(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）カテキン類と（Ｂ）リン脂質との質量比[（Ｂ）／（Ａ）]が２〜１００であるカテキン類含有組成物と、アルコール水溶液及びアルコールから選択される少なくとも１種の溶媒とを、総固形分量に対する総溶媒量の質量比が２〜７０となるように混合する工程Ａと、
前記混合液中に生じるカテキン類に富む相を回収する工程Ｂを含む、
精製カテキン類含有組成物の製造方法。
【請求項２】
前記カテキン類含有組成物の固形分中の（Ａ）カテキン類の含有量が１〜３５質量％である、請求項１記載の精製カテキン類含有組成物の製造方法。
【請求項３】
前記カテキン類含有組成物中の（Ａ）カテキン類と（Ｃ）カフェインとの質量比[（Ｃ）／（Ａ）]が０．００００１〜１である、請求項１又は２記載の精製カテキン類含有組成物の製造方法。
【請求項４】
前記混合液中のアルコール濃度が１５〜５５質量％である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の精製カテキン類含有組成物の製造方法。
【請求項５】
前記アルコール水溶液中のアルコール濃度が１０質量％以上である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の精製カテキン類含有組成物の製造方法。
【請求項６】
前記アルコールがエタノールである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の精製カテキン類含有組成物の製造方法。
【請求項７】
混合温度が５〜６０℃である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の精製カテキン類含有組成物の製造方法。
【請求項８】
前記カテキン類に富む相が、前記混合液を固液分離することにより生じる液相である、請求項１〜７のいずれか１項に精製カテキン類含有組成物の製造方法。
【請求項９】
前記固液分離が遠心分離である、請求項８に記載の精製カテキン類含有組成物の製造方法。
【請求項１０】
前記遠心分離を、温度５〜６０℃、相対遠心加速度３００〜１７０,０００Ｇ、及び時間３〜３００分の条件にて行う、請求項９記載の精製カテキン類含有組成物の製造方法。
【請求項１１】
前記工程Ａ及び工程Ｂの前に、茶抽出物とリン脂質とを混合し、混合液中から前記カテキン類含有組成物を回収する工程を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の精製カテキン類含有組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、精製カテキン類含有組成物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
茶葉にはカテキン類が豊富に含まれており、茶葉から抽出することによりカテキン類を得ることができるが、抽出の際にはカフェイン等の夾雑物も同時に抽出されてしまう。
【０００３】
このような夾雑物を低減する技術として、例えば、茶葉を熱湯又は有機溶媒水溶液で抽出し、抽出成分を含む溶液をクロロホルムで洗浄し、次いで抽出成分を有機溶媒に転溶した後、有機溶媒を留去する方法（特許文献１）、茶抽出物を活性白土又は酸性白土と接触させる方法（特許文献２）、茶抽出物を水又は含水有機溶媒中に溶解又は懸濁し、アルカリ性条件下、合成吸着剤と接触させる方法（特許文献３）等が知られている。
【０００４】
一方、茶抽出物をリン脂質と共存させることで、茶抽出物の渋味を低減できることが報告されているが（特許文献４）、リン脂質を用いた茶抽出物の精製方法については知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開昭５９−２１９３８４号公報
【特許文献２】特開平６−１４２４０５号公報
【特許文献３】特開平８−１０９１７８号公報
【特許文献４】特表２０１２−５０３４７９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、カテキン類を純度よく、かつより高い収率で回収可能な精製カテキン類含有組成物の製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、カテキン類及びリン脂質を特定の割合で含有するカテキン類含有組成物と、特定溶媒とを混合することで、カテキン類に富む相と、リン脂質及び夾雑物に富む相とに分離され、そしてカテキン類に富む相を回収することで、カテキン類を純度よく、かつより高い収率で得られることを見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は、（Ａ）カテキン類と（Ｂ）リン脂質との質量比[（Ｂ）／（Ａ））]が２〜１００であるカテキン類含有組成物と、有機溶媒水溶液及び有機溶媒から選択される少なくとも１種の溶媒とを混合する工程Ａと、混合液中に生じるカテキン類に富む相を回収する工程Ｂを含む、精製カテキン類含有組成物の製造方法を提供するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、カテキン類を純度よく、かつより高い収率で回収可能な精製カテキン類含有組成物の製造方法を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の精製カテキン類含有組成物の製造方法は、工程Ａ及び工程Ｂを含むものである。以下、各工程について説明する。
