(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
オーリスタチンおよびＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬を併用投与する、肺がんまたは乳がんを処置するための薬剤の製造におけるオーリスタチンおよびＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬の使用であって、
前記ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬が下式で示される１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素
0006784668.tif 000025
または薬学的に許容できるその塩、
前記オーリスタチンが下式で示される２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（オーリスタチン−１０１）
0006784668.tif 000026
または薬学的に許容できるその塩
またはオーリスタチン−１０１の抗体−薬物コンジュゲート誘導体である、使用。
【請求項２】
前記ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬が、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素または薬学的に許容できるその塩である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記オーリスタチンが、２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドまたは薬学的に許容できるその塩である、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記オーリスタチンが、オーリスタチン−１０１の抗体−薬物コンジュゲート誘導体である、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記オーリスタチンおよび前記ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬を同時投与する、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記オーリスタチンおよび前記ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬を逐次投与する、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
前記オーリスタチンおよび前記ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬をいずれかの順序で逐次投与する、請求項１に記載の使用。
【請求項８】
一定量のオーリスタチンまたは薬学的に許容できるその塩、ここで前記オーリスタチンが下式で示される２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（オーリスタチン−１０１）
0006784668.tif 000027
または薬学的に許容できるその塩またはオーリスタチン−１０１の抗体−薬物コンジュゲート誘導体である；
一定量の下式で示される１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素
0006784668.tif 000028
または薬学的に許容できるその塩；
および薬学的に許容できる担体または希釈剤を含む、肺がんまたは乳がんを処理するための、医薬組成物。
【請求項９】
（ａ）オーリスタチン、または薬学的に許容できるその塩、ここで前記オーリスタチンが下式で示される２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（オーリスタチン−１０１）
0006784668.tif 000029
または薬学的に許容できるその塩またはオーリスタチン−１０１の抗体−薬物コンジュゲート誘導体である；
（ｂ）ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬、または薬学的に許容できるその塩、
ここで前記ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬が下式で示される１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素
0006784668.tif 000030
である；
ならびに（ｃ）薬学的に許容できる担体または希釈剤を含む、肺がんまたは乳がんを処置するための薬剤、ここで前記薬剤の剤形は、錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、経口用液剤、懸濁剤、ロゼンジ剤、トローチ剤、硬キャンディー剤、噴霧剤、クリーム剤、膏薬、坐剤、ゼリー剤、ゲル剤、ペースト剤、ローション剤、軟膏剤、注射用液剤、エリキシル剤、シロップ剤、または非経口液剤である。
【請求項１０】
（ａ）第１の単位剤形中のオーリスタチン、または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤、ここで前記オーリスタチンが下式で示される２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド（オーリスタチン−１０１）
0006784668.tif 000031
または薬学的に許容できるその塩またはオーリスタチン−１０１の抗体−薬物コンジュゲート誘導体である；
（ｂ）第２の単位剤形中の、ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬、または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤、
ここで前記ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬が下式で示される１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素
0006784668.tif 000032
である；
ならびに（ｃ）前記第１および第２の剤形を収容するための手段を含む、肺がんまたは乳がんを処理するためのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オーリスタチンまたはオーリスタチンをベースとした抗体−薬物−コンジュゲート（ＡＤＣ）と、ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害薬、ＭＥＫ阻害薬、タキサン、または他の抗がん薬などの第２の活性薬剤との組合せに関する。本発明はまた、これらの組合せを患者に投与することによって、異常な細胞成長、例えば、がんを処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明の一実施形態では、がんなどの異常な細胞成長を処置する方法であって、それを必要とする患者に、オーリスタチンまたはオーリスタチンをベースとしたＡＤＣと、ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害薬、ＭＥＫ阻害薬、タキサン、および他の抗がん薬から選択される第２の薬剤との組合せの有効量を投与することを含む方法を提供する。
【０００５】
制がん薬の標的であるｍＴＯＲは、２種類の複合体、ラプターサブユニットを含有するｍＴＯＲＣ１、およびリクターを含有するｍＴＯＲＣ２で存在する。当技術分野において公知のとおり、「リクター」は、ヒト遺伝子座５ｐ１３．１を有する細胞成長調節タンパク質を指す。これらの複合体は、異なって調節され、異なる基質範囲を有する。ｍＴＯＲＣ２は一般に、ラパマイシンおよび選択的阻害薬に対して非感受性である。ｍＴＯＲＣ２は、Ａｋｔなどの一部のＡＧＣキナーゼのＣ末端疎水性モチーフをリン酸化することによって、成長因子シグナル伝達をモジュレートすると考えられる。多くの細胞に関連して、ｍＴＯＲＣ２は、ＡｋｔのＳ４７３部位のリン酸化のために必要とされる。したがって、ｍＴＯＲＣ１活性は、Ａｋｔによって部分的に制御されるが、Ａｋｔ自体は、ｍＴＯＲＣ２によって部分的に制御される。ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）の成長因子刺激は、２つの重要な部位、Ｓ４７３およびＴ３０８におけるリン酸化によって、Ａｋｔの活性化を引き起こす。Ａｋｔの完全な活性化は、Ｓ４７３およびＴ３０８活性の両方のリン酸化を必要とすることが報告されている。Ａｋｔは、アポトーシスの抑制、グルコース取り込みの促進、および細胞代謝の変更を含む多くの方法で、細胞生存および増殖を促進する。Ａｋｔ上の２つのリン酸化部位のうち、ＰＤＫ１によって媒介されるＴ３０８における活性化ループのリン酸化は、キナーゼ活性のために不可欠であると考えられているが、Ｓ４７３における疎水性モチーフのリン酸化は、Ａｋｔキナーゼ活性を増強させる。Ｓ４７３におけるＡＫＴリン酸化は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ  ｍＴＯＲ経路の構成的活性化のためのマーカーとして使用することができる。
【０００６】
本発明の別の実施形態は、対象においてがんを処置するための方法であって、それを必要とする対象にオーリスタチンおよびＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬を併用投与することを含み、前記ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬がＰＦ−３８４およびＰＦ−５０２から選択される方法に関する。
【０００７】
好ましい一実施形態では、ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬は、ＰＦ−３８４である。
【０００８】
別の実施形態では、対象においてがんを処置するための方法であって、それを必要とする対象にオーリスタチンおよびＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬を併用投与することを含み、ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬が、ＰＦ−３８４およびＰＦ−５０２から選択され、前記オーリスタチンが、式
【０００９】
【化１】
0006784668.tif 000002
［式中、出現するごとに独立に、
Ｗは、
【００１０】
【化２】
0006784668.tif 000003
であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、
（ｉ）Ｒ３Ａは、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンまたはアラルキルであり、かつ
Ｒ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルもしくはハロゲンである、または
（ｉｉ）Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンもしくはＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンである
のいずれかであり、
Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂは、
（ｉ）Ｒ４Ａは、水素であり、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルまたはアラルキルであり、かつ
Ｒ４Ｂは、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルもしくはアラルキルである、または
（ｉｉ）Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンもしくはＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンである
のいずれかであり、
Ｒ５は、
【００１１】
【化３】
0006784668.tif 000004
、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリルおよびＣ６〜Ｃ１４アリールであり、これらは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、ハロゲン、−Ｎ３、−Ｎ（Ｒ’）２、−ＣＮ、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＮＨＣＯＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’および−ＳＲ’からなる群から独立に選択される１、２、３、４または５個の基で置換されていてもよく、各Ｒ’は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよび非置換アリールからなる群から独立に選択されるか、または２個のＲ’は、それらが結合している窒素と一緒になって、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成することができ、または
Ｒ５は、
【００１２】
【化４】
0006784668.tif 000005
であり、これらは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、ハロゲン、−Ｎ３、−Ｎ（Ｒ’）２、−ＣＮ、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＮＨＣＯＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’、−ＳＲ’およびアリーレン−Ｒ’からなる群から独立に選択される１、２、３、４または５個の基で置換されていてもよく、各Ｒ’は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびアリールからなる群から独立に選択されるか、もしくは２個のＲ’は、それらが結合している窒素と一緒になって、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成することができ、
Ｒ６は、水素、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、−Ｃ２〜Ｃ８アルキニルまたは−Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
Ｒ１２は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリルまたはＣ６〜Ｃ１４アリールであり、
Ｒ１３は、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリルであり、
Ｘは、Ｏである］
の化合物または薬学的に許容できるその塩もしくは溶媒和物、または前記化合物もしくは塩もしくは溶媒和物の抗体−薬物コンジュゲートである、方法を提供する。
【００１３】
そのような方法のさらなる一実施形態では、ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬は、ＰＦ−３８４およびＰＦ−５０２から選択され、オーリスタチンは、抗体薬物コンジュゲート５Ｔ４−ＡＤＣ、ＰＦ−１０１およびＭＭＡＦから選択される。
【００１４】
そのような方法のさらなる一実施形態では、ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬は、ＰＦ−３８４およびＰＦ−５０２から選択され、オーリスタチンは、抗体薬物コンジュゲート５Ｔ４−ＡＤＣである。
