(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
単一の軸方向キラル異性体の形態または一つの軸方向キラル異性体に富む形態で存在することを特徴とする右旋性の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩
【化１】
0006725530.tif 000041
【請求項２】
式（II）の化合物またはその薬学的に許容される塩
【化２】
0006725530.tif 000042
【請求項３】
式（IV）で示される経路を含み、
【化３】
0006725530.tif 000043
Ｙは、Ｏ、ＮＨまたはＮ（Ｗ）から選択され、Ｗは、アルキル基（ａｌｋｙｌ）、ヘテロアルキル基（ｈｅｔｅｒｏａｌｋｙｌ）、アラルキル基（ａｒａｌｋｙｌ）、ヘテロアラルキル基（ｈｅｔｅｒｏａｒａｌｋｙｌ）、アリール基（ａｒｙｌ）、ヘテロアリール基（ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ）から選択され、任意にハロゲン（ｈａｌｏｇｅｎ）、ＯＨ、ＣＮまたはＮＨ２の中の１、２または３個に置換されることを特徴とする請求項１に記載の化合物の製造方法。
【請求項４】
前記キラル分離とは、超臨界流体クロマトグラフィー（ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌｆｌｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＳＦＣ）による分離を指すことを特徴とする請求項３に記載の化合物の製造方法。
【請求項５】
Ｗは、Ｃ１-６アルキル基から選択され、任意にハロゲン、ＯＨ、ＣＮまたはＮＨ２の中の１、２または３個に置換されることを特徴とする請求項３に記載の化合物の製造方法。
【請求項６】
Ｗは、メチル基（ｍｅｔｈｙｌ）、エチル基（ｅｔｈｙｌ）、プロピル基（ｐｒｏｐｙｌ）、トリフルオロメチル基（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）、トリフルオロエチル基（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌ）から選択されることを特徴とする請求項３に記載の化合物の製造方法。
【請求項７】
式（Ｖ）で示される経路を含み、
【化４】
0006725530.tif 000044
Ｌは、Ｏ、ＮＨまたはＮ（Ｒ）から選択され、
Ｒは、キラル基を代表し、キラルであるアルキル基、ヘテロアルキル基、アラルキル基、
ヘテロアラルキル基、アリール基、ヘテロアリール基から選択され、
前記キラル基は、任意にハロゲン、ＯＨ、ＣＮまたはＮＨ２の中の１、２または３個に置換されることを特徴とする請求項１に記載の化合物の製造方法。
【請求項８】
アキラル分離とは、再結晶、薄層クロマトグラフィーによる分離、カラムクロマトグラフィーによる分離、フラッシュカラムクロマトグラフィーによる分離及びアキラルなパッキングを用いた分取クロマトグラフィーによる分離を指すことを特徴とする請求項７に記載の化合物の製造方法。
【請求項９】
式（VI）で示される経路を含み、
【化５】
0006725530.tif 000045
Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、スルホン酸エステル（ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ｅｓｔｅｒｓ）から選択され、Ｒ’は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＯＨから選択されることを特徴とする請求項７に記載の製造方法。
【請求項１０】
前記加水分解は、強塩基の条件下で行われる、請求項３〜９のいずれか一つに記載の製造方法。
【請求項１１】
前記強塩基はＬｉＯＨ、ＮａＯＨまたはＫＯＨから選択される、請求項１０に記載の製造方法。
【請求項１２】
前記Ｒは、フェニルアルキル基（ｐｈｅｎｙｌａｌｋｙｌ  ｇｒｏｕｐ）または
【化６】
0006725530.tif 000046
から選択され、前記フェニルアルキル基の中のアルキル基においてＣは、任意にＮ、Ｏ、Ｓ、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ、Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨまたはＮＨＢｏｃの中の一つまたは一つ以上に置換されることを特徴とする請求項７、請求項８または請求項９に記載の製造方法。
【請求項１３】
Ｒは、
【化７】
0006725530.tif 000047
から選択されることを特徴とする請求項１２に記載の製造方法。
【請求項１４】
前記臭素化剤は、Ｂｒ２/塩基であることを特徴とする請求項９に記載の製造方法。
【請求項１５】
前記塩基は、ピリジン（ｐｙｒｉｄｉｎｅ）、トリエチルアミン（ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）またはＮ,Ｎ-ジイソプロピルエチルアミン（Ｎ,Ｎ-ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ，ＤＩＰＥＡ）から選択されることを特徴とする請求項１４に記載の製造方法。
【請求項１６】
前記スルホン酸エステルは、メタンスルホン酸エステル（ｍｅｓｙｌａｔｅ）、ｐ-トルエンスルホン酸エステル（ｐ-ｔｏｌｕｅｎｅ  ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、ｐ-ニトロベンゼンスルホン酸エステル（ｐ-ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｅｎｅ ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）またはトリフルオロメタンスルホン酸エステル（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ  ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）から選択されることを特徴とする請求項９に記載の製造方法。
【請求項１７】
治療有効量の請求項１または請求項２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、活性成分及び薬学的に許容される担体として含むことを特徴とする薬学的組成物。
【請求項１８】
請求項１または請求項２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む血清尿酸レベル異常に関連する病気を治療するための請求項１７に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２つの軸方向キラル異性体及びその薬学的に許容される塩、その調製方法、並びにその２つの軸方向キラル異性体またはその薬学的組成物の製薬用途を開示している。
【背景技術】
【０００２】
Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ（ＣＡＳ：８７８６７２-００-５, ＲＤＥＡ５９４）は、血清尿酸値を下げる試薬として、Ａｒｄｅａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ株式会社より、特許（出願番号：ＷＯ２００９０７０７４０）の形式で最初に報告されており、その合成経路は、以下のようである。
【０００３】
合成経路１：
【化１】
0006725530.tif 000002
【０００４】
以下の多数の特許（ＷＯ２０１１０８５００９、ＷＯ２０１１１２６８５２、ＷＯ２０１１５９７３２、ＷＯ２０１２０５０５８９、ＷＯ２０１２０９２３９５、ＷＯ２０１４００８２９５）において、Ａｒｄｅａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ株式会社から、Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ及びそのナトリウム塩の合成生産と、コルヒチン（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｓ）、フェブキソスタット（ｆｅｂｕｘｏｓｔａｔ）及びアロプリノール（ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌ）等の薬物との併用療法に対しての詳細な報告が行われた。
【０００５】
出願番号がＣＮ１０３５２４４４０Ａの中国特許により、他のＬｅｓｉｎｕｒａｄ及びその中間体を合成する方法も報告されており、以下のようである。
【０００６】
合成経路２：
【化２】
0006725530.tif 000003
【０００７】
報告されているこれらの特許のいずれも、Ｌｅｓｉｎｕｒａｄは、軸不斉を有する一対のキラルな光学異性体の混合物であることを明示的に言及しておらず、詳細な分離技術および詳細なキラル合成技術、並びにこの一対のキラル光学異性体の特定のパラメータは、具体的に報告されていない。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、単一の軸方向キラル異性体の方案または一つの軸方向キラル異性体に富む方案で存在することを特徴とする左旋性または右旋性の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【化３】
0006725530.tif 000004
【０００９】
本発明の一方案において、一つの軸方向キラル異性体の含有量は、≧６０％であり、好ましくは、≧７０％であり、より好ましくは、≧８０％であり、より好ましくは、≧９０％であり、最も好ましくは、≧９５％である。
【００１０】
本発明は、式（II）の化合物をさらに提供し、
【化４】
0006725530.tif 000005
本発明の一方案において、式（II）の軸方向キラル異性体は、≧９５％を越える。
【００１１】
本発明は、式（III）の化合物をさらに提供し、
【化５】
0006725530.tif 000006
本発明の一方案において、式（III）の軸方向キラル異性体の過剰率は、≧９５％である。
