(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト可変領域及びマウス定常領域を含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、又はＴＣＲの機能的変異体であって、該ＴＣＲ及び機能的変異体が、配列番号３のα鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１アミノ酸配列、配列番号４のα鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号５のα鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号６のβ鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７のβ鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び、配列番号８のβ鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）１６  Ｅ７１１−１９に対する抗原特異性を有する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、又はＴＣＲの機能的変異体。
【請求項２】
配列番号３のα鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号４のα鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号５のα鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号６のβ鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７のβ鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び、配列番号８のβ鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）１６  Ｅ７１１−１９に対する抗原特異性を有する、単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）。
【請求項３】
ヒト定常領域を含む、請求項２の単離又は精製されたＴＣＲ。
【請求項４】
（ａ）配列番号９及び
（ｂ）配列番号１０（２位のＸはＡｌａ又はＧｌｙである）
のアミノ酸配列を含む、請求項１のＴＣＲ若しくは機能的変異体、又は請求項２又は３の単離若しくは精製されたＴＣＲ。
【請求項５】
（ａ）配列番号１６（
（ｉ）４８位のＸはＴｈｒ又はＣｙｓであり；
（ｉｉ）１１２位のＸは、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐであり；
（ｉｉｉ）１１４位のＸは、Ｍｅｔ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐであり；及び
（ｉｖ）１１５位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐである）；並びに
（ｂ）配列番号１８（５６位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓである）のアミノ酸配列を含む、請求項１又は４のＴＣＲ若しくは機能的変異体、又は請求項２〜４のいずれか１項の単離若しくは精製されたＴＣＲ。
【請求項６】
（ａ）配列番号１４、１７、２１、２４、及び２５のいずれか１；及び
（ｂ）配列番号１５、１９、及び２３のいずれか１
のアミノ酸配列を含む、請求項１、４及び５のいずれか１項のＴＣＲ若しくは機能的変異体、又は請求項２〜５のいずれか１項の単離若しくは精製されたＴＣＲ。
【請求項７】
（ａ）（ｉ）配列番号１２、（ｉｉ）配列番号２２、（ｉｉｉ）配列番号２６、（ｉｖ）配列番号９及び２４、（ｖ）配列番号９及び１６、又は（ｖｉ）配列番号９及び１７；並びに
（ｂ）（ｉ）配列番号１０及び１８、又は（ｉｉ）配列番号１３、２０及び２７のいずれか１
のアミノ酸配列を含む、請求項１及び４〜６のいずれか１項のＴＣＲ若しくは機能的変異体、又は請求項２〜６のいずれか１項の単離若しくは精製されたＴＣＲ。
【請求項８】
配列番号２９又は３０のアミノ酸配列を含む、請求項１及び４〜７のいずれか１項のＴＣＲ若しくは機能的変異体、又は請求項２〜７のいずれか１項の単離若しくは精製されたＴＣＲ。
【請求項９】
（ｉ）請求項１及び３〜８のいずれか１項のＴＣＲ若しくは機能的変異体、又は（ｉｉ）請求項２〜８のいずれか１項の単離若しくは精製されたＴＣＲ、の機能的部分を含む、単離又は精製されたポリペプチドであって、機能的部分が、配列番号３のα鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号４のα鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号５のα鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号６のβ鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７のβ鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び、配列番号８のβ鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項１０】
請求項９に記載のポリペプチドであって、機能的部分が、（ａ）配列番号９、（ｂ）配列番号１０、又は（ｃ）配列番号９及び１０のアミノ酸配列を含み、配列番号１０の２位のＸがＡｌａ又はＧｌｙである、ポリペプチド。
【請求項１１】
請求項９又は１０に記載のポリペプチドであって、機能的部分が
（ａ）（ｉ）配列番号９及び２４；（ｉｉ）配列番号９及び１７；（ｉｉｉ）配列番号９及び１６；（ｉｖ）配列番号１０及び１８；若しくは（ｖ）配列番号１２、１３、２０、２２、２６、２７、２９及び３０のいずれか１；
（ｂ）配列番号１２及び１３；
（ｃ）配列番号２０及び２２；
（ｄ）配列番号２６及び２７；
（ｅ）配列番号９、２４、及び２７；
（ｆ）配列番号９、１７及び２０；又は
（ｇ）配列番号９、１０、１６及び１８、
のアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項１２】
請求項９の、少なくとも１のポリペプチドを含む、単離若しくは精製されたタンパク質、又は請求項１０若しくは１１の、少なくとも１のポリペプチドを含むタンパク質。
【請求項１３】
配列番号３のα鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号４のα鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号５のα鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号６のβ鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７のβ鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び、配列番号８のβ鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含む、単離又は精製されたタンパク質。
【請求項１４】
配列番号９のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖、及び
配列番号１０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖
を含み、
（ｉ）配列番号１０の２位のＸはＡｌａ又はＧｌｙであり、且つ
（ｉｉ）配列番号９及び１０（配列番号１０の２位のＸはＧｌｙである）を含むタンパク質は単離又は精製されている、請求項１２又は１３のタンパク質。
【請求項１５】
（ｉ）配列番号１２、（ｉｉ）配列番号２２、（ｉｉｉ）配列番号２６、（ｉｖ）配列番号９及び１６、（ｖ）配列番号９及び１７、又は（ｖｉ）配列番号９及び２４、のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖、並びに
（ｉ）配列番号１０及び１８、又は（ｉｉ）配列番号１３、２０及び２７のいずれか１、のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含み、配列番号１２及び１３を含むタンパク質は単離又は精製されている、請求項１２〜１４のいずれか１項のタンパク質。
【請求項１６】
配列番号２９又は３０を含む、タンパク質。
【請求項１７】
タンパク質が融合タンパク質である、請求項１２〜１６のいずれか１項のタンパク質。
【請求項１８】
（ａ）請求項１及び３〜８のいずれか１項に記載のＴＣＲ若しくは機能的変異体、請求項１０若しくは１１に記載のポリペプチド、又は請求項１２及び１４〜１７のいずれか１項に記載のタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸、或いは
（ｂ）請求項２〜８のいずれか１項に記載のＴＣＲ、請求項９〜１１のいずれか１項に記載のポリペプチド、又は請求項１２〜１７のいずれか１項に記載のタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、単離又は精製された核酸。
【請求項１９】
配列番号３１、配列番号３２、又は配列番号３１及び３２の両方のヌクレオチド配列を含む、請求項１８に記載の単離又は精製された核酸。
【請求項２０】
（ａ）配列番号３３〜３６のいずれか１、（ｂ）配列番号３３及び３４の両方、又は（ｃ）配列番号３５及び３６の両方のヌクレオチド配列を含む、請求項１８に記載の核酸。
【請求項２１】
請求項１８〜２０のいずれか１項の核酸を含む、組換え発現ベクター。
【請求項２２】
ベータ鎖をコードするヌクレオチド配列が、アルファ鎖をコードするヌクレオチド配列の５’に位置する、請求項２１に記載の組換え発現ベクター。
【請求項２３】
配列番号３７、３８、３９又は４０を含む、請求項２１又は２２に記載の組換え発現ベクター。
【請求項２４】
請求項２１〜２３のいずれか１項の組換え発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項２５】
細胞がヒトのである、請求項２４に記載の宿主細胞。
【請求項２６】
請求項２４又は２５の、少なくとも１の宿主細胞を含む、細胞集団。
【請求項２７】
請求項１及び３〜８のいずれか１項に記載のＴＣＲ若しくは機能的変異体、請求項２〜８のいずれか１項の単離若しくは精製されたＴＣＲ、請求項９〜１１のいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項１２〜１７のいずれか１項に記載のタンパク質、請求項１８〜２０のいずれか１項の核酸、請求項２１〜２３のいずれか１項の組換え発現ベクター、請求項２４若しくは２５の宿主細胞、又は、請求項２６の細胞集団、及び医薬的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
【請求項２８】
哺乳動物における状態の存在を検出する方法であって：
（ａ）哺乳動物からの１以上の細胞を含む試料と、作用物質とを接触させる工程であって、ここで、該試料の該１以上の細胞が、ＨＬＡ−Ａ２により提示されたＨＰＶ１６  Ｅ７１１−１９を発現しており、且つ、該作用物質が、請求項１及び３〜８のいずれか１項に記載のＴＣＲ若しくは機能的変異体、請求項２〜８のいずれか１項の単離若しくは精製されたＴＣＲ、請求項９〜１１のいずれか１項に記載のポリペプチド、又は、請求項１２〜１７のいずれか１項に記載のタンパク質であり、該接触によって、ＨＬＡ−Ａ２によって提示されたＨＰＶ１６  Ｅ７１１−１９と該作用物質とを含む複合体を形成させる工程、及び
（ｂ）複合体を検出する工程（複合体の検出が、哺乳動物における状態の存在を表す）を含み、状態が、がん、ＨＰＶ１６感染、又はＨＰＶ陽性の前がん状態である、方法。
【請求項２９】
請求項１及び３〜８のいずれか１項に記載のＴＣＲ若しくは機能的変異体、請求項２〜８のいずれか１項の単離若しくは精製されたＴＣＲ、請求項９〜１１のいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項１２〜１７のいずれか１項に記載のタンパク質、請求項１８〜２０のいずれか１項の核酸、請求項２１〜２３のいずれか１項の組換え発現ベクター、請求項２４若しくは２５の宿主細胞、又は請求項２６の細胞集団を含む、哺乳動物における状態の治療又は予防用医薬組成物であって、状態が、がん、ＨＰＶ１６感染、又はＨＰＶ陽性の前がん状態である、医薬組成物。
【請求項３０】
状態が、子宮頸部、口腔咽頭、肛門、肛門管、肛門直腸、膣、外陰又は陰茎のがんである、請求項２９の医薬組成物。
【請求項３１】
状態がＨＰＶ１６陽性がんである、請求項２９又は３０の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本特許出願は、２０１４年５月２９日出願の米国仮特許出願第６２／００４，３３５号（参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる）の利益を主張する。
【０００２】
電子提出された物件の参照による組み込み
本明細書と同時提出され、且つ、以下の通り識別されるコンピューター可読のヌクレオチド／アミノ酸の配列表が、本明細書中、参照によりその全体が組み込まれる：２０１５年５月２８日付ファイル名「７２０９４０＿ＳＴ２５．ＴＸＴ」、７８，６０７バイトのＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイル１件。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
例えば、子宮頸がん等のいくつかのがんのタイプの主な原因は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染である。化学療法等の治療における進歩にもかかわらず、ＨＰＶ関連のがんを含む多くのがんの予後は不良であり得る。従って、がん、特にＨＰＶ関連のがんの、さらなる治療に関する、満たされていないニーズが存在する。
【発明の概要】
【０００４】
発明の要旨
本発明の一実施形態は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）１６  Ｅ７に対する抗原特異性を有する、単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供する。
【０００５】
本発明の別の実施形態は、ヒト可変領域及びマウス定常領域を含むＴＣＲ、又は該ＴＣＲの機能的変異体であって、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）１６  Ｅ７に対する抗原特異性を有する、ＴＣＲ及び機能的変異体を提供する。
【０００６】
本発明は、関連するポリペプチド及びタンパク質並びに関連する核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞及び細胞集団を更に提供する。本発明のＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）に関連する抗体、又はその抗原結合部分、及び医薬組成物が、本発明によって更に提供される。
【０００７】
哺乳動物における状態の存在を検出する方法、及び、哺乳動物における状態の治療又は予防の方法であって、状態が、がん、ＨＰＶ１６感染、又はＨＰＶ陽性の前がん状態である、方法が、本発明によって更に提供される。哺乳動物における状態の存在を検出する本発明の方法は、（ｉ）該状態の細胞を含む試料と、本明細書に記載される本発明のＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、宿主細胞集団、抗体若しくはその抗原結合部分、又は医薬組成物のいずれかとを接触させることによって、複合体を形成すること、及び（ｉｉ）複合体を検出することを含み、該複合体の検出は、哺乳動物における状態の存在を表し、状態は、がん、ＨＰＶ１６感染、又はＨＰＶ陽性の前がん状態である。
【０００８】
哺乳動物における状態を治療又は予防する本発明の方法は、哺乳動物に、本明細書に記載されるＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれか、本明細書に記載されるＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む、任意の核酸若しくは組換え発現ベクター、又は、本明細書に記載されるＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれかをコードする組換えベクターを含む任意の宿主細胞若しくは宿主細胞集団を、哺乳動物における状態を治療又は予防するのに有効な量で投与することを含み、状態は、がん、ＨＰＶ１６感染、又はＨＰＶ陽性の前がん状態である。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、キメラ抗ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲ（陰影の付いた棒）をコードするヌクレオチド配列で形質導入した末梢血リンパ球（ＰＢＬ）によって、標的の、ＨＰＶ１６  Ｅ６２９−３８ペプチドでパルスした２９３−Ａ２細胞、ＨＰＶ１６  Ｅ７１１−１９ペプチドでパルスした２９３−Ａ２細胞、ＨＰＶ１６  Ｅ６をコードするプラスミドで形質導入した６２４細胞、ＨＰＶ１６  Ｅ７をコードするプラスミドで形質導入した６２４細胞、ＳＣＣ１５２細胞、ＳＣＣ９０細胞、ＣａＳｋｉ細胞、Ａｌｂ細胞、Ｐａｎｃ１細胞、又はＳｉＨａ細胞との共培養に際して分泌されたインターフェロン（ＩＦＮ）−γ（ｐｇ／ｍＬ）を示す棒グラフである。各標的細胞によるＨＬＡ−Ａ２及びＨＰＶ−１６  Ｅ７の発現を図１の下部に示す（「＋」は発現について陽性であることを示し、「−」は発現について陰性であることを示す）。非形質導入細胞（陰影のない棒）をネガティブコントロールとして用いた。
【図２】図２Ａ〜２Ｒは、以下：ＨＬＡ−Ａ２／Ｅ７１１−１９４量体＋／ｍ  ＴＲＢＣ−（左上象限）、ＨＬＡ−Ａ２／Ｅ７１１−１９４量体＋／ｍ  ＴＲＢＣ＋（右上象限）、ＨＬＡ−Ａ２／Ｅ７１１−１９４量体−／ｍ  ＴＲＢＣ−（左下象限）及びＨＬＡ−Ａ２／Ｅ７１１−１９４量体−／ｍ  ＴＲＢＣ＋（右下象限）を発現した、表１に記載の組換え発現ベクターの１つで形質導入した（Ｂ〜Ｉ及びＫ〜Ｒ）、第１ドナー（Ａ〜Ｉ）又は第２ドナー（Ｊ〜Ｒ）からの細胞のパーセンテージを示すドットプロットである。各象限についての百分率の数値を、各ドットプロットの上に提供する。非形質導入細胞（Ａ及びＪ）をネガティブコントロールとして用いた。
