(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ニワトコ抽出物と、ラクトバチルス・ラムノーサスの少なくとも１種の菌株との組合せを含んでなる組成物であって、該ニワトコ抽出物は、その抽出物の乾燥物質に対して０．５〜２５重量％で含まれるアントシアニン含有物と、その抽出物の乾燥物質に対して２〜１０重量％で含まれるタンパク質含有物とを含んでなり、該組成物が１×１０７〜１×１０１１ＣＦＵ／単位用量の量で含まれるラクトバチルス・ラムノーサスを含んでなる、免疫を刺激し、および／または免疫防御を強化し、および／または感染防御応答および／または抗炎症性応答を促進し、および／または活力の維持を補助し、インフルエンザウイルスによる感染によって引き起こされるインフルエンザ様状態の症状の治療および／または予防するための組成物。
【請求項２】
食物、栄養補助食品または医薬である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
カプセル剤、内服錠、チュアブル錠、発泡錠、トローチ剤、丸薬、散剤、顆粒剤、経口液剤または懸濁剤、ならびに舌下および口内の投与形態からなる群から選択される投与形での栄養補助食品である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
単位用量当たりニワトコ乾燥抽出物２０ｍｇ〜２００ｍｇ、好ましくは単位用量当たりニワトコ乾燥抽出物２０ｍｇ〜１００ｍｇ、および単位用量当たりラクトバチルス・ラムノーサス１×１０７〜１×１０１１ＣＦＵ、好ましくは単位用量当たりラクトバチルス・ラムノーサス１×１０８〜１×１０９ＣＦＵで含んでなる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
ビタミンおよび／または無機塩をさらに含んでなる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
本発明は、免疫を刺激し、および／または感染防御応答および／または抗炎症性応答を促進することを目的とする、ニワトコ抽出物と、ラクトバチルス・ラムノーサス(lactobacillus rhamnosus)の少なくとも１種の菌株との組合せを含んでなる組成物に関する。
【０００２】
ニワトコ(elder)またはセイヨウニワトコ(Sambucus nigra L.）は、レンプクソウ科(Adoxaceae）に属する。ニワトコ属(Sambucus)は、温帯地域で世界中に分布している２５種を含んでなる。クロニワトコ(black elder)、S. nigra ssp. nigraは、ヨーロッパ（特に、デンマーク、イタリアおよびオーストリア）、アフリカ北部地域およびアジア西部で広く栽培されている。カナダニワトコ(Canadian elder)、S. nigra ssp. Canadensisは、カナダで選択が行われたにもかかわらず、北アメリカ北東部原産であり、オレゴン州、ペンシルベニア州およびカンザス州で栽培されている。
【０００３】
ニワトコの種々の器官：樹皮、根、茎、花、葉および果実は、医薬、食品業界ならびに工具および玩具の製造のように多様な分野において伝統的に使用されている。最も重要な工業生産は、現在、栄養補助食品市場および染料工業に向けたニワトコ実抽出物の生産に関する。
【０００４】
いくつかの刊行物には、サイトカインの産生に対するニワトコ実抽出物の効果が報告されている(Barak et al., European Cytokine network, Vol 12(2), 290-296, 2001)。その効果は、特に、インフルエンザウイルス（Ａおよび／またはＢおよび／またはＣ）によるインフルエンザ感染と関連している症状の軽減に対するニワトコ抽出物の効果について、単純ヘルペスウイルス１型、呼吸器合胞体ウイルスおよびインフルエンザウイルスに対する抗ウイルス効果とともに既に示されている(Zakay-Rones et al., The Journal of International Medical Research, vol 32, 132-140, 2004)。
【０００５】
多くの科学的研究により、発酵食品、特に、乳製品中に存在する特定の微生物の、健康に対する有益な効果が示されている。これらの微生物は、一般に、「プロバイオティクス」と呼ばれている。現在、一般的に受け入れられている定義によれば、プロバイオティクスとは、十分な量で摂取された場合に宿主の健康に対して有益な効果を有する、生きている微生物である（生存乳酸菌含有粉乳を含む食物中のプロバイオティクスについての健康および栄養特性の評価に関するＷＨＯ報告書(WHO report on the evaluation of the health and nutritional properties of probiotics in foods, including powdered milk containing living lactic bacteria)、コルドバ、アルゼンチン、２００１年１０月１〜４日）。
【０００６】
特許出願Ｗ０９６／２０６０７、ＥＰ０７９４７０７、ＥＰ１２８３７１４およびＦＲ２９２９１２６５７には、プロバイオティック細菌を含有する食品の摂取により、特に、腸内細菌叢の再平衡化、感染に対する抵抗性の向上、および免疫応答の調節を通じて、健康に対して好ましい効果がもたらされ得ることが示されている。
【０００７】
ヒトの食物に使用されるプロバイオティック微生物は、一般的に乳酸菌であり、主として、乳酸桿菌属(Lactobacillus)およびビフィドバクテリウム属(Bifidobacterium）、特に、ラクトバチルス・パラカゼイ(Lactobacillus paracasei)種に属するものである。
【０００８】
乳酸桿菌属は、通性嫌気性で(optionally anaerobic)、様々な形および寸法を有し、非運動性である、グラム陽性菌の属である。乳酸桿菌属は、そのメンバーの大部分がラクトースおよびその他の単糖を乳酸へ変換することからこのように名付けられている。ヒトでは、乳酸桿菌は、片利共生生物として非常に広範囲に及び、一般的に有用である宿主であり、または必要でさえある。それらは、腸内細菌叢の重要な要素を構成する．
【０００９】
ラクトバチルス・ラムノーサスは、最初はラクトバチルス・カゼイ(Lactobacillus casei)の亜種と考えられていた細菌であるが、遺伝子研究により、全く異なった種であることが証明された。ラクトバチルス・ラムノーサスは、通常、胃内および消化管内に見られる。この細菌は、腸管にとって有益なだけでなく、特に、腸管および尿路の病原体との戦いにおいて、免疫系にも有益な特性を有する。
【００１０】
プロバイオティクスは、糜粥、細菌叢に対して直接的な効果を発揮し得る。これは管腔効果(luminal effects)と呼ばれ、また、腸細胞またはＧＡＬＴの免疫担当細胞のレベルでは、表皮効果(skin effects)と呼ばれる。プロバイオティクスは、生態系または局所免疫系の修飾と関連する間接的な効果も有し得る。
