(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１８〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつ配列番号１２２３または配列番号１６３４の核酸塩基配列を具備する核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号１に１００％相補的である、上記化合物。
【請求項２】
修飾オリゴヌクレオチドが、
（ｉ）２０個の連続核酸塩基からなる；
（ｉｉ）１９個の連続核酸塩基からなる；または
（ｉｉｉ）１８個の連続核酸塩基からなる；
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号１２２３の核酸塩基配列からなる、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号１６３４の核酸塩基配列からなる、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項５】
修飾オリゴヌクレオチドがギャップマーである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
修飾オリゴヌクレオチドが１本鎖修飾オリゴヌクレオチドである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
少なくとも１つのヌクレオシド間結合は修飾ヌクレオシド間結合である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
少なくとも1つの修飾ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
少なくとも１つのヌクレオシド間結合はホスホジエステルヌクレオシド間結合である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
それぞれのヌクレオシド間結合は修飾ヌクレオシド間結合であり、それぞれの修飾ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１１】
少なくとも１つのヌクレオシドは修飾核酸塩基を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
前記修飾核酸塩基は５−メチルシトシンである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシドは修飾糖を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
前記少なくとも１つの修飾糖は二環式糖である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
前記二環式糖は糖の２’位と４’位との間に化学架橋を含み、該化学架橋は４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’および４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’から選択され、それぞれのＲは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびＣ１−Ｃ６アルコキシから選択される、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
少なくとも１つの化学架橋が４’−ＣＨ（Ｒ）−Ｏ−２’であり、Ｒがメチルである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
少なくとも１つの化学架橋が４’−ＣＨ（Ｒ）−Ｏ−２’であり、ＲがＨである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１８】
少なくとも１つの化学架橋が４’−ＣＨ（Ｒ）−Ｏ−２’であり、Ｒが−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１９】
修飾糖が２’−Ｏ−メトキシエチル基または２’−Ｏ−メチル基を含む、請求項１３に記載の化合物。
【請求項２０】
修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシドが糖代替物を含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２１】
糖代替物がモルホリノ又はペプチド核酸である、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
修飾オリゴヌクレオチドが、
１〜６個のヌクレオシドを有する５’ウイングセグメントであって、５’ウイングのそれぞれのヌクレオシドが修飾糖を含む、５’ウイングセグメント；
１〜６個のヌクレオシドを有する３’ウイングセグメントであって、３’ウイングのそれぞれのヌクレオシドが修飾糖を含む、３’ウイングセグメント；および
８〜１５個のヌクレオシドを有するギャップセグメントであって、ギャップセグメントのそれぞれのヌクレオシドがデオキシヌクレオシドである、ギャップセグメント、
を含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２３】
修飾オリゴヌクレオチドが、
８個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
５個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
５個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント；
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２４】
１８個の結合ヌクレオシドからなり、かつ配列番号１６３４の核酸塩基配列の１８個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を有する１本鎖修飾オリゴヌクレオチドであって、該修飾オリゴヌクレオチドが、
８個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
５個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
５個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント； 
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、少なくとも１つのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、少なくとも１つのヌクレオシド間結合はホスホジエステルヌクレオシド間結合であり、それぞれのシトシンは５−メチルシトシンである、前記修飾オリゴヌクレオチド。
【請求項２５】
請求項１〜２４のいずれか１項に記載の修飾オリゴヌクレオチドを含む、コンジュゲートされたアンチセンス化合物。
【請求項２６】
請求項１〜２５のいずれか１項に記載の化合物、及び少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む、組成物。
【請求項２７】
薬学的に許容可能な希釈剤がリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）である、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記化合物の修飾オリゴヌクレオチドが塩である、請求項２６又は２７に記載の組成物。
【請求項２９】
塩がナトリウム塩である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物又は組成物を含む、治療用の医薬組成物。
【請求項３１】
請求項１〜３０のいずれか１項に記載の化合物又は組成物を含む、神経変性の疾患、障害または病態の治療用の医薬組成物。
【請求項３２】
神経変性の疾患、障害または病態が、タウオパシー、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、ＦＴＤＰ−１７、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳皮質神経節変性症（ＣＢＤ）、てんかん、またはドラベ症候群である、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記化合物の投与が、タウ関連疾患、障害または病態の進行を妨げ、治療し、改善し、または遅延させる、請求項３０〜３２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、電子フォーマットで配列表と一緒に出願されている。配列表は、サイズが９１６Ｋbで、２０１４年７月１７日に作成されたＢＩＯＬ０２２７ＷＯＳＥＱ＿ＳＴ２５.ｔｘｔと題するファイルとして提供されている。配列表の電子フォーマットでの情報は、その全体が参照により本明細書に組込まれる。
【０００２】
動物におけるタウｍＲＮＡ及び蛋白質の発現を低減するための組成物及び方法が提供される。このような方法は、動物におけるタウの発現を阻害することにより、タウオパシー，アルツハイマー病，前頭側頭型認知症（ＦＴＤ），ＦＴＤＰ−１７，進行性核上性麻痺（ＰＳＰ），慢性外傷性脳症（ＣＴＥ），大脳皮質神経節変性症（ＣＢＤ），てんかん，及びドラベ症候群を含む神経変性疾患を、治療、予防、または改善するのに有用である。
【背景技術】
【０００３】
タウの主要な機能は、有糸分裂、細胞質分裂、及び小胞輸送に関与する細胞骨格の重要な構造コンポーネントである微小管に結合して安定化させることである。タウは、複数の組織に見られるが、神経細胞の軸索において特に豊富である。ヒトでは、エクソン２，３，及び１０の選択的スプライシングによって生成されたタウの６つのアイソフォームが存在する。タンパク質のＮ末端のエクソン２及び３のスプライシングは、ゼロ、１つまたは２つの２９アミノ酸の酸性ドメインの封入につながり、それぞれ０Ｎ，１Ｎ，または２Ｎタウと呼ばれる。タウ機能に及ぼすこれらのドメインの影響は、十分に明らかではないが、細胞膜との相互作用において役割を果し得る。Ｃ末端におけるエクソン１０の封入は、エクソン１０によってコードされる微小管結合ドメインの封入につながる。タウ中には、どこかに３つの微小管結合ドメインがあるので、このタウのアイソフォーム（エクソン１０が含まれる）は、４Ｒタウと呼ばれ、ここで、「Ｒ」は、微小管結合ドメインの繰返し数を指す。エクソン１０のないタウは、３Ｒタウと呼ばれる。より多くの微小管結合ドメイン（３Ｒと比較した４Ｒ）は、微小管への結合を増加させるので、４Ｒタウは、おそらく微小管結合及びアセンブリを大幅に増加させる。３Ｒ／４Ｒタウ比は、３Ｒタウだけを発現する胎児組織及びほぼ等しいレベルの３Ｒ／４Ｒタウを発現する成人組織により、発生的に調節される。正常な３Ｒ／４Ｒタウ比からの逸脱は神経変性ＦＴＤタウオパチーの特徴である。大人の動物の後の段階で３Ｒ／４Ｒタウ比を変化させることがタウ病因にどのような影響を及ぼすかは知られていない。
【０００４】
セリン−トレオニンによって誘導されたリン酸化はタウの微小管結合能を調節する。過剰リン酸化は微小管からのタウの解離を促進する。タウの他の翻訳後修飾が記載されている；しかし、これらの意義は不明である。タウのリン酸化も、胎児組織におけるより高いリン酸化及び成人におけるずっと低いリン酸化により発生的に調節される。神経変性障害の１つの特徴は異常に増加したタウリン酸化である。
【０００５】
微小管ネットワークは、細胞の形態を維持し、輸送機構を作動するのに必要な構造的完全性を含む細胞内の多くの重要なプロセスに関与する。微小管へのタウの結合は微小管を安定化させるので、タウは、これらのプロセスのうちのいくつかの重要なメディエーターである可能性があり、神経変性疾患における正常なタウの破壊はこれらの重要な細胞プロセスのいくつかを破壊し得る。
【０００６】
タウが神経変性症候群において重要であり得る早期の指標の１つは、タウがアルツハイマー病における神経原線維封入体の重要なコンポーネントであるという認識であった。実際、神経原線維封入体は過リン酸化タウタンパク質の凝集体である。アミロイドベータを含有するプラークとともに、神経原線維封入体はアルツハイマー病の特徴であり、認知機能障害と有意に相関する。ＡＤにおけるタウ蓄積の９５％は神経プロセスにおいて見出され、神経炎性ジストロフィーと呼ばれている。この微小管関連タンパク質が微小管から遊離して、タンパク質の蓄積を生じるプロセス及びこのプロセスが神経毒性にいかに関連しているかは十分に理解されていない。
【０００７】
ニューロンのタウ封入体は、アルツハイマー病だけでなく、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、ＰＳＰ及びＣＢＤのサブセットの病理学的特徴である。タウと神経変性との間の関連は、タウ遺伝子における変異がＦＴＤのサブセットを引起すという発見によって証明された。これらの遺伝的データも、３Ｒ：４Ｒタウ比の重要性を強調している。ＦＴＤを引き起こすタウ変異体の多くはエクソン１０の優先的封入を導くタウスプライシングの変化を導き、従って４Ｒタウの増加を導く。全体のタウレベルは正常である。タウアイソフォーム変化またはアミノ酸変化またはこの両方が神経変性を引き起こすかどうかは不明のままである。最近のデータにより、ＰＳＰも、増加した４Ｒ：３Ｒタウ比に関連し得ることが示唆されている。
【０００８】
神経変性に及ぼすタウ比の影響の理解に役立つように、スプライシングタウ変異体（Ｎ２７９Ｋ）の１つに基いたマウスモデルが、タウプロモーター及びエクソン１０の隣接イントロン配列を含むミニ遺伝子を使用して生成されている。ヒトと同様に、これらのマウスは、ＷＴタウを発現するトランスジェニックと比較して増加したレベルの４Ｒタウを示し、行動及び運動異常ならびに脳及び脊髄における凝集したタウの蓄積を発生している。
【０００９】
タンパク質「タウ」は、アルツハイマー病，前頭側頭型認知症，進行性核上性麻痺，大脳皮質基底核神経節変性症，ボクサー認知症，染色体に関連したパーキンソニズム，リチコ−ボディグ病（Ｌｙｔｉｃｏ−Ｂｏｄｉｇ ｄｉｓｅａｓｅ），タングル優勢認知症，神経節，神経節細胞腫，髄膜血管腫症，亜急性硬化性全脳炎，鉛脳症，結節硬化症，ハレルホルデン−スパッツ病，ピック病，嗜銀顆粒病，大脳皮質基底核変性症または前頭側頭葉変性症，及びその他、を含む脳の複数の疾患に関連している。ＡＤなどのタウ関連障害は早期における認知症の最も一般的な原因である。ＡＤは世界で推定１５００万人に影響を及ぼし、８５歳以上の年齢で集団の４０％に影響を及ぼしている。ＡＤは２つの病理学的特徴：タウ神経原線維封入体（ＮＦＴ）及びアミロイド−β（Ａβ）プラークにより特徴付けられている。
【００１０】
このような神経変性疾患を治療するための許容可能な選択肢の欠如が現在存在する。従って、本明細書では、このような疾患の治療のための方法を提供することが目的である。
【発明の概要】
【００１１】
本明細書では、タウｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を調節するための、方法、化合物、及び組成物が提供される。特定の実施形態では、タウｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を調節するのに有用な化合物はアンチセンス化合物である。特定の実施形態では、そのアンチセンス化合物はアンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【００１２】
特定の実施形態では、調節は細胞または組織内で発生し得る。特定の実施形態では、細胞または組織は、動物中にある。特定の実施形態では、動物はヒトである。特定の実施形態では、タウｍＲＮＡレベルが低減される。特定の実施形態では、タウタンパク質のレベルが低下している。このような低下は、時間依存的にまたは用量依存的に起り得る。
【００１３】
疾患、障害、及び病態を予防し、治療し、そして改善するのに有用な方法、化合物、及び組成物も提供される。特定の実施形態では、このようなタウ関連の疾患、障害、及び病態は、神経変性疾患である。特定の実施形態では、このような神経変性疾患、障害、及び病態は、タウオパシー，アルツハイマー病，前頭側頭型認知症（ＦＴＤ），ＦＴＤＰ−１７，進行性核上性麻痺（ＰＳＰ），慢性外傷性脳症（ＣＴＥ），大脳皮質神経節変性症（ＣＢＤ），てんかん，及びドラベ症候群、を含む。
【００１４】
このような疾患、障害、及び病態は、共通した１つ以上のリスク要因、原因、またはアウトカムを持ち得る。神経変性障害の発症の特定のリスク要因及び原因は、加齢、個人もしくは家族の履歴、または遺伝的素因を含む。神経変性障害の発症に関連した特定の症状及びアウトカムは以下を含むが、これらに限定されない：過リン酸化タウの存在，神経原線維介在物の存在，神経機能の低下，記憶力の低下，運動機能の低下，運動協調の低下，及び混乱。
【００１５】
特定の実施形態では、治療方法は、それを必要とする個人にタウアンチセンス化合物を投与することを含む。特定の実施形態では、治療方法は、それを必要とする個人にタウアンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを含む。
【００１６】
本開示は、以下の非限定的な番号付け実施形態を提供する：
【００１７】
実施形態１：１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０−２４４３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４７８−２４８３の任意の核酸塩基配列の、少なくとも８個，少なくとも９個，少なくとも１０個，少なくとも１１個，少なくとも１２個，少なくとも１３個，少なくとも１４個，少なくとも１５個，少なくとも１６個，少なくとも１７個，少なくとも１８個，少なくとも１９個，または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【００１８】
実施形態２：１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４４４−２４７７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４８４−２５６５の任意の核酸塩基配列の、少なくとも８個，少なくとも９個，少なくとも１０個，少なくとも１１個，少なくとも１２個，少なくとも１３個，少なくとも１４個，少なくとも１５個，少なくとも１６個，少なくとも１７個，少なくとも１８個，少なくとも１９個，または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【００１９】
実施形態３：１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０−２５６５の任意の核酸塩基配列の、少なくとも８個，少なくとも９個，少なくとも１０個，少なくとも１１個，少なくとも１２個，少なくとも１３個，少なくとも１４個，少なくとも１５個，少なくとも１６個，少なくとも１７個，少なくとも１８個，少なくとも１９個，または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【００２０】
実施形態４：１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１３５７８３−１３５９８０の等しい長さ部分に相補的な、少なくとも８個，少なくとも９個，少なくとも１０個，少なくとも１１個，少なくとも１２個，少なくとも１３個，少なくとも１４個，少なくとも１５個，少なくとも１６個，少なくとも１７個，少なくとも１８個，少なくとも１９個，または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【００２１】
実施形態５：１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１３５８５３−１３５８７２の等しい長さ部分に相補的な、少なくとも８個，少なくとも９個，少なくとも１０個，少なくとも１１個，少なくとも１２個，少なくとも１３個，少なくとも１４個，少なくとも１５個，少なくとも１６個，少なくとも１７個，少なくとも１８個，少なくとも１９個，または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【００２２】
実施形態６：１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１３５７８３−１３５９２９の等しい長さ部分に相補的な、少なくとも８個，少なくとも９個，少なくとも１０個，少なくとも１１個，少なくとも１２個，少なくとも１３個，少なくとも１４個，少なくとも１５個，少なくとも１６個，少なくとも１７個，少なくとも１８個，少なくとも１９個，または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【００２３】
実施形態７：１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基配列１３５７８３−１３５９１４の等しい長さ部分に相補的な、少なくとも８個，少なくとも９個，少なくとも１０個，少なくとも１１個，少なくとも１２個，少なくとも１３個，少なくとも１４個，少なくとも１５個，少なくとも１６個，少なくとも１７個，少なくとも１８個，少なくとも１９個，または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【００２４】
実施形態８：前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に、少なくとも８０％，少なくとも８１％，少なくとも８２％，少なくとも８３％，少なくとも８４％，少なくとも８５％，少なくとも８６％，少なくとも８７％，少なくとも８８％，少なくとも８９％，少なくとも９０％，少なくとも９１％，少なくとも９２％，少なくとも９３％，少なくとも９４％，少なくとも９５％，少なくとも９６％，少なくとも９７％，少なくとも９８％，少なくとも９９％，または１００％相補的である、実施形態４〜７に記載の化合物。
【００２５】
実施形態９：１本鎖修飾オリゴヌクレオチドからなる前記実施形態のいずれかに記載の化合物。
【００２６】
実施形態１０：少なくとも１つのヌクレオシド間結合は修飾ヌクレオシド間結合である、前記実施形態のいずれかに記載の化合物。
【００２７】
実施形態１１：少なくとも1つの修飾ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、実施形態１０に記載の化合物。
【００２８】
実施形態１２：それぞれの修正ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、実施形態１０に記載の化合物。
【００２９】
実施形態１３：少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、リン酸ジエステルヌクレオシド間結合である、前記実施形態のいずれかに記載の化合物。
【００３０】
実施形態１４：少なくとも１つのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、かつ少なくとも１つのヌクレオシド間結合はリン酸ジエステルヌクレオシド間結合である、前記実施形態のいずれかに記載の化合物。
【００３１】
実施形態１５：少なくとも１つのヌクレオシドは修飾核酸塩基を含む、前記実施形態のいずれかに記載の化合物。
【００３２】
実施形態１６：前記修飾核酸塩基は５−メチルシトシンである、実施形態１５に記載の化合物。
【００３３】
実施形態１７：前記修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシドは修飾糖を含む、前記実施形態のいずれかに記載の化合物。
【００３４】
実施形態１８：前記少なくとも１つの修飾糖は二環式糖である、実施形態１７に記載の化合物。
【００３５】
実施形態１９：前記二環式糖は糖４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’架橋の２’位と４’位との間に化学結合を含み、Ｒは、独立して、Ｈ，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，または保護基である、実施形態１８に記載の化合物。
【００３６】
実施形態２０：前記二環式糖は４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’架橋を含み、Ｒは、独立して、Ｈ，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，または保護基である、実施形態１８に記載の化合物。
【００３７】
実施形態２１：少なくとも1つの修飾糖は２’−Ｏ−メトキシエチル基を含む、実施形態１７に記載の化合物。
【００３８】
実施形態２２：前記修飾糖は２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３基を含む、実施形態１７に記載の化合物。
【００３９】
実施形態２３：前記修飾オリゴヌクレオチドは：
１０個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
５個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
５個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント； 
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む、前記実施形態のいずれかに記載の化合物。
【００４０】
実施形態２４：前記修飾オリゴヌクレオチドは：
９個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
５個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
５個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント； 
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む、前記実施形態のいずれかに記載の化合物。
【００４１】
実施形態２５：前記修飾オリゴヌクレオチドは：
７個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
５個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
６個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント； 
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む、前記実施形態のいずれかに記載の化合物。
【００４２】
実施形態２６：前記修飾オリゴヌクレオチドは：
８個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
５個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
５個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント； 
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む、前記実施形態のいずれかに記載の化合物。
【００４３】
実施形態２７：前記修飾オリゴヌクレオチドは：
８個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
４個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
６個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント； 
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む、前記実施形態のいずれかに記載の化合物。
【００４４】
実施形態２８：前記修飾オリゴヌクレオチドは：
８個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
６個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
４個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント； 
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む、前記実施形態のいずれかに記載の化合物。
【００４５】
実施形態２９：前記修飾オリゴヌクレオチドは２０個の結合ヌクレオシドからなる、前記実施形態のいずれかに記載の化合物。
【００４６】
実施形態３０：前記修飾オリゴヌクレオチドは１９個の結合ヌクレオシドからなる、前記実施形態のいずれかに記載の化合物。
【００４７】
実施形態３１：前記修飾オリゴヌクレオチドは１８個の結合ヌクレオシドからなる、前記実施形態のいずれかに記載の化合物。
【００４８】
実施形態３２：前記実施形態のいずれかに記載の前記化合物またはその組成物、及び少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む組成物。
【００４９】
実施形態３３：前記実施形態のいずれかに記載の前記化合物または組成物の動物への投与を含む方法。
【００５０】
実施形態３４：前記動物はヒトである、実施形態３３に記載の方法。
【００５１】
実施形態３５：前記化合物の投与は、タウ関連疾患、障害または病態の進行を妨げ、治療し、改善し、または遅延させる、実施形態３３に記載の方法。
【００５２】
実施形態３６：前記疾患、障害または病態は、タウオパシー，アルツハイマー病，前頭側頭型認知症（ＦＴＤ），ＦＴＤＰ−１７，進行性核上性麻痺（ＰＳＰ），慢性外傷性脳症（ＣＴＥ），大脳皮質神経節変性症（ＣＢＤ），てんかん，またはドラベ症候群である、実施形態３５に記載の方法。
【００５３】
実施形態３７：神経変性障害の治療のための医薬の製造のための、前記実施形態のいずれかに記載の前記化合物または組成物の使用。
【００５４】
実施形態３８：ＩＳＩＳ６１３０９９からなる化合物。
【００５５】
実施形態３９：ＩＳＩＳ６１３３６１からなる化合物。
【００５６】
実施形態４０：ＩＳＩＳ６１３３７０からなる化合物。
【００５７】
実施形態４１：ＩＳＩＳ６２３７８２からなる化合物。
【００５８】
実施形態４２：ＩＳＩＳ６２３９９６からなる化合物。
【００５９】
実施形態４３：実施形態３８〜４２のいずれかに記載の前記化合物またはその塩、及び少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む組成物。
【００６０】
実施形態４４：実施形態３８〜４３のいずれかに記載の前記化合物またはその塩の動物へ能投与を含む方法。
【００６１】
実施形態４５：前記動物がヒトである、実施形態４４に記載の方法。
【００６２】
実施形態４６：前記化合物の投与は、タウ関連疾患、障害または病態の進行を妨げ、治療し、改善し、または遅延させる、実施形態４４に記載の方法。
【００６３】
実施形態４７：前記疾患、障害または病態は、タウオパシー，アルツハイマー病，前頭側頭型認知症（ＦＴＤ），ＦＴＤＰ−１７，進行性核上性麻痺（ＰＳＰ），慢性外傷性脳症（ＣＴＥ），大脳皮質神経節変性症（ＣＢＤ），てんかん，またはドラベ症候群である、実施形態４６に記載の方法。
【００６４】
実施形態４８：神経変性障害の治療のための医薬の製造のための、実施形態３８〜４３のいずれかに記載の前記化合物または組成物の使用。
【発明を実施するための形態】
【００６５】
前述の一般的な説明と以下の詳細な説明の両方は、請求項に記載されているように、例示的及び説明的のみのものであり、本発明を限定するものではないことが理解されるべきである。本明細書では、別途具体的に記載されなければ、単数形の使用は複数形を含む。本明細書で使用される場合、別途記載されなければ、「または」は「及び/または」を意味する。本明細書で使用される場合、別途記載されなければ、「及び」は「及び/または」を意味する。さらに、用語「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」並びに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態の使用は、限定的なものではない。、「要素（ｅｌｅｍｅｎｔ）」または「コンポーネント（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）」などの用語も、別途具体的に記載されなければ、複数のサブユニットを含む１つのユニット及び「要素類（ｅｌｅｍｅｎｔｓ）」及び「コンポーネント類（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）」を含む、「要素類（ｅｌｅｍｅｎｔｓ）」と「コンポーネント類（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）」の両方を包含する。
【００６６】
本明細書で使用されるセクションの見出しは、構成上の目的のためのみであり、記述される主題を限定するものとして解釈されるべきではない。特許、特許出願、公開特許出願、記事、書籍、論文、及びＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｕｍｂｅｒｓ及びＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ)などのデータベースによって入手できる関連配列情報及び本明細書の開示を通して参照される他のデータなどを含むが、これらに限定されない、本開示において引用されるすべての文書または文書の部分は、本明細書に説明されている文書の部分についての参照により本明細書に明確に組込まれており、同様にそれらの全体が本明細書に明確に組込まれている。
定義
【００６７】
具体的な定義が提供されていない限り、本明細書に記載されている分析化学、有機合成化学並びに医薬品及び医薬品化学に関連して使用されている用語並びにこれらの手順及び技術は当該技術分野において周知であり、一般に使用されているものである。標準的な技術が化学合成及び化学分析のために使用されてもよい。
【００６８】
別途示されない限り、以下の用語は以下の意味を有する：
【００６９】
「２’−Ｏ−メトキシエチル」（２’−ＭＯＥ及び２’−ＯＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ３及びＭＯＥともいう）は、フラノシル環の２’位におけるＯ−メトキシ−エチル修飾を指す。２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖は修飾糖である。
【００７０】
「２’−ＭＯＥヌクレオシド」（２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドともいう）は、２’−ＭＯＥ修飾糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【００７１】
「２’置換ヌクレオシド」は、ＨまたはＯＨ以外のフラノース環の２’位に置換基を含むヌクレオシドを意味する。特定の実施形態では、２’置換ヌクレオシドは二環式糖修飾を有するヌクレオシドを含む。
【００７２】
「５−メチルシトシン」は、５位に付着したメチル基により修飾されたシトシンを意味する。５−メチルシトシンは修飾核酸塩基である。
【００７３】
「約」は、値の±７％内を意味する。例えば、「化合物はタウの少なくとも約７０％阻害に影響を与えた」と記載されている場合、タウレベルが６３％〜７７％の範囲内で阻害されることを意味する。
