(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
【化１】
0006714687.tif 000069
（式中、
Ｒ１及びＲ２はチオールと反応することが可能な官能基であり、Ｒ１及びＲ２は独立して、
【化２】
0006714687.tif 000070
から選択され、
式中、ＸがＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩから選択され、
Ｒ１及びＲ２の両方がマレイミドになることはなく、Ｒ１及びＲ２の両方がハロゲンになることはなく、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌはリンカーを表すか又はヌルとすることができ、
Ｍは結合基を表し、
Ｑは活性剤を表すか又はヌルとすることができ、
ｍは０〜６の整数を表し、
ｎは０〜８の整数を表す）
で表されるリンカー活性剤又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ｒ１及びＲ２が異なる、請求項１に記載のリンカー活性剤。
【請求項３】
ＭがＣ−Ｒ５、Ｎ、Ｂ、Ｐ、Ｓｉ−Ｒ５、芳香族基、ヘテロアリール、シクロアルキル、及び（ヘテロシクリル）アルキルから選択され、及び
Ｒ５がＨ、Ｃｌ〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、及びＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択され、及び/又は
Ｌ１及びＬ２が独立してＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、芳香族基、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ９シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ９ヘテロシクリル、ポリエチレングリコール、Ｏ、Ｓ、ＮＲ６、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６、Ｃ＝ＮＲ６、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ、ＮＲ６（Ｃ＝Ｏ）、ＮＲ６（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ７、Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ６、Ｓ（＝Ｏ）２及びそれらの組み合わせから選択され、Ｒ６及びＲ７が独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、及びＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択される、請求項１又は２に記載のリンカー活性剤。
【請求項４】
Ｌが切断不可単位及び/又は切断可能単位を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のリンカー活性剤。
【請求項５】
ＬがＣ１〜Ｃ９アルキル、Ｃ２〜Ｃ９アルケニル、Ｃ２〜Ｃ９アルキニル、芳香族基、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ９シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ９ヘテロシクリル、ポリエチレングリコール、Ｏ、Ｓ、ＮＲ８、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ８、Ｃ＝ＮＲ８、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ８、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ、ＮＲ８（Ｃ＝Ｏ）、ＮＲ８（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ９、Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ８、Ｓ（＝Ｏ）２、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢ又はそれらの組み合わせを含み、及び
Ｒ８及びＲ９が独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、及びＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載のリンカー活性剤。
【請求項６】
Ｑがチューブリン結合剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレータ、酵素阻害剤、免疫調節剤、可視化剤、ペプチド及びヌクレオチドから選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載のリンカー活性剤。
【請求項７】
Ｑがマイタンシノイド、アウリスタチン、カリケアマイシン、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、及びピロロベンゾジアゼピンから選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載のリンカー活性剤。
【請求項８】
前記式Ｉの構造が、
【化３】
0006714687.tif 000071
0006714687.tif 000072
0006714687.tif 000073
から選ばれる少なくとも１つである、請求項１〜７のいずれか一項に記載のリンカー活性剤。
【請求項９】
下記式：
【化４】
0006714687.tif 000074
（式中、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌはリンカーを表すか又はヌルとすることができ、
Ｍは結合基を表し、
Ｑは活性剤を表すか又はヌルとすることができ、
ｍは０〜６の整数を表し、
ｎは０〜８の整数を表し、
Ａはターゲッティング部分であり、モノクローナル抗体、抗体フラグメント、抗体サロゲート、又は、抗体変異体を含み、
Ｓはターゲッティング部分のチオール基の硫黄原子であり、及び
Ｒ３及びＲ４は各々独立して、チオール基と、
【化５】
0006714687.tif 000075
から選択される基との反応の結果として形成され、
式中、ＸがＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩから選択され、
Ｒ３及びＲ４の両方が、チオール基とマレイミドとの反応の結果として形成されることはなく、Ｒ３及びＲ４の両方が、チオール基とハロゲンとの反応の結果として形成されることはない）
で表される抗体薬物複合体又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１０】
Ｒ３及びＲ４が異なる、請求項９に記載の抗体薬物複合体。
【請求項１１】
Ｒ３及びＲ４が各々独立して、
【化６】
0006714687.tif 000076
から選択される、請求項９又は１０に記載の抗体薬物複合体。
【請求項１２】
ＭがＣ−Ｒ５、Ｎ、Ｂ、Ｐ、Ｓｉ−Ｒ５、芳香族基、ヘテロアリール、シクロアルキル及び（ヘテロシクリル）アルキルから選択され、及び
Ｒ５がＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、及びＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択され、及び/又は
Ｌ１及びＬ２が独立してＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、芳香族基、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ９シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ９ヘテロシクリル、ポリエチレングリコール、Ｏ、Ｓ、ＮＲ６、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６、Ｃ＝ＮＲ６、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ、ＮＲ６（Ｃ＝Ｏ）、ＮＲ６（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ７、Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ６、Ｓ（＝Ｏ）２及びそれらの組み合わせから選択され、Ｒ６及びＲ７が独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、及びＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択される、請求項９に記載の抗体薬物複合体。
【請求項１３】
Ｌが切断不可単位及び/又は切断可能単位を含む、請求項９〜１２のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体。
【請求項１４】
ＬがＣ１〜Ｃ９アルキル、Ｃ２〜Ｃ９アルケニル、Ｃ２〜Ｃ９アルキニル、芳香族基、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ９シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ９ヘテロシクリル、ポリエチレングリコール、Ｏ、Ｓ、ＮＲ８、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ８、Ｃ＝ＮＲ８、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ８、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ、ＮＲ８（Ｃ＝Ｏ）、ＮＲ８（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ９、Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ８、Ｓ（＝Ｏ）２、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢ、又はそれらの組み合わせを含み、及び
Ｒ８及びＲ９が独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、及びＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択される、請求項９〜１３のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体。
【請求項１５】
前記式ＩＩの構造が、
【化７】
0006714687.tif 000077
0006714687.tif 000078
0006714687.tif 000079
から選ばれる少なくとも１つである、請求項９〜１４のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体。
【請求項１６】
被験体における病的状態の治療方法での使用のための請求項９〜１５のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体：
前記方法が、病的状態の治療を必要とする被験体に抗体薬物複合体を投与することを含む。
【請求項１７】
ＡがＨＥＲ２に結合する抗体又はそのフラグメントである、請求項１６に記載の使用のための抗体薬物複合体。
【請求項１８】
Ｑがシトトキシンである、請求項１６又は１７に記載の使用のための抗体薬物複合体。
【請求項１９】
被験体がヒトである、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の使用のための抗体薬物複合体。
【請求項２０】
前記病的状態が癌、炎症性障害、自己免疫障害、神経系の障害、及び心血管系障害から選択される、請求項１６に記載の使用のための抗体薬物複合体。
【請求項２１】
前記癌が癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病又はリンパ性悪性腫瘍から選択される、請求項２０に記載の使用のための抗体薬物複合体。
【請求項２２】
前記癌がＨＥＲ２陽性癌である、請求項２１に記載の使用のための抗体薬物複合体。
【請求項２３】
前記癌が乳癌である、請求項２２に記載の使用のための抗体薬物複合体。
【請求項２４】
目的の分析物を有することが疑われる試料と、請求項９〜１５のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体とを接触させることを含む診断方法での使用のための請求項９〜１５のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体：
ターゲット部分が前記目的の分析物に選択的に結合し、
Ｑが検出可能な実体、及び／又は１以上の追加の実体が結合する実体であり、
該１以上の追加の実体自体が検出可能な実体であり、
前記方法が前記試料を分析して、検出可能な実体の存在を判定することを更に含み、
その存在が前記目的の分析物の存在の指標となる。
【請求項２５】
前記分析物が癌と関連する、請求項２４に記載の使用のための抗体薬物複合体。
【請求項２６】
前記分析物がＨＥＲ２である、請求項２４又は２５に記載の使用のための抗体薬物複合体。
【請求項２７】
前記Ａが抗体又は抗体フラグメントである、請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の使用のための抗体薬物複合体。
【請求項２８】
ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる、請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の使用のための抗体薬物複合体。
【請求項２９】
ヒトにおいて行われる、請求項２４〜２８のいずれか一項に記載の使用のための抗体薬物複合体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本願は、２０１６年８月１４日付で出願された米国仮特許出願第６２／２０５，１２１号の利益を主張するものであり、あらゆる数値、表及び図面を含む全ては、引用することにより本明細書の一部をなす。
【背景技術】
【０００２】
急速に成長している一種の標的療法である抗体薬物複合体（antibody drug conjugates）（ＡＤＣ）は、癌薬物の選択性及び細胞毒性の活性の両方の改善に向けた有望な新たなアプローチである。米国で治療的使用に対して承認されているＡＤＣ薬の例は、未分化大細胞型リンパ腫及びホジキンリンパ腫の治療に使用される、モノメチルアウリスタチンＥに複合体化されたキメラ抗ＣＤ３０抗体である、ブレンツキシマブベドチン（ＡＤＣＥＴＲＩＳ（登録商標））である。
【０００３】
抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の設計で採用される従来の一方法は、結合部分を介して抗体鎖のチオール基に対して薬物分子をカップリングすることを含む。遊離チオール基は、還元反応によって抗体のシステイン鎖間ジスルフィド結合を破壊する結果として得られる。典型的な抗体は４個の鎖間ジスルフィド結合（重鎖間の２個、及び重鎖と軽鎖との間の２個）を含む。これらの鎖間ジスルフィドをジチオトレイトール、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン、又は他の穏やかな還元剤によって選択的に還元して、複合体化のための８個の反応性スルフヒドリル基をもたらすことができる。この方法は、８個までの薬物分子を所与の抗体に連結することができる。
【０００４】
少なくとも２個のジスルフィド結合が破壊されるという事実により、この原理を使用して設計したＡＤＣは、一旦循環に入ると不安定であることから、ＡＤＣの半減期が短縮される。その結果、最近のＡＤＣ設計及び合成における開発は、異なるアプローチ、すなわちカップリング剤によって２個のチオール基を共有結合することに依存して、所与の抗体の２本の重鎖間及び重鎖と軽鎖との間のチオール架橋を確立するアプローチを採用している。かかるアプローチを探索する現在の研究努力は、主に、２個のチオール基に共有結合的に架橋するための官能性を有するのみならず、特定の生物学的活性を促進するために必要な成分も包含するカップリング剤の構造設計に着目するものである。
【０００５】
当該分野における初期の研究は、破壊されたジスルフィド結合に起因する２個のチオール基と反応するビス−マレイミドを利用していた。マレイミドとチオールとの間の共有結合カップリングは典型的なアルケン転換反応である。より最近に研究されたチオール架橋反応もまた、マレイミド、ビス−マレイミド及びハロゲン置換基を有するマレイミドを含む例示的な反応によるこの原理に基づくものである。しかしながら、現在まで、チオール架橋リンカー組成物は、マレイミド系化合物のみに限定され、腫瘍標的ＡＤＣにおける適用については指定されないことが多い。例えば、同様のマレイミド系化合物の使用を含む共有結合チオールカップリングの先に開示した方法は、腫瘍標的薬物分子、タンパク質、又はポリペプチド等の活性剤によるカップリングの際にそれらの適用を指定していなかった（例えば、特許文献１を参照されたい）。マレイミド系化合物を利用する腫瘍標的ＡＤＣにおける適用を具体的に開示した他の方法は、本発明によって提供されるような１個のリンカーが同時に２個のチオール基と反応する、共有結合チオール架橋を含む機構を採用するものではなかった（例えば、特許文献２を参照されたい）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２０１３１３２２６８号
【特許文献２】中国特許出願公開第１０３９３３５７５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、別の化合物に抗体をカップリングするための新規で有利なリンカーを提供する。構造的合成及びその使用が本明細書に記載されているリンカーに加えて、本発明は、例えば抗体薬物複合体用途に使用されるような、抗体／活性剤複合体及びその適用も提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
幾つかの実施の形態は、式Ｉ：
【化１】
0006714687.tif 000002
（式中、
Ｒ１及びＲ２はチオールと反応することが可能な官能基であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌはリンカーを表すか又はヌル（null）とすることができ、
Ｍは結合基を表し、
Ｑは活性剤を表すか又はヌルとすることができ、
ｍは０〜６の整数を表し、
ｎは０〜８の整数を表す）
の構造を有するリンカー活性剤又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【０００９】
幾つかの実施の形態では、Ｒ１及びＲ２は独立して、
【化２】
0006714687.tif 000003
及びそれらの誘導体から選択される。
【００１０】
幾つかの実施の形態は、式ＩＩ：
【化３】
0006714687.tif 000004
（Ａはターゲッティング部分であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌはリンカー又はヌルを表し、
Ｍは結合基であり、
Ｑは活性剤又はヌルであり、
ｍは０〜６から選択される整数であり、
ｎは０〜８から選択される整数であり、
Ｒ３及びＲ４は各々独立して、
【化４】
0006714687.tif 000005
、それらの誘導体から選択されるか、又はヌルである）
の構造を有する、ターゲッティング部分とリンカー活性剤との複合体又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１１】
