(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
コマモナス（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ）属に属し、農業上有用な植物体内に共生して該植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する能力を有する細菌を、該植物に人為的に感染させる工程を含む、但し、前記細菌がＣｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．  ＭＹＫ１０２（受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−０１７６９）、Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．  ＭＹＫ１０３（受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−０１７７０）、或いは、農業上有用な植物体内に共生して該植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する能力を有する、前記ＭＹＫ１０２又はＭＹＫ１０３の変異株である、農業上有用な植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する方法。
【請求項２】
農業上有用な植物が、アブラナ科植物、キク科植物、マメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、ユリ科植物、セリ科植物、及びウリ科植物からなる群から選択される植物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
コマモナス（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ）属に属し、農業上有用な植物体内に共生して該植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する能力を有する細菌を有効成分として含有する、但し、前記細菌がＣｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．  ＭＹＫ１０２（受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−０１７６９）、Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．  ＭＹＫ１０３（受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−０１７７０）、或いは、農業上有用な植物体内に共生して該植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する能力を有する、前記ＭＹＫ１０２又はＭＹＫ１０３の変異株である、農業上有用な植物の塩耐性及び／又は浸透圧耐性を増加させるための微生物製剤。
【請求項４】
農業上有用な植物が、アブラナ科植物、キク科植物、マメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、ユリ科植物、セリ科植物、及びウリ科植物からなる群から選択される植物である、請求項３に記載の微生物製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はエンドファイトであるコマモナス（Comamonas）属細菌を農業上有用な植物に人為的に感染させることにより、これらの植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する方法、並びに、コマモナス（Comamonas）属細菌を含む塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与するための微生物製剤等に関する。
【背景技術】
【０００２】
作物は様々な環境ストレスにさらされており、環境ストレスによる負荷が大きいと、収量の減少等が生じる。環境ストレスの一例として、土壌中の塩濃度が高まることによりもたらされる塩害が挙げられる。塩害は主に灌漑農業地において排水不良により塩類が土壌中に蓄積することで発生するが、海岸地域における海水の流入や、ハウス栽培等において長期の施肥に起因する塩類の集積によって生じる場合もある。塩害は世界規模で大きな問題となっており、塩害による作物生産量の減少は世界の経済損失として年間273億ドルに達すると報告されている（非特許文献１）。
【０００３】
