(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
４−［（Ｓ）−２−アゼチジン−１−イル−１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−エチルアミノ］−キナゾリン−８−カルボン酸アミド、またはその生理学的に許容し得る塩、およびＨｅｒ２のインヒビター、またはその生理学的に許容し得る塩を含む、がんの予防または処置のための化合物の混合物。
【請求項２】
Ｈｅｒ２インヒビターが、トラスツズマブまたはラパチニブである、請求項１に記載の化合物の混合物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の化合物の混合物および、任意に、賦形剤および／またはアジュバントを含む、がんの予防または処置のための医薬組成物。
【請求項４】
（ａ）４−［（Ｓ）−２−アゼチジン−１−イル−１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−エチルアミノ］−キナゾリン−８−カルボン酸アミドまたはその生理学的に許容し得る塩の有効量および
（ｂ）Ｈｅｒ２インヒビターまたはその生理学的に許容し得る塩の有効量
の別個のパックからなる、がんの予防または処置のためのキット。
【請求項５】
４−［（Ｓ）−２−アゼチジン−１−イル−１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−エチルアミノ］−キナゾリン−８−カルボン酸アミド、またはその生理学的に許容し得る塩、およびＨｅｒ２インヒビター、またはその生理学的に許容し得る塩を含む、がんの予防または処置のための医薬。
【請求項６】
がんが、ヒト乳がんである、請求項５に記載の医薬。
【請求項７】
４−［（Ｓ）−２−アゼチジン−１−イル−１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−エチルアミノ］−キナゾリン−８−カルボン酸アミドおよびＨｅｒ２インヒビターが同時に対象へ投与される、請求項５または６に記載の医薬。
【請求項８】
４−［（Ｓ）−２−アゼチジン−１−イル−１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−エチルアミノ］−キナゾリン−８−カルボン酸アミドおよびＨｅｒ２インヒビターが経時的に対象へ投与される、請求項５または６に記載の医薬。
【請求項９】
Ｈｅｒ２インヒビターが最初に投与される、請求項８に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、４−［（Ｓ）−２−アゼチジン−１−イル−１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−エチルアミノ］−キナゾリン−８−カルボン酸アミド（以降、化合物Ａと称す）および／またはその生理学的に許容し得る塩および溶媒和物、ならびにＨＥＲ２（ヒト上皮成長因子受容体２）としても知られる受容体チロシン−タンパク質キナーゼｅｒｂＢ−２のインヒビターの組合せ、ならびにかかる組合せのがんの処置のための使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明の背景技術
化合物Ａ、その調製のためのプロセスおよびがんの処置のためのその使用は、ＷＯ２０１２／０６９１４６に開示されている。この化合物は、種々の細胞ベースのアッセイで実証されるように、新規で選択的な、高度に強力な、ｐ７０Ｓ６ＫおよびＡｋｔのデュアルインヒビターである。化合物Ａは、がん細胞株の広範なパネルに対して強力な抗腫瘍活性を呈することが示された。乳がん細胞、神経膠芽腫細胞、子宮体がん細胞および卵巣癌腫細胞は、化合物Ａに対してとくに感受性が高い。
【０００３】
タンパク質キナーゼは、細胞内の広範なシグナル伝達プロセスの調節の原因となる構造的に関連のある酵素の大きなファミリーを構成する（Hardie, G. and Hanks, S. (1995) The Protein Kinase Facts Book. I and II, Academic Press, San Diego, CA）。キナーゼは、それらがリン酸化する物質によってファミリーにカテゴライズされ得る（例、タンパク質−チロシン、タンパク質−セリン／スレオニン、脂質等）。配列モチーフは、これらのキナーゼファミリーの各々に一般的に対応することが同定されている（例、Hanks, S.K., Hunter, T., FASEB J., 9:576-596 (1995); Knighton, et al., Science, 253:407-414 (1991); Hiles, et al., Cell, 70:419-429 (1992); Kunz, et al., Cell, 73:585-596 (1993); Garcia-Bustos, et al., EMBO J., 13:2352-2361 (1994)）。
【０００４】
タンパク質キナーゼは、それらの制御機構によって特徴づけられ得る。これらの機構には、例えば、自己リン酸化、他のキナーゼによるトランスリン酸化、タンパク質−タンパク質相互作用、タンパク質−脂質相互作用およびタンパク質−ポリヌクレオチド相互作用が含まれる。個別のタンパク質キナーゼは、１つより多い機構によって制御され得る。
【０００５】
キナーゼは、増殖、分化、アポトーシス、運動、転写、翻訳および他のシグナルプロセスを含むがこれらに限定されない多くの異なる細胞プロセスを、ホスフェート基を標的タンパク質へ添加することにより制御する。これらのリン酸化イベントは、標的タンパク質の生物学的機能をモジュレートまたは制御することができる分子的なオン／オフスイッチとして作用する。標的タンパク質のリン酸化は、種々の細胞外シグナル（ホルモン、神経伝達物質、成長および分化因子等）、細胞サイクルイベント、環境的なまたは栄養的なストレス等に反応して生じる。適切なタンパク質キナーゼは、例えば、代謝酵素、制御タンパク質、受容体、細胞骨格タンパク質、イオンチャネルまたはポンプ、または転写因子を、シグナル経路において活性化または不活化（直接的または間接的のいずれかで）するために機能する。タンパク質リン酸化の欠陥調節による未調節シグナルは、例えば、炎症、がん、アレルギー／喘息、免疫系の疾患および症状、中枢神経系の疾患および症状、ならびに血管新生を含む数々の疾患において関係づけられてきた。
【０００６】
