(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化３４】
0006629320.tif 000043
（Ａｒは、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリルからなる群から選択され、Ａｒは、任意選択で、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６フルオロアルキルまたはＣ１〜Ｃ６アルコキシから選択される１つ以上の置換基で置換されており；および
Ｒ１は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３フルオロアルキルまたはＣ１〜Ｃ３アルキルである）
の化合物；
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
前記化合物が、式Ｉａ
【化３５】
0006629320.tif 000044
の化合物；
またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が、ＦまたはＨである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ａｒが、任意選択で、１個以上のＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３フルオロアルキルまたはＣ１〜Ｃ３アルコキシで置換されている、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５】
Ａｒが、任意選択で置換されたピリジルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ａｒが、任意選択で置換されたピリミジルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ａｒが、任意選択で置換されたピラジニルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ａｒが、任意選択で置換されたオキサゾリルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ａｒが、任意選択で置換されたチアゾリルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
前記化合物が、以下：
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−クロロピコリンアミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−フルオロピコリンアミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−メトキシピラジン−２−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−２−メチルオキサゾール−４−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−メトキシピコリンアミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−（ジフルオロメチル）ピラジン−２−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−シアノピコリンアミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−４−メチルチアゾール−２−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−メトキシピリミジン−２−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−メトキシ−３−メチルピラジン−２−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−シアノ−３−メチルピコリンアミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−ブロモピコリンアミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−（メトキシ−ｄ３）ピコリンアミド、および
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−（メトキシ−ｄ３）ピラジン−２−カルボキサミド；
またはその薬学的に許容される塩
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
前記化合物が、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−（メトキシ−ｄ３）ピコリンアミド、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項１３】
アルツハイマー病（家族性もしくは孤発性）、発症前アルツハイマー病、前駆期アルツハイマー病、軽度認知障害、ダウン症候群および脳アミロイド血管症から選択される疾患を治療するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物。
【請求項１４】
アルツハイマー病（家族性もしくは孤発性）、発症前アルツハイマー病、前駆期アルツハイマー病、軽度認知障害、ダウン症候群および脳アミロイド血管症から選択される疾患を治療する医薬を製造するための請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＢＡＣＥ１阻害剤として作用する化合物を提供する。本発明の別の態様は、前記化合物を含む医薬組成物、および神経変性または認知障害を治療するための化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
認知症は、通常の老化現象では説明できない複数の認知領域の障害と、機能の著しい低下と、せん妄がないこととを特徴とする臨床症候群である。さらに、神経精神症状および限局性の神経学的所見が通常認められる。認知症は病因に基づいて細分される。アルツハイマー病（ＡＤ）は、認知症の最も一般的な原因であり、ＡＤと血管性認知症の混合、レヴィー小体型認知症（ＤＬＢ）、および前頭側頭葉型認知症がそれに続く。βアミロイドの沈着および神経原線維変化は、記憶、認知、論理的思考（ｒｅａｓｏｎｉｎｇ）、判断力、および見当識の喪失を特徴とするＡＤに関連する主な病理学的特徴であると考えられている。また、疾患が進行するにつれ、運動、感覚、および言語能力も冒され、ついに複数の認知機能の全般的な障害が起こる。βアミロイドの沈着は大部分、βアミロイド形成経路の一部であるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）のタンパク質分解の生成物であるＡβペプチドの凝集体であり、Ａβペプチドは１種以上のγセクレターゼによるＡＰＰのＣ末端の切断、およびアスパルチルプロテアーゼ２としても知られるβセクレターゼ１（ＢＡＣＥ１）によるＮ末端の切断により生じる。ＢＡＣＥ１活性はＡＰＰからのＡβペプチドの生成に直接相関する。
【０００３】
研究から、ＢＡＣＥ１の阻害によりＡβペプチドの産生が妨げられることが分かっている。さらに、ＢＡＣＥ１はその基質であるＡＰＰと共にゴルジ体および細胞内区画に共局在する（Ｗｉｌｌｅｍ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｍｉｎ．Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ，２００９，２０，１７５−１８２）。マウスのノックアウト試験から、動物が健康で生殖能がある間はアミロイドペプチドが生成されないことが分かった（Ｏｈｎｏ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．，２００７，２６，１３４−１４５）。ＡＰＰ過剰発現マウスでＢＡＣＥ１の遺伝的除去（ｇｅｎｅｔｉｃ  ａｂｌａｔｉｏｎ）を行うと、プラークが形成されず、認知障害が抑制されることが分かった（Ｏｈｎｏ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｎ；２００４，４１，２７−３３）。散発性ＡＤ患者の脳内ではＢＡＣＥ１レベルが上昇する（Ｈａｍｐｅｌ  ａｎｄ  Ｓｈｅｎ，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．２００９，６９，８−１２）。
【０００４】
これらの収束する知見から、ＢＡＣＥ１の阻害はＡＤならびにＡβ沈着の低減が有効な障害を治療するための治療標的となり得ることが分かっている。
【０００５】
ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａは、２０１２年１０月、ＡＤを治療するための強力な選択されたＢＡＣＥ１阻害剤臨床候補である、ＡＺＤ３８３９の発見を発表した（Ｊｅｐｐｓｓｏｎ，Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１２，２８７，４１２４５−４１２５７）。ＡＺＤ３８３９の発見に繋がる努力は、Ｇｉｎｍａｎ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１３，５６，４１８１−４２０５に詳細に記載された。Ｇｉｎｍａｎの刊行物は、ＡＺＤ３８３９の発見および同定に関して克服された問題について記載している。これらの問題は、化合物の血液脳関門の透過性が低く、Ｐ糖タンパク質により排出されるため、脳が曝露されなくなることに関する。
【０００６】
Ｇｉｎｍａｎの原稿では脳の曝露における差が主にコア構造に起因すると仮定され、報告された化合物に関するｉｎ  ｖｉｔｒｏ特性をコアサブタイプにより４つの表に分けて記載した構造活性関係データが提供された。表４に、活性の点から興味深いと考えられた一連のアミジン含有化合物が記載されている。しかし、データから、アミジン含有コアは有利な血液脳関門透過性プロファイルを示さなかったことが示唆される。
【０００７】
Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  ａｎｄ  Ｓｉｅｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈの研究者らもアミジン含有化合物の発見を報告した（Ｗｏｌｔｅｒｉｎｇ，Ｔ．  Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２０１３，２３，４２３９−４２４３）。これらの化合物（論文中の化合物１７および１８）は、ｉｎ  ｖｉｖｏ効果を有していない（野生型マウスの脳内でＡβ４０低減が認められない）ことが判明した。
【０００８】
ＧｉｎｍａｎらおよびＷｏｌｔｅｒｉｎｇ，Ｔ．Ｊ．らの教示とは異なり、本発明者らは、脳透過性である、一連のアミジン化合物を発見した。従って、本発明は、ＢＡＣＥ１阻害活性を有する新規な化合物、それらの製造、それらの医薬としての使用、およびそれらを含む医薬に関する。
【発明の概要】
【０００９】
本発明の目的は、ＢＡＣＥ１を阻害する化合物を提供することである。従って、本発明は、式Ｉ
【化１】
0006629320.tif 000002
（Ａｒは、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリルからなる群から選択され、Ａｒは、任意選択で、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６フルオロアルキルまたはＣ１〜Ｃ６アルコキシから選択される１つ以上の置換基で置換されており；
Ｒ１は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３フルオロアルキルまたはＣ１〜Ｃ３アルキルである）
の化合物；
またはその薬学的に許容される塩に関する。
【００１０】
一実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の治療での使用を提供する。
【００１１】
本発明はさらに、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物に関する。
【００１２】
一実施形態では、本発明は、神経変性または認知障害の治療のための医薬の製造における式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００１３】
一実施形態では、本発明は、神経変性または認知障害の治療方法で使用される式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１４】
一実施形態では、本発明は、神経変性または認知障害の治療方法を提供し、この方法は、それを必要とする患者に、治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。
【００１５】
本発明の他の実施形態を以下に提供する：
一実施形態では、化合物は、式Ｉａ
【化２】
0006629320.tif 000003
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【００１６】
一実施形態では、Ｒ１は、ＦまたはＨ、特にＦである。
【００１７】
一実施形態では、Ａｒは、任意選択で、１個以上のＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３フルオロアルキルまたはＣ１〜Ｃ３アルコキシで置換されている。
【００１８】
一実施形態では、Ａｒは、任意選択で置換されたフェニルである。
【００１９】
一実施形態では、Ａｒは、任意選択で置換されたピリジルである。
【００２０】
一実施形態では、Ａｒは、任意選択で置換されたピリミジルである。
【００２１】
一実施形態では、Ａｒは、任意選択で置換されたピラジニルである。
【００２２】
一実施形態では、Ａｒは、任意選択で置換されたイミダゾリルである。
【００２３】
一実施形態では、Ａｒは、任意選択で置換されたピラゾリルである。
