(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧的な非治療的な処置および／またはケアのための、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された発酵エキスの使用であって、
Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａの菌株によって生成された前記発酵エキスは、少なくとも１種の菌体外多糖を含有し、
前記菌体外多糖は、百分率の合計が１００％を超えないという条件で、重量で、０．５％〜４５％のラムノース、０．１％〜２５％のガラクトース、０．５％〜３０％のマンノース、合計で５０％〜９５％のグルコースおよびＤ−グルコサミン、０％〜１０％のフコース、ならびに０％〜１２％のグルクロン酸の組成を有し、
前記Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株が、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株である、使用。
【請求項２】
前記皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の前記化粧的な非治療的な処置および／またはケアが、コラーゲン合成を刺激する処置、皮膚老化の処置および／または防止、皮膚皺の処置および／または防止、皮膚の張りを改善するためおよび／または皮膚の張りの喪失を防止するための処置、乾燥皮膚、ひび割れた唇、頭部粃糠疹、乾燥毛髪、脆弱な毛髪および／または爪の処置および／または防止である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の前記化粧的な非治療的な処置および／またはケアが、該皮膚のコネキシンレベルを増大させる、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された前記発酵エキスが、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する、請求項１〜３のいずれかに記載の使用。
【請求項５】
皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧的な非治療的な処置および／またはケアのための、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の使用であって、
前記菌体外多糖は、百分率の合計が１００％を超えないという条件で、重量で、０．５％〜４５％のラムノース、０．１％〜２５％のガラクトース、０．５％〜３０％のマンノース、合計で５０％〜９５％のグルコースおよびＤ−グルコサミン、０％〜１０％のフコース、ならびに０％〜１２％のグルクロン酸の組成を有し、
前記Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株が、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株である、使用。
【請求項６】
前記Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ株によって生成された前記菌体外多糖の保持時間が、粒径８μｍ、細孔径５０Åおよび長さ／内径３００ｍｍ×７．５ｍｍの水性サイズ排除クロマトグラフィーのためのクロマトグラフィーカラムならびに溶出液として水中０．１Ｍ酢酸ナトリウムを流速０．８ｍｌ／分で用いるＨＰＬＣ分析で、４〜８．５分である、請求項１から５のいずれかに記載の使用。
【請求項７】
化粧品として有効な量の、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された少なくとも１種の菌体外多糖を含有する発酵エキスまたはＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖、ならびに少なくとも１種の化粧品として許容される賦形剤および／または成分を含む化粧品組成物であって、
前記菌体外多糖は、百分率の合計が１００％を超えないという条件で、重量で、０．５％〜４５％のラムノース、０．１％〜２５％のガラクトース、０．５％〜３０％のマンノース、合計で５０％〜９５％のグルコースおよびＤ−グルコサミン、０％〜１０％のフコース、ならびに０％〜１２％のグルクロン酸の組成を有し、
前記Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株が、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株である、化粧品組成物。
【請求項８】
前記発酵エキスが、化粧品の送達系および／もしくは徐放系に組み込まれるか、または固体有機ポリマーもしくは固体無機支持体上に吸着される、請求項７に記載の化粧品組成物。
【請求項９】
クリーム、多重エマルション、溶液、液晶、無水組成物、水性分散液、油、乳液、バルサム、フォーム、ローション、ジェル、クリームジェル、ハイドロアルコール溶液、ハイドログリコール溶液、ヒドロゲル、リニメント、美容液、石けん、シャンプー、コンディショナー、セラム、多糖類膜、軟膏、ムース、ポマード、パウダー、棒状物質、ペンシル、スプレーまたはエアロゾルによって形成される群から選択される製剤中に提供される、請求項７から８のいずれかに記載の化粧品組成物。
【請求項１０】
布、不織布または医療デバイスに組み込まれる、請求項７から８のいずれかに記載の化粧品組成物。
【請求項１１】
前記化粧品として許容される賦形剤および／または成分が、神経細胞の開口分泌を阻害する薬剤、抗コリン作用剤、筋収縮を阻害する薬剤、老化防止剤、皺取り剤、保湿剤、保湿物質、アルファヒドロキシ酸、ベータヒドロキシ酸、モイスチャー化粧品、真皮もしくは上皮巨大分子の合成を刺激し、かつ／またはそれらの分解を阻害もしくは防止することができる薬剤、コラーゲン合成刺激剤、エラスチン合成刺激剤、デコリン合成刺激剤、ラミニン合成刺激剤、デフェンシン合成刺激剤、シャペロン合成刺激剤、ｃＡＭＰ合成刺激剤、ＡＱＰ−３をモジュレートする薬剤、アクアポリン合成をモジュレートする薬剤、アクアポリンファミリーのタンパク質、ヒアルロン酸合成刺激剤、グリコサミノグリカン合成刺激剤、フィブロネクチン合成刺激剤、サーチュイン合成刺激剤、熱ショックタンパク質、熱ショックタンパク質合成刺激剤、ノクターニンの量を低減する薬剤、ノクターニン発現を阻害する薬剤、脂肪分解剤もしくは脂肪分解を刺激する薬剤、静脈強壮剤、ＰＧＣ−１α発現をモジュレートする薬剤、ＰＰＡＲγの活性を阻害する薬剤、脂肪細胞のトリグリセリド含量を低減する薬剤、抗セルライト剤、脂肪細胞分化遅延剤、皮脂生成を減少させる薬剤、抗脂漏剤、艶消し剤、抗座瘡剤、制汗剤、抗炎症剤および／もしくは鎮痛剤、抗そう痒剤、鎮静剤、麻酔薬、アセチルコリン受容体凝集の阻害剤、アセチルコリンエステラーゼを阻害する薬剤、皮膚弛緩剤、メラニン合成の刺激剤もしくは阻害剤、ホワイトニング剤もしくは脱色剤、色素沈着促進剤、セルフタンニング剤、ＮＯシンターゼ阻害剤、５α還元酵素阻害剤、リシルおよび／もしくはプロリルヒドロキシラーゼ阻害剤、抗酸化剤、フリーラジカルスカベンジャーおよび／もしくは抗大気汚染剤、反応性カルボニル種スカベンジャー、抗糖化剤、抗ヒスタミン剤、抗ウイルス剤、駆虫剤、乳化剤、皮膚軟化剤、有機溶媒、液体噴霧剤、皮膚コンディショナー、上皮加水分解酵素、ビタミン、アミノ酸、タンパク質、顔料もしくは着色剤、染料、バイオポリマー、ゲル化ポリマー、増粘剤、界面活性剤、軟化剤、乳化剤、結合剤、保存剤、目の下のたるみを低減もしくは処置することができる薬剤、角質除去剤、角質溶解剤、角質溶解剤、抗微生物剤、抗真菌剤、静真菌剤、殺菌剤、静菌剤、角質層構成成分の合成を刺激する薬剤、セラミド、脂肪酸、コラーゲン分解を阻害する薬剤、マトリックスメタロプロテイナーゼを阻害する薬剤、エラスチン分解を阻害する薬剤、セリンプロテアーゼを阻害する薬剤、線維芽細胞増殖を刺激する薬剤、ケラチノサイト増殖を刺激する薬剤、メラニン細胞増殖を刺激する薬剤、ケラチノサイト分化を刺激する薬剤、抗過角化症剤、面皰溶解剤、抗乾癬剤、ＤＮＡ修復剤、ＤＮＡ保護剤、幹細胞保護剤、安定剤、敏感肌の処置および／もしくはケアのための薬剤、引締め剤、抗ストレッチマーク剤、収斂剤、ＰＡＲ−２の活性を阻害する薬剤、創傷治癒を刺激する薬剤、コアジュバント創傷治癒剤、上皮再形成を刺激する薬剤、コアジュバント上皮再形成剤、サイトカイン成長因子、毛細血管循環および／もしくは微小循環に作用する薬剤、血管新生を刺激する薬剤、血管透過性を阻害する薬剤、細胞代謝に作用する薬剤、真皮−上皮結合を改善する薬剤、発毛誘導剤、発毛阻害剤もしくは発毛遅延剤、抜け毛遅延剤、保存剤、香料、化粧品用および／もしくは吸収性および／もしくは体臭マスキング用のデオドラント、キレート剤、植物エキス、エッセンシャルオイル、海産物エキス、生物工学的プロセスから得られた薬剤、ミネラル塩、細胞エキス、日焼け止めならびに紫外Ａおよび／もしくはＢ線および／もしくは赤外Ａ線に対して活性な有機もしくは無機光防護剤、またはそれらの混合物によって形成される群から選択される、請求項７から１０のいずれかに記載の化粧品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
開示されている技術は、老化処置のための細菌起源の発酵エキスおよび菌体外多糖に関する。前記生成物は、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって分泌される。本発明はまた、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の処置および／またはケアのための化粧品組成物または皮膚医薬（dermopharmaceutical）組成物における細菌起源の前記発酵エキスまたは菌体外多糖の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒト上皮は、独特の機能的構造を有する多層の付着性組織であり、外部環境に対して一次バリアを形成する。ケラチノサイトは、上皮の主な構成成分であり、それらの付着性は、細胞の再生および分化を確実にするために必須である。上皮細胞は、「結合部（junctions）」と命名された特別な構成によって、互いに連結する。強剛性（固定結合部）、耐水性（密着結合部）および細胞間連絡（細隙結合部）などの異なる役割を有する異なるタイプの結合部が存在する。細隙結合部は、イオン（Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋）および小さい代謝産物（グルコース）、栄養分、ならびに隣接する細胞間の１ｋＤａ未満のシグナル伝達分子（環状アデノシン一リン酸、ｃＡＭＰ、または環式グアノシン一リン酸ｃＧＭＰ）の拡散による交換を可能にする細胞間チャネルのクラスターである。代謝産物およびイオンの、この直接的な細胞質交換は、上皮恒常性を調和させると考えられる。細隙結合部媒介性の細胞間連絡（ＧＪＩＣ）は、細胞の分化、増殖および電気的伝達を含む異なる生理的プロセスにおいて重要であり、細胞内シグナル伝達にも寄与する［Scott  CAら、「Connexins  in  epidermal  homeostasis  and  skin  disease」、Biochim.  Biophys.  Acta.、２０１２年、８月；１８１８巻（８号）：１９５２〜６１頁］。この機序は、厳密に調節され、異常なＧＪＩＣは、いくつかの病理学的障害をもたらし得る。
【０００３】
細隙結合部チャネルは、コネキシン（Ｃｘ）と呼ばれる内在性膜タンパク質からなる。コネキシンは、配列類似性に基づいてαとβの２つの系統発生群に分類されており、それらの分子質量に従って命名されている。６種のコネキシンタンパク質のオリゴマー化によって、コネクソンとも命名されるヘミチャネルが形成される。このコネクソンは、単一のタイプのコネキシン（ホモマー）または２つ以上のタイプ（ヘテロマー）のいずれかから形成され得る。さらに、細隙結合部は、２つの同一のコネクソンが集合する場合には同型（homotypic）であり得、または２つの異なるコネクソンが、相互作用する２つの細胞間で集合する場合には異型であり得る［Dbouk  HAら、「Connexins:  a  myriad  of  functions  extending  beyond  assembly  of  gap  junction  channels」、Cell  Communication  and  Signaling、２００９年、７巻：４頁］。およそ２０種の利用可能なコネキシンの潜在的な組合せの数に起因して、異なるコネキシンタイプから構成される細隙結合部は、異なる特性、例えば分子およびイオンに対する異なる透過性を有することができる。したがって、細胞型における多様なコネキシンタンパク質の発現は、皮膚のＧＪＩＣに異なる特性を付与する可能性がある。ケラチノサイトは、それらの分化度に応じて、１０種もの異なるコネキシンを時間的および空間的に発現する。すべてのコネキシンが、ＧＪＩＣを可能にする適合性のあるヘミチャネルを形成する訳ではない。コネキシンがヘテロマーヘミチャネルを形成する能力は、同じ系統発生亜群のメンバーに制限されるようである。また、コネキシンの適合性および不適合性は、異なる分子の別個の連絡区画の発生を可能にするので、細胞間連絡の範囲を増大する［Scott  CAおよびKelsell  DP、「Key  functions  for  gap  junctions  in  skin  and  hearing」、Biochem  J.、２０１１年、９月１日；４３８巻（２号）：２４５〜５４頁］。ヘミチャネルは、微小管を介して輸送される小胞によって細胞表面に運搬され、最後にヘミチャネルは、原形質膜と融合して、細隙結合部を形成する［Mese  Gら、「Gap  Junctions:  Basic  Structure  and  Function」、J.  Investig.  Dermatol.、２００７年、１２７巻、２５１６〜２５２４頁］。細胞のＧＪＩＣレベルは、コネキシンの合成、集合および分解のすべてのレベルで動的に調節され得るが、他の細胞接着分子、密着結合部の構成成分および細胞骨格要素の機能に応じても変わるようである［Dbouk  HAら、「Connexins:  a  myriad  of  functions  extending  beyond  assembly  of  gap  junction  channels」、Cell  Communication  and  Signaling、２００９年、７巻：４号］。
【０００４】
細隙結合部媒介性の細胞間連絡（ＧＪＩＣ）は、細胞の分化、増殖、電気的伝達および炎症を含む異なる生理的プロセスにおいて重要である［Scott  CAら、「Connexins  in  epidermal  homeostasis  and  skin  disease」、Biochim.  Biophys.  Acta.、２０１２年、８月；１８１８巻（８号）：１９５２〜６１頁］。Ｃｘ２６およびＣｘ３０などのいくつかのコネキシンの発現は、創傷治癒の初期応答中に上方調節され、Ｃｘ２６は、ヒト過剰増殖性乾癬性病変において上方調節される。したがって、コネキシン、特にＣｘ２６および／またはＣｘ３０の上方調節は、皮膚の炎症性疾患および／または創傷治癒の処置のための戦略となり得る。
【０００５】
細胞間連絡の低下は、皮膚老化をもたらす機序の１つであり、すなわちコネキシンの加齢誘導性の下方調節は、細隙結合部の変化と関係している［Dumont  Sら、「Two  new  lipoaminoacids」Intl.  J.  Cosmet.  Science、２０１０年、３２巻、９〜２７頁］。細胞間連絡の低下の徴候は、皮膚表面上に、小皺、皺、表面の粗さ、弾力の喪失、不均等な皮膚の緊張、張りの喪失、または乾燥としてあらわれる。コネキシンの下方調節による、皮膚のこの加齢性劣化は、閉経と共に特に加速する。多くの女性は、閉経後、急速な皮膚老化に悩まされ、皮膚は、コラーゲン含量の低下、弾力の低下、皺の増加および乾燥の増進と共により薄くなる。閉経後の女性では、皮膚の厚さは、関連するコラーゲン含量の低下（閉経後１年当たり２％）と共に、閉経後１年当たり１．１３％低下する。皮膚のコラーゲン含量（Ｉ型およびＩＩＩ型）は、閉経後最初の５年で３０％も低下すると考えられる［Thornton  MJ、「Estrogens  and  aging  skin」、Dermatoendocrinol.、２０１３年、５巻（２号）：２６４〜７０頁］。コラーゲンは、主に線維芽細胞によって、皮膚の張りおよび弾力をもたらす他の細胞外マトリックスタンパク質と共に分泌される。
【０００６】
したがって、コネキシンタンパク質のレベルが増大すると、細胞間連絡が改善されるはずであり、皺、不規則な皮膚の色素沈着、弾力、コラーゲン、皮膚の張り、厚さの喪失、および乾燥などの皮膚老化の徴候を処置し、遅延させるはずである。
驚くべきことに、本発明の出願人は、前述の問題の代替となる細菌起源の発酵エキスおよび菌体外多糖を見出した。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Scott  CAら、「Connexins  in  epidermal  homeostasis  and  skin  disease」、Biochim.  Biophys.  Acta.、２０１２年、８月；１８１８巻（８号）：１９５２〜６１頁
【非特許文献２】Dbouk  HAら、「Connexins:  a  myriad  of  functions  extending  beyond  assembly  of  gap  junction  channels」、Cell  Communication  and  Signaling、２００９年、７巻：４頁
【非特許文献３】Scott  CAおよびKelsell  DP、「Key  functions  for  gap  junctions  in  skin  and  hearing」、Biochem  J.、２０１１年、９月１日；４３８巻（２号）：２４５〜５４頁
【非特許文献４】Mese  Gら、「Gap  Junctions:  Basic  Structure  and  Function」、J.  Investig.  Dermatol.、２００７年、１２７巻、２５１６〜２５２４頁
【非特許文献５】Dbouk  HAら、「Connexins:  a  myriad  of  functions  extending  beyond  assembly  of  gap  junction  channels」、Cell  Communication  and  Signaling、２００９年、７巻：４号
【非特許文献６】Dumont  Sら、「Two  new  lipoaminoacids」Intl.  J.  Cosmet.  Science、２０１０年、３２巻、９〜２７頁
【非特許文献７】Thornton  MJ、「Estrogens  and  aging  skin」、Dermatoendocrinol.、２０１３年、５巻（２号）：２６４〜７０頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
開示されている技術は、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株から排出された発酵エキスまたは菌体外多糖を使用することによって、皮膚老化問題の解決法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明は、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株から排出された発酵エキスまたは菌体外多糖、皮膚および／または粘膜の治療的な処置において使用するための発酵エキスまたは菌体外多糖、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧的な非治療的な処置および／またはケアのための発酵エキスまたは菌体外多糖の使用、ならびに発酵エキスまたは菌体外多糖を含む化粧品組成物または皮膚医薬組成物に関する。驚くべきことに、本発明の発明者らは、前述の発酵エキスまたは菌体外多糖が、皮膚老化を処置し、または防止することを見出した。一実施形態では、コネキシンレベルの増大は、皮膚老化を処置し、または防止する。
【００１０】
定義
【００１１】
本発明の理解を容易にするために、本発明の文脈で使用されるいくつかの用語および表現の意味を挙げる。
【００１２】
本明細書で使用される場合、移行句「含む（comprising）」は、「含む（including）」、「含有する（containing）」または「によって特徴付けられる」と同義であり、包括的であり、または制限がなく、記載されていない追加の要素または方法ステップを除外しない。しかし、本明細書の「含む（comprising）」の各記載において、この用語は、代替実施形態として、句「から本質的になる」および「からなる」を包含することも企図し、ここで「からなる」は、特定されていない任意の要素またはステップを除外し、「から本質的になる」は、考慮される組成物または方法の必須のまたは基本的な、新規な特徴に実質的に影響を及ぼさない、記載されていない追加の要素またはステップを包含することができる。
【００１３】
本発明の文脈では、用語「生成された」、「分泌された」および「排出された」は、明確な区別なしに使用される。
【００１４】
本発明の文脈では、「皮膚」は、最上層または角質層から、最下層または皮下組織まで、その両方を含み皮膚を含む層であると理解される。これらの層は、中でもケラチノサイト、線維芽細胞、メラニン細胞および／または脂肪細胞などの異なるタイプの細胞から構成される。本発明の文脈では、用語「皮膚」は頭皮を含む。
【００１５】
