(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0006665169.tif 000056
［式中、Ｒは、ＨまたはＦを表す。］
の化合物またはその塩。
【請求項２】
式（ＩＡ）：
【化２】
0006665169.tif 000057
の４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸またはその塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式（ＩＡ２）：
【化３】
0006665169.tif 000058
を有する（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸またはその薬学上許容される塩である、請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
式（ＩＢ）：
【化４】
0006665169.tif 000059
の４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（２−フルオロ−５−モルホリノフェニル）ブタン酸またはその塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
式（ＩＢ２）：
【化５】
0006665169.tif 000060
を有する（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（２−フルオロ−５−モルホリノフェニル）ブタン酸またはその薬学上許容される塩である、請求項１または請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
治療において使用するための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学上許容される塩を含んでなる、医薬組成物。
【請求項７】
αｖβ６受容体アンタゴニストが指示される疾患または病態の治療または予防のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学上許容される塩を含んでなる、医薬組成物。
【請求項８】
特発性肺線維症の治療または予防のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学上許容される塩を含んでなる、医薬組成物。
【請求項９】
αｖβ６受容体の拮抗作用が有益である障害の治療または予防のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学上許容可能な塩を含んでなる、医薬組成物。
【請求項１０】
線維性疾患の治療または予防のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学上許容可能な塩を含んでなる、医薬組成物。
【請求項１１】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学上許容可能な塩と、１種以上の薬学上許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含んでなる医薬組成物。
【請求項１２】
経口投与に適合した形態の請求項６〜１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、αｖβ６インテグリンアンタゴニストであるピロリジン化合物、そのような化合物を含んでなる医薬組成物および療法、特に、αｖβ６インテグリンアンタゴニストが指示される（indicated）病態の治療におけるそれらの使用、αｖβ６インテグリンのアンタゴニストが指示される病態の治療のための医薬の製造における化合物の使用、およびヒトにおけるαｖβ６インテグリンの拮抗作用が指示される障害の治療または予防のための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
インテグリンスーパーファミリータンパク質は、αおよびβサブユニットからなるヘテロ二量体の細胞表面受容体である。少なくとも１８種のαサブユニットと８種のβサブユニットが報告されており、それらは、２４種の異なるα／βヘテロ二量体を形成することが実証されている。各鎖は、鎖１本当たり２０前後のアミノ酸の膜貫通領域を備えた大きな細胞外ドメイン（βサブユニットでは６４０を越えるアミノ酸、αサブユニットでは９４０を越えるアミノ酸）と、一般に、鎖１本当たり３０〜５０アミノ酸の短い細胞質テールを含んでなる。種々のインテグリンが、細胞外マトリックスとの細胞接着、細胞−細胞相互作用、ならびに細胞の遊走、増殖、分化および生存に対する作用を含む多くの細胞生物学に関与していることが示されている (Barczyk et al, Cell and Tissue Research, 2010, 339, 269)。
【０００３】
インテグリン受容体は、短いタンパク質−タンパク質結合界面を介して結合タンパク質と相互作用する。インテグリンファミリーは、そのようなリガンドにおける類似の結合認識モチーフを共有するサブファミリーに分類され得る。主なサブファミリーは、ＲＧＤ−インテグリンであり、これはそれらのタンパク質配列内にＲＧＤ（アルギニン−グリシン−アスパラギン酸）モチーフを含有するリガンドを認識する。このサブファミリーには、８種のインテグリン、すなわち、αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、αｖβ８、αＩＩｂβ３、α５β１、α８β１が存在し、命名は、αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、およびαｖβ８が、βサブユニットは異なるが、共通のαｖサブユニットを有し、αｖβ１、α５β１およびα８β１が、αサブユニットは異なるが、共通のβ１サブユニットを有することを示している。β１サブユニットは、１１種の異なるαサブユニットと対を成し、そのうち、上記に列挙した３種のみが、ＲＧＤペプチドモチーフを共通に認識することが示されている(Humphries et al, Journal of Cell Science, 2006, 119, 3901)。
【０００４】
８種のＲＧＤ結合インテグリンは、異なるＲＧＤ含有リガンドに対して、異なる結合親和性および特異性を有する。リガンドには、フィブロネクチン、ビトロネクチン、オステオポンチン、ならびにトランスフォーミング増殖因子β１およびβ３（ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３）の潜伏関連ペプチド（ＬＡＰ）などのタンパク質が含まれる。ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３のＬＡＰと結合するインテグリンは、いくつかのシステムで、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３生物活性の活性化、およびその後のＴＧＦβ駆動性の生物学を可能にすることが示されている(Worthington et al, Trends in Biochemical Sciences, 2011, 36, 47)。このようなリガンドの多様性は、ＲＧＤ結合インテグリンの発現パターンと相まって、疾患介入のための多くの機会を作り出す。このような疾患には、線維性疾患(Margadant et al, EMBO reports, 2010, 11, 97)、炎症性障害、癌(Desgrosellier et al, Nature Reviews Cancer, 2010, 10, 9)、再狭窄、および血管形成要素を有する他の疾患(Weis et al, Cold Spring. Harb. Perspect. Med. 2011, 1, a 006478)が含まれる。
【０００５】
阻害性の抗体、ペプチドおよび小分子を含め相当な数のαｖインテグリンアンタゴニスト(Goodman et al, Trends in Pharmacological Sciences, 2012, 33, 405)が文献に開示されている。抗体では、これらには、ｐａｎ−αｖアンタゴニストのインテツムマブおよびアビツズマブ(Gras, Drugs of the Future, 2015, 40, 97)、選択的αｖβ３アンタゴニストのエタラシズマブ、および選択的αｖβ６アンタゴニストのＳＴＸ−１００が含まれる。シレンジタイドは、αｖβ３およびαｖβ５の両方を阻害する環状ペプチドアンタゴニストであり、ＳＢ−２６７２６８は、αｖβ３およびαｖβ５の両方を阻害する化合物の例である(Wilkinson-Berka et al, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2006, 47, 1600)。種々の組合せのαｖインテグリンのアンタゴニストとして作用する化合物を発明することで、新規薬剤を、特定の疾患兆候のために作出、適合させることが可能となる。
【０００６】
肺線維症は、特発性間質性肺炎を含むいくつかの間質性肺疾患の最終段階であり、肺間質内での細胞外マトリックスの過剰な沈積を特徴とする。特発性間質性肺炎のうち、特発性肺線維症（ＩＰＦ）は、診断後３〜５年の典型的生存期間を有する最も一般的かつ最も致命的な病態である。ＩＰＦにおける線維症は、一般に、進行性で、現行の薬理学的介入に不応であり、無情にも機能性肺胞単位の閉塞のために呼吸不全につながる。ＩＰＦは米国および欧州の約５００，０００人を侵している。
【０００７】
ＴＧＦ−β１の活性化における上皮限定インテグリンαｖβ６の重要な役割を裏付けるｉｎ  ｖｉｔｒｏの実験的動物およびＩＰＦ患者の免疫組織化学データが存在する。このインテグリンの発現は、正常な上皮組織では低く、ＩＰＦにおける活性化上皮を含む、損傷および炎症上皮において有意にアップレギュレートされる。従って、このインテグリンを標的とすることで、より広いＴＧＦβ恒常性の役割に干渉する理論的可能性が低くなる。抗体遮断によるαｖβ６インテグリンの部分的阻害は、炎症を悪化させることなく、肺線維症を予防することが示されている(Horan GS et al Partial inhibition of integrin αvβ6 prevents pulmonary fibrosis without exacerbating inflammation. Am J Respir Crit Care Med  2008 177: 56-65)。肺線維症の他、αｖβ６はまた、肝臓および腎臓を含む他の器官の線維性疾患の重要な促進因子と考えられ(Reviewed in Henderson NC et al Integrin-mediated regulation of TGFβ in Fibrosis, Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Basis of Disease 2013 1832:891-896)、このことは、αｖβ６アンタゴニストが複数の器官の線維性疾患を治療する上で有効であり得ることを示唆している。
【０００８】
いくつかのＲＧＤ結合インテグリンがＴＧＦβと結合してこれを活性化し得るという所見と一致して、種々のαｖインテグリンが最近、線維性疾患に関連付けられている(Henderson NC et al Targeting of αv integrin identifies a core molecular pathway that regulates fibrosis in several organs Nature Medicine 2013 Vol 19, Number 12: 1617-1627; Sarrazy V et al Integrins αvβ5 and αvβ3 promote latent TGF-β1 activation by human cardiac fibroblast contraction Cardiovasc Res 2014 102:407-417; Minagawa S et al Selective targeting of TGF-β activation to treat fibroinflammatory airway disease Sci Transl Med  2014 Vol 6, Issue 241: 1-14; Reed NI et al .  The αvβ1 integrin plays a critical in vivo  role in tissue fibrosis Sci Transl Med  2015 Vol 7, Issue 288: 1-8)。従って、ＲＧＤ結合インテグリンファミリーの特定のメンバーに対する、またはＲＧＤ結合インテグリンファミリー内の特定の選択的フィンガープリントを有する阻害剤は、複数の器官の線維性疾患を治療する上で有効であり得る。
【０００９】
αｖβ３  αｖβ５、αｖβ６およびαｖβ８に対する一連のインテグリンアンタゴニストのＳＡＲ関係が記載されている(Macdonald, SJF et al. Structure activity relationships of αv integrin antagonists for pulmonary fibrosis by variation in aryl substituents. ACS MedChemLett 2014, 5, 1207-1212. 19 Sept 2014)。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
αｖβ１、αｖβ５またはαｖβ８などの他のαvインテグリンに対しても活性を持ち得るαvβ6アンタゴニストを提供することが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
発明の簡単な概要
本発明の第１の態様では、式（Ｉ）の化合物またはその塩、より詳しくは、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容可能な塩：
【化１】
0006665169.tif 000002
（式中、ＲはＨまたはＦを表す）
が提供される。
【００１２】
式（Ｉ）の化合物およびそれらの塩は、αｖβ６アンタゴニスト活性を有し、特定の障害の治療または予防に使用される可能性があると考えられる。用語αｖβ６アンタゴニスト活性には、本明細書ではαｖβ６阻害剤活性を含む。
【００１３】
本発明の第２の態様では、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容可能な塩と１種以上の薬学上許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含んでなる医薬組成物が提供される。
【００１４】
本発明の第３の態様では、療法において、特に、αｖβ６インテグリン受容体アンタゴニストが指示される疾患または病態の治療において使用するための式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩が提供される。
【００１５】
本発明の第４の態様では、必要とするヒトにおけるαｖβ６インテグリン受容体アンタゴニストが指示される疾患または病態の治療または予防方法が提供され、その方法は、それを必要とするヒトに治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容可能な塩を投与することを含んでなる。
【００１６】
本発明の第５の態様では、αｖβ６インテグリン受容体アンタゴニストが指示される疾患または病態の治療のための医薬の製造における式（Ｉ）の化合物、またはその薬学上許容可能な塩の使用が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、化合物(XVIII)のＸ線結晶構造を示す図である。
【図２】図２は、化合物(XXIII)のＸ線結晶構造を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
発明の詳細な説明
本発明の第１の態様では、式（Ｉ）の化合物またはその塩：
【化２】
0006665169.tif 000003
（式中、ＲはＨまたはＦを表す）
が提供される。
【００１９】
式（Ｉ）の１つの化合物は、４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸（ＩＡ）またはその塩である：
【化３】
0006665169.tif 000004
【００２０】
一実施形態において、式（ＩＡ）の化合物は、４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸の薬学上許容される塩である。
【００２１】
一実施形態において、式（ＩＡ）の化合物は、式（ＩＡ１）：
【化４】
0006665169.tif 000005
を有し、（Ｒ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸、またはその薬学上許容される塩である。
【００２２】
別の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＡ２）：
【化５】
0006665169.tif 000006
を有し、（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸、またはその薬学上許容される塩である。
【００２３】
別の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＡ３）：
【化６】
0006665169.tif 000007
を有し、（Ｓ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸、またはその薬学上許容される塩である。
【００２４】
別の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＡ４）：
【化７】
0006665169.tif 000008
を有し、（Ｒ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸、またはその薬学上許容される塩である。
【００２５】
式（Ｉ）の別の化合物は、４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（２−フルオロ−５−モルホリノフェニル）ブタン酸（ＩＢ）またはその塩である：
【化８】
0006665169.tif 000009
【００２６】
一実施形態において、式（ＩＢ）の化合物は、４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（２−フルオロ−５−モルホリノフェニル）ブタン酸の薬学上許容される塩である。
【００２７】
一実施形態において、式（ＩＢ）の化合物は、（ＩＢ１）： 
【化９】
0006665169.tif 000010
の式を有し、（Ｒ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（２−フルオロ−５−モルホリノフェニル）ブタン酸、またはその薬学上許容される塩である。
【００２８】
別の実施形態において、式（ＩＢ）の化合物は、（ＩＢ２）：
【化１０】
0006665169.tif 000011
の式を有し、（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（２−フルオロ−５−モルホリノフェニル）ブタン酸、またはその薬学上許容される塩である。
【００２９】
別の実施形態において、式（ＩＢ）の化合物は、（ＩＢ３）：
【化１１】
0006665169.tif 000012
の式を有し、（Ｓ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（２−フルオロ−５−モルホリノフェニル）ブタン酸、またはその薬学上許容される塩である。
【００３０】
別の実施形態において、式（ＩＢ）の化合物は、（ＩＢ４）：
【化１２】
0006665169.tif 000013
の式を有し、（Ｒ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（２−フルオロ−５−モルホリノフェニル）ブタン酸、またはその薬学上許容される塩である。
【００３１】
式（Ｉ）の化合物は、塩基性アミン基とカルボン酸基の両方を有し、結果として内部塩、すなわち、両性イオンまたは分子内塩を形成し得る。従って、ある実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、両性イオン塩形態にある。別の実施形態において、式（ＩＡ）の化合物は、両性イオン塩形態の４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸もしくは４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（２−フルオロ−５−モルホリノフェニル）ブタン酸または化合物ＩＡ１、ＩＡ２、ＩＡ３、ＩＡ４、ＩＢ１、ＩＢ２、ＩＢ３もしくはＩＢ４のいずれか１つである。別の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、非両性イオン形態の４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸または４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（２−フルオロ−５−モルホリノフェニル）ブタン酸または化合物ＩＡ１、ＩＡ２、ＩＡ３、ＩＡ４、ＩＢ１、ＩＢ２、ＩＢ３もしくはＩＢ４のいずれか１つである。
【００３２】
本発明は親化合物としての、両性イオンとしての（親化合物はそのカルボン酸基により内部がプロトン化され、通常、両性イオンとして存在する）、およびその塩としての、例えば、その薬学上許容可能な塩としての式（Ｉ）の化合物を包含することが認識されるであろう。一実施形態において、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容可能な塩に関する。
【００３３】
