(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
【化１】
0006692423.tif 000031
からなる群より選択される化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
前記化合物が、
【化２】
0006692423.tif 000032
の１つ又はその薬学的に許容可能な塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物と少なくとも１つの薬学的に許容可能な添加剤とを含む医薬組成物。
【請求項４】
請求項３に記載の医薬組成物と、該組成物の処方情報と、容器とを含む医薬キット。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を治療有効量含有する、被験体におけるＷｅｅ１キナーゼ活性を調節するための組成物。
【請求項６】
Ｗｅｅ１キナーゼ活性の調節がＷｅｅ１キナーゼ活性を阻害することを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を治療有効量含有する、被験体における癌を予防、治療若しくは改善するか、又は癌の転移を予防するための組成物。
【請求項８】
前記癌が進行性固形腫瘍、血液癌、脳腫瘍、卵巣腫瘍、子宮頸癌、頭頸部扁平上皮癌、膵臓癌又は肺癌である、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記癌が急性骨髄性白血病である、請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
前記癌が髄芽腫、原始神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）、膠芽腫（ＧＢＭ）及び毛様細胞性星状細胞腫（ＰＡ）から選択される、請求項７に記載の組成物。
【請求項１１】
前記医薬組成物が、非経口又は経口投与に好適な単相医薬組成物である、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記医薬組成物がシスプラチン、カペシタビン、カルボプラチン、シクロフォスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、メトトレキサート、パクリタキセル、ペメトレキセド、イリノテカン、テモゾロミド、トポテカン、放射線又はそれらの組合せから選択される１つ以上のＤＮＡ標的剤と組み合わされた投与のために使用される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記医薬組成物がシスプラチン、シタラビン又はテモゾロミドの少なくとも１つと併せた投与のために使用される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
癌の治療のための薬剤の製造における請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項１５】
癌の治療に使用される請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１５年１１月１日付けで出願された米国仮特許出願第６６／２４９，３２９号の利益を主張するものである。この出願は引用することにより本明細書の一部をなす。
【０００２】
［政府の権利］
本発明は、米国国立衛生研究所（ＮＩＨ）によって授与された助成金番号Ｒ２１ＮＳ０８４０８４による政府の支援を受けてなされたものである。合衆国政府は本発明における一定の権利を有する。
【０００３】
本発明は癌化学療法の改善に関する。
【背景技術】
【０００４】
細胞周期チェックポイントは、細胞周期事象の順序及び忠実性をモニタリング及び調整する監視機構である。細胞の分裂プログラムに欠陥が検出されると、チェックポイントで関連サイクリン−ｃｄｋ複合体の調節によりその後の細胞周期の推移が阻止される。ＤＮＡ損傷に応答するチェックポイントは、細胞周期のＧ１期、Ｓ期及びＧ２期について記載されている。例えば、ｐ５３腫瘍抑制因子はＧ１／Ｓチェックポイントの重要な制御因子であり、ＤＮＡ損傷に応答して細胞周期の遅延又はアポトーシスを促進し得る。ＤＮＡ損傷を複製前に修復するために細胞周期を停止させる細胞の能力を損なうＧ１チェックポイントの欠損を有する癌細胞は、これらの癌細胞に突然変異を蓄積し、癌形成に有利な異常を広める手段を与える。これらの癌細胞はしたがって、分裂期細胞死（mitotic catastrophe）によるアポトーシスにつながる過剰なＤＮＡ損傷を阻止するためにＧ２チェックポイントに依存する（非特許文献１、非特許文献２）。正常細胞ではＧ１チェックポイントが損なわれていないため、Ｇ２チェックポイントはＤＮＡ損傷の修復前の細胞周期の停止を受けない。このため、Ｇ２チェックポイントの調節が正常細胞成長ではなく腫瘍形成に選択的に影響を与える。
【０００５】
Ｗｅｅ１は、細胞ＤＮＡ損傷に応答して有糸分裂の開始を阻止する、毛細血管拡張性運動失調症突然変異及びＲａｄ３関連（ＡＴＲ）により媒介されるＧ２細胞周期チェックポイント制御の重要な要素であるチロシンキナーゼである（非特許文献３）。ＡＴＲはＣＨＫ１をリン酸化して活性化し、これがＷｅｅ１を活性化し、Ｔｙｒ１５でのサイクリン依存性キナーゼ１（ＣＤＫ１）の選択的リン酸化をもたらし（非特許文献４、非特許文献５）、それによりＣＤＫ１−サイクリンＢ複合体を安定化し、細胞周期の進行を停止させる（非特許文献６、非特許文献７）。このプロセスは、腫瘍細胞に有糸分裂の開始前に損傷ＤＮＡを修復する時間を与えることにより生存上の利点を有する（非特許文献８）。Ｗｅｅ１の阻害はＧ２チェックポイントを無効にし、ＤＮＡ損傷を有する癌細胞が不定期の有糸分裂を開始し、分裂期細胞死による細胞死を受けるようにする（非特許文献９、非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献６、非特許文献１２、非特許文献１３、非特許文献１４）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Chen T, et al. Drug Discovery Today. 2012;17(5-6):194-202
【非特許文献２】Bucher N, et al., British Journal of Cancer. 2008;98(3):523-8
【非特許文献３】Do K, et al., Cell Cycle. 2013;12(19):3159-64
【非特許文献４】Parker LL, et al., Science. 1992;257(5078):1955-7
【非特許文献５】McGowan CH, et al., The EMBO Journal. 1993;12(1):75-85
【非特許文献６】Indovina P, et al., Cancer Biol. Ther.9(7):523-5
【非特許文献７】Jin P, et al., J Cell Biol. 1996;134(4):963-70
【非特許文献８】Igarashi M, et al., 1991;353(6339):80-3
【非特許文献９】De Witt Hamer PC, et al., Clin Cancer Res. 2011;17(13):4200-7
【非特許文献１０】Hirai H, et al., Mol Cancer Ther. 2009;8(11):2992-3000
【非特許文献１１】Hirai H, et al., 2010;9(7):514-22
【非特許文献１２】Leijen S, et al. Current clinical pharmacology. 2010;5(3):186-91
【非特許文献１３】Mir SE, et al., Cancer Cell. 2010;18(3):244-57
【非特許文献１４】Bridges KA, et al., Clinical cancer research 2011;17(17):5638-48
【発明の概要】
【０００７】
本開示の１つの態様は、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）：
【化１】
0006692423.tif 000002
（式中、
Ｒ１はＨ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、置換Ｃ１〜６アルキル又は置換Ｃ２〜６アルケニルであり、
Ｒ２はＨ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ１〜６アルキル又は置換Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｒ３はメチレン、酸素、アミン、又はＣ２〜６アルキル置換Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ若しくはＣＯ２Ｒ６で置換された窒素であるが、Ｒ３をＮ−メチルとすることはできず、
Ｒ４はＨ又は任意に置換されたアルキル（Ｃ１〜６）であり、
Ｒ５はＨ、Ｃ１〜６アルキル、置換Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ１〜６アルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ＯＲ６、ＳＲ６、ＣＯ２Ｒ６、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ６又はＮＲ７Ｒ８であり、
Ｒ６はＨ、Ｃ１〜６アルキル、置換Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール又は置換ヘテロアリールであり、
Ｒ７及びＲ８は独立してＨ、Ｃ１〜６アルキル、置換Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ２〜４アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール又は置換ヘテロアリールである）の化学構造を有する化合物又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【０００８】
Ｒ７及びＲ８が独立してＨ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ２〜４アルケニル、アリール、ヘテロアリール、又はヒドロキシ、メルカプト、アミノ、スルホン酸、カルボン酸、ハロゲン化物、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルケニル、Ｃ１〜４アルコキシ、ＯＲ９、ＳＲ９、ＮＲ９Ｒ９、ＣＯ２Ｒ９、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ９、ヘテロアリール若しくはそれらの組合せで置換されたＣ１〜６アルキルであってもよく、
Ｒ９がＨ、又はＣ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ２〜４アルケニル、アリール、ヘテロアリール、又はヒドロキシ、メルカプト、アミノ、スルホン酸、カルボン酸、ハロゲン化物、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルケニル、Ｃ１〜４アルコキシで置換されたＣ１〜６アルキルであってもよい。
【０００９】
Ｒ１がヒドロキシ、メルカプト、アミノ、スルホン酸、カルボン酸、ハロゲン化物、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、ＯＲ６、ＳＲ６、ＮＲ７Ｒ８、ＣＯ２Ｒ６、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ６、ヘテロアリール又はそれらの組合せで置換されたＣ１〜６アルキルであってもよい。
【００１０】
Ｒ２がヒドロキシ、メルカプト、アミノ、スルホン酸、カルボン酸、ハロゲン化物、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、ＯＲ６、ＳＲ６、ＮＲ７Ｒ８、ＣＯ２Ｒ６、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ６、ヘテロアリール又はそれらの組合せで置換されたＣ１〜６アルキルであってもよい。
【００１１】
Ｒ３がメチレン、アミン、又はヒドロキシ、メルカプト、アミノ、スルホン酸、カルボン酸、ハロゲン化物、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、ＯＲ６、ＳＲ６、ＮＲ７Ｒ８、ＣＯ２Ｒ６、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ６、ヘテロアリール若しくはそれらの組合せで置換されたＣ１〜６アルキルで置換されたＮであってもよいが、Ｎ−メチルではない。
【００１２】
Ｒ４がヒドロキシ、メルカプト、アミノ、スルホン酸、カルボン酸、ハロゲン化物、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、ＯＲ６、ＳＲ６、ＮＲ７Ｒ８、ＣＯ２Ｒ６、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ６、ヘテロアリール又はそれらの組合せで置換されたＣ１〜６アルキルであってもよい。
【００１３】
Ｒ５がヒドロキシ、メルカプト、アミノ、スルホン酸、カルボン酸、ハロゲン化物、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、ＯＲ６、ＳＲ６、ＮＲ７Ｒ８、ＣＯ２Ｒ６、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ６、ヘテロアリール又はそれらの組合せで置換されたＣ１〜６アルキルであってもよい。
【００１４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４及びＲ５の各々が水素であってもよい。Ｒ３がＣＨ２である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４及びＲ５の各々が水素であってもよい。
【００１５】
本開示の別の態様は、本開示のＷｅｅ１阻害剤化合物と少なくとも１つの薬学的に許容可能な添加剤とを含む医薬組成物を提供する。
【００１６】
本開示の別の態様は、本開示の医薬組成物と、組成物の処方情報と、容器とを含む医薬キットを提供する。
【００１７】
本開示の別の態様は、被験体においてＷｅｅ１キナーゼ活性を阻害する方法であって、被験体に本開示のＷｅｅ１阻害剤化合物又はその薬学的に許容可能な塩を治療有効量、投与することを含む、方法を提供する。
【００１８】
本開示は、被験体における癌を予防、治療若しくは改善するか、又は癌の転移を予防する方法であって、Ｗｅｅ１キナーゼを阻害する本開示の化合物を治療有効量、それを必要とする被験体に投与することを含む、方法も提供する。
【００１９】
これらの方法では、癌は進行性固形腫瘍、血液癌（例えば、急性骨髄性白血病を含む）、脳腫瘍、卵巣腫瘍、子宮頸癌、頭頸部扁平上皮癌、膵臓癌及び肺癌であり得る。
【００２０】
これらの方法では、Ｗｅｅ１阻害剤化合物は被験体に医薬組成物中で投与してもよい。医薬組成物は、治療有効量の化合物と薬学的に許容可能な添加剤とから本質的になる非経口又は経口投与に好適な単相医薬組成物であり得る。
【００２１】
これらの方法では、医薬組成物をシスプラチン、カペシタビン、カルボプラチン、シクロフォスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、メトトレキサート、パクリタキセル、ペメトレキセド、イリノテカン、テモゾロミド、トポテカン、放射線又はそれらの組合せを含むＤＮＡアルキル化剤及びトポイソメラーゼ阻害剤を含む１つ以上のＤＮＡ標的剤と組み合わせて投与してもよい。
【００２２】
これらの方法では、医薬組成物はシスプラチン、シタラビン又はテモゾロミドの少なくとも１つと組み合わせて投与してもよい。
【００２３】
関連態様では、本開示は、癌の治療のための薬剤の製造における本開示のＷｅｅ１阻害剤化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用も提供する。同様に、本開示は、癌の治療に使用される本開示のＷｅｅ１阻害剤化合物又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２４】
本発明の概要は、本開示の完全な範囲（extent and scope）を代表するものであると意図されるものでも、解釈されるものでもない。さらに、本明細書での「本開示」又はその態様への言及は、本開示の或る特定の実施形態を意味すると理解され、必ずしも全ての実施形態を特定の記載に限定すると解釈されるものではない。本開示は本発明の概要並びに添付の図面及び発明を実施するための形態に様々な詳細度で説明され、本開示の範囲に関する限定は本発明の概要に要素、構成要素等を含める又は含めないことによっては表されない。本開示の付加的な態様は、発明を実施するための形態から特に図面と考え合わせることで明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１Ａ〜図１Ｃは、髄芽腫におけるキナーゼの分析を示す図である。図１Ａは、３個の正常小脳と比較した１６個の髄芽腫組織サンプルにおける５０個の調節不全細胞周期関連キナーゼの遺伝子発現ヒートマップである。図１Ｂは、ｓｉＲＮＡスクリーニングにおいて標的化される７１０個のヒトキナーゼ遺伝子の単一キナーゼを標的化する３つの別個のｓｉＲＮＡの平均Ｚスコアのドットプロットである。各ドットは平均Ｚスコアを表す。図１Ｃは、Ｄａｏｙ細胞増殖を媒介するＧ２−Ｍキナーゼのモデルである。赤色のキナーゼは、組み合わせ遺伝子発現分析及びキノームワイドＲＮＡｉスクリーニングによる統計的に有意なヒットであった。
【図２】図２Ａ〜図２Ｃは、髄芽腫におけるＷｅｅ１発現を示す図である。図２Ａは正常脳と比較した小児髄芽腫（Ｍｅｄｕｌｌｏ）、原始神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）、膠芽腫（ＧＢＭ）及び毛様細胞性星状細胞腫（ＰＡ）におけるＷｅｅ１  ｍＲＮＡ発現のマイクロアレイ分析を示す。図２Ｂは、正常小脳と比較した９０個の髄芽腫組織サンプルにおけるＷｅｅ１  ｍＲＮＡ発現のマイクロアレイ分析を示す。図２Ｃは、Ｗｅｅ１タンパク質レベルが６個の髄芽腫細胞株において増大し、ＵＰＮ５１４及びＵＰＮ６０５が正常な小児小脳（ＣＢ）溶解物であることを示す。
【図３】図３Ａ及び図３Ｂは、ｓｉＲＮＡ媒介Ｗｅｅ１阻害が髄芽腫細胞増殖を減少させることを示す図である。図３Ａは、ＷＥＥ１を標的化するｓｉＲＮＡ（ｓｉＷＥＥ１）又は非サイレンシングｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ  Ｎ．Ｃ．）をトランスフェクトしたＤａｏｙ及びＵＷ２２８細胞、並びにｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステムを用いてモニタリングされるリアルタイム細胞増殖を示す。図３Ｂは、相対コロニー数に対するｓｉＷＥＥ１及びｓｉＲＮＡ  Ｎ．Ｃ．の影響を示す。
【図４】Ｗｅｅ１のＡＴＰ結合ドメインにドッキングしたＡＺＤ１７７５を示す図である。ＡＴＰ結合部位（Ｌｙｓ４２６部位参照）、キナーゼドメイン（Ａｓｐ３２８部位参照）及びドッキングしたＭＫ１７７５（橙色の炭素）を示すＷｅｅ１のリボン表示。
【図５】図５Ａ及び図５Ｂは、ＡＺＤ１７７５類似体の合成及びそれらのＷｅｅ１阻害活性を示す図である。図５ＡはＡＺＤ１７７５類似体１１ａ〜１１ｎの合成スキームを示す。図５Ｂは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏキナーゼアッセイにおけるＡＺＤ１７７５類似体のＷｅｅ１阻害活性を示す。
【図６】図６Ａ及び図６Ｂは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏキナーゼ活性アッセイのＡＺＤ１７７５類似体によるＷｅｅ１阻害の用量応答を示す図である。図６Ａは、ＡＺＤ１７７５及び１１ａ〜１１ｎによるＷｅｅ１キナーゼ活性のｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害を示す。図６Ｂは、Ｗｅｅ１阻害剤１１ａ〜１１ｄ、１１ｍ及びＡＺＤ１７７５の阻害ＩＣ５０曲線を示す。発光比（６６５／６１５ｎｍ）を各阻害剤濃度について三連で決定し、ｌｏｇ用量応答曲線の非線形回帰分析を用いてデータを分析して、ＩＣ５０値を得た。
【図７】図７Ａ及び図７Ｂは、ＡＺＤ１７７５及び１１ｄの構造並びに予測ＢＢＢ透過を示す図である。図７Ａは、構造修飾のためのＡＺＤ１７７５及び１１ｄ強調領域の構造を示す。図７Ｂは、参照のNeuwelt et al.から引用される化学療法薬のＢＢＢ透過性とオクタノール／水分配係数との間の関係を示す。ＡＺＤ１７７５及び１１ｄの予測ＢＢＢ透過はＱｕｉｋｐｒｏｐを用いて算出し、プロットをグラフに付記した。即座の（Ready）脳への取込み（赤色）及び制限された脳への取込み（緑色）の領域。