【００１５】
そのような方法のさらなる一実施形態では、ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬は、ＰＦ−３８４およびＰＦ−５０２から選択され、オーリスタチンは、オーリスタチン−１０１である。
【００１６】
そのような方法のさらなる一実施形態では、ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬は、ＰＦ−３８４およびＰＦ−５０２から選択され、オーリスタチンは、ＭＭＡＦである。
【００１７】
そのような方法のさらなる一実施形態では、ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬およびオーリスタチンまたはオーリスタチンをベースとしたＡＤＣを、肺がんを処置するために使用する。
【００１８】
そのような方法のさらなる一実施形態では、ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬およびオーリスタチンまたはオーリスタチンをベースとしたＡＤＣを、乳がんを処置するために使用する。
【００１９】
そのような方法のさらなる一実施形態では、オーリスタチンまたはオーリスタチンをベースとしたＡＤＣおよびＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬を同時投与するか、または逐次投与する。
【００２０】
そのような方法のさらなる一実施形態では、オーリスタチンまたはオーリスタチンをベースとしたＡＤＣおよびＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬を、いずれかの順序で逐次投与する。
【００２１】
別の実施形態では、本発明は、一定量のオーリスタチンまたは薬学的に許容できるその塩、一定量のＰＦ−３８４または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤を含む医薬組成物に関する。
【００２２】
本発明の別の実施形態は、対象においてがんを処置するための方法であって、それを必要とする対象にオーリスタチンおよびＭＥＫ阻害薬を併用投与することを含む方法に関する。
【００２３】
好ましい一実施形態では、ＭＥＫ阻害薬は、ＰＤ−９０１である。
【００２４】
そのような方法のさらなる一実施形態では、ＭＥＫ阻害薬は、ＰＤ−９０１であり、オーリスタチンは、抗体薬物コンジュゲート５Ｔ４−ＡＤＣ、ＰＦ−１０１およびＭＭＡＦから選択される。
【００２５】
そのような方法のさらなる一実施形態では、ＭＥＫ阻害薬は、ＰＤ−９０１であり、オーリスタチンは、抗体薬物コンジュゲート５Ｔ４−ＡＤＣである。
【００２６】
そのような方法のさらなる一実施形態では、ＭＥＫ阻害薬は、ＰＤ−９０１であり、オーリスタチンは、オーリスタチン−１０１である。
【００２７】
そのような方法のさらなる一実施形態では、ＭＥＫ阻害薬は、ＰＤ−９０１であり、オーリスタチンは、ＭＭＡＦである。
【００２８】
そのような方法のさらなる一実施形態では、ＭＥＫ阻害薬およびオーリスタチンまたはオーリスタチンをベースとしたＡＤＣを、肺がんを処置するために使用する。
【００２９】
そのような方法のさらなる一実施形態では、ＭＥＫ阻害薬およびオーリスタチンまたはオーリスタチンをベースとしたＡＤＣを、乳がんを処置するために使用する。
【００３０】
また別の実施形態では、本発明は、一定量のオーリスタチンもしくはオーリスタチンをベースとしたＡＤＣ、または薬学的に許容できるその塩、および一定量のＰＤ−９０１または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤を含む医薬組成物に関する。
【００３１】
本発明の別の実施形態は、対象においてがんを処置するための方法であって、それを必要とする対象にオーリスタチンおよびタキサンを併用投与することを含む方法に関する。
【００３２】
そのような方法のさらなる一実施形態では、タキサンは、パクリタキセルまたはドセタキセルであり、オーリスタチンは、抗体薬物コンジュゲート５Ｔ４−ＡＤＣ、ＰＦ−１０１およびＭＭＡＦから選択される。
【００３３】
そのような方法のさらなる一実施形態では、タキサンは、パクリタキセルまたはドセタキセルであり、オーリスタチンは、抗体薬物コンジュゲート５Ｔ４−ＡＤＣである。
【００３４】
そのような方法のさらなる一実施形態では、タキサンは、パクリタキセルまたはドセタキセルであり、オーリスタチンは、オーリスタチン−１０１である。
【００３５】
そのような方法のさらなる一実施形態では、タキサンは、パクリタキセルまたはドセタキセルであり、オーリスタチンは、ＭＭＡＦである。
【００３６】
そのような方法のさらなる一実施形態では、タキサンおよびオーリスタチンまたはオーリスタチンをベースとしたＡＤＣを、肺がんを処置するために使用する。
【００３７】
そのような方法のさらなる一実施形態では、タキサンおよびオーリスタチンまたはオーリスタチンをベースとしたＡＤＣを、乳がんを処置するために使用する。
【００３８】
また別の実施形態では、本発明は、一定量のオーリスタチンもしくはオーリスタチンをベースとしたＡＤＣ、または薬学的に許容できるその塩、および一定量の、パクリタキセルおよびドセタキセルまたは薬学的に許容できるその塩から選択されるタキサン、ならびに薬学的に許容できる担体または希釈剤を含む医薬組成物に関する。
【００３９】
オーリスタチンおよび前記タキサンを当時投与するか、または逐次投与する実施形態も提供する。
【００４０】
オーリスタチンおよび前記タキサンをいずれかの順序で逐次投与する実施形態も提供する。
【００４１】
さらなる一実施形態は、一定量のオーリスタチンまたは薬学的に許容できるその塩、一定量のタキサンまたは薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤を含む医薬組成物を含む。
【００４２】
オーリスタチンをＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害薬と共に、オーリスタチンをＭＥＫ阻害薬と共に、およびオーリスタチンをタキサンと共に投与することを含む本明細書に記載の併用投与の方法のいずれかにおいて、併用投与によって達成される抗がん効果が、前記第１および第２の医薬組成物を非併用投与することによって達成される抗がん効果よりも大きい実施形態を提供する。
【００４３】
（ａ）オーリスタチン、または薬学的に許容できるその塩、（ｂ）ＰＦ−３８４およびＰＦ−５０２から選択されるＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬、または薬学的に許容できるその塩、および（ｃ）薬学的に許容できる担体または希釈剤を含む、哺乳類においてがんを処置するための剤形実施形態を提供する。
【００４４】
（ａ）オーリスタチン、または薬学的に許容できるその塩、（ｂ）ＰＤ−９０１であるＭＥＫ阻害薬、または薬学的に許容できるその塩、および（ｃ）薬学的に許容できる担体または希釈剤を含む、哺乳類においてがんを処置するための剤形実施形態を提供する。
【００４５】
（ａ）オーリスタチン−１０１であるオーリスタチン、または薬学的に許容できるその塩、（ｂ）パクリタキセルもしくはドセタキセルであるタキサン、または薬学的に許容できるその塩、ならびに（ｃ）薬学的に許容できる担体または希釈剤を含む、哺乳類においてがんを処置するための剤形実施形態を提供する。
【００４６】
（ａ）第１の単位剤形中のオーリスタチン、または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤、（ｂ）第１の単位剤形中の、ＰＦ−３８４およびＰＦ−５０２から選択されるＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬、または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤、ならびに（ｃ）前記第１および第２の剤形を収容するための手段を含む、キット実施形態を提供する。
【００４７】
（ａ）第１の単位剤形中のオーリスタチン、または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤、（ｂ）第１の単位剤形中の、ＰＤ−９０１であるＭＥＫ阻害薬、または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤、ならびに（ｃ）前記第１および第２の剤形を収容するための手段を含む、キット実施形態を提供する。
【００４８】
（ａ）第１の単位剤形中の、オーリスタチン−１０１であるオーリスタチン、または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤、（ｂ）第１の単位剤形中の、パクリタキセルまたはドセタキセルであるタキサン、または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤、ならびに（ｃ）前記第１および第２の剤形を収容するための手段を含む、キット実施形態を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】がん細胞株のパネルにおける併用指数（ＣＩ）値の概要を示す図である。Ａ．ＰＦ−３８４、二重ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害薬との、またはｍＴＯＲ特異的阻害薬との薬物組合せの分析後に得られたＣＩ指数値の範囲を示すドットプロット。Ｂ．ＰＴＸとの薬物組合せの分析後に得られたＣＩ指数値の範囲を示すドットプロット。Ａ．およびＢ．でのＣＩ指数は、材料および方法において記載するとおりのＣｈｏｕ  Ｔａｌａｌａｙ方法を使用して決定し、組合せのそれぞれについてＥＤ５０レベルで表されている。結果は、少なくとも３つの独立した実験の平均である。ＣＩは、次のとおりに解釈されている：非常に強い相乗効果（０．１未満）、強い相乗効果（０．１〜０．３）、相乗作用（０．３〜０．７）、中等度の相乗作用（０．７〜０．８５）、僅かな相乗作用（０．８５〜０．９）、ほぼ相加的（０．９〜１．１）、僅かな拮抗作用（１．１〜１．２）および中等度の拮抗作用（１．２〜１．４５）。破線は、１．１および０．７のＣＩ値である。ＰＴＸ、パクリタキセル；ＶＩＮＯ、ビノレルビン；Ａｕｒ１０１、オーリスタチン−１０１；ｍＴＯＲｉ、ＷＹＥ−１３２。
【図２】ｘＣＥＬｉｇｅｎｃｅシステムを用いての、ＭＤＡ−４６８細胞における細胞成長の動的モニタリングを示す図である。Ａ．ＭＤＡ−４６８細胞における５Ｔ４−ＡＤＣ、ＰＦ−３８４または組合せの濃度−および時間依存的細胞毒性効果。Ａ．において、３つの異なる実験のうちの代表１つが示されている。Ｂ．８日目時点でのインピーダンス指数値が表されており、これは、５Ｔ４−ＡＤＣおよびＰＦ−３８４の組合せでの細胞成長阻害の統計的に有意な増強を示している。Ｃ．ＭＤＡ−４６８細胞におけるＭＭＡＦ−ＯＭｅ、ＰＦ−３８４または組合せの濃度−および時間依存的細胞毒性効果。Ｃ．には、３つの異なる実験のうちの代表１つが示されている。Ｄ．８日目時点でのインピーダンス指数値が表されており、これは、ＭＭＡＦ−ＯＭｅおよびＰＦ−３８４組合せでの細胞成長阻害の統計的に有意な増強を示している。
【図３】５Ｔ４−ＡＤＣまたはＭＭＡＦ−ＯＭｅとＰＦ−３８４またはＰＴＸとの組合せが、３Ｄ培養において細胞成長のより強い抑制をもたらすことを示す図である。材料および方法において記載するとおり、マトリゲル中で３Ｄスフェロイドとして成長させたＭＤＡ−４６８（Ａ−Ｆ）またはＨ−１９７５（Ｇ−Ｊ）細胞およびスフェロイド生存率を測定した。値は、平均±ＳＥＭである。Ａ、ＭＤＡ−４６８細胞を、漸増用量の５Ｔ４−ＡＤＣ、固定用量のＰＦ−３８４（１０ｎＭ）または両方の薬物の組合せで７日間処置した。プロットは、個々の未処置対照と比較しての成長のパーセンテージである。破線は、固定用量のＰＦ−３８４での生存率％を示している。Ｂ、Ａからの、指示薬物濃度での選択データポイントのヒストグラムプロット。アステリスクは、５Ｔ４−ＡＤＣ＋ＰＦ−３８４（＊＊ｐ＜０．０１、スチューデントｔ検定）からの有意な差を表している。Ｃ、ＭＤＡ−４６８細胞を、漸増用量のＰＦ−３８４、固定用量のＭＭＡＦ−ＯＭｅ（０．８ｎＭ）または両方の薬物の組合せで７日間処置した。個々の未処置対照と比較しての成長のパーセンテージがプロットされている。破線は、固定用量のＭＭＡＦ−ＯＭｅでの生存率％を示している。Ｄ、（Ｃ）からの、指示薬物濃度での選択データポイントのヒストグラムプロット。アステリスクは、ＭＭＡＦ−ＯＭｅ＋ＰＦ−３８４からの有意な差を表している（＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１；スチューデントｔ検定）。Ｅ、ＭＤＡ−４６８細胞を、漸増用量の５Ｔ４−ＡＤＣ、固定用量のＰＴＸ（１ｎＭ）または両方の薬物の組合せで７日間処置した。個々の未処置対照と比較しての成長のパーセンテージがプロットされている。破線は、固定用量のＰＴＸでの生存率％を示している。Ｆ、（Ｅ）からの、指示薬物濃度での選択データポイントのヒストグラムプロット。値は、平均±ＳＥＭである。アステリスクは、５Ｔ４−ＡＤＣ＋ＰＴＸからの有意な差を表している（＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１；スチューデントｔ検定）。Ｇ、漸増濃度のＰＦ−３８４、固定用量の５Ｔ４−ＡＤＣ（５または１０μｇ／ｍｌ）、または２種の薬物の組合せで処置されたＨ−１９７５スフェロイドの用量反応曲線。Ｈ．Ｇからの、指示薬物濃度での選択データポイントのヒストグラムプロット。アステリスクは、５Ｔ４−ＡＤＣ（１０μｇ／ｍｌ）＋ＰＦ−３８４（＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１；スチューデントｔ検定）からの、または５Ｔ４−ＡＤＣ（５μｇ／ｍｌ）＋ＰＦ−３８４（＊ｐ＜０．０５；スチューデントｔ検定）の組合せからの有意な差を表している。Ｉ、漸増濃度のＰＦ−３８４、固定用量のＭＭＡＦ−ＯＭｅ（０．３または０．８ｎＭ）、または２種の薬物の組合せで処置されたＨ−１９７５スフェロイドの用量反応曲線。Ｊ．Ｉからの、指示薬物濃度での選択データポイントのヒストグラムプロット。アステリスクは、ＭＭＡＦ−ＯＭｅ（０．３ｎＭ）＋ＰＦ−３８４（＊ｐ＜０．０５；スチューデントｔ検定）からの、またはＭＭＡＦ−ＯＭｅ（０．８ｎＭ＋ＰＦ−３８４（＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、スチューデントｔ検定）の組合せからの有意な差を表している。
【図４】５Ｔ４−ＡＤＣまたはＭＭＡＦ−ＯＭｅとＰＦ−３８４またはＰＴＸとの組合せによる、カスパーゼ３／７活性の誘導を示す図である。Ａ、Ｄ  ５Ｔ４−ＡＤＣ（１０μｇ／ｍｌ）＋ＰＦ−３８４（１μＭ）で２４時間処置されたＭＤＡ−４６８（Ａ）またはＨ−１９７５（Ｅ）細胞におけるカスパーゼ３／７の誘導の増強。Ｂ、Ｆ  ＭＭＡＦ−ＯＭｅ（２ｎＭ）＋ＰＦ−３８４（１μＭ）で２４時間処置されたＭＤＡ−４６８（Ｂ）またはＨ−１９７５（Ｆ）細胞におけるカスパーゼ３／７誘導の増強。Ｃ、Ｄ  ５Ｔ４−ＡＤＣ（１μｇ／ｍｌ）＋ＰＴＸ（６ｎＭ）（Ｃ）またはＭＭＡＦ−ＯＭｅ（０．２２ｎＭ）＋ＰＴＸ（６ｎＭ）（Ｄ）で４８時間処置されたＭＤＡ−４６８細胞におけるカスパーゼ３／７活性の誘導の増強。カスパーゼ３／７活性における誘導倍率を、材料および方法において記載するとおりに決定した。３連実験の平均およびＳＥＭが示されている。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。アステリスクは、単独の単一薬物のそれぞれと組合せとの間の統計的に有意な差を示している；スチューデントｔ検定。
