(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
２−メチルブチリルグリシンであって、過敏性腸症候群の罹患によりヒト尿中の含有量が変動する化合物であることを特徴とする、過敏性腸症候群診断用のバイオマーカー。
【請求項２】
請求項１に記載のバイオマーカーのヒト尿中の濃度を測定する工程を含む、過敏性腸症候群の治療薬のスクリーニング方法。
【請求項３】
請求項１に記載のバイオマーカーの、過敏性腸症候群の診断薬の製造のための使用。
【請求項４】
請求項１に記載のバイオマーカーのヒト尿中の濃度を測定するための試薬を含むことを特徴とする過敏性腸症候群の診断用キット。
【請求項５】
過敏性腸症候群の治療薬を、過敏性腸症候群の種類及び／又は重症度に応じて選別するための請求項４に記載の診断用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、過敏性腸症候群の患者のヒト尿中サンプルにおいて、その発症や症状の悪化を判定することのできるバイオマーカー（以下、本発明のバイオマーカーともいう。）に関する。
【背景技術】
【０００２】
過敏性腸症候群（以下、ＩＢＳ（Irritable Bowel Syndrome）ともいう。）は、強い緊張、不安、ストレス等に起因して惹起されるストレス性消化器疾患であり、ストレス社会とも例えられる現代において注目されている疾患の一つである。ＩＢＳは、大抵は大腸、時には小腸での消化管運動機能異常症状、例えば腹部不快感や腹痛を伴う慢性的な下痢症状若しくは便秘症状、腸内でのガス過多による腹部膨満感や鈍痛を伴うガスが溜まる症状又はそれらを交互に繰り返す症状のような通便異常を主症状とする疾患である。
【０００３】
近年、ＩＢＳの治療薬の探索が進められてきており、様々な薬理作用を有する治療薬が開発されている。例えば、５−ＨＴ３拮抗薬、５−ＨＴ４作動薬、ＴＳＰＯ拮抗薬、オピオイド作動薬等が報告されているが、これらのいずれについてもまだ十分な効果を引き出せていないのが現状である。
【０００４】
一方、ＩＢＳの殆どは、レントゲン撮影診断や内視鏡診断でも腸の形態異常所見等の器質的病変が見当たらないにもかかわらず、長期間、通便異常症状が持続するものである。したがって、ＩＢＳは、確実な検査方法が無く、ＲｏｍｅＩＩＩ（ローマ・スリー）診断基準（非特許文献１参照）に基づいて、症状のみから診断しなければならない疾患であることから、ＩＢＳの発症を客観的に判別できるバイオマーカーが望まれている。
【０００５】
これまで、ＩＢＳを判別し得るバイオマーカーについての研究は多数報告されている。例えば、コルチコトロピン放出ホルモン（ＣＲＨ）の負荷により、ＩＢＳ患者の血漿中副腎皮質ホルモン（ＡＣＴＨ）レベルは、健常人に比べ増加するため、血漿中ＡＣＴＨがバイオマーカーとなり得ること（非特許文献２及び３参照）、交感神経ニューロンから分泌されるタンパク質であるクロモグラニンＡ（ＣｇＡ）について、健常人よりもＩＢＳ患者の唾液中に多く分泌されること（非特許文献４参照）、男性ＩＢＳ患者の血漿中キヌレン酸は、健常人のそれよりも低下すること（非特許文献５参照）、Ｔｒｉｅｒ  Ｓｏｃｉａｌ  Ｓｔｒｅｓｓ  Ｔｅｓｔ（ＴＳＳＴ）を行った後では、ＩＢＳ患者の唾液中デヒドロエピアンドロステロンサルファート（ＤＨＥＡ−Ｓ）が、健常人よりも低下すること（非特許文献６参照）が報告されている。
また、例えば、女性ＩＢＳ患者の尿では、健常人と比較して、ノルエピネフリン、エピネフリン等のカテコールアミン及びコルチゾールが増加すること（非特許文献７参照）、ＩＢＳ患者の尿では、健常人と比較して６−スルファトキシメラトニンの含有量に差があったこと（非特許文献８〜１０参照）、ＩＢＳ患者の血中セロトニンが健常者と比較して高く、尿中の５−ＨＩＡＡ（セロトニン代謝物）が健常者と比較して低かったこと（非特許文献１１及び１２参照）等が報告されている。
【０００６】
また、特許文献１には、ＩＢＳの病態を反映した動物モデルの尿からストレス性疾患のバイオマーカーを検出したこと、特許文献２には、ＩＢＳ患者の糞便中プロピオン酸がＩＢＳの判定マーカーとして使用できることが記載されている。
【０００７】
しかしながら、これらの非特許文献や特許文献に記載のバイオマーカーは、ヒトにおける非侵襲的で簡便、迅速かつ正確なＩＢＳ診断に用いるには課題がある。そのため、ヒトＩＢＳ患者において、非侵襲的かつ簡便な方法で迅速かつ正確に検出することが可能であって、ＩＢＳの発症又は病態を的確に反映することが可能なＩＢＳのバイオマーカーの開発が望まれていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２０１２−０４７７３５号公報
【特許文献２】特開２００９−２２９４５６号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】ガストロエンテロロジー（Gastroenterology）、２００６年、第１３０巻、１４８０−１４９１ページ
【非特許文献２】ガット（Gut）、１９９８年、第４２巻、８４５−８４９ページ
【非特許文献３】ガット（Gut）、２００４年、第５３巻、１１０２−１１０８ページ
【非特許文献４】バイオサイコソーシャル・メディシン（BioPsychoSocial Medicine）、２００８年、第２巻、第２０号
【非特許文献５】ＢＭＣ・ガストロエンテロロジー（BMC Gastroenterology）、２００９年、第９巻、第６号
【非特許文献６】インターナショナル・ジャーナル・オブ・サイコフィジオロジー（International Journal of Psychophysiology）、２０１２年、第８４巻、３９−４４ページ
【非特許文献７】ザ・アメリカン・ジャーナル・オブ・ガストロエンテロロジー（The American Journal of Gastroenterology）、１９９６年、第９１巻、第５号、９０６−９１３ページ
【非特許文献８】ジャーナル・オブ・フィジオロジー・アンド・ファーマコロジー（J Physiol Pharmacol）、２０１０年、第６１巻、第３号、２９５−３００ページ
【非特許文献９】ジャーナル・オブ・フィジオロジー・アンド・ファーマコロジー（J Physiol Pharmacol）、２００９年、第６０巻、別冊第３号、６７−７０ページ
【非特許文献１０】Pol Merkur Lekarski, 2009 May;26(155):440-3.
