(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ４０Ｌに結合する単離抗体の有効成分を含む疾患または障害の治療のための医薬組成物であって、単離抗体が軽鎖および重鎖配列を含み、ここで
１）軽鎖が配列番号７のアミノ酸配列からなり、かつ重鎖が配列番号９のアミノ酸配列からなり；
２）軽鎖が配列番号７のアミノ酸配列からなり、かつ重鎖が配列番号１３のアミノ酸配列からなり；
３）軽鎖が配列番号１１のアミノ酸配列からなり、かつ重鎖が配列番号９のアミノ酸配列からなり；または
４）軽鎖が配列番号１１のアミノ酸配列からなり、かつ重鎖が配列番号１３のアミノ酸配列からなり；
前記医薬組成物が生理的に許容可能な担体をさらに含み、かつ前記疾患または障害が筋委縮性側索硬化症、全身性紅斑性狼瘡、１型糖尿病、重症筋無力症、炎症性腸疾患、免疫性血小板減少性紫斑病、リウマチ性関節炎、大腸炎、薬剤誘発性ループス腎炎、移植片対宿主疾患、移植片拒絶反応およびアテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、多巣性運動ニューロパチー、原発性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症、ケネディ病、および脊髄小脳失調から選択される、
医薬組成物。
【請求項２】
前記疾患または障害が筋委縮性側索硬化症、薬剤誘発性ループス腎炎、全身性紅斑性狼瘡、移植片対宿主疾患、１型糖尿病、移植片拒絶反応、免疫性血小板減少性紫斑病、およびリウマチ性関節炎である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
単離抗体が、軽および重鎖配列を含み、ここで軽鎖が配列番号７のアミノ酸配列からなり、かつ重鎖が配列番号９のアミノ酸配列からなる、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記医薬組成物がＣＤ２８とＣＤ８６の間またはＣＤ２８とＣＤ８０の間の相互作用を遮断する化合物と投与され、前記化合物が、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ融合タンパク質である、請求項１−３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記医薬組成物がＣＤ２８とＣＤ８６の間またはＣＤ２８とＣＤ８０の間の相互作用を遮断する化合物と組み合わせて投与され、前記化合物が、アバタセプトまたはベラタセプトまたはガリキシマブである、請求項１−３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本ＰＣＴ出願は、参照により本明細書に開示全体が組込まれている、２０１５年２月３日付けの米国仮特許出願第６２，１１１，２６１号の利益を主張する。  
【０００２】
抗ＣＤ４０Ｌ抗体、該抗体を含む組成物、及びＣＤ４０Ｌ関連疾患または障害の治療のためのこれらの使用方法。
【０００３】
配列表
本出願は、電子式可読書式で提出される配列表を含んでいる。電子配列表は、２０１６年２月２日に新規作成されたものであり、「３８４８９７ＳＴ２５．ｔｘｔ」と命名され、３２．６ＫＢのサイズを有する。電子「３８４８９７ＳＴ２５．ｔｘｔ」ファイル内の配列表の内容全てが、本明細書中にこの参照番号で包含される。
【背景技術】
【０００４】
ＣＤ４０とそのリガンドＣＤ４０Ｌの相互作用は、免疫応答を調節する上で極めて重要な役割を果たす。ＣＤ４０に対するＣＤ４０Ｌの結合は、ＣＤ８０及びＣＤ８６などの共刺激分子をアップレギュレートするＣＤ４０経路の活性化をひき起こす。モノクローナル抗体によるＣＤ４０とＣＤ４０Ｌの間の相互作用の封鎖は、様々な前臨床モデル内の自己免疫及び移植片拒絶からの防御を結果としてもたらすことが示されてきた。近年、筋委縮性側索硬化症のマウスモデルにおいて、ＣＤ４０Ｌに向けられた抗体が発病を遅延させ、発病後の余命を延長することが示された（参照により本明細書に組込まれている米国特許第８，４３５，５１４号）。初期の臨床研究において、ヒト化抗−ＣＤ４０Ｌ抗体ｈｕ５ｃ８は、紅斑性狼瘡患者及び免疫性血小板減少性紫斑病患者で効能を示した。しかしながら、ｈｕ５ｃ８での治療を受けた患者における血栓栓塞症の発生が、さらなる試験を躊躇させた。さらなるインビトロ及び前臨床動物研究により、ＦｃとＦｃ受容体ＦｃγＲＩＩａとの相互作用が、血小板の活性化及び凝集をひき起こし、その結果血栓塞栓性事象がもたらされることが立証された。Ｆｃエフェクタ機能が欠如した脱グリコシル化抗ＩＣ４０ＬＩｇＧ１を作るためＦｃ領域内に点突然変異を導入することを含め、免疫グロブリンＦｃ領域とＦｃγＲＩＩａとの相互作用を削減するかまたは除去することを目的として様々なアプローチが講じられてきた。他のアプローチでは、Ｆｃ領域が欠如した抗体またはＦｃ領域内に多数のアミノ酸置換を含む抗体のフラグメントが使用される。抗ＣＤ４０Ｌ抗体ｈｕ５ｃ８はヒト患者において効能を示したものの、市場には抗ＣＤ４０Ｌ抗体が全く存在しない。したがって、血小板の活性化または凝集をひき起こさず、しかも安定していてＣＤ４０Ｌに結合する、ヒトへの投与のための改良型抗−ＣＤ４０Ｌに対するニーズが存在する。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、血小板凝集及び付随する血栓栓塞症のリスクを削減または除去するように操作されたＦｃドメインを有するヒト及び非ヒト霊長類において使用するのに好適である抗ＣＤ４０Ｌ抗体を提供する。本発明の一態様において、本発明は、マウス抗ヒトＣＤ４０Ｌ抗体５ｃ８のヒト化バージョンである抗体を提供する。一実施形態において、本発明の抗体は、可変軽鎖及び可変重鎖が５ｃ８のＣＤＲ配列を含むヒトＩｇＧｌコンセンサスフレームワークを含む。
【０００６】
