(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
５１ｋＤａのＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ５タンパク質）の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを、ヒト対象におけるグルココルチコイド受容体アンタゴニスト（ＧＲＡ）に対する生化学的応答を評価するための指標とする方法であって、
ａ）前記対象からの第１の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の第１の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第１の発現レベルが測定され、
ｉ）前記第１の試料は、初代細胞を含み、
ｉｉ）前記第１の試料は、前記ＧＲＡが前記対象に投与される前に得られ；
ｂ）前記対象からの第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の第２の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第２の発現レベルが測定され、
ｉ）前記第２の試料は、初代細胞を含み、
ｉｉ）前記第２の試料は、前記ＧＲＡが前記対象に投与された後に得られ；
ｃ）前記第１および第２の量、活性または発現レベルが比較され、
前記第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の前記量もしくは活性の減少、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする前記遺伝子の前記発現レベルの減少が、前記ＧＲＡに対する前記生化学的応答を示し、
前記第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の前記量もしくは活性の減少が検出されない、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする前記遺伝子の前記発現レベルの減少が検出されないことは、増加させた量のＧＲＡが前記対象に投与されることを示す、方法。
【請求項２】
前記第１の試料が、前記対象へのＧＲＡの複数回投与の前に得られ、前記第２の試料が、前記対象へのＧＲＡの複数回投与の後に得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ａ）および／またはｂ）の測定が、前記試料中のＦＫＢＰ５タンパク質をコードするｍＲＮＡの量を定量するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ａ）および／またはｂ）の測定が、前記試料中のＦＫＢＰ５タンパク質の前記量を定量するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ａ）および／またはｂ）の測定が、前記試料中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性の量を定量するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記試料中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性の量を定量するステップが、前記試料中のＦＫＢＰ５タンパク質のペプチジル−プロリル−シス−トランスイソメラーゼ活性を測定するステップを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記試料中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性の量を定量するステップが、前記試料中のグルココルチコイド受容体（ＧＲ）と結合しているＦＫＢＰ５タンパク質の量を測定するステップを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記対象に投与される前記ＧＲＡが、ミフェプリストンを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記対象に投与される前記ＧＲＡが、ミフェプリストンではない、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記対象に投与される前記ＧＲＡが、ヘテロアリール−ケトンＧＲＡを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記第１または第２の試料が、全血またはその画分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１または第２の試料が、鼻粘膜上皮の擦過試料を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記対象が、がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、前立腺がん、転移性前立腺がん、卵巣がん、クッシング症候群またはクッシング病を有するかまたは有する疑いがある、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記対象が、上昇したレベルのコルチゾールを有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記対象ががんを有し、前記第１および第２の試料が腫瘍細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記第１および第２の試料が、全血またはその画分を含む、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１５年５月１８日に出願された米国仮出願第６２／１６３，１３０号の優先権を主張し、その内容は、全体においてすべての目的のために参照によって組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
グルココルチコイド（ＧＣ）は、ほぼ全ての脊椎動物細胞に存在するグルココルチコイド受容体（ＧＲ）に結合してそれを活性化するステロイドホルモンの一クラスである。ＧＲは多面的であり、脊椎生物における種々の重要な経路、例えば、代謝、免疫、および発生を制御する。そのため、ＧＲ活性または制御の検出は、種々の異なる脊椎動物の疾患を診断するため、またはＧＲ活性をモジュレートする処置に対する臨床もしくは生化学的応答を評価するために使用することができる。
【０００３】
例えば、ＧＲ活性または制御の検出は、様々な形態のクッシング症候群の検出のために使用することができる。別の例として、グルココルチコイド受容体アンタゴニスト（ＧＲＡ）は、いくつかの異なる疾患および状態を処置するために患者に投与することができ、ＧＲＡの投与に応答したＧＲ活性の変化の検出は、処置に対する臨床もしくは生化学的応答を示すか、または評価することができる。しかしながら、ＧＲ活性を評価するための現在の方法および組成物は、以下の欠点：高コスト、低感度、低特異性、高偽陽性率または高偽陰性率のうちの１つまたは複数を有する。したがって、ＧＲ活性の検出のための改善された方法および組成物が依然として必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
第１の態様では、本発明は、ヒト対象におけるグルココルチコイド受容体アンタゴニスト（ＧＲＡ）に対する臨床または生化学的応答を評価するための方法であって、ａ）対象からの第１の試料中の、５１ｋＤａのＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ５タンパク質）の第１の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第１の発現レベルを測定するステップであって、ｉ）第１の試料は、初代細胞を含み、ｉｉ）第１の試料は、ＧＲＡを対象に投与する前に得られる、または得られた、ステップ；ｂ）任意選択で、ＧＲＡを対象に投与するステップ；ｃ）対象からの第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の第２の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第２の発現レベルを測定するステップであって、ｉ）第２の試料は、初代細胞を含み、ｉｉ）第２の試料は、ＧＲＡを対象に投与した後に得られる、または得られた、ステップ；ならびにｄ）第１および第２の量、活性または発現レベルを比較するステップを含み、第１の試料と比較して、第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性の減少、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルの減少が、ＧＲＡに対する臨床または生化学的応答を示す、方法を提供する。一部の場合では、減少がないことは、ＧＲＡに対する臨床応答の欠如または生化学的応答の欠如を示す。
【０００５】
第２の態様では、本発明は、ヒト対象におけるＧＲＡに対する臨床または生化学的応答を評価するための方法であって、ａ）対象からの第１の試料中の、５１ｋＤａのＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ５タンパク質）の第１の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第１の発現レベルを測定するステップであって、ｉ）第１の試料は、初代細胞を含み、ｉｉ）第１の試料は、ＧＲＡを対象に投与する前に得られる、または得られた、ステップ；ｂ）任意選択で、ＧＲＡを対象に投与するステップ；ｃ）対象からの第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の第２の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第２の発現レベルを測定するステップであって、ｉ）第２の試料は、初代細胞を含み、ｉｉ）第２の試料は、ＧＲＡを対象に投与した後に得られる、または得られた、ステップ；ｄ）第１および第２の量、活性または発現レベルを比較して、ＦＫＢＰ５の差分値を得るステップ；ｅ）差分値を、少なくとも２０人または３０人または５０人の試験個体のコホートに由来する差分閾値と比較するステップ；ならびにｆ）差分値および差分閾値の比較に基づき、ＧＲＡに対する臨床もしくは生化学的応答を有する対象または有さない対象を同定するステップを含む方法を提供する。一部の場合では、差分閾値は減少閾値であり、減少閾値を超える、第１および第２の試料の間のＦＫＢＰ５の量または活性の減少の存在は、ＧＲＡに対する臨床または生化学的応答を示す。一部の場合では、差分閾値は減少閾値であり、減少閾値に類似する（例えば、減少閾値の約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％または７０％以内である）、第１および第２の試料の間のＦＫＢＰ５の量または活性の減少の存在は、ＧＲＡに対する臨床または生化学的応答を示す。一部の場合では、少なくとも２０人または３０人または５０人の試験個体は、クッシング症候群であることが既知であるか、または疑いがある対象である。一部の場合では、差分閾値は、ＧＲＡの投与によって、コントロールもしくは十分にコントロールされるクッシング症候群であることが既知であるか、または疑いがある、２０人または３０人または５０人の試験個体のコホートにおいて、ＧＲＡの投与前のＦＫＢＰ５の量、活性または発現から、ＧＲＡの投与後のＦＫＢＰ５の量、活性または発現を減算することにより決定される。
【０００６】
一部の実施形態では、対象は、ＧＲＡを複数用量で投与され、第１の試料は、複数用量のＧＲＡを対象に投与する前に得られ、第２の試料は、複数用量のＧＲＡを対象に投与した後に得られる。一部の実施形態では、ａ）および／またはｃ）の測定するステップは、試料中のＦＫＢＰ５タンパク質をコードするｍＲＮＡの量を定量するステップを含む。一部の実施形態では、ａ）および／またはｃ）の測定するステップは、試料中のＦＫＢＰ５タンパク質の量を定量するステップを含む。一部の実施形態では、測定するステップは、試料中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性の量を定量するステップを含む。一部の実施形態では、試料中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性の量を定量するステップは、試料中のＦＫＢＰ５タンパク質のペプチジル−プロリル−シス−トランスイソメラーゼ活性を測定するステップを含む。一部の実施形態では、試料中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性の量を定量するステップは、試料中のグルココルチコイド受容体（ＧＲ）と結合しているＦＫＢＰ５タンパク質の量を測定するステップを含む。
【０００７】
一部の実施形態では、ＧＲＡを対象に投与するステップは、ミフェプリストンを対象に投与するステップを含む。一部の実施形態では、ＧＲＡを対象に投与するステップは、ミフェプリストンではないＧＲＡを対象に投与するステップを含む。一部の実施形態では、ＧＲＡを対象に投与するステップは、ヘテロアリール−ケトンＧＲＡを投与するステップを含む。一部の実施形態では、第１または第２の試料は、全血またはその画分を含む。一部の実施形態では、第１および第２の試料は、全血またはその画分を含む。一部の実施形態では、第１または第２の試料は、鼻粘膜上皮の擦過試料を含む。一部の実施形態では、患者は、グルココルチコイド受容体アンタゴニスト（ＧＲＡ）の投与を必要とする。一部の実施形態では、患者は、上昇したレベルのコルチゾールを有する。
【０００８】
一部の実施形態では、患者は、がんを有し、第１および第２の試料は、腫瘍細胞を含む。一部の実施形態では、第１または第２の試料は、全血またはその画分を含む。一部の実施形態では、第１および第２の試料は、全血またはその画分を含む。一部の実施形態では、方法は、増加させた量のＧＲＡを、第２の試料中、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性の減少が検出されない、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルの減少が検出されない対象に投与するステップを含む。
【０００９】
第３の態様では、本発明は、ヒト対象におけるクッシング症候群を診断するための方法であって、ａ）対象から得られたまたは提供された試料中の、５１ｋＤａのＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ５タンパク質）の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを測定するステップであって、試料は初代細胞を含む、ステップ；およびｂ）量、活性または発現レベルが対照に対して高い場合に、対象がクッシング症候群に罹患している可能性が高いと同定するステップを含む方法を提供する。一部の場合では、対照は、少なくとも１００人または少なくとも２００人の試験個体に由来する値を含む。一部の場合では、試験個体は、クッシング症候群を生じていないことが分かっている対象である。一部の場合では、試験個体は、正常なコルチゾールレベルを有することが分かっている対象または高コルチゾール血症がないことが分かっている対象である。一部の場合では、対照は、少なくとも２０人または３０人または５０人の試験個体に由来する値を含む。一部の場合では、試験個体は、クッシング症候群であると診断された対象およびＧＲＡによる治療を受けている対象である。一部の場合では、試験個体は、クッシング症候群であると診断された対象、ＧＲＡによる治療を受けている対象であって、少なくとも１つのクッシング症候群の症状は、ＧＲＡ治療によって軽減または除去される。
【００１０】
第４の態様では、本発明は、ヒト対象におけるＧＲＡに対する臨床または生化学的応答を評価するための方法であって、ａ）対象からの試料中の、５１ｋＤａのＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ５タンパク質）の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを測定するステップであって、ｉ）試料は、初代細胞を含み、ｉｉ）試料は、ＧＲＡを対象に投与した後に得られる、または得られた、ステップ；ｄ）ＦＫＢＰ５の量、活性または発現レベルを、少なくとも１００人または少なくとも２００人の試験個体のコホートに由来する対照値と比較するステップ；およびｆ）対照値に対するＦＫＢＰ５の量、活性または発現レベルの比較に基づき、ＧＲＡに対する臨床もしくは生化学的応答を有する対象または有さない対象を同定するステップを含む方法を提供する。一部の場合では、少なくとも１００人または少なくとも２００人の試験個体は、そうでなければＧＲＡを必要としない、正常な対象である。一部の場合では、少なくとも１００人または少なくとも２００人の試験個体は、クッシング症候群を有さない。一部の場合では、少なくとも１００人または少なくとも２００人の試験個体は、上昇したレベルのコルチゾールを有さない。一部の場合では、少なくとも１００人または少なくとも２００人の試験個体は、高コルチゾール血症の症状を有さないか、または示さない。
【００１１】
一部の実施形態では、測定するステップは、試料の初代細胞中のＦＫＢＰ５タンパク質をコードするｍＲＮＡの量を定量するステップを含む。一部の実施形態では、測定するステップは、試料の初代細胞中のＦＫＢＰ５タンパク質の量を定量するステップを含む。一部の実施形態では、測定するステップは、試料の初代細胞中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性の量を定量するステップを含む。一部の実施形態では、試料の初代細胞中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性の量を定量するステップは、試料の初代細胞中の、ＦＫＢＰ５タンパク質のペプチジル−プロリル−シス−トランスイソメラーゼ活性を定量するステップを含む。一部の実施形態では、試料の初代細胞中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性の量を定量するステップは、試料の初代細胞中のＧＲと結合しているＦＫＢＰ５タンパク質の量を定量するステップを含む。一部の実施形態では、対象から得られる試料は、全血またはその画分を含む。一部の実施形態では、対象は、試料を対象から得る前に、経蝶形骨洞手術を受けている。一部の実施形態では、試料は、対象が経蝶形骨洞手術によって処置された後１１日未満で対象から得られる。一部の実施形態では、試料は、対象が経蝶形骨洞手術によって処置された後２、４または６週未満で対象から得られる。一部の実施形態では、方法は、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルが対照に対して高い場合に、クッシング症候群のための処置を投与するステップを含む。一部の場合では、クッシング症候群のための処置を投与するステップは、対象にグルココルチコイド受容体アンタゴニスト（ＧＲＡ）を投与するステップを含む。