７０ｋＤａのリボソーム性タンパク質キナーゼｐ７０Ｓ６Ｋ（ＳＫ６、ｐ７０／ｐ８５  Ｓ６キナーゼ、ｐ７０／ｐ８５リボソーム性Ｓ６キナーゼおよびｐｐ７０Ｓ６Ｋとしてもまた知られる）であるタンパク質キナーゼ７０Ｓ６Ｋは、タンパク質キナーゼのＡＧＣサブファミリーのメンバーである。ｐ７０Ｓ６Ｋは、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／ＡＫＴ経路の構成であるセリン−スレオニンキナーゼである。ｐ７０Ｓ６ＫはＰＩ３Ｋの下流にあり、活性化は、数々の分裂促進因子、ホルモンおよび成長因子に反応して、数々の場所でのリン酸化を介して生じる。ｐ７０Ｓ６Ｋ活性は、ラパマイシンがｐ７０Ｓ６Ｋ活性を阻害するために作用することから、ｍＴＯＲ含有複合体（ＴＯＲＣ１）の調節下にまたある。ｐ７０Ｓ６Ｋは、ＰＩ３Ｋ下流標的ＡｋｔおよびＰＫＣζによって制御される。Ａｋｔは、ＴＳＣ２を直接的にリン酸化および不活化し、それによって、ｍＴＯＲを活性化する。加えて、ラパマイシンではなくＷｏｒｔｍａｎｎｉｎによって阻害されるｐ７０Ｓ６Ｋの変異体アレルを伴う実験は、Ｐｌ３Ｋ経路が、ｍＴＯＲ活性の制御から独立したｐ７０Ｓ６Ｋに対する効果を呈することができることを示唆する。
【０００７】
酵素ｐ７０Ｓ６Ｋは、Ｓ６リボソーム性タンパク質のリン酸化によってタンパク質合成をモジュレートする。Ｓ６リン酸化は、リボソーム性タンパク質および翻訳伸長因子を含む翻訳アパラタス（これらの増加した発現は、細胞成長および増殖にとって必須である）の構成をコードするｍＲＮＡの増加した翻訳と相関する。これらのｍＲＮＡは、それらの５’転写開始（５’ＴＯＰと名付ける）にてオリゴピリミジン管を含み、これは、翻訳段階でのこれらの制御のために必須であることが示された。
【０００８】
翻訳におけるその関与に加え、ｐ７０Ｓ６Ｋ活性化はまた、細胞サイクル調節、神経細胞分化、腫瘍転移に重要な細胞運動および細胞反応の制御、免疫反応および組織修復において関係づけられてきた。ｐ７０Ｓ６Ｋに対する抗体は、分裂促進的な反応によって駆動されるラット線維芽細胞のＳフェーズへの移行を消失させ、これは、ｐ７０Ｓ６Ｋ機能が、細胞サイクルにおいて、Ｇ１からＳフェーズへの進行のために必須であることを示唆する。さらには、細胞サイクルのＧ１からＳフェーズでの細胞サイクル増殖のラパマイシンによる阻害は、過剰リン酸化され、活性化された形態のｐ７０Ｓ６Ｋ生成の阻害の結果として同定されている。
【０００９】
腫瘍細胞増殖および細胞のアポトーシスからの保護におけるｐ７０Ｓ６Ｋのための役割は、腫瘍組織における成長因子受容体シグナル伝達、過剰発現および活性化における関与に基づいて支持される。例えば、ノーザンおよびウエスタン分析では、ＰＳ６Ｋ遺伝子の増幅が、ｍＲＮＡおよびタンパク質発現の夫々における対応する増加に関連付けられたことを明らかにした（Cancer Res. (1999) 59: 1408-11-Localization of PS6K to Chromosomal Region 17q23 and Determ ination of Its Amplification in Breast Cancer）．
【００１０】
染色体１７ｑ２３は、原発性乳腫瘍の２０％までにおいて、ＢＲＣＡ２変異を含む乳腫瘍の８７％において、およびＢＲＣＡ１変異を含有する腫瘍の５０％において、ならびに他のがん型、例えば膵臓がん、膀胱がんおよび神経芽細胞腫において増幅される（M. Barlund, O. Monni, J. Kononen, R. Cornelison, J. Torhorst, G. Sauter, O.-P. KallioniemiおよびKallioniemi A., Cancer Res., 2000, 60:5340-5346）。乳がんにおける１７ｑ２３増幅がＰＡＴ１、ＲＡＤ５１Ｃ、ＰＳ６ＫおよびＳＩＧＭＡ１Ｂ遺伝子を含むことが示された（Cancer Res. (2000): 60, pp. 5371-5375）。ｐ７０Ｓ６Ｋ遺伝子は、この領域における増幅および過剰発現の標的であると確認され、増幅と予後不良との間の統計的に有意な関連性が、観察された。
【００１１】
ｐ７０Ｓ６Ｋ活性化の臨床的阻害は、ＣＣＩ−７７９（ラパマイシンエステル）、すなわち上流のキナーゼｍＴＯＲの阻害剤で処置した腎癌患者において観察された。ｐ７０Ｓ６Ｋ活性の疾患進行と阻害との間の有意な線形の関連性が、報告された。
【００１２】
エネルギーストレスに応答して、腫瘍抑制因子ＬＫＢ１は、ＡＭＰＫを活性化し、それは、ＴＳＣ１／２複合体をリン酸化し、それがｍＴＯＲ／ｐ７０Ｓ６Ｋ経路を不活化することを可能にする。ＬＫＢ１における変異によって、ポイツ・ジェガース症候群（ＰＪＳ）が発生し、ここでＰＪＳを有する患者は、がんを発症する傾向が一般的な人口より１５倍高い。さらに、肺腺癌の１／３は、不活性化ＬＫＢ１変異を保有する。
【００１３】
ｐ７０Ｓ６Ｋは、代謝疾患及び障害に関与していた。ｐ７０Ｓ６Ｋの欠如が年齢および食事誘発肥満に対して保護し、一方でインスリン感度を増強することが、報告された。代謝疾患および障害、例えば肥満、糖尿病、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、高血糖、高アミノ酸血症および高脂血症におけるｐ７０Ｓ６Ｋについての役割は、発見に基づいて支持される。
【００１４】
ｐ７０Ｓ６Ｋ阻害に好適であると記載された化合物は、WO 03/064397、WO 04/092154、WO 05/054237、WO 05/056014、WO 05/033086、WO 05/117909、WO 05/039506、WO 06/120573、WO 06/136821、WO 06/071819、WO 06/131835、WO 08/140947、WO 10/093419およびWO 12/069146に開示されている。
【００１５】
ｐ７０Ｓ６Ｋだけでなく、キナーゼＡｋｔ（ＰＩ３Ｋ経路においてｐ７０Ｓ６Ｋの上流）もまた阻害する化合物Ａが、より効率的なＰＩ３Ｋ経路閉鎖を提供し（Choo AY, Yoon SO, Kim SG, Roux PP, Blenis J. Proc. Natl Acad Sci U S A. 2008 Nov 11;105(45):17414-9.）、かつ任意のＡｋｔフィードバックループ活性化の捕獲を可能にする（Tamburini et al. Blood 2008;111:379-82）ことが、期待される。
【００１６】
本発明は、化合物Ａのための医薬利用をさらに前進させるための方法を探索する目的を有していた。これに関し、化合物ＡとＨＥＲ２のインヒビターとの組合せが、in vitroおよびin vivoで研究された。
【００１７】
ＣＤ３４０（分化３４０の一群）またはプロトオンコジーンＮｅｕとしてもまた知られる受容体チロシン−タンパク質キナーゼｅｒｂＢ−２は、ヒトではＥＲＢＢ２遺伝子によりコードされるタンパク質である。ＥＲＢＢ２遺伝子は、ＨＥＲ２（ヒト上皮成長因子受容体から）としても頻繁に称される。
