(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
【化１】
0006763769.tif 000018
（式中、
Ｒ1が、Ｈ、フッ素またはメチルであり、
Ｒ2が、Ｈ、ハロゲンまたはＣ1〜3アルキルであり、
Ｒ3が、アリールオキシ、複素環、ハロゲン、アリール、ヘテロアリール、アルキルア
ミノ、ジアルキルアミノ、Ｃ1〜6アルキル、−ＣＯＯＨ、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、ニトリル、またはＣ1〜6アルコキシから独立に選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキルであり；
または式中、
Ｒ3が、ハロゲン、アリールオキシ、アリール、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、
Ｃ1〜6アルキル、−ＣＯＯＨ、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アミノスルホニル、ニトリル、またはＣ1〜6アルコキシから独立に選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されたアルキルアリールであり；
Ｒ4が、ヒドロキシル、Ｃ1〜6アルキル、Ｃ3〜7シクロアルキル、Ｃ2〜6アルケニル、
Ｃ1〜6アルキルで任意選択的にさらに置換されたＣ3〜7シクロアルキル、およびＣ1〜6ア
ルキルで任意選択的にさらに置換されたヘテロアリールから独立に選択される１つまたは
複数の置換基で任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキルであり、前記ヘテロアリールは、
Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１つまたは２つのヘテロ原子を含み；
または式中、
Ｒ4が、ハロゲン、アリールオキシ、アリール、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、
Ｃ1〜6アルキル、−ＣＯＯＨ、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アミノスルホニル、ニトリル、またはＣ1〜6アルコキシから独立に選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されたアルキルアリールである）
およびその薬学的に許容できる塩または溶媒和物であって、
但し、前記化合物は、下記式に示す化合物：
【化３】
0006763769.tif 000019
を除く化合物である、式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容できる塩または溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ3が−ＣＨ2−アリール基（置換または非置換）または−ＣＨ2−ヘテロアリール基（
置換または非置換）であり、かつＲ1、Ｒ2、およびＲ4が請求項１の通りに記載される、
請求項１に記載の化合物およびその薬学的に許容できる塩または溶媒和物。
【請求項３】
Ｒ3が請求項１に記載の通りに任意選択的にさらに置換された−ＣＨ2−アリール基また
は−ＣＨ2−ヘテロアリール基であり、
Ｒ4が請求項１に記載の通りに任意選択的にさらに置換された−ＣＨ2−ヘテロアリール
基であり、
Ｒ1およびＲ2が請求項１に記載の通りである、請求項１に記載の化合物およびその薬学
的に許容できる塩または溶媒和物。
【請求項４】
Ｒ1がフッ素であり、Ｒ2が水素であり、かつＲ3およびＲ4が請求項１の通りに記載され
る、請求項１に記載の化合物およびその薬学的に許容できる塩または溶媒和物。
【請求項５】
下記の化学構造：
【化２】
0006763769.tif 000020
を有する請求項１に記載の化合物およびその薬学的に許容できる塩または溶媒和物。
【請求項６】
１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤または担体と共に、請求項１また
は５に記載の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩もしくは
溶媒和物を含む医薬組成物。
【請求項７】
薬剤として使用するための、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
ＴＬＲ７の活性化が必要である任意の障害の処置に使用するための、請求項６に記載の
医薬組成物であって、前記式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物又はその薬学的に許容できる
