(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の構造式：
【化１】
0006718451.tif 000095
を有する化合物またはその立体異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物、またはその立体異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体を、１種以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体とともに含む医薬組成物。
【請求項３】
医薬として使用される、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
インフルエンザを治療するための、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項５】
生物試料または患者におけるインフルエンザウィルスの複製を阻害するための医薬組成物であって、次の構造式によって示される化合物
【化２】
0006718451.tif 000096
その立体異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体
を含む、医薬組成物。
【請求項６】
さらなる治療剤と同時投与される、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記さらなる治療薬は、抗ウィルス剤もしくはインフルエンザワクチン、またはその両方から選択される、請求項６に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
インフルエンザは、人の集団で高い発生率を有する、公衆の健康上の深刻な問題であり、定期的な大規模の罹患率および死亡率をもたらす。それは、急性の発熱性疾患を引き起こす伝染性の高い空気感染性疾患である。全身性の症状の程度が、軽度の倦怠感から呼吸不全および死まで変化する。ＷＨＯによれば、毎年の流行の平均世界疾病負荷は、１０億例のオーダーであり、３００万〜５００万が重篤な症状例で、年間、３００，０００〜５００，０００人が死亡し得る。毎年、インフルエンザは人に拡がり、あらゆる年齢群でその人数の通常５〜２０％に影響し、大規模流行した期間ではこの数は３０％に達する。重篤な症状および死が起こる割合は、＞６５歳の人々、＜２歳の幼児、および、インフルエンザによる合併症のリスクを増大させる疾患、例えば、慢性の心疾患、肺疾患、腎臓疾患、肝臓疾患もしくは代謝性疾患、または弱い免疫系を有するあらゆる年齢の人々が最も高い。子供達の間で死に至ることは稀であるが、＜５歳の幼児では、合併症の有無に応じて、１００，０００人に約１００〜５００人の割合で入院する。＜２４ヶ月の月齢の幼児の入院率は、＞６５歳の人々で報告されている割合と同等である。
【０００２】
ＵＳでは、毎年のインフルエンザの流行により、約３，０００万人が外来患者となり、医療費は年間＄１００億に達する。病気および命が失われることによる収入の損失は、年間、＄１５０億を超える経費に相当し、インフルエンザの流行による年間のＵＳの経済的負担は合計で＄８５０億超に達する。
【背景技術】
【０００３】
インフルエンザを引き起こす病原体は、オルソミクソウィルス（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）科に属する、マイナス鎖の一本鎖ＲＮＡウィルスである。インフルエンザウィルスには３つの型、Ａ型、Ｂ型およびＣ型がある。インフルエンザＡ型ウィルスは、最も一般的な型で、哺乳類および鳥類に広がり得る。インフルエンザＡ型の亜型は、表面タンパク質のヘマグルチニン（Ｈ）およびノイラミニダーゼ（Ｎ）の型によって名付けられている。１８種のヘマグルチニンと１１種の知られたノイラミニダーゼがある。ヒトで見出されている今日の季節性インフルエンザウィルスは、主にＨ１Ｎ１亜型およびＨ３Ｎ２亜型である。インフルエンザＢ型ウィルスは、通常、ヒトにおいてのみ、見出されている。それらは亜型に分類されていないが、異なる株にさらに分類することができる。循環インフルエンザウィルスは毎年大きく変化し、インフルエンザＡ型およびＢ型はいずれも世界中で季節的流行を引き起こしている。インフルエンザＣ型ウィルスは、症状が非常に穏やかで、流行を引き起こすことはない。
【０００４】
３つの型のウィルスは全て、似たゲノム構造を有している。ゲノムは、型に応じて、９〜１１種のタンパク質をコードする８個のセグメントを含んでいる。インフルエンザＡ型は、１１種のタンパク質をコードする。それには、表面タンパク質（ヘマグルチニン（ＨＡ）およびノイラミニダーゼ（ＮＡ）、ポリメラーゼ複合体（ＰＡ、ＰＢ１およびＰＢ２）、核タンパク質（ＮＰ）、膜タンパク質（Ｍ１およびＭ２）、および他のタンパク質（ＮＳ１、ＮＳ２、ＮＥＰ）が含まれる。３つのインフルエンザウィルスの型のなかでは、インフルエンザＡ型が最も高率で変異する。インフルエンザＢ型は、Ａ型よりも進化が遅いが、Ｃ型よりも速い。セグメント化したゲノムは、異なるウィルス株間の遺伝子交換を可能にし、それはインフルエンザウィルスの新しい変種を生じさせる。
【０００５】
インフルエンザウィルスは、感染した個体またはウィルスに汚染された物質と直接接触することによって、ヒトの間で感染し得る。ヒトはまた、空気中に浮遊するウィルスの飛沫を吸入することによって感染し得る。それらの飛沫は、感染した個体が咳、くしゃみ、または話をすることによって生じる。季節性のインフルエンザは、急激な高熱、（通常、乾いた）咳、頭痛、筋肉および関節痛、重度の倦怠感（気分が悪い感じ）、喉の痛み、ならびに鼻水を特徴としている。咳がひどく、２週間以上続くことがある。殆どの人は、治療せずに１週間以内に、熱その他の症状から回復する。しかし、インフルエンザは、上述したような高いリスクを有する人には、重度の疾患または死を引き起こし得る。感染から発病するまでの時間は、潜伏期間として知られ、約２日である。
【０００６】
病気および／または疾患がもたらす重度の結果を防止する最も有効な方法は、ワクチンの摂取である。安全で有効なワクチンが入手可能であり、６０年を超えて使用されている。健康な成人の間では、インフルエンザワクチンは十分な保護を提供し得る。しかしながら、ワクチン接種にはいくつかの制限がある。第１に、インフルエンザワクチンは高齢者の病気の予防に効果が少なく、病気の重症度や、合併症および死の発生率を低下させ得るのみである。さらに、インフルエンザのワクチン接種は、循環ウィルスがワクチンウィルスとよく一致しているときに最も効果があり、ワクチン接種の成功の可否は、その季節に流行するウィルスの型の適切な予測に大きく依存する。抗原連続変異によるインフルエンザウィルス株の急速で継続的な発展は、現在のインフルエンザワクチンに対するワクチン誘発免疫応答が短いという性質と相まって、季節的に適切な株のワクチンの接種が、予防のために毎年必要であることを意味する。
【０００７】
インフルエンザの現在の治療では、直接的な抗ウィルス剤、またはインフルエンザが誘発する症状を除く医薬品を使用する。市場で入手可能なインフルエンザ抗ウィルス剤には２つの種類、ノイラミニダーゼ阻害剤およびＭ２チャネル阻害剤がある。ノイラミニダーゼ阻害剤、オセルタミビルまたはザナミビルは、インフルエンザの予防および治療に推奨されている主要な抗ウィルス剤である。これらは、インフルエンザウィルスのＡ型およびＢ型の両方に有効である。これらの抗ウィルス剤に対する耐性の発現が、季節性インフルエンザの治療期間中に、散発性オセルタミビル耐性２００９Ｈ１Ｎ１ウィルスにおいて特定されているが、今のところ、公衆の健康への影響は限られている。アマンタジンおよびリマンタジン（アマンタダン）などのＭ２チャネル阻害剤は、インフルエンザＡ型株に有効であるが、インフルエンザＢ型株には有効ではない。循環インフルエンザＡ型ウィルスのアマンタダン耐性は、２００３〜２００４年に始まり、急速に世界中で増大した。したがって、アマンタジンおよびリマンタジンは、今日循環しているインフルエンザＡ型株の抗ウィルス治療または化学的予防には推奨されない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
２００９年に、ヒト、ブタおよび鳥のＨ１Ｎ１ウィルスの遺伝子の再集合の結果として、新規なブタＨ１Ｎ１株が予期しないインフルエンザの流行を引き起こした。この過去の流行は、高病原性鳥Ｈ５Ｎ１株の継続している循環と、中国で単離され、ヒトからヒトへの感染に潜在的に適合し得た、死亡率４０％の深刻な呼吸器系疾患を伴う、鳥起源の新しい再集合体である最近のＨ７Ｎ９ウィルスの出現とともに、新しいインフルエンザ株に対する世界の人口の脆弱性を強調した。ワクチン接種は、今もインフルエンザ感染を制御する主要な予防戦略であるが、新しいワクチンが入手可能になる前の期間を埋め、重度のインフルエンザ症例を治療し、かつウィルス耐性の問題に立ち向かうため、抗インフルエンザ薬を幅広く選択し得ることが求められている。したがって、新規な抗インフルエンザウィルス薬を開発することが、再び高い優先度を持ち、未だ達成されていない医学的要求になっている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、インフルエンザウィルス感染の治療、または予防に使用することができる式（Ｉ）の化合物：
【化１】
0006718451.tif 000002
その立体異性体、薬学的に許容されるその塩、溶媒和物または多形体（式中、
Ｘは、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｃ１〜３アルキル−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜３アルキル、
−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｃ１〜３アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｎ−（ジアルキル）または−ＣＨ２−ＮＣ（Ｏ）−ＣＨ３で置換されていてもよいＮまたはＣであり；
Ｒ１は、ＨまたはＣＨ３であり；
Ｒ２は、ＨまたはＮＨ２であり；
Ｒ３は、カルボン酸により置換されたＣ１〜８アルキル；
またはカルボン酸、−Ｎ−Ｃ１〜３アルキルスルホン、もしくは
Ｃ１〜６アルキルによって置換されていてもよい−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３〜６ヘテロ環によって置換されたＣ３〜８シクロアルキル；
または−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３〜６ヘテロ環によって置換されたＣ３〜６ヘテロ環である）
に関する。
【００１０】
本発明の化合物は、Ｒ１およびＲ２がいずれもＨである、式（Ｉ）の化合物であることが好ましい。
【００１１】
本発明の好ましい化合物は、次の構造式を有する。
【化２】
0006718451.tif 000003
【００１２】
本発明の一部はまた、１種以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体とともに、式（Ｉ）の化合物、またはその立体異性体、薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくは多形体を含む医薬組成物である。
【００１３】
医薬組成物はまた、さらなる治療薬、例えば、他の抗ウィルス剤もしくはインフルエンザワクチン、またはその両方を含んでもよい。
【００１４】
医薬として使用される、式（Ｉ）の化合物、またはその立体異性体、薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくは多形体、あるいは医薬組成物もまた本発明に属する。
【００１５】
さらに、本発明は、インフルエンザの治療に使用される、式（Ｉ）の化合物、またはその立体異性体、薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくは多形体、あるいは医薬組成物に関する。
【００１６】
本発明の一部は、次の構造式（Ｉ）で示される化合物
【化３】
0006718451.tif 000004
その立体異性体、薬学的に許容されるその塩、溶媒和物または多形体（式中、
Ｘは、−ＣＮ，−ＣＦ３，−Ｃ１〜３アルキル−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜３アルキル、
−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｃ１〜３アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｎ−（ジアルキル）または−ＣＨ２−ＮＣ（Ｏ）−ＣＨ３で置換されていてもよいＮまたはＣであり；
Ｒ１は、ＨまたはＣＨ３であり；
Ｒ２は、ＨまたはＮＨ２であり；
Ｒ３は、カルボン酸により置換されたＣ１〜８アルキル；
またはカルボン酸、−Ｎ−Ｃ１〜３アルキルスルホン、もしくは
Ｃ１〜６アルキルによって置換されていてもよい−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３〜６ヘテロ環によって置換されたＣ３〜８シクロアルキル；
または−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３〜６ヘテロ環によって置換されたＣ３〜６ヘテロ環である）
の、生物試料または患者におけるインフルエンザウィルスの複製を阻害するための使用である。
【００１７】
前記使用もまた、さらなる治療薬の同時投与を含んでもよい。ここで、前記さらなる治療薬は、抗ウィルス剤もしくはインフルエンザワクチン、またはその両方から選択される。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
「アルキル」という用語は、特定の数の炭素原子を含有する直鎖状または分枝鎖状飽和脂肪族炭化水素を指す。
【００１９】
「シクロアルキル」という用語は、特定の数の炭素原子を含有する炭素環を指す。
【００２０】
「ヘテロ環」という用語は、Ｎ、ＯまたはＳ、特にＮまたはＯから選択される１種以上のヘテロ原子を含む、飽和、または部分的に飽和されている分子を指す。前記ヘテロ環は４、５、６または７個の環原子を有し得る。
【００２１】
式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩としては、その酸付加塩および塩基塩が挙げられる。好適な酸付加塩は、非毒性塩を生成する酸から生成される。好適な塩基塩は、非毒性塩を生成する塩基から生成される。
【００２２】
本発明の化合物はまた、非溶媒和および溶媒和形態で存在してもよい。本明細書では、「溶媒和物」という用語は、本発明の化合物と、１種以上の薬学的に許容される溶媒分子、例えば、エタノールとを含む分子複合体を表すために使用される。
【００２３】
「多形体」という用語は、本発明の化合物が２つ以上の形態または結晶構造で存在できることを指す。
【００２４】
本発明の化合物は、結晶質または非晶質生成物として投与され得る。それらは、沈殿、結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥、または蒸発乾燥などの方法によって、例えば、固体プラグ、粉末、またはフィルムとして得ることができる。それらは、単独で、または本発明の１種以上の他の化合物と組み合わされて、または１種以上の他の薬剤と組み合わされて投与され得る。一般に、それらは、１種以上の薬学的に許容される賦形剤とともに製剤として投与されるであろう。本明細書では「賦形剤」という用語は、本発明の化合物以外の任意の成分を表すために使用される。賦形剤の選択は、具体的な投与形態、溶解性および安定性に対する賦形剤の影響、および剤形の性質などの要因に大きく左右される。
【００２５】