【００７４】
「併用して投与した」は、両方の薬理作用が同時に患者において現れる任意の方法での２つの医薬品の同時投与を指す。同時投与は、両方の医薬品が単一の医薬組成物で、同じ剤形で、または同じ投与経路によって投与されることを必要としない。両方の医薬品の効果は同時にこれら自体を現す必要はない。効果はある期間重なることのみを必要とし、同一の広がりを持つことを必要としない。
【００７５】
「投与している」は、医薬品を動物に提供していることを意味し、医療専門家によって投与していること及び自己投与していることを含むが、これらに限定されない。
【００７６】
「改善」は、病態または疾患の重症度の少なくとも一つの指標の低減、減速、停止、または逆転を指す。指標の重症度は当業者に公知である主観的または客観的尺度によって決定され得る。
【００７７】
「動物」は、ヒトまたはマウス，ラット，ウサギ，イヌ，ネコ，ブタを含むがこれらに限定されない非ヒト動物，並びに，サル及びチンパンジーを含むがこれらに限定されないが非ヒト霊長類、を指す。
【００７８】
「抗体」は、何らかの方法で抗原と特異的に反応することによって特徴付けられる分子を指し、抗体及び抗原は、それぞれ、他方に関して定義されている。抗体は、完全な抗体分子または任意のフラグメントまたは領域、重鎖、軽鎖、Ｆａｂ領域及びＦｃ領域などのその領域を指し得る。
【００７９】
「アンチセンス活性」は、その標的核酸に対するアンチセンス化合物のハイブリダイゼーションに起因する任意の検出可能または測定可能な活性を意味する。特定の実施形態では、アンチセンス活性は、このような標的核酸によってコードされた標的核酸またはタンパク質の量または発現の減少である。
【００８０】
「アンチセンス化合物」は、水素結合による標的核酸に対するハイブリダイゼーションを受けることができるオリゴマー化合物を意味する。アンチセンス化合物の例には、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ及び占有系化合物などの１本鎖及び２本鎖化合物が含まれる。
【００８１】
「アンチセンス阻害」は、アンチセンス化合物の非存在下での標的核酸レベルと比較した、標的核酸に相補的なアンチセンス化合物の存在下での標的核酸レベルの減少を意味する。
【００８２】
「アンチセンス機構」は、標的核酸との化合物のハイブリダイゼーションに関する全てのこれらの機構であり、ハイブリダイゼーションの結果または効果は、例えば、転写またはスプライシングを含む、細胞機構の失速を伴う標的分解または標的占有のいずれかである。
【００８３】
「アンチセンスオリゴヌクレオチド」は、標的核酸の対応するセグメントに対するハイブリダイゼーションを許容する核酸塩基配列を有する１本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。
【００８４】
「塩基の相補性」は、標的核酸における対応する核酸塩基とのアンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基の正確な塩基対合（すなわちハイブリダイゼーション）の能力を指し、対応する核酸塩基間のＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ，Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎまたは逆Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ水素結合によって媒介される。
【００８５】
「二環式糖」は、２つの原子の架橋によって修飾されたフラノース環を意味する。二環式糖は修飾糖である。
【００８６】
「二環式ヌクレオシド」（ＢＮＡともいう）は、糖環の２つの炭素原子を接続し、それによって二環式環系を形成する架橋を含む糖部分を有するヌクレオシドを意味する。特定の実施形態では、架橋は糖環の４’−炭素と２’−炭素を接続する。
【００８７】
「キャップ構造」または「末端キャップ部分」は、アンチセンス化合物のいずれかの末端に組み込まれている化学修飾を意味する。
【００８８】
「ｃＥｔ」または「限定されたエチル」は、４’−炭素及び２’−炭素を接続する架橋を含む糖部分を有する二環式ヌクレオシドを意味し、架橋は式：４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’を有する。
【００８９】
「限定されたエチルヌクレオシド」（ｃＥｔヌクレオシドともいう）は、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋を含む二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【００９０】
「化学的に異なる領域」は、同じアンチセンス化合物の別の領域と何らかの方法で化学的に異なるアンチセンス化合物の領域を指す。例えば、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオチドを有する領域は、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾のないヌクレオチドを有する領域と化学的に異なる。
【００９１】
「キメラアンチセンス化合物」は、少なくとも２つの化学的に異なる領域を有するアンチセンス化合物を意味し、それぞれの位置は複数のサブユニットを有する。
【００９２】
「同時投与」は、２つ以上の医薬品の個体への投与を意味する。２つ以上の医薬品は単一の医薬組成物中にあってもよく、または別個の医薬組成物中にあってもよい。２つ以上の医薬品のそれぞれは、同じまたは異なる投与経路を介して投与されてもよい。同時投与は並行または連続投与を包含する。
【００９３】
「相補性」は、第１の核酸と第２の核酸の核酸塩基間を対合する能力を意味する。
【００９４】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含んでいる」は、記載されたステップもしくは要素またはステップもしくは要素の群の包含を意味するが、任意の他のステップもしくは要素またはステップもしくは要素の群の排除を意味しないと理解される。
【００９５】
「連続核酸塩基」は、互いに直接隣接する核酸塩基を意味する。
【００９６】
「設計している」または「ように設計された」は、選択された核酸分子と特異的にハイブリダイズするオリゴマー化合物の設計プロセスを指す。
【００９７】
「希釈剤」は、薬理活性を欠くが、薬学的に必要なまたは望ましい組成物中の成分を意味する。例えば、注射される薬物中で、希釈剤は例えば食塩水などの液体であり得る。
【００９８】
「用量」は、単回投与または特定の期間で提供される医薬品の特定量を意味する。特定の実施形態では、用量は、１つ、２つまたはそれ以上のボーラス、錠剤または注射剤で投与されてもよい。例えば、皮下投与が所望される特定の実施形態では、所望の用量は単回注射によって容易に適合しない体積を必要とし、従って、２回以上の注射が所望の用量を達成するために使用され得る。特定の実施形態では、医薬品は長期間にわたってまたは連続して注入によって投与される。用量は、１時間、１日、１週間または１ヶ月当たりの医薬品の量として記載することができる。
【００９９】
活性を調節するまたは病態を治療するもしくは予防する関係において、「有効量」は、単回用量で、または、その効果の調節またはその病態の治療もしくは予防もしくは改善のために有効な一連の一部としてのどちらかでの、そのような調節、治療、または予防を必要とする被験者への医薬品のその量の投与を意味する。有効量は、治療される個体の健康及び身体状態、治療される個体の分類群、組成物の製剤、医学的状況の評価及び他の関連要因に応じて、個体間で変化し得る。
【０１００】
「有効性」は、所望の効果を生じる能力を意味する。
【０１０１】
「発現」は、遺伝子のコードされた情報を、細胞内で存在し、作用する構造に変換する全ての機能を含む。このような構造は、転写及び翻訳の生成物を含むが、これらに限定されない。
【０１０２】
「完全に相補的」または「１００％相補的」は、第１の核酸のそれぞれの核酸塩基が第２の核酸において相補的核酸塩基を有することを意味する。特定の実施形態では、第１の核酸はアンチセンス化合物であり、標的核酸は第２の核酸である。
【０１０３】
「ギャップマー」は、ＲＮａｓｅ Ｈ切断を支持する複数のヌクレオシドを有する内部領域が、１つ以上のヌクレオシドを有する外部領域の間に位置し、内部領域を含むヌクレオシドが外部領域を含むヌクレオシド（複数可）と化学的に異なる、キメラアンチセンス化合物を意味する。内部領域は「ギャップ」と呼ぶことができ、外部領域は「ウイング」と呼ぶことができる。
【０１０４】
「ギャップ狭小」は、１〜６個のヌクレオシドを有する５’と３’ウィングセグメントの間にかつ直接隣接して存在する、９個以下の隣接２’−デオキシロボヌクレオシドのギャップセグメントを有するキメラアンチセンス化合物を意味する。
【０１０５】
「ギャップ広大」は、１〜６個のヌクレオシドを有する５’と３’ウィングセグメントの間にかつ直接隣接して存在する、１２個以上の隣接２’−デオキシロボヌクレオシドのギャップセグメントを有するキメラアンチセンス化合物を意味する。
【０１０６】
「ハイブリダイゼーション」は、相補的核酸分子のアニーリングを意味する。特定の実施形態では、相補的核酸分子は、アンチセンス化合物及び核酸標的を含むが、これらに限定されない。特定の実施形態では、相補的核酸分子は、アンチセンスオリゴヌクレオチド及び核酸標的を含むが、これらに限定されない。
【０１０７】
「タウ関連疾患を有する動物の同定」は、タウ関連疾患と診断されたまたはタウ関連疾患にかかりやすい素因を持っている動物を同定することを意味する。タウ関連疾患にかかりやすい素因を持つ個体は、加齢、個人または家族の履歴、または１つ以上のタウ関連疾患の遺伝性素因を含む、タウ関連疾患の１つ以上のリスク要因を有する個体を含む。このような同定は、個体の病歴の評価及び遺伝子検査などの臨床検査または評価を含む任意の方法によって達成することができる。
【０１０８】
「直接隣接する」は、直接隣接する要素の間に介在する要素が存在しないことを意味する。
【０１０９】
「個体」は、治療または療法のために選択されるヒトまたは非ヒト動物を意味する。
【０１１０】
「タウを阻害する」は、タウｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルまたは発現を減少させることを意味する。特定の実施形態では、タウは、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのタウアンチセンス化合物の非存在下でのタウｍＲＮＡ及び／またはタンパク質レベルの発現と比較して、タウを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、タウを標的とするアンチセンス化合物の存在下で阻害される。
【０１１１】
「発現または活性を阻害する」は、発現または活性の減少または遮断を指し、発現または活性の全ての排除を必ずしも指さない。
【０１１２】
「ヌクレオシド間結合」は、ヌクレオシド間の化学結合を指す。
【０１１３】
「結合ヌクレオシド」は、ヌクレオシド間結合によって一緒に結合した隣接ヌクレオシドを意味する。
【０１１４】
「ロックされた核酸」または「ＬＮＡ」または「ＬＮＡヌクレオシド」は、ヌクレオシド糖ユニットの４’位と２’位との間で２つの炭素原子を接続し、それにより二環式糖を形成する架橋を有する核酸モノマーを意味する。このような二環式糖の例は、以下に示されるように、Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡ，（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡ，（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＬＮＡ，（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＬＮＡ及び（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＬＮＡを含むが、これらに限定されない。
【０１１５】
【化１】
0006684707.tif 000002
【０１１６】
本明細書で使用される場合、ＬＮＡ化合物は、糖の４’位と２’位との間に少なくとも１つの架橋を有し、架橋のそれぞれが、−［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ−，−Ｃ（Ｒ１）＝Ｃ（Ｒ２）−，−Ｃ（Ｒ１）＝Ｎ−，−Ｃ（＝ＮＲ１）−，−Ｃ（＝Ｏ）−，−Ｃ（＝Ｓ）−，−Ｏ−，−Ｓｉ（Ｒ１）２−，−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−及び−Ｎ（Ｒ１）−から独立して選択される１または２〜４個の結合基を独立して含む化合物を含むが、これらに限定されない。ここで、ｘは０，１または２であり、ｎは１，２，３または４であり、Ｒ１及びＲ２のそれぞれは、独立して、Ｈ，保護基，ヒドロキシル，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ２−Ｃ１２アルキニル，置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル，Ｃ５−Ｃ２０アリール，置換Ｃ５−Ｃ２０アリール，複素環ラジカル，置換複素環ラジカル，ヘテロアリール，置換ヘテロアリール，Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル，置換Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル，ハロゲン，ＯＪ１，ＮＪ１Ｊ２，ＳＪ１，Ｎ３，ＣＯＯＪ１，アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ），置換アシル，ＣＮ，スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり、Ｊ１及びＪ２のそれぞれは、独立して、Ｈ，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ２−Ｃ１２アルキニル，置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル，Ｃ５−Ｃ２０アリール，置換Ｃ５−Ｃ２０アリール，アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ），置換アシル，複素環ラジカル，置換複素環ラジカル，Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル，置換Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキルまたは保護基である。
【０１１７】
ＬＮＡの定義に包含される４’−２’架橋基の例は、式：−［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ−，−［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ−Ｏ−，−Ｃ（Ｒ１Ｒ２）−Ｎ（Ｒ１）−Ｏ−または−Ｃ（Ｒ１Ｒ２）−Ｏ−Ｎ（Ｒ１）−のうちの１つを含むが、これに限定されない。さらに、ＬＮＡの定義に包含されている他の架橋基は、４’−ＣＨ２−２’，４’−（ＣＨ２）２−２’，４’−（ＣＨ２）３−２’，４’−ＣＨ２−Ｏ−２’，４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’，４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ１）−２’及び４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ１）−Ｏ−２’−架橋であり、Ｒ１及びＲ２のそれぞれは、独立して、Ｈ，保護基またはＣ１−Ｃ１２アルキルである。
【０１１８】
本発明に係るＬＮＡの定義には、リボシル糖環の２’−ヒドロキシル基が糖環の４’炭素原子に接続され、それによりメチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）架橋を形成して、二環式糖部分を形成する、ＬＮＡも含まれる。架橋は、２’酸素原子及び４’炭素原子を接続するメチレン（−ＣＨ２−）基であってもよく、これに対してはメチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡという用語が使用される。さらに、この位置においてエチレン架橋基を有する二環式糖部分の場合、エチレンオキシ（４’−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡという用語が使用される。本明細書で使用される場合、α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’），メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡの異性体も、ＬＮＡの定義に包含される。
【０１１９】
「ミスマッチ」または「非相補的核酸塩基」は、第１の核酸の核酸塩基が第２または標的核酸の対応する核酸塩基と対合できない場合の事例を指す。
【０１２０】
「修飾ヌクレオシド間結合」は、天然に存在するヌクレオシド間結合（すなわちホスホジエステルヌクレオシド間結合）からの置換または任意の変化を指す。
【０１２１】
「修飾核酸塩基」は、アデニン，シトシン，グアニン，チミジンまたはウラシル以外の任意の核酸塩基を意味する。「未修飾核酸塩基」は、プリン塩基アデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ），並びにピリミジン塩基チミン（Ｔ），シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）を意味する。
【０１２２】
「修飾ヌクレオシド」は、独立して、修飾された糖部分及び／または修飾された核酸塩基を有するヌクレオシドを意味する。
【０１２３】
「修飾ヌクレオチド」は、独立して、修飾糖部分、修飾ヌクレオシド間結合、及び／または修飾核酸塩基を有するヌクレオチドを意味する。
【０１２４】
「修飾オリゴヌクレオチド」は、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合、修飾糖及び／または修飾核酸塩基を含むオリゴヌクレオチドを意味する。
【０１２５】
「修飾糖」は、天然糖部分からの置換及び／または任意の変化を意味する。
【０１２６】
「モノマー」は、オリゴマーの単一ユニットを指す。モノマーは、天然に存在しているかまたは修飾されているかに関わらず、ヌクレオシド及びヌクレオチドを含むが、これに限定されない。
【０１２７】
「モチーフ」は、アンチセンス化合物における修飾されていない及び修飾されたヌクレオシドのパターンを意味する。
【０１２８】
「天然の糖部分」は、ＤＮＡ（２’−Ｈ）またはＲＮＡ（２’−ＯＨ）に見られる糖部分を意味する。
【０１２９】
「天然に存在するヌクレオシド間結合」は、３’から５’ホスホジエステル結合を意味する。
【０１３０】
「非相補的核酸塩基」は、互いに水素結合を形成しないまたは別途ハイブリダイゼーションを支持しない一対の核酸塩基を指す。
【０１３１】
「核酸」は、モノマーヌクレオチドから構成された分子を指す。核酸は、リボ核酸（ＲＮＡ），デオキシリボ核酸（ＤＮＡ），１本鎖核酸，２本鎖核酸、低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）を含むが、これらに限定されない。
【０１３２】
「核酸塩基」は、他の核酸の塩基と対合できる複素環部分を意味する。
【０１３３】
「核酸塩基相補性」は、他の核酸塩基と塩基対合できる核酸塩基を指す。例えば、ＤＮＡにおいて、アデニン（Ａ）はチミン（Ｔ）に相補的である。例えば、ＲＮＡにおいて、アデニン（Ａ）はウラシル（Ｕ）に相補的である。特定の実施形態では、相補的核酸塩基は、この標的核酸の核酸塩基と塩基対合できるアンチセンス化合物の核酸塩基を指す。例えば、アンチセンス化合物の特定の位置における核酸塩基が標的核酸の特定の位置において核酸塩基と水素結合できる場合、オリゴヌクレオチドと標的核酸との間の水素結合の位置はこの核酸塩基対において相補的であるとみなされる。
【０１３４】
「核酸塩基配列」は、任意の糖、結合及び／または核酸塩基修飾から独立した、隣接核酸塩基の順序を意味する。
【０１３５】
「ヌクレオシド」は、糖に結合した核酸塩基を意味する。
【０１３６】
「ヌクレオシド模倣剤」は、糖または糖及び塩基を置換するのに使用される構造を含み、例えば、モルホリノ，シクロヘキセニル，シクロヘキシル，テトラヒドロピラニル，ビシクロまたはトリシクロ糖模倣剤，例えば非フラノース糖ユニットを有するヌクレオシド模倣剤などのオリゴマー化合物の１つ以上の位置における結合を必ずしも含まない。ヌクレオチド模倣剤は、例えばペプチド核酸またはモルホリノ（−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−または他の非ホスホジエステル結合によって結合したモルホリノ）などのオリゴマー化合物の１つ以上の位置におけるヌクレオシド及び結合を置換するために使用される構造を含む。糖代替物は、わずかに広い用語ヌクレオシド模倣剤と重なるが、糖単位（フラノース環）のみの置換を示すことが意図されている。本明細書に提供されるテトラヒドロピラニル環は、フラノース糖基がテトラヒドロピラニル環系と置換されている糖代替物の例を示している。「模倣剤」は、糖、核酸塩基及び／またはヌクレオシド間結合に置換されている基を指す。一般に、模倣剤は糖または糖−ヌクレオシド間結合の組合せの代わりに使用されており、核酸塩基は選択された標的に対するハイブリダイゼーションのために維持される。
【０１３７】
「ヌクレオチド」は、ヌクレオシドの糖部分に共有結合したリン酸基を有するヌクレオシドを意味する。
【０１３８】
「オフターゲット効果」は、意図した標的核酸以外の遺伝子のＲＮＡまたはタンパク質発現の調節に関連した望ましくないまたは有害な生物学的効果を指す。
【０１３９】
「オリゴマー化合物」または「オリゴマー」は、核酸分子の少なくとも１つの領域にハイブリダイズできる結合したモノマーサブユニットのポリマーを指す。
【０１４０】
「オリゴヌクレオチド」は、それぞれが互いに独立して修飾または未修飾であり得る結合ヌクレオシドのポリマーを意味する。
【０１４１】
「非経口投与」は、注射（例えばボーラス注射）または注入による投与を意味する。非経口投与は、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与または、例えば、くも膜下または脳室内投与などの、頭蓋内投与、を含む。
【０１４２】
「ペプチド」は、アミド結合により少なくとも２つのアミノ酸を結合することによって形成された分子を意味する。本明細書で使用される場合、「ペプチド」は、ポリペプチド及びタンパク質を指すが、限定されない。
【０１４３】
「医薬品」は、個体に投与された場合に治療的有用性を提供する物質を意味する。例えば、特定の実施形態では、タウを標的としたアンチセンスオリゴヌクレオチドは医薬品である。
【０１４４】
「医薬組成物」は、被験者への投与に適した物質の混合物を意味する。例えば、医薬組成物はアンチセンスオリゴヌクレオチド及び無菌水溶液を含んでもよい。
【０１４５】
「薬学的に許容可能な誘導体」は、本明細書に記載される化合物の薬学的に許容可能な塩、コンジュゲート、プロドラッグまたは異性体を包含する。
【０１４６】
「薬学的に許容可能な塩」は、アンチセンス化合物の生理的及び薬学的に許容可能な塩、すなわち親オリゴヌクレオチドの所望の生物活性を保持しており、このアンチセンス化合物に望ましくない毒性効果を与えない塩を指す。
【０１４７】
「ホスホロチオエート結合」は、ホスホジエステル結合が、非架橋酸素原子の１つを硫黄原子に置換することによって修飾されているヌクレオシド間の結合を意味する。ホスホロチオエート結合は修飾ヌクレオシド間結合である。
【０１４８】
「部分」は、核酸の規定された数の隣接（結合）核酸塩基を意味する。特定の実施形態では、部分は標的核酸の規定された数の隣接する核酸塩基である。特定の実施形態では、部分はアンチセンス化合物の規定された数の隣接核酸塩基である。
【０１４９】
「予防」または「予防している」は、数分間から数日間、数週間から数ヶ月間、あるいは無期限に、疾患、障害または病態の発病または発症を遅延させることまたは未然に防ぐことを指す。
【０１５０】
「プロドラッグ」は、内因性酵素または他の化学物質及び／もしくは条件の作用によって身体またはその細胞内で活性形態（すなわち薬物）に変換される不活性形態で調製されている治療剤を意味する。
【０１５１】
「予防的有効量」は、予防的または防止的有益性を動物に提供する医薬品の量を指す。
【０１５２】
「領域」は、少なくとも１つの識別できる構造、機能または特徴を有する標的核酸の部分として定義される。
【０１５３】
「リボヌクレオチド」は、ヌクレオチドの糖部分の２’位においてヒドロキシを有するヌクレオチドを意味する。リボヌクレオチドは様々な置換基のいずれかで修飾されてもよい。
【０１５４】
「塩」は、アンチセンス化合物の生理的及び薬学的に許容可能な塩、すなわち親オリゴヌクレオチドの所望の生物活性を保持しており、このアンチセンス化合物に望ましくない毒性効果を与えない塩を意味する。
【０１５５】
「セグメント」は、標的核酸内のより小さいまたは副部分の領域として定義される。
【０１５６】
本明細書に教示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドの「短縮した」または「切断した」型は、欠失した１つ，２つまたはそれ以上のヌクレオシドを有する。
【０１５７】
「副作用」は、所望の効果以外の治療に起因する生理反応を意味する。特定の実施形態では、副作用は、注射部位反応，肝機能検査異常，腎機能異常，肝臓毒性，腎臓毒性，中枢神経系異常及びミオパシーを含むが、限定されない。
【０１５８】
「１本鎖オリゴヌクレオチド」は、相補鎖にハイブリダイズされていないオリゴヌクレオチドを意味する
【０１５９】
本明細書で使用される場合、「部位」は標的核酸内の固有の核酸塩基位置と定義される。
【０１６０】
「進行を遅延させる」は、該疾患の発症の低下を意味する。
【０１６１】
「特異的にハイブリダイズする」は、所望の効果を誘導するようにアンチセンスオリゴヌクレオチドと標的核酸との間で十分な程度の相補性を有するが、特異的結合が望まれる条件下、すなわちインビボアッセイ及び治療的処置の場合の生理的条件下で、非標的核酸に最小の効果を示すまたは効果を示さない、アンチセンス化合物を指す。
【０１６２】
「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」または「ストリンジェントな条件」は、オリゴマー化合物がこの標的核酸にハイブリダイズするが、最少数の他の配列にハイブリダイズする条件を指す。
【０１６３】
「被験者」は、治療または療法のために選択されるヒトまたは非ヒト動物を意味する。
【０１６４】
「標的」は、調節が所望されるタンパク質を指す。
【０１６５】
「標的遺伝子」は、標的をコードする遺伝子を指す。
【０１６６】
「標的とする」または「標的とした」は、標的核酸に特異的にハイブリダイズし、所望の効果を誘導するアンチセンス化合物の設計及び選択のプロセスを意味する。
【０１６７】
「標的核酸」、「標的ＲＮＡ」、「標的ＲＮＡ転写産物」、及び「核酸標的」は、全て、アンチセンス化合物によって標的とされ得る核酸を意味する。
【０１６８】
「標的領域」は、１つ以上のアンチセンス化合物が標的とされる標的核酸の一部を意味する。
【０１６９】
「標的セグメント」は、アンチセンス化合物が標的とされている標的核酸のヌクレオチドの配列を意味する。「５’標的部位」は、標的セグメントの最も５’側のヌクレオチドを指す。「３’標的部位」は、標的セグメントの最も３’側のヌクレオチドを指す。
【０１７０】
「タウ」は、「ヒト微小管結合タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）を含む哺乳動物の微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）を意味する。
【０１７１】
「タウ関連疾患」は、任意のタウ核酸またはその発現生成物に関連した任意の疾患を意味する。このような疾患は、神経変性疾患を含み得る。このような神経変性疾患は、タウオパシー，アルツハイマー病，前頭側頭型認知症（ＦＴＤ），ＦＴＤＰ−１７，進行性核上性麻痺（ＰＳＰ），慢性外傷性脳症（ＣＴＥ），大脳皮質神経節変性症（ＣＢＤ），てんかん，及びドラベ症候群を含み得る。
【０１７２】
「タウｍＲＮＡ」は、タウをコードするＤＮＡ配列の任意のメッセンジャーＲＮＡ発現生成物を意味する。
【０１７３】
「タウ核酸」は、タウをコードする任意の核酸を意味する。例えば、特定の実施形態では、タウ核酸は、タウをコードするＤＮＡ配列、タウをコードするＤＮＡ（イントロン及びエクソンを含むゲノムＤＮＡを含む）から転写されたＲＮＡ配列、及びタウをコードするｍＲＮＡ配列を含む。「タウｍＲＮＡ」は、タウタンパク質をコードするｍＲＮＡを意味する。
【０１７４】
「タウタンパク質」は、タウ核酸のポリペプチド発現生成物を意味する。
【０１７５】
「治療有効量」は、個体に治療有益性を提供する医薬品の量を意味する。
【０１７６】
「治療する（Ｔｒｅａｔ）」または「治療している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、疾患または病態の変化または改善をもたらすように組成物を投与することを指す。
【０１７７】
「未修飾核酸塩基」は、プリン塩基アデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）ならびにピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）を意味する。
【０１７８】
「未修飾ヌクレオチド」は、天然に存在する核酸塩基、糖部分及びヌクレオシド間結合から構成されるヌクレオチドを意味する。特定の実施形態では、未修飾ヌクレオチドはＲＮＡヌクレオチド（すなわちβ−Ｄ−リボヌクレオシド）またはＤＮＡヌクレオチド（すなわちβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド）である。
【０１７９】
「ウイングセグメント」は、増強した阻害活性、標的核酸に対する増加した結合親和性またはインビボヌクレアーゼによる分解に対する耐性などの特性をオリゴヌクレオチドに与えるように修飾された複数のヌクレオシドを意味する。
特定の実施形態
【０１８０】
特定の実施形態は、タウｍＲＮＡ及びタンパク質発現を阻害するための方法、化合物、及び組成物を提供する。特定の実施形態は、タウｍＲＮＡ及びタンパク質レベルを減少させるための方法、化合物、及び組成物を提供する。
【０１８１】
特定の実施形態は、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物を提供する。特定の実施形態において、タウ核酸は、ヌクレオチド９２４００００〜９３８１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１として本明細書に組込まれる），ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿００１１２３０６６．３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２として本明細書に組込まれる），エクソン３，４，６，８，１０，及び１２をスキップする変異体ｍＲＮＡ配列であるＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿０１６８４１．４，（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３として本明細書に組込まれる），ヌクレオチド２６２４０００〜２７６１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４として本明細書に組込まれる），ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＤＲ００２４６７．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５として本明細書に組込まれる），ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿００１２０３２５１．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６として本明細書に組込まれる），及びＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿０１６８３５．４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７として本明細書に組込まれる），で示される配列である。
【０１８２】
特定の実施形態は、それを必要とする個体においてタウに関連する疾患、障害及び病態の治療、予防、または改善のための方法を提供する。タウに関連した疾患、障害、または病態の治療、予防、または改善のための医薬の調製方法も企図される。タウに関連する疾患、障害及び病態は、神経変性疾患を含む。特定の実施形態では、タウに関連する疾患は、タウオパシー，アルツハイマー病，前頭側頭型認知症（ＦＴＤ），ＦＴＤＰ−１７，進行性核上性麻痺（ＰＳＰ），慢性外傷性脳症（ＣＴＥ），大脳皮質神経節変性症（ＣＢＤ），てんかん，及びドラベ症候群を含む。
【０１８３】
特定の実施形態は、１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０−２４４３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４７８−２４８３の任意の核酸塩基配列の、少なくとも８個，少なくとも９個，少なくとも１０個，少なくとも１１個，少なくとも１２個，少なくとも１３個，少なくとも１４個，少なくとも１５個，少なくとも１６個，少なくとも１７個，少なくとも１８個，少なくとも１９個，または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物を提供する。
【０１８４】
特定の実施形態は、１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４４４−２４７７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４８４−２５６５の任意の核酸塩基配列の、少なくとも８個，少なくとも９個，少なくとも１０個，少なくとも１１個，少なくとも１２個，少なくとも１３個，少なくとも１４個，少なくとも１５個，少なくとも１６個，少なくとも１７個，少なくとも１８個，少なくとも１９個，または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物を提供する。
【０１８５】
特定の実施形態は、１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０−２５６５の任意の核酸塩基配列の、少なくとも８個，少なくとも９個，少なくとも１０個，少なくとも１１個，少なくとも１２個，少なくとも１３個，少なくとも１４個，少なくとも１５個，少なくとも１６個，少なくとも１７個，少なくとも１８個，少なくとも１９個，または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物を提供する。
【０１８６】
特定の実施形態は、１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１３５７８３−１３５９８０の等しい長さ部分に相補的な、少なくとも８個，少なくとも９個，少なくとも１０個，少なくとも１１個，少なくとも１２個，少なくとも１３個，少なくとも１４個，少なくとも１５個，少なくとも１６個，少なくとも１７個，少なくとも１８個，少なくとも１９個，または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物を提供する。
