(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程を含む、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法：
Ａ0）
被験材料のＧＡ値の実測値をＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値へ、
被験材料のＧＡ濃度[P]の実測値をＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]へ、
被験材料のＧＡ値の実測値をＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値から被験材料に設定したＧＡ値へ、又は
被験材料のＧＡ濃度[P]の実測値をＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]から被験材料に設定したＧＡ濃度[L]へ、
換算するための式を決定する工程であって、
前記被験材料のＧＡ値の実測値が、ＧＡ濃度[P]／アルブミン濃度で計算され、
前記ＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値から被験材料に設定したＧＡ値が、ＧＡ濃度[L]／アルブミン濃度で計算される、工程；及び
Ｆ0）
ＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]から換算したＧＡ濃度[P]及びＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度から換算したアルブミン濃度を設定した標準物質を用いて作成した検量線を用いて、被験材料のＧＡ濃度[P]及びアルブミン濃度を測定し、工程Ａ0）で決定した回帰式を用いてＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値を決定する工程
（上記各工程において、ＧＡ濃度[L]は、グルコースが結合したリジン残基（ＤＯＦ−Ｌｙｓ）の濃度であり、ＧＡ濃度[P]は、糖化アミノ酸又は糖化ペプチドの濃度である）。
【請求項２】
以下の工程を含む、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法：
Ａ1）以下のｂ）、ｃ）及びｅ0）〜ｈ）を含む工程により、回帰式IIIを決定する工程；
ｂ）以下の式１：
ＧＡ濃度[L]（Ａ）
＝ＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）×ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）    （式１）
を用いて、異なるＧＡ認証値を有する２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）を決定する工程；
ｃ）２種以上のＧＡ認証標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｄ）を測定する工程；
ｅ0）切片をゼロとする以下の直線の式II0：
Ｄ＝α0Ｅ      （式II0）
を作成する工程
（ここで、α0は、任意の正の値であり、Ｅは、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である）；
ｆ）式II0を用いて、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）を２種以上決定する工程；
ｇ）以下の式２：
ＧＡ値（Ｆ）＝ＧＡ濃度[P]（Ｅ）／アルブミン濃度（Ｃ）    （式２）
を用いて、ＧＡ値（Ｆ）を２種以上決定する工程；及び
ｈ）２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）と、対応する２種以上のＧＡ値（Ｆ）とから回帰式III：
Ｂ＝γＦ＋δ      （回帰式III）
を作成する工程
（上記各工程において、ＧＡ濃度[L]は、グルコースが結合したリジン残基（ＤＯＦ−Ｌｙｓ）の濃度であり、ＧＡ濃度[P]は、糖化アミノ酸又は糖化ペプチドの濃度である）。
【請求項３】
さらに以下の工程を含む、請求項２に記載の方法：
Ｂ）標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｇ）を測定し、式II0を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｈ）を決定する工程；及び
Ｃ）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定することにより、標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程。
【請求項４】
工程Ｃ）が以下の工程Ｃ１）〜Ｃ３）を含む、請求項３に記載の方法：
Ｃ１）ＧＡ認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｋ）と、ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）から、下記式３：
Ｋ＝εＣ      （式３）
を満たすεを決定する工程；
Ｃ２）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定する工程；及び
Ｃ３）吸光度（Ｉ）から、式３’：
Ｉ＝εＪ      （式３’）
を用いて標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程。
【請求項５】
工程ｂ）に先立って、以下の工程ａ１）〜ａ３）：
ａ１）以下の式４：
アルブミンモル認証値（Ｌ）
＝アルブミン認証標準物質のアルブミン認証値／アルブミンの分子量      （式４）
を用いてアルブミンモル認証値（Ｌ）を決定する工程；
ａ２）アルブミン認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｍ）を測定する工程；及び
ａ３）アルブミンモル認証値（Ｌ）と、吸光度（Ｍ）から、下記式５：
Ｍ＝θＬ      （式５）
を満たすθを決定する工程；
を含み、
工程Ｃ）が以下の工程Ｃ２）及びＣ４）：
Ｃ２）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定する工程；及び
Ｃ４）吸光度（Ｉ）から、式５’：
Ｉ＝θＪ      （式５’）
を用いて標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程；
を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
さらに以下の工程Ｆ１）〜Ｆ４）を含む、請求項２〜５のいずれか一項に記載の方法：
Ｆ１）ＧＡ認証標準物質のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するＧＡ濃度[P]（Ｎ）を決定する工程；
Ｆ２）工程Ｆ１）で用いたＧＡ認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｋ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するアルブミン濃度（Ｏ）を決定する工程；
Ｆ３）下記式６：
ＧＡ認証標準物質のＧＡ値（Ｐ）＝ＧＡ濃度[P]（Ｎ）／アルブミン濃度（Ｏ）    （式６）
を用いてＧＡ値（Ｐ）を決定する工程；及び
Ｆ４）ＧＡ値（Ｐ）と前記回帰式IIIを用いて、工程Ｆ１）で用いたＧＡ認証標準物質の認証値にトレーサブルなＧＡ値（Ｑ）を決定する工程。
【請求項７】
以下の工程を含む、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法：
Ａ2）以下のｂ）、ｃ）、ｅ0）、ｆ）及びｉ）を含む工程により、回帰式IVを決定する工程；
ｂ）以下の式１：
ＧＡ濃度[L]（Ａ）
＝ＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）×ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）    （式１）
を用いて、異なるＧＡ認証値を有する２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）を決定する工程；
ｃ）２種以上のＧＡ認証標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｄ）を測定する工程；
ｅ0）切片をゼロとする以下の直線の式II0：
Ｄ＝α0Ｅ      （式II0）
を作成する工程
（ここで、α0は、任意の正の値であり、Ｅは、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例する比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である）；
ｆ）式II0を用いて、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）を２種以上決定する工程；
ｉ）２種以上のＧＡ濃度[L]（Ａ）とＧＡ濃度[P]（Ｅ）とから、回帰式IV：
Ａ＝κＥ＋λ  （回帰式IV）
を作成する工程
（上記各工程中、ＧＡ濃度[L]は、グルコースが結合したリジン残基（ＤＯＦ−Ｌｙｓ）の濃度であり、ＧＡ濃度[P]は、糖化アミノ酸又は糖化ペプチドの濃度である）。
【請求項８】
さらに以下の工程を含む、請求項７に記載の方法：
Ｂ）標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｇ）を測定し、式II0を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｈ）を決定する工程；
Ｃ）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定することにより、標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程。
【請求項９】
さらに以下の工程を含む、請求項７又は８に記載の方法：
Ｆ１）ＧＡ認証標準物質のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応する酵素法によるＧＡ濃度[P]（Ｎ）を決定する工程；
Ｆ２）工程Ｆ１）で用いたＧＡ認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｋ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するアルブミン濃度（Ｏ）を決定する工程；
Ｆ５）ＧＡ濃度[P]（Ｎ）から回帰式IVを用いて、ＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ｒ）を決定する工程；及び
Ｆ６）下記式７：
ＧＡ認証標準物質のＧＡ値（Ｑ1’）＝ＧＡ濃度[L]（Ｒ）／アルブミン濃度（Ｏ）    （式７）
を用いて、工程Ｆ１）で用いたＧＡ認証標準物質の認証値にトレーサブルなＧＡ値（Ｑ1’）を決定する工程。
【請求項１０】
以下の工程を含む、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法：
Ａ3）以下のｂ）〜ｅ0）及びｊ）〜ｏ）を含む工程により、回帰式Vを決定する工程；
ｂ）以下の式１：
ＧＡ濃度[L]（Ａ）
＝ＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）×ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）    （式１）
を用いて、異なるＧＡ認証値を有する２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）を決定する工程；
ｃ）２種以上のＧＡ認証標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｄ）を測定する工程；
ｄ）２種以上のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と、２種以上のＧＡ濃度[L]（Ａ）とから、回帰式I：
Ｄ＝αＡ＋β      （回帰式I）
を作成する工程；
ｅ0）切片をゼロとする以下の直線の式II0：
Ｄ＝α0Ｅ      （式II0）
を作成する工程
（ここで、α0は、任意の正の値であり、Ｅは、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である）；
ｊ）２種以上の被験材料におけるＧＡ由来の吸光度（Ｓ）を測定し、回帰式Iを用いて対応するＧＡ濃度[L]（Ｔ）を決定する工程；
ｋ）２種以上の被験材料におけるアルブミン由来の吸光度（Ｕ）を測定し、アルブミン濃度（Ｖ）を決定する工程；
ｌ）以下の式８：
ＧＡ値1（Ｗ）＝ＧＡ濃度[L]（Ｔ）／アルブミン濃度（Ｖ）    （式８）
を用いて、２種以上の被験材料のＧＡ値1（Ｗ）をＧＡ濃度[L]（Ｔ）から決定する工程；
ｍ）２種以上の被験材料におけるＧＡ由来の吸光度（Ｓ）から、式II0を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｘ）を決定する工程；
ｎ）以下の式９：
ＧＡ値2（Ｙ）＝ＧＡ濃度[P]（Ｘ）／アルブミン濃度（Ｖ）    （式９）
を用いて、２種以上の被験材料のＧＡ値2（Ｙ）をＧＡ濃度[P]（Ｘ）から決定する工程；
ｏ）２種以上の被験材料のＧＡ値1（Ｗ）と、対応する２種以上のＧＡ値2（Ｙ）とから回帰式V：
Ｗ＝πＹ＋φ      （回帰式V）
を作成する工程
（上記各工程中、ＧＡ濃度[L]は、グルコースが結合したリジン残基（ＤＯＦ−Ｌｙｓ）の濃度であり、ＧＡ濃度[P]は、糖化アミノ酸又は糖化ペプチドの濃度である）。
【請求項１１】
さらに以下の工程を含む、請求項１０に記載の方法：
Ｂ）標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｇ）を測定し、式II0を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｈ）を決定する工程；
Ｃ）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定することにより、標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程。
【請求項１２】
さらに以下の工程を含む、請求項１０又は１１に記載の方法：
Ｆ１’）被験材料のＧＡ由来の吸光度（Ｓ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するＧＡ濃度[P]（Ｎ’）を決定する工程；
Ｆ２’）工程Ｆ１’）で用いた被験材料のアルブミン由来の吸光度（Ｕ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するアルブミン濃度（Ｏ’）を決定する工程；及び
Ｆ３’）下記式６’：
被験材料のＧＡ値（Ｐ’）＝ＧＡ濃度[P]（Ｎ’）／アルブミン濃度（Ｏ’）（式６’）
を用いてＧＡ値（Ｐ’）を決定する工程。
Ｆ４’）ＧＡ値（Ｐ’）と前記回帰式Vを用いて、工程Ｆ１’）で用いた被験材料に値付けた認証ＧＡ値1（Ｗ）にトレーサブルなＧＡ値（Ｑ2’）を決定する工程。
【請求項１３】
以下の工程を含む、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法
Ａ4）以下のｂ）〜ｅ0）、ｊ）、ｍ）、及びｐ）を含む工程により、回帰式VIを決定する工程；
ｂ）以下の式１：
ＧＡ濃度[L]（Ａ）
＝ＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）×ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）    （式１）
を用いて、異なるＧＡ認証値を有する２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）を決定する工程；
ｃ）２種以上のＧＡ認証標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｄ）を測定する工程；
ｄ）２種以上のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と、２種以上のＧＡ濃度[L]（Ａ）とから、回帰式I：
Ｄ＝αＡ＋β      （回帰式I）
を作成する工程；
ｅ0）切片をゼロとする以下の直線の式II0：
Ｄ＝α0Ｅ      （式II0）
を作成する工程
（ここで、α0は、任意の正の値であり、Ｅは、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である）；
ｊ）２種以上の被験材料におけるＧＡ由来の吸光度（Ｓ）を測定し、回帰式Iを用いて対応するＧＡ濃度[L]（Ｔ）を決定する工程；
ｍ）２種以上の被験材料におけるＧＡ由来の吸光度（Ｓ）から、式II0を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｘ）を決定する工程；及び
ｐ）２種以上の被験材料のＧＡ濃度[L]（Ｔ）とＧＡ濃度[P]（Ｘ）とから、回帰式VI：
Ｔ＝ψＸ＋ω  （回帰式VI）
を作成する工程
（上記各工程中、ＧＡ濃度[L]は、グルコースが結合したリジン残基（ＤＯＦ−Ｌｙｓ）の濃度であり、ＧＡ濃度[P]は、糖化アミノ酸又は糖化ペプチドの濃度である）。
【請求項１４】
さらに以下の工程を含む、請求項１３に記載の方法。
Ｂ）標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｇ）を測定し、式II0を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｈ）を決定する工程；及び
Ｃ）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定することにより、標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程。
【請求項１５】
工程ｂ）に先立って、さらに以下の工程ａ１）〜ａ３）：
ａ１）下記式４：
アルブミンモル認証値（Ｌ）
＝アルブミン認証標準物質のアルブミン認証値／アルブミンの分子量      （式４）
を用いてアルブミンモル認証値（Ｌ）を決定する工程；
ａ２）アルブミン認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｍ）を測定する工程；
ａ３）アルブミンモル認証値（Ｌ）と、吸光度（Ｍ）から、下記式５：
Ｍ＝θＬ      （式５）
を満たすθを決定する工程；
を含み、工程Ａ4）がさらに以下の工程ｋ）：
ｋ）２種以上の被験材料におけるアルブミン由来の吸光度（Ｕ）を測定し、アルブミン濃度（Ｖ）を決定する工程；
を含み、工程Ａ4）が、工程ｊ）及びｋ）より後に、さらに以下の工程ｌ）：
ｌ）以下の式８：
ＧＡ値1（Ｗ）＝ＧＡ濃度[L]（Ｔ）／アルブミン濃度（Ｖ）    （式８）
を用いて、２種以上の被験材料におけるＧＡ値1（Ｗ）をＧＡ濃度[L]（Ｔ）から決定する工程；
を含み、方法がさらに以下の工程：
Ｆ１’）被験材料のＧＡ由来の吸光度（Ｓ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応する酵素法によるＧＡ濃度[P]（Ｎ’）を決定する工程；
Ｆ２’）工程Ｆ１’）で用いた被験材料のアルブミン由来の吸光度（Ｕ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するアルブミン濃度（Ｏ’）を決定する工程；
Ｆ５’）ＧＡ濃度[P]（Ｎ’）から回帰式VIを用いて、被験材料のＧＡ濃度[L]（Ｒ’）を決定する工程；及び
Ｆ６’）下記式７’：
被験材料のＧＡ値（Ｑ3’）＝ＧＡ濃度[L]（Ｒ’）／アルブミン濃度（Ｏ’）（式７’）
