(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の急性増悪を、それを必要とする被験者において処置するための、抗ＩＬ−２０Ｒβ抗体含む、医薬組成物。
【請求項２】
前記ＣＯＰＤの急性増悪が、細菌感染によって、ウイルス感染によって、又は大気汚染によって引き起こされる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記細菌感染が、肺炎レンサ球菌（Streptococcus pneumoniae）、インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）、又はモラクセラ・カタラーリス（Moraxella catarrhalis）に起因する、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記被験者が、ＣＯＰＤの急性増悪を体験したか、又はＣＯＰＤの急性増悪を体験するリスクにある、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記被験者が、頻回増悪患者である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記処置が、予防的処置である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記抗ＩＬ−２０Ｒβ抗体が、気道に送達される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記抗ＩＬ−２０Ｒβ抗体が、抗ウイルス剤又は抗菌剤と組み合わせて被験者に投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、慢性閉塞性肺疾患の急性増悪の処置のための方法及び医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は深刻であり、且つ増加しつつある地球規模の健康問題である。２０２０年までに、ＣＯＰＤは世界中で最も一般的な死因の第６位（現在）から第３位に増加するであろう。米国では、ＣＯＰＤは１年当たり１２０，０００の死亡数にまで該当すると考えられる。ＣＯＰＤの臨床経過は、病原体、吸入された刺激物質（たとえば、タバコ煙）、アレルゲン、又は汚染物質への曝露を含む様々な刺激によって引き起こされ得る間欠的な急性増悪を伴う慢性障害により特徴付けられる。「急性増悪」とは、正常な日差変動を超え、発症が急性である、被験者（subject）自身の普通の状態からのＣＯＰＤ症状の悪化を称する。急性ＣＯＰＤの増悪は、ＣＯＰＤの被験者の健康及び生活の質に大幅に影響を及ぼす。ＣＯＰＤの急性増悪は、本疾患の関連する実質的な社会経済的コストの高まりを主として担うものである。複数の研究で、事前増悪（prior exacerbation）は、ＣＯＰＤで将来入院することに対しては独立した危険因子であることも示されている。結論としてＣＯＰＤの増悪は、被験者に対するそれらの長期の有害作用、疾患進行の促進、及び医療費高騰の点で極めて重要である。しかしながら現在に至るまで、ＣＯＰＤの急性増悪の処置のための方法はない。
【０００３】
それらの遺伝子及びタンパク質構造に基づき、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０及びＩＬ−２４は、ＩＬ−１０サイトカインファミリーでサブファミリー、すなわちＩＬ−２２に非常に近縁のＩＬ−２０サイトカイン類を形成している。ＩＬ−１９及びＩＬ−２０は、上皮細胞及び抗原提示細胞上に存在するＩＬ−２０Ｒ１及びＩＬ−２０Ｒ２鎖からなるレセプター複合体を介して作用する。ＩＬ−２０及びＩＬ−２４はさらに、第二レセプター複合体（ＩＬ−２２Ｒ１／ＩＬ−２０Ｒ２）を介してシグナル伝達することができる。近年の報告で、ＩＬ−２０サイトカイン類は、乾癬、関節リウマチ、アテローム性動脈硬化症、虚血性発作、及び腎不全などの炎症性疾患に関わる炎症誘発性サイトカインとして機能することが示されている。このサイトカインファミリーは、上皮細胞の成長及び分化に影響を及ぼすが、いくつかのケモカイン、抗微生物ペプチド及び成長因子の誘導も行う。それらの起源及びそれらの特性を考えると、これらのサイトカインはおそらく、粘膜免疫及び創傷治癒の際の免疫細胞と常在細胞との間のクロストークをコントロールする。しかしながらＩＬ−２０サイトカイン類の役割は、ＣＯＰＤの急性増悪において全く精査されていない。
【０００４】
［課題を解決するための手段］
本発明は、慢性閉塞性肺疾患の急性増悪の処置のための方法及び医薬組成物に関する。特に、本発明は請求項によって規定される。
【０００５】
［発明を実施するための形態］
細菌感染は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を含む肺の炎症性障害における疾患増悪の主因である。本疾患において、細菌感受性はＴｈ１７サイトカインの欠陥に関連し、一方ＩＬ−２０サイトカイン類が肺において過剰発現されている。平行して、ＩＬ−２０サイトカイン類に対する免疫抑制の役割は、感染への感受性を改変するような治療ターゲットとなり得る感染時に確認される。
【０００６】
したがって、本発明は、慢性閉塞性肺疾患の急性増悪を、それを必要とする被験者において処置する方法であって、被験者にＩＬ−２０サイトカイン類のアンタゴニストの治療上有効量を投与することを含む方法に関する。
【０００７】
本願明細書で使用する場合、「急性増悪」の用語は、当該技術分野における一般的な意味を有し、正常な日差変動を超え、発症が急性である、被験者の自身の普通の状態からのＣＯＰＤ症状の悪化を称する。典型的には、ＣＯＰＤの急性増悪は、呼吸困難の悪化、痰の生成増加、痰膿の増加、痰の色の変化、咳嗽の増加、風邪及び咽喉痛を含む上気道症状、喘鳴の増加、胸部絞扼感、運動耐性の低下、疲労、体液貯留、及び急性錯乱から選択される１以上の症状を呈し、本発明の方法は、前記症状の１以上の頻度、重症度又は継続期間を低減することを含む。急性増悪には種々の病因があり得るが、典型的にはウイルス感染、細菌感染、又は大気汚染によって引き起こされ得る。たとえば、急性増悪のおよそ５０％は細菌、肺炎レンサ球菌（Streptococcus pneumoniae）、インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）、及びモラクセラ・カタラーリス（Moraxella catarrhalis（それらすべてが、肺炎を引き起こす）に主に起因するものである。ＣＯＰＤの被験者における急性増悪に関連するウイルス性病原体としては、ライノウイルス、インフルエンザ、パラインフルエンザ、コロナウイルス、アデノウイルス、及び呼吸器多核体ウイルスが挙げられる。
【０００８】
いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤの急性増悪は細菌感染によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤの急性増悪はウイルス感染によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤの急性増悪は大気汚染によって引き起こされる。
【０００９】
いくつかの実施形態では、被験者は、ＣＯＰＤの急性増悪を体験したか、又はＣＯＰＤの急性増悪を体験するリスクにある。いくつかの実施形態では、被験者は過去２４カ月に少なくとも１回のＣＯＰＤの急性増悪を体験している。一つの特定の実施形態では、被験者は過去１２カ月に少なくとも１度のＣＯＰＤの急性増悪を体験している。いくつかの実施形態では、被験者は増悪患者（exacerbator）である。本願明細書で使用する場合「頻回増悪患者」の用語は、ＣＯＰＤに罹患するか又はその処置を受けており、且つ１２カ月の間に少なくとも２回、より典型的には３回以上の急性増悪を体験している被験者を称する。
【００１０】
いくつかの実施形態では、「処置すること」とは、ヒトにおいて、ＣＯＰＤの急性増悪を処置すること、ＣＯＰＤの急性増悪の頻度、継続期間又は重症度を低減すること、ＣＯＰＤの急性増悪の１以上の症状を処置すること、ＣＯＰＤの急性増悪の１以上の症状の頻度、継続期間又は重症度を低減すること、ＣＯＰＤの急性増悪の発生を防止すること、又はＣＯＰＤの急性増悪の１以上の症状の発生を防止することを称する。頻度、継続期間又は重症度の低減は、本発明の方法にかかる処置を受けていない、同じヒトにおける急性増悪又は症状の頻度、継続期間又は重症度に対するものである。急性増悪の頻度、継続期間若しくは重症度又は急性増悪の１以上の症状の低減は、ＣＯＰＤ被験者を処置する経験がある、通常の知識を有する臨床医による臨床的観察によって、又は処置を受けている被験者による主観的な自己評価によって測定され得る。通常の知識を有する臨床医による臨床的観察としては、肺機能や、被験者を最も好適な状態に維持するために介入が必要とされる頻度、並びに被験者を最も好適な状態に維持するために必要とされる入院の頻度及び入院期間の、客観的計測を挙げることができる。典型的には、被験者による主観的な自己評価は、業界で認知され、且つ／又はＦＤＡで認可された被験者報告アウトカム（ＰＲＯ）ツールを用いて集められる。このようなツールは、被験者が具体的な症状又は生活の質の他の主観的な指標を評価すること可能とし得る。１つの被験者報告アウトカムツールの例は、Exacerbations from Pulmonary Disease Tool（ＥＸＡＣＴ−ＰＲＯ）であり、これが現在、ＦＤＡと協議して製薬産業スポンサー連合と共にUnited BioSource Corporationによって、急性細菌性増悪における臨床的応答を評価するために開発されているところである。
【００１１】
いくつかの実施形態では、前記処置は予防的処置である。本願明細書で使用する場合、「予防的処置」の用語は、その目的が疾患を防止することである、任意の医療手順又は公衆衛生手順を称する。本願明細書で使用する場合、「防止する」、「防止」及び「防止すること」の用語は、所定の状態がもたらされる若しくはそれを患うリスクの低減、又は罹病していないが当該疾患の被験者であるかそれに近い被験者における当該状態若しくは再発の低減若しくは阻害を称する。
【００１２】
