４０抗体は、好ましくは、腫瘍に局所投与される。
【００５２】
本発明はまた、対象における固形腫瘍を治療するためのキットを提供し、本キットは、（ａ）ＣＤ４０に特異的に結合し、かつ投与後に腫瘍部位において保持される、治療有効量の抗体と、任意に（ｂ）対象への全身投与に好適である治療有効量の追加の治療薬とを含む。ＣＤ４０に特異的に結合する抗体は、好ましくは、腫瘍への局所投与に好適な形態で提供される。
配列表の簡単な説明
【００５３】
配列番号１、２、及び３はそれぞれ、抗体Ｇ１２の軽鎖のＣＤＲ１、２、及び３である（ＩＭＧＴ番号付けに従って定義される）。
【００５４】
配列番号４、５、及び６はそれぞれ、抗体Ｇ１２の重鎖のＣＤＲ１、２、及び３である（ＩＭＧＴ番号付けに従って定義される）。
【００５５】
配列番号７及び８はそれぞれ、抗体Ｇ１２の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【００５６】
配列番号９及び１０はそれぞれ、抗体Ｇ１２の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の核酸配列である。
【００５７】
配列番号１１は、例示的な軽鎖定常領域のアミノ酸配列である。
【００５８】
配列番号１２は、例示的な重鎖定常領域のアミノ酸配列である。
【００５９】
配列番号１３は、ヒトＣＤ４０のアミノ酸配列である。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】１００μｇの用量での抗体の腫瘍内（ＩＴ）、腫瘍周辺（ＰＴ）、または静脈内（ＩＶ）投与後の、ｈＣＤ４０陰性膀胱癌細胞ＭＢ４９の腫瘍を有するｈＣＤ４０ｔｇマウスの血清中で検出可能な抗体のレベルを示す。
【図２】皮下または静脈内経路を介した指示された用量における抗体の投与後の、カニクイザルの血液試料中で検出可能な抗体のレベルを示す。
【図３】（Ａ）Ｂ１６．Ｆ１０（ｈＣＤ４０＋）クローン５．Ｇ１２．４６細胞及び（Ｂ）模擬トランスフェクトした細胞による細胞表面ヒトＣＤ４０発現のフローサイトメトリー解析の結果を示す。
【図４】［図４Ａ］対照のＡＤＣ−１０１３のみ、または抗ＰＤ−１抗体（「ＰＤ−１」）と共にＡＤＣ−１０１３を用いた処理後の、皮下Ｂ１６．Ｆ１０（ｈＣＤ４０＋）黒色腫を有するｈＣＤ４０ｔｇマウスの生存率を示す。    ［図４Ｂ］最初のマウスを屠殺した日における各処置群についての腫瘍体積を示す。グラフは、２つの個々の実験（ｎ＝１６）からの統合データを示す。ＡＤＣ−１０１３処置で、有意な抗腫瘍有効性及び生存の増加が実証された。抗ＰＤ−１との組み合わせた処置で、抗腫瘍有効性の改善及び生存の改善が観察された（＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝＜０．０１、生存に対するログランク検定及び腫瘍体積に対するマンホイットニー検定）。
【図５Ａ】マウス腫瘍モデルにおける抗ＣＤ４０抗体の異なる様式の投与後の、排出リンパ節におけるＣＤ１１ｃ陽性細胞の活性化に対するアッセイの結果を示す。腫瘍内投与（ＩＴ）、腹腔内投与（ＩＰ）。活性化は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）によって測定されるＣＤ８６発現レベルによって示される。
【図５Ｂ】マウス腫瘍モデルにおける抗ＣＤ４０抗体の異なる様式の投与後の、排出リンパ節におけるＣＤ１１ｂ陽性細胞の活性化に対するアッセイの結果を示す。腫瘍内投与（ＩＴ）、腹腔内投与（ＩＰ）。活性化は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）によって測定されるＣＤ８６発現レベルによって示される。
【図６】Ｂ１６．Ｆ１０．ｈＣＤ４０＋腫瘍を、片方の脇腹に接種した。処置を３、６、及び９日目に施した。ＡＤＣ−１０１３を腫瘍内投与した（１用量当たり１００μｇ）。抗ＰＤ−１、１用量当たり２５０μｇ（Ｃｌｏｎｅ  ＲＰＭ１−１４、ＢｉｏＸｃｅｌｌ）及び抗ＣＴＬＡ−４抗体、１用量当たり１００μｇ（９Ｄ９、ＢｉｏＸｃｅｌ）を腹腔内注射した。１４日目の腫瘍体積が示される。
【図７】Ｂ１６．Ｆ１０腫瘍を、片方の脇腹に接種した。処置を３、６、及び９日目に施した。ＡＤＣ−１０１３、抗ＣＤ１３７（Ｌｏｂ１２．３）、及び抗ＯＸ４０（ＣＤ８６）抗体、ならびに対照を腫瘍内投与した（１用量当たり１００μｇ）。腫瘍体積を経時的に観察した。
【図８】ＡＤＣ−１０１３または対照での処置（腫瘍内、３、６、及び９日目に１００μｇ）後の、Ｂ１６．Ｆ１０（ｗｔ）腫瘍における抗腫瘍効果と比較した、Ｂ１６．Ｆ１０．ｈＣＤ４０＋腫瘍におけるＡＤＣ−１０１３の抗腫瘍効果。
【図９】ＡＤＣ−１０１３（３０μｇ）を、確立されたリンパ腫腫瘍（Ａ２０）を有するｈＣＤ４０ｔｇ−ＢａｌｂＣ（Ｆ１）マウスに、１０、１３、１６日目に腫瘍内投与した。経時的な腫瘍体積及び生存が図面に示される。
【図１０】ＡＤＣ−１０１３（１００μｇ）を、確立された腫瘍（ＬＬＣ−１）を有するｈＣＤ４０ｔｇマウスに、４、７、及び１０日目に腫瘍内投与した。経時的な腫瘍体積が図面に示される。
【図１１】Ｂ１６．Ｆ１０黒色腫癌転移モデルにおける抗腫瘍効果。各脇腹に１つの腫瘍を有するｈＣＤ４０ｔｇマウスは、腫瘍接種後３、６、及び９日目に、右の脇腹の腫瘍に１００μｇのＡＤＣ−１０１３の腫瘍周辺投与を受けた。注射された（右側の腫瘍）及び注射されていない（左側の）腫瘍の両方に対する経時的な腫瘍体積が、図面中に表示される。
【図１２】１６日目の腫瘍体積ＡＤＣ−１０１３を、確立された黒色腫腫瘍（Ｂ１６．Ｆ１０．ｈＣＤ４０＋）、１００ｕｇを有するｈＣＤ４０ｔｇマウス（ｎ＝１２）に、３、６、及び９日目に静脈内投与した。
【図１３】ＢａｌｂＣマウスにおける皮下Ａ２０リンパ腫腫瘍における抗腫瘍効果（経時的な生存によって測定される）を示す。マウスを、５及び８日目に９Ｄ９（抗ＣＴＬＡ−４抗体、ＢｉｏＸｃｅｌ）で腫瘍周辺処置し、かつ５、８、及び１１日目にＴＬＲアゴニストＣｐＧ（１６６８）で腫瘍内処置した。
【発明を実施するための形態】
【００６１】
開示された併用療法及び方法の異なる適用が、当該技術分野における特定の必要性に合わせて調整され得ることが理解されるものとする。また、本明細書で使用される用語が、本発明の特定の実施形態を説明する目的のみであり、限定することを意図していないことも理解されるものとする。
【００６２】
加えて、本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、その内容が別様に明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「抗体（ａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」への言及は、「複数の抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」を含み、「抗原（ａｎ  ａｎｔｉｇｅｎ）」への言及は、２つ以上のそのような抗原を含み、「対象（ａ  ｓｕｂｊｅｃｔ）」への言及は、２つ以上のそのような対象を含む、というようなものである。
【００６３】
「ポリペプチド」は、２つ以上のサブユニットアミノ酸、アミノ酸類似体、または他のペプチド模倣薬の化合物を指すために、その最も広い意味において本明細書で使用される。したがって、「ポリペプチド」という用語は、短いペプチド配列、ならびにより長いポリペプチド及びタンパク質を含む。本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、グリシン及びＤまたはＬ光学異性体の両方、ならびにアミノ酸類似体及びペプチド模倣薬を含む、天然及び／または非天然もしくは合成アミノ酸のいずれかを指す。
【００６４】
「固形腫瘍部位において保持される」とは、抗ＣＤ４０抗体が腫瘍範囲からゆっくりとのみ放出されることを含む。腫瘍部位における抗体の保持は、投与後の抗体の血清中レベルを監視することによって評価され得る（Ｍａｎｇｓｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２１（５）：１１１５−１１２６を参照されたく、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる）。例えば、一実施形態では、３０μｇの抗体（６０μＬ中）の腫瘍内注射の４時間後の抗ＣＤ４０の血清中レベルは、１μＬ／ｍＬ未満である。
【００６５】
「治療有効量の」の物質によって、所与の物質が、ある状態を患う対象に、その状態またはその症状のうちの１つ以上を治癒、軽減、または部分的に停止させるのに十分な量で投与されることが意味される。そのような治療は、疾患の症状の重症度の減少、または無症状期間の頻度もしくは継続期間の増加をもたらし得る。所与の目的及び所与の薬剤のための有効量は、疾病または外傷の重症度、ならびに対象の体重及び全身状態によって決まる。本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、任意の哺乳動物、好ましくは、ヒトを含む。
【００６６】
上記または下記にかかわらず、本明細書に列挙される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
方法
【００６７】
本発明は、対象における固形腫瘍を治療するための方法を提供する。腫瘍は、典型的には、悪性であり、かつ転移性であり得る。
【００６８】
固形腫瘍は、それらが生じる組織、例えば、乳房、結腸などによって古典的に定義される。しかしながら、免疫療法が腫瘍自体ではなく免疫系に作用し、腫瘍の免疫状態は、腫瘍の発生よりも応答を予測し得る。本明細書に示される裏付け研究において、２つの異なるモデル、より詳細には、黒色腫モデル、Ｂ１６．Ｆ１０（ヒトＣＤ４０あり及びなし）ならびにＭＢ４９膀胱腫瘍モデル。以下の実施例に示されるデータは、ＭＢ４９がＢ１６．Ｆ１０よりも免疫原性であることを示す。しかしながら、両方のモデルにおいて、本明細書に記載されるように、抗ＣＤ４０抗体を用いた処置後に、有意な抗腫瘍効果が観察される。したがって、本発明は、免疫原性腫瘍（上記のＭＢ４９）及び低免疫原性モデル（上記のＢ１６．Ｆ１０）の両方において抗腫瘍効果を提供する。
【００６９】
したがって、本発明の一実施形態では、腫瘍は、免疫原性である。そのような腫瘍は、Ｔ細胞及び骨髄由来の細胞などの免疫細胞の浸潤を特徴とする。ＣＤ８  Ｔ細胞の浸潤、すなわち、より免疫原性の腫瘍プロファイルは、例えば、結腸癌における療法後の良好な予後と相関することが実証されている（Ｇａｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．２３２（２）：１９９−２０９）。
【００７０】
本発明の代替の実施形態では、腫瘍は、非免疫原性または低免疫原性である。低免疫原性腫瘍は、多くの場合、ＭＨＣＩ発現が低いか、またはなく、かつより少ない数のＴ細胞及び骨髄由来の細胞などの浸潤免疫細胞を特徴とする（Ｌｅｃｈｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ３６（９）：４７７−８９）。腫瘍は、腺腫、腺癌、芽腫、癌腫、類腱腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、内分泌腺腫瘍、胚細胞腫瘍、リンパ腫、肉腫、ウィルムス腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、リンパ腫瘍、乳房腫瘍、または黒色腫であってもよい。
【００７１】
芽腫の種類としては、肝芽腫、膠芽腫、神経芽腫、または網膜芽腫が挙げられる。癌腫の種類としては、結腸直腸癌腫または肝細胞癌腫、膵臓、前立腺、胃、食道、子宮頸、及び頭頸部癌腫、ならびに腺癌が挙げられる。肉腫の種類としては、ユーイング肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、または任意の他の軟組織肉腫が挙げられる。黒色腫の種類としては、悪性黒子、悪性黒子黒色腫、表在拡大型黒色腫、末端性黒子性黒色腫、粘膜黒色腫、結節型黒色腫、ポリープ状黒色腫、線維形成性黒色腫、メラニン欠乏性黒色腫、軟組織黒色腫、小母斑様細胞を有する黒色腫、スピッツ母斑の特徴を有する黒色腫、及びブドウ膜黒色腫が挙げられる。リンパ腫の種類としては、前駆Ｔ細胞白血病／リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病／リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、バーキットリンパ腫、菌状息肉腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、結節性硬化型ホジキンリンパ腫、混合細胞型サブタイプホジキンリンパ腫が挙げられる。肺腫瘍の種類としては、非小細胞性肺癌の腫瘍（腺癌、扁平上皮癌腫、及び大細胞癌腫）、ならびに小細胞性肺癌腫が挙げられる。
【００７２】
黒色腫の発生率は増加しており、約２００，０００の新しい症例が毎年世界中で診断されている。さらに、黒色腫は、原発腫瘍ならびに転移の両方が多くの場合、容易に接触可能であるため、診療所における局所投与に非常に適している。したがって、本発明の方法に対して、腫瘍は、好ましくは黒色腫であり、最も好ましくは転移性黒色腫である。腫瘍は、高い乳酸脱水素酵素の試験結果により、転移性として分類されたものであり得る。腫瘍は、以下の病期のうちのいずれか１つとして分類されたものであり得るが、好ましくは第ＩＩＩまたはＩＶ期である。
【００７３】
第０期：表皮内黒色腫（クラークレベルＩ）、９９．９％の生存
【００７４】
第Ｉ／ＩＩ期：浸潤性黒色腫、８９〜９５％の生存
Ｔ１ａ：１．０ｍｍ未満の原発腫瘍の厚さ、潰瘍形成なし、及び有糸分裂＜１／ｍｍ２
Ｔ１ｂ：１．０ｍｍ未満の原発腫瘍の厚さ、潰瘍形成なし、潰瘍形成あり、または有糸分裂≧１／ｍｍ２
Ｔ２ａ：１．０１〜２．０ｍｍの原発腫瘍の厚さ、潰瘍形成なし
【００７５】
第ＩＩ期：高リスク黒色腫、４５〜７９％の生存
Ｔ２ｂ：１．０１〜２．０ｍｍの原発腫瘍の厚さ、潰瘍形成あり
Ｔ３ａ：２．０１〜４．０ｍｍの原発腫瘍の厚さ、潰瘍形成なし
Ｔ３ｂ：２．０１〜４．０ｍｍの原発腫瘍の厚さ、潰瘍形成あり
Ｔ４ａ：４．０ｍｍを超える原発腫瘍の厚さ、潰瘍形成なし
Ｔ４ｂ：４．０ｍｍを超える原発腫瘍の厚さ、潰瘍形成あり
【００７６】
第ＩＩＩ期：局所転移、２４〜７０％の生存
Ｎ１：単一陽性リンパ節
Ｎ２：２〜３つの陽性リンパ節または局所皮膚／イン・トランジット（ｉｎ―ｔｒａｎｓｉｔ）転移
Ｎ３：４つの陽性リンパ節または１つのリンパ節及び局所皮膚／イン・トランジット転移
【００７７】
第ＩＶ期：遠隔転移、７〜１９％の生存
Ｍ１ａ：遠隔皮膚転移、正常ＬＤＨ
Ｍ１ｂ：肺転移、正常ＬＤＨ
Ｍ１ｃ：他の遠隔転移またはＬＤＨが上昇した任意の遠隔転移
【００７８】
本発明の方法は、（ａ）対象に、ＣＤ４０に特異的に結合し、かつ投与後に腫瘍部位において保持される、治療有効量の抗体を投与することと、任意に（ｂ）対象に、治療有効量の追加の治療薬を全身投与することと、を含む。腫瘍部位における抗体の保持は、以下でより詳細に記載される。ステップ（ａ）及び（ｂ）は、同時に実施されてもよい。あるいは、ステップ（ａ）及び（ｂ）は、ステップ（ａ）がステップ（ｂ）に先行するという条件で、順次に実施されてもよい。ステップ（ａ）において、抗ＣＤ４０抗体は、好ましくは、腫瘍に局所投与される。
【００７９】
本発明の方法は、いくつかの利点を有する。第１に、抗ＣＤ４０抗体が腫瘍部位において保持されるため、それは処置として非常に効果的である。さらに、抗ＣＤ４０抗体への全身曝露が低減され、より低用量の抗体が使用されることを可能にし、より少ない副作用をもたらす。ステップ（ｂ）が実施されるとき、処置効果はさらに改善される。
【００８０】
本発明はまた、以下を提供する。
−対象における固形腫瘍を治療するための方法で使用するための、ＣＤ４０に特異的に結合し、かつ投与後に腫瘍部位において保持される抗体であって、本方法は、（ａ）対象に、ＣＤ４０に特異的に結合する治療有効量の該抗体を投与することと、任意に（ｂ）対象に、治療有効量の追加の治療薬を全身投与することとを含む。ステップ（ａ）及び（ｂ）は、同時に実施されてもよい。あるいは、ステップ（ａ）及び（ｂ）は、ステップ（ａ）がステップ（ｂ）に先行するという条件で、順次に実施されてもよい。ステップ（ａ）において、該抗ＣＤ４０抗体は、好ましくは、腫瘍に局所投与される。
−対象における固形腫瘍を治療するための医薬品の製造における、ＣＤ４０に特異的に結合し、かつ投与後に腫瘍部位において保持される抗体の使用であって、該治療は、（ａ）腫瘍に、ＣＤ４０に特異的に結合する治療有効量の該抗体を投与することと、任意に（ｂ）対象に、治療有効量の追加の治療薬を全身投与することとを含む。ステップ（ａ）及び（ｂ）は、同時に実施されてもよい。あるいは、ステップ（ａ）及び（ｂ）は、ステップ（ａ）がステップ（ｂ）に先行するという条件で、順次に実施されてもよい。ステップ（ａ）において、該抗ＣＤ４０抗体は、好ましくは、腫瘍に局所投与される。
−対象における固形腫瘍を治療するための方法で同時、別々、または順次に使用するための（１）ＣＤ４０に特異的に結合し、かつ投与後に腫瘍部位において保持される抗体と、任意に（２）追加の治療薬とを含む、製品であって、本方法は、（ａ）腫瘍に、ＣＤ４０に特異的に結合する治療有効量の該抗体を局所投与することと、任意に（ｂ）対象に、治療有効量の追加の治療薬を全身投与することとを含む。ステップ（ａ）及び（ｂ）は、同時に実施されてもよい。あるいは、ステップ（ａ）及び（ｂ）は、ステップ（ａ）がステップ（ｂ）に先行するという条件で、順次に実施されてもよい。ステップ（ａ）において、該抗ＣＤ４０抗体は、好ましくは、腫瘍に局所投与される。
ステップ（ａ）及び（ｂ）のタイミング及び順序
【００８１】
ステップ（ａ）及び（ｂ）は、好ましくは、順次に（すなわち、異なるときに）実施され、ステップ（ａ）は、ステップ（ｂ）の前に実施される。
【００８２】