【００２４】
一実施形態では、Ａｒは、任意選択で置換されたチアゾリルである。
【００２５】
一実施形態では、Ａｒは、任意選択で置換されたオキサゾリルである。
【００２６】
一実施形態では、Ａｒは、任意選択で置換されたイソキサゾリルである。
【００２７】
一実施形態では、化合物は、以下：
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−クロロピコリンアミド
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−フルオロピコリンアミド
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−メトキシピラジン−２−カルボキサミド
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−２−メチルオキサゾール−４−カルボキサミド
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−メトキシピコリンアミド
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−（ジフルオロメチル）ピラジン−２−カルボキサミド
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−シアノピコリンアミド
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−４−メチルチアゾール−２−カルボキサミド
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−メトキシピリミジン−２−カルボキサミド
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−メトキシ−３−メチルピラジン−２−カルボキサミド
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−シアノ−３−メチルピコリンアミド
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−ブロモピコリンアミド
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−（メトキシ−ｄ３）ピコリンアミド
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−（メトキシ−ｄ３）ピラジン−２−カルボキサミド
またはその薬学的に許容される塩
からなる群から選択される。
【００２８】
個別の実施形態は、上のリストからの化合物と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物に関する。
【００２９】
別の実施形態は、神経変性または認知障害を治療する方法に関し、これは、上のリストからの化合物を治療有効量で投与することを含む。
【００３０】
また別の実施形態は、神経変性または認知障害を治療する医薬を製造するための、上のリストからの化合物の使用に関する。
【００３１】
一実施形態は、治療に使用される、上のリストからの化合物である。
【００３２】
さらに別の実施形態は、神経変性または認知障害の治療に使用される上のリストからの化合物に関する。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
発明の詳細な説明
本発明は、式Ｉの化合物がＢＡＣＥ１の阻害剤であり、従って、関連障害の治療に有用であるという発見に基づく。本発明の特定の態様について以下でさらに詳しく説明するが、この説明は、本発明を実施し得る全ての異なる方法、または本発明に追加し得る全ての特徴を詳細に列挙するものではない。従って、以下の明細書は、本発明の幾つかの実施形態を説明しようとするものであり、その全ての順列、組み合わせ、および変形を網羅的に明記するものではない。
【００３４】
本発明で使用する場合、「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」という用語は、炭素数１〜６（両端値を含む）の直鎖または分岐の飽和炭化水素を指す。Ｃ１〜Ｃ６アルキルの例としては、メチル、エチル、１−プロピル、２−プロピル、１−ブチル、２−ブチル、２−メチル−２−プロピル、２−メチル−１−プロピル、ｎ−ペンチルおよびｎ−ヘキシルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。同様に、直鎖または分岐の「Ｃ１〜Ｃ３アルキル」という用語は、炭素数１〜３（両端値を含む）の直鎖または分岐の飽和炭化水素を指す。このような置換基の例としては、メチル、エチル、およびｎ−プロピルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３５】
同様に、「Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ」という用語は、酸素の結合価が空いている炭素数１〜６（両端値を含む）の直鎖または分岐の飽和アルコキシ基を指す。Ｃ１〜Ｃ６アルコキシの例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−ブトキシ、ｔ−ブトキシおよびｎ−ヘキシルオキシが挙げられるが、これらに限定されるものではない。「Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ」は、任意選択で、１個以上のフッ素原子で置換されている。
【００３６】
本発明で使用する場合、「Ｃ１〜Ｃ６フルオロアルキル」という用語は、１個以上のフッ素原子で置換された炭素数１〜６（両端値を含む）の直鎖または分岐の飽和炭化水素を指す。Ｃ１〜Ｃ６フルオロアルキルの例としては、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、１フルオロエチル、モノフルオロメチル、ジフルオロメチル、１，２−ジフルオロエチルおよび３，４ジフルオロヘキシルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。同様に、「Ｃ１〜Ｃ３フルオロアルキル」という用語は、炭素原子１個当たり１個以上のフッ素原子で置換された炭素数１〜３（両端値を含む）の直鎖または分岐の飽和炭化水素を指す。
【００３７】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素を指す。
【００３８】
「Ｃ２〜Ｃ６アルケニル」という用語は、炭素数２〜６で二重結合を１個有する分岐または非分岐のアルケニル基を指し、エテニル、プロペニル、およびブテニルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
「Ｃ２〜Ｃ６アルキニル」という用語は、炭素数２〜６で三重結合を１個有する分岐または非分岐のアルキニル基を意味するものとし、エチニル、プロピニル、およびブチニルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３９】
本発明で使用する場合、「有効量」という語句は本発明の化合物に適用するとき、目的とする生物学的効果を引き起こすのに十分な量を示すものとする。「治療有効量」という語句は本発明の化合物に適用するとき、障害もしくは疾患状態、または障害もしくは疾患の症状の進行を改善する、緩和する、安定化させる、抑制する、緩速化するまたは遅延させるのに十分な化合物の量を示すものとする。一実施形態では、本発明の方法は、化合物の組み合わせの投与を提供する。このような場合、「有効量」は、目的とする生物学的効果を引き起こすのに十分な組み合わせの本発明の化合物の量である。
【００４０】
本発明で使用する「治療」または「治療すること」という用語は、疾患または障害の進行もしくは重症度を改善もしくは抑制すること、またはこのような疾患もしくは障害の１つ以上の症状もしくは副作用を改善もしくは抑制することを意味する。本発明で使用する「治療」または「治療すること」はまた、疾患または障害のシステム、病態、または状態の進行を阻害するまたはブロックする、例えば、遅延させる、阻止する、抑える、妨げるまたは妨害することも意味する。本発明の目的では、「治療」または「治療すること」はさらに、有利なまたは所望の臨床結果を得る方法を意味し、「有利なまたは所望の臨床結果」には、部分的であるかまたは全体的であるかに関わらず、症状の軽減、障害または疾患の程度の減少、疾患または障害状態の安定化（即ち、状態が悪化しないこと）、疾患または障害状態の遅延または緩速化、疾患または障害状態の改善または緩和、および、疾患または障害の寛解が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００４１】
本発明は、式Ｉの化合物が、ＢＡＣＥ１の阻害剤であり、従って、病理学的特徴が、β−アミロイド沈着および神経原線維濃縮体を含む障害、例えば、神経変性または認知障害の治療に有用である。
【００４２】
本発明の化合物は、前述したように、β−アミロイド沈着および神経原線維濃縮体へのその作用によって、アルツハイマー病の治療に有用であると予想される。これは、患者が、Ａβペプチドの産生に密接に関与する特定の遺伝子に突然変異を有する、家族性アルツハイマー病を含む。しかしながら、Ａβペプチドの凝集体は、家族性アルツハイマー病に限定されず、同様に、より一般的な孤発性アルツハイマー病の重要な病態生理学的特徴でもあることに留意すべきである［Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，６６，３−１１，２０１５］。
【００４３】
本発明の化合物はまた、早期アルツハイマー病、即ち、生物学的および構造的変化が始まっているが、疾患の臨床症状は、明白ではないか、またはまだ発症していない病期の治療に有用であると考えられる。早期アルツハイマー病は、実際には、疾患のいずれかの臨床症状が現れる何年も前に始まっている、早期アルツハイマー病は、前駆期アルツハイマー病、発症前アルツハイマー病および軽度認知障害を含む。軽度認知障害は、アルツハイマー病とは無関係である場合もあるが、アルツハイマー病への移行期であるか、またはアルツハイマー病に起因することが多い。発症前および前駆期アルツハイマー病は、無症候期であり、一般に、アルツハイマー病関連バイオマーカの存在によって診断される。これに関連して、本発明の化合物は、軽度認知障害などの早期アルツハイマー病からアルツハイマー病への進行を遅らせる上で有用であると考えられる。本発明の化合物は、アルツハイマー病に関連する記憶喪失、注意欠陥および認知症の治療に有用であると考えられる。
【００４４】
アルツハイマー病の連続体に加え、他の疾患も、β−アミロイド沈着および神経原線維濃縮体を特徴とする。これは、例えば、ダウン症候群としても知られるトリソミー２１を含む。ダウン症候群に罹患している患者は、過剰染色体２１を有するが、この染色体は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の遺伝子を含有する。過剰染色体２１は、ＡＰＰの過剰発現を招き、これにより、Ａβペプチドのレベル増加が起こり、これは、最終的にダウン症候群患者に認められるアルツハイマー病の発症のリスクを著しく高める［Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ＆Ｄｅｍｅｎｔｉａ，１１，７００−７０９，２０１］。脳アミロイド血管症もまた、中枢神経系の血管におけるβ−アミロイド沈着および神経原線維濃縮体を特徴とし［Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，６７，１９５−２０３，２０１５］、従って、本発明の化合物で治療可能であると予想される。
【００４５】
一実施形態では、本発明は、アルツハイマー病（家族性もしくは孤発性）、発症前アルツハイマー病、前駆期アルツハイマー病、軽度認知障害、ダウン症候群および脳アミロイド血管症から選択される疾患を治療する方法を提供し、この方法は、それを必要とする患者に、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を治療有効量投与することを含む。
【００４６】
本発明はさらに、患者のＢＡＣＥ１を阻害する方法であって、それを必要とする患者に、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を治療有効量投与することを含む方法を提供する。
【００４７】
本発明はまた、アミロイド前駆体タンパク質のβセクレターゼによる切断を阻害する方法であって、このような治療を必要とする患者に、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を治療有効量投与することを含む方法も提供する。
【００４８】
別の実施形態では、本発明は、アルツハイマー病（家族性もしくは孤発性）、発症前アルツハイマー病、前駆期アルツハイマー病、軽度認知障害、ダウン症候群または脳アミロイド血管症から選択される疾患を治療する医薬を製造するための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００４９】
本発明はさらに、ＢＡＣＥ１を阻害する医薬を製造するための式Ｉの化合物の使用も提供する。本発明はさらに、Ａβペプチドの産生または蓄積を阻害する医薬を製造するための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００５０】
一実施形態では、本発明は、アルツハイマー病（家族性もしくは孤発性）、発症前アルツハイマー病、前駆期アルツハイマー病、軽度認知障害、ダウン症候群または脳アミロイド血管症から選択される疾患を治療する方法に使用される式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００５１】
一実施形態では、本発明は、ＢＡＣＥ１を阻害する方法またはＡβペプチドの産生もしくは蓄積を阻害する方法に使用される式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩に関連する。