【図３】図３Ａ及び３Ｂは、表１に記載の組換え発現ベクターの１つで形質導入したドナー１（Ａ）又はドナー２（Ｂ）由来のエフェクター細胞による、標的の６２４、ＣａＳｋｉ、ＳＣＣ９０、又はＳＣＣ１５２細胞との共培養に際してのＩＦＮ−γ分泌を示すグラフである。各標的細胞株について、陰影の付いた棒（左から右へ）は、以下のベクター：キメラ抗ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲ（α／β）、Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（α／β）、ＬＶＬ改変ＴＣＲ（α／β）、ＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（α／β）、キメラ抗ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲ（β／α）、Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）、ＬＶＬ改変ＴＣＲ（β／α）、又はＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）で形質導入したエフェクター細胞に対応する。非形質導入細胞（陰影のない棒）をネガティブコントロールとして用いた。
【図４】図４は、ＬＶＬ改変ＴＣＲ（β／α）をコードするレトロウイルスベクター（配列番号３７）で形質導入したＰＢＬ（陰影の付いた棒）によって、標的の、ＨＰＶ１６  Ｅ６２９−３８ペプチドでパルスした２９３−Ａ２細胞、ＨＰＶ１６  Ｅ７１１−１９ペプチドでパルスした２９３−Ａ２細胞、ＨＰＶ１６  Ｅ６をコードするプラスミドで形質導入した６２４細胞、ＨＰＶ１６  Ｅ７をコードするプラスミドで形質導入した６２４細胞、ＳＣＣ１５２細胞、ＳＣＣ９０細胞、ＣａＳｋｉ細胞、Ａｎｅ細胞、Ａｌｂ細胞、Ｐａｎｃ１細胞、又はＳｉＨａ細胞との共培養に際して、分泌されたＩＦＮ−γ（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。各標的細胞によるＨＬＡ−Ａ２及びＨＰＶ−１６  Ｅ７の発現を図４の下部に示す（「＋」は発現について陽性を示し、「−」は発現について陰性を示す）。非形質導入細胞（陰影のない棒）を、ネガティブコントロールとして用いた。
【図５】図５は、ＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）をコードするレトロウイルスベクター（配列番号３８）で形質導入したＰＢＬによって、抗体なし（黒色の棒）での、又は抗ＭＨＣクラスＩ（灰色の棒）抗体若しくは抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体（陰影のない棒）の存在下での、標的の６２４細胞、ＳＣＣ９０細胞、又はＣａＳｋｉ細胞との共培養に際して、分泌されたＩＦＮ−γ（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。コントロールとして、ＰＢＬにＤＭＦ５  ＴＣＲで形質導入し、６２４細胞と、又は抗ＭＡＧＥ  Ａ３  ＴＣＲで形質導入し、５２６−ＣＩＩＴＡ細胞と、抗体なしで、又は抗ＭＨＣクラスＩ抗体若しくは抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体の存在下で、共培養した。
【図６】図６Ａ〜６Ｄは、ＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）をコードするレトロウイルスベクター（配列番号３８）で形質導入したエフェクター細胞（四角）と、種々のエフェクター：標的比で共培養した標的細胞ＣａＳｋｉ（Ａ）、ＳＣＣ９０（Ｂ）、ＳＣＣ１５２（Ｃ）、又は６２４細胞（Ｄ）の特異的溶解（％）を示すグラフである。非形質導入細胞（丸）をネガティブコントロールとして用いた。
【図７】図７Ａ及び７Ｂは、ＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）（配列番号３８）（陰影の付いた棒）又は抗ＨＰＶ１６  Ｅ６  ＴＣＲ  ＤＣＡ２Ｅ６（陰影のない棒）をコードするレトロウイルスベクターで形質導入したＰＢＬによって、様々な濃度のＨＰＶ１６  Ｅ７１１−１９ペプチド（Ａ）又はＨＰＶ１６  Ｅ６２９−３８ペプチド（Ｂ）でパルスした標的細胞との共培養に際して分泌されたＩＦＮ−γ（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図８Ａ】図８Ａは、ＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）（配列番号３８）（黒色の棒）又はＤＣ２Ｅ６  ＴＣＲ（灰色の棒）をコードするレトロウイルスベクターで形質導入したＰＢＬによって、標的の６２４細胞、Ｃａｓｋｉ細胞、ＳＣＣ９０細胞、又はＳＣＣ１５２細胞との共培養に際して分泌されたＩＦＮ−γ（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。非形質導入細胞（陰影のない棒）をネガティブコントロールとして用いた。
【図８Ｂ】図８Ｂは、Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）（黒色の棒）又はＤＣＡ２Ｅ６  ＴＣＲ（灰色の棒）をコードするレトロウイルスベクターで形質導入したＰＢＬによって、標的の、ＨＰＶ１６  Ｅ６２９−３８ペプチドでパルスした２９３−Ａ２細胞、ＨＰＶ１６  Ｅ７１１−１９ペプチドでパルスした２９３−Ａ２細胞、ＳＣＣ１５２細胞、ＳＣＣ９０細胞、ＣａＳｋｉ細胞、Ａｎｅ細胞、Ａｌｂ細胞、Ｐａｎｃ１細胞、又はＳｉＨａ細胞との共培養に際して分泌されたＩＦＮ−γ（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。非形質導入細胞（陰影のない棒）をネガティブコントロールとして用いた。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
発明の詳細な説明
本発明の実施形態は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）１６  Ｅ７に対する抗原特異性を有する、単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供する。
【００１１】
ＨＰＶ１６は、悪性腫瘍と最も一般的に関連しているＨＰＶのサブタイプである。特定の理論又はメカニズムには縛られないが、ＨＰＶ１６は、少なくとも部分的にＲｂの不活性化を介して、細胞分裂周期においてがん細胞を活性に保つがんタンパク質Ｅ７の作用を介してがんを引き起こすと考えられている。ＨＰＶ１６  Ｅ７は、がん細胞で構成的に発現し、正常な未感染ヒト組織では発現しない。ＨＰＶ１６  Ｅ７は、子宮頸部、口腔咽頭部、肛門、肛門管、肛門直腸、膣、外陰部、陰茎のがんが挙げられるが、これらに限定されない様々なヒトのがんで発現する。
【００１２】
本発明のＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は、任意のＨＰＶ１６のＥ７タンパク質、ポリペプチド又はペプチドに対する抗原特異性を有し得る。本発明の実施形態においては、ＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は、配列番号１、を含むか、からなるか、又はから実質的になる、ＨＰＶ１６  Ｅ７タンパク質に対する抗原特異性を有する。本発明の好ましい実施形態においては、ＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は、ＹＭＬＤＬＱＰＥＴ（配列番号２）、を含むか、からなるか、又はから実質的になる、ＨＰＶ１６  Ｅ７１１−１９ペプチドに対する抗原特異性を有する。
【００１３】
本発明の一実施形態においては、本発明のＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ依存的様態でＨＰＶ１６  Ｅ７を認識することができる。本明細書で用いる場合、「ＭＨＣクラスＩ依存的様態」とは、ＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）が、ＭＨＣクラスＩ分子との関連の中で、ＨＰＶ１６  Ｅ７への結合に際し免疫反応を引き起こすことを意味する。ＭＨＣクラスＩ分子は、当該技術分野で公知の任意のＭＨＣクラスＩ分子（例、ＨＬＡ−Ａ分子）であり得る。本発明の好ましい実施形態においては、ＭＨＣクラスＩ分子は、ＨＬＡ−Ａ２分子である。
【００１４】
本発明のＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は、養子細胞移入のために用いられる細胞により発現する場合を含め、多くの利点を提供する。特定の理論又はメカニズムには縛られないが、ＨＰＶ１６  Ｅ７は、複数のタイプのがんのＨＰＶ１６感染細胞で発現するので、本発明のＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は、好都合なことに、複数のタイプの、ＨＰＶ１６に関連するがんの細胞を破壊する能力を提供し、従って、複数のタイプの、ＨＰＶ１６に関連するがんを治療又は予防すると考えられている。更に、特定の理論又はメカニズムには縛られないが、ＨＰＶ１６  Ｅ７タンパク質は、がん細胞でのみ発現するので、本発明のＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は、好都合なことに、正常で非がん性の細胞の破壊を最小限に抑えるか、又は排除しながら、がん細胞の破壊を標的にし、それによって、毒性を、例えば、最少化又は、除去することによって、低減すると考えられている。その上、本発明のＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は、好都合なことに、例えば、化学療法単独、手術、又は放射線等の他のタイプの治療により反応しないＨＰＶ陽性がんの治療又は予防に成功し得る。更に、本発明のＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は、好都合なことに、未操作の腫瘍細胞（例、インターフェロン（ＩＦＮ）−γで処理されていない、ＨＰＶ１６  Ｅ７及びＨＬＡ−Ａ２の一方又は両方をコードするベクターでトランスフェクトされていない、Ｅ７１１−１９ペプチドでパルスされていない、又はそれらの組み合わせの、腫瘍細胞）を認識する能力をもたらし得る、ＨＰＶ１６  Ｅ７の非常に活発な認識をもたらす。
【００１５】
フレーズ「抗原特異性」は、本明細書で用いる場合、ＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）が、ＨＰＶ１６  Ｅ７に、高い結合活性をもって、特異的に結合でき、且つこれらを免疫学的に認識できることを意味する。低濃度のＨＰＶ１６  Ｅ７ペプチド（例、約０．０５ｎｇ／ｍＬ〜約５ｎｇ／ｍＬ、０．０５ｎｇ／ｍＬ、０．１ｎｇ／ｍＬ、０．５ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ、又は５ｎｇ／ｍＬ）でパルスされた、抗原陰性のＨＬＡ−Ａ２＋標的細胞と共培養した際、ＴＣＲ（又はその機能的部分又は機能的変異体）を発現するＴ細胞が、少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ以上（例、２００ｐｇ／ｍＬ以上、３００ｐｇ／ｍＬ以上、４００ｐｇ／ｍＬ以上、５００ｐｇ／ｍＬ以上、６００ｐｇ／ｍＬ以上、７００ｐｇ／ｍＬ以上、１０００ｐｇ／ｍＬ以上、５，０００ｐｇ／ｍＬ以上、７，０００ｐｇ／ｍＬ以上、１０，０００ｐｇ／ｍＬ以上、又は２０，０００ｐｇ／ｍＬ以上）のＩＦＮ−γを分泌する場合、例えば、ＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は、ＨＰＶ１６  Ｅ７に対して「抗原特異性」を有するとみなされ得る。代替的に、又は追加的に、低濃度のＨＰＶ１６  Ｅ７ペプチドでパルスされた、抗原陰性のＨＬＡ−Ａ２＋標的細胞と共培養した際、ＴＣＲ（又はその機能的部分又は機能的変異体）を発現するＴ細胞が、非形質導入末梢血リンパ球（ＰＢＬ）のＩＦＮ−γバックグラウンドレベルの少なくとも２倍のＩＦＮ−γを分泌する場合、ＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は、ＨＰＶ１６  Ｅ７に対して「抗原特異性」を有するとみなされ得る。本発明のＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）を発現する細胞はまた、より高濃度のＨＰＶ１６  Ｅ７ペプチドでパルスされた抗原陰性のＨＬＡ−Ａ２＋標的細胞と共培養した際、ＩＦＮ−γを分泌し得る。
【００１６】
本発明は、ＴＣＲのアルファ（α）鎖、ＴＣＲのベータ（β）鎖、ＴＣＲのガンマ（γ）鎖、ＴＣＲのデルタ（δ）鎖又はそれらの組み合わせ等の、２のポリペプチド（即ち、ポリペプチド鎖）を含むＴＣＲを提供する。本発明のＴＣＲのポリペプチドは、ＴＣＲがＨＰＶ１６  Ｅ７に対する抗原特異性を有するならば、任意のアミノ酸配列を含み得る。
【００１７】
本発明の一実施形態においては、ＴＣＲは２のポリペプチド鎖を含み、その各々はＴＣＲの相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含むヒト可変領域を含む。本発明の一実施形態においては、ＴＣＲは、配列番号３のアミノ酸配列（α鎖のＣＤＲ１）を含むＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列（α鎖のＣＤＲ２）を含むＣＤＲ２、及び配列番号５のアミノ酸配列（α鎖のＣＤＲ３）を含むＣＤＲ３を含む第１のポリペプチド鎖並びに、配列番号６のアミノ酸配列（β鎖のＣＤＲ１）を含むＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列（β鎖のＣＤＲ２）を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列（β鎖のＣＤＲ３）を含むＣＤＲ３を含む第２のポリペプチド鎖を含む。これに関して、本発明のＴＣＲは、配列番号３〜８からなる群から選択される１以上の任意のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、ＴＣＲは、配列番号３〜５又は配列番号６〜８を含む。特に好ましい実施形態においては、ＴＣＲは、配列番号３〜８のアミノ酸配列を含む。
【００１８】
本発明の一実施形態においては、ＴＣＲは、上記のＣＤＲを含むＴＣＲの可変領域のアミノ酸配列を含み得る。これに関して、ＴＣＲは、配列番号９（ヒトα鎖の可変領域）；配列番号１０（配列番号１０の２位のＸはＡｌａ又はＧｌｙである）（β鎖の可変領域）；配列番号９及び１０の両方（配列番号１０の２位のＸはＡｌａ又はＧｌｙである）；配列番号１１（ヒトβ鎖の可変領域）；又は配列番号９及び１１の両方のアミノ酸配列を含み得る。配列番号１０は、配列番号１０の２位のＸがＧｌｙである場合、配列番号１１に相当する。好ましくは、本発明のＴＣＲは、配列番号９及び１０の両方（配列番号１０の２位のＸはＡｌａである）のアミノ酸配列を含む。
【００１９】
本発明のＴＣＲは、ヒト又はマウス等（例）の、任意の好適な種に由来する定常領域を更に含み得る。本発明の実施形態においては、ＴＣＲは、ヒトの定常領域を更に含む。これに関して、ＴＣＲは、配列番号１４（ヒトα鎖の定常領域）、配列番号１５（ヒトβ鎖の定常領域）、又は配列番号１４及び１５の両方のアミノ酸配列を含み得る。
【００２０】
本発明の実施形態においては、本発明のＴＣＲは、可変領域及び定常領域の組み合わせを含み得る。これに関して、ＴＣＲは、配列番号９（ヒトα鎖の可変領域）及び配列番号１４（ヒトα鎖の定常領域）の両方のアミノ酸配列を含むアルファ鎖；配列番号１１（ヒトβ鎖の可変領域）及び配列番号１５（ヒトβ鎖の定常領域）の両方のアミノ酸配列を含むベータ鎖；配列番号１０（配列番号２の２位のＸはＡｌａ又はＧｌｙである）（β鎖の可変領域）及び配列番号１５（ヒトβ鎖の定常領域）の両方のアミノ酸配列を含むベータ鎖；配列番号９、１１、１４、及び１５の全てのアミノ酸配列；又は配列番号９、１０、１４及び１５の全てのアミノ酸配列を含み得る。
【００２１】
本発明の一実施形態においては、本発明のＴＣＲは、ＴＣＲのα鎖及びＴＣＲのβ鎖を含み得る。本発明のＴＣＲのα鎖及びβ鎖のそれぞれは、独立に、任意のアミノ酸配列を含み得る。これに関して、本発明のＴＣＲのα鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み得る。このタイプのα鎖は、ＴＣＲの任意のβ鎖と対になり得る。これに関して、本発明のＴＣＲのβ鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み得る。従って、本発明のＴＣＲは、配列番号１２、配列番号１３、又は配列番号１２及び１３の両方のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、本発明のＴＣＲは、配列番号１２及び１３の両方のアミノ酸配列を含むヒトＴＣＲである。
【００２２】
本発明の別の実施形態は、ヒト可変領域及びマウス定常領域を含むキメラＴＣＲか、又は該ＴＣＲの機能的変異体であって、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）１６  Ｅ７に対する抗原特異性を有するＴＣＲ及び機能的変異体を提供する。キメラＴＣＲ、又はその機能的変異体は、本明細書中に、本発明の他の態様に関して記載した通りの、いずれかのＣＤＲ領域を含み得る。本発明の別の実施形態においては、キメラＴＣＲ、又はその機能的変異体は、本明細書中に、本発明の他の態様に関して記載した、いずれかの可変領域を含み得る。
【００２３】
本明細書で用いる場合、用語「マウス（ｍｕｒｉｎｅ）」又は「ヒト（ｈｕｍａｎ）」とは、本明細書に記載のＴＣＲ又はＴＣＲの任意の構成要素（例、相補性決定領域（ＣＤＲ）、可変領域、定常領域、アルファ鎖及び／又はベータ鎖）に関する場合、それぞれ、マウス又はヒトに由来するＴＣＲ（又はその構成要素）、すなわち、それぞれ、マウスＴ細胞又はヒトＴ細胞が起源であったか、又はかつてマウスＴ細胞又はヒトＴ細胞により発現されたＴＣＲ（又はその構成要素）を意味する。
【００２４】
本発明の一実施形態においては、本発明のキメラＴＣＲは、マウス定常領域を含む。これに関して、ＴＣＲは、配列番号１７（マウスα鎖の定常領域）、配列番号１９（マウスβ鎖の定常領域）、又は配列番号１７及び１９の両方のアミノ酸配列を含み得る。好ましい実施形態においては、本発明のＴＣＲは、ヒト可変領域及びマウス定常領域の両方を含むキメラＴＣＲである。
【００２５】