本願明細書で使用する場合、「ＩＬ−２０サイトカイン類」の用語は、当該技術分野における一般的な意味を有し、ＩＬ−１９（例示ヒトＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿７１５６３９．１）、ＩＬ−２０（例示ヒトＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０６１１９４．２）及びＩＬ−２４（例示ヒトＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００６８４１．１）を含むＩＬ−１０サイトカインファミリーのサブファミリーを称する。ＩＬ−２０サイトカイン類は、ＩＬ−２２に非常に近縁である。ＩＬ−１９及びＩＬ−２０は、上皮細胞及び抗原提示細胞上に存在するＩＬ−２０Ｒ１及びＩＬ−２０Ｒ２鎖からなるレセプター複合体を介して作用する。ＩＬ−２０及びＩＬ−２４はさらに、第二レセプター複合体（ＩＬ−２２Ｒ１／ＩＬ−２０Ｒ２）を介してシグナル伝達することができる。ＩＬ−２０サイトカイン類に対するヒトレセプターの例としては、ｈＩＬ−２０Ｒ１（ＣＲＦ２−８としても知られる；ＩＬ−２０ＲＡ；ＩＬ−２０Ｒ−α）（例示ヒトＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０５５２４７．３）、ｈＩＬ−２０Ｒ２（ＩＬ−２０ＲＢとしても知られる；ＩＬ−２０Ｒ−β）（例示ヒトＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿６５３３１８．２）及びｈＩＬ−２２Ｒ１（例示ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０６７０８１．２）が挙げられる。より具体的には、ＩＬ−２０サイトカイン類に対するヒトレセプターの配列は、たとえば、米国特許第６，６１０，２８６号；７，１２２，６３２号；７，３９３，６８４号；及び７，５３７，７６１号；並びに米国特許出願公開第２００６／０２６３８５Ａ１号；２００６／０２６３８５１Ａ１号；２００８／０２４７９４５Ａ１号、及び２００９／００７４６６１Ａ１号に報告されている。
【００１３】
本願明細書に記載される方法において使用されるべき「ＩＬ−２０サイトカイン類のアンタゴニスト」は、ＩＬ−２０サイトカイン類に対する細胞応答の誘出及び／又はレセプター結合などの、ＩＬ−２０サイトカイン類のシグナル伝達により媒介される下流の経路を含む、ＩＬ−２０サイトカイン類の生物活性を阻止、抑制、又は低減する（「有意に」を含む）分子である。このように「ＩＬ−２０サイトカイン類のアンタゴニスト」の用語は、いかなる生物学的作用の具体的なメカニズムも含意せず、また直接、間接を問わずＩＬ−２０サイトカイン類とレセプターとのあらゆる可能な薬理学的、生理学的、及び生化学的相互作用を明確に含み、且つ包含すると判断される。本開示の目的のため、「ＩＬ−２０サイトカイン類のアンタゴニスト」の用語は、あらゆる既に同定された条件（terms）、タイトル、並びに機能的状態及び特性で、それによりＩＬ−２０サイトカイン類それら自体、ＩＬ−２０サイトカイン類の生物活性（ＣＯＰＤの急性増悪の間にＩＬ−１７及びＩＬ−２２サイトカインび発現をコントロールするその能力を含むが、これらに限定されない）、又は当該生物活性の結果が、たとえば、実質的にゼロになる、低減する、又は少なくとも２０％、５０％、７０％、８５％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、若しくは５００％又は１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、１０００倍、若しくは１０４倍のいずれの有意義な程度でも中和されるものを包含することは、明示的に理解されるはずである。
【００１４】
ＩＬ−２０サイトカイン類の例示アンタゴニストとしては、ＩＬ−２０サイトカインに対しての抗体、ＩＬ−２０サイトカインに対するアンチセンス核酸分子（ＩＬ−２０をコードする核酸に対するアンチセンス核酸を含む）、ＩＬ−２０サイトカインをコードする核酸に対する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ＩＬ−２０サイトカインをコードする核酸に対するマイクロＲＮＡ、ＩＬ−２０サイトカインのレセプターに対しての抗体（たとえば、ＩＬ−２０Ｒ１、ＩＬ−２０Ｒ２、ＩＬ−２２ＲＩ又はこれにより形成される二量体複合体に特異的に結合する抗体）、ＩＬ−２０サイトカインに対するレセプターのサブユニットに対するアンチセンス核酸分子、ＩＬ−２０サイトカインに対するレセプターのサブユニットをコードする核酸に対するｓｉＲＮＡ又はマイクロＲＮＡが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２０サイトカイン類のアンタゴニストは、ＩＬ−２０サイトカイン又はレセプターに結合して、そのレセプターとサイトカインとの間の複合体の形成を防止し、これによりシグナル伝達経路を阻害する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２０サイトカイン類のアンタゴニストは、ＩＬ−２０サイトカインの合成及び／又は生成（遊離）を阻害又は低減する。
【００１５】
いくつかの実施形態では、本発明のＩＬ−２０サイトカイン類のアンタゴニストは、ＩＬ−２２Ｒ１レセプターに対しての抗体、ＩＬ−２２Ｒ１をコードする核酸に対するアンチセンス核酸分子、ＩＬ−２２Ｒ１レセプターをコードする核酸に対する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ＩＬ−２２Ｒ１レセプターをコードする核酸に対するマイクロＲＮＡではない。このようにして、ＩＬ−２２のシグナル伝達経路は妨害されない。
【００１６】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２０サイトカイン類のアンタゴニストは抗体である。たとえば、本願明細書に開示される抗体は、ヒトＩＬ−２０サイトカイン又はＩＬ−２０サイトカインに対するヒトレセプターのサブユニットの１つ（たとえば、ＩＬ−２０Ｒ１）などのターゲット抗原を特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２０サイトカイン類のアンタゴニストは、抗ＩＬ−１９抗体、抗ＩＬ−２０抗体、抗ＩＬ−２４抗体、抗ＩＬ２０Ｒ１抗体、及び抗ＩＬ２０Ｒ２抗体からなる群より選択される。
【００１７】
ターゲット又はエピトープ（本明細書において互換的に使用される）に「特異的に結合する」抗体は、当該技術分野で良く理解される用語であり、このような特異結合を求める方法もまた当該技術分野で周知である。分子は、代替ターゲットとの場合よりも、特定のターゲット抗原とより頻繁に、より迅速に、より長い継続期間で、及び／若しくはより高親和性でそれが反応するか又は会合すれば、「特異結合」を呈すると称される。抗体は、それが他の物質に結合するよりも高親和性、アビディティーで、より迅速に、及び／又はより長い継続期間で結合すれば、ターゲット抗原に「特異的に結合する」。たとえば、エピトープに特異的に（又は優先的に）結合する抗体は、それがＩＬ−２０サイトカインに存在する他のエピトープ（又はそのレセプターサブユニット）又はＩＬ−２０サイトカインに存在しないエピトープ（又はそのレセプターサブユニット）に結合する場合よりも、より高親和性、アビディティーで、より迅速に、及び／又はより長い継続期間でこのエピトープを結合する抗体である。本定義を読むことにより、たとえば、第一ターゲット抗原に特異的に結合する抗体は、第二ターゲット抗原に特異的に又は優先的に結合してもしなくてもよいことも理解される。このように、「特異結合」又は「優先結合」は、必ずしも排他的結合を含む可能性はあるがそれを必要とするわけではない。必ずではないが一般に、結合を言及する場合、優先結合を意味する。
【００１８】
「抗体」の用語はこのように、抗原結合領域を有する任意の抗体様分子を称するのに用いられ、また本用語には、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２などの抗原結合ドメイン含む抗体フラグメント、単一ドメイン抗体（ＤＡＢｓ）、ＴａｎｄＡｂｓ二量体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ（単鎖Ｆｖ）、ｄｓＦｖ、ｄｓ−ｓｃＦｖ、Ｆｄ、直鎖状抗体、ミニボディ、ダイアボディ、二重特異性抗体フラグメント、ビボディ（bibody）、トリボディ（tribody）（ｓｃＦｖ−Ｆａｂ融合体、それぞれ二重特異性又は三重特異性）；ｓｃ−ダイアボディ；カッパ（ラムダ）ボディ（ｓｃＦｖ−ＣＬ融合体）；ＢｉＴＥ（Bispecific T-cell Engager、Ｔ細胞を誘引するｓｃＦｖ−ｓｃＦｖタンデム）；ＤＶＤ−Ｉｇ（二重可変ドメイン抗体、二重特異性フォーマット）；ＳＩＰ（小免疫タンパク質、ミニボディの一種）；ＳＭＩＰ（「小モジュラー免疫薬（small modular immunopharmaceutical）」ｓｃＦｖ−Ｆｃ二量体；ＤＡＲＴ（ds-安定化ダイアボディ「Dual Affinity ReTargeting」）；１以上のＣＤＲを含む低分子擬似抗体などが含まれる。種々の抗体ベースの構築体及びフラグメントを調製及び使用するための技術は、当該技術分野で周知である（Kabat et al., 1991（参照により具体的に本明細書に組み入れられる）を参照のこと）。ダイアボディはとりわけ、欧州特許第４０４、０９７号及び国際公開公報第９３／１１１６１号にさらに記載されており；直鎖状抗体はZapata et al. (1995)にさらに記載されている。抗体は、従来の技術を使用して断片化されることが可能である。たとえば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、抗体をペプシンで処理することによって生成されることが可能である。得られたＦ（ａｂ’）２フラグメントに、ジスルフィド架橋を還元する処理をしてＦａｂ’フラグメントを生成することができる。パパイン消化で、Ｆａｂフラグメントの形成を導くことができる。Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂｓ、ＴａｎｄＡｂｓ、ｄｓ−ｓｃＦｖ、二量体、ミニボディ、ダイアボディ、二重特異性抗体フラグメント及び他のフラグメントは、リコンビナント技術によって合成されることも可能であり、又は化学的に合成されることも可能である。抗体フラグメントを生成するための技術は、周知であって、当該技術分野において報告されている。たとえば、Beckman et al., 2006; Holliger & Hudson, 2005; Le Gall et al., 2004; Reff & Heard, 2001 ; Reiter et al., 1996; and Young et al., 1995の各々は、有効な抗体フラグメントをさらに記載しており、その生成を可能とするものである。
【００１９】