本発明の一態様は、ＣＤ４０Ｌに結合しかつ軽鎖及び重鎖を含む単離抗体において、（ｉ）軽鎖が、配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、（ｉｉ）重鎖が、可変重鎖領域とＦｃ領域を含み、ａ）重鎖可変領域が、配列番号２と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｂ）Ｆｃ領域が、配列番号３と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｆｃ領域はＣ１１Ｓ、Ｃ１４Ｓ、及びＰ２３Ｓからなる群から選択される１つの置換または置換の組合せを含む、単離抗体である。任意には、Ｆｃ領域は、さらなるアミノ酸置換Ｃ５Ｓを含む。
【０００７】
本発明の別の態様は、治療上有効な量の本発明に係る抗体を対象に投与することを含む、ＣＤ４０Ｌ関連疾患または障害を有する患者を治療するための方法である。本発明の一実施形態は、治療上有効な量の本発明に係る抗体を対象に投与することを含む、神経変性もしくは神経筋疾患または障害；炎症性もしくは免疫性疾患または障害；あるいは自己免疫疾患を有する患者を治療するための方法である。別の実施形態は、ＣＤ２８とＣＤ８６の間またはＣＤ２８とＣＤ８０の間の相互作用を遮断する化合物と組合せて投与される、治療上有効な量の本発明に係る抗体を対象に投与することを含む、ＣＤ４０Ｌ関連疾患または障害を有する患者を治療するための方法である。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１Ａ】ｈｕ５ｃ８についての重鎖アミノ酸配列を示す。太字で示されているアミノ酸は、５ｃ８についての重鎖配列及びＪＢ５及びＪＢ５−Ｋ７４Ｒについての重鎖配列の間で異なるアミノ酸を表わす。
【図１Ｂ】ＪＢ５についての重鎖アミノ酸配列を示す。太字で示されているアミノ酸は、５ｃ８についての重鎖配列及びＪＢ５及びＪＢ５−Ｋ７４Ｒについての重鎖配列の間で異なるアミノ酸を表わす。
【図１Ｃ】ＪＢ５−Ｋ７４Ｒについての重鎖アミノ酸配列を示す。太字で示されているアミノ酸は、５ｃ８についての重鎖配列及びＪＢ５及びＪＢ５−Ｋ７４Ｒについての重鎖配列の間で異なるアミノ酸を表わす。
【図２Ａ】ＪＢ５についての軽鎖アミノ酸配列を示す。太字で示されているアミノ酸は、５ｃ８及びＪＢ５−Ｒ２８Ｋについての軽鎖配列間及びｈｕ５ｃ８及びＪＢ５についてのＦｃ領域間で異なるアミノ酸を表わす。
【図２Ｂ】ＪＢ５−Ｒ２８Ｋについての軽鎖アミノ酸配列を示す。太字で示されているアミノ酸は、５ｃ８及びＪＢ５−Ｒ２８Ｋについての軽鎖配列間及びｈｕ５ｃ８及びＪＢ５についてのＦｃ領域間で異なるアミノ酸を表わす。
【図２Ｃ】ｈｕ５ｃ８についてのＦｃ領域アミノ酸配列を示す。太字で示されているアミノ酸は、５ｃ８及びＪＢ５−Ｒ２８Ｋについての軽鎖配列間及びｈｕ５ｃ８及びＪＢ５についてのＦｃ領域間で異なるアミノ酸を表わす。
【図２Ｄ】ＪＢ５についてのＦｃ領域アミノ酸配列を示す。太字で示されているアミノ酸は、５ｃ８及びＪＢ５−Ｒ２８Ｋについての軽鎖配列間及びｈｕ５ｃ８及びＪＢ５についてのＦｃ領域間で異なるアミノ酸を表わす。
【図３】ＪＢ５抗体（円、破線）、ｈｕ５ｃ８抗体（正方形−実線）、及び対照ＣＴＬＡ４−ＩｇＧ１（三角形）の、ヒトＣＤ４０Ｌに対する相対的結合を示すグラフである。
【図４】ヒトＦｃガンマ受容体タンパク質のＦＣＧＲ１Ａ（円、実線）、ＦＣＧＲ２Ａ（円、破線）、ＦｃＲ３Ａ及びＦｃＲ３Ｂイソ型に対するｈｕ５ｃ８抗体の結合を示すグラフである。
【図５】ＪＢ５抗体が、ヒトＦｃガンマ受容体タンパク質のＦＣＧＲ１Ａ、ＦＣＧＲ２Ａ、ＦｃＲ３ＡまたはＦｃＲ３Ｂイソ型に結合しないことを示すグラフである。
【図６】サイズ排除カラムから３０℃で実施されたＪＢ５抗体についての分析クロマトグラフィ溶出プロファイルを示す。
【図７】サイズ排除カラムから３０℃で実施されたｈｕ５ｃ８抗体についての分析クロマトグラフィ溶出プロファイルを示す。
【図８】蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）によって査定される、未処置血小板試料（陰性対照）に対する血小板活性化マーカーＰＡＣ１抗体の結合を示すグラフである。
【図９】抗ＰＡＣ１抗体の、ＦＡＣＳによって査定された結合を示すグラフである。
【図１０】ＣＤ４０Ｌを用いた血小板のインキュベーションの後の血小板に対する抗ＰＡＣ１抗体の、ＦＡＣＳによって査定された結合を示すグラフである。
【図１１】ＣＤ４０Ｌ及びｈｕ５ｃ８抗体の免疫複合体を用いた血小板のインキュベーション後の、血小板に対する抗ＰＡＣ１抗体の、ＦＡＣＳによって査定された結合を示すグラフである。
【図１２】ＣＤ４０Ｌ及びＪＢ５抗体の免疫複合体を用いた血小板のインキュベーション後の、血小板に対する抗ＰＡＣ１抗体の、ＦＡＣＳによって査定された結合を示すグラフである。
【図１３】ＣＤ４０Ｌ及びｈｕ５ｃ８Ｆ（ａｂ’）２の免疫複合体を用いた血小板のインキュベーション後の、血小板に対する抗−ＰＡＣ１抗体の、ＦＡＣＳによって査定された結合を示すグラフである。
【図１４】２０μＭのＡＤＰ、５μｇ／ｍｌのＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４０Ｌとｈｕ５ｃ８の免疫複合体、ＣＤ４０ＬとＪＢ５抗体の免疫複合体、またはＣＤ４０Ｌとｈｕ５ｃ８Ｆ（ａｂ’）２の免疫複合体を用いた血小板のインキュベーション後の、３人の血小板からのＦＡＣＳ結果を示す、散布図グラフである。
【図１５】抗ＣＤ４０Ｌ抗体ＪＢ５及びｈｕ５ｃ８の可変軽領域アミノ酸配列（配列番号１）、抗ＣＤ４０Ｌ抗体ＪＢ５及びｈｕ５ｃ８の可変重領域アミノ酸配列（配列番号２）、抗ＣＤ４０Ｌ抗体ｈｕ５ｃ８のＦｃ領域アミノ酸配列（配列番号３）、抗ＣＤ４０Ｌ抗体ＪＢ５のＦｃ領域アミノ酸配列（配列番号４）、抗ＣＤ４０Ｌ抗体ＪＢ５−Ｒ２８Ｋの可変軽領域アミノ酸配列（配列番号５）、抗ＣＤ４０Ｌ抗体ＪＢ５−Ｋ７４Ｒの可変重領域アミノ酸配列（配列番号６）、及び抗ＣＤ４０Ｌ抗体ＪＢ５の軽鎖アミノ酸配列（配列番号７）を提供する。
