(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における細菌性乳房炎を処置する方法であって、ナラシン、サリノマイシン、ラサロシド、モネンシン、センデュラマイシン、マデュラマイシン及びライドロマイシンから選択されるポリエーテル系イオノフォアまたはその治療的に許容し得る塩の治療有効量を、１００ｍｇ／乳頭管〜６００ｍｇ／乳頭管の範囲の用量で前記対象に乳房内投与することにより処置するステップを含む、方法。
【請求項２】
前記細菌性乳房炎は、スタフィロコッカス・エピデルミディス、スタフィロコッカス・シミュランス、スタフィロコッカス・フェリス、スタフィロコッカス・キシローサス、スタフィロコッカス・クロモゲネス、スタフィロコッカス・ワーネリ、スタフィロコッカス・ヘモリチカス、スタフィロコッカス・シウリ、スタフィロコッカス・サプロフィチカス、スタフィロコッカス・ホミニス、スタフィロコッカス・カプラエ、スタフィロコッカス・コーニイ亜種コーニイ、スタフィロコッカス・コーニィ亜種ウレアリチカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｈｎｉｉ  ｓｕｂｓｐ．  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｓ）、スタフィロコッカス・キャピティス亜種キャピティス、スタフィロコッカス・キャピティス亜種ウレアリチカス、スタフィロコッカス・ハイカス、スタフィロコッカス・アウレウス、スタフィロコッカス・シュードインターメディウス、スタフィロコッカス・デルフィニ、スタフィロコッカス・シュレイフェリ亜種コアグランス、スタフィロコッカス・アウレウス亜種アネロビウス、ストレプトコッカス・ウベリス、ストレプトコッカス・アガラクチエ、ストレプトコッカス・ディスガラクチエ、ストレプトコッカス・ピオゲネス、ストレプトコッカス・ボビス、ストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミクス、ストレプトコッカス・エクイヌス、バチルス・メラニノゲニカス、バチルス・プミルス、バチルス・リチェニフォルミス、バチルス・セレウス、バチルス・サブチリス、バチルス・アントラシス、エンテロコッカス・フェシウム、エンテロコッカス・フェカリス、エンテロコッカス・デュランス、リステリア・モノサイトゲネス、クロストリジウム・パーフリンゲンス、アクチノマイセス・ボビス、プロピオニバクテリウム・アクネス、プロピオニバクテリウム・グラヌロスム、エウバクテリウム、ペプトコッカス・インドリカス、およびペプトストレプトコッカス・アネロビウスを含む群から選択される細菌性物質によって引き起こされることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ナラシン、サリノマイシン、ラサロシド、モネンシン、センデュラマイシン、マデュラマイシン及びライドロマイシンから選択されるポリエーテル系イオノフォアまたは治療的に許容し得る塩の治療有効量と、場合により獣医学的に許容し得る賦形剤または担体を、１００ｍｇ／乳頭管〜６００ｍｇ／乳頭管の範囲の用量で含有する、対象における細菌性乳房炎の治療用乳房内獣医学的抗菌組成物。
【請求項４】
抗生物質および抗真菌薬を含む群から選択されるさらなる抗菌薬を含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
キレート化剤を含む群から選択される賦形剤を含む、請求項３又は請求項４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
対象における乳房炎の処置に用いられる場合の即時放出、持続放出または制御放出のための獣医学的デバイスであって、乳房内インジェクターと、請求項３〜５のいずれか１項に記載の組成物と、を含む、デバイス。
【請求項７】
対象における細菌性乳房炎の処置用の薬剤を製造する際の、ナラシン、サリノマイシン、ラサロシド、モネンシン、センデュラマイシン、マデュラマイシン及びライドロマイシンから選択されるポリエーテル系イオノフォアまたはその治療的に許容し得る塩の使用であって、１００ｍｇ／乳頭管〜６００ｍｇ／乳頭管の範囲の用量で乳房内投与されることを特徴とする、薬剤を製造する際の使用。
【請求項８】
前記細菌性乳房炎は、スタフィロコッカス・エピデルミディス、スタフィロコッカス・シミュランス、スタフィロコッカス・フェリス、スタフィロコッカス・キシローサス、スタフィロコッカス・クロモゲネス、スタフィロコッカス・ワーネリ、スタフィロコッカス・ヘモリチカス、スタフィロコッカス・シウリ、スタフィロコッカス・サプロフィチカス、スタフィロコッカス・ホミニス、スタフィロコッカス・カプラエ、スタフィロコッカス・コーニイ亜種コーニイ、スタフィロコッカス・コーニィ亜種ウレアリチカス、スタフィロコッカス・キャピティス亜種キャピティス、スタフィロコッカス・キャピティス亜種ウレアリチカス、スタフィロコッカス・ハイカス、スタフィロコッカス・アウレウス、スタフィロコッカス・シュードインターメディウス、スタフィロコッカス・デルフィニ、スタフィロコッカス・シュレイフェリ亜種コアグランス、スタフィロコッカス・アウレウス亜種アネロビウス、ストレプトコッカス・ウベリス、ストレプトコッカス・アガラクチエ、ストレプトコッカス・ディスガラクチエ、ストレプトコッカス・ピオゲネス、ストレプトコッカス・ボビス、ストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミクス、ストレプトコッカス・エクイヌス、バチルス・メラニノゲニカス、バチルス・プミルス、バチルス・リチェニフォルミス、バチルス・セレウス、バチルス・サブチリス、バチルス・アントラシス、エンテロコッカス・フェシウム、エンテロコッカス・フェカリス、エンテロコッカス・デュランス、リステリア・モノサイトゲネス、クロストリジウム・パーフリンゲンス、クロストリジウム・ディフィシル、アクチノマイセス・ボビス、プロピオニバクテリウム・アクネス、プロピオニバクテリウム・グラヌロスム、エウバクテリウム、ペプトコッカス・インドリカス、およびペプトストレプトコッカス・アネロビウスを含む群から選択される細菌性物質によって引き起こされることを特徴とする、請求項７に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、対象における乳房炎の処置および予防の方法、それに用いられる場合の乳房内獣医学的抗菌組成物、ならびにそれに用いられる場合の乳房内獣医学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景技術
人間医学および獣医学の両方における感染は多くの場合、ブドウ球菌属の細菌への感染により誘発される。ブドウ球菌は、健常な哺乳動物およびトリの片利共生生物であり、皮膚上および付属する腺の内部、鼻孔、ならびに一時的に胃腸管内で、そして上気道および下部尿生殖路の粘膜上で見出される場合がある。ブドウ球菌の多くの菌種は疾患を誘発しないが、特定の種は日和見病原性が可能である。医学的および獣医学的に重要である２つの主要な病原性ブドウ球菌属菌種が、スタフィロコッカス・アウレウスおよびスタフィロコッカス・シュードインターメディウスである。スタフィロコッカス・アウレウスは、乳房炎、皮膚および術後創部感染に関連するが、スタフィロコッカス・シュードインターメディウスは一般に、イヌおよびネコの発熱性皮膚感染および術後創部感染に関連する。スタフィロコッカス・シュードインターメディウスは、菌種スタフィロコッカス・インターメディウス、スタフィロコッカス・シュードインターメディウス、およびスタフィロコッカス・デルフィニを含む、スタフィロコッカス・シュードインターメディウス群（ＳＩＧ）の獣医学的重要性のある主な病原種として同定された。
【０００３】
抗生物質による細菌の処置
ブドウ球菌の処置は、特に対象が抗生物質耐性株に感染している場合には、困難になる可能性がある。ブドウ球菌による細菌感染は通常、細菌細胞壁の生合成において機能するペニシリン結合タンパク質（ＰＢＰ）を標的とする抗菌薬の一分類：β−ラクタム系抗菌薬の投与により処置される。これらの抗菌薬は、殺菌活性を有し、細菌細胞壁の生合成を阻害することにより機能して、高い内部浸透圧をもたらし、細菌を溶解させる。しかし、細菌感染の処置における抗菌薬の使用、過剰使用および誤使用が、抗菌薬耐性菌を出現させており、ブドウ球菌属で特にその傾向が高い。ブドウ球菌の一部の種における耐性機構は、β−ラクタム系抗菌薬のβ−ラクタム環を加水分解することが可能なβ−ラクタマーゼ酵素の分泌を含む。この形態の耐性に取り組むために、クラブラン酸などのβ−ラクタマーゼ阻害剤が、典型的には、β−ラクタム系抗菌薬と共に同時投与されるか、またはβ−ラクタマーゼの基質でないメチシリンおよびクロキサシリンなどのペニシリンの合成類似体を用いることができる。
【０００４】
近年になり、β−ラクタム系抗菌薬およびβ−ラクタマーゼ阻害剤との併用処置でさえ、ブドウ球菌の抗生物質耐性菌種に対して無効になることが立証された。メチシリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス単離物（ＭＲＳＡ）の出現は、β−ラクタマーゼにより不活性化されないメチシリンおよび他のβ−ラクタム系抗菌薬の使用を事実上、妨害した。ＭＲＳＡ単離物は、現在では、突然変異したペニシリン結合タンパク質またはＰＢＰをコードして、ペニシリンおよびその類似物、ならびに他のβ−ラクタム系抗菌薬、例えばほとんどのセファロスポリンおよびカルバペネムへの耐性を付与する、ｍｅｃＡまたはｍｅｃＣ耐性遺伝子を有することが見出されている。ＭＲＳＡの問題は多くの場合、ＭＲＳＡ菌単離物が患者に伝染した病院内で、院内感染型ＭＲＳＡ（ＨＡ−ＭＲＳＡ）として遭遇し、院内機器の汚染および職員の保菌によって院内に保持されることが多い。不幸にも免疫抑制されていて創傷または他の外傷を有する患者は、ＭＲＳＡ感染およびブドウ球菌属の他の菌種への感染に容易に罹患する素因を有する。これにより多くの病院は、ＨＡ−ＭＲＳＡ感染の発生を低減するために抗ＭＲＳＡ策を講じた。より近年の問題が、市中感染型ＭＲＳＡ（ＣＡ−ＭＲＳＡ）と称される病院外でのＭＲＳＡ株の出現であった。これらの菌株は多くの場合、ＨＡ−ＭＲＳＡよりも猛毒性であり、壊死性菌膜炎を誘発する場合がある。最も近年では、家畜関連ＭＲＳＡ（ＬＡ−ＭＲＳＡ）菌株（例えば、欧州の配列タイプ［ＳＴ］３９８、およびアジアのＳＴ９）が、ブタ、家禽、ウシ（乳牛など）および他の家畜種における新興感染症として記載された。
【０００５】
メチシリン耐性は、ＭＲＳＡに加えて、他のブドウ球菌種でも観察された。例えば病原性のコアグラーゼ陰性種（ＭＲ−ＣＮＳ）およびスタフィロコッカス・シュードインターメディウス（ＭＲＳＰ）は、メチシリン耐性であることが公知である。異なる耐性機構を有する他の耐性種としては、ＭＤＲシュードモナス・エルギノサ、ならびにＭＤＲ大腸菌およびエンテロバクター種、ならびにグラム陽性バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）、ならびにペニシリンおよびマクロリド耐性連鎖球菌の菌種が挙げられる。
【０００６】
ウシ乳房炎
抗生物質による処置および予防を必要とする動物の主要な生産制限疾患の例が、ウシ乳房炎である。乳房炎は、畜産動物における抗生物質使用の最も多くを占める原因であり、感染を排除して乳房内感染の新たな例を予防するために乳製品業界の実質的なコストを占める。乳房炎は、ウシ乳腺または乳房の４つの分房のうちの１つ以上に発症し、罹患したウシの健康に悪影響を及ぼす可能性がある。乳頭括約筋が搾乳後に弛緩されると、病原が乳頭管を介して乳腺に侵入する。オーストララシア地区およびその他の地域において、乳房炎を誘発する最も一般的な病原として、ストレプトコッカス・ウベリス、スタフィロコッカス・アウレウス、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌、ストレプトコッカス・ディスガラクチエ、およびストレプトコッカス・アガラクチエが挙げられる。ＭＲＳＡにより誘発される乳房炎は、乳牛の体内で同定され、ヒトにおいて保菌、感染および疾患誘発を行い得る一部の菌株（ＳＴ３９８など）を世界全体に伝染し得る、乳牛の生産性破壊の新たな原因である。乳牛の乳房炎を処置するために現在、利用可能な製品のうち、ＭＲＳＡに効果のあるものはほとんどなく、２０年を超えて新しい抗細菌薬が開発および登録されていないため、微生物学的および臨床的転帰を改善する新しい薬物および乳房内送達システムが、緊急に求められている。乳房炎を管理する上での歴史的失敗のほとんどが、検証済みの乳房内送達システム、動物への安全性があり一般的な乳房炎原因菌に対して信頼性および再現性の上で有効であるシステムという要件が適わないことによる。
【０００７】
乳房炎処置は、典型的にはウシの泌乳サイクルの２つの異なる期間：乾乳（ＤＣ）期および搾乳または泌乳（ＬＣ）期に投与される。泌乳期治療は、搾乳時に牛に投与されるが、乾乳期治療は、ウシが泌乳終了時の乾乳した時に牛に投与される。乾乳期治療は、泌乳期に蓄積される感染体を除去するため、次の泌乳までのキャリーオーバーを予防するため、そして乾乳期に受けた新たな感染体の数を低減するために投与される。乳房炎処置は多くの場合、乳房内注射または輸液により乳頭管から動物の乳房に投与される。
【０００８】
乾乳期治療
乾乳期処置は、抗菌薬輸液または乳頭シーラント導入により実施することができる。乾乳期の新たな感染を予防するために、ウシの自然な防御機構には、乳頭を密閉する自然なケラチンプラグの形成がある。ケラチンプラグは、乾乳期に乳頭管から細菌が侵入する際の効果的バリアを提供する。ほとんどのウシでは、ケラチンプラグの形成は、最後の搾乳および乾乳期開始後の最初の２週間にわたり漸進的に生じる。一部のウシは、ケラチンプラグを形成せず、乾乳期に感染を受け易い。乳頭縁部への外傷も、乳頭管を密閉する能力に重大な影響を及ぼす可能性がある。
【０００９】
ウシ乳房炎を処置する１つのアプローチが、抗菌製剤の乳頭管および乳頭槽への乳房内輸液である。この標準技術は、Ｒｏｇｅｒ  Ｂｌｏｗｅｙ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒ  Ｅｄｍｏｎｄｓｏｎによる表題「Ｍａｓｔｉｔｉｓ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｉｎ  ｄａｉｒｙ  ｈｅｒｄｓ」（２０１０）（第２版）という教書、そして特にＣＡＢ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（英国ウォーリングフォード）２０１０、ｐ１９６〜１９７の表題「Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｄｒｙ  Ｃｏｗ  Ｔｈｅｒａｐｙ」の節に記載されている。抗菌製剤は、乳頭管に部分的に挿入されたシリンジを介して投与され、抗生物質が乳頭から乳腺槽内および乳腺槽全体に揉み込まれる。
【００１０】
乾乳期の完全なケラチンプラグを自然に形成することの遅延する、または明らかに不能である場合、ウシは新たな乳房炎感染のリスクに見舞われることになる。乳頭の自然な防御を補足し、乾乳期全体を通して乳頭管が効率的に密閉されるのを確実にする１つの方法が、内部乳頭シーラントの使用によるものである。内部乳頭シーラントの使用は、１９７０年代中期にＭｅａｎｅｙ，  Ｗ．  Ｊ．により「Ｄｒｙ  ｐｅｒｉｏｄ  ｔｅａｔ  ｓｅａｌ．”  Ｖｅｔ  Ｒｅｃ．  ９９（２）  （１９７６）  ３０」に記載された。
【００１１】
本出願者は、乾乳期感染を低減するのに利用できる２種の乳頭シール：乳頭端部に最大７日間にわたり可撓性バリアフィルムをもたらす外部フィルムシーラント、および内部乳頭管シールを認識している。外部シールは、現在は一般に用いられていないが、内部シールが投与されない後期乾乳期に用いることができる。内部シールは、はるかに効果的であり、最も一般的に用いられている。最も一般的には内部乳頭シールは、乾乳期に乳頭管に輸液される基剤の中のビスマス塩である。ビスマス塩は、抗細菌特性を有さず、このため投与時の厳密な衛生が不可欠である。しかし、内部乳頭シール組成物中に抗菌物質を含ませれば、既存の感染を処置して新たな感染を予防する確率を高めることができる。効果的な乾乳期処置は、乾乳期を通して抗菌薬の乳房内濃度を持続的および効果的にする乳房内調製剤を必要とする。例えば、モノステアリン酸アルミニウムのゲル中に配合されて鉱物油に希釈されたペニシリン（特にクロキサシリンベンザチン）の不溶性塩の持続的投与（例えば、Ｓｍｉｔｈ，  Ａ．，  Ｆ．  Ｋ．  Ｎｅａｖｅ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９６７）  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄａｉｒｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３４（０１）：  ４７−５７参照）。
【００１２】
泌乳期治療
泌乳期調製剤を配合して、２つの相反する因子のバランスを模索する。該配合剤は、最終的な輸液が投与された後に許容されない濃度の牛乳残留物が持続することによる搾乳差し控えの期間を最小限に抑えながら、１日あたり２回以上の継続的な搾乳に逆らって、抗細菌物質の有効濃度を感染物質が存在する乳腺全体（即ち、感染部位）に可能な限り長期間、提供しなければならない。一般に泌乳牛において使用される調製剤は、数時間または数日間、高濃度をもたらし、急速放出性の水性または油性（鉱物油または植物油）基剤中に配合される。
【００１３】
抗生物質耐性の出現により、ＭＲＳＡおよびＭＲＳＰなどの多剤耐性菌株を阻害することが可能な別の化合物を提供する必要性が高まった。
【００１４】
ポリエーテル系イオノフォア
ポリエーテル系抗生物質またはポリエーテル系イオノフォアとしても公知であるカルボキシルポリエーテルは、一価または二価カチオンと電気的に中性の複合体を形成して、様々な生体膜を通したカチオンまたはプロトンの電気的にサイレントな交換を触媒する。これらの化合物は、薬物耐性菌および原生動物感染の潜在的制御への大きな期待を示すことが報告されたが、それらの使用は、高い毒性によって厳密に制限されている。これらの分子は、生体膜を通って通常は非対称に分布されるカチオンを細胞膜または細胞内膜に透過性にし、それにより急激な濃度勾配を形成することにより機能する。ポリエーテル系イオノフォアの例としては、ラサロシド、モネンシン、ナラシン、サリノマイシン、センデュラマイシン、マデュラマイシンおよびライドロマイシンが挙げられる。
【００１５】
しかし、赤血球溶解活性および心臓毒性によるこれらの化合物の急性毒性が、インビボでのそれらの使用を事実上妨害した。ヒト疾患を制御する薬物としてのポリエーテル系イオノフォアの使用に対する主な障害は、毒性の問題である。一例において、ＮａｕｊｏｋａｔおよびＳｔｅｉｎｈａｒｔ  （２０１２，  Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ９５０６５８）により報告された通り、サリノマイシンの少なからぬ毒性が、ヒトにおいて報告された。この症例において、３５歳男性による約１ｍｇ／ｋｇサリノマイシンの偶発的吸入および嚥下が、悪心を伴う急性的羞明、下肢脱力、頻脈および血圧上昇、ならびに慢性的な（２日目〜３５日目）クレアチンキナーゼ増加、ミオグロビン尿症、四肢脱力、筋肉痛、および軽度横紋筋融解重度を含む重度の急性および慢性サリノマイシン毒性を生じた。欧州食品安全機関は、近年になりリスク評価データを発表し、イヌによる５００μｇ／ｋｇを超えるサリノマイシンの連日摂取が髄鞘脱落および軸索変性などの神経毒作用を誘導することから、ヒトに関して５μｇ／ｋｇサリノマイシンという一日摂取許容量（ＡＤＩ）を公表した（Ｎａｕｊｏｋａｔ  ａｎｄ  Ｓｔｅｉｎｈａｒｔ，  ２０１２、上掲）。別の例において、Ｌｉｕ（１９８２，  Ｐｏｌｙｅｔｈｅｒ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ．  Ｎａｔｕｒａｌｌｙ  Ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ  Ａｃｉｄ  Ｉｏｎｏｐｈｏｒｅｓ．  Ｖｏｌｕｍｅ  １．  Ｂｉｏｌｏｇｙ．  Ｊ．  Ｗ．  Ｗｅｓｔｌｅｙ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ  Ｉｎｃ：  ４３−１０２）は、ポリエーテル系イオノフォアの高い経口および非経口毒性がポリエーテル系イオノフォアのインビボ抗菌活性に関する報告が存在しない理由として考えられることを例証している。
【００１６】
本出願者が認識しているポリエーテル系イオノフォアのわずかな現行適用例が、コクシジウム病のコントロールおよび成長促進用に獣医学の経口投与剤として適用することである。
【００１７】
さらにポリエーテル系イオノフォアの全てが、スタフィロコッカス・アウレウスなどのグラム陽性菌に対して有意な活性を示さず、ほとんどがグラム陰性菌に対する広域スペクトルの活性を有さない。ＮａｕｊｏｋａｔおよびＳｔｅｉｎｈａｒｔ（２０１２、上掲）により報告された哺乳動物における少なからぬ毒性のために、サリノマイシンは、家畜における抗コクシウム剤および成長促進剤として使用されるに過ぎず、ヒトの薬物開発では適切な候補と見なされていない。
【００１８】