【図８】図８Ａ〜図８Ｄは、ＡＺＤ１７７５の単剤毒性がＡＺＤ１７７５類似体よりも顕著に高いことを示す図である。図８Ａは、ＤＭＳＯ（緑色）と比較した、７５ｎＭ（青色）及び１５０ｎＭ（赤色）の化合物１１ａ〜１１ｎ及びＡＺＤ１７７５での処理後の４時間〜５６時間のリアルタイム細胞増殖アッセイ（ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ）から導かれた、１／傾き（Δ細胞指数／時間）として表されるＤａｏｙ細胞成長速度を示す。ＤＭＳＯと比較して全ての値Ｐ＜０．００１。図８Ｂは、Ｗｅｅ１阻害剤で７２時間処理したＤａｏｙ細胞のＭＴＳアッセイによる用量応答を示す。ＡＺＤ１７７５（赤色）は、Ｄａｏｙ細胞の細胞生存能力を２１９±２６ｎＭのＥＣ５０で減少させた。他の全ての阻害剤が最大濃度（６００ｎＭ）で効果を示した。図８Ｃは、ＡＺＤ１７７５（赤色）並びに１１ｄ（青色）及び１１ｍ（緑色）で７２時間処理したＯＮＳ−７６細胞のＭＴＳアッセイによる用量応答を示す。図８Ｄは、漸増濃度のＡＺＤ１７７５（橙色）、１１ｄ（青色）及び１１ｍ（緑色）に７２時間曝露した場合にフローサイトメトリー（Ｖｉａｃｏｕｎｔ）により決定されるＤ４５８細胞の生存能力及び総細胞数を示す。（ＤＭＳＯと比較して、総細胞数；Ｐ＜０．０５＝＊、Ｐ＜０．０１＝＊＊、Ｐ＜０．００１＝＊＊＊。非生存細胞数；Ｐ＜０．０５＝＋、Ｐ＜０．０１＝＋＋、Ｐ＜０．００１＝＋＋＋）。
【図９】図９Ａ及び図９Ｂは、ＡＺＤ１７７５が、Ｔｙｒ１５での細胞ＣＤＫ１リン酸化を強力な新規のＷｅｅ１阻害剤よりも低濃度で減少させたことを示す図である。図９Ａは、Ｗｅｅ１阻害剤及びＤＭＳＯ対照で２４時間処理したＤａｏｙ細胞溶解物の免疫ブロット分析を示す。膜をｐＣＤＫ１（Ｙ１５）、総ＣＤＫ１及びローディング対照としてのアクチンについてプロービングした。図９Ｂは、漸増濃度のＡＺＤ１７７５（赤色）、１１ｄ（青色）及び１１ｍ（緑色）で２４時間処理したＤａｏｙ細胞溶解物（０．１５ｍｇ／ｍｌの総タンパク質）における相対ｐＣＤＫ１（Ｔｙｒ１５）レベルの定量ＥＬＩＳＡ決定を示す。曲線の補間により、細胞ｐＣＤＫ１（Ｔｙｒ１５）を同じレベルまで低減するのに１２５ｎＭのＡＺＤ１７７５、２０５ｎＭの１１ｄ及び５６５ｎＭの１１ｍが必要とされることが明らかである。
【図１０】図１０Ａ〜図１０Ｄは、ＡＺＤ１７７５が細胞成長に対する阻害効果を同等の細胞Ｗｅｅ１阻害をもたらすことが知られる濃度で１１ｄと比較して増大させたことを示す図である。７６時間の後処理（２４時間の時点で薬物を添加した）について記録されたＡＺＤ１７７５（図１０Ａ）、１１ｄ（図１０Ｂ）及び１１ｍ（図１０Ｃ）に曝露したＤａｏｙ細胞のリアルタイム細胞増殖プロット（ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ）。図１０Ｄは、様々な阻害剤濃度にわたるＡＺＤ１７７５（赤色）、１１ｄ（緑色）及び１１ｍ（青色）についての１／傾き（Δ細胞指数／時間）によって表されるＤａｏｙ細胞成長速度のプロットである。成長速度を線形成長相（ｔ＝３０時間〜８０時間）について決定した。データの補間から、一定の阻害剤濃度での成長速度；１２５ｎＭのＡＺＤ１７７５、１／傾き＝０．０３３Δ細胞指数／時間；２０５ｎＭの１１ｄ、１／傾き＝０．０６３Δ細胞指数／時間；５６５ｎＭの１１ｍ、１／傾き＝０．０１２Δ細胞指数／時間が明らかである。
【図１１】図１１Ａ〜図１１Ｅは、ＡＺＤ１７７５及び新規のＷｅｅ１阻害剤の細胞透過性及び保持を示す図である。ＡＺＤ１７７５（赤色）、１１ｄ（緑色）及び１１ｍ（青色）との５分間、１５分間、３０分間及び６０分間のインキュベーションに続く培地の吸引及び洗浄後にＤａｏｙ細胞溶解物においてＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって決定される阻害剤濃度。０．１μＭの化合物の添加（図１１Ａ）、０．５μＭの化合物の添加（図１１Ｂ）、１．０μＭの化合物の添加（図１１Ｃ）、３．０μＭの化合物の添加（図１１Ｄ）を示す。図１１Ｅは、６０分間のインキュベートに続く培地の吸引及び洗浄後の漸増濃度のＡＺＤ１７７５、１１ｄ及び１１ｍにわたるＤａｏｙ細胞溶解物においてＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって決定される化合物濃度を示す。
【図１２】図１２Ａ及び図１２Ｂは、Ｗｅｅ１阻害剤がシスプラチンの活性を非毒性濃度で増強することを示す図である。図１２Ａは、Ｗｅｅ１阻害剤及びシスプラチンの組合せで７２時間処理したＤａｏｙ細胞においてＭＴＳアッセイを用いて生成した併用指数（ＣＩ）プロットを示す。ＣＩ値はＣｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙの式を用いて決定し、併用治療は非相乗的（赤色、＞１．０５）、相乗的（緑色、＜０．９５）及び中間（黄色、０．９６〜１．０４）として示される。図１２ＢはＣＩプロットの数値表現を示す。図１２Ｃは、Ｗｅｅ１阻害剤及びシスプラチンでの７２時間の処理後のＤａｏｙ細胞におけるＭＴＳアッセイを示す。シスプラチン単独と比較した、幾つかのＷｅｅ１阻害剤の濃度（３００ｎＭ）での漸増シスプラチン濃度に対する用量応答。
【図１３】図１３Ａ及び図１３Ｂは、ＡＺＤ１７７５の組織分布を示す図である。薬物の単回経口投与の３時間後のヌードマウスにおいて、図１３ＡはＡＺＤ１７７５（２０ｍｇ／ｋｇ）を示し、図１３ＢはＡＺＤ１７７５（４０ｍｇ／ｋｇ）を示す。データは３匹のマウスの平均±ＳＤを表す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本開示は低い細胞毒性、良好な血液脳関門透過性、及び進行性固形腫瘍又は血液癌を有する患者の治療におけるシスプラチンとの相乗効果を示す、Ｗｅｅ１キナーゼ阻害に対する特異性が顕著に改善されたＷｅｅ１キナーゼ阻害剤に関する。
【００２７】
提示の実施形態の理解を容易にするために、以下の説明を提供する。
【００２８】
数量を特定していない単数形（The singular terms "a," "an," and "the"）は、文脈上そうでないことが明らかに示されない限り、複数の指示対象を含む。同様に、「又は」という単語は、文脈上そうでないことが明らかに示されない限り、「及び」を含むことを意図している。「含む（comprises）」という用語は「含む（includes）」を意味する。また、「Ａ又はＢを含む」は、文脈上そうでないことが明らかに示されない限り、Ａ若しくはＢ又はＡ及びＢを含むことを意味する。化合物について与えられる全ての分子量又は分子質量の値は近似値であり、説明のために提示されることを更に理解されたい。本明細書に記載されるものと同様又は同等の方法及び材料を、本開示の実施又は試験に使用することができ、好適な方法及び材料を下記に記載する。加えて、材料、方法及び実施例は一例にすぎず、限定を意図するものではない。
【００２９】
化合物又は作用物質「の投与」及び「を投与する」とは、本明細書に記載される化合物若しくは作用物質、化合物若しくは作用物質のプロドラッグ、又は医薬組成物を提供することを意味すると理解されるものとする。化合物、作用物質又は組成物は他者によって被験体に（例えば、静脈内）投与されても、又は被験体によって自己投与されてもよい（例えば、錠剤又はカプセル）。
【００３０】
「被験体」という用語は、哺乳動物（例えばヒト、並びにイヌ、ネコ、ブタ、ウマ、ヒツジ及びウシ等の動物（veterinary animals））を含む動物を指す。
【００３１】
「Ｒ基」又は「置換基」は、分子の原子（単数又は複数）の原子価要件を満たすように、通例は水素原子の代わりに分子中の原子（単数又は複数）に共有結合した、単一原子（例えば、ハロゲン原子）又は互いに共有結合した２個以上の原子の基を指す。Ｒ基／置換基の例としては、アルキル基、ヒドロキシル基、アルコキシ基、アシルオキシ基、メルカプト基及びアリール基が挙げられる。
【００３２】
「置換された」又は「置換」はハロゲン、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、トリフルオロメチル、アシルオキシ、ヒドロキシ、メルカプト、カルボキシ、アリールオキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、モルホリノ、ピペリジノ、ピロリジン−１−イル、ピペラジン−１−イル、ニトロ、スルファト又は他のＲ基等の１つ以上の付加的なＲ基による分子の水素原子又はＲ基の置換えを指す。
【００３３】
「アシル」は、構造ＲＣＯ−（ここで、Ｒはアルキル又は置換アルキルであり得る）を有する基を指す。「低級アシル」基は、１個〜６個の炭素原子を含有する基である。
【００３４】
「アシルオキシ」は、構造ＲＣＯＯ−（ここで、Ｒはアルキル又は置換アルキルであり得る）を有する基を指す。「低級アシルオキシ」基は１個〜６個の炭素原子を含有する。
【００３５】
「アルケニル」は、他に言及されない限り、通例は１個〜１２個の炭素原子を含有し、共役していても又は共役していなくてもよい１つ以上の二重結合を含有する、炭素及び水素のみを含有する環状、分岐又は直鎖基を指す。アルケニル基は非置換であっても又は置換されていてもよい。「低級アルケニル」基は１個〜６個の炭素原子を含有する。
【００３６】
「アルコキシ」という用語は、１個〜２０個の炭素原子、好ましくは１個〜８個の炭素原子（「低級アルコキシ」と称される）、より好ましくは１個〜４個の炭素原子を含み、付着点に酸素原子を含む直鎖、分岐又は環状の炭化水素配置及びそれらの組合せを指す。「アルコキシ基」の一例は、式−ＯＲ（式中、Ｒはアルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ハロゲン化アルキル、アルコキシ又はヘテロシクロアルキル基で任意に置換されたアルキル基であり得る）によって表される。好適なアルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｉ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、シクロプロポキシ、シクロヘキシルオキシ等が挙げられる。
【００３７】
「アルキル」という用語は、炭素原子数１〜２４の分岐又は非分岐飽和炭化水素基、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、デシル、テトラデシル、ヘキサデシル、エイコシル、テトラコシル等を指す。「低級アルキル」基は、１個〜６個の炭素原子を有する飽和分岐又は非分岐炭化水素である。好ましいアルキル基は、１個〜４個の炭素原子を有する。アルキル基は、１つ以上の水素原子がハロゲン、シクロアルキル、アルコキシ、アミノ、ヒドロキシル、アリール、アルケニル又はカルボキシル等の置換基で置換された「置換アルキル」であってもよい。例えば、低級アルキル又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ペンチル、３−ペンチル又はヘキシルであり得る。（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキルはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル又はシクロヘキシルであり得る。（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルはシクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シクロペンチルメチル、シクロヘキシルメチル、２−シクロプロピルエチル、２−シクロブチルエチル、２−シクロペンチルエチル又は２−シクロヘキシルエチルであり得る。（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシはメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ペントキシ、３−ペントキシ又はヘキシルオキシであり得る。（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニルはビニル、アリル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、１，−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル又は５−ヘキセニルであり得る。（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニルはエチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、３−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、４−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニル又は５−ヘキシニルであり得る。（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルはアセチル、プロパノイル又はブタノイルであり得る。ハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルはヨードメチル、ブロモメチル、クロロメチル、フルオロメチル、トリフルオロメチル、２−クロロエチル、２−フルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル又はペンタフルオロエチルであり得る。ヒドロキシ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルはヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシエチル、１−ヒドロキシプロピル、２−ヒドロキシプロピル、３−ヒドロキシプロピル、１−ヒドロキシブチル、４−ヒドロキシブチル、１−ヒドロキシペンチル、５−ヒドロキシペンチル、１−ヒドロキシヘキシル又は６−ヒドロキシヘキシルであり得る。（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニルはメトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、ペントキシカルボニル又はヘキシルオキシカルボニルであり得る。（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオはメチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチオ、イソブチルチオ、ペンチルチオ又はヘキシルチオであり得る。（Ｃ２〜Ｃ６）アルカノイルオキシはアセトキシ、プロパノイルオキシ、ブタノイルオキシ、イソブタノイルオキシ、ペンタノイルオキシ又はヘキサノイルオキシであり得る。
【００３８】
「アルキニル」は、他に言及されない限り、通例は１個〜１２個の炭素原子を含有し、１つ以上の三重結合を含有する、炭素及び水素のみを含有する環状、分岐又は直鎖基を指す。アルキニル基は非置換であっても又は置換されていてもよい。「低級アルキニル」基は、１個〜６個の炭素原子を含有する基である。
【００３９】
「ハロゲン」という用語はフルオロ、ブロモ、クロロ及びヨード置換基を指す。
【００４０】
「アリール」は、任意に非置換であっても又は置換されていてもよい、単一環（例えば、フェニル）又は複数の縮合環（例えば、ナフチル又はアントリル）を有する一価不飽和芳香族炭素環基を指す。
【００４１】
「アミノ」という用語は、一般構造−ＮＨＲ又は−ＮＲ２を有するアミノ基が得られるように例えば低級アルキル基で任意に置換され得る、構造−ＮＨ２を有するＲ基を指す。
【００４２】
「ニトロ」は、構造−ＮＯ２を有するＲ基を指す。
【００４３】
「脂肪族」という用語は環状基に適用される場合、環中に存在する任意の二重結合が全環構造の周りで共役していない環構造を指す。
【００４４】
「芳香族」という用語は環状基に適用される場合、おそらくは酸素原子又は窒素原子等のヘテロ原子を介して全環構造の周りで共役した二重結合を含有する環構造を指す。アリール基、ピリジル基及びフラン基が芳香族基の例である。芳香族基の共役系は、通例は非混成ｐ軌道である共役系を構成する電子軌道を占める固有数の電子、例えば６個又は１０個の電子を含有する。
【００４５】
「医薬組成物」は、或る量（例えば、単位投与量）の開示の化合物の１つ以上を担体、希釈剤及び／又はアジュバント、並びに任意に他の生物学的に活性な成分を含む１つ以上の非毒性の薬学的に許容可能な添加剤と共に含む組成物である。かかる医薬組成物は、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa.（第１９版）に開示されているような標準的な医薬配合法によって調製することができる。
【００４６】
「薬学的に許容可能な塩又はエステル」という用語は、従来の手段によって調製される塩又はエステルを指し、限定されるものではないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、リンゴ酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、マレイン酸、サリチル酸、安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸等を含む、例えば無機及び有機酸の塩を含む。
【００４７】
今回開示の化合物の「薬学的に許容可能な塩」には、ナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、亜鉛等のカチオンとアンモニア、エチレンジアミン、Ｎ−メチル−グルタミン、リシン、アルギニン、オルニチン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、プロカイン、Ｎ−ベンジルフェネチルアミン、ジエチルアミン、ピペラジン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン及び水酸化テトラメチルアンモニウム等の塩基とから形成されるものも含まれる。これらの塩は標準的な手順、例えば遊離酸と好適な有機又は無機塩基とを反応させることによって調製され得る。本明細書に挙げられる任意の化学化合物は、代替的にはその薬学的に許容可能な塩として投与することができる。「薬学的に許容可能な塩」は遊離酸、塩基及び双性イオン形態も含む。好適な薬学的に許容可能な塩の説明は、Handbook of Pharmaceutical Salts, Properties, Selection and Use, Wiley VCH (2002)に見ることができる。本明細書に開示の化合物がカルボキシ基等の酸性官能基を含む場合、カルボキシ基に好適な薬学的に許容可能なカチオン対は当業者に既知であり、アルカリ、アルカリ土類、アンモニウム、第４級アンモニウムカチオン等が挙げられる。かかる塩は当業者に既知である。「薬理学的に許容可能な塩」の付加的な例については、Berge et al., J. Pharm. Sci. 66:1 (1977)を参照されたい。
【００４８】
治療用途については、化合物の塩は対イオンが薬学的に許容可能な塩である。しかしながら、薬学的に許容可能でない酸及び塩基の塩も、例えば薬学的に許容可能な化合物の調製又は精製に使用することができる。
【００４９】
上述のような薬学的に許容可能な酸及び塩基付加塩は、化合物が形成することができる治療的に活性な非毒性の酸及び塩基付加塩形態を含むことを意味する。薬学的に許容可能な酸付加塩は好都合には、塩基形態をかかる適切な酸で処理することによって得ることができる。適切な酸は、例えば無機酸、例えばハロゲン化水素酸、例えば塩酸又は臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等；又は有機酸、例えば酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸（すなわち、エタン二酸）、マロン酸、コハク酸（すなわち、ブタン二酸）、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸（すなわち、ヒドロキシブタン二酸）、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、パモ酸等を含む。逆に、上記塩形態は、適切な塩基での処理によって遊離塩基形態へと変換することができる。
【００５０】
酸性プロトンを含有する化合物は、適切な有機及び無機塩基での処理によって、それらの非毒性の金属又はアミン付加塩形態へと変換することもできる。適切な塩基塩形態には、例えばアンモニウム塩、アルカリ及びアルカリ土類金属塩、例えばリチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム塩等、有機塩基との塩、例えばベンザチン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、ヒドラバミン塩、並びに例えばアルギニン、リシン等のアミノ酸との塩等が含まれる。
