(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
発芽玄米のプロテアーゼ処理物を有効成分とする血管内皮細胞賦活剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体安全性にすぐれ、化粧料（医薬部外品も含む）や美容用又は健康用の経口組成物に配合される機能性材料に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、血管に関連する老化現象が注目されており、血管の老化と皮膚等の体組織、器官の老化との関係について、研究が行われている。皮膚科学分野においては、加齢と共に皮膚色は「赤味が減り、明度が下がる」傾向があるというデータがあり、加齢と血流低下の関連が示唆されている。血管の構造は、外膜、中膜、内膜の三層からなり、血管内皮細胞はその内膜の中でも最も内側に一層の状態で存在し、常に血液と接することから、当該細胞の主な機能は、（１）血液を凝固させずに体のすみずみまで行き渡らせること、（２）血液中の栄養成分等を体の組織へ選択的に透過させること、（３）血圧を調節すること、である。このことから、加齢等の要因で血管内皮細胞の機能低下が起こると、血管系疾病や皮膚色が変化すると考えられている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明者らは、上記課題を解決すべき鋭意研究した結果、発芽玄米の加水分解物が血管内皮細胞賦活効果を有することを見出した。従来、発芽玄米の抽出物が保湿効果及び美白効果を有することは知られていたが（特許文献１）、発芽玄米の加水分解物が血管内皮細胞賦活効果を有することについては、知られていなかった。
【０００４】
【特許文献１】特開2006-111580号
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、発芽玄米の加水分解物を有効成分とする血管内皮細胞賦活剤である。
また、本発明は、発芽玄米の加水分解物を有効成分とする血管内皮細胞賦活剤を含む皮膚外用組成物である。
また、本発明は、発芽玄米の加水分解物を有効成分とする血管内皮細胞賦活剤を含む経口用組成物である。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、天然物由来で生体安全性にすぐれ、かつ、格段にすぐれた血管内皮細胞賦活作用に基づく、皮膚色の改善等の効果を有する組成物を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
以下、本発明の好ましい実施の形態について詳細に説明する。
本発明は、発芽玄米の抽出物を加水分解処理して得られる加水分解処理物を有効成分として含む血管内皮細胞賦活剤、並びに血管内皮細胞賦活剤を含む皮膚外用組成物及び経口用組成物である。
【０００８】
本発明において、発芽玄米とは、イネ科（Poaceae）イネ属（Oryza）の植物から得られるものであって、常法により発芽処理を施したものという。
【０００９】
抽出物の調製は、まず、発芽玄米を、必要ならば予め水洗して異物を除いた後、そのまま又は乾燥した上、必要に応じて細切又は粉砕し、抽出溶媒と接触させて抽出を行う方法（例えば、浸漬法、向流抽出法等の方法）により調製することができる。また、超臨界抽出法を用いてもよい。
【００１０】
抽出溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノール等の低級アルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン等の多価アルコール類；酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル等のエステル類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；エチルエーテル、イソプロピルエーテル等のエーテル類；ｎ−ヘキサン、トルエン、クロロホルム等の炭化水素系溶媒等が挙げられ、それらは単独で又は二種以上混合して用いられる。
【００１１】
本発明においては、水、低級アルコール類又は多価アルコール類等の親水性溶媒が好適である。この親水性溶媒を用いる場合の好ましい例としては、例えば、水、低級アルコール類（特にエタノール）、又は多価アルコール（特に、１，３−ブチレングリコール）の単独使用、或いは、水と低級アルコール類（特にエタノール）との混合溶媒、又は水と多価アルコール類（特に１，３−ブチレングリコール，グリセリン）との混合溶媒の使用等が挙げられるが、なかでも水単独、又は水と１，３−ブチレングリコールの混合溶媒が特に好ましい。
【００１２】
混合溶媒を用いる場合の混合比は、例えば水と１，３−ブチレングリコールとの混合溶媒であれば、容量比（以下同じ）で１：１０〜２０：１、水とエタノールとの混合溶媒であれば、１：１０〜２５：１、水とグリセリンとの混合溶媒であれば１：１０〜２０：１の範囲とすることが好ましい。
【００１３】
また、発芽玄米と抽出溶媒との重量比は好ましくは１：１〜１：５０の範囲であり、より好ましくは、１：３〜１：３５の範囲である。
【００１４】
抽出温度、抽出時間等の抽出条件は、用いる溶媒の種類やｐＨによっても異なるが、例えば、水もしくは１，３−ブチレングリコール、又は水と１，３−ブチレングリコールとの混液を溶媒とする浸漬法の場合であれば、抽出温度は一般に０〜９０℃、好ましくは５℃から３５℃の範囲である。抽出時間は、１時間〜７日間、好ましくは、６〜４８時間の範囲である。
【００１５】