塩害への対策には、灌漑耕作地の排水管理の最適化が重要な技術の一つである。しかし、排水管理の最適化には大型の土木機械や大量の水資源を必要とする場合が多く、塩害を解消するまでに多大な経費と時間がかかる。また、作物自身の塩耐性を向上させるために、交配育種及び突然変異体の選抜による品種改良、並びに遺伝子導入及び遺伝子組み換えによる強化株の作出が試みられている。しかしながら、交配育種や選抜による品種改良は、望ましい形質を有する品種を得るまでに多大な時間と労力が必要であり、遺伝子操作により得られた食用作物の商業的栽培は、現在のところ日本では行われていない。
したがって、植物の作物の塩耐性を向上させる簡便な方法が求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】M. Qadir et al., Natural Resource Forum, 2014, 38:282-295
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、微生物学的な手段によって、簡便に農業上有用な植物の塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、以下の態様を包含する。
（１）コマモナス（Comamonas）属に属し、農業上有用な植物体内に共生して該植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する能力を有する細菌を、該植物に人為的に感染させる工程を含む、農業上有用な植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する方法。
（２）農業上有用な植物が、アブラナ科植物、キク科植物、マメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、ユリ科植物、セリ科植物、及びウリ科植物からなる群から選択される植物である、（１）に記載の方法。
（３）前記細菌が、配列番号1に示す塩基配列と97%以上の同一性を有する塩基配列を含む16S rDNAを有する、（１）又は（２）に記載の方法。
（４）前記細菌がComamonas sp. MYK102（受託番号NITE P-01769）、又は、農業上有用な植物体内に共生して該植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する能力を有する、その変異株である、（１）〜（３）のいずれかに記載の方法。
（５）前記細菌が、配列番号2に示す塩基配列と97%以上の同一性を有する塩基配列を含む16S rDNAを有する、（１）又は（２）に記載の方法。
（６）前記細菌がComamonas sp. MYK103（受託番号NITE P-01770）、又は、農業上有用な植物体内に共生して該植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する能力を有する、その変異株である、（１）、（２）、又は（５）に記載の方法。
（７）コマモナス（Comamonas）属に属し、農業上有用な植物体内に共生して該植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する能力を有する細菌を有効成分として含有する、農業上有用な植物の塩耐性及び／又は浸透圧耐性を増加させるための微生物製剤。
（８）農業上有用な植物が、アブラナ科植物、キク科植物、マメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、ユリ科植物、セリ科植物、及びウリ科植物からなる群から選択される植物である、（７）に記載の微生物製剤。
（９）前記細菌がComamonas sp. MYK102（受託番号NITE P-01769）、又は、農業上有用な植物体内に共生して該植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する能力を有する、その変異株である、（７）又は（８）に記載の微生物製剤。
（１０）前記細菌がComamonas sp. MYK103（受託番号NITE P-01770）、又は、農業上有用な植物体内に共生して該植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する能力を有する、その変異株である、（７）又は（８）に記載の微生物製剤。
【０００７】
本明細書において「コマモナス（Comamonas）属細菌」は、農業上有用な植物体内に共生して該植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する能力を有する、エンドファイト細菌を指す。一般に、「エンドファイト」なる用語は、植物に共生する微生物をいう。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、微生物学的な手段、すなわちエンドファイトとして使用可能なComamonas属細菌（例えばMYK102株又はMYK103株）によって、農業上有用な植物に、簡便に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与することが可能となる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
