(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＩＩ）の化合物、
【化１】
0006774943.tif 000056
（ＩＩＩ）
（式中、ＷはＭｅ、−ＣＨＯ、または−ＣＨ２ＯＨであり、かつＶはＨまたはＯＨである）。
【請求項２】
請求項１に記載の前記化合物の極小サポニンアナログの合成における中間体としての使用。
【請求項３】
請求項１に記載の前記化合物を調製するためのプロセスであって：
ａ）式（１００）の化合物を保護基と反応させて式（１０１）の化合物を形成するステップ（式中ＷはＭｅ、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨ、またはＣＨ２ＯＲｐであり；ＲｐはＨまたは位置選択性保護基であり；ＶはＨまたはＯＲｐであり、またＴＥＳはトリエチルシリル保護基である）；
【化２】
0006774943.tif 000057
ｂ）前記式（１０１）の化合物を式（１０２）の化合物と反応させて式（１０３）の化合物を形成するステップ（式中Ｂｎはベンジル保護基である）；
【化３】
0006774943.tif 000058
ｃ）前記式（１０３）の化合物を還元剤と反応させて式（１０４）の化合物を形成するステップ；
【化４】
0006774943.tif 000059
ｄ）活性化剤の存在下で前記式（１０４）の化合物を式（１０５）の化合物とカップリングさせて式（１０６）の化合物を形成するステップ（式中Ｂｏｃはｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル保護基である）；
【化５】
0006774943.tif 000060
ｅ）前記式（１０６）の化合物を脱保護して前記式（ＩＩＩ）の化合物を形成するステップ；を含む前記プロセス。
【請求項４】
以下の式の化合物、
【化６】
0006774943.tif 000061
（式中、Ｒ１及びＲ２は上記表中のサポニン１６、１８〜２２のいずれか一つに示した置換基の組合せである）。
【請求項５】
以下の式で示される、請求項４に記載の化合物、
【化７】
0006774943.tif 000062
（式中、Ｒ１は−ＣＨＯ、および、Ｒ２は−ＯＨである）。
【請求項６】
以下の式で示される、請求項４に記載の化合物、
【化８】
0006774943.tif 000063
（式中、Ｒ１は−ＣＨ２ＯＨ、および、Ｒ２は−ＯＨである）。
【請求項７】
以下の式で示される、請求項４に記載の化合物、
【化９】
0006774943.tif 000064
（式中、Ｒ１は−Ｍｅ、および、Ｒ２は−ＯＨである）。
【請求項８】
以下の式で示される、請求項４に記載の化合物、
【化１０】
0006774943.tif 000065
（式中、Ｒ１は−ＣＨＯ、および、Ｒ２は−Ｈである）。
【請求項９】
以下の式で示される、請求項４に記載の化合物、
【化１１】
0006774943.tif 000066
（式中、Ｒ１は−ＣＨ２ＯＨ、および、Ｒ２は−Ｈである）。
【請求項１０】
以下の式で示される、請求項４に記載の化合物、
【化１２】
0006774943.tif 000067
（式中、Ｒ１は−Ｍｅ、および、Ｒ２は−Ｈである）。
【請求項１１】
薬剤組成物であって：
請求項４〜１０のうちいずれか１つに記載の前記化合物または医薬として許容されるその塩；および
免疫学的に有効な量の抗原を含む前記薬剤組成物。
【請求項１２】
ヒト以外の被験体を免疫するための方法であって：
前記被験体に請求項１１に記載の前記薬剤組成物を投与することを含む前記方法。
【請求項１３】
薬剤組成物であって：
請求項４〜１０のうちいずれか１つに記載の前記化合物または医薬として許容されるその塩；および
有効量の細胞障害性薬剤を含む前記薬剤組成物。
【請求項１４】
ヒト以外の被験体における細胞障害性薬剤の効果を促進するための方法であって：前記被験体に請求項１３に記載の前記薬剤組成物を投与することを含む前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連する出願との相互参照）
本出願は、２０１４年５月３０日に出願された仮米国特許出願第６２／００５，３０２号の優先権を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本開示は、全般的にトリテルペングリコシドサポニン由来のアジュバント、その合成、およびその中間体に関する。本発明はまた、本発明の化合物を含む薬剤組成物、および感染症および癌の治療において前記化合物または組成物を使用する方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
抗癌および抗菌ワクチンの臨床的な成功は、毒性の減弱を伴う新規の強力なアジュバントの同定およびこれに対するアクセスに決定的に依存する。サブユニット抗原で構成される分子ワクチンは、病原体全体よりも抗原性が低く、単独では十分な免疫応答を誘導せず、免疫原性を高めるための免疫アジュバントの配合を必要とすることが多い。残念ながら、臨床使用のための十分強力で無毒性のアジュバントは少ない。こうした状況において、Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ（ＱＳ）の樹皮のエキスからの特定の分画が、免疫療法における抜きん出て強力なアジュバントであることが立証されている。Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａの木に由来するサポニン天然産物ＱＳ−２１は、現在研究されている最も有望なアジュバントの１つである（図１ａ）。直鎖四糖ドメインの末端の糖が異なる、２つの異性体成分ＱＳ−２１−アピオース（１ａ）およびＱＳ−２１キシロース（１ｂ）より構成される。ＱＳ−２１は、最近の臨床試験の多くで第一選択的免疫増強剤として登場し、またいくつかの癌および感染症および神経変性疾患（マラリア、ＨＩＶ、肝炎、結核、アルツハイマー病）に対するＱＳ−２１含有ワクチンが開発中である。その有望性にもかかわらず、ＱＳ−２１はその天然採取源からのアクセスが限られる、毒性副作用、およびアシル鎖の自然加水分解による化学的不安定性といったいくつかの不利な点を被る。さらに、その分子的作用機序の理解が乏しいために、有効性が改善され毒性が低下したアナログの合理的な開発が妨げられる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本出願の一態様は、式（Ｉ）
【化１】
0006774943.tif 000002
（Ｉ）
の構造を有する極小（最小）サポニンアナログ、または医薬として許容されるその塩に関する（式中、
【化２】
0006774943.tif 000003
は単結合または二重結合であり；ＷはＣ（Ｏ）Ｒ、ＣＨ２ＯＲまたはＣＨ２Ｒであり、ＲはＨであるか、またはアシル、アリールアルキル、アリール、ヘテロアリール、脂肪族、ヘテロ脂肪族、脂環式、およびヘテロシクリル基から選択される任意選択で置換された基であり；ＶはＨまたはＯＨであり；ＹはＯであり；Ｚは直鎖オリゴ糖またはアミン、アミド、アシル、アリールアルキル、アリール、ヘテロアリール、脂肪族、ヘテロ脂肪族、脂環式、およびヘテロシクリル基からなる群から選択される任意選択で置換された基である）。
【０００５】
本出願の他の態様は、式（ＩＩ）
【化３】
0006774943.tif 000004
（ＩＩ）
の構造を有する極小サポニンアナログ、または医薬として許容されるその塩に関する（式中、ＷはＣ（Ｏ）Ｒ、ＣＨ２ＯＲまたはＣＨ２Ｒであり、ＲはＨ、またはアシル、アリールアルキル、アリール、ヘテロアリール、脂肪族、ヘテロ脂肪族、脂環式およびヘテロシクリル基から選択される任意選択で置換された基であり、ＶはＨまたはＯＨであり；ＸはＣＨ２Ｒｍ、Ｃ（Ｏ）Ｒｍ、ＣＨ２ＯＲｍ、ＣＨ２Ｒｍ、ＯＲｍ、またはＮＨＲｍであり、ＲｍはＨ、またはアシル、アリールアルキル、アリール、ヘテロアリール、脂肪族、ヘテロ脂肪族、脂環式およびヘテロシクリル基から選択される任意選択で置換された基であり、かつＲｎの各存在は独立に水素、単糖、二糖または三糖である）。
【０００６】
本出願の他の態様は、本出願の極小サポニンアナログ、または医薬として許容されるその塩；および免疫学的に有効な量の抗原を含む薬剤組成物に関する。
【０００７】
本出願の他の態様は、被験体に極小サポニンアナログおよび抗原を含む薬剤組成物を投与することを含む、被験体を免疫するための方法に関する。
【０００８】
本出願の他の態様は、被験体を抗原で免疫するための方法であって：有効な量の抗原；および有効な量の式（Ｉ）の化合物または医薬として許容されるその塩を含むワクチンを被験体に投与することを含む方法に関する。ある実施形態においては、ワクチンは経口投与される。他の実施形態においては、ワクチンは筋肉内投与される。他の実施形態においては、ワクチンは皮下投与される。ある種の実施形態においては、投与される式（Ｉ）の化合物の量は１０〜１０００μｇ、５００〜１０００μｇ、１００〜５００μｇ、５０〜２５０μｇ、５０〜５００μｇまたは２５０〜５００μｇである。
【０００９】
本出願の他の態様は、本出願の極小サポニンアナログ、または医薬として許容されるその塩、および有効量の細胞障害性薬剤を含む薬剤組成物に関する。
【００１０】
本出願の他の態様は、被験体における細胞障害性薬剤の効果を促進するための方法であって、本出願の極小サポニンアナログおよび細胞障害性薬剤を含む薬剤組成物を被験体に投与することを含む方法に関する。
【００１１】
本出願の他の態様は、被験体における細胞障害性薬剤の効果を促進するための方法であって：細胞障害性薬剤；および有効な量の式（Ｉ）の化合物または医薬として許容されるその塩を含む薬剤組成物を被験体に投与することを含む方法に関する。
【００１２】
本出願の他の態様は、本出願の極小サポニンアナログを含むキットに関する。ある実施形態では、キットは処方情報を含む。ある実施形態では、そのようなキットは発明アジュバント化合物および他の免疫療法剤の組み合わせを含む。薬剤は個別に包装されることも、または一括して包装されることもある。キットは、薬物療法を処方するための指示を任意選択として含む。ある種の実施形態では、キットは各薬剤の複数の用量を含む。キットは、被験体を１週間、２週間、３週間、４週間または複数月治療するのに十分な量の各成分を含みうる。いくつかの実施形態においては、キットは１サイクルの免疫療法を含む。いくつかの実施形態においては、キットは被験体を抗原に対して長期間免疫するのに十分な量の薬剤組成物を含む。
【００１３】
本出願の他の態様は、式（ＩＩＩ）
【化４】
0006774943.tif 000005
（ＩＩＩ）
の化合物に関する、（式中ＷはＭｅ、−ＣＨＯ、または−ＣＨ２ＯＨであり、かつＶはＨまたはＯＨである）。
【００１４】
本出願の他の態様は、式（ＩＩＩ）の化合物を調製するためのプロセスに関する。
【００１５】
付属の図面は、本開示の１つまたはそれ以上の実施形態を例示し、また、書かれた記述と共に、本開示の典型的な実施形態の原理を説明する役割を果たす。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
付属の図面は、本開示の１つまたはそれ以上の実施形態を例示し、また、書かれた記述と共に、本開示の典型的な実施形態の原理を説明する役割を果たす。
【図１−１】前臨床マウス接種モデルで強力なアジュバント活性および低い毒性を示すヨウ化アリールサポニン６を図示する。（パネルａ）ＱＳ−２１の構造およびその４つの主要構造ドメイン。（パネルｂ）ヨウ化アリールサポニン６（ＳＱＳ−０−０−５−１８）および［１３１Ｉ］−６の合成：（ｉ）ＦＩＴＣ、Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、２１℃、２ｈ、７５％；（ｉｉ）４、Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、２１℃、１ｈ、５２％；（ｉｉｉ）５、Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、２１℃、１ｈ、７５％；（ｉｖ）［１３１Ｉ］−ＮａＩ、クロラミン−Ｔ、ＭｅＯＨ、２１℃、１ｍｉｎ、＞５０％。
【図１−２】（パネルｃ）アジュバント減弱ネガティブコントロールサポニン８の構造（ＳＱＳ−０−３−７−１８）および［１３１Ｉ］８の合成：（ｖ）［１３１Ｉ］−ＮａＩ、クロラミン−Ｔ、ＭｅＯＨ、２１℃、１分、＞５０％。
【図１−３】（（パネルｄ）抗−ＫＬＨ力価（ＩｇＧ）、（パネルｅ）抗−ＭＵＣ１力価（ＩｇＧ）、および（パネルｆ）抗−ＯＶＡ力価（ＩｇＧ）について、天然および合成ＱＳ−２１（２０ｇ用量で比較）に匹敵する強力なアジュバント活性を示す、３成分ワクチンと併用したヨウ化アリールサポニン６（ＳＱＳ−０−０−５−１８）の生物学的評価；横棒は力価の中央値を示す；非アジュバント対照と比較した統計的有意性：＊＝ｐ≦０．０５，＊＊＝ｐ＜０．０１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１。（パネルｇ）６（ＳＱＳ−０−０−５−１８）の低毒性を示す、体重減少百分率中央値に基づく毒性評価；誤差棒は５匹のマウスの最大値および最小値を示す。
【図１−４】同上。
【図２−１】マウスのリンパ節および注射部位に局在する各種放射ヨウ素化サポニン［１３１Ｉ］−６および蛍光サポニン３を図示する。（パネルａ）ＯＶＡ抗原と併用した活性アジュバント［１３１Ｉ］−６（［１３１Ｉ］−ＳＱＳ−０−０−５−１８）および減弱アジュバント［１３１Ｉ］−８（［１３１Ｉ］−ＳＱＳ−０−３−７−１８）の生体内分布であって、［１３１Ｉ］６は注射部位およびリンパ節に蓄積を示したが［１３１Ｉ］−８は示さない；誤差棒は５匹のマウスの平均値からの標準偏差を示す；分かりやすくするためリンパ節と注射部位についてのみ統計的有意性を図示：＊＝ｐ≦０．０５：肝臓、筋肉、リンパ節、皮膚、甲状腺；＊＊＝ｐ＜０．０１：血液、肺、脾臓、腎臓、骨、注射部位；＊＊＊＝ｐ＜０．００１：心臓。
【図２−２】（パネルｂ）フルオレセイン標識活性アジュバント３（ＳＱＳ−０−０−５−１２）または非標識非活性アジュバント２（ＳＱＳ−０−０−５−１１）およびＡｌｅｘａ−６４７−標識ＯＶＡ（ＯＶＡ−Ａ６４７）による注射部位の画像撮影であって（黄色い矢印はインクの輪を示す）、注射部位への３およびＯＶＡ−Ａ６４７の滞留を示す；マウス２のフルオレセイン画像の緑色三日月形はソフトウェアのゴースト効果によるものである。
【図２−３】（パネルｃ）活性アジュバント３（ＳＱＳ−０−０−５−１２）または非活性アジュバント２（ＳＱＳ−０−０−５−１１）およびＯＶＡ−Ａ６４７を用いた切開リンパ節の画像撮影であって、３によりＯＶＡ−Ａ６４７の蓄積が増加を示したが、２は示さなかった。マウスは左わき腹に注射し、各動物において右側のリンパ節をネガティブコントロールとした。
【図３−１】前臨床マウス接種モデルで、ＱＳ−２１の分枝状三糖ドメイン全体を欠くものの強力なアジュバント活性および低毒性を維持する切断サポニン１６を図示する。（パネルａ）ヨウ化アリールサポニン１６（ＳＱＳ−１−０−５−１８）および［１３１Ｉ］−１６の合成。（ｉ）ＴＥＳＯＴｆ，２，６−ルチジン、ＣＨ２Ｃｌ２、０℃、１時間、８０％；（ｉｉ）１．１２，ＢＦ３・ＯＥｔ２，４Å  Ｍ．Ｓ．、ＣＨ２Ｃｌ２、−３５℃、３０分；２．ＰｈＳｅＨ，Ｅｔ３Ｎ，３８℃、８ｈ、５８％（２ステップ）；（ｉｉｉ）１．ＨＯ２Ｃ（ＣＨ２）５ＮＨＢｏｃ（１４）、ＥｔＯＣＯＣｌ、Ｅｔ３Ｎ、ＴＨＦ、０℃、２．５時間、（酸、前活性化）、その後１３に添加、０℃、１．５時間；２．Ｈ２（５０ｐｓｉ）、Ｐｄ／Ｃ（Ｄｅｇｕｓｓａ）、ＴＨＦ／ＥｔＯＨ（１：１）、２１℃、２４ｈ；３．ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ（４：１）、０℃、２ｈ、６５％（３ステップ）；（ｉｖ）４、Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、２１℃、２時間、６７％；（ｖ）５、Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、２１℃、１．５ｈ、７５％；（ｖｉ）［１３１Ｉ］−ＮａＩ、クロラミン−Ｔ、ＭｅＯＨ、２１℃、１分、５５％。
【図３−２】（パネルｂ）抗−ＫＬＨ力価（ＩｇＧ）、（パネルｃ）抗−ＭＵＣ１力価（ＩｇＧ）、および（パネルｄ）抗−ＯＶＡ力価（ＩｇＧ）について、強力なアジュバント活性を示す、３成分ワクチンと併用した切断サポニン１６の生物学的評価；横棒は力価の中央値を示す；非アジュバント対照と比較した統計的有意性：＊＝ｐ≦０．０５，＊＊＝ｐ＜０．０１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１。（パネルｅ）１６（ＳＱＳ−１−０−５−１８）の低毒性を示す、体重減少百分率中央値に基づく毒性評価；エラーバーは５匹のマウスの最大値および最小値を示す。
【図３−３】同上。
【図４−１】前臨床マウス接種モデルで乏しいアジュバント活性を示す、ＱＳ２１のトリテルペンドメインのＣ４−アルデヒド置換基およびＣ１６−アルコール置換基の双方を欠くオレアノール酸誘導体１８を図示する。（パネルａ）抗−ＫＬＨ力価（ＩｇＧ）、（パネルｂ）抗−ＭＵＣ１力価（ＩｇＧ）、および（パネルｃ）抗−ＯＶＡ力価（ＩｇＧ）について、減弱したアジュバント活性を示す、３成分ワクチンと併用したオレアノール酸誘導体１８（ＳＱＳ−１−７−５−１８）の生物学的評価；横棒は力価の中央値を示す；非アジュバント対照と比較した統計的有意性：＊＝ｐ≦０．０５，＊＊＝ｐ＜０．０１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１。（パネルｄ）１８（ＳＱＳ−１−７−５−１８）の低毒性を示す、体重百分率中央値に基づく毒性評価；誤差棒は５匹のマウスの最大値および最小値を示す。
【図４−２】同上。
【図５−１】前臨床マウス接種モデルで強力なアジュバント活性を示しかつ毒性を示さない、ＱＳ２１のトリテルペンドメインのＣ４−アルデヒド置換基を欠くがＣ１６−アルコール置換基を保持するカウロフィロゲニン誘導体１９およびエキノシスト酸誘導体２０を図示する。（パネルａ）ＱＳ２１のトリテルペンドメインのＣ４−アルデヒド置換基およびＣ１６−アルコールを修飾したサポニンアジュバント１９〜２２の構造。パネルａでは、アシル鎖として６−（４−ヨードベンゾイルアミノ）−ヘキサノイルを有する構造を示している。（パネルｂ）抗−ＫＬＨ力価（ＩｇＧ）、（パネルｃ）抗−ＭＵＣ１力価（ＩｇＧ）、（パネルｄ）抗−ＯＶＡ力価（ＩｇＧ）、（パネルｅ）抗−ＧＤ３力価（ＩｇＭ）、および（パネルｆ）抗ＧＤ３（ＩｇＧ）力価について、Ｃ４−アルデヒド置換基がアジュバント活性に必要とされない一方で（１９、２０）、Ｃ１６−アルコールの除去が活性を減弱化することを示す（２１、２２）、４成分ワクチン（ＭＵＣ１−ＫＬＨ、ＯＶＡ、ＧＤ３  ＫＬＨ）と併用したトリテルペン変異体１９〜２２の生物学的評価；横棒は力価の中央値を示す；非アジュバント対照と比較した統計的有意性：＊＝ｐ≦０．０５，＊＊＝ｐ＜０．０１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１。（パネルｇ）１９〜２２に毒性がないことを示す、体重減少百分率中央値に基づく毒性評価；誤差棒は５匹のマウスの最大値および最小値を示す。
【図５−２】同上。
【図５−３】同上。
【図５−４】同上。
【図５−５】同上。
【図６】マウスにおいてアジュバント活性キラ酸誘導体１６が注射部位およびリンパ節に局在するのに対し、アジュバント減弱オレアノール酸誘導体１８は局在しないことを図示する。ＯＶＡ２０μｇの存在下で、活性アジュバント［１３１Ｉ］−１６（［１３１Ｉ］−ＳＱＳ−０−１−５−１８）および減弱アジュバント［１３１Ｉ］−１８（［１３１Ｉ］−ＳＱＳ−１−７−５−１８）の注射より２４時間後のマウスインビボ生体内分布；；誤差棒は５匹のマウスにおける平均値からの標準偏差を示す；分かりやすくするためリンパ節と注射部位についてのみ統計的有意性を表示：＊＝ｐ≦０．０５：リンパ節、注射部位、皮膚；＊＊＝ｐ＜０．０１：肺、脾臓、胃、筋肉、骨、；＊＊＊＝ｐ＜０．００１：血液、心臓。
【図７−１】前臨床マウス接種モデルで乏しいアジュバント活性を示す、直鎖四糖ドメインを欠くヨウ化アリールサポニン８を図示する。（ａ）ネガティブコントロールサポニン８（ＳＱＳ−０−３−７−１８）の合成：（ｉ）ＳＯＣｌ２、ピリジン、ＣＨ２Ｃｌ２／ＤＭＦ、２１℃、２時間，９１％；（ｉｉ）１．Ｈ２（５０ｐｓｉ），Ｐｄ／Ｃ（Ｄｅｇｕｓｓａ）、ＴＨＦ／ＥｔＯＨ（１：１）、２１℃、２４時間、２．ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ（４：１）、０℃、３．３時間、ＲＰ−ＨＰＬＣ、５０％（２ステップ）；（ｉｉｉ）４、Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、２１℃、３時間、ＲＰ−ＨＰＬＣ、６８％；（ｉｖ）５、Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、２１℃、２．５時間、ＲＰ−ＨＰＬＣ、５３％。
【図７−２】（ｂ）ＯＶＡ抗原によるヨウ化アリールサポニン８の生物学的評価。本出願で論じる一般的な方法に従い、マウスにＯＶＡ（２０μｇ）を接種した。力価の中央値は赤い横棒で示した。ＳＱＳ２１と比較した統計的有意性を、対応のない両側Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−検定でＣＩ＝９５％：＊＝０．０１≦ｐ≦０．０５（有意）として評価した。
【図８−１】マウスのリンパ節および注射部位に局在しかつ滞留する放射ヨウ素化サポニン［１３１Ｉ］−６を図示する。ＯＶＡ抗原と併用した（ａ）放射ヨウ素化サポニン［１３１Ｉ］−６および（ｂ）非放射サポニン［１３１Ｉ］−８の投与後２４、７２および９６時間の長時間生体内分布。３つの測定点全てにおいて、リンパ節および注射部位から［１３１Ｉ］−６による有意に高い放射能が回収された一方で、他の臓器においては開始時に何倍も異なる放射能が認められ（筋肉、骨、皮膚）、その後の測定点で急速に低下し；全ての放射ヨウ素標識物質については、トレーサーの脱ヨウ素化により、後半の測定時で甲状腺からの回収量の増加が共通して認められる。各測定時点の各臓器における［１３１Ｉ］−８と比較した［１３１Ｉ］−６の統計的有意性を、対応のない両側Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−検定でＣＩ＝９５％として評価した。２４時間後：＊＝０．０１≦ｐ≦０．０５（有意）：肝臓、筋肉、リンパ節、皮膚、甲状腺；＊＊＝０．００１＜ｐ＜０．０１（非常に有意）：血液、肺、脾臓、腎臓、骨、注射部位；＊＊＊＝ｐ＜０．００１（極めて有意）：心臓。７２時間後：＊＝０．０１≦ｐ≦０．０５（有意）：脾臓、胸腺、リンパ節、皮膚、骨；＊＊＝０．００１＜ｐ＜０．０１（非常に有意）：心臓、肺、肝臓、腎臓、卵巣、甲状腺；＊＊＊＝ｐ＜０．００１（極めて有意）：血液、注射部位。９６時間後：＊＝０．０１≦ｐ≦０．０５（有意）：骨、卵巣、胸腺、皮膚、甲状腺；＊＊＝０．００１＜ｐ＜０．０１（非常に有意）：肺、脾臓、胃、腎臓、リンパ節、注射部位；＊＊＊＝ｐ＜０．００１（極めて有意）：血液、心臓、肝臓。
【図８−２】同上。
【図９−１】放射ヨウ素化サポニン［１３１Ｉ］−６および［１３１Ｉ］−８の生体内分布がＯＶＡ抗原の不在によって撹乱されないことを図示する。（ａ）活性アジュバント［１３１Ｉ］−６（［１３１Ｉ］−ＳＱＳ−０−０−５−１８）および（ｂ）減弱アジュバント［１３１Ｉ］−８（［１３１Ｉ］−ＳＱＳ−０−３−７−１８）の生体内分布。（ｃ）リンパ節および（ｄ）注射部位から回収された放射能の比較であって、これらでは３つの測定点全てにわたって［１３１Ｉ］−６による放射能の回収が有意に高い一方で、他の臓器においては開始時に何倍も異なる放射能が認められ（筋肉、骨、皮膚）、後半の測定点で減少した。各測定時点の各臓器における［１３１Ｉ］−８と比較した［１３１Ｉ］−６の統計的有意性を、対応のない両側Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−検定を用いてＣＩ＝９５％として評価し、分かりやすくするために（ａ）および（ｂ）の部分は図に示さなかった。２４時間後：＊＝０．０１≦ｐ≦０．０５（有意）：筋肉、骨、卵巣、注射部位、皮膚；＊＊＝０．００１＜ｐ＜０．０１（非常に有意）：肺、肝臓、脾臓、腎臓、胸腺；＊＊＊＝ｐ＜０．００１（極めて有意）：血液、心臓。７２時間後：＊＝０．０１≦ｐ≦０．０５（有意）：脾臓、胸腺、リンパ節、注射部位；＊＊＝０．００１＜ｐ＜０．０１（非常に有意）：血液、肺、肝臓、筋肉、骨、甲状腺；＊＊＊＝ｐ＜０．００１（極めて有意）：心臓、腎臓、卵巣、皮膚。９６時間後：＊＝０．０１≦ｐ≦０．０５（有意）：心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓、胸腺、リンパ節、皮膚；＊＊＝０．００１＜ｐ＜０．０１（非常に有意）：血液、注射部位。
【図９−２】同上。
【図９−３】同上。
【図１０−１】放射ヨウ素化卵白アルブミン（［１３１Ｉ］−ＯＶＡ）の生体内分布が急速な脱ヨウ素化を示すことを図示する。活性アジュバント６（ＳＱＳ−０−０−５−１８）の（ａ）存在下（２０μｇ）および（ｂ）非存在下での投与後２４、７２、および９６時間後の生体内分布。各測定時点の各臓器における６の非存在下と比較した６の存在下の接種の統計的有意性を、対応のない両側Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−検定を用いてＣＩ＝９５％として評価し、分かりやすくするために図に示さなかった。２４時間後：＊＝０．０１≦ｐ≦０．０５（有意）：心臓、皮膚；＊＊＝０．００１＜ｐ＜０．０１（非常に有意）：胸腺。７２時間後：＊＝０．０１≦ｐ≦０．０５（有意）：胃、リンパ節、皮膚。９６時間後：＊＝０．０１≦ｐ≦０．０５（有意）：血液、肺、胃、腎臓、骨；＊＊＝０．００１＜ｐ＜０．０１（非常に有意）：脾臓、卵巣、胸腺。
【図１０−２】同上。
【図１１】フルオレセイン標識活性アジュバント３が注射部位に滞留することを図示する。蛍光サポニン３（ＳＱＳ−０−０−５−１２）およびアミン含有非活性アジュバント２（ＳＱＳ−０−０−５−１１）を用いた、本出願図２ｂとの比較を目的としたマウス全身画像。