【０１８７】
特定の実施形態は、１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１３５８５３−１３５８７２の等しい長さ部分に相補的な、少なくとも８個，少なくとも９個，少なくとも１０個，少なくとも１１個，少なくとも１２個，少なくとも１３個，少なくとも１４個，少なくとも１５個，少なくとも１６個，少なくとも１７個，少なくとも１８個，少なくとも１９個，または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物を提供する。
【０１８８】
特定の実施形態は、１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１３５７８３−１３５９２９の等しい長さ部分に相補的な、少なくとも８個，少なくとも９個，少なくとも１０個，少なくとも１１個，少なくとも１２個，少なくとも１３個，少なくとも１４個，少なくとも１５個，少なくとも１６個，少なくとも１７個，少なくとも１８個，少なくとも１９個，または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物を提供する。
【０１８９】
特定の実施形態は、１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１３５７８３−１３５９１４の等しい長さ部分に相補的な、少なくとも８個，少なくとも９個，少なくとも１０個，少なくとも１１個，少なくとも１２個，少なくとも１３個，少なくとも１４個，少なくとも１５個，少なくとも１６個，少なくとも１７個，少なくとも１８個，少なくとも１９個，または少なくとも２０個、の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物を提供する。
【０１９０】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に、少なくとも８０％，少なくとも８１％，少なくとも８２％，少なくとも８３％，少なくとも８４％，少なくとも８５％，少なくとも８６％，少なくとも８７％，少なくとも８８％，少なくとも８９％，少なくとも９０％，少なくとも９１％，少なくとも９２％，少なくとも９３％，少なくとも９４％，少なくとも９５％，少なくとも９６％，少なくとも９７％，少なくとも９８％，少なくとも９９％，または１００％相補的である。
【０１９１】
特定の実施形態では、化合物は１本鎖修飾オリゴヌクレオチドである。
【０１９２】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシド間結合は修飾ヌクレオシド間結合である。
【０１９３】
特定の実施形態では、少なくとも1つの修飾ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０１９４】
特定の実施形態では、それぞれの修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０１９５】
特定の実施形態では、少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、リン酸ジエステルヌクレオシド間結合である。
【０１９６】
特定の実施形態では、少なくとも１つのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、かつ少なくとも１つのヌクレオシド間結合はリン酸ジエステルヌクレオシド間結合である。
【０１９７】
特定の実施形態では、少なくとも１つのヌクレオシドは修飾核酸塩基を含む。
【０１９８】
特定の実施形態では、修飾核酸塩基は５−メチルシトシンである
【０１９９】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシドは修飾糖を含む。
【０２００】
特定の実施形態では、少なくとも１つの修飾糖は二環式糖である。
【０２０１】
特定の実施形態では、二環式糖は糖４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’架橋の２’位と４’位との間に化学結合を含み、Ｒは、独立して、Ｈ，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，または保護基である。
【０２０２】
特定の実施形態では、二環式糖は４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’架橋を含み、Ｒは、独立して、Ｈ，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，または保護基である、
【０２０３】
特定の実施形態では、少なくとも1つの修飾糖は２’−Ｏ−メトキシエチル基を含む。
【０２０４】
特定の実施形態では、修飾糖は２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３基を含む。
【０２０５】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは：
１０個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
５個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
５個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント； 
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む
【０２０６】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは：
９個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
５個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
５個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント； 
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む。
【０２０７】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは：
７個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
５個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
６個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント； 
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む。
【０２０８】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは：
８個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
５個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
５個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント； 
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む。
【０２０９】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは：
８個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
４個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
６個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント； 
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む。
【０２１０】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは：
８個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
６個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
４個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント； 
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む。
【０２１１】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２０個の結合ヌクレオシドからなる。
【０２１２】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１９個の結合ヌクレオシドからなる。
【０２１３】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１８個の結合ヌクレオシドからなる。
【０２１４】
特定の実施形態では、本明細書に記載の任意の化合物またはその塩、及び少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む。
【０２１５】
特定の実施形態では、本明細書に記載の任意の化合物または組成物の動物への投与を含む。
【０２１６】
特定の実施形態では、動物はヒトである。
【０２１７】
特定の実施形態では、化合物の投与は、タウ関連疾患、障害または病態の進行を妨げ、治療し、改善し、または遅延させる。
【０２１８】
特定の実施形態では、疾患、障害または病態は、タウオパシー，アルツハイマー病，前頭側頭型認知症（ＦＴＤ），ＦＴＤＰ−１７，進行性核上性麻痺（ＰＳＰ），慢性外傷性脳症（ＣＴＥ），大脳皮質神経節変性症（ＣＢＤ），てんかん，またはドラベ症候群である。
【０２１９】
特定の実施形態は、神経変性障害の治療のための医薬の製造のための、本明細書に記載の任意の化合物または組成物の使用を提供する。
【０２２０】
特定の実施形態は、以下の式（Ｉａ）に従う化合物：
【０２２１】
【化２】
0006684707.tif 000003
【０２２２】
、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。特定の実施形態では、式（Ｉａ）を有する化合物を含む薬学的組成物が提供される。
【０２２３】
特定の実施形態は、以下の式（ＩＩａ）に従う化合物：
【０２２４】
【化３】
0006684707.tif 000004
【０２２５】
、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。特定の実施形態では、式（ＩＩａ）を有する化合物を含む薬学的組成物が提供される。
【０２２６】
特定の実施形態は、以下の式（ＩＩＩａ）に従う化合物：
【０２２７】
【化４】
0006684707.tif 000005
【０２２８】
、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。特定の実施形態では、式（ＩＩＩａ）を有する化合物を含む薬学的組成物が提供される。
【０２２９】
特定の実施形態は、以下の式（ＩＶａ）に従う化合物：
【０２３０】
【化５】
0006684707.tif 000006
【０２３１】
、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。特定の実施形態では、式（ＩＶａ）を有する化合物を含む薬学的組成物が提供される。
【０２３２】
特定の実施形態は、以下の式（Ｖａ）に従う化合物：
【０２３３】
【化６】
0006684707.tif 000007
【０２３４】
、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。特定の実施形態では、式（Ｖａ）を有する化合物を含む薬学的組成物が提供される。
アンチセンス化合物
【０２３５】
オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチド，オリゴヌクレオシド，オリゴヌクレオチド類似体，オリゴヌクレオチド模倣剤，アンチセンス化合物，アンチセンスオリゴヌクレオチド及びｓｉＲＮＡを含むが、これらに限定されない。オリゴマー化合物は、標的核酸に対して「アンチセンス」であってもよく、水素結合によって標的核酸に対するハイブリダイゼーションを受けることができることを意味する。
【０２３６】
特定の実施形態では、アンチセンス化合物は、５’から３’方向に記載された場合、これが標的とされる標的核酸の標的セグメントの逆相補体を含む、核酸塩基配列を有する。特定のこのような実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５’から３’方向に記載された場合、これが標的とされる標的核酸の標的セグメントの逆相補体を含む、核酸塩基配列を有する。
【０２３７】
特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１２〜３０サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１２〜２５サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１２〜２２サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１４〜２０サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１５〜２５サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１８〜２２サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１９〜２１サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物は、８〜８０，１２〜５０，１３〜３０，１３〜５０，１４〜３０，１４〜５０，１５〜３０，１５〜５０，１６〜３０，１６〜５０，１７〜３０，１７〜５０，１８〜３０，１８〜５０，１９〜３０，１９〜５０，または２０〜３０結合サブユニット長である。
【０２３８】
特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１２サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１３サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１４サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１５サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１６サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１７サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１８サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１９サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は２０サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は２１サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は２２サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は２３サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は２４サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は２５サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は２６サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は２７サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は２８サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は２９サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は３０サブユニット長である。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、３１，３２，３３，３４，３５，３６，３７，３８，３９，４０，４１，４２，４３，４４，４５，４６，４７，４８，４９，５０，５１，５２，５３，５４，５５，５６，５７，５８，５９，６０，６１，６２，６３，６４，６５，６６，６７，６８，６９，７０，７１，７２，７３，７４，７５，７６，７７，７８，７９，または８０結合サブユニット長であるか、または上記の値の任意の２つによって定義される範囲である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物はアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、結合サブユニットはヌクレオチドである。
【０２３９】
特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドは短縮されるかまたは切断されてもよい。例えば、単一サブユニットは、５’末端から（５’切断型）または３’末端から（３’切断型）欠失されてもよい。タウ核酸を標的とする短縮されたまたは切断されたアンチセンス化合物は、アンチセンス化合物の５’末端から欠失された２つのサブユニットを有してもよいまたは３’末端から欠失された２つのサブユニットを有してもよい。あるいは、欠失したヌクレオシドは、アンチセンス化合物全体にわたって、例えば、５’末端から欠失された１つのヌクレオシド及び３’末端から欠失された１つのヌクレオシドを有するアンチセンス化合物において、分散されてもよい。
【０２４０】
単一の付加のサブユニットが伸長したアンチセンス化合物に存在する場合、付加のサブユニットはアンチセンス化合物の５’または３’末端に位置してもよい。２つ以上の付加のサブユニットが存在する場合、付加されたサブユニットは、例えば、アンチセンス化合物の５’末端に（５’付加）または３’末端に（３’付加）付加された２つのサブユニットを有するアンチセンス化合物において互いに隣接し得る。あるいは、付加されたサブユニットは、アンチセンス化合物全体にわたって、例えば、５’末端に付加された１つのサブユニット及び３’末端に付加された１つのサブユニットを有するアンチセンス化合物において分散されてもよい。
【０２４１】
アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのアンチセンス化合物の長さを増加もしくは低下させることができ、及び／または活性を排除せずにミスマッチ塩基を導入することができる。例えば、Ｗｏｏｌｆ ｅｔ ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：７３０５−７３０９，１９９２）において、一連のアンチセンスオリゴヌクレオチド１３−２５核酸塩基長が、卵母細胞注射モデルにおいて標的ＲＮＡの切断を誘導する能力について試験された。アンチセンスオリゴヌクレオチドの端部付近に８または１１個のミスマッチ塩基を有するアンチセンスオリゴヌクレオチド２５核酸塩基長は、ミスマッチを含有しないアンチセンスオリゴヌクレオチドより少ない程度にも関わらず、標的ｍＲＮＡの特異的切断を導くことができる。同様に、標的特異的切断が、１または３個のミスマッチを有するものを含む、１３核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドを使用して達成された。
【０２４２】
Ｇａｕｔｓｃｈｉ ｅｔ ａｌ（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９３：４６３−４７１，Ｍａｒｃｈ ２００１）は、インビトロ及びインビボでｂｃｌ−２及びｂｃｌ−ｘＬの両方の発現を減少させるためのｂｃｌ−２ ｍＲＮＡに対して１００％相補性を有し、ｂｃｌ−ｘＬ ｍＲＮＡに対して３個のミスマッチを有するオリゴヌクレオチドの能力を示した。さらに、このオリゴヌクレオチドはインビボで有効な抗腫瘍活性を示した。
【０２４３】
Ｍａｈｅｒ及びＤｏｌｎｉｃｋ（Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１６：３３４１−３３５８，１９８８）は、一連のタンデム１４核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチド並びにタンデムアンチセンスオリゴヌクレオチドの２つまたは３つの配列から構成されている２８及び４２核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドを、それぞれ、ウサギ網状赤血球アッセイにおいてヒトＤＨＦＲの翻訳を停止させるこれらの能力について試験した。２８または４２核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドより適度なレベルにも関わらず、３個の１４核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドのそれぞれは単独で翻訳を阻害することができた。
アンチセンス化合物モチーフ
【０２４４】
特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、増強した阻害活性、標的核酸に対する増加した結合親和性、またはインビボでのヌクレアーゼによる分解に対する耐性などのアンチセンス化合物特性に付加するための、パターンまたはモチーフに配置される化学的に修飾されたサブユニットを有する。
【０２４５】
キメラアンチセンス化合物は、典型的に、ヌクレアーゼ分解に対する増加した耐性、増加した細胞取り込み、標的核酸に対する増加した結合親和性、及び／または増加した阻害活性に付加するように修飾された少なくとも１つの領域を含有する。キメラアンチセンス化合物の第２の領域は、選択で、ＲＮＡ：ＤＮＡ二重鎖のＲＮＡ鎖を切断する、細胞エンドヌクレアーゼＲＮａｓｅ Ｈについての基質として役立ち得る。
【０２４６】
ギャップマーモチーフを有するアンチセンス化合物は、キメラアンチセンス化合物であると考えられる。ギャップマーにおいて、ＲＮａｓｅＨ切断を支持する複数のヌクレオチドを有する内部領域は、内部領域のヌクレオシドと化学的に異なる複数のヌクレオチドを有する外部領域の間に位置する。ギャップマーモチーフを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの場合、ギャップセグメントは、一般に、エンドヌクレアーゼ切断のための基質として役立つが、ウィングセグメントは修飾ヌクレオシドを含む。特定の実施形態では、ギャップマーの領域はそれぞれの異なる領域を含む糖部分のタイプによって識別される。ギャップマーの領域を識別するのに使用される糖部分のタイプは、いくつかの実施形態において、β−Ｄ−リボヌクレオシド、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、２’修飾ヌクレオシド（このような２’修飾ヌクレオシドは、とりわけ、２’−ＭＯＥ及び２’−Ｏ−ＣＨ３を含み得る）、及び二環式糖修飾ヌクレオシド（このような二環式糖修飾ヌクレオシドは、４’−（ＣＨ２）n−Ｏ−２’架橋を有するものをふくんでもよく、ここで、ｎ＝１またはｎ＝２及び４’−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−２’である）を含んでもよい。特定の実施形態では、ウイングは、例えば２’−ＭＯＥを含む、いくつかの修飾された糖部分を含んでもよい。特定の実施形態では、ウイングは、いくつかの修飾された及び修飾されていない糖部分を含んでもよい。特定の実施形態では、ウイングは２’−ＭＯＥヌクレオシド及び２’−デオキシヌクレオシドの様々な組合せを含んでもよい。
【０２４７】
それぞれの異なる領域は、均一の糖部分、変異体または交互の糖部分を含んでもよい。ウイング−ギャップ−ウイングモチーフは頻繁に「Ｘ−Ｙ−Ｚ」として記載されており、ここで、「Ｘ」は５’−ウイングの長さを表し、「Ｙ」はギャップの長さを表し、「Ｚ」は３’−ウイングの長さを表す。「Ｘ」及び「Ｚ」は、均一な、変異しているまたは交互の糖部分を含んでもよい。特定の実施形態では、「Ｘ」及び「Ｙ」は１つ以上の２’−デオキシヌクレオシドを含んでもよい。「Ｙ」は２’−デオキシヌクレオシドを含んでもよい。本明細書で使用される場合、「Ｘ−Ｙ−Ｚ」として記載されるギャップマーは、ギャップが５’−ウイング及び３’ウイングのそれれぞれに直接近接して位置しているような構成を有する。従って、５’−ウイングとギャップとの間またはギャップと３’−ウイングとの間にヌクレオチドは存在しない。本明細書に記載される任意のアンチセンス化合物はギャップマーモチーフを有することができる。特定の実施形態では、「Ｘ」と「Ｚ」は同じであり；他の実施形態ではこれらは異なる。
【０２４８】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるギャップマーは、例えば、５−１０−５のモチーフを有する２０−マーを含む。
【０２４９】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるギャップマーは、例えば、５−9−５のモチーフを有する１９−マーを含む
【０２５０】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるギャップマーは、例えば、５−８−５のモチーフを有する１８−マーを含む
【０２５１】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるギャップマーは、例えば、４−８−６のモチーフを有する１８−マーを含む
【０２５２】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるギャップマーは、例えば、６−８−４のモチーフを有する１８−マーを含む
【０２５３】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるギャップマーは、例えば、５−７−６のモチーフを有する１８−マーを含む
標的核酸、標的領域及びヌクレオチド配列
【０２５４】
タウをコードするヌクレオチド配列は、以下を含むが、限定されない：ヌクレオチド９２４００００〜９３８１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１として本明細書に組込まれる），ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿００１１２３０６６．３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２として本明細書に組込まれる），エクソン３，４，６，８，１０，及び１２をスキップする変異体ｍＲＮＡ配列であるＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿０１６８４１．４，（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３として本明細書に組込まれる），ヌクレオチド２６２４０００〜２７６１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４として本明細書に組込まれる），ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＤＲ００２４６７．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５として本明細書に組込まれる），ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿００１２０３２５１．１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６として本明細書に組込まれる），及びＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿０１６８３５．４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７として本明細書に組込まれる）。
【０２５５】
本明細書に含まれる実施例においてそれぞれのＳＥＱ ＩＤ ＮＯで示される配列は、糖部分、ヌクレオシド間結合または核酸塩基に対する任意の修飾とは関係ないことが理解される。従って、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯにより定義されるアンチセンス化合物は、独立して、糖部分、ヌクレオシド間結合または核酸塩基に対する１つ以上の修飾を含んでもよい。Ｉｓｉｓ番号（Ｉｓｉｓ Ｎｏ）により記載されるアンチセンス化合物は、核酸塩基配列及びモチーフの組合せを示す。
【０２５６】
特定の実施形態では、標的領域は標的核酸の構造的に定義された領域である。例えば、標的領域は、３’ＵＴＲ，５’ＵＴＲ，エクソン，イントロン，エクソン／イントロン結合，コード領域，翻訳開始領域，翻訳終結領域または他の定義された核酸領域を包含してもよい。タウにに対して構造的に定義された領域はＮＣＢＩなどの配列データベースからの受託番号により得ることができ、このような情報は本明細書に参照により組込まれている。特定の実施形態では、標的領域は、標的領域内の１つの標的セグメントの５’標的部位から同じ標的領域内の他の標的セグメントの３’標的部位までの配列を包含してもよい。
【０２５７】
標的化は、所望の効果が生じるように、アンチセンス化合物がハイブリダイズずる少なくとも１つの標的セグメントの決定を含む。特定の実施形態では、所望の効果はｍＲＮＡ標的核酸レベルの減少である。特定の実施形態では、所望の効果は、標的核酸によってコードされたタンパク質のレベルの減少または標的核酸に関連した表現型の変化である。
【０２５８】
標的領域は１つ以上の標的セグメントを含有してもよい。標的領域内の複数の標的セグメントは重複していてもよい。あるいは、これらは重複していなくてもよい。特定の実施形態では、標的領域内の標的セグメントは約３００以下のヌクレオチドによって分離されている。特定の実施形態では、標的領域内の標的セグメントは、多くのヌクレオチドによって分離されている。すなわち、２５０，２００，１５０，１００，９０，８０，７０，６０，５０，４０，３０，２０もしくは１０のまたは、約２５０，２００，１５０，１００，９０，８０，７０，６０，５０，４０，３０，２０もしくは１０の、または２５０，２００，１５０，１００，９０，８０，７０，６０，５０，４０，３０，２０もしくは１０以下の、または約２５０，２００，１５０，１００，９０，８０，７０，６０，５０，４０，３０，２０もしくは１０以下の標的核酸上のヌクレオチドである、または上述の値の任意の２つによって定義される範囲である。特定の実施形態では、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸上で５以下のヌクレオチド、約５以下のヌクレオチドによって分離されている。特定の実施形態では、標的セグメントは隣接している。標的領域は、本明細書に記載されている５’標的部位または３’標的部位のいずれかである開始核酸を有する範囲によって定義されることが意図される。
【０２５９】
適切な標的セグメントは、５’ＵＴＲ、コード領域、３’ＵＴＲ、イントロン、エクソンまたはエクソン／イントロン結合内に見出され得る。開始コドンまたは停止コドンを含有する標的セグメントも、適切な標的セグメントである。適切な標的セグメントは開始コドンまたは停止コドンなどの特定の構造的に定義された領域を特異的に排除し得る。
【０２６０】
適切な標的セグメントの決定は、ゲノム全体の他の配列に対する標的核酸の配列の比較を含んでもよい。例えば、ＢＬＡＳＴアルゴリズムが、異なる核酸の中で類似した領域を識別するために使用されてもよい。この比較は、選択された標的核酸以外の配列（すなわち、非標的またはオフターゲット配列）と非特異的にハイブリダイズし得るアンチセンス化合物配列の選択を防止できる。
【０２６１】
活性標的領域内のアンチセンス化合物の活性（例えば、標的核酸レベルの％減少により定義される）の変動が存在し得る。特定の実施形態では、タウｍＲＮＡレベルの減少はタウ発現の阻害の指標である。タウタンパク質のレベルの減少も、標的ｍＲＮＡ発現の阻害の指標である。さらに、表現型の変化はタウ発現の阻害の指標である。神経機能の改善はタウ発現の阻害の指標である。改善された記憶力及び運動機能はタウ発現の阻害の調節の指標である。神経原線維封入体の減少はタウ発現の阻害の指標である。
ハイブリダイゼーション
【０２６２】
いくつかの実施形態では、ハイブリダイゼーションは本明細書に開示されるアンチセンス化合物とタウ核酸との間で生じる。ハイブリダイゼーションの最も一般的な機構は、核酸分子の相補的核酸塩基間の水素結合（例えば、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ，Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎまたは逆Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ水素結合）を含む。
【０２６３】
ハイブリダイゼーションは様々な条件下で生じ得る。ストリンジェントな条件は配列依存性であり、ハイブリダイズされる核酸分子の性質及び組成により決定される。
【０２６４】
配列が標的核酸に特異的にハイブリダイズ可能であるかどうかを決定する方法は当該技術分野において周知である。特定の実施形態では、本明細書に提供されるアンチセンス化合物はタウ核酸と特異的にハイブリダイズ可能である。
相補性
【０２６５】
アンチセンス化合物の十分な数の核酸塩基が、標的核酸の対応する核酸塩基と水素結合し得る場合、アンチセンス化合物及び標的核酸は互いに相補的であり、所望の効果が生じるであろう（例えば、タウ核酸などの、標的核酸のアンチセンス阻害）。
【０２６６】
アンチセンス化合物とタウ核酸との間の非相補的核酸塩基は、アンチセンス化合物が標的核酸に特異的にハイブリダイズ可能であり続けるという条件で許容され得る。さらに、アンチセンス化合物は、それにより介入するまたは隣接するセグメントはハイブリダイゼーション事象（例えば、ループ構造、ミスマッチまたはヘアピン構造）に関与しないように、タウ核酸の１つ以上のセグメントに対してハイブリダイズできる。
【０２６７】
特定の実施形態では、本明細書に提供されるアンチセンス化合物またはその特定の部分は、タウ核酸、標的領域、標的セグメントまたははその特定の部分に対して、少なくとも、７０％，８０％，８５％，８６％，８７％，８８％，８９％，９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％，または１００％相補的である。標的核酸に対するアンチセンス化合物の％相補性は、所定の方法を使用して決定され得る。
【０２６８】