【００１２】
本発明は、式（IV）で示される経路を含む前記化合物を製造する方法をさらに提供し、
【化６】
0006725530.tif 000007
Ｙは、Ｏ、ＮＨまたはＮ（Ｗ）から選択され、Ｗは、アルキル基（ａｌｋｙｌ  ｇｒｏｕｐ）から選択され、任意にハロゲン（ｈａｌｏｇｅｎ）、ＯＨ、ＣＮまたはＮＨ２の中の１、２または３個に置換され、
好ましくは、前記キラル分離とは、超臨界流体クロマトグラフィー（ ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌｆｌｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＳＦＣ）による分離を指し、
好ましくは、Ｗは、Ｃ１-６アルキル基から選択され、任意にハロゲン、ＯＨ、ＣＮまたはＮＨ２の中の１、２または３個に置換され、
より好ましくは、Ｗは、メチル基（ｍｅｔｈｙｌ  ｇｒｏｕｐ）、エチル基（ｅｔｈｙｌ  ｇｒｏｕｐ）、プロピル基（ｐｒｏｐｙｌ  ｇｒｏｕｐ）、トリフルオロメチル基（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ  ｇｒｏｕｐ）、リフルオロエチル基（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌ  ｇｒｏｕｐ）から選択される。
【００１３】
本発明は、式（Ｖ）で示される経路を含む前記化合物を製造する方法をさらに提供し、
【化７】
0006725530.tif 000008
Ｌは、Ｏ、ＮＨまたはＮ（Ｒ）から選択され、
Ｒは、キラル基を代表し、キラルであるアルキル基（ａｌｋｙｌ  ｇｒｏｕｐ）、ヘテロアルキル基（ｈｅｔｅｒｏａｌｋｙｌ  ｇｒｏｕｐ）、アラルキル基（ａｒａｌｋｙｌ  ｇｒｏｕｐ）、ヘテロアラルキル基（ｈｅｔｅｒｏａｒａｌｋｙｌ  ｇｒｏｕｐ）、アリール基（ａｒｙｌ  ｇｒｏｕｐ）から選択され、
前記キラル基は、任意にハロゲン、ＯＨ、ＣＮまたはＮＨ２の中の１、２または３個に置換され、
好ましくは、アキラル分離とは、再結晶、薄層クロマトグラフィーによる分離、カラムクロマトグラフィーによる分離、フラッシュカラムクロマトグラフィーによる分離及びアキラルなパッキングを用いた分取クロマトグラフィーによる分離を指す。
【００１４】
本発明は、式（VI）で示される経路を含む前記化合物を製造する方法をさらに提供し、
【化８】
0006725530.tif 000009
Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、スルホン酸エステル（ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ｅｓｔｅｒｓ）から選択され、Ｒ’は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＯＨから選択される。
【００１５】
本発明の製造方法の一方案において、前記加水分解は、強塩基の条件下で行われる。
【００１６】
本発明の製造方法の一方案において、前記強塩基は、好ましくは、ＬｉＯＨ、ＮａＯＨまたはＫＯＨから選択される。
【００１７】
本発明の製造方法の一方案において、前記Ｒは、フェニルアルキル基（ｐｈｅｎｙｌａｌｋｙｌ  ｇｒｏｕｐ）または、
【化９】
0006725530.tif 000010
から選択され、前記フェニルアルキル基のなかのアルキル基においてのＣは、任意にＮ、Ｏ、Ｓ、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｓ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ、Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨまたはＮＨＢｏｃの中の一つまたは一つ以上に置換される。
【００１８】
本発明の製造方法の一方案において、Ｒは、
【化１０】
0006725530.tif 000011
から選択される。
【００１９】
本発明の製造方法の一方案において、前記臭素化剤は、Ｂｒ２/塩基である。
【００２０】
本発明の製造方法の一方案において、好ましくは、前記臭素化剤の塩基は、ピリジン（ｐｙｒｉｄｉｎｅ）、トリエチルアミン（ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）またはＮ,Ｎ-ジイソプロピルエチルアミン（Ｎ,Ｎ-ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ，ＤＩＰＥＡ）から選択される。
【００２１】
本発明の製造方法の一方案において、前記スルホン酸エステル（ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ｅｓｔｅｒｓ）は、メタンスルホン酸エステル（ｍｅｔｈａｎｅ  ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ｅｓｔｅｒｓ）、ｐ-トルエンスルホン酸エステル（ｐ-ｔｏｌｕｅｎｅ  ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ｅｓｔｅｒｓ）、ｐ-ニトロベンゼンスルホン酸エステル（ｐ-ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｅｎｅ ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ｅｓｔｅｒｓ）またはトリフルオロメタンスルホン酸エステル（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ  ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ｅｓｔｅｒｓ）から選択される。
【００２２】
本発明は、治療有効量の前記化合物またはその薬学的に許容される塩を、活性成分及び薬学的に許容される担体としてを含む薬学的組成物をさらに提供する。
【００２３】
本発明は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩、または前記組成物が、血清尿酸レベル異常に関連する病気を治療するための薬物の製造への応用をさらに提供する。
【００２４】
本発明は、治療対象に治療有効量の化合物またはその薬学的に許容される塩、または前記組成物を投与することを含む血清尿酸レベル異常に関連する病気を治療する方法をさらに提供する。
【００２５】
本発明は、前記化合物、またはその薬学的に許容される塩、または前記組成物を、血清尿酸レベル異常に関連する病気を治療するための薬物とする応用をさらに提供する。
用語の定義
【００２６】
本発明において、特に規定されてない限り、「Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ」は、特に式（Ｉ）の化合物を指し、
【化１１】
0006725530.tif 000012
「左旋性または右旋性の式（Ｉ）の化合物」は、式（Ｉ）の化合物の単一の軸方向キラル異性体であってもよく、一つの軸方向キラル異性体に富む混合物であってもよい。
【００２７】
「一つの軸方向キラル異性体に富む」とは、一つの軸方向キラル異性体の含有量が、＜１００％且つ≧６０％であり、好ましくは、≧７０％であり、より好ましくは、≧８０％であり、より好ましくは、≧９０％であり、最も好ましくは、≧９５％であることを指す。
【００２８】
軸方向キラル異性体の過剰率とは、二つの軸方向キラル異性体の相対百分率との間の差を指す。例えば、一つの軸方向キラル異性体の含有量は９０％であり、他の一つの軸方向キラル異性体の含有量は１０％である場合、軸方向キラル異性体の過剰率は８０％である。
【００２９】
式（II）の化合物と式（III）の化合物は、それぞれ式（Ｉ）の化合物の二つの絶対配置であり、
【化１２】
0006725530.tif 000013
【００３０】
しかし、説明を容易にするために、製造経路または実施例において、前記
【化１３】
0006725530.tif 000014
に言及されている内容は、構造式で定義される単一の軸方向キラル異性体に限らず、当該単一の軸方向キラル異性体に富む場合も含む。
【００３１】
（＋）は、右旋性を表し、（-）は、左旋性を表し、（±）は、ラセミ体を表す。
【００３２】
特に規定されていない限り、用語「アリール基」とは、不飽和芳香族炭化水素の置換基を表し、一置換、二置換または複数の置換であることができ、一価、二価または多価であることができ、単環式または多環式（例えば、１個乃至３個の環であり、少なくとも１個の環は芳香族である）であることができ、それらは一緒に融合しているか、または共有結合している。用語「ヘテロアリール基」とは、一つ乃至四つのヘテロ原子を含むアリール基（または環）を指す。一例示的な実施例において、ヘテロ原子は、Ｂ、Ｎ、Ｏ及びＳから選択され、窒素と硫黄原子は任意に酸化され、窒素原子は任意に四級化される。ヘテロアリール基は、ヘテロ原子によって分子の残りの部分に結合されることができる。