ＭＲＳＡおよびＭＲＳＰなどの多剤耐性菌による感染の処置において別の抗菌薬が依然として求められている。しかし、米国感染症学会および欧州疾病対策センターにより報告された通り、既存の処置を越える有望な結果を提示する新規薬物はほとんど開発されておらず、これらのうちブドウ球菌の処置に特化して投与されるものは、ほとんどない（Ｇｉｌｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１０，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，  ５０（８）：１０８１−１０８３）。
【００１９】
本発明の目的は、先行技術の欠点の一部または全てを克服することである。
【００２０】
先に示された背景の議論は、本発明の理解を促すことのみを目的とするものである。その議論は、本出願の優先日に、参照された材料のいずれかが共通一般知識の一部であることまたは一部であったことの承認または許容ではない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
発明の概要
本発明の一態様によれば、対象における乳房炎を処置する方法であって、ポリエーテル系イオノフォアまたはその治療的に許容し得る塩の治療有効量を対象の乳腺に投与するステップを含む、方法が提供される。
【００２２】
本発明の別の態様によれば、対象における乳房炎を予防する方法であって、ポリエーテル系イオノフォアまたはその治療的に許容し得る塩の治療有効量を対象の乳腺に投与するステップを含む、方法が提供される。
【００２３】
本発明の別の態様によれば、対象における乳房炎の処置または予防のための薬剤の製造において、ポリエーテル系イオノフォアまたはその治療的に許容し得る塩の使用が提供される。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
該投与は、乳頭管を介した乳房内注射または輸液などによる乳房内投与によるものであってもよい。
【００２５】
本発明のさらなる特色は、モネンシン（Ａ−３８２３Ａとしても公知）、ナラシンＡ（Ａ−２８０８６Ａとしても公知）、ナラシンＢ（Ａ−２８０８６Ｂとしても公知）、ナラシンＤ（Ａ−２８０８６Ｄとしても公知）、ラサロシド、サリノマイシン、およびマデュラマイシン、アルボリキシン（Ｓ−１４７５０Ａ、ＣＰ−３８，９８６としても公知）、ライドロマイシン（ＡＢ−７８としても公知）、レノレマイシン（Ａ−１３０Ａ、Ｒｏ２１−６１５０としても公知）、Ａ−１３０Ｂ、Ａ−１３０Ｃ、ジアネマイシン（Ａ−１５０（Ｍ５−１６１８３）としても公知）、Ａ−２０４Ａ、Ａ−２０４Ｂ、ロノマイシン（Ａ−２１８としても公知）、デオキシライドロマイシン（Ａ−７１２としても公知）、カルシマイシン（Ａ−２３１８７としても公知）、セプタマイシン（ＢＬ−５８０αおよびＡ−２８６９５Ａとしても公知）、Ａ−２８６９５Ｂ、Ｋ−４１Ａ（Ａ−３２８８７としても公知）、セプタマイシン（ＢＬ−５８０αｂとしても公知）、ＢＬ−５８０β、ＢＬ−５８０δ、ＢＬ−５８０Ｚ、カリオマイシン、カルマイシンｂ（ｃａｌｍｙｃｉｎｂ）（Ａ−２３１８７としても公知）、カチオノマイシン、クロロノボリトマイシンＡ（Ｘ−１４７６６Ａとしても公知）、エーテロマイシン（ＣＰ−３８，２９５、Ｃ  ２０−１２、Ｔ−４０５１７としても公知）、デオキシサリノマイシン（ＳＹ−１としても公知）、デオキシエピサリノマイシン（ＳＹ−２）、デオキシナラシン、デオキシエピナラシン、ジアネマイコンｂ（ｄｉａｎｅｍｙｃｏｎｂ）（Ｍ５−１６１８３、Ａ−１５０としても公知）、エメリシド（ロノマイシンＡおよびＤＥ３９３８としても公知）、デュアマイシン（ｄｕａｍｙｃｉｎ）（ニゲリシン、ヘリキシンＣおよびアザロマイシンＭとしても公知）、グリドリキシン（ｇｒｉｄｏｒｉｘｉｎ）、イオノマイシン、Ｋ−４１Ｂ、ラサロシドＡ（Ｘ−５３７Ａ）、ラサロシドＢ、ラサロシドＣ、ラサロシドＤ、ラサロシドＥ、イソラサロシドＡ、ロイセラマイシン、ロモマイシンＢ（ｌｏｍｏｍｙｃｉｎ  Ｂ）、ロモマイシンＣ、リソセリン、Ｍ−１３９６０３、モネンシンＢ、モネンシンＣ、モネンシンＤ、ムタロマイシン、ノボリトマイシンＡ、ノボリトマイシンＢ、ＲＰ３０５０４、ＲＰ３７４５４、サリノマイシン、サリノマイシンＡＩＩ、ＳＹ−４、ＳＹ−５、ＳＹ−８、テトロノマイシン、ＴＭ−５３１Ｂ、ＴＭ−５３１Ｃ、Ｘ−２０６、Ｘ−１４５４７Ａ、Ｘ−１４６６７Ａ、Ｘ−１４６６７Ｂ、Ｘ−１４８６８Ａ、Ｘ−１４８６８Ｂ、Ｘ−１４８６８Ｃ、Ｘ−１４８６８Ｄ、５０５７、６０１６を含む群から選択される、ポリエーテル系イオノフォアまたはその治療的に許容し得る塩を提供する。
【００２６】
好ましくはポリエーテル系イオノフォアは、サリノマイシン、ラサロシド、ナラシン、マデュラマイシン、モネンシン、ライドロマイシン、およびセンデュラマイシンを含む群から選択される。
【００２７】
該対象は、ウシ、ヒツジ、ヤギ、その他の反芻動物種、ラクダ科またはウマ科（ウマ、ロバおよびシマウマ）であってもよい。対象は、ヒトであってもよい。
【００２８】
該ポリエーテル系イオノフォアは、５ｍｇ／乳腺〜２，０００ｍｇ／乳腺、好ましくは２０ｍｇ／乳腺〜９００ｍｇ／乳腺、より好ましくは４０ｍｇ／乳腺〜６００ｍｇ／乳腺、最も好ましくは５０ｍｇ／乳腺〜５００ｍｇ／乳腺を含む群から選択される用量で、対象の乳腺（反芻動物の乳房を形成する２つもしくは４つ、またはヒトの乳房）に投与される。例えばポリエーテル系イオノフォアは、５０ｍｇ／乳腺、６０ｍｇ／乳腺、７０ｍｇ／乳腺、８０ｍｇ／乳腺、９０ｍｇ／乳腺、１００ｍｇ／乳腺、１１０ｍｇ／乳腺、１２０ｍｇ／乳腺、１３０ｍｇ／乳腺、１４０ｍｇ／乳腺、１５０ｍｇ／乳腺、１６０ｍｇ／乳腺、１７０ｍｇ／乳腺、１８０ｍｇ／乳腺、１９０ｍｇ／乳腺、２００ｍｇ／乳腺、２１０ｍｇ／乳腺、２２０ｍｇ／乳腺、２３０ｍｇ／乳腺、２４０ｍｇ／乳腺、２５０ｍｇ／乳腺、２６０ｍｇ／乳腺、２７０ｍｇ／乳腺、２８０ｍｇ／乳腺、２９０ｍｇ／乳腺、３００ｍｇ／乳腺、３１０ｍｇ／乳腺、３２０ｍｇ／乳腺、３３０ｍｇ／乳腺、３４０ｍｇ／乳腺、３５０ｍｇ／乳腺、３６０ｍｇ／乳腺、３７０ｍｇ／乳腺、３８０ｍｇ／乳腺、３９０ｍｇ／乳腺、４００ｍｇ／乳腺、４１０ｍｇ／乳腺、４２０ｍｇ／乳腺、４３０ｍｇ／乳腺、４４０ｍｇ／乳腺、４５０ｍｇ／乳腺、４６０ｍｇ／乳腺、４７０ｍｇ／乳腺、４８０ｍｇ／乳腺、４９０ｍｇ／乳腺、および５００ｍｇ／乳腺を含む群から選択される用量で、対象の乳腺に投与される。
【００２９】
一実施形態において、該ポリエーテル系イオノフォアは、２０ｍｇ／乳頭管〜９００ｍｇ／乳頭管、および５０ｍｇ／乳頭管〜６００ｍｇ／乳頭管を含む群から選択される用量で、対象に投与される。
【００３０】
本発明の一実施形態において、該ポリエーテル系イオノフォアは、乳頭管を介して各乳腺に投与される。例えば該ポリエーテル系イオノフォアは、シリンジなどの乳房内デバイスを用いて乳頭管を介して投与される。これは、ウシに加え、ラクダ科およびウマ科などの反芻動物の乳房炎の処置に好ましい経路である。別の実施形態において、該ポリエーテル系イオノフォアは、乳腺の表面への局所適用を介して、または対象の皮膚を通した乳腺への直接注入もしくは乳管を介した注入により、対象に投与される。例えばヒトの乳房炎の処置において、該イオノフォアは、乳腺の表面への局所適用により、または乳管への輸液により、投与される。
【００３１】
本発明の一実施形態において、該ポリエーテル系イオノフォアは、１日３回、１日２回、１日１回、２日毎に、１週間に１回、２週間に１回、１ヶ月に１回、乾乳期あたり１回、または乾乳期あたり２回からなる群から選択される投与レジメンを利用して対象に投与される。好ましくは該ポリエーテル系イオノフォアは、搾乳の直後に（または子孫に授乳した直後に）対象の乳腺（動物の乳房など）の各感染した１／４または半分に、乳頭管を介して投与される。例えば対象が１日２回搾乳される場合、該ポリエーテル系イオノフォアは、各搾乳の直後に投与される。好ましい実施形態において、該ポリエーテル系イオノフォアは、１日２回泌乳の際に、２日間、３日間、７日間、１４日間、２１日間および１ヶ月間各搾乳の直後に、もしくは乳房炎の兆候がもはや検出されなくなるまで対象に；またはウシへの適用の場合には泌乳の終了時に乾乳した乳牛に、もしくは初産前の若雌牛に、投与される。
【００３２】
本発明の一実施形態において、該ポリエーテル系イオノフォアは、１ｍｇ〜１０００ｍｇ；１０ｍｇ〜５００ｍｇ；１０ｍｇ〜４００ｍｇ；１０ｍｇ〜３００ｍｇ；１０ｍｇ〜２００ｍｇ；１０ｍｇ〜１００ｍｇ；および５０ｍｇ〜１００ｍｇからなる群から選択される、乳頭管（反芻動物）または乳房（ヒト）あたりの総用量で対象に投与される。好ましくは該ポリエーテル系イオノフォアは、１５０ｍｇ、３００ｍｇまたは６００ｍｇの、投与あたりの総量で対象に投与される。
【００３３】
本発明の一実施形態において、該ポリエーテル系イオノフォアは、動物対象の乳房またはヒト対象の乳房に投与される。一実施例において、該ポリエーテル系イオノフォアは、動物対象の乳房の４分の１または半数のそれぞれに投与される。一実施例において、該ポリエーテル系イオノフォアは、１ｍｇ〜１０００ｍｇ；１０ｍｇ〜５００ｍｇ；１０ｍｇ〜４００ｍｇ；１０ｍｇ〜３００ｍｇ；１０ｍｇ〜２００ｍｇ；１０ｍｇ〜１００ｍｇ；および５０ｍｇ〜１００ｍｇからなる群から選択される、分房あたりの（または動物種間の解剖学的差にもよるが動物の乳房半数あたりもしくはヒトの乳房あたりの）総用量で対象に投与される。より好ましくは、分房あたりの用量は、７５ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇまたは６００ｍｇである。一実施形態において、分房あたりの（または動物の乳房半数あたりもしくはヒトの乳房あたりの）投与される用量は、１ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２６０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２９０ｍｇ、３００ｍｇ、３１０ｍｇ、３２０ｍｇ、３３０ｍｇ、３４０ｍｇ、３５０ｍｇ、３６０ｍｇ、３７０ｍｇ、３８０ｍｇ、３９０ｍｇ、４００ｍｇ、４１０ｍｇ、４２０ｍｇ、４３０ｍｇ、４４０ｍｇ、４５０ｍｇ、４６０ｍｇ、４７０ｍｇ、４８０ｍｇ、４９０ｍｇ、５００ｍｇ、５１０ｍｇ、５２０ｍｇ、５３０ｍｇ、５４０ｍｇ、５５０ｍｇ、５６０ｍｇ、５７０ｍｇ、５８０ｍｇ、５９０ｍｇ、６００ｍｇを含む群から選択される。一実施例において、動物の乳房（４つ全てまたは２つのうちの２つ）またはヒトの両乳房あたりの総用量は、これらの用量に乳腺の数を掛け合わせた量から選択される。
【００３４】
一実施形態において、処置後の対象の乳中の残留イオノフォアの濃度は、１２時間後に１〜２００ｍｇ／Ｌ；２４時間後に０．１〜５ｍｇ／Ｌ；４８時間後に０．０１〜２ｍｇ／Ｌ；および７２時間後に０．０００１〜１ｍｇ／Ｌからなる群から選択される範囲である。好ましくは該濃度は、１２時間後に２００ｍｇ／Ｌ未満；２４時間後に５ｍｇ／Ｌ未満；４８時間後に１ｍｇ／Ｌ未満；および７２時間後に０．５ｍｇ／Ｌ未満からなる群から選択される。あるいは該濃度は、１２時間後に１０ｍｇ／Ｌ未満；２４時間後に１ｍｇ／Ｌ未満；４８時間後に０．１ｍｇ／Ｌ未満；および７２時間後に０．０１ｍｇ／Ｌ未満からなる群から選択される。あるいは該濃度は、１２時間後に１ｍｇ／Ｌ未満；２４時間後に０．１ｍｇ／Ｌ未満；４８時間後に０．０１ｍｇ／Ｌ未満；および７２時間後に０．００１ｍｇ／Ｌ未満からなる群から選択される。あるいは該濃度は、１２時間後に０．１ｍｇ／Ｌ未満；２４時間後に０．０１ｍｇ／Ｌ未満；４８時間後に０．００１ｍｇ／Ｌ未満；および７２時間後に０．０００１ｍｇ／Ｌ未満からなる群から選択される。
【００３５】
該微生物は、原核生物または真核生物であってもよい。好ましくは乳房炎を誘発する微生物は、ブドウ球菌属の菌種、連鎖球菌属の菌種、桿菌属の菌種、腸球菌属の菌種、リステリア属の菌種、マイコプラズマ属の菌種、および嫌気性細菌からなる群から選択される細菌性物質であるが、これらに限定されない。該細菌性物質は、スタフィロコッカス・エピデルミディス、スタフィロコッカス・シミュランス、スタフィロコッカス・フェリス、スタフィロコッカス・キシローサス、スタフィロコッカス・クロモゲネス、スタフィロコッカス・ワーネリ、スタフィロコッカス・ヘモリチカス、スタフィロコッカス・シウリ、スタフィロコッカス・サプロフィチカス、スタフィロコッカス・ホミニス、スタフィロコッカス・カプラエ、スタフィロコッカス・コーニイ亜種コーニイ、スタフィロコッカス・コーニィ亜種ウレアリチカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｈｎｉｉ  ｓｕｂｓｐ．  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｓ）、スタフィロコッカス・キャピティス亜種キャピティス、スタフィロコッカス・キャピティス亜種ウレアリチカス、スタフィロコッカス・ハイカス、スタフィロコッカス・アウレウス、スタフィロコッカス・シュードインターメディウス、スタフィロコッカス・デルフィニ、スタフィロコッカス・シュレイフェリ亜種コアグランス、スタフィロコッカス・アウレウス亜種アネロビウス、ストレプトコッカス・ウベリス、ストレプトコッカス・アガラクチエ、ストレプトコッカス・ディスガラクチエ、ストレプトコッカス・ピオゲネス、ストレプトコッカス・ボビス、ストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミクス、ストレプトコッカス・エクイヌス、バチルス・メラニノゲニカス、バチルス・プミルス、バチルス・リチェニフォルミス、バチルス・セレウス、バチルス・サブチリス、バチルス・アントラシス、エンテロコッカス・フェシウム、エンテロコッカス・フェカリス、エンテロコッカス・デュランス、リステリア・モノサイトゲネス、クロストリジウム・パーフリンゲンス、アクチノマイセス・ボビス、プロピオニバクテリウム・アクネス、プロピオニバクテリウム・グラヌロスム、エウバクテリウム、ペプトコッカス・インドリカス、ペプトストレプトコッカス・アネロビウス、およびマイコプラズマ・ボビスを含む群から選択され得るが、これらに限定されない。
【００３６】
より好ましくは該細菌性物質は、スタフィロコッカス・アウレウス、スタフィロコッカス・エピデルミディス、ストレプトコッカス・ウベリス、ストレプトコッカス・アガラクチエ、ストレプトコッカス・ディスガラクチエ、およびプロピオニバクテリウム・アクネスを含む群から選択される。
【００３７】
最も好ましくは該細菌性物質は、抗生物質感受性株または抗生物質耐性株である。抗生物質耐性株の例としては、ＭＲＳＡおよびテトラサイクリン耐性連鎖球菌属の菌種である。好ましい実施形態において、該細菌性物質は，ＭＲＳＡである。
【００３８】
一実施形態において、該細菌性物質は、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌（ＣＮＳ）を含む群から選択されるが、これらに限定されない。コアグラーゼ陰性ブドウ球菌（ＣＮＳ）の例としては、スタフィロコッカス・エピデルミディス（ウシ乳房炎から単離）、スタフィロコッカス・シミュランス（ウシ乳房炎またはネコ皮膚炎から単離）、スタフィロコッカス・フェリス（ネコ皮膚炎から単離）、スタフィロコッカス・キシローサス（ウシ乳房炎またはウシ皮膚炎から単離）、スタフィロコッカス・クロモゲネス（ウシ乳房炎またはヤギ皮膚炎から単離）、スタフィロコッカス・ワーネリ（ヤギの細菌叢から単離）、スタフィロコッカス・ヘモリチカス（ヤギの細菌叢から単離）、スタフィロコッカス・シウリ（ブタ滲出性表皮炎から単離）、スタフィロコッカス・サプロフィチカス（ヤギの細菌叢から単離）、スタフィロコッカス・ホミニス（ブタの細菌叢から単離）、スタフィロコッカス・カプラエ（ヤギの細菌叢から単離）、スタフィロコッカス・コーニイ亜種コーニイ（ヤギの細菌叢から単離）、スタフィロコッカス・コーニィ亜種ウレアリチカス（ヤギの細菌叢から単離）、スタフィロコッカス・キャピティス亜種キャピティス（ウシ乳房炎から単離）、スタフィロコッカス・キャピティス亜種ウレアリチカス（ウシ乳房炎から単離）、およびスタフィロコッカス・ハイカス（ブタ滲出性表皮炎およびウシの細菌叢から単離）が挙げられる。
【００３９】
別の実施形態において、該細菌性物質は、コアグラーゼ陽性ブドウ球菌から選択される。例えば該細菌性物質は、スタフィロコッカス・アウレウス（ヒト、ウマ、イヌ、およびネコの細菌叢、ウシおよびヒツジの乳房炎、ならびに多くの種の皮膚炎および術後創感染から単離）、スタフィロコッカス・シュードインターメディウス（イヌ膿皮症、イヌおよびネコの細菌叢）、スタフィロコッカス・デルフィニ（イルカの可能性皮膚病変）、スタフィロコッカス・シュレイフェリ亜種コアグランス（イヌ外耳炎、イヌおよびネコの細菌叢）、およびスタフィロコッカス・アウレウス亜種アネロビウス（ヒツジリンパ節炎）を含む群から選択され得るが、これらに限定されない。最も好ましい実施形態において、該細菌性物質は、シークエンスタイプ（ＳＴ）またはクローナルコンプレックス（ＣＣ）３９８またはＳＴ９の家畜関連ＭＲＳＡ、様々なヒト市中型（ＣＡ）ＭＲＳＡおよび院内型（ＨＡ）ＭＲＳＡをはじめとし、多くの系統、適合された多くの宿主から得ることができるスタフィロコッカス・アウレウスである。
【００４０】
別の実施形態において、該細菌性物質は、連鎖球菌属のものである。例えば該細菌性物質は、ストレプトコッカス・ウベリス、ストレプトコッカス・アガラクチエ、ストレプトコッカス・ディスガラクチエ、ストレプトコッカス・ピオゲネス、ストレプトコッカス・ボビス、ストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミクス、およびストレプトコッカス・エクイヌスを含む群から選択され得るが、これらに限定されない。該細菌は、ウシ乳房炎から単離され得る。
【００４１】
別の実施形態において、該細菌性物質は、桿菌属のものである。例えば該細菌性物質は、バチルス・メラニノゲニカス、バチルス・プミルス、バチルス・リチェニフォルミス、バチルス・セレウス、バチルス・サブチリス、およびバチルス・アントラシスを含む群から選択され得るが、これらに限定されない。該細菌は、ウシ乳房炎から単離され得る。
【００４２】
別の実施形態において、該細菌性物質は、腸球菌属のものである。例えば該細菌性物質は、エンテロコッカス・フェシウム、エンテロコッカス・フェカリス、およびエンテロコッカス・デュランスを含む群から選択され得るが、これらに限定されない。該細菌は、ウシ乳房炎から単離され得る。
【００４３】
別の実施形態において、該細菌性物質は、リステリア属のものである。例えば該細菌性物質は、リステリア・モノサイトゲネスであってもよい。該細菌は、ウシ乳房炎から単離され得る。
【００４４】
別の実施形態において、該細菌性物質は、嫌気性である。例えば該細菌性物質は、クロストリジウム・パーフリンゲンス、アクチノマイセス・ボビス、プロピオニバクテリウム・アクネス、プロピオニバクテリウム・グラヌロスム、エウバクテリウム、ペプトコッカス・インドリカス、およびペプトストレプトコッカス・アネロビウスを含む群から選択され得るが、これらに限定されない。該細菌は、ウシ乳房炎から単離され得る。
【００４５】
別の実施形態において、該微生物は、マイコプラズマ属のものである。例えば該微生物は、マイコプラズマ・ボビスであってもよい。該細菌性物質は、ウシ乳房炎から単離され得る。
好ましい実施形態において、該微生物は、スタフィロコッカス・アウレウスである。最も好ましい実施形態において、該微生物は、ＭＲＳＡである。
【００４６】
本明細書に記載されたポリエーテル系イオノフォアが典型的にはグラム陽性菌および多数の嫌気性細菌に加え、真菌に対して効果的であることは、理解されよう。本明細書に記載されたポリエーテル系イオノフォアに対する微生物の感受性は、個々の菌株に応じて変動するが、一般には、クロストリジウム、エウバクテリウム、プロピオニバクテリウム、マイコバクテリウムおよびストレプトマイセスなどの一部の嫌気性細菌と同様にグラム陽性球菌および桿菌も、影響を受け易い。スクレロチニア・スクレロチオルム、モニラ・ラクサ（Ｍｏｎｉｌａ  ｌａｘａ）、フォモプシス・マリ、ボトリチス・シネリア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｉａ）、トリクセシウム・ロセウム、およびベルチシリウム・アルボアトルムなどの真菌および酵母もまた、本明細書に記載されたポリエーテル系イオノフォアに対して感受性を示し得る。
【００４７】
本発明の別の態様によれば、ポリエーテル系イオノフォアまたはその治療的に許容し得る塩の治療有効量を含む乳房内医学的抗菌組成物が提供される。本発明の乳房内獣医学的抗菌組成物を、ヒトの乳房炎の処置に用いられ得る。
【００４８】
本発明の別の態様によれば、ポリエーテル系イオノフォアまたはその治療的に許容し得る塩の治療有効量を含む乳房内獣医学的抗菌組成物が提供される。
【００４９】
本発明の乳房内獣医学的抗菌組成物は、ウシの乳房炎の処置に用いられ得る。
【００５０】
本発明の抗菌組成物は、乾乳牛の乳房炎を処置するため、または泌乳牛の乳房炎を処置するために配合され得る。乾乳牛の乳房炎を処置するための製剤は、該製剤をゲル化、さもなければ固化し、乳頭管を密閉することを目的とした賦形剤をさらに含むことができる。泌乳牛の乳房炎を処置するため製剤は、製剤が泌乳牛の乳腺に保持されないように急速な放出を目的とした賦形剤をさらに含むことができる。
【００５１】
