(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９６）を有効成分として含む機能性胃腸症改善剤。
【請求項２】
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９６）の培養物を有効成分として含む、請求項１に記載の機能性胃腸症改善剤。
【請求項３】
前記培養物が大豆培養物である、請求項２に記載の機能性胃腸症改善剤。
【請求項４】
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９６）の芽胞を含む、請求項３に記載の機能性胃腸症改善剤。
【請求項５】
経口摂取により機能性胃腸症を改善させる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の機能性胃腸症改善剤。
【請求項６】
錠剤である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の機能性胃腸症改善剤。
【請求項７】
錠剤が素錠である、請求項６に記載の機能性胃腸症改善剤。
【請求項８】
錠剤が糖衣錠である、請求項６に記載の機能性胃腸症改善剤。
【請求項９】
麦芽糖及びでんぷんを含む、請求項６〜８のいずれか１項に記載の機能性胃腸症改善剤。
【請求項１０】
１錠あたり２．０×１０8〜９．０×１０10ＣＦＵのバチルス・ズブチリスＣ−３１０２株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９６）を含む請求項６〜９のいずれか１項に記載の機能性胃腸症改善剤。
【請求項１１】
１錠あたり４．０×１０8〜２．０×１０10ＣＦＵのバチルス・ズブチリスＣ−３１０２株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９６）を含む請求項１０に記載の機能性胃腸症改善剤。
【請求項１２】
１日あたり１〜５錠服用されることを特徴とする、請求項１０又は１１に記載の機能性胃腸症改善剤。
【請求項１３】
１日あたり２．０×１０9〜２．０×１０10ＣＦＵのバチルス・ズブチリスＣ−３１０２株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９６）を摂取できるように製剤化されている、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の機能性胃腸症改善剤。
【請求項１４】
少なくとも２カ月間服用される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の機能性胃腸症改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バチルス・ズブチリス、特にバチルス・ズブチリスＣ−３１０２株またはその培養物を有効成分とする、機能性胃腸症の改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
機能性胃腸症は、内視鏡検査等で器質的疾患を認めないにも関わらず、心窩部痛、心窩部灼熱感、食後膨満感、早期膨満感などの症状を呈する疾患である。機能性胃腸症は、ストレス社会、偏った食事、高齢者人口の増加、運動不足等により、患者数が増加していると言われており、現在、日本人の約４人に１人が罹患していると考えられている。機能性胃腸症の発症機序については酸分泌異常、消化管運動機能異常、内臓知覚異常、Helicobacter pylori感染、心理社会的因子など諸説あり、未だに確立された治療法がなく、治療法の確立が望まれている。
【０００３】
プロバイオティクスとして用いられることの多いバチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis）は、ヒトにおいて、腸内菌叢改善作用や腸内腐敗産物の減少作用などが知られている（非特許文献１）。
【０００４】
出願人は、バチルス・ズブチリスの活性酸素の産生抑制作用やこれを利用した炎症性腸疾患予防治療剤（特許文献１）、バチルス・ズブチリスを鶏をはじめとする家畜に摂取させて、腸内有害細菌の数を減少させて、これらの菌による食中毒を回避する効果やこれを利用した飼料添加用腸内有害細菌抑制剤（特許文献２）について報告している。しかし、機能性胃腸症に対する効果に関する報告はこれまでない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特再公表２００８−６９１０２号
【特許文献２】特開平５−１４６２６０号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】腸内細菌学会誌  第１８巻  第二号  ９３−９９（２００４）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、経口摂取等により、安全かつ簡便に機能性胃腸症を改善（治療又は予防）するための手段を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するために鋭意検討し、発明者らは、バチルス・ズブチリスの菌体を経口摂取することで、機能性胃腸症が有意に改善することを見出した。