アリール基またはヘテロアリール基の非限定的な実施例は、フェニル基（ｐｈｅｎｙｌ  ｇｒｏｕｐ）、１-ナフチル基（１-ｎａｐｈｔｈｙｌ）、２-ナフチル基（２-ｎａｐｈｔｈｙｌ）、４-ビフェニル基（４-ｂｉｐｈｅｎｙｌ）、１-ピロリル基（１-ｐｙｒｒｏｌｙｌ）、２-ピロリル基（２-ｐｙｒｒｏｌｙｌ）、３-ピロリル基（３-ｐｙｒｒｏｌｙｌ）、３-ピラゾリル基（３-ｐｙｒａｚｏｌｙｌ）、２-イミダゾリル基（２-ｉｍｉｄａｚｏｌｙｌ）、４-イミダゾリル基（４-ｉｍｉｄａｚｏｌｙｌ）、４-ピラジニル基（４-ｐｙｒａｚｉｎｙｌ）、２-オキサゾリル基（２-ｏｘａｚｏｌｙｌ）、４-オキサゾリル基（４-ｏｘａｚｏｌｙｌ）、２-フェニル-４-オキサゾリル基（２-ｐｈｅｎｙｌ-４-ｏｘａｚｏｌｙｌ）、５-オキサゾリル基（５-ｏｘａｚｏｌｙｌ）、３-イソオキサゾリル基（３-ｉｓｏｘａｚｏｌｙｌ）、４-イソオキサゾリル基（４-ｉｓｏｘａｚｏｌｙｌ）、５-イソオキサゾリル基（５-ｉｓｏｘａｚｏｌｙｌ）、２-チアゾリル基（２-ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）、４-チアゾリル基（４-ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）、５-チアゾリル基（５-ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）、２-フリル基（２-ｆｕｒｙｌ）、３-フリル基（３-ｆｕｒｙｌ）、２-チエニル基（２-ｔｈｉｅｎｙｌ）、３-チエニル基（３-ｔｈｉｅｎｙｌ）、２-ピリジル基（２-ｐｙｒｉｄｙｌ）、３-ピリジル基（３-ｐｙｒｉｄｙｌ）、４-ピリジル基（４-ｐｙｒｉｄｙｌ）、２-ピリミジニル基（２-ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｙｌ）、４-ピリミジニル基（４-ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｙｌ）、５-ベンゾチアゾリル基（５-ｂｅｎｚｏｔｈｉａｚｏｌｙｌ）、プリニル基（ｐｕｒｉｎｙｌ）、２-ベンゾイミダゾリル基（２-ｂｅｎｚｏｉｍｉｄａｚｏｌｙｌ）、５-インドリル基（５-ｉｎｄｏｌｙｌ）、１-イソキノリニル基（１-ｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎｙｌ）、５-イソキノリニル基（５-ｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎｙｌ）、２-キノキサリニル基（２-ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｙｌ）、５-キノキサリニル基（５-ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｙｌ）、３-キノリニル基（３-ｑｕｉｎｏｌｉｎｙｌ）及び６-キノリニル（６-ｑｕｉｎｏｌｉｎｙｌ）を含む。
【００３３】
用語「アラルキル基」とは、アリール基がアルキル基に結合しているそれらの原子団（例えば、ベンジル基（ｂｅｎｚｙｌ  ｇｒｏｕｐ）、フェネチル基（ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ  ｇｒｏｕｐ）、ピリジルメチル基（ｐｙｒｉｄｙｌｍｅｔｈｙｌ  ｇｒｏｕｐ）等）を指し、またその中で炭素原子（例えば、メチレン基（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ））が、既に酸素原子に置換されたフェノキシメチル基（ｐｈｅｎｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）、２-ピリジルオキシメチル-３-（１-ナフチルオキシ）プロピル基（２-ｐｙｒｉｄｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌ-３-（１-ｎａｐｈｔｈｙｌｏｘｙ）ｐｒｏｐｙｌ）等のようなアルキル基を指すことである。
【００３４】
ＤＩＰＥＡは、Ｎ,Ｎ-ジイソプロピルエチルアミン（Ｎ,Ｎ-ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）を表し、ＯＴｏｓはｐ-トルエンスルホン酸エステル（ｐ-ｔｏｌｕｅｎｅ  ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ｅｓｔｅｒｓ）を表し、ＯＭｓはメタンスルホン酸エステル（ｍｅｔｈａｎｅ  ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ｅｓｔｅｒｓ）を表す。
【００３５】
本発明に使用される用語「薬学的に許容される」は、それらの化合物、材料、組成物及び/または剤形を対象とすることで、それらが健全な医学的判断の範囲内で、人間と動物の組織とが接触して使われることに適応され、過度の毒性、刺激性、アレルギー反応または他の問題または合併症を伴わずに、合理的な利益/リスク比率に見合うことである。
【００３６】
用語「薬学的に許容される塩」とは、本発明の化合物の塩を指し、本発明により発現された特定の置換基を有する化合物と、比較的非毒性である酸または塩基とから調製される。本発明の化合物が比較的酸性の官能基を含む場合、塩基付加塩は、純粋な溶液または適切な不活性溶媒に、十分な量の塩基が、このような化合物の中性形態と接触する方式によって、獲得することができる。薬学的に許容される塩基付加塩（ａｌｋａｌｉ-ａｄｄｉｔｉｏｎ ｓａｌｔ）は、ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ）、カリウム（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ）、カルシウム、アンモニウム（ａｍｍｏｎｉｕｍ）、有機アンモニア（ｏｒｇａｎｉｃ ａｍｍｏｎｉａ）またはマグネシウム塩（ｍａｇｎｅｓｉｕｍ ｓａｌｔ）または類似な塩を含む。本発明の化合物に比較的塩基性の官能基が含まれる場合、酸付加塩は、純粋な溶液または適切な不活性溶媒で、十分な量の酸と、これらの化合物の中性形態と接触する方式によって、獲得することができる。薬学的に許容される酸付加塩（ａｃｉｄ-ａｄｄｉｔｉｏｎ ｓａｌｔ）の実例は、塩酸（ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ ａｃｉｄ）、臭化水素酸（ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｃ ａｃｉｄ）、硝酸（ｎｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ）、炭酸（ｃａｒｂｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、重炭酸塩（ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ）、りん酸（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ）、りん酸一水素（ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、りん酸二水素（ｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、硫酸（ｓｕｌｆｕｒｉｃ ａｃｉｄ）、重硫酸塩（ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｓｕｌｆａｔｅ）、ヨウ化水素酸（ｈｙｄｒｏｉｏｄｉｃ ａｃｉｄ）、亜りん酸(ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓ ａｃｉｄ)等の無機酸塩（ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄ ｓａｌｔ）と、酢酸ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）、プロピオン酸（ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、イソ酪酸（ｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）、マレイン酸（ｍａｌｅｉｃ ａｃｉｄ）、マロン酸（ｍａｌｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、安息香酸（ｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ）、コハク酸（ｓｕｃｃｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、スベリン酸（ｓｕｂｅｒｉｃ ａｃｉｄ）、フマル酸（ｆｕｍａｒｉｃ ａｃｉｄ）、乳酸（ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ）、マンデル酸（ｍａｎｄｅｌｉｃ ａｃｉｄ）、フタル酸（ｐｈｔｈａｌｉｃ ａｃｉｄ）、ベンゼンスルホン酸（ｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、ｐ-トルエンスルホン酸（ｐ-ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、クエン酸（ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ）、酒石酸（ｔａｒｔａｒｉｃ ａｃｉｄ）およびメタンスルホン酸（ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）等の類似な酸である有機酸塩（ｓａｌｔ  ｏｆ  ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄ ）とを含み、アミノ酸（アルギニンのような）の塩と、グルクロン酸のような有機酸の塩とをさらに含む（Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ., 「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」, Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６６：１-１９（１９７７）を参照）。本発明の特定の化合物は、塩基性および酸性である官能基を含むことによって、任意の塩基または酸付加塩に変換することができる。
【００３７】
好ましくは、従来の方式で、塩を塩基または酸と接触させ、また母体化合物を単離することによって、化合物の中性形態を再生する。化合物の母体形式と、ある物理的性質、例えば、極性溶媒における溶解度が異なっている点で、その様々な塩の形式と異なっている。
【００３８】