【図１６】抗ＣＤ４０Ｌ抗体ＪＢ５をコードする軽鎖合成ヌクレオチド配列（配列番号８）を提供し、大文字はエクソンを表わし、小文字は合成遺伝子のイントロン配列を表わし、同様に抗ＣＤ４０Ｌ抗体ＪＢ５の重鎖アミノ酸配列（配列番号９）も提供している。
【図１７】抗ＣＤ４０Ｌ抗体ＪＢ５の重鎖をコードする合成核酸配列（配列番号１０）を提供し、大文字はエクソンを表わし、小文字は合成遺伝子のイントロン配列を表わす。
【図１８】抗ＣＤ４０Ｌ抗体ＪＢ５−Ｒ２８Ｋのアミノ酸配列（配列番号１１）、抗ＣＤ４０Ｌ抗体ＪＢ５−Ｒ２８Ｋの軽鎖をコードする合成核酸配列（配列番号１２）を提供し、大文字はエクソンを表わし、小文字は合成遺伝子のイントロン配列を表わし、同様に、抗ＣＤ４０Ｌ抗体ＪＢ５−Ｋ７４Ｒの重鎖アミノ酸配列（配列番号１３）をも提供している。
【図１９】抗ＣＤ４０Ｌ抗体ＪＢ５−Ｋ７４Ｒの重鎖をコードする合成核酸配列（配列番号１４）を提供し、大文字はエクソンを表わし、小文字は合成遺伝子のイントロン配列を表わす。
【図２０】抗ＣＤ４０Ｌ抗体ＪＢ５の重鎖及び軽鎖のＣＤＲのアミノ酸配列（それぞれ配列番号１５〜２０）、ならびにｈｕ５ｃ８重鎖のアミノ酸配列（配列番号２１）を提供する。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
定義
「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」、「ｃｏｎｔａｉｎｓ」、「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ」（〜を含む）などの用語は、米国特許法で付与された意味を有する。これらの用語は、包括的または開放形式の表現であり、列挙されていない追加の要素または方法ステップを排除しない。「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ」及び「ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ」（本質的に〜からなる、〜で構成される）などの用語は、米国特許法においてこれらに付与された意味を有する。これらの用語は、特許請求されている発明の基本的な新規の特徴に著しく影響しない追加の成分またはステップの内含を許容する。「ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｏｆ」及び「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ」（〜からなる、〜から構成される）なる用語は、米国特許法中でこれらに与えられた意味を有し、これらの用語は、閉鎖形式の表現である。
【００１０】
「ｔｒｅａｔ（治療する）」、「ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（治療）」などの用語は、治療的処置及び予防的処置を含む。治療的処置は、治療すべき疾患、身体条件または障害の症候または症候を有する対象の処置である。予防的処置は、疾患、身体条件及び障害の顕在的兆候を示さない、この疾患、身体条件及び障害の素因を有する対象の処置を意味する。したがって治療は、病気の兆候または症候の停止、部分的または完全な緩和または縮小を結果としてもたらす可能性があり、具体的には、限定的意味なく、延命を含む。
【００１１】
「約」は、提示された数値が幾分かのわずかな不精確さを許容すること（その値の正確さに対する幾分かの近似を伴う；おおよそまたは合理的にその値に近い；ほぼ）を標示する。「約」なる用語によって提供される不精確さが、当該技術分野において前記の通常の意味で理解されているのでない他の場合には、本明細書中で使用される「約」は、そのようなパラメータを測定及び使用する通常の方法から発生する可能性のある変動を少なくとも表わしている。さらに、範囲の開示は、範囲全体の全ての値及びさらに分割された範囲の開示を含む。
【００１２】
「ｏｒ（または）」なる接続詞の使用は、「ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ  ｏｆ（〜の少なくとも１つ）」と互換的に使用される。例えば、組成物がＡまたはＢを含む場合、方法は、Ａ及びＢの少なくとも１つを含まなければならないが、Ａ及びＢの両方も含むこともできる。同様にして、「Ａ、Ｂ、ＣまたはＤ」を含む組成は、Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤの群の少なくとも１つを含まなければならないが、Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤの全てのまたは任意の組合せも含み得る。
【００１３】
アミノ酸置換は、原初のアミノ酸、特定された配列内のアミノ酸の位置及び置換アミノ酸を同定する慣例により表示され、例えばＣ１１Ｓは、ポリペプチド配列の１１位にあるシステインがセリンで置換されていることを標示すると考えられる。
【００１４】
「５ｃ８」は、ＣＤ４０Ｌに結合し、ＡＴＣＣから入手可能である受入番号ＨＢ１０９１６を有するハイブリドーマによって産生され、かつ米国特許第５，４７４，７７１号中に記載されているマウス抗ヒト抗体を意味する。「ｈｕ５ｃ８」は、Ｋａｒｐｕｓａｓら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｖｏｌ．９、ｐｐ３２１〜３２９、（２００１）中で配列が開示されている５ｃ８のヒト化バージョンを意味する。
【００１５】
