(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体または抗体断片を含む、必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低減する又はそれまでに低下したコレステロールレベルを維持するための組成物であって、前記抗体が、アリロクマブの重鎖及び軽鎖可変ドメインを含み、前記抗体が、配列番号1における突然変異I474V及び/又はE670Gを含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)のアミノ酸配列に特異的に結合し、前記ヒトが、前記PCSK9アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、組成物。
【請求項２】
前記ヒトが、配列番号40のフレームワーク1をコードするVH遺伝子セグメントをコードするヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の組成物。
【請求項３】
前記ヒトが、配列番号1において突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は配列番号30のヌクレオチド配列によってコードされる前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことが判定されている、請求項1又は2に記載の組成物。
【請求項４】
前記ヒトが、突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は突然変異E670Gを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことが判定されており、任意選択で、前記判定が、ヒトへの前記抗体の投与前に実施される、請求項1から3のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記判定が、配列番号1において突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列について、ヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、請求項4に記載の組成物。
【請求項６】
前記アッセイが、前記生物学的試料と、
a.配列番号1における突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列に、前記生物学的試料中で、特異的にハイブリダイズして特定しうるか、又は前記配列のアンチセンスに対して特異的にハイブリダイズする少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、前記核酸が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドに対してハイブリダイズするか、又はアンチセンス配列に対してハイブリダイズし、それによって、配列番号1において突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ;並びに/又は
b.配列番号1における突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、連続したヌクレオチドの前記配列が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドを含み、それによって、配列番号1において突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ
とを接触させる工程;並びに
前記複合体の存在又は非存在を検出する工程であって、前記複合体の存在を検出することによって、ヒトが配列番号1において突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含むPCSK9を含むことを判定する、工程
を含む、請求項5に記載の組成物。
【請求項７】
前記アッセイが、核酸増幅、並びに任意選択で、配列決定、核酸ハイブリダイゼーション及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/或いは前記アッセイがマルチプレックスフォーマットで行われる、請求項5に記載の組成物。
【請求項８】
スタチン処置に対して実質的に耐性である、又はスタチン処理に対して実質的に耐性であると更に判定されたヒトに投与するための、請求項1から7のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
スタチン処置を受けているか、若しくは受けたか、又はスタチン処置に対して応答性が低下したヒトに投与するための、請求項1から8のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記スタチン処置とは別々に又は同時にヒトに投与するための、請求項8又は9に記載の組成物。
【請求項１１】
前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、請求項5から7のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ヒトが、突然変異E670Gを含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性であると示され、任意選択で、前記ヒトが更に、配列番号28のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトが、配列番号1において突然変異E670Gを含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、請求項1から11のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ヒトが、脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態と診断されている、請求項1から12のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ヒトにおける、脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態のリスクを処置又は低下する、請求項1から13のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ヌクレオチド配列が、配列番号30である、請求項1から14のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
静脈内投与若しくは皮下投与によって投与するための、及び/又は注射用調製物中に含まれる、請求項1から15のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記突然変異が、配列番号1におけるI474V又はE670Gである、請求項1から16のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記突然変異が、配列番号1におけるI474Vである、請求項1から17のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記突然変異が、配列番号1におけるE670Gである、請求項1から17のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記抗体又は断片が、ヒトPCSK9のf型に特異的に結合する、請求項1から19のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ヒトが、f、e、p、及びaj型から選択されるPCSK9を発現する、請求項1から20のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記ヒトが、ASW、LWK、YRI、CEU又はGBR血統に属する、請求項1から21のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記ヒトが、ASW血統に属し、且つ、f、e、p及びaj型から選択されるヒトPCSK9を発現し、任意選択で、前記抗体又はその断片が、ヒトVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む、請求項22に記載の組成物。
【請求項２４】
前記ヒトが、LWK血統に属し、且つ、f、e、p及びaj型から選択されるヒトPCSK9を発現し、任意選択で、前記抗体又はその断片が、ヒトVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む、請求項22に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ヒトが、YRI血統に属し、且つ、f、e、p及びaj型から選択されるヒトPCSK9を発現し、任意選択で、前記抗体又はその断片が、ヒトVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む、請求項22に記載の組成物。
【請求項２６】
前記ヒトが、CEU血統に属し、且つ、f、e、p及びaj型から選択されるヒトPCSK9を発現し、任意選択で、前記抗体又はその断片が、ヒトVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む、請求項22に記載の組成物。
【請求項２７】
前記ヒトが、GBR血統に属し、且つ、f、e、p及びaj型から選択されるヒトPCSK9を発現し、任意選択で、前記抗体又はその断片が、ヒトVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む、請求項22に記載の組成物。
【請求項２８】
前記ヒトのゲノムが、配列番号29、32、34及び36からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、前記抗体又は断片が、それぞれf、e、p及びaj型から選択されるヒトPCSK9に特異的に結合し、前記VHセグメントが、配列番号39を含むヌクレオチド配列又はその相補物を含み、任意選択で、前記VH遺伝子セグメントが、VH3-23*04(配列番号38)である、請求項22に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書に記載される技術は、とりわけ、疾患を処置するためのリガンド、例えば抗体又はトラップ、方法、組成物、キット及び使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
個々のヒトは、その配列の点で異なることが認識されており、近年、数人の個体、例えばJames Watson及びCraig Venterは、そのゲノムが配列決定されている。個体のゲノム配列の比較により、ゲノムのコード部分と非コード部分の両方においてその配列に差があることが解明された。ヒトにおけるこれらのバリエーションの一部は重要であり、個体間の表現型の差に寄与する。極端な場合、これらは、遺伝病をもたらすと予想される。1000ゲノムプロジェクトは、多様な当業界で認識されているヒト民族集団からの個体の極めて大規模な試料のゲノムを配列決定することを含む、ヒトゲノム中の配列のカタログを作る目的を有する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】米国特許出願公開第20120093818号
【特許文献２】米国特許出願公開第2011/0065902号
【特許文献３】GB2444410A
【特許文献４】米国特許公報第2013/0071405号
【特許文献５】米国特許第7,282,337号
【特許文献６】米国特許第7,279,563号
【特許文献７】米国特許第7,226,720号
【特許文献８】米国特許第7,220,549号
【特許文献９】米国特許第7,169,560号
【特許文献１０】米国特許第6,818,395号
【特許文献１１】米国特許第6,911,345号
【特許文献１２】米国特許出願公開第2006/0252077号
【特許文献１３】米国特許出願公開第2007/0070349号
【特許文献１４】WO2013041844
【特許文献１５】米国特許第5,624,821号
【特許文献１６】米国特許第6,277,375号
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【特許文献２２】WO04/035752
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【特許文献２４】WO2008/057457
【特許文献２５】WO2008/057458
【特許文献２６】WO2008/057459
【特許文献２７】WO2008/063382
【特許文献２８】WO2008/133647
【特許文献２９】WO2009/100297
【特許文献３０】WO2009/100318
【特許文献３１】WO2011/037791
【特許文献３２】WO2011/053759
【特許文献３３】WO2011/053783
【特許文献３４】WO2008/125623
【特許文献３５】WO2011/072263
【特許文献３６】WO2009/055783
【特許文献３７】WO2010/029513
【特許文献３８】WO2011/111007
【特許文献３９】WO2010/077854
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【特許文献４２】欧州特許第2604628号
【特許文献４３】WO01/92340
【特許文献４４】WO05/047331
【特許文献４５】WO2011/051351
【特許文献４６】米国特許出願公開第201200202975A1号
【特許文献４７】米国特許出願公開第20120027765A1号
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【特許文献４９】米国特許出願公開第20120020976A1号
【特許文献５０】米国特許出願公開第20130085265A1号
【特許文献５１】米国特許出願公開第20130079501A1号
【特許文献５２】米国特許出願公開第20120213797A1号
【特許文献５３】米国特許出願公開第20120251544A1号
【特許文献５４】米国特許出願公開第20130052201A1号
【特許文献５５】米国特許出願公開第20130058944A1号
【特許文献５６】米国特許出願公開第20130079502A1号
【特許文献５７】米国特許出願公開第20130245235A1号
【特許文献５８】米国特許第5,888,510号
【特許文献５９】米国第6,723,319号
【特許文献６０】米国特許出願公開第2001/0001663号
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【特許文献６２】米国特許第6,410,691号
【特許文献６３】米国特許第5,817,790号
【特許文献６４】米国特許第5,795,695号
【特許文献６５】米国特許第6,670,373号
【特許文献６６】米国特許第7,582,298号
【特許文献６７】EP1130123A2
【特許文献６８】米国特許出願公開第2012064621A1号
【特許文献６９】米国特許第7704500B2号
【特許文献７０】米国特許第8568721号
【特許文献７１】米国特許出願公開20130157313A1号
【特許文献７２】米国特許出願公開20130149310A1号
【特許文献７３】米国特許出願公開20130122003A1号
【特許文献７４】米国特許第8192741号
【特許文献７５】米国特許第8183014号
【特許文献７６】米国特許出願公開20120003697A1号
【特許文献７７】米国特許第8080248号
【特許文献７８】米国特許第8043617号
【特許文献７９】米国特許出願公開20110171241A1号
【特許文献８０】米国特許出願公開20100316636A1号
【特許文献８１】米国特許出願公開20100316627A1号
【特許文献８２】米国特許第7582298号
【特許文献８３】WO2014109999A1
【特許文献８４】WO2008130704
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【特許文献８６】米国特許第5,731,144号
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【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、ヒトの遺伝学的バリエーションの分析及び合理的に設計された配列の選択の適用を介して、改善されたヒト患者の診断及び療法を提供する。重要なことに、本発明は、個々のヒト患者の遺伝子型又は表現型に向けたテーラーメイド医療を可能にする。
【０００６】
本発明者による膨大な数の天然に存在するゲノムのヒトTOI配列の分析は、多様なヒト集団にわたり有意なバリエーションがあることを明らかにし、個々のヒト患者と、標的に向けたテーラーメイド医学的及び診断アプローチとを関連付ける能力を提供する。したがってこれらの発見の技術的な適用は、本発明によれば、ヒトにおけるより優れた処置、予防及び診断に寄与し、個人化医療及び療法を可能にすることによって患者に利益をもたらす。これは、より優れた処方、薬品のより少ない廃棄及び薬効が生じる機会の改善の利点、並びに患者におけるより優れた診断をもたらす。
【０００７】
更に、本発明者は、驚くべきことに、いくつかのよりまれな天然型は、ヒトにおいて共通型よりかなり低い頻度でしか存在しないにもかかわらず、多数の且つ民族的に多様なヒト集団で提示され、通常、提示された民族集団につき多数のヒトの例があることを理解した。したがって、本発明者は、このようなよりまれな型を標的化することは、多くのヒト民族集団にわたり有効な処置、予防又は診断をもたらすと予想され、それによって本発明の有用性が広がり、より一層そのような集団における患者の役に立つことを理解した。
【０００８】
それに伴い、本発明者は、TOIが媒介又は関連する疾患及び状態の療法及び/又は予防のための、ヒト患者に投与するための抗TOIリガンドの選択をガイドするという観点で、本発明の重大な産業的及び医学的適用があることを理解した。この方式で、患者は、患者の遺伝学的又は表現型の構成によって決定されるその必要性に対してテーラーメイドされた薬物及びリガンドを受ける。それと同調して、本発明は、このような処置に関連する患者の遺伝子型判定及び/又は表現型判定を提供し、それによって薬物を患者に適切に適合させることを可能にする。これは、医学的効能の機会を増加させ、患者に適合しない薬物又はリガンドを使用した劣った処置(例えば、乏しい効能及び/又は副作用)の見込みを低減し、医薬品の処方ミス及び浪費を回避する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
この目的を達成するために、本発明は、以下を提供する。
【００１０】
第1の構成では、
ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI:Target of Interest)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法であって、
a.ヒトに抗TOIリガンドを投与して、ヒトにおけるTOIバリアントを標的化し、前記疾患又は状態を処置又は防止する工程を含み、前記ヒトにおけるTOIは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされ、及び/又は前記ヒトにおけるTOIは、50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされ、
b.工程(a)の前に、前記ヒトは、前記ヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、若しくは遺伝子型判定されるか、又は前記TOIバリアントについて陽性であると表現型判定される、方法。
【００１１】
第2の構成では、
ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法であって、
a.ヒトに抗TOIリガンドを投与して、ヒトにおけるTOIバリアントを標的化し、前記疾患又は状態を処置又は防止する工程を含み、前記ヒトにおけるTOIは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされ、及び/又は前記ヒトにおけるTOIは、50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされ、
b.工程(a)の前に、リガンドが、前記TOIバリアントに結合可能であると決定されたか、又は決定される、方法。
【００１２】
第3の構成では、
ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法であって、
a.ヒトに抗TOIリガンドを投与して、ヒトにおけるTOIバリアントを標的化し、前記疾患又は状態を処置又は防止する工程を含み、前記ヒトにおけるTOIは、50%より高い累積ヒト対立遺伝子頻度を有するか、及び/又は50%より高い総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされたバリアントであり、
b.工程(a)の前に、前記ヒトは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/若しくは50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するバリアントヌクレオチド配列について陰性であると遺伝子型判定されたか、若しくは遺伝子型判定されるか、又は50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされたTOIバリアントについて陰性であると表現型判定される、方法。
【００１３】
第4の構成では、
ヒトにおけるTOIが媒介する疾患又は状態を処置及び/又は防止する方法で使用するための抗ヒトTOIリガンドであって、TOIは、ヒト中に異なる多型バリアントとして存在し、前記ヒトのゲノムは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列を含み、この方法は、ヒトにリガンドを投与する工程を含む、リガンド。
【００１４】
第5の構成では、
リガンドを使用してヒトにおける前記TOIを標的化し、TOIが媒介する疾患又は状態を処置及び/又は防止する工程を含む方法で使用するための、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むヒトTOIに結合するリガンドであって、この方法は、ヒトにリガンドを投与する工程を含む、リガンド。
【００１５】
第6の構成では、
TOIが媒介する状態又は疾患を処置又は防止するための医薬組成物又はキット。
【００１６】
第7の構成では、
抗ヒトTOI抗体結合部位を生成する方法であって、複数の抗TOI抗体結合部位を得る工程と、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むTOIへの、又は最も高い累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は最も高い総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIをコードするヌクレオチド配列によってコードされた対応する配列からのアミノ酸バリエーションを含むそのペプチドへの結合に関して抗体結合部位をスクリーニングする工程と、スクリーニングする工程で結合する抗体結合部位を単離する工程とを含む、方法。
【００１７】
第8の構成では、
抗ヒトTOI抗体を生成する方法であって、非ヒト脊椎動物(例えば、マウス又はラット)を、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むTOI、又は最も高い累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は最も高い総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIをコードするヌクレオチド配列によってコードされた対応する配列からのアミノ酸バリエーションを含むそのペプチドで免疫化する工程と、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むTOIに結合する抗体を単離する工程と、任意選択で、単離された抗体のTOI結合断片又は誘導体を生成する工程とを含む、方法。
【００１８】
第9の構成では、
ヒトをTOI遺伝子型判定するためのキットであって、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する選択されたTOIヌクレオチド配列又はそのRNA転写物に特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む核酸を含み;及び/又は核酸が、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドを含むヌクレオチド配列を含むか又はそのアンチセンス配列である、キット。
【００１９】
第10の構成では、
そのゲノムが50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列を含むヒトにおけるTOIが媒介する疾患又は状態を処置及び/又は防止するための医薬の製造における、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むヒトTOIに結合する抗TOIリガンドの使用。
【００２０】
第11の構成では、
ヒトにおいてTOIを標的化してTOIが媒介する疾患又は状態を処置及び/又は防止するための医薬の製造における、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含む前記ヒトTOIに結合する抗TOIリガンドの使用。
【００２１】
第12の構成では、
ヒトにおけるTOIが媒介する疾患又は状態を処置及び/又は防止するためのTOIを標的化する方法であって、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する選択されたTOIヌクレオチド配列を含むヒトに抗TOIリガンドを投与する工程を含み、それによって前記ヌクレオチド配列によってコードされたTOIが標的化される、方法。
【００２２】
第13の構成では、
ヒトの核酸試料をTOI遺伝子型判定する方法であって、試料中で、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列の存在を同定する工程を含む、方法。
【００２３】
第14の構成では、
ヒトのタンパク質試料をTOI型判定する方法であって、試料中で、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたTOIアミノ酸配列の存在を同定する工程を含む、方法。
【００２４】
ある例では、TOIは、PCSK9、VEGF-A及びIL6受容体からなる群から選択されるヒトTOIである。ある例では、TOIは、ヒトIL4Ra、PDGF-B、PDGFR-B又はAng-2である。
【００２５】
第15の構成は、
(i)リガンド(例えば、抗体又は断片)が、
(a)ヒトV領域ヌクレオチド配列によってコードされる可変ドメインであって、Vヌクレオチド配列は、ヒトVH、D及びJH遺伝子セグメント又はヒトVL及びJL遺伝子セグメントの組換え由来の、可変ドメイン;又は
(b)C領域遺伝子セグメントによってコードされた定常領域ドメイン
を含み、
(a)の前記遺伝子セグメント又は(b)の前記C領域遺伝子セグメントの第1の遺伝子セグメントが、第1のアミノ酸多型をコードする第1の一塩基多型(SNP)を含み;
(ii)前記ヒトのゲノムが、前記第1のSNPを含むか、又は前記ヒトは、(a')前記第1のアミノ酸多型を含む抗体可変ドメイン又は(b')前記第1のアミノ酸多型を含む抗体定常ドメインを発現する、本発明のリガンド、方法、使用、キット又は組成物を提供する。
【００２６】
第16の構成は、リガンドが、ヒトV遺伝子セグメント及びヒトJ遺伝子セグメント(及び任意選択で、可変ドメインがVHドメインである場合、ヒトD遺伝子セグメント)の組換え由来のヒト抗体可変ドメインを含む抗体又は断片を含むか、又はそれからなり;ヒトのゲノムが、前記ヒトV遺伝子セグメントを含み、並びに/又はヒトが、前記ヒトV遺伝子セグメント及びヒトJ遺伝子セグメント(及び任意選択でヒトD遺伝子セグメント)の組換え由来の抗体可変ドメインを含む抗体を発現する、本発明のリガンド、方法、使用、キット又は組成物を提供する。
【００２７】
第16の構成は、リガンド(例えば、抗体又は断片又はFc融合ヒトPCSK9受容体を含むか、又はそれからなる)が、第1の定常領域ヌクレオチド配列によってコードされたヒト重鎖定常ドメインを含み;ヒトのゲノムが、前記第1の定常領域ヌクレオチド配列に同一な重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒト定常ドメインを含む抗体を発現する、本発明のリガンド、方法、使用、キット又は組成物を提供する。
【００２８】
第17の構成は、リガンド(例えば、抗体又は断片又はFcに融合したTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、配列番号42の204位に対応するAsp又は配列番号42の206位に対応するLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、ヒトのゲノムが、このようなAsp若しくはLeuをコードするガンマ-1重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、このようなAsp若しくはLeuを含むヒトガンマ-1定常領域を含む抗体を発現する、本発明のリガンド、方法、使用、キット又は組成物を提供する。
【００２９】
第18の構成は、リガンド(例えば、抗体又は断片又はFcに融合したTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn、配列番号44の76位に対応するPhe、配列番号44の161位に対応するVal及び配列番号44の257位に対応するAlaからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み;ヒトのゲノムが、このような選択されたアミノ酸をコードするガンマ-2重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、このような選択されたアミノ酸を含むヒトガンマ-2定常領域を含む抗体を発現する、本発明のリガンド、方法、使用、キット又は組成物を提供する。
【００３０】
第19の構成は、リガンド(例えば、抗体又は断片又はFcに融合したTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、配列番号50の84位に対応するVal又は配列番号50の87位に対応するCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含み;ヒトのゲノムが、このようなVal若しくはCysをコードするカッパ軽鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、このようなVal若しくはCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含む抗体を発現する、本発明のリガンド、方法、使用、キット又は組成物を提供する。
【００３１】
第20の構成は、リガンドが、ヒトVH遺伝子セグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJH遺伝子セグメントの組換え由来のVHドメインを含む抗体又は断片を含むか、又はそれからなり、VH遺伝子セグメントが、(i)IGHV1-18*01及びヒトのゲノムは、ヒトIGHV1-18*01ヌクレオチド配列を含むか、若しくはヒトは、ヒトIGHV1-18*01の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現すること;又は(ii)IGVH1-46*01及びヒトのゲノムは、ヒトIGHV1-46*01ヌクレオチド配列を含むか、若しくはヒトは、ヒトIGHV1-46*01の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現することからなる群から選択される本発明のリガンド、方法、使用、キット又は組成物を提供する。
【００３２】
第21の構成は、リガンドが、ヒトVL遺伝子セグメント及びヒトJL遺伝子セグメントの組換え由来のVLドメインを含む抗体又は断片を含むか、又はそれからなり、VL遺伝子セグメントが、(i)IGKV4-1*01及びヒトのゲノムは、ヒトIGKV4-1*01ヌクレオチド配列を含むか、若しくはヒトは、ヒトIGKV4-1*01の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現するか;(ii)IGLV2-14*01及びヒトのゲノムは、ヒトIGLV2-14*01ヌクレオチド配列を含むか、若しくはヒトは、ヒトIGLV2-14*01の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現するか;又は(iii)IGKV1-13*02及びヒトのゲノムは、ヒトIGKV1-13*02ヌクレオチド配列を含むか、若しくはヒトは、ヒトIGKV1-13*02の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現する、本発明のリガンド、方法、使用、キット又は組成物を提供する。
【００３３】
第22の構成は、それを必要とするヒトにおけるIL4Ra媒介疾患又は状態を処置するか又はそのリスクを低下させる方法であって、前記ヒトに、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される突然変異を含むヒトIL4RAタンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含む、方法を提供する。以下で更に説明されるように、これらのアミノ酸バリエーションは、多くの集団で見出されるヒトにおける天然に存在するIL-4Raバリアントで見出される。前記ヒトは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。
【００３４】
第23の構成は、それを必要とするヒトにおけるIL4Ra媒介疾患又は状態を処置するか又はそのリスクを低下させるリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)であって、この方法は、前記ヒトに前記リガンドを投与する工程を含み、リガンドは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される突然変異を含むヒトIL4RAタンパク質に特異的に結合する、リガンドを提供する。前記ヒトは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。
【００３５】
第24の構成は、ヒトにおいてIL4Raを標的化する方法であって、前記ヒトに、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される突然変異を含むヒトIL4RAタンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含む、方法を提供する。前記ヒトは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。ある例では、ヒトは、IL4Ra媒介疾患若しくは状態に罹っているか、又はそのリスクがある。ある例では、この方法は、ヒトにおけるIL4Ra媒介疾患又は状態を処置するか又はそのリスクを低下させる。
【００３６】
第25の構成は、ヒトにおいてIL4Raを標的化するためのリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)であって、この方法は、前記ヒトに前記リガンドを投与する工程を含み、リガンドは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される突然変異を含むヒトIL4RAタンパク質に特異的に結合する、リガンドを提供する。前記ヒトは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。ある例では、ヒトは、IL4Ra媒介疾患若しくは状態に罹っているか、又はそのリスクがある。ある例では、この方法は、ヒトにおけるIL4Ra媒介疾患又は状態を処置するか又はそのリスクを低下させる。
【００３７】
第21〜25の構成のいずれかの実施形態では、(i)抗体又は断片は、ヒトVHセグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、ヒトVHセグメントが、配列番号40のフレームワーク1をコードし、前記ヒトが、配列番号40のフレームワーク1をコードするVH遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号40のフレームワーク1を含むVHドメインを発現し; (ii)前記ヒトは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。
【００３８】
加えて、又はその代わりに、第21〜25の構成のいずれかの実施形態では、(i)抗体又は断片は、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;(ii)前記ヒトは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。
【００３９】
第26の構成では、それを必要とするヒトにおけるNav1.7媒介疾患又は状態を処置するか又はそのリスクを低下させる方法であって、前記ヒトに、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み;(i)リガンドは、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;(ii)前記ヒトは、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む、前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、方法が本明細書に記載される。本発明はまた、このような方法で使用するための、対応するリガンド、例えば、抗体又は抗体断片も提供する。
【００４０】
いくつかの実施形態では、前記アミノ酸は、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P及び1449Vのいずれか1つからなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態は、疼痛性疾患又は状態である。いくつかの実施形態では、前記アミノ酸は、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I及び1627Kからなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態は、疼痛性疾患又は状態である。いくつかの実施形態では、前記アミノ酸は、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)及び1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)からなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態は、疼痛性疾患又は状態である。
【００４１】
いくつかの実施形態では、前記ヒトに含まれる定常領域遺伝子セグメントは、生殖細胞系の遺伝子セグメントである。いくつかの実施形態では、この方法は、前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含むヒトを選択する工程を更に含む。
【００４２】
いくつかの実施形態では、ヒトは、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質、並びに/又は136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことが決定された。
【００４３】
いくつかの実施形態では、この方法は、ヒトが、(a)136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列、並びに/又は(b)136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記突然変異前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことを決定する工程を更に含み、任意選択で、決定する工程は、ヒトに抗体を投与する前に行われる。いくつかの実施形態では、決定する工程は、ヒトからの生体試料を、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列に関してアッセイする工程を含む。いくつかの実施形態では、アッセイする工程は、生体試料を、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチ���のアンチセンス配列を含む、少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブと接触させる工程であって、連続したヌクレオチドの前記配列が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸をコードするヌクレオチド配列を含み、それによって、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、工程と;複合体の存在又は非存在を検出する工程であって、複合体の存在を検出する工程は、ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことを決定する、工程とを含む。いくつかの実施形態では、アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で、配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/又はアッセイする工程がマルチプレックスの様式で行われる。いくつかの実施形態では、前記生体試料が、前記ヒトの血清、血液、糞、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む。
【００４４】
いくつかの実施形態では、前記ヒトは、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性であると示され、任意選択で、前記ヒトは、配列番号76のヌクレオチド配列を含むことが更に示され、又は前記ヒトは、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される。
【００４５】
いくつかの実施形態では、前記ヒトは、疼痛又は掻痒の処置に対して実質的に耐性であるか、又はそうであることが更に決定されている。いくつかの実施形態では、前記ヒトは、疼痛又は抗掻痒の処置を受けているか、又はこれまでに受けているか、又は疼痛又は掻痒の処置に対する応答性の低減を有する。いくつかの実施形態では、前記疾患又は状態は、疼痛性又は掻痒性の疾患又は状態である。いくつかの実施形態では、前記疾患又は状態は、チャネル障害であるか、又はチャネル障害に関連するか;又は原発性肢端紅痛症(PE)、発作性激痛症(PEPD)及びチャネル障害関連の無痛症(CIP)からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、前記ヒトは、疼痛性又は掻痒性の疾患又は状態と診断されている。
【００４６】
いくつかの実施形態では、前記リガンド断片は、疼痛性又は掻痒性の疾患又は状態の前記ヒトを処置するか又はそのリスクを低下させる。
【００４７】
いくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列は、rs6746030、rs3750904、rs58022607、rs4369876、rs13402180及びrs12478318からなる群から選択される1つ又は複数のSNPを含む。
【００４８】
第27の構成では、ヒトにおけるVEGF-Aが媒介する疾患又は状態を処置するか又はそのリスクを低下させる方法であって、前記ヒトに、rs699947、rs833061、rs2010963、rs3025039、rs699946、rs2146323、rs1413711、rs833068、rs833069、rs3025000及びrs1570360からなる群から選択されるSNPを含むVEGF-Aヌクレオチド配列によって発現されるヒトVEGF-Aに特異的に結合する抗VEGF-Aリガンド(例えば、抗VEGF-Aトラップ、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み、前記ヒトが、選択された前記SNPを含むVEGF-Aヌクレオチド配列を含む、方法が本明細書に記載される。本発明はまた、このような方法で使用するための、対応するリガンド、例えば、抗体又は抗体断片も提供する。
【００４９】
第28の構成では、ヒトにおけるVEGF-Aが媒介する疾患又は状態を処置するか又はそのリスクを低下させる方法であって、前記ヒトに、ヒトVEGF-Aに特異的に結合する抗VEGF-Aリガンド(例えば、抗VEGF-Aトラップ、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み、ヒトは、(i)SNPのrs10490924の位置にGを含むARMS2ヌクレオチド配列;(ii)SNPのrs1061170の位置にT又はrs3766404の位置にTを含むCFHヌクレオチド配列;又は(iii)SNPのrs4576072又はrs6828477を含むVEGFR2ヌクレオチド配列を含み、リガンドは、配列番号42の204位に対応するAsp及び配列番号42の206位に対応するLeuからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、IGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、選択された前記アミノ酸を含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含む抗体を発現する、方法が本明細書に記載される。これらのSNPは、眼の疾患又は状態の抗VEGF-A処置後の改善された応答と関連がある。本発明はまた、このような方法で使用するための、対応するリガンド、例えば、抗体又は抗体断片も提供する。
【００５０】
第29の構成では、VEGF-Aが媒介するヒトにおける疾患又は状態を処置するか又はそのリスクを低下させる方法であって、ヒトに抗ヒトVEGF-Aリガンドを投与する工程を含み、ヒトは、(i)rs142404523(すなわち、-776位に対応するC)及びrs1800818の位置におけるC(すなわち、-735位に対応するC)からなる群から選択されるSNPを含むPDGF-Bヌクレオチド配列;又は(ii)rs246395(すなわち、2601位に対応するG)及びrs74943037(すなわち、1391位に対応するT)からなる群から選択されるSNPを含むPDGFR-Bヌクレオチド配列を含む、方法が本明細書に記載される。本発明はまた、このような方法で使用するための、対応するリガンド、例えば、抗体又は抗体断片も提供する。
【００５１】
第27〜29の構成のいずれかの例では、リガンドは、抗体定常領域(例えば、抗体Fc領域)を含む。任意選択で、リガンドは、配列番号42の204位に対応するAsp及び配列番号42の206位に対応するLeuからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、IGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、選択された前記アミノ酸を含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
【００５２】
第27〜29の構成のいずれかの例では、疾患又は状態は、眼の状態若しくはがん;又は血管新生若しくは新生血管形成である。
【００５３】
第27〜29の構成のいずれかの例では、この方法は、前記ヒトにおいてPDGF-Bを拮抗させる工程を更に含む。
【００５４】
第27〜29の構成のいずれかの例では、この方法は、前記ヒトにおいてアンジオポエチン-2(Ang2)を拮抗させる工程を更に含む。
【００５５】
第30の構成では、本発明は、以下を提供する。
【００５６】
ヒトにおけるPD-L1が媒介する疾患又は状態を処置するか又はそのリスクを低下させる方法であって、前記ヒトに、Table 21(表22)に列挙したバリエーションから選択されるバリエーションを含むPD-L1ヌクレオチド配列によって発現されるヒトPD-L1に特異的に結合する抗PD-L1リガンド(例えば、抗PD-L1トラップ、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含む、方法。
【００５７】
例えば、ヒトにおけるPD-L1が媒介する疾患又は状態を処置するか又はそのリスクを低下させる方法であって、前記ヒトに、Table 21(表22)に列挙したバリエーションから選択されるバリエーションを含むPD-L1ヌクレオチド配列によって発現されるヒトPD-L1に特異的に結合する抗PD-L1リガンド(例えば、抗PD-L1トラップ、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み、前記ヒトが、選択された前記バリエーションを含むPD-L1ヌクレオチド配列を含む、方法が提供される。
【００５８】
例えば、ヒトにおけるがんを処置するか又はそのリスクを低下させる方法であって、前記ヒトに、Table 21(表22)に列挙したバリエーションから選択されるバリエーションを含むPD-L1ヌクレオチド配列によって発現されるヒトPD-L1に特異的に結合する抗PD-L1リガンド(例えば、抗PD-L1トラップ、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み、前記ヒトが、選択された前記バリエーションを含むPD-L1ヌクレオチド配列を含む、方法が提供される。
【００５９】
例えば、ヒトにおける自己免疫疾患又は状態を処置するか又はそのリスクを低下させる方法であって、前記ヒトに、Table 21(表22)に列挙したバリエーションから選択されるバリエーションを含むPD-L1ヌクレオチド配列によって発現されるヒトPD-L1に特異的に結合する抗PD-L1リガンド(例えば、抗PD-L1トラップ、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み、前記ヒトが、選択された前記バリエーションを含むPD-L1ヌクレオチド配列を含む、方法が提供される。
【００６０】
例えば、ヒトにおける炎症性疾患又は状態を処置するか又はそのリスクを低下させる方法であって、前記ヒトに、Table 21(表22)に列挙したバリエーションから選択されるバリエーションを含むPD-L1ヌクレオチド配列によって発現されるヒトPD-L1に特異的に結合する抗PD-L1リガンド(例えば、抗PD-L1トラップ、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み、前記ヒトが、選択された前記バリエーションを含むPD-L1ヌクレオチド配列を含む、方法が提供される。
【００６１】
第31の構成では、本発明は、第30の構成の方法で使用するための、抗ヒトPD-L1リガンド(例えば、抗体、抗体断片又はヒトPD-L1トラップ)を提供する。
【００６２】
第32の構成では、本発明は、1つ又は複数のアミノ酸多型で異なっている複数のバリアントとしてヒトに存在する免疫細胞TOI(例えば、PD-1)をヒトにおいて標的化することによる、ヒトにおけるがん免疫療法の方法であって、ヒトにリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み、リガンドは、第1及び第2のタンパク質ドメインを含み、第1のドメインは、第1のアミノ酸多型を含むTOIバリアントに特異的に結合し、第2のドメインは、第2の多型を含み、ヒトは、(i)前記第1のアミノ酸多型を含むTOI;及び(ii)前記第2の多型を含むタンパク質ドメインを発現し、リガンドは、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;第2のドメインは、リガンドの前記ガンマ-4重鎖定常領域に含まれる、方法を提供する。
【００６３】
この構成はまた、以下の態様も提供する。
【００６４】
ヒトにおいてPD-1を標的化することによるヒトにおけるがん免疫療法の方法であって、ヒトに抗体又は抗体断片を投与する工程を含み、抗体又は抗体断片は、Table 23(表24)で詳述されるバリエーションからなる群から選択されるSNPを含むPD-1ヌクレオチド配列によってコードされたPD-1に特異的に結合し、抗体又は抗体断片は、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;(ii)選択された前記SNPを含むPD-1ヌクレオチド配列を含む、方法。
【００６５】
ヒトにおいてPD-1を標的化することによるヒトにおけるがん免疫療法の方法であって、ヒトに抗体又は抗体断片を投与する工程を含み、抗体又は抗体断片は、Table 23(表24)で詳述されるバリエーションからなる群から選択される(例えば、rs36084323、rs10204225、rs11568821、rs2227981及びrs2227982からなる群から選択される)SNP(第1の多型)を含むPD-1ヌクレオチド配列によってコードされたPD-1に特異的に結合し、抗体又は抗体断片は、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;(ii)選択された前記SNPを含むPD-1ヌクレオチド配列を含む、方法。
【００６６】
ヒトにおけるがんの処置方法であって、ヒトに抗体又は抗体断片を投与する工程を含み、抗体又は抗体断片は、第1のアミノ酸多型を含むPD-1へのPD-L1又はPD-L2の結合を阻害し、抗体又は抗体断片は、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;(ii)前記第1のアミノ酸多型を含むPD-1をコードするPD-1ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトは、前記第1のアミノ酸多型を含むPD-1を発現する、方法。
【００６７】
代替例では、「がん免疫療法の方法」又は「がんの処置方法」の代わりに、本発明は、「自己免疫疾患又は状態を処置するか若しくはそのリスクを低下させる方法」又は「炎症性疾患若しくは状態を処置するか又はそのリスクを低下させる方法」をその代わりに提供し、TOI多型は、自己免疫疾患若しくは状態又は炎症性疾患若しくは状態と関連がある。
【００６８】
本発明はまた、本方法のいずれかで使用するためのリガンド(例えば、トラップ、抗体又は抗体断片)も提供する。
【００６９】
第33の構成では、本発明は、1つ又は複数のアミノ酸多型で異なっている複数のバリアントとしてヒトに存在するTOIが媒介する疾患又は状態(例えば、貧血)をヒトにおいて処置するか又はそのリスクを低下させる方法であって、ヒトにリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み、リガンドは、第1及び第2のタンパク質ドメインを含み、第1のドメインは、第1のアミノ酸多型を含むTOIバリアントに特異的に結合し、第2のドメインは、第2の多型を含み、ヒトは、(i)前記第1のアミノ酸多型を含むTOI;及び(ii)前記第2の多型を含むタンパク質ドメインを発現し、任意選択でリガンドは、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;第2のドメインは、リガンドの前記ガンマ-4重鎖定常領域に含まれ; TOIは、ヒトヘモジュベリン(hemojuvelin)-BMP6-TMPRSS6-ヘプシジン-フェロポーチン-トランスフェリン軸から選択される、方法を提供する。
【００７０】
第34の構成では、本発明は、それを必要とするヒトにおけるIL6R媒介疾患又は状態を処置するか又はそのリスクを低下させる方法であって、前記ヒトに、配列番号78における突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み;前記ヒトが、配列番号78における前記Asp358Ala又はVal385Ileを含む前記IL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、方法を提供する。この構成の様々な実施形態では、リガンド及びヒトは、定常及び/又は可変領域について適合している。本発明のこの構成はまた、対応するリガンド、使用及びキットも提供する。
【００７１】
第35の構成では、本発明は、ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法で使用するための抗TOIリガンドであって、方法は、ヒトに前記リガンドを投与する工程を含み、リガンドは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するSNP(第1のSNP)を含むヌクレオチド配列によってコードされたTOIバリアントに特異的に結合し;ここでヒトは、前記SNPを含むTOIをコードするヌクレオチド配列を含む、リガンドを提供する。
【００７２】
ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法であって、前記ヒトに、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するSNP(第1のSNP)を含むヌクレオチド配列によってコードされたTOIバリアントに特異的に結合する抗TOIリガンドを投与する工程を含み;ヒトは、前記SNPを含むTOIをコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【００７３】
ヒトにおいて目的とする標的(TOI)を標的化してTOIが媒介する疾患又は状態を処置又は防止する方法に使用するための医薬の製造における、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するSNP(第1のSNP)を含むTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むヒトTOIバリアントに特異的に結合する抗TOIリガンドの使用であって、TOIは、ヒト中に異なる多型バリアントとして存在し、ヒトは、前記SNPを含むTOIをコードするヌクレオチド配列を含む、使用。
【００７４】
リガンド、方法又は使用の例では、リガンドは、第2のSNPを含むヌクレオチド配列によってコードされた重鎖ガンマ-1、2、3又は4定常領域を含み、ヒトは、前記第2のSNPを含む重鎖ガンマ-1、2、3又は4定常領域をそれぞれ含む。
【００７５】
リガンド、方法又は使用の例では、リガンドは、ヒトV遺伝子セグメント及びヒトJ遺伝子セグメント(及び任意選択で、可変ドメインがVHドメインである場合、ヒトD遺伝子セグメント)の組換え由来のヒト抗体可変ドメインを含み;ヒトのゲノムが、前記ヒトV遺伝子セグメントを含み、及び/又はヒトが、前記ヒトV遺伝子セグメント及びヒトJ遺伝子セグメント(及び任意選択でヒトD遺伝子セグメント)の組換え由来の抗体可変ドメインを含む抗体を発現する。本発明は更に、レジメン、リガンド及びキットを提供する。
【００７６】
いずれかの構成の例又はいずれかのTOIに関する例は、以下の通りである。
(i)リガンドが、ヒトVHセグメント(例えば、ヒトVH3-23*04)、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、ヒトVHセグメントが、配列番号40のフレームワーク1をコードし、前記ヒトが、配列番号40のフレームワーク1をコードするVH遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号40のフレームワーク1を含むVHドメインを発現する。
(ii)リガンドが、ヒトVHセグメントIGHV3-7*01、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、前記ヒトが、IGHV3-7*01VH遺伝子セグメントを含むか、又はヒトが、ヒトVHセグメントIGHV3-7*01、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを発現する。
(iii)リガンドが、ヒトVκセグメントIGKV1-12*01及びヒトJκセグメントの組換え由来のVκドメインを含み、前記ヒトが、IGKV1-12*01Vκ遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、ヒトVκセグメントIGKV1-12*01及びヒトJκセグメントの組換え由来のVκドメインを発現する。
(iv)リガンドが、ヒトVκセグメント及びヒトJκセグメントの組換え由来のVκドメインを含み、ヒトVκセグメントが、(i)配列番号36に示される7位のProを含むCDR3をコードし、前記ヒトが、配列番号36に示される7位のProを含むCDR3をコードするVκ遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号36に示される7位のProを含むCDR3を含むVκドメインを発現するか;又は(ii)配列番号38に示される15位のSerを含むFW3をコードし、前記ヒトが、配列番号38に示される15位のSerを含むFW3をコードするVκ遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号38に示される15位のSerを含むFW3を含むVκドメインを発現する。
(v)リガンドが、配列番号4に示される204位のAsp又は配列番号4に示される206位のLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)IGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号4に示される204位のAsp又は配列番号4に示される206位のLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(vi)リガンドが、配列番号6に示される72位のPro、配列番号6に示される75位のAsn、配列番号6に示される76位のPhe、配列番号6に示される161位のVal及び配列番号6に示される257位のAlaからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)IGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、前記選択された配列番号6に示される72位のPro、配列番号6に示される75位のAsn、配列番号6に示される76位のPhe、配列番号6に示される161位のVal又は配列番号6に示される257位のAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(vii)リガンドが、配列番号16に示される84位のVal又は配列番号16に示される87位のCysを含むヒトカッパ鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)IGKC1*01ヒトカッパ鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号16に示される84位に対応するVal又は配列番号16に示される87位のCysを含むヒトカッパ鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(viii)リガンドが、ヒトIGLC1*01ラムダ鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)ヒトIGLC1*01ラムダ鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、ヒトIGLC1*01ラムダ鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(ix)リガンドが、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(x)リガンドが、第1のヒトIGHG3(例えば、IGHG3*01)定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトガンマ-3重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)前記第1の定常領域遺伝子セグメント(例えば、IGHG3*01)を含むか、又はヒトは、前記第1のヒトIGHG3(例えば、IGHG3*01)定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトガンマ-3重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(xi)リガンドが、第1のヒトイプシロン重鎖定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトイプシロン重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)前記第1の定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、前記第1の定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトイプシロン重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(xii)リガンドが、第1のヒトミュー重鎖定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトミュー重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)前記第1の定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、前記第1の定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトミュー重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(xiii)リガンドが、第1のヒトアルファ重鎖定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトアルファ重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)前記第1の定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、前記第1の定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトアルファ重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(xiv)リガンドが、第1のヒトデルタ重鎖定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトデルタ重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)前記第1の定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、前記第1の定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトデルタ重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(xv)リガンドが、第1のヒトカッパ軽鎖定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトカッパ軽鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)前記第1の定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、前記第1の定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトカッパ軽鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(xvi)リガンドが、第1のヒトラムダ軽鎖定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトラムダ軽鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)前記第1の定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、前記第1の定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトラムダ軽鎖定常領域を含む抗体を発現する。
【００７７】
いくつかの実施形態では、前記リガンド(例えば、抗体又は抗体断片)は、吸入、静脈内又は皮下投与によって投与されるか、及び/又は吸入用又は注射製剤に含まれる。
【００７８】
いくつかの実施形態では、リガンドのヒトガンマ-4重鎖定常領域は、配列番号73のアミノ酸配列又はそのADCC不活性化バージョンを含む。
【００７９】
いくつかの実施形態では、ヒトガンマ-4重鎖定常領域は、228P及び235Eを含む。
【００８０】
任意選択で、本発明において、TOIは、ヒトTOI:PCSK9、IL6R、IL4Ra、VEGF-A、胎盤成長因子(PGF)、PDGF-B、PDGFR-B、Ang-2、Nav1.7、Nav1.8、Nav1.9、PD-1、PD-L1、ICOS、BMP6、ヘモジュベリン、フェロポーチン、TMPRSS6、トランスフェリン、ヒトヘモクロマトーシスタンパク質(HFE)及びスクレロスチンからなる群から選択される。
【００８１】
例えば、TOIは、PCSK9である。
【００８２】
例えば、TOIは、IL6Rである。
【００８３】
例えば、TOIは、IL4Raである。
【００８４】
例えば、TOIは、VEGF-Aである。
【００８５】
例えば、TOIは、胎盤成長因子(PGF)である。
【００８６】
例えば、TOIは、PDGF-Bである。
【００８７】
例えば、TOIは、PDGFR-Bである。
【００８８】
例えば、TOIは、Ang-2である。
【００８９】
例えば、TOIは、Nav1.7である。
【００９０】
例えば、TOIは、Nav1.8である。
【００９１】
例えば、TOIは、Nav1.9である。
【００９２】
例えば、TOIは、PD-1である。
【００９３】
例えば、TOIは、PD-L1である。
【００９４】
例えば、TOIは、ICOSである。
【００９５】
例えば、TOIは、BMP6である。
【００９６】
例えば、TOIは、ヘモジュベリンである。
【００９７】
例えば、TOIは、フェロポーチンである。
【００９８】
例えば、TOIは、TMPRSS6である。
【００９９】
例えば、TOIは、トランスフェリンである。
【０１００】
例えば、TOIは、ヒトヘモクロマトーシスタンパク質(HFE)である。
【０１０１】
例えば、TOIは、スクレロスチンである。
【０１０２】
例えば、本発明のいずれかの態様、実施例、実施形態又は構成において、抗TOI(例えば、PCSK9又はIL4Ra)リガンド(例えば、トラップ、抗体又は断片)は、ヒトVHセグメント(例えば、ヒトVH3-23*04)、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、ヒトVHセグメントが、配列番号40のフレームワーク1をコードし、前記ヒトが、配列番号40のフレームワーク1をコードするVH遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号40のフレームワーク1を含むVHドメインを発現する。代替例では、リガンドは、ヒトVHセグメント(例えば、ヒトVH3-23*04)、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、ヒトVHセグメントが、SNPのrs56069819を含み、前記ヒトが、SNPのrs56069819を含むVH遺伝子セグメントを含む。
【０１０３】
SNPのrs56069819は、1000ゲノムのフェーズIデータベースに従って11%の平均累積頻度でヒト中に存在するが、AFR(23%)、EUR(13%)、ASW(27%)、LWK(15%)、YRI(28%)、CEU(19%)及びGBR(15%)集団ではそれより高く、したがってある実施形態では、抗TOI(例えば、PCSK9又はIL4Ra)抗体又は断片が配列番号40のフレームワーク1を含むか、又はヒトVHセグメント(例えば、ヒトVH3-23*04)、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含む場合、ヒトVHセグメントは、SNPのrs56069819を含み、ヒトが、AFR、EUR、ASW、LWK、YRI、CEU及びGBR血統からなる群から選択される血統に属する。例えば、ヒトは、AFR血統に属する。例えば、ヒトは、EUR血統に属する。例えば、ヒトは、ASW血統に属する。例えば、ヒトは、LWK血統に属する。例えば、ヒトは、YRI血統に属する。例えば、ヒトは、CEU血統に属する。例えば、ヒトは、GBR血統に属する。ある例では、ヒトの選択された血統は、これらの列挙された血統の1つであり、TOIは、1000ゲノムに従って平均より高い累積頻度でこのようなヒト集団にも存在するSNPによってコードされるアミノ酸バリエーション(突然変異)を含む。例えば、リガンド(例えば、抗体又は断片)が、突然変異S752Aを含むIL4Rタンパク質に特異的に結合し、ヒトは、YRI血統に属する。このケースにおいて、突然変異をコードするSNP、加えてSNPのrs56069819は、YRI集団中に、平均より高い累積頻度で存在する。したがって本発明のこの一般的な態様は、このような集団のメンバーのゲノムプロファイルに合わせてテーラーメイドするために特に有用である。
【０１０４】
ある例では、リガンドは、ヒトPCSK9のf型に特異的に結合する。
【０１０５】
ある例では、ヒトは、f、e、p、及びaj型から選択されるヒトPCSK9を発現する。
【０１０６】
ある例では、ヒトは、ASW、LWK、YRI、CEU又はGBR血統に属する。
【０１０７】
ある例では、ヒトは、ASW血統に属し、ヒトは、f、e、p及びaj型から選択されるヒトPCSK9を発現する;任意選択でリガンドは、ヒトVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む。
【０１０８】
ある例では、ヒトは、LWK血統に属し、ヒトは、f、e、p及びaj型から選択されるヒトPCSK9を発現する;任意選択でリガンドは、ヒトVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む。
【０１０９】
ある例では、ヒトは、YRI血統に属し、ヒトは、f、e、p及びaj型から選択されるヒトPCSK9を発現する;任意選択でリガンドは、ヒトVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む。
【０１１０】
ある例では、ヒトは、CEU血統に属し、ヒトは、f、e、p及びaj型から選択されるヒトPCSK9を発現する;任意選択でリガンドは、ヒトVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む。
【０１１１】
ある例では、ヒトは、GBR血統に属し、ヒトは、f、e、p及びaj型から選択されるヒトPCSK9を発現する;任意選択でリガンドは、ヒトVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む。
【０１１２】
ある例では、ヒトのゲノムは、配列番号29、32、34及び36からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、抗体又は断片は、それぞれf、e、p及びaj型から選択されるヒトPCSK9に特異的に結合し、抗体又は断片は、ヒトVH遺伝子セグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJH遺伝子セグメントの組換え由来のVHドメインを含み、VH遺伝子セグメントが、配列番号39を含むヌクレオチド配列又はその相補物を含む。任意選択で、VH遺伝子セグメントは、VH3-23*04(配列番号38)である。
【０１１３】
本特許又は出願のファイルには、少なくとも1つの色付きの図面を含む。色付きの図面を伴った本特許又は特許出願公開のコピーは、請求及び必要な費用の支払いがあれば特許庁によって提供される。
【図面の簡単な説明】
【０１１４】
【図１】PCSK9表面バリアント残基のインシリコモデリングを示す図である。
【図２】SNP rs56069819を含むヒトVH3-23対立遺伝子の1000ゲノムプロジェクトのデータベースにわたる累積対立遺伝子頻度分布を示す図である(このような対立遺伝子は「C」と示し、最も高頻度の対立遺伝子(これは、このSNPを含まない)は、「A」と示した)。この図は、SNP rs56069819を含むVH3-23対立遺伝子が、全体としてとった全てのヒト民族集団にわたって11%という累積頻度で存在するが、特定の特異的なヒト民族亜集団(ASW、LWK、YRI、CEU及びGBR)では、このような対立遺伝子が、平均の累積頻度より上で存在することを示す。この図に示されるのは、SNP rs56069819を含むヒトVH3-23対立遺伝子の平均出現を上回って種々の亜集団で見出されるヒトPCSK9バリアント型(「バリアント(Variants)」と記される)である。
【図３】IMGTデータベースから得られたVH3-23*04によってコードされるフレームワーク及びCDRを示す図である(www.IMGT.orgでWorld Wide Webから入手可能である)。図3は、ヌクレオチド配列を、出現順序で、それぞれ、配列番号117、117、117、119、119、119、120、122、124、39及び125として開示する。図3は、コードされたアミノ酸配列を、出現の順序で、それぞれ、配列番号118、118、118、118、118、118、121、123、123、38及び126として開示する。
【図４】VH3-23*04の配列を示す図である。rs56069819のFW1残基変化を含むVH3-23*04の部分(配列番号38)。rs56069819をコードする核酸配列の部分が示される(配列番号39)。VH3-23*04によってコードされるFW1が示される(配列番号40)。
【発明を実施するための形態】
【０１１５】
当業者であれば、アミノ酸バリエーションに翻訳されるSNP又は他の変化が、取り組まれるべきヒト標的の高次構造又は活性において可変性を生じうることを承知している。これによって、遺伝子型判定並びにタンパク質及びヌクレオチドの可変性の知見を用いて、患者の医療及び診断をより有効にテーラーメイドする個人化医療に大きな関心が生じた。本発明は、ヒトの目的とする標的(TOI)のよりまれなバリアント型に具体的に向けたテーラーメイド医薬品及び試験を提供する。
【０１１６】
本発明は、ヒトの遺伝学的バリエーションの分析及び合理的に設計された配列の選択の能力を利用する。これらのアプローチの技術的な適用は、本発明によれば、ヒトにおけるより優れた処置、予防及び診断に寄与し、選択肢を提供して個人化医療及び療法を可能にすることによって患者に利益をもたらす。これは、より優れた処方、薬品のより少ない消耗及び薬効が生じる機会の改善の利点、並びに患者におけるより優れた診断をもたらす。
【０１１７】
ゲノム配列バリエーションのデータ源として、当業者であれば、以下によって提供される利用可能なデータベース及びリソース(そのアップデートも包含する)を知っていると予想される。
1. HapMap(The International HapMap Consortium. 2003;ワールドワイドウェブにおいて、hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/index.html.enで利用可能)。HapMapプロジェクトは、異なる個体の遺伝子配列を比較して、共通の遺伝学的バリアントを含有する染色体領域を同定することを目的とする国際プロジェクトである。HapMapのwwwサイトは、染色体領域及びその中のバリアントを同定するためのツールを提供し、集団レベルの頻度データに掘り下げるためのオプションを有する。
2. 1000ゲノムプロジェクト(The 1000 Genomes Project Consortium 2010;ワールドワイドウェブにおいて、1000genomes.org/で利用可能)。このリソースは、25の別個の集団群のうち1つからの少なくとも2500人の身元不明の個体の完全ゲノム配列を提供する。
3. Japanese SNP Database(H.Hagaら、2002;ワールドワイドウェブにおいて、snp.ims.u- tokyo.ac.jp/index.htmlで利用可能)。研究に基づいて、190,562種のヒト遺伝学的バリアントを同定する。
【０１１８】
本発明は、特定のヒト民族集団で及び多くの個々のヒトにおいて区別される比較的低い頻度又はまれなバリアントであることが見出されたものを含む、天然に存在するヒトゲノム標的配列バリアントの同定及びカタログ作成を含む。
【０１１９】
本発明の態様は、目的とする標的が媒介するか又はそれに関連する疾患若しくは状態に罹っているか、又はそれに罹る可能性がある(すなわち、そのリスクがある)ヒト個体の、よりまれな、ただしそれでもなお有意な群に合わせて医薬及び診断剤をテーラーメイドするための望ましさに取り組む配列の選択の合理的設計に基づく。本発明の態様のこの合理的設計を考え出すにあたり、本発明者は、多数の且つ多様なヒト民族集団にわたる天然に存在する標的バリアント配列の普及の広がり、加えて多くの個体が1つ又は複数のバリアントの遺伝子型及び/又は表現型を示す可能性が高い集団を分析することに取り組む重要性を考慮に入れた。この設計の一部として、本発明者は、当業界において認識されたヒト民族集団の分類を採用することの重要性を理解しており、この点において本発明者は、分析及び設計の基礎を、1000ゲノムプロジェクトが採用する認識されたヒト民族集団に置いたが、これは、1000ゲノムプロジェクトが、科学及び医学界によって広く採用され、且つ採用され続けるリソースであるためである。
【０１２０】
このようにして、本発明のこの態様で、本発明者は以下のバリアント配列の選択基準を設計し、本発明者が体得した、これらは、ヒト集団にけるテーラーメイド要求に応じる有用な医学的薬物及び診断剤を提供する。
【０１２１】
選択基準
以下のもののうち3又は4つである。
・35%又はそれ未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有する天然に存在するヒト標的バリアント配列;
・40%又はそれ未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する天然に存在するヒト標的バリアント配列;
・多くの様々なヒト民族集団で見出される天然に存在するヒト標的バリアント配列(1000ゲノムプロジェクトの標準的なカテゴリー化を使用;以下のTable 4(表5)を参照);及び
・このような多くの様々な民族集団にわたって分布する多くの個体で見出される天然に存在するヒト標的バリアント配列。
【０１２２】
本発明者の選択には、考慮すべきものとして、標的タンパク質中のアミノ酸残基を変更しないサイレントバリエーションとは対照的に対応するTOIの型においてアミノ酸バリエーションを生じるヌクレオチドバリエーション(すなわち、非同義的バリエーション)の選択が含まれた。
【０１２３】
ある実施形態では、累積ヒト対立遺伝子頻度は、30、25、20、15、10若しくは5%又はそれ未満であり、例えば、1〜20%又は1〜15%又は1〜10%の範囲である。
【０１２４】
ある実施形態では、総ヒト遺伝子型頻度は、35、30、25、20、15、10若しくは5%又はそれ未満であり、例えば、1〜25%、1〜20%、1〜15%、1〜約15%、1〜10%、1〜約10%、又は1〜5%、又は1〜約5%の範囲である。
【０１２５】
ある実施形態では、天然に存在するヒト標的バリアント配列は、少なくとも9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19又は20種の異なるヒト民族集団(1000ゲノムプロジェクトの標準的なカテゴリー化を使用)に見出される。
【０１２６】
ある実施形態では、天然に存在するヒト標的バリアント配列は、このような多くの様々な民族集団にわたって分布する、少なくとも20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、130、140又は150人の個体に見出される。
【０１２７】
ある例では、以下の基準が適用される。
・15%又はそれ未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有する天然に存在するヒト標的バリアント配列;
・20%又はそれ未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する天然に存在するヒト標的バリアント配列;
・少なくとも5種の異なるヒト民族集団で見出される天然に存在するヒト標的バリアント配列(1000ゲノムプロジェクトの標準的なカテゴリー化を使用);及び
・このような多くの様々な民族集団にわたって分布する多くの個体で見出される天然に存在するヒト標的バリアント配列。
【０１２８】
ある例では、基準は、本明細書に記載されているような1つ又は複数のヒトゲノム配列データベースを参照して適用される。例えば、基準は、1000ゲノムのデータベースに適用されるような基準である。
【０１２９】
例えば本発明のいずれかの態様、実施例、実施形態又は構成において、1000ゲノムのデータベースは、13をリリースしている。例えば、1000ゲノムのデータベースは、2013年10月1日時点でのその最新バージョンである。
【０１３０】
任意選択で、更なる配列分析及び3Dインシリコモデリング(例えば、図1を参照)はまた、追加の選択基準としても使用できる:選択にとって、そのバリアントアミノ酸残基(ヒトTOIの最も一般的な型に対して)が標的上に表面露出されるバリアントが望ましく、これは、本発明者が、そのようなバリアントを、標的のトポグラフィーの決定に寄与し、潜在的にどのように及びどこで標的へのリガンド結合が起こるかに寄与するものとみなしているためである。
【０１３１】
本発明に使用するためのヒト配列を同定するために以下のバイオインフォマティクスプロトコールが構想される:
(a)目的とする標的配列を含有するゲノム領域(「標的ゲノム領域」)を同定し、1000ゲノムプロジェクト又はInternational HapMapプロジェクト(又は別の選択された最適なヒト遺伝子データベース)によって使用される配列アセンブリ構造に整合するゲノム座標を計算する。
(b)(a)で前もって同定されたゲノム領域にマッピングされるゲノムバリアントを同定する。各上位集団、好ましくはこのようなデータが利用可能な亜集団のバリアントごとに対立遺伝子頻度を引き出す。この工程に、1000ゲノムプロジェクトのVWCツールを使用することができる。
(c)「非同義的」一塩基多型(SNP)又はゲノムの「挿入又は欠失」(インデル)のいずれかと分類されたバリアントのみが含有されるように、標的ゲノム領域からのゲノムバリアントのリストをフィルタリングする。エクソンを有する配列中にのみ存在するものが包含されるように、更にフィルタリングする。「非同義的」は、アミノ酸バリエーションを生じるヌクレオチドバリエーションを指す(すなわち、サイレント突然変異を除く)。
(d)上位集団のそれぞれ(例えば「欧州人血統」、「東アジア人血統」、「西アフリカ人血統」、「南北アメリカ人」、及び「南アジア人血統」)につき同定されたバリアントのそれぞれごとの集団頻度データを相関させて、2つ未満の上位集団で区別されるバリアント上位集団を同定する。更に、全ての同定されたバリアントを亜集団のそれぞれと相関させ(例えば、「欧州人血統」の上位集団は更に、「CEU-北欧人又は西欧人血統を有するユタ在住者」、「TSI、イタリアにおけるトスカナ人」及び「イングランド及びスコットランドからのイギリス人」等の群に分割される場合がある)、上位集団内のバリアントの希少性に関する第2のスコアを作成する。
(e)例えば、本明細書に記載されるような選択基準に従って、本発明で使用するための特定の亜集団への区別を示す1つ又は複数の配列を収集する。
【０１３２】
ヒト集団
任意選択で、民族集団は、1000ゲノムプロジェクトのデータベースで同定されたものから選択される。この点において、1000ゲノムプロジェクトのデータベースの基礎となる民族集団の詳細を示すTable 4(表5)を参照されたい。
【０１３３】
N A Rosenbergら(Science 2002年12月20日:298巻5602号2342〜2343)は、地理的に異なる血統のヒト集団の遺伝学的構造を研究した。合計で52の集団をサンプリングし、これらは以下のような集団である。
アフリカ人血統
[ムブティ族(Mbuti Pygmies)、ビアカ族(Biaka Pygmies)、サン人、及びニジェール-コルドファン語族の話者(バンツー族、ヨルバ族又はマンディンカ族]、
ユーラシア血統
[欧州人血統(オークニー諸島民、アディゲ人(Adygei)、バスク人、フランス人、ロシア人、イタリア人、サルデーニャ人、トスカナ人]、
中東血統(ムザブ人、ベドウィン族、ドルーズ派の人々、パレスチナ人)、
中央/南アジア人血統[バルーチ族、ブラーフーイー族、マクラニ族(Makrani)、シンド族、パターン族、ブルショー人、ハザラ人、ウイグル人、カラシュ人]、
東アジア人血統
[漢族、ダル族(Dal)、ダウール族、ホジェン族、ラフ族、ミャオ族、オロチョン族、シェ族、トゥチャ族、ツー族(Tu)、シーボ族(Xibo)、イ族、モンゴル人、ナシ族、カンボジア人、日本人、ヤクート人]、オセアニア血統(メラネシア人、パプア人);又は
南北アメリカ人血統
[カリチアナ族(Karitiana)、スルイ族、コロンビア人、マヤ族、ピマ族]。
【０１３４】
International HapMapプロジェクト、Nature、2003年12月18日;426(6968):789〜96によれば、HapMapプロジェクトの目標は、アフリカ、アジア及び欧州の各地域からの血統を有する集団からのDNA試料中で、100万以上の配列バリアントの遺伝子型、その頻度及びその間の関連の程度を決定することによって、ヒトゲノムにおけるDNA配列バリエーションの共通パターンを決定することであると開示されている。地理的に異なる血統の関連するヒト集団は、ヨルバ族、日本人、中国人、北欧及び西欧集団を含む。より具体的には以下の通りである。
北欧又は西欧人血統を有するユタ集団(Centre d'Etude du Polymorphisme Humain (CEPH)により1980年に収集された試料);
ナイジェリア国イバダンからのヨルバ族の人の血統を有する集団;
日本人血統を有する集団;及び
中国からの漢民族の血統を有する集団。
【０１３５】
著者らは、以前の出版物を引用して、血統の地理学がヒト集団をサンプリングするための理にかなった基準であることを示唆している。
【０１３６】
本発明で使用されるヒト集団の好適な試料は、以下の通りである。
(a)欧州人血統
(b)北欧人血統;西欧人血統;トスカナ人血統;イギリス人血統、フィンランド人血統又はイベリア人血統。
(c)より具体的には、北欧人及び/若しくは西欧人血統を有するユタ在住者の集団;イタリアにおけるトスカナ人集団;イングランド及び/若しくはスコットランドにおけるイギリス人集団;フィンランドにおけるフィンランド人集団;又はスペインにおけるイベリア人集団。
(a)東アジア人血統
(b)日本人血統;中国人血統又はベトナム人血統。
(c)より具体的には、日本国東京における日本人集団;中国北京における漢民族集団;シーサンパンナにおける中国ダイ族集団;ベトナム国ホーチミン市におけるキン族集団;又は米国コロラド州デンバーにおける中国人集団。
(a)西アフリカ人血統
(b)ヨルバ族血統;ルイヤ族血統;ガンビア人血統;又はマラウィ人血統。
(c)より具体的には、ナイジェリア国イバダンにおけるヨルバ族集団;ケニア国ウェブイェにおけるルイヤ族集団;ガンビア国西地区におけるガンビア人集団;又はマラウィ国ブランタイアにおけるマラウィ人集団。
(a)南北アメリカ人集団
(b)ネイティブアメリカ人血統;アフリカ系カリブ人血統;メキシコ人血統;プエルトリコ人血統;コロンビア人血統;又はペルー人血統。
(c)より具体的には、米国南西部におけるアフリカ人血統の集団;ミシシッピ州ジャクソンにおけるアフリカ系アメリカ人の集団;バルバドスにおけるアフリカ系カリブ人の集団;カリフォルニア州ロサンゼルスにおけるメキシコ人血統の集団;プエルトリコにおけるプエルトリコ人の集団;コロンビア国メデリンにおけるコロンビア人の集団;又はペルー国リマにおけるペルー人の集団。
(a)南アジア人血統
(b)アーホーム族血統;カーヤスト血統;レッディ族血統;マラータ族;又はパンジャブ人血統。
(c)より具体的には、インド国アッサム州におけるアーホーム族集団;インド国カルカッタにおけるカーヤスト集団;インド国ハイデラバードにおけるレッディ族集団;インド国ボンベイにおけるマラータ族集団;又はパキスタン国ラホールにおけるパンジャブ人集団。
【０１３７】
本発明のいずれかの構成では、一実施形態では、各ヒト集団は、上記で「(a)」と表された集団から選択される。
【０１３８】
本発明のいずれかの構成では、別の実施形態では、各ヒト集団は、上記で「(b)」と表された集団から選択される。
【０１３９】
本発明のいずれかの構成では、別の実施形態では、各ヒト集団は、上記で「(c)」と表された集団から選択される。
【０１４０】
一実施形態では、民族集団は、欧州人血統を有する民族集団、東アジア人を有する民族集団、西アフリカ人血統を有する民族集団、南北アメリカ人血統を有する民族集団及び南アジア人血統を有する民族集団からなる群から選択される。
【０１４１】
一実施形態では、民族集団は、北欧人血統を有する民族集団;又は西欧人血統を有する民族集団;又はトスカナ人血統を有する民族集団;又はイギリス人血統を有する民族集団;又はアイスランド人血統を有する民族集団;又はフィンランド人血統を有する民族集団;又はイベリア人血統を有する民族集団;又は日本人血統を有する民族集団;又は中国人血統を有する民族集団;又はベトナム人血統を有する民族集団;又はヨルバ族血統を有する民族集団;又はルイヤ族血統を有する民族集団;又はガンビア人血統を有する民族集団;又はマラウィ人血統を有する民族集団;又はネイティブアメリカ人血統を有する民族集団;又はアフリカ系カリブ人血統を有する民族集団;又はメキシコ人血統を有する民族集団;又はプエルトリコ人血統を有する民族集団;又はコロンビア人血統を有する民族集団;又はペルー人血統を有する民族集団;又はアーホーム族血統を有する民族集団;又はカーヤスト血統を有する民族集団;又はレッディ族血統を有する民族集団;又はマラータ族を有する民族集団;又はパンジャブ人血統を有する民族集団からなる群から選択される。
【０１４２】
抗標的リガンド
本発明は、TOIが媒介又は関連する疾患又は状態に罹ったヒト又は罹る可能性が高いヒトに向けた有用な抗標的リガンドを提供する。例えば、リガンドは、本発明に従って、TOIバリアントに特異的に結合する。リガンドは、標的の活性を阻害するか又はそれと拮抗する可能性があり、例えばリガンドは標的を中和する。当業者であれば、一般的にはリガンド、例えば抗体又は抗体断片の中和について熟知していると予想され、インビトロ又はインビボのアッセイで標的の特異的な結合及び/又は中和に関して好適なリガンドを容易に試験することができる。
【０１４３】
抗体「断片」は、インタクト抗体の一部、好ましくはインタクト抗体の抗原結合及び/又は可変領域を含む。抗体断片の例としては、dAb、Fab、Fab'、F(ab')2及びFv断片; ダイアボディ;直鎖状抗体;抗体断片から形成された単鎖抗体分子及び多重特異性抗体が挙げられる。
【０１４４】
ある実施形態では、本発明のリガンドは、抗体又は抗体断片、例えばヒト可変領域を(及び任意選択でヒト定常領域も)含む抗体又は断片であるか又はそれを含む。抗TOI又はTOI結合若しくは標的化抗体及び断片は、あらゆる公知の方法に従って調製することができ、例えば、TOIで免疫化され、それに続き任意選択でヒト又はヒト化抗体を生成するために定常領域及び/又は可変領域がヒト化された、トランスジェニックマウス[例えば、Kymouse(商標)若しくはVelocimouse(商標)、又はOmnimouse(商標)、Xenomouse(商標)、HuMab Mouse(商標)若しくはMeMo Mouse(商標)]、ラット[例えば、Omnirat(商標)]、ラクダ科の動物、サメ、ウサギ、ニワトリ又は他の非ヒト動物を使用して調製することができる。ある例では、当業者には明らかであると予想されるような、酵母、ファージ又はリボソームディスプレイ等のディスプレイ技術を使用することができる。例えばディスプレイ技術を使用する標準的な親和性の成熟は、トランスジェニック動物、ファージディスプレイライブラリー又は他のライブラリーからの抗体リードを単離した後の更なる工程で行うことができる。好適な技術の代表的な例は、参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第20120093818号(Amgen, Inc社)に記載されており、例えば段落[0309]から[0346]で詳述される方法である。これはPCSK9を基準にしているが、抗体生成方法は、本発明の最も広い範囲の通りに他のTOIにも適用することができる。
【０１４５】
一般的に、VELOCIMMUNE(商標)又は他のマウス若しくはラットを目的とする抗原で負荷することができ、抗体を発現するマウスからリンパ細胞(例えばB細胞)を回収する。リンパ細胞を骨髄腫細胞株と融合させて不死ハイブリドーマ細胞株を調製してもよく、このようなハイブリドーマ細胞株は、目的とする抗原に特異的な抗体を生成するハイブリドーマ細胞株を同定するためにスクリーニングされ選択される。重鎖及び軽鎖の可変領域をコードするDNAを単離して、重鎖及び軽鎖の所望のアイソタイプ定常領域に連結してもよい。このような抗体タンパク質は、CHO細胞等の細胞で生成させることができる。その代わりに、抗原特異的なキメラ抗体又は軽鎖及び重鎖の可変ドメインをコードするDNAは、抗原特異的リンパ球から直接単離することができる。
【０１４６】
最初に、ヒト可変領域とマウス定常領域とを有する高親和性キメラ抗体が単離される。後述するように、抗体は、親和性、選択性、エピトープ等を含む所望の特徴に関して特徴付けられ、選択される。マウス定常領域は、所望のヒト定常領域で置き換えられて、本発明の完全ヒト抗体、例えば野生型又は改変IgG1又はIgG4(例えば、米国特許出願公開第2011/0065902号における配列番号751、752,753、これらの配列は、本発明のリガンドで使用するために参照により本明細書に援用される)が生成する。選択された定常領域は具体的な使用に従って変更が可能であるが、高親和性の抗原結合及び標的特異性の特徴は、可変領域に存在する。
【０１４７】
ある例では、本発明のリガンドは、ストリンジェントな条件下でTOIバリアント配列にハイブリダイズする、例えば、(最も一般的なTOI配列に対して、例えば、1000ゲノムプロジェクトのデータベースを参照して)バリアントである1つ又は複数のヌクレオチドを含むヌクレオチド配列にハイブリダイズする核酸、例えばRNA、例えばsiRNAであるか又はそれを含む。
【０１４８】
標的に結合する能力、特異性及び親和性(Kd、Koff及び/又はKon)は、当業界におけるあらゆる慣例的な方法によって、例えば表面プラズモン共鳴(SPR)によって決定することができる。用語「Kd」は、本明細書で用いられる場合、特定の抗体-抗原相互作用の平衡解離定数を指すことが意図されている。
【０１４９】
一実施形態では、表面プラズモン共鳴(SPR)は、25℃で行われる。別の実施形態では、SPRは、37℃で行われる。
【０１５０】
一実施形態では、SPRは、生理学的pHで、例えば約pH7又はpH7.6で[例えば、pH7.6でHepes緩衝食塩水(HBS-EPとも称される)を使用して]行われる。
【０１５１】
一実施形態では、SPRは、生理学的な塩レベル、例えば、150mMのNaClで行われる。
【０１５２】
一実施形態では、SPRは、0.05容積%以下の界面活性剤レベルで、例えば、0.05%のP20[ポリソルベート20;例えば、Tween-20(商標)]及び3mMのEDTAの存在下で行われる。
【０１５３】
一例では、SPRは、pH7.6の緩衝液、150mMのNaCl、0.05%界面活性剤(例えば、P20)及び3mMのEDTA中で、25℃又は37℃で行われる。緩衝液は、10mMのHepesを含有していてもよい。一例では、SPRは、HBS-EP中で、25℃又は37℃で行われる。HBS-EPは、Teknova Inc社(California;カタログ番号H8022)より入手可能である。
【０１５４】
ある例では、リガンド(例えば、抗体)の親和性は、SPRを使用して、
1.抗マウス(又は他の関連ヒト、ラット若しくは非ヒト脊椎動物の、適合した抗体定常領域種)IgG(例えば、Biacore(商標)BR-1008-38)をバイオセンサーチップ(例えば、GLMチップ)に、例えば第1級アミンカップリングによってカップリングすること;
2.抗マウスIgG(又は他の適合した種の抗体)を試験IgG抗体に暴露して、チップ上の試験抗体を捕獲すること;
3.試験抗原を、1024nM、256nM、64nM、16nM、4nMに加えて0nM(すなわち緩衝液単独)でチップの捕獲表面上に通過させること;及び
4.例えば、上記で論じられたSPR条件下で(例えば、生理学的緩衝液中、25℃で)表面プラズモン共鳴を使用して、試験抗原への試験抗体の結合の親和性を決定すること
によって決定される。SPRは、あらゆる標準的なSPR装置を使用して、例えばBiacore(商標)によって、又はProteOn XPR36(商標)[Bio-Rad(登録商標)]を使用して行うことができる。
【０１５５】
捕獲表面の再生は、pH1.7で10mMのグリシンを用いて行うことができる。これは、捕獲された抗体を除去して、表面を別の相互作用のために使用できるようにする。結合データは、標準的な技術を使用して、例えば、ProteOn XPR36(商標)分析ソフトウェアに備え付けのモデルを使用して、備え付けの1:1モデルに当てはめることができる。
【０１５６】
ある例では、本発明のリガンドは、医療用容器、例えば、バイアル、シリンジ、IV容器又は注射デバイス(例えば、眼球内又は硝子体内注射デバイス)中に含有される。ある例では、リガンドは、インビトロで存在し、例えば滅菌容器中に存在する。ある例では、本発明は、ヒトにおけるTOIが媒介する疾患又は状態の処置又は防止又は診断で使用するための、本発明のリガンド、包装及び説明書を含むキットを提供する。ある例では、説明書は、ヒトにリガンドを投与する前に、本発明のTOIバリアント配列についてヒトを遺伝子型判定するべきであることを示す。ある例では、説明書は、ヒトにリガンドを投与する前に、本発明のTOIバリアントについてヒトを表現型判定するべきであることを示す。ある例では、ヒトは、中国人(例えば、漢民族)の民族性を有し、説明書は、中国語(例えば、北京官話)で記載される。ある例では、説明書は、前記ヒトにアリロクマブ又はエボロクマブを投与する指示を含む。
【０１５７】
本発明は、以下の態様で詳述される概念に関する。
1.ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法で使用するための抗TOIリガンドであって、方法は、ヒトに前記リガンドを投与する工程を含み、リガンドは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するSNP(第1のSNP)を含むヌクレオチド配列によってコードされたTOIバリアントに特異的に結合し;ヒトは、前記SNPを含むTOIをコードするヌクレオチド配列を含む、リガンド。
2.ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法であって、前記ヒトに、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するSNP(第1のSNP)を含むヌクレオチド配列によってコードされたTOIバリアントに特異的に結合する抗TOIリガンドを投与する工程を含み;ヒトは、前記SNPを含むTOIをコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
3.ヒトにおいて目的とする標的(TOI)を標的化してTOIが媒介する疾患又は状態を処置又は防止する方法に使用するための医薬の製造における、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するSNP(第1のSNP)を含むTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むヒトTOIバリアントに特異的に結合する抗TOIリガンドの使用であって、TOIは、ヒト中に異なる多型バリアントとして存在し、ヒトは、前記SNPを含むTOIをコードするヌクレオチド配列を含む、使用。
4.リガンドが、第2のSNPを含むヌクレオチド配列によってコードされた重鎖ガンマ-1、2、3又は4定常領域を含み、ヒトが、前記第2のSNPを含む重鎖ガンマ-1、2、3又は4定常領域をそれぞれ含む、態様1から3のいずれか1つに記載のリガンド、方法又は使用。
5.リガンドが、ヒトV遺伝子セグメント及びヒトJ遺伝子セグメント(及び任意選択で、可変ドメインがVHドメインである場合、ヒトD遺伝子セグメント)の組換え由来のヒト抗体可変ドメインを含み;ヒトのゲノムが、前記ヒトV遺伝子セグメントを含み、及び/又はヒトが、前記ヒトV遺伝子セグメント及びヒトJ遺伝子セグメント(及び任意選択でヒトD遺伝子セグメント)の組換え由来の抗体可変ドメインを含む抗体を発現する、態様1から4のいずれか1つに記載のリガンド、方法又は使用。
6.各SNPが、非同義的アミノ酸バリエーションをコードし、及び/又は各SNPが、標的上に表面露出されるアミノ酸をコードする、態様1から5のいずれか1つに記載のリガンド、方法又は使用。
7.リガンドが、抗体又は抗体断片であるか;又はリガンドが、トラップである、態様1から6のいずれか1つに記載のリガンド、方法又は使用。
8.方法が、ヒトがTOIバリアントについて陽性であることを決定する工程を含み、任意選択で、決定する工程が、ヒトが前記TOIバリアントをコードするヌクレオチドバリアントについて陽性であることを決定する工程を含む、態様1から7のいずれか1つに記載のリガンド、方法又は使用。
9.リガンドが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するSNPを含むヌクレオチド配列によってそれぞれコードされる2つ以上の異なるTOIバリアントに特異的に結合することが可能である、態様1から8のいずれか1つに記載のリガンド、方法又は使用。
10.前記TOIバリアントが、少なくとも2種の異なるヒト民族集団中に存在すると決定されたか、又は決定される、態様1から9のいずれか1つに記載のリガンド、方法又は使用。
11.前記累積ヒト対立遺伝子頻度が、少なくとも15種の異なるヒト民族集団からサンプリングされ、少なくとも1000種の配列を含む天然に存在する配列のデータベース中での頻度である、態様1から10のいずれか1つに記載のリガンド、方法又は使用。
12.態様1から11のいずれか1つに記載のTOIが媒介する状態又は疾患を処置又は防止するためのキットであって、前記リガンドを含み、ここで第1のSNPが、少なくとも2種の異なる民族集団で見出され;任意選択で、ヒトにおける前記疾患又は状態の処置及び/又は防止に使用するためのラベル又は説明書と組み合わされ;任意選択で、ラベル又は説明書は、監督官庁によって発行された販売許可番号を含み;任意選択で、リガンドを含む注射用ペン又はIV容器を含む、キット。
13.リガンドが、CH1ヌクレオチド配列によってコードされたヒトガンマ重鎖CH1ドメインを含み;ヒトのゲノムが、前記CH1ヌクレオチド配列に同一なガンマ重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒトガンマCH1ドメインを含む抗体を発現する、態様1から12のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用又はキット。
14.リガンドが、CH2ヌクレオチド配列によってコードされたヒトガンマ重鎖CH2ドメインを含み;ヒトのゲノムが、前記CH2ヌクレオチド配列に同一なガンマ重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒトガンマCH2ドメインを含む抗体を発現する、態様1から13のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用又はキット。
15.リガンドが、CH3ヌクレオチド配列によってコードされたヒトガンマ重鎖CH3ドメインを含み;ヒトのゲノムが、前記CH3ヌクレオチド配列に同一なガンマ重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒトガンマCH3ドメインを含む抗体を発現する、態様1から14のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用又はキット。
16.リガンドが、CH4ヌクレオチド配列によってコードされたヒトガンマ重鎖CH4ドメインを含み;ヒトのゲノムが、前記CH4ヌクレオチド配列に同一なガンマ重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒトガンマCH4ドメインを含む抗体を発現する、態様1から15のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用又はキット。
17.リガンドが、Fcヌクレオチド配列によってコードされたヒトガンマ重鎖Fc領域を含み;ヒトのゲノムが、前記Fcヌクレオチド配列に同一なガンマ重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒトガンマFc領域を含む抗体を発現する、態様1から16のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用又はキット。
18.ヒトが、前記重鎖定常領域ヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、態様13から17のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用又はキット。
19.ヒトが、前記ガンマ重鎖定常ドメイン、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcについて陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、態様13から18のいずれか一項に記載のリガンド、方法、使用又はキット。
20.リガンドが、ヒトIGHG1*01ガンマ-1重鎖定常領域;又はヒトIGHG2*01ガンマ-1重鎖定常領域を含む、態様1から19のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用又はキット。
21.リガンドが、
a)配列番号4に示される204位のAsp若しくは配列番号4に示される206位のLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、IGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、若しくはヒトは、配列番号4に示される204位のAsp若しくは配列番号4に示される206位のLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含む抗体を発現するか;又は
b)配列番号6に示される72位のPro、配列番号6に示される75位のAsn、配列番号6に示される76位のPhe、配列番号6に示される161位のVal及び配列番号6に示される257位のAlaからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、IGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、若しくはヒトは、前記選択された配列番号6に示される72位のPro、配列番号6に示される75位のAsn、配列番号6に示される76位のPhe、配列番号6に示される161位のVal若しくは配列番号6に示される257位のAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含む抗体を発現するか;又は
c)IGHG3*01定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトガンマ-3重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、IGHG3*01定常領域遺伝子セグメントを含むか、若しくはヒトは、IGHG3*01定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトガンマ-3重鎖定常領域を含む抗体を発現するか;又は
(i)配列番号73に示される189位のLeu若しくは配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、若しくはヒトは、配列番号73に示される189位のLeu若しくは配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;ここで第2のドメインは、リガンドの前記ガンマ-4重鎖定常領域に含まれる、態様1から20のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用又はキット。
22.TOIが、以下のヒトTOI:
a)PCSK9[任意選択で、疾患又は状態が、脂質障害、高リポタンパク血症、高脂血症、異常脂質血症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロールの上昇に関連する跛行)、II型糖尿病、高血圧及び心臓血管疾患又は状態から選択される]、
b)IL6R[任意選択で、疾患又は状態が、炎症性疾患又は状態、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿主病(GvHD)、喘息、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、敗血性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、気道炎症、キャッスルマン病、歯周炎、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス及び冠動脈性心疾患から選択される]、
c)IL4Ra[任意選択で、疾患又は状態が、喘息、COPD、炎症性腸疾患、線維性状態、アレルギー、移植片拒絶、遅延型過敏症、接触過敏症、鼻ポリープ及び副鼻腔炎から選択される]、
d)VEGF-A[任意選択で、疾患又は状態が、眼の状態、がん;血管新生、新生血管形成、糖尿病性網膜症(DR)、加齢性黄斑変性症(AMD)、ポリープ状脈絡膜血管症(PCV)、網膜血管腫状増殖(RAP)、糖尿病黄斑浮腫(DME)、網膜静脈閉塞症(RVO)及び未熟児網膜症(ROP)から選択される]、
e)PDGF-B[任意選択で、疾患又は状態が、眼の状態、がん;血管新生、新生血管形成、糖尿病性網膜症(DR)、加齢性黄斑変性症(AMD)、ポリープ状脈絡膜血管症(PCV)、網膜血管腫状増殖(RAP)、糖尿病黄斑浮腫(DME)、網膜静脈閉塞症(RVO)及び未熟児網膜症(ROP)から選択される]、
f)PDGFR-B[任意選択で、疾患又は状態が、眼の状態、がん;血管新生、新生血管形成、糖尿病性網膜症(DR)、加齢性黄斑変性症(AMD)、ポリープ状脈絡膜血管症(PCV)、網膜血管腫状増殖(RAP)、糖尿病黄斑浮腫(DME)、網膜静脈閉塞症(RVO)及び未熟児網膜症(ROP)から選択される]、
g)アンジオポエチン(例えば、Ang-2)[任意選択で、疾患又は状態が、眼の状態、がん;血管新生、新生血管形成、糖尿病性網膜症(DR)、加齢性黄斑変性症(AMD)、ポリープ状脈絡膜血管症(PCV)、網膜血管腫状増殖(RAP)、糖尿病黄斑浮腫(DME)、網膜静脈閉塞症(RVO)及び未熟児網膜症(ROP)から選択される]、
h)Nav1.7[任意選択で、疾患又は状態が、疼痛、掻痒又はチャネル障害、例えば、慢性疼痛、神経因性疼痛、有痛性糖尿病性神経障害(PDN)、ヘルペス後神経障害(PHN)、三叉神経痛(TN)、脊髄損傷疼痛、多発性硬化症疼痛、幻肢痛、脳卒中後疼痛、慢性背痛、変形性関節症疼痛、がん関連疼痛、HIV関連疼痛、炎症性疼痛、原発性肢端紅痛症(PE)、発作性激痛症(PEPD)又はチャネル障害関連の無痛症(CIP)から選択される]、
i)PD-L1[任意選択で、疾患又は状態が、がん、自己免疫疾患若しくは状態、ウイルス感染及び炎症性疾患若しくは状態、例えば、固形腫瘍、乳がん、肺がん(例えば、非小細胞肺がん)、結腸がん、卵巣がん、黒色腫(例えば、ステージIV黒色腫)、膀胱がん、肝臓がん(例えば、肝細胞癌)、腎臓がん、唾液腺がん、胃がん(stomach cancer)、胃がん(gastric cancer)、神経膠腫、膵臓がん、甲状腺がん、胸腺上皮がん、頭部がん及び/若しくは頸部がん、多発性骨髄腫、T細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、腎細胞癌、子宮頸がん、結腸直腸がん、血液系新生物、転移性結腸直腸がん、子宮若しくは子宮頸がん、白血病(例えば、急性骨髄性白血病)、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、濾胞中心リンパ腫、前立腺がん、メルケル細胞癌、HIV感染、C型肝炎感染又はエボラ感染から選択される]。
j)PD-1[任意選択で、疾患又は状態が、例えば、腎細胞癌;血液系新生物;ステージIVの黒色腫;非小細胞肺がん;転移性胃がん;乳がん;固形腫瘍;膀胱がん;頭頸部がん、結腸直腸がん、膠芽腫、胃がん、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、子宮頸がん、骨髄性白血病(例えば、急性骨髄性白血病及び慢性骨髄性白血病)から選択されるがんである]、
k)BMP6[任意選択で、疾患又は状態が、貧血;鉄欠乏症;慢性炎症性貧血(ACI);慢性疾患性貧血(ACD);がん、腎臓の状態又はGvHDに関連する貧血;ヘモクロマトーシス及び鉄剤不応性鉄欠乏性貧血(IRIDA)から選択される]、
l)ヘモジュベリン[任意選択で、疾患又は状態が、貧血;鉄欠乏症;慢性炎症性貧血(ACI);慢性疾患性貧血(ACD);がん、腎臓の状態又はGvHDに関連する貧血;ヘモクロマトーシス及び鉄剤不応性鉄欠乏性貧血(IRIDA)から選択される]、
m)ヘプシジン[任意選択で、疾患又は状態が、貧血;鉄欠乏症;慢性炎症性貧血(ACI);慢性疾患性貧血(ACD);がん、腎臓の状態又はGvHDに関連する貧血;ヘモクロマトーシス及び鉄剤不応性鉄欠乏性貧血(IRIDA)から選択される]、
n)フェロポーチン[任意選択で、疾患又は状態が、貧血;鉄欠乏症;慢性炎症性貧血(ACI);慢性疾患性貧血(ACD);がん、腎臓の状態又はGvHDに関連する貧血;ヘモクロマトーシス及び鉄剤不応性鉄欠乏性貧血(IRIDA)から選択される]、
o)TMPRSS6[任意選択で、疾患又は状態が、貧血;鉄欠乏症;慢性炎症性貧血(ACI);慢性疾患性貧血(ACD);がん、腎臓の状態又はGvHDに関連する貧血;ヘモクロマトーシス及び鉄剤不応性鉄欠乏性貧血(IRIDA)から選択される]、
p)トランスフェリン[任意選択で、疾患又は状態が、貧血;鉄欠乏症;慢性炎症性貧血(ACI);慢性疾患性貧血(ACD);がん、腎臓の状態又はGvHDに関連する貧血;ヘモクロマトーシス及び鉄剤不応性鉄欠乏性貧血(IRIDA)から選択される];及び
q)ヒトヘモクロマトーシスタンパク質(HFE)[任意選択で、疾患又は状態が、貧血;鉄欠乏症;慢性炎症性貧血(ACI);慢性疾患性貧血(ACD);がん、腎臓の状態又はGvHDに関連する貧血;ヘモクロマトーシス及び鉄剤不応性鉄欠乏性貧血(IRIDA)から選択される]
からなる群から選択される、態様1から21のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用又はキット。
【０１５８】
本発明は、以下の条項で詳述される概念に関する。
【０１５９】
条項1:ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法であって、
a.ヒトに抗TOIリガンドを投与して、ヒトにおけるTOIバリアントを標的化し、前記疾患又は状態を処置又は(例えば、少なくとも40、50、60、70、80、90若しくは95%)防止する工程を含み、前記ヒトにおけるTOIは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされ、及び/又は前記ヒトにおけるTOIは、50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされ、
工程(a)の前に、前記ヒトは、前記ヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、若しくは遺伝子型判定されるか、又は前記TOIバリアントについて陽性であると表現型判定されるか、又は、工程(a)の前にヒトを、前記ヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定する工程、又はヒトを、前記TOIバリアントについて陽性であると表現型判定する工程を含む、方法。
【０１６０】
本明細書に記載のいずれかの態様、構成、実施例、実施形態、条項又は概念において、頻度は、バイオインフォマティクスを使用して決定されてもよい。
【０１６１】
本明細書に記載のいずれかの態様、構成、実施例、実施形態、条項又は概念において、頻度は、少なくとも1000又は2000種のヒト配列を含むデータベースを参照することによって決定されてもよい。
【０１６２】
本明細書に記載のいずれかの態様、構成、実施例、実施形態、条項又は概念において、「ヘテロ接合性ヒト遺伝子型頻度」は、試料若しくはデータベース中の、又はまれなバリアント対立遺伝子の1つの出現及び別の対立遺伝子の1つの出現(ヘテロ接合性の状態)、例えば1000ゲノムのデータベースにおける遺伝子型を有するヒトにおける全ての遺伝子型の累積頻度を意味する。
【０１６３】
本明細書に記載のいずれかの態様、構成、実施例、実施形態、条項又は概念において、「ホモ接合性ヒト遺伝子型頻度」は、バリアント対立遺伝子の2つの出現(ホモ接合性の状態)、例えば1000ゲノムプロジェクトのデータベースにおける遺伝子型の累積頻度を意味する。
【０１６４】
本明細書に記載のいずれかの態様、構成、実施例、実施形態、条項又は概念において、「総ヒト遺伝子型頻度」は、ヘテロ接合性のヒト遺伝子型頻度とホモ接合性のヒト遺伝子型頻度との合計を意味する。
【０１６５】
本明細書に記載のいずれかの態様、構成、実施例、実施形態、条項又は概念において、「累積ヒト対立遺伝子頻度」は、試料若しくはデータベース中の、又はヒトにおける、例えば1000ゲノムプロジェクトのデータベースにおけるバリアント対立遺伝子(例えば、SNP)の全ての出現の合計を指す。
【０１６６】
条項2:工程(a)の前に、リガンドが、例えば以下で開示される親和性(Kd)で、前記TOIバリアントに結合可能であると決定されたか、又は決定される、条項1に記載の方法。
【０１６７】
ある例では、リガンドは、TOIの中和剤である(又は中和剤であると決定される)。ある例では、決定は、ヒトで(例えば、臨床試験で)行われる。ある例では、決定は、非ヒトで、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、イヌ、ヒツジ又は非ヒト霊長類(例えば、カニクイザル、アカゲザル又はヒヒ)で行われる。
【０１６８】
条項3:ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法であって、
a.ヒトに抗TOIリガンドを投与して、ヒトにおけるTOIバリアントを標的化し、前記疾患又は状態を処置又は(例えば、少なくとも40、50、60、70、80、90若しくは95%)防止する工程を含み、前記ヒトにおけるTOIは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされ、及び/又は前記ヒトにおけるTOIは、50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされ、
b.工程(a)の前に、リガンドが、例えば以下で開示される親和性(Kd)で、前記TOIバリアントに結合可能であると決定されたか、又は決定される、方法。
【０１６９】
ある例では、リガンドは、TOIの中和剤である(又は中和剤であると決定される)。ある例では、決定は、ヒトで(例えば、臨床試験で)行われる。ある例では、決定は、非ヒトで、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、イヌ、ヒツジ又は非ヒト霊長類(例えば、カニクイザル、アカゲザル又はヒヒ)で行われる。
【０１７０】
条項4:前記ヒトのゲノムが、前記TOIバリアントをコードするヌクレオチド配列を含み;工程(a)の前に、前記ヌクレオチド配列が、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/若しくは50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有すると決定されたか、又は決定される、条項3に記載の方法。
【０１７１】
TOIバリアントは、最も頻度の高いものではない。
【０１７２】
条項5:工程(a)の前に、前記ヒトが、前記バリアントヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、若しくは遺伝子型判定されるか、又は、工程(a)の前に、ヒトを、前記バリアントヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定する工程を含む、条項3又は4に記載の方法。
【０１７３】
条項6:ヒトが、工程(a)の前に、前記TOIバリアントについて陽性であると表現型判定されたか、若しくは表現型判定されるか、又は、工程(a)の前に、ヒトを、前記バリアントヌクレオチド配列について陽性であると表現型判定する工程を含む、前記条項のいずれかに記載の方法。
【０１７４】
条項7:前記頻度が、10又は15%未満(例えば、1から10%)である、前記条項のいずれかに記載の方法。
【０１７５】
ある実施形態では、累積ヒト対立遺伝子頻度は、30、25、20、15、10若しくは5%又はそれ未満であり、例えば、1〜20%又は1〜15%又は1〜10%の範囲である。
【０１７６】
ある実施形態では、総ヒト遺伝子型頻度は、35、30、25、20、15、10若しくは5%又はそれ未満であり、例えば、1〜25%、1〜20%、1〜15%、1〜約15%、1〜10%、1〜約10%、又は1〜5%、又は1〜約5%の範囲である。
【０１７７】
条項8:リガンドが、50%未満(例えば、1〜10%)の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満(例えば、1〜20%)の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってそれぞれコードされる2つ以上の異なるTOIバリアントに結合することが可能である、前記条項のいずれかに記載の方法。
【０１７８】
ある実施形態では、各TOIバリアントの累積ヒト対立遺伝子頻度は、30、25、20、15、10若しくは5%又はそれ未満であり、例えば、1〜20%又は1〜15%又は1〜10%の範囲である。
【０１７９】
ある実施形態では、各TOIバリアントの総ヒト遺伝子型頻度は、35、30、25、20、15、10若しくは5%又はそれ未満であり、例えば、1〜25%、1〜20%、1〜15%、1〜約15%、1〜10%、1〜約10%、又は1〜5%、又は1〜約5%の範囲である。
【０１８０】
条項9:ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法であって、
a.ヒトに抗TOIリガンドを投与して、ヒトにおけるTOIバリアントを標的化し、前記疾患若しくは状態を処置若しくは(例えば、少なくとも40、50、60、70、80、90若しくは95%)防止する工程を含み、前記ヒトにおけるTOIは、50%より高い累積ヒト対立遺伝子頻度(例えば、最も高い頻度)及び/若しくは50%より高い総ヒト遺伝子型頻度(例えば、最も高い頻度)を有するヌクレオチド配列によってコードされたバリアントであり、