本明細書に使用される「薬学的に許容される塩」は、本発明における化合物の誘導体であり、ここで、母体化合物は、酸により塩を形成または塩基により塩を形成する方式により修飾される。薬学的に許容される塩においての実施例は、アミンの無機酸または有機酸塩のような塩基と、カルボン酸(ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ)のアルカリ金属または有機塩などのような酸基等とを含むが、それに限定されない。薬学的に許容される塩は、非毒性無機酸または有機酸からなる塩のような慣用の非毒性塩または第四級アンモニウム塩（ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ  ａｍｍｏｎｉｕｍ  ｓａｌｔ）を含む。慣用の非毒性塩は、無機及び有機酸から誘導された塩を含むが、それに限定されない。前記無機酸または有機酸は、２-アセトキシ安息香酸（２-ａｃｅｔｏｘｙｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ）、２-ヒドロキシエタンスルホン酸（２-ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、酢酸、アスコルビン酸（ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）、ベンゼンスルホン酸（ｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、安息香酸、重炭酸塩（ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ）、炭酸、クエン酸、エデト酸（ｅｄｅｔｉｃ ａｃｉｄ）、エタンジスルホン酸（ｅｔｈａｎｅ ｄｉｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、エタンスルホン酸（ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、フマル酸（ｆｕｍａｒｉｃ ａｃｉｄ）、グルコヘプトース（ｇｌｕｃｏｈｅｐｔｏｓｅ）、グルコン酸（ｇｌｕｃｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、グルタミン酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ）、グリコール酸（ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸塩、ヒドロキシナフタレン（ｈｙｄｒｏｘｙｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ）、イセチオン酸（ｉｓｅｔｈｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、乳酸（ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ）、乳糖（ｌａｃｔｏｓｅ）、ドデシルスルホン酸（ｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、マレイン酸（ｍａｌｅｉｃ ａｃｉｄ）、リンゴ酸（ｍａｌｉｃ ａｃｉｄ）、マンデル酸（Ｍａｎｄｅｌｉｃ ａｃｉｄ）、メタンスルホン酸（ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、硝酸（ｎｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ）、シュウ酸（ｏｘａｌｉｃ ａｃｉｄ）、パモ酸（ｐａｍｏｉｃ ａｃｉｄ）、パントテン酸（ｐａｎｔｏｔｈｅｎｉｃ ａｃｉｄ）、フェニル酢酸（ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）、りん酸（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ）、ポリガラクツロン酸（ｐｏｌｙｇａｌａｃｔｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、プロピオン酸（ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、サリチル酸（ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ）、ステアリン酸（ｓｔｅａｒｉｃ ａｃｉｄ）、ロイコボリンカルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ ｆｏｌｉｎａｔｅ）、コハク酸、スルファミン酸（ｓｕｌｆａｍｉｃ ａｃｉｄ）、ｐ-アミノベンゼンスルホン酸（ｐ-ａｍｉｎｏｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、硫酸、タンニン（ｔａｎｎｉｎ）、酒石酸およびｐ-トルエンスルホン酸から選択される。
【００３９】
本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法で酸基または塩基を含む母体化合物を合成することにより得られる。一般に、このような塩の製造方法は、水または有機溶媒またはそれらの２つの混合物で、遊離酸（ｆｒｅｅ ａｃｉｄｓ）または塩基形式のような化合物と、化学的に計量した適切な塩基または酸を反応させることによって製造する。一般に、好ましくは、エーテル（ｅｔｈｅｒ）、酢酸エチル（ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ）、エタノール（ｅｔｈａｎｏｌ）、イソプロパノール（ｉｓｏｐｒｏｐａｎｏｌ）またはアセトニトリル（ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）等の非水性媒体である。
【００４０】
本発明の化合物は、化合物を構成する一つまたは複数の原子に、非自然的な割合の原子同位体を含むことができる。例えば、トリチウム（３Ｈ）、ヨウ素-１２５（１２５Ｉ）またはＣ-１４（１４Ｃ）のように、放射性同位元素で化合物を標識することができる。本発明の化合物の全ての同位体組成の変換は、放射性であるか否か、すべて本発明の範囲内に含まれる。
【００４１】
用語「薬学的に許容される担体」とは、本発明の有効量の活性物質、活性物質を妨害しない生物学的活性が送達でき、また宿主または患者に対して有毒な副作用のない任意の製剤または担体媒体であり、代表的な担体は、水、油、野菜及びミネラル、クリームベース、ローションベース、軟膏基剤を含む。これらの基剤は、懸濁剤、増粘剤、浸透促進剤等を含む。それらの製剤は、化粧品分野または一部の薬学分野における当業者に周知されている。担体に関する他の情報は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ, ２１ｓｔ Ｅｄ., Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ, Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００５）を参照することができ、当該文献の内容は引用の方式で本明細書に組み込まれる。
【００４２】
薬物または薬理学的に活性な薬剤については、用語「有効量」または「治療的有効量」とは、非毒性であるが、所望の効果が達成できる十分な量の薬物または薬剤を指す。本発明の経口剤形の場合、組成物においての活性物質の「有効量」とは、当該化合物において別の活性物質と組み合わせて使用される場合、所望の効果を達成するために必要な使用量を指す。有効量の確定は、人によって異なり、受容体の年齢および一般状況によって決められ、また具体的な活性物質により決められることで、それぞれの方案に適切な有効量は、当業者によって日常的なテストにより決定され得る。
【００４３】
用語「有効成分」とは、化学物質を指し、有効的に標的障害、疾患または病気を治療することができる。
【００４４】
用語「任意」または「任意に」とは、その後の説明する事例または状況が、発生する場合もあり、発生しない場合もあることを指し、当該説明は、上述した事例や状況が発生する場合と、上述した事例や状況が発生しない場合とを含む。例えば、エチル基は「任意に」ハロゲンに置換されるとは、エチル基は、置換されない（例えば、ＣＨ２ＣＨ３）ことができ、一置換（例えば、ＣＨ２ＣＨＦなど）であることができ、多置換（例えば、ＣＨＦＣＨ２Ｆ、ＣＨ２ＣＨＦ２など）であることができ、または完全に置換（例えば、ＣＦ２ＣＦ３）されることができることを指す。
【００４５】
用語「置換される」とは、重水素と水素の変形を含んだ特定原子上のいずれか一つまたは複数の水素原子が、置換基によって置換されることを指し、また特定原子の原子価状態が正常であれば、置換された後の化合物は安定的である。置換基がケトン基（即ち、＝Ｏ）の場合、二つの水素原子が置換されたことを意味する。ケトンの置換は、芳香族基には起こらない。用語「任意に置換される」とは、置換されてもよく、置換されなくてもよいことを指し、特に規定されていない限り、化学的に実現できることを前提に、置換基の種類及び数は、いずれでもよい。
【００４６】
いずれかの変数（例えば、Ｒ）が化合物の組成物または構造中に一回以上現れる場合、それぞれの場合においての定義はすべて独立的である。したがって、例えば、一個の基が０〜２個のＲに置換される場合、その基は、少なくてもいずれか２個のＲに置換され、またそれぞれの場合のＲは、全て独立的な選択肢を有する。さらに、置換基および/またはその変異体の組み合わせは、このような組み合わせが安定な化合物を生成する場合にのみ許容される。
本発明の進歩
【００４７】
Ｌｅｓｉｎｕｒａｄは、キラル軸に起因する光学異性体を有することが発見されており、さらに（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ及び（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄが、常温及び血漿の下で安定であることが発現されていることで、Ｌｅｓｉｎｕｒａｄの単一の軸方向キラル異性体への開発を必要とする。
【００４８】
