(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
赤血球を溶解させる溶血剤と、核酸を染色する染色色素と、血液試料とを混合して測定試料を調製する試料調製部と、
前記試料調製部によって調製された前記測定試料に対して光を照射したときに発生する側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する検出部と、
前記検出部によって検出された前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において白血球の集団の出現領域と巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定する弁別処理、及び、弁別された白血球の集団に属する粒子群を計数する計数処理を行う解析部と、
を備え、
前記解析部は、側方散乱光強度が大きくなるにしたがって蛍光強度が大きくなる粒子群を前記白血球の集団の出現領域として設定し、前記白血球の集団の出現領域よりも側方散乱光強度が小さい領域を前記巨大血小板を含む集団の出現領域として設定するように構成されている、
血液分析装置。
【請求項２】
前記解析部は、前記弁別処理によって設定された前記巨大血小板を含む集団の出現領域に、白血球の集団の出現領域と、巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定する再弁別処理を実行するように構成されている、
請求項１に記載の血液分析装置。
【請求項３】
前記解析部は、前記弁別処理において、前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間における、前記白血球を含む粒子集団の最大分散方向と交差する方向の各位置での前記粒子集団の粒子数に基づいて、前記粒子集団の出現領域に、前記白血球の集団の出現領域と前記巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定するように構成されている、
請求項１又は２に記載の血液分析装置。
【請求項４】
前記解析部は、前記再弁別処理において、前記弁別処理によって設定された巨大血小板を含む粒子集団の出現領域に交差する方向の各位置での前記粒子集団の粒子数に基づいて、白血球の集団の出現領域と巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定するように構成されている、
請求項２に記載の血液分析装置。
【請求項５】
前記検出部は、前記試料調製部によって調製された前記測定試料に対して光を照射したときに発生する前方散乱光強度をさらに検出するように構成されており、
前記解析部は、前記検出部によって検出された前記前方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において、白血球の集団の出現領域と他の粒子集団の出現領域とを設定する他の弁別処理を実行し、前記他の弁別処理の結果が所定の条件に合致した場合、前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において、白血球の集団の出現領域と巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定する前記弁別処理を実行するように構成されている、
請求項１乃至４の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項６】
前記解析部は、前記他の弁別処理によって得られた白血球の集団を、前記弁別処理において、前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において、白血球の集団と、巨大血小板を含む集団とに弁別するように構成されている、
請求項５に記載の血液分析装置。
【請求項７】
表示部を備え、
前記解析部は、
前記他の弁別処理の結果が前記所定の条件に合致しない場合、前記他の弁別処理において弁別された前記白血球の集団に含まれる粒子数を白血球数として前記表示部に表示させ、
前記他の弁別処理の結果が前記所定の条件に合致した場合、前記弁別処理において弁別された白血球の集団に含まれる粒子数を白血球数として前記表示部に表示させるように構成されている、
請求項５又は６に記載の血液分析装置。
【請求項８】
前記所定の条件は、所定範囲の前記前方散乱光強度および前記蛍光強度を有する粒子の数が閾値を超えることである、
請求項５乃至７の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項９】
表示部を備え、
前記解析部は、前記他の弁別処理の結果が前記所定の条件に合致した場合、巨大血小板の存在を示唆する情報を前記表示部に表示させる、
請求項５乃至８の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項１０】
表示部をさらに備え、
前記解析部は、前記側方散乱光強度と前記蛍光強度とを軸とする粒子分布図を前記表示部に表示させる、
請求項１乃至９の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項１１】
前記検出部は、
前記試料調製部によって調製された前記測定試料を流すためのフローセルと、
前記フローセルを流れる前記測定試料にレーザ光を照射するための光源部と、
前記フローセルを流れる前記測定試料に対して前記光源部からレーザ光が照射されたときに発生する側方散乱光及び蛍光を受光し、受光した側方散乱光の強度に応じた信号及び受光した蛍光の強度に応じた信号を出力する受光部と、
を含む、
請求項１乃至１０の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項１２】
赤血球が溶解され、血球中の核酸が染色された測定試料に対して光を照射する工程と、
前記測定試料に対して前記光が照射されることによって生じた側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する工程と、
検出された前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において白血球の集団の出現領域と巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定する弁別処理を行う工程と、
弁別された白血球の集団に属する粒子群を計数する計数処理を行う工程と、を備え、
前記弁別処理を行う工程では、側方散乱光強度が大きくなるにしたがって蛍光強度が大きくなる粒子群を前記白血球の集団の出現領域として設定し、前記白血球の集団の出現領域よりも側方散乱光強度が小さい領域を前記巨大血小板を含む集団の出現領域として設定する、
血液分析方法。
【請求項１３】
好塩基球、好塩基球を除く白血球、及び、有核赤血球を弁別するための試薬を血液試料と混合することにより、前記測定試料を調製する工程をさらに備える、
請求項１２に記載の血液分析方法。
【請求項１４】
前記試薬は、界面活性剤を含有し、
界面活性剤のｐＨが、２．０以上４．５以下である、
請求項１２又は１３に記載の血液分析方法。
【請求項１５】
血液試料を測定する測定部に接続されたコンピュータに、
赤血球が溶解され、血球中の核酸が染色された測定試料から生じた側方散乱光強度及び蛍光強度を検出することによって得られた測定データを取得する処理と、
取得された前記測定データにおける前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において白血球の集団の出現領域と巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定する弁別処理と、
弁別された白血球の集団に属する粒子群を計数する計数処理と、
を実行させ、
前記弁別処理において、前記コンピュータに、側方散乱光強度が大きくなるにしたがって蛍光強度が大きくなる粒子群を前記白血球の集団の出現領域として設定し、前記白血球の集団の出現領域よりも側方散乱光強度が小さい領域を前記巨大血小板を含む集団の出現領域として設定する処理を実行させる、
コンピュータプログラム。
【請求項１６】
赤血球を溶解させる溶血剤と、核酸を染色する染色色素と、血液試料とを混合して測定試料を調製する試料調製部と、
前記試料調製部によって調製された前記測定試料に対して光を照射したときに発生する側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する検出部と、
表示部と、
前記検出部によって検出された前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において巨大血小板を含む集団の出現領域を設定し、設定した前記巨大血小板を含む集団の出現領域に基づいて前記測定試料中の巨大血小板を検出し、巨大血小板の存在を示唆する情報を前記表示部に表示させる解析部と、
を備え、