【非特許文献１１】Pol Merkur Lekarski, 2007 May;22(131):366-8
【非特許文献１２】Scott Med J, 2005 Feb;50(1):27-9
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
上記の状況に鑑み、本発明の主な課題は、ＩＢＳに罹患した可能性のある患者から、非侵襲的な方法で採取することが可能であって、かつ簡便な分析方法で検出することが可能であるバイオマーカーを提供すること、さらに、ＩＢＳの病態進行に伴って変動するバイオマーカーを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、前記課題を解決するため、鋭意研究を重ねた結果、予想外にも、ＩＢＳ患者の尿中に、消化器症状悪化時に変動する代謝物が存在するという新たな知見を得て、さらに検討を重ね、本発明を完成させるに至った。
【００１２】
すなわち、本発明は、以下に関する。
（１）  ０．０９％（ｗ／ｗ）アジ化ナトリウムを添加した０．１％（ｗ／ｗ）ギ酸水溶液で希釈したヒト尿を、ＬＣ／ＭＳで測定した際に得られるｍ／ｚ値が、
121.1、130.0、130.1、133.1、149.0、152.0、156.1、159.2、162.1、166.0、168.1、169.3、170.1、175.1、180.8、181.0、181.2、182.1、182.3、189.2、192.0、196.2、197.0、198.1、205.1、205.2、210.1、212.1、216.1、217.1、221.4、226.1、226.4、244.4、247.5、248.1、251.3、259.2、260.1、260.2、264.3、267.3、268.2、271.2、280.1、283.0、283.2、284.2、286.2、291.2、292.0、292.5、295.1、296.2、298.1、299.0、300.5、301.6、302.7、306.0、313.6、320.1、325.2、325.6、326.4、327.2、328.4、340.1、342.1、344.2、344.4、345.3、346.2、350.4、352.5、356.5、358.5、361.2、364.1、366.5、368.5、370.5、381.3、388.2、389.3、392.1、402.2、406.1、419.9、420.1、424.1、430.1、444.2、446.1、458.1、462.1、469.3、474.2、503.3、504.2、526.2、537.2、558.2、562.2、562.3又は601.3であり（ただし、前記ｍ／ｚ値は、±０．１の誤差範囲を含有する）、
過敏性腸症候群の罹患によりヒト尿中の含有量が変動する化合物であることを特徴とする、過敏性腸症候群診断用のバイオマーカー。
（２）  ＬＣカラムとしてＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（１．７μｍ、２．１ｍｍ×１５０ｍｍ；ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）社製）を装着させ、ＭＳ機器として４０００ＱＴＲＡＰ（ＡＢ  ＳＣＩＥＸ社製）を装着させたＬＣ／ＭＳ（ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ、ウォーターズ社製）にて、
カラム温度４０℃；
オートサンプラー温度４℃；
測定用サンプルインジェクション量５μＬ；
流速０．３０ｍＬ／分；
分析時間２１分；及び
移動相（Ａ）０．１％（ｗ／ｗ）ギ酸水溶液、及び移動相（Ｂ）アセトニトリルのグラジエント条件（Ａ／Ｂ（ｖ／ｖ％））：０〜７分（１００／０）、７〜１４分（０／１００）、１４〜２１分（１００／０）、
とした条件にて、
遠心機で４℃及び２５００ｒｐｍの条件で１５分間遠心分離を行ったヒト尿の上清２５０μＬを、０．０９％（ｗ／ｗ）アジ化ナトリウムを添加した０．１％（ｗ／ｗ）ギ酸水溶液７５０μＬと混合した混合液
を測定し、
ｍ／ｚ値及び保持時間が、
350.4及び4.4分、264.3及び3.9分、251.3及び1.6分、283.2及び1.7分、267.3及び1.7分、268.2及び1.6分、205.2及び2.6分、189.2及び2.7分、356.5及び4.4分、356.5及び4.7分、358.5及び5.2分、326.4及び4.1分、352.5及び5.1分、328.4及び3.1分、366.5及び4.4分、344.4及び3.8分、370.5及び5.0分、166.0及び0.6分、149.0及び0.7分、325.2及び4.1分、152.0及び1.6分、133.1及び0.7分、217.1及び1.0分、168.1及び1.7分、181.1及び1.0分又は197.0及び1.7分
（ただし、前記ｍ／ｚ値は、±０．１の誤差範囲を含有し、前記保持時間は±０．１分の誤差範囲を含有する）
である前記（１）に記載のバイオマーカー。
（３）  ＬＣカラムとしてＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（１．７μｍ、２．１ｍｍ×１００ｍｍ；ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）社製）を装着させ、ＭＳ機器としてＬＣＴ  Ｐｒｅｍｉｅｒ（ウォーターズ社製）を装着させたＬＣ／ＭＳ（ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ、ウォーターズ社製）にて、
カラム温度４０℃；
オートサンプラー温度４℃；
測定用サンプルインジェクション量５μＬ；
流速０．３０ｍＬ／分；
分析時間１７分；及び
移動相（Ａ）０．１％（ｗ／ｗ）ギ酸水溶液、及び移動相（Ｂ）０．１％（ｗ／ｗ）ギ酸メタノール溶液のグラジエント条件（Ａ／Ｂ（ｖ／ｖ％））：０〜４分（１００／０）、４〜４．５分（３０／７０）、４．５〜１０分（２／９８）、１０〜１７分（１００／０）、
の条件にて、
遠心機で４℃及び２５００ｒｐｍの条件で１５分間遠心分離を行ったヒト尿の上清２５０μＬを、０．０９％（ｗ／ｗ）アジ化ナトリウムを添加した０．１％（ｗ／ｗ）ギ酸水溶液７５０μＬと混合した混合液
を測定し、
ｍ／ｚ値及び保持時間が、
419.9及び0.6分、198.1及び1.3分、121.1及び1.5分、226.4及び1.6分、221.4及び1.7分、182.3及び1.8分、299.0及び1.8分、364.1及び1.8分、430.1及び1.8分、462.1及び1.8分、216.1及び1.9分、175.1及び2.0分、169.3及び2.1分、291.2及び2.1分、212.1及び2.2分、280.1及び2.2分、283.0及び2.2分、406.1及び2.2分、156.1及び2.3分、295.1及び2.3分、180.8及び2.4分、181.2及び2.4分、260.1及び2.4分、392.1及び2.4分、458.1及び2.4分、170.1及び2.5分、286.2及び2.5分、300.5及び2.5分、601.3及び2.5分、159.2及び2.6分、226.1及び2.6分、320.1及び2.6分、406.1及び2.7分、420.1及び2.7分、558.2及び2.8分、537.2及び2.9分、280.1及び3.1分、526.2及び3.3分、244.4及び3.5分、284.2及び3.6分、298.1及び3.8分、388.2及び3.8分、474.2及び3.8分、444.2及び3.9分、259.2及び4.0分、292.5及び4.0分、562.3及び4.0分、248.1及び4.1分、504.2及び4.1分、325.2及び4.2分、325.6及び4.2分、446.1及び4.2分、424.1及び4.3分、301.6及び4.4分、302.7及び4.4分、313.6及び4.5分、562.2及び4.5分、503.3及び4.6分、247.5及び4.7分、271.2及び4.7分、345.3及び4.7分、327.2及び4.8分、381.3及び4.8分又は、469.3及び5.1分
（ただし、前記ｍ／ｚ値は、±０．１の誤差範囲を含有し、前記保持時間は±０．１分の誤差範囲を含有する）
である前記（１）に記載のバイオマーカー。
（４）  ＬＣカラムとしてＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（１．７μｍ、２．１ｍｍ×１００ｍｍ；ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）社製）を装着させ、ＭＳ機器としてＬＣＴ  Ｐｒｅｍｉｅｒ（ウォーターズ社製）を装着させたＬＣ／ＭＳ（ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ、ウォーターズ社製）にて、
カラム温度４０℃；
オートサンプラー温度４℃；
測定用サンプルインジェクション量５μＬ；
流速０．３０ｍＬ／分；
分析時間１７分；及び