明細書中では、ポリペプチドまたはアミノ酸配列間の同一性百分率に言及がなされている。２つの配列間の同一性百分率は、２つの配列の最適な配列アラインメントのために導入される必要のあるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮に入れた、配列が共有する同一の位置の数の関数である。同一性は、「局所的同一性」と「包括的同一性」として測定可能である。局所的同一性は、配列のストリング間の整合により決定されるポリペプチド間の配列関係性の程度を意味する。包括的同一性は、基準ポリペプチドの全長に比較したポリペプチドの配列関係性の程度を意味する。別段の規定の無いかぎり、本明細書で使用される同一性は、包括的同一性を意味する。本開示の目的のためには、包括的同一性の百分率は、１２のギャップペナルティ、４のギャップ伸長ペナルティ及び５のフレームシフトギャップペナルティでＢｌｏｓｓｕｍ６２スコアリングマトリクスを用いるＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４〜４５３）を用いて計算される。Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズムを組込んだ公的に入手可能なソフトウェアプログラムは、例えばＧＣＧソフトウェアパッケージ内のＧＡＰプログラムなど、数多く存在する。
【００１６】
ＣＤ４０Ｌは、同様に、ＣＤｌ５４、ｇｐ３９、Ｔ−ＢＡＭ、５ｃ８抗原またはＴＮＦ関連活性化タンパク質（ＴＲＡＰ）としても公知である。
【００１７】
実施形態
本発明は、ＣＤ４０Ｌ関連疾患または障害を有する患者を治療するために本発明の抗体を使用するための治療的抗ヒトＣＤ４０Ｌ抗体及び方法を提供する。本発明の様々な例示的実施形態が提供されているが、本発明は、開示された実施形態ではなくクレームによって限定されるべきである。
【００１８】
本発明の一態様において、本発明は、血小板の活性化を妨げるようにＦｃドメインが改変された状態で、ｈｕ５ｃ８の可変軽鎖と可変重鎖ＣＤＲ配列を有するヒトＩｇＧ１コンセンサスフレームワークを含む抗ＣＤ４０Ｌ抗体ｈｕ５ｃ８の改変されたバージョンである抗体を提供する。
【００１９】
表１は、出願中で言及されている配列番号の説明を提供する。
表１
0006797810.tif 000002
【００２０】
一実施形態（実施形態Ａ）は、ＣＤ４０Ｌに結合しかつ軽鎖及び重鎖を含む単離抗体において、軽鎖が、配列番号１と少なくとも９０％、または少なくとも９１％、または少なくとも９２％、または少なくとも９３％、または少なくとも９４％、または少なくとも９５％、または少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、かつ重鎖が、可変重鎖領域とＦｃ領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号２と少なくとも９０％、または少なくとも９１％、または少なくとも９２％、または少なくとも９３％、または少なくとも９４％、または少なくとも９５％、または少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつＦｃ領域が、配列番号３と少なくとも９０％、または少なくとも９１％、または少なくとも９２％、または少なくとも９３％、または少なくとも９４％、または少なくとも９５％、または少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記Ｆｃ領域はＣ１１Ｓ、Ｃ１４Ｓ及びＰ２３Ｓからなる群から選択される１つの置換または置換の組合せを含む、単離抗体である。
【００２１】
別の実施形態（実施形態Ｂ）は、Ｆｃ領域がさらに、アミノ酸置換Ｃ５Ｓを含む、実施形態Ａに記載の単離抗体である。
【００２２】
実施形態Ａ及びＢの変形形態において、抗体は、置換Ｔ３３Ｗ、Ｓ２６Ｄ、またはＱ２７Ｅのいずれも含まない前記軽鎖可変領域を含む。
【００２３】
実施形態Ａ及びＢの他の変形形態において、軽鎖可変領域は置換Ｒ２８Ｋを含む。
【００２４】
Ａ及びＢの実施形態のいくつかの変形形態において、重鎖及び軽鎖のＣＤＲは、表２中に列挙された配列を有する。
表２
0006797810.tif 000003
【００２５】
実施形態Ａ及びＢのさらに他の変形形態において、軽鎖可変領域は、アミノ酸配列ＩＣＲＲＡＳＱＲＶＳＳＳＴＹＳＹＭＨ（配列番号１５）を含む。さらに他の実施形態において、軽鎖可変領域は、アミノ酸配列ＩＣＲＲＡＳＱＲＶＳＳＳＴＹＳＹＭＨ（配列番号１５）ならびにアミノ酸配列ＹＡＳＮＬＥＳ（配列番号１６）とＱＨＳＷＥＩＰＰＴ（配列番号１７）の一方または両方を含む。
【００２６】
実施形態Ａ及びＢのいくつかの変形形態において、軽鎖可変領域は配列番号１のアミノ酸配列を含む。さらに他の実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号１のアミノ酸からなる。いくつかの実施形態において、軽鎖は本質的に配列番号７のアミノ酸配列からなる。他の実施形態において、軽鎖は配列番号７のアミノ酸配列からなる。さらに他の実施形態において、軽鎖は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。さらに他の実施形態において、軽鎖は本質的に配列番号１１のアミノ酸配列からなる。さらに他の実施形態において、軽鎖は配列番号１１のアミノ酸配列からなる。
【００２７】
実施形態Ａ及びＢの他の変形形態では、抗体は、置換Ｔ３０Ｈ、Ｙ３３ＷまたはＳ５４Ｎのいずれも含まない重鎖可変領域を含む。実施形態Ａ及びＢの抗体のいくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、置換Ｔ３３Ｗ、Ｓ２６Ｄ及びＱ２７Ｅのいずれも含まない。実施形態Ａ及びＢの他の変形形態において、軽鎖可変領域は、置換Ｔ３３Ｗ、Ｓ２６Ｄ、及びＱ２７Ｅのいずれも含まず、かつ重鎖可変領域は、置換Ｔ３０Ｈ、Ｙ３３ＷまたはＳ５４Ｎのいずれも含まない。
【００２８】
実施形態Ａ及びＢのさらに他の変形形態においては、重鎖可変領域は、置換Ｋ７４Ｒを含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、アミノ酸配列ＳＹＹＭＹ（配列番号１８）、ＥＩＮＰＳＮＧＤＴＮＦＮＥＫＦＫＳ（配列番号１９）、及びＳＤＧＲＮＤＭＤＳ（配列番号２０）の１つまたは任意の組合せを含む。