例えば、アンチセンス化合物の２０個の核酸塩基のうちの１８個が標的領域に対して相補的であり、従って特異的にハイブリダイズするであろうアンチセンス化合物は、９０パーセントの相補性を表す。この例では、残りの非相補的核酸塩基は、相補的核酸塩基とクラスターを形成するかまたは相補的核酸塩基に散在することができ、互いにまたは相補的核酸塩基に隣接している必要はない。従って、標的核酸と完全な相補性の２つの領域に隣接する４つの非相補的核酸塩基を有する１８核酸塩基長であるアンチセンス化合物は、標的核酸と７７．８％の全体の相補性を有するので、本発明の範囲内に入るであろう。標的核酸の領域とのアンチセンス化合物の％相補性は、当該技術分野において公知のＢＬＡＳＴプログラム（基本ローカルアラインメント探査ツール）及びＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴプログラムを使用して通常決定することができる（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９０，２１５，４０３ ４１０；Ｚｈａｎｇ及びＭａｄｄｅｎ，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．，１９９７，７，６４９ ６５６）。相同性、配列同一性または相補性の％は、例えば、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎ（Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．，１９８１，２，４８２  ４８９）のアルゴリズムを使用する、デフォルト設定を使用したＧａｐプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ,Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ，Ｍａｄｉｓｏｎ Ｗｉｓ．）によって決定することができる。
【０２６９】
特定の実施形態では、本明細書に提供されるアンチセンス化合物またはその特定の部分は、標的核酸またはその特定の部分に対して完全に相補的（すなわち１００％相補的）である。例えば、アンチセンス化合物は、タウ核酸またはその標的領域または標的セグメントまたは標的配列に完全に相補的であり得る。本明細書で使用される場合、「完全に相補的」は、アンチセンス化合物のそれぞれの核酸塩基は、標的核酸の対応する核酸塩基と正確に塩基対合できることを意味する。例えば、２０核酸塩基アンチセンス化合物は、アンチセンス化合物に対して完全に相補的である標的核酸の対応する２０核酸塩基部分が存在する限り、４００核酸塩基長である標的配列と完全に相補的である。完全に相補的は、第１及び／または第２の核酸の特定の部分を参照して使用されてもよい。例えば、３０核酸塩基アンチセンス化合物の２０核酸塩基部分は４００核酸塩基長である標的配列に対して「完全に相補的」であり得る。標的配列が、それぞれの核酸塩基はアンチセンス化合物の２０核酸塩基部分に相補的であるような、対応する２０核酸塩基部分を有する場合、３０核酸塩基オリゴヌクレオチドの２０核酸塩基部分は標的配列に対して完全に相補的である。同時に、全体の３０核酸塩基アンチセンス化合物は、アンチセンス化合物の残りの１０核酸塩基も、標的配列に相補的であるかどうかに依存して、標的配列に対して完全に相補的であってもなくてもよい。
【０２７０】
非相補的核酸塩基の位置は、アンチセンス化合物の５’末端または３’末端であり得る。あるいは、非相補的核酸塩基または非相補的核酸塩基類はアンチセンス化合物の内部にあってもよい。２つ以上の非相補的核酸塩基が存在する場合、これらは隣接（すなわち結合した）であってもまたは非隣接であってもよい。一実施形態において、非相補的核酸塩基はギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドのウィングセグメントに位置する。
【０２７１】
特定の実施形態では、１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，１９，もしくは２０核酸塩基長であるか、または１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，１９，もしくは２０までの核酸塩基長であるアンチセンス化合物は、タウ核酸などの標的核酸またはその特定の部分に対して４以下、３以下、２以下もしくは１以下の非相補的核酸塩基を含む。
【０２７２】
特定の実施形態では、１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８,１９，２０，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，２９，もしくは３０核酸塩基長であるかまたは１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８,１９，２０，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，２９，もしくは３０までの核酸塩基長であるアンチセンス化合物は、タウ核酸などの標的核酸またはこの特定の部分に対して６以下、５以下、４以下、３以下、２以下もしくは１以下の非相補的核酸塩基を含む。
【０２７３】
本明細書で提供されるアンチセンス化合物は標的核酸の部分に相補的であるものも含む。本明細書で使用される場合、「部分」は、標的核酸の領域またはセグメント内の定義された数の隣接する（すなわち結合した）核酸塩基を指す。「部分」は、アンチセンス化合物の定義された数の隣接する核酸塩基を指してもよい。特定の実施形態では、アンチセンス化合物は標的セグメントの少なくとも８核酸塩基部分に対して相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物は標的セグメントの少なくとも９核酸塩基部分に対して相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物は標的セグメントの少なくとも１０核酸塩基部分に対して相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物は標的セグメントの少なくとも１１核酸塩基部分に対して相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物は標的セグメントの少なくとも１２核酸塩基部分に対して相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物は標的セグメントの少なくとも１３核酸塩基部分に対して相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物は標的セグメントの少なくとも１４核酸塩基部分に対して相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物は標的セグメントの少なくとも１５核酸塩基部分に対して相補的である。標的セグメントの少なくとも９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，１９，２０，もしくはこれ以上の核酸塩基部分またはこれらの値の任意の２つによって定義される範囲の核酸塩基部分に対して相補的であるアンチセンス化合物も意図される。
同一性
【０２７４】
本明細書に提供されるアンチセンス化合物は、特定のヌクレオチド配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ、もしくは特定のＩｓｉｓ番号によって表された化合物、またはこれらの部分に対して、定義された％同一性を有してもよい。本明細書で使用される場合、アンチセンス化合物は、それが同じ核酸塩基対合能力を有する場合、本明細書に開示される配列と同一である。例えば、開示されたＤＮＡ配列においてチミジンの代わりにウラシルを含有するＲＮＡは、ウラシル及びチミジンの両方がアデニンと対合するので、ＤＮＡ配列に対して同一であるとみなされる。本明細書に記載されるアンチセンス化合物の短縮された及び伸長された型も、本明細書に提供されるアンチセンス化合物に対して同一でない塩基を有する化合物と同様に、意図される。同一でない塩基は、互いに隣接してもよいし、またはアンチセンス化合物全体にわたって分散されてもよい。アンチセンス化合物の％同一性は、比較される配列に対して同一の塩基対を有する塩基の数に従って計算される。
【０２７５】
特定の実施形態では、アンチセンス化合物またはその部分は、本明細書に開示されるアンチセンス化合物もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯまたはそれらの一部の１つ以上に対して少なくとも７０％，７５％，８０％，８５％，９０％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％または１００％同一である。
【０２７６】
特定の実施形態では、アンチセンス化合物の一部は標的核酸の等しい長さの部分と比較される。特定の実施形態では、８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，１９，２０，２１，２２，２３，２４，または２５核酸塩基部分は標的核酸の等しい長さの部分と比較される。
【０２７７】
特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドの一部は標的核酸の等しい長さの部分と比較される。特定の実施形態では、８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，１９，２０，２１，２２，２３，２４，または２５核酸塩基部分は標的核酸の等しい長さの部分と比較される。
修飾
【０２７８】
ヌクレオシドは塩基−糖の組合せである。ヌクレオシドの核酸塩基（塩基としても知られる）部分は通常、複素環塩基部分である。ヌクレオチドはヌクレオシドの糖部分に共有結合したリン酸基をさらに含むヌクレオシドである。ペントフラノシル糖を含むこれらのヌクレオシドについて、リン酸基は、糖の２’，３’または５’ヒドロキシル部分に結合されてもよい。オリゴヌクレオチドは、線形ポリマーオリゴヌクレオチドを形成するために、互いに隣接するヌクレオシドの共有結合により形成される。オリゴヌクレオチド構造内で、リン酸基は一般に、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合を形成すると言われる。
【０２７９】
アンチセンス化合物に対する修飾は、ヌクレオシド間結合、糖部分または核酸塩基に対する置換または変化を含む。修飾アンチセンス化合物は、例えば、増強した細胞取り込み、核酸標的に対する増強した親和性、ヌクレアーゼの存在下での増加した安定性または増加した阻害活性などの望ましい特性のために、天然形態より好ましいことが多い。
【０２８０】
化学的に修飾されたヌクレオシドは、その標的核酸に対する短縮されたまたは切断されたアンチセンスオリゴヌクレオチドの結合親和性を増加させるために利用されてもよい。その結果、同等の結果が、そのような化学的に修飾されたヌクレオシドを有するより短いアンチセンス化合物で得られることが多い。
修飾ヌクレオシド間結合
【０２８１】
ＲＮＡ及びＤＮＡの天然に存在するヌクレオシド間結合は３’から５’のホスホジエステル結合である。１つ以上の修飾された、すなわち天然に存在しないヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物は、例えば、増強した細胞取り込み、標的核酸に対する増強した親和性、ヌクレアーゼの存在下での増加した安定性などの望ましい特性のために、天然に存在するヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物よりも、選択されることが多い。
【０２８２】
修飾ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドは、リン原子を保持するヌクレオシド間結合及びリン原子を有さないヌクレオシド間結合を含む。代表的なリン含有ヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル，ホスホトリエステル，メチルホスホネート，ホスホラミデート及びホスホロチオエートを含むが、これらに限定されない。リンを含有する及び含有しない結合の調製方法は周知である。
【０２８３】
特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１つ以上の修飾されたヌクレオシド間結合を含む。特定の実施形態では、修飾されたヌクレオシド間結合はアンチセンス化合物の全体にわたって散在している。特定の実施形態では、修飾されたヌクレオシド間結合はホスホロチオエート結合である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物のそれぞれのヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
修飾糖部分
【０２８４】
アンチセンス化合物は、選択で、糖基が修飾されている１つまたは複数のヌクレオシドを含むことができる。このような糖修飾ヌクレオシドは、アンチセンス化合物に、増強したヌクレアーゼ安定性、増強した結合親和性、または何らかの他の生物学的特性を与え得る。特定の実施形態では、ヌクレオシドは、化学的に修飾されたリボフラノース環部分を含む。化学的に修飾されたリボフラノース環の例は、置換基（５’及び２’置換基を含む）の付加、二環式核酸を形成するための非ジェミナル環原子の架橋（ＢＮＡ）、Ｓ，Ｎ（Ｒ），またはＣ（Ｒ１）（Ｒ２）によるリボシル環酸素原子の置換（Ｒ，Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立にＨ，Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたは保護基である）、及びそれらの組合せを含むがこれらに限定されない。化学的に修飾された糖の例は、２’−Ｆ−５’−メチル置換ヌクレオシド（他の開示された５’，２’−ビス置換ヌクレオシドに関しては８／２１／０８に公開されたＰＣＴ国際出願ＷＯ ２００８／１０１１５７参照）、または、２’位でさらに置換されたＳによるリボシル環酸素原子の置換（２００５年６月１６日公開の公開米国特許出願ＵＳ２００５−０１３０９２３参照）、または、ＢＮＡの５’−置換（ＬＮＡが例えば５’−メチルまたは５’−ビニル基で置換されている１１／２２／０７公開のＰＣＴ国際出願ＷＯ ２００７／１３４１８１参照）、を含む。
【０２８５】
修飾糖部分を有するヌクレオシドの例は、５’−ビニル，５’−メチル（ＲまたはＳ），４’−Ｓ，２’−Ｆ，２’−ＯＣＨ３，２’−ＯＣＨ２ＣＨ３，２’−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｆ及び２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３置換基を含むヌクレオシドを限定なしに含む。２’位の置換基は、アリル，アミノ，アジド，チオ，Ｏ−アリル，Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルキル，ＯＣＦ３，ＯＣＨ２Ｆ，Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３,Ｏ（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ），Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ），及びＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｌ）−（ＣＨ２）２−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択することもでき、ここで、Ｒｌ，Ｒｍ及びＲｎは、独立して、Ｈまたは、置換もしくは非置換のＣ１−Ｃ１０アルキルである。
【０２８６】
本明細書で使用される場合、「二環式ヌクレオシド」は、二環式糖部分を含む修飾ヌクレオシドを指す。二環式ヌクレオシドの例は、４’と２’のリボシル環原子の間に架橋を具備するヌクレオシドを、限定なしに含む。特定の実施形態では、本明細書中で提供されるアンチセンス化合物は、４’から２’への架橋を具備する1つまたは複数の二環式ヌクレオシドを含む。このような４’から２’へ架橋された二環式ヌクレオシドの例は、以下の式の１つを含むが、これらに限定されない：４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）；４’−（ＣＨ２）−Ｓ−２’；４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）；４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’及び４’−ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−２’(及びその類似体２００８年７月１５日発行の米国特許第 ７，３９９，８４５参照)；４’−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）−Ｏ−２’(及びその類似体２００９年１月８日発行の公開国際出願ＷＯ／２００９／００６４７８参照)；４’−ＣＨ２−Ｎ（ＯＣＨ３）−２’(及びその類似体２００８年１２月１１日発行の公開国際出願ＷＯ／２００８／１５０７２９参照)；４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−２’(２００４年９月２日公開の公開米国特許出願ＵＳ２００４−０１７１５７０参照)；４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’，ここでＲは、Ｈ，Ｃ１−Ｃ１２アルキル,または保護基である（２００８年９月２３日発行の米国特許第７，４２７，６７２参照）；４’−ＣＨ２−Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）−２’（Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００９，７４，１１８−１３４参照）；及び４’−ＣＨ２−Ｃ−（＝ＣＨ２）−２’（及びその類似体２００８年１２月８日発行の公開国際出願ＷＯ ２００８／１５４４０１参照)。
【０２８７】
二環式ヌクレオシドに関連するさらなる報告は、公開文献にも見出すことができる（例えば以下を参照：Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ.Ｃｏｍｍｕｎ.，１９９８，４，４５５−４５６；Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７−３６３０；Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ.，２０００，９７，５６３３−５６３８；Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９−２２２２；Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９；Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（２６）８３６２−８３７９；Ｅｌａｙａｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，２００１，２，５５８−５６１；Ｂｒａａｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００１，８，１−７；及びＯｒｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ.，２００１，３，２３９−２４３；米国特許第６，２６８，４９０；６，５２５，１９１；６，６７０，４６１；６，７７０，７４８；６，７９４，４９９；７，０３４，１３３；７，０５３，２０７；７，３９９，８４５；７，５４７，６８４；及び７，６９６，３４５；米国特許公開第ＵＳ２００８−００３９６１８；ＵＳ２００９−００１２２８１；米国特許シリアル番号６０／９８９，５７４；６１／０２６，９９５；６１／０２６，９９８；６１／０５６，５６４；６１／０８６,２３１；６１／０９７，７８７；及び６１／０９９，８４４；公開ＰＣＴ国際出願ＷＯ １９９４／０１４２２６；ＷＯ ２００４／１０６３５６；ＷＯ ２００５／０２１５７０；ＷＯ ２００７／１３４１８１；ＷＯ ２００８／１５０７２９；ＷＯ ２００８／１５４４０１；及びＷＯ ２００９／００６４７８。例えばα−Ｌ−リボフラノース及びβ−Ｄ−リボフラノースを含む１つ以上の立体化学の糖構成を有する、上記の二環式ヌクレオシドのそれぞれが調製され得る（ＷＯ ９９／１４２２６として１９９９年３月２５日に公開されたＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＤＫ９８／００３９３参照）。
【０２８８】
特定の実施形態では、ＢＮＡヌクレオシドの二環式糖部分は、ペントフラノシル糖部分の４’位置と２’位置の間に少なくとも１つの架橋を有する化合物を含むが、これらに限定されず、このような架橋は、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−，Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）−，Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ−，−Ｃ（＝Ｏ）−，−Ｃ（＝ＮＲａ）−，−Ｃ（＝Ｓ）−，−Ｏ−，−Ｓｉ（Ｒａ）２−，−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−，及び−Ｎ（Ｒａ）−から独立に選択される１個または２〜４個の結合基を独立に含む;
ここで：
ｘは、０，１，または２であり；
ｎは、１，２，３，または４であり；
それぞれの各Ｒａ及びＲｂは、独立してＨ，保護基，ヒドロキシル，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ２−Ｃ１２アルキニル，置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル，Ｃ５−Ｃ２０アリール，置換Ｃ５−Ｃ２０アリール，複素環ラジカル，置換複素環ラジカル，ヘテロアリール，置換ヘテロアリール，Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル，置換Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル，ハロゲン、ＯＪ１，ＮＪ１Ｊ２，ＳＪ１，Ｎ３，ＣＯＯＪ１，アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ），置換アシル，ＣＮ，スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１），またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり；そして
それぞれのＪ１及びＪ２は、独立して、Ｈ，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ２−Ｃ１２アルキニル，置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル，Ｃ５−Ｃ２０アリール，置換Ｃ５−Ｃ２０アリール，アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ），置換アシル，複素環ラジカル，置換複素環ラジカル，Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル，置換Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル，または保護基である。
【０２８９】
特定の実施形態では、二環式糖部分の架橋は、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−，−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−Ｏ−，−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−，または−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−である。特定の実施形態では、架橋は、４’−ＣＨ２−２’，４’−（ＣＨ２）２−２’，４’−（ＣＨ２）３−２’，４’−ＣＨ２−Ｏ−２’，４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’，４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’，及び４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’−であり、式中、各Ｒは、独立して、Ｈ，保護基，またはＣ１−Ｃ１２アルキルである。
【０２９０】
特定の実施形態では、二環式ヌクレオシドは、異性体配置によってさらに定義される。例えば、４’−２’メチレン−オキシ架橋を含むヌクレオシドは、α−Ｌ配置またはβ−Ｄ配置であってもよい。以前は、α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡの配置は、アンチセンス活性を示すアンチセンスオリゴヌクレオチドに組込まれていた（Ｆｒｉｅｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，２１，６３６５−６３７２）。
【０２９１】
特定の実施形態では、二環式ヌクレオシドは、以下に示す通り、（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ，（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ，（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＢＮＡ，（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ，（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ，及び（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ，（Ｇ）メチレン−チオ（４’−ＣＨ２−Ｓ−２’）ＢＮＡ，（Ｈ）メチレン−アミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ，（Ｉ）メチル炭素環式（４’−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’）ＢＮＡ，及び（Ｊ）プロピレン炭素環式（４’−（ＣＨ２）３−２’）ＢＮＡを含むが、これらに限定されない。
【０２９２】
【化７】
0006684707.tif 000008
【０２９３】
ここで、Ｂｘは塩基部分であり、Ｒは独立してＨ，保護基またはＣ１−Ｃ１２アルキルである。
【０２９４】
特定の実施形態では、式Ｉを有する二環式ヌクレオシドが提供される：
【０２９５】
【化８】
0006684707.tif 000009
【０２９６】
ここで：
Ｂｘは、複素環塩基部分であり；
−Ｑａ−Ｑｂ−Ｑｃ−は、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−，−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−，−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒｃ）−，−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−，または−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−ＣＨ２であり；
Ｒｃは、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたはアミノ保護基であり；
Ｔａ及びＴｂはそれぞれ、独立して、Ｈ，ヒドロキシル保護基，コンジュゲート基，反応性リン基，リン部分，または支持体との共有結合である。
【０２９７】
特定の実施形態では、式ＩＩを有する二環式ヌクレオシドが提供される：
【０２９８】
【化９】
0006684707.tif 000010
【０２９９】
ここで：
Ｂｘは、複素環塩基部分であり；
Ｔａ及びＴｂはそれぞれ、独立して、Ｈ，ヒドロキシル保護基，コンジュゲート基，反応性リン基，リン部分，または支持体との共有結合であり；
Ｚａは、Ｃ１−Ｃ６アルキル，Ｃ２−Ｃ６アルケニル，Ｃ２−Ｃ６アルキニル，置換Ｃ１−Ｃ６アルキル，置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル，置換Ｃ２−Ｃ６アルキニル，アシル，置換アシル，置換アミド，チオール，または置換チオである。
【０３００】
一実施形態では、置換基のそれぞれは、独立して、ハロゲン，オキソ，ヒドロキシル，ＯＪｃ，ＮＪｃＪｄ，ＳＪｃ，Ｎ３，ＯＣ（＝Ｘ）Ｊｃ，及びＮＪｅＣ（＝Ｘ）ＮＪｃＪｄから独立して選択される置換基でモノ置換またはポリ置換され、ここで、各Ｊｃ，Ｊｄ，及びＪｅは、独立して、Ｈ，Ｃ１−Ｃ６アルキル，または置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、Ｘは、ＯまたはＮＪｃである。
【０３０１】
特定の実施形態では、式ＩＩＩを有する二環式ヌクレオシドが提供される：
【０３０２】
【化１０】
0006684707.tif 000011
【０３０３】
ここで：
Ｂｘは、複素環塩基部分であり；
Ｔａ及びＴｂはそれぞれ、独立して、Ｈ，ヒドロキシル保護基，コンジュゲート基，反応性リン基，リン部分，または支持体との共有結合であり；
Ｚｂは、Ｃ１−Ｃ６アルキル，Ｃ２−Ｃ６アルケニル，Ｃ２−Ｃ６アルキニル，置換Ｃ１−Ｃ６アルキル，置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル，置換Ｃ２−Ｃ６アルキニル，または置換アシル（Ｃ（＝Ｏ）−）である。
【０３０４】
特定の実施形態では、式ＩＶを有する二環式ヌクレオシドが提供される：
【０３０５】
【化１１】
0006684707.tif 000012
【０３０６】
ここで：
Ｂｘは、複素環塩基部分であり；
Ｔａ及びＴｂはそれぞれ、独立して、Ｈ，ヒドロキシル保護基，コンジュゲート基，反応性リン基，リン部分，または支持体との共有結合であり；
Ｒｄは、Ｃ１−Ｃ６アルキル，置換Ｃ１−Ｃ６アルキル，Ｃ２−Ｃ６アルケニル，置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル，Ｃ２−Ｃ６アルキニル，または置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり；
それぞれｑａ、ｑｂ、ｑｃ、及びｑｄは、独立して、Ｈ，ハロゲン，Ｃ１−Ｃ６アルキル，置換Ｃ１−Ｃ６アルキル，Ｃ２−Ｃ６アルケニル，置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル，Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２−Ｃ６アルキニル，Ｃ１−Ｃ６アルコキシル，置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシル，アシル，置換アシル，Ｃ１−Ｃ６アミノアルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ６アミノアルキルである。
【０３０７】
特定の実施形態では、式Ｖを有する二環式ヌクレオシドが提供される：
【０３０８】
【化１２】
0006684707.tif 000013
【０３０９】
ここで：
Ｂｘは、複素環塩基部分であり；
Ｔａ及びＴｂはそれぞれ、独立して、Ｈ，ヒドロキシル保護基，コンジュゲート基，反応性リン基，リン部分，または支持体との共有結合であり；
ｑａ，ｑｂ，ｑｅ，及びｑｆはそれぞれ、独立して、水素，ハロゲン，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ２−Ｃ１２アルキニル，置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル，Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ，置換Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ，ＯＪｊ，ＳＪｊ，ＳＯＪｊ，ＳＯ２Ｊｊ，ＮＪｊＪｋ，Ｎ３，ＣＮ，Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ，Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ，Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ，Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ，Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ，Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ，またはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであるか；
あるいは、ｑｅ及びｑｆは、ともに＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり；
ｑｇ及びｑｈはそれぞれ、独立して、Ｈ，ハロゲン，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，または置換Ｃ１−Ｃ１２アルキルである。
【０３１０】
メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡモノマーである、アデニン、シトシン、グアニン、５−メチル−シトシン、チミン、及びウラシルの合成及び調製が、それらのオリゴマー化及び核酸認識特性とともに、記載されている（Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７−３６３０）。またＢＮＡ及びその調製は、ＷＯ ９８／３９３５２及びＷＯ ９９／１４２２６にも記載されている。
【０３１１】
メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡの類似体及び２’−チオ−ＢＮＡも調製されている（Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９−２２２２）。核酸ポリメラーゼの基質としてオリゴデオキシリボヌクレオチド二重鎖を含むロックされたヌクレオシド類似体の調製も、記載されている（Ｗｅｎｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，ＷＯ ９９／１４２２６）。さらに、配座固定された高親和性オリゴヌクレオチド類似体である２’−アミノ−ＢＮＡの合成が、当該技術分野で記載されている（Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９）。さらに、２’−アミノ−及び２’−メチルアミノ−ＢＮＡが調製されており、相補的ＲＮＡ鎖及びＤＮＡ鎖を有するそれらの二重鎖の熱安定性が以前に報告されている。
【０３１２】
特定の実施形態では、式ＶＩを有する二環式ヌクレオシドが提供され：
【０３１３】
【化１３】
0006684707.tif 000014