本発明の化合物またはその任意のサブグループは、投与のために様々な医薬品形態へと製剤化され得る。適切な組成物として、全身投与薬物について通常使用されるあらゆる組成物を挙げ得る。本発明の医薬組成物を調製するには、活性成分として、特定の化合物の有効量を、任意選択により付加塩形態で、薬学的に許容される担体と組み合わせて緊密な混合物とする。この担体は、投与に所望される製剤の形態に応じて、多種多様な形態をとり得る。これらの医薬組成物は、例えば、経口、直腸内、または経皮投与に好適な単一の剤形であることが望ましい。例えば、経口投与形態の組成物を調製する際、懸濁液、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤および溶液剤などの経口液体製剤の場合には、例えば水、グリコール、油、アルコールなどの通常の医薬媒体の任意のものを使用することができ、また散剤、丸剤、カプセル剤および錠剤の場合には、デンプン、糖、カオリン、希釈剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などの固体担体を使用し得る。投与が容易であるため、錠剤およびカプセル剤は最も有利な経口投与単位剤形を代表するものであり、その場合、固体医薬担体が当然使用される。使用の直前に液体形態に変換され得る固形製剤もまた含まれる。経皮投与に好適な組成物においては、担体は、浸透促進剤および／または好適な湿潤剤を、少量の、任意の性質の好適な添加剤と任意選択により組み合わせて、任意選択により含み、これらの添加剤は、有意な有害作用を皮膚に及ぼすものではない。前記添加剤は、皮膚への投与を容易にすることができ、かつ／または所望の組成物の調製に有用となり得る。これらの組成物は、様々な方法で、例えば、経皮貼付剤として、スポットオン剤として、軟膏剤として投与され得る。本発明の化合物はまた、吸入または吹送による投与のために当該技術分野において使用される方法および製剤を用いて、吸入または吹送によって投与され得る。したがって、一般に、本発明の化合物は、溶液、懸濁液または乾燥粉末の形態で肺に投与され得る。
【００２６】
投与を容易にし、投与量を均一にするために、前述した医薬組成物を単位剤形に製剤化することは特に有利である。本明細書で使用される単位剤形とは、単位投与量として好適な物理的に個別の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と共同して所望の治療効果を生じるよう計算された所定量の有効成分を含有する。そのような単位剤形の例としては、錠剤（分割錠剤またはコーティング錠剤を含む）、カプセル剤、丸剤、粉末パケット、ウエハー、坐剤、注射液、または懸濁剤など、およびそれらの分離複合剤がある。
【００２７】
感染症の治療の当業者は、以下に示される試験結果から有効量を決定することができるであろう。一般に、有効な日量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重であろうと考えられる。必要な用量を２、３、４またはそれより多いサブ用量として、一日の間に適切な間隔を置いて投与することが適切であり得る。前記サブ用量は、例えば、単位剤形当たり１〜１０００ｍｇ、特に、５〜２００ｍｇの有効成分を含有する単位剤形として製剤化され得る。
【００２８】
正確な投与量および投与頻度は、当業者に周知のように、使用する式（Ｉ）の特定の化合物、治療される特定の病態、治療される病態の重篤度、特定の患者の年齢、体重および全身的な身体状態、ならびに個体が摂取している可能性のある他の薬剤に応じて決まる。さらに、有効量は、治療される対象の応答に応じて、かつ／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて、減少または増加させ得ることは明らかである。したがって、上記の有効量の範囲は単に指針に過ぎず、本発明の範囲または使用を、いかなる程度であれ限定することは意図されていない。
【実施例】
【００２９】
式（Ｉ）の化合物の調製
スキーム１。化合物７の調製
【化４】
0006718451.tif 000005
スキーム１。ｉ）Ｂｒ２、ＤＭＦ、室温、８ｈ  ｉｉ）ＮａＨ、ＴｓＣｌ、ＴＨＦ  ｉｉｉ）ビス（ピナコラト）ジボロン、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２、ＫＯＡｃ、１，４−ジオキサン、８０℃、１６ｈ  ｉｖ）ＥｔＯＨ／ＴＨＦ、ＤＩＰＥＡ  ｖ）Ｎａ２ＣＯ３、テトラキス、キサントホス、１，４−ジオキサン、マイクロ波  １５０℃、１５ｍｉｎ  ｖｉ）ＮａＯＣＨ３、ＣＨ３ＯＨ
【００３０】
中間体１の調製
ＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解した臭素（１１．８ｇ、７３．８４ｍｍｏｌ）を、７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１１．５ｇ、７３．９２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３５０ｍＬ）溶液に撹拌しながら０℃で添加した。冷却浴を除去し、反応物を２０℃で８時間撹拌し、その後、反応混合物を氷水に注ぎ、Ｎａ２ＣＯ３で塩基性化した。この混合物を酢酸エチルで抽出した。まとめた有機相をＮａ２Ｓ２Ｏ３水溶液塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、固形物を濾過により除去し、濾液を減圧濃縮して、１，５−ブロモ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンを黄色固体として得、さらに精製することなく次の工程に使用した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ７．８４（ｓ，１Ｈ），８．８４（ｓ，１Ｈ），８．９２（ｓ，１Ｈ），１２．５７（ｂｒ，１Ｈ）．
【００３１】
中間体２の調製
窒素下、０℃で、ＮａＨ（４．４８ｇ、１１２．０１ｍｍｏｌ）を、５−ブロモ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１２．８ｇ、５５．１１ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しながら少しずつ添加した。得られた混合物を５℃で１時間撹拌し、その後、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（１１．６ｇ、６０．８５ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。反応混合物を室温まで温め、３時間撹拌した。反応混合物を氷と１ＭＨＣｌ水溶液との混合物に撹拌しながら注いだ。この混合物を酢酸エチルで抽出した。まとめた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、固形物を濾過によって除去し、濾液を減圧濃縮した。残留物を酢酸エチルから結晶化させることによって精製して、２，５−ブロモ−７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンを白色固体として得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ２．３６（ｓ，３Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），８．３１（ｓ，１Ｈ），９．０３（ｓ，１Ｈ），９．０６（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３５１．８；Ｒｔ：１．１６ｍｉｎ，方法Ｄ．
【００３２】
中間体３の調製
還流冷却器を備えた５００ｍＬ丸底フラスコにおいて、窒素下、５−ブロモ−７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１０ｇ、２８．３９ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１４．４２ｇ、５６．７９ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（８．３６ｇ、８５．１８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１７０ｍＬ、窒素で脱気）中混合物を８０℃で１６時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、充填Ｃｅｌｉｔｅで濾過し、固形物を酢酸エチルで洗滌した。濾液を減圧濃縮し、残留物をシリカカラムクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮して３，５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンを得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．３３（ｓ，１２Ｈ）２．３７（ｓ，３Ｈ）７．４７（ｄ，Ｊ＝８．３６Ｈｚ，２Ｈ）８．１１（ｄ，Ｊ＝８．５８Ｈｚ，２Ｈ）８．１４（ｓ，１Ｈ）９．００（ｓ，１Ｈ）９．１０（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３１８．１；Ｒｔ：０．７４ｍｉｎ，方法Ａ．
【００３３】
中間体５の調製
【化５】
0006718451.tif 000006
２，４−ジクロロ−５−フルオロ−ピリミジン（２．７６ｇ、１６．５５ｍｍｏｌ）のエタノール（７０ｍＬ）およびＴＨＦ（７０ｍＬ）溶液を室温で撹拌した。（＋／−）−ｃｉｓ−Ｎ−（３−アミノシクロヘキシル）ピロリジン−１−カルボキサミド（４．１ｇ、１６．５５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（８．５６ｍＬ、４９．６４ｍｍｏｌ）を反応混合物に少しずつ添加し、７０℃で１時間、その後、周囲温度で終夜撹拌した。反応混合物の溶媒を減圧除去し、残留物を水に溶解し、ＤＣＭで２回抽出した。まとめた有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、固形物を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧除去した。残留物をシリカフラッシュカラムクロマトグラフィー（勾配：ＣＨ２Ｃｌ２〜ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ：９０／１０）により精製した。所望の画分をプールし、蒸発乾固して、５を白色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３４２．３；Ｒｔ：０．７５ｍｉｎ，方法Ａ．
【００３４】
中間体４の調製
【化６】
0006718451.tif 000007
（＋／−）−ｃｉｓ−３−（ｂｏｃ−アミノ）シクロヘキサンカルボン酸（９．５１ｇ、３９．０９ｍｍｏｌ）、ジフェニルリン酸アジド（１２．６１ｍＬ、５８．６３ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（７．６１ｍＬ、５４．７２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２５０ｍＬ）中混合物を２時間還流した。溶液を室温にし、次いで、ピロリジン（９．８１ｍＬ、１１７．２６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１時間還流した。混合物を０℃に冷却し、濾過によって沈殿物を分離し、ＴＨＦで洗浄し、真空で乾燥して、４ａ，ｔ−ブチル（＋／−）−（ｃｉｓ−３−（ピロリジン−１−カルボキサミド）シクロヘキシル）カルバメートを白色粉末として得た。（＋／−）−ｔ−ブチル（ｃｉｓ−３−（ピロリジン−１−カルボキサミド）シクロヘキシル）カルバメート（２３．７７ｇ、７６．３３ｍｍｏｌ）のＨＣｌ（４Ｍ、１，４−ジオキサン中、３４４ｍＬ）溶液を室温で４時間撹拌した。溶液を減圧濃縮し、次いで、真空で乾燥して、４，（＋／−）−Ｎ−（（ｃｉｓ）−３−アミノシクロヘキシル）ピロリジン−１−カルボキサミドを白色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝２１２．２；Ｒｔ：１．０６ｍｉｎ，方法Ｃ．
【００３５】
７の調製
【化７】
0006718451.tif 000008
窒素雰囲気下、室温で、３（７９９ｍｇ、２ｍｍｏｌ）、５（６８４ｍｇ、２ｍｍｏｌ）およびＮａ２ＣＯ３（３ｍＬ、２Ｍ、６ｍｍｏｌ）の混合物を１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）中で撹拌した。次いで、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１１６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびキサントホスを添加し、混合物を１０分間脱気した。反応物を電子レンジにて１５０℃で１５分間加熱した。溶媒を減圧除去し、残留物をＮａＯＣＨ３（１００ｍＬ、０．５Ｍ  ＣＨ３ＯＨ中）とともに１時間撹拌した。溶媒を減圧除去し、残留物を水中で撹拌し、酢酸で中和した。溶液をＣＨ２Ｃｌ２で３回抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、固形物を濾過によって除去し、濾液の溶媒を減圧除去した。残留物を、シリカによりＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ：９８／２〜９０／１０の勾配を用いて精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧除去し、アセトニトリルから生成物を再結晶化させた。オフホワイト色の沈殿物を濾過によって回収し、真空で乾燥して７を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．０６−１．５２（ｍ，４Ｈ），１．６７−１．８９（ｍ，６Ｈ），１．９７（ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，１Ｈ），２．０６−２．１８（ｍ，１Ｈ），３．１１−３．２３（ｍ，５Ｈ），３．５５−３．７５（ｍ，１Ｈ），４．０２−４．２７（ｍ，１Ｈ），５．８２（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），８．１０−８．２２（ｍ，２Ｈ），８．８０（ｓ，１Ｈ），９．５９（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４２５．４；Ｒｔ：１．４２ｍｉｎ，方法Ｂ．
【００３６】
中間体８の調製
【化８】
0006718451.tif 000009
２，６−ジクロロ−５−フルオロ−３−ピリジンカルボニトリル（４．７７ｇ、２５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液を室温で撹拌しながら、４（６．１９ｇ、２５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（８．６２ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（２０ｍＬ）中混合物を少しずつ添加した。反応物を周囲温度で２時間撹拌した。減圧下で溶媒を除去した。粗生成物をジイソプロピルエーテル／酢酸エチル（１／１）に溶解し、水で洗浄した。有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、固形物を濾過によって除去し、濾液の溶媒を減圧除去した。残留物をジイソプロピルエーテル中で沈澱させ、真空で乾燥して、白色固体の８、（＋／−）−Ｎ−（（ｃｉｓ）−３−（（６−クロロ−５−シアノ−３−フルオロピリジン−２−イル）アミノ）シクロヘキシル）ピロリジン−１−カルボキサミドを得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３６６．１；Ｒｔ：０．８８ｍｉｎ，方法Ａ．