【０００９】
すなわち、本発明は以下の（１）〜（１５）を提供する。
（１）バチルス・ズブチリスを有効成分として含む機能性胃腸症改善剤；
（２）バチルス・ズブチリスの培養物を有効成分として含む、上記（１）に記載の機能性胃腸症改善剤；
（３）前記培養物が大豆培養物である、上記（２）に記載の機能性胃腸症改善剤；
（４）バチルス・ズブチリスの芽胞を含む、上記（３）に記載の機能性胃腸症改善剤。
（５）前記バチルス・ズブチリスがＣ−３１０２株（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９６）である、上記（１）〜（４）のいずれかに記載の機能性胃腸症改善剤；
（６）経口摂取により機能性胃腸症を改善させる、上記（１）〜（５）のいずれかに記載の機能性胃腸症改善剤；
（７）錠剤である、上記（１）〜（６）のいずれかに記載の機能性胃腸症改善剤；
（８）錠剤が素錠である、上記（７）に記載の機能性胃腸症改善剤；
（９）錠剤が糖衣錠である、上記（７）に記載の機能性胃腸症改善剤；
（１０）麦芽糖及びでんぷんを含む、上記（７）〜（９）のいずれかに記載の機能性胃腸症改善剤；
（１１）１錠あたり２．０×１０8〜９．０×１０10ＣＦＵのバチルス・ズブチリスを含む上記（７）〜（１０）のいずれか１項に記載の機能性胃腸症改善剤；
（１２）１錠あたり４．０×１０8〜２．０×１０10ＣＦＵのバチルス・ズブチリスを含む上記（１１）に記載の機能性胃腸症改善剤；
（１３）１日あたり１〜５錠服用されることを特徴とする、上記（１１）又は（１２）に記載の機能性胃腸症改善剤；
（１４）１日あたり２．０×１０9〜２．０×１０10ＣＦＵのバチルス・ズブチリスを摂取できるように製剤化されている、上記（１）〜（１３）のいずれかに記載の機能性胃腸症改善剤；
（１５）少なくとも２カ月間服用される、上記（１）〜（１４）のいずれかに記載の機能性胃腸症改善剤。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の機能性胃腸症改善剤は、微量かつ短期間で胃腸症状を改善することができる。有効成分であるバチルス・ズブチリスは古くから食品等に使用されており、長期にわたって安全に経口摂取することができる。それゆえ、本発明によれば、経口摂取という簡便な方法で、しかも安全に機能性胃腸症を改善させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、胃腸症状（個別症状スコア）の変化を示す（◆：プラセボ群、■：Ｃ−３１０２株群）。群間差：マン・ホイットニーのＵ検定, *p<0.05, **p<0.01、前後差：ウイルコクソンの符号付順位検定, #p<0.05, ##p<0.01
【図２】図２は、胃腸症状（下位尺度：統合スコア）の変化を示す（◆：プラセボ群、■：Ｃ−３１０２株群）。群間差：マン・ホイットニーのＵ検定, *p<0.05, **p<0.01、前後差：ウイルコクソンの符号付順位検定, #p<0.05, ##p<0.01
【図３】図３は、次世代シーケンサーによる腸内細菌の解析結果を示す（左：Ｃ−３１０２株群、右：プラセボ群）。群間差：マン・ホイットニーのＵ検定、 *p<0.05（平均値±SE）
【図４】図４は、２菌属（コリオバクテリウム科の菌属、ホールディマニア属）と全体スコアとの相関関係を示す（左：Ｃ−３１０２株群、右：プラセボ群）。群間差：マン・ホイットニーのＵ検定、 *p<0.05（平均値±SE）
【図５】図５は、Faecalibacterium prausnitziiの８週目占有率を示す。群間差：マン・ホイットニーのＵ検定、 *p<0.05（平均値±SE）
【発明を実施するための形態】
【００１２】
１．本発明の機能性胃腸症改善剤
１．１  有効成分：バチルス・ズブチリス
本発明の機能性胃腸症改善剤は、バチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を有効成分として含む。バチルス属の菌は古くからヒトの食生活に深くかかわっており、その機能性についての情報は多いが、機能性胃腸症に対する効果は未だ報告されていない。
【００１３】
本発明の機能性胃腸症改善剤は、バチルス属に属する細菌の菌体またはその培養物、好ましくはバチルス・ズブチリスの菌体またはその培養物を有効成分として含むことを特徴とする。バチルス・ズブチリスの菌学的性質はバージーズ・マニュアル・オブ・バクテリオロジー Ｖｏｌ．１１（１９８６）等に記載されており、具体的には例えば以下の特徴を有する。
（１）グラム陽性
（２）卵円形の芽胞を形成
（３）桿菌
（４）運動性：あり
（５）好気性
（６）カタラーゼ：陽性
（７）５０℃における発育：＋
（８）ｐＨ５．７における発育：＋
（９）クエン酸塩の利用：＋
（１０）糖類からの酸生成の有無：アラビノース、グルコース、キシロース、マンニット：＋
（１１）ＶＰ反応：＋
（１２）デンプンの加水分解：＋
（１３）硝酸塩の還元性：＋
（１４）インドールの生成：−
（１５）ゼラチンの加水分解：＋
（１６）カゼインの加水分解：＋