【００１１】
いくつかのプロバイオティクスは、消化器上皮に付着する能力を有する。この特性は、腸細胞上皮および局所免疫系と密接に相互に関係する可能性を裏付ける生態学的利点を構成し得る。ラクトバチルス・ラムノーサスの付着性菌株が、一部の対象において空腸および／または直腸の粘膜に長期にわたって定着することができることを示した研究がある(Alander et al., Letters in Applied Microbiology, 24 (5), vol 361-364, 1997)。
【００１２】
ますます数多くの研究によって複数の菌株の生物学的効果が示されているが、これらの効果は菌株依存的であると思われることに留意することが重要である。
【００１３】
特許出願ＵＳ２００６／０２３３８９５には、ラクトバチルス・カゼイなどのプロバイオティックと組み合わせられる可能性が潜在的にあるニワトコ抽出物を含んでなる組成物が記載されている。しかし、この組成物は、キャッツクロー(Uncaria tomentosa）、パウダルコ(Pau d’Arco)、スクルテラリア・バイカレンシス(Scrutellaria baicalensis)およびアルテミシンの混合物を含む必要がある。さらに、この組成物は、免疫を刺激することを目的としておらず、ライム病を治療するために使用される。ライム病は、細菌感染によって引き起こされるためにインフルエンザ型のウイルスによる感染と非常に異なっている。
【００１４】
特許出願ＷＯ２０１０／０４３６９６には、免疫を刺激することを目的とする、クロニワトコ抽出物と、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・ブルガリクス(Lactobacillus bulgaricus)、またはストレプトコッカス・サーモフィラス(Streptococcus thermophilus)の菌株との組合せを含んでなる組成物が開示されている。この出願では、ニワトコおよびラクトバチルス・パラカゼイ間の相乗効果は、ＩＬ−１０およびインターフェロン−γの産生に関して示されている。しかし、炎症反応の制限は知られていない。他のサイトカインおよびＣＸＣＬ１０タイプのケモカインについてのデータは、この炎症応答のあまりにも重要な増加の危険性を取り去るものであった。
【発明の概要】
【００１５】
従って、本発明は、ニワトコ抽出物と、ラクトバチルス・ラムノーサスの少なくとも１種の菌株とを含んでなる組合せに関する。
【発明の具体的説明】
【００１６】
有利には、そのような組合せは相乗的組合せである。
【００１７】
本発明はまた、そのような組合せを含んでなる組成物、有利には、ニワトコ抽出物と、ラクトバチルス・ラムノーサスの少なくとも１種の菌株とを含んでなる組成物に関する。  
【００１８】
本発明はまた、ニワトコ抽出物と、ラクトバチルス・ラムノーサスの少なくとも１種の菌株と、さらに、ビタミンおよび／または無機塩とを含んでなる組成物に関する。
【００１９】
特定の実施形態では、本発明による組成物は、以下の工程：
・前記組合せを調製する工程、
・本発明による組成物中に前記組合せを添加する工程
を含む方法により調製され得る。
【００２０】
従って、この場合、前記組合せは、それを本組成物へ添加する前に調製される。しかし、前記組合せの各構成要素を別々に本組成物中へ添加することにより、すなわち、事前に前記組合せを調製することなく、本発明による組成物を調製することも可能である。
【００２１】
好ましくは、本発明による組成物は、経口経路による投与のために意図されている。
【００２２】
有利には、本発明による組成物は、食物、栄養補助食品、医薬またはＯＴＣ(Over The Counter)製品である。
【００２３】
有利には、本発明によるニワトコ抽出物は、ニワトコの実および／または花から、好ましくは、ニワトコの実から得られる。有利には、本発明によるニワトコ抽出物は水溶性抽出物である。
【００２４】
本発明の範囲内で使用されるニワトコ抽出物は、一方でそのアントシアニン含有物を、もう一方でタンパク質（特に、レクチン）などの大きな分子を特徴とし得る。アントシアニンは、可視スペクトルにおける橙赤色から紫青色までに及ぶ、水溶性の、細胞の液胞にある、葉、花弁および果実の天然顔料である。
【００２５】
有利には、ニワトコ抽出物は、アントシアニン、有利には、ペラルゴニジン群およびシアニジン群のものを、その抽出物の乾燥物質に対して、約０．５重量％〜約２５重量％、有利には、約３重量％〜約２５重量％、さらに有利には、約８重量％〜約１６重量％で含まれる量で含んでなる。好ましくは、アントシアニン含有量は、その抽出物の乾燥物質に対して、約１２重量％に等しい。これらの含有量は、Wu et al., (J. Agric. Food Chem. 52(26), 7846-7856, 2004)に記載されたＨＰＬＣ法によれば、シアニジン−３−グルコシドとして表される。
【００２６】
有利には、ニワトコ抽出物は、その乾燥物質に対して表される、２〜１０重量％で含まれる量でタンパク質を含んでなる（ケルダール法(Proteines vegetales, Coord. B. Godon, Collection Sciences et techniques agro-alimentaires, Technique et Documentation Lavoisier, Paris, 1985)によれば、Ｎ×６．２５）。
【００２７】
本発明の範囲内で、ニワトコ抽出物は、市販品であり、または以下の工程を含む方法によって得ることができる：
【００２８】
新鮮なまたは冷凍のニワトコの実は、圧搾して、濾過後にジュースを得ることができる。それは、酵素加水分解（ペクチナーゼまたはペクチンメチルエステラーゼとポリガラクツロナーゼの混合物）の段階を経て、濾過の前に清澄化することができる(Girard and Fukumoto, Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 40(2), 91-157, 2000)。また、乾燥および粉砕された実の水抽出も行うことができ、続いて、濾過による固体／液体分離が行われる。このようにして得られた抽出物は、そのまま使用することができ、または濃縮することができ、または粉末の形態に乾燥させることができる。
【００２９】
アントシアニン含有量は、この段階で、その抽出物の乾燥物質に対して０．５重量％〜３重量％で含まれ、有利には、約１％（ＨＰＬＣアッセイ、シアニジン−３−グルコシドとして表される）に等しい。
【００３０】
ニワトコ抽出物は、特に、アントシアニンおよび／または高分子量の分子（タンパク質、ポリフェノール、多糖類）を強化することができる。その目的のために、当業者に周知のいくつかの方法が可能である：
・限外濾過：事前に希釈されたジュースにダイアフィルトレーションを行い、その後、１〜２０ｋＤａで含まれる、好ましくは、３〜１０ｋＤａで含まれるカットオフ閾値を有する有機または無機の膜で過濃縮する工程(Girard and Fukumoto, Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 40(2), 91-157, 2000)。
・Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＸＡＤタイプの吸収性ポリマー樹脂カラムの通過。
・水−アルコール（水とＣｌ〜Ｃ４アルコールとのあらゆる比率での混合物）または酸性ｐＨの水溶液での抽出(Bronnum-Hansen and Flink, Int. J. Food Sci. Tech. 21(2), 605-614, 1986、 Lee and Wrolstad, J. Food Sci. 69(7), 564-573, 2004)。この抽出は、有利には、乾燥および粉砕された実でまたは新鮮な実から得られたピューレで直接行うことができる。
【００３１】
このようにして得られた抽出物は、ブリックス度を上げ、微生物汚染に関して安定化するために、（真空下、５０℃を超えない温度で）熱濃縮することができる。それは、単独でまたは担体（例えば、マルトデキストリン、ラクトースなど）上で乾燥させることもできる。
【００３２】
得られた強化ジュースは、好ましくは、４０〜６０°Ｂｒｉｘであり、アントシアニンが３〜２５％であり、タンパク質が５〜１０％である（ケルダール法、Ｎ×６．２５）（その乾燥物質に対する重量で表される）。
【００３３】
有利には、本発明による、組成物中に存在する、単位用量当たりのニワトコ乾燥抽出物の量は、約１０ｍｇ〜約１ｇで含まれる。より有利には、組成物は、単位用量当たり約２０ｍｇ〜約２００ｍｇのニワトコ乾燥抽出物、より有利には、単位用量当たり約２０〜１００ｍｇのニワトコ乾燥抽出物、さらに有利には、単位用量当たり４０ｍｇ〜８０ｍｇのニワトコ乾燥抽出物、さらに同様に有利には、単位用量当たり２０〜６０ｍｇのニワトコ乾燥抽出物を含んでなる。
【００３４】
本発明の範囲内で、「単位用量」という用語は、１回に投与される本発明による組成物の量を表す。有利には、本発明による単位用量は、例えば、１００ｍｌまたは１２５ｍｌのヨーグルト、従来のサイズのカプセル剤または２ｇの錠剤に相当し得る。従って、組成物の重量に関わらず、単位用量当たりのニワトコ乾燥抽出物および／またはラクトバチルス・ラムノーサスの菌株の量は一定のままである。
【００３５】
本発明の範囲内で非常に特に好適なラクトバチルス・ラムノーサスの菌株は、ラクトバチルス・ラムノーサスＧＧ菌株（ＡＴＣＣ  ５３１０３）である。このラクトバチルス・ラムノーサス菌株は、１９８３年に健常なヒトの腸管内で単離された菌株である。この菌株は、特許ＵＳ４８３９２８１の主題である。ラクトバチルス・ラムノーサスＧＧ菌株は、成人および小児における種々のタイプの下痢症の予防に有益であることが示されている(Guandalini et al., J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 30(1), 54-60, 2000、 Osterlund et al., Br. J. Cancer 97, 1028-1034, 2007)。また、ラクトバチルス・ラムノーサスＧＧ菌株が小児における気道の感染症の危険性の減少の原点にあったことが報告されている(Hojsak et al., Clin. Nutr. 29(3), 312-316, 2010)。
【００３６】
また、ラクトバチルス・ラムノーサスは、特に、腸管および尿路の病原体との戦いにおいて、免疫系に対して大きな助けとなる。ラクトバチルス・ラムノーサスは、それ自体が腸の粘膜に付着し、そこで、消化を助ける善玉菌の増殖を促す。ラクトバチルス・ラムノーサスは、腸内の有害な細菌を排除し、その増殖を防止する手助けをする細菌である。
【００３７】
有利には、本組成物は、単位用量当たりラクトバチルス・ラムノーサス１．１０７〜１．１０１１ＣＦＵ、好ましくは、単位用量当たり１．１０８〜１．１０９ＣＦＵ、さらに好ましくは、単位用量当たり５．１０８ＣＦＵを含む。
【００３８】
本発明の特定の実施形態では、本組成物は、単位用量当たり、
・ニワトコ乾燥抽出物１０ｍｇ〜１ｇ、好ましくは、２０ｍｇ〜２００ｍｇ、有利には、２０ｍｇ〜１００ｍｇ、より好ましくは、４０ｍｇ〜８０ｍｇ、さらに同様に有利には、２０〜６０ｍｇ、
・単位用量当たりラクトバチルス・ラムノーサス１．１０７〜１．１０１１、好ましくは、１．１０８〜１．１０９ＣＦＵ
を含んでなる。
【００３９】
本発明の特定の実施形態では、本組成物は、単位用量当たり、
・ニワトコアントシアニン２ｍｇ〜２００ｍｇ、好ましくは、２ｍｇ〜１００ｍｇ、より好ましくは、２ｍｇ〜２０ｍｇ、同様に有利には、２０ｍｇ〜５０ｍｇ、
・ニワトコタンパク質２ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは、１０ｍｇ〜２０ｍｇ、
および
・単位用量当たりラクトバチルス・ラムノーサス１．１０７〜１．１０１１、好ましくは、１．１０８〜１．１０９ＣＦＵ
を含んでなる。
【００４０】
有利には、その結果、相乗効果が観察される。
【００４１】
本発明による、ニワトコ抽出物と、ラクトバチルス・ラムノーサスの菌株との組合せは、非特異的免疫応答を誘導し、および／または刺激する良好な能力を示し、その結果、食品分野および／または医薬分野において関心が示された。
【００４２】
本発明による組成物は、有利には、経口または舌下経路による投与のために食品分野および／または医薬分野において通常使用されるあらゆる投与形であり得る。
【００４３】
食品の場合、それは、特に、新鮮な乳製品、発酵乳製品、ヨーグルト、発酵乳、乳児用ミルク、粉末、トローチ、野菜ジュース、飲料およびそれらの混合物であり得、有利には、新鮮な乳製品、フルーツジュースおよび／もしくは野菜ジュースまたはフルーツコンポートからなる群の中にあり得る。
【００４４】
有利には、果実は、リンゴ、オレンジ、レッドフルーツ、イチゴ、モモ、アプリコット、プルーン、ラズベリー、ブラックベリー、レッドカレント(red current)、レモン、グレープフルーツ、バナナ、パイナップル、キウイ、ナシ、サクランボ、ココナツ、パッションフルーツ、マンゴー、イチジク、ダイオウ、メロン、エキゾチックフルーツ、ライチ、レーズン、ビルベリーまたはそれらの混合物からなる群から選択される。
【００４５】
「栄養補助食品」とは、本発明の意味の範囲内で、通常の食事を補完することを目的とする食品であり、栄養学的もしくは生理学的な効果を単独でもしくは組合せで有する濃縮された栄養源またはその他の物質となる食品を意味するものと解釈される。
【００４６】
有利には、栄養補助食品は、ビタミンおよび／または無機物および／または微量元素を含んでなり得る。
【００４７】
これらのうち、ビタミン、特に、ビタミンＡ、Ｃ、ＤおよびＥ、およびビタミンＢ群、特に、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ５、Ｂ６、Ｂ８、Ｂ９およびＢ１２を挙げることができる。
