(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
フラーレンとγ−シクロデキストリンとからなる複合体であって、モル比でフラーレン：γ−シクロデキストリン＝１：４であることを特徴とする複合体。
【請求項２】
フラーレンが、Ｃ60またはＣ70である請求項１に記載の複合体。
【請求項３】
フラーレンが、Ｃ60とＣ70との両方を含む請求項１に記載の複合体。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の複合体を含む水溶液。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれかに記載の複合体を含む抗菌剤組成物。
【請求項６】
遊星ボールミルでフラーレン及びγ−シクロデキストリンを乾式で粉砕混合する工程を有することを特徴とする、モル比でフラーレン：γ−シクロデキストリン＝１：４であるフラーレンとγ−シクロデキストリンとからなる複合体の製造方法。
【請求項７】
フラーレンが、Ｃ60またはＣ70である請求項６に記載の複合体の製造方法。
【請求項８】
前記粉砕混合に直径２〜５ｍｍの粉砕用ボールを用いる請求項６に記載の複合体の製造方法。
【請求項９】
前記遊星ボールミルに投入するフラーレンとγ−シクロデキストリンとのモル比がフラーレン：γ−シクロデキストリン＝１：３〜８である請求項６または７に記載の複合体の製造方法。
【請求項１０】
前記遊星ボールミルに投入するフラーレンに対するγ−シクロデキストリンのモル比が４以下である請求項９に記載の複合体の製造方法。
【請求項１１】
さらに、前記複合体を精製する工程を有する請求項６〜１０のいずれかに記載の複合体の製造方法。
【請求項１２】
前記精製が、前記粉砕混合で得た粉砕混合粉と水とを混合し、該混合物から不溶成分を除去し、溶解成分を取得することにより行われる請求項１１に記載の複合体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フラーレンの水溶性複合体に関する。さらに詳しく言えば、フラーレンとγ−シクロデキストリンとの水溶性複合体、その複合体の水溶液、それらの製造方法及び前記複合体を用いた抗菌剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
フラーレンは疎水性であるため、有機溶媒に溶解して用いられてきたが、フラーレンを官能基化することによって、またはフラーレンを包接することによって、水への溶解度を上げる研究が行われている。このような水溶性のフラーレン類は、例えば、サニタリー分野、消臭等の用途で用いられている。
【０００３】
前記フラーレンを包接する物質として、γ−シクロデキストリン、ポリビニルピロリドンまたは水溶性カリックスアレーンなどが用いられてきた。例えば、特開平８−３２０１号公報（特許文献１）には、水溶性フラーレン包接化合物を製造するための簡単、かつ迅速な方法を開発することを目的として、フラーレン（Ｃ60）と、γ−シクロヘキサン及びカリクス−［８］−アレンから選択されたホスト格子との包接化合物の製造方法であって、Ｃ60とホスト格子とを含む固体混合物をメカノケミカル活性化することにより包接化合物を形成することを含む製造方法が開示されている。
【０００４】
また、ＷＯ２００６／１０９７７４号公報（特許文献２）には、フラーレンとγ−シクロデキストリンの複合体を含み、生体が紫外線を照射されることによって発生する活性酸素量を抑制する化粧料を、効率的に、かつ安定して得ることを目的として、フラーレンとフラーレンの質量の３倍以上８倍未満の質量のγ−シクロデキストリンとを乳鉢中で粉砕混合後、得られた固体混合物に溶剤を加え、混合液に超音波振動を与えて、フラーレンとγ−シクロデキストリンの複合体を得る方法が開示されている。特許文献２の方法で得られる複合体は、後述の比較例１に記載の通り、フラーレンとγ−シクロデキストリンのモル比が１：２の複合体であって、これまでフラーレンとγ−シクロデキストリンのモル比が１：４の複合体に関する報告はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平８−３２０１号公報
