(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミロイドβ種に結合する少なくとも１つのアミノ酸配列を含み、通常遊離のＣ末端に存在するカルボキシル基の負の電荷が、そこに電荷が生じないかまたは正の電荷が生じるように、修飾により除去された、ペプチドであって、
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１もしくはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸配列からなる少なくとも１つのモノマーを含有し、
アミロイドβ種に結合する上記モノマーを少なくとも２つ含むことを特徴とする、ペプチド。
【請求項２】
カルボキシル基の位置の遊離Ｃ末端に、酸アミド基（ＣＯＮＨ２−基）またはＣＯＨ−基、ＣＯＣｌ−基、ＣＯＢｒ−基、ＣＯＮＨ−アルキル残基またはＣＯＮＨ−アルキル−アミン−残基が存在するか、または一方で環化したペプチドが存在することを特徴とする、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
Ｄ−エナンチオマーのアミノ酸からなることを特徴とする、以下に「モノマー」と呼ばれる、請求項１または２に記載のペプチド。
【請求項４】
さらなる物質と連結していることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１つに記載のペプチド。
【請求項５】
２つの上記モノマーからなることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１つに記載のペプチド。
【請求項６】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７のアミノ酸配列を有することを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１つに記載のペプチド。
【請求項７】
医薬における使用のための、請求項１〜６のいずれか１つに記載のペプチド。
【請求項８】
アルツハイマー病の治療のための、請求項１〜７のいずれか１つに記載のペプチド。
【請求項９】
アミロイドβ−ペプチドのフィブリル形成の阻害のための、請求項１〜８のいずれか１つに記載のペプチド。
【請求項１０】
凝集したアミロイドβ−ペプチドへの結合のための、請求項１〜９のいずれか１つに記載のペプチド。
【請求項１１】
通常遊離のＣ末端に存在するカルボキシル基の負の電荷が修飾によって除去されなかった同一のアミノ酸配列を有するペプチドよりも高いアミロイドβ種への結合親和性を有することを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１つに記載のペプチド。
【請求項１２】
アミロイドβ−オリゴマーの形成の阻止および／または解毒化および／または消失において、通常遊離のＣ末端に存在するカルボキシル基の負の電荷が修飾によって除去されなかった同一のアミノ酸配列を有するペプチドよりも高い効果を有することを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか１つに記載のペプチド。
【請求項１３】
環化ペプチドの場合に、ペプチドであってそれから環化ペプチドが誘導できるペプチドよりも、アミロイドβ種への高い結合親和性、および／またはアミロイドβ−オリゴマーの形成の阻止および／または解毒化および／または消失において高い効果を有することを特徴とする、請求項１１または１２に記載のペプチド。
【請求項１４】
ペプチドをペプチド合成または突然変異誘発によって製造することを特徴とする、請求項１〜１３のいずれか１つに記載のペプチドを製造するための方法。
【請求項１５】
請求項１〜１３のいずれか１つに記載のペプチドを含むキット。
【請求項１６】
請求項１〜１３のいずれか１つに記載のペプチドを含む組成物。
【請求項１７】
請求項１〜１３のいずれか１つに記載のペプチドを含む、アミロイドβ−フィブリル、アミロイドβ−プロトフィブリルおよび／またはアミロイドβ−オリゴマーの同定、定量的および／または定性的測定のためのプローブ。
【請求項１８】
アミロイドβ−フィブリル、アミロイドβ−プロトフィブリル、アミロイドβ−オリゴマーおよび／またはアミロイドβ−ペプチド凝集体の形成の阻止のための、請求項１〜１３のいずれか１つに記載のペプチドを含む組成物。
【請求項１９】
毒性のアミロイドβ−フィブリル、アミロイドβ−プロトフィブリル、アミロイドβ−オリゴマーおよび／または凝集体の消失および／または解毒化のための、請求項１〜１３のいずれか１つに記載のペプチドを含む組成物。
【請求項２０】
アミロイドβ−オリゴマーおよび／または凝集体が、請求項１〜１３のいずれか１つに記載のペプチドと、無定形の非毒性凝集体を形成することを特徴とする、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
治療薬としてのおよびアルツハイマー病の予防のための、請求項１〜１３のいずれか１つに記載のペプチドを含む組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミロイド-β-結合性ペプチド、ならびにアルツハイマー型認知症の治療および診断のためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
公開公報ＷＯ２０１３／１５０１２７  Ａ２（特許文献１）から、それ自体が既にアミロイド−β−結合特性を有する相互に結合した複数の物質から成る多価アミロイドβ結合ポリマー物質、ならびにこれらの物質の特に医薬品における使用が知られている。  
【０００３】
ここ数十年での人口増加に基づき、加齢に伴う疾病を患う人の数は高まっている。ここでは、特にいわゆるアルツハイマー病（ＡＤ、アルツハイマー型認知症、ラテン名＝Ｍｏｒｂｕｓ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ）を挙げる。  
【０００４】
これまでにＡＤの原因に働く作用物質又は医薬は存在していない。これまでに使用され、かつ認可されている医薬はアルツハイマー型認知症の際に生じる症状を僅かに緩和する。  しかし、これらは病気の進行を遅らせること又は治癒をもたらすことはできない。動物実験でＡＤの予防では成功したが、しかし（必ずしも）ＡＤの治療では成功を示さなかった幾つかの物質が存在する。神経変性疾患に対する作用物質は、ＤＥ  １０  ２００６  ０１５  １４０  Ａ１（特許文献２）から公知である。
【０００５】
アルツハイマー病の特徴は、アミロイド−β−ペプチド（Ａ−β−ペプチド、Ａβ又はＡβ−ペプチド）の細胞外堆積物である。プラークにおけるこれらのＡ−β−ペプチドの堆積物が、通常、死後ＡＤ−患者の脳内に確認される。従って、種々の形態のＡ−β−ペプチド（例えば、フィブリル）が、疾患の発生と進行の原因になっていると推定されている。更に数年来、小さな自由拡散性Ａ−β−オリゴマーは、ＡＤの発症と進行の主な原因になっているとみなされている。
【０００６】
従来技術から公知の物質は、種々の方法および様式でＡ−β−モノマー及び／又はオリゴマーの濃度を減少させる。従って、例えば、動物実験で予防に使用されたγ−セクレターゼモジュレーターが公知である。  
【０００７】
ＷＯ０２／０８１５０５Ａ２（特許文献３）からは、Ａ−β−ペプチドに結合するＤ−アミノ酸の種々の配列が公知である。Ｄ−アミノ酸からのこれらの配列は、４μＭの解離定数（ＫＤ値）でアミロイド−β−ペプチドに結合する。  
【０００８】
ＷＯ２０１１／１４７７９７Ａ２（特許文献４）からは、Ａ−β−オリゴマー化を阻止するアミノピラゾールとペプチドから成るハイブリッド化合物が公知である。
【０００９】
Ａ−β−ペプチドと相互作用する化合物は、ＤＥ１０２００８０３７５６４Ａ１（特許文献５）、ＤＥ６９６２１６０７Ｔ２（特許文献６）又はＤＥ１０２０１００１９３３６Ａ１（特許文献７）から公知である。２個の結合相手への多価ポリマーの結合が、ＷＯ２００８／１１６２９３Ａ１（特許文献８）に記載されている。
【００１０】
動物実験でポジティブな結果を示した多くの物質では、この作用をヒトにおける臨床実験では証明できなかった。フェーズＩＩとＩＩＩの臨床実験では、明らかにＡＤと診断されたヒトだけが処置されることができる。ここでは、例えばプリオンに類似したメカニズムにより、既に存在するＡ−β−オリゴマーからの更なる形成を阻止するために、Ａ−β−モノマー濃度を僅かに減少させることはもはや十分ではない。しかし、疾患の経過に影響を与えるために、Ａ−β−オリゴマーの増大、あるいはさらに良好にはその破壊又は無害化が絶対に必要である。
【００１１】
これまでに、アルツハイマー型認知症は、認知症症状が認知されたヒトでの試験により主に神経−心理学的試験により診断されている。しかし、Ａ−β−オリゴマー及び更にそれに続くフィブリル及びプラークは、症状が生じる前に患者の脳内で２０年間まで遡って生じており、かつ既に不可逆的な障害を引き起こし得たことが公知である。ただし、これまでにＡＤを症状の発症前に診断する手段はなおも存在しない。
【００１２】
従って、極めて特異的かつ高い親和性でＡ−β−オリゴマーに結合し、そうしてそれらの増大を阻止する新規化合物（作用物質）の必要性がなおも存在する。これらの化合物は、不所望な副作用を有する効果を示すべきではなく、特に免疫反応を惹起しないべきである。該化合物は、更に毒性Ａ−β−オリゴマー、ひいては小さな自由拡散性オリゴマーを低濃度でさえも認識し、完全に根絶する及び／又はそれらの（プリオンに類似した）増大を阻止すべきである。  
【００１３】