【００５２】
別の実施形態では、本発明は、上記治療および使用のいずれかに適した医薬製剤を提供する。
【００５３】
一実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
【００５４】
一実施形態では、患者は、ヒト患者である。
【００５５】
薬学的に許容される塩
本発明はまた、本化合物の塩、典型的には薬学的に許容される塩も含む。このような塩には薬学的に許容される酸付加塩が含まれる。酸付加塩には無機酸および有機酸の塩が含まれる。
【００５６】
好適な無機酸の代表例としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リン酸、硫酸、スルファミン酸、および硝酸等が挙げられる。好適な有機酸の代表例としては、ギ酸、酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、安息香酸、ケイ皮酸、クエン酸、フマル酸、グリコール酸、イタコン酸、乳酸、メタンスルホン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、シュウ酸、ピクリン酸、ピルビン酸、サリチル酸、コハク酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、酒石酸、アスコルビン酸、パモ酸、ビスメチレンサリチル酸、エタンジスルホン酸、グルコン酸、シトラコン酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、ＥＤＴＡ、グリコール酸、ｐ−アミノ安息香酸、グルタミン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、テオフィリン酢酸、および８−ハロテオフィリン（例えば、８−ブロモテオフィリン等）が挙げられる。薬学的に許容される無機酸付加塩または有機酸付加塩のその他の例としては、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１９７７，６６，２に記載の薬学的に許容される塩が挙げられる。
【００５７】
さらに、本発明の化合物は、溶媒和していない形態でも、水およびエタノール等の薬学的に許容される溶媒と溶媒和した形態で存在してもよい。
【００５８】
本発明の化合物は１つ以上の不斉中心を有してもよく、任意の光学異性体（即ち、鏡像異性体またはジアステレオマー）は、分離された、純粋な、または部分的に精製された光学異性体、および、ラセミ混合物、即ち立体異性体の混合物を含むその任意の混合物として本発明の範囲内に含まれるものとする。
【００５９】
これに関して、鏡像異性体を明記する場合、化合物はどちらかの鏡像異性体が過剰である、例えば、本質的に純粋な形態であるものと理解される。従って、本発明の一実施形態は、６０％以上、７０％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９６％以上、好ましくは９８％以上の鏡像体過剰率を有する本発明の化合物に関する。
【００６０】
ラセミ体は、既知の方法で、例えば、光学活性な酸を用いてそのジアステレオマー塩を分離し、塩基を用いた処理により光学活性なアミン化合物を遊離することにより光学対掌体に分割することができる。このようなジアステレオマー塩の分離は、例えば、分別結晶により達成することができる。この目的に好適な光学活性な酸としては、ｄ−またはｌ−酒石酸、マンデル酸、またはカンファースルホン酸を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。ラセミ化合物を光学対掌体に分割する別の方法は、光学活性なマトリックスでのクロマトグラフィーに基づく。本発明の化合物はまた、キラルアルキル化またはキラルアシル化試薬などのキラル誘導体化試薬からジアステレオマー誘導体を生成・クロマトグラフィー分離した後、キラル補助剤を切断することにより分割されてもよい。上記方法のいずれかを適用して、本発明の化合物の光学対掌体自体を分割しても、または、後で本明細書に記載の方法により本発明の化合物である光学分割された最終生成物に変換することができる合成中間体の光学対掌体を分割してもよい。
【００６１】
当業者に公知の他の光学異性体分割方法を使用することができる。このような方法には、Ｊ．Ｊａｑｕｅｓ，Ａ．Ｃｏｌｌｅｔ  ａｎｄ  Ｓ．Ｗｉｌｅｎ  ｉｎ  Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８１で検討されたものが含まれる。光学活性な化合物は、光学活性な出発原料から製造することもできる。
【００６２】
本発明はさらに、治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。本発明はまた、実験の項に開示する特定の化合物の１種を治療有効量と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物も提供する。
【００６３】
本発明の化合物は、単独で、または薬学的に許容される担体もしくは賦形剤と組み合わせて、単回投与または複数回投与のいずれかで投与することができる。本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される担体または希釈剤、ならびに他の任意の公知のアジュバントおよび賦形剤と共に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，２０１３に開示されているものなどの従来技術により製剤化することができる。
【００６４】
経口投与用の医薬組成物には、カプセル剤、錠剤、糖衣錠、丸剤、ロゼンジ剤、散剤および顆粒剤などの固体剤形が含まれる。組成物は、適宜、腸溶性コーティングなどのコーティングで被覆して製造されてもよく、または組成物は、当技術分野で周知の方法により、有効成分を放出制御する、例えば、徐放または持続放出するように製剤化されてもよい。経口投与用の液体剤形には、溶液剤、乳剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれる。非経口投与用の医薬組成物には、水性および非水性の滅菌注射用溶液剤、分散液剤、懸濁剤または乳剤、および使用前に滅菌注射用溶液剤または分散液剤中で再構成される滅菌粉末も含まれる。他の好適な投与形態としては、坐剤、スプレー剤、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、吸入剤、皮膚貼付剤および埋め込み剤が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００６５】
典型的な経口投与量は、一日当たり約０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。
【００６６】
本発明の化合物は、一般的に、遊離塩基としてまたはその薬学的に許容される塩として使用される。式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩は、例えば、式Ｉの遊離塩基の溶液または懸濁液を１モル当量の薬学的に許容される酸で処理することによる従来の方法で製造される。好適な有機酸および無機酸の代表例は前述している。
【００６７】
好適な医薬担体としては、不活性な固体希釈剤または充填剤、滅菌水溶液および様々な有機溶媒が挙げられる。固体担体の例としては、乳糖、白土、ショ糖、シクロデキストリン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸およびセルロースの低級アルキルエーテルが挙げられる。液体担体の例としては、シロップ、ピーナッツ油、オリーブ油、リン脂質、脂肪酸、脂肪酸アミン、ポリオキシエチレンおよび水が挙げられるが、これらに限定されるものではない。同様に、担体または希釈剤は、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの当技術分野で公知の任意の徐放性材料を単独で含んでもまたはワックスと混合して含んでもよい。式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩と薬学的に許容される担体とを組み合わせることにより形成される医薬組成物は、開示されている投与経路に好適な、様々な剤形で容易に投与される。製剤は、好都合には、薬学の分野で公知の方法により単位剤形で提供することができる。
【００６８】
経口投与用に固体担体を使用する場合、製剤は錠剤化されても、粉末もしくはペレットの形態で硬ゼラチンカプセルに封入されてもよく、または製剤はトローチ剤もしくはロゼンジ剤の形態であってもよい。固体担体の量は非常に様々となるが、投与単位当たり約２５ｍｇ〜約１ｇの範囲となる。液体担体を使用する場合、製剤は、シロップ剤、乳剤、軟ゼラチンカプセル剤、または水性もしくは非水性の液体懸濁剤もしくは溶液剤などの滅菌注射用液剤の形態であってもよい。
【実施例】
【００６９】
実験の項
一般式Ｉ（式中、Ｒ１およびＡｒは上記定義の通りである）の本発明の化合物は、以下の反応スキーム１〜４および実施例に概説した方法で製造することができる。前述の方法では、それ自体、当該技術分野の化学者に公知の、または当業者に明らかとなり得る変形または変更を使用することも可能である。さらに、本発明の化合物を製造する他の方法が、以下の反応スキームおよび実施例に鑑みて当業者に容易に明らかとなるであろう。
【００７０】
例えば、スキーム２は、本発明の化合物の合成中の選択的保護基の使用について説明する。当業者であれば、特定の反応に適切な保護基を選択することができるであろう。さらに、式Ｉの化合物を合成する後述の合成方法に、アミノ基、アミド基、ケト基、およびヒドロキシル基などの置換基を保護・脱保護する方法を組み込むことが必要な場合がある。このような基を保護・脱保護する方法は当該技術分野で周知であり、Ｔ．Ｇｒｅｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９１，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに記載されている。
【００７１】
２種以上の互変異性体の混合物または平衡として存在し得る化合物については、１種の互変異性体のみをスキームに示すが、それは最も安定な互変異性体ではないこともある。鏡像異性体、立体異性体、または幾何異性体として存在し得る化合物については、それらの幾何学的配置を明記し；さもなければ、構造は立体異性体の混合物を示す。
【００７２】
以下の方法を用いて分析ＬＣ−ＭＳデータを得た。
【００７３】
方法Ａ：
ＬＣ−ＭＳは、カラムマネージャ、バイナリーソルベントマネージャ、サンプルオーガナイザ、ＰＤＡ検出器（２５４ｎｍで動作）、ＥＬＳ検出器、および正イオンモードで動作するＡＰＰＩ源を備えるＳＱ−ＭＳを含むＷａｔｅｒｓ  ＡｃｑｕｉｔｙからなるＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ−ＭＳで行った。
【００７４】
ＬＣ条件：カラムは、Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ；２．１×１５０ｍｍで、６０℃で操作し、水＋０．０５％トリフルオロ酢酸（Ａ）と、アセトニトリル＋５％水＋０．０３％トリフルオロ酢酸（Ｂ）とからなる２液グラジエント０．６ｍｌ／分であった。勾配：０．００分：Ｂ１０％；３．００分：Ｂ９９．９％；３．０１分：Ｂ１０％；３．６０分：Ｂ１０％。総分析時間：３．６０分。
【００７５】
方法Ｂ：
ＬＣ−ＭＳは、カラムマネージャ、バイナリーソルベントマネージャ、サンプルオーガナイザ、ＰＤＡ検出器（２５４ｎｍで動作）、ＥＬＳ検出器、および正イオンモードで動作するＡＰＰＩ源を備えるＴＱ−ＭＳを含むＷａｔｅｒｓ  ＡｃｑｕｉｔｙからなるＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ−ＭＳで行った。
【００７６】
ＬＣ条件：カラムは、Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ；２．１×５０ｍｍで、６０℃で操作し、水＋０．０５％トリフルオロ酢酸（Ａ）と、アセトニトリル＋５％水＋０．０５％トリフルオロ酢酸（Ｂ）とからなる２液グラジエント１．２ｍｌ／分であった。勾配：０．００分：Ｂ１０％；１．００分：Ｂ１００％；１．０１分：Ｂ１０％；１．１５分：Ｂ１０％。総分析時間１．１５分。
【００７７】
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＡＶ−ＩＩＩ−６００装置により６００ＭＨｚで、またはＢｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＡＶ−ＩＩＩ−４００装置もしくはＶａｒｉａｎ  ４００装置により４００ＭＨｚで記録した。化学シフト値は、相対ｐｐｍ値で表す。複数のＮＭＲシグナルについて次の略称を使用する：ｓ＝シングレット、ｄ＝ダブレット、ｔ＝トリプレット、ｑ＝カルテット、ｄｄ＝ダブルダブレット、ｄｄｄ＝ダブルダブルダブレット、ｄｔ＝ダブルトリプレット、ｂｒ＝ブロード、およびｍ＝マルチプレット。
【００７８】
Ｒ１が、フェニル環のオルト位のフッ素である一例として、一般式ＩＶの化合物は、スキーム１に示すように製造することができる。
【化３】
0006629320.tif 000004
（式中、Ｒ１は、式Ｉで定義した通りであり、Ｒは、メチルまたはエチルなどのアルキル基である）
【００７９】
一般式ＩＶの化合物（スキーム１）は、一般式ＩＩの化合物をブチルリチウムなどのハロゲン−金属交換試薬と反応させた後、一般式ＩＩＩのエステルに添加することにより製造することができる。
【００８０】
Ｒ１が、フェニル環のオルト位のフッ素である一例として、一般式ＸＶＩの化合物は、スキーム２に示すように製造することができる。
【化４】
0006629320.tif 000005
（式中、Ｒ２およびＲ３は、メチルまたはエチルなどのアルキル基である）
【００８１】