【００２９】
別の実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号２のアミノ酸配列を含む。さらに別の実施形態において、重鎖可変領域は、本質的に配列番号２のアミノ酸配列からなる。さらに別の実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号２のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。さらに他の実施形態において、重鎖可変領域は、本質的に配列番号６のアミノ酸配列からなる。さらに他の実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号６のアミノ酸配列からなる。
【００３０】
本発明の一実施形態は、軽鎖が配列番号１のアミノ酸配列を含み、重鎖が配列番号９のアミノ酸配列からなる、単離抗体である。
【００３１】
本発明の別の実施形態は、軽鎖が配列番号７のアミノ酸配列からなり、重鎖が配列番号９のアミノ酸配列からなる、単離抗体である。
【００３２】
さらに別の実施形態は、軽鎖可変領域が、配列番号５のアミノ酸配列を含み、重鎖が配列番号９のアミノ酸配列からなる、単離抗体である。
【００３３】
さらに別の実施形態は、軽鎖が配列番号１１のアミノ酸配列からなり、重鎖が配列番号９のアミノ酸配列からなる、単離抗体である。
【００３４】
さらに別の実施形態は、軽鎖が配列番号７のアミノ酸配列からなり、重鎖が配列番号１３のアミノ酸配列からなる、単離抗体である。
【００３５】
別の実施形態は、軽鎖が配列番号１１のアミノ酸配列からなり、重鎖が配列番号１３のアミノ酸配列からなる、単離抗体である。
【００３６】
好ましい実施形態において、本発明の抗体は、少なくとも１２時間の間、３７℃で安定している。
【００３７】
別の態様において、本開示は、治療上有効な量の本発明の抗体を対象に投与することを含む、ＣＤ４０Ｌ関連疾患または障害を有する患者を治療するための方法を提供する。本発明の抗体またはその混合物は、本明細書中で使用されるように抗体が患者に投与される根本的な疾患または障害の治療に向けられた唯一の治療薬であることを意味する単剤療法として、対象に対して投与され得る、ということが企図される。本発明の抗体を用いる単剤療法は、筋弛緩剤、非ステロイド性抗炎症薬、鎮痛剤及び抗うつ剤を非限定的な例とする他の薬剤の投与を除外するわけではない。したがって、本発明の様々な実施形態において、本発明の抗体の１つまたは混合物は、根本的な疾患または障害の治療に向けられた唯一の治療薬である。
【００３８】
本発明の抗体またはその混合物は、他の治療薬と組合わせて投与可能であることも同様に企図されている。「ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ（〜と組合わせて）」は、異なる時点での、異なる頻度での、同時の、または単一剤形と組合わされた、治療薬の投与を含むが、これに限定されない。
【００３９】
一実施形態は、治療上有効な量の本発明の抗体を対象に投与することを含む、神経変性もしくは神経筋疾患または障害を有する患者を治療するための方法である。神経変性または神経筋疾患及び障害には、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋委縮性側索硬化症、多巣性運動ニューロパチー、原発性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症、ケネディ病、または脊髄小脳失調が含まれるが、これらに限定されない。
【００４０】
別の実施形態は、治療上有効な量の本発明の抗体を対象に投与することを含む、筋萎縮性側索硬化症を有する対象を治療するための方法である。
【００４１】
本発明の一実施形態は、治療上有効な量の本発明の抗体を対象に投与することを含む、炎症性または免疫性疾患または障害を有する対象を治療するための方法である。炎症性または免疫性疾患及び障害には、大腸炎、薬剤誘発性ループス腎炎、移植片対宿主疾患、移植片拒絶反応及びアテローム性動脈硬化症が含まれるが、これらに限定されない。
【００４２】
さらに別の実施形態は、治療上有効な量の本発明の抗体を対象に投与することを含む、自己免疫疾患を有する対象を治療するための方法である。自己免疫疾患には、全身性紅斑性狼瘡、１型糖尿病、重症筋無力症、炎症性腸疾患、免疫性血小板減少性紫斑病、及びリウマチ性関節炎が含まれるが、これらに限定されない。
【００４３】
さらに別の実施形態は、治療上有効な量の本発明の抗体を対象に投与することを含む、対象における免疫応答を阻害する方法である。一実施形態において、免疫応答は、移植片対宿主病である。別の実施形態において、免疫応答は、移植臓器拒絶である。
【００４４】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、単剤療法として投与される。一実施形態においては、抗体ＪＢ５が単剤療法として投与される。別の実施形態においては、抗体ＪＢ５−Ｋ７４Ｒが単剤療法として投与される。さらに別の実施形態においては、抗体ＪＢ５−Ｒ２８Ｋが単剤療法として投与される。さらに別の実施形態においては、抗体ＪＢ５−Ｒ２８Ｋ−Ｋ７４Ｒが単剤療法として投与される。
【００４５】
本発明に係る方法のいくつかの実施形態において、抗体は、別の治療薬と組合わせて投与される。
【００４６】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ＣＤ２８とＣＤ８６の間、またはＣＤ２８とＣＤ８０の間の相互作用を遮断する化合物と組合わせて投与される。
【００４７】
