(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）
【化１】
0006786761.tif 000012
のクロマンまたはクロメン化合物のキラル異性体を分離するプロセスであって、
［式中、Ｒ１、Ｒ３、およびＲ４は、互いに独立して、水素またはメチル基であり；
Ｒ２は、水素またはフェノール保護基を表し；
Ｒ５は、直鎖状もしくは分岐状の完全に飽和のＣ６〜２５−アルキル基、または少なくとも一つの炭素−炭素二重結合を含む直鎖状もしくは分岐状のＣ６〜２５−アルキル基のいずれかを表し；
そして、＊は、キラル中心を表す］
以下の工程
ａ）式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）において＊で表した前記キラル中心に、異なったキラルコンフィギュレーションを有する式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の異性体の混合物を準備する工程；
ｂ）移動相として超臨界二酸化炭素、そしてキラル固定相（ＣＳＰ）としてシリカ担体の上にコーティングまたは固定化したアミローストリス（３，５−ジメチルフェニル−カルバメート）を用いた超臨界流体クロマトグラフィーの手段によって、工程ａ）の異性体の前記混合物をキラルクロマトグラフ分離する工程、
を含むプロセス。
【請求項２】
Ｒ１＝Ｒ３＝Ｒ４＝ＣＨ３であることを特徴とする請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
Ｒ５が、式（ＩＩＩ）
【化２】
0006786761.tif 000013
［式中、ｍおよびｐは、互いに独立して、０〜５の数値を表しているが、ただし、ｍとｐを合計したものが１〜５であり、
ｓ１およびｓ２で示した、式（ＩＩＩ）の中の下部構造は、いかなる順序であってもよく、
そして点線は、それによって式（ＩＩＩ）の置換基が、式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の残りの部分に結合されている結合を表しており、
そして、＃印はキラル中心を表しているが、前記中心が２個のメチル基に結合されている場合には、明らかに除外される。］
であることを特徴とする、請求項１〜２のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項４】
Ｒ５が、式（ＩＩＩ−Ａ）、または（ＩＩＩ−Ｂ）
【化３】
0006786761.tif 000014
［式中、点線は、それによって式（ＩＩＩ−Ａ）または（ＩＩＩ−Ｂ）の置換基が、式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の残りの部分に結合されている結合を表しており、そして、＃は、キラル中心を表す。］
であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項５】
前記移動相が、アルコールを含むことを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項６】
前記アルコールが、前記超臨界二酸化炭素に対して、１〜３０％の容積比で使用されることを特徴とする請求項５に記載のプロセス。
【請求項７】
前記クロマトグラフ分離が、３１．３℃〜８０℃の間の温度で実施されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項８】
前記クロマトグラフ分離が、７３．９〜２００ｂａｒの間の範囲の圧力で実施されることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項９】
工程ｂ）の前記キラルクロマトグラフ分離によって、望ましい異性体（Ｉｄｅｓ）と残分（Ｉ’）とが生成し、さらに以下の工程、
ｃ）工程ｂ）で分離された前記残分（Ｉ’）の異性体の、式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の中で＊で示された前記環の中心でのキラリティを異性化させて、異性化された生成物を得る工程；
ｅ）前記望ましい異性体（Ｉｄｅｓ）を捕集する工程、
を含むことを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１０】
前記プロセスが、さらなる工程、
ｄ）前記異性化された生成物を、工程ｂ）の前記クロマトグラフ分離に導入する工程、
を含むことを特徴とする、請求項９に記載のプロセス。
【請求項１１】
式（Ｉ−Ｂ）の前記キラル異性体の混合物が、（ａｌｌ−ｒａｃ）−トコフェロールであることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１２】
式（Ｉ−Ｂ）の前記キラル異性体の混合物が、（２−ａｍｂｏ）−トコフェロールであることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１３】
前記キラルクロマトグラフ分離が、疑似移動床（ＳＭＢ）クロマトグラフィーを使用することを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１４】
移動相として超臨界二酸化炭素、そしてキラル固定相（ＣＳＰ）としてシリカ担体の上にコーティングまたは固定化されたアミローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）を用いる超臨界流体クロマトグラフィーの使用であって、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−β−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−γ−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−δ−トコフェロール；（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−β−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−γ−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−δ−トコフェロール、（２Ｒ）−α−トコトリエノール、（２Ｒ）−β−トコトリエノール、（２Ｒ）−γ−トコトリエノール、および（２Ｒ）−δ−トコトリエノールからなる群より選択されるクロマンまたはクロメンを９５重量％よりも高い異性体純度で調製するための、使用。
【請求項１５】
食品または飼料または補助食品または補助飼料または医薬品組成物を製造するためのプロセスであって、
ｉ）先行する請求項１〜１３のいずれか１項に記載のプロセスによって、９５重量％よりも高い異性体純度を有する式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）