ステップ（ａ）及び（ｂ）は、好ましくは、組み合わされた抗腫瘍効果が最適化されるような間隔で分離される。これは、典型的には、ステップ（ｂ）が、ステップ（ａ）の少なくとも１つの生理学的効果がそのピークレベルにあるか、またはそれに近いように、ステップ（ａ）の後に十分長い間隔で実施されることを意味する。例えば、抗ＣＤ４０抗体は、典型的には、樹状細胞を刺激し、それは、腫瘍特異的Ｔ細胞の活性化をもたらす。活性化されたＴ細胞は、抗ＣＤ４０を用いた処置の約２４時間以内に、より高いレベルの免疫系チェックポイント分子（ＰＤ−１など）を発現させ始める。これらの免疫系チェックポイント分子は、抗腫瘍応答を負に調節し得る。したがって、ステップ（ｂ）で投与される薬剤は、好ましくは、そのような免疫系チェックポイントのそのような活性を阻止または阻害する薬剤（抗ＰＤ１または抗ＰＤＬ１抗体など）であってもよい。ステップ（ｂ）で投与される薬剤がそのような薬剤である場合、ステップ（ｂ）は、好ましくは、対象における細胞中の免疫系チェックポイント分子の発現レベル、または該免疫系チェックポイント分子を発現させる対象における細胞の数が、ステップ（ａ）の前の対象における該レベルもしくは数と比較して、または健康な対象における該レベルもしくは数と比較して上昇するように、ステップ（ａ）後に十分長い間隔で実施される。これに関連して、ステップ（ｂ）は、好ましくは、ステップ（ａ）の２４時間〜２週間後、ステップ（ａ）の２４時間〜１週間後、ステップ（ａ）の２４時間〜７２時間後、またはステップ（ａ）の２４時間〜４８時間後に実施される。
【００８３】
あるいは、ステップ（ｂ）は、対象の細胞中の免疫系チェックポイント分子の発現レベル、または該免疫系チェックポイント分子を発現させる対象における細胞の数が、ステップ（ａ）の前の対象における該レベルもしくは数と比較して、または健康な対象における該レベルもしくは数と比較して上昇していると決定される、ステップ（ａ）後の時点において実施されてもよい。
【００８４】
対象の細胞中の免疫系チェックポイント分子の発現レベル、またはそのような分子を発現させる対象における細胞の数は、任意の好適な手段によって、例えば、対象から採取された試料のフローサイトメトリー解析によって決定されてもよい。
【００８５】
あるいは、両方のステップ（ａ）及び（ｂ）が同じ日に、または治療センターへの同じ通院中に実施され得るように、ステップ（ａ）及び（ｂ）を同時に（すなわち、同じ時間に）、または互いから２４時間以内に実施されることが好ましくあり得る。これは、治療センターへのアクセスが制限される場合に特に有利であり得る。これに関連して、ステップ（ａ）及び（ｂ）は、同時に実施されてもよく、または２４時間未満離れて、１２時間未満離れて、１０時間未満離れて、６時間未満離れて、４時間未満離れて、３時間未満離れて、または２時間未満離れて実施されてもよい。
【００８６】
上記の実施形態のいずれかにおいて、ステップ（ａ）は、最初の段階の後に複数のさらなる段階で実施されてもよい。つまり、対象は、一連の用量の抗ＣＤ４０抗体を受けてもよい。これらの用量は、対象が抗ＣＤ４０抗体への断続的な曝露のみを有するように、好ましくは、対象の免疫細胞が枯渇しないように、かつ／または対象が抗ＣＤ４０抗体に対するタキフィラキシーに悩まされないように投与される。これらの症状のうちのいずれかの検出において、抗ＣＤ４０抗体の次の投与は、遅延または中止され得る。複数用量の抗ＣＤ４０が投与される場合、ステップ（ｂ）は、好ましくは、ステップ（ｂ）の開始後に、ステップ（ａ）の任意の第２の、及びさらなる段階を含む、本方法の継続時間にわたる追加の治療薬への対象の連続的な曝露を可能にする様式で実施される。これは、追加の薬剤が免疫系チェックポイントのそのような活性を阻止または阻害する薬剤（抗ＰＤ１または抗ＰＤＬ１抗体）である場合、特に適切であり得る。連続的な受容体遮断は、そのような薬剤の治療効果にとって特に重要であり得る。
ステップ（ａ）
【００８７】
本方法のステップ（ａ）は、固形腫瘍を有する対象への抗ＣＤ４０抗体の局所または全身投与に関する。腫瘍部位への局所投与が好ましく、注射などの任意の好適な手段による腫瘍周辺、腫瘍近接、腫瘍内、病巣内、病変周辺、頭蓋内、及び膀胱内投与を含む。局所投与はまた、腫瘍部位に応じて、腔内注入及び吸入を含んでもよい。
【００８８】
高い割合の抗ＣＤ４０抗体が、該抗体の投与後に長期間にわたって、インビボで腫瘍部位において、つまり腫瘍微小環境内に保持される。つまり、抗体は、とくに腫瘍部位に局所投与されたときに、腫瘍部位から血管またはリンパ循環への漏れの低減を示す。好ましくは、本方法に従って腫瘍に投与される抗体用量の少なくとも３０％が、投与の４時間後に腫瘍部位において保持され、より好ましくは、用量の少なくとも４０％が、投与の４時間後に保持され、最も好ましくは、用量の少なくとも５０％が投与の４時間後に保持される。
【００８９】
腫瘍微小環境内の抗体保持は、マウスモデルにおける腫瘍に抗体を注射し、投与後に経時的に抗体の血清中レベルを測定することによって研究され得る。あるいは、抗体の分布は、マウスモデルにおける腫瘍に注射された放射性標識抗体を使用して測定され得る。好適な技術は、実施例に記載される。
【００９０】
インビボでの腫瘍微小環境内のｐＨは、健康な組織のｐＨよりも著しくより酸性である。腫瘍に対する範囲は、健康な組織に対する７．２〜７．４と比較して、約ｐＨ６．５〜７．２または６．６〜７．０と報告される。この酸度は、主に、カオス的血流の減少を伴う不十分に組織化された血管系の結果としての短期または長期低酸素症にさらされた腫瘍領域内の嫌気性解糖、及び解糖代謝経路が酸素の存在下でさえ使用される一般的な癌表現型特性である、好気的解糖（ワールブルク効果）による。この酸度を所与として、本発明の方法で使用される抗ＣＤ４０抗体は、これがより低い等電点を有する同様の抗体と比較して、腫瘍微小環境内の改善された保持をもたらすため、好ましくは、高い等電点を有し得る。
【００９１】
抗体の等電点は、任意の好適な方法によって決定されてもよい。それは、例えば、電気泳動法によって、インビトロで決定されてもよい。あるいは、等電点は、基本原理から計算されてもよい。この場合、得られる等電点は、典型的には、理論等電点と称される。理論等電点のインシリコ計算のために、例えば、ＧＰ−ＭＡＷ（バージョン９．２、Ｌｉｇｈｔｈｏｕｓｅ  Ｄａｔａから）など、多数のソフトウェアプログラムが存在する。本発明の方法で使用される抗ＣＤ４０抗体は、好ましくは、９．０以上、好ましくは９．１以上、より好ましくは９．２以上、または９．２５以上、最も好ましくは９．３以上の理論等電点（ｐＩ）を有する。
ステップ（ｂ）
【００９２】
本方法のステップ（ｂ）は、対象への追加の治療薬の全身投与に関する。本明細書に記載される任意の薬剤（ステップ（ａ）の抗ＣＤ４０抗体を含む）の全身投与は、血管系及び／またはリンパ系を含む、対象の循環系への投与を意味する。そのような投与は、任意の好適な経路であってもよいが、典型的には、非経口である。
【００９３】
本明細書で使用される場合、「非経口投与」という語句は、腸内及び局所投与以外の投与様式を意味し、典型的には、注射、注入、または埋め込みによって達成される。好適な経路としては、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄、脳内、髄腔内、骨内、または他の非経口投与経路が挙げられる。
抗体
概要
【００９４】
本明細書で言及される「抗体」という用語は、全抗体及び任意の抗原結合フラグメント（すなわち、「抗原結合部分」）、またはその一本鎖を含む。抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続される少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質、またはその抗原結合部分を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略される）及び重鎖定常領域からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略される）及び軽鎖定常領域からなる。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存されている領域が散在した、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、高度可変領域にさらに細分され得る。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）、及び古典的な補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【００９５】
重鎖は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４サブタイプ）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２サブタイプ）、ＩｇＭ、ならびにＩｇＥを含む、任意のアイソタイプであってもよい。
【００９６】
軽鎖は、カッパ鎖及びラムダ鎖を含む。
【００９７】
抗体及びそれらの抗原結合フラグメントが天然に発生し得るものとは異なる物理的環境で存在するように「単離されている」か、またはアミノ酸配列中の自然発生抗体とは異なるように修飾されている抗体及びそれらの抗原結合フラグメントが、特に適切である。
【００９８】
抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であってもよい。抗体は、任意の好適な方法によって生成されてもよい。例えば、モノクローナル抗体を生成するための好適な方法は、“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ；Ａ  ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ”、Ｈ  Ｚｏｌａ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８）及び「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ」、ＳＧＲ  Ｈｕｒｒｅｌｌ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９８２）に開示される。組み換え技術もまた使用され得る。
【００９９】
抗体の「抗原結合部分」または「抗原結合フラグメント」という用語は、ＣＤ４０などの抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上のフラグメントを指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントによって実施され得ることが示されている。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合フラグメントの例としては、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ´）２フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、ｄＡｂフラグメント、及び単離相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。ｓｃＦｖなどの一本鎖抗体ならびにＶＨＨ及びラクダ抗体などの重鎖抗体もまた、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されるよう意図される。これらの抗体フラグメントは、当業者に既知の従来の技術を使用して得られ得、フラグメントは、無傷抗体と同じ様式で有用性に関してスクリーニングされ得る。
【０１００】
本発明の方法で使用するための抗体は、ヒト抗体であってもよい。本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」という用語は、フレームワーク及びＣＤＲ領域の両方がヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来である、可変領域を有する抗体を含むよう意図される。さらに、抗体が定常領域を含む場合、定常領域もまた、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来である。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含んでもよい（例えば、インビトロのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発によって、またはインビボの体細胞突然変異によって導入される突然変異）。しかしながら、本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳類種の生殖系列由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上にグラフトされている抗体を含むよう意図されず、そのような抗体は、典型的には、キメラまたはヒト化と称される。
【０１０１】
本発明の方法で使用するためのヒト抗体は、典型的には、ヒトモノクローナル抗体である。そのようなヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞と融合されるヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウスから得られるＢ細胞を含む、ハイブリドーマによって生成されてもよい。ヒト抗体はまた、ヒトリンパ球のインビトロ免疫付与、続いて、エプスタイン・バーウイルスによるリンパ球の形質転換によって調製されてもよい。「ヒト抗体誘導体」という用語は、ヒト抗体の任意の修飾形態、例えば、抗体及び別の薬剤または抗体の共役を指す。
【０１０２】
あるいは、本発明の方法で使用するための抗体は、ヒト化抗体であってもよい。
【０１０３】
「ヒト化」という用語は、非ヒト種からの免疫グロブリンならびにヒト免疫グロブリンの構造及び／または配列に基づく残りの免疫グロブリン構造由来の抗原結合部位を有する、組み換え技術を使用して概して調製される抗体分子を指す。抗原結合部位は、ヒト定常ドメインと融合した完全非ヒト抗体可変ドメイン、またはヒト可変ドメインの適切なヒトフレームワーク領域にグラフトされたそのような可変ドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）のみのいずれかを含んでもよい。そのようなヒト化分子のフレームワーク残基は、野生型（例えば、完全にヒト）であってもよく、またはそれらは、配列がヒト化の基礎となっているヒト抗体において見られない１つ以上のアミノ酸置換を含むように修飾されてもよい。ヒト化は、分子の定常領域がヒト個人において免疫原として作用する可能性を減少させるか、または排除するが、外来可変領域に対する免疫応答の可能性は残る（ＬｏＢｕｇｌｉｏ，Ａ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（１９８９）“Ｍｏｕｓｅ／Ｈｕｍａｎ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｍａｎ：Ｋｉｎｅｔｉｃｓ  Ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８６：４２２０−４２２４）。別のアプローチは、ヒト由来定常領域を提供するだけではなく、可変領域を改変して、それらをヒト形態に可能な限り近く作り直すようにすることにも焦点を当てる。重鎖及び軽鎖の両方の可変領域が、所与の種において比較的保存され、かつＣＤＲのための足場を推定上提供する４つのフレームワーク領域（ＦＲ）が隣接した、問題の抗原に対する応答が異なり、かつ結合能力を決定する、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むことが既知である。非ヒト抗体が特定の抗原に対して調製されるとき、可変領域は、修飾されるヒト抗体中に存在するＦＲ上に、非ヒト抗体由来のＣＤＲをグラフトすることによって、「作り直され」得るか、または「ヒト化され」得る。様々な抗体へのこのアプローチの適用は、Ｓａｔｏ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５３：８５１−８５６、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９８８）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（１９８８）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｇｒａｆｔｉｎｇ  Ａｎ  Ａｎｔｉｌｙｓｏｚｙｍｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ，”Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，Ｃ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）“Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｂｙ  ＣＤＲ−Ｇｒａｆｔｉｎｇ：Ｔｈｅ  Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ  Ｏｆ  Ｆｒａｍｅｗｏｒｋ  Ｒｅｓｉｄｕｅｓ  Ｏｎ  Ｌｏｏｐ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４：７７３−３７８３、Ｍａｅｄａ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）“Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｒｅｓｈａｐｅｄ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｗｉｔｈ  ＨＩＶ−Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ，”Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ２：１２４−１３４、Ｇｏｒｍａｎ，Ｓ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  Ａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ＣＤ４  Ａｎｔｉｂｏｄｙ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８８：４１８１−４１８５、Ｔｅｍｐｅｓｔ，Ｐ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  Ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｏ  Ｉｎｈｉｂｉｔ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｓｙｎｃｙｔｉａｌ  Ｖｉｒｕｓ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ，”Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：２６６−２７１、Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）“Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８８：２８６９−２８７３、Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）“Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａｎ  Ａｎｔｉ−ｐ１８５ｈｅｒ２  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８９：４２８５−４２８９、及びＣｏ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）“Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｄ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｗｉｔｈ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  ＣＤ３３  Ａｎｔｉｇｅｎ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９−１１５４によって報告されている。