【００１２】
第５の態様では、本発明は、ヒト対象における、高コルチゾール血症の処置のための内科的（ｍｅｄｉｃａｌ）または外科的治療の対象への投与に対する臨床または生化学的応答を評価するための方法であって、ａ）対象からの第１の試料中の、５１ｋＤａのＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ５タンパク質）の第１の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第１の発現レベルを測定するステップであって、ｉ）第１の試料は、初代細胞を含み、ｉｉ）第１の試料は、高コルチゾール血症の処置のための内科的もしくは外科的治療を対象に投与する前に得られる、または得られた、ステップ；ｂ）任意選択で、高コルチゾール血症の処置のための内科的または外科的治療を対象に投与するステップ；ｃ）対象からの第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の第２の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第２の発現レベルを測定するステップであって、ｉ）第２の試料は、初代細胞を含み、ｉｉ）第２の試料が、高コルチゾール血症の処置のための内科的もしくは外科的治療を対象に投与した後に得られる、または得られた、ステップ；ならびにｄ）第１および第２の量、活性または発現レベルを比較するステップを含み、第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性の減少、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルの減少が、高コルチゾール血症の処置のための内科的もしくは外科的治療に対する臨床応答または生化学的応答を示す、方法を提供する。例えば、第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性の減少、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルの減少は、内科的または外科的治療が、コルチゾン過剰症の処置に成功していることを指し示し得る。
【００１３】
第６の態様では、本発明は、高コルチゾール血症の処置のための内科的または外科的治療の対象への投与に対する臨床または生化学的応答を評価するための方法であって、ａ）対象からの第１の試料中の、５１ｋＤａのＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ５タンパク質）の第１の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第１の発現レベルを測定するステップであって、ｉ）第１の試料は、初代細胞を含み、ｉｉ）第１の試料は、ＧＲＡを対象に投与する前に得られる、または得られた、ステップ；ｂ）任意選択で、高コルチゾール血症の処置のための内科的または外科的治療を対象に投与するステップ；ｃ）対象からの第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の第２の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第２の発現レベルを測定するステップであって、ｉ）第２の試料は、初代細胞を含み、ｉｉ）第２の試料は、ＧＲＡを対象に投与した後に得られる、または得られた、ステップ；ｄ）第１および第２の量、活性または発現レベルを比較して、ＦＫＢＰ５の差分値を得るステップ；ｅ）差分値を、少なくとも２０人または３０人または５０人の試験個体のコホートに由来する差分閾値と比較するステップ；ならびにｆ）差分値および差分閾値の比較に基づき、ＧＲＡに対する臨床もしくは生化学的応答を有する対象または有さない対象を同定するステップを含む方法を提供する。一部の場合では、差分閾値は、減少閾値であり、減少閾値を超えるまたは同様である、第１および第２の試料の間のＦＫＢＰ５の量または活性の減少の存在は、ＧＲＡに対する臨床または生化学的応答を示す。一部の場合では、少なくとも２０人または３０人または５０人の試験個体は、クッシング症候群であることが既知であるか、または疑いがある対象である。
【００１４】
一部の実施形態では、高コルチゾール血症の処置のための内科的または外科的治療は、ステロイド産生の阻害、ＡＣＴＨモジュレーターの投与、ＧＲＡの投与、経蝶形骨洞手術、反復経蝶形骨洞手術、片側副腎摘除術、両側副腎摘除術、放射線治療、非下垂体性ＡＣＴＨ分泌腫瘍の切除、ペプチド受容体放射性核種治療による処置およびこれらの組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、ステロイド産生の阻害は、ケトコナゾール、レボケトコナゾール、メチラポン、ＬＣＩ６９９、ミトタン、アミノグルテチミド、エトミデートまたはこれらの組合せの投与を含む。一部の実施形態では、ＡＣＴＨモジュレーターの投与は、ドーパミンアゴニスト、ソマトスタチン、ソマトスタチンアナログ、レチノイン酸、Ｒ−ロスコビチンまたはこれらの組合せの投与を含む。一部の実施形態では、ドーパミンアゴニストは、ブロモクリプチンおよびカベルゴリンからなる群から選択される。一部の実施形態では、方法は、第２の試料中、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性の減少が検出されない、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルの減少が検出されない高コルチゾール血症の処置のための、さらなる内科的または外科的治療を投与するステップを含む。
【００１５】
一部の実施形態では、ａ）および／またはｃ）の測定するステップは、試料中のＦＫＢＰ５タンパク質をコードするｍＲＮＡの量を定量するステップを含む。一部の実施形態では、ａ）および／またはｃ）の測定するステップは、試料中のＦＫＢＰ５タンパク質の量を定量するステップを含む。一部の実施形態では、測定するステップは、試料中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性の量を定量するステップを含む。一部の実施形態では、試料中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性の量を定量するステップは、試料中のＦＫＢＰ５タンパク質のペプチジル−プロリル−シス−トランスイソメラーゼ活性を測定するステップを含む。一部の実施形態では、試料中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性の量を定量するステップは、試料中のグルココルチコイド受容体（ＧＲ）と結合しているＦＫＢＰ５タンパク質の量を測定するステップを含む。
【００１６】
一部の実施形態では、ＧＲＡの投与は、ミフェプリストンを対象に投与することを含む。一部の実施形態では、ＧＲＡの投与は、ミフェプリストンではないＧＲＡを対象に投与することを含む。一部の実施形態では、ＧＲＡの投与は、ヘテロアリール−ケトンＧＲＡを投与することを含む。一部の実施形態では、第１または第２の試料は、全血またはその画分を含む。一部の実施形態では、第１および第２の試料は、全血またはその画分を含む。一部の実施形態では、第１または第２の試料は、鼻粘膜上皮の擦過試料を含む。一部の実施形態では、患者は、高コルチゾール血症の処置のための内科的または外科的治療を必要とする。一部の実施形態では、患者は、上昇したレベルのコルチゾールを有する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、ＧＲモジュレーターの投与に対する応答において、ＦＫＢＰ５タンパク質をコードするＦＫＢＰ５遺伝子の発現レベルを調べるための試験の模式図を表す。この模式図では、健康な対象は、ＧＲアゴニストを投与され、続いて、ＧＲアゴニストおよびＧＲアンタゴニスト（ＧＲＡ）を同時投与される。血液試料は、各投与の前、および各投与後の様々な時点で、１０人の対象から得られる。ＦＫＢＰ５の発現レベルは、各日の投与の前、および各日の投与後の選択された時点で測定される。
【００１８】
【図２】図２は、示されるＧＲアゴニスト（プレドニゾン）の投与の前および後、または示されるＧＲアンタゴニスト（ミフェプリストンまたはＣＯＲＴ１２５１３４）と組み合わされた示されるＧＲアゴニストの投与の前および後に採取された試料中のＧＡＰＤＨ正規化ＦＫＢＰ５の発現レベルの倍数差を表す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
定義
本明細書において使用される略語は、化学および生物学的技術分野内でのそれらの従来の意味を有する。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上、明確に指示がない限り、複数形を含む。
【００２０】
本明細書において使用される場合、「グルココルチコイド受容体」（「ＧＲ」）は、タイプＩＩのＧＲまたは核内受容体サブファミリー３、グループＣ、メンバー１（ＮＲ３Ｃ１）を指し、これは、デキサメタゾンなどのコルチゾールおよび／またはコルチゾールアナログと特異的に結合する（例えば、TurnerおよびMuller、J  Mol  Endocrinol、２００５年１０月１日、３５巻、２８３〜２９２頁を参照）。ＧＲは、コルチゾール受容体とも言われる。この用語は、ＧＲ、組換えＧＲおよび変異ＧＲのアイソフォームを含む。
【００２１】
「グルココルチコイド受容体アンタゴニスト」（「ＧＲＡ」）は、コルチゾールなどのグルココルチコイド受容体（ＧＲ）アゴニストまたは合成もしくは天然のコルチゾールアナログのＧＲへの結合を、部分的または完全に阻害する（アンタゴナイズする）、任意の組成物または化合物を指す。「特異的グルココルチコイド受容体アンタゴニスト」は、アゴニストへのＧＲの結合に関係する任意の生物学的応答を阻害する、任意の組成物または化合物を指す。「特異的」とは、薬物が、ミネラルコルチコイド受容体（ＭＲ）、アンドロゲン受容体（ＡＲ）またはプロゲステロン受容体（ＰＲ）などの他の核内受容体よりもむしろＧＲと優先的に結合する。特異的グルココルチコイド受容体アンタゴニストが、ＭＲ、ＡＲもしくはＰＲ、ＭＲおよびＰＲの両方、ＭＲおよびＡＲの両方、ＡＲおよびＰＲの両方またはＭＲ、ＡＲおよびＰＲに対するその親和性よりも１０倍超（１／１０のＫｄ値）の親和性でＧＲと結合することが好ましい。より好ましい実施形態では、特異的グルココルチコイド受容体アンタゴニストは、ＭＲ、ＡＲもしくはＰＲ、ＭＲおよびＰＲの両方、ＭＲおよびＡＲの両方、ＡＲおよびＰＲの両方またはＭＲ、ＡＲおよびＰＲに対するその親和性よりも１００倍超（１／１００のＫｄ値）の親和性でＧＲと結合する。
【００２２】
「ヒト対象」は、ヒト霊長類を指す。ヒト対象は、クッシング症候群またはＧＲＡによって処置され得る疾患もしくは状態を有するかまたは有する疑いがある人であり得る。同様に、「グルココルチコイド受容体アンタゴニスト（ＧＲＡ）の投与を必要とする患者」は、クッシング症候群またはＧＲＡによって処置され得る疾患もしくは状態を有するか、または有する疑いがある人であり得る。ＧＲＡによって処置され得る例示的な疾患または状態は、がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、前立腺がん、転移性前立腺がん、卵巣がん、クッシング症候群またはクッシング病を含むが、これらに限定されない。一部の場合では、ヒト対象は、（例えば、下垂体腺腫などの下垂体の腫瘍を除去するための）経蝶形骨洞手術によって以前に処置された人であり得る。例えば、対象は、クッシング病を処置するために経蝶形骨洞手術を受けていてよい。一部の場合では、経蝶形骨洞手術によって以前に処置されたヒト対象は、２０日、１９日、１８日、１７日、１６日、１５日、１４日、１３日、１２日、１１日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日、２日もしくは１日未満またはおよそこれらの日数未満前に、経蝶形骨洞手術を受けた対象であり得る。
【００２３】
「グルココルチコイド受容体アンタゴニスト（ＧＲＡ）に対する臨床または生化学的応答を評価する」とは、投与されたＧＲＡに対する応答を検出または定量することを指す。臨床応答は、ＧＲＡが、疾患もしくは状態の処置に成功している、または疾患もしくは状態の１つもしくは複数の症状の軽減もしくは寛解に成功している可能性が高いことの指標であり得る。生化学的応答は、ＧＲＡが投与される対象の生理機能を変えるまたは著しく変えるのに十分な用量であることの指標であり得る。生化学的応答は、ＧＲＡが、疾患もしくは状態の処置に成功している、または疾患もしくは状態の１つもしくは複数の症状の軽減もしくは寛解に成功している可能性が高いことの指標であり得る。疾患または状態は、例えば、高コルチゾール血症またはクッシング症候群であり得る。臨床または生化学的応答は、ＧＲＡの投与によって引き起こされるもしくは相関する、ＧＲの活性または制御の変化を検出することによって評価することができる。例えば、ＧＲＡの投与に対する応答における、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルの変化は、ＧＲＡに対する臨床応答または生化学的応答を評価するために検出することができる。
【００２４】
「高コルチゾール血症の処置のための内科的または外科的治療の投与に対する臨床または生化学的応答を評価する」などとは、投与された治療に対する応答を検出または定量することを指す。臨床応答は、治療が、高コルチゾール血症の処置に成功している、または高コルチゾール血症の１つもしくは複数の症状の軽減もしくは寛解に成功している可能性が高いことの指標であり得る。生化学的応答は、投与された治療が、治療が投与された対象の生理機能を変えているまたは著しく変えていることの指標であり得る。生化学的応答は、治療が、高コルチゾール血症の処置に成功している、または高コルチゾール血症の１つもしくは複数の症状の軽減もしくは寛解に成功している可能性が高いことの指標であり得る。
【００２５】
「ＦＫＢＰ５タンパク質の量または活性を測定する」とは、試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の量を測定すること、またはＦＫＢＰ５タンパク質の活性の量を測定することを指す。活性は、シス−トランスプロリルイソメラーゼ活性、ＦＫ５０６もしくはラパマイシン結合活性、ＧＲ結合活性またはシャペロン活性（例えば、ステロイドホルモンシャペロン活性）であり得る。
【００２６】
「ＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを測定する」とは、通常、試料中のＦＫＢＰ５タンパク質をコードするｍＲＮＡの量の測定、または試料中のＦＫＢＰ５タンパク質をコードするｍＲＮＡの産生を測定することを指す。ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ産生を測定するための方法は、限定されないが、ＲＴ−ＰＣＲ、デジタルＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮＡ−ｓｅｑ（例えば、Methods  Mol  Biol.、２０１４年、１１５８巻、７１〜９１頁）およびマイクロアレイ分析を含む。
【００２７】
「初代細胞」は、不死化されていない細胞または２回以上継代されていない細胞を指す。初代細胞は、その後に培養または分裂していない、個体から直接採取されたヒト細胞を含む。
【００２８】
「試料」は、ヒト対象の任意の組織または器官から得られる生物学的試料を指す。試料は、ヒト対象からの任意の細胞または組織の試料であってよい。試料は、本明細書に記載の方法に従って分析される前に、種々の処置、保管または加工手順に付すことができる。一般に、「試料」または「試料（複数可）」という用語は、それらの供給源、起源、獲得の方法、処置、プロセシング、保管もしくは分析または任意の改変によって限定されることを意図するものではない。  生物学的試料は、ヒト対象が起源の初代細胞を含有することができる。試料は、ＦＫＢＰ５ポリペプチドもしくはそのタンパク質、ＦＫＢＰ５ポリペプチドもしくはそのタンパク質をコードする核酸、ＦＫＢＰ５ポリペプチドもしくはそのタンパク質をコードする核酸の増幅または逆転写産物、あるいは前述のポリペプチド、核酸、増幅産物、逆転写産物またはこれらの部分の任意の２つまたはそれ超の組合せを含有することができる。
【００２９】
「全血」は、血清または血漿分離に供されていないヒト対象から収集された血液を指す。このような全血の文脈における「その画分」とは、血漿、血清、白血球画分、赤血球細胞画分、末梢血単核球の試料などのような全血の任意の画分を指す。
【００３０】
ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、ＦＫＢＰ５遺伝子の発現レベル、またはＦＫＢＰ５の量、活性もしくは発現レベルの倍数変化の文脈における「対照」または「対照値」とは、種々の臨床状態の下で、対象において典型的に見出されるレベルを指し得る。例えば、対照値は、クッシングの患者において典型的に見出される量であり得る。別の例として、対照値は、健康な（例えば、クッシングではない）患者において典型的に見出される量であり得る。別の例として、対照値は、患者または患者の細胞にＧＲＡが（例えば、典型的な用量で）投与された場合に典型的に観察される倍数変化であり得、患者または患者の細胞は、ＧＲＡに対する臨床応答を示し、またはＧＲＡに対する生化学的応答を示す。別の例として、対照値は、患者または患者の細胞にＧＲＡが（例えば、典型的な用量で）投与された場合に典型的に観察される倍数変化であってよく、患者または患者の細胞は、ＧＲＡに対する臨床応答を示さず、またはＧＲＡに対する生化学的応答を示さない。
【００３１】
一部の場合では、対照値は、正規化対照値である。正規化対照値は、ハウスキーピング遺伝子（例えば、ＧＡＰＤＨ）もしくはタンパク質に対して正規化され得、または本明細書に記載されるように、総タンパク質もしくはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）レベルに対して正規化され得る。一部の場合では、対照値は、絶対値であり、または試料容積あたりもしくは試料中の細胞の数あたりの絶対値である。
発明の詳細な説明
Ｉ．諸言
【００３２】
５１ｋＤａのＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ５１またはＦＫＢＰ５）は、イムノフィリンファミリーである、免疫抑制薬に結合する能力によって第１に特徴付けられる高度に保存されたタンパク質のスーパーファミリーの一部である（Barik、２００６年；Baughmanら、１９９５年）。それらの薬物の結合能力に加えて、一部のＦＫ５０６結合イムノフィリンは、タンパク質シャペロンでもあり、関連しているが、明らかに別個のプロリン残基を異性化する能力を有する（ＰＰＩａｓｅ活性）（Barik、２００６年）。