【特許文献２】ＷＯ２００６／１０９７７４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
特許文献２は活性酸素量を抑制する複合体を提供するものであるが、一般に、活性酸素量を抑制すると抗菌作用は得にくくなる。本発明では、抗菌作用と抗酸化作用を兼ね備えた水溶性のフラーレン複合体を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、遊星ボールミルでフラーレン及びγ−シクロデキストリンを乾式で粉砕混合することにより、フラーレンとγ−シクロデキストリンとのモル比が１：４の水溶性複合体が得られること、及びその複合体の水溶液が抗菌作用と抗酸化作用を有することを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
本発明は、以下の［１］〜［５］の複合体、その水溶液及び抗菌剤組成物、並びに［６］〜［１２］の複合体の製造方法に関する。
［１］  フラーレンとγ−シクロデキストリンとからなる複合体であって、モル比でフラーレン：γ−シクロデキストリン＝１：４であることを特徴とする複合体。
［２］  フラーレンが、Ｃ60またはＣ70である前項１に記載の複合体。
［３］  フラーレンが、Ｃ60とＣ70との両方を含む前項１に記載の複合体。
［４］  前項１〜３のいずれかに記載の複合体を含む水溶液。
［５］  前項１〜３のいずれかに記載の複合体を含む抗菌剤組成物。
［６］  遊星ボールミルでフラーレン及びγ−シクロデキストリンを乾式で粉砕混合する工程を有することを特徴とする、モル比でフラーレン：γ−シクロデキストリン＝１：４であるフラーレンとγ−シクロデキストリンとからなる複合体の製造方法。
［７］  フラーレンが、Ｃ60またはＣ70である前項６に記載の複合体の製造方法。
［８］  前記粉砕混合に直径２〜５ｍｍの粉砕用ボールを用いる前項６に記載の複合体の製造方法。
［９］  前記遊星ボールミルに投入するフラーレンとγ−シクロデキストリンとのモル比がフラーレン：γ−シクロデキストリン＝１：３〜８である前項６または７に記載の複合体の製造方法。
［１０］  前記遊星ボールミルに投入するフラーレンに対するγ−シクロデキストリンのモル比が４以下である前項９に記載の複合体の製造方法。
［１１］  さらに、前記複合体を精製する工程を有する前項６〜１０のいずれかに記載の複合体の製造方法。
［１２］  前記精製が、前記粉砕混合で得た粉砕混合粉と水とを混合し、該混合物から不溶成分を除去し、溶解成分を取得することにより行われる前項１１に記載の複合体の製造方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明による、フラーレンに対するγ−シクロデキストリンのモル比が１：４の水溶性複合体を用いることにより、抗菌作用と抗酸化作用とを兼ね備えた組成物を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】遊星ボールミルで乾式粉砕処理に供するフラーレンを一定量として、投入するγ−シクロデキストリン量（モル比）を変えた時、得られた本発明の複合体の収率の変化を示すグラフである。
【図２】本発明の製造方法による、乾式粉砕混合で遊星ボールミルに投入したフラーレン量を一定として、横軸は該粉砕混合で投入したフラーレンに対する投入したγ-シクロデキストリンのモル比、縦軸は得られた複合体含有溶液中に存在するフラーレンＣ60に対するγ-シクロデキストリン（複合体及び遊離のγ-シクロデキストリンの合計量）のモル比を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
［複合体］
本発明の複合体は、フラーレンとγ−シクロデキストリンとからなる複合体であって、モル比でフラーレン：γ−シクロデキストリン＝１：４である。
前記複合体中のフラーレンは、特に限定されず、例えば、Ｃ60やＣ70、さらに高次のフラーレン、あるいはそれらの混合物が挙げられる。フラーレンの中でもＣ60及びＣ70が比較的入手しやすく好ましい。
【００１２】
［複合体の製造方法］
本発明の複合体は、遊星ボールミルでフラーレン及びγ−シクロデキストリンを乾式で粉砕混合することにより得られる。前記粉砕混合の際、高い収率を得るために直径２〜５ｍｍの粉砕用ボールを用いることが好ましい。