【００４８】
ビタミンＡ（レチノールまたはカロテノイド）、ビタミンＥおよびビタミンＣは、３つの主要な抗酸化ビタミンである。ビタミンＡは、動物由来の食品中にのみ存在する。しかし、いくつかの植物は、プロビタミンＡ、すなわち、体内でビタミンＡへと変換され得る物質を含む。それは、視覚および気管支、腸または皮膚の成長に不可欠である。また、ビタミンＡは、免疫機構にも関与している。抗酸化物質は、それらの損傷を和らげ、細胞が受けた損傷を回復させ、老廃物を排除し、酸化現象を妨げることによってフリーラジカルの作用に拮抗する。フリーラジカルが体内に過剰に存在する場合、それらは細胞の老化を促進する可能性がある。これらの抗酸化ビタミンは、酸素代謝に由来するフリーラジカルの生成を制御する能力を有し、フリーラジカルの過剰生成は、非常に多くの障害、特に、心血管レベルでの障害、免疫、癌、皮膚、老化の加速、神経変性疾患などの原因となる。具体的には、ビタミンＣはよく知られている抗酸化剤で、水溶性である。ヒトは、ビタミンＣ必要量を満たすために、ビタミンＣの外部供給源に依存する。よって、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、またはそれらの混合物がビタミンＣ源である。ビタミンＣは、血管および筋肉の合成に必要である。ビタミンＣは、食物中に存在する鉄の吸収を促進し、いくつかのホルモン機構に干渉する。また、ビタミンＣは、毒性物質の排出においても役割を果たす。ビタミンＣ欠乏は、感染に対する抵抗性を低下させる可能性がある。ビタミンＥもよく知られている抗酸化剤である。ビタミンＥは、通常の酸化剤から重要な細胞機能を保護するために、ビタミンＣと相乗的に働くことができる。α−トコフェロールアセテート、トリメチル−トコフェロールアセテートおよび／またはビタミンＥスクシネートがビタミンＥ源である。ビタミンＥは、体の細胞に対して特に重要な保護効果を有する。ビタミンＥは、生殖機構において重要な役割を果たし、赤血球の合成に関与する。
【００４９】
ビタミンＤは、とりわけ、ＵＶＢ光線の作用下でコレステロールの誘導体からヒト体内で合成されたホルモンであるが、脂溶性ビタミンと呼ばれる。ビタミンＤは、２つの形態、Ｄ２（エルゴカルシフェロール）またはＤ３（コレカルシフェロール）で存在する。これら２つの分子は、９，１０−セコステロイドである。ビタミンＤは、腸によるカルシウムおよびリンの吸収だけでなく、腎臓によるそれらの再吸収にも関与する、真のホルモンである。一方、ビタミンＤは、２００種を超える遺伝子に影響を及ぼし、それによって、最近まで考えられなかったその重要性が、関節炎、乾癬に関連した皮膚障害、糖尿病、特定の癌、さらには認知症を含む数多くの病気において説明される。
【００５０】
ビタミンＢ群は、細胞の代謝において重要な役割を果たす水溶性ビタミンの群を形成し、その中で以下が見られる：
・ピルビン酸デカルボキシラーゼ複合体の補因子である、ビタミンＢ１またはチアミン、
・フラビンアデニンジヌクレオチドの前駆体である、ビタミンＢ２またはリボフラビン、
・ニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチドの前駆体である、ビタミンＢ３（ＰＰ）またはニコチンアミド、
・補酵素Ａの前駆体および構成要素である、ビタミンＢ５またはパントテン酸、
・アミノ酸およびタンパク質の代謝と関連している反応の補酵素である、ビタミンＢ６またはピリドキシン、
・脂肪酸、炭水化物およびアミノ酸の代謝反応の補酵素である、ビタミンＢ８（Ｈ）またはビオチン、
・Ｓ−アデノシルメチオニンの補因子である、ビタミンＢ９または葉酸およびビタミンＢ１２またはシアノコバラミン。
【００５１】
ビタミンＢ群は、多くの場合、体の健康の利益のために相互に機能し合う。ビタミンＢ群は、代謝を増加させ、良好な健康状態で健康な皮膚および筋肉を維持する助けをし、免疫系を改善させ、神経系を改善させ、アルツハイマー病の認知障害を遅らせ、細胞の成長だけでなく分裂も促進し、過度のストレスによって引き起こされる症状に対処する。
【００５２】
有利には、無機物は、鉄、亜鉛、セレン、クロム、マンガン、モリブデンおよびそれらの混合物から選択される。無機塩は、生物の組成に入る岩石由来物質であり、動物性および植物性食物中に存在する。無機塩は、イオン形態であり、主要な無機元素、例えば、カルシウム、鉄、マグネシウム、リン、カリウム、ナトリウム、硫黄および微量元素、例えば、アルミニウム、ヒ素、ホウ素、塩素、クロム、コバルト、銅、フッ素、ヨウ素、マンガン、モリブデン、ニッケル、鉛、ケイ素、セレン、バナジウム、亜鉛などは区別される。
【００５３】
鉄は、体が正しく機能するために必須の無機塩の一つである。鉄は、赤血球に含まれるヘモグロビンの構造、筋肉に含まれるミオグロビンの構造および体の機能に不可欠な数多くの酵素の構造において基本的な役割を果たす。鉄欠乏は、世界中でよく見られ、貧血を起こし、心身の能力の低下、感染に対する抵抗性の低下を伴う。
【００５４】
亜鉛は、酸化剤に対する防御に直接加わる酵素の補因子として抗酸化剤の役割を果たす。酸化亜鉛、グルコン酸亜鉛、クエン酸亜鉛、酢酸亜鉛、塩化亜鉛、乳酸亜鉛または硫酸亜鉛は、本発明による組成物中に単独でまたは混合物として使用することができる。有利には、それはグルコン酸亜鉛である。
【００５５】
セレンもまた、酸化剤に対する防御に直接加わる酵素、特に、グルタチオンペルオキシダーゼ、の補因子として抗酸化剤の役割を果たす。
【００５６】
クロムは、炭水化物の代謝に関与する微量元素であり、インスリンの作用を促進する。また、クロムは、脂質の代謝およびコレステロールの代謝にも関与し、その濃度を減少させるのに寄与する。また、クロムは核酸の代謝においても役割を果たす。
【００５７】
マンガンは、ビタミンＢ１の有効性に不可欠な微量元素である。マンガンは、いくつかの金属タンパク質、例えば、スーパーオキシドジスムターゼにも干渉する。
【００５８】
マンガンは、数多くの酵素の補因子として作用する。また、マンガンは、酸化的ストレスへの対処に加わる酵素の合成に必須の金属であり、フリーラジカルによって起こる損傷を防ぐ。
【００５９】
モリブデンは、特定の酵素、特に、キサンチンオキシダーゼの構成要素として数多くのレベルで関与する。
【００６０】
モリブデンは、骨の成長および歯の構造において役割を果たす。モリブデンは、鉄の代謝において好ましい作用を有する。また、モリブデンは、体の解毒に加わり、尿酸の合成に関与する。
【００６１】
任意選択の追加有効成分を、本発明に従って添加することができる。例えば、補酵素（コエンザイム）Ｑ１０および／または朝鮮人参(Ginseng)抽出物。補酵素Ｑ１０またはユビキノンは、ヒトの体の機能にとって極めて重要なビタミンに似た物質である。補酵素Ｑ１０は、総てのヒト細胞中に自然に存在し、ミトコンドリアでの体のエネルギーの生産を確保する。肉体のエネルギー必要量の約９５％は補酵素Ｑ１０によって変換される。この物質は、任意の他の物質で置き換えることができない。栄養補助食品を介して、補酵素Ｑ１０の摂取を増加させると、運動能力が強化される。最大酸素消費量および活動の継続時間と同様に、脂質代謝は効率がよくなる。補酵素Ｑ１０のレベルの低下は、老化だけでなく、ストレスにも関連している。