を用い、工程Ｆ１’）で用いた被験材料に設定したＧＡ認証値1（Ｗ）にトレーサブルなＧＡ値（Ｑ3’）を決定する工程；
を含む、請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
３種以上のＧＡ認証標準物質を用いる、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＧＡ認証値が、同位体希釈質量分析（ＩＤ−ＭＳ）法によるＧＡ認証値である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＧＡ認証値が、同位体希釈質量分析（ＩＤ−ＭＳ）法によるＧＡ認証値であり、前記ＧＡ認証標準物質がＪＣＣＲＭ  ６１１である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
請求項２の方法で決定された回帰式III、請求項７の方法で決定された回帰式IV、請求項１０の方法で決定された回帰式V及び請求項１３の方法で決定された回帰式VIからなる群から選択される回帰式；
ＧＡ測定用試薬；
アルブミン測定用試薬；及び
標準物質；
を含む、ＧＡ値測定用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖化アルブミン（ＧＡ）値の測定方法に関し、より詳細には、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病の診断及び管理を行う上で非常に重要な指標となる糖化タンパク質として、過去約１〜２ヶ月の平均血糖値を反映するヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）や、より直近の、過去約２週間の平均血糖値を反映するＧＡ等が日常検査に導入されている。いずれの糖化タンパク質にも複数の測定方法があり、各方法で測定対象が異なるところ、値の信頼性向上のため、ＨｂＡ１ｃの測定法については、国際臨床化学連合（ＩＦＣＣ）による標準化が行われ、世界で広く用いられているＮＧＳＰ値が現在国内でも採用されている。【０００３】
一方、ＧＡ値の測定については基準測定法が確立されておらず、測定値のトレーサビリティ体系が組めないという問題があった。そのため日本臨床化学会（ＪＳＣＣ）により「ＧＡ測定の標準法の確立」プロジェクトが発足し、その結果、新たに開発された同位体希釈質量分析法（ＩＤ−ＭＳ法）を用いるＧＡ測定のＪＳＣＣ勧告法が２００８年に発行された（非特許文献１）。さらに、このＪＳＣＣ勧告法での標準化をうけて、血清ベースの認証標準物質も２０１３年に発売された（社団法人検査医学標準物質機構、認証標準物質名：グリコアルブミン測定用常用参照標準物質：ＪＣＣＲＭ  ６１１）。【０００４】
このように、ＧＡ値の標準化では、ＩＤ−ＭＳ法を用いるＪＳＣＣ勧告法がレファレンス法として確立され、かかる方法による測定値がＧＡ認証値となるが、臨床検査の現場では、ＧＡ値の測定は、簡便且つ安価な定量方法である、吸光度測定と組み合わせた酵素法により行われており（非特許文献１）、この酵素法では酵素法独自の検量物質が使用されている（例えば、特許文献１〜２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】ＷＯ２００２／０６１１１９
【特許文献２】特開２００４−７７４５７号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】武井ら、臨床化学、２００８、３７：１７８−１９１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ＧＡ値の標準化が確立されたことにより、今後はＩＤ−ＭＳ法を用いるＪＳＣＣ勧告法での測定によるＧＡ測定値がＧＡ認証値となるが、ＩＤ−ＭＳ法は非常に時間がかかり、かつ高価な機器も必要な測定方法である。よって、臨床の現場では引き続き、吸光度測定を用いた酵素法によってＧＡ値を測定し、この酵素法によるＧＡ測定値を、ＧＡ認証値にトレーサブルな値とする必要がある。例えば、ＩＤ−ＭＳ法で測定したＧＡ値が認証値として定められた認証標準物質を上位基準とし、酵素法用標準物質の値へと紐付けたトレーサビリティ体系を確立する必要がある。【０００８】
この点、ＧＡ値の標準化の過程で、ＩＤ−ＭＳ法により得られたＧＡ認証値（ｍｍｏｌ／ｍｏｌ）が、酵素法を用いた液体クロマトグラフィ法（ＨＰＬＣ）の値であるＧＡ値（％）、すなわち、ＨＰＬＣで測定した糖化アルブミン面積／アルブミン面積（％）と相関することは確認されていた（非特許文献１）。【０００９】
一方、本発明者は、酵素法による測定用の標準物質を用いて作成した検量線を用いて、吸光度測定を用いた酵素法により、ＪＳＣＣ勧告法での認証標準物質（ＪＣＣＲＭ  ６１１）のＧＡ値（ｍｍｏｌ／ｍｏｌ）を測定したところ、認証標準物質に記載のＧＡ認証値と必ずしも一致しないことを見出した。また、認証標準物質のＧＡ認証値のレベルに応じて、ＧＡ認証値と、吸光度測定を用いた酵素法により測定したＧＡ値（ｍｍｏｌ／ｍｏｌ）との乖離の程度が異なることを見出した。その結果、単に、酵素法用標準物質を用いて作成した検量線に基づき、上記認証標準物質（ＪＣＣＲＭ  ６１１）と被験材料のＧＡ値を、吸光度測定を用いた酵素法により測定し、認証標準物質のＧＡ認証値と比較しても、ＧＡ認証値にトレーサブルな被験材料のＧＡ値を決定することができないことが明らかになった。【００１０】
本発明は、上記の問題に鑑みてなされたものであり、測定方法が異なることに起因して測定値が一致しない場合に測定値を一致させる方法を提供することを目的とする。本発明は、また、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値を、簡便且つ安価に、短時間で測定する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者は、上記課題を解決するため鋭意研究を重ねた結果、上記の不一致は、酵素法の測定対象物（ＧＡをプロテアーゼ分解して得られる糖化アミノ酸／糖化ペプチド）と、ＩＤ−ＭＳ法の測定対象物（ＧＡを加水分解して遊離した全ての「グルコースが結合したリジン残基（ＤＯＦ−Ｌｙｓ）」）の違いに起因することを見出した。プロテアーゼでは全てのＤＯＦ−Ｌｙｓ部位に完全に分解できないため、ＩＤ−ＭＳ法と酵素法の測定対象物質を同一にすることは非常に難しい。
このような背景のもと、本発明者は、ＩＤ−ＭＳ法で測定したＧＡ値が認証値として定められた認証標準物質を上位基準とし、酵素法等による測定用の標準物質の値へと紐付けたトレーサビリティ体系を確立し（図１）、酵素法による測定対象物の測定値を、ＩＤ−ＭＳ法による測定対象物の測定値と一致させる方法を見出した。また、吸光度測定を用いた酵素法により、被験材料の、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値を、簡便且つ安価に、短時間で測定する方法を見出した。すなわち本発明は以下のとおりである。【００１２】
[１]
以下の工程を含む、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法：
Ａ０）
被験材料のＧＡ値の実測値をＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値へ、
被験材料のＧＡ濃度[P]の実測値をＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]へ、
被験材料のＧＡ値の実測値をＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値から被験材料に設定したＧＡ値へ、又は
被験材料のＧＡ濃度[P]の実測値をＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]から被験材料に設定したＧＡ濃度[L]へ、
換算するための式を決定する工程；及び
Ｆ０）
ＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]から換算したＧＡ濃度[P]及びＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度から換算したアルブミン濃度を設定した標準物質を用いて作成した検量線を用いて、被験材料のＧＡ濃度[P]及びアルブミン濃度を測定し、工程Ａ０）で決定した回帰式を用いてＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値を決定する工程
（上記各工程において、ＧＡ濃度[L]は、グルコースが結合したリジン残基（ＤＯＦ−Ｌｙｓ）の濃度であり、ＧＡ濃度[P]は、糖化アミノ酸又は糖化ペプチドの濃度である）。
［２］
以下の工程を含む、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法：
Ａ１）以下のｂ）、ｃ）及びｅ０）〜ｈ）を含む工程により、回帰式IIIを決定する工程；
ｂ）以下の式１：
ＧＡ濃度[L]（Ａ）
＝ＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）×ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）    （式１）
を用いて、異なるＧＡ認証値を有する２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）を決定する工程；
ｃ）２種以上のＧＡ認証標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｄ）を測定する工程；
ｅ０）切片をゼロとする以下の直線の式II０：
Ｄ＝α０Ｅ      （式II０）
を作成する工程
（ここで、α０は、任意の正の値であり、Ｅは、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である）；
ｆ）式II０を用いて、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）を２種以上決定する工程；
ｇ）以下の式２：
ＧＡ値（Ｆ）＝ＧＡ濃度[P]（Ｅ）／アルブミン濃度（Ｃ）    （式２）
を用いて、ＧＡ値（Ｆ）を２種以上決定する工程；及び
ｈ）２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）と、対応する２種以上のＧＡ値（Ｆ）とから回帰式III：
Ｂ＝γＦ＋δ      （回帰式III）
を作成する工程
（上記各工程において、ＧＡ濃度[L]は、グルコースが結合したリジン残基（ＤＯＦ−Ｌｙｓ）の濃度であり、ＧＡ濃度[P]は、糖化アミノ酸又は糖化ペプチドの濃度である）。
［２−１］
式II０が以下のｄ）及びｅ）を含む工程により作成される式IIである、［２］に記載の方法。
ｄ）２種以上のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と、２種以上のＧＡ濃度[L]（Ａ）とから、回帰式I：
Ｄ＝αＡ＋β      （回帰式I）
を作成する工程；
ｅ）回帰式Iの切片をゼロとする式II：
Ｄ＝αＥ      （式II）
を作成する工程。
［２−２］
式II０が以下のｅ１）を含む工程により作成される式II１である、［２］に記載の方法。
ｅ１）切片をゼロとする以下の式II１：
Ｄ＝α１Ｅ      （式II１）
を作成する工程
（ここで、α１＝［工程ｃ）において測定したＧＡ認証標準物質のうちの１種のＧＡ認証標準物質のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）］／［工程ｂ）において決定した対応するＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）］である）。
［３］
さらに以下の工程を含む、［２］〜［２−２］のいずれかに記載の方法：
Ｂ）標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｇ）を測定し、式II０、式II又は式II１を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｈ）を決定する工程；及び
Ｃ）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定することにより、標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程。
［４］
工程Ｃ）が以下の工程Ｃ１）〜Ｃ３）を含む、［３］に記載の方法：
Ｃ１）ＧＡ認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｋ）と、ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）から、下記式３：
Ｋ＝εＣ      （式３）
を満たすεを決定する工程；
Ｃ２）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定する工程；及び
Ｃ３）吸光度（Ｉ）から、式３’：
Ｉ＝εＪ      （式３’）
を用いて標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程。
［５］
工程ｂ）に先立って、以下の工程ａ１）〜ａ３）：
ａ１）以下の式４：
アルブミンモル認証値（Ｌ）
＝アルブミン認証標準物質のアルブミン認証値／アルブミンの分子量      （式４）
を用いてアルブミンモル認証値（Ｌ）を決定する工程；
ａ２）アルブミン認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｍ）を測定する工程；及び
ａ３）アルブミンモル認証値（Ｌ）と、吸光度（Ｍ）から、下記式５：
Ｍ＝θＬ      （式５）
を満たすθを決定する工程；
を含み、
工程Ｃ）が以下の工程Ｃ２）及びＣ４）：
Ｃ２）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定する工程；及び
Ｃ４）吸光度（Ｉ）から、式５’：
Ｉ＝θＪ      （式５’）
を用いて標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程；
を含む、［３］に記載の方法。
［６］
さらに以下の工程Ｆ１）〜Ｆ４）を含む、［２］〜［５］のいずれかに記載の方法：
Ｆ１）ＧＡ認証標準物質のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するＧＡ濃度[P]（Ｎ）を決定する工程；
Ｆ２）工程Ｆ１）で用いたＧＡ認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｋ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するアルブミン濃度（Ｏ）を決定する工程；
Ｆ３）下記式６：
ＧＡ認証標準物質のＧＡ値（Ｐ）＝ＧＡ濃度[P]（Ｎ）／アルブミン濃度（Ｏ）    （式６）
を用いてＧＡ値（Ｐ）を決定する工程；及び
Ｆ４）ＧＡ値（Ｐ）と前記回帰式IIIを用いて、工程Ｆ１）で用いたＧＡ認証標準物質の認証値にトレーサブルなＧＡ値（Ｑ）を決定する工程。
［７］
以下の工程を含む、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法：
Ａ２）以下のｂ）、ｃ）、ｅ０）、ｆ）及びｉ）を含む工程により、回帰式IVを決定する工程；
ｂ）以下の式１：
ＧＡ濃度[L]（Ａ）
＝ＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）×ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）    （式１）
を用いて、異なるＧＡ認証値を有する２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）を決定する工程；
ｃ）２種以上のＧＡ認証標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｄ）を測定する工程；
ｅ０）切片をゼロとする以下の直線の式II０：
Ｄ＝α０Ｅ      （式II０）
を作成する工程
（ここで、α０は、任意の正の値であり、Ｅは、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である）；
ｆ）式II０を用いて、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）を２種以上決定する工程；
ｉ）２種以上のＧＡ濃度[L]（Ａ）とＧＡ濃度[P]（Ｅ）とから、回帰式IV：
Ａ＝κＥ＋λ  （回帰式IV）
を作成する工程
（上記各工程中、ＧＡ濃度[L]は、グルコースが結合したリジン残基（ＤＯＦ−Ｌｙｓ）の濃度であり、ＧＡ濃度[P]は、糖化アミノ酸又は糖化ペプチドの濃度である）。
［７−１］
式II０が以下のｄ）及びｅ）を含む工程により作成される式IIである、［７］に記載の方法。
ｄ）２種以上のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と、２種以上のＧＡ濃度[L]（Ａ）とから、回帰式I：
Ｄ＝αＡ＋β      （回帰式I）
を作成する工程；
ｅ）回帰式Iの切片をゼロとする式II：
Ｄ＝αＥ      （式II）
を作成する工程。
［７−２］
式II０が以下のｅ１）を含む工程により作成される式II１である、［７］に記載の方法。
ｅ１）切片をゼロとする以下の式II１：
Ｄ＝α１Ｅ      （式II１）
を作成する工程
（ここで、α１＝［工程ｃ）において測定したＧＡ認証標準物質のうちの１種のＧＡ認証標準物質のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）］／［工程ｂ）において決定した対応するＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）］である）。
［８］
さらに以下の工程を含む、［７］〜［７−２］のいずれかに記載の方法：
Ｂ）標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｇ）を測定し、式II０、式II又は式II１を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｈ）を決定する工程；
Ｃ）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定することにより、標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程。
［９］
さらに以下の工程を含む、［７］〜［８］のいずれかに記載の方法：
Ｆ１）ＧＡ認証標準物質のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応する酵素法によるＧＡ濃度[P]（Ｎ）を決定する工程；
Ｆ２）工程Ｆ１）で用いたＧＡ認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｋ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するアルブミン濃度（Ｏ）を決定する工程；
Ｆ５）ＧＡ濃度[P]（Ｎ）から回帰式IVを用いて、ＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ｒ）を決定する工程；及び
Ｆ６）下記式７： 
ＧＡ認証標準物質のＧＡ値（Ｑ１’）＝ＧＡ濃度[Ｌ]（Ｒ）／アルブミン濃度（Ｏ）    （式７）
を用いて、工程Ｆ１）で用いたＧＡ認証標準物質の認証値にトレーサブルなＧＡ値（Ｑ１’）を決定する工程。
［１０］
以下の工程を含む、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法：
Ａ３）以下のｂ）〜ｅ０）及びｊ）〜ｏ）を含む工程により、回帰式Vを決定する工程；