本明細書で使用される「ヌル」に対する言及は、実体（entity）が存在しないことを意味する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】抗体の破壊された又は還元されたジスルフィド結合の２つの隣接するチオール基と反応するリンカーによって確立された共有結合チオール架橋の概要図を示す。
【図２】Ｍｃ−ＶＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを使用して作製された細胞毒素と複合体化した抗Ｈｅｒ−２モノクローナル抗体を含む、例示的な抗Ｈｅｒ−２  ＡＤＣのＳＤＳ−ＰＡＧＥ画像である。
【図３】ＭＳＬ−Ｃ３１のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図４】ＭＳＬ−Ｃ７５の還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果を示す図である。
【図５】ＭＳＬ−Ｃ７５のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図６】ａ）ネイキッド抗体、ｂ）ＣＤ５９−Ｃ７８に対する還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果を示す図である。
【図７】ＣＤ５９−Ｃ７８のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下の詳細な説明では、本発明の例示的で非限定的かつ非網羅的な実施形態を描く添付の図面に言及される。これらの実施形態は、当業者が本発明を実施することができるように十分詳細に記載され、他の実施形態が使用され得ること、また本発明の趣旨又は範囲から逸脱することなく、他の変更を行ってもよいことが理解される。したがって、以下の詳細な説明は限定の意味で取られるものではなく、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ規定される。本明細書において参照又は引用される特許、特許出願、仮出願、及び出版物はいずれも、本明細書の明示的な教示と矛盾しない程度に、全ての図面及び表を含むその全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【００１４】
本発明は、リンカーの１つの末端を介して抗体の２個の遊離チオールに共有結合するとともに、リンカーの別の末端で活性剤に結びつくことが可能な、新規で有利なリンカー分子を提供する。本明細書では、例えば抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を含む抗体／活性剤複合体も提供される。幾つかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＤＣは、活性剤として抗癌剤を組み込む。
【００１５】
定義
本明細書で使用される共通の有機化合物の略語を以下に定義する。
ＢＯＣ  ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＦｍｏＣ  ９−フルオレニルメトキシカルボニル
℃  摂氏温度
ＤＩＰＥＡ  ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ  Ν，Ν’−ジメチルホルムアミド
Ｒ．Ｔ．  室温
ＥｔＯＨ  エタノール
ｈ  時間
Ｅｔ３Ｎ  トリエチルアミン
ＨＯＢｔ  Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
分取ＨＰＬＣ  分取高速液体クロマトグラフィー
ＮａＨＣＯ３  重炭酸ナトリウム
ＤＣＣ  ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＭｅＣＮ  アセトニトリル
ＥＤＣ  １−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＤＩＣ  Ν，Ν’−ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＥＡ  ジエチルアミン
Ｋ２ＣＯ３  炭酸カリウム
Ｍ  モル／リットル
ｍＬ  ミリリットル
ＭｇＳＯ４  硫酸マグネシウム
ＴＨＦ  テトラヒドロフラン
ＣＨ２Ｃｌ２  ジクロロメタン
ＮａＣｌ  塩化ナトリウム
ＮａＳＯ４  硫酸ナトリウム
ＨＣｌ  塩酸
ＬＣ−ＭＳ  液体クロマトグラフィー−質量分析
ＣＨＣｌ３  トリクロロメタン
ＮａＡｃ  酢酸ナトリウム
Ａｃ２Ｏ  無水酢酸
ＴＦＡ  トリフルオロ酢酸
ＮａＯＨ  水酸化ナトリウム
【００１６】
本発明により使用される「活性剤」の用語は、動物に投与された場合に生理学的効果を有する任意の天然又は合成の物質を含む。活性剤は、例えば、温血動物、特にヒトを含む哺乳動物、獣医動物及び家畜を治療するために、本発明に従って利用することができる。活性剤は、腫瘍組織を含む、動物の身体内の又は身体上の所望の標的に対して作用するか、又は該標的において可視化され得る。
【００１７】
「活性剤」の非限定的な例は、シナプスの部位及び神経効果器接合部位に作用する薬物；全身及び局所の鎮痛剤；催眠剤及び鎮静剤；鬱病及び統合失調症等の精神障害の治療薬；抗てんかん薬及び抗痙攣薬；パーキンソン病及びハンチントン病、老化及びアルツハイマー病の治療薬；興奮性アミノ酸拮抗剤、神経栄養因子及び神経再生剤；栄養因子；中枢神経系（ＣＮＳ）の外傷又は卒中の治療を目的とする薬物；依存症及び薬物乱用の治療薬；インフルエンザ、ＨＩＶ、ヘルペス、水痘等の細菌、ウイルス及び／又は微生物の感染症の治療薬；制酸薬及び抗炎症薬；寄生虫感染症及び微生物によって引き起こされた疾患に対する化学療法剤；免疫抑制剤；抗癌剤；ホルモン及びホルモン拮抗剤；重金属及び重金属拮抗剤；非金属毒物に対する拮抗剤；細胞分裂阻害剤；視覚化剤及び他の診断用物質；免疫活性剤及び免疫反応剤；伝達物質並びにそれらの各受容体アゴニスト及び受容体アンタゴニスト、それらの各前駆物質及び代謝産物；トランスポーター阻害剤；抗生物質；鎮痙剤；抗ヒスタミン薬；制吐剤；弛緩剤；興奮剤；センス及びアンチセンスのオリゴヌクレオチド；大脳拡張剤（cerebral dilators）；向精神薬；抗躁薬；血管の拡張剤及び収縮剤；抗高血圧薬；片頭痛治療薬；血糖上昇剤（hyperglycemic agent）及び血糖降下剤；ミネラル剤及び栄養剤；抗肥満薬；アナボリック（anabolics：同化剤）；抗喘息薬；並びにそれらの混合物である。
【００１８】
免疫グロブリンとしても知られる「抗体」は、細菌及びウイルス等の外来物質を識別し、中和するために免疫系によって使用される大きなＹ形のタンパク質である。抗体はシステインジスルフィド結合によって接続される４本のポリペプチド鎖、すなわち２本の同じ重鎖と２本の同じ軽鎖とを有する。
【００１９】
「モノクローナル抗体」は、いずれも特有の親細胞のクローンである同一の免疫細胞によって作られるため、全ての抗体分子が同一である単特異性抗体である。モノクローナル抗体は、骨髄腫細胞を、所望の抗原で免疫したマウス由来脾臓細胞（又はウサギ由来Ｂ細胞）と融合させた後、得られたハイブリドーマをアフィニティー精製等の技術によって精製することにより作製され得る。組み換えモノクローナル抗体を、所望の特異性を有する抗体が得られる可能性のある、わずかに異なるアミノ酸配列を有する抗体のライブラリを生成する免疫グロブリン遺伝子セグメントのクローニングであるレパートリークローニング又はファージディスプレイ／酵母ディスプレイを含む技術によって、マウスではなくウイルス又は酵母細胞で作製してもよい。得られた抗体を発酵によって大規模に作製してもよい。
【００２０】
「キメラ（の）」、「ヒト化（された）」抗体は、モノクローナル抗体の結合部分をコードするマウスＤＮＡを、ヒト抗体を生産するＤＮＡと融合させて、部分的にマウス、部分的にヒトのモノクローナル抗体を生じるような、組み換えのプロセスで使用される本来の（通常はマウス）及びヒトのＤＮＡ配列の組み合わせを含む抗体である。完全ヒト化抗体は、（ヒト抗体を産生するように操作された）トランスジェニックマウス又はファージディスプレイライブラリを使用して産生される。
【００２１】
「リンカー」は、１つは抗体（又はそのフラグメント）等の生物学的部分又はそのフラグメントの結合用、又はそうでなければそれと会合するためのものと、他方は細胞毒素等の活性剤に対する複合体化用のものとの２つの反応性末端を有する部分である。
【００２２】
「細胞毒素」は、癌細胞等の細胞が存在する場合に毒性であるか、又はその細胞に対して重要な機能変化を誘導する実体である。
【００２３】
本明細書で使用される「アルキル」は、完全に飽和された（すなわち、二重結合又は三重結合を含まない）直鎖又は分岐鎖の炭化水素鎖を指す。アルキル基は、１個〜９個の炭素原子を有してもよい（本発明での定義は数値範囲が指定されない「アルキル」の用語の存在も包含するが、本明細書に示される場合は常に、「１〜９」等の数値範囲が所与の範囲内の各整数を指し、例えば、「１個〜９個の炭素原子」は、アルキル基が１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子等の９個までの炭素原子を含むことを意味する）。また、アルキル基は、１個〜９個の炭素原子を有する中級（medium size）アルキルであってもよい。典型的なアルキル基として、何ら限定されないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ターシャリーブチル、ペンチル、ヘキシル等が挙げられる。
【００２４】
本明細書で使用される「アルケニル」は、１以上の二重結合を含む直鎖又は分岐鎖の炭化水素鎖を指す。本発明での定義は数値範囲が指定されない「アルケニル」の用語の存在も包含するが、アルケニル基は２個〜９個の炭素原子を有してもよい。また、アルケニル基は２個〜９個の炭素原子を有する中級アルケニルであってもよい。また、アルケニル基は２個〜４個の炭素原子を有する低級アルケニルであってもよい。アルケニル基は、「Ｃ２〜４アルケニル」又は同様の表示として指定され得る。例に過ぎないが、「Ｃ２〜４アルケニル」は、２個〜４個の炭素原子がアルケニル鎖中にあることを示し、すなわち、アルケニル鎖はエテニル、プロペン−１−イル、プロペン−２−イル、プロペン−３−イル、ブテン−１−イル、ブテン−２−イル、ブテン−３−イル、ブテン−４−イル、１−メチル−プロペン−１−イル、２−メチル−プロペン−１−イル、１−エチル−エテン−１−イル、２−メチル−プロペン−３−イル、ブタ−１，３−ジエニル、ブタ−１，２−ジエニル、及びブタ−１，２−ジエン−４−イルから選択される。典型的なアルケニル基として、何ら限定されないが、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル及びヘキセニル等が挙げられる。
【００２５】
本明細書で使用される「アルキニル」は、１以上の三重結合を含む直鎖又は分岐鎖の炭化水素鎖を指す。本発明での定義は数値範囲を指定しない「アルキニル」の用語の存在も包含するが、アルキニル基は、２個〜９個の炭素原子を有してもよい。また、アルキニル基は、２個〜９個の炭素原子を有する中級アルキニルであってもよい。また、アルキニル基は２個〜４個の炭素原子を有する低級アルキニルであってもよい。アルキニル基は「Ｃ２〜４アルキニル」又は同様の表示として指定され得る。例に過ぎないが、「Ｃ２〜４アルキニル」は、２個〜４個の炭素原子がアルキニル鎖中にあることを示し、すなわち、アルキニル鎖は、エチニル、プロピン−１−イル、プロピン−２−イル、ブチン−１−イル、ブチン−３−イル、ブチン−４−イル、及び２−ブチニルから選択される。典型的なアルキニル基として、何ら限定されないが、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル及びヘキシニル等が挙げられる。
【００２６】
「芳香族」の用語は、共役π電子系を有する環又は環系を指し、炭素環式芳香族基（例えばフェニル）と複素環式芳香族基（例えばピリジン）の両方を含む。全環系が芳香族である場合、上記用語は単環式基又は縮合環多環式基（すなわち、隣接する原子対を共有する環）を含む。
【００２７】
本明細書で使用される「シクロアルキル」は、完全に飽和したカルボシクリル環又は環系を意味する。例として、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルが挙げられる。
【００２８】
本明細書で使用される「ヘテロアリール」は、１以上のヘテロ原子、すなわち、限定されないが、窒素、酸素及び硫黄を含む炭素以外の元素を環骨格中に含む、芳香環又は芳香環系（すなわち、２個の隣接する原子を共有する２以上の縮合環）を指す。ヘテロアリールが環系である場合、該系の環はいずれも芳香族である。本発明での定義は数値範囲が指定されない「ヘテロアリール」の用語の存在も包含するが、ヘテロアリール基は、５個〜１８個の環員（すなわち、炭素原子及びヘテロ原子を含む環骨格を構成する原子の数）を含んでもよい。ヘテロアリール環の例として、限定されないが、フリル、チエニル、フタラジニル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾキサゾリル、ベンゾチアゾリル、インドリル、イソインドリル、及びベンゾチエニルが挙げられる。
【００２９】
本明細書で使用される「ヘテロシクリル」は、環骨格中に少なくとも１つのヘテロ原子を含む非芳香環又は環系を意味する。ヘテロシクリルは、縮合、架橋、又はスピロ接続において共に連結され得る。環系中の少なくとも１つの環が芳香族でなければ、ヘテロシクリルはどのような飽和度を有していてもよい。ヘテロ原子（複数の場合がある）は、環系中の非芳香環又は芳香環のいずれの中にあってもよい。本発明での定義は数値範囲が指定されない「ヘテロシクリル」の用語の存在も包含するが、ヘテロシクリル基は、３個〜２０個の環員（すなわち、炭素原子及びヘテロ原子を含む環骨格を構成する原子の数）を有してもよい。また、ヘテロシクリル基は、３個〜１０個の環員を有する中級ヘテロシクリルであってもよい。また、ヘテロシクリル基は、３個〜６個の環員を有するヘテロシクリルであってもよい。ヘテロシクリル環の例として、限定されないが、アゼピニル、アクリジニル、カルバゾリル、シンノリニル、ジオキソラニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、モルフォリニル、オキシラニル、オキセパニル、チエパニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ジオキソピペラジニル、ピロリジニル、ピロリドニル、ピロリジオニル、４−ピペリドニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、１，３−ジオキシニル、１，３−ジオキサニル、１，４−ジオキシニル、１，４−ジオキサニル、１，３−オキサチアニル、１，４−オキサチイニル、１，４−オキサチアニル、２Ｈ−１，２−オキサジニル、トリオキサニル、ヘキサヒドロ−１，３，５−トリアジニル、１，３−ジオキソリル、１，３−ジオキソラニル、１，３−ジチオリル、１，３−ジチオラニル、イソキサゾリニル、イソキサゾリジニル、オキサゾリニル、オキサゾリジニル、オキサゾリジノニル、チアゾリニル、チアゾリジニル、１，３−オキサチオラニル、インドリニル、イソインドリニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロ−１，４−チアジニル、チアモルフォリニル、ジヒドロベンゾフラニル、ベンズイミダゾリジニル、及びテトラヒドロキノリンが挙げられる。
【００３０】
「（ヘテロシクリル）アルキル」は、置換基としてアルキレン基を介して接続されたヘテロシクリル基である。例として、限定されないが、イミダゾリニルメチル及びインドリニルエチルが挙げられる。
【００３１】
リンカー／活性剤
一態様において、本発明は、式Ｉ：
【化５】
0006714687.tif 000006
（式中、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌはリンカー又はヌルを表し、
Ｍは結合基であり、
Ｑは活性剤又はヌルであり、
ｍは０〜６の整数であり、
ｎは０〜８の整数であり、
Ｒ１及びＲ２は各々、チオールと反応することが可能な官能基である）
として表され得るリンカー活性剤又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００３２】
幾つかの実施形態では、２個のチオール反応性官能基は、各々独立してマレイミド、ハロゲン、ハロゲン置換官能基、アルカナール、アルカノン、スルホニル−アルケン、シラン、イソシアネート、又はノルボルネンを含んでもよいが、両方がマレイミドになることはなく、また両方がハロゲンになることはない。
【００３３】
特定の実施形態では、Ｒ１及びＲ２が各々独立して、
【化６】
0006714687.tif 000007
並びにそれらの誘導体から選択され、
式中、本実施形態では、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７が独立してＨ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、芳香族基（aromatics）、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ９シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ９ヘテロシクリル、ポリエチレングリコール、ＮＯ２、ＣＮ、ＳＣＮ、ＯＲ８、ＳＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１２、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ８、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１１、Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ８、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ１０Ｒ１１、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ９、ＮＲｌ０（Ｃ＝Ｏ）Ｒ１２、ＮＲ１０（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ１０Ｒ１１、Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１１、ＳＯ２Ｒ９、Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲ８、及びそれらの組み合わせから選択され、
Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２が独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、及びそれらの組み合わせから選択され、
Ｘはハロゲンであり、幾つかの実施形態では、ＸがＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩとすることができ、
Ｒ１及びＲ２は同じであっても異なっていてもよい。
【００３４】
幾つかの実施形態では、Ｍが例えば、Ｃ−Ｒ５、Ｎ、Ｂ、Ｐ、Ｓｉ−Ｒ５、芳香族基、ヘテロアリール、シクロアルキル、及び（ヘテロシクリル）アルキルから選択され、Ｒ５がＨ、Ｃｌ〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、及びＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択される。
【００３５】
他の実施形態では、Ｍは、
【化７】
0006714687.tif 000008
からなる群から選択される。
【００３６】
特定の実施形態では、Ｍは、
【化８】
0006714687.tif 000009
から選択される。