上述の抽出処理と並行して、又は抽出処理後、加水分解処理を施す。加水処理の方法としては、酸処理、アルカリ処理、酵素処理等が挙げられるが、それらの中でも酵素処理が最も好ましい。使用する酵素としては、蛋白分解酵素、澱粉分解酵素、繊維素分解酵素及び脂肪分解酵素から選ばれた１種又は２種以上が挙げられる。
【００１６】
蛋白分解酵素は、動物由来酵素、植物由来酵素、及び微生物由来の酵素のいずれでも良い。例えば、アクチナーゼ、ペプシン、トリプシン、パパイン、キモパパイン、グリシルグリシンペプチターゼ、カルボキシペプチターゼ、アミノペプチターゼ及びブロメライン等が挙げられ、これらの１種以上を用いることができる。また、澱粉分解酵素としては、グルコアミラーゼ、α-アミラーゼ等が挙げられる。また、繊維素分解酵素としては、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペクチナーゼ等が挙げられる。また、脂肪分解酵素としてはリパーゼ等が挙げられる。使用する酵素としては、いずれかの酵素群から選ばれた１種又は２種以上を用いても、それらの酵素群からそれぞれ選ばれた１種又は２種以上の酵素を組み合わせて用いてもよい。
【００１７】
酵素の添加量は、各植物の使用部位の固形分に対して、合計で０．０１〜５０重量％の範囲とすることが好ましく、より好ましくは０．１〜１０．０重量％の範囲である。
【００１８】
上述のように調製した加水分解物は、一般にはｐＨを３〜８に調製した上で、これをそのままの状態で使用しても良く、又減圧濃縮等により所望の濃度として使用しても良い。また、スプレードライ法等の常法により乾燥物としても良い。
【００１９】
上述のように調製した加水分解物は、化粧品等の皮膚外用剤、各種の美容用又は健康増進用飲食品の配合剤として適用することができる。
【００２０】
本発明に係る加水分解物を含む化粧品（医薬部外品も含む）としては、例えば、乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パック、口紅、ファンデーション、リクイドファンデーション、メイクアッププレスパウダー、ほほ紅、白粉、洗顔料、洗浄剤、ボディシャンプー、シャンプー、石けん等が挙げられ、さらには浴剤等も挙げられるが、本発明はこれらに限定されるものではない。また、美容用又は健康増進用飲食品としては、美容飲料、栄養ドリンク、スポーツドリンク、ニアウォーター、ビタミン飲料、ミネラル飲料、アルコール飲料等の飲料；各種スープ類（粉末スープも含む）、乳製品、ゼリー、キャンディ、錠菓、ガム等の食品；錠剤、液状、顆粒状又はゼリー状の健康食品・飲料等に配合することができるが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２１】
例えば、化粧品（医薬部外品も含む）における本発明の加水分解物の配合量は、加水分解物の固形分として、基礎化粧料の場合は、一般に０．００２〜１．０重量％、好ましくは０．０２〜０．２重量％の範囲、メイクアップ化粧料の場合は、一般に０．００２〜１．０重量％、好ましくは０．０２〜０．２重量％の範囲、又清浄用化粧料の場合は、一般に０．００２〜１０．０重量％、好ましくは０．０２〜７．０重量％の範囲である。また、美容用又は健康増進用飲食品における本発明の加水分解物の配合量は、加水分解物の固形分として、０．１〜３０重量％の範囲が好ましい。
【００２２】
本発明に係る加水分解物を化粧品（医薬部外品も含む）の配合剤として使用する場合には、必須成分の加水分解物のほかに、例えば油性成分、界面活性剤（合成系、天然物系）、保湿剤、増粘剤、乳化剤又は乳化助剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、色素、香料、その他の生理活性成分等を必要に応じて適宜配合することができる。また、本発明に係る加水分解物の有効性、特長を損なわない限り、他の生理活性成分と組み合わせて配合することも何ら差し支えない。
【００２３】
ここで、油性成分としては、例えばオリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米胚芽油、ヤシ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、シアーバター、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、植物由来スクワラン等の植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油等の動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリン等のロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワラン等の炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、ｃｉｓ−１１−エイコセン酸等の脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール等の高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、２−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）等の合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。
【００２４】