ｂ）以下の式１：
ＧＡ濃度[L]（Ａ）
＝ＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）×ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）    （式１）
を用いて、異なるＧＡ認証値を有する２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）を決定する工程；
ｃ）２種以上のＧＡ認証標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｄ）を測定する工程；
ｄ）２種以上のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と、２種以上のＧＡ濃度[L]（Ａ）とから、回帰式I：
Ｄ＝αＡ＋β      （回帰式I）
を作成する工程；
ｅ０）切片をゼロとする以下の直線の式II０：
Ｄ＝α０Ｅ      （式II０）
を作成する工程
（ここで、α０は、任意の正の値であり、Ｅは、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である）；
ｊ）２種以上の被験材料におけるＧＡ由来の吸光度（Ｓ）を測定し、回帰式Iを用いて対応するＧＡ濃度[L]（Ｔ）を決定する工程；
ｋ）２種以上の被験材料におけるアルブミン由来の吸光度（Ｕ）を測定し、アルブミン濃度（Ｖ）を決定する工程；
ｌ）以下の式８：
ＧＡ値１（Ｗ）＝ＧＡ濃度[L]（Ｔ）／アルブミン濃度（Ｖ）    （式８）
を用いて、２種以上の被験材料のＧＡ値１（Ｗ）をＧＡ濃度[L]（Ｔ）から決定する工程；
ｍ）２種以上の被験材料におけるＧＡ由来の吸光度（Ｓ）から、式II０を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｘ）を決定する工程；
ｎ）以下の式９：
ＧＡ値２（Ｙ）＝ＧＡ濃度[P]（Ｘ）／アルブミン濃度（Ｖ）    （式９）
を用いて、２種以上の被験材料のＧＡ値２（Ｙ）をＧＡ濃度[P]（Ｘ）から決定する工程；
ｏ）２種以上の被験材料のＧＡ値１（Ｗ）と、対応する２種以上のＧＡ値２（Ｙ）とから回帰式V：
Ｗ＝πＹ＋φ      （回帰式V）
を作成する工程
（上記各工程中、ＧＡ濃度[L]は、グルコースが結合したリジン残基（ＤＯＦ−Ｌｙｓ）の濃度であり、ＧＡ濃度[P]は、糖化アミノ酸又は糖化ペプチドの濃度である）。
［１０−１］
式II０が以下のｅ）を含む工程により作成される式IIである、［１０］に記載の方法。
ｅ）回帰式Iの切片をゼロとする式II：
Ｄ＝αＥ      （式II）
を作成する工程；
［１０−２］
式II０が以下のｅ１）を含む工程により作成される式II１である、［１０］に記載の方法。
ｅ１）切片をゼロとする以下の式II１：
Ｄ＝α１Ｅ      （式II１）
を作成する工程
（ここで、α１＝［工程ｃ）において測定したＧＡ認証標準物質のうちの１種のＧＡ認証標準物質のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）］／［工程ｂ）において決定した対応するＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）］である）。
［１１］
さらに以下の工程を含む、［１０］〜［１０−２］のいずれかに記載の方法：
Ｂ）標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｇ）を測定し、式II０、式II又は式II１を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｈ）を決定する工程；
Ｃ）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定することにより、標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程。
［１２］
さらに以下の工程を含む、［１０］〜［１１］のいずれかに記載の方法：
Ｆ１’）被験材料のＧＡ由来の吸光度（Ｓ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するＧＡ濃度[P]（Ｎ’）を決定する工程；
Ｆ２’）工程Ｆ１’）で用いた被験材料のアルブミン由来の吸光度（Ｕ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するアルブミン濃度（Ｏ’）を決定する工程；及び
Ｆ３’）下記式６’：
被験材料のＧＡ値（Ｐ’）＝ＧＡ濃度[P]（Ｎ’）／アルブミン濃度（Ｏ’）（式６’）
を用いてＧＡ値（Ｐ’）を決定する工程。
Ｆ４’）ＧＡ値（Ｐ’）と前記回帰式Vを用いて、工程Ｆ１’）で用いた被験材料に値付けた認証ＧＡ値１（Ｗ）にトレーサブルなＧＡ値（Ｑ２’）を決定する工程。
［１３］
以下の工程を含む、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法
Ａ４）以下のｂ）〜ｅ０）、ｊ）、ｍ）、及びｐ）を含む工程により、回帰式VIを決定する工程；
ｂ）以下の式１：
ＧＡ濃度[L]（Ａ）
＝ＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）×ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）    （式１）
を用いて、異なるＧＡ認証値を有する２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）を決定する工程；
ｃ）２種以上のＧＡ認証標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｄ）を測定する工程；
ｄ）２種以上のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と、２種以上のＧＡ濃度[L]（Ａ）とから、回帰式I：
Ｄ＝αＡ＋β      （回帰式I）
を作成する工程；
ｅ０）切片をゼロとする以下の直線の式II０：
Ｄ＝α０Ｅ      （式II０）
を作成する工程
（ここで、α０は、任意の正の値であり、Ｅは、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である）；
ｊ）２種以上の被験材料におけるＧＡ由来の吸光度（Ｓ）を測定し、回帰式Iを用いて対応するＧＡ濃度[L]（Ｔ）を決定する工程；
ｍ）２種以上の被験材料におけるＧＡ由来の吸光度（Ｓ）から、式II０を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｘ）を決定する工程；及び
ｐ）２種以上の被験材料のＧＡ濃度[L]（Ｔ）とＧＡ濃度[P]（Ｘ）とから、回帰式VI：
Ｔ＝ψＸ＋ω  （回帰式VI）
を作成する工程
（上記各工程中、ＧＡ濃度[L]は、グルコースが結合したリジン残基（ＤＯＦ−Ｌｙｓ）の濃度であり、ＧＡ濃度[P]は、糖化アミノ酸又は糖化ペプチドの濃度である）。
［１３−１］
式II０が以下のｅ）を含む工程により作成される式IIである、［１３］に記載の方法。
ｅ）回帰式Iの切片をゼロとする式II：
Ｄ＝αＥ      （式II）
を作成する工程。
［１３−２］
式II０が以下のｅ１）を含む工程により作成される式II１である、［１３］に記載の方法。
ｅ１）切片をゼロとする以下の式II１：
Ｄ＝α１Ｅ      （式II１）
を作成する工程
（ここで、α１＝［工程ｃ）において測定したＧＡ認証標準物質のうちの１種のＧＡ認証標準物質のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）］／［工程ｂ）において決定した対応するＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）］である）。
［１４］
さらに以下の工程を含む、［１３］〜［１３−２］のいずれかに記載の方法。
Ｂ）標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｇ）を測定し、式II０、式II又は式II１を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｈ）を決定する工程；及び
Ｃ）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定することにより、標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程。
［１５］
工程ｂ）に先立って、さらに以下の工程ａ１）〜ａ３）：
ａ１）下記式４：
アルブミンモル認証値（Ｌ）
＝アルブミン認証標準物質のアルブミン認証値／アルブミンの分子量      （式４）
を用いてアルブミンモル認証値（Ｌ）を決定する工程；
ａ２）アルブミン認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｍ）を測定する工程；
ａ３）アルブミンモル認証値（Ｌ）と、吸光度（Ｍ）から、下記式５：
Ｍ＝θＬ      （式５）
を満たすθを決定する工程；
を含み、工程Ａ４）がさらに以下の工程ｋ）：
ｋ）２種以上の被験材料におけるアルブミン由来の吸光度（Ｕ）を測定し、アルブミン濃度（Ｖ）を決定する工程；
を含み、工程Ａ４）が、工程ｊ）及びｋ）より後に、さらに以下の工程ｌ）：
ｌ）以下の式８：
ＧＡ値１（Ｗ）＝ＧＡ濃度[L]（Ｔ）／アルブミン濃度（Ｖ）    （式８）
を用いて、２種以上の被験材料におけるＧＡ値１（Ｗ）をＧＡ濃度[L]（Ｔ）から決定する工程；
を含み、方法がさらに以下の工程：
Ｆ１’）被験材料のＧＡ由来の吸光度（Ｓ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応する酵素法によるＧＡ濃度[P]（Ｎ’）を決定する工程；
Ｆ２’）工程Ｆ１’）で用いた被験材料のアルブミン由来の吸光度（Ｕ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するアルブミン濃度（Ｏ’）を決定する工程；
Ｆ５’）ＧＡ濃度[P]（Ｎ’）から回帰式VIを用いて、被験材料のＧＡ濃度[L]（Ｒ’）を決定する工程；及び
Ｆ６’）下記式７’：
被験材料のＧＡ値（Ｑ３’）＝ＧＡ濃度[Ｌ]（Ｒ’）／アルブミン濃度（Ｏ’）（式７’）
を用い、工程Ｆ１’）で用いた被験材料に設定したＧＡ認証値１（Ｗ）にトレーサブルなＧＡ値（Ｑ３’）を決定する工程；
を含む、［１３］〜［１４］のいずれかに記載の方法。
［１６］
３種以上のＧＡ認証標準物質を用いる、［１］〜［１５］のいずれかに記載の方法。
［１７］
前記ＧＡ認証値が、同位体希釈質量分析（ＩＤ−ＭＳ）法によるＧＡ認証値である、［１］〜［１６］のいずれかに記載の方法。
［１８］
前記ＧＡ認証値が、同位体希釈質量分析（ＩＤ−ＭＳ）法によるＧＡ認証値であり、前記ＧＡ認証標準物質がＪＣＣＲＭ  ６１１である、［１］〜［１６］のいずれかに記載の方法。
［１９］
［２］、［２−１］又は［２−２］の方法で決定された回帰式III、［７］、［７−１］又は［７−２］の方法で決定された回帰式IV、［１０］、［１０−１］又は［１０−２］の方法で決定された回帰式V及び［１３］、［１３−１］又は［１３−２］の方法で決定された回帰式VIからなる群から選択される回帰式；
ＧＡ測定用試薬；
アルブミン測定用試薬；及び
標準物質； 
を含む、ＧＡ値測定用キット。
［２０］
［２］、［２−１］又は［２−２］の方法で決定された式III、［７］、［７−１］又は［７−２］の方法で決定された式IV、［１０］、［１０−１］又は［１０−２］の方法で決定された式V及び［１３］、［１３−１］又は［１３−２］の方法で決定された式VIからなる群から選択される式が設定された演算部；
式II０、式II又は式II１によってＧＡ濃度[P]が設定された標準物質を用いて検量線を作成する検量線作成部、若しくは式II０、式II又は式II１が演算に組み込まれている検量線作成部；
及び
ＧＡ値を測定する測定部； 
を含む、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定装置。
［２１］
以下の１）標準物質と２）演算プログラムを用いることを特徴とする、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法：
１）上記工程ｅ０）で作成された式II０、工程ｅ）で作成された式II又は工程ｅ１）で作成された式II１によってＧＡ濃度[P]が設定された標準物質；及び
２）［２］、［２−１］又は［２−２］の方法で決定された式III、［７］、［７−１］又は［７−２］の方法で決定された式IV、［１０］、［１０−１］又は［１０−２］の方法で決定された式V及び［１３］、［１３−１］又は［１３−２］の方法で決定された式VIからなる群から選択される式が組み込まれた演算プログラム。【００１３】
なお、前記［２］〜［５］のように引用する項番号が範囲で示され、その範囲内に［２−２］等の枝番号を有する項が配置されている場合には、［２−２］等の枝番号を有する項も引用されることを意味する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、測定方法が異なることに起因して測定値が一致しない場合に測定値を一致させる方法を提供することができる。例えば、簡便且つ安価で短時間で測定可能な酵素法を用いて、被験材料の、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値を測定することが可能となる。本発明によれば、また、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値を、簡便且つ安価に、短時間で測定する方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本実施形態の一態様において確立したトレーサビリティ体系図
【図２】実施例１において、アルブミン認証標準物質の単位換算後のアルブミンモル認証値（Ｌ）を横軸、アルブミン由来の吸光度（Ｍ）を縦軸にプロットした回帰直線式（式５）
【図３】実施例１において、糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[L]（Ａ）を横軸、糖化アルブミン由来の吸光度（Ｄ）を縦軸にプロットした回帰直線式（I）
【図４】実施例２において、回帰直線式（I）を切片が０となるように平行移動した直線式（II）
【図５】実施例２において、糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン認証値（Ｂ）を縦軸、糖化アルブミン値（Ｆ）を横軸にプロットした回帰直線式（III）
【図６】実施例３において、糖化アルブミン認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）を横軸、アルブミン吸光度（Ｋ）を縦軸にプロットした回帰直線式（式３）
【図７】実施例６において、回帰直線式（I）を、実施例１で得られた糖化アルブミン認証標準物質ＨＨの糖化アルブミン濃度[L]（Ａ）３３０．０μｍｏｌ／Ｌを基準に切片が０となるように傾きを変更した直線式（II(d)）
【図８】実施例６において、糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン認証値（Ｂ）を縦軸、糖化アルブミン値（Ｆ（ｄ））を横軸にプロットした回帰直線式（III(d)）
【図９】実施例９において、糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[L]（Ａ）を縦軸、糖化アルブミン濃度[P]（Ｅ）を横軸にプロットした回帰直線式（IV）
【図１０】実施例１０において、被験材料の糖化アルブミン値（Ｗ）（設定値）を縦軸、糖化アルブミン値（Ｙ）を横軸にプロットした回帰直線式（V）
【図１１】実施例１１において、被験材料の糖化アルブミン濃度[L]（Ｔ）を縦軸、糖化アルブミン濃度[P]（Ｘ）を横軸にプロットした回帰直線式（VI）
【図１２】実施例１２において、低値（Ｌ）及び高値（Ｈ）標準物質の糖化アルブミン濃度[L]（Ｔ−２）を横軸、糖化アルブミン由来の吸光度（Ｓ−２）を縦軸にプロットした回帰直線式（I−２）
【図１３】実施例１２において、回帰直線式（I−２）を切片が０となるように平行移動した直線式（II−２）
【図１４】実施例１２において、低値（Ｌ）及び高値（Ｈ）標準物質の糖化アルブミン値（Ｗ−２）（設定値）を縦軸、糖化アルブミン値（Ｙ−２）（測定値）を横軸にプロットした回帰直線式（III−２）
【図１５】実施例１３において、糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[L]（Ａ（ａ））を横軸、糖化アルブミン由来の吸光度（Ｄ（ａ））を縦軸にプロットした回帰直線式（I(a)）
【図１６】実施例１３において、回帰直線式（I(a)）を切片が０となるように平行移動した直線式（II(a)）
【図１７】実施例１３において、糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン認証値（Ｂ）を縦軸、糖化アルブミン値（Ｆ（ａ））を横軸にプロットした回帰直線式（III(a)）
【図１８】実施例１４において、糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[L]（Ａ（ｂ））を横軸、糖化アルブミン由来の吸光度（Ｄ（ｂ））を縦軸にプロットした回帰直線式（I(b)）
【図１９】実施例１４において、回帰直線式（I(b)）を切片が０となるように平行移動した直線式（II(b)）
【図２０】実施例１４において、糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン認証値（Ｂ）を縦軸、糖化アルブミン値（Ｆ（ｂ））を横軸にプロットした回帰直線式（III(b)）
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明の実施形態（「本実施形態」ともいう。）に基づき、本発明について詳細に説明する。以下の実施形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明をこの実施の形態のみに限定する趣旨ではない。
【００１７】
一態様において、本実施形態の、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法は、回帰式IIIを決定する工程（Ａ１）を含む。
本実施形態において、糖化アルブミン（ＧＡ。グリコアルブミンともいう。）とは、以下に詳述するＪＳＣＣ勧告法により定義される、「グルコースが結合したリジン残基、(Nε-(1-deoxy-D-fructose-1-yl)-L-lysine，ＤＯＦ−Ｌｙｓ)を有するアルブミン」である。
【００１８】
本実施形態において、ＧＡ値とは、ＪＳＣＣ勧告法により定義される「アルブミンのＤＯＦ−Ｌｙｓとアルブミンのモル比」である。ＧＡ値の単位はｍｍｏｌ／ｍｏｌであり、下記式で算出できる。
ＧＡ値＝ＧＡ濃度／アルブミン濃度
ここで、ＧＡ濃度については、測定原理の違いから、酵素法を用いて測定した場合のＧＡ濃度は糖化アミノ酸もしくは糖化ペプチドの濃度を指し、本実施形態において、ＧＡ濃度[P]ということがある。一方、ＩＤ−ＭＳ法を用いて測定した場合のＧＡ濃度はＤＯＦ−Ｌｙｓ濃度を指し、本実施形態において、ＧＡ濃度[L]ということがある。
【００１９】
本実施形態において、認証値とは、認証標準物質に表示された値であり、標準測定操作法を用いて測定される。例えば、ＧＡ認証値とは、ＧＡ認証標準物質に表示された値である。本実施形態の好ましい態様において、ＧＡ認証値とはＩＤ−ＭＳ法によるＧＡ認証値を指し、非特許文献１に記載の方法（ＪＳＣＣ勧告法）で値付けされた認証済みＧＡ値を指す。
【００２０】