本発明は、本発明の二つの軸方向キラル異性体（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄの固体粉末、慣用の有機溶液及び血漿溶液での安定性データ、ＵＲＡＴ１遺伝子を安定的に感染させたＨＥＫ２９３細胞系が、尿酸輸送をマークすることに対する化合物の阻害の程度の評価及び（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄがラットの体内での薬物動態パラメーターを詳しく説明した。これらのデータから、（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄの固体と（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄの固体は、通常の保存条件下及び溶液中では、安定的であり、ＵＲＡＴ１遺伝子を安定的に感染させるＨＥＫ２９３細胞系が、尿酸輸送をマークすることに対する化合物の阻害の程度の評価実験において、（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄの体外活性は、（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄより明らかに優れており、（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄは体外活性が比較的に高い軸方向キラル異性体であり、またラセミ化された（±）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄより優れており、ＳＤ-ラット体内の薬物動態実験において、（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄが体内で相互変換されることは観察されず、（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄは、体内で安定した単一の軸方向キラル異性体として維持されると結論付けることができる。
【００４９】
本発明の製造方法において、経路式（Ｖ）または式（VI）は、キラル分離を使用しないことにより、コストを低減することができる。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】化合物１２Ａの単分子の立体構造を示す楕円体の図である。
【図２】化合物１２Ａの二分子の立体構造を示す楕円体の図である。
【図３】化合物１２Ａのａ軸方向への単位胞の堆積図である。
【図４】化合物１２Ｂの単分子の立体構造を示す楕円体の図である。
【図５】化合物１２Ｂの二分子の立体構造を示す楕円体の図である。
【図６】化合物１２Ｂのａ軸方向への単位胞の堆積図である。
【発明を実施するための形態】
【００５１】
以下、実施例及びテスト例によって本発明をさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。本明細書は、既に本発明を詳細に説明し、その具体的な実施例も開示されており、当業者にとって、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、本発明の具体的な実施形態に対して、様々な変更および修正を行うことは明らかである。
【００５２】
実施例１：（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄの製造
【化１４】
0006725530.tif 000015
【００５３】
合成経路：
【化１５】
0006725530.tif 000016
【００５４】
ステップ１：化合物１２Ａと１２Ｂの合成
【００５５】
化合物１２は、出願番号がＣＮ１０３５２４４４０Ａの中国特許または出願番号がＷ２００９０７０７４０の特許に記載された方法によって合成される。化合物１２（３３０.００ｍｇ、７６３.３１ｕｍｏｌ）は、超臨界流体クロマトグラフィーＳＦＣ（キラルカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ（２５０ｍｍ×３０ｍｍ、５ｕｍ）、移動相：超臨界ＣＯ２/エタノール（０.０５％のＤＥＡ）＝７０/３０、流速：６０ｍＬ/ｍｉｎ、検出波長：２２０ｎｍ）で分離して、化合物１２Ａ（１５０.００ｍｇ、３４６.９６ｕｍｏｌ）と化合物１２Ｂ（１５２.００ｍｇ、３５１.５８ｕｍｏｌ）を獲得する。
【００５６】
化合物１２Ａ：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ, ＤＭＳＯ-ｄ６）δ：８.５７（ｄ, Ｊ＝８.４ Ｈｚ, １Ｈ）, ７.７８-７.７６（ｍ, １Ｈ）, ７.６９-７.５８（ｍ, ２Ｈ）, ７.４３（ｄ, Ｊ＝７.６ Ｈｚ, １Ｈ）, ７.１３（ｄ, Ｊ＝８.０ Ｈｚ, １Ｈ）, ４.１０-４.００（ｍ, ４Ｈ）, ２.５９-２.５１（ｍ, １Ｈ）, １.１７-１.１１（ｍ, ５Ｈ）, ０.８９-０.８３（ｍ, ２Ｈ）。ＳＦＣ（キラルカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ-Ｈ（２５０ｍｍ×４.６ｍｍ、５ｕｍ）、移動相：エタノール（０.０５％のＤＥＡ）/超臨界ＣＯ２＝５〜４０％、流速：２.５ｍＬ/ｍｉｎ、検出波長：２５４ｎｍ）Ｒｔ＝４.８４２ｍｉｎ。軸方向キラル異性体の過剰率は１００％である。[α]２５Ｄ＝-１１.０３６（ｃ＝９.４５５ｍｇ/ｍＬのエタノール溶液）。化合物１２ＡのＳＸＲＤグラフィーデータは、図１〜図３を参照し、具体的なデータは、以下のようである。
【００５７】
【数１】
0006725530.tif 000017
【００５８】
【数２】
0006725530.tif 000018
【００５９】
【数３】
0006725530.tif 000019
【数４】
0006725530.tif 000020
【数５】
0006725530.tif 000021
【００６０】
【数６】
0006725530.tif 000022
【００６１】
化合物１２Ｂ：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ, ＤＭＳＯ-ｄ６）δ：８.５７（ｄ, Ｊ＝８.４ Ｈｚ, １Ｈ）, ７.７８-７.７６（ｍ, １Ｈ）, ７.６８-７.６０（ｍ, ２Ｈ）, ７.４３（ｄ, Ｊ＝８.０ Ｈｚ, １Ｈ）, ７.１３（ｄ, Ｊ＝８.０ Ｈｚ, １Ｈ）, ４.１０-４.０２（ｍ, ４Ｈ）, ２.６０-２.５１（ｍ, １Ｈ）, １.２０-１.１０（ｍ, ５Ｈ）, ０.８９-０.８３（ｍ, ２Ｈ）。ＳＦＣ（キラルカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ-Ｈ（２５０ｍｍ×４.６ｍｍ, ５ｕｍ）、移動相：エタノール（０.０５％の ＤＥＡ）/超臨界ＣＯ２＝５〜４０％、流速：２.５ｍＬ/ｍｉｎ、検出波長：２５４ｎｍ）Ｒｔ＝５.１１３ｍｉｎ..軸方向キラル異性体の過剰率は９５.７％である。[α]２５Ｄ＝９.０５３（ｃ＝８.６４５ｍｇ/ｍＬ エタノール溶液）。化合物１２ＢのＳＸＲＤグラフィーデータは、図４〜図６を参照し、具体的なデータは、以下のようである。
【００６２】
【数７】
0006725530.tif 000023
【００６３】
【数８】
0006725530.tif 000024
【００６４】
【数９】
0006725530.tif 000025
【数１０】
0006725530.tif 000026
【数１１】
0006725530.tif 000027
【数１２】
0006725530.tif 000028
【数１３】
0006725530.tif 000029
【００６５】
【数１４】
0006725530.tif 000030
【００６６】
ステップ２：化合物（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄの合成
【００６７】
化合物１２Ａ（１０６.００ｍｇ、２４５.１８ｕｍｏｌ、１.００ｅｑ）を、テトラヒドロフラン（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ）/水/エタノール（３ｍＬ、 １：１：１）混合溶媒に溶解させる。０℃まで冷却した後、水酸化リチウム一水和物（ｌｉｔｈｉｕｍ ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）（１２.３５ｍｇ、 ２９４.２２ｕｍｏｌ、１.２０ｅｑ）を添加し、０℃で一時間反応させる。反応した後、ギ酸（１ｍｏｌ/Ｌ）でｐＨ＝４まで調整し、室温で窒素ガスで乾燥し、テトラヒドロフランとエタノールを除去する。残渣に水（１ｍＬ）を添加し、ジクロロメタン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ）（２ｍＬ×６）で抽出する。有機相を合わせ、室温で、窒素ガスで乾燥し、テトラヒドロフランとエタノールを除去する。残渣にエタノール（１ｍＬ）を添加して、残留物を溶解させ、また水（１０ｍＬ）を添加して、混合してから冷凍乾燥させて、白色の固体化合物（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ（９４.４０ｍｇ、２３３.５０ｕｍｏｌ）を獲得する。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ, ＤＭＳＯ-ｄ６）δ＝８.５９（ｄ, Ｊ＝８.４ Ｈｚ, １Ｈ）, ７.７９-７.７１（ｔ, Ｊ＝７.６ Ｈｚ, １Ｈ）, ７.７０-７.６１（ｍ, ２Ｈ）, ７.４５（ｄ, Ｊ＝８.０ Ｈｚ, １Ｈ）, ７.１６（ｄ, Ｊ＝８.４ Ｈｚ, １Ｈ）, ３.９７（ｓ, ２Ｈ）, ２.６０-２.５５（ｍ, １Ｈ）, １.１８-１.１４（ｄ, Ｊ＝６.４ Ｈｚ, ２Ｈ）, ０.９１-０.８６（ｍ, ２Ｈ）。ＬＣ/ＭＳ（クロマトグラフィーカラム：Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＸＢ-Ｃ１８、３ｕｍ、３０×２.１ｍｍ、移動相：アセトニトリル（ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）（０.０２％のトリフルオロ酢酸）の水（０.０４％のトリフルオロ酢酸）溶液、グラジエント：５〜９５％（１.５ｍｉｎ）、流速：１.２ｍＬ/ｍｉｎ、検出波長：２２０ｎｍ ＆２５４ｎｍ）Ｒｔ＝０.８０１ｍｉｎ、ＭＳ ｍ/ｚ：４０４[Ｍ＋Ｈ]＋、４０６[Ｍ＋Ｈ＋２]＋。ＳＦＣ（キラルカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ-Ｈ（２５０ｍｍ×４.６ｍｍ,５μｍ）、移動相：Ａ：超臨界ＣＯ２、Ｂ：メタノール（ｍｅｔｈａｎｏｌ）（０.０５％ＤＥＡ）、グラジエント：５〜４０％Ｂ（５ｍｉｎ）、４０％Ｂ（３ｍｉｎ）、５％Ｂ（１.５ｍｉｎ）、流速：２.５ｍＬ/ｍｉｎ; カラム温度：３５℃）Ｒｔ＝５.１９７ｍｉｎ。軸方向キラル異性体の過剰率は９６.５％である。[α]２２Ｄ＝-３.６９３（ｃ＝３.０３０ｍｇ/ｍＬのエタノール溶液）。