天然抗体において、２つの重鎖がジスルフィド結合によって互いに連結されており、各重鎖はジスルフィド結合によって軽鎖に連結されている。２種の軽鎖、すなわちラムダ（ｌ）及びカッパ（ｋ）がある。抗体分子の機能活性を決定する、５つの主要な重鎖クラス（又はアイソタイプ）：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥがある。各々の鎖は、別個の配列ドメインを含む。軽鎖は、２つのドメイン、すなわち可変ドメイン（ＶＬ）及び定常ドメイン（ＣＬ）を含む。重鎖は、４つのドメイン、すなわち可変ドメイン（ＶＨ）及び３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３、まとめてＣＨと呼ぶ）を含む。軽（ＶＬ）及び重（ＶＨ）鎖双方の可変領域が、抗原に対する特異性及び結合認識を決定する。軽（ＣＬ）及び重（ＣＨ）鎖の定常領域ドメインは、抗体鎖会合、分泌、胎盤通過移動性、補体結合、及びＦｃレセプター（ＦｃＲ）への結合などの重要な生物学的特性を与える。Ｆｖフラグメントは、免疫グロブリンのＦａｂフラグメントのＮ末端部分であって、１つの軽鎖及び１つの重鎖の可変部分からなる。抗体の特異性は、抗体結合部位と抗原決定基との間の構造的相補性に存する。抗体結合部位は、本来は超可変又は相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基で構成される。場合によって、非超可変又はフレームワーク領域（ＦＲ）からの残基が、全体のドメイン構造に、したがって結合部位に影響を及ぼす。相補性決定領域又はＣＤＲは、ネイティブな免疫グロブリン結合部位の天然のＦｖ領域の特異性及び結合親和性を共に規定するアミノ酸配列を称する。免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖は各々３つのＣＤＲを有し、それぞれＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３及びＨ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、Ｈ−ＣＤＲ３と命名されている。抗原結合部位はそれゆえ６つのＣＤＲを含み、重鎖及び軽鎖Ｖ領域の各々からのＣＤＲセットを含んでいる。フレームワーク領域（ＦＲ）は、ＣＤＲ間に介在するアミノ酸配列を称する。加えて、抗体におけるＣＤＲ領域の決定は、充分に当該技術分野の技術の範囲内である。ＣＤＲを決定するための技術として少なくとも２つ：（１）異種間配列変異性に基づくアプローチ（すなわち、Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda Md.)）；及び（２）抗原−抗体複合体の結晶学的研究に基づくアプローチ（Chothia et al. (1989) Nature 342:877; Al-lazikani et al (1997) J. Molec. Biol. 273:927-948)）が挙げられる。本願明細書で使用する場合、ＣＤＲは、いずれかのアプローチ又は両方のアプローチの組み合わせによって定義されるＣＤＲを称し得る。
【００２０】
「Ｆａｂ」の用語は、約５０，０００の分子量及び抗原結合活性を有する抗体フラグメントを意味し、プロテアーゼ、パパインでＩｇＧを処理することにより得られるフラグメントのうち、Ｈ鎖のＮ末端側のおよそ半分とＬ鎖全体とが、ジスルフィド結合を介して結び付けられている。
【００２１】
「Ｆ（ａｂ’）２」の用語は、約１００，０００の分子量及び抗原結合活性を有する抗体フラグメントであって、プロテアーゼ、ペプシンでＩｇＧを処理することにより得られるフラグメントのうち、ヒンジ領域のジスルフィド結合を介して結合されるＦａｂよりもわずかに大きいものを称する。
【００２２】
「Ｆａｂ’」の用語は、約５０，０００の分子量及び抗原結合活性を有する抗体フラグメントであって、Ｆ（ａｂ’）２のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断することにより得られるものを称する。
【００２３】
単鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）ポリペプチドは、ペプチドをコードするリンカーにより連結される、ＶＨ及びＶＬをコードする遺伝子を含む遺伝子融合体から通常発現されている、共有結合されたＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体である。「ｄｓＦｖ」は、ジスルフィド結合によって安定化されたＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体である。二価び多価抗体フラグメントは、一価のｓｃＦｖｓの会合により自発的に形成できるか、又は二価のｓｃ（Ｆｖ）２など、ペプチドリンカーによる一価のｓｃＦｖのカップリングによって生成され得る。
【００２４】
「ダイアボディ」の用語は、２つの抗原−結合部位を持つ小さい抗体フラグメントを言い、このフラグメントは、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）において軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖での２つのドメイン間の対合させるには短すぎるリンカーを使用することによって、それらのドメインは別の鎖の相補性ドメインと対合せざるを得ず、２つの抗原−結合部位を作る。
【００２５】
モノクローナル抗体は、Kohler and Milstein (Nature, 256:495, 1975)の方法を用いて生成され得る。本発明において有用なモノクローナル抗体を調製するために、マウス又は他の適切な宿主動物が好適な間隔（たとえば、週２回、週１回、月２回又は月１回）で、関連する抗原型（たとえば、ＩＬ−２０サイトカイン又はレセプター）を用いて免疫付与される。動物には屠殺の１週間以内に抗原の最終「追加免疫」が投与されてもよい。免疫化の際、免疫アジュバントを使用するのが望ましいことが多い。好適な免疫アジュバントとして、フロインド不完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、ミョウバン、Ｒｉｂｉアジュバント、Hunter’s Titermax、ＱＳ２１若しくはＱｕｉｌ Ａなどのサポニンアジュバント、又はＣｐＧ含有免疫促進性オリゴヌクレオチドが挙げられる。他の好適なアジュバントは、当該技術分野において周知である。動物は、皮下、腹腔内、筋肉内、静脈内、鼻腔内又は他の経路によって免疫付与され得る。所定の動物は、複数の経路により複数の形態の抗原で免疫付与され得る。
【００２６】
簡潔に言えば、リコンビナント抗原（たとえば、ＩＬ−２０サイトカイン又はレセプター）は、リコンビナント細胞株での発現によって提供され得る。たとえば、レセプター（たとえば、ＩＬ−２０Ｒ１又はＩＬ−２０Ｒ２）は、そのレセプターをそれら細胞の表面に発現するヒト細胞の形態で提供され得る。リコンビナント型のサイトカイン又はレセプターは、これまでに記載された任意の方法を使用して提供され得る。免疫レジメン後、動物の脾臓、リンパ節又は他の器官からリンパ球を単離し、ポリエチレングリコールなどの薬剤を使用して適切な骨髄腫細胞株と融合してハイブリドーマを形成する。融合後、記載されているように（Coding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice: Production and Application of Monoclonal Antibodies in Cell Biology, Biochemistry and Immunology, 3rd edition, Academic Press, New York, 1996）、標準的な方法を使用して、ハイブリドーマの成長を許容するが融合パートナーの成長は許容しない培地中に細胞を置く。ハイブリドーマの培養後、所望の特異性の（すなわち、抗原に選択的に結合する）抗体の存在について細胞上清を分析する。適切な分析技術としては、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、免疫沈降及びウエスタンブロッティングが挙げられる。他のスクリーニング技術は、当技術分野で周知である。好ましい技術は、コンフォメーションがインタクトな、ネイティブでフォールディングされた抗原に対する抗体の結合を確認する技術、たとえば、非変性ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー及び免疫沈降である。
【００２７】
重要なことに、当技術分野で周知のように、抗体分子の小部分（パラトープ）のみが、抗体のそのエピトープへの結合に関与する（一般には、Clark, W. R. (1986) The Experimental Foundations of Modern Immunology Wiley Sons, Inc., New York; Roitt, I. (1991) Essential Immunology, 7th Ed., Blackwell Scientific Publications, Oxfordを参照のこと）。たとえば、Ｆｃ’領域及びＦｃ領域は、補体カスケードのエフェクターであるが、抗原結合に関与しない。ｐＦｃ’領域が酵素切断されたか又はｐＦｃ’領域を有さずに産生された抗体（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントと称される）は、インタクトな抗体の抗原結合部位の両方を保持する。同様に、Ｆｃ領域が酵素切断されたか又はＦｃ領域を有さずに産生された抗体（Ｆａｂフラグメントと称される）は、インタクトな抗体分子の抗原結合部位の一方を保持する。さらにいうと、Ｆａｂフラグメントは、共有結合した抗体軽鎖及び抗体重鎖の一部（Ｆｄと称される）からなる。Ｆｄフラグメントは、抗体特異性の主要な決定基であり（単一のＦｄフラグメントは、抗体特異性を変化させることなく、最大１０個の異なる軽鎖に結合され得る）、Ｆｄフラグメントは、単独でエピトープ結合能を保持する。
【００２８】
当技術分野で周知のように、抗体の抗原結合部分内に、抗原のエピトープと直接相互作用する相補性決定領域（ＣＤＲ）、及びパラトープの三次構造を維持するフレームワーク領域（ＦＲ）が存在する（一般には、Clark, 1986; Roitt, 1991を参照のこと）。ＩｇＧ免疫グロブリンの重鎖Ｆｄフラグメント及び軽鎖の両方において、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１〜ＣＤＲＳ）によってそれぞれ分断された４つのフレームワーク領域（ＦＲ１〜ＦＲ４）が存在する。ＣＤＲ、特にＣＤＲＳ領域、より具体的には重鎖ＣＤＲＳは、抗体特異性の大部分を担う。
【００２９】