【００５１】
本明細書に記載される化合物の一部が、それらの互変異性形態で存在していてもよい。
【００５２】
開示の化合物の「治療有効量」は血管新生の阻害、又は抗腫瘍若しくは抗転移効果、ＴＮＦ−α活性の阻害、免疫サイトカインの阻害又は神経変性疾患の治療等の所望の治療効果を達成するのに十分な化合物の投与量である。場合によっては、治療有効量は血管新生、ＴＮＦ−α活性又は免疫サイトカインを組織培養物中、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏで調節することが示されている濃度と同様の組織濃度を作用部位で達成するのに十分な量である。例えば、化合物の治療有効量は、被験体に約０．１μｇ／ｋｇ（体重）／日〜約１０００ｍｇ／ｋｇ（体重）／日の投与量、例えば約１μｇ／ｋｇ（体重）／日〜約１０００μｇ／ｋｇ（体重）／日の投与量、例えば約５μｇ／ｋｇ（体重）／日〜約５００μｇ／ｋｇ（体重）／日の投与量が与えられるようなものであり得る。
【００５３】
「立体異性体」という用語は、分子のエナンチオマー、ジアステレオマー又は幾何異性体である分子を指す。立体異性体は構造異性体とは異なり、分子の構造中の原子の数及びタイプに関して異ならないが、分子の原子の空間的配置に関して異なる。立体異性体の例としては、光学活性分子の（＋）及び（−）形態が挙げられる。
【００５４】
「調節する」という用語は、生物学的機能、疾患の進行又は病態の改善の量、程度又は速度を変更する開示の化合物の能力を指す。例えば、調節は血管新生の増大若しくは減少を生じさせる、ＴＮＦ−α活性を阻害する、又は腫瘍転移若しくは腫瘍形成を阻害する化合物の能力を指す場合がある。
【００５５】
「血管新生活性」という用語は、血管新生を刺激する開示の化合物又は特定の濃度の開示の化合物の能力を指す。血管新生活性はｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで検出することができる。血管新生化合物又は血管新生濃度の開示の化合物は血管新生を刺激し、かかる化合物及び／又は濃度は当業者により、例えば以下の実施例に記載の方法を用いて容易に同定することができる。
【００５６】
「抗血管新生活性」という用語は、血管新生を阻害する化合物又は特定の濃度の開示の化合物の能力を指す。抗血管新生活性はｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで検出することができる。抗血管新生化合物又は抗血管新生濃度の開示の化合物は血管新生を阻害し、かかる化合物及び／又は濃度は当業者により、例えば以下の実施例に記載の方法を用いて容易に同定することができる。
【００５７】
「治療」は、疾患又は病的状態の兆候又は症状を、それが発症し始めた後に改善する治療的介入を指す。本明細書で使用される場合、疾患又は病的状態に関した「改善する」という用語は、治療の任意の観察可能な有益な効果を指す。有益な効果は、例えば感受性のある被験体における疾患の臨床症状の発現の遅延、疾患の一部又は全ての臨床症状の重症度の低減、疾患の進行の減速、被験体の健康全般若しくは快適さ（well-being）の改善、又は特定の疾患に特異的な当該技術分野で既知の他のパラメーターによって証明することができる。「疾患を治療する」という表現は、例えば癌又は免疫不全と関連する疾患等の疾患のリスクがある又は疾患を有する被験体において、疾患又は病態の完全な発症を阻害することを含む。疾患又は病態を「予防する」とは、疾患の兆候を示さないか又は疾患の初期兆候のみを示す被験体に、病変若しくは病態を発症するリスクを減少させるか又は病変若しくは病態の重症度を減らす目的で組成物を予防的に投与することを指す。
【００５８】
開示の化合物のプロドラッグも本明細書で企図される。プロドラッグは、被験体へのプロドラッグの投与後にｉｎ  ｖｉｖｏ生理作用、例えば加水分解、代謝等によって活性化合物へと化学的に修飾される活性又は不活性な化合物である。本書全体を通して使用される「プロドラッグ」という用語は、得られる誘導体のｉｎ  ｖｉｖｏ生体変化産物が本明細書に記載の化合物において規定される活性薬物となるようなエステル、アミド及びホスフェート等の薬理学的に許容可能な誘導体を意味する。プロドラッグは好ましくは優れた水溶解度、増大したバイオアベイラビリティを有し、ｉｎ  ｖｉｖｏで活性な阻害剤へと容易に代謝される。本明細書に記載の化合物のプロドラッグは、修飾が日常操作又はｉｎ  ｖｉｖｏで切断され、親化合物となるように、化合物中に存在する官能基を修飾することによって調製することができる。作製及び使用されるプロドラッグに関わる適合性及び技法は当業者に既知である。エステルを含むプロドラッグの一般的な論考については、Svensson and Tunek, Drug Metabolism Reviews 165 (1988) and Bundgaard, Design of Prodrugs, Elsevier (1985)を参照されたい。
【００５９】
「プロドラッグ」という用語は、プロドラッグを被験体に投与した場合に、本発明の活性親薬物をｉｎ  ｖｉｖｏで放出する任意の共有結合担体を含むことも意図する。プロドラッグは多くの場合、活性医薬品に対して溶解性及びバイオアベイラビリティ等の特性の向上を有するため、本明細書に開示の化合物はプロドラッグ形態で送達することができる。このため、今回開示の化合物のプロドラッグ、プロドラッグを送達する方法及びかかるプロドラッグを含有する組成物も企図される。開示の化合物のプロドラッグは通例、修飾が日常操作又はｉｎ  ｖｉｖｏで切断され、親化合物が得られるように、化合物中に存在する１つ以上の官能基を修飾することによって調製される。プロドラッグは、ｉｎ  ｖｉｖｏで切断され、対応するアミノ及び／又はホスホネート基をそれぞれ生じる任意の基で官能化されたホスホネート及び／又はアミノ基を有する化合物を含む。プロドラッグの例としては、限定されるものではないが、アシル化アミノ基及び／又はホスホン酸エステル又はホスホン酸アミド基を有する化合物が挙げられる。特定の例では、プロドラッグは低級アルキルホスホン酸エステル、例えばイソプロピルホスホン酸エステルである。
【００６０】
開示の化合物の保護誘導体も企図される。開示の化合物と共に使用される様々な好適な保護基が、Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis; 3rd Ed.; John Wiley & Sons, New York, 1999に開示されている。概して、保護基は分子の残存部分に影響を及ぼさない条件下で除去される。これらの方法は当該技術分野で既知であり、酸加水分解、水素化分解等が挙げられる。好ましい方法の１つは、遊離ホスホネートを得るためのＴＭＳ−Ｂｒ媒介エステル切断におけるようなルイス酸性条件を用いたホスホン酸エステルの切断等のエステルの除去を含む。第２の好ましい方法はアルコール、酢酸等又はそれらの混合物等の好適な溶媒系中でパラジウム炭素を利用した水素化分解によるベンジル基の除去等の保護基の除去を含む。ｔ−ブトキシカルボニル保護基を含むｔ−ブトキシ系基は水、ジオキサン及び／又は塩化メチレン等の好適な溶媒系中でＨＣｌ又はトリフルオロ酢酸等の無機又は有機酸を利用して除去することができる。アミノ及びヒドロキシ官能基アミノの保護に好適な別の例示的な保護基はトリチルである。他の従来の保護基が既知であり、当業者は、Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis; 3rd Ed.; John Wiley & Sons, New York, 1999を参照して好適な保護基を選択することができる。アミンを脱保護する場合、得られる塩は容易に中和され、遊離アミンを生じることができる。同様に、ホスホン酸部分等の酸部分を露出させる（unveiled）場合、化合物は酸化合物又はその塩として単離することができる。
【００６１】
今回開示の化合物の特定の例は１つ以上の不斉中心を含む。このため、これらの化合物は異なる立体異性形態で存在し得る。したがって、化合物及び組成物は、個々の純粋なエナンチオマー又はラセミ混合物を含む立体異性混合物として提供することができる。本明細書に開示の化合物は、実質的にエナンチオピュアな形態、例えば９０％の鏡像体過剰率、９５％の鏡像体過剰率、９７％の鏡像体過剰率、又は更には９９％を超える鏡像体過剰率、例えばエナンチオピュアな形態で合成することができるか又は精製される。
【００６２】
置換された基（例えば、置換アルキル）は幾つかの実施形態では、置換された基（例えば、置換アリール）で置換されていてもよい。幾つかの実施形態では、互いに連結する置換された基の数は２つまでに限定される（例えば、置換アルキルが置換アリールで置換され、アリール上に存在する置換基は更に置換されない）。例示的な実施形態では、置換された基は別の置換された基で置換されない（例えば、置換アルキルが非置換のアリールで置換される）。
【００６３】
特に開示される実施形態の概要
Ｗｅｅ１キナーゼに対する特異性が顕著に改善され、したがって広範な進行性固形腫瘍及び血液癌の治療に使用することができる、Ｗｅｅ１キナーゼ酵素を阻害する化合物が開示される。開示される全ての化合物の薬学的に許容可能な塩、立体異性体及び代謝産物も企図される。
【００６４】
本開示の１つの態様は、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）：
【化２】
0006692423.tif 000003
（式中、
Ｒ１はＨ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、置換Ｃ１〜６アルキル又は置換Ｃ２〜６アルケニルであり、
Ｒ２はＨ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ１〜６アルキル又は置換Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｒ３はメチレン、酸素、アミン、又はＣ２〜６アルキル置換Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ若しくはＣＯ２Ｒ６で置換された窒素であるが、Ｒ３をＮ−メチルとすることはできず、
Ｒ４はＨ又は任意に置換されたアルキル（Ｃ１〜６）であり、
Ｒ５はＨ、Ｃ１〜６アルキル、置換Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ１〜６アルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ＯＲ６、ＳＲ６、ＣＯ２Ｒ６、ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ６又はＮＲ７Ｒ８であり、
Ｒ６はＨ、Ｃ１〜６アルキル、置換Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール又は置換ヘテロアリールであり、
Ｒ７及びＲ８は独立してＨ、Ｃ１〜６アルキル、置換Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ２〜４アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール又は置換ヘテロアリールである）の化学構造を有する化合物又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００６５】
例示的な本開示の化合物としては、以下のものが挙げられる：
【化３】
0006692423.tif 000004
0006692423.tif 000005
【００６６】
本明細書に開示の化合物は、Ｗｅｅ１キナーゼを阻害する本開示の化合物を治療有効量、投与することによって、被験体において癌を予防、治療若しくは改善するか又は癌の転移を予防するために使用することができる。例えば、開示の化合物は進行性固形腫瘍、血液癌、脳腫瘍、卵巣腫瘍、子宮頸癌、頭頸部扁平上皮癌、膵臓癌及び肺癌の治療に使用することができる。これらの化合物は、血液癌である急性骨髄性白血病の治療に特に有用であり得る。これらの化合物は、血液脳関門を容易に通過し、それにより全身投与後に脳腫瘍を首尾よく治療する物理化学的特性を有する低分子量親油性化合物である。
【００６７】
治療有効量の開示の化合物は、腫瘍を有する被験体に投与し、腫瘍形成又は腫瘍転移の阻害等の抗腫瘍効果を達成することができる。開示の化合物はまた、原発性及び転移性の両方の固形腫瘍の治療に有用である。開示の化合物は、白血病（すなわち緑色腫、形質細胞腫、並びに菌状息肉腫のプラーク及び腫瘍、並びに皮膚Ｔ細胞リンパ腫／白血病）等の造血器悪性腫瘍の治療、及びリンパ腫（ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫の両方）の治療にも有用である。加えて、これらの化合物は造血器悪性腫瘍から生じる固形腫瘍の治療に有用であり得る。加えて、これらの化合物は単独で又は放射線療法及び／又は他の化学療法剤と組み合わせて使用した場合に、上記の腫瘍からの転移の予防に有用であり得る。化合物は、多発性骨髄腫の治療にも有用である。
【００６８】
さらに、開示の化合物を用いて被験体におけるＷｅｅ１キナーゼの活性を阻害する方法が提供される。該方法は、Ｗｅｅ１阻害効果を達成するために治療有効量の開示の化合物を被験体に投与することを含む。Ｗｅｅ１阻害効果を有する開示の化合物は多くの炎症性、感染性、免疫性及び悪性疾患の治療に有用である。これらの疾患としては、限定されるものではないが、癌、腫瘍成長、望ましくない血管新生及び自己免疫疾患が挙げられる。
【００６９】
Ｗｅｅ１は、具体的には膠芽腫（Forte et al PLoS One 2013 8(12):e81432）、白血病（Tuel-Ahlgren et al, Leuk Lymphoma 1996;20(5-6):417-26、Zhou et al. Leukemia. 2015;29(4):807-18）、乳癌（Wang et al. Oncologist 2011;16(7):966-79）及び肺癌（Syljuasen et al. Front Genet. 2015;6:70）を含む癌幹細胞の維持及び生存に関連付けられている。このため、開示の化合物を用いて癌幹細胞におけるＷｅｅ１キナーゼの活性を阻害する更なる方法が提供される。これらの方法は、癌細胞を本開示のＷｅｅ１阻害剤と組み合わせて投与され得る他の抗癌剤に感作することを含んでいてもよい、患者における腫瘍の転移の予防及び／又は患者における薬剤耐性癌の治療に特に効果的であり得る。
【００７０】
開示の化合物は、疾患の治療のための他の組成物及び手順と組み合わせて使用することができる。例えば、癌は本明細書に開示のＷｅｅ１キナーゼ阻害剤化合物の１つ以上と組み合わせた外科手術、放射線又は化学療法により慣習的に治療することができる。付加的に、癌は化学療法剤により慣習的に治療することができ、本明細書に開示のＷｅｅ１キナーゼ阻害剤化合物の１つ以上を、従来の化学療法剤に対する癌細胞の化学療法薬耐性を低減するために投与することができる。
【００７１】
Ｗｅｅ１阻害活性を示す開示の化合物を、他のキナーゼ阻害剤と組み合わせることができる。Ｗｅｅ１阻害活性を示す開示の化合物を他の従来の抗癌療法、例えばデキサメサゾン及びプレドニゾロン等のステロイドと組み合わせることができる。
【００７２】
開示の化合物と組み合わせて使用することができる他の化学療法剤の例としては、ＤＮＡアルキル化剤を含むＤＮＡ標的剤、及びシスプラチン、カペシタビン、カルボプラチン、シクロフォスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、メトトレキサート、パクリタキセル、ペメトレキセド、イリノテカン、テモゾロミド、トポテカンを含むトポイソメラーゼ阻害剤、放射線又はそれらの組合せが挙げられる。開示の化合物と組み合わせて使用することができる特に有用な化学療法剤としては、シスプラチン、シタラビン又はテモゾロミドが挙げられる。
【００７３】
開示の化合物は、放射性同位体（３２Ｐ、９０Ｙ、１２５Ｉ、１３１Ｉ及び１７７Ｌｕ等）、粒子ビーム（陽子ビーム、中性子ビーム及び電子ビーム等）及び電磁放射（γ線、ｘ線、並びに光増感剤及び可視光線又は紫外線を用いた光線力学療法等）を用いた放射線療法と組み合わせることもできる。
【００７４】
開示の化合物を薬学的に許容可能な賦形剤、及び任意に生分解性ポリマー等の持続放出性マトリックスと組み合わせて、治療用組成物を形成することができる。したがって、上記に開示される化合物のいずれか１つ以上と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物も開示される。組成物は組成物の単位投与形態を含み、組成物を被験体に投与して癌の進行又は転移を阻害するための説明書、例えば組成物を投与して抗腫瘍効果を達成するか又は病的細胞増殖を阻害するための説明書を更に含み得る。かかる医薬組成物は、被験体に治療有効量の組成物を投与することによって被験体において癌成長を治療又は予防する方法に使用することができる。
【００７５】
これらの医薬組成物は錠剤、カプセル、粉末、顆粒、舐剤、液体又はゲル調製物、例えば経口、局部又は滅菌非経口溶液又は懸濁液（例えば、点眼剤又は点耳剤、喉又は鼻腔用スプレー等）、経皮パッチの形態及び当該技術分野で既知の他の形態であり得る。
【００７６】
医薬組成物は、所与の病態の治療に適切な任意の方法で全身的又は局所的に、例えば経口的、非経口的、髄腔内、経直腸的、経鼻的、口腔内、膣内、局部的、光学的に、吸入スプレー又は埋め込みリザーバにより投与することができる。「非経口的に」という用語は本明細書で使用される場合、例えば注射又は注入による皮下、静脈内、筋肉内、胸骨内（intrasternal）、滑液嚢内、髄腔内、肝臓内、病巣内及び頭蓋内投与を含むが、これらに限定されない。中枢神経系の治療については、医薬組成物は末梢又は脳室内に投与された場合に、血液脳関門を容易に透過することができる。
【００７７】
薬学的に許容可能な担体としては、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質（ヒト血清アルブミン等）、緩衝液（リン酸緩衝液等）、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩又は電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ろう、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール及び羊毛脂が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７８】
経口投与のための錠剤及びカプセルは、単位用量投与（unit dose presentation）に好適な形態とすることができ、従来の薬学的に許容可能な賦形剤を含有し得る。これらの賦形剤の例としては、シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント及びポリビニルピロリドン等の結合剤；ラクトース、糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトール又はグリシン等の充填剤；ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール又はシリカ等の錠剤化潤滑剤；ジャガイモデンプン等の崩壊剤；及びラウリル硫酸ナトリウム等の分散剤又は湿潤剤が挙げられる。経口液体調製物は、例えば水性若しくは油性懸濁液、溶液、エマルション、シロップ若しくはエリキシルの形態とするか、又は使用前に水若しくは他の好適なビヒクルで再構成するための乾燥製品として与えることができる。
【００７９】
医薬組成物は、滅菌水性又は油脂性媒体中で非経口的に投与することもできる。組成物は、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤又は溶媒に、例えば１，３−ブタンジオール溶液として溶解又は懸濁することができる。一般に使用されるビヒクル及び溶媒としては、水、生理食塩水、ハンクス液、リンガー液、及び合成モノグリセリド又はジグリセリドを含む滅菌固定油等が挙げられる。局部用途については、薬物を好適な水性又は非水性ビヒクル中で溶液、懸濁液、クリーム、ローション又は軟膏とすることができる。添加剤、例えばメタ重亜硫酸ナトリウム又はエデト酸二ナトリウム等の緩衝液；酢酸フェニル水銀若しくは硝酸フェニル水銀、塩化ベンザルコニウム、又はクロルヘキシジンを含む殺菌剤及び殺真菌剤等の保存料、並びにヒプロメロース等の増粘剤も含まれ得る。
【００８０】
含まれる投与量単位は、例えば治療される病態、配合物の性質、病態の性質、特許請求される医薬組成物の実施形態、投与方法、並びに患者の状態及び体重によって決まる。投与量レベルは通例、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ又は組織培養物中で活性であることが示されている濃度と少なくとも同じ組織濃度を作用部位で達成するのに十分である。例えば約０．１μｇ／ｋｇ（体重）／日〜約１０００ｍｇ／ｋｇ（体重）／日の投与量、例えば約１μｇ／ｋｇ（体重）／日〜約１０００μｇ／ｋｇ（体重）／日の投与量、例えば約５μｇ／ｋｇ（体重）／日〜約５００μｇ／ｋｇ（体重）／日の投与量が特定の病態の治療に有用であり得る。