【００１８】
ＨＥＲ２は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ）ファミリーのメンバーである。このオンコジーンの増幅または過剰発現は、一定の高悪性度のタイプの乳がんの発達および進行において重要な役割を担うことが示されてきた。近年では、タンパク質は、約３０％の乳がん患者のための治療の重要なバイオマーカおよび標的となっている。
【００１９】
ＥｒｂＢファミリーは、４種の細胞膜結合受容体チロシンキナーゼから構成される。全４種は、多数のシグナル分子と相互作用し、リガンド依存的な活性とリガンド非依存的な活性の両方を呈することができる、細胞外リガンド結合ドメイン、膜貫通型ドメイン、およびおよび細胞内ドメインを含有する。ＨＥＲ２は、他の３種の受容体のうちの任意のものとヘテロ二量体化することができ、他方のＥｒｂＢ受容体の好ましい二量化パートナーとして考えられる。二量化は、受容体の細胞質ドメイン内のチロシン残基の自己リン酸化を引き起こし、種々のシグナル経路を開始させる。ファミリーの他方のメンバー上皮成長因子受容体、ｅｒｂＢ−３（ニューレグリン−結合；キナーゼドメインを有しない）、およびｅｒｂＢ−４である。
【００２０】
ＨＥＲ２によるシグナル経路活性化は以下を含む：マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）およびホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ。
【００２１】
概略すると、ＥｒｂＢファミリーの受容体を介したシグナル伝達は、細胞増殖を促進してアポトーシスに対抗し、よって、非制御の細胞成長が生じるのを阻止するために堅固に制御されなければならない。
【００２２】
ＥＲＢＢ２遺伝子の増幅または過剰発現は、乳がんの約１５〜３０％において生じる。それは、増加した疾患の再発および予後不良に強力に関連づけられる。過剰発現は、卵巣、胃、および子宮漿液性内膜癌腫などの高悪性度の形態の子宮がんにおいて生じることもまた知られる。
【００２３】
さらには、多様な構造変性は、この受容体のリガンド依存性惹起を生じることが確認され、これは、受容体過剰発現の非存在下で行われる。ＨＥＲ２は、種々の腫瘍で見られ、これらの腫瘍のうちのいくつかは、ＨＥＲ２の膜貫通型ドメインを特定する配列における点変異を有する。膜貫通型ドメインにおけるグルタミン酸のバリンでの置換により、リガンドなしでのこのタンパク質の恒常的な二量体化を生じさせることができる。
【００２４】
驚くべきことに、化合物Ａは、ＨＥＲ２インヒビターと組み合わせた場合に、相乗的に作用することが本特許出願の発明者らによって見出された。
【００２５】
Ｈｅｒ２のインヒビターの例は、モノクローナル抗体トラスツズマブ（ハーセプチンなる商品名で販売）である。トラスツズマブは、ＨＥＲ２受容体の細胞外ドメインに高親和性および特異性で結合する、高度に精製された組み換えＤＮＡ由来のヒト化モノクローナルＩｇＧＩκ抗体である。これは、ＨＥＲ２が過剰発現されるがんの処置においては、承認されている。
【００２６】
Ｈｅｒ２の小分子インヒビターの例は、ラパチニブ（タイバーブなる商品名で販売）である。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】いくつかのがん細胞株における化合物Ａとラパチニブとの組み合わせによる効果の評価。
【図２】患者由来の乳がんの異種移植モデルにおける化合物Ａとトラスツズマブとの組合せによる効果の評価
【００２８】
発明の詳細な説明
本発明は、ＨＥＲ２が過剰発現されるがん（Ｈｅｒ２＋がん）の処置の予防および／または処置のための方法であって、対象へ化合物Ａおよび／またはその生理学的に許容し得る塩および溶媒和物、および１種または２種以上のＨｅｒ２のインヒビターを投与することを含む、前記方法に関する。
【００２９】
化合物Ａおよび／またはその生理学的に許容し得る塩および溶媒和物、ならびにＨｅｒ２インヒビターは、同時にまたは経時的に投与することができる。同時に投与される場合、化合物Ａおよび／またはその生理学的に許容し得る塩および溶媒和物、ならびにＨｅｒ２インヒビターは、１つの医薬組成物における化合物の混合物として、または別個の医薬組成物として、投与し得る。
【００３０】
好ましい態様において、本発明の方法は、経時的に投与される、化合物Ａおよび／またはその生理学的に許容し得る塩および溶媒和物、ならびに１種のＨｅｒ２インヒビターの使用を含む。さらに好ましい態様において、Ｈｅｒ２インヒビターは、最初に投与される。
【００３１】
本発明は、特に、ＨＥＲ２＋乳がん、胃または胃食道接合部腺癌からなる群から選択される腫瘍の予防および／または処置のための方法に関する。しかしながら、処置方法は、膀胱がん、肺がん、卵巣がん、子宮体がん、食道がん、唾液腺がん等などの、トラスツズマブに反応を呈する他のＨＥＲ２＋腫瘍型、またはそれらの分子プロファイルに基づいてトラスツズマブでの処置に反応する他の腫瘍にもまた関する。
【００３２】
好ましい態様において、本発明の方法は、がんの処置に、および特に、上記または下記の腫瘍に関する。
【００３３】
さらに、本発明は、医薬品活性成分（ＡＰＩ）化合物Ａの化合物の混合物、およびその生理学的に許容し得る塩および溶媒和物、ならびに１種のＨｅｒ２インヒビターを含む医薬組成物に関する。Ｈｅｒ２インヒビターが、ラパチニブなどの小さい化学分子（抗体、抗体断片または抗体コンジュゲートなどの生物分子とは対照的に）の場合、医薬組成物における化合物の混合物は、この小分子Ｈｅｒ２インヒビターの生理学的に許容し得る塩および溶媒和物をもまた含み得る。
【００３４】
好適な酸付加塩は、全ての生理学的にまたは薬学的に許容し得る酸の無機または有機塩であり、例えばハロゲン化物、特にハイドロクロライドまたは臭化水素酸塩、乳酸塩、硫酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、シュウ酸塩、酢酸塩、リン酸塩、メチルスルホン酸塩、安息香酸塩またはｐ-トルエンスルホン酸塩である。
【００３５】
化合物Ａおよび小分子Ｈｅｒ２インヒビターの溶媒和物は、それらの相互引力により形成する、不活性な溶媒分子の化合物Ａへのアダクション（adduction）を意味するものとされる。溶媒和物は、例えば、一水和物または二水和物などの水和物、またはアルコラート、すなわちメタノールまたはエタノールなどのアルコールとの添加化合物である。
【００３６】
好ましい塩形態の化合物Ａは、その遊離な塩である。また、好ましいものは、そのハイドロクロライド、ジヒドロクロライド、メシル酸、コハク酸またはマロン酸塩である。