適切な塩の総説としては、Berge et al., J. Pharm. Sci., 66:1-19, (1977)を参照。適切な薬学上許容可能な塩は、P H Stahl and C G Wermuth編, Handbook of Pharmaceutical Salts; Properties, Selection and Use, Weinheim/Surich: Wiley- VCH/VHCA, 2002に列挙されている。適切な薬学上許容可能な塩には、例えば、塩酸、臭化水素酸、オルトリン酸、硝酸、リン酸、もしくは硫酸などの無機酸、または例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、プロピオン酸、乳酸、クエン酸、フマル酸、リンゴ酸、コハク酸、サリチル酸、マレイン酸、グリセロリン酸、酒石酸、安息香酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸などのナフタレンスルホン酸、ヘキサン酸、もしくはアセチルサリチル酸などの有機酸との酸付加塩が含まれ得る。特に好適な酸は、フマル酸およびマレイン酸である。一般に、薬学上許容可能な塩は、適当であれば所望の酸または塩基を使用することによって容易に調製することができる。得られた塩は、溶液から沈澱させ、濾取することができるか、または溶媒の蒸発により回収することができる。
【００３４】
他の薬学上許容されない塩、例えば、ギ酸塩、シュウ酸塩またはトリフルオロ酢酸塩も、式（Ｉ）の化合物を単離する際に使用することができ、本発明の範囲内に含まれる。
【００３５】
薬学上許容可能な塩基付加塩を、場合により好適な溶媒中で、式（Ｉ）の化合物を好適な有機塩基（例えば、トリエチルアミン、エタノールアミン、トリエタノールアミン、コリン、アルギニン、リシンもしくはヒスチジン）と反応させることにより形成して塩基付加塩を得ることができ、この塩基付加塩を通常、例えば、結晶化および濾過により単離する。薬学上許容可能な無機塩基塩には、アンモニウム塩、ナトリウムおよびカリウムの塩などのアルカリ金属塩、カルシウムおよびマグネシウムの塩などのアルカリ土類金属、ならびにイソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミンおよびＮ−メチル−Ｄ−グルカミンなどの第一級、第二級および第三級アミンの塩を含む有機塩基との塩が含まれる。
【００３６】
本発明は、その範囲内に、総ての可能な化学量論的および非化学量論的形態の式（Ｉ）の化合物の塩を含む。
【００３７】
式（Ｉ）の化合物は、結晶形または非晶質形であり得る。さらに、式（Ｉ）の化合物の結晶形の一部は多形として存在することもあり、これらも本発明の範囲内に含まれる。式（Ｉ）の化合物の多形形態は、限定されるものではないが、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターン、赤外（ＩＲ）スペクトル、ラマンスペクトル、示差走査熱分析（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、および固相核磁気共鳴（ＳＳＮＭＲ）を含むいくつかの従来の分析技術を使用して、特性評価および識別を行うことができる。
【００３８】
式（Ｉ）の化合物はまた、原体の安定性および溶解度を高めるために噴霧乾燥分散（ＳＤＤ）法を用い、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのポリマーマトリックス中の非晶質分子分散物として製造してもよい。
【００３９】
多くの有機化合物は、それらが反応される、またはそれらが沈澱もしくは結晶化される溶媒と複合体を形成することができることが認識されるであろう。これらの複合体は、「溶媒和物」として知られる。例えば、水との複合体は、「水和物」として知られる。水、キシレン、Ｎ−メチルピロリジノン、メタノールおよびエタノールなどの、高沸点を有しかつ／または水素結合を形成することができる溶媒を、溶媒和物を形成するために使用することができる。溶媒和物を同定するための方法には、限定されるものではないが、ＮＭＲおよび微量分析が含まれる。結晶形態は場合により、例えば、薬学上許容可能な溶媒和物、例えば、化学量論水和物ならびに変動量の水を含有する化合物であり得る水和物を形成するように溶媒和され得ることが認識されるであろう。溶媒和物には、化学量論溶媒和物および非化学量論的溶媒和物が含まれる。式（Ｉ）の化合物は、溶媒和形態または非溶媒和物形態で存在し得る。
【００４０】
本明細書に記載の化合物は２個の不斉中心を含有するので、光学異性体、例えば、ジアステレオ異性体および鏡像異性体が形成され得る。従って、本発明は、他の異性体を実質的に含まないように単離された（すなわち、純粋な）個々の異性体としてであれ、または混合物としてであれ、式（Ｉ）の化合物の異性体を包含する。他の異性体を実質的に含まないように単離された（すなわち、純粋な）個々の異性体は、１０％未満、特に、約１％未満、例えば約０．１％未満の他の異性体が存在するように単離され得る。
【００４１】
当業者には、ある特定のジアステレオ異性体は他のものよりも活性が劣ることがあり、個々のジアステレオ異性体の活性は選択限界を下回ることもあることが理解されるであろう。
【００４２】
異性体の分離は、当業者に公知の従来の技術、例えば、分別結晶、クロマトグラフィー、ＨＰＬＣまたはこれらの技術の組合せなどによって達成され得る。
【００４３】
式（Ｉ）の化合物は、いくつかの互変異性形の１つで存在し得る。本発明は、個々の互変異性体としてであれ、またはそれらの混合物としてであれ、式（Ｉ）の化合物の総ての互変異性体を包含すると理解される。
【００４４】
以上から、式（Ｉ）の化合物およびその塩の溶媒和物、異性体および多形形が本発明の範囲内に含まれることが認識されるであろう。
【００４５】
化合物の製造
本発明の化合物は、標準的な化学作用を含む様々な方法によって製造することができる。従前に定義された変項はいずれも、そうではないことが示されない限り、従前に定義された意味を有し続ける。一般合成法の実例を以下に示し、次いで、具体的な本発明の化合物を、実施例において調製する。
【００４６】
当業者には、２つの幾何異性体で存在し得る数種の中間化合物の（Ｅ）または（Ｚ）型が微量成分として他の幾何異性体に含まれてもよいことが認識されるであろう。
【００４７】
構造式（Ｉ）の化合物は、構造式（ＩＩ）：
【化１３】
0006665169.tif 000014
(式中、Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、例えば、ｔｅｒｔ−Ｂｕ、エチルまたはメチル基である。あるいは、Ｒ２は、キラルアルコール、例えば、（−）−メントール［（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキサノール］である）
の化合物の第１の脱保護、すなわち、エステル基の切断、続いて、塩への変換を伴う工程によって製造され得る。
【００４８】
本発明の第６の態様は、式（ＩＩ）の化合物を提供する。
【００４９】
Ｒ２がメチル、エチル、メントールなどのキラルアルコール、またはｔｅｒｔ−Ｂｕである構造式（ＩＩ）の化合物の脱保護は、例えば、ジクロロメタン、２−メチル−テトラヒドロフラン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサンもしくはシクロペンチルメチルエーテルまたは水などの不活性溶媒中、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、またはトリフルオロ酢酸を用いた酸加水分解により達成され得る。
【００５０】
あるいは、Ｒ２がメチル、エチルまたはメントールなどのキラルアルコールである構造式（ＩＩ）の化合物の脱保護は、好適な溶媒、例えば、水性メタノールなどの水性溶媒中、例えば、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムを用いた塩基加水分解によっても達成され得る。
【００５１】
エステル基の切断後、得られた生成物は、当業者に周知の方法により必要な塩に変換され得る。
【００５２】
一実施形態において、両性イオンのフマル酸塩への変換は、両性イオンのエタノール溶液をフマル酸のエタノール溶液で処理し、得られた塩溶液を４０℃に加熱し、結晶化させるために５℃に冷却することにより達成される。
【００５３】
別の実施形態において、両性イオンのマレイン酸塩への変換は、両性イオンのアセトニトリル溶液をマレイン酸水溶液で処理し、得られた溶液を４０℃に加熱し、結晶化させるために５℃に冷却することにより達成される。
【００５４】
構造式（ＩＩ）の化合物は、構造式（ＩＩＩ）：
【化１４】
0006665169.tif 000015
（式中、Ｒ２は上記で定義された通り）
の化合物から、構造式（ＩＶ）：
【化１５】
0006665169.tif 000016
（式中、Ｒは、ＨまたはＦである）
のボロン酸化合物との反応により得られ得る。
【００５５】
あるいは、ピナコールエステルなどのボロン酸エステルを用いてもよく、これによりｉｎ  ｓｉｔｕで親ボロン酸を提供する。構造式（ＩＶ）の化合物は、例えば、Ｅｎａｍｉｎｅ  ＬＬＣ，  Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｅ  Ｐｌａｚａ，  ７  Ｄｅｅｒ  Ｐａｒｋ  Ｄｒｉｖｅ  Ｓｔｅ．  １７−３，  Ｍｏｎｍｏｕｔｈ  Ｊｃｔ．  ＮＪ  （ＵＳＡ）  ０８８５２，  Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｔｒ  ＯｒｇａｎｉｃｓまたはＦｌｕｏｒｏｃｈｅｍから市販されている。構造式（ＩＩＩ）と（ＩＶ）の化合物間の反応は、１，４−ジオキサンなどの水混和性溶媒中、５０〜９５℃などの高温下、ロジウム触媒、例えば、ロジウム（１，５−シクロオクタジエン）クロリドの二量体である［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２などの好適な触媒、およびホスフィンリガンドなどの添加剤、例えば、ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）の存在下、好ましくは、水酸化カリウムなどの塩基の存在下で行うことができる。この反応は、好ましくは、反応混合物が窒素などの不活性ガスでパージされ、減圧下で排気され、この排気および窒素でのパージが３回繰り返された厳密な嫌気性好気性で行われる。あるいは、この反応は、マイクロ波バイアル内で行ってもよく、混合物はマイクロ波反応器内、高温下で加熱される。この反応は、通常は１：１の比で異性体混合物を生じる。生成された異性体の混合物は、クロマトグラフィー、ＨＰＬＣまた結晶化により分離することができる。不斉合成は、ロジウム化合物に基づく触媒の存在下、キラルリガンド、例えば、（Ｒ）−（＋）−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（Ｒ−ＢＩＮＡＰ）の１つの鏡像異性体を含めることによって達成することができる。構造式（ＩＩＩ）の化合物における二重結合の幾何学は、（Ｅ）または（Ｅ）異性体と（Ｚ）異性体の混合物、好ましくは、純粋な（Ｅ）異性体であり得る。
【００５６】
式（ＩＩＩ）の化合物の１つの鏡像異性体と式（ＩＶ）の化合物の間の反応は、２つのジアステレオ異性体をおよそ１：１比で生じ、これらは結晶化、クロマトグラフィー、またはＨＰＬＣにより分離することができる。好ましい分離方法は、ＣｈｉｒａｌｐａｋまたはＣｈｉｒａｃｅｌカラムなどのキラル支持体上でのキラルＨＰＬＣである。形成されるジアステレオ異性体の比は、約１０％の添加剤、例えば、（Ｒ）−（＋）−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフタレン［（Ｒ）−ＢＩＮＡＰ］の存在下で例えばおよそ８０：２０、またはそれを越えるまでに実質的に高まり得、生物学的により活性なジアステレオ異性体が主要な異性体として得られる。
【００５７】
あるいは、当業者によりまたは多数の組合せをスクリーニングすることにより選択される、化合物（ＩＩＩ）とキラルＲ２基、リガンド、ボロン酸（ＩＶ）、触媒および溶媒の種々の組合せは、より高い比率のジアステレオ異性体をもたらし得る。
【００５８】
ジアステレオ異性体比は、キラルＨＰＬＣにより、または結晶化により、例えば９９：１を越えるまでにさらに高めることができる。
【００５９】
構造式（ＩＩＩ）の化合物は、構造式（Ｖ）：
【化１６】
0006665169.tif 000017
の化合物から、構造式（ＶＩ）
【化１７】
0006665169.tif 000018
（式中、Ｒ２は上記で定義される通り）
の化合物と、ジクロロメタンなどの溶媒中、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（「ＤＩＰＥＡ」）などの有機塩基および好適なパラジウム系触媒、例えば、ジクロロメタンとの錯体としてのＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）の存在下で反応させることにより得ることができる。式（Ｖ）の化合物は親化合物として使用することができ、または第三級アミン塩基の存在下、二塩酸塩などの塩からｉｎ  ｓｉｔｕで生成させることもできる。
【００６０】
構造式（ＶＩ）の化合物は、本明細書に記載の方法によって製造され得る。例として、Ｒ２がメチルであり、二重結合が（Ｅ）幾何学を有する構造式（ＶＩ）の化合物は、高温下、例えば、５０℃で、アセトニトリル中、市販の４−ブロモクロトン酸メチルおよび酢酸ナトリウムまたはカリウムから出発し、下記に示す方法によって製造することができる。
【化１８】
0006665169.tif 000019
【００６１】
構造式（Ｖ）の化合物は、構造式（ＶＩＩ）：
【化１９】
0006665169.tif 000020
の化合物から、例えば、エタノールまたは酢酸エチルなどの不活性溶媒中、炭素上に沈着させたパラジウム触媒を用いた触媒的水素化分解により得ることができる。
【００６２】
構造式（ＶＩＩ）の化合物は、構造式（ＶＩＩＩ）：
【化２０】
0006665169.tif 000021
の化合物から、例えば、ＤＭＦなどの好適な溶媒中、１３０℃などの高温下、炭酸カリウムなどの塩基の存在下でベンゼンスルホニルヒドラジドから生じるジイミド還元によって得ることができる。
【００６３】
構造式（ＶＩＩＩ）の化合物は、異性体、例えば、（Ｅ）または（Ｚ）型として存在し、  純粋な異性体としてまたは混合物として使用され得る。構造式（ＶＩＩＩ）の化合物は、構造式（ＩＸ）：
【化２１】
0006665169.tif 000022
の既知の市販（例えば、Ｗｕｘｉ  Ａｐｐ  Ｔｅｃ，  ２８８  Ｆｕｔｅ  Ｚｈｏｎｇ  Ｒｏａｄ，  Ｗａｉｇａｏｑｕｉａｏ  Ｆｒｅｅ  Ｔｒａｄｅ，  Ｓｈａｎｇｈａｉ  ２００１３１，  Ｃｈｉｎａ製）化合物から出発して得ることができ、これを例えばピリジン中三酸化硫黄で酸化して対応する構造式（Ｘ）：
【化２２】
0006665169.tif 000023
のアルデヒドとすることができる。
【００６４】
この構造式（Ｘ）の化合物を、次に、式（Ｘ）の化合物を単離せずに、構造式（ＸＩ）：
【化２３】
0006665169.tif 000024
のイリドと反応させ、それにより、幾何異性体（Ｅ）および（Ｚ）の混合物として存在する式（ＶＩＩＩ）の化合物が生成され得る。当業者には、アルデヒド（Ｘ）から式（ＶＩＩＩ）の化合物を生成するために他の方法もあることが認識されるであろう。幾何異性体は、クロマトグラフィーにより分離することもできるし、または次の工程で混合物として使用することもできる。構造式（Ｉ）の化合物の製造のためのこの全スキームをスキーム（Ｉ）として以下に示す。
【００６５】
スキーム（Ｉ）：
【化２４】
0006665169.tif 000025
【００６６】
構造式（ＸＩ）のイリドは、式（ＸＩＩ）： 
【化２５】
0006665169.tif 000026
（Ｆｌｕｏｒｏｃｈｅｍから入手可能）の化合物から出発して作製することができ、これを次に、まず塩酸と反応させ、その後、重炭酸ナトリウムで中和することによって構造式（ＸＩＩＩ）：
【化２６】
0006665169.tif 000027
のアルデヒドに変換することができ、これを、例えば水素化ホウ素ナトリウムを用いて還元し、対応する構造式（ＸＩＶ）：
【化２７】
0006665169.tif 000028
のアルコールとすることができ（式（ＸＩＶ）のアルコールの製造に関してはＵＳ−Ａ−２００４００９２５３８に開示されている経路も参照）、これを次に、例えば三臭化リンを用いて臭素化し、対応する構造式（ＸＶ）：
【化２８】
0006665169.tif 000029
のブロモ化合物を生成することができ、これを、アセトニトリルなどの溶媒中、トリフェニルホスフィンと反応させることにより臭化トリフェニルホスホニウム（ＸＶＩ）に変換することができる。
【化２９】
0006665169.tif 000030
【００６７】
上述の構造式（ＸＩ）のイリド化合物は、構造式（ＸＶＩ）の化合物を、ＴＨＦなどの不活性溶媒中、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの溶液などの塩基と反応させることにより得ることができる。構造式（ＸＩ）のイリドは単離され得るか、または好ましくはｉｎ  ｓｉｔｕで形成され、事前に単離せずに、同じ容器内で構造式（Ｘ）のアルデヒドと反応させることができる。
【００６８】
構造式（ＸＩ）のイリドの製造のための全スキームををスキーム（ＩＩ）として以下にまとめる。
【００６９】
スキーム（ＩＩ）
【化３０】
0006665169.tif 000031
【００７０】
式（ＩＸ）の化合物の２つの市販の鏡像異性体のそれぞれは、他方よりも強力な式（Ｉ）の化合物の一方のジアステレオ異性体を提供する。
【００７１】
上記の経路のいずれにおいても、１以上の官能基を保護することが有利であり得ることが認識されるであろう。保護基およびそれらの除去のための手段の例は、T. W. Greene ‘Protective Groups in Organic Synthesis’ (第3版, J. Wiley and Sons, 1999)に見出すことができる。好適なアミン保護基としては、アシル（例えば、アセチル、カルバメート（例えば、２’，２’，２’−トリクロロエトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニルまたはｔ−ブトキシカルボニル）およびアリールアルキル（例えば、ベンジル）が含まれ、これらは、適当であれば、加水分解（例えば、ジオキサン中の塩酸、もしくはジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸などの酸を使用）によって、または還元的に（例えば、ベンジルもしくはベンジルオキシカルボニル基の水素化分解、または酢酸中で亜鉛を使用する２’，２’，２’−トリクロロエトキシカルボニル基の還元的除去）によって除去することができる。他の好適なアミン保護基としては、トリフルオロアセチル（−ＣＯＣＦ３）が含まれ、これは塩基触媒による加水分解によって除去することができる。
【００７２】
上記いずれの経路でも、様々な基および部分が分子に導入される合成段階の正確な順序は可変であることが認識されるであろう。この工程の一段階で導入される基または部分が、その後の変換および反応によって影響を受けないように保証し、それに応じて合成段階の順序を選択することは当業者の技術の範囲内である。
【００７３】
式（ＩＩＩ）、（Ｖ）〜（ＶＩＩＩ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＶ）および（ＸＶＩ）の特定の化合物もまた新規であると考えられ、従って、本発明のなおさらなる態様を成す。
【００７４】
化合物（Ｉ）の絶対立体配置は、既知の絶対立体配置の中間体からの独立したエナンチオ選択的合成に従って得ることができる。あるいは、鏡像異性体的に純粋な式（Ｉ）の化合物は、絶対立体配置が既知の化合物に変換され得る。いずれの場合にも、分光分析データ、旋光度および分析的ＨＰＬＣカラムでの保持時間の比較を絶対立体配置の確認に使用することができる。実現可能であれば、第３の選択肢として、Ｘ線結晶構造からの絶対立体配置の決定がある。
【００７５】
使用方法
式（Ｉ）の化合物およびその塩は、αｖインテグリンアンタゴニスト活性、特に、αｖβ６受容体活性を有すると考えられ、従って、αｖβ６アンタゴニストが指示される疾患または病態の治療において潜在的有用性を有する。
【００７６】
従って、本発明は、療法において使用するための式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容可能な塩を提供する。式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容可能な塩は、αｖβ６インテグリンアンタゴニストが指示される疾患または病態の治療において使用することができる。
【００７７】
従って、本発明は、αｖβ６インテグリンアンタゴニストが指示される疾患または病態の治療において使用するための式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容可能な塩を提供する。
【００７８】
また、αｖβ６インテグリンアンタゴニストが指示される疾患または病態の治療のための医薬の製造における式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容可能な塩の使用も提供される。
【００７９】
また、必要とする対象においてαｖβ６インテグリンアンタゴニストが指示される疾患または病態を治療する方法であって、治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容可能な塩を投与することを含んでなる方法が提供される。
【００８０】
好適には、それを必要とする対象は哺乳動物、特に、ヒトである。
【００８１】