更に、特にこれらのオリゴマーがまだ低濃度で生じる場合に、Ａ−β−オリゴマーの検出とマーキング用のプローブとして使用可能な新規化合物もまた必要とされている。  
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】ＷＯ２０１３／１５０１２７  Ａ２
【特許文献２】ＤＥ  １０  ２００６  ０１５  １４０  Ａ１
【特許文献３】ＷＯ０２／０８１５０５Ａ２
【特許文献４】ＷＯ２０１１／１４７７９７Ａ２
【特許文献５】ＤＥ１０２００８０３７５６４Ａ１
【特許文献６】ＤＥ６９６２１６０７Ｔ２
【特許文献７】ＤＥ１０２０１００１９３３６Ａ１
【特許文献８】ＷＯ２００８／１１６２９３Ａ１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
従って、本発明の課題は、以下のための化合物を案出することである：
Ａ）これらの化合物によるアルツハイマー病の原因療法は、毒性のアミロイド−β−オリゴマー、フィブリルもしくは凝集体の形成を阻止し、あるいは、既に生じているオリゴマー、フィブリルもしくは凝集体を消失させまたはそれらの解毒化をもたらす。
Ｂ）アルツハイマー型認知症の診断を可能にし、その際、これらの化合物をｉｎ  ｖｉｖｏイメージングのためのプローブとして使用できる。  
【００１６】
これとともに、さらなる課題、例えば医薬における前記化合物の使用も含まれる。
【００１７】
本発明の課題はさらに、新規ペプチド、好ましくはＤ−エナンチオマーのＤ−ペプチドＤ３の誘導体であって、Ｄ３と比較してより有効な特性を有する誘導体、を提供することである。上記特性には、特に、Ａβ種に対するより高い結合親和性および結合特異性、Ａβフィブリル形成の阻害、Ａβ毒性の阻害、Ａβオリゴマー、フィブリルおよび他の凝集体の消失または解毒化、Ａβアミロイド−フィブリル、−プロトフィブリルもしくは−オリゴマーの非毒性、非アミロイド形成性種への変換が含まれる。
【００１８】
以下、「Ａ−ベータ」、「アミロイド−ベータ」、「アミロイド−β」または「Ａβ」という語句は互いに同義に使用される。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
上記課題は、主請求項に従うペプチド、キットおよび組成物、ならびに従属請求項に従う方法および使用によって解決される。そのための有利な態様は、それぞれここで参照する特許請求の範囲から明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】物体認識試験を示す。
【図２】ロータロッドを示す。
【図３】ＳＨＩＲＰＡを示す。
【図４】モーリス水迷路を示す。
【図５】物体認識を示す。
【図６】アミロイドβ−モノマーに関するＫＤ値（カイネティック）を示す。
【図７】アミロイドβ−オリゴマーに関するＫＤ値（カイネティック）を示す。
【図８】アミロイドβ−フィブリルに関するＫＤ値（カイネティック）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明のペプチドは、アミロイド−β種に結合する少なくとも１つのアミノ酸配列を含むペプチドであり、この性質は、維持されるかまたは増大されており、そしてその際、遊離のＣ末端、すなわちＣ末端カルボキシル基が当該Ｃ末端が負の電荷を有しないように修飾されているが、その代わりに中性であるか、または１つまたは複数の正の電荷を有する。
【００２２】
本発明のペプチドは、少なくとも１種のアミロイドβ種結合性ペプチドにも該当し、ここで、当該ペプチドは、直鎖状のアミノ酸配列を有し、この配列によりＡβへ結合することが可能であり、そして上記ペプチドはその２つの末端の共有結合により環化された形態で存在するため、この特性は維持されるかもしくは増大される。
【００２３】
本発明のペプチドにより、特に有利には、さらに、Ｃ末端に負の電荷のないペプチドを提供するという課題が解決される。これにより、有利には、これが遊離Ｃ末端にカルボキシル基を有するペプチドより高い親和性で標的分子に結合できるという結果が生じる。遊離の修飾されていないカルボキシル基を有するペプチドは、生理的条件において、この末端に負の電荷を有する。  
【００２４】
本発明の１つの態様において、本発明のペプチドは、生理的条件において、特にｐＨ６−８、特に６．５−７．５において、特にｐＨ６．０、ｐＨ６．１、ｐＨ６．２、ｐＨ６．３、ｐＨ６．４、ｐＨ６．５ｐＨ６．６、ｐＨ６．７、ｐＨ６．８、ｐＨ６．９、ｐＨ７．０、ｐＨ７．１、ｐＨ７．２、ｐＨ７．３、ｐＨ７．４、ｐＨ７．５、ｐＨ７．６、ｐＨ７．７．ｐＨ７．８、ｐＨ７．９またはｐＨ８．０において、Ｃ末端が負の電荷を有さないが、その代わりに中性であるか、または１つまたは複数の正の電荷を有するように、修飾されている。
【００２５】
本発明の１つの態様において、上記ペプチドは、カルボキシル基の位置の遊離Ｃ末端に、酸アミド基が存在する。従って、カルボキシル基（−ＣＯＯＨ基）の代わりに、酸アミド基（−ＣＯＮＨ２基）がＣ末端に配置される。
【００２６】
従って、上記ペプチドは特に有利には遊離のＣ末端においてアミド化されている。これにより、特に有利には、さらなる課題が解決され、その結果、ペプチドが過剰な負の電荷を持たずに存在し、それは標的分子により密接に結合することができ、簡単な方法で入手できる。
本発明のさらなる実施態様において、以下のさらなる基がカルボキシル基の部位に存在する：ＣＯＨ、ＣＯＣｌ、ＣＯＢｒ、ＣＯＮＨ−アルキル残基、ＣＯＮＨ−アルキル−アミン残基（正の正味電荷）等（ただし、主請求項の技術的主題に従う限り、これらに限定はされない）。
【００２７】
これらの課題は、特に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１（ＲＤ２）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２（Ｄ３）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３（ＤＢ３）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９（Ｄ３ｒ）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０（Ｄ３ｐ）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１（Ｄ３ａ）および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２（Ｄ３ｐ２ｋ）のアミノ酸配列および／またはそれらのホモログ、断片および部分を含有するペプチドにより解決される。これらのペプチドは、アミロイドβ種に結合する物質単位（以下、しばしば「モノマー」と呼ぶ）である。
【００２８】
本発明の変法において、最大で５００μＭ、好ましくは２５０、１００、５０μＭ、特に好ましくは２５、１０、６μＭ、特に４、２、１μＭまたはμＭ未満の解離定数（ＫＤ値）で、Ａ−β−モノマーおよび／またはＡ−β−オリゴマーおよび／またはＡ−β−ペプチドのフィブリルに結合するようなモノマーが使用される。  
【００２９】
この課題はまた、特に、２つまたはそれ以上の上記モノマーまたは本発明のペプチドからなるポリマー、特にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４（ＲＤ２Ｄ３）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５（Ｄ３ＲＤ２）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６（Ｄ３Ｄ３）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７（ＲＤ２ＲＤ２）および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８（ＤＢ３ＤＢ３）および／またはそれらのホモログのダイマー、により解決される。上記ダイマーは、それぞれアミロイドβ種に結合する２つのモノマー単位に基づく。
【００３０】
Ａβオリゴマーにそこで結合するモノマーから本発明に従って合成されたポリマーは、Ａβオリゴマーへのそれらの選択性および親和性に関して、モノマーと比較して、明確な相乗効果を示す。すなわち：本発明のポリマー、特にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８の群から選択されるダイマーは、これらのベースとなるモノマーよりも優れている。本発明の意味における相乗効果は、関連のＡβ種に関して、個々のモノマー単位と比較して、より高い選択性および／または親和性（特にＡβ種への結合に関するＫＤ値の）を示す効果である。
【００３１】
本発明のさらなる特に有利な態様において、上記ポリマーおよび特にダイマーは、動物モデル試験（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ）において、有利には、モノマーよりも有効である。
【００３２】
本発明の１つの変形において、Ａβモノマーおよび／またはＡβオリゴマーおよび／またはＡβペプチドのフィブリルに、最大で５００μＭ、好ましくは２５０、１００、５０μＭ、特に好ましくは２５、１０、１μＭの解離定数（ＫＤ値）で、特に好ましくは５００ｎＭ、２５０、１００、５０、特に好ましくは２５、１０、１ｎＭ、５００ｐＭ、１００、５０、２５、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１ｐＭ〜ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ値）で、結合するようなポリマーが使用される（それぞれの中間値が採用され得る）。