【図１２】オレアノール酸１８（［ＳＱＳ−１−７−５−１８］）およびＳ９に由来するヨウ化アリールおよびアリールスズ変異体の合成を図示する。（ｉ）１．ＴＥＳＯＴｆ、２，６−ルチジン、ＣＨ２Ｃｌ２、０℃、１時間；２．１２、ＢＦ３・ＯＥｔ２、４Å  Ｍ．Ｓ．、ＣＨ２Ｃｌ２、−５０℃、２０分、２１℃、２分［２温度サイクル］、５４％（２ステップ）、（ｉｉ）１．ＰｈＳｅＨ、Ｅｔ３Ｎ、３８℃、８時間；２．ＨＯ２Ｃ（ＣＨ２）５ＮＨＢｏｃ（１４）、ＥｔＯＣＯＣｌ、Ｅｔ３Ｎ、ＴＨＦ、０℃、２．５時間、［酸前活性化］、その後０℃、１．５時間、７７％（２ステップ）；（ｉｉｉ）１．Ｈ２（５０ｐｓｉ）、Ｐｄ／Ｃ（Ｄｅｇｕｓｓａ）、ＴＨＦ／ＥｔＯＨ（１：１）、２１℃、２４時間；２．ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ（４：１）、０℃、２時間、ＲＰ−ＨＰＬＣ、４４％（２ステップ）；（ｉｖ）４，Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、２１℃、２時間、ＲＰ−ＨＰＬＣ；６３％；（ｖ）５、Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、２１℃、１．５時間、ＲＰ−ＨＰＬＣ、６３％；（ｖｉ）［１３１Ｉ］−ＮａＩ、クロラミン−Ｔ、ＭｅＯＨ、２１℃、１分、ＲＰ−ＨＰＬＣ、５５％。
【図１３】ヨウ化アリールサポニンアジュバント１９（ＳＱＳ−１−１１−５−１８）の合成を図示する。（ｉ）ＮａＢＨ４、ＭｅＯＨ、２１℃、３時間、＞９９％；（ｉｉ）１．Ｈ２（１時間）、Ｐｄ／Ｃ（Ｄｅｇｕｓｓａ）、ＥｔＯＨ／ＴＨＦ（１：１）、２１℃、１２時間；２．ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ（３：１）、０℃、１．２５時間、ＲＰ−ＨＰＬＣ、７０％（２ステップ）；（ｉｉｉ）４、Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、２１℃、３時間、ＲＰ−ＨＰＬＣ、６５％。
【図１４】保護トリテルペン構築ブロックの合成を例示する。（ｉ）ＴＥＳＯＴｆ、２，６−ルチジン、ＣＨ２Ｃｌ２、０℃、１時間、Ｓ１４：９４％；Ｓ１７：６５％；Ｓ１８：８１％；（ｉｉ）２，２，６，６−テトラメチルピペリジン１−オキシル（ＴＥＭＰＯ）、Ｎ−クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）、塩化テトラブチルアンモニウム水和物（ＴＢＡＣｌ・Ｈ２Ｏ）、ＣＨ２Ｃｌ２／ＮａＨＣＯ３  ０．５  Ｍ／Ｋ２ＣＯ３  ０．０５Ｍ、２１℃２時間、７２％。
【図１５】分枝状三糖ドメインを欠く追加的ヨウ化アリール変異体２０（ＳＱＳ−１−８−５−１８）、２１（ＳＱＳ−１−９−５−１８）および２２（ＳＱＳ−１−１０−５−１８）の合成を図示する。（ｉ）Ｓ１４またはＳ１７またはＳ１８、ＢＦ３・ＯＥｔ２、４Å  Ｍ．Ｓ．、ＣＨ２Ｃｌ２、−３５℃、３０分；Ｓ１９：８０％；Ｓ２０：７０％；Ｓ２１：７１％；（ｉｉ）１．ＰｈＳｅＨ、Ｅｔ３Ｎ、３８℃、８時間；２．ＨＯ２Ｃ（ＣＨ２）５ＮＨＢｏｃ（１４）、ＥｔＯＣＯＣｌ、Ｅｔ３Ｎ、ＴＨＦ、０℃、２．５時間［酸前活性化］、その後、０℃、１．５時間；Ｓ２２：７３％（２ステップ）；Ｓ２３：６２％（２ステップ）；Ｓ２４：７４％；（ｉｉｉ）１．Ｈ２（１気圧）、Ｐｄ／Ｃ（Ｄｅｇｕｓｓａ）、ＴＨＦ／ＥｔＯＨ（１：１）、２１℃、１２時間；２．ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ（３：１）、０℃、１．２５時間、ＲＰ−ＨＰＬＣ、Ｓ２５：５３％（２ステップ）；Ｓ２６：８２％（２ステップ）；Ｓ２７：６６％；（ｉｖ）４，Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、２１℃、３時間、ＲＰ−ＨＰＬＣ；２０：８０％；２１：５６％；２２：５７％。
【図１６−１】前臨床マウス接種モードにおけるトリテルペン変異体１９〜２２の評価のための完全なデータを図示する。（ａ）抗−ＫＬＨ（ＩｇＧ）、（ｂ）抗ＭＵＣ１（ＩｇＧ）、（ｃ）  抗−ＯＶＡ（ＩｇＧ）、（ｄ）抗−ＧＤ３（ＩｇＭ）および（ｅ）抗−ＧＤ３（ＩｇＧ）力価についての４成分ワクチン（ＭＵＣ１−ＫＬＨ、ＯＶＡ、ＧＤ３  ＫＬＨ）と併用した２０μｇおよび５０μｇ用量における１９（ＳＱＳ−１−１１−５−１８）、２０（ＳＱＳ−１−８−５−１８）、２１（ＳＱＳ−１−９−５−１８）、および２２（ＳＱＳ−１−１０−５−１８）の生物学的評価。力価の中央値は赤い横棒で示した。統計的有意性を非アジュバント対照と比較し、対応のない両側Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−検定を用いて、ＣＩ＝９９％として評価した：＊＝０．０１≦ｐ≦０．０５（有意）、＊＊＝０．００１＜ｐ＜０．０１（非常に優位）、＊＊＊＝ｐ＜０．００１（極めて有意）を用いて評価した。（ｅ）初回ワクチン注射より１週間にわたる体重減少百分率中央値に基づく１９〜２２の毒性評価。
【図１６−２】同上。
【図１６−３】同上。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下の発明を実施するための形態は、任意の当業者が本方法およびキットを用いることを可能とするために提示する。説明を目的として、特定の命名を記載して本方法およびキットの完全な理解を提供する。しかし、これらの具体的な詳細は本方法およびキットの実践に必要でないことが当業者に明らかとなる。具体的な用途の記述は、代表的な実施例としてのみ提供される。本方法およびキットは提示した実施形態に限定することを意図していないものの、本出願に開示される原理および特徴と一致する可能な限り最も広い範囲で一致するものである。
【００１８】
本出願で用いる見出しは整理のみを目的としており、実施形態または請求項の範囲を制限するために用いることを意図していない。本出願を通じて用いられる文言「でありうる」は、義務的な意味（すなわち義務を意味する）ではなく許容的な意味において使用される（すなわちその可能性があることを意味する）。本出願における用語「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は数量の制限を意味するのではなく、むしろ言及された項目が少なくとも１つ存在することを意味する。
【００１９】
定義
本明細書では、別段の指示がない限り、以下の定義を適用するものとする。
【００２０】
用語「脂肪族」または「脂肪族基」は、本明細書では、完全に飽和している、または１つまたは複数の不飽和の単位を含有する、直鎖（すなわち枝分かれしていない）もしくは分枝状の置換または非置換の炭化水素鎖；あるいは、完全に飽和している、または１つまたは複数の不飽和の単位を含有し、他の分子に対する単一の付着点を有するが、芳香族（「炭素環式化合物」、「脂環式」、または「シクロアルキル」とも称される）ではない単環式炭化水素もしくは二環式の炭化水素；を意味する。別段の指定がない限り、脂肪族基は、１〜１２の脂肪族炭素原子を含有する。ある実施形態では、脂肪族基は、１〜６の脂肪族炭素原子を含有する。ある実施形態では、脂肪族基は、１〜５の脂肪族炭素原子を含有する。他の実施形態では、脂肪族基は、１〜４の脂肪族炭素原子を含有する。さらに他の実施形態では、脂肪族基は、１〜３の脂肪族炭素原子を含有し、さらに他の実施形態では、脂肪族基は、１〜２の脂肪族炭素原子を含有する。ある実施形態では、「脂環式」（または「炭素環式化合物」または「シクロアルキル」）は、完全に飽和しているまたは１つまたは複数の不飽和の単位を含有し、他の分子に対する単一の付着点を有するが、芳香族ではない単環式のＣ３〜Ｃ６炭化水素を指す。適切な脂肪族基としては、それだけには限らないが、直鎖または分枝状の、置換または非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル基、および、例えば（シクロアルキル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキル、または（シクロアルキル）アルケニルなどのそれらのハイブリッドが挙げられる。
【００２１】
用語「低級アルキル」は、Ｃ１〜４の直鎖または分枝状アルキル基を指す。例示的な低級アルキル基は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、およびｔｅｒｔ−ブチルである。
【００２２】
用語「低級ハロアルキル」は、１種または複数のハロゲン原子で置換されたＣ１〜４の直鎖または分枝状アルキル基を指す。
【００２３】
用語「ヘテロ原子」は、１つまたは複数の酸素、硫黄、窒素、リン、またはケイ素（窒素、硫黄、リン、もしくはケイ素のいずれの酸化型；いずれの塩基性窒素の４級化形、または；例えば、Ｎ（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロリルで見られる通り）、ＮＨ（ピロリジニルで見られる通り）、もしくはＮＲ＋（Ｎ置換型ピロリジニルで見られる通り）などの複素環の置換可能な窒素；も含めて）を意味する。
【００２４】
用語「不飽和の」は、本明細書では、ある部分が、１つまたは複数の不飽和の単位を有することを意味する。
【００２５】
本明細書では、用語「二価のＣ１〜１２（またはＣ１〜２６、Ｃ１〜１６、Ｃ１〜８）または飽和または不飽和の直鎖または分枝状炭化水素鎖」は、本明細書で定義する通りの直鎖または分枝状である二価のアルキレン、アルケニレン、およびアルキニレン鎖を指す。
【００２６】
用語「アルキレン」は、二価のアルキル基を指す。「アルキレン鎖」は、ポリメチレン基、すなわち−（ＣＨ２）ｎ−（式中、ｎは正整数、好ましくは１から６、１から４、１から３、１から２、または２から３である）である。置換されたアルキレン鎖は、１種または複数のメチレン水素原子が置換基で置き換えられたポリメチレン基である。適切な置換基としては、置換された脂肪族基について以下で述べるものが挙げられる。
【００２７】
用語「アルケニレン」は、二価のアルケニル基を指す。置換されたアルケニレン鎖は、１種または複数の水素原子が置換基で置き換えられた、少なくとも１つの二重結合を含有するポリメチレン基である。適切な置換基としては、置換された脂肪族基について以下で述べるものが挙げられる。
【００２８】
用語「アルキニレン」は、二価のアルキニル基を指す。置換されたアルキニレン鎖は、１種または複数の水素原子が置換基で置き換えられた、少なくとも１つの二重結合を含有するポリメチレン基である。適切な置換基としては、置換された脂肪族基について以下で述べるものが挙げられる。
【００２９】
用語「アシル」は、単独で、またはより大きな部分の一部として使用され、カルボン酸からヒドロキシ基を除去することによって形成される基を指す。
【００３０】
用語「ハロゲン」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを意味する。
【００３１】
用語「アラルキル」および「アリールアルキル」は、同義的に使用され、水素原子がアリール基で置き換えられたアルキル基を指す。こうした基としては、それだけには限らないが、ベンジル、シンナミル、およびジヒドロシンナミルが挙げられる。
【００３２】
用語「アリール」は、単独で、あるいは、「アラルキル」、「アラルコキシ」、または「アリールオキシアルキル」で見られる通り、より大きな部分の一部として使用され、合計５から１４個の環メンバーを有する単環式または二環式の環構造（ここでは、系中の少なくとも１つの環は、芳香族であり、かつ系中の各環は、３から７個の環メンバーを含有する）を指す。用語「アリール」は、用語「アリール環」と同義的に使用することができる。
【００３３】
本発明のある種の実施形態では、「アリール」は、それだけには限らないが、フェニル、ビフェニル、ナフチル、アントラシルなどを含めた芳香族環構造（これは、１種または複数の置換基を有し得る）を指す。本明細書で使用される用語「アリール」の範囲内には、芳香環が、例えばインダニル、フタルイミジル、ナフチミジル（ｎａｐｈｔｈｉｍｉｄｙｌ）、フェナントリジニル、またはテトラヒドロナフチルなどの１種または複数の非芳香族環に縮合された基も含まれる。
【００３４】
用語「ヘテロアリール」および「ヘテロア−（ｈｅｔｅｒｏａｒ−）」は、単独で、あるいは、例えば「ヘテロアラルキル」または「ヘテロアラルコキシ」などの、より大きな部分の一部として使用され、５から１０個の環原子、好ましくは５、６、または９個の環原子を有する；環配列中に共有される６、１０、または１４個のπ電子を有する；また、炭素原子に加えて、１から５個のヘテロ原子を有する基を指す。用語「ヘテロ原子」は、窒素、酸素、または硫黄を指し、これには、窒素または硫黄のいずれの酸化形、および塩基性窒素のいずれの４級化形も含まれる。ヘテロアリール基としては、それだけには限らないが、チエニル、フラニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリジニル、プリニル、ナフチリジニル、およびプテリジニルが挙げられる。本明細書では、用語「ヘテロアリール」および「ヘテロア−（ｈｅｔｅｒｏａｒ−）」には、芳香族複素環が、１つまたは複数のアリール、脂環式、またはヘテロシクリル環に縮合された基（ここでは、付着のラジカルまたは点は、芳香族複素環上にある）も含まれる。非限定的な例としては、インドリル、イソインドリル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、ジベンゾフラニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、４Ｈ−キノリジニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、およびピリド［２，３−ｂ］−１，４−オキサジン−３（４Ｈ）−オンが挙げられる。ヘテロアリール基は、単環または二環式であり得る。用語「ヘテロアリール」は、用語「ヘテロアリール環」「ヘテロアリール基」または「複素環式芳香族」と同義的に使用することができ、この用語には、任意選択で置換された環が含まれる。用語「ヘテロアラルキル」および「ヘテロアリールアルキル」は、ヘテロアリール部分によって置換されたアルキル基（ここでは、アルキルおよびヘテロアリール部分は独立に、任意選択で置換される）を指す。
【００３５】
用語「ヘテロ脂肪族」は、本明細書では、１または２個の炭素原子が、１つまたは複数の酸素、硫黄、窒素、またはリンによって独立に置き換えられた脂肪族基を意味する。ヘテロ脂肪族基は、置換または非置換の、分枝状または枝分かれしていない、環式または非環式であり得、これには、「ヘテロ環」、「ヘテロシクリル」、「ヘテロ脂環式」、または「複素環式」基が含まれる。
【００３６】
本明細書では、用語「ヘテロ環」、「ヘテロシクリル」、「複素環ラジカル」、および「複素環」は、同義的に使用され、飽和または部分的に不飽和であり、炭素原子に加えて、１つまたは複数の、好ましくは１から４個の上で定義した通りのヘテロ原子を有する、安定な５〜７員の単環式または７〜１０員の二環式の複素環部分を指す。ヘテロ環の環原子に関して使用される場合、用語「窒素」は、置換された窒素を含む。一例として、酸素、硫黄、または窒素から選択される０〜３個のヘテロ原子を有する飽和または部分的に不飽和の環では、窒素は、Ｎ（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロリルで見られる通り）、ＮＨ（ピロリジニルで見られる通り）、または＋ＮＲ（Ｎ置換型ピロリジニルで見られる通り）であり得る。
【００３７】
複素環は、任意のヘテロ原子または炭素原子の位置でそのペンダント基に付着され得（その結果、安定な構造が得られる）、環原子のいずれかは、任意選択で置換され得る。こうした飽和または部分的に不飽和の複素環ラジカルの例としては、それだけには限らないが、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニルピロリジニル、ピペリジニル、ピロリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、ジアゼピニル、オキサゼピニル、チアゼピニル、モルホリニル、およびキヌクリジニルが挙げられる。用語「ヘテロ環」、「ヘテロシクリル」、「ヘテロシクリル環」、「複素環基」、「複素環部分」、および「複素環ラジカル」）は、本明細書では同義的に使用され、これには、さらに、インドリニル、３Ｈ−インドリル、クロマニル、フェナントリジニル、またはテトラヒドロキノリニルなどの、ヘテロシクリル環が１つまたは複数のアリール、ヘテロアリール、または脂環式環に縮合された基（ここでは、付着のラジカルまたは点は、ヘテロシクリル環上にある）が含まれる。ヘテロシクリル基は、単環または二環式であり得る。用語「ヘテロシクリルアルキル」は、ヘテロシクリルによって置換されたアルキル基（ここでは、アルキルおよびヘテロシクリル部分は独立に、任意選択で置換される）を指す。
【００３８】
本明細書では、用語「部分的に不飽和の」は、少なくとも１つの二重または三重結合を含む環部分を指す。用語「部分的に不飽和の」は、不飽和の複数の部位を有する環を包含することが意図されるが、本明細書に定義された通りのアリールまたはヘテロアリール部分を含むことは意図されない。
【００３９】
語句「医薬として許容される担体」は、本明細書では、ある器官または体の部分から、別の器官または体の部分まで、本願の化合物を運搬または移動することに関与する、液体もしくは固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、または溶媒カプセル化材料などの、医薬として許容される材料、組成物、または賦形剤を意味する。各担体は、製剤の他成分と適合性があるという意味で、「許容され」なければならず、かつ、患者に対して有害であってはならない。医薬として許容される担体として作用することができる、材料のいくつかの例としては以下が挙げられる：糖（ラクトース、グルコース、およびスクロースなど）；デンプン（トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなど）；セルロースおよびその誘導体（カルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロースなど）；トラガント末；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤（カカオバターおよび座薬ワックスなど）；オイル（ラッカセイ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、およびダイズ油など）；グリコール（プロピレングリコールなど）；ポリオール（グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなど）；エステル（オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなど）；寒天；緩衝剤（水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなど）；アルギン酸；発熱性物質除去水；等張性生理食塩水；リンガー液；エチルアルコール；ｐＨ緩衝溶液；ポリエステル、ポリカーボネート、および／またはポリ酸無水物；および医薬製剤に利用される他の非毒性の適合性のある物質。
【００４０】
本明細書では、用語「医薬として許容される塩」は、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴わず、適切な医学的判断の範囲内で、ヒトおよび下等動物の組織と接触する使用に適切であり、かつ、妥当なベネフィット／リスク比率に相応する塩を指す。医薬として許容される塩は、当分野でよく知られている。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅらは、参照により本明細書に組み込まれる「Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、１９７７、６６、１〜１９において、医薬として許容される塩を詳細に記載している。本発明の化合物の医薬として許容される塩としては、適切な無機および有機の酸および塩基から得られるものが挙げられる。医薬として許容される非毒性の酸付加塩の例は、無機酸（塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、および過塩素酸など）を用いて、あるいは、有機酸（酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、またはマロン酸など）を用いて、あるいは、イオン交換などの当分野で使用される他の方法を用いて形成されるアミノ基の塩である。他の医薬として許容される塩としては、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、重硫酸、ホウ酸、酪酸、樟脳酸、カンファースルホン酸、クエン酸、シクロペンタンプロピオン酸、ジグルコン酸、ドデシル硫酸、エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グリセロリン酸、グルコン酸、ヘミ硫酸、ヘプタン酸、ヘキサン酸、沃化水素酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、ラクトビオン酸、乳酸、ラウリン酸、ラウリル硫酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、メタンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、ペクチン酸、過硫酸、３−フェニルプロピオン酸、リン酸、ピバル酸、プロピオン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ウンデカン酸、吉草酸の塩などが挙げられる。
【００４１】
他の場合には、本発明の化合物は、１つまたは複数の酸性官能基を含有することができ、したがって、医薬として許容される塩基を用いて、医薬として許容される塩を形成することが可能である。これらの場合には、用語「医薬として許容される塩」は、本発明の化合物の、比較的毒性のない無機および有機の塩基付加塩を指す。これらの塩は同様に、投与用賦形剤または剤形製造プロセス中にｉｎ  ｓｉｔｕで、あるいは、その遊離酸の形の精製された化合物を、適切な塩基（医薬として許容される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩、または重炭酸塩など）と、またはアンモニアと、または医薬として許容される一級、二級、三級、または四級有機アミンと、別に反応させることによって調製することができる。適切な塩基から得られる塩としては、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム、およびＮ＋（Ｃ１〜４アルキル）４の塩が挙げられる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが挙げられる。医薬として許容されるさらなる塩としては、適切な場合、非毒性アンモニウム、四級アンモニウム；および、ハロゲン化物、水酸化物などの対イオンを使用して形成されるアミンカチオン；カルボン酸、硫酸、リン酸、硝酸、低級アルキルスルホン酸、およびアリールスルホン酸の塩が挙げられる。塩基付加塩の形成のための有用な代表的な有機アミンとしては、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどが挙げられる。（例えば、Ｂｅｒｇｅら、上記、を参照のこと）。
【００４２】
別段の記述がない限り、本明細書に表される構造はまた、すべての異性体（例えば、鏡像、ジアステレオ、および幾何（または配座））形の構造；例えば、各立体中心についてのＺおよびＥ二重結合異性体、ＺおよびＥ配座異性体、ならびにＲおよびＳ配置などを含むことを意味する。したがって、単一の立体化学的異性体、ならびに本発明の化合物の鏡像異性、ジアステレオ、および幾何（または配座）異性体の混合物は、本発明の範囲内である。別段の記述がない限り、本発明の化合物のすべての互変異性型は、本発明の範囲内である。
【００４３】
提供される化合物は、１つまたは複数の糖部分を含むことができる。別段の指定がない限り、Ｄ配置とＬ配置の両方、およびそれらの混合物は、本発明の範囲内である。別段の指定がない限り、α−連結型とβ−連結型の実施形態の両方、およびそれらの混合物が、本発明によって意図される。
【００４４】
例えば、本発明の化合物の特定のエナンチオマーが所望される場合、これは、不斉合成、キラルクロマトグラフィー、またはキラル補助基を用いる誘導によって調製することができる。ここでは、得られたジアステレオマー混合物は分離され、補助基は切断され、純粋な所望のエナンチオマーが提供される。あるいは、分子が、アミノなどの塩基性官能基またはカルボキシルなどの酸性官能基を含有する場合、光学活性のある適切な酸または塩基を用いてジアステレオマー塩を形成し、続いて、このようにして形成されたジアステレオマーを、当分野でよく知られた分別結晶またはクロマトグラフィー手段によって分割し、その後、純粋なエナンチオマーを回収する。
【００４５】
加えて、別段の記述がない限り、本明細書に表される構造はまた、１つまたは複数の同位元素的に濃縮された原子の存在のみが異なる化合物も含むことが意図される。例えば、重水素またはトリチウムによる水素の置換、または１３Ｃ−または１４Ｃ−濃縮炭素による炭素の置換を含む、本発明の構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。こうした化合物は、例えば、分析手段として、またはバイオアッセイにおけるプローブとして、または本発明による治療剤として有用である。
【００４６】
本明細書では、用語「還元剤」は文脈的に関係する還元反応を遂行するために適した試薬を指す。典型的ではあるが非限定的な還元剤は：水素化アルミニウムリチウム（ＬｉＡｌＨ４）、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）、ヒドロホウ素化試薬（ＢＨ３、Ｂ２Ｈ６）、アルカリ金属（ＬｉまたはＮａなど）、遷移金属（Ｓｎ、Ｚｎ、またはＦｅなど）、グリニャール試薬（ＲＭｇＸ）、および有機金属（Ｒｌｉ、ＲＮａ、Ｒ２ＣｕＬｉ）である。当該用語は触媒水素化などの還元技術も包含しうる。当業者は、本出願に記載の合成方法が多様な還元剤を利用することを認識することになる。
【００４７】