本発明の実施形態においては、本発明のキメラＴＣＲは、可変領域及び定常領域の組み合わせを含み得る。これに関して、ＴＣＲは、配列番号９（ヒトα鎖の可変領域）及び配列番号１７（マウスα鎖の定常領域）の両方のアミノ酸配列を含むアルファ鎖；配列番号１１（ヒトβ鎖の可変領域）及び配列番号１９（マウスβ鎖の定常領域）の両方のアミノ酸配列を含むベータ鎖；配列番号１０（配列番号１０の２位のＸはＡｌａ又はＧｌｙである）（β鎖の可変領域）及び配列番号１９（マウスβ鎖の定常領域）の両方のアミノ酸配列を含むベータ鎖；配列番号９、１１、１７及び１９の全てのアミノ酸配列；又は配列番号９、１０、１７及び１９の全てのアミノ酸配列を含み得る。一実施形態においては、本発明のキメラＴＣＲは、配列番号２０を含む全長ベータ鎖を含む。これに関して、ＴＣＲは、配列番号９、１７及び２０の全てを含み得る。
【００２６】
本発明の範囲には、本明細書に記載の本発明のＴＣＲの機能的変異体が含まれる。本明細書で用いる場合、用語「機能的変異体（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｖａｒｉａｎｔ）」とは、親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質と実質的又は顕著な配列同一性又は類似性を有するＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質であって、該機能的変異体がＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質（該機能的変異体はその変異体である）の生物学的活性を保持するものを指す。機能的変異体は、例えば、親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質と類似の（ｓｉｍｉｌａｒ）程度に、同（ｓａｍｅ）程度に、又はより高い程度に、ＨＰＶ１６  Ｅ７（親ＴＣＲが抗原特異性を有するか、又は親ポリペプチド若しくはタンパク質が特異的に結合する）と特異的に結合する能力を保持する、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質（親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質）の変異体を包含する。親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質に関連して、機能的変異体は、親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質に対して、アミノ酸配列において、例えば、少なくとも約３０％、５０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上同一であり得る。
【００２７】
機能的変異体は、例えば、少なくとも１の保存的アミノ酸置換を有する親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。保存的アミノ酸置換は、当該技術分野で公知であり、特定の物理的及び／又は化学的特性を有する１のアミノ酸が、同じ化学的又は物理的特性を有する別のアミノ酸と交換されるアミノ酸置換が挙げられる。例えば、保存的アミノ酸置換は、酸性アミノ酸の、酸性の別のアミノ酸との置換（例、Ａｓｐ又はＧｌｕ）、非極性側鎖を有するアミノ酸の、非極性側鎖を有する別のアミノ酸との置換（例、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｖａｌ等）、塩基性アミノ酸の、塩基性の別のアミノ酸との置換（Ｌｙｓ、Ａｒｇ等）、極性側鎖を有するアミノ酸の、極性側鎖を有する別のアミノ酸との置換（Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ等）等であり得る。
【００２８】
代替的に、又は追加的に、機能的変異体は、少なくとも１の非保存的アミノ酸置換を有する親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。この場合、非保存的アミノ酸置換が、機能的変異体の生物学的活性を妨害又は阻害しないことが好ましい。好ましくは、非保存的アミノ酸置換は、親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質と比較して機能的変異体の生物学的活性が増加するように、機能的変異体の生物学的活性を増強する。
【００２９】
本発明の実施形態においては、機能的変異体は、アルファ鎖又はベータ鎖の定常領域に、１、２、３又は４のアミノ酸置換（複数可）を伴う、本明細書に記載のＴＣＲのいずれかのアミノ酸配列を含む。好ましくは、機能的変異体は、マウス定常領域に、１、２、３、又は４のアミノ酸置換（複数可）を伴う、本明細書に記載のマウス定常領域のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態においては、置換されたアミノ酸配列（複数可）を含むＴＣＲ（又はその機能的部分）は、非置換のアミノ酸配列を含む親ＴＣＲと比較して、好都合なことに、ＨＰＶ１６  Ｅ７＋標的の認識増加、宿主細胞による発現の増加、及び抗腫瘍活性の増大の１以上をもたらす。一般に、ＴＣＲのα鎖及びβ鎖のマウス定常領域の、置換されたアミノ酸配列である配列番号１６及び１８は、それぞれ、マウス定常領域の、置換されていないアミノ酸配列である配列番号１７及び１９の全て又は一部に、それぞれ相当し、配列番号１６は、配列番号１７と比較した場合に、１、２、３又は４のアミノ酸置換（複数可）を有し、配列番号１８は、配列番号１９と比較した場合に、１のアミノ酸置換を有する。これに関して、本発明の実施形態は、（ａ）配列番号１６（アルファ鎖の定常領域）（（ｉ）４８位のＸはＴｈｒ又はＣｙｓ；（ｉｉ）１１２位のＸは、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐ；（ｉｉｉ）１１４位のＸは、Ｍｅｔ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐ；及び（ｉｖ）１１５位のＸは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐである）；並びに（ｂ）配列番号１８（ベータ鎖の定常領域）（５６位のＸはＳｅｒ又はＣｙｓである）のアミノ酸配列を含むＴＣＲの機能的変異体を提供する。本発明の一実施形態においては、配列番号１６を含むＴＣＲの機能的変異体は、配列番号１７（マウスの、アルファ鎖の非置換定常領域）を含まない。本発明の一実施形態においては、配列番号１８を含むＴＣＲの機能的変異体は、配列番号１９（マウスの、ベータ鎖の非置換定常領域）を含まない。
【００３０】
本発明の実施形態においては、置換されたアミノ酸配列は、α鎖及びβ鎖の一方又は両方の定常領域中にシステインの置換を含み、システインが置換されたＴＣＲを提供する。α鎖及びβ鎖中の、対向するシステインは、置換ＴＣＲのα鎖及びβ鎖の定常領域を互いに連結し、ヒトの非置換定常領域又はマウスの非置換定常領域を含むＴＣＲ中には存在しない、ジスルフィド結合をもたらす。これに関して、ＴＣＲの機能的変異体は、配列番号１７の天然のＴｈｒ４８及び配列番号１９の天然のＳｅｒ５６の一方又は両方がＣｙｓで置換されていてもよい、システイン置換キメラＴＣＲである。好ましくは、配列番号１７の天然のＴｈｒ４８及び配列番号１９の天然のＳｅｒ５６の両方がＣｙｓで置換されている。一実施形態においては、システイン置換キメラＴＣＲは、配列番号１６のアミノ酸配列（４８位のＸはＣｙｓであり、１１２位のＸは天然のＳｅｒであり、１１４位のＸは天然のＭｅｔであり、且つ１１５位のＸは天然のＧｌｙである）を含むアルファ鎖定常領域及び配列番号１８のアミノ酸配列（５６位のＸはＣｙｓである）を含むベータ鎖定常領域を含む。好ましくは、システイン置換キメラＴＣＲは、配列番号２４のアミノ酸配列を含むアルファ鎖定常領域及び配列番号２３のアミノ酸配列を含むベータ鎖定常領域を含む。本発明のシステイン置換キメラＴＣＲは、本明細書に記載のＣＤＲ及び／又は可変領域のいずれかに加えて、置換定常領域を含み得る。これに関して、システイン置換キメラＴＣＲは、（ｉ）配列番号３〜５及び２４；（ｉｉ）配列番号９及び２４；（ｉｉｉ）配列番号６〜８及び２３；（ｉｖ）配列番号１０及び２３（配列番号１０の２位のＸはＡｌａ又はＧｌｙである）；（ｖ）配列番号１１及び２３；（ｖｉ）配列番号９及び１６；（ｖｉｉ）配列番号１０及び１８；（ｖｉｉｉ）配列番号１１及び１８；（ｉｘ）配列番号３〜５及び１６；又は（ｘ）配列番号６〜８及び１８のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、システイン置換キメラＴＣＲは、（ｉ）配列番号３〜８及び２３〜２４；（ｉｉ）配列番号９〜１０及び２３〜２４；（ｉｉｉ）配列番号９、１１及び２３〜２４；（ｉｖ）配列番号３〜８、１６及び１８；（ｖ）配列番号９〜１０、１６、及び１８；又は（ｖｉ）配列番号９、１１、１６、及び１８のアミノ酸配列を含む。一実施形態においては、Ｃｙｓ置換キメラＴＣＲは、配列番号２７を含む全長ベータ鎖を含む。これに関して、Ｃｙｓ置換キメラＴＣＲは、配列番号９及び２４；配列番号２７；又は配列番号９、２４、及び２７の全て、を含み得る。
【００３１】
本発明の一実施形態においては、置換アミノ酸配列は、疎水性アミノ酸を含むα鎖及びβ鎖の一方又は両方の定常領域の膜貫通（ＴＭ）ドメインにおける１、２又は３アミノ酸の置換を含み、疎水性アミノ酸置換ＴＣＲ（本明細書中、「ＬＶＬ改変ＴＣＲ」ともいわれる）を提供する。ＴＣＲのＴＭドメインにおける疎水性アミノ酸置換（複数可）は、ＴＭドメインにおける疎水性アミノ酸置換（複数可）を欠くＴＣＲと比較して、ＴＣＲのＴＭドメインの疎水性を増加させ得る。これに関して、ＴＣＲの機能的変異体は、配列番号１７の天然のＳｅｒ１１２、Ｍｅｔ１１４、及びＧｌｙ１１５の１、２又は３つ、が独立してＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐで；好ましくはＬｅｕ、Ｉｌｅ又はＶａｌで、置換され得る、ＬＶＬ改変キメラＴＣＲである。好ましくは、配列番号１７の天然のＳｅｒ１１２、Ｍｅｔ１１４、及びＧｌｙ１１５の３つ全てが、独立して、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐで；好ましくはＬｅｕ、Ｉｌｅ又はＶａｌで、置換され得る。一実施形態においては、ＬＶＬ改変キメラＴＣＲは、配列番号１６のアミノ酸配列（４８位のＸは天然のＴｈｒであり、１１２位のＸはＳｅｒ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐであり、１１４位のＸはＭｅｔ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐであり、１１５位のＸはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐである）を含むアルファ鎖定常領域及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むβ鎖定常領域を含み、配列番号１６を含むＬＶＬ改変キメラＴＣＲは、配列番号１７（マウスの非置換アルファ鎖定常領域）を含まない。好ましくは、ＬＶＬ改変キメラＴＣＲは、配列番号２１のアミノ酸配列を含むアルファ鎖定常領域及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むベータ鎖定常領域を含む。本発明のＬＶＬ改変キメラＴＣＲは、本明細書に記載のＣＤＲ及び／又は可変領域のいずれかに加えて、置換定常領域を含み得る。これに関して、ＬＶＬ改変キメラＴＣＲは、（ｉ）配列番号３〜５及び２１；（ｉｉ）配列番号９及び２１；（ｉｉｉ）配列番号６〜８及び１９；（ｉｖ）配列番号１０及び１９（配列番号１０の２位のＸはＡｌａ又はＧｌｙである）；（ｖ）配列番号１１及び１９；（ｖｉ）配列番号９及び１６；（ｖｉｉ）配列番号３〜５及び１６；（ｘ）配列番号６〜８及び１８；（ｖｉｉｉ）配列番号１０及び１８；又は（ｉｘ）配列番号１１及び１８を含み得る。好ましくは、システイン置換キメラＴＣＲは、（ｉ）配列番号３〜８及び１９及び２１；（ｉｉ）配列番号９〜１０及び１９及び２１；（ｉｉｉ）配列番号９、１１及び１９及び２１；（ｉｖ）配列番号３〜８、１６及び１８；（ｖ）配列番号９〜１０、１６、及び１８；又は（ｖｉ）配列番号９、１１、１６、及び１８のアミノ酸配列を含む。一実施形態においては、ＬＶＬ改変キメラＴＣＲは、配列番号２２のアミノ酸配列を含む全長アルファ鎖及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む全長ベータ鎖を含む。これに関して、ＬＶＬ改変キメラＴＣＲは、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２９、又は配列番号２０及び２２の両方を含み得る。
【００３２】
本発明の一実施形態においては、置換アミノ酸配列は、α鎖及びβ鎖の一方又は両方の定常領域におけるシステイン置換を、α鎖及びβ鎖の一方又は両方の定常領域の膜貫通（ＴＭ）ドメインにおける、１、２又は３アミノ酸の、疎水性アミノ酸との置換（複数可）と組み合わせて含む（本明細書では「システイン置換ＬＶＬ改変ＴＣＲ」ともいわれる）。これに関して、ＴＣＲの機能的変異体は、配列番号１７の天然のＴｈｒ４８がＣｙｓで置換され；配列番号１７の天然のＳｅｒ１１２、Ｍｅｔ１１４、及びＧｌｙ１１５のうち１、２又は３つが、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐで；好ましくはＬｅｕ、Ｉｌｅ又はＶａｌで独立に置換され；且つ配列番号１９の天然のＳｅｒ５６がＣｙｓで置換されている、システイン置換ＬＶＬ改変キメラＴＣＲである。好ましくは、配列番号１７の天然のＳｅｒ１１２、Ｍｅｔ１１４、及びＧｌｙ１１５の３つ全てが、独立して、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐで、好ましくはＬｅｕ、Ｉｌｅ又はＶａｌ、で置換されていてもよい。一実施形態においては、システイン置換ＬＶＬ改変キメラＴＣＲは、配列番号１６（４８位のＸはＣｙｓであり、１１２位のＸはＳｅｒ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐであり、１１４位のＸはＭｅｔ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、又はＴｒｐであり、且つ１１５位のＸはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐである）のアミノ酸配列を含むアルファ鎖定常領域、及び配列番号１８（５６位のＸはＣｙｓである）のアミノ酸配列を含むベータ鎖定常領域を含み、配列番号１６を含むシステイン置換ＬＶＬ改変キメラＴＣＲは、配列番号１７（マウスの非置換アルファ鎖定常領域）を含まない。好ましくは、システイン置換ＬＶＬ改変キメラＴＣＲは、配列番号２５のアミノ酸配列を含むアルファ鎖定常領域及び配列番号２３のアミノ酸配列を含むベータ鎖定常領域を含む。本発明のシステイン置換ＬＶＬ改変キメラＴＣＲは、本明細書に記載のＣＤＲ及び／又は可変領域のいずれかに加えて、置換定常領域を含み得る。これに関して、システイン置換ＬＶＬ改変キメラＴＣＲは、（ｉ）配列番号３〜５及び２５；（ｉｉ）配列番号９及び２５；（ｉｉｉ）配列番号６〜８及び２３；（ｉｖ）配列番号１０及び２３（配列番号１０の２位のＸはＡｌａ又はＧｌｙである）；（ｖ）配列番号１１及び２３；（ｖｉ）配列番号３〜５及び１６；（ｖｉｉ）配列番号９及び１６；（ｖｉｉｉ）配列番号６〜８及び１８；（ｉｘ）配列番号１０及び１８；又は（ｘ）配列番号１１及び１８を含み得る。好ましくは、システイン置換ＬＶＬ改変キメラＴＣＲは、（ｉ）配列番号３〜８及び２３及び２５；（ｉｉ）配列番号９〜１０及び２３及び２５；（ｉｉｉ）配列番号９、１１及び２３及び２５；（ｉｖ）配列番号３〜８、１６及び１８；（ｖ）配列番号９、１０、１６、及び１８；又は配列番号９、１１、１６、及び１８のアミノ酸配列を含む。特に好ましい実施形態においては、システイン置換ＬＶＬ改変キメラＴＣＲは、配列番号２６���アミノ酸配列を含む全長アルファ鎖及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む全長ベータ鎖を含む。これに関して、Ｃｙｓ置換ＬＶＬ改変キメラＴＣＲは、配列番号２６、配列番号２７、配列番号３０、又は配列番号２６及び２７の両方を含み得る。
【００３３】
ＴＣＲ（又はその機能的変異体）、ポリペプチド、又はタンパク質は、ＴＣＲ（又はその機能的変異体）、ポリペプチド、又はタンパク質の他の構成要素（例、他のアミノ酸）が、ＴＣＲ（又はその機能的変異体）、ポリペプチド、又はタンパク質の生物学的活性を実質的に変化させないように、本明細書中に記載の特定のアミノ酸配列又はアミノ酸配列（複数）から実質的に成り得る。これに関して、本発明のＴＣＲ（又はその機能的変異体）、ポリペプチド、又はタンパク質は、例えば、配列番号１２、１３、２０、２２、２６、２７、２９及び３０のいずれかのアミノ酸配列から実質的に成り得る。また、例えば、本発明のＴＣＲ（その機能的変異体を含む）、ポリペプチド又はタンパク質は、配列番号９、１０、１１、１４〜１９、２１、２３〜２５、配列番号９及び１０の両方、配列番号９及び１１の両方、配列番号１４及び１５の両方、配列番号１６及び１８の両方、配列番号１７及び１９の両方、配列番号２３及び２４の両方、配列番号１９及び２１の両方、又は配列番号２３及び２５の両方のアミノ酸配列（複数可）から実質的に成り得る。更に、本発明のＴＣＲ（その機能的変異体を含む）、ポリペプチド又はタンパク質は、配列番号３（α鎖のＣＤＲ１）、配列番号４（α鎖のＣＤＲ２）、配列番号５（α鎖のＣＤＲ３）、配列番号６（β鎖のＣＤＲ１）、配列番号７（β鎖のＣＤＲ２）、配列番号８（β鎖のＣＤＲ３）、又はそれらの任意の組み合わせ（例、配列番号３〜５；６〜８；又は３〜８）のアミノ酸配列から実質的に成り得る。
【００３４】
本明細書に記載されるいずれかのＴＣＲ（又はその機能的変異体）の機能的部分を含むポリペプチドも、本発明によって提供される。用語「ポリペプチド」は、本明細書で用いる場合、オリゴペプチドを含み、１以上のペプチド結合によって接続される、一本鎖のアミノ酸のことを指す。
【００３５】
本発明のポリペプチドに関して、機能的部分は、該機能的部分がＨＰＶ１６  Ｅ７に特異的に結合するならば、それが一部であるＴＣＲ（又はその機能的変異体）の、連続するアミノ酸を含む任意の部分であり得る。用語「機能的部分」は、ＴＣＲ（又はその機能的変異体）に関して用いられる場合、本発明のＴＣＲ（又はその機能的変異体）の任意の部分又は断片を指し、その部分又は断片は、それが一部であるところのＴＣＲ（又はその機能的変異体）（その親ＴＣＲ又は親の、その機能的変異体）の生物学的活性を保持する。機能的部分は、例えば、ＨＰＶ１６  Ｅ７に特異的に結合する能力（例、ＨＬＡ−Ａ２依存的な様態で）か、又はがんを検出、治療、若しくは予防する能力を、親ＴＣＲ（又はその機能的変異体）と類似の程度で、同程度で、又はより高い程度で保持するＴＣＲ（又はその機能的変異体）の部分を包含する。親ＴＣＲ（又はその機能的変異体）に関して、機能的部分は、例えば、親ＴＣＲ（又はその機能的変異体）の、約１０％、２５％、３０％、５０％、６８％、８０％、９０％、９５％又はそれ以上を含み得る。