前記解析部は、側方散乱光強度が大きくなるにしたがって蛍光強度が大きくなる粒子群の出現領域よりも側方散乱光強度が小さい領域を前記巨大血小板を含む集団の出現領域として設定するように構成されている、
血液分析装置。
【請求項１７】
赤血球が溶解され、核酸が染色された測定試料に対して光を照射する工程と、
前記測定試料に対して前記光が照射されることによって生じた側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する工程と、
検出された前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において巨大血小板を含む集団の出現領域を設定する工程と、
設定した前記巨大血小板を含む集団の出現領域に基づいて前記測定試料中の巨大血小板を検出し、巨大血小板の存在を示唆する情報を出力する工程と、を備え、
前記巨大血小板を含む集団の出現領域を設定する工程では、側方散乱光強度が大きくなるにしたがって蛍光強度が大きくなる粒子群の出現領域よりも側方散乱光強度が小さい領域を前記巨大血小板を含む集団の出現領域として設定する、
血液分析方法。
【請求項１８】
赤血球を溶解させる溶血剤と、核酸を染色する染色色素と、血液試料とを混合して測定試料を調製する試料調製部と、
前記試料調製部によって調製された前記測定試料に対して光を照射したときに発生する前方散乱光強度、側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する検出部と、
前記検出部によって検出された前記前方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において白血球の集団の出現領域と他の粒子集団の出現領域とを設定し、白血球の集団に属する粒子群を計数する第１弁別処理、及び、前記検出部によって検出された前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において白血球の集団の出現領域と他の粒子集団の出現領域とを設定し、白血球の集団に属する粒子群を計数する第２弁別処理を実行可能な解析部と、
表示部と、を備え、
前記解析部は、前記第１弁別処理の結果が所定の条件に合致しない場合には、前記第１弁別処理で得られた白血球数を前記表示部に表示させ、前記第１弁別処理の結果が前記所定の条件に合致した場合には、前記第２弁別処理で得られた白血球数を前記表示部に表示させる、
血液分析装置。
【請求項１９】
赤血球を溶解させる溶血剤と、核酸を染色する染色色素と、血液試料とを混合して測定試料を調製する試料調製部と、
前記試料調製部によって調製された前記測定試料に対して光を照射したときに発生する側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する検出部と、
前記検出部によって検出された前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において、白血球の集団の出現領域と巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定する弁別処理、及び、前記弁別処理によって設定された前記巨大血小板を含む集団の出現領域に、白血球の集団の出現領域と、巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定する再弁別処理を行い、前記弁別処理によって弁別された白血球の集団に属する粒子群および前記再弁別処理によって弁別された白血球の集団に属する粒子群のそれぞれを計数する計数処理を行う解析部と、
を備える、
血液分析装置。
【請求項２０】
赤血球を溶解させる溶血剤と、核酸を染色する染色色素と、血液試料とを混合して測定試料を調製する試料調製部と、
前記試料調製部によって調製された前記測定試料に対して光を照射したときに発生する前方散乱光強度、側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する検出部と、
前記検出部によって検出された前記前方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において、白血球の集団の出現領域と他の粒子集団の出現領域とを設定する第１弁別処理を実行し、前記第１弁別処理の結果が所定の条件に合致した場合、前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において、白血球の集団の出現領域と巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定し、白血球の集団に属する粒子群を計数する第２弁別処理を実行する解析部と、
を備える、血液分析装置。
【請求項２１】
赤血球を溶解させる溶血剤と、核酸を染色する染色色素と、血液試料とを混合して測定試料を調製する試料調製部と、
前記試料調製部によって調製された前記測定試料に対して光を照射したときに発生する側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する検出部と、
前記検出部によって検出された前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において白血球の集団の出現領域と巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定する弁別処理、及び、弁別された白血球の集団に属する粒子群を計数する計数処理を行う解析部と、
表示部と、を備え、
前記解析部は、前記側方散乱光強度と前記蛍光強度とを軸とする粒子分布図を前記表示部に表示させる、血液分析装置。
【請求項２２】
好塩基球、好塩基球を除く白血球、及び、有核赤血球を弁別するための試薬を血液試料と混合することにより、赤血球が溶解され、血球中の核酸が染色された測定試料を調製する工程と、
調製された前記測定試料に対して光を照射する工程と、
前記測定試料に対して前記光が照射されることによって生じた側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する工程と、
検出された前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において白血球の集団の出現領域と巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定する弁別処理を行う工程と、
弁別された白血球の集団に属する粒子群を計数する計数処理を行う工程と、を備える、
血液分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液から調製された測定試料を用いて白血球と巨大血小板とを弁別するための血液分析装置、血液分析方法、及びコンピュータプログラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
特許文献１には、血液試料に含まれる白血球と異常血球とを弁別し、異常血球の存在の有無を検知する血液分析装置が開示されている。この血液分析装置は、血液試料と溶血剤と染色用試薬とを混合して、ＣＢＣ（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏｕｎｔ）項目における白血球数を測定するための測定試料を調製する。この血液分析装置は、測定試料をフローセルに導入し、フローセルを流れる測定試料に光を照射して、測定試料から発せられる前方散乱光と蛍光とを検出する。この血液分析装置は、前方散乱光強度と蛍光強度とを用いて、白血球の粒子群と、血小板系異常血球の粒子群とを弁別する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０１０−２４９７９６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ベルナール-スーリエ症候群、メイ-ヘグリン異常症等の疾患がある被検者の血液試料には、顆粒が集合した「偽核」と呼ばれる構造を呈し、白血球と同程度のサイズの巨大血小板が存在する。特許文献１に開示された血液分析装置では、このような巨大血小板を含む血液試料において、白血球と血小板系異常血球とを正確に弁別することができない場合がある。そこで、白血球と巨大血小板との弁別精度の向上が望まれている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の第１の態様による血液分析装置は、赤血球を溶解させる溶血剤と、核酸を染色する染色色素と、血液試料とを混合して測定試料を調製する試料調製部と、前記試料調製部によって調製された前記測定試料に対して光を照射したときに発生する側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する検出部と、前記検出部によって検出された前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において白血球の集団の出現領域と巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定する弁別処理、及び、弁別された白血球の集団に属する粒子群を計数する計数処理を行う解析部と、を備え、前記解析部は、側方散乱光強度が大きくなるにしたがって蛍光強度が大きくなる粒子群を前記白血球の集団の出現領域として設定し、前記白血球の集団の出現領域よりも側方散乱光強度が小さい領域を前記巨大血小板を含む集団の出現領域として設定するように構成されている。