【図５】細胞周期プロファイルに対する５Ｔ４ＡＤＣ、ＭＭＡＦ−ＯＭｅ、ＰＦ−３８４の単一薬剤処置およびそれらの組合せの効果を示す図である。ビヒクル（対照）、５Ｔ４−ＡＤＣ（１μｇ／ｍｌ）、単一薬剤としてのＰＦ−３８４（１００ｎＭ）または５Ｔ４−ＡＤＣ（１μｇ／ｍｌ）＋ＰＦ−３８４（１００ｎＭ）の組合せで２４（Ａ）時間および３６（Ｂ）時間処置したＭＤＡ−４６８の細胞周期段階分布。Ｃ、分裂係数に対する、単一薬剤処置５Ｔ４−ＡＤＣ、ＰＦ−３８４およびそれらの組合せの効果。分裂係数を、フローサイトメトリーによって、Ａ、Ｂにおいて示されている実験での集団における、ホスホ−ヒストンＨ３陽性細胞のパーセンテージとして決定した。細胞周期分析および分裂係数を、フローサイトメトリーによって、ＦｌｏｗＣｅｌｌｅｃｔ  Ｂｉｖａｒｉａｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅキットを用いて行った。細胞周期のＧ１、Ｓ、Ｇ２期を、総細胞集団に対する平均パーセンテージとして、標準誤差と共にプロットした。結果は、３連で実行された２種の独立した実験を代表しており、エラーバーは、標準誤差を表している。
【図６】５Ｔ４−ＡＤＣ＋ＰＦ−３８４組合せ処置が、ｉｎ  ｖｉｖｏでの乳房および肺がんモデルにおいて、治療効果の増強をもたらすことを示す図である。Ａ、皮下ＭＤＡ−４６８腫瘍を有するマウスを、ビヒクル、５Ｔ４−ＡＤＣ（静脈内２ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×４）、ＰＦ−３８４（静脈内７．５ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×４）または組合せで処置した。エンドポイントまでの時間（Ｔｉｍｅ  ｔｏ  Ｅｎｄｐｏｉｎｔ）（ＴＴＥ）を、動物が腫瘍−退縮を達成するまでに経過した時間と定義する。Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒプロットは、腫瘍を有する動物のパーセント変化を経時的に示している。ＴＴＥ分析は、５Ｔ４−ＡＤＣの単一薬剤活性と比較して、５Ｔ４−ＡＤＣおよびＰＦ−３８４の組合せで腫瘍退縮の有意に増強した速度を実証している（ｐ＜０．０００１、ログランクマンテル・コックス検定）。ＰＦ−３８４は、この実験において、退縮を誘発しなかった。Ｂ、（Ａ）において示されているデータの５３日目の個々の腫瘍体積分析。５Ｔ４−ＡＤＣ＋ＰＦ−３８４は、単独での５Ｔ４−ＡＤＣ（Ｐ＜０．０５）またはＰＦ−３８４（Ｐ＜０．０００１）処置と比較して、平均腫瘍体積の統計的に有意な阻害をもたらす。グラフ図は、５３日目（マウスの１５％以上が実験群のいずれかにおいて研究を離脱したとき）での個々の腫瘍体積を示しており、横棒は、１群当たりの平均腫瘍体積を示している。ＣＲ、完全寛解は、完全な腫瘍退縮によって定義される。Ｃ、皮下Ｈ−１９７５腫瘍を有するマウスを、５Ｔ４−ＡＤＣ（静脈内３ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×４）、ＰＦ−３８４（静脈内７．５ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×４）または組合せで処置した。エンドポイントを、腫瘍体積が３倍になったときと定義する。Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒプロットは、３倍未満の腫瘍体積の増加を有する動物のパーセンテージを経時的に示している。データのＴＴＥ分析は、単独での５Ｔ４−ＡＤＣ（ｐ＝０．０３５６、対数順位検定）またはＰＦ−３８４（ｐ＜０．０００１対数順位検定）の単一薬剤活性と比較して、５Ｔ４−ＡＤＣ＋ＰＦ−３８４の組合せでは、腫瘍３倍化の速度の有意な遅延を実証する。Ｄ、（Ｃ）において示されているデータの２１目での個々の腫瘍体積分析。５Ｔ４−ＡＤＣは、単独での５Ｔ４−ＡＤＣ（Ｐ＜０．０１）またはＰＦ−３８４（Ｐ＜０．０００１）処置と比較して、平均腫瘍体積の統計的に有意な阻害をもたらす。
【図７】５Ｔ４−ＡＤＣおよびＰＴＸ組合せ処置が、ｉｎ  ｖｉｖｏでの乳房および肺がんモデルにおいて、治療効果の増強をもたらすことを示す図である。Ａ、皮下ＭＤＡ−４６８腫瘍を有するマウスを、５Ｔ４−ＡＤＣ（静脈内２ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×４）、ＰＴＸ（経口１０ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×４）または組合せで処置した。データのＴＴＥ分析は、５Ｔ４−ＡＤＣ（ｐ＝０．００７１、対数順位検定）またはＰＴＸ（ｐ＝０．０１、対数順位検定）の単一薬剤活性と比較して、５Ｔ４−ＡＤＣおよびＰＴＸの組合せで達成される完全腫瘍退縮の有意により早い速度を実証する。Ｂ、（Ａ）において示されているデータの５３日目での個々の腫瘍体積分析。５Ｔ４−ＡＤＣ＋ＰＴＸ（１０ｍｇ／ｋｇ）は、単独での５Ｔ４−ＡＤＣ（Ｐ＜０．０５）またはＰＴＸ（Ｐ＜０．００１）処置と比較して、平均腫瘍体積の阻害の有意な増強をもたらす。横棒は、１群当たりの平均腫瘍体積を示している。ＣＲ、完全寛解は、完全な腫瘍退縮によって定義される。Ｃ、（Ａ）と同様に、ただし、ＰＴＸを２２．５ｍｇ／ｋｇの用量（経口Ｑ４Ｄ×４）で使用した。データのＴＴＥ分析は、この用量ではいかなる腫瘍退縮も生成していない５Ｔ４−ＡＤＣ（ｐ＝０．００８２１、対数順位検定）またはＰＴＸの単一薬剤活性と比較して、５Ｔ４−ＡＤＣ＋ＰＴＸの組合せで達成される完全腫瘍退縮の有意により早い速度を示している。Ｄ、（Ｃ）において示されているデータの５３日目での個々の腫瘍体積分析。５Ｔ４−ＡＤＣ＋ＰＴＸ（２２．５ｍｇ／ｋｇ）は、単独での５Ｔ４−ＡＤＣ（Ｐ＜０．０５）またはＰＴＸ（ｐ＝０．０７）処置と比較して、平均腫瘍体積の阻害の増強をもたらす。横棒は、１群当たりの平均腫瘍体積を示す。ＣＲ、完全寛解は、完全な腫瘍退縮によって定義される。Ｅ、皮下Ｈ−１９７５腫瘍を有するマウスを、５Ｔ４−ＡＤＣ（静脈内３ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×４）、ＰＴＸ（経口１０ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×４）または組合せで処置した。ＰＴＸと組み合わせた５Ｔ４−ＡＤＣは、単一薬剤での処置よりも有効である。図３Ｃと同様に行ったデータのＴＴＥ分析は、単独での５Ｔ４−ＡＤＣ（ｐ＜０．０００１、対数順位検定）またはＰＴＸ（ｐ＝０．０００１対数順位検定）の単一薬剤活性と比較して、５Ｔ４−ＡＤＣ＋ＰＴＸの組合せでは、腫瘍３倍化の速度の有意な遅延を実証する。Ｆ、（Ｅ）において示されているデータの４６日目の個々の腫瘍体積分析。５Ｔ４−ＡＤＣ＋ＰＴＸ（２２．５ｍｇ／ｋｇ）は、単独での５Ｔ４−ＡＤＣ（ｐ＜０．０００１）またはＰＴＸ（ｐ＜０．０００１）処置と比較して、平均腫瘍体積の阻害の増強をもたらす。横棒は、１群当たりの平均腫瘍体積を示している。Ｇ、皮下３７６２２Ａ１肺がんＰＤＸ腫瘍を有するマウスを、５Ｔ４−ＡＤＣ（静脈内３ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×４）、ＰＴＸ（経口２２．５ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×４）または組合せで処置した。エラーバーは、平均の標準誤差を表す。研究を、群の１つ（ビヒクル）が動物の１５％超を失った５６日目に終了した。統計的解析をビヒクル群の終了時に行った（＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元ＡＮＯＶＡ）。
【図８】５Ｔ４−ＡＤＣ＋ゲムシタビンの組合せ処置が、ｉｎ  ｖｉｖｏでの肺がんモデルにおいて治療効果の増強をもたらすことを示す図である。皮下Ｈ−１９７５ヒト肺腫瘍異種移植片を有するマウスを５Ｔ４−ＡＤＣ（静脈内４ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×４）、ゲムシタビン（静脈内３０ｍｇ／ｋｇ、Ｑ７Ｄ×３）または組合せで処置した。プロットは、処置の開始後の指示時点で決定された腫瘍体積での腫瘍成長曲線を示している。ポイント、１０マウス／群からの値の平均；横棒、ＳＥ。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
本発明において、次の用語は、別段に示さない限り、下記に示すとおりに説明される。
【００５１】
オーリスタチン：本明細書において使用する場合、「オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）」または「オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎｓ）」という用語は、天然産物タツナミガイ（Ｄｏｌａｂｅｌｌａ  ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ）に由来する薬物、ならびにオーリスタチン−１０１、ＭＭＡＥおよびＭＭＡＦなどの構造的に関連した化合物を含む、ポリペプチドをベースとした化合物のクラスを指す。本発明の組合せ（複数可）の成分を記載するために本明細書において使用する場合、「オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）」または「オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎｓ）」はまた、オーリスタチンを組み込んでいるか、またはそれを含むバイオコンジュゲート分子、例えば、抗体（Ａｂ）などの生物学的部分がポリペプチド部分に連結している抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を指す。代表的なオーリスタチンポリペプチドをベースとした分子には、オーリスタチン−１０１、ＭＭＡＥ、およびＭＭＡＦが含まれる。代表的なオーリスタチンＡＤＣには、５Ｔ４−ＡＤＣが含まれる。
【００５２】
「オーリスタチン−１０１」は、オーリスタチンポリペプチド化合物：式
【００５３】
【化５】
0006784668.tif 000006
の２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド、または薬学的に許容できるその塩もしくは溶媒和物、またはその誘導体を指す。
【００５４】
「ＭＭＡＥ」は、モノメチルオーリスタチンＥとして知られる、式
【００５５】
【化６】
0006784668.tif 000007
を有するオーリスタチンポリペプチド化合物、または薬学的に許容できるその塩もしくは溶媒和物、またはその誘導体を指す。
【００５６】
「ＭＭＡＦ」は、モノメチルオーリスタチンＦ、または（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−３−メチル−２−（メチルアミノ）ブタンアミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸として知られる、式
【００５７】
【化７】
0006784668.tif 000008
を有するオーリスタチンポリペプチド化合物、または薬学的に許容できるその塩もしくは溶媒和物、またはその誘導体を指す。
【００５８】
「５Ｔ４−ＡＤＣ」は、「ｍｃ」リンカーを介して、５Ｔ４抗原に特異的な抗体にコンジュゲートしているオーリスタチンポリペプチドＭＭＡＦを含む分子を指す。
【００５９】
「抗５Ｔ４抗体−薬物コンジュゲート」は、切断不可能なマレイミドカプロイル（ｍｃ）リンカーを介して強力なチューブリン阻害薬であるモノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）に連結している抗５Ｔ４  Ａ１抗体を指す。抗５Ｔ４  ＡＤＣと呼ばれるＡ１ｍｃＭＭＡＦにおける標的薬剤は、ヒト５Ｔ４を特異的に認識するヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体Ａ１である（Ｓａｐｒａ  Ｐ、Ｄａｍｅｌｉｎ  Ｍ、Ｄｉｊｏｓｅｐｈ  Ｊ、Ｍａｒｑｕｅｔｔｅ  Ｋ、Ｇｅｌｅｓ  ＫＧ、Ｇｏｌａｓ  Ｊら  Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｔｕｍｏｒ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｔｈａｔ  ｔａｒｇｅｔｓ  ５Ｔ４，  ａｎ  ｏｎｃｏｆｅｔａｌ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｏｎ  ｔｕｍｏｒ−ｉｎｉｔｉａｔｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．２０１３；１２：３８〜４７）。ｍｃＭＭＡＦのマレイミドが、抗体上のシステインスルフヒドリル基にコンジュゲートされた。得られたＡＤＣは、４ｍｏｌ／ｍｏｌの平均薬物：抗体比を有する。標的細胞に内部移行すると、ＡＤＣはリソソームにおいて分解されて、ｃｙｓｍｃＭＭＡＦの放出をもたらし、それが、チューブリン重合を阻害し、アポトーシスおよび細胞死をもたらすことが提案されている。
【００６０】
本明細書において使用する場合、「ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害薬」は、ＰＩ３ＫおよびｍＴＯＲ標的を二重阻害し得る化合物を指す。そのような二重特異性阻害薬は、ｍＴＯＲおよびＰＩ３ＫのＡＴＰ結合部位の両方に結合する。そのような阻害薬の例には、ウォルトマニン、ＬＹ２９４００２、ＰＩ−１０３（Ｃａｙｍａｎ  ｃｈｅｍｉｃａｌ）、ＳＦ１１２６（Ｓｅｍａｆｏｒｅ）、ＢＧＴ２２６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ７６５（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）およびＮＶＰ−ＢＥＺ２３５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）が含まれる（Ｌｉｕら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗ、８、６２７〜６４４、２００９）。一部の態様では、二重特異性阻害薬は、イミダゾキナゾリン（例えば、イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体）であろう。化合物がＰＩ３Ｋおよび／もしくはｍＴＯＲに結合し、かつ／またはそれらを阻害するかどうかのための例示的なアッセイは、当技術分野において周知である。
【００６１】
「対象」および「患者」という用語は、本明細書において互換的に使用される。「対象」および「患者」の例には、これらだけに限定されないが、ヒト、ラット、マウス、モルモット、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、トリおよびニワトリが含まれる。例示的な一実施形態では、対象または患者はヒトである。
【００６２】
臨床開発中で、かつ本発明において特に重要なＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害薬にはまた、２−アミノ−８−［ｔｒａｎｓ−４−（２−ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］−６−（６−メトキシピリジン−３−イル）−４−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン：
【００６３】
【化８】
0006784668.tif 000009
または薬学的に許容できるその塩もしくは溶媒和物、またはその誘導体、および１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素：
【００６４】
【化９】
0006784668.tif 000010