【化４】
0006786761.tif 000015
［式中、Ｒ１、Ｒ３、およびＲ４は、互いに独立して、水素またはメチル基であり；
Ｒ２は、水素またはフェノール保護基を表し；
Ｒ５は、直鎖状もしくは分岐状の完全に飽和のＣ６〜２５−アルキル基、または少なくとも一つの炭素−炭素二重結合を含む直鎖状もしくは分岐状のＣ６〜２５−アルキル基のいずれかを表し；
そして、＊は、キラル中心を表す］
の化合物を調製する工程；
ｉｉ）工程ｉ）の式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の化合物を、少なくとも１種の食品成分または少なくとも１種の飼料成分または少なくとも１種の補助食品成分または少なくとも１種の補助飼料成分または少なくとも１種の医薬品組成物のための成分に添加する工程、
を含む、プロセス。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［技術分野］
本発明は、キラル異性体を相互に分離する分野に関する。具体的には、それは、クロマンおよびクロメン化合物のキラル異性体の分離の分野に関する。
【０００２】
［発明の背景］
分子の中にキラル中心が存在すると、多くの場合、各種のキラル異性体が得られる。分子の中のキラル中心の数が多いほど、異なった異性体の数も多くなる。そのようなキラル分子を合成すると、通常キラル異性体の混合物が形成される。しかしながら、極めて多くの場合、キラル化合物を互いに分離するのが望ましいが、その理由は、それらが異なった性質を有しているからである。
【０００３】
クロマン化合物は、キラル天然物および生理活性化合物の重要なタイプを代表している。クロマン化合物の重要なタイプは、ビタミンＥおよびそのエステルである。ビタミンＥは、そのエステルの形態で商品化されることが多いが、その理由は、後者の方が高い安定性を示すからである。
【０００４】
その一方で、ビタミンＥの典型的な工業的合成では、複数の異性体の混合物が得られる。他方では、分子の環の中でエーテル原子の隣に位置するキラル中心（本発明の文書において後ほど、示す式の中で＊で示している）でＲ−コンフィギュレーションをとっているトコフェロール（すなわち、２Ｒ−コンフィギュレーション）の方が、Ｓ−コンフィギュレーションを有する相当する異性体に比べて、より高い生物活性（生物作用能）を示すことがわかっている。特に活性が高いのが、すべてのキラル中心で天然のコンフィギュレーションを有しているトコフェロールの異性体、たとえば（Ｒ，Ｒ，Ｒ）−トコフェロールであり、これについてはたとえば、Ｈ．Ｗｅｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｔｒ．，１９９６，１２６（１０），２５３９−４９に開示されている。このことから、異性体を分離する効率的なプロセスが強く望まれるようになった。したがって、その分離は、構造的に異なるトコフェロールの分離だけではなく、同一の化学構造の、すなわち同一のトコフェロールの中の異なったキラル異性体を分離することにも関連している。
【０００５】
異なったトコフェロール、すなわち、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、およびδ−トコフェロール、または別物であるトコトリエノール、さらにはそれらの保護された形のものを分離することは、すでにかなり以前から慣用されるクロマトグラフィー法によって達成されているが、キラル異性体の分離は、はるかに達成が困難な目標である。それらの異性体は、化学的に類似していて、同一の化学構造を有しているために、クロマトグラフィー法でそれらを分離することは極めて困難である。
【０００６】
Ｓ．Ｋ．Ｊｅｎｓｅｎ，Ｖｉｔａｍｉｎｓ  ａｎｄ  Ｈｏｒｍｏｎｅｓ，２００７，Ｖｏｌ．７６，２８１−３０８に開示されているように、キラル化合物のクロマトグラフ分離が、ある種のキラル物質を分離するためには十分な方法であることが見出されている。工業的なクロマトグラフ分離プロセスに特に適しているのは、疑似移動床（Ｓｉｍｕｌａｔｅｄ  Ｍｏｖｉｎｇ  Ｂｅｄ＝ＳＭＢ）クロマトグラフィーであり、これによって、分離効率が向上し、分離のために必要な溶離剤の量を減らすことができるようになった。
【０００７】
国際公開第２０１２／１５２７７９Ａ１号パンフレットには、キラル相の手段によるクロマトグラフ分離工程と異性化工程とを含む、キラルクロマンまたはクロメン化合物を分離するプロセスが開示されている。
【０００８】
超臨界流体は、それらが液体とガスとの中間に位置するような物理的性質を示す。それらは、ガスと同じように、容易に圧縮することが可能であり、そして密度や粘度のような物性は、圧力や温度を変化させることによって変えることができる。超臨界二酸化炭素は、コーヒーの生豆からの脱カフェインや、ビールの製造のためのホップの抽出のために、工業的大スケールで使用されている。トコフェロールの合成における反応媒体として超臨界二酸化炭素を使用することが、欧州特許出願公開第１  ０００  ９４０Ａ１号明細書においてすでに提案されている。
【０００９】
さらには、超臨界二酸化炭素が低い粘度および高い拡散速度という高度に有利な性質を有しているので、それは、化合物を分離するための超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ＝ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ  ｆｌｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）にも用途を見出してきた。たとえば、欧州特許出願公開第１  １２２  ２５０Ａ１号明細書には、トコフェロール（α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロール）ならびにトコトリエノール（α−トコトリエノール、β−トコトリエノール、γ−トコトリエノール、およびδ−トコトリエノール）の構造異性体をそれぞれから、移動相として超臨界二酸化炭素、固定相としてシリカゲルまたはＣ１８逆相シリカゲルを使用してクロマトグラフ分離することが開示されている。しかしながら、同一の化学構造を有する複数のキラル異性体を分離することは、この方法では達成することができなかった。
【００１０】
したがって、トコフェロールの同一の化学構造、特にそれらの保護された形のものの、複数のキラル異性体を分離することが、依然として望まれている。
【００１１】
［発明の概要］
本発明によって解決されるべき課題は、クロマンまたはクロメン化合物、同様にそれらの保護された形のものの複数のキラル異性体を容易かつ迅速に分離する方法を提供することである。
【００１２】
驚くべきことには、請求項１に記載のプロセスによってこの課題を解決することが可能であることが見出された。
【００１３】