【００６８】
ステップ３：化合物（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ的合成
【００６９】
化合物１２Ｂ（４５.００ｍｇ、１０４.０９ｕｍｏｌ、１.００ｅｑ）を、テトラヒドロフラン/水/エタノール（３ｍＬ、１：１：１）混合溶媒に溶解させる。０℃まで冷却した後、水酸化リチウム一水和物（５.２４ｍｇ、１２４.９ｕｍｏＬ、１.２０ｅｑ）を添加し、０℃で一時間反応させる。反応した後、ギ酸（１ｍｏｌ/Ｌ）でｐＨ＝４まで調整し、室温で窒素ガスで乾燥し、テトラヒドロフランとエタノールを除去する。残渣に水（１ｍＬ）を添加し、ジクロロメタン（２ｍＬ×６）で抽出する。有機相を合わせ、室温で窒素ガスで乾燥し、除去テトラヒドロフランとエタノールを除去する。残渣にエタノール（１ｍＬ）を添加して、残留物を溶解させ、また水（１０ｍＬ）を添加して、混合してから冷凍乾燥させて、白色の固体化合物（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ（３８.４０ｍｇ、８２.５９ｕｍｏｌ）を獲得する。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ, ＤＭＳＯ-ｄ６）δ＝８.５９（ｄ, Ｊ＝８.４ Ｈｚ, １Ｈ）, ７.８０-７.７２（ｔ, Ｊ＝７.２ Ｈｚ, １Ｈ）, ７.７１-７.６１（ｍ, ２Ｈ）, ７.４５（ｄ, Ｊ＝７.２ Ｈｚ, １Ｈ）, ７.１６（ｄ, Ｊ＝８.０ Ｈｚ, １Ｈ）, ３.９９（ｓ, ２Ｈ）, ２.６０-２.５５（ｍ, １Ｈ）, １.２０-１.１２（ｄｄ, Ｊ＝８.４ Ｈｚ, Ｊ＝１.６ Ｈｚ, ２Ｈ）, ０.９１-０.８３（ｍ, ２Ｈ）。ＬＣ/ＭＳ（クロマトグラフィーカラム：Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＸＢ-Ｃ１８, ３ｕｍ, ３０×２.１ｍｍ、移動相：アセトニトリル（０.０２％のトリフルオロ酢酸）の水（０.０４％のトリフルオロ酢酸）溶液、グラジエント：５％〜９５％（１.５ｍｉｎ）、流速：１.２ｍＬ/ｍｉｎ、検出波長：２２０ｎｍ ＆２５４ｎｍ）Ｒｔ＝０.７９６ｍｉｎ、ＭＳ ｍ/ｚ：４０４[Ｍ＋Ｈ]＋, ４０６[Ｍ＋Ｈ＋２]＋。ＳＦＣ（キラルカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ-Ｈ（２５０ｍｍ×４.６ｍｍ,５μｍ）、移動相：Ａ：超臨界ＣＯ２、Ｂ：メタノール（０.０５％ＤＥＡ）、グラジエント：５〜４０％Ｂ（５ｍｉｎ）、４０％Ｂ（３ｍｉｎ）、５％Ｂ（１.５ｍｉｎ）、流速：２.５ｍＬ/ｍｉｎ、カラム温度：３５℃）Ｒｔ＝５.５７０ｍｉｎ.軸方向キラル異性体の過剰率は９５.９％である。[α]２５Ｄ＝４.４３２（ｃ＝３.３５ｍｇ/ｍＬのエタノール溶液）。
【００７０】
実施例２：（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄの製造
【化１６】
0006725530.tif 000031
【００７１】
合成経路：
【化１７】
0006725530.tif 000032
【００７２】
ステップ１：化合物１４の合成
【００７３】
化合物１３（２.００ｇ、１６.３７ｍｍｏｌ、１.００ｅｑ）とピリジン（ｐｙｒｉｄｉｎｅ）（２.５９ｇ、３２.７４ｍｍｏｌ、２.００ｅｑ）を、トルエン（ｔｏｌｕｅｎｅ）（３０.００ｍＬ）に溶解させ、混合物を氷水浴中で０℃まで冷却させ、２-ブロモアセチルクロリド（２-ｂｒｏｍｏａｃｅｔｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）（３.０９ｇ、１９.６４ｍｍｏＬ、１.２０ｅｑ）を添加し、反応液を０℃で、１時間撹拌して、大量の白色の固体を析出させる。反応した後、ろ過し、フィルターケーキをジクロロメタン（３ｍＬ）で洗浄して、獲得された濾液をスピン乾燥して、黄色の油状の粗生成物を獲得する。粗生成物は、カラムクロマトグラフィーで精製（溶離液：０〜１５％の酢酸エチル/石油エーテル）して、無色の油状化合物１４（３.２０ｇ、１３.１６ｍｍｏｌ、８０.４１％の収率）を獲得する。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３）δ：７.４５-７.２２（ｍ, ６Ｈ）, ６.００-５.９２（ｍ, １Ｈ）, ４.０７（ｓ, １Ｈ）, ３.８５（ｓ, １Ｈ）, １.６３-１.５５（ｄ, Ｊ＝４ Ｈｚ, ３Ｈ）。
【００７４】
ステップ２：化合物１５の合成
【００７５】
化合物１０は、出願番号がＣＮ１０３５２４４０Ａの中国特許に記載された方法によって合成される。化合物１０（５０.００ｍｇ、１８７.０２ｕｍｏｌ、１.００ｅｑ）、化合物１４（５４.５６ｍｇ、２２４.４２ｕｍｏｌ、１.２０ｅｑ）と炭酸カリウム（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃａｒｂｏｎａｔｅ）（３１.０２ｍｇ、２２４.４２ｕｍｏｌ、１.２０ｅｑ）を、Ｎ、Ｎ-ジメチルホルムアミド（Ｎ,Ｎ-ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ）（１０.００ｍＬ）に溶解させ、反応液を１５℃で２.５時間撹拌する。反応した後、反応液をスピン乾燥して黄色の固体粗生成物を獲得する。粗生成物は、薄層クロマトグラフィーＰＴＬＣで精製（展開溶媒：５０％の酢酸エチル/石油エーテル）して、無色の油状化合物１５を獲得する。ＬＣＭＳ（クロマトグラフィーカラム：Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＸＢ-Ｃ１８、３ｕｍ, ３０×２.１ｍｍ、移動相：アセトニトリル（０.０２％のトリフルオロ酢酸）の水（０.０４％のトリフルオロ酢酸）溶液、グラジエント：５％〜９５％（１.５ｍｉｎ）、流速：１.２ｍＬ/ｍｉｎ、検出波長：２２０ｎｍ ＆２５４ｎｍ）Ｒｔ＝０.８８８ｍｉｎ, ＭＳ：ｍ/ｚ ４３１[Ｍ＋Ｈ]＋。ＳＦＣ（キラルカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ-３ １５０×４.６ｍｍ Ｉ.Ｄ., ３ｕｍ、移動相：Ａ：超臨界ＣＯ２ Ｂ：イソプロピルアルコール（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ）（０.０５％のＤＥＡ）、グラジエント：５〜４０％Ｂ（５.５ｍｉｎ）、４０％Ｂ（２ｍｉｎ）、５％Ｂ（２.５ｍｉｎ）、流速：２.５ｍＬ/ｍｉｎ、カラム温度：３５℃、検出波長：２５４ｎｍ）Ｒｔ＝５.７６６ｍｉｎ。
【００７６】
ステップ３：化合物１６Ａと１６Ｂの合成
【００７７】
化合物１５（１.３０ｇ、３.０３ｍｍｏｌ、１.００ｅｑ）とピリジン（２８７.６１ｍｇ、３.６４ｍｍｏｌ、１.２０ｅｑ）を、アセトニトリル（５００.００ｍＬ）に溶解させ、混合液を、氷水浴の中で０℃まで冷却させ、液体臭素（１.４５ｇ、９.０９ｍｍｏｌ、３.００ｅｑ）を添加し、反応を徐々に１５℃まで昇温させて４時間撹拌する。反応液を飽和亜硫酸水素ナトリウム溶液（２０ｍＬ）でクエンチした後、低温でスピン乾燥して、黄色の固体粗生成物１６を獲得する。粗生成物１６を、フラッシュカラムクロマトグラフィーＣｏｍｂｉ Ｆｌａｓｈで精製（溶離液：０〜２０％酢酸エチル/石油エーテル）して、化合物１６Ａと１６Ｂを獲得する。
【００７８】
化合物１６Ａ：ＬＣＭＳ（クロマトグラフィーカラム：Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＸＢ-Ｃ１８, ３ｕｍ, ３０×２.１ｍｍ、移動相：アセトニトリル（０.０２％のトリフルオロ酢酸）の水（０.０４％のトリフルオロ酢酸）溶液、グラジエント：５％〜９５％（１.５ｍｉｎ）、流速：１.２ｍＬ/ｍｉｎ、検出波長：２２０ｎｍ ＆２５４ｎｍ）Ｒｔ＝０.９５１ｍｉｎ, ＭＳ：ｍ/ｚ ５０８[Ｍ＋Ｈ]＋, ５１０[Ｍ＋Ｈ＋２]＋。ＳＦＣ（キラルカラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ-Ｈ ２５０×４.６ｍｍ Ｉ.Ｄ., ５ｕｍ、移動相：イソプロピルアルコール（０.０５％のＤＥＡ）/超臨界ＣＯ２（５％〜４０％）、流速：２.４ｍＬ/ｍｉｎ、検出波長：２２０ｎｍ）Ｒｔ＝８.４１ｍｉｎ。
【００７９】
化合物１６Ｂ：ＬＣＭＳ（クロマトグラフィーカラム：Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＸＢ-Ｃ１８, ３ｕｍ, ３０×２.１ｍｍ、移動相：アセトニトリル（０.０２％のトリフルオロ酢酸）の水（０.０４％のトリフルオロ酢酸）溶液、グラジエント：５％〜９５％（１.５ｍｉｎ）、流速：１.２ｍＬ/ｍｉｎ、検出波長：２２０ｎｍ ＆２５４ｎｍ）Ｒｔ＝０.９４６ｍｉｎ, ＭＳ：ｍ/ｚ ５０８[Ｍ＋Ｈ]＋、５１０[Ｍ＋Ｈ＋２]＋。ＳＦＣ（キラルカラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ-Ｈ ２５０×４.６ｍｍ Ｉ.Ｄ., ５ｕｍ、移動相：イソプロピルアルコール（０.０５％のＤＥＡ）/超臨界ＣＯ２（５％〜４０％）、流速：２.４ｍＬ/ｍｉｎ、検出波長：２２０ｎｍ）Ｒｔ＝７.５４ｍｉｎ。
【００８０】
ステップ４：化合物（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄの合成
【００８１】