界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル等の非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩等のアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２−アルキル−１−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩等のカチオン界面活性剤；Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリアルキル−Ｎ−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ−アシルアミドプロピル−Ｎ′，Ｎ′−ジメチル−Ｎ′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタイン等の両性界面活性剤等を使用することができる。
【００２５】
乳化剤又は乳化助剤としては、酵素処理ステビア等のステビア誘導体、サポニン又はその誘導体、カゼイン又はその塩（ナトリウム等）、糖と蛋白質の複合体、ショ糖又はそのエステル、ラクトース、大豆由来の水溶性多糖、大豆由来蛋白質と多糖の複合体、ラノリン又はその誘導体、コレステロール、ステビア誘導体（ステビア酵素処理物等）、ケイ酸塩（アルミニウム、マグネシウム等）、炭酸塩（カルシウム、ナトリウム等）サポニン及びその誘導体、レシチン及びその誘導体（水素添加レシチン等）等を配合することもできる。
【００２６】
保湿剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等があり、さらにトレハロース等の糖類、ムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体等）、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、ＮＭＦ関連物質、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、海藻抽出物、各種アミノ酸及びそれらの誘導体が挙げられる。
【００２７】
増粘剤としては、例えばアルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン等の褐藻、緑藻又は紅藻由来成分；ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体、アルカリゲネス産生多糖体等の多糖類；キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム等のガム類；カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体；ポリグルタミン酸及びその誘導体等が挙げられる。
【００２８】
防腐・殺菌剤としては、例えば尿素；パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル等のパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャマール（イミダゾデイニールウレア）、１，２−ペンタンジオール、各種精油類、樹皮乾留物、大根発酵液等がある。
【００２９】
粉体成分としては、例えばセリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー、穀類（米、麦、トウモロコシ、キビ等）のパウダー、豆類（大豆、小豆等）のパウダー等がある。
【００３０】
紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩、４−ターシャリーブチル−４−メトキシベンゾイルメタン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。
【００３１】
抗酸化剤としては、例えばブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ビタミンＥ及びその誘導体（例えば、ビタミンＥニコチネート、ビタミンＥリノレート等）等がある。
【００３２】
美白剤としては、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン又はその誘導体、エラグ酸及びその誘導体、ニコチン酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、トラネキサム酸及びその誘導体、４−メトキシサリチル酸カリウム塩、マグノリグナン（5,5'−ジプロピル−ビフェニル−2,2’−ジオール）、ヒドロキシ安息香酸及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、α−ヒドロキシ酸、ＡＭＰ（アデノシンモノホスフェイト、アデノシン１リン酸）が挙げられ、これらを単独で配合しても、複数を組み合わせて配合しても良い。
【００３３】
次に、製造例、試験例及び処方例によって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。なお、以下において、部はすべて重量部を、また％はすべて重量％を意味する。
【００３４】
製造例１．発芽玄米の加水分解物の調製
発芽玄米８０ｇに精製水３２０ｇを加え、室温で２４時間攪拌し、抽出処理を行った。得られた抽出物溶液に対してろ過処理を行った。このろ液に、プロテアーゼ０．６ｇを加え、５０℃で４時間酵素分解処理を行った。その後８０℃で１時間加熱して酵素を失活させ、室温まで冷却した。こうして得られた酵素処理液を精製ろ過し、淡黄色の発芽玄米加水分解物溶液１８５ｇを得た（固形分濃度：４．８％）。
【００３５】
試験例１．血管内皮細胞賦活効果の評価試験