移動相（Ａ）６．５ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液、及び移動相（Ｂ）６．５ｍＭ炭酸水素アンモニウム９５％（ｗ／ｖ）メタノール水溶液のグラジエント条件（Ａ／Ｂ（ｖ／ｖ％））：０〜４分（１００／０）、４〜４．５分（３０／７０）、４．５〜１０分（２／９８）、１０〜１７分（１００／０）、
の条件にて、
遠心機で４℃及び２５００ｒｐｍの条件で１５分間遠心分離を行ったヒト尿の上清２５０μＬを、０．０９％（ｗ／ｗ）アジ化ナトリウムを添加した０．１％（ｗ／ｗ）ギ酸水溶液７５０μＬと混合した混合液
を測定し、
ｍ／ｚ値及び保持時間が、
192.0及び0.6分、196.2及び0.6分、182.1及び0.7分、210.1及び0.7分、292.0及び0.7分、306.0及び0.7分、130.0及び0.8分、205.1及び0.9分、342.1及び1.2分、162.1及び1.5分、260.2及び1.8分、340.1及び2.1分、130.1及び2.2分、296.2及び2.6分、346.2及び3.8分、344.2及び4.2分、402.2及び4.3分、361.2及び4.4分、368.5及び4.8分又は、389.3及び5.0分
（ただし、前記ｍ／ｚ値は、±０．１の誤差範囲を含有し、前記保持時間は±０．１分の誤差範囲を含有する）
である前記（１）に記載のバイオマーカー。
（５）  ２−メチルブチリルグリシン、デヒドロエピアンドロステロンサルファート、１１−デヒドロ−トロンボキサンＢ２、エストロンサルファート、２，７，８−トリメチル−２−（β−カルボキシエチル）−６−ヒドロキシクロマン、２’−デオキシアデノシン、グアノシン、２’−デオキシグアノシン、イノシン、キサンツレン酸、キヌレン酸、８−イソ−プロスタグランジンＦ１α、プロスタグランジンＦ１α、１３，１４−ジヒドロ−プロスタグランジンＦ１α、２，３−ジノル−１１β−プロスタグランジンＦ２α、１３，１４−ジヒドロ−１５−ケト−プロスタグランジンＤ２、テトラノル−プロスタグランジンＤ  メタボライト、１１−デヒドロ−トロンボキサンＢ３、２，３−ジノル−トロンボキサンＢ１、トロンボキサンＢ２、キノリン酸、キシロース、２，３−ジノル−８−イソ−プロスタグランジンＦ２α、ゲンチジン酸、グリシルグリシン、Ｎ−アセチルアルギニン、３−メトキシチラミン、ホモバニリン酸及びバニリルマンデル酸からなる群から選択される前記（１）〜（４）のいずれか１項に記載のバイオマーカー。
（６）  ２−メチルブチリルグリシン、１１−デヒドロ−トロンボキサンＢ２、エストロンサルファート、２’−デオキシアデノシン、グアノシン、２’−デオキシグアノシン、イノシン、キサンツレン酸、８−イソ−プロスタグランジンＦ１α、プロスタグランジンＦ１α、１３，１４−ジヒドロ−プロスタグランジンＦ１α、２，３−ジノル−１１β−プロスタグランジンＦ２α、１３，１４−ジヒドロ−１５−ケト−プロスタグランジンＤ２、テトラノル−プロスタグランジンＤ  メタボライト、１１−デヒドロ−トロンボキサンＢ３、２，３−ジノル−トロンボキサンＢ１、トロンボキサンＢ２、キノリン酸、キシロース、２，３−ジノル−８−イソ−プロスタグランジンＦ２α、ゲンチジン酸、グリシルグリシン、Ｎ−アセチルアルギニン、３−メトキシチラミン、ホモバニリン酸及びバニリルマンデル酸からなる群から選択される前記（１）〜（４）のいずれか１項に記載のバイオマーカー。
（７）  前記（１）〜（６）のいずれかに記載のバイオマーカーのヒト尿中の濃度を測定する工程を含む、過敏性腸症候群の治療薬のスクリーニング方法。
（８）  前記（１）〜（６）のいずれかに記載のバイオマーカーの、過敏性腸症候群の診断薬の製造のための使用。
（９）  尿中の前記（１）〜（６）のいずれかに記載のバイオマーカーを定量することを特徴とする過敏性腸症候群の診断薬。
（１０）  前記（１）〜（６）のいずれかに記載のバイオマーカーを測定することによって過敏性腸症候群の種類及び／又は重症度を判断し、患者に適した薬剤を選別することを特徴とする、薬剤の選別方法。
（１１）  前記（１）〜（６）のいずれかに記載のバイオマーカーを測定することによって過敏性腸症候群の種類及び／又は重症度を判断し、患者に適した薬剤を選別するための該バイオマーカーの使用。
（１２）  前記（１）〜（６）のいずれかに記載のバイオマーカーのヒト尿中の濃度を測定するための試薬を含むことを特徴とする過敏性腸症候群の診断用キット。
（１３）  過敏性腸症候群の治療薬を、過敏性腸症候群の種類及び／又は重症度に応じて選別するための前記（１２）に記載の診断用キット。
（１４）  前記（１）〜（６）のいずれかに記載のバイオマーカーのヒト尿中の濃度を測定する工程を含む、過敏性腸症候群の診断方法。
（１５）  前記（１）〜（６）のいずれかに記載のバイオマーカーのヒト尿中の濃度を測定し、当該バイオマーカーのうち任意の２種以上のヒト尿中の濃度比を算出することを特徴とする、過敏性腸症候群の診断方法。
（１６）  キノリン酸、キサンツレン酸及びキヌレン酸のヒト尿中の濃度を測定し、キノリン酸／キサンツレン酸比又はキノリン酸／キヌレン酸比を算出することを特徴とする、過敏性腸症候群の診断方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明のバイオマーカーによれば、非侵襲的かつ簡便な方法で迅速かつ正確にＩＢＳの診断を行うことができる。また、本発明のバイオマーカーは、ＩＢＳの発症又は病態を的確に反映することができるため、本発明によれば、ＩＢＳ罹患の有無の判定、ＩＢＳの重症度の判定、ＩＢＳの型の判定、ＩＢＳ治療の要否の判定、及びＩＢＳ治療薬の薬効確認に有用なバイオマーカーを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】健常者とＩＢＳ患者における、キノリン酸／キサンツレン酸比を比較した結果を表す。縦軸はキノリン酸／キサンツレン酸比を、横軸は実施例１（４）で示した採尿ポイントを表す。
【図２】健常者とＩＢＳ患者における、キノリン酸／キヌレン酸比を比較した結果を表す。縦軸はキノリン酸／キヌレン酸比を、横軸は実施例１（４）で示した採尿ポイントを表す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のバイオマーカーは、ＩＢＳの罹患、及びＩＢＳの病状の程度に依存して、ヒト生体試料中の含有量が変動する物質を包含する。前記生体試料は、例えば、尿、血液、唾液、脳脊髄液等を用いることができるが、本発明においては、生体試料として、好ましくはヒト尿を用いる。
【００１６】
ここで、上記したように、ヒト尿中の特定の物質の含有量について、ＩＢＳ患者と健常人との比較を行った研究が、これまでいくつか報告されている。
例えば、ザ・アメリカン・ジャーナル・オブ・ガストロエンテロロジー、１９９６年、第９１巻、第５号、９０６−９１３ページには、女性のＩＢＳ患者の尿中のカテコールアミン（ノルエピネフリン及びエピネフリン）及びコルチゾール濃度が、健常者と比較して高かったことが報告されている。しかしながら、カテコールアミンの尿中濃度は、褐色細胞腫、神経芽細胞腫、副腎髄質過形成、心不全、心筋梗塞、パーキンソン病、本態性高血圧、甲状腺機能低下症、総合失調症、うつ病、及び糖尿病等でも増加することが知られており（例えば、医学書院  医学大辞典（第２版）３９９頁を参照。）、ＡＣＴＨの一種であるコルチゾールの尿中濃度は、クッシング症候群、ストレス、うつ病、神経性食欲不振症等でも増加することが知られている。すなわち、尿中のカテコールアミン及びコルチゾールは、ＩＢＳのバイオマーカーとして特異性の高いものではない。
また、ジャーナル・オブ・フィジオロジー・アンド・ファーマコロジー、２０１０年、第６１巻、第３号、２９５−３００ページ、並びにPol Merkur Lekarski, 2009 May; 26(155): 440-3には、便秘性及び下痢性の女性ＩＢＳ患者における、６−スルファトキシメラトニンの尿中濃度が、健常者の女性と比較して高かったことが報告されている。しかしながら、一方で、ジャーナル・オブ・フィジオロジー・アンド・ファーマコロジー、２００９年、第６０巻、別冊第３号、６７−７０ページには、便秘性及び下痢性のＩＢＳ患者（男性及び女性）の６−スルファトキシメラトニンの尿中濃度が、健常者と比較して低かったことが報告されている。上記文献の結果に整合性がないことから、６−スルファトキシメラトニンをＩＢＳのバイオマーカーとして用いるには、課題があることが分かる。
Pol Merkur Lekarski, 2007 May; 22(131): 366-8及びScott Med J, 2005 Feb; 50(1): 27-9.には、ＩＢＳ患者の血中セロトニンが健常者と比較して高く、尿中の５−ＨＩＡＡ（セロトニン代謝物）が健常者と比較して低かったこと、ＩＢＳ患者ではセロトニン代謝能が低下する可能性が報告されている。しかしながら、セロトニンの代謝量を決定するためには、血中セロトニンの量と尿中の５−ＨＩＡＡの量を比較する必要があり、非侵襲的で簡便、迅速かつ正確なＩＢＳ診断に用いるには不十分である。