移動相として超臨界二酸化炭素を、固定相としての極めて特殊なキラル相と組み合わせて使用することによって、ここのキラル異性体を極めて効率よく分離することできることが見出された。
【００１４】
この方法では、クロマンまたはクロメン化合物を互いに分離することができるだけではなく、個々のキラル異性体を分離することもまた可能である。
【００１５】
特に、生物学的に高活性の（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−トコフェロールを、（ａｌｌ−ｒａｃ）−トコフェロール、同様に２−ａｍｂｏ−トコフェロールから単離することができることがわかった。
【００１６】
しかしながら、そのプロセスは、単一のキラル異性体の単離に限定される訳ではなく、他のキラル異性体もまた、キラル異性体の混合物から個別に容易に単離することができる。個々の異性体に相当するピークの大部分は、特にうまくベースラインで分かれていて、前記キラル異性体を高い異性体純度で効率よく分離できていることが見出された。
【００１７】
その分離は、分離効率の点で極めて有利であるだけでなく、例外的に高い分離速度も示す。この方法では、分析スケールで５分以内、準分取スケール（ｓｅｍｉ−ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ｓｃａｌｅ）でも９分以内でキラル異性体を分離できることがわかった。
【００１８】
このような高い分離速度は、分析用途の点で有利であるだけでなく、分取分離（ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ）の点では特に有利である。
【００１９】
移動相として超臨界二酸化炭素を使用することで、分離における有機溶媒の使用量を無くすか、または大幅に少なくすることができる。このことは、エコロジーおよび作業安全性の点で極めて有利である。
【００２０】
したがって、このプロセスは、合成由来の高い生物活性のキラル異性体を単離することにユニークな可能性を与え、そのために、食品（ｆｏｏｄ）、飼料（ｆｅｅｄ）、補助食品（ｆｏｏｄ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）、補助飼料（ｆｅｅｄ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）、および医薬品組成物において極めて興味深い。
【００２１】
本発明のさらなる態様が、さらなる独立特許請求項の主題である。特に好ましい実施態様が、従属請求項の主題である。
【００２２】
［発明の詳細な説明］
第一の態様において、本発明は、式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）
【化１】
0006786761.tif 000002
の化合物のクロマンまたはクロメン化合物のキラル異性体を分離するプロセスに関しており、
［式中、Ｒ１、Ｒ３、およびＲ４は、互いに独立して、水素またはメチル基であり；
Ｒ２は、水素またはフェノール保護基を表し；
Ｒ５は、直鎖状もしくは分岐状の完全に飽和のＣ６〜２５−アルキル基、または少なくとも一つの炭素−炭素二重結合を含む直鎖状もしくは分岐状のＣ６〜２５−アルキル基のいずれかを表し；
そして、＊は、キラル中心を表す］
以下の工程
ａ）式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）において＊で表したキラル中心に、異なったキラルコンフィギュレーションを有する式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の異性体の混合物を準備する工程；
ｂ）移動相として超臨界二酸化炭素、そしてキラル固定相（ＣＳＰ＝ｃｈｉｒａｌ  ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ  ｐｈａｓｅ）としてシリカ担体の上にコーティングまたは固定化したアミローストリス（３，５−ジメチルフェニル−カルバメート）を用いた超臨界流体クロマトグラフィーの手段によって、工程ａ）の異性体の混合物をキラルクロマトグラフ分離する工程、を含む。
【００２３】
本明細書においては、「互いに独立して（ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ  ｆｒｏｍ  ｅａｃｈ  ｏｔｈｅｒ）」という用語は、置換基、残基、または基の文脈において、同一の表示をされている置換基、残基、または基が、同じ分子の中で、異なった意味合いで同時に使用されることが起こりうるということを意味している。
【００２４】
本明細書においては、点線はすべて、それによって置換基が残りの分子に結合されているという結合を表している。
【００２５】
「Ｃｘ〜ｙ−アルキル」、同様に「Ｃｘ〜ｙ−アシル」基は、ｘ〜ｙ個の炭素原子を含むアルキル基、同様にアシル基である、すなわち、たとえばＣ１〜３−アルキル基は、１〜３個の炭素原子を含むアルキル基である。アルキル基、同様にアシル基は、直鎖状もしくは分岐状であってよい。たとえば−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３は、Ｃ４−アルキル基と考えられる。
【００２６】
「ｐＫａ」は一般的に、酸の解離定数の１０を底とする負の対数として知られている（ｐＫａ＝−ｌｏｇ１０Ｋａ）。有機酸が複数のプロトンを有している場合、ｐＫａは、最初のプロトンの解離に関する（Ｋａ１）。示されているｐＫａ値は、室温におけるものである。当業者には公知のように、ある種の酸の酸度（ａｃｉｄｉｔｉｅｓ）は十分な溶媒の中で測定され、個々の測定で変化する可能性があり、あるいは、ｐＫａの測定が各種の溶媒の中で測定されたために、特定の酸に対して、異なったｐＫａ値が見出されるということもあり得る。したがって、極端な場合には、一つの酸に対して、異なったｐＫａ値が文献に見出され、その内の少なくとも一つが本明細書で示されたｐＫａ範囲に入っている場合（ここで、他の値が前記範囲の外であることが見出された場合）、そのような酸は、ｐＫａ値の範囲内にあると考えるよう定義する。
【００２７】
本明細書においては、「異性化された（ｉｓｏｍｅｒｉｚｅｄ）」または「異性化（ｉｓｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）」という用語は、キラリティにおける変化に関連する。したがって、原子が別の結合になるような構造異性化は、この用語では、意味されていない。さらに、この用語には、本明細書では、ｃｉｓ／ｔｒａｎｓ異性化も含まれない。
【００２８】
本明細書においては、単一の点線はすべて、それによって置換基が残りの分子に結合されているという結合を表している。
【００２９】
個々のキラル炭素中心のキラリティは、Ｒ．Ｓ．Ｃａｈｎ、Ｃ．Ｋ．Ｉｎｇｏｌｄ、およびＶ．Ｐｒｅｌｏｇによって定義された規則に従って、ＲまたはＳの表示で示される。立体化学において絶対的コンフィギュレーションを決めるためのこのＲ／Ｓの概念および規則は、当業者には公知である。
