(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの総合レベルを対象が心臓障害を有するか、または心臓障害を発症する危険があるかどうかの指標とする方法であって、
（ａ）前記対象からの血漿試料を、（ｉ）ＢＩＮ１のエクソン１３によってコードされるポリペプチド（１３＋ＢＩＮ１ポリペプチド）に特異的に結合する抗体、および（ｉｉ）ＢＩＮ１のエクソン１７によってコードされるポリペプチド（１７＋ＢＩＮ１ポリペプチド）に特異的に結合する抗体と、１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの識別を可能にする条件の下で接触させるステップであって、前記１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドが、エクソン１３によってコードされる前記ポリペプチドおよびエクソン１７によってコードされる前記ポリペプチドを含む、ステップ；ならびに
（ｂ）１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの総合レベルを判定するステップであって、対照レベルと比較した総合ＢＩＮ１ポリペプチドレベルの低下が、前記対象が心臓障害を有するか、または心臓障害を発症する危険があることを示す、ステップ
を含む、方法。
【請求項２】
前記心臓障害が不整脈、心筋症またはうっ血性心不全である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象が心臓障害と関連した１つまたは複数の危険因子を有する個体である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する前記抗体が配列番号２に特異的に結合する、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記抗体がモノクローナル抗体もしくは組換え抗体である、
請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記対象が心臓障害を有するかまたは心臓障害を発症する危険があることが、前記対象が心臓障害について処置されるべき対象であることを示す、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを対象において心臓障害のための療法の効能についての指標とする方法であって、
（ａ）前記対象からの第１の血漿試料を、（ｉ）ＢＩＮ１のエクソン１３によってコードされるポリペプチドに特異的に結合する抗体、および（ｉｉ）ＢＩＮ１のエクソン１７によってコードされるポリペプチドに特異的に結合する抗体と、１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの識別を可能にする条件の下で接触させ、第１の１３＋１７＋ＢＩＮ１レベルを判定するステップ；
（ｂ）前記心臓障害のための第１の療法による少なくとも１回の治療の後の前記対象から得られた第２の血漿試料を、（ｉ）ＢＩＮ１のエクソン１３によってコードされるポリペプチドに特異的に結合する前記抗体、および（ｉｉ）ＢＩＮ１のエクソン１７によってコードされるポリペプチドに特異的に結合する抗体と、１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの識別を可能にする条件の下で接触させ、第２の１３＋１７＋ＢＩＮ１レベルを判定するステップ；
（ｃ）前記第１の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを前記第２の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルと比較するステップ
を含み、
前記第１の血漿試料と比較した前記第２の血漿試料における前記１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルの低下または増加しないことが、第２の療法が前記心臓障害のために選択され得ることを示すか、または、前記第１の血漿試料と比較した前記第２の血漿試料における前記１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルの増加が、前記対象が前記心臓障害のための前記第１の療法で治療し続けられ得ることを示す、方法。
【請求項８】
前記心臓障害が不整脈、心筋症またはうっ血性心不全である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する前記抗体が配列番号２に特異的に結合する、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体がモノクローナル抗体もしくは組換え抗体である、
請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを対象における心臓障害の進行または心臓障害を発症する危険の増加の指標とする方法であって、
（ａ）前記対象から得られた第１の血漿試料を、（ｉ）１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体、および（ｉｉ）１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体と接触させることによって、前記第１の血漿試料において第１の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを判定するステップ；
（ｂ）前記第１の血漿試料を得た後に前記対象から得られた第２の血漿試料を、（ｉ）１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体、および（ｉｉ）１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体と接触させることによって、前記第２の血漿試料において第２の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを検出するステップ；
（ｃ）前記第１の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを前記第２の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルと比較するステップ
を含み、前記第１の血漿試料と比較した前記第２の血漿試料における前記１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルの低下が、前記対象の前記心臓障害が進行しているか、または前記対象において心臓障害を発症する危険が増加していることを示す、方法。
【請求項１２】
前記心臓障害が不整脈、心筋症またはうっ血性心不全である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する前記抗体が配列番号２に特異的に結合する、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗体がモノクローナル抗体もしくは組換え抗体である、
請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記対象の心臓障害が進行したかまたは進行する危険があることが、前記対象が心臓障害のための処置を開始されるべき対象であることまたは心臓障害のための前記対象の現在の治療が変更されることを必要とすることを示す、請求項１１〜１４のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１５年３月２日に出願された米国仮出願第６２／１２６，８６７号の利益を主張し、本明細書にその全体を参照によって組み込む。
【背景技術】
【０００２】
心臓障害は、米国で主要な死因である。したがって、心臓障害を診断するための方法、心臓障害の進行を評価するための方法および心臓障害のための治療の効能を評価するための方法が必要である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
対象が心臓障害を有するか、または心臓障害を発症する危険があるかを判定する方法が提供される。本方法は、対象からの生体試料を、（ｉ）ＢＩＮ１のエクソン１３によってコードされるポリペプチド（１３＋ＢＩＮ１ポリペプチド）に特異的に結合する抗体、および（ｉｉ）ＢＩＮ１のエクソン１７によってコードされるポリペプチド（１７＋ＢＩＮ１ポリペプチド）に特異的に結合する抗体と接触させるステップ、および１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの総合レベルを判定するステップを含む。これらの方法では、対照レベルと比較した全１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルの低下は、対象が心臓障害を有するか、または心臓障害を発症する危険があることを示す。
【０００４】
心臓障害のために対象を治療する方法も提供される。本方法は、対象からの試料中の対照レベルと比較した１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドのレベルの低下を検出することによって、対象が心臓障害を有するか、または心臓障害の危険があるかを判定するステップ、および心臓障害のために対象を治療するステップを含む。
【０００５】
対象での１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドのレベルの変化に基づいて、対象において心臓障害のための療法の効能を判定するための方法も提供される。本方法は、対象からの第１の生体試料を、（ｉ）１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体、および（ｉｉ）１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体と接触させて第１の１３＋１７＋ＢＩＮ１レベルを判定するステップ、心臓障害のための第１の療法による少なくとも１回の治療の後に対象から第２の生体試料を得るステップ、第２の生体試料を、（ｉ）１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体、および（ｉｉ）１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体と接触させて第２の１３＋１７＋ＢＩＮ１レベルを判定するステップ、ならびに第１のＢＩＮ１ポリペプチドレベルを第２のＢＩＮ１ポリペプチドレベルと比較するステップを含むことができる。これらの方法では、第１の生体試料と比較して第２の生体試料においてＢＩＮ１ポリペプチドレベルが低下するかまたは増加しない場合は、対象のために心臓障害のための第２の療法を選択することができる。第１の試料と比較して第２の試料において１３＋１７＋ＢＩＮ１レベルが増加する場合は、心臓障害のための第１の療法による対象の治療を継続することができる。