【０３１４】
ここで：
Ｂｘは、複素環塩基部分であり；
Ｔａ及びＴｂはそれぞれ、独立して、Ｈ，ヒドロキシル保護基，共役基，反応性リン基，リン部分，または支持体との共有結合であり；
それぞれのｑｉ，ｑｊ，ｑｋ，及びｑｌは、独立して、Ｈ，ハロゲン，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル，Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル，Ｃ２−Ｃ１２アルキニル，置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル，Ｃ１−Ｃ１２アルコキシル，置換Ｃ１−Ｃ１２アルコキシル，ＯＪｊ，ＳＪｊ，ＳＯＪｊ，ＳＯ２Ｊｊ，ＮＪｊＪｋ，Ｎ３，ＣＮ，Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ，Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ，Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ，Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ，Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ，Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ，またはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり；そして
ｑｉ及びｑｊまたはｑｌ及びｑｋは、ともに＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、ｑｇ及びｑｈはそれぞれ、独立して、Ｈ，ハロゲン，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，または置換Ｃ１−Ｃ１２アルキルである。
【０３１５】
４’−（ＣＨ２）３−２’架橋を有する１つの炭素環式二環式ヌクレオシド及びアルケニル類似体架橋４’−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−２’が記載されている（Ｆｒｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４２９−４４４３及びＡｌｂａｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６，７１，７７３１−７７４０）。炭素環式二環式ヌクレオシドの合成及び調製が、それらのオリゴマー化及び生化学的研究とともに、記載されている（Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（２６），８３６２−８３７９）。
【０３１６】
本明細書で使用される場合、「４’−２’二環式ヌクレオシド」または「４’〜２’二環式ヌクレオシド」は、糖環の２’炭素原子と４’炭素原子を接続するフラノース環の２つの炭素原子を接続する架橋を含むフラノース環を含む二環式ヌクレオシドを指す。
【０３１７】
本明細書で使用される場合、「単環式ヌクレオシド」は、二環式糖部分ではない修飾糖部分を含むヌクレオシドを指す。特定の実施形態では、ヌクレオシドの糖部分、または糖部分類似体は、任意の位置で修飾または置換され得る。
【０３１８】
本明細書で使用される場合、「２’−修飾糖」は、２’位で修飾されたフラノシル糖を意味する。特定の実施形態では、そのような修飾は、以下から選択される置換基を含む：置換及び非置換アルコキシ，置換及び非置換チオアルキル，置換及び非置換アミノアルキル，置換及び非置換アルキル，置換及び非置換アリル，並びに置換及び非置換アルキニル、を含むがこれらに限定されないハロゲン化物。特定の実施形態では、２’修飾は、以下を含む置換基から選択されるが、これらに限定されない：Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３，Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２，Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３，Ｏ（ＣＨ２）ｎＦ，Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２，ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３，及びＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］２、ここでｎ及びｍは、１〜約１０である。他の２’−置換基は、以下からも選択され得る：Ｃ１−Ｃ１２アルキル，置換アルキル，アルケニル，アルキニル，アルカリル，アラルキル，Ｏ−アルカリルもしくはＯ−アラルキル，ＳＨ，ＳＣＨ３，ＯＣＮ，Ｃｌ，Ｂｒ，ＣＮ，Ｆ，ＣＦ３，ＯＣＦ３，ＳＯＣＨ３，ＳＯ２ＣＨ３，ＯＮＯ２，ＮＯ２，Ｎ３，ＮＨ２，ヘテロシクロアルキル，ヘテロシクロアルカリル，アミノアルキルアミノ，ポリアルキルアミノ，置換シリル，ＲＮＡ切断基，レポーター基，インターカレーター，薬力学的特性を改善するための基、またはアンチセンス化合物の薬物動態特性を改善するための基、ならびに同様の特性を有する他の置換基。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ側鎖を含む（Ｂａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，２７２，１１９４４−１２０００）。そのような２’−ＭＯＥ置換は、２’−Ｏ−メチル、Ｏ−プロピル、及びＯ−アミノプロピルなどの非修飾ヌクレオシド及び他の修飾ヌクレオシドと比較して、改善された結合親和性を有すると記載されている。２’−ＭＯＥ置換基を有するオリゴヌクレオチドは、インビボ使用のための有望な特徴を有する、遺伝子発現のアンチセンス阻害物質であることも示されている（Ｍａｒｔｉｎ，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８，４８６−５０４、Ａｌｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｉｍｉａ，１９９６，５０，１６８−１７６、Ａｌｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，１９９６，２４，６３０−６３７、及びＡｌｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９７，１６，９１７−９２６）。
【０３１９】
本明細書で使用される場合、「修飾テトラヒドロピランヌクレオシド」または「修飾ＴＨＰヌクレオシド」は、通常のヌクレオシド中のペントフラノシル残基の代わりに置換された６員テトラヒドロピラン「糖」（糖代用物）を有するヌクレオシドを意味する。修飾ＴＨＰヌクレオシドは、当該技術分野でヘキシトール核酸（ＨＮＡ），アニトール核酸（ＡＮＡ），マニトール核酸（ＭＮＡ）（Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００２，１０，８４１−８５４参照）、フルオロＨＮＡ（Ｆ−ＨＮＡ）と称されるもの、または式ＶＩＩを有するものを含むが、これらに限定されない：
【０３２０】
【化１４】
0006684707.tif 000015
【０３２１】
ここで、式ＶＩＩの少なくとも１つのテトラヒドロピランヌクレオシド類似体のそれぞれに関して、独立して：
Ｂｘは、複素環塩基部分であり；
Ｔａ及びＴｂはそれぞれ、独立して、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に連結させるヌクレオシド間連結基であるか、あるいは、Ｔａ及びＴｂの一方が、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に連結させるヌクレオシド間連結基であり、かつＴａ及びＴｂの他方が、Ｈ，ヒドロキシル保護基，連結共役基，または５’もしくは３’末端基であり；
ｑ１，ｑ２，ｑ３，ｑ４，ｑ５，ｑ６，及びｑ７はそれぞれ、独立して、Ｈ，Ｃ１−Ｃ６アルキル，置換Ｃ１−Ｃ６アルキル，Ｃ２−Ｃ６アルケニル，置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル，Ｃ２−Ｃ６アルキニル，または置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり、Ｒ１及びＲ２のそれぞれは、水素，ヒドロキシル，ハロゲン，置換もしくは非置換アルコキシ，ＮＪ１Ｊ２，ＳＪ１，Ｎ３，ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１，ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２，ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２，及びＣＮから選択され、ここで、ＸはＯ，Ｓ，またはＮＪ１であり、各Ｊ１，Ｊ２，及びＪ３は独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０３２２】
特定の実施形態では、ｑ１，ｑ２，ｑ３，ｑ４，ｑ５，ｑ６，及びｑ７が、それぞれＨである、式ＶＩＩの修飾ＴＨＰヌクレオシドが提供される。特定の実施形態では、ｑ１，ｑ２，ｑ３，ｑ４，ｑ５，ｑ６，及びｑ７のうちの少なくとも１つは、Ｈ以外である。特定の実施形態では、ｑ１，ｑ２，ｑ３，ｑ４，ｑ５，ｑ６，及びｑ７のうちの少なくとも１つは、メチルである。特定の実施形態では、Ｒ１及びＲ２のうちの１つがフルオロである、式ＶＩＩのＴＨＰヌクレオシドが提供される。特定の実施形態では、Ｒ１はフルオロでありかつＲ２はＨである；Ｒ１はメトキシでありかつＲ２はＨである、及びＲ１はＨでありかつＲ２はメトキシエトキシである。
【０３２３】
本明細書に使用される場合、「２’−修飾」または「２’−置換」は、２’位にＨまたはＯＨ以外の置換基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。２’−修飾ヌクレオシドは、糖環の２つの炭素原子を接続する架橋が、糖環の２’炭素と別の炭素とを接続する二環式ヌクレオシド；並びにアリル，アミノ，アジド，チオ，Ｏ−アリル，Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルキル，−ＯＣＦ３，Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ３，２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３，Ｒｍ及びＲｎがそれぞれ、独立して、Ｈまたは置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ１０アルキルであるＯ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ），またはＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）等の非架橋２’置換基を有するヌクレオシド、を含むが、これらに限定されない。２’−修飾ヌクレオシドはさらに、例えば、糖の他の位置に及び／または核酸塩基に、他の修飾を含んでもよい。
【０３２４】
本明細書で使用される場合、「２’−Ｆ」は、２’位にフルオロ基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
【０３２５】
本明細書で使用される場合、「２’−ＯＭｅ」または「２’−ＯＣＨ３」または「２’−Ｏ−メチル」はそれぞれ、糖環の２’位に−ＯＣＨ３基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
【０３２６】
本明細書で使用される場合、「ＭＯＥ」または「２’−ＭＯＥ」または「２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３」または「２’−Ｏ−メトキシエチル」はそれぞれ、糖環の２’位に−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
【０３２７】
本明細書で使用する際、「オリゴヌクレオチド」は、複数の連結されたヌクレオシドを含む化合物を指す。特定の実施形態では、複数のヌクレオシドのうちの１つ以上が修飾されている。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上のリボヌクレオシド（ＲＮＡ）及び／またはデオキシリボヌクレオシド（ＤＮＡ）を含む。
【０３２８】
アンチセンス化合物中に取り込むためのヌクレオシドを修飾するために使用できる、多くの他の二環式及び三環式糖代用環系も当該技術分野で公知である（例えば、レビュー記事：Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００２，１０，８４１−８５４参照）。そのような環系は、活性を向上させるために、様々なさらなる置換を行うことができる。
【０３２９】
修飾糖の調製方法は当業者に周知である。
【０３３０】
修飾糖部分を有するヌクレオチドにおいて、核酸塩基部分（天然、修飾、またはそれらの組み合わせ）は、適切な核酸標的とのハイブリダイゼーションのために維持される。
【０３３１】
特定の実施形態では、アンチセンス化合物は、修飾糖部分を有する１つ以上のヌクレオシドを含む。特定の実施形態では、修飾糖部分は、２’−ＭＯＥである。特定の実施形態では、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドは、ギャップマーモチーフに配置される。特定の実施形態では、修飾糖部分は、（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）架橋基を有する二環式ヌクレオシドである。ある特定の実施形態では、（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）修飾ヌクレオシドは、ギャップマーモチーフのウイング全体に配置される。
医薬組成物を製剤化するための組成物及び方法
【０３３２】
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、医薬組成物または医薬製剤の調製のために薬学的に許容可能な活性または不活性な物質と混合され得る。医薬組成物を製剤化するための組成物及び方法は、投与経路、疾患の程度、または投与される用量を含むいくつかの基準に依存するが、これらに限定されない。
【０３３３】
タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、アンチセンス化合物を適切な薬学的に許容可能な希釈剤または担体と組合せることにより医薬組成物中で使用することができる。薬学的に許容可能な希釈剤は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含む。ＰＢＳは、非経口的に送達される組成物中での使用に適した希釈剤である。従って、一実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物及び薬学的に許容可能な希釈剤を含む医薬組成物が本明細書に記載の方法で使用される。特定の実施形態では、薬学的に許容可能な希釈剤はＰＢＳである。特定の実施形態では、アンチセンス化合物はアンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【０３３４】
アンチセンス化合物を含む医薬組成物は、ヒトを含む動物への投与の際に生物学的に活性な代謝物質またはその残基を（直接または間接的に）形成することができる、薬学的に許容可能な塩、エステル、またはそのようなエステルの塩、または任意の他のオリゴヌクレオチドを包含する。従って、例えば、本開示は、アンチセンス化合物の薬学的に許容可能な塩、プロドラッグ、そのようなプロドラッグの薬学的に許容可能な塩、及びその他の生物学的等価物にも関する。適切な薬学的に許容可能な塩は、ナトリウム塩及びカリウム塩を含むが、これらに限定されない。
【０３３５】
プロドラッグは、活性アンチセンス化合物を形成するために体内で内因性ヌクレアーゼにより切断される、アンチセンス化合物の一端または両端における付加的ヌクレオシドの導入を含むことができる。
コンジュゲートされたアンチセンス化合物
【０３３６】
アンチセンス化合物は、得られるアンチセンスオリゴヌクレオチドの活性、細胞分布、または細胞取込みを向上させる１つまたは複数の部分またはコンジュゲートに共有結合していてよい。典型的なコンジュゲート基は、コレステロール部分及び脂質部分を含む。さらなるコンジュゲート基は、炭水化物，リン脂質，ビオチン，フェナジン，葉酸，フェナントリジン，アントラキノン，アクリジン，フルオレセイン，ローダミン，クマリン，及び色素を含む。
【０３３７】
アンチセンス化合物は、例えばヌクレアーゼ安定性などの特性を向上させるために、一般的にアンチセンス化合物の一端または両端に付加される１つまたは複数の安定基を有するように修飾されてもよい。安定基には、キャップ構造が含まれる。これらの末端修飾は、末端核酸を有するアンチセンス化合物をエキソヌクレアーゼ分解から保護し、細胞内における送達及び／または局在化を支援することができる。キャップは、５’−末端（５’−キャップ）または３’−末端（３’−キャップ）に存在することができ、または両端に存在することがでる。キャップ構造は、当該技術分野で周知であり、例えば逆方向デオキシ脱塩基キャップを含む。ヌクレアーゼ安定性を付与するようにアンチセンス化合物の一端または両端をキャップするために使用することができるさらなる３’及び５’−安定基は、２００３年１月１６日に公開されたＷＯ ０３／００４６０２に開示されているものを含む。
細胞培養及びアンチセンス化合物処理
【０３３８】
タウ核酸のレベル、活性、または発現に対するアンチセンス化合物の効果は、様々な細胞タイプで、インビトロで試験することができる。このような分析に使用される細胞タイプは、市販されており（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓｕｓ,ＶＡ；Ｚｅｎ−Ｂｉｏ,Ｉｎｃ．，Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ，ＮＣ;Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、市販の試薬（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いてメーカーの使用説明書に従って培養される。例示的な細胞タイプは、ＨｅｐＧ２細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、及び初代培養肝細胞を含むが、これらに限定されない。
アンチセンスオリゴヌクレオチドのインビトロ試験
【０３３９】
アンチセンスオリゴヌクレオチドによる細胞の処理方法が本明細書に記載されており、これは他のアンチセンス化合物による処理用に適切に改変することができる。
【０３４０】
細胞が培養液中で約６０〜８０％のコンフルエンシーに達した時に、細胞はアンチセンスオリゴヌクレオチドで処理される。
【０３４１】
培養細胞中にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために一般に使用される他の試薬は、カチオン性脂質トランスフェクション試薬ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＴＩＮ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を含む。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ １（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中でＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮと混合して、所望のアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度及び１００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドあたり２〜１２μｇ／ｍＬの範囲であり得るリポフェクチン濃度を達成する。
【０３４２】
培養細胞中にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために使用される他の試薬は、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を含む。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ１低血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中でＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥと混合して、所望のアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度及び１００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドあたり２〜１２uｇ／ｍＬの範囲であり得るＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ濃度を達成する。
【０３４３】
培養細胞中にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために使用される他の技術は、エレクトロポレーションを含む。
【０３４４】
細胞は、慣例の方法によって、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理される。細胞は、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理の１６〜２４時間後に回収され、その時点での標的核酸のＲＮＡまたはタンパク質レベルが、当該技術分野で周知の方法及び本明細書に記載の方法によって測定される。一般的に、処理を複数の複製物で行う場合、データは複製物の処理の平均で表される。
【０３４５】
使用されるアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は細胞株によって異なる。特定の細胞株に最適なアンチセンスオリゴヌクレオチド濃度の決定方法は当該技術分野で周知である。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、典型的には、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥを用いてトランスフェクトされる場合、１ｎＭ〜３００ｎＭの範囲の濃度で使用される。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、エレクトロポレーションを用いてトランスフェクトされる場合、より高濃度の６２５〜２０，０００ｎＭの範囲でで使用される。
ＲＮＡ単離
【０３４６】
ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ ｍＲＮＡに対して行われ得る。ＲＮＡ単離方法は当該技術分野で周知である。ＲＮＡは、当該技術分野で周知の方法を用いて、例えばＴＲＩＺＯＬ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を製造者が推奨するプロトコルに従って用いて、調製される。
標的レベルまたは発現の阻害の分析
【０３４７】
タウ核酸のレベルまたは発現の阻害は、当該技術分野で公知の様々な方法でアッセイされ得る。例えば、標的核酸レベルは、例えばノーザンブロット解析、競合的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、または定量的リアルタイムＰＣＲにより定量化することができる。ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ ｍＲＮＡに対して行うことができる。ＲＮＡの単離方法は当該技術分野で周知である。ノーザンブロット解析も当該技術分野で慣例である。ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡから市販されているＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７６００，７７００，または７９００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍを製造者の取扱説明書に従って用いて、定量的リアルタイムＰＣＲを便利に行うことができる。
標的ＲＮＡレベルの定量的リアルタイムＰＣＲ分析
【０３４８】
ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７６００，７７００，または７９００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）をメーカーの取扱説明書に従って用いる定量的リアルタイムＰＣＲにより、標的ＲＮＡレベルを定量化することができる。定量的リアルタイムＰＣＲの方法は当該技術分野で周知である。
【０３４９】
リアルタイムＰＣＲの前に、単離されたＲＮＡは逆転写酵素（ＲＴ）反応に供され、これは、その後リアルタイムＰＣＲ増幅の基質として使用される相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を生成する。ＲＴ及びリアルタイムＰＣＲ反応は同じサンプルウェル中で続けて行われる。ＲＴ及びリアルタイムＰＣＲ試薬はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）から入手できる。ＲＴ及びリアルタイムＰＣＲ反応は当業者に周知の方法により行われる。
【０３５０】
リアルタイムＰＣＲにより得られる遺伝子（またはＲＮＡ）標的の量は、シクロフィリンＡなどの、発現が一定の遺伝子の発現レベルを用いることにより、またはＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いて全ＲＮＡを定量化することにより、標準化される。シクロフィリンＡの発現は、標的と同時、多重、または別個に行われることにより、リアルタイムＰＣＲによって定量化される。全ＲＮＡは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ ＲＮＡ定量試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて定量化される。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮによるＲＮＡ定量方法はＪｏｎｅｓ，Ｌ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，２６５，３６８−３７４）によって教示されている。ＣＹＴＯＦＬＵＯＲ ４０００機器（ＰＥ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）がＲＩＢＯＧＲＥＥＮの蛍光を測定するのに用いられる。
【０３５１】
プローブ及びプライマーはタウ核酸にハイブリダイズするように設計される。リアルタイムＰＣＲ用のプローブ及びプライマーの設計方法は、当該技術分野で周知であり、ＰＲＩＭＥＲ ＥＸＰＲＥＳＳ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）などのソフトウェアの使用を含み得る。
タンパク質レベルの分析
【０３５２】
タウ核酸のアンチセンス阻害は、タウタンパク質レベルを測定することにより評価することができる。タウのタンパク質レベルは、免疫沈降，ウェスタンブロット解析（イムノブロッティング），酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ），定量的タンパク質アッセイ，タンパク質活性アッセイ（例えば、カスパーゼ活性アッセイ），免疫組織化学，免疫細胞化学，または蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＳ）などの、当該技術分野で周知の種々の方法で評価又は定量化することができる。標的に対する抗体は、ＭＳＲＳ抗体カタログ（（Ａｅｒｉｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＭＩ）などの様々な供給元から特定及び入手することができるか、または、当該技術分野で周知の従来のモノクローナル又はポリクローナル抗体生成方法により調製することができる。
アンチセンス化合物のインビボ試験
【０３５３】
アンチセンス化合物、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドは、改善された認知及び運動機能などの、タウの発現を阻害して表現型の変化を生成する能力を評価するために動物で試験される。特定の実施形態では、認知は、新規物体認識とネストレット構成活性によって測定される。特定の実施形態では、運動機能は、動物における歩行開始分析，ロータロッド，握力，ポール登り，オープンフィールドパフォーマンス，バランスビーム，後足フットプリント試験によって測定される。特定の実施形態では、アンチセンス化合物、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ペンチレンテトラゾール（ＰＴＺ）誘導性発作モデルの発作の重症度を防止、及び／または低減させる能力を評価するために試験される。
【０３５４】
試験は、通常の動物または実験用の疾患モデルで行うことができる。動物への投与では、アンチセンスオリゴヌクレオチドはリン酸緩衝食塩水などの薬学的に許容可能な希釈剤中で製剤化される。投与は、腹腔内，静脈内，及び皮下投与などの非経口投与経路を含む。アンチセンスオリゴヌクレオチドの用量及び投与頻度の計算は、当業者の能力内にあり、投与経路、動物の体重などの因子に依存する。アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いた治療期間の後、ＲＮＡはＣＮＳ組織またはＣＳＦから単離され、タウ核酸発現の変化が測定される。
特定の適応症
【０３５５】
特定の実施形態では、本明細書に記載される１つ以上の医薬組成物を投与することを含む、個体を治療する方法、化合物、及び組成物が、本明細書で提供される。特定の実施形態では、個体は神経変性疾患を有する。特定の実施形態では、個体は、タウオパシー，アルツハイマー病，前頭側頭型認知症（ＦＴＤ），ＦＴＤＰ−１７，進行性格上性まひ（ＰＳＰ），慢性外傷性脳症（ＣＴＥ），大脳皮質神経節変成症（ＣＢＤ），てんかん，及びドラベ症候群を含むが、これらに限定されない、神経変性疾患を発症するリスクがある。特定の実施形態では、個体はタウ関連疾患を有すると同定されている。特定の実施形態では、個体におけるタウの発現を予防的に減少させるための方法が、本明細書で提供される。特定の実施形態は、タウ核酸を標的とした治療有効量のアンチセンス化合物を固体に投与することにより、治療を必要とする個体を治療することを含む。
【０３５６】
一実施形態では、アンチセンス化合物の投与に対する個体の応答を決定するために、タウ核酸を標的とした治療有効量のアンチセンス化合物の投与は、個体におけるタウレベルのモニタリングを伴う。アンチセンス化合物の投与に対する個体の応答は、治療的介入の量と期間を決定するために医師によって使用され得る。
【０３５７】
特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物の投与は、少なくとも１５，２０，２５，３０，３５，４０，４５，５０，５５，５６，５７，５８，５９，６０，６１，６２，６３，６４，６５，６６，６７，６８，６９，７０，７１,７２,７３,７４,７５,７６,７７,７８,７９,８０，８１，８２，８３，８４，８５，８６，８７，８８，８９，９０，９１，９２，９３，９４，９５，９６，９７，９８，９９，もしくは１００％、またはこれらの値の任意の２つにより定義される範囲だけ、タウ核酸の発現の減少をもたらす。特定の実施形態では、タウ核酸を標的とするアンチセンス化合物の投与は、動物において改善された運動機能をもたらす。特定の実施形態では、タウアンチセンス化合物の投与は、少なくとも１５，２０，２５，３０，３５，４０，４５，５０，５５，５６，５７，５８，５９，６０，６１，６２，６３，６４，６５，６６，６７，６８，６９，７０，７１,７２,７３,７４,７５,７６,７７,７８,７９,８０，８１，８２，８３，８４，８５，８６，８７，８８，８９，９０，９１，９２，９３，９４，９５，９６，９７，９８，９９，もしくは１００％、またはこれらの値の任意の２つにより定義される範囲だけ、運動機能を改善する。
【０３５８】
特定の実施形態では、タウを標的とするアンチセンス化合物を含む医薬組成物は、タウオパシー，アルツハイマー病，前頭側頭型認知症（ＦＴＤ），ＦＴＤＰ−１７，進行性核上性麻痺（ＰＳＰ），慢性外傷性脳症（ＣＴＥ），大脳皮質神経節変性症（ＣＢＤ），てんかん，及びドラベ症候群を含む神経変性に罹患しているまたは感受性のある患者を治療するための医薬の調製のために使用される。
特定のホットスポット領域
１.ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１の核酸塩基１３５７８３−１３５９８０
【０３５９】
特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１の核酸塩基１３５７８３−１３５９８０（ヌクレオチド９２４００００〜９３８１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１５）標的とするように設計される。特定の実施形態では、核酸塩基１３５７８３−１３５９８０はホットスポット領域である。特定の実施形態では、核酸塩基１３５７８３−１３５９８０はアンチセンスオリゴヌクレオチドによって標的にされる。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１８，１９，または２０核酸塩基長さである。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドはギャップマーである。特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマー，５−９−５ＭＯＥギャップマー，５−７−６ＭＯＥギャップマー，及び５−８−５ＭＯＥギャップマーである。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合によって結合している。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合によって結合している。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホロチオエート及びホスホジエステルヌクレオチド間結合によって結合している（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは「混合主鎖」を持つ）。
【０３６０】
特定の実施形態では、核酸塩基１３５７８３−１３５９８０は以下のＩＳＩＳ番号によって標的にされる：４２４８７９，４２４８８０，５４８９３７，６１３１１４−６１３１２０，６２２０９６−６２２１５０，６２３９８８−６２３９９６，６６４５１１−６６４５４２，及び６６４６６１−６６４８１９。
【０３６１】
特定の実施形態では、核酸塩基１３５７８３−１３５９８０は以下のＳＥＱ ＩＤ ＮＯによって標的にされる：５６，５７，２４８，４６２−４６７，１６６８−１６９８，２０２５−２０４８，２３０１−２３０９，２３３１−２４４３，及び２４７８−２４８３。