【００３７】
９の調製
【化９】
0006718451.tif 000010
厚肉ガラス管に３（５００ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１４５ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（３４６ｍｇ、２．５１ｍｍｏｌ）および８（４８１ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１５ｍＬ）および水（５ｍＬ）中混合物を投入し、１００℃に加熱し、１６時間撹拌した。減圧下で溶媒を除去した。粗生成物をＤＣＭ中で撹拌し、濾別し、シリカフラッシュカラムクロマトグラフィー（第１勾配：ヘプタン〜酢酸エチル、第２勾配：ＤＣＭ〜ＤＣＭ／ＣＨ３ＯＨ  １００〜９０／１０）で精製した。所望の画分を回収し、蒸発乾固させて９、（＋／−）−Ｎ−（（ｃｉｓ）−３−（（５−シアノ−３−フルオロ−６−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）シクロヘキシル）ピロリジン−１−カルボキサミドを得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．１５−１．３１（ｍ，２Ｈ）１．３４−１．４４（ｍ，１Ｈ）１．４８（ｑ，Ｊ＝１１．９３Ｈｚ，１Ｈ）１．７５−１．７８（ｍ，４Ｈ）１．７８−１．８４（ｍ，２Ｈ）２．００（ｄ，Ｊ＝１１．３０Ｈｚ，１Ｈ）２．０３−２．０６（ｍ，１Ｈ）３．１６−３．１９（ｍ，４Ｈ）３．５３−３．５６（ｍ，１Ｈ）４．１２−４．１５（ｍ，１Ｈ）５．８４（ｄ，Ｊ＝７．９２Ｈｚ，１Ｈ）７．７４（ｄ，Ｊ＝７．０４Ｈｚ，１Ｈ）７．８７（ｄ，Ｊ＝１１．３０Ｈｚ，１Ｈ）８．３３（ｓ，１Ｈ）８．８５（ｓ，１Ｈ）９．５６（ｓ，１Ｈ）１２．６６（ｂｒ．  ｓ．，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４４９．２；Ｒｔ：１．５５ｍｉｎ，方法Ｂ．
【００３８】
中間体１０の調製
【化１０】
0006718451.tif 000011
（＋／−）−ｔｅｒｔ−ブチル（（ｃｉｓ）−３−アミノシクロヘキシル）カルバメート（５ｇ、２３．３ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（７．１ｇ、５８．３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中混合物を周囲温度で撹拌し、その後、１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸（２．９ｇ、２３．３ｍｍｏｌ）を添加した。１０分間室温で撹拌後、ＥＤＣ（６．７ｇ、３５ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を１８時間、室温で撹拌した。反応混合物をクエン酸（５％水溶液）で洗浄し、有機層を除去し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、固形物を濾過によって除去し、濾液の溶媒を減圧下で除去して、１０ａ、（＋／−）−ｔ−ブチル（（ｃｉｓ）−３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミド）シクロヘキシル）カルバメートを得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３２３．５；Ｒｔ：０．７５ｍｉｎ，方法Ａ．中間体４の調製方法のように、ｂｏｃ−基をＨＣｌの１，４−ジオキサン溶液により除去して、１０、（＋／−）−Ｎ−（（ｃｉｓ）−３−アミノシクロヘキシル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミドを得た。
【００３９】
中間体１１の調製
【化１１】
0006718451.tif 000012
（＋／−）−Ｎ−［（ｃｉｓ）−３−アミノシクロヘキシル］−１−メチル−イミダゾール−４−カルボキサミド（４．６４ｇ、１５．７ｍｍｏｌ）および２，６−ジクロロ−５−フルオロ−３−ピリジンカルボニトリル（３ｇ、１５．７ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（５０ｍＬ）溶液を室温で撹拌した。ＤＩＰＥＡ（１０ｍＬ、５４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を５０℃で２４時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。ＣＨ２Ｃｌ２を添加し、１１、（＋／−）−Ｎ−（（ｃｉｓ）−３−（（６−クロロ−５−シアノ−３−フルオロピリジン−２−イル）アミノ）シクロヘキサン）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミドを白色沈殿物として濾過によって分離し、さらに精製することなく次の工程に使用した。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３７７．１；Ｒｔ：１．５８ｍｉｎ，方法Ｂ．
【００４０】
１２の調製
【化１２】
0006718451.tif 000013
２０ｍＬの厚肉ガラス管に、３（０．２５ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（７２ｍｇ、０．０６２６ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１７３ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）、ＤＭＥ（５ｍＬ）、水（１．５ｍＬ）、および１１（０．２５ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）を投入した。この瓶を密閉し、油浴にて１００℃で１８時間加熱した。濃ＨＣｌを添加して、反応混合物をｐＨ６にした。ＤＭＳＯを添加し、溶液を濾過した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（ＲＰ  ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ−１０μｍ、３０×１５０ｍｍ、移動相０．２５％炭酸アンモニウム水溶液、ＣＨ３ＯＨへ）により精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧除去して、１２を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．１８−１．５４（ｍ，３Ｈ），１．６２（ｑ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），１．８４（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，２Ｈ），２．０６（ｔ，Ｊ＝１４．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．８５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），４．２０（ｄｄ，Ｊ＝７．８，３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．８６（ｓ，１Ｈ），９．５９（ｓ，１Ｈ），１２．６５（ｂｒ．  ｓ．，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４６０．１；Ｒｔ：０．７１ｍｉｎ，方法Ａ．
【００４１】
中間体１３の調製
【化１３】
0006718451.tif 000014
１０（５．３ｇ、１８ｍｍｏｌ）および２，４−ジクロロ−５−フルオロ−ピリミジン（３ｇ、１８ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（５０ｍＬ）溶液を室温で撹拌した。ＤＩＰＥＡ（１０ｍＬ、５４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２日間撹拌した。溶媒を減圧除去し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによりヘプタンから酢酸エチルへの勾配を用いて精製した。最良の画分をプールし、溶媒を除去して、１３をオフホワイト色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３５３．１；Ｒｔ：１．３４ｍｉｎ，方法Ｂ．
【００４２】
１４の調製
【化１４】
0006718451.tif 000015
化合物１２で記載したのと同じ鈴木反応条件で、中間体３（０．３ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を１３（０．２６５ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）と反応させた。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（固定相：ＲＰ  Ｖｙｄａｃ  Ｄｅｎａｌｉ  Ｃ１８−１０μｍ、２００ｇ、５ｃｍ）、移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＣＨ３ＯＨ）で精製し、最良の画分をプールし、溶媒を減圧除去して、１４を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．２７−１．４４（ｍ，２Ｈ）１．５４（ｍ，Ｊ＝１１．７０，１１．７０，１１．７０Ｈｚ，２Ｈ）１．８４（ｍ，Ｊ＝１１．００Ｈｚ，２Ｈ）２．００（ｍ，Ｊ＝１２．３０Ｈｚ，１Ｈ）２．１４（ｍ，Ｊ＝１１．９０Ｈｚ，１Ｈ）３．６７（ｓ，３Ｈ）３．８９−４．０４（ｍ，１Ｈ）４．２１（ｍ，Ｊ＝７．８０，３．４０Ｈｚ，１Ｈ）７．５３−７．７１（ｍ，４Ｈ）８．１０−８．２６（ｍ，２Ｈ）８．８１（ｓ，１Ｈ）９．６２（ｓ，１Ｈ）１２．４７（ｂｒ．  ｓ．，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４３６．２；Ｒｔ：１．２７ｍｉｎ，方法Ｂ．
【００４３】
中間体１５の調製
【化１５】
0006718451.tif 000016
ＴＨＦ／ＣＨ３ＯＨ（１／１）（５０ｍＬ）の混合物に溶解した２−ブロモ−３，５，６−トリフルオロピリジン（３ｇ、１４．１５３ｍｍｏｌ）、１０（３．２５ｇ、１８．８７ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３．９４ｍＬ、２８．３１ｍｍｏｌ）の溶液を、圧力容器内にて９５℃で１６時間加熱した。反応混合物を加熱しながら酢酸エチルに溶解し、塩水で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、固形物を濾過によって除去し、濾液の溶媒を減圧濃縮した。粗生成物をシリカフラッシュカラムクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製した。所望の画分を回収し、蒸発乾固して、１５を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４１４．１；Ｒｔ：０．９１ｍｉｎ，方法Ａ．
【００４４】
１６の調製
【化１６】
0006718451.tif 000017
化合物７の生成で記載したのと同じ鈴木反応条件で、中間体３（０．２０ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を１５（０．２０７ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）と反応させた。粗生成物を超音波浴で１時間、ＮａＯＣＨ３（２．８ｍＬ、０．５Ｍ  ＣＨ３ＯＨ溶液）とさらに反応させ、次いで、溶媒を減圧除去した。粗生成物を酢酸エチルに溶解し、１Ｍ  ＨＣｌで中和し、塩水で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、減圧下、固形物を除去して固体を得た。粗生成物をシリカフラッシュカラムクロマトグラフィーで、ＤＣＭ〜ＤＣＭ／ＣＨ３ＯＨ  １００〜９０／１０の勾配を使用して精製した。所望の画分を回収し、蒸発乾固させて１６を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．１７−１．４２（ｍ，２Ｈ）１．４４−１．６１（ｍ，２Ｈ）１．７６−１．９３（ｍ，２Ｈ）２．００−２．２１（ｍ，２Ｈ）３．６５（ｓ，３Ｈ）３．７８−３．９５（ｍ，１Ｈ）３．９５−４．１７（ｍ，１Ｈ）６．４６−６．６５（ｍ，１Ｈ）７．５０−７．７９（ｍ，４Ｈ）７．９９（ｄ，Ｊ＝２．４２Ｈｚ，１Ｈ）８．７１−８．８９（ｍ，１Ｈ）９．７２（ｓ，１Ｈ）１２．４６（ｂｒ．  ｓ．，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４５３．０；Ｒｔ：０．７２ｍｉｎ，方法Ａ
【００４５】
（＋／−）−３−アミノ−４，４−ジメチルペンタノエートの調製
【化１７】
0006718451.tif 000018
メチル４，４−ジメチル−３−オキソペンタノエート（２ｍＬ、１２．５ｍｍｏｌ）のメタノール（２０ｍＬ）溶液に、酢酸アンモニム（６．７５ｇ、８７．６ｍｍｏｌ）およびＮａＣＮＢＨ３（９４４ｍｇ、１５．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１８時間撹拌した。水を添加して混合物を反応停止させ、溶媒を減圧除去した。残留物を酢酸エチルに溶解し、有機層をＮａＯＨ（水溶液、１Ｍ）、次いで、ＭｇＳＯ４で乾燥し、固形物を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧除去して、（＋／−）−３−アミノ−４，４−ジメチルペンタノエートを無色液体として得、さらに精製またはキャラクタリゼーションすることなく使用した。
【００４６】
中間体１７の調製
【化１８】
0006718451.tif 000019
２，６−ジクロロ−３−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）ピリジン（１ｇ、４．１５ｍｍｏｌ）および（＋／−）−３−アミノ−４，４−ジメチルペンタノエート（９７４ｍｇ、４．９８ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（５ｍＬ）溶液に、ＤＩＰＥＡ（２．８６ｍＬ、１６．５８ｍｍｏｌ）を添加した。密閉した管に入れた混合物を、電子レンジにて、１４０℃で４５分間加熱した。反応混合物を氷水で冷却して反応を停止させ、生成物を酢酸エチルで抽出した。有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、固形物を濾過によって除去し、濾液の溶媒を減圧除去した。粗生成物をシリカカラムクロマトグラフィーでアイソクラチックジクロロメタンを使用して精製した。所望の画分を回収し、溶媒を除去して１７を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３５７．２；Ｒｔ：０．９２ｍｉｎ，方法Ａ．
【００４７】
１８の調製
【化１９】
0006718451.tif 000020
化合物７の生成で記載したのと同じ鈴木反応条件で、中間体３（０．３５ｇ、０．８８ｍｍｏｌ）を１７（０．３６ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）と反応させた。