このように、いくつかの物質について、ＩＢＳ患者と健常人における尿中の含有量に差が認められたことが報告されているが、非侵襲的で簡便、迅速かつ正確なＩＢＳ診断の実施が可能となるバイオマーカーについては、未だ知られていなかった。
【００１７】
一方、本発明においては、ヒト尿中における本発明のバイオマーカーを検査することにより、客観的にＩＢＳを診断することが可能である。すなわち、本発明によれば、診断者の技能に依存することなく、非侵襲的で簡便、迅速かつ正確なＩＢＳ診断を実施することができる。
【００１８】
一般的に、ＩＢＳには、下痢型、便秘型、混合型、分類不能型の４種があることが知られているが、本発明のバイオマーカーはいずれの型のＩＢＳも対象とすることができ、さらに、本発明のバイオマーカーは、患者の性別（男性又は女性）あるいは患者の年齢等を問わず、ＩＢＳの診断等に好適に用いることができる。
【００１９】
本発明の好ましいひとつの態様において、前記バイオマーカーを用いてＩＢＳを診断する場合、バイオマーカーを２種以上、より好ましくは３種以上を用いる。バイオマーカーを複数用いて多角的に判断することにより、好ましくは、診断の精度が向上する。
【００２０】
以下、本発明のバイオマーカーについて具体的に説明する。
本発明のバイオマーカーは、ヒト尿中に含まれ、後記する条件におけるＬＣ／ＭＳの分析により検出され、さらに、ヒト尿中における含有量がＩＢＳの罹患又はＩＢＳの病状の程度に依存して変動するものであれば、特に限定されない。
【００２１】
本発明の前記バイオマーカーには、（１）化合物名で特定される生体試料中の代謝物等の物質、及び（２）後記する実施例に記載されたＬＣ／ＭＳ条件で測定された質量（ｍ／ｚ値）及び保持時間で特定される生体試料中の代謝物等の物質が含まれる。
【００２２】
本発明の好ましいひとつの態様において、前記バイオマーカーとしては、具体的には、例えば、２−メチルブチリルグリシン（ＣＡＳ登録番号：５２３２０−６７−９）、デヒトロエピアンドロステロンサルファート（ＤＨＥＡ−Ｓ）（ＣＡＳ登録番号：６５１−４８−９）、１１−デヒドロ−トロンボキサンＢ２（ＣＡＳ登録番号：６７９１０−１２−７）、エストロンサルファート（Ｅｓｔｒｏｎ  ｓｕｌｆａｔｅ）（ＣＡＳ登録番号：４８１−９７−０）、２，７，８−トリメチル−２−（β−カルボキシエチル）−６−ヒドロキシクロマン（γ−ＣＥＨＣ）（ＣＡＳ登録番号：１７８１６７−７５−４）、２’−デオキシアデノシン（ＣＡＳ登録番号：９５８−０９−８）、グアノシン（ＣＡＳ登録番号：１１８−００−３）、２’−デオキシグアノシン（ＣＡＳ登録番号：９６１−０７−９）、イノシン（ＣＡＳ登録番号：５８−６３−９）、キサンツレン酸（ＣＡＳ登録番号：５９−００−７）、キヌレン酸（ＣＡＳ登録番号：４９２−２７−３）、８−イソ−プロスタグランジンＦ１α（ＣＡＳ登録番号：２６７７１−９６−０）、プロスタグランジンＦ１α（ＣＡＳ登録番号：７４５−６２−０）、１３，１４−ジヒドロ−プロスタグランジンＦ１α（ＣＡＳ登録番号：２０５９２−２０−５）、２，３−ジノル−１１β−プロスタグランジンＦ２α（ＣＡＳ登録番号：２４０４０５−２０−３）、１３，１４−ジヒドロ−１５−ケト−プロスタグランジンＤ２（ＣＡＳ登録番号：５９８９４−０７−４）、テトラノル−プロスタグランジンＤ  メタボライト（ＣＡＳ登録番号：７０８０３−９１−７）、１１−デヒドロ−トロンボキサンＢ３（ＣＡＳ登録番号：１２９２２８−５５−３）、２，３−ジノル−トロンボキサンＢ１（ＣＡＳ登録番号：６３２５０−０９−９）、トロンボキサンＢ２（ＣＡＳ登録番号：５４３９７−８５−２）、キノリン酸（ＣＡＳ登録番号：８９−００−９）、キシロース（ＣＡＳ登録番号：５８−８６−６）、２，３−ジノル−８−イソ−プロスタグランジンＦ２α（ＣＡＳ登録番号：２２１６６４−０５−７）、ゲンチジン酸（ＣＡＳ登録番号：４９０−７９−９）、グリシルグリシン（ＣＡＳ登録番号：５５６−５０−３）、Ｎ−アセチルアルギニン（ＣＡＳ登録番号：１５５−８４−０）、３−メトキシチラミン（ＣＡＳ登録番号：５５４−５２−９）、ホモバニリン酸（ＣＡＳ登録番号：３０６−０８−１）及びバニリルマンデル酸（ＣＡＳ登録番号：５５−１０−７）が挙げられる。なかでも、２−メチルブチリルグリシン、１１−デヒドロ−トロンボキサンＢ２、エストロンサルファート、２’−デオキシアデノシン、グアノシン、２’−デオキシグアノシン、イノシン、キサンツレン酸、８−イソ−プロスタグランジンＦ１α、プロスタグランジンＦ１α、１３，１４−ジヒドロ−プロスタグランジンＦ１α、２，３−ジノル−１１β−プロスタグランジンＦ２α、１３，１４−ジヒドロ−１５−ケト−プロスタグランジンＤ２、テトラノル−プロスタグランジンＤ  メタボライト、１１−デヒドロ−トロンボキサンＢ３、２，３−ジノル−トロンボキサンＢ１、トロンボキサンＢ２、キノリン酸、キシロース、２，３−ジノル−８−イソ−プロスタグランジンＦ２α、ゲンチ��ン酸、グリシルグリシン、Ｎ−アセチルアルギニン、３−メトキシチラミン、ホモバニリン酸及びバニリルマンデル酸が、正確なＩＢＳ診断の観点から好ましく用いられる。
【００２３】
本発明において、前記バイオマーカーのうち、各バイオマーカーの尿中濃度を測定した後、任意の２種以上のバイオマーカーの濃度比を算出することによって、ＩＢＳ診断を行うことも可能である。例えば、後記する実施例で示すように、キノリン酸、キサンツレン酸及び／又はキヌレン酸のヒト尿中濃度を測定し、キノリン酸／キサンツレン酸比及び／又はキノリン酸／キヌレン酸比を算出することによって、ＩＢＳ診断を正確に行うことができる。
【００２４】
本発明の好ましい別のひとつの態様において、前記バイオマーカーとして、後記する実施例に記載されたＬＣ／ＭＳ条件で測定された質量（ｍ／ｚ値）及び保持時間で特定される構造未知又は構造既知の、代謝物等の化合物が挙げられる。
【００２５】
より具体的には、本発明の前記バイオマーカーは、０．０９％アジ化ナトリウム添加０．１％ギ酸水溶液で希釈したヒト尿を、後記する条件においてＬＣ／ＭＳで測定した際に得られるｍ／ｚ値が、
121.1、130.0、130.1、133.1、149.0、152.0、156.1、159.2、162.1、166.0、168.1、169.3、170.1、175.1、180.8、181.0、181.2、182.1、182.3、189.2、192.0、196.2、197.0、198.1、205.1、205.2、210.1、212.1、216.1、217.1、221.4、226.1、226.4、244.4、247.5、248.1、251.3、259.2、260.1、260.2、264.3、267.3、268.2、271.2、280.1、283.0、283.2、284.2、286.2、291.2、292.0、292.5、295.1、296.2、298.1、299.0、300.5、301.6、302.7、306.0、313.6、320.1、325.2、325.6、326.4、327.2、328.4、340.1、342.1、344.2、344.4、345.3、346.2、350.4、352.5、356.5、358.5、361.2、364.1、366.5、368.5、370.5、381.3、388.2、389.3、392.1、402.2、406.1、419.9、420.1、424.1、430.1、444.2、446.1、458.1、462.1、469.3、474.2、503.3、504.2、526.2、537.2、558.2、562.2、562.3又は601.3（ただし、前記ｍ／ｚ値は、±０．１の誤差範囲を含有する）であり、ＩＢＳの罹患により尿中の含有量が変動する化合物を包含する。
【００２６】
上記ＬＣ／ＭＳの測定条件としては、具体的には以下の測定条件１〜３が好ましいものとして挙げられる。
【００２７】
＜測定条件１＞
ＬＣカラム：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８
（１．７μｍ、２．１ｍｍ×１５０ｍｍ；ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）社製）、
ＬＣ／ＭＳ機器：４０００ＱＴＲＡＰ（ＡＢ  ＳＣＩＥＸ社製）を装着した
ＬＣ／ＭＳ（ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ、ウォーターズ社製）、
カラム温度：４０℃、
オートサンプラー温度：４℃、
測定用サンプルインジェクション量：５μＬ、
流速：０．３０ｍＬ／分、
分析時間：２１分、
移動相（Ａ）：０．１％ギ酸水溶液、
移動相（Ｂ）：アセトニトリル、
グラジエント条件（Ａ／Ｂ（ｖ／ｖ％））：０〜７分（１００／０）→７〜１４分（０／１００）→１４〜２１分（１００／０）、
極性：ポジティブ、ネガティブ、
スキャンタイプ：ＭＲＭ、
イオン化方法：ＥＳＩ(エレクトロスプレーイオン)法、
ソース温度：４００℃、