塩もしくは溶媒和物がＴＬＲ７アゴニストである、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン誘導体、その調製方法、医薬組成物、ならびに疾患の処置および／または治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン誘導体の使用、より具体的には、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の調節、またはアゴニズムが関与する、ウイルス感染症、免疫障害または炎症性障害の処置におけるピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン誘導体の使用に関する。Ｔｏｌｌ様受容体は、ロイシンに富む細胞外ドメイン、および保存領域を含有する細胞質の伸長を特徴とする主要な膜貫通タンパク質である。自然免疫系は、一定のタイプの免疫細胞の細胞表面上に発現するこのＴＬＲを介して病原体関連分子パターンを認識することができる。外来病原体を認識すると、サイトカインの産生および食細胞における共刺激分子の上方制御が活性化される。これにより、Ｔ細胞挙動が調節される。
【０００３】
大多数の哺乳類種には、１０〜１５種類のＴｏｌｌ様受容体がある。（単純にＴＬＲ１〜ＴＬＲ１３と命名された）１３種のＴＬＲが、ヒトおよびマウスで共に確認されており、これらの多くと同等の形態が、他の哺乳類種において見出されている。しかしながら、ヒトに見られるある特定のＴＬＲに相当するものが、全ての哺乳動物において存在するわけではない。例えば、ヒトのＴＬＲ１０に類似したタンパク質をコードする遺伝子がマウスに存在するが、過去のいずれかの時点で、レトロウイルスによって損傷されたと考えられる。一方、マウスは、ヒトでは示されないＴＬＲ１１、１２、および１３を発現する。他の哺乳動物は、ヒトに見られないＴＬＲを発現し得る。他の非哺乳類種は、トラフグに見られるＴＬＲ１４によって示されるような、哺乳動物とは異なるＴＬＲを有し得る。これにより、ヒト自然免疫のモデルとして実験動物を使用するプロセスが複雑になる恐れがある。
【０００４】
Ｔｏｌｌ様受容体に関する概説については、次の雑誌論文を参照されたい。Ｈｏｆｆｍａｎｎ，Ｊ．Ａ．，Ｎａｔｕｒｅ，４２６，ｐ３３−３８，２００３；Ａｋｉｒａ，Ｓ．，Ｔａｋｅｄａ，Ｋ．，ａｎｄ  Ｋａｉｓｈｏ，Ｔ．，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２１，ｐ３３５−３７６，２００３；Ｕｌｅｖｉｔｃｈ，Ｒ．Ｊ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４，ｐ５１２−５２０，２００４。
【０００５】
国際公開第２０００／００６５７７号パンフレットでは複素環誘導体、国際公開第９８／０１４４８号パンフレットおよび国際公開第９９／２８３２１号パンフレットではアデニン誘導体、ならびに国際公開第２００９／０６７０８１号パンフレットではピリミジンなどの、Ｔｏｌｌ様受容体に対して活性を示す化合物が既に記載されている。
【０００６】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の場合のように、一定のウイルス感染症の治療では、注射により定期的にインターフェロン（ＩＦＮ−アルファ）を投与することができる。経口投与可能な低分子ＩＦＮ誘導物質は、免疫原性の低下と投与の簡便性という利点を提供する可能性がある。このように、新規なＩＦＮ誘導物質は、ウイルス感染症の処置のための有効な新種の薬剤の可能性がある。抗ウイルス効果を有する低分子ＩＦＮ誘導物質の文献中の例については、Ｄｅ  Ｃｌｅｒｃｑ，Ｅ．；Ｄｅｓｃａｍｐｓ，Ｊ．；Ｄｅ  Ｓｏｍｅｒ，Ｐ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９７８，２００，５６３−５６５を参照されたい。
【０００７】
インターフェロンαはまた、一定の種類のがんの処置において、他の薬物と組み合わせて患者に投与される。ＴＬＲ７／８アゴニストもまた、明白なＴｈ１反応を誘導する能力があるため、ワクチンアジュバントとして着目されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかし、従来技術の化合物と比較して、選択性が好ましく、安全性プロファイルが改善されている新規なＴｏｌｌ様受容体調節剤が強く求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明によって、式（Ｉ）の化合物
【化１】
0006763769.tif 000002
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、フッ素またはメチルであり、
Ｒ２は、Ｈ、ハロゲンまたはＣ１〜３アルキルであり、
Ｒ３は、アリールオキシ、複素環、ハロゲン、アリール、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、Ｃ１〜６アルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、ニトリル、またはＣ１〜６アルコキシから独立に選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルであり；
または式中、
Ｒ３は、ハロゲン、アリールオキシ、アリール、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、Ｃ１〜６アルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、スルホンアミド、ニトリル、またはＣ１〜６アルコキシから独立に選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されたアルキルアリールであり；