粗生成物を、超音波浴で１時間、ＮａＯＣＨ３（１．３５ｍＬ、０．５Ｍ  ＣＨ３ＯＨ溶液）に添加した。溶液をＣＨ３ＯＨ（１０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）で希釈した。ＬｉＯＨ（１６ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を周囲温度で２時間撹拌した。反応物を濃ＨＣｌでｐＨ＝４になるまで処理し、反応混合物を減圧濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（固定相：ＲＰ  Ｖｙｄａｃ  Ｄｅｎａｌｉ  Ｃ１８−１０μｍ、２００ｇ、５ｃｍ、移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＣＨ３ＯＨ）で精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去して１８を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ０．７６−０．９３（ｍ，９Ｈ）２．５４−２．６１（ｍ，２Ｈ）４．６０−４．７７（ｍ，１Ｈ）７．３５（ｄ，Ｊ＝８．５８Ｈｚ，１Ｈ）７．６４−７．８１（ｍ，１Ｈ）７．６４−７．８１（ｍ，１Ｈ）８．８２（ｓ，１Ｈ）９．５１（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４２６．２；Ｒｔ：１．４２ｍｉｎ，方法Ｂ．
【００４８】
１９の調製
【化２０】
0006718451.tif 000021
２−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（４２６ｍｇ、３．２ｍｍｏｌ）を氷浴で冷却したＤＭＦ（５４ｍＬ）に溶解し、窒素下、Ｎ−ブロモスクシンイミド（５６９ｍｇ、３．２ｍｍｏｌ）で少しずつ処理した。得られた混合物を２０分間撹拌し、室温まで加温し、１０分間撹拌した。ＣＨ３ＯＨ（５ｍＬ）を添加して、反応を停止させ、溶媒を減圧除去した。粗生成物をシリカフラッシュカラムクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧除去して、５−ブロモ−２−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、１９を得た。
【００４９】
中間体２０の調製
【化２１】
0006718451.tif 000022
アセトニトリル／ＴＨＦ／ＥｔＯＨ（５０／２５／２５ｍＬ）の混合物に溶解した（＋／−）−３−アミノ−４，４−ジメチルペンタノエート（３．０９ｇ、１３．３２ｍｍｏｌ）および２，６−ジクロロ−５−フルオロニコチノニトリル（３ｇ、１５．７１ｍｍｏｌ）の溶液を室温で撹拌した。ＤＩＰＥＡ（５．４１４ｍＬ、３１．４２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を６０℃で３時間撹拌した。溶媒を減圧除去し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製して、固体として２０を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３１４．１；Ｒｔ：１．１３ｍｉｎ，方法Ａ．
【００５０】
２１の調製
【化２２】
0006718451.tif 000023
化合物７の生成で記載したのと同じ鈴木反応条件で、中間体３（０．３５ｇ、０．８８ｍｍｏｌ）を１７（０．３６ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）と反応させた。粗生成物を超音波浴で１時間、ＮａＯＣＨ３（４ｍＬ、０．５Ｍ  ＣＨ３ＯＨ溶液）に添加した。溶液をＣＨ３ＯＨ（１０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）で希釈した。ＬｉＯＨ（１６ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を周囲温度で２時間撹拌した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（固定相：ＲＰ  Ｖｙｄａｃ  Ｄｅｎａｌｉ  Ｃ１８−１０μｍ、２００ｇ、５ｃｍ、移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３、ＣＨ水溶液ＣＨ３ＯＨ）で精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧除去して２１を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ０．８７−０．９５（ｍ，９Ｈ）２．５４−２．６２（ｍ，２Ｈ）４．８１（ｄ，Ｊ＝５．２８Ｈｚ，１Ｈ）７．８３（ｄ，Ｊ＝１１．２２Ｈｚ，１Ｈ）７．８７（ｄ，Ｊ＝９．０２Ｈｚ，１Ｈ）８．２９（ｓ，１Ｈ）８．８５（ｓ，１Ｈ）９．８２（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３８３．２；Ｒｔ：０．６６ｍｉｎ，方法Ａ．
【００５１】
２２の調製
【化２３】
0006718451.tif 000024
ＴＨＦ／ＣＨ３ＯＨ（１／１、５０ｍＬ）の混合物に溶解した２−ブロモ−３，５，６−トリフルオロピリジン（１．５ｇ、７．０８ｍｍｏｌ）、４（１６４５ｍｇ、７．７８ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（１．９６７ｍＬ、１４．１５ｍｍｏｌ）を圧力容器にて８５℃で２日間加熱した。この反応混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカフラッシュカラムクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製した。所望の画分を回収し、蒸発乾固して、中間体２２を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４０３．１；Ｒｔ：１．９０ｍｉｎ，方法Ｂ
【００５２】
２３の調製
【化２４】
0006718451.tif 000025
化合物７の生成で記載したのと同じ鈴木反応条件で、中間体３（０．４０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を２２（０．３３ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）と反応させた。粗生成物を超音波浴で１時間、ＮａＯＣＨ３（１．５ｍＬ、０．５Ｍ  ＣＨ３ＯＨ溶液）に添加した。減圧下で溶媒を除去した。粗生成物を酢酸エチルに溶解し、ＨＣｌ（１Ｍ  水溶液）で中和し、塩水で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４し、固形分を濾過によって除去し、濾液の溶媒を減圧除去した。固体をシリカフラッシュカラムクロマトグラフィーで、シリカ：ＤＣＭ〜ＤＣＭ／ＣＨ３ＯＨ（１００〜９０／１０）により精製した。所望の画分を回収し、蒸発乾固して、（ｃｉｓ）−メチル  ３−（（２−クロロ−５−フルオロピリミジン−４−イル）アミノ）ビシクロ［２．２．２］オクタン−２−カルボキシレート，２３を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．１１−１．３３（ｍ，２Ｈ）１．３５−１．５１（ｍ，２Ｈ）１．７１−１．９２（ｍ，２Ｈ）１．７１−１．９２（ｍ，４Ｈ）２．１０（ｄ，Ｊ＝１１．２２Ｈｚ，２Ｈ）３．１８（ｔ，Ｊ＝６．６０Ｈｚ，４Ｈ）３．５９（ｍ，Ｊ＝７．８０，３．８０，３．８０Ｈｚ，１Ｈ）３．９３−４．１１（ｍ，１Ｈ）５．８１（ｄ，Ｊ＝７．９２Ｈｚ，１Ｈ）６．５１（ｄ，Ｊ＝７．２６Ｈｚ，１Ｈ）７．６８（ｔ，Ｊ＝１０．４５Ｈｚ，１Ｈ）７．９９（ｄ，Ｊ＝２．２０Ｈｚ，１Ｈ）８．８２（ｓ，１Ｈ）９．７０（ｓ，１Ｈ）１２．４８（ｂｒ．  ｓ．，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４４１．０；Ｒｔ：１．６４ｍｉｎ，方法Ｂ．
【００５３】
２４の調製
【化２５】
0006718451.tif 000026
７の生成で記載したのと同じ条件で、２４ａ（２８３ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）（調製はＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４，ＤＯＩ：１０．１０２１／ｊｍ５００７２７５を参照）を中間体３（４００ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）と反応させた。瓶内の粗混合物にＫＯＡｃ（５５９ｍｇ、５．６９ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（５ｍＬ）溶液を添加し、瓶を密閉し、電子レンジにて１２０℃で１０分間加熱した。減圧下で溶媒を除去した。化合物を酢酸エチルに溶解し、濃ＨＣｌでｐＨ５になるまで処理した。化合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４し、固形分を濾過によって除去し、濾液の溶媒を減圧留去した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（固定相：ＲＰ  Ｖｙｄａｃ  Ｄｅｎａｌｉ  Ｃ１８−１０μｍ、２００ｇ、５ｃｍ）、移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＣＨ３ＯＨ）で精製し、所望の画分を回収し、溶媒を減圧除去して、２４を固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．２２−１．８８（ｍ，１３Ｈ）１．９２（ｂｒ．  ｓ．，１Ｈ）１．９４（ｂｒ．  ｓ．，１Ｈ）１．９９（ｂｒ．  ｓ．，１Ｈ）２．０１（ｂｒ．  ｓ．，１Ｈ）２．８１（ｄｄ，Ｊ＝１０．２７，２．２０Ｈｚ，１Ｈ）２．８４（ｄ，Ｊ＝７．０４Ｈｚ，１Ｈ）４．３４−４．４４（ｍ，１Ｈ）４．７１（ｔ，Ｊ＝６．８２Ｈｚ，１Ｈ）７．６１（ｄ，Ｊ＝６．７５Ｈｚ，１Ｈ）８．１１（ｄ，Ｊ＝３．８１Ｈｚ，１Ｈ）８．１２（ｓ，１Ｈ）８．１４（ｓ，１Ｈ）８．１８（ｄ，Ｊ＝３．８１Ｈｚ，１Ｈ）８．３４（ｓ，１Ｈ）８．８０（ｓ，１Ｈ）８．８１（ｓ，１Ｈ）９．６４（ｓ，１Ｈ）９．６８（ｓ，１Ｈ）１０．２０（ｂｒ．  ｓ．，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３８３．２；Ｒｔ：０．５５ｍｉｎ，方法Ａ．
【００５４】
中間体２６の調製
【化２６】
0006718451.tif 000027
１Ｌ丸底フラスコ内の（＋／−）−ｃｉｓ−３−アミノシクロヘキサンカルボン酸（２５ｇ、１７４．６ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（２００ｍＬ）懸濁液に、１Ｎ  ＮａＯＨ（２６２ｍＬ、１Ｍ  水溶液、２６２ｍｍｏｌ）を添加した。１５分間撹拌したところ、混合物は透明溶液になり、ｂｏｃ−無水物（４９．５４ｇ、２２６．９８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物体積を減圧下で除去し、反応混合物を１Ｍ  ＨＣｌを用いて酸性化（ｐＨ  ５）した。生成した沈殿物を濾過によって分離し、水で洗浄し、真空下で乾燥して、２５を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ０．９３−１．３１（ｍ，４Ｈ），１．３７（ｓ，９Ｈ），１．６４−１．７５（ｍ，２Ｈ），１．７９（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），１．９５（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），２．１５−２．３０（ｍ，１Ｈ），３．１２−３．２１（ｍ，２Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）
【００５５】
トリエチルアミン（３５ｍＬ、２５１．６ｍｍｏｌ）およびジフェニルリン酸アジド（３９．０５６ｍＬ、１８１．０９ｍｍｏｌ）を、（＋／−）−ｃｉｓ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロヘキサンカルボン酸（３８．９９ｇ、１６０．２５ｍｍｏｌ）のトルエン（６００ｍＬ）溶液に撹拌しながら添加し、得られた混合物を室温で３時間撹拌した。ベンジルアルコール（３３．１７ｍＬ、３２０．５１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１００℃に加熱した。１２時間後、反応混合物を室温に冷却し、酢酸エチルで希釈し、得られた混合物を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で濃縮して粗固体２６を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ−  ｍ／ｚ＝３４７．１；Ｒｔ：０．６６ｍｉｎ，方法Ｂ．
【００５６】
中間体２７の調製
【化２７】
0006718451.tif 000028
化合物２７を、１４の調製方法にしたがって調製した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．０６−１．３３（ｍ，４Ｈ），１．６１（ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ，１Ｈ），１．７８（ｓ，１Ｈ），１．８７−１．９８（ｍ，１Ｈ），２．０８（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），２．２１（ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ），２．５５（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６５−３．８２（ｍ，１Ｈ），４．１６−４．３１（ｍ，１Ｈ），４．７４（ｂｒ．  ｓ．，１Ｈ），５．００（ｄｄ，Ｊ＝７．７，１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．０５−５．１６（ｍ，２Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，６Ｈ），８．０８（ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），８．４５（ｓ，１Ｈ），９．０５（ｓ，１Ｈ）
【００５７】
２８の調製
【化２８】
0006718451.tif 000029
磁気撹拌子を備えた２０ｍＬガラス瓶に、中間体２７（５００ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）、ＣＨ３ＯＨ（１０ｍＬ）およびＫＯＡｃ（２５０ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ）を入れた。瓶を密閉し、電子レンジにて１５０℃で１５分間加熱した。減圧下、溶媒を除去し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（固定相：Ｕｐｔｉｓｐｈｅｒｅ  Ｃ１８  ＯＤＢ−１０μｍ、２００ｇ、５ｃｍ、移動相：０．５％ＮＨ４Ａｃ水溶液／１０％ＣＨ３ＣＮ、ＣＨ３ＣＮ）で精製した。回収した画分をアンモニアでアルカリ性とし、減圧下で体積を減らし、沈殿物を濾過し、水で洗浄して塩を除去し、２８を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．０５−１．５６（ｍ，４Ｈ），１．７５−１．９１（ｍ，２Ｈ），１．９６（ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ），２．１４（ｄ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ，１Ｈ），３．４５−３．６２（ｍ，１Ｈ），４．０５−４．２６（ｍ，１Ｈ），５．００（ｓ，２Ｈ），７．１５−７．４４（ｍ，６Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），８．１０−８．２６（ｍ，２Ｈ），８．８１（ｓ，１Ｈ），９．６１（ｓ，１Ｈ），１２．４８（ｂｒ．  ｓ．，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４６２．２；Ｒｔ：１．７０ｍｉｎ，方法Ｂ．