【００３３】
本発明の１つの態様において、親和性は、解離定数（ＫＤ値）によって定義される。
【００３４】
その際、本発明のペプチドの解離定数（ＫＤ値）は、本発明の１つの有利な態様において、遊離のＣ末端が、すなわちＣ末端のカルボキシル基が負の電荷を有する直鎖状の結合性ペプチドと比較して、有利には低下する。その結果、結合のより高い親和性、ならびに毒性アミロイドβ種の分解および／または阻止のより高い効果のような、本発明のペプチドの改善された特性が伴う。これは特にＡβ（モノマー、オリゴマーおよびフィブリル）の高親和性部位でのより低いＫＤ値に関するが、それに限定されるものではない。
【００３５】
断片および部分は、有利には、同様に各々、本発明のペプチドと同一の作用を示す。
【００３６】
本発明の変形では、本発明のペプチド、特にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のペプチドならびにそれらのホモログ、それらの断片または部分は、本質的に、好ましくは少なくとも５０％、６０％、７５％、８０％、特に好ましくは８５％、９０％、９５％、特に９６％、９７％、９８％、９９％、１００％がＤ−エナンチオマーアミノ酸からなる。
【００３７】
ポリマーは、本発明の意味において、アミロイドβ種、特にオリゴマーに結合する、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれ以上のモノマーから形成される。
【００３８】
上記ポリマーは、特に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２からなる群から選択されるモノマーから形成される。
【００３９】
上記ポリマーは、本発明の１つの態様において、それらに関して既にアミロイドβ種に結合する、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８ならびにそれらのホモログの群から選択することができる。
【００４０】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜１２のペプチドは、本発明の１つの態様において、Ｄ−エナンチオマーのアミノ酸から構成される。
【００４１】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜１２のペプチドは、本発明の１つの態様において、遊離のＣ−末端に酸性アミド基を備える。モノマー、例えばＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜３のＤ３、ＤＢ３もしくはＲＤ２、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９〜１２のＤ３ｒ、Ｄｒｐ、Ｄ３ａもしくはＤ３（ｐ２ｋ）は、その場合、１２番目の遊離Ｃ末端でアミド化されている。例えばＲＤ２Ｄ３、Ｄ３ＲＤ２、Ｄ３Ｄ３、ＲＤ２ＲＤ２またはＤＢ３ＤＢ３のようなポリマーは、２４番目のＣ末端でアミド化されている。
【００４２】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜１２のペプチドは、本発明のさらなる態様において、遊離のＣ末端で遊離のＮ末端と相互に共有結合しており、その場合適切には環化されて存在している。また環で閉じられていることにより、有利には、カルボキシル基が遊離Ｃ末端にもはや存在しないということがもたらされる。
【００４３】
本発明のペプチドは、有利には、例えば、最初のアミノ酸と最後のアミノ酸との共有結合、例えば縮合反応による共有結合により、そこで直鎖状分子の環化が起こるアミノ酸配列を有する。もちろん、環化の別の手段、例えば別のアミノ酸を一緒に連結させることによる手段も存在する。単なる例示としては、２番目のアミノ酸と最後のアミノ酸との連結が挙げられる。いずれの可能な他の連結も同様に考慮され得る。
【００４４】
ペプチドの最初と最後のアミノ酸が互いに連結される場合、有利には、ペプチド鎖（アミノ酸配列）に開放端が存在しなくなる。
【００４５】
この処置によりさらに、直鎖状のアミノ酸配列を有する全てのペプチドが、環化後に同じもはや区別できないアミノ酸順序を生じ、この意味において同一となる。
【００４６】
例：公知のペプチドＤ３のアミノ酸配列は、ｒｐｒｔｒｌｈｔｈｒｎｒである。適切なＮ末端アミノ基とＣ末端カルボキシル基の間のアミド結合により連結した環化ペプチド「ｃＤ３」は、環化ペプチドｐｒｔｒｌｈｔｈｒｎｒｒ、ｒｔｒｌｈｔｈｒｎｒｒｐ、ｔｒｌｈｔｈｒｎｒｒｐｒ、ｒｌｈｔｈｒｎｒｒｐｒｔ、ｌｈｔｈｒｎｒｒｐｒｔｒ、ｈｔｈｒｎｒｒｐｒｔｒｌ、ｔｈｒｎｒｒｐｒｔｒｌｈ、ｈｒｎｒｒｐｒｔｒｌｈｔ、ｒｎｒｒｐｒｔｒｌｈｔｈ、ｎｒｒｐｒｔｒｌｈｔｈｒまたはｒｒｐｒｔｒｌｈｔｈｒｎからもはや区別されない。ｃＤ３はさらに、これらの配列それぞれに由来することもできる。
【００４７】
より高い親和性および効率という本発明により求められる効果はさらに、直鎖状の結合性ペプチド、好ましくはいずれの直鎖状の結合性ペプチドに対してさえも生じ、当該ペプチドに、環化されたまたはその他の修飾がされた本発明のペプチドは由来することができる。
【００４８】
環化ペプチドの製造は、通常の従来技術であり、例えばＤＥ１０２００５０４９５３７Ａ１に記載されるような方法に従って行うことができる。
【００４９】
有利には、ペプチドの最初および最後のアミノ酸による環化により、細胞、動物またはヒトにおいて多くの場合に、例えばアミノペプチダーゼおよびカルボキシペプチダーゼによる、ペプチド分解活性に関する弱点である、ペプチド鎖の「開いている」末端がもはや存在しなくなる。 
【００５０】
本発明の環化モノマー、例えば、ｃＤ３、ｃＲＤ２等、または環化ポリマー、例えばｃＲＤ２Ｄ３、ｃＤ３Ｄ３、ｃＤＢ３ＤＢ３等により、さらに有利には、これらの本発明の環化ペプチドが、副次的作用として、場合によりまた、容易には分解されなくなる（この効果は決定的ではないが）。それはその他の点において、上記のように、適切に直鎖状ペプチドの２つの末端が相互に連結される、ヘッドｔｏテイルでの環化またはテイルｔｏヘッドでの環化の場合にのみまた有利である。
【００５１】
本発明のさらなる態様において、上記ポリマーは、同一のモノマー、例えばＤ３、ＲＤ２またはＤＢ３から構成されるか、または２、３、４、５、６、７、８、９、１０個の種々の異なる上記モノマーの組み合わせから、いわゆるコンビネーション−ポリマー（Ｋｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ−Ｐｏｌｙｍｅｒｅ）として構成される。該モノマーは、部分的に同一であることもできる。コンビネーションポリマーにおける同一モノマーの数は、自由に選択可能である。
【００５２】
ポリマーは、例えば、化学合成またはペプチド合成により製造することができる。
【００５３】
本発明の１つの実施態様において、上記モノマーは互いに共有結合で連結されている。さらなる実施態様において、上記モノマーは、互いに共有結合で結合されていない。
【００５４】
モノマー単位の共有結合での結合または連結は、本発明の意味において、ペプチドがヘッドｔｏヘッド、テイルｔｏテイル又はヘッドｔｏヘッドで、その間に挿入されたリンカーもしくはリンカー基を用いてまたは用いずに、直鎖状に相互に連結される場合に存在する。
【００５５】
上記モノマーが、例えばビオチンとストレプトアビジン、特にストレプトアビジン−テトラマー、を介して互いに連結している場合、本発明の意味において、共有結合によらない連結が存在する。
【００５６】
本発明の１つの変形において、上記モノマーは、特に上記のように、直線状に互いに連結することができる。別の変形において、上記モノマーは、互いに分岐状に連結して本発明のポリマーとなる。 
【００５７】
分岐状ポリマーは本発明においてデンドリマーであることができ、そこではモノマーは、共有結合により、または共有結合によらずに、互いに連結されている。
【００５８】
あるいは、上記モノマーをプラットフォーム分子（例えばＰＥＧまたは糖）を用いて連結することもでき、それにより分岐状ポリマーが形成する。 
【００５９】
あるいはこれらの選択肢の組み合わせも可能である。 
【００６０】
以下に本発明のペプチドとしてのモノマーおよびポリマーを示す。
【００６１】
本発明の変形において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸配列および／または５０％の同一性を有するそれらのホモログを有するペプチドである。
【００６２】
本発明の意味において、「ホモログ配列」または「ホモログ」は、あるアミノ酸配列が、モノマーの上記アミノ酸配列の１つと、少なくとも５０、５５、６０、６５、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％の同一性を有することを意味する。語句「同一性」の代わりに、本明細書では、「相同の」または「相同性」が同義で使用される。２つの核酸配列またはポリペプチド配列の間の同一性は、Ｓｍｉｔｈ，Ｔ．Ｆ．ｕｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ｍ．Ｓ（Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９（１９８１））のアルゴリズムをベースとするＢＥＳＴＦＩＴプログラムを使用する比較により、アミノ酸に関しては、以下のパラメーター：ギャップ作成ペナルティー：８およびギャップ伸長ペナルティー：２；そして核酸に関しては以下のパラメーターを用いて算出する：ギャップ作成ペナルティー：５０およびギャップ伸長ペナルティー：３。好ましくは、２つの核酸配列またはポリペプチド配列の間の同一性は、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．ｕｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｃ．Ｄ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：  ４４３−４５３）のアルゴリズムをベースとするＧＡＰプログラムを用いての比較のように、それぞれの全体の配列長に関する核酸配列／ポリペプチド配列の同一性によって定義され、アミノ酸に関しては、以下のパラメーター：ギャップ作成ペナルティー：８およびギャップ伸長ペナルティー：２；そして核酸に関しては以下のパラメーターを用いて算出する：ギャップ作成ペナルティー：５０およびギャップ伸長ペナルティー：３。