用語「処置」は、「化粧的非治療的」という但し書きを伴わずに本明細書の文脈で使用される場合、疾患もしくは障害を軽減もしくは排除し、またはこの疾患もしくは障害と関連する１つもしくは複数の症状を低減もしくは排除するために本発明による化合物を投与することを意味する。また、用語「処置」は、疾患または障害の生理的な結果を軽減または排除する能力を含む。
【００１６】
用語「処置」は、「化粧的な非治療的な」という限定を伴う場合、典型的には、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧的な質、例えば限定されるものではないが、中でもそれらの水分補給（hydration）レベル、弾力、張り、艶、緊張または質感を改善する目的で、化合物を皮膚、粘膜、毛髪および／または爪に適用することを指す。本発明における用語「ケア」は、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の質の維持を指す。これらの質は、健康な被験体、ならびに皮膚および／または粘膜の疾患および／または障害、例えば限定されるものではないが、中でも皮膚の潰瘍および病変、乾癬、皮膚炎、座瘡、または酒さを呈している被験体の両方における、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧的な処置および／またはケアによって改善され、維持される。
【００１７】
本発明で使用される用語「防止」は、疾患、障害、状態または変化の出現または発生を、その出現前に防止し、遅延させ、または妨害する、本発明の化合物の能力を指す。
【００１８】
本発明の文脈では、用語「老化」は、年齢と共に（経年老化（chronoaging））、あるいは太陽（光老化）への、またはたばこの煙、寒冷、高温もしくは風の極度の気候条件、化学的夾雑物（chemical  contaminant）もしくは汚染物質（pollutant）などの環境物質への曝露により、皮膚が受ける変化を指し、外部の目に見えるおよび／または触って知覚できるあらゆる変化、例えば限定されるものではないが、皮膚の不連続性の発生、例えば皺、小皺、深い皺、不規則性または粗さ、毛穴のサイズの増大、弾力の喪失、張りの喪失、滑らかさの喪失、変形から回復する能力の喪失、皮膚のたるみ、例えば中でも頬のたるみ、目の下のたるみの出現または二重顎の出現、皮膚色の変化、例えばしみ、発赤、目の下のたるみまたは色素沈着過剰領域、例えば中でも年齢に伴う斑もしくはそばかすの出現、異常な分化、角質増殖（hyperkeratinization）、弾性線維症、角化症、オレンジピールスキン（orange-peel  skin）、コラーゲン構造の喪失、および中でも角質層、皮下組織、真皮、上皮、血管系（例えばクモ状静脈または毛細血管拡張症の出現）または皮膚近辺の組織の他の組織学的変化を含む。用語「光老化」は、皮膚の早期老化をもたらし、老化と同じ身体的特徴、例えば限定されるものではないが、弛緩状態、たるみ、色の変化または色素沈着の不規則性、異常なおよび／または過度の角質化を呈する、紫外線放射への皮膚の長期曝露に起因する一連のプロセスをまとめる。
【００１９】
したがって、本発明の第１の態様は、皮膚、粘膜および／または爪の治療的な処置に使用するための、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株から排出された発酵エキスに関する。一実施形態では、発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、発酵エキスは、少なくとも１種の菌体外多糖を含有する。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、少なくとも１種の菌体外多糖を含有する。
【００２０】
本発明の第２の態様は、皮膚、粘膜および／または爪の治療的な処置に使用するための、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株から排出された菌体外多糖に関する。一実施形態では、菌体外多糖は、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する。
【００２１】
一実施形態では、皮膚、粘膜および／または爪の治療的な処置は、皮膚、粘膜および／もしくは爪の上皮再形成および／もしくは創傷治癒、皮膚および／もしくは粘膜の炎症の処置および／もしくは防止、または皮膚、粘膜および／もしくは爪の水分補給の欠如もしくは低下の結果である状態、障害および／もしくは疾患の処置および／もしくは防止を指す。一実施形態では、皮膚、粘膜および／または爪の治療的な処置は、皮膚、粘膜および／もしくは爪の上皮再形成および／もしくは創傷治癒、皮膚および／もしくは粘膜の炎症の処置および／もしくは防止、または皮膚、粘膜および／もしくは爪の水分補給の欠如もしくは低下の結果である状態、障害および／もしくは疾患の処置および／もしくは防止を指し、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、少なくとも１種の菌体外多糖を含有し、または菌体外多糖は、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する。
【００２２】
一実施形態では、皮膚および／または粘膜の炎症は、例えば限定されるものではないが、中でも乾癬、敏感肌、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、おむつ皮膚炎、脂漏性皮膚炎、湿疹、酒さ、座瘡、過剰増殖性皮膚疾患、熱傷、日焼け、爪囲炎、外科手術後、インテンスパルス光治療（ＩＰＬ）による処置後、単色パルス光治療（レーザー）による処置後、化学的剥離剤による処置後、または侵襲性の外部薬剤（aggressive  external  agent）への過剰曝露後の皮膚炎症、膣粘膜の炎症、口腔粘膜の炎症、歯肉炎、歯周炎、鼻炎、アレルギー性鼻炎によって形成される群から選択される。一実施形態では、コネキシンＣｘ２６および／またはＣｘ３０レベルの増大は、皮膚および／または粘膜の炎症を処置および／または防止する。
【００２３】
一実施形態では、皮膚、粘膜および／または爪の水分補給の欠如または低下の結果である状態、障害および／または疾患は、乾燥症、過角化症、反応性過角化症、手掌および足底過角化症、鶏眼または胼胝、光線角化症、非光線角化症、アトピー性皮膚炎、接触性湿疹、脂漏性皮膚炎、乳児の乳痂（cradle  cap  on  babies）、座瘡、酒さ、母斑、魚鱗癬、乾癬、錯角化症、粃糠疹、扁平苔癬、掌蹠角皮症、クーパーローズ（couperose）、膣内乾燥によって形成される群から選択される。
【００２４】
別の態様では、本発明は、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧的な非治療的な処置および／またはケアのための、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株から排出された発酵エキスの使用に関する。一実施形態では、発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、発酵エキスは、少なくとも１種の菌体外多糖を含有する。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、少なくとも１種の菌体外多糖を含有する。一実施形態では、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧的な非治療的な処置および／またはケアは、コラーゲン合成を刺激する処置、皮膚老化の処置および／または防止、皮膚皺の処置および／または防止、皮膚の張りを改善するためおよび／または皮膚の張りの喪失を防止するための処置、乾燥皮膚、ひび割れた唇、頭部粃糠疹、乾燥毛髪、脆弱な毛髪および／または爪の処置および／または防止である。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、少なくとも１種の菌体外多糖を含有し、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧的な非治療的な処置および／またはケアは、コラーゲン合成を刺激する処置、皮膚老化の処置および／または防止、皮膚皺の処置および／または防止、皮膚の張りを改善するためおよび／または皮膚の張りの喪失を防止するための処置、乾燥皮膚、ひび割れた唇、頭部粃糠疹、乾燥毛髪、脆弱な毛髪および／または爪の処置および／または防止である。
【００２５】
別の態様では、本発明は、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧的な非治療的な処置および／またはケアのための、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株から排出された菌体外多糖の使用に関する。一実施形態では、菌体外多糖は、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧的な非治療的な処置および／またはケアは、コラーゲン合成を刺激する処置、皮膚老化の処置および／または防止、皮膚皺の処置および／または防止、皮膚の張りを改善するためおよび／または皮膚の張りの喪失を防止するための処置、乾燥皮膚、ひび割れた唇、頭部粃糠疹、乾燥毛髪、脆弱な毛髪および／または爪の処置および／または防止である。一実施形態では、菌体外多糖は、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧的な非治療的な処置および／またはケアは、コラーゲン合成を刺激する処置、皮膚老化の処置および／または防止、皮膚皺の処置および／または防止、皮膚の張りを改善するためおよび／または皮膚の張りの喪失を防止するための処置、乾燥皮膚、ひび割れた唇、頭部粃糠疹、乾燥毛髪、脆弱な毛髪および／または爪の処置および／または防止である。
【００２６】
別の実施形態では、皮膚の治療的な処置、化粧的な非治療的な処置および／またはケアが、皮膚のコネキシンレベルを増大させる。本発明によれば、皮膚のコネキシンレベルの増大は、皮膚ケラチノサイトにおける少なくとも１種のコネキシンの量の増大として理解される。一実施形態では、コネキシンは、コネキシン２６、コネキシン３０、コネキシン３０．３、コネキシン３１、コネキシン３１．１、コネキシン３７、コネキシン４３、コネキシン４６、またはコネキシン５９とも命名されるコネキシン５８である。一実施形態では、皮膚の治療的な処置、化粧的な非治療的な処置および／またはケアは、皮膚のコネキシンレベルを増大させ、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、少なくとも１種の菌体外多糖を含有し、または菌体外多糖は、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する。
【００２７】
別の実施形態では、皮膚の処置および／またはケアは、局所または経皮適用によって行われる。
【００２８】
別の実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の株は、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の株である。前記株は、１９７７年４月２８日の微生物寄託の国際認識に関するブダペスト条約に従って、前記目的について法的に認められている機関としての、Ｂｅｌｇｉａｎ  Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ（ＢＣＣＭ）／Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｕｍ  ｖｏｏｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅ−Ｂａｃｔｅｒｉｅｖｅｒｚａｍｅｌｉｎｇ（ＬＭＧ）（ＢＣＣＭ／ＬＭＧ）（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｇｈｅｎｔ、Ｋ．Ｌ．Ｌｅｄｅｇａｎｃｋｓｔｒａａｔ  ３５、Ｂ−９０００  Ｇｈｅｎｔ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）において、２０１４年１０月１０日に寄託されたものである。
【００２９】
一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の細菌株から排出された菌体外多糖、または発酵エキスに含有されている菌体外多糖は、単糖であるラムノース、ガラクトース、グルコース、マンノースおよびＤ−グルコサミンを含有する。任意選択で、菌体外多糖は、フコースおよび／またはグルクロン酸も含有する。典型的には、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株は、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株である。一実施形態では、菌体外多糖は、百分率の合計が１００％を超えないという条件で、重量で、０．５％〜４５％のラムノース、０．１％〜２５％のガラクトース、０．５％〜３０％のマンノース、合計で５０％〜９５％のグルコースおよびＤ−グルコサミン、ならびに０％〜１０％のフコース、ならびに０％〜１２％のグルクロン酸の組成を示す。別の実施形態では、菌体外多糖は、百分率の合計が１００％を超えないという条件で、重量で、１％〜３５％のラムノース、０．５％〜２０％のガラクトース、１％〜２５％のマンノース、合計で５５％〜９０％のグルコースおよびＤ−グルコサミン、ならびに０％〜５％のフコース、ならびに０％〜６％のグルクロン酸の組成を示す。別の実施形態では、菌体外多糖は、百分率の合計が１００％を超えないという条件で、重量で、１．５％〜３０％のラムノース、１％〜１０％のガラクトース、１．５％〜２０％のマンノース、合計で６５％〜８５％のグルコースおよびＤ−グルコサミン、ならびに０％〜３％のフコース、ならびに０％〜４％のグルクロン酸の組成を示す。一実施形態では、グルコース：Ｄ−グルコサミンの比は、９０：１〜１：３５、８５：１〜１：２５、または７５：１〜１：１５である。
【００３０】
別の実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の細菌株から排出された菌体外多糖は、クロマトグラフィー分析の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）において、クロマトグラフィーカラムＰＬ  ＡＱＵＡＧＥＬ−ＯＨ  ８μｍ  ＡＱＵＥＯＵＳ  ＳＥＣカラムおよび水中０．１Ｍ酢酸ナトリウムを溶出液として用いて、保持時間が４〜８．５分、または５〜８分である。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌体外多糖は、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、排出された菌体外多糖は、クロマトグラフィー分析の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）において、クロマトグラフィーカラムＰＬ  ＡＱＵＡＧＥＬ−ＯＨ  ８μｍ  ＡＱＵＥＯＵＳ  ＳＥＣカラムおよび溶出液としての水中０．１Ｍ酢酸ナトリウムおよび流速０．８ｍｌ／分を用いて、保持時間が４〜８．５分、または５〜８分である。典型的には、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株は、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株である。ＰＬ  ＡＱＵＡＧＥＬ−ＯＨ  ８μｍ  ＡＱＵＥＯＵＳ  ＳＥＣカラムは、中性、アニオン性およびカチオン性の水溶性ポリマーに適用される、化合物のＭＷに応じて化合物を分離する能力を持つパッケージを備えた水性サイズ排除クロマトグラフィーのためのカラムであり、粒径８μｍ、細孔径５０Åおよび長さ／内径３００ｍｍ×７．５ｍｍを有する。
【００３１】
別の実施形態では、発酵エキスは、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株を、従来、前記生成物を合成し、培養培地に分泌するために撹拌し曝気した適切な培養培地中で発酵させた後、単離し、精製することによって得られる。発酵は、１５℃〜４０℃、典型的には３２℃の温度で撹拌し曝気した培地中で行うことができ、この培地は、ｐＨ５．５〜９、典型的には約７．０を有するが、ｐＨは必要に応じて発酵中に調整される。発酵継続時間は、１２〜１２０時間、一実施形態では、２４〜７２時間、他の実施形態では、３６〜４８時間である。典型的には、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株は、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株である。
【００３２】
一実施形態では、発酵エキスの単離および精製の方法は、遠心分離、濾過、限外濾過および透析などの当業者に公知の方法によって行われる。第１のステップでは、遠心分離および濾過ステップは、発酵エキスが見出される上清から、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株を分離することを対象とする。一実施形態では、上清の限外濾過および透析は、１０，０００Ｄａ超の分子量の分子を保持するポリエーテルスルホン膜を用いて行われ、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する発酵エキスが得られる。他の実施形態では、菌体外多糖は、上清から、エタノール、アセトンまたはイソプロパノールの添加による沈殿によって精製される。別の実施形態では、１０，０００Ｄａ超の分子量の分子を保持するポリエーテルスルホン膜を用いる上清の限外濾過および透析、ならびにエタノール、アセトンまたはイソプロパノールの添加による沈殿は、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する菌体外多糖を得るために行われる。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株は、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株である。
【００３３】
別の実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株の発酵では、外部からの糖、例えば限定されるものではないが、ガラクトース、グルコース、マンノース、アミグダリン、セロビオース、マルトース、デンプン、グリコーゲン、ラクトース、それらの混合物および／またはこれらの糖の混合物を含有するエキスを含有する培養培地を、炭素供給源として使用することができる。一実施形態では、２〜４０ｇ／Ｌ、または５〜２５ｇ／Ｌのグルコースの外部からの供給が提供される。
【００３４】
別の実施形態では、培養培地は、酵母エキス、麦芽エキスまたはペプトンなどの追加の窒素または炭素供給源を含むことができ、これら構成成分のそれぞれの濃度は、０．１〜２０ｇ／Ｌ、または０．５〜１０ｇ／Ｌである。
【００３５】
別の実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株の発酵培養のために、ミネラル塩も提供され、ミネラル塩は、Ｎａ＋、Ｋ＋、ＮＨ４＋、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、ＰＯ４３−、ＳＯ４２−、Ｃｌ−、ＣＯ３２−イオン、またはＣｕ、Ｍｎ、ＦｅおよびＺｎなどの微量元素を提供する塩のなかから選択される。
【００３６】
別の実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された発酵エキスに含まれる菌体外多糖は、いかなる化学修飾も媒介することのない、最大７％のサルフェート、または最大５％のサルフェートという天然の硫酸化（sulfatation）を含有する。
【００３７】
別の実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された発酵エキスに含まれる菌体外多糖は、リン酸化、スルホン化、例えばアセチル、ピルボイル、プロピオニル、スクシニル、ラクトイルもしくは３−ヒドロキシブチル基によるアシル化、例えばグリセリルによるエステル化、菌体外多糖の金属複合体の形成および／または７％超の化学的硫酸化剤などの、当業者に公知の化学修飾を含有する。
【００３８】
本発明の別の態様は、化粧品または皮膚医薬として有効な量の、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された発酵エキスまたは菌体外多糖、ならびに少なくとも１種の化粧品としておよび／または皮膚医薬として許容される賦形剤および／または成分を含むという点で特徴付けられる、化粧品組成物または皮膚医薬組成物に関する。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、少なくとも１種の菌体外多糖を含有し、または菌体外多糖は、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する。典型的には、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株は、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株である。前記組成物は、当業者に公知の従来の方法によって調製することができる［「Harry's  Cosmeticology」、第７版、（１９８２年）、Wilkinson  J.B.、Moore  R.J.編、Longman  House、Essex、GB］。
【００３９】