b.工程(a)の前に、前記ヒトは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/若しくは50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するバリアントヌクレオチド配列について陰性であると遺伝子型判定されたか、若しくは遺伝子型判定されるか;若しくは50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/若しくは50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされたTOIバリアントについて陰性であると表現型判定されるか;
又は
工程(a)の前に、このヒトを、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/若しくは50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するバリアントヌクレオチド配列について陰性であると遺伝子型判定する工程;若しくはこのヒトを、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/若しくは50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされたTOIバリアントについて陰性であると表現型判定する工程を含む、方法。
【０１８１】
ある実施形態では、(a)において、累積ヒト対立遺伝子頻度は、55、60、65、70、75、80、85若しくは90又はそれより高く、ただし95、96、97、98、99又は100%未満である(例えば、51〜80%の範囲である)。
【０１８２】
ある実施形態では、(a)において、総ヒト遺伝子型頻度は、55、60、65、70、75、80、85若しくは90又はそれより高く、ただし95、96、97、98、99又は100%未満である(例えば、51〜80%の範囲である)。
【０１８３】
ある実施形態では、(b)において、累積ヒト対立遺伝子頻度は、30、25、20、15、10若しくは5%又はそれ未満であり、例えば、1〜20%又は1〜15%又は1〜10%の範囲である。
【０１８４】
ある実施形態では、(b)において、総ヒト遺伝子型頻度は、35、30、25、20、15、10若しくは5%又はそれ未満であり、例えば、1〜25%、1〜20%、1〜15%、1〜約15%、1〜10%、1〜約10%、又は1〜5%、又は1〜約5%の範囲である。
【０１８５】
条項10:工程(a)の前に、ヒトが、最も頻度の高いTOIバリアントについて陽性であると表現型判定されたか、若しくは表現型判定されるか、又はそのヌクレオチド配列について遺伝子型判定される、条項9に記載の方法。
【０１８６】
ある実施形態では、工程(a)の前に、ヒトは、55、60、65、70、75、80、85若しくは90又はそれより高く、ただし95、96、97、98、99又は100%未満の(例えば、51〜80%の範囲の)累積ヒト対立遺伝子頻度を有するTOIバリアントヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、若しくは遺伝子型判定されるか、又はそのTOIバリアントについて表現型判定される。
【０１８７】
ある実施形態では、工程(a)の前に、ヒトは、55、60、65、70、75、80、85若しくは90又はそれより高く、ただし95、96、97、98、99又は100%未満の(例えば、51〜80%の範囲の)総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIバリアントヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、若しくは遺伝子型判定されるか、又はそのTOIバリアントについて表現型判定される。
【０１８８】
条項11:工程(a)の前に、リガンドが、最も頻度の高いTOIバリアントに結合可能であると決定されたか、又は決定される、条項9又は10に記載の方法。
【０１８９】
条項12:工程(a)の前に、リガンドが、工程(b)に挙げられる前記TOIバリアントを実質的に中和又は阻害することができないと決定されたか、又は決定される、条項9、10又は11に記載の方法。
【０１９０】
「実質的に中和又は阻害することができない」は、最も頻度の高いTOIバリアントの阻害又は中和の50、25、10、5又は0.5%未満の中和又は阻害を意味する。
【０１９１】
条項13:リガンドが、最も頻度の高いTOIバリアントに結合可能である、条項9から12のいずれか1つに記載の方法。
【０１９２】
条項14:リガンドが、50%より高い累積ヒト対立遺伝子頻度を有するヌクレオチド配列によってそれぞれコードされる2つ以上の異なるTOIバリアントに結合することが可能である、条項9から13のいずれか1つに記載の方法。
【０１９３】
ある実施形態では、各TOIバリアントは、55、60、65、70、75、80、85若しくは90又はそれより高く、ただし95、96、97、98、99又は100%未満の(例えば、51〜80%の範囲の)累積ヒト対立遺伝子頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされる。
【０１９４】
ある実施形態では、各TOIバリアントは、55、60、65、70、75、80、85若しくは90又はそれより高く、ただし95、96、97、98、99又は100%未満の(例えば、51〜80%の範囲の)総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされる。
【０１９５】
条項15:工程(a)に挙げられる前記バリアントヌクレオチド配列が、少なくとも2種の異なるヒト民族集団、例えば、Table 4(表5)に記載の少なくとも2、3、4、5、6、7、8又は9種の異なるヒト民族集団中に存在すると決定されたか、又は決定される、前記条項のいずれかに記載の方法。
【０１９６】
条項16:前記ヒトの頻度が、少なくとも15、20又は25種の異なるヒト民族集団からサンプリングされ、少なくとも1000種の配列を含む天然に存在する配列のデータベース中での頻度である、前記条項のいずれかに記載の方法。ある実施形態では、データベースは、本明細書に記載されるような1000ゲノムプロジェクトのデータベースである。
【０１９７】
条項17:ヒトにおけるTOIが媒介する疾患又は状態を処置及び/又は防止する方法で使用するための抗ヒトTOIリガンドであって、TOIは、ヒト中に異なる多型バリアントとして存在し、前記ヒトのゲノムは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列を含み、この方法は、ヒトにリガンドを投与する工程を含む、リガンド。
【０１９８】
代替例では、条項17は、条項1から16のいずれか1つに記載の方法で使用するための抗ヒトTOIリガンドであって、この方法は、ヒトにリガンドを投与する工程を含む、リガンドを提供する。
【０１９９】
ある実施形態では、累積ヒト対立遺伝子頻度は、30、25、20、15、10若しくは5%又はそれ未満であり、例えば、1〜20%又は1〜15%又は1〜10%の範囲である。
【０２００】
ある実施形態では、総ヒト遺伝子型頻度は、35、30、25、20、15、10若しくは5%又はそれ未満であり、例えば、1〜25%、1〜20%、1〜15%、1〜約15%、1〜10%、1〜約10%、又は1〜5%、又は1〜約5%の範囲である。
【０２０１】
条項18:リガンドが、前記ヌクレオチド配列によってコードされたヒトTOIに結合可能であると決定されたか、又は決定される、条項17に記載のリガンド。
【０２０２】
代替例では、条項18は、リガンドを使用してヒトにおける前記TOIを標的化し、TOIが媒介する疾患又は状態を処置及び/又は防止する工程を含む方法で使用するための、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むヒトTOIに結合するリガンドであって、この方法は、ヒトにリガンドを投与する工程を含む、リガンドを提供する。
【０２０３】
条項19:条項1から16のいずれか1つに記載の方法で使用するための、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むヒトTOIに結合するリガンドであって、この方法は、ヒトにリガンドを投与する工程を含む、リガンド。
【０２０４】
条項20:ヒトが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有する前記TOIヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、条項17から19のいずれか1つに記載のリガンド。
【０２０５】
ヒトが、50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する前記TOIヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、条項17から19のいずれか1つに記載のリガンド。
【０２０６】
条項21:ヒトが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされたTOIについて陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、条項17から20のいずれか1つに記載のリガンド。
【０２０７】
条項22:ヒトが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列についてヘテロ接合性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定され;任意選択で、ヒトが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有するTOIヌクレオチド配列、並びに50%より高い累積ヒト対立遺伝子頻度を有する(例えば、最も高い累積ヒト対立遺伝子頻度を有する)及び/又は50%より高い総ヒト遺伝子型頻度を有する(例えば、最も高い総ヒト遺伝子型頻度を有する)TOIヌクレオチド配列を含むと遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、条項17から21のいずれか1つに記載のリガンド。
【０２０８】
条項23:ヒトのゲノムが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列についてホモ接合性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、条項17から22のいずれか1つに記載のリガンド。
【０２０９】
条項24:リガンドが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含み;任意選択でこのような結合が可能であると決定されたか、又は決定される、ヒトTOIに結合する抗体結合部位を含む、条項17から23のいずれか1つに記載のリガンド。
【０２１０】
条項25:リガンドが、抗体又は抗体断片である、条項24に記載のリガンド。
【０２１１】
条項26:リガンドが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/若しくは50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列若しくはそのRNA転写物に特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含み;並びに/又はリガンドが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドを含むヌクレオチド配列を含むか若しくはそのアンチセンス配列である、条項17から23のいずれか1つに記載のリガンド。
【０２１２】
ある実施形態では、リガンドは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50又は100個の連続したヌクレオチドを含むヌクレオチド配列を含むか又はそのアンチセンス配列である。
【０２１３】
条項27:前記ヒトのゲノムは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有するヌクレオチド配列を含み、配列は、少なくとも2種の異なる民族集団で見出される{例えば、少なくとも9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19又は20種の異なるヒト民族集団[例えばTable 4(表5)中の集団の通り]で見出される}、条項17から26のいずれか1つに記載のリガンド。ある例では、数は、1000ゲノムプロジェクトのデータベースに準拠する。
【０２１４】
前記ヒトのゲノムは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有するヌクレオチド配列を含み、配列は、少なくとも2種の前記異なる民族集団にわたって分布する少なくとも20人の個体で見出される(例えば、このような多くの様々な民族集団にわたって分布する少なくとも20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、130、140又は150人の個体で見出される)、条項17から26のいずれか1つに記載のリガンド。ある例では、数は、1000ゲノムプロジェクトのデータベースに準拠する。
【０２１５】
条項28:いずれかの前記条項に挙げられるTOIが媒介する状態又は疾患を処置又は防止するための医薬組成物又はキットであって、条項17から27のいずれか1つに記載のリガンドを含み;任意選択で、ヒトにおける疾患又は状態の処置及び/又は防止に使用するためのラベル又は説明書と組み合わされ;任意選択で、ラベル又は説明書は、販売許可番号(例えば、FDA又はEMAの許可番号)を含み;任意選択で、キットは、リガンドを含む注射用ペン又はIV容器を含む、組成物又はキット。
【０２１６】
ある例では、ラベル又は説明書は、条項17に挙げられるヌクレオチド配列によってコードされたTOIバリアントを含むヒトのための使用を取り扱うか又は説明する。
【０２１７】
条項29:抗ヒトTOI抗体結合部位を生成する方法であって、複数の抗TOI抗体結合部位を得る工程と、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むTOIへの、又は最も高い累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は最も高い総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIをコードするヌクレオチド配列によってコードされた対応する配列からのアミノ酸バリエーションを含むそのペプチドへの結合に関して抗体結合部位をスクリーニングする工程と、スクリーニングする工程で結合する抗体結合部位を単離する工程とを含む、方法。
【０２１８】
本明細書に記載のいずれかの態様の実施形態では、抗体、断片又は結合部位は、組換え体である。
【０２１９】
代替例では、条項29は、抗ヒトTOI抗体を生成する方法であって、非ヒト脊椎動物(例えば、マウス又はラット)を、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むTOI、又は最も高い累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は最も高い総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIをコードするヌクレオチド配列によってコードされた対応する配列からのアミノ酸バリエーションを含むそのペプチドで免疫化する工程と、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むTOIに結合する抗体を単離する工程と、任意選択で、単離された抗体のTOI結合断片又は誘導体を生成する工程とを含む、方法。
【０２２０】
例えばいずれかの態様、構成、実施例又は実施形態では、リガンド、抗体又はタンパク質に関する用語「単離された」は、対象のリガンド、抗体、タンパク質等が、(1)通常見出されると予想される少なくとも数種の他のタンパク質を含まないこと、(2)同じ源、例えば同じ種からの他のタンパク質を本質的に含まないこと、(3)異なる種からの細胞によって発現されること、(4)自然界で共に存在するポリヌクレオチド、脂質、炭水化物、又は他の材料の少なくとも約50パーセントから分離されていること、(5)自然界において結合しないポリペプチドと(共有結合又は非共有結合の相互作用によって)作動可能に結合されること、又は(6)自然に発生しないことを意味する。典型的には、「単離された」リガンド、抗体、タンパク質等は、所与の試料の少なくとも約5%、少なくとも約10%、少なくとも約25%、又は少なくとも約50%を構成する。合成起源のゲノムDNA、cDNA、mRNA若しくは他のRNA、又はそのあらゆる組合せは、このような単離されたリガンド、抗体タンパク質等をコードすることができる。好ましくは、単離されたリガンド、抗体タンパク質等は、その治療、診断、予防、調査又は他の使用を妨げると予想されるその自然環境で見出されるタンパク質若しくはポリペプチド又は他の汚染物質を実質的に含まない。
【０２２１】
例えば、「単離された」抗体は、その産生環境(例えば、自然に、又は組換えによる)の成分から同定された、分離された、及び/又は回収された抗体である。好ましくは、単離されたポリペプチドは、例えばFDA承認見込み又は承認済みの基準まで抗体が単離されるように、その生成環境からの全ての他の成分との結合を含まない。その生成環境の汚染成分、例えば細胞を組換えトランスフェクトした結果生じるのは、典型的には抗体に関する調査、診断又は治療用途を妨げると予想される材料であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様の溶質を挙げることができる。好ましい実施形態では、ポリペプチドは、(1)例えばローリー法によって決定した場合、抗体が95質量%超に、いくつかの実施形態では99質量%超に;(2)スピニングカップシークエネーターの使用によってN末端又は内部アミノ酸配列の少なくとも15残基を得るのに十分な程度に、又は(3)クーマシーブルー若しくは好ましくは銀染色を使用した非還元若しくは還元条件下でのSDS-PAGEによって均一な状態になるまで精製されると予想される。単離された抗体には、組換え細胞内におけるインサイチュの抗体も包含されるが、これは、抗体の自然環境の少なくとも1つの成分が存在しないと予想されるためである。しかしながら、通常は、単離されたポリペプチド又は抗体は、少なくとも1つの精製工程によって調製されると予想される。
【０２２２】
イムノコンジュゲート
本発明は、治療部分(「イムノコンジュゲート」)、例えば細胞毒、化学療法薬、免疫抑制剤又は放射線同位体にコンジュゲートしたリガンド(例えば、抗体)を包含する。細胞毒性剤は、細胞に有害なあらゆる薬剤を含む。イムノコンジュゲートを形成するのに好適な細胞毒性剤及び化学療法剤の例は当業界において公知である。例えば、WO05/103081を参照のこと。
【０２２３】
二重特異性物質
本発明の抗体は、単一特異性、二重特異性、又は多重特異性でありうる。多重特異性mAbは、1つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であってもよいし、又は1種より多くの標的ポリペプチドに特異的な抗原-結合ドメインを含有していてもよい。例えば、Tuttら(1991) J.Immunol.147:60〜69を参照されたい。ヒト抗TOI(例えば、抗PCSK9)mAbは、別の機能的分子、例えば別のペプチド又はタンパク質に連結されていてもよいし、又はそれらと共に発現されてもよい。例えば、抗体又はその断片を、(例えば、化学的カップリング、遺伝学的な融合、非共有結合による結合又は別の方法によって)1つ又は複数の他の分子実体、例えば別の抗体又は抗体断片に機能的に連結して、第2の結合特異性を有する二重特異性又は多重特異性抗体を生成してもよい。
【０２２４】
本発明の状況で使用できる例示的な二重特異性の抗体の様式は、第1の免疫グロブリン(Ig)CH3ドメイン及び第2のIg CH3ドメインの使用を含み、第1及び第2のIg CH3ドメインは少なくとも1つのアミノ酸で互いに異なっており、少なくとも1つのアミノ酸の差が、アミノ酸の差がない二重特異性抗体と比較してプロテインAへの二重特異性抗体の結合を低減する。一実施形態では、第1のIg CH3ドメインはプロテインAに結合し、第2のIg CH3ドメインは、H95R改変(IMGTのエクソンナンバリングによる;EUナンバリングによればH435R)等のプロテインAの結合を低減又は破壊する突然変異を含有する。第2のCH3は、Y96F改変(IMGTによる;EUによればY436F)を更に含んでいてもよい。第2のCH3内に見出される可能性がある更なる改変としては、IgG1抗体のケースではD16E、L18M、N44S、K52N、V57M、及びV821(IMGTによる;EUによればD356E、L358M、N384S、K392N、V397M、及びV422I);IgG2抗体のケースではN44S、K52N、及びV82I(IMGT;EUによればN384S、K392N、及びV422I);並びにIgG4抗体のケースではQ15R、N44S、K52N、V57M、R69K、E79Q、及びV82I(IMGTによる;EUによればQ355R、N3845、K392N、V397M、R409K、E419Q、及びV422I)が挙げられる。上述した二重特異性抗体の様式へのバリエーションは、本発明の範囲内で考慮される。
【０２２５】
条項30:抗体、断片、誘導体又は結合部位をコードする核酸を得る工程と、任意選択で核酸を発現ベクターに挿入する工程とを含む、条項29に記載の方法。
【０２２６】
条項31:ヒトをTOI遺伝子型判定するためのキットであって、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する選択されたTOIヌクレオチド配列又はそのRNA転写物に特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む核酸を含み;及び/又は核酸が、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列の少なくとも10個(例えば、少なくとも10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50又は100個)の連続したヌクレオチドを含むヌクレオチド配列を含むか又はそのアンチセンス配列である、キット。
【０２２７】
例えば、核酸は、最も高い累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は最も高い総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列の対応するヌクレオチドと比較してバリアントであるヌクレオチドのすぐ端にある領域にハイブリダイズする。ある例では、核酸は、2つ以上のこのようなバリアントヌクレオチドにハイブリダイズする。
【０２２８】
特異的なハイブリダイゼーションは、当業者には明らかであると予想されるようなストリンジェントな条件下で、例えば、5×SSC、5×デンハルト試薬、及び0.5%SDS、65℃の条件下である。
【０２２９】
条項32:ヒトをTOI遺伝子型判定又は表現型判定するためのキットであって、条項17から27のいずれか1つに記載のリガンド、又は条項29から31のいずれか1つに記載の方法によって生成された抗体、断片若しくは誘導体を含む、キット。
【０２３０】
例えば、リガンドは、最も高い累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は最も高い総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされたTOIの対応するアミノ酸と比較してバリアントであるアミノ酸を含むエピトープに特異的に結合する。ある例では、リガンドは、2つ又はそれより多いこのようなバリアントアミノ酸を含むエピトープに特異的に結合する。ある例では、特異的な結合は、例えばSPRによって決定した場合、1mM、100nM、10nM若しくは1nM又はそれ未満の親和性(Kd)での結合を意味する。
【０２３１】
用語「エピトープ」は、抗体が結合する抗原の領域である。エピトープは、構造エピトープ又は機能性エピトープと定義される場合もある。機能性エピトープは、一般的に、構造エピトープの部分集合であり、相互作用の親和性に直接寄与する残基を有する。またエピトープは、立体構造エピトープ、すなわち非直鎖状アミノ酸で構成されるエピトープでもありうる。ある特定の実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、又はスルホニル基等の分子の化学的に活性な表面の原子団である決定基を含んでいてもよく、ある特定の実施形態では、特定の三次元構造特徴、及び/又は特定の電荷の特徴を有していてもよい。
【０２３２】
条項33:そのゲノムが50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列を含むヒトにおけるTOIが媒介する疾患又は状態を処置及び/又は防止するための医薬の製造における、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むヒトTOIに結合する抗TOIリガンドの使用。
【０２３３】
条項34:ヒトにおいてTOIを標的化してTOIが媒介する疾患又は状態を処置及び/又は防止するための医薬の製造における、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むヒトTOIに結合する抗TOIリガンドの使用。
【０２３４】
リガンド、ヒト、疾患又は状態が、条項1から27のいずれか1つに記載されている、条項33又は34に記載の使用。
【０２３５】
条項35:ヒトにおけるTOIが媒介する疾患又は状態を処置及び/又は防止するためのTOIを標的化する方法であって、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する選択されたTOIヌクレオチド配列を含むヒトに抗TOIリガンドを投与する工程を含み、それによって前記ヌクレオチド配列によってコードされたTOIが標的化される、方法。
【０２３６】
条項36:前記リガンドを用いてアミノ酸配列を含むヒトTOIを標的化して、前記ヒトにおける前記疾患又は状態を処置及び/又は防止する工程であって、前記アミノ酸配列は、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされる工程を含む、条項35に記載の方法。
【０２３７】
条項37:ヒトの核酸試料をTOI遺伝子型判定する方法であって、試料中で、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列の存在を同定する工程を含む、方法。
【０２３８】
ある例では、この方法は、ヒトからTOI核酸試料を得て、次いで同定する工程を行うことを含む。
【０２３９】
条項38:ヒトのタンパク質試料をTOI型判定する方法であって、試料中で、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたTOIアミノ酸配列の存在を同定する工程を含む、方法。
【０２４０】
ある例では、この方法は、ヒトからTOIタンパク質試料を得て、次いで同定する工程を行うことを含む。
【０２４１】
条項39:ヒトから血清、血液、糞、毛髪、尿又は唾液の試料を得る工程を含み、それによって前記配列を同定する工程で使用するための核酸又はタンパク質試料を得る、条項37又は38に記載の方法。
【０２４２】
条項40:条項17から27のいずれか1つに記載のリガンドを使用して、前記同定する工程を行うことを含む、条項37から39のいずれか1つに記載の方法。
【０２４３】
条項41:50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むヒトTOIに結合可能であるリガンドと、条項38又は39に記載の方法を行うための説明書とを含む、診断キット。
【０２４４】
条項42:50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/若しくは50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列又はそのRNA転写物に特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む核酸プローブと、条項38又は39に記載の方法を行うための説明書とを含む診断キット。
【０２４５】
条項43:TOIが、1〜10%の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は1〜約15%又は1〜15%の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされる、いずれかの前記条項に記載の方法、リガンド、組成物、キット又は使用。
【０２４６】
条項44:TOIが、Table 5(表6)から選択されるヒトTOIであり;任意選択で、Table 5(表6)で詳述された対応する疾患又は状態を処置及び/又は防止するための、いずれかの前記条項に記載の方法、リガンド、組成物、キット又は使用。
【０２４７】
例えば、TOIは、ヒトPCSK9、例えば、成熟、切断された、自己触媒された、又は活性PCSK9である。ある例では、疾患は、心血管疾患、例えば、高脂血症である。
【０２４８】
本発明のリガンドは、例えば、ヒトを遺伝子型判定又は表現型判定するための特異的結合アッセイ、TOIの親和性による精製、及びTOI活性の他のアンタゴニストを同定するためのスクリーニングアッセイにおいて有用である。本発明のリガンドのいくつかは、同族のヒト受容体若しくはタンパク質へのTOIの結合を阻害すること、又はTOIが媒介する活性を阻害することにとって有用である。
【０２４９】
本発明は、改変された糖付加パターンを有する抗TOI(例えば、PCSK9)抗体リガンドを包含する。いくつかの用途において、望ましくない糖付加部位を除去するための改変、又は例えば抗体依存性細胞傷害(ADCC)機能を増加させるためのフコース部分の除去が有用な場合がある[Shieldら(2002) JBC 277:26733を参照]。他の用途において、補体依存性細胞毒性(CDC)を改変するために、ガラクトシル化の改変を行ってもよい。
【０２５０】
ある例では、本発明は、TOI(例えば、本明細書に記載されるようなまれなバリアント)に特異的に結合する組換えヒト抗体若しくはその断片であるか又はそれを含む本発明のリガンドと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を特徴とする。一実施形態では、本発明は、本発明の抗体リガンド又は抗体の抗原結合性断片と、第2の治療剤との組合せである組成物を特徴とする。第2の治療剤は、抗炎症剤、抗血管新生剤、鎮痛剤、利尿薬、化学療法剤、抗新生物剤、血管拡張剤、血管収縮剤、スタチン、ベータブロッカー、栄養素、アジュバント、抗肥満症剤及び抗糖尿病剤のいずれかでありうる。
【０２５１】
「薬学的に許容される」は、米国連邦又は州政府の監督官庁により承認済み若しくは承認見込みであること、又は米国薬局方若しくはヒトを含む動物で使用するための他の一般的に認められた薬局方に列挙されていることを指す。「薬学的に許容される担体、賦形剤、又はアジュバント」は、薬剤、例えば本明細書に記載されるあらゆる抗体又は抗体鎖と共に対象に投与することができ、その薬理活性を破壊せず、治療量の薬剤を送達するのに十分な用量で投与される場合に非毒性である担体、賦形剤、又はアジュバントを指す。
【０２５２】
ある例では、本発明は、本発明の抗TOIリガンド(例えば、本発明の抗体又は抗体の抗原結合部分)を使用してTOI活性を阻害するための方法を特徴とし、治療方法は、治療有効量のリガンドを含む医薬組成物を投与する工程を含む。処置される障害は、TOI活性の除去、阻害又は低減によって改善、緩和、阻害又は防止されるあらゆる疾患又は状態である。
【０２５３】
成句「治療有効量」は、所望の作用を生じるために投与される量を意味する。正確な量は処置の目的によって決まると予想され、公知の技術を使用して当業者により確認が可能であると予想される(例えば、Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compoundingを参照のこと)。
【０２５４】
用語「特異的に結合する」等は、リガンド、例えば抗体又はその抗原結合性断片は、生理学的条件下で比較的安定な抗原との複合体を形成することを意味する。特異的な結合は、少なくとも約1×10-6M又はそれ未満の平衡解離定数で特徴付けることができる(例えば、より小さいKDは、より固い結合を示す)。2つの分子が特異的に結合するかどうかを決定するための方法は当業界において周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴等が挙げられる。しかしながら、ヒトTOIに特異的に結合する単離された抗体は、別の種からのTOI分子等の他の抗原に交差反応性を示す可能性がある。更に、ヒトTOIと1つ又は複数の追加の抗原とに結合する多重特異性抗体(例えば、二重特異性)はそれでもなお、本明細書で使用されるようなTOIに「特異的に結合する」抗体とみなされる。
【０２５５】
遺伝子型判定及び表現型判定
当業者であれば、正確な遺伝子型判定及び本発明への適用に使用できる技術を熟知していると予想される。これらとしては、以下が挙げられる。
1 ハイブリダイゼーションベースの方法
1.1 動的対立遺伝子特異的ハイブリダイゼーション
1.2 分子ビーコン
1.3 SNPマイクロアレイ
2 酵素ベースの方法
2.1 制限酵素断片長多型
2.2 PCRベースの方法
2.3 フラップエンドヌクレアーゼ
2.4 プライマー伸長
2.5 5'-ヌクレアーゼ
2.6 オリゴヌクレオチドライゲーションアッセイ
3 DNAの物理的特性をベースとする他の増幅後の方法
3.1 一本鎖高次構造多型
3.2 温度勾配ゲル電気泳動
3.3 変性高速液体クロマトグラフィー
3.4 アンプリコン全体の高解像度融解曲線解析(High-resolution melting)
3.5 DNAミスマッチ結合タンパク質の使用
3.6 SNPlex[SNPlex(商標)は、Applied Biosystems社により専売されている遺伝子型判定プラットフォームである]。
【０２５６】
パイロシーケンシング等の次世代配列決定技術も有用である。
【０２５７】
更に、その全体が参照により本明細書に援用されるGB2444410A及びそこで開示された遺伝子型判定方法も参照される。
【０２５８】
小型化されたアッセイ、例えばオリゴヌクレオチド試薬が小さい表面に固定されたマイクロアレイが、大規模な突然変異分析及びハイスループット遺伝子型判定(ヒトゲノムにおける一塩基多型の大規模な同定、マッピング、及び遺伝子型判定)のためにたびたび提唱されている(Wang DG、Fan JB、Siao CJ、Berno A、Young P、Sapolsky R、Ghandour G、Perkins N、Winchester E、Spencer J、Kruglyak L、Stein L、Hsie L、Topaloglou T、Hubbell E、Robinson E、Mittmann M、Morris MS、Shen N、Kilburn D、Rioux J、Nusbaum C、Rozen S、Hudson TJ、Lipshutz R、Chee M、Lander ES、Science.1998年5月15日; 280(5366): 1077〜82)。他のハイスループット方法は、ディファレンシャルハイブリダイゼーション、プライマー伸長、対立遺伝子特異的プローブのライゲーション及び切断によって対立遺伝子を識別する(Review Accessing genetic variation: genotyping single nucleotide polymorphisms、Syvanen AC、Nat Rev Genet. 2001 Dec; 2(12):930〜42; Review Techniques patents for SNP genotyping、Twyman RM、Primrose SB、Pharmacogenomics. 2003 Jan; 4(l):67〜79)。
【０２５９】
完全に自動化された大規模なSNP分析のためのアプローチは、「均一な」アッセイ、すなわち分離工程を伴わない単一相アッセイであり、これは、増幅中の継続的なモニタリングを許容する。TaqMan(商標)アッセイ(Applied Biosystems社)は、元々は定量リアルタイムPCR用に設計されたものであるが、均一な単一工程アッセイであり、DNAの突然変異状態の決定にも使用される[例えば、A.A. Komar (編)、Single Nucleotide Polymorphisms, Methods in Molecular Biology 578、DOI 10.1007/978-1-60327-411-1_19、Humana Press、Springer Science+Business Media, LLC社の一部;及びSingle Nucleotide Polymorphisms, Methods in Molecular Biology(商標) 578巻、2009、293〜306頁、The TaqMan Method for SNP Genotyping, Gong-Qing Shenらを参照のこと]。TaqMan SNP遺伝子型判定アッセイは、AmpliTaq Gold(商標)DNAポリメラーゼの5'-エキソヌクレアーゼ活性を利用して、ssDNAのSNP含有配列にハイブリダイズした二重標識プローブを切断する。切断により3'-クエンチャーから5'-フルオロフォアが分離されて、検出可能な蛍光シグナルを引き起こす。異なるフルオロフォアを有する2つの対立遺伝子特異的プローブの使用は、いかなるPCR後プロセシングを要することなく同じ試験管内でのSNP決定を許容する。遺伝子型は、増幅終了時における2つの蛍光プローブの強度の比率から決定される。したがって、定量的な研究でなされるようなリアルタイムPCRデータの全セットを活用するというより、エンドポイントデータのみが使用される。
【０２６０】
ハイスループットの自動化方式でのTaqMan SNP遺伝子型判定は、検証済みの予め作製されたTaqMan(登録商標)遺伝子型判定アッセイの使用によって促進されるが、Custom TaqMan(登録商標)アッセイも使用が可能である[High-throughput genotyping with single nucleotide polymorphisms、Ranade K、Chang MS、Ting CT、Pei D、Hsiao CF、Olivier M、Pesich R、Hebert J、Chen YD、Dzau VJ、Curb D、Olshen R、Risch N、Cox DR、Botstein D、Genome Res. 2001年7月; 11(7):1262〜8; Assessment of two flexible and compatible SNP genotyping platforms: TaqMan SNP Genotyping Assays and the SNPlex Genotyping System、De la Vega FM、Lazaruk KD、Rhodes MD、Wenz MH、Mutat Res. 2005年6月3日; 573(1〜2):111〜35]。アッセイの結果は、リアルタイムサーマルサイクラーに備えられた遺伝子型判定ソフトウェア(例えばBio-Rad社のIQソフトウェア、Applied Biosystems社の配列検出ソフトウェア)によって自動的に決定することができる。
【０２６１】
一塩基多型(SNP)は、TaqMan(商標)リアルタイムPCRアッセイ(Applied Biosystems社)及び増幅終了時におけるレポータープローブシグナルに基づき遺伝子型を割り振る市販のソフトウェアを使用して決定することができる。TaqManリアルタイムデータの全部を使用するSNPの自動遺伝子型コーリングのためのアルゴリズムが使用可能である(A. Callegaroら、Nucleic Acids Res. 2006; 34(7): e56、2006年4月14日 doiでオンライン公開:10.1093/nar/gkl185、PMCID: PMC1440877)。このアルゴリズムは、ブランク(DNA試料なし)の挙動に従って試料を分類して、ヘテロ接合性試料とクラスター化するという点で独特である。この分類方法は、陽性対照の必要性をなくし、例えば1つの対立遺伝子がまれな場合、遺伝子型クラスの非存在下でさえも正確な遺伝子型判定を許容する。
【０２６２】
当業者であれば、正確な表現型判定及び本発明への適用に使用できる技術を熟知していると予想される。これらは、単離された標的タンパク質のアミノ酸配列決定、及び異なるバリアント(例えば、最も一般的なバリアント)からの配列の比較の使用を含む。特定のバリアントを同定するために、ストリンジェントな条件下においてSNPの領域中で特異的且つ選択的に結合する抗体を使用することもできる。別の方法において、遺伝子型が決定され、例えばインシリコ翻訳によって対応するアミノ酸配列(表現型)が決定される。
【０２６３】
治療のための投与及び製剤
本発明は、抗TOIリガンド、例えば本発明の抗体又はその抗原結合性断片を含む治療用組成物を提供する。本発明に係る治療用組成物の投与は、改善された移動、送達、忍容性等をもたらすために製剤に取り入れられる好適な担体、賦形剤、及び他の薬剤と共に投与されると予想される。多数の適切な製剤は、全ての薬剤師に公知の処方集:Remington's Pharmaceutical Sciences、Mack Publishing Company、Easton、Paで見出すことができる。これらの製剤としては、例えば、散剤、ペースト、軟膏剤、ゼリー、ワックス、油剤、脂質、脂質(カチオン性又はアニオン性)含有小胞[例えばLIPOFECTINT(商標)]、DNAコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型及び油中水型エマルジョン、エマルジョンカーボワックス(様々な分子量のポリエチレングリコール)、半固体ゲル、及びカーボワックスを含有する半固体混合物が挙げられる。Powellら「Compendium of excipients for parenteral formulations」PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238〜311も参照のこと。
【０２６４】
用量は、投与される対象の年齢及び大きさ、標的の疾患、状態、投与経路等に応じて変更してもよい。成人患者においてTOIに関連する様々な状態及び疾患を処置するために本発明のリガンド、例えば抗体が使用される場合、通常、約0.01〜約20mg/kg体重、より好ましくは約0.02〜約7、約0.03〜約5、又は約0.05〜約3mg/kg体重の単回用量で本発明の抗体を静脈内投与することが有利である。状態の重症度に応じて、処置の頻度及び持続時間を調整することができる。
【０２６５】
様々な送達系が公知であり、本発明のリガンド又は医薬組成物、例えば、例えばリポソーム中へのカプセル化、微粒子、マイクロカプセル、突然変異ウイルスを発現することが可能な組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシスによって提供されるリガンドを投与するのに使用することができる(例えば、Wuら(1987) J. Biol. Chem. 262:4429〜4432を参照のこと)。導入方法としては、限定するものではないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口経路が挙げられる。リガンド又は組成物は、あらゆる便利な経路によって、例えば点滴又はボーラス注射によって、上皮又は粘膜皮膚の内層(例えば、口腔粘膜、直腸及び腸粘膜等)を介した吸収によって投与されてもよく、他の生物活性物質と共に投与されてもよい。投与は、全身性でもよいし、又は局所的でもよい。
【０２６６】
リガンド又は医薬組成物はまた、小胞、特にリポソーム中で送達することもできる[Langer (1990) Science 249:1527〜1533; Treatら(1989)、Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer、Lopez Berestein and Fidler (編)、Liss、New York、353〜365頁; Lopez-Berestein、同書中、317〜327頁を参照のこと;全般的に同書を参照のこと]。
【０２６７】
特定の状況において、リガンド又は医薬組成物は、制御放出系で送達することができる。一実施形態では、ポンプが使用される可能性がある[Langer、上記; Sefton (1987) CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201を参照のこと]。別の実施形態では、高分子材料を使用することができる;Medical Applications of Controlled Release、Langer及びWise(編)、CRC Pres.、Boca Raton、Fla.(1974)を参照のこと。更に別の実施形態では、制御放出系は、組成物の標的に近接して設置することができ、したがって全身用量の分量のみを必要とする(例えば、Goodson、Medical Applications of Controlled Release、上記、第2巻、115〜138頁、1984を参照のこと)。
【０２６８】
注射製剤は、静脈内、皮下、皮内及び筋肉内注射、点滴注入等のための剤形を含みうる。これらの注射製剤は、公知の方法によって調製されうる。例えば、注射製剤は、例えば、慣習的に注射に使用される滅菌水性媒体又は油性媒体中に上述した抗体又はその塩を溶解、懸濁又は乳化することによって調製されうる。注射のための水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコース及び他の補助剤を含有する等張溶液等があり、これらは、適切な可溶化剤、例えばアルコール(例えば、エタノール)、多価アルコール(例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール)、非イオン界面活性剤[例えば、ポリソルベート80、HCO-50(硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン(50mol)付加物)]等と組み合わせて使用してもよい。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、ダイズ油等が採用される。これらは、可溶化剤、例えば安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等と組み合わせて使用してもよい。このようにして調製された注射は、好ましくは、適切なアンプルに充填される。本発明の医薬組成物は、標準的な針及びシリンジを用いて皮下又は静脈内に送達することができる。加えて、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスが、本発明の医薬組成物の送達における適用において手軽に使用することができる。このようなペン型送達デバイスは、再使用可能であってもよいし、又は使い捨てであってもよい。再使用可能なペン型送達デバイスは、一般的に、医薬組成物を含有する交換式カートリッジを利用する。カートリッジ内の医薬組成物の全てが投与され、カートリッジが空になったら、容易に空のカートリッジを捨てて、医薬組成物を含有する新しいカートリッジで交換することができる。このようにしてペン型送達デバイスは、再使用することができる。使い捨てのペン型送達デバイスでは、交換式カートリッジはない。そうではなく、使い捨てのペン型送達デバイスは、前もって医薬組成物が充填され、デバイス内の貯蔵容器中に保持された状態になっている。貯蔵容器中の医薬組成物が空になれば、デバイス全体を捨てる。
【０２６９】
極めて多くの再使用可能なペン型及び自己注射器送達デバイスが、本発明のリガンド又は医薬組成物の皮下送達で適用される。例としては、それらに限定されることはまったくないが、一部のみ挙げれば、AUTOPEN(商標)(Owen Mumford, Inc.社、Woodstock、UK)、DISETRONIC(商標)ペン(Disetronic Medical Systems社、Burghdorf、Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25(商標)ペン、HUMALOG(商標)ペン、HUMALIN 70/30(商標)ペン(Eli Lilly and Co.社、Indianapolis、Ind.)、NOVOPEN(商標)I、II及びIII(Novo Nordisk社、Copenhagen、Denmark)、NOVOPEN JUNIOR(商標)(Novo Nordisk社、Copenhagen、Denmark)、BD(商標)ペン (Becton Dickinson社、Franklin Lakes、N.J.)、OPTIPENT(商標)、OPTIPEN PRO(商標)、OPTIPEN STARLET(商標)、及びOPTICLIKT(商標)(sanofi-aventis社、Frankfurt、Germany)がある。本発明の医薬組成物の皮下送達に適用される使い捨てのペン型送達デバイスの例としては、それらに限定されることはまったくないが、SOLOSTAR(商標)ペン(sanofi-aventis社)、FLEXPEN(商標)(Novo Nordisk社)、及びKWIKPEN(商標)(Eli Lilly社)が挙げられる。
【０２７０】
有利には、上述した経口又は非経口での使用のための医薬組成物は、リガンドの用量を合わせるのに適した単位用量の剤形に調製される。このような単位用量の剤形としては、例えば、錠剤、丸剤、カプセル、注射剤(アンプル)、坐剤等が挙げられる。含有される前述の抗体の量は、一般的に、単位用量の剤形1つ当たり約5から約500mgであり;特に注射剤の形態では、前述の抗体が約5〜約100mgで含有されることが好ましく、他の剤形では約10〜約250mgで含有される。
【０２７１】
例示的なTOI
例えば、本発明のいずれかの構成、態様、概念、実施例又は構成において、その又は各TOIは、ABCF1;ACVR1;ACVR1B;ACVR2;ACVR2B;ACVRL1;ADORA2A;アグリカン;AGR2;AICDA;AWl;AIG1;AKAP1;AKAP2;AIYIH;アミロイド-ベータ;AMHR2;ANGPT1;ANGPT2;ANGPTL3;ANGPTL4;ANPEP;APC;APOC1;AR;Axl;AZGP1(亜鉛-a-糖タンパク質);B7.1;B7.2;BAD;BAFF;BAG1;BAI1;BCL2;BCL6;BDNF;BLNK;BLR1(MDR15);B1yS;BMP1;BMP2;BMP3B(GDF1O);BMP4;BMP6;BMP8;BMPR1A;BMPR1B;BMPR2;BPAG1(プレクチン);BRCA1;Cl9orflO(IL27w);C3;C4A;C5;C5R1;CANT1;CASP1;CASP4;CAV1;CB1;CCBP2(D6/JAB61);CCL1(I-309);CCL11(エオタキシン);CCL13(MCP-4);CCL15(MIP-id);CCL16(HCC-4);CCL17(TARC);CCL18(PARC);CCL19(MIP-3b);CCL2(MCP-1);MCAF;CCL2O(MIP-3a);CCL21(MIP-2);SLC;エキソダス-2;CCL22(MDC/STC-1);CCL23(MPIF-1);CCL24(MPIF-2Iエオタキシン-2);CCL25(TECK);CCL26(エオタキシン-3);CCL27(CTACK/ILC);CCL28;CCL3(MIP-1a);CCL4(MIP-1b);CCL5(RANTES);CCL7(MCP-3);CCL8(mcp-2);CCNA1;CCNA2;CCND1;CCNE1;CCNE2;CCR1(CKR1/HM145);CCR2(mcp-1RB/RA);CCR3(CKR3/CMKBR3);CCR4;CCR5(CMKBR5/ChemR13);CCR6(CMKBR6/CKR-L3/STRL22/DRY6);CCR7(CKR7/EBI1);CCR8(CMKBR8/TER1/CKR-L1);CCR9(GPR-9-6);CCRL1(VSHK1);CCRL2(L-CCR);CD7、CD164;CD19;CD1C;CD2O;CD200;CD-22;CD24;CD28;CD3;CD37;CD38;CD3E;CD3G;CD3Z;CD4;CD4O;CD4OL;CD44;CD45RB;CD52;CD69;CD72;CD74;CD79A;CD79B;CD8;CD8O;CD81;CD83;CD86;CD96;CD207;CDH1(E-カドヘリン);CDH10;CDH12;CDH13;CDH18;CDH19;CDH20;CDH5;CDH7;CDH8;CDH9;CDK2;CDK3;CDK4;CDK5;CDK6;CDK7;CDK9;CDKN1A(p2lWap1/Cip1);CDKN1B(p27Kip1);CDKNIC;CDKN2A(p16lNK4a);CDKN2B;CDKN2C;CDKN3;CEBPB;CELSR3;CER1;CHGA;CHGB;キチナーゼ;CHRNG;CHST10;CKLFSF2;CKLFSF3;CKLFSF4;CKLFSF5;CKLFSF6;CKLFSF7;CKLFSF8;CLDN3;CLDN7(クローディン-7);CLN3;CLU(クラスタリン);CMKLR1;CMKOR1(RDC1);CNR1;COL18A1;COL1A1;COL4A3;COL6A1;CR2;CRP;CSF1(M-CSF);CRLF2;CSF2(GM-CSF);CSF3(GCSF);CTLA4;CTNNB1(b-カテニン);CTSB(カテプシンB);CX3CL1(SCYDi);CX3CR1(V28);CXCR6;CXCL1(GRO1);CXCL1O(IP-10);CXCL11(I-TAC/IP-9);CXCL12(SDF1);CXCL13;CXCL14;CXCL16;CXCL2(GRO2);CXCL3(GRO3);CXCL5(ENA-78I LIX);CXCL6(GCP-2);CXCL9(MIG);CXCR3(GPR9/CKR-L2);CXCR4;CXCR6(TYMSTR ISTRL33 I Bonzo);CYB5;CYC1;CYSLTR1;DAB2IP;DAND5;DES;DKFZp451J0118;DNCL1;DPP4;E2F1;ECGF1;EDG1;EFNAI;EFNA3;EFNB2;EGF;EGFR;ELAC2;ENG;ENO1;ENO2;ENO3;EphA4;EPHB4;EPO;ERBB2(Her-2);EREG;ERK8;ESR1;ESR2;F3(TF);FADD;FasL;FASN;FCER1A;FCER2;FCGR3A;FCRL4;FGF;FGF1(aFGF);FGF1O;FGF11;FGF12;FGF12B;FGF13;FGF14;FGF16;FGF17;FGF18;FGF19;FGF2(bFGF);FGF2O;FGF21;FGF22;FGF23;FGF3(int-2);FGF4(HST);FGF5;FGF6(HST-2);FGF7(KGF);FGF8;FGF9;FGFR3;FIGF(VEGFD);FIL1(イプシロン);FIL1(ゼータ);FLJ12584;FLJ25530;FLRT1(フィブロネクチン);FLT1;FOS;FOSL1(FRA-l);FY(DARC);GABRP(GABAa);GAGEB1;GAGEC1;ガレクチン-3;GALNAC4S-65T;GATA3;GDF5;GFI1;GGT1;GHR;GM-CSF;GNAS1;GNRH1;GPR2(CCR1O);GPR31;GPR44;GPR81(FKSG8O);GPR87;GPR137C;GRCC10(C10);GRP;GSN(ゲルソリン);GSTP1;HAVCR1;HAVCR2;HDAC4;EDAC5;HDAC7A;HDAC9;ヘプシジン;ヘモジュベリン;HGF;HIF1A;HIP1;ヒスタミン及びヒスタミン受容体;HLA-A;HLA-DRA;HM74;HMOX1;HUMCYT2A;ICEBERG;ICOS;1D2;IFN-a;IFNA1;IFNA2;IFNA4;IFNA5;IFNA6;IFNA7;IFNB1;IFNガンマ;TFNW1;IGBP1;IGF1;IGF1R;IGF2;IGFBP2;IGFBP3;IGFBP6;IL-1;IL10;IL10RA;IL10RB;IL11;IL11RA;IL-12;IL12A;IL12B;IL12RB1;IL12RB2;1L13;IL13RA1;IL13RA2;1L14;1L15;IL15RA;IL16;1L17;IL17B;IL17C;IL17R;1L18;IL18BP;IL18R1;IL18RAP;1L19;IL1A;IL1B;IL1F1O;IL1F5;IL1F6;IL1F7;IL1F8;IL1F9;IL1HY1;IL1R1;IL1R2;IL1RAP;IL1RAPL1;IL1RAPL2;IL1RL1;IL1RL2 IL1RN;1L2;1L20;IL2ORA;IL21R;1L22;1L22R;1L22RA2;1L23;1L24;1L25;1L26;1L27;1L28A;1L28B;1L29;IL2RA;IL2RB;IL2RG;1L3;1L30;IL3RA;1L4;IL4R;1L5;IL5RA;1L6;IL6受容体;IL6ST(糖タンパク質130);1L7;TL7R;1L8;IL8RA;IL8RB;IL8RB;1L9;IL9R;ILK;INHA;INHBA;INSL3;INSL4;IRAK1;IRAK2;ITGA1;ITGA2;1TGA3;ITGA6(a6インテグリン);ITGAV;ITGB3;ITGB4(b4インテグリン);JAG1;JAK1;JAK3;JUN;K6HF;KAI1;KDR;MTLG;KLF5(GCボックスBP);KLF6;KLK10;KLK12;KLK13;KLK14;KLK15;KLK3;KLK4;KLK5;KLK6;KLK9;KRT1;KRT19(ケラチン19);KRT2A;KRTHB6(毛髪特異的II型ケラチン);LAG3;LAMA5;LEP(レプチン);LIGHT;Lingo-p75;Lingo-Troy;LPS;LRP5;LTA(TNF-b);LTB;LTB4R(GPR16);LTB4R2;LTBR;MACMARCKS;MAG又はOmgp;MAP2K7(c-Jun);MDK;MIB1;ミッドカイン;MIF;MIP-2;MK167(Ki-67);MMP2;MMP9;MS4A1;MSMB;MT3(メタロチオネクチン-ifi);MTSS1;MUC1(ムチン);MYC;MYD88;NCK2;ニューロカン;Nav1.7;Nav1.8;NFKB1;NFKB2;NGFB(NGF);NGFR;NgR-Lingo;NgR-Nogo66(Nogo);NgR-p75;NgR-Troy;NME1(NM23A);NOX5;NPPB;NROB1;NROB2;NR1D1;NR1D2;NR1H2;NR1H3;NR1H4;NR1I2;NR1I3;NR2C1;NR2C2;NR2E1;NR2E3;NR2F1;NR2F2;NR2F6;NR3C1;NR3C2;NR4A1;NR4A2;NR4A3;NR5A1;NR5A2;NR6A1;NRP1;NRP2;NT5E;NTN4;ODZ1;OPG;OPRD1;OX40L;OX40;P2RX7;PAP;PART1; PATE;PAWR;PCA3;PCNA;PCSK9、PD-1、PD-L1;PDGFA;PDGFB;PECAM1;PF4(CXCL4);PGF;PGR;ホスファカン;PIAS2;胎盤成長因子(PIGF);PIK3CG;PLAU(uPA);PLG;PLXDC1;PPBP(CXCL7);PPID;PR1;PRKCQ;PRKD1;PRL;PROC;PROK2;PSAP;PSCA;PTAFR;PTEN;PTGS2(COX-2);PTN;RAC2(p2lRac2);RARB;RGS1;RGS13;RGS3;RNF11O(ZNF144);ROBO2;ROR1;S100A2;SCGB1D2(リポフィリンB);SCGB2A1(マンマグロビン  2);SCGB2A2(マンマグロビン1);SCYE1(内皮単球活性化サイトカイン);SDF2;SERPINA1;SERPINIA3;SERPINB5(マスピン);SERPINE1(PAT-i);SERPINF1;SHBG;SLA2;SLC2A2;SLC33A1;SLC43A1;SLIT2;SPP1;SPRR1B(Spri);ST6GAL1;STAB1;STAT6;STEAP;STEAP2;TB4R2;TBX21;TCP1O;TDGF1;TEK;TGFA;TGFB1;TGFB1I1;TGFB2;TGFB3;TGFBI;TGFBR1;TGFBR2;TGFBR3;TH1L;THBS1(トロンボスポンジン-1);THBS2;THBS4;THPO;TIE(Tie-i);TIM3;TMP3;組織因子;TLR1O;TLR2;TLR3;TLR4;TLR5;TLR6;TLR7;TLR8;TLR9;TMPRSS6;TNF;TNF-α;TNFAIP2(B94);TNFAIP3;TNFRSF11A;TNFRSF1A;TNFRSF1B;TNFRSF21;TNFRSF5;TNFRSF6(Fas);TNFRSF7;TNFRSF8;TNFRSF9;TNFSF1O(TRAIL);TNFSF11(TRANCE);TNFSF12(APO3L);TNFSF13(4月);TNFSF13B;TNFSF14(HVEM-L);TNFSF15(VEGI);TNFSF18;TNFSF4(0X40リガンド);TNFSF5(CD4Oリガンド);TNFSF6(FasL);TNFSF7(CD27リガンド);TNFSF8(CD3Oリガンド);TNFSF9(4-1BBリガンド);TOLLIP;Toll様受容体;TOP2A(トポイソメラーゼlia);TP53;TPM1;TPM2;TRADD;TRAF1;TRAF2;TRAF3;TRAF4;TRAF5;TRAF6;TRAIL;TREM1;TREM2;TRPC6;TSLP;TWEAK;VEGFA;VEGFB;VEGFC;ベルシカン;VHL C5;VLA-4;Wnt7A;XCL1(リンホタクチン);XCL2(SCM-lb);XCR1(GPR5/CCXCR1);YY1;及びZFPM2からなる群から選択される。
【０２７２】
ある例では、TOIは、Table 5(表6)から選択されるヒトTOIである。
【０２７３】
ある例では、TOIは、OX40リガンドである。
【０２７４】
ある例では、TOIは、OX40である。
【０２７５】
ある例では、TOIは、PCSK9である。
【０２７６】
ある例では、TOIは、IL6受容体(IL-6R)である。
【０２７７】
ある例では、TOIは、LIGHTである。
【０２７８】
ある例では、TOIは、VEGF-Aである。
【０２７９】
ある例では、TOIは、TNFアルファである。
【０２８０】
ある例では、TOIは、PIGFである。
【０２８１】
ある例では、TOIは、IGF1Rである。
【０２８２】
ある例では、TOIは、OPGである。
【０２８３】
ある例では、TOIは、ICOSである。
【０２８４】
ある例では、TOIは、NGFである。
【０２８５】
ある例では、TOIは、BMP6である。
【０２８６】
ある例では、TOIは、フェロポーチンである。
【０２８７】
ある例では、TOIは、TMPRSS6である。
【０２８８】
ある例では、TOIは、ヘモジュベリンである。
【０２８９】
ある例では、TOIは、VEGF受容体である。
【０２９０】
ある例では、TOIは、PDGF受容体である。
【０２９１】
ある例では、TOIは、幹細胞因子受容体である。
【０２９２】
ある例では、TOIは、ヘプシジンである。
【０２９３】
ある例では、TOIは、IL-4受容体アルファである。
【０２９４】
ある例では、TOIは、スクレロスチンである。
【０２９５】
ある例では、TOIは、IL-13受容体である。
【０２９６】
ある例では、TOIは、CD7である。
【０２９７】
ある例では、TOIは、デルタ様リガンド-4(Dll4)である。
【０２９８】
ある例では、TOIは、HGFである。
【０２９９】
ある例では、TOIは、アンジオポエチン-2(Ang2)である。
【０３００】
ある例では、TOIは、GDF8である。
【０３０１】
ある例では、TOIは、ERBB3である。
【０３０２】
ある例では、TOIは、IL-17受容体である。
【０３０３】
ある例では、TOIは、CD40である。
【０３０４】
ある例では、TOIは、CD40リガンドである。
【０３０５】
ある例では、TOIは、EGFRである。
【０３０６】
ある例では、TOIは、そのTOIに関して本明細書に記載されるような突然変異を含むか、又はそのTOIに関して本明細書に記載されるようなSNPを含むヌクレオチド配列によってコードされる。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記TOIを含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記TOIをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３０７】
例えば、TOIは、ヒトPCSK9であり、配列番号1における突然変異I474、E670G、N425S又はQ619Pを含む。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記PCSK9を含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記PCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む。代替例では、例えば本明細書においてPCSK9が特異的な「型」を有する、例えばf、c、r、p、e、h、aj又はq型を有すると述べられる場合、代替例では、PCSK9は、配列番号1におけるR46L、A53V、N425S、A443T、I474V、Q619P及びE670Gから選択される突然変異を含む(例えば、突然変異I474、E670G、N425S又はQ619Pを含む)ヒトPCSK9である;例えば、PCSK9は、配列番号1においてI474Vを含み、任意選択でヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えばこの方法は、異常脂質血症を処置又は防止するためであり、例えばヒトにおいてコレステロールを低下させる又はコレステロールの低下を維持するためである);例えば、PCSK9は、配列番号1においてE670Gを含み、任意選択でヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えばこの方法は、異常脂質血症を処置又は防止するためであり、例えばヒトにおいてコレステロールを低下させる又はコレステロールの低下を維持するためである);例えば、PCSK9は、配列番号1においてQ619Pを含み、任意選択でヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えばこの方法は、異常脂質血症を処置又は防止するためであり、例えばヒトにおいてコレステロールを低下させる又はコレステロールの低下を維持するためである);例えば、PCSK9は、配列番号1においてN425Sを含み、任意選択でヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えばこの方法は、異常脂質血症を処置又は防止するためであり、例えばヒトにおいてコレステロールを低下させる又はコレステロールの低下を維持するためである);例えば、PCSK9は、配列番号1においてR46Lを含み、任意選択でヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えばこの方法は、異常脂質血症を処置又は防止するためであり、例えばヒトにおいてコレステロールを増加させるためである);例えば、PCSK9は、配列番号1においてA53Vを含み、任意選択でヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えばこの方法は、異常脂質血症を処置又は防止するためであり、例えばヒトにおいてコレステロールを増加させるためである);例えば、PCSK9は、配列番号1においてA443Tを含み、任意選択でヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えばこの方法は、異常脂質血症を処置又は防止するためであり、例えばヒトにおいてコレステロールを増加させるためである)。
【０３０８】
例えば、TOIは、ヒトIL6Rであり、配列番号78における突然変異D358A又はV385Iを含む。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記IL6Rを含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記IL6Rをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３０９】
例えば、TOIは、ヒトIL4Raであり、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される突然変異を含む。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記IL4Raを含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記IL4Raをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３１０】
例えば、TOIは、ヒトNav1.7であり、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される突然変異を含み、例えば突然変異は、1161Wである。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記Nav1.7を含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記Nav1.7をコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３１１】
例えば、TOIは、ヒトVEGF-Aであり、rs699947、rs833061、rs2010963、rs3025039、rs699946、rs2146323、rs1413711、rs833068、rs833069、rs3025000及びrs1570360からなる群から選択されるSNPを含むVEGF-Aヌクレオチド配列によってコードされる。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記VEGF-Aを含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記VEGF-Aをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３１２】
例えば、TOIは、ヒトPDGF-Bであり、rs142404523(すなわち、-776位に対応するC)及びrs1800818の位置におけるC(すなわち、-735位に対応するC)からなる群から選択されるSNPを含むPDGF-Bヌクレオチド配列によってコードされる。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記PDGF-Bを含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記PDGF-Bをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３１３】
例えば、TOIは、ヒトPDGFR-Bであり、rs246395(すなわち、2601位に対応するG)及びrs74943037(すなわち、1391位に対応するT)からなる群から選択されるSNPを含むPDGFR-Bヌクレオチド配列によってコードされる。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記PDGFR-Bを含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記PDGFR-Bをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３１４】
例えば、TOIは、ヒトPD-L1であり、本明細書に挙げられるPD-L1のSNPの群から選択されるSNPを含むPD-L1ヌクレオチド配列によってコードされる。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記PD-L1を含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記PD-L1をコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３１５】
例えば、TOIは、ヒトPD-1であり、本明細書に挙げられるPD-1のSNPの群から選択されるSNPを含むPD-L1ヌクレオチド配列によってコードされる。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記PD-1を含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記PD-1をコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３１６】
例えば、TOIは、ヒトアンジオポエチン(例えば、Ang-2)であり、本明細書に挙げられるアンジオポエチン(例えば、Ang-2)のSNPの群から選択されるSNPを含むアンジオポエチン(例えば、Ang-2)のヌクレオチド配列によってコードされる。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記アンジオポエチン(例えば、Ang-2)を含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記アンジオポエチン(例えば、Ang-2)をコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３１７】
例えば、TOIは、ヒトBMP6であり、本明細書に挙げられるBMP6のSNPの群から選択されるSNPを含むBMP6のヌクレオチド配列によってコードされる。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記BMP6を含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記BMP6をコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３１８】
例えば、TOIは、ヒトヘモジュベリンであり、本明細書に挙げられるヘモジュベリンのSNPの群から選択されるSNPを含むヘモジュベリンのヌクレオチド配列によってコードされる。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記ヘモジュベリンを含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記ヘモジュベリンをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３１９】
例えば、TOIは、ヒトヘプシジンであり、本明細書に挙げられるヘプシジンのSNPの群から選択されるSNPを含むヘプシジンのヌクレオチド配列によってコードされる。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記ヘプシジンを含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記ヘプシジンをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３２０】
例えば、TOIは、ヒトフェロポーチンであり、本明細書に挙げられるフェロポーチンのSNPの群から選択されるSNPを含むフェロポーチンのヌクレオチド配列によってコードされる。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記フェロポーチンを含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記フェロポーチンをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３２１】
例えば、TOIは、ヒトTMPRSS6であり、本明細書に挙げられるTMPRSS6のSNPの群から選択されるSNPを含むTMPRSS6のヌクレオチド配列によってコードされる。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記TMPRSS6を含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記TMPRSS6をコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３２２】
例えば、TOIは、ヒトトランスフェリンであり、本明細書に挙げられるトランスフェリンのSNPの群から選択されるSNPを含むトランスフェリンのヌクレオチド配列によってコードされる。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記トランスフェリンを含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記トランスフェリンをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３２３】
例えば、TOIは、ヒトヘモクロマトーシスタンパク質(HFE)であり、本明細書に挙げられるHFEのSNPの群から選択されるSNPを含むHFEのヌクレオチド配列によってコードされる。任意選択で、加えて、ヒトは、前記突然変異を含む前記HFEを含むか;又はヒトは、前記突然変異を含む前記HFEをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３２４】
便宜のため、明細書、実施例、及び添付の特許請求の範囲で使用されるいくつかの用語及び成句の意味を以下に示す。特に他の指定がない限り、又は文脈から暗に示されない限り、以下の用語及び成句は以下に示される意味を包含する。本発明の範囲は特許請求の範囲によってのみ限定されるため、定義は、特定の実施形態の説明を助けるために示され、特許請求された発明を限定することは意図しない。特に他の定義がない限り、本明細書において使用される全ての専門用語や科学用語は、本発明が属する分野の当業者が一般的に理解するものと同じ意味を有する。当業界における用語の用法とその本明細書で示された定義との間に明らかな矛盾がある場合、明細書内で示された定義を優先させるものとする。
【０３２５】
便宜のため、本文、明細書、実施例及び添付の特許請求の範囲で採用される特定の用語をここに集める。
【０３２６】
用語「減少する」、「低下した」、又は「低減」は全て、本明細書では統計学的に有意な量の減少を意味するものとして使用される。いくつかの実施形態では、「低下した」、「低減」又は「減少する」は、典型的には、参照レベル(例えば所与の処置の非存在)と比較して少なくとも10%の減少を意味し、例えば、少なくとも約10%、少なくとも約20%、少なくとも約25%、少なくとも約30%、少なくとも約35%、少なくとも約40%、少なくとも約45%、少なくとも約50%、少なくとも約55%、少なくとも約60%、少なくとも約65%、少なくとも約70%、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約98%、少なくとも約99%、又はより多くの減少を挙げることができる。本明細書で使用される場合、「低減」は、参照レベルと比較して完全な低減を包含しない。減少は、好ましくは、所与の障害のない個体にとって正常の範囲内と容認されるレベルに下がることでありうる。しかしながら、例えば、コレステロールレベルを下降又は低下させる目的の場合、例えば、約5〜10ポイントの低減が、「減少する」又は「低減」とみなすことができる。
【０３２７】
本発明の全ての実施形態のある特定の態様において、用語「阻害」が使用される。阻害は、参照レベル(例えば所与の処置の非存在)と比較して少なくとも10%の減少を指し、例えば、参照レベルと比較して、少なくとも約10%、少なくとも約20%、少なくとも約25%、少なくとも約30%、少なくとも約35%、少なくとも約40%、少なくとも約45%、少なくとも約50%、少なくとも約55%、少なくとも約60%、少なくとも約65%、少なくとも約70%、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約98%、少なくとも約99%、又は100%を含めてそれより多くの阻害の減少を挙げることができる。「完全な阻害」は、参照レベルと比較して100%の阻害を指す。
【０３２８】
用語「増加した」、「増加する」、「増大する」、又は「活性化する」は全て、統計学的に有意な量の増加を意味するものとして本明細書で使用される。いくつかの実施形態では、用語「増加した」、「増加する」、「増大する」、又は「活性化する」は、参照レベルと比較して少なくとも10%の増加、例えば、参照レベルと比較して、少なくとも約20%、又は少なくとも約30%、又は少なくとも約40%、又は少なくとも約50%、又は少なくとも約60%、又は少なくとも約70%、又は少なくとも約80%、又は少なくとも約90%の増加、又は同値を含めて100%までの増加、又は10〜100%の間のいずれかの増加、又は参照レベルと比較して、少なくとも約2倍、又は少なくとも約3倍、又は少なくとも約4倍、又は少なくとも約5倍、又は少なくとも約10倍の増加、又は2倍から10倍又はそれより多くの間のいずれかの増加を意味しうる。マーカー又は症状の文脈で、「増加する」は、このようなレベルでの統計学的に有意な増加である。
【０３２９】
本明細書で使用される場合、用語「実質的に」は、目的とする特徴又は特性の全て又はほぼ全ての程度若しくは度合を提示する定性的な状態を指す。生物学分野の当業者は、生物学的及び化学的現象は、最後まで完了したり、及び/又は完全に進行したり、又は絶対的な結果を達成若しくは回避したりすることは、あったとしてもまれであることを理解しているものと予想される。したがって用語「実質的に」は、多くの生物学的及び化学的現象に特有の完了に至らない可能性を取り込むために本明細書で使用される。疑義を取り除くため、「実質的に」は、目的とする特徴又は特性の、少なくとも90%の程度又は度合、例えば少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも98%、少なくとも99%又はそれより大きい程度又は度合を指す場合がある。
【０３３０】
本明細書で使用される場合、「対象」は、ヒト又は動物を意味する。通常、動物は、脊椎動物、例えば霊長類、げっ歯類、家畜又は狩猟動物である。霊長類としては、チンパンジー、カニクイザル、クモザル、及びマカク、例えば、アカゲザルが挙げられる。げっ歯類としては、マウス、ラット、ウッドチャック、フェレット、ウサギ及びハムスターが挙げられる。いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物、例えば霊長類、例えばヒトである。用語「個体」、「患者」及び「対象」は、本明細書では同義的に使用される。いくつかの実施形態では、対象は、非ヒト脊椎動物、例えば霊長類、げっ歯類、マウス、ラット、ブタ、ヒツジ、ゼブラフィッシュ、カエル等でありうる。
【０３３１】
好ましくは、対象は、哺乳動物である。哺乳動物は、これらの例に限定するものではないが、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、又はウシでありうる。ヒト以外の哺乳動物は、疾患又は状態、例えば心血管状態の動物モデルを提供する対象として有利に使用することができる。対象は、雄でもよいし、又は雌でもよい。
【０３３２】
対象は、処置を必要とする状態又はこのような状態に関する1つ又は複数の合併症に罹っているか又はそれを有すると以前に診断されているか又はそのように同定されている対象であって、任意選択で、状態又はその状態に関する1つ又は複数の合併症のための処置をすでに受けている対象であってもよい。その代わりに、対象はまた、状態又はその状態に関する1つ又は複数の合併症を有すると以前に診断されていない対象であってもよい。例えば、対象は、状態又はその状態に関する1つ又は複数の合併症に関する1つ又は複数のリスク因子を提示する対象であってもよいし、又はリスク因子を提示しない対象であってもよい。
【０３３３】
特定の状態に関する処置を「必要とする対象」又は「必要とするヒト」は、その状態、例えばコレステロールレベルの増加を有する、その状態を有すると診断された、又はその状態を発症させるリスクがある対象でありうる。
【０３３４】
本明細書で使用される場合、用語「タンパク質」及び「ポリペプチド」は、アルファ-アミノ基と隣接する残基のカルボキシ基の間のペプチド結合によって互いに接続された一連のアミノ酸残基を示すものとして本明細書では同義的に使用される。用語「タンパク質」及び「ポリペプチド」は、天然アミノ酸を含むアミノ酸のポリマーを指す。「改変されたポリペプチド」と称される場合、それは、そのサイズ又は機能に関係なく、改変されたアミノ酸(例えば、リン酸化、糖化、グリコシル化された等)及びアミノ酸類似体を含むポリペプチドを指す。「タンパク質」及び「ポリペプチド」は比較的大きいポリペプチドに関して使用されることが多く、それに対して用語「ペプチド」は小さいポリペプチドに関して使用されることが多いが、当業界におけるこれらの用語の用法はオーバーラップしている。用語「タンパク質」及び「ポリペプチド」は、遺伝子産物及びその断片について述べられる場合、本明細書では同義的に使用される。したがって、例示的なポリペプチド又はタンパク質は、遺伝子産物、特定の配列を有する天然に存在するタンパク質を含む。また、これらの用語が当業者によって理解される通りに、ペプチド相同体、ペプチドオーソログ、ペプチドパラログ、ペプチド断片及び他の等価体、ペプチドのバリアント、断片、及び類似体も使用することができる。
【０３３５】
本明細書で使用される場合、用語「核酸」又は「核酸配列」は、リボ核酸、デオキシリボ核酸の単位を取り込んでいるあらゆる分子、好ましくはポリマー分子を指す。核酸は、一本鎖又は二本鎖のどちらであってもよい。一本鎖核酸は、変性した二本鎖DNAの1本の核酸鎖でありうる。その代わりに、核酸は、いずれの二本鎖DNAにも由来しない一本鎖核酸であってもよい。一態様において、核酸は、DNAであってもよい。別の態様において、核酸は、RNAであってもよい。好適な核酸分子は、ゲノムDNA又はcDNAを含むDNAである。他の好適な核酸分子は、mRNAを含むRNAである。いくつかの態様において、核酸の類似体も使用することができる。
【０３３６】
本明細書で使用される場合、用語「核酸プローブ」は、標的核酸配列にハイブリダイズすることができる、例えば標的配列に特異的にハイブリダイズすることができる核酸配列を有する単離されたオリゴヌクレオチド分子を指す。いくつかの実施形態では、核酸プローブは、検出可能な標識を更に含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、核酸プローブは、固体表面に結合されていてもよい。いくつかの実施形態では、核酸は、約5nt〜約100ntの長さである。
【０３３７】
本明細書で使用される場合、用語「siRNA」は、互いに実質的に相補的なRNAの2つの個別の鎖を含むRNA分子を形成する核酸を指す。典型的には、siRNAは、少なくとも約15〜40ヌクレオチドの長さである(例えば、二本鎖siRNAの各相補配列は、約15〜40ヌクレオチドの長さであり、二本鎖siRNAは、約15〜40塩基対の長さ、好ましくは約19〜25塩基ヌクレオチド、例えば、19、20、21、22、23、24、又は25ヌクレオチドの長さである)。いくつかの実施形態では、siRNAは、平滑末端化されていてもよい。いくつかの実施形態では、siRNAは、各鎖に、約0、1、2、3、4、又は5ヌクレオチドの長さを有する3'及び/又は5'オーバーハングを含んでいてもよい。オーバーハングの長さは、2つの鎖間で無関係であり、すなわち、1つの鎖におけるオーバーハングの長さは、第2の鎖におけるオーバーハングの長さに依存しない。またsiRNA分子は、3'ヒドロキシル基も含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、siRNAは、5'リン酸基を含んでいてもよい。同じ細胞中に標的遺伝子、例えば標的RNAとしてsiRNAが存在するか又は発現される場合、siRNAは、遺伝子又は標的RNAの発現を低減又は阻害する能力を有する。遺伝子発現のsiRNA依存性転写後サイレンシングは、siRNAによってガイドされた部位で標的RNA分子切断することを含む。
【０３３８】
本明細書で使用される場合、「PCSK9」又は「前駆タンパク質転換酵素ズブチリシン/ケキシン9型」は、低密度リポタンパク質受容体(LDLR)タンパク質のレベルの調節に関与するセリンプロテアーゼを指す(Hortonら、2007; Seidah及びPrat、2007)。PCSK9は、LDLRタンパク質と直接相互作用して、LDLRとともにエンドサイトーシスされ、エンドソーム経路全体にわたってLDLRと同時免疫蛍光されることが示されている(Lagaceら、2006)。PCSK9は、セリンプロテアーゼのズブチリシン(S8)ファミリーにおけるプロホルモン-前駆タンパク質転換酵素である(Seidahら、2003)。様々な種のPCSK9の配列は公知であり、例えばヒトPCSK9(NCBI遺伝子番号255738)である。多数のPCSK9アイソフォームのヌクレオチド及びポリペプチド配列、例えば配列番号1〜37が本明細書で示される。
【０３３９】
PCSK9は、プロ型及び成熟型の両方として存在する。PCSK9プロ型の自己触媒は、Gln152とSer153の間[VFAQ|SIP(配列番号116)]で起こり(Naureckieneら、2003)、その細胞からの分泌に必要であることが示されている(Seidahら、2003)。この切断の前の不活性型は、本明細書では、PCSK9の「不活性」、「プロ型」、又は「プロセシングされていない」型と称される場合もある。自己触媒事象によって生成したC末端断片は、本明細書では、「成熟」、「切断された」、「プロセシングされた」又は「活性」PCSK9と称される場合もある。プロ型及び成熟PCSK9アイソフォームの例が本明細書で示されており、例えば配列番号1〜27を参照されたい。
【０３４０】
本明細書で使用される場合、PCSK9の「触媒ドメイン」は、例えば配列番号1のPCSK9の153位〜449位に対応するPCSK9ポリペプチドの部分を指す。本明細書で使用される場合、PCSK9の「C末端ドメイン」は、例えば配列番号1のPCSK9の450〜692位に対応するPCSK9ポリペプチドの部分を指す。
【０３４１】
本明細書で使用される場合、「PCSK9が媒介する」疾患又は状態は、PCSK9の変化、例えば発現レベルの変化、活性の変化、及び/又はPCSK9のバリアント若しくは突然変異の存在によって引き起こされるか又はそれを特徴とする疾患又は状態を指す。このような疾患又は状態の非限定的な例としては、例えば、脂質障害、高リポタンパク血症、高脂血症;異常脂質血症;高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロールの上昇に関連する跛行)、II型糖尿病、高血圧、及び心血管疾患又は状態を挙げることができる。別の例は、急性冠症候群である。ある例では、疾患又は状態は、炎症性疾患若しくは状態又は自己免疫疾患若しくは状態である。このような疾患及び状態を同定及び/又は診断する方法は、通常の技術を有する医療従事者に周知である。
【０３４２】
PCSK9が媒介する疾患又は状態を有するリスクがあるか又はそれを発症している対象は、このような疾患若しくは状態の1つ又は複数の徴候若しくは症状を提示している対象、又はこのような疾患若しくは状態の1つ又は複数のリスク因子を有する対象、例えば過体重の対象、コレステロールレベルが上昇している対象、疾患若しくは状態、例えばコレステロールレベルの上昇に罹りやすくなることが公知の1つ若しくは複数の遺伝学的多型を含む対象、例えばLDLR(低密度リポタンパク質受容体をコードする)若しくはAPOB(アポリポタンパク質Bをコードする)若しくはPCSK9遺伝子に突然変異を有する対象、及び/又はこのような疾患若しくは状態の家族歴を有する対象でありうる。
【０３４３】
本明細書で使用される場合、「リガンド」は、第2の分子又は受容体に結合することができる、例えば特異的に結合することができる分子を指す。いくつかの実施形態では、リガンドは、例えば、抗体、抗体断片、抗体部分、及び/又はアフィボディでありうる。
【０３４４】
用語「バリアント」は、本明細書で使用される場合、ポリペプチド又は核酸(例えば、ヒトにおいて最も一般的なもの、例えば、本明細書で開示されたようなデータベース、例えば1000ゲノムプロジェクトのデータベースにおいて最も高頻度なもの)と1つ又は複数のアミノ酸又は核酸の欠失、付加で異なっているが、天然に存在する分子の1つ又は複数の特定の機能又は生物活性を保持するペプチド又は核酸を指す。アミノ酸の置換は、アミノ酸が異なる天然に存在するアミノ酸残基で置き換えられている変更を含む。このような置換は「保存的」と分類される場合もあり、そのケースにおいて、ポリペプチドに含有されるアミノ酸残基は、極性、側鎖の官能性又はサイズのいずれかに関して類似の特徴を有する別の天然に存在するアミノ酸で置き換えられる。このような保存的置換は当業界において周知である。また本発明に包含される置換は「非保存的」であってもよく、その場合、ペプチド中に存在するアミノ酸残基が、異なる特性を有するアミノ酸、例えば異なる群からの天然に存在するアミノ酸で置換され(例えば、電荷を有するアミノ酸又は疎水性アミノ酸をアラニンで置換すること)、又はその代わりに、天然に存在するアミノ酸が、通常ではないアミノ酸で置換される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、保存的である。バリアントという用語には、ポリヌクレオチド又はポリペプチドに関して使用される場合も包含され、それぞれ参照ポリヌクレオチド又はポリペプチドと比較して(例えば、野生型ポリヌクレオチド又はポリペプチドと比較して)一次、二次、又は三次構造において変化している可能性があるポリヌクレオチド又はポリペプチドを指す。
【０３４５】
本明細書の他所において、PCSK9のバリアントが提供される。PCSK9のバリアントとしては、a、f、c、r、p、m、eh、aj、及びqのような本明細書に記載される型を挙げることができる。本明細書においてこれらのバリアントの配列が示されており、例えば、配列番号1〜27及びTable 1(表1)、Table 2(表2)又はTable 6(表7)を参照されたい。
【０３４６】
いくつかの態様において、当業界において周知の方法を使用して単離又は生成された、「合成バリアント」、「組換えバリアント」、又は「化学的に改変された」ポリヌクレオチドバリアント若しくはポリペプチドバリアントを使用することができる。「改変されたバリアント」は、後述するような保存的又は非保存的なアミノ酸の変化を含んでいてもよい。ポリヌクレオチドの変化は、参照配列によってコードされたポリペプチドにアミノ酸置換、付加、欠失、融合及びトランケーションを生じさせることができる。使用のいくつかの態様は、挿入バリアント、欠失バリアント、又はバリアントの基礎となるペプチド配列には通常存在しないアミノ酸及び他の分子の挿入及び置換、例えば、限定するものではないが、ヒトタンパク質には通常存在しないオルニチンの挿入を含むアミノ酸置換で置換されたバリアントを含む。用語「保存的置換」は、ポリペプチドを説明する場合、ポリペプチドの活性を実質的に変更しないポリペプチドのアミノ酸組成の変化を指す。例えば、保存的置換は、アミノ酸残基を類似の化学的特性を有する異なるアミノ酸残基で置換することを指す。保存的アミノ酸置換としては、ロイシンのイソロイシン若しくはバリンでの置き換え、アスパラギン酸のグルタミン酸での置き換え、又はスレオニンのセリンでの置き換えが挙げられる。
【０３４７】
「保存的アミノ酸置換」は、1つのアミノ酸が類似の構造的及び/又は化学特性を有する別のアミノ酸で置き換えられることによって起こり、例えばロイシンのイソロイシン若しくはバリンでの置き換え、アスパラギン酸のグルタミン酸での置き換え、又はスレオニンのセリンでの置き換えによって起こる。したがって、特定のアミノ酸配列の「保存的置換」は、まさに重要なアミノ酸が置換されることによってペプチドの活性[すなわち血液脳関門(BBB)を透過するペプチドの能力]が低下しないように、ポリペプチドの活性にとって重要ではないアミノ酸を置換すること、又はアミノ酸を類似の特性(例えば、酸性、塩基性、正又は負電荷を有する、極性又は非極性等)を有する他のアミノ酸で置換することを指す。機能的に類似するアミノ酸を示す保存的置換の表は当業界において周知である。例えば、以下の6つの群はそれぞれ、互いに保存的置換であるアミノ酸を含有する:1)アラニン(A)、セリン(S)、スレオニン(T);2)アスパラギン酸(D)、グルタミン酸(E);3)アスパラギン(N)、グルタミン(Q);4)アルギニン(R)、リシン(K);5)イソロイシン(I)、ロイシン(L)、メチオニン(M)、バリン(V);及び6)フェニルアラニン(F)、チロシン(Y)、トリプトファン(W)。[その全体が参照により援用されるCreighton、Proteins、W. H. Freeman and Company (1984)も参照のこと。]いくつかの実施形態では、単一のアミノ酸又は少ないパーセンテージのアミノ酸を変更する、付加する又は欠失させる個々の置換、欠失又は付加も、変化がペプチドの活性を低下させない場合は「保存的置換」とみなすことができる。挿入又は欠失は、典型的には約1〜5個のアミノ酸の範囲内である。保存的アミノ酸の選択は、ペプチド中の置換しようとするアミノ酸の位置に基づいて選択されてもよく、例えばアミノ酸がペプチドの外部にあり溶媒に露出しているか、又は内部にあり溶媒に露出していないかに基づいて選択されてもよい。
【０３４８】
代替の実施形態では、既存のアミノ酸の位置、すなわちその溶媒への露出(すなわち、溶媒に露出していない内部に局所するアミノ酸と比較して、アミノ酸が溶媒に露出しているか又はペプチド若しくはポリペプチドの外面に存在する場合)に基づき既存のアミノ酸を置換すると予想されるアミノ酸を選択することができる。このような保存的アミノ酸置換の選択は当業界において周知であり、例えば、Dordoら、J. MoI Biol、1999、217、721〜739及びTaylorら、J. Theor. Biol. 119(1986);205〜218及びS. French及びB. Robson、J. MoI. Evol. 19(1983)171で開示されている通りである。したがって、タンパク質又はペプチドの外部にあるアミノ酸(すなわち溶媒に露出したアミノ酸)に好適な保存的アミノ酸置換を選択することができ、例えば、限定するものではないが、以下の置換:YのFでの置換、TのS又はKでの置換、PのAでの置換、EのD又はQでの置換、NのD又はGでの置換、RのKでの置換、GのN又はAでの置換、TのS又はKでの置換、DのN又はEでの置換、IのL又はVでの置換、FのYでの置換、SのT又はAでの置換、RのKでの置換、GのN又はAでの置換、KのRでの置換、AのS、K又はPでの置換を使用することができる。
【０３４９】
代替の実施形態では、タンパク質又はペプチドの内部におけるアミノ酸に好適な保存的アミノ酸置換の包含を選択することもでき、例えば、タンパク質又はペプチドの内部におけるアミノ酸(すなわちアミノ酸が溶媒に露出していない)に好適な保存的置換を使用することができ、例えば、限定するものではないが、以下の保存的置換:YのFでの置換、TのA又はSでの置換、IのL又はVでの置換、WのYでの置換、MのLでの置換、NのDでの置換、GのAでの置換、TのA又はSでの置換、DのNでの置換、IのL又はVでの置換、FのY又はLでの置換、SのA又はTでの置換及びAのS、G、T又はVでの置換を使用することができる。いくつかの実施形態では、非保存的アミノ酸置換もバリアントという用語に包含される。
【０３５０】
「抗体」は、本明細書で使用される場合、自然に抗体を生成するいずれかの種に由来するのか、又は組換えDNA技術によって作り出されるのかどうか;血清、B細胞、ハイブリドーマ、トランスフェクトーマ、酵母又は細菌から単離されるのかどうかにかかわらず、IgG、IgM、IgA、IgD若しくはIgE分子又はその抗原特異的な抗体断片(限定するものではないが、Fab、F(ab')2、Fv、ジスルフィド結合したFv、scFv、単一ドメイン抗体、閉じた高次構造の多重特異性抗体、ジスルフィド結合したscfv、ダイアボディ等)を指す。抗体は、慣例的な技術を使用してヒト化されてもよい。
【０３５１】
「抗原」は、本明細書に記載される場合、抗体である薬剤上の結合部位と結合する分子である。典型的には、抗原は抗体であるリガンドと結合して、インビボにおける抗体反応を引き起こすことが可能である。抗原は、ポリペプチド、タンパク質、核酸若しくは他の分子又はその部分でありうる。用語「抗原決定基」は、抗原結合分子によって、より特定には前記分子の抗原結合部位によって認識される抗原上のエピトープを指す。
【０３５２】
用語「抗体断片」は、本明細書で使用される場合、所与の抗原に特異的に結合する、少なくとも1つの免疫グロブリン可変ドメイン又は免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むポリペプチドを指す。抗体断片は、抗体又は抗体の抗原結合ドメインを含むポリペプチドを含みうる。いくつかの実施形態では、抗体断片は、モノクローナル抗体又はモノクローナル抗体の抗原結合ドメインを含むポリペプチドを含みうる。例えば、抗体は、重(H)鎖可変領域(本明細書ではVHと略記される)、及び軽(L)鎖可変領域(本明細書ではVLと略記される)を含みうる。別の例では、抗体は、2つの重(H)鎖可変領域及び2つの軽(L)鎖可変領域を含む。用語「抗体断片」は、抗体の抗原結合性断片{例えば、単鎖抗体、Fab及びsFab断片、F(ab')2、Fd断片、Fv断片、scFv、並びにドメイン抗体(dAb)断片[例えばその全体が参照により本明細書に援用されるde Wildtら、Eur J. Immunol. 1996; 26(3):629〜39を参照のこと]}、加えて完全な抗体を包含する。抗体は、IgA、IgG、IgE、IgD、IgM(加えてそのサブタイプ及び組合せ)の構造的特徴を有していてもよい。抗体は、マウス、ウサギ、ブタ、ラット、及び霊長類(ヒト及び非ヒト霊長類)並びに霊長類化抗体を含むあらゆる源から形成されてもよい。また抗体は、ミディボディ、ヒト化抗体、キメラ抗体等も含む。
【０３５３】
「抗体可変ドメイン」は、本明細書で使用される場合、相補性決定領域(CDR;すなわち、CDR1、CDR2、及びCDR3)、及びフレームワーク領域(FR)のアミノ酸配列を含む抗体分子の軽鎖及び重鎖の一部を指す。VHは、重鎖の可変ドメインを指す。VLは、軽鎖の可変ドメインを指す。本発明で使用される方法によれば、CDR及びFRに割り振られたアミノ酸の位置は、Kabat[Sequences of Proteins of Immunological Interest(国立衛生研究所、Bethesda、Md.、1987及び1991)]に従って、又はIMGT命名法に従って定義することができる。
【０３５４】
Dドメイン又は領域は、抗体鎖の多様性ドメイン又は領域を指す。Jドメイン又は領域は、抗体鎖の連結ドメイン又は領域を指す。
【０３５５】
抗体「遺伝子セグメント」、例えばVH遺伝子セグメント、D遺伝子セグメント、又はJH遺伝子セグメントは、抗体のその部分をコードする核酸配列を有するオリゴヌクレオチドを指し、例えばVH遺伝子セグメントは、ポリペプチドのVHドメインをコードする核酸配列を含むオリゴヌクレオチドである。
【０３５６】
VH及びVL領域は更に、「フレームワーク領域」(「FR」)と称されるより高度に保存されている領域が散在する、「相補性決定領域」(「CDR」)と称される超可変性を有する領域に細分することができる。フレームワーク領域及びCDRの程度は、正確に定義されている(IMGT又はKabat, E. A.ら(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest、第5版、U.S. Department of Health and Human Services、NIH公開番号91-3242、及びChothia, C.ら(1987) J. Mol. Biol. 196:901〜917を参照のこと;これらは、参照によりその全体が本明細書に援用される)。各VH及びVLは、典型的には、3つのCDR及び4つのFRで構成され、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順番:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4で配列される。
【０３５７】
用語「抗原結合性断片」又は「抗原結合ドメイン」は、本明細書では同義的に使用され、目的とする標的に特異的に結合する能力を保持する全長抗体の1つ又は複数の断片を指すのに使用される。全長抗体の「抗原結合性断片」という用語に包含される結合断片の例としては、(i)VL、VH、CL及びCH1ドメインからなる1価の断片である、Fab断片;(ii)ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された2つのFab断片を含む2価の断片である、F(ab')2断片;(iii)VH及びCH1ドメインからなるFd断片;(iv)抗体の単一アームからなるVL及びVHドメインFv断片、(v)VH又はVLドメインからなるdAb断片[Wardら(1989) Nature 341:544〜546;その全体が参照により本明細書に援用される];及び(vi)特異的な抗原結合官能性を保持する単離された相補性決定領域(CDR)が挙げられる。
【０３５８】
用語「抗体結合部位」は、本明細書で使用される場合、抗体の1つ又は複数のCDRを含み、抗原に結合可能であるポリペプチド又はドメインを指す。例えば、ポリペプチドは、CDR3(例えば、HCDR3)を含む。例えばポリペプチドは、抗体の可変ドメインのCDR1及び2(例えば、HCDR1及び2)又はCDR1〜3(例えば、HCDR1〜3)を含む。ある例では、抗体結合部位は、単一の可変ドメイン(例えば、VH又はVLドメイン)によって提供される。別の例では、結合部位は、VH/VL対又はこのような対の2つ以上を含む。
【０３５９】
用語「特異的な結合」は、本明細書で使用される場合、2つの分子、化合物、細胞及び/又は粒子間の化学的相互作用であって、第1の実体が、非標的である第3の実体に結合する場合より大きい特異性及び親和性で第2の標的実体に結合する、化学的相互作用を指す。例えば、診断試験において、リガンドの特異的な結合は、本明細書に記載されるような2つのバリアントPCSK9タンパク質を識別することができる。いくつかの実施形態では、特異的な結合は、第3の非標的実体についての親和性の少なくとも10倍、少なくとも50倍、少なくとも100倍、少なくとも500倍、少なくとも1000倍又はそれより大きい、第1の実体の第2の標的実体についての親和性を指す場合がある。ハイブリダイゼーションを介して相互作用するオリゴヌクレオチド鎖の文脈において、特異的な結合は、「特異的なハイブリダイゼーション」でありうる。
【０３６０】
加えて、本明細書に記載される場合、組換えヒト(ヒト化)抗体を更に最適化して、ヒトにおける療法のための機能的活性を維持しながら起こりうる免疫原性を減少させることができる。これに関して、機能的活性は、本明細書に記載されるような組換え抗体又はその抗体試薬に関連する1つ又は複数の公知の機能的活性を提示することが可能なポリペプチドを意味する。このような機能的活性としては、例えば、標的分子に結合する能力が挙げられる。
【０３６１】
用語「免疫化すること」は、一般的には動物で抗体を発生させることができるように、動物に1つ又は複数の抗原を投与する工程(単数又は複数)を指し、免疫化は、動物に抗原(単数又は複数)を注入することを含む。免疫化は、抗原(単数又は複数)の1回又は複数の投与を含んでいてもよい。好適な方法は、当業者公知のようなプライム-ブースト及びRIMMS手順である。
【０３６２】
「アフィボディ」は、本明細書で使用される場合、標的タンパク質(例えばPCSK9又はそのバリアント)に高い結合親和性を有する比較的小さい合成タンパク質分子を指す。アフィボディは、ブドウ球菌プロテインAのIgG-結合ドメイン由来の3つのヘリックスバンドルドメインで構成される。タンパク質ドメインは、58アミノ酸の配列からなり、そのうち13個が無作為化されたアミノ酸であり、様々なアフィボディバリアントがもたらされる。アフィボディ分子は、抗体より有意に小さいにもかかわらず(アフィボディは約6kDaの重さである一方で、抗体は一般的に約150kDaの重さである)、その結合部位が表面積で抗体の結合部位とほぼ同等であることから、抗体のように働く。
【０３６３】
「VH3-23*04」は、本明細書で使用される場合、配列番号38のポリペプチド配列を含むヒトVHドメインバリアントを指す。参照配列とは対照的に、VH3-23*04は、VHドメインをコードする核酸配列中のrs56069819SNPの存在の結果として、ロイシン残基の代わりにバリン残基を有する(図3及び4;L24V、シグナル配列を含むナンバリング;図4に示される5位のバリンを参照のこと)。「rs56069819」は、本明細書で使用される場合、結果としてVH3-23*04をコードするVHドメインが生じる、VH遺伝子セグメント中のアデノシンからシトシンへの(又は読み取られているDNAの鎖に応じてチミンからグアニンへの)突然変異又はバリアントを指す。rs56069819は、図4及び配列番号39に表されており、これはT→G突然変異を例示する(RS5606819に関するdbSNP侵入は、A→C突然変異を含む他の鎖を表することに留意されたい)。VH3-23*04の更なる説明は、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第2013/0071405号に見出すことができる。
【０３６４】
「決定する」又は「決定すること」は、本明細書で使用される場合、例えば定量的又は定性的な分析によって確認することを指す。「決定されている」は、本明細書で使用される場合、以前に得られた情報又は同時に得られた情報に基づき確認することを指す場合がある。
【０３６５】
本発明の全ての実施形態のいくつかの態様において、選択することは、民族性又はSNPデータのパネル等の関連データを入力すると明細書に記載の説明書に基づき決定をなすことができる、コンピューターによって実現されるソフトウェアプログラム等の自動化を含んでいてもよい。
【０３６６】
「アッセイすること」は、本明細書で使用される場合、分析物を査定、評価、定量化、測定又は特徴付けること、例えば試料中の分析物のレベルを測定すること、分析物を同定すること、又は試料中の分析物の存在又は非存在を検出することを指す。いくつかの実施形態では、アッセイすることは、目的とする分析物の存在又は非存在を検出することを指す。いくつかの実施形態では、アッセイすることは、分析物の量を定量化すること、例えば、濃度の測定値又は分析物の存在量の程度を提供することを指す。いくつかの実施形態では、アッセイすることは、試料及び/又は検体中に存在する分析物の分子の数を数えて、例えば分析物のコピー数を決定することを指す。
【０３６７】
「マルチプレックス」は、本明細書で使用される場合、2つ以上の、典型的には3つ以上の異なる標的配列に、例えばPCSK9の2つ以上のアイソフォームに、又はPCSK9及び追加の標的に、同時に且つ同じ反応容器中で方法又はプロセスを行うことを指す。マルチプレックス分析は、典型的には、マルチウォール、アレイ、又はマルチチャネル反応等のマルチプレックスの様式での、10〜50;10〜100;10〜1000、10〜5000、10〜10000回の反応の分析を包含する。
【０３６８】
また分析又はマルチプレックス分析は、ロボット工学及び典型的にはコンピューターによって実行されるソフトウェアを使用して自動化されることも多く、試料のロボットによる取り扱い、陽性又は陰性結果の自動又はロボットによる選択、標的、例えば核酸多型又はタンパク質バリアントの存在又は非存在についてのアッセイを含んでもよい。
【０３６９】
用語「生体試料」又は「試験試料」は、本明細書で使用される場合、生物から採取又は単離された試料、例えば対象からの試料を示す。例示的な生体試料としては、限定するものではないが、生物学的流体の試料;血清;血漿;尿;唾液;毛髪、上皮細胞、皮膚、腫瘍生検及び/又は組織試料等が挙げられる。この用語はまた、上述の試料の混合物も含む。また用語「試験試料」又は「生体試料」は、未処置の又は前処置された(又は事前に加工された)生体試料も含む。核酸の分析のために、生体試料は、典型的には、核酸を含む少なくとも1つの細胞を含むと予想される。
【０３７０】
試験試料は、対象から細胞の試料を取り出すことにより得ることができるが、前もって単離された細胞(例えば前の時点で単離された、及び同じ又は別の人によって単離された)を使用することによって達成することもできる。加えて、試験試料は、新たに収集してもよいし、又は前もって収集された、冷蔵された、凍結された、又は別の方法で保存された試料であってもよい。
【０３７１】
いくつかの実施形態では、試験試料は、未処置の試験試料であってもよい。成句「未処置の試験試料」は、本明細書で使用される場合、希釈及び/又は溶液中の懸濁を除いていかなる先行する試料の前処置もなされていない試験試料を指す。試験試料を処置するための例示的な方法としては、限定するものではないが、遠心分離、ろ過、超音波破砕、均質化、加熱、凍結及び融解、並びにその組合せが挙げられる。いくつかの実施形態では、試験試料は、凍結試験試料、例えば凍結組織でありうる。凍結試料は、本明細書に記載される方法、アッセイ及びシステムを採用する前に融解させてもよい。融解後、凍結試料は、本明細書に記載される方法、アッセイ及びシステムに供される前に遠心分離してもよい。いくつかの実施形態では、試験試料は、例えば遠心分離と清澄化した試験試料を含む上清の収集によって清澄化された試験試料である。いくつかの実施形態では、試験試料は、事前に加工された試験試料であってもよく、例えば、遠心分離、ろ過、融解、精製、及びそのあらゆる組合せからなる群から選択される処置の結果生じる上清又はろ液であってもよい。いくつかの実施形態では、試験試料は、化学的及び/又は生物学的試薬で処置されてもよい。化学的及び/又は生物学的試薬は、その中に生体分子(例えば、核酸及びタンパク質)を含む試料の安定性を加工中に保護及び/又は維持するために採用することができる。1つの例示的な試薬は、プロテアーゼ阻害剤であり、これは、一般的に加工中にタンパク質の安定性を保護又は維持するために使用される。当業者は、本明細書に記載されるような発現生成物のレベルの決定に必要な生体試料を事前に加工することに適切な方法及びプロセスについて熟知している。
【０３７２】
「遺伝子型判定」は、本明細書で使用される場合、ゲノム内の1つ又は複数の位置における細胞及び/又は対象の具体的な対立遺伝子の組成を、例えばその位置における核酸配列を決定することによって決定するプロセスを指す。遺伝子型判定は、核酸分析及び/又は核酸レベルでの分析を指す。「表現型判定」は、本明細書で使用される場合、細胞及び/又は対象の発現生成物の同一性及び/又は組成を、例えば発現生成物のポリペプチド配列を決定することによって決定するプロセスを指す。表現型判定は、タンパク質分析及び/又はタンパク質レベルでの分析を指す。
【０３７３】
用語「核酸増幅」は、本明細書で使用される場合、核酸配列の追加のコピーの生成を指し、典型的には当業界において周知のポリメラーゼ連鎖反応(PCR)又はリガーゼ連鎖反応(LCR)技術を使用して行われる(Dieffenbach, C. W.及びG. S. Dveksler (1995) PCR Primer, a Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Press、Plainview、N. Y.)。また他の増幅するための方法も本発明の態様において考慮される。
【０３７４】
用語「対立遺伝子特異的増幅」は、プライマー(例えば、対立遺伝子特異的なプライマー)の少なくとも1つが、プライマーの3'末端又はその近傍に多型が位置する遺伝子の多型領域(例えば、一塩基多型)から選ばれる反応(例えば、PCR反応)を指す。ミスマッチしたプライマーは増幅を開始させないと予想され、それに対して適合したプライマーは増幅を開始させると予想される。増幅産物の出現は、多型の存在の指標である。
【０３７５】
「配列決定」は、本明細書で使用される場合、DNA(デオキシリボ核酸)若しくはRNA(リボ核酸)の鎖におけるヌクレオチド塩基の正確な順番又はタンパク質におけるアミノ酸残基若しくはペプチドの正確な順番の決定を指す。核酸の配列決定は、サンガーによる配列決定又は次世代ハイスループット配列決定を使用して行うことができる。
【０３７６】
「次世代配列決定」は、本明細書で使用される場合、数千から数百万の配列決定反応を並行して行い読み取ることによる、従来の配列決定方法(例えばサンガーによる配列決定)で可能な速度を超える速度でオリゴヌクレオチドを配列決定する能力を有するオリゴヌクレオチドの配列決定技術を指す。次世代配列決定方法/プラットフォームの非限定的な例としては、超並列署名シーケンシング(Lynx Therapeutics);454ピロシーケンス(454 Life Sciences/Roche Diagnostics社);固相の可逆的色素-ターミネーターシーケンシング(Solexa/Illumina社):SOLiD技術(Applied Biosystems社);イオン半導体シーケンシング(ION Torrent社);DNAナノボールシーケンシング(Complete Genomics社);並びにPacific Biosciences社、Intelligen Bio-systems社、Oxford Nanopore Technologies社、及びHelicos Biosciences社より入手可能な技術が挙げられる。次世代配列決定技術並びに関連する配列決定プライマーの制約及び設計パラメーターは当業界において周知である(例えばShendureら、「Next-generation DNA sequencing」、Nature, 2008、26巻、10号、1135〜1145; Mardis、「The impact of next-generation sequencing technology on genetics」、Trends in Genetics、2007、24巻、3号、133〜141頁;Suら、「Next-generation sequencing and its applications in molecular diagnostics」Expert Rev Mol Diagn、2011、11(3):333〜43; Zhangら、「The impact of next-generation sequencing on genomics」、J Genet Genomics、2011、38(3):95〜109; (Nyren, P.ら、Anal Biochem 208: 17175 (1993); Bentley, D. R. Curr Opin Genet Dev 16:545〜52 (2006); Strausberg, R. L.ら、Drug Disc Today 13:569〜77 (2008);米国特許第7,282,337号;米国特許第7,279,563号;米国特許第7,226,720号;米国特許第7,220,549号;米国特許第7,169,560号;米国特許第6,818,395号;米国特許第6,911,345号;米国特許出願公開第2006/0252077号;同第2007/0070349号;及び同第20070070349号を参照のこと;これらは、参照によりその全体が本明細書に援用される)。
【０３７７】
「核酸ハイブリダイゼーション」は、本明細書で使用される場合、相補的RNA及びDNA鎖の対形成、加えて相補的DNA一本鎖の対形成を指す。いくつかの実施形態では、核酸ハイブリダイゼーションは、核酸試料をプローブとハイブリダイズさせることによって核酸配列及び/又は同一性を決定する方法、例えばノーザン若しくはサザンブロット分析又はマイクロアレイ分析を指す場合がある。
【０３７８】
用語「処置する」、「処置」、「処置すること」、又は「緩和」は、本明細書で使用される場合、疾患又は障害に関連する状態の進行又は重症度を元に戻す、軽減する、緩和する、阻害する、その速度を落とす、又は止めることを目的とする治療的処置を指す。用語「処置すること」は、状態、疾患又は障害の少なくとも1つの有害な作用又は症状を、低下させる又は軽減することを含む。一般的に、1つ又は複数の症状又は臨床的なマーカーが低下すれば、処置は「有効」である。その代わりに、疾患の進行が低下又は停止すれば、処置は「有効」である。すなわち、「処置」は、症状又はマーカーの改善だけでなく、症状の進行又は悪化が中断するか、又は処置の非存在下で予測される場合と比較して少なくとも遅延することも含む。有益な又は所望の臨床結果としては、限定するものではないが、検出可能か又は検出不可能かどうかにかかわらず、1つ又は複数の症状の軽減、疾患の程度の減少、安定化された(すなわち、悪化しない)疾患の状況、疾患進行の遅延又は速度の低下、病状の緩和若しくは一時的緩和、寛解(部分又は完全のどちらでも)、及び/又は死亡率減少が挙げられる。また疾患の「処置」という用語は、疾患の症状又は副作用(一時的緩和処置を含む)の軽減を提供することも含む。処置が有効であることに関して、完全な治癒は考慮されない。同様に本方法は、ある特定の態様において、治癒を含む。
【０３７９】
用語「医薬組成物」は、本明細書で使用される場合、薬学的に許容される担体、例えば医薬産業で一般的に使用される担体と組み合わされた活性物質を指す。成句「薬学的に許容される」は、本明細書では、確実な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー性応答、又は他の問題若しくは合併症を起こさずにヒト及び動物の組織と接触して使用するのに好適な、相応なベネフィット/リスク比に対応する化合物、材料、組成物、及び/又は剤形を指すものとして採用される。
【０３８０】
用語「投与すること」は、本明細書で使用される場合、所望の部位への薬剤の少なくとも部分的な送達をもたらす方法又は経路によって、対象に本明細書で開示されたような化合物を送ることを指す。本明細書で開示された化合物を含む医薬組成物は、対象において有効な処置をもたらすあらゆる適切な経路によって投与することができる。
【０３８１】
複数の組成物を別々又は同時に投与することができる。別々の投与は、2種の組成物を、異なる時間で、例えば少なくとも10、20、30、若しくは10〜60分離して、又は1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12時間離して投与することを指す。24時間離して、又はそれより更に長く離して組成物を投与することもできる。その代わりに、2種以上の組成物を、同時に、例えば10分未満又は5分未満離して投与することができる。いくつかの態様において、同時に投与される組成物は、混合物として、成分のそれぞれにつき類似の又は異なる持続放出メカニズムで、又はそのようなメカニズムなしに投与することができる。
【０３８２】
「接触させること」は、本明細書で使用される場合、少なくとも1つの複合体、酵素、又は細胞に薬剤を送達又は暴露するためのあらゆる好適な手段を指す。例示的な送達方法としては、限定するものではないが、細胞培養培地への直接の送達、潅流、注射、又は当業者に周知の他の送達方法が挙げられる。
【０３８３】
「得る」は、本明細書で使用される場合、例えば試料を獲得する、確保する、入手する、又は所有するあらゆる方法を指す。対象から生体試料を得ることは、対象の能動的な参加を伴うか又は伴わない、対象からの試料の物理的な取り出し(例えば採血又は毛髪若しくは唾液試料の採取);対象から試料を受け取ること(例えば対象が唾液又は毛髪試料そのものを収集し、それを例えばその目的のために提供された容器中で提供する);又は貯蔵施設、医療施設、若しくは医療提供者から試料を入手することを含みうる。ヒト又は対象から得るとは、例えば採血又は組織若しくは細胞試料の採取の能動的な工程を指す。
【０３８４】
「コレステロールレベル」は、本明細書で使用される場合、総コレステロール、LDLコレステロール、HDLコレステロール、及び/又はトリグリセリドの1つ又は複数のレベルを指す。コレステロールレベルは、対象の血液中のコレステロールのレベルでありうる。
【０３８５】
コレステロールレベルに関して、「維持する」は、本明細書で使用される場合、レベルの悪化(例えば増加)を防止することを指す。いくつかの実施形態では、特定のレベルを維持することは、経時的にコレステロールレベルを10%より高く増加させないプロセスを指す。また維持することは、それまでに達成されたレベルを維持することを指す場合もある。例えば、ヒトがスタチン処置を受けている場合、スタチン処置を使用して達成されたコレステロールレベルを維持することができる。
【０３８６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法に従って処置される対象は、それまでに低下したコレステロールレベルを有している。「それまでに低下した」は、本明細書で使用される場合、前の時点で対象がコレステロールレベルの減少を経験していることを示す。減少は、医薬組成物の投与(例えば本明細書に記載されるような組成物又は別の組成物、例えばスタチンの投与)に起因していてもよいし、又は別の原因、例えば食事の変化及び/又は運動に起因していてもよい。
【０３８７】
高コレステロールレベルのための既存の処置は、スタチンの投与である。本明細書で述べられるように、「スタチン」(HMG-CoAレダクターゼ阻害剤としても知られている)は、肝臓でのコレステロール産生を媒介する酵素HMG-coAレダクターゼの阻害剤である。スタチンは、HMG-CoAレダクターゼと競合的に結合することによって酵素へのHMG-CoAの結合を防止し、それによってレダクターゼの活性(例えばメバロネート産生)を阻害する。スタチンの非限定的な例としては、アトルバスタチン[LIPITOR(商標)]、フルバスタチン[LESCOL(商標)]、ロバスタチン[MEVACOR(商標)、ALTOCOR(商標)]、ピタバスタチン[LIVALO(商標)]、プラバスタチン[PRAVACHOL(商標)]、ロスバスタチン[CRESTOR(商標)]、及びシンバスタチン[ZOCOR(商標)]を挙げることができる。スタチンは、他の薬剤と組み合わせて、例えばエゼチマイブとシンバスタチンと組み合わせて投与することができる。
【０３８８】
一部の対象は、スタチン処置に耐性であるか、又はスタチン処置に耐性になる。「スタチン処置に耐性」又は「スタチン処置への応答性の低減」は、本明細書で使用される場合、対象が、スタチンの投与に対して参照レベルと比較して統計学的に有意に低い応答を提示することを指す。参照レベルは、例えば、対象の集団の場合は平均応答、又はそれより前の日付における個々の対象のレベルでありうる。スタチン処置への応答は、当業者によって容易に測定され、例えば、コレステロールレベル、コレステロールレベルの変化、及び/又はHMG-CoAレダクターゼ活性の測定である。
【０３８９】
用語「検出可能な標識」は、本明細書で使用される場合、存在しているか又は存在していないか検出が可能な、例えば測定及び/又は決定が可能な分子又は部分を指す。検出可能な標識は、例えば、光吸収色素、蛍光色素、又は放射性標識を含みうる。検出可能な標識、それらを検出する方法、及びそれらを試薬(例えば抗体及び核酸プローブ)に取り込む方法は当業界において周知である。
【０３９０】
いくつかの実施形態では、検出可能な標識としては、分光、光化学、生化学、免疫化学、電磁気、放射化学若しくは化学的な手段、例えば蛍光、化学蛍光、若しくは化学発光、又は他のあらゆる適切な手段によって検出することができる標識を挙げることができる。本明細書に記載される方法で使用される検出可能な標識は、一次標識(この場合、標識は、直接検出可能な部分、又は直接検出可能な部分を生成する部分を含む)又は二次標識(この場合、検出可能な標識は、例えば二次及び三次抗体を使用する免疫学的な標識付けにおいて一般的な部分のような検出可能なシグナルを生成する別の部分に結合する)でありうる。検出可能な標識は、共有結合又は非共有結合の手段によって試薬に連結されてもよい。その代わりに、検出可能な標識は、例えばリガンド-受容体結合対の構成による試薬への結合を達成する分子又は他のこのような特異的な認識分子を直接標識付けることによって連結されてもよい。検出可能な標識としては、限定するものではないが、放射性同位体、生物発光化合物、発色団、抗体、化学発光化合物、蛍光化合物、金属キレート、及び酵素を挙げることができる。
【０３９１】