なお、上記グラジエント条件において、例えば、『０〜７分（１００／０）→７〜１４分（０／１００）→１４〜２１分（１００／０）』との記載は、分析時間の開始（０分）から７分間は移動相（Ａ）が１００％（ｖ／ｖ）であり移動相（Ｂ）が０％（ｖ／ｖ）の条件で送液し、分析開始後７分から１４分までは移動相（Ａ）が０％（ｖ／ｖ）であり移動相（Ｂ）が１００％（ｖ／ｖ）の条件で送液し、分析開始後１４分から２１分まで移動相（Ａ）が１００％（ｖ／ｖ）であり移動相（Ｂ）が０％（ｖ／ｖ）の条件で送液することを表す。本明細書において、以下同様である。
【００２８】
＜測定条件２＞
ＬＣカラム：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８
（１．７μｍ、２．１ｍｍ×１００ｍｍ；ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）社製）、
ＬＣ／ＭＳ機器：ＬＣＴ  Ｐｒｅｍｉｅｒ（ウォーターズ社製）を装着した
ＬＣ／ＭＳ（ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ、ウォーターズ社製）、
カラム温度：４０℃、
オートサンプラー温度：４℃、
測定用サンプルインジェクション量：５μＬ、
流速：０．３０ｍＬ／分、
分析時間：１７分、
移動相（Ａ）：０．１％ギ酸水溶液、
移動相（Ｂ）：０．１％ギ酸メタノール溶液、
グラジエント条件（Ａ／Ｂ（ｖ／ｖ％））：０〜４分（１００／０）→４〜４．５分（３０／７０）→４．５〜１０分（２／９８）→１０〜１７分（１００／０）、
極性：ポジティブ、
アナライザー：Ｖモード、
キャピラリー：２３００Ｖ、
サンプルコーン：３０Ｖ、
脱溶媒温度：３５０℃、
ソース温度：１２０℃、
コーンガス流量：５０Ｌ／ｈ、
脱溶媒ガス流量：８００Ｌ／ｈ
【００２９】
＜測定条件３＞
ＬＣカラム：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８
（１．７μｍ、２．１ｍｍ×１００ｍｍ；ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）社製）、
ＬＣ／ＭＳ機器：ＬＣＴ  Ｐｒｅｍｉｅｒ（ウォーターズ社製）を装着した
ＬＣ／ＭＳ（ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ、ウォーターズ社製）、
カラム温度：４０℃、
オートサンプラー温度：４℃、
測定用サンプルインジェクション量：５μＬ、
流速：０．３０ｍＬ／分、
分析時間：１７分、
移動相（Ａ）：６．５ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液、
移動相（Ｂ）：６．５ｍＭ炭酸水素アンモニウム９５％（ｗ／ｖ）メタノール水溶液、
グラジエント条件（Ａ／Ｂ（ｖ／ｖ％））：０〜４分（１００／０）→４〜４．５分（３０／７０）→４．５〜１０分（２／９８）→１０〜１７分（１００／０）、
極性：ネガティブ、
アナライザー：Ｖモード、
キャピラリー：２２００Ｖ、
サンプルコーン：７０Ｖ、
脱溶媒温度：２００℃、
ソース温度：１００℃、
コーンガス流量：５０Ｌ／ｈ、
脱溶媒ガス流量：２００Ｌ／ｈ
【００３０】
なお、本発明において、上記ＬＣ／ＭＳの分析に用いる試料は、５０ｍＬのサンプリングチューブに入れたヒト尿を、遠心分離機で４℃及び２５００ｒｐｍの条件で１５分間遠心分離を行い、その後、尿の上清２５０μＬを、０．０９％（ｗ／ｗ）アジ化ナトリウムを添加した０．１％（ｗ／ｗ）ギ酸水溶液７５０μＬと混合することによって調製することができる。
【００３１】
本発明のひとつの態様において、前記バイオマーカーは、上記の方法により調製したヒト尿の測定試料を、上記測定条件１で測定したときのｍ／ｚ値及び保持時間が、
350.4及び4.4分、264.3及び3.9分、251.3及び1.6分、283.2及び1.7分、267.3及び1.7分、268.2及び1.6分、205.2及び2.6分、189.2及び2.7分、356.5及び4.4分、356.5及び4.7分、358.5及び5.2分、326.4及び4.1分、352.5及び5.1分、328.4及び3.1分、366.5及び4.4分、344.4及び3.8分、370.5及び5.0分、166.0及び0.6分、149.0及び0.7分、325.2及び4.1分、152.0及び1.6分、133.1及び0.7分、217.1及び1.0分、168.1及び1.7分、181.1及び1.0分又は197.0及び1.7分
（ただし、前記ｍ／ｚ値は、±０．１の誤差範囲を含有し、前記保持時間は±０．１分の誤差範囲を含有する ）
である化合物であってもよい。
【００３２】
本発明の別のひとつの態様において、前記バイオマーカーは、上記の方法により調製したヒト尿の測定試料を、上記測定条件２で測定したときのｍ／ｚ値及び保持時間が、
419.9及び0.6分、198.1及び1.3分、121.1及び1.5分、226.4及び1.6分、221.4及び1.7分、182.3及び1.8分、299.0及び1.8分、364.1及び1.8分、430.1及び1.8分、462.1及び1.8分、216.1及び1.9分、175.1及び2.0分、169.3及び2.1分、291.2及び2.1分、212.1及び2.2分、280.1及び2.2分、283.0及び2.2分、406.1及び2.2分、156.1及び2.3分、295.1及び2.3分、180.8及び2.4分、181.2及び2.4分、260.1及び2.4分、392.1及び2.4分、458.1及び2.4分、170.1及び2.5分、286.2及び2.5分、300.5及び2.5分、601.3及び2.5分、159.2及び2.6分、226.1及び2.6分、320.1及び2.6分、406.1及び2.7分、420.1及び2.7分、558.2及び2.8分、537.2及び2.9分、280.1及び3.1分、526.2及び3.3分、244.4及び3.5分、284.2及び3.6分、298.1及び3.8分、388.2及び3.8分、474.2及び3.8分、444.2及び3.9分、259.2及び4.0分、292.5及び4.0分、562.3及び4.0分、248.1及び4.1分、504.2及び4.1分、325.2及び4.2分、325.6及び4.2分、446.1及び4.2分、424.1及び4.3分、301.6及び4.4分、302.7及び4.4分、313.6及び4.5分、562.2及び4.5分、503.3及び4.6分、247.5及び4.7分、271.2及び4.7分、345.3及び4.7分、327.2及び4.8分、381.3及び4.8分又は、469.3及び5.1分（ただし、前記ｍ／ｚ値は、±０．１の誤差範囲を含有し、前記保持時間は±０．１分の誤差範囲を含有する）
である化合物であってもよい。
【００３３】
本発明のさらに別のひとつの態様において、前記バイオマーカーは、上記の方法により調製したヒト尿の測定試料を、上記測定条件３で測定したときのｍ／ｚ値及び保持時間が、
192.0及び0.6分、196.2及び0.6分、182.1及び0.7分、210.1及び0.7分、292.0及び0.7分、306.0及び0.7分、130.0及び0.8分、205.1及び0.9分、342.1及び1.2分、162.1及び1.5分、260.2及び1.8分、340.1及び2.1分、130.1及び2.2分、296.2及び2.6分、346.2及び3.8分、344.2及び4.2分、402.2及び4.3分、361.2及び4.4分、368.5及び4.8分又は、389.3及び5.0分
（ただし、前記ｍ／ｚ値は、±０．１の誤差範囲を含有し、前記保持時間は±０．１分の誤差範囲を含有する）
である化合物であってもよい。
【００３４】
本発明において、上記測定に用いる尿試料を採取するタイミングは、特に限定されないが、ＩＢＳの罹患の有無の判定、ＩＢＳの重症度の判定、ＩＢＳ治療の要否の判定等を行う場合においては、ＩＢＳの発症や病態をより明確に反映させる観点から、対象者自身が、消化器症状が悪化したと感じる日に採取することがより好ましい。
【００３５】
本発明の前記バイオマーカーは、ＩＢＳの発症や病態を反映しているため、ＩＢＳ罹患の有無の判定、ＩＢＳの重症度の判定、ＩＢＳ治療の要否の判定又はＩＢＳ治療薬の治療効果の確認等に使用できる。
【００３６】
本発明のバイオマーカーを用いて、ＩＢＳ罹患の有無の判定、ＩＢＳの重症度の判定、ＩＢＳの型の判定、ＩＢＳ治療の要否の判定又はＩＢＳ治療薬の治療効果の確認等を行うためには、上記したヒト尿の測定試料中の本発明のバイオマーカーを定量又は前記バイオマーカーの尿中の濃度を測定することによって行ってもよい。
また、バイオマーカーの測定値を、基準値と比較することにより、ＩＢＳ罹患の有無の判定、ＩＢＳの重症度の判定、ＩＢＳの型の判定、ＩＢＳ治療の要否の判定等を行ってもよい。前記「基準値」とは、ＲｏｍｅＩＩＩ（ローマ・スリー）に基づいて医師が診断し、器質的疾患及び精神疾患がなく、かつ消化器症状もまったくない者と判断された健常者のバイオマーカーの測定値を用いることができる。
【００３７】