（１７）液体培地での被膜形成：＋
（１８）牛乳の凝固：−
（１９）牛乳のペプトン化：＋
【００１４】
バチルス・ズブチリスは芽胞（胞子）を形成し、芽胞は高温や消化酵素に対して耐久性を有する。本発明の機能性胃腸症改善剤は、このバチルス・サブチリスを芽胞状態で含み、それゆえ、経口摂取しても生きたまま腸に届き、その効果を発揮できる。
【００１５】
本発明に用いるバチルス・ズブチリスとしては、例えば、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株（１９８５年１２月２５日付にて受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９６として生命工学工業技術研究所に寄託されている（現  独立行政法人製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター：千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２室））を挙げることができる。
【００１６】
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株については、整腸作用（特表２０１１−１１１７８３号、脂質代謝改善作用（特表２００８−２３６０８号）、腎機能改善作用（特表２００８−２３６０７号）等、さまざまな有用な効果が知られている。すでに、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株を含む食品も市販されており、長期摂取による安全性も確立されている。
【００１７】
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株の大豆培養物は家畜に対して、腸内細菌叢改善、増体、感染防御、卵殻強化、肉質改善、便臭改善等の効果があり、添加物として利用されている（特公平４−２４０２２）。またこの株の保健効果として、整腸作用、腸内腐敗産物の減少などが知られている（腸内細菌学会誌 第18巻 第二号 93-99（2004））。
【００１８】
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２は、下記配列１及び配列２のＰＣＲプライマーを用いてＰＣＲ反応を行うと約７００ｂｐｓの断片が増幅するという特徴を持つ。他のバチルス・ズブチリスでは、このＰＣＲプライマーによって増幅は起こらない。バチルス・ズブチリスＣ−３１０２のゲノムをテンプレートとして増幅される約７００ｂｐｓの断片は、アミラーゼの配列と相同性を有しないという特徴をもち、この点においてＣ−３１０２株はバチルス・ズブチリスの他の株と明確に識別される。
配列１：５'−ＧＣＣＣＣＧＣＡＣＡＴＡＣＧＡＡＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＡ−３'（配列番号１）
配列２：５'−ＧＧＡＴＣＣＣＡＣＧＴＴＧＴＧＡＴＴＡＡＡＡＧＣＡＧＣＧＡＴ−３'（配列番号２）
【００１９】
さらに、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株は以下の性質を有する：
（１）プラスミドＤＮＡを有しない。
（２）ゲノムＤＮＡを調製し、制限酵素ＮｏｔＩまたはＳｆｉＩで消化してアガロース電気泳動により分離したときの消化パターンは図１に示されるとおりである。
（３）B.cerous抗菌物質を産生する。
（４）アンピシリン、クロラムフェニコール、シプロフロキサシン、エリスロマイシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、リネゾリド、キヌプリスチン／ダルフォプリスチン、リファムピン、ストレプトマイシン、テトラサイクリン、トリメトプリム、バンコマイシンに対して耐性を有しない（いずれも最小阻害濃度０．０３〜４μｇ／ｍｌ）。
【００２０】
１．２  バチルス・ズブチリスの培養物
バチルス・ズブチリスは、培地として微生物培養に通常使用される炭素源、窒素源、無機物等を含む液体培地又は固体培地を用いて培養することができる。炭素源としては、バチルス・ズブチリスが資化可能な炭素源であればよく、例えばグルコース、フルクトース、スクロース、スターチ、糖蜜等を、また窒素源としては、例えばペプトン、カゼイン加水分解物、肉エキス、硫安等を挙げることができる。更に、必要に応じて燐酸、カリウム、マグネシウム、カルシウム、ナトリウム、鉄およびマンガン等の塩類、ビタミン類、アミノ酸類、界面活性剤等を添加することもできる。また、これらの合成培地の他、大豆油かすなどの天然物由来物質を用いて培養してもよい。培養条件としては、好気的条件が好ましく、培養装置としては例えばジャーファーメンターによる通気撹拌液体培養、棚式固体培養、自動製麹培養装置等が好ましい。培養温度は２０〜５０℃、特に３０〜４５℃が好ましく、培養時間は１２時間〜７日間、培養初発ｐＨはｐＨ５〜９、特に好ましくはｐＨ６〜８である。
【００２１】