本実施形態において、ＧＡ測定のＪＳＣＣ勧告法とは、非特許文献１に記載の方法を指し、血清アルブミン分画を加水分解して遊離した全てのＤＯＦ−Ｌｙｓ及びリジンをＩＤ−ＭＳで同時に測定するＧＡ測定法である。ＪＳＣＣ勧告法によるＧＡ値測定は、高価な試薬及びＬＣ−ＭＳを使用し、１回の測定に数日を要する非常に複雑な測定方法である。これは、ＧＡ中の５９個のリジン残基すべてにグルコースが結合してＤＯＦ−Ｌｙｓを形成するわけではないこと、アルブミンのペプチド結合を加水分解する条件下で、ＤＯＦ−Ｌｙｓも分解してしまうため、ＤＯＦ−Ｌｙｓの安定化や内部標準物質としてのＤＯＦ−Ｌｙｓの安定同位体の使用が必要になるためである。
【００２１】
本実施形態において、「認証標準物質」とは、JIS Q 0030で定義されるとおり、「認証書の付いた標準物質で、一つ以上の特性値が、その特性値を表す単位を正確な現示へのトレーサビリティが確立された手順によって認証され、各認証値にはある表記された信頼水準での不確かさが付いているもの」を指す。
【００２２】
本実施形態において、「ＧＡ認証標準物質」とは、糖化アルブミンを測定するための認証標準物質であり、例えば、一般社団法人：検査医学標準物質機構 が提供しているグリコアルブミン測定用常用参照標準物質（ＪＣＣＲＭ  ６１１。Ｍ、Ｈ、ＨＨの３種の異なる濃度レベルが存在する）が挙げられる。また、地域、使用時の技術水準により当該技術分野で取り決められた糖化アルブミンを測定するための認証標準物質であってもよい。本実施形態の好ましい態様においては、ＧＡ認証標準物質として、３種以上のＧＡ認証標準物質を用いることができる。例えば、３種の異なる濃度レベルのＪＣＣＲＭ  ６１１であるＭ、Ｈ及びＨＨを用いることができる。
【００２３】
本実施形態において、「アルブミン認証標準物質」とは、アルブミンを測定するための認証標準物質であり、アルブミンが含まれ、アルブミンの認証値が設定されている認証標準物質であれば特に限定されない。例えば、一般社団法人  検査医学標準物質機構が提供している、ＩＦＣＣ血漿タンパク  国際標準物質（ＥＲＭ−ＤＡ  ４７０ｋ／ＩＦＣＣ）、アルブミン測定用常用参照標準物質ＪＣＣＲＭ６１３−１等が挙げられる。また、地域、使用時の技術水準により当該技術分野で取り決められたアルブミンを測定するための認証標準物質であってもよい。
【００２４】
本実施形態において「トレーサブルな」「トレーサブルになる」とは、JIS Q 0030で定義されているとおり、「不確かさがすべて表記された、切れ目のない比較の連鎖を通じて、通常は国家標準又は国際標準である決められた標準に関連づけられ得る測定結果又は標準の値の性質、になる」ことを指す。本実施形態の一態様において、所定の測定結果がトレーサブルになるとは、±５％の範囲で測定結果が認証標準物質の認証値にリンクすることをいう。
【００２５】
本実施形態の一態様において、回帰式IIIを決定する工程は以下の工程ｂ）〜ｈ）を含む。
工程ｂ）は、式１（ＧＡ濃度[L]（Ａ）＝ＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）×ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ））を用いて、異なるＧＡ認証値を有する２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）を決定する工程である。ここで、ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）は、任意の方法で測定又は決定することができ、たとえば、酵素法等を用いて測定することができる。また、ＧＡ認証標準物質の認証書に記載のアルブミン濃度を参考値として用いて工程ｂ）を実施することも可能である。
【００２６】
工程ｃ）は、２種以上のＧＡ認証標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｄ）を測定する工程である。なお、ＧＡ由来の吸光度とは、ＧＡ測定用試薬等によって得られるＧＡに基づく吸光度であり、実際に被験材料を、ＧＡ測定用試薬等を用いて測定した際に得られた吸光度からブランク吸光度を引いた値や、ＨＰＬＣ等でＧＡを分離してＧＡ測定用試薬等によって測定される吸光度である。
吸光度の測定は、公知の任意の手法を用いて実施することができる。例えば、特開２００１−５４３９８号公報等に記載の方法を参照してＧＡの測定用試薬を用いて実施することができる。ＧＡの測定用試薬としては、酸化酵素、分解酵素、発色剤などを含み、ＧＡを酸化／分解するなどして過酸化水素を生じさせ、その過酸化水素と反応した発色剤の吸光度を測定してＧＡ濃度を測定できるものであれば特に限定されない。ＧＡの測定用試薬は、後述する標準物質を含んでもよく、希釈液、安定化剤などの他の成分を含んでもよい。また、各成分がそれぞれ異なる容器に収容されていてもよい。試薬の具体例については、後述の実施例を参照することができ、例えば、ＧＡ試薬  ルシカ（登録商標）ＧＡ−Ｌ等を用いることができるが、これに限定されない。
【００２７】
工程ｄ）は、２種以上のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と、２種以上のＧＡ濃度[L]（Ａ）とから、回帰式I：
Ｄ＝αＡ＋β      （回帰式I）
を作成する工程である。工程ｄ）は、例えば、後述の実施例に示すとおり、２種以上のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）を縦軸に、２種以上のＧＡ濃度[L]（Ａ）を横軸にプロットし、回帰直線式を設定することにより実施することができる。
【００２８】
工程ｅ０）は、切片をゼロとする直線式II０：
Ｄ＝α０Ｅ      （式II０）
を作成する工程である。ここで、Ｅは、ＧＡ由来の吸光度Ｄと比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である。工程ｅ０）は、任意の正の傾きα０を設定することにより実施することができる。また、工程ｅ０）は、工程ｃ）を実施後、工程ｄ）を行わずに実施することができる。
【００２９】
工程ｅ）は、工程ｅ０）における傾きα０の式II０として、工程ｄ）にて得られた回帰式Ｉの切片をゼロとする式II：
Ｄ＝αＥ      （式II）
を作成する工程である。ここでＥは、ＧＡ由来の吸光度Ｄと比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である。
【００３０】
工程ｅ１）は、工程ｅ０）における傾きα０の式II０として、工程ｃ）において測定した２種以上のＧＡ認証標準物質のうちの１種のＧＡ認証標準物質のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と、工程ｂ）において決定した対応するＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[Ｌ]（Ａ）とから設定される点及び原点の２点を通る、切片をゼロとする式II１：
Ｄ＝α１Ｅ      （式II１）
を作成する工程である。ここで、傾きα１は、［工程ｃ）において測定したＧＡ認証標準物質のうちの１種のＧＡ認証標準物質のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）］／［工程ｂ）において決定した対応するＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[Ｌ]（Ａ）］であり、Ｅは、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である。
工程ｅ１）は、例えば、後述の実施例に示すとおり、ＧＡ認証標準物質ＨＨにおけるＧＡ由来の吸光度（Ｄ）を縦軸に、対応するＧＡ濃度[Ｌ]（Ａ）横軸にプロットし、この点と原点との２点を通る直線式を設定することにより実施することができる。
【００３１】
工程ｆ）は、式II０を用いて、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）を２種以上決定する工程である。工程ｃ）において測定したＧＡ由来の吸光度（Ｄ）から、式II０を用いて、すなわち、Ｄ＝α０Ｅの式により、対応するＧＡ濃度[P]（Ｅ）を決定することができる。
【００３２】
工程ｇ）は、式２（ＧＡ値（Ｆ）＝ＧＡ濃度[P]（Ｅ）／アルブミン濃度（Ｃ））を用いて、ＧＡ値（Ｆ）を２種以上決定する工程である。この際、ＧＡ値の単位をｍｍｏｌ／ｍｏｌにするために適宜単位合わせをしてもよい。例えば、ＧＡ濃度[P]（μｍｏｌ／Ｌ）をアルブミン濃度（μｍｏｌ／Ｌ）で割る場合、１０００をかけて単位合わせをすることができる。
【００３３】
工程ｈ）は、２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）と、対応する２種以上のＧＡ値（Ｆ）とから回帰式III：
Ｂ＝γＦ＋δ      （回帰式III）
を作成する工程である。工程ｈ）は、例えば、後述の実施例に示すとおり、２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）を縦軸に、対応する２種以上のＧＡ値（Ｆ）を横軸にプロットし、回帰直線式を設定することにより実施することができる。
このように回帰式IIIを設定することで、ＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値と、ＧＡ認証標準物質を酵素法で測定した場合のＧＡ値とを相関させることができる。
【００３４】
本実施形態の、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法は、さらに以下の工程Ｂ）及びＣ）：
Ｂ）標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｇ）を測定し、式II０、式II又は式II１を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｈ）を決定する工程；及び
Ｃ）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定することにより、標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程；
を含むことができる。これらの工程により、認証値から換算した濃度を標準物質に値付けることができる。なお、アルブミン由来の吸光度とは、アルブミン測定用試薬等によって得られるアルブミンに基づく吸光度であり、実際に被験材料を、アルブミン測定用試薬を用いて測定した際に得られた吸光度からブランク吸光度を引いた値や、ＨＰＬＣ等でアルブミンを分離してアルブミン測定用試薬等によって測定される吸光度である。
【００３５】
本実施形態において、「標準物質」とは、JIS Q 0035：2008で定義されるとおり、「一つ以上の規定特性について、十分均質、かつ、安定であり、測定プロセスでの使用目的に適するように作製された物質」を指す。標準物質は、校正試料、キャリブレーター、検量線作成用物質とも呼ばれ、検量線を作成する際に用いる物質である。例えば、上記工程Ｂ）及びＣ）で用いる標準物質として、酵素法によりＧＡ濃度及びアルブミン濃度を測定する際の標準物質を用いることができる。そのような標準物質としては、例えば、ＧＡ−Ｌキャリブレーター（旭化成ファーマ（株））、校准品
【化１】
0006720311.tif 000002
、Ｇｌｙｃａｔｅｄ  ａｌｂｕｍｉｎ  Ｃａｌｉｂｒａｔｏｒ（ＩＶＤＬａｂ  ＣＯ．，ＬＴＤ）、Ｇｌｙｃａｔｅｄ  Ｓｅｒｕｍ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｃａｌｉｂｒａｔｏｒｓ（Ｄｉａｚｙｍｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、及び糖化白蛋白校准品（寧波美康生物科技有限公司）等が挙げられる。
【００３６】
工程Ｂ）において、ＧＡ由来の吸光度（Ｇ）の測定は、上記工程ｃ）を参照して実施することができる。測定した吸光度（Ｇ）から、式II０、式II又は式II１を用いて、すなわち、Ｇ＝α０Ｈ、Ｇ＝αＨ又はＧ＝α１Ｈの式により、対応するＧＡ濃度[P]（Ｈ）を決定することができる。
【００３７】
工程Ｃ）において、アルブミン由来の吸光度（Ｉ）の測定は、公知の任意の手法を用いて実施することができる。例えば、特開２００９−１５９９８９号公報等に記載の方法を参照してアルブミンの測定用試薬を用いて実施することができる。アルブミンの測定用試薬としては、色素などを含み、アルブミンと色素が結合することにより、生じる色素結合体の吸光度を測定して、アルブミン濃度を測定できるものであればよい。アルブミンの測定用試薬は、上記の標準物質を含んでもよく、希釈液、安定化剤などの他の成分を含んでもよい。アルブミンの測定方法としては例えばＢＣＧ法、ＢＣＰ法、改良ＢＣＰ法などが挙げられる。ＢＣＧ法とは、アルブミンとブロモクレゾールグリーン（ＢＣＧ）が結合した色素結合体を生成する測定原理を利用した測定方法である。ＢＣＰ法とは、アルブミンとブロモクレゾールパープル（ＢＣＰ）が結合した色素結合体を生成する測定原理を利用した測定方法である。ＢＣＧ法と比較し、グロブリンへの特異性が低いことを特徴とする。改良ＢＣＰ法とは、前記ＢＣＰ法を基本原理とし、誤差の要因であるＳＨ基を持つヒトメルカプトアルブミン（ＨＭＡ）の影響を回避する為、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）及び５、５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）を試薬として含む方法をいう。色素は、ブロモクレゾールパープル、ブロモクレゾールグリーン等アルブミンと結合する色素であればどれを用いてもよい。試薬の具体例については後述の実施例を参照することができ、例えば改良ＢＣＰ法によるアルブミン測定試薬であるルシカ（登録商標）ＧＡ−Ｌ、ＢＣＧ法によるアルブミン測定試薬である糖化白蛋白測定試剤盒
【化２】
0006720311.tif 000003
及びＧｌｙｃａｔｅｄ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ（ＩＶＤＬａｂ  ＣＯ．，ＬＴＤ）等を用いることができるが、これに限定されない。
【００３８】
一態様において、工程Ｃ）は、以下の工程Ｃ１）〜Ｃ３）：
Ｃ１）ＧＡ認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｋ）と、ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）から、下記式３：
Ｋ＝εＣ      （式３）
を満たすεを決定する工程；
Ｃ２）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定する工程；及び
Ｃ３）吸光度（Ｉ）から、式３’：
Ｉ＝εＪ      （式３’）
を用いて標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程；
を含み、これにより標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定することができる。
工程Ｃ１）におけるＧＡ認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｋ）及びＣ２）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）は、工程Ｃ）を参照して測定することができる。
【００３９】
別の態様において、本実施形態の、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法は、工程ｂ）に先立って、以下の工程ａ１）〜ａ３）：
ａ１）以下の式４：
アルブミンモル認証値（Ｌ）
＝アルブミン認証標準物質のアルブミン認証値／アルブミンの分子量      （式４）
を用いてアルブミンモル認証値（Ｌ）を決定する工程；
ａ２）アルブミン認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｍ）を測定する工程；及び
ａ３）アルブミンモル認証値（Ｌ）と、吸光度（Ｍ）から、下記式５：
Ｍ＝θＬ      （式５）
を満たすθを決定する工程；
を含み、
工程Ｃ）が以下の工程Ｃ２）及びＣ４）：
Ｃ２）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定する工程；及び
Ｃ４）吸光度（Ｉ）から、式５’：
Ｉ＝θＪ      （式５’）
を用いて標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程；
を含み、これにより標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定することができる。
【００４０】
工程ａ１）は、後述の実施例を参照して実施することができ、例えば、アルブミン認証標準物質のアルブミン認証値（ｇ／ｄＬ）を、アルブミンの分子量で割り、アルブミンモル認証値（μｍｏｌ／Ｌ）を決定することができる。工程ａ２）及びＣ２）は、上記工程Ｃ）を参照して実施することができる。アルブミンの分子量は約６６０００であり、より具体的には公知の文献に記載の分子量を用いることができ、例えば（Ｇｅｉｓｏｗ  ＭＪ  ｅｔ．  Ａｌ．  Ｉｎ：  Ｖｉｌｌａｆｒａｎｃａ  ＪＪ，  ｅｄ．  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ：  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  １９９１：  ５７６−５７２）に記載の６６４３８を用いてもよい。
【００４１】
本実施形態の、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法は、さらに以下の工程Ｆ１）〜Ｆ４）：
Ｆ１）ＧＡ認証標準物質のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するＧＡ濃度[P]（Ｎ）を決定する工程；
Ｆ２）工程Ｆ１）で用いたＧＡ認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｋ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するアルブミン濃度（Ｏ）を決定する工程；
Ｆ３）下記式６：
ＧＡ認証標準物質のＧＡ値（Ｐ）＝ＧＡ濃度[P]（Ｎ）／アルブミン濃度（Ｏ）    （式６）
を用いてＧＡ値（Ｐ）を決定する工程；及び
Ｆ４）ＧＡ値（Ｐ）と前記回帰式IIIを用いて、工程Ｆ１）で用いたＧＡ認証標準物質の認証値にトレーサブルなＧＡ値（Ｑ）を決定する工程；
を含むことができる。これらの工程により、標準物質を用いた検量線で認証標準物質を測定して換算することで認証値が算出できることを確認できる。
【００４２】
工程Ｆ１）及びＦ３）における標準物質は、特に限定されないが、本実施形態の方法において、工程Ｂ）及びＣ）と工程Ｆ１）及びＦ２）を共に実施する場合、工程Ｂ）及びＣ）で用いる標準物質と、工程Ｆ１）及びＦ２）で用いる標準物質は同一である。
工程Ｆ１）における検量線の作成は、ＧＡ濃度[P]の規定された標準物質について、工程ｃ）の方法と同様にＧＡ由来の吸光度を測定して実施することができる。
工程Ｆ２）における検量線の作成は、アルブミン濃度の規定された標準物質について、工程Ｃ）の方法と同様にアルブミン由来の吸光度を測定して実施することができる。
工程Ｆ３）では、工程Ｆ１）で決定したＧＡ濃度[P]（Ｎ）を、工程Ｆ２）で決定したアルブミン濃度（Ｏ）で割ることにより、ＧＡ認証標準物質のＧＡ値（Ｐ）を決定する。この際、ＧＡ値の単位をｍｍｏｌ／ｍｏｌにするために適宜単位合わせをしてもよい。例えば、ＧＡ濃度[P]（μｍｏｌ／Ｌ）をアルブミン濃度（μｍｏｌ／Ｌ）で割る場合、１０００をかけて単位合わせをすることができる。