【００３７】
幾つかの実施形態では、Ｑは活性剤であり、チューブリン結合剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレータ、酵素阻害剤、免疫調節剤、ペプチド、及びヌクレオチドからなる群から選択される。
【００３８】
幾つかの実施形態では、Ｑはマイタンシノイド、アウリスタチン、カリケアマイシン、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、及びピロロベンゾジアゼピンからなる群から選択される。
【００３９】
或る特定の実施形態では、Ｑは、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ、ＰＢＤ二量体、ＤＭ１及びＤＭ４から選択される。活性剤は、例えば、国際公開第２０１３０８５９２５号（その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）に開示されるもののいずれかであってもよい。「薬物」及び「活性剤」は本明細書において同じ意味で使用される。
【００４０】
幾つかの実施形態では、内部結合部分Ｌ１及びＬ２が各々独立してＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、芳香族基、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ９シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ９ヘテロシクリル、ポリエチレングリコール、Ｏ、Ｓ、ＮＲ６、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６、Ｃ＝ＮＲ６、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ、ＮＲ６（Ｃ＝Ｏ）、ＮＲ６（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ７、Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ６、Ｓ（＝Ｏ）２及びそれらの任意の組み合わせから選択され、
式中、本実施形態では、Ｒ６及びＲ７が独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、及びＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択される。
【００４１】
他の実施形態では、Ｌ１及びＬ２は各々独立して、
【化９】
0006714687.tif 000010
から選択されるか、又はヌルである。
【００４２】
或る特定の実施形態では、Ｌ１及びＬ２は各々独立して、
【化１０】
0006714687.tif 000011
から選択されるか、又はヌルである。
【００４３】
Ｌは結合基Ｍに対して活性剤Ｑを接続するリンカーを表す。幾つかの実施形態では、Ｌは切断不可単位を含み、他の実施形態ではＬは切断可能単位を含む。リンカー／活性剤複合体は、１個のリンカー、２個のリンカー、３個のリンカー、４個のリンカー、５個のリンカー、又は６個のリンカーを有してもよい。
【００４４】
幾つかの実施形態では、Ｌが独立してＣ１〜Ｃ９アルキル、Ｃ２〜Ｃ９アルケニル、Ｃ２〜Ｃ９アルキニル、芳香族基、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ９シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ９ヘテロシクリル、ポリエチレングリコール、Ｏ、Ｓ、ＮＲ８、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ８、Ｃ＝ＮＲ８、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ８、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ、ＮＲ８（Ｃ＝Ｏ）、ＮＲ８（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ９、Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ８、Ｓ（＝Ｏ）２、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢ及びそれらの任意の組み合わせから選択される。
【００４５】
本実施形態では、Ｒ８及びＲ９が独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、及びＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択される。
【００４６】
幾つかの実施形態では、Ｌはヌルである。Ｌがヌルの場合、活性剤ＱはＭに直接接続される。
【００４７】
幾つかの実施形態では、Ｌは独立して、
【化１１】
0006714687.tif 000012
0006714687.tif 000013
からなる群から選択されるか、又はヌルである。
【００４８】
幾つかの実施形態では、Ｌは独立して下記：
【化１２】
0006714687.tif 000014
のような群から選択されるか、又はヌルである。
【００４９】
幾つかの実施形態では、リンカー−活性剤複合体は下記式Ｉの構造を有する。
【化１３】
0006714687.tif 000015
【００５０】
幾つかの実施形態では、リンカー−活性剤複合体は下記式Ｉの構造を有する。
【化１４】
0006714687.tif 000016
【００５１】
幾つかの実施形態では、リンカー−活性剤複合体は下記式Ｉの構造を有する。
【化１５】
0006714687.tif 000017
【００５２】
幾つかの実施形態では、リンカー−活性剤複合体は下記式Ｉの構造を有する。
【化１６】
0006714687.tif 000018
【００５３】
幾つかの実施形態では、リンカー−活性剤複合体は下記式Ｉの構造を有する。
【化１７】
0006714687.tif 000019
【００５４】
幾つかの実施形態では、リンカー−活性剤複合体は下記式Ｉの構造を有する。
【化１８】
0006714687.tif 000020
【００５５】
幾つかの実施形態では、リンカー−活性剤複合体は下記式Ｉの構造を有する。
【化１９】
0006714687.tif 000021
【００５６】
幾つかの実施形態では、リンカー−活性剤複合体は下記式Ｉの構造を有する。
【化２０】
0006714687.tif 000022
【００５７】
幾つかの実施形態では、リンカー−活性剤複合体は下記式Ｉの構造を有する。
【化２１】
0006714687.tif 000023
【００５８】
幾つかの実施形態では、リンカー−活性剤複合体は下記式Ｉの構造を有する。
【化２２】
0006714687.tif 000024
【００５９】
幾つかの実施形態では、リンカー−活性剤複合体は下記式Ｉの構造を有する。
【化２３】
0006714687.tif 000025
【００６０】
幾つかの実施形態では、リンカー−活性剤複合体は下記式Ｉの構造を有する。
【化２４】
0006714687.tif 000026
【００６１】
別の態様では、本発明は、下記式ＩＩ：
【化２５】
0006714687.tif 000027
を有する抗体薬物複合体又はその薬学的に許容可能な塩を提供し、
Ａはターゲッティング部分であり、
Ｓはターゲッティング部分のチオール基の硫黄原子であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌはリンカー又はヌルを表し、
Ｍは結合基であり、
Ｑは活性剤又はヌルであり、
ｍは０〜６から選択される整数であり、
ｎは０〜８から選択される整数であり、
Ｒ３及びＲ４は各々、Ｓと、チオールと反応することができる官能基との間の反応の結果として形成される。
【００６２】
幾つかの実施形態では、チオールと反応する官能基は、独立してマレイミド、ハロゲン、ハロゲン置換官能基、アルカナール、アルカノン、スルホニル−アルケン、シラン、イソシアネート、又はノルボルネンを含んでもよいが、両方がマレイミドになることはなく、また両方がハロゲンになることはない。
【００６３】
或る特定の実施形態では、Ｒ３及びＲ４が各々独立して、チオール基と、
【化２６】
0006714687.tif 000028
並びにそれらの誘導体から選択される基との反応の結果として形成され、
式中、本実施形態では、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７が独立してＨ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、芳香族基、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ９シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ９ヘテロシクリル、ポリエチレングリコール、ＮＯ２、ＣＮ、ＳＣＮ、ＯＲ８、ＳＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１２、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ８、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１１、Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ８、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ１０Ｒ１１、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ９、ＮＲ１０（Ｃ＝Ｏ）Ｒ１２、ＮＲ１０（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ１０Ｒ１１、Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１１、ＳＯ２Ｒ９、Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲ８、及びそれらの組み合わせから選択され、
式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２が独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、及びそれらの組み合わせから選択される。
【００６４】
或る特定の実施形態では、Ｒ３及びＲ４は１０個以下、好ましくは５以下の炭素原子を有し、環状である及び／又はケトン基を含む。
【００６５】
特定の実施形態では、Ｒ３及びＲ４が各々独立して、
【化２７】
0006714687.tif 000029
及びそれらの誘導体から選択される。一実施形態では、Ｒ３及びＲ４は２個のスルフヒドリル基を連結し、抗体の軽鎖−重鎖をより安定にすることができる。
【００６６】
Ｒ３又はＲ４がヌルである場合、Ｌ１又はＬ２はターゲッティング部分に直接複合体化される。
【００６７】
Ｒ３及びＲ４は同じであっても異なっていてもよい。
【００６８】
Ｒ３のみが、
【化２８】
0006714687.tif 000030
であり、Ｒ３及びＲ４は同じであってもよい。
【００６９】
幾つかの実施形態では、Ｍが例えば、Ｃ−Ｒ５、Ｃ、Ｎ、Ｂ、Ｐ、Ｓｉ−Ｒ５、芳香族基、ヘテロアリール、シクロアルキル、及び（ヘテロシクリル）アルキルから選択され、Ｒ５がＨ、Ｃｌ〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、及びＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択される。他の実施形態では、Ｍは、
【化２９】
0006714687.tif 000031
からなる群から選択される。
【００７０】
或る特定の実施形態では、Ｍは、
【化３０】
0006714687.tif 000032
から選択される。
【００７１】
幾つかの実施形態では、Ｑは活性剤であり、チューブリン結合剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレータ、酵素阻害剤、免疫調節剤、ペプチド、及びヌクレオチドからなる群から選択される。「薬物」及び「活性剤」は本明細書において同じ意味で使用される。
【００７２】
幾つかの実施形態では、Ｑはマイタンシノイド、アウリスタチン、カリケアマイシン、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、及びＰＢＤからなる群から選択される。
【００７３】
或る特定の実施形態では、Ｑは、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ、ＰＢＤ、ＤＭ１及びＤＭ４から選択される。活性剤は、例えば、国際公開第２０１３０８５９２５号（その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）に開示されるもののいずれかであってもよい。
【００７４】
幾つかの実施形態では、内部結合部分Ｌ１及びＬ２が各々独立してＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、芳香族基、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ９シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ９ヘテロシクリル、ポリエチレングリコール、Ｏ、Ｓ、ＮＲ６、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６、Ｃ＝ＮＲ６、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ、ＮＲ６（Ｃ＝Ｏ）、ＮＲ６（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ７、Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ６、Ｓ（＝Ｏ）２及びそれらの任意の組み合わせから選択される。
【００７５】
ここで、本実施形態では、Ｒ６及びＲ７が独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、及びＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択される。
【００７６】
他の実施形態では、Ｌ１及びＬ２は各々独立して、
【化３１】
0006714687.tif 000033
から選択されるか、又はヌルである。
【００７７】
或る特定の実施形態では、Ｌ１及びＬ２は各々独立して、
【化３２】
0006714687.tif 000034
から選択されるか、又はヌルである。
【００７８】
Ｌは結合基Ｍに対して薬物Ｑを接続するリンカーを表す。幾つかの実施形態では、Ｌは切断不可単位を含み、他の実施形態ではＬは切断可能単位を含む。抗体薬物複合体は、１個のリンカー、２個のリンカー、３個のリンカー、４個のリンカー、５個のリンカー、又は６個のリンカーを有してもよい。
【００７９】
幾つかの実施形態では、Ｌが独立してＣ１〜Ｃ９アルキル、Ｃ２〜Ｃ９アルケニル、Ｃ２〜Ｃ９アルキニル、芳香族基、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ９シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ９ヘテロシクリル、ポリエチレングリコール、Ｏ、Ｓ、ＮＲ８、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ８、Ｃ＝ＮＲ８、Ｃ（＝Ｓ）Ｏ、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ８、Ｃ（＝Ｓ）Ｓ、ＮＲ８（Ｃ＝Ｏ）、ＮＲ８（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ９、Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ８、Ｓ（＝Ｏ）２、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ、ＰＡＢ及びそれらの任意の組み合わせから選択される。
【００８０】
ここで、本実施形態では、Ｒ８及びＲ９が独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、及びＣ２〜Ｃ６アルキニルから選択される。
【００８１】
幾つかの実施形態では、Ｌはヌルである。Ｌがヌルの場合、活性剤ＱはＭに直接接続される。
【００８２】
幾つかの実施形態では、Ｌは独立して、
【化３３】
0006714687.tif 000035
0006714687.tif 000036
0006714687.tif 000037
からなる群から選択されるか、又はヌルである。
【００８３】
幾つかの実施形態では、Ｌは独立して下記：
【化３４】
0006714687.tif 000038
0006714687.tif 000039
のような群から選択されるか、又はヌルである。
【００８４】
Ａはターゲッティング部分である。幾つかの実施形態では、Ａは抗体、抗体のフラグメント、サロゲート（surrogate）若しくは変異体、タンパク質リガンド、タンパク質スキャフォールド、ペプチド、又は低分子リガンドである。抗体フラグメントは、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、又はｓｃＦｖ、Ｆｖであってもよい。
【００８５】
本発明に従って標的化され得る腫瘍関連抗原の例として、限定されないが、以下に列挙される腫瘍関連抗原（１）〜（３６）が挙げられる。各抗原例の名称、代替名、及びＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号を提示する。これらの例示的な腫瘍関連抗原に対応する核酸及びタンパク質の配列は、ＧｅｎＢａｎｋ等の公的データベースに見ることができる。
【００８６】
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（１Ｂ型骨形成タンパク質受容体、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００１２０３）；
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ｂａｎｄｉｔ＿００：３４８６）；
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通型上皮抗原、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０１２４４９）；
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５、ＭＵＣ１６、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ３６１４８６）；
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球強化因子、メソテリン、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００５８２３）；
（６）Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰ１−３Ｂ、ＮＰＴＩｌｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質輸送体ファミリー３４メンバー（リン酸ナトリウム）メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００６４２４）；