一般法Ａ。化合物２７を室温でＴＦＡに添加し、２日間撹拌した。溶媒を減圧除去し、残留物にＮａＨＣＯ３水溶液およびＣＨ２Ｃｌ２を添加した。有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、固形物を濾過によって除去し、濾液の溶媒を減圧除去し、その後、シリカゲルにより濾過した。次いで、粗生成物を有機層（Ｅｔ３Ｎ、またはＤＩＰＥＡ）および求電子剤（酸クロライド、クロロギ酸エステルまたはイソシアナート）のＴＨＦ溶液と０℃〜室温で混合した。反応物がカルボン酸であれば、極性溶媒（例えば、ＤＭＦ）中、カップリング剤（例えば、ＨＡＴＵ、ＥＤＣ）を用いてアミド結合もまた生成されるであろう。この後、室温で１日間撹拌した、過剰なカリウムｔ−ブトキシドの添加によってトシル基を除去した。生成物をシリカカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ２Ｃｌ２から１０％ＣＨ３ＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２への勾配を使用して精製した。
【００５８】
中間体２９ａの調製
【化２９】
0006718451.tif 000030
中間体２７（３ｇ、４．８７３ｍｍｏｌ）を含む反応フラスコにＴＦＡ（３０ｍＬ）を室温で添加した。得られた溶液を周囲温度で２日間撹拌した。溶媒を減圧除去し、ＮａＨＣＯ３およびＣＨ２Ｃｌ２を添加した。有機層を濃縮し、乾燥した。有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４、固形物を濾過によって除去し、濾液の溶媒を減圧除去した。化合物をフラッシュカラムクロマトグラフィーで、ジクロロメタンおよびメタノールを溶離液として用いて精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧除去して、２９ａを得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４８２；Ｒｔ：０．７７ｍｉｎ，方法Ｃ．
【００５９】
中間体２９ｂの調製
【化３０】
0006718451.tif 000031
中間体２９ａ（１００ｍｇ、０．２０８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍＬ）溶液を含む反応フラスコに、ＨＢＴＵ（２８５ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１３１ｍＬ、０．７５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を不活性雰囲気下、室温で５分間撹拌した。ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５−カルボン酸（４１ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。ＴＨＦ減圧下で除去し、得られた残留物をＤＣＭおよび水で抽出した。有機層を減圧濃縮し、２９ｂを得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝６２７；Ｒｔ：１．２６ｍｉｎ，方法Ｃ．
【００６０】
２９の調製
【化３１】
0006718451.tif 000032
ＴＨＦ（４ｍＬ）に溶解した２９ｂ（１３０ｍｇ、０．２０７ｍｍｏｌ）を含有する反応フラスコに、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１．０４ｍＬ、１．０４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で２４時間撹拌した。ＮａＨＣＯ３およびＣＨ２Ｃｌ２により反応を停止させた。有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、固形物を濾過によって除去し、濾液の溶媒を減圧除去した。化合物をフラッシュカラムクロマトグラフィーで、ジクロロメタンおよびメタノールを溶媒として用いて精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧除去して、２９を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．１８−２．０９（ｍ，８Ｈ）３．９９−４．０９（ｍ，１Ｈ）４．２５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）６．９０（ｄ，Ｊ＝１．５１Ｈｚ，１Ｈ）７．５５（ｄ，Ｊ＝７．２９Ｈｚ，１Ｈ）８．１７（ｄ，Ｊ＝３．８５Ｈｚ，１Ｈ）８．２２（ｓ，１Ｈ）８．３７（ｄ，Ｊ＝２．２０Ｈｚ，１Ｈ）８．８０（ｓ，１Ｈ）８．８３−８．９３（ｍ，１Ｈ）９．２５（ｄ，Ｊ＝７．１５Ｈｚ，１Ｈ）９．６１（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４７３；Ｒｔ：２．１６ｍｉｎ，方法Ｃ．
【００６１】
４２の調製
【化３２】
0006718451.tif 000033
１００ｍＬ丸底フラスコに、２，６−ジクロロ−３−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）ピリジン（２ｇ、８．２９１ｍｍｏｌ）、４２ａ（調製は、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４，ＤＯＩ：１０．１０２１／ｊｍ５００７２７５、１．８２２ｇ、７．７９４ｍｍｏｌ）、ＡＣＮ（４０ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（３．２１５ｇ、２４．８７４ｍｍｏｌ）を投入した。得られた混合物を室温で２日間撹拌した。溶媒を減圧除去し、粗生成物をシリカカラムクロマトグラフィーでヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製した。最良の画分を回収し、溶媒を減圧除去して４２を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３９４．１；Ｒｔ：１．３７ｍｉｎ，方法Ａ．
【００６２】
４３の調製
【化３３】
0006718451.tif 000034
３（４００ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）、４２（４００ｍｇ、０．９８３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１１６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、キサントホス（５８ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（２．８ｍＬ、２Ｍ  水溶液、５．７７ｍｍｏｌ）、および１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）の混合物を、マイクロ波の照射下、１５０℃で１０分間撹拌した。減圧下、溶媒を除去した。ＤＣＭを添加し、その後、混合物をシリカプラグで濾過し、５倍体積のＤＣＭでフラッシュした。減圧下で溶媒を除去した。ＫＯＡｃ（２００ｍｇ）およびエタノール（７ｍＬ）を添加し、電子レンジにて１０分間、１２０℃に加熱した。ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を用いたシリカカラムクロマトグラフィーによって、残留物を精製した。最良の画分を回収し、溶媒を減圧除去して、４３を得た。
【００６３】
４４の調製
【化３４】
0006718451.tif 000035
１００ｍＬフラスコで、４３（１．６ｇ、２．５３３ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（９０ｍＬ）溶液を６０℃で撹拌し、その間に、ＬｉＯＨ（６０６．６ｍｇ、２５．３３ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）溶液を添加した。混合物を１時間還流し、周囲温度で終夜撹拌した。１，４−ジオキサンを蒸発させ、残留物を２０ｍＬ酢酸エチルに取り、撹拌し、濃ＨＣｌで中和した。残留物を減圧濃縮した。分取ＨＰＬＣ（固定相：ＲＰ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＤＢ−５μｍ、３０×２５０ｍｍ、移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、メタノール）により、精製を行った。所望の画分を回収し、蒸発乾固した。メタノール添加後、溶液に２度目の濃縮を行って、４４を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．２７−１．４５（ｍ，４Ｈ）１．７５（ｍ，４Ｈ）１．７８−１．８６（ｍ，１Ｈ）１．９１−２．０１（ｍ，１Ｈ）２．７４（ｍ，１Ｈ）４．６４（ｍ，１Ｈ）７．４２（ｍ，１Ｈ）７．７０−７．７６（ｍ，２Ｈ）８．８２（ｓ，１Ｈ）９．３７（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４４９；Ｒｔ：１．５８ｍｉｎ，方法Ｂ．
【００６４】
４６の調製
【化３５】
0006718451.tif 000036
化合物４６を、７の調製方法にしたがって調製した。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４２４．２；Ｒｔ：１．４１ｍｉｎ，方法Ｂ．
【００６５】
４８の調製
化合物１４を分取ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  Ｄｉａｃｅｌ  ＯＤ  ２０×２５０ｍｍ、移動相：ＣＯ２、０．２％イソプロピルアミンを含むイソプロパノール）により精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧下で除去して、４８を得た。
【００６６】
５０の調製
【化３６】
0006718451.tif 000037
３（４．３９ｇ、１１ｍｍｏｌ）、２−クロロ−５−フルオロ−４−メチルスルファニル−ピリミジン（１．９６ｇ、１１ｍｍｏｌ）およびリン酸カリウム（７ｇ、３３ｍｍｏｌ）の水（４４ｍＬ）およびＭｅ−ＴＨＦ（１３２  ｍＬ）中混合物を、窒素雰囲気下、室温で撹拌した。その後、キサントホス（６２９ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）およびＰｄ２（ｄｂａ）３（３０２．１９ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を添加し、１０分間、混合物を窒素でバブリングした。反応物を８０℃に加熱し、密閉した容器中、この温度で２時間撹拌した。混合物を１時間かけて冷却し、その後、２００ｍＬの酢酸エチルに溶解し、塩水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。残留物をシリカで、ジクロロメタン／メタノール（９９／１）を溶離液として用いて精製した。所望の画分を蒸発させ、残留物をアセトニトリル中で結晶化させた。結晶を濾過によって回収し、真空で乾燥した、５０。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４１５；Ｒｔ：２．００ｍｉｎ，方法Ｂ．
【００６７】
５１の調製
【化３７】
0006718451.tif 000038
５０（４１５．４７ｍｇ、１ｍｍｏｌ）のメタノール（２ｍＬ）およびＤＣＭ（１．１５ｍＬ）溶液を室温で撹拌した。ｍ−ＣＰＢＡ（７３９．５８ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を１０分間にわたって少しずつ添加し、周囲温度で終夜、撹拌を続けた。混合物を３０ｍＬ  ＤＣＭで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で２回、水で１回洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。残留物をジイソプロピルエーテル／アセトニトリル（２０／１）中で沈澱させた。黄色の沈殿物を濾過によって回収し、乾燥して、５１を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４４７；Ｒｔ：１．５９ｍｉｎ，方法Ｂ．
一般法Ｂ。化合物５１を室温で１，４−ジオキサンに添加した。その後、粗生成物を有機塩基（Ｅｔ３ＮまたはＤＩＰＥＡ）およびアミンと混合した。得られた混合物を還流し、１日間撹拌した。減圧下で溶媒を除去した。得られた粗生成物をシリカカラムクロマトグラフィーにより精製した。この後、室温で１日間撹拌した、過剰なカリウムｔ−ブトキシドの添加によってトシル基を除去した。生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。
【００６８】
５２の調製
【化３８】
0006718451.tif 000039
５１（１．６８３ｇ、３．７６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２ｍＬ）の１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）溶液に、３−アミノ−３−（１−メチル−シクロペンチル）−プロピオン酸エチルエステル（１．５００ｇ、７．５２７ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応混合物を７０℃で終夜、撹拌した。その後、反応混合物を蒸発乾固し、シリカカラムクロマトグラフィー（ヘプタン−酢酸エチル６０：４０）で精製して５２を得た。
【００６９】
３−アミノ−３−（１−メチル−シクロペンチル）−プロピオン酸エチルエステルの調製
工程１。窒素下、ＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ  ＴＨＦ中）（１８９ｍＬ、１８９ｍｍｏｌ）を、シクロペンタンカルボニトリル（１５ｇ、１５８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６４ｍＬ）溶液に−７８℃で少しずつ添加した。その後、混合物を３０分間撹拌し、ＣＨ３Ｉ（１４．７ｍＬ、２４０ｍｍｏｌ）を一度に添加し、終夜、室温までゆっくりと加温した。ＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）を添加し、ＮＨ４Ｃｌ  １０％（２００ｍＬ）を０℃でゆっくりと添加した。その後、水（１００ｍＬ）を加えて溶液とし、有機層を分離し、塩水で洗浄し、乾燥し、濃縮して、１−メチルシクロペンタンカルボニトリル（１６．８ｇ、黄色油状物）を得、精製することなく次の工程に使用した。
【００７０】
工程２。窒素下、−７８℃で、ＤＩＢＡＬ（３７ｍＬ、３７ｍｍｏｌ）を１−メチルシクロペンタンカルボニトリル（２．０ｇ、１８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１１７ｍＬ）溶液に少しずつ添加し、添加終了後、−７８℃で１５分間混合物を撹拌した。−７８℃でゆっくりとＣＨ３ＯＨ（３７ｍＬ）を添加し、反応物を室温まで加温した。ＮａＯＨ（１Ｍ）２００ｍＬを添加し、水溶液をＣＨ２Ｃｌ２で２回抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。この混合物をＨＣｌ水溶液（３Ｍ）中で１時間、撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、１−メチルシクロペンタンカルバルデヒド（１．４ｇ、黄色油状物）を得た。