このようにして得られた培養物は、バチルス・ズブチリスの菌体、培地および発酵生成物を含む。培養物は、機能性胃腸症改善剤としてそのまま用いてもよく、培養物を濃縮してもよく、またはこれらに賦形剤等を加えて乾燥粉末、顆粒、錠剤等の製剤として用いてもよい。また、培養物から分離した菌体を用いてもよく、培養物から菌体を除去して用いてもよく、菌体を含む形の培養物を用いてもよい。特に好ましい態様においては、バチルス・ズブチリスは、大豆油かす、大豆煮豆、小豆煮豆、米飯、麦飯、小麦ふすま、煮とうもろこし、その他の穀類などの食用に適した天然物由来物質を用いて培養し、培養物から菌体を分離することなく、そのまま食品に配合する。
【００２２】
１．３  効果及び用法用量
本発明の機能性胃腸症改善剤は、経口摂取により機能性胃腸症に伴う胃腸症状、例えば、消化不良、下痢、腹痛、軟便等を改善させる。
【００２３】
本発明の機能性胃腸症改善剤は、腸内フローラにおいて、有用菌（炎症を抑制するとされる菌）を増加させ、胃腸症状の悪化と関連している可能性がある２菌属を減少させる。具体的に言えば、本発明の機能性胃腸症改善剤は、有用菌の一種であるフィーカリバクテリウム属の腸内フローラにおける占有率を増加させることができる。フィーカリバクテリウム属は、大腸で酪酸を産生する主要な菌であり、酪酸には、過剰な免疫応答を抑制する制御性Ｔ細胞の分化を促進し、炎症を抑制する。また、本発明の機能性胃腸症改善剤は、コリオバクテリウム科の菌属、及びホールディマニア属の占有率を減少させるが、これら２菌属は胃腸症状の悪化と関連している可能性が高いことが後述する実施例で明らかにされている。
【００２４】
本発明の機能性胃腸症改善剤は、薬理学的に許容される担体や添加物とともに適宜製剤化され、液体、粉末、造粒物、カプセル剤、錠剤等の形で投与してもよく、食品添加物として飲食品中に配合して摂取してもよい。飲食品としては、例えば、飲料、製菓錠菓、ペースト、パン、魚肉加工製品、乳製品、ゼリー、キャンディ、レトルト食品、クッキー、カステラ、ビスケット、チョコレートなどが挙げられる。本発明の機能性胃腸症改善剤をこれらの様々な食品素材に添加して、健康飲料、健康食品あるいは機能性食品として提供することができる。
【００２５】
本発明の機能性胃腸症改善剤は、１日あたり１．０×１０8〜２．０×１０11ＣＦＵ、好ましくは１日あたり１．０×１０9〜１．０×１０11ＣＦＵ、より好ましくは１日あたり１．０×１０9〜４．０×１０10ＣＦＵ、さらに好ましくは１日あたり２．０×１０9〜２．０×１０10ＣＦＵのバチルス・ズブチリスを摂取できるように服用されることが好ましい。服用回数は１錠に含まれる菌数にもより適宜設定され、特に限定されないが、１日１回〜５回、好ましくは１回〜４回、より好ましくは１日１回〜３回に分けて服用するか、あるいは１日１回服用する。本発明の機能性胃腸症改善剤の対象は、本剤の服用を必要とする者、すなわち、胃腸症状、例えば、消化不良、下痢、腹痛、軟便等の機能性胃腸症に伴う何らかの症状を有する者である。
【００２６】
本発明の有効成分であるバチルス・ズブチリスは微量かつ短期間で有効で、保存性と耐酸性にもすぐれ腸内に到達して増殖しやすく、持続的な胃腸機能改善作用が期待できる。一方、本発明のバチルス・ズブチリスは長期にわたって安全に摂取することができる。それゆえ、本発明の機能性胃腸症改善剤は２ヶ月以上、好ましくは６ヶ月以上、より好ましくは１年以上継続して使用するとよい。
【００２７】
２．機能性胃腸症改善用の錠剤
本発明は、バチルス・ズブチリス又はその培養物と薬理学的に許容しうる担体を含む錠剤（錠剤として製剤化された機能性胃腸症改善剤）を提供する。
【００２８】
薬理学的に許容しうる担体としては、例えば賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、矯味剤等が挙げられるが、これらに制限されず、その他常用の担体が適宜使用できる。
【００２９】
賦形剤としては、乳糖、白糖、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ソルビトール、デンプン、α化デンプン、デキストリン、結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アラビアゴム、プルラン、軽質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムが挙げられる。
【００３０】
滑沢剤としては、例えば、ショ糖脂肪酸エステルやグリセリン脂肪酸エステルなどのシュガーエステル類、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ステアリルアルコール、粉末植物油脂などの硬化油、サラシミツロウなどのロウ類、タルク、ケイ酸、ケイ素、等が挙げられる。
【００３１】
結合剤としては、α化デンプン、ショ糖、ゼラチン、アラビアゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、結晶セルロース、白糖、Ｄ−マンニトール、トレハロース、デキストリン、プルラン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドンが挙げられる。
【００３２】