さらに工程Ｆ４）で、ＧＡ値（Ｐ）、回帰式IIIを用いて、すなわち、Ｑ＝γＰ＋δに当てはめることにより、工程Ｆ１）で用いたＧＡ認証標準物質の認証値にトレーサブルなＧＡ値（Ｑ）を決定することができる。工程Ｆ４で得られたＧＡ値（Ｑ）が、工程Ｆ１）で用いたＧＡ認証標準物質の認証値と一致することを確認することで、回帰式IIIを用いてＧＡ値のトレーサビリティ体系が確立したことを確認することができる。すなわち、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値を、回帰式IIIと酵素法を用いて、簡便に測定可能であることが確認される。
【００４３】
上記の各工程は、それぞれの工程において必要な測定値、回帰式等が得られる限り、順不同に実施することができる。例えば、工程ｂ）とｃ）とは順不同に実施することができ、工程Ｂ）とＣ）とは順不同に実施することができ、工程Ｆ１）とＦ２）とは順不同に実施することができる。
【００４４】
本実施形態の、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法は、工程ｂ）に先立って、さらに以下の工程ａ）：異なるＧＡ認証値を有する２種以上のＧＡ認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｚ）を測定することにより、アルブミン濃度（Ｃ）を決定する工程；を含むことができる。
工程ａ）は、上記工程Ｃ）を参照して実施することができ、例えば、ＢＣＧ法、ＢＣＰ法又は改良ＢＣＰ法を用いて実施することができる。
【００４５】
一態様において、工程ａ）は、以下の工程ａ１）〜ａ５）： 
ａ１）以下の式４：
アルブミンモル認証値（Ｌ）
＝アルブミン認証標準物質のアルブミン認証値／アルブミンの分子量      （式４）
を用いてアルブミンモル認証値（Ｌ）を決定する工程；
ａ２）アルブミン認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｍ）を測定する工程；
ａ３）アルブミンモル認証値（Ｌ）と、吸光度（Ｍ）から、下記式５：
Ｍ＝θＬ      （式５）
を満たすθを決定する工程；
ａ４）異なるＧＡ認証値を有する２種以上のＧＡ認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｚ）を測定する工程；及び
ａ５）吸光度（Ｚ）から、下記式５’’：
Ｚ＝θＣ      （式５’’）
を用いてアルブミン濃度（Ｃ）を決定する工程；
を含むことができる。
工程ａ１）〜ａ３）は、上述したとおりに実施することができる。工程ａ４）は、工程Ｃ）を参照して実施することができる。
【００４６】
一態様において、本実施形態は、また、工程Ａ２）を含む、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法にも関する。工程Ａ２）は、以下の工程ｂ）、ｃ）、ｅ０）、ｆ）及びｉ）を含み、回帰式IVを決定する工程である。
ｂ）以下の式１：
ＧＡ濃度[L]（Ａ）
＝ＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）×ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）    （式１）
を用いて、異なるＧＡ認証値を有する２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）を決定する工程；
ｃ）２種以上のＧＡ認証標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｄ）を測定する工程；
ｅ０）切片をゼロとする以下の直線の式II０：
Ｄ＝α０Ｅ      （式II０）
を作成する工程
（ここで、α０は、任意の正の値であり、Ｅは、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である）；
ｆ）式II０を用いて、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）を２種以上決定する工程；及び
ｉ）２種以上のＧＡ濃度[L]（Ａ）とＧＡ濃度[P]（Ｅ）とから、回帰式IV：
Ａ＝κＥ＋λ  （回帰式IV）
を作成する工程。
【００４７】
一態様において、本実施形態は、また、工程Ａ２）に含まれる工程ｅ０）及び工程ｆ）における式II０が、以下の工程ｄ）及び工程ｅ）を含む工程により作成される式IIである、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法にも関する。
ｄ）２種以上のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と、２種以上のＧＡ濃度[L]（Ａ）とから、回帰式I：
Ｄ＝αＡ＋β      （回帰式I）
を作成する工程；
ｅ）回帰式Iの切片をゼロとする式II：
Ｄ＝αＥ      （式II）
を作成する工程。
【００４８】
一態様において、本実施形態は、また、工程Ａ２）に含まれる工程ｅ０）及び工程ｆ）における式II０が、以下の工程ｅ１）を含む工程により作成される式II１である、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法にも関する。
ｅ１）切片をゼロとする以下の式II１：
Ｄ＝α１Ｅ      （式II１）
を作成する工程
（ここで、α１＝［工程ｃ）において測定したＧＡ認証標準物質のうちの１種のＧＡ認証標準物質のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）］／［工程ｂ）において決定した対応するＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）］である）。
【００４９】
工程ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ０）、ｅ）、ｅ１）及びｆ）は、上述のとおりに実施することができる。
工程ｉ）は、例えば、後述の実施例に示すとおり、２種以上のＧＡ濃度[L]（Ａ）を縦軸に、２種以上のＧＡ濃度[P]（Ｅ）を横軸にプロットし、回帰直線式を設定することにより実施することができる。
このように回帰式IVを設定することで、ＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]と、ＧＡ認証標準物質を酵素法で測定した場合のＧＡ濃度[P]とを相関させることができ、この回帰式IVとアルブミン濃度の測定値を用いて、ＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値と、ＧＡ認証標準物質を酵素法で測定した場合のＧＡ値とを相関させることができる。
【００５０】
上記の回帰式IVを作成する工程を含む、本実施形態の方法は、工程ｂ）に先立って、上述の：工程ａ）；工程ａ１）〜ａ５）；又は工程ａ１）〜ａ３）と工程Ｃ２）及びＣ４）；を実施することもできる。
【００５１】
上記の回帰式IVを作成する工程を含む、本実施形態の方法は、さらに以下の工程Ｂ）及びＣ）を含むことができる。
Ｂ）標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｇ）を測定し、式II０、式II又は式II１を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｈ）を決定する工程；
Ｃ）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定することにより、標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程。
工程Ｂ）及びＣ）は、上述のとおりに実施することができる。これらの工程により、認証値から換算した濃度を標準物質に値付けることができる。
【００５２】
上記の回帰式IVを作成する工程を含む、本実施形態の方法は、さらに以下の工程Ｆ１）、Ｆ２）、Ｆ５）及びＦ６）を含むことができる。これらの工程により、標準物質を用いた検量線で認証標準物質を測定して換算して認証値が算出できることを確認することができる。
Ｆ１）ＧＡ認証標準物質のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応する酵素法によるＧＡ濃度[P]（Ｎ）を決定する工程；
Ｆ２）工程Ｆ１）で用いたＧＡ認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｋ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するアルブミン濃度（Ｏ）を決定する工程；
Ｆ５）ＧＡ濃度[P]（Ｎ）から回帰式IVを用いて、ＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ｒ）を決定する工程；及び
Ｆ６）下記式７： 
ＧＡ認証標準物質のＧＡ値（Ｑ１’）＝ＧＡ濃度[Ｌ]（Ｒ）／アルブミン濃度（Ｏ）    （式７）
を用いて、工程Ｆ１）で用いたＧＡ認証標準物質の認証値にトレーサブルなＧＡ値（Ｑ１’）を決定する工程。
【００５３】
工程Ｆ１）及びＦ２）は、上述のとおりに実施することができる。
工程Ｆ５）において、工程Ｆ１）で得たＧＡ濃度[P]（Ｎ）から回帰式IVを用いて、ＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ｒ）を決定し、さらに、工程Ｆ６）において、ＧＡ認証標準物質のＧＡ値（Ｑ１’）を決定することができる。なお、工程Ｆ６において、ＧＡ値の単位をｍｍｏｌ／ｍｏｌにするために適宜単位合わせをしてもよい。例えば、ＧＡ濃度[P]（μｍｏｌ／Ｌ）をアルブミン濃度（μｍｏｌ／Ｌ）で割る場合、１０００をかけて単位合わせをすることができる。
工程Ｆ５）で得られたＧＡ値（Ｑ１’）が、工程Ｆ１）で用いたＧＡ認証標準物質の認証値と一致することを確認することで、回帰式IVを用いてＧＡ値のトレーサビリティ体系が確立したことを確認することができる。すなわち、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値を、回帰式IVと酵素法を用いて、簡便に測定可能であることが確認される。
【００５４】
上記の各工程は、それぞれの工程において必要な測定値、回帰式等が得られる限り、順不同に実施することができる。例えば、工程ｂ）とｃ）とは順不同に実施することができ、工程Ｂ）とＣ）とは順不同に実施することができ、工程Ｆ１）とＦ２）とは順不同に実施することができる。
【００５５】
一態様において、本実施形態は、また、工程Ａ３）を含む、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法にも関する。工程Ａ３は、以下の工程ｂ）〜ｅ０）及びｊ）〜ｏ）を含み、回帰式Vを決定する工程である。
ｂ）以下の式１：
ＧＡ濃度[L]（Ａ）
＝ＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）×ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）    （式１）
を用いて、異なるＧＡ認証値を有する２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）を決定する工程；
ｃ）２種以上のＧＡ認証標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｄ）を測定する工程；
ｄ）２種以上のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と、２種以上のＧＡ濃度[L]（Ａ）とから、回帰式I：
Ｄ＝αＡ＋β      （回帰式I）
を作成する工程；
ｅ０）切片をゼロとする以下の直線の式II０：
Ｄ＝α０Ｅ      （式II０）
を作成する工程
（ここで、α０は、任意の正の値であり、Ｅは、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である）；
ｊ）２種以上の被験材料におけるＧＡ由来の吸光度（Ｓ）を測定し、回帰式Iを用いて対応するＧＡ濃度[L]（Ｔ）を決定する工程；
ｋ）２種以上の被験材料におけるアルブミン由来の吸光度（Ｕ）を測定し、アルブミン濃度（Ｖ）を決定する工程；
ｌ）以下の式８： 
ＧＡ値１（Ｗ）＝ＧＡ濃度[L]（Ｔ）／アルブミン濃度（Ｖ）    （式８）
を用いて、２種以上の被験材料のＧＡ値１（Ｗ）をＧＡ濃度[L]（Ｔ）から決定する工程；
ｍ）２種以上の被験材料におけるＧＡ由来の吸光度（Ｓ）から、式II０を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｘ）を決定する工程；
ｎ）以下の式９：
ＧＡ値２（Ｙ）＝ＧＡ濃度[P]（Ｘ）／アルブミン濃度（Ｖ）    （式９）
を用いて、２種以上の被験材料のＧＡ値２（Ｙ）をＧＡ濃度[P]（Ｘ）から決定する工程；
ｏ）２種以上の被験材料のＧＡ値１（Ｗ）と、対応する２種以上のＧＡ値２（Ｙ）とから回帰式V：
Ｗ＝πＹ＋φ      （回帰式V）
を作成する工程。
【００５６】
一態様において、本実施形態は、また、工程Ａ３）に含まれる工程ｅ０）及び工程ｍ）における式II０が、下記に示す工程ｅ）を含む工程により作成される式IIである、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法にも関する。
ｅ）回帰式Iの切片をゼロとする式II：
Ｄ＝αＥ      （式II）
を作成する工程
（ここで、Ｅは、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である）。
【００５７】
一態様において、本実施形態は、また、工程Ａ３）に含まれる工程ｅ０）及び工程ｍ）における式II０が、下記に示す工程ｅ１）を含む工程により作成される式II１である、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法にも関する。
ｅ１）切片をゼロとする以下の式II１：
Ｄ＝α１Ｅ      （式II１）
を作成する工程
（ここで、α１＝［工程ｃ）において測定したＧＡ認証標準物質のうちの１種のＧＡ認証標準物質のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）］／［工程ｂ）において決定した対応するＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）］である）。
【００５８】
工程ｂ）〜ｄ）、ｅ０）、ｅ）及びｅ１）は、上述のとおりに実施することができる。
工程ｊ）及びｋ）は、工程Ｂ）及びＣ）を参照して実施することができる。なお、本実施形態において、「被験材料」は、糖化アルブミンを含有する限り特に限定されず、如何なるものを用いてもよいが、好ましくは、血液由来成分、例えば血清、血漿、全血、血液成分を加工し得られた物等を用いることができる。具体例としては、健常人検体、患者検体、ＧＡ−Ｌ  管理血清（旭化成ファーマ（株））、ＧＡ−Ｌキャリブレーター（旭化成ファーマ（株））等が挙げられる。
工程ｌ）〜ｎ）は、各工程の手順に従い、後述の実施例も参照して実施することができる。工程ｏ）は、後述の実施例に示すとおり、２種以上のＧＡ値１（Ｗ）を縦軸に、対応する２種以上のＧＡ値２（Ｙ）を横軸にプロットし、回帰直線式を設定することにより実施することができる。
この方法によれば、回帰式Iを経由して任意の被験材料のＧＡ値１（Ｗ）を設定し、酵素法由来の被験材料のＧＡ値２（Ｙ）と、回帰式Vで相関させることができる。
【００５９】
なお、上記の工程ｆ）、ｍ）及び工程Ｂ）は、式II０の代わりに、下記の工程：
被験材料のＧＡ由来の吸光度（Ｓ）から、回帰式Iを用いて対応するＧＡ濃度[L]（Ｔ）を求める工程；
吸光度（Ｓ）とＧＡ濃度[L]（Ｔ）とから回帰式I’を作成する工程；
回帰式I’の切片をゼロとする式II’を作成する工程；
を含む方法で作成される式II’を用いて実施することもできる。
また、上記の工程ｆ）、ｍ）及び工程Ｂ）は、式II０の代わりに、下記の工程：
被験材料のＧＡ由来の吸光度（Ｓ）から、回帰式Iを用いて対応するＧＡ濃度[L]（Ｔ）を求める工程；
吸光度（Ｓ）と対応するＧＡ濃度[L]（Ｔ）とから設定される点及び原点との２点を通過する、切片をゼロとする式II’’を作成する工程；
を含む方法で作成される式II’’を用いて実施することもできる。
【００６０】
また、上記の工程ｊ）は、回帰式Iの代わりに、下記の工程：
被験材料のＧＡ由来の吸光度（Ｓ）から、回帰式Iを用いて対応するＧＡ濃度[L]（Ｔ）を求める工程；
吸光度（Ｓ）、とＧＡ濃度[L]（Ｔ）とから回帰式I’を作成する工程；
を含む方法で作成される回帰式I’を用いて実施することもできる。
【００６１】
上記の回帰式Vを作成する工程を含む、本実施形態の方法は、工程ｂ）に先立って、上述の：工程ａ）；工程ａ１）〜ａ５）；又は工程ａ１）〜ａ３）と工程Ｃ２）及びＣ４）；を実施することもできる。
【００６２】
上記の回帰式Vを作成する工程を含む、本実施形態の方法は、さらに以下の工程Ｂ）及びＣ）を含むことができる。
Ｂ）標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｇ）を測定し、式II０、式II又は式II１を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｈ）を決定する工程；
Ｃ）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定することにより、標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程。
工程Ｂ）及びＣ）は、上述のとおりに実施することができる。これらの工程により、認証値から換算した濃度を標準物質に値付けることができる。
【００６３】
上記の回帰式Vを作成する工程を含む、本実施形態の方法は、さらに以下の工程Ｆ１’）〜Ｆ４’）を含むことができる。これらの工程により、標準物質を用いた検量線で認証標準物質を測定して換算して認証値が算出できることを確認することができる。
Ｆ１’）被験材料のＧＡ由来の吸光度（Ｓ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するＧＡ濃度[P]（Ｎ’）を決定する工程；
Ｆ２’）工程Ｆ１’）で用いた被験材料のアルブミン由来の吸光度（Ｕ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するアルブミン濃度（Ｏ’）を決定する工程；及び
Ｆ３’）下記式６’：
被験材料のＧＡ値（Ｐ’）＝ＧＡ濃度[P]（Ｎ’）／アルブミン濃度（Ｏ’）（式６’）
を用いてＧＡ値（Ｐ’）を決定する工程。
Ｆ４’）ＧＡ値（Ｐ’）と前記回帰式Vを用いて、工程Ｆ１’）で用いた被験材料に値付けた認証ＧＡ値１（Ｗ）にトレーサブルなＧＡ値（Ｑ２’）を決定する工程。
【００６４】
工程Ｆ１’）〜Ｆ４’）は、上述の工程Ｆ１）〜Ｆ４）を参照して実施することができる。
工程Ｆ４’）で得られたＧＡ値（Ｑ２’）が、工程Ｆ１’）で用いた被験材料に値付けた認証ＧＡ値１（Ｗ）と一致することを確認することで、回帰式Vを用いてＧＡ値のトレーサビリティ体系が確立したことを確認することができる。すなわち、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値を、回帰式Vと酵素法を用いて、簡便に測定可能であることが確認される。
【００６５】
上記の各工程は、それぞれの工程において必要な測定値、回帰式等が得られる限り、順不同に実施することができる。例えば、工程ｂ）とｃ）とは順不同に実施することができ、工程ｊ）とｋ）とは順不同に実施することができ、工程Ｂ）とＣ）とは順不同に実施することができ、工程Ｆ１’）とＦ２’）とは順不同に実施することができる。
【００６６】
一態様において、本実施形態は、また工程Ａ４）を含む、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法にも関する。工程Ａ４は、以下の工程ｂ）〜ｄ）、ｅ０）、ｊ）、ｍ）、及びｐ）を含み、回帰式VIを決定する工程である。
