(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0006692408.tif 000087
で示されるアピキサバンが、アピキサバンの次の二量体不純物：
構造式（ＩＩ）：
【化２】
0006692408.tif 000088
で示される（Ｅ）−６,６’−（４,４’−（ジアゼン−１,２−ジイル）ビス（４,１−フェニレン））ビス（１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−３−カルボキシアミド）、および／または、アピキサバンの次の二量体不純物：
構造式（ＩＩＩ）：
【化３】
0006692408.tif 000089
で示される（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−カルバモイル−１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−６（７Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシド
をＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％により測定された場合に、０.０２％ないし０.１０％で含む、その調製方法であって、
次の工程：
ａ）式（ＩＸ）：
【化４】
0006692408.tif 000090
で示される３−モルホリノ−１−（４−（２−オキソピペリジン−１−イル）フェニル）−５,６−ジヒドロピリジン−２（１Ｈ）−オンの、Ｃ１−Ｃ３アルコールおよび水の混合液中溶液を調製し、
ｂ）工程ａ）にて調製した溶液を濾過し、下記：
式（ＶＩ）：
【化５】
0006692408.tif 000091
で示される（Ｅ）−１,１’−（４,４’−（ジアゼン−１,２−ジイル）ビス（４,１−フェニレン））ビス（３−モルホリノ−５,６−ジヒドロピリジン−２（１Ｈ）−オン）の二量体不純物、および／または、
式（ＶＩＩ）：
【化６】
0006692408.tif 000092
で示される（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−モルホリノ−２−オキソ−５,６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシドの二量体不純物
を除去し、
ｃ）濾液にて、式（ＩＸ）の精製された化合物を含む溶液を得、
ｄ）工程ｃ）の式（ＩＸ）の化合物を式（Ｉ）のアピキサバンに変換する、
ことを含む、方法。
【請求項２】
工程ａ）にて、Ｃ１−Ｃ３アルコールの量が式（ＩＸ）の化合物と比べて５ないし２０倍容量であるところの、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
工程ａ）にて、水の量が式（ＩＸ）の化合物と比べて１ないし１５倍容量であるところの、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
工程ａ）にて、Ｃ１−Ｃ３アルコールの量、および水の量が、式（ＩＸ）の化合物と比べて、各々、５ないし２０倍容量、および１ないし１５倍容量であるところの、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
工程ａ）にて、Ｃ１−Ｃ３アルコールがエタノールであるところの、請求項１ないし４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
工程ｂ）が３０℃と５０℃の間からなる温度で実施されるところの、請求項１ないし５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
工程ａ）において、濾過助剤および／または活性炭がさらに添加されるところの、請求項１ないし６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
工程ｂ）がダイカライトパネルを用いて実施されるところの、請求項１ないし７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
アピキサバンが、アピキサバンの次の二量体不純物である、次式（ＩＩＩ）：
【化７】
0006692408.tif 000093
で示される（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−カルバモイル−１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−６（７Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシドを、ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％により測定された場合に、０.０２％ないし０.１０％で含み、ここで工程ｂ）にて、先駆体としての式（ＶＩＩ）の二量体不純物が除去されるところの、請求項１ないし８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
アピキサバンが、ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％により測定された場合に、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物を０.０２％ないし０.１０％で含有するところの方法であって、式（ＩＸ）の化合物のアピキサバンへの変換を含み、式（ＩＸ）の化合物が、ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％により測定された場合に、２％と５％の間からなる量で式（ＶＩ）および／または式（ＶＩＩ）の二量体不純物を含むところの、請求項１ないし９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
工程ｄ）にて得られるアピキサバンがＮ−１形態を有するところの、請求項１ないし１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
Ａ）次式（ＩＩ）：
【化８】
0006692408.tif 000094
で示される（Ｅ）−６,６’−（４,４’−（ジアゼン−１,２−ジイル）ビス（４,１−フェニレン）ビス（１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−３−カルボキシアミド）、
Ｂ）次式（ＩＩＩ）：
【化９】
0006692408.tif 000095
で示される（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−カルバモイル−１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−６（７Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシド、
Ｃ）次式（ＶＩ）：
【化１０】
0006692408.tif 000096
で示される（Ｅ）−１,１’−（４,４’−（ジアゼン−１,２−ジイル）ビス（４,１−フェニレン））ビス（３−モルホリノ−５,６−ジヒドロピリジン−２（１Ｈ）−オン）、
Ｄ）次式（ＶＩＩ）：
【化１１】
0006692408.tif 000097
で示される（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−モルホリノ−２−オキソ−５,６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシド、
Ｅ）次式（ＩＶ）：
【化１２】
0006692408.tif 000098
で示される（Ｅ）−ジエチル  ６,６’−（４,４’−（ジアゼン−１,２−ジイル）ビス（４,１−フェニレン））ビス（１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−３−カルボキシラート）、
Ｆ）次式（Ｖ）：
【化１３】
0006692408.tif 000099
で示される（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−（エトキシカルボニル）−１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−６（７Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシド
からなる群より選択される、アピキサバンまたはその先駆体の二量体不純物。
【請求項１３】
アピキサバンまたはその先駆体の二量体不純物が黄色粉末であるところの、請求項１２に記載の二量体不純物。
【請求項１４】
次式（ＩＩＩ）：
【化１４】
0006692408.tif 000100
で示される（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−カルバモイル−１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−６（７Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシドである、請求項１２または１３に記載の二量体不純物。
【請求項１５】
アピキサバン中の次式（ＩＩ）：
【化１５】
0006692408.tif 000101
および／または式（ＩＩＩ）：
【化１６】
0006692408.tif 000102
で示されるアピキサバンの二量体不純物を測定する方法であって、以下の工程：
ａ）既知量の式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物をアピキサバン試料に加え、
ｂ）工程ａ）のアピキサバン試料をＨＰＬＣまたはＬＣ／ＭＳ解析に供し、
ｃ）二量体不純物のＨＰＬＣまたはＬＣ／ＭＳピークを検出するか；
または
ａ１）ＨＰＬＣまたはＬＣ／ＭＳによって、二量体不純物を解析し、
ｂ１）アピキサバン試料をＨＰＬＣまたはＬＣ／ＭＳによって解析し、
ｃ１）保持時間または相対保持時間を比較することによって、二量体不純物のＨＰＬＣまたはＬＣ／ＭＳピークを検出するか；
あるいは
ＬＣ／ＭＳ解析によって、［Ｍ＋１］＋が７５１または７６７に等しいａｍｕのピークを検出する
ことを含む、方法。
【請求項１６】
アピキサバン中の、次式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）：
【化１７】
0006692408.tif 000103
【化１８】
0006692408.tif 000104
で示されるアピキサバンの二量体不純物を定量する方法であって、
以下の工程：
ａ）未知の量の式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）で示される化合物を含むアピキサバン試料中の該化合物の各単一の二量体不純物に相当するピーク面積をＨＰＬＣまたはＬＣ／ＭＳによって測定し、
ｂ）既知量の式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）で示される二量体不純物を含有する「対照基準」に相当するピーク面積をＨＰＬＣまたはＬＣ／ＭＳによって測定し、
ｃ）工程ａ）にて測定された面積と、工程ｂ）にて測定された面積を比較してアピキサバン中の二量体不純物の量を規定すること
を含む、方法。
【請求項１７】
アピキサバンの二量体不純物が、式（ＩＩＩ）：
【化１９】
0006692408.tif 000105
で示されるところの、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
アピキサバンの以下の二量体不純物：
ａ）式（ＩＩ）：
【化２０】
0006692408.tif 000106
で示される二量体不純物、
ｂ）式（ＩＩＩ）：
【化２１】
0006692408.tif 000107
で示される二量体不純物の、式（Ｉ）：
【化２２】
0006692408.tif 000108
で示されるアピキサバン中の該二量体不純物を同定および／または定量するための「対照マーカー」または「対照基準」としての使用。
【請求項１９】
アピキサバンの二量体不純物が、式（ＩＩＩ）：
【化２３】
0006692408.tif 000109
の二量体不純物であるところの、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
アピキサバン中に存在する、次式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）：
【化２４】
0006692408.tif 000110
【化２５】
0006692408.tif 000111
で示されるアピキサバンの二量体不純物を１と１００ｐｐｍとの間からなる量で定量する方法であって、その測定がＬＣ／ＭＳによってなされるところの、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アピキサバン（Apixaban）の合成の間に生成され得る、活性成分であるアピキサバンの不純物に、かかる不純物を同定および／または定量する方法に、およびアピキサバンおよびその合成先駆体中にあるその存在を取り除くか、または制限するための合成方法に関する。本発明はこれらの二量体不純物を分析方法で利用することにも関する。
【背景技術】
【０００２】
アピキサバンは静脈血栓塞栓事象を治療するための抗凝血剤として使用される活性医薬成分である。その上、該化合物はまた急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）、脳血管虚血およびがんの治療において有望であることも分かっている。
【０００３】
アピキサバンは、下記の化学式（Ｉ）：
【化１】
0006692408.tif 000002
で示され、
【０００４】
１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−６−［４−（２−オキソピペリジン−１−イル）フェニル］−４,５−ジヒドロピラゾロ［５,４−ｃ］ピリジン−３−カルボキシアミドの化学名およびＣＡＳ  ＲＮ５０３６１２−４７−３を有する。
【０００５】
これまでに、アピキサバンの調製方法がいくらか記載されている。
【０００６】
特に、ＷＯ２００７／００１３８５は、数キログラムの規模での合成を開示する。
【０００７】
具体的には、ＷＯ２００７／００１３８５は、その実施例６において、以下の反応式：