【０００６】
本発明の第２の態様による血液分析方法は、赤血球が溶解され、血球中の核酸が染色された測定試料に対して光を照射する工程と、前記測定試料に対して前記光が照射されることによって生じた側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する工程と、検出された前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において白血球の集団の出現領域と巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定する弁別処理を行う工程と、弁別された白血球の集団に属する粒子群を計数する計数処理を行う工程と、を備え、前記弁別処理を行う工程では、側方散乱光強度が大きくなるにしたがって蛍光強度が大きくなる粒子群を前記白血球の集団の出現領域として設定し、前記白血球の集団の出現領域よりも側方散乱光強度が小さい領域を前記巨大血小板を含む集団の出現領域として設定する。
【０００７】
本発明の第３の態様によるコンピュータプログラムは、血液試料を測定する測定部に接続されたコンピュータに、赤血球が溶解され、血球中の核酸が染色された測定試料から生じた側方散乱光強度及び蛍光強度を検出することによって得られた測定データを取得する処理と、取得された前記測定データにおける前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において白血球の集団の出現領域と巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定する弁別処理と、弁別された白血球の集団に属する粒子群を計数する計数処理と、を実行させ、前記弁別処理において、前記コンピュータに、側方散乱光強度が大きくなるにしたがって蛍光強度が大きくなる粒子群を前記白血球の集団の出現領域として設定し、前記白血球の集団の出現領域よりも側方散乱光強度が小さい領域を前記巨大血小板を含む集団の出現領域として設定する処理を実行させる。
【０００８】
本発明の第４の態様による血液分析装置は、赤血球を溶解させる溶血剤と、核酸を染色する染色色素と、血液試料とを混合して測定試料を調製する試料調製部と、前記試料調製部によって調製された前記測定試料に対して光を照射したときに発生する側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する検出部と、表示部と、前記検出部によって検出された前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において巨大血小板を含む集団の出現領域を設定し、設定した前記巨大血小板を含む集団の出現領域に基づいて前記測定試料中の巨大血小板を検出し、巨大血小板の存在を示唆する情報を前記表示部に表示させる解析部と、を備え、前記解析部は、側方散乱光強度が大きくなるにしたがって蛍光強度が大きくなる粒子群の出現領域よりも側方散乱光強度が小さい領域を前記巨大血小板を含む集団の出現領域として設定するように構成されている。
【０００９】
本発明の第５の態様による血液分析方法は、赤血球が溶解され、核酸が染色された測定試料に対して光を照射する工程と、前記測定試料に対して前記光が照射されることによって生じた側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する工程と、検出された前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において巨大血小板を含む集団の出現領域を設定する工程と、設定した前記巨大血小板を含む集団の出現領域に基づいて前記測定試料中の巨大血小板を検出し、巨大血小板の存在を示唆する情報を出力する工程と、を備え、前記巨大血小板を含む集団の出現領域を設定する工程では、側方散乱光強度が大きくなるにしたがって蛍光強度が大きくなる粒子群の出現領域よりも側方散乱光強度が小さい領域を前記巨大血小板を含む集団の出現領域として設定する。
【００１０】
本発明の第６の態様による血液分析装置は、赤血球を溶解させる溶血剤と、核酸を染色する染色色素と、血液試料とを混合して測定試料を調製する試料調製部と、前記試料調製部によって調製された前記測定試料に対して光を照射したときに発生する前方散乱光強度、側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する検出部と、前記検出部によって検出された前記前方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において白血球の集団の出現領域と他の粒子集団の出現領域とを設定し、白血球の集団に属する粒子群を計数する第１弁別処理、及び、前記検出部によって検出された前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において白血球の集団の出現領域と他の粒子集団の出現領域とを設定し、白血球の集団に属する粒子群を計数する第２弁別処理を実行可能な解析部と、表示部と、を備え、前記解析部は、前記第１弁別処理の結果が所定の条件に合致しない場合には、前記第１弁別処理で得られた白血球数を前記表示部に表示させ、前記第１弁別処理の結果が前記所定の条件に合致した場合には、前記第２弁別処理で得られた白血球数を前記表示部に表示させる。
本発明の第７の態様による血液分析装置は、赤血球を溶解させる溶血剤と、核酸を染色する染色色素と、血液試料とを混合して測定試料を調製する試料調製部と、前記試料調製部によって調製された前記測定試料に対して光を照射したときに発生する側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する検出部と、前記検出部によって検出された前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において、白血球の集団の出現領域と巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定する弁別処理、及び、前記弁別処理によって設定された前記巨大血小板を含む集団の出現領域に、白血球の集団の出現領域と、巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定する再弁別処理を行い、前記弁別処理によって弁別された白血球の集団に属する粒子群および前記再弁別処理によって弁別された白血球の集団に属する粒子群のそれぞれを計数する計数処理を行う解析部と、を備える。
本発明の第８の態様による血液分析装置は、赤血球を溶解させる溶血剤と、核酸を染色する染色色素と、血液試料とを混合して測定試料を調製する試料調製部と、前記試料調製部によって調製された前記測定試料に対して光を照射したときに発生する前方散乱光強度、側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する検出部と、前記検出部によって検出された前記前方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において、白血球の集団の出現領域と他の粒子集団の出現領域とを設定する第１弁別処理を実行し、前記第１弁別処理の結果が所定の条件に合致した場合、前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において、白血球の集団の出現領域と巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定し、白血球の集団に属する粒子群を計数する第２弁別処理を実行する解析部と、を備える。
本発明の第９の態様による血液分析装置は、赤血球を溶解させる溶血剤と、核酸を染色する染色色素と、血液試料とを混合して測定試料を調製する試料調製部と、前記試料調製部によって調製された前記測定試料に対して光を照射したときに発生する側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する検出部と、前記検出部によって検出された前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において白血球の集団の出現領域と巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定する弁別処理、及び、弁別された白血球の集団に属する粒子群を計数する計数処理を行う解析部と、表示部と、を備え、前記解析部は、前記側方散乱光強度と前記蛍光強度とを軸とする粒子分布図を前記表示部に表示させる。