一般式ＶＩＩの化合物（スキーム２）は、一般式ＩＶの化合物をＶＩなどのスルフィンアミドと、ルイス酸／乾燥剤、例えば、チタンテトラエトキシドの存在下で反応させることにより製造することができる。Ｚｎ粉末の存在下またはジエチル亜鉛およびトリス（トリフェニルホスフィン）ロジウム（Ｉ）塩化物の存在下、一般式ＶＩＩの化合物をブロモジフルオロ酢酸エチルなどの一般式ＶＩＩＩの化合物で処理すると、一般式ＩＸの化合物が得られる。一般式Ｘの化合物は、一般式ＩＸの化合物から、水素化ジイソブチルアルミニウムなどの還元剤で処理することにより得られる。幾つかの場合、化合物Ｘは、水和物の形態で平衡状態であり得る。一般式Ｘの化合物を、塩化リチウムおよび塩基、例えば、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下、２−（ジメトキシホスホリル）−酢酸メチルなどの条件で処理すると、一般式ＸＩの化合物が得られる。一般式ＸＩＩの化合物は、一般式ＸＩの化合物をパラジウム炭素などの触媒の存在下で水素化することにより得られる。一般式ＸＩＩＩの化合物は、一般式ＸＩＩの化合物を酸、例えば、塩酸のメタノール溶液で処理した後、炭酸カリウムのメタノール溶液で処理するか、またはトルエンなどの溶媒中で加熱することにより得られる。一般式ＸＩＩＩの化合物は、硝酸を用いてニトロ化すると、一般式ＸＩＶの化合物を得ることができる。一般式ＸＩＶの化合物をローソン試薬（２，４−ビス（４−メトキシフェニル）−１，３，２，４−ジチアジホスフェタン−２，４−ジスルフィド）などの試薬で処理すると、一般式ＸＶの化合物が得られる。一般式ＸＶの化合物のニトロ基を還元すると、一般式ＸＶＩの化合物が得られる。
【００８２】
また、一般式ＸＩＶの化合物は、スキーム３に示すように製造することもできる。一般式ＩＶｂのニトロ置換アセトフェノンから出発して、一般式ＸＩｂの化合物は、スキーム２に記載のように製造することができる。一般式ＸＩＩｂの化合物は、一般式ＸＩｂの化合物をパラジウム炭素などの触媒の存在下で水素化することにより得られる。一般式ＸＩＶの化合物は、一般式ＸＩＩの化合物からの一般式ＸＩＩＩの化合物の製造について記載したスキーム２と同様に製造することができる。一般式ＸＩＶの化合物のアニリン部分を保護すると、一般式ＸＩＶｂの化合物が得られる。一般式ＸＩＶｂの化合物をローソン試薬（２，４−ビス（４−メトキシフェニル）−１，３，２，４−ジチアジホスフェタン−２，４−ジスルフィド）などの試薬で処理した後、アニリン部分を脱保護すると、一般式ＸＶＩの化合物が得られる。
【化５】
0006629320.tif 000006
（式中、Ｒ１は、式Ｉで定義した通りであり、Ｒ３は、メチルまたはエチルなどのアルキル基である）
【００８３】
一般式Ｉの化合物は、スキーム４に示すように製造することができる。
【化６】
0006629320.tif 000007
（式中、Ｒ１およびＡｒは、式Ｉで定義した通りである）
【００８４】
一般式ＸＩＸの化合物は、一般式ＸＶＩの化合物を一般式ＸＶＩＩのカルボン酸塩化物と反応させることにより、または当該技術分野の化学者に公知の方法を用いて一般式ＸＶＩＩＩのカルボン酸と反応させることにより製造することができる。一般式ＸＩＸの化合物をアンモニアで処理すると、一般式Ｉの化合物が得られる。幾つかの場合、反応を促進するために、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシドなどの酸化試薬の添加が必要なことがある。
【００８５】
中間体の製造
中間体：２，２−ジフルオロ−１−（２−フルオロフェニル）エタン−１−オン
【化７】
0006629320.tif 000008
１−ブロモ−２−フルオロベンゼン（１０．００ｇ、５７．１４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液に、ｎ−ブチルリチウム（２．５Ｍ、２４．００ｍＬ）をＮ２下、−７８℃で１５分にわたり滴下しながら添加した。混合物を−７８℃で３０分間攪拌した。２，２−ジフルオロ酢酸エチル（１０．６４ｇ、８５．７１ｍｍｏｌ）を−７８℃で滴下しながら添加し、−７８℃で２時間攪拌した。ＴＬＣは、出発材料が一切残留しないことを示した。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１５ｍＬ）を−７８℃で滴下しながら添加した。反応混合物を２５℃に昇温させ、酢酸エチル（１００ｍＬ、３回）で抽出した。合わせた有機相を塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝９５：５）により精製し、２，２−ジフルオロ−１−（２−フルオロフェニル）エタン−１−オン（５．６０ｇ、収率４７．８％、純度８５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ  ７．９９−７．９５（ｍ，１Ｈ），７．７０−７．６４（ｍ，１Ｈ），７．３３（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ２Ｈ），７．２４（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．５９−６．３２（ｍ，１Ｈ）．
【００８６】
中間体：（Ｒ）−Ｎ−（２，２−ジフルオロ−１−（２−フルオロフェニル）エチリデン）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド
【化８】
0006629320.tif 000009
２，２−ジフルオロ−１−（２−フルオロフェニル）エタン−１−オン（５．６０ｇ、３２．１６ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィンアミド（５．０７ｇ、４１．８１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１１０ｍＬ）溶液に、テトラエトキシチタン（１４．６７ｇ、６４．３２ｍｍｏｌ）を２６℃で一度に添加した。黄色の溶液を８０℃で２．５時間攪拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１）は、出発材料が一切残留しないことを示した。混合物を２６℃に冷却した。水（１０ｍＬ）を混合物に添加し、これを濾過してから、酢酸エチル（６０ｍＬ、３回）で抽出した。有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝９１：９）により精製し、（Ｒ）−Ｎ−２，２−ジフルオロ−１−（２−フルオロフェニル）エチリデン）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（５．６０ｇ、収率６１．６％、純度９８．１％）を得た。
【００８７】
中間体：（Ｓ）−３−（（（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）アミノ）−２，２，４，４−テトラフルオロ−３−（２−フルオロフェニル）ブタン酸エチル
【化９】
0006629320.tif 000010
（Ｒ）−Ｎ−（２，２−ジフルオロ−１−（２−フルオロフェニル）エチリデン）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（４．６０ｇ、１６．６ｍｍｏｌ）、２−ブロモ−２，２−ジフルオロ−酢酸エチル（６．７３ｇ、３３．１８ｍｍｏｌ）およびＲｈ（ＰＰｈ３）３Ｃｌ（４６９ｍｇ、４９８μｍｏｌ）のＴＨＦ（９０ｍＬ）溶液に、ジエチル亜鉛の溶液（ＴＨＦの１Ｍ溶液、３３ｍＬ）をＡｒ下、−７８℃で２０分かけて滴下しながら添加し、その間、温度を−６５℃未満に維持した。反応混合物を１０分かけて０℃に昇温させ、０℃で２時間攪拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１）は、出発材料が完全に消費されたことを示した。暗赤色の溶液を水（４０ｍＬ）により反応停止させた後、濾過した。濾過物を酢酸エチル（１００ｍＬ、２回）で抽出した。合わせた有機相を飽和塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝４：１）により精製し、（Ｓ）−３−（（（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）アミノ）−２，２，４，４−テトラフルオロ−３−（２−フルオロフェニル）ブタン酸エチル（４．２６ｇ、収率６２．１％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）：δ  ７．６５−７．３１（ｍ，１Ｈ），７．４９−７．４４（ｍ，１Ｈ），７．２３−７．１２（ｍ，２Ｈ），６．９３−６．６６（ｍ，１Ｈ），５．００（ｓ，１Ｈ），４．３９−４．２９（ｍ，２Ｈ），１．３９（ｓ，９Ｈ），１．３２（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，３Ｈ）．
【００８８】
中間体：（Ｒ）−２−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１，１，３，３−テトラフルオロ−２−（２−フルオロフェニル）−４−オキソブタン−２−イル）−プロパン−２−スルフィンアミド
【化１０】
0006629320.tif 000011
（Ｓ）−３−（（（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）アミノ）−２，２，４，４−テトラフルオロ−３−（２−フルオロフェニル）ブタン酸エチル（３．２０ｇ、７．９７ｍｍｏｌ）のドライＴＨＦ（３５ｍＬ）溶液に、ＤＩＢＡＬ−Ｈ（水素化ジイソブチルアルミニウム）のトルエン（１．０Ｍ、１６ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）溶液をＮ２下、−７８℃で滴下しながら添加した。混合物を−７８℃で２時間攪拌した。−７８℃で、メタノール（３ｍＬ）で注意深く反応を停止させた。次に、水（２０ｍＬ）と酢酸エチル（２００ｍＬ）を添加し、２５℃に昇温させた。混合物を３０分間熟成させた。得られた混合物は、セライト（Ｃｅｌｉｔｅ）パッドを介して濾過した。有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。有機層を濃縮することにより、粗生成物（Ｒ）−２−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１，１，３，３−テトラフルオロ−２−（２−フルオロフェニル）−４−オキソブタン−２−イル）プロパン−２−スルフィンアミドを取得し、これは、さらに精製することなく次の工程で直接使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）：δ  ７．６５−７．３１（ｍ，１Ｈ），７．４９−７．４４（ｍ，１Ｈ），７．２３−７．１２（ｍ，２Ｈ），６．９３−６．６６（ｍ，１Ｈ），５．００（ｓ，１Ｈ），４．３９−４．２９（ｍ，２Ｈ），１．３９（ｓ，９Ｈ），１．３２（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，３Ｈ）．
【００８９】
中間体：（Ｓ）−５−（（（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）アミノ）−４，４，６，６−テトラフルオロ−５−（２−フルオロフェニル）−へクス−２−エン酸エチル
【化１１】
0006629320.tif 000012
Ｎ２下、攪拌したＬｉＣｌ（４０５ｍｇ、９．５６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３０ｍＬ）溶液に、２−ジエトキシホスホリル酢酸エチル（２．１４ｇ、９．５６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）（２．０６ｇ、１５．９４ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。２０分後、（Ｒ）−２−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１，１，３，３−テトラフルオロ−２−（２−フルオロフェニル）−４−オキソブタン−２−イル）−プロパン−２−スルフィンアミド（２．８５ｇ、７．９７ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）溶液を混合物に０℃で滴下しながら添加し、混合物を２５℃で１７．５時間攪拌した。反応混合物を濃縮してアセトニトリルを除去し、水（５０ｍＬ）を添加し、酢酸エチル（２００ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥し、蒸発させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１〜４：１）により精製し、（Ｓ）−５−（（（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）アミノ）−４，４，６，６−テトラフルオロ−５−（２−フルオロフェニル）へクス−２−エン酸エチル（１．７７ｇ、収率４６．８％）を得た。
【００９０】
中間体：（Ｓ）−５−（（（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）アミノ）−４，４，６，６−テトラフルオロ−５−（２−フルオロフェニル）−ヘキサン酸エチル
【化１２】
0006629320.tif 000013
（Ｓ）−５−（（（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）アミノ）−４，４，６，６−テトラフルオロ−５−（２−フルオロフェニル）−へクス−２−エン酸エチル（１．７７ｇ、４．２８ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（１００ｍＬ）溶液に、Ｐｄ／Ｃ（４００ｍｇ、１０％）を添加した。黒色の懸濁液を４５〜５０ｐｓｉＨ２下、２５℃で１８時間攪拌した。これを濾過し、濃縮することにより、（Ｓ）−５−（（（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）アミノ）−４，４，６，６−テトラフルオロ−５−（２−フルオロフェニル）−ヘキサン酸エチル（１．７０ｇ、収率９５．５％）を取得し、これをさらに精製することなく、次の工程で直接使用した。