【００３３】
ＦＫＢＰ５タンパク質は、グルココルチコイド受容体（ＧＲ）、プロゲステロン受容体およびアンドロゲン受容体を含むステロイドホルモン受容体と相互作用するｈｓｐ９０コシャペロンである（O'Leary、２０１３年）。これは、細胞質中のリガンド未結合の（ｕｎ−ｌｉｇａｎｄｅｄ）ＧＲを維持し、したがってコルチゾールに対するＧＲの親和性を減少させ、核に対するＧＲの転位を減少させるシャペロンの１つである。プロリンシス−トランス異性化は、適切なタンパク質のフォールディングのために重要であるが、Ｎ−末端ＰＰＩａｓｅドメインの欠失は、シャペロンとしてのＦＫＢＰ５タンパク質の有効性に対してわずかな効果を有する。ＦＫＢＰ５タンパク質の結合活性が、ＧＲシグナル伝達の観点からそのＰＰＩａｓｅ酵素活性よりもより重要であってよいことは明らかである（O'Leary、２０１３年）。
【００３４】
ＦＫＢＰ５遺伝子の発現は、ＧＲ活性のための細胞内の超短ネガティブフィードバックループの部分として、グルココルチコイド（コルチゾールを含む）によって誘導される（Vermeer、２００３年）。この誘導は、ＧＲによって媒介される（Vermeer、２００３年；Caldwell、２０１０年）。コルチコステロンのマウスへの慢性的な投与も、ＦＫＢＰ５遺伝子の発現の上昇をもたらす（Lee、２０１０年；Ewald、２０１４年）。
【００３５】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏのＦＫＢＰ５の過剰発現は、グルココルチコイドの結合親和性およびＧＲの核移行を減少させる。天然に生じるＦＫＢＰ５の過剰発現は、新世界ザルにおけるＧＲ抵抗性を引き起こし（Scammell、２００１年）、これはコルチゾールレベルの増加に付随する。骨の破壊、関節リウマチにおける骨粗鬆症の発生およびグルココルチコイドが誘導する骨粗鬆症におけるＦＫＢＰ５の役割が示唆されている（Kimura、２０１３年）。ｒＴｇ４５  １０ｔａｕトランスジェニックマウスモデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏのＦＫＢＰ５の過剰発現は、リン酸化されたｔａｕのレベルの増加をもたらし、神経細胞の減少と関連していた（Blair、２０１３年）。ヒトでは、ＦＫＢＰ５の過剰発現は、アルツハイマー病と関連している（Blair、２０１３年）。
【００３６】
ＦＫＢＰ５の多型は、うつ（Binder、２００４年）、外傷後ストレス障害（Binder、２００８年）、気分障害（Binder、２００９年）および双極性障害（Willour、２００９年）を含むいくつかの疾患と関連している。ＦＫＢＰ５の多型は、抗うつ薬処置に対する応答とも関連している（Binder、２００４年）。
【００３７】
Yangらは、絶食がマウスおよびラットの視床下部におけるＦＫＢＰ５遺伝子の発現を誘導することを実証した。高脂肪食のマウスにおけるＦＫＢＰ５遺伝子の過剰発現は、持続的な体重の上昇および耐糖能障害をもたらし、ＦＫＢＰ５発現の上昇および／またはＦＫＢＰ５タンパク質レベルもしくは活性の上昇が肥満表現型を促進することを示唆している。
【００３８】
Pereiraら（Metabolism、２０１４年）による最近の研究は、ＦＫＢＰ５遺伝子が、ヒトの皮下および網状脂肪組織において、デキサメタゾンによって制御されることを実証している。ＦＫＢＰ５は、ＧＲアゴニストであるデキサメタゾンによって刺激されるトップの遺伝子である。著者らは、脂肪組織におけるＦＫＢＰ５の発現が、インスリン抵抗性のマーカーと相関することも報告している。加えて、ＦＫＢＰ５領域におけるＳＮＰは、２型糖尿病および糖尿病関連形質と関連していた。
ａ．グルココルチコイド受容体アンタゴニスト（ＧＲＡ）による疾患の処置
【００３９】
ＧＲは、幅広い種類の疾患または状態に関与する。一部の場合では、（例えば、グルココルチコイド受容体アンタゴニスト（ＧＲＡ）の投与による）ＧＲ活性またはシグナル伝達のアンタゴナイズは、このような疾患または状態を処置することができる。しかしながら、ＧＲＡによって処置されるある特定の疾患または状態の感受性において大きな可変性が存在する。一部の場合では、疾患もしくは状態によって影響を受ける細胞、組織または器官は、１つまたは複数のＧＲＡの投与に抵抗性であっても影響を受けなくてもよく、または抵抗性になってもよく影響を受けなくなってもよい。例えば、ある特定の乳がん細胞（例えば、トリプルネガティブ乳がん細胞）は、（例えば、１つまたは複数の化学療法薬と組み合わせる）ＧＲＡ処置に対して応答性であってもよいが、そのような全ての乳がん細胞は応答性であるわけではない。同様に、上昇したコルチゾールレベルによって引き起こされるかもしくは関連する一部の疾患または状態は、１つまたは複数のＧＲＡの投与による可変性の処置の有効性を示す。一部の場合では、ＧＲＡに対する臨床または生化学的応答の同定は、ＧＲＡ処置を継続すべきことを指し示し得る。一部の場合では、臨床または生化学的応答の欠如は、異なる処置（例えば、異なるＧＲＡの投与または同じＧＲＡの高用量での投与）が必要であることを指し示し得る。このような応答性は、対象から対象、細胞から細胞、組織から組織、または対象の疾患の進行過程において、変化し得る。したがって、ヒト対象におけるＧＲＡに対する臨床または生化学的応答を評価するための代替の方法の必要性が存在する。
【００４０】
したがって、本明細書において、疾患または状態の処置のためのグルココルチコイド受容体アンタゴニスト（ＧＲＡ）の投与に対する、臨床もしくは生化学的応答を検出または評価する方法を記載する。本明細書に記載のＧＲＡに対する臨床もしくは生化学的応答を検出または評価するための方法は、ヒト対象から提供される１つまたは複数の試料中の、（ｉ）ＦＫＢＰ５タンパク質の活性もしくは量；または（ｉｉ）ＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベル（例えば、ＦＫＢＰ５のｍＲＮＡの絶対量または相対量）の検出を含む。
【００４１】
一部の場合では、本明細書に記載の方法は、対象中の、（ｉ）ＦＫＢＰ５タンパク質の活性もしくは量；または（ｉｉ）ＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベル（例えば、ＦＫＢＰ５のｍＲＮＡの絶対量または相対量）の検出あるいは変化の検出を含む。このような変化は、対象からの第１の試料中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性もしくは量、またはＦＫＢＰ５をコードする遺伝子の発現レベルを決定すること、およびその結果を対象からの第２の試料の結果と比較することによって、検出することができる。第１の試料は、ＧＲＡを投与する１つまたは複数のステップより前に、対象から提供または得ることができ、第２の試料は、ＧＲＡを投与する１つまたは複数のステップの後に、対象から提供または得ることができる。
ｂ．クッシング症候群
【００４２】
本明細書において、クッシング症候群を診断する方法も記載する。クッシング症候群は、グルココルチコイドであるコルチゾールの副腎皮質による過剰産生によって引き起こされる状態である。この状態は、しばしば副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）の未制御の分泌を示す腫瘍または過形成の存在に起因する。ＡＣＴＨの未制御の分泌は、次に、過剰のコルチゾールを分泌するために副腎を誘導する。コルチゾールは、通常、ネガティブフィードバックループ中に関与し、その中で、高いレベルのコルチゾールは、ＡＣＴＨおよびコルチゾール両方の分泌を抑制する。しかしながら、クッシング症候群において、この負の制御は、有効ではないか、または存在せず、慢性高コルチゾール血症をもたらす。
【００４３】
クッシング症候群は、様々な方法で診断することができる。診断の一方法は、デキサメタゾン抑制試験（ＤＳＴ）として公知である。この試験では、グルココルチコイド受容体アゴニストであるデキサメタゾンが患者に投与され、投与後に、コルチゾールレベルが測定される。アゴニストは、コルチゾールレベルに対する低用量の効果を測定するために、低用量（例えば、１〜２ｍｇ）で投与することができる。一部の場合では、コルチゾールレベルに対する高用量の効果を測定するために、高用量も投与される（例えば、８ｍｇ）。さらに、ＡＣＴＨレベルは、追加情報のためにデキサメタゾンの投与より前に決定することができる。高用量または低用量のデキサメタゾンによって抑制されない低いＡＣＴＨレベルおよびコルチゾールレベルは、副腎皮質のアデノーマ腫瘍が分泌する、例えば、コルチゾールによって引き起こされる原発性の高コルチゾール血症を示す。この種類のクッシング症候群は、ＡＣＴＨまたはコルチゾールの制御に対する典型的な対象ではない。
【００４４】
ＤＳＴのためのコルチゾールのカットオフは、移動標的（ｍｏｖｉｎｇ  ｔａｒｇｅｔ）であった。現在、内分泌学会は、１．８μｇ／ｄｌのカットオフを推奨しており、ＡＡＣＥガイドラインは、最近３μｇ／ｄｌのカットオフに低下した（以前は、５μｇ／ｄｌで高かった）。他国の内分泌学会は、異なるカットオフを使用している。このように、使用される最も適切なカットオフの一般的なコンセンサスはない。さらに、ＤＳＴは、感度は高いが特異度が低く、したがって、クッシング症候群（ＣＳ）の診断のための現在のガイドラインは、少なくとも２つの確証的な試験（例えば、ＤＳＴおよび代替の診断方法による確認）を必要とする。
【００４５】
加えて、１ｍｇのＤＳＴの偽陽性率は、ある特定の集団において高い（重症のインスリン抵抗性、脂肪肝疾患、ＰＣＯＳなど、「The  Diagnosis  of  Cushing's  Syndrome:  An  Endocrine  Society  Clinical  Practice  Guideline」（２００８年）J.  Clin.  Endocrin.  &  Metab.発行、２００８年５月、９３巻（５号）、１５２６〜４０頁を参照）。デキサメタゾンの代謝に影響する医薬も試験に影響を与え得る（内分泌学会からのガイドラインを参照）。１ｍｇのＤＳＴについての別の重要な制限は、１０〜１５％の確認されたクッシング病（ＣＤ）の症例では、１ｍｇのＤＳＴにより２μｇ／ｄｌ未満のカットオフに低下するという事実であり（Findlingら、J.  Clin.  Endocrinol.  Met.、２００４年、８９巻、１２２２〜１２２６頁）、したがって、この試験によって診断できないだろう。さらに、クッシング、特に副腎性のクッシングのより軽度の形態についての最良の診断基準についてのコンセンサスはない（内分泌学会のガイドライン、副腎偶発腫を参照）。
【００４６】
デキサメタゾン抑制試験（ＤＳＴ）の代替は、２４時間尿中遊離コルチゾール（ＵＦＣ）試験である。しかしながら、ＵＦＣ試験は、軽度の形態のＣＳにおいて非常に感度が低い。加えて、現在のアッセイの品質は悪い（Raffら、J.  Clin.  Endocrinol.  Met.、２０１５年、１００巻、３９５〜３９７頁を参照）。これは、明白なＣＳの症例に対して有用な試験であるが、末期の症例でさえも偽陰性の結果がしばしばあり、これは、診断プロセスを複雑にし、診断を遅らせ得る。加えて、周期性のＣＳの症例において、ＣＳの診断は、腫瘍が活発でないときに試験が行われると、見逃し得る。
【００４７】
ＤＳＴの別の代替は、深夜の唾液のコルチゾールレベルに基づく。この試験も、より軽度の形態のＣＳにおいて感度が低い。経蝶形骨洞手術後に、ＣＤの早期の再発を診断することは有用であり得る。しかしながら、これは、多くの偽陽性および偽陰性を有する。これは、患者が適切に試験を実施することができるか否かに依存し、不適切な試料の収集は、しばしば交絡因子である。
【００４８】
デスモプレシンまたはＣＲＨの投与によってクッシング病およびクッシング症候群の間を区別することも可能である。クッシング病の患者の大部分はＣＲＨに応答するが、他の種類のクッシング症候群の患者は、通常、応答しないので、ＣＲＨは、クッシング症候群の鑑別診断に有用であり得る。これらの試験、特にデキサメタゾン抑制試験は、クッシング症候群を診断するため、および／またはクッシング病と他の種類のクッシング症候群の間を鑑別するために幅広く使用されているが、これらは、決定的ではなく、望ましくない数の偽陽性および偽陰性を生じ得る。
【００４９】
したがって、本発明者らは、クッシング症候群を診断するための改善された方法を開発した。方法は、ヒト対象からの１つまたは複数の試料中の、（ｉ）ＦＫＢＰ５タンパク質の活性もしくは量；または（ｉｉ）ＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを検出することを含み得る。
ＩＩ．方法
ａ．ＧＲＡに対する、または高コルチゾール血症の処置のための内科的もしくは外科的治療に対する、臨床または生化学的応答の評価
【００５０】
本明細書において、ヒト対象におけるグルココルチコイド受容体アンタゴニスト（ＧＲＡ）に対する臨床または生化学的応答を評価するための方法を記載する。本方法は、例えば、処置モダリティの有効性を確認する、処置の結果をモニターする、または処置の決定を案内するために有用であり得る。例えば、患者が、ＧＲＡによって処置可能であると分かっているか、もしくは思われる疾患または状態を示す場合、次いで、ＧＲＡを投与することができ、ＧＲＡに対する臨床応答を、１つまたは複数の本明細書に記載の方法を使用して評価することができる。一部の場合では、次いで、ＧＲＡに対する臨床もしくは生化学的応答の陽性の指標、または強い臨床もしくは生化学的応答の指標により、陽性の臨床結果、陽性の臨床結果の可能性の増加を予測し得、またはＧＲＡの投与の継続を示唆し得る。一部の場合では、臨床もしくは生化学的応答の陰性の指標、または強い臨床もしくは生化学的応答の欠如により、陰性の臨床結果、陰性の臨床結果の可能性の増加を予測し得、または増加させた用量のＧＲＡの投与または代替のＧＲＡの投与を示唆し得る。一部の場合では、臨床応答もしくは生化学的応答の陰性の指標、または強い臨床もしくは生化学的応答の欠如は、追加処置または代替処置の必要性を示唆し得る。
【００５１】
ヒト対象におけるグルココルチコイド受容体アンタゴニスト（ＧＲＡ）に対する臨床または生化学的応答を評価するための方法は、ａ）対象からの第１の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の第１の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第１の発現レベルを測定するステップであって、ｉ）第１の試料は、初代細胞を含み、ｉｉ）第１の試料は、ＧＲＡを対象に投与する前に得られる、ステップ；ｂ）任意選択で、ＧＲＡを対象に投与するステップ；ｃ）対象からの第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の第２の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第２の発現レベルを測定するステップであって、ｉ）第２の試料は、初代細胞を含み、ｉｉ）第２の試料は、ＧＲＡを対象に投与した後に得られる、ステップ；ならびにｄ）第１および第２の量、活性または発現レベルを比較するステップを含むことができ、第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性の減少、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルの減少が、ＧＲＡに対する応答を示す。
【００５２】
一部の場合では、対象は、第１の試料を得るより前に、１つまたは複数の用量のＧＲＡを受けている。例えば、対象は、ＧＲＡ治療を受けていてよく、またはＧＲＡ治療を以前に受けていてよい。したがって、一部の場合では、ＧＲＡの投与前の試料は、ＧＲＡの存在によって影響されていないＦＫＢＰ５のベースラインレベルの測定を可能にするために、ＧＲＡの投与から適切な期間の後に得てもよい。したがって、一部の場合では、ＧＲＡを対象に投与する前に得られる第１の試料は、以前のＧＲＡの投与の少なくとも４時間後、５時間後、６時間後、７時間後、８時間後、９時間後、１０時間後、１２時間後、１６時間後、１８時間後もしくは２４時間後に、または以前のＧＲＡの投与の少なくとも１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、８日後、９日後、１０日後、１１日後、１２日後、１３日後、１４日後、１５日後、１６日後、１７日後、１８日後、１９日後、２０日後、２１日後、２２日後、２３日後、２４日後、２５日後、２６日後、２７日後、２８日後、２９日後、３０日後もしくは３１日後に得られる。以前のＧＲＡの投与と第１の試料を得る間の適切な期間は、ＧＲＡを投与する以前の薬物動態に基づき決定することができる。一部の場合では、適切な期間は、ＧＲＡが対象から完全に除去されるのに十分な時間の長さである。一部の場合では、適切な期間は、ＦＫＢＰ５のレベル（例えば、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはｍＲＮＡレベル）に対する効果を有さないか、または最小にするＧＲＡのために、十分な時間の長さである。
【００５３】
一部の場合では、対象は、第１の試料を得ることと第２の試料を得ることの間に、複数用量のＧＲＡを投与される。一部の場合では、対象は、投与され、または第１の試料を得ることと第２の試料を得ることの間に、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４またはそれ超の用量を投与される。一部の場合では、対象は、ＧＲＡを投与され、第２の試料は、ＦＫＢＰ５の下方調節を可能にするのに適切な期間の後に得られる。例えば、第２の試料は、ＧＲＡの投与の少なくとも０．５時間後、１時間後、２時間後、４時間後、６時間後、８時間後、１０時間後、１２時間後、１６時間後、２０時間後または２４時間後に得ることができる。他の場合では、第２の試料は、複数用量のＧＲＡの投与スケジュールの間に得ることができる。さらに他の場合では、第２の試料は、１つもしくは複数のＧＲＡの投与の直前、直後または投与中に得られる。任意の場合では、第２の試料は、少なくとも１用量のＧＲＡが対象に投与された後に得られる。
【００５４】