【００８１】
化合物は限定されるものではないが、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩（camphorate）、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩及びウンデカン酸塩を含む無機又は有機酸及び塩基に由来する薬学的に許容可能な塩の形態で使用することができる。塩基塩としては、アンモニウム塩、アルカリ金属塩（ナトリウム塩及びカリウム塩等）、アルカリ土類金属塩（カルシウム塩及びマグネシウム塩等）、有機塩基との塩（ジシクロヘキシルアミン塩等）、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、及びアミノ酸（アルギニン、リシン等）との塩が挙げられるが、これらに限定されない。塩基性窒素含有基を、例えばハロゲン化Ｃ１〜８アルキル（メチル、エチル、プロピル及びブチルクロリド、ブロミド及びヨージド等）、硫酸ジアルキル（硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチル、ジアミル等）、長鎖ハロゲン化物（デシル、ラウリル、ミリスチル及びステアリルクロリド、ブロミド及びヨージド等）、ハロゲン化アラルキル（ベンジル及びフェネチルブロミド等）等のような作用物質により四級化することができる。水又は油に可溶性又は分散性の生成物がそれにより生成される。
【００８２】
本明細書に引用される各々の刊行物又は特許は、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。ここで一般的に記載される開示は、本開示の実施形態の或る特定の態様の単なる例示を目的として含まれる以下の実施例を参照することでより容易に理解される。実施例は、他の技法及び方法が特許請求の範囲を満たし、特許請求される開示の範囲から逸脱することなく用いることができることが上記の教示及び以下の実施例から当業者により認識されるように、本開示を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【００８３】
実施例１  脳癌におけるＷｅｅ１キナーゼの同定
髄芽腫療法に対する新規の分子標的を同定するために、本発明者らは腫瘍組織における遺伝子発現の経路分析を用いた統合的ゲノムスクリーニング、及びＤａｏｙ髄芽腫細胞株におけるキノームワイドｓｉＲＮＡスクリーニングを行った。本発明者らは、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘマイクロアレイによって測定される、１６個の髄芽腫及び３個の正常小脳組織サンプルに対して遺伝子発現プロファイリングを行った（Int J Cancer. 2012;131(8):1800-9）。ＩＰＡソフトウェア（Ingenuity）を用いた経路分析及び遺伝子セットエンリッチメント分析を行い、特定のシグナル伝達ネットワークを同定した。細胞周期関連遺伝子が分子カテゴリー内で最も豊富であり、キナーゼが機能カテゴリー内で最も豊富であった。髄芽腫における全調節異常遺伝子との分子カテゴリー及び機能カテゴリーの比較により、５０個の特異遺伝子が同定され（図１Ａ）、正常小脳と比較して２９個が髄芽腫において顕著に過剰発現していた。本発明者らは次に、キノームワイドｓｉＲＮＡスクリーニングを行い、髄芽腫細胞増殖に不可欠なキナーゼを同定した。髄芽腫Ｄａｏｙ細胞株に、７１０個のキナーゼ遺伝子又は非サイレンシング対照の各々を標的化する２１３０個のｓｉＲＮＡをトランスフェクトした。
【００８４】
細胞増殖を７２時間のトランスフェクション後にＭＴＳアッセイによって評価した。吸光度値を対照に対して正規化し、平均Ｚスコアを算出した。阻害された場合にＤａｏｙ細胞成長が減少する合計９５個の遺伝子が同定された（２以下のＺスコア）（図１Ｂ）。遺伝子発現データによる過剰発現された２９個の遺伝子及びｓｉＲＮＡスクリーニングにおいて同定された９５個のキナーゼの組み合わせ分析から、Ｇ２チェックポイントにおける細胞周期関連キナーゼが同定され、髄芽腫療法の標的としてＧ２チェックポイント制御が示唆された（図１Ｃ）。
【００８５】
多くの癌が、ＤＮＡ損傷を複製前に修復するために細胞周期を停止させる細胞の能力を損なうＧ１チェックポイントの不全を有する（非特許文献１）。これは癌細胞に突然変異を蓄積し、癌形成に有利な異常を広める手段を与える。正常細胞では、Ｇ１チェックポイントは損なわれない。したがって、Ｇ２チェックポイントはＤＮＡ損傷の修復前の細胞周期の停止を受けない。これにより、Ｇ２チェックポイントの無効化が正常細胞成長ではなく腫瘍形成に選択的に影響を与えることが支持される。本発明者らの組み合わせゲノム分析及びｓｉＲＮＡスクリーニングにより、Ｗｅｅ１が２つのシグナル伝達経路における焦点キナーゼとして同定され（図１Ｃ）、阻害のためのＷｅｅ１の標的化が複数の腫瘍生存機構を破壊する可能性を有することが実証された。
【００８６】
Ｗｅｅ１は、細胞ＤＮＡ損傷に応答して有糸分裂の開始を阻止する、ＡＴＲにより媒介されるＧ２細胞周期チェックポイント制御の重要な要素であるチロシンキナーゼである（非特許文献３）。ＡＴＲはＣＨＫ１をリン酸化して活性化し、これがＷｅｅ１を活性化し、Ｔｙｒ１５でのサイクリン依存性キナーゼ１（ＣＤＫ１）の選択的リン酸化をもたらし、それによりＣＤＫ１−サイクリンＢ複合体を安定化し、細胞周期の進行を停止させる。このプロセスは、腫瘍細胞に有糸分裂の開始前に損傷ＤＮＡを修復する時間を与えることにより生存上の利点を有する。Ｗｅｅ１の阻害はＧ２チェックポイントを無効にし、ＤＮＡ損傷を有する癌細胞が不定期の有糸分裂を開始し、分裂期細胞死による細胞死を受けるようにする。
【００８７】
実施例２  癌におけるＷｅｅ１の役割
本発明者らは、小児脳腫瘍のパネルにおけるＷｅｅ１の発現を検査し、Ｗｅｅ１が髄芽腫（ｍｅｄｕｌｌｏ）、原始神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）及び小児ＧＢＭを含む高悪性度腫瘍、並びに低悪性度毛様細胞性星状細胞腫（ＰＡ）において正常脳と比較して過剰発現されていることを見出した（図２Ａ）。これらのデータにより、Ｗｅｅ１発現の増大が腫瘍形成に関与することが支持される。
【００８８】
髄芽腫におけるＷｅｅ１の標的化を更に支持するために、本発明者らは９０個の髄芽腫組織サンプルにおいてＷｅｅ１の発現を検査した（図２Ｂ）。髄芽腫組織において正常小脳と比較してＷｅｅ１の顕著な過剰発現が見られたが、重要なことには、４つの髄芽腫サブグループ（Ｗｎｔ、Ｓｈｈ、グループ３及びグループ４）の間でＷｅｅ１発現の顕著な差は見られず、髄芽腫の標的化が全てのサブグループで効果的であることが示唆された。さらに、本発明者らは、よく特徴付けられた髄芽腫細胞株のパネルにおけるＷｅｅ１発現を評価した（図２Ｃ）。Ｗｅｅ１は小児（ＵＰＮ５１４及び６０５）又は成人小脳組織サンプルには存在しなかったが、６つの髄芽腫細胞株に存在していた。Ｗｅｅ１阻害の機能的結果を決定するために、本発明者らはＷｅｅ１に対するｓｉＲＮＡを使用し、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅリアルタイム細胞分析（ＲＴＣＡ）システムを用いてＤａｏｙ及びＵＷ２２８細胞における細胞増殖を測定した。細胞成長の減少がＤａｏｙ及びＵＷ２２８細胞株において観察された（図３Ａ）。次いで、本発明者らはコロニー形成アッセイを用い、ｓｉＲＮＡによるＷｅｅ１の阻害後に無限数の分裂を受ける髄芽腫細胞の能力を決定した。Ｗｅｅ１を標的化するｓｉＲＮＡは、Ｄａｏｙ及びＵＷ２２８細胞株における非サイレンシングｓｉＲＮＡと比較して相対コロニー数の減少を示した（図３Ｂ）。
【００８９】
幾つかのＷｅｅ１の小分子阻害剤が記載されているが（非特許文献９、非特許文献１０、非特許文献１３）、いずれもＷｅｅ１に高度選択的ではなく、最も強力なＡＺＤ１７７５が現在、幾つかの癌タイプについてＤＮＡ損傷剤と組み合わせて臨床試験で評価されている。小化学化合物ライブラリーに対してMerck Research Laboratoriesによって行われたハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）により、ＭＫ１７７５（現在ＡＺＤ１７７５として知られる）がＷｅｅ１キナーゼの小分子ナノモル阻害剤として同定された。ＡＺＤ１７７５によるＷｅｅ１の阻害が、幾つかの癌においてＧ２チェックポイントを無効にし、ＤＮＡ損傷を有する癌細胞が不定期の有糸分裂を開始し、細胞死を受けるようにすることが示されている（非特許文献６、非特許文献１２）。Ｃｈｋ１と同様、ＤＮＡ損傷剤と組み合わせたＷｅｅ１の阻害が調節不全のｐ５３を有する腫瘍に対する治療戦略として調査されている（非特許文献１４）。しかしながら、Ｗｅｅ１はＣｈｋ１の下流にあるため、Ｗｅｅ１キナーゼ活性の阻害は、上流の主要制御因子の阻害と関連した重大な副作用を生じる可能性が低い。本発明者らにより、小分子阻害剤ＡＺＤ１７７５によるＷｅｅ１阻害が単剤として細胞成長を抑制し、アポトーシスを誘導し、腫瘍成長を減少させ、髄芽腫細胞においてシスプラチンとの相乗活性を示すことが示された（Mol Cancer. 2014;13:72）。さらに、本発明者らのデータから、単剤としてのＡＺＤ１７７５によって誘導される細胞成長阻害が髄芽腫及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞株におけるｐ５３状態とは独立していることが示唆される（Mol Cancer Ther. 2013;12(12):2675-84）。総合すると、それらのデータから、Ｗｅｅ１が髄芽腫における標的化療法の有望な候補であり、Ｗｅｅ１キナーゼ活性の阻害が腫瘍をＤＮＡ損傷剤に対して化学増感させる（chemosensitize）可能性を有することが支持される。
【００９０】
ＡＺＤ１７７５の構造−活性相関（ＳＡＲ）データは、集中的な医薬品化学の取り組みにより開発されていないことから限られているが、ＨＴＳにより発見され、少なくとも８つの他のキナーゼとのナノモル活性を有することが知られている。このＳＡＲ及びキナーゼ選択性データの欠如、並びにＡＺＤ１７７５の強力な単剤細胞毒性は、Ｗｅｅ１阻害とは無関係の細胞毒性をもたらすオフターゲット効果が髄芽腫を有する患者において療法関連有害作用を悪化させ得ることから懸念されていた。ＡＺＤ１７７５は臨床試験において「耐容性良好」であることが報告されているが、ＡＺＤ１７７５に関する単剤での安全性及び耐容性の研究はなく、その毒性は併用療法により隠され得る。これらの懸念により、本発明者らの髄芽腫の治療のための新たな選択的Ｗｅｅ１阻害剤の開発が支持された。本発明者らは、ＡＺＤ１７７５に基づく少数の一連のＷｅｅ１阻害剤を開発し、アッセイシステムを確立し、髄芽腫におけるＷｅｅ１阻害の効果を更に検査した。興味深いことに、ｉｎ  ｖｉｔｒｏキナーゼアッセイにおいてＷｅｅ１をＡＺＤ１７７５と同じナノモル範囲で阻害した本発明者らの化合物は、髄芽腫細胞成長に対して単剤と同じ強力な阻害効果を示さなかったが、これらの化合物はｐＣＤＫレベルを低減し、非毒性阻害剤濃度でシスプラチンとの相乗効果を示した。本発明者らは今回、Ｗｅｅ１に対する選択性が改善された阻害剤を開発し、それらの単剤細胞毒性、シスプラチンとの相乗効果、血液脳関門（ＢＢＢ）透過、薬物動態プロファイル、及び異種移植片モデルにおける腫瘍成長の阻害を評価する。
【００９１】
実施例３：Ｗｅｅ１キナーゼの選択的小分子阻害剤の開発
Ｍａｅｓｔｒｏ（Schroedinger）におけるＧｌｉｄｅドッキングプロトコルを用いたＷｅｅ１のＡＴＰ結合部位へのＡＺＤ１７７５の計算に基づく分子ドッキングによりＡＺＤ１７７５とＷｅｅ１との間の相互作用が明らかとなり、４−メチルピペラジニル及びピリジル−２−プロパン−２−オール側鎖が、様々な潜在的置換が適合され得る結合キャビティの入り口に対して配向していることが示された（図４）。このモデルによると、４−メチルピペラジニル基はＩｌｅ３０５、Ｔｙｒ３７８及びＣｙｓ３７９と疎水性相互作用及びπ−アルキル相互作用により相互作用し得る。これらの相互作用の程度を理解するために、ジアルキルアニリノ基を保持し、順次にこの領域におけるジメチルアミノ、ピペラジン、モルホリン及びピペラジンＮ−メチルエステル基との複雑性を高めた一連の化合物を提案した。ＡＺＤ１７７５中のピリジル−２−プロパン−２−オール置換基は、Ｐｈｅ４３３とのｅｄｇｅ−ｆａｃｅ  π−π相互作用を生じると予測された。この基の修飾への適性（amenability）を確認するために、このπ−π相互作用を保持し、ＡＺＤ１７７５のプロパン−２−オール基とは構造的に異なる２−トリフルオロメチルピリジン及び２−メトキシピリジンを同定した。化合物（１１ａ〜ｎ）及びＡＺＤ１７７５の考え得る全ての組合せを合成し（図５）、ＩＣ５０値をｉｎ  ｖｉｔｒｏ組み換えＷｅｅ１キナーゼ活性アッセイにおいて決定した（図５及び図６）。ＡＺＤ１７７５のピリジル−２−プロパン−２−オール置換基を保持する全ての化合物（１１ａ〜ｄ）が強力なＷｅｅ１阻害を示した。しかしながら、ピリジン環を修飾した場合、２−メトキシピリジニル置換を有し、４−メチルピペラジニル基を保持する化合物１１ｍのみがＡＺＤ１７７５と同等の阻害を示した。これらのデータから、ＡＺＤ１７７５が修飾に適していても、側鎖の僅かな構造変化がＷｅｅ１阻害活性に影響を与える可能性があることが示される。
【００９２】
本発明者らにより合成されたＡＺＤ１７７５の類似体（図５）を、コアピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３（２Ｈ）−オン構造の周辺の側鎖置換基の２つを修飾することによって設計した。これら１４個のＡＺＤ１７７５類似体は有用な構造データを与え、本発明者らは阻害活性を維持する置換基を同定した。本発明者らは、アリル基を置き換えるピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３（２Ｈ）−オン環の２位の置換の検査も行ったが、アルキル５員〜６員窒素含有複素環が好ましいようである。また、化合物をそれらの予測ＢＢＢ透過に基づいて検査した。Ｑｕｉｋｐｒｏｐにおいて算出される血液−脳分配係数（ｑｐｌｏｇＢＢ）については、−３．０〜１．２の範囲が良好なＢＢＢ透過に推奨されるが、実験的に導き出されるＢＢＢ透過の限界は−２．０〜１．０の範囲である。結果として、実験値との相関の改善のために０．３超が優れ、−１．０超が不良であると考えるより厳格な規則を算出ｌｏｇＢＢ値に適用した。−０．８９のｑｐｌｏｇＢＢがＡＺＤ１７７５について算出され、−１．８によりＢＢＢを越える僅かな能力が示される。したがって、ＡＺＤ１７７５及び１１ｄのＢＢＢ透過を改善する明白な範囲がある（図７Ｂ）。
【００９３】
実施例４  細胞ｐＣＤＫに対するＷｅｅ１阻害剤の効果、単剤としてのそれらのキナーゼ選択性及び毒性、並びにシスプラチンとの相乗効果の検査
本発明者らは、ＡＺＤ１７７５が髄芽腫細胞の成長及び生存能力の低減に単剤として顕著な影響を及ぼすことを以前に示している。ＡＺＤ１７７５類似体の効果を評価するために、Ｄａｏｙ細胞を７５ｎＭ及び１５０ｎＭのＡＺＤ１７７５及び化合物１１ａ〜１１ｎで処理し、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ分析を用いてリアルタイムで細胞成長をモニタリングした（図８Ａ）。驚くべきことに、ｉｎ  ｖｉｔｒｏキナーゼアッセイにおいてＡＺＤ１７７５と同様の阻害活性を有するもの（１１ａ〜ｄ、１１ｍ）を含む全ての化合物１１ａ〜１１ｎが、細胞成長に対してＡＺＤ１７７５と比較して僅かな影響しか及ぼさなかった。対照的に、ＡＺＤ１７７５は７５ｎＭで細胞成長の顕著な低減及び１５０ｎＭで細胞数の純喪失をもたらした。この単剤細胞効果の違いが、ＭＴＳアッセイによりＡＺＤ１７７５と本開示のＷｅｅ１阻害剤（１１ａ〜ｄ、１１ｍ）とで更に観察された（図８Ｂ及び図８Ｃ）。ＡＺＤ１７７５は細胞生存能力に対して顕著な効果を有していたが（Ｄａｏｙ；ＥＣ５０＝２１９±２６ｎＭ、ＯＮＳ−７６；ＥＣ５０＝２８９±４７ｎＭ）、これらのＷｅｅ１阻害剤はアッセイ濃度範囲内でＤａｏｙ細胞に対して僅かな効果しか有さず、本発明者らの最も強力なＷｅｅ１阻害剤である１１ｄ及び１１ｍはＯＮＳ−７６細胞に対する効果を示さず、ＥＣ５０決定が阻止された。本発明者らは、ＡＺＤ１７７５と１１ｄ及び１１ｍとを或る濃度範囲にわたって髄芽腫Ｄ４５８懸濁細胞株においてフローサイトメトリーを用いて更に比較し、細胞数及び生存能力のパーセンテージを決定した。細胞数は減少し、非生存細胞のパーセンテージは、ＤＭＳＯ対照と比較してより低濃度のＡＺＤ１７７５（１２３．５ｎＭ、ｐ＜０．０１）で１１ｄ（３７０．４ｎＭ、ｐ＜０．０１）及び１１ｍ（１．１１μＭ、ｐ＜０．００１）よりも増大した（図８Ｄ）。単剤としてのＡＺＤ１７７５のこれらの結果は、細胞がＤＮＡ損傷剤に曝露されず、ＤＮＡ損傷なしには周期を停止させるＷｅｅ１の要件がなくなることから重要である。加えて、本開示のＷｅｅ１阻害剤（１１ａ〜ｄ及び１１ｍ）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏキナーゼ活性においてＡＺＤ１７７５と同じナノモル活性を示したが、細胞成長阻害に対して僅かな効果しか有しなかった。これらのデータから、Ｗｅｅ１阻害の効果がＡＺＤ１７７５によって示される強力な成長阻害活性とは切り離されている可能性があることが示唆される。これらのデータから、ｉｎ  ｖｉｔｒｏキナーゼアッセイにおいてＷｅｅ１阻害活性を維持する阻害剤構造の僅かな変化であっても細胞成長の強力な阻害をもたらさない場合があることが示唆される。化学療法増感剤の所望の特性は、腫瘍細胞に選択的な感作を与え、ＤＮＡ損傷剤と関連する有害作用の影響を低減する最低毒性である。
【００９４】
Ｗｅｅ１は、ＣＤＣ２−サイクリンＢ複合体を安定化するサイクリン依存性キナーゼ１（ＣＤＫ１）のＴｙｒ１５残基の選択的リン酸化によりＣＤＣ２を不活性化する。したがって、Ｗｅｅ１キナーゼ活性の阻害は、その基質であるＣＤＫ１のＴｙｒ１５でのリン酸化を阻止する。下流のシグナル伝達に対する本発明者らのＷｅｅ１阻害剤の効果を確認するために、本発明者らはＷｅｅ１阻害剤ＡＺＤ１７７５、１１ａ〜ｄ及び１１ｍでの処理後のＤａｏｙ細胞溶解物におけるリン酸−ＣＤＫ１（Ｔｙｒ１５）レベルの免疫ブロット分析を行った（図９Ａ）。１１ｃを除く全ての化合物が、細胞ｐＣＤＫ１を用量依存的に低減させた。より定量的な分析のために、ＥＬＩＳＡアッセイを用いて、より広い濃度範囲のＡＺＤ１７７５、１１ｄ及び１１ｍでの処理後のＤａｏｙ細胞溶解物におけるｐＣＤＫ１（Ｔｙｒ１５）の相対レベルを決定した。細胞ｐＣＤＫ１レベルは、ＡＺＤ１７７５の存在下で同等の濃度の１１ｄ及び１１ｍと比べてより低レベルまで減少した。ＥＬＩＳＡデータの補間により、１２５ｎＭのＡＺＤ１７７５での処理により誘導される細胞ｐＣＤＫ１と同じレベルをもたらすのに必要とされる１１ｄ及び１１ｍの濃度が、それぞれ２０５ｎＭ及び５６５ｎＭであることが決定された（図９Ｂ）。観察されるＷｅｅ１阻害剤処理の効果に対する細胞ｐＣＤＫ１（Ｔｙｒ１５）レベル、更にはＷｅｅ１活性の寄与を評価するために、本発明者らは、広い濃度範囲のＡＺＤ１７７５、１１ｄ及び１１ｍにわたってＤａｏｙ細胞における７６時間のリアルタイム細胞増殖アッセイ（ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ）を繰り返した（図１０）。ＡＺＤ１７７５により媒介される成長阻害が６２．５ｎＭ〜１２５ｎＭで生じ、これは１１ｄ（２５０ｎＭ）及び１１ｍ（２５０ｎＭ〜５００ｎＭ）で大幅に低減した。しかしながら、ｐＣＤＫ１（Ｔｙｒ１５）レベルのＥＬＩＳＡ決定により実証されるように（図９Ｂ）、ＡＺＤ１７７５はＷｅｅ１の細胞活性を１１ｄ及び１１ｍの両方よりも低濃度で低減する。Ｄａｏｙ細胞成長の阻害に対する細胞ｐＣＤＫ１レベルの寄与を決定するために、成長速度を阻害剤濃度に応じてプロットした。１２５ｎＭのＡＺＤ１７７５とのインキュベーションは、ビヒクル対照と比較して成長速度の顕著な低減をもたらした（０．０３３対０．０６８）（図１０）。対照的に、機能的に同等の濃度である２０５ｎＭの１１ｄはＡＺＤ１７７５と比較して細胞成長速度のほぼ２倍の増大をもたらした（０．０６３対０．０３３）。化合物１１ｍについては、同等濃度の５６５ｎＭは、細胞成長の更に大きな低減をもたらした（０．０１２）。まとめると、これらのデータにより、細胞ｐＣＤＫ１レベル及び結果としてＷｅｅ１活性が、ＡＺＤ１７７５及び１１ｍの単剤成長阻害活性の背後にある唯一の原動力でない可能性があることが示唆される。
【００９５】
全てが許容限界内のｃＬｏｇＰ値を有する（ＡＺＤ１７７５；ｃＬｏｇＰ＝２．１８、１１ｄ；ｃＬｏｇＰ＝２．３５、１１ｍ；ｃＬｏｇＰ＝２．８９）、ＡＺＤ１７７５と化合物１１ｄ及び１１ｍとの間の顕著な構造的類似性にも関わらず、細胞透過性及び保持の違いにより細胞生存能力に対する各Ｗｅｅ１阻害剤の差次的な効果を説明することが可能であった。したがって、本発明者らは様々な濃度及びインキュベーション回数でのＡＺＤ１７７５、１１ｄ及び１１ｍの細胞取込みを決定した（図１１）。驚くべきことに、ＡＺＤ１７７５及び１１ｄの細胞濃度には僅かな違いしか見られず、１１ｍは全ての濃度及び回数でレベルの上昇を示した。