元の抗体のエピトープ特異性を維持しながら、哺乳動物抗体の非ＣＤＲ領域を同種特異的又は異種特異的抗体の類似領域で置換し得ることは、現在では当技術分野で十分に確立されている。これは、機能的抗体を生成するために、非ヒトＣＤＲをヒトＦＲ及び／又はＦｃ／ｐＦｃ’領域に共有結合する「ヒト化」抗体の開発及び使用において最も明確に認められる。
【００３０】
いくつかの実施形態では、前記抗体はヒト化抗体である。本願明細書で使用する場合、「ヒト化」は、ＣＤＲ領域の外側のアミノ酸の一部、大部分又は全部がヒト免疫グロブリン分子由来の対応するアミノ酸で置換された抗体を示す。ヒト化の方法としては、米国特許第４，８１６，５６７号、米国特許第５，２２５，５３９号、米国特許第５，５８５，０８９号、米国特許第５，６９３，７６１号、米国特許第５，６９３，７６２号及び米国特許第５，８５９，２０５号（これらは、参照により本明細書に組み入れられる）に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。上記米国特許第５，５８５，０８９号及び米国特許第５，６９３，７６１号並びに国際公開第９０／０７８６１号はまた、ヒト化抗体を設計するのに使用することができる４つの可能な基準を提案している。第１の提案は、アクセプターについて、ヒト化するべきドナー免疫グロブリンに対して非常に相同な特定のヒト免疫グロブリン由来のフレームワークを使用するか、又は多くのヒト抗体由来のコンセンサスフレームワークを使用することであった。第２の提案は、ヒト免疫グロブリンのフレームワークのアミノ酸が通常のものではなく、その位置のドナーアミノ酸がヒト配列に典型的なものである場合、アクセプターではなくドナーアミノ酸を選択し得ることであった。第３の提案は、ヒト化免疫グロブリン鎖における３つのＣＤＲに直接隣接する位置において、アクセプターアミノ酸ではなくドナーアミノ酸を選択し得ることであった。第４の提案は、そのアミノ酸が、三次元抗体モデルにおけるＣＤＲの３Ａ内に側鎖原子を有すると予測され、ＣＤＲと相互作用することができると予測されるフレームワーク位置において、ドナーアミノ酸残基を使用することであった。上記方法は、当業者がヒト化抗体を作製するのに用いることができる方法の一部の単なる例示である。当業者であれば、抗体をヒト化するための他の方法を熟知しているであろう。
【００３１】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ領域の外側のアミノ酸の一部、大部分又は全部をヒト免疫グロブリン分子由来のアミノ酸で置換したが、１つ以上のＣＤＲ領域内の一部、大部分又は全部のアミノ酸は変更しない。アミノ酸のわずかな付加、欠失、挿入、置換又は修飾は、所定の抗原に結合する抗体の能力を無効化しない限り許容され得る。適切なヒト免疫グロブリン分子としては、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ及びＩｇＭ分子が挙げられる。「ヒト化」抗体は、元の抗体と同様の抗原特異性を保持する。しかしながら、Wu et al., /. Mol. Biol. 294:151, 1999（この内容は、参照により本明細書に組み入れられる）に記載されているように、ある特定のヒト化法を使用して、抗体の結合の親和性及び／又は特異性は、「定向進化」の方法を使用して増加され得る。
【００３２】
完全ヒトモノクローナル抗体はまた、ヒト免疫グロブリン重鎖及び軽鎖遺伝子座の大部分がトランスジェニックなマウスを免疫することによって調製され得る。たとえば、米国特許第５，５９１，６６９号、米国特許第５，５９８，３６９号、米国特許第５，５４５，８０６号、米国特許第５，５４５，８０７号、米国特許第６，１５０，５８４号及びそれらで引用されている参照文献を参照のこと（これらの内容は、参照により本明細書に組み入れられる）。これらの動物は、内因性（たとえば、マウス）抗体の産生において機能的欠陥が存在するように遺伝子修飾されている。動物は、これらの動物を免疫すると目的の抗原に対する完全ヒト抗体が産生されるよう、ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含有するようにさらに修飾される。これらのマウス（たとえば、XenoMouse（Abgenix）、HuMAbマウス（Medarex/GenPharm））の免疫後、モノクローナル抗体は、標準的なハイブリドーマ技術に従って調製され得る。これらのモノクローナル抗体は、ヒト免疫グロブリンアミノ酸配列を有するので、ヒトに投与した場合にヒト抗マウス抗体（ＫＡＭＡ）応答を誘起しないであろう。ヒト抗体を生産するためのin vitro方法も存在する。これらとしては、ファージディスプレイ技術（米国特許第５，５６５，３３２号及び米国特許第５，５７３，９０５号）及びヒトＢ細胞のin vitro刺激（米国特許第５，２２９，２７５及び米国特許第５，５６７，６１０号）が挙げられる。これらの特許の内容は、参照により本明細書に組み入れられる。
【００３３】
したがって、当業者には明らかであるように、本発明はまた、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆｖ及びＦｄフラグメント；Ｆｃ及び／若しくはＦＲ並びに／又はＣＤＲ１及び／若しくはＣＤＲ２及び／若しくは軽鎖ＣＤＲ３領域が相同なヒト若しくは非ヒト配列で置換されたキメラ抗体；ＦＲ並びに／又はＣＤＲ１及び／若しくはＣＤＲ２及び／若しくは軽鎖ＣＤＲ３領域が相同なヒト若しくは非ヒト配列で置換されたキメラＦ（ａｂ’）２フラグメント抗体；ＦＲ並びに／又はＣＤＲ１及び／若しくはＣＤＲ２及び／若しくは軽鎖ＣＤＲ３領域が相同なヒト若しくは非ヒト配列で置換されたキメラＦａｂフラグメント抗体；並びにＦＲ並びに／又はＣＤＲ１及び／若しくはＣＤＲ２領域が相同なヒト若しくは非ヒト配列で置換されたキメラＦｄフラグメント抗体を提供する。本発明はまた、いわゆる単鎖抗体を含む。
【００３４】
種々の抗体分子及びフラグメントは、ＩｇＡ、分泌性ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭを非限定的に含む一般的に公知の免疫グロブリンクラスのいずれかに由来し得る。ＩｇＧサブクラスも当業者に周知であり、これらとしては、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４が挙げられるが限定されない。
【００３５】
抗体の結合親和性は、約１００nM、約５０nM、約１０nM、約１nM、約５００pM、約１００pM、又は約５０pMのいずれか未満、約２pM相当までであり得る。結合親和性は、ＫＤすなわち解離定数で表されることができ、結合親和性の増加はＫＤの減少に対応する。抗体の結合親和性を求める一つの手段は、抗体の一官能性のＦａｂフラグメントの結合親和性を測定することによる。一官能性のＦａｂフラグメントを得るために、抗体（たとえば、ＩｇＧ）はパパインで切断されるか又は組換えにより発現され得る。抗体の抗ＩＬ−２０Ｆａｂフラグメントの親和性は、表面プラスモン共鳴により求められ得る（BIAcore3000（商標）表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）システム、BIAcore, INC, Piscaway N.J.）。動的会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）（通常、２５℃で測定）を得て、平衡解離定数（ＫＤ）値をｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算する。
【００３６】
抗ＩＬ−２０抗体の例としては、米国特許第７，４３５，８００号；７，１１５，７１４号；７，１１９，１７５号；７，１５１，１６６号；及び７，３９３，６８４号；及びＰＣＴ国際公開公報第２００７／０８１４６５号；国際公開公報第９９／２７１０３号；国際公開公報第２００４／０８５４７５号；及び国際公開公報第２００５／０５２０００号にに開示されるものが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本願明細書に記載される抗ＩＬ−２０抗体は抗ＩＬ−２０抗体７Ｅであり、これはモノクローナル抗体ｍＡｂ７Ｅ及びその機能性変種を称する。ＭＡｂ７Ｅは、American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Va. 20110-2209, U.S.A.に寄託され、寄託番号ＰＴＡ−８６８７を与えられたハイブリドーマ細胞系により生成される。このハイブリドーマ細胞系は、本願の米国特許が付与されれば、変更不可で無制限／無条件に、公に開放され、その特許の有効期間（enforceable life）に対する寄託の日から少なくとも３０年間にわたり、又は直近の日以降（after the date of the most recent）５年間にわたり、ＡＴＣＣにて維持されることになる。ｍＡｂ７Ｅの機能性変種（等価物）は、ｍＡｂ７Ｅと実質的に同じエピトープ結合特異性を有し、ｍＡｂ７Ｅに対して、ＩＬ−２０により媒介されるシグナル伝達経路を中和するその活性の少なくとも２０％（たとえば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又はそれ以上）を呈する。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ７Ｅの機能性変種は、ＣＤＲの同じ特異性決定残基又はＣＤＲ全体などの、ｍＡｂ７Ｅと同じ抗原結合を担う領域／残基を含む。抗原結合を担う領域／残基は、当該技術分野で公知の方法によって、上記したｍＡｂ７ＧＷ又はｍＡｂ５１Ｄの重鎖／軽鎖配列のアミノ酸配列から同定され得る。たとえば、www.bioinf.org.uk/abs; Almagro, J. Mol. Recognit. 17:132-143 (2004);及びChothia et al., J. Mol. Biol. 227:799-817 (1987)を参照されたい。
【００３７】