【０３６２】
特定の実施形態では、核酸塩基１３５７８３−１３５９８０を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１２％，少なくとも１３％，少なくとも１４％，少なくとも１５％，少なくとも１６％，少なくとも１７％，少なくとも１８％，少なくとも１９％，２０％，少なくとも２１％，少なくとも２２％，少なくとも２３％，少なくとも２４％，少なくとも２５％，少なくとも２６％，少なくとも２７％，少なくとも２８％,少なくとも２９％，少なくとも３０％，少なくとも３１％，少なくとも３２％，少なくとも３３％，少なくとも３４％，少なくとも３５％，少なくとも３６％，少なくとも３７％，少なくとも３８％，少なくとも３９％，少なくとも４０％，少なくとも４１％，少なくとも４２％，少なくとも４３％，少なくとも４４％，少なくとも４５％，少なくとも４６％，少なくとも４７％，少なくとも４８％，少なくとも４９％，少なくとも５０％, 少なくとも５１％，少なくとも５２％，少なくとも５３％，少なくとも５４％，少なくとも５５％，少なくとも５６％，少なくとも５７％，少なくとも５８％，少なくとも５９％，少なくとも６０％，少なくとも６１％，少なくとも６２％，少なくとも６３％，少なくとも６４％，少なくとも６５％，少なくとも６６％，少なくとも６７％，少なくとも６８％，少なくとも６９％，少なくとも７０％，少なくとも７１％，少なくとも７２％，少なくとも７３％，少なくとも７４％，少なくとも７５％，少なくとも７６％，少なくとも７７％，少なくとも７８％，少なくとも７９％，少なくとも８０％，少なくとも８１％，少なくとも８２％，少なくとも８３％，少なくとも８４％，少なくとも８５％，少なくとも８６％，少なくとも８７％，少なくとも８８％，少なくとも８９％，少なくとも９０％，少なくとも９１％，少なくとも９２％，または少なくとも９３％、インビトロ及び／またはインビボのタウｍＲＮＡ及び／またはタンパク質レベルの減少を達成する。
２.ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１の核酸塩基１３５８５３−１３５８７２
【０３６３】
特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１の核酸塩基１３５８５３−１３５８７２（ヌクレオチド９２４００００〜９３８１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１５）を標的とするように設計される。特定の実施形態では、核酸塩基１３５８５３−１３５８７２はホットスポット領域である。特定の実施形態では、核酸塩基１３５８５３−１３５８７２はアンチセンスオリゴヌクレオチドによって標的にされる。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１８，１９，または２０核酸塩基長さである。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドはギャップマーである。特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマー，５−９−５ＭＯＥギャップマー，５−７−６ＭＯＥギャップマー，または５−８−５ＭＯＥギャップマーである。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合によって結合している。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合によって結合している。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホロチオエート及びホスホジエステルヌクレオチド間結合によって結合している（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは「混合主鎖」を持つ）。
【０３６４】
特定の実施形態では、核酸塩基１３５８５３−１３５８７２は以下のＩＳＩＳ番号によって標的にされる：４２４８７９，４２４８８０，６１３１１７，６１３１１８，６２２１１４−６２２１２５，６２３９９３−６２３９９６，６６４５２２−６６４５４２，６６４６７６−６６４７１３，６６４７２９−６６４７６６および６６４７８３−６６４８１９。
【０３６５】
特定の実施形態では、核酸塩基１３５８５３−１３５８７２は以下のＳＥＱ ＩＤ ＮＯによって標的にされる：５６，５７，２４８，４６４−４６５，１６６８−１６７３，２０３９−２０４８，２３０６−２３０９，２３４５−２４４３，及び２４７８−２４８３。
【０３６６】
特定の実施形態では、核酸塩基１３５８５３−１３５８７２を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも３６％，少なくとも３７％，少なくとも３８％，少なくとも３９％，少なくとも４０％，少なくとも４１％，少なくとも４２％，少なくとも４３％，少なくとも４４％，少なくとも４５％，少なくとも４６％，少なくとも４７％，少なくとも４８％，少なくとも４９％，少なくとも５０％, 少なくとも５１％，少なくとも５２％，少なくとも５３％，少なくとも５４％，少なくとも５５％，少なくとも５６％，少なくとも５７％，少なくとも５８％，少なくとも５９％，少なくとも６０％，少なくとも６１％，少なくとも６２％，少なくとも６３％，少なくとも６４％，少なくとも６５％，少なくとも６６％，少なくとも６７％，少なくとも６８％，少なくとも６９％，少なくとも７０％，少なくとも７１％，少なくとも７２％，少なくとも７３％，少なくとも７４％，少なくとも７５％，少なくとも７６％，少なくとも７７％，少なくとも７８％，少なくとも７９％，少なくとも８０％，少なくとも８１％，少なくとも８２％，少なくとも８３％，少なくとも８４％，少なくとも８５％，少なくとも８６％,または少なくとも８７％、インビトロ及び／またはインビボのタウｍＲＮＡ及び／またはタンパク質レベルの減少を達成する。
３.ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１の核酸塩基１３５７８３−１３５９２９
【０３６７】
特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１の核酸塩基１３５７８３−１３５９２９（ヌクレオチド９２４００００〜９３８１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１５）を標的とするように設計される。特定の実施形態では、核酸塩基１３５７８３−１３５９２９はホットスポット領域である。特定の実施形態では、核酸塩基１３５７８３−１３５９２９はアンチセンスオリゴヌクレオチドによって標的にされる。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１８，１９，または２０核酸塩基長さである。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドはギャップマーである。特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマー，５−９−５ＭＯＥギャップマー，５−７−６ＭＯＥギャップマー，または５−８−５ＭＯＥギャップマーである。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合によって結合している。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合によって結合している。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホロチオエート及びホスホジエステルヌクレオチド間結合によって結合している（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは「混合主鎖」を持つ）。
【０３６８】
特定の実施形態では、核酸塩基１３５７８３−１３５９２９は以下のＩＳＩＳ番号によって標的にされる：４２４８７９，４２４８８０，５４８９３７，６１３１１４−６１３１１９，６２２０９６−６２２１３８，６２３９８８−６２３９９６，６６４５１１−６６４５４２，及び６６４６６１−６６４８１９。
【０３６９】
特定の実施形態では、核酸塩基１３５７８３−１３５９２９は以下のＳＥＱ ＩＤ ＮＯによって標的にされる：５６，５７，２４８，４６２−４６６，１６６８−１６８６，２０２５−２０４８，２３０１−２３０９，２３３１−２４４３，及び２４７８−２４８３。
【０３７０】
特定の実施形態では、核酸塩基１３５７８３−１３５９２９を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１２％，少なくとも１３％，少なくとも１４％，少なくとも１５％，少なくとも１６％，少なくとも１７％，少なくとも１８％，少なくとも１９％，２０％，少なくとも２１％，少なくとも２２％，少なくとも２３％，少なくとも２４％，少なくとも２５％，少なくとも２６％，少なくとも２７％，少なくとも２８％,少なくとも２９％，少なくとも３０％，少なくとも３１％，少なくとも３２％，少なくとも３３％，少なくとも３４％，少なくとも３５％，少なくとも３６％，少なくとも３７％，少なくとも３８％，少なくとも３９％，少なくとも４０％，少なくとも４１％，少なくとも４２％，少なくとも４３％，少なくとも４４％，少なくとも４５％，少なくとも４６％，少なくとも４７％，少なくとも４８％，少なくとも４９％，少なくとも５０％, 少なくとも５１％，少なくとも５２％，少なくとも５３％，少なくとも５４％，少なくとも５５％，少なくとも５６％，少なくとも５７％，少なくとも５８％，少なくとも５９％，少なくとも６０％，少なくとも６１％，少なくとも６２％，少なくとも６３％，少なくとも６４％，少なくとも６５％，少なくとも６６％，少なくとも６７％，少なくとも６８％，少なくとも６９％，少なくとも７０％，少なくとも７１％，少なくとも７２％，少なくとも７３％，少なくとも７４％，少なくとも７５％，少なくとも７６％，少なくとも７７％，少なくとも７８％，少なくとも７９％，少なくとも８０％，少なくとも８１％，少なくとも８２％，少なくとも８３％，少なくとも８４％，少なくとも８５％，少なくとも８６％，少なくとも８７％，少なくとも８８％，少なくとも８９％，少なくとも９０％，少なくとも９１％，少なくとも９２％，または少なくとも９３％、インビトロ及び／またはインビボのタウｍＲＮＡ及び／またはタンパク質レベルの減少を達成する。
４.ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１の核酸塩基１３５７８３−１３５９１４
【０３７１】
特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１の核酸塩基１３５７８３−１３５９１４（ヌクレオチド９２４００００〜９３８１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１５）を標的とするように設計される。特定の実施形態では、核酸塩基１３５７８３−１３５９１４はホットスポット領域である。特定の実施形態では、核酸塩基１３５７８３−１３５９１４はアンチセンスオリゴヌクレオチドによって標的にされる。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１８，１９，または２０核酸塩基長さである。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドはギャップマーである。特定の実施形態では、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマー，５−９−５ＭＯＥギャップマー，５−７−６ＭＯＥギャップマー，または５−８−５ＭＯＥギャップマーである。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合によって結合している。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合によって結合している。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホロチオエート及びホスホジエステルヌクレオチド間結合によって結合している（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは「混合主鎖」を持つ）。
【０３７２】
特定の実施形態では、核酸塩基１３５７８３−１３５９１４は以下のＩＳＩＳ番号によって標的にされる：４２４８７９，４２４８８０，５４８９３７，６１３１１４−６１３１１９，６２２０９６−６２２１３３，６２３９８８−６２３９９６，６６４５１１−６６４５４２，及び６６４６６１−６６４８１９。
【０３７３】
特定の実施形態では、核酸塩基１３５７８３−１３５９１４は以下のＳＥＱ ＩＤ ＮＯによって標的にされる：５６，５７，２４８，４６２−４６６，１６６８−１６８１，２０２５−２０４８，２３０１−２３０９，２３３１−２４４３，及び２４７８−２４８３。
【０３７４】
特定の実施形態では、核酸塩基１３５７８３−１３５９１４は以下のＩＳＩＳ番号によって標的にされる：４２４８７９，４２４８８０，５４８９３７，６１３１１４−６１３１１９，６２２０９６−６２２１３３，及び６２３９８８−６２３９９６。
【０３７５】
特定の実施形態では、核酸塩基１３５７８３−１３５９１４は以下のＳＥＱ ＩＤ ＮＯによって標的にされる：５６，５７，２４８，４６２−４６６，１６６８−１６８１，２０２５−２０４８，及び２３０１−２３０９。
【０３７６】
特定の実施形態では、核酸塩基１３５７８３−１３５９１４を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１２％，少なくとも１３％，少なくとも１４％，少なくとも１５％，少なくとも１６％，少なくとも１７％，少なくとも１８％，少なくとも１９％，２０％，少なくとも２１％，少なくとも２２％，少なくとも２３％，少なくとも２４％，少なくとも２５％，少なくとも２６％，少なくとも２７％，少なくとも２８％，少なくとも２９％，少なくとも３０％，少なくとも３１％，少なくとも３２％，少なくとも３３％，少なくとも３４％，少なくとも３５％，少なくとも３６％，少なくとも３７％，少なくとも３８％，少なくとも３９％，少なくとも４０％，少なくとも４１％，少なくとも４２％，少なくとも４３％，少なくとも４４％，少なくとも４５％，少なくとも４６％，少なくとも４７％，少なくとも４８％，少なくとも４９％，少なくとも５０％, 少なくとも５１％，少なくとも５２％，少なくとも５３％，少なくとも５４％，少なくとも５５％，少なくとも５６％，少なくとも５７％，少なくとも５８％，少なくとも５９％，少なくとも６０％，少なくとも６１％，少なくとも６２％，少なくとも６３％，少なくとも６４％，少なくとも６５％，少なくとも６６％，少なくとも６７％，少なくとも６８％，少なくとも６９％，少なくとも７０％，少なくとも７１％，少なくとも７２％，少なくとも７３％，少なくとも７４％，少なくとも７５％，少なくとも７６％，少なくとも７７％，少なくとも７８％，少なくとも７９％，少なくとも８０％，少なくとも８１％，少なくとも８２％，少なくとも８３％，少なくとも８４％，少なくとも８５％，少なくとも８６％，少なくとも８７％，少なくとも８８％，少なくとも８９％，少なくとも９０％，少なくとも９１％，少なくとも９２％，または少なくとも９３％、インビトロ及び／またはインビボのタウｍＲＮＡ及び／またはタンパク質レベルの減少を達成する。
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０−２４４３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４７８−２４８３の任意の核酸塩基配列の、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様２］前記修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４６，３１３，３２１，１６３４,及び２３０９の任意の核酸塩基配列の、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を有する、態様１に記載の化合物。
［態様３］前記修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４６の、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を有する、態様１に記載の化合物。
［態様４］前記修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１３の、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を有する、態様１に記載の化合物。
［態様５］前記修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２１の、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を有する、態様１に記載の化合物。
［態様６］前記修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６３４の、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を有する、態様１に記載の化合物。
［態様７］前記修飾オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３０９の、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を有する、態様１に記載の化合物。
［態様８］１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４４４−２４７７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４８４−２５６５の任意の核酸塩基配列の、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様９］１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０−２５６５の任意の核酸塩基配列の、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様１０］１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１３５７８３−１３５９８０の等しい長さ部分に相補的な、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様１１］１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１３５８５３−１３５８７２の等しい長さ部分に相補的な、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様１２］１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１３５７８３−１３５９２９の等しい長さ部分に相補的な、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様１３］１２〜３０個の結合ヌクレオシドからなり、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の核酸塩基１３５７８３−１３５９１４の等しい長さ部分に相補的な、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続核酸塩基を具備する核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様１４］前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に、少なくとも８０％，少なくとも８１％，少なくとも８２％，少なくとも８３％，少なくとも８４％，少なくとも８５％，少なくとも８６％，少なくとも８７％，少なくとも８８％，少なくとも８９％，少なくとも９０％，少なくとも９１％，少なくとも９２％，少なくとも９３％，少なくとも９４％，少なくとも９５％，少なくとも９６％，少なくとも９７％，少なくとも９８％，少なくとも９９％，または１００％相補的である、態様４−７に記載の化合物。
［態様１５］１本鎖修飾オリゴヌクレオチドからなる前記態様のいずれかに記載の化合物。
［態様１６］少なくとも１つのヌクレオシド間結合は修飾ヌクレオシド間結合である、前記態様のいずれかに記載の化合物。
［態様１７］少なくとも1つの修飾ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、態様１６に記載の化合物。
［態様１８］それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合またはホスホジエステルヌクレオシド間結合である、態様１６に記載の化合物。
［態様１９］少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、態様１〜１８のいずれかに記載の化合物。
［態様２０］２つのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、態様１〜１８のいずれかに記載の化合物。
［態様２１］３つのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、態様１〜１８のいずれかに記載の化合物。
［態様２２］４つのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、態様１〜１８のいずれかに記載の化合物。
［態様２３］５つのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、態様１〜１８のいずれかに記載の化合物。
［態様２４］６つのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、態様１〜１８のいずれかに記載の化合物。
［態様２５］少なくとも６つのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、態様１〜１８のいずれかに記載の化合物。
［態様２６］少なくとも１つのヌクレオシド間結合はホスホロチオエート結合であり、少なくとも１つのヌクレオシド間結合はホスホジエステル結合である、前記態様のいずれかに記載の化合物。
［態様２７］それぞれの修飾ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、態様１〜１７のいずれかに記載の化合物。
［態様２８］少なくとも１つのヌクレオシドは修飾核酸塩基を含む、前記態様のいずれかに記載の化合物。
［態様２９］前記修飾核酸塩基は５−メチルシトシンである、態様２８に記載の化合物。
［態様３０］前記修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシドは修飾糖を含む、前記態様のいずれかに記載の化合物。
［態様３１］前記少なくとも１つの修飾糖は二環式糖である、態様３０に記載の化合物。
［態様３２］前記二環式糖は糖４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’架橋の２’位と４’位との間に化学結合を含み、Ｒは、独立して，Ｈ，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，または保護基である、態様３１に記載の化合物。
［態様３３］前記二環式糖は４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’架橋を含み、Ｒは、独立して、Ｈ，Ｃ１−Ｃ１２アルキル，または保護基である、態様３１に記載の化合物。
［態様３４］少なくとも1つの修飾糖は２’−Ｏ−メトキシエチル基を含む、態様３１に記載の化合物。
［態様３５］前記修飾糖は２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３基を含む、態様３１に記載の化合物。
［態様３６］前記修飾オリゴヌクレオチドは：
１０個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
５個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
５個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント；
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む、前記態様のいずれかに記載の化合物。
［態様３７］前記修飾オリゴヌクレオチドは：
９個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
５個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
５個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント；
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む、前記態様のいずれかに記載の化合物。
［態様３８］前記修飾オリゴヌクレオチドは：
７個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
５個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
６個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント；
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む、前記態様のいずれかに記載の化合物。
［態様３９］前記修飾オリゴヌクレオチドは：
８個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
５個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
５個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント；
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む、前記態様のいずれかに記載の化合物。
［態様４０］前記修飾オリゴヌクレオチドは：
８個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
４個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
６個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント；
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む、前記態様のいずれかに記載の化合物。
［態様４１］前記修飾オリゴヌクレオチドは：
８個の結合デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
６個の結合ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；及び、
４個の結合ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント；
を含み、
前記ギャップセグメントは前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む、前記態様のいずれかに記載の化合物。
［態様４２］前記修飾オリゴヌクレオチドは２０個の結合ヌクレオシドからなる、前記態様のいずれかに記載の化合物。
［態様４３］前記修飾オリゴヌクレオチドは１９個の結合ヌクレオシドからなる、前記態様のいずれかに記載の化合物。
［態様４４］前記修飾オリゴヌクレオチドは１８個の結合ヌクレオシドからなる、前記態様のいずれかに記載の化合物。
［態様４５］前記態様のいずれかに記載の前記化合物またはその塩、及び少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む組成物。
［態様４６］前記態様のいずれかに記載の前記化合物または組成物の動物への投与を含む方法。
［態様４７］前記動物はヒトである、態様４６に記載の方法。
［態様４８］前記化合物の投与は、タウ関連疾患、障害または病態の進行を妨げ、治療し、改善し、または遅延させる、態様４６に記載の方法。
［態様４９］前記疾患、障害または病態は、タウオパシー，アルツハイマー病，前頭側頭型認知症（ＦＴＤ），ＦＴＤＰ−１７，進行性核上性麻痺（ＰＳＰ），慢性外傷性脳症（ＣＴＥ），大脳皮質神経節変性症（ＣＢＤ），てんかん，またはドラベ症候群である、態様４８に記載の方法。
［態様５０］前記疾患、障害または病態はアルツハイマー病である、態様４８に記載の方法。
［態様５１］神経変性の疾患、障害または病態の治療のための医薬の製造のための、前記態様のいずれかに記載の前記化合物または組成物の使用。
［態様５２］前記疾患、障害または病態は、タウオパシー，アルツハイマー病，前頭側頭型認知症（ＦＴＤ），ＦＴＤＰ−１７，進行性核上性麻痺（ＰＳＰ），慢性外傷性脳症（ＣＴＥ），大脳皮質神経節変性症（ＣＢＤ），てんかん，またはドラベ症候群である、態様５１に記載の使用。
［態様５３］前記疾患、障害または病態はアルツハイマー病である、態様５１に記載の使用。
［態様５４］神経変性の疾患、障害または病態の治療に使用するための、態様１〜４６のいずれかに記載の前記化合物または組成物。
［態様５５］前記疾患、障害または病態は、タウオパシー，アルツハイマー病，前頭側頭型認知症（ＦＴＤ），ＦＴＤＰ−１７，進行性核上性麻痺（ＰＳＰ），慢性外傷性脳症（ＣＴＥ），大脳皮質神経節変性症（ＣＢＤ），てんかん，またはドラベ症候群である、態様５４に記載の前記化合物または組成物。
［態様５６］前記疾患、障害または病態は、タウオパシー、アルツハイマー病である、態様５４に記載の前記化合物または組成物。
［態様５７］ＩＳＩＳ６１３０９９からなる化合物。
［態様５８］ＩＳＩＳ６１３３６１からなる化合物。
［態様５９］ＩＳＩＳ６１３３７０からなる化合物。
［態様６０］ＩＳＩＳ６２３７８２からなる化合物。
［態様６１］ＩＳＩＳ６２３９９６からなる化合物。
［態様６２］以下の式に従う修飾オリゴヌクレオチドからなる化合物：Ｇｅｓ Ａｅｏ Ｔｅｏ Ａｅｏ Ｔｅｏ Ｔｄｓ Ａｄｓ Ｔｄｓ ｍＣｄｓ ｍＣｄｓ Ｔｄｓ Ｔｄｓ Ｔｄｓ Ｇｄｓ Ａｄｓ Ｇｅｏ ｍＣｅｏ ｍＣｅｓ Ａｅｓ ｍＣｅ；
ここで
Ａ＝アデニン，
ｍＣ＝５’−メチルシトシン
Ｇ＝グアニン，
Ｔ＝チミン，
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシド，
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシド，及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合，及び
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合。
［態様６３］以下の式に従う修飾オリゴヌクレオチドからなる化合物：Ａｅｓ ｍＣｅｏ Ａｅｏ ｍＣｅｏ Ａｅｏ ｍＣｄｓ ｍＣｄｓ Ｔｄｓ Ｔｄｓ ｍＣｄｓ Ａｄｓ Ｔｄｓ Ｔｄｓ Ｔｄｓ Ａｄｓ ｍＣｅｏ Ｔｅｏ Ｇｅｓ Ｔｅｓ ｍＣｅ；
ここで
Ａ＝アデニン，
ｍＣ＝５’−メチルシトシン
Ｇ＝グアニン，
Ｔ＝チミン，
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシド，
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシド，及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合，及び
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合。
［態様６４］以下の式に従う修飾オリゴヌクレオチドからなる化合物：Ｇｅｓ Ｇｅｏ Ｔｅｏ Ｔｅｏ Ｔｅｏ Ｔｄｓ ｍＣｄｓ Ａｄｓ Ａｄｓ Ａｄｓ ｍＣｄｓ Ａｄｓ ｍＣｄｓ Ａｄｓ ｍＣｄｓ ｍＣｅｏ Ｔｅｏ Ｔｅｓ ｍＣｅｓ Ａｅ；
ここで
Ａ＝アデニン，
ｍＣ＝５’−メチルシトシン
Ｇ＝グアニン，
Ｔ＝チミン，
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシド，
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシド，及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合，及び
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合。
［態様６５］以下の式に従う修飾オリゴヌクレオチドからなる化合物：ｍＣｅｓ ｍＣｅｏ Ｇｅｏ Ｔｅｏ Ｔｅｓ Ｔｄｓ Ｔｄｓ ｍＣｄｓ Ｔｄｓ Ｔｄｓ Ａｄｓ ｍＣｄｓ ｍＣｄｓ Ａｅｏ ｍＣｅｏ ｍＣｅｓ ｍＣｅｓ Ｔｅ；
ここで
Ａ＝アデニン，
ｍＣ＝５’−メチルシトシン
Ｇ＝グアニン，
Ｔ＝チミン，
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシド，
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシド，及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合，及び
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合。
［態様６６］以下の式に従う修飾オリゴヌクレオチドからなる化合物：Ａｅｓ Ａｅｏ Ｔｅｏ Ｔｅｏ Ｔｅｓ Ｇｄｓ ｍＣｄｓ Ｔｄｓ ｍＣｄｓ Ｔｄｓ Ｔｄｓ Ａｄｓ ｍＣｄｓ Ｔｅｏ ｍＣｅｏ ｍＣｅｓ ｍＣｅｓ Ａｅ；
ここで
Ａ＝アデニン，
ｍＣ＝５’−メチルシトシン
Ｇ＝グアニン，
Ｔ＝チミン，
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシド，
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシド，及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合，及び
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合。
［態様６７］態様５７〜６６のいずれかに記載の前記化合物またはその塩、及び少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む組成物。
［態様６８］態様５７〜６６のいずれかに記載の前記化合物または組成物の動物へ能投与を含む方法。
［態様６９］前記動物がヒトである、態様６８に記載の方法。
［態様７０］前記化合物の投与は、タウ関連疾患、障害または病態の進行を妨げ、治療し、改善し、または遅延させる、態様６７または６８に記載の方法。
［態様７１］前記疾患、障害または病態は、タウオパシー，アルツハイマー病，前頭側頭型認知症（ＦＴＤ），ＦＴＤＰ−１７，進行性核上性麻痺（ＰＳＰ），慢性外傷性脳症（ＣＴＥ），大脳皮質神経節変性症（ＣＢＤ），てんかん，またはドラベ症候群である、態様７０に記載の方法。
［態様７２］前記疾患、障害または病態はアルツハイマー病である、態様７１に記載の方法。
［態様７３］神経変性障害の治療のための医薬の製造のための、態様５７〜６６のいずれかに記載の前記化合物または組成物の使用。