【００９６】
ＭＴＳアッセイを用いて、Ｗｅｅ１阻害に応答して予想される結果である、ＤＮＡ損傷剤シスプラチンとのＷｅｅ１阻害剤の相乗効果を決定した。Ｄａｏｙ細胞を漸増濃度のシスプラチン及びＷｅｅ１阻害剤（ＡＺＤ１７７５、１１ａ〜ｄ又は１１ｍ）の両方で７２時間処理し、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙの式を用いて薬物の組合せの効果を分析した。併用指数（ＣＩ）を各々の薬物の組合せについて決定した。１未満のＣＩ値は相乗効果を示し、１を超えるＣＩは非相乗効果を示す。予想されるように、ＡＺＤ１７７５は、最低のシスプラチン及びＷｅｅ１阻害剤の濃度を除く全ての濃度にわたってシスプラチンと強い相乗効果を示した（図１２Ａ及び図１２Ｂ）。Ｗｅｅ１阻害剤（１１ａ〜ｄ、１１ｍ）の全てがシスプラチン、特により高濃度のシスプラチンとの相乗効果を示した。強力なＷｅｅ１阻害剤である１１ｄ及び１１ｍがより低いシスプラチン濃度で相乗活性を示し、ＡＺＤ１７７５により匹敵していた。特に、６００ｎＭのシスプラチンでは、相乗効果が全ての１１ｄ濃度及び最低濃度を除く全ての１１ｍ濃度で観察され、ＡＺＤ１７７５の相乗効果プロファイルに対する改善が示された。ＭＴＳアッセイによる用量応答曲線を、単剤として及び単一濃度のＷｅｅ１阻害剤と組み合わせた場合のシスプラチンについてプロットした（図１２Ｃ）。３００ｎＭの濃度のＷｅｅ１阻害剤単独で処理したＤａｏｙ細胞においてＡＺＤ１７７５を除く全ての場合で効果が観察されないことから、この濃度をＷｅｅ１阻害剤について選んだ。シスプラチン処理と比較すると、本発明者らの阻害剤との同時処理はシスプラチンの効果を増強した。効果はＡＺＤ１７７５の存在下でも増強されたが、これはこの濃度でのＡＺＤ１７７５単独の存在下での大幅な細胞生存能力の喪失によるものであった。興味深いことに、処理をｐ５３野生型ＯＮＳ−７６細胞においてＡＺＤ１７７５、１１ｄ及び１１ｍをシスプラチンと組み合わせて用いて繰り返すことで、同様の結果が観察された。これらのデータから、Ｗｅｅ１阻害が細胞ｐ５３状態とは独立してＤＮＡ損傷との相乗効果において作用することを示唆する先行研究が支持される。
【００９７】
ＡＺＤ１７７５及びＷｅｅ１阻害剤の薬物動態（ＰＫ）及び組織分布をマウスにおいて検査した。単剤としてのＷｅｅ１阻害剤の効果を決定するために本発明者らが確立した背側脇腹腫瘍異種移植片において、本発明者らは微量のＡＺＤ１７７５又は１１ｄが脳に浸透することを見出した（図１３）。
【００９８】
実施例５：阻害剤の合成
【化４】
0006692423.tif 000006
ｔｅｒｔ−ブチル（１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）カルバメート（３）の合成。ｔｅｒｔ−ブチルカルバゼート（２；９．４０ｇ、７０．９ｍｍｏｌ）を、還流トルエン（１１０ｍｌ）中の無水フタル酸（１；１０．０ｇ、６７．５ｍｍｏｌ）の溶液に少量ずつ添加した。得られた懸濁液を還流条件下で１８時間加熱した後、冷却し、沈殿物を濾過によって除去した。濾過物（filtrand）をヘキサンで洗浄し、真空下で乾燥させ、所望の生成物を白色の結晶性固体（１６．１ｇ、６１．４ｍｍｏｌ、９１％）として得た。Ｒｆ０．６８（１：１  ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）；Ｍ．ｐ．１９１℃〜１９４℃（Ｌｉｔ．＝１８６℃）；（１）ＩＲ（ｃｍ−１）３３１６、２９７９、１７９６、１７３０、１６１４、１４９０；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  １．４５（９Ｈ，ｓ，−ＯＣ（ＣＨ３）３）、７．８７〜８．０４（４Ｈ，ｍ，Ｈ−４／５／６／７）、９．８６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ２８．３（Ｃ（ＣＨ３）３）、８１．６（Ｃ（ＣＨ３）３）、１２４．２（Ａｒ−Ｃ）、１２９．８（Ａｒ−Ｃ）、１３５．８（Ａｒ−Ｃ）、１５４．４（Ｃ＝Ｏ）、１６５．９（Ｃ＝Ｏ）。
【００９９】
【化５】
0006692423.tif 000007
ｔｅｒｔ−ブチルアリル（１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）カルバメート（４）の合成。炭酸カリウム（１６．１ｇ、１１６ｍｍｏｌ）、塩化ベンジルトリエチルアンモニウム（１．３９ｇ、６．１２ｍｍｏｌ）及び臭化アリル（８．００ｍｌ、９１．８ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（１１０ｍｌ）中のカルバメート３（１６．１ｇ、６１．２ｍｍｏｌ）の懸濁液に順次添加した。反応混合物を室温で１８時間撹拌した後、水（１００ｍｌ）を添加した。有機抽出物を蒸発乾固し、得られた淡黄色の油をヘキサンでトリチュレートし（triturated）、５℃に冷却した。沈殿物を濾過によって除去し、ヘキサンで洗浄して、所望の生成物を白色の結晶性固体（１５．７ｇ、５２．１ｍｍｏｌ、８５％）として得た。Ｒｆ０．５２（４：１  ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）；Ｍ．ｐ．７２℃〜７５℃（Ｌｉｔ．＝７６℃〜７８℃）；（１）ＩＲ（ｃｍ−１）２９７８、２９３６、１７９２、１７１９、１６４１；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  １．２５＆１．４６（９Ｈ，ｓ，Ｃ（ＣＨ３）３）、４．１９（２Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，Ｎ−ＣＨ２）、５．１０〜５．１７（１Ｈ，ｍ，アリルＣ−Ｈトランス）、５．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．３，１．３Ｈｚ，アリルＣ−Ｈシス）、５．７８〜５．９３（１Ｈ，ｍ，アリルＣ−Ｈ）、７．９３〜８．０２（４Ｈ，ｍ，Ｈ−４／５／６／７）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ２７．９（Ｃ（ＣＨ３）３）、２８．１（Ｃ（ＣＨ３）３）、５１．７３１（Ｎ−ＣＨ２）、５３．７（Ｎ−ＣＨ２）、８２．１（Ｃ（ＣＨ３）３）、８２．８（Ｃ（ＣＨ３）３）、１１９．１（アリル−ＣＨ２）、１１９．７（アリル−ＣＨ２）、１２４．３、１２４．４、１２９．５、１２９．６、１３２．８（Ａｒ−Ｃ）、１３３．３（Ａｒ−Ｃ）、１３５．９（Ａｒ−Ｃ）、１３６．０（Ａｒ−Ｃ）、１５３．０（Ｃ＝Ｏ）、１５３．１（Ｃ＝Ｏ）、１６５．３（Ｃ＝Ｏ）、１６５．５（Ｃ＝Ｏ）。
【０１００】
【化６】
0006692423.tif 000008
ｔｅｒｔ−ブチル１−アリルヒドラジン−１−カルボキシレート（５）の合成。メチルヒドラジン（３．４０ｍｌ、６４．３ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１００ｍｌ）中のフタルアミド４（１５．６ｇ、５１．５ｍｍｏｌ）の氷冷溶液に添加した。反応混合物を室温に温め、１８時間撹拌した。得られた白色の懸濁液をフィルターに通し、濾液を真空で濃縮した。ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（３：１）の混合物を添加し、形成される沈殿物を濾過によって除去した。このプロセスを更に２回繰り返し、最終濾液を濃縮して、標的化合物を淡黄色の油（８．４７ｇ、４９．２ｍｍｏｌ、９６％）として得た。Ｒｆ０．２２（４：１  ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）；ＩＲ（ｃｍ−１）３３３６、２９７７、２９３２、１６９０；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  １．４０（９Ｈ，ｓ，−Ｃ（ＣＨ３）３）、３．８５（２Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝５．５，１．４，１．４Ｈｚ，Ｎ−ＣＨ２）、４．４６（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２）、５．０６〜５．０９（１Ｈ，ｍ，アリルＣ−Ｈトランス）、５．１１（１Ｈ，ｂｒ，アリルＣ−Ｈシス）、５．７４〜５．８６（１Ｈ，ｍ，アリルＣ−Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ２８．５（Ｃ（ＣＨ３）３）、５３．６（Ｎ−ＣＨ２）、７９．４（Ｃ（ＣＨ３）３）、１１６．２（アリル−ＣＨ２）、１３４．６（アリル−ＣＨ）、１５６．５（Ｃ＝Ｏ）。
【０１０１】
【化７】
0006692423.tif 000009
２−アリル−６−（メチルチオ）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オン（７）の合成。ＤＩＰＥＡ（２０．８ｍｌ、１２０ｍｍｏｌ）及びアリルヒドラジン５（８．２３ｇ、４７．８ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１５０ｍｌ）中のエチル４−クロロ−２−メチルチオ−５−ピリミジンカルボキシレート（６；１１．１ｇ、４７．８ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応混合物を還流で７２時間加熱した後、真空で濃縮した。Ｅｔ２Ｏ（５０ｍｌ）を残渣に添加し、得られた沈殿物を濾過によって回収した。濾液を蒸発乾固し、残渣を氷浴内で冷却した後、ＴＦＡ（４０ｍｌ）を添加した。得られた溶液を室温で１時間、続いて７０℃で１時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残渣をＥｔＯＨ（５０ｍｌ）に溶解し、氷浴内で冷却した後、６Ｍ  ＮａＯＨ（７５ｍｌ）を添加した。得られた溶液を室温で１５分間撹拌した後、３２を濃ＨＣｌ（４０ｍｌ）の添加によって酸性化した。橙色の溶液を蒸発乾固し、得られた残渣をクロロホルム（１００ｍｌ）と水（１００ｍｌ）との間で分配し、有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（Ｍｇ２ＳＯ４）、真空で濃縮し、ヘキサンでトリチュレートした。固体沈殿物をＥｔＯＨ及びＥｔ２Ｏで洗浄した後、真空下で乾燥させて、標的化合物を黄色の固体（５．４４ｇ、２４．５ｍｍｏｌ、５１％）として得た。Ｒｆ０．４５（９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．１２５℃〜１２８℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３０３２、２９７９、２９２６、２６５９、１６５６、１６１５、１５６６、１５１４；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ２．５３（３Ｈ，ｓ，−ＳＣＨ３）、４．３８（２Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，Ｎ２−ＣＨ２）、５．０６〜５．２０（２Ｈ，ｍ，アリルＣ−Ｈシス／トランス）、５．８７（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１７．２，１０．５，５．３Ｈｚ，アルケンＣ−Ｈ）、８．６７（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）、１２．６５（１Ｈ，ｂｒ，Ｈ−１）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ２２３．１。
【０１０２】
【化８】
0006692423.tif 000010
２−（６−ブロモピリジン−２−イル）プロパン−２−オール（８ａ）の合成。ヨウ化メチルマグネシウム（Ｅｔ２Ｏ中３Ｍ、１．５０ｍｌ、４．４８ｍｍｏｌ）を、乾燥Ｅｔ２Ｏ（１５ｍｌ）中のメチル６−ブロモピリジン−２−カルボキシレート（０．４３０ｇ、１．９９ｍｍｏｌ）の溶液にＮ２下で添加した。室温で５分後に反応物を１Ｍ  ＨＣｌ（１０ｍｌ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１５ｍｌ）で抽出した。有機抽出物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５ｍｌ）及びブライン（１０ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空で濃縮した。所望の生成物を黄色の油（０．３６５ｇ、１．６９ｍｍｏｌ、８５％）として得た。Ｒｆ０．６０（１：１  ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）；ＩＲ（ｃｍ−１）３４２０、２９７５、２９３０、１７３１、１７０１、１５８０、１５５３；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  １．４２（６Ｈ，ｓ，Ｃ（ＣＨ２）２）、５．３３（１Ｈ，ｓ，ＯＨ）、７．４７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．７，０．９Ｈｚ，Ｈ−５）、７．６７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．７，０．９Ｈｚ，Ｈ−３）、７．７３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．７，７．７Ｈｚ，Ｈ−４）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ３０．９（Ｃ（ＣＨ２）２）、７２．６（Ｃ（ＣＨ２）２）、１１８．５（Ａｒ−Ｃ）、１２６．０（Ａｒ−Ｃ）、１４０．４（Ａｒ−Ｃ）、１４０．５（Ａｒ−Ｃ）、１７０．８（Ａｒ−Ｃ）。
【０１０３】
ピリジルピラゾロピリミジノン（９ａ〜ｃ）を調製する一般的方法。Ｎ，Ｎ’− ジメチルエチレンジアミン（４．４７ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（５ｍｌ）中のピラゾロピリミジン７（２．２５ｍｍｏｌ）、ブロモピリジン（８ａ〜ｃ；２．９３ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（２．２５ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（３．１５ｍｍｏｌ）の溶液に８０℃で添加した。得られた懸濁液を９５℃で１８時間加熱し、その時間で橙色から暗緑色への色変化が生じた。反応混合物を室温に冷却し、ＮＨ４ＯＨ（１０ｍｌ）で希釈した後、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（２０ｍｌ）で洗浄し、３３を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発乾固した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（１９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）によって精製し、標的ピリジルピラゾロピリミジノン（６９％〜８４％）を得た。
【０１０４】
【化９】
0006692423.tif 000011
２−アリル−１−（６−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリジン−２−イル）−６−（メチルチオ）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オン（９ａ）。Ｒｆ０．６３（９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．１０８℃〜１１１℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３３３７、３０８１、２９６６、２９２４、１６６３、１６０１、１５５９；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）  １．６１（６Ｈ，ｓ，Ｃ（ＣＨ３）２）、２．６１（３Ｈ，ｓ，Ｓ−ＣＨ３）、３．７７（１Ｈ，ｓ，−ＯＨ）、４．８２（２Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｎ２−ＣＨ２）、４．９５（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１６．９Ｈｚ，アリルＣ−Ｈトランス）、５．０８（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，アリルＣ−Ｈシス）、５．７２（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１６．９，１０．３，５．９Ｈｚ，アリルＣ−Ｈ）、７．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，Ｈ−５’）、７．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−３’）、７．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，７．７Ｈｚ，Ｈ−４’）、８．９６（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）  １４．５（ＳＣＨ３）、３０．５（Ｃ（ＣＨ３）２）、４７．５（Ｎ２−ＣＨ２）、７２．５（Ｃ（ＣＨ３）２）、１１６．４（Ａｒ−Ｃ）、１１６．６（Ａｒ−Ｃ）、１１９．３（アリル−ＣＨ２）、１３１．２、１３９．２、１４７．０（Ａｒ−Ｃ）、１５４．３（Ａｒ−Ｃ）、１５９．２（Ｃ＝Ｏ）、１６１．０（Ａｒ−Ｃ）、１６６．１（Ａｒ−Ｃ）、１７７．０（Ａｒ−Ｃ）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ３５９．３。
【０１０５】
【化１０】
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２−アリル−６−（メチルチオ）−１−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オン（９ｂ）。Ｒｆ０．５６（１９：１  ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．９９℃〜１０２℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３０７６、２９２９、２３３０、１６９２、１５９９、１５５８；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）  ２．６４（３Ｈ，ｓ，Ｓ−ＣＨ３）、４．９２〜５．０５（４Ｈ，ｍ，Ｎ２−ＣＨ２＆アリルＣ−Ｈトランス）、５．０３（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，アリルＣ−Ｈシス）、５．６９（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１６．８，９．９，６．８Ｈｚ，アリルＣ−Ｈ）、７．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｈ−５’）、８．０８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．１，７．６Ｈｚ，Ｈ−４’）、８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｈ−３’）、８．９８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  １４．５（ＳＣＨ３）、４７．９（Ｎ２−ＣＨ２）、１０４．９（Ａｒ−Ｃ）、１１９．０（ｑ，ＪＣＦ＝２．８Ｈｚ，Ａｒ−Ｃ）、１１９．３（アリル−ＣＨ２）、１２１．６（ｑ，ＪＣＦ＝３４２７４．２Ｈｚ，ＣＦ３）、１２１．７（Ａｒ−Ｃ）、１３２．３，１４１．７（Ａｒ−Ｃ）、１４５．２（ｑ，ＪＣＦ＝３４．７Ｈｚ，Ａｒ−Ｃ）、１４８．７（Ａｒ−Ｃ）、１５５．２（Ａｒ−Ｃ）、１５９．２（Ｃ＝Ｏ）、１６１．０（Ａｒ−Ｃ）、１７６．６（Ａｒ−Ｃ）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ３６８．１。
【０１０６】
【化１１】