【００１３】
図１は、遊星ボールミルで粉砕処理に供するフラーレンを一定量として、投入するγ−シクロデキストリン量（モル比）を変えた時、得られた本発明の複合体の収率の変化をプロットしたものである。ここで収率は、［得られた複合体中のフラーレン（モル）］／［投入フラーレン（モル）］で定義する。なお、得られた複合体のフラーレン：γ-シクロデキストリンのモル比が１：４であることは、図２に示す結果（後述する。）及び元素分析法及び1Ｈ−ＮＭＲと13Ｃ−ＮＭＲ測定によるγ−シクロデキストリンのケミカルシフトによって確認された。
図１から複合体の収率はγ−シクロデキストリン量を増やしていくと向上し、４以上ではほぼ変化がなくなっているのがわかる。複合体を安定した高い収率で得るためには、原料として前記遊星ボールミルに投入するフラーレンとγ−シクロデキストリンとのモル比（フラーレン：γ−シクロデキストリン）は、１：３〜８が好ましく、１：３〜５がより好ましく、１：４がさらに好ましい。
【００１４】
前記粉砕混合処理は乾式で行うため、原料のフラーレンとγ−シクロデキストリンは水分や溶剤成分をできるだけ含まないことが好ましい。水分子は、γ−シクロデキストリンに配位し、フラーレンとγ−シクロデキストリンとの複合体形成を阻害すると考えられる。水以外の溶剤成分についても同様である。
【００１５】
［粉砕混合］
本発明では、粉砕混合処理装置として、高い収率を得やすいように、より大きなエネルギーを加えることができる装置を用いる。このような装置としては、公転／自転運動の組み合わせ運動をする遊星ボールミルが挙げられ、好ましくは、公転加速度方向とは方向性が異なる自転加速度が生じる傾斜型遊星ボールミルが挙げられる。
このような遊星ボールミルでは、１バッチ当たりに投入するフラーレンとγ−シクロデキストリンの合計量を２０ｇ〜１ｋｇとすることができる装置もあり、生産設備、生産効率上好ましい。
【００１６】
また、このような遊星ボールミルで用いる粉砕用ボールの大きさは、一般に遊星ボールミルで用いられるボールよりもその直径が大きいもの（１ｍｍ以上）がメカノケミカル反応で加えるエネルギーが大きくなるので好ましい。ただし、ある程度小さなボールの方が粉砕効率が良い。そのため、直径２〜５ｍｍがより好ましい。
【００１７】
本発明で用いる粉砕用ボールの材質は、例えば、ジルコニア製ボール、ステンレス鋼製ボール、アルミナ製ボール及びメノウ製ボール等を挙げることができる。粉砕用ボールは、質量が大きいほどメカノケミカル反応で加えるエネルギーが大きくなるので、ボールの密度は高いものが好ましい。前記ボールの材質の中で密度の大きいものとして、例えば金属製のボールが挙げられる。ただし、金属不純物を避けたい場合は、セラミック製のボールを用いることが好ましい。セラミック製ボールの中でも、最も密度が大きい部類に入るジルコニア製のボール（密度６．５ｇ/ｃｍ3程度）が好ましい。
【００１８】
さらに、本発明で用いる粉砕用ボールの表面形態は、その面粗さ（Ｒａ）が０．０１〜１０μｍであるものが好ましい。この範囲であると、粉砕時に粉砕される材料が逃げる場所がなくなるのでより大きなエネルギーを加えることができる。Ｒａが上記範囲の場合は、メカノケミカルの反応が起こる確率が高く、高い収率が得やすい。
【００１９】
遊星ボールに投入するフラーレンとγ−シクロデキストリンの合計量は、その比が上記の範囲を満たしていれば特に制限されないが、粉砕混合処理に用いる装置の処理能力に合わせて適宜調整することができる。好ましくは、遊星ボールミルのポットの体積で３〜７割のボールを入れ、その空隙の３〜６割に粉砕される材料を入れ、残りを空間にすることで、安定して高収率で複合体を得られ、さらに好ましくは、ボールの体積と、材料の体積と残りの空間との体積比を１：１：１に近くする。
【００２０】