本発明の第１０の態様による血液分析方法は、好塩基球、好塩基球を除く白血球、及び、有核赤血球を弁別するための試薬を血液試料と混合することにより、赤血球が溶解され、血球中の核酸が染色された測定試料を調製する工程と、調製された前記測定試料に対して光を照射する工程と、前記測定試料に対して前記光が照射されることによって生じた側方散乱光強度及び蛍光強度を検出する工程と、検出された前記側方散乱光強度及び前記蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間において白血球の集団の出現領域と巨大血小板を含む集団の出現領域とを設定する弁別処理を行う工程と、弁別された白血球の集団に属する粒子群を計数する計数処理を行う工程と、を備える。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、白血球と巨大血小板とを精度よく弁別することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】実施の形態に係る血液分析装置の構成を示す模式図。
【図２】解析部の構成を示すブロック図。
【図３】実施の形態に係る血液分析装置の動作の流れを示すフローチャート。
【図４】測定試料調製処理の手順を示すフローチャート。
【図５】測定データ解析処理の手順を示すフローチャート。
【図６】縦軸を前方散乱光強度、横軸を蛍光強度としたスキャッタグラムにおける好塩基球、好塩基球を除く白血球、有核赤血球、及び赤血球ゴーストの各粒子群の出現領域を説明するための図。
【図７】巨大血小板が出現する血液試料における前方散乱光強度及び蛍光強度を軸としたスキャッタグラムの一例を示す図。
【図８】判定処理を説明するための前方散乱光強度及び蛍光強度を軸としたスキャッタグラムを示す図。
【図９】判定処理の手順を示すフローチャート。
【図１０】ＳＳＣ−ＦＬ弁別処理の手順を示すフローチャート。
【図１１】ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理の結果の側方光強度及び蛍光強度を軸としたスキャッタグラムを示す図。
【図１２Ａ】巨大血小板弁別処理を説明するための側方散乱光強度及び蛍光強度を軸としたスキャッタグラムを示す図。
【図１２Ｂ】巨大血小板弁別処理を説明するための側方散乱光強度及び蛍光強度を軸としたスキャッタグラムを示す図。
【図１２Ｃ】巨大血小板弁別処理を説明するための側方散乱光強度及び蛍光強度を軸としたスキャッタグラムを示す図。
【図１２Ｄ】巨大血小板弁別処理を説明するための粒度分布を示す図。
【図１２Ｅ】巨大血小板弁別処理を説明するための側方散乱光強度及び蛍光強度を軸としたスキャッタグラムを示す図。
【図１３】巨大血小板弁別処理の結果の側方光強度及び蛍光強度を軸としたスキャッタグラムを示す図。
【図１４Ａ】再弁別処理を説明するための側方散乱光強度及び蛍光強度を軸としたスキャッタグラムを示す図。
【図１４Ｂ】再弁別処理を説明するための側方散乱光強度及び蛍光強度を軸としたスキャッタグラムを示す図。
【図１４Ｃ】再弁別処理を説明するための側方散乱光強度及び蛍光強度を軸としたスキャッタグラムを示す図。
【図１４Ｄ】再弁別処理を説明するための粒度分布を示す図。
【図１４Ｅ】再弁別処理を説明するための側方散乱光強度及び蛍光強度を軸としたスキャッタグラムを示す図。
【図１５】ＳＳＣ−ＦＬ弁別処理による弁別結果の前方散乱光強度及び蛍光強度を軸としたスキャッタグラムの一例を示す図。
【図１６】分析結果の表示例を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本実施の形態では、血液試料及び試薬から調整された測定試料に光を照射したときに発生する側方散乱光強度と蛍光強度とに基づいて、測定試料中の白血球と巨大血小板とを弁別する血液分析装置について説明する。
【００１４】
＜血液分析装置の構成＞
図１を参照し、血液分析装置の構成について説明する。血液分析装置１は、測定部２と、解析部３とを備える。測定部２は、血液試料を取り込み、血液試料から測定試料を調製し、測定試料を光学測定する。解析部３は、測定部２の測定により得られた測定データを処理し、血液試料の分析結果を表示する。
【００１５】
測定部２は、吸引部４と、試料調製部５と、検出部６と、信号処理回路８１と、マイクロコンピュータ８２と、通信インターフェース８３とを備える。
【００１６】
吸引部４は、図示しない吸引管を有し、試験管に収容された血液試料を吸引管によって吸引する。
【００１７】
試料調製部５は、反応槽５４を有し、試薬容器５１，５２，５３に接続されている。試薬容器５１は、希釈液を収容する。試薬容器５２は、赤血球を溶解させる溶血剤を収容する。試薬容器５３は、核酸を染色する染色色素を含有する染色用試薬を収容する。吸引部４は、吸引管を反応槽５４の上方へ移動させ、吸引された血液試料を反応槽５４に吐出する。試料調製部５は、血液試料と、溶血剤と、染色用試薬とを反応槽５４で混合し、測定試料を調製する。測定試料は、白血球の測定に用いられる。
【００１８】
試薬容器５１に収容される希釈液は、フローサイトメトリー方式による血球の測定においてシース液として利用される。
【００１９】
試薬容器５２に収容される溶血剤について説明する。溶血剤は、界面活性剤を含んでおり、赤血球を溶血させるとともに、白血球の細胞膜を損傷させる。溶血剤のｐＨは、２．０以上４．５以下が好ましく、２．０以上３．５以下がより好ましい。溶血剤は、具体的には、カチオン性界面活性剤およびノニオン性界面活性剤を含む。カチオン性界面活性剤の濃度としては、３００ｍｇ／Ｌ以上９０００ｍｇ／Ｌ以下が好ましく、４００ｍｇ／Ｌ以上８０００ｍｇ／Ｌ以下がより好ましく、５００ｍｇ／Ｌ以上７０００ｍｇ／Ｌ以下が最も好ましいが、使用するカチオン性界面活性剤の種類により適宜調製することができる。ノニオン性界面活性剤の濃度としては、５００ｍｇ／Ｌ以上７０００ｍｇ／Ｌ以下が好ましく、８００ｍｇ／Ｌ以上６０００ｍｇ／Ｌ以下がより好ましく、１０００ｍｇ／Ｌ以上５０００ｍｇ／Ｌ以下が最も好ましいが、使用するノニオン性界面活性剤の種類により適宜調製することができる。また、溶血剤は芳香族カルボン酸又はその塩を含んでもよい。溶血剤中の芳香族カルボン酸又はその塩の濃度は、溶血剤中のｐＨが上記に示した範囲となる濃度であれば特に限定されないが、０．１ｍＭ以上１００ｍＭ以下が好ましく、０．５ｍＭ以上５０ｍＭ以下がより好ましい。なお、溶血剤の詳細な組成は、米国特許出願公開第２０１０／３３０５６５号公報に記載されたものとすることができる。また、溶血剤には、シスメックス株式会社製のライザセルＷＮＲを用いることができる。
【００２０】
試薬容器５３に収容される染色用試薬について説明する。染色用試薬は、染色色素を含んでいる。溶血剤と染色用試薬と血液試料とを混合することで、細胞膜が損傷された細胞内に染色色素が入り、核酸及び細胞小器官を染色する。蛍光色素としては、核酸を染色するものであれば特に限定されず、一般的に当該分野において用いられるのであれば使用できる。具体的な染色用試薬の組成は、米国特許出願公開第２０１０／３３０５６５号公報に記載されたものとすることができる。また、溶血剤には、シスメックス株式会社製のフルオロセルＷＮＲを用いることができる。
【００２１】
なお、溶血剤と染色用試薬とを分けずに、赤血球を溶解させる溶血剤と染色色素とを含有する１つの試薬を、血液試料と混合して測定試料を調製してもよい。
【００２２】
検出部６は、フローサイトメトリー法による白血球の測定に用いられる。検出部６は、フローセル６１と、光源部６２と、受光部６３、６４、６５とを備える。フローセル６１は、試薬容器５１に収容された希釈液及び試料調製部５により調製された測定試料が供給される。フローセル６１は、測定試料を希釈液であるシース液で包んだ流れを形成する。
【００２３】
光源部６２は、半導体レーザ光源であり、波長６３３ｎｍの赤色レーザ光をフローセル６１へ照射する。
【００２４】
受光部６３、６４、６５は、フローセル６１中の測定試料の流れに光が照射されたときに、測定試料から発せられる光を受光し、受光した光の強度に応じた電気信号を出力する。受光部６３、６４、６５には、アバランシェフォトダイオード、フォトダイオード、又は光電子増倍管を採用できる。以下の説明では、光源部６２とフローセル６１とを結ぶ方向を「Ｘ方向」といい、Ｘ方向に対して直交する方向をＹ方向という。フローセル６１からＹ方向側には、ダイクロイックミラー６６が配置されている。ダイクロイックミラー６６は、測定試料から発せられる蛍光を透過し、測定試料から発せられる側方散乱光を反射する。受光部６３は、フローセル６１からＹ方向側に配置され、ダイクロイックミラー６６を透過した蛍光を受光できる。受光部６５は、ダイクロイックミラー６６を反射した側方散乱光を受光できる。また、受光部６４は、フローセル６１からＸ方向側に配置される。さらに具体的には、受光部６４は、フローセル６１を挟んで光源部６２の反対側に配置される。受光部６４は、測定試料から発せられる前方散乱光を受光できる。
【００２５】