【００３０】
「異性体純度」（ＩＰ＝ｉｓｏｍｅｒｉｃ  ｐｕｒｉｔｙ）という用語は、本明細書においては、サンプルの中の全部の異性体の量を基準にした、特定のキラリティを有する異性体の量を記述している。たとえば、サンプル中の（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールの異性体純度（ＩＰ（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ））は、次式で与えられる。
【数１】
0006786761.tif 000003
【００３１】
この（上記の）式において、［（２Ｘ，４’Ｙ，８’Ｚ）］は、α−トコフェロール（Ｘ＝ＲまたはＳ、Ｙ＝ＲまたはＳ、そしてＺ＝ＲまたはＳ）の２、４’、および８’位にあるキラル中心における、所定のキラリティを有する個々の異性体の量（単位：ｍｏｌ）を示している。異性体純度は％の単位で与えられる。
【００３２】
前記プロセスによって、式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）のキラル異性体の区別が可能となる。式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）は、異なった置換基、すなわち、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５を有している。
【００３３】
残基Ｒ５は、直鎖状もしくは分岐状の完全に飽和のＣ６〜２５−アルキル基、または少なくとも一つの炭素−炭素二重結合を含む直鎖状もしくは分岐状のＣ６〜２５−アルキル基のいずれかを表している。
好ましくは、基Ｒ５が式（ＩＩＩ）の基である。
【化２】
0006786761.tif 000004
【００３４】
式（ＩＩＩ）において、ｍおよびｐは、互いに独立して、０〜５の数値を表しているが、ただし、ｍとｐを合計したものが１〜５である。さらに、ｓ１およびｓ２で示した、式（ＩＩＩ）の中の下部構造は、いかなる順序であってもよい。点線は、それによって式（ＩＩＩ）の置換基が、式（Ｉ−Ａ）または式（Ｉ−Ｂ）の化合物の残りの部分に結合されている結合を表している。さらに、＃印はキラル中心を表しているが、前記中心が２個のメチル基に結合されている場合には、明らかに除外される。
基Ｒ５が、式（ＩＩＩ−ｘ）の基であるのが好ましい。
【化３】
0006786761.tif 000005
【００３５】
先に述べたように、ｓ１およびｓ２で示した、式（ＩＩＩ）の中の下部構造は、いかなる順序であってもよい。したがって、末端基が下部構造ｓ２を有している場合には、この末端下部構造がキラル中心を有していないことは明らかである。
【００３６】
式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩ−ｘ）の二重結合（単一または複数）は、Ｅ−コンフィギュレーション、Ｚ−コンフィギュレーションのいずれであってもよい。二重結合（単一または複数）がＥ−コンフィギュレーションであるのが好ましく、式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩ−ｘ）の中の二重結合がすべてＥ−コンフィギュレーションであれば、最も好ましい。
【００３７】
一つの好ましい実施態様においては、ｍが３、ｐが０を表している。
【００３８】
また別の好ましい実施態様においては、ｐが３，ｍが０を表している。
【００３９】
従って、Ｒ５が好ましくは式（ＩＩＩ−Ａ）、特には（ＩＩＩ−ＡＲＲ）、または（ＩＩＩ−Ｂ）である。
【化４】
0006786761.tif 000006
Ｒ１、Ｒ３、およびＲ４が以下の組合せであるのが好ましい：
Ｒ１＝Ｒ３＝Ｒ４＝ＣＨ３
または
Ｒ１＝Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ３＝Ｈ
または
Ｒ１＝Ｈ、Ｒ３＝Ｒ４＝ＣＨ３
または
Ｒ１＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３。
より好ましいのは、Ｒ１＝Ｒ３＝Ｒ４＝ＣＨ３である。
【００４０】
式（Ｉ−Ｂ）のキラル異性体が、以下のものからなる群より選択される異性体であるのが好ましい：
・α−トコフェロール（Ｒ１＝Ｒ３＝Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ５＝（ＩＩＩ−Ａ））；
・β−トコフェロール（Ｒ１＝Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ３＝Ｈ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ５＝（ＩＩＩ−Ａ））、
・γ−トコフェロール（Ｒ１＝Ｈ、Ｒ３＝Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ５＝（ＩＩＩ−Ａ））、
・δ−トコフェロール（Ｒ１＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ５＝（ＩＩＩ−Ａ））；
・α−トコトリエノール（Ｒ１＝Ｒ３＝Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ５＝（ＩＩＩ−Ｂ））、
・β−トコトリエノール（Ｒ１＝Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ３＝Ｈ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ５＝（ＩＩＩ−Ｂ））、
・γ−トコトリエノール（Ｒ１＝Ｈ、Ｒ３＝Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ５＝（ＩＩＩ−Ｂ））、
・δ−トコトリエノール（Ｒ１＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ５＝（ＩＩＩ−Ｂ））
ならびに、それらの保護された形、特にそれらのエステル、好ましくは酢酸エステル（Ｒ２＝ＣＯＣＨ３）。
【００４１】
式（Ｉ−Ｂ）のキラル異性体が、以下のものからなる群より選択される異性体であれば、より好ましい：α−トコフェロール、γ−トコフェロール、α−トコトリエノール、およびγ−トコトリエノール、特にα−トコフェロールまたはα−トコトリエノール、および特にそれらの保護された形、特にそれらのエステル、好ましくは酢酸エステル（Ｒ２＝ＣＯＣＨ３）。
【００４２】
式（Ｉ−Ａ）のキラル異性体が、以下のものからなる群より選択される異性体であるのが好ましい：
・３，４−デヒドロ−α−トコフェロール（Ｒ１＝Ｒ３＝Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ５＝（ＩＩＩ−Ａ））；