なお、遊星ボールミルに投入する原料の形態は特に限定されないが、粉砕混合処理時間を短くするために、顕微鏡観察による平均粒径が５〜１５μｍの（造粒）粒子になっているフラーレンが好ましく、また、顕微鏡観察による平均粒径が３０〜３００μｍの粉末であるγ−シクロデキストリンが好ましい。これらの粒径が前記範囲の場合は、あらかじめ両者をよく混ぜたものをミルに投入すると、複合体の合成が容易になり粉砕時間を短くすることができる。フラーレンとγ−シクロデキストリンとを遊星ボールミルに一緒に投入して粉砕混合処理を開始しても良いが、一方の原料の粒径が前述の範囲より大きい場合は、当該原料を先に投入して粉砕を開始し、前記粒径範囲になった後に、他方の原料を後から加える方法が好ましい。
【００２１】
遊星ボールミルの運転条件としては、回転速度３００〜１１００ｒｐｍが好ましく、粉砕処理時間５分〜１時間が好ましく、粉砕混合処理中の温度０〜５０℃が好ましい。これらの範囲であれば、比較的高い収率を得やすい。また粉砕は、何回かに分けて行っても良い。運転の際、粉砕混合処理は大気の雰囲気で構わないが、前述の通り水分が入らないような装置や運転方法を用いることが好ましい。
【００２２】
［複合体の精製］
前記粉砕混合で得た本発明の複合体を精製してもよい。精製方法としては、例えば、前記粉砕混合で得た粉砕混合粉と水とを混合し、混合物（以下、「粉砕混合粉溶液」とも言うことがある。）から不溶成分を除去し、溶解成分を取得する方法が挙げられる。
より具体的には、得られた粉砕混合粉の質量に対して２〜１００倍質量の水（用いる水は、ｐＨが７近辺である純水が好ましい。）を、粉砕混合粉に加え、撹拌して粉砕混合粉溶液を得る。粉砕混合粉に含まれる本発明の複合体は、容易に水に溶け分散するので、超音波振動を用いた強力な撹拌処理を用いなくてもよい。なお、この段階までに必ずしもボールを粉砕混合粉から分離する必要はない。
【００２３】
次に前記粉砕混合粉溶液から、分離処理により、不溶成分を除去し、溶解成分を取得する。
前記分離処理としては、例えば、遠心分離、ろ過分離、またはそれらを組み合わせた方法を挙げることができる。前記遠心分離の条件は適宜設定することができるが、例えば１２００〜３００００ｒｐｍとすることができる。ここで、不溶成分は、前記遠心分離での沈殿物または前記ろ過分離でのろ過残渣として除去される。また、溶解成分は、前記遠心分離での上清または前記ろ過分離でのろ液として取得される。
【００２４】
前記不溶成分としては、未反応のフラーレンやボールが挙げられる。
前記溶解成分としては、本発明の複合体及び未反応のγ−シクロデキストリンが挙げられる。ここで、未反応のγ−シクロデキストリンを減らすには、前記遊星ボールミルに投入するフラーレンに対するγ−シクロデキストリンのモル比を、４以下にすることが好ましく、収率をある程度確保するために３〜４にすることがより好ましい。
【００２５】
なお、前記分離処理として遠心分離やろ過分離を用いた場合、前記溶解成分は、該溶解成分が溶解する溶液（以下、この溶液を「複合体含有溶液」と言うことがある。）として取得される。
【００２６】
次に得られた複合体含有溶液を乾燥させて、本発明の複合体の紛体を得てもよい。乾燥の条件は、適宜設定することができるが、特に乾燥時の温度は、６０℃以下で行うことが好ましく、乾燥する装置は、真空乾燥機、エバポレータなどを用いることが好ましい。前記複合体の粉体は、大気中常温で安定であるので保管において特に注意する点はないが、吸水性が多少あるので密閉して保管することが好ましい。
【００２７】
［複合体の構造］
図２は、前述の複合体の製造方法において、粉砕混合で投入したフラーレン量を一定として、横軸は該粉砕混合で投入したフラーレンに対する投入したγ−シクロデキストリンのモル比を、縦軸は得られた複合体含有溶液中のフラーレンに対するγ−シクロデキストリンのモル比をプロットしたものである。
【００２８】
投入したγ−シクロデキストリンが少ない図２の左側のモル比４以下となる領域では、フラーレンが余剰となり未反応のフラーレンが生じるが、これは水に溶けず複合体含有溶液からは取り除かれるので、複合体含有溶液中には反応したフラーレンとγ−シクロデキストリンとの複合体が残る。このため、縦軸は反応して複合体となったフラーレンとγ−シクロデキストリンのモル比を表す。
【００２９】
一方、投入したγ-シクロデキストリンが多くなる図２の右側のモル比４以上の領域では、未反応のγ−シクロデキストリンが生じ、これも複合体含有溶液中に残るため、縦軸のγ−シクロデキストリンのモル比が上昇する。