【００６２】
朝鮮人参は、アジアで最大の評価を得ている薬用植物である。朝鮮人参は、とりわけ、神経性の心身系の興奮剤であり、肉体の抵抗力を高める。朝鮮人参は、体への基本作用を有する血管運動薬である興奮剤であり、様々なストレスに対するより良好な抵抗を可能にする。
【００６３】
本発明による組成物は、経口経路または任意の他の薬学的投与経路によって投与し得る。
【００６４】
本発明による組成物は、ヒトをはじめとする哺乳類への投与のために処方し得る。これらの組成物は、経口経路、舌下経路、皮下経路、筋肉内経路、静脈内経路、経皮経路、局所経路または直腸経路によって投与可能なように生産される。この場合、有効成分は、動物またはヒトへ、従来の医薬担体と混合された単位投与形態で投与し得る。
【００６５】
栄養補助食品または医薬の場合、以下の投与形が想定され得る：カプセル剤、内服錠、チュアブル錠、発泡錠、トローチ剤、丸薬、散剤、顆粒剤、経口液剤または懸濁剤、ならびに舌下および口内の投与形態、皮下、局所、筋肉内、静脈内、鼻腔内または眼内および直腸の投与形態。好ましい投与形はカプセル剤である。
【００６６】
固体組成物を錠剤形態で調製する場合、有効成分は、医薬ビヒクル、例えば、ゼラチン、デンプン、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、アラビアガム、シリカまたは類似物と混合される。錠剤は、スクロースまたは他の好適な材料でコーティングすることが可能であり、またはその代わりに、それらが延長または遅延された活性を有しかつそれらが所定量の有効成分を連続的に放出するように、それらを処理することができる。
【００６７】
カプセル剤での調製物は、有効成分を希釈剤と混合し（任意の工程）、得られた混合物を軟または硬カプセル中に注ぐことによって得られる。
【００６８】
シロップ剤またはエリキシル剤の形態での調製物は、有効成分を、甘味料、香味剤および好適な着色剤と一緒に含有することができる。
【００６９】
水に分散する散剤または顆粒剤は、香味剤または甘味料とともに懸濁剤と混合された有効成分を含有することができる。
【００７０】
直腸投与では、直腸温度で融解する結合剤、例えば、カカオ脂またはポリエチレングリコールを用いて調製される坐剤が用いられる。
【００７１】
非経口投与（静脈内、筋肉内など）、鼻腔内または眼内投与では、分散剤および／または薬理学上適合性のある湿潤剤を含有する水性懸濁液、等張生理食塩液または無菌の注射用溶液の使用がなされる。
【００７２】
有効成分はまた、潜在的に１種以上の添加剤の補助により、マイクロカプセルの形態に処方することができる。
【００７３】
有利には、本発明による組成物は、経口経路による投与を目的としている。
【００７４】
本発明のもう一つの目的は、医薬として使用するための本発明による組成物である。
【００７５】
本発明のもう一つの目的は、免疫を刺激し、および／または免疫防御を強化し、および／または感染防御応答および／または抗炎症性応答を促進するために、および／または活力の維持において、使用するための本発明による組成物である。
【００７６】
活力の維持に関する使用は、ビタミンＢ２、Ｂ５、Ｂ６、Ｂ１２、Ｃおよび鉄についての強調表示に基づいていることが理解される。これらの強調表示は、これらの栄養素について、欧州食品安全機関(the European Food Safety Authority)（ＥＦＳＡ）によって認可された健康強調表示である。健康強調表示は、炭水化物、脂質またはタンパク質の使用を介したエネルギーの代謝生産を評価する科学的データに基づいている。これはまた、代謝に作用するホルモン、例えば、ステロイドホルモンなどの合成に影響を与える。
【００７７】
この使用は、例えば、以下の参考文献によって裏付けられている：
・EFSA Journal 2009、 7(9): 1215 Scientific opinion on the substantiation of health claims related to iron and formation of red blood cells and haemoglobin (ID 249, ID 1589), function of the immune system (ID 252, ID 259), cognitive function (ID 253) and cell division (ID 368) pursuant to Article 13(1) of regulation (EC) n° 1924/2006.
・Huskisson E., Maggini S., Ruf M., Journal of International Medical Research 2007, 25: 277-289. The role of vitamins and minerals in energy metabolism and well-being.
・Institute of Medicine (1998), National Academy press, Washington, DC (592 pages). Dietary reference intakes for Thiamine, Riboflavin, Niacin, Vitamin B6, Folate, Vitamin B12, Pantothenic acid, Biotin, and Choline.
・医学研究所食品栄養委員会の、食事摂取基準の科学的評価と葉酸塩、他のビタミンＢ群、およびコリンのそのパネルに関する常任委員会、ならびに栄養素の上限基準量に関する分科委員会の報告書。
【００７８】
本発明のもう一つの目的は、呼吸器および／または腸管の感染症の治療および／または予防において使用するための組成物である。
【００７９】
本発明のもう一つの目的は、特に、単純ヘルペスウイルス１型、呼吸器合胞体ウイルスおよびインフルエンザウイルス（Ａおよび／またはＢおよび／またはＣ）による感染ならびにパラインフルエンザによって引き起こされる症状、有利には、インフルエンザ様状態の症状、特に、インフルエンザウイルス（Ａおよび／またはＢおよび／またはＣ）によって引き起こされるものの治療および／または予防において使用するための組成物である。
【００８０】
本発明による組成物は、インフルエンザウイルス（オルトミクソウイルス(Orthomyxovirus)、インフルエンザＡ、ＢまたはＣ）による感染によって引き起こされるインフルエンザ様状態の症状の治療および／または予防に特に好適である。これらの症状としては、寒気、鼻炎、咳、鼻粘膜の炎症（鼻漏、鼻閉塞、くしゃみ発作）、咽喉炎（種々の症状：ヒリヒリ感、嚥下困難）、発熱、頭痛、疼痛、疲労が挙げられる。
【００８１】
これらの「冬の病気」は免疫防御の低下に関連している。