【００３７】
表現「有効量」は、組織、系、動物またはヒトにおいて、例えば、研究者または医師によって求められるまたは望まれる生物学的または医学的反応を生じさせる医薬または医薬活性成分の量を示す。
【００３８】
さらに、表現「治療有効量」は、この量を受けていない対応する対象と比べて、以下の結果を有する量を示す：改良された処置、治癒、疾患、シンドローム、症状、訴え、障害の防止または除去、または副作用の防止、またはまた疾患、症状または障害の進行の軽減。用語「治療有効量」は、正常な生理学的機能を増加させるために効果的な量をもまた包含する。
【００３９】
本発明の医薬組成物は、例えば、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：１００または１：１０００の比率における、２つのＡＰＩの混合物を含む。
【００４０】
医薬組成物はさらに、少なくとも１種の固形、液状および／または半液状賦形剤またはアジュバントを含む。したがって、本発明は、本発明の前記ＡＰＩ混合物および前記賦形剤および／またはアジュバントを含む医薬組成物にもまた関する。
【００４１】
さらに、本発明は、前記医薬組成物の、がんの処置のための医薬の調製のための使用に関する。
【００４２】
本発明は、
（ａ）化合物Ａの有効量を含む医薬組成物、
（ｂ）Ｈｅｒ２インヒビターの有効量を含む医薬組成物、および、任意に，
（ｃ）第三のがん治療剤の有効量を含む医薬組成物
の別個のパックからなるセット（キット）にもまた関する。
【００４３】
セットは、個別のボトル、バッグまたはアンプルなどの好適な容器を含む。セットは、化合物Ａおよび／またはその医薬的に使用可能な塩の有効量を含む医薬組成物、Ｈｅｒ２インヒビターおよび／またはその医薬的に使用可能な塩の有効量を含む医薬組成物、ならびに、任意に、溶解または凍結乾燥形態での別のがん治療剤の有効量を含む医薬組成物を各々含有する別個のアンプルを例えば含み得る。
【００４４】
化合物ＡおよびＨｅｒ２インヒビターと組み合わせることができるがん治療剤は、本発明によると、以下の剤の１種または２種以上、しかし好ましくは１種を含み得る：
【００４５】
−  アルトレタミン、ベンダムスチン、ブスルファン、カルムスチン、クロラムブシル、クロルメチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、イホスファミド、インプロスルファントシル酸塩、ロムスチン、メルファラン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ニムスチン、ラニムスチン、テモゾロミド、チオテパ、トレオスルファン、メクロレタミン、カルボコン、アパジコン、ホテムスチン、グルフォスファミド、パリフォスファミド、ピポブロマン、トロフォスファミド、ウラムスチンなどのアルキル化剤；
【００４６】
−  カルボプラチン、シスプラチン、エプタプラチン、ミリプラチン水和物、オキサリプラチン、ロバプラチン、ネダプラチン、ピコプラチン、サトラプラチンなどの白金化合物；
【００４７】
−  アムルビシン、ビサントレン、デシタビン、ミトキサントロン、プロカルバジン、トラベクテジン、クロファラビン、アムサクリン、ブロスタリシン、ピクサントロン、ラロムスチンなどのＤＮＡ変性剤；
【００４８】
−  エトポシド、イリノテカン、ラゾキサン、ソブゾキサン、テニポシド、トポテカン、アモナフィド、ベロテカン、エリプチニウムアセタート、ボレロキシンなどのトポイソメラーゼインヒビター；
【００４９】
−  カバジタキセル、ドセタキセル、エルブリン、イキサベピロン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ビンフルニン、フォスブレタブリン、タセタキセルなどの微小管変性剤：
【００５０】
−  アスパラギナーゼ、アザシチジン、レボホリナートカルシウム、カペシタビン、クラドリビン、シタラビン、エノシタビン、フロクスリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、メルカプトプリン、メトトレキサート、ネララビン、ペメトレキセド、プララトレキサート、アザチオプリン、チオグアニン、カルモファー、ドキシフルリジン、エラシタラビン、ラルチトレキセド、サパシタビン、テガファー、トリメトレキサートなどの代謝拮抗剤；
【００５１】
−  ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、レバミゾール、ミルテフォシン、マイトマイシンＣ、ロミデプシン、ストレプトゾシン、バルルビシン、ジノスタチン、ゾルビシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、プリカマイシン、アクラルビシン、ペプロマイシン、ピラルビシンなどの抗がん抗体；
【００５２】
−  アバレリクス、アビラテロン、ビカルタミド、ブセレリン、カルステロン、クロロトリアニセン、デガレリクス、デキサメタゾン、エストラジオール、フルオコルトロン、フルオキシメステロン、フルタミド、フルベストラント、ゴセレリン、ヒストレリン、リュープロレリン、メゲストロール、ミトタン、ナファレリン、ナンドロロン、ニルタミド、オクトレオチド、プレドニゾロン、ラロキシフェン、タモキシフェン、甲状腺刺激ホルモンアルファ、トレミフェン、トリロスタン、トリプトレリン、ジエチルスシルベストロール、アコルビフェン、ダナゾール、デスロレリン、エピチオスタノール、オルテロネル、エンザルタミドなどのホルモン／アンタゴニスト；
【００５３】
−  アミノグルテチミド、アナストロゾール、エキセメスタン、ファドロゾール、レトロゾール、テストラクトン、フォルメスタンなどのアロマターゼインヒビター；
【００５４】
−  クリゾチニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、ニロチニブ、パゾパニブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、バンデタニブ、ベムラフェニブ、ボスチニブ、ゲフィチニブ、アキシチニブ、アファチニブ、アリセルチブ、ダブラフェニブ、ダコミチニブ、ジナシクリブ、ドビチニブ、エンザスタウリン、ニンテダニブ、レンバチニブ、リニファニブ、リンシチニブ、マシチニブ、ミドスタウリン、モテサニブ、ネラチニブ、オランチニブ、ペリホシン、ポナチニブ、ラドチニブ、リゴセルチブ、チピファルニブ、チバンチニブ、チボザニブ、トラメチニブ、ピマセルチブ、ブリバニブアラニネート、セジラニブ、アパチニブ、カボザンチニブＳ−マレート、カルフィルゾミブ、イブルチニブ、イコチニブなどの小分子キナーゼインヒビター；