Ｒ４は、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｃ２〜６アルケニル、またはＣ１〜６アルキルで任意選択的にさらに置換されたアリール、およびＣ１〜６アルキルで任意選択的にさらに置換されたＣ３〜７シクロアルキルから独立に選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルであり；
または式中、
Ｒ４は、ハロゲン、アリールオキシ、アリール、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、Ｃ１〜６アルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、スルホンアミド、ニトリル、またはＣ１〜６アルコキシから独立に選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されたアルキルアリールである）
およびその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、またはその多形体が提供される。
【００１０】
好ましい化合物は、Ｒ３がＣＨ２−アリール基（置換または非置換）であり、かつＲ１、Ｒ２およびＲ４が上記の通りに記載される、式（Ｉ）のものである。
【００１１】
第２の実施形態では、Ｒ３およびＲ４が共に上記の通りに任意選択的にさらに置換されたＣＨ２−アリール基であり、Ｒ１およびＲ２が上記の通りである、式（Ｉ）の化合物である。
【００１２】
他の好ましい実施形態は、Ｒ１がフッ素であり、Ｒ２が水素であり、かつＲ３およびＲ４が上記の通りに記載される、式（Ｉ）のものである。
【００１３】
最も好ましい化合物は、下記の化学構造：
【化２】
0006763769.tif 000003
を有する式（ＩＩ）の化合物である。
【００１４】
式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物およびその薬学的に許容できる塩、溶媒和物または多形体は、医薬品として、特に、Ｔｏｌｌ様受容体（特に、ＴＬＲ７）活性の調節剤としての活性を有する。
【００１５】
さらなる態様において、本発明は、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物もしくは多形体を、１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤または担体と共に含む医薬組成物を提供する。
【００１６】
さらに、本発明に係る式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物もしくは多形体、あるいは式（Ｉ）または（ＩＩ）の前記化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物もしくは多形体を含む医薬組成物は、薬剤として使用され得る。
【００１７】
本発明の別の態様は、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物もしくは多形体、あるいは式（Ｉ）または‘ＩＩ）の前記化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物もしくは多形体を含む前記医薬組成物が、ＴＬＲ７の調節が関与するいずれの障害の処置にも相応に使用され得ることである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
「アルキル」という用語は、規定数の炭素原子を含有する直鎖状または分枝鎖状の飽和脂肪族炭化水素を指す。
【００１９】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を指す。
【００２０】
「アルキルアリール」という用語は、「アリール」が以下の通りに定義される、アリールで置換された規定数の炭素原子を含有する直鎖状または分枝鎖状の飽和脂肪族炭化水素を指す。
【００２１】
「アルケニル」という用語は、少なくとも２つの炭素原子および少なくとも１つの炭素−炭素二重結合からなる上に定義されるアルキルを指す。
【００２２】
「シクロアルキル」という用語は、規定数の炭素原子を含有する炭素環を指す。
【００２３】
「アルコキシ」という用語は、例えば、メトキシ基またはエトキシ基のような、酸素原子に単結合しているアルキル（炭素と水素の鎖）基を指す。
【００２４】
「アリール」という用語は、Ｎ、ＯおよびＳから、特にＮおよびＯから選択される１つまたは２つのヘテロ原子を任意選択的に含む芳香環構造を意味する。前記芳香環構造は、５つ、６つまたは７つの環原子を有し得る。特に、前記芳香環構造は、５つまたは６つの環原子を有し得る。
【００２５】
「アリールオキシ」という用語は、芳香環構造を指す。前記芳香族基は酸素に単結合している。
【００２６】