当分野の技術者は、本明細書に記述する通りの合成の方法が、様々な保護基を利用することを理解するであろう。用語「保護基」は、本明細書では、特定の官能性部分、例えばＯ、Ｓ、またはＮが、マスクまたはブロックされ、必要に応じて、多官能化合物における別の反応部位で選択的に行われるべき反応を可能にすることを意味する。好ましい実施形態では、保護基は、好収率で選択的に反応して、計画された反応に対して安定である保護された基質を与える；保護基は、他官能基を攻撃しない容易に入手可能な好ましくは非毒性の試薬によって、好ましくは選択的に除去可能である；保護基は、（より好ましくは、新規の不斉中心の産生を伴わずに）分離可能な誘導体を形成する；また、保護基は、さらなる部位の反応を避けるために、好ましくは、最小限のさらなる官能基を有する。本明細書では、詳細には、酸素、硫黄、窒素、および炭素保護基を利用することができる。非限定的な例として、ヒドロキシル保護基としては、メチル、メトキシルメチル（ＭＯＭ）、メチルチオメチル（ＭＴＭ）ｔ−ブチルチオメチル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチル（ＳＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル（ＰＭＢＭ）、（４−メトキシフェノキシ）メチル（ｐ−ＡＯＭ）、グアヤコールメチル（ＧＵＭ）、ｔ−ブトキシメチル、４−ペンテニルオキシメチル（ＰＯＭ）、シロキシメチル、２−メトキシエトキシメチル（ＭＥＭ）、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、ビス（２−クロロエトキシ）メチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭＯＲ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、３−ブロモテトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１−メトキシシクロヘキシル、４−メトキシテトラヒドロピラニル（ＭＴＨＰ）、４−メトキシテトラヒドロチオピラニル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルＳ，Ｓ−ジオキシド、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イル（ＣＴＭＰ）、１，４−ジオキサン−２−イル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、２，３，３ａ，４，５，６，７，７ａ−オクタヒドロ−７，８，８−トリメチル−４，７−メタノベンゾフラン−２−イル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチル、２，２，２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、２−（フェニルセレニル）エチル、ｔ−ブチル、アリル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ハロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ｐ−シアノベンジル、ｐ−フェニルベンジル、２−ピコリル、４−ピコリル、３−メチル−２−ピコリルＮ−オキシド、ジフェニルメチル、ｐ，ｐ’−ジニトロベンズヒドリル、５−ジベンゾスベリル、トリフェニルメチル、α−ナフチルジフェニルメチル、ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチル、ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル、トリ（ｐ���メトキシフェニル）メチル、４−（４’−ブロモフェナシルオキシフェニル）ジフェニルメチル、４，４’，４’’−トリス（４，５−ジクロロフタルイミドフェニル）メチル、４，４’，４’’−トリス（レブリノイルオキシフェニル）メチル、４，４’，４’’−トリス（ベンゾイルオキシフェニル）メチル、３−（イミダゾール−１−イル）ビス（４’，４’’−ジメトキシフェネチル）メチル、１，１−ビス（４−メトキシフェニル）−１’−ピレニルメチル、９−アントリル、９−（９−フェニル）キサンテニル、９−（９−フェニル−１０−オキソ）アントリル、１，３−ベンゾジチオラン−２−イル、ベンズイソチアゾリルＳ，Ｓ−ジオキシド、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリエチルシリル（ＴＥＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、ジメチルイソプロピルシリル（ＩＰＤＭＳ）、ジエチルイソプロピルシリル（ＤＥＩＰＳ）、ジメチルヘキシルシリル（ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｅｘｙｌｓｉｌｙｌ）、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリベンジルシリル、トリ−ｐ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル（ＤＰＭＳ）、ｔ−ブチルメトキシフェニルシリル（ＴＢＭＰＳ）、ギ酸エステル、ベンゾイルギ酸エステル、酢酸エステル、クロロ酢酸エステル、ジクロロ酢酸エステル、トリクロロ酢酸エステル、トリフルオロ酢酸エステル、メトキシ酢酸エステル、トリフェニルメトキシ酢酸エステル、フェノキシ酢酸エステル、ｐ−クロロフェノキシ酢酸エステル、３−フェニルプロピオン酸エステル、４−オキソペンタン酸エステル（レブリン酸エステル）、４，４−（エチレンジチオ）ペンタン酸エステル（レブリノイルジチオアセタール）、ピバル酸エステル、アダマント酸エステル（ａｄａｍａｎｔｏａｔｅ）、クロトン酸エステル、４−メトキシクロトン酸エステル、安息香酸エステル、ｐ−フェニル安息香酸エステル、２，４，６−トリメチル安息香酸エステル（メシトエート（ｍｅｓｉｔｏａｔｅ））、炭酸アルキルメチル、炭酸９−フルオレニルメチル（Ｆｍｏｃ）、炭酸アルキルエチル、炭酸アルキル２，２，２−トリクロロエチル（Ｔｒｏｃ）、炭酸２−（トリメチルシリル）エチル（ＴＭＳＥＣ）、炭酸２−（フェニルスルホニル）エチル（Ｐｓｅｃ）、炭酸２−（トリフェニルホスホニオ）エチル（Ｐｅｏｃ）、炭酸アルキルイソブチル、炭酸アルキルビニル、炭酸アルキルアリル、炭酸アルキルｐ−ニトロフェニル、炭酸アルキルベンジル、炭酸アルキルｐ−メトキシベンジル、炭酸アルキル３，４−ジメトキシベンジル、炭酸アルキルｏ−ニトロベンジル、炭酸アルキルｐ−ニトロベンジル、チオ炭酸アルキルＳ−ベンジル、炭酸４−エトキシ−１−ナフチル（ｎａｐｈｔｈｙｌ）、ジチオ炭酸メチル、２−ヨード安息香酸エステル、酪酸４−アジド、４−ニトロ−４−メチルペンタン酸エステル、安息香酸ｏ−（ジブロモメチル）、２−ホルミルベンゼンスルホン酸エステル、２−（メチルチオメトキシ）エチル、酪酸４−（メチルチオメトキシ）、安息香酸２−（メチルチオメトキシメチル）、フェノキシ酢酸２，６−ジクロロ−４−メチル、フェノキシ酢酸２，６−ジクロロ−４−（１���１，３，３−テトラメチルブチル）、フェノキシ酢酸２，４−ビス（１，１−ジメチルプロピル）、クロロジフェニル酢酸エステル、イソ酪酸エステル、モノコハク酸エステル（ｍｏｎｏｓｕｃｃｉｎｏａｔｅ）、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテン酸エステル、安息香酸ｏ−（カルボメトキシル）、α−ナフトエ酸エステル、硝酸エステル、アルキルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホスホロジアミデート、Ｎ−フェニルカルバミン酸アルキル、ホウ酸エステル、ジメチルホスフィノチオイル、２，４−ジニトロフェニルスルフェン酸アルキル、硫酸エステル、メタンスルホン酸エステル（メシラート）、ベンジルスルホン酸エステル、およびトシラート（Ｔｓ）が挙げられる。１，２−または１，３−ジオールを保護するためには、保護基として、メチレンアセタール、エチリデンアセタール、１−ｔ−ブチルエチリデンケタール、１−フェニルエチリデンケタール、（４−メトキシフェニル）エチリデンアセタール、２，２，２−トリクロロエチリデンアセタール、アセトニド、シクロペンチリデンケタール、シクロヘキシリデンケタール、シクロヘプチリデンケタール、ベンジリデンアセタール、ｐ−メトキシベンジリデンアセタール、２，４−ジメトキシベンジリデンケタール、３，４−ジメトキシベンジリデンアセタール、２−ニトロベンジリデンアセタール、メトキシメチレンアセタール、エトキシメチレンアセタール、ジメトキシメチレンオルトエステル、１−メトキシエチリデンオルトエステル、１−エトキシエチリデン（ｅｔｈｏｘｙｅｔｈｙｌｉｄｉｎｅ）オルトエステル、１，２−ジメトキシエチリデンオルトエステル、α−メトキシベンジリデンオルトエステル、１−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチリデン誘導体、α−（Ｎ，Ｎ’−ジメチルアミノ）ベンジリデン誘導体、２−オキサシクロペンチリデンオルトエステル、ジ−ｔ−ブチルシリレン基（ＤＴＢＳ）１，３−（１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサニリデン）誘導体（ＴＩＰＤＳ）、テトラ−ｔ−ブトキシジシロキサン−１，３−ジイリデン誘導体（ＴＢＤＳ）、環状カーボネート、環状ボロナート、エチルボロナート、およびフェニルボロナートが挙げられる。アミノ保護基としては、カルバミン酸メチル、カルバミン酸エチル（ｅｔｈｙｌ  ｃａｒｂａｍａｎｔｅ）、カルバミン酸９−フルオレニルメチル（Ｆｍｏｃ）、カルバミン酸９−（２−スルホ）フルオレニルメチル、カルバミン酸９−（２，７−ジブロモ）フルオロエニルメチル、カルバミン酸２，７−ジ−ｔ−ブチル−［９−（１０，１０―ジオキソ−１０，１０，１０，１０−テトラヒドロチオキサンチル）］メチル（ＤＢＤ−Ｔｍｏｃ）、カルバミン酸４−メトキシフェナシル（Ｐｈｅｎｏｃ）、カルバミン酸２，２，２−トリクロロエチル（Ｔｒｏｃ）、カルバミン酸２−トリメチルシリルエチル（Ｔｅｏｃ）、カルバミン酸２−フェニルエチル（ｈＺ）、カルバミン酸１−（１−アダマンチル）−１−メチルエチル（Ａｄｐｏｃ）、カルバミン酸１，１−ジメチル−２−ハロエチル、カルバミン酸１，１−ジメチル−２，２−ジブロモエチル（ＤＢ−ｔ−ＢＯＣ）、カルバミン酸１，１−ジメチル−２，２，２−トリクロロエチル（ＴＣＢＯＣ）、カルバ��ン酸１−メチル−１−（４−ビフェニル）エチル（Ｂｐｏｃ）、カルバミン酸１−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−１−メチルエチル（ｔ−Ｂｕｍｅｏｃ）、カルバミン酸２−（２’−および４’−ピリジル）エチル（Ｐｙｏｃ）、カルバミン酸２−（Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボキシアミド）エチル、カルバミン酸ｔ−ブチル（ＢＯＣ）、カルバミン酸１−アダマンチル（Ａｄｏｃ）、カルバミン酸ビニル（Ｖｏｃ）、カルバミン酸アリル（Ａｌｌｏｃ）、カルバミン酸１−イソプロピルアリル（Ｉｐａｏｃ）、カルバミン酸シンナミル（Ｃｏｃ）、カルバミン酸４−ニトロシンナミル（Ｎｏｃ）、カルバミン酸８−キノリル、カルバミン酸Ｎ−ヒドロキシピペリジニル、カルバミン酸アルキルジチオ、カルバミン酸ベンジル（Ｃｂｚ）、カルバミン酸ｐ−メトキシベンジル（Ｍｏｚ）、カルバミン酸ｐ−ニトロベンジル（ｎｉｔｏｂｅｎｚｙｌ）、カルバミン酸ｐ−ブロモベンジル、カルバミン酸ｐ−クロロベンジル、カルバミン酸２，４−ジクロロベンジル、カルバミン酸４−メチルスルフィニルベンジル（Ｍｓｚ）、カルバミン酸９−アントリルメチル、カルバミン酸ジフェニルメチル、カルバミン酸２−メチルチオエチル、カルバミン酸２−メチルスルホニルエチル、カルバミン酸２−（ｐ−トルエンスルホニル）エチル、カルバミン酸［２−（１，３−ジチアニル）］メチル（Ｄｍｏｃ）、カルバミン酸４−メチルチオフェニル（Ｍｔｐｃ）、カルバミン酸２，４−ジメチルチオフェニル（Ｂｍｐｃ）、カルバミン酸２−ホスホニオエチル（Ｐｅｏｃ）、カルバミン酸２−トリフェニルホスホニオイソプロピル（Ｐｐｏｃ）、カルバミン酸１，１−ジメチル−２−シアノエチル、カルバミン酸ｍ−クロロ−ｐ−アシルオキシベンジル、カルバミン酸ｐ−（ジヒドロキシボリル）ベンジル、カルバミン酸５−ベンズイソオキサゾリルメチル、カルバミン酸２−（トリフロロメチル）−６−クロモニルメチル（Ｔｃｒｏｃ）、カルバミン酸ｍ−ニトロフェニル、カルバミン酸３，５−ジメトキシベンジル、カルバミン酸ｏ−ニトロベンジル、カルバミン酸３，４−ジメトキシ−６−ニトロベンジル、カルバミン酸フェニル（ｏ−ニトロフェニル）メチル、フェノチアジニル−（１０）−カルボニル誘導体、Ｎ’−ｐ−トルエンスルホニルアミノカルボニル誘導体、Ｎ’−フェニルアミノチオカルボニル誘導体、カルバミン酸ｔ−アミル、チオカルバミン酸
Ｓ−ベンジル、カルバミン酸ｐ−シアノベンジル、カルバミン酸シクロブチル、カルバミン酸シクロヘキシル、カルバミン酸シクロペンチル、カルバミン酸シクロプロピルメチル、カルバミン酸ｐ−デシルオキシベンジル、カルバミン酸２，２−ジメトキシカルボニルビニル、カルバミン酸ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキシアミド）ベンジル、カルバミン酸１，１−ジメチル−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキシアミド）プロピル、カルバミン酸１，１−ジメチルプロピニル、メチルカルバミン酸ジ（２−ピリジル）、カルバミン酸２−フラニルメチル、カルバミン酸２−ヨードエチル、カルバミン酸イソボルニル（ｉｓｏｂｏｒｙｎｌ）、カルバミン酸イソブチル、カルバミン酸イソニコチニル、カルバミン酸ｐ−（ｐ’−メトキシフェニルアゾ）ベンジル、カルバミン酸１−メチルシクロブチル、カルバミン酸１−メチルシクロヘキシル、カルバミン酸１−メチル−１−シクロプロピルメチル、カルバミン酸１−メチル−１−（３，５−ジメトキシフェネチル）エチル、カルバミン酸塩１−メチル−１−（ｐ−フェニルアゾフェニル）エチル、カルバミン酸１−メチル−１−フェニルエチル、カルバミン酸１−メチル−１−（４−ピリジル）エチル、カルバミン酸塩フェニル、カルバミン酸ｐ−（フェニルアゾ）ベンジル、カルバミン酸２，４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニル、カルバミン酸４−（トリメチルアンモニウム）ベンジル、カルバミン酸２，４，６−トリメチルベンジル、ホルムアミド、アセトアミド、クロロアセトアミド、トリクロロアセトアミド、トリフルオロアセトアミド、フェニルアセトアミド、３−フェニルプロパンアミド、ピコリンアミド、３−ピリジルカルボキサミド、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、ベンズアミド、ｐ−フェニルベンズアミド、ｏ−ニトロフェニルアセトアミド（ｎｉｔｏｐｈｅｎｙｌａｃｅｔａｍｉｄｅ）、ｏ−ニトロフェノキシアセトアミド、アセトアセトアミド、（Ｎ’−ジチオベンジルオキシカルボニルアミノ）アセトアミド、３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）プロパンアミド、３−（ｏ−ニトロフェニル）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−ニトロフェノキシ）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−フェニルアゾフェノキシ）プロパンアミド、４−クロロブタンアミド、３−メチル−３−ニトロブタンアミド、ｏ−ニトロシンナミド、Ｎ−アセチルメチオニン誘導体、ｏ−ニトロベンズアミド、ｏ−（ベンゾイルオキシメチル）ベンズアミド、４，５−ジフェニル−３−オキサゾリン−２−オン、Ｎ−フタルイミド、Ｎ−ジチアスクシンイミド（Ｄｔｓ）、Ｎ−２，３−ジフェニルマレイミド、Ｎ−２，５−ジメチルピロール、Ｎ−１，１，４，４−テトラメチルジシリルアザシクロペンタン付加物（ＳＴＡＢＡＳＥ）、５−置換型１，３−ジメチル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、５−置換型１，３−ジベンジル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、１置換型３，５−ジニトロ−４−ピリドン、Ｎ−メチルアミン、Ｎ−アリルアミン、Ｎ−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチルアミン（ＳＥＭ）、Ｎ−３−アセトキシプロピルアミン、Ｎ−（１−イソプロピル−４−ニトロ−２−オキソ−３−ピロリン（ｐｙｒｏｏｌｉｎ）−３−イル）アミン、第四級アンモニウム塩、Ｎ−ベンジルアミン、Ｎ−ジ（４−メトキシフェニル）メチルアミン、Ｎ−５−ジベンゾスベリルアミン、Ｎ−トリフェニルメチルアミン（Ｔｒ）、Ｎ−［（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル］アミン（ＭＭＴｒ）、Ｎ−９−フェニルフルオレニルアミン（ＰｈＦ）、Ｎ−２，７−ジクロロ−９−フルオレニルメチレンアミン、Ｎ−フェロセニルメチルアミノ（Ｆｃｍ）、Ｎ−２−ピコリルアミノＮ’−オキシド、Ｎ−１，１−ジメチルチオメチレンアミン、Ｎ−ベンジリデンアミン、Ｎ−ｐ−メトキシベンジリデンアミン、Ｎ−ジフェニルメチレンアミン、Ｎ−［（２−ピリジル）メシチル］メチレンアミン、Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノメチレン）アミン、Ｎ，Ｎ’−イソプロピリデンジアミン、Ｎ−ｐ−ニトロベンジリデンアミン、Ｎ−サリチリデンアミン、Ｎ−５−クロロサリチリデンアミン、Ｎ−（５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）フェニルメチレンアミン、Ｎ−シクロヘキシリデンアミン、Ｎ−（５，５−ジメチル−３−オキソ−１−シクロヘキセニル）アミン、Ｎ−ボラン誘導体、Ｎ−ジフェニルボリン酸誘導体、Ｎ−［フェニル（ペンタカルボニルクロム―またはタングステン）カルボニル］アミン、Ｎ−銅キレート、Ｎ−亜鉛キレート、Ｎ−ニトロアミン、Ｎ−ニトロソアミン、アミンＮ−オキシド、ジフェニルホスフィンアミド（Ｄｐｐ）、ジメチルチオホスフィンアミド（Ｍｐｔ）、ジフェニルチオホスフィンアミド（Ｐｐｔ）、ホスホルアミド酸ジアルキル、ホスホルアミド酸ジベンジル、ホスホルアミド酸ジフェニル、ベンゼンスルフェンアミド、ｏ−ニトロベンゼンスルフェンアミド（Ｎｐｓ）、２，４−ジニトロベンゼンスルフェンアミド、ペンタクロロベンゼンスルフェンアミド、２−ニトロ−４−メトキシベンゼンスルフェンアミド、トリフェニルメチルスルフェンアミド、３−ニトロピリジンスルフェンアミド（Ｎｐｙｓ）、ｐ−トルエンスルホンアミド（Ｔｓ）、ベンゼンスルホンアミド、２，３，６−トリメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｒ）、２，４，６−トリメトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｂ）、２，６−ジメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｐｍｅ）、２，３，５，６−テトラメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｅ）、４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｂｓ）、２，４，６−トリメチルベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｓ）、２，６−ジメトキシ−４−メチルベンゼンスルホンアミド（ｉＭｄｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホンアミド（Ｐｍｃ）、メタンスルホンアミド（Ｍｓ）、β−トリメチルシリルエタンスルホンアミド（ＳＥＳ）、９−アンスラセンスルホンアミド、４−（４’，８’−ジメトキシナフチルメチル）ベンゼンスルホンアミド（ＤＮＭＢＳ）、ベンジルスルホンアミド、トリフルオロメチルスルホンアミド、およびフェナシルスルホンアミドが挙げられる。例示的な保護基を、本明細書に詳述するが、本発明は、これらの保護基に限定することを意図せず、むしろ、様々なさらなる同等の保護基を、上の基準を使用して容易に特定することができ、本発明の方法に利用する���とができることを理解されたい。加えて、様々な保護基は、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ（上記）によって記載されている。
【００４８】
本明細書に記述する通り、本発明の化合物は、「任意選択で置換された」部分を含有することができる。一般に、用語「置換された」は、用語「任意選択で」が先行するかどうかにかかわらず、所定の部分の１つまたは複数の水素が、適切な置換基で置き換えられることを意味する。別段の指示がない限り、「任意選択で置換された」基は、基のそれぞれ置換可能な位置で、適切な置換基を有することができ、任意の所与の構造において、指定された基から選択される２つ以上の置換基で２つ以上の位置が置換され得る場合、置換基は、あらゆる位置で、同じでも異なってもよい。この発明によって想定される置換基の組み合わせは、好ましくは、安定または化学的に可能な化合物の形成をもたらすものである。用語「安定な」は、本明細書では、その生成、検出、およびある種の実施形態ではその回収、精製、ならびに本明細書に開示される１つまたは複数の目的のための使用を可能にする条件にかけた場合でも、実質的に変わらない化合物を指す。
【００４９】
「任意選択で置換された」基の置換可能な炭素原子に対する適切な一価の置換基は独立に、ハロゲン；−（ＣＨ２）０〜４Ｒ○；−（ＣＨ２）０〜４ＯＲ○；−Ｏ（ＣＨ２）０〜４Ｒ○、−Ｏ−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＯＲ○；−（ＣＨ２）０〜４ＣＨ（ＯＲ○）２；−（ＣＨ２）０〜４ＳＲ○；Ｒ○で置換可能な−（ＣＨ２）０〜４Ｐｈ；Ｒ○で置換可能な−（ＣＨ２）０〜４Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ；Ｒ○で置換可能な−ＣＨ＝ＣＨＰｈ；Ｒ○で置換可能な−（ＣＨ２）０〜４Ｏ（ＣＨ２）０〜１−ピリジル；−ＮＯ２；−ＣＮ；−Ｎ３；−（ＣＨ２）０〜４Ｎ（Ｒ○）２；−（ＣＨ２）０〜４Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）Ｒ○；−Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｓ）Ｒ○；−（ＣＨ２）０〜４Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）ＮＲ○２；−Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｓ）ＮＲ○２；−（ＣＨ２）０〜４Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）ＯＲ○；−Ｎ（Ｒ○）Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）Ｒ○；−Ｎ（Ｒ○）Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）ＮＲ○２；−Ｎ（Ｒ○）Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）ＯＲ○；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）Ｒ○；−Ｃ（Ｓ）Ｒ○；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＯＲ○；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＳＲ○；（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＯＳｉＲ○３；−（ＣＨ２）０〜４ＯＣ（Ｏ）Ｒ○；−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）０〜４ＳＲ−、−ＳＣ（Ｓ）ＳＲ○；−（ＣＨ２）０〜４ＳＣ（Ｏ）Ｒ○；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＮＲ○２；−Ｃ（Ｓ）ＮＲ○２；−Ｃ（Ｓ）ＳＲ○；−ＳＣ（Ｓ）ＳＲ○、−（ＣＨ２）０〜４ＯＣ（Ｏ）ＮＲ○２；−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＲ○）Ｒ○；−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ○；−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ○；−Ｃ（ＮＯＲ○）Ｒ○；−（ＣＨ２）０〜４ＳＳＲ○；−（ＣＨ２）０〜４Ｓ（Ｏ）２Ｒ○；−（ＣＨ２）０〜４Ｓ（Ｏ）２ＯＲ○；−（ＣＨ２）０〜４ＯＳ（Ｏ）２Ｒ○；−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ○２；−（ＣＨ２）０〜４Ｓ（Ｏ）Ｒ○；−Ｎ（Ｒ○）Ｓ（Ｏ）２ＮＲ○２；−Ｎ（Ｒ○）Ｓ（Ｏ）２Ｒ○；−Ｎ（ＯＲ○）Ｒ○；−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ○２；−Ｐ（Ｏ）２Ｒ○；−Ｐ（Ｏ）Ｒ○２；−ＯＰ（Ｏ）Ｒ○２；−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ○）２；ＳｉＲ○３；−（Ｃ１〜４直鎖または分枝状アルキレン）Ｏ−Ｎ（Ｒ○）２；または−（Ｃ１〜４直鎖または分枝状アルキレン）Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｎ（Ｒ○）２であり、式中、各Ｒ○は、下で定義する通りに置換することができ、また、独立に、水素、Ｃ１〜６脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ、−ＣＨ２−（５〜６員ヘテロアリール環）；あるいは、窒素、酸素、または硫黄から独立に選択される０〜４個のヘテロ原子を有する、５〜６員の飽和した、部分的に不飽和の、またはアリールの環である。あるいは、上の定義と関係なく、Ｒ○の２つの独立した存在は、その介在原子（１つまたは複数）と共に、下で定義する通りに置換することが可能な、窒素、酸素、または硫黄から独立に選択される０〜４個のヘテロ原子を有する、３〜１２員の飽和した、部分的に不飽和の、またはアリールの単環または二環式の環を形成する。
【００５０】