【００５５】
−  メトキサレン、ポルフィマーナトリウム、タラポルフィン、テモポルフィンなどの光増感剤；
【００５６】
−  アレムツズマブ、ベシレソマブ、ブレンツキシマブベドチン、セツキシマブ、デノスマブ、イピリムマブ、オファツムマブ、パニツムマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、ペルツズマブ、カツマキソマブ、エロツズマブ、エプラツズマブ、ファルレツズマブ、モガムリズマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、オビヌツマブ、オカラツズマブ、オレゴボマブ、ラムシルマブ、リロツムマブ、シルツキシマブ、トシリズマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、マツズマブ、ダロツズマブ、オナルツズマブ、ラコツモバブ、タバルマブなどの抗体；
【００５７】
−  アルデスロイキン、インターフェロンα、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、タソネルミン、テセロイキン、オプレルベキンなどのサイトカイン；
【００５８】
−  デニロイキンジフチトクス、イブリツモマブチウキセタン、イオベングアンＩ１２３、プレドニムスチン、トラスツズマブエムタンシン、エストラムスチン、ゲムツズマブ、オゾガマイシン、アフリベルセプト、シントレデキンベスドトクス、エドトレオチド、イノツズマブ、オゾガマイシン、ナプツモマブエスタフェナトクス、オポルツズマブモナトクス、テクネチウム（９９ｍＴｃ）アルシツモマブ、ビンタフォリデなどの薬剤コンジュゲート；
【００５９】
−  シプロイセル、ビテスペン、エメプピムト−Ｓ、オンコＶＡＸ４、リンドペピムト、トロＶａｘなどのワクチン；
【００６０】
−アリトレチノイン、ベキサロテン、ボルテゾミブ、エベロリムス、イバンドロン酸、イミキモド、レナリドマイド、レンチナン、メチロシン、ミファムルチド、パミドロン酸、ペガスパルガーゼ、ペントスタチン、シプロイセル、シゾフィラン、タミバロテン、テムシロリムス、サリドマイド、トレチノイン、ビスモデギブ、ゾレドロン酸、ボリノスタット、セレコキシブ、シレンジチド、エンチノスタット、エタニダゾール、ガネテスピブ、イドロノキシル、イニパリブ、イクサゾミブ、ロニダミン、ニモラゾール、パノビノスタット、ペレチノイン、プリチデプシン、ポマリドマイド、プロコダゾール、リダフォロリムス、タキニモド、テロトリスタット、チマルファシン、チラパザミン、トセドスタット、トラベデルセン、ウベニメクス、バルスポダール、ゲンジシン、ピシバニル、レオリシン、レタスピマイシンヒドロクロリド、トレバナニブ、ビルリジンなどのその他の剤。
【００６１】
化合物ＡおよびＨｅｒ２インヒビターのとくに好ましい組合せのパートナーは、ＭＭ−１２１（ＨＲＧ１（ニューレグリン−１型Ｉポリペプチド）のＨｅｒ３への結合を特異的に阻止する完全ヒト化抗Ｈｅｒ３抗体）、ＭＭ−１１１（２種の異なる標的タンパク質、ＥｒｂＢ２およびＥｒｂＢ３へ結合する二重特異性抗体）、またはＵ３−１２８７（最初のヒト化Ｈｅｒ３モノクローナル抗体であるＡＭＧ８８８）などのＨｅｒ３インヒビター、あるいは、ＷＯ２０１１／１４４７４９に記載のＨｅｒ３ナノ抗体である。
【００６２】
本発明の化合物および化合物の混合物を、任意の所望される好適な方法を介する投与、例えば、経口（頬側または舌下を含む）、直腸、経鼻、局所（頬側、舌下または経皮を含む）、膣または非経口（皮下、筋肉内、静脈内または皮内を含む）方法によるもののために適合することができる。かかる医薬は、医薬の分野において知られる全てのプロセスを用いて、例えば、活性成分を賦形剤（単数または複数）またはアジュバント（単数または複数）と組み合わせることによって、調製できる。
【００６３】
経口投与のために適合される化合物および化合物の混合物は、例えば、カプセルまたは錠剤；粉末または顆粒；水性または非水性液中の溶液または懸濁液；食用発泡体または発泡体食品；または水中油液体エマルジョンまたは油中水液体エマルジョンなどの別個の単位として投与することができる。
【００６４】
したがって、例えば、錠剤またはカプセルの形態での経口投与の場合において、化合物または化合物の混合物を、経口的な、無毒性の、かつ医薬的に許容し得る不活性な賦形剤、例えばエタノール、グリセロール、水などと組み合わせることができる。粉末を、化合物を好適な微細な大きさに粉砕し、これを同様にして粉砕した医薬賦形剤、例えば食用炭水化物など、例えばデンプンまたはマンニトールなどと混合することによって製造する。風味剤、防腐剤、分散剤および色素が、同時に存在してもよい。
【００６５】
カプセルを、上記のように粉末混合物を調製し、成形したゼラチン殻をそれで充填することによって製造する。流動促進剤および潤滑剤、例えば固体形態での高度に分散性のケイ酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムまたはポリエチレングリコールなどを、充填操作の前に粉末混合物に添加することができる。崩壊剤または可溶化剤、例えば寒天、炭酸カルシウムまたは炭酸ナトリウムなどを、同様に加えて、カプセルを服用した後の化合物または化合物の混合物の有効性を改善することができる。
【００６６】
さらに、所望により、または所要に応じて、好適な結合剤、潤滑剤および崩壊剤ならびに色素を、同様に混合物中に組み込むことができる。好適な結合剤には、デンプン、ゼラチン、天然糖類、例えばグルコースまたはベータ−ラクトース、トウモロコシから製造された甘味剤、天然および合成ゴム、例えばアカシア、トラガカントまたはアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ろうなどが含まれる。これらの投与形態において用いられる潤滑剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれる。崩壊剤には、限定されずに、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンゴムなどが含まれる。
【００６７】
錠剤を、例えば粉末混合物を調製し、混合物を顆粒化または乾燥圧縮し、潤滑剤および崩壊剤を添加し、混合物全体を圧縮して錠剤を得ることによって処方する。粉末混合物を、好適な方法で粉砕した化合物を上記のように希釈剤または塩基と、および任意に結合剤、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチンまたはポリビニルピロリドン、溶解遅延剤、例えばパラフィン、吸収促進剤、例えば第四級塩および／または吸収剤、例えばベントナイト、カオリンまたはリン酸二カルシウムと混合することによって調製する。粉末混合物を、それを結合剤、例えばシロップ、デンプンペースト、アカシア粘液またはセルロースの溶液またはポリマー材料で湿潤させ、それをふるいを通して押圧することによって顆粒化することができる。顆粒化の代替として、粉末混合物を、打錠機に通し、不均一な形状の塊を得、それを崩壊させて、顆粒を形成することができる。