「複素環」という用語は、飽和または部分的に飽和した分子を指し、テトラヒドロフラン、ジオキサンまたは他の環状エーテルを含む。窒素を含有する複素環としては、例えば、アゼチジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジンなどが挙げられる。他の複素環としては、例えば、チオモルホリン、ジオキソリニル（ｄｉｏｘｏｌｉｎｙｌ）、および環状スルホンが挙げられる。
【００２７】
式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物の薬学的に許容できる塩としては、その酸付加塩および塩基塩が挙げられる。好適な酸付加塩は、非毒性塩を生成する酸から生成される。好適な塩基塩は、非毒性塩を生成する塩基から生成される。
【００２８】
本発明の化合物はまた、非溶媒和および溶媒和形態で存在してもよい。本明細書では、「溶媒和物」という用語は、本発明の化合物と、１種以上の薬学的に許容できる溶媒分子、例えば、エタノールとを含む分子錯体を表すために使用される。
【００２９】
「多形体」という用語は、本発明の化合物が２つ以上の形態または結晶構造で存在できることを指す。
【００３０】
本発明の化合物は、結晶質生成物または非晶質生成物として投与され得る。それらは、沈殿、結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥、または蒸発乾燥などの方法によって、例えば、固体プラグ、粉末、またはフィルムとして得ることができる。それらは、単独で、または本発明の１種以上の他の化合物と組み合わされて、または１種以上の他の薬物と組み合わされて投与され得る。一般に、それらは、１種以上の薬学的に許容できる賦形剤と共に製剤として投与されるであろう。本明細書では「賦形剤」という用語は、本発明の化合物以外の任意の成分を表すために使用される。賦形剤の選択は、具体的な投与形態、溶解性および安定性に対する賦形剤の影響、および剤形の性質などの要因に大きく左右される。
【００３１】
本発明の化合物またはその任意のサブグループは、投与のために様々な医薬品形態へと製剤化され得る。適切な組成物として、全身投与薬物に通常使用される全ての組成物を挙げ得る。本発明の医薬組成物を調製するには、有効成分としての特定の化合物の有効量を、任意選択により付加塩形態で、薬学的に許容できる担体と組み合わせて緊密な混合物とする。この担体は、投与に所望される製剤の形態に応じて、多種多様な形態をとり得る。これらの医薬組成物は、例えば、経口、直腸内、または経皮投与に好適な単一の剤形であるのが望ましい。例えば、経口投与形態の組成物を調製する際、懸濁液、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤および溶液剤などの経口液体製剤の場合には、例えば水、グリコール、油、アルコールなどの通常の医薬媒体の任意のものを使用することができ、また散剤、丸剤、カプセル剤および錠剤の場合には、デンプン、糖、カオリン、希釈剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などの固体担体を使用し得る。投与が容易であるため、錠剤およびカプセル剤は最も有利な経口投与単位剤形を代表するものであり、その場合、固体医薬担体が当然使用される。使用の直前に液体形態に変換され得る固形製剤もまた含まれる。経皮投与に好適な組成物においては、担体は、浸透促進剤および／または好適な湿潤剤を、少量の、任意の性質の好適な添加剤と任意選択により組み合わせて、任意選択により含み、これらの添加剤は、有意な有害作用を皮膚に及ぼすものではない。前記添加剤は、皮膚への投与を容易にすることができ、かつ／または所望の組成物の調製に有用となり得る。これらの組成物は、様々な方法で、例えば、経皮貼付剤として、スポットオン剤として、軟膏剤として投与され得る。本発明の化合物はまた、吸入または吹送による投与のために当該技術分野において使用される方法および製剤を用いて、吸入または吹送によって投与され得る。したがって、一般に、本発明の化合物は、溶液、懸濁液または乾燥粉末の形態で肺に投与され得る。
【００３２】
投与を容易にし、投与量を均一にするために、前述した医薬組成物を単位剤形に製剤化することは特に有利である。本明細書で使用される単位剤形とは、単位投与量として好適な物理的に個別の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と共同して所望の治療効果を生じるよう計算された所定量の有効成分を含有する。そのような単位剤形の例としては、錠剤（分割錠剤またはコーティング錠剤を含む）、カプセル剤、丸剤、粉末パケット、ウエハー、坐剤、注射液、または懸濁剤など、およびそれらの分離複合剤がある。
【００３３】
感染症の治療の当業者は、以下に示される試験結果から有効量を決定することができるであろう。一般に、有効な日量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重であろうと考えられる。必要な用量を２、３、４またはそれより多いサブ用量として、一日の間に適切な間隔を置いて投与することが適切であり得る。前記サブ用量は、例えば、単位剤形当たり１〜１０００ｍｇ、特に、５〜２００ｍｇの有効成分を含有する単位剤形として製剤化され得る。
【００３４】