なお、側方散乱光は、光源部６２の光軸方向であるＸ方向に対して９０°の方向（Ｙ方向）に散乱する光でなくてもよい。Ｘ方向に対して８０°以上１００°以下の方向に散乱する光を側方散乱光とすることができる。また、前方散乱光も、光源部６２の光軸方向であるＸ方向に散乱する光でなくてもよい。Ｘ方向に対して−１０°以上１０°以下の方向に散乱する光を前方散乱光とすることができる。
【００２６】
受光部６３、６４、６５のそれぞれは、受光強度を示すアナログ信号を出力する。以下、受光部６３から出力されるアナログ信号を「蛍光信号」、受光部６４から出力されるアナログ信号を「前方散乱光信号」、受光部６５から出力されるアナログ信号を「側方散乱光信号」という。
【００２７】
信号処理回路８１は、受光部６３、６４、６５が出力するアナログ信号に対して信号処理を行う。信号処理回路８１は、蛍光信号、前方散乱光信号、側方散乱光信号に含まれるパルスのピーク値を特徴パラメータとして抽出する。以下、蛍光信号のピーク値を「蛍光強度」といい、前方散乱光信号のピーク値を「前方散乱光強度」といい、側方散乱光信号のピーク値を「側方散乱光強度」という。
【００２８】
マイクロコンピュータ８２は、吸引部４、試料調製部５、検出部６、信号処理回路８１、及び通信インターフェース８３を制御する。
【００２９】
通信インターフェース８３は、通信ケーブルによって解析部３に接続される。測定部２は、通信インターフェース８３によって、解析部３とデータ通信を行う。通信インターフェース８３は、血液試料の測定が行われると、各特徴パラメータを含む測定データを解析部３へ送信する。
【００３０】
図２を参照し、解析部３の構成について説明する。解析部３は、本体３００と、入力部３０９と、表示部３１０とを備えている。本体３００は、ＣＰＵ（Central Processing Unit）３０１と、ＲＯＭ（Read Only Memory）３０２と、ＲＡＭ（Random Access Memory）３０３と、ハードディスク３０４と、読出装置３０５と、入出力インターフェース３０６と、画像出力インターフェース３０７と、通信インターフェース３０８とを有する。
【００３１】
ＣＰＵ３０１は、ＲＯＭ３０２に記憶されているコンピュータプログラム及びＲＡＭ３０３にロードされたコンピュータプログラムを実行する。ＲＡＭ３０３は、ＲＯＭ３０２及びハードディスク３０４に記録されているコンピュータプログラムの読み出しに用いられる。ＲＡＭ３０３は、コンピュータプログラムを実行するときに、ＣＰＵ３０１の作業領域としても利用される。
【００３２】
ハードディスク３０４には、測定部２から与えられた測定データを解析し、分析結果を表示するためのコンピュータプログラム３２０がインストールされている。
【００３３】
読出装置３０５は、フレキシブルディスクドライブ、ＣＤ−ＲＯＭドライブ、又はＤＶＤ−ＲＯＭドライブ等であり、可搬型記録媒体３２１に記録されたコンピュータプログラム又はデータを読み出すことができる。また、可搬型記録媒体３２１には、コンピュータを解析部３として機能させるためのコンピュータプログラム３２０が格納されている。可搬型記録媒体３２１から読み出されたコンピュータプログラム３２０は、ハードディスク３０４にインストールされる。
【００３４】
入力部３０９は、入出力インターフェース３０６に接続される。表示部３１０は、画像出力インターフェース３０７に接続される。通信インターフェース３０８は、測定部２の通信インターフェース８３に接続される。
【００３５】
＜血液分析装置の動作＞
図３を参照し、血液分析装置１の動作について説明する。
【００３６】
まず、解析部３のＣＰＵ３０１が、ユーザからの測定実行の指示を、入力部３０９を介して受け付ける（ステップＳ１０１）。測定実行の指示を受け付けると、ＣＰＵ３０１は、測定部２に測定開始を指示する指示データを送信し（ステップＳ１０２）、測定部２が指示データを受信する（ステップＳ１０３）。マイクロコンピュータ８２は、測定試料調製処理を実行し（ステップＳ１０４）、測定処理を実行する（ステップＳ１０５）。
【００３７】
図４を参照して、測定試料調製処理について説明する。マイクロコンピュータ８２が吸引部４を制御して、反応槽５４に所定量の血液試料を供給する（ステップＳ２０１）。次に、マイクロコンピュータ８２が試料調製部５を制御して、試薬容器５２から反応槽５４に所定量の溶血剤を供給し、試薬容器５３から反応槽５４に所定量の染色用試薬を供給する（ステップＳ２０２）。
【００３８】
反応槽５４は、ヒータによって所定温度になるように加温されている。加温された状態で、反応槽５４内の混合物の撹拌が行われる（ステップＳ２０３）。ステップＳ２０１〜Ｓ２０３の動作により、試料調製部５が反応槽５４において測定試料を調製する。マイクロコンピュータ８２が試料調製部５を制御して、測定試料を反応槽５４から検出部６へ導出する（ステップＳ２０４）。
【００３９】
ステップＳ２０４の処理が終了すると、マイクロコンピュータ８２は、メインルーチンへ処理をリターンする。
【００４０】
再び図３を参照する。測定処理では、検出部６が測定試料を測定する。測定処理において、試料調製部５がシース液と共に測定試料をフローセル６１に供給し、フローセル６１を測定試料が流れる。光源部６２がフローセル６１中の測定試料の流れに光を照射する。
【００４１】
測定試料がフローセル６１を流れると、白血球、有核赤血球、巨大血小板、溶血処理によって溶解された赤血球である赤血球ゴースト等の粒子がフローセル６１を順次通過する。白血球及び有核赤血球には核が存在するため、染色用試薬によって染色される。「偽核」の巨大血小板は内部の顆粒が染色用試薬によって染色される。赤血球ゴーストには核が存在しないため、染色用試薬によってはほとんど染色されない。
【００４２】
血球に光が照射される都度、粒子（白血球、有核赤血球、巨大血小板、赤血球ゴースト）からは蛍光、前方散乱光、及び側方散乱光が発せられる。受光部６３が粒子から発せられた蛍光を受光し、受光部６４が粒子から発せられた前方散乱光を受光し、受光部６５が粒子から発せられた側方散乱光を受光する。
【００４３】
受光部６３、６４、６５のそれぞれは、受光レベルに応じた電気信号を、蛍光信号、前方散乱光信号、側方散乱光信号として出力する。信号処理回路８１は、蛍光信号から蛍光強度を抽出し、前方散乱光信号から前方散乱光強度を抽出し、側方散乱光信号から側方散乱光強度を抽出する。
【００４４】
測定処理の後、マイクロコンピュータ８２は、各特徴パラメータを含む測定データを解析部３へ送信し（ステップＳ１０６）、処理を終了する。
【００４５】
解析部３は、測定データを受信する（ステップＳ１０７）。その後、ＣＰＵ３０１は、測定データ解析処理を実行し、血液試料の分析結果を生成して、分析結果をハードディスク３０４に格納する（ステップＳ１０８）。
【００４６】
図５を参照し、測定データ解析処理について説明する。測定データ解析処理を開始すると、まずＣＰＵ３０１は、測定データに含まれる前方散乱光強度及び蛍光強度を用いて、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理を実行する（ステップＳ３０１）。
【００４７】
ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理は、検出部６によって検出された前方散乱光強度及び蛍光強度に基づいて、白血球の集団と他の粒子集団とを弁別する処理である。さらに具体的には、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理は、好塩基球と、好塩基球以外の白血球と、有核赤血球と、赤血球ゴーストとを弁別する処理である。
【００４８】
図６を参照する。図６のスキャッタグラムにおいて、縦軸は前方散乱光強度を、横軸は蛍光強度を示している。前方散乱光強度は粒子の大きさを反映する情報である。好塩基球を除く白血球と、有核赤血球とは、大きさが同程度である。そのため、好塩基球を除く白血球の集団は、前方散乱光強度が有核赤血球の集団と同程度となる。また、上記の染色用試薬によって、白血球は有核赤血球より染色部位が保持される傾向にあり、有核赤血球よりも蛍光強度が強くなる。このため、好塩基球を除く白血球の集団は、蛍光強度が有核赤血球の集団よりも大きい。また、各白血球は細胞特性により外形及び内部構造がそれぞれ変化する。この形態的差異が前方散乱光強度の違いとして現れる。このため、好塩基球の集団は、前方散乱光強度が好塩基球を除く白血球の集団よりも大きい。赤血球ゴーストは、大きさが他の粒子に比べて小さく、また染色用試薬によってほとんど染色されない。このため、赤血球ゴーストを含む集団は、前方散乱光強度及び蛍光強度が他の粒子集団よりも小さい。
【００４９】
ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理において、ＣＰＵ３０１は、好塩基球、好塩基球を除く白血球、有核赤血球、赤血球ゴーストそれぞれの出現領域を設定し、好塩基球の出現領域に含まれる粒子群を好塩基球として、好塩基球以外の白血球の出現領域に含まれる粒子群を好塩基球以外の白血球として、有核赤血球の出現領域に含まれる粒子群を有核赤血球として、赤血球ゴーストの出現領域に含まれる粒子群を赤血球として、それぞれ弁別する。