一実施形態において、乳房内抗菌組成物は、不純物を含み、該組成物の総重量の百分率として表した不純物の量は、不純物２０％未満（組成物の総重量に対して）；不純物１５％未満；不純物１０％未満；不純物８％未満；不純物５％未満；不純物４％未満；不純物３％未満；不純物２％未満；不純物１％未満；不純物０．５％未満；不純物０．１％未満からなる群から選択される。一実施形態において、乳房内抗菌組成物は、微生物の不純物または二次代謝産物を含み、該組成物の総重量の百分率として表した微生物不純物の量は、５％未満；４％未満；３％未満；２％未満；１％未満；０．５％未満；０．１％未満；０．０１％未満；０．００１％未満からなる群から選択される。一実施形態において、該乳房内抗菌組成物は、滅菌性であり、密閉された滅菌性の容器に貯蔵される。一実施形態において、該乳房内抗菌組成物は、検出可能なレベルの微生物混入物を全く含まない。
【００５２】
本発明の組成物は、さらなる抗菌薬を含むことができる。さらなる抗菌薬は、抗真菌薬であってもよい。
【００５３】
一実施形態において、該抗真菌薬は、エキノカンジン系（アニデュラファンギン、カスポファンギン、ミカファンギン）、ポリエン系（アンホテリシンＢ、カンジシジン、フィリピン、ファンギクロミン、ハチマイシン、ハマイシン、ルセンソマイシン、メパルトリシン、ナタマイシン、ナイスタチン、ペチロシン、ペリマイシン、グリセオフルビン、オリゴマイシン、ピロールニトリン、シッカニン、およびビリジン（Ｖｉｒｉｄｉｎ）を含む群から選択されるが、これらに限定されない。該抗真菌薬は、アリルアミン系（ブテナフィン、ナフチフィン、テルビナフィン）;イミダゾール系（ビホナゾール、ブトコナゾール、クロルミダゾール、クロコナゾール、クロトリマゾール、エコナゾール、フェンチコナゾール、フルトリマゾール、イソコナゾール、ケトコナゾール、ラノコナゾール、ミコナゾール、ネチコナゾール、オモコナゾール、硝酸オキシコナゾール、セルタコナゾール、スルコナゾール、チオコナゾール）、チオカルバメート系（リラナフタート、トルシクラート、トリンダート、トルナフタート）、トリアゾール系（フルコナゾール、イサブコナゾール、イトラコナゾール、ポサコナゾール、ラブコナゾール、サペルコナゾール、テルコナゾール、ボリコナゾール）、アクリソルシン、アモロルフィン、ブロモサリチルクロルアニリド、ブクロサミド、プロピオン酸カルシウム、クロルフェネシン、シクロピロクス、クロキシキン、コパラフィネート、エキサラミド、フルシトシン、ハロプロジン、ヘキセチジン、ロフルカルバン、ニフラテル、ヨウ化カリウム、プロピオン酸、ピリチオン、サリチルアニリド、プロピオン酸ナトリウム、スルベンチン、テノニトロゾール、トリアセチン、ウンデシレン酸、およびプロピオン酸亜鉛を含む群から選択される合成化合物であってもよいが、これらに限定されない。
【００５４】
別の実施形態において、該抗真菌薬は、アモロルフィン、アンホテリシンＢ、アニデュラファンギン、ビホナゾール、ブロモクロロサリチルアニリド、ブテナフィン塩酸塩、硝酸ブトコナゾール、酢酸カスポファンギン、クロルミダゾール塩酸塩、クロルフェネシン、シクロピロクス、クリムバゾール、クロトリマゾール、クロキシキン、塩酸クロコナゾール、エベルコナゾール硝酸塩、エコナゾール、エニルコナゾール、フェンチコナゾール硝酸塩、フルコナゾール、フルシトシン、フルトリマゾール、フォスフルコナゾール、グリセオフルビン、イソコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ラノコナゾール、リラナフタート、ルリコナゾール、メパルトリシン、ミカファンギンナトリウム、ミコナゾール、ナフチフィン塩酸塩、ナタマイシン、塩酸ネチコナゾール、ニフロキシム（Ｎｉｆｕｒｏｘｉｍｅ）、ナイスタチン、硝酸オモコナゾール、硝酸オキシコナゾール、パルコナゾール塩酸塩、ペンタマイシン、ピロクトンオラミン、ポサコナゾール、プロピオン酸、ピロールニトリン、ラブコナゾール、硝酸セルタコナゾール、シッカニン、パラクロロ安息香酸ナトリウム、硝酸スルコナゾール、テルビナフィン、テルコナゾール、チオコナゾール、トルシクラート、トルナフタート、トリアセチン、グルクロン酸トリメトレキサート、ウンデカン酸、およびボリコナゾールを含む群から選択され得るが、これらに限定されない。
【００５５】
本発明の組成物は、β−ラクタマーゼ阻害剤（クラブラン酸、スルバクタム、スルタミシリン、タゾバクタム）、腎ジペプチダーゼ阻害剤（シラスタチン）、および腎保護剤（ベタミプロン）を含む群から選択される抗生物質補助剤を含み得るが、これらに限定されない。
【００５６】
一実施形態において、本発明の組成物は、アミノグリコシド系（アミカシン、アルベカシン、バンベルマイシン、ブチロシン、ジベカシン、ジヒドロストレプトマイシン、ホルチミシン、ゲンタマイシン、イセパマイシン、カナマイシン、ミクロノマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、パロモマイシン、リボスタマイシン、シソマイシン、スペクチノマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン）、アムフェニコール系（アジダムフェニコール、クロラムフェニコール、チアムフェニコール）、アンサマイシン系（リファミド、リファンピン、リファマイシンＳＶ、リファペンチン、リファキシミン）、β−ラクタム系、カルバセフェム系（ロラカルベフ）、カルバペネム系（ビアペネム、ドリペネム、エルタペネム、イミペネム、メロペネム、パニペネム）、セファロスポリン系（セファクロル、セファドロキシル、セファマンドール、セファトリジン、セファゼドン、セファゾリン、セフカペン、セフジニル、セフジトレン、セフェピム、セフェタメト、セフィキシム、セフメノキシム、セフォジジム、セフォニシド、セフォペラゾン、セフォラニド、セフォセリス、セフォタキシム、セフォチアム、セフォゾプラン、セフピミゾール、セフピラミド、セフピロム、セフポドキシム、セフプロジル、セフロキサジン、セフスロジン、セフタロリン、セフタジジム、セフテラム、セフテゾール、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトビプロールメドカリル、セフトリアキソン、セフロキシム、セフゾナム、セファセトリル、セファレキシン、セファログリシン、セファロリジン、セファロチン、セファピリン、セフラジン、ピブセファレキシン）、セファマイシン系（セフブペラゾン、セフメタゾール、セフミノックス、セフォテタン、セフォキシチン）、モノバクタム系（アズトレオナム、カルモナム）、オキサセフェム系（フロモキセフ、モキサラクタム）、ペネム系（ファロペネム、リチペネム）、ペニシリン類（アムジノシリン、アムジノシリンピボキシル、アモキシシリン、アンピシリン、アパルシリン、アスポキシシリン、アジドシリン、アズロシリン、バカンピシリン、カルベニシリン、カリンダシリン、クロメトシリン、クロキサシリン、シクラシリン、ジクロキサシリン、エピシリン、フェンベニシリン、フロキサシリン、ヘタシリン、レナンピシリン、メタムピシリン、メチシリンナトリウム、メズロシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペナメシリン、ヨウ化水素酸ペネタメート、ペニシリンＧ、ペニシリンＧベンザチン、ペニシリンＧプロカイン、ペニシリンＮ、ペニシリンＯ、ペニシリンＶ、フェネチシリンカリウム、ピペラシリン、ピバンピシリン、プロピシリン、キナシリン、スルベニシリン、スルタミシリン、タランピシリン、テモシリン、チカルシリン）、リンコサミド系（クリンダマイシン、リンコマイシン）、マクロリド系（アジスロマイシン、セトロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、エリスロマイシンアシストラート、エリスロマイシンエストラート、グルコヘプトン酸エリスロマイシン、ラクトビオン酸エリスロマイシン、プロピオン酸エリスロマイシン、ステアリン酸エリスロマイシン、フィダキソマイシン、ジョサマイシン、ロ���コマイシン、ミデカマイシン、ミオカマイシン、オレアンドマイシン、プリマイシン、ロキタマイシン、ロサラマイシン、ロキシスロマイシン、スピラマイシン、テリスロマイシン、トロレアンドマイシン）、ポリペプチド系（アンホマイシン、バシトラシン、バシトラシン亜鉛、カプレオマイシン、コリスチン、ダルババンシン、ダプトマイシン、エンジュラシジン、エンビオマイシン、フサファンギン、グラミシジン、グラミシジンＳ、イセガナン、オリタバンシン、ポリミキシン、キヌプリスチン、ラモプラニン、リストセチン、テイコプラニン、テラバンシン、チオストレプトン、ツベラクチノマイシン、チロシジン、チロトリシン、バンコマイシン、バイオマイシン）、テトラサイクリン系（クロルテトラサイクリン、クロモサイクリン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、グアメサイクリン（Ｇｕａｍｅｃｙｃｌｉｎｅ）、リメサイクリン、メクロサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ピパサイクリン、ロリテトラサイクリン、テトラサイクリン、チゲサイクリン）、その他（シクロセリン、ダルフォプリスチン、ホスホマイシン、フシジン酸、ムピロシン、プリスチナマイシン、レタパムリンおよびバージニアマイシン）を含む群から選択されるさらなる抗生物質を含むが、これらに限定されない。
【００５７】
別の実施形態において、本発明の組成物は、２，４−ジアミノピリミジン系（ブロジモプリム、イクラプリム、テトロキソプリム、トリメトプリム）、ニトロフラン系（フラルタドン、塩化フラゾリウム、ニフラテル、ニフルフォリン、ニフルピリノール、ニフルトイノール、ニトロフラントイン）、オキサゾリジノン系（リネゾリド）、ペプチド系（オミガナン、ペキシガナン）、キノロン系および類似体（バロフロキサシン、ベシフロキサシン、シノキサシン、シプロフロキサシン、クリナフロキサシン、エノキサシン、フィナフロキサシン、フレロキサシン、フルメキン、ガレノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、グレパフロキサシン、ロメフロキサシン、ミロキサシン、モキシフロキサシン、ナジフロキサシン、ナジリクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、オキソリン酸、パズフロキサシン、ペフロキサシン、ピペミド酸、ピロミド酸、プルリフロキサシン、ロソキサシン、ルフロキサシン、シタフロキサシン、スパルフロキサシン、トスフロキサシン、トロバフロキサシン）、スルホンアミド系（アセチルスルファメトキシピラジン、クロラミンＢ、クロラミンＴ、ジクロラミンＴ、マフェニド、ノプリルスルファミド、フタリルスルフアセトアミド、フタリルスルファチアゾール、サラゾスルファジミジン、スクシニルスルファチアゾール、スルファベンズアミド、スルファアセトアミド、スルファクロロピリダジン、スルファクリソイジン、スルファシチン、スルファジアジン、スルファジクラミド、スルファドキシン、スルファエチドール、スルファグアニジン、スルファグアノール、スルファレン、スルファロキクス酸、スルファメラジン、スルファメータ、スルファメタジン、スルファメチゾール、スルファメトミジン、スルファメトキサゾール、スルファメトキシピリダジン、スルファメトロール、スルファミドクリソイジン、スルファモキソール、スルファニルアミド、Ｎ４−スルファニリルスルファニルアミド、スルファニリル尿素、Ｎ−スルファニリル−３，４−キシルアミド、スルファペリン、スルファフェナゾール、スルファプロキシリン、スルファピラジン、スルファピリジン、スルファチアゾール、スルファチオ尿素、スルフィソミジン、スルフィソキサゾール）、スルホン系（アセジアスルホン、ダプソン、グルコスルホンナトリウム、スクシスルホン、スルファニル酸、ｐ−スルファニリルベンジルアミン、スルホキソンナトリウム、チアゾールスルホン）、クロフォクトール、メテナミン、メトロニダゾール、ニトロキソリン、タウロリジン、およびキシボルノールを含む群から選択される合成抗生物質をさらに含むが、これらに限定されない。
【００５８】
別の実施形態において、本発明の組成物は、アセジアスルホンナトリウム、アミカシン、アミノサリチル酸、アモキシシリン、アンピシリン、アプラマイシン、硫酸アルベカシン、アルサニル酸、アスポキシシリン、硫酸アストロマイシン、アビラマイシン、アボパルシン、アジダムフェニコール、アジドシリンナトリウム、アジスロマイシン、アズロシリン、アズトレオナム、塩酸バカンピシリン、バシトラシン、バロフロキサシン、バンベルマイシン、バクイロプリム、硫酸ベカナマイシン、ベネタミンペニシリン、ベンザチンベンジルペニシリン、ベンザチンフェノキシメチルペニシリン、ベンジルペニシリン、ベシフロキサシン、ベタミプロン、ビアペネム、ブロジモプリム、硫酸カプレオマイシン、カルバドックス、カルベニシリンナトリウム、カリンダシリンナトリウム、カルモナムナトリウム、セファクロル、セファドロキシル、セファレキシン、セファロニウム、セファロリジン、セファロチンナトリウム、セファマンドール、セファピリンナトリウム、セファトリジン、セファゾリン、セフブペラゾン、セフカペンキボキシル塩酸塩、セフジニル、セフジトレンピボキシル、セフェピム塩酸塩、セフェタメト、セフィキシム、セフメノキシム塩酸塩、セフメタゾール、セフミノックスナトリウム、セフォジジムナトリウム、セフォニシドナトリウム、セフォペラゾンナトリウム、セフォラニド、セフォセリス硫酸塩、セフォタキシムナトリウム、セフォテタン、塩酸セフォチアム、セフォベシンナトリウム、セフォキシチンナトリウム、セフォゾプラン塩酸塩、セフピラミド、硫酸セフピロム、セフポドキシムプロキセチル、セフプロジル、硫酸セフキノム、セフラジン、セフスロジンナトリウム、セフタロリンフォサミル酢酸塩、セフタジジム、セフテラムピボキシル、セフテゾールナトリウム、セフチブテン、セフチオフル、セフチゾキシムナトリウム、セフトビプロールメドカリル、セフトリアキソンナトリウム、セフロキシム、セスロマイシン、クロラムフェニコール、クロロキシン、クロルキナルドール、クロルテトラサイクリン、シクラシリン、シラスタチンナトリウム、シノキサシン、シプロフロキサシン、クラリスロマイシン、クラブラン酸、クレミゾールペニシリン、クリンダマイシン、クリオキノール、クロファジミン、クロフォクトール、クロメトシリンカリウム、クロキサシリン、硫酸コリスチン、コテトロキサジン、コトリファモール（Ｃｏ−ｔｒｉｆａｍｏｌｅ）、コトリモキサゾール、シクロセリン、ダルババンシン、メシル酸ダノフロキサシン、ダプソン、ダプトマイシン、デラマニド、デメクロサイクリン、硫酸ジベカシン、ジクロキサシリン、塩酸ジフロキサシン、硫酸ジヒドロストレプトマイシン、ジリスロマイシン、ドリペネム、ドキシサイクリン、エノキサシン、エンロフロキサシン、エルタペネムナトリウム、エリスロマイシン、エタムブトール塩酸塩、エチオナミド、硫酸エチマイシン、ファロペネムナトリウム、フィダキソマイシン、フレロキサシン、フロモキセフナトリウム、フロルフェニコール、フルクロキサシリン、フルメキン、フルリスロマイシンエチルスクシナート、フォルモスルファチアゾール、ホスホマイシン、硫酸フラマイセチン、フチバジド、塩酸フラルタドン、フラジジン（Ｆｕｒａｚｉｄｉｎ）、フサファンギン、フシジン酸、ガミスロマイシン、メシル酸ガレノキサシン、ガチフロキサシン、メシル酸ゲミフロキサシン、硫酸ゲンタマイシン、グラミシジン、グラミシジンＳ、ハルキノール、イバフロキサシン、イクラプリム、イミペネム、イセパマイシン、イソニアジド、ジョサマイシン、酸性硫酸カナマイシン、キタサマイシン、ラタモキセフ二ナトリウム、レボフロキサシン、リンコマイシン、リネゾリド、塩酸ロメフロキサシン、ロラカルベフ、リメサイクリン、マフェニド、マガイニン、マンデル酸、マルボフロキサシン、メシリナム、メクロサイクリン、メレウマイシン（Ｍｅｌｅｕｍｙｃｉｎ）、メロペネム、メタサイクリン、メテナミン、メチシリンナトリウム、メズロシリン、硫酸ミクロノマイシン、ミデカマイシン、ミノサイクリン、モリナミド、塩酸モキシフロキサシン、ムピロシン、ナジフロキサシン、ナフシリンナトリウム、ナリジクス酸、ネオマイシン、硫酸ネチルマイシン、ニフロキサジド、ニフルピリノール、ニフルトイノール、ニフルジド、ニシン、ニトロフラントイン、ニトロフラゾン、ニトロキソリン、ノルフロキサシン、塩酸ノルバンコマイシン、ノボビオシン、オフロキサシン、リン酸オレアンドマイシン、オルビフロキサシン、オリタバンシン、オルメトプリム、オキサシリンナトリウム、オキソリン酸、オキシテトラサイクリン、パニペネム、メシル酸パズフロキサシン、メシル酸ペフロキサシン、塩酸ペネタメート、フェネチシリンカリウム、フェノキシメチルペニシリン、フタリルスルフアセトアミド、フタリルスルファチアゾール、ピペミド酸、ピペラシリン、塩酸ピルリマイシン、ピロミド酸、ピバンピシリン、ピブメシリナム、硫酸ポリミキシンＢ、プラドフロキサシン、プリスチナマイシン、プロカイン、ベンジルペニシリン、プロピシリンカリウム、プロチオンアミド、プルリフロキサシン、ピラジナミド、キヌプリスチン／ダルフォプリスチン、ラモプラニン、レタパムリン、硫酸リボスタマイシン、リファブチン、リファンピシン、リファマイシンナトリウム、リファペンチン、リファキシミン、ロキタマイシン、ロリテトラサイクリン、ロソキサシン、ロキシスロマイシン、塩酸ルフロキサシン、塩酸サラフロキサシン、硫酸シソマイシン、シタフロキサシン、スパルフロキサシン、スペクチノマイシン、スピラマイシン、ストレプトマイシン、スクシニルスルファチアゾール、スルバクタム、スルベニシリンナトリウム、スルファベンザミド、スルファカルバミド、スルフアセタミド、スルファクロルピリダジン、スルファクリソイジン、スルファクロジン、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジクラミド、スルファジメトキシン、スルファジミジン、スルファドキシン、スルファフラゾール、スルファグアニジン、スルファメラジン、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルファメトキシピリダジン、スルファメチルチアゾール、スルファメトピラジン、スルファメトロール、スルファモノメトキシン、スルファモキソール、スルファニルアミド、スルファピリジン、スルファキノキサリン、スルファチアゾール、スルファチアゾール銀、スルファトロキサゾール、スルフィソミジン、スルタミシリン、タウロリジン、タゾバクタムナトリウム、テイコプラニン、テラバンシン、テリスロマイシン、テモシリン、テリジドン、テトラサイクリン、テトロキソプリム、テノイル酸、チアンフェニコール、チアセタゾン、チオストレプトン、チアムリン、チカルシリン一ナトリウム、チゲサイクリン、チルジピロシン、チルミコシン、トブラマイシン、トスフロキサシン、トリメトプリム、トロレアンドマイシン、ツラスロマイシン、タイロシン、酒石酸タイルバロシン、チロスリシン、バルネムリン、バンコマイシン、バージニアマイシン、およびキシボルノールを含む群から選択される抗生物質をさらに含むが、これらに限定されない。
【００５９】
好ましくは本発明の組成物は、ペニシリンＧ、ペネタメート、クロキサシリン、ナフシリン、アンピシリン、アモキシシリン、クラブラン酸、ゲンタマイシン、ストレプトマイシン、ネオマイシン、フラマイセチン、テトラサイクリン、チルミコシンおよびピルリマイシンを含む群から選択されるさらなる抗生物質を含むが、これらに限定されない。
【００６０】
本発明の組成物は、結合剤および圧縮助剤、コーティングおよびフィルム、着色剤、希釈剤およびビヒクル崩壊剤、乳化剤および可溶化剤、香味剤および甘味剤、忌避薬、滑剤および滑沢剤、可塑化剤、防腐剤、噴射剤、溶媒、安定化剤、懸濁剤および増粘剤を含む群から選択される賦形剤をさらに含み得るが、これらに限定されない。本発明の実施形態において、該組成物は、クエン酸をさらに含む。そのような賦形剤が該組成物の任意のｐＨ変化をもたらし得ることは、理解されよう。
【００６１】
該組成物は、本明細書に記載されたポリエーテル系イオノフォアを、当該技術分野で一般に用いられるようなゲル化物質と共に含む乳頭シーラントの形態であってもよい。例えばパラフィン油ゲル基剤中の６５％（ｗ／ｗ）次硝酸ビスマス、または次硝酸ビスマスと液体パラフィンとステアリン酸アルミニウムとゲル基剤。
【００６２】
本発明のさらなる態様によれば、対象における乳房炎の処置に用いられる場合の、乳房内インジェクターを含む治療デバイスと、ポリエーテル系イオノフォアまたはその治療的に許容し得る塩の治療有効量を含む本発明の組成物と、が提供される。
【００６３】
本発明のさらなる態様によれば、対象における乳房炎の処置に用いられる場合の、乳房内インジェクターを含む獣医学的デバイスと、ポリエーテル系イオノフォアまたはその治療的に許容し得る塩の治療有効量を含む本発明の組成物と、が提供される。
【００６４】
好ましくは該デバイスは、イオノフォアの即時放出、持続放出または制御放出に適合される。
【００６５】
さらなる態様において、本発明は、対象の乳房炎の処置または予防用の薬剤を製造する際の、ポリエーテル系イオノフォアまたはその治療的に許容し得る塩の使用である。好ましくは該使用は、ポリエーテル系イオノフォアまたはその治療的に許容し得る塩の治療有効量を、対象の乳腺に投与することを含む。好ましくは該ポリエーテル系イオノフォアは、２０ｍｇ／乳頭管〜９００ｍｇ／乳頭管または５０ｍｇ／乳頭管〜６００ｍｇ／乳頭管の範囲内の用量で対象に投与される。
【００６６】
さらなる態様において、本発明は、実質的に添付の実施例および図を参照して本明細書に記載された方法、組成物、デバイスまたは使用である。