投与される本発明の組成物における、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された発酵エキスの、または菌体外多糖の化粧品または皮膚医薬として有効な量、およびその投与量は、患者の年齢、状態、処置および／またはケアされる状態、障害または疾患の性質または重症度、発酵エキスの、または菌体外多糖の投与の経路および頻度を含む数々の要因に応じて決まる。
【００４０】
「化粧品または皮膚医薬として有効な量」は、非毒性であり、所望の効果をもたらすのに十分な発酵エキスまたは菌体外多糖の量と理解される。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された発酵エキスまたは菌体外多糖は、所望の効果を達成するための化粧品または皮膚医薬としての濃度で使用され、一実施形態では、組成物の総重量に対して、０．０００００００００１％（重量）〜２０％（重量）、０．０００００００１％（重量）〜１０％（重量）、０．０００００１％（重量）〜５％（重量）または０．０００１％（重量）〜５％（重量）で使用される。
【００４１】
別の実施形態では、本発明の発酵エキスまたは菌体外多糖は、化粧品および／または皮膚医薬の送達系および／または徐放系に組み込むこともできる。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、少なくとも１種の菌体外多糖を含有し、または菌体外多糖は、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する。
【００４２】
用語「送達系」は、本発明の発酵エキスまたは菌体外多糖と共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、ビヒクルまたは添加剤に関する。これらの化粧品担体または皮膚医薬担体は、水、油または界面活性剤などの液体であってよく、これらには、石油、動物、植物または合成起源のもの、例えば限定されるものではないが、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油、ヒマシ油、ポリソルベート、ソルビタンエステル、エーテルサルフェート、サルフェート、ベタイン、グリコシド、マルトシド、脂肪アルコール、ノノキシノール、ポロキサマー、ポリオキシエチレン、ポリエチレングリコール、デキストロース、グリセロール、ジギトニンなどが含まれる。当業者には、本発明の発酵エキスまたは菌体外多糖を投与できる異なる送達系において使用することができる希釈剤、アジュバントまたは賦形剤が公知である。
【００４３】
用語「徐放」は、ある期間中この化合物を徐々に放出する、化合物の送達系に関する従来の意味で使用され、一実施形態では、必ずではないが、ある期間にわたり化合物の比較的一定な放出レベルがもたらされる。
【００４４】
送達系または徐放系の例として、発酵エキスのより高い浸透を達成し、かつ／または発酵エキスの薬物動態および薬力学的特性を改善するために添加され得る、リポソーム、混合リポソーム、オレオソーム、ニオソーム、エトソーム、ミリ粒子、マイクロ粒子、ナノ粒子および固体脂質ナノ粒子、ナノ構造の脂質支持体、スポンジ、シクロデキストリン、小胞、ミセル、界面活性剤の混合ミセル、界面活性剤−リン脂質の混合ミセル、ミリスフェア、ミクロスフェアおよびナノスフェア、リポスフェア、ミリカプセル、マイクロカプセルおよびナノカプセル、ならびにマイクロエマルションおよびナノエマルションが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、送達系または徐放系は、リポソーム、界面活性剤−リン脂質の混合ミセルおよびマイクロエマルション、ならびに内部逆ミセル構造を有する油中水マイクロエマルションおよびマイクロエマルションを含有するナノカプセルである。
【００４５】
徐放系は、従来技術で公知の方法によって調製することができ、それらを含有する組成物は、例えば、接着パッチ、非接着パッチ、閉塞パッチおよび微小電気パッチを含めた局所投与もしくは経皮投与によって、あるいは全身投与によって、例えば限定されるものではないが、経鼻、直腸もしくは皮下移植もしくは注射、または特定の身体部分への直接移植もしくは注射を含む経口または非経口経路によって投与することができる。一実施形態では、徐放系は、相対的に一定量の本発明の発酵エキスまたは菌体外多糖を放出するべきである。徐放系に含有されている発酵エキスまたは菌体外多糖の量は、例えば組成物が投与される場所、本発明の発酵エキスまたは菌体外多糖の放出の反応速度および持続期間、ならびに処置および／または防止される状態、障害および／または疾患の性質に応じて決まる。
【００４６】
また、本発明の発酵エキスまたは菌体外多糖を含有する組成物は、例えば限定されるものではないが、中でもタルク、ベントナイト、シリカ、デンプンまたはマルトデキストリンなどの、固体有機ポリマーまたは固体無機支持体上に吸着され得る。
【００４７】
Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された発酵エキスまたは菌体外多糖を含有する組成物は、皮膚に直接接触する布、不織布または医療デバイスに組み込むこともでき、したがって、本発明の発酵エキスまたは菌体外多糖を、布、不織布もしくは医療デバイスへの結合系の生分解によって、またはそれらと身体との摩擦に起因して、身体の水分、皮膚のｐＨもしくは体温に起因して放出することができる。さらに、本発明の発酵エキスまたは菌体外多糖は、身体に直接接触する衣類の製造に使用される布および不織布に組み込むことができる。一実施形態では、本発明の発酵エキスまたは菌体外多糖を含有する布、不織布および医療デバイスは、皮膚のコネキシンレベルの増大によって改善または防止される状態、障害および／または疾患の処置および／または防止のために使用される。
【００４８】
上記の送達系および／または徐放系が含まれる、布、不織布、衣類、医療デバイスおよびそれらに化合物を固定化するための手段の例は、文献に見出すことができ、従来技術で公知である［Schaab  C.K.（１９８６年）HAPPI  １９８６年５月；Nelson  G.、「Application  of  microencapsulation  in  textiles」、（２００２年）、Int.  J.  Pharm.、２４２巻（１〜２号）、５５〜６２頁；「Biofunctional  Textiles  and  the  Skin」（２００６年）  Curr.  Probl.  Dermatol.  ３３巻、Hipler  U.C.およびElsner  P.、編S.  Karger  AG、Basel、Switzerland；Malcolm  R.K.ら、「Controlled  release  of  a  model  antibacterial  drug  from  a  novel  self-lubricating  silicone  biomaterial」、（２００４年）、J.  Cont.  Release、９７巻（２号）、３１３〜３２０頁］。一実施形態では、布、不織布、衣類および医療デバイスは、包帯、ガーゼ、Ｔシャツ、ソックス、タイツ、下着、ガードル、手袋、おむつ、生理用ナプキン、包帯剤、ベッドカバー、拭き取り材、接着パッチ、非接着パッチ、閉塞パッチ、微小電気パッチおよび／またはフェイスマスクである。
【００４９】
本発明の発酵エキスまたはエキソポリサッカライドを含有する化粧品組成物または皮膚医薬組成物は、任意選択で所望の投与形態を製剤化するのに必要な、化粧品としておよび／または皮膚医薬として許容される賦形剤を含む、局所または経皮適用の異なるタイプの組成物に使用することができる。
【００５０】
局所または経皮適用の組成物は、任意の固体、液体または半固体製剤に、例えば限定されるものではないが、リーブオン製剤およびリンスオフ製剤を含めた、クリーム、多重エマルション、例えば限定されるものではないが、水中油および／または水中シリコーンエマルション、油中水および／またはシリコーン中水エマルション、水／油／水または水／シリコーン／水タイプのエマルション、および油／水／油またはシリコーン／水／シリコーンタイプのエマルション、液晶、無水組成物、水性分散液、油、乳液、バルサム、フォーム、ローション、ジェル、クリームジェル、ハイドロアルコール溶液、ハイドログリコール溶液、ヒドロゲル、リニメント、美容液（sera）、石けん、シャンプー、コンディショナー、セラム、多糖類膜、軟膏、ムース、ポマード、パウダー、棒状物質、ペンシル、ならびにスプレーまたはエアロゾル（スプレー）に生成され得る。これらの局所または経皮適用製剤は、当業者に公知の技法を使用して、異なるタイプの固体付属品に、例えば限定されるものではないが、中でも包帯、ガーゼ、Ｔシャツ、ソックス、タイツ、下着、ガードル、手袋、おむつ、生理用ナプキン、包帯剤、ベッドカバー、拭き取り材、接着パッチ、非接着パッチ、閉塞パッチ、微小電気パッチもしくはフェイスマスクに組み込まれ得、または異なるメーキャップ製品に、例えばメーキャップファンデーション、例えばリキッドファンデーションおよびコンパクトファンデーション、メーキャップ除去ローション、メーキャップ除去乳液、目の下用のコンシーラー、アイシャドウ、リップスティック、リッププロテクター、リップグロス、ならびにパウダーに組み込まれ得る。
【００５１】
本発明の化粧品組成物または皮膚医薬組成物は、本発明の化合物の経皮吸収を増大する剤、例えば限定されるものではないが、中でもジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド、界面活性剤、アゾン（１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン）、アルコール、尿素、エトキシジグリコール、アセトン、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールを含み得る。さらに、本発明の化粧品組成物または皮膚医薬組成物は、本発明の発酵エキスまたは菌体外多糖のより高い浸透を達成するために、イオン導入、ソノフォレーシス、エレクトロポレーション、微小電気パッチ、機械的圧力、浸透圧勾配、閉塞治療、マイクロインジェクションもしくは圧力を用いる無針注射、例えば酸素圧による注射、またはそれらの任意の組合せを用いることによって、処置される局所領域に適用され得る。適用領域は、処置および／または防止される状態、障害および／または疾患の性質によって決定される。
【００５２】
本発明に記載されている化粧品組成物または皮膚医薬組成物に含有されている、化粧品としてまたは皮膚医薬として許容される賦形剤および／または成分の中には、化粧品組成物または皮膚医薬組成物に一般に使用される追加の成分があり、例えば限定されるものではないが、神経細胞の開口分泌を阻害する薬剤、抗コリン作用剤、筋収縮を阻害する薬剤、老化防止剤、皺取り剤（anti-wrinkle  agent）、保湿剤、保湿物質、アルファヒドロキシ酸、ベータヒドロキシ酸、モイスチャー化粧品（moisturizer）、真皮もしくは上皮巨大分子の合成を刺激し、かつ／またはそれらの分解を阻害もしくは防止することができる薬剤、コラーゲン合成刺激剤、エラスチン合成刺激剤、デコリン合成刺激剤、ラミニン合成刺激剤、デフェンシン合成刺激剤、シャペロン合成刺激剤、ｃＡＭＰ合成刺激剤、ＡＱＰ−３をモジュレートする薬剤、アクアポリン合成をモジュレートする薬剤、アクアポリンファミリーのタンパク質、ヒアルロン酸合成刺激剤、グリコサミノグリカン合成刺激剤、フィブロネクチン合成刺激剤、サーチュイン合成刺激剤、熱ショックタンパク質、熱ショックタンパク質合成刺激剤、ノクターニンの量を低減する薬剤、ノクターニン発現を阻害する薬剤、脂肪分解剤もしくは脂肪分解を刺激する薬剤、静脈強壮剤（venotonic  agent）、ＰＧＣ−１α発現をモジュレートする薬剤、ＰＰＡＲγの活性を阻害する薬剤、脂肪細胞のトリグリセリド含量を低減する薬剤、抗セルライト剤、脂肪細胞分化遅延剤、皮脂生成を減少させる薬剤、抗脂漏剤、艶消し剤（mattifying  agent）、抗座瘡剤、制汗剤、抗炎症剤および／もしくは鎮痛剤、抗そう痒剤、鎮静剤、麻酔薬、アセチルコリン受容体凝集の阻害剤、アセチルコリンエステラーゼを阻害する薬剤、皮膚弛緩剤、メラニン合成の刺激剤もしくは阻害剤、ホワイトニング剤もしくは脱色剤、色素沈着促進剤（propigmenting  agent）、セルフタンニング剤、ＮＯシンターゼ阻害剤、５α還元酵素阻害剤、リシルおよび／もしくはプロリルヒドロキシラーゼ阻害剤、抗酸化剤、フリーラジカルスカベンジャーおよび／もしくは抗大気汚染剤、反応性カルボニル種スカベンジャー、抗糖化剤、抗ヒスタミン剤、抗ウイルス剤、駆虫剤、乳化剤、皮膚軟化剤、有機溶媒、液体噴霧剤、皮膚コンディショナー、上皮加水分解酵素、ビタミン、アミノ酸、タンパク質、顔料もしくは着色剤、染料、バイオポリマー、ゲル化ポリマー、増粘剤、界面活性剤、軟化剤、乳化剤、結合剤、保存剤、目の下のたるみを低減もしくは処置することができる薬剤、角質除去剤（exfoliating  agent）、角質溶解剤（keratolytic  agent）、角質溶解剤（desquamating  agent）、抗微生物剤、抗真菌剤、静真菌剤、殺菌剤、静菌剤、角質層構成成分の合成を刺激する薬剤、セラミド、脂肪酸、コラーゲン分解を阻害する薬剤、マトリックスメタロプロテイナーゼを阻害する薬剤、エラスチン分解を阻害する薬剤、セリンプロテアーゼ、例えばカリクレイン、白血球エラスターゼもしくはカテプシンＧを阻害する薬剤、線維芽細胞増殖を刺激する薬剤、ケラチノサイト増殖を刺激する薬剤、メラニン細胞増殖を刺激する薬剤、ケラチノサイト分化を刺激する薬剤、抗過角化症剤、面皰溶解剤、抗乾癬剤、ＤＮＡ修復剤、ＤＮＡ保護剤、幹細胞保護剤、安定剤、敏感肌の処置および／もしくはケアのための薬剤、引締め剤、抗ストレッチマーク剤、収斂剤、ＰＡＲ−２の活性を阻害する薬剤、創傷治癒を刺激する薬剤、コアジュバント創傷治癒剤、上皮再形成を刺激する薬剤、コアジュバント上皮再形成剤、サイトカイン成長因子、毛細血管循環および／もしくは微小循環に作用する薬剤、血管新生を刺激する薬剤、血管透過性を阻害する薬剤、細胞代謝に作用する薬剤、真皮−上皮結合を改善する薬剤、発毛誘導剤、発毛阻害剤もしくは発毛遅延剤、抜け毛遅延剤、保存剤、香料、化粧品用および／もしくは吸収性および／もしくは体臭マスキング用のデオドラント、キレート剤、植物エキス、エッセンシャルオイル、海産物エキス、生物工学的プロセスから得られた薬剤、ミネラル塩、細胞エキス、日焼け止めならびに紫外Ａおよび／もしくはＢ線および／もしくは赤外Ａ線に対して活性な有機もしくは無機光防護剤、またはそれらの混合物が含まれ、ただしこれらは、組成物の構成成分の残りおよびＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された発酵エキスまたは菌体外多糖と、物理的かつ化学的に適合性がある。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、少なくとも１種の菌体外多糖を含有する。同様に、これらの追加の成分の性質は、本発明の発酵エキスまたは菌体外多糖の利益を容認しがたく変えるべきではない。これらの追加の成分の性質は、合成であってよく、もしくは植物エキスなどのように天然であってよく、または生物工学的プロセスから得ることができ、または合成プロセスと生物工学的プロセスの組合せから得ることができる。さらなる例は、CTFA  International  Cosmetic  Ingredient  Dictionary  &  Handbook、第１２版（２００８年）に見出すことができる。本発明の文脈では、生物工学的プロセスは、生物またはその一部において、活性成分またはその一部を生成するための任意のプロセスであると理解される。
【００５３】
一実施形態では、本発明の化粧品組成物および／または皮膚医薬組成物は、
−  ０．０００００００００１％（重量）〜２０％（重量）の、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株から排出された発酵エキスまたは菌体外多糖、
−  ０．１％（重量）〜２０％（重量）の、（ＩＮＣＩ名）グリセリン、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ペンチレングリコール、カプリリルグリコール、乳酸、尿素、ヒアルロン酸ナトリウムの群から選択される保湿剤、
−  ０．１％（重量）〜２０％（重量）の、（ＩＮＣＩ名）ジメチコン、ステアリン酸グリセリル、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、セテアリルアルコール、レシチン、Ｃ１２〜１５安息香酸アルキル、スクアラン、ラノリン、ベヘニルアルコール、トコフェロール酢酸エステル、パンテノール、Ｂｕｔｙｒｏｓｐｅｒｍｕｍ  Ｐａｒｋｉｉバター、パルミチン酸レチニル、レチノールの群から選択される皮膚軟化剤または皮膚コンディショニング剤、
−  ０．１％（重量）〜２０％（重量）の、（ＩＮＣＩ名）キサンタンガム、ラウレス硫酸ナトリウム、ステアリン酸（Steraric  Acid）、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ステアリルアルコール、セチルアルコール、ステアレス−２、セテアレス−２０、コカミドプロピルベタインの群から選択される界面活性剤
を含有する。
【００５４】
一実施形態では、皺取り剤および／または老化防止剤は、例えば限定されるものではないが、中でもＶｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ、Ｒｏｓａ  ｃａｎｉｎａ、Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ、Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ  ｃａｃａｏ、Ｇｉｎｋｇｏ  ｂｉｌｏｂａ、Ｌｅｏｎｔｏｐｏｄｉｕｍ  ａｌｐｉｎｕｍもしくはＤｕｎａｌｉｅｌｌａ  ｓａｌｉｎａのエキスもしくは加水分解エキス、Ｍａｔｒｉｘｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：パルミトイルペンタペプチド−４］、Ｍａｔｒｉｘｙｌ（登録商標）３０００（登録商標）［ＩＮＣＩ：パルミトイルテトラペプチド−７、パルミトイルオリゴペプチド］、Ｍａｔｒｉｘｙｌ（登録商標）Ｓｙｎｔｈｅ’６（商標）［ＩＮＣＩ：グリセリン、水、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン、パルミトイルトリペプチド−３８］、Ｅｓｓｅｎｓｋｉｎ（商標）［ＩＮＣＩ：カルシウムヒドロキシメチオニン］、Ｒｅｎｏｖａｇｅ［ＩＮＣＩ：テプレノン］、Ｒｅｓｉｓｔｅｍ（商標）［ＩＮＣＩ：Ｇｌｏｂｕｌａｒｉａ  Ｃｏｒｄｉｆｏｌｉａ発酵物］、Ｂｅａｕｔｉｆｅｙｅ［ＩＮＣＩ：Ａｌｂｉｚｉａ  Ｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎ樹皮エキス、ダルトシド］、Ｍｅｉｒｉｔａｇｅ［ＩＮＣＩ：Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ  Ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ根エキス、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｉｄｅｓ  Ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ根エキス、Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ  Ｆａｌｃａｔｕｍ根エキス］、Ｓｅｎｅｓｔｅｍ［ＩＮＣＩ：Ｐｌａｎｔａｇｏ  Ｌａｎｃｅｏｌａｔａ葉エキス］、Ｖｅｎｕｃｅａｎｅ［ＩＮＣＩ：Ｔｈｅｒｍｕｓ  Ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｌｕｓ発酵物］もしくはＤｅｒｍａｘｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：パルミトイルオリゴペプチド］（Ｓｅｄｅｒｍａ／Ｃｒｏｄａによって販売）、Ｖｉａｌｏｘ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ペンタペプチド−３］、Ｓｙｎ（登録商標）−Ａｋｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ジペプチドジアミノブチロイルベンジルアミドジアセテート］、Ｓｙｎ（登録商標）−Ｃｏｌｌ［ＩＮＣＩ：パルミトイルトリペプチド−５］、Ｐｈｙｔａｌｕｒｏｎａｔｅ［ＩＮＣＩ：ローカストビーン（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ  ｓｉｌｉｑｕａ）ガム］、Ｒｅｇｕ−Ｓｃｅｎｃｅ［ＩＮＣＩ：Ａｓｐａｒａｇｕｓ  Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ茎エキス、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸カリウム、グルコノラクトン、グルコン酸カルシウム］、Ｓｙｎ−ＴＣ［ＩＮＣＩ：トリフルオロ酢酸テトラデシルアミノブチロイルバリルアミノ酪酸ウレア、パルミトイルトリペプチド−５、パルミトイルジペプチド−５ジアミノブチロイルヒドロキシトレオニン］もしくはＰｒｅｒｅｇｅｎ（登録商標）［ＩＮＣＩ：Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｓｏｊａ（ダイズ）タンパク質、オキシドレダクターゼ］（Ｐｅｎｔａｐｈａｒｍ／ＤＳＭによって販売）、Ｍｙｏｘｉｎｏｌ（商標）［ＩＮＣＩ：加水分解Ｈｉｂｉｓｃｕｓ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｓエキス］、Ｓｙｎｉｏｒａｇｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルテトラペプチド−１１］、Ｄｅｒｍｉｃａｎ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルテトラペプチド−９］、Ｓｈａｄｏｗｎｙｌ［ＩＮＣＩ：藻類エキス、へキシレングリコール、カプリリルグリコール、キサンタンガム］もしくはＤＮ  