【００１１】
＜工程Ａ＞
工程Ａは、（Ａ）カテキン類と（Ｂ）リン脂質との質量比[（Ｂ）／（Ａ）]が２〜１００であるカテキン類含有組成物と、有機溶媒水溶液及び有機溶媒から選択される少なくとも１種の溶媒とを混合する工程である。
【００１２】
ここで、本明細書において「カテキン類」とは、エピガロカテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピカテキンガレート及びカテキンガレートからなるガレート体と、エピガロカテキン、ガロカテキン、エピカテキン及びカテキンからなる非ガレート体を併せての総称である。なお、カテキン類の含有量は、上記８種の合計量に基づいて定義され、本発明においては、上記８種のカテキン類のうち少なくとも１種を含有すればよい。
また、本明細書において「リン脂質」とは、構造中にリン酸エステル部位、ホスホン酸エステル部位をもつ脂質の総称をいう。
【００１３】
（カテキン類含有組成物）
カテキン類含有組成物は、（Ａ）カテキン類及び（Ｂ）リン脂質を含み、それらの質量比[（Ｂ）／（Ａ））]が２〜１００であるものであるが、カテキン類の収率及び純度の観点から、２以上が好ましく、４以上がより好ましく、６以上が更に好ましく、そして１００以下が好ましく、５０以下がより好ましく、２５以下が更に好ましく、２０以下がより更に好ましい。かかる質量比の範囲としては、２〜１００が好ましく、４〜５０がより好ましく、６〜２５が更に好ましく、６〜２０がより更に好ましい。
【００１４】
カテキン類含有組成物の固形分中の（Ａ）カテキン類の含有量は、カテキン類の収率及び純度の観点から、１質量％以上が好ましく、２質量％以上がより好ましく、４質量％以上が更に好ましく、そして３５質量％以下が好ましく、３０質量％以下がより好ましく、２５質量％以下が更に好ましい。かかる（Ａ）カテキン類の含有量の範囲としては、カテキン類含有組成物の固形分中に、好ましくは１〜３５質量％、より好ましくは２〜３０質量％、更に好ましくは４〜２５質量％である。ここで、本明細書において「固形分」とは、試料を１０５℃の電気恒温乾燥機で６時間乾燥して揮発物質を除いた残分であり、次の式（Ｉ）で算出される。
【００１５】
固形分(質量％)＝試料乾燥後の質量(ｇ)／試料乾燥前の質量(ｇ)×１００・・・（Ｉ）
【００１６】
カテキン類含有組成物中の固形分中の（Ｂ）リン脂質の含有量は、分離操作のしやすさの観点から、６５質量％以上が好ましく、７０質量％以上がより好ましく、７５質量％以上が更に好ましく、またカテキン類の収率及び純度の観点から、９９質量％以下が好ましく、９８質量％以下がより好ましく、９６質量％以下が更に好ましい。かかる（Ｂ）リン脂質の含有量の範囲としては、カテキン類含有組成物中の固形分中に、好ましくは６５〜９９質量％、より好ましくは７０〜９８質量％、更に好ましくは７５〜９６質量％である。なお、カテキン類含有組成物中のリン脂質量は、例えば、リン脂質Ｃテストワコー（和光純薬社製）等のリン脂質定量キットや、ＨＰＬＣを用いた分析等により定量することが可能である。
【００１７】
カテキン類含有組成物は、（Ａ）カテキン類と（Ｃ）カフェインとの質量比[（Ｃ）／（Ａ）]が、１以下が好ましく、０．５以下がより好ましく、０．１以下が更に好ましく、０．０５以下がより更に好ましい。なお、下限は特に限定されるものではく、０であっても良いが、例えば０．００００１以上が好ましく、０．０００１以上が更に好ましい。かかる質量比[（Ｃ）／（Ａ）]の範囲としては、好ましくは０．００００１〜１、より好ましくは０．００００１〜０．５、更に好ましくは０．００００１〜０．１、より更に好ましくは０．０００１〜０．０５である。
【００１８】
（カテキン類含有組成物を調製するための一態様）
カテキン類含有組成物は、（Ａ）カテキン類と（Ｂ）リン脂質との質量比[（Ｂ）／（Ａ）]が２〜１００、好ましくは上述の好適範囲を満たすものであれば良く、適宜の方法により調製することが可能であるが、例えば、（Ａ’）茶抽出物とリン脂質とを混合し、混合液中からリン脂質相を回収する工程を含む方法に供することにより調製することができる。
【００１９】