【００６３】
本発明の意味において、２つのアミノ酸配列は、これらが同一のアミノ酸配列を有する場合に同一である。
【００６４】
ホモログとは、変法において、上述のモノマーの相応するレトロインバース（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｅ）配列と理解されるべきである。「レトロインバース配列」という語句は、本発明では、エナンチオマーの形態のアミノ酸から構成され（ｉｎｖｅｒｓｅ：α−Ｃ原子のキラリティーが逆転している）、さらに元のアミノ酸配列に対する配列順序が反転した（ｒｅｔｒｏ＝逆向き）アミノ酸配列を表す。
【００６５】
更なる変法において、本発明のペプチドは、アミロイドβ−ペプチドの一部に結合する。   
【００６６】
更なる変法において、本発明のペプチドは、上記の配列とは、３個までのアミノ酸が異なる配列を有する。
【００６７】
さらに、ペプチドとして、上述の配列を含む配列も使用される。
【００６８】
更なる変法において、ペプチドは、上述の配列の断片を有するか、又は上述の配列に対するホモログ配列を有する。 
【００６９】
本発明によれば、医薬において使用するための、好ましくはアルツハイマー病の治療のためのペプチドである。
【００７０】
本発明の１つの実施態様において、上記ペプチドは本質的にＤ−アミノ酸からなる。
【００７１】
本発明の意味において、「本質的にＤ−エナンチオマーのアミノ酸から」という語句は、本発明において使用されるモノマーが、少なくとも５０％、６０％、好ましくは７５％、８０％、特に好ましくは８５％、９０％、９５％、特に９６％、９７％、９８％、９９％、１００％が、Ｄ−エナンチオマーのアミノ酸から構成されることを意味する。
【００７２】
本発明の１つの実施態様において、本発明のモノマーペプチドは、Ｄ−エナンチオマーのＤペプチドＤ３の誘導体である。本発明の意味における誘導体は、Ｄ３から誘導されたペプチド配列であり、これは以下の３つの方法により得られる：
ａ）Ｄ３におけるアミノ酸構成要素の順序および／または数の変更。ここでは、Ｄ３配列に存在しているアミノ酸だけが使用される。
ｂ）Ｄ３配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１個のアミノ酸の欠失。
ｃ）１、２、３、４、５または６個のアミノ酸の、他のアミノ酸、好ましくはＤ−エナンチオマーとの交換。
【００７３】
更なる変法において、本発明のペプチドは、アミロイドβ−オリゴマーのフィブリル形成の阻害のためのものである。本発明のペプチドは、Ａβ−オリゴマー又はそこから形成されるポリマー並びにフィブリルを、それらに結合し、そうして毒性でない化合物に変換することで、解毒化する。相応して、本発明の対象はまた、Ａβ−オリゴマー、そこから形成されるポリマー又はフィブリルの解毒化のための方法である。
【００７４】
１つの実施態様において、本発明の対象はまた、更なる物質と連結している本発明のペプチドである。
【００７５】
連結とは、本発明の意味において、化学結合、例えばＲｏｅｍｐｐ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｌｅｘｉｋｏｎ，第９版，第１巻，６５０頁〜，Ｇｅｏｒｇ  Ｔｈｉｅｍｅ  Ｖｅｒｌａｇ  Ｓｔｕｔｔｇａｒｔに定義されている化学結合であり、好ましくは主原子価結合、特に共有結合である。
【００７６】
１つの変法において、上記物質は、薬事法（§２又は§４（１９）、２０１２年９月より）に定義されている医薬品又は作用物質である。代替的に、作用物質は、薬学的に作用物質として使用される、治療的に活性な物質である。好ましくは、炎症抑制剤が使用される。
【００７７】
さらなる１つの変法において、上記物質は、ペプチドの作用を強化する化合物である。
【００７８】
代替において、そのような化合物は、アミノピラゾール及び／又はアミノピラゾール誘導体である。アミノピラゾール誘導体は、本発明の意味において、３−アミノピラゾール−５−カルボン酸又は３−ニトロピラゾール−５−カルボン酸並びに、複素環のＣＨ−基が−ＣＲ−又は−Ｎ−又は−Ｏ−又はＳ−により交換された全ての誘導体、並びにそれらから誘導される全てのペプチド性のダイマー、トライマー又はテトラマー、好ましくはアミノピラゾール−トライマーである。
【００７９】
更に代替的に、ペプチドの溶解性及び／又は脳血液関門の通過を改善する化合物である。
【００８０】
更に代替的に、ペプチドは、本発明によれば、上述の変法、実施態様及び／又は代替物の少なくとも２以上の特徴のいずれの任意の組み合わせも有する。
【００８１】
発明の枠内においてさらに、本発明の修飾ペプチドが、遊離のＣ末端、すなわちＣ末端のカルボキシル基が修飾されておらず、従って負の電荷を有する直鎖状の結合性ペプチドと比較して、より高い親和性でＡβ種に結合し、しかも特また、特に毒性のアミロイドβ−オリゴマーに結合することが認められた。すなわち、遊離のＣ末端、すなわちＣ末端カルボキシル基が修飾されておらず、従って負の電荷を有する直鎖状ペプチドにおけるよりも、本発明のペプチドにおけるＫＤ値は低い。
【００８２】
従って、本発明のさらなる好ましい態様において、Ｃ末端に負の電荷を持たない本発明の修飾されたペプチドの結合の親和性は、Ｃ末端に負の電荷を有するがその他の点は同一のアミノ酸配列を有する直鎖状ペプチドと比較して、約１％、２、３、４、５、６、７、８、９、特に１０％、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、特に１００％、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、特に２００％、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、特に３００％、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、特に４００％、４０１、４０２、４０３、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、４０９、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、４２５、４２６、４２７、４２８、４２９、４３０、４３１、４３２、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７７、４７８、４７９、４８０、４８１、４８２、４８３、４８４、４８５、４８６、４８７、４８８、４８９、４９０、４９１、４９２、４９３、４９４、４９５、４９６、４９７、４９８、４９９、有利にはそれどころか５００％、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、５１１、５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、５２４、５２５、５２６、５２７、５２８、５２９、５３０、５３１、５３２、５３３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８、５３９、５４０、５４１、５４２、５４３、５４４、５４５、５４６、５４７、５４８、５４９、５５０、５５１、５５２、５５３、５５４、５５５、５５６、５５７、５５８、５５９、５６０、５６１、５６２、５６３、５６４、５６５、５６６、５６７、５６８、５６９、５７０、５７１、５７２、５７３、５７４、５７５、５７６、５７７、５７８、５７９、５８０、５８１、５８２、５８３、５８４、５８５、５８６、５８７、５８８、５８９、５９０、５９１、５９２、５９３、５９４、５９５、５９６、５９７、５９８、５９９、特に有利には６００％、６０１、６０２、６０３、６０４、６０５、６０６、６０７、６０８、６０９、６１０、６１１、６１２、６１３、６１４、６１５、６１６、６１７、６１８、６１９、６２０、６２１、６２２、６２３、６２４、６２５、６２６、６２７、６２８、６２９、６３０、６３１、６３２、６３３、６３４、６３５、６３６、６３７、６３８、６３９、６４０、６４１、６４２、６４３、６４４、６４５、６４６、６４７、６４８、６４９、６５０、６５１、６５２、６５３、６５４、６５５、６５６、６５７、６５８、６５９、６６０、６６１、６６２、６６３、６６４、６６５、６６６、６６７、６６８、６６９、６７０、６７１、６７２、６７３、６７４、６７５、６７６、６７７、６７８、６７９、６８０、６８１、６８２、６８３、６８４、６８５、６８６、６８７、６８８、６８９、６９０、６９１、６９２、６９３、６９４、６９５、６９６、６９７、６９８、６９９、特に有利には７００％、７０１、７０２、７０３、７０４、７０５、７０６、７０７、７０８、７０９、７１０、７１１、７１２、７１３、７１４、７１５、７１６、７１７、７１８、７１９、７２０、７２１、７２２、