なお、バイオマーカーの定量又は尿中濃度の測定の具体的な方法については、後記する実施例に記載の方法を用いることで行うことができる。また、測定値については、クレアチニン補正等、通常この分野で用いられる技術を適用してもよい。なお、前記クレアチニン補正は従来十分に確立されているので、本発明においてもそれに従ってよい。
【００３８】
本発明は、また、ＩＢＳの治療薬の創薬におけるスクリーニング方法も包含する。ひとつの態様において、本発明の前記スクリーニング方法は、好ましくは、前記バイオマーカーのヒト尿中濃度を測定する工程、及び、ＩＢＳ治療薬の候補薬剤を、患者に投与する工程を含む。本態様において、バイオマーカーの測定は、候補薬剤の投与前及び投与後に実施することが好ましい。候補薬剤の投与前後のバイオマーカーの測定値の比較において、ＩＢＳの罹患によりヒト尿中の含有量が増加するバイオマーカーの測定値を薬剤の投与後に減少させた薬剤、及び／又は、ＩＢＳの罹患により含有量が減少するバイオマーカーの測定値を薬剤の投与後に増加させた薬剤は、ＩＢＳ治療薬として有効であることが期待される。なお、ＩＢＳの罹患によりヒト尿中の含有量が増加又は減少するバイオマーカーは、具体的には、後記する実施例を参考にできる。
【００３９】
さらに、個々の患者に適した治療薬を選択する際に、本発明の前記バイオマーカーを用いることができる。ＩＢＳ患者のタイプ（種類）及び／又はその病態の程度によって、治療薬の治療効果が異なることがある。本発明においては、前記バイオマーカーを測定することによって、個々の患者における治療薬の治療効果を確認する方法も、そのひとつの態様に包含する。
【００４０】
また、本発明のひとつの態様は、前記バイオマーカーを測定することによってＩＢＳの種類及び／又は重症度を判断し、患者に適した薬剤を選別することを特徴とする、薬剤の選別方法に関する。
【００４１】
さらに、本発明の別のひとつの態様は、前記バイオマーカーを測定することによってＩＢＳの種類及び／又は重症度を判断し、患者に適した薬剤を選別するための該バイオマーカーの使用に関する。
【００４２】
本発明のバイオマーカーによって、その治療効果を確認できるＩＢＳ治療薬としては、例えば、ＴＳＰＯ（Translocator protein １８ｋＤａ）拮抗薬、ベンゾジアゼピン系抗不安薬、チエノジアゼピン系抗不安薬、非ベンゾジアゼピン系抗不安薬、ＣＲＦ拮抗薬、ニューロキニン−１（ＮＫ１）拮抗薬、三環系抗うつ薬、四環系抗うつ薬、モノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ）阻害薬、トリアゾロピリジン系抗うつ薬、セロトニン及びノルアドレナリン再取り込み阻害薬（ＳＮＲＩ）、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）、セロトニン再取り込み阻害薬、ノルアドレナリン再取り込み阻害薬、ノルアドレナリン作動性及び特異的セロトニン作動性抗うつ薬（ＮａＳＳＡ）、ノルアドレナリン及びドパミン脱抑制薬（ＮＤＤＩ）、選択的セロトニン再取り込み促進薬（ＳＳＲＥ）、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパルタート（ＮＭＤＡ）受容体阻害薬、グリシントランスポーター阻害薬、ドパミン前駆物質、ドパミン受容体作動薬、カテコール−Ｏ−メチル基転移酵素（ＣＯＭＴ）阻害薬、コリンエステラーゼ阻害薬、ニューロテンシン拮抗薬、抗コリン薬、セロトニン・ドパミン拮抗薬、中枢神経刺激薬、抗てんかん薬、抗めまい薬、消化管機能調整薬、ヒスタミンＨ２受容体拮抗薬、プロトンポンプ阻害薬、ムスカリン受容体拮抗薬、防御因子増強薬、プロスタグランジン誘導体、オピオイドμ受容体作動及びオピオイドδ受容体拮抗薬、オピオイド作動薬、５−ＨＴ４作動薬、５−ＨＴ３拮抗薬、クロライドチャネル活性化薬、グアニル酸シクラーゼ阻害薬、膨張性下剤、塩類下剤、刺激性下剤、親和性ポリアクリル樹脂が挙げられる。
【００４３】
本発明において、前記ＴＳＰＯ拮抗薬としては、例えば、ＯＮＯ−２９５２が挙げられる。
本発明において、前記ベンゾジアゼピン系抗不安薬としては、例えば、アルプラゾラム、オキサゼパム、オキサゾラム、クロキサゾラム、クロラゼプ酸二カリウム、クロルジアゼポキシド、ジアゼパム、トフィソパム、トリアゾラム、プラゼパム、フルジアゼパム、フルタゾラム、フルトプラゼパム、ブロマゼパム、メキサゾラム、メダゼパム、ロフラゼプ酸エチル、ロラゼパムが挙げられる。
本発明において、前記チエノジアゼピン系抗不安薬としては、例えば、エチゾラム、クロチアゼパムが挙げられる。
本発明において、前記非ベンゾジアゼピン系抗不安薬としては、例えば、クエン酸タンドスピロン、塩酸ヒドロキシルジンが挙げられる。
本発明において、前記ＣＲＦ拮抗薬としては、例えば、ペクサセルフォント、ベルセルフォント、エミセルフォント、Ｅ−２５０８、ＯＮＯ−２３３３が挙げられる。
本発明において、前記ニューロキニン−１拮抗薬としては、例えば、アプレピタント、ホスアプレピタントメグルミンが挙げられる。
本発明において、前記三環系抗うつ薬としては、例えば、塩酸アミトリプチリン、塩酸イミプラミン、塩酸クロミプラミン、塩酸ドスレピン、塩酸ノルトリプチリン、塩酸ロフェプラミン、マレイン酸トリミプラミン、アモキサピンが挙げられる。
本発明において、前記四環系抗うつ薬としては、例えば、塩酸マプロチリン、塩酸ミアンセリン、マレイン酸セチプチリンが挙げられる。
本発明において、前記モノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ）阻害薬としては、例えば、塩酸サフラジンが挙げられる。
本発明において、前記トリアゾロピリジン系抗うつ薬としては、例えば、塩酸トラゾドンが挙げられる。
本発明において、前記セロトニン及びノルアドレナリン再取り込み阻害薬（ＳＮＲＩ）としては、例えば、塩酸ミルナシプラン、塩酸デュロキセチン、塩酸ベンラファキシンが挙げられる。
本発明において、前記選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）としては、例えば、マレイン酸フルボキサミン、塩酸パロキセチン、塩酸フルオキセチン、塩酸シタロプラム、シュウ酸エスシタロプラムが挙げられる。
本発明において、前記セロトニン再取り込み阻害薬としては、例えば、塩酸トラゾドンが挙げられる。
本発明において、前記ノルアドレナリン再取り込み阻害薬としては、例えば、アトモキセチンが挙げられる。
本発明において、前記ノルアドレナリン作動性及び特異的セロトニン作動性抗うつ薬としては、例えば、ミルタザピンが挙げられる。
本発明において、前記ノルアドナリン及びドパミン脱抑制薬としては、例えば、アゴメラチンが挙げられる。
本発明において、前記選択的セロトニン再取り込み促進薬としては、例えば、チアネプチンが挙げられる。
本発明において、前記Ｎ−メチル−Ｄ−アスパルタート受容体阻害薬としては、例えば、メマンチンが挙げられる。
本発明において、前記グリシントランスポーター阻害薬としては、例えば、ビトペルチン、ＯＲＧ２５９３５が挙げられる。
本発明において、前記ドパミン前駆物質としては、例えば、レボドパが挙げられる。
本発明において、前記ドパミン受容体作動薬としては、例えば、ブロモグリプチンが挙げられる。
本発明において、前記ＣＯＭＴ阻害薬としては、例えば、エンタカポン、オピカポンが挙げられる。
本発明において、前記コリンエステラーゼ阻害薬としては、例えば、ドネペジル、リバスチグミンが挙げられる。
本発明において、前記ニューロテンシン拮抗薬としては、例えば、ＳＲ４８６９２が挙げられる。
本発明において、前記抗コリン薬としては、例えば、トリヘキシフェニジル、ビペリデン、臭化イプラトロピウム、臭化メペンゾラートが挙げられる。
本発明において、前記セロトニン・ドパミン拮抗薬としては、例えば、リスペリドン、パリペリドン、塩酸ペロスピロン水和物、フマル酸クエチアピン、オランザピンが挙げられる。
本発明において、前記抗てんかん薬としては、例えば、フェノバルビタール、フェニトイン、カルバマゼピン、バルプロ酸、クロナゼパム、レベチラセタム、トピラマート、ラモトリキンが挙げられる。
本発明において、前記抗めまい薬としては、例えば、ジフェニドール、ベタヒスチンが挙げられる。
本発明において、前記消化管機能調整薬としては、例えば、マレイン酸トリメブチン、ポリカルボフィルカルシウムが挙げられる。
本発明において、前記ヒスタミンＨ２受容体拮抗薬としては、例えば、シメチジン、ラニチジン、ファモチジン、ニザチジン、ラフチジンが挙げられる。
本発明において、前記プロトンポンプ阻害薬としては、例えば、オメプラゾール、ランソプラゾール、ラベプラゾールが挙げられる。
本発明において、前記ムスカリン受容体拮抗薬としては、例えば、ピレンゼピンが挙げられる。
本発明において、前記防御因子増強薬としては、例えば、ゲファルナート、テプレノン、スクラルファート、アルジオキサ、塩酸セトラキサート、オルノプロスチルが挙げられる。
本発明において、前記プロスタグランジン誘導体としては、例えば、オルノプロスチル、ミソプロストールが挙げられる。