（Ａ’）茶抽出物としては、茶抽出液、その濃縮物、又はそれらの精製物が挙げられ、その形態としては、固体、液体、溶液、スラリー等の種々のものがある。茶抽出物は１種又は２種以上組み合わせて使用することができる。ここで、本明細書において「茶抽出液」とは、茶葉から熱水又は親水性有機溶媒を用いて抽出されたものであって、濃縮や精製操作が行われていないものをいう。抽出方法及び抽出条件は、公知の方法及び条件を採用することが可能であり、特に限定されない。茶葉としては、例えば、Camellia属、例えば、C. sinensis var.sinensis（やぶきた種を含む）、C. sinensis var.assamica及びそれらの雑種から選択される茶樹（Camellia sinensis）が挙げられる。茶樹は、その加工方法により、不発酵茶、半発酵茶、発酵茶に分類することができる。
不発酵茶としては、例えば、煎茶、番茶、碾茶、釜入り茶、茎茶、棒茶、芽茶等の緑茶が挙げられる。また、半発酵茶としては、例えば、鉄観音、色種、黄金桂、武夷岩茶等の烏龍茶が挙げられる。更に、発酵茶としては、ダージリン、アッサム、スリランカ等の紅茶が挙げられる。これらは１種又は２種以上を組み合わせて用いることができる。中でも、カテキン類の含有量の点から、不発酵茶が好ましく、緑茶が更に好ましい。
【００２０】
また、「茶抽出液の濃縮物」とは、茶抽出液から溶媒の一部を除去してカテキン類濃度を高めたものであり、例えば、濃縮方法として、常圧濃縮、減圧濃縮、膜濃縮等を挙げることができる。茶抽出液の濃縮物としては市販品を使用してもよく、例えば、三井農林（株）の「ポリフェノン」、伊藤園（株）の「テアフラン」、太陽化学（株）の「サンフェノン」等の緑茶抽出液の濃縮物が挙げられる。更に、「茶抽出液の精製物」とは、茶抽出液又はその濃縮物を精製してカテキン類の純度を高めたものであり、例えば、特開２００４−１４７５０８号公報、特開２００４−１４９４１６号公報、特開２００６−１６０６５６号公報、特開２００７−２８２５６８号公報、特開２００８−０７９６０９号公報等に記載の方法を採用することができる。その他、茶抽出物を逆相クロマトグラフィ、液体クロマトグラフィ等の各種クロマトグラフィに供してカテキン類を分画したものを使用しても構わない。
【００２１】
茶抽出物は水溶液の形態であることが好ましい。茶抽出物を溶解させた水溶液は、例えば、茶葉から水を用いて抽出された茶抽出液を、必要により水希釈又は濃縮して用いても、茶抽出液の濃縮物又はその精製物を水希釈して用いても、茶抽出液、その濃縮物又はそれらの精製物の乾燥物を再び水に溶解して用いてもよい。
【００２２】
茶抽出物を溶解させた水溶液中のカテキン類の含有量は適宜選択可能であるが、精製効率の観点から、０．０２質量％以上が好ましく、０．０５質量％以上がより好ましく、０．０６質量％以上が更に好ましく、そして１０質量％以下が好ましく、７質量％以下がより好ましく、５質量％以下が更に好ましい。かかるカテキン類の含有量の範囲としては、好ましくは０．０２〜１０質量％、より好ましくは０．０５〜７質量％、更に好ましくは０．０６〜５質量％である。
【００２３】
また、本発明に用いる茶抽出物は、カテキン類中のガレート体の割合（以下、「ガレート体率」とも称する）が、生理効果の観点から、３０質量％以上が好ましく、３５質量％以上がより好ましく、４０質量％以上が更に好ましく、また風味の観点から、７０質量％以下が好ましく、６５質量％以下がより好ましく、６０質量％以下が更に好ましい。かかるガレート体率の範囲としては、好ましくは３０〜７０質量％、より好ましくは３５〜６５質量％、更に好ましくは４０〜６０質量％である。ここで、本明細書において「ガレート体率」とは、カテキン類８種に対する上記ガレート体４種の質量比率である。
【００２４】
（Ｂ）リン脂質は、卵黄、大豆その他の動植物材料に由来するものを特に限定されることなく用いることができ、それらの水素添加物、水酸化物の誘導体といった半合成のリン脂質、合成品等であってもよい。（Ｂ）リン脂質の構成脂肪酸も特に限定されず、飽和脂肪酸及び不飽和脂肪酸のいずれでもよい。また、（Ｂ）リン脂質は、中性リン脂質の他に、アニオン性リン脂質、カチオン性リン脂質といった荷電リン脂質、更には重合性リン脂質を含んでもよい。リン脂質は、１種又は２種以上組み合わせて用いることができる。
【００２５】
（Ｂ）リン脂質としては、例えば、グリセロリン脂質、リゾグリセロリン脂質、スフィンゴリン脂質が挙げられる。中でも、グリセロリン脂質、スフィンゴリン脂質が好ましい。グリセロリン脂質としては、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリンが挙げられるが、中でもホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリンが好ましい。スフィンゴリン脂質としては、スフィンゴミエリン、セラミドシリアチンが挙げられる。これらリン脂質を含む原料として、天然レシチン、又はそれを水素添加処理した精製品を利用することもできる。天然レシチンとしては、例えば、卵黄レシチン、大豆レシチン、イカレシチン等が挙げられ、水素添加リン脂質としては、例えば、水素添加大豆ホスファチジルコリン、水素添加卵黄レシチン等が挙げられる。