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、全てのＣＤＲ配列を保存する（例えば、マウス抗体からの６つ全てのＣＤＲを含むヒト化マウス抗体）。他の実施形態では、ヒト化抗体は、元の抗体に対して改変される１つ以上（１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ）のＣＤＲを有し、それらはまた、元の抗体からの１つ以上のＣＤＲ「由来」の１つ以上のＣＤＲと呼ばれる。抗原をヒト化する能力は、周知である（例えば、米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，８５９，２０５号、同第６，４０７，２１３号、同第６，８８１，５５７号を参照されたい）。
【０１０４】
本明細書で言及される任意の抗体は、単離形態で提供されてもよく、または任意に、別の部分に（直接または間接的に）結合して提供されてもよい。他の部分は、細胞傷害性部分または薬剤などの治療用分子であってもよい。
【０１０５】
治療用分子は、本発明の抗体に、例えば、化学的共役によって直接結合されてもよい。分子を抗体と共役するための方法は、当該技術分野において既知である。例えば、カルボジイミド共役（Ｂａｕｍｉｎｇｅｒ  ＆  Ｗｉｌｃｈｅｋ（１９８０）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．７０，１５１−１５９）が使用されて、ドキソルビシンを含む様々な薬剤を抗体またはペプチドに共役してもよい。水溶性カルボジイミドである１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）は、機能部分を結合部分と共役するのに特に有用である。
【０１０６】
部分を抗体に共役するための他の方法もまた使用され得る。例えば、グルタルアルデヒド架橋のように、適切な反応物質の過ヨウ素酸ナトリウム酸化、続いて、還元的アルキル化が使用され得る。しかしながら、本発明の共役をもたらすどの方法が選択されるかにかかわらず、抗体がその標的化能力を維持していること、及び機能部分がその関連機能を維持することが決定されなければならないことが認識される。
【０１０７】
細胞傷害性部分は、直接的及び／または間接的に細胞傷害性であってもよい。「直接的に細胞傷害性」とは、その部分がそれ自体細胞傷害性である部分であることを意味する。「関節的に細胞傷害性」とは、その部分が、それ自体細胞傷害性ではないが、例えば、さらなる分子へのその作用によって、またはそれに対するさらなる作用によって、細胞傷害性を誘導することができる部分であることを意味する。細胞傷害性部分は、細胞内であるときのみ細胞傷害性であってもよく、好ましくは、細胞外であるとき細胞傷害性ではない。
【０１０８】
好ましくは、抗体または抗原結合フラグメントは、直接的に細胞傷害性の化学療法薬である細胞傷害性部分に結合される。任意に、細胞傷害性部分は、直接的に細胞傷害性のポリペプチドである。細胞傷害性化学療法薬は、当該技術分野において周知である。
【０１０９】
抗癌剤などの細胞傷害性化学療法薬としては、メクロレタミン（ＨＮ２）などの窒素マスタード、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン（Ｌ−サルコリシン）、及びクロランブシルなどのアルキル化剤；エチレンイミン及びヘキサメチルメラミン、チオテパなどのメチルメラミン；ブスルファンなどのアルキルスルホン酸塩；カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）などのニトロソウレア、及びストレプトゾシン（ストレプトゾトシン）；ならびにデカルバジン（ＤＴＩＣ；ジメチルトリアゼノイミダゾールカルボキサミド）などのトリアゼン；メトトレキサート（アメトプテリン）などの葉酸類似体を含む代謝拮抗剤；フルオロウラシル（５−フルオロウラシル；５−ＦＵ）、フロクスウリジン（フルオロデオキシウリジン；ＦＵｄＲ）、及びシタラビン（シトシンアラビノシド）などのピリミジン類似体；ならびにメルカプトプリン（６−メルカプトプリン；６−ＭＰ）、チオグアニン（６−チオグアニン；ＴＧ）、及びペントスタチン（２´−デオキシコホルマイシン）などのプリン類似体及び関連阻害剤が挙げられる。天然生成物としては、ビンブラスチン（ＶＬＢ）及びビンクリスチンなどのビンカアルカロイド；エトポシド及びテニポシドなどのエピポドフィロトキシン；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン（ダウノマイシン；ルビドマイシン）、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、及びマイトマイシン（マイトマイシンＣ）などの抗生物質；Ｌ−アスパラギナーゼなどの酵素；ならびにインターフェロンアルフェノームなどの生物学的応答調節剤が挙げられる。その他の薬剤としては、シスプラチン（シス−ＤＤＰ）及びカルボプラチンなどの白金配位錯体；ミトキサントロン及びアントラサイクリンなどのアントラセンジオン；ヒドロキシウレアなどの置換尿素；プロカルバジン（Ｎ−メチルヒドラジン、ＭＩＨ）などのメチルヒドラジン誘導体；ならびにミトタン（ｏ，ｐ´−ＤＤＤ）及びアミノグルテチミドなどの副腎皮質抑制剤；タキソール及び類似体／誘導体；ならびにフルタミド及びタモキシフェンなどのホルモンアゴニスト／アンタゴニストが挙げられる。
【０１１０】
細胞傷害性部分は、細胞死を引き起こす細胞傷害性ペプチドまたはポリペプチド部分であってもよい。細胞傷害性ペプチド及びポリペプチド部分は、当該技術分野において周知であり、例えば、リシン、アブリン、緑膿菌外毒素、組織因子などを含む。それらを抗体などの標的化部分に結合するための方法もまた、当該技術分野において既知である。他のリボソーム不活性化タンパク質は、国際公開第ＷＯ  ９６／０６６４１号において細胞傷害性薬剤として記載される。緑膿菌外毒素もまた、細胞傷害性ポリペプチドとして使用され得る。ＴＮＦα及びＩＬ−２などのある特定のサイトカインもまた、細胞傷害性薬剤として有用であり得る。
【０１１１】
ある特定の放射性原子もまた、十分な用量で送達された場合に細胞傷害性であってもよい。したがって、細胞傷害性部分は、使用中、細胞傷害性になるように十分な量の放射能を標的部位に送達する放射性原子を含んでもよい。好適な放射性原子としては、リン３２、ヨウ素１２５、ヨウ素１３１、インジウム１１１、レニウム１８６、レニウム１８８、もしくはイットリウム９０、または隣接細胞、細胞小器官、もしくは核酸を破壊するのに十分なエネルギーを放射する任意の他のアイソトープが挙げられる。好ましくは、本発明の薬剤中のアイソトープ及び放射性原子の密度は、４０００ｃＧｙを超える用量（好ましくは少なくとも６０００、８０００、または１００００ｃＧｙ）が標的部位、好ましくは、標的部位における細胞、及びそれらの細胞小器官、特に、核に送達されるようなものである。
【０１１２】
放射性原子は、既知の方法で、抗体、その抗原結合フラグメント、変異体、融合体、または誘導体に結合されてもよい。例えば、ＥＤＴＡまたは別のキレート化剤は、結合部分に結合され、１１１Ｉｎまたは９０Ｙに結合するために使用されてもよい。チロシン残基は、１２５Ｉまたは１３１Ｉで直接的に標識化されてもよい。
【０１１３】
細胞傷害性部分は、好適な間接的な細胞傷害性のポリペプチドであってもよい。間接的な細胞傷害性のポリペプチドは、酵素活性を有するポリペプチドであってもよく、非毒性及び／または比較的に非毒性のプロドラッグを細胞傷害性薬物に変換することができる。抗体では、この種類の系は、多くの場合、ＡＤＥＰＴ（抗体指向性酵素プロドラッグ療法）と称される。その系は、抗体が、酵素部分を患者の体内の所望の部位に配置し、酵素がその部位において局在する時間を可能にした後で、酵素のための基質であるプロドラッグを投与し、触媒作用の最終生成物が細胞傷害性化合物であることを必要とする。そのアプローチの目的は、所望の部位における薬物の濃度を最大化すること、及び正常組織における薬物の濃度を最小化することである。細胞傷害性部分は、非細胞傷害性プロドラッグを細胞傷害性薬物に変換することが可能であり得る。
【０１１４】
本明細書に記載される標的酵素を使用した、その系の酵素及びプロドラッグは、すでに提案されたもののいずれかであってもよい。細胞傷害性物質は、アルキル化剤などの任意の既存の抗癌薬；ＤＮＡ内に挿入される薬剤；ジヒドロ葉酸レダクターゼ、チミジンシンセターゼ、リボヌクレオチドレダクターゼ、ヌクレオシドキナーゼ、もしくはトポイソメラーゼなどの任意の重要な酵素を阻害する薬剤；または任意の他の細胞構成要素と相互作用することによって細胞死をもたらす薬剤であってもよい。エトポシドは、トポイソメラーゼ阻害剤の一例である。
【０１１５】
報告されているプロドラッグ系は、表１に列挙されたものを含む。
【表１】
0006654187.tif 000002
【０１１６】
酵素部分の一部を形成するための好適な酵素としては、カルボキシペプチダーゼＧ、Ｇ１、及びＧ２（グルタミル化マスタードプロドラッグのための）、カルボキシペプチダーゼＡ及びＢ（ＭＴＸベースのプロドラッグのための）、及びアミノペプチダーゼ（２−α−アミノシルＭＴＣプロドラッグのため）などのエクソペプチダーゼ；例えば、トロンボリシン（トロンビンプロドラッグのための）などのエンドペプチダーゼ；ホスファターゼ（例えば、アルカリホスファターゼ）またはスルファターゼ（例えば、アリールスルファターゼ）などのヒドロラーゼ（リン酸化または硫酸化プロドラッグのための）；ペニシリンアミダーゼ及びアリールアシルアミダーゼなどのアミダーゼ；β−ラクタマーゼなどのラクタマーゼ；β−グルクロニダーゼ（β−グルクロノミドアントラサイクリンのための）、α−ガラクトシダーゼ（アミグダリンのための）、及びβ−ガラクトシダーゼ（β−ガラクトースアントラサイクリンのための）などのグリコシダーゼ；シトシンデアミナーゼなどのデアミナーゼ（５ＦＣのための）；ウロキナーゼ及びチミジンキナーゼなどのキナーゼ（ガンシクロビルのための）；ニトロレダクターゼ（ＣＢ１９５４及び類似体のための）、アゾレダクターゼ（アゾベンゼンマスタードのための）、及びＤＴ−ジアフォラーゼ（ＣＢ１９５４のための）などのレダクターゼ；グルコースオキシダーゼ（グルコースのための）、キサンチンオキシダーゼ（キサンチンのための）、及びラクトペルオキシダーゼなどのオキシダーゼ；ＤＬ−ラセマーゼ、触媒抗体、ならびにシクロデキストリンが挙げられる。
【０１１７】
好ましくは、プロドラッグは、細胞傷害性薬物と比較して比較的非毒性である。典型的には、それは、好適なインビトロ細胞傷害性試験で測定されるものとして、１０％未満の毒性、好ましくは１％未満の毒性を有する。
【０１１８】
プロドラッグを細胞傷害性薬物に変換することが可能である部分は、本発明の薬剤の残りからの単離において活性である可能性が高いが、（ａ）それが本発明の薬剤の残りと組み合わされているとき、及び（ｂ）本発明の薬剤が標的細胞に付着、隣接、または内在化されるときのみ、それが活性である必要がある。
【０１１９】
各部分がポリペプチドであるとき、２つの部分は、ポリペプチドを架橋する従来の方法のいずれかによって一緒に結合されてもよい。例えば、抗体または抗原結合フラグメントは、チオール基、それらのチオール基と反応することが可能な二官能性薬剤と反応したさらなる部分、例えば、ヨード酢酸のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＩＡ）またはＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）が豊富であってもよい。例えば、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルで達成されるアミド及びチオエーテル結合は、概して、インビボで、ジスルフィド結合よりも安定している。
【０１２０】
細胞傷害性部分は、放射線増感剤であってもよい。放射線増感剤としては、フルオロピリミジン、チミジン類似体、ヒドロキシウレア、ゲムシタビン、フルダラビン、ニコチンアミド、ハロゲン化ピリミジン、３−アミノベンズアミド、３−アミノベンゾジアミド、エタニキサドール、ピモニダゾール、及びミソニダゾールが挙げられる。また、細胞への遺伝子の送達、例えば、ｐ５３遺伝子またはサイクリンＤの送達も、それらを放射線増感することができる。さらなる部分は、照射されると細胞傷害性となるか、または細胞傷害性部分を放出する部分であってもよい。例えば、ホウ素１０アイソトープは、適切に照射されたとき、細胞傷害性であるα粒子を放出する。同様に、細胞傷害性部分は、フォトフリンなどの光線力学療法で有用である部分であってもよい。
ＣＤ４０に特異的な抗体
【０１２１】
本発明の併用療法及び方法は、ＣＤ４０に免疫特異的に結合する抗体、つまり、「抗ＣＤ４０抗体」を利用する。一実施形態では、該抗体は、対象への投与後に腫瘍部位において保持される（上記のステップ（ａ）での考察を参照されたい）。抗体は、好ましくは、ＣＤ４０に特異的に結合し、つまり、それは、ＣＤ４０に結合するが、他の分子には結合しないか、またはより低い親和性（例えば、１０倍低い親和性）で結合する。別段の定めがない限り、本明細書で使用される場合、ＣＤ４０という用語は、ヒトＣＤ４０を指す。ヒトＣＤ４０の配列は、配列番号１３に記載される。本発明の抗ＣＤ４０抗体は、他の哺乳動物からのＣＤ４０、例えば、霊長類またはマウスＣＤ４０に対するある程度の結合親和性を有し得る。抗体は、好ましくは、細胞表面上に局在したときにヒトＣＤ４０に結合する。
【０１２２】
具体的には、本発明の併用療法で使用される抗ＣＤ４０抗体は、ヒトＣＤ４０への結合に対して、配列番号７の軽鎖可変領域及び配列番号８の重鎖可変領域を含む（任意に、配列番号１１及び配列番号１２のそれぞれの軽鎖定常領域及び重鎖定常領域と一緒に）「基準抗体」と競合する。そのような競合的結合阻害は、当該技術分野において周知のアッセイ及び方法を使用して、例えば、試験される抗体ポリペプチドあり及びなしで、固定化ヒトＣＤ４０を用いたＢＩＡｃｏｒｅチップ及び基準抗体の存在下でのインキュベーションを使用して決定され得る。あるいは、ペアワイズマッピングアプローチが使用され得、基準抗体は、ＢＩＡｃｏｒｅチップの表面に固定化され、ヒトＣＤ４０は、固定化抗体に結合され、次いで、第２の抗体が、ヒトＣＤ４０への同時結合能力に関して試験される（‘ＢＩＡｃｏｒｅ  Ａｓｓａｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ’，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２９−０１９４−００  ＡＡ  ０５／２０１２を参照されたく、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１２３】
例示的な抗ＣＤ４０抗体は、国際公開第ＷＯ  ２０１３／０３４９０４号（Ａｌｌｉｇａｔｏｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＡＢ）で開示される（その開示は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１２４】
抗体は、好ましくは、その天然の状態のＣＤ４０、具体的には、細胞表面上に局在するＣＤ４０に結合する能力を有する。好ましくは、抗体は、ＣＤ４０に特異的に結合する。つまり、本発明の方法で使用される抗体は、好ましくは、それが別の分子に結合するよりも大きい結合親和性でＣＤ４０に結合する。
【０１２５】
「細胞表面上に局在する」とは、ＣＤ４０の１つ以上の領域が細胞表面の外面上に存在するように、ＣＤ４０が細胞と関連していることを意味する。例えば、ＣＤ４０は、細胞外表面上に示される１つ以上の領域を有する細胞原形質膜に挿入されてもよい（すなわち、膜貫通タンパク質として配向される）。これは、細胞によるＣＤ４０の発現の過程で生じ得る。したがって、一実施形態では、「細胞表面上に局在する」は、「細胞表面上に発現する」を意味し得る。あるいは、ＣＤ４０は、細胞の外側にあってもよく、共有結合相互作用及び／またはイオン性相互作用がそれを細胞表面の特定の１つの領域または複数の領域に局在化させる。
【０１２６】