７２３、７２４、７２５、７２６、７２７、７２８、７２９、７３０、７３１、７３２、７３３、７３４、７３５、７３６、７３７、７３８、７３９、７４０、７４１、７４２、７４３、７４４、７４５、７４６、７４７、７４８、７４９、７５０、７５１、７５２、７５３、７５４、７５５、７５６、７５７、７５８、７５９、７６０、７６１、７６２、７６３、７６４、７６５、７６６、７６７、７６８、７６９、７７０、７７１、７７２、７７３、７７４、７７５、７７６、７７７、７７８、７７９、７８０、７８１、７８２、７８３、７８４、７８５、７８６、７８７、７８８、７８９、７９０、７９１、７９２、７９３、７９４、７９５、７９６、７９７、７９８、７９９、同様に特に有利には８００％、８０１、８０２、８０３、８０４、８０５、８０６、８０７、８０８、８０９、８１０、８１１、８１２、８１３、８１４、８１５、８１６、８１７、８１８、８１９、８２０、８２１、８２２、８２３、８２４、８２５、８２６、８２７、８２８、８２９、８３０、８３１、８３２、８３３、８３４、８３５、８３６、８３７、８３８、８３９、８４０、８４１、８４２、８４３、８４４、８４５、８４６、８４７、８４８、８４９、８５０、８５１、８５２、８５３、８５４、８５５、８５６、８５７、８５８、８５９、８６０、８６１、８６２、８６３、８６４、８６５、８６６、８６７、８６８、８６９、８７０、８７１、８７２、８７３、８７４、８７５、８７６、８７７、８７８、８７９、８８０、８８１、８８２、８８３、８８４、８８５、８８６、８８７、８８８、８８９、８９０、８９１、８９２、８９３、８９４、８９５、８９６、８９７、８９８、８９９、同様に特に有利には９００％、９０１、９０２、９０３、９０４、９０５、９０６、９０７、９０８、９０９、９１０、９１１、９１２、９１３、９１４、９１５、９１６、９１７、９１８、９１９、９２０、９２１、９２２、９２３、９２４、９２５、９２６、９２７、９２８、９２９、９３０、９３１、９３２、９３３、９３４、９３５、９３６、９３７、９３８、９３９、９４０、９４１、９４２、９４３、９４４、９４５、９４６、９４７、９４８、９４９、９５０、９５１、９５２、９５３、９５４、９５５、９５６、９５７、９５８、９５９、９６０、９６１、９６２、９６３、９６４、９６５、９６６、９６７、９６８、９６９、９７０、９７１、９７２、９７３、９７４、９７５、９７６、９７７、９７８、９７９、９８０、９８１、９８２、９８３、９８４、９８５、９８６、９８７、９８８、９８９、９９０、９９１、９９２、９９３、９９４、９９５、９９６、９９７、９９８、９９９、またはそれどころか約１０００％、またはそれどころか１００００％、またはそれどころか最大で１０００００％もしくは１００００００％高められており、ここでそれぞれの中間値を取ることもできる。これは特に、Ａβ（モノマー、オリゴマー、フィブリルなど）の高親和性部位への高められた親和性に関するが、それに限定されるものではない。
【００８３】
これは、相応に低下したＫＤ値によって表される。アミロイドβ種への、特にアミロイドβ−オリゴマーへの本発明の修飾ペプチドの結合の親和性に関する尺度としてのＫＤ値は、遊離Ｃ末端に負の電荷を有する直鎖状の結合性ペプチドと比較して、約１％、２、３、４、５、６、７、８、９、特に１０％、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、特に９９．１、９９．２、９９．３、９９．４、９９．５％、９９．６、９９．７、９９．８、９９．９、最大９９．９９またはそれどころか９９．９９９％低下しており、ここでそれぞれの中間値を取ることもできる。
【００８４】
これらの低下したＫＤ値は、有利には特にＡβ種（モノマー、オリゴマー、フィブリルなど）の高親和性部位に関するが、これらに限定されるわけではない。
【００８５】
従って、本発明の修飾ペプチドは、診断の目的のためのプローブとして、遊離Ｃ末端に負の電荷を有する直鎖状の結合性ペプチドより効果的に使用することができ、特にまた同一のアミノ酸配列を有するそれらの直鎖状ペプチド対応物より有効に使用することができる。
【００８６】
それらはまた、特に、治療剤としても、遊離Ｃ末端に負の電荷を有する直鎖状の結合性ペプチドよりも、特に同一のアミノ酸配列を有するそれらの直鎖状ペプチド対応物よりも効果的に使用することができる。
【００８７】
本発明の修飾ペプチドとＣ末端に負の電荷を有するペプチドとの直接的な比較において、本発明のペプチドは親和性および効果に関してより良好である。
【００８８】
すなわち発明の枠内においてさらに、本発明の修飾ペプチドが、遊離Ｃ末端に負の電荷を有するペプチドと比較して、そして特に同一のアミノ酸配列を有するそれらのペプチド対応物と比較して、さらにまたより高い効果および効率で、特に毒性のアミロイドβ−オリゴマーの形成を阻止し、またはその破壊および／または解毒化をもたらすことが認められた。この効果は特に、約１％、２、３、４、５、６、７、８、９、特に１０％、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、特に有利にはそれどころか約１００％高められる。
【００８９】
これに関して、試験のために、最も簡単な場合で、種々のＡβコンフォーマーを有する試料を、例えば分画化する。各々のフランクションにおいて、分画化ステップに応じて、異なるコンフォーマー、例えばモノマー、オリゴマー、フィブリルまたはより高度な凝集体を富化させ、その後正確に測定することができる。
【００９０】
「正確に測定」という語句は、公知の性質および挙動の分子による、分画化の際の較正ステップを含む。分画化後に、各フラクションには、特定の種類のＡβのコンフォーマー、例えば、モノマー、オリゴマーまたはフィブリル等のみが存在する。
【００９１】
例えば、上記コンフォーマーは、分画化ステップとしての密度勾配遠心の際に、ｓ値または沈降係数に従って分離される。異なる大きさの分子は同一の流体力学的半径を有し得るが、しかしながらそれにもかかわらず異なるｓ値を有し、それに従って分離することもできる。既知のｓ値の分子を用いる較正により、密度勾配遠心を用いて得られたＡβコンフォーマーをそれらのｓ値に従って正確に測定する。
【００９２】
さらに、得られたフラクションを、作用物質でもしくは作用物質なしで処理し、例えばＲＰ−ＨＰＬＣにより測定する。この方法において、作用物質の効果を測定できる。
【００９３】
さらなる方法を以下に示す。作用物質の定量的分析のために、いわゆるＱＩＡＤ試験を使用できる（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｗｉｔｈ  Ａβ  ａｇｇｒｅｇａｔｅ  ｓｉｚｅ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ（Ａβ凝集体の粒度分布に対する干渉の定量的測定））。作用物質の影響の定量的分析のための上記方法は、試料におけるアミロイド化ペプチドおよび／またはタンパク質の粒度分布に関して以下のステップを有する。最初にＡβを制御された条件下で凝集化させ、その結果、それぞれ異なるＡβ凝集体が生じる。上記条件は、特に多くの小さい、特に細胞毒性のＡβ−オリゴマーが形成されたように選択される。次として、試験すべき物質、例えば、本発明の修飾ペプチドの１種を、試料に添加する。作用物質は試料における粒度分布を変化させる。この変化を定量的に決定する。当該変化は、特定の粒子サイズの特定の毒性種の減少に関するまたはそれどころか完全な消失に関する尺度である。上記ＱＩＡＤ法により、特定の粒子サイズのＡβ−凝集体の増加または減少を測定する。初めのうちは特定の大きさを有するいくつかのＡβ−凝集体が試料中に存在する一方、これらは作用物質の影響で減少するか、またはそれどころか完全に消失する。別の粒子サイズは作用物質の影響下で増加するか、または一定に維持される。Ａβから形成する粒子は、好ましくは、それらの粒子の流体力学的半径に従い、互いに分離される。この方法では、有利には、試料から多数のフラクションが得られる。フラクションにおいて、特定の凝集体サイズを有するアミロイド化ペプチドおよび／またはタンパク質の粒子が富化される。この粒子の分離は、密度勾配遠心により行うことができる。フラクションは、例えばピペッティングにより、空間的に互いに分離される。最終的に、各フラクションにおけるＡβの濃度を、分画化に続いて実施される逆相（ＲＰ−）ＨＰＬＣの間に、Ａβ種の完全な変性により測定する。凝集体の変性は、例えば、３０％アセトニトリルおよび０．１％トリフルオロ酢酸で、８０℃のカラム温度で完全に行うことができ、Ｃ８カラムにおいて疎水性に応じて分離することができる。溶出したＡβを２１５ｎｍでのＵＶ吸収により検出する。ピーク面積の積分は、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェアによって行うことができる。予め実施した較正を用いて得られた値を計算することによって、各々のフラクションに存在するＡβの濃度を算出することが可能である。各フラクションについて、いくつかの、例えば６個の、互いに独立して実施した実験からの平均値を、生じる標準偏差とともに算出すべきである。ＨＰＬＣ分析の利点は、凝集状態および溶媒とは独立に、非常に高感度に検出でき（例えば、約２０ｎＭまたは１．８ｎｇ  Ａβ１−４２）、確実に定量化できることである。当該方法の重要な利点は、密度勾配遠心と逆相ＨＰＬＣの結合にあり、これはＡβオリゴマーの確実な定量化も可能にする。 
【００９４】
アミロイドβ種、特にアミロイドβオリゴマー（あるいはその形成）の消失の増加した効果の本発明の効果は、この方法で生じるが、しかしながら、この方法でのみ生じるわけではない。
【００９５】