本発明において、前記オピオイドμ受容体作動及びオピオイドδ受容体拮抗薬としては、例えば、エルキサドリンが挙げられる。
本発明において、前記オピオイド作動薬としては、例えば、アシマドリン、ナルフラフィンが挙げられる。
本発明において、前記５−ＨＴ４作動薬としては、例えば、テガセロド、シサプリド、クエン酸モサプリドが挙げられる。
本発明において、前記５−ＨＴ３拮抗薬としては、例えば、ラモセトロン、アロセトロン、シランセトロンが挙げられる。
本発明において、前記クロライドチャネル活性化薬としては、例えば、ルビプロストンが挙げられる。
本発明において、前記グアニル酸シクラーゼ作動薬としては、例えば、リナクロチドが挙げられる。
本発明において、前記膨張性下剤としては、例えば、メチルセルロース、カルメロース、ラクツロースが挙げられる。
本発明において、前記塩類下剤としては、例えば、硫酸マグネシウム、酸化マグネシウムが挙げられる。
本発明において、前記刺激性下剤としては、例えば、ピコスルファート、ラクツロース、ヒマシ油、センナ、大黄が挙げられる。
本発明において、前記親和性ポリアクリル樹脂としては、例えば、ポリカルボフィルカルシウムが挙げられる。
【００４４】
また、本発明の別のひとつの態様は、前記バイオマーカーの、ＩＢＳの診断薬の製造のための使用に関する。前記診断薬は、前記バイオマーカーを定量するものであることが好ましい。より具体的には、前記診断薬は、バイオマーカーの尿中濃度の、基準値との誤差（基準値よりも高い又は低い）を検出するものであることが好ましい。また、本発明における診断薬として、例えば、現在他の用途に使用されている下記表１に示す市販の測定用キットを応用してもよい。すなわち、表１に示した定量キットを用いて、本願発明のバイオマーカーの定量を行ってもよい。
【表１】
0006713723.tif 000002
【００４５】
さらに、本発明は、前記バイオマーカーのヒト尿中の濃度を測定するための試薬を含むＩＢＳの診断用キットを包含する。本発明のひとつの好ましい態様において、前記ＩＢＳの診断用キットは、患者のＩＢＳの種類及び／又は重症度に応じてＩＢＳの治療薬を選別する用途を包含するものであることが好ましい。
【００４６】
また、本発明は、前記バイオマーカーのヒト尿中の濃度を測定する工程を含む、過敏性腸症候群の診断方法も包含する。バイオマーカーのヒト尿中の濃度を測定する方法は、上記と同様であってよい。
【実施例】
【００４７】
次に、実験例、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら限定されるものではなく、多くの変形が本発明の技術的思想内で当分野において通常の知識を有する者により可能である。
【実施例１】
【００４８】
＜ＩＢＳ患者と健常者の比較試験＞
（１）被験者：ＩＢＳ患者２５名（男性１５名、女性１０名）及び健常者２５名（男性１５名、女性１０名）を対象とした。対象者の年齢層は、男性健常者１８〜５５歳、男性ＩＢＳ患者１７〜５４歳、女性健常者１８〜４８歳、女性ＩＢＳ患者１７〜４８歳であった。なお、本試験は東北大学大学院医学系研究科倫理委員会の承認を得るとともに、すべての対象者から文書による同意を得た。
（２）患者の分類基準：ＩＢＳ患者への分類は、医師がＲｏｍｅＩＩＩ基準に基づいて行った。一方、健常者は、器質的疾患及び精神疾患がなく、かつ消化器症状もまったくない者と医師が診断して分類した。
（３）採尿方法、処理方法：下記に示す採尿ポイント毎に、被験者により採尿カップにて採取した随時尿は、採尿専用サンプルチューブに採取（約１０ｍＬ／回）し、調製まで冷凍保存した。
（４）採尿ポイント：ＩＢＳ患者及び健常者ともに下記の採尿日に、朝食後から昼食前までの時間に尿を任意で採取した。
（Ａ）試験参加への同意当日
（Ｂ）（Ａ）〜（Ｄ）の期間中に、消化器症状が悪化したと自己評価した日
（Ｃ）（Ａ）〜（Ｄ）の期間中に、（Ｂ）よりさらに消化器症状が悪化したと自己評価した日
（Ｄ）（Ａ）の同意日から１ヶ月後の受診日
（５）ヒト試料の調製：凍結保存したヒト試料を４℃の冷蔵庫で溶解し、５０ｍＬサンプリングチューブ（日本ベクトンディッキンソン社）に移し、撹拌後、冷却遠心機で、４℃、２５００ｒｐｍにて１５分間遠心分離を行った。この上清２５０μＬをサンプリングチューブ（ＢＩＯ−ＢＩＫ社）にとり、ヒト試料希釈溶液（０．０９％アジ化ナトリウム添加０．１％ギ酸水溶液）７５０μＬを添加撹拌した溶液をＬＣ／ＭＳ測定用サンプルとした。
【００４９】
（６）ＬＣ／ＭＳの測定条件
［ＬＣ測定条件１］
・使用機器：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ社）
・カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（１．７μｍ、２．１ｍｍ×１５０ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ社）
・カラム温度：４０℃
・オートサンプラー温度：４℃
・移動相：Ａ）０．１％ギ酸水溶液
Ｂ）アセトニトリル
・測定用サンプルインジェクション量：５μＬ
・移動相Ａ／Ｂのグラジエント条件
【表２】
0006713723.tif 000003
なお、表中、％は容量％を示す。
・流速：０．３０ｍＬ／分
・分析時間：２１分
・ＭＳ機器：４０００ＱＴＲＡＰ（ＡＢ  ＳＣＩＥＸ社）
・極性：ポジティブ、ネガティブ
［ＬＣ測定条件２］
・使用機器：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ社）
・カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（１．７μｍ、２．１ｍｍ×１００ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ社）
・カラム温度：４０℃
・オートサンプラー温度：４℃
・移動相：Ａ）０．１％ギ酸水溶液
Ｂ）０．１％ギ酸メタノール溶液
・測定用サンプルインジェクション量：５μＬ
・移動相Ａ／Ｂのグラジエント条件
【表３】
0006713723.tif 000004
なお、表中、％は容量％を示す。
・流速：０．３５ｍＬ／分
・分析時間：１７分
・ＭＳ機器：４０００ＱＴＲＡＰ、ＬＣＴ  Ｐｒｅｍｉｅｒ（Ｗａｔｅｒｓ社）
・極性：ポジティブ
［ＬＣ測定条件３］
・使用機器：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ社）
・カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（１．７μｍ、２．１ｍｍ×１００ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ社）
・カラム温度：４０℃
・オートサンプラー温度：４℃
・移動相：Ａ）６．５ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液
Ｂ）６．５ｍＭ炭酸水素アンモニウム９５％メタノール水溶液
・測定用サンプルインジェクション量：５μＬ
・移動相Ａ／Ｂのグラジエント条件
【表４】
0006713723.tif 000005
なお、表中、％は容量％を示す。
・流速：０．３５ｍＬ／分
・分析時間：１７分
・ＭＳ機器：４０００ＱＴＲＡＰ，ＬＣＴ  Ｐｒｅｍｉｅｒ
・極性：ネガティブ
［ＭＳ測定条件１］
・ＭＳ機器：４０００ＱＴＲＡＰ
・極性：ポジティブ，ネガティブ
・スキャンタイプ：ＭＲＭ
・イオン化方法：ＥＳＩ(エレクトロスプレーイオン)法
・ソース温度：４００℃
［ＭＳ測定条件２］
・ＭＳ機器：ＬＣＴ  Ｐｒｅｍｉｅｒ
・極性：ポジティブ
・アナライザー：Ｖモード
・キャピラリー：２３００Ｖ
・サンプルコーン：３０Ｖ
・脱溶媒温度：３５０℃
・ソース温度：１２０℃
・コーンガス流量：５０Ｌ／ｈ
・脱溶媒ガス流量：８００Ｌ／ｈ
［ＭＳ測定条件３］
・ＭＳ機器：ＬＣＴ  Ｐｒｅｍｉｅｒ
・極性：ネガティブ
・アナライザー：Ｖモード
・キャピラリー：２２００Ｖ
・サンプルコーン：７０Ｖ
・脱溶媒温度：２００℃
・ソース温度：１００℃
・コーンガス流量：５０Ｌ／ｈ
・脱溶媒ガス流量：２００Ｌ／ｈ
【００５０】
（７）ＩＢＳ患者及び健常者の消化器症状及びストレス等の評価