他の実施形態では、検出可能な標識は、蛍光化合物でありうる。蛍光標識が適した波長の光に晒されると、蛍光によりその存在を検出することができる。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、限定するものではないが、フルオレセイン、フィコエリトリン、フィコシアニン、o-フタルアルデヒド(o-phthaldehyde)、フルオレサミン、Cy3(商標)、Cy5(商標)、アロフィコシアニン、テキサスレッド、ペリジニンクロロフィル(peridenin chlorophyll)、シアニン、タンデムコンジュゲート、例えばフィコエリトリン-Cy5(商標)、緑色蛍光タンパク質、ローダミン、フルオレセインイソチオシアネート(FITC)及びOregon Green(商標)、ローダミン及び誘導体[例えば、テキサスレッド及びテトラローダミンイソチオシアネート(tetrarhodimine isothiocynate)(TRITC)]、ビオチン、フィコエリトリン、AMCA、CyDyes(商標)、6-カルボキシフルオレセイン(6-carboxyfhiorescein)(一般的にはFAM及びFという略語で知られている)、6-カルボキシ-2',4',7',4,7-ヘキサクロロフルオレセイン(hexachlorofiuorescein)(HEX)、6-カルボキシ-4',5'-ジクロロ-2',7'-ジメトキシフルオレセイン(dimethoxyfiuorescein)(JOE又はJ)、N,N,N',N'-テトラメチル-6カルボキシローダミン(TAMRA又はT)、6-カルボキシ-X-ローダミン(ROX又はR)、5-カルボキシローダミン-6G(R6G5又はG5)、6-カルボキシローダミン-6G(R6G6又はG6)、及びローダミン110;シアニン色素、例えばCy3、Cy5及びCy7色素;クマリン、例えばウンベリフェロン;ベンズイミド色素、例えばヘキスト33258;フェナントリジン色素、例えばテキサスレッド;エチジウム色素;アクリジン色素;カルバゾール色素;フェノキサジン色素;ポルフィリン色素;ポリメチン色素、例えばCy3、Cy5等のシアニン色素; BODIPY色素及びキノリン色素を含む蛍光色素分子又はフルオロフォアでありうる。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、限定するものではないが、3H、125I、35S、14C、32P、及び33Pを含む放射標識でありうる。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、限定するものではないが、ホースラディッシュペルオキシダーゼ及びアルカリホスファターゼを含む酵素でありうる。酵素標識は、例えば、化学発光シグナル、色シグナル、又は蛍光シグナルを生成することができる。検出可能な標識として使用するために検討される酵素としては、限定するものではないが、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌のヌクレアーゼ、デルタ-V-ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、アルファ-グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータ-ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース-VI-リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ及びアセチルコリンエステラーゼを挙げることができる。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、限定するものではないが、ルシゲニン、ルミノール、ルシフェリン、イソルミノール、テロマティックアクリジニウムエステル(theromatic acridinium ester)、イミダゾール、アクリジニウム塩及びシュウ酸エステルを含む化学発光標識である。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、限定するものではないが、コロイド金又は有色のガラス若しくはプラスチック(例えば、ポリスチレン���ポリプロピレン、及びラテックス)のビーズを含む分光比色標識でありうる。
【０３９２】
いくつかの実施形態では、試薬はまた、検出可能なタグ、例えばc-Myc、HA、VSV-G、HSV、FLAG、V5、HIS、又はビオチンで標識することもできる。他の検出系、例えばビオチン-ストレプトアビジン系も使用することができる。この系において、目的とするバイオマーカーと免疫反応性を有する(すなわちそれに特異的な)抗体は、ビオチン化される。バイオマーカーに結合したビオチン化抗体の量は、ストレプトアビジン-ペルオキシダーゼコンジュゲート及び発色性(chromagenic)基質を使用して決定される。このようなストレプトアビジンペルオキシダーゼ検出キットは、例えばDAKO;Carpinteria、CAから市販されている。また試薬は、152Eu、又はランタニド系列からの他のもの等の蛍光発光金属を使用して検出可能に標識されてもよい。これらの金属は、ジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)又はエチレンジアミン四酢酸(EDTA)のような金属キレート基を使用して試薬に結合することができる。
【０３９３】
「許可番号」又は「販売許可番号」は、本明細書で使用される場合、監督官庁が、特定の医薬製品及び/又は組成物を官庁の管轄区での販売のために市場に出す及び/又は供給することができると決定する際にその官庁によって発行された番号を指す。「監督官庁」は、本明細書で使用される場合、医薬製品及び/又は組成物の例えば安全性及び効能を評価すること、並びに所与の地域におけるこのような製品及び/又は組成物の販売/市場取引を管理することに関与する官庁の1つを指す。このような監督官庁の例を2つだけ挙げれば、米国における食品医薬品局(FDA)及び欧州における欧州医薬品庁(EPA)がある。他の非限定的な例としては、SDA、MPA、MHPRA、IMA、ANMAT、Hong Kong Department of Health-Drug Office、CDSCO、Medsafe、及びKFDAを挙げることができる。
【０３９４】
「注射デバイス」は、本明細書で使用される場合、注射を行うために設計されているデバイスを指し、注射は、注射デバイスをヒトの組織、典型的には皮下組織に、一時的に流体連結する工程を含む。注射は更に、ある量の液体薬物を組織に投与して、組織から注射デバイスを取り外す又は取り出すことを含む。いくつかの実施形態では、注射デバイスは、静脈内デバイス又はIVデバイスであってもよく、これは、標的組織が循環系内の血液、例えば静脈中の血液である場合に使用されるタイプの注射デバイスである。注射デバイスの一般的な、ただし非限定的な例は、針及びシリンジである。
【０３９５】
「緩衝液」は、本明細書で使用される場合、pHの強い変動を受けずに所定量の酸又は塩基を吸収することが可能な化学物質を指す。
【０３９６】
「包装」は、本明細書で使用される場合、分配及び/又は使用に適した単位に成分を組織化する及び/又はまとめる手段を指す。包装としては、例えば、箱、バッグ、シリンジ、アンプル、バイアル、チューブ、クラムシェル包装、滅菌状態、ラベル等を維持するためのバリア及び/又は容器を挙げることができる。
【０３９７】
「説明書」は、本明細書で使用される場合、物品の直接容器上の書面、印刷物、又は図表による表示、例えば医薬活性物質を含有するバイアル上に表示された文章、又は目的とする組成物を含有するキットに包含される目的とする製品の組成及び使用についての詳細を指す。説明書は、投与又は実行が検討される場合の処置方法を説明する。
【０３９８】
「固体表面」は、本明細書で使用される場合、生体分子の結合に好適な物体を指す。固体表面の非限定的な例としては、粒子(限定するものではないが、アガロース又はラテックスビーズ又は粒子又は磁気粒子を含む)、ビーズ、ナノ粒子、ポリマー、基板、スライド、カバースリップ、プレート、培養皿、ウェル、膜、及び/又は格子を挙げることができる。固体表面としては、限定するものではないが、ポリマー、プラスチック、樹脂、多糖、シリコン又はシリカベースの材料、炭素、金属、無機ガラス、及び膜を含む多くの様々な材料を挙げることができる。
【０３９９】
対象の「分類」、例えば対象の血統の分類は、本明細書で使用される場合、対象が、特定の地理的領域に起源を持つ生物学的な祖先を有するかどうか、したがって歴史的にその領域を占有してきた集団で見出される特定の遺伝学的バリアントを有する可能性が高いかどうかを決定することを指す。分類は、例えば、対象の家族に関する情報を得ること、対象又は家族の一員に彼らの生物学的な家族の血統に関してインタビューすること、及び/又は遺伝学的試験を行うことを含みうる。分類は、当業者によく知られていると予想される1000ゲノムプロジェクトに使用される基準に基づいていてもよい。いくつかの実施形態では、少なくとも対象のゲノムが、特定の血統に属する他のヒトに共通する相当数の異なる対立遺伝子(例えば、1000ゲノムプロジェクトのデータベースを参照してによって決定された)を含む、例えば、少なくとも10、20、30、40、50又は100又はそれより多くの共通する対立遺伝子を含む場合、対象は、その血統に属すると分類することができる。Table 4(表5)に、特定の血統の群に関する略語を示す。
【０４００】
用語「統計学的に有意な」又は「有意に」は、統計的有意性を指し、一般的に2標準偏差(2SD)又はそれより大きい差を意味する。
【０４０１】
操作の実施例で記載されるか又は別段の指示がある場合を除いて、成分の量を表す全ての数値又は本明細書で使用される反応条件は、全ての例において用語「約」によって修飾されていると理解されるものとする。用語「約」は、パーセンテージと関連して使用される場合、±1%を意味する場合がある。
【０４０２】
本明細書で使用される場合、用語「含むこと」又は「含む」は、組成物、方法、及びその方法又は組成物に必須のそれらそれぞれの成分に関して使用されるが、必須か又は必須ではないかにかかわらず特に明示していない要素の包含を排除しない。
【０４０３】
用語「からなる」は、本明細書に記載されるような組成物、方法、及びそれらそれぞれの成分を指すが、その実施形態の説明に挙げられていないいかなる要素も含まれない。
【０４０４】
本明細書で使用される場合、用語「から本質的になる」は、所与の実施形態に必要な要素を指す。この用語は、その実施形態の基礎となる新規な特徴又は機能的な特徴に顕著な影響を与えない要素の存在を許容する。
【０４０５】
単数形の用語「1つの(a)」、「1つの(an)」、及び「その(the)」は、文脈上明らかに別段の指示がない限り、複数形の指示対象を含む。同様に、言葉「又は」は、文脈上明らかに別段の指示がない限り「及び」を含むことが意図される。本開示の実施又は試験で本明細書に記載したものに類似した、又は同等な方法及び材料が使用できるが、好適な方法及び材料が後述される。略語「例えば(e.g.)」は、ラテン語のexempli gratiaに由来し、本明細書では非限定的な例を示すのに使用される。したがって、略語「例えば(e.g.)」は、用語「例えば(for example)」と同義である。
【０４０６】
細胞生物学及び分子生物学において一般的な用語の定義は、「The Merck Manual of Diagnosis and Therapy」、第19版、Merck Research Laboratories社出版、2006 (ISBN 0-911910-19-0); Robert S. Porterら(編)、The Encyclopedia of Molecular Biology、Blackwell Science Ltd.社出版、1994 (ISBN 0-632-02182-9); Benjamin Lewin、Genes X、Jones & Bartlett Publishing社出版、2009 (ISBN-10: 0763766321); Kendrewら(編)、Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference、VCH Publishers, Inc.社出版、1995 (ISBN 1-56081-569-8)及びCurrent Protocols in Protein Sciences 2009、Wiley Intersciences社、Coliganら編に見出すことができる。
【０４０７】
特に他の指定がない限り、本発明は、例えば、全て参照によりその全体が本明細書に援用される、Sambrookら、Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第4版)、Cold Spring Harbor Laboratory Press社、Cold Spring Harbor、N.Y.、USA (2012); Davisら、Basic Methods in Molecular Biology、Elsevier Science Publishing, Inc.社、New York、USA (1995);又はMethods in Enzymology: Guide to Molecular Cloning Techniques、第152巻、S. L. Berger及びA. R. Kimmel編、Academic Press Inc.社、San Diego、USA (1987); Current Protocols in Protein Science (CPPS) (John E. Coliganら編、John Wiley and Sons, Inc.社)、Current Protocols in Cell Biology (CPCB) (Juan S. Bonifacinoら編、John Wiley and Sons, Inc.社)、及びCulture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique by R. Ian Freshney、出版元: Wiley-Liss;第5版(2005)、Animal Cell Culture Methods (Methods in Cell Biology,第57巻、Jennie P. Mather及びDavid Barnes編集者、Academic Press社、第1版、1998)で説明されているような標準的手順を使用して行われた。
【０４０８】
他の用語は、本明細書において、本発明の様々な態様の説明内で定義される。
【０４０９】
本出願全体にわたり引用された、参考文献、発行された特許、公開された特許出願、及び同時係属中の特許出願を含む全ての特許及び他の公報は、例えば、本明細書に記載される技術と関連して使用される可能性があるこのような公報に記載された手法を説明し開示する目的で、明示的に参照により本明細書に援用される。これらの公報は、単に本出願の出願日の前のその開示のために提供される。これに関するいかなる事柄も、本発明者らが、先行発明のために、又は他のあらゆる理由でこのような開示に先行する権利がないという承認として解されないものとする。日付に関する全ての陳述又はこれらの文書の内容に関する表示は出願人が入手可能な情報に基づいており、これらの文書の日付又は内容の正確さに関するいかなる承認も構成しない。
【０４１０】
本開示の実施形態の説明は、網羅的であったり又は開示された正確な形態に開示を限定したりすることを意図していない。本開示の具体的な実施形態及びそれに関する実施例は、本明細書において例示的な目的のために記載されるが、関連分野の当業者が認識すると予想されるような本開示の範囲内の様々な等価な改変が可能である。例えば、方法の工程又は機能が所与の順番で示されるが、代替の実施形態では異なる順番で機能が果たされる場合もあるし、又は実質的に同時に機能が果たされる場合もある。本明細書で示される開示の教示は、任意選択で他の手順又は方法に適用することができる。本明細書で記載される様々な実施形態を組み合わせて、更なる実施形態を提供することができる。本開示の態様は、任意選択で、本開示の更なる実施形態を提供するために上記の参考文献及び適用の組成、機能及び概念が採用されるように改変してもよい。更に、生物学的機能の等価性を考慮することによって、種類又は量における生物学的又は化学的作用に影響を及ぼすことなくタンパク質構造においていくつかの変化を作製することができる。詳細な説明に鑑み本開示にこれら及び他の変化を作製することができる。このような全ての改変は、添付の特許請求の範囲内に包含されることが意図される。
【０４１１】
前述の実施形態のいずれかの具体的な要素は、他の実施形態における要素と組み合わせてもよいし、又はそれと置換されてもよい。更に、本開示のある特定の実施形態に関連する利点がこれらの実施形態の文脈で説明されているが、他の実施形態もまたこのような利点を提示する可能性があり、必ずしも全ての実施形態が開示の範囲内に含まれるようにこのような利点を提示するとは限らない。
【０４１２】
本明細書に記載される特定の構成、態様、実施例、条項及び実施形態は、例証として示され、本発明の限定として示されないことが理解されるものとする。本発明の主要な特徴は、本発明の範囲から逸脱することなく様々な実施形態で採用されうる。当業者であれば、慣例的な研究に加えて、本明細書に記載される具体的な手順と等価な極めて多くの手順を使用することを認識するか、又は確認することができると予想される。このような等価な手順は本発明の範囲内とみなされ、特許請求の範囲に包含される。明細書中に記載された全ての公報及び特許出願は、本発明が関する分野の当業者の能力のレベルを示す。全ての公報及び特許出願は、それぞれ個々の公報又は特許出願が参照により援用されると具体的及び個々に示される場合と同じ程度に参照により本明細書に援用される。言葉「1つの(a)」又は「1つの(an)」の使用は、特許請求の範囲及び/又は明細書において用語「含む」と共に使用される場合、「1つの(one)」を意味する場合があるが、「1つ又は複数の」、「少なくとも1つの」、及び「1つ又は1つより多くの」という意味とも一致する。特許請求の範囲における用語「又は」の使用は、二者択一のみを指すか又は選択肢が相互排他的であると明示的に示されない限り「及び/又は」を意味するものとして使用されるが、本開示は、二者択一のみ及び「及び/又は」を指すという定義を支持する。本出願全体にわたり、用語「約」は、値が、値を決定するのに採用されているデバイス、方法ごとに固有の誤差の変動、又は研究対象間に存在する変動を包含することを示すのに使用される。
【０４１３】
本明細書及び特許請求の範囲で使用されるように、言葉「含むこと」[並びに含むのあらゆる形態、例えば「含む(comprise)」及び「含む(comprises)」]、「有すること(having)」[並びに有することのあらゆる形態、例えば「有する(have)」及び「有する(has)」]、「含むこと(including)」[並びに含むことのあらゆる形態、例えば「含む(includes)」及び「含む(include)」]、又は「含有すること(containing)」[並びに含有することのあらゆる形態、例えば「含有する(contains)」及び「含有する(contain)」]は包括的であるか、又はオープンエンドであり、追加の列挙されていない要素又は方法の工程を排除しない。
【０４１４】
文脈からそうではないことが明示されない限り、本開示のあらゆる部分を本開示の他のあらゆる部分と組み合わせて読み取ることができる。
【０４１５】
本明細書における(例えば、特許請求の範囲における)「配列番号」による配列への言及は、表に記載される配列を参照することによってなされ、同様に「配列番号」中の位置番号への言及(例えば、特許請求の範囲において)は、本明細書の表に記載される(例えば、表6、10及び17の通りの)配列を参照することによってなされる。したがって、例えば、「配列番号42の204位に対応するAsp又は配列番号42の206位に対応するLeu」は、本明細書の表10に示される配列番号42のそれぞれ204位及び206位と標識されたAsp及びLeuを指す。
【０４１６】
本明細書において開示及び特許請求された組成物及び/又は方法の全ては、本発明の開示を考慮して余計な実験を行うことなく作製及び実行することができる。本発明の組成物及び方法を好ましい実施形態に関して説明してきたが、本発明の概念、本質及び範囲から逸脱することなく、組成物及び/又は方法に、更には本明細書に記載される方法の工程又は工程の順番にバリエーションが適用されうることが当業者には明らかであると予想される。このような全ての当業者に明らかな類似の置換及び改変は、添付の特許請求の範囲によって定義されるような本発明の本質、範囲及び概念内であるとみなされる。
【０４１７】
以下の非限定的な例で、本発明をより詳細に説明する。
【０４１８】
本明細書に記載される技術のいくつかの実施形態は、以下の番号付けされた段落のいずれかに従って定義することができる:
1.ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法であって、
a.TOI多型バリアントについて陽性であるヒトを選択する工程であって、前記ヒトにおけるTOIは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有する対立遺伝子を含むヌクレオチド配列によってコードされるか、及び/又は前記ヒトにおけるTOIは、50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含むヌクレオチド配列によってコードされる、工程と;
b.ヒトに抗TOIリガンドを投与して、ヒトにおけるTOIを標的化し、前記疾患又は状態を処置又は防止する工程と
を含む、方法。
【０４１９】
第1の代替例では、段落1は、
ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法であって、前記ヒトに、抗TOIリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み、抗TOIリガンドが、50%未満(例えば、40、35、30、35、20、15、10、5、4、3、2、又は1%未満)の累積ヒト対立遺伝子頻度を有するSNPを含むヌクレオチド配列によってコードされたTOIバリアントに特異的に結合し、及び/又はTOIバリアントは、50%未満(例えば、40、35、30、35、20、15、10、5、4、3、2、又は1%未満)の総ヒト遺伝子型頻度を有するSNPを含むヌクレオチド配列によってコードされ;このヒトは、前記SNPを含む(例えば、前記)TOIをコードするヌクレオチド配列を含み;
(i)リガンド(例えば、抗体又は断片)が、ヒトVHセグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、ヒトVHセグメントが、SNPを含み、ヒトは、前記SNPを含む(例えば、前記)VHセグメントを含むか;又は
(ii)リガンド(例えば、抗体又は断片)が、ヒトVλセグメント及びヒトJλセグメントの組換え由来のVλドメインを含み、ヒトVλセグメントが、SNPを含み、ヒトは、前記SNPを含む(例えば、前記)Vλセグメントを含むか;又は
(iii)リガンド(例えば、抗体又は断片)が、ヒトVκセグメント及びヒトJκセグメントの組換え由来のVκドメインを含み、ヒトVκセグメントが、SNPを含み、ヒトは、前記SNPを含む(例えば、前記)Vκセグメントを含むか;又は
(iv)リガンド(例えば、抗体又は断片)が、SNPを含むヌクレオチド配列によってコードされた重鎖定常領域(例えば、ガンマ-1、2、3又は4定常領域)を含み、ヒトは、前記SNPを含む(例えば、前記)重鎖定常領域(例えば、それぞれガンマ-1、2、3又は4定常領域)を含むか;又は
(v)リガンド(例えば、抗体又は断片)が、SNPを含むヌクレオチド配列によってコードされたラムダ鎖定常を含み、ヒトは、前記SNPを含む(例えば、前記)ラムダ鎖定常領域を含むか;又は
(vi)リガンド(例えば、抗体又は断片)が、SNPを含むヌクレオチド配列によってコードされたカッパ鎖定常を含み、ヒトは、前記SNPを含む(例えば、前記)カッパ鎖定常領域を含む、方法を提供する。
【０４２０】
第2の代替例では、段落1は、
ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法であって、前記ヒトに、TOIバリアントに特異的に結合する抗TOIリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み、TOIバリアントは、50%未満(例えば、40、35、30、35、20、15、10、5、4、3、2、又は1%未満)の累積ヒト対立遺伝子頻度を有する単一のアミノ酸バリエーション(すなわち、ヒトにおけるTOIバリアント間に差がある位置における単一のアミノ酸)を含み、及び/又はこのアミノ酸バリアントは、50%未満(例えば、40、35、30、35、20、15、10、5、4、3、2、又は1%未満)の総ヒト遺伝子型頻度を有し;ヒトは、前記単一のアミノ酸バリエーションを含むTOIタンパク質を発現し;
(i)リガンド(例えば、抗体又は断片)が、同じ単一のアミノ酸バリエーションを含むVHドメインを含み、ヒトは、前記単一のアミノ酸バリエーションを含むVHドメインを発現するか;又は
(ii)リガンド(例えば、抗体又は断片)が、単一のアミノ酸バリエーションを含むVλドメインを含み、ヒトは、同じ単一のアミノ酸バリエーションを含むVλドメインを発現するか;又は
(iii)リガンド(例えば、抗体又は断片)が、単一のアミノ酸バリエーションを含むVκドメインを含み、ヒトは、同じ単一のアミノ酸バリエーションを含むVκドメインを発現するか;又は
(iv)リガンド(例えば、抗体又は断片)が、単一のアミノ酸バリエーションを含む重鎖定常領域(例えば、ガンマ-1、2、3又は4定常領域、例えば、この定常領域は、Fc、CH1、CH2又はCH3である)を含み、ヒトは同じ単一のアミノ酸バリエーションを含む重鎖定常領域(例えば、ガンマ-1、2、3又は4定常領域、例えば、この定常領域は、それぞれFc、CH1、CH2又はCH3である)を発現するか;又は
(v)リガンド(例えば、抗体又は断片)が、単一のアミノ酸バリエーションを含むラムダ鎖定常領域を含み、ヒトは、同じ単一のアミノ酸バリエーションを含むラムダ鎖定常領域を発現するか;又は
(vi)リガンド(例えば、抗体又は断片)が、単一のアミノ酸バリエーションを含むカッパ鎖定常領域を含み、ヒトは、同じ単一のアミノ酸バリエーションを含むカッパ鎖定常領域を発現する、方法を提供する。
【０４２１】
用語「単一のアミノ酸バリエーションを含む」は、TOI配列中に更なるアミノ酸バリエーションが存在する可能性を含む。
【０４２２】
ある例では、本明細書における頻度は、1000ゲノムのデータベース、例えばフェーズIデータベースに従うか、又は例えば2013年10月1日又は2014年10月1日におけるEnsembl(ワールドワイドウェブにおいて、ensembl.orgで利用可能)で示された通りである。
【０４２３】
ある例では、各SNPは、非同義的アミノ酸バリエーションをコードし、すなわち、SNPは、サイレント突然変異ではない。
【０４２４】
任意選択で、この方法は、投与前に、ヌクレオチド配列を含む前記ヒトを選択する工程を含む。
【０４２５】
TOIがヒトPCSK9である第3の代替例では、段落1は、
それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下させるか又はそれまでの低下したコレステロールレベルを維持する方法であって、前記ヒトに、配列番号1において本明細書で定義されるような突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素ズブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合する抗体又は抗体断片を投与する工程を含み、抗体は、ヒトVHセグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、ヒトVHセグメントが、配列番号40の5位に相当するアミノ酸においてバリンをコードし、前記ヒトが、(i)配列番号40のフレームワーク1をコードするVH遺伝子セグメント及び(ii)配列番号1において前記突然変異を含むC末端ドメインを含む、前駆タンパク質転換酵素ズブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む、方法を提供する。
【０４２６】
TOIがヒトPCSK9である第4の代替例では、段落1は、
それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下させるか又はそれまでの低下したコレステロールレベルを維持する方法であって、前記ヒトに、配列番号1において本明細書で定義されるような突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素ズブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合する抗体又は抗体断片を投与する工程を含み、抗体は、ヒトVLセグメント及びヒトJLセグメントの組換え由来のVLドメインを含み、ヒトVLセグメントが、本明細書で開示されたVλ又はVκであり、前記ヒトが、(i)前記VL遺伝子セグメント及び(ii)配列番号1において前記突然変異を含むC末端ドメインを含む、前駆タンパク質転換酵素ズブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む、方法を提供する。
【０４２７】
TOIがヒトPCSK9である第5の代替例では、段落1は、
それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下させるか又はそれまでの低下したコレステロールレベルを維持する方法であって、前記ヒトに、配列番号1において本明細書で定義されるような突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素ズブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合する抗体又は抗体断片を投与する工程を含み、抗体は、本明細書で開示されたヒトCH、Cλ又はCκ遺伝子セグメントによってコードされたCドメインを含み、前記ヒトが、(i)前記C遺伝子セグメント及び(ii)配列番号1において前記突然変異を含むC末端ドメインを含む、前駆タンパク質転換酵素ズブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む、方法を提供する。
【０４２８】
以下の段落は、段落1の代替例のいずれかに関する。
2.工程(a)の前に、リガンドが、前記TOIバリアントに特異的に結合することが可能であると決定されたか、又は決定される、段落1に記載の方法。
3.ヒトがTOI多型バリアントについて陽性であることを決定する工程を含み、任意選択で、決定する工程が、ヒトが前記TOIバリアントをコードするヌクレオチドバリアントについて陽性であることを決定する工程を含む、段落1又は2に記載の方法。
4.決定する工程が、前記ヒトから得られた生体試料を、前記TOI多型バリアントをコードするヌクレオチド多型についてアッセイする工程を含む、段落3に記載の方法。
5.決定する工程が、前記ヒトから得られた生体試料を、TOI多型バリアントに対応するタンパク質についてアッセイする工程を含む、段落3又は4に記載の方法。
6.前記頻度が、15%未満である、前記段落のいずれかに記載の方法。
7.前記頻度が、10%未満である、前記段落のいずれかに記載の方法。
8.リガンドが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含むヌクレオチド配列によってそれぞれコードされる2つ以上の異なるTOIバリアントに特異的に結合することが可能である、前記段落のいずれかに記載の方法。
9.ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法であって、
a.50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含むバリアントヌクレオチド配列について陰性であるか;又は50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含むヌクレオチド配列によってコードされたTOIバリアントについて陰性であるヒトを選択する工程と;
b.ヒトに抗TOIリガンドを投与して、ヒトにおけるTOIバリアントを標的化し、前記疾患又は状態を処置又は防止する工程であって、前記ヒトにおけるTOIは、50%より高い累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%より高い総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含むヌクレオチド配列によってコードされたバリアントである、工程と
を含む、方法。
10.ヒトがTOI多型バリアントについて陽性であることを決定する工程を含み、任意選択で、決定する工程は、ヒトが、最も頻度の高いTOIバリアントについて陽性であると表現型判定されたか、若しくは表現型判定されるか、又はそのヌクレオチド配列について遺伝子型判定されることを含む、段落9に記載の方法。
11.決定する工程が、前記対立遺伝子の存在を決定するためにヌクレオチド配列についてアッセイする工程を含む、段落10に記載の方法。
12.アッセイする工程が、核酸増幅を含む、段落11に記載の方法。
13.アッセイする工程が、ハイブリダイゼーション、配列決定、又は次世代配列決定を含む、段落11又は12に記載の方法。
14.ヒトから生体試料を得る工程を更に含む、段落11〜13のいずれかに記載の方法。
15.リガンドが、最も頻度の高いTOIバリアントに特異的に結合することが可能であると決定されたか、又は決定される、段落9から14のいずれか1つに記載の方法。
16.リガンドが、前記TOIバリアントを実質的に中和又は阻害することができないと決定されたか、又は決定される、段落9から15のいずれか1つに記載の方法。
17.リガンドが、最も頻度の高いTOIバリアントに特異的に結合することが可能である、段落9から16のいずれか1つに記載の方法。
18.リガンドが、50%より高い累積ヒト対立遺伝子頻度を有する対立遺伝子を含むヌクレオチド配列によってそれぞれコードされる2つ以上の異なるTOIバリアントに特異的に結合することが可能である、段落9から17のいずれか1つに記載の方法。
19.前記TOI多型バリアントが、少なくとも2種の異なるヒト民族集団中に存在すると決定されたか、又は決定される、前記段落のいずれかに記載の方法。
20.前記累積ヒト対立遺伝子頻度が、少なくとも15種の異なるヒト民族集団からサンプリングされ、少なくとも1000種の配列を含む天然に存在する配列のデータベース中での頻度である、前記段落のいずれかに記載の方法。
21.リガンドが、抗体、抗体断片又はアフィボディである、前記段落のいずれか1つに記載の方法。
22.リガンドが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含むTOIヌクレオチド配列又はそのRNA転写物に特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含み;及び/又はリガンドが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドを含むヌクレオチド配列を含むか又はそのアンチセンス配列である、前記段落のいずれか1つに記載の方法。
23.前記ヒトのゲノムが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有する対立遺伝子を含み、この対立遺伝子は、少なくとも2種の異なる民族集団で見出される、前記段落のいずれか1つに記載の方法。
24.50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有する対立遺伝子を含むヌクレオチド配列によってコードされた目的とする標的と結合可能なリガンドを含む組成物であって、対立遺伝子は、少なくとも2種の異なる民族集団で見出され、この組成物は、任意選択で薬学的に許容される担体、並びに任意選択で前記ヒトにおける疾患又は状態の処置及び/又は防止に使用するためのラベル又は説明書を含み;任意選択で、ラベル又は説明書は、監督機関によって発行された販売許可番号を含む、組成物。
25.前記段落のいずれかに挙げられる目的とする標的が媒介する状態又は疾患を処置又は防止するためのキットであって、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有する対立遺伝子を含むヌクレオチド配列によってコードされた目的とする標的に特異的に結合可能なリガンドを含み、この対立遺伝子は、少なくとも2種の異なる民族集団で見出され;任意選択で、前記ヒトにおける疾患又は状態の処置及び/又は防止に使用するためのラベル又は説明書と組み合わされ;任意選択で、このラベル又は説明書は、監督官庁によって発行された販売許可番号を含み;任意選択で、このキットは、このリガンドを含む注射用ペン又はIV容器を含む、キット。
26.監督官庁が、FDA又はEMAである、段落24に記載の組成物又は段落25に記載のキット。
27.抗ヒトTOI抗体結合部位を生成する方法であって、複数の抗TOI抗体結合部位を得る工程と、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含むヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むTOIへの、又は最も高い累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は最も高い総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含むTOIをコードするヌクレオチド配列によってコードされた対応する配列からのアミノ酸バリエーションを含むそのペプチドへの結合に関して抗体結合部位をスクリーニングする工程と、スクリーニングする工程で結合する抗体結合部位を単離する工程とを含む、方法。
28.抗ヒトTOI抗体を生成する方法であって、非ヒト脊椎動物を、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含むヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むTOI、又は最も高い累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は最も高い総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含むTOIをコードするヌクレオチド配列によってコードされた対応する配列からのアミノ酸バリエーションを含むそのペプチドで免疫化する工程と、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含むTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むTOIに結合する抗体を単離する工程と、任意選択で、単離された抗体のTOI結合断片又は誘導体を生成する工程とを含む、方法。
29.非ヒト脊椎動物が、マウス又はラットである、段落28に記載の方法。
30.抗体、断片、誘導体又は結合部位をコードする核酸を得る工程と、任意選択でこの核酸を発現ベクターに挿入する工程とを含む、段落29又は30に記載の方法。
31.ヒトをTOI遺伝子型判定するためのキットであって、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する選択されたTOIヌクレオチド配列又はそのRNA転写物に特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む核酸を含み;及び/又は核酸が、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドを含むヌクレオチド配列を含むか又はそのアンチセンス配列である、キット。
32.ヒトをTOI遺伝子型判定又は表現型判定するためのキットであって、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有する対立遺伝子を含むヌクレオチド配列によってコードされた目的とする標的と結合可能なリガンド、又は段落28から30のいずれか1つに記載の方法によって生成された抗体、断片若しくは誘導体を含む、キット。
33.対立遺伝子が、少なくとも2種の異なる民族集団で見出される、段落32に記載のキット。
34.そのゲノムが50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列を含むヒトにおけるTOIが媒介する疾患又は状態を処置及び/又は防止するための医薬の製造における、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むヒトTOIに特異的に結合する抗TOIリガンドの使用。
35. 50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むヒトTOIを標的化してTOIが媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置及び/又は防止するための医薬の製造における、前記TOIに特異的に結合する抗TOIリガンドの使用。
36.目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置及び/又は防止するためのTOIを標的化する方法であって、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するとして選択された対立遺伝子を含むTOIヌクレオチド配列を含むヒトに抗TOIリガンドを投与する工程を含み、それによって前記ヌクレオチド配列によってコードされたTOIが標的化される、方法。
37.前記リガンドを用いてアミノ酸配列を含むヒトTOIを標的化して、前記ヒトにおける前記疾患又は状態を処置及び/又は防止する工程を含み、前記アミノ酸配列は、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含むヌクレオチド配列によってコードされる、段落36に記載の方法。
38.ヒトの核酸試料を目的とする標的(TOI)について遺伝子型判定する方法であって、試料中で、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含むTOIヌクレオチド配列の存在をアッセイする工程を含む、方法。
39.ヒトのタンパク質試料を目的とする標的(TOI)について型判定する方法であって、試料中で、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含むTOIヌクレオチド配列によってコードされたTOIアミノ酸配列の存在をアッセイする工程を含む、方法。
40.ヒトから血清、血液、糞、毛髪、尿又は唾液の試料を得る工程を含み、それによって前記配列をアッセイする工程で使用するための核酸又はタンパク質試料を得る、段落38又は39に記載の方法。
41.50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含む核酸配列を標的化することが可能なリガンド又は前記核酸配列によってコードされたTOIに特異的に結合可能なリガンドを使用して、前記同定する工程を行うことを含む、段落38から40のいずれか1つに記載の方法。
42.50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含む目的とする標的(TOI)ヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むヒトのTOIに結合可能なリガンドと、段落38から41のいずれか1つに記載の方法を行うための説明書とを含む、診断キット。
43.リガンドが、抗体、抗体断片、抗体部分、アフィボディ、オリゴヌクレオチド、改変されたオリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、siRNA、及びマイクロRNAから選択される、診断キット。
44.50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含む目的とする標的(TOI)ヌクレオチド配列又はそのRNA転写物に特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む核酸プローブと、段落38又は39に記載の方法を行うための説明書とを含む、診断キット。
45.TOIが、1から10%の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は1から約15%又は1から15%の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされる、前記段落のいずれかに記載の方法、リガンド、組成物、キット又は使用。
46.TOIが、Table 5(表6)から選択されるヒトTOIであり;任意選択で、Table 5(表6)で詳述された対応する疾患又は状態を処置及び/又は防止するためである、前記段落のいずれかに記載の方法、リガンド、組成物、キット又は使用。
47.ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法であって、TOI多型バリアントについて陽性であると決定されたヒトに、抗TOIリガンドを投与して、ヒトにおいてTOIを標的化して前記疾患又は状態を処置又は防止する工程を含み、前記ヒトにおけるTOIは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有する対立遺伝子を含むヌクレオチド配列によってコードされるか、及び/又は前記ヒトにおけるTOIは、50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する対立遺伝子を含むヌクレオチド配列によってコードされる、方法。
48.抗TOIリガンドが、抗体、抗体部分、抗体断片、アフィボディ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、siRNA、及びマイクロRNAから選択される、段落47に記載の方法。
49.前記段落のいずれかに記載の方法で使用するための(例えば、段落1から8及び19から23のいずれかに記載の方法で使用するための)、段落1に記載のTOIに特異的に結合する抗TOIリガンド。
50.リガンドが、抗TOIトラップ、抗体又は抗体断片である、段落49に記載のリガンド。
51.リガンドが、ヒトへの皮下又は静脈内投与用であるか、又は注射製剤に含まれる、段落49又は50に記載のリガンド。
52.段落49から51のいずれか1つに記載のリガンドを含む注射デバイス。
【０４２９】
ヒト患者の遺伝子型及び/又は表現型へリガンドを追加でテーラーメイドすること
本明細書に記載されるように、本発明は、結合部位の特異性を1つ又は複数のバリアントヒトTOI(例えば、PCSK9又はIL6R)に適合させたリガンド(例えば、抗体及び断片)を意図している。加えて、又はその代わりに(及び以下の非限定的な例で更に例示されるように)、本発明の任意選択の態様は、リガンドの他の特徴を患者の遺伝子型又は表現型に適合させることを提供する。この点において、例えば、本発明は、ヒト患者におけるアミノ酸配列のバリエーションを、結合部位の外側にある1つ又は複数のリガンド配列又はドメインに適合させる能力を含む。例えば、リガンドが、ヒトTOI結合抗体又は抗ヒトTOI受容体Fc融合体を含むか、又はそれからなる場合、本発明のこの態様は、1つ又は複数の定常領域ドメイン(例えば、Fc)の、患者の遺伝子型又は表現型への、よりテーラーメイドされた適合を提供する。加えて、又はその代わりに、結合部位における配列のバリエーションは、同様に患者の遺伝子型又は表現型に適合させうることが意図される。本発明者は、リガンドの1つ又は複数の部分をコードする配列におけるSNP出現、例えば、可変ドメイン及び/又は定常領域ドメインが誘導される遺伝子セグメントの1つ、1つより多く、又は全てにおけるSNP出現を考慮するとによってこれを行った。本発明者は、リガンドを、治療的及び/又は予防的に処置しようとする患者で見出される1つ又は複数の対応するバリアントSNPに適合させることが望ましいと予想されることを理解した。適合は、公知の表現型及び/又は遺伝子型を有する患者に対して具体的にリガンドを設計することを含んでいてもよいし、又は適合は、患者の表現型又は遺伝子型におけるバリエーションと、リガンドのアミノ酸及び/又は対応するヌクレオチドにおけるバリエーションとの間に関連があることを決定することによってリガンドを選ぶことを含んでいてもよい。
【０４３０】
本発明者にとって重要な考慮すべき事柄は、リガンドと患者の体との適合性、特定には、投与されるリガンドに対して起こりうる患者の免疫系の応答を促進したいという要望であった。例えば、ヒト又はヒト化抗体薬物を受けているヒト患者は、入ってくる抗体に対する免疫反応(いわゆるHAHA応答)を上昇させる可能性があり、それにより薬物を外来と認識する患者の免疫系の結果として患者が抗薬物抗体を産生するに至ることがが観察されている。例えば、現在のところ最も多く販売されている抗体医薬であるHUMIRA(商標)(アダリムマブ)を受けている一部の患者は、その医薬に対するHAHA免疫反応を上昇させ、これは、処置に悪影響を及ぼす可能性があることが研究から示唆されている。JAMA. 2011;305(14):1460〜1468. doi:10.1001/jama.2011.406:「Development of Antidrug Antibodies Against Adalimumab and Association With Disease Activity and Treatment Failure During Long-term Follow-up」、GM Barteldsらを参照されたい。著者は、この研究の結果から、抗薬物抗体の発生は、ヒトRA患者におけるアダリムマブ処置の負の転帰と関連していたことが示されたと結論付けた。抗アダリムマブ抗体を有する患者は、抗アダリムマブ抗体を有さない患者より頻繁に且つ早期に処置を中止することに加えて、彼らは、処置中により高い疾患活動性も有し、極めてまれに寛解にも至ったことが報告されている。加えて、報告によれば、抗アダリムマブ抗体陽性患者の3分の2が、処置の最初の28週間でこれらの抗体を発生させたこと、更に抗アダリムマブ抗体の存在が実質的に血清アダリムマブ濃度に影響を与えたことがデータから示された。
【０４３１】
それゆえにこのHAHAというテーマは重要な懸念であり、これは管理当局によって検討されてきた。例えば、欧州医薬品庁(EMA)は、「Guideline on immunogenicity assessment of monoclonal antibodies intended for in vivo clinical use」を発行し(ワールドワイドウェブにおいて、ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2012/06/WC500128688.pdf; EMA/CHMP/BMWP/86289/2010、EMEA/CHMP/BMWP/14327/2006の補遺で利用可能)、これは2012年12月1日に施行された。そのようなものとして、抗薬物抗体の出現及び作用のリスクを同定し評価することは、研究者にとってよく行われることである。
【０４３２】
本発明の態様は、リガンドそのもの(同様にその特異性)を患者に合わせてより厳密にテーラーメイドすることによって、ヒトTOI関連の疾患及び状態を処置及び/又は防止するために抗ヒトTOI薬を設計及び投与する際にこれらの考察に取り組む助けになる。
【０４３３】
また本発明者は、リガンド定常領域(例えば、抗体又はFc含有リガンドの場合)におけるバリエーションをテーラーメイドする望ましさも考慮し、次いで患者に投与される定常領域が、患者において定常領域と相互作用すると予想される様々な成分、例えば患者のFc受容体と合わせられるであろうということにも配慮している。優れたFc/Fc受容体の相互作用は、インビボにおける有用な半減期をもたらすための薬物の再利用(FcRnを介した)、又は細胞の死滅での使用、例えばがんの指標にとって重要でありうる。それゆえに、この方式において、定常領域(例えば、Fc)のエフェクター機能をより厳密に患者に合わせて、効能を促進することが可能である。例えば、より有効な薬物は、より優れた患者の処置にとって望ましく、投与及び/又は投与頻度低減の可能性をもたらす可能性がある。
【０４３４】
したがって、この態様の例では、本発明は、以下を提供する(条項として設定される)。
【０４３５】
1.(i)リガンド(例えば、抗体又は断片)が、
(c)ヒトV領域ヌクレオチド配列によってコードされる可変ドメインであって、Vヌクレオチド配列は、ヒトVH、D及びJH遺伝子セグメント又はヒトVL及びJL遺伝子セグメントの組換え由来の、可変ドメイン;又は
(d)C領域遺伝子セグメントによってコードされた定常領域ドメイン
を含み、(a)の前記遺伝子セグメント又は(b)の前記C領域遺伝子セグメントの第1の遺伝子セグメントが、第1のアミノ酸多型をコードする第1の一塩基多型(SNP)を含み;
(ii)前記ヒトのゲノムが、前記第1のSNPを含むか、又は前記ヒトは、(a')前記第1のアミノ酸多型を含む抗体可変ドメイン又は(b')前記第1のアミノ酸多型を含む抗体定常ドメインを発現する、本発明のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４３６】
2.前記ヒトの血液が、インビトロの結合アッセイで決定した場合、前記第1のアミノ酸多型を含むドメインに特異的に結合する抗体を実質的に含まない、条項1に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４３７】
3.前記アッセイを行うためにSPRが使用される、条項2に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４３８】
代替例では、ELISAが使用される。
【０４３９】
4.前記ヒトのゲノムが、前記第1の遺伝子セグメント[(a)が適用される場合]又は前記C領域遺伝子セグメント[(b)が適用される場合]を含む、条項1から3のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４４０】
5.(a)の前記セグメントの前記第1のセグメント若しくは第2のセグメント、又は(b)の前記C領域遺伝子セグメントが、第2のアミノ酸多型をコードする第2のSNPを含み;前記ヒトのゲノムが、前記第2のSNPを含むか、又は前記ヒトが、(a")前記第2のアミノ酸多型を含む抗体可変ドメイン又は(b")前記第1及び第2のアミノ酸多型を含む抗体定常領域ドメインを発現する、条項1から4のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４４１】
6.前記ヒトが、前記第1及び第2のアミノ酸多型を含む抗体可変ドメインを発現する、条項5に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４４２】
7.前記ゲノムの第1及び第2のSNPが、同じ抗体遺伝子セグメントに含まれる、条項5又は6に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４４３】
例えば、ゲノムの第1及び第2のSNPは、IGHG1*01遺伝子セグメントに含まれ、(a)の前記第1のセグメントは、IGHG1*01遺伝子セグメントである。
【０４４４】
例えば、ゲノムの第1及び第2のSNPは、IGHG2*01遺伝子セグメントに含まれ、(a)の前記第1のセグメントは、IGHG2*01遺伝子セグメントである。
【０４４５】
8.各SNPが、可変領域遺伝子セグメントのSNPである、条項1から7のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４４６】
9.各SNPが、定常領域遺伝子セグメントのSNPであり、例えば各SNPが、ガンマ-1定常領域遺伝子セグメントのSNP、又はガンマ-2定常領域遺伝子セグメントのSNP、又はガンマ-3定常領域遺伝子セグメントのSNP、又はガンマ-4定常領域遺伝子セグメントのSNPである、条項1から7のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４４７】
10.第1のSNPが、CH1、CH2、CH3又はCH4遺伝子セグメントのSNPであり、及び/又は第2のSNPが、CH1、CH2、CH3又はCH4遺伝子セグメントのSNPである、条項9に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４４８】
11.各SNPが、可変ドメインのSNP、例えば、VHドメインのSNP、又はVκドメインのSNP、又はVλのSNPである、条項1から8のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４４９】
12.(b)の前記定常領域ドメインが、抗体Fc領域に含まれる、条項1から11のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４５０】
13.リガンド(例えば、抗体又は断片)が、例えば、SPRによって決定した場合、1nM又はそれ未満(例えば、100又は10pM又はそれ未満)のKDで、本明細書で開示されたような1つ又は複数のヒトTOIバリアントに特異的に結合すると決定されている、条項1から12のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４５１】
14.本発明の(例えば、条項1から13のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物であって、リガンドが、ヒトV遺伝子セグメント及びヒトJ遺伝子セグメント(及び任意選択で、可変ドメインがVHドメインである場合、ヒトD遺伝子セグメント)の組換え由来のヒト抗体可変ドメインを含む抗体又は断片を含むか、又はそれからなり;ヒトのゲノムが、前記ヒトV遺伝子セグメントを含み、及び/又はヒトが、前記ヒトV遺伝子セグメント及びヒトJ遺伝子セグメント(及び任意選択でヒトD遺伝子セグメント)の組換え由来の抗体可変ドメインを含む抗体を発現する、リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４５２】
ある例では、V遺伝子セグメントは、WO2013041844、1000ゲノムのデータベース及び/又はwww.imgt.orgに開示されたV遺伝子セグメントのいずれかであり、その開示(配列に関する開示を含む)は、本発明で使用するための参照により明示的に本明細書に援用される。
【０４５３】
15.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFc融合ヒトTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、第1の定常領域ヌクレオチド配列によってコードされたヒト重鎖定常ドメインを含み;ヒトのゲノムが、前記第1の定常領域ヌクレオチド配列に同一な重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒト定常ドメインを含む抗体を発現する、本発明の(例えば、条項1から14のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４５４】
16.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFc融合ヒトTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、CH1ヌクレオチド配列によってコードされたヒトガンマ重鎖CH1ドメインを含み;ヒトのゲノムが、前記CH1ヌクレオチド配列に同一なガンマ重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒトガンマCH1ドメインを含む抗体を発現する、本発明の(例えば、条項1から15のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４５５】
17.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFc融合ヒトTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、CH2ヌクレオチド配列によってコードされたヒトガンマ重鎖CH2ドメインを含み;ヒトのゲノムが、前記CH2ヌクレオチド配列に同一なガンマ重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒトガンマCH2ドメインを含む抗体を発現する、本発明の(例えば、条項1から16のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４５６】
18.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFc融合ヒトTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、CH3ヌクレオチド配列によってコードされたヒトガンマ重鎖CH3ドメインを含み;ヒトのゲノムが、前記CH3ヌクレオチド配列に同一なガンマ重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒトガンマCH3ドメインを含む抗体を発現する、本発明の(例えば、条項1から17のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４５７】
19.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFc融合ヒトTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、CH4ヌクレオチド配列によってコードされたヒトガンマ重鎖CH4ドメインを含み;ヒトのゲノムが、前記CH4ヌクレオチド配列に同一なガンマ重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒトガンマCH4ドメインを含む抗体を発現する、本発明の(例えば、条項1から18のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４５８】
20.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFc融合ヒトTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、Fcヌクレオチド配列によってコードされたヒトガンマ重鎖Fc領域を含み;ヒトのゲノムが、前記Fcヌクレオチド配列に同一なガンマ重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒトガンマFc領域を含む抗体を発現する、本発明の(例えば、条項1から19のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４５９】
21.前記ヒトガンマ重鎖が、ヒトガンマ-1重鎖である、条項16から20のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４６０】
22.前記ヒトガンマ重鎖が、ヒトガンマ-2重鎖である、条項16から20のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４６１】
23.リガンドが、ヒトIGHG1*01ガンマ-1重鎖定常領域を含む、条項16から20のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４６２】
24.リガンドが、ヒトIGHG2*01ガンマ-1重鎖定常領域を含む、条項16から20のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４６３】
25.ヒトが、前記重鎖定常領域ヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、条項15から24のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４６４】
26.ヒトが、ヒトIGHG1*01ヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、条項23に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４６５】
27.ヒトが、ヒトIGHG2*01ヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、条項24に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４６６】
28.ヒトが、前記ガンマ重鎖定常ドメイン、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcについて陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、条項16から24のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４６７】
29.(i)条項23に従って、ヒトが、ヒトIGHG1*01ガンマ重鎖定常ドメイン、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcについて陽性であると表現型判定されたか、若しくは表現型判定されるか、又は(ii)条項24に従って、ヒトが、ヒトIGHG2*01ガンマ重鎖定常ドメイン、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcについて陽性であると表現型判定された、条項28に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４６８】
30.ヒトを、前記ガンマ重鎖定常領域ヌクレオチド配列について陽性、例えば、前記ガンマ重鎖定常ドメイン、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcヌクレオチド配列について陽性;前記ヒトIGHG1*01ガンマ重鎖定常領域、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcヌクレオチド配列について陽性;又は前記ヒトIGHG2*01ガンマ重鎖定常領域、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定する工程を含む、条項16から24及び26から29のいずれか1つに記載の方法又は使用。
【０４６９】
31.ヒトを、前記ガンマ重鎖定常領域について陽性、例えば、前記ガンマ重鎖定常ドメイン、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcについて陽性;前記ヒトIGHG1*01ガンマ重鎖定常ドメイン、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcについて陽性;又は前記ヒトIGHG2*01ガンマ重鎖定常ドメイン、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcについて陽性であると表現型判定する工程を含む、条項16から24及び26から30のいずれか1つに記載の方法又は使用。
【０４７０】
テーラーメイドされたリガンドの例
本発明者は、大規模な代表的ヒト試料間でのアミノ酸の可変性及び分布を分析した。Table 9(表10)に抗体遺伝子セグメント例の分析の結果を示す。
【０４７１】
第1の例では、本発明者は、よりまれなIGH-ガンマ-1のSNPである204D(観察された累積頻度は0.296)及び206L(観察された累積頻度は0.283)に個々に又は組み合わせて取り組む可能性を確認した。これらの残基はCH3ドメインの一部であり、そのようなものとしてそれらは抗体Fc領域の一部を形成する。したがって、これらのCH3バリエーションと患者との適合は、上記で論じられたような理由で特に有益である。したがって、この例は、以下の条項で詳述される態様を提供する。
【０４７２】
32.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFcに融合したTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、配列番号42の204位に対応するAsp又は配列番号42の206位に対応するLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、ヒトのゲノムが、このようなAsp又はLeuをコードするガンマ-1重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、このようなAsp又はLeuを含むヒトガンマ-1定常領域を含む抗体を発現する、本発明の(例えば、条項1から31のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４７３】
当業者であれば、例えば、ゲノムDNA及び/又はRNAを含有する試料を使用することによってヒトのゲノム配列を決定し、サンプリングした配列とヒト対立遺伝子の配列(例えば、IMGT、100ゲノム又は本明細書で開示されたような他のデータベースで示されたような)とを比較するためのバイオインフォマティクス又は他のコンピューターツールを使用して配列決定し比較するための技術を熟知していると予想される。ある例では、試料は、血液若しくは唾液又は頬スワブ試料である。
【０４７４】
33.リガンドが、配列番号42の204位に対応するAsp及び配列番号42の206位に対応するLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含む、条項32に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４７５】
34.ヒトのゲノムが、このようなAsp及びLeuをコードするガンマ-1重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、このようなAsp及びLeuを含むヒトガンマ-1定常領域を含む抗体を発現する、条項32又は33に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４７６】
35.リガンドが、ヒトIGHG1*01ガンマ-1重鎖定常領域、例えば、ヒトIGHG1*01によってコードされたFc、CH1、CH2及び/又はCH3ドメインを含む、条項32、33又は34に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４７７】
36.ヒトのゲノムが、ヒトIGHG1*01ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、ヒトIGHG1*01ヌクレオチド配列によってコードされたヒト定常ドメインを含む抗体を発現する、条項32から35のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４７８】
37.リガンドが、ヒトIGHG1*01によってコードされたヒンジ領域を含む、条項32から36のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４７９】
38.リガンドが、配列番号61を含む重鎖を含む抗体を含むか、又はそれからなる、条項32から37のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４８０】
39.ヒトが、欧州人血統に属する、条項32から38のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４８１】
Table 9(表10)で示したように、204D及び206Lは、このようなヒトにおいて見出される。
【０４８２】
40.ヒトが、前記Asp及び/又はLeuについて陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、条項32から39のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４８３】
41.ヒトが、ヒトIGHG1*01について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、条項32から40のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４８４】
42.ヒトが、ヒトIGHG1*01のCH3について陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、条項32から41のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４８５】
43.そのゲノムが前記Asp及び/又はLeuをコードするコドンを含むか;ヒトIGHG1*01を含むか;又はヒトIGHG1*01のCH3を含む前記ヒトを選択する工程を含む、条項32から42のいずれか1つに記載の方法又は使用。
【０４８６】
44.その表現型が前記Asp及び/又はLeu;ヒトIGHG1*01領域;又はヒトIGHG1*01のCH3を含む前記ヒトを選択する工程を含む、条項32から43のいずれか1つに記載の方法又は使用。
【０４８７】
44a.ヒトが、このようなAsp及びLeuを含むヒトガンマ-1定常領域を含む抗体を発現する、条項32から44のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４８８】
第2の例では、本発明者は、IGH-ガンマ-2のSNPに取り組む可能性を確認した。これにはFc領域のバリエーションの考察が含まれ、この点において本発明者は、Fc領域中である161位及び257位に焦点を当てた。したがって、この例は、以下の条項で詳述される態様を提供する。
【０４８９】
45.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFcに融合したTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn、配列番号44の76位に対応するPhe、配列番号44の161位に対応するVal及び配列番号44の257位に対応するAlaからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み;ヒトのゲノムが、このような選択されたアミノ酸をコードするガンマ-2重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、このような選択されたアミノ酸を含むヒトガンマ-2定常領域を含む抗体を発現する、本発明の(例えば、条項1から31のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４９０】
46.リガンドが、(i)配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn、配列番号44の76位に対応するPhe、並びに任意選択で(ii)配列番号44の161位に対応するVal及び/又は配列番号44の257位に対応するAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み;ヒトのゲノムが、このような(i)のアミノ酸をコードするガンマ-2重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、このような(i)のアミノ酸を含むヒトガンマ-2定常領域を含む抗体を発現する、条項45に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４９１】
この例は、CH1バリエーションに焦点を当てている。
【０４９２】
47.リガンドが、(i)配列番号44の161位に対応するVal及び配列番号44の257位に対応するAla、並びに任意選択で(ii)配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn及び配列番号44の76位に対応するPheからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み;ヒトのゲノムが、このような(i)のアミノ酸をコードするガンマ-2重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、このような(i)のアミノ酸を含むヒトガンマ-2定常領域を含む抗体を発現する、条項45又は46に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４９３】
この例は、Fcバリエーションに焦点を当てている。
【０４９４】
48.リガンドが、ヒトIGHG2*01ガンマ-2重鎖定常領域、例えば、ヒトIGHG2*01によってコードされたFc、CH1、CH2及び/又はCH3ドメインを含む、条項45から47のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４９５】
49.ヒトのゲノムが、ヒトIGHG2*01ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、ヒトIGHG2*01ヌクレオチド配列によってコードされたヒト定常ドメインを含む抗体を発現する、条項45から48のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４９６】
50.リガンドが、ヒトIGHG2*01によってコードされたヒンジ領域を含む、条項45から49のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４９７】
51.リガンドが、配列番号63又は65を含む重鎖を含む抗体を含むか、又はそれからなる、条項45から50のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４９８】
52.ヒトが、欧州人、アフリカ系アメリカ人、又は欧州系アメリカ人血統に属する、条項45から51のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０４９９】
53.ヒトが、前記Pro、Asn、Phe、Val及びAlaの1つ、1つより多く、又は全てについて陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、条項45から52のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５００】
54.ヒトが、ヒトIGHG2*01について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、条項45から53のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５０１】
55.ヒトが、ヒトIGHG2*01のCH1について陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、条項45から54のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５０２】
56.ヒトが、ヒトIGHG2*01のCH2について陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、条項45から55のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５０３】
57.ヒトが、ヒトIGHG2*01のCH3について陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、条項45から56のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５０４】
58.そのゲノムが前記Pro、Asn、Phe、Val及びAlaの1つ、1つより多く、又は全てをコードするコドンを含むか;ヒトIGHG2*01を含むか;又はヒトIGHG2*01のCH1、CH2及び/又はCH3を含む前記ヒトを選択する工程を含む、条項45から57のいずれか1つに記載の方法又は使用。
【０５０５】
59.その表現型が前記Pro、Asn、Phe、Val及びAlaの1つ、1つより多く、又は全て;ヒトIGHG2*01領域;又はヒトIGHG2*01のCH1、CH2及び/又はCH3を含む前記ヒトを選択する工程を含む、条項45から58のいずれか1つに記載の方法又は使用。
【０５０６】
60.ヒトが、このようなPro、Asn、Phe、Val及びAlaを含むヒトガンマ-2定常領域を含む抗体を発現する、条項45から59のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５０７】
第3の例では、本発明者は、ヒトカッパ定常領域のバリエーションに取り組んだ。したがって、本発明の態様はまた、以下も提供する。
【０５０８】
61.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFcに融合したTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、配列番号50の84位に対応するVal又は配列番号50の87位に対応するCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含み;ヒトのゲノムが、このようなVal又はCysをコードするカッパ軽鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、このようなVal又はCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含む抗体を発現する、本発明の(例えば、条項1から60のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５０９】
62.リガンドが、配列番号50の84位に対応するVal及び配列番号50の87位に対応するCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含む、条項61に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５１０】
63.ヒトのゲノムが、このようなVal及びCysをコードするカッパ軽鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、このようなVal及びCysを含むヒトカッパ定常領域を含む抗体を発現する、条項61又は62に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５１１】
64.抗体又は断片が、ヒトIGKC*01カッパ軽鎖定常領域を含む、条項61から63のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５１２】
65.リガンドが、配列番号62又は66を含む軽鎖を含む抗体を含むか、又はそれからなる、条項61から64のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５１３】
66.リガンドが、ヒトVκ遺伝子セグメント及びヒトJκ遺伝子セグメントの組換え由来の軽鎖可変ドメインを含む抗体を含むか、又はそれからなり、Jκ遺伝子セグメントが、IGKJ2*01(配列番号57)である、条項61から65のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５１４】
67.ヒトが、前記Val及び/又はCysについて陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、条項61から66のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５１５】
68.ヒトが、ヒトIGKC*01について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、条項61から67のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５１６】
69.ヒトが、ヒトIGKC*01ドメインについて陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、条項61から68のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５１７】
70.そのゲノムが前記Val及び/又はCysをコードするコドンを含むか;又はヒトIGKC*01を含む前記ヒトを選択する工程を含む、条項61から69のいずれか1つに記載の方法又は使用。
【０５１８】
71.その表現型がこのようなVal及び/又はCysを含むか;又はヒトIGKC*01ドメインを含む前記ヒトを選択する工程を含む、条項61から70のいずれか1つに記載の方法又は使用。
【０５１９】
72.ヒトが、このようなVal及びCysを含むヒトカッパ定常ドメインを含む抗体を発現し、例えば、ヒトIGKC*01定常ドメインを発現する、条項61から71のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５２０】
第4の例では、本発明者は、ヒトラムダ定常領域のバリエーションに取り組んだ。したがって、この例は、以下の条項で詳述される態様を提供する。
【０５２１】
73.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFcに融合したTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、ヒトIGLC2*01軽鎖定常領域を含み;ヒトのゲノムが、ヒトIGLC2*01ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトは、ヒト軽鎖IGLC2*01定常領域を含む抗体を発現する、本発明の(例えば、条項1から60のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５２２】
74.抗体が、配列番号64を含む軽鎖を含む、条項73に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５２３】
75.ヒトが、ヒトIGLC2*01について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、条項73又は74に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５２４】
76.ヒトが、ヒトIGLC2*01ドメインについて陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、条項73から75のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５２５】
77.そのゲノムがヒトIGLC2*01を含む前記ヒトを選択する工程を含む、条項73から76のいずれか1つに記載の方法又は使用。
【０５２６】
78.その表現型がヒトIGLC2*01ドメインを含む前記ヒトを選択する工程を含む、条項73から77のいずれか1つに記載の方法又は使用。
【０５２７】
79.ヒトが、ヒトラムダIGLC2*01定常ドメインを含む抗体を発現する、条項73から78のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５２８】
第5の例では、本発明者は、ヒト重鎖可変領域のバリエーションに取り組んだ。したがって、この例は、以下の条項で詳述される態様を提供する。
【０５２９】
80.リガンドが、ヒトVH遺伝子セグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJH遺伝子セグメントの組換え由来のVHドメインを含む抗体又は断片を含むか、又はそれからなり、VH遺伝子セグメントが、以下からなる群から選択される(i)IGHV1-18*01及びヒトのゲノムは、ヒトIGHV1-18*01ヌクレオチド配列を含むか、若しくはヒトは、ヒトIGHV1-18*01の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現するか;又は(ii)IGVH1-46*01及びヒトのゲノムは、ヒトIGHV1-46*01ヌクレオチド配列を含むか、若しくはヒトは、ヒトIGHV1-46*01の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現する、本発明の(例えば、条項1から79のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５３０】
81.抗体又は断片が、ヒトIGHG2*01によってコードされたCH1ドメイン、CH2ドメイン、CH3ドメイン、ヒンジ又はFcの1つのより多く又は全てを含む、条項80に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５３１】
82.抗体又は断片が、配列番号63又は65を含む重鎖を含む、条項80又は81に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５３２】
83.ヒトが、選択された前記VH遺伝子セグメントについて陽性、ヒトIGHV1-18*01又はIGVH1-46*01について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、条項80から82のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５３３】
84.ヒトを、選択された前記VH遺伝子セグメントについて陽性、例えば、ヒトIGHV1-18*01又はIGVH1-46*01について陽性であると遺伝子型判定する工程を含む、条項80から83のいずれかに記載の方法又は使用。
【０５３４】
第6の例では、本発明者は、ヒト軽鎖可変領域のバリエーションに取り組んだ。したがって、この例は、以下の条項で詳述される態様を提供する。
【０５３５】
85.リガンドが、ヒトVL遺伝子セグメント及びヒトJL遺伝子セグメントの組換え由来のVLドメインを含む抗体又は断片を含むか、又はそれからなり、VL遺伝子セグメントが、以下からなる群から選択される(i)IGKV4-1*01及びヒトのゲノムは、ヒトIGKV4-1*01ヌクレオチド配列を含むか、若しくはヒトは、ヒトIGKV4-1*01の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現するか;(ii)IGLV2-14*01及びヒトのゲノムは、ヒトIGLV2-14*01ヌクレオチド配列を含むか、若しくはヒトは、ヒトIGLV2-14*01の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現するか;又は(iii)IGKV1-13*02及びヒトのゲノムは、ヒトIGKV1-13*02ヌクレオチド配列を含むか、若しくはヒトは、ヒトIGKV1-13*02の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現する、本発明の(例えば、条項1から84のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５３６】
86.抗体が、配列番号62、64又は66を含む軽鎖を含む、条項85に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５３７】
87.抗体又は断片が、ヒトVκ遺伝子セグメント及びヒトJκ遺伝子セグメントの組換え由来の軽鎖可変ドメインを含み、Jκ遺伝子セグメントが、IGKJ2*01(配列番号57)であり;(i)又は(iii)が適用される、条項85又は86に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５３８】
88.ヒトが、選択された前記VL遺伝子セグメントについて陽性、例えば、ヒトIGKV4-1*01、IGLV2-14*01又はIGKV1-13*02について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、条項85から87のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５３９】
89.ヒトを、選択された前記VL遺伝子セグメントについて陽性であると遺伝子型判定する工程、例えば、ヒトを、ヒトIGKV4-1*01、IGLV2-14*01又はIGKV1-13*02について陽性であると遺伝子型判定する工程を含む、条項88に記載の方法又は使用。
【０５４０】
90.リガンド(例えば、抗体又は断片)が、SPRによって決定した場合、1nM又はそれ未満(例えば、100、10又は1pM又はそれ未満)の解離定数(Kd)で、前記ヒトTOIに結合する、条項1から89のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５４１】
具体的な実施形態では、本発明のリガンド、抗体又は断片は、Fc領域を含み、Fc領域は、Kabatで記載された通りのEUインデックスによって番号付けした場合、234D、234E、234N、234Q、234T、234H、234Y、234I、234V、234F、235A、235D、235R、235W、235P、235S、235N、235Q、235T、235H、235Y、235I、235V、235F、236E、239D、239E、239N、239Q、239F、239T、239H、239Y、240I、240A、240T、240M、241W、241L、241Y、241E、241R、243W、243L 243Y、243R、243Q、244H、245A、247L、247V、247G、251F、252Y、254T、255L、256E、256M、262I、262A、262T、262E、263I、263A、263T、263M、264L、264I、264W、264T、264R、264F、264M、264Y、264E、265G、265N、265Q、265Y、265F、265V、265I、265L、265H、265T、266I、266A、266T、266M、267Q、267L、268E、269H、269Y、269F、269R、270E、280A、284M、292P、292L、296E、296Q、296D、296N、296S、296T、296L、296I、296H、269G、297S、297D、297E、298H、298I、298T、298F、299I、299L、299A、299S、299V、299H、299F、299E、305I、313F、316D、325Q、325L、325I、325D、325E、325A、325T、325V、325H、327G、327W、327N、327L、328S、328M、328D、328E、328N、328Q、328F、328I、328V、328T、328H、328A、329F、329H、329Q、330K、330G、330T、330C、330L、330Y、330V、330I、330F、330R、330H、331G、331A、331L、331M、331F、331W、331K、331Q、331E、331S、331V、331I、331C、331Y、331H、331R、33
1N、331D、331T、332D、332S、332W、332F、332E、332N、332Q、332T、332H、332Y、332A、339T、370E、370N、378D、392T、396L、416G、419H、421K、440Y及び434Wからなる群から選択される少なくとも1つの非天然のアミノ酸残基を含む。任意選択で、Fc領域は、当業者公知の追加及び/又は代替の非天然のアミノ酸残基を含みうる(例えば、米国特許第5,624,821号;6,277,375号;6,737,056号;PCT特許公報WO01/58957;WO02/06919;WO04/016750;WO04/029207;WO04/035752及びWO05/040217を参照)。
【０５４２】
ある例では、リガンド、抗体又は断片は、TOIに特異的に結合する1つ又は複数のヒト結合部位(例えば、PCSK9、LDL受容体、IL4Ra、IL6R、PD-L1、PD-1、PDGF-B、PDGFR-B、アンジオポエチン、BMP6、ヘモジュベリン、ヘプシジン、フェロポーチン、トランスフェリン、HFE、TMPRSS6、VEGFA、Nav1.8又はNav1.7)を含む。ある実施形態では、結合部位は、TOIに関するヒト抗体可変ドメイン又はヒト受容体(例えば、VEGFAに関するヒト受容体結合部位)を含むか、又はそれからなる。更に、リガンド、抗体又は断片は、任意選択で完全にヒトであってもよい(例えば、ヒト定常領域を含む、例えばヒトCL領域含有又は非含有のヒトFc領域)。ある例では、リガンドは、アフリバーセプト、アリロクマブ、サリルマブ又はデュピルマブである。完全にヒトのリガンドは、V及び/又はC領域が本明細書での記載の通りにヒト遺伝子型及び/又は表現型に合わせてテーラーメイドされた本発明の状況で使用される場合、ヒト患者との適合性を最大化する。
【０５４３】
本明細書に記載される技術のいくつかの実施形態は、以下の番号付けされた段落のいずれかに従って定義することができる:
1.ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法であって、
a.ヒトに抗TOIリガンドを投与して、ヒトにおけるTOIバリアントを標的化し、前記疾患又は状態を処置又は防止する工程を含み、前記ヒトにおけるTOIは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされ、及び/又は前記ヒトにおけるTOIは、50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされ、
b.工程(a)の前に、前記ヒトは、前記ヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、若しくは遺伝子型判定されるか、又は前記TOIバリアントについて陽性であると表現型判定される、方法。
2.工程(a)の前に、リガンドが、前記TOIバリアントに結合可能であると決定されたか、又は決定される、段落1に記載の方法。
3.ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法であって、
a.ヒトに抗TOIリガンドを投与して、ヒトにおけるTOIバリアントを標的化し、前記疾患又は状態を処置又は防止する工程を含み、前記ヒトにおけるTOIは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされ、及び/又は前記ヒトにおけるTOIは、50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされ、
b.工程(a)の前に、リガンドが、前記TOIバリアントに結合可能であると決定されたか、又は決定される、方法。
4.前記ヒトのゲノムが、前記TOIバリアントをコードするヌクレオチド配列を含み;工程(a)の前に、前記ヌクレオチド配列が、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有すると決定されたか、又は決定される、段落3に記載の方法。
5.工程(a)の前に、前記ヒトが、前記バリアントヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、段落3又は4に記載の方法。
6.ヒトが、工程(a)の前に、前記TOIバリアントについて陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、前記段落のいずれかに記載の方法。
7.前記頻度が、10又は15%未満である、前記段落のいずれかに記載の方法。
8.リガンドが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってそれぞれコードされる2つ以上の異なるTOIバリアントに結合することが可能である、前記段落のいずれかに記載の方法。
9.ヒト中に異なる多型バリアントとして存在する目的とする標的(TOI)が媒介する疾患又は状態をヒトにおいて処置又は防止する方法であって、
a.ヒトに抗TOIリガンドを投与して、ヒトにおけるTOIバリアントを標的化し、前記疾患又は状態を処置又は防止する工程を含み、前記ヒトにおけるTOIは、50%より高い累積ヒト対立遺伝子頻度を有するか、及び/又は50%より高い総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされたバリアントであり、
b.工程(a)の前に、前記ヒトは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するバリアントヌクレオチド配列について陰性であると遺伝子型判定されたか、若しくは遺伝子型判定されるか;又は50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされたTOIバリアントについて陰性であると表現型判定される、方法。
10.工程(a)の前に、ヒトが、最も頻度の高いTOIバリアントについて陽性であると表現型判定されたか、若しくは表現型判定されるか、又はそのヌクレオチド配列について遺伝子型判定される、段落9に記載の方法。
11.工程(a)の前に、リガンドが、最も頻度の高いTOIバリアントに結合可能であると決定されたか、又は決定される、段落9又は10に記載の方法。
12.工程(a)の前に、リガンドが、工程(b)に挙げられる前記TOIバリアントを実質的に中和又は阻害することができないと決定されたか、又は決定される、段落9、10又は11に記載の方法。
13.リガンドが、最も頻度の高いTOIバリアントに結合可能である、段落9から12のいずれか1つに記載の方法。
14.リガンドが、50%より高い累積ヒト対立遺伝子頻度を有するヌクレオチド配列によってそれぞれコードされる2つ以上の異なるTOIバリアントに結合することが可能である、段落9から13のいずれか1つに記載の方法。
15.工程(a)に挙げられる前記バリアントヌクレオチド配列が、少なくとも2種の異なるヒト民族集団中に存在すると決定されたか、又は決定される、前記段落のいずれかに記載の方法。
16.前記ヒトの頻度が、少なくとも15種の異なるヒト民族集団からサンプリングされ、少なくとも1000種の配列を含む天然に存在する配列のデータベース中での頻度である、前記段落のいずれかに記載の方法。
17.ヒトにおけるTOIが媒介する疾患又は状態を処置及び/又は防止する方法で使用するための抗ヒトTOIリガンドであって、TOIは、ヒト中に異なる多型バリアントとして存在し、前記ヒトのゲノムは、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列を含み、この方法は、ヒトにリガンドを投与する工程を含む、リガンド。
18.リガンドが、前記ヌクレオチド配列によってコードされたヒトTOIに結合可能であると決定されたか、又は決定される、段落17に記載のリガンド。
19.リガンドを使用してヒトにおけるTOIを標的化してTOIが媒介する疾患又は状態を処置及び/又は防止する工程を含む方法で使用するための、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むヒトTOIに結合するリガンドであって、この方法は、ヒトにリガンドを投与する工程を含む、リガンド。
20.ヒトが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有する前記TOIヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、段落17から19のいずれか1つに記載のリガンド。
ヒトが、50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する前記TOIヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、段落17から19のいずれか1つに記載のリガンド。
21.ヒトが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされたTOIについて陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、段落17から20のいずれか1つに記載のリガンド。
22.ヒトが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列についてヘテロ接合性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定され;任意選択で、ヒトが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有するTOIヌクレオチド配列、並びに50%より高い累積ヒト対立遺伝子頻度を有する及び/又は50%より高い総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列を含むと遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、段落17から21のいずれか1つに記載のリガンド。
23.ヒトのゲノムが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列についてホモ接合性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、段落17から22のいずれか1つに記載のリガンド。
24.リガンドが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含み;任意選択でこのような結合が可能であると決定されたか、又は決定される、ヒトTOIに結合する抗体結合部位を含む、段落17から23のいずれか1つに記載のリガンド。
25.リガンドが、抗体又は抗体断片である、段落24に記載のリガンド。
26.リガンドが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/若しくは50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列又はそのRNA転写物に特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含み;及び/又はリガンドが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドを含むヌクレオチド配列を含むか又はそのアンチセンス配列である、段落17から23のいずれか1つに記載のリガンド。
27.前記ヒトのゲノムが、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度を有するヌクレオチド配列を含み、この配列は、少なくとも2種の異なる民族集団で見出される、段落17から26のいずれか1つに記載のリガンド。
28.前記段落のいずれかに挙げられるTOIが媒介する状態又は疾患を処置又は防止するための医薬組成物又はキットであって、段落17から27のいずれか1つに記載のリガンドを含み;任意選択で、前記ヒトにおける疾患又は状態の処置及び/又は防止に使用するためのラベル又は説明書と組み合わされ;任意選択で、このラベル又は説明書は、販売許可番号を含む(例えば、FDA又はEMAの許可番号);任意選択で、このキットは、このリガンドを含む注射用ペン又はIV容器を含む、組成物又はキット。
29.抗ヒトTOI抗体結合部位を生成する方法であって、複数の抗TOI抗体結合部位を得る工程と、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むTOIへの、又は最も高い累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は最も高い総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIをコードするヌクレオチド配列によってコードされた対応する配列からのアミノ酸バリエーションを含むそのペプチドへの結合に関して抗体結合部位をスクリーニングする工程と、スクリーニングする工程で結合する抗体結合部位を単離する工程とを含む、方法。
30.抗ヒトTOI抗体を生成する方法であって、非ヒト脊椎動物(例えば、マウス又はラット)を、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むTOI、又は最も高い累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は最も高い総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIをコードするヌクレオチド配列によってコードされた対応する配列からのアミノ酸バリエーションを含むそのペプチドで免疫化する工程と、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むTOIに結合する抗体を単離する工程と、任意選択で、単離された抗体のTOI結合断片又は誘導体を生成する工程とを含む、方法。
31.抗体、断片、誘導体又は結合部位をコードする核酸を得る工程と、任意選択でこの核酸を発現ベクターに挿入する工程とを含む、段落29又は30に記載の方法。
32.ヒトをTOI遺伝子型判定するためのキットであって、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する選択されたTOIヌクレオチド配列又はそのRNA転写物に特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む核酸を含み;及び/又は核酸が、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドを含むヌクレオチド配列を含むか又はそのアンチセンス配列である、キット。
33.ヒトをTOI遺伝子型判定又は表現型判定するためのキットであって、段落17から27のいずれか1つに記載のリガンド、又は段落29から31のいずれか1つに記載の方法によって生成された抗体、断片若しくは誘導体を含む、キット。
34.そのゲノムが50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列を含むヒトにおけるTOIが媒介する疾患又は状態を処置及び/又は防止するための医薬の製造における、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むヒトTOIに結合する抗TOIリガンドの使用。
35.ヒトにおいてTOIを標的化してTOIが媒介する疾患又は状態を処置及び/又は防止するための医薬の製造における、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むヒトTOIに結合する抗TOIリガンドの使用。
36.ヒトにおけるTOIが媒介する疾患又は状態を処置及び/又は防止するためのTOIを標的化する方法であって、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有する選択されたTOIヌクレオチド配列を含むヒトに抗TOIリガンドを投与する工程を含み、それによって前記ヌクレオチド配列によってコードされたTOIが標的化される、方法。
37.前記リガンドを用いてアミノ酸配列を含むヒトTOIを標的化して、前記ヒトにおける前記疾患又は状態を処置及び/又は防止する工程を含み、前記アミノ酸配列は、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされる、段落36に記載の方法。
38.ヒトの核酸試料をTOI遺伝子型判定する方法であって、試料中で、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列の存在を同定する工程を含む、方法。
39.ヒトのタンパク質試料をTOI型判定する方法であって、試料中で、50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたTOIアミノ酸配列の存在を同定する工程を含む、方法。
40.ヒトから血清、血液、糞、毛髪、尿又は唾液の試料を得る工程を含み、それによって前記配列を同定する工程で使用するための核酸又はタンパク質試料が得られる、段落38又は39に記載の方法。
41.段落17から27のいずれか1つに記載のリガンドを使用して、前記同定する工程を行うことを含む、段落38から40のいずれか1つに記載の方法。
42.50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含むヒトTOIに結合可能であるリガンドと、段落38又は39に記載の方法を行うための説明書とを含む診断キット。
43.50%未満の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は50%未満の総ヒト遺伝子型頻度を有するTOIヌクレオチド配列又はそのRNA転写物に特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む核酸プローブと、段落38又は39に記載の方法を行うための説明書とを含む診断キット。
44.TOIが、1から10%の累積ヒト対立遺伝子頻度及び/又は1から約15%又は1から15%の総ヒト遺伝子型頻度を有するヌクレオチド配列によってコードされる、前記段落のいずれかに記載の方法、リガンド、組成物、キット又は使用。
45.TOIが、Table 5(表6)から選択されるヒトTOIであり;任意選択で、Table 5(表6)で詳述された対応する疾患又は状態を処置及び/又は防止するためである、前記段落のいずれかに記載の方法、リガンド、組成物、キット又は使用。
46.(i)リガンド(例えば、抗体又は断片)が、
(e)ヒトV領域ヌクレオチド配列によってコードされる可変ドメインであって、Vヌクレオチド配列は、ヒトVH、D及びJH遺伝子セグメント又はヒトVL及びJL遺伝子セグメントの組換え由来の、可変ドメイン;又は
(f)C領域遺伝子セグメントによってコードされた定常領域ドメイン
を含み、(a)の前記遺伝子セグメント又は(b)の前記C領域遺伝子セグメントの第1の遺伝子セグメントが、第1のアミノ酸多型をコードする第1の一塩基多型(SNP)を含み;
(ii)前記ヒトのゲノムが、前記第1のSNPを含むか、又は前記ヒトは、(a')前記第1のアミノ酸多型を含む抗体可変ドメイン又は(b')前記第1のアミノ酸多型を含む抗体定常ドメインを発現する、前記段落のいずれかに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
47.前記ヒトの血液が、インビトロの結合アッセイで決定した場合、前記第1のアミノ酸多型を含むドメインに特異的に結合する抗体を実質的に含まない、段落46に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
48.前記アッセイを行うためにSPRが使用される、段落47に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
49.前記ヒトのゲノムが、前記第1の遺伝子セグメント[(a)が適用される場合]又は前記C領域遺伝子セグメント[(b)が適用される場合]を含む、段落46から48のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
50.(a)の前記セグメントの前記第1のセグメント若しくは第2のセグメント、又は(b)の前記C領域遺伝子セグメントが、第2のアミノ酸多型をコードする第2のSNPを含み;前記ヒトのゲノムが、前記第2のSNPを含むか、又は前記ヒトが、(a")前記第2のアミノ酸多型を含む抗体可変ドメイン又は(b")前記第1及び第2のアミノ酸多型を含む抗体定常領域ドメインを発現する、段落46から49のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
51.前記ヒトが、前記第1及び第2のアミノ酸多型を含む抗体可変ドメインを発現する、段落50に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
52.前記ゲノムの第1及び第2のSNPが、同じ抗体遺伝子セグメントに含まれる、段落50又は51に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
53.各SNPが、可変領域遺伝子セグメントのSNPである、段落46から52のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
54.各SNPが、定常領域遺伝子セグメントのSNPであり、例えば各SNPが、ガンマ-1定常領域遺伝子セグメントのSNP、又はガンマ-2定常領域遺伝子セグメントのSNP、又はガンマ-3定常領域遺伝子セグメントのSNP、又はガンマ-4定常領域遺伝子セグメントのSNPである、段落46から52のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
55.第1のSNPが、CH1、CH2、CH3又はCH4遺伝子セグメントのSNPであり、及び/又は第2のSNPが、CH1、CH2、CH3又はCH4遺伝子セグメントのSNPである、段落54に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
56.各SNPが、可変ドメインのSNP、例えば、VHドメインのSNP、又はVκドメインのSNP、又はVλのSNPである、段落46から53のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
57.(b)の前記定常領域ドメインが、抗体Fc領域に含まれる、段落46から56のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
58.リガンド(例えば、抗体又は断片)が、例えば、SPRによって決定した場合、1nM又はそれ未満(例えば、100又は10pM又はそれ未満)のKDで、本明細書で開示されたような1つ又は複数のヒトTOIバリアントに特異的に結合すると決定されている、段落46から57のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
59.リガンドが、ヒトV遺伝子セグメント及びヒトJ遺伝子セグメント(及び任意選択で、可変ドメインがVHドメインである場合、ヒトD遺伝子セグメント)の組換え由来のヒト抗体可変ドメインを含む抗体又は断片を含むか、又はそれからなり;ヒトのゲノムが、前記ヒトV遺伝子セグメントを含み、及び/又はヒトが、前記ヒトV遺伝子セグメント及びヒトJ遺伝子セグメント(及び任意選択でヒトD遺伝子セグメント)の組換え由来の抗体可変ドメインを含む抗体を発現する、前記段落のいずれかに記載の(例えば、段落46から58のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
60.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFc融合ヒトTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、第1の定常領域ヌクレオチド配列によってコードされたヒト重鎖定常ドメインを含み;ヒトのゲノムが、前記第1の定常領域ヌクレオチド配列に同一な重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒト定常ドメインを含む抗体を発現する、前記段落のいずれかに記載の(例えば、段落46から59のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
61.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFc融合ヒトTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、CH1ヌクレオチド配列によってコードされたヒトガンマ重鎖CH1ドメインを含み;ヒトのゲノムが、前記CH1ヌクレオチド配列に同一なガンマ重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒトガンマCH1ドメインを含む抗体を発現する、前記段落のいずれかに記載の(例えば、段落46から60のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
62.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFc融合ヒトTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、CH2ヌクレオチド配列によってコードされたヒトガンマ重鎖CH2ドメインを含み;ヒトのゲノムが、前記CH2ヌクレオチド配列に同一なガンマ重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒトガンマCH2ドメインを含む抗体を発現する、前記段落のいずれかに記載の(例えば、段落46から61のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
63.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFc融合ヒトTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、CH3ヌクレオチド配列によってコードされたヒトガンマ重鎖CH3ドメインを含み;ヒトのゲノムが、前記CH3ヌクレオチド配列に同一なガンマ重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒトガンマCH3ドメインを含む抗体を発現する、前記段落のいずれかに記載の(例えば、段落46から62のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
64.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFc融合ヒトTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、CH4ヌクレオチド配列によってコードされたヒトガンマ重鎖CH4ドメインを含み;ヒトのゲノムが、前記CH4ヌクレオチド配列に同一なガンマ重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒトガンマCH4ドメインを含む抗体を発現する、前記段落のいずれかに記載の(例えば、段落46から63のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
65.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFc融合ヒトTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、Fcヌクレオチド配列によってコードされたヒトガンマ重鎖Fc領域を含み;ヒトのゲノムが、前記Fcヌクレオチド配列に同一なガンマ重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含み、及び/又はヒトが、前記ヒトガンマFc領域を含む抗体を発現する、前記段落のいずれかに記載の(例えば、段落46から64のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
66.前記ヒトガンマ重鎖が、ヒトガンマ-1重鎖である、段落61から65のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
67.前記ヒトガンマ重鎖が、ヒトガンマ-2重鎖である、段落61から65のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
68.リガンドが、ヒトIGHG1*01ガンマ-1重鎖定常領域を含む、段落61から65のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
69.リガンドが、ヒトIGHG2*01ガンマ-1重鎖定常領域を含む、段落61から65のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
70.ヒトが、前記重鎖定常領域ヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、段落60から69のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
71.ヒトが、ヒトIGHG1*01ヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、段落68に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
72.ヒトが、ヒトIGHG2*01ヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、段落69に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
73.ヒトが、前記ガンマ重鎖定常ドメイン、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcについて陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、段落61から69のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
74.(i)条項23に従って、ヒトが、ヒトIGHG1*01ガンマ重鎖定常ドメイン、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcについて陽性であると表現型判定されたか、若しくは表現型判定されるか、又は(ii)条項24に従って、ヒトが、ヒトIGHG2*01ガンマ重鎖定常ドメイン、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcについて陽性であると表現型判定された、段落63に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
75.ヒトを、前記ガンマ重鎖定常領域ヌクレオチド配列について陽性、例えば、前記ガンマ重鎖定常ドメイン、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcヌクレオチド配列について陽性;前記ヒトIGHG1*01ガンマ重鎖定常領域、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcヌクレオチド配列について陽性;又は前記ヒトIGHG2*01ガンマ重鎖定常領域、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型判定する工程を含む、段落61から69及び71から74のいずれか1つに記載の方法又は使用。
76.ヒトを、前記ガンマ重鎖定常領域について陽性、例えば、前記ガンマ重鎖定常ドメイン、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcについて陽性;前記ヒトIGHG1*01ガンマ重鎖定常ドメイン、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcについて陽性;又は前記ヒトIGHG2*01ガンマ重鎖定常ドメイン、CH1、CH2、CH3、CH4又はFcについて陽性であると表現型判定する工程を含む、段落61から69及び71から75のいずれか1つに記載の方法又は使用。
77.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFcに融合したTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、配列番号42の204位に対応するAsp又は配列番号42の206位に対応するLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、ヒトのゲノムが、このようなAsp又はLeuをコードするガンマ-1重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、このようなAsp又はLeuを含むヒトガンマ-1定常領域を含む抗体を発現する、前記段落のいずれかに記載の(例えば、条項46から76のいずれか1つに記載の)リガンド、方法、使用、キット又は組成物。
78.リガンドが、配列番号42の204位に対応するAsp及び配列番号42の206位に対応するLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含む、段落77に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
79.ヒトのゲノムが、このようなAsp及びLeuをコードするガンマ-1重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、このようなAsp及びLeuを含むヒトガンマ-1定常領域を含む抗体を発現する、段落77又は78に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
80.リガンドが、ヒトIGHG1*01ガンマ-1重鎖定常領域、例えば、ヒトIGHG1*01によってコードされたFc、CH1、CH2及び/又はCH3ドメインを含む、段落77、78又は79のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