本発明の特に好ましい形態において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏにおいても、増加した親和性ならびに消失、解毒化（あるいは形成）の効果の上述の効果が生じる。
【００９６】
本発明の対象はまた、凝集したＡβ−ペプチドに結合するための本発明のペプチドである。
【００９７】
本発明のさらなる対象は、例えば当業者に公知の、低い分子量を有する任意の化合物（低分子量化合物）のための有機合成法のようなペプチド合成、および／または突然変異誘発および組換え体製造による、本発明のペプチドを製造するための方法である。
【００９８】
本発明はさらにまた、特にアルツハイマー病を治療するための、本発明のペプチドを含む組成物に関する。
【００９９】
本発明の対象は、さらに、特に毒性Ａβ−オリゴマーの阻止のための、またはそこから形成したポリマーまたはフィブリルの破壊のための、本発明のペプチドを含む組成物である。
【０１００】
本発明の「組成物」は、例えば、本発明のペプチドを専門知識に基づいて製造される処方物において含む、ワクチン、医薬（例えば、タブレット形態にある）、注入溶液、食品又は食品補助剤であることができる。
【０１０１】
本発明は、さらに、本発明のペプチドを含むキットにも関する。
【０１０２】
このようなキットにおいて、本発明のペプチドは、容器において、場合によって、緩衝液又は溶液と共に／緩衝液又は溶液の中に、包装されていてよい。キットの全ての成分は、同一の容器において又は相互に別個に包装されていてよい。さらに、キットは、その使用のための指示書を含んでよい。このようなキットは、例えば、本発明の、栓及び／又はセプタムを有する注入バイアルにおいて含んでよい。さらに、その中には、例えばディスポーザブルシリンジが含まれていてもよい。
【０１０３】
本発明の更なる対象は、アミロイドβオリゴマー又はフィブリルの同定、定性的および／または定量的測定のためのプローブとしての本発明のペプチドの使用である。
【０１０４】
本発明の対象はまた、アミロイドβオリゴマーの同定、定性的および／または定量的測定のための、本発明のペプチドを含むプローブである。
【０１０５】
このようなプローブは、それを用いてＡＤの早期診断が可能になるため、重大な意義をもつ。早期診断を用いて、疾病は既に極めて早期の段階で対抗処置できる。
【０１０６】
このような分子プローブは、本発明のポリマー及び場合によって色素、蛍光色素、放射性同位体（ＰＥＴ他）、ガドリニウム（ＭＲＩ）並びにプローブの像形成に適した代替的な物質を含み、かつ、例えば静脈内注射によって、患者に注射されてよい。脳血液関門を介した通過性に応じて、プローブはＡβ−オリゴマー及び／又はプラークに結合することができる。そうしてマーキングされたＡβ−オリゴマー及び／又はプラークは、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、ＣＴ、ＭＲＴ、プロトン−ＭＲ−分光法等といった像形成法を用いて、可視可能にすることができる。
【０１０７】
さらに、本発明は、アミロイドβ−オリゴマー及び／又はアミロイドβ−ペプチド−凝
集体及び／又はアミロイドβ−フィブリルの阻止のためのペプチドの使用にも関する。
【０１０８】
本発明のペプチドはまた、毒性アミロイドβオリゴマー及び／又は凝集体の解毒化のために使用される。特に、アミロイドβ−オリゴマー及び／又は凝集体に結合し、そうして無定形の、非毒性の凝集体を形成するために、使用される。
【０１０９】
Ａβ−オリゴマーが既に生じている場合、これにＡβに対してできる限り高い親和性を有する物質により対処することが治療の目標でなければならないことが認められた。事実上、親和性が全然十分に大きくないことがあるが、本発明のペプチドの適切な解離定数は、μＭ未満の範囲に、より良好にはさらにｐＭの範囲あるいはさらにより低い範囲にあることができる。
【０１１０】
本発明の枠内において、Ａβ−モノマーが、Ａβ−オリゴマーの構成成分として、人体で常に発生しており、恐らくそれ自体では毒性でないことが認められた。それどころか、モノマーは、ポジティブな機能を有する可能性さえある。Ａβ−モノマーは、その濃度に依存して偶発的に一緒に堆積し得る。この濃度は、体内のそれらの形成速度及び分解速度に依存する。年齢が増加すると共に、体内でのＡβ−モノマーの濃度の上昇が起こり、そして前記モノマーが自然発生的に一緒に堆積してＡβ−オリゴマーを生じる可能性が益々大きくなる。そうして発生したＡβ−オリゴマーは、プリオンに類似して増加し、そして最終的にはアルツハイマー病を引き起こし得る。
【０１１１】
さらに、ＡＤの予防と治療又はましてや治癒との間の重要な相違点は、予防は場合によっては、最初のＡβ−オリゴマーの形成を妨げることによって既に達成できる、という事実にあると認められた。このためには、Ａβ−オリゴマーに対してわずかに親和性であり選択的である、いくつかの、わずかなＡβ−リガンドで十分である。
【０１１２】
多くのモノマーからのＡβ−オリゴマーの形成は、高い次数の反応であり、その結果高度にＡβ−モノマー濃度に依存する。従って、活性なＡβ−モノマー濃度の小さな低下が既に、最初のＡβ−オリゴマーの形成の阻止をもたらす。これまでに開発段階にあるどちらかといえば予防的な治療のコンセプトおよび物質はおそらく、この機構に基づいている。
【０１１３】
しかしながら、ＡＤの治療では、完全に変化した状況という前提から出発する。この場合、Ａβ−オリゴマー、または場合により既により大きいポリマーもしくはフィブリルも存在し、これらはプリオンに類似した機構により増加する。しかしながら、この増加は、低い次数の反応であり、Ａβ−モノマー濃度にほとんど依存しない。
【０１１４】
従って、Ａβ−オリゴマーが既に生じている場合、これにＡβ−オリゴマーに対してできる限り高い親和性を有する物質により対処すること、および／またはこれを特に効率的に消失させること、および／または形成を特に効率的に阻止するかまたはこれを解毒化することが治療の目標でなければならない。そのために、適切な解離定数は、μＭ未満、ｎＭまたはｐＭの範囲あるいはさらにより低い範囲になければならない。
【０１１５】
アルツハイマー型認知症の診断（プローブ）および治療に関するこの要求は、本発明のペプチドの提供により満たされる。本発明のペプチドは、診断および／または治療の目的で、アミロイドβ種および特にＡβ−オリゴマーに、適切に低い解離定数で結合する。さらなる対象は、相応に、本発明のペプチドのアルツハイマー病の治療薬としての使用である。
【０１１６】
本発明のペプチドは、特に良好に、Ａβ−オリゴマーに、特に可溶性のＡβ−オリゴマーに結合する。
【０１１７】
本発明のペプチドの標的分子への特に強力な結合は、本発明のペプチドの標的分子への高い特異性および／または親和性によりもたらされる。従って、形成した複合体は、低い解離定数（ＫＤ値）を有する。
【０１１８】
チオフラビンＴ試験により、本発明のペプチド、特にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜１２、特にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８を有するペプチドが、Ａβペプチドのフィブリル形成を非常に効果的に抑制することを示すことができた。
【０１１９】
更なる対象は、本発明のペプチドの、血液、血液製剤および／または器官の処置（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ）のための方法における使用であって、上記血液、血液製剤および／または器官が、ヒトまたは動物の体から取り出されたものであり、Ａ（アミロイド）β−オリゴマーが除去され、および／または解毒化されることを特徴とする使用である。
なお、本願は、特許請求の範囲に記載の発明に関するものであるが、他の態様として以下も包含し得る。
１．アミロイドβ種に結合する少なくとも１つのアミノ酸配列を含み、通常遊離のＣ末端に存在するカルボキシル基の負の電荷が、そこに電荷が生じないかまたは正の電荷が生じるように、修飾により除去された、ペプチド。
２．カルボキシル基の位置の遊離Ｃ末端に、酸アミド基（ＣＯＮＨ２−基）またはＣＯＨ−基、ＣＯＣｌ−基、ＣＯＢｒ−基、ＣＯＮＨ−アルキル残基またはＣＯＮＨ−アルキル−アミン−残基が存在するか、または一方で環化したペプチドが存在することを特徴とする、上記１に記載のペプチド。
３．本質的にＤ−エナンチオマーのアミノ酸からなることを特徴とする、以下に「モノマー」と呼ばれる、上記１または２に記載のペプチド。
４．少なくとも１つのモノマー、特にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２ならびにそのホモログ、断片および部分からなる群から選択される少なくとも１つのモノマーを含有する、上記３に記載のペプチド。
５．さらなる物質と連結していることを特徴とする、上記１〜４のいずれか１つに記載のペプチド。
６．アミロイドβ種に結合する上記モノマーを少なくとも２つ含むことを特徴とする、以下に「ポリマー」と呼ばれる、上記１〜５のいずれか１つに記載のペプチド。
７．２つのモノマーからのダイマーを特徴とする、上記６に記載のペプチド。
８．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８のダイマーを特徴とする、上記６または７に記載のペプチド。
９．医薬における使用のための、上記１〜８のいずれか１つに記載のペプチド。
１０．アルツハイマー病の治療のための、上記１〜９のいずれか１つに記載のペプチド。
１１．アミロイドβ−ペプチドのフィブリル形成の阻害のための、上記１〜１０のいずれか１つに記載のペプチド。
１２．凝集したアミロイドβ−ペプチドへの結合のための、上記１〜１１のいずれか１つに記載のペプチド。