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２−アリル−１−（６−メトキシピリジン−２−イル）−６−（メチルチオ）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オン（９ｃ）。Ｒｆ０．４４（１９：１  ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．１１４℃〜１１６℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３０９６、３０５６、２９８９、２９２７、２３５６、１７０５、１５９９、１５５７；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）  ２．５９（３Ｈ，ｓ，ＳＣＨ３）、３．９５（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３）、４．８７（２Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，Ｎ２−ＣＨ２）、４．９９（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，アリルＣ−Ｈトランス）、５．０８（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，アリルＣ−Ｈシス）、５．７２（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１６．８，１０．３，６．１Ｈｚ，アリルＣ−Ｈ）、６．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，Ｈ−５’）、７．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，Ｈ−３’）、７．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．２，７．７Ｈｚ，Ｈ−４’）、８．９５（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  １４．４（ＳＣＨ３）、４７．１（Ｎ２−ＣＨ２）、５４．２（ＯＣＨ３）、１０４．６（Ａｒ−Ｃ）、１０９．２（Ａｒ−Ｃ）、１１１．５（Ａｒ−Ｃ）、１１８．９（アリル−ＣＨ２）、１３２．３，１４１．９（Ａｒ−Ｃ）、１４６．０（Ａｒ−Ｃ）、１５４．９、１５８．８、１６０．４（Ａｒ−Ｃ）、１６３．３（Ａｒ−Ｃ）、１７６．２（Ａｒ−Ｃ）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ３３０．２。
【０１０７】
【化１２】
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メチル４−（４−ニトロフェニル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１２）の合成。Ｋ２ＣＯ３（１．３４ｇ、９．６６ｍｍｏｌ）及びクロロギ酸メチル（０．５６ｍｌ、７．２４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２０ｍｌ）中の１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン（１．００ｇ、４．８３ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。溶液を室温で３０分間撹拌した後、１Ｍ  ＮａＯＨ（１５ｍｌ）を添加し、混合物をＤＣＭ（２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（２０ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空で濃縮して、標的化合物を黄色の固体（１．２４ｇ、４．６７ｍｍｏｌ、９７％）として得た。Ｒｆ０．３２（１：１  ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）；Ｍ．ｐ．１６６℃〜１６８℃；ＩＲ（ｃｍ−１）２９５３、２９０４、２８５４、２３６４、１６９２、１５８８；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ３．５０〜３．５３（８Ｈ，ｂｒ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２ＮＣＯ）、３．６４（３Ｈ，ｓ，ＣＯ２ＣＨ３）、７．０２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−２／６）、８．０８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−３／５）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ４３．２（ＮＣＨ２）、４６．４（ＮＣＨ２）、５２．９（ＯＣＨ３）、１１３．１（Ａｒ−Ｃ）、１２６．２（Ａｒ−Ｃ）、１３７．５（Ａｒ−Ｃ）、１５４．９、１５５．５。
【０１０８】
【化１３】
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メチル４−（４−アミノフェニル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１０ｅ）の合成。パラジウム炭素（０．１１ｇ、１０％（ｗ／ｗ））及びギ酸アンモニウム（２．６４ｇ、４１．８ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（４０ｍｌ）中の芳香族ニトロ１２（１．１１ｇ、４．１８ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応混合物を室温で１８時間撹拌した後、セライトに通して濾過し、蒸発乾固し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）に再溶解した。有機相を水（１００ｍｌ）及びブライン（５０ｍｌ）で洗浄した後、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空で濃縮して、所望の化合物を淡いピンク色の固体（０．８９７ｇ、３．８１ｍｍｏｌ、９１％）として得た。Ｒｆ０．１９（１：１  ヘキサン：ＥｔＯ）；Ｍ．ｐ．１３０℃〜１３３℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３４２９、３３５２、３０１７、２９５２、２９１５、３８１４、２７４８、２３５９、１６８２、１６２４、１６０６、１５１５；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ２．８３〜２．８８（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２ＮＣＯ）、３．４５〜３．５０（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２ＮＣＯ）、３．６２（３Ｈ，ｓ，ＣＯ２ＣＨ３）、４．６２（２Ｈ，ｂｒ，Ｃ４−ＮＨ２）、６．５０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｈ−３／５）、６．７０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｈ−２／６）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ４４．１（ＮＣＨ２）、５１．１（ＮＣＨ２）、５２．８（ＯＣＨ３）、１１５．１（Ａｒ−Ｃ）、１１９．２（Ａｒ−Ｃ）、１４２．６（Ａｒ−Ｃ）、１４３．３（Ａｒ−Ｃ）、１５５．５（Ｃ＝Ｏ）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ２３５．２。
【０１０９】
アニリンピリジルピラゾロピリミジノン（１１ａ〜ｎ）の調製の一般的方法。ｍＣＰＢＡ（０．３４ｍｍｏｌ）を、トルエン（５ｍｌ）中のピラゾロピリミジノン９ａ〜ｃ（０．３１ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、得られる混合物を室温で１時間撹拌した。ＤＩＰＥＡ（１．６３ｍｍｏｌ）及び関連の置換アニリン１０ａ〜ｅ（０．４０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１８時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５ｍｌ）を添加し、混合物をＥｔＯＡｃ（２×１５ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（１０ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空で濃縮した。得られた残渣をシリカクロマトグラフィー（１９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）によって精製して、標的化合物を黄色の固体として得た（５５％〜７２％）。
【０１１０】
【化１４】
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２−アリル−６−（（４−（ジメチルアミノ）フェニル）アミノ）−１−（６−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリジン−２−イル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オン（１１ａ）。Ｒｆ０．３７（１９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．１７３℃〜１７５℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３３２５、３２４５、３１７２、３０５６、２９６４、２９２２、２３５７、１６６９、１６１１、１５６８、１５４２、１５１６；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  １．４７（６Ｈ，ｓ，Ｃ（ＣＨ３）２）、２．８８（６Ｈ，ｓ，Ｎ（ＣＨ３）２）、４．６８（２Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，Ｎ２−ＣＨ２）、４．８３（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ，アリルＣＨトランス）、５．００（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，アリルＣ−Ｈシス）、５．３２（１Ｈ，ｓ，ＯＨ）、５．６７（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１７．２，１０．１，６．０Ｈｚ，アリルＣ−Ｈ）、６．７３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｈ−３’’／５’’）、７．４９〜７．５７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’）、７．６０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｈ−２’’／６’’）、７．７６（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−５’）、８．０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６，７．５Ｈｚ，Ｈ−４’）、８．８１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）、１０．０８（１Ｈ，ｂｒ，Ｃ６−ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ３０．９（Ｃ（ＣＨ３）２）、４１．０（Ｎ（ＣＨ３）２）、４７．１（Ｎ２−ＣＨ２）、７２．８（Ｃ（ＣＨ３）２）、１１３．０、１１６．０、１１６．７、１１８．７、１２２．１、１２９．０、１３２．７、１３９．２、１４７．５、１５６．４、１６１．１、１６１．５、１６１．８、１６８．０；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ４４６．３。
【０１１１】
【化１５】
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２−アリル−１−（６−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリジン−２−イル）−６−（（４−（ピペリジン−１−イル）フェニル）アミノ）−１，２−ジヒドロ−３Ｈピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オン（１１ｂ）。Ｒｆ０．３８（１９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．１５８℃〜１６０℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３２６７、２９２８、２８５１、２７９０、２３６０、１６６８、１６０６、１５６７、１５３２、１５０８；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  １．４７（６Ｈ，ｓ，Ｃ（ＣＨ３）２）、１．５０〜１．５６（２Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ）２）、１．５９〜１．６８（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ）２）、３．０６〜３．１１（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ）２）、４．６８（２Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，Ｎ２−ＣＨ２）、４．８３（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１７．３Ｈｚ，アリルＣ−Ｈトランス）、５．００（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，アリルＣＨシス）、５．３３（１Ｈ，ｓ，ＯＨ）、５．６７（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１７．２，１０．１，５．８Ｈｚ，アリルＣ−Ｈ）、６．９２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｈ−３’’／５’’）、７．５３〜７．５９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’）、７．６１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｈ−２’’／６’’）、７．７６（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，Ｈ−５’）、８．０２〜８．０８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４’）、８．８３（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）、１０．１４（１Ｈ，ｂｒ，Ｃ６−ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ２４．３（ピペリジン−ＣＨ２）、２５．８（ピペリジン−ＣＨ２）、３０．９（Ｃ（ＣＨ３）２）、４７．１（Ｎ２−ＣＨ２）、５０．６（ピペリジン−ＣＨ２）、７２．８（Ｃ（ＣＨ３）２）、１１６．５、１１６．７、１１８．７、１２１．７、１３１．０、１３２．７、１３９．３、１４７．６、１４８．４、１５６．５、１６１．０、１６１．７、１６８．０；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ４８６．４。
【０１１２】
【化１６】
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２−アリル−１−（６−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリジン−２−イル）−６−（（４−モルホリノフェニル）アミノ）−１，２−ジヒドロ−３Ｈピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オン（１１ｃ）。Ｒｆ０．４０（１９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．２００℃〜２０３℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３３８３、２９６９、２８５８、２８１３、２３５８、１６５９、１６０９、１５６５、１５２５、１５１０；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  １．４７（６Ｈ，ｓ，Ｃ（ＣＨ３）２）、３．０５〜３．１１（４Ｈ，ｂｒ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ）、３．７３〜３．７８（４Ｈ，ｂｒ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ）、４．６９（２Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｎ２−ＣＨ２）、４．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．１，１．３Ｈｚ，アリルＣ−Ｈトランス）、５．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１．３Ｈｚ，アリルＣ−Ｈシス）、５．３３（１Ｈ，ｓ，ＯＨ）、５．６７（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１７．１，１０．２，５．９Ｈｚ，アリルＣ−Ｈ）、６．９４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−３／５’’）、７．５７〜７．６１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’）、７．６１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−２／６’’）、７．７６（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｈ−３’）、８．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．９，７．２Ｈｚ，Ｈ−４’）、８．８４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）、１０．１７（１Ｈ，ｂｒ，Ｃ６−ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ３０．９（Ｃ（ＣＨ３）２）、４７．１（Ｎ２−ＣＨ２）、４９．４（Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ）、６６．６（Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ）、７２．８（Ｃ（ＣＨ３）２）、１１５．７、１１６．１、１１６．８、１１８．７、１２１．７、１３１．６、１３２．７、１３９．３、１４７．６、１５６．５、１６１．０、１６１．５、１６１．６、１６８．１；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ４８８．３。
【０１１３】
【化１７】