いくつかの実施形態では、本願明細書に記載される方法において使用される抗ＩＬ２０Ｒ１抗体は、モノクローナル抗体ｍＡｂ７ＧＷ又はｍＡｂ５１Ｄのものと同じ重鎖及び軽鎖可変領域（ＶＨ及びＶＬ）を有する抗体、当該モノクローナル抗体、その抗原結合フラグメント、又は参照によりその全体が本明細書に組み入れられる米国特許公開第２０１１／０２５６０９３号に開示されるｍＡｂ７ＧＷ若しくはｍＡｂ５１Ｄのいずれかの機能的等価物である。ｍＡｂ７ＧＷ又はｍＡｂ５１Ｄの機能的等価物は、ｍＡｂ７ＧＷ又はｍＡｂ５１Ｄと同じエピトープ−結合特異性を有し、ｍＡｂ７ＧＷ又はｍＡｂ５１Ｄに対して、ＩＬ−２０Ｒ１により媒介されるシグナル伝達経路を中和するその活性の少なくとも２０％（たとえば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又はそれ以上）を呈する。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ７ＧＷ又はｍＡｂ５１Ｄの機能性等価物は、ＣＤＲの同じ特異性決定残基又はＣＤＲ全体などの、ｍＡｂ７ＧＷ又はｍＡｂ５１Ｄと同じ抗原結合を担う領域／残基を含む。抗原結合を担う領域／残基は、当該技術分野で公知の方法によって、上記したｍＡｂ７ＧＷ又はｍＡｂ５１Ｄの重鎖／軽鎖配列のアミノ酸配列から同定され得る。たとえば、www.bioinf.org.uk/abs; Almagro, J. Mol. Recognit. 17:132-143 (2004);及びChothia et al., J. Mol. Biol. 227:799-817 (1987)を参照されたい。
【００３８】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２０サイトカイン類のアンタゴニストはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＩＬ−２０レセプター（すなわちＩＬ−２０Ｒ１、ＩＬ−２０Ｒ２、及びＩＬ−２２ＲＩ）の機能的等価物を含む。本願明細書で使用する場合、ａ「ＩＬ−２０レセプターの機能的等価物は、ＩＬ−２０サイトカインに結合し、それによりＩＬ−２０レセプターとの相互作用を妨げることができる化合物である。「機能的等価物」という用語は、ＩＬ−２０レセプターのフラグメント、突然変異体及び突然変異タンパク質を含む。従って、「機能的に等価な」という用語は、タンパク質類似体がＩＬ−２０サイトカイン結合能を保持するように、たとえば、１つ以上のアミノ酸の欠失、置換又は付加によってアミノ酸配列を変化させることによって得られる任意のＩＬ−２０レセプター等価物を含む。アミノ酸置換は、たとえば、アミノ酸配列をコードするＤＮＡの点突然変異によって行うことができる。機能的等価物としては、ＩＬ−２０サイトカインに結合し、ＩＬ−２０レセプターの細胞外ドメインの全部又は一部を含み、これによりＩＬ−２０サイトカインを捕捉することができる可溶性レセプターを形成する分子が挙げられる。したがって、機能的等価物としては、可溶性形態のＩＬ−２０レセプターが挙げられる。適切な可溶性形態のこれらのタンパク質又はその機能的等価物は、たとえば、化学的、タンパク質分解又はリコンビナント方法によって膜貫通ドメインが除去された短縮形態のタンパク質を含み得る。典型的には、機能的等価物は、対応するタンパク質に少なくとも８０％相同である。好ましい実施形態では、機能的等価物は、任意の従来の分析アルゴリズムによって評価した場合に、少なくとも９０％相同である。本願明細書で使用する場合、「機能的等価フラグメント」の用語は、ＩＬ−２０サイトカインに結合するＩＬ−２０レセプターのフラグメントの任意のフラグメント又はアセンブリをも意味し得る。したがって、本発明はＩＬ−２０サイトカインへのＩＬ−２０レセプターの結合を阻害することができるポリペプチドを提供するものであり、このポリペプチドは、ＩＬ−２０レセプターの細胞外ドメインの少なくとも一部の配列に対応する配列を有する連続したアミノ酸を含み、この部分がＩＬ−２０サイトカインに結合する。いくつかの実施形態では、前記ポリペプチドは、ＩＬ−２０レセプターの細胞外ドメインに対応する。いくつかの実施形態では、前記ポリペプチドはＩＬ−２２ＲＩの機能的等価物を含まない。
【００３９】
いくつかの実施形態では、前記ポリペプチドは、免疫グロブリン定常ドメイン（Ｆｃ領域）に融合されてイムノアドヘシンを形成する、ＩＬ−２０レセプターの機能的等価物を含む。イムノアドヘシンは、ヒト抗体のかけがえのない化学的及び生物学的特性の多くを保有することができる。イムノアドヘシンは適切なヒト免疫グロブリンヒンジ及び定常ドメイン（Ｆｃ）配列に連結される、所望の特異性を持つヒトタンパク質配列から構築されることができるので、全体的にヒトの成分を用いて、注目する結合特異性を、もたらすことができる。このようなイムノアドヘシンは、患者への免疫原性が最低限であり、また慢性及び反復使用に安全である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はネイティブな配列のＦｃ領域である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域が変種Ｆｃ領域である。さらに別の実施形態では、Ｆｃ領域が機能性Ｆｃ領域である。本願明細書で使用する場合、「Ｆｃ領域」の用語は、ネイティブな配列のＦｃ領域及び変種Ｆｃ領域を含め免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するのに使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変動するかもしれないが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は普通、Ｃｙｓ２２６の位置のアミノ酸残基から、又はＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで伸びるものと定義される。イムノアドヘシンの接着部位及び免疫グロブリン配列部位は、最小のリンカーによって連結され得る。免疫グロブリン配列は、必須ではないが典型的には、免疫グロブリン定常ドメインである。本発明のキメラにおける免疫グロブリン部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４亜型、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ又はＩｇＭから、典型的にはＩｇＧ１又はＩｇＧ３から得られ得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２０レセプターの機能的等価物とイムノアドヘシンの免疫グロブリン配列部分とが最小リンカーによって連結されている。本願明細書で使用する場合、「リンカー」の用語は、本発明のポリペプチドと免疫グロブリン配列部分とを連結する少なくとも１つのアミノ酸の配列を称する。このようなリンカーは、立体障害を防止するのに有用であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは４；５；６；７；８；９；１０；１１；１２；１３；１４；１５；１６；１７；１８；１９；２０；２１；２２；２３；２４；２５；２６；２７；２８；２９；３０アミノ酸残基を有する。しかしながら、その上限は臨界的でなく、たとえばこのようなポリペプチドのバイオ医薬品の製造に関する利便性の理由で選択される。リンカー配列は、天然に存在する配列、又は天然に存在しない配列であり得る。治療目的で使用されるのであれば、リンカーは典型的には、イムノアドヘシンが投与される被験者において非免疫原性である。リンカー配列の１つの有用な群は、国際公開第９６／３４１０３号及び国際公開第９４／０４６７８号に記載されるような、重鎖抗体のヒンジ領域由来のリンカーである。他の例として、ポリ−アラニンリンカー配列が挙げられる。
【００４０】
いくつかの実施形態では、前記ポリペプチドは、共に共有結合されたＩＬ−２０Ｒ１ポリペプチドの細胞外ドメイン及びＩＬ−２０ＲＩＩの細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、一方の細胞外ドメインはそのカルボキシ末端に融合された免疫グロブリンの重鎖の定常領域を有し、他の細胞外ドメインはそのカルボキシ末端に融合された免疫グロブリンの定常軽鎖（Ｉｇ）を有しており、２つのポリペプチドが合わさって可溶性レセプターを形成し、また重Ｉｇ鎖と軽Ｉｇ鎖との間にジスルフィド結合が形成されるようになる。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは細胞外ドメインの２つのカルボキシ末端に融合可能で、共有結合された可溶性レセプターを形成する。
【００４１】
当業者には明らかになるように、本発明のポリペプチドは、任意の適切な手段によって生産することができる。本発明に従って使用するのに十分な量のＩＬ−２０レセプター又はその機能的等価物を生産するために、本発明のポリペプチドを含有するリコンビナント宿主細胞を適切な条件下で培養することによって、発現を好都合に成し遂げることができる。典型的には、ポリペプチドは、リコンビナント手段によって、コード核酸分子からの発現によって生産される。様々な異なる宿主細胞におけるポリペプチドのクローニング及び発現のための系が周知である。リコンビナント形態で発現される場合、ポリペプチドは、典型的には、宿主細胞におけるコード核酸からの発現によって生成される。特定の系の個々の要件に応じて、任意の宿主細胞を使用することができる。適切な宿主細胞としては、細菌、哺乳動物細胞、植物細胞、酵母及びバキュロウイルス系が挙げられる。異種ポリペプチドの発現のための当技術分野で利用可能な哺乳動物細胞株としては、チャイニーズハムスター卵巣細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞及び多くの他のものが挙げられる。また、細菌は容易に操作及び成長させることができるので、リコンビナントタンパク質の生産に好ましい宿主である。一般的な好ましい細菌宿主はE coliである。
【００４２】