（７）Ｓｅｍａ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ  Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７回トロンボスポンジンリピート（Ｉ型及びＩ型）、膜貫通領域（ＴＭ）及び短い細胞質領域、（セマフォリン）５ｂ、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＢ０４０８７８）；
（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８０１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮｃＤＮＡ２７０００５０Ｃ１２遺伝子、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＹ３５８６２８）；
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ受容体、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＹ２７５４６３）；
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、偽タンパク質ＦＬＪ２０３１５、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０１７７６３）；
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ  Ｉ、ＳＴＡＭＰ  Ｉ及びＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子Ｉ、前立腺癌関連タンパク質Ｉ、前立腺の６回膜貫通型上皮抗原２、６回膜貫通型前立腺タンパク質、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ４５５１３８）；
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位陽イオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０１７６３６）；
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦＩ、奇形腫由来増殖因子、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００３２０３又はＮＭ＿００３２１２）；
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（２型補体受容体）又はＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／ＥＢウイルス受容体）、又はＨｓ．７３７９２、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｍ２６００４）；
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連β）、Ｂ２９、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０００６２６）；
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメインのホスファターゼアンカータンパク質Ｉａを含む）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０３０７６４）；
（１７）ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｍ１１７３０）；
（１８）ＮＣＡ（ＣＥＡＣＡＭ６、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｍ１８７２８）；
（１９）ＭＤＰ（ＤＰＥＰ１、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＢＣ０１７０２３）；
（２０）ＩＬ２０Ｒａ（ＩＬ２０Ｒａ、ＺＣＹＴ０Ｒ７、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ１８４９７１）；
（２１）Ｂｒｅｖｉｃａｎ（ＢＣＡＮ、ＢＥＨＡＢ、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ２２９０５３）；
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ（ＤＲＴ、ＥＲＫ、Ｈｅｋ５、ＥＰＨＴ３、Ｔｙｒｏ５、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００４４４２）；
（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｂ７ｈ、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＸ０９２３２８）；
（２４）ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原フォーマー体（former body）、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＪ２９７４３６）；
（２５）ＧＥＤＡ（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＹ２６０７６３）；
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ１１６４５６）；
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＫ０２６４６７）；
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９ａ、Ｉｇ（ＣＤ７９Ｂ）との共有結合的相互作用が可能であり、表面上でＩｇＭ分子と複合物（complex）を形成する免疫グロブリン関連α、Ｂ細胞シグナル特異的タンパク質に関与する導入Ｂ細胞、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１７７４．１）；
（２９）ＣＸＣＲ５（ケモカインＣＸＣＬ１３によって活性化されるＧタンパク質共役型受容体であるバーキットリンパ腫受容体１は、リンパ球の遊走及び液性防御に役割を果たし、恐らくＨＩＶ−２感染、ＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫及び白血病に影響する、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１７０１．１）；
（３０）ＨＬＡ−Ｄ０Ｂ（ペプチドを結合し、小さなリンパ（small lymphoid）においてＣＤ４＋Ｔ細胞にそれらを提示するベータサブユニット（Ｉａ抗原）のＭＨＣＩＩ分子、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００２１１１．１）；
（３１）Ｐ２Ｘ５（細胞外ＡＴＰ開口型イオンチャネルであるＰ２Ｘプリン作動性受容体リガンド開口型イオンチャネル５は、シナプス伝達及び神経新生に関与し、その欠損は特発性排尿筋不安定の病態生理を引き起こす可能性がある、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００２５５２．２）；
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１７７３．１）；
（３３）ＬＹ６４（ロイシンリッチリピートＩ型膜タンパク質（ＬＲＲ）ファミリーであるリンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）は、Ｂ細胞活性化、アポトーシス及び機能喪失を調節し、全身性紅斑性狼瘡の患者において活性の増加に関与する可能性がある、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００５５７３．１）；
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｅ１受容体様タンパク質である免疫グロブリンドメイン受容体の推定上のＦｃはＣ２型Ｉｇ様ドメイン及びＩＴＡＭドメインを含み、Ｂ細胞分化に役割を果たす可能性がある、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿４４３１７０．１）；
（３５）ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリー転座関連受容体２、推定上の免疫受容体は、Ｂ細胞発生及びリンパ腫発生に役割を果たす可能性がある；転座によって引き起こされる遺伝的障害は、幾つかのＢ細胞悪性腫瘍において起こる、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿１１２５７１．１）；
（３６）ＴＥＮＢ２（推定上の膜貫通性プロテオグリカン、増殖因子ＥＧＦ／ヘレグリンファミリー及びホリスタチンに関連する、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ１７９２７４）。
【００８７】
或る特定の実施形態では、Ａは腫瘍関連抗原を標的とするヒト化モノクローナル抗体である。ヒト化抗体は、限定されないが、トラスツズマブ（抗ＨＥＲ２）、ペルツズマブ（抗ＨＥＲ２）、リツキシマブ（抗ＣＤ２０）、アレムツズマブ（抗ＣＤ５２）、ベバシズマブ（抗ＶＥＧＦ）、アダリムマブ（抗ＴＮＦ−アルファ）、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ）、アマツキシマブ（抗メソテリン）、ブリナツモマブ（抗ＣＤ１９）、ブレンツキシマブ（抗ＣＤ３０）、セルトリズマブペゴール（抗ＴＮＦ−アルファ）、パニツムマブ（抗ＥＧＦＲ）、ニモツズマブ（抗ＥＧＦＲ）、ゲムツズマブ（抗ＣＤ３３）、ゴリムマブ（抗ＴＮＦ−アルファ）、イブリツモマブ（抗ＣＤ２０）、インフリキシマブ（抗ＴＮＦ−アルファ）、イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ−４）、オファツムマブ（抗ＣＤ２０）、及びトシツモマブ（抗ＣＤ２０）であってもよい。
【００８８】
幾つかの実施形態では、抗体薬物複合体は下記式ＩＩの構造を有する。
【化３５】
0006714687.tif 000040
【００８９】
幾つかの実施形態では、抗体薬物複合体は下記式ＩＩの構造を有する。
【化３６】
0006714687.tif 000041
【００９０】
幾つかの実施形態では、抗体薬物複合体は下記式ＩＩの構造を有する。
【化３７】
0006714687.tif 000042
【００９１】
幾つかの実施形態では、抗体薬物複合体は下記式ＩＩの構造を有する。
【化３８】
0006714687.tif 000043
【００９２】
幾つかの実施形態では、抗体薬物複合体は下記式ＩＩの構造を有する。
【化３９】
0006714687.tif 000044
【００９３】
幾つかの実施形態では、抗体薬物複合体は下記式ＩＩの構造を有する。
【化４０】
0006714687.tif 000045
【００９４】
幾つかの実施形態では、抗体薬物複合体は下記式ＩＩの構造を有する。
【化４１】
0006714687.tif 000046
【００９５】
幾つかの実施形態では、抗体薬物複合体は下記式ＩＩの構造を有する。
【化４２】
0006714687.tif 000047
【００９６】
幾つかの実施形態では、抗体薬物複合体は下記式ＩＩの構造を有する。
【化４３】
0006714687.tif 000048
【００９７】
幾つかの実施形態では、抗体薬物複合体は下記式ＩＩの構造を有する。
【化４４】
0006714687.tif 000049
【００９８】
幾つかの実施形態では、抗体薬物複合体は下記式ＩＩの構造を有する。
【化４５】
0006714687.tif 000050
【００９９】
幾つかの実施形態では、抗体薬物複合体は下記式ＩＩの構造を有する。
【化４６】
0006714687.tif 000051
【０１００】
或る特定の実施形態では、上記化合物において、限定されないが、Ａはトラスツズマブを含む。
【０１０１】
治療的使用
或る特定の実施形態では、本発明の複合体は、限定されないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫及び白血病を含む癌、又はリンパ性悪性腫瘍の治療を提供する。かかる癌の更なる特定の例として、扁平細胞癌（squamous cell cancer）（例えば扁平上皮癌（epithelial squamous cell cancer））；小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌及び肺の扁平上皮癌を含む肺癌；腹膜の癌；肝細胞癌；消化器癌を含む胃癌（gastric or stomach cancer）；膵癌；膠芽腫；子宮頸癌；卵巣癌；口腔癌；肝臓癌（liver cancer）；膀胱癌；尿路の癌；肝癌（hepatoma）；例えばＨＥＲ２陽性乳癌を含む乳癌；大腸癌；直腸癌；結腸直腸癌；子宮内膜癌又は子宮癌；唾液腺癌；腎癌（kidney or renal cancer）；前立腺癌；外陰部癌；甲状腺癌；肝臓の癌（hepatic carcinoma）；肛門癌；陰茎癌；黒色腫；多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫；脳腫瘍；頭頸部癌；並びに関連する転移が挙げられる。
【０１０２】
また、本発明の複合体を、限定されないが、炎症性障害、自己免疫障害、神経系の障害及び心血管障害を含む様々な他の状態の治療に対して、活性剤を送達するために使用することもできる。
【０１０３】
診断的使用
他の実施形態では、本発明の複合体は活性剤として検出可能な実体を含む。検出可能な実体は、例えば、可視化剤であってもよい。該薬剤は合成製品又は天然産物であってもよく、顕微鏡等の好適な画像化及び／又は診断用の機器によって検出可能な波長で光を反射するか発することができる。好適な可視化剤の非限定的な例として、有機染料、食用色素、及び蛍光染料が挙げられる。
【０１０４】
したがって、一実施形態では、本発明は、目的の分析物を有することが疑われる試料と、本発明の抗体薬物複合体とを接触させることを含む診断方法であって、上記ターゲット部分が目的の分析物に選択的に結合し、Ｑが検出可能な実体、及び／又は１以上の追加の実体が結合する実体であり、該１以上の追加の実体自体が検出可能な実体であり、上記方法が上記試料を分析して、検出可能な実体の存在を判定することを更に含み、その存在が目的の分析物の存在の指標となる、診断方法を提供する。一実施形態では、上記分析物はＨＥＲ２又は癌と関連する他の抗原である。ｉｎ  ｖｉｖｏで又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで上記方法を行ってもよい。
【０１０５】
複合体の生物学的活性
本明細書における本発明の複合体を、既知の方法を使用して効力及び毒性について評価することができる。例えば、特定の化合物の毒性評価（toxicology）、又は或る特定の化学部分を共有する化合物のサブセットの毒性評価は、哺乳動物の細胞株、好ましくはヒトの細胞株等に対するｉｎ−ｖｉｔｒｏ毒性を判定することによって確立され得る。かかる研究の結果は、哺乳動物、又はより具体的にはヒト等の動物における毒性の予測であることが多い。代替的には、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、又はサル等の動物モデルにおける特定の化合物の毒性を既知の方法を使用して判定することができる。
【０１０６】
特定の化合物の効力は、ｉｎ−ｖｉｔｒｏ法、動物モデル、又はヒト臨床試験等の当該技術分野で認識される方法を使用して確立され得る。癌、心血管疾患、及び様々な免疫系機能不全、並びに感染性疾患を含む、本明細書に開示される化合物によって緩和される状態を含む、ほぼ全ての種類の状態について、当該技術分野で認識されるｉｎ−ｖｉｔｒｏモデルが存在する。同様に、許容可能な動物モデルを使用して、かかる状態を治療するための化学物質の効力を確立することができる。効力を判定するためにモデル選択する場合、当業者は、適切なモデル、用量、並びに投与経路及び投与計画を選択するため最先端の技術水準によって導くことができる。
【０１０７】
本明細書で提供される複合物を、抗体のアッセイに従来使用される方法のいずれかによって所望の標的に対する結合親和性及び特異性についてアッセイしてもよい。上記複合物を、細胞培養物に対する効能に関するアッセイ、異種移植片アッセイ等といった、細胞分裂阻害剤／細胞毒性剤のアッセイに従来使用される方法のいずれかによって、抗癌剤としての効力についてアッセイしてもよい。
【０１０８】
本開示の利益を有する当業者は、利用可能な技術及び文献を考慮すれば、好適なアッセイ技術の決定において；それらのアッセイの結果から、抗癌剤としてヒトにおいて試験するための好適な用量の決定において；またそれらの試験の結果から、ヒトにおいて癌を治療するために使用される好適な用量の決定において困ることはないであろう。
【０１０９】
製剤化及び投与
本発明の組成物は、本明細書に記載される複合物に加えて、投与後に動物において標的への複合物の輸送を可能とする生理学的に許容可能な担体及び／又は希釈剤を含む。担体及び／又は希釈剤は、一般的には、それによって所望の目的が達成され、所望の標的に向けられる複合体の能力に影響を及ぼさない、また所望の効果のためこの標的に活性剤を輸送する任意の好適な媒質とすることができる。特に、担体及び／又は希釈剤は、動物の身体内で又は身体に対して所望の標的に向けられる活性剤の薬理学的効能及び複合物の能力を低下させるものであってはならない。上記担体及び／又は希釈剤は、水、塩及び／又はバッファーを含む生理学的に許容可能な水溶液、並びに動物への投与に関して許容可能な任意の他の溶液から選択されることが好ましい。かかる担体及び希釈剤は当業者によく知られており、例えば、蒸留水、脱イオン水、純水又は超純水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、薬物標的システムの他の成分と適合する通常のバッファーを含む溶液等であってもよい。
【０１１０】
上記組成物は、限定されないが、（ａ）カプセル剤、錠剤、顆粒剤、スプレー剤、シロップ剤、又は他のかかる形態での投与を含む経口経路による投与；（ｂ）水性懸濁液、油性製剤等、又は点滴、坐剤、膏薬、軟膏等としての投与を含む非経口経路による投与；皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮内等の注射による投与；また同様に、本発明の実施形態の化合物を生きた組織と接触させるため当業者によって適切であるとされる（ｃ）局所投与、（ｄ）直腸投与、又は（ｅ）経膣投与；並びに（ｆ）制御放出製剤、デポ製剤及び輸液ポンプ送達による投与、を含む方法によって被験体に投与され得る。
【０１１１】
かかる投与様式の更なる例として、また投与様式の更なる開示として、眼内、鼻腔内、及び耳介内の経路による投与様式を含む、開示される化合物及び医薬組成物の投与に関する様々な方法が本明細書に開示される。
【０１１２】
特定の実施形態では、本発明の複合物は、静脈内投与用の溶液として、又は静脈内溶液を調製するための再構成用凍結乾燥濃縮物（例えば、通常の生理食塩水、５％デキストロース、又は同様の等張溶液により再構成される）として製剤化され得る。本発明の複合物は、典型的には静脈内の注射又は点滴によって投与される。医薬の製剤化、特に抗癌抗体の製剤化の技術分野の当業者は、利用可能な技術及び文献を考慮すれば、好適な製剤の開発に困ることはないであろう。
【実施例】
【０１１３】
以下は、本発明を実施するための手順を示す実施例である。これらの実施例は限定するよう解釈されるべきものではない。
【０１１４】
実施例Ｉ  リンカー−活性剤複合体の合成
実施例Ｉ−１  化合物９の合成
【化４７】
0006714687.tif 000052