本明細書で使用する場合、用語「有効な量」は、例えば、研究者または臨床家が求めている組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を誘発する薬物または薬剤の量を意味する。さらに、用語「治療有効な量」は、そのような量を受容していない対応する対象と比較して、疾患、障害、もしくは副作用の治療、治癒、予防、もしくは寛解の改善、または疾患もしくは障害の進行速度の低下をもたらす任意の量を意味する。この用語はまた、その範囲内に、正常な生理学的機能を増進するために有効な量に含む。
【００８２】
線維性疾患は、修復過程または反応過程にある器官または組織において過剰な線維性結合組織の形成を伴う。αｖβ６アンタゴニストは、αｖβ６インテグリン機能およびαｖインテグリンを介してのトランスフォーミング増殖因子βの活性化に依存するものを含む、様々なそのような疾患または病態の治療において有用であると考えられる。疾患には、限定されるものではないが、肺線維症（例えば、特発性肺線維症、非特異的間質性肺炎（ＮＳＩＰ）、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、Ｈｅｒｍａｎｓｋｙ−Ｐｕｄｌａｋ症候群、進行性塊状線維症（炭坑夫塵肺症の合併症）、結合組織疾患関連肺線維症、喘息およびＣＯＰＤでの気道線維症、ＡＲＤＳ関連線維症、急性肺損傷、放射線誘発線維症、家族性肺線維症、肺高血圧）；腎線維症（糖尿病性腎障害、ＩｇＡ腎障害、狼瘡性腎炎、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、移植腎障害、自己免疫腎障害、薬物誘発性腎障害、高血圧関連腎障害、腎性全身性線維症）；肝線維症（ウイルス誘発性線維症（例えば、Ｃ型またはＢ型肝炎）、自己免疫肝炎、原発性胆汁性肝硬変、アルコール性肝臓疾患、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含む非アルコール性脂肪肝疾患、先天性肝線維症、原発性硬化性胆管炎、薬物誘発性肝炎、肝硬変）；皮膚線維症（肥厚性瘢痕、強皮症、ケロイド、皮膚筋炎、好酸球性筋膜炎、Ｄｕｐｙｔｒｅｎｓ拘縮、Ｅｈｌｅｒｓ−Ｄａｎｌｏｓ症候群、Ｐｅｙｒｏｎｉｅ病、栄養障害型表皮水疱症、口腔粘膜下線維症）；眼線維症（加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ、緑内障）；角膜瘢痕化、角膜損傷および角膜創傷治癒、線維柱帯切除術後の濾過胞瘢痕化の予防；心臓線維症（鬱血性心不全、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、心内膜心筋線維症、肥大性心筋症（ＨＣＭ））、ならびに他の多種の線維性病態（縦隔線維症、骨髄線維症、腹膜後線維症、クローン病、神経線維腫症、子宮平滑筋腫（線維性）、慢性臓器移植拒絶）が含まれ得る。αｖβ１、αｖβ５またはαｖβ８インテグリンのさらなる阻害に関するさらなる利点も存在し得る。
【００８３】
加えて、αｖβ６インテグリンに関連する前癌病変または癌も治療することができる（これらには、限定されるものではないが、子宮内膜癌、基底細胞癌、肝臓癌、結腸癌、子宮頸癌、口腔癌、膵臓癌、乳癌および卵巣癌、カポジ肉腫、巨細胞腫瘍、ならびに癌関連間質が含まれ得る)。血管新生に対する作用から利点を得ることができる病態も、利益を受け得る(例えば、固形腫瘍)。
【００８４】
用語「αｖβ６アンタゴニストが指示される疾患または病態」は、上記病的状態のいずれかまたは総てを含むことが意図される。
【００８５】
一実施形態において、αｖβ６アンタゴニストが指示される疾患または病態は、特発性肺線維症である。
【００８６】
別の実施形態において、αｖβ６アンタゴニストが指示される疾患または病態は、角膜瘢痕化、角膜損傷および角膜創傷治癒から選択される。
【００８７】
組成物
療法において使用するために、式（Ｉ）の化合物ならびにその薬学上許容可能な塩を、そのままの化学物質として投与してもよいが、有効成分を医薬組成物として提供することが一般的である。
【００８８】
従って、本発明は、さらなる態様で、式（Ｉ）の化合物またその薬学上許容可能な塩と１種以上の薬学上許容可能な担体、希釈剤および／または賦形剤を含んでなる医薬組成物を提供する。式（Ｉ）の化合物および薬学上許容可能な塩は上記の通りである。担体、希釈剤または賦形剤は、組成物の他の成分と適合し、そのレシピエントに有害でないという意味で許容されなければならない。
【００８９】
本発明の別の態様によれば、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容可能な塩を、１種以上の薬学上許容可能な担体、希釈剤または賦形剤と混合することを含む、医薬組成物の調製方法も提供される。医薬組成物は、本明細書に記載の病態のいずれかの治療において使用することができる。
【００９０】
さらに、式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容可能な塩を含んでなる、αｖβ６インテグリンアンタゴニストが指示される疾患または病態を治療するための医薬組成物も提供される。
【００９１】
さらに、０．０１〜３０００ｍｇの式（Ｉ）の化合物またはその薬学的塩と０．１〜２ｇの１種以上の薬学上許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含んでなる医薬組成物も提供される。
【００９２】
式（Ｉ）の化合物は医薬組成物における使用を意図されているので、それらがそれぞれ、好ましくは実質的に純粋な形態で、例えば、少なくとも純度６０％、より好適には少なくとも純度７５％、好ましくは少なくとも純度８５％、特には少なくとも純度９８％（重量に対する重量の％）で提供されることが容易に理解されるであろう。
【００９３】
医薬組成物は、単位用量当たり所定量の有効成分を含有する単位投与形で提供され得る。好ましい単位投与組成物は、有効成分の１日用量もしくは部分用量、またはその適切な分数を含有するものである。従って、そのような単位用量は、１日２回以上投与することができる。好ましい単位投与組成物は、本明細書の上記で挙げたような１日用量もしくは部分用量（１日２回以上投与するため）、または適切なその分数の有効成分を含有するものである。
【００９４】
医薬組成物は、任意の適切な経路、例えば、経口（頬側または舌下を含む）、直腸、吸入、鼻腔内、局所（頬側、舌下または経皮を含む）、膣、目または非経口（皮下、筋肉内、静脈内または皮内を含む）経路による投与に適合させることができる。そのような組成物は、薬学分野で知られている任意の方法によって、例えば、有効成分を担体または賦形剤と会合させることによって製造することができる。
【００９５】
一実施形態において、医薬組成物は経口投与に適合される。
【００９６】
経口投与に適合させた医薬組成物は、カプセル剤もしくは錠剤などの分離した単位；散剤もしくは顆粒；水性液もしくは非水性液中の溶液もしくは懸濁液；可食フォームまたはホイップ；または水中油型液体エマルションもしくは油中水型液体エマルションとして提供され得る。
【００９７】
例えば、錠剤またはカプセル剤の形態での経口投与では、有効薬物成分を、エタノール、グリセロール、水などの経口用の非毒性で薬学上許容可能な不活性担体と合わせることができる。錠剤またはカプセル剤に組み込むために適した散剤は、化合物を好適な微細な粒径（例えば、微粉化によって）に縮小し、例えば、デンプンまたはマンニトールなどの可食炭水化物などの同様に調製された医薬担体と混合することによって調製され得る。香味剤、保存剤、分散剤および着色剤も存在することができる。
【００９８】
カプセル剤は、上記のように粉末混合物を調製し、成形ゼラチンシースに充填することによって製造することができる。コロイドシリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムまたは固体ポリエチレングリコールなどの、流動促進剤および滑沢剤を、充填操作の前に、粉末混合物に添加することができる。カプセル剤が摂取される際に、医薬のアベイラビリティを改善するために、寒天、炭酸カルシウムまたは炭酸ナトリウムなどの崩壊剤または可溶化剤を添加することもできる。
【００９９】
さらに、所望の場合または必要な場合には、好適な結合剤、流動促進剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤、崩壊剤および着色剤も、混合物に組み込むことができる。好適な結合剤には、デンプン、ゼラチン、天然の糖（グルコースまたはベータ−ラクトースなど）、トウモロコシ甘味剤、天然および合成ゴム（アラビアガム、トラガカントガムまたはアルギン酸ナトリウムなど）、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックスなどが含まれる。
【０１００】
これらの投与形で使用される滑沢剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれる。
【０１０１】
崩壊剤には、限定されるものではないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが含まれる。錠剤は、例えば、粉末混合物を調製し、造粒またはスラグとし、滑沢剤および崩壊剤を添加し、打錠することによって製剤化する。粉末混合物は、適切に微粉化された化合物を、上記のように希釈剤または基剤、ならびに任意選択でカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、もしくはポリビニルピロリドンなどの結合剤、パラフィンなどの溶解遅延剤、第四級塩などの吸収促進剤、および／またはベントナイト、カオリンもしくリン酸二カルシウムなどの吸収剤と混合することによって調製される。粉末混合物は、シロップ、デンプンペースト、アラビアゴム漿またはセルロースもしくはポリマー材料の溶液などの結合剤で湿らせ、篩に通すことによって顆粒化することができる。造粒の代わりに、粉末混合物を、打錠機に掛けることができ、結果として不完全に形成されたスラグが破砕されて顆粒となる。顆粒剤は、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルクまたは鉱油を添加することによって、錠剤成形金型に粘着することを防止するために滑沢化することができる。次いで、滑沢化された混合物を打錠する。本発明の化合物は、流動性不活性担体と混合して、造粒またはスラグ化工程を行うことなく直接、打錠することもできる。セラックのシールコート、糖またはポリマー材料のコーティング、およびワックスの艶出コーティングからなる透明または不透明の保護コーティングを施すことができる。異なる単位用量を識別するために、これらのコーティングに染料を添加することができる。
【０１０２】
溶液、シロップ、およびエリキシルなどの経口用液体は、所定量が、予め決定された量の化合物を含有するように、単位投与形で調製することができる。シロップは、化合物を適宜矯味した水溶液に溶かすことによって調製することができ、エリキシルは、非毒性アルコールビヒクルの使用によって調製する。懸濁剤は、化合物を非毒性ビヒクルに分散させることによって製剤化することができる。エトキシ化イソステアリルアルコールおよびポリオキシエチレンソルビトールエーテルなどの可溶化剤および乳化剤、保存剤、ペパーミントオイルなどの香味添加剤、または天然甘味剤もしくはサッカリンもしくは他の人口甘味剤なども添加することができる。
【０１０３】
適当であれば、経口投与用の用量単位組成物を、マイクロカプセル化することができる。処方物は、例えば、粒子材料をポリマー、ワックスなどでコーティングまたはそれに包埋することによって、放出を延長また持続させるように調製することもできる。
【０１０４】
本発明の化合物は、小単ラメラ小胞、大単ラメラ小胞および多重ラメラ小胞などのリポソーム送達系の形態で投与することもできる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンなどの様々なリン脂質から形成することができる。
【０１０５】
経皮投与に適合させた医薬組成物は、長期間にわたってレシピエントの表皮と密着して接触して留まるように意図された別個のパッチ剤として提供することができる。
【０１０６】
局所投与に適合させた医薬組成物は、軟膏、クリーム、懸濁剤、ローション、散剤、液剤、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾルまたはオイルとして製剤化することができる。
【０１０７】
眼または他の外部組織、例えば、口および皮膚の治療では、組成物は、好ましくは、局所用軟膏またはクリームとして塗布される。軟膏に製剤化する場合、有効成分を、パラフィン系または水混和性軟膏剤基剤のいずれかとともに使用することができる。あるいは、有効成分を、水中油型クリームまたは油中水型基剤を用いてクリーム剤に製剤化することができる。本発明の化合物は、局所用点眼剤として投与することができる。本発明の化合物は、１日より長い投与間隔を要する結膜下、房内または硝子体内経路を介して投与することができる。
【０１０８】
眼への局所投与に適合させた医薬組成物には、有効成分が好適な担体、特に、水性溶媒に溶解または懸濁している点眼剤が含まれる。眼に投与される処方物は、眼科的に適合するｐＨおよびモル浸透圧濃度を有する。酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸および塩酸などの酸；水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、および乳酸ナトリウムなどの塩基；ならびにクエン酸塩／デキストロース、重炭酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムなどのバッファーを含め、１種以上の眼科的に許容可能なｐＨ調整剤および／または緩衝剤が本発明の組成物に含まれ得る。このような酸、塩基、およびバッファーは、組成物のｐＨを眼科的に許容可能な範囲に維持するのに必要な量で含まれ得る。１以上の眼科的に許容可能な塩は、組成物のモル浸透圧濃度を眼科的に許容可能な範囲とするのに十分な量で組成物を含み得る。このような塩としては、ナトリウム、カリウムまたはアンモニウム陽イオンおよび塩化物、クエン酸、アスコルビン酸、ホウ酸、リン酸、重炭酸、硫酸、チオ硫酸または重亜硫酸陰イオンを有するものが含まれる。
【０１０９】
眼送達デバイスは、複数の定義された放出速度ならびに持続的用量動態および透過性を持った１種以上の治療薬の放出制御のために設計することができる。放出制御は、生分解性／声帯浸食性ポリマー（例えば、ポリ（エチレンビニル）アセテート（ＥＶＡ）、超加水分解ＰＶＡ）、ヒドロキシアルキルセルロース（ＨＰＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ポリカプロラクトン、ポリ（グリコール）酸、ポリ（乳）酸、ポリ無水物の、薬物の拡散、腐食、溶解および浸透を増強するポリマー分子量、ポリマー結晶度、共重合体比、加工条件、表面仕上げ、幾何学、賦形剤添加およびポリマーコーティングの、種々の選択および特性を組み込んだポリマーマトリックスの設計を通して得ることができる。
【０１１０】
眼用デバイスを用いた薬物送達のための処方物は、１種以上の有効薬剤と指示される投与経路に適当なアジュバントを組み合わせることができる。例えば、有効薬剤を、任意の薬学上許容可能な賦形剤、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、ステアリン酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウムおよびカルシウム塩、アラビアガム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリジン、および／またはポリビニルアルコールと混合し、従来の投与向けに錠剤化またはカプセル化することができる。あるいは、本化合物をポリエチレングリコール、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロースコロイド溶液、エタノール、トウモロコシ油、落花生油、綿実油、ゴマ油、トラガカントガム、および／または種々のバッファーに溶解させてもよい。本化合物はまた、生分解性および非生分解性ポリマーの両方の組成物および時間遅延特性を有する担体または希釈剤と混合してもよい。生分解性組成物の代表例としては、アルブミン、ゼラチン、デンプン、セルロース、デキストラン、多糖類、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ヒドロキシブチレート）、ポリ（アルキルカーボネート）およびポリ（オルトエステル）およびそれらの混合物が挙げられる。非生分解性ポリマーの代表例としては、ＥＶＡコポリマー、シリコーンゴムおよびポリ（メチルアクリレート）、およびそれらの混合物が挙げられる。
【０１１１】
眼送達用の医薬組成物はまた、ｉｎ  ｓｉｔｕゲル化可能水性組成物も含む。このような組成物は、眼または涙液と接触した際にゲル化を促進するのに効果的な濃度でゲル化剤を含んでなる。好適なゲル化剤としては、限定されるものではないが、熱硬化性ポリマーが含まれる。用語「ｉｎ  ｓｉｔｕゲル化可能」とは、本明細書で使用する場合、眼または涙液と接触した際にゲルを形成する低粘度の液体を含むだけでなく、眼に投与した際に実質的に高い粘度またはゲル強度を示す半液体およびチキソトロピックゲルなどのより粘稠な液体も含む。例えば、眼への薬物送達に使用するためのポリマーの例の教示の目的で引用することにより本明細書の一部とされるLudwig (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 3; 57:1595-639を参照。
【０１１２】
口腔中への局所投与に適合させた医薬組成物には、ロゼンジ剤、香錠および洗口液が含まれる。
【０１１３】
直腸投与に適合させた医薬組成物は、坐剤または浣腸として提供することができる。
【０１１４】
鼻腔または吸入投与用の投与形は、好都合には、エアロゾル、溶液、懸濁液、ゲルまたはドライパウダーとして処方され得る。
【０１１５】
膣投与に適合させた医薬組成物は、膣坐剤、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたは噴霧処方物として提供され得る。
【０１１６】
非経口投与に適合させた医薬組成物には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および組成物を、意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質を含有してよい、水性および非水性無菌液、ならびに懸沈殿防止剤および増粘剤を含み得る水性および非水性無菌懸濁剤が含まれる。組成物を、単位用量または多回用量容器、例えば、密封アンプルおよびバイアル中で提供してもよく、使用直前に、無菌液体担体、例えば注射水を添加するだけのフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存してもよい。即時注射溶液および懸濁液は、無菌粉末、顆粒および錠剤から調製することができる。
【０１１７】
皮下または筋肉内投与に適合された医薬組成物には、徐放性を提供するために、有効医薬成分を含有する微粒子を形成するためのポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）共重合体が含まれる。
【０１１８】
本発明の化合物の治療上有効な量は、例えば、対象の齢および体重、治療を必要とする厳密な病態およびその重篤度、処方物の性質、ならびに投与経路を含む複数の因子によって決まり、最終的には担当の医師または獣医の裁量にある。本医薬組成物では、経口または非経口投与の各用量単位は、好ましくは、０．０１〜３０００ｍｇ、より好ましくは０．１〜２０００ｍｇの両イオン性親化合物として計算される本発明の化合物の化合物を含有する。
【０１１９】
本発明の薬学上許容可能な化合物は、例えば、両性イオンとして計算される式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容可能な塩１日当たり０．０１ｍｇ〜３０００ｍｇ、もしくは１日当たり０．５〜１０００ｍｇの経口もしくは非経口用量の１日用量（成人患者）で投与することができる。この量は、１日当たり単回用量で、またはより通常には、全１日用量は同じであるように１日当たり複数回（２回、３回、４回、５回もしくは６回）の部分用量で与えてよい。有効量のその塩は、有効量の式（Ｉ）の化合物自体の割合として決定することができる。
【０１２０】
本発明の化合物は、単独で、または他の治療薬と組み合わせて使用することができる。従って、本発明による併用療法は、少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容可能な塩の投与、および少なくとも１種の他の薬学上活性な薬剤の使用を含んでなる。好ましくは、本発明による併用療法は、少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容可能な塩、および少なくとも１種の他の薬学上活性な薬剤の投与を含んでなる。本発明の１または複数の化合物および１または複数の他の薬学上活性な薬剤は、一緒に単一の医薬組成物で、または別個に投与することができ、別個に投与される場合には、これを同時にまたは任意の順序で逐次に行うことができる。本発明の１または複数の化合物および他の１または複数の薬学上活性な薬剤の量、ならびに投与の相対的なタイミングは、所望の併用治療効果が達成されるように選択される。
【０１２１】
よって、さらなる態様では、本発明の化合物と少なくとも１種の他の薬学上活性な薬剤を含んでなる組合せが提供される。
【０１２２】
従って、一態様において、本発明による化合物および医薬組成物は、アレルギー性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患の療法、抗線維性療法および閉塞性気道疾患の療法、糖尿病性眼疾患の療法、ならびに角膜瘢痕化、角膜損傷の療法および角膜創傷治癒を含む、１種以上の他の治療薬と組み合わせて使用し得るか、それを含み得る。
【０１２３】