・３，４−デヒドロ−β−トコフェロール（Ｒ１＝Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ３＝Ｈ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ５＝（ＩＩＩ−Ａ））、
・３，４−デヒドロ−γ−トコフェロール（Ｒ１＝Ｈ、Ｒ３＝Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ５＝（ＩＩＩ−Ａ））、
・３，４−デヒドロ−δ−トコフェロール（Ｒ１＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ５＝（ＩＩＩ−Ａ））；
・３，４−デヒドロ−α−トコトリエノール（Ｒ１＝Ｒ３＝Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ５＝（ＩＩＩ−Ｂ））、
・３，４−デヒドロ−β−トコトリエノール（Ｒ１＝Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ３＝Ｈ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ５＝（ＩＩＩ−Ｂ））、
・３，４−デヒドロ−γ−トコトリエノール（Ｒ１＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ５＝（ＩＩＩ−Ｂ））、
・３，４−デヒドロ−δ−トコトリエノール（Ｒ１＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ５＝（ＩＩＩ−Ｂ））
ならびに、それらの保護された形、特にそれらのエステル、好ましくは酢酸エステル（Ｒ２＝ＣＯＣＨ３）。
【００４３】
式（Ｉ−Ａ）のキラル異性体が、以下のものからなる群より選択される異性体であるのが、より好ましい；３，４−デヒドロ−α−トコフェロールおよび３，４−デヒドロ−α−トコトリエノール、特に３，４−デヒドロ−α−トコフェロール、ならびにそれらの保護された形、特にそれらのエステル、好ましくは酢酸エステル（Ｒ２＝ＣＯＣＨ３）。
【００４４】
Ｒ２は、水素またはフェノール保護基を表す。
【００４５】
フェノール保護基は、フェノール性の基（式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）におけるＯＨ）を保護する基であって、容易に脱保護、すなわち最新式の方法によって元のフェノール性の基に戻すことができる。
【００４６】
フェノール保護基は、分子の残りの部分と共になって化学的官能基を形成するが、それは特に、エステル、エーテル、またはアセタールからなる群より選択される。保護基は、当業者公知の標準的な方法によって、容易に除去することができる。
【００４７】
フェノール保護基が分子の残りと共になってエーテルを形成する場合には、その置換基Ｒ２は特に、直鎖状もしくは分岐状のＣ１〜１０−アルキル基またはシクロアルキル基またはアラルキル基である。置換基Ｒ２がベンジル基または置換されたベンジル基であるのが好ましく、ベンジル基であれば特に好ましい。
【００４８】
フェノール保護基が分子の残りと共になってエステルを形成する場合には、そのエステルは、有機酸または無機酸のエステルである。
【００４９】
そのエステルが有機酸のエステルなら、その有機酸は、モノカルボン酸またはポリカルボン酸、すなわち２個以上のＣＯＯＨ基を有する酸とすることができる。ポリカルボン酸は、好ましくは、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、マレイン酸、またはフマル酸である。
【００５０】
その有機酸がモノカルボン酸であるのが好ましい。
【００５１】
したがって、その置換基Ｒ２は、好ましくはアシル基である。そのアシル基は、特にはＣ１〜７−アシル、好ましくは、アセチル、トリフルオロアセチル、プロピオニル、またはベンゾイル基もしくは置換されたベンゾイル基である。
【００５２】
そのエステルが無機酸のエステルなら、その無機酸は、好ましくは硝酸またはポリプロトン酸、すなわち酸１分子あたり２個以上のプロトンを供与することが可能な酸であるが、特には、リン酸、ピロリン酸、亜リン酸、硫酸、および亜硫酸からなる群より選択される。
【００５３】
フェノール保護基が分子の残りと共になってアセタールを形成する場合には、その置換基Ｒ２は好ましくは
【化５】
0006786761.tif 000007
であり、ｎ＝０または１である。
【００５４】
したがって、そのようにして形成されるアセタールは、好ましくは、メトキシメチルエーテル（ＭＯＭ−エーテル）、β−メトキシエトキシメチルエーテル（ＭＥＭ−エーテル）、またはテトラヒドロピラニルエーテル（ＴＨＰ−エーテル）である。それらの保護基は、酸によって容易に除去できる。
【００５５】
保護基は、Ｒ２がＨである、相当する分子を保護剤と反応させることにより導入する。
【００５６】
相当するフェノール保護基を得るための保護剤、さらにはその化学プロセス、およびこの反応のための条件は、当業者には公知である。たとえば、そのフェノール保護基が分子の残りと共になってエステルを形成するのなら、それに適した保護剤は、たとえば、酸、無水物、またはハロゲン化アシルである。
【００５７】
上述の保護剤との反応によってエステルが形成され、そして前記エステルが有機ポリカルボン酸または無機ポリプロトン酸のエステルである場合には、本明細書の文脈で保護されていると認められるには、必ずしも全部の酸基がエステル化される必要はない。無機ポリプロトン酸のエステルが、リン酸エステルであるのが好ましい。
【００５８】
保護基Ｒ２が、ベンゾイル基またはＣ１〜４−アシル基、特にはアセチル基もしくはトリフルオロアセチル基であるのが好ましい。Ｒ２がアシル基、特にアセチル基で表されている分子は、エステル化によって相当する未保護の分子から容易に調製できるし、同様に、フェノール性の化合物は、相当するエステルから、エステル加水分解反応によって得ることができる。
【００５９】
Ｒ２がＨであるのが最も好ましい。
【００６０】
好ましい実施態様においては、式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の化合物が、式（Ｉ−Ａ−Ｉ）または（Ｉ−Ｂ−Ｉ）である。
【化６】
0006786761.tif 000008
【００６１】
式（Ｉ−Ａ−Ｉ）または（Ｉ−Ｂ−Ｉ）は、三つのキラル中心を有している。本明細書の式では、それらのキラル中心には＊の符号をつけている。キラル中心は、２位、４’位、および８’位に位置している。
【００６２】
このことから、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４の特定の組合せそれぞれにおいて、式（Ｉ−Ａ−Ｉ）または（Ｉ−Ｂ−Ｉ）の化合物には、８種のキラル異性体があることになる。
【００６３】