最初にＩＢＳ症状の重症度をＩＢＳ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ（ＩＢＳ−ＳＩ：Aliment Pharmacol Ther 1997; 11: pp.395-402を参照）、ＩＢＳ症状の性質をＳｅｌｆ−ｒｅｐｏｒｔｅｄ  ＩＢＳ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ（ＳＩＢＳＱ：Journal of Clinical Gastroenterology, 2008, Vo.42, No.9, pp.1010-6を参照）、全般的消化器症状をＧａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｓｙｍｐｔｏｍｓ  Ｒａｔｉｎｇ  Ｓｃａｌｅ（ＧＳＲＳ：Digestive Diseases and Sciences, 1988, Vol.33, No.2, pp.129-134を参照）、ＩＢＳに関係する疾患特異的ＱＯＬをＩＢＳ−ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  ｌｉｆｅ（ＩＢＳ−ＱＯＬ：Digestive Diseases and Sciences, 1998, Vol.43, No.2, pp.400-411を参照）、全般的ＱＯＬをＭｅｄｉｃａｌ  Ｏｕｔｃｏｍｅ  Ｓｔｕｄｙ  ３６−ｉｔｅｍ  Ｓｈｏｒｔ  Ｆｏｒｍ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｕｒｖｅｙ（ＳＦ−３６：Journal of Clinical Epidemiology, 1998, Vol.51, pp.1045-53を参照）、不安をＳｔａｔｅ  Ｔｒａｉｔ  Ａｎｘｉｅｔｙ  Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ（ＳＴＡＩ：Perceptual and motor skills, Vol.69, pp.611-617を参照）、抑うつをＳｅｌｆ−ｒａｔｉｎｇ  Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｃａｌｅ（ＳＤＳ：Biopsychosocial Medicine, 2008, Vol.2, No.20、及びZung WW: A Self-Rating Depression Scale. Arch Gen Psychiatry 1965, 12:63-70を参照）、自覚ストレスをＰｅｒｃｅｉｖｅｄ  Ｓｔｒｅｓｓ  Ｓｃａｌｅ（ＰＳＳ：PLOS one, 2012, Vol.7, No.9, e42450、及びCohen S, Kamarck T, Mermelstein R (1983) A global measure of perceived stress. J Health Soc Behav 24: pp.385-396を参照）にて測定した。次いで、ＩＢＳ患者及び健常者ともに症状ダイアリーにて便通回数や腹痛等を記録し、ＩＢＳ症状と自覚ストレスを２８日間定量化した。ＩＢＳ症状は、腹痛、腹部不快感、腹部膨満感、残便感、便意切迫感、いきみ、以上のそれぞれを１〜７のＯｒｄｉｎａｔｅ  ｓｃａｌｅ、便性状スケールであるＢｒｉｓｔｏｌ  Ｓｔｏｏｌ  Ｆｏｒｍ  Ｓｃａｌｅ（Gastroenterology, 1997, Vol.32, No.9, pp.920-924を参照）を１〜７型、排便頻度を実数で評価した。自覚ストレスは１〜７のｏｒｄｉｎａｔｅ  ｓｃａｌｅで評価した。中間の症状悪化日もしくは不変日にＩＢＳ−ＳＩとＰＳＳを再検した。更に、最終日にＩＢＳ−ＳＩ、ＳＩＢＳＱ、ＧＳＲＳ、ＩＢＳ−ＱＯＬ、ＳＦ−３６、ＳＴＡＩ、ＳＤＳ、ＰＳＳ陰性情動を測定した。それぞれの評価項目について、ＩＢＳ患者と健常者を比較した。
［結果］健常者に比較し、ＩＢＳ患者は基線値のＩＢＳ−ＳＩ，ＳＩＢＳＱ、ＧＳＲＳ、ＩＢＳ−ＱＯＬ、ＳＦ−３６、ＳＤＳ、ＳＴＡＩが有意に高く（ｐ＜０．０１）、腹痛も有意に高かった（ｐ＜０．０１）。
【００５１】
（８）メタボローム解析
ＬＣ／ＭＳ（４０００ＱＴＲＡＰ）分析によって得られたクロマトグラムデータは、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳデータ解析ソフトＡｎａｌｙｓｔ  １．４．２（ＡＢ  ＳＣＩＥＸ社）を用いて、ヒト尿中に認められた代謝物を特定し、ピーク面積値又はピーク強度を算出した。そして、これらのデータから、各代謝物ピークの質量数、溶出時間、ピークエリア値、ピーク強度値、代謝物名の情報を、Ｏｆｆｉｃｅ Ｅｘｃｅｌ ２００７（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ社）に抽出した。
ＬＣ／ＭＳ（ＬＣＴ  Ｐｒｅｍｉｅｒ）分析によって得られたクロマトグラムデータは、２ＤＩＣＡＬ（三井情報株式会社）を用いて、２ＤＩＣＡＬ読み取り用データに変換し、全データのピークアライメントを行った。また、各測定極性モード（ポジティブ及びネガティブ）、精密質量数、溶出時間の情報を基に、代謝物ピークの同定を行った。そして、これらのデータから、各代謝物ピークの精密質量数、溶出時間、ピークエリア値、ピーク強度値をＯｆｆｉｃｅ Ｅｘｃｅｌ ２００７に抽出した。
上記２種類のＭＳ機器から得られたデータは、それぞれアレイ解析ソフトＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓｔ  Ｐｒｏ  Ａｎａｌｙｓｔ  Ｖｅｒ５．１．４（Ｇｅｎｅｄａｔａ社）及びＯｆｆｉｃｅ Ｅｘｃｅｌ ２００７に入力し、健常者及びＩＢＳ患者間での各代謝物のピークエリア値やピーク強度値の変動比及びｐ値を算出した。
【００５２】
（９）統計解析
上記で得られたデータは統計解析ソフト、ＳＰＳＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ２１（ＩＢＭ社）にて解析した。統計は健常者全員及びＩＢＳ患者全員、また、男女別での健常者及びＩＢＳ患者間等で，Ｗｅｌｃｈのｔ検定を行い、ｐ値が０．２未満、両群間で１．５倍以上又は０．６７倍以下のシグナル値の変動比を示したピークを、バイオマーカー候補として、１０２ピークを選別した。得られた１０２ピークについて、Ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ  Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  Ｅｑｕａｔｉｏｎ（ＧＥＥ；一般化推定方程式）を適用し、群間差あるいは群間−時間変動交互作用がいずれもｐ＜０．０５を満たして有意なピークを抽出した。
【００５３】
ＩＢＳ症状を従属変数、年齢、性別、ＰＳＳ、薬剤、Ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ  Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  Ｅｑｕａｔｉｏｎにより有意なピークであった４４ピークを独立変数とし、ステップワイズ法に基づいて重回帰分析を行った。
統計解析で得られた１０２ピークに，キノリン酸／キヌレン酸比、キノリン酸／キサンツレン酸比を含めて，ＧＥＥ（ＳＰＳＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ２１（ＩＢＭ社））を適用し、群間差あるいは群間−時間変動交互作用がいずれもｐ＜０．０５を満たしている有意なピーク及び比を抽出した。
【００５４】
［結果］
その結果、代謝物として公知の化合物のうち、ＩＢＳのバイオマーカーとして、下記表５に示す化合物が見出された。また、表５で示した２９種のバイオマーカーが、ＩＢＳの男性患者及び女性患者でのどのように変動するかについて、表６に示した。また、キノリン酸／キヌレン酸比、キノリン酸／キサンツレン酸比の変動を健常者とＩＢＳ患者とで比較した結果を図１及び図２に示した。
【００５５】
【表５】
0006713723.tif 000006
【００５６】
【表６】
0006713723.tif 000007
【００５７】
また、ＩＢＳのバイオマーカーとして、下記表７、８及び９に示す通り、合計８２種の構造未知の化合物が見出された。表７、８及び９で示した８２種のバイオマーカーが、ＩＢＳの男性患者及び女性患者でのどのように変動するかについて、表１０、１１、及び１２に示した。なお、表７〜９の中の元素組成は、データ解析ソフトにより提示された、ＭＳの測定値から推定される候補組成式である。
【００５８】
【表７】
0006713723.tif 000008
【００５９】
【表８】
0006713723.tif 000009
【００６０】
【表９】
0006713723.tif 000010
【００６１】
【表１０】
0006713723.tif 000011
【００６２】
【表１１】
0006713723.tif 000012
【００６３】
【表１２】
0006713723.tif 000013
【産業上の利用可能性】
【００６４】
本発明のバイオマーカーによれば、非侵襲的かつ簡便な方法で迅速かつ正確にＩＢＳの診断を行うことができる。また、本発明によれば、ＩＢＳ罹患の有無の判定、ＩＢＳの重症度の判定、ＩＢＳの型の判定、ＩＢＳ治療の要否の判定、及びＩＢＳ治療薬の薬効確認に有用なバイオマーカーを提供することができる。さらに、本発明によれば、ＩＢＳの治療薬の創薬におけるスクリーニング方法、ＩＢＳ患者に適した治療薬の選別方法、ＩＢＳ診断薬、ＩＢＳ診断用キット、ＩＢＳ診断方法を提供することができる。
【図１】
0006713723.tif 000014
【図２】
0006713723.tif 000015