ｂ）以下の式１：
ＧＡ濃度[L]（Ａ）
＝ＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）×ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）    （式１）
を用いて、異なるＧＡ認証値を有する２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）を決定する工程；
ｃ）２種以上のＧＡ認証標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｄ）を測定する工程；
ｄ）２種以上のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と、２種以上のＧＡ濃度[L]（Ａ）とから、回帰式I：
Ｄ＝αＡ＋β      （回帰式I）
を作成する工程；
ｅ０）切片をゼロとする以下の直線の式II０：
Ｄ＝α０Ｅ      （式II０）
を作成する工程
（ここで、α０は、任意の正の値であり、Ｅは、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である）；
ｊ）２種以上の被験材料におけるＧＡ由来の吸光度（Ｓ）を測定し、回帰式Iを用いて対応するＧＡ濃度[L]（Ｔ）を決定する工程；
ｍ）２種以上の被験材料におけるＧＡ由来の吸光度（Ｓ）から、式II０を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｘ）を決定する工程；及び
ｐ）２種以上の被験材料のＧＡ濃度[L]（Ｔ）とＧＡ濃度[P]（Ｘ）とから、回帰式VI：
Ｔ＝ψＸ＋ω  （回帰式VI）
を作成する工程。
【００６７】
一態様において、本実施形態は、また、工程Ａ４）に含まれる工程ｅ０）及び工程ｍ）における式II０が、下記に示す工程ｅ）を含む工程により作成される式IIである、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法にも関する。
ｅ）回帰式Iの切片をゼロとする式II：
Ｄ＝αＥ      （式II）
を作成する工程
（ここで、Ｅは、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である）。
【００６８】
一態様において、本実施形態は、また、工程Ａ４）に含まれる工程ｅ０）及び工程ｍ）における式II０が、下記に示す工程ｅ１）を含む工程により作成される式II1である、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法にも関する。
ｅ１）切片をゼロとする以下の式II１：
Ｄ＝α１Ｅ      （式II１）
を作成する工程
（ここで、α１＝［工程ｃ）において測定したＧＡ認証標準物質のうちの１種のＧＡ認証標準物質のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）］／［工程ｂ）において決定した対応するＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）］である）。
【００６９】
工程ｂ）〜ｄ）、ｅ０）、ｅ）、ｅ１）、ｊ）及びｍ）は、上述のとおりに実施することができる。
工程ｐ）は、例えば、後述の実施例に示すとおり、２種以上のＧＡ濃度[L]（Ｔ）を縦軸に、２種以上のＧＡ濃度[P]（Ｘ）を横軸にプロットし、回帰直線式を設定することにより実施することができる。
この方法によれば、回帰式Iを経由して任意の被験材料のＧＡ濃度[L]（Ｔ）を決定し、式II０を経由して任意の被験材料のＧＡ濃度[P]（Ｘ）を決定し、両者を回帰式VIで相関させることができる。
【００７０】
上記の回帰式VIを作成する工程を含む、本実施形態の方法は、工程ｂ）に先立って、上述の：工程ａ）；工程ａ１）〜ａ５）；又は工程ａ１）〜ａ３）と工程Ｃ２）及びＣ４）；を実施することもできる。
【００７１】
上記の回帰式VIを作成する工程を含む、本実施形態の方法は、さらに以下の工程Ｂ）及びＣ）を含むことができる。
Ｂ）標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｇ）を測定し、式II０、式II又は式II１を用いて対応するＧＡ濃度[P]（Ｈ）を決定する工程；
Ｃ）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定することにより、標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を決定する工程。
工程Ｂ）及びＣ）は、上述のとおりに実施することができる。これらの工程により、認証値から換算した濃度を標準物質に値付けることができる。
【００７２】
上記の回帰式VIを作成する工程を含む、本実施形態の方法は、工程ｂ）に先立って、さらに以下の工程ａ１）〜ａ３）：
ａ１）下記式４：
アルブミンモル認証値（Ｌ）
＝アルブミン認証標準物質のアルブミン認証値／アルブミンの分子量      （式４）
を用いてアルブミンモル認証値（Ｌ）を決定する工程；
ａ２）アルブミン認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｍ）を測定する工程；
ａ３）アルブミンモル認証値（Ｌ）と、吸光度（Ｍ）から、下記式５：
Ｍ＝θＬ      （式５）
を満たすθを決定する工程；
を含み、工程Ａ４）がさらに以下の工程ｋ）：
ｋ）２種以上の被験材料におけるアルブミン由来の吸光度（Ｕ）を測定し、アルブミン濃度（Ｖ）を決定する工程；
を含み、工程Ａ４）が、工程ｊ）及びｋ）より後に、さらに以下の工程ｌ）：
ｌ）以下の式８：
ＧＡ値１（Ｗ）＝ＧＡ濃度[L]（Ｔ）／アルブミン濃度（Ｖ）    （式８）
を用いて、２種以上の被験材料におけるＧＡ値１（Ｗ）をＧＡ濃度[L]（Ｔ）から決定する工程；
を含み、方法がさらに以下の工程：
Ｆ１’）被験材料のＧＡ由来の吸光度（Ｓ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応する酵素法によるＧＡ濃度[P]（Ｎ’）を決定する工程；
Ｆ２’）工程Ｆ１’）で用いた被験材料のアルブミン由来の吸光度（Ｕ）から、標準物質を用いて作成した検量線を用いて、対応するアルブミン濃度（Ｏ’）を決定する工程；
Ｆ５’）ＧＡ濃度[P]（Ｎ’）から回帰式VIを用いて、被験材料のＧＡ濃度[L]（Ｒ’）を決定する工程；及び
Ｆ６’）下記式７’：
被験材料のＧＡ値（Ｑ３’）＝ＧＡ濃度[Ｌ]（Ｒ’）／アルブミン濃度（Ｏ’）（式７’）
を用い、工程Ｆ１’）で用いた被験材料に設定したＧＡ認証値１（Ｗ）にトレーサブルなＧＡ値（Ｑ３’）を決定する工程；
を含むものであることができる。
【００７３】
工程ａ１）〜ａ３）、ｋ）及びｌ）は、上述のとおりに実施することができる。
工程Ｆ１’）、Ｆ２’）、Ｆ５’）及びＦ６’）は、それぞれ工程Ｆ１）、Ｆ２）、Ｆ５）及びＦ６）を参照して実施することができる。
工程Ｆ６’）で得られたＧＡ値（Ｑ３’）が、工程Ｆ１’）で用いた被験材料に設定したＧＡ認証値１（Ｗ）と一致することを確認することで、回帰式VIを用いてＧＡ値のトレーサビリティ体系が確立したことを確認することができる。すなわち、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値を、回帰式VIと酵素法を用いて、簡便に測定可能であることが確認される。
【００７４】
上記の各工程は、それぞれの工程において必要な測定値、回帰式等が得られる限り、順不同に実施することができる。例えば、工程ｂ）とｃ）とは順不同に実施することができ、工程Ｂ）とＣ）とは順不同に実施することができ、工程Ｆ１’）とＦ２’）とは順不同に実施することができる。
【００７５】
このように、本実施形態は、回帰式III、回帰式IV、回帰式V又は回帰式VIを決定する工程Ａ０、すなわち：
被験材料のＧＡ値の実測値をＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値へ換算するための回帰式（回帰式III）、
被験材料のＧＡ濃度[P]の実測値をＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]へ換算するための回帰式（回帰式IV）、
被験材料のＧＡ値の実測値をＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値から被験材料に設定したＧＡ値へ換算するための回帰式（回帰式V）、又は
被験材料のＧＡ濃度[P]の実測値をＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]から被験材料に設定したＧＡ濃度[L]へ換算するための回帰式（回帰式VI）
を決定する工程；及び
工程Ｆ０：
ＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]から換算したＧＡ濃度[P] 及びＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度から換算したアルブミン濃度を設定した標準物質を用いて作成した検量線を用いて、被験材料のＧＡ濃度[P]及びアルブミン濃度を測定し、工程Ａ０）で決定した回帰式を用いてＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値を決定する工程；
を含む、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法にも関する。なお、「ＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]から換算したＧＡ濃度[P]」とは、「ＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]に紐付いたＧＡ濃度[P]」と同義である。
【００７６】
本実施形態の方法によれば、ＧＡ値のトレーサビリティを確立することができる。トレーサビリティの確立は、ＧＡと同様の糖化タンパク質である糖化ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）では既に標準測定操作法の測定値から、日常検査法である酵素法へのトレーサビリティが確立しているが、このＨｂＡ１ｃは、「β鎖のＮ末端バリンにグルコースが結合したヘモグロビン」と定義されており、糖化部位が明確である。また、ＨｂＡ１ｃの標準測定操作法は、エンドプロテアーゼＧｌｕ−Ｃによりヘモグロビンを糖化ヘキサペプチドに分解し定量する方法と定義されている。一方、日常検査法であるＨｂＡ１ｃ酵素法は、プロテアーゼの作用によりヘモグロビンβ鎖Ｎ末端の糖化ジペプチド（フルクトシル−バリン−ヒスチジン）を断片化し、断片化された糖化ジペプチドを測定する方法である。したがって、ＨｂＡ１ｃの場合、基準測定操作法と日常検査である酵素法との間で測定対象物は、１分子のヘモグロビンに対して、どちらも１対１の関係である為、トレーサビリティ体系の確立は非常に容易である。
一方、ＧＡの定義は、上述のとおり、「ＤＯＦ−Ｌｙｓを有するアルブミン」であり、１分子のアルブミンにつき５９ヶ所あるリジン残基のどの部位が糖化されたものであってもよい。また、ＧＡの標準測定操作法であるＩＤ−ＭＳ法は、５９ヶ所あるリジン残基を全て断片化し測定を行う。一方、日常検査法であるＧＡ酵素法ではプロテアーゼを用いるが、プロテアーゼ処理で全てのリジン残基を断片化することは困難である為、ＧＡの場合、基準測定操作法と日常検査である酵素法との間で測定対象物は、１分子のアルブミンに対して１対１の関係にならず差異がある。この為、ＧＡのトレーサビリティ体系の確立はＨｂＡ１ｃの場合と同様に実施することができなかった。
【００７７】
本実施形態の方法で得られた各種回帰式を用いて、被験材料の、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値を、簡便に測定することができる。
例えば、被験材料のＧＡ濃度[P]と、アルブミン濃度を、それぞれ酵素法により測定し、これらからＧＡ値を決定する。
上記ＧＡ値と回帰式III又は回帰式Vから、被験材料の、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値を、簡便に測定することができ（回帰式Vの場合、ＧＡ値をＹに代入）、また
上記のＧＡ濃度[P]と回帰式IV又は回帰式VIから、ＧＡ濃度[L]を求めることができ、さらにこの、ＧＡ濃度[L]をアルブミン濃度で割ることで、被験材料の、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値を、簡便に測定することができる。
【００７８】
一態様において、本実施形態はまた：
回帰式III、回帰式IV、回帰式V及び回帰式VIからなる群から選択される回帰式；
ＧＡ測定用試薬；
アルブミン測定用試薬；及び
標準物質； 
を含む、ＧＡ値測定用キットにも関する。この測定キットによれば、被験材料のＧＡ濃度[P]と、アルブミン濃度を、それぞれ酵素法により測定し、被験材料の、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値を、簡便に測定することができる。上記キットに含まれる標準物質は、好ましくは、上記工程Ｂ）及び工程Ｃ）によって式II０、式II又は II１を用いてＧＡ濃度[P] が設定された標準物質である。
【００７９】
一態様において、本実施形態は、また、ＩＤ−ＭＳ法によるＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値の同定を行うコンピュータープログラムであって、上記の各測定方法における各工程を実行するプログラムにも関する。例えば、本実施形態のプログラムは：
ｂ）以下の式１：
ＧＡ濃度[L]（Ａ）
＝ＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）×ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）    （式１）
を用いて、異なるＧＡ認証値を有する２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）を決定するステップ；
ｃ）２種以上のＧＡ認証標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｄ）を入力するステップ；
を作成するステップ；
ｅ０）切片をゼロとする以下の直線の式II０：
Ｄ＝α０Ｅ      （式II０）
を作成するステップ
（ここで、α０は、任意の正の値であり、Ｅは、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である）；
ｆ）式II０を用いて、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）を２種以上決定するステップ；
ｇ）以下の式２：
ＧＡ値（Ｆ）＝ＧＡ濃度[P]（Ｅ）／アルブミン濃度（Ｃ）    （式２）
を用いて、ＧＡ値（Ｆ）を２種以上決定するステップ；及び
ｈ）２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）と、対応する２種以上のＧＡ値（Ｆ）とから回帰式III：
Ｂ＝γＦ＋δ      （回帰式III）
を作成するステップ；
を実行する、プログラムであり得る。
また、一態様において、上記プログラムは、
ステップｅ０）が、下記に示すステップｄ）とステップｅ）であり、
ステップｆ）における式II０が式IIである、
プログラムでもあり得る。
ｄ）２種以上のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と、２種以上のＧＡ濃度[L]（Ａ）とから、回帰式I：
Ｄ＝αＡ＋β      （回帰式I）
を作成するステップ；
ｅ）回帰式Iの切片をゼロとする式II：
Ｄ＝αＥ      （式II）
を作成するステップ。
また、一態様において、上記プログラムは、
ステップｅ０）が、下記に示すステップｅ１）であり、
ステップｆ）における式II０が式II１である、
プログラムでもあり得る。
ｅ１）切片をゼロとする以下の式II１：
Ｄ＝α１Ｅ      （式II１）
を作成するステップ
（ここで、α１＝［ステップｃ）において測定したＧＡ認証標準物質のうちの１種のＧＡ認証標準物質のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）］／［ステップｂ）において決定した対応するＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）］である）。
本実施形態のプログラムは、同様に、上記の本実施形態の他の方法における各工程を実行するプログラムであり得る。
【００８０】
一態様において、本実施形態は、また、ＩＤ−ＭＳ法によるＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定用装置であって、上記の各測定方法における各工程を実施するための手段を備える装置にも関する。例えば、本実施形態の装置は：
ｂ）以下の式１：
ＧＡ濃度[L]（Ａ）
＝ＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）×ＧＡ認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）    （式１）
を用いて、異なるＧＡ認証値を有する２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）を決定するための手段；
ｃ）２種以上のＧＡ認証標準物質におけるＧＡ由来の吸光度（Ｄ）を測定するための手段；
ｅ０）切片をゼロとする以下の直線の式II０：
Ｄ＝α０Ｅ      （式II０）
を作成するための手段
（ここで、α０は、任意の正の値であり、Ｅは、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）である）；
ｆ）式II０を用いて、ＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と比例するＧＡ濃度[P]（Ｅ）を２種以上決定するための手段；
ｇ）以下の式２：
ＧＡ値（Ｆ）＝ＧＡ濃度[P]（Ｅ）／アルブミン濃度（Ｃ）    （式２）
を用いて、ＧＡ値（Ｆ）を２種以上決定するための手段；及び
ｈ）２種以上のＧＡ認証標準物質のＧＡ認証値（Ｂ）と、対応する２種以上のＧＡ値（Ｆ）とから回帰式III：
Ｂ＝γＦ＋δ      （回帰式III）
を作成するための手段；
を備える装置であり得る。
【００８１】
また、一態様において、上記装置は、
手段ｅ０）が、下記に示す手段ｄ）と手段ｅ）であり、
手段ｆ）における、式II０が式IIである、
装置でもあり得る。
ｄ）２種以上のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）と、２種以上のＧＡ濃度[L]（Ａ）とから、回帰式I：
Ｄ＝αＡ＋β      （回帰式I）
を作成する手段；
ｅ）回帰式Iの切片をゼロとする式II：
Ｄ＝αＥ      （式II）
を作成する手段。
また、一態様において、上記装置は、
手段ｅ０）が、下記に示す手段ｅ１）であり、
手段ｆ）における、式II０が式II１である、
装置でもあり得る。
ｅ１）切片をゼロとする以下の式II１：
Ｄ＝α１Ｅ      （式II１）
を作成する手段
（ここで、α１＝［手段ｃ）において測定したＧＡ認証標準物質のうちの１種のＧＡ認証標準物質のＧＡ由来の吸光度（Ｄ）］／［手段ｂ）において決定した対応するＧＡ認証標準物質のＧＡ濃度[L]（Ａ）］である）。
本実施形態の装置は、同様に、上記の本実施形態の他の方法における各工程を実施するための手段を備える装置であり得る。
【００８２】
一態様において、本実施形態は：
式III、式IV、式V及び式VIからなる群から選択される式が設定された演算部；