１.細菌
本発明に用いることができる細菌は、コマモナス（Comamonas）属に属する細菌であって、農業上有用な植物、例えば、アブラナ科植物、キク科植物、マメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、ユリ科植物、セリ科植物、及びウリ科植物からなる群から選択される植物の体内に共生して、該植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する能力を有する細菌であれば特に限定されない。
【００１０】
本明細書では、コマモナス（Comamonas）属細菌は、上記の一方又は両方の能力を植物体に付与することができるエンドファイト細菌であり、自然界から単離された細菌だけでなく、そのような細菌に突然変異処理を施して産生された変異体も包含する。
【００１１】
上記細菌の具体例として、Comamonas属細菌である、Comamonas sp. MYK102（受託番号 NITE P-01769；以下では、単に「MYK102株」又は「NITE P-01769株」と称することもある）又はComamonas sp. MYK103（受託番号 NITE P-01770；以下では、単に「MYK103株」又は「NITE P-01770株」と称することもある）、或いは、上記の一方又は両方の能力を有する、その変異株が挙げられる。
【００１２】
上記のComamonas sp. MYK102及びComamonas sp. MYK103は、野生のキクから単離された株である。Comamonas sp. MYK102及びComamonas sp. MYK103は、2013年12月27日に、国内寄託機関である、独立行政法人製品評価技術基盤機構、特許微生物寄託センター（〒292-0818千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8）に本出願人により寄託され、それぞれ、受託番号 NITE P-01769及びNITE P-01770が付与されている。なお、「NITE P-01769」及び「NITE P-01770」の受託証中の微生物の識別の表示は、当初それぞれ「Delftia sp. MYK102」及び「Delftia sp. MYK103」となっていたが、2014年2月28日付で表示の変更が認められ、それぞれ「Comamonas sp. MYK102」及び「Comamonas sp. MYK103」に修正された。
【００１３】
このMYK102株及びMYK103株は、種々の細菌の属及び種について、16SrDNA遺伝子の部分配列（本件の場合、Comamonas sp. MYK102（受託番号NITE P-01769）株については配列番号1、及びComamonas sp. MYK103（受託番号NITE P-01770）株については配列番号2）を用いて、相同性検索を行った。その結果、Comamonas sp. MYK102については、相同性の高い上位3種についてComamonas koreensis strain IHB B 1392と99%、Comamonas sp. D1と99%、Comamonas sp. TWNG17と99%の高い配列同一性が確認されたことから、Comamonas属に属する細菌であると同定された。また、Comamonas sp. MYK102は、Delftia sp. TS40とも97%の配列相同性を示した。
【００１４】
同様に、Comamonas sp. MYK103については、相同性の高い上位3種についてComamonas koreensis strain IHB B 1392と99%、Comamonas sp. D1と99%、Comamonas sp. TWNG17と99%の高い配列同一性が確認されたことから、Comamonas属に属する細菌であると同定された。また、Comamonas sp. MYK103は、Delftia sp. TS40とも97%の配列相同性を示した。
【００１５】
また、MYK102株は、表１に示す基質資化性を、MYK103株は表２に示す基質資化性を、それぞれ有している。
【００１６】
【表１】
0006748469.tif 000002
【００１７】
【表２】
0006748469.tif 000003
【００１８】