【００２６】
茶抽出物と混合する際のリン脂質は、リン脂質膜やリポソームの形態であってもよい。リン脂質をリン脂質膜又はリポソームの形態とすることで、リン脂質膜内又はその内水相へのカテキン類の取り込みや、リン脂質膜へのカテキン類の吸着が容易になる。ここで、本明細書において「リポソーム」とは、リン脂質２分子膜により囲まれた内水相部分を有する閉鎖小胞をいい、そのサイズや脂質二分子の数によって多重相リポソーム（Ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ Ｖｅｓｉｃｌｅ：ＭＬＶ）、大きな一枚膜リポソーム（Ｌａｒｇｅ Ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ Ｖｅｓｉｃｌｅ：ＬＵＶ）、小さな一枚膜リポソーム（Ｓｍａｌｌ Ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ Ｖｅｓｉｃｌｅ：ＳＵＶ）の３種類に分類される。本発明においてはいずれの種類のリポソームも使用可能である。
【００２７】
リン脂質膜へカテキン類を吸着させる場合、例えば、茶抽出物とリン脂質とを混合し、震盪等により応力を与えてリン脂質膜の形成と、リン脂質膜への非重合体カテキン類の吸着とを略同時に行ってもよい。また、リン脂質に震盪等により応力を与えて予めリン脂質膜の形成した後、これに茶抽出物を混合することもできる。
リポソームの形成方法としては特に限定されず、Ｂａｎｇｈａｍ法、脂質溶解法、メカノケミカル法、凍結乾燥リポソーム法等の方法を採用することができる。
【００２８】
リポソームのメジアン径は、リン脂質相と液相との分離操作の観点から、好ましくは１０〜２０,０００ｎｍ、より好ましくは３０〜１５,０００ｎｍ、更に好ましくは５０〜１０,０００ｎｍ、より更に好ましくは５０〜５,０００ｎｍ、より更に好ましくは５０〜３,０００ｎｍ、より更に好ましくは８０〜１，０００ｎｍ、殊更に好ましくは１００〜５００ｎｍである。ここでいう「メジアン径」とは、レーザー回折散乱法を用いて測定した体積基準の累積粒度分布において、累積値が５０％（ｄ50）に相当する粒子径をいう。
【００２９】
また、茶抽出物と混合する際のリン脂質は、相転移温度を有するものが好ましい。ここで、本明細書において「相転移温度」とは、リン脂質が取り得るゲルと液晶との両状態間の相転移を生じる温度をいい、リン脂質に対して十分量の水が存在する場合の値である。相転移温度は、示差走査熱量計（ＤＳＣ）を用いて示差熱分析により測定することができる。
示差走査熱量計として、例えばＤＳＣ７０２０（日立ハイテクサイエンス製）を用いることができる。具体的には、リン脂質の相転移温度は、下記の手順により測定できる。
（１）０℃を超える温度に相転移温度を有するリン脂質は、下記の手順により相転移温度を測定する。まず、リン脂質に対して十分量の水が存在するよう、リン脂質濃度が１〜１０ｇ／１００ｇとなるように、リン脂質を水に十分分散させた試料を準備する。次いで、試料０．００５ｇをアルミニウム製の試料容器に秤量し、アルミニウム製のカバーをした後、電動サンプルシーラーを用い、密封する。密封した試料容器を、電気炉内のホルダーユニットに乗せる。また、空気を密封したブランク容器を、ホルダーユニットのブランク側に乗せる。電気炉に蓋をし、窒素雰囲気下で１℃、５分間保持する。次いで、１℃から９８℃まで、昇温速度０．５℃／分で加熱する（昇温工程）。この、昇温工程において、示差走査熱量計ＤＳＣ７０２０（日立ハイテクサイエンス製）を用いて、ＤＳＣ曲線を計測する。この際、昇温工程で吸熱ピークが見られた際の温度を、リン脂質の相転移温度とする。
（２）また、上記の測定条件により相転移温度が確認できないリン脂質においては、下記の手順により相転移温度を測定する。まず、リン脂質に対して５０質量％のエチレングリコール水溶液を、リン脂質濃度が１〜１０ｇ／１００ｇとなるように、リン脂質を水に十分分散させた試料を準備する。次いで、上記と同様の操作により、試料容器、ブランク容器を用意し、ホルダーユニットに乗せる。電気炉に蓋をし、窒素雰囲気下で２５℃、５分間保持する。次いで、２５℃から―４０℃まで、降温速度０．５℃／分で冷却する（冷却工程）。この、冷却工程において、示差走査熱量計ＤＳＣ７０２０（日立ハイテクサイエンス製）を用いて、ＤＳＣ曲線を計測する。この際、冷却工程で発熱ピークが見られた際の温度を、リン脂質の相転移温度とする。
【００３０】