Ｒ○（または２つの独立した存在のＲ○をその介在原子と共に用いることによって形成される環）に対する適切な一価の置換基は独立に、ハロゲン、−（ＣＨ２）０〜２Ｒ●、−（ハロＲ●）−（ＣＨ２）０〜２ＯＨ、−（ＣＨ２）０〜２ＯＲ●、−（ＣＨ２）０〜２ＣＨ（ＯＲ●）２；−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｎ３、−（ＣＨ２）０〜２Ｃ（Ｏ）Ｒ●、−（ＣＨ２）０〜２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）０〜２Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−（ＣＨ２）０〜２ＳＲ●、−（ＣＨ２）０〜２ＳＨ、−（ＣＨ２）０〜２ＮＨ２、−（ＣＨ２）０〜２ＮＨＲ●、−（ＣＨ２）０〜２ＮＲ●２、−ＮＯ２、−ＳｉＲ●３、−ＯＳｉＲ●３、−Ｃ（Ｏ）ＳＲ●、−（Ｃ１〜４直鎖または分枝状アルキレン）Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、または−ＳＳＲ●であり、式中、各Ｒ●は、非置換である、あるいは、「ハロ」が先行するものは、１つまたは複数のハロゲンでのみ置換され、かつ、各Ｒ●は、Ｃ１〜４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ；あるいは窒素、酸素、または硫黄から独立に選択される０〜４個のヘテロ原子を有する、５〜６員の飽和した、部分的に不飽和の、またはアリールの環から独立に選択される。Ｒ○の飽和炭素原子に対する適切な二価の置換基としては、＝Ｏおよび＝Ｓが挙げられる。
【００５１】
「任意選択で置換された」基の飽和炭素原子に対する適切な二価の置換基としては、以下が挙げられ：＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮＲ＊２、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ＊、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ＊、＝ＮＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ＊、＝ＮＲ＊、＝ＮＯＲ＊、−Ｏ（Ｃ（Ｒ＊２））２〜３Ｏ−、または−Ｓ（Ｃ（Ｒ＊２））２〜３Ｓ−、式中、それぞれ独立した存在のＲ＊は、水素；下で定義する通りに置換可能なＣ１〜６脂肪族；あるいは、窒素、酸素、または硫黄から独立に選択される０〜４個のヘテロ原子を有する、非置換の５〜６員の飽和した、部分的に不飽和の、またはアリールの環から選択される。「任意選択で置換された」基の近接の置換可能な炭素に結合される適切な二価の置換基としては、−Ｏ（ＣＲ＊２）２〜３Ｏ−が挙げられ、式中、それぞれ独立した存在のＲ＊は、水素；下で定義する通りに置換可能なＣ１〜６脂肪族；あるいは、窒素、酸素、または硫黄から独立に選択される０〜４個のヘテロ原子を有する、非置換の５〜６員の飽和した、部分的に不飽和の、またはアリールの環から選択される。
【００５２】
Ｒ＊の脂肪族基に対する適切な置換基としては、ハロゲン、−Ｒ●、（ハロＲ●）、−ＯＨ、−ＯＲ●、−Ｏ（ハロＲ●）−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、−ＮＨＲ●、−ＮＲ●２、または−ＮＯ２が挙げられ、式中、各Ｒ●は、非置換である、あるいは、「ハロ」が先行するものは、１つまたは複数のハロゲンでのみ置換され、かつ、各Ｒ●は独立に、Ｃ１〜４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ、；あるいは窒素、酸素、または硫黄から独立に選択される０〜４個のヘテロ原子を有する、５〜６員の飽和した、部分的に不飽和の、またはアリールの環である。
【００５３】
「任意選択で置換された」基の置換可能な窒素に対する適切な置換基としては、−Ｒ†、−ＮＲ†２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ†、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ†２、−Ｃ（Ｓ）ＮＲ†２、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ†２、または−Ｎ（Ｒ†）Ｓ（Ｏ）２Ｒ†が挙げられ、式中、各Ｒ†は、独立に水素；下で定義する通りに置換可能なＣ１〜６脂肪族；非置換の−ＯＰｈ；あるいは、窒素、酸素、または硫黄から独立に選択される０〜４個のヘテロ原子を有する、非置換の５〜６員の飽和した、部分的に不飽和の、またはアリールの環である、あるいは、上の定義と関係なく、Ｒ†の２つの独立した存在は、その介在原子（１つまたは複数）と共に、窒素、酸素、または硫黄から独立に選択される０〜４個のヘテロ原子を有する、３〜１２員の飽和した、部分的に不飽和の、またはアリールの単環または二環式の環を形成する。Ｒ＋の脂肪族基に対する適切な置換基は独立に、ハロゲン、−Ｒ●、−（ハロＲ●）−ＯＨ、−ＯＲ●、−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、−ＮＨＲ●、−ＮＲ●２、または−ＮＯ２であり、式中、各Ｒ●は、非置換である、あるいは、「ハロ」が先行するものは、１つまたは複数のハロゲンでのみ置換され、かつ、各Ｒ●は独立に、Ｃ１〜４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ、；あるいは窒素、酸素、または硫黄から独立に選択される０〜４個のヘテロ原子を有する、５〜６員の飽和した、部分的に不飽和の、またはアリールの環である。
【００５４】
語句「非経口投与」および「非経口的に投与される」は、本明細書では、通常注射による、経腸および局所投与以外の投与様式を意味し、これには、限定はされないが、静脈内、筋肉内、動脈内、クモ膜下、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、上皮下、関節腔内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、および胸骨内の注射および注入が含まれる。
【００５５】
語句「全身投与」、「全身的に投与される」、「末梢投与」、および「末梢投与される」は、本明細書では、化合物、薬物、または他の材料の、中枢神経系への直接的投与（その結果、これらが患者の全身に入り、したがって、代謝および他の作用を受ける）、例えば皮下投与を意味する。
【００５６】
本明細書では用語「濃縮された」は、１つまたは複数の種の割合が増大された混合物を指す。ある実施形態では、混合物は、混合物中の１つまたは複数の所望の種の割合を増大させるプロセスに従って「濃縮される」。ある実施形態では、所望の種は、１０％を超える混合物を含む。ある実施形態では、所望の種は、２５％を超える混合物を含む。ある実施形態では、所望の種は、４０％を超える混合物を含む。ある実施形態では、所望の種は、６０％を超える混合物を含む。ある実施形態では、所望の種は、７５％を超える混合物を含む。ある実施形態では、所望の種は、８５％を超える混合物を含む。ある実施形態では、所望の種は、９０％を超える混合物を含む。ある実施形態では、所望の種は、９５％を超える混合物を含む。こうした割合は、例えば、モル比、体積対体積、重量対重量として、多くの方式によって測定することができる。
【００５７】
用語「純粋な」は、関連する非標的構造または化学的前駆体（化学的に合成される場合）の化合物を実質的に含まない化合物を指す。この特性は、「純度」として測定または表現することができる。ある実施形態では、標的化合物は、約３０％、２０％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、および０．１％未満の非標的構造または化学的前駆体を含む。ある種の実施形態では、本発明の純粋化合物は、１種のみのプロサポゲニン化合物（すなわち他のプロサポゲニンから標的プロサポゲニンを分離したもの）である。
【００５８】
用語「糖質」は、糖または糖のポリマーを指す。用語「糖」、「多糖」、「糖質」、および「オリゴ糖」は、同義的に使用することができる。大抵の糖質は、多くのヒドロキシル基（通常、分子の各炭素原子上に１つ）を伴うアルデヒドまたはケトンである。糖質は一般に、分子式ＣｎＨ２ｎＯｎを有する。糖質は、単糖、二糖、三糖、オリゴ糖、または多糖であり得る。最も基本的な糖質は、単糖、例えばグルコース、スクロース、ガラクトース、マンノース、リボース、アラビノース、キシロース、およびフルクトースなどである。二糖は、２つの連結された単糖である。例示的な二糖としては、スクロース、マルトース、セロビオース、およびラクトースが挙げられる。一般的に、オリゴ糖は、３から６の単糖単位（例えばラフィノース、スタキオース）を含み、多糖は、６またはそれ以上の単糖単位を含む。例示的な多糖としては、デンプン、グリコーゲン、およびセルロースが挙げられる。糖質は、ヒドロキシル基が除去された２’−デオキシリボース；ヒドロキシル基がフッ素で置き換えられた２’−フルオロリボース；またはＮ−アセチルグルコサミン、すなわち窒素を含有するグルコースの形；などの修飾された糖単位を含有することができる。（例えば、２’−フルオロリボース、デオキシリボース、およびヘキソース）。糖質は、例えば、配座異性体、環状形、非環状形、立体異性体、互変異性体、アノマー、および異性体など、多くの異なる形で存在することができる。
【００５９】
極小サポニンアナログ
本出願の一態様は、標準的サポニン分子の分枝状三糖ドメインを含まない極小サポニンアナログ（「切断サポニン」とも呼ばれる）に関する。１つの実施形態では、極小サポニンアナログは式（Ｉ）：
【化５】
0006774943.tif 000006
（Ｉ）
の化学構造を有する化合物、または医薬として許容されるその塩である（式中
【化６】
0006774943.tif 000007
は単結合または二重結合であり；
Ｗはメチル、−ＣＨＯ、−ＣＨ２ＯＲｘ、または−Ｃ（Ｏ）Ｒｙであり；
Ｖは水素または−ＯＲｘであり；
ＹはＣＨ２、−Ｏ−、−ＮＲ−、または−ＮＨ−であり；
Ｒは水素、アシル、アリールアルキル、６〜１０員環アリール、Ｃ１〜１２脂肪族またはＣ１〜Ｃ１２ヘテロ脂肪族から選択される任意選択として置換された基であり；
Ｚは水素、環式または非環式、アシル、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、アルキルアリール、ヘテロシクリル、およびヘテロアリールから選択される任意選択として置換された部分であるか；またはＺは糖質を含み；
Ｒｘの各存在は独立に水素またはアルキルエーテル、ベンジルエーテル、シリルエーテル、アセタール、ケタール、エステル、カルバミン酸および炭酸からなる群から選択される酸素保護基であり；
ＲｙはＯＨ、−ＯＲ、またはその結合するカルボニル基と合わせるとカルボキシル保護基が、エステル、アミド、またはヒドラジドであるカルボキシル保護基である）。
【００６０】
ある実施形態においては、Ｗはメチル、−ＣＨＯまたは−ＣＨ２ＯＨである。他の実施形態においては、ＶはＨまたはＯＨである。他の実施形態においては、Ｗはメチル、−ＣＨＯ、または−ＣＨ２ＯＨであり、かつＶはＨまたはＯＨである。他の実施形態においては、ＷはメチルでありかつＶはＯＨである。他の実施形態においては、ＷはＣＨ２ＯＨでありかつＶはＯＨである。ＷはＣＨＯでありかつＶはＯＨである。
【００６１】
ある実施形態においては、式（Ｉ）の構造を有する極小サポニンアナログ（式中、
【化７】
0006774943.tif 000008
は単結合または二重結合であり；ＷはＣ（Ｏ）Ｒ、ＣＨ２ＯＲまたはＣＨ２Ｒであり、ＲはＨであるか、またはアシル、アリールアルキル、アリール、ヘテロアリール、脂肪族、ヘテロ脂肪族、脂環式、およびヘテロシクリル基から選択される任意選択として置換された基であり；ＶはＨまたはＯＨであり；ＹはＯであり；Ｚは直鎖オリゴ糖またはアミン、アミド、アシル、アリールアルキル、アリール、ヘテロアリール、脂肪族、ヘテロ脂肪族、脂環式、およびヘテロシクリル基からなる群から選択される任意選択として置換された基である）。
【００６２】
本出願の他の態様は、式（ＩＩ）：
【化８】
0006774943.tif 000009
（ＩＩ）
の構造を有する極小サポニンアナログまたは医薬として許容されるその塩に関する（式中、ＷはＣ（Ｏ）Ｒ、ＣＨ２ＯＲまたはＣＨ２Ｒであり、ＲはＨ、またはアシル、アリールアルキル、アリール、ヘテロアリール、脂肪族、ヘテロ脂肪族、脂環式およびヘテロシクリル基から選択される任意選択として置換された基であり、ＶはＨまたはＯＨであり；ＸはＣＨ２Ｒｍ、Ｃ（Ｏ）Ｒｍ、ＣＨ２ＯＲｍ、ＣＨ２Ｒｍ、ＯＲｍ、またはＮＨＲｍであって、ＲｍがＨ、またはアシル、アリールアルキル、アリール、ヘテロアリール、脂肪族、ヘテロ脂肪族、脂環式およびヘテロシクリル基から選択される任意選択として置換された基であり、かつＲｎの各存在は独立に水素、単糖、二糖または三糖である）。
【００６３】
ある実施形態では、本出願の極小サポニンアナログは式（ＩＩＩ）：
【化９】
0006774943.tif 000010
（ＩＩＩ）
の構造を有する前駆体より生成される（式中ＷはＭｅ、−ＣＨＯ、または−ＣＨ２ＯＨであり、かつＶはＨまたはＯＨである）。
【００６４】
合成の方法
本出願の他の態様は、本出願の極小サポニンアナログを調製するためのプロセスに関する。ある実施形態では、プロセスは式（ＩＩＩ）の構造を有する前駆体の生成を含む。ある実施形態では、式（ＩＩＩ）の前駆体は以下の：
ａ）式（１００）の化合物を保護基と反応させて式（１０１）の化合物を形成するステップ（式中ＷはＭｅ、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨ、またはＣＨ２ＯＲｐであり；ＲｐはＨまたは必要に応じて位置選択性（regioselectivity）保護基であり；ＶはＨまたはＯＲｐであり、またＴＥＳはトリエチルシリル保護基である）；
【化１０】
0006774943.tif 000011
ｂ）式（１０１）の化合物を式（１０２）の化合物と反応させて式（１０３）の化合物を形成するステップ（式中Ｂｎはベンジル保護基である）；
【化１１】
0006774943.tif 000012
ｃ）式（１０３）の化合物を還元剤と反応させて式（１０４）の化合物を形成するステップ；
【化１２】
0006774943.tif 000013
ｄ）活性化剤の存在下で式（１０４）の化合物を式（１０５）の化合物とカップリングさせて式（１０６）の化合物を形成するステップ（式中Ｂｏｃはｔｅｒｔ−ブチルカルボニル保護基である）；            
【化１３】
0006774943.tif 000014
ｅ）式（１０６）の化合物を脱保護して式（ＩＩＩ）の化合物を形成するステップ；で生成される。
【００６５】
ある実施形態では、保護基はメチル、メトキシメチル（ＭＯＭ）、メチルチオメチル（ＭＴＭ）、ｔ−ブチルチオメチル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチル（ＳＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル（ＰＭＢＭ）、（４−メトキシフェノキシ）メチル（ｐ−ＡＯＭ）、グアヤコールメチル（ＧＵＭ）、ｔ−ブトキシメチル、４−ペンタニルオキシメチル（ＰＯＭ）、シロキシメチル、２−メトキシエトキシメチル（ＭＥＭ）、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、ビス（２−クロロエトキシ）メチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭＯＲ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、３−ブロモテトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１−メトキシシクロヘキシル、４−メトキシテトラヒドロピラニル（ＭＴＨＰ）、４−メトキシテトラヒドロチオピラニル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルＳ，Ｓ−ジオキシド、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イル（ＣＴＭＰ）、１，４−ジオキサン−２−イル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、２，３，３ａ，４，５，６，７，７ａ−オクタヒドロ−７，８，８−トリメチル−４，７−メタノベンゾフラン−２−イル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチル、２，２，２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、２−（フェニルセレニル）エチル、ｔ−ブチル、アリル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ハロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ｐ−シアノベンジル、ｐ−フェニルベンジル、２−ピコリル、４−ピコリル、３−メチル−２−ピコリルＮ−オキシド、ジフェニルメチル、ｐ，ｐ’−ジニトロベンズヒドリル、５−ジベンゾスベリル、トリフェニルメチル、α−ナフチルジフェニルメチル、ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチル、ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル、トリ（ｐ−メトキシフェニル）メチル、４−（４’−ブロモフェナシルオキシフェニル）ジフェニルメチル、４，４’，４’’−トリス（４，５−ジクロロフタルイミドフェニル）メチル、４，４’，４’’−トリス（レブリノイルオキシフェニル）メチル、４，４’，４’’−トリス（ベンゾイルオキシフェニル）メチル、３−（イミダゾール−１−イル）ビス（４’，４’’−ジメトキシフェニル）メチル、１，１−ビス（４−メトキシフェニル）−１’−ピレニルメチル、９−アントリル、９−（９−フェニル）キサンテニル、９−（９−フェニル−１０−オキソ）アントリル、１，３−ベンゾジチオラン−２−イル、ベンズイソチアゾリルＳ，Ｓ−ジオキシド、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリエチルシリル（ＴＥＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、ジメチルイソプロピルシリル（ＩＰＤＭＳ）、ジエチルイソプロピルシリル（ＤＥＩＰＳ）、ジメチルテキシルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリ���（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリベンジルシリル、トリ−ｐ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル（ＤＰＭＳ）、ｔ−ブチルメトキシフェニルシリル（ＴＢＭＰＳ）、ギ酸、ベンゾイルギ酸、酢酸、クロロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、メトキシ酢酸、トリフェニルメトキシ酢酸、フェノキシ酢酸、ｐ−クロロフェノキシ酢酸、３−フェニルプロピオン酸、４−オキソペンタン酸（レブリン酸）、４，４−（エチレンジチオ）ペンタン酸（レブリノイルジチオアセタール）、ピバロエート、アダマントエート、クロトン酸、４−メトキシクロトン酸、安息香酸、ｐ−フェニル安息香酸、２，４，６−トリメチル安息香酸（メシトエート）、アルキルメチルカーボネート、９−フルオレニルメチルカーボネート（Ｆｍｏｃ）、アルキルエチルカーボネート、アルキル２，２，２−トリクロロエチルカーボネート（Ｔｒｏｃ）、２−（トリメチルシリル）エチルカーボネート（ＴＭＳＥＣ）、２−（フェニルスルホニル）エチルカーボネート（Ｐｓｅｃ）、２−（トリフェニルホスホニオ）エチルカーボネート（Ｐｅｏｃ）、アルキルイソブチルカーボネート、アルキルビニルカーボネートアルキルアリルカーボネート、アルキルｐ−ニトロフェニルカーボネート、アルキルベンジルカーボネート、アルキルｐ−メトキシベンジルカーボネート、アルキル３，４−ジメトキシベンジルカーボネート、アルキルｏ−ニトロベンジルカーボネート、アルキルｐ−ニトロベンジルカーボネート、アルキルＳ−ベンジルチオカーボネート、４−エトキシ−１−ナフチルカーボネート、メチルジチオカーボネート、２−ヨード安息香酸、４−アジド酪酸、４−ニトロ−４−メチルペンタン酸、ｏ−（ジブロモメチル）安息香酸、２−ホルミルベンゼンスルホン酸、２−（メチルチオメトキシ）エチル、４−（メチルチオメトキシ）酪酸、２−（メチルチオメトキシメチル）安息香酸、２，６−ジクロロ−４−メチルフェノキシ酢酸、２，６−ジクロロ−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノキシ酢酸、２，４−ビス（１，１−ジメチルプロピル）フェノキシ酢酸、クロロジフェニル酢酸、イソ酪酸、モノスクシノエート、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテン酸、ｏ−（メトキシカルボニル）安息香酸、α−ナフトエ酸、硝酸、アルキルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホスホロジアミデート、アルキルＮ−フェニルカルバメート、ホウ酸、ジメチルホスフィノチオイル、アルキル２，４−ジニトロフェニルスルフェナート、硫酸、メタンスルホン酸（メシラート）、ベンジルスルホン酸、およびトシラート（Ｔｓ）からなる群から選択される。他の実施形態では、酸素保護基がトリエチルシリル（ＴＥＳ）であるプロセス。他の実施形態では、還元剤がフェニルセレノールであるプロセス。
【００６６】
ある種の実施形態では、極小サポニンアナログは８０％またはそれ以上、８５％またはそれ以上、９０％またはそれ以上、９５％またはそれ以上、９６％またはそれ以上、９７％またはそれ以上、９８％またはそれ以上、９９％またはそれ以上の純度を有する。
【００６７】
ワクチン組成物
本出願の他の態様は、抗原と、アジュバントとして本出願の極小サポニンアナログを含むワクチン組成物に関する。ある実施形態では、ワクチン組成物は追加的なアジュバントをさらに含む。
【００６８】
本発明のワクチン組成物は、被験体における抗原に対する能動免疫を誘発するためのワクチンとして有用である。本発明の組成物の有益効果を受けることが可能ないずれの動物も、治療される被験体の範囲内である。ある実施形態では、被験体は、哺乳類である。ある実施形態では、被験体は、ヒトである。
【００６９】
単独で投与される場合、大抵のタンパク質および糖タンパク質抗原は、不十分に免疫原性または非免疫原性である。こうした抗原に対する、適応可能な強い免疫反応は、アジュバントの使用を必要とすることが多い。免疫アジュバントは、被験体に投与された場合に、抗原に対する免疫反応を増強させる、または免疫系由来の細胞のある種の活性を増強する物質である。アジュバントはまた、被験体に有用な免疫反応を達成するための抗原の使用用量を、より低くすることができる。
【００７０】
一般的なアジュバントとしては、ミョウバン、フロイントアジュバント（死滅したミコバクテリアを伴う水中油型エマルジョン）、ＭＤＰを含むフロイントアジュバント（ムラミルジペプチド、ＭＤＰ、ミコバクテリアの成分、を伴う水中油型エマルジョン）ミョウバン＋Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ（死滅させたＢ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓを含む水酸化アルミニウムゲル）が挙げられる。こうしたアジュバントは、抗原の放出を遅らせ、マクロファージによる取り込みを増強させることによって作用すると考えられる。Ｑｕｉｌ−Ａ（キラヤサポニン抽出物）などの免疫刺激性の複合体（ＩＳＣＯＭ）は一般的に、コレステロール、脂質、免疫原、およびサポニンによって構築される、直径が約４０ｎｍであるオープンケージ様の複合体である。ＩＳＣＯＭは、抗原を細胞質ゾルに送達する。また、様々な実験用の動物モデルにおけるヘルパーＴ細胞ならびに細胞障害性Ｔリンパ球応答の抗体応答および誘発を促進することが実証されている。
【００７１】
本発明のワクチンは、受動的または能動的免疫によって、感染症または癌に対する耐性を与えるために使用することができる。本発明のワクチンが能動免疫を介して耐性を与えるために使用される場合、本発明のワクチンは、増殖性または感染性の疾患を予防または減弱化する防御免疫応答を誘発するために、動物に投与される。本発明のワクチンが受動免疫を介して感染症に対する耐性を与えるために使用される場合、ワクチンは、宿主動物（例えばヒト、イヌ、またはマウス）に提供され、このワクチンによって誘発される抗血清が回収され、感染症または疾患を患う疑いのあるレシピエントに直接的に提供される、または原因となる生物に露出される。
【００７２】
したがって、本発明は、本発明のワクチンに含まれる免疫原性ポリペプチドに応答して産生される抗血清によって認識および結合される抗原を有する生物または腫瘍細胞に起因する増殖性疾患を予防または減弱化するための手段に関する、また、こうした手段を提供する。本明細書では、ワクチンは、動物へのその投与が、症状または疾患の状態の全体的または部分的な減弱（すなわち抑制）を、あるいは、疾患に対する動物の全体的または部分的な免疫性をもたらす場合、疾患を予防するまたは減弱化すると言われる。
【００７３】
ワクチン（またはそれが誘発する抗血清）の投与は、「予防」または「治療」目的であり得る。予防的に提供される場合、ワクチン（１種または複数）は、増殖性疾患のいずれの症状にも先立って提供される。ワクチン（１つまたは複数）の予防的投与は、その後の疾患のいずれの症状も予防または減弱化するために役に立つ。治療的に提供される場合、ワクチン（１つまたは複数）は、動物が病原菌に感染する、またはある種の癌を有する可能性があることを示す症状の発見の際、またはその後に提供される。ワクチン（１つまたは複数）の治療的投与は、実際の疾患のいずれの症状も減弱化するために役に立つ。したがって、ワクチンは、疾患増殖の開始より前に（予想される感染症または癌を予防または減弱化するために）、または実際の増殖の開始後に提供することができる。
【００７４】
したがって、一態様では、本発明は、１種または複数の本発明化合物と組み合わせて、１種または複数の細菌性、ウイルス性、原虫性、または腫瘍関連性の抗原を含むワクチンを提供する。ある実施形態では、ワクチンは、ある本発明化合物と組み合わせて、単一の細菌性、ウイルス性、原虫性、または腫瘍関連性抗原を含む。ある実施形態では、ワクチンは、単一の本発明化合物と組み合わせて、２種以上の細菌性、ウイルス性、原虫性、または腫瘍関連性抗原を含む。ある実施形態では、ワクチンは、２種以上の本発明化合物と組み合わせて、２種以上の細菌性、ウイルス性、原虫性、または腫瘍関連性抗原を含む。ある実施形態では、ワクチンは、２種以上の本発明化合物と組み合わせて、単一の細菌性、ウイルス性、原虫性、または腫瘍関連性抗原を含む。