本発明で使用できる細菌としては、新規Comamonas属細菌であるMYK102株又はMYK103株と同等の上記の植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する能力を有する細菌、例えば、Comamonas属に属し、上記のいずれか１つ又は複数の能力を有し、かつ、配列番号1又は配列番号2に示す塩基配列又は該塩基配列と等価な配列を少なくとも一部分に含む16SrDNAを有する細菌、並びにComamonas属に属し、上記の一方又は両方の能力を有し、かつ、MYK102株又はMYK103株と実質的に同等の上記の基質資化性を有する細菌が挙げられるがこれらには限定されない。ここで、配列番号1又は2に示す塩基配列と等価な配列とは、配列番号1又は2に示す塩基配列と好ましくは97%以上、98%以上、又は99%以上、さらに好ましくは99.5%以上、99.7%以上、99.8%以上、又は99.9%以上の同一性を有する塩基配列を意味する。同一性の値は、複数の塩基配列間の同一性を演算するソフトウェア（例えば、FASTA、DANASYS、及びBLAST）を用いてデフォルトの設定で算出した値を示す。また、実質的に同等の基質資化性を有するとは、MYK102株又はMYK103株の基質資化性と比べて、表１又は表２に記載の資化される基質のうち、資化されない基質が、数個以下、例えば3個以下、2個以下、又は1個であることを意味する。
【００１９】
さらにまた、MYK102株又はMYK103株が人為的に突然変異誘発処理されて産生されたその変異株であって、農業上有用な植物、例えばアブラナ科植物、キク科植物、マメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、ユリ科植物、セリ科植物、及びウリ科植物からなる群から選択される植物の体内に共生して、該植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する能力を有する変異株もまた、本発明で使用することができる。
【００２０】
本発明で使用できるComamonas属細菌を自然界から分離するときには、農業上有用な植物の根、茎、葉等の植物体構成部から、該植物に共生する細菌類を培養により分離し、上記の能力の一方又は両方について、上記の配列番号1又は配列番号2に示す塩基配列との配列同一性について、及び／又は、上記の基質資化性について、選抜試験を行い得る。
【００２１】
また、突然変異誘発処理を行う場合には、MYK102株又はMYK103株に対し任意の適当な変異原を用いて突然変異が行われ得る。
【００２２】
ここで、「変異原」なる用語は、広義の意味を有し、例えば変異原作用を有する薬剤のみならずUV照射等の高エネルギー線照射のような変異原作用を有する処理も含むものとする。適当な変異原の例として、エチルメタンスルホネート、UV照射、ガンマ線照射、X線照射、重イオンビーム照射、N−メチル−N'−ニトロ−N−ニトロソグアニジン、ブロモウラシルのようなヌクレオチド塩基類似体、及びアクリジン類が挙げられるが、他の任意の効果的な変異原もまた使用され得る。
【００２３】
或いは、細菌に変異を導入する他の手段には、遺伝子組換え法を利用する方法がある。
【００２４】
本発明に用いられる細菌は、振とう培養等の通常の培養法により、Comamonas属細菌について通常使用されるような条件下で培養されうる。培養に用いる培地としては炭素源としてグルコース、シュークロース、デンプン、デキストリン等の糖類を、窒素源として硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩等の無機窒素源、又は、酵母エキス、コーン・スティープ・リーカー、肉エキス、小麦胚芽、ポリペプトン、サトウキビ絞り粕（バカス）、ビールカス、大豆粉、米糠、魚粉等の有機窒素源を、無機塩としてリン酸一カリ、硫酸マグネシウム、硫酸マンガン、硫酸第一鉄等の、リン、カリウム、マンガン、マグネシウム、鉄等を含む塩類を、それぞれ含有する合成又は天然の培地が挙げられる。培養温度は、通常、20〜37℃、好ましくは27〜32℃で、12〜48時間、好気的条件下で行うことができる。
【００２５】
本発明の方法には、細菌の培養液をそのまま使用することができるが、細菌の培養液を膜分離、遠心分離、濾過分離等の方法により分離した、細菌の高濃度物を用いることもできる。
【００２６】
本発明の方法ではまた、細菌の培養液を乾燥させたものを使用することができる。また、細菌の培養液を活性炭、珪藻土、タルク、ゼオライト、ピートモス、パーライト、ベントナイト、モンモリナイト、バーミュキュライト等の多孔吸着体に吸着させ乾燥させたものを使用することができる。多孔吸着体は、１種類でもよいし、複数の担体を組合せて用いてもよい。乾燥方法は通常の方法でよく、例えば凍結乾燥、減圧乾燥でよい。これらの乾燥物は乾燥後さらにボールミル等の粉砕手段で粉砕されてもよい。
【００２７】