ＡＧＥ（商標）ＬＳ［ＩＮＣＩ：Ｃａｓｓｉａ  ａｌａｔａ葉エキス］（Ｌａｂｏｒ��ｔｏｉｒｅｓ  Ｓｅｒｏｂｉｏｌｏｇｉｑｕｅｓ／Ｃｏｇｎｉｓ／ＢＡＳＦによって販売）、Ａｌｇｉｓｕｍ  Ｃ（登録商標）［ＩＮＣＩ：マンヌロン酸メチルシラノール］、Ｅｘａｇｅ［ＩＮＣＩ：イミダゾリルエチルジアミノプロパンアミド］もしくはＨｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌｉｓｉｌａｎｅ  ＣＮ（登録商標）［ＩＮＣＩ：アスパラギン酸メチルシラノールヒドロキシプロリン］（Ｅｘｓｙｍｏｌによって販売）、Ａｒｇｉｒｅｌｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−８］、ＳＮＡＰ−７［ＩＮＣＩ：アセチルヘプタペプチド−４］、ＳＮＡＰ−８［ＩＮＣＩ：アセチルオクタペプチド−３］、Ｓｅｒｉｌｅｓｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ヘキサペプチド−１０］、Ｌｅｕｐｈａｓｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ペンタペプチド−１８］、Ｉｎｙｌｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−３０］、Ａｌｄｅｎｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：加水分解（Ｈｙｄｒｏｌｉｚｅｄ）コムギタンパク質、加水分解ダイズタンパク質、トリペプチド−１］、Ｐｒｅｖｅｎｔｈｅｌｉａ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ジアミノプロピオノイルトリペプチド−３３］、Ｄｅｃｏｒｉｎｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：トリペプチド−１０シトルリン］、Ｄｅｃｏｒｉｎｏｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：トリペプチド−９シトルリン］、Ｔｒｙｌａｇｅｎ（登録商標）［ＩＮＣＩ：シュードアルテロモナス発酵エキス、加水分解コムギタンパク質、加水分解ダイズタンパク質、トリペプチド−１０シトルリン、トリペプチド−１］、Ｅｙｅｓｅｒｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：アセチルテトラペプチド−５］、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＡＣ２９［ＩＮＣＩ：アセチルトリペプチド−３０シトルリン］、Ｒｅｌｉｓｔａｓｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：アセチルアルギニルトリプトフィルジフェニルグリシン］、Ｔｈｅｒｍｏｓｔｒｅｓｓｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：アセチルテトラペプチド−２２］、Ｌｉｐｏｃｈｒｏｍａｎ（商標）［ＩＮＣＩ：ジメチルメトキシクロマノール］、Ｃｈｒｏｍａｂｒｉｇｈｔ（登録商標）［ＩＮＣＩ：パルミチン酸ジメチルメトキシクロマニル］、Ａｎｔａｒｃｔｉｃｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：シュードアルテロモナス発酵エキス］、ｄＧｌｙａｇｅ（商標）［ＩＮＣＩ：リシンＨＣｌ、レシチン、トリペプチド−９シトルリン］、Ｖｉｌａｓｔｅｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：リシンＨＣｌ、レシチン、トリペプチド−１０シトルリン］、Ｈｙａｄｉｓｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：シュードアルテロモナス発酵エキス］、Ｈｙａｎｉｆｙ（商標）［ＩＮＣＩ：異性化糖］、Ｄｉｆｆｕｐｏｒｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−３７］、Ｓｉｌｕｓｙｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ  Ｓｏｊａ）油、セスキオレイン酸ソルビタン、イソヘキサデカン、ヒアルロン酸ナトリウム、ラウリルジモニウムヒドロキシプロピル加水分解ダイズタンパク質、アセチルヘキサペプチド−３９］、Ａｄｉｆｙｌｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−３８］、Ｕｐｌｅｖｉｔｙ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルテトラペプチド−２］、Ｊｕｖｅｌｅｖｅｎ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−５１アミド］、Ｓｅａｃｏｄｅ（���標）［ＩＮＣＩ：シュードアルテロモナス発酵エキス］、Ｎｏｃｔｕｒｓｈａｐｅ（商標）［ＩＮＣＩ：プランクトンエキス］、Ａｃｔｉｇｙｍ（商標）［ＩＮＣＩ：プランクトンエキス］、もしくはＴｅｌａｎｇｙｎ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルテトラペプチド−４０］（Ｌｉｐｏｔｅｃ／Ｌｕｂｒｉｚｏｌによって販売）、Ｋｏｌｌａｒｅｎ（登録商標）［ＩＮＣＩ：トリペプチド−１、デキストラン］（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｅｕｒｏｐｅｅｎ  ｄｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｅ  Ｃｅｌｌｕｌａｉｒｅによって販売）、Ｃｏｌｌａｘｙｌ（登録商標）ＩＳ［ＩＮＣＩ：ヘキサペプチド−９］、Ｌａｍｉｎｉｘｙｌ  ＩＳ（商標）［ＩＮＣＩ：ヘプタペプチド］、Ｏｒｓｉｒｔｉｎｅ（商標）ＧＬ［ＩＮＣＩ：Ｏｒｙｚａ  ｓａｔｉｖａ（コメ）エキス］、Ｄ’Ｏｒｉｅｎｔｉｎｅ（商標）ＩＳ［ＩＮＣＩ：Ｐｈｏｅｎｉｘ  ｄａｃｔｙｌｉｆｅｒａ（デーツ）種子エキス］、Ｐｈｙｔｏｑｕｉｎｔｅｓｃｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：ヒトツブコムギ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ｍｏｎｏｃｏｃｃｕｍ）エキス］、Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｑ１０［ＩＮＣＩ：トリフルオロ酢酸ペンタペプチド−３４］、Ｔｅｌｏｓｅｎｓｅ［ＩＮＣＩ：加水分解酵母タンパク質、加水分解ダイズタンパク質］もしくはＱｕｉｎｔｅｓｃｉｎｅ（商標）ＩＳ［ＩＮＣＩ：ジペプチド−４］（Ｖｉｎｃｉｅｎｃｅ／ＩＳＰ／Ａｓｈｌａｎｄによって販売）、ＢＯＮＴ−Ｌ−ペプチド［ＩＮＣＩ：パルミトイルヘキサペプチド−１９］（Ｉｎｆｉｎｉｔｅｃ  Ａｃｔｉｖｏｓによって販売）、Ｄｅｅｐａｌｉｎｅ（商標）ＰＶＢ［ＩＮＣＩ：パルミトイル加水分解コムギタンパク質］もしくはＳｅｐｉｌｉｆｔ（登録商標）ＤＰＨＰ［ＩＮＣＩ：ジパルミトイルヒドロキシプロリン］（Ｓｅｐｐｉｃによって販売）、Ｇａｔｕｌｉｎｅ（登録商標）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［ＩＮＣＩ：Ａｃｍｅｌｌａ  ｏｌｅｒａｃｅａエキス］、Ｇａｔｕｌｉｎｅ（登録商標）Ｉｎ−Ｔｅｎｓｅ［ＩＮＣＩ：Ｓｐｉｌａｎｔｈｅｓ  ａｃｍｅｌｌａ花エキス］もしくはＧａｔｕｌｉｎｅ（登録商標）Ａｇｅ  Ｄｅｆｅｎｓｅ  ２［ＩＮＣＩ：Ｊｕｇｌａｎｓ  ｒｅｇｉａ（クルミ）種子エキス］（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅによって販売）、Ｔｈａｌａｓｓｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：藻類エキス］（Ｂｉｏｔｅｃｈｍａｒｉｎｅによって販売）、ＣｈｒｏＮＯｌｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：カプロオイルテトラペプチド−３］もしくはＴｈｙｍｕｌｅｎ−４［ＩＮＣＩ：アセチルテトラペプチド−２］（Ａｔｒｉｕｍ／Ｕｎｉｐｅｘ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓによって販売）、ＥｑｕｉＳｔａｔ［ＩＮＣＩ：Ｐｙｒｕｓ  ｍａｌｕｓ果実エキス、Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｓｏｊａ種子エキス］もしくはＪｕｖｅｎｅｓｃｅ［ＩＮＣＩ：エトキシジグリコールおよびカプリル酸トリグリセリド、レチノール、ウルソール酸、フィトナジオン、イロマスタット］（Ｃｏｌｅｔｉｃａ／Ｅｎｇｅｌｈａｒｄ／ＢＡＳＦによって販売）、Ａｍｅｌｉｏｘ［ＩＮＣＩ：カルノシン、トコフェロール、Ｓｉｌｙｂｕｍ  ｍａｒｉａｎｕｍ果実エキス］、Ｐｈｙｔｏｃｅｌｌｔｅｃ  Ｓｙｍｐｈｙｔｕｍ［ＩＮＣＩ：イソマルト、Ｓｙｍｐｈｙｔｕｍ  Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ根の細胞培養物、レシチン、安息香酸ナトリウム］���Ｓｎｏｗ  Ａｌｇａｅ  Ｐｏｗｄｅｒ［ＩＮＣＩ：クラミドカプサエキス、マルトデキストリン、レシチン］、Ｄｅｒｍｃｏｍ［ＩＮＣＩ：アカシアセネガルガム、Ｃｒｏｃｕｓ  Ｃｈｙｒｓａｎｔｈｕｓ球根エキス］、Ａｎａｇａｉｎ［ＩＮＣＩ：Ｐｉｓｕｍ  Ｓａｔｉｖｕｍ（エンドウマメ）、芽エキス］もしくはＰｈｙｔｏＣｅｌｌＴｅｃ  Ｍａｌｕｓ  Ｄｏｍｅｓｔｉｃａ［ＩＮＣＩ：Ｍａｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ果実細胞培養物］（Ｍｉｂｅｌｌｅ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙによって販売）、Ｂｉｏｘｉｌｉｆｔ［ＩＮＣＩ：Ｐｉｍｐｉｎｅｌｌａ  ａｎｉｓｕｍエキス］、Ｖｉｔａｇｅｎｙｌ［ＩＮＣＩ：Ｐｒｕｎｕｓ  Ｐｅｒｓｉｃａ（モモ）葉エキス］もしくはＳＭＳ  Ａｎｔｉ−Ｗｒｉｎｋｌｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：Ａｎｎｏｎａ  ｓｑｕａｍｏｓａ種子エキス］（Ｓｉｌａｂによって販売）、Ｓｙｍｖｉｔａｌ  Ａｇｅｒｅｐａｉｒ［ＩＮＣＩ：Ｚｉｎｇｉｂｅｒ  Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ（ショウガ）根エキス］（Ｓｙｍｒｉｓｅによって販売）、Ｃｉｔｒｕｓｔｅｍ［ＩＮＣＩ：キサンタンガム、安息香酸ナトリウム、グルコノラクトン、グルコン酸カルシウム］、Ｍｅｌａｖｏｉｄ［ＩＮＣＩ：Ｂｏｅｒｈａｖｉａ  Ｄｉｆｆｕｓａ根エキス］、Ｄａｒｋｏｕｔ［ＩＮＣＩ：Ｈｙｐｏｘｉｓ  Ｒｏｏｐｅｒｉ根茎エキス、Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ  Ｓｐｉｎｏｓａガム］もしくはＬｉｎｅｆｉｌｌ［ＩＮＣＩ：ジメチルイソソルビド、Ｓｅｓａｍｕｍ  Ｉｎｄｉｃｕｍ（ゴマ）種子エキス］（Ｐｒｏｖｉｔａｌによって販売）、Ａｄｉｐｏｆｉｌｌ’ｉｎ［ＩＮＣＩ：オルニチン、リン脂質、糖脂質］、Ｅｌｉｘ−ＩＲ［ＩＮＣＩ：Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ  Ａｖｉｃｕｌａｒｅエキス］もしくはＰｒｏｇｅｌｉｎｅ［ＩＮＣＩ：トリフルオロアセチルトリペプチド−２］（Ｌｕｃａｓ  Ｍｅｙｅｒによって販売）、Ａｍｉｐｅｒｆｅｃｔ［ＩＮＣＩ：Ｇａｕｌｔｈｅｒｉａ  Ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ（ウィンターグリーン）葉エキス］もしくはＲｅｐｕｌｐａｍｉ  ＥＲ［ＩＮＣＩ：Ａｄａｎｓｏｎｉａ  Ｄｉｇｉｔａｔａ  果肉エキス、Ｈｉｂｉｓｃｕｓ  Ｓａｂｄａｒｉｆｆａ花エキス］（Ａｌｂａｎ  Ｍｕｌｌｅｒによって販売）、Ｃｅｌｌｏｘｙｌ［ＩＮＣＩ：Ｕａｐａｃａ  Ｂｏｊｅｒｉ葉エキス］もしくはＲｅｓｉｓｔｒｅｓｓ［ＩＮＣＩ：Ｓｏｐｈｏｒａ  Ｊａｐｏｎｉｃａ花エキス］（Ｓｏｌ
ａｂｉａによって販売）、Ａｃｔｉｐｏｒｉｎｅ  ８Ｇ［ＩＮＣＩ：Ｊａｎｉａ  Ｒｕｂｅｎｓエキス］もしくはＥＰＳ  Ｓｅａｆｉｌｌ［ＩＮＣＩ：プランクトンエキス］（Ｃｏｄｉｆによって販売）、Ｎｏｖｈｙａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｇ［ＩＮＣＩ：アセチルグルコサミンリン酸二ナトリウム］もしくはＲｕｂｉｘｙｌ［ＩＮＣＩ：ヘキサペプチド−４７］（Ｉｎｄｕｃｈｅｍによって販売）、Ｃａ２＋チャネルのアンタゴニスト、例えば限定されるものではないが、アルベリン、マンガンもしくはマグネシウム塩、ある特定の第二級もしくは第三級アミン、レチノールおよびその誘導体、イデベノンおよびその誘導体、補酵素Ｑ１０およびその誘導体、ボスウェル酸およびその誘導体、ＧＨＫおよびその誘導体および／もしくは塩、カルノシンおよびその誘導体、ＤＮＡ修復酵素、例えば限定されるものではないが、光回復酵素もしくはＴ４エンドヌクレアーゼＶ、もしくは塩素チャネルアゴニスト、ならびに／またはこれらの混合物によって形成される群から選択される。
【００５５】
別の実施形態では、引締め剤および／または再高密度化剤（redensifying  agent）および／または再構成剤は、例えば限定されるものではないが、中でもＭａｌｐｉｇｈｉａ  ｐｕｎｉｃｉｔｏｌｉａ、Ｃｙｎａｒａ  ｓｃｏｌｙｍｕｓ、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ  ｈｅｒｂａｃｅｕｍ、Ａｌｏｅ  Ｂａｒｂａｄｅｎｓｉｓ、Ｐａｎｉｃｕｍ  ｍｉｌｉａｃｅｕｍ、Ｍｏｒｕｓ  ｎｉｇｒａ、Ｓｅｓａｍｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍ、Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｓｏｊａ、Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅのエキス、Ｐｒｏｎａｌｅｎ（登録商標）Ｒｅｆｉｒｍｉｎｇ  ＨＳＣ［ＩＮＣＩ：Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  Ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｌｙｂｕｍ  Ｍａｒｉａｎｕｍ、Ｇｌｙｃｉｎｅ  Ｓｏｙ、Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ  Ａｒｖｅｎｓｅ、Ａｌｃｈｅｍｉｌｌａ  Ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｍｅｄｉｃａｇｏ  Ｓａｔｉｖａ、Ｒａｐｈａｎｕｓ  Ｓａｔｉｖｕｓ］、Ｌｉｐｏｏｕｔ［ＩＮＣＩ：プランクトンエキス］もしくはＰｏｌｙｐｌａｎｔ（登録商標）Ｒｅｆｉｒｍｉｎｇ［ＩＮＣＩ：Ｃｏｎｅｆｌｏｗｅｒ、Ａｓｉａｔｉｃ  Ｃｅｎｔｅｌｌａ、ヒバマタ、フェヌグリーク］（Ｐｒｏｖｉｔａｌによって販売）、Ｌａｎａｂｌｕｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ソルビトール、藻類エキス］（Ａｔｒｉｕｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ／Ｕｎｉｐｅｘ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓによって販売）、Ｐｅｐｈａ（登録商標）−Ｎｕｔｒｉｘ［ＩＮＣＩ：天然栄養因子］（Ｐｅｎｔａｐｈａｒｍ／ＤＳＭによって販売）、イソフラボンを含有する植物エキス、Ｂｉｏｐｅｐｔｉｄｅ  ＥＬ（商標）［ＩＮＣＩ：パルミトイルオリゴペプチド］、Ｂｉｏｐｅｐｔｉｄｅ  ＣＬ（商標）［ＩＮＣＩ：パルミトイルオリゴペプチド］、Ｖｅｘｅｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：水（アクア）、プロピレングリコール、レシチン、カフェイン、パルミトイルカルニチン］、Ｍａｔｒｉｘｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：パルミトイルペンタペプチド−３］、Ｍａｔｒｉｘｙｌ（登録商標）３０００［ＩＮＣＩ：パルミトイルテトラペプチド−３、パルミトイルオリゴペプチド］もしくはＢｉｏ−Ｂｕｓｔｙｌ（商標）［ＩＮＣＩ：ポリメタクリル酸グリセリル、ラーネラ属ダイズタンパク質発酵物、水（アクア）、プロピレングリコール、グリセリン、ＰＥＧ−８、パルミトイルオリゴペプチド］（Ｓｅｄｅｒｍａ／Ｃｒｏｄａによって販売）、Ｄｅｒｍｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ（登録商標）ＨＣ［ＩＮＣＩ：グリセリン、水（アクア）、グリコサミノグリカン、グリコーゲン］、Ａｇｌｙｃａｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：マンニトール、シクロデキストリン、グリコーゲン、Ａｒａｔｏｓｔａｐｈｙｌｏｓ  Ｕｖａ  Ｕｒｓｉ葉エキス］、Ｃｙｔｏｋｉｎｏｌ（登録商標）ＬＳ［ＩＮＣＩ：加水分解カゼイン、加水分解酵母タンパク質、リシンＨＣｌ］もしくはＦｉｒｍｉｄｅｒｍ（登録商標）ＬＳ９１２０［ＩＮＣＩ：Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ  Ｃａｔａｐｐａ葉エキス、Ｓａｍｂｕｃｕｓ  Ｎｅｇｒａ花エキス、ＰＶＰ、タンニン酸］（Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅｓ  Ｓｅｒｏｂｉｏｌｏｇｉｑｕｅｓ／Ｃｏｇｎｉｓ／ＢＡＳＦによって販売）、Ｌｉｆｔｌｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：加水分解コムギタンパク質］、Ｒａｆｆｅｒｍｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：加水分解ダイズ粉］もしく��Ｒｉｄｕｌｉｓｓｅ  Ｃ（登録商標）［加水分解ダイズタンパク質］（Ｓｉｌａｂによって販売）、Ｓｅｒｉｌｅｓｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ヘキサペプチド−１０］、Ｄｅｃｏｒｉｎｙｌ（商標）［ＩＮＣＩ：トリペプチド−１０シトルリン］、Ｔｒｙｌａｇｅｎ（登録商標）［ＩＮＣＩ：シュードアルテロモナス発酵エキス、加水分解コムギタンパク質、加水分解ダイズタンパク質、トリペプチド−１０シトルリン、トリペプチド−１］、Ｓｉｌｕｓｙｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ  Ｓｏｊａ）油、セスキオレイン酸ソルビタン、イソヘキサデカン、ヒアルロン酸ナトリウム、ラウリルジモニウムヒドロキシプロピル加水分解ダイズタンパク質、アセチルヘキサペプチド−３９］もしくはＡｄｉｆｙｌｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−３８］（Ｌｉｐｏｔｅｃ／Ｌｕｂｒｉｚｏｌによって販売）、Ｕｒｓｏｌｉｓｏｍｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：レシチン、ウルソール酸、アテロコラーゲン、キサンタンガム、コンドロイチン硫酸ナトリウム］、Ｅｐｅｒｕｌｉｎｅ［ＩＮＣＩ：マルトデキストリン、Ｅｐｅｒｕａ  Ｆａｌｃａｔａ樹皮エキス］もしくはＣｏｌｌａｌｉｆｔ（登録商標）［ＩＮＣＩ：加水分解麦芽エキス］（Ｃｏｌｅｔｉｃａ／Ｅｎｇｅｌｈａｒｄ／ＢＡＳＦによって販売）、Ｓｙｎ（登録商標）−Ｃｏｌｌ［ＩＮＣＩ：パルミトイルトリペプチド−５］（Ｐｅｎｔａｐｈａｒｍ／ＤＳＭによって販売）、Ｈｙｄｒｉａｍｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：水（アクア）、グリコサミノグリカン、スクレロチウムガム］（Ａｔｒｉｕｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ／Ｕｎｉｐｅｘ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓによって販売）、Ｓｐｈｉｎｇｏｋｉｎｅ  ＮＰ［ＩＮＣＩ：カプロオイルフィトスフィンゴシン］（Ｅｖｏｎｉｋによって販売）、Ｂｏｄｙ３  Ｃｏｍｐｌｅｘ［ＩＮＣＩ：ベントナイト、Ｂｕｔｙｒｏｓｐｅｒｍｕｍ  Ｐａｒｋｉｉ（シア）実エキス、Ｐｅｒｓｅａ  Ｇｒａｔｉｓｓｉｍａ（アボカド）果実エキス］（Ｌｕｃａｓ  Ｍｅｙｅｒによって販売）、Ｐｒｏｓｙｎｅｒｇｅｎ  ＤＦ［ＩＮＣＩ：Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ／Ｕｌｋｅｎｉａ  Ａｍｏｅｂｏｉｄｅａ発酵エキス濾液］（Ｌｏｎｚａによって販売）、またはＩＰ２０００［ＩＮＣＩ：デキストラン、トリフルオロアセチルトリペプチド−２］（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｅｕｒｏｐｅｅｎ  ｄｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｅ  Ｃｅｌｌｕｌａｉｒｅ／Ｕｎｉｐｅｘ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓによって販売）によって形成される群から選択される。