本明細書において、高コルチゾール血症の処置のための内科的または外科的治療を対象に投与するために、ヒト対象における臨床または生化学的応答を評価するための方法も記載する。本方法は、例えば、処置様式の有効性を確認する、処置の結果をモニターする、または処置の決定を案内するために有用であり得る。例えば、患者が高コルチゾール血症を示す場合、次いで、内科的または外科的治療を投与することができ、内科的または外科的治療に対する臨床応答を、１つまたは複数の本明細書に記載の方法を使用して評価することができる。一部の場合では、次いで、内科的または外科的治療に対する、臨床もしくは生化学的応答の陽性の指標、または強い臨床もしくは生化学的応答の指標により、陽性の臨床結果、陽性の臨床結果の可能性の増加を予測し得、または内科的もしくは外科的治療の継続を示唆し得る。一部の場合では、臨床もしくは生化学的応答の陰性の指標、または強い臨床もしくは生化学的応答の欠如により、陰性の臨床結果、陰性の臨床結果の可能性の増加を予測し得、または増加させた用量もしくは追加用量の内科的治療の投与、または代替の内科的もしくは外科的治療の投与を示唆し得る。一部の場合では、臨床応答もしくは生化学的応答の陰性の指標、または強い臨床もしくは生化学的応答の欠如は、追加処置または代替処置の必要性を示唆し得る。
【００５５】
ヒト対象における高コルチゾール血症のための内科的もしくは外科的治療に対する臨床または生化学的応答を評価するための方法は、ａ）対象からの第１の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の第１の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第１の発現レベルを測定するステップであって、ｉ）第１の試料は、初代細胞を含み、ｉｉ）第１の試料は、内科的または外科的治療を対象に投与する前に得られる、ステップ；ｂ）任意選択で、内科的または外科的治療を対象に投与するステップ；ｃ）対象からの第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の第２の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第２の発現レベルを測定するステップであって、ｉ）第２の試料は、初代細胞を含み、ｉｉ）第２の試料は、内科的または外科的治療を対象に投与した後に得られる、ステップ；ならびにｄ）第１および第２の量、活性または発現レベルを比較するステップを含むことができ、第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性の減少、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルの減少が、高コルチゾール血症の処置のための内科的または外科的治療に対する応答を示す。
【００５６】
一部の場合では、内科的または外科的治療は、ステロイド産生の阻害剤を投与することを含む。代表的なステロイド産生の阻害剤は、限定されないが、アミノグルテチミド、コレステロール硫酸、ケトコナゾール、レボケトコナゾール、メチラポン、ＬＣＩ６９９、ミトタンおよびエトミデートを含む。一部の場合では、内科的または外科的治療は、ＡＣＴＨモジュレーターを投与することを含む。代表的なＡＣＴＨモジュレーターは、限定されないが、ドーパミンアゴニスト、レチノイン酸、Ｒ−ロスコビチン、ソマトスタチンおよびソマトスタチンアナログを含む。代表的なドーパミンアゴニストは、限定されないが、ブロモクリプチンおよびカベルゴリンを含む。代表的なソマトスタチンアナログは、限定されないが、パシレオチド、オクトレオチドおよびランレオチドを含む。一部の場合では、内科的または外科的治療は、ＧＲＡの投与であるか、または含む。一部の場合では、内科的または外科的治療は、経蝶形骨洞手術もしくは反復経蝶形骨洞手術であるか、または含む。一部の場合では、内科的または外科的治療は、副腎摘除術、片側副腎摘除術もしくは両側副腎摘除術であるか、または含む。一部の場合では、内科的または外科的治療は、放射線治療であるか、または含む。一部の場合では、内科的または外科的治療は、非下垂体性ＡＣＴＨ分泌腫瘍の切除であるか、または含む。一部の場合では、内科的または外科的治療は、ペプチド受容体放射性核種治療（例えば、Ｙ−９０またはＬｕ−１７７標識化オクトレオチド）による処置であるか、または含む。一部の場合では、内科的または外科的治療は、任意の２つもしくはそれ超の前述の内科的もしくは外科的治療の組合せであるか、または含む。一部の場合では、組合せは、２つまたはそれ超の内科的治療の組合せである。一部の場合では、組合せは、２つまたはそれ超の外科的治療の組合せである。一部の場合では、組合せは、内科的治療および外科的治療の組合せである。
【００５７】
一部の場合では、対象は、第１の試料を得るより前に、１つまたは複数の用量の高コルチゾール血症のための内科的治療を受けている。例えば、対象は、ＧＲＡ治療を受けていてよく、またはＧＲＡ治療を以前に受けていてよい。したがって、一部の場合では、内科的治療の投与前の試料は、内科的治療の存在によって影響されていないＦＫＢＰ５のベースラインレベルの測定を可能にするために、内科的治療の投与から適切な期間の後に得てよい。したがって、一部の場合では、内科的治療を対象に投与する前に得られる第１の試料は、以前の内科的治療の投与の少なくとも４時間後、５時間後、６時間後、７時間後、８時間後、９時間後、１０時間後、１２時間後、１６時間後、１８時間後もしくは２４時間後に、または以前の内科的治療の投与の少なくとも１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、８日後、９日後、１０日後、１１日後、１２日後、１３日後、１４日後、１５日後、１６日後、１７日後、１８日後、１９日後、２０日後、２１日後、２２日後、２３日後、２４日後、２５日後、２６日後、２７日後、２８日後、２９日後、３０日後もしくは３１日後に得られる。以前の内科的治療の投与と第１の試料を得る間の適切な期間は、内科的治療を投与する以前の薬物動態に基づき決定することができる。一部の場合では、適切な期間は、内科的治療が対象から完全に除去されるのに十分な時間の長さである。一部の場合では、適切な期間は、ＦＫＢＰ５のレベル（例えば、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはｍＲＮＡレベル）に対する効果を有さないか、または最小にする内科的治療のために、十分な時間の長さである。
【００５８】
一部の場合では、対象は、第１の試料を得ることと第２の試料を得ることの間に、複数回の内科的治療を投与される。一部の場合では、対象は、投与され、または第１の試料を得ることと第２の試料を得ることの間に、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４またはそれ超の用量を投与される。一部の場合では、対象は、内科的治療を投与され、第２の試料は、ＦＫＢＰ５発現、量または活性の下方調節を可能にするのに適切な期間の後に得られる。例えば、第２の試料は、内科的治療の投与の少なくとも０．５時間後、１時間後、２時間後、４時間後、６時間後、８時間後、１０時間後、１２時間後、１６時間後、２０時間後または２４時間後に得ることができる。他の場合では、第２の試料は、複数回投与の投与スケジュールの間に得ることができる。さらに他の場合では、第２の試料は、１つまたは複数の内科的治療の投与の直前、直後または投与中に得られる。任意の場合では、第２の試料は、少なくとも１用量の内科的治療が対象に投与された後に得られる。
ｉ．試料の抽出、調製および分析
【００５９】
試料は、本技術分野において公知の任意の手段によって得ることができる。例えば、試料は、血液試料（例えば、全血またはその画分の試料）を収集することにより得ることができる。あるいは、試料は、対象の上皮細胞（例えば、鼻粘膜上皮細胞）を擦過することにより得ることができる。試料は、限定されないが、血液試料、脳脊髄液試料、滑膜組織試料、滑液試料、脳組織試料、血管試料または腫瘍試料などの、ヒト細胞および組織の試料を含む。
【００６０】
試料は、健康もしくは病理学的な、細胞、組織または構造の試料を包含する。一部の場合では、試料は、ＧＲ活性もしくはシグナル伝達によって媒介される疾患または状態によって影響を受ける組織または器官の細胞を得ることによって提供され得る。例えば、ＧＲＡ（例えば、化学療法薬と組合せたＧＲＡ）で処置することができる種類のがんに罹患しているヒト対象において、初代腫瘍細胞を含有する試料は、本明細書に記載されるように得て、アッセイすることができる。このようながんは、限定されないが、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、前立腺がん、転移性前立腺がん、アンドロゲン抵抗性前立腺がんおよび卵巣がんを含む。一部の場合では、試料は、高コルチゾール血症に罹患している対象の細胞を得ることによって提供され得る。一部の場合では、試料は、高コルチゾール血症によって影響を受ける組織または器官の細胞を得ることによって提供され得る。一部の場合では、試料は、クッシング症候群に罹患しているか、または罹患している疑いのある対象の細胞を得ることによって提供され得る。一部の場合では、試料は、クッシング症候群によって影響を受けるか、もしくは影響を受ける疑いのある組織または器官の細胞を得ることによって提供され得る。
【００６１】
試料は、ＦＫＢＰ５タンパク質またはＦＫＢＰ５核酸を得るために抽出することができる。例えば、細胞を溶解して、タンパク質画分を得ることができる。一部の場合では、ライセートは、さらに分画して、特定の細胞区画を精製することができる。例えば、細胞ライセートは、分画して、サイトゾルのタンパク質画分を得ることができる。別の例として、細胞ライセートは、分画して、核または核小体タンパク質画分を得ることができる。タンパク質画分は、ＦＫＢＰ５タンパク質レベルまたは活性についてアッセイすることができる。あるいは、細胞を溶解して、核酸（例えば、ｍＲＮＡ）画分を得ることができる。核酸画分は、ＦＫＢＰ５をコードする遺伝子の発現についてアッセイすることができる。例えば、発現は、定量的増幅（例えば、ｑＰＣＲ）または逆転写および続く定量的増幅（例えば、ＲＴ−ｑＰＣＲ）によってアッセイすることができる。
【００６２】
細胞ライセートまたはそのタンパク質画分は、様々な方法を使用して精製して、ＦＫＢＰ５タンパク質またはその一部が濃縮された画分を得ることができる。例えば、細胞を溶解して、混入物または標的タンパク質と優先的に結合するための適切な条件下、クロマトグラフィー媒体と接触させることができる。混入物が優先的に結合する場合、標的タンパク質は、通過画分として収集され、さらにアッセイすることができる。標的タンパク質が結合する場合、クロマトグラフィー媒体を洗浄し、標的タンパク質を溶出させることができる。
【００６３】
別の例として、細胞を溶解して、ＦＫＢＰ５タンパク質またはその一部と特異的に結合する捕捉試薬（例えば、捕捉抗体またはアプタマー）と接触させることができる。捕捉試薬は、固体担体上に固定化することができる。一部の場合では、ＦＫＢＰ５タンパク質またはその一部を、捕捉試薬から溶出させて、次いで、検出または定量することができる。他の場合では、ＦＫＢＰ５タンパク質またはその一部は、捕捉試薬に結合した形態として、検出または定量することができる。
【００６４】
同様に、細胞ライセートまたはその核酸画分は、様々な方法を使用して精製して、ＦＫＢＰ５をコードする遺伝子の転写物が濃縮された画分を得ることができる。例えば、細胞を溶解して、核酸を沈殿させるか、またはそうでなければライセートから精製することができる。一部の場合では、核酸は、試料またはその画分を、ポリアデニル化されたｍＲＮＡと優先的に結合するｏｌｉｇｏｄＴ部分を固定化した表面と接触させることによって精製することができる。
【００６５】
核酸は、増幅、ハイブリダイゼーション、重合、逆転写またはこれらの組合せに付すことができる。一部の場合では、増幅、ハイブリダイゼーション、重合または逆転写は、ＦＫＢＰ５をコードする遺伝子、その転写物またはその一部が、特異的に増幅、ハイブリダイズまたは逆転写されるように標的特異的である。一部の場合では、増幅、ハイブリダイゼーション、重合または逆転写は、試料が、全ゲノムもしくは全トランスクリプトームのハイブリダイゼーション、重合または逆転写に付されるように標的特異的ではない。全ゲノムもしくは他の非特異的なハイブリダイゼーション、重合または逆転写は、１つもしくは複数の変性プライマーまたはプローブの使用により行うことができる。非特異的なハイブリダイゼーション、重合または逆転写の後、ＦＫＢＰ５をコードする遺伝子を、検出および／または定量することができる。
【００６６】
ＦＫＢＰ５ポリペプチドもしくはその一部の量または活性は、本技術分野において公知の様々な方法によって測定することができる。例えば、ＥＬＩＳＡ（例えば、サンドイッチＥＬＩＳＡ）は、ＦＫＢＰ５タンパク質またはその一部に対して特異的な１つまたは複数の抗体を使用して、試料またはそのタンパク質抽出物中のポリペプチドレベルを測定するために使用することができる。一部の場合では、ＥＬＩＳＡは、サンドイッチＥＬＩＳＡであり、これは、ＦＫＢＰ５ポリペプチドまたはその一部が、固定化された捕捉試薬（例えば、捕捉抗体またはアプタマー）と結合することによって固定化され、固定化されたポリペプチドまたはそのタンパク質を、検出試薬（例えば、検出抗体またはアプタマー）を用いて検出する。
【００６７】
別の例として、ＦＫＢＰ５ポリペプチドまたはその一部の活性は、試料またはそのタンパク質抽出物を、プロリン含有ペプチド基質と接触させて、試料のＦＫＢＰ５が媒介するシス−トランスプロリルイソメラーゼ活性を測定することによって測定することができる。一部の場合では、基質の異性化は、プロテアーゼなどのシス−トランスプロリン異性体感受性酵素を使用して測定することができる。例えば、Ｐ２位にトランスプロリンおよびＰ１位にフェニルアラニンまたはチロシンを有するペプチド基質に対する高い基質特異性および触媒効率（ｋｃａｔ／Ｋｍ）を有するが、Ｐ２にシスプロリンを含有するこのようなペプチドに対して特異性もしくは触媒効率が非常に低いか、または有さないキモトリプシンを、プロリルイソメラーゼ活性を測定するために使用することができる。例えば、Ｎ−スクシニル−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ｃｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐ−ニトロアニリド基質を、キモトリプシンと組合せて使用することができ、これは、好ましくは、基質のトランスプロリル異性体を切断して、ＦＫＢＰ５のプロリルイソメラーゼ活性について、試料またはその抽出物をアッセイすることができる。ＦＫＢＰ５またはその一部のイソメラーゼ活性による基質のトランス異性体の産生は、例えば、Fischerら、Nature.、１９８９年２月２日、３３７巻（６２０６号）、４７６〜８頁に記載されるように、キモトリプシンによるニトロアニリド基質の消化を検出することによって測定することができる。
【００６８】
別の例として、ＦＫＢＰ５ポリペプチドまたはその一部の活性は、試料中のグルココルチコイド受容体（ＧＲ）と結合しているＦＫＢＰ５タンパク質の量を測定することによって、検出または定量することができる。これは、例えば、ＧＲおよびＦＫＢＰ５タンパク質の間の結合を保つのに適した状態下、ＧＲまたはＦＫＢＰ５タンパク質を精製することによって行うことができる。次いで、精製産物を、同族の結合パートナーの存在、非存在または含量についてアッセイすることができる。例えば、サイトゾルＧＲは、精製することができ、ＦＫＢＰ５タンパク質の存在が、精製産物において検出された。別の例として、ＦＫＢＰ５タンパク質は、精製することができ、ＧＲの存在を、精製産物において検出することができる。一部の場合では、これは、固定化された捕捉試薬が、ＧＲ：ＦＫＢＰ５タンパク質複合体の一メンバーを認識し、検出試薬が、ＧＲ：ＦＫＢＰ５タンパク質複合体の他のメンバーを認識する、サンドイッチＥＬＩＳＡタイプのアッセイを使用して行うことができる。
【００６９】
別の例として、ＦＫＢＰ５をコードする遺伝子の発現は、ＦＫＢＰ５のｍＲＮＡまたはその一部の逆転写、および逆転写産物またはその一部の定量的増幅によって測定することができる。定量的増幅は、ＰＣＲ（例えば、リアルタイムＰＣＲ）または本技術分野において公知の他の増幅手法を使用して行うことができる。増幅は、例えば、増幅産物へのインターカレート性色素の取り込み、クエンチされた蛍光加水分解プローブの分解、またはクエンチされた分子ビーコンの結合を検出することによって検出することができる。
【００７０】
試料中の任意の測定された量もしくは活性、または発現レベルは、参照に対して正規化することができる。例えば、発現レベルは、総ｍＲＮＡ量または参照遺伝子の発現レベルに対して正規化することができる。適切な参照遺伝子は、限定されないが、ＧＡＰＤＨ、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ１（ＨＲＰＴ１）、リボソームタンパク質ラージＰ１または別のハウスキーピング遺伝子を含む。別の例として、ＦＫＢＰ５タンパク質の量は、総タンパク質レベルまたは参照遺伝子産物のレベルに対して正規化することができる。適切な参照遺伝子産物は、限定されないが、アクチン、チューブリン、ＣＯＸ  ＩＶ、ＨＲＰＴ１、ＧＡＰＤＨまたは別のハウスキーピング遺伝子産物を含む。
ｉｉ．ＦＫＢＰ５の量、活性または発現の比較
【００７１】
一部の実施形態では、ＧＲＡの投与後、ＦＫＢＰ５の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルは、１つまたは複数の用量のＧＲＡの投与後に得られた試料から定量され、ＧＲＡの投与前の値よりもむしろ対照値または閾値と比較される。一部の場合では、対照値または閾値は、アッセイされる対象の組織、器官または細胞タイプにおけるＧＲＡに対する、生化学的もしくは臨床応答または強い生化学的もしくは臨床応答を示す、陽性の対照値または閾値である。したがって、このような場合では、陽性の対照値もしくは閾値に、近い、等しいまたは下回る、定量された量、活性または発現レベルは、ＧＲＡに対する生化学的もしくは臨床応答または強い生化学的もしくは臨床応答を指し示し得る。対照的に、陽性の対照値もしくは閾値を、上回る、または顕著に上回る、定量された量、活性または発現レベルは、ＧＲＡに対する生化学的もしくは臨床応答の欠如または強い生化学的もしくは臨床応答の欠如を指し示し得る。
【００７２】
一部の場合では、ＧＲＡに対する生化学的または臨床応答を示す、定量された量、活性、発現は、陽性の対照値または閾値の約２５％、３０％、４０％、５０％、７５％、１００％、１１０％、１２５％もしくは１５０％に等しいか、またはこれらの値未満である。一部の場合では、ＧＲＡに対する生化学的または臨床応答の欠如を示す、定量された量、活性または発現は、複数の陽性の対照値または閾値の約２倍、２．５倍、３倍、４倍、５倍、７．５倍、１０倍、１２倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍もしくは５０倍に等しいか、またはこれらの値を上回る。
【００７３】