【化２】
0006692408.tif 000003
に従って、アピキサバンエチルエステルを、１０ｋｇの規模で、アミド化反応に付すことによってアピキサバンを調製する方法を開示する。
【０００８】
当該操作によれば、無水アンモニアをプロピレングリコール中で用い、反応を９０℃で少なくとも１２時間行うことで、アピキサバンが９４.６％の単離モル収率で得られた。
【０００９】
Jian’an JingとYafeiJiは、Synthetic Communications, 43, 72-79, 2013において、その７４頁のスキーム３にて概説されるように、アピキサバンに対して費用対効果の高い合成方法を開示する。
【００１０】
アピキサバンのもう一つ別の調製方法がＷＯ  ０３／０４９６８１に開示され；特に実施例５４〜５６において、アピキサバンの中間体である、化合物１０より出発し、該活性医薬成分を調製する合成経路を記載する。具体的には、実施例５４のパートＢの最終セクションでは、水酸化アンモニウムとＥｔＯＡｃの混合物を用いて３−モルホリン−４−イル−１−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）−フェニル］−５,６−ジヒドロ−１Ｈ−ピリジン−２−オン（６３）を生成し；最終的に、フラッシュカラムクロマトグラフィーに付して精製した後に、化合物６３が得られる。同じ実施例のパートＡでは代わりに、銅（Ｉ）と称される異なる化合物が触媒として、濾過し、その後でエタノールで、ついでジエチルエーテルで洗浄することで調製される。得られた銅（Ｉ）は反応の触媒として作用して化合物６３を生成し、従って上記の濾過およびエタノール、ついでジエチルエーテルでの洗浄は化合物６３を生成するために実施されるのではなく、単に銅（Ｉ）を取り除くためになされるに過ぎない。
【００１１】
アピキサバンの中間体を得るためのさらなる方法がＣＮ１０４０３０９７２に開示されている。特に、実施例１では、化合物（Ｉ）、すなわち、アピキサバンの中間体を得るための方法が開示される。具体的には、工程（３）にて、水を添加し、つづいて濾過することで該化合物が得られ；最後に化合物（Ｉ）が７４.０％の収率で、かつ９８.５％よりも高い純度で生成される。
【００１２】
本発明者らが実験室で実験している間に、意外にも、アピキサバンの調製に関する文献に開示される多数の合成経路は、高分子量の不純物で汚染されている生成物を提供することが判明した。
【００１３】
そのような高分子量の不純物が、特に、アピキサバンなどの医薬活性物質中に０.１０％よりも多い量で存在することは、許容されない。
【発明の概要】
【００１４】
従って、本発明が取り組む課題は、高分子量の不純物の含量が低いアピキサバンの調製を可能とする、アピキサバンの改善された調製方法を提供することである。
【００１５】
この課題は、添付した特許請求の範囲において要点が説明されるように、アピキサバンの調製方法により解決される。
【００１６】
特に、第１の態様にて、本発明は、下記の構造式（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）：
【化３】
0006692408.tif 000004
【化４】
0006692408.tif 000005
で示される二量体不純物を実質的に含まない、活性成分のアピキサバンを生成する方法を提供する。
【００１７】
さらなる態様において、本発明は、アピキサバン中の式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物の測定方法を提供する。
【００１８】
その上さらなる態様において、本発明は、新規化学物質として、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）および（ＶＩＩ）で示される化合物を提供する。
【００１９】
さらなる態様において、本発明は、アピキサバンの試料中の、またはその先駆体中の不純物の同一性、および／またはその量を測定する方法にて、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）および（ＶＩＩ）で示される単離された不純物の「指示標識」および／または「参考基準」としての使用を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】アピキサバンの全体的な合成スキームであって、先行文献の操作にて示されるように、不純物の化学構造および量の観点から、その不純物のキャリー・オーバーをその合成を通して含む、スキームを示す。
【００２１】
【図２】本発明の方法に係るアピキサバンの全体的な合成スキームであって、工程ａ）からｄ）を含む方法に従って得られるように、不純物の化学構造および量の観点から、その不純物のキャリー・オーバーをその合成を通して含む、スキームを示す。
【００２２】
【図３】ＬＣ−ＭＳによって測定された式（ＩＩ）のアピキサバンの二量体不純物のＵＶスペクトルを示す。
【００２３】
【図４】ＬＣ−ＭＳによって測定された式（ＩＩＩ）のアピキサバンの二量体不純物のＵＶスペクトルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明の目的は、式（Ｉ）：
【化５】
0006692408.tif 000006
で示されるアピキサバンが、アピキサバンの次の二量体不純物：
【００２５】
構造式（ＩＩ）：
【化６】
0006692408.tif 000007
で示される（Ｅ）−６,６’−（４,４’−（ジアゼン−１,２−ジイル）ビス（４,１−フェニレン））ビス（１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−３−カルボキシアミド）、および／または、アピキサバンの次の二量体不純物：
【００２６】
構造式（ＩＩＩ）：
【化７】
0006692408.tif 000008
で示される（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−カルバモイル−１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−６（７Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシド
を０.１０％未満で含む、その調製方法であって、
次の工程：
【００２７】
ａ）式（ＩＸ）：
【化８】
0006692408.tif 000009
で示される３−モルホリノ−１−（４−（２−オキソピペリジン−１−イル）フェニル）−５,６−ジヒドロピリジン−２（１Ｈ）−オンの、Ｃ１−Ｃ３アルコールおよび水の混合液中溶液を調製し、
【００２８】
ｂ）工程ａ）にて調製した溶液を濾過し、下記：
【００２９】
式（ＶＩ）：
【化９】
0006692408.tif 000010
で示される（Ｅ）−１,１’−（４,４’−（ジアゼン−１,２−ジイル）ビス（４,１−フェニレン））ビス（３−モルホリノ−５,６−ジヒドロピリジン−２（１Ｈ）−オン）の二量体不純物、および／または、
式（ＶＩＩ）：
【化１０】
0006692408.tif 000011
で示される（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−モルホリノ−２−オキソ−５,６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシドの二量体不純物
を除去し、
【００３０】
ｃ）濾液にて、式（ＩＸ）の精製された化合物を含む溶液を得、
【００３１】
ｄ）工程ｃ）の式（ＩＸ）の化合物を式（Ｉ）のアピキサバンに変換し、
【００３２】
あるいは、別法として、工程ａ）ないしｄ）を次の工程：
【００３３】
ｅ）式（ＶＩＩＩ）：
【化１１】
0006692408.tif 000012
で示されるエチル  １−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−６−（４−（２−オキソピペリジン−１−イル）フェニル）−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−３−カルボキシラートのＣ１−Ｃ４アルコール中溶液を調製し、
【００３４】
ｆ）工程ｅ）にて調製された溶液を濾過し、下記：
【００３５】
次式（ＩＶ）：
【化１２】
0006692408.tif 000013
で示される（Ｅ）−ジエチル  ６,６’−（４,４’−（ジアゼン−１,２−ジイル）ビス（４,１−フェニレン））ビス（１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−３−カルボキシラート）の二量体不純物、および／または、
式（Ｖ）：
【化１３】
0006692408.tif 000014
で示される（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−（エトキシカルボニル）−１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−６（７Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシドの二量体不純物
を除去し、
【００３６】
ｇ）濾液にて、式（ＶＩＩＩ）の精製された化合物を含む溶液を得、
【００３７】
ｈ）所望により、式（ＶＩＩＩ）の精製された化合物を固体として単離し、工程ｅ）ないしｇ）を１回または複数回繰り返してもよく、
【００３８】
ｉ）工程ｇ）またはｈ）の式（ＶＩＩＩ）の化合物を式（Ｉ）のアピキサバンに変換する
ことを含む、方法を提供することである。
【００３９】
実際に意外にも、式（ＩＸ）の化合物を含むアルコール性水溶液および／または式（ＶＩＩＩ）の化合物のアルコール性溶液を濾過することで、各々、式（ＶＩ）および（ＶＩＩ）、（ＩＶ）および（Ｖ）の関連する二量体不純物を選択的に除去することが可能であることが見出された。該不純物はこのまま固体としてフィルター上に残り、一方で精製された生成物はそのすべての量が濾液中に集められる。フィルター上に残った固体は、実際量の式（ＩＸ）または（ＶＩＩＩ）の生成物を含有しないが、式（ＶＩ）および（ＶＩＩ）または（ＩＶ）および（Ｖ）の二量体不純物だけを、所望により他の無機濾過助剤および／または活性炭を含有する。
【００４０】
本発明の方法の利点は、各々、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）、（ＶＩ）および（ＶＩＩ）、（ＩＶ）および（Ｖ）の各二量体不純物を０.１０％未満で含有する、アピキサバンおよび式（ＩＸ）および（ＶＩＩＩ）で示されるその先駆体の調製を可能とすることである。
【００４１】
本発明の方法のもう一つ別の極めて重要な利点は、該方法が二量体不純物のレベルを低減するにおいて非常に効率的であり、同時に、二量体不純物を除去するのに極めて効率的であって生成物のどのような喪失も回避し、すなわち、生成物をほぼ定量的な収率で提供することである。この結果はいずれか他の再結晶操作により達成され得る結果よりも確実に優れている。というのも、再結晶操作により、理論的に、二量体不純物のレベルを下げて同じ減少レベルにすることも可能であるが、精製された生成物の収率は本発明の方法により得られるほぼ定量的な収率よりも確実にかなり低いからである。
【００４２】
その上、図１に示されるような二量体不純物は除去するのが非常に困難であり、実際には、それら不純物はアピキサバンの合成過程の各工程にて存在し、それらは中間体を単離する間に失われないため、その合成過程のすべての工程を横切って二量体不純物が高含量で生成物であるアピキサバンに到達することとなる。
【００４３】
最後に、これらのアピキサバンの二量体不純物は分子量が大きいため、それらはＨＰＬＣ解析で相対的に高い保持時間を示すか、あるいは多くの場合で、アピキサバンおよび、例えば、異性体の不純物などの、その関連する不純物の解析に向けられた解析方法において、該二量体不純物がクロマトグラフィーカラムに保持され、ほとんどの場合で、それらは溶離せず、カラムの先頭部に残っていると考えなければならない。従って、該二量体不純物の存在の決定はそれが確かなものではないため、結果として、該二量体不純物が存在すると決定することは明らかではない。同じことが該不純物の除去または軽減と関連付けられる方法に適用される。
【００４４】
次式（ＩＸ）：
【化１４】
0006692408.tif 000015
で示される化合物は、Synthetic Communication, 2013, vol.43, pp.72-79に開示される合成方法に従って調製され得る。
【００４５】
次式（ＶＩＩＩ）：
【化１５】
0006692408.tif 000016
で示される化合物は、上記の文献にある方法に従って調製され得る。
【００４６】
本発明の方法に従って調製されるアピキサバンは、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のアピキサバンの二量体不純物を、各々、０.１０％未満で含み、ここで０.１０％は解析性ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％により測定される。該測定は、都合よくは、実施例８に記載の解析方法を用いて実施され得る。
【００４７】
本発明の方法の工程ａ）において、式（ＩＸ）：
【化１６】
0006692408.tif 000017
で示される、３−モルホリノ−１−（４−（２−オキソピペリジン−１−イル）フェニル）−５,６−ジヒドロピリジン−２（１Ｈ）−オンの、Ｃ１−Ｃ３アルコールと水との混合液中溶液が調製される。
【００４８】
式（ＩＸ）の化合物の溶液を調製するとは、固形の式（ＩＸ）の化合物をＣ１−Ｃ３アルコールと水との混合液に溶かすか、あるいはまた、化合物（ＩＸ）をＣ１−Ｃ３アルコールに溶かし、ついで水を添加することを意味する。
【００４９】
別に、式（ＩＸ）の化合物の溶液の調製は、Ｃ１−Ｃ３アルコールと水との混合液中、もう一つ別の化合物（すなわち、先駆体）を式（ＩＸ）の化合物に変換することによっても達成され得る。
【００５０】
別に、式（ＩＸ）の化合物の溶液の調製は、Ｃ１−Ｃ３アルコール中、もう一つ別の化合物（すなわち、先駆体）を式（ＩＸ）の化合物に変換し、次に水を添加することによっても達成され得る。
【００５１】
別に、式（ＩＸ）の化合物の溶液の調製は、別の溶媒中、もう一つ別の化合物（すなわち、先駆体）を式（ＩＸ）の化合物に変換し、ついでその溶媒をＣ１−Ｃ３アルコールと水との混合液と交換し、あるいはＣ１−Ｃ３アルコールと交換し、次に水を添加することによっても達成され得る。