81.ヒトのゲノムが、ヒトIGHG1*01ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、ヒトIGHG1*01ヌクレオチド配列によってコードされたヒト定常ドメインを含む抗体を発現する、段落77から80のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
82.リガンドが、ヒトIGHG1*01によってコードされたヒンジ領域を含む、段落77から81のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
83.リガンドが、配列番号61を含む重鎖を含む抗体を含むか、又はそれからなる、段落77から82のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
84.ヒトが、欧州人血統に属する、段落77から83のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
85.ヒトが、前記Asp及び/又はLeuについて陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、段落77から84のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
86.ヒトが、ヒトIGHG1*01について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、段落77から85のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
87.ヒトが、ヒトIGHG1*01のCH3について陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、段落77から86のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
88.そのゲノムが前記Asp及び/又はLeuをコードするコドンを含むか;ヒトIGHG1*01を含むか;又はヒトIGHG1*01のCH3を含む前記ヒトを選択する工程を含む、段落77から87のいずれか1つに記載の方法又は使用。
89.その表現型が前記Asp及び/又はLeu;ヒトIGHG1*01領域;又はヒトIGHG1*01のCH3を含む前記ヒトを選択する工程を含む、段落77から88のいずれか1つに記載の方法又は使用。
90.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFcに融合したTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn、配列番号44の76位に対応するPhe、配列番号44の161位に対応するVal及び配列番号44の257位に対応するAlaからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み;ヒトのゲノムが、このような選択されたアミノ酸をコードするガンマ-2重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、このような選択されたアミノ酸を含むヒトガンマ-2定常領域を含む抗体を発現する、任意の前述の段落のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
91.リガンドが、(i)配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn、配列番号44の76位に対応するPhe、並びに任意選択で(ii)配列番号44の161位に対応するVal及び/又は配列番号44の257位に対応するAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み;ヒトのゲノムが、このような(i)のアミノ酸をコードするガンマ-2重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、このような(i)のアミノ酸を含むヒトガンマ-2定常領域を含む抗体を発現する、段落90のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
92.リガンドが、(i)配列番号44の161位に対応するVal及び配列番号44の257位に対応するAla、並びに任意選択で(ii)配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn及び配列番号44の76位に対応するPheからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み;ヒトのゲノムが、このような(i)のアミノ酸をコードするガンマ-2重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、このような(i)のアミノ酸を含むヒトガンマ-2定常領域を含む抗体を発現する、段落90又は91のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
93.リガンドが、ヒトIGHG2*01ガンマ-2重鎖定常領域、例えば、ヒトIGHG2*01によってコードされたFc、CH1、CH2及び/又はCH3ドメインを含む、段落90〜92のいずれか1つのリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
94.ヒトのゲノムが、ヒトIGHG2*01ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、ヒトIGHG2*01ヌクレオチド配列によってコードされたヒト定常ドメインを含む抗体を発現する、段落90〜93のいずれか1つのリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
95.リガンドが、ヒトIGHG2*01によってコードされたヒンジ領域を含む、段落90〜94のいずれか1つのリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
96.リガンドが、配列番号63又は65を含む重鎖を含む抗体を含むか、又はそれからなる、段落90〜95のいずれか1つのリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
97.ヒトが、欧州人、アフリカ系アメリカ人、又は欧州系アメリカ人血統に属する、段落90〜96のいずれか1つのリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
98.ヒトが、前記Pro、Asn、Phe、Val及びAlaの1つ、1つより多く、又は全てについて陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、段落90〜97のいずれか1つのリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
99.ヒトが、ヒトIGHG2*01について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、段落90〜98のいずれか1つのリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
100.ヒトが、ヒトIGHG2*01のCH1について陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、段落90〜99のいずれか1つのリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
101.ヒトが、ヒトIGHG2*01のCH2について陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、段落90〜100のいずれか1つのリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
102.ヒトが、ヒトIGHG2*01のCH3について陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、段落90〜101のいずれか1つのリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
103.そのゲノムが前記Pro、Asn、Phe、Val及びAlaの1つ、1つより多く、又は全てをコードするコドンを含むか;ヒトIGHG2*01を含むか;又はヒトIGHG2*01のCH1、CH2及び/又はCH3を含む前記ヒトを選択する工程を含む、段落90〜102のいずれか1つに記載の方法又は使用。
104.その表現型が前記Pro、Asn、Phe、Val及びAlaの1つ、1つより多く、又は全て;ヒトIGHG2*01領域;又はヒトIGHG2*01のCH1、CH2及び/又はCH3を含む前記ヒトを選択する工程を含む、段落90〜103のいずれか1つの方法又は使用。
105.ヒトが、このようなPro、Asn、Phe、Val及びAlaを含むヒトガンマ-2定常領域を含む抗体を発現する、段落90〜104のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
106.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFcに融合したTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、配列番号50の84位に対応するVal又は配列番号50の87位に対応するCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含み;ヒトのゲノムが、このようなVal又はCysをコードするカッパ軽鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、このようなVal又はCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含む抗体を発現する、前記段落のいずれかに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
107.リガンドが、配列番号50の84位に対応するVal及び配列番号50の87位に対応するCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含む、段落106に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
108.ヒトのゲノムが、このようなVal及びCysをコードするカッパ軽鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトが、このようなVal及びCysを含むヒトカッパ定常領域を含む抗体を発現する、段落106又は107に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
109.抗体又は断片が、ヒトIGKC*01カッパ軽鎖定常領域を含む、段落106から108のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
110.リガンドが、配列番号62又は66を含む軽鎖を含む抗体を含むか、又はそれからなる、段落106から109のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
111.リガンドが、ヒトVκ遺伝子セグメント及びヒトJκ遺伝子セグメントの組換え由来の軽鎖可変ドメインを含む抗体を含むか、又はそれからなり、Jκ遺伝子セグメントが、IGKJ2*01(配列番号57)である、段落106から110のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
112.ヒトが、前記Val及び/又はCysについて陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、段落106から111のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
113.ヒトが、ヒトIGKC*01について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、段落106から112のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
114.ヒトが、ヒトIGKC*01ドメインについて陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、段落106から113のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
115.そのゲノムが前記Val及び/又はCysをコードするコドンを含むか;又はヒトIGKC*01を含む前記ヒトを選択する工程を含む、段落106から114のいずれか1つに記載の方法又は使用。
116.その表現型がこのようなVal及び/又はCysを含むか;又はヒトIGKC*01ドメインを含む前記ヒトを選択する工程を含む、段落106から115のいずれか1つに記載の方法又は使用。
117.ヒトが、このようなVal及びCysを含むヒトカッパ定常ドメインを含む抗体を発現し、例えば、ヒトIGKC*01定常ドメインを発現する、段落106から116のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物、。
118.リガンド(例えば、抗体又は断片又はFcに融合したTOI受容体を含むか、又はそれからなる)が、ヒトIGLC2*01軽鎖定常領域を含み;ヒトのゲノムが、ヒトIGLC2*01ヌクレオチド配列を含むか、又はヒトは、ヒト軽鎖IGLC2*01定常領域を含む抗体を発現する、前記段落のいずれかに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
119.抗体が、配列番号64を含む軽鎖を含む、段落118に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
120.ヒトが、ヒトIGLC2*01について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、段落118又は119に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
121.ヒトが、ヒトIGLC2*01ドメインについて陽性であると表現型判定されたか、又は表現型判定される、段落118から120のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
122.そのゲノムがヒトIGLC2*01を含む前記ヒトを選択する工程を含む、段落118から212のいずれか1つに記載の方法又は使用。
123.その表現型がヒトIGLC2*01ドメインを含む前記ヒトを選択する工程を含む、条項73から77のいずれか1つに記載の方法又は使用。
124.ヒトが、ヒトラムダIGLC2*01定常ドメインを含む抗体を発現する、段落108から123のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
125.リガンドが、ヒトVH遺伝子セグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJH遺伝子セグメントの組換え由来のVHドメインを含む抗体又は断片を含むか、又はそれからなり、VH遺伝子セグメントが、以下からなる群から選択される(i)IGHV1-18*01及びヒトのゲノムは、ヒトIGHV1-18*01ヌクレオチド配列を含むか、若しくはヒトは、ヒトIGHV1-18*01の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現するか;又は(ii)IGVH1-46*01及びヒトのゲノムは、ヒトIGHV1-46*01ヌクレオチド配列を含むか、若しくはヒトは、ヒトIGHV1-46*01の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現する、前記段落のいずれかに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
126.抗体又は断片が、ヒトIGHG2*01によってコードされたCH1ドメイン、CH2ドメイン、CH3ドメイン、ヒンジ又はFcの1つのより多く又は全てを含む、段落125に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
127.抗体又は断片が、配列番号63又は65を含む重鎖を含む、段落125又は126に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
128.ヒトが、選択された前記VH遺伝子セグメントについて陽性、ヒトIGHV1-18*01又はIGVH1-46*01について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、段落125から127のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
129.ヒトを、選択された前記VH遺伝子セグメントについて陽性、例えば、ヒトIGHV1-18*01又はIGVH1-46*01について陽性であると遺伝子型判定する工程を含む、段落125から128のいずれかに記載の方法又は使用。
130.リガンドが、ヒトVL遺伝子セグメント及びヒトJL遺伝子セグメントの組換え由来のVLドメインを含む抗体又は断片を含むか、又はそれからなり、VL遺伝子セグメントが、以下からなる群から選択される(i)IGKV4-1*01及びヒトのゲノムは、ヒトIGKV4-1*01ヌクレオチド配列を含むか、若しくはヒトは、ヒトIGKV4-1*01の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現するか;(ii)IGLV2-14*01及びヒトのゲノムは、ヒトIGLV2-14*01ヌクレオチド配列を含むか、若しくはヒトは、ヒトIGLV2-14*01の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現するか;又は(iii)IGKV1-13*02及びヒトのゲノムは、ヒトIGKV1-13*02ヌクレオチド配列を含むか、若しくはヒトは、ヒトIGKV1-13*02の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現する、前記段落のいずれかに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
131.抗体が、配列番号62、64又は66を含む軽鎖を含む、段落130に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
132.抗体又は断片が、ヒトVκ遺伝子セグメント及びヒトJκ遺伝子セグメントの組換え由来の軽鎖可変ドメインを含み、Jκ遺伝子セグメントが、IGKJ2*01(配列番号57)であり;(i)又は(iii)が適用される、段落130又は131に記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
133.ヒトが、選択された前記VL遺伝子セグメントについて陽性、例えば、ヒトIGKV4-1*01、IGLV2-14*01又はIGKV1-13*02について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、段落130から132のいずれか1つに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
134.ヒトを、選択された前記VL遺伝子セグメントについて陽性であると遺伝子型判定する工程と、例えば、ヒトを、ヒトIGKV4-1*01、IGLV2-14*01又はIGKV1-13*02について陽性であると遺伝子型判定する工程とを含む、段落133に記載の方法又は使用。
135.リガンド(例えば、抗体又は断片)が、SPRによって決定した場合、1nM又はそれ未満(例えば、100、10又は1pM又はそれ未満)の解離定数(Kd)で、前記ヒトTOIに結合する、前記段落のいずれかに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
136.TOIが、ヒトPCSK9又はヒトIL-6Rである、前記段落のいずれかに記載のリガンド、方法、使用、キット又は組成物。
【０５４４】
本発明の文章全体にわたり、例えば本明細書に記載の特許請求の範囲において、配列に関する位置番号は、本明細書に記載の表で詳述された位置、例えばTable 10(表11)又はTable 17(表18)に挙げられているような位置を指す。
【実施例】
【０５４５】
(実施例1)
まれなPCSK9バリアント
前駆タンパク質転換酵素スブチリシンケキシン9型(PCSK9)は、低密度リポタンパク質受容体(LDLR)タンパク質のレベルの調節に関与するセリンプロテアーゼである(Hortonら、2007;Seidah及びPrat、2007)。インビトロ実験によって、HepG2細胞へのPCSK9の追加は、細胞表面LDLRのレベルを下げることが示された(Benjannetら、2004;Lagaceら、2006;Maxwellら、2005;Parkら、2004)。マウスを用いた実験によって、PCSK9タンパク質レベルの増大は、肝臓でのLDLRタンパク質のレベルを低下することが示された(Benjannetら、2004;Lagaceら、2006;Maxwellら、2005;Parkら、2004)が、PCSK9ノックアウトマウスは、肝臓でのLDLRのレベルを増大した(Rashidら、2005)。更に、血漿LDLのレベルの増大又は低下のいずれかを生じる種々のヒトPCSK9突然変異が特定された(Kotowskiら、2006;Zhaoら、2006)。PCSK9は、LDLRタンパク質と直接相互作用し、LDLRとともにエンドサイトーシスされ、エンドソーム経路全体にわたってLDLRと同時免疫蛍光されることが示されている(Lagaceら、2006)。
【０５４６】
PCSK9は、セリンプロテアーゼのスブチリシン(S8)ファミリーにおけるプロホルモン-前駆タンパク質転換酵素である(Seidahら、2003)。ヒトは、S8AとS8Bサブファミリーとの間で分割されうる9つのプロホルモン-前駆タンパク質転換酵素を有する(Rawlingsら、2006)。フリン、PC1/PC3、PC2、PACE4、PC4、PC5/PC6及びPC7/PC8/LPC/SPC7は、サブファミリーS8Bに分類される。マウスのフリン及びPCI由来の異なるドメインの結晶構造及びNMR構造によって、スブチリシン様プロ-及び触媒性ドメイン、並びに触媒性ドメインに対してすぐC末端のPドメインが明らかになる(Henrichら、2003;Tangreaら、2002)。このサブファミリー内のアミノ酸配列類似性に基づいて、7つ全てのメンバーが、同様の構造を有すると推測される(Henrichら、2005)。SKI-l/SlP及びPCSK9は、サブファミリーS8Aに分類される。これらのタンパク質との配列比較によってまた、スブチリシン様のプロ-及び触媒性ドメインの存在が示唆される(Sakaiら、1998;Seidahら、2003;Seidahら、1999)。これらのタンパク質では、触媒性ドメインに対するアミノ酸配列C末端は、更に可変であって、Pドメインの存在は示唆されない。
【０５４７】
プロホルモン-前駆タンパク質転換酵素は、チモーゲンとして発現され、それらは、多段階の過程を通じて成熟する。このプロセスにおけるプロドメインの機能は2倍である。このプロドメインはまず、シャペロンとして機能し、触媒性ドメインの適切な折り畳みに必要である(Ikemuraら、1987)。一旦、触媒性ドメインが折り畳まれれば、自己触媒作用が、プロドメインと触媒性ドメインとの間で生じる。この最初の切断反応後、プロドメインは、触媒性ドメインに結合したまま残り、ここでプロドメインは、次に、触媒性活性の阻害剤として機能する(Fuら、2000)。条件が正しい場合、成熟は、プロドメイン内の部位で第2の自己触媒性事象とともに進行する(Andersonら、1997)。この第2の切断事象がプロドメイン及び触媒性ドメインの解離を生じた後、活性なプロテアーゼが生じる。
【０５４８】
PCSK9チモーゲンの自己触媒作用はGlnl52とSerl53との間で生じ(VFAQ|SIP(配列番号116))(Naureckieneら、2003)、細胞からのその分泌に必要であることが示された(Seidahら、2003)。PCSK9のプロドメイン内の部位では第2の自己触媒性の事象は観察されなかった。精製されたPCSK9は、非還元性SDS-PAGEによって分離されうる2つの種(17kdのプロドメイン、及び65kdの触媒性プラスC末端ドメイン)からできている。PCSK9は、その阻害性のプロドメインなしでは単離されず、PCSK9の触媒性活性の測定は、可変性であった(Naureckieneら、2003;Seidahら、2003)。
【０５４９】
特定の実施形態では、PCSK9ポリペプチドは、末端残基、例えば、限定するものではないが、リーダー配列残基、標的化残基、アミノ末端メチオニン残基、リジン残基、タグ残基及び/又は融合タンパク質残基を含む。「PCSK9」はまた、FH3、NARC1、HCHOLA3、前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型、及び神経性アポトーシス調節性転換酵素1とも呼ばれた。PCSK9遺伝子は、分泌性サブチラーゼファミリーのプロテイナーゼKサブファミリーに属する前駆タンパク質転換酵素タンパク質をコードする。「PCSK9」という用語は、前駆タンパク質及び前駆タンパク質の自己触媒作用後に生成される生成物の両方を意味する。自己触媒作用された生成物のみを指している場合(例えば、抗原結合性タンパク質又は切断されたPCSK9に結合するリガンドについて)、タンパク質は、「成熟」、「切断された」、「プロセシングされた」又は「活性な」PCSK9を指す場合がある。不活性型のみを指している場合、タンパク質は、「不活性な」、「前駆型の」、又は「未プロセシングの」形態のPCSK9と呼ぶことができる。PCSK9という用語はまた、PCSK9アミノ酸配列、例えば、グリコシル化されたPCSK9配列、PCSK9配列(それからそのシグナル配列が切断されている)、PCSK9配列(それから、そのプロドメインが触媒性ドメインから切断されているが、触媒性ドメインと隔てられてはいない)の翻訳後修飾を組み込むPCSK9分子も包含する(例えば、その全体が参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第20120093818A1号の図1A及び図1Bを参照のこと)。
【０５５０】
本発明は、本明細書に記載のような抗PCSK9リガンド;及びPCSK9-結合又は標的化リガンドを提供する。このリガンドは種々の有用性を有する。いくつかのリガンドは、例えば、特異的な結合アッセイにおいて、ヒトを遺伝子型判定又は表現型判定するため、PCSK9の親和性精製、具体的には、ヒトCSK9又はそのリガンドにおいて、及びスクリーニングアッセイにおいて、PCSK9活性の他のアンタゴニストを特定するために、有用である。本発明のいくつかのリガンドは、LDLRに対するPCSK9の結合を阻害するか、又はPCSK9媒介性の活性を阻害するのに有用である。
【０５５１】
抗PCSK9リガンド(例えば、抗体及びアンチセンスRNA)は、通常存在する形態である、いわゆる「野性型」ヒトPCSK9を標的化し、中和することに基づいて開発された(例えば、その各々、その全体が参照により本明細書に援用される、米国特許出願公開第20120093818A1号及び米国特許出願公開第20110065902A1号を参照のこと)。このような治療は、この形態のヒトPCSK9を保有するヒト患者に有用であるが、本発明者は、ヒト集団の中でPCSK9の形態の、かなりまれだが、やはり天然に存在する形態を標的化する可能性を検討することが有用であるとみなした。この方法で、本発明者は、PCSK9活性で媒介されるか、又はそれと関連する疾患又は状態に対して妥当なヒトの処置、予防及び診断のために有用な標的として(タンパク質又は核酸レベルで)機能しうるまれなヒトPCSK9型の自然な存在及び分布についての洞察に到達した。これによって、一般的なPCSK9の遺伝子又はタンパク質を欠くヒトにおけるテーラーメイド治療、予防及び診断が特に提供される(すなわち、抗体を生成するために米国特許出願公開第20120093818A1号及び米国特許出願公開第20110065902A1号に用いられるa型又はa'型)。
【０５５２】
当業者であれば、SNP又はアミノ酸のバリエーションへ翻訳する他の変化が、標的とすべきヒト標的の活性及び/又は高次構造における可変性を生じ得ることは分かるであろう。これによって、タンパク質及びヌクレオチドの可変性の遺伝子型判定及び知識を、患者の医療及び診断をより有効にテーラーメイドするのに用いられる個人化医療についての関心が大きくなった。従って、本発明は、更にまれなPCSK9多型バリアント型に特異的に向けられたテーラーメイド医薬品及び試験を提供する。このような形態又は「対立遺伝子」(ヌクレオチドレベルで)は、本発明者によって決定される多くの例では、対応する共通型のヌクレオチド及びアミノ酸配列から、ヌクレオチドレベル及びアミノ酸レベルで多数の変化を含み、すなわち、ヒトでのタンパク質標的の多数の対応する変化に翻訳するヌクレオチドレベルでの多数の非同義変化が存在する。
【０５５３】
更に、本発明者は、驚くべきことに、まれな天然型は、多数の且つ民族的に多様なヒト集団において、及び通常は代表的な民族集団について多くのヒトの例とともに示されているにもかかわらず、ヒトには共通型よりもかなり低頻度で存在することに気付いた。従って、本発明者は、このようなまれな型を標的化することは、多くのヒト民族集団にわたって有効な処置、予防又は診断を提供することに気付き、これによって本発明の有用性が拡大した。
【０５５４】
この認識を考慮すれば、本発明者は、PCSK9が媒介又は関連する疾患又は状態の療法及び/又は予防のための、ヒト患者に投与するための抗PCSK9リガンドの選択をガイドするという観点で、本発明の重大な産業的及び医学的適用があることを理解した。この方式で、患者は、患者の遺伝学的又は表現型の構成によって決定される必要性に応じてテーラーメイドされた薬物及びリガンドを受ける。それと同調して、本発明は、このような処置に関連する患者の遺伝子型判定及び/又は表現型判定を提供し、それによって薬物を患者に適切に適合させることを可能にする。これは、医学的効能の機会を増加させ、患者に適合しない薬物又はリガンドを使用した劣った処置(例えば、乏しい効能及び/又は副作用)の見込みを低減し、医薬品の処方ミス及び浪費を回避する。
【０５５５】
この考えの発展では、本発明者は、以下の基準に基づいてヒトPCSK9バリアントのあるセットを決定することを決め、これらは、ヒト集団における、テーラーメイドの必要性に対して有用な薬物及び診断を提供することを本発明者が実現する基準である。本発明者は、4つの以下の基準のうち少なくとも3つを有するバリアントを選択した:
-  1〜10%の範囲の累積ヒト対立遺伝子頻度を有するPCSK9バリアント;
-  1〜約15%の範囲の総ヒト遺伝子型頻度を有するPCSK9バリアント;
-  多くの異なるヒト民族集団で見出されるPCSK9バリアント[当技術分野で許容される標準である、1000ゲノムプロジェクトの標準カテゴリー化を用いる;下のTable 4(表5)を参照のこと];並びに
-  このような多くの異なる民族集団にわたって分布する多くの個体で見出されるPCSK9バリアント
【０５５６】
これらの基準に基づいて、本発明者は、下のTable 1(表1)に列挙されるバリアントを特定した(a型を除く)。
【０５５７】
本発明者の選択には、検討として、標的タンパク質中のアミノ酸残基を変更しないサイレントなバリエーションとは対照的に、対応するPCSK9型においてアミノ酸バリエーションを生じたヌクレオチドバリエーション(すなわち、非同義的バリエーション)の選択を含んだ。
【０５５８】
【表１Ａ】
0006720079.tif 000002
【０５５９】
【表１Ｂ】
0006720079.tif 000003
【０５６０】
【表１Ｃ】
0006720079.tif 000004
【０５６１】
【表１Ｄ】
0006720079.tif 000005
【０５６２】
【表２Ａ】
0006720079.tif 000006
【０５６３】
【表２Ｂ】
0006720079.tif 000007
【０５６４】
【表２Ｃ】
0006720079.tif 000008
【０５６５】
【表２Ｄ】
0006720079.tif 000009
【０５６６】
バリアント対立遺伝子ヌクレオチド配列
従って、
(i)対立遺伝子fのヌクレオチド配列は、配列番号28と、この対立遺伝子fのヌクレオチド配列が配列番号28において「I474V」と表示される位置でATCコドンの代わりにGTCコドンを含む以外は同一である。
(ii)対立遺伝子cのヌクレオチド配列は、配列番号28と、この対立遺伝子cのヌクレオチド配列が配列番号28において「E670G」と表示される位置でGAGコドンの代わりにGGGコドンを含む以外は同一である。
(iii)対立遺伝子rのヌクレオチド配列は、配列番号28と、この対立遺伝子rのヌクレオチド配列が配列番号28において「I474V」と表示される位置でATCコドンの代わりにGTCコドンを含み;配列番号28において「E670G」と表示される位置でGAGコドンの代わりにGGGコドンを含む以外は同一である。
(iv)対立遺伝子pのヌクレオチド配列は、配列番号28と、この対立遺伝子pのヌクレオチド配列が配列番号28において「A53V」と表示される位置でGCCコドンの代わりにGTCコドンを含み;配列番号28において「I474V」と表示される位置でATCコドンの代わりにGTCコドンを含む以外は同一である。
(v)対立遺伝子mのヌクレオチド配列は、配列番号28と、この対立遺伝子mのヌクレオチド配列が配列番号28において「A443T」と表示される位置でGCCコドンの代わりにACCコドンを含む以外は同一である。
(vi)対立遺伝子eのヌクレオチド配列は、配列番号28と、この対立遺伝子eのヌクレオチド配列が配列番号28において「N425S」と表示される位置でAATコドンの代わりにAGTコドンを含み;配列番号28において「I474V」と表示される位置でATCコドンの代わりにGTCコドンを含む以外は同一である。
(vii)対立遺伝子hのヌクレオチド配列は、配列番号28と、この対立遺伝子hのヌクレオチド配列が配列番号28において「A443T」と表示される位置でGCCコドンの代わりにACCコドンを含み;且つ配列番号28において「Q619P」と表示される位置でCAGコドンの代わりにCCGコドンを含む以外は同一である。
(viii)対立遺伝子ajのヌクレオチド配列は、配列番号28と、この対立遺伝子ajのヌクレオチド配列が配列番号28において「R46L」と表示される位置でCGTコドンの代わりにCTTコドンを含み;且つ配列番号28において「I474V」と表示される位置でATCコドンの代わりにGTCコドンを含む以外は同一である。
(ix)対立遺伝子qのヌクレオチド配列は、配列番号28と、この対立遺伝子qのヌクレオチド配列が配列番号28において「A53V」と表示される位置でGCCコドンの代わりにGTCコドンを含み;且つ配列番号28において「E670G」と表示される位置でGAGコドンの代わりにGGGコドンを含む以外は同一である。
【０５６７】
バリアント前駆型アミノ酸配列
(番号付けは、上記で挙げた配列番号1の通りである)
(A)f型のアミノ酸配列は、配列番号1のアミノ酸番号31から(且つこれを含む)アミノ酸番号692までのアミノ酸配列に対して、このf型のアミノ酸配列が474位でバリンを含む以外は同一である。
(B)c型のアミノ酸配列は、配列番号1のアミノ酸番号31から(且つこれを含む)アミノ酸番号692までのアミノ酸配列に対して、このc型のアミノ酸配列が670位でグリシンを含む以外は同一である。
(C)r型のアミノ酸配列は、配列番号1のアミノ酸番号31から(且つこれを含む)アミノ酸番号692までのアミノ酸配列に対して、このr型のアミノ酸配列が474位でバリン、及び670位でグリシンを含む以外は同一である。
(D)p型のアミノ酸配列は、配列番号1のアミノ酸番号31から(且つこれを含む)アミノ酸番号692までのアミノ酸配列に対して、このp型のアミノ酸配列が53位でバリン、及び474位でバリンを含む以外は同一である。
(E)m型のアミノ酸配列は、配列番号1のアミノ酸番号31から(且つこれを含む)アミノ酸番号692までのアミノ酸配列に対して、このm型のアミノ酸配列が443位でトレオニンを含む以外は同一である。
(F)e型のアミノ酸配列は、配列番号1のアミノ酸番号31から(且つこれを含む)アミノ酸番号692までのアミノ酸配列に対して、このe型のアミノ酸配列が425位でセリン、及び474位でバリンを含む以外は同一である。
(G)h型のアミノ酸配列は、配列番号1のアミノ酸番号31から(且つこれを含む)アミノ酸番号692までのアミノ酸配列に対して、このh型のアミノ酸配列が443位でトレオニン、及び619位でプロリンを含む以外は同一である。
(H)aj型のアミノ酸配列は、配列番号1のアミノ酸番号31から(且つこれを含む)アミノ酸番号692までのアミノ酸配列に対して、このaj型のアミノ酸配列が46位でロイシン、及び474位でバリンを含む以外は同一である。
(I)q型のアミノ酸配列は、配列番号1のアミノ酸番号31から(且つこれを含む)アミノ酸番号692までのアミノ酸配列に対して、このq型のアミノ酸配列が53位でバリン、及び670位でグリシンを含む以外は同一である。
【０５６８】
バリアント成熟型アミノ酸配列
(番号付けは、上記で挙げた配列番号1の通りである)
(A')f型のアミノ酸配列は、配列番号2に対して、このf型のアミノ酸配列が474位でバリンを含む以外は同一である。
(B')c型のアミノ酸配列は、配列番号2に対して、このc型のアミノ酸配列が670位でグリシンを含む以外は同一である。
(C')r型のアミノ酸配列は、配列番号2に対して、このr型のアミノ酸配列が474位でバリン、及び670位でグリシンを含む以外は同一である。
(D')p型のアミノ酸配列は、配列番号2に対して、このp型のアミノ酸配列が474位でバリンを含む以外は同一である。
(E')m型のアミノ酸配列は、配列番号2に対して、このm型のアミノ酸配列が443位でトレオニンを含む以外は同一である。
(F')e型のアミノ酸配列は、配列番号2に対して、このe型のアミノ酸配列が425位でセリン及び474位でバリンを含む以外は同一である。
(G')h型のアミノ酸配列は、配列番号2に対して、このh型のアミノ酸配列が443位でトレオニン、及び619位でプロリンを含む以外は同一である。
(H')aj型のアミノ酸配列は、配列番号2に対して、このaj型のアミノ酸配列が474位でバリンを含む以外は同一である。
(I')q型のアミノ酸配列は、配列番号2に対して、このq型のアミノ酸配列が670位でグリシンを含む以外は同一である。
【０５６９】
成熟型のpは、成熟型のf及びajと同一である。
【０５７０】
成熟型のcは、成熟型のqと同一である。
【０５７１】
さらなる配列分析及び3Dのインシリコモデリング(図1を参照のこと)によって、選択されたバリアントはまた、以下の選択基準を満たすことが明らかになった:-
-  バリアントアミノ酸残基(共通型のヒトPCSK9に対して)が、標的の成熟型(すなわち、プロドメインの外側)に見出されるPCSK9バリアント;及び
-  バリアントアミノ酸残基(共通型のヒトPCSK9に対して)が、標的上に表面露出されるPCSK9バリアント、これを本発明者は、標的のトポグラフィーを決定することに起因して、及び潜在的には、標的に対するリガンド結合がどのように、どこで生じるかに起因して決定した。
【０５７２】
図1からわかる通り、同定された425、443、474、619及び670位(本発明の別の選択されたバリアントで見出される)は全てが表面露出されており、プロドメインの外側である。バリアントの425及び443位は、触媒性ドメイン上に表面露出されるが、バリアント474、619及び670位は、C末端ドメイン上に表面露出される。
【０５７３】
第1の例では、本発明は、天然に存在するまれな天然のPCSK9対立遺伝子、遺伝子型及び表現型(まれな型のタンパク質)を有するヒトを処置する必要性に取り組む。これに関して、本発明は、以下の態様を提供する:
【０５７４】
第1の態様では:そのゲノムが配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むヒトにおけるPCSK9媒介性の疾患又は状態を処置及び/又は防止する方法であって、ヒトにこのリガンドを投与する工程を含む方法における使用のための抗ヒトPCSK9リガンド。
【０５７５】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号29〜35、及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号29〜32及び34〜37からなる群から選択されるか;又は配列番号:29〜32、34、35及び37からなる群から選択される。これらは、天然に存在する対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であり、46Lをコードせず、上記で設定された基準を満たす。これらの群は、LDL-Cの上昇に関連するバリアントを含む。
【０５７６】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号34であり、これは、LDL-Cの上昇に関連する425Sをコードする(Pisciottaら2006)。
【０５７７】
ある例では、冠動脈アテローム性動脈硬化症の重篤度のマーカーである670Gをコードする配列番号31及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列(Chenら2005)。
【０５７８】
ある例では、配列番号31、32、34、35、36及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号31、32、34、35及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列。これらは、対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であり、配列番号28由来の相違の天然に存在する組合せを有し(a型)、且つ上記に設定された基準を満たす。
【０５７９】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号29である。
【０５８０】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号30である。
【０５８１】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号31である。
【０５８２】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号32である。
【０５８３】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号33である。
【０５８４】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号34である。
【０５８５】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号35である。
【０５８６】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号36である。
【０５８７】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号37である。
【０５８８】
別の場合には、このヌクレオチド配列は、配列番号1中に突然変異R46L、A53V、N425S、A443T、I474V、Q619P及びE670Gを含むヒトPCSK9(例えば、突然変異I474、E670G、N425S又はQ619Pを含む)をコードし;例えば、PCSK9は、配列番号1中にI474Vを含み、且つ任意選択でこのヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えば、ここでこの方法は、脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、ヒトにおいてコレステロールを低下するか、又は低下したコレステロールを維持するためである);例えば、PCSK9は、配列番号1中にE670Gを含み、且つ任意選択でこのヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えば、ここでこの方法は、脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、ヒトにおいてコレステロールを低下するか、又は低下したコレステロールを維持するためである);例えば、PCSK9は、配列番号1中にQ619Pを含み、且つ任意選択でこのヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えば、ここでこの方法は、脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、ヒトにおいてコレステロールを低下するか、又は低下したコレステロールを維持するためである);例えば、PCSK9は、配列番号1中にN425Sを含み、且つ任意選択でこのヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えば、ここでこの方法は、脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、ヒトにおいてコレステロールを低下するか、又は低下したコレステロールを維持するためである);例えば、PCSK9は、配列番号1中にR46Lを含み、且つ任意選択でこのヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えば、ここでこの方法は、脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、ヒトにおいてコレステロールを増大するためである);例えば、PCSK9は、配列番号1中にA53Vを含み、且つ任意選択でこのヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えば、ここでこの方法は、脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、ヒトにおいてコレステロールを増大するためである);例えば、PCSK9は、配列番号1中にA443Tを含み、且つ任意選択でこのヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えば、ここでこの方法は、脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、ヒトにおいてコレステロールを増大するためである)。
【０５８９】
第2の態様では:f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9に結合可能であると決定されたか、又は決定される、態様1のリガンド。
【０５９０】
代替の方法では、このリガンドは、配列番号1中に突然変異R46L、A53V、N425S、A443T、I474V、Q619P及びE670Gを含むヒトPCSK9(例えば、突然変異I474、E670G、N425S又はQ619Pを含む)に結合可能であると決定されたか、又は決定される;例えば、PCSK9は、配列番号1中にI474Vを含み、且つ任意選択でこのヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えば、ここでこの方法は、脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、ヒトにおいてコレステロールを低下するか、又は低下したコレステロールを維持するためである);例えば、PCSK9は、配列番号1中にE670Gを含み、且つ任意選択でこのヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えば、ここでこの方法は、脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、ヒトにおいてコレステロールを低下するか、又は低下したコレステロールを維持するためである);例えば、PCSK9は、配列番号1中にQ619Pを含み、且つ任意選択でこのヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えば、ここでこの方法は、脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、ヒトにおいてコレステロールを低下するか、又は低下したコレステロールを維持するためである);例えば、PCSK9は、配列番号1中にN425Sを含み、且つ任意選択でヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えば、ここでこの方法は、脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、ヒトにおいてコレステロールを低下するか、又は低下したコレステロールを維持するためである);例えば、PCSK9は、配列番号1中にR46Lを含み、且つ任意選択でこのヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えば、ここでこの方法は、脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、ヒトにおいてコレステロールを増大するためである);例えば、PCSK9は、配列番号1中にA53Vを含み、且つ任意選択でこのヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えば、ここでこの方法は、脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、ヒトにおいてコレステロールを増大するためである);例えば、PCSK9は、配列番号1中にA443Tを含み、且つ任意選択でこのヒトは、このようなPCSK9又はこのようなPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む(例えば、ここでこの方法は、脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、ヒトにおいてコレステロールを増大するためである)。
【０５９１】
任意の態様のある例では、このリガンドは、f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択される2、3、4若しくはそれ以上のヒトPCSK9、又は前記代替法の前記PCSK9に結合する(か、若しくは結合することが決定された)。
【０５９２】
任意の態様の例では、このリガンドは、PCSK9、例えば、f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9、又は前記代替法における前記PCSK9に特異的に結合するタンパク質ドメインを含む。
【０５９３】
「特異的に結合する」等の用語は、あるリガンド、例えば、抗体又はその抗原結合性断片が、生理学的条件下で比較的安定である抗原と複合体を形成することを意味する。特異的な結合は、少なくとも約1×lO-6M未満の平衡解離定数によって特徴付けられうる(例えば、KDが小さいほど、緊密な結合を意味する)。2つの分子のいずれが特異的に結合するかを決定する方法は、当技術分野で周知であり、これには、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴等が挙げられる。しかし、ヒトPCSK9に特異的に結合する単離された抗体は、別の種由来のPCSK9分子等の他の抗原と交差反応性を呈する場合がある。更に、ヒトPCSK9及び1つ又は複数の追加の抗原に結合する多価特異的抗体(例えば、二重特異性)は、それにもかかわらず、本明細書において用いる場合、PCSK9に「特異的に結合する」抗体とみなされる。
【０５９４】
任意の態様のある例では、このリガンドは、LDL受容体のEGFAドメインを模倣し、且つPCSK9、例えば、f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9、又は前記代替法における前記PCSK9に特異的に結合するタンパク質を含むか、又はそれからなる。
【０５９５】
任意の態様のある例では、このリガンドは、PCSK9、例えば、f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9、又は前記代替法における前記PCSK9と拮抗する。
【０５９６】
任意の態様のある例では、方法は、(リガンドを投与する前に)、そのリガンドが、f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9、又は前記代替法における前記PCSK9に結合可能であることを決定する工程を含む。
【０５９７】
任意の態様のある例では、結合は、SPRによって決定される。任意の態様のある例では、結合は、ELISAによって決定される。
【０５９８】
任意の態様のある例では、前記型は、成熟型である。
【０５９９】
任意の態様のある例では、前記型は、前駆型である。
【０６００】
第3の態様では:(i)前記代替法のPCSK9、又は(ii)配列番号4〜27からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒトPCSK9に結合し、PCSK9によって媒介される疾患又は状態を処置及び/又は防止するためにヒトにおいて前記PCSK9を標的化するためのリガンドを用いる工程を含む方法における使用のためのリガンドであって、この方法は、ヒトに対してこのリガンドを投与する工程を含む。
【０６０１】
ある例では、疾患又は状態は、(i)前記代替法のPCSK9、又は(ii)配列番号4〜27からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒトPCSK9によって媒介される。
【０６０２】
ある例では、配列番号4〜23、26及び27からなる群から選択されるか、又は配列番号4〜14及び18〜27からなる群から選択されるか、又は配列番号4〜14、18〜23、26及び27からなる群から選択されるアミノ酸配列。これらは、46Lを含まず、且つ上記に設定された基準を満たす天然に存在する配列である。これらの群は、LDL-Cの上昇と関連するバリアントを含む。
【０６０３】
ある例では、アミノ酸配列は、LDL-Cの上昇と関連する、425Sを含む配列番号18、19又は20である(Pisciottaら2006)。
【０６０４】
ある例では、配列番号10、11、12、26及び27からなる群から選択されるアミノ酸配列であって、これは、冠動脈アテローム性動脈硬化症の重篤度のマーカーである670Gを含む(Chenら2005)。
【０６０５】
ある例では、配列番号10〜14及び18〜27からなる群から選択されるか;又は配列番号10〜14、18〜23、26及び27からなる群から選択されるアミノ酸配列。これらは、配列番号1〜3(a型)からの相違の天然に存在する組合せを有し、且つ上記で設定された基準を満たす配列である。
【０６０６】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号4である。
【０６０７】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号5である。
【０６０８】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号6である。
【０６０９】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号7である。
【０６１０】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号8である。
【０６１１】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号9である。
【０６１２】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号10である。
【０６１３】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号11である。
【０６１４】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号12である。
【０６１５】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号13である。
【０６１６】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号14である。
【０６１７】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号15である。
【０６１８】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号16である。
【０６１９】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号17である。
【０６２０】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号18である。
【０６２１】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号19である。
【０６２２】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号20である。
【０６２３】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号21である。
【０６２４】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号22である。
【０６２５】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号23である。
【０６２６】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号24である。
【０６２７】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号25である。
【０６２８】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号26である。
【０６２９】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号27である。
【０６３０】
第4の態様では:ヒトのゲノムが、配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列;又は前記代替法のPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む、態様3のリガンド。
【０６３１】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号29〜35、及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号29〜32及び34〜37からなる群から選択されるか;又は配列番号:29〜32、34、35及び37からなる群から選択される。これらは、天然に存在する対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であり、46Lをコードせず、上記で設定された基準を満たす。これらの群は、LDL-Cの上昇に関連するバリアントを含む。
【０６３２】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号34であり、これは、LDL-Cの上昇に関連する425Sをコードする(Pisciottaら2006)。
【０６３３】
ある例では、冠動脈アテローム性動脈硬化症の重篤度のマーカーである670Gをコードする配列番号31及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列(Chenら2005)。
【０６３４】
ある例では、配列番号31、32、34、35、36及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号31、32、34、35及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列。これらは、対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であり、配列番号28由来の相違の天然に存在する組合せを有し(a型)、且つ上記に設定された基準を満たす。
【０６３５】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号29である。
【０６３６】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号30である。
【０６３７】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号31である。
【０６３８】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号32である。
【０６３９】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号33である。
【０６４０】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号34である。
【０６４１】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号35である。
【０６４２】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号36である。
【０６４３】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号37である。
【０６４４】
第5の態様では:ヒトが、配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列又は少なくともその触媒性ドメイン若しくはC末端ドメインコード配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、任意の前述の態様のリガンド。
【０６４５】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号29〜35、及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号29〜32及び34〜37からなる群から選択されるか;又は配列番号:29〜32、34、35及び37からなる群から選択される。これらは、天然に存在する対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であり、46Lをコードせず、上記で設定された基準を満たす。これらの群は、LDL-Cの上昇に関連するバリアントを含む。
【０６４６】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号34であり、これは、LDL-Cの上昇に関連する425Sをコードする(Pisciottaら2006)。
【０６４７】
ある例では、冠動脈アテローム性動脈硬化症の重篤度のマーカーである670Gをコードする配列番号31及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列(Chenら2005)。
【０６４８】
ある例では、配列番号31、32、34、35、36及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号31、32、34、35及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列。これらは、対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であり、配列番号28由来の相違の天然に存在する組合せを有し(a型)、且つ上記に設定された基準を満たす。
【０６４９】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号29である。
【０６５０】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号30である。
【０６５１】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号31である。
【０６５２】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号32である。
【０６５３】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号33である。
【０６５４】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号34である。
【０６５５】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号35である。
【０６５６】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号36である。
【０６５７】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号37である。
【０６５８】
第6の態様では:ヒトが(i)前記代替法のPCSK9、或いは(ii)f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9、又は少なくともその触媒性若しくはC末端ドメインについて陽性と遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、任意の前述の態様のリガンド。
【０６５９】
ある例では、前記形態は成熟型である。
【０６６０】
ある例では、前記形態は前駆型である。
【０６６１】
第7の態様では:方法が、配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列又は少なくともその触媒性ドメイン若しくはC末端ドメインコード配列;又は前記代替法のPCSK9をコードするヌクレオチド配列について陽性であるとヒトを遺伝子型判定する工程を含む、任意の前述の態様のリガンド。
【０６６２】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号29〜35、及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号29〜32及び34〜37からなる群から選択されるか;又は配列番号:29〜32、34、35及び37からなる群から選択される。これらは、天然に存在する対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であり、46Lをコードせず、上記で設定された基準を満たす。これらの群は、LDL-Cの上昇に関連するバリアントを含む。
【０６６３】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号34であり、これは、LDL-Cの上昇に関連する425Sをコードする(Pisciottaら2006)。
【０６６４】
ある例では、冠動脈アテローム性動脈硬化症の重篤度のマーカーである670Gをコードする配列番号31及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列(Chenら2005)。
【０６６５】
ある例では、配列番号31、32、34、35、36及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号31、32、34、35及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列。これらは、対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であり、配列番号28由来の相違の天然に存在する組合せを有し(a型)、且つ上記に設定された基準を満たす。
【０６６６】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号29である。
【０６６７】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号30である。
【０６６８】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号31である。
【０６６９】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号32である。
【０６７０】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号33である。
【０６７１】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号34である。
【０６７２】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号35である。
【０６７３】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号36である。
【０６７４】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号37である。
【０６７５】
第8の態様では:方法は、(i)前記代替法のPCSK9、或いは(ii)f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9、又はその少なくとも触媒性若しくはC末端ドメインについて陽性であるヒトを遺伝子型判定する工程を含む、任意の前述の態様のリガンド。
【０６７６】
ある例では、前記形態は成熟型である。
【０６７７】
ある例では、前記形態は前駆型である。
【０６７８】
第9の態様では:ヒトが、配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列又は少なくともその触媒性ドメイン若しくはC末端ドメインコード配列;又は前記代替法のPCSK9をコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性と遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定され;ここで任意選択でヒトは、配列番号28のヌクレオチド配列、又は少なくともその触媒性ドメイン若しくはC末端ドメインコード配列、及び配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列又は少なくともその触媒性ドメイン若しくはC末端ドメインコード配列;或いは前記代替法のPCSK9をコードするヌクレオチド配列を含むと遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、任意の前述の態様のリガンド。
【０６７９】
「ヘテロ接合性」とは、本明細書では、ヒトの遺伝子型の1つの対立遺伝子が、配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列又は少なくともその触媒性ドメイン若しくはC末端ドメインコード配列を含み、且つ他の対立遺伝子が、任意のPCSK9(例えば、配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列又は少なくともその触媒性ドメイン若しくはC末端ドメインコード配列を含むa、a'型又は対立遺伝子)であってもよいことを意味する。
【０６８０】
ある例では、この方法は、(リガンドを投与する前に)、配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列又は少なくともその触媒性ドメイン若しくはC末端ドメインコード配列についてヒトをヘテロ接合性と遺伝子型判定する工程と、任意選択でまた、このヒトが、配列番号28のヌクレオチド配列、又は少なくともその触媒性ドメイン若しくはC末端ドメインコード配列、及び配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列又は少なくともその触媒性ドメイン若しくはC末端ドメインコード配列を含むとして遺伝子型判定する工程とを含む。
【０６８１】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号29〜35及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号29〜32及び34〜37からなる群から選択されるか;又は29〜32、34、35及び37からなる群から選択される。
【０６８２】
これらは、天然に存在する対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であり、46Lをコードせず、上記で設定された基準を満たす。これらの群は、LDL-Cの上昇に関連するバリアントを含む。
【０６８３】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号34であり、これは、LDL-Cの上昇に関連する425Sをコードする(Pisciottaら2006)。
【０６８４】
ある例では、冠動脈アテローム性動脈硬化症の重篤度のマーカーである670Gをコードする配列番号31及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列(Chenら2005)。
【０６８５】
ある例では、配列番号31、32、34、35、36及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号31、32、34、35及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列。これらは、対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であり、配列番号28由来の相違の天然に存在する組合せを有し(a型)、且つ上記に設定された基準を満たす。
【０６８６】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号29である。
【０６８７】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号30である。
【０６８８】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号31である。
【０６８９】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号32である。
【０６９０】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号33である。
【０６９１】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号34である。
【０６９２】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号35である。
【０６９３】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号36である。
【０６９４】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号37である。
【０６９５】
第10の態様では:態様1〜9のいずれか1つのリガンドであって、ヒトのゲノムが、配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列、又は少なくともその触媒性ドメイン若しくはC末端ドメインコード配列;或いは前記代替法のPCSK9をコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性と遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、リガンド。
【０６９６】
「ホモ接合性」とは、本明細書では、ヒトの遺伝子型において、各々の対立遺伝子が、配列番号29〜37からなる群から選択される同じヌクレオチド配列又は少なくともその触媒性ドメイン若しくはC末端ドメインコード配列を含むということを意味する。
【０６９７】
ある例では、方法は、配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列又は少なくともその触媒性ドメイン若しくはC末端ドメインコード配列;或いは前記代替法のPCSK9をコードするヌクレオチド配列について前記ヒトがホモ接合性とヒトを遺伝子型判定する工程を含む。
【０６９８】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号29〜35及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号29〜32及び34〜37からなる群から選択されるか;又は配列番号29〜32、34、35及び37からなる群から選択される。これらは、天然に存在する対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であり、46Lをコードせず、上記で設定された基準を満たす。これらの群は、LDL-Cの上昇に関連するバリアントを含む。
【０６９９】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号34であり、これは、LDL-Cの上昇に関連する425Sをコードする(Pisciottaら2006)。
【０７００】
ある例では、冠動脈アテローム性動脈硬化症の重篤度のマーカーである670Gをコードする配列番号31及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列(Chenら2005)。
【０７０１】
ある例では、配列番号31、32、34、35、36及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号31、32、34、35及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列。これらは、対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であり、配列番号28由来の相違の天然に存在する組合せを有し(a型)、且つ上記に設定された基準を満たす。
【０７０２】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号29である。
【０７０３】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号30である。
【０７０４】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号31である。
【０７０５】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号32である。
【０７０６】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号33である。
【０７０７】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号34である。
【０７０８】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号35である。
【０７０９】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号36である。
【０７１０】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号37である。
【０７１１】
第11の態様では:(i)前記代替法のPCSK9、又は(ii)配列番号4〜27からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒトPCSK9に結合し、且つ任意選択でそのような結合が可能であると決定されたか、又は決定される決定抗体結合部位を含む、任意の前述の態様のリガンド。
【０７１２】
ある例では、方法は、(リガンドを投与する前に)リガンドが前記ヒトPCSK9に結合可能であることを決定する工程を含む。
【０７１３】
ある例では、結合は、特異的な結合である。ある例では、前記リガンドは、1mM、100nM、10nM又は1nM又はそれ未満という親和性(Kd)でPCSK9に結合する(か、又は結合すると決定された)。ある実施形態では、この親和性は、10、100又は1000fM未満である。
【０７１４】
ある例では、結合又は親和性は、SPR又はELISAによって決定される。
【０７１５】
ある例では、疾患又は状態は、配列番号4〜27からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒトPCSK9によって媒介される。
【０７１６】
ある例では、配列番号4〜23、26及び27からなる群から選択されるか、又は配列番号4〜14及び18〜27からなる群から選択されるか、又は配列番号4〜14、18〜23、26及び27からなる群から選択されるアミノ酸配列。これらは、46Lを含まず、且つ上記に設定された基準を満たす天然に存在する配列である。これらの群は、LDL-Cの上昇と関連するバリアントを含む。
【０７１７】
ある例では、アミノ酸配列は、LDL-Cの上昇と関連する、425Sを含む配列番号18、19又は20である(Pisciottaら2006)。
【０７１８】
ある例では、配列番号10、11、12、26及び27からなる群から選択されるアミノ酸配列であって、これは、冠動脈アテローム性動脈硬化症の重篤度のマーカーである670Gを含む(Chenら2005)。
【０７１９】
ある例では、配列番号10〜14及び18〜27からなる群から選択されるか;又は配列番号10〜14、18〜23、26及び27からなる群から選択されるアミノ酸配列。これらは、配列番号1〜3(a型)からの相違の天然に存在する組合せを有し、且つ上記で設定された基準を満たす配列である。
【０７２０】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号4である。
【０７２１】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号5である。
【０７２２】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号6である。
【０７２３】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号7である。
【０７２４】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号8である。
【０７２５】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号9である。
【０７２６】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号10である。
【０７２７】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号11である。
【０７２８】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号12である。
【０７２９】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号13である。
【０７３０】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号14である。
【０７３１】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号15である。
【０７３２】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号16である。
【０７３３】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号17である。
【０７３４】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号18である。
【０７３５】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号19である。
【０７３６】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号20である。
【０７３７】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号21である。
【０７３８】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号22である。
【０７３９】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号23である。
【０７４０】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号24である。
【０７４１】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号25である。
【０７４２】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号26である。
【０７４３】
ある例では、そのアミノ酸配列は配列番号27である。
【０７４４】
第12の態様では:抗体又は抗体断片である態様11のリガンド。例えば、抗体又は抗体断片は、PCSK9アンタゴニストであり、例えば、PCSK9を中和する。
【０７４５】
このような抗体の例は、例えば、WO2008/057457、WO2008/057458、WO2008/057459、WO2008/063382、WO2008/133647、WO2009/100297、WO2009/100318、WO2011/037791、WO2011/053759、WO2011/053783、WO2008/125623、WO2011/072263、WO2009/055783、WO2010/029513、WO2011/111007、WO2010/077854に開示され、その開示及びこのような抗体の配列は、本発明における使用について参照によりその全体が本明細書に援用されている。1つの特異的な例は、AMG 145(Amgen社)、LY3015014(Eli Lilly社)又はアリロクマブである。有利なことに、このリガンドは、アリロクマブであるか、又はアリロクマブを含む。代わりに、このリガンドは、エボロクマブであるか、又はエボロクマブを含む。
【０７４６】
ある例では、リガンドは、SAR236553/REGN727(Sanofi Aventis社/Regeneron社)であるか、又はそのPCSK9-結合誘導体である。
【０７４７】
ある例では、リガンドは、PCSK9に結合する中和抗体を含むか、又はそれからなり、ここでこの抗体は、PCSK9に結合して、PCSK9がLDLRに結合する確率を低下する。
【０７４８】
PCSK9アンタゴニストであり、例えば、PCSK9を中和する、態様11のリガンド。
【０７４９】
本発明の任意の態様のある例では、リガンドは、エボロクマブ、lD05-IgG2(Merck&Co.社)、ALN-PCS02(Alnylam社)、RN316(Pfizer-Rinat社)、LY3015014(Eli Lilly社)及びアリロクマブ(SAR236553/REGN727;Sanofi Aventis社/Regeneron社)から選択されるリガンドを含むか、又はそれらからなる。
【０７５０】
第13の態様では:態様1〜10のいずれか1つのリガンドであって、(i)配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列、又は少なくともその触媒性ドメイン若しくはC末端ドメインコード配列に特異的にハイブリダイズする(又は前記代替法のPCSK9をコードするヌクレオチド配列にハイブリダイズする)か、又は前記配列のアンチセンス配列若しくはRNA転写物に対して特異的にハイブリダイズする連続したヌクレオチドの配列を含み、連続したヌクレオチドの前記配列は、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドにハイブリダイズするか、又はそれぞれそのアンチセンス配列若しくはRNA転写物にハイブリダイズするか;並びに/或いは(ii)その配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列(又は前記代替法のPCSK9をコードするヌクレオチド配列)の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列若しくはRNAバージョンであり、連続したヌクレオチドの前記配列は、配列番号28に存在しない前記選択された配列に存在する少なくとも1つのヌクレオチドを含む、リガンド。
【０７５１】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号29〜35、及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号29〜32及び34〜37からなる群から選択されるか;又は配列番号:29〜32、34、35及び37からなる群から選択される。これらは、天然に存在する対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であり、46Lをコードせず、上記で設定された基準を満たす。これらの群は、LDL-Cの上昇に関連するバリアントを含む。
【０７５２】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号34であり、これは、LDL-Cの上昇に関連する425Sをコードする(Pisciottaら2006)。
【０７５３】
ある例では、冠動脈アテローム性動脈硬化症の重篤度のマーカーである670Gをコードする配列番号31及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列(Chenら2005)。
【０７５４】
ある例では、配列番号31、32、34、35、36及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号31、32、34、35及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列。これらは、対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であり、配列番号28由来の相違の天然に存在する組合せを有し(a型)、且つ上記に設定された基準を満たす。
【０７５５】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号29である。
【０７５６】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号30である。
【０７５７】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号31である。
【０７５８】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号32である。
【０７５９】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号33である。
【０７６０】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号34である。
【０７６１】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号35である。
【０７６２】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号36である。
【０７６３】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号37である。
【０７６４】
ある実施形態では、このリガンドは、前記ヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50又は100個の連続したヌクレオチドを含む。
【０７６５】
第14の態様では:前記疾患又は状態が、高脂血症、高コレステロール血症(例えば、家族性高コレステロール血症)、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症又は心血管疾患又は状態である、任意の前述の態様のリガンド。
【０７６６】
疾患又は状態が、高コレステロール血症、高脂血症、高コレステロール血症、脂質異常症、胆汁鬱滞性肝疾患、ネフローゼ症候群、甲状腺機能低下症、肥満、アテローム性動脈硬化症又は心血管疾患である、任意の前述の態様のリガンド。
【０７６７】
ある例では、前記疾患又は状態は高コレステロール血症である。「高コレステロール血症」という用語は、本明細書において用いる場合、コレステロールのレベルが所望のレベルを上回って上昇する状態を指す。いくつかの実施形態では、これは、血清コレステロールレベルが上昇することを意味する。いくつかの実施形態では、所望のレベルは、当業者に公知である(そして米国特許出願公開第20120093818号に記載されるか引用される)種々の「リスクファクター」を考慮する。
【０７６８】
ヒトが、家族性高コレステロール血症、スタチン不耐性、スタチン非制御、又は高コレステロール血症、脂質異常症、胆汁鬱滞性肝疾患、ネフローゼ症候群、甲状腺機能低下症、肥満、アテローム性動脈硬化症若しくは心血管疾患を発症するリスクについてヘテロ接合性として特定される、任意の前述の態様のリガンド。
【０７６９】
第15の態様では:前記疾患又は状態は、LDLコレステロールの上昇と関連している、任意の前述の態様のリガンド。
【０７７０】
コレステロールレベルは、米国及びいくつかの他の国では1デシリットルの血液あたりのコレステロールのミリグラム数(mg)で測定される。カナダ及びほとんどのヨーロッパの国では、1リットル(L)の血液あたりのコレステロールのミリモル(mmol)を測定する。下は、一般的なガイドラインの理想的な範囲及び上昇した範囲である。
【０７７１】
【表３】
0006720079.tif 000010
【０７７２】
従って、LDLコレステロールの上昇は、160mg/dL以上(4.1mmol/L以上)である。
【０７７３】
第16の態様では:リガンドが、ヒトLDL受容体に対するヒトPCSK9結合を阻害し、任意選択でこのような阻害阻害が可能であると決定されたか、又は決定される、任意の前述の態様のリガンド。
【０７７４】
ある例では、この方法は、(リガンドを投与する前に)、そのリガンドがこのような阻害が可能であることを決定する工程を含む。
【０７７５】
阻害の決定は、例えば、血液又は血清の試料中で、rtp(室温)、ph7、37℃で、及び/又はヒト身体の生理学的条件下での阻害である。
【０７７６】
第17の態様では:ヒトが、前記疾患又は状態のスタチン(例えば、アボルスタチン及び/又はフルバスタチン)処置に対して耐性であるか、又は実質的に耐性である、任意の前述の態様のリガンド。
【０７７７】
第18の態様では:任意の前述の態様のリガンドであって、
(i)それらのゲノムが、配列番号29を含み、且つここでこのヒトが、ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、LWK、MXL、JPT、PUR、IBS、FIN若しくはCEU血統であるか;又は
(ii)それらのゲノムが、配列番号30を含み、且つここでこのヒトが、ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、CHB、LWK、CHS、JPT、PUR、FIN若しくはCEU血統であるか;又は
(iii)それらのゲノムが、配列番号32を含み、且つここでこのヒトが、ASW、GBR、TSI、CLM、JPT、PUR、IBS、FIN又はCEU血統であるか;又は
(iv)それらのゲノムが、配列番号33を含み、且つここでこのヒトが、LWK、ASW、YRI若しくはCLM血統であるか;又は
(v)それらのゲノムが、配列番号34を含み、且つここでこのヒトが、LWK、ASW若しくはYRI血統であるか;又は
(vi)それらのゲノムが、配列番号35を含み、且つここでこのヒトが、PUR、TSI、FIN若しくはCEU血統であるか;又は
(vii)それらのゲノムが、配列番号36を含み、且つここでこのヒトが、LWK、ASW若しくはYRI血統であるか;又は
(viii)それらのゲノムが、配列番号37を含み、且つここでこのヒトが、CHS、ASW、JPT、PUR若しくはCHB血統である、ヒトにおけるPCSK9媒介性の疾患又は状態を処置及び/又は防止するためである、リガンド。
【０７７８】
第19の態様では:任意の前述の態様のリガンドであって、
(i)PCSK9のf型を発現し、且つここでこのヒトが、
ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、LWK、MXL、JPT、PUR、IBS、FIN若しくはCEU血統であるか;又は
(ii)PCSK9のc型を発現し、且つここでこのヒトが、
ASW、YRI、GBR、TSI、CLM、CHB、LWK、CHS、JPT、PUR、FIN若しくはCEU血統であるか;又は
(iii)PCSK9のp型を発現し、且つここでこのヒトが、ASW、GBR、TSI、CLM、JPT、PUR、IBS、FIN若しくはCEU血統であるか;又は
(iv)PCSK9のm型を発現し、且つここでこのヒトが、LWK、ASW、YRI若しくはCLM血統であるか;又は
(v)PCSK9のe型を発現し、且つここでこのヒトが、LWK、ASW若しくはYRI血統であるか;又は
(vi)PCSK9のh型を発現し、且つここでこのヒトが、PUR、TSI、FIN若しくはCEU血統であるか;又は
(vii)PCSK9のaj型を発現し、且つここでこのヒトが、LWK、ASW若しくはYRI血統であるか;又は
(viii)PCSK9のq型を発現し、且つここでこのヒトがCHS、ASW、JPT、PUR若しくはCHB血統である、ヒトにおけるPCSK9媒介性の疾患又は状態を処置及び/又は防止するためである、リガンド。
【０７７９】
ある例では、前記形態は成熟型である。
【０７８０】
ある例では、前記形態は前駆型である。
【０７８１】
第20の態様では:PCSK9媒介性の状態又は疾患(例えば、態様14又は15に挙げられたような)を処置及び/又は防止するための医薬組成物又はキットであって、任意の前述の態様のリガンド及び任意選択でスタチン(例えば、セロバスタチン、アトルバスタチン、シムバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、又はプラバスタチン);並びに任意選択でヒトにおいて前記疾患又は状態を処置及び/又は防止するための使用のためのラベル又は説明書(例えば、態様18又は19に挙げられるようなヒトの処置をカバーする)と組み合わせて;任意選択で、このラベル又は説明書が、製造承認番号(例えば、FDA又はEMAの承認番号)を含み;任意選択で、このラベル又は説明書が、前記ヒトに対してアリロクマブ又はエボロクマブを投与するための指示を含み;任意選択でこのキットが、リガンド(及び、例えば、またスタチンも)を含むIV又は注射デバイスを含む、組成物又はキット。
【０７８２】
第21の態様では:抗ヒトPCSK9抗体結合部位を生成する方法であって、複数の抗PCSK9抗体結合部位を得る工程と、この抗体結合部位を、(i)前記代替法のPCSK9、又は(ii)f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9、又はその触媒性若しくはC末端ドメイン若しくはペプチド(配列番号1、2又は3の対応する配列由来のアミノ酸バリエーションを含む)に対する結合に関してスクリーニングする工程と、このスクリーニング工程において結合する抗体結合部位を単離する工程と、任意選択で、f、c、r、p、m、e、h、aj若しくはq型のPCSK9結合断片又はその単離された抗体の誘導体を生成する工程とを含む、方法。
【０７８３】
ある例では、前記形態は成熟型である。
【０７８４】
ある例では、前記形態は前駆型である。
【０７８５】
この態様及び次の態様の例では、この複数の結合部位は、複数の4鎖の抗体もしくその断片、例えば、dAb、Fab又はscFvを含むか、又はそれらからなる。スクリーニングのための複数の結合部位を生成する適切な方法としては、ファージディスプレイ(抗体結合部位のファージディスプレイライブラリーを生成する)、リボソームディスプレイ(抗体結合部位のリボソームディスプレイライブラリーを生成する)、酵母ディスプレイ(抗体結合部位の酵母ディスプレイライブラリーを生成する)、又は非ヒト脊椎動物(例えば、げっ歯類、例えば、マウス又はラット)の免疫、例えば、Velocimouse(商標)、Kymouse(商標)、Xenomouse(商標)、Aliva Mouse(商標)、HuMab Mouse(商標)、Omnimouse(商標)、Omnirat(商標)又はMeMo Mouse(商標)と、PCSK9のエピトープを用いる、並びに抗体産生細胞のレパートリー(例えば、B細胞、形質細胞又は形質芽細胞のレパートリー)の単離及び/又は単離された抗体のレパートリーが挙げられる。
【０７８６】
ある例では、方法は、配列番号1、2又は3の対応する配列由来のアミノ酸バリエーションを含むヒトPCSK9エピトープに対して各々が特異的に結合する1つ又は複数の抗体結合部位を選択する工程を含む。
【０７８７】
第22の態様では:抗ヒトPCSK9抗体を生成する方法であって、非ヒト脊椎動物(例えば、マウス又はラット)を、(i)前記代替法のPCSK9、又は(ii)f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はその触媒性若しくはC末端ドメイン若しくはペプチド(配列番号1、2又は3の対応する配列由来のアミノ酸バリエーションを含む)を含むヒトPCSK9を用いて免疫する工程と、f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はその触媒性若しくはC末端ドメイン若しくはペプチド(配列番号1、2又は3の対応する配列由来のアミノ酸バリエーションを含む)を含むヒトPCSK9に結合する抗体を単離する工程と、任意選択でf、c、r、p、m、e、h、aj若しくはq型のPCSK9-結合断片、又は単離された抗体の誘導体を生成する工程とを含む、方法。
【０７８８】
ある例では、前記形態は成熟型である。
【０７８９】
ある例では、前記形態は前駆型である。
【０７９０】
第23の態様では:抗体、断片、誘導体又は結合部位をコードする核酸を得る工程と、任意選択でその核酸を発現ベクターに挿入する工程とを含む、態様21又は22の方法。
【０７９１】
例えば、方法は、核酸を含む細胞(例えば、B細胞、形質芽細胞、形質細胞又は記憶細胞)を単離する工程を含み、この細胞はPCSK9エピトープで免疫された非ヒト脊椎動物から得られる。
【０７９２】
第24の態様では:ヒトを遺伝子型判定するPCSK9のキットであって、(i)前記代替法のPCSK9をコードするヌクレオチド配列に、或いは(ii)配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列又は少なくともその触媒性ドメイン若しくはC末端ドメインコード配列に対して特異的にハイブリダイズするか、或いは前記配列のアンチセンス配列若しくはRNA転写物に特異的にハイブリダイズする(i)10個以上(例えば、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100個以上)連続したヌクレオチドの配列を含み、連続したヌクレオチドの前記配列が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドにハイブリダイズするか、又はそのアンチセンス配列若しくはRNA転写物にハイブリダイズするか、並びに/或いは(ii)配列番号29〜37(又は(i)のヌクレオチド配列)からなる群から選択されるヌクレオチド配列の少なくとも10個以上(例えば、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100個以上)のヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列若しくはRNAバージョンを含む(前記連続したヌクレオチドの配列は、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドを含む)、キット。
【０７９３】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号29〜35及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号29〜32及び34〜37からなる群から選択されるか;又は29〜32、34、35及び37からなる群から選択される。これらは、天然に存在する対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であって、これは46Lをコードせず且つ上記で設定された基準を満たす。これらの群は、LDL-Cの上昇と関連するバリアントを含む。
【０７９４】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号34であって、これは425Sをコードし、LDL-Cの上昇と関連する(Pisciottaら2006)。
【０７９５】
ある例では、配列番号31及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列であって、これは、冠動脈アテローム性動脈硬化症の重篤度のマーカーである670Gをコードする(Chenら2005)。
【０７９６】
ある例では、配列番号31、32、34、35、36及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号31、32、34、35及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列。これらは、対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であって、配列番号28由来の相違の天然に存在する組合せを有し(a型)、且つ上記で設定された基準を満たす。
【０７９７】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号29である。
【０７９８】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号30である。
【０７９９】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号31である。
【０８００】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号32である。
【０８０１】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号33である。
【０８０２】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号34である。
【０８０３】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号35である。
【０８０４】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号36である。
【０８０５】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号37である。
【０８０６】
第25の態様では:ヒトをPCSK9遺伝子型判定又は表現型判定するためのキットであって、態様1〜19のいずれか1つに記載のリガンド、又は態様21〜23のいずれか1つの方法によって生成される抗体、断片又は誘導体を含むキット。
【０８０７】
第26の態様では:(i)前記代替法のPCSK9、又は(ii)f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9に結合する抗PCSK9リガンドの使用であって、そのゲノムが(iii)(i)の前記PCSK9をコードするヌクレオチド配列;又は(iv)配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、任意選択で態様18又は19に挙げたようなヒトにおけるPCSK9媒介性の疾患又は状態を処置及び/又は防止するためのヌクレオチド配列を含む、ヒトにおいてPCSK9媒介性の疾患又は状態を処置及び/又は防止するための医薬の製造における使用。
【０８０８】
ある例では、前記形態は成熟型である。
【０８０９】
ある例では、前記形態は前駆型である。
【０８１０】
第27の態様では:(i)前記代替法のPCSK9、又は(ii)f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9に結合する抗PCSK9リガンドの使用であって、態様18又は19に挙げられるようなヒトにおいて任意選択でPCSK9を標的化するため、PCSK9によって媒介される疾患又は状態を処置及び/又は防止するために、ヒトにおいて前記PCSK9を標的化するための医薬の製造における使用。
【０８１１】
ある例では、前記形態は成熟型である。
【０８１２】
ある例では、前記形態は前駆型である。
【０８１３】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号29〜35及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号29〜32及び34〜37からなる群から選択されるか;又は29〜32、34、35及び37からなる群から選択される。これらは、天然に存在する対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であって、これは46Lをコードせず且つ上記で設定された基準を満たす。これらの群は、LDL-Cの上昇と関連するバリアントを含む。
【０８１４】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号34であって、これは425Sをコードし、LDL-Cの上昇と関連する(Pisciottaら2006)。
【０８１５】
ある例では、配列番号31及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列であって、これは、冠動脈アテローム性動脈硬化症の重篤度のマーカーである670Gをコードする(Chenら2005)。
【０８１６】
ある例では、配列番号31、32、34、35、36及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号31、32、34、35及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列。これらは、対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であって、配列番号28由来の相違の天然に存在する組合せを有し(a型)、且つ上記で設定された基準を満たす。
【０８１７】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号29である。
【０８１８】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号30である。
【０８１９】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号31である。
【０８２０】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号32である。
【０８２１】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号33である。
【０８２２】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号34である。
【０８２３】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号35である。
【０８２４】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号36である。
【０８２５】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号37である。
【０８２６】
このリガンドは、本明細書に開示される任意の抗PCSK9リガンドであってもよい。
【０８２７】
第28の態様では:態様26又は27の使用であって、前記リガンド、ヒト、疾患又は状態が、態様1〜19のいずれか1つに記載の使用。
【０８２８】
第29の態様では:ヒトにおいてPCSK9媒介性の疾患又は状態を処置及び/又は防止するためにPCSK9を標的化する方法であって、ヒトに対して、(i)前記代替法のPCSK9をコードするヌクレオチド配列又は(ii)配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、抗PCSK9リガンドを投与する工程を含み、それによって、前記ヌクレオチド配列によってコードされるPCSK9が標的化される、方法。
【０８２９】
このリガンドは、本明細書に開示される任意の抗PCSK9リガンドであってもよい。
【０８３０】
第30の態様では:f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9を、前記リガンドで標的化して、前記ヒトにおける前記疾患又は状態を処置及び/又は防止する工程を含む、態様29の方法。
【０８３１】
ある例では、前記形態は成熟型である。
【０８３２】
ある例では、前記形態は前駆型である。
【０８３３】
第31の態様では:ヒトにおいてPCSK9によって媒介される疾患又は状態を処置及び/又は防止する方法であって、(i)前記代替法のPCSK9又は(ii)f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9を、前記PCSK9に結合するリガンドをヒトに投与する工程によって標的化し、それによってこのヒトにおける前記疾患又は状態を処置及び/又は防止する工程を含む、方法。
【０８３４】
ある例では、前記形態は成熟型である。
【０８３５】
ある例では、前記形態は前駆型である。
【０８３６】
前記リガンドは、本明細書に開示される任意の抗PCSK9リガンドであってもよい。
【０８３７】
第32の態様では:ヒトのゲノムが、配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、態様31の方法。
【０８３８】
ある例では、このヌクレオチド配列は、配列番号29〜35及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号29〜32及び34〜37からなる群から選択されるか;又は29〜32、34、35及び37からなる群から選択される。これらは、天然に存在する対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であって、これは46Lをコードせず且つ上記で設定された基準を満たす。これらの群は、LDL-Cの上昇と関連するバリアントを含む。
【０８３９】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号34であって、これは425Sをコードし、LDL-Cの上昇と関連する(Pisciottaら2006)。
【０８４０】
ある例では、配列番号31及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列であって、これは、冠動脈アテローム性動脈硬化症の重篤度のマーカーである670Gをコードする(Chenら2005)。
【０８４１】
ある例では、配列番号31、32、34、35、36及び37からなる群から選択されるか;又は配列番号31、32、34、35及び37からなる群から選択されるヌクレオチド配列。これらは、対立遺伝子(ハプロタイプ)配列であって、配列番号28由来の相違の天然に存在する組合せを有し(a型)、且つ上記で設定された基準を満たす。
【０８４２】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号29である。
【０８４３】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号30である。
【０８４４】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号31である。
【０８４５】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号32である。
【０８４６】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号33である。
【０８４７】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号34である。
【０８４８】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号35である。
【０８４９】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号36である。
【０８５０】
ある例では、ヌクレオチド配列は、配列番号37である。
【０８５１】
第33の態様では:ヒトが、配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列又はその触媒性若しくはC末端ドメインコード配列について陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、態様29〜32のいずれか1つの方法。
【０８５２】
第34の態様では:ヒトが(i)前記代替法のPCSK9、又は(ii)f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9に関して陽性陽性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、態様29〜33のいずれか1つの方法。
【０８５３】
ある例では、前記形態は成熟型である。
【０８５４】
ある例では、前記形態は前駆型である。
【０８５５】
第35の態様では:(i)前記代替法のPCSK9をコードするヌクレオチド配列、或いは(ii)配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列又はその触媒性若しくはC末端ドメインコード配列について陽性であると前記ヒトを遺伝子型判定する工程を含む、態様29〜34のいずれか1つの方法。
【０８５６】
第36の態様では:(i)前記代替法のPCSK9又は(ii)f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9配列について前記ヒトが陽性であると表現型判定する工程を含む、態様29〜35のいずれか1つの方法。
【０８５７】
ある例では、前記形態は成熟型である。
【０８５８】
ある例では、前記形態は前駆型である。
【０８５９】
第37の態様では:ヒトが、(i)の前記ヌクレオチド配列或いは配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列又はその触媒性若しくはC末端ドメインコード配列についてヘテロ接合性ヘテロ接合性であると遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定され;任意選択で、前記ヒトが、配列番号28のヌクレオチド配列、又はその触媒性若しくはC末端ドメインコード配列、及び(i)の前記ヌクレオチド配列或いは配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列又はその触媒性若しくはC末端ドメインコード配列を含むと遺伝子型判定されたか、又は遺伝子型判定される、態様29〜36のいずれか1つの方法。
【０８６０】
第38の態様では:ヒトのゲノムが、(i)の前記ヌクレオチド配列、或いは配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列、又はその触媒性若しくはC末端ドメインコード配列についてホモ接合性ホモ接合性であると遺伝子型判定されたか、若しくは遺伝子型判定される、態様29〜37のいずれか1つの方法。
【０８６１】
第39の態様では:(i)の前記ヌクレオチド配列、或いは配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列、又はその触媒性若しくはC末端ドメインコード配列について、前記ヒトに対してリガンドを投与する前に前記ヒトを遺伝子型判定する工程を含み、リガンドが前記選択された配列によってコードされるPCSK9に結合可能であると決定される工程を含む、態様29〜38のいずれか1つの方法。
【０８６２】
第40の態様では:リガンド、ヒト、疾患又は状態が、態様1〜19のいずれか1つに記載されている、態様29〜39のいずれか1つの方法。
【０８６３】
第41の態様では:態様14又は15に挙げられる状態又は疾患を処置及び/又は防止するための態様29〜40のいずれか1つに記載の方法であって、前記リガンド及びスタチン(例えば、セロバスタチン、アトルバスタチン、シムバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、又はプラバスタチン)をヒトに投与する工程を含む、方法。
【０８６４】
第42の態様では:リガンド及びスタチンが別々に投与される、態様41の方法。
【０８６５】
第43の態様では:リガンド及びスタチンが同時に投与される、態様41の方法。
【０８６６】
第44の態様では:リガンドが皮下注射によって投与される、態様29〜43のいずれか1つの方法。
【０８６７】
第45の態様では:ヒトの核酸試料をPCSK9遺伝子型判定する方法であって、(i)前記代替法のPCSK9をコードするヌクレオチド配列或いは(ii)配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列又はその触媒性若しくはC末端ドメインコード配列の存在を試料中で特定する工程を含む、方法。
【０８６８】
第46の態様では:ヒトのタンパク質試料をPCSK9型判定する方法であって、(i)前記代替法のPCSK9又は(ii)f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9の存在を試料中で特定する工程を含む、方法。
【０８６９】
ある例では、前記形態は成熟型である。
【０８７０】
ある例では、前記形態は前駆型である。
【０８７１】
第47の態様では:態様45又は46の方法であって、ヒトから血清、血液、糞便、毛髪、組織、細胞、尿又は唾液の試料を得る工程を含み、これによって核酸又はタンパク質の試料が得られて、前記配列を特定する工程に用いられる、方法。
【０８７２】
第48の態様では:態様45〜47のいずれか1つの方法であって、態様1〜19のいずれか1つに記載のリガンドを用いて、前記特定する工程を行う工程を含む、方法。
【０８７３】
第49の態様では:ヒト患者において心血管の疾患又は状態、或いはLDLコレステロールの上昇と関連している疾患又は状態(例えば、高コレステロール血症)を処置及び/又は防止する方法であって、この患者は、前記疾患又は状態のためにスタチン処置を受けているか、又は以前に受けており、態様45〜48のいずれか1つの方法を用いて患者を型判定する工程と、態様1〜19の1つに記載のリガンドを投与する工程とを含み、それによってこのヒトが処置されるか、又は前記疾患若しくは状態が、防止され;任意選択でスタチン処置も低減若しくは停止される、方法。
【０８７４】
ある例では、前記低下又は停止は、スタチンの用量及び/又は投与頻度を低下する工程を含む。
【０８７５】
第50の態様では:配列番号4〜27から選択されるアミノ酸配列に結合可能であると決定されたか、又は決定されるリガンド、並びに態様46〜49のいずれか1つの方法を行うための説明書及び/又は態様1〜19のいずれか1つに規定されるようなヒトへのリガンドの投与を示すか又はカバーするラベル又は説明書を含む診断、治療又は予防用のキット。
【０８７６】
第51の態様では:あるヌクレオチド配列、或いは(i)又は配列番号29〜37からなる群から選択されるヌクレオチド配列又はそのアンチセンス配列若しくはRNA転写物に対して特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む核酸プローブ、並びに態様45、47又は48の方法を行うための説明書を含む診断、治療又は予防用のキット。
【０８７７】
本発明の例では、リガンドは、ヒトPCSK9、例えば、1つ又は複数の(i)前記代替法のPCSK9又は(ii)本明細書に開示されるまれなPCSK9バリアント(例えば、1つ、2つ、3つ、それ以上又は全ての成熟型のf、c、r、p、m、e、h、aj及びq)及び任意選択でa型及び/又はa'型に対しても特異的に結合する。例えば、そのリガンドは、成熟型のf及び/又はcに対して、同様にa型にも特異的に結合する。例えば、このリガンドは、突然変異E670Gを含むヒトPCSK9に対して特異的に結合し、また配列番号1において突然変異I474V、Q619P又はN425Sを含むヒトPCSK9にも結合する。例えば、このリガンドは、突然変異E670Gを含むヒトPCSK9に対して特異的に結合し、また配列番号1において突然変異I474Vを含むヒトPCSK9にも結合する。例えば、このリガンドは、突然変異E670Gを含むヒトPCSK9に対して特異的に結合し、また配列番号1において突然変異Q619Pを含むヒトPCSK9にも結合する。例えば、このリガンドは、突然変異E670Gを含むヒトPCSK9に対して特異的に結合し、また配列番号1において突然変異N425Sを含むヒトPCSK9にも結合する。このような結合の決定は、当技術分野で公知の任意の抗体結合試験によって、例えば、表面プラズモン共鳴によって行うことができる。このような型の各々に対する結合は、例えば、それぞれ少なくとも1mM、100nM、1nM、100pM、10pM又は1pMのKdである。
【０８７８】
ある例では、前記リガンドは、a型、並びに(i)前記代替法のPCSK9又は(ii)f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるPCSK9に結合し、前記選択された型に対するリガント結合は、a型に対する結合について少なくとも60、70、80、90又は95%というKd(SPRによって決定される)である。ある実施形態では、両方の型とも成熟型である。ある実施形態では、両方の型とも前駆型である。
【０８７９】
ある例では、リガンドは、a型及びf型に結合し、f型に対するリガンド結合は、a型に対する結合について少なくとも60、70、80、90又は95%というKd(SPRによって決定される)である。ある実施形態では、両方の型とも成熟型である。ある実施形態では、両方の型とも前駆型である。
【０８８０】
ある例では、リガンドは、a型及びc型に結合し、c型に対するリガンド結合は、a型に対する結合について少なくとも60、70、80、90又は95%というKd(SPRによって決定される)である。ある実施形態では、両方の型とも成熟型である。ある実施形態では、両方の型とも前駆型である。
【０８８１】
ある例では、リガンドは、a型及びr型に結合し、r型に対するリガンド結合は、a型に対する結合について少なくとも60、70、80、90又は95%というKd(SPRによって決定される)である。ある実施形態では、両方の型とも成熟型である。ある実施形態では、両方の型とも前駆型である。
【０８８２】
ある例では、リガンドは、a型及びp型に結合し、p型に対するリガンド結合は、a型に対する結合について少なくとも60、70、80、90又は95%というKd(SPRによって決定される)である。ある実施形態では、両方の型とも成熟型である。ある実施形態では、両方の型とも前駆型である。
【０８８３】
ある例では、リガンドは、a型及びm型に結合し、m型に対するリガンド結合は、a型に対する結合について少なくとも60、70、80、90又は95%というKd(SPRによって決定される)である。ある実施形態では、両方の型とも成熟型である。ある実施形態では、両方の型とも前駆型である。
【０８８４】
ある例では、リガンドは、a型及びe型に結合し、e型に対するリガンド結合は、a型に対する結合について少なくとも60、70、80、90又は95%というKd(SPRによって決定される)である。ある実施形態では、両方の型とも成熟型である。ある実施形態では、両方の型とも前駆型である。
【０８８５】