本発明の併用療法及び方法で使用される抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０を発現させる細胞のＡＤＣＣ媒介溶解を誘導及び／もしくは強化してもよく、かつ／またはＣＤ４０を発現させる細胞のアポトーシスを強化してもよい。細胞は、典型的には、腫瘍細胞である。「強化する」とは、溶解または自然死した細胞の数が、適切な対照物質の存在下で溶解または自然死した細胞の数と比較して、本発明の抗体の存在下で増加することを意味する。細胞の試料中のＡＤＣＣ媒介溶解またはアポトーシスのレベルを決定するための方法は、当該技術分野において周知である。例えば、クロム５１放出アッセイ、ユウロピウム放出アッセイ、または硫黄３５放出アッセイが使用されてもよい。そのようなアッセイでは、抗原（この場合、ＣＤ４０）を発現させる、すでに標識化された標的細胞株は、試験される抗体でインキュベートされる。洗浄後、エフェクター細胞（典型的には、Ｆｃ受容体ＣＤ１６を発現させる）は、抗体で標識化された標的細胞で共インキュベートされる。標的細胞溶解は、続いて、シンチレーション計数器または分光測光法による細胞内標識の放出によって測定される。
【０１２７】
好ましくは、抗体、抗原結合フラグメントは、抗体Ｆｃ領域を含む。Ｆｃ部分がＩｇＧ抗体由来、または異なるクラスの抗体（ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、もしくはＩｇＥなど）由来であってもよいことが、当業者によって理解されるであろう。例えば、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４抗体由来であってもよい。しかしながら、有利に、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１抗体由来である。
【０１２８】
Ｆｃ領域は、自然発生であってもよく（例えば、内因的に産生された抗体の一部）、または人工であってもよい（例えば、自然発生Ｆｃ領域と比較して、１つ以上の点突然変異を含む）。例えば、血清半減期を改変するか、またはＡＤＣＣ及びＣＤＣに関与するＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）への結合を改善することによって、ＦｃＲに結合するそれらの能力を改善する点突然変異を有するＦｃ領域は、有利であり得る。具体的には、ＦｃγＲＩＩＢへの結合を強化する突然変異、例えば、Ｓ２６７Ｅ（Ｓｔｒｏｈｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０：６８５−６９１）は、ＦｃγＲＩＩＢ結合とＣＤ４０抗体の機能的活性との連関をもたらし、本発明にとって有利であり得る（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３３３：１０３０−１０３４）。
【０１２９】
そのようなアッセイにおいて必要とされる放射性同位体での標識化の代替方法として、標的細胞中に自然に存在する酵素の放出を測定することによって、溶解が検出される方法が使用されてもよい。これは、酵素触媒反応の生成物の検出（例えば、生物発光検出）によって達成され得る。そのようなアッセイにおいて、細胞の事前の標識化は必要ではない。そのようなアッセイで検出される典型的な細胞酵素は、ＧＡＰＤＨである。
【０１３０】
本発明の併用療法及び方法で使用される抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０を発現させる細胞の活性を調節してもよく、該調節は、該細胞の活性の増加または減少である。細胞は、典型的には、樹状細胞またはＢ細胞である。
【０１３１】
樹状細胞などのプロフェッショナルＡＰＣは、ＣＤ４０を介したシグナル伝達が生じるときに活性化され、それは、免疫細胞活性化、増殖、ならびにサイトカイン及びケモカインの産生を含む、いくつかの生物学的事象を引き起こす。ＣＤ４０と関連した樹状細胞活性化を決定するための方法は、当該技術分野において既知であり（例えば、Ｓｃｈｏｎｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．，５８：４０−４３、ｖａｎ  Ｋｏｏｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｌｅｕｋ．，Ｂｉｏｌ．，６７：２−１７で考察される）、以下にさらに記載される。
【０１３２】
組み換えＣＤ４０Ｌまたは抗ＣＤ４０抗体でのヒトＢ細胞の刺激は、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｆａｓ、及びＭＨＣ  ＩＩなどの表面マーカーの上方制御、可溶性サイトカイン、例えば、ＩＬ−６、ＴＮＦ−γ、及びＴＮＦ−αの分泌、ならびに同型凝集を誘導する。ＣＤ４０関連Ｂ細胞活性化を決定するための方法は、当該技術分野において既知であり（例えば、Ｓｃｈｏｎｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１（上記を参照）で考察される）、以下にさらに記載される。
【０１３３】
樹状細胞及びＢ細胞の活性を調節する抗体の能力を決定するための方法及びアッセイは、当該技術分野において周知である。例えば、樹状細胞の活性化は、ＣＤ８６及びＣＤ８０などの細胞表面マーカーのレベルを測定することによって、ならびに／または抗ＣＤ４０抗体によって誘導されたＴ細胞からのＩＦＮγの分泌を測定することによって評価されてもよく、これらのパラメータのうちのいずれかの増加は、活性化の増加を示し、減少は、活性化の減少を表す。同様に、Ｂ細胞の活性を調節する抗体の能力は、細胞表面マーカー（ＣＤ８６など）のレベルを測定することによって、ならびに／または抗ＣＤ４０抗体によって誘導されたＢ細胞増殖を測定することによって（以下の実施例３を参照されたい）、評価されてもよく、これらのパラメータのうちのいずれかの増加は、活性化の増加を示し、減少は、活性化の減少を表す。
【０１３４】
好ましくは、樹状細胞またはＢ細胞の活性化を増加させる、本発明の併用療法及び方法で使用される抗ＣＤ４０抗体は、樹状細胞またはＢ細胞活性化に対する効力を有する。細胞活性化は、典型的には、試験刺激装置を用いて、単離した樹状細胞またはＢ細胞をインキュベートし、次いで、活性化の尺度として細胞増殖を検出することを伴うアッセイにおいて、ＥＣ５０レベルとして測定されてもよい。
【０１３５】
「結合活性」及び「結合親和性」という用語は、抗体分子が標的に結合するか、または結合しない傾向を指すよう意図される。結合親和性は、抗体及びその標的に対する解離定数（Ｋｄ）を決定することによって定量化されてもよい。同様に、抗体のその標的への結合の特異性は、抗体及び別の非標的分子に対する解離定数と比較した、抗体のその標的に対する比較解離定数（Ｋｄ）の観点から定義されてもよい。
【０１３６】
典型的には、標的に対する抗体に対するＫｄは、環境内の非関連材料または付随材料などの他の非標的分子に対するＫｄよりも２倍、好ましくは５倍、より好ましくは１０倍少なくなる。より好ましくは、Ｋｄは、５０倍少ない、さらにより好ましくは１００倍少ない、さらにより好ましくは２００倍少ない。
【０１３７】
解離定数の値は、周知の方法によって直接決定され得、かつ例えば、Ｃａｃｅｃｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｙｔｅ  ９：３４０−３６２，１９８４）に記載されるものなどの方法によって、複雑な混合物に関してさえ計算され得る。例えば、Ｋｄは、Ｗｏｎｇ  ＆  Ｌｏｈｍａｎ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０，５４２８−５４３２，１９９３）によって開示されたものなどの二重フィルターニトロセルロースフィルター結合アッセイを使用して確立されてもよい。例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、ＲＩＡ、及びフローサイトメトリー解析を含む、標的に向けての抗体などのリガンドの結合能力を評価するための他の標準的なアッセイは、当該技術分野において既知である。抗体の結合速度論（例えば、結合親和性）もまた、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）システム解析など、当該技術分野において既知の標準的なアッセイによって評価され得る。
【０１３８】
標的への抗体の結合が、別の抗体などのその標的の別の既知のリガンドによる標的の結合と比較される、比較結合アッセイが実施され得る。５０％の阻害が生じる濃度は、Ｋｉとして既知である。理想的な条件下で、Ｋｉは、Ｋｄと同等である。Ｋｉ値は、Ｋｄ未満になることは決してなく、したがって、Ｋｉの測定は、Ｋｄの上限を提供するために便利に置換され得る。
【０１３９】
本発明の併用療法及び方法で使用される抗ＣＤ４０抗体は、好ましくは、別の非標的分子への結合のためのその親和性よりも少なくとも２倍、１０倍、５０倍、１００倍、またはそれ以上である親和性で、その標的に結合することが可能である。
【０１４０】
本発明の併用療法及び方法で使用される抗体は、典型的には、以下の能力を示す。
（ｉ）細胞の表面上に局在したときにヒトＣＤ４０に特異的に結合し、かつ／または
（ｉｉ）ＣＤ４０を発現させる細胞の抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）媒介溶解を強化し、かつ／または
（ｉｉｉ）ＣＤ４０を発現させる細胞ノアポトーシスを強化し、かつ／または
（ｉｖ）ＣＤ４０を発現させる細胞の活性を調節することであって、該調節は、該細胞の活性の増加もしくは減少である。
【０１４１】
抗体は、本明細書に開示される特定の抗ＣＤ４０抗体のうちの１つの変異体またはフラグメントであってもよく、またはそれを含んでもよいが、ただし、該変異体またはフラグメントがＣＤ４０に対する特異性、及び機能的特徴（ｉ）〜（ｉｖ）のうちの少なくとも１つを保持することを条件とする。
【０１４２】
フラグメントは、好ましくは、該抗体の抗原結合部分である。フラグメントは、切断によって、例えば、ポリペプチドのＮ及び／またはＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の除去によって作製されてもよい。最大１０、最大２０、最大３０、最大４０、またはそれ以上のアミノ酸が、このようにしてＮ及び／またはＣ末端から除去され得る。フラグメントはまた、１つ以上の内部欠失によって生成されてもよい。
【０１４３】
変異体は、本明細書に開示される特定の抗ＣＤ４０抗体の配列に関して１つ以上の置換、欠失、または付加を含んでもよい。変異体は、本明細書に開示される特定の配列からの１、２、３、４、５、最大１０、最大２０、最大３０、またはそれ以上のアミノ酸置換及び／または欠失を含んでもよい。「欠失」変異体は、個々のアミノ酸の欠失、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸の小さい群の欠失、または特定のアミノ酸ドメインもしくは他の特徴の欠失などのより大きいアミノ酸領域の欠失を含んでもよい。「置換」変異体は、好ましくは、同数のアミノ酸での１つ以上のアミノ酸の置き換え、及び保存アミノ酸置換を行うことを伴う。例えば、アミノ酸は、同様の特性を有する代替のアミノ酸、例えば、別の塩基性アミノ酸、別の酸性アミノ酸、別の中性アミノ酸、別の荷電アミノ酸、別の親水性アミノ酸、別の疏水性アミノ酸、別の極性アミノ酸、別の芳香族アミノ酸、または別の脂肪族アミノ酸で置換されてもよい。
【０１４４】
好適な置換基を選択するために使用され得る２０個の主なアミノ酸のいくつかの特性は、以下の通りである。
【表２】
0006654187.tif 000003
【０１４５】
好ましい「変異体」は、自然発生アミノ酸の代わりに、配列中に生じるアミノ酸がその構造類似体であるものを含む。配列中で使用されるアミノ酸はまた、抗体の機能が有意な悪影響を受けないという条件で、誘導体化または修飾、例えば、標識化されてもよい。
【０１４６】
変異体は、抗体の合成中に、もしくは生成後の修飾によって、または抗体が部位特異的突然変異誘発、ランダム突然変異誘発、または酵素開裂、及び／もしくは核酸の連結反応の既知の技術を使用して組み換え形態であるときに、調製されてもよい。
【０１４７】
好ましくは、変異体抗体は、本明細書に開示される抗体のＶＬまたはＶＨドメインに６０％を超える、７０％を超える、例えば、７５％または８０％、好ましくは８５％を超える、例えば、９０または９５％を超えるアミノ酸同一性を有する、アミノ酸配列を有する。アミノ酸同一性のこのレベルは、関連した配列番号の配列の完全長にわたって、または完全長ポリペプチドのサイズに応じて、２０、３０、５０、７５、１００、１５０、２００、もしくはそれ以上のアミノ酸にわたるなど、配列の一部にわたって見られ得る。
【０１４８】
アミノ酸配列に関連して、「配列同一性」は、以下のパラメータを用いたＣｌｕｓｔａｌＷ（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４（上記を参照））を使用して評価されたときの規定値を有する配列を指す。
【０１４９】
ペアワイズアラインメントパラメータ−方法：正確、マトリックス：ＰＡＭ、ギャップオープンペナルティ：１０．００、ギャップ延長ペナルティ：０．１０、
【０１５０】
複数のアラインメントパラメータ−マトリックス：ＰＡＭ、ギャップオープンペナルティ：１０．００、遅延に対する同一性％：３０、エンドギャップへのペナルティ：オン、ギャップ分離距離：０、ネガティブマトリクス：なし、ギャップ延長ペナルティ：０．２０、残基特異的ギャップペナルティ：オン、親水性ギャップペナルティ：オン、親水性残基：ＧＰＳＮＤＱＥＫＲ。特定の残基における配列同一性は、単純に誘導体化されている同一の残基を含むよう意図される。
【０１５１】
本発明の併用療法及び方法で使用するための抗ＣＤ４０抗体は、そのような抗体が開示された抗体の作用を模倣する可能性が高いため、本明細書に開示される特定の抗体と同じエピトープに結合し得る。抗体が別の抗体と同じエピトープに結合するかどうかは、常法によって決定され得る。例えば、標的への各抗体の結合は、比較結合アッセイを使用してもよい。比較結合アッセイを実施するための方法は、当該技術分野において周知である。例えば、それらは、抗体が標的分子に結合することができる条件下で、抗体と標的分子とを一緒に接触させることを伴ってもよい。抗体／標的複合体は、次いで、第２の（試験）抗体と接触させられてもよく、試験抗体が抗体／標的複合体からの第１の抗体に置き換わることが可能である程度が評価され得る。そのような評価は、例えば、表面プラズモン共鳴、ＥＬＩＳＡ、またはフローサイトメトリーを含む、任意の好適な技術を使用してもよい。標的への第１の抗体の結合を阻害する試験抗体の能力は、試験抗体が標的への結合に対して、該第１の抗体と競合することができること、したがって、試験抗体が第１の抗体と同じ標的上のエピトープまたは領域に結合し、したがって、第１の抗体の作用を模倣し得ることを実証する。
【０１５２】
本発明の併用療法及び方法で使用される抗ＣＤ４０抗体は、配列番号１〜３のＣＤＲ配列のうちの１つ、２つ、もしくは３つ全て、及び／または配列番号４〜６のＣＤＲ配列のうちの１つ、２つ、もしくは３つ全てを含む抗体であってもよい。抗体は、配列番号１〜６の６つ全てのＣＤＲ配列を含んでもよい。
【０１５３】
抗体は、配列番号７の軽鎖可変領域配列及び／または配列番号８の重鎖可変領域配列を含んでもよい。
【０１５４】
抗体は、配列番号７の軽鎖可変領域配列及び配列番号８の重鎖可変領域配列を含む抗体であってもよく、またはその抗体と同じエピトープに結合してもよい。加えて、抗体は、配列番号１１の軽鎖定常領域配列及び／または配列番号１２の重鎖定常領域配列を含んでもよい。
【０１５５】
本発明の併用療法及び方法で使用される抗ＣＤ４０抗体またはその任意の変異体もしくはフラグメントは、好ましくは、９．０以上、好ましくは９．１以上、より好ましくは９．２以上、または９．２５以上、最も好ましくは９．３以上の理論等電点（ｐＩ）を有する。
併用療法
【０１５６】
本発明は、（ａ）ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分と、（ｂ）癌の治療において有効性を有するさらなる免疫療法薬であって、その薬剤は、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントではない、さらなる免疫療法薬と、を含む、対象における固形腫瘍を治療するのに使用するための併用療法を提供し、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＣＤ４０への結合に対して、配列番号７の軽鎖可変領域及び配列番号８の重鎖可変領域を含む抗体と競合し、さらなる免疫療法薬は、免疫チェックポイント分子に特異的に結合する。
【０１５７】
本明細書で使用される場合、「併用療法」または「併用治療」または「組み合わせて」という用語は、少なくとも２つの異なる治療薬を用いた同時または並行治療の任意の形態を示す。
【０１５８】
ある特定の実施形態によると、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメント、及びＣＤ４０以外の免疫チェックポイント分子に特異的に結合する免疫療法薬は、同じ組成物中または別々の組成物中のいずれかで、同時に投与される。他の実施形態によると、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメント、及びＣＤ４０以外の免疫チェックポイント分子に特異的に結合する免疫療法薬は、順次に投与され、すなわち、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ４０以外の免疫チェックポイント分子に特異的に結合する免疫療法薬の投与前または後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメント、及びＣＤ４０以外の免疫チェックポイント分子に特異的に結合する免疫療法薬の投与は同時であり、すなわち、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメント、及びＣＤ４０以外の免疫チェックポイント分子に特異的に結合する免疫療法薬の投与期間は、互いに重なる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメント、及びＣＤ４０以外の免疫チェックポイント分子に特異的に結合する免疫療法薬の投与は、同時ではない。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、ＣＤ４０以外の免疫チェックポイント分子に特異的に結合する免疫療法薬が投与される前に終了する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０以外の免疫チェックポイント分子に特異的に結合する免疫療法薬の投与は、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが投与される前に終了する。