ｉ）Ｅｔ３Ｎ、ＭｅＯＨ、室温、２時間；ｉｉ）ＮａＨ、ＴＨＦ、室温、５時間；ｉｉｉ）塩酸、１，４−ジオキサン、室温、１６時間；ｉｖ）ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ／ＴＨＦ、室温、３時間；ｖ）ＨＯＢｔ、ＤＩＣ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、室温、１２時間；ｖｉ）Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、２時間。
【０１１５】
化合物２の合成
１，３−ジアミノ−２−プロパノール（３．１５ｇ、０．０３５ｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（４．８５ｍＬ、０．０３５ｍｏｌ）のメタノール（１２０ｍＬ）溶液を４５℃に加熱した。メタノール（８０ｍＬ）中（Ｂｏｃ）２Ｏ（１７．０５ｇ、０．０７８ｍｏｌ）を該溶液に徐々に滴加した。該反応溶液を４５℃で３０分間撹拌した。更に室温で１．５時間撹拌した後、減圧下で溶媒を除去した。粗生成物をジエチルエーテル（２００ｍＬで３回）で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させて白色粉末として化合物２（９．９４ｇ、９７．８％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、２９１．１９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１６】
化合物３の合成
ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（５．４１ｍＬ、３３．５ｍｍｏｌ）を室温で化合物２（３．８９ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液に添加した。その後、該溶液に水素化ナトリウム（鉱物油中６０％の分散物、２．４２ｇ、６０．５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を５時間後に濾過した。濾液を蒸発させ、残渣をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１〜５：１）によって精製して白色固体として生成物３（３．９６ｇ、７３．１％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、４０５．２６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１７】
化合物４の合成
５ｍＬの塩酸を化合物３（１．０ｇ、２．５ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）撹拌溶液に室温で添加した。反応を１６時間後に完了した。その後、溶媒を除去して白色の粗生成物（３８４．２ｍｇ、６９．８％）を得た。生成物４は精製せずに次の工程で使用可能であった。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、２２１．０５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１８】
化合物５の合成
０℃の化合物４（２４２．１ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の飽和重炭酸ナトリウム溶液／ＴＨＦ（体積／体積＝１：１、２０ｍＬ）溶液に塩化アクリロイル（２６７μＬ、３．３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を０℃で勢いよく撹拌した。１０分後、溶液を室温にし、３時間反応させた。混合物を塩酸で酸性化してｐＨ４未満に調整した。該混合物を酢酸エチル（５０ｍＬで２回）で抽出した。有機層を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液（４０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過して溶媒を除去した。固体残渣を分取ＨＰＬＣによって精製し、灰色の粉末として生成物５（１９６．０ｍｇ、６９．６％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、２５７．１２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１９】
化合物７の合成
０℃の化合物５（２５．６ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１６．５μｌ、０．１０ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（６ｍｌ）撹拌溶液にＨＯＢｔ（１４．９ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）及びＤＩＣ（１３．９ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を添加した。１５分後、化合物６（２０．５ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を該溶液に添加した。反応混合物を室温まで温め、一晩撹拌した。該混合物を水（１０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬで３回）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を真空で除去した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１）によって精製し、白色固体として化合物７（２４．３ｍｇ、６２．６％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、４６７．２２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２０】
化合物９の合成
化合物７（１４０．１ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、氷浴中０℃に冷却した。Ｅｔ３Ｎ（１ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）及び化合物８（７３．７ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を得られた混合物に添加し、撹拌しながら３０分間放置した。溶液を室温まで温め、更に１．５時間撹拌した。減圧下で溶媒を除去し、固体残渣を分取ＨＰＬＣによって精製して白色粉末として化合物９（９０ｍｇ、７４．８％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１２０４．４９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２１】
実施例Ｉ−２  化合物１７の合成
【化４８】
0006714687.tif 000053
ｉ）Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、５時間；ｉｉ）Ｅｔ３Ｎ、ＴＨＦ、室温、４時間；ｉｉｉ）ＣＨ２Ｃｌ２、室温、１２時間；ｉｖ）ＴＦＡ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、３時間；ｖ）Ｋ２ＣＯ３、Ｈ２Ｏ／ＥｔＯＡｃ、室温、５ｈ；ｖｉ）ＨＯＢｔ、ＤＩＣ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、室温、２４時間。
【０１２２】
化合物１１の合成
化合物１０（２６３．３ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）に溶解し、Ｅｔ３Ｎ（５．９μＬ、０．０４ｍｍｏｌ）及び化合物６（３００．１ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を０℃の得られた混合物に添加した。溶液を室温に温め、５時間維持した。真空で溶媒を除去し、粗生成物を分取ＨＰＬＣによって精製して白色固体として化合物１１（１９３．２ｍｇ、４９．７％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、９９４．４３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２３】
化合物１３の合成
ＴＨＦ（１５ｍＬ）中の化合物１２（０．４５ｇ、４．２ｍｏｌ）とＥｔ３Ｎ（８ｍＬ、０．０６ｍｏｌ）との混合物に、２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルオキシイミノ）−２−フェニルアセトニトリル（２．１ｇ、８．３ｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液を０℃で滴加した。添加の完了に続いて、溶液を室温に温め、撹拌しながら４時間放置した。反応混合物を減圧下で油になるまで濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）を添加した。該混合物を水酸化ナトリウム（５％、３０ｍＬ）及び塩水（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝１：１０、体積／体積）によって精製し、黄色の油として化合物１３（８０３．１ｍｇ、６０．７％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、３０４．２２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２４】
化合物１４の合成
無水コハク酸（２６５．２ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ）を化合物１３（８００．１ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液に添加した。混合物を一晩室温で撹拌した後、減圧下で油になるまで濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝１：８、体積／体積）で精製し、灰色の油として化合物１４（５０６．５ｍｇ、４７．６％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、４０４．２４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２５】
化合物１５の合成
化合物１４（５０３．５ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（２ｍＬ）と共にＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解した。溶液を室温で３時間反応させた。減圧下で溶媒を除去し、更に精製することなく灰色の油として化合物１５（１９０．２ｍｇ、７５．１％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、２０４．１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２６】
化合物１６の合成
水（５ｍＬ）中の炭酸カリウム（６８．３ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）と酢酸エチル（１０ｍＬ）中の化合物１５（６７．２ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）との混合物に、塩化アクリロイル（５３．６μＬ、０．６７ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（１０ｍＬ）溶液を０℃で滴加した。得られた混合物を氷浴中０℃で１０分間撹拌した後、室温で５時間反応させた。混合物を塩酸で酸性化してｐＨ５未満に調整した。該混合物を酢酸エチル（２０ｍＬで２回）で抽出した。有機層を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を除去した。固体残渣をカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝１０：１）によって精製し、黄色油として生成物１６（６３．１ｍｇ、６１．７％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、３１２．１５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２７】
化合物１７の合成
化合物１６（２２．２ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（９．７ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及びＤＩＣ（１１μＬ、０．０７ｍｍｏｌ）を８ｍＬのＤＭＦに溶解し、氷浴中０℃に冷却した。その後、化合物１１（５９．１ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１２．４μＬ、０．０７ｍｍｏｌ）を混合物に添加した。溶液を室温まで温め、放置して２４時間反応させた。得られた混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して白色固体として化合物１７（１１．３ｍｇ、３９．５％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１２８７．５６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１２８】
実施例Ｉ−３  化合物２５の合成
【化４９】
0006714687.tif 000054
ｉ）ＨＯＢｔ、ＤＩＰＥＡ、ピリジン、ＤＭＦ、室温、３２時間；ｉｉ）ＤＥＡ、ＤＭＦ、室温、２時間；ｉｉｉ）Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、４時間；ｉｖ）Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、１２時間；ｖ）ＥＤＣＩ、ＨＯＢｔ、ＤＩＰＥＡ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、２４時間。
【０１２９】
化合物２０の合成
窒素下で０℃の化合物１８（１９１．６ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（１５ｍＬ）撹拌溶液に、ＨＯＢｔ（３３．８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及び化合物１９（１９７．３ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を添加した。１５分後、ピリジン（３ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（５２．４μＬ、０．３０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で３０分間反応させた。その後、反応混合物を室温まで温め、３時間撹拌した。該混合物にＤＩＰＥＡ（５２．４μＬ、０．３０ｍｍｏｌ）を補充し、３２時間反応させた。反応の完了に際して、減圧下で溶媒を除去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝２０：１）で精製し、白色固体として化合物２０（１２６．４ｍｇ、３７．５％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１３４４．７７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３０】
化合物２１の合成
ジエチルアミン（４ｍＬ、３８．８ｍｍｏｌ）を室温で化合物２０（１２６．４ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（８ｍＬ）溶液に添加した。２時間撹拌した後、減圧下で溶媒を除去し、粗生成物２１（１０４．１ｍｇ、９９％）を得た。該生成物は精製せずに次の工程で使用可能であった。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１１２３．７２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３１】
化合物２３の合成
塩化アクリロイル（７．３１ｍＬ、９０．００ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）溶液を、アルゴン下の０℃の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）中の化合物２２（２．６４ｇ、２０．００ｍｍｏｌ）とＥｔ３Ｎ（１６．６０ｍＬ、１２０．００ｍｍｏｌ）との混合物に滴加した。混合物を室温にし、４時間反応させた。その後、該混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液（１５０ｍＬ）及び塩水（１５０ｍＬ）で処理し、ＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍＬで３回）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を真空で除去した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１）によって精製し、白色固体として化合物２３（４．８８ｇ、８３．０％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、２９５．１０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３２】
化合物２４の合成
化合物２３（４４４．１ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（０．２３ｍＬ、１．６６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中のメルカプト酢酸（０．２３ｍＬ、３．３２ｍｍｏｌ）を氷浴下で滴加した。添加の完了に続いて、溶液を室温に温め、撹拌しながら一晩放置した。真空で溶媒を除去し、残渣をカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝６０：１〜３０：１）で精製し、黄色の油として化合物２４（１．７２ｇ、３６．８７％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ−）、３８５．１０（Ｍ−Ｈ）−。
【０１３３】
化合物２５の合成
化合物２４（２２．２ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（９．３ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ（１６．５ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ）を５．０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解した。その後、化合物２１（６４．５ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２０．３μＬ、０．１０４ｍｍｏｌ）を混合物に添加した。溶液を室温まで温め、２４時間反応させた。得られた溶液を分取ＨＰＬＣによって分離し、白色固体として化合物２５（２５．３ｍｇ、２９．７％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１４７９．８０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３４】