化合物１６Ａ（１０.００ｍｇ、９.６７ｕｍｏｌ、１.００ｅｑ）と水酸化リチウム一水和物（１.６５ｍｇ、３９.３４ｕｍｏｌ、２.００ｅｑ）を、テトラヒドロフラン（１.５０ｍＬ）と水（１.５０ｍＬ）に溶解させ、反応液を１５℃で１６時間撹拌する。反応した後、反応液を、ギ酸（１Ｍ）で、ｐＨ＝２〜３のシステムになるまで調整し、反応液をスピン乾燥して、黄色の油状の粗生成物を獲得する。粗生成物は、分取クロマトグラフィーＨＰＬＣで分離（製造カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊３０ｍｍ＊４ｕｍ、移動相：Ａ：水（０.０５％のＨＣｌを含む）、Ｂ：アセトニトリル、グラジエント３８％〜６８％Ｂ（１２ｍｉｎ）、１００％Ｂ（２ｍｉｎ）、流速：２５ｍＬ/ｍｉｎ）した後、スピン乾燥して、化合物（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ（白色の固体）を獲得する。ＬＣＭＳ（クロマトグラフィーカラム：Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＸＢ-Ｃ１８、３ｕｍ、３０×２.１ｍｍ、移動相：アセトニトリル（０.０２％のトリフルオロ酢酸）の水（０.０４％のトリフルオロ酢酸）溶液、グラジエント：５％〜９５％（１.５ｍｉｎ）、流速：１.２ｍＬ/ｍｉｎ、検出波長：２２０ｎｍ ＆２５４ｎｍ）Ｒｔ＝０.７８６ｍｉｎ, ＭＳ：ｍ/ｚ ４０４[Ｍ＋Ｈ]＋、４０６[Ｍ＋Ｈ＋２]＋。ＳＦＣ（キラルカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ-Ｈ ２５０×４.６ｍｍ Ｉ.Ｄ.,５μｍ、移動相：Ａ：超臨界ＣＯ２、Ｂ：メタノール（０.０５％のＤＥＡ）、グラジエント：５％〜４０％Ｂ（５ｍｉｎ）、４０％Ｂ（３ｍｉｎ）、５％（１.５ｍｉｎ）、流速：２.５ｍＬ/ｍｉｎ、カラム温度：３５℃）Ｒｔ＝５.２７９ｍｉｎ。
【００８２】
ステップ５：化合物（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄの合成
【００８３】
化合物１６Ｂ（１０.００ｍｇ、１９.６７ｕｍｏＬ、１.００ｅｑ）と水酸化リチウム一水和物（１.６５ｍｇ、３９.３４ｕｍｏＬ、２.００ｅｑ）を、テトラヒドロフラン（１.５０ｍＬ）と水（１.５０ｍＬ）に溶解させ、反応液を１５℃で１６時間撹拌する。反応した後、反応液を、ギ酸（１ Ｍ）でシステムｐＨ＝２〜３まで調整し、反応液をスピン乾燥して、黄色の油状の粗生成物を獲得する。粗生成物は、分取クロマトグラフィーＨＰＬＣで分離（製造カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊３０ｍｍ＊４ｕｍ、移動相：Ａ：アセトニトリル、Ｂ：水（０.０５％のＨＣｌを含む）、グラジエント３８％〜６８％Ａ（１２ｍｉｎ）、１００％Ａ（２ｍｉｎ）、流速：２５ｍＬ/ｍｉｎ）した後、スピン乾燥して、化合物（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ（白色の固体）を獲得する。ＬＣＭＳ（クロマトグラフィーカラム：Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＸＢ-Ｃ１８、３ｕｍ、３０×２.１ｍｍ、移動相：アセトニトリル（０.０２％のトリフルオロ酢酸）の水（０.０４％のトリフルオロ酢酸）溶液、グラジエント：５％〜９５％（１.５ｍｉｎ）、流速：１.２ｍＬ/ｍｉｎ、検出波長：２２０ｎｍ ＆２５４ｎｍ）Ｒｔ＝０.７８７ｍｉｎ、ＭＳ：ｍ/ｚ４０４[Ｍ＋Ｈ]＋, ４０６[Ｍ＋Ｈ＋２]＋。ＳＦＣ（キラルカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ-Ｈ ２５０×４.６ｍｍ Ｉ.Ｄ.,５μｍ、移動相：Ａ：超臨界ＣＯ２、Ｂ：メタノール（０.０５％のＤＥＡ）、グラジエント：５％〜４０％Ｂ（５ｍｉｎ）、４０％Ｂ（３ｍｉｎ）、５％（１.５ｍｉｎ）、流速：２.５ｍＬ/ｍｉｎ、カラム温度：３５℃）Ｒｔ＝５.６６６ｍｉｎ。
【００８４】
テスト例１：ＵＲＡＴ１遺伝子を安定的に感染させるＨＥＫ２９３細胞系が、尿酸輸送をマークすることに対する化合物の阻害への程度の評価
【００８５】
１．実験の目的：
【００８６】
ＵＲＡＴ-１（尿酸輸送体）遺伝子を安定的に感染させるＨＥＫ２９３細胞株を使用して、尿酸再吸収を阻害する化合物のＩＣ５０値を測定する。
【００８７】
２．実験材料：
【００８８】
ＵＲＡＴ-１（ＨＥＫ２９３）細胞株：ＵＲＡＴ-１遺伝子を安定的に感染させるＨＥＫ２９３細胞（細胞株は、上海薬明康徳新薬開発株式会社で製造）、
細胞培養液：ＤＭＥＭ培養液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ １１９６５１１８）に、１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ, Ｃｏｒｎｉｎｇ ３５０７６１０５）、１％のピルビン酸ナトリウム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ １１３６０００７０）と３００ｕｇ/ｍＬｇ４１８（Ｇｉｂｃｏ １０１３１）を加える、
ＨＢＳＳ緩衝液：（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ, １４０２５１２６）、
０.１Ｍ ＮａＯＨ溶液：ＮａＯＨ乾燥粉末（江蘇強盛化工株式会社２００９０２０６）で製造、
１４Ｃマーク-尿酸溶液（ＡＲＣ ０５１３Ａ）、
ＣＯ２インキュベーター：（Ｔｈｅｒｍｏ）、
液体シンチレーション発光カウンターＴｒｉｃａｒｂ：（Ｂａｃｋｍａｎ）。
【００８９】
３．実験ステップと方法：
【００９０】
ａ 細胞の接種：
【００９１】
１）細胞培養物の培養上清を吸引して除去し、１０ｍＬのＰＢＳで細胞を洗浄する。
【００９２】
２）洗浄した細胞培養フラスコに、予熱したトリプシン（ｔｒｙｐｓｉｎ）を加え、培養フラスコを回転させて、トリプシンが培養フラスコの底部を均一にカバーするようにする。室温で消化する。
【００９３】
３）各Ｔ１５０培養フラスコは、１０〜１５ｍＬの培養液で細胞を懸濁させ、０.１ｍＬを吸引して、トリパンブルー溶液（Ｔｒｙｐａｎ Ｂｌｕｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）で２倍カウントの細胞を希釈する。
【００９４】
４）培養液で、細胞を２.５×１０５/ｍＬに希釈し、希釈した後の細胞をラット尾コラーゲンで被覆した２４ウェルプレート（８００μＬ/ウェル、２×１０５細胞/ウェル）に添加する。３７℃に置き、５％のＣＯ２インキュベーターで、一晩培養する。
【００９５】
ｂ   細胞の準備：
【００９６】
１）細胞を２４ウェルプレートに、１６〜１８時間接種してから、上清を除去する。各ウェルに６００μｌのＨＢＳＳ緩衝液を加え、２回洗浄する。
【００９７】
２）ＨＢＳＳ緩衝液を吸引して除去した後、１８０μｌのＨＢＳＳ緩衝液を各ウェルに添加する。
【００９８】
ｃ 化合物溶液の製造、希釈及びサンプルの追加：
【００９９】
１）化合物粉末を１００％のＤＭＳＯに溶解する。次いで、化合物に対して、６ポイントを３倍希釈し、または２ポイントを１０倍希釈して、最高の初期濃度は５０ｍＭである。
【０１００】
２）ステップ１）の５ｕＬのＤＭＳＯ溶液を、１２０μｌのＨＢＳＳ緩衝液に移し、２５倍に希釈する。
【０１０１】
３）ステップ２）の１０μＬの希釈液を、２４ウェル細胞プレートに加え、３７℃に置き、５％のＣＯ２インキュベーターで１５分間インキュベートする。ＤＭＳＯの最終濃度は０.２％である。細胞の対照ウェル：化合物を添加せず、０.２％のＤＭＳＯのみを含む。
【０１０２】
ｄ  検出：
【０１０３】
１４Ｃマークの尿酸溶液を希釈して、細胞プレートに加え、最終濃度は５０μＭである。３７℃に置き、５％のＣＯ２インキュベーターで、１０分間インキュベートする。上清を除去した後、ＨＢＳＳ緩衝液で細胞を２回洗浄する。細胞に０.１Ｍ ＮａＯＨ溶液を添加して溶解する。細胞溶解液を液体フラッシュチューブに集め、液体フラッシュ液をを加え、液体シンチレーションカウンターＴｒｉ-Ｃａｒｂを用いてシグナル値を読み取る。
【０１０４】
ｅ  データ処理と分析：
【０１０５】
ルミネセンスデータによって、化合物のＵＲＡＴ-１に対する阻害効果を分析し、阻害パーセンテージデータを計算した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、阻害パーセンテージ（ｉｎｈ％）データで非線形フィッティング分析して、ＩＣ５０値を得る。
【０１０６】
４．実験結果は、表１に示されている。
【０１０７】
【表１】
0006725530.tif 000033
【０１０８】
実験結果から、複数の並列テストにおいて、（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄの体外活性は、（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄより明らかに優れていることから、体外活性が比較的に高い軸方向キラル異性体であることが見られ、またラセミ化された（±）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄより優れていることが分かる。
【０１０９】
テスト例２：室温における化合物固体の安定性評価
【０１１０】
実験ステップと方法：
【０１１１】
２０ｍｇのテスト化合物を取って、５ｍＬの茶色の透明試薬ボトルに置き、窒素キャビネットで（１５℃）暗所で保存する。予め保存時間を設定した後、約２ｍｇの試験化合物を正確に量ってから、エタノールを加えて、１ｍｇ/ｍＬのエタノール溶液を製造し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）または液体クロマトグラフィー（ＬＣＭＳ）と臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）を使用して、化合物の純度及びキラル純度を検出する。実験結果は、表２に示されている。
【０１１２】
【表２】
0006725530.tif 000034
【０１１３】
注：ＳＦＣの分析条件は、実施例１の中のステップ２とステップ３の分析条件と同じである。
【０１１４】
実験結果から、（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ固体粉末を、１５℃で８０日間以上保存した後、ＳＦＣ純度は変化が見られず、安定を維持する。
【０１１５】
テスト例３：エタノール溶液中の化合物の安定性評価
【０１１６】
実験ステップと方法：
【０１１７】