［態様７４］前記神経変性障害は、タウオパシー，アルツハイマー病，前頭側頭型認知症（ＦＴＤ），ＦＴＤＰ−１７，進行性核上性麻痺（ＰＳＰ），慢性外傷性脳症（ＣＴＥ），大脳皮質神経節変性症（ＣＢＤ），てんかん，またはドラベ症候群である、態様７３に記載の使用。
［態様７５］前記神経変性障害はアルツハイマー病である、態様７３に記載の使用。
［態様７６］神経変性障害の治療に使用するための、態様１〜４５または５７〜６６のいずれかに記載の前記化合物または組成物。
［態様７７］タウオパシー，アルツハイマー病，前頭側頭型認知症（ＦＴＤ），ＦＴＤＰ−１７，進行性核上性麻痺（ＰＳＰ），慢性外傷性脳症（ＣＴＥ），大脳皮質神経節変性症（ＣＢＤ），てんかん，またはドラベ症候群の中から選択された、神経変性障害の治療に使用するための、態様１〜４５または５７〜６６のいずれかに記載の前記化合物または組成物。
［態様７８］アルツハイマー病の治療に使用するための、態様１〜４５または５７〜６６のいずれかに記載の前記化合物または組成物。
実施例
非限定的な開示及び参照による組込み
【０３７７】
本明細書に記載の特定の化合物、組成物、及び方法は特定の実施形態に従って具体的に説明されているが、以下の実施例は本明細書に記載の化合物を説明することだけを果すものであり、本明細書に記載の化合物を限定することは意図されない。本出願で引用される参考文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組込まれる。
実施例１：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐＧ２細胞におけるヒトタウのアンチセンス阻害
【０３７８】
タウ核酸を標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドが設計され、インビトロでのタウｍＲＮＡに対するそれらの効果について試験された。培養ＨｅｐＧ２細胞が１００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドとともにリポフェクチン試薬を用いてトランスフェクトされた。約２４時間の処理期間後に、ＲＮＡが細胞から単離され、そしてタウｍＲＮＡレベルが、定量的リアルタイムＰＣＲにより測定された。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１０４（本明細書中でＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０として示されるフォワード配列ＡＡＧＡＴＴＧＧＧＴＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＴ；本明細書中でＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１として表されるリバース配列ＡＧＣＴＴＧＴＧＧＧＴＴＴＣＡＡＴＣＴＴＴＴＴＡＴＴ；本明細書中でＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２として示されるプローブ配列ＣＡＣＣＣＡＣＧＴＣＣＣＴＧＧＣＧＧＡ）が、ｍＲＮＡレベルを測定するのに使用された。タウｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される通り、総ＲＮＡ含量に従って調整された。結果は、未処理コントロール細胞に対する、タウの％阻害として表される。
【０３７９】
以下の表で新たに設計されたキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計された。ギャップマーは、２０ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ５個のヌクレオシドをそれぞれ含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。５’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシド及び３’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。それぞれのギャップマー全体のヌクレオシド間結合はホスホロチオエート結合である。それぞれのギャップマー全体のすべてのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。「開始部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする最も５’側のヌクレオシドを指す。「停止部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする最も３’側のヌクレオシドを指す。以下の表１に示したそれぞれのギャップマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１（ヌクレオチド９２４００００〜９３８１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１５）として本明細書に指定されるヒトタウゲノム配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２（ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿００１１２３０６６．３）として本明細書に指定されるヒトタウｍＲＮＡのどちらかを標的とする。「ｎ／ａ」は、オリゴヌクレオチドが１００％の相補性で遺伝子配列を標的にしないことを示す。表２に示した配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１又は２のいずれかを１００％の相補性で標的にするのではなく、代りに、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３（エクソン３，４，６，８，１０，及び１２をスキップする変異体ｍＲＮＡ配列であるＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿０１６８４１．４）またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４（ヌクレオチド２６２４０００〜２７６１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１４）を標的とする。
【０３８０】
【表１−１】
0006684707.tif 000016
【０３８１】
【表１−２】
0006684707.tif 000017
【０３８２】
【表２】
0006684707.tif 000018
【０３８３】
実施例２：５−１０−５ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐＧ２細胞におけるヒトタウの用量依存性アンチセンス阻害
【０３８４】
タウｍＲＮＡの著しいインビトロ阻害を示す上述の研究からのギャップマーが選択され、ＨｅｐＧ２細胞において様々な用量で試験された。以下の表に示されるように、細胞は、ウェルあたり１０，０００細胞の密度で播種され、１２．５ｎＭ,２５．０ｎＭ,５０．０ｎＭ,１００．０ｎＭ,または２００．０ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドを有するリポフェクチン試薬を用いてトランスフェクトされた。約１６時間の処理期間後、ＲＮＡが細胞から単離され、タウｍＲＮＡレベルが定量的リアルタイムＰＣＲによって測定された。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１０４がｍＲＮＡレベルを測定するのに使用された。タウｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される通り、総ＲＮＡ含量に従って調整された。結果は、未処理コントロール細胞に対する、タウの％阻害として表される。タウｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理した細胞において、用量依存的に著しく減少した。
【０３８５】
【表３】
0006684707.tif 000019
【０３８６】
実施例３：５−１０−５ＭＯＥギャップマーによるＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞におけるヒトタウのアンチセンス阻害
【０３８７】
タウ核酸をターゲットにするさらなるアンチセンスオリゴヌクレオチドが設計され、インビトロでのタウｍＲＮＡに対するそれらの効果について試験された。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、同様の培養条件を有する一連の実験で試験された。それぞれの実験の結果は、以下に示す別々の表に示される。培養ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞は、７，０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドでエレクトロポレーションを用いてトランスフェクトされた。約２４時間の処理期間後に、ＲＮＡが細胞から単離され、そしてタウｍＲＮＡレベルが、定量的リアルタイムＰＣＲにより測定された。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１０４が、ｍＲＮＡレベルを測定するのに使用された。タウｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される通り、総ＲＮＡ含量に従って調整された。結果は、未処理コントロール細胞に対する、タウの％阻害として表される。
【０３８８】
以下の表で新たに設計されたキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計された。ギャップマーは、２０ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ５個のヌクレオシドをそれぞれ含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。５’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシド及び３’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。それぞれのギャップマー全体のヌクレオシド間結合はホスホロチオエート結合である。それぞれのギャップマー全体のすべてのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。「開始部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする最も５’側のヌクレオシドを指す。「停止部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする最も３’側のヌクレオシドを指す。以下の表に示したそれぞれのギャップマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１（ヌクレオチド９２４００００〜９３８１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１５）として本明細書に指定されるヒトタウゲノム配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２（ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿００１１２３０６６．３）として本明細書に指定されるヒトタウｍＲＮＡ配列のどちらかを標的とする。「ｎ／ａ」は、オリゴヌクレオチドが１００％の相補性でその特定の遺伝子配列を標的にしないことを示す。
【０３８９】
【表４−１】
0006684707.tif 000020
【０３９０】
【表４−２】
0006684707.tif 000021
【０３９１】
【表４−３】
0006684707.tif 000022
【０３９２】
【表５−１】
0006684707.tif 000023
【０３９３】
【表５−２】
0006684707.tif 000024
【０３９４】
【表５−３】
0006684707.tif 000025
【０３９５】
実施例４：５−１０−５ＭＯＥギャップマーによるＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞におけるヒトタウの用量依存性アンチセンス阻害
【０３９６】
タウｍＲＮＡの著しいインビトロ阻害を示す上述の研究からのギャップマーが選択され、ＳＨ−ＳＹ−５Ｙ細胞において様々な用量で試験された。以下の表に示されるように、細胞は、ウェルあたり２０，０００細胞の密度で播種され、１．２５μＭ，２．５０μＭ，５．００μＭ，１０．００μＭ，及び２０．００μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドを有するエレクトロポレーションを用いてトランスフェクトされた。約１６時間の処理期間後、ＲＮＡが細胞から単離され、タウｍＲＮＡレベルが定量的リアルタイムＰＣＲによって測定された。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１０４がｍＲＮＡレベルを測定するのに使用された。タウｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される通り、総ＲＮＡ含量に従って調整された。結果は、未処理コントロール細胞に対する、タウの％阻害として表される。タウｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理した細胞において、用量依存的に著しく減少した。
【０３９７】
【表６】
0006684707.tif 000026
【０３９８】
実施例５：５−１０−５ＭＯＥギャップマーによるＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞におけるヒトタウのアンチセンス阻害
【０３９９】
タウ核酸をターゲットにするさらなるアンチセンスオリゴヌクレオチドが設計され、インビトロでのタウｍＲＮＡに対するそれらの効果について試験された。培養ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞は、ウェルあたり２０，０００細胞の密度で播種され、６，０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドでエレクトロポレーションを用いてトランスフェクトされた。約２４時間の処理期間後に、ＲＮＡが細胞から単離され、そしてタウｍＲＮＡレベルが、定量的リアルタイムＰＣＲにより測定された。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１０４が、ｍＲＮＡレベルを測定するのに使用された。タウｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される通り、総ＲＮＡ含量に従って調整された。結果は、未処理コントロール細胞に対する、タウの％阻害として表される。
【０４００】
以下の表で新たに設計されたキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計された。ギャップマーは、２０ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ５個のヌクレオシドをそれぞれ含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。５’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシド及び３’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。それぞれのギャップマー全体のヌクレオシド間結合はホスホロチオエート結合である。それぞれのギャップマー全体のすべてのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。「開始部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする最も５’側のヌクレオシドを指す。「停止部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする最も３’側のヌクレオシドを指す。以下の表に示したそれぞれのギャップマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１（ヌクレオチド９２４００００〜９３８１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１５）として本明細書に指定されるヒトタウゲノム配列を標的とする。
【０４０１】
【表７−１】
0006684707.tif 000027
【０４０２】
【表７−２】
0006684707.tif 000028
【０４０３】
【表７−３】
0006684707.tif 000029
【０４０４】
【表７−４】
0006684707.tif 000030
【０４０５】
実施例６：５−１０−５ＭＯＥギャップマーによるＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞におけるヒトタウの用量依存性アンチセンス阻害
【０４０６】
タウｍＲＮＡの著しいインビトロ阻害を示す上述の研究からのギャップマーが選択され、ＳＨ−ＳＹ−５Ｙ細胞において様々な用量で試験された。以下の表に示されるように、細胞は、ウェルあたり２０，０００細胞の密度で播種され、０．６２５μＭ，１．２５μＭ，２．５００μＭ，５．００μＭ，１０．００μＭ，及び２０．００μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドを有するエレクトロポレーションを用いてトランスフェクトされた。約１６時間の処理期間後、ＲＮＡが細胞から単離され、タウｍＲＮＡレベルが定量的リアルタイムＰＣＲによって測定された。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１０４がｍＲＮＡレベルを測定するのに使用された。タウｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される通り、総ＲＮＡ含量に従って調整された。結果は、未処理コントロール細胞に対する、タウの％阻害として表される。タウｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理した細胞において、用量依存的に著しく減少した。
【０４０７】
【表８】
0006684707.tif 000031
【０４０８】
実施例７：ホスホロチオエート及びホスホジエステルヌクレオシド間結合を有するＭＯＥギャップマーによるＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞におけるヒトタウのアンチセンス阻害
【０４０９】
タウ核酸をターゲットにするアンチセンスオリゴヌクレオチドが設計され、インビトロでのタウｍＲＮＡに対するそれらの効果について試験された。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、同様の培養条件を有する一連の実験で試験された。それぞれの実験の結果は、以下に示す別々の表に示される。培養ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞は、８，０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドでエレクトロポレーションを用いてトランスフェクトされた。処理期間の約２４時間後に、ＲＮＡが細胞から単離され、そしてタウｍＲＮＡレベルが、定量的リアルタイムＰＣＲにより測定された。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１０４が、ｍＲＮＡレベルを測定するのに使用された。タウｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される通り、総ＲＮＡ含量に従って調整された。結果は、未処理コントロール細胞に対する、タウの％阻害として表される。
【０４１０】
以下の表で新たに設計されたキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計された。ギャップマーは、２０ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ５個のヌクレオシドをそれぞれ含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。５’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシド及び３’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。それぞれのギャップマー全体のヌクレオシド間結合はホスホロチオエート結合またはホスホジエステル結合のどちらかである。それぞれのギャップマー全体のすべてのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。「化学」欄は、それぞれのオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合を記載する。「ｓ」はホスホロチオエート結合を指し、「ｏ」はホスホジエステル結合を指す。「開始部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする最も５’側のヌクレオシドを指す。「停止部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする最も３’側のヌクレオシドを指す。
【０４１１】
以下の表に示したそれぞれのギャップマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１（ヌクレオチド９２４００００〜９３８１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１５）として本明細書に指定されるヒトタウゲノム配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２（ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿００１１２３０６６．３）またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３（ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿０１６８４１．４）として本明細書に指定されるヒトタウｍＲＮＡのどれかを標的とする。表１０，１２，及び１６に表されるいくつかのオリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:５（ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＤＲ００２４６７．１）,ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６（ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ.ＮＭ＿００１２０３２５１．１)またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:７（ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿０１６８３５．４）として本明細書に指定される変異体ｍＲＮＡ配列を標的とする。オリゴヌクレオチドは、１００％相補性で標的とする主な遺伝子配列に従って種々の表に示されている。「ｎ／ａ」は、オリゴヌクレオチドが１００％の相補性でその特定の遺伝子配列を標的にしないことを示す。
【０４１２】
【表９−１】
0006684707.tif 000032
【０４１３】
【表９−２】
0006684707.tif 000033
【０４１４】
【表９−３】
0006684707.tif 000034
【０４１５】
【表１０】
0006684707.tif 000035
【０４１６】
【表１１−１】
0006684707.tif 000036
【０４１７】
【表１１−２】
0006684707.tif 000037
【０４１８】
【表１１−３】
0006684707.tif 000038
【０４１９】
【表１２】
0006684707.tif 000039
【０４２０】
【表１３−１】
0006684707.tif 000040
【０４２１】
【表１３−２】
0006684707.tif 000041
【０４２２】
【表１３−３】
0006684707.tif 000042
【０４２３】
【表１４−１】
0006684707.tif 000043
【０４２４】
【表１４−２】
0006684707.tif 000044
【０４２５】
【表１４−３】
0006684707.tif 000045
【０４２６】
【表１５−１】
0006684707.tif 000046
【０４２７】
【表１５−２】
0006684707.tif 000047
【０４２８】
【表１６】
0006684707.tif 000048
【０４２９】
実施例８：ホスホロチオエート及びホスホジエステルヌクレオシド間結合を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーによるＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞におけるヒトタウの用量依存性アンチセンス阻害
【０４３０】
タウｍＲＮＡの著しいインビトロ阻害を示す上述の研究からのギャップマーが選択され、ＳＨ−ＳＹ−５Ｙ細胞において様々な用量で試験された。以下の表に示されるように、細胞は、ウェルあたり２０，０００細胞の密度で播種され、１．２５μＭ，２．５００μＭ，５．００μＭ，１０．００μＭ，及び２０．００μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドを有するエレクトロポレーションを用いてトランスフェクトされた。約処理期間の１６時間後、ＲＮＡが細胞から単離され、タウｍＲＮＡレベルが定量的リアルタイムＰＣＲによって測定された。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１０４がｍＲＮＡレベルを測定するのに使用された。タウｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される通り、総ＲＮＡ含量に従って調整された。結果は、未処理コントロール細胞に対する、タウの％阻害として表される。タウｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理した細胞において、用量依存的に著しく減少した。
【０４３１】
【表１７】
0006684707.tif 000049
【０４３２】
【表１８】
0006684707.tif 000050
【０４３３】
実施例９：５−１０−５ＭＯＥ，５−８−５ＭＯＥ，４−８−６ＭＯＥ，または６−８−４ＭＯＥギャップマーによるＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞におけるヒトタウのアンチセンス阻害
【０４３４】
タウ核酸をターゲットにするアンチセンスオリゴヌクレオチドが設計され、インビトロでのタウｍＲＮＡに対するそれらの効果について試験された。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、同様の培養条件を有する一連の実験で試験された。ＩＳＩＳ６１３４１２もアッセイに含まれた。それぞれの実験の結果は、以下に示す別々の表に示される。ウェルあたり２０，０００細胞の密度で培養されたＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞は、８，０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドでエレクトロポレーションを用いてトランスフェクトされた。処理期間の約２４時間後に、ＲＮＡが細胞から単離され、そしてタウｍＲＮＡレベルが、定量的リアルタイムＰＣＲにより測定された。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１０４が、ｍＲＮＡレベルを測定するのに使用された。タウｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される通り、総ＲＮＡ含量に従って調整された。結果は、未処理コントロール細胞に対する、タウの％阻害として表される。
【０４３５】
以下の表で新たに設計されたキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−８−５ＭＯＥ，４−８−６ＭＯＥ，または６−８−４ＭＯＥギャップマーである。５−８−５ＭＯＥギャップマーは、１８ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、８個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ５個のヌクレオシドをそれぞれ含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。４−８−６ＭＯＥギャップマーは、１８ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、８個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ４個と６個のヌクレオシドをそれぞれ含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。６−８−４ＭＯＥギャップマーは、１８ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、８個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ６個と４個のヌクレオシドをそれぞれ含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。５’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシド及び３’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。以下の表中のそれぞれのギャップマー全体に対するヌクレオシド間結合モチーフは、IＳＩＳ６１３４１２を除いて、５’−ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓ−３’であり、ここで、それぞれの「ｓ」はホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表し、「ｏ」はホスホジエステルヌクレオシド間結合を表す。IＳＩＳ６１３４１２のヌクレオシド間結合モチーフは、５’−ｓｏｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓ−３’であり、ここで、それぞれの「ｓ」はホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表し、「ｏ」はホスホジエステルヌクレオシド間結合を表す。それぞれのギャップマー全体のすべてのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。「開始部位」は、ヒトの遺伝子配列においてギャップマーが標的としているもっとも５’−側のヌクレオシドを指す。「停止部位」は、ヒトの遺伝子配列においてギャップマーが標的としているもっとも３’−側のヌクレオシドを指す。以下の表に示したそれぞれのギャップマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１（ヌクレオチド９２４００００〜９３８１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１５），ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:４（ヌクレオチド２６２４０００〜２７６１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１４），ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:５（ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＤＲ００２４６７．１），またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:６（ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿００１２０３２５１．１）を標的としている。「ｎ／ａ」は、オリゴヌクレオチドが１００％の相補性でその特定の遺伝子配列を標的にしないことを示す。
【０４３６】
【表１９−１】
0006684707.tif 000051
【０４３７】
【表１９−２】
0006684707.tif 000052
【０４３８】
【表１９−３】
0006684707.tif 000053
【０４３９】
【表２０−１】
0006684707.tif 000054
【０４４０】
【表２０−２】
0006684707.tif 000055
【０４４１】
【表２０−３】
0006684707.tif 000056
【０４４２】
【表２１−１】
0006684707.tif 000057
【０４４３】
【表２１−２】
0006684707.tif 000058
【０４４４】
【表２１−３】
0006684707.tif 000059
【０４４５】
【表２２−１】
0006684707.tif 000060
【０４４６】
【表２２−２】
0006684707.tif 000061
【０４４７】
【表２２−３】
0006684707.tif 000062
【０４４８】
【表２３−１】
0006684707.tif 000063
【０４４９】
【表２３−２】
0006684707.tif 000064
【０４５０】
【表２３−３】
0006684707.tif 000065
【０４５１】
【表２４−１】
0006684707.tif 000066
【０４５２】
【表２４−２】
0006684707.tif 000067
【０４５３】
【表２４−３】
0006684707.tif 000068
【０４５４】
【表２５−１】
0006684707.tif 000069
【０４５５】
【表２５−２】
0006684707.tif 000070
【０４５６】
【表２６−１】
0006684707.tif 000071
【０４５７】
【表２６−２】
0006684707.tif 000072
【０４５８】
【表２７−１】
0006684707.tif 000073
【０４５９】
【表２７−２】
0006684707.tif 000074
【０４６０】
【表２８−１】
0006684707.tif 000075
【０４６１】
【表２８−２】
0006684707.tif 000076
【０４６２】
【表２９−１】
0006684707.tif 000077
【０４６３】
【表２９−２】
0006684707.tif 000078
【０４６４】
【表３０−１】
0006684707.tif 000079
【０４６５】
【表３０−２】
0006684707.tif 000080
【０４６６】
【表３１−１】