実施例Ｉ−４  化合物３１の合成
【化５０】
0006714687.tif 000055
ｉ）ＨＯＢｔ、ＤＩＰＥＡ、ピリジン、ＤＭＦ、室温、２４時間；ｉｉ）ＤＥＡ、ＤＭＦ、室温、２．５時間；ｉｉｉ）Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、１２時間；ｉｖ）ＤＩＣ、ＨＯＢｔ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、室温、２４時間。
【０１３５】
化合物２７の合成
窒素下、０℃の化合物１８（１９４．２ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（１５ｍＬ）溶液にＨＯＢｔ（３４．２ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及び化合物２６（２００．３ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を添加した。１５分間撹拌した後、ピリジン（３ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（５３．１μＬ、０．３２ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で放置して３０分間反応させた。その後、反応混合物を室温で３時間撹拌した。該混合物にＤＩＰＥＡ（５３．１μＬ、０．３２ｍｍｏｌ）を補充し、更に２４時間反応させた。反応の完了に際して、該混合物を真空で濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製し、白色固体として化合物２７（１２６．２ｍｇ、３７．０％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１３９８．７５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３６】
化合物２８の合成
ジエチルアミン（４ｍＬ）を室温で化合物２７（１２６．２ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（８ｍＬ）溶液に添加した。２．５時間撹拌した後、減圧下で溶媒を除去し、粗生成物２８（７３．３ｍｇ、６８．９％）を得て、それを精製せずに使用することができた。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１１７６．６８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３７】
化合物３０の合成
化合物２９（１．８７ｍｇ、７．５ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１０４μＬ、０．７５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中のメルカプト酢酸（１０３．９μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。添加の完了に際して、溶液を室温に温め、撹拌しながら一晩放置した。真空で溶媒を除去し、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し、白色固体として化合物３０（１．７２ｇ、３６．８７％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ−）、３４２．１１（Ｍ−Ｈ）−。
【０１３８】
化合物３１の合成
化合物３０（２２．２ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（８．８ｍｇ、０．０６５ｍｏｍｏｌ）及びＤＩＣ（１１μＬ、０．０６５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（８ｍＬ）に添加し、氷浴中０℃に冷却した。化合物２８（６３．７ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１２．４μＬ、０．０５４ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。混合物を室温に温め、放置して２４時間反応させた。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝６０：１〜３０：１）で精製して、白色固体として化合物３１（１１．３ｍｇ、３９．５％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１４９９．７８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３９】
実施例Ｉ−５  化合物３６の合成
【化５１】
0006714687.tif 000056
ｉ）Ｋ２ＣＯ３、ＥｔＯＡｃ／Ｈ２Ｏ、室温、２時間；ｉｉ）ＥＤＣＩ、ＤＭＦ、室温、１２時間；ｉｉｉ）ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、室温、１２時間；ｉｖ）ＥＤＣＩ、ＨＯＢｔ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、室温、２４時間。
【０１４０】
化合物３３の合成
２，４−ジアミノ安息香酸３２（５０１．８ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（２０ｍＬ）に分散させ、炭酸カリウム（９．０ｇ、６６ｍｍｏｌ）の水溶液（２０ｍＬ）を添加した。混合物に、塩化アクリロイル（１ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）を注意深く添加し、淡褐色沈澱を形成させた。その後、該反応混合物を室温にし、沈殿を溶解させた。２時間後、反応が完了した。有機層を廃棄し、水層を５％塩酸で酸性化して、ｐＨ４未満で沈殿を生じさせた。沈殿を濾過し、石油エーテルで洗浄し、酢酸エチルで希釈した。その後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空で除去した。固体残渣を水に懸濁し、濾過し、ジエチルエーテルで十分に洗浄して、灰色の粉末として生成物３３（６７０．２ｍｇ、７８％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、２６１．０９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４１】
化合物３４の合成
化合物３３（２６０．１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ（２１０．９ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１２６．６ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１４ｍＬ）に溶解した。溶液を室温で一晩撹拌した。反応の完了に際して、減圧下で溶媒を除去した。ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１０：１）を溶離液とするカラムクロマトグラフィーで固体残渣を精製し、淡褐色の固体として生成物３４（２７３ｍｇ、７６．４％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、３５８．１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４２】
化合物３５の合成
４−アミノ酪酸（８２．４ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（４８９μＬ、２．８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、氷浴中０℃で化合物３４（２６０．７ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液を添加した。混合物を０℃で１０分間撹拌した後、室温で一晩撹拌した。反応が完了すると溶媒を真空で除去した。固体残渣をカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ＝１０：１、体積／体積）によって精製して化合物３５（１９２．３ｍｇ、７６．２％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、３４６．１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４３】
化合物３６の合成
ＨＯＢｔ（１４．９ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（２１．１ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１９．２μＬ、０．１１ｍｍｏｌ）を０℃で化合物３５（３４．５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（１０ｍｌ）撹拌溶液に添加した。１５分後、化合物２１（１１２．３ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温に温め、２４時間撹拌した。該混合物に水（１５ｍＬ）を添加し、酢酸エチル（２０ｍＬで３回）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過して、真空で除去した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ＝１０：１、体積／体積）によって精製し、白色固体として化合物３６（５６．５ｍｇ、３９％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１４５０．８４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４４】
実施例Ｉ−６  化合物４３の合成
【化５２】
0006714687.tif 000057
ｉ）ＤＭＡＰ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、１時間；ｉｉ）ＮａＯＨ、ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ、８０℃、２時間；ｉｉｉ）ＥＤＣＩ、ＨＯＢｔ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、室温、１８時間；（ｉｖ）ＥＥＤＱ、ＣＨ２Ｃｌ２、ＭｅＯＨ、室温、１８時間。
【０１４５】
化合物３８の合成
１００ｍＬ容の丸底フラスコに化合物３７（１．０５ｇ、６．９ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（１．９４ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）溶液を入れ、０℃で撹拌しながら塩化アクリロイル（１．３８ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）を滴加した。反応物を室温で１時間撹拌した。反応を水（５０ｍＬ）の添加によってクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬで３回）で抽出した。有機相を合わせ、飽和重炭酸ナトリウム溶液（３０ｍＬ）及び塩水（３０ｍＬ）で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、淡黄色の半固体として化合物３８（１．５１ｇ、８５．８％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、２５３．０４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４６】
化合物３９の合成
化合物３８（１．５６ｇ、５．９４ｍｍｏｌ）及び４−アミノブタン酸（６７３．０ｍｇ、６．５３ｍｍｏｌ）を水（１５ｍＬ）中の水酸化ナトリウム（７１３．３ｍｇ、１７．８２ｍｍｏｌ）と共にＥｔＯＨ（１５ｍｌ）に溶解した。反応混合物を８０℃で２時間撹拌した。室温に冷却した後、減圧下で溶媒を濃縮した。該混合物を塩酸（０．５Ｎ）でｐｈ７未満に酸性化した。固体を濾過によって回収し、水（１０ｍＬで２回）で洗浄し、乾燥してオフホワイト色の固体として化合物３９（４９０．２ｍｇ、２５．８％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、３２０．０３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４７】
化合物４１の合成
化合物３９（２３０．１ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１１６．７ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（１５１．８ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２７９．２ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍＬ）に添加し、氷浴中０℃で撹拌した。１時間後、化合物４０（１４９．１ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。混合物を室温に温め、放置して１８時間反応させた。該反応混合物を塩水（５０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬで３回）で抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝２００／１〜１０／１、体積／体積）によって精製して、黄色固体として化合物４１（９７．３ｍｇ、２７．６％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、４９０．２３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４８】
化合物４３の合成
化合物４１（９０．１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、ＥＥＤＱ（５４．６ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（７ｍｌ）及び無水ＭｅＯＨ（０．０７ｍＬ）溶液を室温で１時間撹拌した。その後、化合物４２（１３３．５ｍｇ、０．１８４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を更に１８時間撹拌した。該反応混合物を真空で濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して白色固体として化合物４３（１２．３ｍｇ、５．６％）得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１１９７．５１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４９】
実施例Ｉ−７  化合物４９の合成
【化５３】
0006714687.tif 000058
ｉ）ＨＣｌ（ｇ）、ＭｅＯＨ、０℃、２時間；ｉｉ）ピリジン、１００℃、２時間；ｉｉｉ）ＮａＯＨ、ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ、室温、４時間；ｉｖ）ＥＤＣＩ、ＨＯＢｔ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、室温、１８時間；ｖ）ＥＥＤＱ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、室温、１８時間。
【０１５０】
化合物４５の合成
化合物４４（１．１３ｇ、６．５３ｍｍｏｌ）のメタノール（３０ｍＬ）溶液に、塩酸（気体）を０℃で撹拌しながら投入した。反応物を０℃で２時間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣を水（５０ｍＬ）に溶解した。該混合物を飽和重炭酸ナトリウムで８に調整し、酢酸エチル（２０ｍＬで３回）で抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を濃縮して、黄色固体として化合物４５（７１０．１ｍｇ、６５．１％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１６８．０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５１】
化合物４６の合成
塩化アクリロイル（９４７．１ｍｇ、１０．４７ｍｍｏｌ）を氷浴中０℃で撹拌しながら化合物４５（７００．５ｍｇ、４．１９ｍｍｏｌ）のピリジン（２０ｍＬ）溶液に滴加した。反応混合物を１００℃で２時間撹拌した。室温に冷却した後、該反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝２００／１〜１０／１、体積／体積）によって精製し、黄色固体として化合物４６（５２０．４ｍｇ、４５．２％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、２７６．０９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５２】
化合物４７の合成
化合物４６（５１０．２ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム（３７０．６ｍｇ、９．２６ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）の混合物を室温で４時間撹拌した。反応の完了に際して、該混合物を濃縮し、塩酸（１Ｎ）でｐＨ７に調整した。化合物４７（３６０．２ｍｇ、７４．１％）をオフホワイト色の固体として濾過によって回収した。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、２６２．０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５３】
化合物４８の合成
化合物４７（１２０．５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（４．７ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（９６．８ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１７８．１ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に添加し、氷浴中０℃で撹拌した。１時間後、化合物４０（９５．１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。混合物を室温に温め、放置して１８時間反応させた。該反応混合物を塩水（２０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（１０ｍＬで３回）で抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝１００／１〜２０／１、体積／体積）によって精製して、白色固体として化合物４１（７１ｍｇ、３５．８％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、４３２．０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５４】
化合物４９の合成