リン脂質の相転移温度は、ハンドリングの観点から、−２５℃以上が好ましく、−２０℃以上がより好ましく、またカテキン類の取込み率、吸着率の観点から、６０℃以下が好ましく、５０℃以下がより好ましく、４０℃以下が更に好ましく、３０℃以下がより更に好ましい。かかる相転移温度の範囲としては、好ましくは−２５℃〜６０℃、より好ましくは−２０℃〜５０℃、更に好ましくは−２０℃〜４０℃、より更に好ましくは−２０℃〜３０℃である。
【００３１】
相転移温度を有するリン脂質としては、例えば、大豆ホスファチジルコリン（本明細書における測定条件により測定した相転移温度約−１０℃）、水素添加大豆ホスファチジルコリン（本明細書における測定条件により測定した相転移温度約５１℃）、ジミリストイルホスファチジルコリン（下記の参考文献１記載の相転移温度約２３℃）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（下記の参考文献１記載の相転移温度約４１℃）、ジステアロイルホスファチジルコリン（下記の参考文献１記載の相転移温度約５４℃）、ジヘキサデシルホスファチジルコリン（下記の参考文献２記載の相転移温度約４５℃）、ステアロイルパルイトミルホスファチジルコリン（下記の参考文献３記載の相転移温度約４５℃）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（下記の参考文献２記載の相転移温度約６３℃）等が挙げられる。中でも、コリン基を有するホスファチジルコリンが好ましい。本発明で使用するリン脂質は、市販品又は合成品を適宜選択して使用することができるが、リン脂質の含有量が６０質量％以上であるものが好ましく、８０質量％以上であるものが更に好ましい。
【００３２】
参考文献１：金品ら， 高圧力下におけるリン脂質二重膜. 高圧力の科学と技術、vol9，No3，p.213-220（1999）
参考文献２：松木ら. 生体膜脂質の膜状態−圧力研究から見えてくる構造機能相関−，高圧力の科学と技術，vol23，No1，p.30-38（2013）
参考文献３：第32回物性物理化学研究会  講演要旨集
【００３３】
茶抽出物とリン脂質との混合割合は、茶抽出物中の（Ａ）カテキン類と（Ｂ）リン脂質との質量比[（Ａ）／（Ｂ）]として、生産効率の観点から、０．００１以上が好ましく、０．０１以上がより好ましく、０．０２以上が更に好ましく、またカテキン類の収率及び純度の観点から、０．２０以下が好ましく、０．１８以下がより好ましく、０．１１以下が更に好ましく、０．０９以下が殊更に好ましい。かかる質量比[（Ａ）／（Ｂ）]の範囲としては、好ましくは０．００１〜０．２０、より好ましくは０．０１〜０．１８、更に好ましくは０．０１〜０．１１、殊更に好ましくは０．０２〜０．０９である。
【００３４】
茶抽出物とリン脂質との混合温度は、使用するリン脂質の相転移温度よりも高い温度であることが好ましく、リン脂質の相転移温度よりも５℃以上高い温度であることがより好ましく、１０℃以上高い温度であることがより好ましく、２０℃以上高い温度であることがより更に好ましい。
茶抽出物とリン脂質との混合時間は、製造スケール等により一様ではないが、カテキン類の回収率、精製効率の観点から、好ましくは１０〜３６０分、より好ましくは１５〜１２０分、更に好ましくは２０〜６０分である。なお、混合液の温度が所定時間一定に保持されるように、液温制御手段を設けることができる。
【００３５】
茶抽出物とリン脂質との混合する際のｐＨ（２５℃）は、設備腐食防止、カテキン類の安定性の観点から、好ましくは２．５〜９．０、より好ましくは４．０〜８．０、更に好ましくは６．０〜７．０である。
【００３６】
茶抽出物とリン脂質との混合順序は特に限定されず、茶抽出物とリン脂質とを同時に投入して混合しても、一方を他方に投入して混合してもよい。また、茶抽出物とリン脂質とを混合する際には、撹拌、震盪、超音波照射等の処理を行ってもよい。
【００３７】
茶抽出物とリン脂質との混合により、カテキン類がリン脂質膜内又はその内水相に取り込まれるか、あるいはリン脂質膜に吸着される一方、夾雑物はリン脂質膜外、あるいはリポソームの外水相にそのまま存在するため、カテキン類と夾雑物とが分離される。
【００３８】
混合後、混合液中からリン脂質相を回収するが、回収方法としては、限外濾過、遠心分離、ゲルクロマトグラフィー、透析等の固液分離を挙げることができる。固液分離は、１種又は２種以上を組み合わせて行うことができる。中でも、遠心分離が好ましい。混合液を遠心分離することで、リン脂質相を沈殿相として簡便に回収することができる。
【００３９】
遠心分離機としては、分離板型、円筒型、デカンター型等の一般的な機器を使用することができ、必要に応じて超遠心機を用いても良い。
遠心分離する際の温度は、リン脂質相の回収率の観点から、好ましくは１〜６０℃、より好ましくは２〜５０℃、更に好ましくは３〜４０℃である。
遠心分離の時間は、リン脂質相の回収率の観点から、好ましくは３〜３００分、より好ましくは５〜２００分、更に好ましくは１０〜１００分、より更に好ましくは１５〜６０分である。