【００５６】
他の実施形態では、真皮または上皮高分子の合成を刺激する薬剤は、例えば限定されるものではないが、中でもコラーゲン合成刺激剤、エラスチン合成刺激剤、デコリン合成刺激剤、ラミニン合成刺激剤、シャペロン合成刺激剤、サーチュイン合成刺激剤、サーチュイン活性化剤、アクアポリン合成をモジュレートする薬剤、フィブロネクチン合成刺激剤、コラーゲン分解を阻害する薬剤、エラスチン分解を阻害する薬剤、セリンプロテアーゼ、例えばカリクレイン、白血球エラスターゼもしくはカテプシンＧを阻害する薬剤、線維芽細胞増殖を刺激する薬剤、ならびにＤＮＡ修復剤および／もしくはＤＮＡ保護剤、例えば限定されるものではないが、Ｃｅｎｔｅｌｌａ  ａｓｉａｔｉｃａ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｉｖｉｓｉａｅ、Ｓｏｌａｎｕｍ  ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ、Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｍのエキス、藻類Ｍａｃｒｏｃｙｓｔｉｓ  ｐｙｒｉｆｅｒａ、Ｐａｄｉｎａ  ｐａｖｏｎｉｃａのエキス、ダイズ、麦芽、亜麻、セージ、レッドクローバー、葛根、白色ルピナス植物のエキス、ヘーゼルナッツエキス、トウモロコシエキス、酵母エキス、ブナノキ（beech  shoot）エキス、マメ科種子エキス、植物ホルモンエキス、例えばジベレリン、オーキシンもしくはサイトカイニン、または中でも動物プランクトンＳａｌｉｎａのエキス、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓを含む乳の発酵生成物、アシアチコシドおよびそれらの誘導体、ビタミンＣおよびその誘導体、ケイ皮酸およびその誘導体、Ｍａｔｒｉｘｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：パルミトイルペンタペプチド−３］、Ｍａｔｒｉｘｙｌ（登録商標）３０００［ＩＮＣＩ：パルミトイルテトラペプチド−３、パルミトイルオリゴペプチド］もしくはＢｉｏｐｅｐｔｉｄｅ  ＣＬ（商標）［ＩＮＣＩ：ポリメタクリル酸グリセリル、プロピレングリコール、パルミトイルオリゴペプチド］（Ｓｅｄｅｒｍａ／Ｃｒｏｄａによって販売）、Ａｎｔａｒｃｔｉｃｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：シュードアルテロモナス発酵エキス］、Ｄｅｃｏｒｉｎｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：トリペプチド−１０シトルリン］、Ｓｅｒｉｌｅｓｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：ヘキサペプチド−１０］、Ｌｉｐｅｐｔｉｄｅ［ＩＮＣＩ：加水分解野菜タンパク質］、Ａｌｄｅｎｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：加水分解コムギタンパク質、加水分解ダイズタンパク質、トリペプチド−１］、Ｒｅｌｉｓｔａｓｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルアルギニルトリプトフィルジフェニルグリシン］、Ｔｈｅｒｍｏｓｔｒｅｓｓｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルテトラペプチド−２２］、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＡＣ２９［ＩＮＣＩ：アセチルトリペプチド−３０シトルリン］、Ｄｉｆｆｕｐｏｒｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−３７］、Ｓｉｌｕｓｙｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｓｏｊａ）油、セスキオレイン酸ソルビタン、イソヘキサデカン、ヒアルロン酸ナトリウム、ラウリルジモニウムヒドロキシプロピル加水分解ダイズタンパク質、アセチルヘキサペプチド−３９］もしくはＡｄｉｆｙｌｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド��３８］（Ｌｉｐｏｔｅｃ／Ｌｕｂｒｉｚｏｌによって販売）、Ｄｒｉｅｌｉｎｅ（登録商標）ＰＦ［ＩＮＣＩ：酵母ベータグルカン］（Ａｌｂａｎ  Ｍｕｌｌｅｒによって販売）、Ｐｈｙｔｏｖｉｔｙｌ  Ｃ（登録商標）［ＩＮＣＩ：アクア、Ｚｅａ  ｍａｙｓエキス］（Ｓｏｌａｂｉａによって販売）、Ｃｏｌｌａｌｉｆｔ（登録商標）［ＩＮＣＩ：加水分解麦芽エキス］（Ｃｏｌｅｔｉｃａ／Ｅｎｇｅｌｈａｒｄ／ＢＡＳＦによって販売）、Ｐｈｙｔｏｃｏｈｅｓｉｎｅ  ＰＳＰ（商標）［ＩＮＣＩ：ベータシトステロール硫酸ナトリウム］（Ｖｉｎｃｉｅｎｃｅ／ＩＳＰ／Ａｓｈｌａｎｄによって販売）、ミネラル、例えばカルシウム、中でもレチノイドおよびそれらの誘導体、イソフラボノイド、カロテノイド、リコペン、シュードジペプチド、レチノイドおよびそれらの誘導体、例えばレチノールまたはパルミチン酸レチニル、または中でもヘパリノイドによって形成される群から選択される。
【００５７】
別の実施形態では、創傷治癒を刺激する薬剤、コアジュバント創傷治癒剤、上皮再形成（reepithelization）を刺激する薬剤、および／またはコアジュバント上皮再形成剤は、例えば限定されるものではないが、中でもＡｒｉｓｔｏｌｏｑｕｉａ  ｃｌｅｍａｔｉｓ、Ｃｅｎｔｅｌｌａ  ａｓｉａｔｉｃａ、Ｒｏｓａ  ｍｏｓｃｈａｔａ、Ｅｃｈｉｎａｃｅａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ、Ｓｙｍｐｈｙｔｕｍ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ、Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ  ａｒｖｅｎｓｅ、Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ  ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ、Ｍｉｍｏｓａ  ｔｅｎｕｉｆｌｏｒａ、Ｐｅｒｓｅａ  ｇｒａｔｉｓｉｍａ、Ｐｒｕｎｕｓ  ａｆｒｉｃａｎｕｍ、Ｔｏｒｍｅｎｔｉｌｌａ  ｅｒｅｃｔｅａ、Ａｌｏｅ  ｖｅｒａのエキス、Ｐｏｌｙｐｌａｎｔ（登録商標）Ｅｐｉｔｈｅｌｉｚｉｎｇ［ＩＮＣＩ：Ｃａｌｅｎｄｕｌａ  Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ  Ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ、Ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ  Ｒｅｃｕｔｉｔａ、Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ  Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ］（Ｐｒｏｖｉｔａｌによって販売）、Ｃｙｔｏｋｉｎｏｌ（登録商標）ＬＳ  ９０２８［ＩＮＣＩ：加水分解カゼイン、加水分解酵母タンパク質、リシンＨＣｌ］（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｓｅｒｏｂｉｏｌｏｇｉｑｕｅｓ／Ｃｏｇｎｉｓによって販売）もしくはＤｅｌｉｎｅｒ（登録商標）［ＩＮＣＩ：Ｚｅａ  Ｍａｙ（トウモロコシ）穀粒エキス］（Ｃｏｌｅｔｉｃａ／Ｅｎｇｅｌｈａｒｄ／ＢＡＳＦによって販売）、アラントイン、カドヘリン、インテグリン、セレクチン、ヒアルロン酸受容体、免疫グロブリン、線維芽細胞成長因子、結合組織成長因子、血小板由来成長因子、血管内皮成長因子、上皮成長因子、インスリン様成長因子、ケラチノサイト成長因子、コロニー刺激因子、形質転換成長因子ベータ、腫瘍壊死因子−アルファ、インターフェロン、インターロイキン、マトリックスメタロプロテイナーゼ、受容体タンパク質チロシンホスファターゼ、Ａｎｔａｒｃｔｉｃｉｎｅ（登録商標）［ＩＮＣＩ：シュードアルテロモナス発酵エキス］、Ｄｅｃｏｒｉｎｙｌ（登録商標）［ＩＮＣＩ：トリペプチド−１０シトルリン］、Ｔｒｙｌａｇｅｎ（登録商標）［ＩＮＣＩ：シュードアルテロモナス発酵エキス、加水分解コムギタンパク質、加水分解ダイズタンパク質、トリペプチド−１０シトルリン、トリペプチド−１］、Ｂｏｄｙｆｅｎｓｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アミノヘキサン酸アセチルジペプチド−３］、Ｄｅｌｉｓｅｎｓ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−４９］、またはＤｉｆｆｕｐｏｒｉｎｅ（商標）［ＩＮＣＩ：アセチルヘキサペプチド−３７］（Ｌｉｐｏｔｅｃ／Ｌｕｂｒｉｚｏｌによって販売）によって形成される群から選択される。
【００５８】
適用
【００５９】
別の態様では、本発明は、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の処置および／またはケアのための化粧品組成物または皮膚医薬組成物の調製における、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された発酵エキスの使用に言及する。一実施形態では、発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、発酵エキスは、少なくとも１種の菌体外多糖を含有する。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、少なくとも１種の菌体外多糖を含有する。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株は、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株である。
【００６０】
別の態様では、本発明は、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の処置および／またはケアのための化粧品組成物または皮膚医薬組成物の調製における、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の使用に言及する。一実施形態では、菌体外多糖は、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株は、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株である。
【００６１】
一実施形態では、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の処置および／またはケアは、コラーゲン合成を刺激する処置、皮膚老化の処置および／もしくは防止、皮膚皺の処置および／もしくは防止、皮膚の張りを改善するためおよび／もしくは皮膚の張りの喪失を防止するための処置、乾燥皮膚、ひび割れた唇、頭部粃糠疹、乾燥毛髪、脆弱な毛髪および／もしくは爪の処置および／もしくは防止、皮膚、粘膜および／もしくは爪の上皮再形成および／もしくは創傷治癒、皮膚および／もしくは粘膜の炎症の処置および／もしくは防止、または皮膚、粘膜および／もしくは爪の水分補給の欠如もしくは低下の結果である状態、障害および／もしくは疾患の処置および／もしくは防止を指す。一実施形態では、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の処置および／またはケアは、コラーゲン合成を刺激する処置、皮膚老化の処置および／もしくは防止、皮膚皺の処置および／もしくは防止、皮膚の張りを改善するためおよび／もしくは皮膚の張りの喪失を防止するための処置、乾燥皮膚、ひび割れた唇、頭部粃糠疹、乾燥毛髪、脆弱な毛髪および／もしくは爪の処置および／もしくは防止、皮膚、粘膜および／もしくは爪の上皮再形成および／もしくは創傷治癒、皮膚および／もしくは粘膜の炎症の処置および／もしくは防止、または皮膚、粘膜および／もしくは爪の水分補給の欠如もしくは低下の結果である状態、障害および／もしくは疾患の処置および／もしくは防止を指し、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、少なくとも１種の菌体外多糖を含有し、または菌体外多糖は、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株は、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株である。
【００６２】
一実施形態では、皮膚および／または粘膜の炎症は、例えば限定されるものではないが、中でも乾癬、敏感肌、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、おむつ皮膚炎、脂漏性皮膚炎、湿疹、酒さ、座瘡、過剰増殖性皮膚疾患、熱傷、日焼け、爪囲炎、外科手術後、インテンスパルス光治療（ＩＰＬ）による処置後、単色パルス光治療（レーザー）による処置後、化学的剥離剤による処置後、または侵襲性の外部薬剤への過剰曝露後の皮膚炎症、膣粘膜の炎症、口腔粘膜の炎症、歯肉炎、歯周炎、鼻炎、アレルギー性鼻炎によって形成される群から選択される。一実施形態では、コネキシンＣｘ２６および／またはＣｘ３０レベルの増大は、皮膚および／または粘膜の炎症を処置および／または防止する。
【００６３】
一実施形態では、皮膚、粘膜および／または爪の水分補給の欠如または低下の結果である状態、障害および／または疾患は、乾燥症、過角化症、反応性過角化症、手掌および足底過角化症、鶏眼または胼胝、光線角化症、非光線角化症、アトピー性皮膚炎、接触性湿疹、脂漏性皮膚炎、乳児の乳痂、座瘡、酒さ、母斑、魚鱗癬、乾癬、錯角化症、粃糠疹、扁平苔癬、掌蹠角皮症、クーパーローズ、膣内乾燥によって形成される群から選択される。
【００６４】
別の態様では、本発明は、皮膚のコネキシンレベルを増大させる皮膚の処置および／またはケアのための化粧品組成物または皮膚医薬組成物の調製における、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された発酵エキスの使用に言及する。本発明によれば、皮膚のコネキシンレベルの増大は、皮膚ケラチノサイトにおける少なくとも１種のコネキシンの量の増大として理解される。一実施形態では、コネキシンは、コネキシン２６、コネキシン３０、コネキシン３０．３、コネキシン３１、コネキシン３１．１、コネキシン３７、コネキシン４３、コネキシン４６、またはコネキシン５９とも命名されるコネキシン５８である。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、少なくとも１種の菌体外多糖を含有し、皮膚の処置および／またはケアは、皮膚のコネキシンレベルを増大させる。
【００６５】
別の態様では、本発明は、皮膚のコネキシンレベルを増大させる皮膚の処置および／またはケアのための化粧品組成物または皮膚医薬組成物の調製における、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の使用に言及する。本発明によれば、皮膚のコネキシンレベルの増大は、皮膚ケラチノサイトにおける少なくとも１種のコネキシンの量の増大として理解される。一実施形態では、コネキシンは、コネキシン２６、コネキシン３０、コネキシン３０．３、コネキシン３１、コネキシン３１．１、コネキシン３７、コネキシン４３、コネキシン４６、またはコネキシン５９とも命名されるコネキシン５８である。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌体外多糖は、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、皮膚の処置および／またはケアは、皮膚のコネキシンレベルを増大させる。
【００６６】
本発明の追加の一態様は、化粧品または皮膚医薬として有効な量の、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された発酵エキスを投与することを含む、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪を処置および／またはケアする方法に言及する。一実施形態では、発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、発酵エキスは、少なくとも１種の菌体外多糖を含有する。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、少なくとも１種の菌体外多糖を含有する。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株は、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株である。
【００６７】
本発明の追加の一態様は、化粧品または皮膚医薬として有効な量の、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖を投与することを含む、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪を処置および／またはケアする方法に言及する。一実施形態では、菌体外多糖は、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株は、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株である。
【００６８】
一実施形態では、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の処置および／またはケアの方法は、コラーゲン合成を刺激する処置、皮膚老化の処置および／もしくは防止、皮膚皺の処置および／もしくは防止、皮膚の張りを改善するためおよび／もしくは皮膚の張りの喪失を防止するための処置、乾燥皮膚、ひび割れた唇、頭部粃糠疹、乾燥毛髪、脆弱な毛髪および／もしくは爪の処置および／もしくは防止、皮膚、粘膜および／もしくは爪の上皮再形成および／もしくは創傷治癒、皮膚および／もしくは粘膜の炎症の処置および／もしくは防止、または皮膚、粘膜および／もしくは爪の水分補給の欠如もしくは低下の結果である状態、障害および／もしくは疾患の処置および／もしくは防止の方法に言及する。一実施形態では、皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の処置および／またはケアの方法は、コラーゲン合成を刺激する処置、皮膚老化の処置および／もしくは防止、皮膚皺の処置および／もしくは防止、皮膚の張りを改善するためおよび／もしくは皮膚の張りの喪失を防止するための処置、乾燥皮膚、ひび割れた唇、頭部粃糠疹、乾燥毛髪、脆弱な毛髪および／もしくは爪の処置および／もしくは防止、皮膚、粘膜および／もしくは爪の上皮再形成および／もしくは創傷治癒、皮膚および／もしくは粘膜の炎症の処置および／もしくは防止、または皮膚、粘膜および／もしくは爪の水分補給の欠如もしくは低下の結果である状態、障害および／もしくは疾患の処置および／もしくは防止の方法に言及し、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、少なくとも１種の菌体外多糖を含有し、またはＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌体外多糖は、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株は、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株である。
【００６９】
一実施形態では、皮膚、粘膜および／または爪の水分補給の欠如または低下の結果である状態、障害および／または疾患は、乾燥症、過角化症、反応性過角化症、手掌および足底過角化症、鶏眼または胼胝、光線角化症、非光線角化症、アトピー性皮膚炎、接触性湿疹、脂漏性皮膚炎、乳児の乳痂、座瘡、酒さ、母斑、魚鱗癬、乾癬、錯角化症、粃糠疹、扁平苔癬、掌蹠角皮症、クーパーローズ、膣内乾燥によって形成される群から選択される。
【００７０】
別の態様では、本発明は、化粧的にまたは薬学的に有効な量の、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された発酵エキスを投与することを含む、皮膚のコネキシンレベルを増大させる方法に言及する。一実施形態では、発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、発酵エキスは、少なくとも１種の菌体外多糖を含有する。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の発酵エキスは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、少なくとも１種の菌体外多糖を含有する。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株は、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株である。