化合物４８（６０．２ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、ＥＥＤＱ（４１．３ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２（６ｍｌ）及び無水ＭｅＯＨ（０．０６ｍＬ）に溶解し、撹拌しながら室温で１時間放置した。化合物４２（１００．９ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。反応混合物を更に１８時間撹拌した。該反応混合物を減圧下で濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して白色固体として化合物４９（１２．４ｍｇ、７．６１％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１１３９．４５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５５】
実施例Ｉ−８  化合物５５の合成
【化５４】
0006714687.tif 000059
ｉ）Ｅｔ３Ｎ、ＭｅＯＨ、室温、３時間；ｉｉ）Ｎａ２ＣＯ３、ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ、室温、３時間；ｉｉｉ）ＨＯＢｔ、ＤＩＣ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、室温、１２時間；ｉｖ）ＴＦＡ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、３時間；ｖ）Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、２時間；ｖｉ）
【０１５６】
化合物５０の合成
Ｅｔ３Ｎ（３３２．７μＬ、２．４ｍｍｏｌ）を４５℃の化合物４（４４０．０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液に添加した。その後、（Ｂｏｃ）２Ｏ（４３６．２ｍｇ、２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液を添加した。得られた混合物を４５℃で３０分間勢いよく撹拌した後、室温で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣を塩酸（５％、１０ｍＬ）、飽和塩化ナトリウム溶液（１５ｍＬ）で洗浄し、酢酸エチル（１０ｍＬで３回）で抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空で除去した。固体残渣を石油エーテル／酢酸エチル（１０ｍＬ、体積：体積＝２：１）によって再結晶化して白色粉末として化合物５０（３７５．４ｍｇ、７５．６％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、２４９．１５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５７】
化合物５１の合成
塩化アクリロイル（１２１μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を０℃の化合物５０（２４８．０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の飽和重炭酸ナトリウム溶液／ＴＨＦ（体積／体積＝１：１、２０ｍＬ）溶液に添加した。得られた混合物を０℃で１０分間勢いよく撹拌した。該混合物を室温にし、３時間反応させた。該混合物を塩酸で酸性化してｐＨを４未満に調整した。該混合物を酢酸エチル（２０ｍＬで３回）によって抽出した。有機層を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過して、溶媒を除去した。固体残渣を分取ＨＰＬＣによって精製し、灰色の油として生成物５１（１７６．１ｍｇ、５８．３％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、３０３．１６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５８】
化合物５２の合成
化合物５１（３０．２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１４．７ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）及びＤＩＣ（１３．９ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（６ｍＬ）に溶解し、氷浴中０℃に冷却した。１５分後、化合物６（２０．５ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１９．２μＬ、０．１１ｍｍｏｌ）を混合物に添加した。溶液を室温に温め、一晩撹拌した。該混合物を水（１０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬで３回）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で溶媒を除去した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ＝２０：１、体積／体積）によって精製し、白色固体として化合物５２（２８．２ｍｇ、６０．７％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、５１３．２６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５９】
化合物５３の合成
化合物５２（２８．２ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（１．０ｍＬ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液を、室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、灰色固体として化合物５３（２０．４ｍｇ、８８．２％）を得て、それを更に精製することなく次の工程で使用することができた。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、４１３．２１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６０】
化合物５４の合成
化合物５３（４１．２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＤＭＦに溶解し、氷浴中０℃に冷却した。Ｅｔ３Ｎ（６．９μＬ、０．０５ｍｍｏｌ）及び化合物８（７３．７ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を溶液に滴加し、撹拌しながら３０分間放置した。該溶液を室温に温め、更に５時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣによって精製して白色粉末として化合物５４（７３ｍｇ、６３．６％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１１４８．４７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６１】
化合物５５の合成
臭化ブロモアセチル（１５０．０ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を０℃の化合物５４（５７３．７ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に添加した。得られた混合物を０℃で１０分間撹拌した後、室温で更に３時間撹拌した。該混合物に水（２０ｍＬ）を添加し、酢酸エチル（２０ｍＬで３回）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣによって精製して黄色粉末として化合物５５（４２１ｍｇ、６６．４％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１２７０．３８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６２】
実施例Ｉ−９  化合物５９の合成
【化５５】
0006714687.tif 000060
化合物１１
ｉ）Ｋ２ＣＯ３、Ｈ２Ｏ／ＥｔＯＡｃ、室温、５時間；ｉｉ）ＣＨＣｌ３、還流、１２時間；ｉｉｉ）Ａｃ２Ｏ、ＮａＡｃ、１００℃、２時間；ｉｖ）ＨＯＢｔ、ＤＩＣ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、室温、２４時間。
【０１６３】
化合物５６の合成
水（５ｍＬ）中の炭酸カリウム（５１．２ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）と酢酸エチル（１０ｍＬ）中の化合物１５（５０．０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）との混合物に塩化アクリロイル（１６μＬ、０．２ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（８ｍＬ）溶液を０℃で徐々に滴加した。添加の完了に際して、得られた混合物を氷浴中０℃で更に１０分間撹拌した。その後、該混合物を室温にし、５時間反応させた。該混合物を塩酸で酸性化してｐＨを５未満に調整した。該混合物を酢酸エチル（１５ｍＬで３回）で抽出した。合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム溶液（１５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を除去した。固体残渣をカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝８：１）で精製し、灰色の油として生成物５６（２６．２ｍｇ、４０．１％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、２５８．１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６４】
化合物５７の合成
化合物５６（２６．０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）をＣＨＣｌ３（１０ｍＬ）中で撹拌し、無水マレイン酸（２８．１ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を混合物に添加した。反応物を加熱し、１２時間還流させた。室温に冷却した後、沈澱した固体生成物を濾過し、ＣＨＣｌ３（３０ｍＬで３回）で洗浄して、白色固体として化合物５７（２０．１ｍｇ、５９．１％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、３５６．１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６５】
化合物５８の合成
化合物５７（２０．１ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）及び酢酸ナトリウム（６．３ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）の無水酢酸（１０ｍＬ）溶液を１００℃で２時間加熱した。一旦反応が完了すると、反応溶液を撹拌しながら砕いた氷にゆっくりと注ぎ、氷冷水を添加した。１時間撹拌した後、固体を沈澱させた。固体残渣を濾過し、氷冷水（１５ｍＬで３回）で洗浄して白色固体として化合物５８（９．１ｍｇ、４６．１％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋），３３８．１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６６】
化合物５９の合成
化合物５８（８．１ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３．２５ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）及びＤＩＣ（３．７μＬ、０．０２ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＤＭＦに溶解し、氷浴中０℃に冷却した。その後、化合物１１（２０．１ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（４．１μＬ、０．０２ｍｍｏｌ）を混合物に添加した。溶液を室温に温め、放置して２４時間反応させた。得られた混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して、白色固体として化合物５９（９．３ｍｇ、３４．９％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１３１３．５３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６７】
実施例Ｉ−１０  化合物６４の合成
【化５６】
0006714687.tif 000061
ｉ）ＤＭＦ、８０℃、６時間；ｉｉ）Ｋ２ＣＯ３、ＥｔＯＡｃ／Ｈ２Ｏ、室温、５時間；ｉｉｉ）Ａｃ２Ｏ、ＮａＡｃ、９０℃、３時間；ｉｖ）ＨＯＢｔ、ＤＩＣ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、室温、２４時間。
【０１６８】
化合物６０の合成
化合物３２（１４０．０ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（６ｍＬ）溶液に、無水マレイン酸（８９．８ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を滴加した。混合物を６０℃で６時間撹拌した後、減圧下で油になるまで濃縮した。酢酸エチル（５ｍｌ）からの再結晶化により、化合物６０（白色固体、２０９．１ｍｇ、９０．７％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、（Ｍ＋Ｈ）＋２５１．０６。
【０１６９】
化合物６１の合成
水（１５ｍＬ）中の炭酸カリウム（２０１．３ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）と酢酸エチル（２０ｍＬ）中の化合物６０（２０９．１ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）との混合物に塩化アクリロイル（９０μＬ、１．１ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（１０ｍＬ）溶液を０℃で滴加した。添加の完了の際、混合物を室温に温め、５時間反応させた。該混合物を塩酸で酸性化してｐＨ５未満に調整した。該混合物を酢酸エチル（２０ｍＬで２回）で抽出した。有機層を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させて濾過した。真空で溶媒を除去し、灰色の固体として化合物６１（２０１．０ｍｇ、８２．７％）を得て、それを更に精製することなく次の工程で使用することができた。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、（Ｍ＋Ｈ）＋３０４．０７。
【０１７０】
化合物６２の合成
粗化合物６１（２０１．０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）の無水酢酸（３０ｍＬ）溶液に酢酸ナトリウム（６０．５ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を９０℃で３時間撹拌した。該反応混合物を氷水に注ぎ、３０分間撹拌し、酢酸エチル（２０ｍＬで３回）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して、白色固体として化合物６２（９２．２ｍｇ、４８．６％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、（Ｍ＋Ｈ）＋２８７．０６。
【０１７１】
化合物６４の合成
化合物６２（５７．０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（２７．２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（２９．３μＬ、０．２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．２ｍｍｏｌ、３３．１μＬ）をＤＭＦ（６ｍＬ）に添加した。３０分後、化合物６３（１０９．８ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。溶液を濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して白色固体として化合物６４（９４．８ｍｇ、４７．６％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１０００．５３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７２】
実施例Ｉ−１１  化合物６９の合成
【化５７】
0006714687.tif 000062
ｉ）ＤＭＦ、還流、１２時間；ｉｉｉ）Ａｃ２Ｏ、ＮａＡｃ、還流、６時間；ｉｉｉ）ＤＭＦ、８０℃、１２時間；ｉｖ）ＨＯＢｔ、ＤＩＣ、ＤＩＰＥＡ、ＮＭＰ、室温、３６時間。
【０１７３】
化合物６６の合成
ＤＭＦ（６ｍＬ）中の化合物６５（１４５．０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の混合物に、無水マレイン酸（８９．８ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を徐々に滴加した。混合物を加熱して１２時間還流させた。室温に冷却した後、沈澱した固体生成物を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬで３回）で洗浄して白色固体として化合物６６（１１０．２ｍｇ、４５．１％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、２４４．０２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７４】
化合物６７の合成
無水酢酸（１０ｍＬ）中の化合物６６（１１０．２ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）と酢酸ナトリウム（１４．２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）との混合物を加熱して６時間還流させた。一旦反応が完了すると、反応混合物を撹拌しながら砕いた氷にゆっくりと注ぎ、氷冷水を添加した。固体残渣を１時間の撹拌の後に沈澱させた。該固体残渣を濾過し、氷冷水（１０ｍＬで３回）で洗浄して白色固体として化合物６７（８７．３ｍｇ、８５．７％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋），２２６．０１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７５】
化合物６８の合成
無水コハク酸（３８．８ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６ｍＬ）中の化合物６７（８７．３ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）の混合物に添加した。該混合物を８０℃で一晩撹拌した後、減圧下で油になるまで濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣで精製し、白色固体として化合物６８（４５．０ｍｇ、３５．７％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、３２６．０２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７６】