【００５０】
好塩基球を除く白血球と赤血球ゴーストの弁別では、前方散乱光強度における粒度分布が用いられる。ＣＰＵ３０１は、粒度分布において２つの集団の境界を検出し、この境界よりも前方散乱光強度が大きい領域に出現する集団を好塩基球を除く白血球の集団とし、境界よりも前方散乱光強度が小さい領域に出現する集団を赤血球ゴーストの集団とする。
【００５１】
また、ＣＰＵ３０１は、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理において、白血球数と有核赤血球数とを計数し、計数結果をハードディスク３０４に記憶する。さらに具体的には、ＣＰＵ３０１は、弁別された好塩基球と好塩基球を除く白血球とを別々に計数し、その合計を白血球数とする。
【００５２】
再び図５を参照する。次にＣＰＵ３０１は、判定処理を実行する（ステップＳ３０２）。ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理の結果において、前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムにおける白血球の出現領域に、巨大血小板が出現することがある。巨大血小板が含まれる血液試料の場合には、図７に示すように、前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムにおいて、巨大血小板の集団が白血球の集団に重なるように出現する。また、巨大血小板の集団と赤血球ゴーストの集団とは互いに連なり、１つの集団として現れる。以下、巨大血小板の集団と赤血球ゴーストの集団とが連なった集団を、「巨大血小板を含む集団」という。判定処理では、ＣＰＵ３０１が、巨大血小板を含む集団が白血球の集団と重なって出現しているか否かを判定する。
【００５３】
なお、以下の説明における座標空間を用いた情報処理については、仮想的な座標空間において情報処理が行われるのであり、ＣＰＵ３０１が実際に座標空間を表示し、表示された座標空間内で情報処理を行うものではない。
【００５４】
判定処理は、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理の結果が所定の条件（以下、「判定条件」という）に合致するか否かを判定する処理である。判定条件は、前記前方散乱光強度と前記蛍光強度とを軸とする座標空間における所定領域に含まれる粒子数が閾値を超えることとすることができる。図８を参照して、所定領域について説明する。図８に示す前方散乱光強度及び蛍光強度の座標空間において、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理において好塩基球を除く白血球と赤血球ゴーストとの弁別に用いられた境界４００よりも前方散乱光強度が小さい側に所定領域（以下、「判定領域」という）４０１が設けられる。また、判定領域４０１の蛍光強度の範囲は、白血球及び巨大血小板が出現する蛍光強度の範囲とされる。
【００５５】
また、判定条件には、前方散乱光強度及び蛍光強度の座標空間において、境界４００上に存在する粒子数が所定の閾値を超えることを含めてもよい。この実施形態では、判定条件が、境界４００上に存在する粒子数が所定の閾値（以下、「第１閾値」という）を超えることである第１条件と、判定領域４０１に含まれる粒子数が第１閾値とは異なる閾値（以下、「第２閾値」という）を超えることである第２条件とを含む。
【００５６】
図９を参照し、判定処理について詳しく説明する。判定処理において、ＣＰＵ３０１は、第１判定処理（ステップＳ４０１）と、第２判定処理（ステップＳ４０２）とを実行する。
【００５７】
第１判定処理は、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理の結果が第１条件に合致しているか否かを判定する処理である。この第１判定処理において、ＣＰＵ３０１は、境界４００上に存在する粒子数を計数し、計数した粒子数が第１閾値を超えるか否かを判定する。境界４００は、好塩基球を除く白血球の集団と、赤血球ゴーストの集団とを区分する境界である。したがって、巨大血小板を含む集団が好塩基球を除く白血球の集団に重なっている場合には、巨大血小板を含む集団が境界４００を横切るように出現し、境界４００上に一定数以上の粒子が存在する。また、巨大血小板を含む集団が好塩基球を除く白血球の集団に重ならない場合には、赤血球ゴーストの集団が好塩基球を除く白血球の集団と離れて出現する。したがって、好塩基球を除く白血球の集団と赤血球ゴーストの集団との間にある境界４００上には粒子がほとんど存在しない。このように、第１条件に合致するか否かを判定することにより、巨大血小板を含む集団が、白血球の集団と重なって出現しているか否かを判定できる。
【００５８】
第２判定処理は、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理の結果が第２条件に合致しているか否かを判定する処理である。この第２判定処理において、ＣＰＵ３０１は、判定領域４０１に含まれる粒子数を計数し、計数した粒子数が第２閾値を超えるか否かを判定する。血液試料に巨大血小板が含まれる場合、巨大血小板の集団は、境界４００よりも前方散乱光強度が小さい赤血球ゴーストの集団から好塩基球を除く白血球の集団へ延びるように出現する。したがって、巨大血小板を含む集団が好塩基球を除く白血球の集団に重なっている場合には、巨大血小板を含む集団が判定領域４０１に重なるように出現し、判定領域４０１に一定数以上の粒子が存在する。また、巨大血小板を含む集団が好塩基球を除く白血球の集団に重ならない場合には、好塩基球を除く白血球の集団と赤血球ゴーストの集団との間にある判定領域４０１には粒子がほとんど存在しない。このように、第２条件に合致するか否かを判定することにより、巨大血小板を含む集団が、白血球の集団と重なって出現しているか否かを判定できる。
【００５９】
第２判定処理の後、ＣＰＵ３０１は、判定処理を終了する。
【００６０】
再び図５を参照する。ＣＰＵ３０１は、判定処理における判定結果が、第１条件及び第２条件の何れかの判定条件に合致していない場合には（ステップＳ３０３においてＮＯ）、巨大血小板の出現に関する巨大血小板フラグに０をセットする（ステップＳ３０４）。
【００６１】
また、判定処理における判定結果が、第１条件及び第２条件の両方の判定条件に合致している場合には（ステップＳ３０３においてＹＥＳ）、ＣＰＵ３０１は、巨大血小板フラグに１をセットし（ステップＳ３０５）、ＳＳＣ−ＦＬ弁別処理を実行する（ステップＳ３０６）。
【００６２】
なお、第１条件及び第２条件の両方に合致していない場合にＳＳＣ−ＦＬ弁別処理を実行せず、第１条件及び第２条件の何れかに合致している場合にＳＳＣ−ＦＬ弁別処理を実行する構成としてもよい。
【００６３】
巨大血小板フラグは、ＲＡＭ３０３の特定の領域に設けられている。巨大血小板フラグが０である場合、血液試料に巨大血小板が含まれている可能性が低いことを示す。巨大血小板フラグが１である場合、血液試料に巨大血小板が含まれている疑いがあることを示す。
【００６４】
判定条件に合致していない場合、血液試料に巨大血小板が含まれていないと考えられる。また、この場合、巨大血小板の集団が、好塩基球を除く白血球の集団と重なって出現していないと考えられる。したがって、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理によって得られた白血球数は正確であると考えられ、ＳＳＣ−ＦＬ弁別処理を実行する必要はない。よって、ＣＰＵ３０１は、ステップＳ３０４において巨大血小板フラグを０にセットした後、測定データ解析処理を終了する。
【００６５】
判定条件に合致している場合、血液試料に巨大血小板が含まれていると考えられる。また、この場合、巨大血小板の集団が、好塩基球を除く白血球の集団と重なって出現していると考えられる。したがって、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理によって得られた白血球数は正確ではないと考えられる。この場合、ＳＳＣ−ＦＬ弁別処理を実行することで、白血球と巨大血小板とを正確に弁別し、再度白血球を計数することで、正確な白血球数を得る。
【００６６】
ＳＳＣ−ＦＬ弁別処理について説明する。ＳＳＣ−ＦＬ弁別処理は、側方散乱光強度と蛍光強度とに基づいて、白血球と巨大血小板とを弁別する処理である。側方散乱光強度は、細胞の内部状態を反映した情報である。巨大血小板は白血球と大きさが同程度であるため、前方散乱光強度では正確に弁別することができない。ＳＳＣ−ＦＬ弁別処理では、側方散乱光強度と蛍光強度を用いることで、内部構造が異なる巨大血小板と白血球とを弁別する。
【００６７】