【００６７】
さらなる態様において、本発明は、実質的に添付の実施例および図を参照して本明細書に記載された、請求項１４に記載の組成物、請求項２４に記載のデバイス、および請求項２７に記載の使用である。
【００６８】
本明細書で用いられる用語は、他に断りがなければ当該技術分野で慣用される意味を有する。本明細書で表された通り、以下の用語は、指示されたポリエーテル系イオノフォアを指す。
【００６９】
実施例および図に関連して、ＬＰ１０８８は、サリノマイシンを指し、ＬＰ１３６９は、ラサロシドを指し、ＬＰ４５２５は、ナラシンを指し、ＬＰ６３１５は、マデュラマイシンを指し、ＬＰ９６６６は、モネンシンを指す。
【００７０】
本明細書で用いられる用語ラサロシド（アバテック、ボバテックＸ−５３７Ａ、イオノフォアＸ−４５３７Ａ、およびＲｏ２−２９８５としても公知。ＣＡＳ登録番号２５９９９−３１−９（酸）、２５９９９−２０−６（Ｎａ塩））は、以下の化学構造を有する化合物を指す：
【化１】
0006779619.tif 000002
【００７１】
本明細書で用いられる用語モネンシン（コバン、ルメンシン、モネンシン酸、およびＡ３８２３Ａとしても公知。ＣＡＳ登録番号１７０９０−７９−８（酸）、２２３７３−７８−０（Ｎａ塩）） は、以下の化学構造を有する化合物を指す：
【化２】
0006779619.tif 000003
【００７２】
本明細書で用いられる用語サリノマイシン（コキシスタック、ポシスタック（Ｐｏｓｉｓｔａｃ）、サロシン（Ｓａｌｏｃｉｎ）、オビコックス（Ｏｖｉｃｏｘ）、ＡＨＲ−３０９６、Ｋ−３６４、およびＫ−７４８３６４Ａとしても公知。ＣＡＳ登録番号５３００３−１０−４（酸）、５５７２１−３１−８（Ｎａ塩））は、以下の化学構造を有する化合物を指す：
【化３】
0006779619.tif 000004
【００７３】
本明細書で用いられる用語ナラシン（モンテバン、４−メチルサリノマイシン、化合物７９８９１、Ａ−２８０８６ファクターＡ、Ｃ−７８１９Ｂとしても公知ＣＡＳ登録番号 ５５１３４−１３−９（酸）)は、以下の化学構造を有する化合物を指す：
【化４】
0006779619.tif 000005
【００７４】
本明細書で用いられる用語マデュラマイシンは、以下の化学構造を有する化合物を指す（以下にマデュラマイシンアンモニウムとして表す）：
【化５】
0006779619.tif 000006
【００７５】
記載された組成物が、乳房炎を処置および予防する方法に適用されることが、本明細書の利点である。乳房内適用は、当該技術分野で公知の標準的手順により乳房内インジェクターまたは乳頭シーラントを用いて実施することができる。本発明の組成物の乳房内適用は、対象の乳腺／血液バリアを介した全身吸収を最小限に抑えながら、ポリエーテル系イオノフォアへの暴露による対象の乳房炎の処置および予防をもたらすと予測される。こうして、対象をポリエーテル系イオノフォアの実質的毒性用量に暴露することなく、ポリエーテル系イオノフォアの治療有効量を、乳房炎の処置に適用することができる。
【００７６】
本発明のさらなる特色は、複数の非限定的実施形態の以下の説明においてより完全に記載される。この説明は、本発明を例証する目的で含まれているにすぎない。この説明が、先に表された本発明の大まかな概要、開示または説明の制限であると理解されるべきではない。該説明は、添付の図面を参照することによって行われる。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】実施例１による耐性プロファイルをはじめとするブドウ球菌属の菌種の生化学的同定に従う単離採取物および脊椎動物種供給源を表した表である。
【図２】実施例１による最小阻害濃度試験のために設計された９６ウェルプレートの本発明の図面である。
【図３】最小殺菌濃度試験の図面であり、黒っぽい部分は二重測定での１０μＬ容量の配置を表し、矢印の方向は実施例１によるプレート周囲に沿って時計回りに濃度が上昇していることを表す。
【図４】メチシリン感受性およびメチシリン耐性菌株に分離された個々の単離物に関する最小阻害濃度のグラフを示しており、１２８μｇ／ｍＬを超えると示された値はＭＩＣ値が実施例１により試験された濃度範囲内（０．２５〜１２８μｇ／ｍＬ）で得られなかった菌株を表す。
【図５】実施例１によるアンピシリンおよび５種の被験化合物について、メチシリン感受性単離物のＭＩＣ５０、ＭＩＣ９０およびＭＩＣ範囲を示す表を示している。
【図６】実施例１によるアンピシリンおよび５種の被験化合物について、メチシリン耐性単離物のＭＩＣ５０、ＭＩＣ９０およびＭＩＣ範囲を示す表を示している。
【図７】メチシリン感受性およびメチシリン耐性菌株に分離された個々の単離物に関する最小殺菌濃度のグラフを示しており、１２８μｇ／ｍＬを超えると示された値はＭＢＣ値が実施例１により試験された濃度範囲内（０．２５〜１２８μｇ／ｍＬ）で得られなかった菌株を表す。
【図８】実施例１による５種の被験化合物について、メチシリン感受性単離物のＭＢＣ５０、ＭＢＣ９０およびＭＢＣ範囲を示す表を示している。
【図９】実施例１による５種の被験化合物について、メチシリン耐性単離物のＭＢＣ５０、ＭＢＣ９０およびＭＢＣ範囲を示す表を示している。
【図１０】実施例１による増殖曲線と比較した、様々な濃度のアンピシリン、ＬＰ１３６９およびＬＰ６３１５を使用した４８時間のＡＴＣＣ４９７７５の微量希釈時間・殺菌アッセイについて得られた光学濃度測定を示すグラフを示す。
【図１１】実施例１による増殖曲線と比較した、様々な濃度のアンピシリン、ＬＰ１３６９およびＬＰ６３１５を使用した４８時間のＭＳＳ１の微量希釈時間・殺菌アッセイについて得られた光学濃度測定を示すグラフを示す。
【図１２】実施例１による増殖曲線と比較した、様々な濃度のアンピシリン、ＬＰ１３６９およびＬＰ６３１５を使用した４８時間のＭＳＳ１１の微量希釈時間・殺菌アッセイについて得られた光学濃度測定を示すグラフを示す。
【図１３】実施例１による増殖曲線と比較した、４８時間の様々な濃度のアンピシリン、ＬＰ１３６９およびＬＰ６３１５を使用した４８時間のＭＲＳＡの微量希釈時間・殺菌アッセイについて得られた光学濃度測定を示すグラフを示す。
【図１４】実施例１によるＬＰ１３６９のＭＩＣの１倍、４倍および８倍、アンピシリンのＭＩＣの１倍および４倍への導入と比較した、２４時間のＡＴＣＣ４９７７５の生存コロニー数（ｌｏｇ１０）を示すグラフを示す。
【図１５】実施例１によるＬＰ１３６９のＭＩＣの１倍、４倍および８倍、アンピシリンのＭＩＣの１倍および４倍への導入と比較した、２４時間のＭＲＳＡ９の生存コロニー数（ｌｏｇ１０）を表すグラフを示す。
【図１６】実施例１による増殖対照と比較した、様々な濃度のアンピシリンまたはＬＰ１３６９の２４時間のＡＴＣＣ４９７７５およびＭＲＳＡ９のＣＦＵ／ｍＬ数（ｌｏｇ１０）の変動を示す表を示す。
【図１７】実施例１によるＬＰ６３１５のＭＩＣの１倍、４倍および８倍、アンピシリンのＭＩＣの１倍および４倍への導入と比較した、２４時間のＡＴＣＣ４９７７５の生存コロニー数（ｌｏｇ１０）を示すグラフを示す。
【図１８】実施例１によるＬＰ６３１５のＭＩＣの１倍、４倍および８倍、アンピシリンのＭＩＣの１倍および４倍への導入と比較した、２４時間のＭＲＳＡ９の生存コロニー数（ｌｏｇ１０）を示すグラフを示す。
【図１９】実施例１による増殖対照と比較した、様々な濃度のアンピシリンまたはＬＰ６３１５の２４時間のＡＴＣＣ４９７７５およびＭＲＳＡ９のＣＦＵ／ｍＬ数（ｌｏｇ１０）の変動を示す表を示す。
【図２０】実施例１による、様々な濃度の各被験化合物に加え、陽性対照および陰性対照、ならびに血液のみでの赤血球細胞毒性アッセイで得られた光学濃度測定値を示すグラフを示す。
【図２１】実施例２による、耐性プロファイルをはじめとするスタフィロコッカス・シュードインターメディウス単離物の生化学的同定後の単離採取物およびイヌ品種供給源を示す表である。
【図２２】実施例２により採取されたスタフィロコッカス・シュードインターメディウスの耐性プロファイルを示す表である。
【図２３】実施例２により採取されたスタフィロコッカス・シュードインターメディウスに対するアンピシリンおよびＬＰ化合物のＭＩＣプロファイルを示す表である。
【図２４】実施例３による最小阻害濃度試験のために設計された９６ウェルマイクロタイタートレイを示す図面である。
【図２５】実施例３により試験された各化合物のＭＩＣ５０、ＭＩＣ９０、ＭＩＣ範囲、およびＭＢＣ５０、ＭＢＣ９０、ＭＢＣ範囲を示す表である。
【図２６】実施例３による１４のスタフィロコッカス・アウレウス単離物に対して試験された各化合物のＭＩＣ５０、ＭＩＣ９０、ＭＩＣ範囲、およびＭＢＣ５０、ＭＢＣ９０、ＭＢＣ範囲を示す表である。
【図２７】実施例３による６のコアグラーゼ陰性スタフィロコッカス・アウレウス単離物に対して試験された各化合物のＭＩＣ５０、ＭＩＣ９０、ＭＩＣ範囲、およびＭＢＣ５０、ＭＢＣ９０、ＭＢＣ範囲を示す表である。
【図２８】実施例３による１２のスタフィロコッカス・アガラクチエ単離物に対して試験された各化合物のＭＩＣ５０、ＭＩＣ９０、ＭＩＣ範囲、およびＭＢＣ５０、ＭＢＣ９０、ＭＢＣ範囲を示す表である。
【図２９】実施例３による６のスタフィロコッカス・ウベリス単離物に対して試験された各化合物のＭＩＣ５０、ＭＩＣ９０、ＭＩＣ範囲、およびＭＢＣ５０、ＭＢＣ９０、ＭＢＣ範囲を示す表である。
【図３０】実施例３によるウシ乳房炎単離物のプロファイルを示す表である。
【図３１】実施例３による個々のウシ乳房炎単離物のＭＩＣを示す表である。
【図３２】実施例３による個々のウシ乳房炎単離物のＭＢＣを示す表である。
【図３３】マイクロサイズ化物質で１回処置されたウシについて搾乳３回の牛乳中ＬＰ１３６９濃度の加重ＵＣＬを示すグラフである。
【図３４】ナノサイズ化物質で１回処置されたウシについて搾乳３回の牛乳中ＬＰ１３６９濃度の加重ＵＣＬを示すグラフである。
【図３５】ＰＶＰで１回処置されたウシについて搾乳３回の牛乳中ＬＰ１３６９濃度の加重ＵＣＬを示すグラフである。
【図３６】実施例７および８で議論された感染前、感染後および処置後に採取された牛乳試料の微生物の結果を表す表である。
【図３７】ＩＶＰ１で６回（連続した搾乳時）処置された分房の搾乳４回の牛乳中ＬＰ１３６９濃度の加重上限信頼限界を示すグラフである。
【図３８】ＩＶＰ２で２分房に６回（連続した搾乳時）処置されたウシにおける、他の未処置分房についての搾乳４回の牛乳ＬＰ１３６９濃度の加重ＵＣＬを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００７８】
実施形態の説明
概論
本発明を詳細に説明する前に、本発明が本明細書に開示された特定の例証された方法または組成物に限定されないことが理解されなければならない。本明細書で用いられる用語法は、本発明の特定の実施形態を説明することを目的としており、限定されるものではないことも理解されなければならない。
【００７９】
特許または特許出願をはじめとする本明細書で参照される発行物は全て、全体として参照により組み込まれる。しかし、本明細書で言及された適用は、単に、本発明に関連して使用されることがあった発行物内で参照される手順、プロトコル、および試薬を説明および開示する目的で参照されている。本明細書で参照された任意の発行物の引例を、先行の発明のおかげで本発明がそのような開示を事前の日付にする権利を与えられないという承認と解釈すべきではない。
【００８０】
加えて、本発明の実施では、他に断りがなければ、当該技術分野内の従来の微生物学的技術を使用する。そのような従来の技術は、当業者に公知である。
【００８１】
本明細書および添付の特許請求の範囲で用いられる単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、他に明白な指示がない限り、複数を包含する。
【００８２】
他に断りがなければ、本明細書で用いられる技術的および科学的用語の全ては、当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されたものと類似または同一の任意の材料および方法を用いて、本発明を実施してもよく、好ましい材料および方法は、本明細書に記載されている。
【００８３】
本明細書に記載された発明は、値の１つ以上の範囲（例えば、サイズ、濃度、用量など）を包含し得る。値の範囲が、範囲を定義する値、および範囲の境界を定義する値に直接隣接する値と同じ結果または実質的に同じ結果をもたらす範囲に隣接する値など、範囲内の全ての値を含むことは理解されよう。
【００８４】
本明細書で用いられる熟語「治療有効量」は、保菌または乳房炎に関連する細菌増殖を阻害するのに十分な量を指す。即ち、本発明の方法または組成物によるポリエーテル系イオノフォアの治療有効量の投与は、実質的な殺菌または静菌活性が乳房炎の実質的な阻害を誘発する治療効果を指す。本明細書で用いられる用語「治療有効量」は、所望の生物学的、治療的、および／または防御的結果を提供する組成物の非毒性でありながら十分な量を指す。所望の結果としては、保菌の除去、または兆候、症状もしくは疾患原因の低減および／もしくは緩和、または生物学的システムの任意の他の所望の変化が挙げられる。任意の各例における有効量は、日常的実験を利用して当業者により決定され得る。医学的または獣医学的組成物への関連において、有効量は、疾患状態またはその兆候もしくは症状の調整において推奨される投与量であってもよい。有効量は、使用される獣医学的組成物および利用される投与経路に依存して変動する。有効量は、特定の患者の様々な因子、例えば年齢、体重、性別など、そして疾患または疾患の原因微生物により罹患したエリアを考慮して日常的に最適化される。
【００８５】
本明細書で用いられる用語「微生物」および「微生物の」は、細胞の単一細胞壁クラスターのいずれかを含む微視的生物を指し、細菌および古細菌などの原核生物；ならびに原生動物、真菌、藻類などの真核生物の形態を包含するが、これらに限定されない。好ましくは用語「微生物」および「微生物の」は、原核生物および真核生物を指す。原核生物は、ブドウ球菌属の菌種、連鎖球菌属の菌種、桿菌属の菌種、腸球菌属の菌種、リステリア属の菌種、マイコプラズマ属の菌種、および嫌気性細菌などの細菌を指し得る。その用語は、抗生物質感受性菌株または抗生物質耐性菌株を指し得る。好ましい実施形態において、その用語は、ＭＲＳＡを指す。別の好ましい実施形態において、その用語は、ＭＲＳＰを指す。
【００８６】
一実施形態において、用語「微生物」および「微生物の」は、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌（ＣＮＳ）：スタフィロコッカス・エピデルミディス、スタフィロコッカス・シミュランス、スタフィロコッカス・フェリス、スタフィロコッカス・キシローサス、スタフィロコッカス・クロモゲネス、スタフィロコッカス・ワーネリ、スタフィロコッカス・ヘモリチカス、スタフィロコッカス・シウリ、スタフィロコッカス・サプロフィチカス、スタフィロコッカス・ホミニス、スタフィロコッカス・カプラエ、スタフィロコッカス・コーニイ亜種コーニイ、スタフィロコッカス・コーニィ亜種ウレアリチカス、およびスタフィロコッカス・ハイカスのうちの１つ以上を指す。
【００８７】
別の実施形態において、用語「微生物」および「微生物の」は、コアグラーゼ陽性ブドウ球菌：スタフィロコッカス・アウレウス、スタフィロコッカス・シュードインターメディウス、スタフィロコッカス・デルフィニ、スタフィロコッカス・シュレイフェリ亜種コアグランス、およびスタフィロコッカス・アウレウス亜種アネロビウスのうちの１種以上を指す。 
【００８８】
別の実施形態において、該細菌性物質は、連鎖球菌属のものである。例えば該細菌性物質は、ストレプトコッカス・ウベリス、ストレプトコッカス・アガラクチエ、ストレプトコッカス・ディスガラクチエ、ストレプトコッカス・ピオゲネス、ストレプトコッカス・ボビス、ストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミクス、およびストレプトコッカス・エクイヌスを含む群から選択され得るが、これらに限定されない。該細菌は、乳房炎から単離され得る。
【００８９】
別の実施形態において、用語「微生物」および「微生物の」は、桿菌属：バチルス・メラニノゲニカス、バチルス・プミルス、バチルス・リチェニフォルミス、バチルス・セレウス、バチルス・サブチリス、およびバチルス・アントラシスの細菌性物質のうちの１つ以上を指す。
【００９０】
別の実施形態において、用語「微生物」および「微生物の」は、腸球菌属：エンテロコッカス・フェシウム、エンテロコッカス・フェカリス、およびエンテロコッカス・デュランスの細菌性物質のうちの１つ以上を指す。
【００９１】
別の実施形態において、用語「微生物」および「微生物の」は、リステリア・モノサイトゲネスなどのリステリア属の細菌性物質のうちの１つ以上を指す。
【００９２】
別の実施形態において、用語「微生物」および「微生物の」は、１つ以上の嫌気性細菌：クロストリジウム・パーフリンゲンス、アクチノマイセス・ボビス、プロピオニバクテリウム・アクネス、プロピオニバクテリウム・グラヌロスム、エウバクテリウム、ペプトコッカス・インドリカス、およびペプトストレプトコッカス・アネロビウスを指す。
【００９３】
別の実施形態において、用語「微生物」および「微生物の」は、マイコプラズマ・ボビスなどのマイコプラズマ属の１つ以上の種を指す。
【００９４】
別の実施形態において、用語「微生物」および「微生物の」は、マラセジア属の１つ以上の真菌を指す。
【００９５】
別の実施形態において、用語「処置」または「処置すること」は、病気の症状および兆候の完全な、または部分的な除去を指す。例えば乳房炎の処置において、処置は、乳房炎の兆候を完全に、または部分的に除去する。好ましくは乳房炎の処置において（ウシの処置など）、処置は、体細胞数を２８０，０００細胞／ｍＬ未満（リニアスコア５以上）に減少させる。好ましくは処置は、体細胞数を、１０％、２０％、５０％、８０％、９０％および９５％からなる群から選択される百分率で２８０，０００細胞／ｍＬ未満（リニアスコア５以上）に減少させる。
【００９６】
獣医学的および医学的に許容し得る塩は、本開示の化合物の生物学的有効性および特性を保持しながら、生物学的またはその他について望ましくないものを含まない塩を包含する。多くの例において、本明細書で開示された化合物は、アミノおよび／もしくはカルボキシル基、またはそれと類似した基の存在により酸性および／または塩基性塩を形成することが可能である。獣医学的および医学的に許容し得る塩基付加塩は、無機および有機性塩基から調製することができる。無機性塩基に由来する塩としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩が挙げられる。有機塩基に由来する塩としては、第一級、第二級および第三級アミン（例えば、アルキルアミン、ジアルキルアミン、トリアルキルアミン、置換型アルキルアミン、ジ（置換型アルキル）アミン、トリ（置換型アルキル）アミン、アルケニルアミン、ジアルケニルアミン、トリアルケニルアミン、置換型アルケニルアミン、ジ（置換型アルケニル）アミン、トリ（置換型アルケニル）アミン、シクロアルキルアミン、ジ（シクロアルキル）アミン、トリ（シクロアルキル）アミン、置換型シクロアルキルアミン、二置換型シクロアルキルアミン、三置換型シクロアルキルアミン、シクロアルケニルアミン、ジ（シクロアルケニル）アミン、トリ（シクロアルケニル）アミン、置換型シクロアルケニルアミン、二置換型シクロアルケニルアミン、三置換型シクロアルケニルアミン、アリールアミン、ジアリールアミン、トリアリールアミン、ヘテロアリールアミン、ジヘテロアリールアミン、トリヘテロアリールアミン、複素環式アミン、二複素環式アミン、三複素環式アミン、ジアミンとトリアミンとの混合物（ここでアミンの少なくとも２つの置換基は、異なっており、アルキル、置換型アルキル、アルケニル、置換型アルケニル、シクロアルキル、置換型シクロアルキル、シクロアルケニル、置換型シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環式などからなる群から選択される）の塩が挙げられるが、これらに限定されない。２または３個の置換基（アミノ窒素を伴う）が複素環基またはヘテロアリール基を形成するアミンもまた、含まれる。
【００９７】
獣医学的および医学的に許容し得る酸付加塩は、無機酸および有機酸から調製され得る。使用され得る無機酸としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられる。使用され得る有機酸としては、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などが挙げられる。
【００９８】