【００７５】
ある実施形態では、提供されるワクチンの１種または複数の抗原は、細菌性抗原である。ある種の実施形態では、細菌性抗原は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｖｉｒｉｄａｎｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐ．、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｐｅｓｔｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｓｐｐ．、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｓｐｐ．、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｌｅｐｔｏｓｐｒｉａ  ｓｐｐ．、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｐｐ．、Ｅｒｌｉｃｈｉａ  ｓｐｐ．、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｓｐｐ．、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される細菌に関連する抗原である。
【００７６】
ある種の実施形態では、提供されるワクチンの１種または複数の抗原は、ウイルス関連の抗原である。ある種の実施形態では、ウイルス関連の抗原は、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、アデノウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、エプスタイン‐バーウイルス、ライノウイルス、ポリオウイルス、コクスサッキーウイルス、エコーウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、水痘−帯状疱疹ウイルス、ヘルペスウイルス、単純ヘルペスウイルス、パルボウイルス、サイトメガロウイルス、肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、アルファウイルス、フラビウイルス、ブニヤウイルス、狂犬病ウイルス、アレナウイルス、フィロウイルス、ＨＩＶ  １、ＨＩＶ  ２、ＨＴＬＶ−１、ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＦｅＬＶ、ウシＬＶ、ＦｅＩＶ、イヌジステンパーウイルス、イヌ感染性肝炎ウイルス、ネコカリシウイルス、ネコ鼻腔気管炎ウイルス、ＴＧＥウイルス、口蹄疫ウイルス、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるウイルスに関連する抗原である。
【００７７】
ある種の実施形態では、提供されるワクチンの１種または複数の抗原は、腫瘍関連抗原である。ある実施形態では、腫瘍関連抗原は、死滅させた腫瘍細胞およびその溶解産物、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−３、およびそれらのペプチド断片；ヒト絨毛性ゴナドトロピンおよびそのペプチド断片；癌胎児性抗原およびそのペプチド断片、αフェトプロテインおよびそのペプチド断片；膵臓がん胎児性抗原およびそれらのペプチド断片；ＭＵＣ−１およびそのペプチド断片、ＣＡ  １２５、ＣＡ  １５−３、ＣＡ  １９−９、ＣＡ  ５４９、ＣＡ  １９５およびそれらのペプチド断片；前立腺特異抗原およびそのペプチド断片；前立腺特異的膜抗原およびそのペプチド断片；扁平上皮癌抗原およびそのペプチド断片；卵巣癌抗原およびそのペプチド断片；膵臓癌関連抗原およびそのペプチド断片；Ｈｅｒ１／ｎｅｕおよびそのペプチド断片；ｇｐ−１００およびそのペプチド断片；変異型Ｋ−ｒａｓタンパク質およびそのペプチド断片；変異型ｐ５３およびそのペプチド断片；切断型上皮細胞成長因子受容体、キメラタンパク質ｐ２１０ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＫＨ−１、Ｎ３、ＧＭ１、ＧＭ２、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｇｂ３、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴｎ、Ｔｎ、Ｌｅｗｉｓｘ、Ｌｅｗｉｓｙ、ＴＦ；およびそれらの混合物からなる群から選択される抗原である。
【００７８】
ある種の実施形態では、抗原は式（Ｉ）の化合物と共有結合する。ある実施形態では、抗原は式（Ｉ）の化合物と共有結合しない。
【００７９】
当分野の技術者は、ワクチンが、医薬として許容される賦形剤または担体を任意選択で含むことができることを理解するであろう。したがって、別の態様によれば、提供されるワクチンは、医薬として許容される賦形剤または担体に任意選択で結合される１種または複数の抗原を含む。ある実施形態では、前記１種または複数の抗原は、医薬として許容される賦形剤に共有結合的に結合される。他の実施形態では、前記１種または複数の抗原は、医薬として許容される賦形剤に非共有結合的に会合される。
【００８０】
上に述べた通り、抗原に対する免疫反応を増強させるために、アジュバントを使用することができる。本発明によれば、被験体に投与された場合に免疫反応を引き起こすために、提供されるワクチンを使用することができる。ある種の実施形態では、抗原に対する免疫反応は、提供されるワクチンを被験体に、前記抗原に対する前記被験体の免疫反応を増強するのに有効な量で投与することによって増強することができる。
【００８１】
上に述べた通り、提供される化合物を、腫瘍関連抗原と組み合わせたアジュバントとして、癌ワクチンに使用することができる。ある種の実施形態では、前記ワクチンを、新生物の治療または予防に使用することができる。ある種の実施形態では、新生物は、良性新生物である。他の実施形態では、新生物は、悪性新生物である。抗原と共に本発明の化合物を使用して、いずれの癌も治療することができる。
【００８２】
ある種の実施形態では、悪性腫瘍は、血液癌である。血液癌は、血液、骨髄、および／またはリンパ節に影響を及ぼす癌の種類である。式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物を使用して治療することができる血液癌の例としては、それだけには限らないが、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリーセル白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、マントル細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、急性前骨髄球性白血病、および多発性骨髄腫が挙げられる。
【００８３】
血液癌以外の他の癌も、式（Ｉ）の化合物を使用して治療することができる。ある種の実施形態では、癌は、固形腫瘍である。式（Ｉ）の化合物を使用して治療することができる例示的な癌としては、ほんの少し例を挙げれば、大腸癌、肺癌、骨癌、膵臓癌、胃癌、食道癌、皮膚癌、脳癌、肝癌、卵巣癌、子宮頸癌、子宮癌、精巣癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、神経内分泌癌、乳癌、胃癌、眼癌、胆嚢癌、喉頭癌、口腔癌、陰茎癌、腺腫瘍、直腸癌、小腸癌、肉腫、癌腫、黒色腫、尿道癌、膣癌が挙げられる。
【００８４】
ある種の実施形態では、本発明の化合物および医薬組成物は、併用療法で利用することができる、すなわち、該化合物および医薬組成物は、１種または複数の他の所望される治療または医学的手順と同時に、またはその前に、またはその後に投与することができる。併用レジメンに利用する治療（治療法または手順）の特定の組み合わせは、所望の治療法および／または手順と、達成される所望の治療効果との適合性を考慮に入れることとなる。利用される治療法は、同じ疾患のための所望の効果を達成する可能性もあるし（例えば、本発明化合物を、別の抗増殖性薬剤と同時に投与することができる）、異なる効果を達成する（例えばいずれかの有害反応を制御する）可能性もあることも理解されよう。
【００８５】
例えば、本発明の抗癌剤と組み合わせて使用できる他の治療または抗癌剤としては、少し例を挙げると、手術、放射線療法（少し例を挙げると、γ−放射線、中性子線放射療法、電子線放射療法、陽子線療法、近接照射療法、および全身的な放射性同位元素）、内分泌療法、生物学的応答修飾因子（少し例を挙げると、インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ））、温熱および寒冷療法、任意の有害反応を減弱化する薬剤（例えば制吐剤）、および他の認可された化学療法薬（それだけには限らないが、アルキル化薬（メクロレタミン、クロラムブシル、シクロホスファミド、メルファラン、イホスファミド）、代謝拮抗剤（メトトレキセート）、プリンアンタゴニストおよびピリミジンアンタゴニスト（６‐メルカプトプリン、５‐フルオロウラシル、シタラビン（Ｃｙｔａｒａｂｉｌｅ）、ゲムシタビン）、紡錘体阻害剤（ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、パクリタキセル）、ポドフィロトキシン（エトポシド、イリノテカン、トポテカン）、抗生物質（ドキソルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシン）、ニトロソウレア（カルムスチン、ロムスチン）、無機イオン（シスプラチン、カルボプラチン）、酵素（アスパラギナーゼ）、およびホルモン（タモキシフェン、ロイプロリド、フルタミド、およびメゲストロール）を含めて）が挙げられる。さらに、本発明はまた、現在臨床試験中であるが、ＦＤＡによって最終的に承認される可能性がある、ある種の細胞毒性薬剤または抗癌剤（それだけには限らないが、エポシロンおよびその類似体、ならびにゲルダナマイシンおよびその類似体を含めて）の使用を包含する。最新の癌治療のより包括的な考察については、ｗｗｗ．ｎｃｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ；ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｃｄｅｒ／ｃａｎｃｅｒ／ｄｒｕｇｌｉｓｔｆｒａｍｅ．ｈｔｍの、ＦＤＡで認可された腫瘍学薬物のリスト；およびＴｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ、第１７版、１９９９（これらの内容全体を、本明細書に組み込むものとする）を参照されたい。
【００８６】
本出願の他の態様は、本出願のワクチン組成物で被験体を免疫するための方法に関する。
【００８７】
他の薬剤の効果を促進するための方法
本出願の他の態様は、式（Ｉ）の極小サポニンアナログまたはその塩によって、抗癌剤などの細胞障害性薬剤の効果を促進するための方法に関する。細胞障害性薬剤の例には、限定はされないが、ベンダムスチン、ブスルファン、カルムスチン、クロラムブシル、シクロフォスファミド、ダカルバジン、イホスファミド、メルファラン、プロカルバジン、ストレプトゾシン、テモゾロミドなどのアルキル化剤；アクチノマイシンＤ／ダクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ドキソルビシン（ペグ化リポソーム）、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン、ミトキサントロンなどの抗腫瘍抗生物質；エトポシド、ドセタキセル、イリノテカン、パクリタキセル、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビンなどの植物アルカロイド／微小管阻害剤；アスパラギナーゼ、カペシタビン、シタラビン、５−フルオロウラシル、フルダラビン、ゲムシタビン、メトトレキセート、ペメトレキセド、ラルチトレキセドなどの抗代謝剤；カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチンなどのＤＮＡ架橋剤；クロドロネート、イバンドロン酸、パミドロネート、ゾレンドロン酸などのビスホスホネート；アレムツザマブ、ＢＣＧ、ベバシズマブ、セツキシマブ、デノスマブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、インターフェロン、イピリムマブ、ラパチニブ、パニツムマブ、リツキシマブ、スニチニブ、ソラフェニブ、テムシロリムス、トラツズマブなどの生物学的製剤；アナストロゾール、アビラテロン、アミホスチン、ベクサロテン、ビカルタミド、ブセレリン、シプロテロン、デガレリクス、エキセメスタン、フルタミド、フォリン酸、フルベストラント、ゴセレリン、ランレオチド、レナリドミド、レトロゾール、リュープロレリン、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、メスナ、オクトレオチド、スチルベストロール、タモキシフェン、サリドマイド、トリプトレリンなどのホルモン／その他を含む抗癌剤が含まれる。
【００８８】
本出願の他の態様は、有効量の式（Ｉ）の極小サポニンアナログまたはその塩、および細胞障害性薬剤を含む薬剤組成物に関する。
【００８９】
治療の方法
本出願の他の態様は、被験体に治療的に有効な量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、被験体の感染症を治療する方法に関する。ある実施形態では、感染症は細菌性である。ある実施形態では、感染症はウイルス性である。ある実施形態では、感染症は原虫性である。ある実施形態では、被験体はヒトである。
【００９０】
本出願の他の態様は、有効量の式（Ｉ）の極小サポニンアナログまたはその塩、および医薬として許容される担体を含む薬剤組成物に関する。
【００９１】
製剤
本極小サポニンアナログは、医薬組成物を形成するために、医薬として許容される賦形剤と組み合わせることができる。ある種の実施形態では、医薬組成物は、医薬として許容される量の本発明化合物を含む。単一の剤形をもたらすために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、治療される宿主および投与の特定の方式に応じて変動することとなる。単一の剤形をもたらすために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、一般に、治療効果をもたらす化合物の量となる。通常、この量は、約１％から約９９％、好ましくは約５％から約７０％、最も好ましくは約１０％から約３０％の活性成分となる。
【００９２】
組成物中には、湿潤剤、乳化剤、および滑沢剤（ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムなど）、ならびに着色剤、離型剤（ｒｅｌｅａｓｅ  ａｇｅｎｔ）、コーティング剤、甘味料、着香料および芳香剤、保存剤および抗酸化剤も存在することができる。
【００９３】
医薬として許容される抗酸化剤の例としては、以下が挙げられる：水溶性抗酸化剤（アスコルビン酸、塩酸システイン、硫酸水素ナトリウム、異性重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど）；油溶性抗酸化剤（パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α‐トコフェロールなど）；および金属キレート剤（クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸など）。
【００９４】
本発明の製剤としては、経口、経鼻、局所（口腔および舌下を含めて）、直腸、膣、および／または非経口投与に適したものが挙げられる。製剤は、単位剤形で与えられることが好都合であり得、また、薬学の分野でよく知られた任意の方法によって調製することができる。ある種の実施形態では、本発明の製剤は、シクロデキストリン、リポソーム、ミセル形成剤（例えば胆汁酸）、および高分子担体（例えばポリエステルおよびポリ酸無水物）からなる群から選択される賦形剤と、本発明の化合物とを含む。ある種の実施形態では、上述の製剤によって、本発明の化合物が、経口的に利用可能になる。
【００９５】
経口投与に適した本発明の製剤は、カプセル、カシェ剤、丸薬、錠剤、トローチ剤（風味をつけた基剤、通常スクロースおよびアカシアもしくはトラガカントゴムを使用する）、粉末、顆粒の形で、または、水性または非水性液体中の溶液もしくは懸濁液として、または水中油型もしくは油中水型液状エマルジョンとして、またはエリキシル剤もしくはシロップとして、または香錠（不活性のベース、例えばゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアカシアなどを使用する）として、および／または含嗽液として、などであり得、それぞれ、活性成分として、予め定められた量の本発明の化合物を含有する。本発明の化合物は、巨丸剤、舐剤、またはペースト剤として投与することもできる。
【００９６】
経口投与のための本発明の固体剤形（カプセル、錠剤、丸薬、糖衣錠、粉末、顆粒など）では、活性成分は、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムなどの１種または複数の医薬として許容される担体、および／または以下のいずれかのものと混合される：充填剤または増量剤、例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、および／またはケイ酸など；結合剤、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、および／またはアカシアなど；保水剤、例えばグリセロールなど；崩壊剤、例えば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカ澱粉、アルギン酸、ある種のケイ酸塩、および炭酸ナトリウムなど；溶液緩速剤（ｒｅｔａｒｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、例えばパラフィンなど；吸収促進剤、例えば第四級アンモニウム化合物など；湿潤剤、例えばセチルアルコール、モノステアリン酸グリセロール、および非イオン性界面活性剤など；吸湿剤、例えばカオリンおよびベントナイト粘土など；滑沢剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体のポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびそれらの混合物など；および着色剤。カプセル、錠剤、および丸薬の場合、医薬組成物はまた、緩衝剤も含むことができる。同様のタイプの固体組成物を、ラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を使用して、ソフトおよびハードゼラチンカプセル中の充填物として利用することもできる。
【００９７】
本発明の化合物の経口投与のための液体剤形としては、医薬として許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、およびエリキシル剤が挙げられる。活性成分に加えて、液体剤形は、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤（エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールなど）、オイル（特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物などの、当分野で一般的に用いられる不活性希釈剤を含有することができる。
【００９８】
不活性希釈剤以外に、経口用組成物はまた、湿潤剤、乳化および懸濁剤、甘味料、着香料、着色剤、芳香剤、および保存剤などの補助剤を含むことができる。
【００９９】
懸濁液は、活性な化合物に加えて、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、およびトラガカントゴム、ならびにそれらの混合物などの懸濁剤を含有することができる。
【０１００】
本発明の医薬組成物に利用することが可能な適切な水性および非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、および適切なそれらの混合物、植物油（オリーブ油など）、および注射可能有機エステル（オレイン酸エチルなど）が挙げられる。例えば、レシチンなどのコーティング材料を使用することによって、また、分散液の場合には、必要とされた粒径の維持によって、また、界面活性剤を用いることによって、適切な流動性を維持することができる。
【０１０１】
これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などの補助剤を含有することもできる。主題化合物への微生物の作用の予防は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを包含させることによって確実にすることができる。糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含めることが望ましい可能性もある。さらに、注射可能な剤型の持続性の吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの、吸収を遅らせる薬剤を含めることによってもたらすことができる。
【０１０２】
注射可能なデポー形は、ポリ乳酸−ポリグリコリドなどの生分解性高分子中に、主題化合物のマイクロカプセル化（ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌｅ）マトリックスを形成することによって作製される。ポリマーに対する薬物の比率、および利用される特定のポリマーの性質に応じて、薬剤放出速度を制御することができる。他の生分解性高分子の例としては、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が挙げられる。デポー注射可能な製剤はまた、体組織と適合性のあるリポソームまたはマイクロエマルジョン中に薬物を閉じ込めることによって調製される。
【０１０３】
ある種の実施形態では、化合物または製剤は、経口投与される。他の実施形態では、化合物または製剤は、静脈内投与される。投与の他の経路としては、舌下、筋肉内、および経皮投与が挙げられる。
【０１０４】
本発明の調製物は、経口的に、非経口的に、局所的に、または直腸内に与えることができる。これは、当然、各投与経路に適した形で与えられる。例えば、これは、錠剤またはカプセル形で、注射、吸入、点眼、軟膏、座薬、などによって（注射、注入、または吸入による投与）；ローションまたは軟膏により局所的に；および座薬により直腸内に投与される。経口投与が好ましい。
【０１０５】
本発明の極小サポインアナログは、以下を含めた任意の適切な投与経路によって、治療のためにヒトおよび他の動物に投与することができる：経口的、経鼻的（例えばスプレーによるものなど）、直腸内、膣内、腸管外、大槽内、および口腔内および舌下を含めて局所的に（粉末、軟膏、または滴剤によるものなど）。
【０１０６】
選択される投与経路に関係なく、適切な水和形で使用することができる本発明の化合物、および／または本発明の医薬組成物は、当業者に知られている従来方法によって、医薬として許容される剤形に調製される。
【０１０７】
患者に対する毒性を伴わずに、特定の患者、組成物、および投与様式に対する所望の治療効果を達成するために有効である活性成分の量を得るために、この発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投薬レベルは、変動し得る。
【０１０８】
選択される投薬レベルは、利用される本発明の特定の化合物、あるいはそのエステル、塩、またはアミドの活性；投与経路；投与の時間；利用される特定の化合物の排出または代謝の速度；治療の期間；利用される特定の化合物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物、および／または材料；治療される患者の年齢、性別、体重、条件、健康状態、および以前の病歴、および医療技術でよく知られたその他の因子を含めた様々な因子に依存する。
【０１０９】
当業の医師または獣医師は、必要とされる医薬組成物の有効な量を容易に決定および処方することができる。例えば、医師または獣医師は、医薬組成物中に利用される本発明の化合物の用量を、所望の治療効果を達成するために必要とされるよりも低いレベルで開始し、その後、所望の効果が達成されるまで、投薬量を徐々に増加させることができる。
【０１１０】
ある実施形態では、本発明の化合物または医薬組成物は、長期にわたって被験体に提供される。長期にわたる治療は、任意の形の、１ヶ月以上、１ヶ月から１年の間、１年以上、またはそれよりも長い間繰り返される投与などの、繰り返される長期間の投与を含む。多くの実施形態では、長期にわたる治療は、被験体の生涯にわたって繰り返し本発明の化合物または医薬組成物を投与することを含む。好ましい長期にわたる治療は、例えば、１日につき１回または複数回、１週につき１回または複数回、または、１ヶ月につき１回または複数回の定期的な投与を含む。一般に、本発明の化合物の１日量などの適切な用量は、治療効果をもたらすために有効な最も低い用量である化合物の量となる。こうした有効量は、一般に、上述の因子に依存することとなる。通常、患者にとっての本発明化合物の用量は、示された効果のために使用される場合、１日につき体重１ｋｇにつき約０．０００１から約１００ｍｇの範囲となる。好ましくは、１日の投薬量は、体重１ｋｇにつき化合物０．００１から５０ｍｇ、さらに好ましくは体重１ｋｇにつき化合物０．０１から１０ｍｇの範囲である。しかし、より低いまたは高い用量も使用することができる。ある実施形態では、被験体に投与される用量は、年齢、疾患進行、体重、または他の因子に起因する被験体の変化の生理条件として変更される可能性がある。
【０１１１】