式II０、式II又は式II１によってＧＡ濃度[P]が設定された標準物質を用いて検量線を作成する検量線作成部、若しくは式II０、式II又は式II１が演算に組み込まれている検量線作成部；及び
ＧＡ値を測定する測定部； 
を含む、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定装置にも関する。
ここで、各式は、上記の任意の方法を用いて決定することができる。
【００８３】
一態様において、本実施形態は、以下の１）標準物質と２）演算プログラムを用いることを特徴とする、糖化アルブミン（ＧＡ）認証値にトレーサブルなＧＡ値の測定方法にも関する。
１）上記工程ｅ０）で作成された式II０、工程ｅ）で作成された式II又は工程ｅ１）で作成された式II１によってＧＡ濃度[P]が設定された標準物質；及び
２）式III、式IV、式V及び式VIからなる群から選択される式が組み込まれた演算プログラム。
ここで、２）における各式は、上記の任意の方法を用いて決定することができる。
【実施例】
【００８４】
次に、本実施形態を、実施例及び比較例（実施例等）により詳しく述べるが、本発明はこれにより何ら限定されるものではない。以下の実施例等において糖化アルブミン濃度[L]は、グルコースが結合したリジン残基（ＤＯＦ−Ｌｙｓ）の濃度であり、糖化アルブミン濃度[P]は、糖化アミノ酸又は糖化ペプチドの濃度である。【００８５】
本実施例１〜１１及び比較例１においては以下を用いた。
１）糖化アルブミン認証標準物質
一般社団法人  検査医学標準物質機構が製造・販売しているグリコアルブミン測定用常用参照標準物質（ＪＣＣＲＭ  ６１１−１）を用いた。認証値（糖化アルブミン値）が低い方から順に、Ｍ、Ｈ及びＨＨである。
２）アルブミン認証標準物質
一般社団法人  検査医学標準物質機構が販売している、ＩＦＣＣ血漿タンパク  国際標準物質（ＥＲＭ−ＤＡ  ４７０ｋ／ＩＦＣＣ）を用いた。
３）測定試薬
アルブミン（ＡＬＢ）（改良ＢＣＰ法）及び糖化アルブミンの吸光度を測定する試薬は、ルシカＧＡ―Ｌ（旭化成ファーマ（株））を用いた。
ルシカＧＡ−Ｌの糖化アルブミン試薬は、第一試薬（前処理液）と第二試薬（酵素液）で構成され、ＡＬＢ試薬は、第一試薬（前処理液）と第二試薬（発色液）で構成されている。
４）標準物質
標準物質は、ＧＡ−Ｌキャリブレーター（旭化成ファーマ（株））を高値標準物質として用いた。
５）測定装置
吸光度測定、及び吸光度から濃度への換算を行う装置として、７１８０形日立自動分析装置（日立ハイテクフィールディング（株））を使用した。
６）糖化アルブミン測定方法
上記５の測定装置を用い、サンプル４．５μＬ、第一試薬１８０μＬ、第二試薬４５μＬの１０分モードで測定を行った。測光０ポイントでサンプルと第一試薬のサンプリング及び撹拌を行い、測定を開始し、第一反応を行った。その後、１６ポイントで第二試薬のサンプリング及び撹拌後、第二反応を行った。トータルで３４ポイントまで測定した。
その他の操作は、各々の添付文書や取扱説明書に従い行った。
７）糖化アルブミン吸光度の計算方法
糖化アルブミン吸光度（測定サンプルの測定吸光度変化）は、３３及び３４ポイントの平均吸光度と第二試薬添加前の１５及び１６ポイントの平均吸光度を用いて、下記計算式により求めた。
ΔｍＡｂｓ＝（Ａｂ１−（Ａｂ２×０．８））／１０
ΔｍＡｂｓ：糖化アルブミン吸光度変化量
Ａｂ１：３３及び３４ポイントの平均吸光度
Ａｂ２：１５及び１６ポイントの平均吸光度
式中「０．８」は、次の計算式により算出した値である。
第一試薬量（１８０μＬ）／（第一試薬量（１８０μＬ）＋第二試薬量（４５μＬ））＝０．８
８）アルブミン測定方法
上記５）の測定装置を用い、サンプル３．０μＬ、第一試薬２２０μＬ、第二試薬１１０μＬの１０分モードで測定を行った。０ポイントでサンプルと第一試薬のサンプリング及び撹拌を行い、測定を開始し、第一反応を行った。その後、１６ポイントで第二試薬のサンプリング及び撹拌後、第二反応を行った。トータルで３４ポイントまで測定した。
その他の操作は、各々の添付文書や取扱説明書に従い行った。
９）アルブミン（ＡＬＢ）吸光度の計算方法
ＡＬＢ吸光度（測定サンプルの測定吸光度変化）は、３３及び３４ポイントの平均吸光度と第二試薬添加前の１３及び１４ポイントの平均吸光度を用いて、下記計算式により求めた。
ΔｍＡｂｓ＝（Ａｂ１−（Ａｂ２×０．６７））／１０
ΔｍＡｂｓ：ＡＬＢ吸光度変化量
Ａｂ１：３３及び３４ポイントの平均吸光度
Ａｂ２：１３及び１４ポイントの平均吸光度
式中「０．６７」は次の計算式により算出した値である。
第一試薬量（２２０μＬ）／（第一試薬量（２２０μＬ）＋第二試薬量（１１０μＬ））＝０．６７【００８６】
[実施例１]
＜糖化アルブミン認証標準物質のアルブミン濃度の決定＞
１）ルシカＧＡ−Ｌを用い、アルブミン認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｍ）及び糖化アルブミン認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｋ）を測定した。
２）アルブミン認証標準物質のアルブミン認証値（３．７２ｇ／ｄＬ）をモルへ換算した。換算に使用した分子量は６６４３８を用いた（Ｇｅｉｓｏｗ  ＭＪ  ｅｔ．  Ａｌ．  Ｉｎ：  Ｖｉｌｌａｆｒａｎｃａ  ＪＪ，  ｅｄ．  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ：  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  １９９１：  ５７６−５７２）結果、アルブミンモル認証値（Ｌ）は５５９．９μｍｏｌ／Ｌであった。
３）前記単位換算後のアルブミンモル認証値（Ｌ）を横軸、アルブミン由来の吸光度（Ｍ）を縦軸にプロットすることにより、回帰直線式（式５）ｙ＝０．３３５１ｘを作成した（図２）。
４）前記回帰直線式（式５）に糖化アルブミン認証標準物質のアルブミン吸光度（Ｋ）を代入することで、糖化アルブミン認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）を決定した。【００８７】
＜糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[L]の決定＞
１）糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン認証値（Ｂ）は、低い方から順にＭ：２３０、Ｈ；３６５、ＨＨ：５６４ｍｍｏｌ／ｍｏｌであった。各々の糖化アルブミン認証値に前記で決定した、アルブミン濃度（Ｃ）をかけることにより、糖化アルブミン濃度[L]（Ａ）を決定した。【００８８】
＜糖化アルブミン認証標準物質由来の糖化アルブミン吸光度と糖化アルブミン濃度[L]を関連付ける為の回帰直線式の決定＞
１）ルシカＧＡ−Ｌを用い、糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン由来の吸光度（Ｄ）を測定した。【００８９】
上記で求めた各値を表１に記載した。
【表１】
0006720311.tif 000004
【００９０】
２）前記糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[L]（Ａ）を横軸、糖化アルブミン由来の吸光度（Ｄ）を縦軸にプロットし、回帰直線式（I）ｙ＝０．２３４４ｘ−７．９１９４を設定した（図３）。【００９１】
[実施例２]
測定値と認証値を一致させる為に、２段階の回帰直線式の設定を検討した。【００９２】
＜回帰直線式（I）の切片を０とする直線式（II）の設定＞
１）前記回帰直線式（I）を切片が０となるように平行移動し、直線式（II）ｙ＝０．２３４４ｘを設定した（図４）。【００９３】
＜実測値を認証値に換算する為の回帰直線式（III）の設定＞
１）前記で算出した、直線式（II）に、前記糖化アルブミン由来の吸光度（Ｄ）を代入し、糖化アルブミン濃度[P]（Ｅ）を算出した。
２）前記糖化アルブミン濃度[P]（Ｅ）を、前記アルブミン濃度（Ｃ）で割り、１０００をかけることにより、糖化アルブミン値（Ｆ）を算出した。【００９４】
直線式（II）を用いた糖化アルブミン認証標準物質の各値を表２に記載した。
【表２】
0006720311.tif 000005
【００９５】
３）糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン認証値（Ｂ）を縦軸、前記糖化アルブミン値（Ｆ）を横軸にプロットし、回帰直線式（III）ｙ＝１．０１７７ｘ＋４８．７５２を設定した（図５）。【００９６】
[実施例３]
＜直線式（II）を用いた、標準物質への値の設定＞
１）標準物質の糖化アルブミン由来の吸光度（Ｇ）を測定し、前記直線式（II）に代入し、標準物質の糖化アルブミン濃度[P]（Ｈ）を算出した。
２）前記糖化アルブミン認証標準物質のアルブミン濃度（Ｃ）を横軸、前記糖化アルブミン認証標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｋ）を縦軸にプロットし、回帰直線式（式３）ｙ＝０．３３５１ｘを設定した（図６）。
３）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定し、前記回帰直線式（式３）に代入し、標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を算出した。【００９７】
直線式（II）を用いた標準物質の各値を表３に記載した。
【表３】
0006720311.tif 000006
【００９８】
[実施例４]
＜直線式（II）を用いて糖化アルブミン濃度及びアルブミン濃度を決定した標準物質を用いて算出した測定値について、さらに回帰直線式（III）を用いて、糖化アルブミン認証標準物質の認証値にトレーサブルな値を得る工程＞
１）実施例３において値を設定した標準物質を用い検量線を作成し、糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[P]（Ｎ）を測定した。
２）実施例３において値を設定した標準物質を用い検量線を作成し、糖化アルブミン認証標準物質のアルブミン濃度（Ｏ）を測定した。
３）前記糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[P]（Ｎ）をアルブミン濃度（Ｏ）で割り、１０００をかけることにより、糖化アルブミン値（Ｐ）を算出した。
４）糖化アルブミン値（Ｐ）を、回帰直線式（III）に代入することにより、糖化アルブミン値（Ｑ）を得た。【００９９】
直線式（II）を用いた糖化アルブミン認証標準物質の測定値及び回帰直線式（III）を用い、換算した値を表４に記載した。
【表４】
0006720311.tif 000007
【０１００】
表４から分かるように、直線式（II）から値を設定した標準物質を用い、糖化アルブミン認証標準物質の測定値（Ｐ）を回帰直線式（III）で換算し得られた換算値（Ｑ）は、糖化アルブミン認証標準物質に規定されている認証値（Ｂ）とよく一致した。即ち、糖化アルブミン認証標準物質を上位基準とし、値の設定を行った標準物質を用い、糖化アルブミン認証標準物質の認証値が算出されたことから、一連の連鎖的なトレーサビリティ体系を確立できた。【０１０１】
[実施例５]
＜アルブミン認証標準物質の検量線を用いた、標準物質へのアルブミン濃度の設定＞
１）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定し、前記回帰直線式（式５）に代入し、標準物質のアルブミン濃度（Ｊ’）を算出した。【０１０２】
アルブミン認証標準物質の検量線を用いた標準物質の各値を表５に記載した。
【表５】
0006720311.tif 000008
【０１０３】
前記回帰直線式（式５）にアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を代入して得られた標準物質のアルブミン濃度（Ｊ’）と前記アルブミン濃度（Ｊ）が一致したことから、回帰直線式（式５）を用いても、標準物質のアルブミン濃度を求められることを確認した。
前記アルブミン濃度（Ｊ）の代わりにアルブミン濃度（Ｊ’）を標準物質に設定し、実施例４と同様にして、トレーサビリティ体系を確立できることを確認した。【０１０４】
［実施例６］
＜回帰直線式（I）の切片を０とする直線式（II(d)）の設定＞
１）前記回帰直線式（I）の傾きを、実施例１で得られた糖化アルブミン認証標準物質ＨＨの糖化アルブミン濃度［Ｌ］（Ａ）３３０．０μｍｏｌ／Ｌを基準に、切片が０となるように変更し、直線式（II(d)）ｙ＝０．２１０３ｘを設定した（図７）。【０１０５】
＜実測値を認証値に換算する為の回帰直線式（III(d)）の設定＞
１）直線式（II(d)）に、前記糖化アルブミン由来の吸光度（Ｄ）を代入し、糖化アルブミン濃度[P]（Ｅ（ｄ））を算出した。
２）前記糖化アルブミン濃度[P]（Ｅ（ｄ））を、前記アルブミン濃度（Ｃ）で割り、１０００をかけることにより、糖化アルブミン値（Ｆ（ｄ））を算出した。【０１０６】
直線式（II(d)）を用いた糖化アルブミン認証標準物質の各値を表６に記載した。
【表６】
0006720311.tif 000009
【０１０７】
３）糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン認証値（Ｂ）を縦軸、前記糖化アルブミン値（Ｆ（ｄ））を横軸にプロットし、回帰直線式（III(d)）ｙ＝０．９１３ｘ＋４８．７５２を設定した（図８）。【０１０８】
［実施例７］
＜直線式（II(d)）を用いた、標準物質への値の設定＞
１）標準物質の糖化アルブミン由来の吸光度（Ｇ）を測定し、直線式（II(d)）に代入し、標準物質の糖化アルブミン濃度[P]（Ｈ（ｄ））を算出した。
２）実施例３に記載の方法を用い、標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を算出した。【０１０９】
直線式（II(d)）を用いた標準物質の各値を表７に記載した。
【表７】
0006720311.tif 000010
【０１１０】
［実施例８］
＜直線式（II(d)）を用いて糖化アルブミン濃度及びアルブミン濃度を決定した標準物質を用いて算出した測定値について、さらに回帰直線式（III(d)）を用いて、糖化アルブミン認証標準物質の認証値にトレーサブルな値を得る工程＞
１）実施例７において値を設定した標準物質を用い検量線を作成し、糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[P]（Ｎ（ｄ））を測定した。
２）前記糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[P]（Ｎ（ｄ））を実施例４で得たアルブミン濃度（Ｏ）で割り、１０００をかけることにより、糖化アルブミン値（Ｐ（ｄ））を算出した。
４）糖化アルブミン値（Ｐ（ｄ））を、回帰直線式（III(d)）に代入することにより、糖化アルブミン値（Ｑ（ｄ））を得た。【０１１１】
直線式（II(d)）を用いた糖化アルブミン認証標準物質の測定値及び回帰直線式（III(d)）を用い、換算した値を表８に記載した。
【表８】
0006720311.tif 000011
【０１１２】
表８から分かるように、直線式（II(d)）から値を設定した標準物質を用い、糖化アルブミン認証標準物質の測定値（Ｐ（ｄ））を回帰直線式（III(d)）で換算し得られた換算値（Ｑ（ｄ））は、糖化アルブミン認証標準物質に規定されている認証値（Ｂ）とよく一致した。即ち、糖化アルブミン認証標準物質を上位基準とし、値の設定を行った標準物質を用い、糖化アルブミン認証標準物質の認証値が算出されたことから、一連の連鎖的なトレーサビリティ体系を確立できた。【０１１３】
[実施例９]
糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度を用いた、回帰式の設定によるトレーサビリティ体系の確立について検討した。
＜回帰直線式（IV）の設定＞
１）前記糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[L]（Ａ）を縦軸、前記糖化アルブミン濃度[P]（Ｅ）を横軸にプロットし、回帰直線式（IV）ｙ＝０．９９９８ｘ＋３３．７８３を設定した（図９）。【０１１４】
＜直線式（II）により値を設定した標準物質を用い算出した測定値を、さらに回帰直線式（IV）を用いて換算しトレーサブルな値を得る工程＞
１）実施例３で直線式（II）により値を設定した標準物質を用いて検量線を作成し、前記糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン由来の吸光度（Ｄ）を用い、糖化アルブミン濃度[P]（Ｎ）を測定した。
２）糖化アルブミン濃度[P]（Ｎ）を回帰直線式（IV）に代入することにより、糖化アルブミン濃度[L]（Ｒ）を得た。
３）前記糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[L]（Ｒ）を前記アルブミン濃度（Ｏ）で割り、１０００をかけることにより、糖化アルブミン値（Ｑ１’）を算出した。【０１１５】
直線式（II）を用いた糖化アルブミン認証標準物質の測定値及び回帰直線式（IV）を用い、換算した値を表９に記載した。
【表９】
0006720311.tif 000012
【０１１６】
表９から分かるように、直線式（II）から値を設定した標準物質を用い、糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[P]（Ｎ）を回帰直線式（IV）で換算し得られた糖化アルブミン濃度[L]（Ｒ）をアルブミン濃度（Ｏ）で割ることにより、得られた糖化アルブミン値（Ｑ１’）は、糖化アルブミン認証標準物質に規定されている認証値（Ｂ）とよく一致した。即ち、糖化アルブミン認証標準物質を上位基準とし、値の設定を行った標準物質を用い、糖化アルブミン認証標準物質の認証値が算出されたことから、一連の連鎖的なトレーサビリティ体系を確立できた。【０１１７】
本実施例１０及び１１について以下を追加で用いた。
１）被験材料
ＧＡ−Ｌ  管理血清Ｌ、Ｈ（旭化成ファーマ（株））を用いた。
濃度の低い順にＬ、Ｈで構成されている。【０１１８】
[実施例１０]
被験材料を用いた、回帰式の設定によるトレーサビリティ体系の確立について検討した。
＜被験材料への各種値の設定＞
１）被験材料の糖化アルブミン由来の吸光度（Ｓ）を測定し、前記回帰直線式（I）に代入し、被験材料の糖化アルブミン濃度[L]（Ｔ）を決定した。
２）被験材料のアルブミン由来の吸光度（Ｕ）を測定し、前記回帰直線式（式５）に代入し、被験材料のアルブミン濃度（Ｖ）を決定した。【０１１９】
３）前記糖化アルブミン濃度[L]（Ｔ）を、前記アルブミン濃度（Ｖ）で割り、１０００をかけることにより、糖化アルブミン認証標準物質からトレーサブルな糖化アルブミン値（Ｗ）（設定値）を算出した。【０１２０】
＜回帰直線式（V）の設定＞
１）前記被験材料の糖化アルブミン由来の吸光度（Ｓ）を、前記直線式（II）に代入し、被験材料の糖化アルブミン濃度[P]（Ｘ）を算出した。
２）前記糖化アルブミン濃度[P]（Ｘ）を、前記アルブミン濃度（Ｖ）で割り、１０００をかけることにより、糖化アルブミン値（Ｙ）を算出した。【０１２１】
被験材料の各値を表１０に記載した。
【表１０】
0006720311.tif 000013
【０１２２】
３）前記糖化アルブミン値（Ｗ）（設定値）を縦軸、前記糖化アルブミン値（Ｙ）を横軸にプロットし、回帰直線式（V）ｙ＝０．９９６１ｘ＋４７．４６７を設定した（図１０）。【０１２３】
＜直線式（II）を用い、値を設定した標準物質を用い算出した測定値を、さらに回帰直線式（V）を用いてトレーサブルな値を得る工程＞
１）実施例３で直線式（II）を用いて値を設定した標準物質を用い検量線を作成し、被験材料の糖化アルブミン濃度[P]（Ｎ’）を測定した。
２）実施例５で回帰直線式（式５）を用いて値を設定した標準物質を用い検量線を作成し、被験材料のアルブミン濃度（Ｏ’）を測定した。