【００７１】
別の態様では、本発明は、化粧的にまたは薬学的に有効な量の、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖を投与することを含む、皮膚のコネキシンレベルを増大させる方法に言及する。一実施形態では、菌体外多糖は、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する。一実施形態では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株は、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株である。
【００７２】
別の態様では、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された発酵エキスまたは菌体外多糖は、哺乳動物の身体、典型的にはヒトの身体の作用部位と接触させる任意の手段によって、発酵エキスまたは菌体外多糖を含有する組成物の形態で投与することができる。Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された発酵エキスの投与は、局所または経皮によって行われる。一実施形態では、局所または経皮適用は、イオン導入、ソノフォレーシス、エレクトロポレーション、機械的圧力、浸透圧勾配、閉塞治療、マイクロインジェクション、圧力を用いる無針注射、微小電気パッチ、フェイスマスクまたはそれらの任意の組合せによって行われる。
【００７３】
適用または投与の頻度は、各被験体の必要に応じて広く変わり得るが、月１回から１日１０回、週１回から１日４回、週３回から１日３回、または１日１回の、様々な適用または投与が示唆される。
【００７４】
生物学的材料の寄託
【００７５】
Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の株は、Ｂｅｌｇｉａｎ  Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ（ＢＣＣＭ）／Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｕｍ  ｖｏｏｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅ−Ｂａｃｔｅｒｉｅｖｅｒｚａｍｅｌｉｎｇ（ＬＭＧ）（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｇｈｅｎｔ、Ｋ．Ｌ．Ｌｅｄｅｇａｎｃｋｓｔｒａａｔ  ３５、９０００  Ｇｈｅｎｔ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）において、ブダペスト条約の条件下で寄託された。寄託は、２０１４年１０月１０日に行われ、寄託番号はＬＭＧ  Ｐ−２８５７１であった。
【００７６】
［実施例］
【００７７】
上に言及した文書のそれぞれは、上で具体的に列挙されていても列挙されていなくても、従来の任意の特許出願文書を含む参照によって本明細書に組み込まれ、それから優先権が特許請求される。いかなる文書への言及も、このような文書が従来技術とみなされ、または任意の管轄の当業者の一般知識を構成すると認めるものではない。実施例またはそれ以外で明確に示されている場合を除き、材料の量、反応条件、分子量、炭素原子数等を特定する本記載におけるすべての数量は、近似と理解されるべきであり、すなわち示した値の±５％、±３％、±１％、±０．１％、または±０．０１％で変動する。本明細書に記載の量、範囲および比の上限および下限は、独立に組み合わせることができると理解されたい。同様に、本明細書に記載の技術の要素ごとの範囲および量は、その他の要素のいずれかの範囲または量と一緒に使用することができる。
【００７８】
（実施例１）
寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって分泌される菌体外多糖を得る。
【００７９】
Ａ）寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株の培養プロセス。
寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株を、発酵槽中、３２℃およびｐＨ７．０で、水と、炭素供給源としての１０ｇ／Ｌのグルコースと、炭素および窒素供給源としての３ｇ／Ｌの酵母エキスおよび３ｇ／Ｌの麦芽エキスおよび５ｇ／Ｌのエンドウマメペプトンと、９．８ｇ／ＬのＮａＣｌ、１．７ｇ／Ｌの塩化マグネシウム六水和物、２．５ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム七水和物、０．２５ｇ／Ｌの塩化カリウム、０．０５ｇ／Ｌの無水塩化カルシウム、０．０５ｇ／Ｌの重炭酸ナトリウム、臭化ナトリウムおよび塩化鉄の微量の塩を含有する塩溶液とを含有する培養培地で培養する。それを、指数関数的増殖状態にある前培養物からの、５２０ｎｍにおける吸光度で０．２吸光度単位を接種し、発酵継続時間を、およそ４０時間の培養まで延長する。培養物に、十分な空気を供給し、撹拌速度３００〜６００ｒｐｍで撹拌する。
【００８０】
Ｂ）寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１で寄託されたＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株の菌体外多糖の精製。
【００８１】
細菌を、実施例１ａ）に記載の、菌体外多糖を含有する得られた発酵ブロスから、１８，０００ｇで１時間遠心分離することによって分離する。細菌の除去を、最終的な細孔径０．２０μｍで濾過することによって完了する。その後、濾過したブロスを、１０，０００Ｄａカットの膜で透析し、菌体外多糖（expolysaccharide）を、膜によって保持する。透析された菌体外多糖を凍結乾燥させることによって、精製の仕上げを行う。
【００８２】
（実施例２）
寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株から排出された菌体外多糖の物理化学的特徴付け。
【００８３】
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）および赤外分光法（ＩＲ）分析（屈折率検出器）を、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の物理化学的特徴付けを、実施例１に従って得られた菌体外多糖の単糖内容物について実施する。
【００８４】
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）および赤外分光法（ＩＲ）分析
【００８５】
ＨＰＬＣ−ＩＲクロマトグラムを行うために、試料を、実施例１に従って得られた菌体外多糖から、それらを水で２ｍｇ／ｍＬに希釈し、０．２μｍポリエーテルスルホンフィルターで濾過して調製する。ＨＰＬＣ分析を、ＬＣ２０Ａ  ＳＨＩＭＡＤＺＵクロマトグラフィー装置により注入試料１００μＬを使用して行う。使用されるクロマトグラフィーカラムは、ＰＬ  ＡＱＵＡＧＥＬ−ＯＨ  ８μｍ  ＡＱＵＥＯＵＳ  ＳＥＣカラムであり、検出器は、ＲＩＤ−１０Ａ屈折率検出器（島津）である。使用される溶媒は、水中０．１Ｍ酢酸ナトリウムであり、流速は０．８ｍｌ／分である。ＰＬ  ＡＱＵＡＧＥＬ−ＯＨ  ８μｍ  ＡＱＵＥＯＵＳ  ＳＥＣカラムは、中性、アニオン性およびカチオン性の水溶性ポリマーに適用される、化合物のＭＷに応じて化合物を分離する能力を持つパッケージを備えた水性サイズ排除クロマトグラフィーのためのカラムであり、粒径８μｍ、細孔径５０Åおよび長さ／内径３００ｍｍ×７．５ｍｍを有する。
【００８６】
分析結果は、保持時間５〜８分を示す。
【００８７】
単糖の分析
【００８８】
固体から単糖分析を実施するために、Montreuilら、Glycoproteins.  In  Carbohydrate  analysis:  a  practical  approach、１９８６年、Chaplin  et  Kennedy編、I.R.L  Press、Oxford、Washington  D.C.、１４３〜２０４頁によって後に改変されたKamerlingら、Biochem.  J.、１９７５年、１５１巻、４９１〜４９５頁により記載された方法に従う。加水分解された単糖の誘導体化を、文献の方法に従って行う［Rojas  Escuderoら、J.  Chromatogr.  A.、２００４年、１０２７巻：１１７〜１２０頁］。ＺＥＢＲＯＮ  ＺＢ−１７０１（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）カラム、注入器温度２５０℃、検出器温度２８０℃、およびオーブン温度勾配プログラム１６０℃〜２５０℃を、クロマトグラフィー分析で使用する。
【００８９】
実施例１に従って得られた菌体外多糖の分析によれば、７５％のグルコース、１３％のマンノース、２％のラムノース、２％のＤ−グルコサミン、および７％のガラクトース、および１％のフコースという結果である。
【００９０】
実施例１に従う菌体外多糖の培養および調製の２回目の反復では、分析から得られた百分率は、５２％のグルコース、１０％のマンノース、１２％のラムノース、２０％のＤ−グルコサミン、６％のガラクトース、１％のフコース、および１％のグルクロン酸である。
【００９１】
（実施例３）
Ｓｃｒａｐｅ−Ｌｏａｄｉｎｇ染料移動によるヒトケラチノサイトＨａＣａＴ細胞株における細隙結合部細胞間連絡の増大の研究。
【００９２】
細胞の細隙結合部細胞間連絡（ＧＪＩＣ）を、el-Fouly  MHら、［「Scrape-loading  and  dye  transfer.  A  rapid  and  simple  technique  to  study  gap  junctional  intercellular  communication.」、Exp.  Cell  Res.、１９８７年２月；１６８巻（２号）：４２２〜３０頁］によって記載のＳｃｒａｐｅ−Ｌｏａｄｉｎｇ染料移動（ＳＬＤＴ）技術にいくらか改変を加えたものによって評価する。実施例１に従って得られた寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の、ＧＪＩＣに対する効果を、ヒトケラチノサイトＨａＣａＴ細胞株で研究する。
【００９３】
ＨａＣａｔ細胞（ＤＫＦＺ）を、２４ウェルプレートに１．０×１０５個の細胞／ウェルで播種し、培養培地（１０％ウシ胎児血清を補充した、ＤＭＥＭ、高グルコース、ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）補充物）（Ｇｉｂｃｏ（登録商標））中、３７℃および５％ＣＯ２で２４時間インキュベートする。次に、細胞を、実施例１に従って得られた寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の、培養培地（１０％ウシ胎児血清を補充した、ＤＭＥＭ、高グルコース、ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）補充物）（Ｇｉｂｃｏ（登録商標））（基本条件として）中０．５ｍｇ／ｍｌを用いて、３７℃および５％ＣＯ２において２４時間、２４時間にわたり処理する。すべての処理を、条件１つ当たり２つのウェルで行う。インキュベーション期間の最後に、細胞を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２回すすぐ。ＰＢＳを除去し、ルシファーイエロー（ＬＹ）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）（０．５ｍｇ／ｍｌ）、細隙結合部透過性トレーサー、および細隙結合部非透過性化合物ローダミンデキストラン（ＲｈＤ）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）（０．５ｍｇ／ｍｌ）を含有するＰＢＳ４００μｌを、ウェルに添加する。小刀を使用して、細胞単層にわたって１本の擦過線を作成する。細胞を、暗所中、室温で３０分間インキュベートして、染料移動を可能にする。次に、細胞を、ＰＢＳで４回すすぎ、室温において４％（ｗ／ｖ）パラホルムアルデヒドで３０分間固定する。蛍光色素が、ある特定時間中に擦過線から拡散する距離は、培養物内のＧＪＩＣレベルを示している。細隙結合部による染料移動は、蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ）を用いて、１０倍対物レンズを使用して観測する。Ｌｕｃｉｆｅｒイエロー染料の移動距離は、掻爬部分の細胞層から、視覚的に検出可能な染料の前方の端部までを測定する。４回の独立したアッセイを２つ組で実施する（条件１つ当たり２つのウェル）。撮影した写真を、画像分析ソフトウェア（Ｚｅｎ  ｌｉｔｅ  ２０１２（青色版）、Ｚｅｉｓｓ）を使用して分析する。表１は、４回の独立した実験の平均値を示す。
【表１】
0006755863.tif 000002
【００９４】
ＳＬＤＴアッセイでは、本発明の菌体外多糖は、蛍光色素が基本条件（培地）に対して拡散する距離の増大を示し、このことは、ＨａＣａｔ細胞におけるＧＪＩＣを有効に改善することを実証している。
【００９５】
（実施例４）
ヒト細隙結合部ＲＴ２ＰＣＲアレイを使用する、成人のヒト上皮ケラチノサイトにおけるＲＮＡ発現のモジュレーションの研究。
【００９６】
ＲＴ−ＰＣＲは、ｍＲＮＡ発現レベルを検出するための高感度な方法であり、特異的な細隙結合部の発現を活性化する化合物を同定するのに有用な手段であり得る。潜在的な非細胞傷害性候補を、成人のヒト上皮ケラチノサイト（ＨＥＫａ）（Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）において、ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ（ＢｉｏＲａｄ）と共に使用するためのヒト細隙結合部Ｐｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄ  ９６ウェルパネルを使用して、細隙結合部（ＧＪ）発現の活性化およびＲＮＡ発現のモジュレーションについて評価する。このキットにより、細隙結合部の構成成分、相互作用物質、および調節因子をコードする８４の非常に重要な遺伝子と、３つのハウスキーピング遺伝子、および５つの対照の発現プロファイルを研究する。細隙結合部の構成成分および調節因子の発現プロファイルによって、細隙結合部媒介性細胞生物学の背後にある分子機序をより良好に理解することができる。リアルタイムＰＣＲを使用して、実施例１に従って得られた寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の０．５ｍｇ／ｍｌによって誘導されたＲＮＡプロファイルの特異的パターンを、ＨＥＫａにおける未処理細胞（陰性対照）の基本レベルと比較して分析する。
【００９７】
ＨＥＫａ細胞を、６ウェルプレートにおいて、５．０×１０５個の細胞／ウェルで播種し、規定の成長補充物（ＥＤＧＲ）を有するＥｐｉｌｉｆｅ（Ｇｉｂｃｏ）中、３７℃および５％ＣＯ２で２４時間インキュベートする。２４時間後、培地を除去し、細胞を、実施例１に従って得られた寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の０．５ｍｇ／ｍｌと共にインキュベートし、基礎対照として、ＨＥＫａ細胞の２つのウェルを、培地だけと共にインキュベートする（規定の成長補充物（ＥＤＧＲ）を含むＥｐｉｌｉｆｅ（Ｇｉｂｃｏ）。インキュベーション後２４時間で（24  hours  after  incubation）、細胞を、ウェル中で直接溶解させ、ＲＮＡを抽出し、ＱｉａｇｅｎのＲＮｅａｓｙＰｌｕｓ  Ｍｉｎｉキットを用いて、各レプリカおよび各条件から精製する。溶解した細胞をホモゲナイズし、ＲＮａｓｅを不活化する。ゲノムＤＮＡを、ｇＤＮＡ  Ｅｌｉｍｉｎａｔｏｒスピンカラムを使用することによって試料から除去する。次に、試料を、特別なＲＮＡ結合カラムを通過させ、数回の微量遠心分離洗浄を行って、夾雑物および不純物を排除した後、精製されたたＲＮＡを、超純水５０μｌで溶出する。ＲＮＡ溶出の後、ＲＮＡ試料の定量および純度分析を、暗順応計（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）を用いて実施する。試料ごとに、高品質ＲＮＡ７．５μｇを、最終体積２０μｌでｉＳｃｒｉｐｔ  ａｄｖａｎｃｅｄ（ＢｉｏＲａｄ）を用いて逆転写する（retro-transcribed）。完全な反応混合物を、サーマルサイクラー（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）中、４２℃で３０分間インキュベートし、反応は８５℃において５分間で停止する。相補的ＤＮＡを、リアルタイムＰＣＲサーモサイクラー（ＢｉｏＲａｄ）で、ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ（ＢｉｏＲａｄ）と共に使用するためのヒト細隙結合部Ｐｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄ  ９６ウェルパネルにおいて、ＳＹＢＲｇｒｅｅｎ  ｓｕｐｅｒｍｉｘ（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、ｑＰＣＲによって増幅する。ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎは、二本鎖ＤＮＡ分子に結合して、蛍光を発光し、この蛍光が定量され、その蛍光強度は、ＰＣＲ反応における生成物の量に比例する。ＢｉｏＲａｄ  ＣＦＸ９６機器のサイクリング条件は、９５℃で３分間、その後９５℃で５秒の変性、６０℃で３０秒間のアニーリングおよび伸長の４０サイクルである。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ）、ＴＢＰ（ＴＡＴＡボックス結合タンパク質）およびＨＲＰＴ１（ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ１）を、内在性対照として使用する。試料遺伝子および参照遺伝子の発現に対する倍数変化を、ＣＦＸ  Ｍａｎａｇｅｒソフトウェア（ＢｉｏＲａｄ）を使用し、正規化発現（ΔΔ（Ｃｔ））法を使用してデフォルト閾値を用いて算出する。
【００９８】
実施例１による菌体外多糖について得られた結果を、次の表に示す。
【表２】
0006755863.tif 000003
【表３】
0006755863.tif 000004
【表４】
0006755863.tif 000005
【表５】
0006755863.tif 000006
【表６】
0006755863.tif 000007
【００９９】
実施例１による菌体外多糖について得られた結果は、この菌体外多糖が、コネキシン合成、膜および集合体へのヘミチャネルの輸送、ならびに細隙結合部の代謝回転およびモジュレーションなどの、ＨＥＫａにおける異なるレベルでの細胞間連絡に関与する遺伝子の発現を増大することを示している。
【０１００】
（実施例５）
上皮−真皮細胞−細胞連絡に対する、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の効果
【０１０１】
老化は、細胞間の連絡プロセスを枯渇させる。線維芽細胞とケラチノサイトの間のクロストークは、皮膚の再生、修復および成長に必須であり、成長因子およびサイトカインなどのいくつかのメッセンジャーの活性を必要とする。ケラチノサイトは、成長因子の主な供給源であり、これはケラチノサイト自体だけでなく、パラクリンシグナル伝達を介して線維芽細胞も刺激することができ、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の分子構成に大幅に影響を及ぼし得る（Werner  S、Krieg  T、Smola  H.  Keratinocyte-fibroblast  interactions  in  wound  healing.  J  Invest  Dermatol.  ２００７年、５月；１２７巻（５号）：９９８〜１００８頁）。この研究では、実施例１に従って得られた寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の、５４歳のドナーのケラチノサイト−線維芽細胞連絡に対する効果を評価し、より若年（３９歳）のドナーのケラチノサイト−線維芽細胞連絡と比較する。５４歳のドナーの線維芽細胞を、候補の菌体外多糖で最初に処理されるケラチノサイトの上清と共にインキュベートする。３９歳のドナーおよび５４歳のドナーの線維芽細胞におけるマトリックスタンパク質の発現を、定量的ＰＣＲによって分析する。
【０１０２】
３７℃において５％ＣＯ２加湿空気中で７日間、３９歳のドナーおよび５４歳のドナーのヒト上皮ケラチノサイト、（ＨＥＫ）細胞（Ｃｅｌｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）を、７５ｃｍ２のフラスコ中、ＥＤＧＳを補充したＥｐｉｌｉｆｅ（Ｇｉｂｃｏ）中３〜５×１０３個の細胞／ｃｍ２の密度で成長させ、３９歳のドナーおよび５４歳のドナーのヒト皮膚線維芽細胞（ＨＤＦ）細胞（Ｃｅｌｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）を、７５ｃｍ２のフラスコ中、ＬＳＧＳを補充した１０６の培地中７〜８×１０３個の細胞／ｃｍ２の密度で成長させる。この時間後、ＨＥＫを分割し、次に処理のために播種する。３９歳および５４歳のドナーのＨＥＫ細胞を、６ウェルプレートにおいて、６×１０５個の細胞／ウェルの密度で播種する。３７℃において５％ＣＯ２加湿空気中で２４時間インキュベートした後、培地を除去する。５４歳のドナーのＨＥＫ細胞を、新鮮な培養培地中、実施例１に従って得られた寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の０．０２ｍｇ／ｍｌと共にインキュベートする。基礎対照として、５４歳のドナーのＨＥＫ細胞の３つのウェルを、培地だけと共にインキュベートする。基本陽性として、３９歳のドナーのＨＥＫ細胞の３つのウェルを、培地だけと共にインキュベートする。インキュベーション条件は、３７℃および５％ＣＯ２で２４時間である。すべての処理を、培養条件１セット当たり３つのウェルで行う。ＨＤＦ細胞を、２５ｃｍ２のフラスコ中、１．７〜２．４×１０６個の細胞／ウェルの密度で播種する。３７℃において５％ＣＯ２加湿空気中で２４時間インキュベートした後、培地を除去し、ＨＤＦ細胞を、ケラチノサイト培養物の上清と共にインキュベートする。