本発明のプロセスは、前記キラル中心において異なったキラリティを有しているキラル異性体を分離するのに適している。具体的には、それらのキラル異性体は、構造的には同じであるが、それらのキラリティだけが異なっている。
【００６４】
前記プロセスには、式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）において＊で表したキラル中心に、異なったキラルコンフィギュレーションを有する式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の異性体の混合物を準備する工程ａ）が含まれる。そのような混合物は、前記異性体の合成の結果、または前記異性体の前駆体を含む反応の結果として得ることができる。それらの前駆体は、合成由来であっても、あるいは生物由来であってもよい。さらには、そのような混合物が生物由来であることも可能である。
【００６５】
工業的に最も重要なのは、化学合成の結果得られる混合物である。
【００６６】
式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の化合物は公知の方法で調製することができる。
【００６７】
式（Ｉ−Ａ）の化合物は、たとえば、Ｋａｂｂｅ  ａｎｄ  Ｈｅｉｔｚｅｒ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９７８，８８８−８８９に開示されているようにして、式（Ｉ−ａａ）を、特にナトリウムボラネート（ｓｏｄｉｕｍ  ｂｏｒａｎａｔｅ）により還元し、次いで水を除去することによって得ることができる。
【００６８】
式（Ｉ−ａａ）の化合物を合成するのに好ましい方法は、Ｋａｂｂｅ  ａｎｄ  Ｈｅｉｔｚｅｒ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９７８，８８８−８８９に詳しく開示されているようにして、塩基の存在下、特にピロリジンの存在下で、相当する２−アセチル−メチルヒドロキノン、２−アセチル−ジメチルヒドロキノン、同様に、Ｒ２＝Ｈである式（ＸＸ）の２−アセチル−トリメチルヒドロキノン、またはフェノール保護基であるＲ２を有する式（ＸＸ）に相当する化合物と、式（ＸＸＩ）のケトン、特にファルネシルアセトンとからの方法である。
【化７】
0006786761.tif 000009
【００６９】
式（Ｉ−Ｂ）の化合物、特に式（Ｉ−Ｂ−Ｉ）の化合物は、公知の方法（Ｕｌｌｍａｎｎ’ｓ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｒｅｌｅａｓｅ  ２０１０，７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，“Ｖｉｔａｍｉｎｓ”，ｐ．４４−４６）により、相当する式（Ｘ）のメチル−、ジメチル−、同様にトリメチル−ヒドロキノンと、相当するアルコール、特に式（ＸＩ−Ａ）、同様に（ＸＩ−Ｂ）のアルコールとから合成することができる。
【化８】
0006786761.tif 000010
【００７０】
前記反応は立体特異的ではないので、式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の、２位の＊を付けたキラル中心でＲ−およびＳ−コンフィギュレーションをとる異性体の混合物が生成する。典型的には、式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の２位にあるキラル中心のところで約５０％がＳ異性体、５０％がＲ−異性体のラセミ混合物が生成する。
【００７１】
式（ＸＩ−Ｂ）のアルコールであるフィトールは、従来からの方法で合成すれば、典型的には、４種の異性体（（Ｒ，Ｒ）−、（Ｒ，Ｓ）−、（Ｓ，Ｒ）−、および（Ｓ，Ｓ）−異性体）の異性体混合物である。
【００７２】
フィトール、同様にイソフィトールの異性体混合物を使用すると、すべてのキラル中心（２位、４’位、および８’位）で混合コンフィギュレーションを有する式（Ｉ−Ｂ−Ｉ）の８種の異性体の混合物が得られる。
【００７３】
すべてのキラル中心で混合コンフィギュレーションを有する式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の異性体の混合物は、本明細書においては、「（ａｌｌ−ｒａｃ）」と呼ぶ。したがって、すべてのキラル中心（２位、４’位、および８’位）で混合コンフィギュレーションを有する式（Ｉ−Ｂ−Ｉ）におけるような混合物は、Ｒ２＝Ｈである場合には、「（ａｌｌ−ｒａｃ）−トコフェロール」と呼ばれる。したがって、「（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロール」は、α−トコフェロールの８種の異性体の混合物である。
【００７４】
したがって、一つの実施態様においては、式（Ｉ−Ｂ）のキラル異性体の混合物が、（ａｌｌ−ｒａｃ）−トコフェロール、特に（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールであるのが好ましい。
【００７５】
さらなる好ましい実施態様においては、式（Ｉ−Ｂ）のキラル異性体の混合物が、（ａｌｌ−ｒａｃ）−トコフェリルアセテート、特に（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェリルアセテートである。
【００７６】
さらなる好ましい実施態様においては、式（Ｉ−Ａ）のキラル異性体の混合物が、（ａｌｌ−ｒａｃ）−３，４−デヒドロ−トコフェロール、特に（ａｌｌ−ｒａｃ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロール、またはその酢酸エステルである。
【００７７】
これとは対照的に、天然のフィトールは（Ｒ，Ｒ）−異性体のみからなっており、従って異性体的には純品である。
【００７８】
したがって、一つの好ましい実施態様においては、式（Ｉ−Ｂ−Ｉ）の化合物は、天然のフィトールから調製される。しかしながら、天然のフィトール、同様にイソフィトールは、商品としては少量しか入手できず、しかも高価であるので、工業的スケールでトコフェロールを合成するために、天然のフィトール、同様にイソフィトールが使用できる可能性はかなり限定される。
【００７９】
しかしながら、新規な開発によって、好ましい、単一の異性体が生成するような、フィトールの合成が可能となってきた。たとえば国際公開第２００６／０６６８６３Ａ１号パンフレットまたは国際公開第２０１２／１７１９６９Ａ１号パンフレットには、キラルイリジウム錯体を使用してアルケンを不斉水素化する方法が開示されている（参照することによりこれらの特許の内容のすべてを本明細書に取り入れたものとする）。この方法を使用することによって、相当するアルケンのキラル水素化反応生成物の望ましい異性体が選択的に得られ、次いでそれを化学的にさらに転換させて、同様にイソフィトールの望ましい異性体とすることができることが見出された。フィトール、同様にイソフィトールを、次いで、さらなる公知の化学的転位反応によって、最終的にトコフェロールの望ましい異性体に転換させることができる。