３）前記被験材料の糖化アルブミン濃度[P]（Ｎ’）をアルブミン濃度（Ｏ’）で割り、１０００をかけることにより、糖化アルブミン値（Ｐ’）を算出した。
４）糖化アルブミン値（Ｐ’）を、回帰直線式（V）に代入することにより、糖化アルブミン値（Ｑ２’）を得た。【０１２４】
直線式（II）を用いた被験材料の測定値及び回帰直線式（V）を用い、換算した値を表１１に記載した。
【表１１】
0006720311.tif 000014
【０１２５】
表１１から分かるように、直線式（II）から値を設定した標準物質を用い、被験材料の糖化アルブミン値（Ｐ’）を回帰直線式（V）で換算し得られた換算値（Ｑ２’）は、被験材料に設定した糖化アルブミン値（Ｗ）とよく一致した。即ち、糖化アルブミン認証標準物質を上位基準とし、値の設定を行った標準物質を用い、糖化アルブミン認証標準物質から設定した被験材料の設定値が算出されたことから、一連の連鎖的なトレーサビリティ体系を確立できた。【０１２６】
［実施例１１］
被験材料の糖化アルブミン濃度を用いた、回帰式の設定によるトレーサビリティ体系の確立について検討した。【０１２７】
＜回帰直線式（VI）の設定＞
１）前記被験材料の糖化アルブミン濃度[L]（Ｔ）を縦軸、糖化アルブミン濃度[P]（Ｘ）を横軸にプロットし、回帰直線式（VI）ｙ＝ｘ＋３３．７８６を設定した（図１１）。【０１２８】
＜直線式（II）により値を設定した標準物質を用い算出した被験材料の測定値を、さらに回帰直線式（VI）を用いて換算しトレーサブル体系を確立する工程＞
１）実施例１０において値を測定した被験材料の糖化アルブミン濃度[P]（Ｎ’）を回帰直線式（VI）に代入することにより、糖化アルブミン濃度[L]（Ｒ’）を得た。
２）前記被験材料の糖化アルブミン濃度[L]（Ｒ’）を、実施例１０で得たアルブミン濃度（Ｏ’）で割り、１０００をかけることにより、糖化アルブミン値（Ｑ３’）を算出した。【０１２９】
直線式（II）を用いた被験材料の測定値を回帰直線式（VI）を用い、換算した値を表１２に記載した。
【表１２】
0006720311.tif 000015
【０１３０】
表１２から分かるように、直線式（II）から値を設定した標準物質を用い、糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[P]（Ｎ’）を回帰直線式（VI）で換算し得られた糖化アルブミン濃度[L]（Ｒ’）をアルブミン濃度（Ｏ’）で割ることにより、得られた糖化アルブミン値（Ｑ３’）は、実施例１０で被験材料に設定した糖化アルブミン値（Ｗ）とよく一致した。即ち、糖化アルブミン認証標準物質を上位基準とし、値の設定を行った標準物質を用い、糖化アルブミン認証標準物質から設定した被験材料の設定値が算出されたことから、一連の連鎖的なトレーサビリティ体系を確立できた。【０１３１】
[実施例１２]
本実施例１２では、高値標準物質（Ｈ）に加えてさらに、低値標準物質（Ｌ）として、Ｏｆｆ  ｔｈｅ  Ｃｌｏｔ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｕｍ（Ｇｏｌｄｅｎ  ｗｅｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）を用いた。【０１３２】
＜標準物質のアルブミン濃度の算出＞
１）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｕ−２）を測定し、前記回帰直線式（式３）に代入し、標準物質のアルブミン濃度（Ｖ−２）を算出した。【０１３３】
＜回帰直線式の設定＞
１）前記標準物質の糖化アルブミン由来の吸光度（Ｓ−２）を測定し、前記回帰直線式（I）に代入し、標準物質の糖化アルブミン濃度[L]（Ｔ−２）を算出した。
２）前記標準物質の糖化アルブミン濃度[L]（Ｔ−２）を横軸、糖化アルブミン由来の吸光度（Ｓ−２）を縦軸にプロットし、回帰直線式（I−２）ｙ＝０．２３４４ｘ−７．９１９４を設定した（図１２）。【０１３４】
３）前記回帰直線式（I−２）を切片が０となるように平行移動し、直線式（II−２）ｙ＝０．２３４４ｘを設定した（図１３）。【０１３５】
＜測定値を認証値に換算する為の回帰直線式の設定＞
１）前記で算出した、直線式（II−２）に、前記糖化アルブミン由来の吸光度（Ｓ−２）を代入し、糖化アルブミン濃度[P]（Ｘ−２）を算出した。
２）前記糖化アルブミン濃度[L]（Ｔ−２）を、前記アルブミン濃度（Ｖ−２）で割り、１０００をかけることにより、糖化アルブミン値（Ｗ−２）（設定値）を算出した。
３）前記糖化アルブミン濃度[P]（Ｘ−２）を、前記アルブミン濃度（Ｖ−２）で割り、１０００をかけることにより、糖化アルブミン値（Ｙ−２）（測定値）を算出した。【０１３６】
低値（Ｌ）及び高値（Ｈ）標準物質の各値を表１３に記載した。
【表１３】
0006720311.tif 000016
【０１３７】
４）前記糖化アルブミン値（Ｗ−２）（設定値）を縦軸、前記糖化アルブミン値（Ｙ−２）（測定値）を横軸にプロットし、回帰直線式（III−２）ｙ＝０．９９９９ｘ＋４３．９７７を設定した（図１４）。【０１３８】
＜直線式（II−２）を用い、値を設定した標準物質を用い算出した測定値を、さらに回帰直線式（III−２）を用いてトレーサブルな値を得る工程＞
１）直線式（II−２）を用いて値を設定した標準物質を用い検量線を作成し、糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[P]（Ｎ−２）を測定した。
２）回帰直線式（式３）を用いて値を設定した標準物質を用い検量線を作成し、糖化アルブミン認証標準物質のアルブミン濃度（Ｏ−２）を測定した。
３）糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[P]（Ｎ−２）をアルブミン濃度（Ｏ−２）で割り、１０００をかけることにより、糖化アルブミン値（Ｐ―２）（測定値）を算出した。
４）糖化アルブミン値（Ｐ−２）（測定値）を、回帰直線式（III−２）に代入することにより、糖化アルブミン値（Ｑ−２）（換算値）を得た。【０１３９】
直線式（II−２）を用いた糖化アルブミン認証標準物質の測定値及び回帰直線式（III−２）を用い、換算した値を表１４に記載した。
【表１４】
0006720311.tif 000017
【０１４０】
表１４から分かるように、直線式（II−２）から値を設定した標準物質を用い、糖化アルブミン認証標準物質の測定値（Ｐ−２）を回帰直線式（III−２）で換算し得られた換算値（Ｑ−２）は、糖化アルブミン認証標準物質に規定されている認証値（Ｂ）とよく一致した。即ち、糖化アルブミン認証標準物質を上位基準とし、値の設定を行った標準物質を用い、糖化アルブミン認証標準物質の認証値が算出されたことから、一連の連鎖的なトレーサビリティ体系を確立できた。【０１４１】
[実施例１３]
実施例１で用いた糖化アルブミン認証標準物質及びアルブミン認証標準物質と、以下を用いて試験を実施した。
１）測定試薬
アルブミン（ＡＬＢ）及び糖化アルブミンの吸光度を測定する試薬は、糖化白蛋白測定試剤盒
【化３】
0006720311.tif 000018
を用いた。糖化白蛋白測定試剤盒の糖化アルブミン試薬は、第一試薬と第二試薬で構成され、ＡＬＢ試薬（ＢＣＧ法）は、第一試薬で構成されている。
２）標準物質
標準物質は、校准品
【化４】
0006720311.tif 000019
を用いた。
３）測定装置
吸光度測定、及び吸光度から濃度への換算を行う装置として、７１８０形日立自動分析装置（日立ハイテクフィールディング（株））を使用した。
４）糖化アルブミン測定方法
上記３の測定装置を用い、サンプル３．０μＬ、第一試薬１６０μＬ及び第二試薬４０μＬの１０分モードで測定を行った。測光０ポイントでサンプルと第一試薬のサンプリング及び撹拌を行い、測定を開始し、第一反応を行った。その後、１６ポイントで第二試薬をサンプリング及び撹拌後、第二反応を行った。トータルで３４ポイントまで測定した。
その他の操作は、各々の添付文書や取扱説明書に従い行った。
５）糖化アルブミン吸光度の計算方法
糖化アルブミン吸光度（測定サンプルの測定吸光度変化）は、３３及び３４ポイントの平均吸光度と第二試薬添加前の１５及び１６ポイントの平均吸光度を用いて、下記計算式により求めた。
ΔｍＡｂｓ＝（Ａｂ１−（Ａｂ２×０．８）／１０
ΔｍＡｂｓ：糖化アルブミン吸光度変化量
Ａｂ１：３３及び３４ポイントの平均吸光度
Ａｂ２：１５及び１６ポイントの平均吸光度
式中「０．８」は、次の計算式により算出した値である：第一試薬量（１６０μＬ）／（第一試薬量（１６０μＬ）＋第二試薬量（４０μＬ））＝０．８
６）アルブミン測定方法
上記３の測定装置を用い、サンプル２．０μＬ及び第一試薬２００μＬの５分モードで測定を行った。０ポイントでサンプルと第一試薬のサンプリング及び撹拌を行い、測定を開始し、反応を行った。トータルで１７ポイントまで測定した。
その他の操作は、各々の添付文書や取扱説明書に従い行った。
７）アルブミン（ＡＬＢ）吸光度の計算方法
ＡＬＢ吸光度（測定サンプルの測定吸光度変化）は、８及び９ポイントの平均吸光度を用いて下記計算式により求めた。
ΔｍＡｂｓ＝（Ａｂ１）／１０
ΔｍＡｂｓ：ＡＬＢ吸光度変化量
Ａｂ１：８及び９ポイントの平均吸光度【０１４２】
＜回帰直線式（I（ａ））の設定＞
１）実施例１と同様に検討した結果の各値を表１５に記載した。
【表１５】
0006720311.tif 000020
【０１４３】
２）前記糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[L]（Ａ（ａ））を横軸、糖化アルブミン吸光度（Ｄ（ａ））を縦軸にプロットし、回帰直線式（I(a)）ｙ＝０．１３７２ｘ−２．１８７５を設定した。（図１５）【０１４４】
＜回帰直線式（I(a)）の切片を０とする回帰直線式の設定＞
１）前記回帰直線式（I(a)）を切片が０となるように平行移動し、直線式（II(a)）ｙ＝０．１３７２ｘ（II(a)）を設定した（図１６）【０１４５】
＜回帰直線式（III(a)）の設定＞
１）実施例２と同様に検討した結果の各値を表１６に記載した。
【表１６】
0006720311.tif 000021
２）糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン認証値（Ｂ）を縦軸、前記糖化アルブミン値（Ｆ（ａ））を横軸にプロットし、回帰直線式（III(a)）ｙ＝１．００６５ｘ＋２２．７６３を設定した。（図１７）【０１４６】
＜回帰直線式（III(a)）を用いた、標準物質への値の設定＞
実施例３と同様に検討した結果の各値を表１７に記載した。
【表１７】
0006720311.tif 000022
【０１４７】
＜回帰直線式（III(a)）を用いたトレーサビリティの確立＞
実施例４と同様に検討した結果の各値を表１８に記載した。
【表１８】
0006720311.tif 000023
【０１４８】
表１８から分かるように、実施例４と同様に直線式（II(a)）から値を設定した標準物質を用い、糖化アルブミン認証標準物質の測定値（Ｐ（ａ））を回帰直線式（III(a)）で換算し得られた換算値（Ｑ（ａ））は、糖化アルブミン認証標準物質に規定されている認証値（Ｂ）とよく一致した。即ち、糖化アルブミン認証標準物質を上位基準とし、値の設定を行った標準物質を用い、糖化アルブミン認証標準物質の認証値が算出されたことから、一連の連鎖的なトレーサビリティ体系を確立できた。【０１４９】
[実施例１４]
実施例１で用いた糖化アルブミン認証標準物質及びアルブミン認証標準物質と、以下を用いて試験を実施した。
１）測定試薬
アルブミン（ＡＬＢ）、糖化アルブミンの吸光度を測定する試薬は、Ｇｌｙｃａｔｅｄ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ（ＩＶＤＬａｂ  ＣＯ．，ＬＴＤ）を用いた。
Ｇｌｙｃａｔｅｄ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎの糖化アルブミン試薬は、第一試薬と、第二試薬で構成され、ＡＬＢ試薬（ＢＣＧ法）は、第一試薬で構成されている。
２）標準物質
標準物質は、Ｇｌｙｃａｔｅｄ  ａｌｂｕｍｉｎ  Ｃａｌｉｂｒａｔｏｒ（ＩＶＤＬａｂ  ＣＯ．，ＬＴＤ）を用いた。
３）測定装置
吸光度測定及び吸光度から濃度への換算を行う装置として、７１８０形日立自動分析装置（日立ハイテクフィールディング（株））を使用した。
４）糖化アルブミン測定方法
上記３の測定装置を用い、サンプル１０．０μＬ、第一試薬２００μＬ及び第二試薬５０μＬの１０分モードで測定を行った。測光０ポイントでサンプルと第一試薬の、サンプリング及び撹拌を行い、測定を開始し、第一反応をった。その後、１６ポイントで第二試薬をサンプリング及び撹拌後、第二反応を行った。トータルで３４ポイントまで測定した。
その他の操作は、各々の添付文書や取扱説明書に従い行った。
５）糖化アルブミン吸光度の計算方法
糖化アルブミン吸光度（測定サンプル測定吸光度変化）は、３３及び３４ポイントの平均吸光度と第二試薬添加前の１５及び１６ポイントの平均吸光度を用いて下記計算式により求めた。
ΔｍＡｂｓ＝（Ａｂ１−（Ａｂ２×０．８））／１０
ΔｍＡｂｓ：糖化アルブミン吸光度変化量
Ａｂ１：３３及び３４ポイントの平均吸光度
Ａｂ２：１５及び１６ポイントの平均吸光度
式中「０．８」は、次の計算式により算出した値である。
第一試薬量（２００μＬ）／（第一試薬量（２００μＬ）＋第二試薬量（５０μＬ））＝０．８
６）アルブミン測定方法
上記３の測定装置を用い、サンプル２．０μＬ及び第一試薬２００μＬの１分モードで測定を行った。０ポイントでサンプルと第一試薬のサンプリング及び撹拌を行い、測定を開始し、反応を行った。トータルで４ポイントまで測定した。
その他の操作は、各々の添付文書や取扱説明書に従い行った。
７）アルブミン（ＡＬＢ）吸光度の計算方法
ＡＬＢ吸光度（測定サンプル測定吸光度変化）は、３及び４ポイントの平均吸光度を用いて下記計算式により求めた。
ΔｍＡｂｓ＝（Ａｂ１）／１０
ΔｍＡｂｓ：ＡＬＢ吸光度変化量
Ａｂ１：３及び４ポイントの平均吸光度【０１５０】
＜回帰直線式（I(b)）の設定＞
１）実施例１と同様に検討した結果の各値を表１９に記載した。
【表１９】
0006720311.tif 000024
【０１５１】
２）前記糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[L]（Ａ（ｂ））を横軸、糖化アルブミン吸光度（Ｄ（ｂ））を縦軸にプロットし、回帰直線式（I(b)）ｙ＝０．２８８８ｘ−６．４８２７を設定した（図１８）。【０１５２】
＜回帰直線式（I(b)）の切片を０とする回帰直線式の設定＞
１）前記回帰直線式（I(b)）を切片が０となるように平行移動し、直線式（II(b)）
ｙ＝０．２８８８ｘ（II(b)）を設定した（図１９）。【０１５３】
＜回帰直線式（III(b)）の設定＞
１）実施例２と同様に検討した結果の各値を表２０に記載した。
【表２０】
0006720311.tif 000025
【０１５４】
２）糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン認証値を縦軸、前記糖化アルブミン値（Ｆ（ｂ））を横軸にプロットし、回帰直線式（III(b)）ｙ＝１．０１ｘ＋３１．８５６を設定した（図２０）。【０１５５】
＜回帰直線式（III(b)）を用いた、標準物質への値の設定＞
実施例３と同様に検討した結果の各値を表２１に記載した。
【表２１】
0006720311.tif 000026
【０１５６】
＜回帰直線式（III(b)）を用いたトレーサビリティの確立＞
実施例４と同様に検討した結果の各値を表２２に記載した。
【表２２】
0006720311.tif 000027
【０１５７】
表２２から分かるように、実施例４と同様に直線式（II(b)）から値を設定した標準物質を用い、糖化アルブミン認証標準物質の測定値（Ｐ（ｂ））を回帰直線式（III(b)）で換算し得られた換算値（Ｑ（ｂ））は、糖化アルブミン認証標準物質に規定されている認証値（Ｂ）とよく一致した。即ち、糖化アルブミン認証標準物質を上位基準とし、値の設定を行った標準物質を用い、糖化アルブミン認証標準物質の認証値が算出されたことから、一連の連鎖的なトレーサビリティ体系を確立できた。【０１５８】
［比較例１］
＜回帰直線式（I）を用いた、標準物質への値の設定＞
１）標準物質の糖化アルブミン由来の吸光度（Ｇ）を測定した。
２）前記回帰直線式（I）に前記糖化アルブミン吸光度（Ｇ）を代入し、標準物質の糖化アルブミン濃度[L]（Ｔ（ｃ））を算出した。
３）標準物質のアルブミン由来の吸光度（Ｉ）を測定した。
４）実施例３の回帰直線式（式３）に前記アルブミン吸光度（Ｉ）を代入し、標準物質のアルブミン濃度（Ｊ）を算出した。【０１５９】
上記で求めた標準物質の各値を表２３に記載した。
【表２３】
0006720311.tif 000028
【０１６０】
＜回帰直線式（I）を用いて値を設定した標準物質より、糖化アルブミン認証標準物質を測定した結果＞
１）回帰直線式（I）を用い、値を設定した標準物質を用い、糖化アルブミン吸光度から糖化アルブミン濃度へ変換する検量線を作成し、糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[L]（Ｎ（ｃ））を測定した。
２）回帰直線式（I）を用い、値を設定した標準物質を用い、アルブミン吸光度からアルブミン濃度へ変換する検量線を作成し、糖化アルブミン認証標準物質のアルブミン濃度（Ｏ）を測定した。
３）上記、糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン濃度[L]（Ｎ（ｃ））をアルブミン濃度（Ｏ）で割り、１０００をかけることにより、糖化アルブミン値（Ｐ（ｃ））を算出した。【０１６１】
回帰直線式（I）を用いた糖化アルブミン認証標準物質の各値を表２４に記載した。
【表２４】
0006720311.tif 000029
４）表２４から分かるように、回帰直線式（I）から値を設定した標準物質を用いても、糖化アルブミン認証標準物質の糖化アルブミン値の測定値（Ｐ（ｃ））は、糖化アルブミン認証標準物質に規定されている認証値（Ｂ）と一致しなかった。即ち、糖化アルブミン認証標準物質を上位基準とし、上記実施例の方法で値の設定を行った標準物質を用い、糖化アルブミン認証標準物質の認証値が算出されなかったことから、この方法では一連の連鎖的なトレーサビリティ体系を確立できなかった。
【産業上の利用可能性】
【０１６２】
本発明によれば、測定方法が異なることに起因して測定値が一致しない場合に測定値を一致させる方法を提供することが可能となる。例えば、簡便且つ安価で短時間で測定可能な、吸光度測定を用いた酵素法により、被験材料の、ＧＡ認証値にトレーサブルなＧＡ値を測定することが可能となる。よって、本発明は、糖尿病に代表される、ＧＡ値が関与する疾患又は状態の診断及び管理に特に有用であり、医療分野、試薬分野等における産業上の利用可能性を有する。【０１６３】
本出願は、２０１６年７月２８日に出願された日本国特許出願第２０１６−１４８９７３号に基づく優先権を主張するものであり、その内容はここに参照として組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
0006720311.tif 000036
【図８】
0006720311.tif 000037
【図９】
0006720311.tif 000038
【図１０】
0006720311.tif 000039
【図１１】
0006720311.tif 000040
【図１２】
0006720311.tif 000041
【図１３】
0006720311.tif 000042
【図１４】
0006720311.tif 000043
【図１５】
0006720311.tif 000044
【図１６】
0006720311.tif 000045
【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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