または薬学的に許容できるその塩もしくは溶媒和物、またはその誘導体がある。
【００６５】
この第２のトリアジンをベースとした化合物は、ＰＦ−０５２１２３８４、ＰＦ−’３８４、ＰＦ−３８４、またはＰＫＩ−５８７としても公知である。
【００６６】
本明細書において使用する追加の用語には、２Ｄ（二次元細胞培養）；３Ｄ（三次元細胞培養）；５Ｔ４（腫瘍胎児抗原またはＴＰＢＧ）；５Ｔ４−ＡＤＣ（５Ｔ４ｍＡｂもしくはｍＡＢｓとｍｃＭＭＡＦ毒素とのコンジュゲート）；ＣＲ（完全応答）；ＣＩ（併用指数）；ＥＤ５０（５０％有効用量）；ＩＣ５０（５０％阻害濃度）；ＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）；ＩＨＣ（免疫組織化学）；ｍｃ（切断不可能なマレイミドカプロイルリンカー）；ｍｃＭＭＡＦ（切断不可能なマレイミドカプロイルリンカーに接続されたモノメチルオーリスタチンＦ）；ＭＭＡＦ−Ｏｍｅ（モノメチルオーリスタチンＦの透過性バージョン）；ｍＴＯＲ（ラパマイシンの哺乳類標的）；ＰＤ−９０１（ＭＥＫ阻害薬ＰＤ０３２５９０１）；ＰＦ−３８４（二重ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害薬ＰＦ−０５２１２３８４またはＰＫＩ−５８７）；ＰＩ３Ｋ（ホスホイノシチド３−キナーゼ）；ＰＴＸ（パクリタキセル）；ＲＮＡｓｅｑ（ＲＮＡ配列決定）；ＳＯＣ（標準治療処置）；ＴＣＧＡ（Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｔｌａｓ）；およびＷＹＥ−１３２（包括的ｍＴＯＲ阻害薬ＷＹＥ−１２５１３２）が含まれる。
【００６７】
本発明において使用するための活性な部位阻害薬の別のクラスは、選択的ｍＴＯＲ阻害薬である。このクラスのｍＴＯＲ阻害薬は、１種または複数のＩ型ホスファチジルイノシトール３−キナーゼと比較して、ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２活性を選択的に阻害する。Ｉ型ホスファチジルイノシトール３−キナーゼは、例えば、ＰＩ３キナーゼｕ、ＰＩ３キナーゼｐ、ＰＩ３キナーゼ７、またはＰＩ３キナーゼ６から選択することができる。これらの活性な部位阻害薬は、ｍ  ＴＯＲの活性部位に結合するが、ＰＩ３Ｋには結合しない。そのような阻害薬の例には、Ｔｏｒｉｎ１（ＧｕｅｒｔｉｎおよびＳａｂａｔｉｎｉ）、ＰＰ２４２（２−（４−アミノ−Ｉ−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｄ］ピリミジン−３−イル）−１Ｈ−インドール−５−オール）、ＰＰ３０、Ｋｕ−００６３７９４、ＷＡＹ−６００（Ｗｙｅｔｈ）、ＷＡＹ−６８７（Ｗｙｅｔｈ）、ＷＡＹ−３５４（Ｗｙｅｔｈ）、およびＡＺＤ８０５５（ＳｐａｒｋｓおよびＧｕｅｒｔｉｎ、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２９、２７３３〜２７４４、２０１０、Ｌｉｕら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗ、８、６２７〜６４４、２００９）が含まれる。一部の態様では、ｍＴｏｒ阻害薬は、ピラゾロピリミジンであろう。ｍＴＯＲ阻害薬の選択性を決定するための方法は、当技術分野において公知である。本発明において使用するためのｍＴＯＲ阻害薬の別のクラスは、本発明において、「ラバログ」と称される。本明細書において使用する場合、「ラバログ」という用語は、ｍ  ＴＯＲ  ＦＲＢドメイン（ＦＫＢＰラパマイシン結合ドメイン）に特異的に結合し、ラパマイシンと構造的に類似していて、かつｍＴＯＲ阻害特性を保持している化合物を指す。
【００６８】
本明細書において使用する場合、「ＰＩ３Ｋ阻害薬」という用語は、ＰＩ３Ｋに結合し、その少なくとも１つの活性を阻害する化合物またはリガンドを指す。ＰＩ３Ｋタンパク質は、３つのクラス、クラス１  Ｐ１３Ｋ、クラス２  Ｐ１３Ｋ、およびクラス３  Ｐ１３Ｋに分類することができる。ＰＩ３Ｋ阻害薬の例には、ＢＫＭ１２０（クラス１  Ｐ１３Ｋ阻害薬、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ１４７（クラス１  Ｐ１３Ｋ阻害薬、Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＧＤＣ０９４１（クラス１  Ｐ１３Ｋ阻害薬、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＧＳＫ１０５９６１５（ｐａｎ−Ｐ１３Ｋ阻害薬、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＰＸ−８６６（クラス１  Ｐ１３Ｋ阻害薬；ｐ１１０ｕ、ｐ１１０ｐ、およびｐ１１０７アイソフォーム、Ｏｎｃｏｔｈｙｒｅｏｎ）、およびＣＡＬ−１０１（クラス１  Ｐ１３Ｋ阻害薬；ｐ１１０６アイソフォーム、Ｃａｌｉｓｔｏｇａ）が含まれる。
【００６９】
本明細書において既に述べたものに加えて、本発明に関連して有用なＰＩ３ＫまたはＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害薬には、ＧＤＣ０９４１（ＰＩ３Ｋｉ）およびＧＤＣ−０９８０（ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲｉ）（Ｇｅｎｅｔｅｃｈ／  Ｒｏｃｈｅ）；ＢＥＺ２３５（ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲｉ）、ＢＧＴ２２６（ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲｉ）、ＢＫＭ１２０（ＰＩ３Ｋｉ）およびエベロリムス（ｍＴＯＲＣ１ｉ  ラバログ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＸＬ−７６７（ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲｉ）、ＸＬ−１４７（ＰＩ３Ｋｉ）、およびＸＬ−３８８（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ／  Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）；ＡＺＤ８０５５（ｍＴＯＲｉ）（Ａｓｔｒａｚｅｎｅｃａ）；ＧＳＫ２１４１７９（ＡＫＴｉ）およびＧＳＫ２１２６４５８（ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲｉ）（ＧＳＫ）；ＯＳＩ−０２７（ｍＴＯＲｉ）およびＯＸＡ−０１（ｍＴＯＲｉ）（ＯＳＩ）；ＣＡＬ−１０１（ＰＩ３Ｋδ）およびＣＡＬ１２０（ＰＩ３Ｋγ／δｉ）（Ｃａｌｉｓｔｏｇａ）；ＳＦ１１２６（ＰＩ３Ｋｉ）（Ｓｅｍａｆｏｒｅ）；ＩＮＫ−１２８（ｍＴＯＲｉ）、ＰＩ３Ｋγ／δ、およびＰＩ３Ｋα／βｉ（Ｉｎｔｅｌｌｉｋｉｎｅ）；ＳＢ２３１２（ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲｉ）（Ｓ＊Ｂｉｏ）；ＡＲ−ｍＴＯＲ−１（ｍＴＯＲｉ）およびＡＲ−ｍＴＯＲ−２６（ｍＴＯＲｉ）（ＡＲＲＡＹ）；ＰＸ−８６６（ＰＩ３Ｋｉ）（Ｏｎｃｏｔｈｙｒｅｏｎ）；ＡＥＺＳ−１２６（ＰＩ３Ｋｉ）（Ａｅｔｅｒｎａ  Ｚｅｎｔａｒｉｓ）；ＺＳＴＫ４７４（Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）；ＷＸ０３７（Ｗｉｌｅｘ）；ＮＶ−１２８（ｍＴＯＲｉ）（Ｎｏｖａｇｅｎ）；ＥＺＮ−４１５０（ＰＩ３Ｋｉ）（Ｅｎｚｏｎ）；ならびにＸｃｏｖｅｒｙ、Ｃｅｌｌｚｏｍｅなどが開発中の化合物が含まれる。本明細書において既に述べたものに加えて、本発明に関連して有用なＦＧＦＲ阻害薬には、ＡＺＤ−４５４７（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＬＹ２８７４４５５（Ｌｉｌｌｙ）；ＢＧＪ−３９８およびドビチニブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ブリバニブアラニンエステル（ＢＭＳ）；スルファチニブ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ  Ｍｅｄｉ  Ｐｈａｒｍ）；インテダニブ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；レンバチニブ（Ｅｉｓａｉ）；およびＴＳＵ−６８（Ｔａｉｈｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）が含まれる。
【００７０】
本明細書において使用する場合、「ＭＥＫ阻害薬」は、マイトジェン活性化プロテインキナーゼキナーゼ酵素ＭＥＫ１および／またはＭＥＫ２を阻害する薬品または薬物である。ＭＥＫ阻害薬を使用して、一部のがんにおいて過剰活性であることが多いＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路に影響を及ぼすことができる。したがって、ＭＥＫ阻害薬は、ＢＲＡＦ変異黒色腫およびＫＲＡＳ／ＢＲＡＦ変異結腸直腸がんを含む一部のがんを処置するために可能性を有する。ＭＥＫ阻害薬には、ＢＲＡＦ変異黒色腫を処置するためにＦＤＡ承認されていて、かつＢＲＡＦ変異黒色腫を処置するためにＢＲＡＦ阻害薬ダブラフェニブと組み合わせて研究されているトラメチニブ（ＧＳＫ１１２０２１２）；非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）のためのフェーズ２治験において、ＰＦＳの改善を実証しており、ブドウ膜黒色腫、および分化甲状腺癌腫のための他の治験が進行中であるセルメチニブ；胆管癌および黒色腫のためにフェーズ１治験を受けているビニメチニブまたはＭＥＫ１６２；乳がん、結腸がん、および黒色腫と関連して調査されているＰＤ−３２５９０１、またはＰＣＤ−９０１；進行黒色腫を処置するために、ベムラフェニブ（Ｚｅｌｂｏｒａｆ（登録商標））と組み合わせてフェーズＩＩＩ治験中のコビメチニブまたはＸＬ５１８；ならびにＣＩ−１０４０が含まれる。ＭＥＫ阻害薬ＰＤ−３２５９０１が、本発明に特に関連している。
【００７１】
パクリタキセルは、がん化学療法において使用される有糸分裂阻害薬であり、これと、ドセタキセルとは、薬物の「タキサン」ファミリーの代表である。
【００７２】
この方法の一実施形態では、異常な細胞成長は、これらだけに限定されないが、中皮腫、肝胆道（肝および胆管）、原発性もしくは続発性ＣＮＳ腫瘍、原発性もしくは続発性脳腫瘍、肺がん（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、扁平上皮細胞がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、皮膚もしくは眼内黒色腫、卵巣がん、結腸がん、直腸がん、肛門領域のがん、胃がん、胃腸（胃、結腸直腸、および十二指腸）がん、乳がん、子宮がん、ファロピウス管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、睾丸がん、慢性もしくは急性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球性リンパ腫、膀胱がん、腎臓もしくは尿管がん、腎細胞癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹膠腫、下垂体腺腫、副腎皮質がん、胆嚢がん、多発性骨髄腫、胆管癌、線維肉腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、または上述のがんの１種または複数の組合せを含む。
【００７３】
本発明の別の実施形態では、がんは、肺がん（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、頭頸部がん、卵巣がん、結腸がん、直腸がん、肛門領域のがん、胃がん、乳がん、腎臓または尿管がん、腎細胞癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、および脊髄軸腫瘍から選択されるか；または肺がん（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、卵巣がん、結腸がん、直腸がん、肛門領域のがんから選択されるか；または肺がん（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、卵巣がん、結腸がんおよび直腸がんから選択されるか；または膀胱がん、子宮内膜癌、多発性骨髄腫、胃がん、肺がん（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、乳がんおよび扁平上皮細胞がんから選択されるか；または子宮内膜癌、胃がん、肺がん（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、乳がんおよび扁平上皮細胞がんから選択されるか；または子宮内膜癌、胃がんおよび肺がん（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）から選択されるか；または上述のがんの１種または複数の組合せである。
【００７４】
本発明の一実施形態では、対象において癌を処置するための方法であって、それを必要とする対象にオーリスタチンおよびＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬を併用投与することを含み、前記ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬を、ＰＦ−３８４およびＰＦ−５０２から選択することを含む方法を提供する。
【００７５】
本発明の追加の実施形態には、ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬がＰＦ−３８４であるものが含まれる。
【００７６】
本発明の追加の実施形態には、オーリスタチンが、式
【００７７】
【化１０】
0006784668.tif 000011
［式中、出現するごとに独立に、
Ｗは、
【００７８】
【化１１】
0006784668.tif 000012
であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、
（ｉｉｉ）Ｒ３Ａは、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンまたはアラルキルであり、かつ
Ｒ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルもしくはハロゲンである、または
（ｉｖ）Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンもしくはＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンである
のいずれかであり、
Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂは、
（ｉｉｉ）Ｒ４Ａは、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルまたはアラルキルであり、かつ
Ｒ４Ｂは、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルもしくはアラルキルである、または
（ｉｖ）Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンもしくはＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンである
のいずれかであり、
Ｒ５は、
【００７９】
【化１２】
0006784668.tif 000013