【００５２】
好ましい実施態様によれば、もう一つ別の化合物（すなわち、先駆体）は、例えば、式（Ｘ）：
【化１７】
0006692408.tif 000018
で示される化合物であり得る。
【００５３】
好ましい実施態様によれば、式（Ｘ）の化合物の式（ＩＸ）の化合物への変換は、クロロバレリルクロリドとの反応を用いて実施される。
【００５４】
好ましい実施態様によれば、Ｃ１−Ｃ３アルコールと水との混合液で、Ｃ１−Ｃ３アルコールはエタノールである。
【００５５】
好ましい実施態様によれば、溶媒の交換はＣ１−Ｃ３アルコールを用いてなされ、次に水が添加される。より好ましくは、溶媒の交換はエタノールを用いてなされ、次に水が添加される。
【００５６】
本発明の方法の工程ａ）にて調製される、式（ＩＸ）：
【化１８】
0006692408.tif 000019
で示される、３−モルホリノ−１−（４−（２−オキソピペリジン−１−イル）フェニル）−５,６−ジヒドロピリジン−２（１Ｈ）−オンの、Ｃ１−Ｃ３アルコールと水との混合液中の溶液は、少量の固形材料、典型的には、不溶性材料のその量が式（ＩＸ）の化合物の重量の５重量％未満である、乳白色の溶液、あるいはマイクロ懸濁液または懸濁液である。該溶液中で、式（ＶＩ）および（ＶＩＩ）の二量体不純物は、実際に、不溶性固体のままで、化合物（ＩＸ）の溶液に乳白色の外観を、あるいは式（ＶＩ）および（ＶＩＩ）の二量体不純物により構成される少量の固形材料のマイクロ懸濁液または懸濁液を提供する。式（ＩＸ）の化合物は、その逆で、Ｃ１−Ｃ３アルコールと水の溶液に完全に可溶化される。
【００５７】
Ｃ１−Ｃ３アルコールと水との混合液にて、Ｃ１−Ｃ３アルコールは、メタノール、エタノール、およびｎ−プロパノールまたはイソプロパノールより選択される一価アルコール溶媒である
【００５８】
本発明の方法の工程ａ）において、Ｃ１−Ｃ３アルコールの量は式（ＩＸ）の化合物と比べて２ないし３０容量倍である。
【００５９】
容量は生成物の単位当たりの溶媒の容量を意味し、すなわち、例えば、１倍容量は１キログラムに付き１リットルであり、１グラムに対して１ミリリットルであり、または１ミリグラムに付き１マイクロリットルである。かくして、１０倍容量は、例えば、１キログラムの物質、この場合、式（ＩＸ）の化合物に付き、１０リットルを意味する。
【００６０】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ａ）にて、Ｃ１−Ｃ３アルコールの量は式（ＩＸ）の化合物と比べて５ないし２０倍容量である。
【００６１】
本発明の方法のさらに好ましい実施態様によれば、工程ａ）にて、Ｃ１−Ｃ３アルコールの量は式（ＩＸ）の化合物と比べて１０ないし１５倍容量であり、より好ましくは該容量は約１３倍容量である。
【００６２】
本発明の方法の工程ａ）において、水の量は、式（ＩＸ）の化合物と比べて０.５ないし１５倍容量である。
【００６３】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ａ）にて、水の量は、式（ＩＸ）の化合物と比べて１ないし１５倍容量である。
【００６４】
本発明の方法のさらに好ましい実施態様によれば、工程ａ）にて、水の量は、式（ＩＸ）の化合物と比べて７ないし１３倍容量であり、より好ましくは約１０倍容量である。
【００６５】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ａ）にて、Ｃ１−Ｃ３アルコールの量、および水の量は、式（ＩＸ）の化合物と比べて、各々、５ないし２０倍容量、および１ないし１５倍容量である。
【００６６】
本発明の方法のさらに好ましい実施態様によれば、工程ａ）にて、Ｃ１−Ｃ３アルコールの量は式（ＩＸ）の化合物と比べて１０ないし１５倍容量であり、水の量は式（ＩＸ）の化合物と比べて７ないし１３倍容量である。より好ましくは、Ｃ１−Ｃ３アルコールの量は式（ＩＸ）の化合物と比べて約１３倍容量であり、水の量は式（ＩＸ）の化合物と比べて約１０倍容量である。
【００６７】
特に、工程ａ）では、混合液中の、水の量と、Ｃ１−Ｃ３アルコールの量の間の容量割合は、水とＣ１−Ｃ３アルコールの混合液中に２.４％と８０％（ｖ／ｖ％）の間の範囲で、好ましくは水とＣ１−Ｃ３アルコールの上記した混合液中に６.２５％と６０％（ｖ／ｖ％）の間の範囲で、より好ましくは水とＣ１−Ｃ３アルコールの上記した混合液中に３５％と５０％（ｖ／ｖ％）の間の範囲で構成される。
【００６８】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ａ）にて、Ｃ１−Ｃ３アルコールはエタノールである。
【００６９】
本発明の方法のさらに好ましい実施態様によれば、工程ａ）にて、エタノールの量は、式（ＩＸ）の化合物と比べて１０ないし１５倍容量であり、水の量は式（ＩＸ）の化合物と比べて７ないし１３倍容量である。さらに好ましくは、エタノールの量は式（ＩＸ）の化合物と比べて約１３倍容量であり、水の量は式（ＩＸ）の化合物と比べて約１０倍容量である。
【００７０】
本発明の方法の工程ａ）は、２０℃と１２０℃との間からなる温度で実施され得る。
【００７１】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ａ）は３０℃と５０℃との間からなる温度で実施される。
【００７２】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ａ）は４０℃と４５℃との間からなる温度で実施される。
【００７３】
本発明の方法のさらに好ましい実施態様によれば、工程ａ）は３０℃と５０℃との間からなる温度で実施され、エタノールの量は式（ＩＸ）の化合物と比べて１０ないし１５倍容量であり、水の量は式（ＩＸ）の化合物と比べて７ないし１３倍容量である。
【００７４】
より好ましくは、工程ａ）は４０℃と４５℃との間からなる温度で実施され、エタノールの量は式（ＩＸ）の化合物と比べて約１３倍容量であり、水の量は式（ＩＸ）の化合物と比べて約１０倍容量である。
【００７５】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ａ）にて、濾過助剤および／または活性炭がさらに添加される。
【００７６】
工程ａ）の溶液が調製された後で、工程ｂ）にて、該溶液を濾過し、式（ＶＩ）および（ＶＩＩ）の二量体不純物を除去する。
【００７７】
工程ａ）にて調製される溶液は、濾紙を通して、あるいは濾紙パネル、またはダイカライト（dicalite）パネルを通して濾過され得る。
【００７８】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ｂ）はダイカライトパネルを用いて実施される。
【００７９】
本発明の方法の工程ｂ）は、２０℃と１２０℃との間からなる温度で実施され得る。
【００８０】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ｂ）は、３０℃と５０℃との間からなる温度で実施される。
【００８１】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ｂ）は、４０℃と４５℃との間からなる温度で実施される。
【００８２】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ｂ）において、フィルターは、既に実施された濾過の温度と同温に予め加熱されたＣ１−Ｃ３アルコール溶媒でさらに洗浄される。
【００８３】
式（ＶＩ）および（ＶＩＩ）の不溶性不純物はフィルターに固形材料として残り、工程ａ）にて、濾過助剤および／または活性炭がさらに添加され、あるいは工程ｂ）にて、濾過がダイカライトパネルで行われる場合には、それらはフィルターケーキを構成する。
【００８４】
工程ｃ）において、式（ＩＸ）の精製された化合物を含む溶液が濾液中にて得られる。
【００８５】
工程ｃ）で得られる式（ＩＸ）の化合物は、工程ｄ）にて、Synthetic Communications, 43; 72-79, 2013に開示の方法、または好ましくはＷＯ２００７／００１３８５に開示の方法などの、従来技術の方法に従って、式（Ｉ）のアピキサバンに変換される。
【００８６】
常に同じ発明の概念に基づく本発明の別法によれば、上記の工程ａ）ないしｄ）は次の工程ｅ）ないしｉ）と置き換えられる。
【００８７】
工程ｅ）において、式（ＶＩＩＩ）：
【化１９】
0006692408.tif 000020
で示される、エチル  １−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−６−（４−（２−オキソピペリジン−１−イル）フェニル）−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−３−カルボキシラートのＣ１−Ｃ４アルコール中溶液が調製される。
【００８８】
工程ｅ）における化合物（ＶＩＩＩ）の該溶液の調製は、工程ａ）にて式（ＩＸ）の化合物について記載される調製と、上記される変数をすべて含み、同様にして実施され得る。
【００８９】
Ｃ１−Ｃ４アルコールは、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ-ブタノール、イソブタノール、sec-ブタノールおよびtert-ブタノールからなる一価アルコールの群より選択される。
【００９０】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ｅ）にて、Ｃ１−Ｃ４アルコールはエタノールである。
【００９１】
本発明の方法の工程ｅ）において、Ｃ１−Ｃ４アルコールの量は、式（ＶＩＩＩ）の化合物と比べて３ないし２０倍容量である。
【００９２】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ｅ）において、Ｃ１−Ｃ４アルコールの量は、式（ＶＩＩＩ）の化合物と比べて５ないし１５倍容量、より好ましくは約１０倍容量である。
【００９３】
本発明の方法によれば、工程ｅ）は４０℃とそのアルコールの沸点との間からなる温度で実施される。
【００９４】
本発明の方法のさらに好ましい実施態様によれば、工程ｅ）はアルコールの沸点温度で、すなわち還流温度で実施される。
【００９５】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ｅ）は、式（ＶＩＩＩ）の化合物と比べて１０倍容量のエタノールで、そのエタノールの沸点で実施される。
【００９６】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ｅ）において、濾過助剤および／または活性炭がさらに添加される。
【００９７】
本発明の方法のさらに好ましい実施態様によれば、工程ｅ）において、活性炭がさらに添加される。
【００９８】
工程ｅ）の溶液の調製の後に、工程ｆ）において、当該溶液を濾過し、式（ＩＶ）および／または式（Ｖ）の二量体不純物を除去する。
【００９９】
工程ｅ）にて調製される溶液は、濾紙を通して、あるいは濾紙パネル、またはダイカライトパネルを通して濾過され得る。
【０１００】
本発明の方法の工程ｆ）は、４０℃とアルコールの沸点との間からなる温度で実施され得る。
【０１０１】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ｆ）はアルコールの沸点で実施される。
【０１０２】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ｆ）において、フィルターは、既に実施された濾過の温度と同じ温度に予め加熱されたＣ１−Ｃ４アルコール溶媒でさらに洗浄される。
【０１０３】
式（ＩＶ）および（Ｖ）の不溶性不純物はフィルターにて固形材料として残ったままであり、工程ｅ）にて、濾過助剤および／または活性炭がさらに添加され、あるいは工程ｆ）にて、濾過がダイカライトパネルで行われる場合には、それらはフィルターケーキを構成する。
【０１０４】
所望により、特に、式（ＶＩＩＩ）の精製された化合物中にある式（ＩＶ）および（Ｖ）の残りの不純物が工程ｈ）にてなおも０.１０％よりも高い場合には、結果として、式（ＶＩＩＩ）の精製された化合物は固体として単離されてもよく、工程ｅ）ないしｇ）を１回または複数回繰り返して精製されてもよい。
【０１０５】
工程ｇ）またはｈ）において得られる式（ＶＩＩＩ）の精製された化合物は、工程ｉ）にて式（Ｉ）のアピキサバンに、Synthetic Communications, 43; 72-79, 2013、またはＷＯ２００７／００１３８５に開示される方法などの既知の先行技術の方法に従って変換される。
【０１０６】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、アピキサバンは、アピキサバンの次の二量体不純物である、次式（ＩＩＩ）：
【化２０】
0006692408.tif 000021
で示される、（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−カルバモイル−１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−６（７Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシドを０.１０％未満で含み、ここで工程ｂ）にて、式（ＶＩＩ）の二量体不純物が除去されるか、あるいはまた工程ｆ）にて、式（Ｖ）の不純物が除去される。
【０１０７】
式（ＩＩＩ）の二量体不純物またはその先駆体は特定の構造を有し、それらをさらに極性とする電子電荷を有するため、そのために有機溶媒に溶けにくく、同時に本発明の工程ｂ）またはｆ）にてさらに容易に除去される。
【０１０８】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、アピキサバンは式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物を０.０１％未満で含む。
【０１０９】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、アピキサバンは、ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％により測定された場合に、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物を０.００％ないし０.０２％で含有し、該方法は式（ＩＸ）の化合物のアピキサバンへの変換を含み、ここで該式（ＩＸ）の化合物は、ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％により測定された場合に、式（ＶＩ）および／または式（ＶＩＩ）の二量体不純物を０.１％と２％の間からなる量で含む。