正確な投与量および投与頻度は、当業者に周知のように、使用する式（Ｉ）の特定の化合物、治療される特定の病態、治療される病態の重症度、特定の患者の年齢、体重および全身的な身体状態、ならびに個体が摂取している可能性のある他の薬剤に応じて決まる。さらに、有効量は、治療される対象の応答に応じて、かつ／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて、減少または増加させ得ることは明らかである。したがって、上記の有効量の範囲は指針に過ぎず、本発明の範囲または使用を、いかなる程度であれ限定することは意図されていない。
【００３５】
実験の項
スキーム１．全体的な反応スキーム
【化３】
0006763769.tif 000004
スキーム１のタイプＡの化合物は、光延条件を使用して、極性非プロトン性溶媒、例えばＴＨＦ中で、アルコールで官能化することができる。カルバミン酸メチルの開裂を、１，４−ジオキサン中で、塩基性条件にて実施して中間体Ｃを生成した。中間体Ｃの塩素の置換を、極性非プロトン性溶媒（例えばＮＭＰ）中、アルコールおよび塩基（例えばＮａＨ）で実施してタイプＤの化合物を生成した。
【００３６】
中間体Ａの調製
【化４】
0006763769.tif 000005
３−アミノ−２−エトキシカルボニルピロール塩酸塩（２５．８ｇ、１３５．３ｍｍｏｌ）をジクロロメタンと飽和ＮａＨＣＯ３との間で分配した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、固体を濾過によって除去し、濾液の溶媒を蒸発乾固させた。残渣を１，３−ビス（メトキシカルボニル）−２−メチル−２−チオプソイド尿素（３２．１ｇ、１５６ｍｍｏｌ）および酢酸（３９ｍＬ、６７７ｍｍｏｌ）と一緒にメタノール（５００ｍＬ）に溶解し、室温で１時間撹拌した。沈殿物が現れ、撹拌を終夜継続した。ナトリウムメトキシド（７３．１ｇ、１３５３ｍｍｏｌ）を添加した。発熱反応が観察され、反応混合物を終夜撹拌した。混合物を酢酸でｐＨ５にし、沈殿物を濾過で単離し、フィルター上で水（２×３５０ｍＬ）、アセトニトリル（３５０ｍＬ）およびジイソプロピルエーテル（３５０ｍＬ）で研和した。得られたメチルＮ−（４−ヒドロキシ−５Ｈ−ピロロ−［３，２−ｄ］ピリミジン−２−イル）カルバマートを乾燥器で乾燥した。
【００３７】
室温で、メチルＮ−（４−ヒドロキシ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２−イル）カルバマート（２５ｇ、１２０ｍｍｏｌ）を、オーバーヘッドスターラー（３００ｒｐｍ）を具備する５００ｍＬ多口フラスコ内のアセトニトリル３５０ｍＬ中に分注した。ＰＯＣｌ３（２２．１ｍＬ、２３８．２ｍｍｏｌ）を添加し、次いで反応混合物を撹拌しながら７０℃に加熱した。ジイソプロピルエチルアミン（４１．４ｍＬ、２４０．２ｍｍｏｌ）をシリンジポンプにより流速０．２ｍＬ／分で滴加した。
【００３８】
反応混合物を室温まで冷却し、４５℃の撹拌した酢酸ナトリウム（７８．８ｇ、９６１ｍｍｏｌ）の水溶液（５００ｍＬ）に注入した。有機物を蒸発させ、残留液体を撹拌し、氷浴で冷却した。生成した固体を濾過によって単離し、アセトニトリルで洗浄し、ジイソプロピルエーテルで研和して中間体Ａを得、これを真空乾燥した。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝２２７（Ｍ＋Ｈ）
【００３９】
中間体Ｂの調製
方法１
【化５】
0006763769.tif 000006
室温で、無水ＴＨＦ（１５ｍＬ）中、Ａ（５００ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（０．２８ｍＬ、２．６ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（０．６９ｇ、２．６ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＤＩＡＤ（０．６４ｍＬ、３．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。混合物を減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチル（１００−０から９０−１０）への勾配を使用して、生成物を精製した。生成物画分を回収し、濃縮した。生成物をジイソプロピルエーテル中で研和し、濾過で単離し、真空乾燥し、Ｂを淡黄色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝３１７（Ｍ＋Ｈ）
【００４０】
樹脂結合トリフェニルホスフィンを用いた方法２
室温で、無水ＴＨＦ（２１ｍＬ）中、Ａ（７００ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（０．３９ｍＬ、３．７ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン樹脂（２．６ｇ、７．７ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＤＩＡＤ（０．９０ｍＬ、４．６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を充填デカライトで濾過し、メタノールで洗浄した。濾液を真空濃縮した。生成物をジイソプロピルエーテル中で研和し、濾過で単離し、真空乾燥し、淡黄色固体Ｂを得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝３１７（Ｍ＋Ｈ）