１３．通常遊離のＣ末端に存在するカルボキシル基の負の電荷が修飾によって除去されなかった同一のアミノ酸配列を有するペプチドよりも高いアミロイドβ種への結合親和性を有することを特徴とする、上記１〜１２のいずれか１つに記載のペプチド。
１４．アミロイドβ−オリゴマーの形成の阻止および／または解毒化および／または消失において、通常遊離のＣ末端に存在するカルボキシル基の負の電荷が修飾によって除去されなかった同一のアミノ酸配列を有するペプチドよりも高い効果を有することを特徴とする、上記１〜１３のいずれか１つに記載のペプチド。
１５．環化ペプチドの場合に、ペプチドであってそれから環化ペプチドが誘導できるペプチドよりも、アミロイドβ種への高い結合親和性、および／またはアミロイドβ−オリゴマーの形成の阻止および／または解毒化および／または消失において高い効果を有することを特徴とする、上記１３または１４に記載のペプチド。
１６．ペプチドをペプチド合成または突然変異誘発によって製造することを特徴とする、上記１〜１５のいずれか１つに記載のペプチドを製造するための方法。
１７．上記１〜１５のいずれか１つに記載のペプチドを含むキット。
１８．上記１〜１５のいずれか１つに記載のペプチドを含む組成物。
１９．アミロイドβ−フィブリル、アミロイドβ−プロトフィブリルおよび／またはアミロイドβ−オリゴマーの同定、定量的および／または定性的測定のためのプローブとしての、上記１〜１５のいずれか１つに記載のペプチドの使用。
２０．アミロイドβ−フィブリル、アミロイドβ−プロトフィブリル、アミロイドβ−オリゴマーおよび／またはアミロイドβ−ペプチド凝集体の形成の阻止のための、上記１〜１５のいずれか１つに記載のペプチドの使用。
２１．毒性のアミロイドβ−フィブリル、アミロイドβ−プロトフィブリル、アミロイドβ−オリゴマーおよび／または凝集体の消失および／または解毒化のための、上記１〜１５のいずれか１つに記載のペプチドの使用。
２２．アミロイドβ−オリゴマーおよび／または凝集体が、上記１〜１５のいずれか１つに記載のペプチドと、無定形の非毒性凝集体を形成することを特徴とする、上記２１に記載の使用。
２３．治療薬としてのおよびアルツハイマー病の予防のための、上記１〜１５のいずれか１つに記載のペプチドの使用。
【実施例】
【０１２０】
さらに、本発明を実施例および添付の図に基づいてより詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。 
【０１２１】
以下を示す： 
図１：物体認識試験
図２：ロータロッド
図３：ＳＨＩＲＰＡ
図４：モーリス水迷路
図５：物体認識
図６：アミロイドβ−モノマーに関するＫＤ値（カイネティック）
図７：アミロイドβ−オリゴマーに関するＫＤ値（カイネティック）
図８：アミロイドβ−フィブリルに関するＫＤ値（カイネティック）
【０１２２】
作用物質の定量的分析のために、ＱＩＡＤ試験を使用した（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｗｉｔｈ  Ａβ  ａｇｇｒｅｇａｔｅ  ｓｉｚｅ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）。ここで、試料中におけるアミロイド化ペプチドおよび／またはタンパク質の粒度分布への作用物質の影響の定量的分析のための当該方法は、以下のステップを有する：最初に、制御された条件下で、それぞれ異なるＡβ凝集体が生じるようにＡβを凝集させる。表１に要約された結果に関して、特に多くの小さい、特に細胞毒性のＡβ−オリゴマーが形成されるように条件を選択した。次として、試験すべき物質、例えば上記のＤ−エナンチオマーペプチド、を試料に添加する。上記作用物質が、試料中の粒度分布を変化させる。これらの変化を定量的に決定する。当該変化は、特定の粒子サイズの特定の毒性種の減少に関する、またはそれどころか完全な消失の量に関する尺度である。従って、ＱＩＡＤ法により、特定の粒子サイズのＡβ凝集体の増加または減少が測定される。特定の大きさを有するいくつかのＡβ凝集体が試料中に最初に存在するが、これらは上記作用物質の影響により、減少するかまたは完全に消失さえする。他の粒子サイズは作用物質の影響下で増加するか、または一定に維持される。Ａβから形成される粒子は、好ましくは、それらの粒子の流体力学半径に従って互いに分離される。この方法では、有利には、試料から多くのフラクションを得られる。当該フラクションにおいて、特定の凝集体サイズを有するアミロイド化ペプチドおよび／またはタンパク質の粒子が、富化される。この粒子の分離は、密度勾配遠心により実施することができる。フラクションは、例えばピペッティングにより、互いに空間的に分離される。引き続いて、各フラクションにおけるＡβの濃度を、Ａβ種の完全な変性により、分画化に続いて行われる逆相（ＲＰ−）ＨＰＬＣの間に測定する。凝集体の変性は、例えば、３０％アセトニトリルおよび０．１％トリフルオロ酢酸を用いて８０℃のカラム温度で、完全に行うことができ、そして、Ｃ８カラムで疎水性に基づいて分離することができる。溶出したＡβを、２１５ｎｍにおけるＵＶ吸収により検出する。ピーク面積の積分は、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェアによって行うことができる。予め実施した較正を用いて得られた値を計算することによって、各々のフラクションに存在するＡβの濃度を算出することが可能である。各フラクションについて、いくつかの、例えば６個の、互いに独立して実施した実験からの平均値を、生じる標準偏差とともに算出すべきである。ＨＰＬＣ分析の利点は、凝集状態および溶媒とは独立に、非常に高感度に検出でき（例えば、約２０ｎＭまたは１．８ｎｇ  Ａβ１−４２）、確実に定量化できることである。当該方法の重要な利点は、密度勾配遠心と逆相ＨＰＬＣの結合にあり、これはＡβオリゴマーの確実な定量化も可能にする。  
【０１２３】
結果を表1にまとめる。それは、上記物質が特に効果的にオリゴマーを消失させることを示す。
【０１２４】
【表１】
0006660877.tif 000002
【０１２５】
上記結果はさらに、試験した本発明のダイマーが、使用したモノマーと比較して、同一の用量において、相乗的効果を有することを示す。
【０１２６】
さらに、使用したペプチドに対するいくつかのｉｎ  ｖｉｖｏデータを示すが、これらは本発明のポリマーの、特にダイマーの、特に配列番号４〜８の本発明のダイマーの有効性を証明するものである。
【０１２７】
異なるトランスジェニックマウスモデルの動物実験（表２）において、これまで試験された全てのアミド化ペプチドがｉｎ  ｖｉｖｏで活性であることが示された：  
図１：ここでは、いわゆる「物体認識試験（ＯＲＴ）」の結果を示す。ここで、Ｄ３Ｄ３（アミド化）処置動物（表２に詳細）とプラセボ処置動物を単独でかつ互いに隔てて、２つの物体がある箱に入れた。該動物に２つの物体を探索する時間を与えた後で、動物を再度箱から出し、さらに２４時間後に再度入れた。しかしながら、その前に１つの物体を、それとは異なる新しいものと交換した。記憶を有する動物は、今度は嗜好的に新しい物体を探索する。２４時間前の箱での滞在の記憶を有しない動物は、古い物体と新しい物体の探索に同様に多くの時間を費やす。動物が、古い物体（白いバー）および新しい物体（黒いバー）とともに過ごす時間を秒で測定する。プラセボ処置動物が、新しい物体および古い物体とともに同様に多くの時間を過ごすことが、明確に認められる。しかしながら、Ｄ３Ｄ３処置動物は、新しい物体とともにより多くの時間を過ごす。すなわち、Ｄ３Ｄ３処置動物のみが、上記試験において機能的な記憶を示した。
【０１２８】
図２：いわゆる「ロータロッド」試験において、動物が回転する棒の上で、下に落下する前に、どのくらいの時間バランスを取ることができるかを測定する。これにより、動物の神経運動能力を測定することができる。動物がより長い時間バランスをとるほど、その運動ニューロンは、神経変性の表現型との関連性が弱い。当該測定は、処置（処置の詳細は表２）の前後に実施した。処置前と後の間の相違を、秒で示す。コントロール群（黒いバー）に関する正の値は、処置前の未処置動物が、プラセボ処置後のものよりも少ない変性を示したことを表す。すなわち、変性は期待されたように進行している。しかしながら、Ｄ３（アミド化）およびＤ３Ｄ３（アミド化）で処置した動物は、神経運動症状の悪化を示さなかった。すなわち、上記処置は２つの場合において、神経変性の遅滞またはそれどころか停止をもたらした。
【０１２９】
図３：ＳＨＩＲＰＡテストは、一連の特性、特に反射の特性を試験するテストである。各特性を他とは別々に評価し、その度に得点を与える。得点が高い程、表現型、すなわち神経損傷が、さらに進行している。ＳＨＩＲＰＡテストを、処置（処置に関する詳細は表２）の前（黒いバー）および処置後（白いバー）に測定した。Ｄ３Ｄ３（アミド化）で処置された動物はＳＨＩＲＰＡ値の有意な悪化を示さないことが認められる。ただし、Ｄ３（アミド化）で処置された動物およびプラセボで処置された動物は、多かれ少なかれＳＨＩＲＰＡ値の激しい悪化を示した。従って、Ｄ３Ｄ３は、Ｄ３よりも有効に作用する。
【０１３０】
図４：いわゆる「モーリス水迷路」を用いて、動物の空間記憶を測定する。ここでは、動物が、水槽中の水表面のすぐ下に隠されたプラットホームを再度見つけるのに必要な時間を秒で測定する。これを、連日数日間にわたって、１日あたり数回の試験において測定する。その後、統計的評価により、処置された動物が、コントロール群と比較して、より良好にプラットホームを再発見することを学習したかどうかを明らかにする。プロットは、連続５日間の探索時間（秒）である。ＲＤ２Ｄ３（アミド化）で処置した動物は、顕著に学習した。
【０１３１】