いくつかの実施形態では、本発明の治療方法において使用されるポリペプチドは、それらの治療有効性を改善するために修飾され得ると意図される。治療用化合物のこのような修飾は、毒性を減少させ、循環時間を増加させ、又は生体内分布を改変するために使用することができる。たとえば、潜在的に重要な治療用化合物の毒性は、生体内分布を改変する様々な薬物担体ビヒクルとの組み合わせによって有意に減少させることができる。例では、ジペプチドを付加することにより、眼内の循環薬剤が内因性トランスポーターを使用して血液網膜関門を通って浸透するのを改善することができる。薬物バイアビリティーを改善するための戦略は、水溶性ポリマーの利用である。様々な水溶性ポリマーは、生体内分布を改変し、細胞取り込みの様式を改善し、生理学的バリアを通る透過性を変化させ、及び身体からのクリアランス速度を改変することが示されている。ターゲティング効果又は持続放出効果のいずれかを達成するために、末端基として、骨格の一部として、又はポリマー鎖上のペンダント基として薬物部分を含有する水溶性ポリマーが合成されている。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、その高度な生体適合性及び修飾の容易性を考慮して薬物担体として広く使用されている。様々な薬物、タンパク質及びリポソームに付着させることにより、滞留時間を改善し、毒性を減少することが示されている。ＰＥＧは、鎖の末端のヒドロキシル基を通じて、及び他の化学的方法を介して活性薬剤にカップリングすることができる；しかしながら、ＰＥＧそれ自体は、１分子当たり多くとも２つの活性薬剤に限定される。異なるアプローチでは、ＰＥＧの生体適合特性を保持するが、１分子当たりの付着点が多い（より大きな薬物ローディングを提供する）というさらなる利点を有する新規生体材料であって、様々な用途に適するように合成的に設計され得る新規生体材料として、ＰＥＧとアミノ酸とのコポリマーが探索された。当業者であれば、薬物の有効な修飾のためのＰＥＧ化技術を認識している。たとえば、ＰＥＧと三官能性モノマー（たとえば、リシンなど）との交互ポリマーからなる薬物送達ポリマーが、VectraMed (Plainsboro, N.J.）によって使用されている。ＰＥＧ鎖（典型的には２０００ダルトン以下）が、安定したウレタン連結を介してリシンのａ−及びｅ−アミノ基に連結されている。このようなコポリマーは、ポリマー鎖に沿って、厳密にコントロールされた既定の間隔で反応性ペンダント基（リシンのカルボン酸基）を提供しながら、ＰＥＧの望ましい特性を保持する。反応性ペンダント基を、誘導体化、架橋又は他の分子とのコンジュゲーションに使用することができる。これらのポリマーは、ポリマーの分子量、ＰＥＧセグメントの分子量、及び薬物とポリマーとの間の開裂可能な連結を変化させることによって、安定した長期循環プロドラッグを生産するのに有用である。ＰＥＧセグメントの分子量は、薬物／連結基複合体の間隔及びコンジュゲートの分子量当たりの薬物の量に影響を与える（より小さいＰＥＧセグメントはより大きな薬物ローディングを提供する）。一般に、ブロックコポリマーコンジュゲートの全分子量を増加させることによって、コンジュゲートの循環半減期が増加するであろう。それにもかかわらず、コンジュゲートは易分解性であるか、又は閾値を限定する糸球体ろ過を下回る分子量（たとえば、６０ｋDa未満)を有しなければならない。循環半減期及び生体内分布を維持するのに重要なポリマー骨格に加えて、リンカーを使用して、ターゲット組織における特定のトリガー、典型的には酵素活性によって骨格ポリマーから放出されるまで治療剤をプロドラッグ形態に維持し得る。たとえば、この型の組織活性化薬物送達は、生体内分布の特定部位への送達が必要とされ、治療剤が病変部位に又はその近くに放出される場合に特に有用である。活性化薬物送達において使用するための連結基ライブラリーは当業者に知られており、酵素反応速度、活性酵素の分布、及び選択された疾患特異的酵素の切断特異性に基づくものであり得る。このようなリンカーは、治療送達のために、本明細書に記載されるタンパク質又はタンパク質部分を修飾するのに使用することができる。
【００４３】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２０サイトカイン類のアンタゴニストは、発現のインヒビターである。「発現のインヒビター」は、遺伝子発現を阻害する生物学的効果を有する天然又は（すなわち、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２４、ＩＬ−２０Ｒ１又はＩＬ−２０Ｒ２）を称する。いくつかの実施形態では、前記遺伝子発現のインヒビターは、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はリボザイムである。たとえば、アンチセンスＲＮＡ分子及びアンチセンスＤＮＡ分子を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＩＰ２ ｍＲＮＡに結合することによってＲＩＰ２ ｍＲＮＡの翻訳を直接遮断し、それによりタンパク質の翻訳を妨げるか、又はｍＲＮＡの分解を増加させ、それにより細胞におけるＩＬ−２０サイトカイン又はそのレセプターサブユニットのレベル及び活性を低下させるように作用する。たとえば、ＲＩＰ２をコードするｍＲＮＡ転写配列の固有領域に相補的な少なくとも約１５塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、たとえば、従来のホスホジエステル技術によって合成することができる。配列が公知の遺伝子の遺伝子発現を特異的に阻害するためにアンチセンス技術を用いる方法は、当該技術分野で周知である（たとえば、米国特許第６，５６６，１３５号；６，５６６，１３１号；６，３６５，３５４号；６，４１０，３２３号；６，１０７，０９１号；６，０４６，３２１号；及び５，９８１，７３２号を参照されたい）。低分子阻害性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）もまた、本発明において使用するための発現のインヒビターとして機能することができる。遺伝子発現は、遺伝子発現が特異的に阻害されるように（すなわち、ＲＮＡ干渉又はＲＮＡｉ）、被験者又は細胞を低分子二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、又は低分子二本鎖ＲＮＡの生成を引き起こすベクター若しくは構築体と接触させることによって低減可能である。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ及びリボザイムは、単独、又はベクターと合わせてin vivoで送達され得る。広義では、「ベクター」は、細胞への、典型的にはＲＩＰ２を発現している細胞へのアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ又はリボザイム核酸の移送を円滑にすることができる任意のビヒクルである。典型的には、ベクターは、分解が当該ベクターが存在しなければ起こるであろう分解の程度に対して低減する細胞へ核酸をトランスポートする。一般に、本発明において有用なベクターとしては、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ又はリボザイム核酸配列の挿入又は取り込みによって操作されているウイルス又は細菌のソースに由来するプラスミド、ファージミド、ウイルス、他のビヒクルが挙げられるが、これらに限定されない。ウイルスベクターが好ましいタイプのベクターであり、以下のウイルス：モロニーマウス白血病ウイルス、ハーベイマウス肉腫ウイルス、マウス乳房腫瘍ウイルス、及びラウス肉腫ウイルスなどのレトロウイルス；アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス；ＳＶ４０タイプウイルス；ポリオーマウイルス；エプスタイン−バーウイルス；乳頭腫ウイルス；ヘルペスウイルス；牛痘ウイルス；ポリオウイルス；及びレトロウイルスなどのＲＮＡウイルスからの核酸配列が挙げられるが、これらに限定されない。名付けられていないが当該技術分野で公知の他のベクターを用いることも容易である。
【００４４】
「治療上有効量」によって意味するのは、任意の医療処置に適用可能な、妥当な効果／リスク比でＣＯＰＤの急性増悪の処置方法において使用するための、防止に十分な量のポリペプチド（又はポリペプチドをコードする核酸）である。本発明の化合物及び組成物の１日の合計使用量は、信頼できる医学的判断の範囲で担当医により決定されることになるのは理解されるはずである。任意の特定被験者に対する、具体的な治療上有効である用量レベルは、被験者の年齢、体重、全般的な健康状態、性別及び食生活；投与の時間、投与経路、及び用いられる具体的な化合物の排泄速度；処置の継続期間；用いられる特定のポリペプチドと組み合わせて又は同時に使用される薬物；及び医学分野で周知の類似因子を含め、様々な因子に依存することになる。たとえば、所望の治療効果を成し遂げるのに必要な化合物の用量よりも低レベルで開始して、所望の効果が成し遂げられるまで徐々に投薬量を高めることは当該分野の技術において周知である。しかしながら、製品の１日の投薬量は、成人１人に対して１日あたり０．０１から１，０００mgまでの広い範囲にわたって変動され得る。典型的には、処置すべき被験者への投薬量の症状の調整のために、組成物は０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００、２５０及び５００mgの有効成分を含有する。医薬は、典型的には約０．０１mgから約５００ｍｇの有効成分、典型的には１mgから約１００ｍｇの有効成分を含有する。薬物の有効量は普通、１日あたり０．０００２mg/kg体重から約２０mg/kg体重まで、とりわけ１日あたり約０．００１mg/kg体重から７mg/kg体重までの投薬量レベルで供給される。
【００４５】
典型的には本発明の有効成分（すなわち、ＩＬ−２０サイトカイン類のアンタゴニスト）は、薬学的に許容できる賦形剤、及び任意に生分解性ポリマーなどの持続放出マトリクスと組み合わせられて、医薬組成物を形成する。「薬学的に」又は「薬学的に許容できる」の用語は、哺乳動物に、とりわけヒトに、適宜投与された場合に有害な、アレルギー性の、又はその他の副作用を生じない分子部分及び組成物を称する。薬学的に許容できる担体又は賦形剤は、任意なタイプの無毒な固体、半固体又は液体充填剤、希釈剤、封入材料又は製剤化助剤を称する。担体は、たとえば、水、エタノール、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、これらの好適な混合物、及び植物油をを含有する溶媒又は分散媒体であることもできる。適当な流動性は、たとえば、レシチンなどのコーティングの使用によって、ディスパーションの場合には必要な粒径の維持によって、また界面活性剤の使用によって、維持されることができる。微生物の作用の防止は、種々の抗菌性薬及び抗真菌薬、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサルなどによってもたらされ得る。多くの場合、たとえば、糖又は塩化ナトリウムなどの等張剤を含むことが好ましいであろう。注射用組成物の吸収の長期化は、吸収を遅延する薬剤、たとえば、アルミニウムモノステアレート及びゼラチンを、その組成物に使用することによってもたらされ得る。本発明の医薬組成物において、本発明の有効成分は、従来の医薬支持剤（support）との混合物として、単位投与形態で投与され得る。好適な単位投与形態としては、錠剤、ジェルカプセル剤、散剤、顆粒剤及び経口懸濁剤又は液剤などの経口経路形態、舌下及び口腔内投与形態、エアロゾル、インプラント、皮下、経皮、局所、腹腔内、筋肉内、静脈内、真皮下、経皮、髄腔内及び鼻腔内投与形態及び直腸投与形態が挙げられる。