【００４１】
中間体Ｃの調製
【化６】
0006763769.tif 000007
Ｂ（７３８ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）を、５０ｍＬガラス管内の１，４−ジオキサン（１１ｍＬ）に溶解し、ＮａＯＨ（５．６ｍＬ、１Ｎ水溶液）を添加した。混合物を６０℃に５時間加熱した。混合物を冷却し、真空濃縮した。残渣を水で処理し、沈殿物を濾過で単離し、真空乾燥してＣを固体として得た。生成物をそのまま次の工程に使用した。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝２５９（Ｍ＋Ｈ）
【００４２】
１および２の調製
方法１
【化７】
0006763769.tif 000008
ジオキサン（０．４６ｍＬ、１．９ｍｍｏｌ）中の、中間体Ｃ（２４０ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）、ｎ−ブチルアルコール（３．２ｍＬ、３５ｍｍｏｌ）、および４Ｎ  ＨＣｌを、７ｍＬマイクロウェーブバイアルに入れた。バイアルを密封し、混合物を電子レンジ内、１２０℃で１０分間、加熱した。混合物を冷却し、真空濃縮した。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で中和し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、固体を濾過で除去し、濾液を減圧濃縮した。生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ジクロロメタン−メタノール（１００−０から９５−５）の勾配を使用して精製した。最良画分を回収し、減圧濃縮した。生成物をジイソプロピルエーテル中で研和し、固体を濾過で単離して真空乾燥し、１を白色固体として得た。
【００４３】
方法２
【化８】
0006763769.tif 000009
中間体Ｃ２（２５０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）、および３−ヒドロキシメチル−５−メチルイソキサゾール（０．１６ｍＬ、１．６５ｍｍｏｌ）を、７ｍＬバイアル内のＮＭＰ（３ｍＬ）に溶解した。混合物を氷浴で冷却し、ＮａＨ（６６ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ、鉱油中６０％分散）をＮ２下で添加し、混合物を０〜５℃で３０分間撹拌し、次いで室温まで昇温し、２時間撹拌し続けた。次いで、粗反応混合物を分取ＨＰＬＣ（固定相：ＲＰ  Ｖｙｄａｃ  Ｄｅｎａｌｉ  Ｃ１８  １０μｍ、２００ｇ、５ｃｍ）、移動相：０．２５％ＮＨ４ＯＡｃ水溶液、ＣＨ３ＣＮ）で精製し、所望の画分を回収して、真空濃縮した。生成物をＣＨ３ＣＮから結晶化し、濾過で単離し、真空乾燥して白色固体２を得た。
【００４４】
【表１】
0006763769.tif 000010
【００４５】
【表２】
0006763769.tif 000011
【００４６】
【表３】
0006763769.tif 000012
【００４７】
【表４】
0006763769.tif 000013
【００４８】
分析方法
ＬＣＭＳ基本手順
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）測定は、各方法に記載したＬＣポンプ、ダイオードアレイ（ＤＡＤ）検出器またはＵＶ検出器およびカラムを使用して行った。必要に応じて、その他の検出器も含まれた（下の方法の表を参照）。
【００４９】
カラムからの流れを、大気圧イオン源を備える質量分析計（ＭＳ）に導入した。化合物の公称モノアイソトピック分子量（ＭＷ）の特定を可能にするイオンを得るために、調整パラメーター（例えば、走査範囲、滞留時間など）を設定することは、当業者の知識の範囲内である。適切なソフトウェアを用いてデータ取得を行った。
【００５０】
化合物は、それらの実験保持時間（Ｒｔ）およびイオンで表される。データの表に別段記載されていなければ、報告された分子イオンは、［Ｍ＋Ｈ］＋（プロトン化分子）および／または［Ｍ−Ｈ］−（脱プロトン化分子）に相当する。化合物が直接イオン化できなかった場合、付加物の種類が明記される（即ち、［Ｍ＋ＮＨ４］＋、［Ｍ＋ＨＣＯＯ］−等）。同位体パターンが複数ある分子（例えばＢｒ、Ｃｌ）については、報告された値は最低同位体質量について得られたものである。得られた結果全てに、使用した方法に通常関連する実験的不確実性が伴った。
【００５１】
以下では、「ＳＱＤ」はシングル四重極検出器を意味し、「ＭＳＤ」は質量選択検出器を意味し、「ＲＴ」は室温を意味し、「ＢＥＨ」は架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッドを意味し、「ＤＡＤ」はダイオードアレイ検出器を意味し、「ＨＳＳ」は高強度シリカを意味し、「Ｑ−Ｔｏｆ」は四重極飛行時間型質量分析計を意味し、「ＣＬＮＤ」は化学発光窒素検出器を意味し、「ＥＬＳＤ」は蒸発光走査検出器を意味する。
【００５２】
【表５】