ある実施形態では、提供されるアジュバント化合物は、医薬組成物またはワクチンとして投与される。ある種の実施形態では、投与されるアジュバント化合物の量は、１〜２０００μｇである。ある種の実施形態では、投与されるアジュバント化合物の量は、１〜１０００μｇである。ある種の実施形態では、投与されるアジュバント化合物の量は、１〜５００μｇである。ある種の実施形態では、投与されるアジュバント化合物の量は、１〜２５０μｇである。ある種の実施形態では、投与されるアジュバント化合物の量は、１００〜１０００μｇである。ある種の実施形態では、投与されるアジュバント化合物の量は、１００〜５００μｇである。ある種の実施形態では、投与されるアジュバント化合物の量は、１００〜２００μｇである。ある種の実施形態では、投与されるアジュバント化合物の量は、２５０〜５００μｇである。ある種の実施形態では、投与されるアジュバント化合物の量は、１０〜１０００μｇである。ある種の実施形態では、投与されるアジュバント化合物の量は、５００〜１０００μｇである。ある種の実施形態では、投与されるアジュバント化合物の量は、５０〜２５０μｇである。ある種の実施形態では、投与されるアジュバント化合物の量は、５０〜５００μｇである。
【０１１２】
必要に応じて、有効な１日量の活性な化合物を、１日を通して適切な間隔で別々に投与される２、３、４、５、６回またはそれ以上の副投与として、任意選択で単位剤形で投与することができる。
【０１１３】
本発明の化合物は、単独で投与することが可能な一方、ある種の実施形態では、化合物は、上に述べた通りの医薬製剤（組成物）として投与される。
【０１１４】
本発明による化合物は、他の医薬品からの類推による、ヒトまたは動物用医薬品で使用するための任意の好都合な方式で、投与のために調製することができる。
【０１１５】
本発明は、発明化合物の薬剤組成物を含むキットを提供する。ある種の実施形態では、式（Ｉ）の化合物および抗原の組み合わせを含むそのようなキット。薬剤は個別に包装されることも、または一括して包装されることもある。キットは、薬物療法を処方するための指示を任意選択で含む。ある種の実施形態では、キットは各薬剤の複数の用量を含む。キットは、被験体を１週間、２週間、３週間、４週間または複数月治療するのに十分な量の各成分を含むことがある。キットは免疫療法の全サイクルを含んでも良い。ある実施形態では、キットは１つまたはそれ以上の細菌、ウイルス、原虫または腫瘍関連性の抗原、および１つまたはそれ以上の提供される化合物を含むワクチンを含む。
【０１１６】
上記および本明細書のすべての引用文献の全内容を、本明細書に組み込むものとする。
【０１１７】
上に記述した明細は、当業者が本発明を実施することを可能にするのに十分であると考えられる。実施例は、本発明の一態様の単一の実例であることが意図されるので、本発明は、提供される実施例による範囲に限定されるものではなく、他の機能的に同等の実施形態も、本発明の範囲内である。本明細書に示されるおよび記載されるものに加えて、本発明の様々な改変も、前述の説明から、当業者には明らかとなり、またこれも、添付の特許請求の範囲内である。本発明の利点および目的は、本発明の各実施形態によって必ずしも包含されるわけではない。
【実施例１】
【０１１８】
ヨウ化サポニン６および８の初期評価
放射ヨウ素（１３１Ｉ）をＱＳ−２１サポニン骨格に導入してインビボ生体分布研究を可能とした。アミン２（ＳＱＳ−０−０−５−１１）のアシル化により非放射能標識ヨウ化アリール６（ＳＱＳ−０−０−５−１８）を合成した（図１ｂ）。アジュバント活性を評価するインビトロモデルが存在しないので、ヨウ化アリール６の生物学的評価は、高免疫原性ＫＨＬ担体タンパク質とコンジュゲートした免疫原性ペプチドＭＵＣ１（前立腺癌および乳癌抗原、非グリコシル化縦列反復配列）（ＭＵＣ１−ＫＬＨ）と、マウスの抗体およびＴ細胞応答の双方を誘導する信頼性の高い免疫原であるＯＶＡから構成される多抗原製剤を包含する前臨床マウス接種モデルで遂行した。目的のアジュバントと同時投与した３つの抗原のそれぞれに対する抗体応答を、ＥＬＩＳＡで測定した。
【０１１９】
ヨウ化アリールサポニン６（ＳＱＳ−０−０−５−１８）は、ＮＱＳ−２１（天然ＱＳ−２１）およびＳＱＳ−２１（合成ＱＳ−２１、６５％１ａ：３５％１ｂ）（図１ｄ〜ｆ）に匹敵する抗体価を誘導し、またマウス体重減少の評価によりＱＳ  ２１と比較して毒性の低下を示した（図１ｇ）。ネガティブコントロールとして、直鎖三糖体ドメインを欠き（図１ｃおよび図７）乏しいアジュバント活性を示すヨウ化サポニン変異体８（ＳＱＳ−０−３−７−１８）を合成した（図７）。
【０１２０】
反応は、別段の指摘がない限り、アルゴン陽圧下で火炎乾燥した封管、またはガラス栓付き改変シュレンク（ケルダール型）フラスコ内で実施した。空気および水分感受性液状物および溶液はシリンジを介して移し替えた。該当する糖質試薬はトルエンを用いた水の共沸除去を介して乾燥させた。分子ふるいは３５０℃で活性化し、使用の直前に粉砕した後、真空中で火炎乾燥した。有機溶液は３０℃未満で回転蒸発により濃縮した。２３０〜４００メッシュシリカゲルを用いてフラッシュカラムクロマトグラフィを実施した。蛍光指示薬を含浸させた２３０〜４００メッシュシリカゲルで厚さ０．２５ｍｍにプレコーティングしたガラスプレートを用いて、薄層クロマトグラフィを実施した。
【実施例２】
【０１２１】
放射ヨウ素化サポニン［１３１Ｉ］−６および［１３１Ｉ］−８の生体内分布
生体内分布試験用に、放射標識ヨウ化アリールサポニン［１３１Ｉ］−６（［１３１Ｉ］−ＳＱＳ−０−０−５−１８）を、トリメチルスタンナン７のアリールスズ−ハロゲン化物交換を介して合成した（図１ｂ）。同様に、ネガティブコントロールとして９から放射ヨウ素化［１３１Ｉ］−８（［１３１Ｉ］−ＳＱＳ−０−３−７−１８）を合成した（図１ｃ）。
【０１２２】
サポニンの作用機序において役割を果たす可能性のある組織および臓器を同定するために、マウスにおいてＯＶＡと同時投与した活性アジュバント［１３１Ｉ］−６の急性インビボ生体内分布を減弱［１３１Ｉ］−８と比較した。［１３１Ｉ］−６の投与により、注射部位（１７倍、７８％ＩＤ／ｇ［注射用量／ｇ］）および最も近い所属リンパ節（２４倍、２７％ＩＤ／ｇ）からの放射能回収量は、注射より２４時間後に［１３１Ｉ］−８と比較して有意に高くなり（図２ａ）、注射より７２時間後および９６時間後も維持された（図８）。対照的に、当初は放射能に何倍もの差が認められた他の組織の放射能（筋肉、骨、皮膚）は、後半の測定点で急速に減少した。２４時間後に［１３１Ｉ］−６の脱ヨウ素化がごくわずかに認められることが低い甲状腺取り込み（０．２１％ＩＤ／ｇ）で立証されたものの（図２ａ）、後半の測定時では脱ヨウ素化が上昇した（図８）。対照的に、注射部位（４．５％ＩＤ／ｇ）および最も近い所属リンパ節（１．１％ＩＤ／ｇ）では、注射より２４時間後の減弱アジュバント［１３１Ｉ］−８の回収量は有意に低いレベルであり、後半の測定点では両部位からさらに除去された（図８）。以上をまとめると、活性アジュバント６（ＳＱＳ−０−０−５−１８）のみが注射部位およびリンパ節に局在および滞留する一方で、減弱アジュバント８（ＳＱＳ−０−３−７−１８）はそうでないことが、これらのデータより示される。
【０１２３】
ＱＳ−２１およびその変異体のアジュバント活性の分子的メカニズムは、乏しく理解されたままである。ＱＳ−２１は、抗原特異的ＣＤ８＋細胞障害性Ｔリンパ細胞を含む、細胞免疫および液性免疫にそれぞれ対応する、Ｔｈ１／Ｔｈ２ヘルパーＴ細胞応答を刺激すると報告されている。ＱＳ−２１がＴｏｌｌ様レセプター２および４と結合せず、またアジュバントが抗原の半減期を延長し、免疫系に対するその提示を拡張するデポー効果によって作用しないことを示唆するエビデンスがいくつかある。また、ツカレソールとの類似性によって、ＱｕｉｌｌａｊａサポニンはＣ４−アルデヒド置換基でのイミン形成を介してＴ細胞表面受容体上のアミノ基と共有結合し、Ｔ細胞活性化に対する共刺激を提供する。
【０１２４】
Ｑｕｉｌｌａｊａサポニンの混合物を含有する他のアジュバントは、抗原の生体分布に影響することが過去に報告されているものの、アジュバントの生体分布が抗原の有無によって影響されるかは不明である。これらの効果をこれらの構造的に確定したＱＳ−２１変異体と共に検討するために、ＯＶＡ非存在下での活性アジュバント［１３１Ｉ］−６および非活性アジュバント［１３１Ｉ］−８の生体内分布を評価した（図９）。いずれの場合も、生体内分布プロフィールは上記のＯＶＡ存在下で認められたものに匹敵し（図８）、抗原ＯＶＡの存在はこれらのサポニンアジュバントの生体内分布に影響しないことを示した。
【０１２５】
補足的な実験で、活性アジュバント６の存在下および非存在下での［１３１Ｉ］−ＯＶＡの生体内分布を検討した（図１０）。同程度の生体内分布プロフィールが得られたものの、甲状腺取り込みも高く、放射ヨウ素化タンパク質に共通して認められる［１３１Ｉ］−ＯＶＡの急速な脱ヨウ素化を示した。したがって、ＯＶＡ抗原の生体内分布に対する６の影響を有効に評価することができず、代替的な実験手法が必要とされた。
【０１２６】
この問題に対処するために、フルオレセイン標識活性アジュバント３（ＳＱＳ−０−０−５−１２）およびＡｌｅｘａ−６４７−コンジュゲートＯＶＡ（ＯＶＡ−Ａ６４７）によるインビボ蛍光撮影実験を実施した。注射より２４時間後、上記の生体内分布結果と一致する、注射部位での蛍光サポニンの滞留（図２ｂ）および所属リンパ節内での蓄積（図２ｃの左側のリンパ節）を認めた。切開リンパ節の免疫組織化学分析より、所属鼠径リンパ節の内部でアジュバント３が皮質に局在していることが示された。フローサイトメトリー分析により、リンパ節内で樹状細胞特異的な３のインターナリゼーションが立証された。さらに、活性アジュバント３および非標識非活性アジュバント２（ＳＱＳ−０−０−５−１１）の双方を投与したマウスでは、注射部位にＯＶＡ−Ａ６４７が認められた一方で（図２ｂおよび図１１）、活性アジュバント３と同時注射した場合は最も近い所属リンパ節にのみ局在した（図２ｃ）。これらのデータは、全般的に、抗原が適応免疫系に提示される所属リンパ節への、抗原提示細胞によるＯＶＡ抗原の輸送における活性サポニン３について役割を示唆する。
【実施例３】
【０１２７】
分枝状三糖ドメインを欠く切断サポニン（１６）
必須トリテルペン核をヒドロキシル基で選択的にシリル化して（ＴＥＳＯＴｆ、２，６−ルチジン）遊離Ｃ２８カルボン酸を有する保護トリテルペンを提供した。三糖トリクロロアセトイミド酸ドナー１２によるβ選択的シュミットグリコシル化（ＢＦ３・ＯＥｔ２）（Ｃｈｅａ，Ｅ．Ｋ．他、簡素化ワクチンアジュバントおよび機構的プローブをもたらすＱＳ−２１変異体の合成および前臨床評価．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３４，１３４４８‐１３４５７（２０１２））の後、アジドを還元して（ＰｈＳｅＨ）対応するグリコシルエステルを得た。６−（（ｔ−ブトキシカルボニル）−アミノ）ヘキサン酸（１４）によるアミンのアシル化（ＥｔＯＣＯＣｌ、Ｅｔ３Ｎ）およびその後の水素分解（Ｈ２、Ｐｄ／Ｃ）および酸加水分解（ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ）による全体的脱保護によって、完全に脱保護されてアシル鎖ドメインの末端に遊離アミン基を担持するサポニンが得られた。後半の、スクシンイミジルエステル４または５によるアミンのアシル化によって、対応するヨウ化アリール１６、１８〜２２または対応するアリールスズ同族体がそれぞれ得られた（図３ａ）。
【０１２８】
サポニン変異体６（ＳＱＳ−０−０−５−１８）を強力で毒性の低いアジュバントとして確立した後、アジュバント活性における分枝状三糖ドメインの役割を検討した。キラ酸１）と保護三糖１２から、このドメイン全体を欠く切断サポニン１６（ＳＱＳ−１−０−５−１８）を合成した（図３ａ）。注目すべきことに、切断サポニン１６は、低用量（２０μｇ）での抗ＭＵＣ１力価を例外として、親化合物ヨウ化アリール６、ＮＱＳ−２１およびＳＱＳ−２１と匹敵し、非アジュバント対照より有意に高いＫＬＨおよびＭＵＣ１抗体応答を誘導した（図３ｂ、３ｃ）。抗ＯＶＡ抗体力価も、親化合物ヨウ化アリールサポニン６によって誘導されたものと同様であり、かつ非アジュバント対照よりも相当高かった（図３ｄ）。さらに、切断サポニン１６はＮＱＳ−２１およびＳＱＳ−２１よりもさらに低く、親化合物ヨウ化アリール６と比較してもわずかに低い毒性を示した（図３ｅ）。したがって、分枝状三糖ドメイン全体は、切断サポニン変異体１６におけるアジュバント活性に必要とされていない。このことはサポニン構造の大幅な簡素化を表し、且つＱＳ−２１それ自体よりも良好な活性／毒性プロフィールを提供する。
【実施例４】
【０１２９】
標的化トリテルペンドメイン修飾を伴うサポニン（１８〜２２）
５匹のマウス群（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、雌性、６〜８週齢）に、ＭＵＣ１−ＫＬＨ（２．５ｍｇ）およびＯＶＡ（２０ｍｇ）からなる３成分ワクチン、またはＧＤ３−ＫＬＨ（５ｍｇ）をさらに含む４成分ワクチンを接種した。抗原は、０、７、１４日目に、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ、１００ｍＬ）中で目的のアジュバント（５、２０、または５０ｍｇ）と同時投与、またはアジュバントなしで投与し（非アジュバント対照）、その後６５日目に追加免疫した。７２日目にマウス血清を採取し、各抗原に対する抗体価をＥＬＩＳＡで測定した。非アジュバント対照と比較した各抗体応答の統計的有意性を、対応のない両側Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−検定でＣＩ＝９５％として評価した。初期一般毒性評価として、マウスの体重減少を初回接種より０、１、２、３、および７日後にモニタリングした。これらの動物実験は、ＭＳＫＣＣ動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）プロトコル＃９７−１１−０５１の記載にしたがって実施した。
【０１３０】
アリールスズサポニン（７、９、１７、Ｓ９）は、Ｎ−スクシンイミジル−４−（トリメチルスタンニル）安息香酸４（Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、２１℃、１〜２．５時間）を用いたアシル化によって、対応するアミン前駆体（２、Ｓ４、１５、Ｓ８）から合成した。放射標識化は、アリールスズサポニン（２０μｇ）を［１３１Ｉ］−ＮａＩおよびクロラミン−Ｔ（メタノール、２１℃、１分）、でヨウ素化し、その直後にＨＰＣＬ精製して達成した。回転蒸発により３５℃で溶媒を除去し、生体分布試験用に放射ヨウ素化プローブを０．９％生理食塩水に配合した。放射ヨウ素化プローブの対応する非放射サポニンとの共溶離を品質管理分析に用いた。
【０１３１】
メタノール中で卵白アルブミン２０μｇを［１３１Ｉ］−ＮａＩおよびクロラミン−Ｔで処理することにより、放射標識卵白アルブミンを合成した。反応混合物をリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）２ｍＬで希釈した後、３０ｋＤａ分子量カットオフフィルターを用いて、２８００ｒｐｍで１２分間遠心濾過した。このプロセスを２回繰り返した後、濃縮された化合物を０．９％生理食塩水１ｍＬに配合して生体分布試験用に用いた。
【０１３２】
分枝状三糖ドメイン全体がアジュバント活性に必要でないという発見によって、キラ酸からの１６（ＳＱＳ−１−０−５−１８）の合成との類似性による代替的トリテルペン前駆体からの新規変異体の半合成による、ＱＳ−２１のトリテルペンドメインの検討が容易になった（図３ａ）。キラ酸中核構造内のＣ４−アルデヒド置換基およびＣ１６−アルコール置換基の役割は特に興味深い。これまで、Ｃ４アルデヒド置換基がＱＳ−２１のアジュバントの活性にとって重要であると提唱されてきた。しかし、トリテルペンアルデヒド置換基を欠くにもかかわらず活性アジュバントである他のサポニンが、最近同定されている。したがって、キラ酸と同じ炭素骨格を有し、Ｃ４置換基（Ｍｅ対ＣＨＯ）およびＣ１６置換基（Ｈ対ＯＨ）の酸化状態のみが異なる出発変異体１８（ＳＱＳ−１−７−５−１８）を、オレアノール酸から合成した（図１２）。
【０１３３】
オレアノール酸誘導体１８（Ｃ１６−Ｍｅ、Ｃ１６−Ｈ）は、親化合物であるキラ酸誘導体１６と比較して、３抗原全てに対する抗体価の低下をもたらした（図４ａ〜ｄ）。さらに、オレアノール酸誘導体１８によるＯＶＡ抗体価は、非アジュバント対照の抗体価と同様であった。したがって、オレアノール酸誘導体１８のＣ４−アルデヒド置換基とＣ１６−アルコールの双方を除去することにより、この前臨床接種モデルにおける抗体応答が相当減弱する。
【０１３４】
これらの各官能基の重要性を個別に検討するために、Ｃ４−アルデヒド置換基およびＣ１６−アルコールの酸化状態を独立に変化させたトリテルペン変異体１９〜２２を合成した（図５ａ）。Ｃ４−アルデヒド置換基が還元されてヒドロキシメチル基となる一方でＣ１６−アルコールが保持されているカウロフィロゲニン変異体１９（ＳＱＳ−１−１１−５−１８）に、１６（ＳＱＳ−１−０−５−１８）の合成における後期中間体からアクセスした（図１３）。Ｃ４−アルデヒド置換基がメチル基で置換される一方、やはりＣ１６−アルコールが保持されているエキノシスト酸変異体２０（ＳＱＳ−１−８−５−１８）、およびＣ４−アルデヒド置換基がヒドロキシメチル基で置換される一方、Ｃ１６アルコールがプロトンで置換されているヘデラゲニン変異体２２（ＳＱＳ−１−１０−５−１８）を、市販品として入手できる対応するトリテルペンより調製した（図１４および図１５）。Ｃ４−アルデヒド置換基を有するもののＣ１６アルコールを欠くギプソゲニン変異体２１（ＳＱＳ−１−９−５−１８）は、ギプソゲニンを得るために、ヘデラゲニンのＣ４−ヒドロキシメチル置換基のＴＥＭＰＯ酸化から開始することによりアクセスした。
【０１３５】
これらのサポニン変異体は、ＭＵＣ１−ＫＬＨ、ＯＶＡ、およびＫＬＨとコンジュゲートした免疫原性の乏しい糖脂質ＧＤ３（メラノーマ、神経芽細胞腫、肉腫抗原）（ＧＤ３−ＫＬＨ）からなる４成分ワクチンで評価した（図５ｂ〜ｅ、２０μｇおよび５０μｇ用量の双方の完全なデータについては図１６を参照）。エキノシスト酸誘導体２０（Ｃ４−Ｍｅ、Ｃ１６−ＯＨ）は、４つの抗原全てに対し、完全な分枝状三糖含有サポニン６およびＳＱＳ−２１と匹敵するかまたはこれを上回る、最も高い抗体応答を誘導した。カウロフィロゲニン誘導体１９（Ｃ４−ＣＨ２ＯＨ、Ｃ１６−ＯＨ）は、高用量時のみ（５０μｇ）とはいえ、エキノシスト酸誘導体２０，分枝状三糖含有サポニン６、およびＳＱＳ−２１をわずかに下回る抗体価を得た。対照的に、ギプソゲニン誘導体２１（Ｃ４−ＣＨＯ、Ｃ１６−Ｈ）およびヘデラゲニン２２誘導体（Ｃ４−ＣＨ２ＯＨ、Ｃ１６−Ｈ）の双方は、抗ＧＤ３  ＩｇＧ応答を除いて全例でより低い抗体応答を、ＫＬＨおよびＯＶＡについては非アジュバント処理対照と同様の抗体応答を生成した。
【０１３６】
抗ＭＵＣ１および抗ＯＶＡ  ＩｇＧアイソタイプの抗体サブタイピングにより、この群（１９、２０）の両アジュバント活性サポニンによるマウスＩｇＧ１およびＩｇＧ２ｂサブタイプへの有意な偏りが判明した。ＳＱＳ−２１および親化合物キラ酸誘導体１６でも同様な結果が得られた。ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ３を含む他のマウスＩｇＧサブタイプの生成は、クラス特異的ＥＬＩＳＡで示されたように低いかまたは些少であった。全４種類の変異体の毒性は、ＮＱＳ−２１およびＳＱＳ−２１と比較して劇的に低いままであった（図５ｆ）。
【０１３７】
したがって、エキノシスト酸誘導体２０は、ＳＱＳ−２１におおむね匹敵する免疫賦活活性を提供するが、随伴する毒性は示さない。カウロフィロゲニン誘導体１９も、完全分枝状三糖含有サポニン６と同様の抗体応答を提供するものの、より高用量を必要とする。重要なことは、エキノシスト酸誘導体２０とカウロフィロゲニン誘導体１９はいずれもＣ４−アルデヒド置換基を欠くものの、Ｃ１６−アルコールを保持していることである。対照的に、ギプソゲニン誘導体２１およびヘデラゲニン誘導体２２はいずれもＣ１６−アルコールを欠いており、試験した全ての抗原に対してより低い抗体応答を誘導した。以上をまとめると、これらのデータより、Ｃ４−アルデヒド置換基は、これらの新規サポニンの強力な免疫アジュバント活性にとって必要でないことが示され、またこれまで認識されていなかったＣ１６−アルコールの活性促進における役割が明らかとなる。
【実施例５】
【０１３８】
切断サポニン［１３１Ｉ］−１６および［１３１Ｉ］−１８の生体内分布
５匹のマウス群（未接種、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌性、８〜１０週齢）に、ＰＢＳ（１５０μＬ）中の目的の放射ヨウ素化サポニンアジュバント（約２５ｍＣｉ）、対応する非放射標識サポニン（２０ｍｇ）、およびＯＶＡ（２０ｍｇ）を皮下注射した。注射より２４時間、７２時間、および９６時間後にマウスを屠殺した。組織および臓器を回収し、臓器重量に対して正規化した放射能分布を分析した（％ＩＤ／ｇ、１ｇ毎の注射用量百分率）。活性アジュバントと減弱化アジュバントの回収量（％ＩＤ／ｇ）の差の統計的有意性を、対応のない両側Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−検定を用い、組織または臓器毎にＣＩ＝９５％で評価した。実験開始時には、注射後２４時間から９６時間の間で生体内分布プロフィールに相当な変化はなく、その後の実験では２４時間後の測定点を用いた。
【０１３９】
マウス３匹の左わき腹を剃毛し、ＰＢＳ（１００μＬ）中の活性アジュバント３（ＳＱＳ−０−０−５−１２）または非活性アジュバント２（ＳＱＳ−０−０−５−１１）１０μｇおよびＡｌｅｘａ−６４７−コンジュゲートＯＶＡ（ＯＶＡ−Ａ６４７）２０μｇで免疫した。注射より２４時間後に、Ｍａｅｓｔｒｏ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍによる全身撮影を実施した。注射より２４時間後にマウスを屠殺し、左右のリンパ節を切開して個別に撮影した。
【０１４０】
放射ヨウ素化同類化合物［１３１Ｉ］−１６（図３ａ）および［１３１Ｉ］−１８（図１２）を用いて、アジュバント活性切断キラ酸変異体１６（ＳＱＳ−１−０−５−１８）のインビボ生体内分布パターンを、アジュバント減弱化オレアノール酸誘導体１８（ＳＱＳ−１−７−５−１８）と比較し、活性／減弱化アジュバントペア６（ＳＱＳ−０−０−５−１８）および８（ＳＱＳ−０−３−７−１８）に関する先の研究との相関を可能とした（図２ａ）。活性アジュバント［１３１Ｉ］−１６は、注射部位（１３６％  ＩＤ／ｇ）およびリンパ節内（３．５５％  ＩＤ／ｇ）に、［１３１Ｉ］−１８（それぞれ１１．５％および０．５０％ＩＤ／ｇ）と比較して有意に高い局在を示した（図６）。したがって、両生体分布試験では、より活性の高いアジュバントが優先的に注射部位に滞留かつリンパ節に蓄積し、この生体内分布パターンとアジュバント活性との正の相関を提供した。
【実施例６】
【０１４１】
ヨウ化および放射標識サポニンアジュバントの合成
出発変異体６（ＳＱＳ−０−０−５−１８）および８（ＳＱＳ−０−３−７−１８）の合成
【化１４】
0006774943.tif 000015
ＳＱＳ−０−０−５−１８（６）．
（ＥＣ−Ｖ−０５６）アミン２（Ｃｈｅａ，Ｅ．Ｋ．他、簡素化ワクチンアジュバントおよび機構的プローブをもたらすＱＳ−２１変異体の合成および前臨床評価．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３４，１３４４８−１３４５７（２０１２）を参照）（９．０ｍｇ、６．０μｍｏｌ、１．０当量）のＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（２．０ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（５０μＬ、０．３６ｍｍｏｌ、６０当量）を投入し、混合物を２１℃で５０分間攪拌した。次に、ヨウ化アリール４（（ａ）Ｚｈｉ，Ｙ．−Ｇ．他、オリゴ（アリーレン−エチニレン）の光ルミネッセンスに関する体系的研究：励起状態の同調性およびタンパク質に対する発光標識プローブとしての誘導体化．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．３１２５−３１３９（２００６）；（ｂ）Ｓｈｅｌｌ，Ｔ．Ａ．，Ｍｏｈｌｅｒ，Ｄ．Ｌ．スペルミン−［ＣｐＷ（ＣＯ）３Ｐｈ］２コンジュゲートによるＤＮＡ−ヒストンアセンブリ内の回裂を目的としたＤＮＡの選択的ターゲティング．Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．３，３０９１−３０９３（２００５）を参照）（２０ｍｇ、６０μｍｏｌ、１０当量）のＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（０．６ｍＬ）溶液を一滴ずつ添加し、反応物を２１℃で１時間攪拌した。内容物を２０％アセトニトリル／水（１０ｍＬ）で希釈し、ＸＢｒｉｄｇｅＰｒｅｐ  ＢＥＨ３００  Ｃ１８カラム（５μｍ、１０×２５０ｍｍ）上で、２０−７０％アセトニトリル／水リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＣＬにより、流速５ｍＬ／分で３０分間直接的に精製した。凍結乾燥後にＳＱＳ−０−０−５−１８（６）（５．４ｍｇ、収率５２％）を白色粉末として得た。
【化１５】
0006774943.tif 000016
【０１４２】
［１３１Ｉ］−ＳＱＳ−０−０−５−１８のアリールスズ前駆体（７）．
（ＥＣ−Ｖ−０５２）アミン２（２．０ｍｇ、１．３μｍｏｌ、１．０当量）のＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（０．９ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（１０μＬ、７２μｍｏｌ、５５当量）を投入し、混合物を２１℃で５０分間攪拌した。次に、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）中のアリールスズ５（Ｋｏｚｉｏｒｏｗｓｋｉ，Ｊ．，Ｈｅｎｓｓｅｎ，Ｃ．，Ｗｅｉｎｒｅｉｃｈ，Ｒ．タンパク質の放射ヨウ素化用の２種類の試薬である放射ヨウ素化３−および４−ヨード安息香酸Ｎ−スクシンイミジルへの新たな簡便な経路．Ａｐｐｌ．Ｒａｄｉａｔ．Ｉｓｏｔ．４９，９５５‐９５９（１９９８））（２．０ｍｇ，５．２μｍｏｌ、４．０当量）のを１滴ずつ添加し、反応物を２１℃で１時間攪拌した。この時より後、内容物を２０％アセトニトリル／水（１０ｍＬ）で希釈し、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＢＥＨ３００  Ｃ１８カラム（５μｍ、１０×２５０ｍｍ）上で、２０−７０％アセトニトリル／水リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＣＬにより、流速５ｍＬ／分で３０分間直接的に精製した。凍結乾燥後、サポニン７（１．８ｍｇ、収率７８％）を白色粉末として得た。
【化１６】