崩壊剤としては、乳糖、白糖、デンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、軽質無水ケイ酸、低置換度ヒドロキシプロピルセルロースが挙げられる。
【００３３】
防腐剤としては、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸が挙げられ。また、抗酸化剤としては、亜硫酸塩、アスコルビン酸塩等が挙げられる。
【００３４】
着色剤としては、水溶性食用タール色素、水不溶性レーキ色素、β−カロチン、クロロフィル、ベンガラ等の天然色素が挙げられる。
【００３５】
甘味剤としては、サッカリンナトリウム、グリチルリチン酸二カリウム、アスパルテーム、ステビアが挙げられる。
【００３６】
上記のほか、例えば、ビタミン類、ミネラル類、アミノ酸類、カテキンや甜茶などの茶抽出物、グルコサミン、コンドロイチン、ノコギリヤシやりんごなどの植物抽出物、ぶどうやりんごなどに含まれるポリフェノール類、乳酸菌、ビフィズス菌、酪酸菌、納豆菌、糖化菌、酵母、デンプン、デキストリン、アラビアゴム、マンニトールやキシリトールなどの糖アルコール類、結晶セルロースやヒドロキシプロピルセルロースなどのセルロース誘導体、ゼラチン、グリセリン、発酵乳、ラクトフェリン、食物繊維、フレーバー等を含んでいてもよい。
【００３７】
特に、本発明の機能性胃腸症改善剤を含む錠剤は、グルコースやフルクトースなどの単糖、スクロースやラクトースなどの二糖、イソマルトやシクロデキストリンなどのオリゴ糖、グラニュー糖、麦芽糖、乳糖などの糖類、及びでんぷんを含むことが好ましい。
【００３８】
錠剤は、糖衣錠であっても素錠であってもよい。糖衣錠は、素錠に比べて一般的には崩壊性は低いが、有効成分の風味や臭いを感じにくいという利点がある。
【００３９】
本発明の錠剤は、機能性胃腸症改善剤は、１日あたり１．０×１０8〜２．０×１０11ＣＦＵ、好ましくは１日あたり１．０×１０9〜１．０×１０11ＣＦＵ、より好ましくは１日あたり１．０×１０9〜４．０×１０10ＣＦＵ、さらに好ましくは１日あたり２．０×１０9〜２．０×１０10ＣＦＵのバチルス・ズブチリスを摂取できるように服用され、好ましくは１日１回〜５回、より好ましくは１回〜４回、さらに好ましくは１日１回〜３回に分けて服用するか、あるいは１日１回服用することが好ましい。それゆえ、そのような服用に適した錠剤として製剤化されることが望ましい。
【００４０】
例えば、本発明の錠剤は、１錠あたり２．０×１０7〜２．０×１０11ＣＦＵ、好ましくは１錠あたり２．０×１０8〜９．０×１０10ＣＦＵ、より好ましくは１錠あたり４．０×１０8〜４．０×１０10ＣＦＵ、さらに好ましくは１錠あたり４．０×１０8〜２．０×１０10ＣＦＵのバチルス・ズブチリスを含むように調製される。
【００４１】
上述のとおり、本発明の有効成分であるバチルス・ズブチリスは微量かつ短期間で有効であるが、長期にわたって安全に摂取することができる。それゆえ、本発明の錠剤は、上記用法用量にしたがい、２か月以上、好ましくは６ヶ月以上、より好ましくは１年以上継続して使用するとよい。
【実施例】
【００４２】
以下に実施例により本発明をより詳細に説明するが，これらの実施例は本発明の範囲を制限するものではない。
【００４３】
実施例においては、バチルス属に属する細菌の例として、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株（１９８５年１２月２５日付にて受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９６として生命工学工業技術研究所に寄託されている（現  独立行政法人製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター：千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２室））を用いた。
【００４４】
実施例１：バチルス・ズブチリスの機能性胃腸症に対する効果
１．糖衣錠の調製
市販大豆油かす造粒品１０ｋｇに水５ｋｇを加えて１２１℃、６０分間殺菌し、予め前培養しておいたバチルス・ズブチリスＣ−３１０２株（生命工学工業技術研究所寄託番号  ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９６）の培養液を接種し、３７℃程度で、６０．５時間培養することにより、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株の大豆培養物を製造した。このようにして得られた培養物を乾燥粉砕し、下記の表に示す他の成分を配合して、糖衣錠を製造した。糖衣錠の組成を表１、２に示す。
【００４５】
【表１】
0006671950.tif 000002
【００４６】
【表２】
0006671950.tif 000003
【００４７】
２．試験方法