、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリルおよびＣ６〜Ｃ１４アリールであり、これらは、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、ハロゲン、−Ｎ３、−Ｎ（Ｒ’）２、−ＣＮ、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＮＨＣＯＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’および−ＳＲ’からなる群から独立に選択される１、２、３、４または５個の基で置換されていてもよく、各Ｒ’は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよび非置換アリールからなる群から独立に選択されるか、または２個のＲ’は、それらが結合している窒素と一緒になって、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成することができ、または
Ｒ５は、
【化１３】
0006784668.tif 000014
であり、これらは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、ハロゲン、−Ｎ３、−Ｎ（Ｒ’）２、−ＣＮ、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＮＨＣＯＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’、−ＳＲ’およびアリーレン−Ｒ’からなる群から独立に選択される１、２、３、４または５個の基で置換されていてもよく、各Ｒ’は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびアリールからなる群から独立に選択されるか、または２個のＲ’は、それらが結合している窒素と一緒になって、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成することができ、
Ｒ６は、水素、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、−Ｃ２〜Ｃ８アルキニルまたは−Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
Ｒ１２は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリルまたはＣ６〜Ｃ１４アリールであり、
Ｒ１３は、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであるが、
ただし、Ｒ３Ａが水素である場合には、ＸはＳである］
の化合物、または薬学的に許容できるその塩もしくは溶媒和物、または前記化合物もしくは塩もしくは溶媒和物の抗体−薬物コンジュゲートであるものが含まれる。
【００８０】
本発明の追加の実施形態は、オーリスタチンが抗体薬物コンジュゲート５Ｔ４−ＡＤＣ、ＰＦ−１０１およびＭＭＡＦから選択されるものを含む。
【００８１】
本発明の追加の実施形態は、オーリスタチンが抗体薬物コンジュゲート５Ｔ４−ＡＤＣであるものを含む。
【００８２】
本発明のさらなる実施形態は、オーリスタチンがオーリスタチン−１０１であるものを含む。
【００８３】
本発明のさらなる実施形態は、オーリスタチンがＭＭＡＦであるものを含む。
【００８４】
本発明のさらなる実施形態には、肺がんであるがんを処置する方法を含む。
【００８５】
本発明のさらなる実施形態は、乳がんであるがんを処置する方法を含む。
【００８６】
本発明のいっそうさらなる実施形態は、オーリスタチンおよびＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬を同時投与または逐次投与するものを含む。逐次投与は、オーリスタチンを最初にまたは二番目に投与するいずれかの順序で行ってもよい。
【００８７】
本発明の実施形態は、一定量のオーリスタチンまたは薬学的に許容できるその塩、一定量のＰＦ−３８４または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤を含む医薬組成物を含む。
【００８８】
本発明の実施形態はまた、対象においてがんを処置するための方法であって、それを必要とする対象にオーリスタチンおよびＭＥＫ阻害薬を併用投与することを含む方法を含む。
【００８９】
追加の実施形態は、ＭＥＫ阻害薬がＰＤ−９０１であるものを含む。
【００９０】
追加の実施形態は、オーリスタチンが抗体薬物コンジュゲート５Ｔ４−ＡＤＣ、ＰＦ−１０１およびＭＭＡＦから選択されるものを含む。
【００９１】
一部の実施形態では、オーリスタチンは、抗体薬物コンジュゲート５Ｔ４−ＡＤＣである。
【００９２】
一部の実施形態では、オーリスタチンは、オーリスタチン−１０１である。
【００９３】
一部の実施形態では、オーリスタチンは、ＭＭＡＦである。
【００９４】
オーリスタチン／ＭＥＫ組合せでは、実施形態は、がんが肺がんであるもの、およびがんが乳がんであるものを含む。
【００９５】
本発明の一部の実施形態では、オーリスタチンおよびＭＥＫ阻害薬を、同時投与するか、または逐次投与し、逐次投与する場合には、いずれかの順序で投与する。
【００９６】
本発明の一部の実施形態では、一定量のオーリスタチンまたは薬学的に許容できるその塩、一定量のＰＤ−９０１または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
【００９７】
本発明の一部の実施形態では、対象においてがんを処置する方法であって、それを必要とする対象にオーリスタチンおよびタキサンを併用投与することを含み、オーリスタチンがオーリスタチン−１０１であり、タキサンがパクリタキセルまたはドセタキセルである方法を提供する。これらの方法は、肺がんを処置する方法、および乳がんを処置する方法を含む。
【００９８】
本発明の一部の実施形態では、オーリスタチン−１０１およびタキサンを当時投与するか、または逐次投与し、逐次投与する場合には、いずれかの順序で投与する。
【００９９】
本発明はさらに、一定量のオーリスタチンまたは薬学的に許容できるその塩、一定量のタキサンまたは薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
【０１００】
本明細書に記載の一部の実施形態では、前記併用投与によって達成される抗がん効果は、前記第１および第２の医薬組成物を非併用投与することによって達成される抗がん効果よりも大きい。
【０１０１】
本発明の一部の実施形態では、（ａ）オーリスタチン、または薬学的に許容できるその塩、（ｂ）ＰＦ−３８４およびＰＦ−５０２から選択されるＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬、または薬学的に許容できるその塩、ならびに（ｃ）薬学的に許容できる担体または希釈剤を含む、哺乳類においてがんを処置するための剤形を提供する。
【０１０２】
本発明の一部の実施形態では、（ａ）オーリスタチン、または薬学的に許容できるその塩、（ｂ）ＰＤ−９０１であるＭＥＫ阻害薬、または薬学的に許容できるその塩、および（ｃ）薬学的に許容できる担体または希釈剤を含む、哺乳類においてがんを処置するための剤形を提供する。
【０１０３】
本発明の一部の実施形態では、（ａ）オーリスタチン−１０１であるオーリスタチン、または薬学的に許容できるその塩、（ｂ）パクリタキセルまたはドセタキセルであるタキサン、または薬学的に許容できるその塩、ならびに（ｃ）薬学的に許容できる担体または希釈剤を含む、哺乳類においてがんを処置するための剤形を提供する。
【０１０４】
本発明の一部の実施形態では、哺乳類において治療効果を達成するためのキットであって、（ａ）第１の単位剤形中のオーリスタチン、または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤、（ｂ）第１の単位剤形中の、ＰＦ−３８４およびＰＦ−５０２から選択されるＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ阻害薬、または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤、ならびに（ｃ）前記第１および第２の剤形を収容するための手段を含むキットを提供する。
【０１０５】
本発明の一部の実施形態では、哺乳類において治療効果を達成するためのキットであって、（ａ）第１の単位剤形中のオーリスタチン、または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤、（ｂ）第１の単位剤形中の、ＰＤ−９０１であるＭＥＫ阻害薬、または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤、ならびに（ｃ）前記第１および第２の剤形を収容するための手段を含むキットを提供する。
【０１０６】
本発明の一部の実施形態では、哺乳類において治療効果を達成するためのキットであって、（ａ）第１の単位剤形中の、オーリスタチン−１０１であるオーリスタチン、または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤、（ｂ）第１の単位剤形中の、パクリタキセルまたはドセタキセルであるタキサン、または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる担体または希釈剤、ならびに（ｃ）前記第１および第２の剤形を収容するための手段を含むキットを提供する。本発明の一実施形態は、参照によって本明細書に組み込まれる国際特許出願公開第ＷＯ２００８／００２５７８号、米国特許出願公開第２００８−００９０８０１Ａ１号、および米国特許第７，６９６，２１３号において記載されている２−アミノ−８−［ｔｒａｎｓ−４−（２−ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］−６−（６−メトキシピリジン−３−イル）−４−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（化合物１Ａ）
【０１０７】
【化１４】
0006784668.tif 000015
に関する。化合物１Ａは、クラスＩ  ＰＩ３ＫおよびｍＴＯＲの両方の構造的に新規で強力なＡＴＰ−競合的および可逆的二重阻害薬である。Ｄｕｎｄｅｅ  ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙおよびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎキナーゼスクリーニングサービスを利用する８１種のプロテインキナーゼおよびクラスＩＩＩ  ＰＩ３ＫファミリーｈＶｐｓ３４のパネルにおける活性の欠如によって示されるとおり、化合物１Ａは、ＰＩ３Ｋファミリーについて高い選択度を実証した。有意な阻害活性は、１０μＭ（選択率＞５００）まで、評価されたキナーゼのいずれでも観察されなかった。ｉｎ  ｖｉｖｏラットＰＫ研究から、化合物１Ａは、低いクリアランスおよび良好な経口生物学的利用能（Ｆ（％）５６＋／−１６）を実証した。化合物１Ａは、２０．２％の未結合画分（Ｆｕ）で、ラットにおいて中等度の血漿タンパク質結合を示した。その結果、１Ａの未結合クリアランスは低い。これらの特性は、強固なｉｎ  ｖｉｖｏ性能を実証していると解釈されており、化合物１Ａは、ＰＩ３Ｋ経路の異常を伴うヒトがん細胞株を移植されたマウス異種移植片モデルにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏ活性を有する。
【０１０８】
本発明の別の実施形態は、参照によって本明細書に組み込まれる国際特許出願公開第ＷＯ２００９／０４４７７４号、米国特許出願公開第２００９−０２９１０７９Ａ１号、および米国特許第８，０３９，４６９号において記載されている１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（化合物１Ｂ）
【０１０９】
【化１５】
0006784668.tif 000016
に関する。化合物１Ｂは、（ＩＶ）投与される高度に強力なｐａｎ−ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害薬である。化学的には、化合物１Ｂは、ＰＩ３Ｋ酵素のＡＴＰ結合ポケットにおいて結合する２,４−ビスモルホリノ−６−アリールウレイドトリアジンである。重要な結合相互作用は、モルホリノ酸素とヒンジ領域Ｖａｌ８５１との、尿素酸素とＬｙｓ−８０２アミノ基との間のＨ結合、ならびに両方のウレイド−ＮＨとＡｓｐ８１０カルボキシラートとの間の二重Ｈ結合である。２３６キナーゼに対するそのキナーゼ選択性スクリーン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって証拠づけられるとおり、化合物１Ｂは、ＰＩ３ＫおよびＰＩＫＫについて高度に選択的である。当該化合物は、５０種超の多様なヒト腫瘍細胞株において、ＩＣ５０＜１００ｎＭで強い抗増殖効果を有する。さらに、化合物１Ｂは、がん細胞株において、ＰＩ３Ｋシグナル伝達を上昇させながらアポトーシスを誘導し、ＡＫＴなどのＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ下流エフェクターのリン酸化を抑制した。特に応答性の細胞株の１つ、ＭＤＡ−ＭＢ−３６１では、アポトーシスが、４時間目に３０ｎＭの化合物１Ｂで誘導され、切断ＰＡＲＰの抑制によって証拠づけられた。これらのｉｎ  ｖｉｔｒｏ結果は、ｉｎ  ｖｉｖｏ結果に変換され、その場合、化合物１Ｂは、乳房（ＢＴ４７４、ＭＤＡ−ＭＢ−３６１）、結腸（ＨＣＴ１１６）、肺（Ｈ１９７５）、および膠腫（Ｕ８７ＭＧ）異種移植片モデルにおいて腫瘍成長を阻害した。週１回、２５ｍｇ／ｋｇで投薬された化合物１Ｂは、大きな（１０００ｍｍ３）ＭＤＡ−ＭＢ−３６１腫瘍を縮小させ、再成長を抑制した。この腫瘍退縮は、ＭＤＡ−ＭＢ−３６１モデルにおけるリン酸化Ａｋｔの退縮と相関した。
【０１１０】
本発明のまた別の実施形態は、参照によって本明細書に組み込まれる国際特許出願公開第ＷＯ２００４／０１１４６５号、米国特許出願公開第２００４−００１９２１０Ａ１号、および米国特許第７，１９６，０９０号において記載されている１−シクロペンチル−７−（４−ジエチルアミノ−ブチルアミノ）−３−（２，６−ジフルオロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリミド［４，５−ｄ］ピリミジン−２−オン：
【０１１１】
【化１６】
0006784668.tif 000017
に関する。化合物２は、チロシンキナーゼのＦＧＦＲファミリー：ＦＧＦＲ１、２、３、および４の経口利用可能で、強力で、かつ高度に選択的な小分子阻害薬である。化合物２は、ＦＧＦＲ遺伝子が変更された細胞株に対して選択的に強力であり、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方で胃および肺がん細胞株において優先的選択性を実証している。化合物２は、試験された６０種超のキナーゼに対して高いキナーゼ選択性を示す。細胞アッセイにおいて、当該化合物は、ＦＧＦＲ２と比較して、ＶＥＧＦＲ２に対して１００倍超の選択性を有し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方でＦＧＦＲおよび他の下流マーカーのリン酸化を阻害することが示されている。当該化合物は、ＦＧＦＲ遺伝子増幅または変異によって特徴づけられる様々な異種移植片腫瘍モデルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍成長を阻害することが示されている。化合物２は、薬物様医薬特性を有し、ＱＤまたはＢＩＤ経口投与に適した薬物動態プロファイルを有すると予測される。
【０１１２】