【００８２】
本発明のもう一つの目的は、食物、栄養補助食品または医薬の調製のための組成物の使用である。
【００８３】
本発明のもう一つの目的は、呼吸器および／または腸管の感染症の治療および／または予防を目的とする医薬の調製のための組成物の使用である。
【００８４】
本発明のもう一つの目的は、単純ヘルペスウイルス１型、呼吸器合胞体ウイルスおよびインフルエンザウイルス（Ａおよび／またはＢおよび／またはＣ）による感染ならびにパラインフルエンザの症状、有利には、インフルエンザ様状態の症状、特に、インフルエンザウイルス（Ａおよび／またはＢおよび／またはＣ）によって引き起こされるものの治療および／または予防を目的とする医薬の調製のための組成物の使用である。
【００８５】
本発明のもう一つの目的は、免疫を刺激し、および／または感染防御応答および／または抗炎症性応答を促進し、および／または活力の維持の補助に使用する医薬の調製のための組成物の使用である。
【００８６】
最後に、本発明のもう一つの目的は、免疫防御を強化する方法を提供することであり、この方法は、ニワトコ抽出物と、ラクトバチルス・ラムノーサスの少なくとも１種の菌株との組合せに基づく組成物を経口経路により投与することにある。
【００８７】
本発明による組成物は、総ての年齢層に好適である。特に好適なのは幼児である。「幼児」とは、本発明の意味の範囲内で、６ヶ月から最大３歳までの子供を意味するものと解釈される。本発明による組成物は、「ジュニア」に非常に特に適し、この場合の「ジュニア」とは、本発明の意味の範囲内で、３歳から最大１７歳までの子供を意味するものと解釈される。本発明による組成物はまた、成人に特に好適であり、この場合の「成人」とは、本発明の意味の範囲内で、１８歳から６０歳までの人を意味するものと解釈される。しかし、本発明による組成物はまた、「シニア」に非常に特に好適であり、この場合の「シニア」とは、本発明の意味の範囲内で、少なくとも６０歳の人を意味するものと解釈される。
【００８８】
本発明による組成物の特定の実施形態を構成する、以下の限定されない実施例によって本発明をよりよく理解することができる。
【実施例】
【００８９】
実施例１：本発明の範囲内で使用されるニワトコ抽出物の調製
ニワトコ抽出物は、ニワトコ実のジュースから得、アントシアニンを強化し、マルトデキストリン上で乾燥させた。強化は、以下の方法による膜濾過工程によって実施した：清澄化したニワトコジュース２６リットルを水２８４リットル（ジュース１容量に対して水１１容量）で希釈する。それによって得られた３１０リットルを撹拌し、４５℃に加熱し、その後、ジュース１容量当たり水７容量（すなわち、１８１Ｌ）を添加することによって第１の５ｋＤａ膜で透析濾過する。次いで、透析透過物を、５ｋＤａ膜（単位表面５．８ｍ２の５／１０ｋＤａのパイロット膜）での限外濾過によって濃縮する。限外濾過からの保持液を真空下、５０℃を超えない温度で加熱濃縮し、その後、マルトデキストリン担体上に噴霧して、マルトデキストリンの量が３０％（ｗ／ｗ）以下になるようにする。
【００９０】
それによって得られた抽出物の特性は：
・アントシアニン含有量：抽出物の乾燥物質に対して１０〜１４重量％（Wu et al., J. Agric. Food Chem. 52(26), 7846-7856, 2004によって記載されたＨＰＬＣ法によれば、シアニジン−３−グルコシドとして表される）。
・タンパク質含有量：抽出物の乾燥物質に対して５〜７重量％（ケルダール方法によれば、Ｎ×６．２５）
である。
【００９１】
実施例２：カプセル剤形態の栄養補助食品、この組成物は成人に特に好適である。
・凍結乾燥プロバイオティック菌株、ラクトバチルス・ラムノーサス：３５ｍｇ、すなわち、５．１０８ＣＦＵ、
・実施例１によるニワトコ抽出物（セイヨウニワトコ(Sambucus nigra)）：５０ｍｇ、
・ビタミンＡ：４００μｇ、
・ビタミンＢ１：５５０μｇ、
・ビタミンＢ２：７００μｇ、
・ビタミンＢ５：３ｍｇ、
・ビタミンＢ６：７００μｇ、
・ビタミンＢ８：２５μｇ、
・ビタミンＢ９：１００μｇ、
・ビタミンＢ１２：０．６２５μｇ、
・ビタミンＣ：４０ｍｇ、
・ビタミンＤ：２．５μｇ、
・ビタミンＥ：６ｍｇ、
・鉄：２．５ｍｇ、
・亜鉛：２．５ｍｇ、
・セレン：１５μｇ、
・クロム：１２．５μｇ、
・マンガン：５００μｇ、
・モリブデン：１２．５μｇ。
【００９２】
実施例３：サシェ剤形態の栄養補助食品、この組成物は幼児に特に好適である。
・凍結乾燥プロバイオティック菌株、ラクトバチルス・ラムノーサス：３５ｍｇ、すなわち、５．１０８ＣＦＵ、
・実施例１によるニワトコ抽出物（セイヨウニワトコ）：２５ｍｇ、
・ビタミンＣ：１８ｍｇ、
・ビタミンＢ６：６００μｇ、
・ビタミンＥ：２．４ｍｇ、
・亜鉛：２．５ｍｇ、
・セレン：１５μｇ。
【００９３】
実施例４：末梢血由来単核細胞における、ニワトコ抽出物と組み合わせたラクトバチルス・ラムノーサス菌株の免疫調節効果についてのｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究
材料および方法
末梢血由来単核細胞は、健常被験者から単離し、再懸濁し、２４ウェルプレート中に５×１０５細胞／ウェルの割合で分注する。これらの細胞を、５％ＣＯ２下、３７℃で１８時間インキュベートする。これらの細胞は、いずれかを１０μｇ／ｍｌのリポ多糖類を用いて、いずれかを１００μｇ／ｍｌのニワトコ抽出物の存在下で、つまり、５．１０５ラクトバチルス・ラムノーサスを用いて、または１００μｇ／ｍｌのニワトコ抽出物および５．１０５のラクトバチルス・ラムノーサスの存在下で刺激する。培養上清を回収して、フラックスサイトメトリー(flux cytometry)により種々のサイトカインをアッセイする。それらは４℃で１０分間、１６００ｒｐｍで遠心分離し、アッセイまで−２０℃で保存した。
【００９４】
サイトカインのアッセイは、フラックスサイトメトリー(flux cytometry)の原理に基づいたルミネックス法によって実施した。このルミネックステクノロジーは、識別されるカラーコード（異なる蛍光）が付与される正確な比率によって２つの蛍光色素を組み込んでいるマイクロビーズを担体として用いる９６ウェルマイクロプレートでのＥＬＩＳＡアッセイの原理に基づいている。サイトメーター（バイオプレックス２００）の光学システムは、２つのレーザーで構成される：赤色レーザー（λ＝６３５ｎｍ）は、各マイクロビーズ中で色素の混合物を励起し、これによりマイクロビーズは定義され、その結果、アッセイ対象のサイトカインが識別される。第２の緑色レーザー（λ＝５３２ｎｍ）は、特異的検出抗体と結合しているリポーター蛍光色素を励起し、サイトカインが定量される。システムは、データ収集・解析ソフトウェア（バイオプレックスマネージャー・バージョン４．１）を装備したコンピュータによって管理される。解凍後、上清は、そのままで、また、培養培地でｌ／２０に希釈して、ミリプレックスキット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、参照ＨＣＹＴＯＭＡＧ−６０Ｋ−２９）を使用して試験した。このキットは、以下のサイトカインをアッセイするための特異的ビーズ、検出抗体および標準を含んでなる：ＩＬ−ｉβ、ＩＬ−１ＲＡ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７Ａ、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２２、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＧＭ−ＣＳＦ。