抗アレルギー療法としては、抗原免疫療法（例えば、ハチ毒液、花粉、牛乳、落花生、ＣｐＧモチーフ、コラーゲンの成分および断片、口腔または舌下抗原として投与され得る細胞外マトリックスの他の成分）、抗ヒスタミン薬（例えば、セチリジン、ロラチジン、アクリバスチン、フェキソフェナジン、クロルフェナミン）、およびコルチコステロイド（例えば、プロピオン酸フルチカゾン、フロ酸フルチカゾン、二プロピオン酸ベクロメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、フロ酸モメタゾン、トリアムシノロン、フルニソリド、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン）が含まれる。
【０１２４】
抗炎症療法としては、ＮＳＡＩＤ（例えば、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン）、ロイコトリエンモジュレーター（例えば、モンテルカスト、ザフィルルカスト、プランルカスト）、および他の抗炎症療法（例えば、ｉＮＯＳ阻害剤、トリプターゼ阻害剤、ＩＫＫ２阻害剤、ｐ３８阻害剤（ロスマピモド、ジルマピモド）、エラスターゼ阻害剤、β２アゴニスト、ＤＰ１アンタゴニスト、ＤＰ２アンタゴニスト、ｐＩ３Ｋδ阻害剤、ＩＴＫ阻害剤、ＬＰ（リゾホスファチジン酸）阻害剤またはＦＬＡＰ（５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質）阻害剤（例えば、ナトリウム３−（３−（ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−１−（４−（６−エトキシピリジン−３−イル）ベンジル）−５−（（５−メチルピリジン−２−イル）メトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イル）−２，２−ジメチルプロパノエート）；アデノシンａ２ａアゴニスト（例えば、アデノシンおよびリガデノソン）、ケモカインアンタゴニスト（例えば、ＣＣＲ３アンタゴニストまたはＣＣＲ４アンタゴニスト）、メディエーター放出阻害剤が含まれる。
【０１２５】
自己免疫疾患の療法としては、ＤＭＡＲＤＳ（例えば、メトトレキサート、レフルノミド、アザチオプリン）、生物薬剤療法（例えば、抗ＩｇＥ、抗ＴＮＦ、抗インターロイキン（例えば、抗ＩＬ−１、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１２、抗ＩＬ−１７、抗ＩＬ−１８）、受容体療法（例えば、エタネルセプトおよび類似の薬剤）；抗原非特異的免疫療法（例えば、インターフェロンまたは他のサイトカイン／ケモカイン、サイトカイン／ケモカイン受容体モジュレーター、サイトカインアゴニストまたはアンタゴニスト、ＴＬＲアゴニストおよび類似の薬剤）が含まれる。
【０１２６】
他の抗線維性療法としては、ＴＧＦβ合成の阻害剤（例えば、ピルフェニドン）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）および線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）受容体キナーゼを標的とするチロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ニンテダニブ（ＢＩＢＦ−１１２０）およびメシル酸イマチニブ（グリベック））、エンドセリン受容体アンタゴニスト（例えば、アンブリセンタンまたはマシテンタン）、酸化防止剤（例えば、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）；広域抗生物質（例えば、コトリモキサゾール、テトラサイクリン（塩酸ミノサイクリン））、ホスホジエステラーゼ５（ＰＤＥ５）阻害剤（例えば、シルデナフィル）、抗αｖβｘ抗体および薬物（例えば、抗αｖβ６モノクローナル抗体（例えば、ＷＯ２００３１０００３３Ａ２に記載されているもの）；インテツムマブ、シレンジチド）が併用可能である。
【０１２７】
閉塞性気道疾患の療法としては、短期作用型β２−アゴニスト（例えば、サルブタモール）、長期作用型β２−アゴニスト（例えば、サルメテロール、フォルモテロールおよびビランテロール）、短期作用型ムスカリン性アンタゴニスト（例えば、臭化イプラトロピウム）、長期作用型ムスカリン性アンタゴニスト（例えば、チオトロピウム、ウメクリジニウム）などの気管支拡張薬が含まれる。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、治療はまた、本発明の化合物と他の既存の治療様式、例えば、糖尿病性眼疾患の治療のための既存の薬剤、例えば、抗ＶＥＧＦ療法、例えば、ルセンティス（登録商標）、アバスチン（登録商標）、およびアフリバーセプト、ならびにステロイド、例えば、トリアムシノロン、およびフルオシノロンアセトニド含有ステロイドインプラントの組合せも含み得る。
【０１２９】
いくつかの実施形態において、治療はまた、本発明の化合物と他の既存の治療様式、例えば、角膜瘢痕化、角膜損傷の治療または角膜創傷治癒のための既存の薬剤、例えば、ゲンテル（Ｇｅｎｔｅｌ）（登録商標）、ウシ血液抽出物、レボフロキサシン（登録商標）、およびオフロキサシン（登録商標）の組合せも含み得る。
【０１３０】
本発明の化合物および組成物は、癌を治療するために単独で、または化学療法、放射線療法、標的薬剤、免疫療法および細胞もしくは遺伝子療法を含む癌療法と組み合わせて使用され得る。
【０１３１】
適当であれば、治療成分の活性および／または安定性および／または溶解度などの物理的特徴を最適化するために、他の治療成分を、塩の形態で、例えば、アルカリ金属塩もしくはアミン塩もしくは酸付加塩として、またはプロドラッグ、またはエステル、例えば低級アルキルエステル、または溶媒和物、例えば水和物として使用することができることは、当業者には明らかである。適当であれば、治療成分を、光学的に純粋な形態で使用することができることもまた明らかである。
【０１３２】
上記で言及した組合せは、好都合には、医薬組成物の形態で使用するために提供することができ、従って、上記で定義されたような組合せを薬学上許容可能な希釈剤または担体とともに含んでなる医薬組成物は本発明のさらなる態様を表す。そのような組合せの個々の化合物を順次、または個別もしくは組み合わせた医薬組成物として同時に投与することができる。好ましくは、個々の化合物が、組み合わせた医薬組成物として同時に投与される。公知の治療薬の適切な用量は、当業者には容易に分かる。
【０１３３】
本発明の化合物が、通常、吸入、静脈内、経口、鼻腔内、眼内局所、または他の経路よって投与される１種以上の他の治療上有効な薬剤と組み合わせて投与される場合には、結果としての医薬組成物も同じ経路によって投与され得ることが認識されるであろう。あるいは、本組成物の個々の成分は異なる経路によって投与されてもよい。
【０１３４】
以下、本発明を単に例により示す。
【０１３５】
略語
以下のリストは、本明細書で使用される特定の略語の定義を示す。このリストは排他的ではなく、本明細書の下記で定義されていない略語の意味は当業者には容易に分かることが認識されるであろう。
【０１３６】
Ａｃ（アセチル）
ＢＣＥＣＦ−ＡＭ（２’，７’−ビス−（２−カルボキシエチル）−５−（および−６）−カルボキシフルオレセインアセトキシメチルエステル）
ＢＥＨ（エチレン架橋ハイブリッド技術）
Ｂｕ（ブチル）
ＣＢＺ（カルボキシベンジル）
ＣＨＡＰＳ（３−［（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホネート）
Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ−Ｈ（５μｍシリカゲル上のセルローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）コーティング）
Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ（５μｍシリカゲル上のアミローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）コーティング）
Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＤ（５μｍシリカゲル上に固定されたアミローストリス（３−クロロフェニルカルバメート））
Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＳ（５μｍシリカゲル上のアミローストリス（（Ｓ）−α−メチルベンジルカルバメート）コーティング）
ＣＤＩ（カルボニルジイミダゾール）
ＣＳＨ（表面チャージハイブリッド技術）
ＣＶ（カラム体積）
ＤＣＭ（ジクロロメタン）
ＤＩＰＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）
ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）
ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）
ＤＳＣ（示差操作比色法）
Ｅｔ（エチル）
ＥｔＯＨ（エタノール）
ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）
ｈ（時間）
ＨＣｌ（塩酸）
ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）
ＬＣＭＳ（液体クロマトグラフィー質量分析）
Ｍ（モル）
ＭＤＡＰ（質量分析自動分取ＨＰＬＣ）
ＭＤＣＫ（Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙイヌ腎臓）
Ｍｅ（メチル）
ＭｅＣＮ（アセトニトリル）
ＭｅＩ（ヨウ化メチル）
ＭｅＯＨ（メタノール）
ｍｉｎ（分）
ＭＳ（質量スペクトル）
ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２  ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ），ジクロロメタンとの錯体
Ｐｈ（フェニル）
ｉＰｒ（イソプロピル）
（Ｒ）−ＢＩＮＡＰ  （Ｒ）−（＋）−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフタレン
［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２（クロロ（１，５−シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）二量体）
ＳＰＥ（固相抽出）
ＴＢＭＥ（ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル）
ＴＥＡ（トリエチルアミン）
ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）
ＴＧＡ（熱重量分析）
ＴＧＡ−ＩＲ（赤外線インターフェース熱重量分析装置）
ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）
ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）
ＵＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）
ＸＲＰＤ（Ｘ線粉末回折）
【０１３７】
ブラインという場合には総て、塩化ナトリウムの飽和水溶液を指す。
【実施例】
【０１３８】
実験の詳細
分析的ＬＣＭＳ
分析的ＬＣＭＳを、次のシステムＡまたはＢ１つで行った。
【０１３９】
総てのシステムに対するＵＶ検出は、２２０ｎｍ〜３５０ｎｍの波長の平均シグナルであり、質量スペクトルは、交互スキャンポジティブおよびネガティブモードエレクトロスプレーイオン化を使用する質量分析計で記録した。
【０１４０】
本明細書において言及するＬＣＭＳシステムＡ〜Ｃの実験の詳細は以下の通りである。
【０１４１】
システムＡ
カラム：  ５０ｍｍ×２．１ｍｍ  ＩＤ、１．７μｍ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８カラム
流速：  １ｍＬ／分
温度：  ４０℃
溶媒：  Ａ：アンモニア溶液でｐＨ１０に調整した水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム
Ｂ：アセトニトリル
勾配：      時間（分） Ａ％ Ｂ％
０            ９９            １
１．５          ３          ９７
１．９          ３          ９７
２．０        ９９            １
【０１４２】
システムＢ
カラム：  ５０ｍｍ×２．１ｍｍ  ＩＤ、１．７μｍ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８カラム
流速：  １ｍＬ／分
温度：  ４０℃
溶媒：  Ａ：水中０．１％ｖ／ｖギ酸溶液
Ｂ：アセトニトリル中０．１％ｖ／ｖギ酸溶液
勾配：      時間（分） Ａ％ Ｂ％
０            ９７            ３
１．５          ０        １００
１．９          ０        １００
２．０        ９７            ３
【０１４３】
システムＣ
カラム：  ５０ｍｍ×２．１ｍｍ  ＩＤ、１．７μｍ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＣＳＨ  Ｃ１８カラム
流速：  １ｍＬ／分
温度：  ４０℃
溶媒：  Ａ：アンモニア溶液でｐＨ１０に調整した水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム
Ｂ：アセトニトリル
勾配：      時間（分） Ａ％ Ｂ％
０            ９７            ３
１．５          ５          ９５
１．９          ５          ９５
２．０        ９７            ３
【０１４４】
中間体１：７−（ブロモメチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（化合物（ＸＶ））
【化３１】
0006665169.tif 000032
【０１４５】
０℃、窒素下で、無水アセトニトリル（５０ｍＬ）中、（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）メタノール（化合物（ＸＩＶ））：ＵＳ２００４００９２５３８、第８０頁［０８４４］参照）（８２０ｍｇ、４．９９ｍｍｏｌ）の懸濁液に、三臭化リン（０．５６５ｍＬ、５．９９ｍｍｏｌ）を滴下した。添加の際に濃橙色の沈澱が生じ、これは淡橙色となった。この反応混合物を０℃で１時間撹拌し、この時までに反応は完了していたた。この混合物を真空濃縮し、残渣を酢酸エチル（２５０ｍＬ）と飽和  ＮａＨＣＯ３水溶液（２５０ｍＬ）とで分液した。水相をさらに酢酸エチル（２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機溶液を疎水性フリットに通した後、真空濃縮して標題化合物（１．０５ｇ、９３％）を綿毛状のクリーム色の固体として得た：LCMS (システムC) RT=0.95分, ES+ve m/z 227, 229 (M+H)+。
【０１４６】
中間体２：トリフェニル（（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）メチル）ホスホニウムブロミド（化合物（ＸＶＩ））
【化３２】
0006665169.tif 000033
【０１４７】
アセトニトリル（９８ｍＬ）中、７−（ブロモメチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（化合物（ＸＶ）、製造については中間体１を参照）（１．００ｇ、４．４０ｍｍｏｌ）の溶液をトリフェニルホスフィン（１．２７０ｇ、４．８４ｍｍｏｌ）で処理し、溶液を室温、窒素下で一晩撹拌した。この混合物を真空濃縮して暗クリーム色の固体を得、次にこれをジエチルエーテルで摩砕し、標題化合物（２．１３９ｇ、９９％）を淡クリーム色の固体として得た：LCMS (システムC) RT= 1.23分, ES+ve m/z 409 (M+H)+。
【０１４８】
中間体３：３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）ビニル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｅ，Ｚ）ベンジル（化合物（ＶＩＩＩ））
【化３３】
0006665169.tif 000034
【０１４９】
窒素下、ＤＣＭ（３ｍＬ）およびＤＭＳＯ（０．３ｍＬ）中、３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸（＋）−ベンジル（化合物（ＩＸ）：Ｗｕｘｉ  Ａｐｐ  Ｔｅｃから入手可能）（２６０ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を、ＤＩＰＥＡ（０．８９６ｍＬ、５．１３ｍｍｏｌ）で処理した。０〜５℃（氷浴）に冷却後、三酸化硫黄ピリジン（３２７ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）をおよそ５分かけて少量ずつ加えてアルコール化合物（ＩＸ）を酸化し、対応するアルデヒド化合物（Ｘ）を得、これは単離しなかった。冷却浴を除去した後、撹拌を０．５時間続けた。同時に、窒素下、無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）中、トリフェニル（（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）メチル）ホスホニウムブロミド（化合物（ＸＶＩ）、製造については中間体２を参照）（５５３ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）の溶液を、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（ＴＨＦ中１Ｍ）（１．２３２ｍＬ、１．２３２ｍｍｏｌ）でおよそ５分かけて滴下処理し、橙色の溶液を得た。撹拌を１０分間続けた後、このアルデヒド（式（Ｘ））溶液を一度にイリド溶液に加え、この混合物を周囲温度で２２時間撹拌した。この反応混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）た後、真空蒸発させた。暗褐色の残渣を２０ｇシリカＳＰＥカートリッジでのクロマトグラフィーにより精製し、３０分かけて０〜１００％酢酸エチル−シクロヘキサンの勾配で溶出させ、標題化合物を２つの幾何異性体として得た：
異性体１：わら色のガム（１２３．４ｍｇ、３１％）；LCMS (システムA) RT=1.28分, 95%, ES+ve m/z 382 (M+H)+および
異性体２：わら色のガム（１２１．５ｍｇ、３１％）；LCMS (システムA) RT=1.22分, 91%, ES+ve m/z 382 (M+H)+
総収量＝２４４．９ｍｇ、６２．５％。
【０１５０】
その後、中間体３の立体配置は（Ｒ）であることが示され、２つの幾何異性体は、３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）ビニル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ，Ｅ）−ベンジルおよび３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）ビニル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ，Ｚ）−ベンジル塩である。
【０１５１】
中間体４：３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−カルボン酸ベンジル（化合物（ＶＩＩ））
【化３４】
0006665169.tif 000035
【０１５２】
ＤＭＦ（２ｍＬ）中、３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）ビニル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｅ／Ｚ）ベンジル（化合物ＶＩＩＩ、製造については中間体３を参照）（１：１、Ｅ：Ｚ）（２４４ｍｇ、０．６４０ｍｍｏｌ）の溶液をベンゼンスルホニルヒドラジド（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒから入手可能）（２７５ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３５４ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ）で処理した。この反応混合物を１時間１３０℃に加熱した後、冷却し、ＤＣＭと水とで分液した。有機相を水で洗浄し、疎水性フリットを通して乾燥させた。有機溶液を真空蒸発させ、残った橙色油状物を２０分かけて０〜５０％［（３：１  ＥｔＯＡｃ：ＥｔＯＨ）−ＥｔＯＡｃ］の勾配で溶出するシリカカートリッジ（２０ｇ）でのクロマトグラフィーにより精製した。適当な画分を合わせ、真空蒸発させ、標題化合物（１５０ｍｇ、６１％）を淡黄色ガムとして得た：LCMS (システムA) RT=1.24分, 90%, ES+ve m/z 384 (M+H)+。その後、中間体４の絶対立体配置は（Ｓ）であることが推論により示され、従って、この化合物は３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｓ）−ベンジルである。中間体３の（Ｒ）から中間体４の（Ｓ）への変化は、二重結合の除去時に優先する変化である。
【０１５３】
中間体５：７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（化合物（Ｖ））