【００７１】
工程３。ＥｔＯＨ（５．６ｍＬ）中の１−メチルシクロペンタンカルバルデヒド（１．４ｇ、１２ｍｍｏｌ）、マロン酸（１．０ｇ、９．６ｍｍｏｌ）、ＮＨ４ＯＡｃ（１．５ｇ、１９ｍｍｏｌ）を、密閉管内で終夜、８０℃で撹拌した。混合物を室温まで冷却し、濾過し、ＥｔＯＨで洗浄した。Ｈ２ＳＯ４（０．５１ｍＬ、９．６ｍｍｏｌ）を濾液に添加し、混合物を８０℃で２時間撹拌した。混合物を濃縮し、水に取り、ＤＣＭで洗浄した（３×）。有機混合物を捨て、水層をＮａＯＨ（３Ｎ）で塩基性化し、ＤＣＭで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して、３−アミノ−３−（１−メチル−シクロペンチル）−プロピオン酸（０．７５ｇ、無色油状物）。
【００７２】
工程４。３−アミノ−３−（１−メチル−シクロペンチル）−プロピオン酸をエタノールと混合し、それに０℃でＳＯＣｌ２を少しずつ添加した。添加後、反応混合物を加熱還流し、６時間撹拌した。減圧下で溶媒を除去した。粗生成物をＤＣＭに溶解し、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、蒸発乾固して３−アミノ−３−（１−メチル−シクロペンチル）−プロピオン酸エチルエステルを得、さらに精製することなく次の工程に使用した。
【００７３】
５３の調製
【化３９】
0006718451.tif 000040
不活性雰囲気下、５２（４００ｍｇ、０．７０６ｍｍｏｌ）を入れて密閉した容器にカリウムｔ−ブトキシド（３．６３ｍＬ、３．６３ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１０ｍＬ）を添加した。この混合物を室温で１時間撹拌した。その後、少量の水（１０μＬ）を加え、反応混合物を６０℃に加熱した。反応混合物の溶媒を蒸発乾固し、分取ＨＰＬＣ（方法：９０％［水相］−１０％［有機相］から５４％［ＡＰ］−４６％［ＯＰ］へ。ＡＰ：２５ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３ＯＰ：ＭｅＣＮ：メタノール１：１）により精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧下で蒸発させて、５３を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．０４（ｓ，３Ｈ）１．１７−１．４３（ｍ，２Ｈ）１．５４−１．６９（ｍ，５Ｈ）１．７３−１．８３（ｍ，１Ｈ）２．５５−２．６１（ｍ，２Ｈ）４．８７−４．９４（ｍ，１Ｈ）７．０１−７．１０（ｍ，１Ｈ）８．０４（ｓ，１Ｈ）８．１０（ｄ，Ｊ＝３．９６Ｈｚ，１Ｈ）８．７７（ｓ，１Ｈ）９．６９（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３８４．５；Ｒｔ：１．２４ｍｉｎ，方法Ｂ．
【００７４】
中間体５９の調製
【化４０】
0006718451.tif 000041
イソプロピルアミン（２．６６ｍＬ、２９．９５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（５．１６ｍＬ、２９．９５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液を−１０℃で撹拌しながら、２，４−ジクロロ−５−フルオロピリミジン（５ｇ、２９．９５ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。生じた混合物を、室温で一晩撹拌した。混合物を酢酸エチル１００ｍＬおよびジイソプロピルエーテル５０ｍＬで希釈した。この溶液を水で２回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、６７を得た。残留物をそのまま使用した。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝１８９；Ｒｔ：１．６５ｍｉｎ，方法Ｂ．
【００７５】
６０の調製
【化４１】
0006718451.tif 000042
窒素雰囲気下、３（７９８．６ｍｇ、２ｍｍｏｌ）、５９（３７９．２４ｍｇ、２ｍｍｏｌ）およびＮａ２ＣＯ３（３ｍＬ、２Ｍ、６ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）中混合物を室温で撹拌した。その後、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１１５．５６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびキサントホス（５７．８６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を窒素で１０分間バブリングして脱気した。混合物にマイクロ波を１５分間照射して１５０℃に加熱した。この混合物を水で希釈し、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を塩水で１回洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。約１０％アセトニトリルを含むジイソプロピルエーテル中で残留物を結晶化した。オフホワイト色の沈殿物を回収し、真空で乾燥して６０を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４２６；Ｒｔ：２．２２ｍｉｎ，方法Ｂ．
【００７６】
６１の調製
【化４２】
0006718451.tif 000043
６０（３００ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）およびＮａＯＭｅ（１５ｍＬ、０．５Ｍ、７．５ｍｍｏｌ）を１０分間超音波処理し、室温で１時間撹拌した。混合物を蒸発させ、氷水に溶解し、撹拌し、７．５ｍＬの１ＮＨＣｌ水溶液で中和した。水相をジクロロメタンで３回抽出した。まとめた有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。残留物をシリカカラムクロマトグラフィーによりジクロロメタン／メタノール（９８／２〜９５／５）を勾配として精製した。対応する画分を蒸発させ、残留物をジイソプロピルエーテル／アセトニトリル（２／１）中で結晶化した。結晶を濾過によって回収し、真空で乾燥し、６１を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．２９（ｄ，Ｊ＝６．５９Ｈｚ，６Ｈ）４．４０−４．５１（ｍ，１Ｈ）７．４９（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．６８Ｈｚ，１Ｈ）８．１５−８．１８（ｍ，２Ｈ）８．８２（ｓ，１Ｈ）９．６１（ｓ，１Ｈ）１２．５１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝２７２．１；Ｒｔ：１．４５ｍｉｎ，方法Ｂ．
【００７７】
メチル３−アミノ−４，４−ジメチルペンタノエートの調製
【化４３】
0006718451.tif 000044
ＥｔＯＨ１００ｍＬ中のトリメチルアセトアルデヒド（３３．２５ｇ、３８６．０２７ｍｍｏｌ）、マロン酸（３０．２０４ｇ、２９０．２４６ｍｍｏｌ）、ＮＨ４ＯＡｃ（４４．７４６ｇ、５８０．４９２ｍｍｏｌ）混合物を６時間還流した。沈殿物を濾過によって分離し、エタノールで洗浄した。この溶液をそのまま使用し、Ｈ２ＳＯ４（１５．５ｍＬ）を添加した。反応混合物を５時間加熱還流した。溶媒を減圧除去し、粗生成物を３００ｍＬの水および１５０ｍＬのＥｔ２Ｏに添加した。水層を６ＮのＮａＯＨ水溶液で中和した。生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧濃縮した。
メタノール（５０ｍＬ）中の残留物（１０ｇ、６８．８７ｍｍｏｌ）を氷浴で冷却し、ＳＯＣｌ２（５ｍＬ、６８．８７ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。添加後、反応混合物を加熱還流し、６時間撹拌した。所望の画分を回収し、減圧下において溶媒を除去した。粗生成物をＤＣＭに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液および塩水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、蒸発乾固して、メチル３−アミノ−４，４−ジメチルペンタノエートを得た。
【００７８】
６７の調製
【化４４】
0006718451.tif 000045
２，４−ジクロロ−５−フルオロ−ピリミジン（３ｇ、１７．９６７ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（７２ｍＬ）およびＴＨＦ（７２ｍＬ）溶液を室温で撹拌した。反応混合物に、メチル３−アミノ−４，４−ジメチルペンタノエート（３．６２２ｇ、２２．７４９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（９．２８９ｍＬ、５３．９０ｍｍｏｌ）を少しずつ添加し、７０℃で１時間、その後、周囲温度で終夜撹拌した。この反応混合物を蒸発させた。残留物を水に溶解し、ＤＣＭで２回抽出した。まとめた有機層を水で１回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。残留物を、シリカによるフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離液：ＤＣＭ〜ＤＣＭ／メタノール（１００〜９０／１０））で精製した。所望の画分を回収し、蒸発乾固して、６７を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝２８９．１；Ｒｔ：０．９９ｍｉｎ，方法Ａ．
【００７９】
６８の調製
【化４５】
0006718451.tif 000046
圧力管内で、３（３．５ｇ、８．７６６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１０１３ｍｇ、０．８７７ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２４２３ｍｇ、１７．５３ｍｍｏｌ））および６７（２．６６７ｇ、９．２０４ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（５０ｍＬ）および水（１５ｍＬ）中混合物を１００℃に加熱し、１６時間撹拌した。所望の画分を回収し、減圧下において溶媒を除去した。粗残留物をＤＣＭに取り、濾過した。濾液をシリカによるフラッシュカラムクロマトグラフィー（勾配：ヘプタン〜ＥｔＯＡｃ（１００〜１００））で精製した。所望の画分を回収し、蒸発乾固した。残留物をＤＣＭ／メタノール（１／１）混合物に溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（勾配：ヘプタン〜ＥｔＯＡｃ（１００〜１００））により精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧下で除去して６８を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ０．９７（ｓ，９Ｈ）２．６５（ｍ，１Ｈ）２．７８（ｍ，１Ｈ）３．４４（ｓ，３Ｈ）４．７６−４．９４（ｍ，１Ｈ）７．４１（ｍ，１Ｈ）８．０７−８．２７（ｍ，２Ｈ）８．８２（ｓ，１Ｈ）９．７３（ｓ，１Ｈ）１２．４７（ｂｒ．  ｓ．，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３７２．２；Ｒｔ：０．８４ｍｉｎ，方法Ａ．
【００８０】
６９の調製
【化４６】
0006718451.tif 000047
６８（１５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（３７．３７９ｍｇ、１．５６１ｍｍｏｌ）の水（４ｍＬ）および１，４−ジオキサン（８ｍＬ）溶液を室温で１６時間撹拌した。有機溶媒を減圧除去し、水層を１Ｎ  ＨＣＬで酸性化した。生成した沈殿物を濾別し、水で洗浄し、真空で５０℃で乾燥して６９を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ０．９６（ｓ，９Ｈ）２．５４−２．６２（ｍ，２Ｈ）４．６８−４．８４（ｍ，１Ｈ）７．６９（ｍ，１Ｈ）８．１１−８．１５（ｍ，２Ｈ）８．８１（ｓ，１Ｈ）９．７３（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３５８．１；Ｒｔ：１．１５ｍｉｎ，方法Ｂ．
【００８１】
７０の調製
【化４７】
0006718451.tif 000048
中間体７０を、６７の調製方法にしたがって調製した。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３１５；Ｒｔ：１．１１ｍｉｎ，方法Ａ．
【００８２】
７１の調製
【化４８】
0006718451.tif 000049
７１を、６８の調製方法にしたがって調製した。
【００８３】
８７の調製
【化４９】
0006718451.tif 000050
中間体７２を、６９の調製方法にしたがって調製した。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３５８．１；Ｒｔ：１．１５ｍｉｎ，方法Ｂ．
【００８４】
中間体７４の調製
【化５０】
0006718451.tif 000051
中間体７４を、２の調製方法にしたがって調製した。
【００８５】
７５の調製
【化５１】
0006718451.tif 000052
７４（５８０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、２，４−ジメトキシベンジルアミン（２７６ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（４１４ｍｇ、３ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（６ｍＬ）溶液を８０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温にし、溶媒を減圧除去した。粗反応混合物をシリカによるフラッシュカラムクロマトグラフィー（勾配：石油エーテル〜ＥｔＯＡｃ（１００〜５０／５０））で精製した。所望の画分を回収し、蒸発乾固して、７５を得た。
【００８６】
７６の調製
【化５２】
0006718451.tif 000053
７６を、中間体３の調製方法にしたがって調製した。
【００８７】
７７の調製
【化５３】
0006718451.tif 000054
７６（２．７３ｇ、１．４７ｍｍｏｌ）、５（０．５ｇ、１．４７ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４（０．６２ｇ、２．９３ｍｍｏｌ）、および［１，１’−ビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（９６ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（８０ｍＬ）および水（２０ｍＬ）中混合物を７０℃に１０時間加熱した。反応混合物をＣｅｌｉｔｅで濾過し、濃縮した。その後、反応混合物をＤＣＭで希釈し、水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、逆相ＨＰＬＣ（カラム：ＳＹＮＥＲＧＩ  ２５０×５０  １０μｍ、流量：８０ｍＬ／分、移動相：水（０．１％ＴＦＡ含有）、移動相Ｂ：アセトニトリル、勾配：４５〜７５％（％Ｂ））で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧除去して、７７を得た。