0006763769.tif 000014
【００５３】
式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物の生物学的活性
生物学的アッセイの説明
ＴＬＲ７およびＴＬＲ８活性の評価
化合物がヒトＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８を活性化する能力を、ＴＬＲ７またはＴＬＲ８発現ベクターおよびＮＦκＢ−ｌｕｃレポーター構築物を一過的にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞を使用して、細胞レポーターアッセイで評価した。
【００５４】
簡潔に述べると、ＨＥＫ２９３細胞を、培養培地（１０％ＦＣＳおよび２ｍＭグルタミンが補充されたＤＭＥＭ）中で成長させた。１５ｃｍ皿内での細胞のトランスフェクションについては、細胞をトリプシン−ＥＤＴＡで剥離し、ＣＭＶ−ＴＬＲ７またはＴＬＲ８プラスミド（１７００ｎｇ）と、ＮＦκＢ−ｌｕｃプラスミド（８５０ｎｇ）と、トランスフェクション試薬との混合物をトランスフェクトし、加湿した５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で４８時間インキュベートした。次に、トランスフェクトした細胞をＰＢＳ中で洗浄し、トリプシン−ＥＤＴＡで剥離し、１．２５×１０５個の細胞／ｍＬの密度で培地に再懸濁した。次に、４０マイクロリットルの細胞を、１００％ＤＭＳＯ中２００ｎＬの化合物が既に存在する、３８４ウェルプレートの各ウェル中に分注した。３７℃、５％ＣＯ２で６時間インキュベートした後、１５μＬのＳｔｅａｄｙ  Ｌｉｔｅ  Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を各ウェルに添加し、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取りを実施してルシフェラーゼ活性を求めた。４通り実施した測定値から用量反応曲線を作成した。最低有効濃度（ＬＥＣ）値を、アッセイの標準偏差より少なくとも２倍高い効果を誘発する濃度として定義し、各化合物について求めた。
【００５５】
３８４ウェルプレート中で、ＣＭＶ−ＴＬＲ７構築物のみをトランスフェクトした、１ウェル当たり４０μＬの細胞（１．２５×１０５個の細胞／ｍＬ）と共に、同様の希釈系列の化合物を使用して、化合物の毒性を、並行して決定した。３７℃、５％ＣＯ２で６時間インキュベートした後、１ウェル当たり１５μＬのＡＴＰ  ｌｉｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を添加し、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取ることによって、細胞生存率を求めた。データをＣＣ５０として報告した。
【００５６】
並行して、ＮＦκＢ−ｌｕｃレポーター構築物のみをトランスフェクトした、１ウェル当たり４０μＬの細胞（１．２５×１０５個の細胞／ｍＬ）と共に、同様の希釈系列の化合物（１００％ＤＭＳＯ中、２００ｎＬの化合物）を使用した。３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした６時間後、１５μｌのＳｔｅａｄｙ  Ｌｉｔｅ  Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を各ウェルに添加し、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取りを実施して、ルシフェラーゼ活性を求めた。カウンタースクリーンデータをＬＥＣとして報告する。
【００５７】
ＩＳＲＥプロモーター配列の活性化
ＰＢＭＣからの調整培地によるインターフェロン刺激応答配列（ＩＳＲＥ）の活性化を測定することにより、化合物のＩＦＮ−Ｉ誘導能力も評価した。配列ＧＡＡＡＣＴＧＡＡＡＣＴのＩＳＲＥ配列はＳＴＡＴ１−ＳＴＡＴ２−ＩＲＦ９転写因子に対する応答性が高く、それはＩＦＮ−Ｉがその受容体ＩＦＮＡＲ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、ＰＴ３３７２−５Ｗ）に結合すると活性化される。Ｃｌｏｎｔｅｃｈ製のプラスミドｐＩＳＲＥ−Ｌｕｃ（ｒｅｆ．６３１９１３）は、このＩＳＲＥ配列を５コピー、その後にホタルルシフェラーゼＯＲＦを含有する。ｐＩＳＲＥ−Ｌｕｃを安定トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞株（ＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ）を、調整ＰＢＭＣ細胞培養培地のプロファイルに合うように樹立した。
【００５８】