さらに具体的には、ＳＳＣ−ＦＬ弁別処理は、側方散乱光強度と蛍光強度とを軸とする座標空間における粒子の分布状態に基づいて、白血球及び巨大血小板それぞれの出現領域を設定し、白血球の出現領域に含まれる粒子群を白血球として、巨大血小板の出現領域に含まれる粒子群を巨大血小板として弁別する。ＳＳＣ−ＦＬ弁別処理では、側方散乱光強度及び蛍光強度の座標空間における粒子の粒度分布に基づいて、白血球と巨大血小板とを弁別してもよいし、側方散乱光強度及び蛍光強度の座標空間における粒子の分布状態によって粒子をクラスタリングし、白血球と巨大血小板とを弁別してもよい。クラスタリングによる弁別においては、側方散乱光強度と蛍光強度とを２つの直交軸とする２次元空間において粒子のクラスタリングを行うこともできるし、側方散乱光強度と蛍光強度と前方散乱光強度とを３つの直交軸とする３次元空間において粒子のクラスタリングを行うこともできる。
【００６８】
ＳＳＣ−ＦＬ弁別処理では、側方散乱光強度及び蛍光強度の座標空間における粒子の分布状態に基づいて、側方散乱光強度が大きくなるにしたがって蛍光強度が大きくなる粒子群を白血球の集団として弁別し、白血球の集団よりも側方散乱光強度が小さい領域に出現する粒子を巨大血小板として弁別する。
【００６９】
図１０を参照する。図１０に示すように、ＳＳＣ−ＦＬ弁別処理は、巨大血小板弁別処理（ステップＳ５０１）と、再弁別処理（ステップＳ５０２）と、白血球計数処理（ステップＳ５０３）とを含む。
【００７０】
巨大血小板弁別処理について説明する。ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理の結果が第１条件及び第２条件の両方に合致する場合には、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理において好塩基球及び好塩基球を除く白血球として弁別された粒子群（以下、「第１対象粒子群」という）は、白血球と巨大血小板とを含むと考えられる。巨大血小板弁別処理は、第１対象粒子群を、白血球の集団と、巨大血小板を含む集団とに弁別する処理である。さらに具体的には、巨大血小板弁別処理は、側方散乱光強度及び蛍光強度のそれぞれを座標軸とする座標空間における、第１対象粒子群の最大分散方向と交差する方向の各位置での第１対象粒子群の粒子数に基づいて、第１対象粒子群を、白血球の集団と巨大血小板を含む集団とに弁別する処理である。図１１において白血球と弁別された集団（好塩基球の集団及び好塩基球を除く白血球の集団の集合）が第１対象粒子群である。
【００７１】
図１２Ａ乃至図１２Ｅを参照する。図１２Ａに示す粒子群は、第１対象粒子群である。この第１対象粒子群は、図１２Ａ中破線で示す領域に巨大血小板の集団を含んでいる。図１２Ａに示すように、白血球の集団は、側方散乱光強度と蛍光強度とが比例する傾向がある。つまり、側方散乱光強度及び蛍光強度の座標空間において、白血球の集団は、側方散乱光強度が大きくなるにしたがって蛍光強度が大きくなる粒子群として出現する。また、側方散乱光強度及び蛍光強度の座標空間において、白血球として誤って弁別された巨大血小板の集団は、白血球の集団の隣の領域に出現する。
【００７２】
図１２Ｂに示すように、巨大血小板弁別処理において、ＣＰＵ３０１は、側方散乱光強度の座標軸及び蛍光強度の座標軸を含む平面に沿って延びるライン４３１を設定する。具体的には、ＣＰＵ３０１は、側方散乱光強度及び蛍光強度の座標空間を所定角度回転し、そのときの横軸をライン４３１とする。ライン４３１は、側方散乱光強度の座標軸及び蛍光強度の座標軸のそれぞれに対して傾斜した方向に延び、具体的には、蛍光強度の座標軸に対して時計回りに４５°傾斜した方向に延びる。つまり、ライン４３１は、第１対象粒子群の分布における最大分散方向に交差する方向に延びている。なお、ライン４３１を蛍光強度の座標軸に対して時計回りに４５°以外の角度傾斜した方向に延びる直線としてもよい。例えば、蛍光強度の座標軸に対して時計回りに３０°傾斜した方向に延びる直線をライン４３１とすることができる。
【００７３】
側方散乱光強度及び蛍光強度の座標軸のそれぞれは対数軸である。白血球の集団は、側方散乱光強度及び蛍光強度に比例する傾向があるため、２つの座標軸の両方が対数軸であることで、白血球の集団は側方散乱光強度及び蛍光強度の座標軸のそれぞれに対して斜めに延びる直線４１０に沿って分布する。つまり、直線４１０に沿った方向が白血球の集団の最大分散方向である。ライン４３１は、直線４１０に交差するように設定することができ、より具体的には、直線４１０に直交するように設定することができる。また、側方散乱光強度及び蛍光強度の座標軸を線形軸としてもよい。この場合も、白血球の集団は側方散乱光強度及び蛍光強度の座標軸のそれぞれに対して斜めに延びる直線に沿って分布する。
【００７４】
巨大血小板弁別処理では、ＣＰＵ３０１は、ライン４３１において第１対象粒子群の粒度分布を生成する。さらに具体的には、図１２Ｃに示すように、ＣＰＵ３０１は、ライン４３１が延びる方向に分割された複数の領域のそれぞれに含まれる粒子群を計数し、ライン４３１における粒度分布（ヒストグラム）を得る。
【００７５】
ここで、ライン４３１に沿った方向のうち、蛍光強度が大きくなる方向、つまり、側方散乱光強度が小さくなる方向を正方向とし、蛍光強度が小さくなる方向、つまり、側方散乱光強度が大きくなる方向を負方向とする。白血球として誤って弁別された巨大血小板の集団は、白血球の集団よりもライン４３１における正側の領域に、白血球の集団に沿って出現する。ＣＰＵ３０１は、図１２Ｄに示すように、粒度分布の谷を検出することによって境界４１１を設定し、境界４１１よりもライン４３１における負側に出現する白血球の集団と、境界４１１よりもライン４３１における正側に出現する巨大血小板を含む集団とを弁別する。図１２Ｅに示すように、側方散乱光強度及び蛍光強度の座標空間において、境界４１１は、ライン４３１と直交する方向に延びる直線である。
【００７６】
境界４１１よりもライン４３１における負側には、白血球が分布する。このため、境界４１１によって、白血球を正確に弁別できる。また、図１３に示すように、側方散乱光強度及び蛍光強度の座標空間において、巨大血小板弁別処理において巨大血小板を含む集団と弁別された粒子群は、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理において赤血球ゴーストと弁別された粒子群に連なるように出現する。
【００７７】
再弁別処理について説明する。再弁別処理は、巨大血小板弁別処理によって得られた巨大血小板を含む集団を、白血球の集団と、巨大血小板を含む集団とに弁別する処理である。
【００７８】
図１４Ａ乃至図１４Ｅを参照する。再弁別処理では、巨大血小板弁別処理において巨大血小板を含む集団として弁別された粒子群を処理対象とする。つまり、再弁別処理では、第１対象粒子群のうち、巨大血小板弁別処理で設定した境界４１１よりもライン４３１における正側の領域に含まれる粒子群を処理対象とする（図１４Ａ参照）。以下、再弁別処理の処理対象の粒子群を「第２対象粒子群」という。再弁別処理は、側方散乱光強度及び蛍光強度の座標空間におけるライン４３１が延びる方向とは異なる方向の各位置での第２対象粒子群の粒子数に基づいて、第２対象粒子群を、白血球の集団と巨大血小板を含む集団とに弁別する処理である。
【００７９】
第２対象粒子群は、図１４Ａ中破線で示す領域に白血球の集団を含んでいる。図１４Ａに示すように、側方散乱光強度及び蛍光強度の座標空間において、第２対象粒子群のうちの白血球の集団は、巨大血小板を含む集団よりも側方散乱光強度が大きい領域に出現する。
【００８０】
図１４Ｂに示すように、再弁別処理において、ＣＰＵ３０１は、側方散乱光強度及び蛍光強度の座標軸を含む平面に沿って延びる、ライン４３１とは異なるライン４３２を設定する。具体的には、ＣＰＵ３０１は、側方散乱光強度及び蛍光強度の座標空間をさらに所定角度回転し、そのときの横軸をライン４３２とする。ライン４３２は、ライン４３１に対して傾斜した方向に延び、具体的には、ライン４３１に対して時計回りに４５°傾斜した方向に延びる。このライン４３２は、側方散乱光強度の座標軸と平行な直線である。つまり、ライン４３２は、第２対象粒子群に交差する方向に延びている。なお、ライン４３２をライン４３１に対して時計回りに４５°以外の角度傾斜した方向に延びる直線としてもよい。例えば、ライン４３１に対して時計回りに３０°傾斜した方向に延びる直線をライン４３２とすることができる。
【００８１】
再弁別処理では、ＣＰＵ３０１は、ライン４３２において第２対象粒子群の粒度分布を生成する。さらに具体的には、図１４Ｃに示すように、ＣＰＵ３０１は、ライン４３２が延びる方向に分割された複数の領域のそれぞれに含まれる粒子群を計数し、ライン４３２における粒度分布（ヒストグラム）を得る。
【００８２】
ここで、ライン４３２に沿った方向のうち、側方散乱光強度が大きくなる方向を正方向とし、側方散乱光強度が小さくなる方向を負方向とする。第２対象粒子群のうち、白血球の集団は、巨大血小板を含む集団よりもライン４３２における正側の領域に出現する。ＣＰＵ３０１は、図１４Ｄに示すように、粒度分布の谷を検出することによって境界４２１を設定し、境界４２１よりもライン４３２における正側の領域に出現する白血球の集団と、境界４１１よりもライン４３２における負側の領域に出現する巨大血小板を含む集団とを弁別する。図１４Ｅに示すように、側方散乱光強度及び蛍光強度の座標空間において、境界４１１は、ライン４３２と直交する方向に延びる直線である。