【０００６】
対象において心臓障害の進行または心臓障害を発症する危険の増加を判定するための方法がさらに提供される。本方法は、対象から第１の生体試料を得るステップ、第１の生体試料において第１の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを判定するステップ、対象から第２の生体試料を得るステップ、第２の生体試料において第２の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを判定するステップ、および第１の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを第２の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルと比較するステップを含むことができる。これらの方法では、第１の生体試料と比較して第２の生体試料において１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルが低下する場合は、対象の心臓障害が進行しているか、または対象において心臓障害を発症する危険が増加している。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
対象が心臓障害を有するか、または心臓障害を発症する危険があるかを判定するための方法であって、
（ａ）前記対象からの生体試料を、（ｉ）ＢＩＮ１のエクソン１３によってコードされるポリペプチド（１３＋ＢＩＮ１ポリペプチド）に特異的に結合する抗体、および（ｉｉ）ＢＩＮ１のエクソン１７によってコードされるポリペプチド（１７＋ＢＩＮ１ポリペプチド）に特異的に結合する抗体と、１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの識別を可能にする条件の下で接触させるステップであって、前記１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドが、エクソン１３によってコードされる前記ポリペプチドおよびエクソン１７によってコードされる前記ポリペプチドを含む、ステップ；ならびに
（ｂ）１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの総合レベルを判定するステップであって、対照レベルと比較した総合ＢＩＮ１ポリペプチドレベルの低下が、前記対象が心臓障害を有するか、または心臓障害を発症する危険があることを示す、ステップ
の方法。
（項目２）
前記心臓障害が不整脈である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記心臓障害が心筋症である、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記心臓障害がうっ血性心不全である、項目１のいずれかに記載の方法。
（項目５）
前記対象が心臓障害と関連した１つまたは複数の危険因子を有する個体である、項目１〜４のいずれかに記載の方法。
（項目６）
前記１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する前記抗体が配列番号２に特異的に結合する、項目１〜５のいずれかに記載の方法。
（項目７）
前記抗体がモノクローナル抗体または組換え抗体である、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記抗体の重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）が配列番号５、配列番号６および配列番号７のアミノ酸配列を含む、項目６に記載の方法。
（項目９）
前記抗体の軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）が配列番号８、配列番号９および配列番号１０のアミノ酸配列を含む、項目６に記載の方法。
（項目１０）
心臓障害を有するかまたはその危険がある対象を治療する方法であって、
（ａ）対象が心臓障害を有するかまたは心臓障害を発症する危険があるかを項目１に記載の方法によって判定するステップ、および
（ｂ）前記心臓障害のために前記対象を治療するステップ
を含む方法。
（項目１１）
対象において心臓障害のための療法の効能を判定する方法であって、
（ａ）前記対象からの第１の生体試料を、（ｉ）ＢＩＮ１のエクソン１３によってコードされるポリペプチドに特異的に結合する抗体、および（ｉｉ）ＢＩＮ１のエクソン１７によってコードされるポリペプチドに特異的に結合する抗体と、１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの識別を可能にする条件の下で接触させ、第１の１３＋１７＋ＢＩＮ１レベルを判定するステップ；
（ｂ）前記心臓障害のための第１の療法による少なくとも１回の治療の後に前記対象から第２の生体試料を得るステップ；
（ｃ）前記第２の生体試料を、（ｉ）ＢＩＮ１のエクソン１３によってコードされるポリペプチドに特異的に結合する前記抗体、および（ｉｉ）ＢＩＮ１のエクソン１７によってコードされるポリペプチドに特異的に結合する抗体と、１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの識別を可能にする条件の下で接触させ、第２の１３＋１７＋ＢＩＮ１レベルを判定するステップ；
（ｄ）前記第１の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを前記第２の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルと比較するステップ；ならびに
（ｅ）前記第１の生体試料と比較して前記第２の生体試料において前記１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルが低下するかまたは増加しない場合は、前記心臓障害のための第２の療法を選択し、または、前記第１の生体試料と比較して前記第２の生体試料において前記１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルが増加する場合は、前記心臓障害のための前記第１の療法で前記対象を治療し続けるステップ
を含む方法。
（項目１２）
前記心臓障害が不整脈である、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記心臓障害が心筋症である、項目１１に記載の方法。
（項目１４）
前記心臓障害がうっ血性心不全である、項目１１に記載の方法。
（項目１５）
前記１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する前記抗体が配列番号２に特異的に結合する、項目１１〜１４のいずれかに記載の方法。
（項目１６）
前記抗体がモノクローナル抗体または組換え抗体である、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記抗体の重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）が配列番号５、配列番号６および配列番号７のアミノ酸配列を含む、項目１５に記載の方法。
（項目１８）
前記抗体の軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）が配列番号８、配列番号９および配列番号１０のアミノ酸配列を含む、項目１５に記載の方法。
（項目１９）
対象において心臓障害の進行または心臓障害を発症する危険の増加を判定する方法であって、
（ａ）前記対象から第１の生体試料を得るステップ；
（ｂ）前記試料を、（ｉ）１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体、および（ｉｉ）１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体と接触させることによって、前記第１の生体試料において第１の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを判定するステップ；
（ｃ）前記対象から第２の生体試料を得るステップ；
（ｄ）前記試料を、（ｉ）１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体、および（ｉｉ）１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体と接触させることによって、前記第２の生体試料において第２の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを検出するステップ；
（ｅ）前記第１の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを前記第２の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルと比較するステップ
を含み、前記第１の生体試料と比較して前記第２の生体試料において前記１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルが低下する場合は、前記対象の前記心臓障害が進行しているか、または前記対象において心臓障害を発症する危険が増加している、方法。
（項目２０）
前記心臓障害のために前記対象を治療するステップをさらに含む、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記心臓障害が不整脈である、項目１９または２０に記載の方法。
（項目２２）
前記心臓障害が心筋症である、項目１９または２０に記載の方法。
（項目２３）
前記心臓障害がうっ血性心不全である、項目１９または２０に記載の方法。
（項目２４）