一部の場合では、対照値または閾値は、ＧＲＡに対する（例えば、生化学的または臨床）応答の欠如を示す陰性の対照値もしくは閾値、またはＧＲＡの投与がないか、または投与より前に典型的に得られた値である。したがって、このような場合では、陰性の対照値または閾値を下回る（例えば、顕著に下回る）、定量された量、活性または発現レベルは、ＧＲＡに対する、臨床もしくは生化学的応答または強い臨床もしくは生化学的応答を指し示し得る。対照的に、陰性の対照値もしくは閾値に、近い、等しいまたは上回る、定量された量、活性または発現レベルは、ＧＲＡに対する、臨床応答の欠如、生化学的応答の欠如、強い臨床応答の欠如、または強い生化学的応答の欠如を指し示し得る。一部の場合では、ＧＲＡに対する臨床応答またはＧＲＡに対する生化学的応答を示す、定量された量、活性または発現は、陰性の対照値または閾値の約０．２５％、０．５％、１％、５％、７．５％、１０％、１２．５％、１５％、１７．５％、２０％、２５％、３０％、４０％もしくは５０％に等しいか、またはこれらの値未満である。一部の場合では、ＧＲＡに対する臨床応答の欠如または生化学的応答の欠如を示す、定量された量、活性または発現は、陰性の対照値または閾値の少なくとも約７５％、１００％、１１０％、１２５％、１５０％、２００％、３００％または４００％である。
【００７４】
一部の実施形態では、ＧＲＡの投与後のＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５をコードする遺伝子の発現レベルは、１つまたは複数の用量のＧＲＡの投与後に得られた試料から定量され、１つまたは複数の用量のＧＲＡの投与より前に得られた試料から定量された値と比較される。投与前の値を下回る、定量された投与後の量、活性または発現レベルは、ＧＲＡに対する、臨床応答、生化学的応答、強い臨床応答または強い生化学的応答を指し示し得る。対照的に、投与前の値と近いまたは等しい、定量された投与後の量、活性または発現レベルは、ＧＲＡに対する、臨床応答の欠如、生化学的応答の欠如、強い生化学的応答の欠如または強い臨床応答の欠如を指し示し得る。一部の場合では、ＧＲＡの投与後の値が、ＧＲＡの投与前の値より高い場合に、ヒト対象における疾患または状態の進行を示す。一部の場合では、ＧＲＡの投与後の値が、ＧＲＡの投与前の値より低い場合、ヒト対象における疾患または状態の改善を示す。
【００７５】
ＧＲＡの投与前に提供された試料は、ＧＲＡの投与より前の任意の時点で採取することができ、限定されないが、ＧＲＡの投与直前；ＧＲＡの投与の少なくとも約１分前、２分前、３分前、４分前、６分前、７分前、８分前、１０分前、１５分前、２０分前、２５分前、３０分前、４５分前、５０分前、６０分前、８０分前もしくは９０分前；ＧＲＡの投与の少なくとも約２時間前、３時間前、４時間前、５時間前、６時間前、７時間前、８時間前、１０時間前、１２時間前、１４時間前、１６時間前、１８時間前、２０時間前もしくは２２時間前；ＧＲＡの投与の少なくとも約１日前、２日前、３日前、４日前、５日前もしくは６日前；またはＧＲＡの投与の少なくとも約１週前、１．５週前、２週前、３週前もしくは４週前を含む。一部の場合では、提供された投与前の試料は、ＧＲＡの投与の約０〜約１２時間前、約０〜６時間前、約０〜約４時間前、約１〜４時間前または約２〜６時間前に得られる。
【００７６】
ＧＲＡの投与後に提供された試料は、ＧＲＡの活性が、ＦＫＢＰ５の量もしくは活性の変化（例えば、検出可能な変化）またはＦＫＢＰ５をコードする遺伝子の発現の変化を顕在化させるための適切な時間の後に採取される。一部の場合では、この時間は、ＧＲＡの投与に対して可能な最大の応答（例えば、臨床または生化学的応答）を達成するために選択される。一部の場合では、ＧＲＡの投与とＧＲＡの投与後の試料を得る間の遅れは、少なくとも約１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１１分、１２分、１３分、１５分、２０分、２５分、３０分、４０分もしくは５０分；１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１５時間、１６時間、１８時間、２０時間もしくは２２時間；１日、２日、３日、４日、５日もしくは６日；または１週、２週、３週もしくは４週である。
【００７７】
ＧＲＡの投与後に提供された試料は、１つまたは複数のＧＲＡの複数回投与後に採取することができる。例えば、１つまたは複数のＧＲＡは、日（例えば、１日、２日、３日、４日、５日または６日）の期間または週（例えば、１週、２週、３週、４週または５週）の期間、それを必要とするヒト対象に投与することができ、次いで、投与後の試料を得て、ＧＲＡに対する臨床応答を評価するため、またはＧＲＡに対する生化学的応答を評価するために、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５遺伝子の発現について分析される。
【００７８】
一部の場合では、ＧＲＡに対する臨床または生化学的応答を示す、ＧＲＡの投与後の定量された量、活性または発現は、ＧＲＡの投与前の値の約３００％、２５０％、２００％、１５０％、１００％、７５％、５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、７．５％、５％、２．５％、２％、１．５％または１％未満である。一部の場合では、ＧＲＡに対する臨床または生化学的応答の欠如を示す、ＧＲＡの投与後の定量された量、活性または発現は、ＧＲＡの投与前の値の約７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、１１０％、１２０％、１２５％、１５０％もしくは２００％に等しいか、またはこれらの値を上回る。
【００７９】
一部の場合では、ヒト対象はがんを有していてよく、本明細書に記載の方法を、対象のがん細胞に対するＧＲＡ治療の効果を評価または予測するために使用することができる。一部の場合では、がん細胞は、対象から得られ、ＦＫＢＰ５の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５をコードする遺伝子の発現レベルについてアッセイされる。一部の場合では、対照に対して高いレベルのＦＫＢＰ５は、細胞が高いレベルのＧＲを発現していること、およびＧＲＡ治療の適応があり得ることを示唆し得る。一部の場合では、対照に対して低いレベルのＦＫＢＰ５は、細胞が低いレベルのＧＲを発現していること、およびＧＲＡ治療の適応がないことを示唆し得る。一部の場合では、対照に対して低いレベルのＦＫＢＰ５は、ＦＫＢＰ５のフィードバック機構が無効であり、したがって、ＧＲＡ治療の適応があり得ることを示唆し得る。一部の場合では、投与前の値と比較して、ＧＲＡの投与後の腫瘍細胞におけるＦＫＢＰ５の減少は、ＧＲＡ治療の適応があることを示唆し得る。
【００８０】
同様に、ＦＫＢＰ５の量、活性または発現レベルは、ＧＲの量、活性または発現レベルと組合せて評価することができる。一部の場合では、低いＧＲの量、活性または発現レベルおよび低いＦＫＢＰ５の量、活性または発現レベルは、ＧＲＡ治療が、このがんのタイプ、細胞または腫瘍に対して有益ではないことを予測し得る。一部の場合では、高いＧＲの量、活性または発現レベルおよび高いＦＫＢＰ５の量、活性または発現レベルは、ＧＲＡ治療が、このがんのタイプ、細胞または腫瘍に対して有益であり得ることを指し示し得る。一部の場合では、高いＧＲの量、活性または発現レベルおよび低いＦＫＢＰ５の量、活性または発現レベルは、不完全なコルチゾールのカウンター制御機構を指し示し得、ＧＲＡ治療は有益な処置であり得る。
【００８１】
一部の場合では、ＦＫＢＰ５のレベルは、患者から抽出され、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養された腫瘍細胞において検出することができる。例えば、腫瘍細胞を含有する試料を得て、試料の一部を、ＦＫＢＰ５（タンパク質または発現）についてアッセイすることができ、ＧＲＡを、試料の異なる部分に投与することができる。ＧＲＡが投与された試料は、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５遺伝子の発現についてアッセイされ、投与前の値と比較することができる。
【００８２】
一部の場合では、ＦＫＢＰ５のレベルは、クッシング症候群の再発または寛解を検出するために、経蝶形骨洞手術後に決定することができる。例えば、ＦＫＢＰ５は、経蝶形骨洞手術の前および後に得られた試料において測定することができる。さらに、またはあるいは、ＦＫＢＰ５は、経蝶形骨洞手術後のいくつかの時点で得られた試料において決定することができる。例えば、ＦＫＢＰ５は、経蝶形骨洞手術後１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日もしくは２０日以内に得られた、１つまたは複数の試料において決定することができる。一部の場合では、対照に対して低いレベルのＦＫＢＰ５は、対象が、クッシング症候群の寛解を示すこと、またはクッシング症候群の早期の再発を示さないことを指し示し得る。一部の場合では、経蝶形骨洞手術より前に得られた試料において検出された値と比較して、ＦＫＢＰ５の低下は、対象が、クッシング症候群の寛解を示すこと、またはクッシング症候群の早期の再発を示さないことを示す。一部の場合では、経蝶形骨洞手術後に複数の時点で採取された試料におけるＦＫＢＰ５の安定または低下した値は、対象が、クッシング症候群の寛解を示すこと、またはクッシング症候群の早期の再発を示さないことを示す。
【００８３】
一部の実施形態では、ＧＲＡの投与後に、ＧＲＡの投与前の値または対照値に対して、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現の減少の検出がない場合には、方法は、増加させた量のＧＲＡを対象に投与するステップ、もしくは代替のＧＲＡを対象に投与するステップ、またはこれらの組合せを含む。一部の実施形態では、ＧＲＡの投与後に、ＧＲＡの投与前の値または対照値に対して、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現の閾値より大きい減少の検出がない場合には、方法は、増加させた量のＧＲＡを対象に投与するステップ、もしくは代替のＧＲＡを対象に投与するステップ、またはこれらの組合せを含む。
【００８４】
一部の実施形態では、高コルチゾール血症の処置のための内科的（例えば、ＧＲＡ）または外科的治療の投与後、ＦＫＢＰ５の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルは、高コルチゾール血症の処置のための１回または複数の内科的治療の投与後に得られた提供試料から定量され、投与前の値よりもむしろ対照値または閾値と比較される。一部の場合では、対照値または閾値は、アッセイの対象の組織、器官もしくは細胞タイプにおける内科的または外科的治療に対する、生化学的もしくは臨床応答または強い生化学的もしくは臨床応答を示す、陽性の対照値または閾値である。したがって、このような場合では、陽性の対照値もしくは閾値に、近い、等しいまたは下回る、定量された量、活性または発現レベルは、高コルチゾール血症の処置のための内科的または外科的治療に対する生化学的もしくは臨床応答または強い生化学的もしくは臨床応答を指し示し得る。対照的に、陽性の対照値もしくは閾値を、上回る、または顕著に上回る、定量された量、活性または発現レベルは、高コルチゾール血症の処置のための内科的または外科的治療に対する生化学的もしくは臨床応答の欠如または強い生化学的もしくは臨床応答の欠如を指し示し得る。
【００８５】
一部の場合では、高コルチゾール血症の処置のための内科的または外科的治療に対する生化学的または臨床応答を示す、定量された量、活性、発現は、陽性の対照値または閾値の２５％、３０％、４０％、５０％、７５％、１００％、１１０％、１２５％もしくは１５０％に等しいか、これらのおよその値であるか、またはこれらのおよその値未満である。一部の場合では、高コルチゾール血症の処置のための内科的または外科的治療に対する生化学的または臨床応答の欠如を示す、定量された量、活性または発現は、複数の陽性の対照値または閾値の２倍、２．５倍、３倍、４倍、５倍、７．５倍、１０倍、１２倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍もしくは５０倍に等しいか、これらのおよその値であるか、またはこれらのおよその値を上回る。
【００８６】
一部の場合では、対照値または閾値は、高コルチゾール血症の処置のための内科的もしくは外科的治療に対する（例えば、生化学的または臨床）応答の欠如を示す陰性の対照値もしくは閾値、または高コルチゾール血症の処置のための内科的もしくは外科的治療の投与がないか、または投与より前に典型的に得られた値である。したがって、このような場合では、陰性の対照値または閾値を下回る（例えば、顕著に下回る）、定量された量、活性または発現レベルは、高コルチゾール血症の処置のための内科的もしくは外科的治療に対する、臨床もしくは生化学的応答または強い臨床もしくは生化学的応答を指し示し得る。対照的に、陰性の対照値もしくは閾値に、近い、等しいまたは上回る、定量された量、活性または発現レベルは、高コルチゾール血症の処置のための内科的もしくは外科的治療に対する、臨床応答の欠如、生化学的応答の欠如、強い臨床応答の欠如、または強い生化学的応答の欠如を指し示し得る。一部の場合では、高コルチゾール血症の処置のための内科的もしくは外科的治療に対する臨床応答、または高コルチゾール血症の処置のための内科的もしくは外科的治療に対する生化学的応答を示す、定量された量、活性または発現は、陰性の対照値または閾値の０．２５％、０．５％、１％、５％、７．５％、１０％、１２．５％、１５％、１７．５％、２０％、２５％、３０％、４０％もしくは５０％に等しいか、これらのおよその値であるか、またはこれらのおよその値未満である。一部の場合では、高コルチゾール血症の処置のための内科的もしくは外科的治療に対する臨床応答の欠如または生化学的応答の欠如を示す、定量された量、活性または発現は、陰性の対照値または閾値の少なくとも約７５％、１００％、１１０％、１２５％、１５０％、２００％、３００％または４００％である。
【００８７】
一部の実施形態では、高コルチゾール血症の処置のための内科的治療の投与後のＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５をコードする遺伝子の発現レベルは、高コルチゾール血症の処置のための１回または複数回の内科的治療の投与後に得られた試料から定量され、高コルチゾール血症の処置のための１回または複数回の内科的治療の投与より前に得られた試料から定量された値と比較される。投与前の値を下回る、定量された投与後の量、活性または発現レベルは、高コルチゾール血症の処置のための内科的治療に対する、臨床応答、生化学的応答、強い臨床応答または強い生化学的応答を指し示し得る。対照的に、投与前の値と近いまたは等しい、定量された投与後の量、活性または発現レベルは、高コルチゾール血症の処置のための内科的治療に対する、臨床応答の欠如、生化学的応答の欠如、強い生化学的応答の欠如または強い臨床応答の欠如を指し示し得る。一部の場合では、投与後の値が、投与前の値より高い場合に、ヒト対象における高コルチゾール血症の状態の進行を示す。一部の場合では、投与後の値が、投与前の値より低い場合、ヒト対象における高コルチゾール血症の状態の改善を示す。
【００８８】
投与前の試料は、高コルチゾール血症の処置のための内科的または外科的治療の投与より前の任意の時点で採取することができ、限定されないが、治療の投与直前；治療の投与の少なくとも約１分前、２分前、３分前、４分前、６分前、７分前、８分前、１０分前、１５分前、２０分前、２５分前、３０分前、４５分前、５０分前、６０分前、８０分前もしくは９０分前；治療の投与の少なくとも約２時間前、３時間前、４時間前、５時間前、６時間前、７時間前、８時間前、１０時間前、１２時間前、１４時間前、１６時間前、１８時間前、２０時間前もしくは２２時間前；治療の投与の少なくとも約１日前、２日前、３日前、４日前、５日前もしくは６日前；または治療の投与の少なくとも約１週前、１．５週前、２週前、３週前もしくは４週前を含む。一部の場合では、投与前の試料は、治療の投与の約０〜約１２時間前、約０〜６時間前、約０〜約４時間前、約１〜４時間前または約２〜６時間前に得られる。
【００８９】
治療の投与後の試料は、治療の活性が、ＦＫＢＰ５の量もしくは活性の変化（例えば、検出可能な変化）またはＦＫＢＰ５をコードする遺伝子の発現の変化を顕在化させるための適切な時間の後に採取することができる。一部の場合では、この時間は、治療の投与に対して可能な最大の応答（例えば、臨床または生化学的応答）を達成するために選択される。一部の場合では、治療の投与と治療の投与後の試料を得る間の遅れは、少なくとも約１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１１分、１２分、１３分、１５分、２０分、２５分、３０分、４０分もしくは５０分；または１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１５時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間もしくは２４時間である。
【００９０】
治療の投与後の試料は、１つもしくは複数の内科的または外科的治療の複数回投与後に採取することができる。例えば、１つまたは複数の内科的治療（例えば、ＧＲＡ、ＡＣＴＨモジュレーター、ステロイド産生の阻害剤などの投与）は、日（例えば、１日、２日、３日、４日、５日または６日）の期間または週（例えば、１週、２週、３週、４週または５週）の期間、それを必要とするヒト対象に投与することができ、次いで、投与後の試料を得て、内科的治療に対する臨床応答を評価するため、または内科的治療に対する生化学的応答を評価するために、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５遺伝子の発現について分析される。別の例として、１つまたは複数の外科的治療（例えば、経蝶形骨洞手術、非下垂体性ＡＣＴＨ分泌腫瘍の切除など）は、それを必要とするヒト対象に投与することができ、次いで、繰り返し、次いで、投与後の試料を得て、外科的治療に対する臨床応答を評価するため、または外科的治療に対する生化学的応答を評価するために、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５遺伝子の発現について分析される。
【００９１】
一部の場合では、治療に対する臨床または生化学的応答を示す、定量された投与後の量、活性または発現は、投与前の値の約７５％、５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、７．５％、５％、２．５％、２％、１．５％または１％未満である。一部の場合では、治療に対する臨床または生化学的応答の欠如を示す、定量された投与後の量、活性または発現は、投与前の値の８０％、８５％、９０％、１００％、１１０％、１２０％、１２５％、１５０％もしくは２００％に等しいか、これらのおよその値であるか、またはこれらのおよその値を上回る。
【００９２】