本開示において有用な化合物の獣医学的および医学的に許容し得る塩は、従来の化学的方法により、塩基性または酸性部分を含む親化合物から合成され得る。一般にそのような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基の形態を、水または有機溶媒またはそれら２種の混合物中で（一般にはエーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい）、理論量の適正な塩基または酸と反応させることにより調製することができる。適切な塩のリストは、開示が参照により本明細書に組み入れられる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．  １７ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．  （１９８５），  ｐ．１４１８に見出される。そのような獣医学的に許容し得る塩の例は、ヨウ化物、酢酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、アスコルビン酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ−アセトキシ安息香酸塩、ナフタレン−２−安息香酸塩、臭化物、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、γ−ヒドロキシ酪酸、β−ヒドロキシ酪酸塩、ブチン−１，４−ジオアート、ヘキシン−１，４−ジオアート、ヘキシン−１，６−ジオアート、カプリン酸塩、カプリル酸塩、塩化物、桂皮酸塩、クエン酸塩、デカン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、馬尿酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ニコチン酸塩、イソニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、フタル酸塩、テレフタル酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、プロピオール酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、サリチル酸塩、セバシン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、ピロ硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、スルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−ブロモフェニルスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、酒石酸塩などである。
【００９９】
本発明の方法が用いられる予定の微生物感染のタイプが乳腺中の感染を含むことは、理解されよう。
【０１００】
乳房内感染は、潜在性または臨床型乳房炎を生じ得る。潜在性乳房炎は、局所炎症または全身症状の明白な兆候を示さない感染を包含し、異常な乳または乳房炎症の一過性エピソードを生じる場合があり、通常は無症候性である。感染が継続する場合、乳房炎は、慢性と呼ばれる場合がある。カリフォルニア乳房炎検査または乳牛改善団体により提供される自動化法など、当該技術分野で公知の標準的検査を利用して、体細胞数（例えば、好中球など）に関する乳の検査により、検出を実施することができる。体細胞数は一般に、感染の存在を示す。例として、２８０，０００細胞／ｍＬ以上（リニアスコア５以上）の体細胞数を有するウシは、感染確率が８０%を超える。当該技術分野で公知の標準的手順による乳の細菌培養により、感染の原因物質を同定することができる。
【０１０１】
臨床型乳房炎は、感染への炎症性反応を包含し、目視による乳の異常を起こす。炎症の指標としては、乳房の変化（腫脹、熱、疼痛、発赤）を挙げることができる。軽度の臨床症例は、局所兆候のみを含む。重度の臨床症例には、全身症状（発熱、食欲不振、ショック）および急速な発現が挙げられる。
【０１０２】
本明細書に記載された組成物は、そのような投与剤型を水中油エマルジョンまたは油中水エマルジョンで含むことにより乳房内投与用に配合させることができる。そのような製剤において、即時放出投与剤型は、連続相であり、遅延放出性投与剤型は、不連続相である。該製剤は、先に記載された３種の投与剤型を送達するための手法で製造してもよい。例えば、即時放出性成分を含む連続相である油と、第一の遅延放出性投与剤型を含む油に分散された水と、第三の遅延放出性投与剤型を含む水に分散された油と、を含む油中水中油エマルジョンを提供してもよい。
【０１０３】
本明細書に記載された組成物は、液体製剤の形態であってもよい。液体製剤は、溶媒に溶解された治療薬を含む溶液を含んでいてもよい。一般に、所望の効果を有し、治療薬を溶解し、対象に投与され得る、任意の溶媒を用いることができる。一般に所望の効果を有する治療薬の任意の濃度を、用いることができる。幾つかの変形例のある製剤が、不飽和、飽和または過飽和溶液の溶液である。溶媒は、純粋な溶媒であってもよく、または液体溶媒成分の混合物であってもよい。幾つかの変形例において、形成された溶液は、インサイチュのゲル化製剤である。用いられ得る溶媒および溶液タイプは、そのような薬物送達技術に精通した者に周知である。
【０１０４】
当該技術分野で公知の製剤による化合物の乳房内送達もまた、本明細書において企図される。例えば、本発明によるポリエーテル系イオノフォアと、植物油と、乳への油の分散を促進する天然のレシチンリン脂質材料のアルコール溶解性画分と、を含み、を含む乳房内輸液によるもので、該リン脂質は、ホスファチジルコリンおよびホスファチジルエタノールアミンおよびそれらの混合物からなる群から選択され、前記油中に少なくとも０．２５％の量で存在する。そのような組成物は、乳への急速な分散と、短い搾乳時間（ｍｉｌｋｏｕｔ  ｔｉｍｅｓ）を提供することができる。あるいはポリエーテル系イオノフォアは、パルミチン酸およびステアリン酸をポリオキシエチレン化セチルアルコールおよびステアリルアルコールと共に含むトリグリセリドの混合物からなる油に分散させてもよく、無機物、植物、合成または混合抽出物の油性媒体中に保持することができる。そのような組成物は、乳房中の抗菌薬の放出を急速化して、生物学的能力を向上させ、搾乳時間を減少させることができる。乳房内製剤は、ポリエーテル系イオノフォア、ヒュームドシリカ、粘度調整剤、および親水性担体を含むペースト状組成物の形態であってもよい。
【０１０５】
一実施形態において、ポリエーテル系イオノフォアを乳房内製剤中に配合された固体分散物として配合させることにより、本発明の組成物が乳房内送達用に配合される。１つのさらなる実施形態において、ポリエーテル系イオノフォアは、水溶性ポリマーに分散させて、固体分散物を形成する。該固体分散物は、その後、皮膚軟化性トリエステル（ｅｍｏｌｌｉｅｎｔ  ｔｒｉｅｓｔｅｒ）に添加することにより乳房内製剤に配合される。シリカ系組成物の添加により粘度を調整して粘度を上昇させることができる。一実施例において、ポリエーテル系イオノフォアを、ポリビニルピロリドンＫ３０に分散させて、固体分散物を形成させる。該固形分散物は、その後、Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣ（完全に飽和された皮膚軟化性トリエステルである）に添加することにより乳房内製剤に配合され、Ａｅｒｏｓｉｌ  Ｒ９７２の添加により粘度を調整する（Ａｅｒｏｓｉｌ  Ｒ９７２は、ジメチルジクロロシランでの後処置されたヒュームドシリカである）。乳房組成物は、その後、対象の乳房に適用するためにシリンジ内に分配される。
【０１０６】
さらなる態様において、本発明は、固体分散物に配合され、乳房内製剤にさらに配合されたポリエーテル系イオノフォアの治療有効量を含む、乳房内獣医学的抗菌組成物である。好ましくは該組成物は、水溶性ポリマーに分散されて固体分散物を形成するポリエーテル系イオノフォアを含む。該固体分散物は、皮膚軟化剤への添加により乳房内製剤に配合される。粘度上昇剤または低下剤の添加により、粘度を調整することができる。より好ましくは該組成物は、ポリエーテル系イオノフォア、水溶性ポリマーおよび皮膚軟化剤を含む。より好ましくは該組成物は、ポリエーテル系イオノフォア、水溶性ポリマー、皮膚軟化剤および粘性形成剤（ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）を含む。より好ましくは該組成物は、ポリエーテル系イオノフォア、ポリビニルピロリドンＫ３０、Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣおよびＡｅｒｏｓｉｌ  Ｒ９７２を含む。
【０１０７】
好ましい実施形態において、該組成物は、
（１）６００ｍｇのＬＰ１３６９−ＰＶＰＫ３０固体分散物（１５０ｍｇ  ＬＰ１３６９＋４５０ｍｇ  ＰＶＰＫ３０）＋７％Ｒ９７２＋Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣ；および
（２）１２００ｍｇのＬＰ１３６９−ＰＶＰＫ３０固体分散物（３００ｍｇ  ＬＰ１３６９＋９００ｍｇ  ＰＶＰＫ３０）＋７％  Ｒ９７２＋Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣ
からなる群から選択される組成物である。
【０１０８】
一態様において、本発明は、以下のものからなる群から選択される単位投与剤型である：
【０１０９】
７５ｍｇ群
各シリンジは、３００ｍｇのＬＰ１３６９−ＰＶＰＫ３０固体分散物（７５ｍｇ  ＬＰ１３６９＋２２５ｍｇ  ＰＶＰＫ３０）＋７％Ｒ９７２＋Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣを含む；最終容量５ｍＬ
【０１１０】
１５０ｍｇ群
各シリンジは、６００ｍｇのＬＰ１３６９−ＰＶＰＫ３０固体分散物（１５０ｍｇ  ＬＰ１３６９＋４５０ｍｇ  ＰＶＰＫ３０）＋７％Ｒ９７２＋Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣを含む；最終容量５ｍＬ 
【０１１１】
３００ｍｇ群 
各シリンジは、１２００ｍｇ  ＬＰ１３６９−ＰＶＰＫ３０固体分散物（３００ｍｇ  ＬＰ１３６９＋９００ｍｇ  ＰＶＰＫ３０）＋７％Ｒ９７２＋Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣを含む；最終容量５ｍＬ
【０１１２】
６００ｍｇ群（３００ｍｇ×２）
各シリンジは、１２００ｍｇのＬＰ１３６９−ＰＶＰＫ３０固体分散物（３００ｍｇ  ＬＰ１３６９＋９００ｍｇ  ＰＶＰＫ３０）＋７％Ｒ９７２＋Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣを含む；最終容量５ｍＬ
【０１１３】
本発明による乳房炎処置のための乳房内送達システムは、主として乳房内および感染部位付近に乳頭管を通して本発明の組成物を送達するために、乳房内経路を介した送達を含む。本発明の組成物は、ナノ改良された（ｎａｎｏｍｏｄｉｆｉｅｄ）有効成分を含むことができ、インサイでのチュゲル化が可能な獣医学的に許容し得る親水性ポリマー系ヒドロゲル乳房内送達システムの形態で提供することができる。あるいは本発明の組成物は、上皮に接着され得る粘液接着製剤の形態であってもよい。
【０１１４】
本発明の組成物は、あるいは、当該技術分野で公知のものなど、ナノテクノロジーの薬物送達技術を利用して配合することができる。ナノテクノロジーに基づく薬物送達システムは、生物学的利用度、患者の服薬遵守の改善、および副作用の低減という利点を有する。
【０１１５】
本発明の組成物の配合は、化合物の溶解度に基づくナノサスペンジョンまたはナノエマルジョンの形態のナノ粒子の調製を含む。ナノサスペンジョンは、ボトムアップまたはトップダウン技術により調製され、適切な賦形剤により安定化されたナノサイズの薬物粒子の分散物である。このアプローチは、本明細書に記載されたポリエーテル系イオノフォアに適用されてもよく、この場合のポリエーテル系イオノフォアは、飽和溶解度を高めるため、そして溶解性を改善するために、非常に低い水溶性と脂質溶解性を有する。飽和溶解度は、温度、溶解媒体の特性、および粒子径（１〜２μｍ未満）に依存する化合物独自の定数であることは理解されよう。
【０１１６】
本発明の組成物は、ナノサスペンジョンの形態で提供することができる。ナノサスペンジョンの場合、表面積の増加は、飽和溶解度の上昇を導き得る。ナノサスペンジョンは、１μｍ未満の粒子からなるコロイド状薬物送達システムである。本発明の組成物は、ナノ結晶性懸濁物、固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）、ポリマーナノ粒子、ナノカプセル、ポリマーミセルおよびデンドリマーをはじめとするナノサスペンジョンの形態であってもよい。ナノサスペンジョンは、湿式粉砕および高圧均質化をはじめとする当該技術分野で公知の様々な技術により大きな粒子をナノメートル寸法に減少させ得るトップダウンアプローチを利用して調製することができる。あるいはナノサスペンジョンは、粒子の制御的沈殿を溶液から実施し得るボトムアップ技術を利用して調製してもよい。
【０１１７】
本発明の組成物は、ナノエマルジョンの形態で提供することができる。ナノエマルジョンは、典型的には透明の水中油または油中水の二相系であり、小液滴の径が１００〜５００ｎｍであり、該当する化合物が疎水性相に存在する。ナノエマルジョンの調製物は、本明細書に記載されたポリエーテル系イオノフォアの溶解度を改善して、より良好な生物学的利用度に誘導することができる。ナノサイズの懸濁物は、ポリマーおよび界面活性剤などの静電的または立体障害的安定化のための薬剤を含むことができる。ＳＬＮの形態の組成物は、トリグリセリド、ステロイド、ワックスなどの生分解性脂質、ならびに大豆レシチン、卵レシチンおよびポロキサマーなどの乳化剤を含むことができる。ＳＬＮ調製物の調製は、薬物を融解脂質に溶解／分散した後、高温または低温均質化することを含み得る。高温均質化が利用される場合、融解脂質相が水相に分散されて、エマルジョンが調製され得る。これを冷却により固化して、ＳＬＮを実現してもよい。低温均質化が利用される場合、脂質相が液体窒素中に固化され、ミクロンサイズに摩砕され得る。得られた粉末を、水性界面活性剤溶液中で高圧均質化に供することができる。
【０１１８】
本発明の組成物は、ナノエマルジョンの形態であってもよい。本明細書に記載されたポリエーテル化合物を、油／液体脂質に溶解して、エマルジョン製剤に安定化してもよい。高エネルギーおよび低エネルギーでの小液滴縮小技術を利用して、ナノエマルジョンを調製してもよい。高エネルギー法は、高圧均質化、超音波処理および微小流動化を含むことができる。低エネルギー法が用いられる場合、溶媒の拡散および転相が、自然なナノエマルジョンを発生させる。ナノエマルジョン中で用いられる脂質は、トリグリセリド、大豆油、サフラワー油、および胡麻油を含む群から選択されてもよい。乳化剤、抗酸化剤、ｐＨ調整剤および防腐剤などの他の成分が、添加されてもよい。
【０１１９】
乳房炎処置の場合、主として乳房内および感染部位付近に乳頭管を通して本発明の組成物を送達するために、乳房内経路が用いられる。したがって該組成物は、ナノ改良された有効成分を含むように配合させることができる。該組成物は、インサイチュでのゲル化が可能な親水性ポリマー系ヒドロゲル乳房内送達システムの形態であってもよい。あるいは該組成物は、上皮に接着され得る粘液接着製剤の形態であってもよい。他の投与経路としては、局所（皮膚上など）および腸内（経口など）が挙げられる。
【０１２０】
該組成物は、制御放出性製剤の形態であってもよく、分解性または非分解性ポリマー、ヒドロゲル、オルガノゲル、またはポリエーテル系イオノフォアの放出を改変し得る他の物理学的構造体を含んでいてもよい。そのような製剤が、所望の色素、安定性、緩衝能力、分散性、または他の公知の所望の特色を提供するために添加されるさらなる不活性成分を含み得ることは、理解されよう。そのような製剤は、エマルジョン、フォーム、ミセル、不溶性単層、液晶、リン脂質分散物、ラメラ層などのリポソームをさらに含み得る。本発明において用いられるリポソームは、一般には中性および負電荷のリン脂質およびステロール、例えばコレステロールを含む、標準の小胞形成脂質から形成され得る。
【０１２１】
本明細書全体を通して、文脈が他に必要としない限り、言語「（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）含む」または「（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）含む」もしくは「（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）含んでいる」などの変形例は、言及された整数または整数群の含有を示唆するが、任意の他の整数または整数群の除外を示唆しないことは理解されよう。
【０１２２】
実施例１−ブドウ球菌の単離物に対する抗細菌活性
各論
本発明の先行の概要から明白な通り、本発明は、ウシ、ヒツジ、ヤギ、他の反芻動物種、ラクダ科およびウマ科、ならびにヒトなどの対象の乳房炎の処置方法に関する。同じく本発明の先の概要から明白な通り、本発明は、乳房炎のそのような処置方法において用いられる組成物にも関する。
【０１２３】
ポリエーテル系イオノフォアの治療有効量への暴露の毒性作用を最小限に抑えるために、本発明の処置方法または本明細書に記載された組成物により処置される対象の全身暴露が最小限に抑えられるべきであることは、理解されよう。乳腺／血液バリアが、ポリエーテル系イオノフォアの治療有効量の吸収への物理的バリアとして機能することは認識されると思われ、該化合物が抗菌活性の局在化のために乳腺の組織および流体中に局在化され、毒性作用を低下させ続けることは理解されよう。
【０１２４】
材料および方法
細菌単離物の採取および同定
様々な種および菌株であるブドウ球菌の４２の単離物を、単離採取物から採取した。コアグラーゼを含む生化学的試験、プロテインＡについてのラテックス凝集試験、Ｖｏｇｕｅｓ−ＰｒｏｓｋａｕｅｒテストおよびポリミキシンＢへの耐性を利用して、ブドウ球菌の菌種を同定した。単離物は全て、感染の処置に一般的に用いられる様々な抗菌薬への耐性についてもスクリーニングした。これは、ディスク拡散法およびＣＬＳＩにより概説された耐性基準を利用して実施した。以下の抗菌薬を使用した：アモキシシリン−クラブラン酸（３０μｇ）、セファロチン（３０μｇ）、クリンダマイシン（２μｇ）、エンロフロキサシン（５μｇ）、エリスロマイシン（１５μｇ）、ゲンタマイシン（１０μｇ）、イミペネム（１０μｇ）、オキサシリン（１μｇ）、ペニシリンＧ（１０単位）、テトラサイクリン（３０μｇ）、１：１９トリメトプリム−スルファメトキサゾール（２５μｇ）およびバンコマイシン（３０μｇ）。オキサシリンに耐性の菌株は全て、アモキシシリン−クラブラン酸、セファロチンおよびイミペネムに耐性であることも見出され、これらがメチシリン耐性株であることが決定された。単離物のプロファイルの全てを、図１に示す。
【０１２５】
抗菌薬の調製
５種の被験化合物それぞれについて、化合物２．５６グラムをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１０ｍＬに溶解することにより、２５６ｍｇ／ｍＬ原液を調製した。得られた溶液を、その後、５００μＬ容量に分取して、必要になるまで−８０℃に貯蔵した。アンピシリン（Ｓｉｇｍａ  Ａ−０１６６）０．３０３グラムをＤＭＳＯ  １０ｍＬに溶解することにより、アンピシリンの２５６ｍｇ／ｍＬ原液も調製した。この溶液を、５種の被験化合物と同じ手法で分取および貯蔵した。これらの化合物が必要となった時に、原液（２５．６ｍｇ／ｍＬ）１００μＬを陽イオン調整Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ  Ｂｒｏｔｈ（ＣＡＭＨＢ）９．９ｍＬに希釈することにより、２５６μｇ／ｍＬ使用液を調製した。
【０１２６】
最小阻害濃度アッセイ
最小阻害濃度テストを、ＣＬＳＩ基準（ＣＬＳＩ  ２０１２）に従って実施した。被験化合物溶液の１つまたはアンピシリン９０μＬを、各ウェルにＣＡＭＨＢ  ９０μＬを含む９６ウェルプレートの最後の行に添加した。その後、溶液を列方向に横向きに系列希釈し、陽性対照および陰性対照については２行に残留させた（図２）。ヒツジ血液寒天（ＳＢＡ）での一夜培養から得られた新しいコロニーを９．１ｇ／Ｌ生理食塩溶液に添加することにより、細菌懸濁物を調製した。この懸濁物を４×１０８〜５×１０８ＣＦＵ／ｍＬの濃度に調整した。波長６００ｎｍの分光光度計を用いて光学濃度（ＯＤ）を測定することにより懸濁物の濃度を決定し、正しい濃度は１．００〜１．２０の光学濃度を有することが決定された。この懸濁液１ｍＬを生理食塩水９ｍＬに添加した後、陰性対照ウェルを除く全てのウェルに１０μＬ容量で添加し、各ウェルに最終濃度４×１０５〜５×１０５ＣＦＵ／ｍＬを与えた。その後、被験物質を３７℃で２４時間インキュベートし、その後、目視での判断と波長６００ｎｍのマイクロプレートリーダーによるＯＤ測定値の両方を利用して評価した。これらの試験は二重測定で実施したが、不一致が観察されれば再度実施した。
【０１２７】
最小阻害濃度（ＭＩＣ）を、目視での判断とＯＤ測定値利用の両方により、細菌増殖を予防する抗生物質の最小濃度として決定した。被験化合物とアンピシリンとの直接的な統計比較は、分試料などの化合物構造に関係する情報の開示制限など信頼性のある情報の制限により実施することができなかった。代わりにＭＩＣ値を照合し、それらを利用してそれぞれＭＩＣ５０およびＭＩＣ９０と称される、単離物の５０％および９０％に効果のある各化合物の最小濃度を決定した。これらの値とＭＩＣ値の範囲を、その後、被験化合物間の直接比較およびアンピシリンとの大まかな比較に利用した。
【０１２８】
最小殺菌濃度の決定