また、遠心分離の条件は、夾雑物除去、カテキン類の回収率、沈殿相としてリン脂質相を回収する観点から、相対遠心加速度として、例えば、３００Ｇ以上が好ましく、５００Ｇ以上がより好ましく、８００Ｇ以上が更に好ましい。なお、上限は特に限定されるものではないが、例えば１７００００Ｇ以下が好ましい。かかる相対遠心加速度の範囲としては、好ましくは３００〜１７００００Ｇ、より好ましくは５００〜１７００００Ｇ、更に好ましくは８００〜１７００００Ｇである。なお、遠心分離機の回転数と回転半径は、相対遠心加速度が上記範囲内となるように適宜選択することができる。ここで、本明細書において「相対遠心加速度」とは、次の式（II）により算出した値をいう。
【００４０】
相対遠心加速度（Ｇ）＝１１８８×ｒ×Ｎ２×１０−８・・・（II）
【００４１】
〔式（II）中、ｒは遠心機の最大回転半径（ｃｍ）を示し、Ｎは一分間あたりの回転数（ｒｐｍ）を示す。〕
【００４２】
このようにして回収されるリン脂質相は、本工程Ａにおけるカテキン類含有組成物として、そのまま用いることができる。
【００４３】
（溶媒）
本工程においては、溶媒として有機溶媒水溶液及び有機溶媒から選択される少なくとも１種を使用する。
有機溶媒としては、親水性有機溶媒が好ましく、具体的には、エタノール、メタノール等のアルコール、アセトン等のケトン、酢酸エチル等のエステルを挙げることができる。中でも、アルコール、ケトンが好ましく、食品への使用を考慮すると、アルコールがより好ましく、エタノールが更に好ましい。
【００４４】
有機溶媒水溶液中の有機溶媒濃度は、カテキン類の収率及び純度の観点から、１０質量％以上が好ましく、２０質量％以上がより好ましく、３０質量％以上が更に好ましく、４０質量％以上がより更に好ましい。
【００４５】
（混合）
カテキン類含有組成物と溶媒との混合方法は特に限定されず、カテキン類含有組成物と溶媒とを同時に投入して混合しても、一方を他方に投入して混合してもよい。また、カテキン類含有組成物と溶媒とを混合する際には、撹拌、震盪、超音波照射等の処理を行ってもよい。
【００４６】
溶媒の使用量は、カテキン類の収率及び純度の観点から、カテキン類含有組成物中の総固形分量に対する総溶媒量の質量比として、２以上が好ましく、４以上がより好ましく、６以上が更に好ましく、また生産性の観点から、７０以下が好ましく、６０以下がより好ましく、５０以下が更に好ましい。かかる質量比の範囲としては、好ましくは２〜７０、より好ましくは４〜６０、更に好ましくは６〜５０である。ここでいう「総溶媒量」とは、カテキン類含有組成物に含まれる溶媒（例えば水）の量と、混合に使用した有機溶媒水溶液又は有機溶媒の量の総和である。
【００４７】
混合液中の有機溶媒濃度は、カテキン類の収率の観点から、１５質量％以上が好ましく、２０質量％以上がより好ましく、２５質量％以上が更に好ましく、またカテキン類の純度の観点から、５５質量％以下が好ましく、５３質量％以下がより好ましく、５０質量％以下が更に好ましい。かかる有機溶媒濃度の範囲としては、好ましくは１５〜５５質量％、より好ましくは２０〜５３質量％、更に好ましくは２５〜５０質量％である。
なお、混合液中の有機溶媒濃度の調整方法としては、例えば、カテキン類含有組成物と有機溶媒水溶液とを混合し、有機溶媒濃度を上記範囲内に調整する方法、カテキン類含有組成物を水に溶解後、有機溶媒を添加して有機溶媒濃度を上記範囲内に調整する方法、カテキン類含有組成物を有機溶媒に分散又は溶解後、徐々に水を添加して有機溶媒濃度を上記範囲内に調整する方法等が挙げられる。なお、カテキン類含有組成物には溶媒が含まれていてもよく、カテキン類含有組成物中に溶媒が含まれる場合には、該溶媒の濃度を考慮して有機溶媒及び／又は水の添加量を適宜決定し、混合液中の有機溶媒濃度を調整すればよい。
【００４８】
カテキン類含有組成物と溶媒の混合温度は、カテキン類の回収率及び純度の観点から、５℃以上が好ましく、１０℃以上がより好ましく、２０℃以上更に好ましく、３０℃以上より殊更に好ましく、またカテキン類の安定性の観点から、６０℃以下が好ましく、５５℃以下がより好ましく、５０℃以下が更に好ましい。かかる混合温度の範囲としては、好ましくは５〜６０℃、より好ましくは１０〜５５℃、更に好ましくは２０〜５５℃、殊更に好ましくは３０〜５０℃である。
カテキン類含有組成物と溶媒との混合時間は、製造スケール等により一様ではないが、カテキン類の回収率及び純度、精製効率の観点から、１０分以上が好ましく、１５分以上がより好ましく、２０分以上が更に好ましく、そして３６０分以下が好ましく、１２０分以下がより好ましく、６０分以下が更に好ましい。かかる混合時間の範囲としては、好ましくは１０〜３６０分、より好ましくは１５〜１２０分、更に好ましくは２０〜６０分である。なお、混合液の温度が所定時間一定に保持されるように、液温制御手段を設けることができる。
【００４９】