【００６８】
顆粒を、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルクまたは鉱油を添加することによって潤滑化して、錠剤流延型への粘着を防止することができる。次に、潤滑化した混合物を圧縮して、錠剤を得る。本発明の化合物および化合物の混合物をまた、自由流動の不活性賦形剤と組み合せ、次に直接圧縮して、顆粒化または乾燥圧縮工程を行わずに錠剤を得ることができる。セラック密封層、糖またはポリマー材料の層およびろうの光沢層からなる透明な、または不透明な保護層が、存在してもよい。色素を、これらのコーティングに加えて、異なる投与単位間を区別することができるようにすることができる。
【００６９】
経口液体、例えば溶液、シロップおよびエリキシル剤を、投与単位の形態で調製し、したがって所定量が予め特定された量の化合物を含むようにすることができる。シロップを、化合物および化合物の混合物を水性溶液に好適な風味剤と共に溶解することによって調製することができ、一方エリキシル剤を、無毒性アルコール性ビヒクルを用いて調製する。懸濁液を、化合物を無毒性ビヒクル中に分散させることによって処方することができる。可溶化剤および乳化剤、例えばエトキシル化イソステアリルアルコール類およびポリオキシエチレンソルビトールエーテル類、防腐剤、風味添加剤、例えばペパーミント油もしくは天然甘味剤もしくはサッカリン、または他の人工甘味料などを、同様に添加することができる。
【００７０】
経口投与用の投与単位処方物を、所望により、マイクロカプセル中にカプセル封入することができる。処方物をまた、放出が延長されるかまたは遅延されるように、例えば粒子状材料をポリマー、ろうなどの中にコーティングするかまたは包埋することによって調製することができる。
【００７１】
本発明の化合物および化合物の混合物ならびにそれらの塩および溶媒和物をまた、リポソーム送達系、例えば小さな単層小胞（small unilamellar vesicles）、大きな単層小胞（large unilamellar vesicles）、および多層小胞（multilamellar vesicles）の形態で投与することができる。リポソームを、種々のリン脂質、例えばコレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリン類から生成することができる。
【００７２】
本発明の化合物および化合物の混合物をまた、化合物分子が結合する個別のキャリアとしてモノクローナル抗体を用いて送達することができる。化合物および化合物の混合物をまた、標的化された医薬キャリアとしての可溶性ポリマーに結合させることができる。かかるポリマーは、パルミトイル残基により置換されたポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミドフェノール、ポリヒドロキシエチルアスパラタミドフェノールまたはポリエチレンオキシドポリリジンを包含し得る。化合物をさらに、医薬の調節された放出を達成するのに好適な生分解性ポリマーの群、例えばポリ乳酸、ポリ−エプシロン−カプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル類、ポリアセタール類、ポリジヒドロキシピラン類、ポリシアノアクリレート類、およびヒドロゲルの架橋ブロックコポリマーまたは両親媒性ブロックコポリマーに結合し得る。
【００７３】
経皮的投与のために適合される化合物および化合物の混合物を、レシピエントの表皮との長期間の、密接な接触のための独立した硬膏剤として投与することができる。したがって、例えば、活性成分を、Pharmaceutical Res. 1986; 3 (6): 318に一般的に記載されているように、イオン泳動により硬膏剤から送達することができる。
【００７４】
局所投与のために適合される化合物および化合物の混合物を、軟膏、クリーム、懸濁液、ローション、粉末、溶液、ペースト、ゲル、スプレー、エアゾールまたは油として処方することができる。
【００７５】
目または他の外部組織、例えば口および皮膚の処置のために、処方物を、好ましくは、局所用軟膏またはクリームとして適用する。軟膏を施与するための処方物の場合において、化合物または化合物の混合物を、パラフィン系または水混和性クリームベースのいずれかと共に用いることができる。代替的に、化合物または化合物の混合物を、水中油クリームベースまたは油中水ベースを有するクリームを得るために処方することができる。
【００７６】
眼への局所適用のために適合される化合物および化合物の混合物には、活性成分が好適なキャリア、特に水性溶媒で溶解または懸濁される点眼薬が含まれる。
【００７７】
口腔内の局所適用のために適合される化合物および化合物の混合物には、トローチ剤、芳香錠およびマウスウォッシュが包含される。
【００７８】
直腸投与のために適合される化合物および化合物の混合物は、坐薬または浣腸の形態で投与することができる。
【００７９】
キャリア物質が固体である経鼻投与のために適合される化合物および化合物の混合物は、例えば、２０〜５００ミクロンの範囲の粒径を有する粗い粉末を含み、これは、嗅ぎタバコが摂取される様式、すなわち、鼻の近辺にある粉末を含有する容器から鼻孔を介する迅速な吸入により、投与される。キャリア物質としての液体を有する経鼻スプレーまたは点鼻薬としての投与に好適な処方物は、水または油中の活性成分溶液を包含する。
【００８０】
吸入による投与のために適合される化合物および化合物の混合物は、微細な粒子状ダストまたはミストを包含し、これは、エアゾール、噴霧器または吸入器を有する種々のタイプの加圧ディスペンサーによって発生し得る。
【００８１】
膣内投与のために適合される化合物および化合物の混合物を、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、発泡体またはスプレー処方物として投与することができる。
【００８２】