いくつかの実施形態において、ＣＤ２８とＣＤ８６の間、またはＣＤ２８とＣＤ８０の間の相互作用を遮断する化合物は、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ融合タンパク質である。一実施形態において、ＣＤ２８とＣＤ８６の間、またはＣＤ２８とＣＤ８０の間の相互作用を遮断する化合物は、アバタセプトまたはベラタセプトまたはガリキシマブである。
【００４８】
医薬組成物及び投与方法
上述の障害のいずれかを治療するために、本開示の方法にしたがって使用するための医薬組成物は、１つ以上の生理的に許容可能な担体を用いて従来の方法で処方され得る。薬学的に許容可能な担体は、一部には、投与対象の特定の組成物によって、ならびに、組成物を投与するのに使用される特定の方法によって、決定される。したがって、本開示の方法において有用な化合物の多様な好適な処方が存在する（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２０ｔｈ  ｅｄ．、Ｇｅｎｎａｒｏら、Ｅｄｓ．、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ、２０００）を参照のこと）。
【００４９】
非経口投与に好適な処方には、酸化防止剤、緩衝液、静菌薬及び意図されたレシピエントの血液と処方を等張にする溶質を含む水性及び非水性等張無菌注射液、ならびに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤及び防腐剤を含み得る水性及び非水性無菌懸濁液が含まれる。
【００５０】
本開示によると、化合物は、治療対象の障害のタイプまたは化合物自体の性質に応じて変動し得る任意の好適な手段によって投与され得る。例えば、本発明の抗体について、投与経路には好ましくは、非経口投与、例えば筋内、静脈内、動脈内、腹腔内または皮下投与が含まれる。好ましくは、非経口投薬量は、注射、最も好ましくは、静脈内、筋内または皮下注射によって与えられる。投与される量は、様々な要因、例えば臨床的症候、個体の体重、及び他の薬剤の投与の有無などによって左右される。適正な剤形、投薬量及び投与経路の決定は、薬学及び医療技術の当業者のレベルの範囲内に入るという点を認識すべきである。
【実施例】
【００５１】
以下の実施例は、本発明の抗体を製造し試験するために使用される方法を例示する。分子生物学及び免疫学の技術分野において通常遭遇する記載された条件及びパラメータの好適な修正及び適応は、当業者にとっては明白なものである。
【００５２】
実施例１：抗体の生成
本発明の抗体を生成するために、所望される抗体の重鎖及び軽鎖をコードする核酸配列を、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳動物細胞中での発現に好適となるように設計した。次に核酸を人工的に合成し、標準的分子生物学的技術を用いて、抗体発現ベクターＢＰＪＰｕｒｏ内にライゲートした。ＢＰＪＰｕｒｏは、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内における選択可能でかつ安定した免疫グロブリン発現のために最適化されたデュアル遺伝子哺乳動物発現ベクターである。次に、このベクターをＣＨＯ細胞内にトランスフェクトし、安定したトランスフェクタントを選択する。
【００５３】
ＪＢ５抗体の生成
配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖をコードする核酸（配列番号１０）及び配列番号７のアミノ酸配列を有する軽鎖をコードする核酸（配列番号８）を合成し、抗体発現ベクターＢＰＪＰｕｒｏ内にライゲートした。
【００５４】
重鎖及び軽鎖をコードする結果として得た発現ベクターを、リポソーム媒介トランスフェクションを用いてＣＨＯ系（ＣＨＯ  ＳＡ、Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ  ＳＡ、Ｐａｒｉｓ、Ｆｒａｎｃｅ）にトランスフェクトした。ピューロマイシン選択により好適なトランスフェクタントを単離し、サブクローニングしてクローン細胞系を得た。候補細胞系を、無血清懸濁培養に適応させ、ＩｇＧ産生及び力強い成長についてスクリーニングした。細胞系の１つを選択し、ＪＢ５と名付け、この細胞系をパイロット規模の生物反応器内で培養し、抗体ＪＢ５を逐次濃縮、タンパク質Ａ／Ｇ親和性クロマトグラフィ、及びサイズ排除クロマトグラフィにより、馴化培地から精製した。
【００５５】
実施例２：ＣＤ４０Ｌ結合検定
３部構成のサンドイッチＥＬＩＳＡ検定を用いて、親抗体ｈｕ５ｃ８との関係におけるＪＢ５抗体の結合反応速度を決定した。２５０μｌのＰＢＳでの３回の洗浄を用いて、全ての洗浄を行なった。４℃で１６時間、９６ウェルのポリスチレンプレートを１００μｌ／ウェルのＪＢ５またはｈｕ５ｃ８抗体（２μｇ／ｍｌ）でコーティングした。プレートを洗浄し、次に室温で１時間、２％のウシ血清アルブミン／ＰＢＳで遮断した。プレートを洗浄し、２０００ｎｇ／ｍｌで開始して２倍希釈により滴定して、プレートに対して組換え型ヒトＣＤ４０Ｌタンパク質（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）を加えた。結合及び洗浄の後、１００ｎｇ／ｍｌで、１００μｌのビオチニル化ヤギ抗ヒトＣＤ４０Ｌポリクローナル抗体（２００ｎｇ／ｍｌ）及び１００μｌのストレプトアビジン・ホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲートを用いて、結合したＣＤ４０Ｌタンパク質を検出した。クロマゲンＴＭＢ（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）及び４５０ｎｍでの吸収の分光光度分析を用いて、比色検出を行なった。結果として得た結合曲線（図３）は、ＪＢ５（円）が親抗体ｈｕ５ｃ８（正方形）に対して極めて類似するＣＤ４０Ｌ結合を有することを示している。ＪＢ５と同じＦｃドメインを有する対照タンパク質ＣＴＬＡ４−ＩｇＧ１（三角形）は、有意な結合を全く示さなかった。ｈｕ５ｃ８及びＪＢ５についての計算されたＥＣ５０は、それぞれ１１４及び１３７ｎＭである。ＪＢ５−Ｒ２８Ｋ及びＪＢ５−Ｋ７４Ｒは、ＪＢ５のものと類似の結合を示した。