ある例では、リガンドは、a型及びh型に結合し、h型に対するリガンド結合は、a型に対する結合について少なくとも60、70、80、90又は95%というKd(SPRによって決定される)である。ある実施形態では、両方の型とも成熟型である。ある実施形態では、両方の型とも前駆型である。
【０８８６】
ある例では、リガンドは、a型及びaj型に結合し、aj型に対するリガンド結合は、a型に対する結合について少なくとも60、70、80、90又は95%というKd(SPRによって決定される)である。ある実施形態では、両方の型とも成熟型である。ある実施形態では、両方の型とも前駆型である。
【０８８７】
ある例では、リガンドは、a型及びq型に結合し、q型に対するリガンド結合は、a型に対する結合について少なくとも60、70、80、90又は95%というKd(SPRによって決定される)である。ある実施形態では、両方の型とも成熟型である。ある実施形態では、両方の型とも前駆型である。
【０８８８】
本発明の例では、このリガンドは、ヒトPCSK9、例えば、本明細書に開示されるまれなPCSK9バリアントの1つ又は複数(例えば、1つ、2つ、3つ、それ以上又は全ての成熟型のf、c、r、p、m、e、h、aj及びq)及び任意選択で更にa型及び/又はa'型も中和する。例えば、このリガンドは、成熟型のf及び/又はc、並びにa型も同様に中和する。中和の決定は、例えば、米国特許出願公開第20120093818A1号(Amgen, Inc社)又は米国特許出願公開第20110065902A1号(Regeneron Pharmaceuticals, Inc社)に開示される任意の中和アッセイによって行われ得る。PCSK9に結合するか又は標的化する本発明のリガンドは、例えば、米国特許出願公開第20120093818A1号及び米国特許出願公開第20110065902A1号に開示される治療又は予防の適用に有用であり、これらの詳細な開示は、本発明における使用について、及び本明細書の特許請求の範囲内の可能性のある包含について、参照により本明細書に援用されている。
【０８８９】
リガンドが治療適用に用いられる実施形態では、抗原結合性タンパク質は、PCSK9(例えば、本明細書に開示されるまれなバリアント並びに任意選択でまたa型及び/又はa'型の1つ又は複数)の1つ又は複数の生物学的活性を阻害、妨害又はモジュレートしうる。一実施形態では、リガンドは、ヒトPCSK9(例えば、本明細書に開示されるまれなバリアント並びに任意選択でまたa型及び/又はa'型の1つ又は複数)に特異的に結合するか、及び/又はヒトPCSK9(例えば、本明細書に開示されるまれなバリアント並びに任意選択でまたa型及び/又はa'型のうちの前記1つ又は複数)のLDLRに対する結合を、少なくとも20%、例えば、20%〜40%、40〜60%、60〜80%、80〜85%、又はそれ以上(例えば、インビトロ競合結合アッセイにおいて結合を測定することによって)実質的に阻害する。ある例では、このリガンドは抗体である。
【０８９０】
ある実施形態では、このリガンドは、本明細書に開示されるまれなバリアント、及び任意選択でまたa型及び/又はa'型の1つ、2つ又はそれ以上に対する結合について10-7、10-8、10-9、10-10、10-11、10-12、10-13M未満のKd(結合は更に緊密)を有する。ある例では、Kdは、SPRを用いて決定される。
【０８９１】
ある実施形態では、前記リガンドは、本明細書に開示されるまれなPCSK9バリアント(及び任意選択でa型及び/又はa'型も)のうちの1つ又は複数に対するLDLRの結合をブロックするための1マイクロM未満、1000nM〜100nM、100nM〜10nM、10nM〜1nM、1000pM〜500pM、500pM〜200pM、200pM未満、200pM〜150pM、200pM〜100pM、100pM〜10pM、10pM〜1pMというIC50を有する。
【０８９２】
ある実施形態では、リガンドは、本明細書に開示されるまれなPCSK9バリアントのうちの1つ又は複数(例えば、配列番号4〜27から選択される配列を含む1つ又は複数のPCSK9タンパク質)に対するLDLRの結合をブロックするためのIC50よりも1000、100、90、80、70、60、50、40、30、20又は10分の1以下である(すなわち、より阻害性である)PCSK9のa型及び/又はa'型に対するLDLRの結合のブロックに関するIC50を有する。更に、又は代わりに、例えば、このリガンドは、(i)1マイクロM未満、1000nM〜100nM、100nM〜10nM、10nM〜1nM、1000pM〜500pM、500pM〜200pM、200pM未満、200pM〜150pM、200pM〜100pM、100pM〜10pM、10pM〜1pM、例えば、1mM〜1pMの範囲(例えば、1mM〜100pM;10nM〜100pM;1nM〜10pMか;又は100pM〜1pM)のa型及び/又はa'型、並びに(ii)1マイクロM未満、1000nM〜100nM、100nM〜10nM、10nM〜1nM、1000pM〜500pM、500pM〜200pM、200pM未満、200pM〜150pM、200pM〜100pM、100pM〜10pM、10pM〜1pM、例えば、1mM〜1pMの範囲(例えば、1mM〜100pM;10nM〜100pM;1nM〜10pMか;又は100pM〜1pM)の配列番号4〜27から選択される配列を含む1つ又は複数のPCSK9タンパク質に対するLDLRの結合をブロックするためのIC50を有する。
【０８９３】
ある実施形態では、リガンドは、配列番号4〜27から選択される配列を含むPCSK9に対する結合に対して最大10%を超える、最大20%を超える、最大40%を超える、最大50%を超える、最大55%を超える、最大60%を超える、最大65%を超える、最大70%を超える、最大75%を超える、最大80%を超える、最大85%を超える、最大90%を超える、最大95%を超える、又は最大100%を超える(すなわち、二重である)結合親和性(Kd)でa型及び/又はa'型のPCSK9に結合する。このような結合測定は、当技術分野で公知の種々の結合アッセイを用いて、例えば、表面プラズモン共鳴(SPR)[例えば、Biacore(商標)による]を用いて、又はProteOn XPR36(商標)[Bio-Rad(登録商標)]を用いて、又はKinExA(登録商標)(Sapidyne Instruments, Inc社)を用いて行ってもよい。
【０８９４】
一実施形態では、表面プラズモン共鳴(SPR)は、25℃で行う。別の実施形態では、SPRは37℃で行う。
【０８９５】
一実施形態では、SPRは、生理学的pHで、例えば、約pH7で、又はpH7.6で[例えば、Hepes緩衝化生理食塩水をpH7.6で用いて(HBS-EPとも呼ばれる)]行う。
【０８９６】
一実施形態では、SPRは、生理学的な塩濃度、例えば、150mMのNaClで行う。
【０８９７】
一実施形態では、SPRは、0.05容積%以下の界面活性剤レベルで、例えば、0.05%のP20[ポリソルベート20;例えば、Tween-20(商標)]及び3mMのEDTAの存在下で行う。
【０８９８】
一例では、SPRは、25℃又は37℃で、緩衝液中で、pH7.6で、150mMのNaCl、0.05%の界面活性剤(例えば、P20)及び3mMのEDTAで行う。その緩衝液は、10mMのHepesを含有してもよい。一例では、SPRは、25℃又は37℃でHBS-EP中で行う。HBS-EPは、Teknova Inc社から入手可能である(カリフォルニア;カタログ番号H8022)。
【０８９９】
ある例では、
1.第一級アミンカップリング等によって、バイオセンサーチップ(例えば、GLMチップ)へ抗マウス(又は他の関連の脊椎動物)IgG(例えば、Biacore BR-1008-38)をカップリングすること;
2.抗マウスIgG(脊椎動物抗体)を試験IgG抗体に対して暴露して、チップ上に試験抗体を捕獲することと;
3.1024nM、256nM、64nM、16nM、4nMと0nM(すなわち、緩衝液単独)でチップの捕獲表面の上に試験抗原を通過させることと;
4.例えば、上記で論じたSPR条件の下で(例えば、生理学的な緩衝液中、25℃で)、表面プラズモン共鳴を用いて試験抗原に対する試験抗体の結合の親和性を決定すること
により、SPRを用いて抗体が決定される、リガンドの親和性。SPRは、任意の標準的なSPR装置を用いて、例えば、Biacore(商標)によるか、又はProteOn XPR36(商標)[Bio-Rad(登録商標)]を用いて行ってもよい。
【０９００】
捕獲表面の再生は、10mMのグリシンを用いてpH1.7で行ってもよい。これによって、捕獲された抗体を除去して、その表面が別の相互作用に用いられることを可能にする。この結合データは、標準的な技術を用いて、例えば、ProteOn XPR36(商標)分析ソフトウェアに固有のモデルを用いて、固有の1:1モデルに当てはめられてもよい。
【０９０１】
ある実施形態では、本発明のリガンドのアッセイ又は試験は、実質的にpH7で(例えば、インビトロ試験及びアッセイについて)及び室温で若しくは実質的に室温で行うか、又は実質的に行う。
【０９０２】
本発明の抗PCSK9抗体のIgG2重鎖定常ドメインの1例は、その配列が参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第20120093818A1号の図3KKの配列番号154に示されるようなアミノ酸配列を有する。
【０９０３】
本発明の抗PCSK9抗体のIgG4重鎖定常ドメインの1例は、その配列が参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第20120093818A1号の図3KKの配列番号155に示されるようなアミノ酸配列を有する。
【０９０４】
抗PCSK9抗体のカッパ軽鎖定常ドメインの1例は、その配列が参照により本明細書に援用される図3KKの配列番号157に示されるようなアミノ酸配列を有する。
【０９０５】
抗PCSK9抗体のラムダ軽鎖定常ドメインの1例は、その配列が参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第20120093818A1号の図3KKの配列番号156に示されるようなアミノ酸配列を有する。
【０９０６】
本発明の例では、リガンドは、成熟PCSK9、例えば、本明細書に開示される成熟型の1つ又は複数のまれなバリアント並びに任意選択でa型及び/又はa'型にも結合する。
【０９０７】
本発明の例では、リガンドは、PCSK9の触媒性ドメイン、例えば、本明細書に開示される成熟型の1つ又は複数のまれなバリアント並びに任意選択でa型及び/又はa'型の触媒性ドメインにも結合する。
【０９０８】
本発明の例では、リガンドは、PCSK9のプロドメイン、例えば、本明細書に開示される成熟型の1つ又は複数のまれなバリアント並びに任意選択でa型及び/又はa'型のプロドメインにも結合する。
【０９０９】
いくつかの実施形態では、リガンドは、PCSK9のVドメイン、例えば、本明細書に開示される成熟型の1つ又は複数のまれなバリアント並びに任意選択でa型及び/又はa'型のVドメインにも結合する。いくつかの実施形態では、リガンドは、PCSK9の(例えば、本明細書に開示される成熟型の1つ又は複数のまれなバリアント並びに任意選択でa型及び/又はa'型の)Vドメインにも結合し、LDLRに対するPCSK9の結合を防止する(又は、例えば、少なくとも10%まで低下する)。いくつかの実施形態では、リガンドは、PCSK9の(例えば、本明細書に開示される成熟型の1つ又は複数のまれなバリアント並びに任意選択でa型及び/又はa'型の)Vドメインにも結合し、一方では、これは、LDLRに対するPCSK9の結合を防止しない(又は、低下しない)が、前記リガンドは、LDLR上でPCSK9を通じて媒介される有害な活性を防止するか又は低下する(例えば、少なくとも10%まで)。
【０９１０】
本発明の例では、リガンドは、完全ヒト抗体であるか、又はそれを含む。ある例では、リガンドは、ヒト可変領域又はヒト化可変領域を含む。
【０９１１】
ある例では、本発明のリガンドは特異的に、(i)前記代替法のPCSK9又は(ii)f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9のエピトープに結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。例えば、このアミノ酸は、46L、53V、425S、443T、474V、619P及び670G(配列番号1に用いられる通りの番号付け)からなる群から選択される。例えば、このアミノ酸は、425S、443T、474V、619P及び670G(配列番号1に用いられる通りの番号付け)からなる群から選択される。例えば、このアミノ酸は、425S及び443T(配列番号1に用いられる通りの番号付け)からなる群から選択される。例えば、このアミノ酸は、474V、619P及び670G(配列番号1に用いられる通りの番号付け)からなる群から選択される。ある例では、PCSK9の型は成熟型である。ある例では、PCSK9の型は前駆型である。ある例では、このリガンドはまた、a型及び/又はa'型に対して特異的に結合する。ある実施形態では、このリガンドは、f型のPCSK9のエピトープであって、a型で見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含むエピトープに対して特異的に結合する。ある実施形態では、このリガンドは、c型のPCSK9のエピトープであって、a型で見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含むエピトープに対して特異的に結合する。ある実施形態では、このリガンドは、r型のPCSK9のエピトープであって、a型で見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含むエピトープに対して特異的に結合する。ある実施形態では、このリガンドは、p型のPCSK9のエピトープであって、a型で見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含むエピトープに対して特異的に結合する。ある実施形態では、このリガンドは、m型のPCSK9のエピトープであって、a型で見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含むエピトープに対して特異的に結合する。ある実施形態では、このリガンドは、e型のPCSK9のエピトープであって、a型で見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含むエピトープに対して特異的に結合する。ある実施形態では、このリガンドは、h型のPCSK9のエピトープであって、a型で見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含むエピトープに対して特異的に結合する。ある実施形態では、このリガンドは、aj型のPCSK9のエピトープであって、a型で見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含むエピトープに対して特異的に結合する。ある実施形態では、このリガンドは、q型のPCSK9のエピトープであって、a型で見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含むエピトープに対して特異的に結合する。
【０９１２】
ある実施形態では、リガンドは、f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9のプロドメインに特異的に結合する。ある例では、リガンドはまた、a型及び/又はa'型のプロドメインに特異的に結合する。ある実施形態では、このリガンドは、f型PCSK9のプロドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、c型PCSK9のプロドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、r型PCSK9のプロドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、p型PCSK9のプロドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、m型PCSK9のプロドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、e型PCSK9のプロドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、h型PCSK9のプロドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、aj型PCSK9のプロドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、q型PCSK9のプロドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。
【０９１３】
ある実施形態では、リガンドは、f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9の触媒性ドメインに特異的に結合する。ある例では、リガンドはまた、a型及び/又はa'型の触媒性ドメインに特異的に結合する。ある実施形態では、このリガンドは、f型PCSK9の触媒性ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、c型PCSK9の触媒性ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、r型PCSK9の触媒性ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、p型PCSK9の触媒性ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、m型PCSK9の触媒性ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、e型PCSK9の触媒性ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、h型PCSK9の触媒性ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、aj型PCSK9の触媒性ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、q型PCSK9の触媒性ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。
【０９１４】
ある実施形態では、リガンドは、f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9のC末端ドメインに特異的に結合する。ある例では、リガンドはまた、a型及び/又はa'型のC末端ドメインに特異的に結合する。ある実施形態では、このリガンドは、f型PCSK9のC末端ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、c型PCSK9のC末端ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、r型PCSK9のC末端ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、p型PCSK9のC末端ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、m型PCSK9のC末端ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、e型PCSK9のC末端ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、h型PCSK9のC末端ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、aj型PCSK9のC末端ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、q型PCSK9のC末端ドメインに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。
【０９１５】
ある実施形態では、リガンドは、f、c、r、p、m、e、h、aj及びq型からなる群から選択されるヒトPCSK9の基質結合グルーブに特異的に結合する[参照によりその全体が本明細書に援用される、Cunninghamら、Nat Struct Mol Biol. 2007年5月;14(5):413〜9頁. Epub 2007年4月15日、「Structural and biophysical studies of PCSK9 and its mutants linked to familial hypercholesterolemia」を参照のこと]。ある例では、リガンドはまた、a型及び/又はa'型の基質結合グルーブに特異的に結合する。ある実施形態では、このリガンドは、f型PCSK9の基質結合グルーブに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、c型PCSK9の基質結合グルーブに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、r型PCSK9の基質結合グルーブに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、p型PCSK9の基質結合グルーブに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、m型PCSK9の基質結合グルーブに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、e型PCSK9の基質結合グルーブに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、h型PCSK9の基質結合グルーブに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、aj型PCSK9の基質結合グルーブに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。ある実施形態では、このリガンドは、q型PCSK9の基質結合グルーブに特異的に結合し、ここでこのエピトープは、a型では見出されない少なくとも1つのアミノ酸を含む。
【０９１６】
米国特許出願公開第20120093818A1号(Amgen, Inc社)を参照して、その全体の開示が本明細書に援用される。本特許出願は、本発明における使用のための関連のリガンド、並びに本発明を参照して用いられうるリガンドを生成及び試験する実施例及び方法を開示する。
【０９１７】
ある例では、リガンドは、米国特許出願公開第20120093818A1号(Amgen, Inc社)の表2に開示される抗体であるか、若しくはその抗体を含むか、又はそのPCSK9結合誘導体である。
【０９１８】
ある実施形態では、本発明のPCSK9結合リガンドは、米国特許出願公開第20120093818A1号(Amgen, Inc社)において、例えば、米国特許出願公開第20120093818A1号の[0009]〜[0014]及び[0058]〜[0063]の段落で開示される抗原結合性タンパク質から選択される。これらの開示の全て(このようなタンパク質の配列を含む)、並びに1つ又は複数の請求項における潜在的な包含について、又は本発明における使用について、本明細書において明確に挙げた通り、参照により、本明細書に援用される。
【０９１９】
この段落では、配列番号は、米国特許出願公開第20120093818A1号(Amgen, Inc社)にみられる通りの配列番号であって、これらの配列は、本明細書において明確に挙げた通り、参照により、並びに1つ又は複数の請求項における潜在的な包含について、又は本発明における使用について、本明細書に援用される。いくつかの態様では、本発明のリガンドは、以下を含むPCSK9に結合する単離された抗原結合性タンパク質を含む:A)以下からなる群から選択される1つ又は複数の重鎖相補性決定領域(CDRH):(i)配列番号74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81、及び60からなる群から選択される配列中のCDRH1由来のCDRH1;(ii)配列番号74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81、及び60からなる群から選択される配列中のCDRH2由来のCDRH2;(iii)配列番号74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81、及び60からなる群から選択される配列中のCDRH3由来のCDRH3;並びに(iv)4個以下のアミノ酸の1つ又は複数のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含有する(i)、(ii)、及び(iii)のCDRH;B)以下からなる群から選択される1つ又は複数の軽鎖相補性決定領域(CDRL):(i)配列番号5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44、及び46からなる群から選択される配列中のCDRL1由来のCDRL1;(ii)配列番号5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44、及び46からなる群から選択される配列中のCDRL2由来のCDRL2;(iii)配列番号5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44、及び46からなる群から選択される配列中のCDRL3由来のCDRL3;並びに(iv)4個以下のアミノ酸の1つ又は複数のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含有する(i)、(ii)、及び(iii)のCDRL;或いはC)A)の1つ又は複数の重鎖CDRH及びB)の1つ又は複数の軽鎖CDRL。いくつかの実施形態では、単離された抗原結合性タンパク質は、A)の少なくとも1つのCDRH及びB)の少なくとも1つのCDRLを含む。いくつかの実施形態では、単離された抗原結合性タンパク質は、A)の少なくとも2つのCDRH、及びB)の少なくとも2つのCDRLを含む。いくつかの実施形態では、この単離された抗原結合性タンパク質は、前記CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2及びCDRL3を含む。いくつかの実施形態では、A)のCDRHは、以下からなる群のうち少なくとも1つから選択される:(i)配列番号67、79、89、及び49からなる群から選択される配列中のCDRH1から選択されるCDRH1のアミノ酸配列;(ii)配列番号67、79、89、及び49からなる群から選択される配列中のCDRH2から選択されるCDRH2のアミノ酸配列;(iii)配列番号67、79、89、及び49からなる群から選択される配列中のCDRH3から選択されるCDRH3のアミノ酸配列;並びに(iv)2個以下のアミノ酸の1つ又は複数のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含有する(i)、(ii)及び(iii)のCDRH。更に、B)のCDRLは、以下からなる群のうちの少なくとも1つから選択される:(i)配列番号12、35、32、及び23からなる群から選択される配列中のCDRL1から選択されるCDRL1アミノ酸配列;(ii)配列番号12、35、32、及び23からなる群から選択される配列中のCDRL2から選択されるCDRL2アミノ酸配列;(iii)配列番号12、35、32、及び23からなる群から選択される配列中のCDRL3から選択されるCDRL3アミノ酸配列;並びに(iv)2個以下のアミノ酸の1つ又は複数のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含有する(i)、(ii)及び(iii)のCDRL; 或いはC)A)の1つ又は複数の重鎖CDRH、及びBの1つ又は複数の軽鎖CDRL。いくつかの実施形態では、A)のCDRHは、以下からなる群のうちの少なくとも1つから選択される:(i)配列番号67の中のCDRH1のアミノ酸配列のCDRH1アミノ酸配列;(ii)配列番号67の中のCDRH2のアミノ酸配列のCDRH2アミノ酸配列;(iii)配列番号67の中のCDRH3のアミノ酸配列のCDRH3アミノ酸配列;並びに(iv)2個以下のアミノ酸の1つ又は複数のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含有する(i)、(ii)及び(iii)のCDRH;B)の前記CDRLは、以下からなる群のうちの少なくとも1つから選択される:(i)配列番号12中のCDRL1アミノ酸配列のCDRL1アミノ酸配列;(ii)配列番号12のCDRL2アミノ酸配列のCDRL2アミノ酸配列;(iii)配列番号12のCDRL3のアミノ酸配列のCDRL3アミノ酸配列;並びに(iv)2個以下のアミノ酸の1つ又は複数のアミノ酸置換、欠失又は挿入を含有する(i)、(ii)及び(iii)のCDRL; 或いはC)A)の1つ又は複数の重鎖CDRH、及びBの1つ又は複数の軽鎖CDRL。いくつかの実施形態では、この抗原結合性タンパク質は、A)配列番号67の中のCDRH1配列のCDRH1、配列番号67の中のCDRH2配列のCDRH2、及び配列番号67の中のCDRH3配列のCDRH3、並びにB)配列番号12の中のCDRL1配列のCDRL1、配列番号12の中のCDRL2配列のCDRL2、及び配列番号12の中のCDRL3配列のCDRL3を含む。いくつかの実施形態では、この抗原結合性タンパク質は、配列番号74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81、及び60からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも80%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH)、並びに/又は配列番号5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44、及び46からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも80%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)を含む。いくつかの実施形態では、このVHは、配列番号74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81、及び60からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有するか、並びに/又はこのVLは、配列番号5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44、及び46からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、このVHは、配列番号74、85、71、72、67、87、58、52、51、53、48、54、55、56、49、57、50、91、64、62、89、65、79、80、76、77、78、83、69、81、及び60からなる群から選択されるか、並びに/又はこのVLは、配列番号5、7、9、10、12、13、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、31、32、33、35、36、37、38、39、40、42、44、及び46からなる群から選択される。
【０９２０】
本発明の任意の態様の一例では、PCSK9-標的化又は結合リガンドは、その開示(配列を含む)が、本明細書において明確に挙げた通り、及び1つ若しくは複数の請求項における可能性のある包含について、又は本発明における使用について参照により本明細書に援用される、米国特許出願公開第20120093818A1号(Amgen, Inc社)に開示されるAMG145又は31H4、16F12、11F1、8A3若しくは21B12、又はAMG145、31H4、16F12、11F1、8A3若しくは21B12の可変ドメインを含む抗体を含むか、又はそれらからなる。好ましくは、このPCSK9-標的化又は結合リガンドは、AMG145を含むか、又はそれらからなる。
【０９２１】
ある例では、AMG145又は本発明の他のリガンドは、グリコシル化され、例えば、ヒトグリコシル化(例えば、CHO、Cos又はHek293細胞によって生成される)を有する。ある例では、本発明のリガンドは、CHO中で生成される。
【０９２２】
米国特許出願公開第20110065902A1号(Regeneron Pharmaceuticals, Inc社)を参照、その開示全体が本明細書に援用される。本特許出願は、本発明における使用について関連のリガンド、並びに本発明を参照して用いられうるリガンドを生成して試験し、医学的有効性を決定する実施例及び方法を開示する。
【０９２３】
以下のPCT出願を参照、その開示全体が本明細書に援用される。これらでは、本発明における使用のための関連のリガンド、並びに本発明を参照して用いられうるリガンドを生成して試験し、医学的有効性を決定する実施例及び方法を開示する。
WO2008057457
WO2008057458
WO2008057459
WO2008063382
WO2008133647
WO2009100297
WO2009100318
WO2011037791
WO2011053759
WO2011053783
WO2008125623
WO2011072263
WO2009055783
WO2010029513
WO2011111007
WO2010077854
【０９２４】
PCSK9に対する抗体リガンドは、その各々が全体として本明細書に参照により援用される、例えば、WO2008/057457、WO2008/057458、WO2008/057459、WO2008/063382、WO2008/125623、及び米国特許出願公開第2008/0008697号に記載される。
【０９２５】
ある例では、リガンドは、米国特許出願公開第20110065902A1号の実施例に開示される抗体であるか若しくはそれを含むか(例えば、316P又は300N)、又はそのPCSK9結合誘導体である。これらの開示の全て(このようなタンパク質の配列及び対応するヌクレオチド配列を含む)は、本明細書において明確に挙げた通り、及び1つ又は複数の請求項における可能性のある包含について、又は本発明における使用について参照により本明細書に援用される。ある実施形態では、このリガンドは、米国特許出願公開第20110065902A1号に開示される抗体316P又は300Nの可変ドメインであるか、若しくはそれを含むか、又はこのような抗体若しくはそのPCSK9結合誘導体である(か又はそれを含む)。
【０９２６】
ある実施形態では、このリガンドは、抗体アリロクマブの可変ドメイン若しくはSAR236553/REGN727(Sanofi Aventis社/Regeneron社)であるか、若しくはそれを含むか、又はこのような抗体若しくはそのPCSK9結合誘導体であるか(又はそれを含む)。ある例では、アリロクマブはグリコシル化される、例えば、ヒトグリコシル化を有する(例えば、CHO、Cos又はHek293細胞によって生成される)。好ましくは、このリガンドは、アリロクマブ又はSAR236553/REGN727である。
【０９２７】
ある実施形態では、このリガンドは、抗体エボロクマブの可変ドメインであるか、若しくはそれを含むか、又はこのような抗体若しくはそのPCSK9結合誘導体である(か又はそれを含む)。ある例では、その抗体はグリコシル化され、例えば、ヒトグリコシル化を有する(例えば、CHO、Cos又はHek293細胞によって生成される)。好ましくは、このリガンドはエボロクマブである。
【０９２８】
ある実施形態では、このリガンドは、エボロクマブ、1D05-IgG2(Merck & Co.社)、ALN-PCS02(Alnylam社)、RN316(Pfizer-Rinat社)及びアリロクマブから選択される。
【０９２９】
ある実施形態では、リガンドは、以下から選択される(配列及び定義は、参照により本明細書に援用される、米国特許出願公開第2011/0065902号の通り):-
1.hPCSK9に特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片であって、その抗体又は抗原結合性断片は、配列番号218/226を有するHCVR/LCVRのアミノ酸配列対の重鎖及び軽鎖のCDRを含む。
2.概念1の抗体又は抗原結合性断片であって、配列番号220、222、224、228、230及び232を有する重鎖及び軽鎖のCDRアミノ酸配列を含む。
3.配列番号218のアミノ酸配列を有するHCVR及び配列番号226のアミノ酸配列を有するLCVRを含む、概念2の抗体又は抗原結合性断片。
4.配列番号220、222、224、228、230及び232を有する重鎖及び軽鎖CDRアミノ酸配列を含む抗体とhPCSK9上の同じエピトープに結合する、抗体又はその抗原結合性断片。
5.配列番号220、222、224、228、230及び232を有する重鎖及び軽鎖CDRアミノ酸配列を含む抗体とhPCSK9に対する結合について競合する、抗体又はその抗原結合性断片。
【０９３０】
ある実施形態では、このリガンドは、以下から選択される(配列及び定義は、参照により本明細書に援用される、米国特許出願公開第2012/0093818号の通り):-
1.配列番号1のアミノ酸配列を含むPCSK9タンパク質に結合する単離された中和性抗原結合性タンパク質であって、ここでこの中和性抗原結合性タンパク質が、LDLRに対するPCSK9のLDLR低下効果を下げ、ここでこの抗原結合性タンパク質が、配列番号46のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、且つここでこの抗原結合性タンパク質が、配列番号60のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、タンパク質。
2.抗原結合性タンパク質がLDLR非競合的中和性抗原結合性タンパク質である、概念2の単離された中和性抗原結合性タンパク質。
3.抗原結合性タンパク質がLDLR競合的中和性抗原結合性タンパク質である、概念2の単離された中和性抗原結合性タンパク質。
4.が100pM未満のKdでPCSK9に結合する、PCSK9に選択的に結合する抗原結合性タンパク質。
5.第1の方式で配列番号303のPCSK9タンパク質に対して結合する抗原結合性タンパク質であって、ここでこの抗原結合性タンパク質が第2の方式でPCSK9のバリアントに対して結合し、ここで前記PCSK9バリアントが、配列番号303の207、208、185、181、439、513、538、539、132、351、390、413、582、162、164、167、123、129、311、313、337、519、521、及び554からなる群から選択される位置で少なくとも1つの点突然変異を有し、ここで、この第1の方式が、第1のEC50、第1のBmax、又は第1のEC50及び第1のBmaxを含み、ここでこの第2の方式が、第2のEC50、第2のBmax、又は第2のEC50及び第2のBmaxを含み、且つここでこの第1の方式の値は、第2の方式についての値とは異なり、且つここでこの抗原結合性タンパク質が、配列番号46のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、且つここで、この抗原結合性タンパク質が、配列番号60のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、抗原結合性タンパク質。
6.第1の方式が、第1のBmaxを含み、ここでこの第2の方式が、第1のBmaxとは異なる第2のBmaxを含み、且つここで前記PCSK9バリアントが:D162R、R164E、E167R、S123R、E129R、A311R、D313R、D337R、R519E、H521R、及びQ554Rからなる群から選択される少なくとも1つの点突然変異を有する、概念6の抗原結合性タンパク質。
7.LDLRがPCSK9に結合する位置と重複する位置でPCSK9に結合する、概念6の抗原結合性タンパク質。
8.配列番号1のアミノ酸配列を含むPCSK9タンパク質に結合する抗原結合性タンパク質を作製する方法であって、ここでこの抗原結合性タンパク質が、LDLRに対するPCSK9のLDLR低下効果を低下し、抗原結合性タンパク質をコードする核酸配列を含む宿主細胞を提供する工程と;抗原結合性タンパク質が発現される条件下でこの宿主細胞を維持する工程とを含み、ここでこの抗原結合性タンパク質が、配列番号46のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、且つここでこの抗原結合性タンパク質が、配列番号60のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、方法。
9.対象における血清コレステロールレベルの上昇に関連する状態を処置又は防止するための方法であって、それを必要とする対象に対して、有効量の単離された中和性抗原結合性タンパク質を、LDLRタンパク質のアベイラビリティを上昇させる薬剤と同時に又は連続して投与する工程を含み、ここでこの単離された抗原結合性タンパク質が、配列番号1のアミノ酸配列を含むPCSK9タンパク質に結合し、ここでこの中和性抗原結合性タンパク質が、LDLRに対するPCSK9のLDLR低下効果を低下し、ここでこの抗原結合性タンパク質が、配列番号46のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、且つここでこの抗原結合性タンパク質が、配列番号60のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、方法。
10.LDLRタンパク質のアベイラビリティを上昇させる薬剤がスタチンを含む、概念10の方法。
11.PCSK9に結合する抗原結合性タンパク質であって、ここでこの抗原結合性タンパク質がPCSK9に結合される場合、その抗体は、以下の残基PCSK9:S153、S188、I189、Q190、S191、D192、R194、E197、G198、R199、V200、D224、R237、D238、K243、S373、D374、S376、T377、F379、I154、T187、H193、E195、I196、M201、V202、C223、T228、S235、G236、A239、G244、M247、I369、S372、C375、又はC378の少なくとも1つから8オングストローム以下に位置し、ここでこの抗原結合性タンパク質は、配列番号46のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、且つここでこの抗原結合性タンパク質は、配列番号60のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、抗原結合性タンパク質。
【０９３１】
前記リガンドは、1つ又は複数の疾患若しくは状態、又はそれに対する感受性の処置、治療、予防及び/又は診断に用いられてもよく、ここでこのような疾患又は状態は、米国特許出願公開第20120093818A1号(Amgen,社)及び米国特許出願公開第20110065902A1号(Regeneron Pharmaceuticals, Inc社)に開示されるもの、例えば、その開示が、本明細書において1つ又は複数の請求項における包含のためにその全体が参照により本明細書に援用される、米国特許出願公開第20120093818A1号の段落[0375]〜[0383]に開示される疾患又は状態を含む。
【０９３２】
そのリガンドは、米国特許出願公開第20120093818A1号(Amgen, Inc社)又は米国特許出願公開第20110065902A1号に記載の通り特徴付けられるヒトに投与されうる。
【０９３３】
リガンドは、その開示が参照により本明細書に援用される、米国特許出願公開第20120093818A1号(Amgen, Inc社)又は米国特許出願公開第20110065902A1号に開示される形態又は組合せで投与されうる。例えば、その開示が参照により本明細書に援用される、米国特許出願公開第20120093818A1号(Amgen, Inc社)又は米国特許出願公開第20110065902A1号に記載されるような{例えば、米国特許出願公開第20120093818A1号の段落[0384]〜[0412]に開示されるような}薬物、賦形剤、希釈剤又は担体とともにあるリガンド、そして本発明はまた、本発明のリガンド及びこのようなさらなる薬剤の組合せを含む対応する医薬組成物にも関する。
【０９３４】
そのリガンドは、米国特許出願公開第20120093818A1号(Amgen, Inc社)又は米国特許出願公開第20110065902A1号において、例えば、その開示が参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第20120093818A1号の段落[0413]〜[0415]において設定された診断の方法で用いられうる。
【０９３５】
診断適用
いくつかの実施形態では、本発明のリガンドは、診断ツールである。このリガンドは、試料及び/又は対象中に存在するPCSK9の量をアッセイするために用いてもよい。当業者によって理解される通り、このようなリガンドは、中和性リガンドである必要はない。いくつかの実施形態では、この診断用リガンドは、中和性リガンドではない。いくつかの実施形態では、この診断用リガンドは、中和性リガンドが結合するよりも異なるエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、この2つのリガンドは、お互いと競合しない。
【０９３６】
いくつかの実施形態では、本発明のリガンドは、PCSK9のレベルの変化に関連する疾患又は障害についてスクリーニング/診断するために、哺乳動物の組織又は細胞中のPCSK9の検出のためのアッセイキット及び/又は方法で用いられるか、又は提供される。そのキットは、PCSK9に結合するリガンド、及びリガンドとPCSK9との結合(存在するならば)及び任意選択でPCSK9タンパク質レベルを示すための手段を含む。リガンドの存在を示すために種々の手段が用いられてもよい。例えば、フルオロフォア、他の分子プローブ、又は酵素をリガンドに連結させてもよく、リガンドの存在を、種々の方法で観察してもよい。このような障害についてスクリーニングするための方法は、キットの使用、又は単に開示されたリガンドの1つの使用、及びそのリガンドが試料中のPCSK9に結合するか否かの決定に関与しうる。当業者によって理解される通り、高レベル又は上昇したレベルのPCSK9は、その試料中でPCSK9に対する大量のリガンド結合を生じる。従って、リガンド結合の程度を用いて、どれほど多くのPCSK9が試料中にあるかを決定できる。所定の量(例えば、PCSK9関連障害のない人が有する量又は範囲)を超える量のPCSK9を有する対象又は試料は、PCSK9媒介性障害を有すると特徴付けられうる。いくつかの実施形態では、本発明は、スタチンが対象におけるPCSK9の量を増大したか否かを決定するために、スタチンを摂っている対象にリガンドが投与される方法を提供する。
【０９３７】
いくつかの実施形態では、リガンドは、非中和性リガンドであり、且つABP及び/又はスタチン処置を受けている対象におけるPCSK9の量を決定するために用いられる。
【０９３８】
いくつかの実施形態では、本発明のリガンドは、ヒトPCSK9(例えば、本明細書に開示される1つ、2つ又はそれ以上のまれなバリアント型)に特異的に結合することができ、以下のうちの少なくとも1つによって特徴付けられる:(i)血清総コレステロールを投与前に対して少なくとも約25〜35%低下でき、且つ少なくとも24日間にわたってその低下を持続でき;(ii)血清LDLコレステロールを投与前レベルに対して少なくとも約65〜80%低下でき、且つ少なくとも24日間にわたってその低下を持続できる;(iii)血清LDLコレステロールを投与前レベルに対して少なくとも約40〜70%低下させ、且つ少なくとも60又は90日間にわたってその低下を持続できる;(iv)血清トリグリセリドを投与前レベルに対して少なくとも約25〜40%低下でき;(v)投与前レベルに対して血清HDLコレステロールを低下させないか、又は血清HDLコレステロールの低下が5%以下である。いくつかの実施形態では、単離された核酸分子が提供され、且つこれはリガンドをコードする。いくつかの実施形態では、発現ベクターが提供され、これは、核酸分子を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物が提供され、これは、リガンド及び薬学的に許容される担体を含んでもよい。いくつかの実施形態では、本発明のPCSK9アンタゴニストリガンドを用いて、緩和、改善、阻害又は防止される疾患又は状態を処置するための方法が提供される。この方法は、それを必要とする対象に対して治療量の医薬組成物又はリガンドを投与する工程を含みうる。いくつかの実施形態では、この対象とは、高コレステロール血症、高脂血症、LDLアフェレシス適応、家族性高コレステロール血症にヘテロ接合性であるとの特定、スタチン不耐性、スタチン非制御、高コレステロール血症を発症するリスク、脂質異常症、胆汁鬱滞性肝疾患、ネフローゼ症候群、甲状腺機能低下症、肥満、アテローム性動脈硬化症及び心血管疾患に罹患しているヒト対象である。いくつかの実施形態では、処置又は治療を提供する方法が対象に提供される。いくつかの実施形態では、この方法は、少なくとも60〜90日にわたって血清コレステロールを少なくとも40〜70%低下することを含む。いくつかの実施形態では、処置又は治療を受ける方法が提供され、この方法は、60〜90日ごとに1回の
頻度でそのリガンドを投与する工程を含みうる。
【０９３９】
一態様では、本発明は、ALT及びAST測定によって決定される通り、血清HDLコレステロールの低下が少ないか若しくはなしで、及び/又は肝機能に対する影響がわずかであるか若しくは測定不能である、投与前レベルに対して、24、60又は90日にわたって40〜80%までヒトの血清LDLコレステロールを低下する能力によって特徴付けられる、ヒト前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(hPCSK9、例えば、本明細書に開示される1つ、2つ又はそれ以上のまれなバリアント型及び任意選択でa型及び/又はa'型)に特異的に結合し阻害するヒト抗体又はヒト抗体の抗原結合性断片であるか、又はそれを含む本発明のリガンドを提供する。
【０９４０】
一実施形態では、本発明のリガンドは、hPCSK9に特異的に結合する、抗体又は抗体の抗原結合性断片を含み、且つ以下の少なくとも1つによって特徴付けられる:
(i)血清総コレステロールを投与前レベルに対して少なくとも約25〜35%低下し、且つ少なくとも24日間にわたってその低下を持続でき、好ましくは血清総コレステロールの低下は、少なくとも約30〜40%である;
(ii)血清LDLコレステロールを投与前レベルに対して少なくとも約65〜80%低下し、且つ少なくとも24日間にわたってその低下を持続できる;
(iii)血清トリグリセリドを投与前レベルに対して少なくとも約25〜40%低下できる;
(iv)投与前レベルに対して血清HDLコレステロールを低下しないか、又は血清HDLコレステロールの低下が5%以下である。
【０９４１】
これらの用語及び任意の特徴の定義については、その開示がその全体が参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第2011/0065902号を参照のこと。
【０９４２】
一実施形態では、本発明は、hPCSK9に特異的に結合し、且つ以下のうちの少なくとも1つによって特徴付けられる、抗体又は抗体の抗原結合性断片を含む:
(i)血清LDLコレステロールを投与前レベルに対して少なくとも約40〜70%低下し、且つ少なくとも60又は90日間にわたってその低下を持続できる;
(ii)血清トリグリセリドを投与前レベルに対して少なくとも約25〜40%低下できる;
(iii)投与前レベルに対して血清HDLコレステロールを低下しないか、又は血清HDLコレステロールの低下が5%以下である。
【０９４３】
一実施形態では、抗体又は抗原結合性断片は、プラズモン表面共鳴によって測定した場合、pH7.4でのKDに対してpH5.5でhPCSK9について結合親和性(KD)の向上を示すとして特徴付けられる。特定の実施形態では、その抗体又は断片は、プラズモン表面共鳴によって測定した場合、中性のpHに対して酸性のpHでPCSK9について、少なくとも20倍、少なくとも40倍、又は少なくとも50倍の親和性の向上を示す。
【０９４４】
一実施形態では、この抗体又は抗原結合性断片は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合、中性のpHに対して酸性のpHでPCSK9について結合親和性の向上を示さないとして特徴付けられる。特定の実施形態では、その抗体又は断片は、酸性のpHで結合親和性の低下を示す。
【０９４５】
別の実施形態では、この抗体又は抗原結合性断片は、ヒト、ヒトGOF突然変異D374Y、カニクイザル、アカゲザル、マウス、ラット及びハムスターのPCSK9に結合する。
【０９４６】
一実施形態では、抗体又は抗原結合性断片は、ヒト及びサルのPCSK9に結合するが、マウス、ラット又はハムスターのPCSK9には結合しない。
【０９４７】
一実施形態では、本発明は、その開示が参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第2011/0065902号の段落[023]-[037]のいずれかに開示される重鎖可変領域(HCVR)、軽鎖可変領域(LCVR)、HCDR1、HCDR2、HCDR3の1つ又は複数を含む抗体又は抗体の抗原結合性断片を含む。
【０９４８】
関連の実施形態では、本発明は、hPCSK9に特異的に結合する抗体又は抗体の抗原結合性断片を含み、ここでこの抗体又は断片は、配列番号(米国特許出願公開第2011/0065902号の配列番号付を用いる): 2/10、18/20、22/24、26/34、42/44、46/48、50/58、66/68、70/72、74/82、90/92、94/96、98/106、114/116、118/120、122/130、138/140、142/144、146/154、162/164、166/168、170/178、186/188、190/192、194/202、210/212、214/216、218/226、234/236、238/240、242/250、258/260、262/264、266/274、282/284、286/288、290/298、306/308、310/312、314/322、330/332、334/336、338/346、354/356、358/360、362/370、378/380、382/384、386/394、402/404、406/408、410/418、426/428、430/432、434/442、450/452、454/456、458/466、474/476、478/480、482/490、498/500、502/504、506/514、522/524、526/528、530/538、546/548、550/552、554/562、570/572、574/576、578/586、594/596、598/600、602/610、618/620、622/624、626/634、642/644、646/648、650/658、666/668、670/672、674/682、690/692、694/696、698/706、714/716、718/720、722/730、738/740及び742/744からなる群から選択される重鎖及び軽鎖配列対の内に含有される重鎖及び軽鎖CDRドメインを含む。一実施形態では、このCDR配列は、配列番号50/58、66/68、70/72、74/82、90/92、94/96、122/130、138/140、142/144、218/226、234/236、238/240、242/250、258/260、262/264、314/3
22、330/332及び334/336のアミノ酸配列対から選択されるHCVR及びLCVR内に含有される。更に具体的な実施形態では、このCDR配列は、配列番号90/92又は218/226から選択されるHCVR/LCVR配列内に含まれる。
【０９４９】
ある例では、本発明は、本発明のリガンド(ここでこのリガンドは、hPCSK9に特異的に結合する組換えヒト抗体又はその断片を含むか、又はそれからなる)及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を特徴とする。一実施形態では、本発明は、本発明のリガンド(例えば、抗体又は抗体の抗原結合性断片)、及び第2の治療剤の組合せである組成物を特徴とする。第2の治療剤は、本発明のリガンドと有利に組み合わされる任意の薬剤、例えば、3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル(HMG)-補酵素A(CoA)還元酵素を阻害することによるコレステロール合成の細胞性枯渇を誘導することができる薬剤、例えば、セロバスタチン、アトルバスタチン、シムバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン等;コレステロール取り込み又は胆汁酸再吸収を阻害することができる薬剤;リポタンパク質異化作用を増大することができる薬剤(例えば、ナイアシン);並びに/又はコレステロール排出に役割を果たすLXR転写因子の活性化因子、例えば、22-ヒドロキシコレステロールでありうる。
【０９５０】
ある例では、本発明は、本発明の抗PCSK9リガンド(例えば、本発明の抗体又は抗体の抗原結合部分)を用いてhPCSK9活性を阻害するための方法を提供し、この治療方法は、本発明の抗体又は抗体の抗原結合性断片を含む治療上有効な量の医薬組成物を投与する工程を含む。処置される障害は、PCSK9活性の除去、阻害又は低下によって改善、緩和、阻害又は防止される任意の疾患又は状態である。本発明の治療方法によって取扱い可能な特定の集団としては、LDLアフェレシスの適応される対象、PCSK9-活性化突然変異がある(機能的な突然変異、「GOF」の獲得)対象、ヘテロ接合型の家族性高コレステロール血症(heFH)を有する対象;スタチン不耐性又はスタチン非制御である原発性高コレステロール血症のある対象;並びに予防的に処置されうる高コレステロール血症を発症するリスクのある対象が挙げられる。他の適応症としては、2型糖尿病、胆汁鬱滞性肝疾患(原発性胆汁性肝硬変)、ネフローゼ症候群、甲状腺機能低下症、肥満のような二次的原因に関連する脂質異常症;並びにアテローム性動脈硬化症及び心血管疾患の予防及び処置が挙げられる。
【０９５１】
本発明の方法の特定の実施形態では、本発明のリガンド(例えば、本発明の抗hPCSK9抗体又は抗体断片)は、上昇した総コレステロール、非-HDLコレステロール、LDLコレステロール、及び/又はアポリポプロテインB(アポリポプロテインB100)を低下するのに有用である。
【０９５２】
本発明のリガンド(例えば、抗体又は抗原結合性断片)は、単独で用いられてもよいし、又は第2の薬剤、例えば、HMG-CoA還元酵素阻害剤及び/又は別の脂質低下剤と組み合わせて用いられてもよい。
【０９５３】
処置集団
本発明は、本発明の組成物又はリガンドを必要とするヒト患者を処置するための治療方法を提供する。生活習慣及び従来の薬物処置における改変は、コレステロールレベルの低下に成功する場合が多いが、全ての患者がこのようなアプローチを用いて推奨される標的のコレステロールレベルを達成することができるわけではない。種々の状態、例えば、家族性高コレステロール血症(FH)は、従来の治療の積極的な使用にかかわらず、LDL-Cレベルの低下に抵抗性であると考えられる。ホモ接合性及びヘテロ接合性の家族性高コレステロール血症(hoFH、heFH)は、未熟なアテローム性動脈硬化の血管疾患に関連する状態である。しかし、hoFHと診断された患者は、従来の薬物療法には極めて不応答性であって、処置の選択肢は限られている。具体的には、コレステロール合成を阻害し、肝臓のLDL受容体を上方制御することによってLDL-Cを低下するスタチンを用いる処置は、LDL受容体が存在しないか、又は欠けている患者には効果が乏しい場合がある。最大用量のスタチンで処置した遺伝子型が確認されたhoFHのある患者では、わずか約20%未満という平均LDL-C低下が近年報告された。このレジメンに対するエゼチミブ10mg/日の追加によって、27%というLDL-Cレベルの総低下が生じ、これは、やはり最適からは程遠い。同様に、多くの患者がスタチン不応答性であるか、スタチン治療では十分制御されないか、又はスタチン治療に耐容性ではない場合があり;一般にはこれらの患者は、代替的な処置を用いてコレステロールの制御を達成することはできない。現在の処置選択肢の欠点に取り組み得る新規な処置についてはまだかなりの満たされていない医学的必要性がある。
【０９５４】
本発明の治療方法によって処置可能な特定の集団としては、LDLアフェレシスが適応される患者、PCSK9活性化(GOF)突然変異を有する対象、ヘテロ接合性の家族性高コレステロール血症(heFH);スタチン不耐性又はスタチン非制御の原発性高コレステロール血症のある対象;及び予防的に処置されうる高コレステロール血症を発症するリスクのある対象が挙げられる。
【０９５５】
治療的投与及び製剤
本発明は、本発明の抗PCSK9リガンド、抗体又はその抗原結合性断片を含む治療用組成物を提供する。本発明に係る治療用組成物の投与は、改善された移動、送達、忍容性等をもたらすために製剤に取り入れられる好適な担体、賦形剤、及び他の薬剤と共に投与されると予想される。多数の適切な製剤は、全ての薬剤師に公知の処方集:Remington's Pharmaceutical Sciences、Mack Publishing Company、Easton、Paで見出すことができる。これらの製剤としては、例えば、散剤、ペースト、軟膏剤、ゼリー、ワックス、油剤、脂質、脂質(カチオン性又はアニオン性)含有小胞[例えばLIPOFECTINT(商標)]、DNAコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型及び油中水型エマルジョン、エマルジョンカーボワックス(様々な分子量のポリエチレングリコール)、半固体ゲル、及びカーボワックスを含有する半固体混合物が挙げられる。Powellら「Compendium of excipients for parenteral formulations」PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238〜311も参照のこと。
【０９５６】
用量は、投与される対象の年齢及び大きさ、標的の疾患、状態、投与経路等に応じて変更してもよい。このリガンド、例えば、本発明の抗体を用いて、高コレステロール血症、LDL及びアポリポプロテインBに関連する障害、及び脂質代謝障害等を含む、PCSK9に関連する種々の状態及び疾患を、成人患者において処置する場合、本発明のリガンド又は抗体を通常は約0.01〜約20mg/kg体重、より好ましくは約0.02〜約7、約0.03〜約5、又は約0.05〜約3mg/kg体重という単回用量で静脈内に投与することが有利である。その状態の重篤度に依存して、処置の頻度及び期間を調整してもよい。
【０９５７】
種々の送達システムが公知であり、本発明の医薬組成物を投与するために用いられてもよく、したがって、本発明の組成物は、例えば、リポソーム、マイクロ粒子、マイクロカプセルへのカプセル化、突然変異体ウイルスを発現できる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシスによってリガンドを提供する[例えば、Wuら(1987)J.Biol.Chem.262:4429〜4432を参照のこと]。導入方法としては、限定するものではないが、皮内、筋肉内、腹膜内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口経路が挙げられる。組成物は、あらゆる便利な経路によって、例えば点滴又はボーラス注射によって、上皮又は粘膜皮膚の内層(例えば、口腔粘膜、直腸及び腸粘膜等)を介した吸収によって投与されてもよく、他の生物活性物質と共に投与されてもよい。投与は、全身性でもよいし、又は局所的でもよい。
【０９５８】
医薬組成物はまた、小胞、特にリポソーム中で送達することもできる[Langer (1990) Science 249:1527〜1533; Treatら(1989)、Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer、Lopez Berestein and Fidler (編)、Liss、New York、353〜365頁; Lopez-Berestein、同書中、317〜327頁を参照のこと;全般的に同書を参照のこと]。
【０９５９】
特定の状況において、医薬組成物は、制御放出系で送達することができる。一実施形態では、ポンプが使用される可能性がある[Langer、上記; Sefton (1987) CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201を参照のこと]。別の実施形態では、高分子材料を使用することができる;Medical Applications of Controlled Release、Langer及びWise(編)、CRC Pres.、Boca Raton、Fla.(1974)を参照のこと。更に別の実施形態では、制御放出系は、組成物の標的に近接して設置することができ、したがって全身用量の分量のみを必要とする(例えば、Goodson、in Medical Applications of Controlled Release、上記、第2巻、115〜138頁、1984を参照のこと)。
【０９６０】
注射製剤は、静脈内、皮下、皮内及び筋肉内注射、点滴注入等のための剤形を含みうる。これらの注射製剤は、公知の方法によって調製されうる。例えば、注射製剤は、例えば、慣習的に注射に使用される滅菌水性媒体又は油性媒体中に上述した抗体又はその塩を溶解、懸濁又は乳化することによって調製されうる。注射のための水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコース及び他の補助剤を含有する等張溶液等があり、これらは、適切な可溶化剤、例えばアルコール(例えば、エタノール)、多価アルコール(例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール)、非イオン界面活性剤[例えば、ポリソルベート80、HCO-50(硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン(50mol)付加物)]等と組み合わせて使用してもよい。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、ダイズ油等が採用される。これらは、可溶化剤、例えば安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等と組み合わせて使用してもよい。このようにして調製された注射は、好ましくは、適切なアンプルに充填される。本発明の医薬組成物は、標準的な針及びシリンジを用いて皮下又は静脈内に送達することができる。加えて、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスが、本発明の医薬組成物の送達における適用において手軽に使用することができる。このようなペン型送達デバイスは、再使用可能であってもよいし、又は使い捨てであってもよい。再使用可能なペン型送達デバイスは、一般的に、医薬組成物を含有する交換式カートリッジを利用する。カートリッジ内の医薬組成物の全てが投与され、カートリッジが空になったら、容易に空のカートリッジを捨てて、医薬組成物を含有する新しいカートリッジで交換することができる。このようにしてペン型送達デバイスは、再使用することができる。使い捨てのペン型送達デバイスでは、交換式カートリッジはない。そうではなく、使い捨てのペン型送達デバイスは、前もって医薬組成物が充填され、デバイス内の貯蔵容器中に保持された状態になっている。貯蔵容器中の医薬組成物が空になれば、デバイス全体を捨てる。
【０９６１】
極めて多くの再使用可能なペン型及び自己注射器送達デバイスが、本発明の医薬組成物の皮下送達で適用される。例としては、それらに限定されることはまったくないが、一部のみ挙げれば、AUTOPEN(商標)(Owen Mumford, Inc.社、Woodstock、UK)、DISETRONIC(商標)ペン(Disetronic Medical Systems社、Burghdorf、Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25(商標)ペン、HUMALOG(商標)ペン、HUMALIN 70/30(商標)ペン(Eli Lilly and Co.社、Indianapolis、Ind.)、NOVOPEN(商標)I、II及びIII(Novo Nordisk社、Copenhagen、Denmark)、NOVOPEN JUNIOR(商標)(Novo Nordisk社、Copenhagen、Denmark)、BD(商標)ペン(Becton Dickinson社、Franklin Lakes、N.J.)、OPTIPENT(商標)、OPTIPEN PRO(商標)、OPTIPEN STARLET(商標)、及びOPTICLIKT(商標)(sanofi-aventis社、Frankfurt、Germany)がある。本発明の医薬組成物の皮下送達に適用される使い捨てのペン型送達デバイスの例としては、それらに限定されることはまったくないが、SOLOSTAR(商標)ペン(sanofi-aventis社)、FLEXPEN(商標)(Novo Nordisk社)、及びKWIKPEN(商標)(Eli Lilly社)が挙げられる。
【０９６２】
有利なことに、上記の経口又は非経口使用のための医薬組成物は、活性成分の用量に適合するのに適した単位用量で剤形に調製される。このような単位用量の剤形としては、例えば、錠剤、丸剤、カプセル、注射剤(アンプル)、坐剤等が挙げられる。含有される前述の抗体の量は、一般的に、単位用量の剤形1つ当たり約5から約500mgであり;特に注射剤の形態では、前述の抗体が約5から約100mgで含有されることが好ましく、他の剤形では約10から約250mgで含有される。
【０９６３】
本発明は、リガンド、例えば、本発明の抗体又は抗体断片が、hPCSK9に関与する種々の状態に関連する高コレステロール血症を処置するのに有用である治療方法を提供する。抗PCSK9リガンド、例えば、本発明の抗体又は抗体断片は、高コレステロール血症等の処置に特に有用である。併用療法としては、例えば、(1)3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル(HMG)-補酵素A(CoA)還元酵素を阻害することによるコレステロール合成の細胞性枯渇を誘導する薬剤、例えば、セロバスタチン、アトルバスタチン、シムバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン;(2)コレステロール取り込み又は胆汁酸再吸収を阻害する薬剤;(3)リポタンパク質異化作用を増大する薬剤(例えば、ナイアシン)の任意の薬剤の1つ又は複数と組み合わせた、本発明の抗PCSK9リガンド;並びにコレステロール排出に役割を果たすLXR転写因子の活性化因子、例えば、22-ヒドロキシコレステロール、又は固定の組合せ、例えば、エゼチミブに加えてシムバスタチン;スタチンと胆汁樹脂(例えば、コレスチラミン、コレスチポール、コレセベラム)、ナイアシンに加えてスタチンの固定の組合せ(例えば、ナイアシンとロバスタチン)か;又は他の脂質低下剤、例えば、オメガ-3-脂肪酸エチルエステル(例えば、オマコール)との組合せを挙げてもよい。
【０９６４】
まれなPCSK9バリアントのプロファイルに対する抗体のテーラーメイド
上記で概説した通り、本発明は、バリアント型のPCSK9が本発明の選択基準を満たすことが見出される民族集団のヒトで一般的に見出される遺伝子セグメントに基づいて、可変ドメインを有する抗体ベースのリガンドを選択することによって更に、ヒトの処置をテーラーメイドする可能性を含む。組換えのヒトVH3-23由来の抗体VHドメインを含むリガンドについて下に例を示す。
【０９６５】
本発明者は、種々のヒトVH3-23対立遺伝子の頻度及び分布を解析し、SNPrs56069819を含むヒトVH3-23対立遺伝子に基づいてリガンドを用いるという望ましい状況を実現した。このSNPは、コードされたタンパク質配列中の24位でのロイシンからその位置でのバリンへの変化(L24Vの変化)に対応し、このSNPは、ヒト第14染色体上の座標106268889にある。
【０９６６】
図2は、SNP rs56069819を含むヒトVH3-23対立遺伝子の1000ゲノムプロジェクトのデータベースにわたる累積対立遺伝子頻度分布を示す[このような対立遺伝子は「C」を意味しており、最も高頻度の対立遺伝子(これは、このSNPを含まない)は、「A」を意味した]。この図によって、SNP rs56069819を含むVH3-23対立遺伝子は、全体としてとった全てのヒト民族集団にわたって11%という累積頻度で存在するが、特定の特異的なヒト民族亜集団(ASW、LWK、YRI、CEU及びGBR)では、このような対立遺伝子は、平均の累積頻度より上で存在することが示される。この図に示されるのは、SNP rs56069819を含むヒトVH3-23対立遺伝子の平均出現を上回って種々の亜集団で見出されるヒトPCSK9バリアント型[「バリアント(Variants)」と記される]である。Table 7(表8)は、VH3-23バリアント及びそれらが含むSNP、並びに1000ゲノムプロジェクトデータベースに見出されるそれらの累積対立遺伝子を示す。
【０９６７】
特に、SNP rs56069819を含むヒトVH3-23対立遺伝子は、全ての集団について11%というほぼ2倍の頻度である頻度でCEU集団に見出された。ASW及びYRI集団については、その頻度は、集団の四分の一を超えた。従って、有利なことに、本発明は抗体又は抗体断片を含むリガンドを選択することを可能にし、この抗体又は断片は、ヒトVH遺伝子セグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJH遺伝子セグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このVH遺伝子セグメントは、SNP rs56069819を含むヌクレオチド配列を含む(dbSNP番号付け、付けた番号は上記で挙げた通り)。
【０９６８】
ある例では、以下の型:f、c、m、e、h、p、q及びajから選択されるヒトPCSK9に特異的に結合するこのようなリガンドを選択することによって更に処置をテーラーメイドすることが可能で、このような型は、ヒト集団ASW、LWK、YRI、CEU及びGBRにみられるものである。
【０９６９】
ある例では、リガンドは、配列番号1中の突然変異I474Vを含むヒトPCSK9に特異的に結合する(このヒトはASW、LWK、YRI、CEU又はGBR血統である)。任意選択で、このヒトは、遺伝子セグメントVH3-23*04及び/又は配列番号1において突然変異I474Vを含む前記PCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む。ある例では、更に、このリガンドは、抗体又は断片であって、ヒト遺伝子セグメントVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む。
【０９７０】
ある例では、リガンドは、配列番号1において突然変異I474Vを含むヒトPCSK9に特異的に結合し(例えば、f型、r型、p型、e型又はaj型)、ヒトは、ASW、LWK、YRI、CEU又はGBR血統である。任意選択で、そのヒトは、遺伝子セグメントVH3-23*04及び/又は配列番号1において突然変異I474Vを含む前記PCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む。ある例では、更に、このリガンドは、ヒト遺伝子セグメントVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む抗体又は断片である。任意選択で、このリガンドは、前記ヒトにおける脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、前記ヒトにおいてコレステロールを低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持するためである。
【０９７１】
ある例では、リガンドは、配列番号1において突然変異E670Gを含むヒトPCSK9に特異的に結合し(例えば、c型、r型又はq型)、ヒトは、ASW、LWK、YRI、CEU又はGBR血統である。任意選択で、そのヒトは、遺伝子セグメントVH3-23*04及び/又は配列番号1において突然変異I474Vを含む前記PCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む。ある例では、更に、このリガンドは、ヒト遺伝子セグメントVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む抗体又は断片である。任意選択で、このリガンドは、前記ヒトにおける脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、前記ヒトにおいてコレステロールを低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持するためである。
【０９７２】
ある例では、リガンドは、配列番号1において突然変異Q619Pを含むヒトPCSK9に特異的に結合し(例えば、h型)、ヒトは、ASW、LWK、YRI、CEU又はGBR血統である。任意選択で、そのヒトは、遺伝子セグメントVH3-23*04及び/又は配列番号1において突然変異I474Vを含む前記PCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む。ある例では、更に、このリガンドは、ヒト遺伝子セグメントVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む抗体又は断片である。任意選択で、このリガンドは、前記ヒトにおける脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、前記ヒトにおいてコレステロールを低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持するためである。
【０９７３】
ある例では、リガンドは、配列番号1において突然変異N425Sを含むヒトPCSK9に特異的に結合し(例えば、e型)、ヒトは、ASW、LWK、YRI、CEU又はGBR血統である。任意選択で、そのヒトは、遺伝子セグメントVH3-23*04及び/又は配列番号1において突然変異I474Vを含む前記PCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む。ある例では、更に、このリガンドは、ヒト遺伝子セグメントVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む抗体又は断片である。任意選択で、このリガンドは、前記ヒトにおける脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、前記ヒトにおいてコレステロールを低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持するためである。
【０９７４】
ある例では、リガンドは、配列番号1において突然変異R46Lを含むヒトPCSK9に特異的に結合し(例えば、aj型)、このヒトは、ASW、LWK、YRI、CEU又はGBR血統である。任意選択で、このヒトは、遺伝子セグメントVH3-23*04及び/又は配列番号1において突然変異I474Vを含む前記PCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む。ある例では、更に、このリガンドは、ヒト遺伝子セグメントVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む抗体又は断片である。任意選択で、このリガンドは、前記ヒトにおいて脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、前記ヒトにおいてコレステロールレベルを増大するためである。
【０９７５】
ある例では、リガンドは、配列番号1において突然変異A53Vを含むヒトPCSK9に特異的に結合し(例えば、p型又はq型)、このヒトは、ASW、LWK、YRI、CEU又はGBR血統である。任意選択で、このヒトは、遺伝子セグメントVH3-23*04及び/又は配列番号1において突然変異I474Vを含む前記PCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む。ある例では、更に、このリガンドは、ヒト遺伝子セグメントVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む抗体又は断片である。任意選択で、このリガンドは、前記ヒトにおいて脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、前記ヒトにおいてコレステロールレベルを増大するためである。
【０９７６】
ある例では、リガンドは、配列番号1において突然変異A443Tを含むヒトPCSK9に特異的に結合し(例えば、m型又はh型)、このヒトは、ASW、LWK、YRI、CEU又はGBR血統である。任意選択で、このヒトは、遺伝子セグメントVH3-23*04及び/又は配列番号1において突然変異I474Vを含む前記PCSK9をコードするヌクレオチド配列を含む。ある例では、更に、このリガンドは、ヒト遺伝子セグメントVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む抗体又は断片である。任意選択で、このリガンドは、前記ヒトにおいて脂質異常症を処置又は防止するため、例えば、前記ヒトにおいてコレステロールレベルを増大するためである。
【０９７７】
ある例では、VH遺伝子セグメントはVH3-23*04であり、これは、ヒト集団ASW、LWK、YRI、CEU及びGBRにおいて、SNP rs56069819を含む一般的に見出されるバリアントである。
【０９７８】
ある例では、リガンドは、以下の型:f、c、m、e、h、p、q及びajから選択されるヒトPCSK9を発現するヒトにおいてPCSK9媒介性の疾患又は状態を処置及び/又は防止するためである。
【０９７９】
ある例では、リガンドは、ASW、LWK、YRI、CEU又はGBR血統のヒトにおいてPCSK9媒介性の疾患又は状態を処置及び/又は防止するためである。
【０９８０】
ある実施形態では、リガンドは、ASW血統のヒト[このヒトは、f、c、m、e、h、p及びqから選択されるPCSK9を発現するか、又はこのヒトは、Table 6(表7)に設定された対応するヌクレオチド又はアミノ酸配列を含む]においてPCSK9媒介性の疾患又は状態を処置及び/又は防止するためである。任意選択で、このリガンドは、ヒトVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む。
【０９８１】
ある実施形態では、リガンドは、LWK血統のヒト[このヒトは、f、c、m、e及びhから選択されるPCSK9を発現するか、又はこのヒトは、Table 6(表7)に設定された対応するヌクレオチド又はアミノ酸配列を含む]においてPCSK9媒介性の疾患又は状態を処置及び/又は防止するためである。任意選択で、このリガンドは、ヒトVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む。
【０９８２】
ある実施形態では、リガンドは、YRI血統のヒト[このヒトは、f、c、m、e及びhから選択されるPCSK9を発現するか、又はこのヒトは、Table 6(表7)に設定された対応するヌクレオチド又はアミノ酸配列を含む]においてPCSK9媒介性の疾患又は状態を処置及び/又は防止するためである。任意選択で、このリガンドは、ヒトVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む。
【０９８３】
ある実施形態では、リガンドは、CEU血統のヒト[このヒトは、f、c、p及びajから選択されるPCSK9を発現するか、又はこのヒトは、Table 6(表7)に設定された対応するヌクレオチド又はアミノ酸配列を含む]においてPCSK9媒介性の疾患又は状態を処置及び/又は防止するためである。任意選択で、このリガンドは、ヒトVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む。
【０９８４】
ある実施形態では、リガンドは、GBR血統のヒト[このヒトは、f、c及びpから選択されるPCSK9を発現するか、又はこのヒトは、Table 6(表7)に設定された対応するヌクレオチド又はアミノ酸配列を含む]においてPCSK9媒介性の疾患又は状態を処置及び/又は防止するためである。任意選択で、このリガンドは、ヒトVH3-23*04の組換え由来のVHドメインを含む。
【０９８５】
ある例では、リガンドは、アリロクマブである。
【０９８６】
本明細書における任意の構成又はTOIの他の実施形態では、上記で更に詳細に説明される通り、本発明は、代替のヒトVH遺伝子セグメントに基づいて、又はVK、Vλ若しくは定常領域遺伝子セグメント[代表的なバリアントについては更にTable 9(表10)を参照のこと]に基づいて、ヒトレシピエントの遺伝子型及び/又は表現型にに対するテーラーメイドリガンドを提供する。
【０９８７】
例えば、本発明のリガンドは、ヒトVH遺伝子セグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJH遺伝子セグメントの組換え由来のVHドメインを含む抗体を含むか、又はそれからなり、ここでこのVH遺伝子セグメントは、以下からなる群から選択される(i)IGHV1-18*01及びこのヒトのゲノムは、ヒトIGHV1-18*01ヌクレオチド配列を含むか、若しくはこのヒトは、ヒトIGHV1-18*01の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現するか;又は(ii)IGVH1-46*01及びこのヒトのゲノムは、ヒトIGHV1-46*01ヌクレオチド配列を含むか、若しくはこのヒトは、ヒトIGHV1-46*01の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現する。
【０９８８】
例えば、本発明のリガンドは、ヒトVL遺伝子セグメント及びヒトJL遺伝子セグメントの組換え由来のVLドメインを含む抗体を含むか、又はそれからなり、ここでVL遺伝子セグメントは、以下からなる群から選択される(i)IGKV4-1*01及びこのヒトのゲノムは、ヒトIGKV4-1*01ヌクレオチド配列を含むか、若しくはこのヒトは、ヒトIGKV4-1*01の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現するか;(ii)IGLV2-14*01及びこのヒトのゲノムは、ヒトIGLV2-14*01ヌクレオチド配列を含むか、若しくはこのヒトは、ヒトIGLV2-14*01の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現するか;又は(iii)IGKV1-13*02及びこのヒトのゲノムは、ヒトIGKV1-13*02ヌクレオチド配列を含むか、若しくはこのヒトは、ヒトIGKV1-13*02の組換え由来の可変ドメインを含む抗体を発現する。
【０９８９】
例えば、本発明者は、まれなIGH-ガンマ-1 SNP 204D(0.296という累積頻度が観察される)及び206L(0.283という累積頻度が観察される)に個々に又は組み合わせて取り組む可能性を特定した。これらの残基は、CH3ドメインの一部であり、したがって、それらは、抗体Fc領域の一部を形成する。したがって、これらのCH3バリエーションと患者との適合は、上記で論じた理由のために特に有益である。従って、この例では、本発明のリガンドは、配列番号42の204位に対応するAsp、又は配列番号42の206位に対応するLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含む抗体を含むか、又はそれからなり、このヒトのゲノムは、このようなAsp若しくはLeuをコードするガンマ-1重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はこのヒトは、このようなAsp若しくはLeuを含むヒトガンマ-1定常領域を含む抗体を発現する。このようなリガンドの例は、アリロクマブである。
【０９９０】
別の例では、本発明者は、IGH-ガンマ-2 SNPに向けた可能性を特定した。これには、これにはFc領域バリエーションの検討を含み-これに関して、本発明者は、Fc領域にある161位及び257位に焦点を合わせた。従って、この例では、本発明のリガンドは、配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn、配列番号44の76位に対応するPhe、配列番号44の161位に対応するVal、及び配列番号44の257位に対応するAlaからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含む抗体を含むか、又はそれからなり、ここでヒトのゲノムは、このような選択されたアミノ酸をコードするガンマ-2重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はこのヒトは、このような選択されたアミノ酸を含むヒトガンマ-2定常領域を含む抗体を発現する。このようなリガンドの例は、エボロクマブ又はボコシズマブである。
【０９９１】
別の例では、本発明者は、ヒトカッパ定常領域のバリエーションに取り組んだ。従って、この例では、本発明のリガンドは、配列番号50の84位に対応するVal、又は配列番号50の87位に対応するCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含む抗体を含むか、又はそれからなり;且つここでこのヒトのゲノムは、このようなVal若しくはCysをコードするカッパ軽鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はこのヒトは、このようなVal若しくはCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含む抗体を発現する。このようなリガンドの例は、アリロクマブ又はボコシズマブである。
【０９９２】
別の例では、本発明者は、ヒトラムダ定常領域のバリエーションに取り組んだ。従って、この例では、本発明のリガンドは、ヒトIGLC2*01軽鎖定常領域を含む抗体を含むか又はそれからなり;且つここでこのヒトのゲノムは、ヒトIGLC2*01ヌクレオチド配列を含むか、又はこのヒトは、ヒト軽鎖IGLC2*01定常領域を含む抗体を発現する。このようなリガンドの例は、エボロクマブである。
【０９９３】
さらなる例示的なリガンドは、以下の通り段落1〜17にある。
1.(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法における使用のための抗体又は抗体断片であって、
ここでこの抗体又は断片が、ヒトガンマ重鎖定常領域遺伝子セグメントSNPによってコードされる第1のアミノ酸を含むヒトガンマ重鎖定常領域を含み、且つ抗体又は断片が、配列番号1におけるI474V、Q619P、N425S及びE670Gからなる群から選択される(例えば、I474V及びE670Gから選択される)突然変異を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)のアミノ酸配列に特異的に結合し、ここでこのヒトが、前記PCSK9アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、且つ前記SNPを含むヒトガンマ重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトが、前記第1のアミノ酸を含むヒトガンマ定常領域を含む抗体を発現する、抗体又は抗体断片。
【０９９４】
(b)のある実施形態では、抗体又は断片は、ヒトにおいて、コレステロールレベルを処置するか、若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【０９９５】
ある代替法では、段落1では以下が提供される:-
(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法における使用のための抗体又は抗体断片であって、
ここでこの抗体又は断片が、配列番号42の204位に対応するAsp又は配列番号42の206位に対応するLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、且つこの抗体又は断片が、配列番号1において前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)のアミノ酸配列に特異的に結合し、ここでこのヒトが、前記アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、且つIGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、Asp及びLeu等を含むヒトガンマ-1定常領域を含む抗体を発現する、抗体又は抗体断片。
【０９９６】
ある実施形態では、前記突然変異はI474Vである。別の実施形態では、前記突然変異はE670Gである。別の実施形態では、前記突然変異は、N425Sである。別の実施形態では、前記突然変異は、Q619Pである。
【０９９７】
(b)のある実施形態では、抗体又は断片は、ヒトにおいて、コレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【０９９８】
ある例では以下が提供される:-
(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法における使用のための抗体又は抗体断片であって、
ここでこの抗体又は断片が、配列番号42の204位に対応するAsp及び配列番号42の206位に対応するLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、且つこの抗体又は断片が、配列番号1において突然変異I474Vを含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)のアミノ酸配列に特異的に結合し、ここでこのヒトが、前記アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、且つIGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含む、抗体又は抗体断片。任意選択でこの抗体又は断片は、IGHG1*01ヒト重鎖定常領域を含む。
【０９９９】
(b)のある実施形態では、前記抗体又は断片は、ヒトにおいて、コレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１０００】
別の例では以下が提供される:-
(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法における使用のための抗体又は抗体断片であって、
ここでこの抗体又は断片が、配列番号42の204位に対応するAsp及び配列番号42の206位に対応するLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、且つこの抗体又は断片が、配列番号1において突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)のアミノ酸配列に特異的に結合し、ここでこのヒトが、前記アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、且つIGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含む、抗体又は抗体断片。任意選択でこの抗体又は断片は、IGHG1*01ヒト重鎖定常領域を含む。
【１００１】
(b)のある実施形態では、抗体又は断片は、ヒトにおいて、コレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１００２】
ある例では、前記抗体又は抗体断片は、配列番号1におけるI474V、Q619P、N425S及びE670Gからなる群から選択される(例えば、I474V及びE670Gから選択される)突然変異を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合すると決定されており、ここでこの抗体又は断片は、配列番号42の204位に対応するAsp及び配列番号42の206位に対応するLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、且つ前記ヒトは、(i)IGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントと、(ii)配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前記前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列とを含む。
【１００３】
2.抗体が、配列番号42の204位に対応するAsp及び配列番号42の206位に対応するLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含む、段落1の抗体又は抗体断片。
【１００４】
3.抗体がIGHG1*01ヒト重鎖定常領域を含む、段落1又は2の抗体又は抗体断片。
【１００５】
4.ヒトが、配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は配列番号29若しくは30のヌクレオチド配列によってコードされる前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことが決定された、段落1〜3のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１００６】
5.方法が、前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列をヒトが含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、ヒトに対する抗体の投与前に行われる、段落1〜4のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１００７】
6.決定する工程が、配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列についてヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、段落5の抗体又は抗体断片。
【１００８】
7.アッセイする工程が、生物学的試料と、
a.配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列に生物学的試料中で特異的にハイブリダイズしてそれを特定しうるか、又は前記配列のアンチセンスに特異的にハイブリダイズする少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、前記核酸が配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドにハイブリダイズするか、又はアンチセンス配列にハイブリダイズし、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ;並びに/或いは
b.配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、連続したヌクレオチドの前記配列が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドを含み、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ
とを接触させる工程;並びに
複合体の存在を検出することによって、ヒトが配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9を含むことを決定する、複合体の有無を検出する工程
を含む、段落6の抗体又は抗体断片。
【１００９】
8.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で、配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/或いはこのアッセイする工程がマルチプレックスフォーマットで行われる、段落6又は7の抗体又は抗体断片。
【１０１０】
9.前記抗体又は抗体断片が、スタチン処置に対して実質的に耐性であると更に決定されるか、又は更に決定されたヒトに対する投与のためである、段落1〜8のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０１１】
10.抗体又は抗体断片が、スタチン処置を受けているか、若しくは受けたか、又はスタチン処置に対して応答性が低下したヒトに対する投与のためである、段落1〜9のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０１２】
11.前記抗体又は抗体断片が、前記スタチン処置とは別々に又は同時のヒトに対する投与のためである、段落9又は10の抗体又は抗体断片。
【１０１３】
12.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、段落6〜10のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０１４】
13.前記ヒトが前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性と示され、任意選択で、ここで前記ヒトが更に、配列番号28のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトが、配列番号1において前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、段落1〜12のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０１５】
14.前記ヒトが脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態と診断された、段落1〜13のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０１６】
15.前記抗体又は抗体断片が、脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、段落1〜14のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０１７】
16.ヌクレオチド配列が配列番号29又は30である、段落1〜15のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０１８】
17.前記抗体又は抗体断片が、静脈内投与若しくは皮下投与による投与のためであるか、及び/又は注射用調製物中に含まれる、段落1〜16のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０１９】
さらなる例示的な方法は以下の通り段落1〜18にある。
1.(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法であって、
前記ヒトに対して、配列番号1における前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合する抗体又は抗体断片を投与する工程を含み、この抗体又は断片が、配列番号42の204位に対応するAsp又は配列番号42の206位に対応するLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、且つ前記ヒトが、(i)IGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメント、(又はこのヒトは、このようなAsp及びLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含む抗体を発現する)並びに(ii)配列番号1における前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前記前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。ある実施形態では、前記突然変異は、I474Vである。別の実施形態では、前記突然変異は、E670Gである。
【１０２０】
(b)のある実施形態では、抗体又は断片は、ヒトにおいて、コレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１０２１】
ある例では以下が提供される:-
a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法であって、
配列番号1における突然変異I474を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合する抗体又は抗体断片を前記ヒトに対して投与する工程を含み、ここでこの抗体又は断片が、配列番号42の204位に対応するAsp及び配列番号42の206位に対応するLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、且つここで前記ヒトが、(i)IGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメント及び(ii)配列番号1における前記突然変異I474を含むC末端ドメインを含む前記前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。任意選択で、抗体又は断片は、IGHG1*01ヒト重鎖定常領域を含む。
【１０２２】
(b)の実施形態では、抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１０２３】
別の例では以下が提供される:-
(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法であって、
配列番号1における突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合する抗体又は抗体断片を前記ヒトに対して投与する工程を含み、ここでこの抗体又は断片が、配列番号42の204位に対応するAsp及び配列番号42の206位に対応するLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、且つここで前記ヒトが、(i)IGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメント及び(ii)配列番号1における前記突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含む前記前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。任意選択で、この抗体又は断片は、IGHG1*01ヒト重鎖定常領域を含む。
【１０２４】
(b)の実施形態では、この抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１０２５】
ある例では、前記抗体又は抗体断片は、配列番号1における前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合することが決定され、ここでこの抗体又は断片は、配列番号42の204位に対応するAsp及び配列番号42の206位に対応するLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、且つここで前記ヒトは、(i)IGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメント及び(ii)配列番号1における前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前記前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む。
【１０２６】
2.前記投与の前に、ヒトが段落1のヒトである、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含むヒトを選択する工程を含む、段落1の方法。
【１０２７】
3.抗体が、配列番号42の204位に対応するAsp及び配列番号42の206位に対応するLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含む、段落1又は2の方法。
【１０２８】
4.抗体が、IGHG1*01ヒト重鎖定常領域を含む、段落1、2又は3の方法。
【１０２９】
5.ヒトが、配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は配列番号29若しくは30のヌクレオチド配列によってコードされる前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことが決定された、段落1〜4のいずれか1つの方法。
【１０３０】
6.ヒトが、前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、段落1〜5のいずれか1つの方法。
【１０３１】
7.決定する工程が、配列番号1において、突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列についてヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、段落6の方法。
【１０３２】
8.アッセイする工程が、生物学的試料と、
a.配列番号1における突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列に、生物学的試料中で、特異的にハイブリダイズして特定しうるか、又は前記配列のアンチセンスに対して特異的にハイブリダイズする少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、前記核酸が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドに対してハイブリダイズするか、又はアンチセンス配列に対してハイブリダイズし、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成するオリゴヌクレオチドプローブ;並びに/又は
b.配列番号1における突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、連続したヌクレオチドの前記配列が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドを含み、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ
とを接触させる工程;並びに
複合体の存在を検出することによって、ヒトが配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9を含むことを決定する、複合体の有無を検出する工程を含む、段落7の方法。
【１０３３】
9.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で、配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、及び/又はこのアッセイする工程がマルチプレックスフォーマットで行われる、段落7又は8の方法。
【１０３４】
10.前記ヒトが、スタチン処置に対して実質的に耐性であると決定されるか、又は更に決定された、段落1〜9のいずれか1つの方法。
【１０３５】
11.前記ヒトが、スタチン処置を受けているか、若しくは受けたか、又はスタチン処置に対して応答性が低下した、段落1〜10のいずれかの方法。
【１０３６】
12.前記抗体又は抗体断片が、前記スタチン処置とは別々に又は同時にヒトに対して投与される、段落10又は11の方法。
【１０３７】
13.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、段落7〜9のいずれか1つの方法。
【１０３８】
14.前記ヒトが前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性が示され、任意選択で、前記ヒトは更に、配列番号28のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトは、配列番号1において前記突然変異I474V又はE670Gを含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、段落1〜13のいずれか1つの方法。
【１０３９】
15.前記ヒトが脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態を有すると診断された、段落1〜14のいずれか1つの方法。
【１０４０】
16.前記抗体又は抗体断片が、脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、段落1〜15のいずれか1つの方法。
【１０４１】
17.ヌクレオチド配列が配列番号29又は30である、段落1〜16のいずれか1つの方法。
【１０４２】
18.前記抗体又は抗体断片が、静脈内投与若しくは皮下投与によって投与されるか、及び/又は注射用調製物中に含まれる、段落1〜17のいずれか1つの方法。
【１０４３】
さらなる例示的なリガンドは、以下の通り段落1〜17にある。
1.(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法における使用のための抗体又は抗体断片であって、
ここで、抗体が、配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn、配列番号44の76位に対応するPhe、配列番号44の161位に対応するVal及び配列番号44の257位に対応するAlaからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み、且つこの抗体又は断片は、配列番号1における前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)のアミノ酸配列に特異的に結合し、ここで、このヒトは、前記アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み且つIGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、このようなPro、Asn、Phe、Val及びAlaを含むヒトガンマ-2定常領域を含む抗体を発現する、抗体又は抗体断片。
【１０４４】
ある実施形態では、前記突然変異はI474Vである。別の実施形態では、前記突然変異はE670Gである。
【１０４５】
(b)のある実施形態では、この抗体又は断片は、ヒトの領域においてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１０４６】
ある例では、以下が提供される:-
(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法における使用のための抗体又は抗体断片であって、
ここでこの抗体が、配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn、配列番号44の76位に対応するPhe、配列番号44の161位に対応するVal及び配列番号44の257位に対応するAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み、且つこの抗体又は断片が、配列番号1における突然変異I474Vを含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)のアミノ酸配列に特異的に結合し、ここで、このヒトが、前記アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、且つIGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含む、抗体又は抗体断片。任意選択で、この抗体又は断片は、IGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含む。
【１０４７】
(b)のある実施形態では、この抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１０４８】
別の例では、以下が提供される:-
(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法における使用のための抗体又は抗体断片であって、
ここでこの抗体が、配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn、配列番号44の76位に対応するPhe、配列番号44の161位に対応するVal及び配列番号44の257位に対応するAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み、且つこの抗体又は断片が、配列番号1における突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)のアミノ酸配列に特異的に結合し、ここで、このヒトが、前記アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、且つIGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含む、抗体又は抗体断片。任意選択で、この抗体又は断片は、IGHG2*01ヒト重鎖定常領域を含む。
【１０４９】
(b)のある実施形態では、この抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１０５０】
ある例では、前記抗体又は抗体断片は、配列番号1における前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合することが決定され、ここでこの抗体又は断片は、配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn、配列番号44の76位に対応するPhe、配列番号44の161位に対応するVal及び配列番号44の257位に対応するAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み、且つ前記ヒトは、(i)IGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメント、及び(ii)配列番号1における前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前記前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む。
【１０５１】
2.抗体が、配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn、配列番号44の76位に対応するPhe、配列番号44の161位に対応するVal及び配列番号44の257位に対応するAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含む、段落1の抗体又は抗体断片。
【１０５２】
3.抗体がIGHG2*01ヒト重鎖定常領域を含む、段落1又は2の抗体又は抗体断片。
【１０５３】
4.ヒトが、配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は配列番号29若しくは30のヌクレオチド配列によってコードされる前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことが決定された、段落1〜3のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０５４】
5.方法が、前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列をヒトが含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、ヒトに対する抗体の投与前に行われる、段落1〜4のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０５５】
6.決定する工程が、配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列についてヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、段落5の抗体又は抗体断片。
【１０５６】
7.アッセイする工程が、生物学的試料と、
a.配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列に生物学的試料中で特異的にハイブリダイズしてそれを特定しうるか、又は前記配列のアンチセンスに特異的にハイブリダイズする少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、前記核酸が配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドにハイブリダイズするか、又はアンチセンス配列にハイブリダイズし、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ;並びに/或いは
b.配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、連続したヌクレオチドの前記配列が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドを含み、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ
とを接触させる工程;並びに
複合体の存在を検出することによって、ヒトが配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9を含むことを決定する、複合体の有無を検出する工程
を含む、段落6の抗体又は抗体断片。
【１０５７】
8.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で、配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/或いはこのアッセイする工程がマルチプレックスフォーマットで行われる、段落6又は7の抗体又は抗体断片。
【１０５８】
9.前記抗体又は抗体断片が、スタチン処置に対して実質的に耐性であると更に決定されるか、又は更に決定されたヒトに対する投与のためである、段落1〜8のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０５９】
10.抗体又は抗体断片が、スタチン処置を受けているか、若しくは受けたか、又はスタチン処置に対して応答性が低下したヒトに対する投与のためである、段落1〜9のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０６０】
11.前記抗体又は抗体断片が、前記スタチン処置とは別々に又は同時のヒトに対する投与のためである、段落9又は10の抗体又は抗体断片。
【１０６１】
12.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、段落6〜8のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０６２】
13.前記ヒトが前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性と示され、任意選択で、前記ヒトが更に、配列番号28のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトが、配列番号1において突然変異I474V又はE670Gを含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、段落1〜12のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０６３】
14.前記ヒトが脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態と診断された、段落1〜13のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０６４】
15.前記抗体又は抗体断片が、脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、段落1〜14のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０６５】
16.ヌクレオチド配列が配列番号29又は30である、段落1〜15のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０６６】
17.前記抗体又は抗体断片が、静脈内投与若しくは皮下投与による投与のためであるか、及び/又は注射用調製物中に含まれる、段落1〜16のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１０６７】
さらなる例示的な方法は、以下の通り段落1〜18にある。
1.(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法であって、
前記ヒトに対して、配列番号1における前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合する抗体又は抗体断片を投与する工程を含み、ここでこの抗体又は断片が、配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn、配列番号44の76位に対応するPhe、配列番号44の161位に対応するVal及び配列番号44の257位に対応するAlaからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み、ここで前記ヒトが、(i)IGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメント又はこのヒトが、このようなPro、Asn、Phe、Val及びAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含む抗体を発現し、及び(ii)配列番号1における前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前記前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【１０６８】
ある実施形態では、前記突然変異はI474Vである。別の実施形態では、前記突然変異はE670Gである。
【１０６９】
(b)のある実施形態では、この抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１０７０】
ある例では以下が提供される:-
(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法であって、
前記ヒトに対して、配列番号1における突然変異I474を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合する抗体又は抗体断片を投与する工程を含み、ここでこの抗体又は断片が、配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn、配列番号44の76位に対応するPhe、配列番号44の161位に対応するVal及び配列番号44の257位に対応するAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み、ここで前記ヒトが、(i)IGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメント、及び(ii)配列番号1において前記突然変異I474を含むC末端ドメインを含む前記前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。任意選択で、抗体又は断片は、IGHG2*01ヒト重鎖定常領域を含む。