非経口投与のために適合される化合物および化合物の混合物は、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤および溶質を含む水性および非水性の無菌注射溶液であって、それによって処方物が処置されるべきレシピエントの血液と等張になるもの；ならびに懸濁媒体および増粘剤を含み得る水性および非水性の無菌懸濁液を含む。処方物を、単一用量または複数用量の容器、例えば密封したアンプルおよびバイアルにおいて投与し、使用が必要の直前に無菌のキャリア液体、例えば注射用水を添加することしか必要としないようにフリーズドライした（凍結乾燥）状態で貯蔵することができる。レシピに従って調製される注射溶液および懸濁液を、無菌の粉末、顆粒および錠剤から調製することができる。
【００８３】
上記で特定的に述べた構成成分に加えて、本発明の医薬はまた、医薬処方物の特定のタイプに関して当該分野において普通である他の剤を含むことができることは、言うまでもない；したがって、例えば、経口投与に好適な化合物または化合物の混合物は、風味剤を含み得る。
【００８４】
本発明の化合物または化合物の混合物の治療的に有効な量は、例えば、レシピエントの年齢および体重、処置が必要である正確な状態およびその重篤度、処方物の性質および投与の方法を含む多くの要因に依存し、最終的には、処置する医師または獣医師によって決定される。しかしながら、本発明による疾患の処置のためのＡＰＩの有効量は、一般的に、１日あたり０．１〜１００ｍｇ／レシピエント（哺乳動物）の体重１ｋｇの範囲内、とくに典型的には１日あたり１〜１０ｍｇ／体重１ｋｇの範囲内である。よって、体重が７０ｋｇである成体の哺乳動物についての１日あたりの実際の量は、通常は７０〜７００ｍｇであり、ここで、この量を、１日あたり個別の用量として、またはより通常は１日あたり一連の部分用量（例えば２回分、３回分、４回分、５回分もしくは６回分など）で投与し、したがって合計の１日総用量が同一であるようにすることができる。塩もしくは溶媒和物の、またはこの生理学的な機能的誘導体の有効量を、本発明の化合物および化合物の混合物自体の有効量の比として決定することができる。
【００８５】
本発明の医薬調製物を、ヒト医学および獣医学における医薬として用いることができる。好適な賦形剤は、経腸（例えば経口）、非経口または局所投与に好適であり、新規化合物と反応しない有機または無機物質、例えば水、植物油、ベンジルアルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、炭水化物、例えば、ラクトースまたはデンプン、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはワセリンンである。経腸投与に好適なものは、特に、錠剤、コーティングされた錠剤、カプセル、シロップ、ジュース、ドロップまたは坐薬であり、非経口投与に好適なものは溶液、好ましくは油ベースまたは水性溶液、さらにまた懸濁液、エマルションまたはインプラントであり、局所適用に好適なものは、軟膏、クリームまたは粉末である。化合物および化合物の混合物をまた凍結乾燥し得、生じる凍結乾燥物は、例えば注射調製物の調製のために用い得る。
【００８６】
記載の調製物は、滅菌され得、および／または潤滑剤、防腐剤、安定剤および／または湿潤剤、乳化剤、浸透圧を変化させる塩、緩衝物質、色素、風味剤および／またはアロマ物質などのアジュバントを含み得る。これらは、所望される場合には、１種または２種以上のさらなる活性成分、例えば１種または２種以上のビタミン類もまた含むことができる。
【００８７】
例
以下の例は、医薬調製物に関する：
例Ａ１：注射バイアル
３ｌの再蒸留水中の１００ｇの本発明の化合物または化合物の混合物と５ｇのリン酸水素二ナトリウムの溶液を、２Ｎの塩化水素を用いてｐＨ６．５へ調節し、無菌濾過し、注射バイアルへ移動させ、凍結乾燥させ、無菌状態でシールする。各注射バイアルは、５ｍｇの活性成分を含有する。
【００８８】
例Ａ２：坐薬
２０ｇの本発明の化合物または化合物の混合物を１００ｇの大豆レシチンおよび１４００ｇのココアバターで溶かし、型に流し込み、冷ます。各坐薬は、２０ｍｇの活性成分を含有する。
【００８９】
例  Ａ３：溶液
９４０ｍｌの再蒸留水中の１ｇの本発明の化合物または化合物の混合物、９．３８ｇのＮａＨ２ＰＯ４ｘ２Ｈ２Ｏ、２８．４８ｇのＮａＨ２ＰＯ４ｘ１２Ｈ２Ｏおよび０．１ｇの塩化ベンザルコニウムｉｎから、溶液を調製する。ｐＨを６．８に調節し、溶液を最大１ｌまで作製し、放射により消毒する。この溶液を、点眼薬の形態で用いることができる。
【００９０】
例Ａ４：軟膏
５００ｍｇの本発明の化合物または化合物の混合物を、無菌条件下で、９９．５ｇのワセリンと混合する。
【００９１】
例Ａ５：錠剤
１ｋｇの本発明の化合物または化合物の混合物、４ｋｇのラクトース、１．２ｋｇのジャガイモデンプン、０．２ｋｇのタルクおよび０．１ｋｇのステアリン酸マグネシウムをプレスして、各錠剤が１０ｍｇの活性成分を含有するような従来の様式で、錠剤を作製する。
【００９２】
例Ａ６：コーティングされた錠剤
錠剤を例Ｅと同様にプレスして、スクロース、ジャガイモデンプン、タルク、トラガントおよび色素のコーティングで、従来の様式で次いでコーティングする。
【００９３】
例Ａ７：カプセル
２ｋｇの本発明の化合物または化合物の混合物を、各カプセルが２０ｍｇの活性成分を含有するような従来の様式で、ハードゼラチンカプセルに成形する。
【００９４】
例Ａ８：アンプル
６０ｌの再蒸留水中の１ｋｇの本発明の化合物または化合物の混合物の溶液を、アンプルに移動させ、無菌条件下で凍結乾燥させ、無菌条件下でシールする。各アンプルは、１０ｍｇの活性成分を含有する。
【００９５】
以下の例は、化合物ＡおよびＨｅｒ２インヒビターを用いる組合せ実験に関する。
例Ｂ１：９つのヒト乳がん細胞株における化合物Ａおよびラパチニブの組合せ
細胞培養および成長阻害アッセイのための実験手順：
１０％ＦＣＳ（ＰＡＮ、ドイツ）を供給した１００Ｕ／ｍｌのペニシリンＧおよび１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンの存在下で、細胞株を、供給元の推奨する培地で成長させた。
【００９６】