【化３５】
0006665169.tif 000036
【０１５４】
１０％パラジウム炭素（０．５０ｇ）を含有するエタノール（７０ｍＬ）中、３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−カルボン酸ベンジル（化合物（ＶＩＩ、製造については中間体４を参照）（４．６７ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を水素雰囲気下で７時間撹拌した。ＬＣＭＳは不完全な脱保護を示し、さらに１０％パラジウム炭素（０．２５ｇ）を追加し、この混合物を水素雰囲気下で一晩撹拌した。この反応混合物は暗灰色の懸濁液として存在したので、この混合物が黒色となるまでＤＣＭを加え、この材料を溶解させた。触媒をセライトパッドで濾去し、濾液および洗液を真空蒸発させた。残渣をＤＣＭから蒸発させ、標題化合物を橙色油状物として得た（３．２８ｇ）：LCMS (システムA) RT=0.79分, 90%, ES+ve m/z 250 (M+H)+。その後、中間体５の立体配置は（Ｓ）であることが推論により確定され、化合物の名称は、（Ｓ）−７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジンである。
【０１５５】
中間体６［７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（化合物（Ｖ））メタンスルホン酸塩
【化３６】
0006665169.tif 000037
【０１５６】
化合物（Ｖ）のこの塩は、上記の化合物（Ｖ）の精製方法と同様に製造および結晶化され得る。
【０１５７】
２−ブタノール（５ｍＬ）を７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（化合物（Ｖ）、製造については中間体５を参照）（１．０ｇ、４．０ｍｍｏｌ）に加え、この混合物を完全な溶解が達成されるまで加熱した。この温溶液にメタンスルホン酸（０．２６０ｍＬ、４．０１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を撹拌しながら８０℃に加熱した。次に、溶液を周囲温度まで冷却した。沈澱形成はすぐには明らかでなかったので、この溶液をさらに冷蔵庫（およそ４℃）で冷却した。３日後、相当量の固体が見られた。この固体を濾過により単離し、冷２−ブタノールで洗浄し、真空でさらに乾燥させ、標題化合物（６００ｍｇ、４３％）を淡黄色固体として得た：LCMS (システムA) RT=0.80分, 100%, ES+ve m/z 250 (M+H)+；分析的キラルＨＰＬＣ  ４０％ＥｔＯＨ−ヘプタン（０．２％イソプロピルアミン含有）で溶出し、流速１ｍＬ／分、２３５ｎｍで検出するＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤカラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）でＲＴ＝８．４１分、９９．６％およびＲＴ＝１２．０３分、０．４％、。その後、中間体６の立体配置は（Ｓ）として推論により確定され、化合物の名称は、（Ｓ）−７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジンメタンスルホン酸塩である。
【０１５８】
中間体７：４−アセトキシブト−２−エン酸（Ｅ）−メチル（化合物（ＶＩ））
【化３７】
0006665169.tif 000038
【０１５９】
ＭｅＣＮ（３０ｍＬ）中、酢酸ナトリウム（３．５ｇ、４２ｍｍｏｌ）の懸濁液を４−ブロモクロトン酸メチル（Ａｌｄｒｉｃｈから入手可能）（３．３３ｍＬ、５ｇ、２８ｍｍｏｌ）で処理し、この混合物を３日間５０℃に加熱した。この混合物をエーテルで希釈した後、濾過した。この固体をエーテルで洗浄し、合わせた濾液および洗液をを減圧下で蒸発させた。蒸発後、残渣をエーテルと水とで分液した。有機相を重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させ、淡橙色油状物を得た。ＮＭＲは生成物と出発材料の混合物を示したので、この残留油状物に酢酸ナトリウム（３．４４ｇ、４２ｍｍｏｌ）、次いで、ＭｅＣＮ（１０ｍＬ）を加え、この混合物を週末にかけて７０℃に加熱した。この混合物を減圧下濃縮し、残渣をエーテルと水とで分液した。有機溶液を水、ブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過した。濾液を減圧下で蒸発させ、標題化合物（３．５５ｇ、８０％）を橙色油状物として得た：NMR δ (CDCl3) 6.92 (1H, dt, J 16, 5 Hz), 6.01 (1H, dt, J 16, 2 Hz), 4.72 (2H, dd, J 5, 2 Hz), 3.73 (3H, s), 2.10 (3H, s)。
【０１６０】
中間体８：４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）ブト−２−エン酸（Ｅ）−メチル（化合物（ＩＩＩ）
【化３８】
0006665169.tif 000039
【０１６１】
ＤＣＭ（２ｍＬ）中、４−アセトキシブト−２−エン酸（Ｅ）−メチル（化合物（ＶＩ）、製造については中間体７を参照）（１２７ｍｇ、０．８０２ｍｍｏｌ）、７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（化合物（Ｖ）、製造については中間体５を参照）（２００ｍｇ、０．８０２ｍｍｏｌ）およびＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２付加物（６５．７ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）の混合物を周囲温度で２時間撹拌した。ＬＣＭＳは５０％前後の変換率を示し、ＤＩＰＥＡ（０．２７９ｍＬ、１．６０ｍｍｏｌ）を加え、この溶液を室温で２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、生成物へのほとんど完全な変換を示した。この材料をそのままカラムにロードし、２０分かけてシクロヘキサン中０〜１００％ＥｔＯＡｃの勾配で溶出するクロマトグラフィー（２０ｇアミノプロピルカートリッジ）により精製した。適当な画分を合わせ、蒸発させ、標題化合物（１０１．４ｍｇ、収率３６％）を得た：LCMS (システムC) RT=1.08分, 95%, ES+ve m/z 348 (M+H)+。中間体８の立体配置は（Ｓ）として、名称は４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）ブト−３−エン酸（Ｓ，Ｅ）−メチルとして、推論により確定された。
【０１６２】
中間体９：４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸メチル  異性体Ａおよび異性体Ｂ）
【化３９】
0006665169.tif 000040
【０１６３】
４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）ブト−２−エン酸（Ｅ）−メチル（化合物（ＩＩＩ）、製造については中間体８を参照）（１４５ｍｇ、０．３３４ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−ＢＩＮＡＰ（３１ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２（１０ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）、（３−モルホリノフェニル）ボロン酸（例えば、ＣｏｍｂｉＢｌｏｃｋｓ、Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ  ＯｒｇａｎｉｃｓまたはＦｌｕｏｒｏｃｈｅｍから入手可能）（２５９ｍｇ、１．２５１ｍｍｏｌ）および３．８Ｍ  ＫＯＨ（０．２２ｍＬ、０．８３６ｍｍｏｌ）をマイクロ波バイアル内で、１，４−ジオキサン（２ｍＬ）に溶かし、この溶液をマイクロ波オーブン（１００分、９５℃）にて加熱した。この反応混合物をセライトで濾過し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で洗浄し、濃縮した。この反応混合物をＭｅＯＨ（３００μＬ）に懸濁させ、逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８、４０ｇ、１０ｍＭ重炭酸アンモニウム中５〜９５％ＭｅＣＮ（０．１％アンモニアを含有）、２０ＣＶ）により精製した。適当な画分を合わせ、蒸発させ、標題化合物（ＩＩ）（９９ｍｇ、５８％）のジアステレオマー混合物をガムとして得た。
【０１６４】
この混合物をＥｔＯＨ（２ｍＬ）およびヘプタン（１ｍＬ）に溶かし、ジアステレオ異性体を３０％ＥｔＯＨ（０．２％イソプロピルアミン含有）−７０％ヘプタン（流速＝３０ｍＬ／分、２１５ｎｍで検出）で溶出するＣｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ−Ｈカラム（３ｃｍ×２５ｃｍ）でのキラルＨＰＬＣにより分離し、化合物（ＩＩ）の２つのジアステレオ異性体を得た。
【０１６５】
異性体Ａ（１７ｍｇ、１０％）：分析的キラルＨＰＬＣ  Ｃｈｒａｌｃｅｌ  ＯＤ−Ｈカラム（４．６ｍｍ  ｉｄ×２５ｃｍ）（３０％ＥｔＯＨ（０．２％イソプロピルアミン含有）−ヘプタンで溶出、流速＝１．０ｍＬ／分、２１５ｎｍで検出）でＲＴ＝８．０分、＞９９．５％；LCMS (システムA) RT=1.21分, 99%, ES+ve m/z 511 (M+H)+; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.17 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.88-6.84 (m, 1H), 6.76 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.38 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 3.87-3.81 (m, 4H), 3.58 (s, 3H), 3.42-3.36 (m, 2H), 3.17 - 3.10 (m, 4H), 2.90-2.49 (m, 12H), 2.11-1.84 (m, 6H), 1.38-1.28 (m, 2H)。
【０１６６】
異性体Ｂ（７７ｍｇ、４５  ％）：分析的キラルＨＰＬＣ  Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ−Ｈカラム（４．６ｍｍ  ｉｄ×２５ｃｍ）（３０％ＥｔＯＨ（０．２％イソプロピルアミン含有）−ヘプタン、流速＝１．０ｍＬ／分、２１５ｎｍで検出）でＲＴ＝１７．２分、＞９９．５％；1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.18 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.13-7.07 (m, 1H), 6.89-6.77 (m, 2H), 6.74 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.36 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 3.87-3.75 (m, 4H), 3.57 (s, 3H), 3.40-3.34 (m, 2H), 3.28-3.20 (m, 1H), 3.16-3.07 (m, 4H), 2.91-2.74 (m, 4H), 2.74-2.44 (m, 9H), 2.07-1.91 (m, 3H), 1.91-1.80 (m, 2H)。
【０１６７】
中間体９の２つの異性体の絶対立体配置がその後、主異性体（異性体Ｂ）４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸（Ｓ）−メチルおよび副異性体（異性体Ａ）４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸（Ｒ）−メチルに関して推論により確定された。
【０１６８】
中間体１０：３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）ビニル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｓ，Ｅ，Ｚ）−ベンジル（化合物（ＸＸＩＩＩ））
【化４０】
0006665169.tif 000041
【０１６９】
ジクロロメタン（６０ｍＬ）およびＤＭＳＯ（５．８６ｍＬ、８３ｍｍｏｌ）中、３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−（−）−ベンジル［（−）−化合物（ＩＸ）］（Ｗｕｘｉ  Ａｐｐ  Ｔｅｃから入手可能）（４．１８ｇ、１６．５０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を、窒素下、ＤＩＰＥＡ（１４．４１ｍＬ、８３ｍｍｏｌ）で処理した。氷浴中で０〜５℃に冷却した後、三酸化硫黄ピリジン（５．４０ｇ、３３．９ｍｍｏｌ）をおよそ５分かけて少量ずつ加えた。溶液は淡黄色に変わり、撹拌をおよそ０．５時間続けると黄色溶液となった。この溶液を希ＨＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ４）。次に、トリフェニル（（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）メチル）ホスホニウムブロミド（化合物ＸＶＩ、製造については中間体２を参照）（８．０６ｇ、１６．４７ｍｍｏｌ）および少量のＤＣＭ（およそ５ｍＬ）を加え、その後、シクロヘキサン（３．８１ｍＬ）を加えて淡橙色溶液を得た。この溶液にカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１９．８０ｍＬ、１９．８０ｍｍｏｌ）を滴下したところ、クリーム色の懸濁液となった。１時間後、この反応混合物ＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、その後、真空蒸発させた。暗橙色油状物を一晩固化させ、ジエチルエーテル（およそ３０ｍＬ）で摩砕した後、濾過し、クリーム色の固体と黄色濾液を得た。濾液を真空蒸発させて橙色油状物を得、これを３３０ｇ順相シリカカートリッジに適用し、シクロヘキサン／酢酸エチル勾配（５０分で０〜１００％酢酸エチル）で溶出させた。適当な画分を真空蒸発させ、標題化合物（３．９５３ｇ、６３％）をわら色のガムとして得た：LCMS (システムC) RT=1.28分, 50% and 1.34分, 46% ES+ve m/z 382 (M+H)+。
【０１７０】
中間体１１：３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−ベンジル
【化４１】
0006665169.tif 000042
【０１７１】
ＤＭＦ（４０ｍＬ）中、３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）ビニル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｓ，ＥおよびＺ）−ベンジル（化合物ＸＸＩＩＩ、製造については中間体１０を参照）（３．８１４ｇ、１０．００ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を窒素下、炭酸カリウム（５．５３ｇ、４０．０ｍｍｏｌ）、次いで、ベンゼンスルホノヒドラジド（４．３８ｇ、２５．４ｍｍｏｌ）で処理し、黄色の液体を得た。この混合物を１時間１００℃に加熱した後、周囲温度まで冷却し、セライトで濾過した。濾液を真空蒸発させ、クリーム色のスラリーを得た。これを水（１００ｍＬ）と酢酸エチル（１００ｍＬ）とで分液し、有機層を水（４×１００ｍＬ）でさらに洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ４）後、真空蒸発させ、黄色油状物（３．２６１ｇ）を得た。これを週末にかけて高真空ライン上に置いた（２．９８２ｇ）。この油状物を最少量のＤＭＳＯ（およそ３ｍＬ）に溶かし、１２０ｇ逆相カートリッジに適用し、１０ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液中、１０〜１００％（０．１％ＮＨ３を含有するアセトニトリル）の勾配で１２ＣＶにわたって溶出させた。画分６〜９を部分的に真空蒸発させてアセトニトリルを除去した。残った溶液を水（４０ｍＬ）およびＤＣＭ（６０ｍＬ）で希釈した後、分離した。水層をＤＣＭ（３×３０ｍＬ）でさらに抽出し、有機抽出液を合わせ、乾燥させた（ＭｇＳＯ４）後、真空蒸発させて標題化合物（２．１４５ｇ、５６％）を淡黄色油状物として得た。LCMS (システムC): RT=1.25分, ES+ve m/z 384 (M+H)+。
【０１７２】
中間体１２：（Ｒ）−７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン
【化４２】
0006665169.tif 000043
【０１７３】
エタノール（５０ｍＬ）中、３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−ベンジル（製造については中間体１１を参照）（２．３３４ｇ、６．０９ｍｍｏｌ）の溶液を１０％パラジウム炭素（２５０ｍｇ、０．２３５ｍｍｏｌ）に加え、この混合物を水素雰囲気下で３時間撹拌し、この時点でさらなるパラジウム炭素（１０７．２ｍｇ）を追加した。この反応物を一晩撹拌した。ＤＣＭ（およそ３０ｍＬ）を加え、混合物を窒素下、セライトで濾過した。濾液を真空蒸発させ、標題化合物（１．５７５ｇ）を黄色油状物として得た：LCMS (システムC) RT=0.83分, ES+ve m/z 250 (M+H)+。
【０１７４】
中間体１３：４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）ブト−２−エン酸（Ｒ，Ｅ）−メチル
【化４３】
0006665169.tif 000044
【０１７５】
４−アセトキシブト−２−エン酸（Ｅ）−メチル（０．９５１ｇ、６．０１ｍｍｏｌ）（化合物（ＩＶ）、製造については中間体７を参照）、（Ｒ）−７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（製造については中間体１２を参照）（１．５２０ｇ、６．１０ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２付加物（０．２４２ｇ、０．３３１ｍｍｏｌ）および酢酸カリウム（２．０８３ｇ、２１．２２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２５ｍＬ）に溶かし、この反応混合物を窒素下で２０時間撹拌し、橙色の液体（２．１８８ｇ）を得た。この反応混合物をＤＣＭ（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）とで分液し、もう一度ＤＣＭ（５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空除去し、残渣をＤＣＭに溶かし、２０分で０〜１００％酢酸エチル−シクロヘキサンの勾配を用いるアミノプロピルカートリッジ（５０ｇ）で精製した。適当な画分を合わせ、真空蒸発させ、標題化合物（１．５９ｇ、７５％）を黄色油状物として得た。LCMS (システムC): RT=1.07分, ES+ve m/z 348 (M+H)+。
【０１７６】
中間体１４  （Ｒ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸メチルおよび（Ｓ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸メチル
【化４４】
0006665169.tif 000045
【０１７７】
４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）ブト−２−エン酸（Ｒ，Ｅ）−メチル（製造については中間体１３を参照）（４２９ｍｇ、０．９８８ｍｍｏｌ）、［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２（２９．７ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）、（３−モルホリノフェニル）ボロン酸（７１６ｍｇ、３．４６ｍｍｏｌ）および３．８Ｍ  ＫＯＨ（０．６４７ｍＬ、２．４６ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２ｍＬ）に溶かし、この溶液をマイクロ波反応器（高出力、１００分、９５℃）内で加熱した。この反応混合物をセライトで濾過し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で洗浄し、濃縮した。この反応混合物をＭｅＯＨ（３００μＬ）に懸濁させ、１０ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液中３０〜８５％ＭｅＣＮ（０．１％アンモニア含有）の勾配、３０ＣＶで溶出する逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８、４０ｇ）により精製した。適当な画分を合わせ、蒸発させ、生成物をジアステレオ異性体の混合物として得た（２１４ｍｇ、収率４２％）。この混合物をヘプタン中３０％ＥｔＯＨ（０．２％イソプロピルアミン含有）で溶出するＣｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ−Ｈカラム（３０ｍｍ×２５ｃｍ）、流速＝３０ｍＬ／分、２１５ｎｍでの検出による分取キラルＨＰＬＣにより分離し、標題化合物の２つのジアステレオ異性体を得た。