0006774943.tif 000017
【０１４３】
完全保護アミノアシルプロサポゲニンＳ３．
（ＥＣ−Ｖ−１９１）酸Ｓ１（Ｄｅｎｇ，Ｋ．，Ａｄａｍｓ，Ｍ．Ｍ．，Ｇｉｎ，Ｄ．Ｙ．ワクチンアジュバントＱＳ−７−Ａｐｉの合成および構造確認．均一なＱｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ免疫賦活物質への合成アクセス．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３０，５８６０−５８６１（２００８））（５０ｍｇ、２４μｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン（１．５６ｍＬ）溶液およびピリジン（４０μＬ、０．５０ｍｍｏｌ、２０．５当量）を氷浴で冷却した。５分間攪拌後、塩化チオニル（２０μＬ、０．２８ｍｍｏｌ、１１．５当量）を投入した後、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（６．２５μＬ、０．０８１ｍｍｏｌ、３．４当量）を添加し、２１℃で１．５時間攪拌した。生成した透明黄色溶液を濃縮して非晶質白色固形物を得、次にこれをピリジン（４０μＬ、０．５０ｍｍｏｌ、２０．５当量）を含有するジクロロメタン（１．６ｍＬ）に再溶解した。溶液にＳ２（０．１ｍＬ、０．６２  ｍｍｏｌ、２５．８当量）を投入すると、橙色が生じた。３０分後、反応物をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム（３０ｍＬ）で洗浄した。水相をＣＨ２Ｃｌ２（２×３０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせてＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、蒸発乾燥して淡黄色の油状物質を得た。シリカゲルクロマトグラフィ（４：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製してＳ３（４８ｍｇ、収率９１％）をガラス状固形物として得た。
【化１７】
0006774943.tif 000018
【０１４４】
アミノアシルプロサポゲニンＳ４．
（ＥＣ−ＩＶ−１８７）１０ｍＬ丸底フラスコ内で、Ｓ３（２４ｍｇ、１０．８μｍｏｌ、１．０当量）をテトラヒドロフラン／エタノール（５ｍＬ、１：１）に溶解し、さらに１０％（乾燥時）炭素担持パラジウム（ｗｅｔ）、水湿潤、ＤｅｇｕｓｓａタイプＥ１０１  ＮＥ／Ｗ（６３ｍｇ、２９．６μｍｏｌ、２．７当量）を添加した。反応物を、水素加圧（５０ｐｓｉ）下、２１℃で２４時間攪拌した。生成した部分脱シリル化生成物の粗混合物を０．４５μｍナイロンシリンジフィルターで濾過し、メタノール（２０ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）、および再度メタノール（５ｍＬ）ですすぎ、澄明な濾液を蒸発乾固した。脱ベンジル化の成功は、ＣＤ３ＯＤ中での１Ｈ  ＮＭＲによる芳香族共鳴の消失によって評価した。次に、生成した混合物を氷浴中でトリフルオロ酢酸／水（２ｍＬ、４：１）に３．３時間付し、次に蒸発乾固してピンク色の固形物を得た。得られた粗生成物を、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＢＥＨ３００  Ｃ１８カラム（５μｍ、１０×２５０ｍｍ）上で、２０−９５％アセトニトリル／水（ＴＦＡ０．０５％）リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＣＬにより、流量５ｍＬ／分で２０分間精製した。サポニンＳ４（５．４ｍｇ、収率５０％）が幅広い単一ピークとして溶離し、凍結乾燥後に白色粉末として存在した。
【化１８】
0006774943.tif 000019
【０１４５】
ＳＱＳ−０−３−７−１８（８）．
（ＥＣ−ＩＶ−１９４）Ｓ４（７．１ｍｇ、７．１μｍｏｌ、１．０当量）のＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（０．４ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（２０μＬ、０．１４ｍｍｏｌ、２０当量）を投入した後、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（０．４ｍＬ）中の４（１４ｍｇ、４０．６μｍｏｌ、５．７当量）のを一滴ずつ添加した。３時間攪拌した後、内容物を水１０ｍＬ（ＴＦＡ０．０５％）で希釈し、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＢＥＨ３００  Ｃ１８カラム（５μｍ、１０×２５０ｍｍ）上で、３０−８０％アセトニトリル／水（ＴＦＡ０．０５％）リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＣＬにより、流量５ｍＬ／分で３０分間精製した。ＳＱＳ−０−３−７−１８（８）（５．９ｍｇ、収率６８％）が単一ピークとして溶離し、凍結乾燥後に白色粉末として存在した。
【化１９】
0006774943.tif 000020
【０１４６】
［１３１Ｉ］−ＳＱＳ−０−３−７−１８のアリールスズ前駆体（９）．
（ＥＣ−ＩＶ−１９３）トリエチルアミン（２０μＬ、０．１４ｍｍｏｌ、４０当量）を含有するＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）に溶解したＳ４（３．６ｍｇ、３．６μｍｏｌ、１．０当量）溶液に、５（５ｍｇ、１３．１μｍｏｌ、３．６当量）のＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（０．１ｍＬ）溶液を一滴ずつ添加した。２．５時間攪拌した後、内容物を水（４ｍＬ）で希釈し、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＢＥＨ３００  Ｃ１８カラム（５μｍ、１０×２５０ｍｍ）上で、２０−９５％アセトニトリル／水リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＬＣを介して、流量５ｍＬ／分で３０分間精製した。サポニン９（２．４ｍｇ、収率５３％）が単一ピークとして溶離し、凍結乾燥後に白色粉末として得られた。
【０１４７】
分枝状三糖ドメインを欠く変異体の合成（１６）
【化２０】
0006774943.tif 000021
キラ酸のビス（シリルエーテル）（１１）．
（ＡＦＴ−ＩＩ−０４０）キラ酸１０（２００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ、１．０当量）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）懸濁液を氷浴で冷却し、２，６−ルチジン（０．４８ｍＬ、４．１ｍｍｏｌ、１０当量）およびトリフルオロメタンスルホン酸トリエチルシリル（０．４６ｍＬ、２．０６ｍｍｏｌ、５．０当量）を投入した。１時間攪拌した後、内容物を飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）で洗浄し、水相をＣＨ２Ｃｌ２（２×１５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィ（ヘキサン−４：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製して１１を得た（２３５ｍｇ、収率８０％）。
【化２１】
0006774943.tif 000022
【０１４８】
保護キラ酸サポニンアジドＳ２８．
（ＡＦＴ−Ｉ−１６５）１１（３８ｍｇ、４９μｍｏｌ、１．０５当量）およびイミデート１２（５２ｍｇ、４７μｍｏｌ、１．０当量）のＣＨ２Ｃｌ２（７ｍＬ）溶液に、粉末化４Å分子ふるい８０ｍｇを添加し、混合物を２１℃で３０分間攪拌した。次に反応シュレンクを−３５℃に冷却し、三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（１．２μＬ、９．０μｍｏｌ、０．２当量）を投入した。混合物をこの温度で０．５時間攪拌し、トリエチルアミン０．２ｍＬでクエンチングし、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィ（０．２％トリエチルアミンベンゼン溶液−９７：３ベンゼン／ＥｔＯＡｃ）で精製して無色の油状物質を得、さらにクロマトグラフィを実施して所望の生成物Ｓ２８（５６ｍｇ、収率７２％）を白色固形物として得た。
【化２２】
0006774943.tif 000023
【０１４９】
保護キラ酸サポニンアミン１３．
（ＡＦＴ−Ｉ−１６７）トリエチルアミン（２８ｍＬ）に溶解したＳ２８（６２ｍｇ、３７μｍｏｌ、１．０当量）に、用時調製したフェニルセレノール（１．１ｍｍｏｌ、３０当量）溶液を、カニューレを介して添加した。フェニルセレノールの添加後に白色の沈殿が形成され、溶液は明るい黄色となった。反応物を３８℃で８時間攪拌し、その後溶液を濃縮して黄白色固形物を得た。粗混合物をシリカゲルクロマトグラフィ（９０：１０−８５：１５ベンゼン／ＥｔＯＡｃで精製してアミン１３をガラス状固形物として得た（４９ｍｇ、収率８０％）。
【化２３】
0006774943.tif 000024
【０１５０】
完全保護アミノアシルキラ酸サポニンＳ１０．
（ＡＦＴ−Ｉ−１６９）０℃の透明で無色な６−（（ｔ−ブトキシカルボニル）−アミノ）ヘキサン酸（１４）（４５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ、１１．５当量）のテトラヒドロフラン（２．５ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（２１３μＬ、１．５３ｍｍｏｌ、９０当量）、続いてクロロホルム酸エチル（１６．０μＬ、０．１７ｍｍｏｌ、１０．０当量）を添加した。濁った白色の溶液を０℃で２．５時間攪拌した後、カニューレを介して０℃のアミン１３（２８ｍｇ、１７．０μｍｏｌ、１．０当量）に添加した。反応混合物をこの温度で１．５時間攪拌した後、水（０．２ｍＬ）でクエンチングして透明な溶液を得た。内容物を飽和ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）で希釈し、水相をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（３×２５ｍＬ）。合わせた有機相を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発乾固した。シリカゲルクロマトグラフィ（２：１ヘキサン／トリエチルアミン０．２％含有ＥｔＯＡｃ）で精製してＳ１０（２８ｍｇ、収率８８％）を白色ガラス状固形物として得た。
【化２４】
0006774943.tif 000025
【０１５１】
アミノアシルキラ酸サポニン１５
（ＡＦＴ−Ｉ−２０４）５０ｍＬ丸底フラスコ内で、Ｓ１０（６８ｍｇ、３６．６μｍｏｌ、１．０当量）をテトラヒドロフラン／エタノール（２０ｍＬ、１：１）に溶解し、さらに１０％（乾燥時）炭素担持パラジウム（ｗｅｔ）、ＤｅｇｕｓｓａタイプＥ１０１  ＮＥ／Ｗ（３９０ｍｇ、０．１８μｍｏｌ、５．０当量）を添加した。反応物を水素加圧下（５０ｐｓｉ）、２１℃で２４時間攪拌し、懸濁液を０．４５μｍナイロンシリンジフィルターで濾過し、メタノールで洗浄し（３×３０ｍＬ）濃縮した。脱ベンジル化の成功は、ＣＤ３ＯＤ中での１Ｈ  ＮＭＲによる芳香族共鳴の消失によって評価した。次に、粗混合物をトリフルオロ酢酸（８ｍＬ、ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ  ３：１）の溶液に溶解し、氷浴中で２時間攪拌した。反応物を蒸発乾固して白色固形物を得、これを２０％アセトニトリル／水（２０ｍＬ）に溶解し、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＢＥＨ３００  Ｃ１８カラム（５μｍ、１０×２５０ｍｍ）上で、３０−７０％アセトニトリル／水（ＴＦＡ０．０５％）リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＬＣを介して、流速５ｍＬ／分で１５分間精製した。アミノアシルキラ酸サポニン１５が単一ピークとして溶離し、凍結乾燥後に白色粉末（２８ｍｇ、収率７４％）として得られた。
【化２５】
0006774943.tif 000026
【０１５２】
ＳＱＳ−１−０−５−１８（１６）．
（ＡＦＴ−Ｉ−３００）１５（２．１ｍｇ、２．０μｍｏｌ、１．０当量）のＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（０．４ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（１１μＬ、０．０８ｍｍｏｌ、４０当量）を添加した後、４（４．０ｍｇ、１０μｍｏｌ、５．８当量）のＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）溶液を一滴ずつ添加した。２時間攪拌した後、内容物を３０％アセトニトリル／水（２．３ｍＬ）で希釈し、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＢＥＨ３００  Ｃ１８カラム（５μｍ、１０×２５０ｍｍ）上で、３０−７０％アセトニトリル／水（ＴＦＡ０．０５％）リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＬＣにより、流量５ｍＬ／分で１５分間精製した。凍結乾燥後にＳＱＳ−１−１０−５−１８（１６）（１．７ｍｇ、収率６７％）を白色粉末として得た。
【化２６】
0006774943.tif 000027
【０１５３】
［１３１Ｉ］−ＳＱＳ−１−０−５−１８のアリールスズ前駆体（１７）．
（ＥＣ−ＩＶ−２２７）Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）に溶解した１５（０．６５ｍｇ、０．６３μｍｏｌ、１．０当量）に、トリエチルアミン（１０μＬ、７２ｍｍｏｌ、１１４当量）および５（１．０ｍｇ、２．６μｍｏｌ、４．１当量）を添加した。１．５時間攪拌した後、反応物を水（４ｍＬ）で希釈し、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＢＥＨ３００  Ｃ１８カラム（５μｍ、１０×２５０ｍｍ）上で、３５−９５％アセトニトリル／水リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＬＣを介して、流量５ｍＬ／分で３０分間精製した。サポニン１７（０．６ｍｇ、収率７５％）が単一ピークとして溶離し、凍結乾燥後に白色粉末として得られた。
【０１５４】
トリテルペンドメインの修飾を伴う変異体の合成（１８〜２２）
【化２７】
0006774943.tif 000028
オレアノール酸のシリルエーテル（Ｓ２９）．
（ＡＦＴ−Ｉ−１３７）０℃のオレアノール酸Ｓ５（２５０ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ、１．０当量）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液に、２，６−ルチジン（０．３８ｍＬ、３．２８ｍｍｏｌ、６．０当量）、およびトリフルオロメタンスルホン酸トリエチルシリル（０．３７ｍＬ、１．６４ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加し、混合物を１時間攪拌した。内容物を０．５Ｎ  ＨＣｌ（１０ｍＬ）でクエンチングし、水相をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（２×１５ｍＬ）。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮し、最後にシリカゲルクロマトグラフィ（ヘキサン−４：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製してＳ２９を得た（２５０ｍｇ、収率８０％）。
【化２８】
0006774943.tif 000029
【０１５５】
保護オレアノール酸サポニンアジドＳ６．
（ＥＣ−Ｖ−２１５）Ｓ２９（５０ｍｇ、８７μｍｏｌ、１．０当量）およびイミデート１２（９７ｍｇ、８７μｍｏｌ、１．０当量）のＣＨ２Ｃｌ２（８．０ｍＬ）溶液に、粉末化４Å分子ふるい１２０ｍｇを添加し、混合物を２１℃で１時間攪拌した。次に反応シュレンクを−７８℃の浴槽に移し、三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（８．８μＬ、７０μｍｏｌ、０．８当量）を投入した。反応物を−５０℃で２０分間、２１℃で１分間攪拌し、再度−５０℃に冷却し、２０分間攪拌し、最後に再度２１℃で１分間攪拌した。次に−５０℃で混合物をトリエチルアミン（０．１ｍＬ）でクエンチングし、シリカゲル栓を通過させた。生成した濾液を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィ（ヘキサン−５：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製し、Ｓ６をガラス状固形物として得た（８９ｍｇ、収率６８％）。
【化２９】
0006774943.tif 000030
【０１５６】
保護オレアノール酸サポニンアミンＳ３０．
（ＥＣ−Ｖ−２１６）トリエチルアミン（１２ｍＬ）に溶解したＳ６（４４ｍｇ、２９μｍｏｌ、１．０当量）に、用時調製したフェニルセレノール（０．４４ｍｍｏｌ、１５当量）溶液を、カニューレを介して添加した。フェニルセレノールの添加後に白色の沈殿が形成され、混合物は明るい黄色となった。３８℃で８時間攪拌後、溶液を濃縮して黄白色の固形物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィ（５：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ−２％トリエチルアミンＥｔＯＡｃ溶液）で精製してＳ３０（４１ｍｇ、収率９５％）を白色固形物として得た。
【化３０】
0006774943.tif 000031
【０１５７】
完全保護アミノアシルオレアノール酸サポニンＳ７．
（ＥＣ−ＩＶ−２１７）１４（６３ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ、１０当量）のテトラヒドロフラン（２．６ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（３６５μＬ、２．６ｍｍｏｌ、９６当量）を０℃で添加した。透明無色の溶液に、クロロホルム酸エチル（２３μＬ、０．２５ｍｍｏｌ、９．０当量）を投入すると、溶液は白濁した。酸活性化を０℃で２．５時間進行させた後、溶液全体を、アミンＳ３０（４１ｍｇ、２７μｍｏｌ、１．０当量）を収容するシュレンクにカニューレを介して移した。反応混合物を０℃で１．５時間攪拌した後、水（９０μＬ）でクエンチングし、この時点で溶液は白濁から透明に変化した。次に、内容物を蒸発乾固してシリカゲルクロマトグラフィ（５：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製し、Ｓ７を白色ガラス状固形物として得た（４０ｍｇ、収率８１％）。
【化３１】
0006774943.tif 000032
【０１５８】
アミノアシルオレアノール酸サポニンＳ８． 
（ＥＣ−ＩＶ−２１８）Ｓ７（１０ｍｇ、５．８μｍｏｌ、１．０当量）を収容する２５ｍＬ丸底フラスコ内に、テトラヒドロフラン／エタノール（２ｍＬ、１：１）、続いて１０％（乾燥時）炭素担持パラジウム（ｗｅｔ）、ＤｅｇｕｓｓａタイプＥ１０１  ＮＥ／Ｗ（１４．０ｍｇ、６．５μｍｏｌ、１．１当量）を添加した。反応物を水素加圧下（５０ｐｓｉ）、２１℃で２４時間攪拌した後、０．４５ｍｍナイロンシリンジフィルターで濾過し、メタノール（２０ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）、および再度メタノール（５ｍＬ）でパラジウムを完全に洗った。透明な濾液を蒸発乾固した。脱ベンジル化の成功は、ＣＤ３ＯＤ中での１Ｈ  ＮＭＲによる芳香族共鳴の消失によって評価した。次に、混合物をトリフルオロ酢酸／水溶液（２ｍＬ、４：１）に溶解し、氷浴中で２時間攪拌した。この時より後、反応物を蒸発乾固して白色固形物を得、３０−８０％アセトニトリル／水（ＴＦＡ０．１％）リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＬＣにより、流量５ｍＬ／分で２０分間精製した。凍結乾燥後、所望の生成物Ｓ８（２．６ｍｇ、収率４４％）を白色粉末として得た。
【化３２】
0006774943.tif 000033
【０１５９】
ＳＱＳ−１−７−５−１８（１８）．
（ＥＣ−ＩＶ−２２１）アミンＳ８（１．３ｍｇ、１．３μｍｏｌ、１．０当量）をＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（３．６μＬ、２５．６μｍｏｌ、２０当量）を投入した。この溶液に、４（２．５ｍｇ、７．３μｍｏｌ、５．７当量）を添加し、反応混合物を２１℃で２時間攪拌した。この時より後、内容物を水３ｍＬ（ＴＦＡ０．０５％）で希釈し、３０−８０％アセトニトリル／水（ＴＦＡ０．０５％）リニアグラジエントを用いたＨＰＬＣにより、流量５ｍＬ／分で２０分間直接的に精製し、凍結乾燥後にＳＱＳ−１−７−５−１８（１８）（１．０ｍｇ、収率６３％）を白色粉末として得た。
【化３３】
0006774943.tif 000034
【０１６０】
ＳＱＳ−１−７−５−１８のアリールスズ前駆体（Ｓ９）．
（ＥＣ−Ｖ−２２２）アミンＳ８（１．３ｍｇ、１．３μｍｏｌ、１．０当量）のＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（３．６μＬ、２５．６μｍｏｌ、２０当量）、その後５（２．６ｍｇ、６．８μｍｏｌ、５．２当量）を添加した。２１℃で１．５時間攪拌した後、反応物を水３ｍＬで希釈し、３０−９０％アセトニトリル／水リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＬＣにより、流量５ｍＬ／分で３０分間直接的に精製し、凍結乾燥後にＳ９（１．０ｍｇ、収率６２％）を白色粉末として得た。
【化３４】
0006774943.tif 000035
【０１６１】
完全保護アミノアシルカウロフィロゲニンサポニンＳ１１．
（ＡＦＴ−Ｉ−２４３）Ｓ１０（１０ｍｇ、５．４μｍｏｌ）のメタノール（１．０ｍＬ）溶液にＮａＢＨ４を添加し、反応物を２１℃で３時間攪拌した。次に、混合物をアセトン（２ｍＬ）で希釈し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィ（８５：１５ベンゼン／ＥｔＯＡｃ）で精製してＳ１１を得た（１０ｍｇ、収率＞９９％）。
【化３５】
0006774943.tif 000036
【０１６２】
アミノアシルカウロフィロゲニンサポニンＳ１２．
（ＡＦＴ−Ｉ−２４４）２５ｍＬ丸底フラスコ内で、Ｓ１１（１５ｍｇ、８．１μｍｏｌ、１．０当量）をテトラヒドロフラン／エタノール（１：１）４．０ｍＬに溶解し、さらに１０％（乾燥時）炭素担持パラジウム（ｗｅｔ）、ＤｅｇｕｓｓａタイプＥ１０１  ＮＥ／Ｗ（８５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ、５．０当量）を添加した。反応物を水素雰囲気下（バルーン）、２１℃で１２時間攪拌し、懸濁液を０．４５μｍナイロンシリンジフィルターで濾過し、メタノールで完全に洗浄し（４×２０ｍＬ）、濃縮した。脱ベンジル化の成功は、ＣＤ３ＯＤ中での１Ｈ  ＮＭＲによる芳香族共鳴の消失によって評価した。次に、粗混合物をあらかじめ冷却（０℃）したトリフルオロ酢酸（３．２ｍＬ、ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ  ３：１）に溶解し、０℃で１．２５時間攪拌した。反応物を蒸発乾固し、粗生成物を２０％アセトニトリル／水（８ｍＬ）に溶解し、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＢＥＨ３００  Ｃ１８カラム（５μｍ、１０×２５０ｍｍ）上で、２０−７０％アセトニトリル／水（ＴＦＡ０．０５％）リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＬＣを介して、流量５ｍＬ／分で２０分間精製した。凍結乾燥後、所望の生成物Ｓ１２（５．８ｍｇ、収率７０％）を白色粉末として得た。
【化３６】
0006774943.tif 000037
【０１６３】
ＳＱＳ−１−１１−５−１８（１９）． 
（ＡＦＴ−Ｉ−２４５）Ｓ１２（７．０ｍｇ、６．７μｍｏｌ、１．０当量）のＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（１．３ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（２０μＬ、０．１３ｍｍｏｌ、２０当量）を投入した後、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（０．７ｍＬ）中の４（１１．６ｍｇ、３３．６μｍｏｌ、５．０当量）を１滴ずつ添加した。３時間攪拌した後、内容物を２５％アセトニトリル／水（１０ｍＬ）で希釈し、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＢＥＨ３００  Ｃ１８カラム（５μｍ、１０×２５０ｍｍ）上で、３０−７０％アセトニトリル／水（ＴＦＡ０．０５％）リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＬＣにより、流量５ｍＬ／分で１５分間精製した。凍結乾燥後にＳＱＳ−１−１１−５−１８（１９）（５．５ｍｇ、収率６５％）を白色粉末として得た。
【化３７】
0006774943.tif 000038
【０１６４】
エキノシスト酸のビス（シリルエーテル）（Ｓ１４）．
（ＡＦＴ−Ｉ−２０６）エキノシスト酸Ｓ１３（１８ｍｇ、３８μｍｏｌ、１．０当量）をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に懸濁し、氷浴で冷却した。次に２，６−ルチジン（７１μＬ、０．６１ｍｍｏｌ、１６当量）、続いてトリフルオロメタンスルホン酸トリエチルシリル（６９μＬ、０．３１ｍｍｏｌ、８．０当量）を添加し、反応混合物を０℃で１時間攪拌した。この時より後、内容物を飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）で洗浄し、水相をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（２×１０ｍＬ）。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィ（ヘキサン−９：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製してＳ１４を得た（２５ｍｇ、収率９４％）。