【０１０３】
インキュベーション後２４時間で、ＨＤＦを、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）に記載のプロトコールに従って製造者のプロトコールにより、ウェル中で直接溶解させる。溶解した細胞をホモゲナイズし、ＲＮａｓｅを不活化する。ゲノムＤＮＡを、ｇＤＮＡ  Ｅｌｉｍｉｎａｔｏｒスピンカラムを使用することによって試料から除去する。次に、試料を、特別なＲＮＡ結合カラムを通過させ、数回の微量遠心分離洗浄を行って、夾雑物および不純物を排除した後、精製されたＲＮＡを、超純水５０μｌで溶出する。ＲＮＡ溶出の後、ＲＮＡ試料の定量および純度分析を、暗順応計（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）を用いて実施する。高品質ＲＮＡ３μｇを、最終体積２０μｌでｉＳｃｒｉｐｔ  ａｄｖａｎｃｅｄ（ＢｉｏＲａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いて逆転写する。完全な反応ミックスを、サーマルサイクラー（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）中、４２℃で３０分間インキュベートし、反応は８５℃において５分間で停止する。相補的ＤＮＡを、リアルタイムＰＣＲサーモサイクラー（ＢｉｏＲａｄ）で、ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ（ＢｉｏＲａｄ）と共に使用するためのカスタマイズされた細胞外マトリックスの９６ウェルパネルにおいて、ＳＹＢＲｇｒｅｅｎ  ｓｕｐｅｒｍｉｘ（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、ｑＰＣＲによって増幅する。ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎは、二本鎖ＤＮＡ分子に結合して、蛍光を発光し、その蛍光が定量され、それはＰＣＲ反応における生成物の量に比例する。ＢｉｏＲａｄ  ＣＦＸ９６機器のサイクリング条件は、９５℃で３分間、その後９５℃で５秒の変性、６０℃で３０秒間のアニーリングおよび伸長の４０サイクルである。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ）、ＴＢＰ（ＴＡＴＡボックス結合タンパク質）およびＨＲＰＴ１（ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ１）を、内在性対照として使用する。試料遺伝子および参照遺伝子の発現に対する倍数変化を、ＣＦＸ  Ｍａｎａｇｅｒソフトウェア（ＢｉｏＲａｄ）を使用し、正規化発現（ΔΔ（Ｃｔ））法を使用してデフォルト閾値を用いて算出する。
【０１０４】
５４歳のドナーのＨＤＦ基礎対照（１００％）に対して得られた結果を、表７に示す。値は、５回の独立した実験の平均を表す。
【表７】
0006755863.tif 000008
【０１０５】
結果は、本発明の菌体外多糖が、より高齢のドナーの線維芽細胞における、細胞外マトリックスの合成に関与する遺伝子を上方調節し、細胞外マトリックスの分解に関与する遺伝子を下方調節することを示している。
【０１０６】
（実施例６）
免疫組織化学的アッセイを使用する、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖を用いる処理による、再構築されたヒト上皮上のコネキシンタンパク質の発現レベルの誘導。
【０１０７】
細隙結合部（ＧＪ）は、コネキシン（Ｃｘ）と呼ばれる内在性膜タンパク質によって形成されたチャネルである。上皮区画における、ＧＪに関係する１つの老化誘導性変化は、Ｃｘの下方調節である。ヒトケラチノサイトにおけるコネキシンタンパク質、Ｃｘ３７、Ｃｘ３０．３、Ｃｘ３０およびＣｘ５９の発現を研究するために、本発明者らは、ｉｎ  ｓｉｔｕでのヒト上皮の組織学的組織化（histological  organization）をｉｎ  ｖｉｔｒｏで再現する、３次元培養系の再構築されたヒト上皮組織（ＲＨＥ）を使用する。
【０１０８】
ＳｋｉｎＥｔｈｉｃヒト組織モデル（ＥＰＩＳＫＩＮ）を、到着直後にマルチウェルプレートのアガロース栄養溶液から取り出し、各ウェルに予めＳｋｉｎＥｔｈｉｃ成長培地（ＥＰＩＳＫＩＮ）を充填しておいた６ウェルプレートに入れる。３７℃、５％ＣＯ２で終夜インキュベートした後、ＲＨＥを、実施例１に従って得られた寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の０．０２ｍｇ／ｍｌ、および培地だけ（基本条件）で、３７℃および５％ＣＯ２で２４時間処理する。２４時間の処理後、組織モデルを４℃で３時間、４％パラホルムアルデヒド（Ｓｉｇｍａ）で固定し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（Ｓｉｇｍａ）で４回洗浄する。次に、試料を、スクロース勾配０．６Ｍ〜２．３Ｍで処理し、室温で３時間インキュベートする。最後のインキュベーションの後、組織モデルを、Ｔｉｓｓｕｅ  Ｔｅｃｋ  ＯＣＴ化合物（Ａｎａｍｅ）に包埋する。厚さ約１０μｍの凍結組織切片を、クライオミクロトーム（Ｌｅｉｃａ、ＣＭ３０５０）を使用して切り、被覆スライド上に収集し、最後に−２０℃で保存する。
【０１０９】
特異的コネキシンの発現を、免疫組織化学的検査によって特異的一次抗体および蛍光標識二次抗体を用いて評価する。解凍したスライドを、室温で１０分間、アセトンの凍結溶液で固定し、次にＰＢＳですすぐ。非特異的部位を、１０％正常ヤギ血清で室温において３０分間飽和させる。ＰＢＳ中０．２％Ｔｗｅｅｎですすいだ後、スライドを、一次抗体（抗コネキシン３７／ＧＪＡ４、３０．３／ＧＪＢ４、５９／ＧＪＡ１０抗体（Ａｂｃａｍ）、ウサギ抗コネキシン３０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（ＰＢＳ中１０％ヤギ血清で希釈）と共に、加湿チャンバ内で室温において２時間インキュベートする。インキュベーションの最後に、スライドをＰＢＳ中０．２％Ｔｗｅｅｎで洗浄し、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８ヤギ抗−ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、緑色蛍光発光染料）と共に、暗い加湿チャンバ内で室温において１時間インキュベートする。ＰＢＳですすいだ後、切片を、Ｄａｐｉを含有するｐｒｏｌｏｎｇ  Ｇｏｌｄ退色防止（antifade）試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標本にする。
【０１１０】
顕微鏡観察を、Ｚｅｉｓｓ蛍光顕微鏡法を用いて実施し、各条件の写真を、備え付けのカメラで撮影する。コネキシンの各蛍光画像から、ＩＤ値（総密度）を定量し、対照によって正規化する。各条件の少なくとも４つの代表的画像を収集し、Ｉｍａｇｅｎ  Ｊソフトウェアを用いて分析する。平均は、１回または２回の独立した実験のデータを表す。
【０１１１】
基本条件（１００％）に対して得られた結果を、表８に示す。
【表８】
0006755863.tif 000009
【０１１２】
結果は、本発明の菌体外多糖が、再構築されたヒト上皮のケラチノサイトにおけるコネキシンタンパク質の発現の有意な増大を、試験濃度で誘導することを示している。
【０１１３】
（実施例７）
寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖を用いる処理による、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ閉経モデルにおけるコネキシン発現レベルの回復
【０１１４】
皮膚老化は、外因性および内因性因子によって、中でも内分泌腺機能の低下、および循環ホルモンレベルの低下によって生成する。閉経は、低エストロゲン症（hypoestrogenism）を引き起こし、皮膚の加齢性劣化を加速する。多くの女性では、閉経後、皮膚老化の急速な開始が検出され、皮膚は、コラーゲン含量の低下、弾力の低下、皺の増加および乾燥の増進と共により薄くなる。閉経後の女性では、皮膚の厚さは、関連するコラーゲン含量の低下（閉経後１年当たり２％）と共に、閉経後１年当たり１．１３％低下する。細隙結合部細胞間連絡（ＧＪＩＣ）は、細胞成長、分化、恒常性維持および形態形成の制御において重要な役割を演じていると考えられる。ＧＪＩＣは、成長因子、癌遺伝子、Ｃａ２＋、ｐＨおよびホルモンを含む様々な因子によって調節される。ホルモンは、ＧＪＩＣを介して細胞内連絡の調節に関与する。この研究の目的は、細隙結合部細胞間連絡の低下と、ホルモンによる皮膚老化との間の関係を調査することである。したがって、本発明者らは、ケラチノサイトのｉｎ  ｖｉｔｒｏ閉経モデルを、ケラチノサイトを閉経期の女性のホルモンレベルで処理することによって開発した。非閉経期の女性のホルモンレベルで処理したケラチノサイトを、基礎対照として使用した。この研究では、実施例１に従って得られた寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の、閉経期のケラチノサイトにおけるコネキシンレベルを回復する有効性を、ＲＴ−ｑＰＣＲアレイ系によって評価する。
【０１１５】
１９歳のドナーのヒト上皮ケラチノサイトＨＥＫ細胞（Ｃｅｌｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）を、３７℃において５％ＣＯ２加湿空気中で７日間、７５ｃｍ２のフラスコ中、１０％ＥＤＧＳを補充したＥｐｉｌｉｆｅ（Ｇｉｂｃｏ）中３〜５×１０３個の細胞／ｃｍ２の密度で成長させる。この時間後、細胞を分割し、次に処理のために播種する。ＨＥＫ細胞を、６ウェルプレートにおいて、０．１％ＥＤＧＳを補充したＥｐｉｌｉｆｅ中、６〜７．５×１０５個の細胞／ウェルの密度で播種する。３７℃、５％ＣＯ２加湿空気中で２４時間インキュベートした後、培地を除去する。次に、閉経状態を刺激するために、ケラチノサイトを、閉経期のホルモン濃度および実施例１に従って得られた寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の０．０２ｍｇ／ｍｌと共に、ならびに閉経期ホルモン濃度のみの培地と共にインキュベートする。これらの細胞の２つのウェルを、基礎対照としての非閉経期ホルモン濃度と共にインキュベートする。インキュベーション条件は、３７℃および５％ＣＯ２で２４時間である。すべての処理を、培養条件１セット当たり２つのウェルで行う。
【０１１６】
非閉経期および閉経期状態におけるホルモン濃度を、表９に示す。
【表９】
0006755863.tif 000010
【０１１７】
インキュベーション後２４時間で、細胞を、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）に記載のプロトコールに従って製造者のプロトコールにより、ウェル中で直接溶解させる。溶解した細胞をホモゲナイズし、ＲＮａｓｅを不活化する。ゲノムＤＮＡを、ｇＤＮＡ  Ｅｌｉｍｉｎａｔｏｒスピンカラムを使用することによって試料から除去する。次に、試料を、特別なＲＮＡ結合カラムを通過させ、数回の微量遠心分離洗浄を行って、夾雑物および不純物を排除した後、精製されたＲＮＡを、超純水５０μｌで溶出する。ＲＮＡ溶出の後、ＲＮＡ試料の定量および純度分析を、暗順応計（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）を用いて実施する。高品質ＲＮＡ３μｇを、最終体積２０μｌでｉＳｃｒｉｐｔ  ａｄｖａｎｃｅｄ（ＢｉｏＲａｄ）を用いて逆転写する。完全な反応ミックスを、サーマルサイクラー（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）中、４２℃で３０分間インキュベートし、反応は８５℃において５分間で停止する。相補的ＤＮＡを、リアルタイムＰＣＲサーモサイクラー（ＢｉｏＲａｄ）で、ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ（ＢｉｏＲａｄ）と共に使用するためのヒト細隙結合部Ｐｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄ  ９６ウェルパネルにおいて、ＳＹＢＲｇｒｅｅｎ  ｓｕｐｅｒｍｉｘ（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、ｑＰＣＲによって増幅する。ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎは、二本鎖ＤＮＡ分子に結合して、蛍光を発光し、この蛍光が定量され、それはＰＣＲ反応における生成物の量に比例する。ＢｉｏＲａｄ  ＣＦＸ９６機器のサイクリング条件は、９５℃で３分間、その後９５℃で５秒の変性４０サイクル、６０℃で３０秒間のアニーリングおよび伸長である。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ）、ＴＢＰ（ＴＡＴＡボックス結合タンパク質）およびＨＲＰＴ１（ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ１）を、内在性対照として使用する。試料遺伝子および参照遺伝子の発現に対する倍数変化を、ＣＦＸ  Ｍａｎａｇｅｒソフトウェア（ＢｉｏＲａｄ）を使用し、正規化発現（ΔΔ（Ｃｔ））法を使用してデフォルト閾値を用いて算出する。
【０１１８】
非閉経期状態のＨＥＫ細胞（１００％）に対して得られた結果を、表１０に示す。値は、５回の独立した実験の平均を表す。
【表１０】
0006755863.tif 000011
【０１１９】
結果は、本発明の菌体外多糖が、閉経期のケラチノサイトにおけるコネキシンのレベルを回復することを示している。
【０１２０】
（実施例８）
寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の処理による、より高齢のケラチノサイトにおけるコネキシン発現レベルの回復
【０１２１】
老化は、皮膚の連絡網の一部を喪失した皮膚内に蓄積した損傷の結果である。上皮区画における１つの老化誘導性変化は、細隙結合部、すなわちイオン交換することができる２つの隣接細胞間の膜貫通チャネルに関する。実際、それらの構成成分であるコネキシン（Ｃｘ）の発現は、老化中に下方調節される。したがって、この研究の目的は、ＲＴ−ｑＰＣＲアレイ系によって、より高齢のケラチノサイトにおけるコネキシン発現を、より若年のケラチノサイトと比較して評価することによって、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の抗老化有効性を調査することである。
【０１２２】
ヒト上皮ケラチノサイトであるＨＥＫ細胞（Ｃｅｌｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）を、３７℃において５％ＣＯ２加湿空気中で７日間、７５ｃｍ２のフラスコ中、ＥＤＧＳを補充したＥｐｉｌｉｆｅ（Ｇｉｂｃｏ）中２〜４×１０５個の細胞／フラスコの密度で成長させる。この時間後、細胞を分割し、次に処理のために播種する。３９歳のドナーおよび５４歳のドナーのＨＥＫ細胞を、６ウェルプレートにおいて、培養培地中６×１０５個の細胞／ウェルの密度で播種する。３７℃において５％ＣＯ２加湿空気中で２４時間インキュベートした後、培地を除去する。５４歳のドナーのケラチノサイトを、新鮮な培養培地中、実施例１に従って得られた寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の０．０２ｍｇ／ｍｌと共にインキュベートする。これらの細胞の２つのウェルを、基礎対照としての新鮮な培地と共にインキュベートする。陽性対照として、３９歳のドナーのケラチノサイトの２つのウェルを、新鮮な培地と共にインキュベートする。インキュベーション条件は、３７℃および５％ＣＯ２で２４時間である。すべての処理を、培養条件１セット当たり２つのウェルで行う。
【０１２３】
インキュベーション後２４時間で、細胞を、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）に記載のプロトコールに従って製造者のプロトコールにより、ウェル中で直接溶解させる。溶解した細胞をホモゲナイズし、ＲＮａｓｅを不活化する。ゲノムＤＮＡを、ｇＤＮＡ  Ｅｌｉｍｉｎａｔｏｒスピンカラムを使用することによって試料から除去する。次に、試料を、特別なＲＮＡ結合カラムを通過させ、数回の微量遠心分離洗浄を行って、夾雑物および不純物を排除した後、精製されたＲＮＡを、超純水５０μｌで溶出する。ＲＮＡ溶出の後、ＲＮＡ試料の定量および純度分析を、暗順応計（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）を用いて実施する。高品質ＲＮＡ３μｇを、最終体積２０μｌでｉＳｃｒｉｐｔ  ａｄｖａｎｃｅｄ（ＢｉｏＲａｄ）を用いて逆転写する。完全な反応ミックスを、サーマルサイクラー（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）中、４２℃で３０分間インキュベートし、反応は８５℃において５分間で停止する。相補的ＤＮＡを、リアルタイムＰＣＲサーモサイクラー（ＢｉｏＲａｄ）で、ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ（ＢｉｏＲａｄ）と共に使用するためのヒト細隙結合部Ｐｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄ  ９６ウェルパネルにおいて、ＳＹＢＲｇｒｅｅｎ  ｓｕｐｅｒｍｉｘ（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、ｑＰＣＲによって増幅する。ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎは、二本鎖ＤＮＡ分子に結合して、蛍光を発光し、この蛍光は定量され、それはＰＣＲ反応における生成物の量に比例する。ＢｉｏＲａｄ  ＣＦＸ９６機器のサイクリング条件は、９５℃で３分間、その後９５℃で５秒の変性４０サイクル、６０℃で３０秒間のアニーリングおよび伸長である。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ）、ＴＢＰ（ＴＡＴＡボックス結合タンパク質）およびＨＲＰＴ１（ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ１）を、内在性対照として使用する。試料遺伝子および参照遺伝子の発現に対する倍数変化を、ＣＦＸ  Ｍａｎａｇｅｒソフトウェア（ＢｉｏＲａｄ）を使用し、正規化発現（ΔΔ（Ｃｔ））法を使用してデフォルト閾値を用いて算出する。
【０１２４】
５４歳のドナーのＨＥＫ基礎対照（１００％）に対して得られた結果を、表１１に示す。値は、４回の独立した実験の平均を表す。
【表１１】
0006755863.tif 000012
【０１２５】
結果は、本発明の菌体外多糖が、５４歳のドナーのケラチノサイトにおけるコネキシン発現を、より若年の皮膚細胞に見出されるコネキシン発現まで回復することを示している。
【０１２６】
（実施例９）
免疫組織化学的アッセイを使用する、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖を用いる処理による、再構築されたヒト上皮組織のｉｎ  ｖｉｔｒｏ閉経モデルにおけるコネキシンタンパク質発現レベルの回復。
【０１２７】
皮膚老化は、外因性および内因性因子によって、中でも内分泌腺機能の低下、および循環ホルモンレベルの低下によって生成する。閉経は、低エストロゲン症を引き起こし、皮膚の加齢性劣化を加速する。多くの女性では、閉経後、皮膚老化の急速な開始が検出され、皮膚は、コラーゲン含量の低下、弾力の低下、皺の増加および乾燥の増進と共により薄くなる。閉経後の女性では、皮膚の厚さは、関連するコラーゲン含量の低下（閉経後１年当たり２％）と共に、閉経後１年当たり１．１３％低下する。細隙結合部細胞間連絡（ＧＪＩＣ）は、細胞成長、分化、恒常性維持および形態形成の制御において重要な役割を演じていると考えられる。ＧＪＩＣは、成長因子、癌遺伝子、Ｃａ２＋、ｐＨおよびホルモンを含む様々な因子によって調節される。ホルモンは、ＧＪＩＣを介して細胞内連絡の調節に関与する。この研究の目的は、細隙結合部細胞間連絡の低下と、ホルモンによる皮膚老化との間の関係を調査することであった。本発明者らは、閉経期の女性のホルモンレベルで処理した、再構築されたヒト上皮組織（ＲＨＥ）におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ閉経モデルを開発した。比較として、非閉経期の女性のホルモンレベルで処理した、再構築されたヒト上皮組織（ＲＨＥ）を使用する。この研究では、実施例１に従って得られた寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の、コネキシンタンパク質、Ｃｘ５９およびＣｘ３７のレベルを回復する有効性を、免疫組織化学的検査によって評価する。