【００５６】
実施例３：Ｆｃガンマ受容体結合検定
ｈｕ５ｃ８／ヒトＦｃガンマ受容体結合検定
固相ＥＬＩＳＡ結合検定を実施して、親ｈｕ５ｃ８抗体に対する４つのヒトＦｃガンマ受容体イソ型の結合レベルを決定した。１００μｌ／ウェルのｈｕ５ｃ８抗体（リン酸緩衝生理食塩水中２μｇ／ｍｌ）を９６ウェルのポリスチレンプレートに加え、４℃で１６時間インキュベートした。プレートを遮断し、組換え型ヒトＦｃガンマ受容体（ＦＣＧＲ）タンパク質（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を、５μｇ／ｍｌの開始濃度での２倍希釈により滴定した。以下の４つの組換え型ＦＣＧＲイソ型を別個に試験した：ＦＣＧＲ１Ａ（ＣＤ６４）、ＦＣＧＲ２Ａ（ＣＤ３２）、ＦＣＧＲ３Ａ（ＣＤ１６ａ）、ＦＣＧＲ３Ｂ（ＣＤ１６ｂ）。結合及び洗浄後、適切なＦＣＧＲイソ型特異的マウスモノクローナル抗体（１０００ｎｇ／ｍｌ）及びホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ検出抗体を用いて、ＦＣＧＲを検出した。クロマゲンＴＭＢ（３，３′，５，５′−テトラメチルベンジジン）及び４５０ｎｍでの吸収分光光度分析を用いて、比色検出を行なった。結果として得た結合曲線（図４）は、親抗体が、高い親和力で、活性化された血小板上で発現された高親和性ＦＣＧＲ１Ａ（円、実線）受容体及びＦＣＧＲ２Ａ受容体（円、破線）を結合することを実証している。ｈｕ５ｃ８抗体は、ＦｃＲ３ＡまたはＦｃＲ３Ｂイソ型に対する結合を全く示さなかった。
【００５７】
ＪＢ５ヒトＦｃガンマ受容体結合検定
突然変異ＪＢ５抗体に対するヒトＦｃガンマ受容体の結合を試験するために、固相結合検定を使用した。１００μｌ／ウェルのＪＢ５抗体（リン酸緩衝生理食塩水中２μｇ／ｍｌ）を９６ウェルのポリスチレンプレート上へと１６時間コーティングした。プレートを遮断し、組換え型ヒトＦｃガンマ受容体（ＦＣＧＲ）タンパク質（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を、５μｇ／ｍｌの開始濃度での２倍希釈により滴定した。以下の４つの組換え型ＦＣＧＲイソ型を別個に試験した：ＦＣＧＲ１Ａ（ＣＤ６４）、ＦＣＧＲ２Ａ（ＣＤ３２）、ＦＣＧＲ３Ａ（ＣＤ１６ａ）、ＦＣＧＲ３Ｂ（ＣＤ１６ｂ）。結合及び洗浄後、適切なＦＣＧＲイソ型特異的マウスモノクローナル抗体（１０００ｎｇ／ｍｌ）及びホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ検出抗体を用いて、ＦＣＧＲを検出した。クロマゲンＴＭＢ（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）及び４５０ｎｍでの吸収分光光度分析を用いて、比色検出を行なった。結果として得た結合曲線（図５）は、ＪＢ５抗体が、この検定において活性化された血小板上で発現された、高親和性ＦＣＧＲ１Ａ受容体もＦＣＧＲ２Ａ受容体も全く結合させなかったことを実証している。親ｈｕ５ｃ８抗体と同様、ＦＣＧＲ３ＡまたはＦＣＧＲ３Ｂについて、いかなる結合も観察されなかった。
【００５８】
実施例４：２２℃及び３７℃におけるＪＢ５の安定性
ＪＢ５は、野生型ＩｇＧ１抗体内のジスルフィドリンケージのうちの３つが欠如していることから、抗体が安定しているか、すなわちテトラマーの完全無欠な抗体として存在しているか否かを判定するため、サイズ排除クロマトグラフィを使用して、ＪＢ５を試験した。対照として、３つのジスルフィドリンケージを有するｈｕ５ｃ８を使用した。
【００５９】
各々ＪＢ５とｈｕ５ｃ８とを比較する２つの実験を行なった。第１の実験では、抗体は、クロマトグラフィの前及び間、室温（２２℃）にあった。インビボ条件をシミュレートするために、第２の実験では、抗体を、３０℃でのクロマトグラフィに先立ち３０分間３７℃でヒト血漿中でインキュベートした。ＰＢＳ中の２０マイクログラムのＪＢ５またはｈｕ５ｃ８を、プレカラムフィルターＴＳＫｇｅｌ  Ｇｕａｒｄ  ＳＷ×１（６．０ｍｍ×４．０ｃｍ、７μｍビードカラム）の備わったＴＳＫ  ｇｅｌ  Ｇ３０００ＳＷ（７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５μｍビートカラム）（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｋｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｒｕｓｓｉａ、ＰＡ）の中に注入した。移動相はＰＢＳであり、溶出速度は１．０ｍＬ／分であり、吸光度を２８０ｎｍで測定した。２２℃と３０℃の両方において、ＪＢ５は１８３ｋＤａの観察分子量（図６）を有し、ｈｕ５ｃ８（図７）は、抗体がテトラマー２価形態であることと整合して、１６４ｋＤａのＭＷを有していた。ｈｕ５ｃ８抗体とＪＢ５の間で観察された１９ｋＤａの差異は、ＪＢ５のＦｃドメインのグリコシル化の増大に起因する可能性がある。
【００６０】
実施例５：血小板活性化の除去