図５：ここでは、いわゆる「物体認識試験（ＯＲＴ）」の結果を示す。ここで、ＲＤ２Ｄ３（アミド化）処置動物（表２に詳細）とプラセボ処置動物を単独でかつ互いに隔てて、２つの物体がある箱に入れた。該動物に２つの物体を探索する時間を与えた後で、動物を再度箱から出し、さらに２４時間後に再度入れた。しかしながら、その前に１つの物体を、それとは異なる新しいものと交換した。記憶を有する動物は、今度は嗜好的に新しい物体を探索する。２４時間前の箱での滞在の記憶を有しない動物は、古い物体と新しい物体の探索に同様に多くの時間を費やす。動物が、古い物体（黒いバー）および新しい物体（白いバー）とともに過ごす時間を秒で測定する。プラセボ処置動物が、新しい物体および古い物体とともに同様に多くの時間を過ごすことが、明確に認められる。しかしながら、ＲＤ２Ｄ３処置動物は、新しい物体とともにより多くの時間を過ごす。すなわち、ＲＤ２Ｄ３処置動物のみが、上記試験において機能的な記憶を示した。
【０１３２】
Ｄ３およびＤ３Ｄ３のアミド化形態は、ＴＢＡ−２．１マウスにおいて、４週間の処置期間の間に、表現型の進行を停止させることができる（図２も参照）。  
【０１３３】
特に、ダブルペプチドＤ３Ｄ３（アミド化）は、単一のペプチドＤ３（アミド化）よりも効果的に作用し、しかもＳＨＩＲＰＡアッセイにおいて、同様にＴＢＡ−２．１動物モデルにおいて作用した（図３）。Ｄ３Ｄ３は、ＳｗｅＤＩマウスモデルにおいて、未処置マウスと比較して、認知（「物体認識試験」において、図１）が明確に改善することを示すことができる。ＲＤ２Ｄ３（アミド化）は同様に、ＳｗｄＤＩマウスの認知を改善することができ、これはモーリス水迷路においても（図４）、物体認識試験（図５）においても示された。
【０１３４】
さらなる実施例:
以下のステップは、親和性の研究にも、特に毒性のアミロイド−β−オリゴマーの分解のための研究にも関連する。
【０１３５】
Ａβ−モノマー、オリゴマーおよびフィブリルの製造
１ｍｇの凍結乾燥Ａβ１−４２およびＮ末端ビオチン化Ａβ１−４２をそれぞれ、１ｍｌの１００％ヘキサフルオロイソプロパノール（ＨＦＩＰ）に溶解し、室温で一晩溶解した。オリゴマーおよびフィブリル調製のために、非ビオチン化ＡβをＮ末端ビオチン化Ａβとともに１：１０の比率で使用し、ＨＦＩＰを蒸発させた（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ製Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ５３０１）。生じたＡβ膜を、８０μＭの最終濃度でリン酸ナトリウムバッファー（１０ｍＭ、ｐＨ７．４）にとり、インキュベートした（ＲＴ、６００ｒｐｍ）。インキュベーション時間は、オリゴマー調製の際には３時間、フィブリル調製の際には２４時間であった。モノマーの調製には、１００％Ｎ末端ビオチン化Ａβ１−４２をインキュベーションなしで使用した。    
【０１３６】
密度勾配遠心
各Ａβ種をそれらの大きさに応じて精製するために、Ａβ調製に引き続いて密度勾配遠心を実施した。そのために、５０％〜５％ｖ／ｖの濃度を増加させたイオジキサノールを用いた、１０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７．４）におけるイオジキサノール勾配を使用した。１００μｌのＡβ試料を重層し、超遠心分離により分離した（３ｈ、４℃、２５９，０００ｇ）。続いて、勾配を１４のフラクションに１４０μｌずつ分画した。モノマーＡβは最初の２つの上層フラクションに、Ａβ−オリゴマーは第４〜６フラクションに、Ａβ−フィブリルは第１１〜１３フラクションに存在する。  
【０１３７】
ＳＰＲ分光法のための固定化(表面プラズモン共鳴)
ＳＰＲ分光法には、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用した。密度勾配遠心により精製したＡβ種を、直接、ビオチン−ストレプトアビジン結合により、センサーチップ（Ｓｅｒｉｅｓ  Ｓ  Ｓｅｎｓｏｒ  Ｃｈｉｐｓ  ＳＡ）上に供給者の指示に従って固定化した。ランニングバッファーとして、１ｘＰＢＳを使用した。ローディングを２５℃で、および５μｌ／分の流速で行った。続いて、フローセルから、一晩３０μｌ／分の一定流量で、非特異的に結合したリガンドを除去した。
【０１３８】
結合カイネティクス
結合カイティクスを同様に、ＢｉａｃｏｒｅのＴ２００装置（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によるＳＰＲ分光法を用いて測定した。標準条件は、２５℃および３０μｌ／分の流速である。Ｄ−ペプチドの異なる凍結乾燥物をランニングバッファー１ｘＰＢＳにとり、系列希釈した。方法として、５つの増加させたアナライト濃度を固定化したフローセルへポンプで注入する「シングルサイクル」カイネティックを使用した。添加時間をアナライトに応じて、結合および解離に関して９０−１２０ｓ、最終の解離に関して１８００−５４００ｓを選択した。センサーグラムは、ローディングしていないフローセルおよび使用ランニングバッファーを用いて二重に参照された。結合曲線の評価を、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（Ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．０）を使用し、カイネティックフィットモデル（Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ  ｂｉｎｄｉｎｇモデル）を用いて行った。
【０１３９】
図６〜８は、本発明のペプチドの結合挙動に関する結果を示す（アフィニティー試験）。これらの図において、動態評価のためのデータは、アミロイドβモノマー（図６）、アミロイドβオリゴマー（図７）およびアミロイドβフィブリル（図８）に対する異なる候補の結合の強さである。ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ  ｂｉｎｄｉｎｇモデルのフィッティングの際に生じ、それぞれ白いバーおよび黒いバーとして描かれる、それぞれ２つの結合定数を示す。ここでは対数スケールを見ることが重要であり、これは、バーの大きさにおける小さい相違が、解離定数ＫＤにおける大きな相違であることを意味する。白いバーは、それぞれ低親和性部位、すなわち、低親和性の結合場所およびその結合の強さであり、黒いバーは、高親和性の結合部位およびその結合の強さを表す。
【０１４０】
遊離のＣ末端が負の電荷を有する直鎖状ペプチドＤ３の場合にのみ、結合曲線をフィッティングするために、ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  １：１  ｂｉｎｄｉｎｇモデルが十分であることが示される。
【０１４１】
さらに、環化ペプチドを使用したほとんど全ての場合に、低親和性の結合場所に対する白いバーが同様に高いことが示される。大きい相違はむしろ、黒いバーとして表される高親和性の結合部位において現れる。
【０１４２】
さらに、モノマーの場合、環状ｃＤ３ｒ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９）が非常によい成果を収めている（図６）、すなわち特に高い親和性を有することが明らかである。
【０１４３】
オリゴマーの場合、ｃＤ３ｒがそれどころか、他の本発明の環化ペプチドよりも次数２つ分だけ強く結合することが特に興味深い（図７）。
【０１４４】
また、フィブリルの場合、ｃＤ３ｒは、他の本発明のペプチドと比較して非常に良い成果を収めており、ここで特に、本発明のペプチドｃＤ３（Ｐ２Ｋ）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）は、極めて良い成果を収めており、ｐＭ未満の結合範囲にまで突き進む（図８）。
【０１４５】
さらに、Ｄ３のアミド化形態が、Ｄ３の非アミド化形態と比較して、アミロイドβ−モノマーおよびアミロイドβ−オリゴマーにより強く結合することが示される。これは、低親和性部位に関するより低いＫＤ１値において、ならびにμＭ未満の範囲にＫＤ２を有する高親和性部位の存在において示される。
【０１４６】
図６〜８におけるＲｍａｘ値は、全ｌｏａｄｉｎｇ  ｃａｐａｃｉｔｙに対するそれぞれのＫＤの寄与がどれほど強いかを示す。オリゴマーに対する例（図７）において、ペプチドｃＤ３ｚに関して、７９／２１％のＲｍａｘを示す。ｃＤ３ｚは、ｃＤ３ｚｅｒｏ、すなわち他のアミノ酸付加のない環化Ｄ３を示している。白いバーは、低親和性部位が合計でＲＵ全ｌｏａｄｉｎｇ  ｃａｐａｃｉｔｙの７９％になり得、ＫＤ２が合計でＲＵの２１％であることを表す。これは、このペプチドに関して、およそ１：４の結合場所の比率が存在し、すなわちそれは高親和性部位より約４倍多い低親和性部位を与えることを意味する。
【０１４７】
低親和性部位および高親和性部位の間のこのような区別が、本発明のペプチドにおいては生じる。
【０１４８】
直鎖状ペプチドＤ３に関する実験的な結合データのフィッティングでは高親和性部位が生じないという事実は、それが高親和性部位に結合しないか、または一方、高親和性部位および低親和性部位への親和性が区別できないことで説明することができる。
【０１４９】
これらのデータから、直鎖状Ｄ３がアミロイドβ−オリゴマーの場合には低親和性部位にのみ結合するが、高親和性部位には結合しないことが明らかである。
【０１５０】
【表２】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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