細胞の増殖および処理を、９６ウェルマイクロタイタープレートで実施した。トリプシン処理により対数期培養物から採取した細胞を、１９０μｌの培地に最適な播種密度で播種した。各細胞株のための最適な播種密度を決定して、実験期間中の対数成長を確実にした。抗がん剤なしで成長する全ての細胞は、目視検査によって決定されるように、処置の終わりまで準コンフルエントであった。ＤＭＳＯ中の化合物希釈を、９６ウェルの剛性ＰＣＲプレートで実施した。次いで化合物をＲＰＭＩ培地で１：５０に希釈した。２４時間の予備成長期間の後に１９０μｌの細胞を、１０μｌの化合物含有培地（０．１％の最終ＤＭＳＯ濃度をもたらす）と混合することによって処置した。細胞を３７℃で７２時間生育させた。さらに、すべての実験は、２４時間の回復期間の直後に測定のために処理された細胞を含む数枚のプレートを含んでいた。これらのプレートは、処理前、時間ゼロで存在した細胞数に関する情報を含み、細胞毒性および／または成長阻害効果を計算するのに役立った。処置後、細胞を１０％ＴＣＡの添加により沈殿させた。固定の前に、培地を、［Pauwels et al., 2003］に記載されるように吸引した。４℃で１時間インキュベートした後、プレートを４００μｌの脱イオン水で２回洗浄した。次いで細胞を１００μｌの０．０８％ｗｔ／ｖＳＲＢで染色した。プレートを少なくとも３０分間放置し、１％酢酸で６回洗浄して、結合していない染色を除去した［Vichai and Kirtikara, 2006］。プレートを室温で乾燥させ、結合したＳＲＢを１００μｌの１０ｍＭトリス塩基で可溶化した。光学密度の測定を、Ｖｉｃｔｏｒ２プレートリーダー（Perkin Elmer、ドイツ）上で５６０ｎｍで実施した。
【００９７】
実験計画：
in vitroの組合せ研究の前に、個別の剤の活性を、８０細胞株のパネルを用いて調査した。この濃度範囲は、特定の細胞株の濃度範囲を選択するための指針を提供した。この組み合わせを、９６ウェルプレート中で、該濃度のラパチニブのマトリックスと該濃度の化合物Ａとを組み合わせることによって試験した。剤は同時に細胞へ添加された。
【００９８】
用いた化合物の濃度を以下の表に列挙する：
【表１】
0006629753.tif 000002
【００９９】
化合物Ａのラパチニブとの対の組み合わせを、６×６マトリックスを用いて全ての細胞株において試験した。スクリーニングは、潜在的な相乗的組合せを決定するために設計された。６×６マトリックスの全部および／または一部を用いて研究を設計した。
【０１００】
相乗効果を計算するための方法は、［Berenbaum, 1989］から見つけることができる。以下のパラメータが計算され、
δｉ＝測定値ｉ−理論値ｉ
式中、ｉ＝［１．．ｎ］は用いられるマトリックスの値の一つであり、理論値ｉは、Bliss Independence方法［Berenbaum, 1989］について記載されたように計算される。
【０１０１】
ベクトル和は以下のように決定され、
【数１】
0006629753.tif 000003
【数２】
0006629753.tif 000004
【０１０２】
平均値−０．５未満は強力な相乗効果を示唆する：（−０．５、−０．０２］−相乗効果、（−０．０２、０．０２）−ゼロ効果（additivism）、（０．０２、０．５）−潜在的な拮抗作用、および０．５より上−強力な拮抗作用。
【０１０３】
文献
M.C. Berenbaum. What is synergy? Pharmacol Reviews, 41:93-141, 1989.
Bea Pauwels, Annelies E. C. Korst, Christel M. J. de Pooter, Greet G. O. Pattyn, Hilde A. J. Lambrechts, Marc F. D. Baay, Filip Lardon, and Jan B. Vermorken. Comparison of the sulforhodamine b assay and the clonogenic assay for in vitro chemoradiation studies. Cancer chemotherapy and pharmacology, 51:221-226, Mar 2003.
Vanicha Vichai and Kanyawim Kirtikara. Sulforhodamine b colorimetric assay for cytotoxicity screening. Nature protocols, 1:1112-1116, Aug 2006.
【０１０４】
例Ｂ２：乳がんの患者由来異種移植モデルにおける化合物Ａおよびトラスツズマブの組合せ
５-７週の間の雌ヌード（Harlan; nu / nu）に、宿主動物から採取した、Ｈｅｒ２＋患者由来の乳房モデル「ＣＴＧ−００３３」（継代３、すなわちモデルを元の宿主から３回継代培養／増殖させた）の腫瘍断片を皮下移植した。宿主腫瘍が１-１．５ｃｍ３に達したとき、有効性試験のために使用する動物に再移植のために腫瘍を採取した。ＣＴＧ−００３３（継代４）腫瘍が約１９０ｍｍ３に達したとき；動物を処置または対照群（ｎ＝１０）に腫瘍体積によって無作為化し、投薬を０日目に開始した。処置はビヒクル（生理食塩水）、化合物Ａ  ３０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ（毎日）ＰＯ（経口あたり）、ハーセプチン（３０ｍｇ／ｋｇ負荷用量および１５ｍｇ／ｋｇ維持用量）ＱＷ（毎週）ＩＶ（静脈内）、および化合物Ａ３０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ  ＰＯを、ハーセプチン１５ｍｇ／ｋｇ  ＱＷ  ＩＶと組み合わせたものだった。腫瘍体積を週に２回記録した。ビヒクル処置群は５５日目に大きな腫瘍のために終了した。７５日目に他の処置を中止し、処置を受けていないマウスを用いて、腫瘍を２ヶ月以上に亘って再度増殖させた。この実験では２匹の動物が死亡した。化合物Ａ群の１匹の動物は、胃管栄養不良と思しきものにより９日目に死亡し、化合物Ａ＋ハーセプチン群の他方は、人的ミスによって死亡した。
【０１０５】
化合物Ａ３０ｍｇ／ｋｇ（単独療法群）での処置は、５０％の腫瘍退縮をもたらし、一方で、化合物Ａ＋ハーセプチンでの処置は、５５日目に７８％の退縮をもたらした。ハーセプチンでの処置は、５５日目に３７％のＴ／Ｃをもたらした。化合物Ａ＋ハーセプチンでの処置は、５５日目の単剤ハーセプチンおよび化合物Ａと比較して腫瘍成長を有意に阻害した（Ｐ＜．０５；２ウェイＲＭ−ＡＮＯＶＡボンフェローニポストホックテスト）。ビヒクル群が停止している間、動物は７５日目まで化合物Ａ、ハーセプチン、または化合物Ａ＋ハーセプチンを継続して受け取り、腫瘍を再度増殖させた。７６日目に、化合物Ａでの処置は、−６６％の退縮をもたらした一方で、組合せ群は完全に退縮した（腫瘍体積は４０ｍｍ３未満）。処置休止後の再成長期間の７１日後に、化合物Ａで処置された腫瘍のうち６つが再増殖したが、組合せ処置腫瘍はいずれも再増殖しなかった。化合物Ａで処置した腫瘍と化合物およびハーセプチンと比較したこの採取用における差異は、統計的に有意であった（対数ランク和試験ｐ＜．０５）。組合せ群の全ての動物は、腫瘍が再成長しなかったため、治癒したものとした。
【図１】
0006629753.tif 000005
【図２】
0006629753.tif 000006