【１０７１】
(b)のある実施形態では、この抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１０７２】
別の例では以下が提供される:-
(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法であって、
前記ヒトに対して、配列番号1における突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合する抗体又は抗体断片を投与する工程を含み、ここでこの抗体又は断片が、配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn、配列番号44の76位に対応するPhe、配列番号44の161位に対応するVal及び配列番号44の257位に対応するAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み、且つここで前記ヒトは、(i)IGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメント、及び(ii)配列番号1における前記突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含む前記前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【１０７３】
任意選択で、この抗体又は断片は、IGHG2*01ヒト重鎖定常領域を含む。
【１０７４】
(b)のある実施形態では、この抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１０７５】
ある例では、前記抗体又は抗体断片は、配列番号1における前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合することが決定され、ここでこの抗体又は断片は、配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn、配列番号44の76位に対応するPhe、配列番号44の161位に対応するVal及び配列番号44の257位に対応するAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み、且つ前記ヒトは、(i)IGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメント、及び(ii)配列番号1における前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前記前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む。
【１０７６】
2.前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含む前記ヒトを選択する工程を含む、段落1の方法。
【１０７７】
3.この抗体は、配列番号44の72位に対応するPro、配列番号44の75位に対応するAsn、配列番号44の76位に対応するPhe、配列番号44の161位に対応するVal及び配列番号44の257位に対応するAlaを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含む、段落1又は2の方法。
【１０７８】
4.抗体が、IGHG2*01ヒト重鎖定常領域を含む、段落1、2又は3の方法。
【１０７９】
5.ヒトが、配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は配列番号29若しくは30のヌクレオチド配列によってコードされる前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことが決定された、段落1〜4のいずれか1つの方法。
【１０８０】
6.ヒトが、前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、段落1〜5のいずれか1つの方法。
【１０８１】
7.決定する工程が、配列番号1において、突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列についてヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、段落6の方法。
【１０８２】
8.アッセイする工程が、生物学的試料と、
a.配列番号1における突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列に、生物学的試料中で、特異的にハイブリダイズして特定しうるか、又は前記配列のアンチセンスに対して特異的にハイブリダイズする少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、前記核酸が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドに対してハイブリダイズするか、又はアンチセンス配列に対してハイブリダイズし、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成するオリゴヌクレオチドプローブ;並びに/又は
b.配列番号1における突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、連続したヌクレオチドの前記配列が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドを含み、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ
とを接触させる工程;並びに
複合体の存在を検出することによって、ヒトが配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9を含むことを決定する、複合体の有無を検出する工程を含む、段落7の方法。
【１０８３】
9.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で、配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、及び/又はこのアッセイする工程がマルチプレックスフォーマットで行われる、段落7又は8の方法。
【１０８４】
10.前記ヒトが、スタチン処置に対して実質的に耐性であると決定されるか、又は更に決定された、段落1〜9のいずれか1つの方法。
【１０８５】
11.前記ヒトが、スタチン処置を受けているか、若しくは受けたか、又はスタチン処置に対して応答性が低下した、段落1〜10のいずれかの方法。
【１０８６】
12.前記抗体又は抗体断片が、前記スタチン処置とは別々に又は同時にヒトに対して投与される、段落10又は11の方法。
【１０８７】
13.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、段落7〜9のいずれか1つの方法。
【１０８８】
14.前記ヒトが前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性が示され、任意選択で、前記ヒトは更に、配列番号28のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトは、配列番号1において前記突然変異I474V又はE670Gを含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、段落1〜13のいずれか1つの方法。
【１０８９】
15.前記ヒトが脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態を有すると診断された、段落1〜14のいずれか1つの方法。
【１０９０】
16.前記抗体又は抗体断片が、脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、段落1〜15のいずれか1つの方法。
【１０９１】
17.ヌクレオチド配列が配列番号29又は30である、段落1〜16のいずれか1つの方法。
【１０９２】
18.前記抗体又は抗体断片が、静脈内投与若しくは皮下投与によって投与されるか、及び/又は注射用調製物中に含まれる、段落1〜17のいずれか1つの方法。
【１０９３】
さらなる例示的なリガンドは以下の通り段落1〜17にある。
1.(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法における使用のための抗体又は抗体断片であって、
ここでこの抗体又は断片が、配列番号50の84位に対応するVal又は配列番号50の87位に対応するCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含み、且つこの抗体又は断片は、配列番号1における前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)のアミノ酸配列に特異的に結合し、ここで、このヒトが、前記アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、且つIGKC*01ヒト軽鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトが、このようなVal及びCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含む抗体を発現する、抗体又は抗体断片。
【１０９４】
ある実施形態では、前記突然変異はI474Vである。別の実施形態では、前記突然変異はE670Gである。
【１０９５】
(b)のある実施形態では、抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１０９６】
ある例では以下が提供される:-
(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法における使用のための抗体又は抗体断片であって、
ここでこの抗体又は断片が、配列番号50の84位に対応するVal及び配列番号50の87位に対応するCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含み、且つこの抗体又は断片が、配列番号1における突然変異I474Vを含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)のアミノ酸配列に特異的に結合し、ここで、このヒトが、前記アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、且つIGKC*01ヒト軽鎖定常領域遺伝子セグメントを含む、抗体又は抗体断片。任意選択で、抗体又は断片は、IGKC*01ヒト軽鎖定常領域を含む。
【１０９７】
(b)のある実施形態では、この抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１０９８】
別の例では、以下が提供される:-
(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法における使用のための抗体又は抗体断片であって、
ここでこの抗体又は断片が、配列番号50の84位に対応するVal及び配列番号50の87位に対応するCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含み、且つこの抗体又は断片が、配列番号1における突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)のアミノ酸配列に特異的に結合し、ここで、このヒトが、前記アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、且つIGKC*01ヒト軽鎖定常領域遺伝子セグメントを含む、抗体又は抗体断片。任意選択で、この抗体又は断片は、IGKC*01ヒト軽鎖定常領域を含む。
【１０９９】
(b)のある実施形態では、この抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１１００】
ある例では、前記抗体又は抗体断片は、配列番号1において前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合することが決定され、ここでこの抗体又は断片は、配列番号50の84位に対応するVal及び配列番号50の87位に対応するCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含み、且つここで前記ヒトは、(i)IGKC*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメント、及び(ii)配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む。
【１１０１】
2.抗体が、配列番号50の84位に対応するVal又は配列番号50の87位に対応するCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含む、段落1の抗体又は抗体断片。
【１１０２】
3.抗体がIGKC*01ヒトカッパ鎖定常領域を含む、段落1又は2の抗体又は抗体断片。
【１１０３】
4.ヒトが、配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は配列番号29若しくは30のヌクレオチド配列によってコードされる前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことが決定された、段落1〜3のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１０４】
5.方法が、前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列をヒトが含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、ヒトに対する抗体の投与前に行われる、段落1〜4のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１０５】
6.決定する工程が、配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列についてヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、段落5の抗体又は抗体断片。
【１１０６】
7.アッセイする工程が、生物学的試料と、
a.配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列に生物学的試料中で特異的にハイブリダイズしてそれを特定しうるか、又は前記配列のアンチセンスに特異的にハイブリダイズする少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、前記核酸が配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドにハイブリダイズするか、又はアンチセンス配列にハイブリダイズし、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ;並びに/或いは
b.配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、連続したヌクレオチドの前記配列が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドを含み、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ
とを接触させる工程;並びに
複合体の存在を検出することによって、ヒトが配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9を含むことを決定する、複合体の有無を検出する工程
を含む、段落6の抗体又は抗体断片。
【１１０７】
8.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で、配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/或いはこのアッセイする工程がマルチプレックスフォーマットで行われる、段落6又は7の抗体又は抗体断片。
【１１０８】
9.前記抗体又は抗体断片が、スタチン処置に対して実質的に耐性であると更に決定されるか、又は更に決定されたヒトに対する投与のためである、段落1〜8のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１０９】
10.抗体又は抗体断片が、スタチン処置を受けているか、若しくは受けたか、又はスタチン処置に対して応答性が低下したヒトに対する投与のためである、段落1〜9のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１１０】
11.前記抗体又は抗体断片が、前記スタチン処置とは別々に又は同時のヒトに対する投与のためである、段落9又は10の抗体又は抗体断片。
【１１１１】
12.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、段落6〜10のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１１２】
13.前記ヒトが前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性と示され、任意選択で、前記ヒトが更に、配列番号28のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトが、配列番号1において突然変異I474V又はE670Gを含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、段落1〜12のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１１３】
14.前記ヒトが脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態と診断された、段落1〜13のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１１４】
15.前記抗体又は抗体断片が、脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、段落1〜14のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１１５】
16.ヌクレオチド配列が配列番号29又は30である、段落1〜15のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１１６】
17.前記抗体又は抗体断片が、静脈内投与若しくは皮下投与による投与のためであるか、及び/又は注射用調製物中に含まれる、段落1〜16のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１１７】
さらなる例示的な方法は、以下の通り段落1〜18にある。
1.(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法であって、
前記ヒトに対して、配列番号1において前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合する抗体又は抗体断片を投与する工程を含み、ここでこの抗体又は断片が、配列番号50の84位に対応するVal又は配列番号50の87位に対応するCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含み、且つここで前記ヒトが、(i)IGKC*01ヒト軽鎖定常領域遺伝子セグメント(又はこのヒトは、このようなVal及びCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含む抗体を発現する)、及び(ii)配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【１１１８】
ある実施形態では、前記突然変異はI474Vである。別の実施形態では、前記突然変異はE670Gである。
【１１１９】
(b)のある実施形態では、この抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１１２０】
ある例では以下が提供される:-
(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法であって、
前記ヒトに対して、配列番号1において突然変異I474を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合する抗体又は抗体断片を投与する工程を含み、ここでこの抗体又は断片が、配列番号50の84位に対応するVal及び配列番号50の87位に対応するCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含み、且つここで前記ヒトは、(i)IGKC*01ヒト軽鎖定常領域遺伝子セグメント、及び(ii)配列番号1において前記突然変異I474を含むC末端ドメインを含む前記前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。任意選択で、この抗体又は断片は、IGKC*01ヒト軽鎖定常領域を含む。
【１１２１】
(b)のある実施形態では、この抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１１２２】
別の例では以下が提供される:-
(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法であって、
前記ヒトに対して、配列番号1において突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合する抗体又は抗体断片を投与する工程を含み、ここでこの抗体又は断片が、配列番号50の84位に対応するVal及び配列番号50の87位に対応するCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含み、且つここで前記ヒトが、(i)IGKC*01ヒト軽鎖定常領域遺伝子セグメント及び(ii)配列番号1において前記突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含む前記前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。任意選択で、抗体又は断片は、IGKC*01ヒト軽鎖定常領域を含む。
【１１２３】
(b)のある実施形態では、この抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１１２４】
ある例では、前記抗体又は抗体断片は、配列番号1において前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に断片に特異的に結合することが決定され、ここでこの抗体又は断片は、配列番号50の84位に対応するVal及び配列番号50の87位に対応するCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含み、且つここで前記ヒトは、(i)IGKC*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメント、及び(ii)配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む。
【１１２５】
2.前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含む前記ヒトを選択する工程を含む、段落1の方法。
【１１２６】
3.抗体が、配列番号50の84位に対応するVal又は配列番号50の87位に対応するCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含む、段落1又は2の方法。
【１１２７】
4.抗体が、IGKC*01ヒトカッパ鎖定常領域を含む、段落1、2又は3の方法。
【１１２８】
5.ヒトが、配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は配列番号29若しくは30のヌクレオチド配列によってコードされる前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことが決定された、段落1〜4のいずれか1つの方法。
【１１２９】
6.ヒトが、前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、段落1〜5のいずれか1つの方法。
【１１３０】
7.決定する工程が、配列番号1において、突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列についてヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、段落6の方法。
【１１３１】
8.アッセイする工程が、生物学的試料と、
a.配列番号1における突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列に、生物学的試料中で、特異的にハイブリダイズして特定しうるか、又は前記配列のアンチセンスに対して特異的にハイブリダイズする少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、前記核酸が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドに対してハイブリダイズするか、又はアンチセンス配列に対してハイブリダイズし、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成するオリゴヌクレオチドプローブ;並びに/又は
b.配列番号1における突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、連続したヌクレオチドの前記配列が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドを含み、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ
とを接触させる工程;並びに
複合体の存在を検出することによって、ヒトが配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9を含むことを決定する、複合体の有無を検出する工程を含む、段落7の方法。
【１１３２】
9.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で、配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、及び/又はこのアッセイする工程がマルチプレックスフォーマットで行われる、段落7又は8の方法。
【１１３３】
10.前記ヒトが、スタチン処置に対して実質的に耐性であると決定されるか、又は更に決定された、段落1〜9のいずれか1つの方法。
【１１３４】
11.前記ヒトが、スタチン処置を受けているか、若しくは受けたか、又はスタチン処置に対して応答性が低下した、段落1〜10のいずれかの方法。
【１１３５】
12.前記抗体又は抗体断片が、前記スタチン処置とは別々に又は同時にヒトに対して投与される、段落10又は11の方法。
【１１３６】
13.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、段落7〜9のいずれか1つの方法。
【１１３７】
14.前記ヒトが前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性が示され、任意選択で、前記ヒトは更に、配列番号28のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトは、配列番号1において前記突然変異I474V又はE670Gを含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、段落1〜13のいずれか1つの方法。
【１１３８】
15.前記ヒトが脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態を有すると診断された、段落1〜14のいずれか1つの方法。
【１１３９】
16.前記抗体又は抗体断片が、脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、段落1〜15のいずれか1つの方法。
【１１４０】
17.ヌクレオチド配列が配列番号29又は30である、段落1〜16のいずれか1つの方法。
【１１４１】
18.前記抗体又は抗体断片が、静脈内投与若しくは皮下投与によって投与されるか、及び/又は注射用調製物中に含まれる、段落1〜17のいずれか1つの方法。
【１１４２】
さらなる例示的なリガンドは、以下のように段落1〜15にある。
1.(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法における使用のための抗体又は抗体断片であって、
ここでこの抗体又は断片が、ヒトIGLC2*01ラムダ軽鎖定常領域を含み、且つ抗体又は断片が、配列番号1において前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)のアミノ酸配列に特異的に結合し、ここで、このヒトが、前記アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、且つヒトIGLC2*01ラムダ軽鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、ヒトIGLC2*01ラムダ軽鎖定常領域を含む抗体を発現する、抗体又は抗体断片。
【１１４３】
ある実施形態では、前記突然変異はI474Vである。別の実施形態では、前記突然変異はE670Gである。
【１１４４】
(b)のある実施形態では、この抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１１４５】
ある例では、以下が提供される:-
(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法における使用のための抗体又は抗体断片であって
ここでこの抗体又は断片が、ヒトIGLC2*01ラムダ軽鎖定常領域を含み、且つこの抗体又は断片は、配列番号1において突然変異I474Vを含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)のアミノ酸配列に特異的に結合し、ここで、このヒトが、前記アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、且つヒトIGLC2*01ラムダ軽鎖定常領域遺伝子セグメントを含む、抗体又は抗体断片。任意選択で、抗体又は断片は、ヒトIGLC2*01ラムダ軽鎖定常領域を含む。
【１１４６】
(b)のある実施形態では、この抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１１４７】
別の例では、以下が提供される:-
(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法における使用のための抗体又は抗体断片であって、
ここでこの抗体又は断片が、ヒトIGLC2*01ラムダ軽鎖定常領域を含み、且つこの抗体又は断片が、配列番号1において突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)のアミノ酸配列に特異的に結合し、ここで、このヒトが、前記アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、且つヒトIGLC2*01ラムダ軽鎖定常領域遺伝子セグメントを含む、抗体又は抗体断片。任意選択で、この抗体又は断片は、ヒトIGLC2*01ラムダ軽鎖定常領域を含む。
【１１４８】
(b)のある実施形態では、この抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１１４９】
ある例では、前記抗体又は抗体断片は、配列番号1において前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合することが決定され、ここでこの抗体又は断片は、ヒトIGLC2*01ラムダ軽鎖定常領域を含み、且つここで前記ヒトは、(i)IGLC2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメント、及び(ii)配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前記前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む。
【１１５０】
2.ヒトが、配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は配列番号29若しくは30のヌクレオチド配列によってコードされる前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことが決定された、段落1の抗体又は抗体断片。
【１１５１】
3.方法が、前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列をヒトが含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、ヒトに対する抗体の投与前に行われる、段落1又は2の抗体又は抗体断片。
【１１５２】
4.決定する工程が、配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列についてヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、段落3の抗体又は抗体断片。
【１１５３】
5.アッセイする工程が、生物学的試料と、
a.配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列に生物学的試料中で特異的にハイブリダイズしてそれを特定しうるか、又は前記配列のアンチセンスに特異的にハイブリダイズする少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、前記核酸が配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドにハイブリダイズするか、又はアンチセンス配列にハイブリダイズし、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ;並びに/或いは
b.配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、連続したヌクレオチドの前記配列が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドを含み、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ
とを接触させる工程;並びに
複合体の存在を検出することによって、ヒトが配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9を含むことを決定する、複合体の有無を検出する工程
を含む、段落4の抗体又は抗体断片。
【１１５４】
6.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で、配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/或いはこのアッセイする工程がマルチプレックスフォーマットで行われる、段落4又は5の抗体又は抗体断片。
【１１５５】
7.前記抗体又は抗体断片が、スタチン処置に対して実質的に耐性であると更に決定されるか、又は更に決定されたヒトに対する投与のためである、段落1〜6のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１５６】
8.抗体又は抗体断片が、スタチン処置を受けているか、若しくは受けたか、又はスタチン処置に対して応答性が低下したヒトに対する投与のためである、段落1〜7のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１５７】
9.前記抗体又は抗体断片が、前記スタチン処置とは別々に又は同時のヒトに対する投与のためである、段落7又は8の抗体又は抗体断片。
【１１５８】
10.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、段落4〜8のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１５９】
11.前記ヒトが前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性と示され、任意選択で、前記ヒトが更に、配列番号28のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトが、配列番号1において前記PCSK9突然変異I474V又はE670Gを含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、段落1〜10のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１６０】
12.前記ヒトが脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態と診断された、段落1〜11のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１６１】
13.前記抗体又は抗体断片が、脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、段落1〜12のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１６２】
14.ヌクレオチド配列が配列番号29又は30である、段落1〜13のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１６３】
15.前記抗体又は抗体断片が、静脈内投与若しくは皮下投与による投与のためであるか、及び/又は注射用調製物中に含まれる、段落1〜14のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１６４】
さらなる例示的な方法は、以下の通り段落1〜16にある。
1.それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持する方法であって、前記ヒトに対して、配列番号1において前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合する抗体又は抗体断片を投与する工程を含み、ここでこの抗体又は断片が、ヒトIGLC2*01ラムダ軽鎖定常領域を含み、且つここで前記ヒトが、(i)IGLC2*01ヒト軽鎖定常領域遺伝子セグメント、(又はこのヒトは、ヒトIGLC2*01ラムダ軽鎖定常領域を含む抗体を発現する)、及び(ii)配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【１１６５】
ある実施形態では、前記突然変異はI474Vである。別の実施形態では、前記突然変異はE670Gである。
【１１６６】
ある例では以下が提供される:-
それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する方法であって、前記ヒトに対して、配列番号1において突然変異I474を含むC末端ドメインを含む、前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合する抗体又は抗体断片を投与する工程を含み、ここでこの抗体又は断片が、ヒトIGLC2*01ラムダ軽鎖定常領域を含み、且つここで前記ヒトが、(i)IGLC2*01ヒト軽鎖定常領域遺伝子セグメント及び(ii)配列番号1において前記突然変異I474を含むC末端ドメインを含む前記前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。任意選択で、この抗体又は断片は、IGLC2*01ヒト軽鎖定常領域を含む。
【１１６７】
別の例では以下が提供される:-
それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持する方法であって、前記ヒトに対して、配列番号1において突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含む、前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合する抗体又は抗体断片を投与する工程を含み、ここでこの抗体又は断片が、ヒトIGLC2*01ラムダ軽鎖定常領域を含み、且つここで前記ヒトが、(i)IGLC2*01ヒト軽鎖定常領域遺伝子セグメント、及び(ii)配列番号1において前記突然変異E670Gを含むC末端ドメインを含む前記前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。任意選択で、抗体又は断片は、IGLC2*01ヒト軽鎖定常領域を含む。
【１１６８】
ある例では、前記抗体又は抗体断片は、配列番号1において前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合することが決定され、ここでこの抗体又は断片は、ヒトIGLC2*01ラムダ軽鎖定常領域を含み、且つここで前記ヒトは、(i)IGLC2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメント及び(ii)配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前記前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む。
【１１６９】
2.前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含む前記ヒトを選択する工程を含む、段落1の方法。
【１１７０】
3.ヒトが、配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は配列番号29若しくは30のヌクレオチド配列によってコードされる前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことが決定された、段落1又は2の方法。
【１１７１】
4.ヒトが、前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、段落1〜3のいずれか1つの方法。
【１１７２】
5.決定する工程が、配列番号1において、突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列についてヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、段落4の方法。
【１１７３】
6.アッセイする工程が、生物学的試料と、
a.配列番号1における突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列に、生物学的試料中で、特異的にハイブリダイズして特定しうるか、又は前記配列のアンチセンスに対して特異的にハイブリダイズする少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、前記核酸が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドに対してハイブリダイズするか、又はアンチセンス配列に対してハイブリダイズし、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成するオリゴヌクレオチドプローブ;並びに/又は
b.配列番号1における突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、連続したヌクレオチドの前記配列が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドを含み、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ
とを接触させる工程;並びに
複合体の存在を検出することによって、ヒトが配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9を含むことを決定する、複合体の有無を検出する工程を含む、段落5の方法。
【１１７４】
7.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で、配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、及び/又はこのアッセイする工程がマルチプレックスフォーマットで行われる、段落5又は6の方法。
【１１７５】
8.前記ヒトが、スタチン処置に対して実質的に耐性であると決定されるか、又は更に決定された、段落1〜7のいずれか1つの方法。
【１１７６】
9.前記ヒトが、スタチン処置を受けているか、若しくは受けたか、又はスタチン処置に対して応答性が低下した、段落1〜8のいずれかの方法。
【１１７７】
10.前記抗体又は抗体断片が、前記スタチン処置とは別々に又は同時にヒトに対して投与される、段落8又は9の方法。
【１１７８】
11.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、段落5〜7のいずれか1つの方法。
【１１７９】
12.前記ヒトが前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性が示され、任意選択で、前記ヒトは更に、配列番号28のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトは、配列番号1において前記突然変異I474V又はE670Gを含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、段落1〜11のいずれか1つの方法。
【１１８０】
13.前記ヒトが脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態を有すると診断された、段落1〜12のいずれか1つの方法。
【１１８１】
14.前記抗体又は抗体断片が、脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、段落1〜13のいずれか1つの方法。
【１１８２】
15.ヌクレオチド配列が配列番号29又は30である、段落1〜14のいずれか1つの方法。
【１１８３】
16.前記抗体又は抗体断片が、静脈内投与若しくは皮下投与によって投与されるか、及び/又は注射用調製物中に含まれる、段落1〜15のいずれか1つの方法。
【１１８４】
さらなる例示的なリガンドは、以下のように段落1〜15にある。
1.(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法における使用のための抗体又は抗体断片であって、ヒトVH遺伝子セグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJH遺伝子セグメントの組換え由来のヒト可変ドメインを含み、ここでこのVH遺伝子セグメントは、条項80〜90のいずれか1つにおいて定義されており、且つこの抗体又は断片は、配列番号1において前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)のアミノ酸配列に特異的に結合し、ここで、このヒトは、前記アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、且つ前記VH遺伝子セグメントを含むか、又は前記ヒトVH遺伝子セグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJH遺伝子セグメントの組換え由来のVHドメインを含む抗体を発現する、抗体又は抗体断片。
【１１８５】
ある実施形態では、前記突然変異はI474Vである。別の実施形態では、前記突然変異はE670Gである。
【１１８６】
(b)のある実施形態では、この抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１１８７】
2.ヒトが、配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は配列番号29若しくは30のヌクレオチド配列によってコードされる前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことが決定された、段落1の抗体又は抗体断片。
【１１８８】
3.方法が、前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列をヒトが含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、ヒトに対する抗体の投与前に行われる、段落1又は2の抗体又は抗体断片。
【１１８９】
4.決定する工程が、配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列についてヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、段落3の抗体又は抗体断片。
【１１９０】
5.アッセイする工程が、生物学的試料と、
a.配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列に生物学的試料中で特異的にハイブリダイズしてそれを特定しうるか、又は前記配列のアンチセンスに特異的にハイブリダイズする少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、前記核酸が配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドにハイブリダイズするか、又はアンチセンス配列にハイブリダイズし、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ;並びに/或いは
b.配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、連続したヌクレオチドの前記配列が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドを含み、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ
とを接触させる工程;並びに
複合体の存在を検出することによって、ヒトが配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9を含むことを決定する、複合体の有無を検出する工程
を含む、段落4の抗体又は抗体断片。
【１１９１】
6.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で、配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/或いはこのアッセイする工程がマルチプレックスフォーマットで行われる、段落4又は5の抗体又は抗体断片。
【１１９２】
7.前記抗体又は抗体断片が、スタチン処置に対して実質的に耐性であると更に決定されるか、又は更に決定されたヒトに対する投与のためである、段落1〜6のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１９３】
8.抗体又は抗体断片が、スタチン処置を受けているか、若しくは受けたか、又はスタチン処置に対して応答性が低下したヒトに対する投与のためである、段落1〜7のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１９４】
9.前記抗体又は抗体断片が、前記スタチン処置とは別々に又は同時のヒトに対する投与のためである、段落7又は8の抗体又は抗体断片。
【１１９５】
10.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、段落4〜8のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１９６】
11.前記ヒトが前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性と示され、任意選択で、前記ヒトが更に、配列番号28のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトが、配列番号1において突然変異I474V又はE670Gを含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、段落1〜10のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１９７】
12.前記ヒトが脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態と診断された、段落1〜11のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１９８】
13.前記抗体又は抗体断片が、脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、段落1〜12のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１１９９】
14.ヌクレオチド配列が配列番号29又は30である、段落1〜13のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１２００】
15.前記抗体又は抗体断片が、静脈内投与若しくは皮下投与による投与のためであるか、及び/又は注射用調製物中に含まれる、段落1〜14のいずれか1つの抗体又は抗体断片。
【１２０１】
さらなる例示的な方法は以下の通り段落1〜16にある。
1.(a)それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、若しくは以前に低下したコレステロールレベルを維持するか、又は(b)ヒトにおいてPCSK9を標的化する方法、
前記ヒトに対して、配列番号1において前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)に特異的に結合する抗体又は抗体断片を投与する工程を含み、ここでこの抗体又は断片が、ヒトVH遺伝子セグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJH遺伝子セグメントの組換え由来のヒト可変ドメインを含み、ここでこのVH遺伝子セグメントが、条項80〜90のいずれか1つにおいて定義されており、且つここで前記ヒトは、(i)前記VH遺伝子セグメントを含むか、又は前記ヒトVH遺伝子セグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJH遺伝子セグメントの組換え由来のVHドメインを含む抗体を発現し、及び(ii)配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【１２０２】
ある実施形態では、前記突然変異はI474Vである。別の実施形態では、前記突然変異はE670Gである。
【１２０３】
(b)のある実施形態では、この抗体又は断片は、ヒトにおいてコレステロールレベルを処置若しくは低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する。
【１２０４】
2.前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含む前記ヒトを選択する工程を含む、段落1の方法。
【１２０５】
3.ヒトが、配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は配列番号29若しくは30のヌクレオチド配列によってコードされる前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことが決定された、段落1又は2の方法。
【１２０６】
4.ヒトが、前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、段落1〜3のいずれか1つの方法。
【１２０７】
5.決定する工程が、配列番号1において、突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列についてヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、段落4の方法。
【１２０８】
6.アッセイする工程が、生物学的試料と、
a.配列番号1における突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列に、生物学的試料中で、特異的にハイブリダイズして特定しうるか、又は前記配列のアンチセンスに対して特異的にハイブリダイズする少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、前記核酸が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドに対してハイブリダイズするか、又はアンチセンス配列に対してハイブリダイズし、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成するオリゴヌクレオチドプローブ;並びに/又は
b.配列番号1における突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、連続したヌクレオチドの前記配列が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドを含み、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ
とを接触させる工程;並びに
複合体の存在を検出することによって、ヒトが配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9を含むことを決定する、複合体の有無を検出する工程を含む、段落5の方法。
【１２０９】
7.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で、配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、及び/又はこのアッセイする工程がマルチプレックスフォーマットで行われる、段落5又は6の方法。
【１２１０】
8.前記ヒトが、スタチン処置に対して実質的に耐性であると決定されるか、又は更に決定された、段落1〜7のいずれか1つの方法。
【１２１１】
9.前記ヒトが、スタチン処置を受けているか、若しくは受けたか、又はスタチン処置に対して応答性が低下した、段落1〜8のいずれかの方法。
【１２１２】
10.前記抗体又は抗体断片が、前記スタチン処置とは別々に又は同時にヒトに対して投与される、段落8又は9の方法。
【１２１３】
11.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、段落5〜7のいずれか1つの方法。
【１２１４】
12.前記ヒトが前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性が示され、任意選択で、前記ヒトは更に、配列番号28のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトは、配列番号1において前記突然変異I474V又はE670Gを含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、段落1〜11のいずれか1つの方法。
【１２１５】
13.前記ヒトが脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態を有すると診断された、段落1〜12のいずれか1つの方法。
【１２１６】
14.前記抗体又は抗体断片が、脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、段落1〜13のいずれか1つの方法。
【１２１７】
15.ヌクレオチド配列が配列番号29又は30である、段落1〜14のいずれか1つの方法。
【１２１８】
16.前記抗体又は抗体断片が、静脈内投与若しくは皮下投与によって投与されるか、及び/又は注射用調製物中に含まれる、段落1〜15のいずれか1つの方法。
【１２１９】
ある代替法では、本明細書に挙げたような「コレステロールレベルを低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する」方法である代わりに、この方法は、「ヒトPCSK9媒介性の状態又は疾患(例えば、高コレステロール血症、若しくは低コレステロール血症、又は本明細書に開示される任意の他のPCSK9媒介性の疾患又は状態に関連する)を処置及び/又は防止する」ということであり、この突然変異は、代わりにR46L、A53V、N425S、A443T、I474V、Q619P及びE670Gの群から選択される。従って、この代替法では、任意のこのような実施形態は、本明細書の書面の通り開示されるが、この群から選択されるように挙げられた突然変異を伴う。ある例では、この突然変異は、R46Lである。ある例では、この突然変異は、A53Vである。ある例では、この突然変異は、N425Sである。ある例では、この突然変異は、A443Tである。ある例では、この突然変異は、I474Vである。ある例では、この突然変異は、Q619Pである。ある例では、この突然変異は、E670Gである。
【１２２０】
レジメン
A:本発明は更に、以下のレジメン、リガンド及びキットを提供する。
1.まれなバリアントヒトPCSK9を標的化することによって、ヒトにおいてヒトPCSK9媒介性の疾患又は状態を処置するための方法であって、このヒトに対して、前記PCSK9バリアントに対して特異的に結合することが決定されたリガンド(例えば、抗体又は断片)を投与する工程を含み;ここでこのヒトは、前記PCSK9バリアントを発現するか、又はこのヒトのゲノムは、前記PCSK9バリアントをコードするヌクレオチド配列を含み;ここで前記ヒトは、前記疾患又は状態について処置される、方法。
【１２２１】
ある代替法では、条項1によって以下が提供される:-
まれなバリアントヒトPCSK9を標的化するための方法であって、このヒトに対して、前記PCSK9バリアントに対して特異的に結合することが決定されたリガンド(例えば、抗体又は断片)を投与する工程を含み;ここでこのヒトは、前記PCSK9バリアントを発現するか、又はこのヒトのゲノムは、前記PCSK9バリアントをコードするヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、前記ヒトは、前記疾患又は状態について処置される、方法。
【１２２２】
バリアントPCSK9は、例えば、本明細書に記載のような任意のまれなバリアントであってもよい。
【１２２３】
例えば、以下が提供される:
1a.C末端ドメインアミノ酸遺伝子多型(配列番号1に対して比較)を含むPCSK9を標的化することによって、ヒトにおける、PCSK9媒介性の疾患又は状態を処置するための方法であって、このヒトに対して、前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又は670G)(配列番号1にしたがって番号付け)を含むC末端ドメインを含むPCSK9に対して特異的に結合することが決定されたリガンド(例えば、抗体又は断片)を投与する工程を含み;ここでこのヒトが、前記PCSK9を発現するか、又はこのヒトのゲノムが、前記PCSK9をコードするヌクレオチド配列を含み;ここで前記ヒトが、前記疾患又は状態について処置される、方法。
【１２２４】
例えば、以下が提供される:
1b.C末端ドメインアミノ酸遺伝子多型(配列番号1に対して比較)を含むPCSK9を標的化する方法であって、このヒトに対して、前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又は670G)(配列番号1にしたがって番号付け)を含むC末端ドメインを含むPCSK9に特異的に結合することが決定されたリガンド(例えば、抗体又は断片)を投与する工程を含み;ここでこのヒトが、前記PCSK9を発現するか、又はこのヒトのゲノムが、前記PCSK9をコードするヌクレオチド配列を含み;任意選択で、前記ヒトが、前記疾患又は状態について処置される方法。
【１２２５】
ある実施形態では、前記特異的な結合の決定は、結合アッセイデータに対する参照によるものであり、例えば、SPR又はELISAを用いて決定される。決定は、例えば、本発明若しくは別の特許出願において、又は文献記事において示されるデータの知識を、例えば、用いて、印刷された刊行物中の情報を参照してもよい。一旦、このような情報を手にすれば(例えば、結合のさらなる試験なしで)、当業者は、その遺伝子型又は表現型がリガンドの結合特異性に適合する関連のヒトを(本発明の指示によって)処置することができる。
この抗体又は断片は、本明細書における任意の構成、実施例、実施形態、態様、条項又は段落によるものでありうる。
【１２２６】
ある実施形態では、この方法は、前記投与する工程の前に、PCSK9をコードする前記ヌクレオチド配列を含むヒト[ここでこのヒトは、条項1(例えば、1a)における前記ヒトである]を選択する工程を含む。
【１２２７】
2.前記投与する工程の前に、前記リガンドが前記PCSK9に特異的に結合することを、例えば、SPR又はELISAを用いて決定する工程を含む、条項1の方法。
【１２２８】
3.前記PCSK9に対する特異的な結合が、1nM以下、例えば、100、10又は1pM以下という解離定数(Kd)での結合である、条項1又は2の方法。
【１２２９】
4.前記状態が、LDL-コレステロールの上昇であるか、又はLDL-コレステロールの上昇によって生じる、条項1〜3(例えば、条項1a)のいずれかの方法。
【１２３０】
5.条項4の方法(例えば、条項1aとは独立)であって、ここで前記状態が、脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧でから選択される方法。
【１２３１】
6.ヒトが、配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は配列番号29若しくは30のヌクレオチド配列によってコードされる前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことが決定された、条項1〜5(例えば、条項1aとは独立)のいずれか1つの方法。
【１２３２】
7.ヒトが、前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、条項1〜6(例えば、条項1aとは独立)のいずれか1つの方法。
【１２３３】
8.決定する工程が、配列番号1において、突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列についてヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、条項7の方法。
【１２３４】
9.アッセイする工程が、生物学的試料と、
a.配列番号1における突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列に、生物学的試料中で、特異的にハイブリダイズして特定しうるか、又は前記配列のアンチセンスに対して特異的にハイブリダイズする少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、前記核酸が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドに対してハイブリダイズするか、又はアンチセンス配列に対してハイブリダイズし、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成するオリゴヌクレオチドプローブ;並びに/又は
b.配列番号1における突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、連続したヌクレオチドの前記配列が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドを含み、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ
とを接触させる工程;並びに
複合体の存在を検出することによって、ヒトが配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9を含むことを決定する、複合体の有無を検出する工程を含む、条項8の方法。
【１２３５】
10.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で、配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、及び/又はこのアッセイする工程がマルチプレックスフォーマットで行われる、条項8又は9の方法。
【１２３６】
11.前記ヒトが、スタチン処置に対して実質的に耐性であると決定されるか、又は更に決定された、条項1〜10のいずれか1つの方法。
【１２３７】
12.前記ヒトが、スタチン処置を受けているか、若しくは受けたか、又はスタチン処置に対して応答性が低下した、条項1〜11のいずれかの方法。
【１２３８】
13.前記抗体又は抗体断片が、前記スタチン処置とは別々に又は同時にヒトに対して投与される、条項11又は12の方法。
【１２３９】
14.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、条項8〜10のいずれか1つの方法。
【１２４０】
15.前記ヒトが前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性が示され、任意選択で、前記ヒトは更に、配列番号28のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトは、配列番号1において前記突然変異I474V又はE670Gを含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、条項1〜14のいずれか1つの方法。
【１２４１】
16.前記ヒトが脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態を有すると診断された、条項1〜15のいずれか1つの方法。
【１２４２】
17.前記抗体又は抗体断片が、脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、条項1〜16のいずれか1つの方法。
【１２４３】
18.ヌクレオチド配列が配列番号29又は30である、条項1〜17のいずれか1つの方法。
【１２４４】
19.前記抗体又は抗体断片が、静脈内投与若しくは皮下投与によって投与されるか、及び/又は注射用調製物中に含まれる、条項1〜18のいずれか1つの方法。
【１２４５】
20.前記リガンドがPCSK9に特異的に結合する、条項1〜19のいずれか1つの方法における使用のためのリガンド(例えば、抗体又は断片)。
【１２４６】
21.条項20のリガンド及び条項1〜19のいずれか1つの方法を行うための説明書を含むキット。
【１２４７】
B:本発明は更に、以下のレジメン、リガンド及びキットを提供する。
1.それを必要とするヒトにおいてコレステロールレベルを低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する方法であって:
a.前記ヒトに対して抗ヒトPCSK9リガンド(例えば、抗体又は断片)を投与することによって初期処置期間の間前記ヒトの初期処置を行う工程であって、ここで(i)リガンドが、前記PCSK9突然変異(例えば、I474V又は670G)(配列番号1にしたがって番号付け)を含むC末端ドメインを含むPCSK9に対して特異的に結合することが決定された;(ii)ヒトが、前記PCSK9を発現するか、又はこのヒトのゲノムは、前記PCSK9をコードするヌクレオチド配列を含み、及び(iii)ヒトが、コレステロールレベルを低下するか又は維持するためにスタチン処置を受けたか、又は受けており;ここで初期処置が、ヒトに対するリガンドの単回又は複数回用量の投与を含む工程と;
b.(i)スタチン処置を終わらせるか(ii)ヒトにスタチン処置を控えるか;又は(iii)前記の初期処置期間の後、スタチン処置を低下することを決定する工程と;
c.前記期間が満了した後、前記患者にリガンドを投与し続け、それによって前記ヒトにおいて、コレステロールレベルを低下するか、又は以前に低下したコレステロールレベルを維持する工程と、
を含む、方法。
【１２４８】
ある実施形態では、前記特異的な結合の決定は、結合アッセイデータを参照することによるものであり、例えば、SPR又はELISAを用いて決定される。決定は、例えば、本発明若しくは別の特許出願において、又は文献記事において示されるデータの知識を、例えば、用いて、印刷された刊行物中の情報を参照してもよい。一旦、このような情報を手にすれば(例えば、結合のさらなる試験なしで)、当業者は、その遺伝子型又は表現型がリガンドの結合特異性に適合する関連のヒトを(本発明の指示によって)処置することができる。
【１２４９】
この抗体又は断片は、本明細書における任意の構成、実施例、実施形態、態様、条項又は段落によるものでありうる。
【１２５０】
前記リガンドの薬学的に有効な量が投与される。
【１２５１】
ある実施形態では、この方法は、前記投与する工程の前に、PCSK9をコードする前記ヌクレオチド配列を含むヒト(ここでこのヒトは、条項1に挙げられる前記ヒトである)を選択する工程を含む。
【１２５２】
ある例では、初期処置期間は、7日、14日、21日、28日、1ヵ月、2ヵ月、3ヵ月、4ヵ月、5ヵ月、6ヵ月、7ヵ月、8ヵ月、9ヵ月又は1年である。
【１２５３】
2.前記ヒトが、スタチン関連記憶障害若しくはスタチン関連神経変性状態に罹っていたか、又は罹っているか、或いは糖尿病のリスクがあるか又は増大している(例えば、スタチン関連糖尿病)、条項1の方法。
【１２５４】
3.前記初期処置の前に、前記ヒトが、スタチン関連記憶障害若しくはスタチン関連神経変性状態を有しているか、若しくは罹っているか、又は糖尿病(例えば、スタチン関連糖尿病)を有しているか、若しくはそのリスクが増大していることを決定する工程を含む、条項1又は2の方法。
【１２５５】
4.工程(b)の後、[例えば、工程(c)の間]に、記憶障害若しくは前記神経変性状態が改善されていたことを決定する工程を含む、条項2又は3に記載の方法。
【１２５６】
5.前記ヒトが、40歳超の年齢(例えば、50以上、55以上、60以上又は、65以上、又は70以上)である、条項1〜4のいずれか1つの方法。
【１２５７】
6.工程(c)が、前記初期処置期間後に投与されるべき前記リガンドの用量を増大することを決定する工程、及び前記ヒトに対して前記増大した用量を投与する工程を含む、条項1〜5のいずれか1つの方法。
【１２５８】
7.工程(b)が、ヒトがスタチンによる処置に不耐性又は不応性であることを決定する工程を含む、条項1〜6のいずれか1つの方法。
【１２５９】
8.前記初期処置が、リガンドに加えて、ヒトに対する、スタチン、フェノフィブラート[例えば、Tricor(商標)又はLofibra(商標)]又はエゼチミブの投与を含む、条項1〜7のいずれか1つの方法。
【１２６０】
9.工程(b)が、工程(c)の間のスタチン、フェノフィブラート[例えば、Tricor(商標)又はLofibra(商標)]又はエゼチミブ処置を終わらせるか、又は低下させる工程を含む、条項1〜8のいずれか1つの方法。
【１２６１】
10.工程(c)の間にリガンド用量を増量する(すなわち、初期処置用量に比較して増量する)工程を含む、条項1〜9のいずれか1つの方法。
【１２６２】
11.前記ヒトが初期処置の前に高用量のスタチン処置を受けており、且つここで工程(c)が、前記リガンドに加えてより低い(例えば、中又は低)用量のスタチン処置を施す工程を含む、条項1〜10のいずれか1つの方法。
当業者は、高用量、中用量及び低用量の処置という意味(及び各々の患者、例えば、患者のボディマスに応じて決定する方法)にはなじみがある。例えば、スタチンは、ロスバスタチン、アトルバスタチン及びシムバスタチンから選択される。
例えば、毎日のスタチンの用量は以下の通りである:-低は10〜20mg(例えば、10mg);中は>20且つ<60mg(例えば、40mg);高は、60〜100mg(例えば、80mg)。
【１２６３】
12.前記ヒトが、初期処置の前に中用量のスタチン処置を受け、且つここで工程(c)が、前記リガンドに加えて、より低い(例えば、低)用量のスタチン処置を施す工程を含むか、又はスタチンを投与しない、条項1〜10のいずれか1つの方法。
【１２６４】
13.ヒトが、初期処置の前に低用量のスタチン処置を受け、且つここで工程(c)が、前記リガンドに加えて、スタチンを投与しない、条項1〜10のいずれか1つの方法。
【１２６５】
14.初期処置の前に、リガンドが、前記PCSK9に特異的に結合することを、例えば、SPR又はELISAを用いて決定する工程を含む、条項1〜13のいずれか1つの方法。
【１２６６】
15.前記PCSK9に対する特異的な結合が、1nM以下、例えば、100、10又は1pM以下という解離定数(Kd)での結合である、条項1〜14のいずれか1つの方法。
【１２６７】
16.ヒトが、脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される状態のリスクがあるか、又はそれらに罹っている、条項1〜15のいずれかの方法。
【１２６８】
17.工程(c)がヒトにおける前記状態のリスクを処置又は低下する、条項16の方法。
【１２６９】
18.ヒトが、配列番号1において前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は配列番号29若しくは30のヌクレオチド配列によってコードされる前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことが決定された、条項1〜17のいずれか1つの方法。
【１２７０】
19.ヒトが、前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9及び/又は前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含む前駆タンパク質転換酵素スブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)バリアントタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、条項1〜18のいずれか1つの方法。
【１２７１】
20.決定する工程が、配列番号1において、突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列についてヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、条項19の方法。
【１２７２】
21.アッセイする工程が、生物学的試料と、
a.配列番号1における突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列に、生物学的試料中で、特異的にハイブリダイズして特定しうるか、又は前記配列のアンチセンスに対して特異的にハイブリダイズする少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、前記核酸が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドに対してハイブリダイズするか、又はアンチセンス配列に対してハイブリダイズし、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成するオリゴヌクレオチドプローブ;並びに/又は
b.配列番号1における突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブであって、連続したヌクレオチドの前記配列が、配列番号28中に存在しない前記選択された配列中に存在する少なくとも1つのヌクレオチドを含み、それによって配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9をコードするヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、オリゴヌクレオチドプローブ
とを接触させる工程;並びに
複合体の存在を検出することによって、ヒトが配列番号1において突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むC末端ドメインを含むPCSK9を含むことを決定する、複合体の有無を検出する工程を含む、条項20の方法。
【１２７３】
22.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で、配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、及び/又はこのアッセイする工程がマルチプレックスフォーマットで行われる、条項20又は21の方法。
【１２７４】
23.前記ヒトが、スタチン処置に対して実質的に耐性であると決定されるか、又は更に決定された、条項1〜22のいずれか1つの方法。
【１２７５】
24.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、条項20〜22のいずれか1つの方法。
【１２７６】
25.前記ヒトが前記突然変異(例えば、I474V又はE670G)を含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性が示され、任意選択で、前記ヒトは更に、配列番号28のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトは、配列番号1において前記突然変異I474V又はE670Gを含むPCSK9C末端ドメインをコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、条項1〜24のいずれか1つの方法。
【１２７７】
26.前記ヒトが脂質障害、高リポタンパク質血症、高脂血症、脂質異常症、高コレステロール血症、心発作、脳卒中、冠動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、跛行(例えば、コレステロール上昇に関連する跛行)及び高血圧から選択される少なくとも1つの状態を有すると診断された、条項1〜25のいずれか1つの方法。
【１２７８】
27.ヌクレオチド配列が配列番号29又は30である、条項1〜26のいずれか1つの方法。
【１２７９】
28.前記リガンド(例えば、抗体又は抗体断片)が、静脈内若しくは皮下投与によって投与されるか、及び/又は注射用調製物の中に含まれる、条項1〜27のいずれか1つの方法。
【１２８０】
29.条項1〜28のいずれか1つの方法における使用のためのリガンド(例えば、抗体又は断片)であって、PCSK9に特異的に結合するリガンド。
【１２８１】
30.条項29のリガンド、及び条項1〜28のいずれか1つの方法を行うための説明書を含むキット。
【１２８２】
本発明の任意の態様の例では、リガンド(例えば、抗体又は断片、例えば、アリロクマブ、ボコビズマブ若しくはエボロクマブ、又は316P若しくは31H4の可変ドメインを含む抗体又は断片)が、ヒトに対して75〜150mgという2週用量で投与される(例えば、2週間にわたって75〜150mgが1回又は2回投与される)。ある例では、このリガンドは、ヒトに対するこのような投与のためである。
【１２８３】
PCSK9バリアントに対する本発明のリガンドの特異的な結合の決定
結合のSPR決定の方法
PCSK9バリアントに対する抗体の結合は、ProteOn XPR36(商標)Arrayシステム(BioRad)を用いてSPRによって行った。抗ヒトIgG表面(Jackson Labs 109-005-008)は、一級アミンカップリングによってGLC Biosensorチップで作製した。試験抗体は、この表面上にリガンドとして捕獲された。PCSK9バリアントを分析物として用い、捕獲された抗体の上を256nM、64nM、16nM、4nM及び1nMで通過させた。結合曲線は、緩衝液注入物(すなわち、0nM)を用いて二重に参照して、ベースラインのドリフト、及び注入物のアーチファクトを除去した。捕獲表面の再生は、100mMのリン酸を用い、これで捕獲された抗体を除去して、捕獲及び結合の別のサイクルを可能にする。生成した結合センサーグラムを、ProteOn XPR36 Arrayシステム解析ソフトウェアに固有の1:1モデルを用いて解析した。このアッセイは且つ泳動緩衝液として1×HBS-EP(Teknova社)を用いて25℃で行う。
【１２８４】
データ
3つの抗体を試験して、得られた結合データを下に示す[Table 3(表4)]。抗体316P及び31H4は、米国特許出願公開第20110065902A1号に開示される抗体である(これらの抗体及びそれらの可変ドメインの配列は、本発明における可能性のある使用、及び本明細書の請求項における可能性のある包含のために、参照により本明細書に援用される)。抗体316Pは、ヒトVH3-23*04及びJH2*01(Dを伴う)の組換え由来の重鎖可変ドメイン、並びにヒトVK4-1*01及びJK2*01の組換え由来の軽鎖可変ドメインを含む。
【１２８５】
エボロクマブは、ヒトIGHG2*01重鎖及びヒトIGLC2*01ラムダ軽鎖、ヒトIGHV1-18*01及びIGHJ6*01(Dセグメントを伴う)の組換え由来のVH、並びにヒトIGLV2-14*01及びIGU2*01の組換え由来のVλを含む。
【１２８６】
【表４】
0006720079.tif 000011
【１２８７】
結果
この結果によって、試験した全ての抗体が、PCSK9バリアントに等しく結合することが示され、ここで見られたいずれの結合のバリエーションも、このような強力な親和性相互作用について実験誤差内であることが示された。
【１２８８】
従って、本発明は、以下のプロファイルを有する抗体が、本発明の1つ又は複数のバリアントに特異的に結合しうることを決定する:-
1.抗体(例えば、316P又はアリロクマブ)であって、ヒトIGHV3-23*04及びIGHJH2*01(Dを伴う)の組換え由来の重鎖可変ドメイン、並びにヒトIGKV4-1*01及びIGKJ2*01の組換え由来の軽鎖可変ドメインを含む抗体か;又は
2.抗体(例えば、エボロクマブ)であって、ヒトIGHV1-18*01及びIGHJ6*01(Dセグメントを伴う)の組換え由来のヒト重鎖可変ドメイン、並びにヒトIGLV2-14*01及びIGLJ2*01の組換え由来の軽鎖可変ドメインを含む、抗体。
【１２８９】
従って、本発明によれば、当業者には、PCSK9バリアントに対するリガンドの特異的な結合の必要な決定が得られる。この決定の適用は、本発明の方法及び他の態様の状況において上記される。
【１２９０】
引用文献:
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【１２９１】
(実施例2)
IL4受容体アルファ(IL4Ra;CD124)
インターロイキン-4(IL-4、B細胞刺激因子又はBSF-1としても公知)は、表面の免疫グロブリンに対する低濃度の抗体に対する応答において、B細胞の9を刺激するその能力によってもともと特徴付けられた。IL-4は、T細胞、肥満細胞、顆粒球、巨核球及び赤血球の増殖刺激を含む、広範なスペクトルの生物学的活性を保有することが示された。IL-4は、休止しているB細胞においてクラスIIの主要組織適合性複合体分子の発現を誘導し、刺激されたB細胞によるIgE及びIgGIのアイソタイプの分泌を向上させる。
【１２９２】
ある例では、本発明は、それを必要とするヒトにおいて、IL4Ra媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下する方法であって、前記ヒトに対して、ヒトIL4RAタンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含む方法を提供する。本発明はまた、対応するリガンドも提供する。
【１２９３】
本発明は、抗IL4Raリガンド;並びに本明細書に記載されるようなIL4Ra結合性又は標的化リガンドを提供する。このリガンドは、種々の有用性を有する。このリガンドのいくつかは、例えば、特異的な結合アッセイにおいて、ヒトを遺伝子型判定又は表現型判定するために、IL4Ra(特にヒトIL4Ra又はそのリガンド)の親和性精製において、IL4Ra活性の他のアンタゴニストを特定するためのスクリーニングアッセイにおいて、有用である。本発明のいくつかのリガンドは、IL4に対するIL4Raの結合を阻害するか、又はIL4Ra媒介性の活性を阻害するために有用である。
【１２９４】
抗IL4Raリガンド(例えば、抗体及びアンチセンスRNA)は、いわゆる「野性型」ヒトIL4Raの標的化及び中和に基づいて開発され、これは共通して存在する型である(例えば、配列番号67を参照のこと)。このような治療は、この型のヒトIL4RAを保有するヒト患者に有用であるが、本発明者は、ヒト集団の中でIL4Raのまれな型ではあるが、やはり天然に存在する型の標的化の可能性を調べるのに有用であるとみなした。このようにして、本発明者は、IL4RA活性で媒介されるか、又はそれに関連する疾患及び状態に対して妥当であるヒトの処置、予防及び診断のための有用な標的として(タンパク質又は核酸レベルで)機能しうるまれなヒトIL4Ra型の自然な出現及び分布への洞察に到達した。これによって、特に、一般的なIL4Ra遺伝子又はタンパク質を欠くヒトにおけるテーラーメイド治療、予防及び診断が提供される。
【１２９５】
当業者は、アミノ酸バリエーションへ翻訳するSNP又は他の変化が、標的とすべきヒト標的の活性及び/又は高次構造における可変性を生じうることを承知している。これによって、遺伝子型判定並びにタンパク質及びヌクレオチドの可変性の知識を用いて、患者の医療及び診断をより有効にテーラーメイドする個人化医療に大きな関心が生じた。従って、本発明は、まれなIL4Ra多形性のバリアント型に特異的に向けられたテーラーメイド医薬品及び試験を提供する。このような形態又は「対立遺伝子」は、(ヌクレオチドレベルで)、対応する共通型のヌクレオチド及びアミノ酸配列から、ヌクレオチドレベル及びアミノ酸レベルで1つ又は複数の変化を含み、すなわち、ヒトでのタンパク質標的の1つ又は複数の対応する変化に翻訳するヌクレオチドレベルでの1つ又は複数の非同義変化が存在する。
【１２９６】
更に、本発明者は驚くべきことに、まれな天然型は、共通型よりもかなり低頻度でヒトに存在するが、それにもかかわらず、多数の且つ民族的に多様なヒト集団で示され、示された民族集団あたり通常は多くのヒトの例があることに気付いた。従って、本発明者は、このようなまれな型を標的化することによって、多くのヒト民族集団にわたって、有効な処置、予防又は診断が提供され、それによって本発明の有用性が拡大されることに気付いた。
【１２９７】
この認識によって、本発明者は、IL4Ra媒介性の又は関連する疾患若しくは状態の治療及び/又は予防のために、ヒト患者に対する投与のための抗IL4Raリガンドの選択を導くことに関して、本発明の重大な産業的及び医学的適用があることに気付いた。この方法では、患者は、患者の遺伝子又は表現型の構成によって決定されるその必要性に対するテーラーメイド薬物及びリガンドを受ける。それと同調して、本発明は、このような処置に関連する患者の遺伝子型判定及び/又は表現型判定を提供し、それによって薬物を患者に適切に適合させることを可能にする。これは、医学的効能の機会を増加させ、患者に適合しない薬物又はリガンドを使用した劣った処置(例えば、乏しい効能及び/又は副作用)の見込みを低減し、医薬品の処方ミス及び浪費を回避する。
【１２９８】
この考えを発展させるのに、この非限定的な例では、本発明者は、以下の基準に基づいて一連のヒトIL4Raバリアントを決定することを決めたが、本発明者が気付いたこれらの基準は、ヒト集団におけるテーラーメイドの必要性に有用な医学的薬物及び診断を提供する。本発明者は、以下の4つの基準のうち少なくとも3つを有するバリアントを選択した:
35%以下という累積ヒト対立遺伝子頻度を有する天然に存在するヒトIL4Raバリエーション;
約50%以下という総ヒト遺伝子型頻度を有する天然に存在するヒトIL4Raバリエーション;
多くの異なるヒト民族集団で見出される天然に存在するヒトIL4Raバリエーション[1000ゲノムプロジェクトの標準的カテゴリー化を用いる;下のTable 12(表13)を参照のこと];及び
このような多くの異なる民族集団にわたって分布する多くの個体において見出される天然に存在するヒトIL4Raバリエーション。
【１２９９】
これらの基準に基づいて、本発明者は、下のTable 11(表12)に列挙されるバリアントを特定した。本発明者の選択には、追加の又は代替の検討として、標的タンパク質中のアミノ酸残基を変更しないサイレントバリエーションとは対照的に、対応するIL4Ra型におけるアミノ酸バリエーションを生じたヌクレオチドバリエーション(すなわち、非同義的バリエーション)についての選択を含んだ。
【１３００】
ある例では、本発明は、それを必要とするヒトにおいて、IL4Ra媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下する方法であって、前記ヒトに対して、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される突然変異を含むヒトIL4RAタンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含む方法を提供する。下に更に説明される通り、これらのアミノ酸バリエーションは、多くの集団で見出されるヒトにおける天然に存在するIL-4Raバリアントで見出される。前記ヒトは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。
【１３０１】
ある例は、それを必要とするヒトにおいてIL4Ra媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下するためのリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を提供し、この方法は、前記ヒトに対して、前記リガンドを投与する工程を含み、ここでこのリガンドは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される突然変異を含むヒトIL4RAタンパク質に特異的に結合する。前記ヒトは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む、前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。
【１３０２】
ある例では、本発明は、ヒトにおけるIL4Raを標的化する方法であって、前記ヒトに対して、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される突然変異を含むヒトIL4RAタンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含む方法を提供する。前記ヒトは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。ある例では、このヒトは、IL4Ra媒介性の疾患又は状態に罹っているか、又はそのリスクがある。ある例では、この方法は、ヒトにおけるIL4Ra媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は軽減する。
【１３０３】
ある例ではまた、ヒトにおいてIL4Raを標的化するためのリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)が提供され、この方法は、前記ヒトに対して、前記リガンドを投与する工程を含み、ここでこのリガンドは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される突然変異を含むヒトIL4RAタンパク質に特異的に結合する。前記ヒトは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。ある例では、このヒトは、IL4Ra媒介性の疾患又は状態に罹っているか、又はそのリスクがある。ある例では、この方法は、ヒトにおけるIL4Ra媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は軽減する。
【１３０４】
ある実施形態では、(i)この抗体又は断片は、ヒトVHセグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このヒトVHセグメントは、配列番号40のフレームワーク1をコードしており、且つここで、前記ヒトは、配列番号40のフレームワーク1をコードしているVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、配列番号40のフレームワーク1を含むVHドメインを発現し;且つ、ここで(ii)前記ヒトは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。
【１３０５】
更に、又は代わりに、ある例では、(i)この抗体又は断片は、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含む、ヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトは、IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;且つ、ここで(ii)前記ヒトは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。
【１３０６】
IL-4の生物学的活性は、IL-4の特定の細胞表面受容体によって媒介される。ヒトIL-4受容体アルファ(hlL-4Ra)は、例えば、米国特許第5,599,905号、同第5,767,065号、及び同第5,840,869号に記載される。hlL-4Rに対する抗体は、米国特許第5,717,072号に記載される。
【１３０７】
hIL-4Rに対する抗体を用いる方法は、米国特許第5,714,146号;同第5,985,280号;及び同第6,716,587号に記載される。
【１３０８】
ヒトIL-4Ra(別名IL-4Ra)サブユニット(Swiss Protアクセッション番号P24394)は、高い親和性でヒトIL-4に結合する140kDaの1型膜タンパク質である[AndrewsらJ. Biol. Chem(2002)277:46073〜46078頁]。IL-4/IL-4Ra複合体は、一般的なガンマ鎖(γc、CD132)又はIL-13Rアルファ1(IL-13Ra1)サブユニットのいずれかと、IL-4上のドメインを介して二量体化して、それぞれがI型及びII型受容体と一般に呼ばれる、2つの異なるシグナル伝達複合体を作成する。或いは、IL-13は、IL-13Ra1に結合して、IL-13/IL-13Ra1複合体を形成し得、これはIL-4Raサブユニットを補充してII型受容体複合体を形成する。従って、IL-4Raは、IL-4及びIL-13の両方の生物学的活性を媒介する(Gessnerら、Immunobiology、201:285、2000によって総説される)。インビトロの研究によって、IL-4及びIL-13は、多数の細胞型、例えば、T細胞、B細胞、好酸球、肥満細胞、好塩基球、気道平滑筋細胞、呼吸器上皮細胞、肺線維芽細胞及び内皮細胞において、エフェクター機能を活性化することが示された(Steinkeら、Resp Res、2:66、2001によって、及びWillis-Karp、Immunol Rev、202:175、2004によって総説される)。
【１３０９】
IL-4は、その受容体(IL-4R)への結合によって、B細胞におけるIgE合成の誘導及びT細胞のTh2表現型への分化を通じて、喘息に存在する気道の炎症の発症に必須である。デュピルマブ(Dupilumab)は、アトピー性疾患の処置のために設計されたモノクローナル抗体である。デュピルマブは、インターロイキン-4受容体のアルファサブユニットに結合する。IL-4Rアルファの遮断を通じて、デュピルマブは、アレルギー性疾患の病態生理学にかかわっているIL-4及びIL-13の経路の両方のシグナル伝達をモジュレートする。本発明による抗IL4Raリガンド、抗体及び断片は、例えば、アレルギー性疾患のリスクを処置又は低下するためにも有用でありうる。
【１３１０】
ある例では、このリガンド、抗体又は断片は、アレルギー性喘息、好酸球性喘息又はアトピー性皮膚炎のリスクを処置又は低下するためであり(又はそのリスクを処置若しくは低下し)任意選択で、この抗体はデュピルマブである。
【１３１１】
喘息におけるその役割に加えて、IL-4Raは、例えば、以下のような、多数の他の病理と関連していた(本発明による抗IL4Raリガンド、抗体、及び断片は、例えば、これらの疾患又は状態のいずれか1つのリスクを処置又は低下するために用いられうる):
【１３１２】
慢性閉塞性肺疾患(COPD)は、種々の程度の慢性気管支炎、末梢気道疾患、及び肺気腫を有する患者集団を含み、且つ現在の喘息に基づくの治療に対して応答が乏しい進行性で不可逆な肺機能低下によって特徴付けられる。COPDの背景にある原因は、まだ十分に理解されていない。「オランダ仮説」では、COPD及び喘息に対する共通の感受性があること、したがって、同様の機構が両方の障害の病原性に寄与しうることが提唱されている(Sluiterら、Eur Respir J)。Zhengら[J Clin Invest、106(9):1081〜93頁、2000]は、マウスの肺におけるIL-13の過剰発現が、肺気腫を生じ、粘液の産生及び炎症を上昇し、ヒトCOPDの様相に影響したと論証した。更に、AHR(アレルギー性の炎症のマウスモデルにおけるIL-13依存性の応答)が、喫煙者における肺機能低下の予兆であることが示された[Tashkinら、Am J Respir Crit Care Med、153(6 Pt 1):1802〜11頁、1996]。IL-13プロモーターの遺伝子多型とCOPD発症の感受性との間に関連があることも決定された[Van Der Pouw Kraanら、Genes Immun、3(7):436〜9頁、2002]。したがって、この兆候は、IL-4/IL-13経路(そして特にIL-13)が、COPDの病原性に重要な役割を果たすということである。
【１３１３】
喘息に加えて、IL-4/II-13経路は、他の線維性の状態、例えば、全身性硬化症[Hasegawaら、J Rheumatol、24(2):328〜32頁、1997]、肺線維症[Hancockら、Am J Respir Cell Mol Biol、18(1):60〜5頁、1998]、寄生生物誘発性肝線維症[Fallonら、J Immunol、164(5):2585〜91頁、2000;Chiaramonteら、J Clin Invest、104(6):777〜85頁、1999;Chiaramonte Hepatology 34(2):273〜82頁、2001]、及び嚢胞性線維症[Hauberら、J. Cyst Fibr 2:189頁、2003]と関連していた。
【１３１４】
IL-4、及びある程度までのIL-13は、B細胞増殖、免疫グロブリン分泌、及びFcepsilonRの発現のようなB細胞媒介性の活性に重要である。IL-4Ra阻害剤の臨床的な適用としては、例えば、IgE合成を抑制するためのアレルギー療法における使用(例えば、アトピー性皮膚炎及び食物アレルギーを含む)、移植片拒絶を防止するための移植療法における使用、並びに遅延型過敏症又は接触過敏症反応の抑制が挙げられる。
【１３１５】
Il-4Rアンタゴニストはまた、アレルギー免疫療法に対するアジュバントとして、及びワクチンアジュバントとしての使用も見出しうる。
【１３１６】
ヒト集団におけるIL-4Ra遺伝子多型は、記載されており(Gessnerら、Immunobiology、201:285頁、2000によって総説される)、そしてIgEのレベル又は臨床上のアトピーとの関連がいくつかの集団で報告されている。例えば、V75R576 IL-4Raは、アレルギー性喘息に関連し、且つIL-4Raの機能を向上させた[RismaらJ. Immunol. 169(3):1604〜1610頁、2002年]。
【１３１７】
本発明による抗IL4Raリガンド、抗体及び断片は、任意選択で、例えば、欧州特許第2604628号の実施例に詳細に記載されるように、高い力価でIL-4Raを中和する。中和とは、IL-4Raによって媒介される生物学的活性の阻害を意味する。本発明によるリガンド、抗体及び断片は、IL-4Raによって媒介される1つ又は複数の活性を中和しうる。この生物学的活性の阻害は、ガンマ鎖(又はIL-13Ra)及び関連の可溶性リガンド、例えば、IL-4又はIL-13のいずれかとIL-4Raがシグナル伝達複合体を形成することを防止することによって媒介される可能性がある。
【１３１８】
そのIL-4Ra含有受容体複合体を通じたIL-4又はIL-13シグナル伝達の中和は、IL-4又はIL-13刺激性のTF-1細胞増殖の阻害によって測定されうる。
【１３１９】
本発明によるリガンド、抗体又は断片は、例えば、デュピルマブ、又はその開示(配列、例えば、VH、VL並びに重鎖及び軽鎖の配列を含む)が本明細書の1つ又は複数の請求項における可能性のある包含のために参照により本明細書に援用されるWO08/054606(Regeneron)、欧州特許第2604628号(Medimmune)、WO01/92340(immnunex)若しくはWO05/047331(Immunex)に開示されるいずれか1つである。本発明によるリガンド、抗体又は断片のさらなる態様によれば、ヒトインターロイキン-4受容体アルファ(hlL-4Ra)及びカニクイザルインターロイキン-4受容体アルファ(cyIL-4Ra)に結合しうる。カニクイザルIL-4RaのcDNA配列は、配列番号455として欧州特許第2604628号に示される。ある特定の実施形態では、この抗体又は断片は、ヒト抗体又は断片である。本発明によるリガンド、抗体又は断片は、例えば、デュピルマブのVH及び/若しくはVLを含むか、又はデュピルマブの重鎖及び/若しくは軽鎖を含む抗体若しくは断片である。一実施形態では、このリガンド、抗体又は断片は、配列番号69を含むVHドメインを含む。一実施形態では、このリガンド、抗体又は断片は、配列番号70を含むVLドメインを含む。一実施形態では、このリガンド、抗体又は断片は、配列番号71を含む重鎖を含む。一実施形態では、このリガンド、抗体又は断片は、配列番号72を含む軽鎖を含む。
【１３２０】
特定の実施形態では、本発明のリガンド、抗体又は断片は、Fc領域を含み、ここでこのFc領域は、Kabatに示されるようなEUインデックスで番号付けした234D、234E、234N、234Q、234T、234H、234Y、234I、234V、234F、235A、235D、235R、235W、235P、235S、235N、235Q、235T、235H、235Y、235I、235V、235F、236E、239D、239E、239N、239Q、239F、239T、239H、239Y、240I、240A、240T、240M、241W、241L、241Y、241E、241R、243W、243L 243Y、243R、243Q、244H、245A、247L、247V、247G、251F、252Y、254T、255L、256E、256M、262I、262A、262T、262E、263I、263A、263T、263M、264L、264I、264W、264T、264R、264F、264M、264Y、264E、265G、265N、265Q、265Y、265F、265V、265I、265L、265H、265T、266I、266A、266T、266M、267Q、267L、268E、269H、269Y、269F、269R、270E、280A、284M、292P、292L、296E、296Q、296D、296N、296S、296T、296L、296I、296H、269G、297S、297D、297E、298H、298I、298T、298F、299I、299L、299A、299S、299V、299H、299F、299E、305I、313F、316D、325Q、325L、325I、325D、325E、325A、325T、325V、325H、327G、327W、327N、327L、328S、328M、328D、328E、328N、328Q、328F、328I、328V、328T、328H、328A、329F、329H、329Q、330K、330G、330T、330C、330L、330Y、330V、330I、330F、330R、330H、331G、331A、331L、331M、331F、331W、331K、331Q、331E、331S、331V、331I、331C、331Y、331H、331R、331N、331D、331T、332D、332S、332W、332F、332E、332N、332Q、332T、332H、332Y、332A、339T、370E、370N、378D、392T、396L、416G、419H、421K、440Y及び434Wからなる群から選択される少なくとも1つの非天然のアミノ酸残基を含む。任意選択で、このFc領域は、当業者に公知の追加及び/又は代替的な非天然のアミノ酸残基を含んでもよい(例えば、米国特許第5,624,821号;同第6,277,375号;同第6,737,056号;PCT国際公開番号WO01/58957;WO02/06919;WO04/016750;WO04/029207;WO04/035752及びWO05/040217を参照のこと)。
【１３２１】
本発明によるリガンド、抗体又は断片は、その開示の疾患及び状態が、本明細書の1つ又は複数の請求項における可能性のある包含のために参照により本明細書に援用される、WO08/054606(Regeneron)、欧州特許第2604628号(Medimmune)、WO01/92340(immnunex)及びWO05/047331(Immunex)のいずれかに開示される、例えば、任意の疾患又は状態のリスクを処置又は防止又は低下する(又はそのリスクを処置若しくは防止若しくは低下する)ためである。
【１３２２】
本発明によって更に包含されるのは、ヒトにおけるIL-4Ra媒介性の疾患又は障害を減弱又は阻害するための使用のための医薬の製造におけるそのリガンド、抗体又は断片の使用である。本発明のリガンド、抗体又は断片によって処置されるIL-4Ra媒介性の又は関連の障害としては、例えば、関節炎(敗血症性関節炎を含む)、ヘルペス状の疾患、慢性特発性じんま疹、強皮症、肥厚性瘢痕形成、ウイップル病、良性前立腺過形成、肺障害、例えば軽度、中度又は重度の喘息、炎症性障害、例えば、炎症性腸疾患、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球病、チャーグストラウス症候群、グレーブス病、妊娠高血圧腎症、シェーグレン症候群、自己免疫リンパ球増殖性症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫ブドウ膜炎、結核、及びネフローゼが挙げられる。
【１３２３】
本発明のリガンド、抗体又は断片が処置又は診断に用いられうる特定の状態としては:喘息、COPD(例えば、慢性気管支炎、末梢気道疾患又は肺気腫)、炎症性腸疾患、線維性状態(例えば、全身性硬化症、肺線維症、寄生生物誘発性肝線維症、又は嚢胞性線維症)、アレルギー(例えば、アトピー性皮膚炎、イエダニアレルギー、ペットアレルギー又は食物アレルギー)、移植片拒絶を防止するための移植療法、遅延型過敏症又は接触過敏症反応の抑制(アレルギー免疫療法に対するアジュバントとして、又はワクチンアジュバントとして)が挙げられる。ある例では、この方法及びリガンドは、鼻ポリープ及び/又は副鼻腔炎を処置又は防止する(又はそのリスクを低下する)ためである。
【１３２４】
したがって、本発明のリガンド、抗体又は断片は、IL-4、IL-13又はIL-4Raの発現及び/又は活性に関与する状態の処置における治療剤として有用である。とりわけ、一実施形態は、有効量の本発明のリガンド、抗体又は断片をそれを必要とする患者に投与する工程を含む処置の方法であり、ここでIL-4Ra活性化の機能的な帰結が低減される。別の実施形態は、とりわけ、(i)IL-4、IL-13又はIL-4Raの発現又は活性を示している患者を特定する工程、及び(ii)有効量の本発明のリガンド、抗体又は断片をその患者に投与する工程を含み、ここでIL-4Ra活性化の機能的な帰結が減弱される処置の方法である。本発明による有効量とは、IL-4Ra活性化の機能的な帰結をモジュレートし(例えば、低減し)、それによって、処置されている特定の疾患又は障害の少なくとも1つの症状の重篤度をモジュレートする(例えば、低減若しくは弱化する)が、必ずしもその疾患又は障害を治癒させる必要はない量である。従って、本発明の一実施形態は、本明細書に言及される任意の障害の少なくとも1つの症状の重篤度を処置又は低下する方法であって、それを必要とする患者に対して有効量の本発明の1つ又は複数のリガンド、抗体又は断片を、単独で、又は当技術分野で公知であるか、若しくは本明細書に記載される別の適切な医薬と組み合わされた治療的レジメンで投与する工程を含み、その結果その障害のいずれかの少なくとも1つの症状の重篤度が低下されるような方法である。本発明の別の実施形態は、とりわけ、IL-4Raの少なくとも1つの効果に拮抗する方法であって、有効量の本発明の1つ又は複数のリガンド、抗体若しくは断片と接触させるか、又はそれを投与する工程を含み、その結果IL-4Raの前記少なくとも1つの効果が、例えば、IL-4RaがIL-4と複合体(活性なシグナル伝達への前駆体)を形成する能力が拮抗される方法である。
【１３２５】
本発明のリガンド、抗体又は断片は、例えば、がんの処置のための別の治療剤と組み合わせて用いられてもよい。組み合わせて用いられうる適切な剤としては、その開示が参照により本明細書に援用される、欧州特許第2604628号(例えば、段落[0287]に)開示される剤が挙げられる。
【１３２６】
まれなIL4Raバリアントプロファイルに対する抗体のテーラーメイド
本明細書に概説される通り(例えば、実施例1におけるPCSK9の状況では)、本発明は、バリアントのTOI型が本発明の選択基準を満たすことが見出される民族集団の多くのヒトで見出される遺伝子セグメントに基づいて、可変ドメイン及び/又は定常ドメインを有する抗体ベースのリガンドを選択することによって更にヒトの処置をテーラーメイドする可能性を含む。これはまた、本実施例と同様に、TOIがヒトIL4Raである場合にも準用される。従って、可変ドメイン及び/又は定常ドメインをテーラーメイドすることに関する、本明細書における全ての開示は、IL4Raに関する、本実施例にあてはまり、本明細書における1つ又は複数の請求項における使用と組み合わせ可能である。
【１３２７】
実施例1に記載の通り、ある例では、ヒトにおいて可変性があるHCDR1又はFW3中の位置で選択されたヌクレオチドを含むヒトIGHV遺伝子セグメントの組換え由来の抗体VHドメインを含むリガンドが提供される(すなわち、ここではSNPがヒトに存在する)。
【１３２８】
更なる情報がTable 4(表5)に提供され、ここでは、これらの位置でのバリエーション、及び多くのヒト集団に関連する1000ゲノムプロジェクトデータベースにわたるバリアント分布も示される。
【１３２９】
他の実施形態では、上記で更に詳細に説明される通り、本発明は、代替のヒトVH遺伝子セグメント、又はVK、Vλ若しくは定常領域遺伝子セグメントに基づいて、ヒトレシピエントの遺伝子型及び/又は表現型に対してテーラーメイドされたリガンドを提供する[代表的なバリアントについては更にTable 9(表10)を参照のこと]。
【１３３０】
ある例では、このガイダンスに従って、選択されたリガンドはデュピルマブである。
【１３３１】
さらなる例では、したがって、以下である:-
(i)ここでこのリガンドは、ヒトVHセグメント(例えば、ヒトVH3-23*04)、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このヒトVHセグメントは、配列番号40のフレームワーク1をコードしており、且つここで前記ヒトは、配列番号40のフレームワーク1をコードしているVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、配列番号40のフレームワーク1を含むVHドメインを発現する。
ある代替法では、この実施例は(i)以下を提供する:-
ここで、このリガンドは、ヒトVHセグメント(例えば、ヒトVH3-23*04)、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このヒトVHセグメントは、SNP rs56069819を含んでおり、且つここで、前記ヒトは、SNP rs56069819を含むVH遺伝子セグメントを含む。
(ii)ここでこのリガンドは、ヒトVHセグメントIGHV3-7*01、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、ここで前記ヒトは、IGHV3-7*01VH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、ヒトVHセグメントIGHV3-7*01、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを発現する。
(iii)リガンドが、ヒトVκセグメントIGKV1-12*01及びヒトJκセグメントの組換え由来のVκドメインを含み、前記ヒトが、IGKV1-12*01Vκ遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、ヒトVκセグメントIGKV1-12*01及びヒトJκセグメントの組換え由来のVκドメインを発現する。
(iv)リガンドが、ヒトVκセグメント及びヒトJκセグメントの組換え由来のVκドメインを含み、ヒトVκセグメントが、(i)配列番号36に示される7位のProを含むCDR3をコードし、前記ヒトが、配列番号36に示される7位のProを含むCDR3をコードするVκ遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号36に示される7位のProを含むCDR3を含むVκドメインを発現するか;又は(ii)配列番号38に示される15位のSerを含むFW3をコードし、前記ヒトが、配列番号38に示される15位のSerを含むFW3をコードするVκ遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号38に示される15位のSerを含むFW3を含むVκドメインを発現する。
(v)リガンドが、配列番号4に示される204位のAsp又は配列番号4に示される206位のLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)IGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号4に示される204位のAsp又は配列番号4に示される206位のLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(vi)リガンドが、配列番号6に示される72位のPro、配列番号6に示される75位のAsn、配列番号6に示される76位のPhe、配列番号6に示される161位のVal及び配列番号6に示される257位のAlaからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)IGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、前記選択された配列番号6に示される72位のPro、配列番号6に示される75位のAsn、配列番号6に示される76位のPhe、配列番号6に示される161位のVal又は配列番号6に示される257位のAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(vii)リガンドが、配列番号16に示される84位のVal又は配列番号16に示される87位のCysを含むヒトカッパ鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)IGKC1*01ヒトカッパ鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号16に示される84位に対応するVal又は配列番号16に示される87位のCysを含むヒトカッパ鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(viii)リガンドが、ヒトIGLC1*01ラムダ鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)ヒトIGLC1*01ラムダ鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、ヒトIGLC1*01ラムダ鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(ix)リガンドが、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
【１３３２】
例えば、実施例(ix)のように、本発明者は、IGH-ガンマ-4のバリエーションに取り組むという可能性を特定し、且つバリエーション189L及び289Rについて個々に又は組み合わせて有用性を特定した。なぜならこれらの残基は、CH3ドメインの一部であって、そのようなものとして、それらの残基は、抗体Fc領域の一部を形成するからである。従って、これらのCH3バリエーションと患者との適合は、特に、前記で考察されたような理由に有益である。従って、この例では、本発明のリガンドは、配列番号73の189位に対応するLeu若しくは配列番号73の289位に対応するArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を含むか、又はその抗体からなり、且つここで、このヒトのゲノムは、このようなLeu及び/若しくはArgをコードするガンマ-4重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はこのヒトは、このようなLeu及び/若しくはArgを含むヒトガンマ-4定常領域を含む抗体を発現する。このようなリガンドの実施例はデュピルマブである。
【１３３３】
IL4RAバリアントに対する本発明のリガンドの特異的な結合の決定
IL4RAバリアントに対する本発明のリガンドの特異的な結合は、実施例1に記載のSPR方法を用いて行ってもよい。
【１３３４】
実施形態は、以下のように提供される:-
【１３３５】
VHのテーラーメイドを利用した方法
1.それを必要とするヒトにおいて、IL4Ra媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下するための方法であって、前記ヒトに対して、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される突然変異を含むヒトIL4Raタンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み;
ここで(i)このリガンドが、ヒトVHセグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このヒトVHセグメントは、配列番号40のフレームワーク1をコードしており、且つここで、前記ヒトが配列番号40のフレームワーク1をコードしているVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、配列番号40のフレームワーク1を含むVHドメインを発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【１３３６】
ある代替法では、条項1によって以下が提供される:-
ヒトにおいてIL4Raを標的化する方法であって、前記ヒトに対して、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される突然変異を含むヒトIL4Raタンパク質に対して特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み、
ここで(i)このリガンドは、ヒトVHセグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このヒトVHセグメントは配列番号40のフレームワーク1をコードしており、且つここで、前記ヒトは、配列番号40のフレームワーク1をコードしているVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、配列番号40のフレームワーク1を含むVHドメインを発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトは、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【１３３７】
ある例では、このヒトは、IL4Ra媒介性の疾患又は状態に罹っているか、又はそのリスクがある。
【１３３８】
ある例では、この方法は、ヒトにおけるIL4Ra媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は軽減する。任意選択でこの疾患は喘息である。
【１３３９】
任意選択でこの疾患は、アトピー性皮膚炎である。任意選択でこの疾患は、鼻ポリープ及び/又は副鼻腔炎である。
【１３４０】
本発明の方法又はリガンドのある例では、このIL4Raは、突然変異I75Vを含む。
【１３４１】
本発明の方法又はリガンドのある例では、このIL4Raは、突然変異E400Aを含む。
【１３４２】
本発明の方法又はリガンドのある例では、このIL4Raは、突然変異C431Rを含む。
【１３４３】
本発明の方法又はリガンドのある例では、このIL4Raは、突然変異S503Pを含む。
【１３４４】
本発明の方法又はリガンドのある例では、このIL4Raは、突然変異Q576Rを含む。
【１３４５】
本発明の方法又はリガンドのある例では、このIL4Raは、突然変異S752Aを含む。
【１３４６】
2.IL4Raが、配列番号67において突然変異I75V及びQ576Rを含み、且つ任意選択でこの疾患が喘息である、条項1の方法。任意選択でこの疾患は、アトピー性皮膚炎である。任意選択でこの疾患は、鼻ポリープ及び/又は副鼻腔炎である。
【１３４７】
Q576R及びI75Vは、気道炎症疾患、例えば、喘息に関連する。例えば、Clin Exp Allergy. 2003年8月;33(8):1111〜7頁,「Polymorphisms in the interleukin-4 and interleukin-4 receptor alpha chain genes confer susceptibility to asthema and atopy in a Caucasian population」、Beghe Bら(I50Vの代わりにI75Vを指す);J asthma. 2010年4月;47(3):238〜44頁. doi:10.3109/02770900903509099,「Association and gene-gene interactions of eight common single-nucleotide polymorphisms with pediatric asthma in middle china」、Wu Xら;Clin Exp Allergy. 2004年10月;34(10):1570〜5頁,「Haplotypes of the interleukin-4 receptor alpha chain gene associate with susceptibility to and severity of atopic asthma」、Hytonen AMら、(全て、参照により本明細書に援用される)を参照のこと。
【１３４８】
3.(ii)のヌクレオチド配列が、ヌクレオチド突然変異-3223T(dB SNP番号付け)を含む、条項1又は2の方法。
【１３４９】
このバリエーションは、気道炎症性疾患、例えば、喘息と関連する。
【１３５０】
4.各々の前記ヒトVH遺伝子セグメントが、配列番号39を含む、任意の前述の条項の方法。
【１３５１】
5.前記ヒトに含まれる前記VH遺伝子セグメントが、生殖系列VH遺伝子セグメントである、任意の前述の条項の方法。
【１３５２】
6.前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含むヒト(このヒトは、条項1のヒトである)を選択する工程を含む、任意の前述の条項の方法。
【１３５３】