【０１５９】
ある特定の典型的な実施形態によると、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメント、及びＣＤ４０以外の免疫チェックポイント分子に特異的に結合する免疫療法薬は、単一の治療用組成物内で投与される。いくつかの実施形態によると、治療用組成物は、治療上許容可能な希釈剤または担体をさらに含む。
【０１６０】
本発明の併用療法のさらなる構成要素は、癌の治療において有効性を有する免疫療法薬であり、その薬剤は、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントではない。
【０１６１】
「免疫療法薬」という用語は、対象における腫瘍または癌に対する免疫応答を起こすように宿主免疫系を刺激することができる任意の分子、ペプチド、抗体、または他の薬剤を含むよう意図される。様々な免疫療法薬が、本明細書に記載される組成物及び方法において有用である。一実施形態では、免疫療法薬は、抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０１６２】
「免疫応答」という用語は、Ｔ細胞媒介及び／またはＢ細胞媒介免疫応答を含む。例示的な免疫応答としては、Ｔ細胞応答、例えば、サイトカイン産生及び細胞傷害作用が挙げられる。加えて、免疫応答という用語は、Ｔ細胞活性化によって間接的にもたらされる免疫応答、例えば、抗体産生（液性応答）及びサイトカイン応答性細胞、例えば、マクロファージの活性化を含む。
【０１６３】
「免疫チェックポイント分子」という用語は、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞、樹状細胞、ＮＫ細胞、ならびにマクロファージなどの免疫細胞の細胞表面上のタンパク質の群を含むが、免疫応答を調節するある特定の腫瘍細胞上のタンパク質の群も含むよう意図される。免疫チェックポイントタンパク質が抑制性、例えば、ＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１、または刺激性、例えば、ＯＸ４０及びＣＤ１３７のいずれかであってもよいことが、当業者によって理解されるであろう。例示的な免疫チェックポイント分子としては、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ１３７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、２Ｂ４、ＩＣＯＳ、ＨＶＥＭ、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ１６０、ｇｐ４９Ｂ、ＰＩＲ−Ｂ、ＫＩＲファミリー受容体、ＴＩＭ−１、ＴＩＭ−３、ＴＩＭ−４、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、ＳＩＲＰａｌｐｈａ（ＣＤ４７）、ＣＤ４８、２Ｂ４（ＣＤ２４４）、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＩＬＴ−２、ＩＬＴ−４、ＴＩＧＩＴ、及びＡ２ａＲが挙げられるがこれらに限定されない。好ましい実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、またはＣＤ１３７である。
【０１６４】
１つ以上の抑制性免疫チェックポイント分子の遮断または中和は、抑制性シグナル伝達を遮断するか、または別様に中和して、それにより、より効果的に癌を治療するために免疫応答を上方制御することができる。抑制性免疫チェックポイントを遮断するのに有用な例示的な薬剤としては、抑制性免疫チェックポイントタンパク質またはそのフラグメントに結合すること、及び／またはそれを不活性化または阻害することのいずれかができる抗体、小分子、ペプチド、ペプチド模倣薬、天然リガンド、及び天然リガンドの誘導体、ならびに抑制性免疫チェックポイント核酸またはそのフラグメントの発現及び／または活性を下方制御することができるＲＮＡ干渉、アンチセンス、核酸アプタマーなどが挙げられる。免疫応答を上方制御するための例示的な薬剤としては、タンパク質とその天然受容体（複数可）との間の相互作用を遮断する１つ以上の抑制性免疫チェックポイントタンパク質、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤タンパク質の非活性化形態（例えば、優性阻害ポリペプチド）、１つ以上の抑制性免疫チェックポイントタンパク質とその天然受容体（複数可）との間の相互作用を遮断する小分子またはペプチド、その天然受容体（複数可）に結合する融合タンパク質（例えば、抗体または免疫グロブリンのＦｃ部分に融合した免疫チェックポイント阻害タンパク質の細胞外部分、抑制性免疫チェックポイント核酸転写または翻訳を遮断する核酸分子などに対する抗体が挙げられる。そのような薬剤は、１つ以上の抑制性免疫チェックポイントとその天然受容体（複数可）（例えば、抗体）との間の相互作用を直接遮断して、抑制性シグナル伝達を阻止し、免疫応答を上方制御することができる。あるいは、薬剤は、１つ以上の抑制性免疫チェックポイントタンパク質とその天然受容体（複数可）との間の相互作用を間接的に遮断して、抑制性シグナル伝達を阻止し、免疫応答を上方制御することができる。例えば、安定化した細胞外ドメインなどの免疫チェックポイントタンパク質リガンドの可溶性型は、その受容体に結合して、適切なリガンドに結合するために受容体の効果的な濃度を間接的に低減することができる。一実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤を阻害するために、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、及び抗ＣＴＬＡ−４抗体が単独で、または組み合わせてのいずれかで使用される。
【０１６５】
したがって、一実施形態では、ＣＤ４０以外の免疫チェックポイント分子に特異的に結合する免疫療法薬は、抑制性免疫チェックポイント分子に結合し、かつその機能を阻害する抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０１６６】
１つ以上の刺激性免疫チェックポイント分子の活性化は、より効果的に癌を治療するために、免疫応答を上方制御することができる。刺激性免疫チェックポイントを活性化するのに有用な例示的な薬剤としては、刺激性免疫チェックポイントタンパク質またはそのフラグメントを活性化することができる抗体、小分子、ペプチド、ペプチド模倣薬、天然リガンド、及び天然リガンドの誘導体、ならびに免疫チェックポイント核酸またはそのフラグメントを強化することができるＲＮＡ干渉、アンチセンス、核酸アプタマーなどが挙げられる。免疫応答を上方制御するための例示的な薬剤としては、刺激性免疫チェックポイントタンパク質リガンドの可溶性型、またはリガンドの多量体化を促進するＦｃもしくはドメインに融合したそのようなリガンドが挙げられる。一実施形態では、刺激性免疫チェックポイント阻害剤を活性化するために、抗ＣＤ１３７及び抗ＯＸ４０抗体が単独で、または組み合わせてのいずれかで使用される。
【０１６７】
したがって、代替の実施形態では、ＣＤ４０以外の免疫チェックポイント分子に特異的に結合する免疫療法薬は、刺激性免疫チェックポイント分子に結合し、かつその機能を活性化する抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０１６８】
チェックポイント分子の好ましい例としては、そのリガンドＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２と結合したときにＴ細胞活性化の負調節因子としての役割を果たす、ＰＤ１が挙げられる。具体的には、ＰＤ−Ｌ１は、黒色腫を含む多くの固形腫瘍によって発現される。したがって、これらの腫瘍は、Ｔ細胞に対する抑制性ＰＤ−１受容体の活性化を通じて免疫媒介抗腫瘍効果を下方制御し得る。ＰＤ１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を遮断することによって、免疫応答のチェックポイントは除去され得、増強された抗腫瘍Ｔ細胞応答をもたらす。この相互作用は、ＰＤ１もしくはＰＤ−Ｌ１に対して特異的な抗体、または任意の他の好適な薬剤によって遮断され得る。そのような抗体及び薬剤は、概して、ＰＤ１阻害剤と称され得る。ＰＤ１阻害剤は、本発明の方法のステップ（ｂ）の追加の治療薬として特に好ましい。
【０１６９】
抗ＰＤ１抗体としては、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ランブロリズマブ、ピディリズマブ、及びＡＭＰ−２２４が挙げられる。抗ＰＤ−Ｌ１抗体としては、ＭＥＤＩ−４７３６及びＭＰＤＬ３２８０Ａが挙げられる。
【０１７０】
全身ＰＤ１阻害剤及び局所抗ＣＤ４０抗体の組み合わせは、腫瘍によるＰＤ−Ｌ１の発現によって魅力的なだけではない。そのような組み合わせはまた、制御性Ｔ細胞及び骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＳＤＣ）に影響を与えることによって、全体的な免疫抑制環境を調節することにおいて有益であり得る。例えば、本発明の方法で使用される抗ＣＤ４０抗体などのＣＤ４０アゴニストが、ＣＤ４０陽性腫瘍関連Ｍ２マクロファージ及びＭＳＤＣを調節する一方で、ＰＤ１阻害剤は、制御性Ｔ細胞及びＭＳＤＣを調節する。さらに、上記で説明されたように（ステップ（ａ）及び（ｂ）のタイミングに関する考察を参照されたい）、抗体によるＣＤ４０の連結反応は、成熟すると、ＰＤ−Ｌ１及び２を上方制御する樹状細胞を活性化及び成熟させることが報告されており、２つの処置を組み合わせることに対する論理的根拠を提供する。さらに、本発明の方法で使用される抗ＣＤ４０抗体などのＣＤ４０アゴニストは、Ｔ細胞に対するＰＤ−１を、かつ腫瘍及び腫瘍浸潤細胞に対するＰＤ−Ｌ１を間接的に上方制御する。したがって、全身ＰＤ１阻害剤及び腫瘍部位において保持される抗ＣＤ４０抗体の組み合わせを用いた固形腫瘍（黒色腫など）の処置は、免疫系を活性化すること、及び逆調節シグナルを抑制することの両方によって、多面発現効果を有する。
【０１７１】
チェックポイント分子の別の例は、Ｔ細胞活性化の負調節因子としての役割を果たすＴ細胞受容体ＣＴＬＡ−４である。通常、それは、最初の活性化の後にＴ細胞表面上で上方制御される。ＣＴＬＡ−４受容体のリガンドは、抗原提示細胞によって発現されるＢ７タンパク質（Ｂ７−１及びＢ７−２）である。Ｔ細胞活性化の上方制御に関与する対応する受容体は、Ｂ７タンパク質への結合に対してＣＴＬＡ−４と競合するＣＤ２８である。したがって、Ｂ７タンパク質とのＣＤ２８相互作用ではなく、Ｂ７タンパク質とのＣＴＬＡ−４相互作用を遮断することによって、免疫応答の正常なチェックポイントのうちの１つは、除去され得、増強した抗腫瘍Ｔ細胞応答をもたらす。Ｂ７タンパク質とのＣＴＬＡ−４相互作用を遮断することは、抗ＣＴＬＡ−４抗体または他の好適な薬剤で達成されてもよい。抗ＣＴＬＡ−４抗体としては、イピルムマブ、トレメリムマブ、またはＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０６３４４２に開示される抗体のうちのいずれかが挙げられる。他の分子としては、ポリペプチド、または可溶性変異体ＣＤ８６ポリペプチドが挙げられる。
【０１７２】
したがって、追加の治療薬は、好ましくは、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、またはＣＴＬＡ−４のうちの少なくとも１つに特異的に結合する抗体または他の薬剤であってもよい。
【０１７３】
追加の治療薬は、最も好ましくは、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ランブロリズマブ（Ｌａｍｂｏｒｌｉｚｕｍａｂ）、ピディリズマブ（Ｐｄｉｌｉｚｕｍａｂ）、ＭＥＤＩ−４７３６、及びＭＰＤＬ３２８０Ａから選択される、抗ＰＤ１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ１阻害剤である。
【０１７４】
追加の治療薬が抗体または抗体を含む二重特異性分子である場合、抗体、抗体の抗原結合フラグメント、追加の治療部分への任意の共役などの定義に関する上記の全般的考察の全てが、追加の治療薬である抗体にも適用されることが理解されるであろう。同様に、抗ＣＤ４０抗体に関する上記の標的特異性／親和性、及び特異性／親和性を決定するための方法の定義が、薬剤の特定の標的がＣＤ４０の代わりに読まれることを除いて、追加の治療薬である抗体に等しく適用されることが理解されるであろう。追加の治療薬である抗体の変異体及びフラグメントもまた、抗ＣＤ４０抗体の変異体及びフラグメントと同じ方法で定義され得る。
キット及び薬学的組成物
【０１７５】
本発明はまた、対象における固形腫瘍を治療するためのキットを提供し、キットは、上記で定義されるような併用療法を含む。例えば、キットは、（ａ）ＣＤ４０に特異的に結合し、かつ投与後に腫瘍部位において保持される、治療有効量の抗体と、任意に（ｂ）対象への全身投与に好適である治療有効量の追加の治療薬とを含んでもよい。ＣＤ４０に特異的に結合する抗体は、好ましくは、腫瘍部位への局所投与に好適な形態で提供される。
【０１７６】
本発明のキットは、加えて、上記の実施形態のうちのいずれかが実施されることを可能にする１つ以上の他の試薬または器具を含んでもよい。そのような試薬または器具は、以下、好適な緩衝剤（複数可）（水溶液）、ならびに抗ＣＤ４０抗体及び／または追加の治療薬を投与するための手段（槽もしくは針を含む器具など）のうちの１つ以上を含む。
【０１７７】
本発明の方法で使用されるか、または本発明のキットで提供される抗ＣＤ４０抗体及び追加の治療薬はそれぞれ、薬学的に許容される担体と一緒に製剤化される別個の薬学的組成物として提供されてもよい。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合性であり、かつ必要な投与経路と適合する、あらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等を含む。
【０１７８】
したがって、抗ＣＤ４０抗体及び追加の治療薬のための担体は、全身投与に好適であり得、それは、上記のように、血管系及び／またはリンパ系を含む対象の循環系への投与を意味する。そのような投与は、任意の好適な経路であってもよいが、典型的には、非経口である。本明細書で使用される場合、「非経口投与」という語句は、腸内及び局所投与以外の投与様式を意味し、典型的には、注射、注入、または埋め込みによって達成される。好適な経路としては、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄、または他の非経口投与経路が挙げられる。
【０１７９】
しかしながら、抗ＣＤ４０抗体のための担体は、好ましくは、局所投与に好適であり、それは、上記のように、注射などの任意の好適な手段による腫瘍周辺、腫瘍近接、腫瘍内、病巣内、病変周辺、頭蓋内、及び膀胱内投与を含む。局所投与はまた、腫瘍部位に応じて、腔内注入及び吸入を含んでもよい。
【０１８０】
投与経路に応じて、抗体及び／または薬剤は、酸の作用ならびに抗体及び／または薬剤を不活性化するか、もしくは変性させる可能性がある他の自然条件から抗体を保護するための材料でコーティングされてもよい。好ましい薬学的に許容される担体は、水性担体または希釈剤を含む。本発明の薬学的組成物で採用され得る好適な水性担体の例としては、水、緩衝水、及び食塩水が挙げられる。他の担体の例としては、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、及びこれらの好適な混合物、オリーブ油などの植物油、ならびにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散液の場合に必要な粒径の維持によって、かつ界面活性剤の使用によって維持され得る。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムなどのポリアルコールを含むことが好ましい。
【０１８１】
本発明の併用療法の抗体成分が、典型的には、１つ以上の薬学的組成物の形態で提供され、それぞれが、薬学的に許容される緩衝剤、賦形剤、希釈剤、または担体と一緒に治療有効量の抗体成分（複数可）を含有することが、当業者によって理解されるであろう。
【０１８２】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」、または「有効量」、または「治療的に有効な」は、所与の条件及び投与計画に対して治療効果を提供する量を指す。これは、必要な添加剤及び希釈剤、すなわち、担体または投与媒体と関連して所望の治療効果をもたらすように計算された活性抗体の所定の量である。さらに、それは、宿主の活性、機能、及び応答の臨床的に有意な不足を低減または予防するのに十分な量を意味するよう意図される。あるいは、治療有効量は、宿主内の臨床的に有意な条件の改善を引き起こすのに十分である。当業者によって理解されるように、化合物の量は、その比活性度に応じて変化し得る。好適な投与量は、必要な希釈剤と関連して所望の治療効果をもたらすように計算された所定の量の活性組成物を含有し得る。
【０１８３】
治療有効量は、当該技術分野において周知のように、年齢、体重、性別、状態、合併症、他の疾病などの患者の特徴に基づき、通常の技能を有する医療従事者または獣医従事者によって決定され得る。
【０１８４】