ここから、従来は２モルのγ−シクロデキストリンがフラーレンを包接している構造を取っているものが知られていたが、本発明の複合体は、モル比でフラーレン：γ−シクロデキストリン＝１：４であることがわかる。
なお、複合体がフラーレンの包接体構造を含んだ構造を有していることは、ＮＭＲの1Ｈ−ＮＭＲと13Ｃ−ＮＭＲからγ−シクロデキストリンのケミカルシフトが見られる結果からも確認できる。
【００３０】
［複合体を含む水溶液］
本発明の複合体は親水性を有しているので、容易に高濃度の水溶液とすることができる。例えば、本発明の複合体を含む水溶液は、前記複合体の紛体を所望の濃度で溶解して得てもよく、前記複合体含有溶液をそのまま、あるいは濃縮または希釈して、所望の濃度の水溶液を得てもよい。このような複合体を含む水溶液は、フラーレンの濃度換算で１〜１００ｇ／Ｌの低濃度から高濃度まで所望の処方に合わせて設定できる。
【００３１】
［用途］
本発明の複合体は、抗酸化作用と、光照射下で抗菌作用とを有する。また、本発明の複合体は水溶性なので、容易にその水溶液を得ることができる。そのため、抗酸化剤組成物や抗菌剤組成物等を容易に得ることができる。
例えば、本発明の複合体は種々の組成物に混ぜて使ったり、物品の表面にコーティングして使ったりすることができる。前記組成物としては、例えば、水溶性の抗菌性塗料、水溶性防腐剤、防汚塗料、医療用粘着製品、殺菌フィルム及び消臭性繊維等が挙げられ、前記物品としては、不織布、建築用外装建材、殺菌フィルム、消臭性繊維及び装身具等が挙げられる。
【００３２】
なお、一般に酸化チタン光触媒は紫外線を必要とするので室内照明下での抗菌作用は期待できないのに対して、本発明の複合体は、可視光下で抗菌作用を有するので室内で使う抗菌材として使うことができる。その他酸化チタン光触媒の代替として、例えば、殺菌剤、防汚剤、消臭剤、環境浄化剤等に用いることができる。
【実施例】
【００３３】
以下、本発明の実施例について説明する。なお、本発明は以下の実施例のみに限定されるものではない。
【００３４】
実験例１：
フラーレン（フロンティアカーボン社製  ｎａｎｏｍ（登録商標）ｍｉｘ、モル比でＣ60：Ｃ70＝１：４の混合物、平均粒径３０μｍの粉末）２２０ｍｇとγ−シクロデキストリン（東京化成製）１．６１ｇ、すなわち、モル比でフラーレン：γ−シクロデキストリン＝１：４の比率となる組成の原料を、遊星ボールミル（フリッチュ・ジャパン株式会社製プレミアムラインＰ−７）のミル容器に投入した。
遊星ボールミルの回転数７００ｒｐｍ、処理時間３０分で粉砕混合処理を大気雰囲気で実施した。使用した粉砕用ボールは、株式会社ニッカトー製でその直径は５ｍｍ、総質量６０ｇとした。室温で処理を開始したが終了時のミル容器は４０℃以上になっていた。
得られた粉砕混合粉をビーカーに移し、水２０ｍｌを加え、軽く撹拌処理をして溶液化処理を施した。溶液化処理を施した溶液を遠心分離して溶液分を取り出した。得られた溶液を、エバポレータで乾燥処理を施して、複合体１．５８ｇを得た。
収率（得られた複合体中のフラーレン量（モル））／（投入フラーレン量（モル））は６７％であった。得られた複合体を元素分析法（ＨＯＲＩＢＡ製ＥＭＩＡ−９２０Ｖ，ＬＥＣＯ製ＴＣ−６００、ＬＥＣＯ製ＣＨＮＳ９３２）から炭素、水素、窒素、酸素の各々の量を測定し、この酸素と水素量からフラーレンとγ-シクロデキストリン量の比率を求めると、フラーレンと反応しているγ−シクロデキストリンの量の比率は１：４（モル比）であることがわかった。また得られた複合体は、ＮＭＲの１Ｈ−ＮＭＲと１３Ｃ−ＮＭＲ測定を行い、γ−シクロデキストリンのケミカルシフトによってフラーレンとγ−シクロデキストリンの複合体の生成と生成比率を確認した。
得られた複合体を再度水に溶かして１質量％の水溶性フラーレン高濃度水溶液を得た。肉眼での水の色は褐色であり固形分は観察されなかった。
本実施例の実験条件と結果を後述の実施例・比較例の実験条件と結果と共にまとめて表１に示した。
【００３５】
実施例２：
用いるγ−シクロデキストリン量を１．２１ｇ、として、すなわち、原料組成をモル比でフラーレン：γ−シクロデキストリン＝１：３として実施例１と同様に実施した。
【００３６】
実施例３：
用いるγ−シクロデキストリン２．２０ｇとして、すなわち、原料組成をモル比でフラーレン：γ−シクロデキストリン＝１：５として実施例１と同様に実施した。