【００９５】
各サイトカインの濃度は、ｐｇ／ｍｌで表し、６名のドナーによって得られた値から平均した。各サイトカインの検出閾値は３．２ｐｇ／ｍｌである。検出閾値を下回るサンプルについては、検出閾値×１／２に相当する任意の値、すなわち、１．６ｐｇ／ｍｌと考えた。統計解析では、ＡＮＯＶＡにより各サイトカインの濃度のｌｏｇ１０を比較した。
【００９６】
結果
サイトカインに関する各刺激条件で得られた濃度を表１および表２にまとめる。サイトカインのレベルで相乗効果が存在するためには、以下が必要である：
・プロバイオティックとニワトコ抽出物とを同時に用いて末梢血由来単核細胞を刺激することにより実験的に得られたサイトカインの濃度が、ニワトコおよびプロバイオティックを個別に用いて観察されるサイトカインの濃度の合計よりも高いこと、
・６名のドナーについての、組合せを用いて得られたサイトカインの濃度中央値が、ニワトコを用いて得られたものおよびプロバイオティックを用いて得られたものの両方と比べて著しく高いこと。
【００９７】
表１は、プロバイオティックラクトバチルス・ラムノーサスと組み合わせたニワトコ抽出物の活性と、ヒト末梢血由来単核細胞によるサイトカイン産生に対する各有効成分の寄与の結果とをまとめたものである。
【００９８】
【表１】
0006660289.tif 000002
【００９９】
ニワトコに応答したＩＬ−ｉβの増加は、試験を受けた６名のドナーのうち２名でのみ観察される。プロバイオティックは、６名中５名のドナーにおいてＩＬ−ｉβの産生を誘発する。
【０１００】
ニワトコとプロバイオティックとの組合せは、ＩＬ−ｉβの産生を増大させるが、統計的有意性には達していない。
【０１０１】
試験した総てのドナーは、ニワトコに応答してＩＬ−ＩＲＡ（ＩＬ−１受容体アンタゴニスト）を産生し、ニワトコの抗炎症活性を示唆している。試験した総てのドナーは、ラクトバチルス・ラムノーサスに応答してＩＬ−ＩＲＡを産生する。６名のドナーについての、ニワトコ・プロバイオティック組合せを用いて得られたＩＬ−ＩＲＡの濃度は、ニワトコおよびプロバイオティックの両方と比べて著しく高い。さらに、ニワトコ・プロバイオティック組合せを用いて得られたＩＬ−ＩＲＡの濃度は、プロバイオティックにより得られたものとニワトコにより得られたものの合計よりも高い。
【０１０２】
従って、ＩＬ−ｌＲＡの産生に関して、２つの有効成分の相乗効果は存在する。
【０１０３】
ニワトコに応答したＩＬ−２の増加は、試験を受けた６名のドナーのうち１名でのみ観察される。６名のドナーのうち３名は、ＩＬ−２の中程度の産生によってプロバイオティックに応答する。２つの有効成分の組合せは、ＩＬ−２の産生に対して全く影響を及ぼさない。
【０１０４】
試験したドナーで、ＩＬ−５の産生を通じてニワトコに応答するドナーは存在しない。同様に、試験したドナーで、ＩＬ−５の産生によってプロバイオティックに応答するドナーも存在しない。２つの有効成分の組合せは、ＩＬ−５の産生に対して全く影響を及ぼさない。
【０１０５】
試験した総てのドナーは、ニワトコに応答してＩＬ−６を産生する。６名のドナーのうち５名は、プロバイオティックに応答し、非応答者はＩＬ−６の基礎率が最大であることに留意されたい。応答者では、プロバイオティックは、ニワトコよりも強力なＩＬ−６誘導物質である。２つの有効成分の組合せは、ＩＬ−６の相乗的産生を引き起こす。
【０１０６】
表２は、プロバイオティックラクトバチルス・ラムノーサスと組み合わせたニワトコ抽出物の活性と、６名のドナーから得られたヒト末梢血由来単核細胞によるＩＬ−６の産生に対する各有効成分の寄与の結果の一例を示している。
【０１０７】
【表２】
0006660289.tif 000003
【０１０８】
試験したドナーで、ＩＬ−９の産生によってニワトコに応答するドナーは存在しない。同様に、試験したドナーで、ＩＬ−９の産生によってプロバイオティックに応答するドナーも存在しない。２つの有効成分の組合せは、ＩＬ−９の産生に対して全く影響を及ぼさない。
【０１０９】
試験を受けた６名のドナーのうち４名は、ニワトコに応答してＩＬ−１０を産生する。試験した総てのドナーは、プロバイオティックに応答してＩＬ−１０を産生する。６名のドナーについての、ニワトコ＋プロバイオティックを用いて得られたＩＬ−１０の濃度は、ニワトコを用いて得られたものとプロバイオティックを用いて得られたものの両方と比べて著しく高い。さらに、ニワトコ・プロバイオティック組合せを用いて得られたＩＬ−１０の濃度は、プロバイオティックにより得られたものとニワトコにより得られたものの合計よりも高く、従って、ＩＬ−１０の産生に関して、２つの有効成分の相乗効果は存在する。
【０１１０】
試験したドナーで、ＩＬ−１２ｐ７０の産生によってニワトコに応答するドナーは存在しない。もう一方で、総てのドナーは、プロバイオティックに応答してＩＬ−１２ｐ７０を産生する。ニワトコとプロバイオティックとの組合せは、ＩＬ−１２ｐ７０の産生を相乗させない。
【０１１１】
試験したドナーで、ＩＬ−１５の産生によってニワトコに応答するドナーは存在しない。同様に、試験したドナーで、ＩＬ−１５の産生によってプロバイオティックに応答するドナーも存在しない。２つの有効成分の組合せは、ＩＬ−１５の産生に対して全く影響を及ぼさない。
【０１１２】
試験したドナーで、ＩＬ−１７Ａの産生によってニワトコに応答するドナーは存在しない。同じことがプロバイオティックに対する応答についても当てはまり、どのドナーにおいてもＩＬ−１７Ａの産生は誘導されない。２つの有効成分の組合せは、ＩＬ−１７Ａの産生に対して全く影響を及ぼさない。
【０１１３】
試験した総てのドナーは、ＣＣＬ２の産生によってニワトコに応答する。６名のドナーのうち５名は、プロバイオティックに応答し、非応答者はＣＣＬ２の基礎率が最大であることに留意されたい。プロバイオティックは、ニワトコよりも強い応答を誘発する。２つの有効成分の組合せは、ニワトコと比べて著しく高いＣＣ１２の高分泌を誘導するが、プロバイオティックと比べた場合はそうではない。
【０１１４】