【００８３】
白血球計数処理において、ＣＰＵ３０１は、巨大血小板弁別処理において白血球の集団と弁別された粒子群と、再弁別処理において白血球の集団と再弁別された粒子群とを合わせた粒子群を白血球の集団として白血球を計数し（図１５参照）、計数結果をハードディスク３０４に記憶する。このとき、ＣＰＵ３０１は、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理における白血球の計数結果を、ＳＳＣ−ＦＬ弁別処理における白血球の計数結果に置き換える。また、ＣＰＵ３０１は、再弁別処理において巨大血小板を含む集団として再弁別された粒子群と、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理において赤血球ゴーストと弁別された粒子群のうち境界４１１よりもライン４３１における正側の粒子群とを合わせた粒子群を巨大血小板を含む集団とする。以上で、ＣＰＵ３０１は、測定データ解析処理を終了し、メインルーチンへ処理をリターンする。
【００８４】
なお、ＳＳＣ−ＦＬ弁別処理において、再弁別処理を行わず、巨大血小板弁別処理のみを行ってもよい。また、巨大血小板弁別処理及び再弁別処理の２回ではなく、側方散乱光強度及び蛍光強度の座標軸を含む平面に沿って延びるラインを設定し、設定されたラインにおける複数位置の粒子数に基づいて、粒子群を弁別する処理を３回以上実行してもよい。この場合、各処理において、それぞれ異なるラインを設定することができる。
【００８５】
また、好塩基球、好塩基球を除く白血球、有核赤血球、巨大血小板を弁別するだけでなく、赤血球及び血小板を測定し、赤血球及び血小板を計数してもよい。この場合、上記の溶血剤及び染色用試薬とは異なる試薬を血液試料と混合して上記の測定試料とは異なる赤血球及び血小板測定用の測定試料を調製し、調製された測定試料をシースフローＤＣ検出法等によって測定してもよい。また、白血球を単球、リンパ球、好酸球、好中球、好塩基球等の複数の種類に分類し、種類毎に血球を計数してもよい。この場合、上記の測定試料とは異なる白血球分類用の測定試料を調製し、調製された測定試料をフローサイトメトリー法等で測定してもよい。
【００８６】
再び図３を参照する。上記のような測定データ解析処理を終了すると、ＣＰＵ３０１は、分析結果を表示部３１０に表示して（ステップＳ１０９）、処理を終了する。分析結果には、白血球数、有核赤血球数、及び好塩基球数等の各測定結果と、診断の参考となる参考情報とが含まれる。判定処理において、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理の結果が判定条件に合致している場合、巨大血小板の存在を示唆する情報が参考情報として表示される。
【００８７】
判定処理において、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理の結果が判定条件に合致していない場合、表示される白血球数は、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理によって白血球と弁別された粒子数である。ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理では、前方散乱光強度と蛍光強度とに基づいて白血球を弁別する。白血球と有核赤血球とは、蛍光強度に差異があるため、蛍光強度を用いることで白血球を有核赤血球と正確に弁別することができる。また、前方散乱光強度は細胞の大きさを反映した情報であるため、赤血球ゴーストとは大きさが異なる白血球を正確に弁別することができる。したがって、血液試料に巨大赤血球が含まれないと考えられる場合には、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理において弁別された白血球の数を表示することで、正確な白血球数を提示することができる。
【００８８】
判定処理において、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理の結果が判定条件に合致している場合、表示される白血球数は、ＳＳＣ−ＦＬ弁別処理において白血球と再弁別された粒子数である。血液試料に巨大血小板が含まれると考えられる場合、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理において白血球を正確に弁別できないおそれがある。したがって、この場合、ＳＳＣ−ＦＬ弁別処理において正確に巨大血小板と弁別した白血球の数を表示することで、正確な白血球数を提示することができる。
【００８９】
図１６を参照し、表示される分析結果についてさらに説明する。表示部３１０には、分析結果画面５００が表示される。分析結果画面５００は、試料情報表示領域５１０と、患者情報表示領域５２０と、測定結果表示領域５３０と、参考情報表示領域５４０とを有する。
【００９０】
試料情報表示領域５１０には、分析結果画面５００に表示されている分析結果の元となった血液試料の情報が表示される。患者情報表示領域５２０には、血液試料を採取された被験者の情報が表示される。
【００９１】
測定結果表示領域５３０には、測定データ解析処理によって得られた各項目の測定値が表示される。測定結果表示領域５３０に表示される測定値は、白血球数（ＷＢＣ）と、有核赤血球数（ＮＲＢＣ）と、好塩基球数（ＢＡＳＯ）の測定値を含む。また、測定結果表示領域５３０には、側方散乱光強度及び蛍光強度を座標軸とする座標空間における粒子の分布状態を示す分布図であるスキャッタグラム５３１と、前方散乱光強度及び蛍光強度を座標軸とする座標空間における粒子の分布状態を示す分布図であるスキャッタグラム５３２とを含む。
【００９２】
参考情報表示領域５４０には、測定データ解析処理によって、血液試料に巨大血小板が含まれている疑いがある等のユーザに報告すべき結果が得られた場合に、ユーザへの参考情報が表示される。測定データ解析処理において、巨大血小板フラグに１がセットされた場合、参考情報表示領域５４０に、巨大血小板の存在を示唆する情報である「Ｇｉａｎｔ−ＰＬＴ？」が表示される。なお、巨大血小板の存在を示唆する情報は上記に限られず、血液試料に巨大血小板が含まれている疑いがあることを示す情報であればよい。巨大血小板が血液試料に含まれる場合、ベルナール−スーリエ症候群、メイ−ヘグリン異常症、特発性血小板減少性紫斑病等の疾患の可能性がある。このため、血液試料に巨大血小板が含まれている疑いがあることを示す情報を提示することにより、これらの疾患の診断を支援することができる。
【００９３】
また、巨大血小板フラグに１がセットされた場合、ＳＳＣ−ＦＬ弁別処理によって得られた白血球の計数結果が表示される。この場合、ＦＳＣ−ＦＬ弁別処理によって得られた白血球の計数結果は正確ではないと考えられ、この計数結果を表示することはできない。このため、測定結果表示領域５３０において、白血球数の測定値と共に、低信頼性情報５３３である「＊」が表示される。これにより、表示される白血球数の信頼性が低いことをユーザに知らせることができる。
【符号の説明】
【００９４】
１  血液分析装置
２  測定部
３  解析部
５  試料調製部
６  検出部
７  第２検出部
６１  フローセル
６２  光源部
６３  検出部
６４  検出部
３０１  ＣＰＵ
３１０  表示部
３２０  コンピュータプログラム
３２１  可搬型記録媒体
【図１】
0006710512.tif 000002
【図２】
0006710512.tif 000003
【図３】
0006710512.tif 000004
【図４】
0006710512.tif 000005
【図５】
0006710512.tif 000006
【図６】
0006710512.tif 000007
【図７】
0006710512.tif 000008
【図８】
0006710512.tif 000009
【図９】
0006710512.tif 000010
【図１０】
0006710512.tif 000011
【図１１】
0006710512.tif 000012
【図１２Ａ】
0006710512.tif 000013
【図１２Ｂ】
0006710512.tif 000014
【図１２Ｃ】
0006710512.tif 000015
【図１２Ｄ】
0006710512.tif 000016
【図１２Ｅ】
0006710512.tif 000017
【図１３】
0006710512.tif 000018
【図１４Ａ】
0006710512.tif 000019
【図１４Ｂ】
0006710512.tif 000020
【図１４Ｃ】
0006710512.tif 000021
【図１４Ｄ】
0006710512.tif 000022
【図１４Ｅ】
0006710512.tif 000023
【図１５】
0006710512.tif 000024
【図１６】
0006710512.tif 000025