細菌は、上記の培養液、高濃度物又は乾燥物としてそれ自体単独で本発明の用途に用いることができるが、更なる他の任意成分と組み合わせて通常の微生物製剤と同様の形態（例えば粉剤、水和剤、粒剤、乳剤、液剤、懸濁液、フロアブル剤、塗布剤等の形態）に製剤化して用いることもできる。組み合わせて使用することができる任意成分としては例えば固体担体、補助剤のような植物への適用が許容される材料が挙げられる。
【００２８】
２．農業上有用な植物
本発明の方法で使用可能な対象植物は、以下のものに限定されないが、例えばアブラナ科植物、キク科植物、マメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、ユリ科植物、セリ科植物及びウリ科植物からなる群から選択される、好ましくはキク科植物、マメ科植物、ナス科植物、ユリ科植物、セリ科植物及びウリ科植物からなる群から選択される、農業上有用な植物が挙げられる。
【００２９】
本明細書で使用される「農業上有用な植物」は、例えば野菜類、穀類植物等の作物、果樹等の農業において生産対象となる植物を指す。
【００３０】
アブラナ科植物としては、例えばアブラナ、カブ、チンゲンサイ、ノザワナ、カラシナ、タカナ、コブタカナ、水菜、コールラビー、ルッコラ、クレソン、タアサイ、カリフラワー、キャベツ、ケール、ハクサイ、コマツナ、ダイコン、ハツカダイコン、ブロッコリー、メキャベツ、ワサビ、セイヨウワサビ、シロイヌナズナが挙げられる。
【００３１】
キク科植物としては、例えばレタス、サニーレタス、シュンギク、キク等が挙げられる。
【００３２】
マメ科植物としては、例えばダイズ、アズキ、ラッカセイ、インゲンマメ、エンドウマメ、ハナマメ、ソラマメ、ササゲ、ヒヨコマメ、リョクトウ、レンズマメ、ライマメ、バンバラマメが挙げられる。
【００３３】
イネ科植物としては、例えばイネ、コムギ、オオムギ、ライムギ、ライコムギ、ハトムギ、ソルガム、エンバク、トウモロコシ、サトウキビ、アワ、ヒエ等の穀類が挙げられる。イネ科植物としてはさらに、例えばシバ、バッファローグラス、バミューダグラス、ウィーピンググラス、センチピードグラス、カーペットグラス、ダリスグラス、キクユグラス、セントオーガスチングラス等の飼料又は牧草が挙げられる。
【００３４】
ナス科植物としては、例えばナス、トマト、ピーマン、シシトウ、トウガラシ、ジャガイモ、クコ、パプリカ、ハラペーニョ、ハバネロ等が挙げられる。
【００３５】
ユリ科植物としては、例えばタマネギ、ネギ、ラッキョウ、ニンニク、ニラ、アサツキ、ユリ、アスパラガス、エシャロット、ワケギ等が挙げられる。
【００３６】
セリ科植物としては、ニンジン、ミツバ、パセリ、セロリ、セリ、アシタバ、スープセロリ、チャーベル、フェンネル等が挙げられる。
【００３７】
ウリ科植物としては、例えばキュウリ、カボチャ、ゴーヤ、スイカ、ズッキーニ、トウガン、ヘチマ、メロン、ユウガオ等が挙げられる。
【００３８】
３．塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与するための方法
一態様において、本発明は、コマモナス（Comamonas）属に属し、該植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する能力を有する細菌を、該植物に人為的に感染させる工程を含む、農業上有用な植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する方法を提供する。
【００３９】
本明細書において、「植物に塩耐性を付与する」とは、塩ストレスの存在下で、塩ストレスによる生育（生長）阻害又は収量低下を低減することを指す。同様に、本明細書において、「植物に浸透圧耐性を付与する」とは、浸透圧ストレスの存在下で、浸透圧ストレスによる生育（生長）阻害又は収量低下を低減することを指す。本発明の細菌の接種によって塩耐性及び／又は浸透圧耐性が付与されたか否かは、塩ストレス及び／又は浸透圧ストレスの存在下で、本発明の細菌を接種した植物と、本発明の細菌を接種していない対照の生育（生長）又は収量を比較することで調べることができる。
【００４０】
本明細書において、「塩ストレス」とは、栽培媒体（例えば、土壌、及び固体又は液体培地等）中の高い塩類濃度により、植物の生育（生長）又は収量が阻害される環境ストレスを意味する。塩ストレスの原因となる塩の種類は特に限定されず、例えば、NaCl、KCl、MgCl2、及びCaCl2等の塩酸塩、Na2SO4、MgSO4、及びCaSO4等の硫酸塩が挙げられる。塩ストレスへの感受性は植物により異なり得るが、本発明の方法により耐性を付与することができる具体的な塩ストレスの程度は、当業者であれば植物の科や種を考慮して適宜決定することができる。例えば、塩ストレスは、50 mM〜600 mMの濃度のNaClに1時間〜数週間継続的に曝露されたときに生じるストレスであってよい。塩ストレスは主に、高塩濃度による細胞外液の浸透圧の上昇に起因する吸水の低下、及び塩による生体内の酵素反応等の阻害の二つの機構により植物の生育を阻害することが知られている。