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２−アリル−１−（６−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリジン−２−イル）−６−（（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）アミノ）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オン（ＡＺＤ１７７５）。Ｒｆ０．２５（９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．１７０℃〜１７４℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３４２０、２９６９、２８１０、２３６４、１６３９、１６０２、１５４１、１５１２；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  １．４７（６Ｈ，ｓ，Ｃ（ＣＨ３）２）、２．２３（３Ｈ，ｓ，Ｎ−ＣＨ３）、２．４２〜２．５０（４Ｈ，ｍ，Ｎ−（ＣＨ２ＣＨ２）２−ＮＭｅ）、３．０５〜３．１４（４Ｈ，ｍ，Ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−ＮＭｅ）、４．６９（２Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｎ２−ＣＨ２）、４．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．１，１．３Ｈｚ，アルケンＣ−Ｈトランス）、５．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．３，１．３Ｈｚ，アルケンＣ−Ｈシス）、５．３２（１Ｈ，ｓ，−ＯＨ）、５．６７（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１７．１，１０．３，５．９Ｈｚ，アルケンＣ−Ｈ）、６．９３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，Ｈ−３／５’’）、７．５４〜７．６０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’）、７．６１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，Ｈ−２／６’’）、７．７６（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｈ−３’）、８．０６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．１，７．３Ｈｚ，Ｈ−４’）、８．８３（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）、１０．１（１Ｈ，ｂｒ，Ｃ６−ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ３０．９（Ｃ（ＣＨ３）２）、４６．２（Ｎ−ＣＨ３）、４７．１（Ｎ２−ＣＨ２）、４８．９（ピペラジン−ＣＨ２）、５５．１（ピペラジン−ＣＨ２）、７２．８（Ｃ（ＣＨ３）２）、１１６．０、１１６．７、１１８．７、１２１．６、１３１．３、１３２．７、１３９．３、１４７．６、１５６．５、１６１．０、１６１．６、１６８．０；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ５０１．４。
【０１１４】
【化１８】
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メチル４−（４−（（２−アリル−１−（６−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）ピリジン−２−イル）−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ）フェニル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１１ｄ）。Ｒｆ０．４１（１９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．２０１℃〜２０４℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３４０９、３３８３、２９５７、２８６５、２８２０、２３５７、１６９７、１６７８、１６０８、１５６８、１５２２；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  １．４７（６Ｈ，ｓ，Ｃ（ＣＨ３）２）、３．０５〜３．１１（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２ＮＣＯ）、３．４９〜３．５５（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２ＮＣＯ）、３．６４（３Ｈ，ｓ，ＣＯ２ＣＨ３）、４．６９（２Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｎ２−ＣＨ２）、４．８３（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ，アリルＣ−Ｈトランス）、５．００（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，アリルＣ−Ｈシス）、５．３３（１Ｈ，ｓ，ＯＨ）、５．６７（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１７．０，１０．４，５．９Ｈｚ，アリルＣ−Ｈ）、６．９６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，Ｈ−３’’／５’’）、６．５７〜６．６４（３Ｈ，ｍ，Ｈ−５’／２’’／６’’）、７．７６（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，Ｈ−３’）、８．０２〜８．０８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４’）、８．８４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）、１０．１７（１Ｈ，ｂｒ，Ｃ６−ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ３０．９（Ｃ（ＣＨ３）２）、４３．８（ピペラジン−ＣＨ２）、４７．１（Ｎ２−ＣＨ２）、４９．４（ピペラジン−ＣＨ２）、５２．８（ＯＣＨ３）、７２．８（Ｃ（ＣＨ３）２）、１１６．２、１１６．８、１１８．７、１２１．７、１３２．０、１３２．７、１３９．３、１４７．４、１４７．５、１５５．５、１５６．５、１６０．９、１６１．４、１６１．６、１６８．１；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ５４５．４。
【０１１５】
【化１９】
0006692423.tif 000021
２−アリル−６−（（４−（ジメチルアミノ）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オン（１１ｅ）。Ｒｆ０．５７（１９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．１７９℃〜１８１℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３２５５、３１７８、３０７９、２７９４、２３５８、１６８５、１６２１、１５９４、１５６７、１５１７；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ２．８９（６Ｈ，ｓ，Ｎ（ＣＨ３）２）、４．６６（２Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，Ｎ２−ＣＨ２）、４．８８（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ，アリルＣ−Ｈトランス）、５．０１（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，アリルＣＨシス）、５．７０（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１７．２，１０．０，６．１Ｈｚ，アリルＣ−Ｈ）、６．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，Ｈ−３’’／５’’）、７．５２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９３９Ｈｚ，Ｈ−２’’／６’’）、７．８５（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−５’）、８．２４〜８．３５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−３’／４’）、８．８５（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）、１０．２１（１Ｈ，ｂｒ，Ｃ６−ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ４０．９（Ｎ（ＣＨ３）２）、４８．０（Ｎ２−ＣＨ２）、１１２．９，１１８．３，１１９．２，１２１．２，１２１．７（ｑ，ＪＣＦ＝２７３．８Ｈｚ，ＣＦ３）、１２２．４（ｑ，ＪＣＦ＝４．８Ｈｚ，Ａｒ−Ｃ）、１２８．７、１３２．５、１４１．１、１４５．１（ｑ，ＪＣＦ＝３５．４Ｈｚ，Ａｒ−Ｃ）、１４７．７、１４９．４、１５６．７、１６１．６、１６１．８、１６２．５；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ４５６．２。
【０１１６】
【化２０】
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２−アリル−６−（（４−（ピペリジン−１−イル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オン（１１ｆ）。Ｒｆ０．６５（１９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．１８２℃〜１８４℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３２６１、３１８４、２９３２、２８５２、２８０９、２３５８、１６７０、１６２１、１５９３、１５３９、１５０９；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  １．５０〜１．５７（２Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ）２）、１．６０〜１．６７（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ）２）、３．０７〜３．１３（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ）２）、４．６６（２Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｎ２−ＣＨ２）、４．８８（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ，アリルＣ−Ｈトランス）、５．０１（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，アリルＣ−Ｈシス）、５．７１（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１７．２，１０．３，５．９Ｈｚ，アリルＣ−Ｈ）、６．９５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，Ｈ−３’’／５’’）、７．５４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，Ｈ−２’’／６’’）、７．８５（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，Ｈ−５’）、８．２２〜８．３０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３’）、８．３１〜８．３８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４’）、８．８７（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）、１０．２７（１Ｈ，ｂｒ，Ｃ６−ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ２４．３（ピペリジン−ＣＨ２）、２５．８（ピペリジン−ＣＨ２）、４８．０（Ｎ２−ＣＨ２）、５０．５（ピペリジン−ＣＨ２）、１１６．５、１１８．４、１１９．２、１２１．３、１２１．７（ｑ、ＪＣＦ＝２７３．５Ｈｚ，ＣＦ３）、１２２．０、１３０．６、１３２．４、１４１．２、１４５．１（ｑ，ＪＣＦ＝３４．２Ｈｚ，Ａｒ−Ｃ）、１４８．６、１４９．３、１５６．８、１６１．５、１６１．７、１６２．４；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ４９６．３。
【０１１７】
【化２１】
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２−アリル−６−（（４−モルホリノフェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オン（１１ｇ）。Ｒｆ０．５１（１９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．２１５℃〜２１７℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３２４６、３１８３、３０８０、２９５８、２８５４、２３５９、１６８５、１６１９、１５９４、１５１１；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ３．０７〜３．１２（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ）、３．７３〜３．７８（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ）、４．６６（２Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，Ｎ２−ＣＨ２）、４．８８（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝４０１７．１Ｈｚ，アリルＣ−Ｈトランス）、５．０１（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，アリルＣ−Ｈシス）、５．７１（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１７．１，１０．４，６．５Ｈｚ，アリルＣＨ）、６．９７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，Ｈ−３’’／５’’）、７．５８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，Ｈ−２’’／６’’）、７．８６（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｈ−５’）、８．２４〜８．３８（２Ｈ，ｍ，Ｈ−３’／４’）、８．８８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）、１０．２９（１Ｈ，ｂｒ，Ｃ６−ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ４８．０（Ｎ２−ＣＨ２）、４９．３（Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ）、６６．６（Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ）、１１５．７、１１８．４、１１９．２、１２１．３、１２１．６（ｑ，ＪＣＦ＝２７４．３Ｈｚ，ＣＦ３）、１２２．１、１３１．３、１３２．４、１４１．２、１４５．１（ｑ，ＪＣＦ＝３４．９Ｈｚ）、１４７．９、１４９．４、１５６．８、１６１．５、１６１．７、１６２．４；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ４９８．３。
【０１１８】
【化２２】
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２−アリル−６−（（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）アミノ）−１−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オン（１１ｈ）。Ｒｆ０．３９（９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．１７６℃〜１８０℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３２６１、３１８５、３０８６、２９２６、２８３７、２７９２、２３４３、１６７１、１６２２、１５４０、１５１０；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ２．２３（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ３）、２．４５〜２．４９（４Ｈ，ｍ，Ｎ−（ＣＨ２ＣＨ２）２−ＮＭｅ）、３．０９〜３．１４（４Ｈ，ｍ，Ｎ−（ＣＨ２ＣＨ２）２−ＮＭｅ）、４．６６（２Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｎ２−ＣＨ２）、４．８８（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，アリルＣ−Ｈトランス）、５．０１（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，アリルＣ−Ｈシス）、５．７１（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１６．８，１０．４，６．３Ｈｚ，アリルＣ−Ｈ）、６．９６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，Ｈ−３’’／５’’）、７．５６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，Ｈ−２’’／６’’）、７．８５（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ−５’）、８．２４〜８．４０（２Ｈ，ｍ，Ｈ−３’／４’）、８．８７（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）、１０．２７（１Ｈ，ｂｒ，Ｃ６−ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ４６．２（Ｎ−ＣＨ３）、４８．０（Ｎ２−ＣＨ２）、４８．９（ピペラジン−ＣＨ２）、５５．１（ピペラジン−ＣＨ２）、１１５．９、１１８．４、１１９．２、１２１．３、１２１．７（ｑ，ＪＣＦ＝２７４．３Ｈｚ，ＣＦ３）、１２１．９、１２３．０、１３０．９、１３２．５、１４１．２、１４５．１（ｑ，ＪＣＦ＝３５．０Ｈｚ，Ａｒ−Ｃ）、１４７．９、１４９．３、１５６．８、１６１．５、１６１．７、１６２．４；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ５１１．３。
【０１１９】
【化２３】
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メチル４−（４−（（２−アリル−３−オキソ−１−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ）フェニル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１１ｉ）。Ｒｆ０．６１（１９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．１６４℃〜１６７  ４１℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３２５６、３０８０、２９５４、２９１８、２８４９、２３５８、１６８３、１６０８、１５６９、１５３８、１５１１；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ３．０７〜３．１２（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２ＮＣＯ）、３．５０〜３．５５（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２ＮＣＯ）、３．６４（３Ｈ，ｓ，ＣＯ２ＣＨ３）、４．６６（２Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｎ２−ＣＨ２）、４．８８（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１７．０Ｈｚ，アリルＣ−Ｈトランス）、５．０１（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，アリルＣ−Ｈシス）、５．７１（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１７．０，１０．１，５．９Ｈｚ，アリルＣ−Ｈ）、６．９９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｈ−３’’／５’’）、７．５８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｈ−２’’／６’’）、７．８６（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ−５’）、８．２４〜８．３１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３’）、８．３２〜８．３９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４’）、８．８８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）、１０．３０（１Ｈ，ｂｒ，Ｃ６−ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ４３．８（ピペラジン−ＣＨ２）、４８．０（Ｎ２−ＣＨ２）、４９．３（ピペラジン−ＣＨ２）、５２．９（ＯＣＨ３）、１１６．７、１１８．４、１１９．２、１２１．３、１２１．７（ｑ，ＪＣＦ＝２７４．２Ｈｚ，ＣＦ３）、１２２．０、１３１．６、１３２．５、１４１．２、１４５．２（ｑ，ＪＣＦ＝３４．７Ｈｚ，Ａｒ−Ｃ）、１４７．７、１４９．３、１５５．５、１５６．８、１６１．５、１６１．７、１６２．３；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ５５５．３。