一定量のテスト化合物を正確に量り、エタノールを加えて、エタノール溶液を製造する。化合物のエタノール溶液を加熱した油浴に置いて撹拌する。検出終点で、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）または液体クロマトグラフィー（ＬＣＭＳ）と超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）で、化合物の純度及びキラル純度を検出する。実験結果は、表３に示されている。
【０１１８】
【表３】
0006725530.tif 000035
【０１１９】
注：ＳＦＣの分析条件は、実施例１の中のステップ２とステップ３の分析条件と同じである。
【０１２０】
実験結果から、（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ固体が、エタノール溶液の中で３７℃と７０℃まで加熱した後、ＳＦＣ純度は変化が見られず、安定を維持することが分かる。
【０１２１】
テスト例４：ＤＭＳＯ溶液における化合物の安定性評価
【０１２２】
実験ステップと方法：
【０１２３】
一定量のテスト化合物を正確に量り、ＤＭＳＯを加え、ＤＭＳＯ溶液を製造する。化合物のＤＭＳＯ溶液を加熱した油浴に置いて撹拌した。検出終点で、一定量のＤＭＳＯ溶液を取って、エタノールで希釈した後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）または液体クロマトグラフィー（ＬＣＭＳ）と超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）で化合物の純度及びキラル純度を検出する。実験結果は、表４に示されている。
【０１２４】
【表４】
0006725530.tif 000036
【０１２５】
【表５】
0006725530.tif 000037
【０１２６】
注：ＳＦＣの分析条件は、実施例１の中のステップ２とステップ３の分析条件と同じである。
【０１２７】
実験結果から、（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ固体がＤＭＳＯ溶液で、８０℃、１２０℃と１６０℃まで加熱した後、ＳＦＣ純度は変化が見られず、安定を維持することが分かる。
【０１２８】
テスト例５：ラットとヒト血漿においての化合物の安定性評価
【０１２９】
１．実験材料
【０１３０】
１.１ テスト化合物保存溶液
【０１３１】
（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ
【０１３２】
１.２マトリックスのテスト
【０１３３】
【表６】
0006725530.tif 000038
【０１３４】
２．実験ステップと方法
【０１３５】
２.１ 実験前に、冷蔵庫で-４０℃で凍結した血漿を室温で解凍し、３７℃の水浴内で５〜１０分間インキュベートした後、４０００ｒｐｍで５分間遠心分離して、血漿から不純物および脂質を除去する。血漿のｐＨ値をテストし、必要に応じてｐＨを７.４±０.１まで調整する。
【０１３６】
２.２ １０ｍＭ保存溶液を、ＤＭＳＯで４００μＭの中間濃度まで希釈し、希釈ステップは、４μＬである１０ｍＭの保存溶液を９６μのＬＤＭＳＯに加える。
【０１３７】
２.３ インキュベーションサンプルの製造：３μＬの中間濃度溶液（４００μＭ）を、５９７μＬのブランク血漿に加えて、最終濃度が２μＭであるインキュベーションサンプルを形成する。すべての時点（０ｍｉｎ、１０ ｍｉｎ、３０ ｍｉｎ、６０ ｍｉｎ、１２０ｍｉｎ）のインキュベーションサンプルを、３７℃の水浴でインキュベートし、各サンプルを２回繰り返す。
【０１３８】
２.４ 各時点でインキュベーションプレートから１００μＬのインキュベーションサンプルを取って、４００μＬの終止液（終止液は内部標準２００ｎｇ/ｍＬ ｔｏｌｂｕｔａｍａｉｄｅと２０ｎｇ/ｍＬ ｂｕｓｐｉｒｏｎｅ ５０％のＡＣＮ/ＭｅＯＨ溶液を含む）を加え、タンパク質を沈殿する。処理されたすべての時点のサンプルを、プレートシェーカーで十分に混合する。
【０１３９】
２.５ ２０分間、４０００ｒｐｍで遠心分離し、１００μＬの上清液を取って、２００μＬの超純水を加える。プレートシェーカーで８００ｒｐｍ で、１０分間、次いでサンプルをＬＣ-ＭＳ/ＭＳ分析する。
【０１４０】
３. 実験データの分析
【０１４１】
化合物のピーク面積と内部標準ピーク面積の比率で、試験化合物の減少を評価する。
血漿をインキュベートした後、各時間の保持率を計算し、その式は以下のようである。
【０１４２】
％残存率＝１００＊（特定時点のピーク面積比率/Ｔ０時点のピーク面積比率）
特定時点：０ｍｉｎ、１０ ｍｉｎ、３０ ｍｉｎ、６０ ｍｉｎ、１２０ｍｉｎ  Ｔ０：インキュベートする前のサンプル
【０１４３】
４. ラットとヒト血漿においての化合物の安定性の結果
【０１４４】
実験結果は、表５に示されている。
【０１４５】
【表７】
0006725530.tif 000039
【０１４６】
実験結果から、（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄは、ヒト血漿またはＳＤ-ラット血漿の中で、２時間インキュベートした後、安定を維持することが分かる。
【０１４７】
テスト例６：ラット体内における化合物の薬物動態テスト
【０１４８】
１．実験の目的
【０１４９】
ＳＤラットをテスト動物とし、ＬＣ/ＭＳ/ＭＳ法でラットIV（静脈注射）を測定し、（±）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ，（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと（-）-ＬｅｓｉｎｕｒａｄにＰＯ（強制栄養）投与した後、異なる時間に血漿の中の（±）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ、（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄの薬物濃度を測定し、ラット体内における本発明の化合物の薬物動態学的行為を研究し、その薬物動態特徴を評価する。
【０１５０】
２．実験の方案
【０１５１】
２.１テスト薬物
【０１５２】
（±）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ、（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄ
【０１５３】
２.２ テスト動物
【０１５４】
１８匹の健康な成体雄性ＳＤラットを、６グループ（各化合物はそれぞれＩＶ、ＰＯ群を有する）に分け、各グループを３匹にし、Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｕｐｅｒ-Ｂ＆Ｋ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｉｍａｌ Ｃｏｒｐ.Ｌｔｄ.から購入し、動物生産許可番号：ＳＣＸＫ（滬）２０１３-００１６。
【０１５５】
２.３ 薬物の調製
【０１５６】
適切な量のサンプルを量り、一定量の純水を加え、ｐＨを７〜８に調整し、それぞれ１ｍｇ/ｍＬ（ろ過後、清澄する）と２ｍｇ/ｍＬ（少量の懸濁した粒子を有する）を製造し、ＩＶとＰＯ投与に利用される。
【０１５７】
２.４ 投与
【０１５８】
１８匹のＳＤラットを６グループに分け、各グループを３匹の雄性にし、一晩絶食させた後、それぞれIV、ＰＯに投与する。IVへの投与量は２ｍｇ/ｋｇであり、投与の体積は２ｍＬ/ｋｇであり、ＰＯへの投与量は１０ｍ/ｋｇであり、投与の体積は５ｍＬ/ｋｇである。
【０１５９】
３．実験操作
【０１６０】
血液試料を、Ｋ２-ＥＤＴＡ抗凝固剤チューブに収集し、投与の前後に３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。血漿を分離し、-８０℃で保存する。ＰＯ群の投与前および投与後の０.２５時間、０.５時間、１ 時間、２ 時間、４ 時間、８ 時間、２４時間に採血を行い、他の操作はIV群と同じである。IVおよびＰＯに投与した後のラットの血漿の中の試験化合物の含有量を、ＬＣ/ＭＳ/ＭＳにより決定した。分析方法の線形範囲は６.００-１８０００ｎＭであり、定量化の下限は６.００ｎＭである。血漿サンプルを、沈殿したタンパク質で前処理してから分析を行う。
【０１６１】
IV群、投与の前後の０.０８３時間、０.２５時間、０.５時間、１時間、２時間、４時間、８時間、２４時間に、２５０μＬを採血し、Ｋ２-ＥＤＴＡの抗凝固チューブに置き、３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離させ、血漿を分離させ、-８０℃に保存する。ＰＯ群は、投与の前後の０.２５時間、０.５時間、１時間、２時間、４時間、８時間、２４時間に採血を行い、他の操作はIV群と同じである。ＬＣ/ＭＳ/ＭＳ法で、IV、ＰＯに投与した後、ラット血漿の中の試験化合物の含有量を測定する。分析方法の線形範囲は６.００-１８０００ｎＭであり、定量化の下限はすべて６.００ｎＭであり、血漿サンプルは沈殿したタンパク質を前処理してから分析を行う。
【０１６２】
４．薬物動態パラメータの結果
【０１６３】
実験結果は、表６に示されている。
【０１６４】
【表８】
0006725530.tif 000040
【０１６５】
実験結果から、ＳＤ-ラット体内での（＋）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと（-）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄとの薬物動態は近づいており、（±）-Ｌｅｓｉｎｕｒａｄと似ていることが分かる。体内では、二つの軸方向キラル異性体との相互変換は観察されず、循環システム内で、安定した単一の軸方向キラル異性体として維持されていることが分かる。
【図１】
0006725530.tif 000048
【図２】
0006725530.tif 000049
【図３】
0006725530.tif 000050
【図４】
0006725530.tif 000051
【図５】
0006725530.tif 000052
【図６】
0006725530.tif 000053