薬学的組成物は、薬学的に許容される酸化防止剤を含んでもよい。これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などの補助剤を含有してもよい。微生物の存在の防止は、滅菌手順（上記を参照）、ならびに様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、ソルビン酸フェノールなどの包含の両方によって確実にされ得る。また、糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物中に含むことも望ましくあり得る。加えて、注射可能な薬学的形態の持続的吸収は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤の包含によってもたらされ得る。
【０１８５】
薬学的組成物は、典型的には、製造及び保存条件下で無菌であり、かつ安定していなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または高い薬剤濃度に好適な他の規則的な構造として製剤化され得る。無菌の注射可能な溶液は、上記で列挙された成分のうちの１つまたは組み合わせと共に、適切な溶媒中に、必要な量で活性剤（例えば、抗体）組み込み、必要に応じて、その後に滅菌微細濾過によって調製され得る。概して、分散液は、塩基性分散媒及び上記に列挙されたものからの必要な他の成分を含有する無菌媒体中に、活性剤を組み込むことによって調製される。無菌の注射可能な溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、活性剤及びそのすでに滅菌濾過された溶液からの任意の追加の所望の成分の粉末を得る、真空乾燥及び冷凍乾燥（凍結乾燥）である。薬学的組成物は、追加の活性成分ならびに上記のものを含んでもよい。
【０１８６】
好適な薬学的に許容される緩衝剤、希釈剤、担体、及び賦形剤は、当該技術分野において周知である（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ´ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ  Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ（１９９０）及びｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓｓ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｋｉｂｂｅ，Ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ（２０００）を参照されたく、それらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１８７】
「緩衝剤」という用語は、ｐＨを安定させる目的で、酸塩基混合物を含有する水溶液を含むよう意図される緩衝剤の例は、トリズマ、ビシン、トリシン、ＭＯＰＳ、ＭＯＰＳＯ、ＭＯＢＳ、トリス、ヘペス、ＨＥＰＢＳ、ＭＥＳ、リン酸塩、炭酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、グリコール酸塩、乳酸塩、ホウ酸塩、ＡＣＥＳ、ＡＤＡ、酒石酸塩、ＡＭＰ、ＡＭＰＤ、ＡＭＰＳＯ、ＢＥＳ、ＣＡＢＳ、カコジル酸塩、ＣＨＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＥＰＰＳ、エタノールアミン、グリシン、ＨＥＰＰＳＯ、イミダゾール、イミダゾール乳酸、ＰＩＰＥＳ、ＳＳＣ、ＳＳＰＥ、ＰＯＰＳＯ、ＴＡＰＳ、ＴＡＢＳ、ＴＡＰＳＯ、及びＴＥＳである。
【０１８８】
「希釈剤」という用語は、薬学的調製物中で薬剤を希釈する目的で、水溶液または非水溶液を含むよう意図される。希釈剤は、食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、または油（ベニバナ油、コーン油、ピーナッツ油、綿実油、もしくはゴマ油）のうちの１つ以上であってもよい。
【０１８９】
「補助剤」という用語は、本発明の薬剤の生物学的効果を増加させるために、製剤に添加される任意の化合物を含むよう意図される。補助剤は、例えば、フッ化物、塩化物、臭化物、ヨウ化物、チオシアン酸塩、亜硫酸塩、水酸化物、リン酸塩、炭酸塩、乳酸塩、グリコール酸塩、クエン酸塩、ホウ酸塩、酒石酸塩、及び異なるアシル組成物の酢酸塩であるがこれらに限定されない、異なるアニオンを有する亜鉛、銅、または銀塩のうちの１つ以上であってもよい。補助剤はまた、カチオン性セルロースエーテル、カチオン性セルロースエステル、脱アセチル化ヒアルロン酸、キトサン、カチオン性デンドリマーなどのカチオン性ポリマー、ポリ（ビニルイミダゾール）などのカチオン性合成ポリマー、ならびにポリヒスチジン、ポリリシン、ポリアルギニン、及びこれらのアミノ酸を含有するペプチドであってもよい。
【０１９０】
賦形剤は、炭水化物、ポリマー、脂質、及び無機物のうちの１つ以上であってもよい。炭水化物の例としては、ラクトース、グルコース、スクロース、マンニトール、及びシクロデキストリンが挙げられ、それらは、例えば、凍結乾燥を促進するために組成物に添加される。ポリマーの例としては、例えば、粘度制御のために、生物接着を達成するために、または化学分解及びタンパク質分解から脂質を保護するために組成物に添加される、全て異なる分子量のデンプン、セルロースエーテル、セルロースカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸塩、カラギーナン、ヒアルロン酸及びその誘導体、ポリアクリル酸、ポリスルホネート、ポリエチレングリコール／ポリエチレンオキシド、ポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドコポリマー、異なる加水分解度のポリビニルアルコール／ポリビニルアセテート、及びポリビニルピロリドンである。脂質の例としては、ポリマーと同様の理由により組成物に添加される、全て異なるアシル鎖長及び飽和度の脂肪酸、リン脂質、モノ、ジ、及びトリグリセリド、セラミド、スフィンゴ脂質及び糖脂質、卵レシチン、大豆レシチン、水素化卵、ならびに大豆レシチンである。無機物の例は、液体蓄積の低減または有利な色素特性などの利点を得るために組成物に添加される、タルク、酸化マグネシウム、酸化亜鉛、及び酸化チタンである。
【０１９１】
本発明の活性抗体ベースの薬剤は、その送達に好適になるように、当該技術分野において既知の任意の種類の薬学的組成物に製剤化されてもよい。
【０１９２】
一実施形態では、本発明の薬学的組成物は、リポソームの形態であってもよく、薬剤は、他の薬学的に許容される担体に加えて、ミセル、不溶性単分子層、及び液晶として凝集形態で存在する、脂質などの両親媒性薬剤と組み合わされる。リポソーム製剤に好適な脂質としては、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸などに挙げられるがこれらに限定されない。好適な脂質としてはまた、血流循環時間を延長するために極性頭基におけるポリ（エチレングリコール）によって修飾された上記の脂質が挙げられる。そのようなリポソーム製剤の調製は、例えば、米国第ＵＳ４，２３５，８７１号で見ることができ、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９３】
本発明の薬学的組成物はまた、生分解性ミクロスフェアの形態であってもよい。ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ＰＬＡ及びＰＧＡ（ＰＬＧＡ）のコポリマー、またはポリ（カプロラクトン）（ｐｏｌｙ（ｃａｒｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ））（ＰＣＬ）、及びポリ無水物などの脂肪族ポリエステルが、ミクロスフェアの生成で生分解性ポリマーとして広く使用されている。そのようなミクロスフェアの調製物は、米国第ＵＳ  ５，８５１，４５１号及び欧州特許第ＥＰ  ０  ２１３  ３０３号で見ることができ、それらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９４】
さらなる実施形態では、本発明の薬学的組成物は、例えば、ポリ−γグルタミン酸に基づき、ナノ粒子の形態で提供される。そのようなナノ粒子の調製及び使用の詳細は、国際公開第ＷＯ  ２０１１／１２８６４２号で見ることができ、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。本発明の併用療法の活性成分のうちの１つ以上が、別々のナノ粒子中で製剤化されてもよく、または両方の活性成分が同じナノ粒子中で製剤化されてもよいことが、当業者によって理解されるであろう。
【０１９５】
さらなる実施形態では、本発明の薬学的組成物は、ポリマーゲルの形態で提供され、デンプン、セルロースエーテル、セルロースカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸塩、カラギーナン、ヒアルロン酸及びその誘導体、ポリアクリル酸、ポリビニルイミダゾール、ポリスルホネート、ポリエチレングリコール／ポリエチレンオキシド、ポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドコポリマー、異なる加水分解度のポリビニルアルコール／ポリビニルアセテート、及びポリビニルピロリドン等のポリマーが、薬剤を含有する溶液の増粘のために使用される。ポリマーはまた、ゼラチンまたはコラーゲンを含んでもよい。
【０１９６】
あるいは、薬剤は単純に、食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、もしくは油（ベニバナ油、コーン油、ピーナッツ油、綿実油、もしくはゴマ油）、トラガカントガム、及び／または様々な緩衝剤中で溶解されてもよい。
【０１９７】
本発明の薬学的組成物が活性剤の作用の増強のためのイオン及び定義されたｐＨを含んでもよいことが理解される。加えて、組成物は、滅菌などの従来の薬学的操作に供されてもよく、かつ／または保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤、充填剤などの従来の補助剤を含有してもよい。
【０１９８】
本発明に従った薬学的組成物は、当業者に既知の任意の好適な経路を介して投与されてもよい。したがって、可能な投与経路としては、非経口（静脈内、皮下、及び筋肉内）、局所、眼、鼻、肺、経口、非経口、膣、及び直腸が挙げられる。また、埋め込みからの投与が可能である。
【０１９９】
有利に、薬学的組成物は、腫瘍部位において、またはその近くで、例えば、腫瘍内または腫瘍周辺での投与に好適である。
【０２００】
薬学的組成物が非経口投与に好適であることが好ましい。抗体を薬学的組成物に製剤化するための方法は、医学及び薬剤学の当業者に周知である。好ましい組成物は、添付の実施例に記載される。
【０２０１】
本発明の併用療法は、注射可能な持続放出薬物送達システムを使用して送達されてもよい。これらは、特に注射の頻度を低減するように設計される。そのようなシステムの一例は、組み換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）を、いったん注射されると長時間にわたってゆっくりとｒｈＧＨを放出する生分解性ミクロスフェア中に封入する、Ｎｕｔｒｏｐｉｎ  Ｄｅｐｏｔである。好ましくは、送達は、筋肉内（（ｉ．ｍ．）、及び／または皮下（ｓ．ｃ．）、及び／または静脈内（ｉ．ｖ．）で実施される。
【０２０２】
本発明の併用療法は、必要な部位に直接薬物を放出する外科的に埋め込まれた装置によって投与され得る。例えば、Ｖｉｔｒａｓｅｒｔは、サイトメガロウイルス性網膜炎を治療するために、眼内に直接ガンシクロビルを放出する。疾患部位へのこの毒性薬剤の直接の適用は、薬物の有意な全身副作用なしで効果的な療法を達成する。
【０２０３】
電気穿孔療法（ＥＰＴ）システムもまた、本発明の併用療法の投与のために採用され得る。細胞にパルス電界を送達する装置は、薬物に対する細胞膜の浸透性を増加させ、細胞内薬物送達の有意な強化をもたらす。
【０２０４】
本発明の併用療法はまた、エレクトロインコーポレーション（ＥＩ）によって送達され得る。ＥＩは、皮膚の表面上の直径最大３０ミクロンの小粒子が、電気穿孔で使用されるパルスと同一または同様の電気パルスを受けるときに生じる。ＥＩにおいて、これらの粒子は、角質層を通じて、皮膚のより深い層へと運ばれる。粒子は、薬物もしくは遺伝子が添加され得るか、またはそれらでコーティングされ得るか、あるいは単純に、薬物が入ることができる皮膚の孔を生成する「弾丸」として機能を果たし得る。
【０２０５】
本発明の代替の併用療法は、感熱性であるＲｅＧｅｌ注射可能システムである。体温未満で、ＲｅＧｅｌは注射可能な液体である一方で、体温で、それはすぐに、ゆっくりと浸食し、既知の安全な生分解性ポリマー中に溶解するゲルリザーバを形成する。活性物質は、バイオポリマーが溶解するにつれて経時的に送達される。
【０２０６】
本発明の併用療法はまた、経口投与され得る。本プロセスは、タンパク質及びペプチドを共送達するために、体内へのビタミンＢ１２及び／またはビタミンＤの経口摂取のための天然過程を採用する。ビタミンＢ１２及び／またはビタミンＤの摂取系に乗ることによって、本発明の薬剤、医薬品、及び薬学的組成物は、腸壁を通じて移動することができる。複合体のビタミンＢ１２部分／ビタミンＤ部分における内因性因子（ＩＦ）に対する有意な親和性、及び複合体の活性物質の有意な生物活性の両方を保持する複合体は、ビタミンＢ１２類似体及び／またはビタミンＤ類似体と薬剤との間で合成される。
【０２０７】
本発明の併用療法は、「Ｔｒｏｊａｎペプチド」によって細胞に導入され得る。これらは、転位特性を有し、かつ原形質膜にわたって親水性化合物を運ぶことが可能である、ペネトラチンと呼ばれるポリペプチドの種類である。この系は、細胞質及び核へのオリゴペプチドの直接標的化を可能にし、非細胞型特異的かつ高度に効率的であり得る。Ｄｅｒｏｓｓｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８），Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．８，８４−８７を参照されたい。
【０２０８】
好ましくは、本発明の併用療法は、１日用量もしくは単位、１日副用量、またはその適切な分割量の活性成分を含有する単位投与量である。
【０２０９】
本発明の併用療法は、通常、薬学的に許容される投与形態で、活性成分を含む薬学的組成物の形態で、任意に、非毒性有機または無機酸または塩基、付加塩の形態で、経口または任意の非経口経路で投与される。治療される疾患及び患者、ならびに投与経路に応じて、組成物は、異なる用量で投与され得る。
【０２１０】
ヒト療法において、本発明の併用療法は、単独で投与され得るが、概して、目的とする投与経路及び標準的な薬学的慣行に関して選択された、好適な薬学的賦形剤、希釈剤、または担体との混合物中で投与される。
【０２１１】
例えば、本発明の併用療法は、即時放出、遅延放出、または制御放出適用のための、香味剤または着色剤を含有し得るタブレット、カプセル、オビュール、エリキシル剤、溶液、または懸濁液の形態で、経口、口腔、または舌下投与され得る。本発明の薬剤、医薬品、及び薬学的組成物はまた、陰茎海綿体内注射を介して投与されてもよい。
【０２１２】
そのようなタブレットは、微結晶セルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、及びグリシンなどの賦形剤、デンプン（好ましくはトウモロコシ、ジャガイモ、またはタピオカデンプン）、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、及びある特定のケイ酸塩複合体などの崩壊剤、ならびにポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、スクロース、ゼラチン、及びアカシアなどの造粒結合剤を含有し得る。加えて、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル、及びタルクなどの滑沢剤が含まれてもよい。
【０２１３】
同様の種類の固体組成物もまた、ゼラチンカプセル中の充填剤として採用され得る。この点において好ましい賦形剤としては、ラクトース、デンプン、セルロース、乳糖、または高分子量ポリエチレングリコールが挙げられる。水性懸濁液及び／またはエリキシル剤に対して、本発明の薬剤、医薬品、及び薬学的組成物は、様々な甘味剤または香味剤、着色剤または染料と、乳化剤及び／または懸濁化剤と、かつ水、エタノール、プロピレングリコール、及びグリセリルなどの希釈剤と、ならびにこれらの組み合わせと組み合わされ得る。
【０２１４】
本発明の併用療法は、非経口、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、髄腔内、脳室内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、もしくは皮下投与され得るか、またはそれらは、注入技術によって投与されてもよい。それらは、他の物質、例えば、溶液を血液で等張性にするのに十分な塩またはグルコースを含有してもよい、無菌水溶液の形態で最適に使用される。水溶液は、必要に応じて、好適に緩衝化されるべきである（好ましくは、３〜９のｐＨに）。無菌条件下での好適な非経口製剤の調製は、当業者に周知の標準的な薬学的技術によって容易に達成される。
【０２１５】
非経口投与に好適な医薬品及び薬学的組成物としては、製剤を目的とする受容者の血液で等張性にする、酸化防止剤、緩衝剤、制菌剤、及び溶質を含有し得る、水性及び非水性無菌注射溶液、ならびに懸濁化剤及び増粘剤を含み得る、水性及び非水性無菌懸濁液が挙げられる。医薬品及び薬学的組成物は、単位用量または複数用量、例えば、密閉されたアンプル及びバイアル瓶で提示されてもよく、使用直前に、無菌液体担体、例えば、注射用水の添加のみを必要とする冷凍乾燥（凍結乾燥）条件で保存されてもよい。即時注射溶液及び懸濁液は、すでに記載された種類の無菌粉末、顆粒、及びタブレットから調製されてもよい。
【０２１６】