「処置すること」という用語は、本明細書において使用する場合、別段に示さない限り、そのような用語が適用されている障害もしくは状態、またはそのような障害もしくは状態の１種もしくは複数の症状を反転するか、緩和するか、その進行を阻害するか、または予防することを意味する。「処置」という用語は、本明細書において使用する場合、別段に示さない限り、処置する行為を指し、この際、「処置すること」は、直前で定義されている。
【０１１３】
本発明によって処置される患者には、これらだけに限定されないが、ヒト、ウマ、イヌ、モルモット、またはマウスなどの任意の温血動物が含まれる。例えば、患者は、ヒトである。医学分野の当業者は、がんに罹患していて、処置を必要とする個々の患者を容易に同定することができる。
【０１１４】
「同時投与」または「併用投与」という用語は、本明細書において使用する場合、個々の治療用化合物が、重複期間中を含めて、対象内に同時に存在するような、複数の治療用化合物の投与を指す。同時投与または併用投与はまた、個々の治療用化合物が、同じ期間また重複期間で個体中に存在するかどうかに関わらず、患者が複数の治療用化合物を投与される期間、または処置過程を指し得る。
【０１１５】
逐次投与は、治療用化合物が投与されない期間がその間にあってもなくても、患者が、第１の治療用化合物を第１の処方期間に与えられ、かつ第２の治療用化合物を第２の処方期間に与えられるような、複数の治療用化合物が逐次投与される処置過程を指す。
【０１１６】
この方法の一実施形態では、がんには、これらだけに限定されないが、中皮腫、肝胆道（肝および胆管）、原発性もしくは続発性ＣＮＳ腫瘍、原発性もしくは続発性脳腫瘍、肺がん（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、扁平上皮細胞がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、皮膚もしくは眼内黒色腫、卵巣がん、結腸がん、直腸がん、肛門領域のがん、胃がん、胃腸（胃、結腸直腸、および十二指腸）がん、乳がん、子宮がん、ファロピウス管がん、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、睾丸がん、慢性もしくは急性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球性リンパ腫、膀胱がん、腎臓もしくは尿管がん、腎細胞癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹膠腫、下垂体腺腫、副腎皮質がん、胆嚢がん、多発性骨髄腫、胆管癌、線維肉腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、または上述のがんの１種または複数の組合せが含まれる。
【０１１７】
本発明の一実施形態では、がんは、肺がん（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、頭頸部がん、卵巣がん、結腸がん、直腸がん、肛門領域のがん、胃がん、乳がん、腎臓もしくは尿管がん、腎細胞癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、脊髄軸腫瘍または上述のがんの１種または複数の組合せから選択される。
【０１１８】
「相乗的」という用語は、本明細書において使用する場合、２種以上の単一薬剤の相加的効果よりも有効である治療薬の組合せを指す。例えば、５Ｔ４−ｍｃＭＭＡＦ（またはＭＭＡＦもしくは他のオーリスタチン）と１種または複数の化学療法剤との間の相乗的相互作用の決定は、本明細書に記載のアッセイから得られる結果に基づき得る。併用指数「ＣＩ」を得るために、これらのアッセイの結果を、ＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェアを用いてＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ組合せ方法および用量効果分析を使用して分析する（ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４）Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．２２：２７〜５５）。本発明が提供する組合せは、複数のアッセイシステムにおいて評価されており、抗がん薬において相乗作用、相加作用、および拮抗作用を定量化するための標準的なプログラムを利用して、データを分析することができる。利用するのが好ましいプログラムは、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙによって、「Ｎｅｗ  Ａｖｅｎｕｅｓ  ｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７において記載されている。０．８未満の併用指数（ＣＩ）値は、相乗効果を示し、１．２超の値は、拮抗作用を示し、０．８〜１．２の間の値は、相加効果を示す。併用療法は、「相乗効果」をもたらし得、かつ、「相乗的」であることが判明しており、すなわち、活性成分を一緒に使用した場合に達成される効果は、化合物を別々に使用して生じる効果の合計よりも大きい。相乗効果は、活性成分を：（１）同時に製剤化し、合わせた単位製剤で同時に投与または送達するか；（２）別々の製剤として交互に送達するか；または（３）いくつかの他のレジメンによって送達するときに達成され得る。交互治療で送達する場合、化合物を逐次的に、例えば、別々のシリンジで異なる注射剤によって投与または送達する場合に、相乗効果が達成され得る。一般に、交互治療の間、有効な投与量の各活性成分を逐次的に、すなわち、時間的に連続的に投与する。
【０１１９】
ｉｎ  ｖｉｖｏまたは治療相乗効果を測定する際に、相乗効果の１つの尺度は、「最高の単剤に対する超過（Ｅｘｃｅｓｓ  ｏｖｅｒ  Ｈｉｇｈｅｓｔ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ａｇｅｎｔ）」相乗効果として公知である。固定用量の組合せが、その成分用量の両方よりも優れていて、それが、「最高の単剤に対する超過」と呼ばれるような場合に、最高の単剤に対する超過の相乗効果が生じる（組合せ薬品を評価するためにそのような方法を用いるＦＤＡ’ｓ  ｐｏｌｉｃｙ  ａｔ  ２１  ＣＦＲ  ３００．５０；およびＢｏｒｉｓｙら（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ．を参照されたい）。もちろん、本明細書における「相乗効果」の使用はまた、追加および／または代替の方法によって測定されるとおりのｉｎ  ｖｉｖｏ相乗効果を包含する。
【０１２０】
本発明のある種の態様は、薬学的に許容できる塩の投与に関する。「薬学的に許容できる塩」という用語は、本明細書において使用する場合、別段に示さない限り、本発明の化合物中に存在し得る酸性または塩基性基の塩を含む。代表的な塩には、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩、メシル酸塩、グルコヘプト酸塩、ラクトビオン酸塩、およびラウリルスルホン酸塩などが含まれる。これらは、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ金属およびアルカリ土類金属に基づくカチオン、さらには、これらだけに限定されないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどを含む非毒性アンモニウム、第四級アンモニウム、およびアミンカチオンを含み得る（例えば、参照によって本明細書に組み込まれるＳ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、１９７７；６６：１〜１９；およびＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ、Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  Ｓｔａｈｌ、Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（編）  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｊｏｉｎｔｌｙ  ｂｙ  ＶＨＣＡ  （Ｚｕｒｉｃｈ，  Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）＆Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ  （Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）  ２００２を参照されたい）。この用語はまた、薬学的に許容できる酸付加塩を含み、関連化合物は、水和物または溶媒和物として存在してよく、水和物および溶媒和物も、本発明の範囲内である。
【０１２１】
有効量の化合物（または薬学的に許容できるその塩）は、腫瘍細胞の成長またはがん転移の進行を予防または阻害するために十分な量を本発明の組合せ中に含むと理解され得る。用量および投与レジメンの治療的または薬理学的有効性はまた、具体的な腫瘍を経験している患者において寛解を誘導、増強、維持、または延長する能力としても特徴づけられ得る。
【０１２２】
本発明の方法または組合せにおいて利用される化合物は、臨床で通常用いられる投与量また用量で投与し得る。当業者は、公知の方法に従って、本発明の組合せにおいて使用する各化合物の適切な有効量または投与量を決定することができ、年齢、体重、全身健康、投与化合物、投与経路、処置を必要とするがんの性質および進行、ならびに他の医薬の存在などの因子を考慮して、患者に投与することができる。
【０１２３】
本発明の組合せの化合物の投与を、作用部位に化合物を送達することができる任意の方法によって行うことができる。これらの方法には、経口経路、十二指腸内経路、非経口注射（静脈内、皮下、筋肉内、血管内、または注入を含む）、局所、および直腸投与が含まれる。
【０１２４】
本発明の方法または組合せの化合物は、投与前に製剤化し得る。その製剤を好ましくは、特定の投与様式に適合させる。これらの化合物は、当技術分野において公知の薬学的に許容できる担体と共に製剤化し、当技術分野において公知の広範囲の様々な剤形で投与し得る。本発明の医薬組成物の製造では、活性成分を通常、薬学的に許容できる担体と混合するか、または担体によって希釈するか、もしくは担体内に密閉する。そのような担体には、これらだけに限定されないが、固体希釈剤または賦形剤、添加剤、滅菌水性媒体、および様々な非毒性有機溶媒が含まれる。投薬単位形態または医薬組成物には、錠剤、ゼラチンカプセル剤などのカプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、水性および非水性経口用液剤および懸濁剤、ロゼンジ剤、トローチ剤、硬キャンディー剤、噴霧剤、クリーム剤、膏薬、坐剤、ゼリー剤、ゲル剤、ペースト剤、ローション剤、軟膏剤、注射用液剤、エリキシル剤、シロップ剤、ならびに個々の用量に細分するために適合させた容器中にパッケージングされた非経口液剤が含まれる。
【０１２５】
非経口製剤には、薬学的に許容できる水性または非水性液剤、分散剤、懸濁剤、乳剤、およびそれを調製するための滅菌散剤が含まれる。担体の例には、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射可能有機エステルが含まれる。レシチンなどのコーティング剤、界面活性剤の使用、または適切な粒径の維持によって、流動性を維持することができる。例示的な非経口投与形態には、滅菌水溶液、例えば、プロピレングリコールまたはデキストロース水溶液中の本発明の化合物の液剤または懸濁剤が含まれる。そのような剤形を、所望の場合には適切に緩衝することができる。
【０１２６】
加えて、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、およびタルクなどの滑沢剤は多くの場合に、製錠目的に有用である。同様の種類の固体組成物は、充填された軟および硬ゼラチンカプセル剤にも用いることができる。そのための好ましい材料には、ラクトースまたは乳糖および高分子量ポリエチレングリコールが含まれる。水性懸濁剤またはエリキシル剤が経口投与のために望ましい場合には、その中の活性化合物を、様々な甘味剤または香味剤、着色剤または色素および、所望の場合には、乳化剤または懸濁化剤と共に、水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン、またはその組合せなどの希釈剤と一緒に合わせてもよい。
【０１２７】
特定の量の活性な化合物を含む様々な医薬組成物を調製する方法は公知であるか、または当業者には明らかであろう。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｅｒ，  Ｐａ．、１５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９７５）を参照されたい。
【０１２８】
本発明による方法、組成物およびキットは、化合物１Ａもしくは薬学的に許容できるその塩、または化合物１Ｂもしくは薬学的に許容できるその塩を単独で、または化合物２もしくは薬学的に許容できるその塩を単独で含む従来の抗がん処置と比較して、抗がん活性である抑制の改善レベルをもたらし得る。したがって、より少ない副作用で同じか、または適正なレベルの抗がん活性を維持しながら、本発明の抗がん薬は、他の抗がん薬の非存在下では不十分であろう用量（すなわち、治療量以下）で利用することが可能であり得る。
【０１２９】
本発明の方法、組成物およびキットでは、オーリスタチン、または薬学的に許容できるその塩は、１日１回約０．１〜約２０ｍｇの投与量で経口（「ＰＯ」）投与し得る。例えば、１日１回約０．１〜約２０ｍｇ、１日１回約０．５〜約１５ｍｇ、１日１回約１〜約１０ｍｇ、または１日１回約２〜８ｍｇの投与量で。一実施形態では、特許請求の範囲に記載の治療用化合物は、１日１回約２〜８ｍｇ、または１日１回１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０ｍｇの投与量で経口（「ＰＯ」）投与し得る。投与はまた、より多いか、または少ない頻度で、例えば、１日２回、２、３、４、５または６日毎に１回、２週間に１回、月に１回または処方されたとおりに行い得る。別の実施形態では、治療用化合物は静脈内注入によって投与し得る。
【０１３０】
本発明の方法、組成物およびキットでは、薬学的に許容できるその塩を含む治療用化合物は、週に１回約１５分から約３時間かけて静脈内注入によって、好ましくは約３０分かけて静脈内注入によって約１０〜約５００ｍｇの投与量で投与し得る。投与はまた、より多いか、または少ない頻度で、例えば、１日１回、２、３、４、５または６日毎に１回、２週間に１回、月に１回または処方されたとおりに行ってもよい。特許請求の範囲に記載の方法および組合せにおけるオーリスタチン化合物は、他の組合せ化合物の投与の前、その間、またはその後に投与することができる。そのような併用の投与（併用投与）は、別々の剤形で、または同じ剤形であることができる。
【０１３１】
一部の事例では、当業者によって決定されるとおり、前述範囲の下限未満の投与量レベルでも、十分すぎることがある一方で、他の場合には、さらにより多い用量を用いてもよい。
【０１３２】
本発明の方法、組成物およびキットの実行を、様々な投与レジメンによって達成してよい。一態様では、当該化合物を、１週、２週、３週、４週、５週、６週、７週または８週サイクルで投与してよい。がん細胞の所望の減少または削減を達成するために必要な場合には、投与レジメンを繰り返してよい。
【０１３３】