【０１２８】
ＳｋｉｎＥｔｈｉｃヒト組織モデル（ＥＰＩＳＫＩＮ）を、到着直後にマルチウェルプレートのアガロース栄養溶液から取り出し、各ウェルに予めＳｋｉｎＥｔｈｉｃ成長培地（ＥＰＩＳＫＩＮ）を充填しておいた６ウェルプレートに入れる。３７℃、５％ＣＯ２で終夜インキュベートした後、培地を除去する。次に、閉経状態を刺激するために、ＲＨＥを、閉経期のホルモン濃度および実施例１に従って得られた寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の０．０２ｍｇ／ｍｌと共に、ならびに閉経期のホルモン濃度のみの培地と共にインキュベートする。ＲＨＥを、陽性対照としての非閉経期のホルモン濃度と共にインキュベートする。インキュベーション条件は、３７℃および５％ＣＯ２で２４時間である。ＲＨＥ試料を、Ｔｉｓｓｕｅ  Ｔｅｃｋ  ＯＣＴ化合物（Ａｎａｍｅ）に包埋する。すべての処理を、培養条件１セット当たり２つのＲＨＥ試料で行う。
【０１２９】
非閉経期および閉経期状態におけるホルモン濃度を、表１２に示す。
【表１２】
0006755863.tif 000013
【０１３０】
２４時間の処理後、組織モデルを、４％パラホルムアルデヒド（Ｓｉｇｍａ）で４℃において３時間固定し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（Ｓｉｇｍａ）で４回洗浄する。次に、試料を、０．６Ｍ〜２．３Ｍのスクロース勾配で処理し、室温で３時間インキュベートする。最後のインキュベーションの後、組織モデルを、Ｔｉｓｓｕｅ  Ｔｅｃｋ  ＯＣＴ化合物に包埋する。厚さ約１０μｍの凍結組織切片を、クライオミクロトーム（Ｌｅｉｃａ、ＣＭ３０５０）を使用して切り、被覆スライド上に収集し、最後に−２０℃で保存する。
【０１３１】
特異的コネキシンの発現を、免疫組織化学的検査によって特異的一次抗体および蛍光標識二次抗体を用いて評価する。解凍したスライドを、室温で１０分間、アセトンの凍結溶液で固定し、次にＰＢＳですすぐ。非特異的部位を、１０％正常ヤギ血清で室温において３０分間飽和させる。ＰＢＳ中０．２％Ｔｗｅｅｎですすいだ後、スライドを、一次抗体（ＰＢＳ中１０％ヤギ血清で希釈した抗コネキシン３７／ＧＪＡ４および５９／ＧＪＡ１０抗体（Ａｂｃａｍ））と共に、加湿チャンバ内で室温において２時間インキュベートする。インキュベーションの最後に、スライドをＰＢＳ中０．２％Ｔｗｅｅｎで洗浄し、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、緑色蛍光発光染料）と共に、暗い加湿チャンバ内で室温において１時間インキュベートする。ＰＢＳですすいだ後、切片を、Ｄａｐｉを含有するｐｒｏｌｏｎｇ  Ｇｏｌｄ退色防止試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標本にする。
【０１３２】
顕微鏡観察を、Ｚｅｉｓｓ蛍光顕微鏡法を用いて実施し、各条件の写真を、備え付けのカメラで撮影する。コネキシンの各蛍光画像から、ＩＤ値（総密度は、面積と平均濃淡値の積である）を定量し、対照によって正規化する。各条件の少なくとも１２の代表的画像を収集し、ＺＥＮソフトウェア（Ｚｅｉｓｓ）を用いて分析する。値は、３回の独立した実験の平均を表す。
【０１３３】
閉経期状態下の基礎対照ＲＨＥ（１００％）に対して得られた結果を、表１３に示す。
【表１３】
0006755863.tif 000014
【０１３４】
結果は、本発明の菌体外多糖が、閉経期のＲＨＥにおけるコネキシンのレベルを非閉経期状態まで回復することを示している。
【０１３５】
（実施例１０）
寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の、閉経期モデルにおける上皮−真皮細胞−細胞連絡に対する効果
【０１３６】
老化は、細胞間の連絡プロセスを枯渇させる。線維芽細胞とケラチノサイトの間のクロストークは、皮膚の再生、回復および成長に必須であり、成長因子およびサイトカインなどのいくつかのメッセンジャーの活性を必要とする。ケラチノサイトは、成長因子の主な供給源であり、これはケラチノサイト自体だけでなく、パラクリンシグナル伝達を介して線維芽細胞も刺激することができ、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の分子構成に大幅に影響を及ぼし得る（Werner  S、Krieg  T、Smola  H.  Keratinocyte-fibroblast  interactions  in  wound  healing.  J  Invest  Dermatol.  ２００７年、５月；１２７巻（５号）：９９８〜１００８頁）。この研究では、本発明者らは、最初に、ホルモン低下がケラチノサイトと線維芽細胞の間のパラクリン連絡を低減し、細胞外マトリックスの合成に影響を及ぼし得ることを示すことを目的とする。閉経期のケラチノサイトと線維芽細胞の間の連絡に対する、実施例１に従って得られた寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の効果を評価し、非閉経期のケラチノサイトと線維芽細胞の連絡と比較する。閉経期のケラチノサイトの上清および非閉経期のケラチノサイトの上清で処理した線維芽細胞におけるマトリックスタンパク質の発現を、定量的ＰＣＲによって分析する。
【０１３７】
３７℃において５％ＣＯ２加湿空気中で７日間、１９歳のドナーのヒト上皮ケラチノサイト（ＨＥＫａ）細胞（Ｃｅｌｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）を、７５ｃｍ２のフラスコ中、ＥＤＧＳを補充したＥｐｉｌｉｆｅ（Ｇｉｂｃｏ）中５×１０３個の細胞／ｃｍ２の密度で成長させ、１８歳のドナーの成人ヒト皮膚線維芽細胞（ＨＤＦａ）細胞を、７５ｃｍ２のフラスコ中、ＬＳＧＳを補充した１０６（ＧＩＢＣＯ）の培地中７〜８×１０３個の細胞／ｃｍ２の密度で成長させる。この時間後、ＨＥＫａを分割し、次に処理のために播種する。ＨＥＫａ細胞を、６ウェルプレートにおいて、０．１％ＥＤＧＳを補充したＥｐｉｌｉｆｅ中、８．５×１０５個の細胞／ウェルの密度で播種する。３７℃において５％ＣＯ２加湿空気中で２４時間インキュベートした後、培地を除去する。次に、閉経状態を刺激するために、ケラチノサイトを、閉経期のホルモンおよび実施例１に従って得られた寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の０．０２ｍｇ／ｍｌと共に、ならびに基礎対照としての閉経期ホルモンだけの培地と共にインキュベートする。これらの細胞の３つのウェルを、陽性対照としての非閉経期ホルモンと共にインキュベートする。インキュベーション条件は、３７℃および５％ＣＯ２で２４時間である。すべての処理を、培養条件１セット当たり３つのウェルで行う。ＨＤＦａ細胞を、２５ｃｍ２のフラスコ中、１．５×１０６個の細胞／ウェルの密度で播種する。３７℃において５％ＣＯ２加湿空気中で２４時間インキュベートした後、培地を除去し、ＨＤＦａ細胞を、ケラチノサイト培養物の上清と共にインキュベートする。
【０１３８】
非閉経期および閉経期状態のホルモン濃度を、表１４に示す。
【表１４】
0006755863.tif 000015
【０１３９】
インキュベーション後２４時間で、ＨＤＦａを、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）に記載のプロトコールに従って製造者のプロトコールにより、ウェル中で直接溶解させる。溶解した細胞をホモゲナイズし、ＲＮａｓｅを不活化する。ゲノムＤＮＡを、ｇＤＮＡ  Ｅｌｉｍｉｎａｔｏｒスピンカラムを使用することによって試料から除去する。次に、試料を、特別なＲＮＡ結合カラムを通過させ、数回の微量遠心分離洗浄を行って、夾雑物および不純物を排除した後、精製されたＲＮＡを、超純水５０μｌで溶出する。ＲＮＡ溶出の後、ＲＮＡ試料の定量および純度分析を、暗順応計を用いて実施した。高品質ＲＮＡ１μｇを、最終体積２０μｌでｉＳｃｒｉｐｔ  ａｄｖａｎｃｅｄ（ＢｉｏＲａｄ）を用いて逆転写した。完全な反応ミックスを、サーマルサイクラー（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）中、４２℃で３０分間インキュベートし、反応は８５℃において５分間で停止する。相補的ＤＮＡを、リアルタイムＰＣＲサーモサイクラー（ＢｉｏＲａｄ）で、ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ（ＢｉｏＲａｄ）と共に使用するための細胞外マトリックスに合わせてカスタマイズした９６ウェルパネルにおいて、ＳＹＢＲｇｒｅｅｎ  ｓｕｐｅｒｍｉｘ（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、ｑＰＣＲによって増幅する。ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎは、二本鎖ＤＮＡ分子に結合し、定量され、ＰＣＲ反応における生成物の量に比例する蛍光を発光する。ＢｉｏＲａｄ  ＣＦＸ９６機器のサイクリング条件は、９５℃で３分間、その後９５℃で５秒の変性、６０℃で３０秒間のアニーリングおよび伸長の４０サイクルである。ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ）、ＴＢＰ（ＴＡＴＡボックス結合タンパク質）およびＨＲＰＴ１（ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ１）を、内在性対照として使用する。試料遺伝子および参照遺伝子の発現に対する倍数変化を、ＣＦＸ  Ｍａｎａｇｅｒソフトウェア（ＢｉｏＲａｄ）を使用し、正規化発現（ΔΔ（Ｃｔ））法を使用してデフォルト閾値を用いて算出した。
【０１４０】
閉経期のケラチノサイトの上清で処理したＨＤＦａの基礎対照（１００％）に対して得られた結果を、表１５に示す。値は、１回の実験のデータを表す。
【表１５】
0006755863.tif 000016
【０１４１】
結果は、本発明の菌体外多糖が、細胞外マトリックスの合成に関与する遺伝子を上方調節し、閉経期のケラチノサイトの上清で処理した線維芽細胞における細胞外マトリックス（ＭＭＰ１３）の分解に関与する遺伝子を下方調節することを示している。
【０１４２】
（実施例１１）
寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された初代ヒト皮下前脂肪細胞における脂質蓄積の増大の研究
【０１４３】
１つの加齢性の皮膚変化は、皮下脂肪の減少である。細隙結合部細胞間連絡（ＧＪＩＣ）は、前脂肪細胞が脂肪塊において脂肪細胞になる脂肪生成プロセスにおいて、重要な役割を演じるようである。
【０１４４】
脂肪生成の定量は、ＡｄｉｐｏＲｅｄ（商標）脂肪生成アッセイ試薬（Ｌｏｎｚａ）を用いて評価される。脂質蓄積の増大は、脂肪細胞分化培地における、実施例１に従って得られた寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖で処理した後の初代ヒトの初代ヒト皮下前脂肪細胞中のナイルレッド蛍光シグナルを測定することによって決定される。脂肪細胞分化培地だけで処理した細胞を、基礎対照として使用する。
【０１４５】
ヒト前脂肪細胞（２２歳のドナーのもの）（ＺＥＮＢＩＯ）を、９６透明ウェルプレートにおいて、前脂肪細胞成長培地（ＺＥＮＢＩＯ）に播種する（１３，０００個の細胞／ウェル、条件１つ当たり５つのウェル）。細胞を、９５％空気および５％ＣＯ２の水飽和雰囲気中、３７℃で２４時間インキュベートする。インキュベーション後、培地を除去し、細胞を、３７℃および５％ＣＯ２で８日間、脂肪細胞分化培地（ＺＥＮＢＩＯ）（前脂肪細胞の脂肪細胞への分化を誘導するため）中、実施例１に従って得られた寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の０．０２ｍｇ／ｍｌと共にインキュベートする。基礎対照では、前脂肪細胞を脂肪細胞分化培地だけで処理する。陰性対照として、前脂肪細胞を、脂肪細胞分化培地およびカフェインで処理する。
【０１４６】
脂質蓄積の定量を、ＡｄｉｐｏＲｅｄ（商標）試薬（ＬＯＮＺＡ）アッセイによって行う。製造者の指示に従って、条件ごとに分化した前脂肪細胞を、とカルシウムおよびマグネシウムを含むリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（Ｓｉｇｍａ）で洗浄し、希釈ＡｄｉｐｏＲｅｄ試薬を添加する。試薬の添加が完了したら、細胞を室温で１５分間インキュベートする。次に、中性脂肪の蛍光を、ＣｌａｒｉｏＳｔａｒ（Ｓ／Ｎ４３０−０１１０９）読取り装置（ＢＭＧ）を使用して、それぞれ４８５ｎｍおよび５３０ｎｍの励起波長および発光波長で測定する。正規化した脂質蓄積の百分率を、基礎対照と比較して算出する。
【０１４７】
基本条件（１００％）に対して得られた結果を、表１６に示す。値は、３回の独立した実験の平均を表す。
【表１６】
0006755863.tif 000017
【０１４８】
結果は、本発明の菌体外多糖が、ヒト皮下前脂肪細胞培養物における脂肪生成プロセス中に、細胞内脂質蓄積の百分率を増大することを示している。
【０１４９】
本発明の要旨を例示する目的で、ある特定の代表的な実施形態および詳細を示してきたが、本発明の範囲から逸脱することなく、それらに様々な変更および改変を加え得ることを、当業者は理解されよう。これに関して、本発明の範囲は、以下の特許請求の範囲によってのみ制限されるべきである。
本発明の実施形態の例として、以下の項目が挙げられる。
（項目１）
皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧的な非治療的な処置および／またはケアのための、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された発酵エキスの使用。
（項目２）
前記皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の前記化粧的な非治療的な処置および／またはケアが、コラーゲン合成を刺激する処置、皮膚老化の処置および／または防止、皮膚皺の処置および／または防止、皮膚の張りを改善するためおよび／または皮膚の張りの喪失を防止するための処置、乾燥皮膚、ひび割れた唇、頭部粃糠疹、乾燥毛髪、脆弱な毛髪および／または爪の処置および／または防止である、項目１に記載の使用。
（項目３）
前記皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の前記化粧的な非治療的な処置および／またはケアが、該皮膚のコネキシンレベルを増大させる、項目１に記載の使用。
（項目４）
Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された前記発酵エキスが、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有する、前記項目のいずれかに記載の使用。
（項目５）
Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ株によって生成された前記発酵エキスが、少なくとも１種の菌体外多糖を含有する、前記項目のいずれかに記載の使用。
（項目６）
皮膚、粘膜、毛髪および／または爪の化粧的な非治療的な処置および／またはケアのための、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された菌体外多糖の使用。
（項目７）
前記菌体外多糖が、単糖であるラムノース、ガラクトース、グルコース、マンノースおよびＤ−グルコサミンを含有する、項目５から６のいずれかに記載の使用。
（項目８）
前記菌体外多糖が、百分率の合計が１００％を超えないという条件で、重量で、０．５％〜４５％のラムノース、０．１％〜２５％のガラクトース、０．５％〜３０％のマンノース、合計で５０％〜９５％のグルコースおよびＤ−グルコサミン、０％〜１０％のフコース、ならびに０％〜１２％のグルクロン酸の組成を有している、項目７に記載の使用。
（項目９）
Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の前記菌株が、寄託番号ＬＭＧ  Ｐ−２８５７１のＨａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株である、前記項目のいずれかに記載の使用。
（項目１０）
Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ株によって生成された前記菌体外多糖の保持時間が、粒径８μｍ、細孔径５０Åおよび長さ／内径３００ｍｍ×７．５ｍｍの水性サイズ排除クロマトグラフィーのためのクロマトグラフィーカラムならびに溶出液として水中０．１Ｍ酢酸ナトリウムを流速０．８ｍｌ／分で用いるＨＰＬＣ分析で、４〜８．５分である、項目６から９のいずれかに記載の使用。
（項目１１）
Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｉｈａｌｉｎａ種の菌株によって生成された、化粧品として有効な量の発酵エキスまたは菌体外多糖、ならびに少なくとも１種の化粧品として許容される賦形剤および／または成分を含む化粧品組成物。
（項目１２）
前記発酵エキスが、化粧品の送達系および／もしくは徐放系に組み込まれるか、または固体有機ポリマーもしくは固体無機支持体上に吸着される、項目１１に記載の化粧品組成物。
（項目１３）
クリーム、多重エマルション、溶液、液晶、無水組成物、水性分散液、油、乳液、バルサム、フォーム、ローション、ジェル、クリームジェル、ハイドロアルコール溶液、ハイドログリコール溶液、ヒドロゲル、リニメント、美容液、石けん、シャンプー、コンディショナー、セラム、多糖類膜、軟膏、ムース、ポマード、パウダー、棒状物質、ペンシル、スプレーまたはエアロゾルによって形成される群から選択される製剤中に提供される、項目１１から１２のいずれかに記載の化粧品組成物。
（項目１４）
布、不織布または医療デバイスに組み込まれる、項目１１から１２のいずれかに記載の化粧品組成物。
（項目１５）
前記化粧品として許容される賦形剤および／または成分が、神経細胞の開口分泌を阻害する薬剤、抗コリン作用剤、筋収縮を阻害する薬剤、老化防止剤、皺取り剤、保湿剤、保湿物質、アルファヒドロキシ酸、ベータヒドロキシ酸、モイスチャー化粧品、真皮もしくは上皮巨大分子の合成を刺激し、かつ／またはそれらの分解を阻害もしくは防止することができる薬剤、コラーゲン合成刺激剤、エラスチン合成刺激剤、デコリン合成刺激剤、ラミニン合成刺激剤、デフェンシン合成刺激剤、シャペロン合成刺激剤、ｃＡＭＰ合成刺激剤、ＡＱＰ−３をモジュレートする薬剤、アクアポリン合成をモジュレートする薬剤、アクアポリンファミリーのタンパク質、ヒアルロン酸合成刺激剤、グリコサミノグリカン合成刺激剤、フィブロネクチン合成刺激剤、サーチュイン合成刺激剤、熱ショックタンパク質、熱ショックタンパク質合成刺激剤、ノクターニンの量を低減する薬剤、ノクターニン発現を阻害する薬剤、脂肪分解剤もしくは脂肪分解を刺激する薬剤、静脈強壮剤、ＰＧＣ−１α発現をモジュレートする薬剤、ＰＰＡＲγの活性を阻害する薬剤、脂肪細胞のトリグリセリド含量を低減する薬剤、抗セルライト剤、脂肪細胞分化遅延剤、皮脂生成を減少させる薬剤、抗脂漏剤、艶消し剤、抗座瘡剤、制汗剤、抗炎症剤および／もしくは鎮痛剤、抗そう痒剤、鎮静剤、麻酔薬、アセチルコリン受容体凝集の阻害剤、アセチルコリンエステラーゼを阻害する薬剤、皮膚弛緩剤、メラニン合成の刺激剤もしくは阻害剤、ホワイトニング剤もしくは脱色剤、色素沈着促進剤、セルフタンニング剤、ＮＯシンターゼ阻害剤、５α還元酵素阻害剤、リシルおよび／もしくはプロリルヒドロキシラーゼ阻害剤、抗酸化剤、フリーラジカルスカベンジャーおよび／もしくは抗大気汚染剤、反応性カルボニル種スカベンジャー、抗糖化剤、抗ヒスタミン剤、抗ウイルス剤、駆虫剤、乳化剤、皮膚軟化剤、有機溶媒、液体噴霧剤、皮膚コンディショナー、上皮加水分解酵素、ビタミン、アミノ酸、タンパク質、顔料もしくは着色剤、染料、バイオポリマー、ゲル化ポリマー、増粘剤、界面活性剤、軟化剤、乳化剤、結合剤、保存剤、目の下のたるみを低減もしくは処置することができる薬剤、角質除去剤、角質溶解剤、角質溶解剤、抗微生物剤、抗真菌剤、静真菌剤、殺菌剤、静菌剤、角質層構成成分の合成を刺激する薬剤、セラミド、脂肪酸、コラーゲン分解を阻害する薬剤、マトリックスメタロプロテイナーゼを阻害する薬剤、エラスチン分解を阻害する薬剤、セリンプロテアーゼを阻害する薬剤、線維芽細胞増殖を刺激する薬剤、ケラチノサイト増殖を刺激する薬剤、メラニン細胞増殖を刺激する薬剤、ケラチノサイト分化を刺激する薬剤、抗過角化症剤、面皰溶解剤、抗乾癬剤、ＤＮＡ修復剤、ＤＮＡ保護剤、幹細胞保護剤、安定剤、敏感肌の処置および／もしくはケアのための薬剤、引締め剤、抗ストレッチマーク剤、収斂剤、ＰＡＲ−２の活性を阻害する薬剤、創傷治癒を刺激する薬剤、コアジュバント創傷治癒剤、上皮再形成を刺激する薬剤、コアジュバント上皮再形成剤、サイトカイン成長因子、毛細血管循環および／もしくは微小循環に作用する薬剤、血管新生を刺激する薬剤、血管透過性を阻害する薬剤、細胞代謝に作用する薬剤、真皮−上皮結合を改善する薬剤、発毛誘導剤、発毛阻害剤もしくは発毛遅延剤、抜け毛遅延剤、保存剤、香料、化粧品用および／もしくは吸収性および／もしくは体臭マスキング用のデオドラント、キレート剤、植物エキス、エッセンシャルオイル、海産物エキス、生物工学的プロセスから得られた薬剤、ミネラル塩、細胞エキス、日焼け止めならびに紫外Ａおよび／もしくはＢ線および／もしくは赤外Ａ線に対して活性な有機もしくは無機光防護剤、またはそれらの混合物によって形成される群から選択される、項目１１から１４のいずれかに記載の化粧品組成物。