【００９１】
中間体：（Ｓ）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロ−６−（２−フルオロフェニル）ピペリジン−２−オン
【化１３】
0006629320.tif 000014
（Ｓ）−５−（（（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）アミノ）−４，４，６，６−テトラフルオロ−５−（２−フルオロフェニル）−ヘキサン酸エチル（１．７０ｇ、４．０９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１５ｍＬ）溶液に、ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（４Ｍ、１７ｍＬ）を添加した。無色の溶液を２５℃で１時間攪拌した。ＴＬＣ分析は、出発材料が一切残っていないことを示した。混合物を濃縮し、残渣をトルエンに溶解した。得られた混合物を再度濃縮して、１．５ｇの無色の油を得た。この油をトルエン（３０ｍＬ）に溶解し、１００℃で１８時間攪拌した。混合物を２５℃に冷却した後、濃縮して、粗生成物を取得し、これをシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１）により精製し、（Ｓ）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロ−６−（２−フルオロフェニル）ピペリジン−２−オン（８８０ｍｇ、３．１５ｍｍｏｌ、収率７３％）を得た。
【００９２】
中間体：（Ｓ）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロ−６−（２−フルオロ−５−ニトロフェニル）ピペリジン−２−オン
【化１４】
0006629320.tif 000015
（Ｓ）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロ−６−（２−フルオロフェニル）ピペリジン−２−オン（８８０ｍｇ、３．１５ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（２．５５ｍＬ）に懸濁させた。混合物を０℃に冷却し、濃縮Ｈ２ＳＯ４（２．４６ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）を添加した。次に、ＨＮＯ３（６６１．６１ｍｇ、６．３０ｍｍｏｌ）を滴下しながら添加した。２５℃で２時間攪拌した後、反応混合物を１００ｇの氷に注ぎ、５Ｍ  ＮａＯＨ（水溶液）を用いて、ｐＨ＞１１に塩基性化した。懸濁液を酢酸エチル（１５０ｍＬ）で抽出した。これらの相を分離し、水層を酢酸エチル（２×７０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（３０ｍＬ）および水（３０ｍＬ）で洗浄した後、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧濃縮して、（Ｓ）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロ−６−（２−フルオロ−５−ニトロフェニル）ピペリジン−２−オン（１．００ｇ、粗生成物）を得た。
【００９３】
中間体：（Ｓ）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロ−６−（２−フルオロ−５−ニトロフェニル）ピペリジン−２−チオン
【化１５】
0006629320.tif 000016
（Ｓ）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロ−６−（２−フルオロ−５−ニトロフェニル）ピペリジン−２−オン（１．００ｇ、３．０８ｍｍｏｌ）のトルエン（５ｍＬ）溶液に、ローソン試薬（２，４−ビス（４−メトキシフェニル）−１，３，２，４−ジチアジホスフェタン−２，４−ジスルフィド）（６８６ｍｇ、１．７０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１００℃で２時間攪拌した。ＴＬＣ分析は、出発材料が一切残留しないことを示した。混合物を濃縮し、粗生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）により精製し、（Ｓ）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロ−６−（２−フルオロ−５−ニトロフェニル）ピペリジン−２−チオン（１．００ｇ、２．９４ｍｍｏｌ、収率９５．４％）を得た。
【００９４】
中間体：（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオン
【化１６】
0006629320.tif 000017
（Ｓ）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロ−６−（２−フルオロ−５−ニトロフェニル）ピペリジン−２−チオン（１．００ｇ、２．９４ｍｍｏｌ）のエタノール（１５ｍＬ）および水（４ｍＬ）溶液に、鉄粉末（８２１ｍｇ、１４５ｍｍｏｌ）およびＮＨ４Ｃｌ（７８６ｍｇ、１４．７ｍｍｏｌ、５．０当量）を添加した。黒色の混合物を６０℃で１８時間攪拌した。反応混合物を２５℃に冷却した後、粗生成物を濾過し、残渣をエタノール（１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾過物を濃縮し、得られた固体を酢酸エチル（１００ｍＬ）に分散させた。混合物を濾過し、濾過物を水（３０ｍＬ）、塩水（２０ｍＬ）で洗浄した後、濃縮した。粗生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１〜２：１）により精製し、（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオン（８１９ｍｇ、２．５１ｍｍｏｌ、収率８５．３％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）：δ  １０．９７（ｓ，１Ｈ），７．０３−６．９０（ｍ，２Ｈ），６．６４−６．５５（ｍ，２Ｈ），５．１９（ｓ，２Ｈ），３．１９−３．１５（ｍ，１Ｈ），３．０３−２．９４（ｍ，１Ｈ），２．３５−２．２４（ｍ，２Ｈ）．
【００９５】
中間体：ｄ３−５−（メトキシ−ｄ３）ピラジン−２−カルボン酸メチル
【化１７】
0006629320.tif 000018
ナトリウム（０．０９４ｇ、４．１０ｍｍｏｌ）をメタノール−ｄ４（２．９４ｍｌ）に少量ずつ添加し、ナトリウムが全て反応するまで、反応混合物を攪拌した。溶液を別の５−クロロピラジン−２−カルボン酸メチル（０．６ｇ、３．４８ｍｍｏｌ）のメタノール−ｄ４（０．９８ｍｌ）溶液に添加した。反応混合物を室温で１．５時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮した。２ｍｌの水を添加した。混合物を酸化エチルで抽出した。有機相を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮して、ｄ３−５−（メトキシ−ｄ３）ピラジン−２−カルボン酸メチルを得た。
【００９６】
中間体：５−（メトキシ−ｄ３）ピコリン酸メチル
【化１８】
0006629320.tif 000019
アルゴン下、５−ヒドロキシピコリン酸メチル（２．８８ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（１０８ｍｌ）に溶解した。炭酸カリウム（７．２０ｇ、５２．１ｍｍｏｌ）を添加し、オレンジ色の懸濁液を室温で４５分間攪拌した。ヨードメタン−ｄ３（１．４１ｍｌ、２２．６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２時間攪拌した。水を添加した。混合物を酢酸エチルで抽出した。有機相を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘプタン：酢酸エチル）により精製して、５−（メトキシ−ｄ３）ピコリン酸メチルを得た。
【００９７】
本発明の化合物の製造
実施例１：（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−クロロピコリンアミド（化合物１）
【化１９】
0006629320.tif 000020
５−クロロピコリン酸（１９ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート）（６７．４ｍｇ、０．１７７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解した。反応混合物を５分間撹拌した。次に、（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオン（２５ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジ−イソプロピルエチルアミン）（５２ｍｇ、０．０７ｍｌ、０．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧濃縮した。アンモニアのメタノール（７Ｍ、２ｍＬ）溶液を添加し、反応混合物を密閉バイアル内で５５℃にて一晩攪拌した。反応混合物を減圧濃縮した。粗生成物をシリカフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン：酢酸エチル）で精製した。生成物を酢酸エチルに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液／水で３回洗浄して、チオ尿素副産物を除去した。合わせた有機相を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧濃縮することにより、（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−クロロピコリンアミドを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，６００ＭＨｚ）：δ  １０．７８（ｓ，１Ｈ），８．７９（ｄｔ，Ｊ＝２．４，１．１Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄｄ，Ｊ＝８．４，０．７Ｈｚ，１Ｈ），７．９６−７．９０（ｍ，１Ｈ），７．８８（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｔ，Ｊ＝５５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．３８（ｓ，２Ｈ），２．５１（ｄｔ，Ｊ＝３．７，１．８Ｈｚ，２Ｈ），２．１９−１．９８（ｍ，２Ｈ）．
ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４３３（ＭＨ＋）；ｔＲ＝０．５３分（方法Ａ）
【００９８】
実施例２：（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−フルオロピコリンアミド（化合物２）
【化２０】
0006629320.tif 000021
実施例１と同様に、（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオンおよび５−フルオロピコリン酸から製造。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  １０．７２（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄｄ，Ｊ＝８．７，４．６Ｈｚ，１Ｈ），７．９９（ｔｄ，Ｊ＝８．７，２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９５−７．９１（ｍ，１Ｈ），７．８８（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｔ，Ｊ＝５５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．３８（ｓ，２Ｈ），２．５６−２．５０（ｍ，２Ｈ），２．２２−１．９８（ｍ，２Ｈ）．
ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４１７．１（ＭＨ＋）；ｔＲ＝０．４９分（方法Ａ）
【００９９】
実施例３：（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−メトキシピラジン−２−カルボキサミド（化合物３）
【化２１】
0006629320.tif 000022
実施例１と同様に、（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオンおよび５−メトキシピラジン−２−カルボン酸から製造。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  １０．６１（ｓ，１Ｈ），８．８９（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｍ，２Ｈ），７．２０（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．８６−６．６２（ｍ，１Ｈ），６．３７（ｓ，２Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），２．５６−２．５０（ｍ，２Ｈ），２．１９−１．９６（ｍ，２Ｈ）．
ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４３０．１（ｍＨ＋）；ｔＲ＝０．４８分（方法Ａ）
【０１００】
実施例４：（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−メチルオキサゾール−４−カルボキサミド（化合物４）
【化２２】
0006629320.tif 000023