【０１１０】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、アピキサバンは、ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％により測定された場合に、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物を０.０２％ないし０.１０％で含有し、該方法は式（ＩＸ）の化合物のアピキサバンへの変換を含み、ここで該式（ＩＸ）の化合物は、ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％により測定された場合に、式（ＶＩ）および／または式（ＶＩＩ）の二量体不純物を２％と５％の間からなる量で含む。
【０１１１】
具体的には、式（ＶＩ）および／または式（ＶＩＩ）の二量体不純物を２％と５％の間からなる量で含む、式（ＩＸ）の化合物より出発し、上記されるように、工程ａ）、ｂ）、ｃ）およびｄ）を含む本発明の方法に従って、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物を０.０２％ないし０.１０％で含むアピキサバンが得られる。
【０１１２】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、工程ｄ）にて、または工程ｉ）にて得られるアピキサバンはＮ−１形態を有する。
【０１１３】
アピキサバンのＮ−１形態は、Ｎ−１と称される多形相を有するアピキサバンを意味し、ＥＰ３００９４３５の実施例において詳しく特徴付けられ、かつ生成される固体形態であり、該形態はアピキサバンの熱力学的に安定した形態であると定義される。さらには、アピキサバンのＮ−１形態は、特に本願の実験セクションの実施例３にて、ＦＴ−ＩＲ、ＤＳＣ、ＴＧＡおよびＸ−ＲＰＤとしての数種の技法により特徴付けられ、そのデータを参考により本明細書に含めるものとする。
【０１１４】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、該方法は、以下の工程ａ）、ｂ）、ｃ）を含み、精製された化合物（ＩＸ）を得、連続する工程ｅ）、ｆ）、ｇ）、ｈ）、ｉ）を副、見 こうして式（Ｉ）のアピキサバンを得る。
【０１１５】
実際には、ａ）〜ｃ）、およびｅ）〜ｉ）の両方の工程を実施し、アピキサバン中の式（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）の不純物を最低レベルで得ることも可能である。特に、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物のレベルのさらなる低下は、本発明の方法のあらゆる工程を組み合わせて用いたことによるものである。これらの結果は工程ａ）より出発し、工程ｂ）を進め、濾過を行い、式（ＶＩ）の二量体不純物および／または式（ＶＩＩ）の二量体不純物を除去し、最終的に式（ＩＸ）の精製された化合物を含む溶液を得る、以下の方法によって得られた。最後に得られた化合物を、工程ｅ）に、ついでｆ）に続いて、式（ＶＩＩＩ）の化合物に変換し、式（ＩＶ）の二量体不純物および／または式（Ｖ）の二量体不純物を除去し、こうして工程ｇ）において式（ＶＩＩＩ）の精製された化合物を含む溶液を得、所望により工程ｈ）を実施し、最後に工程ｉ）にて、化合物（ＶＩＩＩ）を、このように式（ＩＩ）の二量体不純物および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物をわずかな量で含有する、式（Ｉ）のアピキサバンに変換する。
【０１１６】
特に、上記されるような工程ａ）、ｂ）、ｃ）およびｄ）を含む本発明の方法は、より早い段階で二量体不純物の軽減を可能とするため、すなわち、二量体不純物の量がアピキサバンを調製する方法の第１段階で減らされ、かくして合成を通して二量体不純物のキャリー・オーバーを避け、さらに進行した、より高い付加価値を有する中間体の喪失を回避するため、該方法が好ましい。
【０１１７】
その上、工程ａ）、ｂ）、ｃ）およびｄ）を含む該方法は、二量体不純物、具体的には式（ＶＩ）の二量体不純物、および式（ＶＩＩ）の二量体不純物を減らすことについてより効果的であるため、すなわち、該方法は二量体不純物からの精製を高含量で提供するため、好ましい。
【０１１８】
本発明の方法を開発する間に、合成の間に除去することが非常に困難であり、最終的には、最後の医薬品であるアピキサバンを汚染する、ある不純物の存在が見出された。特に、合成の初期段階で既に、合成先駆体である式（ＩＸ）および（ＶＩＩＩ）の中間体を汚染する不純物、ＨＰＬＣクロマトグラムにおいて保持時間が相対的に高い不純物の存在が観察された。
【０１１９】
かくして、本発明の意外なもう一つ別の態様は、アピキサバンおよびその先駆体中に該不純物の存在を見出したことであり、その不純物の特性、構造および起源も意外である。
【０１２０】
実際、意外なことに、式（ＸＩ）の化合物を、式（Ｘ）の化合物とする変換が：
【化２１】
0006692408.tif 000022
【０１２１】
硫化ナトリウムによってなされる間に、式（ＶＩ）および（ＶＩＩ）：
【化２２】
0006692408.tif 000023
【化２３】
0006692408.tif 000024
で示される二量体不純物が、該反応の副生成物として形成されることが見出された。
【０１２２】
その上、意外にも、該不純物がアピキサバン合成を通して同じ化学的変換を受けて進行し、かくして式（ＶＩＩＩ）の化合物の式（ＩＶ）および（Ｖ）の二量体不純物を生成し、次にアピキサバン化合物の式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の二量体不純物を生成することが見出された。
【０１２３】
図１は、アピキサバン合成を通して、起源の図式および不純物のキャリー・オーバーを示す。
【０１２４】
さらには、該不純物のキャリー・オーバーを考えた場合、上記されるような、工程ａ）、ｂ）、ｃ）およびｄ）を含む方法は、合成の初期段階で、二量体不純物を軽減させる利点を有し、すなわち式（ＩＸ）の化合物中の式（ＶＩ）の二量体不純物および／または式（ＶＩＩ）の二量体不純物の量を減らし、かくして次の中間体に対応して関連付けられる、およびアピキサバン中の二量体不純物の減少をもたらす。
【０１２５】
かくして、本発明の態様は、次の群：
【０１２６】
Ａ）次式（ＩＩ）：
【化２４】
0006692408.tif 000025
で示される、（Ｅ）−６,６’−（４,４’−（ジアゼン−１,２−ジイル）ビス（４,１−フェニレン）ビス（１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−３−カルボキシアミド）、
【０１２７】
Ｂ）次式（ＩＩＩ）：
【化２５】
0006692408.tif 000026
で示される、（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−カルバモイル−１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−６（７Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシド、
【０１２８】
Ｃ）次式（ＶＩ）：
【化２６】
0006692408.tif 000027
で示される、（Ｅ）−１,１’−（４,４’−（ジアゼン−１,２−ジイル）ビス（４,１−フェニレン））ビス（３−モルホリノ−５,６−ジヒドロピリジン−２（１Ｈ）−オン）、
【０１２９】
Ｄ）次式（ＶＩＩ）：
【化２７】
0006692408.tif 000028
で示される、（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−モルホリノ−２−オキソ−５,６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシド、
【０１３０】
Ｅ）次式（ＩＶ）：
【化２８】
0006692408.tif 000029
で示される、（Ｅ）−ジエチル ６,６’−（４,４’−（ジアゼン−１,２−ジイル）ビス（４,１−フェニレン））ビス（１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−３−カルボキシラート）、
【０１３１】
Ｆ）次式（Ｖ）：
【化２９】
0006692408.tif 000030
で示される、（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−（エトキシカルボニル）−１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−６（７Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシド
より選択される、アピキサバンまたはその先駆体の二量体不純物である。
【０１３２】
アピキサバンあるいは上記されるその先駆体の二量体不純物は黄色の粉末である。
【０１３３】
特に、図３および４において、ＨＰＬＣ／ＤＡＤ検出器によって獲得されるアピキサバンの二量体不純物のＵＶ−ＶＩＳスペクトルを報告する。
【０１３４】
二量体不純物はこのようにアピキサバンの色相に影響を及ぼす。特に、該不純物はアピキサバンに黄色を付与する。かくして、アピキサバンはそのような不純物を含有せず、白色を示すことが望ましい。
【０１３５】
別の態様として、アピキサバンおよびその先駆体の二量体不純物、特に式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のアピキサバンの不純物は、いずれの溶媒においても特に不溶性である。
【０１３６】
次式（ＩＩＩ）：
【化３０】
0006692408.tif 000031
で示される、（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−カルバモイル−１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−６（７Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシドが、式（Ｉ）のアピキサバンの好ましい二量体不純物である。該不純物は黄色粉末である。
【０１３７】
特に、式（ＩＩＩ）の二量体不純物は、図４に示されるように、３６０−３７０ｎｍで極大の吸光度を示すＵＶスペクトルを有する。かくして、該二量体不純物は山吹色を示す物質である。
【０１３８】
化学反応の生成物は規制基準に合致するのに十分な純度を有する単一の化合物であることが稀にある。該反応に使用される試薬の二次反応に起因する副生成物もまた単離された生成物中に存在し得る。アピキサバンなどの活性な成分の生成方法のある工程において、その純度は、一般に、それが後の反応に適し、最後に医薬品にて使用するのに適するかどうかを決定するために、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ＬＣ／ＭＳ、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）または薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって解析される。
【０１３９】
一般に、不純物は分光学的に同定され、これによりクロマトグラフィーのピーク位置が決定され、これにはクロマトグラムやＴＬＣパネル上のスポットが関連付けられる。
【０１４０】
ピーク位置が特定の不純物と関連付けられると、その不純物のサンプル中での相対的位置がクロマトグラムにて同定され、ここでそのクロマトグラムでの位置は、サンプルのカラムへの注入と、検出器を介する不純物の溶離との間の時間（分）で測定され得る。クロマトグラムでの位置保持時間として知られており、保持時間の間の割合は相対的保持時間として知られる。
【０１４１】
医薬の分野における当業者は比較的純粋な化合物が対照基準として使用され得ることが分かっている。対照基準は、それが不純物を検出するためでけでなく、活性成分のサンプル中に存在する不純物の量を定量するためにも使用され得ることを除けば、対照マーカーと似ている。
【０１４２】
当業者に知られるように、方法における不純物の管理は、その化学構造、合成経路を理解し、最終生成物中の不純物の量に影響を及ぼすパラメータをＤＯＥにより同定することによりかなり改善される。
【０１４３】
最後まで反応しなかった中間体、原材料の不純物、反応の副生成物、分解生成物、ならびに他の生成物を含む、アピキサバンの不純物は、アピキサバン含有の医薬品形態の品質および効能に影響を及ぼす可能性がある。かくして、アピキサバンのサンプル中のアピキサバンの二量体不純物に対して、特に薬物のアピキサバンを大量に生産するために、特別に焦点を当てて、不純物のレベルを規定する方法が必要とされる。
【０１４４】
このようにして、アピキサバン中の、次式（ＩＩ）：
【化３１】
0006692408.tif 000032
で示されるアピキサバンの二量体不純物、および／または式（ＩＩＩ）：
【化３２】
0006692408.tif 000033
の二量体不純物を測定する方法が見出された。
【０１４５】
式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物は、実際に、以下の解析方法に従って使用され、アピキサバン中の式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の該二量体不純物を同定および／または定量することができる。
【０１４６】
アピキサバン中の式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物を検出または同定する方法は、以下の工程：
ａ）既知量の式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物をアピキサバンの試料に加え、
ｂ）工程ａ）のアピキサバン試料に対してＨＰＬＣまたはＬＣ／ＭＳ解析を行い、
ｃ）式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物のＨＰＬＣまたはＬＣ／ＭＳピークを検出するか；
または