前記１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する前記抗体が配列番号２に特異的に結合する、項目１９〜２３のいずれかに記載の方法。
（項目２５）
前記抗体がモノクローナル抗体または組換え抗体である、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記抗体の重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）が配列番号５、配列番号６および配列番号７のアミノ酸配列を含む、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記抗体の軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）が配列番号８、配列番号９および配列番号１０のアミノ酸配列を含む、項目２５に記載の方法。
（項目２８）
進行したかまたは進行する危険がある心臓障害を有する対象を治療する方法であって、
（ａ）前記対象の心臓障害が進行したかまたは進行する危険があることを項目１９に記載の方法によって判定するステップ、
（ｂ）前記対象の治療を開始または変更するステップ
を含む方法。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１は、捕捉抗体（抗ＢＩＮ１エクソン１７抗体）および検出抗体（抗ＢＩＮ１エクソン１３抗体）の組合せを使用したとき、１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルと光学密度（ＯＤ）シグナルとの間に線形相関があることを示すグラフである（Ｒ２＝０．９９）。
【０００８】
【図２】図２は、正常なイヌ試料中の１３＋／１７＋ＢＩＮ１心臓アイソフォームの心臓の血漿中レベルが１．６７±０．５７ｎｇ／ｍｌ（平均±ＳＥＭ）であり、中央値が０．８６であることを示す。しかし、心筋症のイヌでは、血漿中の１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルは０．３０±０．１１ｎｇ／ｍｌ（平均±ＳＥＭ、中央０．２２、ｐ＝０．０２）に有意に低減される。
【０００９】
【図３】図３は、１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの血漿中レベルの様々な閾値設定において、偽陽性率（１００％−特異度％、Ｘ軸）に対して真の陽性率（感度％、Ｙ軸）をプロットすることによって生成された受信者操作特性（ＲＯＣ）曲線を示すグラフである。ＲＯＣ曲線下面積は０．８５（ｐ＝０．０１）であり、血漿中の１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドが心筋症を検出するのに有用であることを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本明細書に記載される方法は、対象からの生体試料において１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの低下したレベルを検出することによって対象を心臓障害であるか、または心臓障害を発症する危険があると診断することができるとの知見に基づく。したがって、対象が心臓障害を有するか、または心臓障害を発症する危険があるかを判定するための方法が本明細書で提供される。本方法は、対象からの生体試料を、（ｉ）ＢＩＮ１のエクソン１３によってコードされるポリペプチド（１３＋ＢＩＮ１ポリペプチド）に特異的に結合する抗体、および（ｉｉ）ＢＩＮ１のエクソン１７によってコードされるポリペプチド（１７＋ＢＩＮ１ポリペプチド）に特異的に結合する抗体と、１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの識別を可能にする条件の下で接触させるステップであって、１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドが、エクソン１３によってコードされるポリペプチドおよびエクソン１７によってコードされるポリペプチドを含む、ステップ；および１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの総合レベルを判定するステップであって、対照レベルと比較した１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの総合レベルの低下が、対象が心臓障害を有するか、または心臓障害を発症する危険があることを示す、ステップを含む。
【００１１】
ブリッジングインテグレータ１（ＢＩＮ１）遺伝子は、選択的スプライシングを通して核原形質タンパク質のいくつかのアイソフォームをコードする。１０個のＢＩＮ１アイソフォームが現在までに同定されており、２つのアイソフォームは遍在的に発現され、他は特定の組織だけに存在する。ＢＩＮ１遺伝子は、第２染色体（２ｑ１４）の上の１２７，８０５，５９９ｂｐと１２７，８６４，９０３ｂｐとの間に位置し（出典：ＮＣＢＩ）、選択的にスプライシングされて少なくとも１０個の異なるアイソフォームを形成することができる２０個のエクソンを含む。ＢＩＮ１タンパク質は、ＢＡＲドメイン（ＢＩＮ１−アンフィフィジン−Ｒｖｓ１６７）、ホスホイノシチド結合性ドメイン、クラスリン関連タンパク質結合性ドメイン（ＣＬＡＰ）、Ｍｙｃ結合性ドメイン（ＭＢＤ）およびＳｒｃ相同性３ドメイン（ＳＨ３）などの別個のドメインを含有する（Prendergast  GCら、Biochim  Biophys  Acta、２００９年、１７９５巻（１号）：２５〜３６頁）。エクソン１３は、ＣＬＡＰドメインの一部をコードする。
【００１２】
本明細書に利用されるように、１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドは、ＢＩＮ１のエクソン１３によってコードされるポリペプチド（１３＋ＢＩＮ１ポリペプチド）およびＢＩＮ１のエクソン１７によってコードされるポリペプチド（１７＋ＢＩＮ１ポリペプチド）を含むＢＩＮ１アイソフォームである。心臓アイソフォームを含むいくつかのＢＩＮ１アイソフォームは、１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドおよび１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドを含む。これらには、ＢＩＮ１アイソフォーム１（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿６４７５９３）、ＢＩＮ１アイソフォーム４（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿６４７５９６）、ＢＩＮ１アイソフォーム５（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿６４７５９７）およびＢＩＮ１アイソフォーム６（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿６４７５９８）が含まれる。ＢＩＮ１のエクソン１３およびエクソン１７は、それぞれ、エクソン１２ａおよびエクソン１３としても知られる。したがって、用語「エクソン１２ａ」および「エクソン１３」は、ＢＩＮ１のエクソン１３を指すとき、互換的に使用することができるものと理解される。同様に、用語「１２ａ＋ＢＩＮ１ポリペプチド」および「１３＋ＢＩＮ１ポリペプチド」は、１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドを指すとき、互換的に使用することができる。また、用語「エクソン１３」および「エクソン１７」は、ＢＩＮ１のエクソン１７を指すとき、互換的に使用することができるものと理解される。同様に、用語「１３＋ＢＩＮ１ポリペプチド」および「１７＋ＢＩＮ１ポリペプチド」は、１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドを指すとき、互換的に使用することができる。
【００１３】
１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドをコードするエクソン１３は、以下のヌクレオチド配列を有することができる：
【化１】
0006742330.tif 000002
あるいは、ヌクレオチド配列は、配列番号１と少なくとも８５、少なくとも９０または少なくとも９５パーセントの同一性を有し、そのような変動は発現タンパク質のアミノ酸変化をもたらしてもよく、もたらさなくともよい。必要に応じて、エクソン１３は、配列
【化２】
0006742330.tif 000003
を含むアミノ酸配列をコードすることができる。あるいは、アミノ酸配列は、配列番号２と少なくとも８５、少なくとも９０または少なくとも９５パーセント同一であってもよい。配列中の変動は、アミノ酸の挿入、欠失または置換（例えば、１〜５個の保存的アミノ酸置換を含む）を含むことができる。
【００１４】
１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドをコードするエクソン１７は、以下のヌクレオチド配列を有することができる：
【化３】
0006742330.tif 000004
あるいは、ヌクレオチド配列は、配列番号３と少なくとも８５、少なくとも９０または少なくとも９５パーセントの同一性を有し、そのような変動は発現タンパク質のアミノ酸変化をもたらしてもよく、もたらさなくともよい。必要に応じて、エクソン１７は、配列
【化４】
0006742330.tif 000005
を含むアミノ酸配列をコードすることができる。あるいは、アミノ酸配列は、配列番号４と少なくとも８５、少なくとも９０または少なくとも９５パーセント同一であってもよい。配列中の変動は、アミノ酸の挿入、欠失または置換（例えば、１〜５個の保存的アミノ酸置換を含む）を含むことができる。
【００１５】
本明細書で提供される方法では、対象は、脊椎動物、より具体的には哺乳動物（例えば、ヒト、ウマ、ブタ、ウサギ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、非ヒト霊長類、ウシ、ネコ、モルモットまたはげっ歯類）、魚類、鳥類またはは虫類または両生類であってもよい。この用語は、特定の年齢も性別も表さない。したがって、雄であれ雌であれ、成体および新生児対象がカバーされることを意図する。本明細書で使用する場合、患者または対象は互換的に使用することができ、心臓の疾患もしくは障害を有するか、またはそれを発症する危険のある対象を指すことができる。用語患者または対象は、ヒトおよび獣医学的対象を含む。