【０１７８】
異性体１  メチル（Ｒ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸（２９ｍｇ、６％）LCMS (システムB) RT=0.54分, ES+ve m/z 511 (M+H)+；分析的キラルＨＰＬＣ  ０．２％イソプロピルアミン含有３０％ＥｔＯＨ−ヘプタン、流速１ｍＬ／分で溶出するＯＤ−Ｈカラム（４．６  ｍｍ×２５ｃｍ）でＲＴ＝７．５分、＞９９．５％。
【０１７９】
異性体２  メチル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸（１３８ｍｇ、２７％）：  LCMS (システムB) RT=0.57分, ES+ve m/z 511 (M+H)+;分析的キラルＨＰＬＣ  ３０％  ０．２％イソプロピルアミン含有ＥｔＯＨ−ヘプタン、流速１ｍＬ／分で溶出するＣｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ−Ｈカラム（４．６ｍｍ×２５ｃｍ）でＲＴ＝１３．９分、＞９９．５％。
【０１８０】
中間体１５．４−（４−フルオロ−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）モルホリン
【化４５】
0006665169.tif 000046
【０１８１】
４−（４−フルオロフェニル）モルホリン(Roiban, G-D. Eur. J. Org. Chem. 2014, 2070-2076)（８５ｇ、４６９ｍｍｏｌ）をシクロヘキサン（１．２Ｌ）に溶かし、フラスコを３０分間アルゴンでパージした。得られた溶液に、アルゴン下で［Ｉｒ（ＣＯＤ）ＯＭｅ］２（３１．１ｇ、４６．９ｍｍｏｌ）、４，４’−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−２，２’−ビピリジン（２５．２ｇ、９４ｍｍｏｌ）および４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（６０．０ｇ、４６９ｍｍｏｌ）を加え、７０℃で１８時間撹拌した。この反応をＴＬＣ（ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ  Ｒｆ＝０．２、ＵＶで検出）によりモニタリングした。この反応混合物に酢酸エチル（５００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）を加え、有機相を分離した。水相を酢酸エチル（２×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、減圧下で濃縮した。残った液体（８０ｇ）を、３％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出するシリカゲル（１００〜２００メッシュ）カラムにロードした。適当な画分を合わせ、真空蒸発させた。残渣（６０ｇ）をペンタン（１００ｍＬ）で摩砕して５５ｇの生成物を得、これをさらに冷ペンタンで摩砕し、標題化合物（５０．３ｇ、３５％）を白色固体として得た：LCMS ES+ve m/z 308 (M+H)+。
【０１８２】
中間体１６．  ４−（Ｓ）−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（２−フルオロ−５−モルホリノフェニル）ブタン酸（Ｓ）メチル
【化４６】
0006665169.tif 000047
【０１８３】
フラスコに、１，４−ジオキサン（３ｍＬ）中、（２−フルオロ−５−モルホリノフェニル）ボロン酸（製造については中間体１５を参照）（２１６ｍｇ、０．９５８ｍｍｏｌ）、４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）ブト−２−エン酸（Ｓ，Ｅ）−メチル（製造については中間体８を参照）（１１１ｍｇ、０．３１９ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ（水溶液）（０．２５２ｍＬ、０．９５８ｍｍｏｌ）を装填した。この溶液を、窒素を用いて脱気した。［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２（７．８８ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−ＢＩＮＡＰ（２３．８７ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（３ｍＬ）に溶かし、溶液を脱気した。これら２つの溶液を混合し、脱気し、窒素下、９０℃で１時間加熱した。ＬＣＭＳは、生成物への変換は最小で、多くの両出発材料が残存していたことを示した。この溶液に［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２（７．８８ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−ＢＩＮＡＰ（２３．８７ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）を加え、溶液を２時間５０℃に加熱した。ＬＣＭＳは、生成物へのさらなる変換を示したが、変換率はなお２０％前後に過ぎなかった。さらなる量の（Ｒ）−ＢＩＮＡＰ（２３．８７ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）、［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２（７．８８ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）、（２−フルオロ−５−モルホリノフェニル）ボロン酸（２１６ｍｇ、０．９５８ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ（水溶液）（０．２５２ｍＬ、０．９５８ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を５０℃で２時間加熱した。ＬＣＭＳは、必要とする生成物へのさらなる変換を示したので、反応を停止した。この反応混合物をセライト（１０ｇ）に通し、３ＣＶのＭｅＯＨで洗浄した。濾液を減圧下で蒸発させた。残渣を４０〜８５％アセトニトリル−１０ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液で溶出するＢｉｏｔａｇｅ  ＳＮＡＰカートリッジ（３０ｇ）での逆相クロマトグラフィーにより精製した。適当な画分を回収し、真空下で蒸発させ、標題化合物（１１６．９ｍｇ、６９％）を得た。LCMS (システムA) RT=1.23分, 94%, ES+ve m/z 529 (M+H)+; 分析的キラルＨＰＬＣ  ＯＤ−Ｈ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）クロマトグラフィーカラムでの２０％  ＥｔＯＨ（０．２％イソプロピルアミン含有）−ヘプタンによる溶出、流速１ｍＬ／分、２１５ｎｍでの検出でＲＴ＝９．５分、＞９５％。
【０１８４】
実施例の製造
実施例１：（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸
【化４７】
0006665169.tif 000048
【０１８５】
４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸（Ｓ）−メチル（製造については中間体９を参照、異性体Ｂ）（７７ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）に溶かした。この反応混合物にＬｉＯＨ（ａｑ）（１Ｍ、０．４５２ｍＬ）を加えた。この反応混合物を周囲温度で１８時間撹拌した。この反応混合物にＨＣｌ（ａｑ）（２  Ｍ、０．２２６ｍＬ）を加えた後、それをＭｅＯＨ（２ＣＶ）、次いで、ＭｅＯＨ中２Ｍ  ＮＨ３（２ＣＶ）で溶出するプレコンディショニングＳＣＸカラムにロードした。アンモニア画分を合わせ、蒸発させた。残渣を逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８、１０ｍＭ重炭酸アンモニウム中５〜９５％ＭｅＣＮ（０．１％アンモニアを含有）、１５ＣＶ）を用いて精製した。適当な画分を回収し、蒸発させ、標題化合物をガムとして得た（６１ｍｇ、収率８１％）：分析的キラルＨＰＬＣ  ５０％ＥｔＯＨ−ヘプタンで溶出するＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＳ−Ｈカラム（４．６ｍｍ  ｉｄ×２５ｃｍ）、流速＝１．０ｍＬ／分、２１５ｎｍでの検出でＲＴ＝７．０６分、＞９９．５％；LCMS (システムA) RT=0.76分, 98%, ES+ve m/z 497 (M+H)+; 1H NMR (CD3OD, 600 MHz) 7.27-7.20 (m, 2H), 6.89 (s, 1H), 6.86 (dd, J=8.3, 2.0 Hz, 1H), 6.78 (d, J=7.7 Hz, 1H), 6.45 (d, J=7.3 Hz, 1H), 3.88-3.80 (m, 4H), 3.49-3.28 (m, 6H), 3.25-3.18 (m, 2H), 3.17-3.13 (m, 4H), 3.03 (d, J=8.1 Hz, 1H), 2.82 (dd, J=16.1, 8.8 Hz, 1H), 2.77-2.68 (m, 4H), 2.67-2.56 (m, 1H), 2.25 (d, J=3.3 Hz, 1H), 2.20-2.09 (m, 3H), 1.90 (quin, J=6.0 Hz, 2H)。
【０１８６】
実施例１の不斉中心の絶対立体配置を決定したところ、この化合物は構造式（ＩＡ２）（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸であることが判明した。
【０１８７】
実施例２：（Ｓ）−４−（Ｒ）−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸
【化４８】
0006665169.tif 000049
【０１８８】
メタノール（１ｍＬ）中、（Ｓ）−４−（Ｒ）−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸メチル（製造については中間体１４を参照  異性体２）（１３８ｍｇ、０．２７０ｍｍｏｌ）の溶液をＬｉＯＨ水溶液（１Ｍ、０．８１１ｍＬ）で処理し、この反応混合物を周囲温度で１８時間撹拌した。次に、この反応混合物に２Ｍ  ＨＣｌ（０．４０５ｍＬ、０．８１１ｍｍｏｌ）を加え、プレコンディショニングＳＣＸカートリッジに適用した。次に、このカートリッジをＭｅＯＨ（２ＣＶ）、次いで、メタノール中２Ｍアンモニア（２ＣＶ）で洗浄した。アンモニア画分を合わせ、蒸発させ、残渣を、１０ｍＭアンモニウム重炭酸水溶液中、５〜９５％ＭｅＣＮ（０．１％アンモニア含有）（１５ＣＶ）で溶出する逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８カートリッジを用いて精製した。適当な画分を蒸発させ、標題化合物（１２１ｍｇ、９０％）をガムとして得た。このガムをジエチルエーテル（２ｍＬ）に溶かした後、シクロヘキサン（約５ｍＬ）を滴下した。固体が現れ、この懸濁液を減圧下で蒸発させて標題化合物を得た：LCMS (システムA) RT=0.77分, ES+ve m/z 497 (M+H)+; 1H NMR  (DMSO-d6, 600 MHz) 7.12 (t, J=7.5 Hz, 1H), 7.02 (d, J=7.5 Hz, 1H), 6.82-6.81 (m, 1H), 6.76-6.73 (m, 1H), 6.69-6.67 (m, 1H), 6.28 (d, J=7.5 Hz, 1H), 6.26-6.24 (m, 1H), 3.74-3.69 (m, 4H), 3.25-3.21 (m, 2H), 3.15-3.09 (m, 1H), 3.09-3.05 (m, 4H), 2.87-2.65 (m, 4H), 2.64-2.56 (m, 3H), 2.56-2.45 (m, 4H+ (溶媒により不明瞭)), 2.40 (dd, J=16, 8.5 Hz, 1H), 2.04-1.81 (m, 4H), 1.74 (quin, J=6.0 Hz, 2H)。
【０１８９】
実施例２の不斉中心の絶対立体配置を決定したところ、この化合物は構造式（ＩＡ３）（Ｓ）−４−（Ｒ）−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸であることが判明した。
【０１９０】
実施例３：（Ｓ）−４−（Ｓ）−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸マレイン酸塩
ＭｅＣＮ（０．２ｍＬ）を（Ｓ）−４−（Ｓ）−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸（製造については実施例１を参照）（１９．８ｍｇ）に加え、次いで、マレイン酸（水中３Ｍ溶液、０．０１３３ｍＬ）を加えた。この溶液の温度を４８時間４０℃と５℃の間で循環させ、各サイクル間を１時間保持した。結晶性固体を、０．４５μｍフィルターを取り付けた遠心フィルターチューブを用いて単離し、結晶性マレイン酸塩を得た。
【０１９１】
ＭｅＣＮ（３．５ｍＬ）を（Ｓ）−４−（Ｓ）−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸（製造については実施例１を参照）（３４９．６ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）に加えた。この油性溶液に、マレイン酸（水中３Ｍの溶液、１．０当量）を加え、これは橙色溶液となった。結晶のシード（製造については上記を参照）を加えた。この溶液を４０℃で１時間撹拌し、１時間５℃に冷却し、室温で一晩撹拌した。結晶性マレイン酸塩を真空濾過により単離し、１５分間風乾した。結晶性マレイン酸塩の収量は（２６９．６ｍｇ、６２％）であった：ｍｐ  １８４．５℃（融解開始、ＤＳＣ）。
【０１９２】
別の製法：（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸（製造については実施例１を参照）（１．１４６ｇ、２．３０８ｍｍｏｌ）にアセトニトリル（１１．５ｍＬ）を加えた。この撹拌油性溶液に水中３．０Ｍマレイン酸（０．７６９ｍＬ、２．３０８ｍｍｏｌ）を加えると淡橙色溶液となった。この溶液を４０℃に加熱し、結晶性マレイン酸塩のシード（製造については上記を参照）を加えた。この混合物を４０℃で１時間加熱し、現れた白色固体は１時間かけて淡桃色となった。この混合物を氷／水浴中で１時間冷却した。この懸濁液を室温で１８時間撹拌した後、固体を濾取し、でアセトニトリル（２ｍＬ）洗浄し、真空乾燥させ、標題化合物（７５１ｍｇ、５３％）を淡桃色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 600MHz) 7.27 (1H, d, CH), 7.17 (1H, t, CH), 6.92 (1H, br.s, NH), 6.89 (1H, t, CH), 6.80 (1H, dd, CH), 6.75 (1H, br.d, CH), 6.44 (1H, d, CH), 6.04 (2H, s, CH [マレイン酸塩]), 3.73 (4H, br.t, 2xCH2), 3.31 (2H, t, CH2), 3.29-3.20 (2H, CH+1/2 CH2), 3.17-3.07 (7H, br.t + m, 2xCH2 +3X1/2 CH2), 3.04 (1H, br.m, 1/2 CH2), 2.98 (1H, br.m, 1/2 CH2), 2.75 (1H, dd, 1/2 CH2), 2.68-2.59 (4H, m, 2xCH2), 2.49 (1H, dd, 1/2 CH2), 2.17-1.98 (4H, m, 2xCH2), 1.78 (2H, m, CH2)。
【０１９３】
実施例４：（Ｓ）−４−（Ｓ）−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸フマル酸塩
ＭｅＣＮ（０．２ｍＬ）を（Ｓ）−４−（Ｓ）−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸（製造については実施例１を参照）（１９．７ｍｇ）に加え、次いで、フマル酸（ＥｔＯＨ中０．２Ｍ溶液、１９８．３μＬ）を加えた。この溶液の温度を４８時間４０℃と５℃の間で循環させ、各サイクル間を１時間保持した。溶媒を減圧下で蒸発させ、ＭｅＣＮ（０．２ｍＬ）を加えた。この生成物の温度を一晩（約１６時間）４０℃と５℃の間で循環させ、各サイクル間を１時間保持したところ、ガムとなった。マレイン酸塩のシード（製造については実施例３を参照）をこのガムに加え、懸濁液を室温で一晩撹拌したところ、ガムと結晶性固体の混合物が得られた。
【０１９４】
ＥｔＯＨ（０．５ｍＬ）を（Ｓ）−４−（Ｓ）−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸（製造については実施例１を参照）（３４４．２ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）を加えた。この油性溶液に、フマル酸（ＥｔＯＨ中０．２Ｍ溶液、１．０当量）をフマル酸塩のシード（製造については上記を参照）とともに加え、灰白色沈澱を得た。この懸濁液を４０℃で１時間撹拌し、１時間５℃まで冷却し、室温で一晩撹拌した。結晶性フマル酸塩を真空濾過により単離し、１５分間風乾した。結晶性フマル酸塩の収量は（３４５．９ｍｇ、８１％）であった：ｍｐ１７１．℃（融解開始、ＤＳＣ）。
【０１９５】
別の製法：
（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸（製造については実施例１を参照）（１．２４ｇ、２．５０ｍｍｏｌ）にＥｔＯＨ（１．８ｍＬ）を加えた。この撹拌油性溶液にＥｔＯＨ中０．２Ｍフマル酸（１２．４８ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）および結晶性フマル酸塩（製造については上記を参照）を加え、橙色溶液およびガムを得た。これを１時間４０℃に加熱した。白色固体が１時間かけて沈殿した。この懸濁液を氷／水浴で冷却し、１時間撹拌した。次に、この懸濁液を室温で１８時間撹拌した。固体を濾取し、エタノールで洗浄した（２ｍＬ）。固体を真空乾燥させ、標題化合物（１．３４ｇ、８８％）を白色固体として得た：1H NMR (DMSO-d6, 600MHz) 7.13 (1H, t, CH), 7.08 (1H, d, CH), 6.82 (1H, t, CH), 6.78 (1H, br.s, NH), 6.75ppm (1H, dd, CH), 6.69 (1H, br.d, CH), 6.61 (2H, s, CH [フマル酸塩]), 6.31 (1H, d, CH), 3.72 (4H, br.t, 2xCH2), 3.25 (2H, br.t, CH2), 3.13 (1H, m, CH), 3.08 (4H, br.t, 2xCH2), 2.85-2.69 (5H, m, CH2+3x 1/2 CH2), 2.61 (2H, t, CH2), 2.58-2.48 (4H, m, CH2+2x1/2CH2), 2.41 (1H, dd, CH), 2.03-1.85 (4H, m, 2xCH2), 1.75 (2H, m, CH2)。
【０１９６】
実施例５．（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（２−フルオロ−５−モルホリノフェニル）ブタン酸
【化４９】
0006665169.tif 000050
【０１９７】
ＴＨＦ中、４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（２−フルオロ−５−モルホリノフェニル）ブタン酸（Ｓ）メチル（製造については中間体１６を参照）（１１６．９ｍｇ、０．２２１ｍｍｏｌ）の溶液をＬｉＯＨ水溶液（１Ｍ、１．１ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）で処理した。この溶液を２５℃で５時間撹拌した。ＬＣＭＳは、生成物への完全な変換を示した。この溶液に２Ｍ  ＨＣｌ（０．６６３ｍＬ、１．３２７ｍｍｏｌ）を加えた後、この溶液をＭｅＯＨ（３ＣＶ）中３ＣＶ  ２Ｍ  ＮＨ３で溶出するプレコンディショニングＳＣＸカラム（１０ｇ）にロードした。適当な画分を回収し、減圧下で蒸発させ、標題化合物（１１４．３ｍｇ、１００％）を桃色固体として得た：LCMS (システムA) RT=0.77分, 98%, ES+ve m/z 515 (M+H)+; NMR (D2O, 400MHz) 7.37 (d, J=7 Hz, 1H), 7.06 (t, J=9 Hz, 1H), 6.99-6.92 (m, 2H), 6.49 (d, J=7 Hz, 1H), 3.88-3.80 (m, 4H), 3.67-3.39 (m), 3.36-3.20 (m), 3.10-3.03 (m, 4H), 2.76-2.62 (m, 5H), 2.51 (dd, J=15, 7 Hz, 1H), 2.38-2.07 (m, 4H), 1.85-1.77 (m, 2H)。
【０１９８】
実施例６．（Ｓ）−４−（Ｓ）−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸クエン酸塩水和物
ＭｅＣＮ（０．２ｍＬ）を（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸（製造については実施例１を参照）（２０．４ｍｇ）に加え、次いで、クエン酸（ＴＨＦ中１Ｍ溶液、４１．１μＬ）を加え、ガムを得た。このガム残渣の温度を４８時間４０℃と５℃の間で循環させ、各サイクル間を１時間保持した。溶媒を減圧下で蒸発させ、ＭｅＣＮ（０．２ｍＬ）を加えた。得られた生成物の温度を一晩（約１６時間）４０℃と５℃の間で循環させ、各サイクル間を１時間保持し、結晶性クエン酸塩を得た。