【００８８】
中間体７８の調製
【化５４】
0006718451.tif 000055
７７（１２０ｍｇ、０．１６１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（２ｍＬ）を添加し、全溶液を室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧除去し、７８を含む残留物を直接次の工程に使用した。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝５９４．２；Ｒｔ：０．７８ｍｉｎ，方法Ｅ．
【００８９】
７９の調製
【化５５】
0006718451.tif 000056
７８（９０ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍＬ）溶液を含むフラスコに、ナトリウムメトキシド（３３ｍｇ、０．６０８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。次いで、混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を水に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。まとめた有機層を塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。粗混合物を逆相カラムクロマトグラフィー（Ａｇｅｌａ  ＤｕｒａＳｈｅｌｌ  Ｃ１８  １５０×２５×５μｍ、流量：３５ｍｌ／分；移動相Ａ：水（０．０５％ＮＨ３．Ｈ２Ｏ）含有、移動相Ｂ：アセトニトリル、勾配：２６〜５６％（％Ｂ））で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧除去して、７９を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ０．９７−１．３５（ｍ，３Ｈ）１．４２−１．６８（ｍ，２Ｈ）１．８６−１．９５（ｍ，４Ｈ）１．９６−２．１３（ｍ，２Ｈ）２．６４−２．７６（ｍ，１Ｈ）３．２８−３．３５（ｍ，３Ｈ）３．８３−３．９７（ｍ，１Ｈ）４．０４−４．１２（ｍ，１Ｈ）４．９４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ，１Ｈ）７．９４（ｄ，Ｊ＝３．０１Ｈｚ，１Ｈ）７．９８（ｓ，１Ｈ）８．２６（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４４０．２；Ｒｔ：３．７２ｍｉｎ，方法Ｅ．
【００９０】
８０の調製
【化５６】
0006718451.tif 000057
５−ブロモ−６−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（３００ｍｇ、１．４１５ｍｍｏｌ）のトルエン（１５ｍＬ）溶液に、硫酸水素テトラブチルアンモニウム（２８．４ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、ＮａＯＨ（５０％水溶液）（５ｍＬ）を添加し、混合物を激しく撹拌した。ｐ−トルエンスルホニルクロリド（３７８ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ）のトルエン（１５ｍＬ）溶液を添加し、全混合物を室温で１８時間撹拌した。有機層を分離し、水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。８０を含む粗生成物を、さらに精製することなく次の工程に使用した。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３６７；Ｒｔ：１．０３１ｍｉｎ，方法Ｃ．
【００９１】
８１の調製
【化５７】
0006718451.tif 000058
化合物８１を、３の調製方法にしたがって調製した。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４１４  ；Ｒｔ：１．２５７ｍｉｎ，方法Ｃ．
【００９２】
８２の調製
【化５８】
0006718451.tif 000059
９８（１００ｍｇ、０．２４２ｍｍｏｌ）、５（１０７．７ｍｇ、０．３１５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１４０ｍｇ、０．１２１ｍｍｏｌ）、キサントホス（７０ｍｇ、０．１２１ｍｍｏｌ）、２Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３（０．３６３ｍＬ、２Ｍ、０．７２６ｍｍｏｌ）、ジオキサン（１０ｍＬ）の混合物を８０℃で４８時間撹拌した。反応混合物をｃｅｌｉｔｅパッドにより濾過し、酢酸エチルで洗浄した。溶媒を減圧除去した。８２を含む残留物を次の工程に直接使用した。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝５９３  ；Ｒｔ：１．０９４ｍｉｎ，方法Ｃ．
【００９３】
８３の調製
【化５９】
0006718451.tif 000060
化合物８３を、２９の調製方法にしたがって調製した。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．２０−１．４４（ｍ，５Ｈ）１．７２−１．８６（ｍ，６Ｈ）１．８７−２．０６（ｍ，１Ｈ）２．０８−２．２１（ｍ，１Ｈ）２．８６（ｓ，２Ｈ）３．１６−３．２２（ｍ，４Ｈ）３．５０−３．６８（ｍ，１Ｈ）３．９７−４．１３（ｍ，１Ｈ）５．８２（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．９７Ｈｚ，１Ｈ）７．５４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．５６Ｈｚ，１Ｈ）８．２１（ｄ，Ｊ＝３．８５Ｈｚ，１Ｈ）８．７３（ｓ，１Ｈ）９．５７（ｓ，１Ｈ）１２．３３（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４３９  ；Ｒｔ：２．１６０ｍｉｎ，方法Ｃ．
【００９４】
８４の調製
【化６０】
0006718451.tif 000061
５−ブロモ−４−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（２ｇ、９．４３ｍｍｏｌ）のアセトン（２０ｍＬ）溶液に、２Ｎ  ＮａＯＨ溶液（９．４３ｍＬ、１８．８７ｍｍｏｌ）、続いてｐ−トルエンスルホニルクロリド（１．９８ｇ、１０．３８ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、混合物を１８時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。８４を含む残留物を次の工程に直接使用した。
【００９５】
８５の調製
【化６１】
0006718451.tif 000062
８５を、化合物３の調製方法にしたがって調製した。
【００９６】
８６の調製
【化６２】
0006718451.tif 000063
８４（１８０ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）、５（２２３．５ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４（２７８ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）および［１，１’−ビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（２８．５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）の、１，４−ジオキサン（１５ｍＬ）および水（３ｍＬ）中混合物を、マイクロ波の照射下、１００℃に２０分間加熱した。反応混合物をＣｅｌｉｔｅで濾過し、濃縮した。８５を含む混合物を、直接次の工程で使用した。
【００９７】
８６の調製
【化６３】
0006718451.tif 000064
８６（１８０ｍｇ、０．３０４ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）中混合物にＮａＯＭｅ（６６ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を添加し、室温で２時間撹拌した。この反応混合物を水に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機層を分離し、水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。粗混合物を、逆相カラムクロマトグラフィーで精製した。カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  １５０×２０ｍｍ×５μｍ、流量：２５ｍＬ／分、移動相Ａ：水（０．０５％ＮＨ３．Ｈ２Ｏ含有）、移動相Ｂ：アセトニトリル、勾配：１８〜４８％（％Ｂ）。所望の画分を濃縮して、８７を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．０９（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．５４Ｈｚ，４Ｈ）１．５１−１．５９（ｍ，１Ｈ）１．８５−１．９４（ｍ，６Ｈ）２．０３−２．１６（ｍ，２Ｈ）２．６０−２．６９（ｍ，１Ｈ）３．０９（ｓ，３Ｈ）３．２７−３．３６（ｍ，４Ｈ）３．８０−３．９２（ｍ，１Ｈ）４．０４（ｄ，Ｊ＝７．２８Ｈｚ，１Ｈ）４．１２−４．２９（ｍ，１Ｈ）４．９０（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝５．５２Ｈｚ，１Ｈ）８．００（ｓ，１Ｈ）８．０９（ｄ，Ｊ＝３．０１Ｈｚ，１Ｈ）８．７９（ｓ，１Ｈ）９．８７（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４３９．２  ；Ｒｔ：３．１９ｍｉｎ，方法Ｅ．
【００９８】
８８の調製
【化６４】
0006718451.tif 000065
２−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（４００ｍｇ、２．２５３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍＬ）中混合物に、ＮＢＳ（４８０ｍｇ、２．７０ｍｍｏｌ）を添加し、室温で３時間撹拌した。沈殿物を濾過によって分離し、ＤＣＭで洗浄し、真空下で乾燥して、所望の化合物８８を得た。
【００９９】
８９の調製
【化６５】
0006718451.tif 000066
８８（２３０ｍｇ、１．０８５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２５ｍＬ）溶液に、ＮａＨ（８０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を撹拌しながら室温で少しずつ添加した。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、その後、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（２６４ｍｇ、１．３８５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。この反応混合物を減圧下で濃縮した。粗反応混合物をシリカによるフラッシュカラムクロマトグラフィー（勾配：石油エーテル／ＥｔＯＡｃ（６５／３５））で精製した。所望の画分を回収し、蒸発乾固して、８９を得た。
【０１００】
１０７の調製
【化６６】
0006718451.tif 000067
中間体９０を、中間体３の調製方法にしたがって調製した。
【０１０１】
９１の調製
【化６７】
0006718451.tif 000068
９０（１６５．４ｍｇ、０．４８４ｍｍｏｌ）、５（２００ｍｇ、０．４８４ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４（３０８ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）、および［１，１’−ビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（３１．５ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）および水（５ｍＬ）中混合物を８０℃に１８時間加熱した。反応混合物をＣｅｌｉｔｅで濾過し、濃縮した。９１を含む混合物を次の工程に直接使用した。
【０１０２】
９２の調製
【化６８】
0006718451.tif 000069
化合物９２を、１０４の調製方法にしたがって調製した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．０８−１．２９（ｍ，４Ｈ）１．８８−１．９２（ｍ，４Ｈ）２．０８（ｍ，Ｊ＝１４．１０Ｈｚ，１Ｈ）２．１７−２．２５（ｍ，１Ｈ）２．６２−２．６９（ｍ，１Ｈ）２．７７−２．８３（ｍ，１Ｈ）２．８１（ｓ，２Ｈ）３．２５−３．２９（ｍ，１Ｈ）３．２９−３．３４（ｍ，３Ｈ）３．８４−３．９３（ｍ，１Ｈ）４．０４−４．０９（ｍ，１Ｈ）４．０９−４．１８（ｍ，１Ｈ）４．８８（ｍ，１Ｈ）８．０５−８．０８（ｍ，２Ｈ）９．５８（ｓ，２Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４３９．２  ；Ｒｔ：３．４４ｍｉｎ，方法Ｅ．
【０１０３】
９３の調製
化合物９を分取ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  Ｄｉａｃｅｌ  ＯＤ  ２０×２５０ｍｍ；移動相：ＣＯ２、０．２％イソプロピルアミン含有イソプロパノール）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧除去して、９３を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ  ｐｐｍ  １．２２−１．５３（ｍ，９Ｈ）１．５５−１．６７（ｍ，１Ｈ）１．８５−１．９１（ｍ，４Ｈ）２．１３−２．２２（ｍ，１Ｈ）２．２４−２．３２（ｍ，１Ｈ）３．３６−３．４４（ｍ，１Ｈ）３．７０−３．８０（ｍ，１Ｈ）４．１７−４．２７（ｍ，１Ｈ）５．８１（ｍ，１Ｈ）７．５２（ｍ，１Ｈ）８．３９（ｓ，１Ｈ）８．８０（ｓ，１Ｈ）９．６２（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４４８．２；Ｒｔ：１．５５ｍｉｎ，方法Ａ．
【０１０４】
９４の調製
【化６９】
0006718451.tif 000070
ベンジルｔｅｒｔ−ブチル（＋／−）−シクロヘキサン−１，３−ジイルジカルバメート（５２．２７ｇ、１５０ｍｍｏｌ）のメタノール（１．５Ｌ）溶液を、窒素雰囲気下で撹拌し、Ｐｄ／Ｃ（１０％）（１．６ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を添加し、水素（３．７５Ｌ、０．０４Ｍ、１５０ｍｍｏｌ）下、室温で、終夜、撹拌した。触媒を、窒素下、ｄｅｃａｌｉｔｅで濾別し、メタノールで２回洗滌し、濾液を蒸発乾固して、９４を得た。
【０１０５】
９５の調製
【化７０】
0006718451.tif 000071