RomeIII基準により機能性胃腸症もしくはそれに準ずると医師が認めた２２〜７７歳の外来通院可能な４２名を対象とし、このうち２１名に３錠あたり４．５×１０9ＣＦＵのバチルス・ズブチリスＣ−３１０２株を含む糖衣錠を１日３錠、２ヶ月間摂取させ、残り２１名には、プラセボとしてデキストリンを含む錠剤を２ヶ月間摂取させた。１ヶ月ごとに、胃腸症状を評価するGastrointestinal Symptom Rating Scale (GSRS)アンケートを実施した。プラセボ群のうち２名は脱落したため、結果的にＣ−３１０２株群２１名、及びプラセボ群１９名が解析対象となった。摂取８週目においてプラセボ群と比較し、有意な改善がみられた項目を表３に示す。
【００４８】
【表３】
0006671950.tif 000004
【００４９】
また、摂取前と摂取４、８週間後に、高速シーケンサーを用いて腸内フローラを網羅的に解析した。
【００５０】
３．結果
（１）ＧＳＲＳスコア
消化不良スコア（腹鳴・膨満感・曖気・放屁）、下痢スコア（下痢・軟便・便意切迫）、および全体スコアの変化をグラフに示した。摂取４、８週間後に、消化不良スコアおよび全体スコアが、摂取８週間後に下痢スコアが有意に改善することが確認された（図２）。
投与８週目の時点で、プラセボ群と比較して、Ｃ−３１０２株群では１５項目中５項目（腹鳴、膨満感、放屁、下痢、軟便）の有意な改善が確認された。また、各評価項目を統合した評価では、消化不良スコア（腹鳴＋膨満感＋気＋放屁）および下痢スコア（下痢＋軟便＋便意切迫）の有意な改善が確認され、全てを統合した全体スコアでも有意な改善が確認された。以上の結果から、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株が、機能性胃腸症の症状改善作用を有することが明らかとなった。
【００５１】
（２）腸内フローラ解析
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株群はプラセボ群と比較して、有用菌の一種であるフィーカリバクテリウム属の腸内フローラに占める割合（占有率）が、摂取４、８週目において有意に増加していた（図３及び図５）。フィーカリバクテリウム属は、大腸で酪酸を産生する主要な菌であり、酪酸には、過剰な免疫応答を抑制する制御性T細胞の分化を促進し、炎症を抑制することがわかっている。
また、胃腸症状に関するＧＳＲＳスコアと占有率の変化との相関解析から、胃腸症状が悪い人ほど、コリオバクテリウム科の菌属、およびホールディマニア属の占有率が高いことが明らかになった。これらの２菌属は、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株群ではプラセボ群に比較して、摂取８週目において占有率が有意に減少していた。（図４）。以上の結果から、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株の摂取により、有用菌（炎症を抑制するとされる菌）が増加し、胃腸症状の悪化と関連している可能性がある２菌属が減少することが確認された。
【００５２】
（３）ピロリ菌の陽性率
ピロリ菌の陽性率については、Ｃ−３１０２株群及びプラセボ群のいずれにおいても、試験の前後（０週及び８週）で変化はなかった。
【００５３】
４．考察
機能性胃腸症を訴える被験者では、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株を摂取することにより、胃腸症状の改善、炎症抑制作用がある酪酸を産生する主要な菌であるFaecalibacterium prausnitziiの増加、機能性胃腸症の症状スコアと正相関のある菌の減少が認められた。
【００５４】
参考例１：バチルス・ズブチリスを含む素錠
実施例１にしたがい、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株の大豆培養物を製造した。得られた培養物を乾燥粉砕し、下記の表に示す他の成分を配合して、糖衣を施さない素錠を製造した。
【００５５】
【表４】
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【００５６】
２．崩壊性試験
第十六改正日本薬局方に準じて崩壊性試験を実施し、素錠の崩壊性を実施例１の糖衣錠と比較した。結果を下表に示す。
【００５７】
【表５】
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【００５８】
３．保存試験
アルミパウチ中で２３ヶ月及び３６ヶ月保存（２０℃）したときの保存安定性（菌数推移）を素錠と糖衣錠で比較した。結果を下表に示す。
【００５９】
【表６】
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【００６０】
４．素錠の過剰摂取安全性試験
３錠あたり５×１０9ＣＦＵのバチルス・ズブチリスＣ−３１０２株を含む素錠を調製し、便秘傾向者（男性５名、女性１名、合計６名）に、１日３錠（１日１回、原則として朝食後摂取）、４週間連続摂取させ、摂取期間中の排便回数を記録した。結果を図２に示す。
【００６１】
摂取１週目から排便回数が有意に増加した。バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株大豆培養物は素錠の形態にしても、服用による有害事象は認められず、糖衣錠と同様に便秘者において排便回数増加作用を有することが明らかとなった。