【０１９９】
ＭｅＣＮ（６．０ｍＬ）を（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸（製造については実施例１を参照）（３４９．５ｍｇ）のサンプルに加えた。この油性溶液に、クエン酸（ＴＨＦ中１Ｍ溶液、０．７０４ｍＬ）を５アリコートで加え、ガム状の材料を得た。結晶性クエン酸塩のシード（製造については上記を参照）を加えた。このガム状の懸濁液を４０℃で１時間撹拌し、１時間５℃まで冷却し、室温で一晩撹拌した後、この懸濁液の温度を２日間４０℃と５℃の間で循環させた。結晶性クエン酸塩を真空濾過により単離し、１５分間風乾した。結晶性クエン酸塩の収量は（３１５．９ｍｇ、６５％）であった：ｍｐ１２１．４℃（ＤＳＣによる融解開始）。ＴＧＡデータは、２５℃と１３５℃の間で約２．７重量％の損失を示した。発生ガスのＴＧＡ−ＩＲ分析は水の存在を明らかにし、このクエン酸塩が水和物であったことを示す（１当量の水の理論的重量％は２．６％である）。
【０２００】
結晶性メシル酸塩および二コハク酸塩は、それぞれアセトン−トルエンおよびアセトニトリルから同様に製造され、これらもまた水和したことが判明した。
【０２０１】
実施例７．（Ｒ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸
【化５０】
0006665169.tif 000051
【０２０２】
マイクロ波バイアル（０．５〜２ｍｌ）に、０℃で、４−ブロモブト−２−エン酸（Ｅ）−メチル（製造については中間体７を参照）（１１３ｍｇ、０．６３４ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（製造については中間体５を参照）（１６６．４ｍｇ、０．６６７ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．２３３ｍＬ、１．３３ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（１ｍＬ）を加えた。この溶液を０℃で３時間撹拌した。ＬＣＭＳは、アルキル化中間体への妥当な変換を示した。次に、この溶液を窒素下で蒸発させた。マイクロ波バイアルに３．８Ｍ  ＫＯＨ（水溶液）（０．３５１ｍＬ、１．３３５ｍｍｏｌ、［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２（１５ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）、（３−モルホリノフェニル）ボロン酸（２７６ｍｇ、１．３３５ｍｍｏｌ）およびＲ−ＢＩＮＡＰ（５０ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）を加え、このバイアルをマイクロ波内に置いた（５時間、５０℃、高出力）。ＬＣＭＳはいくらかの変換と、出発材料とボロン酸の両方がなお存在していたことを示した。このバイアルを再びマイクロ波内に置いた（１時間、７０℃）。ＬＣＭＳは、エステルへのさらなる変換およびボロン酸の完全なプロトデボリレーション(protodeborylation)を示した。このバイアルにＲ−ＢＩＮＡＰ（５０ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）、［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２（１５ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）、（３−モルホリノフェニル）ボロン酸（２７６ｍｇ、１．３３５ｍｍｏｌ）および３．８Ｍ  ＫＯＨ（水溶液）（０．３５１ｍＬ、１．３３ｍｍｏｌ）を加え、バイアルをマイクロ波内に置いた（１時間、８５℃）。ＬＣＭＳは、いくらかの変換を示したが、収量を高めるためにさらなるＲ−ＢＩＮＡＰ（５０ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）、［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２（１５ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）、（３−モルホリノフェニル）ボロン酸（２７６ｍｇ、１．３３５ｍｍｏｌ）および３．８Ｍ  ＫＯＨ（水溶液）（０．３５１ｍＬ、１．３３ｍｍｏｌ）を加え、このバイアルを再びマイクロ波内に置いた（１時間、１００℃）。ＬＣＭＳは、十分な変換を示し、この混合物をセライト（１０ｇ、２０ｍＬ  ＭｅＯＨ）に通し、濾液を真空下で蒸発させた。このサンプルをＭｅＯＨ：ＤＭＳＯ（１：１）中でロードし、１０ＣＶにわたって１０ｍＭ重炭酸アンモニウム中５０〜９５％ＭｅＣＮ（０．１％アンモニア含有）勾配を用いる逆相（Ｃ１８）カラム（３０ｇ）で精製した。適当な画分を合わせ、真空蒸発させ、必要な中間体を得た。丸底フラスコに３．８Ｍ  ＫＯＨ（３．３４ｍＬ、１２．６９ｍｍｏｌ）を加え、この溶液をテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に懸濁させた（一晩２５℃で撹拌した）。ＬＣＭＳは、カルボン酸塩への最小の変換を示した。１Ｍ  ＬｉＯＨ（水溶液）（３．３４ｍＬ、３．３４ｍｍｏｌ）を加え、この反応物を２５℃で撹拌した。この反応混合物に２Ｍ  ＨＣｌ（水溶液）（８．３４ｍＬ、１６．６８ｍｍｏｌ）を加えた後、それを予め湿らせたＳＣＸカラム（１０ｇ、１ＣＶ  ＭｅＯＨ、次いで、１ＣＶ  ＭｅＣＮで予め湿らせた）にロードし、その後、２ＣＶ  ＭｅＣＮ、次いで、２ＣＶ  ＭｅＯＨ中ＮＨ３で洗浄���た。適当な画分を減圧下で蒸発させた。このサンプルを１０：１０：１  ＭｅＯＨ：ＤＭＳＯ：Ｈ２Ｏ（２．４ｍＬ）に溶かし、ＭＤＡＰ（周囲温度で、アセトニトリル−アンモニア溶液でｐＨ１０に調整した１０ｍＭ重炭酸アンモニウム(ammonium bicarbondate)の勾配で溶出するＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８カラム（一般に１００ｍｍ×３０ｍｍ  ｉ．ｄ．充填径５μｍ）で実施）により精製した。溶媒を窒素流下で蒸発させ、必要な生成物をジアステレオ異性体の混合物として得た。この混合物を１５ｍＬ／分の流速にてヘプタン中５０％ＥｔＯＨで溶出し、２１５ｎｍで検出するＤａｉｃｅｌ  Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＳカラム（２０ｍｍ×２５０ｍｍ）での分取キラルＨＰＬＣにより分離した。副次的な、後に溶出する異性体を含有する画分から溶媒を蒸発させ、標題化合物（７ｍｇ、２％）を得た。分析的キラルＨＰＬＣ  ヘプタン中５０％ＥｔＯＨで溶出し、流速＝１．０ｍＬ／分、２１５ｎｍで検出するＤａｉｃｅｌ  Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＳカラム（４．６ｍｍ×２５ｃｍ）でＲＴ＝８．１５分；LCMS (システムC) RT=0.76分, 98.9%, ES+ve m/z 497 (M+H)+。
【０２０３】
実施例８．（Ｒ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸
【化５１】
0006665169.tif 000052
【０２０４】
４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）ブト−２−エン酸（Ｒ，Ｅ）−メチル（製造については中間体１３を参照）（１１０ｍｇ、０．２５３ｍｍｏｌ）を窒素下で１，４−ジオキサン（２ｍＬ）に溶かした。次に、この反応混合物に（３−モルホリノフェニル）ボロン酸（１５７ｍｇ、０．７６０ｍｍｏｌ）を加えた。［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２（１３．４ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１ｍＬ）に溶かし、窒素を２分間バブリングさせた。この暗赤色溶液をメイン反応フラスコに加えた。３．８Ｍ  ＫＯＨ（水溶液）（０．２ｍＬ、０．７６ｍｍｏｌ）を加えた後、この反応混合物を１時間５０℃に加熱した。ＬＣＭＳは、生成物へのいくらかの変換を示した。この反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。ＬＣＭＳは、生成物へのさらなる変換を示さなかった。この反応混合物を冷却し、セライトで濾過した。カラムをＥｔＯＨ（１０ｍＬ）で洗浄した。溶液を減圧下で蒸発させた後、１Ｍ  ＬｉＯＨ（水溶液）（１ｍＬ、１ｍｍｏｌ）および１，４−ジオキサン（１ｍＬ）に懸濁させた。この反応混合物を一晩撹拌した。ＬＣＭＳは、生成物への変換を示した。この反応混合物を２Ｍ  ＨＣｌ（水溶液）（０．５ｍＬ）で酸性化した。粗混合物をＳＣＸカートリッジにロードし、ＭｅＯＨ中２Ｍ  ＮＨ３で溶出した。アンモニア画分を蒸発させ、粗混合物をＭｅＯＨ（１ｍＬ）に懸濁させた。この材料を１０ｍＭ重炭酸アンモニウム中、５〜７０％ＭｅＣＮ（０．１％アンモニアを含有）の勾配１０ＣＶで溶出するＣ１８カラム（３０ｇ）での逆相クロマトグラフィーにより精製した。適当な画分を合わせ、蒸発させた。残渣を１５ｍＬ／分の流速にてヘプタン中５０％ＥｔＯＨで溶出し、２１５ｎｍで検出するＤａｉｃｅｌ  Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＳカラム（２０ｍｍ×２５ｃｍ）にてキラルＨＰＬＣにより精製した。後に溶出する異性体を含有する画分から溶媒を蒸発させ、標題化合物（６ｍｇ、５％）を得た。分析的キラルＨＰＬＣ  ヘプタン中５０％ＥｔＯＨで溶出し、流速＝１．０ｍＬ／分、２１５ｎｍで検出するＤａｉｃｅｌ  Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＳ−Ｈカラム（４．６ｍｍ×２５ｃｍ）でＲＴ＝２６．５分；LCMS (システムA) RT=0.81分, 100%, ES+ve m/z 497 (M+H)+。
【０２０５】
実施例９．４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（２−フルオロ−５−モルホリノフェニル）ブタン酸
【化５２】
0006665169.tif 000053
【０２０６】
４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）ブト−２−エン酸（Ｒ，Ｅ）−メチル（製造については中間体１３を参照）（１４５ｍｇ、０．４１７ｍｍｏｌ）、［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２（１０．２９ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）、Ｒ−ＢＩＮＡＰ（３１．２ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）、４−（４−フルオロ−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）モルホリン（製造については中間体１５を参照）（２５６ｍｇ、０．８３５ｍｍｏｌ）および３．８Ｍ  ＫＯＨ（水溶液）（０．２２０ｍＬ、０．８３５ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２ｍＬ）に溶かし、溶液をマイクロ波（高出力、１時間、１００℃）にて加熱した。この溶液を週末にかけて放置し、ＬＣＭＳは、生成物への変換がないことを示した。この反応を、Ｒ−ＢＩＮＡＰ（３１．２ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）、［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２（１０．２９ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）および３．８Ｍ  ＫＯＨ（水溶液）（０．２２０ｍＬ、０．８３５ｍｍｏｌ）を加えて繰り返した。ＬＣＭＳは、反応が十分進行したことを示し、この混合物をセライトに通し（ＭｅＯＨ、３ＣＶ）、減圧下で蒸発させた。生成物を１０ｍＭ重炭酸アンモニウム中３５〜９５％ＭｅＣＮ（０．１％アンモニア含有）（１０ＣＶ）で溶出するＣ１８（４０ｇ）カラムでの逆相クロマトグラフィー（１：１  ＭｅＯＨ／ＤＭＳＯ中でロード）により精製した。適当な画分を減圧下で蒸発させた後、生成物をテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に溶かし、１Ｍ  ＬｉＯＨ（水溶液）（２．０８７ｍＬ、２．０８７ｍｍｏｌ）（室温、２時間）と反応させた。ＬＣＭＳは、反応が完全に進行したことを示した。２Ｍ  ＨＣｌ（水溶液）（１．５ｍＬ、３ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を予め湿らせたＳＣＸカラム（１０ｇ、１ＣＶ  ＭｅＯＨ、次いで、１ＣＶ  ＭｅＣＮでプレコンディショニングし、サンプルをロードし、２ＣＶ  ＭｅＣＮ、次いで、２ＣＶのＭｅＯＨ中２Ｍ  ＮＨ３で洗浄した）にロードした。適当な画分を減圧下で蒸発させた。生成物を１０ｍＭ重炭酸アンモニウム中１５〜５５％ＭｅＣＮ（０．１％アンモニア含有）（１０ＣＶ）で溶出する逆相Ｃ１８カラム（１２ｇ）にロードした。適当な画分を減圧下で蒸発させ、標題化合物（１２ｍｇ、６％）を得た。LCMS (システムA) RT=0.77分, 98%, ES+ve m/z 515(M+H)+。
【０２０７】
生物学的アッセイ
細胞間接着アッセイ
使用した試薬および方法は記載の通りであり[Ludbrook et al, Biochem. J. 2003, 369, 311およびにαｖβ８関してはMacdonald et al. ACS MedChemLett 2014, 5, 1207-1212)、以下に明瞭化の点を示す。以下の細胞株を使用し、括弧内にリガンドを示す：、Ｋ５６２−αｖβ３（ＬＡＰ−ｂ１）、Ｋ５６２−αｖβ５（ビトロネクチン）、Ｋ５６２−αｖβ６（ＬＡＰ−ｂ１）、Ｋ５６２−αｖβ８（ＬＡＰ−ｂ１）、Ａ５４９−αｖβ１（ＬＡＰ−ｂ１）。接着を促進するために使用した二価陽イオンは２ｍＭ  ＭｇＣｌ２であった。接着を、蛍光色素ＢＣＥＣＦ−ＡＭ（Ｌｉｆｅ  ＴｅｃＨｎｏｌｏｇｉｅｓ）での細胞標識によって定量化し、その際、３×１０６細胞／ｍＬの細胞懸濁液を、０．３３μＬ／ｍＬの３０ｍＭ  ＢＣＥＣＦ−ＡＭとともに３７℃で１０分間インキュベートし、その後、５０μＬ／ウェルを９６ウェルアッセイプレートに分注した。アッセイの終了時に、接着した細胞を、Ｈ２Ｏ中０．５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を５０μＬ／ウェルで使用して溶解し、蛍光を放出させた。蛍光強度を、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標）プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して検出した。このアッセイにおいて活性なアンタゴニストについて、ＩＣ５０決定のために、データを４パラメーターロジスティック方程式にフィットさせた。
【０２０８】
細胞間接着アッセイにおける実施例１の効力（ｐＩＣ５０）は、αｖβ６  ｐＩＣ５０＝８．０；αｖβ３  ｐＩＣ５０＝６．９；αｖβ５  ｐＩＣ５０＝７．１；αｖβ８  ｐＩＣ５０＝７．６；αｖβ１  ｐＩＣ５０＝７．０であった。
【０２０９】
細胞間接着アッセイにおける実施例２の効力（ｐＩＣ５０）は、αｖβ６  ｐＩＣ５０＝７．９；αｖβ３  ｐＩＣ５０＝６．２；αｖβ５  ｐＩＣ５０＝６．８；αｖβ８  ｐＩＣ５０＝７．６であった。
【０２１０】
細胞間接着アッセイにおける実施例３の効力（ｐＩＣ５０）は、αｖβ６  ｐＩＣ５０＝８．２；αｖβ３  ｐＩＣ５０＝６．９；αｖβ８  ｐＩＣ５０＝７．６；αｖβ１  ｐＩＣ５０＝７．１であった。
【０２１１】
細胞間接着アッセイにおける実施例４の効力（ｐＩＣ５０）は、αｖβ６  ｐＩＣ５０＝８．１；αｖβ３  ｐＩＣ５０＝６．８；αｖβ８  ｐＩＣ５０＝７．６；αｖβ１  ｐＩＣ５０＝７．０であった。
【０２１２】
細胞間接着アッセイにおける実施例５の効力（ｐＩＣ５０）は、αｖβ６  ｐＩＣ５０＝７．８；αｖβ３  ｐＩＣ５０＝６．１；αｖβ５  ｐＩＣ５０＝６．５；αｖβ８  ｐＩＣ５０＝７．６；αｖβ１  ｐＩＣ５０＝６．８であった。
【０２１３】
細胞間接着アッセイにおける実施例７の親和性（ｐＩＣ５０）は、αｖβ６  ｐＩＣ５０＝６．３；αｖβ３  ｐＩＣ５０＝５．５；αｖβ５  ｐＩＣ５０＝６．０；αｖβ８  ｐＩＣ５０＝５．９であった。
【０２１４】
細胞間接着アッセイにおける実施例８の親和性（ｐＩＣ５０）は、αｖβ６  ｐＩＣ５０＝６．５；αｖβ３  ｐＩＣ５０＜５．０であった。
【０２１５】
細胞間接着アッセイにおける実施例９の親和性（ｐＩＣ５０）は、αｖβ６  ｐＩＣ５０＝７．６；αｖβ３  ｐＩＣ５０＝５．１；αｖβ５  ｐＩＣ５０＝６．５；αｖβ８  ｐＩＣ５０＝７．１であった。
【０２１６】
図は、平均ｐＩＣ５０値を示す。
【０２１７】
ＭＤＣＫ細胞における透過性
実施例１、実施例２および実施例５（総て両性イオンとして）の受動的膜透過性を、Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙイヌ腎臓−多剤耐性１（ＭＤＣＫＩＩ−ＭＤＲ１）細胞においてｐＨ７．４、強力なＰ−糖タンパク質阻害剤ＧＦ１２０９１８の存在下で決定した。各化合物を、各試験の場合で３・Ｍの濃度にて２反復でインキュベートした。このアッセイにおいて、実施例１の受動的な見掛けの透過性（Ｐａｐｐ）は６８ｎｍ／秒（試験回数ｎ＝２）であり、実施例２は２０ｎｍ／秒（試験回数ｎ＝１）であった。実施例５  Ｐａｐｐは９０ｎｍ／秒（±２６ｎｍ／秒；試験回数ｎ＝３）であった。
【０２１８】
２つのジアステレオ異性体、実施例１と実施例２は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのαｖβ６細胞間接着アッセイでは同等の親和性を持っていたが（実施例１  ｐＩＣ５０＝８．０；実施例２  ｐＩＣ５０＝７．９、それらはＭＤＣＫ細胞では異なる透過性を持っていた（実施例１  Ｐ＝６８  ｎｍ／秒および実施例２  Ｐ＝２０ｎｍ／秒）ことが認められた。このことは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの薬物動態試験において実施例１が実施例２よりも高い経口アベイラビリティを有することにより現れていると思われる。
【０２１９】
構造式（Ｉ）の化合物の絶対立体配置の同定
３−フルオロピロリジン不斉中心の絶対立体配置の同定
目的分子（ＩＡ）の合成は、それぞれ構造式（ＩＸ）の中間体の各鏡像異性体で開始した。この材料はＷｕｘｉ  Ａｐｐ  Ｔｅｃから３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸（＋）−ベンジルまたは３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸（−）−ベンジルとして購入し、それぞれのものは（ＩＡ）の主要ジアステレオ異性体を提供し、これは副ジアステレオ異性体よりも強力であった。３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸ベンジル（ＩＸ）の鏡像異性体のそれぞれの絶対立体配置は未知であり、それらの立体配置を確定するためにスキーム３に概略を示す以下の実験を行った。
【０２２０】
１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−フルオロピロリジン−３−カルボン酸（ＸＶＩＩ）ラセミ混合物［Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ登録番号１００１７５４−５９−１］（Ｗｕｘｉ  Ａｐｐ  Ｔｅｃから入手可能）を、この酸（ＸＶＩＩ）とまずカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、次いで、（＋）−（Ｒ）−α−メチルベンジルアミンとの反応によりＮ−α−メチルベンジルアミドに変換した。これによりシリカゲルでのクロマトグラフィーにより分離可能なアミドのジアステレオ異性体混合物が得た(P.K. Mykhailiuk et. al. Convenient synthesis of enantiopure (R) - and (S)-3-fluoro-3-aminomethylpyrrolidines, Tetrahedron 2014, 70, 3011-3017)。極性の高い異性体の立体配置は、Ｍｙｋｈａｉｌｉｕｋおよび本発明者らによってＸ線回折により独立に確定され、３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル［化合物（ＸＶＩＩＩ）］（図１）であり、従って、極性の低い異性体は３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル［化合物（ＸＩＸ）］であることが示された。さらに、これにより、スキームＩＩＩに示す順序によって得られる化合物と比較するための参照材料も得られた。極性異性体［化合物（ＸＶＩＩＩ）］についての本発明者らのＸ線データは、Ｍｙｋｈａｉｌｉｕｋらにより報告されているＸ線結晶構造と一致したが、その１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは本発明者らが得たスペクトルとは異なっていた。この２つのジアステレオ異性体［化合物（ＸＶＩＩＩ）と（ＸＩＸ）］のスペクトルは極めて類似していたが、ピロリジンＣ４プロトンに関して小さな識別の違いがあった。本発明者らは、それを２．２２ｐｐｍに認めている。Ｍｙｋｈａｉｌｉｕｋはそれを２．１５ｐｐｍであると報告していた。
【０２２１】