＜工程Ｂ＞
工程Ｂは、工程Ａにより得られた混合液中に生じるカテキン類に富む相を回収する工程である。
本工程では、混合液を固液分離することにより生じる液相を、カテキン類に富む相として回収できる。固液分離としては、前述と同様に、限外濾過、遠心分離、ゲルクロマトグラフィー、透析等を挙げることができる。固液分離は、１種又は２種以上を組み合わせて行うことができる。中でも、遠心分離が好ましい。混合液を遠心分離することで、リン脂質及び夾雑物に富む相が沈殿するため、溶媒に溶解したカテキン類に富む液相を上澄みとして簡便に回収することができる。
【００５０】
遠心分離機としては、分離板型、円筒型、デカンター型等の一般的な機器を使用することができ、必要に応じて超遠心機を用いても良い。
遠心分離する際の温度は、カテキン類の収率と分離しやすさの観点から、５℃以上が好ましく、１０℃以上がより好ましく、２０℃以上が更に好ましく、３０℃以上より殊更に好ましく、またカテキン類の安定性の観点から、６０℃以下が好ましく、５５℃以下がより好ましく、５０℃以下が更に好ましい。かかる温度の範囲としては、好ましくは５〜６０℃、より好ましくは１０〜５５℃、更に好ましくは２０〜５５℃、殊更に好ましくは３０〜５０℃である。
遠心分離の時間は、カテキン類の回収率及び純度、分離しやすさの観点から、３分以上が好ましく、５分以上がより好ましく、１０分以上が更に好ましく、１５分以上がより更に好ましく、そして３００分以下が好ましく、２００分以下がより好ましく、１００分以下が更に好ましく、６０分以下がより更に好ましい。遠心分離の時間の範囲としては、好ましくは３〜３００分、より好ましくは５〜２００分、更に好ましくは１０〜１００分、より更に好ましくは１５〜６０分である。
また、遠心分離の条件は、カテキン類の回収率及び純度、分離しやすさの観点から、相対遠心加速度として、例えば、３００Ｇ以上が好ましく、５００Ｇ以上がより好ましく、８００Ｇ以上が更に好ましい。なお、上限は特に限定されるものではないが、例えば１７００００Ｇ以下が好ましく、１２００００Ｇ以下がより好ましく、７００００Ｇ以下が更に好ましい。かかる相対遠心加速度の範囲としては、好ましくは３００〜１７００００Ｇ、より好ましくは５００〜１２００００Ｇ、更に好ましくは８００〜７００００Ｇである。なお、遠心分離機の回転数と回転半径は、相対遠心加速度が上記範囲内となるように適宜選択することができる。
【００５１】
本発明の製造方法は、下記の特性（ｉ）〜（ii）を具備することができる。
（ｉ）本発明の精製法方法は、カテキン類の収率が、好ましくは２５％以上、より好ましくは３０％以上、更に好ましくは３５％以上である。
（ii）本発明の製造方法により得られた精製カテキン類含有組成物は、カテキン類の純度が、好ましくは２５質量％以上、より好ましくは３０質量％以上、更に好ましくは３５質量％以上である。
【実施例】
【００５２】
１．カテキン類及びカフェインの分析
精製茶抽出物を、０．１ｍｏｌ／Ｌの酢酸−ジメチルスルホオキシド溶液で適宜希釈し０．２μｍのフィルターでろ過して試料を調製した。カテキン類、及びカフェインの測定は、高速液体クロマトグラフ（型式ＳＣＬ−１０ＡＶＰ、島津製作所製）を用い、オクタデシル基導入液体クロマトグラフ用パックドカラム（Ｌ−カラムＴＭ ＯＤＳ、４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ：財団法人 化学物質評価研究機構製）を装着し、カラム温度３５℃でグラジエント法により行った。カテキン類の標準品としては、三井農林製のものを使用し、検量線法で定量した。移動相Ａ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有する蒸留水溶液、Ｂ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有するアセトニトリル溶液とし、試料注入量は２０μＬ、ＵＶ検出器波長は２８０ｎｍの条件で行った。なお、グラジエントの条件は、以下のとおりである。
【００５３】
時間（分）      Ａ液濃度（体積％）      Ｂ液濃度（体積％）
０．０                ９７                      ３
５．０                ９７                      ３
３７．０                ８０                    ２０
４３．０                ８０                    ２０
４３．５                  ０                  １００
４８．５                  ０                  １００
４９．０                ９７                      ３