7.ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列、及び/又は配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質を含むことが決定された、任意の前述の条項の方法。
【１３５４】
8.ヒトが、(a)配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列、及び/又は(b)配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、任意の前述の条項の方法。
【１３５５】
9.決定する工程が、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列について、ヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、条項8の方法。
【１３５６】
10.アッセイする工程が、生物学的試料と、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む、少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブとを接触させる工程であって、ここで前記連続したヌクレオチドの配列が、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異をコードするヌクレオチド配列を含み、それによって、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する工程と、この複合体の有無を検出する工程であって、ここで、その複合体の存在を検出する工程は、そのヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質を含むことを決定する工程とを含む、条項9の方法。
【１３５７】
11.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション、及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含み、並びに/又はここでこのアッセイする工程が、マルチプレックスフォーマットで行われる、条項9の方法。
【１３５８】
12.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、条項9又は11の方法。
【１３５９】
13.前記ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性であることが示され、任意選択で、前記ヒトが更に、配列番号68のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、任意の前述の条項の方法。
【１３６０】
14.前記ヒトが、喘息処置に対して実質的に耐性であるか、又はそうであることが更に決定された、任意の前述の条項の方法。
【１３６１】
15.前記ヒトが、喘息処置を受けているか、若しくは受けたことがあり、又は喘息処置に対する応答性が低下していた、任意の前述の条項の方法。
【１３６２】
16.前記疾患若しくは状態が、炎症性疾患若しくは状態;アトピー性疾患若しくは状態;呼吸器疾患若しくは状態;IgEの上昇に関連した疾患若しくは状態か;又はIL-4及び/若しくはIL-13活性の上昇に関連した疾患若しくは状態である、任意の前述の条項の方法。
【１３６３】
17.前記疾患又は状態が、気道の炎症性疾患又は状態、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺炎、過敏性肺炎、好酸球増加症を伴う肺浸潤、環境性肺疾患、肺炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、間質性肺疾患、原発性肺高血圧症、肺血栓塞栓症、胸膜の障害、縦隔の障害、横隔膜の障害、低換気、過換気、睡眠時無呼吸、急性呼吸窮迫症候群、内皮腫、肉腫、移植片拒絶、移植片対宿主病、肺癌、アレルギー性鼻炎、アレルギー、石綿肺症、アスペルギルス腫、アスペルギルス症、気管支拡張症、慢性気管支炎、肺気腫、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、侵襲性肺炎球菌疾患、インフルエンザ、非結核性抗酸菌、胸水、塵肺症、皮下気腫、肺炎、肺放線菌症、肺胞性タンパク症、肺炭疽、肺水腫、肺動脈塞栓、肺炎症、肺組織球増殖症X、肺高血圧症、肺ノカルジア症、肺結核、肺静脈の閉塞性疾患、リウマチ性肺疾患、サルコイドーシス、及びヴェグナー肉芽腫症からなる群から選択される、任意の前述の条項の方法。
【１３６４】
18.前記ヒトが、気道の炎症性疾患又は状態、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺炎、過敏性肺炎、好酸球増加症を伴う肺浸潤、環境性肺疾患、肺炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、間質性肺疾患、原発性肺高血圧症、肺血栓塞栓症、胸膜の障害、縦隔の障害、横隔膜の障害、低換気、過換気、睡眠時無呼吸、急性呼吸窮迫症候群、内皮腫、肉腫、移植片拒絶、移植片対宿主病、肺がん、アレルギー性鼻炎、アレルギー、石綿肺症、アスペルギルス腫、アスペルギルス症、気管支拡張症、慢性気管支炎、肺気腫、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、侵襲性肺炎球菌疾患、インフルエンザ、非結核性抗酸菌、胸水、塵肺症、皮下気腫、肺炎、肺放線菌症、肺胞性タンパク症、肺炭疽、肺水腫、肺動脈塞栓、肺炎症、肺組織球増殖症X、肺高血圧症、肺ノカルジア症、肺結核、肺静脈の閉塞性疾患、リウマチ性肺疾患、サルコイドーシス、及びヴェグナー肉芽腫症からなる群から選択される少なくとも1つの状態を有すると診断された、任意の前述の条項の方法。
【１３６５】
19.前記抗体又は抗体断片が、気道の炎症性疾患又は状態、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺炎、過敏性肺炎、好酸球増加症を伴う肺浸潤、環境性肺疾患、肺炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、間質性肺疾患、原発性肺高血圧症、肺血栓塞栓症、胸膜の障害、縦隔の障害、横隔膜の障害、低換気、過換気、睡眠時無呼吸、急性呼吸窮迫症候群、内皮腫、肉腫、移植片拒絶、移植片対宿主病、肺がん、アレルギー性鼻炎、アレルギー、石綿肺症、アスペルギルス腫、アスペルギルス症、気管支拡張症、慢性気管支炎、肺気腫、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、侵襲性肺炎球菌疾患、インフルエンザ、非結核性抗酸菌、胸水、塵肺症、皮下気腫、肺炎、肺放線菌症、肺胞性タンパク症、肺炭疽、肺水腫、肺動脈塞栓、肺炎症、肺組織球増殖症X、肺高血圧症、肺ノカルジア症、肺結核、肺静脈の閉塞性疾患、リウマチ性肺疾患、サルコイドーシス、及びヴェグナー肉芽腫症からなる群から選択される少なくとも1つの状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、任意の前述の条項の方法。
【１３６６】
20.前記ヌクレオチド配列が、rs1805010、rs1805011、rs1805012、rs1805015、rsl801275及びrs1805016からなる群から選択される1つ又は複数のSNPを含む、任意の前述の条項の方法。
【１３６７】
21.前記抗体又は抗体断片が、吸入、静脈内若しくは皮下の投与によって投与されるか、及び/又は吸入用若しくは注射用調製物中に含まれる、任意の前述の条項の方法。
【１３６８】
22.VHドメインが、配列番号69のアミノ酸配列を含む、任意の前述の条項の方法。
【１３６９】
VHのテーラーメイドを利用したリガンド
1.それを必要とするヒトにおいてIL4Ra媒介性の疾患又は状態(例えば、喘息)のリスクを処置又は低下する方法における使用のためのリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)であって、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される突然変異を含むヒトIL4RAタンパク質に特異的に結合し;ここで(i)このリガンドが、ヒトVHセグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このヒトVHセグメントが、配列番号40のフレームワーク1をコードしており、且つここで、前記ヒトが、配列番号40のフレームワーク1をコードしているVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、配列番号40のフレームワーク1を含むVHドメインを発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、リガンド。
【１３７０】
ある代替法では、段落1によって以下が提供される:-
ヒトにおいてIL4Raを標的化する方法における使用のためのリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)であって、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される突然変異を含むヒトIL4RAタンパク質に特異的に結合し;
ここで(i)このリガンドが、ヒトVHセグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このヒトVHセグメントが、配列番号40のフレームワーク1をコードしており、且つここで、前記ヒトが、配列番号40のフレームワーク1をコードしているVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、配列番号40のフレームワーク1を含むVHドメインを発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、リガンド。
【１３７１】
ある例では、このヒトは、IL4Ra媒介性の疾患又は状態に罹っているか、又はそのリスクがある。
【１３７２】
ある例では、この方法は、ヒトにおけるIL4Ra媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は軽減する。
【１３７３】
2.IL4Raが、配列番号67における突然変異I75V及びQ576Rを含み、且つ任意選択でこの疾患は、喘息である、段落1のリガンド。
(ii)のヌクレオチド配列が、ヌクレオチド突然変異-3223T(dB SNPの番号付け)を含む段落1又は2のリガンド。
各々の前記ヒトVH遺伝子セグメントが配列番号39を含む、任意の前述の段落のリガンド。
【１３７４】
3.前記ヒトに含まれるVH遺伝子セグメントが、生殖系列VH遺伝子セグメントである、任意の前述の段落のリガンド。
【１３７５】
4.前記方法が、前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含むヒトを選択する工程を含み、ここでこのヒトは段落1のヒトである、任意の前述の段落のリガンド。
【１３７６】
5.ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列、及び/又は配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質を含むことが決定された、任意の前述の段落のリガンド。
【１３７７】
6.前記方法が、ヒトが(a)配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列、並びに/又は(b)配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、任意の前述の段落のリガンド。
【１３７８】
7.決定する工程が、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列について、ヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、段落8のリガンド。
【１３７９】
8.アッセイする工程が、生物学的試料と、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む、少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブとを接触させる工程であって、ここで前記連続したヌクレオチドの配列が、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異をコードするヌクレオチド配列を含み、それによって、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する工程と、この複合体の有無を検出する工程であって、ここで、その複合体の存在を検出する工程は、そのヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質を含むことを決定する工程とを含む、段落9のリガンド。
【１３８０】
9.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション、及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含み、並びに/又はここでこのアッセイする工程が、マルチプレックスフォーマットで行われる、段落9のリガンド。
【１３８１】
10.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、段落9又は11のリガンド。
【１３８２】
11.前記ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性であることが示され、任意選択で、前記ヒトが更に、配列番号68のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、任意の前述の段落のリガンド。
【１３８３】
12.前記ヒトが、喘息処置に対して実質的に耐性であるか、又はそうであることが更に決定された、任意の前述の段落のリガンド。
【１３８４】
13.前記ヒトが、喘息処置を受けているか、若しくは受けたことがあり、又は喘息処置に対する応答性が低下していた、任意の前述の段落のリガンド。
【１３８５】
14.前記疾患若しくは状態が、炎症性疾患若しくは状態;アトピー性疾患若しくは状態;呼吸器疾患若しくは状態;IgEの上昇に関連した疾患若しくは状態か;又はIL-4及び/若しくはIL-13活性の上昇に関連した疾患若しくは状態である、任意の前述の段落のリガンド。
【１３８６】
15.前記疾患又は状態が、気道の炎症性疾患又は状態、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺炎、過敏性肺炎、好酸球増加症を伴う肺浸潤、環境性肺疾患、肺炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、間質性肺疾患、原発性肺高血圧症、肺血栓塞栓症、胸膜の障害、縦隔の障害、横隔膜の障害、低換気、過換気、睡眠時無呼吸、急性呼吸窮迫症候群、内皮腫、肉腫、移植片拒絶、移植片対宿主病、肺がん、アレルギー性鼻炎、アレルギー、石綿肺症、アスペルギルス腫、アスペルギルス症、気管支拡張症、慢性気管支炎、肺気腫、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、侵襲性肺炎球菌疾患、インフルエンザ、非結核性抗酸菌、胸水、塵肺症、皮下気腫、肺炎、肺放線菌症、肺胞性タンパク症、肺炭疽、肺水腫、肺動脈塞栓、肺炎症、肺組織球増殖症X、肺高血圧症、肺ノカルジア症、肺結核、肺静脈の閉塞性疾患、リウマチ性肺疾患、サルコイドーシス、及びヴェグナー肉芽腫症からなる群から選択される、任意の前述の段落のリガンド。
【１３８７】
16.前記ヒトが、気道の炎症性疾患又は状態、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺炎、過敏性肺炎、好酸球増加症を伴う肺浸潤、環境性肺疾患、肺炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、間質性肺疾患、原発性肺高血圧症、肺血栓塞栓症、胸膜の障害、縦隔の障害、横隔膜の障害、低換気、過換気、睡眠時無呼吸、急性呼吸窮迫症候群、内皮腫、肉腫、移植片拒絶、移植片対宿主病、肺がん、アレルギー性鼻炎、アレルギー、石綿肺症、アスペルギルス腫、アスペルギルス症、気管支拡張症、慢性気管支炎、肺気腫、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、侵襲性肺炎球菌疾患、インフルエンザ、非結核性抗酸菌、胸水、塵肺症、皮下気腫、肺炎、肺放線菌症、肺胞性タンパク症、肺炭疽、肺水腫、肺動脈塞栓、肺炎症、肺組織球増殖症X、肺高血圧症、肺ノカルジア症、肺結核、肺静脈の閉塞性疾患、リウマチ性肺疾患、サルコイドーシス、及びヴェグナー肉芽腫症からなる群から選択される少なくとも1つの状態を有すると診断された、任意の前述の段落のリガンド。
【１３８８】
17.前記抗体又は抗体断片が、気道の炎症性疾患又は状態、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺炎、過敏性肺炎、好酸球増加症を伴う肺浸潤、環境性肺疾患、肺炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、間質性肺疾患、原発性肺高血圧症、肺血栓塞栓症、胸膜の障害、縦隔の障害、横隔膜の障害、低換気、過換気、睡眠時無呼吸、急性呼吸窮迫症候群、内皮腫、肉腫、移植片拒絶、移植片対宿主病、肺がん、アレルギー性鼻炎、アレルギー、石綿肺症、アスペルギルス腫、アスペルギルス症、気管支拡張症、慢性気管支炎、肺気腫、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、侵襲性肺炎球菌疾患、インフルエンザ、非結核性抗酸菌、胸水、塵肺症、皮下気腫、肺炎、肺放線菌症、肺胞性タンパク症、肺炭疽、肺水腫、肺動脈塞栓、肺炎症、肺組織球増殖症X、肺高血圧症、肺ノカルジア症、肺結核、肺静脈の閉塞性疾患、リウマチ性肺疾患、サルコイドーシス、及びヴェグナー肉芽腫症からなる群から選択される少なくとも1つの状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、任意の前述の段落のリガンド。
【１３８９】
18.前記ヌクレオチド配列が、rs1805010、rs1805011、rs1805012、rs1805015、rsl801275及びrs1805016からなる群から選択される1つ又は複数のSNPを含む、任意の前述の段落のリガンド。
【１３９０】
19.前記抗体又は抗体断片が、吸入、静脈内若しくは皮下投与のためであるか、及び/又は吸入用若しくは注射用調製物中に含まれる、任意の前述の段落のリガンド。
【１３９１】
20.VHドメインが、配列番号69のアミノ酸配列を含む、任意の前述の段落のリガンド。
【１３９２】
C領域のテーラーメイドを利用した方法
1.それを必要とするヒトにおいて、IL4Ra媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下するための方法であって、前記ヒトに対して、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される突然変異を含むヒトIL4Raタンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み;
ここでこのリガンドが、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトが、(i)IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【１３９３】
ある代替法では、条項1以下が提供される:-
ヒトにおいてIL4Raを標的化する方法であって、前記ヒトに対して、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される突然変異を含むヒトIL4Raタンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み;
ここでこのリガンドが、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトが、(i)IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【１３９４】
ある例では、このヒトは、IL4Ra媒介性の疾患又は状態に罹っているか、又はそのリスクがある。ある例では、この方法は、ヒトにおけるIL4Ra媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は軽減する。
【１３９５】
本発明の方法又はリガンドのある例では、このIL4Raは、突然変異I75Vを含む。
【１３９６】
本発明の方法又はリガンドのある例では、このIL4Raは、突然変異E400Aを含む。
【１３９７】
本発明の方法又はリガンドのある例では、このIL4Raは、突然変異C431Rを含む。
【１３９８】
本発明の方法又はリガンドのある例では、このIL4Raは、突然変異S503Pを含む。
【１３９９】
本発明の方法又はリガンドのある例では、このIL4Raは、突然変異Q576Rを含む。
【１４００】
本発明の方法又はリガンドのある例では、このIL4Raは、突然変異S752Aを含む。
【１４０１】
2. IL4Raが、配列番号67において突然変異I75V及びQ576Rを含み、且つ任意選択でこの疾患が喘息である、条項1の方法。
【１４０２】
3.(ii)のヌクレオチド配列が、ヌクレオチド突然変異-3223T(dB SNP番号付け)を含む、条項1又は2の方法。
【１４０３】
4.前記ヒトガンマ-4重鎖定常領域が、配列番号73を含む、任意の前述の条項の方法。
【１４０４】
5.前記ヒトが、ヒトIGHG4*01重鎖定常領域を含む抗体を発現する、任意の前述の条項の方法。
【１４０５】
6.前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含むヒト(このヒトは、条項1のヒトである)を選択する工程を含む、任意の前述の条項の方法。
【１４０６】
7.ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列、及び/又は配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質を含むことが決定された、任意の前述の条項の方法。
【１４０７】
8.ヒトが、(a)配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列、及び/又は(b)配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、任意の前述の条項の方法。
【１４０８】
9.前記決定する工程が、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列について、ヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、条項8の方法。
【１４０９】
10.アッセイする工程が、生物学的試料と、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む、少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブとを接触させる工程であって、ここで前記連続したヌクレオチドの配列が、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異をコードするヌクレオチド配列を含み、それによって、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する工程と、この複合体の有無を検出する工程であって、ここで、その複合体の存在を検出する工程は、そのヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質を含むことを決定する工程とを含む、条項9の方法。
【１４１０】
11.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション、及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含み、並びに/又はここでこのアッセイする工程が、マルチプレックスフォーマットで行われる、条項9の方法。
【１４１１】
12.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、条項9又は11の方法。
【１４１２】
13.前記ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性であることが示され、任意選択で、前記ヒトが更に、配列番号68のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、任意の前述の条項の方法。
【１４１３】
14.前記ヒトが、喘息処置に対して実質的に耐性であるか、又はそうであることが更に決定された、任意の前述の条項の方法。
【１４１４】
15.前記ヒトが、喘息処置を受けているか、若しくは受けたことがあり、又は喘息処置に対する応答性が低下していた、任意の前述の条項の方法。
【１４１５】
16.前記疾患若しくは状態が、炎症性疾患若しくは状態;アトピー性疾患若しくは状態;呼吸器疾患若しくは状態;IgEの上昇に関連した疾患若しくは状態か;又はIL-4及び/若しくはIL-13活性の上昇に関連した疾患若しくは状態である、任意の前述の条項の方法。
【１４１６】
17.前記疾患又は状態が、気道の炎症性疾患又は状態、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺炎、過敏性肺炎、好酸球増加症を伴う肺浸潤、環境性肺疾患、肺炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、間質性肺疾患、原発性肺高血圧症、肺血栓塞栓症、胸膜の障害、縦隔の障害、横隔膜の障害、低換気、過換気、睡眠時無呼吸、急性呼吸窮迫症候群、内皮腫、肉腫、移植片拒絶、移植片対宿主病、肺がん、アレルギー性鼻炎、アレルギー、石綿肺症、アスペルギルス腫、アスペルギルス症、気管支拡張症、慢性気管支炎、肺気腫、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、侵襲性肺炎球菌疾患、インフルエンザ、非結核性抗酸菌、胸水、塵肺症、皮下気腫、肺炎、肺放線菌症、肺胞性タンパク症、肺炭疽、肺水腫、肺動脈塞栓、肺炎症、肺組織球増殖症X、肺高血圧症、肺ノカルジア症、肺結核、肺静脈の閉塞性疾患、リウマチ性肺疾患、サルコイドーシス、及びヴェグナー肉芽腫症からなる群から選択される、任意の前述の条項の方法。
【１４１７】
18.前記ヒトが、気道の炎症性疾患又は状態、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺炎、過敏性肺炎、好酸球増加症を伴う肺浸潤、環境性肺疾患、肺炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、間質性肺疾患、原発性肺高血圧症、肺血栓塞栓症、胸膜の障害、縦隔の障害、横隔膜の障害、低換気、過換気、睡眠時無呼吸、急性呼吸窮迫症候群、内皮腫、肉腫、移植片拒絶、移植片対宿主病、肺がん、アレルギー性鼻炎、アレルギー、石綿肺症、アスペルギルス腫、アスペルギルス症、気管支拡張症、慢性気管支炎、肺気腫、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、侵襲性肺炎球菌疾患、インフルエンザ、非結核性抗酸菌、胸水、塵肺症、皮下気腫、肺炎、肺放線菌症、肺胞性タンパク症、肺炭疽、肺水腫、肺動脈塞栓、肺炎症、肺組織球増殖症X、肺高血圧症、肺ノカルジア症、肺結核、肺静脈の閉塞性疾患、リウマチ性肺疾患、サルコイドーシス、及びヴェグナー肉芽腫症からなる群から選択される少なくとも1つの状態を有すると診断された、任意の前述の条項の方法。
【１４１８】
19.前記抗体又は抗体断片が、気道の炎症性疾患又は状態、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺炎、過敏性肺炎、好酸球増加症を伴う肺浸潤、環境性肺疾患、肺炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、間質性肺疾患、原発性肺高血圧症、肺血栓塞栓症、胸膜の障害、縦隔の障害、横隔膜の障害、低換気、過換気、睡眠時無呼吸、急性呼吸窮迫症候群、内皮腫、肉腫、移植片拒絶、移植片対宿主病、肺がん、アレルギー性鼻炎、アレルギー、石綿肺症、アスペルギルス腫、アスペルギルス症、気管支拡張症、慢性気管支炎、肺気腫、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、侵襲性肺炎球菌疾患、インフルエンザ、非結核性抗酸菌、胸水、塵肺症、皮下気腫、肺炎、肺放線菌症、肺胞性タンパク症、肺炭疽、肺水腫、肺動脈塞栓、肺炎症、肺組織球増殖症X、肺高血圧症、肺ノカルジア症、肺結核、肺静脈の閉塞性疾患、リウマチ性肺疾患、サルコイドーシス、及びヴェグナー肉芽腫症からなる群から選択される少なくとも1つの状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低減する、任意の前述の条項の方法。
【１４１９】
20.前記ヌクレオチド配列が、rs1805010、rs1805011、rs1805012、rs1805015、rsl801275及びrs1805016からなる群から選択される1つ又は複数のSNPを含む、任意の前述の条項の方法。
【１４２０】
21.前記抗体又は抗体断片が、吸入、静脈内若しくは皮下の投与によって投与されるか、及び/又は吸入用若しくは注射用調製物中に含まれる、任意の前述の条項の方法。
【１４２１】
定常領域のテーラーメイドを利用したリガンド
1.それを必要とするヒトにおいてIL4Ra媒介性の疾患又は状態(例えば、喘息)のリスクを処置又は低下する方法における使用のためのリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)であって、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される突然変異を含むヒトIL4RAタンパク質に特異的に結合し;ここで(i)このリガンドが、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトが、(i)IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、リガンド。
【１４２２】
ある代替法では、段落1では以下が提供される:-
ヒトにおいて、IL4Raを標的化する方法における使用のためのリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)であって、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される突然変異を含むヒトIL4RAタンパク質に特異的に結合し;
ここで(i)このリガンドが、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトが、(i)IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含む前記IL4RAタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、リガンド。
【１４２３】
ある例では、このヒトは、IL4Ra媒介性の疾患又は状態に罹っているか、又はそのリスクがある。
【１４２４】
ある例では、この方法は、ヒトにおけるIL4Ra媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下する。
【１４２５】
2.IL4Raが、配列番号67において突然変異I75V及びQ576Rを含み、且つ任意選択でこの疾患が喘息である、段落1のリガンド。
【１４２６】
3.(ii)のヌクレオチド配列が、ヌクレオチド突然変異-3223T(dB SNP番号付け)を含む、段落1又は2のリガンド。
【１４２７】
4.前記ヒトガンマ-4重鎖定常領域が、配列番号73を含む、任意の前述の段落のリガンド。
【１４２８】
5.ヒトが、ヒトIGHG4*01重鎖定常領域を含む抗体を発現する、任意の前述の段落のリガンド。
【１４２９】
6.前記方法が、前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含むヒトを選択する工程を含み、ここでこのヒトは段落1のヒトである、任意の前述の段落のリガンド。
【１４３０】
7.ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列、及び/又は配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質を含むことが決定された、任意の前述の段落のリガンド。
【１４３１】
8.前記方法が、ヒトが(a)配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列、並びに/又は(b)配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、任意の前述の段落のリガンド。
【１４３２】
9.決定する工程が、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列について、ヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、段落8のリガンド。
【１４３３】
10.アッセイする工程が、生物学的試料と、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む、少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブとを接触させる工程であって、ここで前記連続したヌクレオチドの配列が、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異をコードするヌクレオチド配列を含み、それによって、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する工程と、この複合体の有無を検出する工程であって、ここで、その複合体の存在を検出する工程は、そのヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質を含むことを決定する工程とを含む、段落9のリガンド。
【１４３４】
11.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション、及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含み、並びに/又はここでこのアッセイする工程が、マルチプレックスフォーマットで行われる、段落9のリガンド。
【１４３５】
12.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、段落9又は11のリガンド。
【１４３６】
13.前記ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性であることが示され、任意選択で、前記ヒトが更に、配列番号68のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトが、配列番号67におけるI75V、E400A、C431R、S503P、Q576R及びS752Aからなる群から選択される前記突然変異を含むIL4Raタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、任意の前述の段落のリガンド。
【１４３７】
14.前記ヒトが、喘息処置に対して実質的に耐性であるか、又はそうであることが更に決定された、任意の前述の段落のリガンド。
【１４３８】
15.前記ヒトが、喘息処置を受けているか、若しくは受けたことがあり、又は喘息処置に対する応答性が低下していた、任意の前述の段落のリガンド。
【１４３９】
16.前記疾患若しくは状態が、炎症性疾患若しくは状態;アトピー性疾患若しくは状態;呼吸器疾患若しくは状態;IgEの上昇に関連した疾患若しくは状態か;又はIL-4及び/若しくはIL-13活性の上昇に関連した疾患若しくは状態である、任意の前述の段落のリガンド。
【１４４０】
17.前記疾患又は状態が、気道の炎症性疾患又は状態、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺炎、過敏性肺炎、好酸球増加症を伴う肺浸潤、環境性肺疾患、肺炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、間質性肺疾患、原発性肺高血圧症、肺血栓塞栓症、胸膜の障害、縦隔の障害、横隔膜の障害、低換気、過換気、睡眠時無呼吸、急性呼吸窮迫症候群、内皮腫、肉腫、移植片拒絶、移植片対宿主病、肺癌、アレルギー性鼻炎、アレルギー、石綿肺症、アスペルギルス腫、アスペルギルス症、気管支拡張症、慢性気管支炎、肺気腫、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、侵襲性肺炎球菌疾患、インフルエンザ、非結核性抗酸菌、胸水、塵肺症、皮下気腫、肺炎、肺放線菌症、肺胞性タンパク症、肺炭疽、肺水腫、肺動脈塞栓、肺炎症、肺組織球増殖症X、肺高血圧症、肺ノカルジア症、肺結核、肺静脈の閉塞性疾患、リウマチ性肺疾患、サルコイドーシス、及びヴェグナー肉芽腫症からなる群から選択される、任意の前述の段落のリガンド。
【１４４１】
18.前記ヒトが、気道の炎症性疾患又は状態、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺炎、過敏性肺炎、好酸球増加症を伴う肺浸潤、環境性肺疾患、肺炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、間質性肺疾患、原発性肺高血圧症、肺血栓塞栓症、胸膜の障害、縦隔の障害、横隔膜の障害、低換気、過換気、睡眠時無呼吸、急性呼吸窮迫症候群、内皮腫、肉腫、移植片拒絶、移植片対宿主病、肺癌、アレルギー性鼻炎、アレルギー、石綿肺症、アスペルギルス腫、アスペルギルス症、気管支拡張症、慢性気管支炎、肺気腫、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、侵襲性肺炎球菌疾患、インフルエンザ、非結核性抗酸菌、胸水、塵肺症、皮下気腫、肺炎、肺放線菌症、肺胞性タンパク症、肺炭疽、肺水腫、肺動脈塞栓、肺炎症、肺組織球増殖症X、肺高血圧症、肺ノカルジア症、肺結核、肺静脈の閉塞性疾患、リウマチ性肺疾患、サルコイドーシス、及びヴェグナー肉芽腫症からなる群から選択される少なくとも1つの状態を有すると診断された、任意の前述の段落のリガンド。
【１４４２】
19.前記抗体又は抗体断片が、気道の炎症性疾患又は状態、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺炎、過敏性肺炎、好酸球増加症を伴う肺浸潤、環境性肺疾患、肺炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、間質性肺疾患、原発性肺高血圧症、肺血栓塞栓症、胸膜の障害、縦隔の障害、横隔膜の障害、低換気、過換気、睡眠時無呼吸、急性呼吸窮迫症候群、内皮腫、肉腫、移植片拒絶、移植片対宿主病、肺癌、アレルギー性鼻炎、アレルギー、石綿肺症、アスペルギルス腫、アスペルギルス症、気管支拡張症、慢性気管支炎、肺気腫、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、侵襲性肺炎球菌疾患、インフルエンザ、非結核性抗酸菌、胸水、塵肺症、皮下気腫、肺炎、肺放線菌症、肺胞性タンパク症、肺炭疽、肺水腫、肺動脈塞栓、肺炎症、肺組織球増殖症X、肺高血圧症、肺ノカルジア症、肺結核、肺静脈の閉塞性疾患、リウマチ性肺疾患、サルコイドーシス、及びヴェグナー肉芽腫症からなる群から選択される少なくとも1つの状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低減する、任意の前述の段落のリガンド。
【１４４３】
20.ヌクレオチド配列が、rsl805010、rsl805011、rsl805012、rsl805015、rsl801275及びrsl805016からなる群から選択される1つ又は複数のSNPを含む、任意の前述の段落のリガンド。
【１４４４】
21.前記抗体又は抗体断片が、吸入、静脈内若しくは皮下投与のためであるか、及び/又は吸入用若しくは注射用調製物に含まれる、任意の前述の段落のリガンド。
【１４４５】
IL4Raに関連する任意の他の実施例又は実施形態、条項又は段落の例では、IL4Raの突然変異は75Vであり、且つこのヒトは、AFR又はASN血統であり、例えば、このヒトの血統は、ASW、LWK、CHS又はJPTから選択される。これらの血統の全てが75Vについて平均47%を超える頻度を有する。
【１４４６】
IL4Raに関する任意の他の実施例又は実施形態、条項又は段落の例では、IL4Ra突然変異は、400Aであり、且つヒトは、AFR血統であり、例えば、このヒトの血統は、ASW、LWK及びYRIから選択される。これらの血統の全ては、400Aに関して平均頻度を超える。
【１４４７】
IL4Raに関する任意の他の実施例又は実施形態、条項又は段落の例では、IL4Ra突然変異は、431Rであり、且つこのヒトは、AFR又はAMR血統であり、例えば、このヒトの血統は、YRI、CLM、MXL、PUR又はCEUから選択される。これらの血統の全ては、431Rに関して平均頻度を超える。
【１４４８】
IL4Raに関する任意の他の実施例又は実施形態、条項又は段落の例では、IL4Ra突然変異は、752Aであり、且つこのヒトは、AFR血統であり、例えば、このヒトの血統は、ASW、LWK及びYRIから選択される。これらの血統の全ては、37〜39%の頻度を有し、これは、752Aに関する平均頻度よりも大きい。
【１４４９】
頻度は、ここでは1000ゲノムデータベース(バージョン20110521)を参照している。
【１４５０】
IL4Raに関する任意の他の実施例又は実施形態、条項又は段落の例では、IL4Ra突然変異は、75Vであり、且つこのヒトは、AFR又はASN血統であり、例えば、このヒトの血統は、ASW、LWK、CHS又はJPTから選択される。これらの血統の全てが、75Vに関して平均47%を超える頻度を有する。
【１４５１】
SNP rs1805010[75Vをコードする;Table 11(表12)を参照のこと]は、1000ゲノムのフェーズIデータベースによれば47%という平均の累積頻度でヒトに存在するが、AFR、ASN、ASW、LWK、MXL、CHS及びJPT集団ではより高く;従って、ある実施形態では、このヒトは、AFR又はASN血統、例えば、ASW、LWK、MXL、CHS又はJPT血統のヒトである。従って、ある実施形態では、リガンド(例えば、抗体又は断片)が、突然変異I75Vを含むIL4Rタンパク質に特異的に結合する場合、このヒトは、SNP rs1805010を含み;且つ任意選択でこのヒトは、AFR又はASN血統であり、例えば、ASW、LWK、MXL、CHS又はJPT血統のヒトである。例えば、このヒトは、AFR血統である。例えば、このヒトは、ASN血統である。例えば、このヒトは、ASW血統である。例えば、このヒトは、LWK血統である。例えば、このヒトは、ASW血統である。例えば、このヒトは、MXL血統である。例えば、このヒトは、CHS血統である。例えば、このヒトは、JPT血統である。
【１４５２】
SNP rs1805011[400Aをコードする;Table 11(表12)を参照のこと]は、1000ゲノムのフェーズIデータベースによれば22%という平均の累積頻度でヒトに存在するが、AFR、ASW、LWK、及びYRI集団ではより高く;従って、ある実施形態では、このヒトは、AFR血統、例えば、ASW、LWK、及びYRI血統である。従って、ある実施形態では、リガンド(例えば、抗体又は断片)が、突然変異E400Aを含むIL4Rタンパク質に特異的に結合する場合、このヒトは、SNP rs1805011を含み;且つ任意選択でこのヒトは、AFR血統であり、例えば、ASW、LWK及びYRI血統のヒトである。例えば、このヒトは、AFR血統である。例えば、このヒトは、ASW血統である。例えば、このヒトは、LWK血統である。例えば、このヒトは、YRI血統である。
【１４５３】
SNP rsl805012[431Rをコードする; Table 11(表12)を参照のこと]は、1000ゲノムのフェーズIデータベースによれば10%という平均の累積頻度でヒトに存在するが、AFR、AMR、EUR、YRI、CLM、MXL、PUR、CEU及びGBR集団ではより高く;従って、ある実施形態では、このヒトは、AFR、AMR又はEUR血統、例えば、YRI、CLM、MXL、PUR、CEU又はGBR血統である。従って、ある実施形態では、リガンド(例えば、抗体又は断片)が、突然変異C431Rを含むIL4Rタンパク質に特異的に結合する場合、このヒトは、SNP rsl805012を含み;且つ任意選択でこのヒトは、AFR、AMR又はEUR血統であり、例えば、YRI、CLM、MXL、PUR、CEU又はGBR血統のヒトである。例えば、このヒトは、AFR血統である。例えば、このヒトは、AMR血統である。例えば、このヒトは、EUR血統である。例えば、このヒトは、YRI血統である。例えば、このヒトは、CLM血統である。例えば、このヒトは、MXL血統である。例えば、このヒトは、PUR血統である。例えば、このヒトは、CEU血統である。例えば、このヒトは、GBR血統である。
【１４５４】
SNP rsl805015[503Pをコードする; Table 11(表12)を参照のこと]は、1000ゲノムのフェーズIデータベースによれば21%という平均の累積頻度でヒトに存在するが、AFR、ASW、LWK、YRI、PUR及びGBR集団ではより高く;従って、ある実施形態では、このヒトは、AFR又はASW血統、例えば、LWK、YRI、PUR又はGBR血統である。従って、ある実施形態では、リガンド(例えば、抗体又は断片)が、突然変異S503Pを含むIL4Rタンパク質に特異的に結合する場合、このヒトは、SNP rsl805015を含み;且つ任意選択でこのヒトは、AFR又はASW血統であり、例えば、LWK、YRI、PUR又はGBR血統のヒトである。例えば、このヒトは、AFR血統である。例えば、このヒトは、ASW血統である。例えば、このヒトは、LWK血統である。例えば、このヒトは、YRI血統である。例えば、このヒトは、PUR血統である。例えば、このヒトは、GBR血統である。
【１４５５】
SNP rsl801275[576Rをコードする; Table 11(表12)を参照のこと]は、1000ゲノムのフェーズIデータベースによれば35%という平均の累積頻度でヒトに存在するが、AFR、ASW、LWK及びYRI集団ではより高く;従って、ある実施形態では、このヒトは、AFR血統、例えば、ASW、LWK又はYRI血統である。従って、ある実施形態では、リガンド(例えば、抗体又は断片)が、突然変異Q576Rを含むIL4Rタンパク質に特異的に結合する場合、このヒトは、SNP rsl801275を含み;且つ任意選択でこのヒトは、AFR血統であり、例えば、ASW、LWK又はYRI血統のヒトである。例えば、このヒトは、AFR血統である。例えば、このヒトは、ASW血統である。例えば、このヒトは、LWK血統である。例えば、このヒトは、YRI血統である。
【１４５６】
SNP rsl805016[752Aをコードする; Table 11(表12)を参照のこと]は、1000ゲノムのフェーズIデータベースによれば12%という平均の累積頻度でヒトに存在するが、AFR、ASW、LWK及びYRI集団ではより高く;従って、ある実施形態では、このヒトは、AFR血統、例えば、ASW、LWK又はYRI血統である。従って、ある実施形態では、リガンド(例えば、抗体又は断片)が、突然変異S752Aを含むIL4Rタンパク質に特異的に結合する場合、このヒトは、SNP rsl805016を含み;且つ任意選択でこのヒトは、AFR血統であり、例えば、ASW、LWK又はYRI血統のヒトである。
【１４５７】
IGHV3-23 SNP rs56069819は、1000ゲノムのフェーズIデータベースによれば11%という平均の累積頻度でヒトに存在するが、AFR(23%)、EUR(13%)、ASW(27%)、LWK(15%)、YRI(28%)、CEU(19%)及びGBR(15%)集団ではより高く;従って、ある実施形態では、抗TOI(例えば、PCSK9又はIL4Ra)抗体又は断片が、配列番号40のフレームワーク1を含むか、又はヒトVHセグメント(例えば、ヒトVH3-23*04)、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、ヒトVHセグメントが、SNP rs56069819を含んでいる場合、このヒトは、AFR、EUR、ASW、LWK、YRI、CEU又はGBR血統のヒトである。例えば、このヒトは、AFR血統である。例えば、このヒトは、EUR血統である。例えば、このヒトは、ASW血統である。例えば、このヒトは、LWK血統である。例えば、このヒトは、YRI血統である。例えば、このヒトは、CEU血統である。例えば、このヒトは、GBR血統である。
【１４５８】
(実施例3)
Nav1.7(SCN9A ;ETHA;FEB3B;GEFSP7;NE-NA;NENA;PN1;SFNP)
J Clin Invest. 2007年12月;117(12):3603〜9頁,「Mutations in sodium-channel gene SCN9A cause a spectrum of human genetic pain disorders」、Drenth JP & Waxman SG(参照により本明細書に援用される)を参照のこと。電圧ゲートナトリウムチャネルは、活動電位の発生及び伝導に重要な役割を果たし、したがって、ほとんどの興奮性細胞による電気的なシグナル伝達に重要である。ナトリウムチャネルは、内在性膜タンパク質であり、大きいαサブユニット(電圧感受性及びイオン選択性の細孔を形成する)及びより小さい補助的βサブユニット(チャンネルゲートの反応速度論及び電圧依存性をモジュレートしうる)から構成される。今まで、本発明者らは、各々が固有の中枢神経及び末梢神経系の分布を有する、ナトリウムチャネルαサブユニットの9つのアイソフォーム(Nav1.1〜Nav1.9)を承知している。4つの密接に関連するナトリウムチャネル(Nav1.1、-1.2、-1.3、及び-1.7)は、染色体2q24.3上のクラスター内に位置する一連の4つの遺伝子(それぞれ、SCN1A、SCN2A、SCN3A、及びSCN9A)によってコードされる。Nav1.7は、疼痛の感覚に重要な役割を有する。更に、KO研究及び動物の疼痛モデルから、Nav1.7は、炎症性の疼痛に重要な役割を果たすと考えられる。
【１４５９】
Nav1.7は、末梢神経に位置し、且つこれらの細胞における活動電位発生に重要な役割を果たす。近年の遺伝学的研究では、3つの異なるヒト疼痛障害においてNav1.7の機能不全が特定された。Nav1.7中の機能獲得性ミスセンス突然変異は、原発性先端紅痛症(PE)及び発作性激痛症(PEPD)を生じることが示されたが、Nav1.7におけるナンセンス突然変異は、Nav1.7の機能の喪失、及びチャネル障害関連の無痛症(channelopathy-associated insensitivity to pain)(CIP)として公知の状態(罹患した個体は、物理的疼痛を感じられない、まれな障害)を生じる。近年の研究では、異なる種類のチャネル障害(イオンチャネルサブユニット又はそれを調節するタンパク質の機能障害によって生じる疾患)は、全てが同じNav1.7ナトリウムチャネルに関与しており、これらの障害の背景にあることが示された。
【１４６０】
Nav1.7は、26個のエキソンを含む113.5-kbの遺伝子(OMIM 603415)であるSCN9Aによってコードされる(図1A、Drenth & Waxman)。このコードされたナトリウムチャネルは、各々が6つの膜貫通セグメントを有する、4つのドメインに組織化される、1977個のアミノ酸から構成され、後根神経節(DRG)ニューロン及び交換神経節ニューロンにおいて優勢に発現される(図1B、Drenth & Waxman)。免疫組織化学研究によって、Nav1.7は、ニューロン発火が開始されるインパルストリガーゾーンに近い、神経突起として公知のニューロンのワイヤ様突起の遠位端に存在することが示されている。興味深いことに、Nav1.7を発現するDRGニューロンの大部分は、疼痛検知性(侵害性)であり、これによって疼痛の病原性におけるこのナトリウムチャナルに関するある役割が示唆される。
【１４６１】
Cell. 2014年6月5日;157(6):1393〜404頁. doi:10.1016/j.cell.2014.03.064. Epub 2014年5月22日;「A monoclonal antibody that targets a NaV1.7 channel voltage sensor for pain and itch relief」、Lee JHら及び2011(両方とも参照により本明細書に援用される)は、ヒト1.7に対するモノクローナル抗体の生成を記載している。
【１４６２】
ある例では、本発明は、それを必要とするヒトにおいて、Nav1.7媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下する方法であって、前記ヒトに対して、ヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含む方法を提供する。本発明はまた、対応するリガンドも提供する。
【１４６３】
本発明は、抗Nav1.7リガンド;並びに本明細書に記載されるようなNav1.7結合性又は標的化リガンドを提供する。このリガンドは、種々の有用性を有する。このリガンドのうちいくつかは、例えば、特異的な結合アッセイにおいて、ヒトを遺伝子型判定又は表現型判定するために、Nav1.7 (特にヒトNav1.7又はそのリガンド)の親和性精製において、Nav1.7活性の他のアンタゴニストを特定するためのスクリーニングアッセイにおいて、有用である。本発明のいくつかのリガンドは、Nav1.7媒介性の活性を阻害するために有用である。
【１４６４】
抗Nav1.7リガンド(例えば、抗体及びアンチセンスRNA)は、いわゆる「野性型」ヒトNav1.7の標的化及び中和に基づいて開発され、これは共通して存在する型である(例えば、配列番号75を参照のこと)。このような治療は、この型のヒトNav1.7を保有するヒト患者に有用であるが、本発明者は、ヒト集団の中でNav1.7のまれな型ではあるが、やはり天然に存在する型の標的化の可能性を調べるのに有用であるとみなした。このようにして、本発明者は、Nav1.7活性で媒介されるか、又はそれに関連する疾患及び状態に対して妥当であるヒトの処置、予防及び診断のための有用な標的として(タンパク質又は核酸レベルで)機能しうるまれなヒトNav1.7型の自然な出現及び分布への洞察に到達した。これによって、特に、一般的なNav1.7遺伝子又はタンパク質を欠くヒトににおけるテーラーメイド治療、予防及び診断が提供される。
【１４６５】
当業者は、アミノ酸バリエーションへ翻訳するSNP又は他の変化が、標的とすべきヒト標的の活性及び/又は高次構造における可変性を生じうることを承知している。これによって、遺伝子型判定並びにタンパク質及びヌクレオチドの可変性の知識を用いて、患者の医療及び診断をより有効にテーラーメイドする個人化医療に大きな関心が生じた。従って、本発明は、まれなNav1.7多型バリアント型に特異的に向けられたテーラーメイド医薬品及び試験を提供する。このような形態又は「対立遺伝子」は(ヌクレオチドレベルで)、対応する共通型のヌクレオチド及びアミノ酸配列から、ヌクレオチド及びアミノ酸のレベルで1つ又は複数の変化を含み、すなわち、1つ又は複数の非同義(別名「ミスセンス」)変化(ヒトにおいてタンパク質標的中の1つ又は複数の対応する変化に翻訳する)が、存在する。
【１４６６】
更に、本発明者は驚くべきことに、まれな天然型は、共通型よりもかなり低頻度でヒトに存在するが、それにもかかわらず、多数の且つ民族的に多様なヒト集団で示され、示された民族集団あたり通常は多くのヒトの例があることに気付いた。従って、本発明者は、このようなまれな型を標的化することによって、多くのヒト民族集団にわたって、有効な処置、予防又は診断が提供され、それによって本発明の有用性が拡大されることに気付いた。
【１４６７】
この認識によって、本発明者は、Nav1.7媒介性の又は関連する疾患若しくは状態の治療及び/又は予防のためのヒト患者への投与のために抗Nav1.7リガンドの選択を導くことに関して、本発明には重大な産業的及び医学的な適用があることを確かめた。この方法では、患者は、患者の遺伝子又は表現型の構成によって決定されるその必要性に対してテーラーメイドされた薬物及びリガンドを受ける。それと同調して、本発明は、このような処置に関連する患者の遺伝子型判定及び/又は表現型判定を提供し、それによって薬物を患者に適切に適合させることを可能にする。これは、医学的効能の機会を増加させ、患者に適合しない薬物又はリガンドを使用した劣った処置(例えば、乏しい効能及び/又は副作用)の見込みを低減し、医薬品の処方ミス及び浪費を回避する。
【１４６８】
この考えを発展させるのに、この非限定的な例では、本発明者は、以下の基準に基づいて一連のヒトNav1.7バリアントを決定することを決めたが、本発明者が気付いたこれらの基準は、ヒト集団におけるテーラーメイドの必要性に有用な医学的薬物及び診断を提供する。本発明者は、以下の4つの基準のうち少なくとも3つを有するバリアントを選択した:
35%以下という累積ヒト対立遺伝子頻度を有する天然に存在するヒトNav1.7バリエーション;
約50%以下という総ヒト遺伝子型頻度を有する天然に存在するヒトNav1.7バリエーション;
多くの異なるヒト民族集団で見出される天然に存在するヒトNav1.7バリエーション[1000ゲノムプロジェクトの標準的カテゴリー化を用いる;下のTable 12(表13)を参照のこと];及び
このような多くの異なる民族集団にわたって分布する多くの個体において見出される天然に存在するヒトNav1.7バリエーション。
【１４６９】
これらの基準に基づいて、本発明者は、下のTable 12(表13)に列挙されるバリアントを特定した(さらなるバリアントを参照のこと)。本発明者の選択には、追加の又は代替の検討として、標的タンパク質中のアミノ酸残基を変更しないサイレントバリエーションとは対照的に、対応するNav1.7型におけるアミノ酸バリエーションを生じたヌクレオチドバリエーション(すなわち、非同義的バリエーション)についての選択を含んだ。
【１４７０】
ある例では、本発明は、それを必要とするヒトにおいて、Nav1.7媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下する方法であって、前記ヒトに対して、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含む方法を提供する。更に以下に説明される通り、これらのアミノ酸バリエーションは、多くの集団に見出されるヒトにおける天然に存在するNav1.7バリアントで見出される。前記ヒトは、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。
【１４７１】
例えば、前記アミノ酸は、(a)〜(e)のいずれか1つからなる群から選択される:-
a)136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P及び1449Vか;又は
b)996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I及び1627Kか;又は
c)277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)及び1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)か;又は
d)395K、1200L及び1235Lか;又は
e)422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919G。
アミノ酸類(a)〜(d)は、Drenth & Waxmanにおいて、疼痛状態(望ましくない疼痛の上昇又は低下のいずれか)に関連すると考察されている。従って、一実施形態では、この疾患又は状態は、疼痛疾患又は状態であり、且つアミノ酸は、(a)、(b)、(c)又は(d)から選択される。従って、一実施形態では、この疾患又は状態は、掻痒疾患又は状態であり、且つアミノ酸は、(a)、(b)、(c)又は(d)から選択される。ある例では、この疾患は、PEであり、且つこのアミノ酸は、(a)から選択される。ある例では、この疾患は、PEPDであり、且つアミノ酸は、(b)から選択される。ある例では、この疾患は、CIPであり、且つアミノ酸は、(c)又は(d)から選択される。ある例では、この疾患又は状態は、疼痛又は掻痒疾患又は状態であり、且つアミノ酸は(e)から選択される。
【１４７２】
一実施形態では、この疼痛は、慢性疼痛である。
【１４７３】
一実施形態では、この疼痛は、神経因性疼痛、例えば、慢性神経因性疼痛である。例えば、この疼痛は、有痛性糖尿病性神経障害(PDN)、ヘルペス後神経障害(PHN)又は三叉神経痛(TN)である。
【１４７４】
ある例では、この疼痛は、脊髄損傷疼痛、多発性硬化症疼痛、幻肢痛、脳卒中後疼痛、慢性背痛、変形性関節症疼痛、がん関連疼痛又はHIV関連疼痛である。
【１４７５】
一実施形態では、この疼痛は、炎症性疼痛、例えば、慢性炎症性疼痛である。
【１４７６】
一実施形態では、この疾患又は状態は、チャネル障害であるか、又はチャネル障害に関連する。
【１４７７】
一実施形態では、この疾患又は状態は、原発性先端紅痛症(PE)、発作性激痛症(PEPD)及びチャネル障害関連の無痛症(CIP)からなる群から選択される。
【１４７８】
任意選択で、NAV媒介性の疾患又は状態は、以下のいずれか1つから選択される:
a.神経因性疼痛又は神経原性疼痛(例えば、有痛性糖尿病性神経障害(PDN)、ヘルペス後神経障害(PHN)、中枢神経障害、末梢神経障害、三叉神経痛(TN)、有痛性知覚脱失、脊髄損傷、多発性硬化症、幻肢痛、痛覚過敏(hyperalgesia)、痛覚過敏(hyperpathia)、知覚異常、心因性疼痛、脳卒中後疼痛及びHIV関連疼痛、背痛、慢性背痛、変形性関節症、がん、突出痛、先端紅痛症[例えば、原発性先端紅痛症]、発作性30先端疼痛障害、神経圧迫及び/又は絞扼[例えば、手根管症候群、足根管症候群、尺骨神経絞扼、圧迫神経根障害、神経根腰痛、脊髄神経根病変、脊髄根圧迫、腰部脊椎管狭窄症、坐骨神経圧迫、肋間神経痛]、神経炎、化学療法による疼痛、先天性の欠陥/チャネル障害[例えば、チャネル障害関連の無痛症及び先天性無痛症]又は慢性アルコール依存症[アルコール性多発性神経障害]から生じる);
b.炎症性疼痛(例えば、変形性関節症疼痛、慢性背痛、関節リウマチ疼痛、がん疼痛、突出痛、やけどに伴う疼痛、脳炎疼痛、骨折疼痛、神経炎疼痛、自己免疫疾患疼痛、術後疼痛、歯痛、細菌感染に関連する疼痛、放射線療法に関連する疼痛、痛風に関連する疼痛及び過敏性腸症候群疼痛);
c.外傷に由来する疼痛(例えば、裂傷、切開、やけど、異物又は銃弾及び/又は散弾による損傷、脊髄損傷、腕神経叢裂離、神経挫滅及び/又は絞扼(例えば、手根管症候群、足根管症候群、尺骨神経絞扼、圧迫神経根障害、神経根腰痛、脊髄神経根病変、脊髄根圧迫、腰部脊椎管狭窄症、坐骨神経圧迫、肋間神経痛)、神経横切、術後痛、歯痛及び毒物暴露に由来する)
d.感染由来の疼痛[例えば、ヘルペス後神経障害(PHN)、HIV関連疼痛、天然痘感染、脳炎、ヘルペス感染、及び細菌感染];
e.悪性腫瘍由来の疼痛(例えば、がん疼痛、突出痛、及び神経圧迫疼痛);
f.内蔵疼痛(例えば、腎臓又は尿管疝痛、過敏性腸症候群、狭心症又は心臓疼痛、心不整脈、生理痛、間質性膀胱炎、直腸痛、下痢に関連する疼痛、虫垂炎、胆嚢炎及び膵炎);
g.代謝又は慢性疾患の疼痛(例えば、多発性硬化症関連疼痛、がん疼痛、突出痛、痛風に関連する疼痛、末梢糖尿病性神経障害、慢性アルコール依存性関連疼痛[アルコール性多発性神経障害]、尿毒症疼痛、甲状腺機能低下症関連疼痛、及びビタミン欠乏関連疼痛);
h.頭痛(例えば、緊張性頭痛、片頭痛及び群発性頭痛);
i.特発性疼痛(例えば、三叉神経痛、複合性局所疼痛症候群[例えば、I型複合性局所疼痛症候群及び/又はII型複合性局所疼痛症候群]、異痛症又は線維筋痛);
j.呼吸性疼痛(例えば、喘息関連の疼痛、喘息における気道過敏性、慢性咳、例えば、喘息及び/又は慢性閉塞性肺障害における);又は
k.他の疼痛(例えば、ホルモン療法、糖尿病、甲状腺機能低下症、てんかん、運動失調症、周期性四肢麻痺、急性掻痒又は慢性掻痒に関連する疼痛)。
【１４７９】
ある例では、NAV媒介性の疾患又は状態は、有痛性糖尿病性神経障害、ヘルペス後神経障害、三叉神経痛、変形性関節症、慢性背痛、神経圧迫疼痛(例えば、坐骨神経圧迫)又はがん疼痛から選択されるか;又は片頭痛、術後痛及び線維筋痛から選択される。
【１４８０】
ある例では、本発明のリガンドは、抗ヒトNav1.7結合部位を含み、ここでこの結合部位は、ヒト又はヒト化された結合部位であり、例えば、この結合部位は、ヒト又はヒト化された抗体可変ドメイン又は複数の可変ドメイン(例えば、ヒトVH/VL結合部位)を含むか、又はそれらからなる。更に、又は代わりに、このリガンドは、1つ又は複数のヒト抗体定常領域[例えば、ヒト抗体CH1、CH2、CH3(又はこれらの全て)又はFc]を含む。ある例では、このリガンドは、ヒト又はヒト化された可変領域及びヒト定常領域(例えば、ヒト患者においてFc機能を向上させるか弱らせる1つ又は複数の突然変異を保持する)を含む抗体である。
【１４８１】
ある例では、それを必要とするヒトにおいてNav1.7媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下するためのリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)が提供され、この方法は、前記ヒトに対して、前記リガンドを投与する工程を含み、ここでこのリガンドは、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合する。前記ヒトは、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。
【１４８２】
ある例では、本発明は、ヒトにおいてNav1.7を標的化する方法であって、前記ヒトに対して、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含む方法を提供する。前記ヒトは、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。ある例では、このヒトは、Nav1.7媒介性の疾患又は状態に罹っているか、又はそのリスクがある。ある例では、この方法は、ヒトにおけるNav1.7媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下する。
【１４８３】
ある例ではまた、ヒトにおいてNav1.7を標的化するためのリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)が提供され、この方法は、前記ヒトに対して、前記リガンドを投与する工程を含み、ここでこのリガンドは、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合する。前記ヒトは、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。ある例では、このヒトは、Nav1.7媒介性の疾患又は状態に罹っているか、又はそのリスクがある。ある例では、この方法は、ヒトにおけるNav1.7媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下する。
【１４８４】
ある実施形態では、(i)この抗体又は断片は、ヒトVHセグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このヒトVHセグメントは、配列番号40のフレームワーク1をコードしており、且つここで、前記ヒトは、配列番号40のフレームワーク1をコードしているVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、配列番号40のフレームワーク1を含むVHドメインを発現し;且つ、ここで(ii)前記ヒトは、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。
【１４８５】
更に、又は代わりに、ある例では、(i)この抗体又は断片は、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトは、IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;且つ、ここで(ii)前記ヒトは、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。
【１４８６】
ある例では、このリガンド、抗体又は断片は、疼痛又は掻痒のリスクを処置又は低下するためであるか(又はそのリスクを処置若しくは低下し)、任意選択でこの抗体は、ヒト化されたマウス又はラクダ科(例えば、ラマ又はラクダ)抗体である。
【１４８７】
特定の実施形態では、この抗Nav1.7リガンド、抗体又は断片はまた、Nav1.1-1.9から選択される別のNavに特異的に結合し、例えば、それはNav1.8又は1.9に特異的に結合する。
【１４８８】
特定の実施形態では、本発明の抗Nav1.7リガンド、抗体又は断片は、Fc領域を含み、ここでこのFc領域は、Kabatに示されるようなEUインデックスで番号付けした234D、234E、234N、234Q、234T、234H、234Y、234I、234V、234F、235A、235D、235R、235W、235P、235S、235N、235Q、235T、235H、235Y、235I、235V、235F、236E、239D、239E、239N、239Q、239F、239T、239H、239Y、240I、240A、240T、240M、241W、241L、241Y、241E、241R、243W、243L 243Y、243R、243Q、244H、245A、247L、247V、247G、251F、252Y、254T、255L、256E、256M、262I、262A、262T、262E、263I、263A、263T、263M、264L、264I、264W、264T、264R、264F、264M、264Y、264E、265G、265N、265Q、265Y、265F、265V、265I、265L、265H、265T、266I、266A、266T、266M、267Q、267L、268E、269H、269Y、269F、269R、270E、280A、284M、292P、292L、296E、296Q、296D、296N、296S、296T、296L、296I、296H、269G、297S、297D、297E、298H、298I、298T、298F、299I、299L、299A、299S、299V、299H、299F、299E、305I、313F、316D、325Q、325L、325I、325D、325E、325A、325T、325V、325H、327G、327W、327N、327L、328S、328M、328D、328E、328N、328Q、328F、328I、328V、328T、328H、328A、329F、329H、329Q、330K、330G、330T、330C、330L、330Y、330V、330I、330F、330R、330H、331G、331A、331L、331M、331F、331W、331K、331Q、331E、331S、331V、331I、331C、331Y、331H、331R、331N、331D、331T、332D、332S、332W、332F、332E、332N、332Q、332T、332H、332Y、332A、339T、370E、370N、378D、392T、396L、416G、419H、421K、440Y及び434Wからなる群から選択される少なくとも1つの非天然のアミノ酸残基を含む。任意選択で、このFc領域は、当業者に公知の追加の及び/又は代替的な非天然のアミノ酸残基を含んでもよい。(例えば、米国特許第5,624,821号;同第6,277,375号;同第6,737,056号;PCT国際公開番号WO01/58957;WO02/06919;WO04/016750;WO04/029207;WO04/035752及びWO05/040217を参照のこと)。
【１４８９】
本発明によるリガンド、抗体又は断片は、例えば、WO2011/051351(その疾患又は状態の開示は、本明細書における1つ又は複数の請求項における可能性のある包含について参照により本明細書に援用される)に開示される任意の疾患又は状態のリスクを処置又は防止するためである(又はそのリスクを処置若しくは防止若しくは低下する)。抗体を入手して試験することのガイダンスもそのPCT出願に見出すことができる。
【１４９０】
本発明によって更に包含されるのは、ヒトにおけるNav1.7媒介性の疾患又は障害を減弱又は阻害するための使用のための医薬の製造におけるリガンド、抗体又は断片の使用である。本発明のリガンド、抗体又は断片によって処置されるNav1.7媒介性の又は関連の障害としては、例えば、疼痛又は掻痒疾患又は状態が挙げられる。
【１４９１】
従って、本発明のリガンド、抗体又は断片は、Nav1.7発現及び/又は活性に関与する状態の処置における治療剤として有用である。一実施形態は、とりわけ、それを必要とする患者に対して有効量の本発明のリガンド、抗体又は断片を投与する工程を含む処置の方法であって、ここでNav1.7活性化の機能的な帰結は、低減される。別の実施形態はとりわけ、(i)Nav1.7の発現又は活性を示している患者を特定する工程と、(ii)この患者に対して有効量の本発明のリガンド、抗体又は断片を投与する工程とを含む処置の方法であって、ここでNav1.7活性化の機能的な帰結は減弱される。本発明による有効量とは、Nav1.7の活性化の機能的な帰結をモジュレートして(例えば、低減して)、処置されている特定の疾患又は障害の少なくとも1つの症状の重篤度をモジュレート(例えば、低下又は弱化)する量であるが、必ずしもその疾患又は障害を治癒する必要はない。従って、本発明の一実施形態は、本明細書に言及される任意の障害の少なくとも1つの症状の重篤度を処置又は低下する方法であり、これは、それを必要とする患者に対して、本発明の有効量の1つ又は複数のリガンド、抗体又は断片を、任意の障害の少なくとも1つの症状の重篤度が低下されるように、単独で、又は当技術分野で公知であるか若しくは本明細書に記載される別の適切な医薬と組み合わされた治療レジメンで投与する工程を含む。本発明の別の実施形態は、とりわけ、Nav1.7の少なくとも1つの効果に拮抗する方法であって、Nav1.7の前記少なくとも1つの効果(例えば、Nav1.7がナトリウムチャネルのようなイオンチャネルを形成する能力)が拮抗されるように、本発明の1つ又は複数のリガンド、抗体又は断片の有効量と接触させるか、又はそれを投与する工程を含む。
【１４９２】
まれなNav1.7バリアントプロファイルに対する抗体のテーラーメイド
本明細書に概説される通り(例えば、実施例1におけるPCSK9の状況では)、本発明は、バリアントのTOI型が本発明の選択基準を満たすことが見出される民族集団の多くのヒトで見出される遺伝子セグメントに基づいて、可変ドメイン及び/又は定常ドメインを有する抗体ベースのリガンドを選択することによって更にヒトの処置をテーラーメイドする可能性を含む。これはまた、本実施例と同様に、TOIがヒトNav1.7である場合にも準用される。従って、可変ドメイン及び/又は定常ドメインをテーラーメイドすることに関する、本明細書における全ての開示は、Nav1.7に関する、本実施例にあてはまり、本明細書における1つ又は複数の請求項における使用と組み合わせ可能である。
【１４９３】
実施例1に記載の通り、ある例では、ヒトにおいて可変性があるHCDR1又はFW3中の位置で選択されたヌクレオチドを含むヒトIGHV遺伝子セグメントの組換え由来の抗体VHドメインを含むリガンドが提供される(すなわち、ここではSNPがヒトに存在する)。
【１４９４】
さらなる情報がTable 4(表5)に提供され、ここでは、これらの位置でのバリエーション、及び多くのヒト集団に関連する1000ゲノムプロジェクトデータベースにわたるバリアント分布も示される。
【１４９５】
他の実施形態では、上記で更に詳細に説明される通り、本発明は、代替のヒトVH遺伝子セグメント、又はVK、Vλ若しくは定常領域遺伝子セグメントに基づいて、ヒトレシピエントの遺伝子型及び/又は表現型に対してテーラーメイドされたリガンドを提供する(代表的なバリアントについては更にTable 9(表10)を参照のこと)。
【１４９６】
さらなる例では、したがって以下が存在する:-
(i)ここで、このリガンドは、ヒトVHセグメント(例えば、ヒトVH3-23*04)、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このヒトVHセグメントは、配列番号40のフレームワーク1をコードしており、且つここで、前記ヒトは、配列番号40のフレームワーク1をコードしているVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、配列番号40のフレームワーク1を含むVHドメインを発現する。
(ii)リガンドが、ヒトVHセグメントIGHV3-7*01、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、前記ヒトが、IGHV3-7*01VH遺伝子セグメントを含むか、又はヒトが、ヒトVHセグメントIGHV3-7*01、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを発現する。
(iii)リガンドが、ヒトVκセグメントIGKV1-12*01及びヒトJκセグメントの組換え由来のVκドメインを含み、前記ヒトが、IGKV1-12*01Vκ遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、ヒトVκセグメントIGKV1-12*01及びヒトJκセグメントの組換え由来のVκドメインを発現する。
(iv)リガンドが、ヒトVκセグメント及びヒトJκセグメントの組換え由来のVκドメインを含み、ヒトVκセグメントが、(i)配列番号36に示される7位のProを含むCDR3をコードし、前記ヒトが、配列番号36に示される7位のProを含むCDR3をコードするVκ遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号36に示される7位のProを含むCDR3を含むVκドメインを発現するか;又は(ii)配列番号38に示される15位のSerを含むFW3をコードし、前記ヒトが、配列番号38に示される15位のSerを含むFW3をコードするVκ遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号38に示される15位のSerを含むFW3を含むVκドメインを発現する。
(v)リガンドが、配列番号4に示される204位のAsp又は配列番号4に示される206位のLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)IGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号4に示される204位のAsp又は配列番号4に示される206位のLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(vi)リガンドが、配列番号6に示される72位のPro、配列番号6に示される75位のAsn、配列番号6に示される76位のPhe、配列番号6に示される161位のVal及び配列番号6に示される257位のAlaからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)IGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、前記選択された配列番号6に示される72位のPro、配列番号6に示される75位のAsn、配列番号6に示される76位のPhe、配列番号6に示される161位のVal又は配列番号6に示される257位のAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(vii)リガンドが、配列番号16に示される84位のVal又は配列番号16に示される87位のCysを含むヒトカッパ鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)IGKC1*01ヒトカッパ鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号16に示される84位に対応するVal又は配列番号16に示される87位のCysを含むヒトカッパ鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(viii)リガンドが、ヒトIGLC1*01ラムダ鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)ヒトIGLC1*01ラムダ鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、ヒトIGLC1*01ラムダ鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(ix)リガンドが、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、配列番号73に示される189位のLeu又は配列番号73に示される289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(x)リガンドが、第1のヒトIGHG3(例えば、IGHG3*01)定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトガンマ-3重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)前記第1の定常領域遺伝子セグメント(例えば、IGHG3*01)を含むか、又はヒトは、前記第1のヒトIGHG3(例えば、IGHG3*01)定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトガンマ-3重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(xi)リガンドが、第1のヒトイプシロン重鎖定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトイプシロン重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)前記第1の定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、前記第1の定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトイプシロン重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(xii)リガンドが、第1のヒトミュー重鎖定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトミュー重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)前記第1の定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、前記第1の定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトミュー重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(xiii)リガンドが、第1のヒトアルファ重鎖定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトアルファ重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)前記第1の定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、前記第1の定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトアルファ重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(xiv)リガンドが、第1のヒトデルタ重鎖定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトデルタ重鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)前記第1の定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、前記第1の定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトデルタ重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(xv)リガンドが、第1のヒトカッパ軽鎖定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトカッパ軽鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)前記第1の定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、前記第1の定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトカッパ軽鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(xvi)リガンドが、第1のヒトラムダ軽鎖定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトラムダ軽鎖定常領域を含み、前記ヒトが、(i)前記第1の定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はヒトは、前記第1の定常領域遺伝子セグメントによってコードされたヒトラムダ軽鎖定常領域を含む抗体を発現する。
【１４９７】
これらの実施例は、本発明のNav1.7の実施例の状況で記載されるが、本明細書の任意の他のTOIに関連するので本発明に適用可能であり、従って、任意のTOIに関して本明細書の請求項において組み合わされて用いられうる。これらの実施例のいずれかにおいて、リガンドは、任意選択で抗体、例えば、ヒト又はヒト化された抗体[例えば、ヒト化されたマウス、ラット又はラクダ科(Camelid)抗体]である。
ヒト定常領域についてのADCC有効性は以下である:IgGl≧IgG3>>IgG4≧IgG2
ヒト定常領域についてのCDCの有効性は以下である:IgG3≧IgGl>>IgG2≒IgG4
従って、これは、ガンマ-4又はガンマ-2定常領域を含むリガンドについて、Nav1.7リガンドに有利でありうる(例えば、前記の実施例の通り)。例えば、ガンマ-4は、IgG4PE(すなわち、228Pro及び235Gluを有するガンマ-4定常領域)である。例えば、ガンマ-2は、IgG2Δaである。
【１４９８】
例えば、実施例(ix)の通り、本発明者は、IGH-ガンマ-4バリエーションに取り組む可能性を特定し、且つバリエーション189L及び289Rについての有用性を個々に又は組み合わせて特定した。なぜならこれらの残基は、CH3ドメインの一部であり、そのようなものとして、それらの残基は、抗体Fc領域の一部を形成するからである。従って、これらのCH3バリエーションと患者との適合は特に、前記で考察されるような理由に関して有益である。従って、この例では、本発明のリガンドは、配列番号73の189位に対応するLeu若しくは配列番号73の289位に対応するArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を含むか、又はその抗体からなり、且つここで、このヒトのゲノムは、このようなLeu及び/若しくはArgをコードするガンマ-4重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はこのヒトは、このようなLeu及び/若しくはArgを含むヒトガンマ-4定常領域を含む抗体を発現する。
【１４９９】
NAV1.7バリアントに対する本発明のリガンドの特異的な結合の決定
NAV1.7バリアントに対する本発明のリガンドの特異的な結合は、実施例1に記載のSPR方法を用いて行われうる。
【１５００】
実施形態は以下の通り提供される:-
【１５０１】
VHのテーラーメイドを利用した方法
1.それを必要とするヒトにおいて、Nav1.7媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下する方法であって、前記ヒトに対して、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み;
ここで(i)このリガンドが、ヒトVHセグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このヒトVHセグメントが、配列番号40のフレームワーク1をコードしており、且つここで、前記ヒトが、配列番号40のフレームワーク1をコードしているVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、配列番号40のフレームワーク1を含むVHドメインを発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【１５０２】
ある代替法では、条項1によって以下が提供される:-
ヒトにおいて、Nav1.7を標的化する方法であって、前記ヒトに対して、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み;
ここで(i)このリガンドが、ヒトVHセグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このヒトVHセグメントが、配列番号40のフレームワーク1をコードしており、且つここで、前記ヒトが、配列番号40のフレームワーク1をコードしているVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、配列番号40のフレームワーク1を含むVHドメインを発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【１５０３】
ある例では、このヒトは、Nav1.7媒介性の疾患又は状態に罹っているか、又はそのリスクがある。
【１５０４】
ある例では、この方法は、ヒトにおけるNav1.7媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下する。
【１５０５】
2.前記アミノ酸が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P及び1449Vのいずれか1つからなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態が疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項の方法。
【１５０６】
3.前記アミノ酸が、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I及び1627Kからなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態が疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項の方法。
【１５０７】
4.前記アミノ酸が、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)及び1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)からなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態が疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項の方法。
【１５０８】
5.前記ヒトに含まれるVH遺伝子セグメントが、生殖系列VH遺伝子セグメントである、任意の前述の条項の方法。
【１５０９】
6.前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含むヒト(ここでこのヒトは条項1のヒトである)を選択する工程を含む、任意の前述の条項の方法。
【１５１０】
7.ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列、並びに/又は136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことが決定された、任意の前述の条項の方法。
【１５１１】
8.ヒトが、(a)136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列、並びに/又は(b)136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記突然変異前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、任意の前述の条項の方法。
【１５１２】
9.決定する工程が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列について、ヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、条項8の方法。
【１５１３】
10.アッセイする工程が
生物学的試料と、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む、少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブとを接触させる工程を含み、ここで前記連続したヌクレオチドの配列が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸をコードするヌクレオチド配列を含み、それによって、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する工程と、
この複合体の有無を検出する工程であって、ここでこの複合体の存在を検出する工程は、このヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことを決定する工程とを含む、条項9の方法。
【１５１４】
11.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション、及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/又はここでこのアッセイする工程が、マルチプレックスフォーマットで行われる、条項9の方法。
【１５１５】
12.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、条項9又は11の方法。
【１５１６】
13.前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性であることが示され、任意選択で、前記ヒトが、配列番号76のヌクレオチド配列を含むと更に示されるか、又は前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性と示される、任意の前述の条項の方法。
【１５１７】
14.前記ヒトが、疼痛又は掻痒の処置に対して実質的に耐性であるか、又は実質的に耐性であると更に決定された、任意の前述の条項の方法。
【１５１８】
15.前記ヒトが、疼痛若しくは掻痒の処置を受けているか、若しくは受けたか、又は疼痛若しくは掻痒の処置に対して応答性が低下していた、任意の前述の条項の方法。
【１５１９】
16.前記疾患又は状態が、疼痛又は掻痒疾患又は状態である、任意の前述の条項の方法。
【１５２０】
17.前記疾患又は状態が、チャネル障害であるか、若しくはチャネル障害に関連しているか;又は原発性先端紅痛症(PE)、発作性激痛症(PEPD)及びチャネル障害関連の無痛症(CIP)からなる群から選択される、任意の前述の条項の方法。
【１５２１】
18.前記ヒトが、請求項16又は17に挙げられる少なくとも1つの状態と診断された、任意の前述の条項の方法。
【１５２２】
19.前記抗体又は抗体断片が、請求項16又は17に挙げられる状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、任意の前述の条項の方法。
【１５２３】
20.前記ヌクレオチド配列が、rs6746030、rs3750904、rs58022607、rs4369876、rsl3402180及びrsl2478318からなる群から選択される1つ又は複数のSNPを含む、任意の前述の条項の方法。
【１５２４】
21.前記リガンド(例えば、抗体又は抗体断片)が、吸入、静脈内若しくは皮下投与によって投与されるか、及び/又は吸入用若しくは注射用調製物中に含まれる、任意の前述の条項の方法。
【１５２５】
22.VHドメインが、配列番号69のアミノ酸配列を含む、任意の前述の条項の方法。
【１５２６】
好ましくは、ここでは、Nav1.7突然変異は1161W(いくつかの刊行物、例えば、Reimannら[Proc Natl Acad Sci U S A. 2010年3月16日;107(ll):5148〜53頁. doi:10.1073/pnas.0913181107. Epub 2010年3月8日;「Pain perception is altered by nucleotide polymorphism in SCN9A」;Reimann Fらでは1150Wとしても公知である]である。ここでは、正常なヒトにおける1150W(すなわち、1161W)と疼痛感覚の増大(より低い閾値)との関係が記載される。1161WをコードするSNP rs6746030は、1000ゲノムフェーズIデータベースにおいて全てのヒト集団で11%という累積頻度を有するが、AFR、AMR、EUR、ASW、YRI、CLM、CEU、GBR、IBS及びTSI集団での平均の累積頻度を上回ると示される。従って、一実施形態では、このヒトは、AFR、AMR、EUR、ASW、YRI、CLM、CEU、GBR、IBS又はTSI血統のヒトであり、このリガンドは、突然変異R1161Wを含むヒトNav1.7に特異的に結合し、且つこのヒトは、突然変異R1161Wを含むNav1.7を含むか、又はこのヒトは、SNP rs6746030を含む。ある例では、このヒトは、AFR血統である。ある例では、このヒトは、AMR血統である。ある例では、このヒトは、EUR血統である。ある例では、このヒトは、ASW血統である。ある例では、このヒトは、YRI血統である。ある例では、このヒトは、CLM血統である。ある例では、このヒトは、CEU血統である。ある例では、このヒトは、GBR血統である。ある例では、このヒトは、IBS血統である。ある例では、このヒトは、TSI血統である。ある例では、このヒトは、SNP rs6746030及び定常領域又は可変領域SNP(突然変異)が、平均の累積頻度を上回る血統のヒトである。
【１５２７】
VHのテーラーメイドを利用したリガンド
1.それを必要とするヒトにおいて、Nav1.7媒介性の疾患又は状態(例えば、喘息)のリスクを処置又は低下する方法における使用のためのリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)であって、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合し;
ここで(i)このリガンドが、ヒトVHセグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このヒトVHセグメントが、配列番号40のフレームワーク1をコードしており、且つここで、前記ヒトが、配列番号40のフレームワーク1をコードしているVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、配列番号40のフレームワーク1を含むVHドメインを発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、リガンド。
【１５２８】
ある代替法では、段落1によって以下が提供される:-
ヒトにおいて、Nav1.7を標的化する方法における使用のためのリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)であって、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合し;
ここで(i)このリガンドが、ヒトVHセグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このヒトVHセグメントが、配列番号40のフレームワーク1をコードしており、且つここで、前記ヒトが、配列番号40のフレームワーク1をコードしているVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、配列番号40のフレームワーク1を含むVHドメインを発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、リガンド。
【１５２９】
ある例では、このヒトは、Nav1.7媒介性の疾患又は状態に罹っているか、又はそのリスクがある。ある例では、この方法は、ヒトにおけるNav1.7媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下する。
【１５３０】
2.前記アミノ酸が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P及び1449Vのうちいずれか1つからなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態が疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項のリガンド。
【１５３１】
3.前記アミノ酸が、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I及び1627Kからなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態が疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項のリガンド。
【１５３２】
4.前記アミノ酸が、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)及び1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)からなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態が疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項のリガンド。
【１５３３】
5.前記ヒトに含まれるVH遺伝子セグメントが、生殖系列VH遺伝子セグメントである、任意の前述の条項のリガンド。
【１５３４】
6.前記方法が、前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含むヒト(ここでこのヒトは条項1のヒトである)を選択する工程を含む、任意の前述の条項のリガンド。
【１５３５】
7.ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列、並びに/又は136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことが決定された、任意の前述の条項のリガンド。
【１５３６】
8.ヒトが、(a)136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列、並びに/又は(b)136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記突然変異前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことを決定する工程を前記方法が含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、任意の前述の条項のリガンド。
【１５３７】
9.決定する工程が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列について、ヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、条項8のリガンド。
【１５３８】
10.アッセイする工程が
生物学的試料と、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む、少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブとを接触させる工程を含み、ここで前記連続したヌクレオチドの配列が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸をコードするヌクレオチド配列を含み、それによって、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する工程と、
この複合体の有無を検出する工程であって、ここでこの複合体の存在を検出する工程は、このヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことを決定する工程とを含む、条項9のリガンド。
【１５３９】
11.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション、及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/又はここでこのアッセイする工程が、マルチプレックスフォーマットで行われる、条項9のリガンド。
【１５４０】
12.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、条項9又は11のリガンド。
【１５４１】
13.前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性であることが示され、任意選択で、前記ヒトが、配列番号76のヌクレオチド配列を含むと更に示されるか、又は前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性と示される、任意の前述の条項のリガンド。
【１５４２】
14.前記ヒトが、疼痛又は掻痒の処置に対して実質的に耐性であるか、又は実質的に耐性であると更に決定された、任意の前述の条項のリガンド。
【１５４３】
15.前記ヒトが、疼痛若しくは掻痒の処置を受けているか、若しくは受けたか、又は疼痛若しくは掻痒の処置に対して応答性が低下していた、任意の前述の条項のリガンド。
【１５４４】
16.前記疾患又は状態が、疼痛又は掻痒疾患又は状態である、任意の前述の条項のリガンド。
【１５４５】
17.前記疾患又は状態が、チャネル障害であるか、若しくはチャネル障害に関連しているか;又は原発性先端紅痛症(PE)、発作性激痛症(PEPD)及びチャネル障害関連の無痛症(CIP)からなる群から選択される、任意の前述の条項のリガンド。
【１５４６】
18.前記ヒトが、請求項16又は17に挙げられる少なくとも1つの状態と診断された、任意の前述の条項のリガンド。
【１５４７】
19.前記抗体又は抗体断片が、請求項16又は17に挙げられる状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、任意の前述の条項のリガンド。
【１５４８】
20.ヌクレオチド配列が、rs6746030、rs3750904、rs58022607、rs4369876、rsl3402180及びrsl2478318からなる群から選択される1つ又は複数のSNPを含む、任意の前述の条項のリガンド。
【１５４９】
21.前記リガンド(例えば、抗体又は抗体断片)が、吸入、静脈内若しくは皮下投与のためであるか、及び/又は吸入用若しくは注射用調製物中に含まれる、任意の前述の条項のリガンド。
【１５５０】
22.VHドメインが、配列番号69のアミノ酸配列を含む、任意の前述の条項のリガンド。
【１５５１】
ガンマ-4定常領域のテーラーメイドを利用した方法
1.それを必要とするヒトにおいて、Nav1.7媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下する方法であって、前記ヒトに対して、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み;
ここで(i)このリガンドが、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトが、(i)IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【１５５２】
ある代替法では、条項1によって以下が提供される:-
ヒトにおいて、Nav1.7を標的化する方法であって、前記ヒトに対して、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み;
ここで(i)このリガンドが、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトが(i)IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【１５５３】
ある例では、このヒトは、Nav1.7媒介性の疾患又は状態に罹っているか、又はそのリスクがある。ある例では、この方法は、ヒトにおけるNav1.7媒介性の疾患又は状態のリスクを処置するか又は低下する。
【１５５４】
2.前記アミノ酸が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P及び1449Vのうちいずれか1つからなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態が疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項の方法。
【１５５５】
3.前記アミノ酸が、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I及び1627Kからなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態が疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項の方法。
【１５５６】
4.前記アミノ酸が、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)及び1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)からなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態が疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項の方法。
【１５５７】
5.前記ヒトに含まれる定常領域遺伝子セグメントが、生殖系列遺伝子セグメントである、任意の前述の条項の方法。
【１５５８】
6.前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含むヒト(ここでこのヒトは条項1のヒトである)を選択する工程を含む、任意の前述の条項の方法。
【１５５９】
7.ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列、並びに/又は136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことが決定された、任意の前述の条項の方法。
【１５６０】
8.ヒトが、(a)136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列、並びに/又は(b)136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記突然変異前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、任意の前述の条項の方法。
【１５６１】
9.決定する工程が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列について、ヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、条項8の方法。
【１５６２】
10.アッセイする工程が
生物学的試料と、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む、少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブとを接触させる工程を含み、ここで前記連続したヌクレオチドの配列が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸をコードするヌクレオチド配列を含み、それによって、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する工程と、
この複合体の有無を検出する工程であって、ここでこの複合体の存在を検出する工程は、このヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことを決定する工程とを含む、条項9の方法。
【１５６３】
11.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション、及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/又はここでこのアッセイする工程が、マルチプレックスフォーマットで行われる、条項9の方法。
【１５６４】
12.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、条項9又は11の方法。
【１５６５】
13.前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性であることが示され、任意選択で、前記ヒトが、配列番号76のヌクレオチド配列を含むと更に示されるか、又は前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性と示される、任意の前述の条項の方法。
【１５６６】
14.前記ヒトが、疼痛又は掻痒の処置に対して実質的に耐性であるか、又は実質的に耐性であると更に決定された、任意の前述の条項の方法。
【１５６７】
15.前記ヒトが、疼痛若しくは掻痒の処置を受けているか、若しくは受けたか、又は疼痛若しくは掻痒の処置に対して応答性が低下していた、任意の前述の条項の方法。
【１５６８】
16.前記疾患又は状態が、疼痛又は掻痒疾患又は状態である、任意の前述の条項の方法。
【１５６９】
17.前記疾患又は状態が、チャネル障害であるか、若しくはチャネル障害に関連しているか;又は原発性先端紅痛症(PE)、発作性激痛症(PEPD)及びチャネル障害関連の無痛症(CIP)からなる群から選択される、任意の前述の条項の方法。
【１５７０】
18.前記ヒトが、請求項16又は17に挙げられる少なくとも1つの状態と診断された、任意の前述の条項の方法。
【１５７１】
19.前記抗体又は抗体断片が、請求項16又は17に挙げられる状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、任意の前述の条項の方法。
【１５７２】
20.ヌクレオチド配列が、rs6746030、rs3750904、rs58022607、rs4369876、rsl3402180及びrsl2478318からなる群から選択される1つ又は複数のSNPを含む、任意の前述の条項の方法。
【１５７３】
21.前記リガンド(例えば、抗体又は抗体断片)が、吸入、静脈内若しくは皮下投与によって投与されるか、及び/又は吸入用若しくは注射用調製物中に含まれる、任意の前述の条項の方法。
【１５７４】
22.リガンドのヒトガンマ-4重鎖定常領域が、配列番号73のアミノ酸配列又はそのADCC不活性化バージョンを含む、任意の前述の条項の方法。
【１５７５】
23.ヒトガンマ-4重鎖定常領域が228P及び235Eを含む、任意の前述の条項の方法。
【１５７６】
ガンマ-4定常領域のテーラーメイドを利用したリガンド
1.それを必要とするヒトにおいてNav1.7媒介性の疾患又は状態(例えば、疼痛)のリスクを処置又は低下する方法における使用のためのリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)であって、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合し;
ここで(i)このリガンドが、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトが(i)IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、リガンド。
【１５７７】
ある代替法では、段落1によって以下が提供される:-
ヒトにおいて、Nav1.7を標的化する方法における使用のためのリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)であって、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合し;
ここで(i)このリガンドが、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒト(i)IGHG4*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、配列番号73にみられる189位のLeu若しくは配列番号73にみられる289位のArgを含むヒトガンマ-4重鎖定常領域を含む抗体を発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、リガンド。
【１５７８】
ある例では、このヒトは、Nav1.7媒介性の疾患又は状態のリスクに罹っているか、又はそのリスクがある。ある例では、この方法は、ヒトにおけるNav1.7媒介性の疾患又は状態のリスクを処置するか又は低下する。
【１５７９】
2.前記アミノ酸が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P及び1449Vのうちいずれか1つからなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態が疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項のリガンド。
【１５８０】
3.前記アミノ酸が、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I及び1627Kからなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態が疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項のリガンド。
【１５８１】
4.前記アミノ酸が、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)及び1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)からなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態は疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項のリガンド。
【１５８２】
5.前記ヒトに含まれるVH遺伝子セグメントが、生殖系列VH遺伝子セグメントである、任意の前述の条項のリガンド。
【１５８３】
6.前記方法が、前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含むヒト(ここでこのヒトは条項1のヒトである)を選択する工程を含む、任意の前述の条項のリガンド。
【１５８４】
7.ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列、並びに/又は136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことが決定された、任意の前述の条項のリガンド。
【１５８５】
8.ヒトが、(a)136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列、並びに/又は(b)136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記突然変異前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことを決定する工程を前記方法が含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、任意の前述の条項のリガンド。
【１５８６】
9.決定する工程が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列について、ヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、条項8のリガンド。
【１５８７】
10.アッセイする工程が
生物学的試料と、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む、少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブとを接触させる工程を含み、ここで前記連続したヌクレオチドの配列が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸をコードするヌクレオチド配列を含み、それによって、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する工程と、
この複合体の有無を検出する工程であって、ここでこの複合体の存在を検出する工程は、このヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことを決定する工程とを含む、条項9のリガンド。
【１５８８】
11.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション、及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/又はここでこのアッセイする工程が、マルチプレックスフォーマットで行われる、条項9のリガンド。
【１５８９】
12.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、条項9又は11のリガンド。
【１５９０】
13.前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性であることが示され、任意選択で、前記ヒトが、配列番号76のヌクレオチド配列を含むと更に示されるか、又は前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性と示される、任意の前述の条項のリガンド。
【１５９１】
14.前記ヒトが、疼痛又は掻痒の処置に対して実質的に耐性であるか、又は実質的に耐性であると更に決定された、任意の前述の条項のリガンド。
【１５９２】
15.前記ヒトが、疼痛若しくは掻痒の処置を受けているか、若しくは受けたか、又は疼痛若しくは掻痒の処置に対して応答性が低下していた、任意の前述の条項のリガンド。
【１５９３】
16.前記疾患又は状態が、疼痛又は掻痒疾患又は状態である、任意の前述の条項のリガンド。
【１５９４】
17.前記疾患又は状態が、チャネル障害であるか、若しくはチャネル障害に関連しているか;又は原発性先端紅痛症(PE)、発作性激痛症(PEPD)及びチャネル障害関連の無痛症(CIP)からなる群から選択される、任意の前述の条項のリガンド。
【１５９５】
18.前記ヒトが、請求項16又は17に挙げられる少なくとも1つの状態と診断された、任意の前述の条項のリガンド。
【１５９６】
19.前記抗体又は抗体断片が、請求項16又は17に挙げられる状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、任意の前述の条項のリガンド。
【１５９７】
20.ヌクレオチド配列が、rs6746030、rs3750904、rs58022607、rs4369876、rsl3402180及びrsl2478318からなる群から選択される1つ又は複数のSNPを含む、任意の前述の条項のリガンド。
【１５９８】
21.前記リガンド(例えば、抗体又は抗体断片)が、吸入、静脈内若しくは皮下投与のためであるか、及び/又は吸入用若しくは注射用調製物中に含まれる、任意の前述の条項のリガンド。
【１５９９】
22.リガンドのヒトガンマ-4重鎖定常領域が、配列番号73のアミノ酸配列又はそのADCC不活性化バージョンを含む、任意の前述の条項のリガンド。
【１６００】
23.ヒトガンマ-4重鎖定常領域が228P及び235Eを含む、任意の前述の条項のリガンド。
【１６０１】
ガンマ-2定常領域のテーラーメイドを利用した方法
1.それを必要とするヒトにおいて、Nav1.7媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下する方法であって、前記ヒトに対して、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み;
ここで(i)このリガンドが、配列番号6において示される72位のPro、配列番号6において示される75位のAsn、配列番号6において示される76位のPhe、配列番号6において示される161位のVal及び配列番号6において示される257位のAlaからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトが、(i)IGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、前記選択された配列番号6において示される72位のPro、配列番号6において示される75位のAsn、配列番号6において示される76位のPhe、配列番号6において示される161位のVal若しくは配列番号6において示される257位のAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含む抗体を発現し;且つ、
ここで(ii)前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【１６０２】
ある代替法では、条項1によって以下が提供される:-
ヒトにおいて、Nav1.7を標的化する方法であって、前記ヒトに対して、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み;
ここで(i)このリガンドが、配列番号6において示される72位のPro、配列番号6において示される75位のAsn、配列番号6において示される76位のPhe、配列番号6において示される161位のVal及び配列番号6において示される257位のAlaからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトが、(i)IGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、前記選択された配列番号6において示される72位のPro、配列番号6において示される75位のAsn、配列番号6において示される76位のPhe、配列番号6において示される161位のVal若しくは配列番号6において示される257位のAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含む抗体を発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【１６０３】
ある例では、このヒトは、Nav1.7媒介性の疾患又は状態に罹っているか、又はそのリスクにある。ある例では、この方法は、ヒトにおけるNav1.7媒介性の疾患又は状態のリスクを処置するか又は低下する。
【１６０４】