実施例１と同様に、（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオンおよび２−メチルオキサゾール−４−カルボン酸から製造。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  １０．２５（ｓ，１Ｈ），８．６４（ｓ，１Ｈ），７．８２（ｍ，２Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，８．７Ｈｚ，１Ｈ），６．７３（ｔ，Ｊ＝５５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．３６（ｓ，２Ｈ），３．０１（ｓ，１Ｈ），２．５９−２．４１（ｍ，５Ｈ），２．１９−１．９６（ｍ，２Ｈ）．
ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４０３（ｍＨ＋）；ｔＲ＝０．４２分（方法Ａ）
【０１０１】
実施例５：（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−メトキシピコリンアミド（化合物５）
【化２３】
0006629320.tif 000024
実施例１と同様に、（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオンおよび５−メトキシピコリン酸から製造。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  １０．５５（ｓ，１Ｈ），８．４０（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．９４−７．９０（ｍ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝６．７，２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｄｄ，Ｊ＝８．７，２．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８５−６．６１（ｍ，１Ｈ），６．３６（ｓ，２Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），２．５５−２．４７（ｍ，２Ｈ），２．１７−２．００（ｍ，２Ｈ）．
ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４２９．１（ｍＨ＋）；ｔＲ＝０．５分（方法Ａ）
【０１０２】
実施例６：（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−（ジフルオロメチル）ピラジン−２−カルボキサミド（化合物６）
【化２４】
0006629320.tif 000025
実施例１と同様に、（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオンおよび５−ジフルオロメチル）ピラジン−２−カルボン酸から製造。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  １１．０２（ｓ，１Ｈ），９．４０（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），９．１０（ｓ，１Ｈ），７．９６−７．９１（ｍ，２Ｈ），７．３８−７．１７（ｍ，２Ｈ），６．７５（ｔ，Ｊ＝５５．１Ｈｚ，１Ｈ），６．３８（ｓ，２Ｈ），２．５６−２．５０（ｍ，２Ｈ），２．２０−１．９８（ｍ，２Ｈ）．
ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４５０．１（ｍＨ＋）；ｔＲ＝０．４８分（方法Ａ）
【０１０３】
実施例７：（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−シアノピコリンアミド（化合物７）
【化２５】
0006629320.tif 000026
実施例１と同様に、（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオンおよび５−シアノピコリン酸から製造。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  １０．９４（ｓ，１Ｈ），９．２１（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），８．５９（ｄｄ，Ｊ＝８．２，１．９Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．９６−７．８８（ｍ，２Ｈ），７．２２（ｄｄ，Ｊ＝１１．５，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｔ，Ｊ＝５５．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３７（ｓ，２Ｈ），２．５７−２．４８（ｍ，２Ｈ），２．０７（ｍ，２Ｈ）．
ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４２４．５（ｍＨ＋）；ｔＲ＝０．４５分（方法Ｂ）
【０１０４】
実施例８：（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−４−メチルチアゾール−２−カルボキサミド（化合物８）
【化２６】
0006629320.tif 000027
実施例１と同様に、（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオンおよび４−メチルチアゾール−２−カルボン酸から製造。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  １０．８４（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｄｄ，Ｊ＝６．７，２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．８８−７．８３（ｍ，１Ｈ），７．７０（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｄｄ，Ｊ＝１１．５，８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｔ，Ｊ＝５５．１Ｈｚ，１Ｈ），６．３８（ｓ，２Ｈ），２．５９−２．４６（ｍ，５Ｈ），２．１８−１．９５（ｍ，２Ｈ）．
ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４１９．４（ｍＨ＋）；ｔＲ＝０．４７分（方法Ｂ）
【０１０５】
実施例９：（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−メトキシピリミジン−２−カルボキサミド（化合物９）
【化２７】
0006629320.tif 000028
実施例１と同様に、（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオンおよび５−メトキシピリミジン−２−カルボン酸から製造。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  １０．７３（ｓ，１Ｈ），８．７３（ｓ，２Ｈ），７．９５−７．９１（ｍ，１Ｈ），７．８２（ｄｄ，Ｊ＝６．７，２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２２−７．１８（ｍ，１Ｈ），６．７４（ｔ，Ｊ＝５５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．３７（ｓ，２Ｈ），４．０３（ｓ，３Ｈ），２．５８−２．５０（ｍ，２Ｈ），２．１８−１．９９（ｍ，２Ｈ）．
ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４３０．５（ｍＨ＋）；ｔＲ＝０．３９分（方法Ｂ）
【０１０６】
実施例１０：（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−メトキシ−３−メチルピラジン−２−カルボキサミド（化合物１０）
【化２８】
0006629320.tif 000029
実施例１と同様に、（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオンおよび５−メトキシ−３−メチルピラジン−２−カルボン酸から製造。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  １０．５２（ｓ，１Ｈ），８．２４（ｄ，Ｊ＝０．６Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄｄｄ，Ｊ＝８．８，４．１，２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄｄ，Ｊ＝１１．７，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８５−６．６２（ｍ，１Ｈ），６．３８（ｓ，２Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ），２．７６（ｄ，Ｊ＝０．５Ｈｚ，３Ｈ），２．５５−２．４９（ｍ，２Ｈ），２．１８−１．９９（ｍ，２Ｈ）．
ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４４４．５（ｍＨ＋）；ｔＲ＝０．５２分（方法Ｂ）
【０１０７】
実施例１１：（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−シアノ−メトキシピコリンアミド（化合物１１）
【化２９】
0006629320.tif 000030
実施例１と同様に、（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオンおよび５−シアノ−３−メチルピコリン酸から製造。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  １０．８０（ｓ，Ｊ＝２７．６Ｈｚ，１Ｈ），８．９９（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｓ，１Ｈ），７．９９−７．８７（ｍ，１Ｈ），７．８２−７．６９（ｍ，１Ｈ），７．３６−７．１３（ｍ，１Ｈ），６．７３（ｔ，Ｊ＝５５．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３６（ｓ，２Ｈ），２．５６−２．４７（ｍ，２Ｈ），２．２１−１．９７（ｍ，２Ｈ）．
ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４３８．１（ｍＨ＋）；ｔＲ＝０．４９分（方法Ｂ）
【０１０８】
実施例１２：（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−ブロモピコリンアミド（化合物１２）
【化３０】
0006629320.tif 000031
実施例１と同様に、（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオンおよび５−ブロモピコリン酸から製造。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  １０．７８（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｄｄ，Ｊ＝２．３，０．７Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．３Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｄｄ，Ｊ＝８．４，０．６Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｄｄｄ，Ｊ＝８．８，４．１，２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８８−６．６２（ｍ，１Ｈ），６．３９（ｓ，２Ｈ），２．６０−２．４９（ｍ，２Ｈ），２．１９−１．９６（ｍ，２Ｈ）．
ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４７９．１（ｍＨ＋）；ｔＲ＝０．５３分（方法Ｂ）
【０１０９】
実施例１３：（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−（メトキシ−ｄ３）ピコリンアミド（化合物１３）
【化３１】
0006629320.tif 000032
アルゴン雰囲気下で、（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオン（２５ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解した。トリメチルアンモニウム（５２μｌ、０．１０５ｍｍｏｌ、２モル、トルエン）をゆっくりと添加した後、（メトキシ−ｄ３）ピコリン酸メチル（１８ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）の０．５ｍＬジクロロメタン溶液を添加した。反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応混合物を、冷却した４Ｎ  ＨＣｌ（水溶液）に注ぎ込んだ。混合物を酢酸エチルで抽出した。有機相を塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。７Ｍアンモニアのメタノール（４ｍＬ）溶液を添加し、反応混合物を５０℃の密閉バイアル内で一晩攪拌した。反応混合物を減圧濃縮し、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル）で精製した後、分取ＨＰＬＣにより精製して、トリフルオロ酢酸塩として標題の化合物を取得した。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  １１．１３（ｓ，１Ｈ），１０．７５（ｓ，１Ｈ），９．９８（ｓ，１Ｈ），９．１０（ｓ，１Ｈ），８．４０（ｄｄ，Ｊ＝２．９，０．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｄｄｄ，Ｊ＝８．９，４．１，２．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｄｄ，Ｊ＝８．７，０．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄｄ，Ｊ＝８．７，２．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄｄ，Ｊ＝１１．９，９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｔ，Ｊ＝５３．０Ｈｚ，１Ｈ），３．１７−３．０１（ｍ，２Ｈ），２．４８−２．３８（ｍ，２Ｈ）．
ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４３２（ｍＨ＋）；ｔＲ＝０．４９分（方法Ａ）
【０１１０】
実施例１４：（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−（メトキシ−ｄ３）ピラジン−２−カルボキサミド（化合物１４）
【化３２】
0006629320.tif 000033
実施例１３と同様に、（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオンおよび５−（メトキシ−ｄ３）ピコリン酸メチルから製造。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  １０．６１（ｓ，１Ｈ），８．８９（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９１−７．８６（ｍ，２Ｈ），７．１９（ｄｄ，Ｊ＝１１．５，８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．８４−６．６１（ｍ，１Ｈ），６．３６（ｓ，２Ｈ），２．５３−２．４９（ｍ，２Ｈ），２．１６−１．９６（ｍ，２Ｈ）．
ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４３３．１（ｍＨ＋）；ｔＲ＝０．４９分（方法Ａ）
【０１１１】
立体化学
ヘプタンと酢酸エチルの混合物から（Ｓ）−５−ブロモ−Ｎ−（３−（２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−６−チオキソピペリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）ピコリンアミドを再結晶することにより結晶を得た。（Ｓ）−５−ブロモ−Ｎ−（３−（２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−６−チオキソピペリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）ピコリンアミドの構造は、前記結晶をＸ線結晶構造解析することにより解明した。その構造は、（Ｓ）−５−ブロモ−Ｎ−（３−（２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−６−チオキソピペリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）ピコリンアミドの絶対および相対配置を示す。（Ｓ）−５−ブロモ−Ｎ−（３−（２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−６−チオキソピペリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）ピコリンアミドは、実施例１と同様に、（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオンおよび５−ブロモピコリン酸から出発して製造した。
【化３３】
0006629320.tif 000034
図１：（Ｓ）−５−ブロモ−Ｎ−（３−（２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−６−チオキソピペリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）ピコリンアミドのＸ線構造
【０１１２】
このようにして、例示した本発明の化合物の絶対配置を合理化することができる。（Ｓ）−５−ブロモ−Ｎ−（３−（２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−６−チオキソピペリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）ピコリンアミドは、例示した本発明の化合物全ての出発材料である（Ｓ）−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−（ジフルオロメチル）−５，５−ジフルオロピペリジン−２−チオンから製造した。
【０１１３】
薬理学的試験
ＢＡＣＥ１結合アッセイ
結合アッセイは、Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ  ＨＥＫ２９３細胞から組換え発現させた後、精製したビオチン化型のヒトＢＡＣＥ１を用いるＳＰＡベースのアッセイとして行った。結合アッセイは、白色透明底３８４プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ♯３６５３）内の５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび０．０３％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有する５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）中で行った。１０ｎＭ（最終濃度）放射性リガンド（［３Ｈ］−Ｎ−（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ベンジル−３−シクロプロピルアミノ−２−ヒドロキシプロピル）−５−（メタンスルホニルメチルアミノ）−Ｎ−（（Ｒ）−１−フェニルエチル）イソフタルアミド）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅから購入したＴＲＱ１１５６９）を、所定の濃度の試験化合物、６ｎＭ（最終濃度）ヒトＢＡＣＥ１、および２５μｇストレプトアビジン被覆ＰＶＴコアＳＰＡビーズ（ＲＰＮＱ０００７、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）と全容積４０μｌとなるように混合した。Ｃ５０測定アッセイでは幾つかの濃度の各試験化合物を試験した。プレートを室温で１時間インキュベートし、Ｗａｌｌａｃ  Ｔｒｉｌｕｘカウンターで計数した。全結合および非特異的結合は、バッファーおよび１μＭ（最終濃度）の高親和性ＢＡＣＥ１参照阻害剤（Ｓ）−６−［３−クロロ−５−（５−プロパ−１−イニルピリジン−３−イル）チオフェン−２−イル］−２−イミノ−３，６−ジメチルテトラヒドロピリジン−４−オンをそれぞれ用いて、測定した。各試験化合物について、ＩＣ５０値（放射性リガンドの特異的結合の５０％阻害をもたらす濃度）は濃度反応曲線から求め、式Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋Ｌ／Ｋｄ）（式中、ＬおよびＫｄは、それぞれ、アッセイに使用した放射性リガンドの最終濃度および放射性リガンドの解離定数である）からＫｉを算出するのに使用した。放射性リガンドのＫｄは飽和結合実験から求めた。
【０１１４】
【表１】
0006629320.tif 000035
【０１１５】
ＢＡＣＥ１効力アッセイ
効力アッセイは、市販のＢＡＣＥ１キット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｐ２９８５）を用いるＦＲＥＴベースのアッセイとして行った。１０μＭ（最終濃度）の試験化合物２μｌとキットのＢＡＣＥ１酵素（最終濃度３ｎＭ）１５μｌとを室温で１５分間予備インキュベートした後、キットの基質（最終濃度２５０ｎＭ）１５μｌを添加し、室温でさらに９０分間インキュベートした。その後、Ｐｈｅｒａｓｔａｒ（Ｅｘ５４０／Ｅｍ５９０）でアッセイプレートを読み取った。試験化合物の存在下で観測された酵素活性を、それぞれバッファーおよび１０μＭ（最終濃度）の高親和性ＢＡＣＥ１参照阻害剤（Ｓ）−６−［３−クロロ−５−（５−プロパ−１−イニルピリジン−３−イル）チオフェン−２−イル］−２−イミノ−３，６−ジメチルテトラヒドロピリジン−４−オンの存在下で観測された酵素活性に対して標準化した。試験化合物の効力は１０μＭ（最終濃度）で評価し、式、％阻害＝１００％−標準化した酵素活性（単位：％）を用いて酵素活性の阻害率と定義した。
【０１１６】
【表２】
0006629320.tif 000036
【０１１７】
ＢＡＣＥ１阻害後のラットの脳および血漿中のＡβレベルの評価。
動物。
全てのラットの世話および実験手順は、デンマーク立法府に従い、Ｌｕｎｄｂｅｃｋ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｓｔａｆｆにより承認された。ラットは、１２／１２時間の明／暗サイクルで、食餌と水を自由摂取できるようにしてバリア施設内で飼育した。
【０１１８】
未処置ラットの処置
体重約２５０ｇの若齢成体雄性スプラーグドーリー（Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ）ラットはＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒから購入し、溶媒（１０％ＨＰβＣＤ＋１Ｍ  ＭｅＳＯ４、ｐＨ２．５）または試験化合物（溶媒に溶解）０〜３０ｍｇ／ｋｇを強制経口投与（ｐ．ｏ）のみで与えた。化合物は５ｍｌ／ｋｇの量で投与する。各処置条件について、５〜１０匹の動物のコホートを確立した。
【０１１９】
獣医スタッフは、処置を受ける動物の毒性の徴候を注意深く監視した。監視パラメータには、体重、身体的外観、外被外観の変化、非誘発挙動の発生、および外部刺激に対する反応の鈍化または過剰反応が含まれた。
【０１２０】
組織採取。
最初に投与した後Ｔ＝１８０分の時点で、動物を気絶させ、ギロチンで断頭した。動物の断頭後、体幹血液をＥＤＴＡコートしたチューブに採取した。血液を２２００Ｇで、４℃で１５分間遠心分離し、血漿を採取し、−８０℃で凍結した。血液をＡβ  ＥＬＩＳＡおよびＤＭＰＫ分析用のアリコートに分けた。犠牲にした直後に、脳を摘出し、２つに分割した。右脳半球はドライアイスで急速凍結し、−８０℃で貯蔵した。左半分は切断し；前脳前部（ｆｒｏｎｔ  ｆｏｒｅｂｒａｉｎ）はＡβ  ＥＬＩＳＡ用に取り、残部はＤＭＰＫ分析用に使用した。これらの試料もドライアイスで急速凍結し、分析に使用するまで−８０℃で貯蔵した。
【０１２１】
組織処理。
皮質試料を氷上で少し解凍した後、それらを、約５〜７秒間速度５に設定した少量用分散装置（Ｔ１０  ｂａｓｉｃ  ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ（登録商標））を用いてホモジナイズした。組織をその重量の１０倍の容積中で処理した、例えば、組織１００ｍｇをホモジナイズバッファー１０００μＬ中でホモジナイズした。ホモジナイズバッファー：５０ｍｌＭｉｌｌｉ  Ｑ水＋５０ｎＭ  ＮａＣｌ＋０．２％ジエチルアミン（ＤＥＡ）＋Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏｃｋｔａｉｌ、１錠＋１ｎＭ  フッ化４−（２−アミノエチル）ベンゼンスルホニル塩酸塩不可逆的セリンプロテアーゼ阻害剤（ＡＥＢＳＦ）。
【０１２２】
ホモジナイズした後、試料を４５０μＬずつ１．５ｍｌエッペンドルフ管に採取し、氷上に置き、０．５％ＮＰ−４０（５０ｕｌ）を全ての試料に添加した後、それらを氷上で３０分間インキュベートした。その後、全ての試料を、超音波ホモジナイザを用いて２０ｋＨｚの均質な音（ＳＯＮＯＰＬＵＳ  ＨＤ２０７０，Ｂａｎｄｅｌｉｎ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ）１０パルス、１２〜１３％の出力設定で音波処理し、Ａβ種を全て抽出した。次いで、試料を２００００Ｇで、４℃で２０分間遠心分離した（Ｏｌｅ  Ｄｉｃｈ  １５７  ＭＰＲＦ  Ｍｉｃｒｏ  ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ）。遠心分離した後、上清２８５μＬをピペットで６００μＬマイクロチューブに移し、１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣＬバッファー１５μＬで中和した。
【０１２３】
ＥＬＩＳＡプロトコル。
ＷＡＫＯ２９４−６２５０１ヒト／ラットＡベータアミロイド（４０）キットを全てのＥＬＩＳＡ分析に使用した。血漿試料３０μＬまたは前述のように作成した皮質上清３０μＬを、氷上で６００μＬマイクロチューブに入れた。これに８Ｍ尿素（ＡｐｐｌｉＣｈｅｍ  Ａ１０４９，９０２５）３０μＬを添加し、２倍希釈した。血漿上清と皮質上清の両方を氷上で３０分間インキュベートした。標準列は、キットに提供された標準ペプチドストック溶液と、１．６Ｍ尿素（８Ｍ尿素２００μＬ＋標準希釈剤８００μＬ）および０．８Ｍ尿素（８Ｍ尿素４００μＬ＋標準希釈剤３６００μＬ）を含有する標準希釈剤とから調製した。１００ｐｍｏｌ／ｍｌ〜０ｐｍｏｌ／ＬのＡβ４０の２倍系列希釈をアッセイ用に調製した。
【０１２４】