【００６２】
素錠は同じ組成の糖衣錠と比較して崩壊性に優れ、同等の保存安定性を示し、過剰摂取しても有害事象は認められず、糖衣錠と同様に安全であることが確認された。このことから、素錠についても、糖衣錠と同等あるいはそれ以上の機能性胃腸症改善作用が期待できる。
【００６３】
参考例２：ホームユーステスト
３錠あたり７×１０9ＣＦＵのバチルス・ズブチリスＣ−３１０２株を含む素錠及び糖衣錠を調製し、４５〜５４歳の女性３０名に素錠（１５名）もしくは糖衣錠（１５名）を６日間服用させ、体調変化、飲みやすさ（粒の大きさや粒の数が気になるか否か）についてアンケート調査を実施した。結果を下表に示す。
【００６４】
【表７】
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【００６５】
【表８】
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【００６６】
体調が改善した者は、糖衣錠摂取群と比較し、有意に素錠摂取群で多かった。また、粒の大きさや粒の数が気になる人の数が糖衣錠摂取群と比較し、素錠摂取群で減少した。
【００６７】
製剤例１：カプセル剤
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株大豆培養物と食用油脂を混合し、常法により下記成分からなるソフトカプセル剤皮の中に充填し、１粒３８０ｍｇのソフトカプセルを得た。
内容物
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株大豆培養物                １００ｍｇ
食用油脂                                                    １５０ｍｇ
剤皮
ゼラチン                                                    １００ｍｇ
グリセリン                                                    ３０ｍｇ
【００６８】
製剤例２：粉末剤
下記成分を配合し、常法に従って造粒し、５ｇ入りスティック顆粒を製造した。
配合
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株大豆培養物              ５％
ＣＭＣＮａ                                                適宜
デキストリン                                              適宜
【００６９】
製剤例３：液剤
下記成分を配合し、常法に従って、水１０ｋｇを加えて液剤を調製した。
配合
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株大豆培養物          １００ｇ
液糖                                                ４０００ｇ
ＤＬ−酒石酸ナトリウム                                    １ｇ
クエン酸                                                ５０ｇ
ビタミンＣ                                              ５０ｇ
ビタミンＥ                                            １５０ｇ
シクロデキストリン                                      ２５ｇ
塩化カリウム                                              ５ｇ
硫酸マグネシウム                                          ２ｇ
【産業上の利用可能性】
【００７０】
本発明の機能性胃腸症改善剤は、経口摂取により胃腸機能を改善させることができる。バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株はすでに整腸作用等を目的とした錠剤として利用されており、その安全性も確立している。よって、本発明の機能性胃腸症改善剤は、医薬品のみならず、機能性胃腸症改善を目的とした医薬部外品、食品として有用である。
【配列表フリーテキスト】
【００７１】
配列番号１：合成ＤＮＡ（フォワードプライマー）
配列番号２：合成ＤＮＡ（リバースプライマー）
【受託番号】
【００７２】
ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９６
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
0006671950.tif 000013
【図５】
0006671950.tif 000014
【配列表】
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