【０１２０】
【化２４】
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２−アリル−６−（（４−（ジメチルアミノ）フェニル）アミノ）−１−（６−メトキシピリジン−２−イル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オン（１１ｊ）。Ｒｆ０．６７（１９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．１２６℃〜１２８℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３２４５、３１７０、２９９０、２７９７、２３５８、１６７４、１６１３、１５６８、１５４２、１５１８；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ２．８８（６Ｈ，ｓ，Ｎ（ＣＨ３）２）、３．８９（３Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ３）、４．６３〜４．６８（２Ｈ，ｍ，Ｎ２−ＣＨ２）、４．９４（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ，アルケンＣ−Ｈトランス）、５．０４（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，アルケンＣ−Ｈシス）、５．６９（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１７．１，１０．４，６．０Ｈｚ，アルケンＣ−Ｈ）、６．７２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−３’’／５’’）、６．７９（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，Ｈ−４’）、７．４６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−２’／６’）、７．５１〜７．５９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３’）、７．９５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６，７．５Ｈｚ，Ｈ−４’）、８．８１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）、１０．０９（１Ｈ，ｂｒ，Ｃ６−ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ４１．０（Ｎ（ＣＨ３）２）、４７．４（Ｎ２−ＣＨ２）、５４．１（ＯＣＨ３）、１０８．１、１１３．０、１１８．８、１２２．０、１２９．１、１３２．６、１４１．５、１４７．１、１４７．５、１５６．４、１６１．６、１６２．０、１６３．２；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ４１８．２。
【０１２１】
【化２５】
0006692423.tif 000027
２−アリル−１−（６−メトキシピリジン−２−イル）−６−（（４−（ピペリジン−１−イル）フェニル）アミノ）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オン（１１ｋ）。Ｒｆ０．６６（１９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．１６６℃〜１６７℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３２６４、３１７９、３０６７、２９２９、２８５１、２８１０、２３５９、１６７２、１６０７、１５６６、１５３７、１５０９；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  １．４９〜１．５６（２Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ）２）、１．５９〜１．６６（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ）２）、３．０５〜３．１１（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ）２）、３．８９（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３）、４．６４〜４．６８（２Ｈ，ｍ，Ｎ２−ＣＨ２）、４．９３（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１７．０Ｈｚ，アリルＣ−Ｈトランス）、５．０４（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，アリルＣ−Ｈシス）、５．７０（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１７．０，１０．４，５．９Ｈｚ，アリルＣ−Ｈ）、６．８０（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｈ−５’）、６．９０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｈ−３’’／５’’）、７．４３〜７．４８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３’）、７．５４〜７．６１（２Ｈ，ｍ，Ｈ−２’’／６’’）、７．９４〜８．０１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４’）、８．８２（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）、１０．１５（１Ｈ，ｂｒ，Ｃ６−ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ２４．３（ピペラジン−ＣＨ２）、２５．８（ピペラジン−ＣＨ２）、４７．４（Ｎ２−ＣＨ２）、５０．６（ピペラジン−ＣＨ２）、５４．１（ＯＣＨ３）、１０８．３、１１６．５、１１８．８、１２１．６、１３１．０、１３２．６、１４１．５、１４７．０、１４８．４、１５６．４、１６１．５、１６１．９、１６３．３；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ４５８．３。
【０１２２】
【化２６】
0006692423.tif 000028
２−アリル−１−（６−メトキシピリジン−２−イル）−６−（（４−モルホリノフェニル）チオ）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オン（１１ｌ）。Ｒｆ０．５５（１９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．１９０℃〜１９２℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３２７２、３１８５、３０８２、２９７７、２９４７、２８４８、２３６０、１６８６、１６０３、１５６７、１５４０、１５１０；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）  ３．１９〜３．２４（４Ｈ，ｍ，Ｎ−（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ）、３．８８〜３．９２（４Ｈ，ｍ，Ｎ−（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ）、３．９７（３Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ３）、４．８２（２Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｎ２−ＣＨ２）、５．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．１，１．３Ｈｚ，アルケンＣ−Ｈトランス）、５．０７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１．３Ｈｚ，アルケンＣ−Ｈシス）、５．７３（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１７．１，１０．２，６．３Ｈｚ，アルケンＣ−Ｈ）、６．７０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．１，０．５Ｈｚ，Ｈ−４’）、６．９２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，Ｈ−３’’／５’’）、７．４１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６，０．４Ｈｚ，Ｈ−３’）、７．５１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，Ｈ−２’／６’）、７．７４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．１，７．６Ｈｚ，Ｈ−４’）、８．８４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ４７．３（Ｎ２−ＣＨ２）、４９．４（Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ）、５４．１（ＯＣＨ３）、６６．６（Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ）、１０８．３、１１５．７、１１８．８、１２１．６、１３１．６、１３２．６、１４１．５、１４７．０、１４７．６、１５６．５、１６１．５、１６１．９、１６３．３；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ４６０．３。
【０１２３】
【化２７】
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２−アリル−１−（６−メトキシピリジン−２−イル）−６−（（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）チオ）−１，２−ジヒドロ−３Ｈピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オン（１１ｍ）。Ｒｆ０．４０（９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．７２℃〜７６℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３２５５、３１８１、３０６５、２９２９、２８２１、２７９６、２３５９、１６９２、１６７０、１６１０、１５３８、１５１０；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）  ２．３９（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ３）、２．６０〜２．６５（４Ｈ，ｍ，Ｎ−（ＣＨ２ＣＨ２）２−ＮＭｅ）、３．１９〜３．２４（４Ｈ，ｍ，Ｎ−（ＣＨ２ＣＨ２）２−ＮＭｅ）、３．９６（３Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ３）、４．８１（２Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｎ２−ＣＨ２）、５．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０，１．４Ｈｚ，アルケンＣ−Ｈトランス）、５．０６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１．４Ｈｚ，アルケンＣ−Ｈシス）、５．７３（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１７．０，１０．２，６．３Ｈｚ，アルケンＣ−Ｈ）、６．６９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．２，０．４Ｈｚ，Ｈ−４’）、６．９３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−３’’／５’’）、７．４１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．７，０．４Ｈｚ，Ｈ−３’）、７．４９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−２’／６’）、７．７４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．２，７．７Ｈｚ，Ｈ−４’）、８．８４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ４６．２（Ｎ−ＣＨ３）、４７．４（Ｎ２−ＣＨ２）、４９．０（ピペラジン−ＣＨ２）、５４．１（ＯＣＨ３）、５５．１（ピペラジン−ＣＨ２）、１０８．２、１１５．９、１１８．８、１２１．６、１３１．３、１３２．６、１４１．５、１４７．０、１４７．６、１５６．４、１６１．５、１６１．９、１６３．３；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ４７３．３。
【０１２４】
【化２８】
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メチル４−（４−（（２−アリル−１−（６−メトキシピリジン−２−イル）−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ）フェニル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１１ｎ）。Ｒｆ０．６６（１９：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；Ｍ．ｐ．１９７℃〜２００℃；ＩＲ（ｃｍ−１）３２９３、３１９０、２８８８、２８５０、２８２４、２３６１、１６９９、１６６０、１６０１、１５６７、１５３３、１５１０；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ３．０３〜３．１０（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２ＮＣＯ）、３．４８〜３．５５（４Ｈ，ｍ，Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２ＮＣＯ）、３．６３（３Ｈ，ｓ，ＣＯ２ＣＨ３）、３．８９（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３）、４．６３〜４．６９（２Ｈ，ｍ，Ｎ２−ＣＨ２）、４．９４（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ，アリルＣ−Ｈトランス）、５．０４（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，アリルＣ−Ｈシス）、５．７０（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ＝１７．２，１０．３，５．８Ｈｚ，アリルＣ−Ｈ）、６．８１（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｈ−５’）、６．９５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｈ−３’’／５’’）、７．４５（１Ｈ，ｄａｐｐ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−３’）、７．５６〜７．６５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−２’’／６’’）、７．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．５，７．３Ｈｚ，Ｈ−４’）、８．８４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）、１０．１８（１Ｈ，ｂｒ，Ｃ６−ＮＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５  ４４ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ４３．８（ピペラジン−ＣＨ２）、４７．３（Ｎ２−ＣＨ２）、４９．４（ピペラジン−ＣＨ２）、５２．８（ＣＯ２ＣＨ３）、５４．１（ＯＣＨ３）、１０８．３、１１０．８、１１５．１、１１６．８、１１８．８、１１９．２、１２１．７、１３２．０、１３２．６、１４１．５、１４７．０、１４７．４、１５５．５、１５６．５、１６１．５、１６１．８、１６３．３；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  ｍ／ｚ  ５１７．３。
【０１２５】
開示の化合物、組成物及び方法の原理が適用され得る多くの考え得る実施形態に鑑みて、例示の実施形態が好ましい例にすぎず、本発明の範囲を限定するものとみなすべきではないと認識されたい。
【図１Ａ】
0006692423.tif 000033
【図１Ｂ】
0006692423.tif 000034
【図１Ｃ】
0006692423.tif 000035
【図２Ａ】
0006692423.tif 000036
【図２Ｂ】
0006692423.tif 000037
【図２Ｃ】
0006692423.tif 000038
【図３Ａ】
0006692423.tif 000039
【図３Ｂ】
0006692423.tif 000040
【図４Ａ】
0006692423.tif 000041
【図５Ａ】
0006692423.tif 000042
【図５Ｂ】
0006692423.tif 000043
【図６Ａ】
0006692423.tif 000044
【図６Ｂ】
0006692423.tif 000045
【図７Ａ】
0006692423.tif 000046
【図７Ｂ】
0006692423.tif 000047
【図８Ａ】
0006692423.tif 000048
【図８Ｂ】
0006692423.tif 000049
【図８Ｃ】
0006692423.tif 000050
【図８Ｄ】
0006692423.tif 000051
【図９Ａ】
0006692423.tif 000052
【図９Ｂ】
0006692423.tif 000053
【図１０Ａ】
0006692423.tif 000054
【図１０Ｂ】
0006692423.tif 000055
【図１０Ｃ】
0006692423.tif 000056
【図１０Ｄ】
0006692423.tif 000057
【図１１Ａ】
0006692423.tif 000058
【図１１Ｂ】
0006692423.tif 000059
【図１１Ｃ】
0006692423.tif 000060
【図１１Ｄ】
0006692423.tif 000061
【図１１Ｅ】
0006692423.tif 000062
【図１２Ａ】
0006692423.tif 000063
【図１２Ｂ】
0006692423.tif 000064
【図１２Ｃ】
0006692423.tif 000065
【図１３Ａ】
0006692423.tif 000066
【図１３Ｂ】
0006692423.tif 000067