正常ヒト微小血管内皮細胞HMVECを、ＦＧＦを含まないHuMedia-MvG培地（クラボウ社）を入れた９６穴マイクロプレートに３×１０３個／穴播種し、３７℃,５．０％ＣＯ２の条件下に１日間プレ培養した後、本発明の製造例１に係る加水分解物を試料溶液として培地に添加した。ここで、試料溶液はそれぞれ培地中の加水分解物が溶液として１．０％、２．０％の終濃度となるように添加した。試料溶液を培地に添加後、プレ培養と同条件でさらに３日間培養した。次に、培地を除去し、０．０３％のＭＴＴを添加して３７℃に１時間保持した後、生成したホルマザンをイソプロパノールで抽出し、マイクロプレートリーダー(Model 680、バイオラッド社製)を用いて波長５７０−６３０ｎｍでＭＴＴ値を測定した。試料溶液に代えてPBS(-)を添加した試料無添加の場合（Control）についても上記と同様の操作を行い、ここに得られたＭＴＴ値に対する各試料添加時のＭＴＴ値の相対値を求め、血管内皮細胞ＭＴＴ活性率（％）とした。また、試験系が正常に機能しているかを確認するために、試料溶液の代わりに陽性対照として２５ｍＭのグルコースを添加した場合についても、同様の試験を行った。
【００３６】
試験例１の結果を表１に示す。
［表１］
0006771871.tif 000002
【００３７】
表１に示すように、本発明に係る加水分解物は、濃度依存的に格段にすぐれた血管内皮細胞賦活効果を示し、化粧料、美容用又は健康増進用飲食品の配合剤として有用であることが明らかである。
【００３８】
処方例１．乳液
（成分）                                                            （質量％）
１．ポリオキシブチレンポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリセリルエーテル
（３Ｂ．Ｏ．）（８Ｅ．Ｏ．）（５Ｐ．Ｏ．）                            ３．０
２．グリセリン                                                        ３．０
３．精製水                                                            ０．２
４．オクタン酸セチル                                                １２．０
５．ジプロピレングリコール                                            ４．０
６．１，３−ブチレングリコール                                        ４．０
７．ベタイン                                                          ３．０
８．キサンタンガム                                                    ０．１
９．製造例１の加水分解物                                              ０．２
１０．ローカストビーンガム                                            ０．１
１１．カルボキシビニルポリマー                                        ０．１
１２．水酸化カリウム                                                  ０．０３
１３．精製水                                                          残余
【００３９】
処方例２．クリーム
（成分）                                                            （質量％）
１．マカデミアナッツ油                                                ５．０
２．トリオクタノイン                                                  ５．０
３．ホホバ油                                                          ３．０
４．製造例１の加水分解物                                              ２．０
５．ベヘニルアルコール                                                １．０
６．モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０ＥＯ）          １．５
７．モノステアリン酸グリセリル                                        １．０
８．グリセリン                                                        ４．０
９．ジプロピレングリコール                                            ４．０
１０．１，３−ブチレングリコール                                      ４．０
１１．キサンタンガム                                                  ０．２
１２．フェノキシエタノール                                            ０．２
１３．精製水                                                            残余