【００１６】
対象は、心臓障害と関連した１つまたは複数の危険因子を必要に応じて有することができる。これらには、これらに限定されないが、高血圧、肥満、うつ病、ストレス、糖尿病、高飽和脂肪食、家族病歴、心臓障害への遺伝性素因、タバコ喫煙および異常な血液脂質レベル（例えば、高いコレステロール、トリグリセリド、高い低密度リポタンパク質および／または低レベルの高密度リポタンパク質）が含まれる。
【００１７】
本明細書で使用する場合、対照レベルは、同じ対象または異なる１もしくは複数の対象からの１３＋／１７＋ＢＩＮ１発現レベルを指す。同じ対象からの１３＋／１７＋ＢＩＮ１発現レベルは、１３＋／１７＋ＢＩＮ１発現レベルに関する比較のために直近の時点より前の様々な時点で得ることができる。異なる対象からの１３＋／１７＋ＢＩＮ１発現レベルは、本対象と同じ時点で得ることができる（例えば、対照対象および本対象は同じ年齢である）。一般的に、対照対象および本対象は、同じまたは類似の特徴（例えば、年齢、体重、身長、民族性および人種）の多くを共有する。
【００１８】
生体試料は、生物体から得られる任意の試料であってよい。生体試料の例には、体液および組織検体が含まれる。試料の供与源は、生理的媒体、例えば、血液、血清、血漿、脳脊髄液、母乳、膿、組織をかき取ったもの、洗浄液、尿、糞便、組織、例えば、リンパ節、脾臓などであってよい。用語組織は、血液、結合組織、上皮、収縮組織、神経組織などを含む体の任意の組織を指す。
【００１９】
対照レベルは、対照対象から（例えば、生体試料と異なる時点で同じ対象から）もしくは第２の対象から得られる試料を含むことができる対照試料から得ることができるか、または公知の基準を含むことができる。
【００２０】
必要に応じて、対照レベルは、正常、すなわち心臓障害を有しないか、または一般集団と比較して心臓障害を発症する危険がより高くない対象を示すレベルであってよい。このような場合は、対照レベルよりも低い１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの検出レベルは、対象が心臓障害を有するか、または心臓障害を発症する危険があることを示し、一方、対照レベルとほぼ同じであるか、または対照レベルより高い１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの検出レベルは、対象が心臓障害を有さず、心臓障害を発症する危険がないことを示す。必要に応じて、対照レベルは正常より低く、対照レベルと同等またはより低い１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの検出レベルは、対象が心臓障害を有するか、または心臓障害を発症する危険があることを示す。必要に応じて、対照レベルは正常より高く、対照レベルと同等またはより高い１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの検出レベルは、対象が心臓障害を有さず、心臓障害を発症する危険がないことを示す。
【００２１】
対照レベルは、例えば、閾値未満の１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルが、対象が心臓障害を有するかまたはそれを発症する危険があることを示すように、閾値レベルを確立するために使用することができる。この閾値は、陽性対照（心臓障害を有するかまたはそれを発症する危険がある対象からの試料）および陰性対照（心臓障害のない対象、心臓障害の治療が成功した対象、または一般集団と比較して心臓障害の危険がより高くない対象からの試料）を比較することによって、経験的に決定することができる。そのような対照は、必要に応じて、年齢を一致させるか、または心臓障害のタイプによって一致させる。低下した１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを区別するために、閾値は、平均の陰性対照値の少なくとも１、少なくとも１．５、少なくとも２、少なくとも２．５、少なくとも３、少なくとも３．５、少なくとも４、少なくとも４．５または少なくとも５標準偏差下に設定することができる。アッセイのために必要とされる所望の予測力の範囲内である閾値を設定するために、他の統計的方法を使用することができる。
【００２２】
本明細書で使用する場合、陰性対照レベルは、心臓障害のない異なる対象（複数可）または心臓障害の診断前の同じ対象（複数可）から判定することができる。同様に、陽性対照値は、心臓障害を有するかまたはそれを発症する危険のある１または複数の対象から判定することができる。あるいは、陰性または陽性対照は、標準対照におけるように、組換え１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドなどの１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの既知濃度を含有する１つまたは複数の試料に基づくことができる。
【００２３】
必要に応じて、同じ対象から以前に得られた試料中の１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドのレベルと比較して、１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドのレベルの２０％の低減は、対象が心臓障害を有するかまたはそれを発症する危険があることを示す。
【００２４】
必要に応じて、カットオフ値未満の１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドのレベルは、対象が心臓障害を有するか、またはそれを発症する危険があることを示す。例えば、０からカットオフ値、例えば、約０．２５ｎｇ／ｍｌから約１．０ｎｇ／ｍｌ±２０％の間のカットオフ値までの１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドのレベルは、対象が心臓障害を有するかまたはそれを発症する危険があることを示す。必要に応じて、カットオフ値は、約０．２５ｎｇ／ｍｌから約１．０ｎｇ／ｍｌ±１０％の間にあってよい。カットオフ値は、約０．２５ｎｇ／ｍｌおよび約１．０ｎｇ／ｍｌ±２０％を含む、またはその間の任意の値であってよいものと理解される。例えば、カットオフ値が０．２５ｎｇ／ｍｌである場合は、０．２５ｎｇ／ｍｌ未満かまたはそれと同等の１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルは、対象が心臓障害を有するかまたはそれを発症する危険があることを示し、０．２５ｎｇ／ｍｌを超えるいかなる値も、対象が心臓障害を有さないかまたはそれを発症する危険がないことを示す。別の例では、カットオフ値が０．５０ｎｇ／ｍｌである場合は、０．５０ｎｇ／ｍｌ未満かまたはそれと同等の１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルは、対象が心臓障害を有するかまたはそれを発症する危険があることを示し、０．５０ｎｇ／ｍｌを超えるいかなる値も、対象が心臓障害を有さないかまたはそれを発症する危険がないことを示す。別の例では、カットオフ値が０．７５ｎｇ／ｍｌである場合は、０．７５ｎｇ／ｍｌ未満かまたはそれと同等の１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルは、対象が心臓障害を有するかまたはそれを発症する危険があることを示し、０．７５ｎｇ／ｍｌを超えるいかなる値も、対象が心臓障害を有さないかまたはそれを発症する危険がないことを示す。別の例では、カットオフ値が１．０ｎｇ／ｍｌである場合は、１．０ｎｇ／ｍｌ未満かまたはそれと同等の１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルは、対象が心臓障害を有するかまたはそれを発症する危険があることを示し、１．０ｎｇ／ｍｌを超えるいかなる値も、対象が心臓障害を有さないかまたはそれを発症する危険がないことを示す。
【００２５】
必要に応じて、１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの正常な対照レベルの約５０％またはそれ未満である１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドのレベルは、対象が心臓障害を有するかまたはそれを発症する危険があることを示す。したがって、正常な対照レベルの約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、約１％は、対象が心臓障害を有するかまたはそれを発症する危険があることを示す。正常な対照値は、危険もしくは疾患状態の開始の前の同じ対象から判定することができるか、または、年齢、性別および他の条件もしくは因子（例えば、術後の状態、地理的な位置など）を必要に応じて一致させたコホートからのものであってよい。
【００２６】
全体で利用されるように、心臓障害は、これらに限定されないが、不整脈（例えば、心室性不整脈）、うっ血性心不全または心筋症であってよい。
【００２７】
対象が心臓障害を有するか、または心臓障害を発症する危険があると識別されると、対象のさらなる評価を実行することができる。さらなる評価は、心エコー図、胸部Ｘ線、心電図（ＥＫＧ）、運動もしくは灌流ストレス検査、心臓カテーテル法、心臓磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）、心臓コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンおよび／またはホルターモニタリング（連続的ＥＫＧ）を含むことができる。他の血液ベースの心臓バイオマーカーの増加の測定も、実行してもよい。これらのバイオマーカーには、これらに限定されないが、トロポニン、Ｂ型ナトリウム排泄増加性ポリペプチド（ＢＮＰ）、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）およびクレアチンホスホキナーゼ（ＣＫ）が含まれる。
【００２８】