【００８０】
したがって、また別の好ましい実施態様においては、式（Ｉ−Ｂ−Ｉ）の化合物を、キラルイリジウム錯体の存在下におけるアルケンの不斉水素化も含めた多段の反応で得られたイソフィトールから調製する。
【００８１】
異性体的に純品のフィトール、同様にイソフィトールを使用すると、式（Ｉ−Ｂ−Ｉ）中の２位のキラル中心で混合コンフィギュレーションを有する２種の異性体の混合物が得られる。
【００８２】
２位のキラル中心（だけ）に混合コンフィギュレーションを有する混合物を、本明細書においては、「ａｍｂｏ」、同様に「（２−ａｍｂｏ−）」と呼ぶ。したがって、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−トコフェロールと（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−トコフェロールとのそのような混合物は、Ｒ２＝Ｈである場合には、（２−ａｍｂｏ）−トコフェロールと呼ばれる。したがって、（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェロールとは、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールと（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールとの混合物である。
【００８３】
したがって、また別の好ましい実施態様においては、式（Ｉ−Ｂ）のキラル異性体の混合物が、（２−ａｍｂｏ）−トコフェロール、特に（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェロールである。
【００８４】
さらなる好ましい実施態様においては、式（Ｉ−Ｂ）のキラル異性体の混合物が、（２−ａｍｂｏ）−トコフェリルアセテート、特に（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェリルアセテートである。
【００８５】
トコトリエノールおよび３，４−デヒドロトコトリエノールは、ただ一つのキラル炭素、すなわち２位の炭素中心を有している。したがって、（２Ｒ）−トコトリエノールと（２Ｓ）−トコトリエノールとの混合物は、「（ｒａｃ）−トコトリエノール」と呼ばれ、そして（２Ｒ）−３，４−デヒドロ−トコトリエノールと（２Ｓ）−３，４−デヒドロ−トコトリエノールとの混合物は、「（ｒａｃ）−３，４−デヒドロトコトリエノール」と呼ばれる。
【００８６】
さらなる好ましい実施態様においては、式（Ｉ−Ｂ）のキラル異性体の混合物は、「（ｒａｃ）−トコトリエノール」、特に「（ｒａｃ）−α−トコトリエノール」、またはそれらの酢酸エステルである。さらなる好ましい実施態様においては、式（Ｉ−Ａ）のキラル異性体の混合物が、（２−ａｍｂｏ）−３，４−デヒドロ−トコフェロール、特に（２−ａｍｂｏ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロール、またはその酢酸エステルである。
【００８７】
前記プロセスにはさらに、移動相として超臨界二酸化炭素、そしてキラル固定相（ＣＳＰ）としてシリカ担体の上にコーティングまたは固定化されたアミローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）を用いた超臨界流体クロマトグラフィーの手段によって、式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の異性体の混合物をキラルクロマトグラフ分離する工程ｂ）が含まれる。
【００８８】
超臨界二酸化炭素は、二酸化炭素の流体状態であって、それが、その臨界温度および臨界圧力、またはそれ以上に保持されている。二酸化炭素の場合、その臨界温度（Ｔｃ）が３１．３℃、その臨界圧力（ｐｃ）が７．３９ＭＰａである。超臨界流体クロマトグラフィーのための移動相として、超臨界二酸化炭素が使用される。
【００８９】
キラル固定相（ＣＳＰ）としては、シリカ担体の上にコーティングまたは固定化されたアミローストリス（３，５−ジメチルフェニル−カルバメート）が使用される。
【００９０】
アミローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）は、たとえば米国特許第４，８６１，８７２号明細書に記されているような、化学反応によって変性されたアミロースであるので、アミロースのヒドロキシル基のＨの８０％〜１００％が３，５−ジメチルフェニルカルバメート基に変換されて、次の化学式となっている。
【化９】
0006786761.tif 000011
【００９１】
キラル固定相は、アキラルな固体担体のシリカ、特にシリカゲルの表面にこのキラル化合物を付着させることによって調製することができる。キラル化合物は、シリカ担体の上に固定させるか、またはコーティングを形成させるのがよい。キラル化合物を、担体に吸着させるか、または化学的に結合させることも可能である。担体にキラル化合物を化学的に結合させるのが好ましい。
【００９２】
そのようなキラル相は、米国特許第４，８６１，８７２号明細書およびＰｕｒｅ  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．７９，Ｎｏ．９，２００７，１５６１−１５７３に記載されている（参照することによりそれらの内容をすべて本明細書に取り入れたものとする）。
【００９３】
特に好適なのは、日本国（株）ダイセル（Ｄａｉｃｅｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）から市販されている、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＩＡおよびＩＡ−３およびＡＤおよびＡＤ−ＨおよびＡＤ−３のキラル相である。
【００９４】
他の多糖類たとえばセルロースをベースとする他のキラル固定相（ＣＳＰ）は、適していないか、またははるかに劣っていることが見出された。同様に、アミロースの他の誘導体（たとえば、アミローストリス（（Ｓ）−α−メチルベンジル−カルバメート）もまた、分離を示さないか、または顕著に分離度が低い。たとえば、キラル固定相のＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＩＢまたはＩＣまたはＯＺまたはＯＪ−ＨまたはＡＳ−Ｈは、キラル異性体の分離を示さないか、または分離が不十分である。
【００９５】
キラル相の粒径は、一つの実施態様においては、２５マイクロメートル未満、特には３〜２５マイクロメートルの間、好ましくは５〜２５マイクロメートルの間、より好ましくは５〜１５マイクロメートルの間である。
【００９６】