ａ１）ＨＰＬＣまたはＬＣ／ＭＳによって、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物を解析し、
ｂ１）アピキサバン試料をＨＰＬＣまたはＬＣ／ＭＳによって解析し、
ｃ１）保持時間または相対保持時間を比較することによって、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物のＨＰＬＣまたはＬＣ／ＭＳピークを検出するか；
あるいは
ＬＣ／ＭＳ解析によって、［Ｍ＋１］＋が７５１または７６７に等しい原子質量単位（ａｍｕ）のピークを検出する
ことを含む。
【０１４７】
本発明のもう一つ別の態様によれば、アピキサバン中の不純物のピークを同定することに加えて、アピキサバン中の、次式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）：
【化３３】
0006692408.tif 000034
【化３４】
0006692408.tif 000035
で示されるアピキサバンの二量体不純物を定量する方法であって、
【０１４８】
以下の工程：
ａ）未知の量の式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）で示される化合物を含むアピキサバン試料中の該化合物の各単一の二量体不純物に相当するピーク面積をＨＰＬＣまたはＬＣ／ＭＳによって測定し、
ｂ）既知量の式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）で示される二量体不純物を含有する「対照基準」に相当するピーク面積をＨＰＬＣまたはＬＣ／ＭＳによって測定し、
ｃ）工程ａ）にて測定された面積と、工程ｂ）にて測定された面積を比較してアピキサバン中の二量体不純物の量を規定すること
を含む、方法が見出された。
【０１４９】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、アピキサバン中の、次式（ＩＩＩ）：
【化３５】
0006692408.tif 000036
で示されるアピキサバンの二量体不純物を測定する方法、およびアピキサバン中の式（ＩＩＩ）の二量体不純物を定量する方法は、各々、アピキサバン中の二量体不純物を測定する方法については、ａ）〜ｃ１）に上記される工程、およびアピキサバン中の二量体不純物を定量する方法については、ａ）〜ｃ）に上記される工程をすべて含む。
【０１５０】
本発明のもう一つ別の態様は、アピキサバンの以下の二量体不純物、すなわち、
ａ）式（ＩＩ）：
【化３６】
0006692408.tif 000037
で示される二量体不純物、
ｂ）式（ＩＩＩ）：
【化３７】
0006692408.tif 000038
で示される二量体不純物
が、式（Ｉ）：
【化３８】
0006692408.tif 000039
で示されるアピキサバン中の二量体不純物を同定および／または定量するための「対照マーカー」または「対照基準」として使用できることである。
【０１５１】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、アピキサバンの二量体不純物は、式（ＩＩＩ）：
【化３９】
0006692408.tif 000040
で示される二量体不純物であり、式（Ｉ）のアピキサバン中の二量体不純物を同定および／または定量するための「対照マーカー」または「対照基準」として使用され得る。
【０１５２】
また、以下の二量体不純物は、関連する次の化合物中の該二量体不純物、すなわち、
ｃ）次式（Ｘ）：
【化４０】
0006692408.tif 000041
で示される化合物中の、式（ＩＶ）
【化４１】
0006692408.tif 000042
の二量体不純物、および／または式（Ｖ）：
【化４２】
0006692408.tif 000043
の二量体不純物；
ｄ）次式（ＸＩ）：
【化４３】
0006692408.tif 000044
で示される化合物中の、式（ＶＩ）
【化４４】
0006692408.tif 000045
の二量体不純物、および／または式（ＶＩＩ）：
【化４５】
0006692408.tif 000046
の二量体不純物
を同定および／または定量するための「対照マーカー」または「対照基準」として使用され得る。
【０１５３】
本発明の方法の好ましい実施態様によれば、アピキサバン中に存在する、次式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）：
【化４６】
0006692408.tif 000047
【化４７】
0006692408.tif 000048
で示される二量体不純物を１と１００ｐｐｍの間の量で定量する方法がＬＣ／ＭＳで実施される。
【０１５４】
本発明のもう一つ別の態様によれば、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）：
【化４８】
0006692408.tif 000049
【化４９】
0006692408.tif 000050
で示されるアピキサバンの二量体不純物が、以下の工程：
ａ）式（ＩＸ）：
【化５０】
0006692408.tif 000051
で示される、３−モルホリノ−１−（４−（２−オキソピペリジン−１−イル）フェニル）−５,６−ジヒドロピリジン−２（１Ｈ）−オンの、Ｃ１−Ｃ３アルコールおよび水の混合液中溶液を調製し、
ｂ）工程ａ）にて調製された溶液を濾過し、
ｃ）以下の二量体不純物：
式（ＶＩ）：
【化５１】
0006692408.tif 000052
の二量体不純物、および／または
式（ＶＩＩ）：
【化５２】
0006692408.tif 000053
の二量体不純物を含む固体をフィルターに集め、
ｄ）式（ＶＩ）および（ＶＩＩ）の二量体不純物を分離し、
ｅ）工程ｄ）の式（ＶＩ）および／または式（ＶＩＩ）の不純物を式式（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）のアピキサバンの二量体不純物に変換する
ことを含む方法に従って調製され得る。
あるいはまた、工程ａ）〜ｅ）は次の工程：
ｆ）式（ＶＩＩＩ）：
【化５３】
0006692408.tif 000054
で示されるエチル  １−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−６−（４−（２−オキソピペリジン−１−イル）フェニル）−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−３−カルボキシラートのＣ１−Ｃ４アルコール中溶液を調製し、
ｇ）工程ｆ）において調製された溶液を濾過し、
ｈ）次の二量体不純物：
式（ＩＶ）：
【化５４】
0006692408.tif 000055
の二量体不純物、および／または
式（Ｖ）：
【化５５】
0006692408.tif 000056
の二量体不純物を含む、固体をフィルターに集め、
ｉ）式（ＩＶ）および／または（Ｖ）の二量体不純物を分離し、
ｊ）工程ｉ）の式（ＩＶ）の化合物および／または式（Ｖ）の化合物を式（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）で示されるアピキサバンの二量体不純物に変換する工程
と置換されてもよい。
【０１５５】
分離工程ｄ）およびｉ）は、例えば、分取性ＨＰＬＣ、分取性ＴＬＣにより、あるいは古典的なクロマトグラフィーカラムを用いるなどのクロマトグラフィーによる分離によって実施され得る。後者の場合、その古典的なクロマトグラフィーカラムには、都合よくは、シリカゲルを充填でき、化合物はヘプタン／ＡｃＯＥｔの混合液、好ましくは勾配の混合液で溶出することで分離される。
【０１５６】
工程ｄ）の式（ＶＩ）および／または式（ＶＩＩ）の不純物を式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）のアピキサバンの二量体不純物に変換する工程ｅ）は、化合物（ＩＸ）である出発材料を式（ＶＩ）および／または式（ＶＩＩ）の不純物に変更するという有意に明白な差異のある、式（ＩＸ）の化合物を式（ＶＩＩＩ）の化合物に変換する、先行文献に開示されるとの同じ方法に従う。特に、この方法によれば、式（ＩＶ）の不純物および／または式（Ｖ）の不純物が得られる。その後で、最後に得られた不純物（ＩＶ）および／または（Ｖ）の、式（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）のアピキサバンの不純物への変換が、化合物（ＶＩＩＩ）である出発材料を式（ＩＶ）および／または式（Ｖ）の不純物に変更するという有意に明白な違いのある、式（ＶＩＩＩ）の化合物を式（Ｉ）の化合物に変換する、先行文献に開示されるのと同じ方法に従って実施される。
【０１５７】
Synthetic Communications, 43；72-79, 2013に開示される方法などの、硫化ナトリウムを用いる還元によって式（Ｘ）の化合物を調製することを含む、アピキサバンを調製する先行文献に記載の方法では、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の不純物を０.２８％と１.０％の間からなる量で含有するアピキサバンが提供される。
【０１５８】
本発明のもう一つ別の態様は、本発明の方法が、ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％により測定された場合に、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物を０.００％ないし０.１０％で含有するアピキサバンの調製を可能とするため、アピキサバンそれ自体であり；その不純物の量は、化学構造および相対量を変えることなく、式（Ｘ）の化合物を調製し、式（ＩＸ）の化合物とする間に生成される、式（ＶＩ）および／または（ＶＩＩ）の最初の不純物で開始される量に拘束される。
【０１５９】
特に、本発明の方法、とりわけ工程ａ）ないしｄ）に従って、式（ＩＸ）の化合物中に存在する式（ＶＩ）および／または式（ＶＩＩ）の二量体不純物を５％と２％の間からなる量で出発すると、ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％により測定された場合に、アピキサバン中の式（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）の不純物を０.１０％ないし０.０２％からなる量に該二量体不純物を減少または除去することが可能である。
【０１６０】
それどころか、本発明の方法、とりわけ工程ａ）ないしｄ）に従って、式（ＩＸ）の化合物中に存在する式（ＶＩ）および／または式（ＶＩＩ）の二量体不純物を２％と０％の間からなる量で出発すると、ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％により測定された場合に、アピキサバン中の式（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）の不純物を０.０２％ないし０.００％からなる量に該二量体不純物を減少または除去することが可能である（図２を参照のこと）。
【０１６１】
従って、本発明のもう一つ別の態様は、アピキサバンである最終生成物が、ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％により測定された場合に、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物を極めて少量で含むことである。
【０１６２】
特に、このように、本発明のもう一つ別の態様は、アピキサバンが、ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％により測定された場合に、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物を０.０２％ないし０.１０％で含有し、アピキサバンが、アピキサバンの式（ＩＸ）の化合物への変換を含む、工程ａ）ないしｄ）の本発明に係る方法により得られる場合、ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％により測定された場合に、５％と２％の間からなる量で式（ＶＩ）および／または式（ＶＩＩ）の二量体不純物を含むことである。
【０１６３】
もう一つ別の態様によれば、ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％により測定された場合に、式（ＩＩ）および／または式（ＩＩＩ）の二量体不純物を０.０２％ないし０.１０％で含有するアピキサバンは、式（ＶＩＩＩ）の化合物のアピキサバンへの変換を含む、本発明の工程ｅ）ないしｉ）に係る方法により得られ、ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％により測定された場合に、２％と５％の間からなる量で式（ＩＶ）および／または式（Ｖ）の二量体不純物を含む。そのような場合には、任意の工程ｈ）を繰り返し、精製工程が１回または複数回実施されなければならない。
【０１６４】
図１は、アピキサバンの合成を通して、不純物の化学構造および量（該量は従来の方法によるものである）に関して、その不純物のキャリー・オーバーを含む、その全体としての合成スキームを示す。
【０１６５】
本発明に係る方法（工程ａ）ないしｄ））を含む、アピキサバンの全体としての合成スキームを示す図２と比較することによって、中間体（Ｘ）中にある、ついで最終のアピキサバン中にある不純物の量が従来の方法におけるよりも十分に小さいから（図１を参照のこと）、本発明によってもたらされる効果は明らかである。
【０１６６】
注意することとして、該方法を介する式（ＩＶ）と（Ｖ）の不純物の量は、特に式（ＩＸ）の化合物を化合物（ＶＩＩＩ）に変換する間に増加しているように見える。これは、分子（ＶＩ）および（ＶＩＩ）と比べて、分子（ＩＶ）および（Ｖ）の芳香族性が増加したこと、従って吸着作用の増加に、すなわち検出装置の応答が増加したことよるものである。かくして、該不純物の実際の量に関して、増加するなどはそのように見えるに過ぎず、実際にはそうではない。
【０１６７】
本発明のさらなる態様として、アピキサバンの二量体不純物はアゾまたはアゾキシ官能基を含む、かくしてアゾまたはアゾキシ化合物であり、よって、ＥＭＥＡのよる２００６年付けの「Guideline On The Limits Of Genotoxic Impurities」の規定、および２０１４年６月２３日付けのラインガイドＩＣＨ  Ｍ７に従って、発がんリスクの可能性が有意に高いことを認識すべきである。