本発明はまた、オーリスタチンおよび別の治療用化合物（もちろん、一方または両方の薬学的に許容できる塩を含む）ならびに治療剤を投与するための指示書を含むキットに関する。一実施形態では、指示書は、例えば、本発明の治療剤の同時投与または逐次投与について、治療剤の投与様式を詳述および限定する。別の実施形態では、キットは、これらだけに限定されないが、中皮腫、肝胆道（肝および胆管）、原発性もしくは続発性ＣＮＳ腫瘍、原発性もしくは続発性脳腫瘍、肺がん（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、扁平上皮細胞がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、皮膚もしくは眼内黒色腫、卵巣がん、結腸がん、直腸がん、肛門領域のがん、胃がん、胃腸（胃、結腸直腸、および十二指腸）がん、乳がん、子宮がん、ファロピウス管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、睾丸がん、慢性もしくは急性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球性リンパ腫、膀胱がん、腎臓もしくは尿管がん、腎細胞癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹膠腫、下垂体腺腫、副腎皮質がん、胆嚢がん、多発性骨髄腫、胆管癌、線維肉腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、または上述のがんの１種または複数の組合せを含むがん；またはより具体的には、肺がん（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、頭頸部がん、卵巣がん、結腸がん、直腸がん、肛門領域のがん、胃がん、乳がん、腎臓もしくは尿管がん、腎細胞癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、脊髄軸腫瘍、または上述のがんの１種または複数の組合せ；またはより具体的には、肺がん（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、卵巣がん、結腸がん、直腸がん、肛門領域のがん、または上述のがんの１種または複数の組合せ；またはより具体的には、肺がん（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、卵巣がん、結腸がん、直腸がん、または上述のがんの１種または複数の組合せ；または膀胱がん、子宮内膜癌、多発性骨髄腫、胃がん、肺がん（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、乳がんおよび扁平上皮細胞がん、または上述のがんの１種または複数の組合せ；または子宮内膜癌、胃がん、肺がん（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、乳がんおよび扁平上皮がん、または上述のがんの１種または複数の組合せ；または子宮内膜癌、胃がんおよび肺がん（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、または上述のがんの１種または複数の組合せを処置するためのものである。
【実施例】
【０１３４】
（実施例１）
細胞株および試薬
ヒト腫瘍細胞株ＮＣＩ−Ｈ１９７５、Ｃａｌｕ−６、ＮＣＩ−Ｈ３５８、ＨＣＣ２４２９、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＣＡＯＶ−３、ＴＯＶ−１１２Ｄ、ＯＶ−９０、ＯＶＣＡＲ−３、ＳＫＯＶ−３、ＨＴ−２９、ＮＣＩ−Ｎ８７、Ｒａｊｉ、ＲａｍｏｓをＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。ＭＤＡＭＢ３６１−ＤＹＴ２細胞ＭＤＡＭＢ４３５／５Ｔ４は、ヒト５Ｔ４を安定的にトランスフェクトされた細胞である。３７６２２Ａ１  ＮＳＣＬＣ患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）、ならびに３７６２２Ａ１からの一次血清非含有培養物ＴＵＭ６２２の樹立および特性決定は記載されている（６）。各細胞株を、ＡＴＣＣが推奨するとおりのその標準培地中で培養した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究では、化学療法薬をＳｉｕｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから得た。エルロチニブおよびペメトレキセドは、Ｓｅｌｌｅｃｋ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから購入した。ＰＦ−０５２１２３８４（ＰＫＩ−５８７）、ＰＤ−０３２５９０１（ＰＤ−９０１）、Ｏ−Ｍｅ−ＭＭＡＦ（ＭＭＡＦ）およびオーリスタチン１０１は、市販の試薬を用いて、公知の技術に従って調製した。５Ｔ４−ＡＤＣ（Ａ１ｍｃＭＭＡＦ）の調製は、ＵＳ２０１２０２５１５５８Ａにおいて既に記載されている。
【０１３５】
（実施例２）
２Ｄ細胞増殖アッセイ
細胞を、透明底の９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に蒔き、様々な濃度の化合物で４日間処置した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ発光細胞生存率アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用することによって決定し、Ｖｉｃｔｏｒ  Ｘ３プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して測定した。データを、対照群（空ベクターまたはＤＭＳＯ）に対して正規化した。ＩＣ５０値を、５０％成長阻害をもたらす濃度として定義した。ＸＬ  ｆｉｔ  ｖ４．２を用いるロジスティック非線形回帰、モデル番号２０３（ＩＤＢＳ、Ｇｕｌｄｆｏｒｄ、Ｓｕｒｒｙ、ＵＫ）を使用して、ＩＣ５０値を計算した。すべての実験ポイントを３つの反復ウェルに配置し、２連で独立に行った。
【０１３６】
（実施例３）
３Ｄ細胞増殖スフェロイドアッセイ
１００％ＢＤ  Ｍａｔｒｉｇｅｌ  Ｍａｔｒｉｘ、Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｄｕｃｅｄ（＃３５４２３０）４０μｌ／ウェルを含む透明底の９６ウェルプレート。２％マトリゲル中の３０００／ウェル最終濃度のＭＤＡ−ＭＢ−４６８またはＨ−１９７５の細胞懸濁液を１００％マトリゲルベースの頂部に重ねた。細胞を成長させ、スフェロイドを形成させ、スフェロイドが約１００ｕＭのサイズに達したときに（光学顕微鏡によって測定）、薬物処置を開始した。単回用量処置およびＩＣ５０決定では、スフェロイドの２連ウェルを化合物またはＡＤＣで処置して、９ポイント、２倍用量反応曲線を７日間得た。処置後７日目に、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ発光細胞生存率アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｇ７５７０）を使用して、増殖を測定した。
【０１３７】
（実施例４）
相乗効果アッセイ
Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ中央値効果分析を使用して、薬物の組合せの効果を評価した（２８）。２つの独立した９６ウェルプレートにおいて、対角行列形式（ｄｉａｇｏｎａｌ  ｍａｔｒｉｘ  ｆｏｒｍａｔ）で、細胞を単独の各薬物で、かつ組合せで処置し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用することによって、増殖を測定した。未処置対象の測定ルミネセンスカウントと比較して、処置サンプルの測定ルミネセンスカウントに基づき、結果を生存画分（影響を受けた画分（ｆｒａｃｔｉｏｎ  ａｆｆｅｃｔｅｄ）、Ｆａ）として表した。固定薬物比での様々な用量効果曲線を表す７つのダイアゴナルを使用して、Ｃａｌｃｕｓｙｎソフトウェア（Ｂｉｏｓｏｆｔ、Ｆｅｒｇｕｓｏｎ、ＭＯ）を用いて、組合せのそれぞれについて併用指数（ＣＩ）を測定した。各実験において、ＥＤ５０レベルでのＣＩ指数を、７〜８のデータポイントを有する３つの用量効果曲線で平均した。図１を参照されたい。
【０１３８】
（実施例５）
インピーダンスアッセイ
９６Ｅプレートを使用し、ｘＣｅＬＬｉｇｅｎｃｅ  ＲＴＣＡ  ＭＰシステム（Ａｃｅａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して、細胞成長をリアルタイムでモニターした。ｘＣｅＬＬｉｇｅｎｃｅシステムは、導電性インピーダンスを測定することによって、細胞数の変化を検出し、ウェルの底部に付着している細胞数に直接関係する細胞指数値を生成する（２９）。基線プレート細胞指数を、細胞を播種する前に得た。細胞を、４，０００細胞／ウェル、５０ｍｌ体積で播種し、終夜インキュベートした。投薬日（１日目）に、化合物を指示濃度で添加し、インピーダンス示度を約２５０時間モニターした。薬物またはビヒクル処置アームでのインピーダンス指数値を実験の終了時にプロットするか、または経時的に比較することができる。
【０１３９】
（実施例６）
カスパーゼ３／７アポトーシスアッセイ
ＭＤＡ−４６８およびＨ−１９７５細胞を、処置の前日に、９６ウェルプレートに１ウェル当たり１５，０００で播種した。処置の１６、２４または４８時間後に、製造者プロトコールに従ってＣａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ３／７アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｇ８０９２、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＵＳＡ）を使用して、カスパーゼ３／７活性を測定した。２連のプレートで、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ発光細胞生存率アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｇ７５７３、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＵＳＡ）によって、細胞生存率を決定した。薬物処置サンプルにおけるカスパーゼ３／７活性の増大が最初に、ビヒクル処置対照と比較して表され、それが生存率について正規化され、ビヒクル処置対照と比較して、誘導倍率として表された。
【０１４０】
（実施例７）
細胞周期分析
製造者プロトコールに従ってＦｌｏｗＣｅｌｌｅｃｔ  Ｂｉｖａｒｉａｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅキット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号ＦＣＣＨ０２５１０３）を使用して、組合せの細胞周期およびホスホ−ヒストンＨ３分析のために、細胞を調製した。ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒ機器（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ、Ａｓｈｌａｎｄ  ＯＲ）を使用するフローサイトメトリーによって、サンプルを分析した。
【０１４１】
（実施例８）
異種移植片有効性
雌の無胸腺ｎｕ／ｎｕマウス（１８〜２３ｇ）をＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡから得た。マウスに、腫瘍細胞を皮下注射し、ステージ分類された腫瘍（ｓｔａｇｅｄ  ｔｕｍｏｒ）を有する動物に、生理食塩水（ビヒクル）、５Ｔ４−ＡＤＣ、ＰＦ−３８４、パクリタキセル、または組合せの５Ｔ４−ＡＤＣ＋ＰＦ−３８４、５Ｔ４−ＡＤＣ＋パクリタキセルを静脈内投与した。ＡＤＣを、１群当たり８〜１０マウスで、Ｑ４Ｄ×４（４日毎）のスケジュールで、ｍＡｂタンパク質含有率に基づきＡｂ２または３ｍｇ／ｋｇで投与した。５Ｔ４−ＡＤＣ、ＰＦ−３８４およびパクリタキセルを、ヒトにおいてこれらの薬物によって達成された曝露から外挿された臨床関連用量（ＣＲＤ）で投薬した。マウスを使用するすべての手順は、確立されたガイドラインに従って、Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認された。薬物処置群を比較するために、エンドポイントまでの時間（腫瘍がなくなるまでの時間、または腫瘍３倍化の速度）を使用した。図の説明文において示されているとおり、Ｔ検定を使用して、個々の腫瘍体積を比較した。
【０１４２】
（実施例９）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの５Ｔ４−ＡＤＣまたはオーリスタチンペイロードの組合せ
肺、乳がんおよび卵巣がん細胞株において、様々な標準治療（ＳＯＣ）剤または選択されたシグナル伝達阻害薬と組み合わせた５Ｔ４−ＡＤＣまたはオーリスタチンペイロードのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害性活性を評価した。以前に記載されたとおりに（Ｓａｐｒａら、２０１３）、５Ｔ４状態に基づき、各腫瘍適応のための細胞株を選択した。薬物組合せ研究を開始する前に、従来の２Ｄ増殖アッセイにおける各薬剤のＩＣ５０値を決定した。Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ法を用いて、種々の用量−効果レベルでのＣＩ値を計算した。独立した実験からの平均ＣＩ値を、表２〜５および図１Ａおよび１Ｂにおいて表す。ＣＩ値＜０．９を相乗効果；０．９〜１．１を相加効果；ＣＩ＞１．１を拮抗作用の証明と判断した。５Ｔ４−ＡＤＣをＰＦ−３８４、ＰＤ−９０１、ペメトレキセド、エルロチニブ、またはタキサンと組み合わせた場合には、一貫して強い相乗効果が存在した。多くの細胞株が、単独のＰＤ−９０１またはエルロチニブに対して比較的非感受性であったが、感受性および非感受性細胞の両方が、相乗的相互作用（表２〜５）を示した。５Ｔ４−ＡＤＣを白金化合物と組み合わせた場合には、相加性が一般的に観察されたが、中等度の相加または拮抗作用が、５Ｔ４−ＡＤＣと、アドリアマイシン、エピルビシンまたはゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔｉｂｉｎｅ）との間で観察された。オーリスタチンまたは追加の微小管阻害薬も組合せアッセイに含まれた。相乗的または相加的相互作用のパターンは、ペイロード、ＭＭＡＦ−ＯＭｅ、またはオーリスタチン−１０１の細胞透過性バージョンと、上記薬剤との間でも観察された。細胞株のより小さなサブセットにおいてＰＦ−３８４と組み合わせた場合に、パクリタキセルまたはビノレルビンも、相乗的または相加的関係を示した。高度に選択的なｍＴＯＲキナーゼ阻害薬ＷＹＥ−１３２（表５）は、ＨＴ−２９、Ｎ８７細胞においてオーリスタチン−１０１の抗増殖性効果を増強し、これは、ｍＴＯＲの機能を低減させることが全体として、少なくとも部分的に、オーリスタチンとＰＦ−３８４との間で観察された広範な相乗効果を担い得るという見解を裏付ける所見である。オーリスタチンをベースとした薬剤と、ＰＦ−３８４またはパクリタキセルとの間のより強固な相乗効果が、より広い範囲の細胞株および腫瘍種にわたって同定されるという事実は、これらの組合せが、有望な臨床的有用性を提供し得ることを示唆している。
【０１４３】