９６ウェルのＭＩＣプレートを用いてＭＩＣを決定した後、ドロッププレート法の変法を利用して、被験化合物それぞれの最小殺菌濃度（ＭＢＣ）を決定した。これらを、インキュベート後のＭＩＣプレートから採取した試料を利用して分析した。各化合物は、ＭＩＣと等しいか、またはそれよりも高い各濃度の液滴１０μＬを、ヒツジ血液寒天に時計回りに分注した（図３）。各濃度を二箇所ずつ分注し、その二箇所は液滴の内側の輪に沿って分注した。プレートを３７℃で一晩インキュベートし、翌日、増殖を評価した。ＭＢＣをコロニーの９９．９％が死滅する濃度とし、それを液滴を配置した寒天での増殖の欠如により目視で評価した。これらのデータを利用して、殺菌活性を化合物の幾つかについて示唆することができた。さらなる試験のための化合物を選択するために、単離物の５０％および９０％のＭＢＣ値（ＭＢＣ５０およびＭＢＣ９０）を計算して、ＭＢＣ範囲と共に評価した。
【０１２９】
時間・殺菌速度アッセイ
ＭＩＣおよびＭＢＣ結果の評価に続いて、微量希釈時間・殺菌アッセイを用いた分析用に、２つの化合物：ＬＰ１３６９およびＬＰ６３１５を選択し、これらをアンピシリンと比較した。時間・殺菌アッセイを、変法と共に、ＣＬＳＩのＭ２６−Ａガイドラインに従って実施した。被験化合物およびアンピシリンを、９６ウェルプレートの列に横方向にＣＡＭＨＢに系列希釈し、細菌懸濁物をＭＩＣ試験と同じ手法で調製し添加した。９６ウェルプレートを、その後、３７℃で４８時間インキュベートし、特定の時点で取り出して、陽性対照ウェルと、試験された菌株に特異的な化合物のＭＩＣの１倍、４倍および８倍のＯＤを、波長６００ｎｍの分光光度計を使用して評価した。評価された時点は、ウェルへの細菌懸濁物の添加後０、１、２、４、８、１２、２４および４８時間目であった。各被験化合物を三重測定で試験したが、アンピシリンは二重測定で試験し、このテストを独立に反復した。微量希釈アッセイに用いられた細菌株は、ＭＢＣ試験時に明白となる殺菌活性に基づいて選択した。単離採取物中のブドウ球菌の分類（メチシリン感受性、メチシリン耐性およびコアグラーゼ陰性）それぞれの１菌株を、比較用のＡＴＣＣ参照株と共に選択した。これらの菌株は、菌株ＭＳＳ１、ＭＳＳ１１、ＭＲＳＡ９およびＡＴＣＣ４９７７５参照株であった。
【０１３０】
ＯＤ測定の検出限界により、時間・殺菌アッセイを微量希釈法でも実施した。１５ｍＬ試験管において、ＣＡＭＨＢ中の被験化合物９ｍＬ容量を、ＭＩＣ濃度の１倍、４倍および８倍で調製し、アンピシリン９ｍＬ容量を、ＭＩＣの１倍および４倍でＣＡＭＨＢ中に調製した。４〜５×１０６の細菌懸濁物（ＭＩＣ試験用に調製）１ｍＬを、該試験管およびＣＡＭＨＢ  ９ｍＬのみを含む増殖対照試験管のそれぞれに添加した。これらの試験管を１００ｒｐｍで回転するオービタルシェーカーにおいて３７℃で２４時間インキュベートした。細菌添加後０、１、４、８、１２および２４時間目に、試料１００μＬを各試験管から取り出し、９．１ｇ／Ｌ生理食塩溶液で系列希釈した。その後、希釈液をプレートカウント用寒天に二箇所ずつ接種して、３７℃で２４時間インキュベートした。インキュベーション後に、生存細菌数を寒天に見えるコロニー数から得て、これらを利用して各時点のＣＦＵ／ｍＬ値を計算した。微量希釈時間・殺菌分析では、メチシリン耐性株に対する抗細菌活性をさらに検討するために、ＡＴＣＣ４９７７５参照株およびＭＲＳＡ９のみを評価した。これらの微量希釈時間・殺菌アッセイは、独立に反復し、殺菌活性はＣＦＵ／ｍＬ値で３ｌｏｇ以上の低下と定義した。
【０１３１】
真核細胞の毒性試験
真核細胞に対する５種の化合物全ての毒性を試験するために、赤血球溶血性を利用した。血液試料を９．１ｇ／Ｌ生理食塩溶液を用いて洗浄し、２５００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。これらの工程を、細胞片および部分的に溶解した細胞が溶液から除去されるまで反復した。残された血液細胞２ｍＬを９．１ｇ／Ｌ生理食塩溶液９８ｍＬに懸濁して、２％血液細胞溶液を生成し、９６ウェルプレートのウェルに９０μＬ容量で分配した。化合物溶液およびクロラムフェニコールを、原液から２５６μｇ／ｍＬの濃度に調製した（上記の通り）。クロラムフェニコールは、赤血球溶解性の陰性対照として用い、アンホテリシンＢの即時使用溶液を、陽性対照として用いた。該化合物および対照９０μＬを異なる列の最終ウェルに添加した。異なる濃度の抗菌薬を試験するために、これらの化合物を列に横方向に系列希釈した。２％血液溶液のみを含むウェルを用いて、９６ウェルプレートの異なる行の測定値間の変動も評価した。これらの被験物質を３７℃で１時間インキュベートし、その後、目視での判断と波長６００ｎｍのマイクロプレートリーダーによるＯＤ測定値使用の両方により溶解を評価した。各試験を二重測定で実施し、その後、正確さを確保するために四重測定で再度実施した。
【０１３２】
結果
ＭＩＣ試験の結果から、メチシリン感受性およびメチシリン耐性の両方のブドウ球菌における全ての被験化合物の抗細菌活性が確認された。図４に示す通り、化合物ＬＰ９６６６を除く全ての菌株で、被験化合物全てが一定して低いＭＩＣ値を有した（１６μｇ／ｍＬ以下）。高いＭＩＣ９０値および広いＭＩＣ範囲により示された通り、ＬＰ９６６６に関してＭＩＣの変動が示された。ＭＩＣ値の範囲は、アンピシリンと類似していたが、アンピシリンのＭＩＣ値で観察されたものと同様の、メチシリン耐性株とメチシリン感受性株の間の差異は存在しなかった。メチシリン感受性ブドウ球菌株のＭＩＣ５０、ＭＩＣ９０およびＭＩＣ範囲を、図５に示す。ＬＰ９６６６を除く被験化合物のほとんどのＭＩＣ５０値が、アンピシリンと同等であったが、ＭＩＣ９０値は、かなり低かった。これは、菌株採取物全体に対する被験化合物の範囲に反映され、ＬＰ９６６６以外の被験化合物全てでアンピシリンよりも小さな範囲を示した。図６に示された通り、類似の傾向がメチシリン耐性単離物で観察された。化合物ＬＰ１０８８、１３６９、４５２５および６３１５は、アンピシリンよりもかなり低いＭＩＣ５０およびＭＩＣ９０値、ならびに狭いＭＩＣ範囲を示した。しかしＬＰ９６６６は、他の４種の被験化合物よりも高いＭＩＣ５０およびＭＩＣ９０値を有したが、それらは、メチシリン耐性株ではアンピシリンよりもかなり低かった。
【０１３３】
５種の被験化合物全てが、高濃度で殺菌活性を示したが、化合物ＬＰ１０８８、１３６９、４５２５および６３１５は、低い濃度でも若干の殺菌活性を示した。図７に示す通り、化合物ＬＰ１０８８および１３６９は、メチシリン感受性株でより一貫して殺菌活性を示し、化合物ＬＰ４５２５および６３１５は、メチシリン感受性株でより一貫して殺菌活性を示した。
【０１３４】
メチシリン感受性株およびメチシリン耐性株に関する５種の被験化合物のＭＢＣ５０、ＭＢＣ９０およびＭＢＣ範囲の比較を、それぞれ図８および９に示している。ＭＢＣ５０およびＭＢＣ９０値から、幾つかの株依存性殺菌活性が低濃度の被験化合物で明らかとなったが、ほとんどの化合物が、試験された菌株の大部分で静菌性であった。最大殺菌活性は、メチシリン感受性単離物に対する化合物ＬＰ１３６９およびメチシリン耐性単離物に対するＬＰ６３１５で観察され、これらは類似のＭＢＣ範囲でありながら最小ＭＢＣ５０値を示した。
【０１３５】
微量希釈時間・殺菌アッセイにおいて、化合物ＬＰ１３６９およびＬＰ６３１５の両方が、４８時間のＡＴＣＣ参照株の増殖を、増殖対照と比較して予防した（図１０）。若干の増殖が、ＭＩＣでのＬＰ６３１５の４８時間後に観察されたが、これは依然として増殖対照よりも有意に低かった。類似の傾向が、メチシリン感受性株ＭＳＳ１およびＭＳＳ１１で実施された殺菌速度アッセイで観察された（それぞれ図１１および１２）。ＡＴＣＣ参照株と同様に、化合物の全てが、増殖対照のレベルまで細菌増殖を予防し、ほとんどの濃度で初期濃度よりも増殖を予防した。しかしＡＴＣＣ株と同様に、ＬＰ６３１５のＭＩＣで増殖が観察されたが、２４時間早く観察され、最後の２４時間で増殖し続けた。類似の傾向が、ＭＳＳ１１に対するアンピシリンのＭＩＣでも観察されたが、最後の２４時間の細菌数増加が、ＬＰ６３１５での１×ＭＩＣ殺菌速度アッセイよりもかなり急激であった。ＭＲＳＡ９の時間・殺菌アッセイでは（図１３）、１２時間後の細菌数増加は、アンピシリンで明白であり、４８時間後に得られた増殖は、増殖対照と同等であった。しかしＬＰ６３１５の１×ＭＩＣでの増殖は、２４時間後に明白となり、４８時間後にはこの増殖はもはや観察されなかった。
【０１３６】
微量希釈でのさらなる時間・殺菌アッセイでは、菌株にかかわらず被験化合物の両方で最初の２４時間に生存細菌数の比較的一定した減少が示された。細菌数に及ぼす化合物ＬＰ１３６９の影響が、試験された濃度全てで増殖対照に比較して有意であったが、この化合物がＭＲＳＡ９およびＡＴＣＣ４９７７５参照株でのＭＩＣ濃度の８倍よりもＭＩＣの４倍で高い能力を呈したことが、図１４および１５に示される。細菌数の合計減少数を、図１６に示す通り評価した。予測通りアンピシリンは、両方の菌株で生存菌数の減少が３−ｌｏｇ１０を超える減少であったため殺菌性であることが示されたが、化合物ＬＰ１３６９は、全ての濃度で生存細菌数が３−ｌｏｇ１０未満の減少であったため静菌性であることが見出された。
【０１３７】
ＬＰ１３６９と類似の傾向が、ＬＰ６３１５で観察された。ＡＴＣＣ参照株では（図１７）、被験化合物の３つの濃度全てで２４時間の細菌数の一定した減少が存在した。ＭＲＳＡ９では、図１８に示された通り、全ての濃度で最初の１２時間の細菌数が減少したが、増加がＭＩＣでの１２〜２４時間で観察された。これらの減少を定量すると（図１９）、アンピシリンが予測通り殺菌性であることが示されたが、ＬＰ６３１５ではほとんどの濃度で静菌性であることが示された。しかしＭＩＣの４倍では、ＬＰ６３１５は、ＭＲＳＡに対してコロニーの減少が３−ｌｏｇ１０を超えていたことから殺菌性であることが観察された。
【０１３８】
真核生物毒性アッセイでの光学濃度の測定値を、以下の図２０に示している。光学濃度の低下は、赤血球細胞の溶解の指標と解釈した。３２μｇ／ｍＬ以上の濃度の被験化合物全てで光学濃度の低下が存在したが、ＬＰ１３６９を除く化合物全てでのこの低下は、クロラムフェニコールと同等であったことからこの低下は有意ではなく、赤血球細胞の溶解は、これらの濃度では目視で観察されなかった。溶解レベルは、化合物ＬＰ１３６９ではアンホテリシンＢほど高くなく、細胞の若干の溶解が、濃度範囲３２〜１２８μｇ／ｍＬで観察されたが、これは目視では６４μｇ／ｍＬで最も明白であった。
【０１３９】
実施例２−皮膚病変単離物に対する抗菌活性
スタフィロコッカス・シュードインターメディウスの単離物を、イヌの様々な品種の皮膚病変から採取した。ｍｅｃ遺伝子の存在および耐性プロファイルを、実施例１に記載された材料および方法に従って決定した。
【０１４０】
図２１は、ｍｅｃＡ遺伝子の存在のＲＴ−ＰＣＲ測定および様々な抗生物質への耐性プロファイルについて得られた結果を示している。図２２は、得られた単離物全ての耐性プロファイルを示しており、図２３は、２３の単離物に対するアンピシリン、ＬＰ１３６９、ＬＰ４５２５およびＬＰ６３１５の活性（個々の結果ならびにＭＩＣ５０、ＭＩＣ９０、ＭＩＣモードおよびＭＩＣ範囲）を示している。
【０１４１】
実施例３−ウシ乳房炎単離物に対する抗細菌活性
概要
５種の抗菌薬：ＬＰ１０８８、ＬＰ１３６９、ＬＰ４５２５、ＬＰ６３１５およびＬＰ９６６６を、５１のオーストラリア産ウシ乳房炎単離物、主に病原性Ｓ．アウレウス属の菌種、Ｓ．アガラクチエおよびＳ．ウベリスに対して試験した。ＬＰ４５２５は、最小のＭＩＣ５０およびＭＩＣ９０（それぞれ０．２５μｇ／ｍｌおよび１μｇ／ｍｌ）を呈した。ＬＰ１０８８、ＬＰ１３６９、ＬＰ６３１５およびＬＰ９６６６では、それぞれ２μｇ／ｍＬ、４μｇ／ｍＬ、４μｇ／ｍＬおよび１２８μｇ／ｍＬのＭＩＣ９０が得られた。試験された抗菌薬の全てが、これらの化合物が乳房炎病原に対して静菌性であることを示唆するＭＢＣ値を誘導した。ＬＰ４５２５が、グラム陽性菌への感染から得られたウシ乳房炎の症例を処置する最も有望な乳房内抗菌薬候補になると思われる。
【０１４２】
材料および方法
細菌単離物の採取および同定
様々な細菌種を含む５１の乳牛乳房炎単離物を、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ａｄｅｌａｉｄｅ  Ａｍｂｕｌａｔｏｒｙ  Ｃｌｉｎｉｃによる南オーストラリア州の田園地域の酪農農家から採取された牛乳試料から単離した。グラム染色およびカタラーゼ試験から観察された細胞形態を利用して、グラム陰性菌種のブドウ球菌、連鎖球菌およびコリネバクテリウム属の菌種を識別した。コアグラーゼ、ランスフィールド群、エスクリン加水分解およびＣＡＭＰテストをはじめとするさらなる生化学的検査を利用して、単離物を種のレベルで同定した。生化学的テストの結果が種を同定する際に決定的でなければ、１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子の増幅および配列決定を利用して、単離物の同一性を確認した。
【０１４３】
抗菌薬の調製
５種の被験化合物それぞれについて、化合物２．５６グラムをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１０ｍＬに溶解することにより、２５６ｍｇ／ｍＬ原液を作製した。得られた溶液を、その後、５００μＬ容量に分取して、−８０℃に貯蔵した。アンピシリン（Ｓｉｇｍａ  Ａ−０１６６）０．３０３グラムをＤＭＳＯ  １０ｍＬに溶解することにより、アンピシリンの２５６ｍｇ／ｍＬ原液も作製した。この溶液を、５種の被験化合物と同じ手法で分取および貯蔵した。これらの化合物が必要となった時に、原液（２５．６ｍｇ／ｍＬ）１００μＬを陽イオン調整Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ  Ｂｒｏｔｈ（ＣＡＭＨＢ）９．９ｍＬに希釈することにより、２５６μｇ／ｍＬ使用液を作製した。
【０１４４】
最小阻害濃度アッセイ
最小阻害濃度テストを、ＣＬＳＩ基準（ＣＬＳＩ  ２０１２）に概要された手法で実施した。被験化合物溶液を、９０μＬ体積のＣＡＭＨＢ  ９０μＬを含む９６ウェルマイクロタイタートレイに分配し、系列希釈して１２８μｇ／ｍＬ〜０．２５μｇ／ｍＬの範囲の濃度勾配を得た（図２４参照）。連鎖球菌属の菌種では、ＣＡＭＨＢを、４％溶解ヒツジ血液を含むＣＡＭＨＢサプリメント（４％ＬＳＢ：ＣＡＭＨＢ）と置き換えた。ヒツジ血液５ｍＬをｍｉｌｌｉＱ水５ｍＬと混合することにより４％ＬＳＢ：ＣＡＭＨＢを調製して、−２０℃での凍結および解凍を繰り返した後、７０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。上清７ｍＬを取り出して、ＣＡＭＢ９３ｍＬに添加した。
【０１４５】
ヒツジ血液寒天（ＳＢＡ）での一夜培養から得られた新しいコロニーを９．１ｇ／Ｌ生理食塩水４ｍＬに乳化させることにより、細菌懸濁物を６００ｎｍでの光学濃度測定値（ＯＤ６００ｎｍ）１．００〜１．２０に調製した。標準化された細菌懸濁物を生理食塩水で１：１０に希釈し、陰性対照のウェルを除く全てのウェルに１０μＬ容量で分配して、各ウェルに４×１０５〜５×１０５ＣＦＵ／ｍＬの最終濃度を与えた。９６ウェルマイクロタイタートレイを５％ＣＯ２中、３７℃で２４時間インキュベートし、その後、目視での判断、および波長６００ｎｍのマイクロプレートリーダーからのＯＤ測定値利用の両方で評価した。これらの試験は二重測定で実施したが、ＭＩＣ値の不一致が観察されれば再度実施した。
【０１４６】
最小阻害濃度（ＭＩＣ）を、目視での判断およびＯＤ測定値利用の両方により、細菌増殖を予防する抗生物質の最小濃度として決定した。ＭＩＣ値を照合し、それらを利用してそれぞれＭＩＣ５０およびＭＩＣ９０として公知の、単離物の５０％および９０％に効果のある各化合物の最小濃度を決定した。これらの値とＭＩＣ値の範囲を、その後、被験化合物間の直接比較およびアンピシリンとの大まかな比較に利用した。
【０１４７】
最小殺菌濃度の決定
ＭＩＣを決定した後、ドロッププレート法の変法を利用して、被験化合物それぞれの最小殺菌濃度（ＭＢＣ）を決定した。マイクロタイタープレートからの各濃度の液滴１０μＬをＳＢＡに分取することにより、ＭＢＣを決定して、ＳＢＡを３７℃で２４時間インキュベートした。ＭＢＣをコロニーの９９．９％が死滅する濃度とし、それを液滴を配置した寒天での増殖の欠如により目視で評価した。さらなる試験のための化合物を選択するために、単離物の５０％および９０％のＭＢＣ値（ＭＢＣ５０およびＭＢＣ９０）を計算して、ＭＢＣ範囲と共に評価した。
【０１４８】
結果
ウシ乳房炎単離物に対する抗菌活性が、被験化合物の５種：ＬＰ１０８８、ＬＰ１３６９、ＬＰ４５２５、ＬＰ６３１５およびＬＰ９６６６の全てで観察された。ＬＰ４５２５は、最小のＭＩＣ９０（１μｇ／ｍＬ）を示した。ＬＰ１０８８、ＬＰ１３６９およびＬＰ６３１５の値は、１〜２希釈分高かったが、ＬＰ９６６６の値は、数希釈分高かった（図２５）。５種の化合物のうちの４種で得られた低いＭＩＣ９０値とは異なり、全体として広く高いＭＢＣ９０値であることから、全ての化合物がほとんどの部分で静菌性であるがＭＩＣを超える極めて低い濃度（２〜８μｇ／ｍＬ）での殺菌活性が、幾つかの単離物で観察された。５種の化合物全ての各単離物のＭＩＣおよびＭＢＣについては、図３１および３２を参照されたい。
【０１４９】
ＭＩＣおよびＭＢＣデータを単離物の菌種に従って分析すると、ＭＩＣ５０およびＭＩＣ９０値がブドウ球菌属の菌種に比較して連鎖球菌属の菌種で低いことが明白となった（図２６〜３０）。しかしＭＩＣ範囲から、２群の病原の間の差が有意でないことが示される。ＭＢＣデータは、種の中で高い変動性もあり、一部のブドウ球菌株および連鎖球菌株がＭＩＣをわずかに超える濃度で効果的に死滅したが（例えば、ＬＰ４５２５およびＬＰ６３１５）、有意差は種の間で同定されなかった。
【０１５０】
この試験の予備的結果から、５種の化合物全てが静菌活性を呈し、幾つかの化合物が高濃度で菌株に依存的な殺菌活性を呈することが示唆される。全ての化合物が陽イオン調整Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ  Ｂｒｏｔｈへの希釈により若干の濁りを呈したが、ＬＰ１０８８、ＬＰ１３６９、ＬＰ４５２５、およびＬＰ６３１５の全てが、低いＭＩＣ値を示した。しかしＬＰ９６６６は、乳房炎病原の群それぞれで有意に高いＭＩＣ９０値を有し、これは陽イオン調整Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ  Ｂｒｏｔｈでの希釈の際に形成された多量の沈殿物による可能性がある。ＬＰ４５２５は、全ての単離物で最も一貫したＭＩＣ値を有し、これは小さなＭＩＣ範囲により証明される。ＬＰ４５２５は、全ての化合物と比較して低いＭＩＣ９０値も有した。本発明者らは、１種のグラム陰性菌（採取物中の単離物２８２５）が５種の化合物全ての影響を受け易いことも見出した。
【０１５１】
実施例４−実施例５の乳房内製剤の調製
実施例５における動物試験用のＬＰ１３６９を配合するために、４種の製剤を調製した。
【０１５２】
製剤の組成
群１：ベヒクルのみ。各シリンジは７％Ａｅｒｏｓｉｌ  Ｒ９７２＋Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣを含む；最終容量５ｍＬ
【０１５３】
群２：「マイクロサイズ化」。各シリンジは、９００ｍｇ  ｍｉｃｒｏｇｒａｄｅ  ＬＰ１３６９＋７％Ａｅｒｏｓｉｌ  Ｒ９７２＋Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣを含む；最終容量５ｍＬ
【０１５４】
群３：「ナノサイズ化」。各シリンジは、９００ｍｇ  ｎａｎｏｇｒａｄｅ  ＬＰ１３６９＋７％Ａｅｒｏｓｉｌ  Ｒ９７２＋Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣを含む；最終容量５ｍＬ
【０１５５】
群４：「ＰＶＰ」（固体分散物）。これは、ＰＶＰ（ポリビニルピロリドンＫ３０（ＰＶＰＫ３０、Ｓｉｇｍａ，８１４２０））とＬＰ１３６９の混合物である。各シリンジは、４５０ｍｇ  ＬＰ１３６９＋１３５０ｍｇ  ＰＶＰ＋７％Ａｅｒｏｓｉｌ  Ｒ９７２＋Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣを含む；最終容量５ｍＬ。２つのシリンジ（４５０ｍｇ／シリンジ×２）を各分房用に作製した。
【０１５６】
乳房内製剤の調製
群１：ベヒクルのみ。Ａｅｒｏｓｉｌ  Ｒ９７２  １０．５グラムを、Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣ（完全に飽和された皮膚軟化性トリエステル：Ｃｈｅｍｓｕｐｐｌｙ，  ＣＰ２０９）１５０ｍｌに溶解した
【０１５７】
群２：ＬＰ１３６９（ＨＰＬＣによる純度：＞９８％。Ｂｉｏａｕｓｔｒａｌｉｓ  ｆｉｎｅ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，  ＢＩＡ−Ｌ１３０２）を７５μｍのふるいに通すことにより、マイクロサイズのＬＰ１３６９を作製した。ＬＰ１３６９  ２７グラムをＣｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣに懸濁させて、Ｒ９７２  １０．５グラムを添加した。懸濁物の最終容量を、Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣにより１５０ｍＬに作製した。ＬＰ１３６９の最終濃度は、９００ｍｇ／５ｍＬである。
【０１５８】