化合物６９の合成
化合物６８（４５．０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１９．０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（２０．５μＬ、０．１４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２３．２μＬ、０．１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に添加し、氷浴中０℃で１時間撹拌した。化合物６３（７６．９ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。混合物を室温まで温め、放置して３６時間反応させた。該反応混合物を分取ＨＰＬＣによって精製し、白色固体として化合物６９（６４．３ｍｇ、４４．３％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１０３９．４９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７７】
実施例Ｉ−１２  化合物７４の合成
【化５８】
0006714687.tif 000063
ｉ）Ｅｔ３Ｎ、ｎ−ブタノール、９０℃、１８時間、ｉｉ）Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、１８時間、ｉｉｉ）ＥＤＣＩ、ＨＯＢｔ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、室温、１８時間、ｉｖ）ＥＥＤＱ、ＣＨ２Ｃｌ２、ＭｅＯＨ、室温、１８時間。
【０１７８】
化合物７１の合成
化合物６９（１．０ｇ、６．１０ｍｍｏｌ）及び４−アミノブタン酸（６９１．９ｍｇ、６．７１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３．０９ｇ、３０．５ｍｍｏｌ）をｎ−ブタノール（３０ｍＬ）に溶解した。反応混合物を９０  で１８時間撹拌した。室温に冷却した後、溶媒を減圧下で濃縮した。残渣を水（１００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３０ｍＬで３回）で抽出した。有機相を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝２００／１〜１０／１、体積／体積）により精製し、黄色固体として化合物７１（４８２．３ｍｇ、３４．３％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、２３１．０６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７９】
化合物７２の合成
氷浴中、０℃で撹拌しながら化合物７１（４５０．５ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（５９０．８ｍｇ、５．８５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）溶液に塩化アクリロイル（９４７．２ｍｇ、１０．４７ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を室温で１８時間撹拌した。水（５０ｍＬ）の添加によって反応をクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬで３回）で抽出した。有機層を合わせて塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して黄色固体として化合物７２（２５５．４ｍｇ、４６％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、２８５．０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８０】
化合物７３の合成
化合物３（１５５．７ｍｇ、０．５４７ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（８８．７ｍｇ、０．６５６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（１１５．４ｍｇ、０．６０２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２１２．１ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に添加し、氷浴中０℃で１時間撹拌した。化合物４０（１１３．３ｍｇ、０．６０２ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。混合物を室温まで温め、放置して１８時間反応させた。該反応混合物を塩水（３０ｍＬ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬで３回）で抽出した。有機層を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝２００／１〜１０／１、体積／体積）によって精製し、黄色固体として化合物７３（９０．２ｍｇ、３６．２％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、４５５．１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８１】
化合物７４の合成
化合物７３（８５．４ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）、ＥＥＤＱ（５５．４ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（７ｍｌ）及び無水ＭｅＯＨ（０．０７ｍＬ）溶液を室温で１時間撹拌した。その後、化合物４２（１３５．７ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を更に１８時間撹拌した。該反応混合物を真空で濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して白色固体として化合物７４（１９．１ｍｇ、６．７％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）、１１６２．４５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８２】
【表１】
0006714687.tif 000064
【０１８３】
実施例ＩＩ  抗体薬物複合体の作製
概括的な複合体化手順
ＤＴＰＡ（１ｍＭ）及び３．０当量〜５．０当量のＴＣＥＰ（１０ｍＭ）をＰＣＲチューブ中の抗体（１０ｍｇ／ｍＬ）に添加し、１時間に亘ってミキサーにかけ、抗体上のジスルフィド結合を還元した。様々な量のリンカー−活性剤複合体を反応混合物に添加して、一晩ボルテックスミキサーを使用して振盪した。全ての反応を室温で行った。得られた生成物をゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）及びＨＩＣ（疎水性相互作用クロマトグラフィー）−ＨＰＬＣによって分析した。
【０１８４】
抗体薬物複合体を還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析した：バッファーと混合した試料を８％〜１５％アクリルアミドゲルに充填し、ＵＶＰ  ＢｉｏＤｏｃ−ｉｔ画像化システムでゲル写真を撮影した。
【０１８５】
バンド（５０ｋＤａ以上）がレーン２及びレーン３に現われ、チオール架橋複合体化が有効であったことを示唆する（Ｈ、Ｌ）。７５ｋＤａのバンドは、一対の架橋されたチオールによって連結された重鎖と軽鎖とで構成される部分を表す（ＬＨ）。２本の重鎖が１個又は２個の架橋チオール対によって連結され、１００ｋＤａでバンドを形成した（ＨＨ）。１２５ｋＤａのバンドは、重鎖と軽鎖との間の１個の架橋が形成されなかった部分（ＬＨＨ）を表す。最後に、１５０ｋＤａのバンドは、完全に架橋された抗体（ＬＨＨＬ）の形成を明らかにした。
【０１８６】
抗体薬物複合体を次の条件の下、ＨＩＣ−ＨＰＬＣによって分析した：ＨＰＬＣカラム：ＴＳＫ−ＧＥＬブチル−ＮＰＲカラム４．６×３５ｍｍ；バッファーＡ：７５％リン酸ナトリウム（２０ｍＭ、ｐＨ７．０）、２５％イソプロパノール（体積／体積）；バッファーＢ：リン酸ナトリウム（２０ｍＭ、ｐＨ７．０）、硫酸アンモニウム（１．５ｍＭ）；流速：ｌ．０ｍＬ／分。
【０１８７】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの抗体薬物複合体の評価
初日に、ＯＶＣＡＲ３等のヒト卵巣癌細胞株の腫瘍細胞株を、９６ウェル培養プレート（Cellstar）に１００μｌの培養培地中５０００個の細胞で蒔いた。細胞を３７℃で一晩、飽和水と共にＣＯ２インキュベータにおいてインキュベートした。２日目、ＭＳＬ−３１及びＭＳＬ−７５の２個の共有結合チオール的複合体化ＡＤＣを段階希釈し、ＯＶＣＡＲ３細胞を含む９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μｌで複合体を添加した。最初の複合体は１０００００ｎｇ／ｍｌであり、０．００１ｎｇ／ｍｌまで希釈した。添加したＡＤＣと共にＯＶＣＡＲ３細胞を３７℃で７２時間インキュベートした。その後、共有結合的チオール複合体化ＡＤＣで処理した腫瘍細胞の生存率を、プレートリーダー（Molecular device製ＢＩＯ−ＲＡＤ  ｉＭａｒｋ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｌ）上で製造業者のプロトコルに従い、細胞生存率測定キットであるＣｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（DOJINDO、ＣＫ０４）を使用して測定した。５０％細胞増殖阻害であるＩＣ５０値は、曲線適合ソフトウェア（Graphpad）を使用して計算された。
【０１８８】
実施例ＩＩ−１  ＭＳＬ−Ｃ３１の作製
ＤＴＰＡ（１ｍＭ）及び５．０当量のＴＣＥＰ（１０ｍＭ）をＰＣＲチューブ中の抗ＭＳＬ（１０ｍｇ／ｍＬ）に添加した。混合物をボルテックスミキサーで１時間撹拌して抗体上のジスルフィド結合を還元した。その後、２５％のＤＭＳＯを反応混合物に添加した。化合物３１（５．０当量、１０ｍＭ）を反応混合物に添加し、ボルテックスミキサーを使用して一晩振盪した。全ての反応を室温で行った。反応終了後、混合物をMilliporeの４ｍＬ容の遠心限外濾過チューブに充填し、ＰＢＳで３回洗浄した後、反応混合物を回収した。図２は、少なくとも１対のスルフヒドリル基の共有結合的複合体化の生成物（右レーン）が、重鎖（Ｈ）又は軽鎖（Ｌ）単独のもの（左レーンに示される）よりも遅く移動することを示す。重鎖と軽鎖との間の共有結合的複合体化は７５ｋＤａ（ＨＬ）のバンドを生じ、２本の重鎖の共有結合的複合体化は１００ｋＤａ（ＨＨ）のバンドを生じた。ＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムに３つのピークが存在し、ＤＡＲのうち３、４及び５をそれぞれ表す。得られたＭＳＬ−Ｃ３１のＤＡＲは、ＨＩＣ−ＨＰＬＣの結果に基づき３．６０であった（図３）。
【０１８９】
図２は、ａ）ネイキッド抗体、ｂ）共有結合的チオール複合体化の生成物であるＭＳＬ−Ｃ３１に対する、還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果を示す。
【０１９０】
図３は、ＭＳＬ−Ｃ３１のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【０１９１】
実施例ＩＩ−２  ＭＳＬ−Ｃ７５の作製
ＤＴＰＡ（１ｍＭ）及び５．０当量のＴＣＥＰ（１０ｍＭ）をＰＣＲチューブ中の抗ＭＳＬ（１０ｍｇ／ｍＬ）に添加した。混合物をボルテックスミキサーで１時間撹拌して抗体上のジスルフィド結合を還元した。その後、２５％のＤＭＳＯを反応混合物に添加した。５．０当量の化合物７５（５．０当量、１０ｍＭ）を反応混合物に添加し、ボルテックスミキサーを使用して一晩振盪した。全ての反応を室温で行った。反応終了後、混合物をMilliporeの４ｍＬ容の遠心限外濾過チューブに充填し、ＰＢＳで３回洗浄した後、反応混合物を回収した。試料を電気泳動による分析に供した。還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果を図４に提示する。左レーンはネイキッド抗体であり、右レーンはＭＳＬ−Ｃ７５の共有結合的複合体であった。得られたＭＳＬ−Ｃ７５のＤＡＲは、ＨＩＣ−ＨＰＬＣに基づいて３．８７であった。
【０１９２】
図４は、ＭＳＬ−Ｃ７５の還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果を示す。
【０１９３】
図５は、ＭＳＬ−Ｃ７５のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【０１９４】
表２は、２つの試料、すなわちヒト卵巣癌細胞で試験したＡＤＣ−Ｃ３１及びＡＤＣ−Ｃ７５のＩＣ５０値を示す。
【表２】
0006714687.tif 000065
【０１９５】
実施例ＩＩ−３  ＣＤ５９−Ｃ７８の作製
ＤＴＰＡ（１ｍＭ）及び５．０当量のＴＣＥＰ（１０ｍＭ）をＰＣＲチューブ中の抗ＣＤ５９（１０ｍｇ／ｍＬ）に添加した。混合物をボルテックスミキサーで１時間撹拌して抗体上のジスルフィド結合を還元した。その後、２５％のＤＭＳＯを反応混合物に添加した。化合物７８（５．０当量、１０ｍＭ）を反応混合物に添加し、ボルテックスミキサーを使用して一晩振盪した。全ての反応を室温で行った。反応終了後、混合物をMilliporeの４ｍＬ容の遠心限外濾過チューブに充填し、ＰＢＳで３回洗浄した。得られたＣＤ５９−Ｃ７８のＤＡＲは、ＨＩＣ−ＨＰＬＣに基づき３．６６であった。
【０１９６】
図６は、ａ）ネイキッド抗体、ｂ）ＣＤ５９−Ｃ７８に対する還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果を示す。
【０１９７】
図７は、ＣＤ５９−Ｃ７８のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【０１９８】
実施例ＩＩ−４  ＨＥＲ２−Ｃ７８複合体の作製
ＤＴＰＡ（１ｍＭ）及び５．０当量のＴＣＥＰ（１０ｍＭ）をＰＣＲチューブ中の抗ＨｅＲ２（１０ｍｇ／ｍＬ）に添加した。混合物をボルテックスミキサーで１時間撹拌して抗体上のジスルフィド結合を還元した。その後、２５％のＤＭＳＯを反応混合物に添加した。化合物７５（５．０当量、１０ｍＭ）を反応混合物に添加し、ボルテックスミキサーを使用して一晩振盪した。全ての反応を室温で行った。反応終了後、混合物をMilliporeの４ｍＬ容の遠心限外濾過チューブに充填し、ＰＢＳで３回洗浄した。
【０１９９】
ＨＥＲ２−Ｃ７８複合体に関する安定性研究
通常のチオール複合体化に対する共有結合的チオール複合体化のＡＤＣの分解速度を特定するため、ＥＬＩＳＡ用に上の手順によって作製された３つのＡＤＣ試料を安定性研究に使用した。ＥＬＩＳＡ実施計画は以下の通り：最初に、Ｈｅｒ２−ＥＣＤ（１００ｎｇ）を９６ウェルプレートの各ウェルにコートした；次に（通常のチオール複合体化の）抗Ｈｅｒ２−Ｍｃ−ＶＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、抗Ｈｅｒ２−Ｄｉ−Ｍｃ−ＶＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（ｂｉ−マレイミド−チオール複合体化）、及び抗Ｈｅｒ２−ＰＹ−ＱＪ２−ＡＤＣ（本発明の共有結合的チオール複合体化であるＨｅｒ２−Ｃ７８）で処理したヒト末梢血をコートしたウェルにおいてインキュベートし、Ｈｅｒ２−ＥＣＤに結合させた。最後に、後に発色基質であるｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）の有色生成物への変換を触媒するストレプトアビジン／セイヨウワサビペルオキシダーゼと複合体化された抗ヒトＩｇＧを結合することによって、Ｈｅｒ２−ＥＣＤ抗原に結合した抗ｈｅｒ２  ＡＤＣの量を測定する。結果から、末梢血との３日間のインキュベーションの間に一般的なチオール複合体化によるＡＤＣの分解速度は２６．７％であり、ｂｉ−マレイミド−チオール複合体化による本発明の２番目のＡＤＣの分解速度は１８．９％であり、本発明の３番目のＡＤＣの分解速度は５．１％であったことが示される。本発明の共有結合リンカーによるＡＤＣの分解速度は、下記表３に示される３つのＡＤＣのなかで最も遅い。
【０２００】
【表３】
0006714687.tif 000066
【０２０１】
実施例ＩＩＩ−抗体薬物複合体の活性
本発明の抗体薬物複合体は、一実施形態において、腫瘍細胞を特異的に標的とするのに、また腫瘍細胞の表面上の腫瘍関連抗原に結合するのに使用することができる。ＡＤＣ抗原の複合物はエンドサイトーシスによって腫瘍細胞に入り、ＡＤＣ抗原複合物のエンドソームとリソソームとの融合の後、そのペイロード（payload）を放出する。放出されたペイロードは、腫瘍細胞の重要な機能を阻害する、及び／又は更には腫瘍細胞を殺傷する。ペイロードが細胞表面で又は腫瘍細胞の近くで放出する場合、腫瘍細胞はバイスタンダー方式（by-stander manner）によっても殺傷され得る。
【０２０２】
したがって、本発明は、腫瘍細胞の成長及び／又はそれらの分化を阻害する様々なタンパク質−薬物複合物を提供する。様々な種類の活性ペイロードによって武装されたこれらの化合物を使用して、新生物、自己免疫障害及び炎症、更には腫瘍細胞又は幹細胞の分化を治療することができる。
【０２０３】
実施例ＩＩＩ−１−腫瘍に対する活性
一実施形態又は本発明において、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は、ｍＡｂの特有のターゲッティングと細胞毒性薬物の癌を殺傷する性能とを組み合わせて、ＡＤＣを強力な腫瘍殺傷剤とする。さらに、本発明による共有結合的チオール複合体の使用はＡＤＣの安定性を増加させて、血液循環におけるＡＤＣの分解を制限し、それによりその毒性を減少させる。この実施例は、ヒト乳癌細胞（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）が移植されたヌードマウスにおいて上に記載されるように作製されたＡＤＣを使用する、ヒト癌の治療を示すデータを提供する。
【０２０４】
共有結合的な又は一般的な複合体による様々なＡＤＣの生物学的機能を特定するため、抗Ｈｅｒ−２  ｍＡｂを一般的な複合体化によりチオール複合体化するか又は同じリンカー及び細胞毒素と共有結合的にチオール複合体化した。ヌードマウスにヒト癌細胞株（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）を移植し、腫瘍体積が約１００立方ミリメートルに達した時にＡＤＣ（０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射によって投与した。腫瘍体積を３日毎にモニターし、２１日間の終わりに動物を屠殺して、腫瘍を解剖し、計量した。
【０２０５】
下記表４は、ヒト乳癌細胞が移植されたヌードマウスに投与された一般的なＡＤＣと共有結合的チオール複合体化ＡＤＣとの間の効力の比較を提供する。
【０２０６】
【表４】
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【０２０７】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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