【００４１】
本明細書において、「浸透圧ストレス」は、細胞内外の溶液の浸透圧差により植物の生育（生長）又は収量が阻害される環境ストレスを意味する。浸透圧ストレスは、高浸透圧の外液により生じる高浸透圧ストレスであっても低浸透圧の外液により生じる低浸透圧ストレスであってもよいが、好ましくは高浸透圧ストレスである。浸透圧ストレスの原因となる溶質の種類は特に限定されず、例えば、上記の塩類及びグルコース等の糖等が挙げられる。浸透圧ストレスへの感受性は植物により異なり得るが、本発明の方法により耐性を付与することができる具体的な浸透圧ストレスの程度は、当業者であれば植物の科や種を考慮して適宜決定することができる。例えば、浸透圧ストレスは、50 mM〜600 mMの濃度のNaCl に1時間〜数週間継続的に曝露されたときに生じるストレスであってよい。
【００４２】
本発明の方法は、例えば、乾燥地域又は海岸近くの地域で生育する植物、及び海水が流入した土壌又は長期栽培等に起因して塩類が集積した土壌等で生育する植物に対して実施することができる。
【００４３】
植物への施用方法としては、種子コート、幼植物への潅注、塗布、又は噴霧処理する方法等が挙げられる。特に、種子又は植物体に任意に人為的に傷を付け、菌液を噴霧処理、塗布する方法が好ましい。その他の施用条件としては播種時、育苗期等圃場定植前に施用することが望ましい。また、さらに圃場栽培中に植物、場合により植物根部周囲の土壌、に噴霧処理することで効果の高発現が期待できる。
【００４４】
1つの例として、本発明の細菌を、植物に人為的に感染させるには、圃場に植えつける前の幼苗（例えば１〜4枚の本葉が出た時期の苗）に菌液を散布することができる。この場合、散布後約1〜15日目に、苗を圃場に定植し得る。植物体内に侵入した菌がやがて、植物に共生するようになると考えられる。
【００４５】
菌液の濃度は、１×105〜1×1012個/ml、例えば１×108〜1×1010個/ml又はそれ以上であるが、これらの濃度範囲に限定されない。菌を懸濁する媒体は、水、緩衝液又は培地であることが好ましい。通常、高濃度菌液を水又は培地で所定濃度に希釈して使用することができる。
【００４６】
４．微生物製剤
本発明はさらに、コマモナス（Comamonas）属に属し、農業上有用な植物体内に共生して該植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する能力を有する細菌を有効成分として含有する、農業上有用な植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与するための微生物製剤を提供する。
【００４７】
農業上有用な植物の例は、上で具体的に例示した、アブラナ科植物、キク科植物、マメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、ユリ科植物、セリ科植物、及びウリ科植物からなる群から選択される植物である。
【００４８】
好ましい細菌は、Comamonas sp. MYK102（受託番号NITE P-01769）若しくはComamonas sp. MYK103（受託番号NITE P-01770）、又は農業上有用な植物体内に共生して該植物に塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与する能力を有する、その変異株である。
【００４９】
微生物製剤は、細菌の高濃度物、細菌の培養液を乾燥させたもの等を使用することができる。また、細菌の培養液を活性炭、珪藻土、タルク、ゼオライト、ピートモス、パーライト、ベントナイト、モンモリナイト、バーミュキュライト等の多孔吸着体に吸着させ乾燥させたものを使用することができる。多孔吸着体は、１種類でもよいし、複数の担体を組合せて用いてもよい。乾燥方法は通常の方法でよく、例えば凍結乾燥、減圧乾燥でよい。これらの乾燥物は乾燥後さらにボールミル等の粉砕手段で粉砕されてもよい。
【００５０】
細菌は、上記の培養液、高濃度物又は乾燥物としてそれ自体単独で本発明の用途に用いることができるが、更なる他の任意成分と組み合わせて通常の微生物製剤と同様の形態（例えば粉剤、水和剤、粒剤、乳剤、液剤、懸濁液、フロアブル剤、塗布剤等の形態）に製剤化して用いることもできる。組み合わせて使用することができる任意成分としては例えば固体担体、補助剤のような植物への適用が許容される材料が挙げられる。
【００５１】
以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の技術的範囲は、それらの実施例によって制限されないものとする。
【実施例】
【００５２】
［実施例１：MYK102株による、人工気象機栽培レタスの塩耐性、浸透圧耐性の向上］