簡潔に述べると、標準的なＦｉｃｏｌｌ遠心分離プロトコルを使用して、少なくとも２供与体の軟膜からＰＢＭＣを調製した。単離したＰＢＭＣを、１０％ヒトＡＢ血清が補充されたＲＰＭＩ培地に再懸濁させ、２×１０５個の細胞／ウェルを、化合物を含有する３８４ウェルプレート中に分注した（全体積７０μＬ）。終夜インキュベートした後、３０μＬ中５×１０３個のＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ細胞／ウェルが入った（前日に播種した）３８４ウェルプレートに上清１０μＬを移した。２４時間インキュベートした後、４０μＬ／ウェルのＳｔｅａｄｙ  Ｌｉｔｅ  Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用してルシフェラーゼ活性をアッセイし、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で測定することにより、ＩＳＲＥ配列の活性化を測定した。ＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ細胞に対する各化合物の刺激活性をＬＥＣ値として報告したが、これを、ＰＢＭＣに適用するとアッセイの標準偏差よりも少なくとも２倍高いルシフェラーゼ活性が得られる化合物濃度と定義した。ここで、ＬＥＣは、規定量のＰＢＭＣ培養培地の移入に対するＩＳＲＥ活性化の程度を示す。組み換えインターフェロンα−２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ）を標準対照化合物として使用した。
【００５９】
【表６】
0006763769.tif 000015
本発明は以下の態様を含む。
＜１＞
式（Ｉ）の化合物
【化１】
0006763769.tif 000016
（式中、
Ｒ１が、Ｈ、フッ素またはメチルであり、
Ｒ２が、Ｈ、ハロゲンまたはＣ１〜３アルキルであり、
Ｒ３が、アリールオキシ、複素環、ハロゲン、アリール、アルキルアミノ、ジアルキルア
ミノ、Ｃ１〜６アルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、ニトリ
ル、またはＣ１〜６アルコキシから独立に選択される１つまたは複数の置換基で任意選択
的に置換されたＣ１〜６アルキルであり；
または式中、
Ｒ３が、ハロゲン、アリールオキシ、アリール、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、Ｃ
１〜６アルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、スルホンアミド
、ニトリル、またはＣ１〜６アルコキシから独立に選択される１つまたは複数の置換基で
任意選択的に置換されたアルキルアリールであり；
Ｒ４が、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｃ２〜６アルケニ
ル、またはＣ１〜６アルキルで任意選択的にさらに置換されたアリール、およびＣ１〜６
アルキルで任意選択的にさらに置換されたＣ３〜７シクロアルキルから独立に選択される
１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルであり；
または式中、
Ｒ４が、ハロゲン、アリールオキシ、アリール、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、Ｃ
１〜６アルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、スルホンアミド
、ニトリル、またはＣ１〜６アルコキシから独立に選択される１つまたは複数の置換基で
任意選択的に置換されたアルキルアリールである）
およびその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、またはその多形体。
＜２＞
Ｒ３がＣＨ２−アリール基（置換または非置換）であり、かつＲ１、Ｒ２、およびＲ４
が＜１の通りに記載される、＜１＞に記載の化合物。
＜３＞
Ｒ３およびＲ４が共に＜１＞に記載の通りに任意選択的にさらに置換されたＣＨ２−アリール基であり、Ｒ１およびＲ２が＜１＞に記載の通りである、式（Ｉ）の化合物。
＜４＞
Ｒ１がフッ素であり、Ｒ２が水素であり、かつＲ３およびＲ４が＜１＞の通りに記載される、＜１＞に記載の化合物。
＜５＞
下記の化学構造：
【化２】
0006763769.tif 000017
を有する＜１＞に記載の化合物。
＜６＞
１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤または担体と共に、＜１＞または＜５＞に記載の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物もしくは多形体を含む医薬組成物。
＜７＞
薬剤として使用するための、＜１＞または＜５＞に記載の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物もしくは多形体、あるいは式（Ｉ）または（ＩＩ）の前記化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物もしくは多形体を含む＜６＞に記載の医薬組成物。
＜８＞
ＴＬＲ７の調節が関与するいずれの障害の処置にも使用するための、＜１＞または＜５＞に記載の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物もしくは多形体、あるいは式（Ｉ）または（ＩＩ）の前記化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物もしくは多形体を含む＜６＞に記載の医薬組成物。