【０１６８】
実際に、アゾキシ化合物は、一般構造式：ＲＮ＝Ｎ＋（Ｏ−）Ｒで示される通常の官能基を共有する一群の化合物であり、該官能基はアピキサバンのいくつかの二量体不純物、すなわち式（ＶＩＩ）の二量体不純物、式（Ｖ）の二量体不純物、および式（ＩＩＩ）の二量体不純物中に存在する。
【０１６９】
従って、該二量体不純物の遺伝毒性の可能性に関連するアラートが惹起されなければならない。
【０１７０】
実験的部分
【０１７１】
化合物はＩＵＰＡＣ命名法の基本ルールを用いて命名される。
【０１７２】
プロトン磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルが、バリアン（Varian）装置を用いて４００ＭＨｚで、またはブルカー（Bruker）装置を用いて３００ＮＨｚおよび４００ＭＨｚのいずれかの装置で記録された。化学シフトは内部標準として残留溶媒系を用いてｐｐｍ（δ）にて報告される。分裂パターンはｓ、一重線；ｄ、二重線；ｔ、三重線；ｑ、四重線；ｍ、多重線；ｂ、ブロードとして示される。ＮＭＲスペクトルは２０℃と３０℃との間の温度で記録された。
【０１７３】
紫外線−可視線（ＵＶ−Ｖｉｓ）がＨＰＬＣ／ＤＡＤ検出器により獲得された。
【０１７４】
下記の表は使用される略語を列挙する。
【表１】
0006692408.tif 000057
【０１７５】
実施例１：関連する二量体不純物：式（ＶＩ）の（Ｅ）−１,１’−（４,４’−（ジアゼン−１,２−ジイル）ビス（４,１−フェニレン））ビス（３−モルホリノ−５,６−ジヒドロピリジン−２（１Ｈ）−オン）、および式（ＶＩＩ）の（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−モルホリノ−２−オキソ−５,６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシドを含む、式（ＩＸ）の化合物の調製
【化５６】
0006692408.tif 000058
【化５７】
0006692408.tif 000059
比較例
合成スキーム：
【化５８】
0006692408.tif 000060
【化５９】
0006692408.tif 000061
【０１７６】
式（Ｘ）の化合物は、式（ＸＩ）の化合物より出発して、the Journal Synthetic Communication, 2013, vol.43, pag.72-79に開示の方法に、特に７６頁の段落の表題「１−（４−アミノフェニル）−３−（モルホリン−４−イル）−５,６−ジヒドロピリジン−２（１Ｈ）−オン（１３）」に従って、調製され得る。
【０１７７】
従って、式（Ｘ）の化合物は下記の方法に従って調製された。
【０１７８】
硫酸ナトリウム・９水和物（１９７ｇ、２.５当量）の水（３５０ｍＬ）中溶液をＴ＝４０／４５℃で式（ＸＩ）の化合物（１００ｇ、１.０当量）およびメタノール（１０００ｍＬ）の混合物に添加した。該嵌合物をＴ＝４０／４５℃でさらに２時間攪拌し、反応を完了させた。次に該混合物を、９００ｍＬの溶媒が除去されるまで、減圧下およびＴｍａｘ＝４５℃で蒸留させた。得られたスラリーをＴ＝２０／２５℃に冷却し、この温度で攪拌を２時間続け、次に濾過してその湿ったケーキを水（２ｘ１００ｍＬ）で洗浄した。減圧下およびＴ＝６５℃で１０時間乾燥させ、８３ｇの式（Ｘ）の化合物を得た。（収率９２％、ＨＰＬＣ  Ａ％：式（Ｘ）の化合物：９６.０９％）
【０１７９】
こうして得られた式（Ｘ）の化合物は、下記の二量体不純物：
・０.４８％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）  式（ＶＩ）の二量体不純物
・１.３９％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）  式（ＶＩＩ）の二量体不純物
を含有した。
【０１８０】
四つ口丸底フラスコに６０ｇの式（Ｘ）の化合物（１.０当量）（上記のように調製され、式（ＶＩ）および（ＶＩＩ）の不純物を含有する）を充填し、次に５１,１ｇのトリエチルアミン（ＴＥＡ）（２.３当量）および６００ｍＬのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を充填した。５１ｇの塩化クロロバレリル（１,５当量）の１２０ｍＬのＴＨＦ中溶液を１−２時間以内にＴ＝０／５℃で添加した。該混合物をＴ＝０／５℃でさらに３０分間攪拌し、その後はその同じ温度を維持し、７３.９ｇのカリウムtert−ブトキシド（３.０当量）の３００ｍＬのＴＨＦ中溶液を３０−４５分間にわたって添加した。Ｔ＝０／５℃で３０分間攪拌した後、その混合物をＴ＝２０／２５℃にてさらに２時間加温に供した。反応の終了についてチェックしたすぐ後に、該バッチを減圧下でＴｍａｘ＝３５℃で残りが４倍容量（２４０ｍＬ）になるまで蒸留させた。得られたスラリーを４８０ｍＬの水で希釈し、同じ条件下で再び残りが９倍容量（９００ｍＬ）になるまで蒸留させた。その混合物をＴ＝２０／２５℃で少なくとも２時間攪拌し、次に濾過してその湿ったケーキを水（２ｘ６０ｍＬ）で洗浄した。
【０１８１】
減圧下、Ｔ＝６５℃で少なくとも８時間乾燥させて、６４ｇの式（ＩＸ）の化合物を得た（モル収率８２％）。この固体は下記の二量体不純物：
・０.１７％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）  式（ＶＩ）の二量体不純物
・１.９％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）  式（ＶＩＩ）の二量体不純物
を含有する。
【０１８２】
実施例２：本発明の範例となる、式（ＩＸ）の次の化合物の調製
【０１８３】
合成スキーム：
【化６０】
0006692408.tif 000062
【化６１】
0006692408.tif 000063
【０１８４】
式（Ｘ）の化合物は、式（ＸＩ）の化合物より出発して、the Journal Synthetic Communication, 2013, vol.43, pag.72-79に開示の方法に、特に７６頁の段落の表題「１−（４−アミノフェニル）−３−（モルホリン−４−イル）−５,６−ジヒドロピリジン−２（１Ｈ）−オン（１３）」に従って、調製され得る。
【０１８５】
従って、式（Ｘ）の化合物は下記の方法に従って調製された。
【０１８６】
硫酸ナトリウム・９水和物（１９７ｇ、２.５当量）の水（３５０ｍＬ）中溶液をＴ＝４０／４５℃で式（ＸＩ）の化合物（１００ｇ、１.０当量）およびメタノール（１０００ｍＬ）の混合物に添加した。該嵌合物をＴ＝４０／４５℃でさらに２時間攪拌し、反応を完了させた。次に該混合物を、９３０ｍＬの溶媒が除去されるまで、減圧下およびＴｍａｘ＝４５℃で蒸留させた。得られたスラリーをＴ＝２０／２５℃に冷却し、この温度で攪拌を１時間続け、次に濾過してその湿ったケーキを水（２ｘ１００ｍＬ）で洗浄した。減圧下およびＴ＝６５℃で１０時間乾燥させ、８２ｇの式（Ｘ）の化合物を得た。（収率９１％、ＨＰＬＣ  Ａ％：式（Ｘ）の化合物：９６.１６％）
【０１８７】
こうして得られた式（Ｘ）の化合物は下記の二量体不純物：
・０.６６％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）  式（ＶＩ）の二量体不純物
・１.５０％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）  式（ＶＩＩ）の二量体不純物
を含有した。
四つ口丸底フラスコに８０ｇの式（Ｘ）の化合物（１.０当量）（上記のように調製され、式（ＶＩ）および（ＶＩＩ）の不純物を含有する）を充填し、次に６８,３ｇのトリエチルアミン（ＴＥＡ）（２.３当量）および８００ｍＬのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を充填した。６８.３ｇの塩化クロロバレリル（１,５当量）の１６０ｍＬのＴＨＦ中溶液を１−２時間以内にＴ＝０／５℃で添加した。
該混合物をＴ＝０／５℃でさらに３０分間攪拌し、その後はその同じ温度を維持し、９８.１ｇのカリウムtert−ブトキシド（３.０当量）の４００ｍＬのＴＨＦ中溶液を３０−４５分間にわたって添加する。Ｔ＝０／５℃で３０分間攪拌した後、その混合物をＴ＝２０／２５℃にてさらに２時間加温に供する。反応の終了についてチェックしたすぐ後に、該バッチを減圧下でＴｍａｘ＝３５℃で残りが６倍容量（４８０ｍＬ）になるまで蒸留させ、ついでその同じ条件下で５６０ｍＬのエタノールでストリップさせ、再び残りが６倍容量（４８０ｍＬ）になるまで蒸留させた。得られた混合物を７２０ｍＬのエタノールおよび８８０ｍＬの水で希釈し、ついで得られた乳白色の溶液をＴ＝４０／４５℃に加熱し、ジカライト（dicalite）で濾過し、８０ｍＬの予め加熱したエタノールで洗浄した（この固体ケーキは実施例３の出発材料である）。濾過した溶液を減圧下で残りが６倍容量（４８０ｍＬ）になるまで蒸留させる。混合物をＴ＝２０／２５℃に冷却し、この温度で少なくとも１時間攪拌した。最後に該スラリーを濾過し、湿ったケーキを水（２ｘ８０ｍＬ）で洗浄した。減圧下、Ｔ＝６５℃で少なくとも８時間乾燥させて、９０.３ｇの式（ＩＸ）の化合物を得た。（モル収率８６.８％）
【０１８８】
この固体は次の二量体不純物：
・０.０４％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）  式（ＶＩ）の二量体不純物、
・０.０９％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）  式（ＶＩＩ）の二量体不純物
を含有した。
【０１８９】
実施例３：式（ＶＩ）および式（ＶＩＩ）の下記の二量体不純物の調製
【化６２】
0006692408.tif 000064
【化６３】
0006692408.tif 000065
【０１９０】
集めた不溶性物質（ジカライトならびに式（ＶＩ）および（ＶＩＩ）の二量体不純物を含む実施例２の固体ケーキ）のエタノール性溶液をディーン−スターク（Dean-Stark）装置を装着した丸底フラスコに充填し、６００ｍＬのトルエンに懸濁させる。該混合物を溶媒の沸点に達するまで加熱して還流させ、水を除去する。混合物をＴ＝８０／９０℃にまで冷却し、濾過する。式（ＶＩ）および式（ＶＩＩ）の二量体不純物ならびにジカライトを含め、集めた固体を丸底フラスコに充填し、５００ｍＬのジクロロメタンを添加する。その混合物を加熱して還流させ、濾過し、ジクロロメタン（４ｘ１００ｍＬ）で洗浄する。次に該溶液を減圧下で濃縮して残留物とし、攪拌可能なスラリーを得るためにその残留物をアセトンに溶かす。懸濁液を濾過して５.８ｇの黄色の固体を得、それをＨＰＬＣ解析（図２）に付し、次の２種：
・１６.９％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）の式（ＶＩ）の二量体不純物、
・８０.５％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）の式（ＶＩＩ）の二量体不純物
の混合物として得る。
【０１９１】
その混合物は、２種の不純物はジアゾ基の酸化状態だけが異なり、その１Ｈ化学シフトは重複して得られるスペクトルは単一の種類のスペクトルのように見えるため、ＮＭＲによっても解析された。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３、ｐｐｍ）  ｄ：８.３２（ｄｄ，Ｊ１＝８Ｈｚ、Ｊ２＝２４Ｈｚ，４Ｈ）、７.５３（ｍ，４Ｈ）、５.７６（ｂｓ，２Ｈ）、３.８８（ｍ，１２Ｈ）、２.９６（ｍ，８Ｈ）、２.５７（ｍ，４Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲおよびＤＥＰＴ  １３５ＮＭＲスペクトルでの芳香族炭素は部分的非対称化を示し、一方で脂肪族炭素およびカルボニル基は２種類について同じ化学シフトを示す（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３、ｐｐｍ）  ｄ：１６１.４（Ｃ）、１４５.７（Ｃ）、１４５.１（Ｃ）、１４３.８（Ｃ）、１４３.７（Ｃ）、１４３.６（Ｃ）、１４１.３（Ｃ）、１２６.３（ＣＨ）、１２５.１（ＣＨ）、１２４.６（ＣＨ）、１２４.５（ＣＨ）、１２３.３（Ｃ）、１２２.８（ＣＨ）、１１５.１（ＣＨ）、１１４.７（ＣＨ）、６６.８（ＣＨ２）、５０.６（ＣＨ２）、４８.５（ＣＨ２）、２３.４（ＣＨ２）；ＨＰＬＣ−ＭＳ：１１.３分、ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝５５９（式（ＶＩＩ）の二量体不純物  ＭＷ  ５５８［Ｍ＋Ｈ］＋）、１１.９分、ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝５４３（式（ＶＩ）の二量体不純物  ＭＷ  ５４２［Ｍ＋Ｈ］＋）
【０１９２】
実施例４：式（Ｉ）の化合物の調製であって、実施例２の式（ＩＸ）の化合物より出発する、調製；本発明のアピキサバンに対する効果
合成スキーム：
【化６４】
0006692408.tif 000066
【化６５】
0006692408.tif 000067
【０１９３】
式（ＶＩＩＩ）の化合物は、実施例２にて調製された式（ＩＸ）の化合物より出発して、the Journal Synthetic Communication, 2013, vol.43, pag.72-79に開示の方法に、特に７８頁の段落の表題「エチル  １−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−６−（４−（２−オキソピペリジン−１−イル）フェニル）−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−３−カルボキシラート（２）」に従って、調製された。
【０１９４】
その後で、ＥＰ出願ＥＰ１４１８９００７.９の実施例１１、またはＷＯ２００７／００１３８５の実施例６に記載の方法に従って調製を行い、それにより式（Ｉ）の化合物、アピキサバンを、次のアピキサバンの二量体不純物：
・０.００％の次の構造式（ＩＩ）：
【化６６】
0006692408.tif 000068
で示される、（Ｅ）−６,６’−（４,４’−（ジアゼン−１,２−ジイル）ビス（４,１−フェニレン））ビス（１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−３−カルボキシアミド）