群３：Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣ中のＬＰ１３６９（８０ｍｇ／ｍｌ；４５０ｍｇ／５ｍＬ）を５ｍｍ未満の研削ボールで１０００ｒｐｍで３０分間湿式粉砕し、その後、３０分間均質化することにより、ナノサイズの化合物を作製した。７％Ａｅｒｏｓｉｌ  Ｒ９７２を添加して、粘度を維持した。２本のシリンジ（４５０ｍｇ／シリンジ×２）を、各分房用に作製した。
【０１５９】
群４：ＰＶＰ。ＰＶＰ−ＬＰ１３６９固体分散物５４グラム（ＬＰ１３６９  １３．５グラムおよびＰＶＰ  ４０．５グラム）をＣｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣに懸濁させて、Ａｅｒｏｓｉｌ  Ｒ９７２  １０．５グラムを添加した。懸濁物の最終容量を、Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣにより１５０ｍＬに作製した。ＬＰ１３６９の最終濃度は、４５０ｍｇ／５ｍＬである。２本のシリンジ（４５０ｍｇ／シリンジ×２）を、各分房用に作製した。
【０１６０】
実施例５−泌乳牛において用いられる開発用乳房内抗生物質中でＬＰ１３６９の残留物消失プロファイル（ｒｅｓｉｄｕｅ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｅ）を測定するための予備試験
乳房内処置後の牛乳中薬物残留物の維持を認識することが、搾乳保留期間、または安全な濃度を達成するために牛乳が廃棄されるべき最後の処置後の期間を決定するのに不可欠である。３種のＬＰ１３６９製剤で処置されたウシにおける試験を実施して、投与後の１２回の搾乳（６日）の間の牛乳中濃度をモニタリングした。１回処置された４頭［微粒子化］（「微粒子化」）、２頭［ナノサイズ化］（「ナノサイズ化」）および３頭（「ＰＶＰ」）における処置後の１回目、２回目、および１２回目の搾乳時の牛乳中ＬＰ１３６９の濃度に関するデータを、オーストラリア、ＳＡ州アデレードのＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｏｕｔｈ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ内、Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙでの分析実験により提供した。
【０１６１】
データ解析
牛乳試料中の検出不能のＬＰ１３６９濃度を、０．０００１ｍｇ／ｍＬとした。牛乳濃度のデータを、確率プロットを利用して検証し、対数正規分布により全ての時点で適していることを見出した。それゆえ、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ  ２０１０を用いて、全乳中のＬＰ１３６９の濃度を対数変換した後、各時点での平均および標準偏差を計算した（各動物が生成した牛乳容量により加重した）。
【０１６２】
結果
微粒子化された製剤で処置されたウシ
【表１】
0006779619.tif 000007
【０１６３】
ｌｏｇ１０スケールでのＵＣＬは、時間に応じて直線的に降下するようである（Ｒ２＝０．９９８０）。フィットされた線から、単回処置された場合、最後の処置後の６５．３時間目にＵＣＬが−１未満（ｌｏｇスケールでは０．０１０ｍｇ／Ｌ）になることが示唆される。図３３を参照されたい。
【０１６４】
ナノサイズ化された製剤で処置されたウシ
【表２】
0006779619.tif 000008
【０１６５】
ｌｏｇ１０スケールでのＵＣＬは、時間に応じて直線的に降下するようである（Ｒ２＝０．９８５６）。フィットされた線から、単回処置された場合、最後の処置後の６１．１時間目にＵＣＬが−１未満（ｌｏｇスケールでは０．０１０ｍｇ／Ｌ）になることが示唆される。図３４を参照されたい。
【０１６６】
ＰＶＰで処置されたウシ
【表３】
0006779619.tif 000009
【０１６７】
ｌｏｇ１０スケールでのＵＣＬは、時間に応じて直線的に降下するようである（Ｒ２＝０．９９７６）。フィットされた線から、単回処置された場合、最後の処置後の５．３時間目にＵＣＬが−１未満（ｌｏｇスケールでは０．０１０ｍｇ／Ｌ）になることが示唆される。図３５を参照されたい。
【０１６８】
結論
酪農農家にかかる大きなコストは、牛乳中濃度が規制当局により許容され得ると思われる濃度に達するまで処置されたウシから得た牛乳を廃棄するという要件に関連する。このＬＰ１３６９消失試験の結果から、それぞれ微粒子化製剤、ナノサイズ化製剤およびＰＶＰ製剤で搾乳６回、６回、および１回に相当する保留期間６５．３時間、６１．１時間および５．３時間が必要との予測が決定された。固体分散物（ＰＶＰ）製剤は、５回少ない牛乳廃棄が必要である。
【０１６９】
実施例６−実施例７用の乳房内製剤の調製
実施例７で試験される動物への乳房内適用用のＬＰ１３６９を配合するために、３つの臨床試験用獣医学的生成物（ＩＶＰ）を調製した。
【表４】
0006779619.tif 000010
【０１７０】
方法
ＬＰ１３６９の乳房内製剤の調製は、２段階工程である。最初の段階は、化合物の固体分散物を調製して、乳房内ベヒクルに組み込むことである
【０１７１】
固体分散物の調製
ＬＰ１３６９（ＨＰＬＣによる純度：＞９８％。Ｂｉｏａｕｓｔｒａｌｉｓ  ｆｉｎｅ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，  ＢＩＡ−Ｌ１３０２）８グラムおよびポリビニルピロリドンＫ３０（ＰＶＰＫ３０、Ｓｉｇｍａ，８１４２０）を、丸底フラスコに添加した。メタノール（２００ｍｌ）を撹拌しながら添加して、ＬＰ１３６９およびＰＶＰＫ３０が完全に溶解するまで音波処理した。メタノールを、真空下で４５℃のロータリーエバポレータを用いて除去した（約４〜５時間）。固体分散物が丸底フラスコの壁の周囲に形成し、それを採取して、スパーテルで砕き落とし、ブレンダーで粉砕した。
【０１７２】
乳房内製剤の調製
ＰＶＰＫ３０−ＬＰ１３６９（ＬＰ１３６９  ７．５グラムに相当)３０グラムまたはＰＶＰＫ３０−ＬＰ１３６９（ＬＰ１３６９  １５グラムに相当）６０グラムの固体分散物を、フラスコに添加した。Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣ（完全に飽和された皮膚軟化性トリエステル，Ｃｈｅｍｓｕｐｐｌｙ，  ＣＰ２０９）を添加して、懸濁液を作製した（２５０ｍＬ近くまで。約２２０ｍＬ）。Ａｅｒｏｓｉｌ  Ｒ９７２  １７．５グラム（７重量％）（Ａｅｒｏｓｉｌ  Ｒ９７２は、ジメチルジクロロシランで後処理されたヒュームドシリカであり、Ｅｖｏｎｉｋ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ  Ｐｔｙ  Ｌｔｄにより供給された。カタログ番号Ｒ９７２) を、その後、懸濁液に添加して、粘度を調整した。懸濁液を２５０ｍＬにして、以下のＬＰ１３６９濃度を得た：１５０ｍｇ／５ｍＬまたは３００ｍｇ／５ｍＬ。
【０１７３】
６００ｍｇ／シリンジの群では、ＰＶＰＫ３０−ＬＰ１３６９（ＬＰ１３６９  ３０グラムに相当)の固体分散物１２０グラムを、フラスコに添加した。Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣを添加して、懸濁液を作製した（２５０ｍＬ近くまで。約２２０ｍＬ）。Ａｅｒｏｓｉｌ  Ｒ９７２  １７．５グラム（７重量％）を、その後、懸濁物に添加して、粘度を調整した。懸濁液を２５０ｍＬにして、６００ｍｇ／５ｍＬのＬＰ１３６９濃度を得た。流動性を改善するために、固体分散物を５００ｍＬに２倍希釈し、別のＡｅｒｏｓｉｌ  Ｒ９７２  １７．５グラムを添加して粘度を維持した（最終的なＲ９７２  ７％）。２本のシリンジ（３００ｍｇ／シリンジ×２）を各分房用に作製した。各シリンジ（Ｅｌｍ-Ｐｌａｓｔｉｃ，ドイツ、デュッセルドルフ所在：８ｍｌ乳房インジェクター  Ａｒｔ．  Ｎｏ．  ８０８０００）に懸濁物５ｍＬを充填して、ラベルを貼付した。
製剤の組成
【０１７４】
１５０ｍｇ群  −  ＩＶＰ１
各シリンジは、ＬＰ１３６９−ＰＶＰＫ３０固形分散物６００ｍｇ（１５０ｍｇ  ＬＰ１３６９＋４５０ｍｇ  ＰＶＰＫ３０）＋７％Ｒ９７２＋Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣを含む; 最終容量５ｍＬ 
【０１７５】
３００ｍｇ群  −  ＩＶＰ２
各シリンジは、ＬＰ１３６９−ＰＶＰＫ３０固形分散物１２００ｍｇ（３００ｍｇ  ＬＰ１３６９＋９００ｍｇ  ＰＶＰＫ３０）＋７％Ｒ９７２＋Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣを含む; 最終容量５ｍＬ 
【０１７６】
６００ｍｇ群（３００ｍｇ×２）  −  ＩＶＰ３
各シリンジは、ＬＰ１３６９−ＰＶＰＫ３０固形分散物１２００ｍｇ（３００ｍｇ  ＬＰ１３６９＋９００ｍｇ  ＰＶＰＫ３０）＋７％Ｒ９７２＋Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＧＴＣＣを含む; 最終容量５ｍＬ
【０１７７】
実施例７−泌乳牛において誘発されたストレプトコッカス・ウベリスによる臨床型乳房炎の処置におけるＬＰ１３６９含有の臨床試験用獣医学的生成物の有効性
本試験の目的は、泌乳牛において誘発されたストレプトコッカス・ウベリスによる臨床的乳房炎の処置において２種のＬＰ１３６９含有臨床試験用獣医学的生成物（ＩＶＰ）の予備的有効性を推定することであった。本試験の具体的目的は、
（１）Ｓ．ウベリスの既知の菌株の乳房内投与による実験的チャレンジ後に泌乳牛で誘発された臨床型乳房炎の処置として各ＩＶＰの予備的有効性を試験すること、
（２）Ｓ．ウベリスの既知の菌株の乳房内投与による実験的チャレンジ後に泌乳牛で誘発された臨床型乳房炎の処置において２種のＩＶＰの予備的有効性を比較すること、
（３）Ｓ．ウベリスの既知の菌株の乳房内投与による実験的チャレンジ後に泌乳牛で誘発された臨床型乳房炎の処置において２種のＩＶＰの予備的有効性を市販製品と比較すること、
であった。
【０１７８】
試験の最終目的は、ＩＶＰの有効性に関するデータを提供することであった。
【０１７９】
世界全体における臨床型乳房炎は、乳製品業界に少なからぬ損失をもたらす原因である。オーストラリアおよびニュージーランドの乳牛群における臨床型乳房炎の発症率は、およそ１５％と推定される（ＭｃＤｏｕｇａｌｌ，  １９９９，  ＭｃＤｏｕｇａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７ａ，  Ｐｅｔｒｏｖｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９）。ストレプトコッカス・ウベリスは、オーストラリア（Ｓｈｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９）；  Ｐｅｔｒｏｖｓｋｉ  ２０１３，未発表）およびニュージーランド（Ｌａｖｅｎ，  ２００８，  ＭｃＤｏｕｇａｌｌ，  １９９８，  ＭｃＤｏｕｇａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７ａ，  ＭｃＤｏｕｇａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７ｂ）において主な乳房炎原因生物として報告されている。乳房炎での抗生物質処置によるインビボ有効性を試験するためには、感染したウシを処置することが有利である。しかしこれは、自然な感染を採り入れる試験では日数を要する可能性がある。それゆえ泌乳牛に確定された乳房炎チャレンジを利用することで、自然発生した乳房炎で試験を実施するよりも短時間かつ少ない動物数で有効性試験を完了することができる。チャレンジモデルは、この群により過去に開発されたものであり、さらなる試験ではＳ．ウベリスの１つの菌株を好ましいチャレンジとして選択した。
【表５】
0006779619.tif 000011
【０１８０】
実験計画
試験の種類および計画
本試験は、泌乳牛において誘発された臨床型乳房炎チャレンジに対するＩＶＰの有効性を検査する無作為試験であった。ウシは全て、微生物懸濁液を接種された２つの対側分房（即ち、前左と後右、または前右と後左）を有した。チャレンジ分房は、乳房内投与技術を利用して接種された。各接種は、およそ４ｍＬの容量を有し、公知であり明確な特徴づけがなされたＳ．ウベリス菌株をおよそ１０６コロニー形成単位（ｃｆｕ）／シリンジ含んだ。
【０１８１】
ポータブル搾乳機を用いて、ウシを１日２回搾乳した。ウシおよび各分房の臨床試験を、チャレンジ後の最初の搾乳時（１２時間目）から開始して１８０時間目まで１２時間ごとに実施した。チャレンジ前の搾乳に先立ち、およそ２ｍＬの牛乳をウシの４つの分房それぞれから、牛乳採取試験用の無菌採取法を利用して採取した。各分房からの泌乳の外観を、暗色のプラスチック容器または古いレコード盤を使用して、粘稠性および外観の変化について観察した。小片または塊の存在があれば、さらなる研究を即座に実施した。乳房炎の兆候が検出されたら、牛乳標本を、感染が疑われる分房から牛乳採取試験用の無菌採取法を利用して採取した。牛乳生産量をチャレンジ分房それぞれで各搾乳時に記録し、非チャレンジ分房の両方（例えば、ＦＲとＲＬ、またはＦＬとＲＲを一緒に）からは合乳の生産量を得た。方策として重要な時点では、体細胞数、タンパク質、脂質およびラクトース率の試験のために、合乳の非チャレンジ分房ではバケット搾乳システムを利用し、チャレンジの各分房ではクォーターミルカーでの搾乳システムを利用して、牛乳標本を毎朝採取した。加えて、方策として重要な時点では、ＨＰＬＣおよび微生物阻害残留試験、例えばＣＯＰＡＮまたはＤｅｌｖｏｔｅｓｔのために、牛乳標本を採取した。
【０１８２】
各搾乳の完了の前および後に、ウシを急性乳房炎に関連する臨床兆候：抑うつ状態、跛行および臥床について観察した。検査の工程は、動物の目視での観察および臨床検査と、乳房に集中した病変を含んだ。個々の分房を、乳房炎に関連する臨床兆候、即ち熱、腫脹、発赤、圧痛について精査および触診し、観察は全て記録した。
【０１８３】
臨床型乳房炎に一致した兆候を示したウシ／分房は、直ちに処置した。ウシ／分房が、漸増的に乳房炎の兆候を示したため、それらをＩＶＰ１、ＩＶＰ２または参照生成物（Ｎｏｒｏｃｌｏｘ  ＬＣ，  Ｎｏｒｂｒｏｏｋ）で処置した。次の各ウシの処置割り当てでは、このパターンを引き続き繰り返した。１匹のウシの第二の分房が、同じまたは次の搾乳（複数可）の際に乳房炎の兆候を示した場合、処置は個々のウシの臨床型乳房炎について処置された最初の分房と同じＩＶＰ／参照生成物で行った。それゆえ、群あたりのウシ／分房の数は、異なっていた。
【表６】
0006779619.tif 000012
【０１８４】
材料および方法
動物
動物の詳細
種：                  ウシ
年齢：                ２〜１０歳
品種                   一般的乳牛（ホルスタイン・フリーシアン）
型：                  泌乳牛
体重：                適用可能でない 
個体数および性別:    １４匹雌
識別：                ウシは、最初の農場で永久的な固有番号が記載された片耳の耳標によって識別された。加えて各ウシには、様々な色のテールペイントスプレー缶を利用して、固有試験認識番号（例えば、１、２、３・・・１４）を恥骨直下の後肢にスプレーマーキングした。同じ固有試験認識番号を、各ウシのハインドパスターンに適用された、色が調和した１本のプラスチック脚バンドに記録した。
供給元：               動物は、市販の乳牛群から得られる。
【０１８５】
組み入れ基準
・  健常な牛（購入前３〜４日間の臨床観察）
・  ４つの機能する分房（購入前）
・  既知の体細胞検査歴（最後の１２ヶ月間に２５０，０００細胞／ｍＬを超えるＳＣＣがない）
・  ウシが試験開始前１４日以内に抗菌薬で処置されていない
【０１８６】
組み入れ後の除外（離脱）
【０１８７】
持続時間が短いため、ウシが試験から除外される必要が生じることは予測されなかった。しかし、試験の継続に不適切と思われるウシは、研究責任者の承認後に除外された。任意の除外の理由を完全に文書にして、生データおよびＳＲにおいて正当性を評価された。試験から除外された任意のウシは、適正な獣医のケアを受けた。１匹のウシが、後肢への偶発的損傷により除外された。
【０１８８】
動物の飼育および管理
試験期間の間、動物試験相の試験場所でウシを飼育した。最短で試験開始前７日間、ウシを施設に順化させた。優良農法規範の推奨（ｇｏｏｄ  ｆａｒｍｉｎｇ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ）と一致したオーストラリア飼育場／飼育条件のもとでウシを管理した。ウシを最初の農場で用いられた混合飼料および穀物系濃厚飼料で飼育した。主な水は、清浄な自動補給式の槽から随意に飲用として使用することができた。
【０１８９】
群の割り付けおよび無作為化
組み入れ基準を満たしたウシは全て、試験に登録した。チャレンジされる分房は、搾乳小屋でウシの順番に基づき、表７に示された通りウシの間で交互に割り付けられた。チャレンジへの最終的な割り付けを、ＳＲにおいて報告した。
【表７】
0006779619.tif 000013
【０１９０】
チャレンジ
チャレンジの菌株
【０１９１】
チャレンジに用いられたＳ．ウベリス株は、Ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ａｄｅｌａｉｄｅ内のＳＡＶＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙの菌株ライブラリーから得た。選択された菌株は、十分に特徴づけられていて、チャレンジ後３６〜１２０時間の臨床型乳房炎誘発に成功することが先行の試験で知られたものであった。該菌株は、標準の微生物学的方法により生化学試験を用いてＳ．ウベリスとして表現型により同定された。
【０１９２】
チャレンジ懸濁物
【０１９３】
選択されたＳ．ウベリス株のチャレンジ懸濁物の調製を、Ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ａｄｅｌａｉｄｅ内のＳＡＶＳにあるＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙで実施した。チャレンジ懸濁物の調製手順は、検査所の標準操作手順に従った。
【０１９４】
実験的感染
【０１９５】
ウシは全て、搾乳終了後可能な限り早期に、搾乳後０．５時間を超えないように、チャレンジ懸濁物に２つの対側分房（表７参照）を暴露させた。接種前に、４つ全ての分房の乳頭端部を、乾いた紙タオルおよびアルコール綿のスワブまたは適正な乳頭ワイプを用いて完全に清浄化した。チャレンジ接種物を、乳房内経路から接種した。一方のシリンジの内容物全てを、所定のチャレンジ分房それぞれに投与した。チャレンジ懸濁物の投与後に、分房を徹底的にマッサージして、乳房内の懸濁物の分散を支援した。
【０１９６】
処置レジメン
信頼できる獣医または適正に訓練を受けた職員が、全ての処置を実施した。研究責任者が、試験職員の訓練活動、用いられた被験生成物、および試験時に投与された投与量の詳細記録を管理した。
【０１９７】
ウシを処置スケジュールに従って乳房内経路から処置した。処置を「処置記録」の用紙に記録した。
【０１９８】
ＩＶＰ生成物の投与および回数
【０１９９】
各ウシは、６回の連続処置とし、１回の処置に分房あたり１本の乳房内シリンジの推奨用量で処置した。ＩＶＰ１およびＩＶＰ２で処置されたウシ／分房では、各感染分房を各搾乳後直ちに、例えば１２時間ごとに、６回連続で処置した。乳房内処置は、標準操作手順書に従って施された。
【０２００】
参照生成物の投与および回数
【０２０１】
各ウシを、３回の実施で一回処置に分房あたり１本の乳房内シリンジの推奨用量で処置した。参照生成物で処置された牛／分房では、各分房を、３回の処置で２４時間の間隔をおいて、搾乳後直ちに処置した。乳房内処置は、標準操作手順書に従って施された。
【０２０２】
併用処置
【０２０３】
被験生成物に関係する他の任意処置の使用は、試験の間は禁止した。他の処置は全て、動物の不必要な罹患を回避する場合に限り利用すべきであり、正当性を示す必要があった。いずれの場合でも、研究責任者に任意の処置を報告し、承認されなければならなかった。
【０２０４】
観察／測定／標本採取
動物の検査
獣医が、各ウシを処置前に検査した。検査には、一般観察（具体的には体型、姿勢および挙動）、直腸温度の測定および各分房の触診が含まれた。
【０２０５】
体重は、この試験の間は測定しなかった。
【０２０６】
試験を通して、任意の疾病兆候について、試験の職員がウシを少なくとも１日２回観察した。観察を日誌形式で記録した。有害事象（ＡＥ）の例では、研究責任者と、必要に応じて獣医に、直ちに通知した。事象は全て記録した。
【０２０７】
試験０日目０時間目に開始して試験８日目１８０時間目まで、各ウシを各搾乳時に臨床型乳房炎と一致する兆候について観察した。
【０２０８】
軽度を超える（標準操作手順書に記載された通りスコア３よりも高い）不快感の兆候を示したウシはいずれも、製造業者の推奨用量の抗炎症性鎮痛剤（ケトプロフェン）で処置した。
【０２０９】
異常が存在するか否かにかかわらず、全ての観察の結果を観察用紙に記録した。
【０２１０】
ウシからの臨床検査用搾乳前の無菌分房レベルでの牛乳標本採取