相乗的相互作用の反応速度を理解するために、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステムを使用する細胞成長の動的モニタリングを行ったが、これは、リアルタイムで増殖および付着の導電性インピーダンス測定を提供する。長期間にわたる効果の増強のより正確な可視化を可能にするために、所定の最適以下の用量の薬物で、ＭＤＡ−４６８細胞を、単独の単一薬物５Ｔ４−ＡＤＣ、ＰＦ−３８４で、または５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＦ−３８４の組合せで処置した。約１１日間の経過にわたって、試験濃度の５Ｔ４−ＡＤＣ、またはＰＦ−３８４によって、細胞成長の軽微な阻害が観察された（図２Ａ、Ｂ）。しかしながら、５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＦ−３８４の組合せに起因する増殖の阻害は、単独の個々の薬剤のいずれかの効果よりもかなり顕著であった。組合せ混合物の添加直後に、増強が認められ、その効果は、実験の全時間経過を通じて続いた。遊離の非コンジュゲートペイロードＭＭＡＦ−ＯＭｅをＰＦ−３８４と組み合わせた場合に、同様の結果が得られた（図２Ｃ、Ｄ）。したがって、これらの結果によって、従来の増殖アッセイを使用しての本発明者らの先行する所見が確認され、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの相乗効果の時間依存性についての追加の洞察が得られた。
【０１４４】
細胞外マトリックスの存在下で生成した多細胞３Ｄスフェロイドは、成長中の固形腫瘍とより高い類似性を有するが、２Ｄ培養とは対照的に、３Ｄ条件下の細胞は、よりゆっくりとした速度で増殖し、静止状態にある細胞を含有する。３Ｄ条件下での薬物の組合せ効果についての生物学的洞察を得るために、５Ｔ４−ＡＤＣ、ＭＭＡＦ−ＯＭｅ、ＰＦ−３８４およびパクリタキセルでの処置に対するＭＤＡ−４６８スフェロイドの応答を調査して、単独での各薬剤についてのＩＣ５０を決定した。次いで、固定用量の第２の薬剤と組み合わせた５Ｔ４−ＡＤＣの段階希釈法によって、または２種の薬物の相互組合せとして、組合せを評価した。単独の単一薬物対照を得るために、組み合わせた薬剤を単一薬剤としても同じ実験に含めた。３Ｄスフェロイド細胞毒性の有意な増強が、５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＦ−３８４、ＭＭＡＦ−ＯＭｅ／ＰＦ−３８４、または５Ｔ４−ＡＤＣ／パクリタキセルの組合せで観察された（図３Ａ〜Ｆ）。５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＦ−３８４、ＭＭＡＦ−ＯＭｅ／ＰＦ−３８４または５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＴＸの組合せで処置された肺がんＨ−１９７５スフェロイドで、同様の観察が成された（図３Ｇ〜Ｊ及び図示していないデータ）。
【０１４５】
（実施例１０）
アポトーシスおよび細胞周期に対するＰＦ−３８４またはパクリタキセルの効果
５Ｔ４−ＡＤＣおよびＰＦ３８４またはパクリタキセルの組合せによって誘導された相乗的成長阻害がアポトーシスによるものかどうかを評価するために、Ｈ−１９７５またはＭＤＡ−４６８細胞におけるプロアポトーシスシグナルカスパーゼ３／７活性化を決定した。単独の５Ｔ４−ＡＤＣまたはＰＦ−３８４は、インキュベーションから２４時間後に測定すると、両方の細胞株において、カスパーゼ３／７の中等度の活性化をもたらした（図４）。しかしながら、組合せ処置は、カスパーゼ３／７の誘導の顕著な増強を示した（図４Ａ、Ｅ）。同じ細胞をＭＭＡＦ−ＯＭｅ＋ＰＦ−３８４で処置した場合に、同様の結果が得られたが、これは、５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＦ−３８４の組合せにおけるアポトーシスの誘導が、親ペイロードであるＭＭＡＦ−ＯＭｅの作用に機械的に連結していることを示唆している（図４Ｂ、Ｆ）。切断ＰＡＲＰでのイムノブロット分析（図示せず）が、５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＦ３８４またはＭＭＡＦ−ＯＭｅ／ＰＦ３８４の組合せによるアポトーシスの誘導をさらに裏付ける。さらに、カスパーゼ３／７活性化の増強はまた、単独の単一薬剤で処置された細胞と比較して、５Ｔ４−ＡＤＣまたはＭＭＡＦ−ＯＭｅ＋パクリタキセルで４８時間処置されたＭＤＡ−４６８細胞において観察された（図４Ｃ、Ｄ）。総じて、これらの所見は、組合せで観察される抗増殖効果が、少なくとも部分的に、カスパーゼ３／７によって媒介されるアポトーシス応答の増強によると考えられ得ることを実証している。
【０１４６】
加えて、細胞周期進行のモジュレーションが、細胞周期に対して別個の効果を有すると予測される薬剤である５Ｔ４−ＡＤＣとＰＦ−３８４との間の相乗効果についての説明を与え得るかどうかを評価した。細胞増殖のためにＩＣ５０で、またはそれを超える濃度での薬物曝露から２４または３６時間後に、細胞周期分析をＭＤＡ−４６８およびＨ−１９７５細胞の両方で行った（図５Ａ〜Ｃまたデータは図示せず）。予測されたとおり、ＰＦ−３８４は、細胞周期のＧ０／Ｇ１期にある細胞の蓄積を誘導し、Ｇ２／Ｍ期にある細胞の画分が低減した。この効果は、薬物処置から２４および３６時間後に明らかであった。対照的に、５Ｔ４−ＡＤＣは、細胞周期のＧ２／Ｍ期にある細胞の用量依存的蓄積を引き起こし、かつ５Ｔ４−ＡＤＣおよびＰＦ−３８４の組合せでの曝露処置から２４〜３６時間以内でのＧ０／Ｇ１細胞の同時低下は、曝露から２４時間までに、Ｇ１にある細胞の当初蓄積、およびＧ２／Ｍ期にある細胞のほぼ正常なパーセンテージをもたらした（図５Ａ、Ｂ）。単独での５Ｔ４−ＡＤＣとは違って、組合せでは、あらゆる時点で、Ｇ２／Ｍピークの増大は観察されず、３６時間までにＧ２／Ｍの減少が明らかであった。これは、Ｇ１以下の著しい増大を随伴し、このことは、Ｇ２／Ｍのより短い期間は、細胞周期のこの段階での細胞死の増強によって説明され得ることを示唆している（データは図示せず）。さらに、Ｇ０／Ｇ１およびＧ２／Ｍに対する、１０−または１００ｎＭ−ＰＦ−３８４と組み合わせた未コンジュゲートＭＭＡＦ−ＯＭｅの効果は、少なくとも試験濃度では、単独のＭＭＡＦ−ＯＭｅと総じて同様であった（データは図示せず）。当該組合せについて検出された総Ｇ２／Ｍピークの減少と一致して、単独の５Ｔ４−ＡＤＣと比較して、５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＦ−３８４の組合せで２４または３６時間処置された細胞では、ホスホ−ヒストンＨ３のレベルの減少が観察された（２４時間、５Ｔ４−ＡＤＣ＋ＰＦ−３８４（４．９％）対５Ｔ４−ＡＤＣ（７．７％）；３６時間、５Ｔ４−ＡＤＣ＋ＰＦ−３８４（６．２％）対５Ｔ４−ＡＤＣ（１０．８％））。これは、薬物の組合せで処置された細胞が有糸分裂停止状態からより速く出ることを示唆し得る知見である（図５Ｃ）。
【０１４７】
（実施例１１）
５Ｔ４−ＡＤＣおよびＰＦ−３８４またはパクリタキセルでのｉｎ  ｖｉｖｏ併用療法
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＦ−３８４または５Ｔ４−ＡＤＣ／パクリタキセルでの細胞増殖の優先的な減少、およびアポトーシスの誘導が、ｉｎ  ｖｉｖｏ設定に変換することができるかを決定するために、２種の以前に特徴づけられた腫瘍異種移植片モデルにおける個々の単一の薬剤、および組合せの有効性を評価した。ＭＤＡ−４６８三種陰性乳がんおよびＨ−１９７５肺腺癌モデルは、フローサイトメトリーおよびＩＨＣ染色によって示されているとおり、幅広い範囲の５Ｔ４発現レベルを有する５Ｔ４＋腫瘍異種移植片である（３）。この研究において使用した薬剤は、高用量で使用した場合ほど、高い有効性につながり得るが、本発明者らのデータから臨床診療へのより良好な変換性を保証するために、これらの薬物の臨床関連用量の投与が焦点であった。腫瘍不含（腫瘍退縮）までの時間のエンドポイントまでの時間（ＴＴＥ）分析を、Ｈ−１９７５異種移植片と比較して、５Ｔ４−ＡＤＣに対して通常はより感受性のあるＭＤＡ−４６８乳がんモデルについて行った。ＴＴＥプロットは、ＰＦ−３８４（７．５ｍｇ／ｋｇ）で処置された動物はすべて、腫瘍をなお含有したが、５Ｔ４−ＡＤＣ（２ｍｇ／ｋｇ）および５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＦ−３８４群は、研究経過にわたって腫瘍退縮を達成したことを示している（図６Ａ）。単独の５Ｔ４−ＡＤＣに対して、組合せアームでは、完全な腫瘍退縮を達成するために必要な時間は、かなり短く（対数順位検定によればｐ＜０．０００１）、５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＦ−３８４群の動物はすべて、３６日目までに腫瘍不含となった。さらに、平均腫瘍体積における有意な差が、最初の投薬から５３日後に、単一処置アームと５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＦ−３８４の組合せとの間で観察された（ＰＦ−３８４対５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＦ−３８４でｐ＜０．０００１；ｔ検定によれば５Ｔ４−ＡＤＣ対５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＦ−３８４でｐ＝０．０２）（図６Ｂ）。留意すべきことに、５３日目に、５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＦ−３８４の組合せアームは、１０／１０の完全寛解（ＣＲ）を有したのに対して、単独の５Ｔ４−ＡＤＣでは僅か３／８のＣＲであり、ＰＦ−３８４群ではＣＲがなかった（図６Ｂ）。腫瘍体積の３倍未満の増加を有する動物のパーセンテージを、一般にＭＤＡ−４６８よりも５Ｔ４−ＡＤＣに対して感受性の低いＨ−１９７５モデルの分析のための生存エンドポイントとして使用した。ＴＴＥ分析は、単独の５Ｔ４−ＡＤＣ（３ｍｇ／ｋｇ；ｐ＝０．０３５６、対数順位検定）または単独のＰＦ−３８４（７．５ｍｇ／ｋｇ、ｐ＜０．０００１、対数順位検定、図６Ｃ）と比較して、組合せ群では、腫瘍３倍化速度の統計的に有意な遅延を示した。５Ｔ４−ＡＤＣ＋ＰＦ３８４での処置も、腫瘍成長のより完全な抑制をもたらし、治療の開始から２１日目には（ｐ＝０．００６）、腫瘍体積の統計的に有意な差を有した（図６Ｃ）。
【０１４８】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏで５Ｔ４−ＡＤＣとタキサンとの間で観察される所与の好ましい相互作用、ｉｎ  ｖｉｖｏでのこの組合せの潜在的な抗腫瘍活性を調査した。ＭＤＡ−４６８異種移植片を、５Ｔ４−ＡＤＣ（２ｍｇ／ｋｇ）＋パクリタキセル（２２．５ｍｇ／ｋｇ）の組合せで試験した。これらの組合せのＴＴＥ分析によって、単独の単一薬物と比較して、組合せアームでは、完全な腫瘍退縮を達成するために必要な時間が有意により短いことが判明した（図７Ａ、Ｃ）。図７Ｂにおいて示されているとおり、５Ｔ４−ＡＤＣ単剤療法は、２ｍｇ／ｋｇで強い抗腫瘍活性を示し、５３日目までに８の腫瘍のうちの３において腫瘍退縮をもたらしたが、１０ｍｇ／ｋｇでの単独のパクリタキセルは、腫瘍成長に対して顕著な効果を有さなかった。１０の腫瘍のうちの９の腫瘍における腫瘍退縮および平均腫瘍体積の有意な差によって証明されるとおり（ｔ検定ｐ＝５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＴＸ対５Ｔ４−ＡＤＣでは０．０３７；５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＴＸ対ＰＴＸではｐ＜０．０００１）、５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＴＸ組合せ群は、単剤療法処置を上回る治療効果を示した。パクリタキセル２２．５ｍｇ／ｋｇと組み合わせた５Ｔ４−ＡＤＣは、５３日目までに９の腫瘍のうちの９で顕著で永続的な退縮を示したが、単独の単一処置は、より中等度の抗腫瘍活性を示した（５Ｔ４−ＡＤＣでは３／９のＣＲ、ＰＴＸでは６／１０のＣＲ；平均腫瘍体積：５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＴＸ対５Ｔ４−ＡＤＣではｐ＝０．０３７；５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＴＸ対ＰＴＸではｐ＜０．０００１）（図６Ｄ）。Ｈ−１９７５肺がん異種移植片も、同様の単一の薬剤（５Ｔ４−ＡＤＣ３ｍｇ／ｋｇ、パクリタキセル１０ｍｇ／ｋｇ）または併用療法で処置した（図７）。単独での５Ｔ４−ＡＤＣまたはＰＴＸ処置アームと比較して、組合せ群での腫瘍３倍化速度の有意な遅延によって証明されるとおり、５Ｔ４−ＡＤＣ＋パクリタキセルでの二重処置は、単剤療法処置と比較して、抗腫瘍活性の明白な増強をもたらした（図７Ａ）。さらに、平均腫瘍体積は、単独の単一薬物処置アームに対して、当初投与から４６日後に５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＴＸ群において著しく減少した（図７Ｆ；ｐ＜０．０００１、ｔ検定）。
【０１４９】
本発明者のグループにおいて最近立証された肺がんＡＡ３７６２２のＰＤＸモデル、ｋ−ｒａｓ変異モデルを含むために、研究を行った（３、４）。際立ったことに、３ｍｇ／ｋｇの５Ｔ４−ＡＤＣおよび２２．５ｍｇ／ｋｇのパクリタキセルの同様の組合せは、単剤療法処置と比較すると、より顕著な腫瘍成長の抑制をもたらした（５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＴＸ対５Ｔ４−ＡＤＣではｐ＜０．００１、５Ｔ４−ＡＤＣ／ＰＴＸ対ＰＴＸではｐ＜０．０００１、５６日目での二元ＡＮＯＶＡ；図７Ｇ）。
【０１５０】
生物学的データ
【０１５１】
【表１】
0006784668.tif 000018
【０１５２】
【表２−１】
0006784668.tif 000019
【０１５３】
【表２−２】
0006784668.tif 000020
【０１５４】
【表３−１】
0006784668.tif 000021
【０１５５】
【表３−２】
0006784668.tif 000022
【０１５６】
【表４】
0006784668.tif 000023
【０１５７】
【表５】
0006784668.tif 000024
【０１５８】
表１には、研究において使用したがん細胞株が列挙されている。各細胞株での細胞株の名称、由来組織、選択された変異または分子状態を、公的に利用可能な供給源に基づきまとめている。
【０１５９】
表２〜５には、ＥＤ５０レベルでのそれぞれ決定された組合せでの平均併用指数（ＣＩ）値が列挙されている。ＣＩは、次のとおり解釈されている：非常に強い相乗効果（０．１未満）、強い相乗効果（０．１〜０．３）、相乗作用（０．３〜０．７）、中等度の相乗作用（０．７〜０．８５）、僅かな相乗作用（０．８５〜０．９）、ほぼ相加的（０．９〜１．１）、僅かな拮抗作用（１．１〜１．２）および中等度の拮抗作用（１．２〜１．４５）。結果は、少なくとも３回の独立した実験の平均である。
【図１】
0006784668.tif 000033
【図２−１】
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【図２−２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図３−４】
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【図３−５】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図７−３】
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【図７−４】
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【図８】
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