ＣＤ４０Ｌ免疫複合体媒介型血小板活性化に対するＪＢ５の効果を判定する目的で、抗体を、血小板細胞表面マーカータンパク質ＰＡＣ−１を誘発するその能力について検定した。３人の健康なボランティアから、３．２％のクエン酸ナトリウム管中に全血を採血し、最初の２ｍｌは廃棄した。血小板富有血漿を、１５分間１２０ｇでの遠心分離によって調製し、血小板計数を、１×１０５細胞／ｍｌまでリン酸緩衝生理食塩水で正規化した。１５分間室温でプレインキュベートすることにより、組換え型ヒトＣＤ４０Ｌ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＣＡ、ＵＳＡ）及びテスト抗体、ｈｕ５ｃ８、ＪＢ５及びｈｕ５ｃ８Ｆ（ａｂ’）２の免疫複合体を３：１のＣＤ４０Ｌ：抗体モル比）（０．６９４４ｎｍｏｌｅのＣＤ４０Ｌ：０．２３１５ｎｍｏｌｅの抗体）で調製した。免疫複合体混合物を、正規化したＰＢＳ／血小板溶液中で５μｇ／ｍｌのＣＤ４０Ｌという最終濃度まで希釈し、３０分間３７℃でインキュベートした。陰性対照は、未処置の血小板及びＣＤ４０Ｌ単独であった。正規化されたＰＢＳ−血小板溶液中の２０マイクロモルという最終濃度までＡＤＰを添加することによって、血小板活性化の陽性対照を調製した。３０分間のインキュベーション後、抗ヒトＰＡＣ−１−ＦＩＴＣコンジュゲートされた抗体を全ての試料に添加し、１５分間インキュベートした。試料を、２％のパラホルムアルデヒド：ＰＢＳ緩衝液中に１：１で希釈し、３０分間氷上で定着させ、１００ｇで５分間遠心分離して、細胞をペレット化した。細胞をＰＢＳ中で再懸濁させた。Ｇｕａｖａ  ｅａｓｙＣｙｔｅフローサイトメーター（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｉｎｃ．、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ、ＵＳＡ）上で蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を実施した。Ｆｌｏｗ  Ｊｏソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ、ＬＬＣ、Ａｓｈｌａｎｄ、ＯＲ、ＵＳＡ）を用いて、取得後分析を行なった。
【００６１】
陰性及び陽性ＰＡＣ−１活性化ゲートをセットするために、未処置の血小板対照試料を使用した（図８）。２０マイクロモルのＡＤＰで活性化した血小板は、ＰＡＣ−１細胞表面発現を有意に増大させていた（図９）。公開された観察事実（例えば、Ｍｉｒａｂｅｔ、Ｍ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４５、９３７〜９４４（２００８）を参照）と整合して、ＣＤ４０Ｌ単独で、低レベルで血小板を活性化することができた（図１０）。この活性化は、ＣＤ４０Ｌが免疫複合体としてｈｕ５ｃ８抗体と共に存在した場合に、著しく増大した（図１１）。対照的に、ＣＤ４０Ｌと複合体形成された操作済み抗体ＪＢ５は、非常に低レベルの血小板活性化を実証した（図１２）。ｈｕ５ｃ８Ｆ（ａｂ’）２：ＣＤ４０Ｌ免疫複合体（図１３）も同様にｈｕ５ｃ８−ＩｇＧ１：ＣＤ４０Ｌ免疫複合体（図１１）に比べて血小板を活性化させなかったことから、ＣＤ４０Ｌ：ＪＢ５免疫複合体の活性化潜在力のこの低下は、ＦｃＲ相互作用の喪失によって媒介される。図１４は、２０μＭのＡＤＰ、５μｇ／ｍｌのＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４０Ｌとｈｕ５ｃ８の免疫複合体、ＣＤ４０ＬとＪＢ５抗体の免疫複合体、またはＣＤ４０Ｌとｈｕ５ｃ８Ｆ（ａｂ’）２の免疫複合体を用いた血小板のインキュベーション後の３人の血小板に由来する結果を示す。ＪＢ５免疫複合体は、ｈｕ５ｃ８Ｆ（ａｂ’）２血小板で、ＣＤ４０Ｌの免疫複合体と比べた場合に有意な血小板活性化を全く示さなかった（ｐ＜０．３４）（対応の無いＴ検定、両側；ｔ＝１．０１３、ｄｆ＝４）。さらに、ＪＢ５免疫複合体は、ｈｕ５ｃ８免疫複合体と比べた場合、著しく低い血小板活性化を示した（ｐ＜０．００５）（対応の無いＴ検定、両側；ｔ＝５．５８６、ｄｆ＝４）。
【００６２】
本開示の多数の実施形態が記載されているが、本発明の方法及びプロセスを使用または包含する他の実施形態を提供するために、当業者であれば基本実施例を改変することができる、ということは明白である。実施形態及び実施例は、例示を目的としたものであり、開示を限定するものとして解釈されるべきものではなく、むしろ、添付クレームが本発明の範囲を定義している。
【図１Ａ】
0006797810.tif 000004
【図１Ｂ】
0006797810.tif 000005
【図１Ｃ】
0006797810.tif 000006
【図２Ａ】
0006797810.tif 000007
【図２Ｂ】
0006797810.tif 000008
【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
0006797810.tif 000010
【図３】
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【図４】
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【図５】
0006797810.tif 000013
【図６】
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【図７】
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【図８】
0006797810.tif 000016
【図９】
0006797810.tif 000017
【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
0006797810.tif 000020
【図１３】
0006797810.tif 000021
【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
0006797810.tif 000025
【図１８】
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【図１９】
0006797810.tif 000027
【図２０】
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【配列表】
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