本明細書で提供される方法では、１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドを検出することによって、生体試料中の１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドのレベルを判定することができ、ここで、ポリペプチドは、ＢＩＮ１のエクソン１３によってコードされるポリペプチドおよびＢＩＮ１のエクソン１７によってコードされるポリペプチドを含む。生体試料中の１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドを検出するために、生体試料を、（ｉ）ＢＩＮ１のエクソン１３によってコードされるポリペプチド（１３＋ＢＩＮ１ポリペプチド）に特異的に結合する抗体、および（ｉｉ）ＢＩＮ１のエクソン１７によってコードされるポリペプチド（１７＋ＢＩＮ１ポリペプチド）に特異的に結合する抗体と、１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの識別を可能にする条件の下で接触させる。本明細書で提供される方法は、１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドおよび１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの両方を含むＢＩＮ１ポリペプチドの識別を対象とし、１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドを含み、１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドを含まないＢＩＮ１ポリペプチドの識別も、１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドを含み、１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドを含まないＢＩＮ１ポリペプチドの識別も対象としないと理解される。
【００２９】
本明細書で使用する場合、用語抗体は、これに限定されないが、任意のクラスの全免疫グロブリン（すなわち、インタクトな抗体）を包含する。二重もしくは複数の抗原またはエピトープ特異性を有するキメラ抗体およびハイブリッド抗体、ならびにハイブリッド断片を含む断片、例えばＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂなどが、本明細書で有用である。したがって、それらの特異抗原に結合する能力を保持する抗体の断片が提供され、ここで教示される方法において有用である。例えば、１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドまたは１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドへの結合活性を維持する抗体の断片が、用語抗体またはその断片の意味の範囲内に含まれる。そのような抗体および断片は、当技術分野で公知の技術によって作製することができ、抗体を生成するためのならびに特異性および活性について抗体をスクリーニングするための一般的な方法によって特異性および活性についてスクリーニングすることができる（HarlowおよびLane。Antibodies、A  Laboratory  Manual。Cold  Spring  Harbor  Publications、New  York（１９８８年）を参照）。例えば、その内容がここに参照により完全に組み込まれる米国特許第４，７０４，６９２号に記載されるような、抗体断片および抗原結合性タンパク質（単鎖抗体）のコンジュゲートも、本明細書の方法において有用である。
【００３０】
必要に応じて、抗体はモノクローナル抗体である。本明細書で使用する用語モノクローナル抗体は、実質的に均一な抗体の集団からの抗体を指し、すなわち、集団を含む個々の抗体は、少量存在するかもしれない起こり得る天然に存在する突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、例えば、KohlerおよびMilstein、Nature、２５６巻：４９５頁（１９７５年）またはHarlowおよびLane、Antibodies、A  Laboratory  Manual。Cold  Spring  Harbor  Publications、New  York（１９８８年）によって記載される方法を使用して調製することができる。ハイブリドーマ法では、免疫化剤に特異的に結合する抗体を生成するかまたは生成することが可能なリンパ球を誘発するために、マウスまたは他の適当な宿主動物が免疫化剤で典型的に免疫化される。
【００３１】
モノクローナル抗体は、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されるものなどの組換えＤＮＡ法によって作製することもできる。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手法を使用して容易に単離し、配列決定することができる（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供与源の役割をすることができる。単離されると、ＤＮＡを発現ベクターに入れることができ、それらは、別の方法で免疫グロブリンタンパク質を生成しない、サルのＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、プラズマ細胞腫細胞または骨髄腫細胞などの宿主細胞に次にトランスフェクトさせて、組換え宿主細胞においてモノクローナル抗体の合成を得る。ＤＮＡは、例えば、相同的マウス配列の場所においてヒト重鎖および軽鎖定常ドメインのコード配列を置換することによって（米国特許第４，８１６，５６７号）、または免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全てもしくは一部を共有結合することによって改変することもできる。
【００３２】
一価抗体を調製するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの方法も好適である。その断片、特にＦａｂ断片を生成するための抗体の消化は、当技術分野で公知である通常の技術を使用して達成することができる。例えば、消化はパパインを使用して実行することができる。パパイン消化の例は、ＷＯ９４／２９３４８、米国特許第４，３４２，５６６号ならびにHarlowおよびLane、Antibodies、A  Laboratory  Manual、Cold  Spring  Harbor  Publications、New  York、（１９８８年）に記載される。抗体のパパイン消化は、Ｆａｂ断片と呼ばれる、それぞれ単一の抗原結合性部位を有する２つの同一の抗原結合性断片、および残りのＦｃ断片を典型的に生成する。ペプシン処理は、２つの抗原結合性部位を有し、抗原を架橋することがなお可能である、Ｆ（ａｂ’）２断片と呼ばれる断片を産する。
【００３３】
抗体の消化において生成されるＦａｂ断片は、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメインを含有することもできる。抗体ヒンジ領域からの１つまたは複数のシステインを含む、重鎖ドメインのカルボキシ末端の２、３の残基の付加によって、Ｆａｂ’断片はＦａｂ断片と異なる。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域のジスルフィド架橋によって連結される２つのＦａｂ’断片を含む二価の断片である。Ｆａｂ’−ＳＨは、本明細書において、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有する、Ｆａｂ’のための呼称である。
【００３４】
抗体のヒト化またはヒトバージョンが、本明細書でさらに提供される。ヒト化およびヒト抗体は、当業者に公知の方法を使用して作製することができる；例えば、ヒト抗体は、生殖細胞系突然変異動物を使用して、またはファージディスプレイライブラリーによって生成することができる。
【００３５】
ＢＩＮ１３＋ポリペプチドに特異的に結合する抗体が、本明細書で提供される。例えば、配列番号２、すなわちＢＩＮ１のエクソン１３によってコードされるポリペプチドに特異的に結合する抗体を、本明細書で提供される方法において使用することができる。抗体は、モノクローナル抗体または組換え抗体であってもよい。エクソン１３に特異的に結合するモノクローナル抗体（９Ｄ７  １Ｃ１）を使用することができる。９Ｄ７  １Ｃ１は、この参照により完全に本明細書に組み込まれる国際出願公開番号ＷＯ／２０１３／０４９６６６に記載される。９Ｄ７  １Ｃ１抗体の重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、アミノ酸配列ＧＦＮＩＫＤＹＹ（配列番号５）、ＩＤＰＥＮＧＮＴ（配列番号６）およびＶＲＧＥＤＹＧＧＹＡＭＤＹ（配列番号７）を含む。９Ｄ７  １Ｃ１抗体の軽鎖のＣＤＲは、アミノ酸配列ＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹ（配列番号８）、ＭＱＨＬＥＦＰＦＴ（配列番号９）およびＱＤＶＳＴＡ（配列番号１０）を含む。したがって、１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドに選択的に結合する開示されたモノクローナルまたは組換え抗体は、少なくともこれらのＣＤＲ、または配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９および配列番号１０と少なくとも９５％〜９９％の同一性を有するＣＤＲを含む。
【００３６】
配列番号４、すなわちＢＩＮ１のエクソン１７によってコードされるポリペプチドに特異的に結合する抗体を、本明細書で提供される方法において使用することができる。抗体は、モノクローナル抗体または組換え抗体であってもよい。例えば、抗体は、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）からのカタログ番号＃９４２８に示される、クローン９９Ｄなどのモノクローナル抗体であってよい。
【００３７】
本明細書で使用する場合、フレーズ「特異的に結合する」または「選択的に結合する」は、タンパク質、細胞、プロテオグリカンおよび他の生物学的製剤の不均一集団中のポリペプチド、例えば１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドまたは１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの存在を決定する結合反応を指す。したがって、指定された条件の下では、本発明の抗体またはその断片は、１３＋ＢＩＮ１ポリペプチド、１７＋ＢＩＮ１ポリペプチド、またはそのエピトープ、断片もしくは変異体に結合し、本明細書に記載されるような生体試料中に存在する他のタンパク質またはプロテオグリカンに有意な量で結合しない。