0006684707.tif 000081
【０４６７】
【表３１−２】
0006684707.tif 000082
【０４６８】
【表３２−１】
0006684707.tif 000083
【０４６９】
【表３２−２】
0006684707.tif 000084
【０４７０】
【表３３−１】
0006684707.tif 000085
【０４７１】
【表３３−２】
0006684707.tif 000086
【０４７２】
【表３４−１】
0006684707.tif 000087
【０４７３】
【表３４−２】
0006684707.tif 000088
【０４７４】
【表３５−１】
0006684707.tif 000089
【０４７５】
【表３５−２】
0006684707.tif 000090
【０４７６】
【表３６−１】
0006684707.tif 000091
【０４７７】
【表３６−２】
0006684707.tif 000092
【０４７８】
【表３７−１】
0006684707.tif 000093
【０４７９】
【表３７−２】
0006684707.tif 000094
【０４８０】
【表３８−１】
0006684707.tif 000095
【０４８１】
【表３８−２】
0006684707.tif 000096
【０４８２】
【表３９−１】
0006684707.tif 000097
【０４８３】
【表３９−２】
0006684707.tif 000098
【０４８４】
実施例１１：ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞におけるヒトタウの用量依存性アンチセンス阻害
【０４８５】
タウｍＲＮＡの著しいインビトロ阻害を示す上述の研究からのギャップマーが選択され、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞において様々な用量で試験された。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、同様の培養条件を有する一連の実験で試験された。それぞれの実験の結果は、以下に示す別々の表に示される。以下の表に示されるように、細胞は、ウェルあたり２０，０００細胞の密度で播種され、０．９３８μＭ，０．１.８７５μＭ，３．７５０μＭ，７．５００μＭ，及び１５．００μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドを有するエレクトロポレーションを用いてトランスフェクトされた。処理期間の約１６時間後、ＲＮＡが細胞から単離され、タウｍＲＮＡレベルが定量的リアルタイムＰＣＲによって測定された。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１０４がｍＲＮＡレベルを測定するのに使用された。タウｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される通り、総ＲＮＡ含量に従って調整された。結果は、未処理コントロール細胞に対する、タウの％阻害として表される。タウｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理した細胞において、用量依存的に著しく減少した。
【０４８６】
【表４０】
0006684707.tif 000099
【０４８７】
【表４１】
0006684707.tif 000100
【０４８８】
【表４２】
0006684707.tif 000101
【０４８９】
【表４３】
0006684707.tif 000102
【０４９０】
【表４４】
0006684707.tif 000103
【０４９１】
【表４５】
0006684707.tif 000104
【０４９２】
【表４６】
0006684707.tif 000105
【０４９３】
【表４７】
0006684707.tif 000106
【０４９４】
実施例１２：５−１０−５ＭＯＥ，５−８−５ＭＯＥ，４−８−６ＭＯＥ，または６−８−４ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐＧ２細胞におけるヒトタウのアンチセンス阻害
【０４９５】
タウ核酸をターゲットにするアンチセンスオリゴヌクレオチドが設計され、インビトロでのタウｍＲＮＡに対するそれらの効果について試験された。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、同様の培養条件を有する一連の実験で試験された。ＩＳＩＳ６１３４１２もアッセイに含まれた。それぞれの実験の結果は、以下に示す別々の表に示される。ウエルあたり２０，０００細胞の密度の培養ＨｅｐＧ２細胞は、８，０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドでエレクトロポレーションを用いてトランスフェクトされた。処理期間の約２４時間後に、ＲＮＡが細胞から単離され、そしてタウｍＲＮＡレベルが、定量的リアルタイムＰＣＲにより測定された。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１０４が、ｍＲＮＡレベルを測定するのに使用された。タウｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される通り、総ＲＮＡ含量に従って調整された。結果は、未処理コントロール細胞に対する、タウの％阻害として表される。
【０４９６】
以下の表で新たに設計されたキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−８−５ＭＯＥ，４−８−６ＭＯＥ，または６−８−４ＭＯＥギャップマーとして設計された。５−８−５ＭＯＥギャップマーは、１８ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、８個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ５個のヌクレオシドをそれぞれ含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。４−８−６ＭＯＥギャップマーは、１８ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、８個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ４個と６個のヌクレオシドをそれぞれ含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。６−８−４ＭＯＥギャップマーは、１８ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、８個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ６個と４個のヌクレオシドをそれぞれ含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。５’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシド及び３’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。以下の表中のそれぞれのギャップマー全体に対するヌクレオシド間結合モチーフは、IＳＩＳ６１３４１２を除いて、５’−ｓｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓ−３’であり、ここで、それぞれの「ｓ」はホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表し、「ｏ」はホスホジエステルヌクレオシド間結合を表す。IＳＩＳ６１３４１２のヌクレオシド間結合モチーフは、５’−ｓｏｏｏｏｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｏｏｓｓ−３’であり、ここで、それぞれの「ｓ」はホスホロチオエートヌクレオシド間結合を表し、「ｏ」はホスホジエステルヌクレオシド間結合を表す。それぞれのギャップマー全体のすべてのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。「開始部位」は、ヒトの遺伝子配列においてギャップマーが標的としている最も５’−側のヌクレオシドを指す。「停止部位」は、ヒトの遺伝子配列においてギャップマーが標的としている最も３’−側のヌクレオシドを指す。以下の表に示したそれぞれのギャップマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１（ヌクレオチド９２４００００〜９３８１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１５）を標的としている。
【０４９７】
【表４８−１】
0006684707.tif 000107
【０４９８】
【表４８−２】
0006684707.tif 000108
【０４９９】
【表４８−３】
0006684707.tif 000109
【０５００】
【表４９−１】
0006684707.tif 000110
【０５０１】
【表４９−２】
0006684707.tif 000111
【０５０２】
【表４９−３】
0006684707.tif 000112
【０５０３】
実施例１３：ＭＯＥギャップマーによるＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞におけるヒトタウの用量依存性アンチセンス阻害
【０５０４】
タウｍＲＮＡの著しいインビトロ阻害を示す上述の研究からのギャップマーが選択され、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞において様々な用量で試験された。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、同様の培養条件を有する一連の実験で試験された。それぞれの実験の結果は、以下に示す別々の表に示される。以下の表に示されるように、細胞は、ウェルあたり２０，０００細胞の密度で播種され、０．９３８μＭ，０．１.８７５μＭ，３．７５０μＭ，７．５００μＭ，及び１５．００μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドを有するエレクトロポレーションを用いてトランスフェクトされた。の処理期間の約１６時間後、ＲＮＡが細胞から単離され、タウｍＲＮＡレベルが定量的リアルタイムＰＣＲによって測定された。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１０４がｍＲＮＡレベルを測定するのに使用された。タウｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される通り、総ＲＮＡ含量に従って調整された。結果は、未処理コントロール細胞に対する、タウの％阻害として表される。タウｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理した細胞において、用量依存的に著しく減少した。
【０５０５】
【表５０】
0006684707.tif 000113
【０５０６】
【表５１】
0006684707.tif 000114
【０５０７】
【表５２】
0006684707.tif 000115
【０５０８】
【表５３】
0006684707.tif 000116
【０５０９】
【表５４】
0006684707.tif 000117
【０５１０】
【表５５】
0006684707.tif 000118
【０５１１】
実施例１４：ヒトタウのホットスポット領域にホスホロチオエート及びホスホジエステルヌクレオシド間結合を有する５−７−６ＭＯＥ，５−８−５ ＭＯＥ，５−９−５ＭＯＥ，及び５−１０−５ＭＯＥギャップマーの設計
【０５１２】
上記の研究で「ホットスポット」として識別された領域でタウ核酸を標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドが設計された。
【０５１３】
以下の表で新たに設計されたキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−７−６ＭＯＥ，５−８−５ＭＯＥ，５−９−５ＭＯＥ，または５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計された。５−７−６ＭＯＥギャップマーは、１８ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、７個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ５個と６個のヌクレオシドをそれぞれ含む含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。５−８−５ＭＯＥギャップマーは、１８ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、８個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ５個のヌクレオシドをそれぞれ含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。５−９−５ＭＯＥギャップマーは、１９ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、９個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ５個のヌクレオシドをそれぞれ含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。５−１０−５ＭＯＥギャップマーは、２０ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ５個のヌクレオシドをそれぞれ含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。５’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシド及び３’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。それぞれのギャップマー全体のヌクレオシド間結合はホスホロチオエート結合またはホスホジエステル結合のどちらかである。「化学」欄は、それぞれのオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合を記載する。「ｓ」はホスホロチオエート結合を指し、「ｏ」はホスホジエステル結合を指す。それぞれのギャップマー全体のすべてのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０５１４】
「開始部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする最も５’側のヌクレオシドを指す。「停止部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする最も３’側のヌクレオシドを指す。以下の表に示したそれぞれのギャップマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１（ヌクレオチド９２４００００〜９３８１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１５）として本明細書に指定されるヒトタウゲノム配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２（ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿００１１２３０６６．３）またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２（ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿００１１２３０６６．３）として本明細書に指定されるヒトタウｍＲＮＡのどちらかを標的とする。「ｎ／ａ」は、オリゴヌクレオチドが１００％の相補性でその特定の遺伝子配列を標的にしないことを示す。
【０５１５】
【表５６−１】
0006684707.tif 000119
【０５１６】
【表５６−２】
0006684707.tif 000120
【０５１７】
【表５６−３】
0006684707.tif 000121
【０５１８】
【表５６−４】
0006684707.tif 000122
【０５１９】
【表５６−５】
0006684707.tif 000123
【０５２０】
【表５６−６】
0006684707.tif 000124
【０５２１】
【表５６−７】
0006684707.tif 000125
【０５２２】
実施例１５：ｈタウマウスにおけるヒトタウｍＲＮＡに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの脳室内投与
【０５２３】
選択された化合物が、ヒトタウトランスジェニックマウスにおけるＩＣＶ投与によって有効性について試験された（Ｄｕｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ ７：８７−９８,２０００）。
治療と手術
【０５２４】
それぞれ４マウスの群が、ＩＣＶボーラス注射によって送達される２００μｇ用量で、ＩＳＩＳ ６１３２５５，ＩＳＩＳ ６１３３２９，ＩＳＩＳ ６１３３４４，ＩＳＩＳ ６１３３６１，ＩＳＩＳ ６１３３６９，ＩＳＩＳ ６１３３７０，ＩＳＩＳ ６１３３９７，ＩＳＩＳ ６１３０４５，ＩＳＩＳ ６１３０９９,ＩＳＩＳ ６１３１１８，ＩＳＩＳ ６１３１３６を投与された。２マウスの１つのコントロール群がＩＳＩＳ ４２４８８０で同様に処理され、４マウスの１つのコントロール群がＰＢＳで同様に処理された。すべての手順は、イソフルラン麻酔下でＩＡＣＵＣ規格に従って行われた。マウスのＩＣＶボーラス注射については、アンチセンスオリゴヌクレオチドがヒトタウトランスジェニックマウスの右側脳室に注入された。ＰＢＳに３００μｇのオリゴヌクレオチドを含有する溶液１０マイクロリットルが約１０秒で注入された。組織は、オリゴヌクレオチド投与の１４日後に回収された。
ＲＮＡ分析
【０５２５】
オリゴヌクレオチド投与の１４日後に、タウｍＲＮＡレベルのリアルタイムＰＣＲ分析のために、海馬、脊髄及び皮質からＲＮＡが抽出された。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１０４を使用して、ヒトタウｍＲＮＡレベルが測定された。結果は、コントロールと比較して、ヒトタウｍＲＮＡ発現の％阻害として計算された。すべてのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトタウｍＲＮＡレベルの著しい阻害をもたらす。
【０５２６】
【表５７】
0006684707.tif 000126
【０５２７】
実施例１６：５−７−６ＭＯＥ，５−８−５ＭＯＥ，５−９−５ＭＯＥ，及び５−１０−５ＭＯＥギャップマーによるＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞におけるヒトタウのアンチセンス阻害
【０５２８】
ヒトタウ核酸を標的とする新たに設計されたアンチセンスオリゴヌクレオチドと同様に、上記の実施例で記載されたアンチセンスオリゴヌクレオチドが、同様の培養条件を有する一連の実験で試験された。それぞれの実験の結果は、以下に示す別々の表に示される。培養ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞は、８，０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドでエレクトロポレーションを用いてトランスフェクトされた。処理期間の約２４時間後に、ＲＮＡが細胞から単離され、そしてタウｍＲＮＡレベルが、定量的リアルタイムＰＣＲにより測定された。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１０４が、ｍＲＮＡレベルを測定するのに使用された。タウｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される通り、総ＲＮＡ含量に従って調整された。結果は、未処理コントロール細胞に対する、タウの％阻害として表される。
【０５２９】
以下の表で新たに設計されたキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−７−６ＭＯＥ，５−８−５ＭＯＥ，５−９−５ＭＯＥ，または５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計された。５−７−６ＭＯＥギャップマーは、１８ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、７個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ５個と６個のヌクレオシドをそれぞれ含む含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。５−８−５ＭＯＥギャップマーは、１８ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、８個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ５個のヌクレオシドをそれぞれ含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。５−９−５ＭＯＥギャップマーは、１９ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、９個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ５個のヌクレオシドをそれぞれ含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。５−１０−５ＭＯＥギャップマーは、２０ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ５個のヌクレオシドをそれぞれ含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。５’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシド及び３’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。それぞれのギャップマー全体のヌクレオシド間結合はホスホロチオエート結合またはホスホジエステル結合のどちらかである。「連鎖化学」欄は、それぞれのオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合を記載する。「ｓ」はホスホロチオエート結合を指し、「ｏ」はホスホジエステル結合を指す。それぞれのギャップマー全体のすべてのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０５３０】
「開始部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする最も５’側のヌクレオシドを指す。「停止部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする最も３’側のヌクレオシドを指す。以下の表に示したそれぞれのギャップマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１（ヌクレオチド９２４００００〜９３８１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１５）として本明細書に指定されるヒトタウゲノム配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２（ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿００１１２３０６６．３）として本明細書に指定されるヒトタウｍＲＮＡ配列のどちらかを標的とする。「ｎ／ａ」は、オリゴヌクレオチドが１００％の相補性でその特定の遺伝子配列を標的にしないことを示す。
【０５３１】
【表５８−１】
0006684707.tif 000127
【０５３２】
【表５８−２】
0006684707.tif 000128
【０５３３】
【表５８−３】
0006684707.tif 000129
【０５３４】
【表５９−１】
0006684707.tif 000130
【０５３５】
【表５９−２】
0006684707.tif 000131
【０５３６】
【表５９−３】
0006684707.tif 000132
【０５３７】
【表６０−１】
0006684707.tif 000133
【０５３８】
【表６０−２】
0006684707.tif 000134
【０５３９】
【表６０−３】
0006684707.tif 000135
【０５４０】
【表６１−１】
0006684707.tif 000136
【０５４１】
【表６１−２】
0006684707.tif 000137
【０５４２】
【表６１−３】
0006684707.tif 000138
【０５４３】
実施例１７：ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞におけるヒトタウの用量依存性アンチセンス阻害
【０５４４】
タウｍＲＮＡの著しいインビトロ阻害を示す上述の研究からのギャップマーが選択され、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞において様々な用量で試験された。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、同様の培養条件を有する一連の実験で試験された。それぞれの実験の結果は、以下に示す別々の表に示される。以下の表に示されるように、細胞は、ウェルあたり２０，０００細胞の密度で播種され、０．２４７μＭ，０．７４１μＭ，２．２２μＭ，６．６７μＭ，及び２０．００μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドを有するエレクトロポレーションを用いてトランスフェクトされた。処理期間の約１６時間後、ＲＮＡが細胞から単離され、タウｍＲＮＡレベルが定量的リアルタイムＰＣＲによって測定された。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１０４がｍＲＮＡレベルを測定するのに使用された。タウｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される通り、総ＲＮＡ含量に従って調整された。結果は、未処理コントロール細胞に対する、タウの％阻害として表される。タウｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理した細胞において、用量依存的に著しく減少した。
【０５４５】
【表６２】
0006684707.tif 000139
【０５４６】
【表６３】
0006684707.tif 000140
【０５４７】
【表６４】
0006684707.tif 000141
【０５４８】
実施例１８：ｈタウマウスにおけるヒトタウｍＲＮＡに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの脳室内投与
【０５４９】
選択された化合物が、ヒトタウトランスジェニックマウスにおけるＩＣＶ投与によって有効性について試験された（Ｄｕｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ ７：８７−９８，２０００）。
治療と手術
【０５５０】
それぞれ４マウスの群が、ＩＣＶボーラス注射によって送達される２００μｇ用量で、ＩＳＩＳ ６１３０９９，ＩＳＩＳ ６１３３６１，ＩＳＩＳ ６１３３７０，ＩＳＩＳ ６２３７８２，またはＩＳＩＳ ６２３９９６を投与された。２マウスの１つのコントロール群がＩＳＩＳ ４２４８８０で同様に処理され、４マウスの１つのコントロール群がＰＢＳで同様に処理された。すべての手順は、イソフルラン麻酔下でＩＡＣＵＣ規格に従って行われた。マウスのＩＣＶボーラス注射については、アンチセンスオリゴヌクレオチドがヒトタウトランスジェニックマウスの右側脳室に注入された。ＰＢＳに２００μｇのオリゴヌクレオチドを含有する溶液１０マイクロリットルが約１０秒で注入された。組織は、オリゴヌクレオチド投与の１４日後に回収された。
ＲＮＡ分析
【０５５１】
オリゴヌクレオチド投与の１４日後に、タウｍＲＮＡレベルのリアルタイムＰＣＲ分析のために、海馬、脊髄及び皮質からＲＮＡが抽出された。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３１０４を使用して、ヒトタウｍＲＮＡレベルが測定された。結果は、コントロールと比較して、ヒトタウｍＲＮＡ発現の％阻害として計算された。すべてのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、いくつかの組織におけるヒトタウｍＲＮＡレベルの著しい阻害をもたらす。
【０５５２】
【表６５】
0006684707.tif 000142
【０５５３】
実施例１９：ヒトタウを標的とするオリゴヌクレオチドの設計
【０５５４】
ＩＳＩＳ Ｎｏ.６０３０５４は、ヒトのタウを標的とするように設計された。核酸塩基配列およびＩＳＩＳ Ｎｏ.６０３０５４の連鎖化学は、以下の表６６に示される。ＩＳＩＳ Ｎｏ.６０３０５４は、５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ＩＳＩＳ Ｎｏ.６０３０５４は、２０ヌクレオシドの長さであり、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ５個のヌクレオシドをそれぞれ含む５’方向及び３’方向のウイングセグメントに隣接されている。５’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシド及び３’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。それぞれのギャップマー全体のすべてのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。「開始部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする最も５’側のヌクレオシドを指す。「停止部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする最も３’側のヌクレオシドを指す。以下の表１に示したそれぞれのギャップマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１（ヌクレオチド９２４００００〜９３８１０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＴ＿０１０７８３．１５）として本明細書に指定されるヒトタウゲノム配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２（ＧＥＮＢＡＮＫ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ＿００１１２３０６６．３）として本明細書に指定されるヒトタウｍＲＮＡのどちらかを標的とする。
【０５５５】
【表６６】
0006684707.tif 000143
【０５５６】
実施例２０：ヒトタウを標的とするオリゴヌクレオチドのマウスにおけるインビボ分析
【０５５７】
以下の表に示されるように、オリゴヌクレオチドはタウを標的とするように設計された。ヒトタウトランスジェニックマウス「ｈタウ」（Ｄｕｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ ７：８７−９８，２０００；Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．（２００３）８６，５８２−５９０）または野生型ＷＴ Ｃ５７Ｂｌ６マウスのどちらかのマウスが、３匹または４匹のマウスの群に分けられた。それぞれのマウス群のそれぞれのマウスは、以下の表のオリゴヌクレオチドの３００μｇまたは２００μｇのいずれかの単一ＩＣＶ用量をそれぞれ投与された。注射後３時間で、それぞれのマウスは７つの異なる基準に従って評価された。７つの基準は、（１）マウスは元気がよく、警戒的で、かつ反応が早かった；（２）マウスは刺激なしに立っていたかまたは背を丸めていた；（３）マウスは刺激なしに任意の動きを示す；（４）マウスは持ち上げられた後に前進を示す；（５）マウスはマウスは持ち上げられた後に任意の動きを示す；（６）マウスは尾のつまみに応答する；（７）規則的な呼吸、である。７つの異なる基準のそれぞれについて、それぞれのマウスは、その基準に適合すれば０、適合しなければ１のサブスコアを与えられた。７つの基準のすべてが評価された後、サブスコアは、各マウスについて合計され、次いでそれぞれの群について平均された。例えば、あるマウスが、３００μｇＩＣＶ投与後３時間で元気がよく、警戒的で、かつ反応が早く、かつ他のすべての基準を満たした場合、マウスは合計スコア０を得るであろう。他のマウスが、３００μｇＩＣＶ投与後３時間で元気がなく、警戒的でなく、かつ反応が早くないが、他のすべての基準を満足した場合、マウスはスコア１を得るであろう。生理食塩水処置したマウスは、一般にスコア０を受ける。結果は、以下の表６７に、それぞれの処理群に対する平均スコアとして表されている。「ＮＤ」はデータがないことを意味する。これらの結果は、ＩＳＩＳ ６１３０９９，ＩＳＩＳ ６１３３６１，ＩＳＩＳ ６１３３７０，ＩＳＩＳ ６２３７８２，ＩＳＩＳ ６２３９９６，ＩＳＩＳ ４２４８８０，及びＩＳＩＳ ６０３０５４が十分許容されたことを示す。
【０５５８】
【表６７】
0006684707.tif 000144
【０５５９】
実施例２０：ヒトタウを標的とするオリゴヌクレオチドのラットにおけるインビボ分析
【０５６０】
スプラーグドーリーラットが、それぞれ４匹のラットの群に分けられた。それぞれの群のそれぞれのラットは、単一の１ｍｇの髄腔内（ＩＴ）用量または単一の３ｍｇの髄腔内（ＩＴ）用量のＩＳＩＳ ６１３０９９，ＩＳＩＳ ６１３３６１，ＩＳＩＳ ６１３３７０，ＩＳＩＳ ６２３７８２，ＩＳＩＳ ６２３９９６，ＩＳＩＳ ４２４８８０，またはＩＳＩＳ ６０３０５４を投与された。注射後３時間で、体の７つの異なる部分の動きがそれぞれのラットについて評価された。７つの体部分は、（１）ラットの尾；（２）ラットの後方姿勢；（３）ラットの後肢；（４）ラットの後足；（５）ラットの前足；（６）ラットの前方姿勢；（７）ラットの頭、である。７つの異なる体部分のそれぞれについて、それぞれのラットは、その体部分が動いていた場合、サブスコア０を与えられ、またはその体部分が麻痺していた場合、サブスコア１を与えられた。７つの体部分のそれぞれが評価された後、サブスコアは、各マウスについて合計され、次いでそれぞれの群について平均された。例えば、あるラットの尾、頭、及び他のすべての評価された体部分が３ｍｇＩＴ投与後３時間で動いていた場合、そのラットは合計スコア０を得るであろう。他のラットが３ｍｇＩＴ投与後３時間で尾を動かしていなかったが、他のすべての評価された体部分は動いていた場合、そのラットはスコア１を得るであろう。生理食塩水処置したラットは、一般にスコア０を受ける。範囲の上端にあるスコアは毒性を示唆しているであろう。結果は、以下の表６８で、それぞれの処理群に対する平均スコアとして表される。
【０５６１】
【表６８】
0006684707.tif 000145