一部の場合では、ＦＫＢＰ５のレベルは、高コルチゾール血症の再発または寛解を検出するために、経蝶形骨洞手術後に決定することができる。例えば、ＦＫＢＰ５は、経蝶形骨洞手術の前および後に得られた試料において測定することができる。さらに、またはあるいは、ＦＫＢＰ５は、経蝶形骨洞手術後のいくつかの時点で得られた試料において決定することができる。例えば、ＦＫＢＰ５は、経蝶形骨洞手術後１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日もしくは２０日以内に得られた、１つまたは複数の試料において決定することができる。一部の場合では、対照に対して低いレベルのＦＫＢＰ５は、対象が、高コルチゾール血症の寛解を示すこと、または高コルチゾール血症の早期の再発を示さないことを指し示し得る。一部の場合では、経蝶形骨洞手術より前に得られた試料において検出された値と比較して、ＦＫＢＰ５の低下は、対象が、高コルチゾール血症の寛解を示すこと、または高コルチゾール血症の早期の再発を示さないことを示す。一部の場合では、経蝶形骨洞手術後に複数の時点で採取された試料におけるＦＫＢＰ５の安定または低下した値は、対象が、高コルチゾール血症の寛解を示すこと、または高コルチゾール血症の早期の再発を示さないことを示す。
【００９３】
一部の実施形態では、高コルチゾール血症の処置のための内科的または外科的治療の投与後に、投与前の値または対照値に対して、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現の減少の検出がない場合には、方法は、増加させた量の内科的治療を対象に投与すること、代替の内科的治療を対象に投与すること、さらなる外科的治療を対象に投与すること、もしくは代替の外科的治療を対象に投与すること、またはこれらの組合せを含む。一部の実施形態では、高コルチゾール血症の処置のための内科的または外科的治療の投与後に、投与前の値または対照値に対して、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現の減少の検出がなく、検出された減少が閾値よりも大きい場合には、方法は、増加させた量の内科的治療を対象に投与すること、代替の内科的治療を対象に投与すること、さらなる外科的治療を対象に投与すること、もしくは代替の外科的治療を対象に投与すること、またはこれらの組合せを含む。
ｉｉｉ．閾値、対照値および差分閾値
【００９４】
ＦＫＢＰ５の量、発現または活性は、本明細書に記載されるように、臨床または生化学的応答を評価するために、種々の閾値、対照値または差分閾値と比較することができる。同様に、投与前（例えば、ＧＲＡの投与前もしくは高コルチゾール血症の処置のための内科的または外科的治療の投与前）から投与後のＦＫＢＰ５の量、発現または活性の変化は、本明細書に記載されるように、投与されたＧＲＡもしくは他の治療に対する臨床または生化学的応答を評価するために、種々の閾値、対照値または差分閾値と比較することができる。一部の場合では、閾値、対照値または差分閾値は、診断としての使用のために十分な感度または特異性を提供するために選択される。例えば、閾値、対照値または差分閾値は、少なくとも９０％の感度、少なくとも９５％の特異性、またはこれらの組合せを提供するために選択することができる。一部の場合では、閾値、対照値または差分閾値は、試験個体のコホートに由来し、コホートは、診断としての使用のために十分な感度または特異性を提供するために十分なサイズである。
【００９５】
一部の場合では、コホートのサイズは、少なくとも１００人または少なくとも２００人の試験個体である。例えば、１００人または２００人の健康な（例えば、非クッシング、非高コルチゾール血症またはそうでなければＧＲＡを必要としない）試験個体を、閾値または対照のＦＫＢＰ５の量、活性または発現レベルを提供するために選択することができる。本明細書に記載されるように、少なくとも１００人または少なくとも２００人の健康な試験個体のコホートに由来する閾値または対照レベルと比較して高い、ヒト対象における測定されたＦＫＢＰ５の量、活性または発現レベルは、対象がクッシング症候群であることを指し示し得る。あるいは、本明細書に記載されるように、そのような健康な個体のコホートは、ＧＲＡなどの内科的または外科的治療の投与に対する応答において、ＦＫＢＰ５の量、発現または活性の小さな相違を示すことが予想される。このように、治療の投与に応答する少なくとも１００人または少なくとも２００人の健康な試験個体のコホートに由来する差分閾値（例えば、減少閾値）より大きい（例えば、少なくとも２倍、３倍、５倍、１０倍、２５倍、５０倍）、投与前から投与後のＦＫＢＰ５の量、活性または発現レベルの測定された減少は、ＧＲＡに対する臨床または生化学的応答を指し示し得る。
【００９６】
一部の場合では、コホートのサイズは、少なくとも２０人または３０人または５０人の試験個体である。例えば、コホートは、クッシング症候群であることが既知であるか、または疑いがある対象を含むか、または、からなり得る。一部の場合では、クッシング症候群であることが既知であるか、または疑いがある試験個体のコホートは、処置されていない対照のコホートである。一部の場合では、コホートは、クッシング症候群を有し、例えば、１つまたは複数のクッシングの症状の減少もしくは除去によって指し示される、クッシングの処置のためのＧＲＡまたは他の内科的もしくは外科的治療の投与に対して臨床もしくは生化学的応答を示す対象を含むか、または、からなり得る。本明細書に記載されるように、（例えば、未処置の）クッシング症候群であることが既知であるか、または疑いがある、２０人、３０人または５０人の試験個体のコホートに由来する閾値に類似する（例えば、閾値を５％、１０％、２５％、３０％、５０％、７５％もしくは１００％未満上回る、または閾値の少なくとも９５％、９０％、８０％、７０％、６０％もしくは５０％である）である、測定されたＦＫＢＰ５の量、活性または発現レベルは、対象がクッシング症候群であることを指し示し得る。対照的に、（例えば、未処置の）クッシング症候群であることが既知であるか、または疑いがある、２０人、３０人または５０人の試験個体のコホートに由来する閾値より低い（例えば、閾値の１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％または５０％未満である）、測定されたＦＫＢＰ５の量、活性または発現レベルは、対象がクッシング症候群を有さないことを指し示し得る。
【００９７】
あるいは、クッシング症候群であることが既知であるか、または疑いがあり、ＧＲＡの投与に対して臨床もしくは生化学的応答を示す、２０〜３０人、２０〜５０人、３０人〜５０人、または少なくとも２０人、３０人もしくは５０人の個体のコホートに由来する差分閾値に類似する、ＧＲＡの投与前からＧＲＡの投与後のＦＫＢＰ５の測定された量、活性または発現レベルの減少は、ＧＲＡに対する臨床または生化学的応答を指し示し得る。対照的に、ＧＲＡの投与前からＧＲＡの投与後の減少が、クッシング症候群であることが既知であるか、または疑いがあり、ＧＲＡの投与に対して臨床または生化学的応答を示す、２０〜３０人、２０〜５０人、３０人〜５０人または少なくとも２０人、３０人もしくは５０人の個体のコホートに由来する差分閾値に適合しない場合、ＧＲＡに対する臨床または生化学的応答の欠如を示す。
【００９８】
コホート（例えば、少なくとも１００人もしくは少なくとも２００人の健康な個体のコホート、またはクッシング症候群であることが既知であるか、もしくは疑いがある、少なくとも２０〜３０人、２０〜５０人、３０〜５０人、または少なくとも２０人、３０人もしくは５０人の個体のコホート）に由来する閾値、対照値または差分閾値は、データベースに含まれ得る。この場合では、閾値、対照値または差分閾値との比較は、データベースを検索することを含み得る。一部の場合では、比較は、統計学的有意性の試験を適用することをさらに含む。一部の場合では、統計学的有意性の試験は、ヒト対象における量、活性または発現レベルに対する、コホートにおける量、活性または発現レベルの相対的な可変性の比較を含む。一部の場合では、統計学的有意性の試験は、コホートにおける、内科的もしくは外科的治療の投与前から投与後、またはＧＲＡの投与前から投与後の、ＦＫＢＰ５の量、活性または発現の変化と、ヒト対象におけるＦＫＢＰ５の量、活性または発現レベルの変化との相対的な可変性の比較を含む。一部の場合では、方法は、比較が、コホートにおいて観察された可変性によって指し示されるように、測定の固有の可変性の観点から、統計学的に有意であるか否かを同定することを含む。
ｉｖ．ＧＲＡの投与
【００９９】
ヒト対象に投与されるＧＲＡは、本明細書に記載の任意のＧＲＡを含む、任意のグルココルチコイド受容体アンタゴニストであってよい。例示的なＧＲＡは、限定されないが、ミフェプリストンまたはヘテロアリール−ケトンＧＲＡを含む。一部の場合では、ヒト対象に投与されるＧＲＡは、ミフェプリストンではない。一部の場合では、ＧＲＡは、ミネラルコルチコイド受容体（ＭＲ）、アンドロゲン受容体（ＡＲ）またはプロゲステロン受容体（ＰＲ）などの他の核内受容体よりもむしろＧＲと優先的に結合およびアンタゴナイズする特異的なＧＲＡである。一部の場合では、ＧＲＡは、ＧＲ、ならびにＭＲ、ＡＲおよびＰＲからなる群から選択される１または２つの他の核内受容体と、優先的に結合およびアンタゴナイズする汎特異的なＧＲＡである。一部の場合では、ＧＲＡは、ＧＲ、ＭＲ、ＡＲおよびＰＲに結合およびアンタゴナイズする非特異的なＧＲＡである。
【０１００】
ＧＲＡは、修飾コルチゾールステロイド骨格を含有する化合物などのステロイド性ＧＲＡであってよい。グルココルチコイドアンタゴニストを作成するためのコルチゾールステロイド骨格の構造改変の２つの最も一般的な公知の分類は、１１−βヒドロキシ基の改変および１７−β側鎖の改変を含む（例えば、Lefebvre（１９８９年）J.  Steroid  Biochem.、３３巻、５５７〜５６３頁を参照）。ステロイド性ＧＲＡは、米国特許第５，９２９，０５８号に記載のアンドロゲンタイプのステロイド化合物、ならびに米国特許第４，２９６，２０６号；米国特許第４，３８６，０８５号；米国特許第４，４４７，４２４号；米国特許第４，４７７，４４５号；米国特許第４，５１９，９４６号；米国特許第４，５４０，６８６号；米国特許第４，５４７，４９３号；米国特許第４，６３４，６９５号；米国特許第４，６３４，６９６号；米国特許第４，７５３，９３２号；米国特許第４，７７４，２３６号；米国特許第４，８０８，７１０号；米国特許第４，８１４，３２７号；米国特許第４，８２９，０６０号；米国特許第４，８６１，７６３号；米国特許第４，９１２，０９７号；米国特許第４，９２１，６３８号；米国特許第４，９４３，５６６号；米国特許第４，９５４，４９０号；米国特許第４，９７８，６５７号；米国特許第５，００６，５１８号；米国特許第５，０４３，３３２号；米国特許第５，０６４，８２２号；米国特許第５，０７３，５４８号；米国特許第５，０８９，４８８号；米国特許第５，０８９，６３５号；米国特許第５，０９３，５０７号；米国特許第５，０９５，０１０号；米国特許第５，０９５，１２９号；米国特許第５，１３２，２９９号；米国特許第５，１６６，１４６号；米国特許第５，１６６，１９９号；米国特許第５，１７３，４０５号；米国特許第５，２７６，０２３号；米国特許第５，３８０，８３９号；米国特許第５，３４８，７２９号；米国特許第５，４２６，１０２号；米国特許第５，４３９，９１３号；米国特許第５，６１６，４５８号；米国特許第５，６９６，１２７号および米国特許第６，３０３，５９１号に開示された化合物も含み得る。このようなステロイド性ＧＲＡは、コルテキソロン、デキサメタゾン−オキセタノン、１９−ノルデオキシコルチコステロン、１９−ノルプロゲステロン、コルチゾール−２１−メシレート；デキサメタゾン−２１−メシレート、１１β−（４−ジメチルアミノエトキシフェニル）−１７α−プロピニル−１７β−ヒドロキシ−４，９−エストラジエン−３−オン（ＲＵ００９）および１７β−ヒドロキシ−１７α−１９−（４−メチルフェニル）アンドロスタ−４，９（１１）−ジエン−３−オン（ＲＵ０４４）を含む。
【０１０１】
ステロイド性ＧＲＡの他の例は、Van  Kampenら（２００２年）Eur.  J.  Pharmacol.、４５７号（２〜３頁）、２０７巻、国際公開第０３／０４３６４０号、欧州特許第０６８３１７２Ｂ１号および欧州特許第０７６３５４１Ｂ１号に開示されており、これらのそれぞれは、参照によって本明細書に組み込まれる。欧州特許第ＥＰ０７６３５４１Ｂ１号およびHoybergら、Int'l  J.  of  Neuro-psychopharmacology、５巻、補遺１、Ｓ１４８頁（２００２年）は、（１１β，１７β）−１１−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−１７−ヒドロキシ−１７−（１−プロピニル）エストラ−４，９−ジエン−３−オン（ＯＲＧ３４５１７）という化合物を開示している。
【０１０２】
ＧＲＡは、非ステロイド性ＧＲＡであってよい。非ステロイド性ＧＲＡは、コルチゾールの構造的相同性を共有せず、またはコルチゾールの改変ではない。このような化合物は、部分ペプチド、偽ペプチドおよび非ペプチド分子実体を含む、タンパク質の合成模倣体およびアナログを含む。非ステロイド性ＧＲＡ化合物は、シクロヘキシル−ピリミジン骨格、縮合アザデカリン骨格、ヘテロアリールケトン縮合アザデカリン骨格またはオクタヒドロ縮合アザデカリン骨格を有するグルココルチコイド受容体アンタゴニストも含む。シクロヘキシル−ピリミジン骨格を有する例示的なグルココルチコイド受容体アンタゴニストは、米国特許第８，６８５，９７３号に記載されるものを含む。縮合アザデカリン骨格を有する例示的なグルココルチコイド受容体アンタゴニストは、米国特許第７，９２８，２３７号および米国特許第８，４６１，１７２号に記載のものを含む。ヘテロアリールケトン縮合アザデカリン骨格を有する例示的なグルココルチコイド受容体アンタゴニストは、米国特許出願公開第２０１４／００３８９２６号に記載のものを含む。オクタヒドロ縮合アザデカリン骨格を有する例示的なグルココルチコイド受容体アンタゴニストは、２０１３年１１月２５日に出願された、代理人整理番号８５１７８−８８７８８４（００７８００ＵＳ）のOctahydro  Fused  Azadecalin  Glucocorticoid  Receptor  Modulatorsという名称の、米国仮特許出願第６１／９０８，３３３号に記載のものを含む。
【０１０３】
非ステロイド性ＧＲＡの例は、米国特許第５，６９６，１２７号、米国特許第６，０５１，５７３号および米国特許第６，５７０，０２０号に開示されたＧＲアンタゴニスト化合物、米国特許出願第２００２００７７３５６号に開示されたＧＲアンタゴニスト化合物、Bradleyら、J.  Med.  Chem.、４５巻、２４１７〜２４２４頁（２００２年）に開示されたグルココルチコイド受容体アンタゴニスト、例えば、４α（Ｓ）−ベンジル−２（Ｒ）−クロロエチニル−１，２，３，４，４α，９，１０，１０α（Ｒ）−オクタヒドロ−フェナントレン−２，７−ジオール（「ＣＰ３９４５３１」）および４α（Ｓ）−ベンジル−２（Ｒ）−プロパ−１−イニル−１，２，３，４，４α，９，１０，１０α（Ｒ）−オクタヒドロ−フェナントレン−２，７−ジオール（「ＣＰ４０９０６９」）、６−置換−１，２−ジヒドロ−Ｎ−保護キノリンなどのステロイド受容体に対して高親和性、高選択性のアンタゴニストである非ステロイド性化合物を記載しているＰＣＴ国際出願第９６／１９４５８号に開示された化合物を含む。
【０１０４】
ＧＲＡは、経口、非経口および局所的な方法を含む、任意の適切な手段によって送達することができる。局所経路による経皮的な投与方法は、アプリケータースティック、溶液、懸濁液、乳液、ゲル、クリーム、軟膏、ペースト、ゼリー、ペイント、粉末およびエアロゾルとして製剤化することができる。
【０１０５】
医薬調製物は、好ましくは単位剤形である。このような形態では、調製物は適切な含量のＧＲＡを含有する単位用量に細分される。単位剤形は、包装された調製物であってよく、包装体は、バイアル中またはアンプル中に包装された錠剤、カプセル剤および散剤などの別々の含量の調製物を含有する。また、単位剤形は、カプセル剤、錠剤、カシェ剤もしくはロゼンジ剤自体であってよく、または、包装体の形態における適切な数の任意のこれらであってよい。
【０１０６】
ＧＲＡは、他の薬剤と同時投与することができる。同時投与は、他の薬剤の０．５時間、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１６時間、２０時間または２４時間以内にＧＲＡを投与することを含む。同時投与は、同時に、ほぼ同時に（例えば、互いに約１分、５分、１０分、１５分、２０分または３０分以内）、または任意の順序で順次投与することも含む。さらに、ＧＲＡは、１日あたりに好ましい投与量のレベルを提供するように、それぞれ、１日１回、または１日あたり２回、３回もしくはそれ超の回数で投与することができる。
【０１０７】
一部の実施形態では、同時投与は、合剤、すなわち、ＧＲＡおよび任意の他の薬剤を含む単一の医薬組成物を調製することによって達成することができる。あるいは、種々の成分は、別々に製剤化することができる。ＧＲＡと同時投与され得る代表的な化合物、組成物または活性薬剤は、限定されないが、別のＧＲＡ、細胞増殖を阻害する薬剤、抗がん化学療法剤または抗体を含む。
【０１０８】
ＧＲＡおよび任意の他の薬剤は、任意の適切な量で存在していてよく、限定されないが、対象の体重および年齢、疾患の状況などを含む種々の要因に依存し得る。適切な投与量の範囲は、約０．１ｍｇ〜約１０，０００ｍｇ、または約１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、または約１０ｍｇ〜約７５０ｍｇ、または約２５ｍｇ〜約５００ｍｇ、または約５０ｍｇ〜約２５０ｍｇを含む。適切な投与量はまた、約１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇまたは１０００ｍｇを含む。ＧＲＡがミフェプリストンである場合、処置は、米国特許出願第１３／６７７，４６５号を参照することによってさらに理解することができ、この開示は、その全体が参照によって組み込まれる。
【０１０９】
組成物は、他の適合性の治療剤を含有することもできる。治療剤は、グルココルチコイド受容体をアンタゴナイズするのに有用であることが公知の他の活性薬剤、または単独では有効ではないが活性薬剤の有効性に寄与し得る補助剤と、互いに組み合わせて使用することができる。
ｂ．クッシング症候群の診断
【０１１０】
クッシング症候群は、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５をコードする遺伝子の発現レベルを検出すること、およびクッシング症候群の存在、非存在または可能性をともなって、量、活性または発現レベルを相関させることによって診断することができる。方法は、ａ）対象からの試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを測定するステップ；およびｂ）量、活性または発現レベルがクッシング症候群を示す場合、対象がクッシング症候群に罹患している可能性が高いと同定するステップを含むことができる。
【０１１１】