【００３８】
そのような条件の下での抗体への選択的結合性は、１３＋ＢＩＮ１ポリペプチド、１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドまたはその断片へのその特異性に関して選択される抗体を必要とすることがある。１３＋ＢＩＮ１ポリペプチド、１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドまたはその断片と選択的に結合する抗体を選択するために、様々なイムノアッセイフォーマットを使用することができる。例えば、タンパク質、プロテオグリカンまたはその変異体、断片、エピトープもしくはタンパク質コアと選択的に免疫反応性である抗体を選択するために、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイが通常使用される。イムノアッセイフォーマットおよび選択的結合性を判定するために使用することができる条件の記載については、HarlowおよびLane。Antibodies、A  Laboratory  Manual。Cold  Spring  Harbor  Publications、New  York、（１９８８年）を参照。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えばMunsonら、Anal.  Biochem.、１０７巻：２２０頁（１９８０年）のスキャチャード解析によって判定することができる。
【００３９】
好ましくは、ＥＬＩＳＡでは、本発明の抗体またはその断片の１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドまたは１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドへの結合性は、バックグラウンドレベルの少なくとも１．５倍である（すなわち、非特異的結合性と同等であるかまたは非特異的結合性をわずかに超える）。より好ましくは、本発明の抗体またはその断片の１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドまたは１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドへの結合性は、バックグラウンドレベルの少なくとも２．５倍である。
【００４０】
ポリペプチドの発現の判定に有用な分析技術の例には、免疫組織化学、ウェスタンブロット、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、酵素免疫検定法（ＥＩＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、タンパク質アレイまたは蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）が含まれる。これらの技術は、当業者に公知である。例えば、Sambrookら、Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual、３版、Cold  Spring  Harbor  Press、Cold  Spring  Harbor、NY（２００１年）を参照。
【００４１】
必要に応じて、本明細書に記載される抗体は、検出可能な部分で標識することができる。例えば、検出可能な部分は、蛍光性部分、酵素結合部分（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲート抗体）、ビオチン部分および放射標識部分からなる群から選択することができる。
【００４２】
実施例に記載される通り、生体試料中の１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドのレベルは、捕捉ＥＬＩＳＡアッセイを使用して検出することができる。例えば、１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドを含有する生体試料中のＢＩＮ１アイソフォーム、すなわち、１３＋ＢＩＮ１アイソフォームの全てを捕捉するために、対象からの生体試料を、１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体と接触させる。１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドも含む１３＋ＢＩＮ１アイソフォーム、すなわち１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームまたはポリペプチドを識別するために、捕捉された１３＋ＢＩＮ１アイソフォームは、１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する検出抗体と次に接触させる。当業者は、１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドを含有する生体試料中のＢＩＮ１アイソフォーム、すなわち、１７＋ＢＩＮ１アイソフォームの全てを捕捉するために、生体試料を１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体と接触させることによって、捕捉アッセイを実行することもできることを理解するだろう。１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドも含む１７＋ＢＩＮ１アイソフォーム、すなわち１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームまたはポリペプチドを識別するために、捕捉された１７＋ＢＩＮ１アイソフォームは、１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する検出抗体と次に接触させる。
【００４３】
心臓障害を有するかまたはその危険がある対象を治療する方法が、さらに提供される。これらの方法は、対象が心臓障害を有するか、または心臓障害を発症する危険があるかを本明細書に記載される方法によって判定するステップ、および心臓障害のために対象を治療するステップを含む。
【００４４】
本明細書で使用する場合、用語治療、治療するまたは治療することは、疾患または状態またはその疾患もしくは状態の症状の影響を低減する方法を指す。したがって、開示される方法では、治療は、確立された疾患または状態またはその疾患もしくは状態の症状の重症度の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％の低減を指すことができる。心臓障害の症状には、これらに限定されないが、胸部疼痛、めまい、息切れおよび異常な心拍数が含まれる。例えば、疾患を治療するための方法は、対照と比較して対象において疾患の１つまたは複数の症状の１０％の低減がある場合、治療と考えられる。したがって、低減は、天然または対照レベルと比較して１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、または１０％から１００％の間の任意のパーセントの低減であってよい。治療は、疾患、状態または疾患もしくは状態の症状の治癒または完全な除去を必ずしも指すものではないと理解される。
【００４５】
治療は、これらに限定されないが、心臓障害のタイプ、対象の年齢、体重、一般健康状態、性別および食事を含むいくつかの因子によって異なる。治療の様式および時間も障害の重症度によって異なり、当業者が決定することができる。
【００４６】
例えば、うっ血性心不全は、利尿剤（例えば、フロセミド、ブメタニドまたはヒドロクロロチアジド（hydrocholorothiazide））、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、ベータブロッカー、または心拍出量を増加させることができるジゴキシンなどの薬剤の１つまたは複数を投与することによって治療することができる。適当な場合は、治療は、体重減少プログラム、運動プログラムおよび／または禁煙と組み合わせることができる。高血圧、高コレステロールおよび糖尿病を制御するための治療を用いることもできる。心不全の重症度によっては、外科的処置、例えば、冠状動脈バイパス移植（ＣＡＢＧ）手術、弁手術（例えば、大動脈弁置換術または僧帽弁置換術）、動脈瘤修復、左室補助装置（ＬＶＡＤ）手術、筋腫摘出術、冠状動脈の再灌流または心臓移植を実行してもよい。
【００４７】
心臓の腔が拡張し、心臓が弱くなる状態である心筋症を治療することもできる。他の心臓障害と同様に、治療は、因子の中でも、心筋症のタイプ、症状の重症度、年齢および全体的健康状態に依存する。例えば、心筋症は、少し例を挙げれば、血圧を下げる薬剤、心拍を減速する薬剤（例えば、ベータブロッカーまたはカルシウムチャネルブロッカー）、抗不整脈剤、抗凝固剤または抗炎症剤を投与することによって治療することができる。アルコール中隔アブレーションなどの非外科的処置を実行することができる。心筋症を治療するために、開胸手術、ペースメーカーの植え込みまたは心臓移植などの外科的処置を実行することもできる。
【００４８】
別の例では、不整脈は、対象の心拍数を制御する薬剤、例えば、ベータブロッカーを投与することによって治療することができる。抗凝固剤、例えば、ワルファリン、ダビガトランまたはアスピリンを投与することもできる。医薬品が持続的な不規則な心臓のリズムを制御することができない場合は、電気的除細動を実行することができる。ペースメーカーまたは電気除細動器−細動除去器（ＩＣＤ）を対象に植え込むこともできる。一部の場合には、不整脈によって引き起こされる心疾患を直すのに、心臓手術が必要なことがある。本明細書で提供される方法は、心室不整脈を有したかまたは有している対象が、将来の心室不整脈の危険があるかどうかを判定するために使用することができる。例えば、同じ対象から以前に得られた試料中の１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドのレベルと比較して、１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドのレベルの２０％の低減が観察される場合は、このことは、対象が将来の心室不整脈の危険があり、したがって対象は治療されるべきであることを示す。将来の心室不整脈の早期検出は、対象の早期の治療を促すことができ、心不全または死などの深刻な結果を予防することができる。