【００３６】
機能的部分は、その部分のアミノ末端若しくはカルボキシ末端において、又は両方の末端において、親ＴＣＲ又はその機能的変異体のアミノ酸配列には見受けられない追加のアミノ酸を含み得る。望ましくは、追加のアミノ酸は、機能的部分の生物的機能（例、ＨＰＶ１６  Ｅ７に特異的に結合すること；及び／又はがんを検出し、がんを治療又は予防する等の能力を有すること等）を妨害しない。より望ましくは、追加のアミノ酸は、親ＴＣＲ又はその機能的変異体の生物活性と比較して、生物活性を増強させる。
【００３７】
ポリペプチドは、本発明のＴＣＲ又はその機能的変異体のα鎖及び／又はβ鎖の可変領域（複数可）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のうち１以上を含む機能的部分等、本発明のＴＣＲ又はその機能的変異体のα鎖及びβ鎖のいずれか又は両方の機能的部分を含み得る。本発明の実施形態においては、ポリペプチドは、配列番号３（α鎖のＣＤＲ１）、４（α鎖のＣＤＲ２）、５（α鎖のＣＤＲ３）、６（β鎖のＣＤＲ１）、７（β鎖のＣＤＲ２）、８（β鎖のＣＤＲ３）、又は、それらの組み合わせのアミノ酸配列を含む機能的部分を含み得る。好ましくは、本発明のポリペプチドは、配列番号３〜５；６〜８；又は配列番号３〜８の全てを含む機能的部分を含む。より好ましくは、ポリペプチドは、配列番号３〜８の全てのアミノ酸配列を含む機能的部分を含む。
【００３８】
本発明の一実施形態においては、本発明のポリペプチドは、例えば、上記のＣＤＲ領域の組み合わせを含む、本発明のＴＣＲ又はその機能的変異体の可変領域を含み得る。これに関して、ポリペプチドは、配列番号９（α鎖の可変領域）、配列番号１０（配列番号１０の２位のＸはＡｌａ又はＧｌｙである）（β鎖の可変領域）、配列番号１１（β鎖の可変領域）、配列番号９及び１０の両方、又は配列番号９及び１１の両方、のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、ポリペプチドは、配列番号９及び１０の両方（配列番号１０の２位のＸはＡｌａである）のアミノ酸配列を含む。
【００３９】
本発明のポリペプチドは、本明細書に記載の任意の好適な種（例、ヒト又はマウス等）に由来する定常領域、又は本明細書に記載の置換定常領域のいずれかを更に含み得る。これに関して、ポリペプチドは、配列番号１４（ヒトα鎖の定常領域）、配列番号１５（ヒトβ鎖の定常領域）、配列番号１６（本発明の他の態様に関して本明細書に記載の通り置換されたα鎖の定常領域）、配列番号１７（マウスα鎖の定常領域）、配列番号１８（本発明の他の態様に関して本明細書に記載の通り置換されたβ鎖の定常領域）、配列番号１９（マウスβ鎖の定常領域）、配列番号２１（ＬＶＬ改変α鎖の定常領域）、配列番号２３（Ｃｙｓ置換β鎖の定常領域）、配列番号２４（Ｃｙｓ置換α鎖の定常領域）、配列番号２５（Ｃｙｓ置換ＬＶＬ改変α鎖の定常領域）、配列番号１４及び１５の両方、配列番号１６及び１８の両方、配列番号１７及び１９の両方、配列番号１９及び２１の両方、配列番号２３及び２４の両方、又は配列番号２３及び２５の両方を含み得る。好ましくは、ポリペプチドは、配列番号１４及び１５の両方、配列番号１６及び１８の両方、配列番号１７及び１９の両方、配列番号１９及び２１の両方、配列番号２３及び２４の両方、又は配列番号２３及び２５の両方を含む。一実施形態においては、配列番号９及び１１の一方又は両方のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、単離又は精製されている。
【００４０】
本発明の一実施形態においては、本発明のポリペプチドは、可変領域と定常領域との組み合わせを含み得る。これに関して、ポリペプチドは、配列番号９及び１４の両方、配列番号９及び１６の両方、配列番号９及び１７の両方、配列番号９及び２１の両方、配列番号９及び２４の両方、配列番号９及び２５の両方、配列番号１０及び１５の両方、配列番号１０及び１８の両方、配列番号１０及び１９の両方、配列番号１０及び２３の両方、配列番号１１及び１５の両方、配列番号１１及び１８の両方、配列番号１１及び１９の両方、配列番号１１及び２３の両方、配列番号３〜５及び１４の全て、配列番号３〜５及び１６の全て、配列番号３〜５及び１７の全て、配列番号３〜５及び２１の全て、配列番号３〜５及び２４の全て、配列番号３〜５及び２５の全て、配列番号６〜８及び１５の全て、配列番号６〜８及び１８の全て、配列番号６〜８及び１９の全て、配列番号６〜８及び２３の全て、配列番号３〜８及び１４〜１５の全て、配列番号３〜８及び１６及び１８の全て、配列番号３〜８及び１７及び１９の全て、配列番号３〜８及び１９及び２１の全て、配列番号３〜８及び２３及び２４の全て、配列番号３〜８及び２３及び２５の全て、配列番号９〜１０及び１４〜１５の全て、配列番号９〜１０及び１６及び１８の全て、配列番号９〜１０及び１７及び１９の全て、配列番号９〜１０及び１９及び２１の全て、配列番号９〜１０及び２３及び２４の全て、配列番号９〜１０及び２３及び２５の全て、配列番号９、１１及び１４〜１５の全て、配列番号９、１１及び１６及び１８の全て、配列番号９、１１及び１７及び１９の全て、配列番号９、１１及び１９及び２１の全て、配列番号９、１１及び２３及び２４の全て、又は配列番号９、１１及び２３及び２５の全てを含み得る。配列番号１６及び１８は、本発明の他の態様に関して本明細書に記載の通りに置換され得る。一実施形態においては、（ｉ）配列番号９及び１４並びに（ｉｉ）配列番号１１及び１５の一方又は両方のアミノ酸配列を含むポリペプチドは単離又は精製されている。
【００４１】
本発明の一実施形態においては、本発明のポリペプチドは、本明細書に記載のＴＣＲ又はその機能的変異体のうちの１つのα鎖又はβ鎖の全長を含み得る。これに関して、本発明のポリペプチドは、（ｉ）配列番号１２、１３、２０、２２、２６、２７、２９、３０のいずれか１；（ｉｉ）配列番号９、２４及び２７；（ｉｉｉ）配列番号９、１７及び２０；又は（ｉｖ）配列番号９、１０、１６、及び１８、のアミノ酸配列を含み得る。配列番号１６及び１８は、本発明の他の態様に関して本明細書に記載の通りに置換され得る。
【００４２】
或いは、本発明のポリペプチドは、本明細書に記載のＴＣＲ又はその機能的変異体のα鎖及びβ鎖を含み得る。例えば、本発明のポリペプチドは、配列番号１２及び１３の両方；配列番号２０及び２２の両方；配列番号２６及び２７の両方；配列番号９、２４、及び２７の全て；配列番号９、１７及び２０の全て；又は配列番号９、１０、１６、及び１８の全てのアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、ポリペプチドは、配列番号１２及び１３の両方；配列番号２０及び２２の両方；配列番号２６及び２７の両方；配列番号９、２４、及び２７の全て；配列番号９、１７及び２０の全て；又は配列番号９、１０、１６、及び１８の全てのアミノ酸配列を含む。配列番号１６及び１８は、本発明の他の態様に関して本明細書に記載される通り置換され得る。一実施形態においては、配列番号１２及び１３の一方又は両方のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、単離又は精製されている。
【００４３】
本発明は、本明細書に記載のポリペプチドの少なくとも１を含むタンパク質を更に提供する。「タンパク質」により、１以上のポリペプチド鎖を含む分子が意味される。一実施形態においては、（ａ）配列番号９及び配列番号１０（配列番号１０の２位のＸはＧｌｙである）のアミノ酸配列の一方又は両方、又は（ｂ）配列番号１２及び１３の一方又は両方、を含むタンパク質は単離又は精製されている。
【００４４】
一実施形態においては、本発明のタンパク質は、配列番号３〜５のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号６〜８のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含み得る。代替的に、又は追加的に、本発明のタンパク質は、配列番号９のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖（（ｉ）配列番号１０の２位のＸはＡｌａ又はＧｌｙであり、且つ（ｉｉ）配列番号９及び１０を含むタンパク質（配列番号１０の２位のＸがＧｌｙである）は単離又は精製されている）を含み得る。タンパク質は、例えば、（ｉ）配列番号１２、（ｉｉ）配列番号２２、（ｉｉｉ）配列番号２６、（ｉｖ）配列番号９及び１６、（ｖ）配列番号９及び１７、又は（ｖｉ）配列番号９及び２４のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖、並びに（ｉ）配列番号１０及び１８、又は（ｉｉ）配列番号１３、２０及び２７のいずれか１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含み得、配列番号１２及び１３を含むタンパク質は単離又は精製され、且つ配列番号１６及び１８は、本発明の他の態様に関して本明細書に記載される通り置換される。この場合、本発明のタンパク質はＴＣＲであり得る。或いは、例えば、タンパク質が、配列番号１２及び１３の両方、配列番号２０及び２２の両方、配列番号２６及び２７、配列番号９、１０、１６及び１８の全て、配列番号９、１７及び２０の全て、配列番号９、２４及び２７の全て、を含む単一のポリペプチド鎖を含む場合、又はタンパク質の第１及び／又は第２ポリペプチド鎖（複数可）が、他のアミノ酸配列（例、免疫グロブリン又はその一部をコードするアミノ酸配列）を更に含む場合、本発明のタンパク質は融合タンパク質であり得る。これに関して、本発明は、少なくとも１の他のポリペプチドと共に、少なくとも１の、本明細書に記載の本発明のポリペプチドを含む融合タンパク質も提供する。他のポリペプチドは、融合タンパク質の別個のポリペプチドとして存在し得るか、又は本明細書に記載の、本発明のポリペプチドの１つとインフレーム（タンデム）で発現されるポリペプチドとして存在し得る。他のポリペプチドは、免疫グロブリン、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＭＨＣ分子、ＣＤ１分子（例、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ等）を含むが、これらに限定されない任意のペプチド性若しくはタンパク質性分子又はそれらの部分をコードし得る。
【００４５】
融合タンパク質は、本発明のポリペプチドの１以上のコピー、及び／又は他のポリペプチドの１以上のコピーを含み得る。例えば、融合タンパク質は、本発明のポリペプチド及び／又は他のポリペプチドのコピーを１、２、３、４、５つ又はより多くを含み得る。融合タンパク質を作製する好適な方法は、当該技術分野において公知であり、例えば、組換え法が挙げられる。例えば、Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３１：１９３−２０２（２００５）参照。
【００４６】
本発明のいくつかの実施形態においては、本発明のＴＣＲ（並びにその機能的部分及び機能的変異体）、ポリペプチド及びタンパク質は、α鎖及びβ鎖を連結するリンカーペプチドを含む単一のタンパク質として発現され得る。これに関して、配列番号１２及び１３の両方、配列番号２０及び２２の両方、配列番号２６及び２７、配列番号９、１０、１６及び１８の全て、配列番号９、１７、及び２０の全て、配列番号９、２４、及び２７の全て、を含む、本発明のＴＣＲ（並びにその機能的変異体及び機能的部分）、ポリペプチド及びタンパク質は、リンカーペプチドを更に含み得る。好都合なことに、リンカーペプチドは、宿主細胞における組換えＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）、ポリペプチド、及び/又はタンパク質の発現を促進し得る。リンカーペプチドは、任意の好適なアミノ酸配列を含み得る。例えば、リンカーペプチドは、配列番号２８を含み得る。本発明の一実施形態においては、アルファ鎖、ベータ鎖、及びリンカーを含むタンパク質は、配列番号２９（ＬＶＬ改変キメラＴＣＲ）又は配列番号３０（Ｃｙｓ置換ＬＶＬ改変キメラＴＣＲ）を含み得る。宿主細胞による、リンカーペプチドを含むコンストラクトの発現の際に、リンカーペプチドは切断され得、α鎖及びβ鎖が分離され得る。
【００４７】
本発明のタンパク質は、本明細書に記載される本発明のポリペプチドのうち少なくとも１つを含む組換え抗体であり得る。「組換え抗体」は、本明細書で用いる場合、本発明のポリペプチドのうち少なくとも１つ、及び抗体のポリペプチド鎖、又はその部分を含む組換え（例、遺伝子組換え）タンパク質を指す。抗体のポリペプチド、又はその部分は、重鎖、軽鎖、重鎖若しくは軽鎖の可変領域若しくは定常領域、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又は抗体のＦｃ、Ｆａｂ若しくはＦ（ａｂ）２’断片等であり得る。抗体のポリペプチド鎖、又はその部分は、組換え抗体の分離したポリペプチドとして存在し得る。或いは、抗体のポリペプチド鎖、又はその部分は、本発明のポリペプチドとインフレーム（タンデム）に発現するポリペプチドとして存在し得る。抗体のポリペプチド、又はその部分は、本明細書に記載される抗体及び抗体断片のいずれかを含む、任意の抗体又は任意の抗体断片のポリペプチドであり得る。
【００４８】
本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質（又はそれらの機能的変異体）は、該ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質（又はそれらの機能的変異体）が、それらの生物学的活性（例、ＨＰＶ１６  Ｅ７に特異的に結合する能力；哺乳動物においてがん、ＨＰＶ１６感染、又はＨＰＶ陽性の前がん状態を検出する能力；又は哺乳動物におけるがん、ＨＰＶ１６感染、又はＨＰＶ陽性の前がん状態を治療又は予防する能力等）を保持するならば、任意の長さであり得る（即ち、任意の数のアミノ酸を含み得る）。例えば、ポリペプチドは、長さ約５０〜約５０００アミノ酸（長さ５０、７０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００アミノ酸又はそれを上回る等）の範囲内であり得る。これに関して、本発明のポリペプチドはまた、オリゴペプチドを含む。
【００４９】
本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質（それらの機能的変異体を含む）は、１以上の天然に存在するアミノ酸の代わりに合成アミノ酸を含み得る。かかる合成アミノ酸は、当該技術分野において公知であり、例えば、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、α−アミノｎ−デカン酸、ホモセリン、Ｓ−アセチルアミノメチル−システイン、トランス−３−及びトランス−４−ヒドロキシプロリン、４−アミノフェニルアラニン、４−ニトロフェニルアラニン、４−クロロフェニルアラニン、４−カルボキシフェニルアラニン、β−フェニルセリン  β−ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α−ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、インドリン−２−カルボン酸、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、Ｎ’−ベンジル−Ｎ’−メチル−リジン、Ｎ’，Ｎ’−ジベンジル−リジン、６−ヒドロキシリジン、オルニチン、α−アミノシクロペンタンカルボン酸、α−アミノシクロヘキサンカルボン酸、α−アミノシクロヘプタンカルボン酸、α−（２−アミノ−２−ノルボルナン）−カルボン酸、α，γ−ジアミノ酪酸、α，β−ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン、及びα−ｔｅｒｔ−ブチルグリシンが挙げられる。
【００５０】
本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質（それらの機能的変異体を含む）は、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、Ｎ−アシル化、（例、ジスルフィド架橋を介して）環化され、若しくは、酸付加塩に変換され得、且つ／又は、必要に応じて、二量体化若しくは重合され、又はコンジュゲート化され得る。
【００５１】
本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及び／又はタンパク質（それらの機能的変異体を含む）は、当該技術分野において公知の方法によって得られ得る。ポリペプチド及びタンパク質をｄｅ  ｎｏｖｏ合成する好適な方法は、Ｃｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｍｏｃ  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ，２００５；Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ａｎａｌｙｓｉｓ，ｅｄ．Ｒｅｉｄ，Ｒ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，２０００；Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ，ｅｄ．Ｗｅｓｔｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｏｘｆｏｒｄ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ，２０００；及び米国特許番号第５，４４９，７５２号等の参考文献に記載されている。また、ポリペプチド及びタンパク質は、標準的な組換え方法を用いて、本明細書に記載される核酸を用いて組換えで産生され得る。例えば、Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，４ｔｈ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ  ２０１２；及びＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ，１９９４参照。更に、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質（それらの機能的変異体を含む）のいくつかは、植物、バクテリア、昆虫、哺乳動物（例、ラット、ヒト等）等のソースから、単離及び／又は精製され得る。単離及び精製の方法は、当該技術分野において周知である。或いは、本明細書に記載されるＴＣＲ、ポリペプチド及び／又はタンパク質（それらの機能的変異体を含む）は、Ｓｙｎｐｅｐ（Ｄｕｂｌｉｎ，ＣＡ）、Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐ．（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）及びＭｕｌｔｉｐｌｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）等の企業により商業的に合成され得る。この点において、本発明のＴＣＲ（その機能的変異体を含む）、ポリペプチド及びタンパク質は、合成、組換え、単離及び／又は精製されたものであり得る。