試料は、様々な手段によって得ることができる。例えば、試料は、血液試料（例えば、全血またはその分画の試料）を収集することにより得ることができる。あるいは、試料は、対象の上皮細胞（例えば、鼻粘膜上皮細胞）を擦過することにより得ることができる。試料は、限定されないが、血液試料、脳脊髄液試料、滑膜組織試料、滑液試料、脳組織試料、血管試料または腫瘍（例えば、下垂体腺腫）試料などの、ヒト細胞および組織の試料を含む。
【０１１２】
試料は、ＦＫＢＰ１タンパク質またはＦＫＢＰ５核酸を得るために抽出することができる。例えば、細胞を溶解して、タンパク質画分を得ることができる。一部の場合では、ライセートは、さらに分画して、特定の細胞区画を精製することができる。例えば、細胞ライセートは、分画して、サイトゾルのタンパク質画分を得ることができる。別の例として、細胞ライセートは、分画して、核または核タンパク質画分を得ることができる。タンパク質画分は、ＦＫＢＰ５タンパク質レベルまたは活性についてアッセイすることができる。あるいは、細胞を溶解して、核酸（例えば、ｍＲＮＡ）画分を得ることができる。核酸画分は、ＦＫＢＰ５遺伝子の発現についてアッセイすることができる。
【０１１３】
細胞ライセートまたはそのタンパク質画分は、様々な方法を使用して精製して、ＦＫＢＰ５タンパク質またはその一部が濃縮された画分を得ることができる。例えば、細胞を溶解して、混入物または標的タンパク質と優先的に結合するための適切な条件下、クロマトグラフィー媒体と接触させることができる。混入物が優先的に結合する場合、標的タンパク質は、通過画分として収集され、さらにアッセイすることができる。標的タンパク質が結合する場合、クロマトグラフィー媒体を洗浄し、標的タンパク質を溶出させることができる。
【０１１４】
別の例として、細胞を溶解して、ＦＫＢＰ５タンパク質またはその一部と特異的に結合する捕捉試薬（例えば、捕捉抗体またはアプタマー）と接触させることができる。捕捉試薬は、固体担体上に固定化することができる。一部の場合では、ＦＫＢＰ５タンパク質またはその一部を、捕捉試薬から溶出させて、次いで、検出または定量することができる。他の場合では、ＦＫＢＰ５タンパク質またはその一部は、捕捉試薬に結合した形態として、検出または定量することができる。
【０１１５】
同様に、細胞ライセートまたはその核酸画分は、様々な方法を使用して精製して、ＦＫＢＰ５をコードする遺伝子の転写物が濃縮された画分を得ることができる。例えば、細胞を溶解して、核酸を沈殿させるか、またはそうでなければライセートから精製することができる。一部の場合では、核酸は、試料またはその画分を、ポリアデニル化されたｍＲＮＡと優先的に結合するｏｌｉｇｏｄＴ部分を固定化した表面と接触させることによって精製することができる。
【０１１６】
核酸は、増幅、ハイブリダイゼーション、重合、逆転写またはこれらの組合せに供することができる。一部の場合では、増幅、ハイブリダイゼーション、重合または逆転写は、ＦＫＢＰ５をコードする遺伝子、その転写物またはその一部が、特異的に増幅、ハイブリダイズまたは逆転写されるように標的特異的である。一部の場合では、増幅、ハイブリダイゼーション、重合または逆転写は、試料が、全ゲノムもしくは全トランスクリプトームのハイブリダイゼーション、重合または逆転写に供されるように標的特異的ではない。全ゲノムもしくは他の非特異的なハイブリダイゼーション、重合または逆転写は、１つもしくは複数の変性プライマーまたはプローブの使用により行うことができる。非特異的なハイブリダイゼーション、重合または逆転写の後、ＦＫＢＰ５遺伝子の発現を、特異的に検出および／または定量することができる。
【０１１７】
ＦＫＢＰ５ポリペプチドもしくはその一部の量または活性は、本技術分野において公知の様々な方法によって測定することができる。例えば、ＥＬＩＳＡ（例えば、サンドイッチＥＬＩＳＡ）は、ＦＫＢＰ５タンパク質またはその一部に対して特異的な１つまたは複数の抗体を使用して、試料またはそのタンパク質抽出物中のポリペプチドレベルを測定するために使用することができる。一部の場合では、ＥＬＩＳＡは、サンドイッチＥＬＩＳＡであり、これは、ＦＫＢＰ５ポリペプチドまたはその一部が、固定化された捕捉試薬（例えば、捕捉抗体またはアプタマー）と結合することによって固定化され、固定化されたポリペプチドまたはそのタンパク質を、検出試薬（例えば、検出抗体またはアプタマー）を用いて検出する。
【０１１８】
別の例として、ＦＫＢＰ５ポリペプチドまたはその一部の活性は、試料またはそのタンパク質抽出物を、プロリン含有ペプチド基質と接触させて、試料のＦＫＢＰ５が媒介するシス−トランスプロリルイソメラーゼ活性を測定することによって測定することができる。一部の場合では、基質の異性化は、プロテアーゼなどのシス−トランスプロリン異性体感受性酵素を使用して測定することができる。例えば、Ｐ２位にトランスプロリンおよびＰ１位にフェニルアラニンまたはチロシンを有するペプチド基質に対する高い基質特異性および触媒効率（ｋｃａｔ／Ｋｍ）を有するが、Ｐ２にシス−プロリンを含有するこのようなペプチドに対して特異性もしくは触媒効率が非常に低いか、または有さないキモトリプシンを、プロリルイソメラーゼ活性を測定するために使用することができる。例えば、Ｎ−スクシニル−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ｃｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐ−ニトロアニリド基質を、キモトリプシンと組合せて使用することができ、これは、好ましくは、基質のトランスプロリル異性体を切断して、ＦＫＢＰ５のプロリルイソメラーゼ活性について、試料またはその抽出物をアッセイすることができる。ＦＫＢＰ５またはその一部のイソメラーゼ活性による基質のトランス異性体の産生は、例えば、Fischerら、Nature.、１９８９年２月２日、３３７巻（６２０６号）、４７６〜８頁に記載されるように、キモトリプシンによるニトロアニリド基質の消化を検出することによって測定することができる。
【０１１９】
別の例として、ＦＫＢＰ５ポリペプチドまたはその一部の活性は、試料中のＧＲと結合しているＦＫＢＰ５タンパク質の量を測定することによって、検出または定量することができる。これは、例えば、ＧＲおよびＦＫＢＰ５タンパク質の間の結合を保つのに適した状態下、ＧＲまたはＦＫＢＰ５タンパク質を精製することによって行うことができる。次いで、精製産物を、同族の結合パートナーの存在、非存在または含量についてアッセイすることができる。例えば、サイトゾルＧＲは、精製することができ、ＦＫＢＰ５タンパク質の存在が、精製産物において検出された。別の例として、ＦＫＢＰ５タンパク質は、精製することができ、ＧＲの存在を、精製産物において検出することができる。一部の場合では、これは、固定化された捕捉試薬が、ＧＲ：ＦＫＢＰ５タンパク質複合体の１メンバーを認識し、検出試薬が、ＧＲ：ＦＫＢＰ５タンパク質複合体の他のメンバーを認識する、サンドイッチＥＬＩＳＡタイプのアッセイを使用して行うことができる。
【０１２０】
別の例として、ＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現は、ＦＫＢＰ５のｍＲＮＡまたはその一部の逆転写、および逆転写産物またはその一部の定量的増幅によって測定することができる。定量的増幅は、ＰＣＲ（例えば、リアルタイムＰＣＲ）または本技術分野において公知の他の増幅手法を使用して行うことができる。増幅は、例えば、増幅産物へのインターカレート性色素の取り込み、クエンチされた蛍光加水分解プローブの分解、またはクエンチされた分子ビーコンの結合を検出することによって検出することができる。
【０１２１】
試料中の任意の測定された量、活性または発現レベルは、参照に対して正規化することができる。例えば、発現レベルは、総ｍＲＮＡレベルまたは参照遺伝子の発現レベルに対して正規化することができる。適切な参照遺伝子は、限定されないが、ＧＡＰＤＨ、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ１（ＨＲＰＴ１）、リボソームタンパク質ラージＰ１または別のハウスキーピング遺伝子を含む。別の例として、ＦＫＢＰ５タンパク質の量は、総タンパク質レベルまたは参照遺伝子産物のレベルに対して正規化することができる。適切な参照遺伝子産物は、限定されないが、アクチン、チューブリン、ＣＯＸ  ＩＶ、ＨＲＰＴ１、ＧＡＰＤＨまたは別のハウスキーピング遺伝子産物を含む。
【０１２２】
ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５をコードする遺伝子の発現レベルは、クッシング症候群の存在もしくは非存在または可能性を示す、対照値または閾値と比較することができる。一部の場合では、対照値または閾値は、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５をコードする遺伝子の発現レベルが、対照値または閾値に、近い、等しいまたは高い場合に、クッシング症候群を示すような、陽性対照である。一部の場合では、対照値または閾値は、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性またはＦＫＢＰ５をコードする遺伝子の発現レベルが、閾値に、近い、等しいまたは下回る場合に、クッシング症候群がないことを示すような、陰性対照である。
【実施例】
【０１２３】
（Ｉ．実施例Ｉ）
１０人の健康な対象を、１９日前にプレドニゾンで処置する。１２日前に、対象を、プレドニゾン（２５ｍｇ）およびミフェプリストン（６００ｍｇ）で処置する。１日目に、対象を、プレドニゾン（２５ｍｇ）およびＣＯＲＴ１２５１３４（５００ｍｇ）で処置する。血液試料を、各投与の前、および各投与後の種々の時点で採取する。試験の模式図を図１に表す。ＦＫＢＰ５遺伝子の発現レベルを、各日の投与前に得られた投与前の試料において、および各日の投与後の種々の時点で得られた投与後試料において測定する。試料中の発現レベルの生データを、各試料のグリセルアルデヒドリン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）遺伝子の発現レベルに対して正規化する。図２に図示するように、ＧＲアゴニストであるプレドニゾンの投与後の全血試料中の正規化されたＦＫＢＰ５遺伝子の発現レベルは、投与前レベルを約１０〜５０倍上回る。ＧＲＡであるミフェプリストンまたはＣＯＲＴ１２５１３４の投与は、ＦＫＢＰ５発現の倍数変化の顕著な低下を引き起こす。
参考文献
・Ｂａｒｉｋ  Ｓ．  Ｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎｓ：  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｌｏｖｅ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｌｉｆｅ  ｓｃｉｅｎｃｅｓ：  ＣＭＬＳ，  ２００６，  ６３：２８８９−２９００．
・Ｂａｕｇｈｍａｎ  Ｇ，  Ｗｉｅｄｅｒｒｅｃｈｔ  Ｇ．Ｊ，  Ｃａｍｐｂｅｌｌ    Ｎ  Ｆ，  Ｍａｒｔｉｎ    Ｍ  Ｍ，  Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ    Ｓ．  ＦＫＢＰ５１，  ａ  ｎｏｖｅｌ  Ｔ−ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎ  ｃａｐａｂｌｅ  ｏｆ  ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ．  Ｍｏｌｅｃ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．，  １９９５，  １５：  ４３９５−４４０２．
・Ｂｉｎｄｅｒ  ＥＢ，  Ｓａｌｙａｋｉｎａ  Ｄ，  Ｌｉｃｈｔｎｅｒ  Ｐ，  Ｗｏｃｈｎｉｋ  ＧＭ，  Ｉｓｉｎｇ  Ｍ，  Ｐｕｔｚ  Ｂ，  Ｐａｐｉｏｌ  Ｓ，  Ｓｅａｍａｎ  Ｓ，  Ｌｕｃａｅ  Ｓ，  Ｋｏｈｌｉ  ＭＡ，  Ｎｉｃｋｅｌ  Ｔ，  Ｋｕｎｚｅｌ  ＨＥ，  Ｆｕｃｈｓ  Ｂ，  Ｍａｊｅｒ  Ｍ，  Ｐｆｅｎｎｉｇ  Ａ，  Ｋｅｒｎ  Ｎ，  Ｂｒｕｎｎｅｒ  Ｊ，  Ｍｏｄｅｌｌ  Ｓ，  Ｂａｇｈａｉ  Ｔ，  Ｄｅｉｍｌ  Ｔ，  Ｚｉｌｌ  Ｐ，  Ｂｏｎｄｙ  Ｂ，  Ｒｕｐｐｒｅｃｈｔ  Ｒ，  Ｍｅｓｓｅｒ  Ｔ，  Ｋｏｈｎｌｅｉｎ  Ｏ，  Ｄａｂｉｔｚ  Ｈ，  Ｂｒｕｃｋｌ  Ｔ，  Ｍｕｌｌｅｒ  Ｎ，  Ｐｆｉｓｔｅｒ  Ｈ，  Ｌｉｅｂ  Ｒ，  Ｍｕｅｌｌｅｒ  ＪＣ，  Ｌｏｈｍｕｓｓａａｒ  Ｅ，  Ｓｔｒｏｍ  ＴＭ，  Ｂｅｔｔｅｃｋｅｎ  Ｔ，  Ｍｅｉｔｉｎｇｅｒ  Ｔ，  Ｕｈｒ  Ｍ，  Ｒｅｉｎ  Ｔ，  Ｈｏｌｓｂｏｅｒ  Ｆ，  Ｍｕｌｌｅｒ−Ｍｙｈｓｏｋ  Ｂ．    Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ｉｎ  ＦＫＢＰ５  ａｒｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ  ｏｆ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ  ｅｐｉｓｏｄｅｓ  ａｎｄ  ｒａｐｉｄ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２００４，  ３６：１３１９−１３２５．
・Ｂｉｎｄｅｒ  ＥＢ，  Ｂｒａｄｌｅｙ  ＲＧ，  Ｌｉｕ  Ｗ，  Ｅｐｓｔｅｉｎ  ＭＰ，  Ｄｅｖｅａｕ  ＴＣ，  Ｍｅｒｃｅｒ  ＫＢ，  Ｔａｎｇ  Ｙ，  Ｇｉｌｌｅｓｐｉｅ  ＣＦ，  Ｈｅｉｎ  ＣＭ，  Ｎｅｍｅｒｏｆｆ  ＣＢ，  Ｓｃｈｗａｒｔｚ  ＡＣ，  Ｃｕｂｅｌｌｓ  ＪＦ，  Ｒｅｓｓｌｅｒ  ＫＪ．  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＦＫＢＰ５  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ  ａｂｕｓｅ  ｗｉｔｈ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  ｐｏｓｔｔｒａｕｍａｔｉｃ  ｓｔｒｅｓｓ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｉｎ  ａｄｕｌｔｓ．  ＪＡＭＡ，  ２００８，  ２９９：１２９１−１３０５．
・Ｂｉｎｄｅｒ  ＥＢ．  Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＦＫＢＰ５，  ａ  ｃｏ−ｃｈａｐｅｒｏｎｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ａｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｎｄ  ａｎｘｉｅｔｙ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．  Ｐｓｙｃｈｏｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，  ２００９，  ３４（Ｓｕｐｐ．  １）：  Ｓ１８６−Ｓ１９５．
・Ｂｌａｉｒ  ＬＪ，  Ｎｏｒｄｈｕｅｓ  ＢＡ，  Ｈｉｌｌ  ＳＥ，  Ｓｃａｇｌｉｏｎｅ  ＫＭ，  Ｏ’Ｌｅａｒｙ  ＪＣ  ３ｒｄ，  Ｆｏｎｔａｉｎｅ  ＳＮ，  Ｂｒｅｙｄｏ  Ｌ，  Ｚｈａｎｇ  Ｂ，  Ｌｉ  Ｐ，  Ｗａｎｇ  Ｌ，  Ｃｏｌｍａｎ  Ｃ，  Ｐａｕｌｓｏｎ  ＨＬ，  Ｍｕｓｃｈｏｌ  Ｍ，  Ｕｖｅｒｓｋｙ  ＶＮ，  Ｋｌｅｎｇｅｌ，  Ｔ，  Ｂｉｎｄｅｒ  ＥＢ，  Ｋａｙｅｄ  Ｒ，  Ｇｏｌｄｅ  ＴＥ，  Ｂｅｒｃｈｔｏｌｄ  Ｎ，  Ｄｉｃｋｅｙ  ＣＡ．  Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｃｈａｐｅｒｏｎｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔａｕ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２０１３，  １２３：４１５８−５１６９．
・Ｃａｌｄｗｅｌｌ  ＪＭ，  Ｂｌａｎｃｈａｒｄ  Ｃ，  Ｃｏｌｌｉｎｓ  ＭＨ，  Ｐｕｔｍａｎ  ＰＥ，  Ｋａｕｌ  Ａ，  Ａｃｅｖｅｓ  ＳＳ，  Ｂｏｕｓｋａ  ＣＡ，  Ｒｏｔｈｅｎｂｅｒｇ  ＭＥ．  Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ  ｅｓｏｐｈａｇｉｔｉｓ：  ａ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ＦＫＢＰ５１．  Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ２０１０，  １２５：８７９−８８８．
・Ｅｗａｌｄ  ＲＥ，  Ｗａｎｄ  ＧＳ，  Ｓｅｉｆｕｄｄｉｎ  Ｆ，  Ｙａｎｇ  Ｘ，  Ｔａｍａｓｈｉｒｏ  ＫＬ，  Ｐｏｔａｓｈ  ＪＢ，  Ｚａｎｄｉ  Ｐ，  Ｌｅｅ  ＲＳ．  Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ＤＮＡ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｋｂｐ５  ａｓ  ａ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ．  Ｐｓｙｃｈｏｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  ２０１４，  ４４：１１２−１２２．
・Ｋｉｍｕｒａ  Ｍ，  Ｎａｇａｉ  Ｔ，  Ｍａｔｓｕｓｈｉｔａ  Ｒ，  Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  Ａ，  Ｈｉｒｏｈａｔａ  Ｓ．  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＦＫ５０６  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ５  （ＦＫＢＰ５）  ｉｎ  ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．  Ｍｏｄ．  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，  ２０１３，  ２３：１１３３−１１３９．
・Ｌｅｅ  ＲＳ，  Ｔａｍａｓｈｉｒｏ  ＫＬ，  Ｙａｎｇ  Ｘ，  Ｐｕｒｃｅｌｌ  ＲＨ，  Ｈａｒｖｅｙ  Ａ，  Ｗｉｌｌｏｕｒ  ＶＬ，  Ｈｕｏ  Ｙ，  Ｒｏｎｇｉｏｎｅ  Ｍ，  Ｗａｎｄ  ＧＳ，  Ｐｏｔａｓｈ  ＪＢ．  Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｃｒｅａｓｅｓ  ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｋｂｐ５  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  ２０１０，  １５１：４３３２−４３４３．