チャレンジ接種（試験０日目０時間目）の直前に開始して試験８日目１８０時間目まで１２時間ごとに、ウシを搾乳して臨床検査を実施した。各搾乳の際、チャレンジ分房ではクォーターミルカーでの搾乳の前、非チャレンジ分房ではバケット搾乳の前に、暗色のプラスチック容器を用いて、泌乳の外観を、粘稠性の変化、外観および／または小片もしくは塊の存在をはじめとする乳房炎に一貫した変化について観察した。乳房炎を示す兆候が現れたら、標準操作手順書に従い、無菌技術を利用して、さらなる牛乳標本を採取した。
【０２１１】
全ての無菌牛乳標本は、二本ずつ採取した。
【０２１２】
牛乳の外観の観察
初期観察および無菌標本が完了したら、泌乳の外観を、暗色のプラスチック容器または古いレコード盤を用いて粘稠性の変化、外観および小片または塊の存在について観察した。牛乳の外観は、標準操作手順書に記載された基準に基づいて評価した。
【０２１３】
搾乳
【０２１４】
牛乳の外観を観察した後、ポータブル搾乳機を用いてウシを搾乳した。チャレンジ分房は、チャレンジ接種（試験０日目０時間目）の直前に開始して試験８日目１８０時間目まで１２時間ごとにクォーターミルカーを用いて搾乳した。各ウシの非チャレンジ分房は、チャレンジ接種（試験０日目０時間目）の直前から開始して試験８日目１８０時間目まで１２時間ごとにバケット搾乳を利用して搾乳した。
【０２１５】
牛乳の生産量
【０２１６】
チャレンジ分房と非チャレンジ分房の牛乳生産量を、チャレンジ分房は別個に各搾乳時に、そして非チャレンジ分房では合乳を（非チャレンジ分房のデータポイントとして、例えばＦＲとＲＬ、またはＦＬとＲＲを一緒に）記録した。
【０２１７】
チャレンジ乳房および非チャレンジ乳房レベルでの牛乳標本の採取
バケット搾乳により回収された２つの適切な非チャレンジ分房からプールした牛乳から、またはクォーターミルカーに回収されたチャレンジ分房の個々の分房から、標本を採取した。これらの標本は、標準操作手順書により各ウシ／分房／分房の組み合わせから回収された牛乳の代表であり、新鮮な牛乳の分析標本として用いた。そのような採取された標本を、体細胞数、タンパク質、脂肪およびラクトース率試験に使用した。
【０２１８】
乳房／ウシの搾乳後試験
搾乳の完了後に、ウシを急性乳房炎に関連する臨床兆候：抑うつ状態、跛行、臥床について、そして直腸温度を検査することにより観察した。検査工程は、乳房に集中した目視による観察および動物の臨床検査を含んだ。しかし動物が疾病を有する疑いがあれば、臨床状態を診断する目的の、登録獣医による詳細な臨床検査が実施された。これは、必要と判断されれば、適正なテスト（例えば、血液学的検査、生化学的検査）のための血液試料を含む場合があった。
【０２１９】
乳房および個々の分房を、乳房炎に関連する臨床兆候、即ち熱、腫脹、発赤、圧痛について精査および触診した。乳房触診スコアリングシステムの説明は、標準操作手順書に従った。
【０２２０】
乳房炎と診断された分房／ウシの処置
乳房炎の兆候（牛乳の変化、熱、腫脹および乳房の疼痛、または標準操作手順書により３以上の触診スコア）が検出されたため、標準操作手順書に従い、牛乳標本の無菌採取を利用して、牛乳標本を感染が疑われる分房から採取した。乳房炎と診断された分房を、ＩＶＰまたは参照生成物で処置した。乳房炎の兆候を示した最初のウシ／分房はＩＶＰ１で処置し、その後、漸増的にＩＶＰ２および参照生成物で処置した。このサイクルを、次の感染牛についても適宜、繰り返した。一匹のウシの第二の分房が同じまたは連続する搾乳（複数可）の際に乳房炎の兆候を示した場合には、そのウシの第二の分房内を、第一の分房と同じＩＶＰ／参照生成物で処置した。それゆえ、群あたりのウシ／分房の数は、異なり得る。
【０２２１】
ウシ１匹あたり２つを超える分房が感染したら、注射可能な生成物（即ち、ママジン（Ｍａｍａｚｙｎ））をラベルの推奨に従って使用した（例えば、１日１回５ｇを３回）。急性汎発性乳房炎の兆候を示したウシの場合、全身抗生物質処置を直ちに開始し、必要に応じて補助的処置（例えば、非好いてロイド系抗炎症剤ケトプロフェン）を与えた。処置の決定は、登録獣医が研究責任者と相談して行った。各搾乳時には引き続き分房を観察し、適宜処置した。
【０２２２】
有効性の評価
【０２２３】
有効性の定義
処置された分房の５０％が処置開始から５日以内に臨床治癒に至ったら、生成物を有効と見なした。
【０２２４】
有効性の測定
【０２２５】
臨床治癒
臨床治癒は、ウシの臨床検査、乳房の触診および牛乳の外観観察により決定した。臨床治癒は、
（１）標準操作手順書に従い３以下の触診スコア、および／または
（２）標準操作手順書に従い３以下の牛乳スコア、および／または
（３）乳房が正常な温度に戻り、接触の際に非腫脹および非疼痛であるか、もしくは発赤が消失していること、および／または
（４）ウシの一般的健康状態が標準操作手順書に従い３以下であること、
と定義した。
【０２２６】
微生物学的治癒
【０２２７】
臨床治癒は、処置前および分房レベルで最後の処置後の最短で７日間に採取された無菌牛乳試料の微生物培養によっても決定した。微生物学的治癒は、
（１）処置前に１または２つのコロニータイプが単離され、処置後に増殖がないこと、
（２）処置前に１または２つのコロニータイプが単離され、処置後に異なるコロニータイプ（複数可）が単離されること、
と定義した。
【０２２８】
ＩＶＰ／参照生成物の有効性は、
（１）特定のＩＶＰ／参照生成物で処置された分房の総数から臨床治癒に達した、臨床型乳房炎の分房の割合、
（２）特定のＩＶＰ／参照生成物で処置された分房の総数から微生物学的治癒に達した、臨床型乳房炎の分房の割合、
と決定した。
【０２２９】
これらの方法で用いられた参考文献
（１）Ｌａｖｅｎ，  Ｒ．  ２００８．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｆｏｒｕｍ：  ｃｈｏｏｓｉｎｇ  ｍａｓｔｉｔｉｓ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｌａｃｔａｔｉｎｇ  ｃｏｗ：  ｓｅｌｌｉｎｇ  ｏｒ  ｓｃｉｅｎｃｅ？  ＵＫ  Ｖｅｔ：  Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ  １３（４）：２９−３６．
（２）ＭｃＤｏｕｇａｌｌ，  Ｓ．  １９９８．  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｔｗｏ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｃｕｒｉｎｇ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｓｕｂｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍａｓｔｉｔｉｓ  ｉｎ  ｌａｃｔａｔｉｎｇ  ｄａｉｒｙ  ｃｏｗｓ．  Ｎ．  Ｚ．  Ｖｅｔ．  Ｊ．  ４６（６）：２２６−２３２．
（３）ＭｃＤｏｕｇａｌｌ，  Ｓ．  １９９９．  Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍａｓｔｉｔｉｓ  ｉｎ  ３８  Ｗａｉｋａｔｏ  ｄａｉｒｙ  ｈｅｒｄｓ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ｌａｃｔａｔｉｏｎ．  Ｎ．  Ｚ．  Ｖｅｔ．  Ｊ．  ４７（４）：１４３−１４９．
（４）ＭｃＤｏｕｇａｌｌ，  Ｓ．，  Ｋ．  Ｅ．  Ａｇｎｅｗ，  Ｒ．  Ｃｕｒｓｏｎｓ，  Ｘ．  Ｘ．  Ｈｏｕ，  ａｎｄ  Ｃ．  Ｒ．  Ｃｏｍｐｔｏｎ．  ２００７ａ．  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍａｓｔｉｔｉｓ  ｗｉｔｈ  ｔｙｌｏｓｉｎ  ｂａｓｅ  ｏｒ  ｐｅｎｅｔｈａｍａｔｅ  ｈｙｄｒｉｏｄｉｄｅ  ｉｎ  ｄａｉｒｙ  ｃａｔｔｌｅ．  Ｊ．  Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉ．  ９０（２）：７７９−７８９．
（５）ＭｃＤｏｕｇａｌｌ，  Ｓ．，  Ｄ．  Ｇ．  Ａｒｔｈｕｒ，  Ｍ．  Ａ．  Ｂｒｙａｎ，  Ｊ．  Ｊ．  Ｖｅｒｍｕｎｔ，  ａｎｄ  Ａ．  Ｍ．  Ｗｅｉｒ．  ２００７ｂ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍａｓｔｉｔｉｓ  ｗｉｔｈ  ｏｎｅ  ｏｆ  ｔｈｒｅｅ  ｉｎｔｒａｍａｍｍａｒｙ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ．  Ｎ．  Ｚ．  Ｖｅｔ．  Ｊ．  ５５（４）：１６１−１７０．
（６）Ｐｅｔｒｏｖｓｋｉ，  Ｋ．，  Ｃ．  Ｈｅｕｅｒ，  Ｔ．  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ，  ａｎｄ  Ｎ．  Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ．  ２００９．  Ｔｈｅ  ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ａｎｄ  ａｅｔｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｍａｓｔｉｔｉｓ  ｏｎ  １４  ｆａｒｍｓ  ｉｎ  Ｎｏｒｔｈｌａｎｄ，  Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ．  Ｎ．  Ｚ．  Ｖｅｔ．  Ｊ．  ５７（２）：１０９−１１５．
（７）Ｓｈｕｍ，  Ｌ．  Ｗ．  Ｃ．，  Ｃ．  Ｓ．  ＭｃＣｏｎｎｅｌ，  Ａ．  Ａ．  Ｇｕｎｎ，  ａｎｄ  Ｊ．  Ｋ．  Ｈｏｕｓｅ．  ２００９．  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  ｍａｓｔｉｔｉｓ  ｉｎ  ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  ｈｉｇｈ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｄａｉｒｙ  ｈｅｒｄｓ  ｉｎ  Ｎｅｗ  Ｓｏｕｔｈ  Ｗａｌｅｓ．  Ａｕｓｔ．  Ｖｅｔ．  Ｊ．  ８７（１２）：４６９−４７５．
【０２３０】
結果
【表８】
0006779619.tif 000014
【０２３１】
搾乳前の牛乳の外観
【表９】
0006779619.tif 000015
【０２３２】
搾乳後の触診スコア
【表１０】
0006779619.tif 000016
【０２３３】
牛乳生産量
【表１１】
0006779619.tif 000017
【０２３４】
表１２．臨床治癒の概要および不能
臨床治癒
臨床治癒は、各ウシの臨床検査、乳房の触診および牛乳の外観の観察により決定した。臨床治癒は、
（１）３以下の触診スコア、および／または
（２）３以下の牛乳スコア、および／または
（３）乳房が正常な温度に戻り、接触の際に非腫脹および非疼痛であるか、もしくは発赤が消失していること、および／または
（４）ウシの一般的健康状態が３以下であること、
と定義した。
【表１２】
0006779619.tif 000018
【０２３５】
本試験におけるストレプトコッカス・ウベリスのチャレンジは、治癒されたウシ３頭のうち２頭のみで市販の参照生成物（ノロクロックス）を圧倒する十分な細菌チャレンジを提供した。ノロクロックスは通常、実務現場でのチャレンジの条件下で十分に効果が出ると予測されており、この試験でのチャレンジが極端であったことが示された。顕著な細菌チャレンジであったにもかかわらず、ＩＶＰ１（１５０ｍｇ  ＬＰ１３６９）およびＩＶＰ２（３００ｍｇ  ＬＰ１３６９）は、参照生成物と同じまたはそれを上回る能力を発揮し、この重要で一般的なウシ乳房炎原因に対して両方の製剤により高レベルの活性がもたらされることを実証した。表１２を参照されたい。
【０２３６】
実施例８  −  実施例７に示された処置の微生物学的治癒効果の測定
ウシの健康状態、乳房の外観（特に炎症の兆候−温度、腫脹、疼痛、発赤について）および牛乳の外観の精査は、乳房炎の臨床治癒が実現されたか否かを示すことができるが、処置が微生物学的治癒を実証する別のテストがある。適正な条件下で、細菌を乳房に侵入させて、乳房炎を誘発することができる。乳房炎を誘発した生物体が、処置により感染した乳房から除去されない場合、密に接触する乳牛群では、それらの生物体が感染した牛だけでなく他の牛にも再感染する潜在的確率が残る可能性がある。さらに、たとえ細菌が低温殺菌で死滅される可能性があるとしても、牛乳中の細菌の存在は牛乳の品質および食品安全性の見地からは望ましいと判断されない。それゆえ、微生物学的治癒をもたらす乳房内処置の能力を評価することは、非常に有益である。
【０２３７】
乳房炎の微生物学的治癒は、乳房レベルでの処置前および最後の処置後最短で７日間に採取された無菌牛乳試料の微生物培養により決定される。微生物学的治癒は、（ｉ）処置前に１つもしくは２つのコロニータイプが単離され、処置後に増殖しないこと、または（ｉｉ）処置前に１または２つのコロニータイプが単離され、処置後に異なるコロニータイプ（複数可）が単離されること、と定義される。ＩＶＰ／参照生成物の有効性は、微生物学的治癒を実現する特定のＩＶＰ／参照生成物で処置された臨床型乳房炎を有する分房全ての百分率として決定される。
【０２３８】
材料および方法
微生物培養の結果は、感染前、感染後および処置後に回収された牛乳試料から作成した。数字のゼロを含むセルは、培養で陰性が見出されたものである。試料が得られた場合には、生物体の同一性および存在する生物体の数（ＣＦＵ／ｍｌ）に関する情報を表すか、または試料をコンタミネーションについて同定している（図３６参照）。図内の残りのセルは、評価のために回収されなかった理由を示している。
【０２３９】
結果
結果を、図３６に表している。参照生成物（ノロクロックス）は、８つのチャレンジ分房のうち５つ（６２．５％）で微生物学的治癒を実現した。ＩＶＰ２（３００ｍｇ  ＬＰ１３６９）は、６つのチャレンジ分房のうち４つ（６６．７％）で微生物学的治癒を実現した。ＩＶＰ１（１５０ｍｇ  ＬＰ１３６９）は、６つのチャレンジ分房のうち４つ（６６．７％）で完全または部分的な微生物学的治癒を実現した。これらの誘導されたストレプトコッカス・ウベリス−乳房炎モデルにおいて、結果を実施例７で示された結果とまとめると、ＩＶＰ１およびＩＶＰ２が、高レベルの臨床治癒および微生物学的治癒を提供したことが示される。これらの結果は、乳房炎の効果的処置を示している。
【０２４０】
実施例９−泌乳牛において誘発されたストレプトコッカス・ウベリスの臨床乳房炎の処置におけるＬＰ１３６９の残留物消失プロファイルの決定（実施例７）
６回（６回の連続する搾乳時に）処置したＩＶＰ１およびＩＶＰ２に関する６つの分房から得た、処置後の牛乳中のＬＰ１３６９濃度に関するデータを、オーストラリア、ＳＡ州アデレードのＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｏｕｔｈ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ内のＳｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙにある分析検査室により提供した。牛乳中のＬＰ１３６９の方法の定量限界（ＬｏＱ）は、０．０８８ｍｇ／Ｌであった。ＬＰ１３６９の最大残留レベル（ＭＲＬ）は、ＡＰＶＭＡ，  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２０１３，  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  ａｎｄ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃｏｄｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｎｏ．  ４  （ＭＲＬ  Ｓｔａｎｄａｒｄ）  ２０１２によれば０．０１０ｍｇ／ｋｇであった。
【０２４１】
データ解析
【０２４２】
ＬＰ１３６９レベルがＬｏＱ未満であった牛乳試料中では、ＬＰ１３６９濃度は、０．０００１ｍｇ／Ｌとした。
【０２４３】
牛乳濃度のデータを、確率プロットを利用して精査し、対数正規分布が全ての時点で適正であることを見出した。それゆえ、全乳中のＬＰ１３６９濃度は、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ  ２０１０を用いて、対数変換し、その後各時点での平均および標準偏差（各動物により生成された牛乳容量により加重）を計算した。
【０２４４】
牛乳からの任意の物質の消失の測定は、試験した母集団の規模により影響を受ける。本試験でサンプリングされたウシの数が少なかったため、ｇ’因子（ｇ‘  ｆａｃｔｏｒ）（結果が母集団を象徴するものになるように、９９％信頼区間を提供する因子）を解析に適用した。動物２０匹の母集団に向けてｇ’因子を固定することにより、分散されたデータの確率を最小限にした。
【０２４５】
以下の仮説を定めた。搾乳１回目（１２時間目）の牛乳中の有効成分の濃度は、最初の処置、２回目の処置および最後の処置の後の搾乳時に得られた平均濃度を表している。さらに、搾乳１回目（１２時間目）の牛乳の容量は、最初の処置、２回目の処置および最後の処置の後の搾乳時に回収された平均牛乳容量を表している。
【０２４６】
結果
【表１３】
0006779619.tif 000019
【０２４７】
図３７に示された通り、ｌｏｇ１０スケールでのＵＣＬは、時間に応じて直線的に降下するようである（Ｒ２＝０．９１１３）。フィットされた線から、ＵＣＬが６回の連続した搾乳の際に処置されると最後の処置後１１２．７時間目に−１（ｌｏｇスケールで０．０１０ｍｇ／Ｌ）未満になることが示唆される。極めて高いＵＣＬおよび長い残留物消失は、最後の処置後４回目の搾乳時に高度の陽性という１／６の分房（牛／分房  ＩＤ  ９ＦＲ）の異常な結果による可能性が最も高い。
【表１４】
0006779619.tif 000020
【０２４８】
図３８に示された通り、ｌｏｇ１０スケールでのＵＣＬは、時間に応じて直線的に降下するようである（Ｒ２＝０．９５５８）。フィットされた線から、ＵＣＬが６回の連続した搾乳の際に処置されると最後の処置後５１．７時間目に−１（ｌｏｇスケールで０．０１０ｍｇ／Ｌ）未満になることが示唆される。
【０２４９】
結論
ＬＰ１３６９消失の本試験の結果は、ＬＰ１３６９が処置された乳房炎の分房から急速に消失することを初めて明確に実証した。乳房内製剤の最適化により、牛乳中のＬＰ１３６９の最大有効性および最小滞留時間の要件を考慮することが可能となる。
【図１−１】
0006779619.tif 000021
【図１−２】
0006779619.tif 000022
【図２】
0006779619.tif 000023
【図３】
0006779619.tif 000024
【図４】
0006779619.tif 000025
【図５】
0006779619.tif 000026
【図６】
0006779619.tif 000027
【図７】
0006779619.tif 000028
【図８】
0006779619.tif 000029
【図９】
0006779619.tif 000030
【図１０】
0006779619.tif 000031
【図１１】
0006779619.tif 000032
【図１２】
0006779619.tif 000033
【図１３】
0006779619.tif 000034
【図１４】
0006779619.tif 000035
【図１５】
0006779619.tif 000036
【図１６】
0006779619.tif 000037
【図１７】
0006779619.tif 000038
【図１８】
0006779619.tif 000039
【図１９】
0006779619.tif 000040
【図２０】
0006779619.tif 000041
【図２１】
0006779619.tif 000042
【図２２−１】
0006779619.tif 000043
【図２２−２】
0006779619.tif 000044
【図２３】
0006779619.tif 000045
【図２４】
0006779619.tif 000046
【図２５】
0006779619.tif 000047
【図２６】
0006779619.tif 000048
【図２７】
0006779619.tif 000049
【図２８】
0006779619.tif 000050
【図２９】
0006779619.tif 000051
【図３０−１】
0006779619.tif 000052
【図３０−２】
0006779619.tif 000053
【図３０−３】
0006779619.tif 000054
【図３０−４】
0006779619.tif 000055
【図３１】
0006779619.tif 000056
【図３２】
0006779619.tif 000057
【図３３】
0006779619.tif 000058
【図３４】
0006779619.tif 000059
【図３５】
0006779619.tif 000060
【図３６−１】
0006779619.tif 000061
【図３６−２】
0006779619.tif 000062
【図３６−３】
0006779619.tif 000063
【図３７】
0006779619.tif 000064
【図３８】
0006779619.tif 000065