２，６−ジクロロ−５−フルオロ−ピリジン−３−カルボニトリル（１９．１ｇ、１００ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液を室温で撹拌しながら、９４（１２．５４ｇ、５０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２６ｍＬ、１５０ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（１００ｍＬ）中混合物を少しずつ添加した。反応物を周囲温度で週末の間撹拌した。混合物の溶媒を蒸発させ、残留物を水中に沈澱させ、終夜撹拌した。沈殿物を濾別し、真空で乾燥して、９５を得た。
【０１０６】
９６の調製
【化７１】
0006718451.tif 000072
ＨＣｌ（６Ｍ、ｉＰｒＯＨ中）（１６．７ｍＬ、６Ｍ、１００ｍｍｏｌ）のメタノール（５０ｍＬ）溶液に、９５（４．６１ｇ、１０ｍｍｏｌ）を少しずつ添加し、反応物を２時間、周囲温度で撹拌した。混合物を蒸発乾固し、残留物をジイソプロピルエーテル／アセトン中で沈澱させた。結晶を濾過により回収し、真空で乾燥して、９６を得た。
【０１０７】
９７の調製
【化７２】
0006718451.tif 000073
ＴＨＦ（１８ｍＬ）中にピコリン酸（２４０．５２１ｍｇ、４１．９５４ｍｍｏｌ）を含むフラスコに、ＨＢＴＵ（１４１１ｍｇ、３．７２１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。得られた混合物を、不活性雰囲気下、５分間撹拌した。その後、９６（５００ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．８１ｍＬ、４．６５２ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。その後、反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥し（Ｍｇ２ＳＯ４、濾過し、減圧濃縮した。シリカゲルカラム（ヘプタン：ＡｃＯＥｔ  ５０：５０）を用いて精製を行った。所望の画分を回収し、溶媒を減圧除去して、９７を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝３７３．９；Ｒｔ：１．３８ｍｉｎ，方法Ｃ．
【０１０８】
１５５の調製
【化７３】
0006718451.tif 000074
３（２００ｍｇ、０．５０１ｍｍｏｌ）、９７（１８７ｍｇ、０．５０１ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４（３３ｍｇ、０．０５０１ｍｍｏｌ）、および［１，１’−ビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（３１８ｍｇ、１．５０３ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（５ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）中混合物を９０℃に２時間加熱した。反応混合物をＣｅｌｉｔｅで濾過し、濃縮した。その後、反応混合物をＤＣＭで希釈し、水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、逆相ＨＰＬＣ（方法：ＭＧ３ＢＩＣ  ７０％［水相］−３０％［有機相］から２７％［ＡＰ］−７３％［ＯＰ］へ。ＡＰ＝２５ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＯＰ＝アセトニトリル：メタノール１：１）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧除去して９８を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４５７．２；Ｒｔ：２．３９ｍｉｎ，方法Ｃ．
【０１０９】
９９の調製
【化７４】
0006718451.tif 000075
ＡＣＮ（３０ｍＬ）に溶解した２，６−ジクロロ−５−フルオロ−３−ピリジンカルボニトリル（１ｇ、５．２６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．６１ｍＬ、１１．５４ｍｍｏｌ）および（＋／−）−メチル３−アミノビシクロ［２．２．２］オクタン−２−カルボキシレート（１．０４ｇ、４．７３ｍｍｏｌ）を含むフラスコを１２時間還流した。反応混合物をＥｔＯＡｃおよび塩水に希釈した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を真空で濃縮した。９９を、さらに精製することなく次の工程に使用した。
【０１１０】
１００の調製
【化７５】
0006718451.tif 000076
ＴＨＦ（４０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）に溶解した３（２．８１４ｇ、７．０４９ｍｍｏｌ）および９９（２ｇ、５４．９２ｍｍｏｌ）を含む溶液を、不活性雰囲気下、室温で１０分間撹拌した。その後、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（０．１０３ｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）、リン酸三カリウムおよびキサントホス（０．３３６ｇ、０．７０５ｍｍｏｌ）を添加し、その混合物を１２０℃で１２時間撹拌した。粗生成物を減圧下で濃縮し、１００をさらに精製することなく次の工程で使用した。
【０１１１】
１０１の調製
【化７６】
0006718451.tif 000077
ＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解した１００（５．１０３ｇ、８．８８ｍｍｏｌ）を含むフラスコに、ナトリウムメトキシド（１１．５ｍＬ、５３．２８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を４０℃で３時間撹拌した。その後、反応物を真空下で濃縮した。混合物を逆相クロマトグラフィーで精製した。（開始：有機相１９％；終了：有機相５５％；有機相：０．１％ＨＣＯＯＨ：アセトニトリル、水相  １：１：２５ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）。所望の画分を回収し、溶媒を減圧除去し、１０１を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ＝４０７；Ｒｔ：２．６９ｍｉｎ，方法Ｃ．
【０１１２】
【表１】
0006718451.tif 000078
【０１１３】
【表２】
0006718451.tif 000079
【０１１４】
【表３】
0006718451.tif 000080
【０１１５】
【表４】
0006718451.tif 000081
【０１１６】
【表５】
0006718451.tif 000082
【０１１７】
【表６】
0006718451.tif 000083
【０１１８】
【表７】
0006718451.tif 000084
【０１１９】
【表８】
0006718451.tif 000085
【０１２０】
【表９】
0006718451.tif 000086
【０１２１】
【表１０】
0006718451.tif 000087
【０１２２】
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）測定は、それぞれの方法に特定されたＬＣポンプ、ダイオードアレイ（ＤＡＤ）検出器またはＵＶ検出器、およびカラムを使用して行った。必要に応じて、その他の検出器も含まれた（下の方法の表を参照）。
【０１２３】
カラムからの流れは、大気圧イオン源を装備した質量分析計（ＭＳ）に導入した。化合物の公称モノアイソトピック分子量（ＭＷ）の特定を可能にするイオンを得るために、調整パラメータ（例えば、走査範囲、データ収集時間（ｄｗｅｌｌ  ｔｉｍｅ）など）を設定することは当業者の知識の範囲内である。適切なソフトウェアを用いてデータの取得を行った。
【０１２４】
化合物は、それらの実測保持時間（Ｒｔ）およびイオンで表される。データの表に別段記載されていなければ、報告された分子イオンは、［Ｍ＋Ｈ］＋（プロトン化分子）および／または［Ｍ−Ｈ］−（脱プロトン化分子）に相当する。化合物が直接イオン化できなかった場合、付加物の種類を記載する（すなわち、［Ｍ＋ＮＨ４］＋、［Ｍ＋ＨＣＯＯ］−など）。複数の同位体パターンを有する分子（Ｂｒ、Ｃｌなど）では、報告する値は最も低い同位体質量について得られた値である。得られた結果には全て、使用した方法に通常関連する実験による不確かさを伴った。
【０１２５】
【表１１】
0006718451.tif 000088
【０１２６】
式（Ｉ）の化合物の生物学的活性
化合物のインビトロでの抗ウィルス活性を、セルベースの抗ウィルスアッセイを用いて測定した。このアッセイでは、化合物の存在下または非存在下で、インフルエンザウィルスＡ／Ｔａｉｗａｎ／１／８６（Ｈ１Ｎ１）に感染したＭａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙ  Ｃａｎｉｎｅ  Ｋｉｄｎｅｙ（ＭＤＣＫ）細胞における細胞変性効果（ＣＰＥ）を測定した。ｅｃｈｏ  ｌｉｑｕｉｄ  ｈａｎｄｌｅｒ（Ｌａｂｃｙｔｅ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を用いて、アコースティック液滴吐出により、白色３８４ウェルマイクロタイターアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）に充填した。２００ナノリットルの化合物原液（１００％ＤＭＳＯ）をアッセイプレートにトランスファーした。ＭＤＣＫ細胞を最終密度２５，０００個または６，０００個／ウェルとなるようにプレートに分注した。その後、それぞれ０．００１または０．０１の感染多重度で、インフルエンザＡ／Ｔａｉｗａｎ／１／８６（Ｈ１Ｎ１）ウィルスを添加した。ウェルは１体積当たり０．５％のＤＭＳＯを含む。ウィルス感染および偽感染の対照が、各試験に含まれた。プレートを５％ＣＯ２中、３７℃でインキュベートした。ウィルスに暴露３日後、ＡＴＰｌｉｔｅＴＭキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｚａｖｅｎｔｅｍ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）を製造者の使用説明書にしたがって使用して、ＡＴＰ濃度の低下を測定することによって、細胞変性効果を定量化した。ＩＣ５０を、５０％阻害濃度と定義した。並行して、化合物を３日間、白色３８４ウェルのマイクロタイタープレート内でインキュベートし、ＭＤＣＫ細胞内の化合物の細胞毒性をＡＴＰｌｉｔｅＴＭキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｚａｖｅｎｔｅｍ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）を製造者の使用説明書にしたがって使用して細胞のＡＴＰ含量を測定することによって決定した。細胞毒性を、ＣＣ５０、すなわち、細胞生存度の５０％低下を引き起こす濃度として報告した。
【０１２７】
【表１２】
0006718451.tif 000089
【０１２８】
【表１３】
0006718451.tif 000090
【０１２９】
【表１４】
0006718451.tif 000091
本発明は、以下の態様を包含し得る。
［１］
式（Ｉ）の化合物
【化７７】
0006718451.tif 000092
その立体異性体、薬学的に許容されるその塩、溶媒和物または多形体（式中、
Ｘは、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｃ１〜３アルキル−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜３アルキル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｃ１〜３アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｎ−（ジアルキル）または−ＣＨ２−ＮＣ（Ｏ）−ＣＨ３で置換されていてもよいＮまたはＣであり；
Ｒ１は、ＨまたはＣＨ３であり；
Ｒ２は、ＨまたはＮＨ２であり；
Ｒ３は、カルボン酸により置換されたＣ１〜８アルキル；
またはカルボン酸、−Ｎ−Ｃ１〜３アルキルスルホン、もしくは
Ｃ１〜６アルキルによって置換されていてもよい−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３〜６ヘテロ環によって置換されたＣ３〜８シクロアルキル；
または−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３〜６ヘテロ環によって置換されたＣ３〜６ヘテロ環である）。
［２］
Ｒ１およびＲ２はいずれもＨである、上記［１］に記載の化合物。
［３］
次の構造式を有する、上記［１］または［２］に記載の化合物。
【化７８】
0006718451.tif 000093
［４］
上記［１］に記載の、式（Ｉ）の化合物、またはその立体異性体、薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくは多形体を、１種以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体とともに含む医薬組成物。
［５］
医薬として使用される、上記［１］に記載の、式（Ｉ）の化合物、またはその立体異性体、薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくは多形体、あるいは上記［４］に記載の医薬組成物。
［６］
インフルエンザの治療に使用される、上記［１］に記載の、式（Ｉ）の化合物、またはその立体異性体、薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくは多形体、あるいは上記［４］に記載の医薬組成物。
［７］
次の構造式（Ｉ）によって示される化合物
【化７９】
0006718451.tif 000094
その立体異性体、薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくは多形体（式中、
Ｘは、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｃ１〜３アルキル−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜３アルキル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｃ１〜３アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｎ−（ジアルキル）または−ＣＨ２−ＮＣ（Ｏ）−ＣＨ３で置換されていてもよいＮまたはＣであり；
Ｒ１は、ＨまたはＣＨ３であり；
Ｒ２は、ＨまたはＮＨ２であり；
Ｒ３は、カルボン酸により置換されたＣ１〜８アルキル；
またはカルボン酸、−Ｎ−Ｃ１〜３アルキルスルホン、もしくは
Ｃ１〜６アルキルによって置換されていてもよい−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３〜６ヘテロ環によって置換されたＣ３〜８シクロアルキル；
または−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３〜６ヘテロ環によって置換されたＣ３〜６ヘテロ環である）
の、生物試料または患者におけるインフルエンザウィルスの複製を阻害するための使用。
［８］
さらなる治療剤の同時投与をさらに含む、上記［７］に記載の使用。
［９］
前記さらなる治療薬は、抗ウィルス剤もしくはインフルエンザワクチン、またはその両方から選択される、上記［８］に記載の使用。