【００５２】
本発明の範囲には、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質（それらの機能的変異体のいずれかを含む）、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、宿主細胞集団、又は抗体若しくはその抗原結合部分のいずれかを含むコンジュゲート（例、バイオコンジュゲート）が含まれる。コンジュゲートと、一般的にコンジュゲートを合成する方法とは、当該技術分野において公知である（例えば、Ｈｕｄｅｃｚ，Ｆ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９８：２０９−２２３（２００５）、及び、Ｋｉｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｏｒｇ  Ｃｈｅｍ．４４（１５）：５４０５−５４１５（２００５）参照）。
【００５３】
本発明の一実施形態は、本明細書に記載の、ＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）、ポリペプチド又はタンパク質のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を提供する。本明細書で用いる場合、「核酸」により、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」及び「核酸分子」を含み、一般にＤＮＡ又はＲＮＡの重合体を意味し、これは一本鎖の又は二本鎖の、合成された又は天然の供給源から得た（例、単離及び／又は精製された）ものであり得、天然、非天然又は改変された（ａｌｔｅｒｅｄ）ヌクレオチドを含有し得、修飾されていないオリゴヌクレオチドのヌクレオチド間に見いだされるホスホジエステルの代わりに、天然の、非天然の、又は改変された、ヌクレオチドの結合（例えば、ホスホロアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｍｉｄａｔｅ）結合又はホスホロチオエート結合等）を含有し得る。１実施形態においては、核酸は、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を含む。一般に、核酸は、挿入、欠失、逆位及び／又は置換を何れも含まないことが好ましい。しかし、本明細書中で検討する通り、ある場合には、核酸が１以上の挿入、欠失、逆位及び／又は置換を含むことが好適である場合がある。
【００５４】
好ましくは、本発明の核酸は、組換え体である。用語「組換え体」は、本明細書で用いる場合、（ｉ）天然又は合成の核酸セグメントを、生細胞中で複製し得る核酸分子に連結することによって、生細胞外で構築される分子、又は（ｉｉ）上記（ｉ）に記載した分子の複製から生じる分子を指す。本明細書における目的のためには、複製は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複製又はｉｎ  ｖｉｖｏ複製であり得る。
【００５５】
核酸は、当該技術分野において公知の手順を用いて、化学合成及び／又は酵素的ライゲーション反応に基づいて構築され得る。例えば、Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（上記）及びＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（上記）を参照。例えば、核酸は、天然に存在するヌクレオチド、又は、分子の生物学的安定性を増加させるように、又はハイブリダイゼーションの際に形成される二重鎖の物理的安定性を増加させるように設計された多様な修飾ヌクレオチド（例、ホスホロチオエート誘導体及びアクリジン置換ヌクレオチド）を用いて、化学的に合成され得る。核酸を生成するために用いられ得る修飾ヌクレオチドの例としては、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルキューオシン（ｂｅｔａ−Ｄ−ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−置換アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキューオシン（ｂｅｔａ−Ｄ−ｍａｎｎｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、シュードウラシル（ｐｓｅｕｄｏｕｒａｃｉｌ）、キューオシン（ｑｕｅｏｓｉｎｅ）、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル及び２，６−ジアミノプリンが挙げられるが、これらに限定されない。或いは、本発明の核酸の１以上が、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ（Ｆｏｒｔ  Ｃｏｌｌｉｎｓ，ＣＯ）及びＳｙｎｔｈｅｇｅｎ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）等の企業から購入され得る。
【００５６】
核酸は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、又はそれらの機能的変異体のいずれかをコードする任意のヌクレオチド配列を含み得る。本発明の一実施形態においては、ヌクレオチド配列は、配列番号３１（ヒトアルファ鎖、野生型ＴＣＲ）、配列番号３２（ヒトベータ鎖、野生型ＴＣＲ）、配列番号３３（ＬＶＬ改変キメラＴＣＲのアルファ鎖）、配列番号３４（キメラＴＣＲのベータ鎖）、配列番号３５（Ｃｙｓ置換ＬＶＬ改変キメラＴＣＲのアルファ鎖）、配列番号３６（Ｃｙｓ置換キメラＴＣＲのベータ鎖）、配列番号３１及び３２の両方、配列番号３３及び３４の両方、又は配列番号３５及び３６の両方のいずれか、を含み得るか、から成り得るか、又はから実質的になり得る。
【００５７】
本発明の実施形態においては、核酸は、非天然のヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列が天然に見出されない場合、該ヌクレオチド配列は、「非天然」であるとみなされ得る。いくつかの実施形態においては、ヌクレオチド配列は、コドンが最適化され得る。特定の理論又はメカニズムには縛られないが、ヌクレオチド配列のコドン最適化は、ｍＲＮＡ転写産物の翻訳効率を増大させると考えられている。ヌクレオチド配列のコドン最適化は、天然のコドンを、同じアミノ酸をコードするが、細胞内でより容易に利用可能であるｔＲＮＡにより翻訳され得る、別のコドンに置換し、それによって翻訳効率を増大させることを含み得る。ヌクレオチド配列の最適化は、翻訳を妨害するｍＲＮＡ二次構造も減少させ、従って翻訳効率を上昇させ得る。本発明の一実施形態においては、コドン最適化ヌクレオチド配列は、配列番号３３〜３６のいずれか１、配列番号３３及び３４の両方、又は配列番号３５及び３６の両方、を含み得るか、から成り得るか、又は、から実質的に成り得る。
【００５８】
本発明はまた、本明細書中に記載される核酸のいずれかのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列、又は本明細書中に記載される核酸のいずれかのヌクレオチド配列に対し、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む、核酸を提供する。
【００５９】
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列は、好ましくは、高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする。「高ストリンジェンシー条件」とは、ヌクレオチド配列が、非特異的ハイブリダイゼーションよりも検出可能に強い量で標的配列（本明細書中に記載される核酸のいずれかのヌクレオチド配列）に特異的にハイブリダイズすることを意味する。高ストリンジェンシー条件としては、正確に相補的な配列を有するポリヌクレオチド、又は散らばったミスマッチを少しだけ含有するポリヌクレオチドを、ヌクレオチド配列にマッチしたいくつかの小領域（例、３〜１０塩基）を偶然有するランダム配列から識別する条件が挙げられる。かかる相補的な小領域は、１４〜１７又はそれより多い塩基の全長相補体よりも容易に融解され、高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーションにより、それらが容易に識別可能となる。比較的高ストリンジェンシーの条件としては、例えば、低塩及び／又は高温条件（約０．０２〜０．１ＭのＮａＣｌ又は等価物によって、約５０〜７０℃の温度で提供される等）が挙げられる。かかる高ストリンジェンシー条件は、許容したとしても、ヌクレオチド配列とテンプレート鎖若しくは標的鎖との間のミスマッチをほとんど許容せず、本発明のＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）のいずれかの発現を検出するのに特に好適である。条件は、漸増量のホルムアミドの添加によって、よりストリンジェントになり得ることが、一般的に理解される。
【００６０】
本発明はまた、本明細書に記載される核酸のいずれかと、少なくとも約７０％以上（例、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％又は約９９％）同一であるヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。
【００６１】
本発明の核酸は、組換え発現ベクターに組み込まれ得る。これに関して、本発明は、本発明の核酸のいずれかを含む組換え発現ベクターを提供する。本発明の一実施形態においては、組換え発現ベクターは、α鎖、β鎖及びリンカーペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。例えば、一実施形態においては、組換え発現ベクターは、配列番号３９（キメラα鎖及びβ鎖である配列番号２０及び２２を、それらの間に位置するリンカーと共にコードし、ベータ鎖をコードするヌクレオチド配列が、アルファ鎖をコードするヌクレオチド配列の５’に位置する）又は配列番号４０（キメラα鎖及びβ鎖である配列番号２６及び２７を、それらの間に位置するリンカーと共にコードし、ベータ鎖をコードするヌクレオチド配列が、アルファ鎖をコードするヌクレオチド配列の５’に位置する）を含むコドン最適化ヌクレオチド配列を含む。
【００６２】
本明細書の目的に関して、用語「組換え発現ベクター」とは、宿主細胞によるｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドの発現を可能にする遺伝子改変オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドコンストラクトを意味し、この場合、コンストラクトは、ｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、ベクターは、細胞内でｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドを発現させるのに十分な条件下で細胞と接触させられる。本発明のベクターは、全体としては天然には存在しない。しかし、ベクターの一部は天然に存在し得る。本発明の組換え発現ベクターは、ＤＮＡ及びＲＮＡ（一本鎖又は二本鎖であり得、合成されるか、又は一部を天然のソースから得られ得、天然、非天然又は改変されたヌクレオチドを含有し得る）を含む（がこれらに限定されない）、任意のタイプのヌクレオチドを含み得る。組換え発現ベクターは、天然に存在するヌクレオチド間結合、天然に存在しないヌクレオチド間結合、又は両方のタイプの結合を含み得る。好ましくは、天然に存在しない又は改変されたヌクレオチド又はヌクレオチド間結合が、ベクターの転写や複製を妨害しない。
【００６３】
本発明の組換え発現ベクターは、任意の好適な組換え発現ベクターであり得、任意の好適な宿主細胞を形質転換又はトランスフェクトするために用いられ得る。好適なベクターとしては、プラスミド及びウイルス等の繁殖及び増幅のため、若しくは発現のため、又は両方のために設計されたベクターが挙げられる。ベクターは、ｐＵＣシリーズ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔシリーズ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，ＬａＪｏｌｌａ，ＣＡ）、ｐＥＴシリーズ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、ｐＧＥＸシリーズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、及びｐＥＸシリーズ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）からなる群から選択され得る。λＧＴ１０、λＧＴ１１、λＺａｐＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、λＥＭＢＬ４及びλＮＭ１１４９等のバクテリオファージベクターも用いられ得る。植物発現ベクターの例として、ｐＢＩ０１、ｐＢＩ１０１．２、ｐＢＩ１０１．３、ｐＢＩ１２１及びｐＢＩＮ１９（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。動物発現ベクターの例としては、ｐＥＵＫ−Ｃｌ、ｐＭＡＭ及びｐＭＡＭｎｅｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。好ましくは、組換え発現ベクターは、ウイルスベクター（例、レトロウイルスベクター）である。特に好ましい実施形態においては、組換え発現ベクターはＭＳＧＶ１ベクターである。
【００６４】
好ましい実施形態においては、組換え発現ベクターは、本明細書に記載のＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体を含む）のいずれかのα鎖及びβ鎖をコードするヌクレオチド配列を含む（ベータ鎖をコードするヌクレオチド配列が、アルファ鎖をコードするヌクレオチド配列の５’に位置する）。これに関して、アルファ鎖をコードするヌクレオチド配列は、ベータ鎖をコードするヌクレオチド配列の３’に位置し得る。特定の理論又はメカニズムには縛られないが、アルファ鎖をコードするヌクレオチド配列の５’に位置する、ベータ鎖をコードするヌクレオチド配列は、アルファ鎖をコードするヌクレオチド配列の３’に位置する、ベータ鎖をコードするヌクレオチド配列と比較して、ＨＰＶ１６  Ｅ７＋標的の認識の増加、宿主細胞による発現上昇、抗腫瘍活性の増加のいずれか１以上をもたらし得ると考えられる。あまり好ましくない実施形態においては、ベータ鎖をコードするヌクレオチド配列は、アルファ鎖をコードするヌクレオチド配列の３’に位置する。これに関して、アルファ鎖をコードするヌクレオチド配列は、ベータ鎖をコードするヌクレオチド配列の５’に位置し得る。一実施形態においては、配列番号２０及び２２を含む、本発明のＬＶＬ改変キメラＴＣＲをコードする、コドン最適化ヌクレオチド配列を含むＭＳＧＶ１ベクター（ベータ鎖をコードするヌクレオチド配列が、アルファ鎖をコードするヌクレオチド配列の５’に位置する）は、配列番号３７を含む。別の実施形態においては、配列番号２６及び２７を含む、本発明のＣｙｓ置換ＬＶＬ改変キメラＴＣＲをコードする、コドン最適化ヌクレオチド配列を含むＭＳＧＶ１ベクター（ベータ鎖をコードするヌクレオチド配列が、アルファ鎖をコードするヌクレオチド配列の５’に位置する）は、配列番号３８を含む。
【００６５】
本発明の組換え発現ベクターは、例えば、Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（上記）及びＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（上記）に記載されている標準的な組換えＤＮＡ技術を用いて調製され得る。環状又は線状の発現ベクターのコンストラクトは、原核又は真核の宿主細胞において機能する複製系を含有するように調製され得る。複製系は、ＣｏｌＥｌ、２μプラスミド、λ、ＳＶ４０、ウシ乳頭腫ウイルス等（例）に由来し得る。
【００６６】
望ましくは、組換え発現ベクターは、適宜、ベクターがＤＮＡベースであるかＲＮＡベースであるかを考慮して、ベクターが導入される宿主細胞のタイプ（例、バクテリア、真菌、植物、又は動物）に特異的な、転写、並びに翻訳開始及び終了コドン等の調節配列を含む。
【００６７】
組換え発現ベクターは、形質転換又はトランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能にする、１以上のマーカー遺伝子を含み得る。マーカー遺伝子は、殺生物剤耐性（例、抗生物質、重金属などに対する耐性）、原栄養性を提供するための栄養要求性宿主細胞における補完等を含む。本発明の発現ベクターに好適なマーカー遺伝子としては、例えば、ネオマイシン／Ｇ４１８耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、ヒスチジノール耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子及びアンピシリン耐性遺伝子が挙げられる。
【００６８】
組換え発現ベクターは、ＴＣＲ、ポリペプチド若しくはタンパク質（それらの機能的変異体を含む）をコードするヌクレオチド配列に、又は、ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質（それらの機能的変異体を含む）をコードするヌクレオチド配列に相補的であるか、又はハイブリダイズするヌクレオチド配列に作動可能に結合した天然の、又は非天然のプロモーターを含み得る。プロモーターの選択（例、強力なプロモーター、弱いプロモーター、誘導プロモーター、組織特異的プロモーター、発生特異的（ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）プロモーター）は、当業者の通常の技術の範囲内である。同様に、ヌクレオチド配列をプロモーターと組み合わせることもまた、当業者の通常の技術の範囲内である。プロモーターは、非ウイルスプロモーター、又はウイルスプロモーター（例、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーター、及びマウス幹細胞ウイルス末端の長い反復において見受けられるプロモーター）であり得る。