【００４９】
対象において心臓障害のための療法の効能を判定する方法が、さらに提供される。これらは、対象からの第１の生体試料を、（ｉ）ＢＩＮ１のエクソン１３によってコードされるポリペプチドに特異的に結合する抗体、および（ｉｉ）ＢＩＮ１のエクソン１７によってコードされるポリペプチドに特異的に結合する抗体と、１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの識別を可能にする条件の下で接触させ、第１の１３＋１７＋ＢＩＮ１レベルを判定するステップ；心臓障害のための第１の療法による少なくとも１回の治療の後に対象から第２の生体試料を得るステップ；第２の生体試料を、（ｉ）ＢＩＮ１のエクソン１３によってコードされるポリペプチドに特異的に結合する抗体、および（ｉｉ）ＢＩＮ１のエクソン１７によってコードされるポリペプチドに特異的に結合する抗体と、１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドの識別を可能にする条件の下で接触させ、第２の１３＋１７＋ＢＩＮ１レベルを判定するステップ；第１の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを第２の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルと比較するステップ；および第１の生体試料と比較して第２の生体試料において１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルが低下するかまたは増加しない場合は、心臓障害のための第２の療法を選択し、または、第１の生体試料と比較して第２の生体試料において１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルが増加する場合は、心臓障害のための第１の療法で対象を治療し続けるステップを含む。当業者は、適切な投薬量または治療レジメンの変更を決定することができる。
【００５０】
対象において心臓障害の進行または心臓障害を発症する危険の増加を判定する方法も提供される。これらの方法は、対象から第１の生体試料を得るステップ；試料を、（ｉ）１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体、および（ｉｉ）１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体と接触させることによって、第１の生体試料において第１の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを判定するステップ；対象から第２の生体試料を得るステップ；試料を、（ｉ）１３＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体、および（ｉｉ）１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体と接触させることによって、第２の生体試料において第２の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを検出するステップ；第１の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルを第２の１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルと比較するステップを含み、第１の生体試料と比較して第２の生体試料において１３＋１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルが低下する場合は、対象の心臓障害が進行しているか、または対象において心臓障害を発症する危険が増加している。
【００５１】
心臓障害の進行または心臓障害を発症する危険の増加は、追加の検査、治療の変更および／または治療頻度の変更の必要性を一般的に示す。進行した心臓障害を有する対象または心臓障害を発症する危険が増加した対象を治療するためには、どのような治療の変更が必要であるかを当業者は判定することができる。以前の生体試料と比較した１３＋／１７＋ＢＩＮ１発現の類似のレベルは、心臓障害が進行していないことを示し、以前の生体試料と比較した１３＋／１７＋ＢＩＮ１発現のより高いレベルは改善を示す。一般的に、そのような改善は、治療の成功を示す。このような場合、１３＋／ＢＩＮ１７＋ポリペプチドのレベルが十分に高いならば、治療を続けることまたは中止することさえできる。
【００５２】
開示される方法および組成物のために使用することができるか、それと併用することができるか、その調製のために使用することができるか、またはその生成物である材料、組成物および成分が開示される。これらおよび他の材料は本明細書に開示され、これらの材料の組合せ、サブセット、相互作用、群などが開示される場合、これらの化合物の各様々な個々のおよび集合的な組合せおよび順列の具体的な参照は明示的に開示されないかもしれないが、各々は本明細書で具体的に企図および記載されることが理解される。例えば、方法が開示および議論され、その方法の中を含めいくつかの分子に加えることができるいくつかの改変が議論される場合は、それとは反対に具体的に示されていない限り、方法のあらゆる組合せおよび順列ならびに可能な改変が具体的に企図される。同様に、これらの任意のサブセットまたは組合せも具体的に企図され、開示される。この概念は、これに限定されないが、開示される組成物を使用する方法におけるステップを含む、本開示の全ての態様に当てはまる。したがって、実行することができる様々な追加のステップがある場合、これらの追加のステップの各々は、開示される方法の任意の特定の方法ステップまたは方法ステップの組合せとともに実行することができ、各々のそのような組合せまたは組合せのサブセットは具体的に企図されており、開示されていると考えるべきであると理解される。
【００５３】
本明細書に引用される刊行物およびそれらが引用される材料は、ここに参照により完全に具体的に組み込まれる。
【実施例】
【００５４】
抗体
血液試料中のＢＩＮ１心臓アイソフォーム１３＋／１７＋ＢＩＮ１（１２ａ＋／１３＋ＢＩＮ１としても知られる）のレベルを測定するために、２つのＢＩＮ１抗体を酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）で使用した。捕捉抗体としてマウスモノクローナル抗ＢＩＮ１エクソン１７抗体（クローン９９Ｄ、Ｓｉｇｍａ、カタログ番号＃９４２８、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を使用して、１３＋／１７＋ＢＩＮ１心臓アイソフォームの検出を実行した。ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートマウスモノクローナル抗ＢＩＮ１エクソン１３（組換え抗体クローン＃９Ｄ７１Ｃ１）を使用して、エクソン１７によってコードされるポリペプチドを含有するＢＩＮ１  １３＋／１７＋アイソフォームのサブセットの検出を実行した。
捕捉サンドイッチＥＬＩＳＡによる血漿ＢＩＮ１タンパク質の検出
【００５５】
ＥＬＩＳＡアッセイで使用される抗体の組合せは、上に記載される。ｐＨ９．０の０．１Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液中で希釈した捕捉抗体（５μｇ／ｍｌ）で、丸底９６ウェルプレートを４℃で一晩コーティングした。未結合の抗体を取り出すためにプレートをトリス緩衝食塩水ＴＷＥＥＮ−２０（ＴＢＳＴ）で３回洗浄し、オービタルシェーカーの上でＴＢＳＴ（ブロッキング緩衝液）中の１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）により室温で１時間ブロックした。５０μｌの基準（精製された組換えＢＩＮ１タンパク質）および各血漿試料を２反復で追加し、プレートを軌道回転させながら４℃で一晩インキュベートした。試料を次に吸引し、プレートをＴＢＳＴで２回速やかに、および５分間、３回洗浄した。一次検出抗体（５０μｌのＨＲＰコンジュゲートマウス抗ＢＩＮ１エクソン１３、ブロッキング緩衝液中に５μｇ／ｍｌ）を次に追加し、プレートを軌道回転させながら室温で１時間インキュベートした。検出抗体を次に吸引し、プレートをＴＢＳＴで２回速やかに、続いて５分間、３回洗浄した。テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質を追加し、プレートを暗所で３０分間インキュベートした後、１Ｎ塩酸で反応を終止した。反応終止の後、ＥＬｘ８００マイクロプレート分光計（ＢＩＯＴＥＫ、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ）を使用してプレートを読み取り、光学密度（ＯＤ）値を４０５ｎｍで決定した。既知のタンパク質濃度のタンパク質基準のＯＤ値から、標準曲線を生成した。次に、各試料のＢＩＮ１濃度を標準曲線から導いた。
イヌ試料
【００５６】
見かけ上健康なイヌ（正常と呼ぶ）からの８個の血液試料および心筋症のイヌ（ＣＭと呼ぶ）からの１０個の血液試料を、この研究のために収集した。１０ｍｌの全血をＥＤＴＡ抗凝固チューブに得た。血漿を血液細胞から分離するために、試料を４℃で、４，０００ｒｐｍで２０分間、遠心分離した。血漿を次に収集し、２００〜５００μｌのアリコートに等分し、液体窒素中で急速冷凍し、次に後の分析のために−８０℃のフリーザーで保存した。ＥＬＩＳＡ実験の日に、試料を氷の上で解凍し、４℃において４，０００ｒｐｍで再び遠心分離して、いかなる沈殿剤も除去した。
結果
標準曲線
【００５７】
この研究では、精製された組換えＢＩＮ１タンパク質アイソフォーム１３＋／１７＋ＢＩＮ１および１７＋ＢＩＮ１をそれぞれ陽性および陰性対照として使用した。ＧＳＴタグＢＩＮ１組換えタンパク質（１３＋／１７＋ＢＩＮ１および１７＋ＢＩＮ１）を、ヒトＨＥＫ−２９３細胞において過剰発現させた。全細胞タンパク質溶解物をこれらの細胞から収集し、ＢＩＮ１タンパク質を精製するために次にグルタチオンビーズを使用した。グルタチオンビーズに付着するＢＩＮ１タンパク質を、イミダゾール緩衝液中で次に溶出させた。抗ＢＩＮ１エクソン１７抗体による捕捉および抗ＢＩＮ１エクソン１３抗体による検出の組合せを使用した特異的心臓ＢＩＮ１検査を使用すると、図１に示すように、１７＋ＢＩＮ１でなく１３＋／１７＋ＢＩＮ１だけがＯＤシグナルの用量依存的増加を起こす。精製された１３＋／１７＋ＢＩＮ１の０〜５０ｎｇの範囲内では、１３＋／１７＋ＢＩＮ１タンパク質レベルとＯＤシグナルの間に線形相関がある（Ｒ２＝０．９９）。