【００３７】
実施例４：
遊星ボールミルの粉砕用ボールの直径を２ｍｍに変えた以外は、実施例１と同様に実施した。
【００３８】
実施例５：
用いたフラーレンをＣ60に変えた以外は、実施例１と同様に実施した。
【００３９】
実施例６：
用いたフラーレンをＣ70に変えた以外は、実施例１と同様に実施した。
【００４０】
実施例７：
遊星ボールミルの回転数を５００ｒｐｍに変えた以外は、実施例１と同様に実施をした。
【００４１】
実施例８：
遊星ボールミルの粉砕用ボールの直径を１ｍｍに変えたこと以外は実施例１と同様に実施した。
【００４２】
比較例１：
遊星ボールミルでの粉砕混合を乳鉢での粉砕混合に変えた以外は、実施例１と同様に実施した。表１に示した通り、乳鉢を用いる特許文献２に記載の方法ではフラーレン：γ−シクロデキストリン＝１：４となる複合体は得られないことがわかる。
【００４３】
比較例２〜３：
湿式粉砕混合処理、すなわちミル容器に原材料を投入する際に、フラーレンとγ−シクロデキストリン以外に比較例２では蒸留水１０ｍｌを、比較例３ではエタノール１０ｍｌを添加したこと以外は実施例１と同様に実施した。
【００４４】
比較例４：
遊星ボールミルを振動ボールミルに変えた以外は、実施例１と同様に処理した。
【００４５】
【表１】
0006744106.tif 000002
【００４６】
［抗酸化作用及び抗菌作用の評価試験］
試料として、モル比でフラーレン：γ−シクロデキストリン＝１：４の複合体（フラーレン種の異なる実施例１，５，６で作成の３種）、モル比でフラーレン：γ−シクロデキストリン＝１：２の複合体（比較例１で作成）、及びこれら複合体に不純物として含まれやすいγ−シクロデキストリンをそれぞれ用い、抗酸化作用及び抗菌作用の評価試験を以下のようにして実施した。
【００４７】
抗酸化効果：
前記試料の抗酸化作用の評価試験は、市販の抗酸化能測定キット（日本老化制御研究所製  ＰＡＯ）を用いて、定法に従い実施した。
その結果、用いたいずれの複合体も、Ｃｕ還元力１００ｍｏｌ／Ｌ以上を示し、抗酸化効果を有すると判断された。ただし、γ−シクロデキストリンのＣｕ還元力は０ｍｏｌ／Ｌであった。
【００４８】
抗菌効果：
１）得られた試料０．２５ｇを８０％エタノールで滅菌して、これを無菌的にNutrient Broth（以下「ＮＢ」と記すことがある。）１００ｍｌを加えて０．２５質量％のフラーレン-γ-ＣＤ複合体添加ＮＢを作製した。このフラーレン-γ-ＣＤ複合体を添加したＮＢ２０ｍｌに菌液（大腸菌）を加えて一次培養（３７℃９ｈｒ）した。培養時には、光照射（パナソニック製蛍光灯３０Ｗ、二本）を行った。
２）前記培養後の液を２０μl取り、１９８０μlの生理食塩水を加えて希釈した。さらに同様に希釈を３回繰り返し、希釈倍率が１０2、１０4、１０6の３水準の希釈サンプルを用意した。
３）前記希釈サンプルを１００μl取り、２ｍｌのＮＢアガーと混合し、グルコース寒天培地上に重層して、二次培養(３７℃２４ｈｒ)した。この培養は遮光下で行った。
４）二次培養後コロニーカウンターでコロニーを計測した（コロニー数×希釈倍率をＬ１とする）。
５）上記複合体を添加しないで１）〜４）まで実施した（コロニー数×希釈倍率をＬ０とする）。
６）前記４）、５）で得られた結果Ｌ１とＬ０を用いて、下記式により抗菌作用を算出し、表２にまとめた。
抗菌作用（％）＝１００−（Ｌ１／Ｌ０）×１００
【００４９】
【表２】
0006744106.tif 000003
【００５０】
表２からわかる通り、本発明の複合体は抗菌作用を有する。さらに、フラーレン種がＣ60とＣ70との混合物であると相乗効果が得られる。これは、Ｃ60には紫外光域に主な光吸収帯があり、Ｃ70には可視光域に主な光吸収帯があるので、両者が混合されると広い波長範囲のエネルギーが利用できるためと推定される。このような効果は、従来のフラーレンとγ−シクロデキストリンの複合体（両者のモル比が１：２）やγ−シクロデキストリンでは得られない効果である。
以上の評価試験から、本発明の複合体は、抗酸化作用を有しているにもかかわらず、抗菌作用も有していることが確認できた。
【図１】
0006744106.tif 000004
【図２】
0006744106.tif 000005