【００６９】
本発明の組換え発現ベクターは、一過性の発現のため、安定した発現のため、又はその両方のために設計され得る。また、組換え発現ベクターは、構成的発現のため、又は誘導性発現のために作製され得る。更に、組換え発現ベクターは、自殺遺伝子を含むように作製され得る。
【００７０】
用語「自殺遺伝子」は、本明細書で用いる場合、自殺遺伝子を発現する細胞を死に至らしめる遺伝子を指す。自殺遺伝子は、その遺伝子を発現する細胞に対し物質（例、薬物）に対する感受性を付与し、細胞が該物質と接触したとき又は該物質に曝露されたときに細胞を死に至らしめる遺伝子であり得る。自殺遺伝子は、当該技術分野において公知であり（例えば、Ｓｕｉｃｉｄｅ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｃａｒｏｌｉｎｅ  Ｊ．（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＵＫ  Ｃｅｎｔｒｅ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｕｔｔｏｎ，Ｓｕｒｒｅｙ，ＵＫ），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，２００４参照）、例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子、シトシンデアミナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ及びニトロレダクターゼが挙げられる。
【００７１】
本発明の別の実施形態は、本明細書に記載される組換え発現ベクターのいずれかを含む宿主細胞を更に提供する。用語「宿主細胞」は、本明細書で用いる場合、本発明の組換え発現ベクターを含有し得る任意の型の細胞を指す。宿主細胞は、真核細胞（例、植物、動物、真菌又は藻類）であり得、又は、原核細胞（例、バクテリア若しくは原生動物）であり得る。宿主細胞は、培養細胞、又は、初代細胞であり得、即ち、生物（例、ヒト）から直接単離され得る。宿主細胞は、接着細胞、又は、浮遊細胞、即ち、懸濁物中で増殖する細胞であり得る。好適な宿主細胞は、当該技術分野において公知であり、例えば、ＤＨ５α  Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、サルＶＥＲＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３細胞等が挙げられる。組換え発現ベクターを増幅又は複製する目的のためには、宿主細胞は、好ましくは、原核細胞（例、ＤＨ５α細胞）である。組換えＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質を産生する目的のためには、宿主細胞は、好ましくは、哺乳動物細胞である。最も好ましくは、宿主細胞はヒト細胞である。宿主細胞は任意の型の細胞であり得、任意の型の組織由来であり得、任意の発生段階のものであり得るが、宿主細胞は、好ましくは、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）又は末梢血単核球（ＰＢＭＣ）である。より好ましくは、宿主細胞は、Ｔ細胞である。
【００７２】
本明細書中の目的のためには、Ｔ細胞は、任意のＴ細胞（培養Ｔ細胞（例、初代Ｔ細胞）、若しくは培養Ｔ細胞株（例、Ｊｕｒｋａｔ、ＳｕｐＴ１など）由来のＴ細胞、又は哺乳動物から得られたＴ細胞等）であり得る。哺乳動物から得られる場合、Ｔ細胞は、多数の供給源（血液、骨髄、リンパ節、胸腺又は他の組織若しくは体液が含まれるが、これらに限定されない）から得られ得る。Ｔ細胞はまた、富化又は精製され得る。好ましくは、Ｔ細胞はヒトＴ細胞である。より好ましくは、Ｔ細胞は、ヒトから単離されたＴ細胞である。Ｔ細胞は、任意の型のＴ細胞であり得、任意の発生段階のものであり得る（ＣＤ４＋／ＣＤ８＋二重陽性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞（例、Ｔｈ１及びＴｈ２細胞）、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞（例、細胞傷害性Ｔ細胞）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、メモリーＴ細胞（例、セントラルメモリーＴ細胞及びエフェクターメモリーＴ細胞）、ナイーブＴ細胞等が挙げられるが、これらに限定されない）。
【００７３】
本発明はまた、本明細書中に記載される少なくとも１の宿主細胞を含む細胞集団も提供する。細胞集団は、少なくとも１の他の細胞（例、組換え発現ベクターをいずれも含まない宿主細胞（例、Ｔ細胞）又はＴ細胞以外の細胞（例、Ｂ細胞、マクロファージ、好中球、赤血球、肝細胞、内皮細胞、上皮細胞、筋細胞、脳細胞など））に加えて、記載される組換え発現ベクターのいずれかを含む宿主細胞を含む、不均質な集団であり得る。或いは、細胞集団は、実質的に均質な集団であり得、該集団は、組換え発現ベクターを含む宿主細胞を主に含む（例、組換え発現ベクターを含む宿主細胞から実質的になる）。集団は細胞のクローン集団でもあり得、該集団の全ての細胞は、組換え発現ベクターを含む単一の宿主細胞のクローンであり、その結果、集団の全ての細胞が組換え発現ベクターを含む。本発明の一実施形態においては、細胞集団は、本明細書中に記載される通りの組換え発現ベクターを含む宿主細胞を含むクローン集団である。
【００７４】
本発明の一実施形態においては、集団中の細胞数は急速に増幅され得る。Ｔ細胞数の増幅は、例えば、米国特許第８，０３４，３３４号；米国特許第８，３８３，０９９号；米国特許出願公開第２０１２／０２４４１３３号；Ｄｕｄｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２６：３３２−４２（２００３）；及びＲｉｄｄｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１２８：１８９−２０１（１９９０）．に記載の通りの、当該技術分野で既知の多くの方法のいずれかによって達成され得る。
【００７５】
本発明は、本明細書に記載のＴＣＲ（又はその機能的変異体）のいずれかの機能的部分に特異的に結合する抗体又はその抗原結合部分を更に提供する。好ましくは、機能的部分は、がん抗原に特異的に結合する（例、アミノ酸配列、配列番号３（α鎖のＣＤＲ１）、４（α鎖のＣＤＲ２）、５（α鎖のＣＤＲ３）、６（β鎖のＣＤＲ１）、７（β鎖のＣＤＲ２）、８（β鎖のＣＤＲ３）、配列番号９（α鎖の可変領域）、配列番号１０（β鎖の可変領域）、配列番号１１（β鎖の可変領域）、又はそれらの組み合わせ（例、３〜５；６〜８；３〜８；９；１０；１１；９〜１０；又は９及び１１）を含む機能的部分）。より好ましくは、機能的部分は、配列番号３〜８；配列番号９及び１０；又は配列番号９及び１１のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態においては、抗体又はその抗原結合部分は、６のＣＤＲ（α鎖のＣＤＲ１〜３及びβ鎖のＣＤＲ１〜３）全てによって形成されるエピトープに結合する。抗体は、当該技術分野で公知の任意のタイプの免疫グロブリンであり得る。例えば、抗体は、任意のアイソタイプ（例、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ等）のものであり得る。抗体は、モノクローナル又はポリクローナルであり得る。抗体は、天然に存在する抗体、例、哺乳動物（例、マウス、ウサギ、ヤギ、ウマ、ニワトリ、ハムスター、ヒト等）から単離及び／又は精製された抗体であり得る。或いは、抗体は、遺伝子操作された抗体（例、ヒト化抗体又はキメラ抗体）であり得る。抗体は、モノマー又はポリマー形態であり得る。また、抗体は、本発明のＴＣＲ（又はその機能的変異体）の機能的部分に対し、任意のレベルの親和性又は結合活性を有し得る。望ましくは、抗体は、他のペプチド又はタンパク質と交差反応性が最小限であるように、本発明のＴＣＲ（又はその機能的変異体）の機能的部分に対し特異的である。
【００７６】
本発明のＴＣＲの任意の機能的部分又は機能的変異体と結合する能力について、抗体を試験する方法が当該技術分野において公知であり、任意の抗原抗体結合アッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、免疫沈降及び競合阻害アッセイ等）が挙げられる（例、Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．（下記）、及び米国特許出願公開番号第２００２／０１９７２６６  Ａ１号参照）。
【００７７】
抗体を作製する好適な方法は、当該技術分野において公知である。例えば、標準的なハイブリドーマ法は、Ｋｏｅｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５，５１１−５１９（１９７６），Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（ｅｄｓ．），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ  Ｐｒｅｓｓ（１９８８），及びＣ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ、８ｔｈＥｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ（２０１１）（例））に記載されている。或いは、ＥＢＶ−ハイブリドーマ法（Ｈａｓｋａｒｄ  ａｎｄ  Ａｒｃｈｅｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、７４（２），３６１−６７（１９８４）、及びＲｏｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１２１、１４０−６７（１９８６））、及びバクテリオファージベクター発現系（例、Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６，１２７５−８１（１９８９）参照）等、他の方法が当該技術分野において公知である。更に、非ヒト動物において抗体を産生する方法が、米国特許第５，５４５，８０６号、第５，５６９，８２５号及び第５，７１４，３５２号、並びに米国特許出願公開番号第２００２／０１９７２６６Ａ１号（例）に記載されている。
【００７８】
更に、ファージ提示法が、本発明の抗体を生成するために用いられ得る。これに関して、抗体の抗原結合可変（Ｖ）ドメインをコードするファージライブラリーは、標準的な分子生物学及び組換えＤＮＡ技術（例、Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （２０１２）参照）を使って生成され得る。所望の特異性を伴う可変領域をコードするファージは、所望の抗原への特異的結合に関して選択され、完全又は部分的抗体は、選択された可変ドメインを含むように再構成される。再構成された抗体をコードする核酸配列は、ハイブリドーマ産生に用いられる骨髄腫細胞等、好適な細胞株へと導入され、その結果、モノクローナル抗体の特性を有する抗体が細胞によって分泌される（例、Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．（上記）、Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（上記）、及び米国特許第６，２６５，１５０号参照）。
【００７９】
抗体は、特定の重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックであるトランスジェニックマウスにより産生され得る。かかる方法は、当該技術分野において公知であり、例えば、米国特許第５，５４５，８０６号及び第５，５６９，８２５号、並びに、Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．（上記）に記載されている。
【００８０】
ヒト化抗体を生成する方法は、当該技術分野において周知であり、例えば、Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．（上記）、米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５８５，０８９号及び第５，６９３，７６１号、欧州特許番号第０２３９４００  Ｂ１号、並びに英国特許番号第２１８８６３８号において、詳細に記載されている。ヒト化抗体は、例えば、米国特許第５，６３９，６４１号及びＰｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２３５，９５９−９７３（１９９４）に記載されている抗体リサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）技術を用いても、生成され得る。
【００８１】
本発明は、本明細書に記載される抗体のいずれかの抗原結合部分も提供する。抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｄｓＦｖ、ｓＦｖ、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）及びトリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）等、少なくとも１の抗原結合部位を有する任意の部分であり得る。
【００８２】
単鎖可変領域断片（ｓＦｖ）抗体断片（これは、合成ペプチドを介して抗体軽鎖のＶドメインに連結された抗体重鎖の可変（Ｖ）ドメインを含む、切断型Ｆａｂ断片から成る）は、慣用的な組換えＤＮＡテクノロジー技術を用いて生成され得る（例、Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，（上記）参照）。同様に、ジスルフィド安定化可変領域断片（ｄｓＦｖ）は、組換えＤＮＡ技術によって調製され得る（例、Ｒｅｉｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７，６９７−７０４（１９９４）参照）。しかしながら、本発明の抗体断片は、これらの例示的な抗体断片の型に限定されない。
【００８３】
また、抗体又はその抗原結合部分は、検出可能な標識（例えば、放射性同位体、蛍光色素分子（例、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ））、酵素（例、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、及び元素粒子（例、金粒子）等）を含むように修飾され得る。
【００８４】
本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質（それらの機能的変異体を含む）、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞（その集団を含む）、並びに抗体（その抗原結合部分を含む）は、単離及び／又は精製され得る。用語「単離された」は、本明細書で用いる場合、その自然環境から取り出されたことを意味する。「精製された」という用語は、本明細書で用いる場合、純度が増したことを意味するが、「純度」は、相対的な用語であって、必ずしも絶対的純度として解釈されるべきでない。例えば、純度は、少なくとも約５０％であり得、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％を超え得、又は１００％であり得る。
【００８５】
本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質（それらの機能的変異体を含む）、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞（その集団を含む）、及び抗体（その抗原結合部分を含む）は、これら全てが、本文以下、「本発明のＴＣＲ材料」と総称されるものであるが、医薬組成物等、組成物へと製剤化され得る。これに関して、本発明は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、機能的部分、機能的変異体、核酸、発現ベクター、宿主細胞（その集団を含む）、及び抗体（その抗原結合部分を含む）のいずれか、並びに医薬的に許容可能な担体を含む医薬組成物を提供する。本発明のＴＣＲ材料のいずれかを含有する本発明の医薬組成物は、１を超える本発明のＴＣＲ材料（例、ポリペプチド及び核酸）又は２以上の異なるＴＣＲ（その機能的部分及び機能的変異体）を含み得る。或いは、医薬組成物は、化学療法剤等、別の医薬的に活性な物質（複数可）又は薬剤（複数可）（例、アスパラギナーゼ（ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）、ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、フルオロウラシル（ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、ヒドロキシウレア（ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｅａ）、メトトレキサート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）など）と組み合わせて、本発明のＴＣＲ材料を含み得る。
【００８６】
好ましくは、担体は医薬的に許容可能な担体である。医薬組成物に関して、担体は、考慮中の特定の本発明のＴＣＲ材料のために従来用いられているもののいずれかであり得る。かかる医薬的に許容可能な担体は、当業者に周知であり、公衆にとって容易に入手可能である。医薬的に許容可能な担体は、使用条件下で有害な副作用又は毒性を有さないものであることが好ましい。
【００８７】
担体の選択は、特定の本発明のＴＣＲ材料によって、そして本発明のＴＣＲ材料を投与するために用いられる特定の方法によってある程度決定される。従って、多様な、本発明の医薬組成物の好適な製剤がある。好適な製剤としては、経口、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内及び腹腔内投与のための、いずれかの製剤が挙げられ得る。本発明のＴＣＲ材料を投与するために、１を超える経路が用いられ得、特定の例においては、特定の経路が、別の経路よりも迅速且つ効果的な反応をもたらし得る。
【００８８】
好ましくは、本発明のＴＣＲ材料は、注射により、静脈内（例）に投与される。本発明のＴＣＲ材料が、本発明のＴＣＲ（又はその機能的変異体）を発現する宿主細胞である場合には、注射用の細胞のための医薬上許容される担体は、任意の等張性の担体、例えば、通常の生理食塩水（水中約０．９０％  ｗ／ｖのＮａＣｌ、水中約３００ｍＯｓｍ／ＬのＮａＣｌ、又は水１リットル当たり約９．０ｇのＮａＣｌ）、ＮＯＲＭＯＳＯＬ  Ｒ電解質溶液（Ａｂｂｏｔｔ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）、ＰＬＡＳＭＡ−ＬＹＴＥ  Ａ（Ｂａｘｔｅｒ，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）、水中約５％のデキストロース、又は乳酸リンゲル液等が挙げられ得る。一実施形態においては、医薬上許容される担体には、ヒト血清アルブミン（ａｌｂｕｍｅｎ）が補充される。