イヌ試料
【００５８】
正常イヌ対心筋症（ＣＭ）イヌにおいて心臓ＢＩＮ１アイソフォームのレベルを検出するために１８個のイヌ試料（正常８個および心筋症１０個）を分析するために、ＢＩＮ１心臓検査を使用した。図２に示すように、正常なイヌ試料中の心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームの血漿中レベルは、１．６７±０．５７ｎｇ／ｍｌ（平均±ＳＥＭ）であり、中央値は０．８６である。心筋症のイヌでは、血漿中の１３＋／１７＋ＢＩＮ１は、０．３０±０．１１ｎｇ／ｍｌ（平均±ＳＥＭ、中央０．２２、ｐ＝０．０２）に有意に低減される。次に、１３＋／１７＋ＢＩＮ１の血漿中レベルの様々な閾値設定において、偽陽性率（１００％−特異度％、Ｘ軸）に対して真の陽性率（感度％、Ｙ軸）をプロットすることによって、受信者操作特性（ＲＯＣ）曲線を生成した。図３に示すように、ＲＯＣ曲線下面積は０．８５（ｐ＝０．０１）であり、血漿中の１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドが心筋症を検出するのに有用であることを示す。例えば、０．３９ｎｇ／ｍｌ（図３の星印の所）未満の血漿中１３＋／１７＋ＢＩＮ１ポリペプチドレベルでは、心筋症患者の７０％（真の陽性率）は、わずか１２％の偽陽性率で検出できる。
心不全の診断
【００５９】
対象の心不全を診断するために、心不全の１つまたは複数の症状を呈している患者に対してＢＩＮ１心臓検査が実行される。症状には、これらに限定されないが、疲労、息切れ、運動不耐性、流体貯留による体重増加、四肢の腫脹、呼吸困難により横になることが困難、非特異的疼痛、食欲不振または便秘が含まれる。試料、例えば血漿が対象から得られ、心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームのレベルが判定される。心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームのレベルが低い、例えば、約０．２５ｎｇ／ｍｌと約１．０ｎｇ／ｍｌ±２０％の間とのカットオフ値未満であるか、またはレベルが正常対照の約５０％もしくはそれ未満である場合は、心機能を評価するために心エコー図が指示される。低減した駆出率（ＨＦｒＥＦ）のために患者が心不全を有することが心エコー図によって明らかにされる場合は、対象の治療が開始される。治療は、例えば、１つもしくは複数のベータブロッカー、１つもしくは複数のＡＣＥ阻害剤、１つもしくは複数のアンジオテンシン受容体ブロッカーおよび／または１つもしくは複数の利尿剤の投与を含むことができる。維持された駆出率（ＨＦｐＥＦ）、すなわち、正常な駆出率であるが、制限された充填および容量過負荷のために患者が心不全を有することが心エコー図によって明らかにされる場合は、対象の治療が開始される。治療は、例えば、１つもしくは複数のベータブロッカー、１つもしくは複数のＡＣＥ阻害剤、１つもしくは複数のアンジオテンシン受容体ブロッカーおよび／または１つもしくは複数の利尿剤の投与を含むことができる。ＨＦｐＥＦのために心不全と診断される対象は、虚血性心疾患についても検査されるべきである。心臓弁膜症のために患者が心不全を有することが心エコー図によって明らかにされる場合は、対象の治療が開始される。治療は、例えば、１つもしくは複数のベータブロッカー、１つもしくは複数のＡＣＥ阻害剤、１つもしくは複数のアンジオテンシン受容体ブロッカーおよび／または１つもしくは複数の利尿剤の投与を含むことができる。患者を、欠陥のある心臓弁の外科的修復または交換について評価することもできる。
【００６０】
既知の心不全を有する患者については、そのレベルが、対象において以前に検出された心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームのレベルと比較して低下するか、もしくはカットオフ値未満、例えば、約０．２５ｎｇ／ｍｌ±２０％と約１．０ｎｇ／ｍｌ±２０％の間のカットオフ値未満に下がるときか、またはそのレベルが心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームの正常レベルの約５０％もしくはそれ未満であるときは、心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームのレベルを３〜６カ月ごとに判定し、心エコー図を指示することができる。
疾患進行の追跡
【００６１】
慢性高血圧を有するが正常に機能している高血圧性心臓を有する患者は、患者が無症状の場合は毎年、または患者が心不全に関連した１つもしくは複数の症状を有するごとに、心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームのレベルを判定することができる。心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームのレベルがカットオフレベル未満、例えば、約０．２５ｎｇ／ｍｌと約１．０ｎｇ／ｍｌ±２０％の間のカットオフ値未満に低下するか、または心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームのレベルが正常の約５０％もしくはそれ未満であるときは、患者は、例えば心エコー図によってＨＦｐＥＦについて評価されるべきである。心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームの低下したレベルが検出されると、１つもしくは複数のベータブロッカー、１つもしくは複数のＡＣＥ阻害剤、１つもしくは複数のアンジオテンシン受容体ブロッカーおよび／または１つもしくは複数の利尿剤を投与することによって、患者を治療することができる。
【００６２】
糖尿病を有するが正常に機能している心臓を有する患者は、患者が無症状の場合は毎年、または患者が心不全に関連した１つもしくは複数の症状を有するごとに、心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームのレベルを判定することができる。心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームのレベルがカットオフレベル未満、例えば、約０．２５ｎｇ／ｍｌと約１．０ｎｇ／ｍｌ±２０％の間のカットオフ値未満に低下するか、または心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームのレベルが正常対照の約５０％もしくはそれ未満であるときは、患者は、例えば心エコー図によってＨＦｐＥＦについて評価されるべきである。心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームの低下したレベルが検出されると、１つもしくは複数のベータブロッカー、１つもしくは複数のＡＣＥ阻害剤、１つもしくは複数のアンジオテンシン受容体ブロッカーおよび／または１つもしくは複数の利尿剤を投与することによって、患者を治療することができる。
【００６３】
正常に機能している虚血性心疾患を有する患者は、患者が無症状の場合は毎年、または患者が心不全に関連した１つもしくは複数の症状を有するごとに、心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームのレベルを判定することができる。心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームのレベルがカットオフレベル未満、例えば、約０．２５ｎｇ／ｍｌと約１．０ｎｇ／ｍｌ±２０％の間のカットオフ値未満に低下するか、またはレベルが正常対照の約５０％もしくはそれ未満またはそれ未満であるときは、患者は、例えば心臓専門医を紹介するおよび／または心エコー図を実行することによって、ＨＦｐＥＦについて評価されるべきである。心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームの低下したレベルが検出されると、１つもしくは複数のベータブロッカー、１つもしくは複数のＡＣＥ阻害剤、１つもしくは複数のアンジオテンシン受容体ブロッカーおよび／または１つもしくは複数の利尿剤を投与することによって、患者を治療することもできる。この患者は、ストレス検査または心臓カテーテル法によって虚血性心疾患についても調査されるべきである。
【００６４】
既知の心臓弁膜症を有する患者は、患者が無症状の場合は６〜１２カ月ごとに、または患者が心不全に関連した１つもしくは複数の症状を有するごとに、心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームのレベルを判定することができる。心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームのレベルがカットオフレベル未満に、例えば、約０．２５ｎｇ／ｍｌと約１．０ｎｇ／ｍｌ±２０％の間のカットオフ値未満に低下するか、またはレベルが正常の約５０％もしくはそれ未満であるときは、これは、大動脈弁狭窄または僧帽弁逆流などの心臓弁膜症と関連した心機能の悪化を示す。患者は、外科的介入について評価されるべきである。
心機能の術後の回復
【００６５】
心臓手術の後、例えば、大動脈弁置換術、僧帽弁置換術、筋腫摘出術または冠状動脈の再灌流、心臓移植の後に、患者の心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームのレベルを判定することによって、心機能の回復について患者をモニタリングすることができる。心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームのレベルが、手術前の心臓１３＋／１７＋ＢＩＮ１アイソフォームのレベルと比較して改善しないか、または改善し、その後低下する場合は、患者は追加の処置または元の手術の見直しについて再評価されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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