【００４６】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２０サイトカイン類のアンタゴニストは、抗生物質又は抗ウイルス剤などの抗菌剤と組み合わせて被験者に投与される。前記アンタゴニストと組み合わせて共投与され得る好適な抗生物質としては、セフトリアキソン、セフォタキシム、バンコマイシン、メロペネム、セフェピム、セフタジジム、セフロキシム、ナフシリン、オキサシリン、アンピシリン、チカルシリン、チカルシリン／クラブラン酸（clavulinic acid）（Timentin）、アンピシリン／スルバクタム（Unasyn）、アジスロマイシン、トリメトプリム-スルファメトキサゾール、クリンダマイシン、シプロフロキサシン、レボフロキサシン、シナシッド、アモキシシリン、アモキシシリン/クラブラン酸（Augmentin）、セフロキシム,トリメトプリム/スルファメトキサゾール、アジスロマイシン、クリンダマイシン、ジクロキサシリン、シプロフロキサシン、レボフロキサシン、セフィキシム、セフポドキシム、ロラカルベフ、セファドロキシル、セファブチン（cefabutin）、セフジニル、及びセフラジンからなる群より選択される少なくとも１つの抗生物質が挙げられるが、これらに限定されない。抗ウイルス剤の例としては、アシクロビル、ファムシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、シドフォビル；アマンタジン、リマンタジン；リバビリン；ザナマビル及び／又はオセルタマビル；インジナビル、ネルフィナビル、リトナビル及び／又はサキナビルなどのプロテアーゼインヒビター；ジダノシン、ラミブジン、スタブジン、ザルシタビン、ジドブジンなどのヌクレオシド逆転写酵素インヒビター；ネビラピン、エファビレンツなどの非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４７】
併用治療には、呼吸刺激薬も含んでよい。コルチコステロイドは、急性ＣＯＰＤの増悪に有益であり得る。本発明のアンタゴニストと組み合わせて使用され得るコルチコステロイドの例としては、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメサゾン、ナフロコート（naflocort）、デフラザコート、ハロプレドン酢酸塩、ブデソニド、ベクロメタゾン二プロピオン酸塩、ヒドロコルチゾン、トリアムシノロンアセトニド、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、クロコルトロンピバル酸塩、メチルプレドニゾロンアセポナート、デキサメサゾンパルミチン酸塩（palmitoate）、チプレダン（tipredane）、ヒドロコルチゾンアセポナート、プレドニカルバート、アルクロメタゾン（alclometasone）二プロピオン酸塩、ハロメタゾン、メチルプレドニゾロンスレプタナート（suleptanate）、モメタゾンフロ酸塩、リメキソロン、プレドニゾロンファルネシル酸塩、シクレソニド、デプロドンプロピオン酸塩、フルチカゾンプロピオン酸塩、ハロベタゾールプロピオン酸塩、ロテプレドノールエタボン酸塩、ベタメタゾン酪酸塩プロピオン酸塩、フルニソリド、プレドニゾン、デキサメサゾンリン酸ナトリウム塩、トリアムシノロン、ベタメタゾン１７−吉草酸塩、ベタメタゾン、ベタメタゾン二プロピオン酸塩、ヒドロコルチゾン酢酸塩、ヒドロコルチゾンナトリウムコハク酸塩、プレドニゾロンリン酸ナトリウム塩及びヒドロコルチゾンプロブタートが挙げられる。本発明で特に好ましいコルチコステロイドは、デキサメタゾン、ブデソニド、ベクロメタゾン、トリアムシノロン、モメタゾン、シクレソニド、フルチカゾン、フルニゾリド、リン酸デキサメタゾンナトリウム及びそのエステル、並びに６α，９α−ジフルオロ−１７α−［（２−フラニルカルボニル）オキシ］−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソアンドロスタン−１，４−ジエン−１７β−チオカルボン酸（Ｓ）−フルオロメチルエステルである。本発明でさらにより好ましいコルチコステロイドは、ブデソニド、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、フロ酸モメタゾン、シクレソニド、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンヘキサアセトニド及びプロピオン酸フルチカゾンの、所望によりそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマーおよびそれらの混合物、および所望によりそれらの薬理学的に適合する酸付加塩の形態である。さらにより好ましくは、ブデソニド、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、フロ酸モメタゾン、シクレソニド及びプロピオン酸フルチカゾンである。本発明の最も好ましいコルチコステロイドは、ブデソニドおよびジプロピオン酸ベクロメタゾンである。
【００４８】
気管支拡張薬の投薬量は、急性増悪の間に増加させ、急性気管支痙攣を低減させてもよい。気管支拡張薬の例としては、β２−アゴニスト（たとえば、サルブタモール、ビトルテロールメシル酸塩、ホルモテロール、イソプロテレノール、レバルブテロール、メタプロテレノール、サルメテロール、ターブタリン、及びフェノテロール）、抗コリン作用薬（たとえば、チオトロピウム又はイプラトロピウム）、メチルキサンチネド（methylxanthined）、及びホスホジエステラーゼインヒビターが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４９】
いくつかの実施形態では、本発明のアンタゴニストは、ウイルス又は細菌に対する免疫応答を誘発することができる抗原又は抗原性組成物を含有するワクチンと組み合わせて被験者に投与される。典型的には、ワクチン組成物は、Streptococcus pneumoniae、Staphylococcus aureus、Burkholderis ssp.、Streptococcus agalactiae、Haemophilus influenzae、Haemophilus parainfluenzae、Klebsiella pneumoniae、Escherichia coli、Pseudomonas aeruginosa、Moraxella catarrhalis、Chlamydophila pneumoniae、Mycoplasma pneumoniae、Legionella pneumophila、Serratia marcescens、Mycobacterium tuberculosis、Bordetella pertussisからなる群より選択される少なくとも１つの細菌に対する免疫応答を誘発するために使用される。特に、ワクチン組成物は、Streptococcus pneumonia又はHaemophilus influenzaに対して作られる。より具体的には、ワクチン組成物は、型決定不可能な（Non-typeable）Haemophilus influenzae（ＮＴＨｉ）に対して作られる。典型的には、ワクチン組成物は典型的に、殺傷されたか、又は不活性化された（たとえば、弱毒化された）全細菌単離物（１以上）を含有する。しかしながら、外細胞膜及び／若しくは表面抗原を含むか又はそれからなる可溶性抗原又は微粒子抗原もまた好適であり得、又は殺傷された生物全体の代わりになり得る。一つ以上の実施形態では、選択された単離物（１以上）の外細胞膜画分又は膜タンパク質（１以上）が使用される。たとえば、ＮＴＨｉ ＯＭＰ Ｐ６は、高度に保存された１６kDaのリポタンパク質であって（Nelson, 1988）、これはヒト殺菌性抗体のターゲットであり、またヒト及び動物モデルの双方において保護を誘導する。慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）で、ＯＭＰ Ｐ６は、ＮＴＨｉ感染からの相対的な保護に関連するリンパ球増殖応答を惹起することが示されている（Abe, 2002）。したがって、ＯＭＰ Ｐ６又は他の好適な任意の外膜ＮＴＨｉタンパク質、ポリペプチド（たとえば、Ｐ２、Ｐ４及びＰ２６）又はこのようなタンパク質又はポリペプチドの抗原性フラグメントは、ＮＴＨｉワクチンに応用され得る。可溶性の及び／又は微粒子抗原は、殺傷された又は選択された生存単離物（１以上）を崩壊させることによって調製され得る。ワクチンにおいて使用するための画分は次いで、遠心分離、濾過及び／又は当該技術分野で公知のその他の適切な技術によって調製され得る。超音波処理、又は適切な界面活性剤を利用した溶解及び攪拌、並びにこのような技術の組み合わせを含め、必要なレベルの細胞分布を達成する任意の方法を採用できる。超音波処理が採用される場合、必要とされる程度の細胞分布、又は可溶性物質及び／又は特定のサイズ若しくはサイズ範囲の微粒子状物質の生成を成し遂げるために、単離物はいくつかの超音波処理工程に付され得る。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、アジュバント、特にＴＬＲアゴニストを含む。１つの実施形態では、ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２、又はＴＬＲ１３アゴニストからなる群より選択される。
【００５０】
特定の実施形態では、酸素要求性を高め、酸素補給が提供されてもよい。
【００５１】
本発明は、以下の図面及び実施例によってさらに例証されるであろう。しかしながら、これらの実施例及び図面は、本発明の範囲を多少なりとも限定するものとして解釈されるべきでない。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】ＣＯＰＤ患者は、肺炎レンサ球菌（Streptococcus pneumoniae（Ｓｐ））に対して反応欠損（defective response）がある。ＩＬ−１７及びＩＬ−２２の生成を、非喫煙の健康な被験者（対照）、喫煙の健康な被験者及びＣＯＰＤ患者由来の単核細胞からの上清におけるＥＬＩＳＡによって評価した。結果を平均±ＳＥＭで表した。＊：対照に対し、ｐ＜０．０５。
【図２】ＩＬ−１９、ＩＬ−２０及びＩＬ−２４の発現は、タバコ煙（ＣＳ）への曝露、及びS. pneumoniae（ＳＰ）での感染により、野生型マウスの肺における両方の刺激間の相加効果を伴って誘導された。
【図３】ヒト気道上皮細胞（ＡＥＣ）ＢＥＡＳ−２Ｂ細胞におけるＩＬ−１９及びＩＬ−２４のｍＲＮＡ発現は、ＣＳ抽出物（ＣＳＥ）への曝露によって誘導されたが、S. pneumoniae（ＳＰ１）での感染による誘導はなされなかった。ＣＳＥは、１／３０又は１／６０希釈のいずれか（ＣＳＥ３０対ＣＳＥ６０）で添加された。