1）方法
水耕液（OATハウス肥料A処方の1/2希釈液）に浸漬したウレタンマットにレタスのコート種子（品種：フリルアイス）を播種し、人工気象機内において22℃で、明期16時間、暗期8時間にて1週間栽培した。
Comamonas sp. MYK102株を液体培地にて24時間振とう培養した。培養液を集菌及び洗浄し、菌密度1.0×109cell / mlに調整した菌液を、本葉が1枚展開した後の植物に1植物体あたり100 μlずつ接種した。本葉が2枚展開した後に100mM NaCl又は20%（w/w）ポリエチレングリコール（PEG）を添加した水耕液に置換し、塩ストレス又は浸透圧ストレス処理した。
ストレス処理後1週間目の植物体の新鮮重量を計量した。１処理区あたり植物体12個体とし、同様の試験を3反復実施した。
【００５３】
2）結果
100mM NaCl処理区および20%(w/w)PEG処理区において、無処理区に比べて、それぞれ植物の新鮮重量が33%、及び13%増加していた（表3及び表4）。これは、塩ストレス及び浸透圧ストレスを与えずにMYK102株を接種した場合のレタスの7%の収量増加（データ示さず）と比較して、高い値であった。これらの結果は、MYK102株の接種が、レタスの塩耐性及び浸透圧耐性を向上させることを示唆している。
【００５４】
【表３】
0006748469.tif 000004
【００５５】
【表４】
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【００５６】
［実施例２：MYK102株による、温室栽培レタスの塩耐性の向上］
1）方法
培養土をセルトレーに充填し、1セルあたり3粒ずつレタス種子（品種：グリーンウェーブ）を播種した。本葉が1枚展開した後に1セルあたり植物体1本に間引きした。MYK102株を液体培地にて24時間振とう培養し、菌密度1.0×109cell / mlに調整した培養液を間引き後の植物に1植物体あたり100 μlずつ接種して、ガラス温室内で栽培した。
本葉が2枚展開した後に0.5M NaClの水を植物体に加え、塩ストレス処理し、本葉が4枚以上展開するまで栽培した後、地際部から植物体を切除し収穫した。植物体から双葉を除去した後に新鮮重量を計量した。１処理区あたり植物体12個体とし、同様の試験を3反復実施した。
【００５７】
2）結果
0.5M NaCl処理区において、無処理区に比べて、植物の新鮮重量が20%増加していた（表5）。これは、塩ストレスを与えずにMYK102株を接種した場合のレタスの7%の収量増加（データ示さず）と比較して、高い値であった。この結果は、MYK102株の接種が、レタスの塩耐性を向上させることを示唆している。
【００５８】
【表５】
0006748469.tif 000006
【００５９】
［実施例３：MYK102株による、温室栽培ネギの塩耐性の向上］
1）方法
植物として、ネギ種子（品種：おてがる小ねぎ）を播種した。本葉が1枚展開した後に1セルあたり植物体1本に間引きした。MYK102株を液体培地にて24時間振とう培養し、菌密度1.0×109cell / mlに調整した培養液を間引き後の植物に1植物体あたり100 μlずつ接種して、ガラス温室内で栽培した。
本葉が2枚展開した後に100mM NaClの水を植物体に加え、塩ストレス処理し、本葉が3枚以上展開するまで栽培した後、地際部から植物体を切除し収穫した。植物体から双葉を除去した後に新鮮重量を計量した。１処理区あたり植物体12個体とし、同様の試験を3反復実施した。
【００６０】
2）結果
100 mM NaCl処理区において、無処理区に比べて、植物の新鮮重量が33%増加していた（表6）。これは、塩ストレスを与えずにMYK102株を接種した場合のネギの23%の収量増加（データ示さず）と比較して、高い値であった。この結果は、MYK102株の接種が、ネギの塩耐性を向上させることを示唆している。
【００６１】
【表６】
0006748469.tif 000007
【００６２】
［実施例４：MYK102株による、温室栽培ニンジンの塩ストレスの向上］
1）方法
培養土をセルトレーに充填し、1セルあたり3粒ずつニンジン種子（品種：五寸人参）を播種した。本葉が1枚展開した後に1セルあたり植物体1本に間引きした。MYK102株を液体培地にて24時間振とう培養し、菌密度1.0×109cell / mlに調整した培養液を間引き後の植物に1植物体あたり100 μlずつ接種して、ガラス温室内で栽培した。
本葉が2枚展開した後に100mM NaClの水を植物体に加え、塩ストレス処理し、本葉が3枚以上展開するまで栽培した後、地際部から植物体を切除し収穫した。植物体から双葉を除去した後に新鮮重量を計量した。１処理区あたり植物体12個体とし、同様の試験を3反復実施した。
【００６３】
2）結果