2.前記アミノ酸が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P及び1449Vのうちいずれか1つからなる群から選択され; 任意選択で前記疾患又は状態が疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項の方法。
【１６０５】
3.前記アミノ酸が、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I及び1627Kからなる群から選択され; 任意選択で前記疾患又は状態が疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項の方法。
【１６０６】
4.前記アミノ酸が、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)及び1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)からなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態が疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項の方法。
【１６０７】
5.前記ヒトに含まれる定常領域遺伝子セグメントが、生殖系列遺伝子セグメントである、任意の前述の条項の方法。
【１６０８】
6.前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含むヒト(ここでこのヒトは条項1のヒトである)を選択する工程を含む、任意の前述の条項の方法。
【１６０９】
7.ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列、並びに/又は136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことが決定された、任意の前述の条項の方法。
【１６１０】
8.ヒトが、(a)136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列、並びに/又は(b)136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記突然変異前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、任意の前述の条項の方法。
【１６１１】
9.決定する工程が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列について、ヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、条項8の方法。
【１６１２】
10.アッセイする工程が
生物学的試料と、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む、少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブとを接触させる工程を含み、ここで前記連続したヌクレオチドの配列が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸をコードするヌクレオチド配列を含み、それによって、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する、工程と、
この複合体の有無を検出する工程であって、ここでこの複合体の存在を検出する工程は、このヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことを決定する工程とを含む、条項9の方法。
【１６１３】
11.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション、及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/又はここでこのアッセイする工程が、マルチプレックスフォーマットで行われる、条項9の方法。
【１６１４】
12.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、条項9又は11の方法。
【１６１５】
13.前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性であることが示され、任意選択で、前記ヒトが、配列番号76のヌクレオチド配列を含むと更に示されるか、又は前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性と示される、任意の前述の条項の方法。
【１６１６】
14.前記ヒトが、疼痛又は掻痒の処置に対して実質的に耐性であるか、又は実質的に耐性であると更に決定された、任意の前述の条項の方法。
【１６１７】
15.前記ヒトが、疼痛若しくは掻痒の処置を受けているか、若しくは受けたか、又は疼痛若しくは掻痒の処置に対して応答性が低下していた、任意の前述の条項の方法。
【１６１８】
16.前記疾患又は状態が、疼痛又は掻痒疾患又は状態である、任意の前述の条項の方法。
【１６１９】
17.前記疾患又は状態が、チャネル障害であるか、若しくはチャネル障害に関連しているか;又は原発性先端紅痛症(PE)、発作性激痛症(PEPD)及びチャネル障害関連の無痛症(CIP)からなる群から選択される、任意の前述の条項の方法。
【１６２０】
18.前記ヒトが、請求項16又は17に挙げられる少なくとも1つの状態と診断された、任意の前述の条項の方法。
【１６２１】
19.前記抗体又は抗体断片が、請求項16又は17に挙げられる状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、任意の前述の条項の方法。
【１６２２】
20.ヌクレオチド配列が、rs6746030、rs3750904、rs58022607、rs4369876、rsl3402180及びrsl2478318からなる群から選択される1つ又は複数のSNPを含む、任意の前述の条項の方法。
【１６２３】
21.前記リガンド(例えば、抗体又は抗体断片)が、吸入、静脈内若しくは皮下投与によって投与されるか、及び/又は吸入用若しくは注射用調製物中に含まれる、任意の前述の条項の方法。
【１６２４】
22.リガンドのヒトガンマ-2重鎖定常領域が、IGHG2*01アミノ酸配列又はそのADCC不活性化バージョンを含む、任意の前述の条項の方法。
【１６２５】
ガンマ-2定常領域のテーラーメイドを利用したリガンド
1.それを必要とするヒトにおいてNav1.7媒介性の疾患又は状態(例えば、疼痛)のリスクを処置又は低下する方法における使用のためのリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)であって、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合し;
ここで(i)このリガンドが、配列番号6において示される72位のPro、配列番号6において示される75位のAsn、配列番号6において示される76位のPhe、配列番号6において示される161位のVal及び配列番号6において示される257位のAlaからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトが、(i)IGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、前記選択された配列番号6において示される72位のPro、配列番号6において示される75位のAsn、配列番号6において示される76位のPhe、配列番号6において示される161位のVal若しくは配列番号6において示される257位のAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含む抗体を発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトが136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、リガンド。
【１６２６】
ある代替法では、段落1によって以下が提供される:-
ヒトにおいて、Nav1.7を標的化する方法における使用のためのリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)であって、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトNav1.7タンパク質に特異的に結合し;
ここで(i)このリガンドが、配列番号6において示される72位のPro、配列番号6において示される75位のAsn、配列番号6において示される76位のPhe、配列番号6において示される161位のVal及び配列番号6において示される257位のAlaからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトが、(i)IGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、前記選択された、配列番号6において示される72位のPro、配列番号6において示される75位のAsn、配列番号6において示される76位のPhe、配列番号6において示される161位のVal若しくは配列番号6において示される257位のAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含む抗体を発現し;且つ
ここで(ii)前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含む前記Nav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、リガンド(例えば、抗体又は抗体断片)。
【１６２７】
ある例では、このヒトは、Nav1.7媒介性の疾患又は状態のリスクに罹っているか、又はそのリスクがある。ある例では、この方法は、ヒトにおけるNav1.7媒介性の疾患又は状態のリスクを処置するか又は低下する。
【１６２８】
2.前記アミノ酸が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P及び1449Vのうちいずれか1つからなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態が疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項のリガンド。
【１６２９】
3.前記アミノ酸が、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I及び1627Kからなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態が疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項のリガンド。
【１６３０】
4.前記アミノ酸が、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)及び1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)からなる群から選択され;任意選択で前記疾患又は状態が疼痛疾患又は状態である、任意の前述の条項のリガンド。
【１６３１】
5.前記ヒトに含まれるVH遺伝子セグメントが、生殖系列VH遺伝子セグメントである、任意の前述の条項のリガンド。
【１６３２】
6. 前記方法が、前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含むヒト(ここでこのヒトは条項1のヒトである)を選択する工程を含む、任意の前述の条項のリガンド。
【１６３３】
7.ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列、並びに/又は136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことが決定された、任意の前述の条項のリガンド。
【１６３４】
8.ヒトが、(a)136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列、並びに/又は(b)136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記突然変異前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことを決定する工程を前記方法が含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、任意の前述の条項のリガンド。
【１６３５】
9.決定する工程が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列について、ヒト由来の生物学的試料をアッセイする工程を含む、条項8のリガンド。
【１６３６】
10.アッセイする工程が
生物学的試料と、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む、少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブとを接触させる工程を含み、ここで前記連続したヌクレオチドの配列が、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸をコードするヌクレオチド配列を含み、それによって、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する工程と、
この複合体の有無を検出する工程であって、ここでこの複合体の存在を検出する工程は、このヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質を含むことを決定する工程とを含む、条項9のリガンド。
【１６３７】
11.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション、及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/又はここでこのアッセイする工程が、マルチプレックスフォーマットで行われる、条項9のリガンド。
【１６３８】
12.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、条項9又は11のリガンド。
【１６３９】
13.前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性であることが示され、任意選択で、前記ヒトが、配列番号76のヌクレオチド配列を含むと更に示されるか、又は前記ヒトが、136I、216S、241T、395K、848T、858H、858F、863P、1449V、996C、1298F、1298D、1299F、1461T、1462V、1464I、1627K、277X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、328X(ここでXは、Y以外のアミノ酸である)、395K、459X(ここでXは、S以外のアミノ酸である)、693X(ここでXは、E以外のアミノ酸である)、767X(ここでXは、I以外のアミノ酸である)、830X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、897X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、1200L、1235L、1488X(ここでXは、R以外のアミノ酸である)、1659X(ここでXは、K以外のアミノ酸である)、1689X(ここでXは、W以外のアミノ酸である)、422D、490N、943L、1002L、1161W及び1919Gからなる群から選択される前記アミノ酸を含むNav1.7タンパク質をコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性と示される、任意の前述の条項のリガンド。
【１６４０】
14.前記ヒトが、疼痛又は掻痒の処置に対して実質的に耐性であるか、又は実質的に耐性であると更に決定された、任意の前述の条項のリガンド。
【１６４１】
15.前記ヒトが、疼痛若しくは掻痒の処置を受けているか、若しくは受けたか、又は疼痛若しくは掻痒の処置に対して応答性が低下していた、任意の前述の条項のリガンド。
【１６４２】
16.前記疾患又は状態が、疼痛又は掻痒疾患又は状態である、任意の前述の条項のリガンド。
【１６４３】
17.前記疾患又は状態が、チャネル障害であるか、若しくはチャネル障害に関連しているか;又は原発性先端紅痛症(PE)、発作性激痛症(PEPD)及びチャネル障害関連の無痛症(CIP)からなる群から選択される、任意の前述の条項のリガンド。
【１６４４】
18.前記ヒトが、請求項16又は17に挙げられる少なくとも1つの状態と診断された、任意の前述の条項のリガンド。
【１６４５】
19.前記抗体又は抗体断片が、請求項16又は17に挙げられる状態の前記ヒトにおけるリスクを処置又は低下する、任意の前述の条項のリガンド。
【１６４６】
20.ヌクレオチド配列が、rs6746030、rs3750904、rs58022607、rs4369876、rsl3402180及びrsl2478318からなる群から選択される1つ又は複数のSNPを含む、任意の前述の条項のリガンド。
【１６４７】
21.前記リガンド(例えば、抗体又は抗体断片)が、吸入、静脈内若しくは皮下投与のためであるか、及び/又は吸入用若しくは注射用調製物中に含まれる、任意の前述の条項のリガンド。
【１６４８】
22.リガンドのヒトガンマ-2重鎖定常領域が、IGHG2*01アミノ酸配列又はそのADCC不活性化バージョンを含む、任意の前述の条項のリガンド。
【１６４９】
【表５Ａ】
0006720079.tif 000012
【１６５０】
【表５Ｂ】
0006720079.tif 000013
【１６５１】
【表６Ａ】
0006720079.tif 000014
【１６５２】
【表６Ｂ】
0006720079.tif 000015
【１６５３】
【表６Ｃ】
0006720079.tif 000016
【１６５４】
【表６Ｄ】
0006720079.tif 000017
【１６５５】
【表６Ｅ】
0006720079.tif 000018
【１６５６】
【表６Ｆ】
0006720079.tif 000019
【１６５７】
【表６Ｇ】
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【１６５８】
【表６Ｈ】
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【１６５９】
【表６Ｉ】
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【１６６０】
【表６Ｊ】
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【１６６１】
【表６Ｋ】
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【１６６２】
【表６Ｌ】
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【１６６３】
【表６Ｍ】
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【１６６４】
【表７Ａ】
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【１６６５】
【表７Ｂ】
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【１６６６】
【表７Ｃ】
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【１６６７】
【表７Ｄ】
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【１６６８】
【表７Ｅ】
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【１６６９】
【表７Ｆ】
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【１６７０】
【表７Ｇ】
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【１６７１】
【表７Ｈ】
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【１６７２】
【表７Ｉ】
0006720079.tif 000035
【１６７３】
【表７Ｊ】
0006720079.tif 000036
【１６７４】
【表７Ｋ】
0006720079.tif 000037
【１６７５】
【表７Ｌ】
0006720079.tif 000038
【１６７６】
【表７Ｍ】
0006720079.tif 000039
【１６７７】
【表７Ｎ】
0006720079.tif 000040
【１６７８】
【表７Ｏ】
0006720079.tif 000041
【１６７９】
【表７Ｐ】
0006720079.tif 000042
【１６８０】
【表７Ｑ】
0006720079.tif 000043
【１６８１】
【表７Ｒ】
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【１６８２】
【表７Ｓ】
0006720079.tif 000045
【１６８３】
【表７Ｔ】
0006720079.tif 000046
【１６８４】
【表８】
0006720079.tif 000047
【１６８５】
【表９Ａ】
0006720079.tif 000048
【１６８６】
【表９Ｂ】
0006720079.tif 000049
【１６８７】
【表９Ｃ】
0006720079.tif 000050
【１６８８】
【表９Ｄ】
0006720079.tif 000051
【１６８９】
【表９Ｅ】
0006720079.tif 000052
【１６９０】
【表９Ｆ】
0006720079.tif 000053
【１６９１】
【表９Ｇ】
0006720079.tif 000054
【１６９２】
【表１０Ａ】
0006720079.tif 000055
【１６９３】
【表１０Ｂ】
0006720079.tif 000056
【１６９４】
【表１０Ｃ】
0006720079.tif 000057
【１６９５】
【表１０Ｄ】
0006720079.tif 000058
【１６９６】
【表１０Ｅ】
0006720079.tif 000059
【１６９７】
【表１１Ａ】
0006720079.tif 000060
【１６９８】
【表１１Ｂ】
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【１６９９】
【表１１Ｃ】
0006720079.tif 000062
【１７００】
【表１１Ｄ】
0006720079.tif 000063
【１７０１】
【表１１Ｅ】
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【１７０２】
【表１１Ｆ】
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【１７０３】
【表１１Ｇ】
0006720079.tif 000066
【１７０４】
【表１１Ｈ】
0006720079.tif 000067
【１７０５】
【表１１Ｉ】
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【１７０６】
【表１１Ｊ】
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【１７０７】
【表１１Ｋ】
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【１７０８】
【表１２Ａ】
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【１７０９】
【表１２Ｂ】
0006720079.tif 000072
【１７１０】
【表１２Ｃ】
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【１７１１】
【表１２Ｄ】
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【１７１２】
【表１３Ａ】
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【１７１３】
【表１３Ｂ】
0006720079.tif 000076
【１７１４】
【表１３Ｃ】
0006720079.tif 000077
【１７１５】
【表１３Ｄ】
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【１７１６】
【表１３Ｅ】
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【１７１７】
【表１３Ｆ】
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【１７１８】
【表１３Ｇ】
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【１７１９】
【表１３Ｈ】
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【１７２０】
【表１３Ｉ】
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【１７２１】
【表１３Ｊ】
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【１７２２】
【表１３Ｋ】
0006720079.tif 000085
【１７２３】
【表１３Ｌ】
0006720079.tif 000086
【１７２４】
【表１３Ｍ】
0006720079.tif 000087
【１７２５】
(実施例4)
まれなIL6Rバリアント
インターロイキン-6(IL-6)は、複合体サイトカインであり、これは、炎症応答の調節に重要な役割を果たす。インターロイキン-6(IL-6)は、リガンド結合性IL-6受容体(IL-6R;CD126としても公知)鎖、及び共通のシグナル伝達性鎖糖タンパク質130(gpl30;CD130としても公知)[これはまた、IL-11、IL-27、白血病阻害因子、オンコスタチンM(OSM)、毛様体神経栄養因子(CNTF)及びカルジオトロフィン1(CT1)に特異的な受容体に係合される]を通じてシグナル伝達する。可溶型のIL-6R(sIL-6R)は、メタロプロテイナーゼTNFa変換酵素(TACE;ADAM17としても公知)及びADAM10、或いはスプライシングされたmRNAによるmIL-6Rのタンパク質分解性切断によって生成されうる。IL-6応答は、IL-6、IL-6R及び2つのgpl30分子からなる高親和性の四量体複合体(又は2つのIL-6、2つのmIL-6R及び2つのgpl30分子からなる六量体の複合体)を通じてmIL-6Rを発現する細胞中で古典的に誘導されうる。或いは、SIL-6-IL-6R複合体は、トランスシグナル伝達と命名されたプロセスにおいてmIL-6Rを欠く細胞においてgpl30に直接結合し、それを通じてシグナル伝達する。高レベルのIL-6及びsIL-6Rは、いくつかの慢性の炎症性疾患において、及びがんにおいて報告された。IL-6及びIL-6R系の異なる成分を標的化するいくつかの薬物が記載されており、これには、IL-6特異的なモノクローナル抗体(mAb)(例えば、CNTO 328)、IL-6R特異的mAb(例えば、トシリズマブ)及び可溶性gpl30-Fc、IL-6Rトランスシグナル伝達のアンタゴニストが挙げられる。「Averting inflammation by targeting the cytokine environment」、Manfred Kopf、Martin F. Bachmann & Benjamin J. Marsland、Nature Reviews Drug Discovery 9、703〜718頁(2010年9月)、doi:10.1038/nrd2805(参照により本明細書に援用される)で総説を参照のこと。
【１７２６】
IL-6受容体遺伝子における遺伝的バリエーションは、冠動脈性心疾患、関節リウマチ、及び喘息を含む、炎症性成分があるいくつかのヒト疾患のリスクに関連する。IL-6受容体遺伝子中の非同義バリアント(IL6R Asp358Ala;rs2228145 A>C)は、喘息に対する感受性の増大と関連する。そのバリアントは、sIL6R(細胞表面受容体の切断を通じて、及び可溶性IL6Rアイソフォームの選択的スプライシングによって生成される)と、膜結合したIL-6R(古典的なIL6Rシグナル伝達に関与する)との間の平衡を調節することによって、その機能的な機構を発揮すると考えられる。Ferreiraらは、この非同義バリアント(Ala358)のわずかな対立遺伝子が個々の免疫細胞上のIL-6Rの表面レベルを直接制御すること、並びにタンパク質レベルにおけるこれらの相違が、IL6Rシグナル伝達における機能的な障害に翻訳されることを初めて報告として示した。
【１７２７】
Ferreiraらは、古典的なIL6Rシグナル伝達が、調節性T細胞抑制を担うと考えられるが、IL6Rシグナル伝達(sIL6Rを介する)は、肺におけるTヘルパー2細胞分極を促進するように思われると注記した。IL6Rは、ヒト気道の上皮、平滑筋及び血管内皮で、並びに気管支肺胞洗浄液(BALF)のマクロファージ及び顆粒球において発現されることが示された。BALFにおける可溶性のIL6Rレベルは、コントロールに比較して喘息患者で上昇しており、且つアレルゲンチャレンジの際に更に上昇し、このことは、肺及び関連の組織の状況でのsIL6Rの重要な役割を示している。これらの知見と一致して、前記で注記される通り、358Alaは、喘息の重篤度の増大とも関連している。著者らはまた、2つの独立した集団における1型糖尿病(T1D)のリスクを有するこの非同義バリアントの関連について証拠を提供し、且つrs2228145が、循環中の可溶性のIL6R(sIL6R)レベルの濃度の主な決定因子であることを確認する(報告としては、マイナーな対立遺伝子358AlaのコピーあたりsIL6Rにおける34.6%の増大;rs2228145 [C])。著者らは、非同義バリアントrs2228145が、表面とsIL6Rの平衡を調節し、更にIL6刺激に対する免疫細胞の応答性にも影響するという証拠を提供した。この機構によって、IL-6/IL-6R経路に対する358Alaの影響が実証される。
【１７２８】
Revezらは、可溶性インターロイキン6受容体レベルの主要な遺伝的決定因子が、IL6Rの切断部位にマッピングするバリアントrs2228145であるとコメントしている。報告としては、各々のAla対立遺伝子について、sIL6Rの血清レベルは、約20ng mlまで、及び喘息リスクは1.09倍まで増大する。しかし、この著者らは、このバリアントがsIL6Rレベルについて総遺伝可能性を説明しないと結論する。従って、IL6Rにおける追加的な独立したバリアントは、IL6Rのレベルのバリエーションに寄与し、且つ喘息リスクに影響しうる。この著者らは、IL6Rにおいて471のバリアントをインプットし、これらを360の個体におけるsIL6Rの血清レベルとの関連について試験した。イントロンのバリアント(rsl2083537)は、rs2228145に関する代理の一塩基多型である、rs4129267とは独立してIL6Rレベルと関連していた(P=0.0005)。rsl2083537に関する有意で且つ矛盾のない関連が、354の個体の複製パネルで観察された(P=0.033)。各々のrsl2083537:A対立遺伝子は、sIL6Rの血清レベルを2.4ng mlまで増大した。2つのコホートにおけるmRNAレベルの解析では、rsl2083537とIL6Rの転写レベルとの間の有意な関連は特定されなかった。他方では、16705例の喘息患者及び30809例の対照からの結果によって、rsl2083537:A対立遺伝子が喘息リスクを1.04倍まで増大した(P=0.0419)ことが示された。
【１７２９】
J C Galiciaらは、血清レベルの可溶性IL6受容体とのIL6R遺伝子多型の関連を調べた。全部で、115例の健常なボランティアを遺伝子型判定し、それらのうちの70例をsIL6Rレベルについて解析した。PCR/RFLP方法を用いて、2つの重要な多形性の部位を遺伝子型判定のために選択した(エキソン9における48892A/C(D358A)、及びプロモーター領域の-183G/A)。エキソン9では、C対立遺伝子のキャリアは、より高いsIL6Rレベルを有しており(P<0.0001)、これによって、IL-6Rアルファのタンパク質分解性切断部位に応答するこの配列バリエーションは、血清のsIL6Rレベルに強力に影響することが示されている。プロモーター領域では、G対立遺伝子のキャリアは、A対立遺伝子のキャリアと比べてより低いsIL6Rレベルを有した(P<0.0082)。
【１７３０】
Esparza-Gordilloらは、公的な保管場所からの全てのゲノムワイドな関連研究の結果を検査して、任意の炎症性の形質に有意に関連した318の遺伝子マーカーを選択した。これらのマーカーは、アトピー性皮膚炎(AD)を有する7130例の患者及び9253例の対照の対象を含む7つの研究集団を用いて3段階のアプローチでADとの関連について候補を検討及び試験した。報告としては、IL-6受容体(IL-6R Asp358Ala;rs2228145)における機能的なアミノ酸変化は、ADと有意に関連していた。2つの独立した集団に基づく出生コホートの調査によって、IL-6R 358Alaは、持続型のADに対して特に罹りやすいことが示された。358Alaのキャリアは、可溶性IL6Rの血清レベルが増大しており、ホモ接合体キャリアは、2倍の増大を示す。更に、著者らは、sIL6Rレベルが対照の対象よりもADを有する患者で高かったことを報告した。著者らは、この研究によって、ADの病因において炎症に影響する遺伝的バリアントの重要性が支持されると結論している。更に、彼らは、疾患の予後に影響し、且つ持続型ADに特に罹りやすい、IL6Rにおける機能的な遺伝子バリアントを特定した。
【１７３１】
ヒトIL6Rに対する抗体は、米国特許第8043617号、同第5670373号、同第5817790号、欧州特許第409607号、及び下のTable 13(表14)におけるそれらの刊行物に記載されている。治療方法は、米国特許第5888510号、同第8043617号、同第6723319及び下のTable 13(表14)におけるそれらの刊行物に記載されている。Actemra(商標)(トシリズマブ)は、古典的及びトランスシグナル伝達の両方をブロックする抗IL-6R薬剤のヒト化の例である。抗体に関する場合、本発明は代わりに、完全ヒト(ヒト化されていない)可変領域(及び任意選択でヒト定常領域も)を有する抗体に関する。
【１７３２】
関節リウマチ(RA)は、関節構造の破壊につながる、滑膜組織の慢性の炎症によって特徴付けられる、自己免疫疾患である。腫瘍壊死因子(TNF)、インターロイキン-1(IL-1)及びインターロイキン-6(IL-6)等のサイトカインは、RAで観察される関節の炎症及び軟骨の損傷においてある役割を果たすことが認識される。IL-6は、多くの細胞型に生物学的効果を有する多面的なサイトカインである。炎症性サイトカインカスケードにおいてTNF又はIL-1の下流であるとみなされる場合が多く、従って、広範な炎症性プロセスにおける共通の経路の要因を示しうる。従って、IL-6シグナル伝達の遮断は、RA及び他の炎症性疾患の複数の病原性の特徴を緩和する能力をもたらす。
【１７３３】
IL-6Rアンタゴニストを用いる治療方法は、米国特許第5,888,510号;同第6,723,319号;及び米国特許出願公開第2001/0001663号に言及される。例示的な抗IL-6R抗体は、米国特許第7,582,298号;同第6,410,691号;同第5,817,790号;同第5,795,695号;同第6,670,373号;及び同第7,582,298号に記載される。
【１７３４】
特定の実施形態では、IL6Rポリペプチドは、末端残基、例えば、限定するものではないが、リーダー配列残基、標的化残基、アミノ末端メチオニン残基、リジン残基、タグ残基及び/又は融合タンパク質残基を含む。「IL6R」はまた、インターロイキン-6受容体サブユニットアルファ、CD126;IL-6R-1;IL-6RA;IL6Q;IL6RA;IL6RQ;及びgp80とも呼ばれていた。
【１７３５】
本発明は、抗IL6Rリガンド;並びに本明細書に記載されるようなIL6R結合性又は標的化リガンドを提供する。このリガンドは、種々の有用性を有する。このリガンドのうちいくつかは、例えば、特異的な結合アッセイにおいて、ヒトを遺伝子型判定又は表現型判定するために、IL6R(特にヒトIL6R又はそのリガンド)の親和性精製において、IL6R活性の他のアンタゴニストを特定するためのスクリーニングアッセイにおいて、有用である。本発明のいくつかのリガンドは、IL6及び/若しくはgp130に対するIL6Rの結合を阻害するか、又はIL6R媒介性の活性を阻害するために有用である。
【１７３６】
抗IL6Rリガンド(例えば、抗体及びアンチセンスRNA)は、いわゆる「野性型」ヒトIL6Rの標的化及び中和に基づいて開発され、これは共通して存在する型である(例えば、配列番号78を参照のこと)。このような治療は、この型のヒトIL6Rを保有するヒト患者に有用であるが、本発明者は、ヒト集団の中でIL6Rのまれな型ではあるが、やはり天然に存在する型の標的化の可能性を調べるのに有用であるとみなした。このようにして、本発明者は、IL6R活性で媒介されるか、又はそれに関連する疾患及び状態に対して妥当であるヒトの処置、予防及び診断のための有用な標的として(タンパク質又は核酸レベルで)機能しうるまれなヒトIL6R型の自然な出現及び分布への洞察に到達した。これによって、特に、一般的なIL6R遺伝子又はタンパク質を欠くヒトにおけるテーラーメイド治療、予防及び診断が提供される。
【１７３７】
当業者は、アミノ酸バリエーションへ翻訳するSNP又は他の変化が、標的とすべきヒト標的の活性及び/又は高次構造における可変性を生じ得ることを承知している。これによって、遺伝子型判定並びにタンパク質及びヌクレオチドの可変性の知識を用いて、患者の医療及び診断をより有効にテーラーメイドする個人化医療に大きな関心が生じた。従って、本発明は、まれなIL6R多型バリアント型に特異的に向けられたテーラーメイド医薬品及び試験を提供する。このような形態又は「対立遺伝子」は、(ヌクレオチドレベルで)、対応する共通型のヌクレオチド及びアミノ酸配列から、ヌクレオチドレベル及びアミノ酸レベルで1つ又は複数の変化を含み、すなわち、ヒトでのタンパク質標的の1つ又は複数の対応する変化に翻訳するヌクレオチドレベルでの1つ又は複数の非同義的変化が存在する。
【１７３８】
更に、本発明者は驚くべきことに、まれな天然型は、共通型よりもかなり低頻度でヒトに存在するが、それにもかかわらず、多数の且つ民族的に多様なヒト集団で示され、示された民族集団あたり通常は多くのヒトの例があることに気付いた。従って、本発明者は、このようなまれな型を標的化することによって、多くのヒト民族集団にわたって、有効な処置、予防又は診断が提供され、それによって本発明の有用性が拡大されることに気付いた。
【１７３９】
この認識によって、本発明者は、IL6R媒介性の又は関連する疾患若しくは状態の治療及び/又は予防のために、ヒト患者に対する投与のための抗IL6Rリガンドの選択を導くことに関して、本発明の重大な産業的及び医学的適用があることに気付いた。この方法では、患者は、患者の遺伝子又は表現型の構成によって決定されるその必要性に対してテーラーメイドされた薬物及びリガンドを受ける。それと同調して、本発明は、このような処置に関連する患者の遺伝子型判定及び/又は表現型判定を提供し、それによって薬物を患者に適切に適合させることを可能にする。これは、医学的効能の機会を増加させ、患者に適合しない薬物又はリガンドを使用した劣った処置(例えば、乏しい効能及び/又は副作用)の見込みを低減し、医薬品の処方ミス及び浪費を回避する。
【１７４０】
この考えを発展させるのに、この非限定的な例では、本発明者は、以下の基準に基づいて一連のヒトIL6Rバリアントを決定することを決めたが、本発明者が気付いたこれらの基準は、ヒト集団におけるテーラーメイドの必要性に有用な医学的薬物及び診断を提供する。本発明者は、以下の4つの基準のうち少なくとも3つを有するバリアントを選択した:
35%以下という累積ヒト対立遺伝子頻度を有する天然に存在するヒトIL6Rバリエーション;
約50%以下という総ヒト遺伝子型頻度を有する天然に存在するヒトIL6Rバリエーション;
多くの異なるヒト民族集団で見出される天然に存在するヒトIL6Rバリエーション(1000ゲノムプロジェクトの標準的カテゴリー化を用いる;下のTable 14(表15)を参照のこと);及び。
このような多くの異なる民族集団にわたって分布する多くの個体において見出される天然に存在するヒトIL6Rバリエーション。
【１７４１】
これらの基準に基づいて、本発明者は、下のTable 13(表14)に列挙されるバリアントを特定した。本発明者の選択には、検討として、標的タンパク質中のアミノ酸残基を変更しないサイレントバリエーションとは対照的に、対応するIL6R型におけるアミノ酸バリエーションを生じたヌクレオチドバリエーション(すなわち、非同義的バリエーション)についての選択を含んだ。
【１７４２】
【表１４Ａ】
0006720079.tif 000088
【１７４３】
【表１４Ｂ】
0006720079.tif 000089
【１７４４】
【表１４Ｃ】
0006720079.tif 000090
【１７４５】
まれなIL6Rバリアントのプロファイルに対する抗体をテーラーメイドする
前記で概説される通り、本発明は、バリアントIL6R型が本発明の選択基準を満たすことが見出される民族集団の多くのヒトで見出された遺伝子セグメントに基づいて可変ドメイン及び/又は定常ドメインを有する抗体ベースのリガンドを選択することによって更にヒトの処置をテーラーメイドする可能性を含む。ある例では、ヒトにおいて可変性がある(すなわち、ヒトでSNPが生じる)HCDR1又はFW3中の位置で選択されたヌクレオチドを含むヒトIGHV遺伝子セグメントの組換え由来の抗体のVHドメインを含むリガンドが提供される。
【１７４６】
本発明者は、ヒトIGHVバリエーションを解析し、これを用いて、前記選択されたヌクレオチドを含むヒトIGHV対立遺伝子に基づいて、且つヒトレシピエントの遺伝子型及び/又は表現型に対して適合するようにリガンドを選択した。本発明者は、(i)配列番号109に示される4位にPheを含むCDR1(ここで前記ヒトは、配列番号109に示される4位にPheを含むCDR1をコードするVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、配列番号109に示される4位にPheを含むCDR1を含むVHドメインを発現する);或いは(ii)配列番号111に示される33位にThrを含むFW3(ここで、前記ヒトは、配列番号111に示される33位にThrを含むFW3をコードするVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、配列番号111に示される33位にThrを含むFW3を含むVHドメインを発現する)をコードするVH遺伝子セグメントを、遺伝子を用いることにおいて有用性を特定した。さらなる情報がTable 14(表15)に示され、これによって、これらの位置でのバリエーション、並びに多くのヒト集団に関係する1000ゲノムプロジェクトデータベースにわたるバリアント分布が示される。
【１７４７】
他の実施形態では、上記で更に詳細に説明される通り、本発明は、代替的なヒトVH遺伝子セグメントに、又はVK、Vλ若しくは定常領域遺伝子セグメントに基づいてヒトレシピエントの遺伝子型及び/又は表現型に対してテーラーメイドされたリガンドを提供する[代表的なバリアントに関しては更にTable 16(表17)を参照のこと]。
【１７４８】
ある例では、このガイダンスに従って、選択されたリガンドは、サリルマブであってもよい。
【１７４９】
従って、さらなる実施例は以下である:-
(i)ここで、このリガンドは、ヒトVHセグメントIGHV3-7*01、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、且つ、ここで前記ヒトは、IGHV3-7*01 VH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、ヒトVHセグメントIGHV3-7*01、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを発現する。
(ii)ここで、このリガンドは、ヒトVKセグメントIGKV1-12*01及びヒトJKセグメントの組換え由来のVKドメインを含み、且つ、ここで前記ヒトは、IGKV1-12*01VK遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、ヒトVKセグメントIGKV1-12*01及びヒトJKセグメントの組換え由来のVKドメインを発現する。
(iii)ここでこのリガンドは、ヒトVKセグメント及びヒトJKセグメントの組換え由来のVKドメインを含み、このヒトVKセグメントは、(i)配列番号113に示される7位にProを含むCDR3(且つここで、前記ヒトは、配列番号113に示される7位にProを含むCDR3をコードするVK遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、配列番号113に示される7位にProを含むCDR3を含むVKドメインを発現する);又は(ii)配列番号115に示される15位にSerを含むFW3(且つここで、前記ヒトは、配列番号115に示される15位にSerを含むFW3をコードするVK遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、配列番号115に示される15位にSerを含むFW3を含むVKドメインを発現する)をコードする。
(iv)ここでこのリガンドは、配列番号81に示される204位にAsp若しくは配列番号81に示される206位にLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトは、(i)IGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、配列番号81に示される204位にAsp若しくは配列番号81に示される206位にLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(v)ここでこのリガンドは、配列番号83に示される72位のPro、配列番号83に示される75位のAsn、配列番号83に示される76位のPhe、配列番号83に示される161位のVal及び配列番号83に示される257位のAlaからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトは、(i)IGHG2*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、前記選択された、配列番号83に示される72位のPro、配列番号83に示される75位のAsn、配列番号83に示される76位のPhe、配列番号83に示される161位のVal若しくは配列番号83に示される257位のAlaを含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(vi)ここでこのリガンドは、配列番号93に示される84位のVal若しくは配列番号93に示される87位のCysを含むヒトカッパ鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトは、(i)IGKC1*01ヒトカッパ鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、配列番号93に示される84位に対応するVal若しくは配列番号93に示される87位のCysを含むヒトカッパ鎖定常領域を含む抗体を発現する。
(vii)ここで、このリガンドは、ヒトIGLC1*01ラムダ鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトは、(i)ヒトIGLC1*01ラムダ鎖定常領域遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、ヒトIGLC1*01ラムダ鎖定常領域を含む抗体を発現する。
【１７５０】
例えば、実施例(iv)のように、本発明者は、まれなIGH-ガンマ-1 SNP 204D(0.296という累積頻度を観察)及び206L(0.283という累積頻度を観察)に個々に又は組み合わせて取り組む可能性を特定した。これらの残基は、CH3ドメインの一部であり、且つそのようなものとして抗体Fc領域の一部を形成する。従って、これらのCH3バリエーションと患者との適合は、前記で考察したような理由によって特に有益である。従って、この例では、本発明のリガンドは、配列番号81の204位に対応するAsp若しくは配列番号81の206位に対応するLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含む抗体を含むか、又はそれらの抗体からなり、且つここで、このヒトのゲノムは、このようなAsp又はLeuをコードするガンマ-1重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はこのヒトは、このようなAsp又はLeuを含むヒトガンマ-1定常領域を含む抗体を発現する。このようなリガンドの例はサリルマブである。
【１７５１】
別の例では、実施例(v)の通り、本発明者は、IGH-ガンマ-2のSNPに取り組む可能性を特定した。これは、Fc領域バリエーションの検討を含んでおり、これに関して、本発明者は、Fc領域にある161位及び257位に注目した。従って、この例では、本発明のリガンドは、配列番号83の72位に対応するPro、配列番号83の75位に対応するAsn、配列番号83の76位に対応するPhe、配列番号83の161位に対応するVal及び配列番号83の257位に対応するAlaからなる群から選択されるアミノ酸を含むヒトガンマ-2重鎖定常領域を含む抗体を含むか、又はそれらの抗体からなり;且つ、ここでこのヒトのゲノムは、このような選択されたアミノ酸をコードするガンマ-2重鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はこのヒトは、このような選択されたアミノ酸を含むヒトガンマ-2定常領域を含む抗体を発現する。
【１７５２】
別の例では、実施例(vi)の通り、本発明者は、ヒトカッパ定常領域バリエーションに取り組んだ。従って、この例では、本発明のリガンドは、配列番号93の84位に対応するVal若しくは配列番号93の87位に対応するCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含む抗体を含むか、又はそれらの抗体からなり;且つ、ここでこのヒトのゲノムは、このようなVal若しくはCysをコードするカッパ軽鎖定常領域ヌクレオチド配列を含むか、又はこのヒトは、このようなVal又はCysを含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含む抗体を発現する。このようなリガンドの例は、サリルマブである。
【１７５３】
別の例では、実施例(vii)の通り、本発明者は、ヒトラムダ定常領域バリエーションに取り組んだ。従って、この例では、本発明のリガンドは、ヒトIGLC2*01軽鎖定常領域を含む抗体を含むか、又はそれらからなり;且つ、ここでこのヒトのゲノムは、ヒトIGLC2*01ヌクレオチド配列を含むか、又はこのヒトは、ヒト軽鎖IGLC2*01定常領域を含む抗体を発現する。
【１７５４】
IL6Rバリアントに対する本発明のリガンドの特異的な結合の決定
IL6Rバリアントに対する本発明のリガンドの特異的な結合は、以下の方法を用いて行ってもよい。
【１７５５】
結合のSPR決定の方法
IL6Rバリアントに対する抗体の結合は、ProteOn XPR36(商標)Arrayシステム(BioRad)を用いてSPRによって行う。抗ヒトIgG表面(Jackson Labs 109-005-008)は、一級アミンカップリングによってGLC Biosensorチップ上で作製した。試験抗体は、この表面上にリガンドとして捕獲する。IL6Rバリアントを分析物として用い、捕獲した抗体の上を256nM、64nM、16nM、4nM及び1nMで通過させる。結合曲線は、緩衝液注入(すなわち、0nM)を用いて二重に参照して、ベースラインのドリフト及び注入のアーチファクトを除去する。捕獲表面の再生は、100mMのリン酸を用い、これで捕獲された抗体を除去して、捕獲及び結合の別のサイクルを可能にする。生成した結合センサーグラムを、ProteOn XPR36 Arrayシステム解析ソフトウェアに固有の1:1モデルを用いて解析する。そのアッセイは、泳動緩衝液として1×HBS-EP(Teknova社)を用いて25℃で行う。
【１７５６】
本発明のある実施形態では、以下の条項のような方法が提供される。
1.それを必要とするヒトにおいてIL6R媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下する方法であって、前記ヒトに対して、配列番号78において突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み、
ここでこのリガンドが、ヒトVHセグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このヒトVHセグメントが、(i)配列番号109に示される4位にPheを含むCDR1(且つここで、前記ヒトは、配列番号109に示される4位にPheを含むCDR1をコードするVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、配列番号109に示される4位にPheを含むCDR1を含むVHドメインを発現する)か;又は(ii)配列番号111に示される33位にThrを含むFW3(且つここで、前記ヒトは、配列番号111に示される33位にThrを含むFW3をコードするVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、配列番号111に示される33位にThrを含むFW3を含むVHドメインを発現し;且つ、ここで前記ヒトは、配列番号78において前記Asp358Ala又はVal385Ileを含む前記IL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む)をコードする、方法。
【１７５７】
ある例では、前記リガンドは、配列番号78において突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質に特異的に結合することが決定された。
【１７５８】
ある例では、前記IL6Rタンパク質は、配列番号78における突然変異Asp358Alaを含む。
【１７５９】
ある例では、前記IL6Rタンパク質は、配列番号78における突然変異Val385Ileを含む。
【１７６０】
2.それを必要とするヒトにおいてIL6R媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下する方法であって、前記ヒトに対して、配列番号78において突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み;ここでこのリガンドが、ヒトVH遺伝子セグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このヒトVH遺伝子セグメントが、(a)配列番号84に示されるヌクレオチド番号86のT(且つここで、前記ヒトは、配列番号84に示されるヌクレオチド番号86のTを含むVH遺伝子セグメントを含む);又は(b)配列番号84に示されるヌクレオチド番号272のC(且つここで、前記ヒトは、配列番号84に示されるヌクレオチド番号272のCを含むVH遺伝子セグメントを含み;且つ、ここで前記ヒトは、配列番号78において前記Asp358Ala又はVal385Ileを含む前記IL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む)を含む、方法。
【１７６１】
3.各々の前記ヒトVH遺伝子セグメントが、配列番号108を含む、任意の前述の条項の方法。
【１７６２】
4.各々の前記ヒトVH遺伝子セグメントが、配列番号110を含む、任意の前述の条項の方法。
【１７６３】
5.前記VHドメインが、ヒトVHセグメントIGHV3-9*01、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来である、任意の前述の条項の方法。
【１７６４】
6.前記VHドメインが配列番号111のFW3配列を含む、任意の前述の条項の方法。
【１７６５】
7.前記ヒトに含まれるVH遺伝子セグメントが、生殖系列VH遺伝子セグメントである、任意の前述の条項の方法。
【１７６６】
8.リガンドが、前記VHドメインを含むヒトガンマ-1重鎖並びに配列番号81に示される204位のAsp及び配列番号81に示される206位のLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトが、IGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含む、任意の前述の条項の方法。
【１７６７】
9.抗体又は断片が、IGHG1*01ヒト重鎖定常領域を含む、任意の前述の条項の方法。
【１７６８】
10.ヒトが、AMR、ASN又はEUR血統のヒトである、任意の前述の条項の方法。
例えば、このヒトは、CHB、CHS、JPT、CEU又はFIN血統のヒトである。これらの血統は、SNP(FW3 SNP)について極めて高い(85%を超える、例えば90%超、又は更には100%の)累積頻度を有し、従って本発明のリガンドは、このようなヒトにおいてヒトIL6R媒介性の疾患又は状態を処置又は防止することによく適している。
【１７６９】
11.前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含むヒト(ここでこのヒトは条項1のヒトである)を選択する工程を含む、任意の前述の条項の方法。
【１７７０】
12.ヒトが、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列並びに/或いは配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことが決定された、任意の前述の条項の方法。
【１７７１】
13.ヒトが、前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列並びに/或いは前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、任意の前述の条項の方法。
【１７７２】
14.決定する工程が、ヒト由来の生物学的試料を、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてアッセイする工程を含む、条項13の方法。
【１７７３】
15.アッセイする工程が
生物学的試料と、配列番号78に前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブとを接触させ、ここで前記連続したヌクレオチドの配列は、配列番号78に前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileをコードするヌクレオチド配列を含み、それによって、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する工程;並びに
この複合体の有無を検出する工程であって、ここで、この複合体の存在を検出する工程が、このヒトが配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことを決定する工程を含む、条項14の方法。
【１７７４】
16.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション、及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/或いはここでこのアッセイする工程が、マルチプレックスフォーマットで行われる、条項14の方法。
【１７７５】
17.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、条項14又は16の方法。
【１７７６】
18.前記ヒトが、配列番号78における前記突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列に関してヘテロ接合性と示され、任意選択で、前記ヒトが更に、配列番号79のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトが、配列番号78における前記突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列に関してホモ接合性であると示される、任意の前述の条項の方法。
【１７７７】
19.前記ヒトが、抗TNFアルファ処置に実質的に耐性であるか、又は実質的に耐性であると更に決定された、任意の前述の条項の方法。
本明細書における任意の実施形態では、「抗TNFアルファ処置」は、メトトレキセートを伴うか又は伴わない、インフリキシマブ(infliximab)[例えば、Remicade(登録商標)]、アダリムマブ(adalimumab)[例えば、Humira(登録商標)]、セルトリズマブペゴール(certolizumab pegol)[例えば、Cimzia(登録商標)]、ゴリムマブ(golimumab)[例えば、Simponi(登録商標)]、及びエタネルセプト(etanercept)[例えば、Enbrel(登録商標)]処置からなる群から選択される。
前記ヒトが、抗TNFアルファ処置を受けているか、若しくは受けたか、又は抗TNFアルファ処置に対する応答性が低下していた、任意の前述の条項の方法。
【１７７８】
20.前記抗体又は抗体断片が、ヒトに対して、メトトレキセート又は抗TNFアルファ処置と別々に又は同時に投与される、任意の前述の条項の方法。
【１７７９】
21.前記疾患又は状態が炎症性の疾患又は状態である、任意の前述の条項の方法。
【１７８０】
22.前記疾患又は状態が、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿主病(GvHD)、喘息、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、敗血性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、気道炎症、キャッスルマン病、歯周炎、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス及び冠動脈性心疾患からなる群から選択される、任意の前述の条項の方法。
本明細書における任意の実施形態では、この関節炎は、中度から重度の関節リウマチ又は全身性若年性特発性関節炎である。
【１７８１】
23.前記ヒトが、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿主病(GvHD)、喘息、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、敗血性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、気道炎症、キャッスルマン病、歯周炎、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス及び冠動脈性心疾患からなる群から選択される少なくとも1つの状態と診断された、任意の前述の条項の方法。
【１７８２】
24.前記抗体又は抗体断片が、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿主病(GvHD)、喘息、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、敗血性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、気道炎症、キャッスルマン病、歯周炎、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス及び冠動脈性心疾患からなる群から選択される少なくとも1つの状態のリスクを前記ヒトにおいて処置又は低下する、任意の前述の条項の方法。
【１７８３】
25.ヌクレオチド配列が、SNP rs2228145及び/又はSNP rs28730736を含む、任意の前述の条項の方法。
【１７８４】
26.前記抗体又は抗体断片が、静脈内若しくは皮下投与によって投与されるか、及び/又は注射用調製物中に含まれる、任意の前述の条項の方法。
【１７８５】
本発明のある実施形態では、以下の段落によるリガンドが提供される:-
1.それを必要とするヒトにおいてIL6R-媒介性疾患又は状態のリスクを処置又は低下するための抗IL6Rリガンド(例えば、抗体又は断片)であって、配列番号78において突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質に特異的に結合し、ヒトVHセグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このヒトVHセグメントが、(i)a配列番号109に示される4位にPheを含むCDR1(且つここで、前記ヒトは、配列番号109に示される4位にPheを含むCDR1をコードするVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、配列番号109に示される4位にPheを含むCDR1を含むVHドメインを発現する);又は(ii)配列番号111に示される33位にThrを含むFW3(且つここで、前記ヒトは、配列番号111に示される33位にThrを含むFW3をコードするVH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトは、配列番号111に示される33位にThrを含むFW3を含むVHドメインを発現する)をコードし;且つ、ここで前記ヒトが、配列番号78において前記Asp358Ala又はVal385Ileを含む前記IL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、抗IL6Rリガンド(例えば、抗体又は断片)。
【１７８６】
ある例では、前記リガンドは、配列番号78において突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質に特異的に結合することが決定された。
【１７８７】
2.それを必要とするヒトにおいてIL6R-媒介性疾患又は状態のリスクを処置又は低下するための抗IL6Rリガンド(例えば、抗体又は断片)であって、配列番号78において突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質に特異的に結合し、ヒトVH遺伝子セグメント、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、このヒトVH遺伝子セグメントが、(a)配列番号84に示されるヌクレオチド番号86のT(且つここで、前記ヒトは、配列番号84に示されるヌクレオチド番号86のTを含むVH遺伝子セグメントを含む);又は(b)配列番号84に示されるヌクレオチド番号272のC(且つここで、前記ヒトは、配列番号84に示されるヌクレオチド番号272のCを含むVH遺伝子セグメントを含む)を含んでおり;且つ、ここで前記ヒトが、配列番号78において前記Asp358Ala又はVal385Ileを含む前記IL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、抗IL6Rリガンド(例えば、抗体又は断片)。
【１７８８】
ある例では、前記リガンドは、配列番号78において突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質に特異的に結合することが決定された。
【１７８９】
3.各々の前記ヒトVH遺伝子セグメントが、配列番号108を含む、任意の前述の段落のリガンド。
【１７９０】
4.各々の前記ヒトVH遺伝子セグメントが、配列番号110を含む、任意の前述の段落のリガンド。
【１７９１】
5.前記VHドメインが、ヒトVHセグメントIGHV3-9*01、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来である、任意の前述の段落のリガンド。
【１７９２】
6.前記VHドメインが配列番号111のFW3配列を含む、任意の前述の段落のリガンド。
【１７９３】
7.前記ヒトに含まれるVH遺伝子セグメントが、生殖系列VH遺伝子セグメントである、任意の前述の段落のリガンド。
【１７９４】
8.リガンドが、前記VHドメインを含むヒトガンマ-1重鎖並びに配列番号81に示される204位のAsp及び配列番号81に示される206位のLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトが、IGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含む、任意の前述の段落のリガンド。
【１７９５】
9.抗体又は断片が、IGHG1*01ヒト重鎖定常領域を含む、任意の前述の段落のリガンド。
【１７９６】
10.ヒトが、AMR、ASN又はEUR血統のヒトである、任意の前述の段落のリガンド。
例えば、このヒトは、CHB、CHS、JPT、CEU又はFIN血統のヒトである。
【１７９７】
11.ヒトが、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列並びに/或いは配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことが決定された、任意の前述の段落のリガンド。
【１７９８】
12.ヒトが、前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列並びに/或いは前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、任意の前述の段落のリガンド。
【１７９９】
13.決定する工程が、ヒト由来の生物学的試料を、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてアッセイする工程を含む、段落12のリガンド。
【１８００】
アッセイする工程が
生物学的試料と、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブとを接触させ、ここで前記連続したヌクレオチドの配列は、配列番号78に前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileをコードするヌクレオチド配列を含み、それによって、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する工程;並びに
この複合体の有無を検出する工程であって、ここで、この複合体の存在を検出する工程が、このヒトが配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことを決定する工程を含む、段落13のリガンド。
【１８０１】
14.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション、及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/或いはここでこのアッセイする工程が、マルチプレックスフォーマットで行われる、段落13のリガンド。
【１８０２】
15.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、段落13又は15のリガンド。
【１８０３】
16.任意の前述の段落のリガンドであって、前記ヒトが、配列番号78における前記突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてヘテロ接合性であることが示され、任意選択で、前記ヒトが更に、配列番号79のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトが、配列番号78における前記突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、リガンド。
【１８０４】
17.抗TNFアルファ処置に対して実質的に耐性であるか、又は実質的に耐性であると更に決定されたヒトに対する投与のためである、任意の前述の段落のリガンド。
本明細書における任意の実施形態では、「抗TNFアルファ処置」は、メトトレキセートを伴うか又は伴わない、インフリキシマブ(infliximab)[例えば、Remicade(登録商標)]、アダリムマブ(adalimumab)[例えば、Humira(登録商標)]、セルトリズマブペゴール(certolizumab pegol)[例えば、Cimzia(登録商標)]、ゴリムマブ(golimumab)[例えば、Simponi(登録商標)]、及びエタネルセプト(etanercept)[例えば、Enbrel(登録商標)]処置からなる群から選択される。
【１８０５】
18.抗TNFアルファ処置を受けているか、若しくは受けたか、又は抗TNFアルファ処置に対する応答性が低下したヒトに対する投与のためである、任意の前述の段落のリガンド。
【１８０６】
19.ヒトに対する、メトトレキセート又は抗TNFアルファ処置と別々に又は同時の投与のためである、任意の前述の段落のリガンド。
【１８０７】
20.前記疾患又は状態が炎症性の疾患又は状態である、任意の前述の段落のリガンド。
【１８０８】
21.前記疾患又は状態が、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿主病(GvHD)、喘息、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、敗血性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、気道炎症、キャッスルマン病、歯周炎、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス及び冠動脈性心疾患からなる群から選択される、任意の前述の段落のリガンド。本明細書における任意の実施形態では、この関節炎は、中度から重度の関節リウマチ又は全身性若年性特発性関節炎である。
【１８０９】
22.前記ヒトが、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿主病(GvHD)、喘息、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、敗血性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、気道炎症、キャッスルマン病、歯周炎、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス及び冠動脈性心疾患からなる群から選択される少なくとも1つの状態と診断された、任意の前述の段落のリガンド。
【１８１０】
23.前記リガンドが、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿主病(GvHD)、喘息、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、敗血性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、気道炎症、キャッスルマン病、歯周炎、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス及び冠動脈性心疾患からなる群から選択される少なくとも1つの状態の前記ヒトにおいてリスクを処置又は低下する、任意の前述の段落のリガンド。
【１８１１】
24.ヌクレオチド配列が、SNP rs2228145及び/又はSNP rs28730736を含む、任意の前述の段落のリガンド。
【１８１２】
25.前記リガンドが、静脈内若しくは皮下投与のためであるか、及び/又は注射用調製物中に含まれる、任意の前述の段落のリガンド。
【１８１３】
本発明のある実施形態では、以下の条項の通りの方法が提供される:-
1.それを必要とするヒトにおいてIL6R媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下する方法であって、前記ヒトに対して、配列番号78において突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み;
このリガンドが、ヒトVHセグメントIGHV3-7*01、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、且つ、ここで前記ヒトが、IGHV3-7*01 VH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、ヒトVHセグメントIGHV3-7*01、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを発現し;且つ
ここで前記ヒトが、配列番号78において前記Asp358Ala又はVal385Ileを含む前記IL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【１８１４】
ある例では、前記リガンドは、配列番号78において突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質に特異的に結合することが決定された。
【１８１５】
2.リガンドが、前記VHドメインを含むヒトガンマ-1重鎖並びに配列番号81に示される204位のAsp及び配列番号81に示される206位のLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトが、IGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含む、条項1の方法。
【１８１６】
3.抗体又は断片が、IGHG1*01ヒト重鎖定常領域を含む、任意の前述の条項の方法。
【１８１７】
4.前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含むヒト(ここでこのヒトは条項1のヒトである)を選択する工程を含む、任意の前述の条項の方法。
【１８１８】
5.ヒトが、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列並びに/或いは配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことが決定された、任意の前述の条項の方法。
【１８１９】
6.ヒトが、前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列並びに/或いは前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、任意の前述の条項の方法。
【１８２０】
7.決定する工程が、ヒト由来の生物学的試料を、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてアッセイする工程を含む、条項6の方法。
【１８２１】
8.アッセイする工程が
生物学的試料と、配列番号78に前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブとを接触させ、ここで前記連続したヌクレオチドの配列は、配列番号78に前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileをコードするヌクレオチド配列を含み、それによって、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する工程;並びに
この複合体の有無を検出する工程であって、ここで、この複合体の存在を検出する工程は、このヒトが配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことを決定する工程を含む、条項7の方法。
【１８２２】
9.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション、及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/或いはここでこのアッセイする工程が、マルチプレックスフォーマットで行われる、条項7の方法。
【１８２３】
10.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、条項7又は9の方法。
【１８２４】
11.前記ヒトが、配列番号78における前記突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列に関してヘテロ接合性と示され、任意選択で、前記ヒトが更に、配列番号79のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトが、配列番号78における前記突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列に関してホモ接合性であると示される、任意の前述の条項の方法。
【１８２５】
12.前記ヒトが、抗TNFアルファ処置に実質的に耐性であるか、又は実質的に耐性であると更に決定された、任意の前述の条項の方法。
本明細書における任意の実施形態では、「抗TNFアルファ処置」は、任意選択で、メトトレキセートを伴うか又は伴わない、インフリキシマブ(infliximab)[例えば、Remicade(登録商標)]、アダリムマブ(adalimumab)[例えば、Humira(登録商標)]、セルトリズマブペゴール(certolizumab pegol)[例えば、Cimzia(登録商標)]、ゴリムマブ(golimumab)[例えば、Simponi(登録商標)]、及びエタネルセプト(etanercept)[例えば、Enbrel(登録商標)]処置からなる群から選択される。
【１８２６】
13.前記ヒトが、抗TNFアルファ処置を受けているか、若しくは受けたか、又は抗TNFアルファ処置に対する応答性が低下していた、任意の前述の条項の方法。
【１８２７】
14.前記抗体又は抗体断片が、ヒトに対して、メトトレキセート又は抗TNFアルファ処置と別々に又は同時に投与される、任意の前述の条項の方法。
前記疾患又は状態が炎症性の疾患又は状態である、任意の前述の条項の方法。
【１８２８】
15.前記疾患又は状態が、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿主病(GvHD)、喘息、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、敗血性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、気道炎症、キャッスルマン病、歯周炎、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス及び冠動脈性心疾患からなる群から選択される、任意の前述の条項の方法。本明細書における任意の実施形態では、この関節炎は、中度から重度の関節リウマチ又は全身性若年性特発性関節炎である。
【１８２９】
16.前記ヒトが、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿主病(GvHD)、喘息、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、敗血性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、気道炎症、キャッスルマン病、歯周炎、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス及び冠動脈性心疾患からなる群から選択される少なくとも1つの状態と診断された、任意の前述の条項の方法。
【１８３０】
前記抗体又は抗体断片が、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿主病(GvHD)、喘息、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、敗血性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、気道炎症、キャッスルマン病、歯周炎、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス及び冠動脈性心疾患からなる群から選択される少なくとも1つの状態のリスクを前記ヒトにおいて処置又は低下する、任意の前述の条項の方法。
【１８３１】
17.ヌクレオチド配列が、SNP rs2228145及び/又はSNP rs28730736を含む、任意の前述の条項の方法。
前記抗体又は抗体断片が、静脈内若しくは皮下投与によって投与されるか、及び/又は注射用調製物中に含まれる、任意の前述の条項の方法。
【１８３２】
本発明のある実施形態では、以下の段落の通りのリガンドが提供される:-
1.それを必要とするヒトにおいてIL6R-媒介性疾患又は状態のリスクを処置又は低下するための抗IL6Rリガンド(例えば、抗体又は断片)であって、配列番号78において突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質に特異的に結合し、ヒトVHセグメントIGHV3-7*01、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを含み、且つ、ここで前記ヒトが、IGHV3-7*01VH遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、ヒトVHセグメントIGHV3-7*01、ヒトD遺伝子セグメント及びヒトJHセグメントの組換え由来のVHドメインを発現し;且つ
ここで前記ヒトが、配列番号78において前記Asp358Ala又はVal385Ileを含む前記IL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、リガンド。
【１８３３】
ある例では、前記リガンドは、配列番号78において突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質に特異的に結合することが決定された。
【１８３４】
2.前記VHドメインを含むヒトガンマ-1重鎖並びに配列番号81に示される204位のAsp及び配列番号81に示される206位のLeuを含むヒトガンマ-1重鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトが、IGHG1*01ヒト重鎖定常領域遺伝子セグメントを含む、段落1のリガンド。
【１８３５】
3.抗体又は断片が、IGHG1*01ヒト重鎖定常領域を含む、任意の前述の段落のリガンド。
【１８３６】
4.ヒトが、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列並びに/或いは配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことが決定された、任意の前述の段落のリガンド。
【１８３７】
5.ヒトが、前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列並びに/或いは前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことを決定する工程を包含し、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、任意の前述の段落のリガンド。
【１８３８】
6.決定する工程が、ヒト由来の生物学的試料を、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてアッセイする工程を含む、段落5のリガンド。
【１８３９】
7.アッセイする工程が
生物学的試料と、配列番号78に前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブとを接触させ、ここで前記連続したヌクレオチドの配列は、配列番号78に前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileをコードするヌクレオチド配列を含み、それによって、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する工程;並びに
この複合体の有無を検出する工程であって、ここで、この複合体の存在を検出する工程は、このヒトが配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことを決定する工程を含む、段落6のリガンド。
【１８４０】
8.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション、及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/或いはここでこのアッセイする工程が、マルチプレックスフォーマットで行われる、段落6のリガンド。
【１８４１】
9.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、段落6又は8のリガンド。
【１８４２】
10.前記ヒトが、配列番号78における前記突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列に関してヘテロ接合性と示され、任意選択で、前記ヒトが更に、配列番号79のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトが、配列番号78における前記突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、任意の前述の段落のリガンド。
【１８４３】
11.抗TNFアルファ処置に対して実質的に耐性であるか、又は実質的に耐性であると更に決定されたヒトに対する投与のためである、任意の前述の段落のリガンド。
【１８４４】
本明細書における任意の実施形態では、「抗TNFアルファ処置」は、メトトレキセートを伴うか又は伴わない、インフリキシマブ(infliximab)[例えば、Remicade(登録商標)]、アダリムマブ(adalimumab)[例えば、Humira(登録商標)]、セルトリズマブペゴール(certolizumab pegol)[例えば、Cimzia(登録商標)]、ゴリムマブ(golimumab)[例えば、Simponi(登録商標)]、及びエタネルセプト(etanercept)[例えば、Enbrel(登録商標)]処置からなる群から選択される。
【１８４５】
抗TNFアルファ処置を受けているか、若しくは受けたか、又は抗TNFアルファ処置に対する応答性が低下したヒトに対する投与のためである、任意の前述の段落のリガンド。
【１８４６】
12.ヒトに対する、メトトレキセート又は抗TNFアルファ処置と別々に又は同時の投与のためである、任意の前述の段落のリガンド。
【１８４７】
13.前記疾患又は状態が炎症性の疾患又は状態である、任意の前述の段落のリガンド。
【１８４８】
14.前記疾患又は状態が、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿主病(GvHD)、喘息、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、敗血性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、気道炎症、キャッスルマン病、歯周炎、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス及び冠動脈性心疾患からなる群から選択される、任意の前述の段落のリガンド。本明細書における任意の実施形態では、この関節炎は、中度から重度の関節リウマチ又は全身性若年性特発性関節炎である。
【１８４９】
15.前記ヒトが、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿主病(GvHD)、喘息、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、敗血性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、気道炎症、キャッスルマン病、歯周炎、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス及び冠動脈性心疾患からなる群から選択される少なくとも1つの状態と診断された、任意の前述の段落のリガンド。
【１８５０】
16.炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿主病(GvHD)、喘息、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、敗血性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、気道炎症、キャッスルマン病、歯周炎、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス及び冠動脈性心疾患からなる群から選択される少なくとも1つの状態のリスクを前記ヒトにおいて処置又は低下する、任意の前述の段落のリガンド。
【１８５１】
17.ヌクレオチド配列が、SNP rs2228145及び/又はSNP rs28730736を含む、任意の前述の段落のリガンド。
【１８５２】
18.静脈内若しくは皮下投与のためであるか、及び/又は注射可能な調製物中に含まれる、任意の前述の段落のリガンド。
【１８５３】
本発明のある実施形態では、以下の条項の通りの方法が提供される:-
1.それを必要とするヒトにおいてIL6R媒介性の疾患又は状態のリスクを処置又は低下する方法であって、前記ヒトに対して、配列番号78において突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質に特異的に結合するリガンド(例えば、抗体又は抗体断片)を投与する工程を含み;
ここでこのリガンドが、ヒトVKセグメントIGKV1-12*01及びヒトJKセグメントの組換え由来のVKドメインを含み、且つ、ここで前記ヒトが、IGKV1-12*01 VK遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、ヒトVKセグメントIGKV1-12*01及びヒトJKセグメントの組換え由来のVKドメインを発現し;且つ
ここで前記ヒトが、配列番号78において前記Asp358Ala又はVal385Ileを含む前記IL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
【１８５４】
ある例では、前記リガンドは、配列番号78において突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質に特異的に結合することが決定された。
【１８５５】
2.リガンドが、前記VKドメインを含むヒトカッパ鎖並びに配列番号93に示される84位のVal及び配列番号93に示される87位のCysを含むヒトカッパ鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトが、IGKC*01ヒトカッパ鎖定常領域遺伝子セグメントを含む、条項1の方法。
【１８５６】
3.抗体又は断片が、IGKC*01ヒトカッパ鎖定常領域を含む、任意の前述の条項の方法。
【１８５７】
4.前記投与する工程の前に、(ii)の前記ヌクレオチド配列を含むヒト(ここでこのヒトは条項1のヒトである)を選択する工程を含む、任意の前述の条項の方法。
【１８５８】
5.ヒトが、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列並びに/或いは配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことが決定された、任意の前述の条項の方法。
【１８５９】
6.ヒトが、前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列並びに/或いは前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことを決定する工程を含み、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、任意の前述の条項の方法。
【１８６０】
7.決定する工程が、ヒト由来の生物学的試料を、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてアッセイする工程を含む、条項6の方法。
【１８６１】
8.アッセイする工程が
生物学的試料と、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブとを接触させ、前記連続したヌクレオチドの配列は、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileをコードするヌクレオチド配列を含み、それによって、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する工程;並びに
この複合体の有無を検出する工程であって、ここで、この複合体の存在を検出する工程が、このヒトが配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことを決定する工程を含む、条項7の方法。
【１８６２】
9.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション、及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/或いはここでこのアッセイする工程が、マルチプレックスフォーマットで行われる、条項7の方法。
【１８６３】
10.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、条項7又は9の方法。
【１８６４】
11.前記ヒトが、配列番号78における前記突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列に関してヘテロ接合性と示され、任意選択で、前記ヒトが更に、配列番号79のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトが、配列番号78における前記突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてホモ接合性であると示される、任意の前述の条項の方法。
【１８６５】
12.前記ヒトが、抗TNFアルファ処置に実質的に耐性であるか、又は実質的に耐性であると更に決定された、任意の前述の条項の方法。
【１８６６】
本明細書における任意の実施形態では、「抗TNFアルファ処置」は、メトトレキセートを伴うか又は伴わない、インフリキシマブ(infliximab)[例えば、Remicade(登録商標)]、アダリムマブ(adalimumab)[例えば、Humira(登録商標)]、セルトリズマブペゴール(certolizumab pegol)[例えば、Cimzia(登録商標)]、ゴリムマブ(golimumab)[例えば、Simponi(登録商標)]、及びエタネルセプト(etanercept)[例えば、Enbrel(登録商標)]処置からなる群から選択される。
【１８６７】
13.前記ヒトが、抗TNFアルファ処置を受けているか、若しくは受けたか、又は抗TNFアルファ処置に対する応答性が低下していた、任意の前述の条項の方法。
【１８６８】
14.前記抗体又は抗体断片が、ヒトに対して、メトトレキセート又は抗TNFアルファ処置と別々に又は同時に投与される、任意の前述の条項の方法。
【１８６９】
15.前記疾患又は状態が炎症性の疾患又は状態である、任意の前述の条項の方法。
【１８７０】
16.前記疾患又は状態が、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿主病(GvHD)、喘息、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、敗血性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、気道炎症、キャッスルマン病、歯周炎、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス及び冠動脈性心疾患からなる群から選択される、任意の前述の条項の方法。本明細書における任意の実施形態では、この関節炎は、中度から重度の関節リウマチ又は全身性若年性特発性関節炎である。
【１８７１】
前記ヒトが、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿主病(GvHD)、喘息、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、敗血性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、気道炎症、キャッスルマン病、歯周炎、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス及び冠動脈性心疾患からなる群から選択される少なくとも1つの状態と診断された、任意の前述の条項の方法。
【１８７２】
17.前記抗体又は抗体断片が、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿主病(GvHD)、喘息、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、敗血性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、気道炎症、キャッスルマン病、歯周炎、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス及び冠動脈性心疾患からなる群から選択される少なくとも1つの状態のリスクを前記ヒトにおいて処置又は低下する、任意の前述の条項の方法。
【１８７３】
18.ヌクレオチド配列が、SNP rs2228145及び/又はSNP rs28730736を含む、任意の前述の条項の方法。
【１８７４】
19.前記抗体又は抗体断片が、静脈内若しくは皮下投与によって投与されるか、及び/又は注射用調製物中に含まれる、任意の前述の条項の方法。
【１８７５】
本発明のある実施形態では、以下の段落の通りのリガンドが提供される:-
1.それを必要とするヒトにおいてIL6R-媒介性疾患又は状態のリスクを処置又は低下するための抗IL6Rリガンド(例えば、抗体又は断片)であって、配列番号78において突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質に特異的に結合し、ヒトVKセグメントIGKV1-12*01及びヒトJKセグメントの組換え由来のVKドメインを含み、且つ、ここで前記ヒトが、IGKV1-12*01VK遺伝子セグメントを含むか、又はこのヒトが、ヒトVKセグメントIGKV1-12*01及びヒトJKセグメントの組換えから導かれるVKドメインを発現し;且つ
ここで前記ヒトが、配列番号78において前記Asp358Ala又はVal385Ileを含む前記IL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、抗IL6Rリガンド(例えば、抗体又は断片)。
【１８７６】
ある例では、前記リガンドは、配列番号78において突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質に特異的に結合することが決定された。
【１８７７】
2.前記VKドメインを含むヒトカッパ鎖並びに配列番号93に示される84位のVal及び配列番号93に示される87位のCysを含むヒトカッパ鎖定常領域を含み、且つここで、前記ヒトが、IGKC*01ヒトカッパ鎖定常領域遺伝子セグメントを含む、段落1のリガンド。
【１８７８】
3.抗体又は断片が、IGKC*01ヒトカッパ鎖定常領域を含む、任意の前述の段落のリガンド。
【１８７９】
4.ヒトが、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列並びに/或いは配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことが決定された、任意の前述の段落のリガンド。
【１８８０】
5.ヒトが、前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列並びに/或いは前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことを決定する工程を包含し、任意選択で、この決定する工程が、このヒトに対するこの抗体の投与の前に行われる、任意の前述の段落のリガンド。
【１８８１】
6.決定する工程が、ヒト由来の生物学的試料を、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列についてアッセイする工程を含む、段落5のリガンド。
アッセイする工程が
生物学的試料と、配列番号78に前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも10個の連続したヌクレオチドの配列を含むか、又は前記連続したヌクレオチドのアンチセンス配列を含む少なくとも1つのオリゴヌクレオチドプローブとを接触させ、前記連続したヌクレオチドの配列は、配列番号78に前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileをコードするヌクレオチド配列を含み、それによって、配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列が存在する場合、複合体を形成する工程;並びに
この複合体の有無を検出する工程であって、ここで、この複合体の存在を検出する工程が、このヒトが配列番号78において前記突然変異Asp358Ala及び/又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質を含むことを決定する工程を含む、段落6のリガンド。
【１８８２】
7.アッセイする工程が、核酸増幅、並びに任意選択で配列決定、次世代配列決定、核酸ハイブリダイゼーション、及び対立遺伝子特異的増幅から選択される1つ又は複数の方法を含むか、並びに/或いはここでこのアッセイする工程が、マルチプレックスフォーマットで行われる、段落6のリガンド。
【１８８３】
8.前記生物学的試料が、前記ヒトの血清、血液、糞便、組織、細胞、尿及び/又は唾液を含む、段落6又は8のリガンド。
【１８８４】
9.前記ヒトが、配列番号78における前記突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列に関してヘテロ接合性と示され、任意選択で、前記ヒトが更に、配列番号79のヌクレオチド配列を含むと示されるか、又は前記ヒトが、配列番号78における前記突然変異Asp358Ala又はVal385Ileを含むIL6Rタンパク質をコードするヌクレオチド配列に関してホモ接合性であると示される、任意の前述の段落のリガンド。
【１８８５】
10.抗TNFアルファ処置に対して実質的に耐性であるか、又は実質的に耐性であると更に決定されたヒトに対する投与のためである、任意の前述の段落のリガンド。
本明細書における任意の実施形態では、「抗TNFアルファ処置」は、メトトレキセートを伴うか又は伴わない、インフリキシマブ(infliximab)[例えば、Remicade(登録商標)]、アダリムマブ(adalimumab)[例えば、Humira(登録商標)]、セルトリズマブペゴール(certolizumab pegol)[例えば、Cimzia(登録商標)]、ゴリムマブ(golimumab)[例えば、Simponi(登録商標)]、及びエタネルセプト(etanercept)[例えば、Enbrel(登録商標)]処置からなる群から選択される。
【１８８６】
11.抗TNFアルファ処置を受けているか、若しくは受けたか、又は抗TNFアルファ処置に対する応答性が低下したヒトに対する投与のためである、任意の前述の段落のリガンド。
【１８８７】
12.ヒトに対する、メトトレキセート又は抗TNFアルファ処置と別々に又は同時の投与のためである、任意の前述の段落のリガンド。
【１８８８】
13.前記疾患又は状態が炎症性の疾患又は状態である、任意の前述の段落のリガンド。
【１８８９】
14.前記疾患又は状態が、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿主病(GvHD)、喘息、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、敗血性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、気道炎症、キャッスルマン病、歯周炎、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス及び冠動脈性心疾患からなる群から選択される、任意の前述の段落のリガンド。
【１８９０】
本明細書における任意の実施形態では、この関節炎は、中度から重度の関節リウマチ又は全身性若年性特発性関節炎である。
【１８９１】
15.前記ヒトが、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病、関節リウマチ、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植片拒絶、同種間移植片拒絶、移植片対宿룤薗䜨䡶⥄胣颖臦膀裦몺釥뢐ꫧꮿ韧馀뻧⢤剁卄膀闦股胦랂菣莃苣膀뷦趘胦Ꞥ藨躂胣랂苣벃苣것菣螗胥꒾胣鞰臩躂韧膀苣ꎃ菣릂菣麃菣薗胣꾭釥躂胣ꊂ菣钃菣Ꞁ髧骆苧膀藥ꮺ胦ꢂ菣蚃菣袃菣螃苣誏臣ꂆ该袄胦莿雧ꎂ臣覂臣讂뻧讁苣뢁諦閁苣讂냥ꪁ臣ꢁ苣ㆂ臣꺁諧讅臣모雦閁苣龁胣뮻蓦꺁觥낿臣떮部꺁菣겂菣覃胣ં䐼噉邀볯颼볯銼胣㲑䐯噉ਾ†㘱躂韧Ꞁ藨뺖苦⢣䉉⥄胣꾂菣벃菣薗胣ꊖ꿧ꪃ苣麃菣膀매겙胣내냦ꆮ铦躂胣꾭苨躂胣뮧ꓦ螉详뚵胣貐꣧鎖꟧趤觧銋뗧膀꟧趤觧뺯껥뮸韧⢅癇䑈膀雥꾁胣邈뫤벑郥꺪뿨螗胥꒾䄨䑒⥓胣鞕ꇨꞀ苣ꞃ菣꾂胣낽飧Ꞁꓥ뢅苧膀苣Ꞃ菣낂菣뎃韧馀뻧膀냦鎁苧螗胣궂菣莃苣ꮃ菣뎃韧膀귦ꢑ苧膀苣袃菣벃胦꺚蛨躂胣ꢅ뫨Ꞁ苣ꪃ菣麃菣벃菣릂迥뎁蛥開蓨Ꞁ뿥뺖苦讁苣ꪁ苣꒾臣覂臩麊臣貂苣醰臣辁臣节ꒁ臣뚊藦꺁菣릂苣銂觥風菣袃臣誁臣ꚁ蟥꺽迥꾁뷤许臣讂胣뮻蓦꺁觥낿臣떮部꺁菣겂菣覃胣ં䐼噉邀볯颼볯鎼胣㲑䐯噉ਾ†㜱貃苣것苣膃菣超裥貁胣厁偎爠㉳㈲ㄸ㔴迥뎁袏臣厯偎爠㉳㜸〳㌷銂郥肂胣뮻蓦꺁觥낿臣떮部꺁菣겂菣覃胣ં䐼噉邀볯颼볯钼胣㲑䐯噉ਾ†㠱馝蓨薆诨鞁臣꾁髧许諦躸臣龁苣ꞁ臣讂臣膀迥뎁袏臣ꢳ냥꾏菨ꪁꫨ붣觧궸臣ꮐ臣貂苣膀믤辄臣趉뿨꺁껦붐臣ꪃ苣뎃菣芀㰊䥄㹖胣醼볯馼볯醀⼼䥄㹖 겜駧躘臣芁苣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀믤许臣ꆝꃩ꺁胩誂臣릖돦貁迦鮾臣貂苣㪋㰭牢ਾ⸱臣貂苣薿ꛨꢁ臣讂菣袃臣誁臣ꚁ䱉制ꫥ讻胦꺁雧ꎂ迥꾁諧讅臣ꪃ苣꾂苣ꚇ뷧袏臣躽룤馁苣릖돦ꞁ臣ꎁ臣膀觥風菣袃臣뺯臣ꚁ胣超裥ꪕ迥㞷ꮁ臣蒁臣膪蓧覤闧䆰灳㔳䄸慬迥꾁慖㍬㔸汉銂郥肂䱉制苣뎃菣꾂돨ꮁ觧낕髧ꮁ뗧袐臣讂菣겂菣覃设臣낁胣鞊뷤袏臣鞊뷤궖觧⦇苣閊룤馁苣ꖷ꣧銂郥뾁㰻牢ਾ臣鎁臣膀臣꺁菣겂菣覃臣膀菣袃㱖畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢㱋猯扵뮂苣ꆃ菣袃迥뎁菣袃㱊畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢㱋猯扵뮂苣ꆃ菣袃臣蒵迦袁铧ꖝ臣嚮猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰䬾⼼畳㹢菣ꆃ苣뎃苣ꮐ臣膀臣꺁菣袃㱖畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢㱋猯扵뮂苣ꆃ菣袃臣膀椨超裥ꪕ迥ㆷ㌱臣몤臣貂苣㞋뷤ꮁ牐銂郥肂䑃㍒钸臣鎁臣ꞁ胣趉꣨銃菣꾁胣超裥ꪕ迥ㆷ㌱臣몤臣貂苣㞋뷤ꮁ牐銂郥肂䑃㍒苣뎂菣覃臣讂㱖畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢㱋猯扵몁볤邭苣낂菣뎃菣銂郥肂臣膀迥꾁臣꺁菣袃臣膀藩鞈闧랏ㄱꮁꓧ閁苣讂趽臣傫潲苣ꮐ苣䎀剄銂郥肂㱖畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮���朮⹯灪㸢㱋猯扵覃菣ꒂ菣銂駧뺏臣讂㬩迥꾁椨⥩藩鞈闧랏ㄱꮁꓧ閁苣讂㔱뷤ꮁ敓銂郥肂坆⠳룤ꒁ臣鎁臣膀觥風菣袃臣膀藩鞈闧랏ㄱꮁꓧ閁苣讂㔱뷤ꮁ敓銂郥肂坆銂苣벃菣馁苣嚋猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰䬾⼼畳㹢臩鶼귥뮂苣ꆃ菣袃苣ꮐ苣讁胣袏臣鎁臣銃菣꾁胣超裥ꪕ迥ㆷ㔱臣몤臣貂苣ㆋ趽臣厫牥苣ꮐ苣䚀㍗苣ꮐ苣嚀猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰䬾⼼畳㹢菣ꆃ苣뎃苣몙迧馁苣⦋苣뎂菣覃臣㮗룤ꒁ戼㹲鎁臣ꞁ觥風菣袃臣膀藩鞈闧랏㠷臣誁臣ꚁ觥風獁㍰㠵汁袏臣嚯污㠳䤵敬苣ꮐ苣趉꣨䦘㙌뾂菣醃苣ꪳ苣뎂菣覃臣讂菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈苣ꮐ苣膀雦閳胣ં䐼噉邀볯颼볯隼胣㲑䐯噉ਾ†臣讂뻤ꞁ臣膀觥風菣겂菣覃臣膀藩鞈闧랏㠷臣誁臣ꚁꫧ뚄ꓥ낕獁㍰㠵汁袏臣嚯污㠳䤵敬苣ꮐ苣䦀㙌뾂菣醃苣ꪳ臣릉闧蒚臣邵郥馁苣鎁臣貁뇦骮臣貂臣芀㰊䥄㹖胣醼볯馼볯醀⼼䥄㹖 ㈠鶁苣銂뿥膦臣馁苣銃菣ꮁ臣蒁臣䦦㙌銪믤Ꞁ臣뺖苦袏臣뚊藦꺁菣릂苣銂蟥꺽迥꾁뷤许臣讂雦閳臣芁臣ꚁ胣趉꣨銃菣ꮁ꿥鞁臣膀藩鞈闧랏㠷臣誁臣ꚁꫧ뚄ꓥ낕獁㍰㠵汁袏臣嚯污㠳䤵敬苣ꮐ苣䦀㙌뾂菣醃苣ꪳ臣릉闧蒚臣邵郥馁苣ꪃ苣뎃菣⢉뻤袁臣膀諦鎽迥꾁諦鎽雦螉銂諦躸臣讂럥讨苣ꮐ臣㮿戼㹲鎁臣ꞁ胣鎁臣ꪃ苣뎃菣貁胣銃菣嚈猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰䬾⼼畳㹢臩鶼귥뮂苣ꆃ菣袃迥뎁菣袃㱊畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢㱋猯扵뮂苣ꆃ菣袃臣蒵迦袁铧ꖝ臣嚮猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰䬾⼼畳㹢菣ꆃ苣뎃苣ꮐ臣膀臣꺁菣袃䭖臩鶼귥뮂苣ꆃ菣袃臣膀愨超裥ꪕ迥㦷ꮁꓧ閁苣讂菣꾂菣ꪂ菣覃闧랏㤱꺁⡔룤ꒁ臣鎁臣膀觥風菣袃臣超裥ꪕ迥㦷ꮁꓧ閁苣讂菣꾂菣ꪂ菣覃闧랏㤱꺁銂郥肂㱖畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢㱋猯扵몁볤邭苣낂菣뎃菣銂郥肂㬩迥꾁戨超裥ꪕ迥㦷ꮁꓧ閁苣讂菣꾂菣ꪂ菣覃闧랏㠲꺁⡃룤ꒁ臣鎁臣膀觥風菣袃臣超裥ꪕ迥㦷ꮁꓧ閁苣讂菣꾂菣ꪂ菣覃闧랏㠲꺁銂郥肂㱖畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢㱋猯扵몁볤邭苣낂菣뎃菣銂郥肂銂郥뾁钸臣㲤牢ਾ臣鎁臣趉꣨銃菣貁胣超裥ꪕ迥㞷ꮁ臣蒁臣趉꣨䆘灳㔳䄸慬迥꾁慖㍬㔸汉銂郥肂觥風䱉制苣뎃菣꾂돨銂苣벃菣馁苣貃苣것苣膃菣超裥銂郥肂胣릖돦芀㰊䥄㹖胣醼볯馼볯醀⼼䥄㹖 ㌠蒐胣꺁觥風菣袃㱖畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢㱋猯扵몁볤邭苣낂菣뎃菣貁胣超裥ꪕ迥ㆷ㈱苣ꮐ苣膀믤辄臣趉뿨꺁鷦薠臣릖돦芀㰊䥄㹖胣醼볯馼볯醀⼼䥄㹖 㐠蒐胣꺁觥風菣袃㱖畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢㱋猯扵몁볤邭苣낂菣뎃菣貁胣超裥ꪕ迥ㆷ㐱苣ꮐ苣膀믤辄臣趉뿨꺁鷦薠臣릖돦芀㰊䥄㹖胣醼볯邼볯醀⼼䥄㹖 㔠趉꣨���猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰䬾⼼畳㹢菣ꆃ苣뎃臣膀菣袃㱖畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢㱋猯扵뮂苣ꆃ菣袃䝉噋ⴳㄱ〪誏臣銃菣䪈뮂苣ꆃ菣袃臣蒵迦袁铧ꖝ臣芁苣膀믤辄臣趉뿨꺁鷦薠臣릖돦芀㰊䥄㹖胣醼볯邼볯醀⼼䥄㹖 㘠趉꣨嚘猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰䬾⼼畳㹢菣ꆃ苣뎃臣超裥ꪕ迥ㆷ㔱臣䚮㍗藩鞈苣ꮐ苣膀믤辄臣趉뿨꺁鷦薠臣릖돦芀㰊䥄㹖胣醼볯邼볯醀⼼䥄㹖 㜠趉꣨銃菣ꮁ郥뺁苣讂㱖畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢㱋猯扵몁볤邭苣낂菣뎃菣貁胣龔껦뮳裥嚗猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰䬾⼼畳㹢臩鶼귥뮂苣ꆃ菣袃臣芁苣膀믤辄臣趉뿨꺁鷦薠臣릖돦芀㰊䥄㹖胣醼볯邼볯醀⼼䥄㹖 㠠ꪃ苣뎃菣貁胣趉꣨嚘猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰䬾⼼畳㹢菣ꆃ苣뎃苣ꮐ苣銃菣ꮂ菣醃軩ꚸ臣ꮁ藩鞈闧랏㌹臣몤臣貂苣㢋趽臣嚮污迥뎁藩鞈闧랏㌹臣몤臣貂苣㢋趽臣䎮獹苣ꮐ苣銃菣ꮂ菣醃軩骮룥颠鿥銂郥뾁胣钸臣鎁臣ꞁ胣趉꣨銃菣貁胣䦁䭇⩃㄰菣袃苣莃菣階껥뢸ꃩ龟臩鶼귥뮂苣ꆃ菣袃苣ꮐ苣膀믤辄臣趉뿨꺁鷦薠臣릖돦芀㰊䥄㹖胣醼볯邼볯醀⼼䥄㹖 㤠鞊뷤袏臣궖觧貁胣䦁䭇⩃㄰菣袃蟩階껥뢸ꃩ龟苣ꮐ苣膀믤辄臣趉뿨꺁鷦薠臣릖돦芀㰊䥄㹖胣醼볯邼볯醀⼼䥄㹖 ㄠ⸰觥風諦躸臣讂럥讨臣趉臣膀椨⥩臣趉꣨貃苣것苣膃菣超裥銂郥肂菣袃鎁臣ꞁ臣꺁菣袃臣ꆝꃩㆅ臣銃菣ꞁ臣讂銂臩麊臣讂럥讨苣ꮐ苣膀믤辄臣趉뿨꺁鷦薠臣릖돦芀㰊䥄㹖胣醼볯邼볯醀⼼䥄㹖 ㄠ⸱菣袃臣膀藩鞈闧랏㠷臣誁臣ꚁ觥風ꫧ뚄ꓥ낕獁㍰㠵汁誏臣⾳迥꾁慖㍬㔸汉銂郥肂䱉制苣뎃菣꾂돨銂苣벃菣馁苣貃苣것苣膃菣超裥ꚸ臣ꮁ隈臣꾁藩鞈闧랏㠷臣誁臣ꚁ觥風ꫧ뚄ꓥ낕獁㍰㠵汁誏臣⾳迥꾁慖㍬㔸汉銂郥肂䱉制苣뎃菣꾂돨銂郥肂臣ꢁ臣몱껥閁苣龁胣뮻蓦꺁觥낿臣ꆝꃩ꺁雦閳胣ં䐼噉邀볯馼볯鞼胣㲑䐯噉ਾ†㈱銃菣貁胣趉꣨膪蓧覤闧䆰灳㔳䄸慬迥뎁袏臣嚯污㠳䤵敬苣ꮐ苣䦀㙌뾂菣醃苣ꪳ苣뎂菣覃臣讂菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈룤뎁臣⾫裦蒁臣趉꣨膪蓧覤闧䆰灳㔳䄸慬迥뎁袏臣嚯污㠳䤵敬苣ꮐ苣䦀㙌뾂菣醃苣ꪳ苣ꮐ苣鎁臣銂뇦骮臣讂럥讨苣ꮐ臣膀믤辄臩麊臣膀臣꺁뇦骮臣讂럥讨臣膀臣꺁菣袃臣뺯臣讂臣꺁諦鎽臣閊룤꺁觥ꮁꇨ辂苣讂胣뮻蓦꺁觥낿臣ꆝꃩ꺁雦閳胣ં䐼噉邀볯馼볯颼胣㲑䐯噉ਾ†㌱몱껥馁苣ꖷ꣧貁胣銃菣놔鷦꺁铧ꦉ귥蒚ꧨ首苣膀藩鞈闧랏㠷臣誁臣ꚁ觥風ꫧ뚄ꓥ낕獁㍰㠵汁誏臣⾳迥꾁慖㍬㔸汉銂郥肂䱉制苣뎃菣꾂돨銂苣벃菣馁苣貃苣것苣膃菣超裥ꮁ臣蒁臣ꊂ菣뮂苣馁苣ꖷ꣧銂郥肂胣ꆝꃩㆅ꺁雦閳胣ં䐼噉邀볯馼볯馼胣㲑䐯噉ਾ†㐱ꊂ菣뮂苣馁苣ꖷ꣧貁戼㹲龔觧���ꚭ髧ꚩ雦ꢁ胣超裥ꪕ迥㞷ꮁ觥風ꫧ뚄ꓥ낕獁㍰㠵汁誏臣⾳迥꾁慖㍬㔸汉銂郥肂䱉制苣뎃菣꾂돨銂苣벃菣馁苣貃苣것苣膃菣超裥꺁냥ꪁ臣ꢁ苣ㆂ讀臣ꎀ뛧鞁臣貃苣것苣膃菣꺁藩鞈苣ꮐ苣讁胣袏臣趉꣨ꎀ뛧鞁臣貃苣것苣膃菣꺁苣뎃菣뮂菣릂藩鞈苣ꮐ苣醰臣辁臣节ꒁ臣ꪂ菣뒂菣꾂菣ꪂ菣覃菣궃菣隃臣銂軦ꚧ臣鮁胣趉꣨ꎀ뛧鞁臣貃苣것苣膃菣꺁藩鞈臣膀藩鞈闧랏㠷臣趉꣨膪蓧覤闧䆰灳㔳䄸慬迥뎁袏臣嚯污㠳䤵敬苣뎂菣覃臣讂菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈苣ꮐ臣膀臣貂臣袂臣ꚁ胣超裥ꪕ迥㞷ꮁ臣蒁臣趉꣨膪蓧覤闧䆰灳㔳䄸慬迥뎁袏臣嚯污㠳䤵敬苣ꮐ苣䦀㙌뾂菣醃苣ꪳ苣뎂菣覃臣讂냥ꪁ臣ꢁ苣ㆂ臣꺁菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈臣颭鳥馁苣뒠郥膀ꓨ袐뷤銂뷥邈臣讂럥讨ꚸ臣ꮁ戼㹲鎁臣螤郥鎽臣覜蓧銂ꓦ몇臣讂럥讨臣芁臣ꚁ胣鎁臣ꞁ胣鎁臣螤郥鎽臣颭鳥銂ꓦ몇臣讂럥讨臣膀臣꺁菣袃臣超裥ꪕ迥㞷ꮁ臣蒁臣趉꣨膪蓧覤闧䆰灳㔳䄸慬迥뎁袏臣嚯污㠳䤵敬苣ꮐ苣䦀㙌뾂菣醃苣ꪳ苣ꮐ苣鎁臣銂뇦骮臣讂럥讨苣ꮐ苣膀鷦薠㌱臣릖돦芀㰊䥄㹖胣醼볯醼볯醀⼼䥄㹖 ㄠ⸵苣莃苣ꒂ臣讂럥讨臣膀ꃦ뢅ꋥ薹胣ꚸ臣ꮁ믤辄臩麊臣超裥몱껥膀곦隸믤超裥몱껥膀ꃦ뢅菣ꒂ菣ꪃ菣ꒂ苣벃苣ꞃ菣膀迥뎁꿥讫臩鶼귥릉闧蒚ꋥ薹臣覂臩麊臣貂苣ㆋ臣袏臣螤闦꺁雦閳苣ꮐ苣讁胣ꚸ臣ꮁ隈臣꾁臣鎁臣鎁臣ꊂ菣뮂苣馁苣ꖷ꣧貁胣麃菣膃菣것菣꾂苣閃苣벃菣莃菣ꞁꇨ辂苣讂胣ꆝꃩㆅ꺁雦閳胣ં䐼噉邀볯馼볯醼胣㲑䐯噉ਾ†㘱趉꣨龔觧ꚭ髧ꚩ雦貁胣趉꣨銃菣꺁ꇨ薸胣股뛦膀돧뾾胣蒵맧膀듧麃胣뾰迥뎁袏臣뺔뛦銂郥肂胣ꆝꃩㆅ袏臣ㆯ꺁雦閳胣ં䐼噉邀볯馼볯銼胣㲑䐯噉ਾ†㜱趉꣨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覃藩鞈苣ꮐ苣讁胣袏臣鎁臣銃菣貁胣⢁⥩臣鎁臣袂臣ꪁ苣龃菣뢅苣ꮐ苣銃菣겂菣麃㈭껥뢸ꃩ龟苣ꮐ苣鞊뷤銂駧뺏臣讂胣뮻蓦꺁觥낿臣ꆝꃩ꺁雦閳胣ં䐼噉邀볯馼볯隼胣㲑䐯噉ਾ†⸴觥風諦鎽迥꾁雦螉臣膀䝉䝈⨲㄰菣袃蟩階껥뢸ꃩ龟苣ꮐ苣膀鷦薠膀袏臣㎯臣릖돦芀㰊䥄㹖胣醼볯馼볯醀⼼䥄㹖 㔠趉꣨閊룤馁苣ꖷ꣧꺁觥ꮁ胣⢁楩꺁觥風菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈苣ꮐ苣銃菣⢈臣鎁臣鎁臣銃菣꾁鷦薠꺁菣袃臣芁苣⦋苣뢁諦馁苣ꖷ꣧銂郥肂胣뮻蓦꺁觥낿臣ꆝꃩ꺁雦閳胣ં䐼噉邀볯馼볯颼胣㲑䐯噉ਾ†⸶菣袃臣膀藩鞈闧랏㠷臣誁臣ꚁ觥風ꫧ뚄ꓥ낕獁㍰㠵汁誏臣⾳迥꾁慖㍬㔸汉銂郥肂䱉制苣뎃菣꾂돨銂苣벃菣馁苣貃苣것苣膃菣超裥ꚸ臣ꮁ隈臣꾁藩鞈闧랏㠷臣誁臣ꚁ觥風ꫧ뚄ꓥ낕獁㍰㠵汁誏臣⾳迥꾁慖㍬㔸汉銂郥肂䱉制苣뎃菣꾂돨銂郥肂臣ꢁ臣몱껥閁苣龁胣뮻蓦꺁觥낿臣ꆝꃩ꺁雦閳胣ં䐼噉邀볯馼볯馼胣㲑䐯噉ਾ†⸷菣袃臣膀觥風ꫧ뚄ꓥ낕獁㍰㠵汁誏臣⾳迥꾁慖㍬㔸汉銂郥肂䱉制苣뎃菣꾂돨銂苣벃菣馁苣貃苣것苣膃菣超裥ꚸ臣ꮁ隈臣꾁觥風ꫧ뚄ꓥ낕獁㍰㠵汁誏臣⾳迥꾁慖㍬㔸汉銂郥肂䱉制苣뎃菣꾂돨銂郥肂臣ꢁ苣몱껥馁苣ꖷ꣧銂郥뾁胣뮻蓦뢁諦ꞁ胣鎁臣몱껥馁苣ꖷ꣧貁胣鎁臣銃菣ꮁ꿥馁苣鎁臣鞊뷤꺁諦躸臣趉臣財苣貂苣膀鷦薠鲀꺁臣骁苣讁ꒁ臣릖돦芀㰊䥄㹖胣銼볯邼볯醀⼼䥄㹖 㠠몱껥馁苣ꖷ꣧貁胣銃菣놔鷦꺁铧ꦉ귥蒚ꧨ首苣膀藩鞈闧랏㠷臣誁臣ꚁ觥風ꫧ뚄ꓥ낕獁㍰㠵汁誏臣⾳迥꾁慖㍬㔸汉銂郥肂䱉制苣뎃菣꾂돨銂苣벃菣馁苣貃苣것苣膃菣超裥ꮁ臣蒁臣ꊂ菣뮂苣馁苣ꖷ꣧銂郥肂胣ꆝꃩ㞅臣릖돦芀㰊䥄㹖胣銼볯邼볯醀⼼䥄㹖 㤠ꊂ菣뮂苣馁苣ꖷ꣧貁戼㹲龔觧ꚭ髧ꚩ雦ꢁ胣超裥ꪕ迥㞷ꮁ觥風ꫧ뚄ꓥ낕獁㍰㠵汁誏臣⾳迥꾁慖㍬㔸汉銂郥肂䱉制苣뎃菣꾂돨銂苣벃菣馁苣貃苣것苣膃���超裥꺁냥ꪁ臣ꢁ苣ㆂ讀臣ꎀ뛧鞁臣貃苣것苣膃菣꺁藩鞈苣ꮐ苣讁胣袏臣趉꣨ꎀ뛧鞁臣貃苣것苣膃菣꺁苣뎃菣뮂菣릂藩鞈苣ꮐ苣醰臣辁臣节ꒁ臣ꪂ菣뒂菣꾂菣ꪂ菣覃菣궃菣隃臣銂軦ꚧ臣鮁胣趉꣨ꎀ뛧鞁臣貃苣것苣膃菣꺁藩鞈臣膀藩鞈闧랏㠷臣趉꣨膪蓧覤闧䆰灳㔳䄸慬迥뎁袏臣嚯污㠳䤵敬苣뎂菣覃臣讂菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈苣ꮐ臣膀臣貂臣袂臣ꚁ胣超裥ꪕ迥㞷ꮁ臣蒁臣趉꣨膪蓧覤闧䆰灳㔳䄸慬迥뎁袏臣嚯污㠳䤵敬苣ꮐ苣䦀㙌뾂菣醃苣ꪳ苣뎂菣覃臣讂냥ꪁ臣ꢁ苣ㆂ臣꺁菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈臣颭鳥馁苣뒠郥膀ꓨ袐뷤銂뷥邈臣讂럥讨ꚸ臣ꮁ戼㹲鎁臣螤郥鎽臣覜蓧銂ꓦ몇臣讂럥讨臣芁臣ꚁ胣鎁臣ꞁ胣鎁臣螤郥鎽臣颭鳥銂ꓦ몇臣讂럥讨臣膀臣꺁菣袃臣超裥ꪕ迥㞷ꮁ臣蒁臣趉꣨膪蓧覤闧䆰灳㔳䄸慬迥뎁袏臣嚯污㠳䤵敬苣ꮐ苣䦀㙌뾂菣醃苣ꪳ苣ꮐ苣鎁臣銂뇦骮臣讂럥讨苣ꮐ苣膀鷦薠꺁雦閳胣ં䐼噉邀볯邼볯銼胣㲑䐯噉ਾ†〱ꊂ菣뮂苣馁苣ꖷ꣧貁胣뢠藩鞢맥膀룤뎁臣뮻蓦뢁諦ꞁ藩鞈뇦骮胣ꆬ룤ꎻ藩鞈뇦骮胣뢠藩较苣隃菣肃苣벂菣랂菣뎃胣誏臣뺯ꯧ몁볤邭觧낕髧鞢맥讁苣뢁諦閁苣讂ꒁ迥꾁ꓨ낕臣릖돦銂郥肂臣膀룤뎁臣⾫裦蒁臣鎁臣ꞁ臣꺁苣莃苣ꒂ臣讂럥讨臣膀菣ꮃ菣鞃菣莃苣릂菣ꦂ菣麃菣袃臣財苣貂苣膀鷦薠꺁雦閳胣ં䐼噉邀볯邼볯鎼胣㲑䐯噉ਾ†ㄱ趉꣨龔觧ꚭ髧ꚩ雦貁胣趉꣨銃菣꺁ꇨ薸胣股뛦膀돧뾾胣蒵맧膀듧麃胣뾰迥뎁袏臣뺔뛦銂郥肂胣ꆝꃩ㢅迥꾁〱臣릖돦芀㰊䥄㹖胣銼볯邼볯醀⼼䥄㹖 ㄠ⸲觥風菣袃臣膀藩鞈闧랏㠷臣誁臣讂觥風ꫧ뚄ꓥ낕獁㍰㠵汁袏臣嚯污㠳䤵敬苣ꮐ苣䦀㙌뾂菣醃苣ꪳ苣뎂菣覃臣讂菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈臣ꊖ臣ꚁ菣蚃菣ꖎ郥Ꞁ臣몤臣貂胣뮻蓦뢁諦ꞁ胣趉꣨銃菣貁鯦ꮁ胣超裥ꪕ迥㞷꺁菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈苣ꮐ苣ꢁꓧ閁苣讂臣膀迥꾁觥風菣袃臣膀藩鞈闧랏㠷臣誁臣讂觥風ꫧ뚄ꓥ낕獁㍰㠵汁袏臣嚯污㠳䤵敬苣ꮐ苣䦀㙌뾂菣醃苣ꪳ苣뎂菣覃臣讂菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈臣ꊖ臣ꚁ菣ꊃ軦袐胦ꞁ臣讂臣몤臣貂苣膀믤辄臣趉뿨꺁鷦薠臣릖돦芀㰊䥄㹖胣銼볯邼볯醀⼼䥄㹖 ㄠ⸳觥風菣袃臣膀諦咗䙎苣ꮃ菣ꆂ蟥꺽臣龮돨蒚臣邀胦ꞁ臣讂臣膀迥꾁껥ꪳ髧ꮁ胨Ꞁ臣芁苣ꢁ鯦ꮁ뇦骮臣貂臣膀믤辄臣趉뿨꺁鷦薠臣릖돦芀戼㹲겜飦내鯦ꮁ臣醁苣뮻蓦꺁껥붖뷥讅臣꾁胣貀諦咗䙎苣ꮃ菣ꆂ蟥꺽胣꾁胣ꆃ菣袃菣궂苣벃菣銂볤蚁臣袏臣뒼苣ꪁ臣膀苣뎃菣ꪃ苣랂菣隃椨普楬楸慭⥢设臣낁胣劁浥捩摡⡥駧늌闥馨崩胣ꊂ菣ꪃ菣麃菣⢖摡污浩浵扡嬩뻤袁臣膀畈業慲뮙賩蚕꣦⦙膀苣ꮃ菣ꪃ苣麃菣骃苣���벃菣⢫散瑲汯穩浵扡瀠来汯嬩뻤袁臣膀楃穭慩뮙賩蚕꣦⦙膀苣ꪃ菣麃菣⢖潧楬畭慭⥢设臣낁胣厁浩潰楮뮙賩蚕꣦⦙膀迥뎁苣뾂菣ꮃ苣鞃菣⢈瑥湡牥散瑰嬩뻤袁臣膀湅牢汥뮙賩蚕꣦⦙ꚇ뷧讁苣ꪁ苣꒾臣覂臩麊臣貂苣芀㰊䥄㹖胣銼볯邼볯醀⼼䥄㹖 ㄠ⸴觥風菣袃臣膀諦咗䙎苣ꮃ菣ꆂ蟥꺽苣鞏臣ꚁ臣讂臣膀诨鞁臣꾁迥醁臣讁胣袏臣鞊乔ꊂ菣閃苣ꚇ뷧ꮁ꿥馁苣鲿귧Ꞁ臣躽룤鞁臣蒁臣膀믤辄臣趉뿨꺁鷦薠臣릖돦芀㰊䥄㹖胣銼볯邼볯醀⼼䥄㹖 ㄠ⸵觥風諦鎽迥꾁諦鎽雦螉臣膀菣袃臣뺯臣ꚁ胣ꆃ菣袃菣궂苣벃菣袏臣鞊乔ꊂ菣閃苣ꚇ뷧ꢁ裥薀臣袏臣貐駦ꮁ諦躸臣貂苣膀믤辄臣趉뿨꺁鷦薠臣릖돦芀㰊䥄㹖胣銼볯邼볯醀⼼䥄㹖 ㄠ⸶觥風雧ꎂ迥꾁諧讅臣躂韧Ꞁ臣뺖苦袏臣뚊藦ꞁ臣讂胣뮻蓦꺁觥낿臣ꆝꃩ꺁雦閳胣ં䐼噉邀볯邼볯馼胣㲑䐯噉ਾ†㜱趉꣨뺖苦袏臣뚊藦貁胣躂韧Ꞁ藨뺖苦⢣䉉⥄胣꾂菣벃菣薗胣ꊖ꿧ꪃ苣麃菣膀매겙胣내냦ꆮ铦躂胣꾭苨躂胣뮧ꓦ螉详뚵胣貐꣧鎖꟧趤觧銋뗧膀꟧趤觧뺯껥뮸韧⢅癇䑈膀雥꾁胣邈뫤벑郥꺪뿨螗胥꒾䄨䑒⥓胣鞕ꇨꞀ苣ꞃ菣꾂胣낽飧Ꞁꓥ뢅苧膀苣Ꞃ菣낂菣뎃韧馀뻧膀냦鎁苧螗胣궂菣莃苣ꮃ菣뎃韧膀귦ꢑ苧膀苣袃菣벃胦꺚蛨躂胣ꢅ뫨Ꞁ苣ꪃ菣麃菣벃菣릂迥뎁蛥開蓨Ꞁ뿥뺖苦讁苣ꪁ苣꒾臣覂臩麊臣貂苣膀믤辄臣趉뿨꺁鷦薠臣릖돦芀戼㹲겜飦내鯦ꮁ臣醁苣뮻蓦꺁껥붖뷥讅臣꾁胣鎁臣ꊖ꿧躂臣膀룤ꚺ臣覂蟩ꚺ臣ꊖ꿧ꪃ苣麃菣袏臣ꢅ뫨Ꞁ诨뒹胦릉駧Ꞁ雩肯苧ꞁ臣讂胣ં䐼噉邀볯邼볯邼胣㲑䐯噉ਾ†㠱趉꣨銃菣貁胣躂韧Ꞁ藨뺖苦⢣䉉⥄胣꾂菣벃菣薗胣ꊖ꿧ꪃ苣麃菣膀매겙胣내냦ꆮ铦躂胣꾭苨躂胣뮧ꓦ螉详뚵胣貐꣧鎖꟧趤觧銋뗧膀꟧趤觧뺯껥뮸韧⢅癇䑈膀雥꾁胣邈뫤벑郥꺪뿨螗胥꒾䄨䑒⥓胣鞕ꇨꞀ苣ꞃ菣꾂胣낽飧Ꞁꓥ뢅苧膀苣Ꞃ菣낂菣뎃韧馀뻧膀냦鎁苧螗胣궂菣莃苣ꮃ菣뎃韧膀귦ꢑ苧膀苣袃菣벃胦꺚蛨躂胣ꢅ뫨Ꞁ苣ꪃ菣麃菣벃菣릂迥뎁蛥開蓨Ꞁ뿥뺖苦讁苣ꪁ苣꒾臣覂臩麊臣貂苣醰臣辁臣节ꒁ臣뚊藦ꢁ꣨궖臣貂臣膀믤辄臣趉뿨꺁鷦薠臣릖돦芀㰊䥄㹖胣銼볯醼볯醀⼼䥄㹖 ㄠ⸹觥風諦鎽迥꾁諦鎽雦螉臣膀苧螗胦뢅雧ꎂ䤨䑂膀苣궃菣뎃韧膀雩肯菣Ꚃ菣膃胣뺹駧膀듧鞰껧꾔苧膀귦覂苧膀꟧趤觧銋뗧膀郥꺨雩뮧ꓦ螉详뚵胣뮧ꓦ螉꿥뾮룤薗䜨䡶⥄胣颖臦膀裦몺釥뢐ꫧꮿ韧馀뻧⢤剁卄膀闦股胦랂菣莃苣膀뷦趘胦Ꞥ藨躂胣랂苣벃苣것菣螗胥꒾胣鞰臩躂韧膀苣ꎃ菣릂菣麃菣薗胣꾭釥躂胣ꊂ菣钃菣Ꞁ髧骆苧膀藥ꮺ胦ꢂ菣蚃菣袃菣螃苣誏臣ꂆ该袄胦莿���ꎂ臣覂臣讂뻧讁苣뢁諦閁苣讂냥ꪁ臣ꢁ苣ㆂ臣꺁諧讅臣ꪃ苣꾂苣趉꣨銃菣ꮁ臣蒁臣ꚇ뷧袏臣躽룦馁苣膀믤辄臣趉뿨꺁鷦薠臣릖돦芀㰊䥄㹖胣銼볯醼볯醀⼼䥄㹖 ㈠⸰菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈臣膀乓⁐獲㈲㠲㐱誏臣⾳迥꾁乓⁐獲㠲㌷㜰㘳苣ꮐ苣膀믤辄臣趉뿨꺁鷦薠臣릖돦芀㰊䥄㹖胣銼볯醼볯醀⼼䥄㹖 ㈠⸱觥風諦鎽迥꾁諦鎽雦螉臣膀鷩袄蛥ꖋ臣辁臣꺚룤閊룤ꮁ苣ꎁ臣閊룤閁苣讂臣膀迥뎁袏臣ꢳ냥ꢔꫨ붣觧궸臣ꮐ臣貂苣膀믤辄臣趉뿨꺁鷦薠臣릖돦芀㰊䥄㹖胣銼볯醼볯醀⼼䥄㹖 겜駧躘臣芁苣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀믤许臣떮部꺁胩誂臣ꪃ苣뎃菣貁迦鮾臣貂苣㪋㰭牢ਾ⸱臣貂苣薿ꛨꢁ臣讂菣袃臣誁臣ꚁ䱉制銪믤Ꞁ雧ꎂ迥꾁諧讅臣ꪃ苣꾂苣ꚇ뷧袏臣躽룤馁苣龁苣꺁諦䦗㙌ꪃ苣뎃菣⢉뻤袁臣膀諦鎽迥꾁雦螉ꞁ臣ꎁ臣膀藩鞈闧랏㠷臣誁臣ꚁꫧ뚄ꓥ낕獁㍰㠵汁袏臣嚯污㠳䤵敬苣ꮐ苣䦀㙌뾂菣醃苣ꪳ臣릉闧蒚臣邵郥鞁胣超裥ꪕ迥㢷ꮁꓧ閁苣讂〲趽臣䆫灳迥꾁藩鞈闧랏ㄸ臣몤臣貂苣㊋㘰뷤ꮁ敌銂郥肂菣袃苣뎃菣⶞趇軩骮룥颠鿥銂郥뾁胣钸臣鎁臣ꞁ胣趉꣨銃菣貁椨䤩䡇ㅇ〪銃菣趇軩骮룥颠鿥몁볤邭苣낂菣뎃菣⢈迥꾁臣꺁菣袃臣膀藩鞈闧랏ㄸ臣몤臣貂苣㊋㐰뷤ꮁ獁袏臣超裥ꪕ迥㢷ꮁꓧ閁苣讂〲趽臣䲫略苣ꮐ苣銃菣겂菣麃ㄭ蟩階껥뢸ꃩ龟苣ꮐ苣鞊뷤銂駧뺏臣讂ꚸ臣ꮁ椨⥩藩鞈闧랏㠷臣誁臣ꚁ觥風獁㍰㠵汁袏臣嚯污㠳䤵敬苣ꮐ苣趉꣨䦘㙌뾂菣醃苣ꪳ苣뎂菣覃臣讂菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈苣ꮐ苣膀諦䦗㙌ꪃ苣뎃菣⢉뻤袁臣膀諦鎽迥꾁雦螉芀㰊䥄㹖胣銼볯醼볯醀⼼䥄㹖 芁苣设臣꾁胣趉꣨ꪃ苣뎃菣꾁胣超裥ꪕ迥㞷ꮁ臣蒁臣膪蓧覤闧䆰灳㔳䄸慬迥꾁慖㍬㔸汉銂郥肂䱉制苣뎃菣꾂돨ꮁ觧낕髧ꮁ뗧袐臣讂臣ꢁ臣몱껥閁苣龁胣ં䐼噉邀볯邼볯隼胣㲑䐯噉ਾ†⸲⠠⥩藩鞈闧랏㌸臣몤臣貂苣㞋趽臣傮潲胣超裥ꪕ迥㢷ꮁꓧ閁苣讂㔷뷤꺁獁膀藩鞈闧랏㌸臣몤臣貂苣㞋趽臣傮敨胣ꚸ臣ꮁ믤辄臩麊臣⢧楩超裥ꪕ迥㢷ꮁꓧ閁苣讂㘱趽臣嚮污迥뎁袏臣超裥ꪕ迥㢷ꮁꓧ閁苣讂㔲趽臣䆮慬苣ꮐ苣銃菣겂菣麃㈭蟩階껥뢸ꃩ龟苣ꮐ臣㮿룤ꒁ胣鎁臣ꞁ臣꺁菣袃臣늂菣ꂃ臣膀椨꺁臣꺁苣蚁臣ꊂ菣躃藩銂苣벃菣馁苣겂菣麃㈭蟩階껥뢸ꃩ龟菣꾂菣ꪂ菣覃藩鞈苣ꮐ苣讁胣袏臣鎁臣銃菣貁胣⢁⥩臣鎁臣袂臣ꪁ苣龃菣뢅苣ꮐ苣銃菣겂菣麃㈭껥뢸ꃩ龟苣ꮐ苣鞊뷤銂駧뺏臣讂胣떮部ㆽ臣ꪃ苣뎃菣芀㰊䥄㹖胣銼볯醼볯醀⼼䥄㹖 ㌠銃菣겂菣麃㈭蟩階껥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