【００８９】
本発明の目的のためには、投与される本発明のＴＣＲ材料の量又は用量（例、本発明のＴＣＲ材料が１以上の細胞の場合、細胞数）は、例えば、被験者又は動物において、適切な期間にわたって治療的又は予防的応答（例）をもたらすのに十分であるべきである。例えば、本発明のＴＣＲ材料の用量は、がん抗原と結合するのに、又は、投与時から約２時間以上、例、１２〜２４時間以上という期間でがんを検出、治療若しくは予防するのに十分でなければならない。特定の実施形態においては、期間は、もっと長くなり得る。用量は、特定の本発明のＴＣＲ材料の有効性、及び動物（例、ヒト）の状態と、治療する動物（例、ヒト）の体重とによって決定される。
【００９０】
投与される用量を決定するための多くのアッセイが当該技術分野において公知である。本発明の目的のために、標的細胞が溶解される程度、又は、それぞれが異なる用量のＴ細胞を与えられた哺乳動物１セットのうち、１匹の哺乳動物へ所与の用量のかかるＴ細胞を投与した際の、本発明のＴＣＲ（又はその機能的変異体若しくは機能的部分）、ポリペプチド又はタンパク質を発現するＴ細胞によってＩＦＮ−γが分泌される程度を比較することを含むアッセイを用いて、哺乳動物に投与する開始用量を決定し得る。一定用量の投与の際の、標的細胞が溶解する程度、又はＩＦＮ−γが分泌される程度は、当該技術分野において公知の方法によってアッセイされ得る。
【００９１】
本発明のＴＣＲ材料の用量はまた、特定の本発明のＴＣＲ材料の投与に伴い得る任意の有害な副作用の存在、性質及び程度によって決定される。典型的には、主治医が、年齢、体重、全般的健康、食習慣、性別、投与する本発明のＴＣＲ材料、投与経路、治療されている状態の重篤度等、様々な要因を考慮に入れて、個々の患者を治療するための本発明のＴＣＲ材料の用量を決定する。本発明のＴＣＲ材料が細胞集団である実施形態においては、注入あたりで投与される細胞の数は、約１×１０６から約１×１０１２細胞又はより多く（例）まで変わり得る。特定の実施形態においては、１×１０６未満の細胞が投与され得る。
【００９２】
本発明のＴＣＲ材料の治療効力又は予防効力を修飾によって増大させるために、本発明のＴＣＲ材料（ｉｎｖｅｎｔｉｖｅ  ＴＣＲ  ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｖｅｎｔｉｏｎ）が、いくつもの形に修飾され得ることを、当業者は容易に理解する。例えば、本発明のＴＣＲ材料は、直接的又は標的化部分への架橋物（ｂｒｉｄｇｅ）によって間接的にコンジュゲート化され得る。化合物（例、本発明のＴＣＲ材料）を標的化部分にコンジュゲート化する実務は、当該技術分野において公知である。例えば、Ｗａｄｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ３：１１１（１９９５）及び米国特許第５，０８７，６１６号参照。用語「標的化部分」は、本明細書で用いる場合、細胞表面受容体を特異的に認識し、これに結合する任意の分子又は物質を指し、標的化部分は、かかる表面受容体が発現する細胞の集団への、本発明のＴＣＲ材料の送達を指令する。標的化部分としては、細胞表面受容体（例、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）、ＣＤ２８、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦ）、ニコチン性アセチルコリン受容体（ｎＡＣｈＲ）等）に結合する抗体又はその断片、ペプチド、ホルモン、成長因子、サイトカイン、及び他の任意の天然リガンド又は非天然リガンドが挙げられるが、これらに限定されない。用語「架橋物」は、本明細書で用いる場合、本発明のＴＣＲ材料を標的化部分に連結させる任意の物質又は分子を指す。当業者は、本発明のＴＣＲ材料の機能には必要でない、本発明のＴＣＲ材料における部位が、架橋物及び／又は標的化部分を結合させるのに理想的な部位であると認識する（但し、架橋物及び／又は標的化部分は、本発明のＴＣＲ材料に結合して、本発明のＴＣＲ材料の機能（すなわち、ＨＰＶ１６  Ｅ７に結合する能力；又はがん、ＨＰＶ１６感染、若しくはＨＰＶ陽性の前がん状態を検出、治療若しくは予防する能力）を妨害しないものとする）。
【００９３】
本発明の医薬組成物、ＴＣＲ（その機能的変異体を含む）、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞又は細胞集団が、がん、ＨＰＶ１６感染、又はＨＰＶ陽性の前がん状態の治療又は予防の方法において用いられ得ることが検討される。特定の理論には縛られないが、本発明のＴＣＲ（及びその機能的変異体）は、ＨＰＶ１６  Ｅ７に特異的に結合すると考えられ、その結果、ＴＣＲ（又は関連する本発明のポリペプチド又はタンパク質及びそれらの機能的変異体）が、細胞によって発現されると、ＨＰＶ１６  Ｅ７を発現する標的細胞に対する免疫反応を仲介することができる。これに関して、本発明は、哺乳動物における状態の治療又は予防の方法であって、本明細書に記載される医薬組成物、ＴＣＲ（及びその機能的変異体）、ポリペプチド又はタンパク質のいずれか、本明細書に記載されるＴＣＲ（及びその機能的変異体）、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む、任意の核酸又は組換え発現ベクター、或いは本明細書に記載されるＴＣＲ（及びその機能的変異体）、ポリペプチド又はタンパク質のいずれかをコードする発現ベクターを含む任意の宿主細胞又は細胞集団を、哺乳動物における状態を治療又は予防するのに有効な量で、哺乳動物に投与することを含み、状態が、がん、ＨＰＶ１６感染、又はＨＰＶ陽性の前がん状態である、方法を提供する。
【００９４】
用語「治療する」及び「予防する」並びにそれらの派生語は、本明細書で用いる場合、１００％の、又は完全な治療又は予防を必ずしも意味しない。むしろ、当業者が潜在的な利益又は治療効果を有すると認識する、様々な程度の治療又は予防が存在する。これに関して、本発明の方法は、任意のレベルの任意の量の、哺乳動物における状態の治療又は予防を提供し得る。更に、本発明の方法が提供する治療又は予防は、治療又は予防されている１以上の状態又は状態の症状（例、がん）の治療又は予防を含み得る。例えば、治療又は予防は、腫瘍の退行を促進することを含み得る。また、本明細書の目的のために、「予防」は、状態の発症、又はその症状若しくは状態を遅延させることを包含し得る。
【００９５】
哺乳動物における状態の存在を検出する方法も提供される。該方法は、（ｉ）哺乳動物由来の１以上の細胞を含む試料と、本明細書に記載の、本発明のＴＣＲ（及びその機能的変異体）、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、抗体若しくはその抗原結合部分、又は医薬組成物のいずれかとを接触させ、それによって複合体を形成すること、及び該複合体を検出することを含み、該複合体の検出が哺乳動物における状態の存在を示し、状態が、がん、ＨＰＶ１６感染、ＨＰＶ陽性の前がん状態である。
【００９６】
哺乳動物における状態を検出する本発明の方法に関して、細胞の試料は、全細胞、その溶解物又は全細胞溶解物の画分（例、核画分又は細胞質画分、全タンパク質画分、又は核酸画分）を含む試料であり得る。
【００９７】
本発明の検出方法の目的のために、哺乳動物にｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏの接触を行うことがあり得る。好ましくは、接触はｉｎ  ｖｉｔｒｏである。
【００９８】
また、複合体の検出は当該技術分野で公知の、任意の数の方法によって起こり得る。例えば、本明細書中に記載の、本発明のＴＣＲ（及びその機能的変異体）、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、又は抗体若しくはその抗原結合部分は、例えば、放射性同位体、蛍光色素分子（例、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ））、酵素（例、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、及び元素粒子（例、金粒子）等の検出可能な標識で標識され得る。
【００９９】
宿主細胞又は細胞集団が投与される本発明の方法の目的のために、細胞は、哺乳動物に対して同種又は自己の細胞であり得る。好ましくは、細胞は哺乳動物に対して自己である。
【０１００】
本発明の方法に関して、がんは、急性リンパ球性がん、急性骨髄性白血病、肺胞横紋筋肉腫、骨がん、脳がん、乳がん、肛門、肛門管又は肛門直腸のがん、眼のがん、肝内胆管のがん、関節のがん、頸部、胆嚢又は胸膜のがん、鼻、鼻腔、又は中耳のがん、口腔のがん、膣のがん、外陰のがん、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性がん、大腸がん、食道がん、子宮頸がん、胃腸カルチノイド腫瘍、神経膠腫、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、腎臓がん、喉頭がん、肝臓がん、肺がん、悪性中皮腫、黒色腫、多発性骨髄腫、鼻咽頭がん、非ホジキンリンパ腫、口腔咽頭がん、卵巣がん、陰茎のがん、膵臓がん、腹膜がん、大網がん及び腸間膜がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、腎臓がん、皮膚がん、小腸がん、軟部組織がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、尿管がん及び膀胱がんを含む、任意のがんであり得る。好ましいがんは、子宮頸部、口腔咽頭、肛門、肛門管、肛門直腸、膣、外陰又は陰茎のがんである（ｉｓ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｓ  ｃａｎｃｅｒ）。特に好ましいがんは、ＨＰＶ１６陽性がんである。ＨＰＶ１６感染に最も一般的に関連するがんとしては、子宮頸部、口腔咽頭、肛門、肛門管、肛門直腸、膣、外陰及び陰茎のがんが挙げられる（ｉｎｃｌｕｄｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｓ  ｃａｎｃｅｒ  ｏｆ）が、本発明の方法は、任意のＨＰＶ１６陽性がん（他の解剖学的領域で生じるものを含む）を治療するために用いられ得る。
【０１０１】
本発明の方法において哺乳動物というのは、任意の哺乳動物であり得る。用語「哺乳動物」は、本明細書で用いる場合、マウス及びハムスター等、ネズミ目の哺乳動物、及びウサギ等、ウサギ目の哺乳動物を含む任意の哺乳動物を指すが、これらに限定されない。哺乳動物が、ネコ科の動物（ネコ）及びイヌ科の動物（イヌ）を含むネコ目由来であることが好ましい。哺乳動物が、ウシ属の動物（ウシ）及びイノシシ属の動物（ブタ）を含むウシ目、又はウマ属の動物（ウマ）を含むウマ目（Ｐｅｒｓｓｏｄａｃｔｙｌａ）由来であることが、より好ましい。哺乳動物が、霊長目、セボイド（Ｃｅｂｏｉｄｓ）目若しくはシモイド（Ｓｉｍｏｉｄｓ）目（サル）又は、類人（Ａｎｔｈｒｏｐｏｉｄｓ）目（ヒト及び類人猿）であることが、最も好ましい。特に好ましい哺乳動物は、ヒトである。
【０１０２】
以下の実施例は、本発明を更に説明しているが、当然ながら、多少なりともその範囲を制限すると解釈されるべきでない。
【０１０３】
実施例１
本実施例では、新生物からのヒト抗ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲの単離を実例で示す。
【０１０４】
ＨＰＶ１６陽性の子宮頸部上皮内新生物（ＣＩＮ）ＩＩ／ＩＩＩ由来のリンパ球サンプルを、１４人の患者から得た。患者は、以前にＨＰＶ１６  Ｅ７を標的とする様々なワクチンを受けていた。前述（Ｄｕｄｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２６：３３２−４２（２００３）及びＲｉｄｄｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２８：１８９−２０１（１９９０））のように、子宮頸部浸潤リンパ球（ＣＩＬ）数を、急速増幅プロトコル（Ｒａｐｉｄ  Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ）（ＲＥＰ）を用いて増幅した。簡潔には、ＴＩＬは、３０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体及び６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む完全培地（ＣＭ）中の、放射線照射（４０Ｇｙ）した同種末梢血単核「フィーダー」細胞と共に培養した。ＣＩＬを、数を増幅して、ｇｐ１００ペプチド、１１アミノ酸残基が重複した、１５ｍｅｒのＥ６ペプチドのプール（ＨＰＶ１６  Ｅ６の全長に及ぶ）、１１アミノ酸残基が重複した、１５ｍｅｒのＥ７ペプチドのプール（ＨＰＶ１６  Ｅ７の全長に及ぶ）、又はＯＫＴ３でパルスした自己樹状細胞（ＤＣ）との共培養後に、インターフェロン（ＩＦＮ）−γ分泌を測定することにより、ＨＰＶ１６  Ｅ７反応性についてスクリーニングした。１患者（５０４８）のＣＤ８＋ＣＩＬが、ＨＰＶ１６  Ｅ７反応性を有すると判定した。患者５０４８が、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１を発現することも判明した。
【０１０５】
ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１／Ｅ７１１−１９の４量体を用いて、エピトープＨＰＶ１６  Ｅ７１１−１９を標的とする、患者５０４８由来のＴ細胞の存在を判定した。４量体結合細胞を、抗ＰＥ抗体を用いた磁気ビーズ分離を用いて単離し、限界希釈クローニングを行った。Ｔ細胞クローンを４量体結合についてスクリーニングし、高結合性クローンを同定した。
【０１０６】
ＨＬＡ−Ａ２／Ｅ７１１−１９４量体と結合したクローンのＴＣＲのアルファ鎖及びベータ鎖の可変領域を単離し、ｃＤＮＡ末端の５’迅速増幅（ＲＡＣＥ）ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて配列決定した。配列番号９を含む野生型ヒトα鎖の可変領域をコードするｃＤＮＡを含むヌクレオチド配列を、ＴＲＡＶ１−２＊０１／ＴＲＡＪ７＊０１から得た。配列番号１１を含む野生型ヒトβ鎖の可変領域をコードするｃＤＮＡを含むヌクレオチド配列を、ＴＲＢＶ５−６＊０１／ＴＲＢＪ２−１／ＴＲＢＤ２から得た。
【０１０７】
実施例２
本実施例では、ヒト可変領域及びマウス定常領域を含むキメラ抗ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを発現するように形質導入した末梢血Ｔ細胞が、ＨＬＡ−Ａ２／Ｅ７１１−１９  ４量体に対する、ＣＤ８非依存的結合を示し、ＨＬＡ−Ａ２＋ＨＰＶ−１６＋腫瘍株を認識することを実例で示す。
【０１０８】
実施例１の野生型ヒトＴＣＲ由来のヒト可変領域及びマウス定常領域を含むキメラ抗ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲをコードするヌクレオチド配列を含むＭＳＧＶ１組換え発現ベクターを以下の通り調製した。組換え発現ベクター中のヌクレオチド配列は、実施例１のＴＣＲのα鎖の可変領域及びβ鎖の可変領域をコードした（組換え発現ベクター中のＮｃｏＩ制限部位及びＫｏｚａｋ配列を提供するために、β鎖（リーダー配列）の可変領域の２位において、天然のグリシンがアラニンで置換されていたことを除く）。キメラＴＣＲをコードするヌクレオチド配列を提供するために、α鎖及びβ鎖のマウス定常領域（それぞれ配列番号１７及び１９）をコードするヌクレオチド配列をそれぞれのヒト定常領域の代わりにベクターに挿入した。ピコルナウイルス２Ａペプチド（配列番号２８）をコードするコドン最適化ヌクレオチド配列をα鎖とβ鎖との間に配置した。キメラのα鎖及びβ鎖並びにリンカーをコードするヌクレオチド配列は、ヒト組織における発現のために、コドンを最適化した。
【０１０９】
末梢血細胞を、キメラＴＣＲをコードするＭＳＧＶ１組換え発現ベクター又は完全にマウスの抗ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲをコードするベクターからのレトロウイルスで形質導入した。非形質導入細胞をネガティブコントロールとして用いた。形質導入した細胞を抗ＣＤ８及び抗ＴＲＢＣ（マウス定常領域）抗体で標識し、フローサイトメトリーによりＨＬＡ−Ａ２／Ｅ７１１−１９４量体への結合について試験した。非形質導入細胞（ＣＤ８＋及びＣＤ８−の両方）及び以前の実験において同定されたコントロールのマウス抗ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲを発現するように形質導入した細胞（ＣＤ８＋及びＣＤ８−の両方）は、４量体と結合しなかった。キメラＨＰＶ−１６  Ｅ７  ＴＣＲで形質導入したＣＤ８＋細胞及びＣＤ８−細胞の両方が、４量体と結合した。従って、キメラＴＣＲで形質導入したＰＢＬは、ＣＤ８非依存的様態で、ＨＬＡ−Ａ２／Ｅ７１１−１９４量体と結合した。また、キメラＴＣＲのβ鎖を発現する、形質導入したＴ細胞の約５０％が、４量体に結合しないことが観察された。
【０１１０】
別の実験では、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を、約５０％の形質導入効率を有する、キメラＴＣＲをコードするＭＳＧＶ１組換え発現ベクターで形質導入した。蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によりＨＬＡ−Ａ２／Ｅ７１１−１９４量体結合を測定し、２５％の細胞が、刺激後８日目に４量体と結合することが判明した。形質導入した細胞と、標的の、ＨＰＶ１６  Ｅ６２９−３８ペプチドでパルスした２９３−Ａ２細胞（コントロール）、ＨＰＶ１６  Ｅ７１１−１９ペプチドでパルスした２９３−Ａ２細胞、ＨＰＶ１６  Ｅ６をコードするプラスミドで形質導入した６２４細胞、ＨＰＶ１６  Ｅ７をコードするプラスミドで形質導入した６２４細胞、ＳＣＣ１５２細胞、ＳＣＣ９０細胞、ＣａＳｋｉ細胞、Ａｌｂ細胞、Ｐａｎｃ１細胞、又はＳｉＨａ細胞とを、刺激の１０日後に共培養した。非形質導入細胞をコントロールとして用いた。ＩＦＮ−γを測定した。結果を図１に示す。図１に示す通り、キメラＴＣＲをコードするＭＳＧＶ１組換え発現ベクターで形質導入したＰＢＬは、ＨＬＡ−Ａ２拘束性の様態で、ＨＰＶ１６  Ｅ７陽性腫瘍細胞株及び他のＨＬＡ−Ａ２＋ＨＰＶ１６  Ｅ７＋標的を特異的に認識した。別のドナーの細胞で得られた結果は同様であった。
【０１１１】
実施例３