100 mM NaCl処理区において、無処理区に比べて、植物の新鮮重量が12%増加していた（表7）。これは、塩ストレスを与えずにMYK102株を接種した場合のニンジンの7%の収量増加（データ示さず）と比較して、高い値であった。この結果は、MYK102株の接種が、ニンジンの塩耐性を向上させることを示唆している。
【００６４】
【表７】
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【００６５】
［実施例５：MYK102株による、温室栽培ダイズの塩ストレスの向上］
1）方法
培養土をセルトレーに充填し、1セルあたり3粒ずつダイズ種子（品種：早生枝豆）を播種した。本葉が1枚展開した後に1セルあたり植物体1本に間引きした。MYK102株を液体培地にて24時間振とう培養し、菌密度1.0×109cell / mlに調整した培養液を間引き後の植物に1植物体あたり100 μlずつ接種して、ガラス温室内で栽培した。
本葉が2枚展開した後に0.5M NaClの水を植物体に加え、塩ストレス処理し、本葉が4枚以上展開するまで栽培した後、地際部から植物体を切除し収穫した。植物体から双葉を除去した後に新鮮重量を計量した。１処理区あたり植物体12個体とし、同様の試験を3反復実施した。
【００６６】
2）結果
0.5 M NaCl処理区において、無処理区に比べて、植物の新鮮重量が20%増加していた（表8）。これは、塩ストレスを与えずにMYK102株を接種した場合のダイズの9%の収量増加（データ示さず）と比較して、高い値であった。この結果は、MYK102株の接種が、ダイズの塩耐性を向上させることを示唆している。
【００６７】
【表８】
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【００６８】
［実施例６：MYK102株による、温室栽培キュウリの塩ストレスの向上］
1）方法
培養土をセルトレーに充填し、1セルあたり1粒ずつキュウリ種子（品種：霜しらず地這）を播種した。本葉が1枚展開した後に1セルあたり植物体1本に間引きした。MYK102株を液体培地にて24時間振とう培養し、菌密度1.0×109cell / mlに調整した培養液を間引き後の植物に1植物体あたり100 μlずつ接種して、ガラス温室内で栽培した。
本葉が2枚展開した後に0.5M NaClの水を植物体に加え、塩ストレス処理し、本葉が3枚以上展開するまで栽培した後、地際部から植物体を切除し収穫した。植物体から双葉を除去した後に新鮮重量を計量した。１処理区あたり植物体12個体とし、同様の試験を3反復実施した。
【００６９】
2）結果
0.5 M NaCl処理区において、無処理区に比べて、植物の新鮮重量が12%増加していた（表9）。これは、塩ストレスを与えずにMYK102株を接種した場合のキュウリの3%の収量増加（表10）と比較して、高い値であった。この結果は、MYK102株の接種が、キュウリの塩耐性を向上させることを示唆している。
【００７０】
【表９】
0006748469.tif 000010
【００７１】
【表１０】
0006748469.tif 000011
【００７２】
［実施例７：MYK102株による、温室栽培トマトの塩ストレスの向上］
1）方法
培養土をセルトレーに充填し、1セルあたり1粒ずつトマト種子（品種：強力米寿）を播種した。本葉が1枚展開した後に1セルあたり植物体1本に間引きした。MYK102株を液体培地にて24時間振とう培養し、菌密度1.0×109cell / mlに調整した培養液を間引き後の植物に1植物体あたり100 μlずつ接種して、ガラス温室内で栽培した。
本葉が2枚展開した後に100mM NaClの水を植物体に加え、塩ストレス処理し、本葉が4枚以上展開するまで栽培した後、地際部から植物体を切除し収穫した。植物体から双葉を除去した後に新鮮重量を計量した。１処理区あたり植物体12個体とし、同様の試験を3反復実施した。
【００７３】
2）結果
100mM NaCl処理区において、無処理区に比べて、植物の新鮮重量が9%増加していた（表11）。これは、塩ストレスを与えずにMYK102株を接種した場合のトマトの1%の収量増加（表12）と比較して、高い値であった。この結果は、MYK102株の接種が、植物の塩耐性を向上させることを示唆している。
【００７４】
【表１１】
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【００７５】
【表１２】
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【産業上の利用可能性】
【００７６】
本発明は、Comamonas属細菌を農業上有用な植物に人為的に感染させることにより、これらの植物の塩耐性及び／又は浸透圧耐性を付与するため、農業上有用である。
【配列表】
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