・０.０１％の次の構造式（ＩＩＩ）：
【化６７】
0006692408.tif 000069
で示される、（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−カルバモイル−１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−６（７Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシド
を含んで得た。
【０１９５】
実施例５：
式（ＶＩＩＩ）の化合物の調製であって、実施例１の式（ＩＸ）の化合物から出発する、調製
比較例
合成スキーム：
【化６８】
0006692408.tif 000070
【０１９６】
式（ＶＩＩＩ）の化合物は、実施例１にて調製された式（ＩＸ）の化合物より出発して、the Journal Synthetic Communication, 2013, vol.43, pag.72-79に開示の方法に、特に７８頁の段落の表題「エチル  １−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−６−（４−（２−オキソピペリジン−１−イル）フェニル）−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−３−カルボキシラート（２）」に従って、調製された。
【０１９７】
得られた式（ＶＩＩＩ）の化合物は、次の二量体不純物：
・０.５９％の次の構造式（ＩＶ）：
【化６９】
0006692408.tif 000071
で示される、（Ｅ）−ジエチル ６,６’−（４,４’−（ジアゼン−１,２−ジイル）ビス（４,１−フェニレン））ビス（１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−３−カルボキシラート）、
・１.６１％の次の構造式（Ｖ）：
【化７０】
0006692408.tif 000072
で示される、（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−（エトキシカルボニル）−１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−６（７Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシド
を含有した。
【０１９８】
実施例６：式（ＶＩＩＩ）の化合物の精製；発明の効果
【化７１】
0006692408.tif 000073
四つ口丸底フラスコに、０.２１％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）の式（ＩＶ）の二量体および０.１０％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）の式（Ｖ）の二量体不純物を含有する、１０ｇのエチル  １−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−６−（４−（２−オキソピペリジン−１−イル）フェニル）−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−３−カルボキシラート（０.０２モル）（式（ＶＩＩＩ）の化合物）を充填した。
該化合物を１００ｍＬのエタノールに懸濁させ、その混合物を加熱して還流させ、乳白色の溶液を得た。活性炭（１ｇ）を加え、還流温度でさらに３０分間経過した後、該混合物をなおも加熱しながら濾過し、予め加熱したエタノール（２ｘ２０ｍＬ）で洗浄した。濾過した溶液をＴ＝２０／２５℃にまで冷却し、この温度で少なくとも２時間攪拌する。次に該スラリーを濾過し、そのケーキをエタノール（２ｘ１０ｍＬ）で洗浄する。その湿った固体を真空下、Ｔ＝６５℃で乾燥させる。得られた７.０ｇの式（ＶＩＩＩ）の化合物（７０％モル収率）は：
・０.０６％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）の式（ＩＶ）の（Ｅ）−ジエチル  ６,６’−（４,４’−（ジアゼン−１,２−ジイル）ビス（４,１−フェニレン））ビス（１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−３−カルボキシラート）
・０.０３％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）の式（Ｖ）の（Ｚ）−１,２−ビス（４−（３−（エトキシカルボニル）−１−（４−メトキシフェニル）−７−オキソ−４,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｃ］ピリジン−６（７Ｈ）−イル）フェニル）ジアゼン  オキシド
を含有した。
【０１９９】
実施例７：式（ＶＩＩＩ）の化合物の精製；発明の効果
【化７２】
0006692408.tif 000074
該実施例は、０.５９％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）の式（ＩＶ）の二量体および１.８０％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）の式（Ｖ）の二量体不純物を含有する、式（ＶＩＩＩ）の化合物より出発して繰り返された。
【０２００】
得られた式（ＶＩＩＩ）の化合物は：
・０.１１％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）の式（ＩＶ）の二量体不純物、
・０.３６％（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）の式（Ｖ）の二量体不純物
を含有した。
該化合物（ＶＩＩＩ）は、実施例６に記載の操作を１回または複数回繰り返してさらに精製され得る。
【０２０１】
実施例８：
・式（ＩＸ）および（Ｘ）の化合物中の式（ＶＩ）および式（ＶＩＩ）の二量体不純物
・式（ＶＩＩＩ）の化合物中の式（ＩＶ）および式（Ｖ）の二量体不純物
・式（Ｉ）のアピキサバン中の式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の二量体不純物
の量を測定する解析方法
【０２０２】
該化合物は、次のＨＰＬＣ方法を介して同定かつモニター観察され得る：
【０２０３】
クロマトグラフィー条件：
カラム：エックスブリッジ（XBridge）Ｃ１８  １５０ｘ４.６ｍｍ  ３.５μｍ
カラム温度：４０℃
クォータナリーシステム
移動相Ａ：Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水
移動相Ｂ：アセトニトリル
移動相Ｃ：メタノール
【表２】
0006692408.tif 000075
バイナリーシステム
移動相Ａ：Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水／メタノール    ９０／１０
移動相Ｂ：アセトニトリル／メタノール      ９０／１０
【表３】
0006692408.tif 000076
ポストラン：７分
流速：１.０ｍＬ／分
検出：２４３ｎｍでのＵＶ
注入容量：５μＬ
ラン時間：２５分間
サンプル希釈液：ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ  １：５：４
【０２０４】
上記される条件を適用して、期待される保持時間は以下のとおりである：
【表４】
0006692408.tif 000077
【０２０５】
式（Ｉ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）および（Ｘ）の化合物について発明を実施するための形態および実施例において記載される二量体不純物の量、特にＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％にて表される量は、この実施例８に記載のＨＰＬＣ方法に従って実施され得る。
【０２０６】
アピキサバンの二量体不純物を測定するためのＬＣ／ＭＳ方法
ＬＣパラメータ
装置：アジレント（Agilent）１１００シリーズ  ＬＣ／ＭＳＤトラップ
カラム：ポロシェル（Poroshell）ＳＢ−Ｃ１８  １５０ｘ４.６ｍｍ  ２.７μｍ
カラム温度：４０℃
移動相Ａ：Ｈ２Ｏ
移動相Ｂ：アセトニトリル／メタノール  ８０／２０
【表５】
0006692408.tif 000078
流速：１.０ｍＬ／分
検出：２４３ｎｍでのＵＶ
注入容量：５μＬ
ラン時間：３０分間
ポストラン：５分間
ＭＳパラメータ
ＭＳの極性：陽性
イオン化：ＡＰＣＩ
噴霧圧：６０ｐｓｉ
乾燥気体流速：５Ｌ／分
乾燥気体温度：３５０℃
蒸気温度：４００℃
コロナ電流：４０００ｎＡ
キャピラリー電圧：３５００Ｖ
質量範囲：１００−９００ａｍｕ
サンプル調製
サンプル希釈液：ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ  １：５：４
サンプル濃度：２ｍｇ／ｍＬ
【０２０７】
実施例９
式（ＶＩ）の二量体不純物および式（ＶＩＩ）の二量体不純物の混合物から出発する、式（ＩＶ）の二量体不純物および式（Ｖ）の二量体不純物の調製
【化７３】
0006692408.tif 000079
【化７４】
0006692408.tif 000080
【０２０８】
丸底フラスコに、実施例２および３を大規模に再構成して調製された、式（ＶＩ）の二量体不純物および式（ＶＩＩ）の二量体不純物の混合物（式（ＶＩＩ）の二量体不純物の種類の分子量に鑑みて、１４ｇ、２５ミリモル、１.０当量）、式（ＸＩＩ）の化合物（９０ｇ、３５０ミリモル、７.０当量）、トリエチルアミン（７６ｇ、７５０ミリモル、１５.０当量）、ヨウ化カリウム（８.５ｇ、５１ミリモル、１.０当量）および酢酸エチル（１９６０ｍＬ）を充填した。懸濁液を加熱して還流させ、１６時間攪拌し、次にＴ＝２０／２５℃に冷却し、濾過して不溶物を除去し、そのケーキを酢酸エチル（３ｘ２０ｍＬ）で洗浄した。
その得られた溶液に、水性３２％ＨＣｌ溶液（７２ｍＬ、d＝１.１６ｇ／ｍｌ）をＴ＝２０／２５℃でゆっくりと添加し、該混合物をこの温度で３０分間攪拌する。
スラリーを濾過し、集めた湿った固体を炭酸ナトリウム飽和溶液（５０ｍＬ）にＴ＝２０／２５℃で懸濁させた。この温度で３０分間攪拌した後、該混合物を濾過し、その湿ったケーキを炭酸ナトリウム飽和溶液（５０ｍＬ）で、次に水（２０ｍＬ）で洗浄した。
減圧下にてＴ＝６５℃で８時間乾燥させて、８.４ｇの二量体不純物の混合物を得た（４０％収率、ＨＰＬＣ  Ａ％：式（Ｖ）の二量体（ＭＷ  ８２４）７１.３％；式（ＩＶ）の二量体（ＭＷ  ８０８）１２.２％、ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）。
【０２０９】
実施例１０：
式（ＩＩＩ）の二量体不純物および式（ＩＩ）の二量体不純物から出発する、式（Ｖ）の二量体不純物および式（ＩＶ）の二量体不純物の調製
合成スキーム
【化７５】
0006692408.tif 000081
【化７６】
0006692408.tif 000082
【０２１０】
１Ｌのステンレス製オートクレーブに、大規模で実施された実施例９から由来の式（ＩＶ）の二量体不純物および式（Ｖ）の二量体不純物の混合物（式（Ｖ）の二量体不純物の分子量、ＭＷ  ８２４種に鑑みて、１５ｇ、１８.５ミリモル、１.０当量）およびプロピレングリコール（６００ｍＬ）を充填した。窒素をパージした後、アンモニアをｐ＝１.５／２.０バールの安定した内部圧となるまでＴ＝２０／２５℃で充填した。次に該混合物をＴ＝１２０℃に加熱し、内部圧をＰ＝９バールに到達させた。
この温度で４０時間経過した後、該混合物をＴ＝２０／２５℃に冷却し、プロピレングリコール（３０ｍＬ）、水（３６０ｍＬ）およびエタノール（９０ｍＬ）で希釈した。得られたスラリーをＴ＝２０／２５℃で１時間攪拌し、最後に濾過して該ケーキを水（６０ｍＬ）で洗浄した。その湿潤材料を減圧下にてＴ＝６５℃で８時間乾燥させ、１０.３ｇの二量体不純物の混合物（収率７４％、ＨＰＬＣ  Ａ％：式（ＩＩＩ）の二量体  ＭＷ  ７６６  ４８.５３％；式（ＩＩ）の二量体  ＭＷ  ７５０  ３４.６％）を得た。
【０２１１】
実施例１１：
二量体不純物の混合物のクロマトグラフィー分離および単一の不純物の解析試験
二量体不純物を分離するための次の方法および各単一の二量体不純物を特徴付けるための次の解析方法
１．式（ＶＩ）の二量体不純物および式（ＶＩＩ）の二量体不純物の混合物
２．式（ＩＶ）の二量体不純物および式（ＩＶ）の二量体不純物の混合物
３．式（ＩＩ）の二量体不純物および式（ＩＩＩ）の二量体不純物の混合物
【０２１２】
１．式（ＶＩ）の二量体不純物および式（ＶＩＩ）の二量体不純物の混合物のクロマトグラフィー分離
実施例３にて得られる該混合物の分離は、以下の条件を適用して、分取性ＨＰＬＣ（アジレント・テクノロジーズ（Agilent Technologies）１２００シリーズ）を通してなされた。
【０２１３】
クロマトグラフィー条件：
カラム：ゾルバックス（Zorbax）-Rx-Sil、２１.２ｘ２５０ｍｍ、７μｍ
カラム温度：２５℃
移動相Ａ：ＤＣＭ
移動相Ｂ：ＥｔＯＨ
【表６】
0006692408.tif 000083
流速：２０ｍＬ／分
検出：２２０ｎｍでのＵＶ
抽出容量：３００μＬ
ラン時間：２０分間
サンプル溶出液：ＣＨ２Ｃｌ２
サンプル濃度：５ｍｇ／ｍＬ
【０２１４】
式（ＶＩＩ）の二量体不純物の特徴付け
保持時間：１１.８分（上記されるクロマトグラフィー条件によって得られた）
ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ＝５５９［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ  （ｐｐｍ）：８.３４（ｄ，Ｊ＝８.８Ｈｚ，２Ｈ）；８.２７（ｄ，Ｊ＝８.８Ｈｚ，２Ｈ）；７.５１（ｍ，４Ｈ）；５.７３（ｍ，２Ｈ）；３.８５（ｍ，１２Ｈ）；２.９３（ｍ，８Ｈ）；２.５６（ｍ，４Ｈ）；１３ＣおよびＤＥＰＴ  １３５ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ  （ｐｐｍ）：１６１.３（Ｃ）；１４５.６（Ｃ）；１４５.０５（Ｃ）；１４３.７（Ｃ）；１４３.６（Ｃ）；１４３.５（Ｃ）；１４１.３（Ｃ）；１２６.３（ＣＨ）；１２４.６（ＣＨ）；１２４.５（ＣＨ）；１２２.７（ＣＨ）；１１５.２（ＣＨ）；１１４.９（ＣＨ）；６６.７（ＣＨ２）；５０.５（ＣＨ２）；４８.４（ＣＨ２）；２３.４（ＣＨ２）.