本実施例では、ヒト可変領域及びマウス定常領域を含むキメラ抗ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲ（該ＴＣＲのα鎖の定常領域の膜貫通（ＴＭ）領域の天然の３アミノ酸残基は、それぞれ疎水性アミノ酸残基で置換される）を作製する方法を実例で示す。
【０１１２】
ヒト可変領域及びマウス定常領域を含むキメラＴＣＲをコードするヌクレオチド配列であって、ＴＣＲのα鎖の定常領域の膜貫通領域の天然の３アミノ酸残基が、それぞれ疎水性アミノ酸残基で置換されている配列を、以下の通り調製した。実施例２のキメラＴＣＲのα鎖及びβ鎖をコードするヌクレオチド配列を、β鎖をコードするヌクレオチド配列が、α鎖をコードするヌクレオチド配列の５’に位置し、且つピコルナウイルス２Ａペプチド（配列番号２８）をコードするヌクレオチド配列が、α鎖とβ鎖との間に位置する状態で、単一ヌクレオチド配列にクローニングした。野生型α鎖マウス定常領域の配列番号１７を参照して、α鎖のＴＭ領域における天然の３アミノ酸残基（すなわち、それぞれ、位置１１２、１１４及び１１５のＳｅｒ、Ｍｅｔ及びＧｌｙを、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、及びＶａｌに、それぞれ、置換した。組み合わせたヌクレオチド配列を、ヒト組織における発現のためにコドンを最適化し、ベクターインサート（配列番号３９）を提供した。ベクターインサートを、ＭＳＧＶ１発現ベクターにクローニングし、配列番号３７を得た。ベクターによってコードされるＴＣＲは、配列番号２２を含むアミノ酸配列を含むα鎖及び、配列番号２０を含むアミノ酸配列を含むβ鎖を含んだ（「ＬＶＬ改変「ＴＣＲ」又は「ＬＶＬ  ＴＣＲ」）。
【０１１３】
実施例４
本実施例では、ヒト可変領域及びマウス定常領域を含むキメラ抗ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲ（β鎖及びα鎖中の天然の１のアミノ酸残基を、それぞれ１のシステイン残基で置換する）を作製する方法を実例で示す。
【０１１４】
実施例２のＴＣＲを、以下の通り、α鎖及びβ鎖のそれぞれの定常領域にＣｙｓ置換を含むように改変した。実施例２のＴＣＲのα鎖の定常領域（アミノ酸配列番号１７）をコードするヌクレオチド配列を改変して、４８位の天然のＴｈｒをＣｙｓで置換した。実施例２のＴＣＲのβ鎖の定常領域（配列番号１９）をコードするヌクレオチド配列を改変して、５６位の天然ＳｅｒをＣｙｓで置換した。α及びβ鎖をコードするヌクレオチド配列を、β鎖をコードするヌクレオチド配列が、α鎖をコードするヌクレオチド配列の５’に位置し、且つピコルナウイルス２Ａペプチド（配列番号２８）をコードするヌクレオチド配列がα鎖とβ鎖との間に位置する状態で、単一ヌクレオチド配列にクローニングした。組み合わせたヌクレオチド配列を、ヒトの組織における発現のためにコドンを最適化し、ベクターインサートを提供した。ベクターインサートをＭＳＧＶ１発現ベクターにクローニングした。ベクターにコードされるＴＣＲは、配列番号９及び２４を含むアミノ酸配列を含むα鎖及び配列番号２７を含むアミノ酸配列を含むβ鎖を含んだ（「Ｃｙｓ改変ＴＣＲ」又は「Ｃｙｓ  ＴＣＲ」）。
【０１１５】
実施例３のＴＣＲ（ＬＶＬ改変ＴＣＲ）を更に改変して、以下の通り、α鎖及びβ鎖のそれぞれの定常領域にＣｙｓ置換を含めた。実施例３のＬＶＬ改変ＴＣＲのα鎖の定常領域（アミノ酸配列番号２１）をコードするヌクレオチド配列を改変して、４８位の天然のＴｈｒをＣｙｓで置換した。実施例３のＬＶＬ改変ＴＣＲのβ鎖の定常領域（配列番号１９）をコードするヌクレオチド配列を改変して、５６位の天然のＳｅｒをＣｙｓで置換した。α鎖及びβ鎖をコードするヌクレオチド配列を、β鎖をコードするヌクレオチド配列が、α鎖をコードするヌクレオチド配列の５’に位置し、且つピコルナウイルス２Ａペプチド（配列番号２８）をコードするヌクレオチド配列が、α鎖とβ鎖との間に位置する状態で、単一ヌクレオチド配列にクローニングした。組み合わせたヌクレオチド配列を、ヒトの組織における発現のためにコドンを最適化し、ベクターインサート（配列番号４０）を提供した。ベクターインサートをＭＳＧＶ１発現ベクターにクローニングして、配列番号３８を得た。ベクターによってコードされるＴＣＲは、配列番号２６を含むアミノ酸配列を含むα鎖及び配列番号２７を含むアミノ酸配列を含むβ鎖を含んだ（「ＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ」又は「ＬＶＬ−Ｃｙｓ  ＴＣＲ」）。
【０１１６】
実施例５
本実施例では、実施例２のキメラ抗ＨＰＶ１６  Ｅ７  ＴＣＲをコードする組換え発現ベクターの改変がＨＰＶ１６Ｅ７１１−１９４量体結合を向上させ、ＨＰＶ１６＋腫瘍細胞株の認識を向上させることを実証する。
【０１１７】
２人のドナーからのＰＢＬを、表１に記載の、組換え発現ベクターの１つで形質導入した。
【０１１８】
【表１】
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【０１１９】
２人の正常ドナーからの形質導入ＰＢＬを、刺激後８日目に、抗ＨＰＶ１６  Ｅ７１１−１９４量体及び抗マウス（ｍ）ＴＲＢＣ抗体を用いたフローサイトメトリーにより、ＨＰＶ１６  Ｅ７１１−１９４量体結合について試験した。非形質導入細胞をネガティブコントロールとして用いた。結果を図２Ａ〜２Ｒに示す。各象限で検出された染色細胞のパーセンテージを各グラフの上に示す。図２Ａ〜２Ｒに示す通り、β鎖がα鎖の５’に位置する組換え発現ベクターで形質導入した細胞は、α鎖がβ鎖の５’に位置する組換え発現ベクターで形質導入した細胞と比較して、４量体結合の向上を実証した。やはり図２Ａ〜２Ｒに示す通り、Ｃｙｓ改変ＴＣＲ、ＬＶＬ改変ＴＣＲ、又はＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲで形質導入した細胞は、それぞれ実施例２のＴＣＲで形質導入した細胞と比較して、４量体結合の向上を実証した。
【０１２０】
別の実験においては、形質導入した細胞を、刺激の１１日後に、６２４細胞、ＣａＳｋｉ細胞、Ｓｃｃ９０細胞、又はＳｃｃ１５２細胞と共培養し、ＩＦＮ−γ分泌を測定した。非形質導入細胞をネガティブコントロールとして用いた。結果を図３Ａ及び３Ｂに示す。図３Ａ及び３Ｂに示す通り、Ｃｙｓ改変ＴＣＲ、ＬＶＬ改変ＴＣＲ、又はＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲで形質導入した細胞は、それぞれ、実施例２のＴＣＲで形質導入した細胞と比較して、ＨＰＶ１６＋腫瘍株の認識の向上を実証した。やはり図３Ａ〜３Ｂに示す通り、β鎖がα鎖の５’に位置する組換え発現ベクターで形質導入した細胞は、概して、α鎖がβ鎖の５’に位置する組換え発現ベクターで形質導入した細胞と比較して、ＨＰＶ１６＋腫瘍株の認識の向上を実証した。
【０１２１】
β鎖がα鎖の５’に位置する組換え発現ベクターで形質導入した細胞は、フローサイトメトリーにより測定した場合、α鎖がβ鎖の５’に位置する組換え発現ベクターで形質導入した細胞と比較して、発現の向上も実証した。
【０１２２】
実施例６
本実施例では、ＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）をコードする組換え発現ベクターで形質導入したＴ細胞が、ＨＰＶ−１６  Ｅ７１１−１９４量体のＣＤ８非依存的結合を示したことを実証する。
【０１２３】
末梢血細胞を、実施例４のＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）をコードするＭＳＧＶ１組換え発現ベクターで形質導入した。形質導入細胞を、抗ＣＤ８抗体、抗ＴＲＢＣ（マウス定常領域）抗体及びＨＬＡ−Ａ２／Ｅ７１１−１９４量体で標識し、フローサイトメトリーで解析した。両方のドナーからのＣＤ８＋形質導入細胞及びＣＤ８−形質導入細胞は両方とも４量体と結合し、これによりＣＤ８非依存的結合が実証された。
【０１２４】
実施例７
本実施例では、ＬＶＬ改変ＴＣＲ（β／α）を発現するように形質導入した末梢血Ｔ細胞が、ＨＰＶ１６  Ｅ７１１−１９ペプチド及びＨＰＶ１６＋腫瘍細胞株を特異的に認識することを実証する。
【０１２５】
ＰＢＬを、実施例３のＬＶＬ改変ＴＣＲ（β／α）をコードする組換え発現ベクター（配列番号３７）で形質導入した。前述（Ｄｕｄｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２６：３３２−４２（２００３）及びＲｉｄｄｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２８：１８９−２０１（１９９０））の通りの急速増幅プロトコル（ＲＥＰ）を用いて、細胞数の急速な増幅を行った。簡潔には、ＴＩＬを、３０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体及び６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む完全培地（ＣＭ）中、放射線照射（４０Ｇｙ）した同種末梢血単核「フィーダー」細胞と共に培養した。増幅した形質導入細胞と、標的の、ＨＰＶ１６  Ｅ６２９−３８ペプチドでパルスした２９３−Ａ２細胞（コントロール）、ＨＰＶ１６  Ｅ７１１−１９ペプチドでパルスした２９３−Ａ２細胞、ＨＰＶ１６  Ｅ６をコードするプラスミドで形質導入した６２４細胞、ＨＰＶ１６  Ｅ７をコードするプラスミドで形質導入した６２４細胞、ＳＣＣ１５２細胞、ＳＣＣ９０細胞、ＣａＳｋｉ細胞、Ａｌｂ細胞、Ｐａｎｃ１細胞、Ａｎｅ細胞又はＳｉＨａ細胞とを共培養した。ＩＦＮ−γを測定した。結果を図４に示す。図４に示す通り、ＬＶＬ改変ＴＣＲ（β／α）をコードする組換え発現ベクターで形質導入したＰＢＬは、ＨＬＡ−Ａ２拘束性の様態で、ＨＰＶ１６  Ｅ７陽性腫瘍細胞株及び他のＨＬＡ−Ａ２＋ＨＰＶ１６  Ｅ７＋標的を特異的に認識した。別のドナーの細胞により得た結果は、同様であった。
【０１２６】
実施例８
本実施例では、ＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）を発現するように形質導入した末梢血Ｔ細胞が、ＨＰＶ１６＋腫瘍細胞株を特異的認識すること、及びこの認識が、抗ＭＨＣクラスＩ抗体により阻止されることを実例で示す。本実施例では、これらの形質導入Ｔ細胞が、ＨＰＶ１６＋ＨＬＡ−Ａ２＋腫瘍細胞株を特異的に殺傷することも実例で示す。
【０１２７】
ＰＢＬを、ＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）をコードする組換え発現ベクター（配列番号３８）で形質導入した。実施例７に記載した通り、ＲＥＰを用いて細胞数の急速増幅を行った。形質導入した細胞を、抗体なし（黒色の棒）、又は抗ＭＨＣクラスＩ抗体（灰色の棒）若しくは抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体（陰影のない棒）の存在下で、標的の６２４細胞、ＳＣＣ９０細胞、又はＣａＳｋｉ細胞と共培養した。コントロールとして、ＰＢＬにＤＭＦ５  ＴＣＲで形質導入し、６２４細胞と、又は抗ＭＡＧＥ  Ａ３  ＴＣＲで形質導入し、５２６−ＣＩＩＴＡ細胞と、抗体なしで、又は抗ＭＨＣクラスＩ抗体若しくは抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体の存在下で、共培養した。ＩＦＮ−γを測定した。結果を図５に示す。図５に示す通り、ＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）を発現するように形質導入した末梢血Ｔ細胞は、ＨＰＶ１６＋腫瘍細胞株を特異的に認識し、この認識は抗ＭＨＣクラスＩ抗体により阻止された。
【０１２８】
別の実験においては、形質導入したエフェクター細胞を、様々なエフェクター：標的比で、標的のＣａＳｋｉ細胞、ＳＣＣ９０細胞、ＳＣＣ１５２細胞、又は６２４細胞と共培養した。非形質導入エフェクター細胞をネガティブコントロールとして用いた。結果を図６Ａ〜６Ｄに示す。図６Ａ〜６Ｄに示す通り、ＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）をコードする組換え発現ベクター（配列番号３８）で形質導入したＰＢＬは、ＨＰＶ１６＋ＨＬＡ−Ａ２＋腫瘍株の特異的死滅を実証した。
【０１２９】
実施例９
本実施例では、ＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）を発現するよう形質導入した末梢血Ｔ細胞が、抗ＨＰＶ１６  Ｅ６  ＴＣＲ  ＤＣＡ２Ｅ６と同様の機能的結合活性を有することを実証する。本実施例では、ＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）を発現するよう形質導入した末梢血Ｔ細胞が、ＣａＳｋｉ細胞及びＳＣＣ１５２細胞との共培養の際、ＤＣＡ２Ｅ６  ＴＣＲで形質導入した細胞と比較して、より高いＩＦＮ−γ産生を示したが、ＳＣＣ９０細胞との共培養の際はそうではなかったことも実証する。
【０１３０】
ＰＢＬを、ＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）（配列番号３８）又はＤＣＡ２Ｅ６をコードする組換え発現ベクターで形質導入した。形質導入した細胞を、ペプチド無し又は１μＭ〜１ｐＭの範囲の濃度のＨＰＶ１６  Ｅ７１１−１９ペプチド若しくはＨＰＶ１６  Ｅ６２９−３８ペプチドでパルスしたＴ２細胞と共培養した。ＩＦＮ−γを測定した。結果を図７Ａ及び７Ｂに示す。図７Ａ及び７Ｂに示す通り、ＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）を発現するように形質導入したＰＢＬは、抗ＨＰＶ１６  Ｅ６  ＴＣＲ  ＤＣＡ２Ｅ６と同様の機能的結合活性を有する。別のドナー由来の細胞により得られた結果は同様であった。
【０１３１】
別の実験においては、ＰＢＬを、ＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）（配列番号３８）又はＤＣＡ２Ｅ６を発現するよう形質導入した。非形質導入細胞をネガティブコントロールとして用いた。細胞を、標的の６２４細胞、Ｃａｓｋｉ細胞、ＳＣＣ９０細胞、又はＳＣＣ１５２細胞と共培養した。ＩＦＮ−γを測定した。結果を図８Ａに示す。図８Ａに示す通り、ＬＶＬ−Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）を発現するように形質導入した末梢血Ｔ細胞は、ＣａＳｋｉ細胞及びＳＣＣ１５２細胞との共培養の際、ＤＣＡ２Ｅ６  ＴＣＲで形質導入した細胞と比較して、より高いＩＦＮ−γ産生を示したが、ＳＣＣ９０細胞との共培養の際はそうではなかった。
【０１３２】
別の実験においては、ＰＢＬを、Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）（配列番号９、２４及び２７）又はＤＣＡ２Ｅ６を発現するよう形質導入した。非形質導入細胞をネガティブコントロールとして用いた。細胞を、標的のＨＰＶ１６  Ｅ６２９−３８ペプチドでパルスした２９３−Ａ２細胞（コントロール）、ＨＰＶ１６  Ｅ７１１−１９ペプチドでパルスした２９３−Ａ２細胞、ＳＣＣ１５２細胞、ＳＣＣ９０細胞、ＣａＳｋｉ細胞、Ａｌｂ細胞、Ａｎｅ細胞、Ｐａｎｃ１細胞、又はＳｉＨａ細胞と共培養した。ＩＦＮ−γを測定した。結果を図８Ｂに示す。図８Ｂに示す通り、Ｃｙｓ改変ＴＣＲ（β／α）を発現するよう形質導入した末梢血Ｔ細胞は、ＣａＳｋｉ細胞及びＳＣＣ１５２細胞との共培養の際、ＤＣＡ２Ｅ６  ＴＣＲで形質導入した細胞と比較して、より高いＩＦＮ−γ産生を示したが、ＳＣＣ９０細胞との共培養の際はそうではなかった。
【０１３３】
刊行物、特許出願及び特許を含む、本明細書中に引用した全ての参考文献は、それぞれの参考文献が参照によって組み込まれることが個々に且つ具体的に示されているのと同程度及びその全体が本明細書中に記載されているのと同程度まで、参照によって本明細書中に組み込まれる。
【０１３４】
本発明の説明に関して（特に、以下の特許請求の範囲に関して）、用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」及び「少なくとも１の（ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ）」並びに同様の指示対象の使用は、本明細書中に特記しないか文脈と明らかに矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方をカバーすると解釈すべきである。１以上の事項の列挙の後での用語「少なくとも１の」の使用（例えば、「Ａ及びＢのうち少なくとも１の」）は、本明細書中に特記しない又は文脈と明らかに矛盾しない限り、列挙した事項（Ａ若しくはＢ）から選択された１の事項又は列挙した事項（Ａ及びＢ）のうち２以上の任意の組み合わせを意味すると解釈されるべきである。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、特記しない限り、オープンエンドの用語（即ち、「〜を含むがそれらに限定されない」を意味する）と解釈すべきである。本明細書中の値の範囲の記述は、本明細書中に特記しない限り、その範囲内に入る各個別の値に個々に言及する省略方法として働くことのみを意図しており、各個別の値は、それが本明細書中に個々に記述されているかのように本明細書中に組み込まれる。本明細書中に記載される全ての方法は、本明細書中に特記しない又は文脈と明らかに矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施できる。本明細書中に提供される任意の及び全ての例又は例示的語句（例、「等（ｓｕｃｈ  ａｓ）」）の使用は、本発明をよりよく説明することのみを意図しており、特段特許請求されない限り、本発明の範囲に限定を課すものではない。本明細書中の全ての語句は、特許請求されていない任意の要素を本発明の実施に必須のものとして示していると解釈すべきではない。
【０１３５】
発明を実施するための、発明者が知る最良の形態を含む、本発明の好ましい実施形態が本明細書中に記載されている。これらの好ましい実施形態のバリエーションは、上述の説明を読めば当業者に明らかとなり得る。本発明者らは、当業者がかかるバリエーションを適宜使用することを予期しており、本発明者らは、本明細書中に具体的に記載されたのとは異なる方法で本発明が実施されることを意図している。従って、本発明は、適用法によって許容されるとおり、本明細書中に添付した特許請求の範囲に記載される対象の全ての改変及び均等物を含む。更に、その全ての可能なバリエーションでの上記要素の任意の組合せが、本明細書中に特記しない限り又は文脈と明らかに矛盾しない限り、本発明によって包含される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【配列表】
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