尿素と共にインキュベートした後、キットの５倍標準希釈剤を添加することにより全ての試料をさらに希釈した。これは、標準希釈剤２４０μＬを試料／尿素混合物６０μＬに添加した後、それを十分混合することにより行った。希釈した各試料１００μＬをピペットでＥＬＩＳＡプレートの指定されたウェルにデュプリケートで移した。次いで、プレートを被覆して、４℃で終夜インキュベートした。翌日、使用する前にＥＬＩＳＡキットを室温にした。インキュベートしたプレートは、Ｍｉｌｌｉ  Ｑ水で希釈した２０×洗浄液で５回洗浄した。ＨＲＰコンジュゲート１００μＬを各ウェルに加え、プレートを被覆し、４℃で１時間インキュベートした。洗浄を再び５回繰り返した。３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）溶液１００μＬを各ウェルに加え、プレートを被覆し、暗所にて室温で３０分間インキュベートした。次に、停止液１００μＬを各ウェルに加え、ウェルに停止液を添加して３０分以内にプレートを分光光度計（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍｕｌｔｉｓｃａｎ  Ａｓｃｅｎｔ）で、４５０ｎｍの波長で読み取った。
【０１２５】
既知の濃度の合成Ａβ４０を含有する標準物質から作成した標準曲線に基づいて、試料中のＡβの濃度を測定した。当業者には、ジエチルアミン（ＤＥＡ）および尿素での抽出により、それぞれ可溶性Ａβおよび不溶性Ａβが遊離されることが分かるであろう。ＥＬＩＳＡキットはバリデーションが行われ、広く使用されているため、処置条件およびアッセイ条件が各被検化合物について同じである限り、アッセイは被検化合物について一貫性のあるロバストなデータが得られ、不一致が最小限になるものと認められている。
【０１２６】
データ解析
試料中のＡβ４０の濃度を求めるために、プレートに添加した試料の補間値に２０を乗じるが、それはＤＥＡ、尿素、および中和溶液の容積を合計したときの希釈に相当する。値は、溶媒処理された動物と比較したＡβ４０の変化率として算出される。
【０１２７】
脳および血漿サンプルの生体分析
ＵｌｔｒａＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ＬＣ（登録商標）（ＵＰＬＣ（登録商標））クロマトグラフィーを用いて、血漿および脳ホモジネートにおけるＴＣを決定した後、タンデム−ＭＳ（ＭＳ／ＭＳ）検出を実施した。
【０１２８】
装置：
Ｔｅｃａｎ  Ｇｅｎｅｓｉｓ  ＲＳＰ  ２００；Ｂｉｏｍｅｋ  ＮＸＰ，Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ；Ｓｉｇｍａ  ４Ｋ１５遠心分離機；Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ，Ｗａｔｅｒｓ；Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ４０００  ＴＱ，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；ＭＳソフトウエア：Ａｎａｌｙｓｔバージョン１．４．１
【０１２９】
化学薬品
アセトニトリル、ＨＰＬＣ−グレード、Ｆｌｕｋａ、Ｎｏ．３４９６７Ｎ；メタノール、ＨＰＬＣ−グレード、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，ロット９００３Ｓ；ギ酸、ＨＰＬＣ−グレード、Ｒｉｅｄｅｌ−ｄｅ  Ｈａｅｅｎ、ロット５１６６０；精製水、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  ＵＶ
【０１３０】
サンプル調製
脳ホモジネートは、脳１：４（ｖ／ｖ）を水：２−プロパノール：ＤＭＳＯ（５０：３０：２０ｖ／ｖ／ｖ）と共に均質化した後、遠心分離し、上清を回収することにより調製した。較正標準およびＱＣサンプルは、ハミルトン（Ｈａｍｉｌｔｏｎ）ロボットを用いて調製した。Ｂｉｏｍｅｋロボットを用いて、１５０μＬのＩＳＴＤのアセトニトリル（１ｎｇ／ｍＬＩＳＴＤ）溶液を２５μＬの較正標準、ＱＣサンプルおよび試験サンプル（血漿および脳ホモジネート）に添加した。遠心分離（６２００ｇ、４℃、２０分）後、各サンプルからの１００μＬの上澄みを新しいプレートに移し、Ｂｉｏｍｅｋロボット（メソッドファイルＩｎＶｉｖｏ導入）を用いて、０．１％ギ酸を含む１００μＬの水と混合した。急速遠心分離（６２００ｇ、４℃、５分）の後、サンプルをオートサンプラー内に配置した。
【０１３１】
ＵＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析
ＭＳ／ＭＳ検出は、正イオンエレクトロスプレーイオン化モードのＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ  ４０００装置を用いて実施した。ＴＣおよびＩＳＴＤは、親＞娘質量と電荷の比（ｍ／ｚ）で検出した。ネブライザーおよび衝突ガスには窒素を使用した。ピーク面積は、１．００〜１０００ｎｇ／ｍＬの血漿および５．００〜５０００ｎｇ／ｇの脳の範囲（希釈のために補正）内で分析物の血漿および脳濃度と線形的に相関した。血漿／脳サンプル薬物濃度が１０００ｎｇ／ｍＬまたは５０００ｎｇ／ｇを超えた場合、分析の前にサンプルをブランク血漿／脳ホモジネートで適切に希釈した。
【０１３２】
クロマトグラフィーシステム
分析カラム：
Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｃ１８  ＳＢ（ｐＨ２〜８）１．８μｍ、２．１×３０ｍｍ。
移動相Ａ：０．１％ギ酸水溶液または０．１％水酸化アンモニウム水溶液
移動相Ｂ：アセトニトリルと０．１％ギ酸水溶液または０．１％水酸化アンモニウム水溶液。
弱洗浄：メタノール
強洗浄：アセトニトリル／イソプロパノール／ギ酸（５０／５０／２ｖ／ｖ／ｖ）
流量：０．６ｍＬ／分
分析時間：３分
空費見込み（ｔｏ  ｗａｓｔｅ）：０〜０．５分
温度：４０℃
【０１３３】
【表３】
0006629320.tif 000037
【０１３４】
化合物３および５は、用量１０ｍｇ／ｋｇｐ．ｏ．で投与し、投与から３時間後に脳および血漿サンプルを収集し、前述した通りに以下の曝露を測定した。
【０１３５】
【表４】
0006629320.tif 000038
【０１３６】
【表５】
0006629320.tif 000039
【０１３７】
表３および４に示されるように、本発明の化合物は、脳血液関門を透過することができ、ＣＮＳにおいて効果を示す。
【０１３８】
ＭＤＣＫ−ＭＤＲ１アッセイ
試験化合物の透過性をＭＤＣＫ−ＭＤＲ１細胞において評価したが、これらの細胞は、９６トランスウェルプレート内に密集まで（４〜６日）培養した。試験化合物は、輸送バッファー（ＨＢＳＳ＋１％ＢＳＡ）で０．５μＭの濃度に希釈し、細胞単層の頂端または基底側に塗布した。３７℃、９５％の相対湿度を有する５％ＣＯ２で、６０分のインキュベーション時間にわたり、ＡからＢ方向またはＢからＡ方向の試験化合物の透過を３回反復して測定した。トランスウェルプレートのレシーバおよびドナーウェルの両方での分析物／ＩＳのピーク面積比に基づくＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析により、試験化合物を定量した。
【０１３９】
見掛け透過係数Ｐａｐｐ（ｃｍ／ｓ）は、式：
Ｐａｐｐ＝（ｄＣｒ／ｄｔ）×Ｖｒ／（Ａ×Ｃ０）
（式中、ｄＣｒ／ｄｔは、時間の関数としてのレシーバチャンバ内の化合物の蓄積濃度（μＭ／ｓ）であり；Ｖｒは、レシーバチャンバ内の溶液量であり（頂端側が０．０５ｍＬ；基底側が０．２５ｍＬ）；Ａは、輸送のための表面積、即ち、単層の面積の場合、０．０８０４ｃｍ２であり；Ｃ０は、ドナーチャンバ内の初期濃度（μＭ）である）
を用いて計算した。
【０１４０】
化合物は、流出比（Ｐａｐｐ  ＢＡ／Ｐａｐｐ  ＡＢ）が≧２であるとき、Ｐｇｐ基質に分類される。
【０１４１】
【表６】
0006629320.tif 000040
【０１４２】
表５に示されるように、例示した本発明の化合物の大部分が、２未満のＭＤＣＫ−ＭＤＲ１流出比を有しており、従って、血液脳関門を通過することができると考えられる（Ｅ  Ｋｅｒｎｓ，Ｌ  Ｄｉ，Ｄｒｕｇ−ｌｉｋｅ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ：Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（２００８）Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）。
本発明は以下の態様も含み得る。
［１］
式Ｉ
【化３４】
0006629320.tif 000041
（Ａｒは、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリルからなる群から選択され、Ａｒは、任意選択で、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６フルオロアルキルまたはＣ１〜Ｃ６アルコキシから選択される１つ以上の置換基で置換されており；および
Ｒ１は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３フルオロアルキルまたはＣ１〜Ｃ３アルキルである）
の化合物；
またはその薬学的に許容される塩。
［２］
前記化合物が、式Ｉａ
【化３５】
0006629320.tif 000042
の化合物；
またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物。
［３］
Ｒ１が、ＦまたはＨである、請求項１または２に記載の化合物。
［４］
Ａｒが、任意選択で、１個以上のＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３フルオロアルキルまたはＣ１〜Ｃ３アルコキシで置換されている、請求項１または２に記載の化合物。
［５］
Ａｒが、任意選択で置換されたピリジルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
［６］
Ａｒが、任意選択で置換されたピリミジルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
［７］
Ａｒが、任意選択で置換されたピラジニルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
［８］
Ａｒが、任意選択で置換されたオキサゾリルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
［９］
Ａｒが、任意選択で置換されたチアゾリルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
［１０］
前記化合物が、以下：
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−クロロピコリンアミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−フルオロピコリンアミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−メトキシピラジン−２−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−２−メチルオキサゾール−４−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−メトキシピコリンアミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−（ジフルオロメチル）ピラジン−２−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−シアノピコリンアミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−４−メチルチアゾール−２−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−メトキシピリミジン−２−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−メトキシ−３−メチルピラジン−２−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−シアノ−３−メチルピコリンアミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−ブロモピコリンアミド、
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−（メトキシ−ｄ３）ピコリンアミド、および
（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−２−（ジフルオロメチル）−３，３−ジフルオロ−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン−２−イル）−４−フルオロフェニル）−５−（メトキシ−ｄ３）ピラジン−２−カルボキサミド；
またはその薬学的に許容される塩
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
［１１］
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
［１２］
アルツハイマー病（家族性もしくは孤発性）、発症前アルツハイマー病、前駆期アルツハイマー病、軽度認知障害、ダウン症候群および脳アミロイド血管症から選択される疾患を治療する方法であって、前記方法は、それを必要とする患者に、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物を治療有効量投与することを含む方法。
［１３］
アルツハイマー病（家族性もしくは孤発性）、発症前アルツハイマー病、前駆期アルツハイマー病、軽度認知障害、ダウン症候群および脳アミロイド血管症から選択される疾患を治療する医薬を製造するための請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物の使用。
［１４］
治療に使用するための請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
［１５］
アルツハイマー病（家族性もしくは孤発性）、発症前アルツハイマー病、前駆期アルツハイマー病、軽度認知障害、ダウン症候群および脳アミロイド血管症から選択される疾患の治療に使用するための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。