【０２１５】
ＵＶ−Ｖｉｓスペクトル：
３５０−３６０ｎｍでの最大吸収
【０２１６】
式（ＶＩ）の二量体不純物の特徴付け
保持時間：１４.３分（上記されるクロマトグラフィー条件によって得られた）
ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ＝５４３  ［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ  （ｐｐｍ）：８.００（ｍ，４Ｈ）；７.５６（ｍ，４Ｈ）；５.３７（ｍ，２Ｈ）；３.７３（ｍ，１２Ｈ）；３.２７（ｍ，８Ｈ）；２.９６（ｍ，４Ｈ）
【０２１７】
２．式（ＩＶ）の二量体不純物および式（Ｖ）の二量体不純物の混合物のクロマトグラフィー分離
実施例９にて得られる該混合物の分離は、以下の条件を適用して、分取性ＨＰＬＣ（アジレント・テクノロジーズ１２００シリーズ）を通してなされた。
【０２１８】
クロマトグラフィー条件：
カラム：ゾルバックス-Rx-Sil、２１.２ｘ２５０ｍｍ、７μｍ
カラム温度：２５℃
移動相Ａ：ＤＣＭ
移動相Ｂ：ＥｔＯＨ
【表７】
0006692408.tif 000084
流速：２０ｍＬ／分
検出：２２０ｎｍでのＵＶ
抽出容量：３００μＬ
ラン時間：１０分間
サンプル溶出液：ＣＨ２Ｃｌ２
サンプル濃度：１０ｍｇ／ｍＬ
【０２１９】
式（Ｖ）の二量体不純物の特徴付け
保持時間：３.０分（上記されるクロマトグラフィー条件によって得られた）
ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ＝８２５  ［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ  （ｐｐｍ）：８.３２（ｄ，Ｊ＝９.２Ｈｚ，２Ｈ）；８.２４（ｄ，Ｊ＝９.２Ｈｚ，２Ｈ）；７.４８（ｍ，８Ｈ）；６.９５（ｄｄ，Ｊ１＝８.８Ｈｚ、Ｊ２＝２Ｈｚ，４Ｈ）；４.４９（ｑ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，４Ｈ）；４.２１（ｍ，４Ｈ）；３.８４（ｓ，６Ｈ）；３.３６（ｍ，４Ｈ）；１.４６（ｔ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，６Ｈ）
１３ＣおよびＤＥＰＴ  １３５  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ  （ｐｐｍ）： １６２.１（Ｃ）；１６２.０（Ｃ）； １６０.０（Ｃ）；１５９.９（Ｃ）；１５７.１（Ｃ）；１４５.５（Ｃ）；１４４.７（Ｃ）；１４２.５（Ｃ）；１４１.７（Ｃ）；１３９.１（Ｃ）；１３９.０（Ｃ）；１２６.９４（ＣＨ）；１２６.９３（ＣＨ）；１２６.４（ＣＨ）；１２５.２（ＣＨ）；１２５.１（ＣＨ）；１２２.７９（ＣＨ）；１１３.７３（ＣＨ）；１１３.７１（ＣＨ）；６１.３３（ＣＨ２）；６１.２９（ＣＨ２）；５５.５（ＣＨ３）； ５０.９（ＣＨ２）；２１.６（ＣＨ２）；１４.４（ＣＨ３）；
ＵＶ−Ｖｉｓスペクトル：
３５６−３６０ｎｍでの最大吸収
【０２２０】
式（ＩＶ）の二量体不純物の特徴付け
保持時間：４.０分（上記されるクロマトグラフィー条件によって得られた）
ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ＝８０９  ［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ  （ｐｐｍ）：７.９４（ｄ，Ｊ＝８.８Ｈｚ，４Ｈ）；７.５０（ｍ，８Ｈ）；６.９５（ｄ，Ｊ＝９.２Ｈｚ，４Ｈ）；４.４９（ｑ，Ｊ＝７.２Ｈｚ，４Ｈ）；４.２２（ｍ，４Ｈ）；３.８４（ｓ，６Ｈ）；３.３６（ｍ，４Ｈ）；１.４６（ｔ，Ｊ＝７.２Ｈｚ，６Ｈ）
【０２２１】
ＵＶ−Ｖｉｓスペクトル：
３５６−３６０ｎｍでの最大吸収
【０２２２】
３．式（ＩＩ）の二量体不純物および式（ＩＩＩ）の二量体不純物の混合物のクロマトグラフィー分離
実施例１０にて得られる該混合物の分離は、以下の条件を適用して、分取性ＨＰＬＣ（アジレント・テクノロジーズ１２００シリーズ）を通してなされた。
【０２２３】
クロマトグラフィー条件：
カラム：ゾルバックス-Rx-Sil、２１.２ｘ２５０ｍｍ、７μｍ
カラム温度：２５℃
移動相Ａ：ＤＣＭ
移動相Ｂ：ｉ−ＰｒＯＨ
【表８】
0006692408.tif 000085
流速：２０ｍＬ／分
検出：２２０ｎｍでのＵＶ
抽出容量：３００μＬ
ラン時間：２０分間
サンプル溶出液：ＣＨ２Ｃｌ２
サンプル濃度：＜５ｍｇ／ＭＩ
該種は溶解度が低いため、５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、
透明な溶液を得るために不溶物を濾過した
【０２２４】
式（ＩＩＩ）の二量体不純物の特徴付け
保持時間：１３.６分（上記されるクロマトグラフィー条件によって得られた）
【０２２５】
ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ＝７６７  ［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２２６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ  （ｐｐｍ）：８.２８（ｄ，Ｊ＝９.２Ｈｚ，２Ｈ）；８.１８（ｄ，Ｊ＝８.８Ｈｚ，２Ｈ）；７.７６（ｂｓ，２Ｈ）；７.６３−７.５２（ｍ，８Ｈ）；７.４７（ｂｓ，２Ｈ）；７.０２（ｄ，Ｊ＝８.８Ｈｚ，４Ｈ）；４.１７（ｍ，４Ｈ）；３.８２（ｓ，６Ｈ）；３.２５（ｍ，４Ｈ）
ＵＶ−Ｖｉｓスペクトル：図４に図示
３６０−３７０ｎｍでの最大吸収
【０２２７】
式（ＩＩ）の二量体不純物の特徴付け
保持時間：１４.６分（上記されるクロマトグラフィー条件によって得られた）
ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ＝７５１  ［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ  （ｐｐｍ）：７.９３（ｄ，Ｊ＝８.８Ｈｚ，４Ｈ）；７.７６（ｂｓ，２Ｈ）；７.６３−７.５２（ｍ，８Ｈ）；７.４７（ｂｓ，２Ｈ）；７.０２（ｄ，Ｊ＝８.８Ｈｚ，４Ｈ）；４.１７（ｍ，４Ｈ）；３.８２（ｓ，６Ｈ）；３.２５（ｍ，４Ｈ）
【０２２８】
ＵＶ−Ｖｉｓスペクトル：図３に図示
３５０−３６０ｎｍでの最大吸収
【０２２９】
二量体不純物のＭＳおよびＵＶスペクトル測定
ＬＣパラメータ
装置：アジレントＬＣ／ＭＳＤ  トラップＳＬ
カラム：ポロシェル（Poroshell）ＳＢ−Ｃ１８  １５０ｘ４.６ｍｍ  ２.７μｍ
カラム温度：４０℃
移動相Ａ：ＴＦＡ  ０.１％（ｖ／ｖ）／Ｈ２Ｏ
移動相Ｂ：アセトニトリル／メタノール  ８０／２０
【表９】
0006692408.tif 000086
流速：１.０ｍＬ／分
検出：２４３ｎｍでのＵＶ
注入容量：５μＬ
ラン時間：３０分間
ポストラン：５分間
ＭＳパラメータ
ＭＳの磁性：陽性
イオン化：ＥＳＩ＋
乾燥温度：３２０℃
噴霧圧：７０ｐｓｉ
乾燥気体流：１２Ｌ／分
トラップドライブ：４２.９
ＨＶキャピラリー：４１００Ｖ
電流キャピラリー：４０ｎＡ
質量範囲：１００−９００ａｍｕ
サンプル分取
サンプル希釈液：ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ  １：５：４
サンプル濃度：０.３ｍｇ／ｍＬ
【０２３０】
実施例１においては、従来方法を用いて式（ＩＸ）の化合物を調製し、該化合物が式（ＶＩ）と（ＶＩＩ）の二量体不純物を多量に含んで得られた。
【０２３１】
実施例２においては、本発明の知見を利用した時、すなわち、化合物（ＩＸ）のエタノールおよび水中溶液を濾過した場合、得られる式（ＩＸ）の化合物は、式（ＶＩ）および（ＶＩＩ）の各二量体不純物を０.１０％未満の含量で有した。
【０２３２】
実施例１と２を比較することにより、工程ａ）ないしｄ）に関する本発明の効果がこのように強調され得る。
【０２３３】
実施例３にて、式（ＶＩ）および（ＶＩＩ）の不純物は、式（ＶＩ）と（ＶＩＩ）との二量体不純物の混合物を含んで構成される、実施例２の固体を除去することにより調製された。
【０２３４】
実施例４は、本発明の方法を適用した場合に、最終生成物のアピキサバンが式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の二量体不純物を０.１０％未満の含量で含むとの証拠を提供する。
【０２３５】
実施例５は、従来の方法に従う式（ＶＩＩＩ）の化合物の調製であって、式（ＩＶ）および（Ｖ）の二量体不純物を多量に、すなわち、０.５０％よりも多く（ＨＰＬＣ  Ａ／Ａ％）含む、化合物（ＶＩＩＩ）を得るための調製を記載する。
【０２３６】
実施例６は、化合物（ＶＩＩＩ）が本発明の工程ｅ）〜ｉ）の方法に従って調製され、それで不純物（ＩＶ）および（Ｖ）の初期量が、各々、０.２１％および０.１０％から０.０６％および０.０３％に減少しているため、本発明の効果を示す証拠を提供する。.
【０２３７】
実施例７は、化合物（ＶＩＩＩ）が本発明の方法に従って調製され、それで単離された化合物（ＶＩＩＩ）中の不純物（ＩＶ）および（Ｖ）の初期量が、各々、０.５９％および１.８０％から０.１１％および０.３６％に減少しているため、本発明の効果を示す証拠を再び提供する。この実施態様の生成物（ＶＩＩＩ）が実施例６に記載されるように同じ実験に供され、任意の工程ｈ）を１回または複数回実施することで、さらに精製され得ることは明らかである。
【０２３８】
上記の実験および提供される結果を解析し、特にアピキサバン中の二量体不純物のレベルに鑑みて、本発明の方法により、二量体不純物を除去する効果が、すなわち二量体不純物を実質的に含まないアピキサバンを得る効果が提供されると認識され得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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