本発明の併用療法はまた、鼻腔内または吸入投与され得、好適な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、ヒドロフルオロアルカン、例えば、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ  １３４Ａ３もしくは１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＡ  ２２７ＥＡ３）、二酸化炭素、または他の好適なガスなどを使用した加圧容器、ポンプ、スプレー、またはネブライザーから、ドライパウダー吸入器またはエアロゾルスプレー形の形態で便利に送達される。加圧エアロゾルの場合、投与量単位は、計量された量を送達するための弁を提供することによって決定されてもよい。加圧容器、ポンプ、スプレー、またはネブライザーは、例えば、溶媒としてエタノール及び噴射剤の混合物を使用して、活性剤の溶液または懸濁液を含有してもよく、それは、加えて、滑沢剤、例えば、トリオレイン酸ソルビタンを含有してもよい。吸入器または注入器で使用するためのカプセル及びカートリッジ（例えば、ゼラチンから作られる）は、本発明の薬剤と、ラクトースまたはデンプンなどの好適な粉末ベースとの粉末混合物を含有するように製剤化されてもよい。
【０２１７】
あるいは、本発明の併用療法は、坐剤もしくはペッサリーの形態で投与され得、またはそれらは、ローション、溶液、クリーム、ゲル、軟膏、もしくは粉剤の形態で局所に適用されてもよい。本発明の薬剤、医薬品、及び薬学的組成物はまた、例えば、皮膚パッチを使用することによって経皮投与されてもよい。それらはまた、特に、眼の疾病を治療するために、眼の経路によって投与されてもよい。
【０２１８】
眼の使用のために、本発明の併用療法は、等張性のｐＨ調節された無菌食塩水中の微粉化懸濁液として、または好ましくは、等張性のｐＨ調節された無菌食塩水中の溶液として、任意に、塩化ベンジルアルコニウムなどの保存剤と組み合わせて製剤化され得る。あるいは、それらは、ペトロラタムなどの軟膏中で製剤化されてもよい。
【０２１９】
皮膚への局所適用のために、本発明の併用療法は、例えば、以下、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン剤、乳化ワックス、及び水のうちの１つ以上との混合物中で懸濁または溶解された活性剤を含有する好適な軟膏として製剤化され得る。あるいは、それらは、例えば、以下、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリエチレングリコール、流動パラフィン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、及び水のうちの１つ以上との混合物中で懸濁または溶解された好適なローションまたはクリームとして製剤化され得る。
【０２２０】
口内の局所投与に好適な製剤としては、風味付けされた基剤、通常はスクロース及びアカシアまたはトラガカント中に活性成分を含むドロップ、ゼラチン及びグリセリンまたはスクロース及びアカシアなどの不活性基剤、例えばゼラチン及びグリセリンまたはスクロース及びアカシア中に活性成分を含むトローチ、ならびに好適な液体担体中に活性成分を含むマウスウォッシュが挙げられる。
【０２２１】
概して、ヒトにおいて、腫瘍部位における、またはその近くの本発明の併用療法の局所投与、具体的に腫瘍内または周辺投与は、好ましい経路である。
【０２２２】
獣医学での使用に対して、本発明の併用療法は、通常の獣医学の慣行に従って好適に許容される製剤として投与され、獣医は、特定の動物に対して最も適切である投与計画及び投与経路を決定する。
【０２２３】
本発明の実施形態としては以下が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２２４】
Ａ．対象における固形腫瘍を治療するための方法であって、（ａ）対象に、ＣＤ４０に特異的に結合し、かつ投与後に腫瘍部位において保持される、治療有効量の抗体またはその抗原結合部分を投与することと、任意に（ｂ）対象に、治療有効量の追加の治療薬を全身投与することと、を含む、方法。
【０２２５】
Ｂ．ステップ（ｂ）の追加の治療薬は、抗ＣＤ４０抗体ではない、癌の治療のための免疫療法薬である、実施形態Ａに記載の方法。
【０２２６】
Ｃ．該免疫療法薬は、ＰＤ１阻害剤であり、任意に、該ＰＤ１阻害剤は、抗ＰＤ１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、実施形態ｂに記載の方法。
【０２２７】
Ｄ．固形腫瘍は、腺腫、芽腫、癌腫、類腱腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、内分泌腺腫瘍、胚細胞腫瘍、リンパ腫、肉腫、ウィルムス腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、リンパ腫瘍、乳房腫瘍、または黒色腫である、実施形態Ａ〜Ｃのいずれか１つに記載の方法。
【０２２８】
Ｅ．固形腫瘍は、黒色腫、好ましくは転移性黒色腫である、実施形態Ａ〜Ｄのいずれか１つに記載の方法。
【０２２９】
Ｆ．ステップ（ａ）の抗体は、配列番号１、２、３、４、５、及び６から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む、実施形態Ａ〜Ｅのいずれか１つに記載の方法。
【０２３０】
Ｇ．ステップ（ａ）の抗体は、配列番号１、２、及び３、ならびに／または配列番号４、５、及び６のＣＤＲ配列を含む、実施形態Ａ〜Ｆのいずれか１つに記載の方法。
【０２３１】
Ｈ．ステップ（ａ）の抗体は、配列番号７の軽鎖可変領域及び／または配列番号８の重鎖可変領域を含む、実施形態Ａ〜Ｇのいずれか１つに記載の方法。
【０２３２】
Ｉ．ステップ（ａ）の抗体は、配列番号１１の軽鎖定常領域及び／または配列番号１２の重鎖定常領域を含む、実施形態Ａ〜Ｈのいずれか１つに記載の方法。
【０２３３】
Ｊ．ステップ（ａ）の抗体は、ヒトＣＤ４０への結合に対して、配列番号７の軽鎖可変領域及び／または配列番号８の重鎖可変領域を含む抗体と競合する、実施形態Ａ〜Ｉのいずれか１つに記載の方法。
【０２３４】
Ｋ．ステップ（ａ）及び（ｂ）は、同時に実施されるか、またはステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）の２４時間〜２週間後、ステップ（ａ）の２４時間〜１週間後、ステップ（ａ）の２４時間〜７２時間後、もしくはステップ（ａ）の２４時間〜４８時間後に実施される、実施形態Ａ〜Ｊのいずれか１つに記載の方法。
【０２３５】
Ｌ．ステップ（ａ）は、腫瘍部位への抗体の局所投与を含み、任意に、抗体は、局所投与に好適な組成物として、少なくとも１つの薬学的に許容される希釈剤もしくは担体と共に製剤化され、かつ／または抗体は、追加の治療部分に共役される、実施形態Ａ〜Ｋのいずれか１つに記載の方法。
【０２３６】
Ｍ．ステップ（ａ）において投与される抗体の量の少なくとも３０％が、投与の４時間後に腫瘍部位において保持され、好ましくは、該量の少なくとも４０％が、投与の４時間後に腫瘍部位において保持される、実施形態Ａ〜Ｌのいずれか１つに記載の方法。
【０２３７】
Ｎ．ステップ（ｂ）の追加の治療薬は、全身投与に好適な組成物として、少なくとも１つの薬学的に許容される希釈剤または担体と共に製剤化される、実施形態Ａ〜Ｍのいずれか１つに記載の方法。
【０２３８】
Ｏ．ステップ（ａ）は、複数の別々の時機に実施され、ステップ（ｂ）は、追加の治療薬への対象の曝露が方法の継続時間にわたって連続的であるように実施される、実施形態Ａ〜Ｎのいずれか１つに記載の方法。
【０２３９】
Ｐ．対象は、ヒトである、実施形態Ａ〜Ｏのいずれか１つに記載の方法。
【０２４０】
Ｑ．対象における固形腫瘍を治療するためのキットであって、キットは、（ａ）ＣＤ４０に特異的に結合し、かつ投与後に腫瘍部位において保持される、治療有効量の抗体と、任意に（ｂ）対象への全身投与に好適である治療有効量の追加の治療薬と、を含む、キット。
【０２４１】
Ｒ．対象における固形腫瘍の治療で使用するための、ＣＤ４０に特異的に結合し、かつ投与後に腫瘍部位において保持されることが可能である抗体またはその抗原結合部分。
【０２４２】
Ｓ．追加の治療薬（複数可）は、抗ＣＤ４０抗体ではない、１つ以上の追加の治療薬と組み合わせて使用するための、実施形態Ｒに記載の抗体またはその抗原結合部分。
【０２４３】
Ｔ．該追加の治療薬は、従来の放射線治療剤、経路阻害剤（チロシンキナーゼ阻害剤またはセリン／トレオニンキナーゼ阻害剤など）、サイトカイン（ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、またはＩＬ−２１など）、化学療法薬、及び免疫療法薬からなる群から選択される癌治療である、実施形態Ｓに記載の抗体またはその抗原結合部分。
【０２４４】
Ｕ．以下の追加の治療薬、
（ｉ）抗ＰＤ１免疫療法薬、
（ｉｉ）抗ＣＴＬＡ−４免疫療法薬、
（ｉｉｉ）抗ＯＸ４０免疫療法薬、及び／または
（ｉｖ）抗ＣＤ１３７免疫療法薬、のうちの１つ以上と組み合わせて使用するための、請求項実施形態ＳまたはＴに記載の抗体またはその抗原結合部分。
【０２４５】
Ｖ．該免疫療法薬は、ＰＤ１阻害剤であり、任意に、該ＰＤ１阻害剤は、抗ＰＤ１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、実施形態ＴまたはＵに記載の抗体またはその抗原結合部分。
【０２４６】
Ｗ．固形腫瘍は、腺腫、芽腫、癌腫、類腱腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、内分泌腺腫瘍、胚細胞腫瘍、リンパ腫、肉腫、ウィルムス腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、リンパ腫瘍、乳房腫瘍、または黒色腫である、実施形態Ｒ〜Ｖのいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分。
【０２４７】
Ｘ．固形腫瘍は、黒色腫、好ましくは転移性黒色腫である、実施形態Ｒ〜Ｗのいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分。
【０２４８】
Ｙ．配列番号１、２、３、４、５、及び６から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む、請求項実施形態Ｒ〜Ｘのいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分。
【０２４９】
Ｚ．配列番号１、２、及び３、ならびに／または配列番号４、５、及び６のＣＤＲ配列を含む、実施形態Ｒ〜Ｙのいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分。
【０２５０】
ＡＡ．配列番号７の軽鎖可変領域及び／または配列番号８の重鎖可変領域を含む、実施形態Ｒ〜Ｚのいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分。
【０２５１】
ＢＢ．配列番号１１の軽鎖定常領域及び／または配列番号１２の重鎖定常領域を含む、実施形態Ｒ〜ＡＡのいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分。
【０２５２】
ＣＣ．抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＣＤ４０への結合に対して、配列番号７の軽鎖可変領域及び／または配列番号８の重鎖可変領域を含む抗体と競合する、実施形態Ｒ〜ＢＢのいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分。
【０２５３】
ＤＤ．抗体は、局所投与に好適な組成物として、少なくとも１つの薬学的に許容される希釈剤もしくは担体と共に製剤化され、かつ／または抗体は、追加の治療部分に共役される、実施形態Ｒ〜ＣＣのいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分。
【０２５４】
ＥＥ．実施形態Ｒ〜ＤＤのいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分と、１つ以上の追加の治療薬（複数可）と、を含む、併用療法組成物であって、追加の治療薬（複数可）は、抗ＣＤ４０抗体ではない、併用療法組成物。
【０２５５】
ＦＦ．該追加の治療薬は、従来の放射線治療剤、経路阻害剤（チロシンキナーゼ阻害剤またはセリン／トレオニンキナーゼ阻害剤など）、サイトカイン（ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、またはＩＬ−２１など）、化学療法薬、及び免疫療法薬からなる群から選択される癌治療である、実施形態ＥＥに記載の併用療法組成物。
【０２５６】
ＧＧ．
（ｉ）抗ＰＤ１免疫療法薬、
（ｉｉ）抗ＣＴＬＡ−４免疫療法薬、
（ｉｉｉ）抗ＯＸ４０免疫療法薬、及び／または
（ｉｖ）抗ＣＤ１３７免疫療法薬を含む、実施形態ＥＥまたはＦＦに記載の併用療法組成物。
【０２５７】
ＨＨ．該免疫療法薬は、ＰＤ１阻害剤であり、任意に、該ＰＤ１阻害剤は、抗ＰＤ１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、実施形態ＥＥ〜ＧＧのいずれか１つに記載の併用療法組成物。
ＩＩ．対象における固形腫瘍の治療のための医薬品の調製における、実施形態Ｒ〜ＤＤのいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分の使用。
【０２５８】
本発明は、以下の実施例によってさらに例示され、それらは、さらに限定するものと解釈されるべきではない。全ての図面、ならびに本願全体を通して列挙される全ての参考文献、特許、及び特許出願公開の内容は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【実施例】
【０２５９】
実施例１−配列情報
抗ＣＤ４０抗体クローンＧ１２（抗体ＡＤＣ−１０１３）
（ａ）ＣＤＲ配列（ＩＭＧＴ番号付けに従って定義され、コアＣＤＲ配列は、その中で下線が引かれる）
ＶＬ  ＣＤＲ１：ＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＮＶＹ    ［配列番号１］、
ＶＬ  ＣＤＲ２：ＧＮＩＮＲＰＳ                    ［配列番号２］、
ＶＬ  ＣＤＲ３：ＣＡＡＷＤＫＳＩＳＧＬＶ          ［配列番号３］、
ＶＨ  ＣＤＲ１：ＧＦＴＦＳＴＹＧＭＨ              ［配列番号４］、
ＶＨ  ＣＤＲ２：ＧＫＧＬＥＷＬＳＹＩＳＧＧＳＳＹＩＦＹＡＤＳＶＲＧＲ  ［配列番号５］、
ＶＨ  ＣＤＲ３：ＣＡＲＩＬＲＧＧＳＧＭＤＬ        ［配列番号６］
【０２６０】
（ｂ）可変領域配列
可変軽鎖（ＶＬ）アミノ酸配列−配列番号７
【化１】
0006654187.tif 000004
可変重鎖（ＶＨ）アミノ酸配列−配列番号８
【化２】
0006654187.tif 000005
可変軽鎖（ＶＬ）ヌクレオチド配列−配列番号９
ＣＡＧＴＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＡＧＣＧＴＣＴＧＧＧＡＣＣＣＣＣＧＧＧＣＡＧＡＧＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＴＧＣＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＡＣＡＴＣＧＧＧＧＣＧＧＧＴＴＡＣＡＡＴＧＴＡＴＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＣＴＣＣＣＡＧＧＡＡＣＧＧＣＣＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＡＡＣＡＴＣＡＡＴＣＧＧＣＣＣＴＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＣＴＧＧＣＣＡＴＣＡＧＴＧＧＧＣＴＣＣＧＧＴＣＣＧＡＧＧＡＴＧＡＧＧＣＴＧＡＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＧＣＡＴＧＧＧＡＴＡＡＧＡＧＣＡＴＴＴＣＴＧＧＴＣＴＧＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＧＧＴＣＣＴＡＧＧＴ
可変重鎖（ＶＨ）ヌクレオチド配列−配列番号１０
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＴＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＣＴＴＡＴＧＧＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＴＴＣＡＴＡＴＡＴＴＡＧＴＧＧＴＧＧＴＡＧＴＡＧＴＴＡＣＡＴＴＴＴＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＡＧＴＧＡＧＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＣＴＣＣＧＡＧＡＡＣＧＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＡＴＡＴＴＡＡＧＡＧＧＣＧＧＧＡＧＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＧＡＧＣＴＣＡ
【０２６１】
（ｃ）例示的な定常領域アミノ酸配列
ヒトＩｇラムダ軽鎖Ｃ２領域（ＮＣＢＩ  ＡＡＡ５９１０７．１）−配列番号１１
ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
ヒトＩｇガンマ−１重鎖定常領域（Ｕｎｉｐｒｏｔ  Ｐ０１８５７．１）−配列番号１２
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ヒトＣＤ４０配列−配列番号１３
＞ｇｉ｜１１７６０６５６０｜ｇｂ｜ＡＢＫ４１９３７．１｜ＣＤ４０分子、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー５［ホモ・サピエンス］
ＭＶＲＬＰＬＱＣＶＬＷＧＣＬＬＴＡＶＨＰＥＰＰＴＡＣＲＥＫＱＹＬＩＮＳＱＣＣＳＬＣＱＰＧＱＫＬＶＳＤＣＴＥＦＴＥＴＥＣＬＰＣＧＥＳＥＦＬＤＴＷＮＲＥＴＨＣＨＱＨＫＹＣＤＰＮＬＧＬＲＶＱＱＫＧＴＳＥＴＤＴＩＣＴＣＥＥＧＷＨＣＴＳＥＡＣＥＳＣＶＬＨＲＳＣＳＰＧＦＧＶＫＱＩＡＴＧＶＳＤＴＩＣＥＰＣＰＶＧＦＦＳＮＶＳＳＡＦＥＫＣＨＰＷＴＳＣＥＴＫＤＬＶＶＱＱＡＧＴＮＫＴＤＶＶＣＧＰＱＤＲＬＲＡＬＶＶＩＰＩＩＦＧＩＬＦＡＩＬＬＶＬＶＦＩＫＫＶＡＫＫＰＴＮＫＡＰＨＰＫＱＥＰＱＥＩＮＦＰＤＤＬＰＧＳＮＴＡＡＰＶＱＥＴＬＨＧＣＱＰＶＴＱＥＤＧＫＥＳＲＩＳＶＱＥＲＱ