（ＩＡ）実施例２のジアステレオ異性体を提供した構造式（ＩＸ）の化合物の（−）−鏡像異性体［３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸（−）−ベンジル］は、ＣＢＺ保護基を除去するためにエタノール中１０％Ｐｄ／Ｃ上で水素化し、得られたアミン（ＸＸ）を二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルで保護して３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸（−）−ｔｅｒｔ−ブチル（ＸＸＩ）を得た。前記をアセトニトリル−水中、三塩化ルテニウムおよび過ヨウ素酸ナトリウムで酸化した。次に、得られたカルボン酸（ＸＸＩＩ）を従前のようにＣＤＩおよび（＋）−（Ｒ）−α−メチルベンジルアミンを用いてアミドに変換した。このアミドを参照アミドサンプル（ＸＶＩＩＩ）および（ＸＩＸ）と比較し、ＮＭＲ分光法、旋光度およびキラルＨＰＬＣによって３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（ＸＩＸ）と同一であることが判明した。（ＩＸ）の（−）−鏡像異性体は、ジアステレオ異性体（ＩＡ３）および（ＩＡ４）を提供する異性体であり、これらはピロリジン不斉中心に（Ｒ）−立体配置を有する。（ＩＸ）の（＋）−鏡像異性体は、（ＩＡ１）および（ＩＡ２）を提供し、ピロリジン不斉中心に絶対立体配置（Ｓ）を有する。
【０２２２】
【化５３】
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スキームＩＩＩ．３−フルオロピロリジン不斉中心の絶対立体配置の同定
【０２２３】
ベンジル不斉中心の絶対立体配置の同定
実施例１のベンジル不斉中心の絶対立体配置は、スキームＩＶで示す分解実験によって得られた。従って、実施例１をＤＣＭ中、ヨウ化メチルで、室温にて一晩処理してピロリジン窒素を第四級化した後、炭酸カリウムを加え、マイクロ波反応器内で１時間１２０℃に加熱し、（Ｓ）−４−（３−モルホリノフェニル）ジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（化合物ＸＸＩＩＩ）を得た。この分解生成物を、古典的な林の不斉反応(T. Hayashi et. al. Tetrahedron Asymmetry, 1999, 10, 4047-4056)を用い、触媒としてのビス（ノルボルナジエン）ロジウム（Ｉ）テトラフルオロボレートおよびキラル配位子としての（Ｒ）−ＢＩＮＡＰを用いて、（３−モルホリノフェニル）ボロン酸をフラン−２（５Ｈ）−オンを付加することによって製造した真正な（Ｒ）−４−（３−モルホリノフェニル）ジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（化合物ＸＸＩＶ）と比較し、分解生成物の鏡像異性体であることを示し、従って、そのベンジル中心における実施例１の立体配置を（Ｓ）と確定した。
【０２２４】
【化５４】
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スキームＩＶ．試薬および条件：ｉ）ＭｅＩ、ＤＣＭ、室温、１８時間；ｉｉ）Ｋ２ＣＯ３、１２０℃、１時間；ｉｉｉ）ビス（ノルボルナジエン）ロジウム（Ｉ）テトラフルオロボレートおよび（Ｒ）−ＢＩＮＡＰ、ＫＯＨ、１，４−ジオキサン、１００℃、１時間
【０２２５】
さらに、化合物ＸＸＩＩＩの立体配置をＸ線回折試験によって独立に確認し、（Ｓ）であることを示した（図２）。
【０２２６】
構造式（Ｉ）の化合物中の各不斉中心の絶対立体配置を特定するための上記試験に基づけば、実施例の絶対立体配置は次のようにまとめられる：
実施例１は、構造式（ＩＡ２）の化合物（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸であり、実施例２は、構造式（ＩＡ３）の化合物（Ｓ）−４−（Ｒ）−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸である。
【０２２７】
実験
３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（化合物ＸＶＩＩＩ）および３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（化合物ＸＩＸ）
ＴＨＦ（７０ｍＬ）中、（±）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−フルオロピロリジン−３−カルボン酸（化合物ＸＶＩＩ［Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ登録番号１００１７５４−５９−１］（Ｗｕｘｉ  Ａｐｐ  Ｔｅｃから入手可能）（３．００ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）の溶液を、室温にて固体ＣＤＩ（２．５ｇ、１５．４ｍｍｏｌ）で処理した後、この混合物を１．５時間８０℃に加熱した。（Ｒ）−（＋）−α−メチルベンジルアミン（Ｆｌｕｋａから入手可能）（１．６ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）をこの温度で加えた後、この混合物をさらに１．５時間８０℃で加熱した。この混合物を酢酸エチルで希釈し、希ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、室温でゆっくり蒸発さえた。この混合物は、固体が析出しなかったので最終的に減圧下で濃縮した。残渣を４０分かけて０〜２５％ＥｔＯＡｃ−シクロヘキサンで溶出するシリカ（２×１００ｇ）カートリッジでのクロマトグラフィーにより精製した。最初に溶出する化合物は白色泡沫として得られた（１．５４ｇ、３６％）：LCMS (システムA) RT=1.17分, ES+ve m/z 337 (M+H)+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) 1.43-1.49 (m, 9H), 1.54 (d, J=7.0 Hz, 3H), 2.08-2.19 (m, 1H), 2.37-2.62 (m, 1H), 3.43-3.56 (m, 1H), 3.61-3.93 (m, 3H), 5.14 (quin, J=7.1 Hz, 1H), 6.71-6.76 (m, 1H), 7.27-7.39 (m, 5H)、約１０％の極性の高いジアステレオ異性体を含有する；［α］Ｄ２０＋６１（ＭｅＯＨ中ｃ＝１．２７）；分析的キラルＨＰＬＣ  １０％ＥｔＯＨ−ヘプタンで溶出し、流速＝１ｍＬ／分、２１５ｎｍで検出するＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤカラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）で、ＲＴ＝７．５８分、９０％、およびＲＴ＝９．５３分、１０％。５０ｍｇ部のこのサンプルを２０分かけて０〜２５％ＥｔＯＡｃ−シクロヘキサンで溶出するシリカカートリッジ（２０ｇ）でさらに精製した。適当な画分を減圧下で蒸発させ、３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（化合物ＸＩＸ）の分析上純粋なサンプル（３０ｍｇ）を得たLCMS (システムC) RT=1.16分, ES+ve m/z 337 (M+H)+および(M+NH4)+ならびにES-ve m/z 335 (M-H)- ; [α]D 20 +63 (MeOH 中c=0.933)。
【０２２８】
このカラムから溶出する第２の化合物（極性の高いジアステレオ異性体）（１．２ｇ、２８％）をエーテルから結晶化させて、３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（化合物ＸＶＩＩＩ）の白色結晶を得た：ｍｐ＝１１３〜１１５℃；LCMS (システムC) RT=1.16分, ES+ve m/z 337 (M+H)+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) 1.43 - 1.48 (m, 9H), 1.54 (d, J=7.0 Hz, 3H), 2.14-2.26 (m, 1H), 2.44-2.70 (m, 1H), 3.46-3.55 (m, 1H), 3.56-3.87 (m, 3H), 5.14 (quin, J=7.1 Hz, 1H), 6.73 (br s, 1H), 7.27-7.40 (m, 5H)；［α］Ｄ２０＋７３（ＭｅＯＨ中ｃ＝０．８７６）；分析的キラルＨＰＬＣ  １０％ＥｔＯＨ−ヘプタンで溶出し、流速＝１ｍＬ／分、２１５ｎｍで検出するＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤカラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）でＲＴ＝９．５０分、１００％。このジアステレオ異性体の絶対立体配置をＸ線回折試験から確定した。
【０２２９】
（Ｒ）−（−）−（３−フルオロピロリジン−３−イル）メタノール（化合物ＸＸ）
化合物（ＩＸ）の（−）−異性体である（−）−Ｎ−ＣＢＺ−３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン（Ｗｕｘｉ  Ａｐｐ  Ｔｅｃから入手可能）（４．０ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）の溶液を、エタノール（１５０ｍＬ）中、１０％Ｐｄ／Ｃ（４００ｍｇ）上で一晩水素化した。触媒をセライトで濾去し、エタノールで洗浄した。濾液および洗液を減圧下で蒸発させ、標題化合物（２．０ｇｍ、１０６％、ＮＭＲによればいくらかのエタノールを含有）を黄色油状物として得、これは固化して蝋状固体となった：LCMS (システムC) RT=0.22分, ES+ve m/z 120 (M+H)+およびES-ve m/z 118 (M-H)-。生成物をさらにブローダウンユニットに窒素下、４０℃で乾燥させた。1H NMR (500 MHz, CDCl3) 3.82 (dd, J=18.7, 12.5 Hz, 1H), 3.73 (dd, J=22.0, 12.2 Hz, 1H), 3.22-3.15 (m, 1H), 3.23-3.14 (m, 1H), 2.99-2.92 (m, 1H), 2.91 (dd, J=29.1, 13.2 Hz, 1H), 2.66 (br s, 2H), 2.10-1.98 (m, 1H), 1.94-1.81 (m, 1H)；[α]D 20=-4 (EtOH中c=1.19)。
【０２３０】
３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−（−）−ｔｅｒｔ−ブチル（化合物ＸＸＩ）
ＤＣＭ（１５ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（４．１３ｍＬ、２３．７ｍｍｏｌ）中、（Ｒ）−（３−フルオロピロリジン−３−イル）メタノール（化合物ＸＸ）（１．８８ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）の溶液を二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３．７９ｇ、１７ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を２０℃で３時間撹拌した。この混合物を２Ｍ  ＨＣｌとＤＣＭとで分液し、相分離カートリッジで分離した。有機層を減圧下で濃縮し、残渣を４０分で０〜５０％ＥｔＯＡｃ−シクロヘキサンの勾配で溶出するシリカカートリッジ（７０ｇ）でのクロマトグラフィーにより精製した。画分をシリカでのＴＬＣ（５０％ＥｔＯＡｃ−シクロヘキサン）により確認し、ＫＭｎＯ４溶液で染色した。適当な画分を合わせ、減圧下で蒸発させ、標題化合物（２．７３ｇ、７９％）を無色の油状物として得た：LCMS (システムC) RT=0.79分, ES+ve m/z 220 (M+H)+ and 439 (2M+H)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.42 (s, 9H), 1.96-2.14 (m, 2H), 3.32-3.41 (m, 2H), 3.42-3.50 (m, 2H), 3.54-3.61 (m, 1H), 3.62-3.69 (m,  H), 4.90 (t, J=5.8 Hz, 1H); [α]D 20 = -28 (CHCl3中c=3.51)。
【０２３１】
３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（化合物ＸＩＸ）
ＭｅＣＮ（１ｍＬ）および水（１ｍＬ）中、３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸（−）−ｔｅｒｔ−ブチル（化合物ＸＸＩ）（２００ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）の溶液をＲｕＣｌ３（９．５ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）および過ヨウ素酸ナトリウム（９７６ｍｇ、４．５ｍｍｏｌ）で処理し、この混合物を２０℃で１６時間撹拌した。この混合物を１Ｍ  ＨＣｌ（５ｍＬ）で酸性化し、ＤＣＭで分液した。水相をＤＣＭで２回再抽出し、相分離カートリッジで相を分離した。有機溶液をブローダウンユニットで蒸発させ、（Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−フルオロピロリジン−３−カルボン酸（化合物ＸＸＩＩ）（１２５ｍｇ、５９％）を得た：MS ES-ve m/z 232 (M-H)-。この酸（１２５ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１０ｍＬ）に溶かし、ＣＤＩ（３６０ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）で処理し、この混合物を室温で１時間撹拌した後、５０℃で０．５時間加熱した。この混合物をブローダウンユニットで濃縮し、残渣をＴＨＦ（６ｍＬ）に溶かし、（Ｒ）−（＋）−α−メチルベンジルアミン（２００ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）で処理し、２０℃で１．５時間撹拌した。この混合物を酢酸エチルで希釈し、２Ｍ  ＨＣｌ溶液で２回、次いで、ブラインで洗浄した。有機溶液を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、減圧下で蒸発させ、灰色の固体を得た（２９０ｍｇ）。この残渣をＭｅＯＨ−ＤＭＳＯ（１：１；３ｍＬ）に溶かし、周囲温度で、３０〜８５％（アンモニア水溶液でｐＨ１０に調整した水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム−アセトニトリル）の勾配で溶出し、３０分流動し、２５４ｎｍで検出し、ＲＴ＝１７．４分のピークで回収するＸＳＥＬＥＣＴ  ＣＳＨ  Ｃ１８カラム（１５０ｍｍ×３０ｍｍ  ｉ．ｄ．充填径５μｍ）でのＭＤＡＰにより精製したES+ve m/z 337(M+H)+。この画分を４５℃、窒素下、ブローダウンユニットで濃縮し、残った懸濁液をＥｔＯＡｃで抽出した。有機溶液を２Ｍ  ＨＣｌで２回、次いで、ブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、減圧下で蒸発させ、黄色ガムを得た（３５ｍｇ）。このガムを、周囲温度で、アンモニア水溶液でｐＨ１０に調整した水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム−アセトニトリル）の勾配で溶出し、２５分流動し、２５４ｎｍで検出し、最初の画分（ＲＴ＝１０分）を回収するＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８カラム（１００ｍｍ×１９ｍｍ  ｉ．ｄ．充填径５μｍ）でのＭＤＡＰにより再精製した。溶媒をブローダウンユニットにて窒素下、４５℃で除去し、標題化合物（１６ｍｇ、５％）を無色のガムとして得た：LCMS (システムC) RT=1.16分, ES+ve m/z 337 (M+H)+, 354 (M+NH4)+;分析的キラルＨＰＬＣ  １０％ＥｔＯＨ−ヘプタンで溶出し、流速＝１ｍＬ／分、２１５ｎｍで検出するＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤカラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）でＲＴ＝７．５８分、９７．７％；［α］Ｄ２０＋６３（ＭｅＯＨ中ｃ＝１．１５）。１Ｈ  ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）ならびに旋光度およびキラルＨＰＬＣ  ＲＴは総て、３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（化合物ＸＩＸ）のものと一致する。
【０２３２】
（＋）−（Ｓ）−４−（３−モルホリノフェニル）ジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（化合物ＸＸＩＩＩ）への分解による実施例１のベンジル不斉中心の絶対立体配置の決定
室温で、ＤＣＭ（８ｍＬ）中、（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸（実施例１）（１００ｍｇ、０．２０１ｍｍｏｌ）の溶液をヨードメタン（０．１９５ｍＬ、３．１３ｍｍｏｌ）で処理し、１８時間撹拌した。この反応物を真空濃縮した（過剰なヨードメタンを除去するため）。残渣をＤＣＭ（５ｍＬ）中に再溶解させ、炭酸カリウム（１２２ｍｇ、０．８８４ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物をマイクロ波反応器内、１２０℃で１時間加熱した。溶液を濾過し、真空濃縮した。残った油状物をシクロヘキサン中０〜１００％ＴＢＭＥの勾配で溶出するシリカ（１０ｇ）でのカラムクロマトグラフィーにより精製した。関連画分を真空濃縮し、（Ｓ）−４−（３−モルホリノフェニル）ジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（化合物ＸＸＩＩＩ）（３２ｍｇ、６４％）を白色固体として得た：LCMS (システムC) RT=0.82分, 100%, ES+ve m/z 247 (M+H)+; 1H NMR (400MHz, CDCl3) 7.32-7.26 (m, 1H), 6.89-6.84 (m, 1H), 6.79-6.73 (m, 2H), 4.67 (dd, J=9, 8 Hz, 1H), 4.30 (dd, J=9.06, 7.5 Hz, 1H), 3.92-3.85 (m, 4H), 3.76 (quin, J=8.31 Hz, 1H), 3.21-3.17 (m, 4H), 2.93 (dd, J=17.5, 8.7 Hz, 1H), 2.93 (dd, J=17.5, 8.7 Hz, 1H), 2.70 (dd, J =17.5, 8.7 Hz, 1H); [a]D22 = +37.1 (c = 1.40 in CHCl3)；キラルＨＰＬＣ  ２０％イソプロパノール−ヘプタンで溶出し、流速１ｍＬ／分、２１５ｎｍで検出するＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＤカラム（２５ｃｍ×４．６ｍｍ）でＲＴ＝２５．４分。化合物ＸＸＩＩＩの一部を緩慢な結晶化によりクロロホルムから再結晶化させ、Ｘ線回折試験に好適な結晶を得た。
【０２３３】
化合物（ＸＸＩＩＩ）と比較するための真正な（Ｒ）−４−（３−モルホリノフェニル）ジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（化合物ＸＸＩＶ）の合成
１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）中、テトラフルオロホウ酸ビス（ノルボルナジエン）ロジウム（Ｉ）（Ａｌｄｒｉｃｈから入手可能）（１８．７０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）および（３−モルホリノフェニル）ボロン酸（１０３５ｍｇ、５．００ｍｍｏｌ）の溶液をフラン−２（５Ｈ）−オン（０．１４２ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ溶液（３．８Ｍ、１．０５３ｍＬ、４．００ｍｍｏｌ）で処理した。得られた溶液をマイクロ波反応器にて１時間１００℃に加熱した。この反応物を放冷し、真空濃縮し、褐色油状物を得た。残渣を４５分でシクロヘキサン中０〜５０％ＥｔＯＡｃの勾配で溶出するクロマトグラフィー（５０ｇ  ＫＰＮＨカートリッジ）により精製した。関連画分を真空濃縮し、（Ｒ）−４−（３−モルホリノフェニル）ジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（化合物ＸＸＩＶ）（１３２ｍｇ、２７％）を白色固体として得た：LCMS (システムC) RT= 0.82分, 100%, ES+ve m/z 248 (M+H)+; [a]D22 = -28.3 (CHCl3中c = 1.70); キラルＨＰＬＣ  ２０％イソプロパノール−ヘプタンで溶出し、流速１ｍＬ／分、２１５ｎｍで検出するＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＤカラム（２５ｃｍ×４．６ｍｍ）でＲＴ＝２３．４分、９４％、ＲＴ＝２５．４分  ６％。
【図１】
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【図２】
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