・Ｏ’Ｌｅａｒｙ  ＪＣ  ＩＩＩ，  Ｚｈａｎｇ，  Ｂ，  Ｋｏｒｅｎ  Ｊ  ＩＩＩ，  Ｂｌａｉｒ  Ｌ，  Ｄｉｃｋｅｙ  ＣＡ．  Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＦＫＢＰ５  ｉｎ  ｍｏｏｄ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ：  Ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＦＫＢＰ５  ｏｎ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｑｕｅｓｔｉｏｎｓ  ａｂｏｕｔ  ｉｔｓ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ．  ＣＮＳ  Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｄｉｓｏｒｄ．  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ，  ２０１３，  １２：１１５７−１１６２．
・Ｐｅｒｅｉｒａ  ＭＪ，  Ｐａｌｍｉｎｇ  Ｊ，  Ｓｖｅｎｓｓｏｎ  ＭＫ，  Ｒｉｚｅｌｌ  Ｍ，  Ｄａｌｅｎｂａｃｋ  Ｊ，  Ｈａｍｍａｒｅ  Ｍ，  Ｆａｌｌ  Ｔ，  Ｓｉｄｉｂｅｈ  ＣＯ，  Ｓｖｅｎｓｓｏｎ  Ｐ−Ａ，  Ｅｒｉｋｓｓｏｎ  ＪＷ．  ＦＫＢＰ５  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ  ａｎｄ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，  ２０１４，  ｄｏｉ：  １０．１０１６／ｊ．ｍｅｔａｂｏｌ．２０１４．０５．０１５．
・Ｓｃａｍｍｅｌｌ  ＪＧ，  Ｄｅｎｎｙ  ＷＢ，  Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ  ＤＬ，  Ｓｍｉｔｈ  ＤＦ．  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＦＫ５０６−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎ  ＦＫＢＰ５１  ｉｓ  ｔｈｅ  ｃｏｍｍｏｎ  ｃａｕｓｅ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｔｈｒｅｅ  Ｎｅｗ  Ｗｏｒｌｄ  ｐｒｉｍａｔｅｓ．  Ｇｅｎ．  Ｃｏｍｐ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，  ２００１，  １２４：１５２−１６５．
・Ｖｅｒｍｅｅｒ  Ｈ，  Ｈｅｎｄｒｉｋｓ−Ｓｔｅｇｅｍａｎ  ＢＩ，  ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｂｕｒｇ  Ｂ，  ｖａｎ  Ｂｕｕｌ−Ｏｆｆｅｒｓ  ＳＣ，  Ｊａｎｓｅｎ  Ｍ．  Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ＦＫＢＰ５１  ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：  ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  ｆｏｒ  ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，  ｐｏｔｅｎｃｙ，  ａｎｄ  ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ．  Ｊ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  Ｍｅｔａｂ．  ２００３，  ８８：２７７−２８４．
・Ｗｉｌｌｏｕｒ  ＶＬ，  Ｃｈｅｎ  Ｈ，  Ｔｏｏｌａｎ  Ｊ，  Ｂｅｌｍｏｎｔｅ  Ｐ，  Ｃｕｔｌｅｒ  ＤＪ，  Ｇｏｅｓ  ＦＳ，  Ｚａｎｄｉ  ＰＰ，  Ｌｅｅ  ＲＳ，  ＭａｃＫｉｎｎｏｎ  ＤＦ，  Ｍｏｎｄｉｍｏｒｅ  ＦＭ，  Ｓｃｈｗｅｉｚｅｒ  Ｂ，  Ｂｉｐｏｌａｒ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ  ｐｈｅｎｏｍｅ  ｇｒｏｕｐ，  ＮＩＭＨ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ  ｂｉｐｏｌａｒ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ  ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ，  ＤｅＰａｕｌｏ  ＪＲ  Ｊｒ．，  Ｇｅｒｓｈｏｎ  ＥＳ，  ＭｃＭａｈｏｎ  ＦＪ，  Ｐｏｔａｓｈ  ＪＢ．  Ｆａｍｉｌｙ−ｂａｓｅｄ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＦＫＢＰ５  ｉｎ  ｂｉｐｏｌａｒ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ．  Ｍｏｌ．  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，  ２００９，  １４：２６１−２６８．
・Ｙａｎｇ  Ｌ，  Ｉｓｏｄａ  Ｆ，  Ｙｅｎ  Ｋ，  Ｋｌｅｏｐｏｕｌｏｓ  ＳＰ，  Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｗ，  Ｆａｎ  Ｘ，  Ｍａｓｔａｉｔｉｓ  Ｊ，  Ｄｕｎｎ−Ｍｅｙｎｅｌｌ  Ａ，  Ｌｅｖｉｓ  Ｂ，  ＭｃＣｒｉｍｍｏｎ  Ｒ，  Ｓｈｅｒｗｉｎ  Ｒ，  Ｍｕｓａｔｏｖ，  Ｓ，  Ｍｏｂｂｓ，  ＣＶ．  Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ  Ｆｋｂｐ５１  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｆａｓｔｉｎｇ，  ａｎｄ  ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｏｂｅｓｅ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ．
【０１２４】
先述の発明が、理解の明確性の目的のために例示および例によって詳細に記載されるが、当業者は、添付の特許請求の範囲の範囲内である特定の変化および改変が行われ得ることを理解する。加えて、本明細書中で提供される各参照文献は、各参照文献が参照によって個別に組み込まれたように、全体が同じ範囲で参照によって組み込まれる。本願と本明細書中で提供される参照文献との間にコンフリクトが存在する場合、本願が優先するものとする。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ヒト対象におけるグルココルチコイド受容体アンタゴニスト（ＧＲＡ）に対する生化学的応答を評価するための方法であって、
ａ）前記対象からの第１の試料中の、５１ｋＤａのＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ５タンパク質）の第１の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第１の発現レベルを測定するステップであって、
ｉ）前記第１の試料は、初代細胞を含み、
ｉｉ）前記第１の試料は、前記ＧＲＡを前記対象に投与する前に得られる、ステップ；
ｂ）前記対象からの第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の第２の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第２の発現レベルを測定するステップであって、
ｉ）前記第２の試料は、初代細胞を含み、
ｉｉ）前記第２の試料は、前記ＧＲＡを前記対象に投与した後に得られる、ステップ；ならびに
ｄ）前記第１および第２の量、活性または発現レベルを比較するステップ
を含み、前記第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の前記量もしくは活性の減少、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする前記遺伝子の前記発現レベルの減少が、前記ＧＲＡに対する前記生化学的応答を示す、方法。
（項目２）
前記第１の試料が、複数用量のＧＲＡを前記対象に投与する前に得られ、前記第２の試料が、前記複数用量のＧＲＡを前記対象に投与した後に得られる、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ａ）および／またはｂ）の測定するステップが、前記試料中のＦＫＢＰ５タンパク質をコードするｍＲＮＡの量を定量するステップを含む、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記ａ）および／またはｂ）の測定するステップが、前記試料中のＦＫＢＰ５タンパク質の前記量を定量するステップを含む、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記測定するステップが、前記試料中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性の量を定量するステップを含む、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記試料中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性の量を定量するステップが、前記試料中のＦＫＢＰ５タンパク質のペプチジル−プロリル−シス−トランスイソメラーゼ活性を測定するステップを含む、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記試料中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性の量を定量するステップが、前記試料中のグルココルチコイド受容体（ＧＲ）と結合しているＦＫＢＰ５タンパク質の量を測定するステップを含む、項目５に記載の方法。
（項目８）
前記対象に投与される前記ＧＲＡが、ミフェプリストンを含む、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記対象に投与される前記ＧＲＡが、ミフェプリストンではない、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記対象に投与される前記ＧＲＡが、ヘテロアリール−ケトンＧＲＡを含む、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記第１または第２の試料が、全血またはその画分を含む、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記第１または第２の試料が、鼻粘膜上皮の擦過試料を含む、項目１に記載の方法。
（項目１３）
前記患者が、前記グルココルチコイド受容体アンタゴニスト（ＧＲＡ）の投与を必要とする、項目１に記載の方法。
（項目１４）
前記患者が、上昇したレベルのコルチゾールを有する、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記患者ががんを有し、前記第１および第２の試料が腫瘍細胞を含む、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記第１および第２の試料が、全血またはその画分を含む、項目１に記載の方法。
（項目１７）
増加させた量のＧＲＡを、前記第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の前記量もしくは活性の減少が検出されない、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする前記遺伝子の前記発現レベルの減少が検出されない前記対象に投与するステップを含む、項目１に記載の方法。
（項目１８）
ヒト対象におけるクッシング症候群を診断するための方法であって、
ａ）前記対象から得られた試料中の、５１ｋＤａのＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ５タンパク質）の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを測定するステップであって、前記試料は初代細胞を含む、ステップ；および
ｂ）前記量、活性または発現レベルが対照に対して高い場合に、対象がクッシング症候群に罹患している可能性が高いと同定するステップ
を含む方法。
（項目１９）
前記測定するステップが、前記試料の前記初代細胞中のＦＫＢＰ５タンパク質をコードするｍＲＮＡの量を定量するステップを含む、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記測定するステップが、前記試料の前記初代細胞中のＦＫＢＰ５タンパク質の量を定量するステップを含む、項目１８に記載の方法。
（項目２１）
前記測定するステップが、前記試料の前記初代細胞中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性を定量するステップを含む、項目１８に記載の方法。
（項目２２）
前記試料の前記初代細胞中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性を定量するステップが、前記試料の前記初代細胞中の、ＦＫＢＰ５タンパク質のペプチジル−プロリル−シス−トランスイソメラーゼ活性を定量するステップを含む、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記試料の前記初代細胞中のＦＫＢＰ５タンパク質の活性を定量するステップが、前記試料の前記初代細胞中のＧＲと結合しているＦＫＢＰ５タンパク質の量を定量するステップを含む、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記対象から得られる前記試料が、全血またはその画分を含む、項目１８に記載の方法。
（項目２５）
前記対象が、前記試料を前記対象から得る前に、経蝶形骨洞手術を受けている、項目１８に記載の方法。
（項目２６）
ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性、または前記ＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルが対照に対して高い場合に、クッシング症候群のための処置を投与するステップを含む、項目１８に記載の方法。
（項目２７）
前記クッシング症候群のための処置を投与するステップが、前記対象にグルココルチコイド受容体アンタゴニスト（ＧＲＡ）を投与することを含む、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
ヒト対象における、前記対象に高コルチゾール血症の処置のための内科的または外科的治療を投与すること対する生化学的応答を評価するための方法であって、
ａ）前記対象からの第１の試料中の、５１ｋＤａのＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ５タンパク質）の第１の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第１の発現レベルを測定するステップであって、
ｉ）前記第１の試料は、初代細胞を含み、
ｉｉ）前記第１の試料は、高コルチゾール血症の処置のための前記内科的または外科的治療を前記対象に投与する前に得られる、ステップ；
ｂ）前記対象からの第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の第２の量もしくは活性、またはＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の第２の発現レベルを測定するステップであって、
ｉ）前記第２の試料は、初代細胞を含み、
ｉｉ）前記第２の試料が、高コルチゾール血症の処置のための前記内科的または外科的治療を前記対象に投与した後に得られる、ステップ；ならびに
ｄ）前記第１および第２の量、活性または発現レベルを比較するステップ
を含み、前記第２の試料中の、ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性の減少、または前記ＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルの減少が、高コルチゾール血症の処置のための前記内科的または外科的治療に対する生化学的応答を示す、方法。
（項目２９）
高コルチゾール血症の処置のための前記内科的または外科的治療が、ステロイド産生の阻害、ＡＣＴＨモジュレーターの投与、ＧＲＡの投与、経蝶形骨洞手術、反復経蝶形骨洞手術、片側副腎摘除術、両側副腎摘除術、放射線治療、非下垂体性ＡＣＴＨ分泌腫瘍の切除、ペプチド受容体放射性核種治療による処置およびこれらの組合せからなる群から選択される、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記ステロイド産生の阻害が、ケトコナゾール、レボケトコナゾール、メチラポン、ＬＣＩ６９９、ミトタン、アミノグルテチミド、エトミデートまたはこれらの組合せの投与を含む、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記ＡＣＴＨモジュレーターの投与が、ドーパミンアゴニスト、ソマトスタチン、ソマトスタチンアナログ、レチノイン酸、Ｒ−ロスコビチンまたはこれらの組合せの投与を含む、項目２９に記載の方法。
（項目３２）
前記ドーパミンアゴニストが、ブロモクリプチンおよびカベルゴリンからなる群から選択される、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記第２の試料中、前記ＦＫＢＰ５タンパク質の量もしくは活性の減少が検出されない、または前記ＦＫＢＰ５タンパク質をコードする遺伝子の前記発現レベルの減少が検出されない高コルチゾール血症の処置のための、さらなる内科的または外科的治療を投与するステップを含む、項目２８に記載の方法。
【図１】
0006755264.tif 000002
【図２】
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