【図４】気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）、及びS. pneumoniae（ＳＰ１）で感染させてアイソタイプ対照（ＩｇＧ）又は抗ＩＬ−２０Ｒβ抗体のいずれかで処置したＣＯＰＤマウスからの肺溶解液中の細菌量を測定した。ＢＡＬ及び肺は、感染の３日後に採集された。
【図５】気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）、及び型決定不可能なHaemophilus influenza（ＮＴＨｉ）で感染させてアイソタイプ対照（ＩｇＧ）又は抗ＩＬ−２０Ｒβ抗体のいずれかで処置したＣＯＰＤマウスからの肺溶解液中の細菌量を測定した。ＢＡＬ及び肺は、感染の１日後に採集された。＊＊：それぞれ、空気に曝露されたか、又はＣＳに曝露された（ＣＯＰＤ）感染マウスを比較して、ｐ＜０．０１。
【図６】型決定不可能なH. influenza（ＮＴＨＩ）で感染させて、アイソタイプ対照（ＮＴＨＩ＋ＰＢＳ）又は抗ＩＬ−２０Ｒβ抗体のいずれかで処置したＣＯＰＤマウスからの肺細胞においてＩＬ−２２の分泌を測定した。肺細胞は、感染の１日及び２日後に採集され、培地単独中、又は熱殺菌した細菌（ＨＫ）の存在下に３７℃で３日間インキュベーションされた。
【図７】S. pneumoniae（Ｓｐ１）で感染させて、アイソタイプ対照（ＩｇＧ）又は抗ＩＬ−２０Ｒβ抗体のいずれかで処置したＣＯＰＤマウスからの肺組織における、抗微生物ペプチドＳ１００Ａ８及びＲＥＧ３ＧをコードするｍＲＮＡの発現。肺は、感染の３日後に採集された。
【図８】ＩＬ−２０サイトカイン及び抗ＩＬ−２０Ｒβ抗体での処置が、S. pneumoniae（Ｓｐ１）による活性化に応答したＴ細胞のＩＬ−１７及びＩＬ−２２生成を単球由来樹状細胞（ＭＤＤＣ）が刺激する能力を異なる態様で改変させた。実施例
【００５３】
緒言：細菌性合併症は、ＣＯＰＤなどの実に様々な肺炎症性障害の際の共通特徴である。ＣＯＰＤの患者では、急性増悪はほとんど、インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）及び肺炎レンサ球菌（Streptococcus pneumoniae）に起因することが多い細菌感染に関連している。これらの 感染は、好中球動員により特徴付けられる強い炎症反応を誘起し、炎症誘発性サイトカインの生成を増加させ、疾患の進行を促進した。ＣＯＰＤの増悪の間の細菌感受性を担うメカニズムをより明確にするために、適切なモデルが必要とされている。本発明者らは、１２週間にわたる、タバコ煙（ＣＳ）への慢性的な曝露によって、ＣＯＰＤのマウスモデルを既に開発している。この曝露は、肺における自然免疫反応と、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞の活性化とを強く改変させる（Pichavant M et al., Mucosal Immunol, 2014）。細菌感受性を担うメカニズムをより明確にするために、本発明者らは今や、ＣＳに慢性的に曝露させ、次いでH. influenzae及びS. pneumoniaeの亜致死用量の局所投与によって感染させた、Ｃ５７／ＢＬ６マウスにおけるＣＯＰＤ増悪の実験モデルを開発している。
【００５４】
細菌感染に対するＩＬ−１７及びＩＬ−２２応答は、ＣＯＰＤマウスにおいて改変される：
感染ＣＯＰＤマウスは、ＳＰで強い肺感染（炎症反応の増加を伴う）をもたらすが、一方ナイーブなマウスは、その細菌を２４時間以内に除去できる。細菌クリアランスにおけるこの欠陥は、ＢＡＬ中、及び肺細胞の再刺激後のＩＬ−１７及びＩＬ−２２両者の生成の低下を伴う。ＩＬ−１７及びＩＬ−２２における欠陥は、感染され空気に曝露されたマウスに比した、感染されたＣＯＰＤマウスの肺において、ＮＫ、ＮＫＴ細胞のパーセンテージや、これらのサイトカインに陽性な自然リンパ球細胞（ＩＬＣ）の低減に関連している。さらに、リコンビナントＩＬ−２２の補充は、ＣＯＰＤマウスにおける細菌のクリアランスを促進させ、またS. pneumoniaeによる感染の結果を限定する。ＣＯＰＤマウスにおいて、H. influenzaeでの感染は、ＩＬ−２２の生成の欠陥を伴い、ＳＰに対して観察されたと同じ細胞（ＩＬＣ、ＮＫ及びＮＫＴ細胞）が関与していた。H. influenzaeによる感染の際のＩＬ−２２の役割は未知であるので、本発明者らは、ＩＬ−２２−／−マウスが、ＣＯＰＤマウスの表現型と近いもの（感受性増大、高い炎症反応及び肺リモデリング）を再生することを観察した。これらのデータは、ＣＯＰＤマウスが対照マウスよりもH. influenzae及びS. pneumoniaeによる感染に、感受性がより高く、そしてＩＬ−１７及び／又はＩＬ−２２の生成欠損が、細菌で誘導されたＣＯＰＤ増悪の発生を助け得ることを示す。
【００５５】
細菌感染に対するＩＬ−１７及びＩＬ−２２応答は、ＣＯＰＤ患者からの単核細胞において改変される：
ＩＬ−１７及びＩＬ−２２の生成の欠陥は、ＣＯＰＤの際の細菌感染に対する感受性にある役割を果たすかもしれないが、ＡＥ−ＣＯＰＤの患者からの肺におけるこれらのサイトカインの濃度を報告しているデータはない。ＣＯＰＤ患者が、細菌に応答してＴｈ１７サイトカインを生成する許容能力を見積もるために、本発明者らは先ず、健康な喫煙者及び非喫煙者と比較して、ＣＯＰＤ患者からの血液単核細胞（ＭＮＣ）のS. pneumoniaeに対する応答を分析する。フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）の添加によって、ＭＮＣ活性化の陽性対照も含められた。刺激なしの細胞におけるサイトカインの濃度は、３群の間で有意に異なっていなかった（図１）。一方、非喫煙者（対照）及び喫煙者において両者の刺激が、ＩＬ−１７及びＩＬ−２２のレベルを有意に増加させ、Ｓｐへの曝露はＣＯＰＤ患者におけるこれらのサイトカインの分泌を有意に増幅させることはなかった。ＰＨＡに対する応答も、主にＩＬ−１７及びＩＬ−２２に対して、ＣＯＰＤ患者において部分的に改変されていた。S. pneumoniaeに応答したこれらのサイトカインに対する細胞ソースを同定するために、本発明者らはこれらのＭＮＣにおけるＩＬ−１７及びＩＬ−２２についての細胞内染色を分析した。喫煙者及び非喫煙者と比較して、ＩＬ−１７及びＩＬ−２２の生成は、ＣＯＰＤ患者からのＬｉｎ−（潜在的にＩＬＣ）、ｉＮＫＴ及びＮＫ細胞において改変されたがＴγδ細胞では改変されなかった（データ示さず）。
【００５６】
タバコの煙への曝露後、及び細菌感染に応答したＩＬ−２０サイトカイン類の生成：
ＩＬ−２０サイトカイン類はＩＬ−２２に関連しており、それらの生成はいくらかの細菌（黄色ブドウ球菌）によって誘導されるので、本発明者らは我々の実験モデルにおいてこれらのサイトカインの発現を評価した。ＣＳへの慢性的な曝露後、対照（空気に曝露された動物）と比べて、ＣＯＰＤマウスの肺ではＩＬ−１９及びＩＬ−２０ ｍＲＮＡの発現が増加していた（図２）。加えて、S. pneumoniaeで感染された空気マウスは、ＩＬ−１９及びＩＬ−２４を生成しなかったが、一方ＩＬ−２０ ｍＲＮＡ発現はアップレギュレーションされた。ＣＯＰＤマウスにおいて、S. pneumoniaeでの感染は、非感染ＣＯＰＤマウスの結果と比較しても、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０及びＩＬ−２４の発現を顕著に増強させた。
【００５７】
型決定不可能なH. influenzae（ＮＴＨＩ）での感染後にも、同様の結果、すなわち、これらのサイトカインの発現に対するＣＳ曝露及び細菌感染の付加的効果が得られた。
【００５８】
本発明者らはまた、ＣＳ抽出物（ＣＳＥ）及び／又は細菌によってin vitroで活性化された、ヒト樹状細胞（ＤＣ）及び気道上皮細胞（ＡＥＣ）におけるこれらのサイトカインの発現を分析した。図３に報告されるように、ＳＰ１での感染はＩＬ−１９及びＩＬ−２４の発現を有意に増加させなかった。対照的に、ＣＳＥへの曝露は、サイトカイン単独又はS. pneumoniaeの存在下の双方に対して強い効果があった。同様の結果が、単球由来ＤＣでも得られた（データ示さず）。
【００５９】
ＣＯＰＤの際の細菌感染に応答するＩＬ−２０サイトカイン類の機能：
Myles IA et al（Nat Immunol. 2013）は、ＩＬ−２０レセプターを介するシグナル伝達がＩＬ−１７及びＩＬ−２２の生成を阻害して皮膚感染を促進することを報告していたので、本発明者らは、ＣＯＰＤマウスの細菌感染で観察されるＩＬ−１７及びＩＬ−２２応答の欠陥に、これらのレセプターが関係しているという仮定を立てた。これを立証するために、本発明者らはＩＬ−２０Ｒβサブユニットを認識する中和抗体を用いた。このレセプターは、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０又はＩＬ−２４に結合する両レセプター（ＩＬ−２０Ｒα／ＩＬ−２０Ｒβ、ＩＬ−２２Ｒα／ＩＬ−２０Ｒβ）と共通である。この市販の抗体、抗ＩＬ−２０Ｒβ（クローン２０ＲＮＴＣ、ヒト及びマウスの両方を認識した）は、感染の１日前、及び翌日に腹腔内に投与される（５０μg/注射／マウス）。これらの予備実験のために、本発明者らは、細菌量、及びＴｈ１７サイトカインの発現を分析した。
【００６０】
図４に示すとおり、阻止的抗ＩＬ−２０Ｒβ抗体での処置は、ＢＡＬ中、及びS. pneumoniaeでの感染後の肺組織中の細菌量を強く低減させた。H. influenzaeでの感染後も、同様の結果が得られた（データ示さず）。対照的に、空気中で感染されたマウスでは、この処置は穏やかな効果であるか又は効果がなく、本抗体の活性がＩＬ−２０Ｒリガンドの発現レベルに関連することを示唆していた。
【００６１】
平行して、本発明者らは、感染されたＣＯＰＤマウスの肺におけるTh17サイトカインの発現を評価した。図５に示すとおり、NTHIでの感染の１日後でも２日後でも、アイソタイプ対照を与えたマウスと比べて、抗ＩＬ−２０Ｒb抗体で処置したＣＯＰＤマウスからの胚細胞において、ＩＬ−２２の分泌の増加が検出された。
【００６２】
結論：まとめると、これらのデータで強調されるのは、ＩＬ２０サイトカイン類のアンタゴニスト（たとえば、阻止的抗ＩＬ−２０Ｒβ抗体）の興味対象を、潜在的にＩＬ−２２の生成の増加による、ＣＯＰＤマウスにおける感染への感受性に限定することである。
【００６３】
参考文献：
本願全体にわたって、本発明が属する技術分野の状態を種々の参考文献が記載している。これらの参考文献の開示は、参照により本願の開示に組み入れられる。
【表１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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