実施例２−局所または全身投与後のバイオアベイラビリティ
【０２６２】
カニクイザル及びマウスにおいて全臨床研究を実施して、腫瘍周辺、腫瘍内、または静脈内投与後のＡＤＣ−１０１３のバイオアベイラビリティを研究した。
材料及び方法
【０２６３】
ヒトＣＤ４０陰性膀胱癌細胞であるＭＢ４９が接種されたヒトＣＤ４０陽性トランスジェニックマウスモデルにおいて、ＡＤＣ−１０１３の薬物動態を評価した。ＡＤＣ−１０１３を１００μｇの用量で腫瘍内（ＩＴ）、腫瘍周辺（ＰＴ）、または静脈内（ＩＶ）注射し、処置前ならびに処置の４時間後及び２４時間後に、血清を採取した。薬物動態プロファイル（図１）は、投与の４時間後のＡＤＣ−１０１３の全身曝露が、ＩＶと比較して、ＩＴまたはＰＴ投与後に１００〜１０００倍低減されることを示す。
【０２６４】
皮下または静脈内経路を介して、カニクイザルをＡＤＣ−１０１３に曝露した。ここでの皮下投与は、黒色腫への局所投与と類似する。
結果及び結論
【０２６５】
以下の時点、投与前、ならびに投与の１５分、及び２、６、２４、４８、７２、９６、及び１６８時間後における毒物動態解析のために、全ての動物から血液試料を採取し、ＡＤＣ１０１３のレベルを測定した（図２）。平均曲線下面積（ＡＵＣ−９６）に基づく皮下投与後のＡＤＣ１０１３のバイオアベイラビリティを計算した。皮下投与対静脈内投与に対するＡＵＣ−９６は、２８％〜４２％に及び、２８％〜４２％の全身バイオアベイラビリティを示した。
【０２６６】
これらの観察を、実施例３に開示されるようなＢ１６．Ｆ１０マウスモデルにおける免疫療法抗体の投与の組み合わせの用量レベルを決定することにおいて適用した。
実施例３−インビボマウス黒色腫モデル
【０２６７】
Ｂ１６．Ｆ１０は、臨床前マウスモデルにおける黒色腫のためのモデルとして最も頻繁に使用される腫瘍細胞株である（Ｇｒｏｓｓｏ  ２０１３  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  Ｒｅｖｉｅｗ）。マウスＢ１６．Ｆ１０黒色腫細胞株は、それが低レベルでＭＨＣを発現させ、かつ低免疫原性であると見なされるため、ヒト黒色腫とよく比較される（Ｌｅｃｈｎｅｒ  Ｊ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２０１３）。低ＭＨＣレベルは、例えば、不十分なＴ細胞活性化と関連し得、そのような腫瘍の免疫療法での治療をより困難にする可能性がある。Ｂ１６．Ｆ１０の翻訳の関連性を増加させるために、細胞株をヒトＣＤ４０でトランスフェクトした。トランスフェクトした株（Ｂ１６．Ｆ１０（ｈＣＤ４０＋）と称される）をこれらの実験に使用した。
材料及び方法
【０２６８】
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から、黒色腫細胞株Ｂ１６．Ｆ１０を得た。ヒトＣＤ４０を含有する線形化ベクターでＢ１６．Ｆ１０をトランスフェクトすることによって、かつリポフェクタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用することによって、ｈＣＤ４０発現株Ｂ１６．Ｆ１０（ｈＣＤ４０＋）を得た。ベクターは、ネオマイシン耐性を与える要素を含有した。トランスフェクトした細胞を、ＤＭＥＭ（４．５ｇ／Ｌのグルコース、ウルトラグルタミンＩ、及びピルビン酸ナトリウムを含有する）、１０％ＦＣＳ、ヘペス、及び１ｍｇ／ｍＬのＧ４１８中で培養して、安定したトランスフェクタントを選択した。ＣＤ４０ビオチン及び磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して、ＣＤ４０陽性クローンを選択した。フローサイトメトリーによって測定された、検証されたｈＣＤ４０発現を有する単一のクローンを選択した（クローン５．Ｇ１２．４６）。
【０２６９】
０日目（Ｄ０）に、対数期に増殖するＢ１６．Ｆ１０（ｈＣＤ４０＋）を、１００μＬの体積で、ｈＣＤ４０トランスジェニックマウス（ｈＣＤ４０Ｔｇ）の右脇腹に皮下注射した。平均細胞接種数は、１マウス当たり０．１×１０６個であった。デジタルキャリパーを用いて、腫瘍増殖の幅、長さ、及び高さを測定し、腫瘍体積を計算した（幅／２×長さ／２×高さ／２×π×（４／３））。処置を３、６、及び９日目に施した。ＡＤＣ−１０１３を腫瘍内投与し（２０μＬ、１用量当たり１００μｇ）、抗ＰＤ−１（Ｃｌｏｎｅ  ＲＰＭ１−１４、ＢｉｏＸｃｅｌｌ）を腹腔内投与した（１００μＬ、１用量当たり２５０μｇ）。
結果及び結論
【０２７０】
トランスフェクトしたＢ１６．Ｆ１０（ｈＣＤ４０＋）黒色腫細胞株は、図３Ａに示されるように、ヒトＣＤ４０の実質的な発現を示した。皮下Ｂ１６．Ｆ１０（ｈＣＤ４０＋）黒色腫を有するｈＣＤ４０ｔｇマウスにおいて、生存（図４Ａ）及び最初のマウスを屠殺した日における腫瘍体積（図４Ｂ）によって、ＡＤＣ−１０１３の抗腫瘍効果を決定した。ＡＤＣ−１０１３は、増加した生存時間及び減少した腫瘍体積によって測定される腫瘍増殖の有意な減少を示した。ＡＤＣ−１０１３及び抗ＰＤ−１抗体の組み合わせで動物を処置することによって、抗腫瘍有効性は増加した。
実施例４−インビボマウス膀胱癌モデル
材料及び方法
【０２７１】
ＭＢ４９膀胱癌細胞を使用して、８週齢の雌ｈＣＤ４０Ｔｇマウス上で腫瘍を引き起こした。０日目、０．２５×１０６個の腫瘍細胞を、マウスの右脇腹に皮下接種した。１４日目、試験抗ＣＤ４０抗体の腫瘍内注射または腹腔内注射のいずれかを、マウスに行った（１匹のマウス当たり合計で１ｕｇ及び３０ｕｇの抗体、またはＰＢＳ、１群当たり４匹のマウス）。１６日目、頚椎脱臼によって４０匹のマウスを屠殺した。腫瘍排出リンパ節を完全培地に採取し、各実験群からの２つの腫瘍またはリンパ節を一緒に混合した。Ｌｉｂｅｒａｓｅ  ＴＬ（Ｒｏｃｈｅ）及びナイロンネットフィルタ（１００μｍ、Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、採取した組織を酵素的かつ機械的に均質化した。３〜１０ｍＭのＥＤＴＡ及び０．１％ウシ胎児血清を含有するＲＰＭＩ培地で、膜を十分に洗浄して、単細胞懸濁液を調製した。０．５％ウシ血清アルブミンを含有するＰＢＳ中で、単離した細胞を洗浄し、マウス抗ＣＤ１６／３２（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で細胞を処置することによって、非特異的Ｆｃ結合を遮断した。
【０２７２】
フローサイトメトリーによって、ＣＤ１１ｃ陽性細胞及びＣＤ１１ｂ陽性細胞上で、ＣＤ８６発現レベル（活性化に対するマーカーとして）を別々に分析した。ＣＤ１１ｃは、樹状細胞に対するマーカーである。ＣＤ１１ｂは、単球、マクロファージ、及び樹状細胞のサブセット上に発現される。ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ  ｆｉｘａｂｌｅ  ｓｔａｉｎ  ＦＶＳ４５０（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で、細胞を染色し、ＣＤ１１ｃ−ＰＥ、ＣＤ１１ｂ−ＰＥＣｙ７、及びＣＤ８６−ＡＰＣ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に特異的な抗体を１：１００で希釈した。染色後、Ｃｅｌｌｆｉｘ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して、全ての細胞をパラホルムアルデヒド固定した。各試料に対する染色を測定し、ＣＤ８６（試料）−ＦＭＯ（試料）として計算し、陽性細胞％−ＰＢＳ対照として示した。ＦＡＣＳ  Ｖｅｒｓｅ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）及びＦｌｏｗＪｏ  ｖＸ解析ソフトウェアを使用して、染色した細胞を解析した。結果は、図５Ａ（ＣＤ１１ｃ細胞）及び５Ｂ（ＣＤ１１ｂ細胞）に示される。
結果及び結論
【０２７３】
図５Ａ中のデータは、抗ＣＤ４０抗体での処置が、腫瘍におけるＣＤ８６発現によって測定された樹状細胞の活性化を増加させたことを示す。図ＢＡ中のデータは、抗ＣＤ４０抗体での処置が、腫瘍におけるＣＤ８６発現によって測定されたＣＤ１１ｂ陽性細胞の活性化を増加させたことを示す。全体的に、腹腔内（ＩＰ）処置と比較して、腫瘍内（ＩＴ）処置後に、より強い活性化が得られる。腫瘍内（ＩＴ）投与される１μｇの低用量での処置は、樹状細胞の予想外に高い活性化をもたらした。
実施例５−併用療法Ｉのインビボ効果
材料及び方法
【０２７４】
０日目（Ｄ０）に、対数期に増殖するＢ１６．Ｆ１０（ｈＣＤ４０＋）腫瘍細胞株を、１００μＬの体積で、ｈＣＤ４０トランスジェニックマウス（ｈＣＤ４０Ｔｇ）の右脇腹に皮下注射した。細胞接種数は、１マウス当たり０．１×１０６個であった。デジタルキャリパーを用いて、腫瘍増殖の幅、長さ、及び高さを測定し、腫瘍体積を計算した（幅／２×長さ／２×高さ／２×π×（４／３））。処置を３、６、及び９日目に施した。ＡＤＣ−１０１３を腫瘍内投与した（１用量当たり１００μｇ）。抗ＰＤ−１、１用量当たり２５０μｇ（Ｃｌｏｎｅ  ＲＰＭ１−１４、ＢｉｏＸｃｅｌｌ）及び抗ＣＴＬＡ−４抗体、１用量当たり１００μｇ（９Ｄ９、ＢｉｏＸｃｅｌ）を腹腔内注射した。１４日目における腫瘍体積は、図６に示される。
結果及び結論
【０２７５】
ＣＴＬＡ−４を標的化する抗体と組み合わせたＰＤ−１を標的化する抗体での処置が、臨床試験において相加効果を与え得ることが示されている（Ｗｏｌｃｈｏｋ  ｅｔ  ａｌ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄ，２０１３）。この実施例において、我々は、ＣＴＬＡ−４／ＰＤ−１の組み合わせにＡＤＣ−１０１３での処置を加えることが、黒色腫患者における治療効果をさらに高め得ることを示唆する、臨床前データを開示している。１４日目における腫瘍体積の減少によって測定された抗腫瘍効果は、ＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１単独と比較して、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、及びＡＤＣ−１０１３に関して有意により良好であった（図６）。
【０２７６】
臨床状況において、ＣＴＬＡ−４抗体は、イピリムマブ、トレメリムマブ、または他のＣＴＬＡ−４標的化抗体のうちのいずれかであり得る。ＰＤ−１標的化抗体は、ニボルマブもしくはペンブロリズマブなどのヒトＰＤ−１に結合する抗体、またはその他であり得る。それはまた、ドゥバルマブ及びアベルマブなどのＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２標的化抗体など、ＰＤ−１のリガンドに結合する抗体であり得る。
実施例６−併用療法ＩＩのインビボ効果
材料及び方法
【０２７７】
０日目（Ｄ０）に、対数期に増殖するＢ１６．Ｆ１０腫瘍細胞株を、１００μＬの体積で、ｈＣＤ４０トランスジェニックマウス（ｈＣＤ４０Ｔｇ）の右脇腹に皮下注射した。接種細胞数は、１匹のマウス当たり０．１×１０６個であった。デジタルキャリパーを用いて、腫瘍増殖の幅、長さ、及び高さを測定し、腫瘍体積を計算した（幅／２×長さ／２×高さ／２×π×（４／３））。処置を３、６、及び９日目に施した。ＡＤＣ−１０１３、抗ＣＤ１３７（クローンＬｏｂ１２．３）、及び抗ＯＸ４０（ＣＤ８６）抗体、ならびに対照を腫瘍内投与した（１用量当たり１００μｇ）。体積を、図７に示されるように経時的に観察した。
結果及び結論
【０２７８】
ＡＤＣ−１０１３での処置は、対照と比較して、有意な抗腫瘍応答をもたらした。抗腫瘍効果は、ＣＤ１３７及びＯＸ４０を標的化する抗体で得られた抗腫瘍効果よりも大きかった（図７）。ＡＤＣ−１０１３及びＯＸ４０の組み合わせ、ならびにＣＤ１３７とＡＤＣ−１０３の組み合わせは、単剤療法と比較してより強い抗腫瘍効果をもたらした。これは、ＣＤ４０及びＣＤ１３７の組み合わせ、またはＣＤ４０及びＯＸ４０の組み合わせが臨床的利点を有することを示す。
実施例７−マウスにおける野生型Ｂ１６黒色腫に対するＡＤＣ−１０１３の効果
材料及び方法
【０２７９】
Ｂ１６．Ｆ１０．ｈＣＤ４０＋細胞またはＢ１６．Ｆ１０（ｗｔ）細胞（１ｘ１０５）を皮下接種し、３、６、及び９日目に、マウスをＡＤＣ−１０１３で腫瘍内処置した（１用量当たり１００μｇ）。
【０２８０】
この研究のために使用したマウスは、ｈＣＤ４０ｔｇマウスであった。
結果及び結論
【０２８１】
ＡＤＣ−１０１３は、Ｂ１６．Ｆ１０腫瘍においても有意な抗腫瘍効果をもたらす。Ｂ１６．Ｆ１０（ｗｔ）及びＢ１６．Ｆ１０．ｈＣＤ４０＋腫瘍で得られた抗腫瘍効果は、同様であった（図８）。これは、ＡＤＣＣの直接誘導がヒトＣＤ４０陽性黒色腫の治療において役割を果たすことを除外しない。より低い免疫細胞浸潤など、ｈＣＤ４０陽性腫瘍における他の定性的差異がある可能性がある。さらに、Ｂ１６腫瘍上のヒトＣＤ４０レベルは、腫瘍試料上でエクスビボで測定されたように低かった。
実施例８−リンパ腫モデル（Ａ２０）におけるＡＤＣ−１０１３の効果
材料及び方法
【０２８２】
０日目（Ｄ０）に、対数期に増殖するＡ２０リンパ腫細胞株を、１００μＬの体積で、ｈＣＤ４０ｔｇ−ＢａｌｂＣ（Ｆ１）マウスの右脇腹に皮下注射した。ｈＣＤ４０ｔｇ−ＢａｌｂＣ（Ｆ１）マウスを、ｈＣＤ４０ｔｇマウスをＢａｌｂＣマウスと交配させることによって生成した。接種細胞数は、１匹のマウス当たり５×１０６個であった。デジタルキャリパーを用いて、腫瘍増殖の幅、長さ、及び高さを測定し、腫瘍体積を計算した（幅／２×長さ／２×高さ／２×π×（４／３））。ＡＤＣ−１０１３（１用量当たり３０μｇ）を、確立されたリンパ腫腫瘍（Ａ２０）を有するマウスに、１０、１３、及び１６日目に腫瘍周辺投与した。
結果及び結論
【０２８３】
ＡＤＣ−１０１３での処置は、Ａ２０リンパ腫モデルにおいて有意な抗腫瘍効果をもたらす（図９）。このモデルは、ｈＣＤ４０陰性であり、したがって、ここで実証された抗腫瘍効果は、ＡＤＣ−１０１３による免疫細胞の活性化によってのみ引き起こされる。
実施例９−肺癌モデル（ＬＬＣ−１）におけるＡＤＣ−１０１３の効果
材料及び方法
【０２８４】
０日目（Ｄ０）に、対数期に増殖する肺癌細胞株（ＬＬＣ−１）を、１００μＬの体積で、ｈＣＤ４０ｔｇマウスの右脇腹に皮下注射した。細胞接種数は、１マウス当たり０．２５×１０６個であった。デジタルキャリパーを用いて、腫瘍増殖の幅、長さ、及び高さを測定し、腫瘍体積を計算した（幅／２×長さ／２×高さ／２×π×（４／３））。ＡＤＣ−１０１３（１００μｇ）を、確立された腫瘍（ＬＬＣ−１）を有するｈＣＤ４０ｔｇマウスに、４、７、及び１０日目に腫瘍周辺投与した。
結果及び結論
【０２８５】
ＡＤＣ−１０１３での処置は、肺癌モデルにおいて有意な（ｐ＜０．０５、片側マンホイットニーｔ検定）抗腫瘍効果をもたらす（図１０）。このモデルは、ｈＣＤ４０陰性であり、ここで実証された抗腫瘍効果は、ＡＤＣ−１０１３による免疫細胞の活性化によってのみ引き起こされる。
実施例１０−ＡＤＣ−１０１３の局所投与の遠位効果
材料及び方法
【０２８６】
０日目（Ｄ０）に、対数期に増殖するＢ１６．Ｆ１０腫瘍細胞株を、１００μＬの体積で、ｈＣＤ４０トランスジェニックマウス（ｈＣＤ４０Ｔｇ）の右脇腹に皮下注射した。細胞接種数は、１マウス当たり０．１×１０６個であった。デジタルキャリパーを用いて、腫瘍増殖の幅、長さ、及び高さを測定し、腫瘍体積を計算した（幅／２×長さ／２×高さ／２×π×（４／３））。処置を３、６、及び９日目に施した。ＡＤＣ−１０１３及び対照を、右脇腹の腫瘍に腫瘍内投与した（１用量当たり１００μｇ）。注射された腫瘍及び注射されなかった腫瘍の両方の腫瘍体積を、図１１に示されるように経時的に観察した。
結果及び結論
【０２８７】
局所腫瘍内処置はまた、遠位の注射されなかった腫瘍においても抗腫瘍効果をもたらした。１００μｇの用量の処置後の遊離ＡＤＣ−１０１３のレベルは、インビトロアッセイにおいてＡＤＣ−１０１３に対するＥＣ５０をはるかに下回り、注射されなかった腫瘍に対する抗腫瘍効果の一部が、注射された腫瘍範囲内で活性化される免疫細胞の、注射されなかった腫瘍への移動に依存することを示唆する。
【０２８８】
これは、１つの腫瘍に注射されたＡＤＣ−１０１３が、他の注射されなかった腫瘍に対して有意な抗腫瘍効果（例えば、転移）を有することができることを示唆する。
実施例１１−ＡＤＣ−１０１３の全身（ｉｖ）投与の効果
材料及び方法
【０２８９】
０日目（Ｄ０）に、対数期に増殖するＢ１６．Ｆ１０（ｈＣＤ４０＋）腫瘍細胞株を、１００μＬの体積で、ｈＣＤ４０トランスジェニックマウス（ｈＣＤ４０Ｔｇ）の右脇腹に皮下注射した。細胞接種数は、１マウス当たり０．１×１０６個であった。デジタルキャリパーを用いて、腫瘍増殖の幅、長さ、及び高さを測定し、腫瘍体積を計算した（幅／２×長さ／２×高さ／２×π×（４／３））。処置を３、６、及び９日目に施した。ＡＤＣ−１０１３を静脈内投与した（１用量当たり１００μｇ）。
結果及び結論
【０２９０】
ＡＤＣ−１０１３の全身の静脈内投与は、腫瘍増殖に対する顕著な阻害効果をもたらした（図１２）。
実施例１２−併用療法ＩＩＩのインビボ効果
材料及び方法
【０２９１】
雌ＢａｌｂＣマウスに、５×１０６個のＡ２０リンパ腫細胞を皮下接種した。マウスを、５及び８日目に９Ｄ９（抗ＣＴＬＡ−４抗体、ＢｉｏＸｃｅｌ）で腫瘍周辺処置し、かつ５、８、及び１１日目にＴＬＲアゴニストＣｐＧ（１６６８）で腫瘍内処置した。生存を経時的に観察した。
結果及び結論
【０２９２】
９Ｄ９抗体は、チェックポイント受容体ＣＴＬＡ−４を標的化し、ＣｐＧは、Ｔｏｌｌ様受容体９に結合する。ＴＬＲは、樹状細胞などの抗原提示細胞上に発現される膜貫通タンパク質である。ＴＬＲ９のＣｐＧとの連結反応は、樹状細胞の活性化を誘導する。結果は、図１３に示される。
【０２９３】
ＴＬＲ９及びＣＴＬＡ４を標的化する処置の組み合わせの抗腫瘍効果は、ＣｐＧ単独での処置と比較して、抗腫瘍効果の増加をもたらさない。したがって、データは、チェックポイント阻害剤と組み合わせて樹状細胞を活性化する処置の組み合わせが必ずしも抗腫瘍効果の増加をもたらすわけではないことを示す。
【０２９４】
したがって、本発明の併用療法の有効性は、予測または合理的に予想され得なかったであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【配列表】
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