試験した総てのドナーは、ＣＣＬ３の産生によってニワトコに応答する。６名のドナーのうち５名は、プロバイオティックに応答し、非応答者はＣＣＬ３の基礎率が最大であることに留意されたい。プロバイオティックは、ニワトコより強い応答を誘発する。６名のドナーについての、ニワトコ＋プロバイオティックを用いて得られたＣＣＬ３の濃度は、ニワトコを用いて得られたものとプロバイオティックを用いて得られたものの両方と比べて著しく高い。さらに、ニワトコ・プロバイオティック組合せを用いて得られたＣＣＬ３の濃度は、プロバイオティックにより得られたものとニワトコにより得られたものの合計よりも高く、従って、ＣＣＬ３の産生に関して、２つの有効成分の相乗効果は存在する。
【０１１５】
試験した総てのドナーは、ＣＣＬ４の産生によってニワトコに応答する。試験した総てのドナーは、ＣＣＬ４の基礎率が高い１名のドナーを除いて、プロバイオティックに応答してＣＣＬ４を産生する。プロバイオティックは、ニワトコよりも強い応答を誘発する。６名のドナーについての、ニワトコ＋プロバイオティックを用いて得られたＣＣＬ４の濃度は、ニワトコを用いて得られたものとプロバイオティックを用いて得られたものの両方と比べて著しく高い。さらに、ニワトコ・プロバイオティック組合せを用いて得られたＣＣＬ４の濃度は、プロバイオティックにより得られたものとニワトコにより得られたものの合計よりも高く、従って、ＣＣＬ４の産生に関して、２つの有効成分の相乗効果は存在する。
【０１１６】
試験したドナーで、ＣＣＬ５の産生によってニワトコに応答するドナーは存在しない。６名のドナーのうち１名だけが、プロバイオティックに応答してＣＣＬ５を産生する。ニワトコとプロバイオティックとの組合せは、ＣＣＬ５に対して全く影響を及ぼさない。
【０１１７】
試験を受けた６名のドナーのうち２名だけが、ニワトコに応答してＣＣＬ２２を産生する。試験した総てのドナーは、プロバイオティックに応答してＣＣＬ２２を産生する。２つの有効成分の組合せは、ＣＣＬ２２に対して全く相乗的作用を及ぼさない。
【０１１８】
試験した総てのドナーは、ニワトコに応答してＣＸＣＬ８を産生する。６名のドナーのうち５名は、プロバイオティックに応答し、非応答者はＣＸＣＬ８の基礎率が最大であることに留意されたい。プロバイオティックは、ニワトコよりも強い応答を誘発する。２つの有効成分の組合せは、ＣＸＣＬ８の相乗的産生を引き起こす。
【０１１９】
試験したドナーで、ニワトコに応答してＣＸＣＬ１０を産生するドナーは存在しないが、逆に、ニワトコは、ＣＸＣＬ１０の構成的産生を著しく阻害する。６名のドナーのうち５名は、プロバイオティックに応答する。２つの有効成分の組合せにより、ニワトコが、プロバイオティックによって誘導される産生を著しく阻害することが示される。
【０１２０】
試験した総てのドナーは、ニワトコに応答してＴＮＦαを産生する。試験した総てのドナーは、プロバイオティックに応答してＴＮＦαを産生する。この産生は、ニワトコにより誘発されるものよりも激しい。ニワトコとプロバイオティックとの組合せは、ＴＮＦαの産生に対して全く影響を及ぼさない。
【０１２１】
試験したドナーで、ニワトコに応答してＩＦＮγを産生するドナーは存在せず、その一方で、試験した総てのドナーは、プロバイオティックに応答してＩＦＮγを産生する。ニワトコとプロバイオティックとの組合せは、ＩＦＮγの産生に対して全く影響を及ぼさない。
【０１２２】
試験したドナーで、ニワトコに応答してＧＭ−ＣＳＦを産生するドナーは存在しない。その一方で、６名のドナーのうち５名は、プロバイオティックに応答してＧＭ−ＣＳＦを産生する。６名のドナーについての、ニワトコ＋プロバイオティックを用いて得られたＧＭ−ＣＳＦの濃度は、ニワトコを用いて得られたものとプロバイオティックを用いて得られたものの両方と比べて著しく高い。さらに、ニワトコ・プロバイオティック組合せを用いて得られたＧＭ−ＣＳＦの濃度は、プロバイオティックにより得られたものとニワトコにより得られたものの合計よりも高く、従って、ＧＭ−ＣＳＦの産生に関して、２つの有効成分の相乗効果は存在する。
【０１２３】
ＩＬ−２、ＩＬ−５およびＩＬ−９、すなわち、Ｔ細胞の増殖を刺激するサイトカインの産生の欠如により、前記組合せがＴリンパ球のクローン性増殖を活性化しなかったことが示唆される。
【０１２４】
１型応答に典型的な、ＩＦＮγおよびＩＬ−１２ｐ７０の産生が、ラクトバチルス・ラムノーサスに起因する一方で、２型応答に特有の、ＩＬ−４のわずかな産生はニワトコ抽出物と関連している。応答の型は、ＩＦＮγ／ＩＬ−４比率によって推定される：比率が１００より大きい場合、応答は１型であり、この比率が０．０１〜１００に含まれるときは０型であり、０．０１未満であるならば２型である。この比率が、ラクトバチルス・ラムノーサスでは６００であり、ニワトコ抽出物では３であり、ニワトコ＋ラクトバチルス・ラムノーサス組合せでは１１９であり、従って、これは１型である。このように、プロバイオティックによって誘導される強い１型応答は、ニワトコにより誘発されるＩＬ−の産生により十分に相殺される。
【０１２５】
ニワトコとラクトバチルス・ラムノーサスとの組合せによるＩＬ−ｉβ、ＩＬ−６、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２２、ＣＸＣＬ８、ＴＮＦαおよびＧＭ−ＣＳＦの産生は、炎症部位への細胞の動員および活性化を伴う炎症活性を示唆している。関与するケモカイン（ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２２、ＣＸＣＬ８）を考えると、好ましくは、自然免疫性を有する細胞、顆粒球および単球／マクロファージタイプの誘引だけでなく、デリンホサイト(delymphocytes)の誘引もある。この炎症誘発活性は、ＩＬ−１と同じ膜受容体に結合し、細胞へのそのシグナルの送信を妨げる抗炎症性サイトカインである、ＩＬ−ＩＲＡの産生によって調節される。さらに、活性化リンパ球、ＮＫ細胞だけでなく好酸球も誘引するケモカインであるＣＸＣＬ１０の構成的産生および誘導的産生に対するニワトコの阻害効果は、同じ方向に働く。従って、プロバイオティックの炎症誘発活性は、ニワトコの抗炎症作用によって相殺されるものと思われる。
【０１２６】
結論
試験した条件下で、本発明者らは、ニワトコ抽出物とラクトバチルス・ラムノーサスとの組合せが、ＩＬ−１ＲＡ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＸＣＬ８、ＧＭ−ＣＳＦの誘導に関して相乗作用を示すことを示した。この組合せは、ＩＬ−ｌβ、ＩＬ−１ＲＡ、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２２、ＣＸＣＬ８、ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびＧＭ−ＣＳＦの産生を誘導する。このプロファイルは、ニワトコ＋ラクトバチルス・ラムノーサス組合せが、炎症部位に単球、顆粒球およびリンパ球を動員することによって免疫防御を刺激することを示唆している。１型プロフィールは、その際、特に、単球／マクロファージおよび好中球の活性化を伴うが、リンパ球増殖効果を受けずに、細胞型応答の発展を促す。炎症反応は、ＩＬ−ＩＲＡおよびＩＬ−１０の産生と、特にニワトコに関連する、ＣＸＣＬ１０の産生阻害によって抑制される。