【化３８】
0006774943.tif 000039
【０１６５】
保護エキノシスト酸サポニンアジドＳ１９．
（ＡＦＴ−Ｉ−２１２）Ｓ１４（２５ｍｇ、３６μｍｏｌ、１．０当量）およびイミデート１２（５０ｍｇ、４５μｍｏｌ、１．２５当量）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液を、粉末化４Å分子ふるい４０ｍｇと共に−４５℃に冷却した後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（０．９μＬ、７μｍｏｌ、０．２当量）を添加した。混合物をこの温度で０．５時間分攪拌し、トリエチルアミン０．２ｍＬでクエンチングし、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィ（０．２％トリエチルアミンベンゼン溶液−９７：３ベンゼン／ＥｔＯＡｃ）で精製してＳ１９を（４８ｍｇ、収率８０％）を白色固形物として得た。
【化３９】
0006774943.tif 000040
【０１６６】
保護エキノシスト酸サポニンアミンＳ３１．
（ＡＦＴ−Ｉ−２１４）トリエチルアミン（２５ｍＬ）に溶解したＳ１９（５２ｍｇ、３１μｍｏｌ、１．０当量）に、用時調製したフェニルセレノール（０．９４ｍｍｏｌ、３０当量）溶液を、カニューレを介して添加した。反応物を３８℃で８時間攪拌し、その後溶液を濃縮して黄白色固形物を得た。粗混合物をシリカゲルクロマトグラフィ（９：１−４：１トルエン／ＥｔＯＡｃ）で精製してアミンＳ３１をガラス状固形物として得た（４２ｍｇ、収率８３％）。
【化４０】
0006774943.tif 000041
【０１６７】
完全保護アミノアシルエキノシスト酸サポニンＳ２２．
（ＡＦＴ−Ｉ−２１５）０℃の透明で無色な６−（（ｔ−ブトキシカルボニル）−アミノ）ヘキサン酸（１４）（４４ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、１１．５当量）のテトラヒドロフラン（２ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（２０８μＬ、１．４９ｍｍｏｌ、９０当量）、続いてクロロホルム酸エチル（１６．０μＬ、０．１７ｍｍｏｌ、１０．０当量）を添加した。濁った白色の溶液を０℃で２．５時間攪拌した後、０℃でカニューレを介してアミンＳ３１（２７ｍｇ、１６．６μｍｏｌ、１．０当量）に添加した。反応混合物をこの温度で１．５時間攪拌した後、水（０．２ｍＬ）でクエンチングして濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（９：１−５：１ヘキサン／０．２％トリエチルアミン含有ＥｔＯＡｃ）で精製してＳ２２（２７ｍｇ、収率８８％）を白色ガラス状固形物として得た。
【０１６８】
アミノアシルエキノシスト酸サポニンＳ２５．
（ＡＦＴ−Ｉ−２１６）Ｓ２２（２４ｍｇ、１３μｍｏｌ、１．０当量）を収容する２５ｍＬ丸底フラスコ内で、テトラヒドロフラン／エタノール（６ｍＬ、１：１）および１０％（乾燥時）炭素担持パラジウム（ｗｅｔ）、ＤｅｇｕｓｓａタイプＥ１０１  ＮＥ／Ｗ（１３８ｍｇ、６５μｍｏｌ、５．０当量）を添加した。反応物を水素雰囲気下（バルーン）、２１℃で１２時間攪拌し、その後０．４５μｍナイロンシリンジフィルターで濾過し、メタノールで洗浄（３×２０ｍＬ）して濃縮した。脱ベンジル化の成功は、ＣＤ３ＯＤ中での１Ｈ  ＮＭＲによる芳香族共鳴の消失によって評価した。次に、粗混合物をあらかじめ冷却（０℃）したトリフルオロ酢酸（４ｍＬ、ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ  ３：１）の溶液に溶解し、さらに氷浴で１．２５時間攪拌した。反応物を蒸発乾固して白色固形物を得、これを２５％アセトニトリル／水（１２ｍＬ）に溶解し、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＢＥＨ３００  Ｃ１８カラム（５μｍ、１０×２５０ｍｍ）上で、３０−７０％アセトニトリル／水（ＴＦＡ０．０５％）リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＬＣを介して、流速５ｍＬ／分で１５分間精製した。アミノアシルエキノシスト酸サポニンＳ２５が単一ピークとして溶離し、凍結乾燥後に白色粉末（７．０ｍｇ、収率５３％）として得られた。
【化４１】
0006774943.tif 000042
【０１６９】
ＳＱＳ−１−８−５−１８（２０）．
（ＡＦ−Ｉ−２２３）２５ｍＬ丸底フラスコ中でＳ２５（７．０ｍｇ、６．８μｍｏｌ、１．０当量）をＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（０．２ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（２０μＬ、０．１４μｍｏｌ、２０当量）を投入した。４（１１．８ｍｇ、３４μｍｏｌ、５．０当量）のＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）溶液をシリンジを介して１滴ずつ添加し、反応物を２１℃の暗所で攪拌した。３時間後、内容物を２５％アセトニトリル／水（９ｍＬ）で希釈し、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＢＥＨ３００  Ｃ１８カラム（５μｍ、１０×２５０ｍｍ）上で、３０−７０％アセトニトリル／水（ＴＦＡ０．０５％）リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＬＣを介して、流量５ｍＬ／分で１５分間精製した。ＳＱＳ１−８−５−１８（２０）（６．８ｍｇ、収率８０％）が単一ピークとして溶離し、凍結乾燥後に白色粉末として得られた。
【化４２】
0006774943.tif 000043
【０１７０】
ギプソゲニン（Ｓ１６）．
（ＡＦＴ−Ｉ−２１８）２５ｍＬ丸底フラスコ内で、ヘデラゲニンＳ１５（４５ｍｇ、９５μｍｏｌ、１．０当量）をＣＨ２Ｃｌ２（３．５ｍＬ）に懸濁し、その後０．５Ｍ  ＮａＨＣＯ３（１４７ｍｇ）水溶液（３．５ｍＬ）、０．０５Ｍ  Ｋ２ＣＯ３（２４．２ｍｇ）、および塩化テトラブチルアンモニウム水和物（２８ｍｇ、９５μｍｏｌ、１．０当量）を添加した。激しく攪拌している混合物に、ＴＥＭＰＯ（１４．８ｍｇ、９５μｍｏｌ、１．０当量）、続いてＮ−クロロスクシンイミド（３８．０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加し、反応混合物を暗所で２時間攪拌した。内容物を分液漏斗内で分配し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（３×１０ｍＬ）。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して粗生成物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、７：３）で精製して所望のギプソゲニントリテルペンＳ１６を得た（３２ｍｇ、収率７２％）。
【化４３】
0006774943.tif 000044
【０１７１】
ギプソゲニンのシリルエーテル（Ｓ１７）．
（ＡＦＴ−Ｉ−２１９）ギプソゲニンＳ１６（３２ｍｇ、６８μｍｏｌ、１．０当量）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）懸濁液を氷浴で冷却し、２，６−ルチジン（６３μＬ、０．５４ｍｍｏｌ、８．０当量）およびトリフルオロメタンスルホン酸トリエチルシリル（６２μＬ、０．２７ｍｍｏｌ、４．０当量）を投入した。１時間攪拌後、内容物を飽和ＮａＨＣＯ３（７ｍＬ）で洗浄し、水相をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（３×１０ｍＬ）。合わせた有機相を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィ（ヘキサン−４：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で数回精製してＳ１７を得た（２６ｍｇ、収率６５％）。
【化４４】
0006774943.tif 000045
【０１７２】
保護ギプソゲニンサポニンアジドＳ２０．
（ＡＦ−Ｉ−２２４）Ｓ１７（２６ｍｇ、４４μｍｏｌ、１．０当量）およびイミデート１２（５５ｍｇ、４９μｍｏｌ、１．１当量）のＣＨ２Ｃｌ２（６ｍＬ）溶液を、粉末化４Å分子ふるい４０ｍｇと共に２１℃で３０分間攪拌した後、−４５℃に冷却し、その後三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（１．１μＬ、９μｍｏｌ、０．２当量）を投入した。混合物をこの温度で０．５時間攪拌し、トリエチルアミン（０．２ｍＬ）でクエンチングし、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（ベンゼン−９７：３ベンゼン／ＥｔＯＡｃ）で精製して所望の生成物＋数種類の不純物の混合物を得、これをさらにクロマトグラフィに付してＳ２０（４８ｍｇ、収率７０％）をガラス状固形物として得た。
【化４５】
0006774943.tif 000046
【０１７３】
保護ギプソゲニンサポニンアミンＳ３２．
（ＡＦＴ−Ｉ−２２５）Ｓ２０（５０ｍｇ、３２μｍｏｌ、１．０当量）のトリエチルアミン（２７ｍＬ）溶液に、用時調製したフェニルセレノール（１．０７ｍｍｏｌ、３２当量）溶液を、カニューレを介して添加した。３８℃で８時間攪拌後、溶液を濃縮して黄白色の固形物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィ（９：１−８：２トルエン／ＥｔＯＡｃ）で精製してＳ３２（３５ｍｇ、収率７２％）を白色固形物として得た。
【化４６】
0006774943.tif 000047
【０１７４】
完全保護アミノアシルギプソゲニンサポニンＳ２３．
（ＡＦＴ−Ｉ−２２６）０℃の１４（６１ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ、１１．５当量）のテトラヒドロフラン（３ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（２９０μＬ、２．１ｍｍｏｌ、９０当量）、続いてクロロホルム酸エチル（２２μＬ、０．２３ｍｍｏｌ、１０当量）を添加したところ、透明な溶液が白濁した。酸活性化を０℃で２．５時間進行させ、溶液全体を、カニューレを介してアミンＳ３２（３５ｍｇ、２７μｍｏｌ、１．０当量）を収容するシュレンクに移した。反応混合物を０℃で１．５時間攪拌した後、水（９０μＬ）でクエンチングし、この時点で溶液は白濁から透明に変化した。次に、内容物を蒸発乾固してシリカゲルクロマトグラフィ（９：１−５：１ベンゼン／０．２％トリエチルアミン含有ＥｔＯＡｃ）で精製し、Ｓ２３を白色ガラス状固形物として得た（収量３４ｍｇ、８６％）。
【化４７】
0006774943.tif 000048
【０１７５】
アミノアシルギプソゲニンサポニンＳ２６．
（ＡＦＴ−Ｉ−２２７）２５ｍＬ丸底フラスコ内で、Ｓ２３（２７ｍｇ、１５．５μｍｏｌ、１．０当量）をテトラヒドロフラン／エタノール（１：１）６ｍＬに溶解し、さらに１０％（乾燥時）炭素担持パラジウム（ｗｅｔ）、ＤｅｇｕｓｓａタイプＥ１０１  ＮＥ／Ｗ（１６６ｍｇ、７８μｍｏｌ、５当量）を添加した。反応物を、水素雰囲気下（バルーン）、２１℃で１２時間攪拌した。この時より後、混合物を０．４５ｍｍナイロンシリンジフィルターで濾過し、メタノールで洗浄し（２０ｍＬ）、濃縮した。脱ベンジル化の成功は、ＣＤ３ＯＤ中での１Ｈ  ＮＭＲによる芳香族共鳴の消失によって評価した。次に、残渣をあらかじめ冷却（０℃）したトリフルオロ酢酸／水（４ｍＬ、３：１）の溶液に溶解し、氷浴で１．２５時間攪拌した。この時より後、反応物を蒸発乾固して白色固形物を得、３０−８０％アセトニトリル／水（ＴＦＡ０．０５％）リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＬＣにより、流量５ｍＬ／分で１５分間精製した。凍結乾燥後、所望の生成物Ｓ２６（１３ｍｇ、収率８２％）を白色粉末として得た。
【化４８】
0006774943.tif 000049
【０１７６】
ＳＱＳ−１−９−５−１８（２１）．
（ＡＦ−Ｉ−２３０）２５ｍＬ丸底フラスコ内で、アミンＳ２６（６．６ｍｇ、６．５μｍｏｌ、１．０当量）をＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（２．０ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（１８μＬ、０．１３ｍｍｏｌ、２０当量）を投入した。この溶液に、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）に溶解した４（１１．１ｍｇ、３４μｍｏｌ、５．０当量）を１滴ずつ添加し、反応混合物を２１℃の暗所で３時間攪拌した。この時より後、内容物を２５％アセトニトリル／水（ＴＦＡ０．０５％）９ｍＬで希釈し、３０−７０％アセトニトリル／水（ＴＦＡ０．０５％）リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＬＣにより、流量５ｍＬ／分で１５分間直接的に精製した。凍結乾燥後にＳＱＳ−１−９−５−１８（２１）（４．５ｍｇ、収率５６％）を白色粉末として得た。
【化４９】
0006774943.tif 000050
【０１７７】
ヘデラゲニンのビス（シリルエーテル）（Ｓ１８）．
（ＡＦＴ−Ｉ−２２８）ヘデラゲニンＳ１５（３５ｍｇ、７４μｍｏｌ、１．０当量）をＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）に懸濁し、氷浴で冷却した。次に２，６−ルチジン（１３８μＬ、１．１８ｍｍｏｌ、１６当量）、続いてトリフルオロメタンスルホン酸トリエチルシリル（１３４μＬ、０．５９ｍｍｏｌ、８．０当量）を添加し、反応混合物を０℃で１時間攪拌した。これより後、内容物を飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）で洗浄し、水相をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（２×１５ｍＬ）。合わせた有機相を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィ（ヘキサン−４：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で数回精製してＳ１８を得た（４５ｍｇ、収率８１％）。
【化５０】
0006774943.tif 000051
【０１７８】
保護ヘデラゲニンサポニンアジドＳ２１．
（ＡＦＴ−Ｉ−２３２）Ｓ１８（２８ｍｇ、４０μｍｏｌ、１．１当量）およびイミデート１２（４１ｍｇ、３６．７μｍｏｌ、１．０当量）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液を、粉末化４Å分子ふるい３５ｍｇと共に−４５℃に冷却した後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（０．９μＬ、７μｍｏｌ、０．２当量）を添加した。混合物をこの温度で０．５時間攪拌し、トリエチルアミン０．２ｍＬでクエンチングし、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィ（０．２％トリエチルアミンベンゼン溶液−９８：２ベンゼン／ＥｔＯＡｃ）で精製してＳ２１を（４３ｍｇ、収率７１％）をガラス状固形物として得た。
【化５１】
0006774943.tif 000052
【０１７９】
保護ヘデラゲニンサポニンアミンＳ３３．
（ＡＦＴ−Ｉ−２３３）トリエチルアミン（２４ｍＬ）に溶解したＳ２１（４４ｍｇ、２６．５μｍｏｌ、１．０当量）に、用時調製したフェニルセレノール（０．８０ｍｍｏｌ、３０当量）溶液をカニューレを介して添加した。反応物を３８℃で８時間攪拌し、その後溶液を濃縮して黄白色固形物を得た。粗混合物をシリカゲルクロマトグラフィ（９：１−４：１トルエン／ＥｔＯＡｃ）で精製してアミンＳ３３をガラス状固形物として得た（３４．５ｍｇ、収率８０％）。
【化５２】
0006774943.tif 000053
【０１８０】
完全保護アミノアシルヘデラゲニンサポニンＳ２４．
（ＡＦＴ−Ｉ−２３４）０℃の６−（（ｔ−ブトキシカルボニル）−アミノ）ヘキサン酸（１４）（５６ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、１１．５当量）のテトラヒドロフラン（２．５ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（２６３μＬ、１．８９ｍｍｏｌ、９０当量）を添加した後、クロロホルム酸エチル（２０．０μＬ、０．２１ｍｍｏｌ、１０．０当量）を添加した。濁った白色の溶液を０℃で２．５時間攪拌した後、０℃でアミンＳ３３（３４．５ｍｇ、２１．０μｍｏｌ、１．０当量）にカニューレを介して添加した。反応混合物をこの温度で１．５時間攪拌した後、水（０．２ｍＬ）でクエンチングして濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（９：１−５：１ベンゼン／０．２％トリエチルアミン含有ＥｔＯＡｃ）で精製してＳ２４（収量３６．５ｍｇ、９２％）を白色固形物として得た。
【化５３】
0006774943.tif 000054
【０１８１】
アミノアシルヘデラゲニンサポニンＳ２７．
（ＡＦＴ−Ｉ−２３５）２５ｍＬ丸底フラスコ内で、Ｓ２４（３０ｍｇ、１６．３μｍｏｌ、１．０当量）をテトラヒドロフラン／エタノール（７ｍＬ、１：１）に溶解し、さらに１０％（乾燥時）炭素担持パラジウム（ｗｅｔ）、ＤｅｇｕｓｓａタイプＥ１０１  ＮＥ／Ｗ（１７３ｍｇ、８１μｍｏｌ、５．０当量）を添加した。反応物を水素雰囲気下（バルーン）、２１℃で１２時間攪拌し、その後０．４５μｍナイロンシリンジフィルターで濾過し、メタノールで洗浄（３×２０ｍＬ）して濃縮した。脱ベンジル化の成功は、ＣＤ３ＯＤ中での１Ｈ  ＮＭＲによる芳香族共鳴の消失によって評価した。次に、粗混合物をあらかじめ冷却（０℃）したトリフルオロ酢酸（４ｍＬ、ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ  ３：１）の溶液に溶解し、さらに氷浴中で１．２５時間攪拌した。反応物を蒸発乾固し、白色固形物を３０％アセトニトリル／水（ＴＦＡ０．０５％）（１４ｍＬ）に溶解し、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＢＥＨ３００  Ｃ１８カラム（５μｍ、１０×２５０ｍｍ）上で、３０−７０％アセトニトリル／水（ＴＦＡ０．０５％）リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＬＣを介して、流量５ｍＬ／分で１５分間精製した。凍結乾燥後、所望の生成物Ｓ２７（１１．０ｍｇ、収率６６％）を白色粉末として得た。
【化５４】
0006774943.tif 000055
【０１８２】
ＳＱＳ−１−１０−５−１８（２２）．
（ＡＦ−Ｉ−２３６）２５ｍＬ丸底フラスコ中でＳ２７（６．０ｍｇ、５．８μｍｏｌ、１．０当量）をＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（２．５ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（１６．３μＬ、０．１２μｍｏｌ、２０当量）を投入した。４（１０．１ｍｇ、２９μｍｏｌ、５．０当量）のＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）溶液を、シリンジを介して１滴ずつ添加し、反応物を２１℃の暗所で３時間攪拌した。この時より後、内容物を２５％アセトニトリル／水（９ｍＬ）で希釈し、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＢＥＨ３００  Ｃ１８カラム（５μｍ、１０×２５０ｍｍ）上で、３０−７０％アセトニトリル／水（ＴＦＡ０．０５％）リニアグラジエントを用いたＲＰ−ＨＰＬＣを介して、流量５ｍＬ／分で１５分間精製した。凍結乾燥後にＳＱＳ−１−１０−５−１８（２２）（４．２ｍｇ、収率５７％）を白色粉末として得た。
【０１８３】
要約すると、ＱＳ−２１を基にした新規ヨウ素化サポニンの広汎な構造−機能試験により、天然生成物と比較して強力な活性および劇的に低下した毒性（図５）、さらにはこれまでに報告された変異体と比較して改善した合成実施容易性を有する極小サポニン免疫アジュバントとして、エキノシスト酸誘導体２０（ＳＱＳ−１−８−５−１８）が同定された。エキノシスト酸誘導体２０、さらには密接に関連するキラ酸誘導体１６（ＳＱＳ−１−０−５−１８）およびカウロフィロゲニン誘導体１９（ＳＱＳ−１−１１−５−１８）によって誘導されたＩｇＧ抗体のサブタイピングより、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ｂサブクラスが支配的であることが示される。マウスＩｇＧ１サブクラスはＴｈ２細胞応答（液性免疫）と関連する一方、ＩｇＧ２ｂはＩｇＧ２ａと共にＴｈ１応答（細胞免疫）と関係し、補体依存性細胞毒性および抗体依存性細胞毒性を含む、強力な免疫治療エフェクター機能を誘導することが知られている。ＳＱＳ−２１でも同様の結果が得られた。したがって、これらの切断サポニンとＱＳ−２１の間には相当な構造的な差があるものの、それらはＱＳ−２１それ自体の特徴であるＴｈ１およびＴｈ２免疫の両者を誘導する。
【０１８４】
これまで、ＱＳ−２１のトリテルペンドメイン内の構造的要件の研究は、天然産物の化学選択的修飾に随伴する困難、および代替的トリテルペンを組み入れた合成アナログについての物質スループットの限界によって妨げられてきた。したがって、強力なアジュバント活性を維持しかつ毒性を減弱しながら分枝状三糖体ドメイン全体を除去できるという発見は、代替的な容易に入手できるトリテルペン前駆体からの半合成によるこのようなトリテルペン修飾の研究への扉を開いた。
【０１８５】
これらの検討より、Ｃ４−アルデヒド置換基は強力なアジュバント活性にとって必須でない一方で、Ｃ１６−ヒドロキシル基はこれらの切断サポニンの活性を促進することが判明した。対照的に、ＱＳ−２１のＣ４−アルデヒド置換基は、これまでシッフ塩基形成によりＴ細胞表面受容体上のアミノ基と反応し、Ｔ細胞活性化およびＴｈ１細胞免疫にとって必要な共刺激を提供していることが示唆されている。この仮説は、ＱＳ−２１のＣ４アルデヒド置換基の還元的アミン化により、アジュバント活性が著しく減弱したアミン誘導体が提供されるという所見に基づく。しかし、この修飾はＣ４アルデヒド置換基を除去するのみならず、正に荷電したアミノ基をこの位置に導入もし、これにより推定される受容体との非共有結合相互作用が代替的に損なわれるか、そうでなければアジュバントの適切な生体内分布または細胞内局在に干渉する可能性がある。同様の考え方で、Ｃ４−アルデヒド置換基を保持するがアシル鎖ドメインに正に荷電したアミノ官能基を担持するＱＳ２１変異体２（ＳＱＳ−０−０−５−１１）が同様に不活性であることが示された。ＱＳ  ２１およびこれらの修飾合成変異体が異なる分子標的を有する可能性が残っている一方で、それらはインビボで同様の細胞作用を誘導するとみられる。
【０１８６】
反対に、本出願で開示した、Ｃ１６−ヒドロキシル基がこれらの切断サポニンにおいてアジュバント活性を促進するという所見は、おそらくはサポニンのコンホメーションを安定化および／または推定される受容体と直接的に相互作用する際の、この官能基についてこれまで認識されていなかった役割を示唆する。これらの結果は、Ｃ１６−ヒドロキシル基を有するがトリテルペンＣ４−アルデヒド置換基を欠く他のアジュバント活性サポニンの報告と一致する。
【図１−１】
0006774943.tif 000068
【図１−２】
0006774943.tif 000069
【図１−３】
0006774943.tif 000070
【図１−４】
0006774943.tif 000071
【図２−１】
0006774943.tif 000072
【図２−２】
0006774943.tif 000073
【図２−３】
0006774943.tif 000074
【図３−１】
0006774943.tif 000075
【図３−２】
0006774943.tif 000076
【図３−３】
0006774943.tif 000077
【図４−１】
0006774943.tif 000078
【図４−２】
0006774943.tif 000079
【図５−１】
0006774943.tif 000080
【図５−２】
0006774943.tif 000081
【図５−３】
0006774943.tif 000082
【図５−４】
0006774943.tif 000083
【図５−５】
0006774943.tif 000084
【図６】
0006774943.tif 000085
【図７−１】
0006774943.tif 000086
【図７−２】
0006774943.tif 000087
【図８−１】
0006774943.tif 000088
【図８−２】
0006774943.tif 000089
【図９−１】
0006774943.tif 000090
【図９−２】
0006774943.tif 000091
【図９−３】
0006774943.tif 000092
【図１０−１】
0006774943.tif 000093
【図１０−２】
0006774943.tif 000094
【図１１】
0006774943.tif 000095
【図１２】
0006774943.tif 000096
【図１３】
0006774943.tif 000097
【図１４】
0006774943.tif 000098
【図１５】
0006774943.tif 000099
【図１６−１】
0006774943.tif 000100
【図１６−２】
0006774943.tif 000101
【図１６−３】
0006774943.tif 000102