６０．０                ９７                      ３
【００５４】
２．カテキン類の回収率
カテキン類の回収率は、下記式（１）により算出した。
【００５５】
精製カテキン類含有組成物のカテキン類の回収率＝（精製カテキン類含有組成物に含まれるカテキン類質量）／（カテキン類含有組成物に含まれるカテキン類質量）×１００・・・（１）
【００５６】
３．カテキン類の純度
カテキン類の純度は、下記式（２）により算出した。
精製カテキン類含有組成物のカテキン類の純度＝（精製カテキン類含有組成物に含まれるカテキン類質量）／（精製カテキン類含有組成物に含まれる総固形分質量）×１００・・・（２）
【００５７】
調製例１
緑茶抽出物（カテキン類濃度３２質量％）を０．１２ｇ、リン脂質として大豆ホスファチジルコリン（コートソームＮＣ２０、日油株式会社製）を０．２１ｇを、１０ｇのイオン交換水と混合した。混合物を２５℃にて３０分震盪しつつ、インキュベートした。次いで、分離操作として２５℃、１０００Ｇ（回転数３０００ｒｐｍ）、３０分の条件にて遠心分離を行い、リン脂質相を沈殿させ、上澄みの液相を除去した。沈殿相の固形分を回収し、カテキン類含有組成物Ｘを得た。
【００５８】
調製例２
緑茶抽出物（カテキン類濃度３２質量％）を０．２５ｇ、リン脂質として大豆ホスファチジルコリン（コートソームＮＣ２０、日油株式会社製）を０．８１ｇを、１０ｇのイオン交換水と混合した。混合物を２５℃にて３０分震盪しつつ、インキュベートした。次いで、分離操作として２５℃、１０００Ｇ（回転数３０００ｒｐｍ）、３０分の条件にて遠心分離を行い、リン脂質相を沈殿させ、上澄みの液相を除去した。沈殿相の固形分を回収し、カテキン類含有組成物Ｙを得た。
【００５９】
調製例３
緑茶抽出物（カテキン類濃度３２質量％）を０．１２ｇ、リン脂質として大豆ホスファチジルコリン（コートソームＮＣ２０、日油株式会社製）を０．２０ｇを、１０ｇのイオン交換水と混合した。混合物を２５℃にて３０分震盪しつつ、インキュベートした。次いで、分離操作として２５℃、１０００Ｇ（回転数３０００ｒｐｍ）、３０分の条件にて遠心分離を行い、リン脂質相を沈殿させ、上澄みの液相を除去した。沈殿相の固形分を回収し、カテキン類含有組成物Ｚを得た。
【００６０】
実施例１
調製例１で得られたカテキン類含有組成物Ｘ０．３８ｇと、２０質量％のエタノール水溶液１０．０２ｇとを２５℃で混合した（混合後のエタノール濃度は、１９．７質量％）。混合物を２５℃にて３０分震盪しつつ、インキュベートした。次いで、分離操作として２５℃、１０００Ｇ（回転数３０００ｒｐｍ）、３０分の条件にて遠心分離を行い、リン脂質及び夾雑物に富む相を沈殿させ、上澄みのカテキン類に富む液相を回収し、精製カテキン類含有組成物を得た。得られた精製カテキン類含有組成物について、分析を行った。その結果を表１に示す。
【００６１】
実施例２〜９
表１に示す濃度のエタノール水溶液を用いたこと以外は、実施例１と同様の操作により精製カテキン類含有組成物を得た。得られた精製カテキン類含有組成物について、分析を行った。その結果を表１に示す。
【００６２】
比較例１
エタノール水溶液の代わりに水を用いたこと以外は、実施例１と同様の操作により精製カテキン類含有組成物を得た。得られた精製カテキン類含有組成物について、分析を行った。その結果を表１に示す。
【００６３】
【表１】
0006730788.tif 000002
【００６４】
実施例１０
表２に示す量のエタノール水溶液を用いたこと以外は、実施例５と同様の操作により精製カテキン類含有組成物を得た。得られた精製カテキン類含有組成物について、分析を行った。その結果を実施例５の結果とともに表２に示す。
【００６５】
実施例１１〜１３
カテキン類含有組成物Ｘをカテキン類含有組成物Ｙに代え、表２に示す量のエタノール水溶液を用いたこと以外は、実施例５と同様の操作により精製カテキン類含有組成物を得た。得られた精製カテキン類含有組成物について、分析を行った。その結果を実施例５の結果とともに表２に示す。
【００６６】
【表２】
0006730788.tif 000003
【００６７】
実施例１４〜１７
カテキン類含有組成物Ｘをカテキン類含有組成物Ｚに代え、エタノール水溶液の濃度を４０質量％とし、表３に示す温度でカテキン類含有組成物とエタノール水溶液とを混合したこと以外は、実施例１０と同様の操作により精製カテキン類含有組成物を得た。得られた精製カテキン類含有組成物について、分析を行った。その結果を表３に示す。
【００６８】
【表３】
0006730788.tif 000004
【００６９】
表１〜３から、（Ａ）カテキン類と（Ｂ）リン脂質との質量比[（Ｂ）／（Ａ）]が２〜１００であるカテキン類含有組成物と、有機溶媒水溶液及び有機溶媒から選択される少なくとも１種の溶媒とを混合し、混合液中に生じるカテキン類に富む相を回収することで、カテキン類を純度よく回収できることがわかる。