また別な実施態様においては、キラル相の粒径が、２５マイクロメートルより大、特には５０〜７０マイクロメートルの間である。そのような大きな粒径を使用することによって、加える圧力を下げることができるので好ましい。これらの大きな粒径は、分取分離の場合に特に適している。
【００９７】
日本国（株）ダイセル製のキラル固定相のＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−ＨおよびＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−３が、本発明の目的には特に適していることがわかった。
【００９８】
移動相に、変性剤としてある種の溶媒を添加するのが好ましいこともわかった。具体的には、移動相にアルコール、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、２−メチル−１−プロパノール、および２−メチル−２−プロパノールからなる群より選択されるアルコールを含んでいると特に有利であることが見出された。メタノールおよびエタノールが好ましく、メタノールが最も好ましい。
【００９９】
移動相にこれらの溶媒を加えることによって、分離の選択性が顕著に改良されることが観察された。このことは、アルコールを添加することによって超臨界の移動相の極性が高くなるということによって説明される。
【０１００】
観察されたところでは、アルコールは、超臨界二酸化炭素に対して、好ましくは１〜３０％、特には１〜２５％、好ましくは５〜２０％、より好ましくは８〜１５％の容積比で使用される。
【０１０１】
移動相に対してその他の極性溶媒たとえば、アセトニトリル、エーテル（たとえばｔｅｒｔ．−ブチルメチルエーテル）、エステル（たとえば酢酸エチル）、ケトン（たとえばアセトン）、ハロゲン化炭化水素（たとえばクロロホルムまたはジクロロメタン）、または水を添加しても、このように有利な硬化は認められなかった。
【０１０２】
ある種の場合においては、その移動相にさらに、アミン、特にジメチルアミン、ジエチルアミン、およびジプロピルアミンからなる群より選択される二級アミンを含ませることもまた可能である。典型的には、それらのアミンは少量で添加する。
【０１０３】
さらに、移動相には、少なくとも、６．０未満、特には０．５〜６．０の間、好ましくは３．０〜６．０の間のｐＫａを有する有機酸、特に酢酸を含むこともできる。
【０１０４】
３．０〜６．０の間のｐＫａを有する有機酸の例としては、具体的には、クエン酸、フタル酸、テレフタル酸、コハク酸、ケイ皮酸、ギ酸、乳酸、酢酸、アスコルビン酸、安息香酸、ブタン酸、プロパン酸、およびオクタン酸が挙げられる。
【０１０５】
６．０よりも低いｐＫａを有する酸は、先に挙げたものに加えて、たとえばスルホン酸またはハロゲン化酸、たとえばトリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ドデシルベンゼンスルホン酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、およびノナフルオロブタンスルホン酸である。
【０１０６】
移動相の中の超臨界二酸化炭素の量は、７５容積％より大、好ましくは容積で８５％より大、特には９０％以上であるのが好ましい。
【０１０７】
クロマトグラフ分離は、３１．３℃〜８０℃の間の範囲、好ましくは３２℃〜５０℃の間の範囲、特には３５℃〜４５℃の間の温度で実施するのが好ましい。
【０１０８】
さらに観察されたところでは、クロマトグラフ分離は、７３．９ｂａｒ（７．３９ＭＰａ）〜２００ｂａｒの間、特には７４〜１５０ｂａｒの間、好ましくは７４〜１００ｂａｒの間、より好ましくは７４〜９０ｂａｒの間の圧力で実施する。
【０１０９】
最良の分離結果が観察されたのは、二酸化炭素の臨界温度（３１．３℃）近くの温度および臨界圧力（７３．９ｂａｒ）近くの圧力の場合であった。
【０１１０】
キラルクロマトグラフ分離および超臨界流体クロマトグラフィーのための装置は、原理としては、当業者に公知である。
【０１１１】
好ましい実施態様を、図１ａ）、図１ｂ）、および図１ｃに示す。
【０１１２】
一つの実施態様においては、カラムの出口で異性体を捕集する。これは、図１ａ）の中に、模式的に示されている。二酸化炭素は、二酸化炭素ボンベ１から供給される。アルコール２を、二酸化炭素のストリームに加え、ＳＦＣポンプ５の手段によって、キラル固定相４が含まれているクロマトグラフのカラム３に輸送する。式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）のキラル異性体の混合物６を、適切な注入手段によって移動相の中に注入する。キラル固定相４を含むカラム３は、加熱装置７、具体的にはＳＦＣ（カラム−）オーブンの手段によって温度調節し、クロマトグラフのカラムから出てくる溶出液８を、検出手段９、具体的にはＵＶ検出器またはダイオードアレー検出器によって分析／検出するが、検出器は、コンピューター１０（これはＳＦＣ装置全体１１も調節している）に接続されている。クロマトグラフ条件、特に圧力は、レストリクター１２によって調節されている。溶出液がレストリクターを通過すると、それが膨張して、超臨界二酸化炭素１３はその凝集状態から変化して、ガス状の二酸化炭素１４に変容し、それにより残存溶出液が得られ、分離された異性体の１５、１５’が容器１６、１６’に残る。残存溶出液の流れは、バルブ１７で仕分けられて、第一の容器１６、または第二の容器１６’の中に入る。
【０１１３】
圧力放散の結果として、超臨界二酸化炭素がガス状の二酸化炭素に変化し、その移動相の組成と溶解性が劇的に変化するので、分離されたキラル異性体が、レストリクター１２とバルブ１７の間のチューブ１８に付着する傾向がある。それらの残渣１９が、その後のフラクションがクロマトグラフ分離のこの部分を通過するときに、それらを汚染する傾向がある。
【０１１４】
この問題を克服するためには、装置の第二の実施態様が好ましい。この改良した装置１１’は、すぐ上で述べた装置１と同様であるが、ただし検出手段９、特にダイオードアレー検出器とレストリクター１２との間にＴ字形接続部２０を位置させて、それによって、ポンプ２２、特にはＨＰＬＣ−ポンプの手段によって溶出液の流れの中に、フラッシュ／リンス溶媒２１の流れを導入している。このフラッシュ／リンス溶媒はさらに、二酸化炭素がなくなったところで、レストリクター１２とバルブ１７との間のチューブ１８を連続的に洗い流す。そのフラッシュ／リンス溶媒は、式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）のキラル異性体に対して高い溶解性を有している溶媒であるで、残渣が形成されることもないし、その結果、後のフラクションの汚染も起きない。特に好適なフラッシュ／リンス溶媒は、炭化水素、特にヘプタンである。一つの極めて好ましい実施態様においては、そのフラッシュ／リンス溶媒がアルコール、特に移動相の一部としたのと同じアルコール、すなわち分離カラムに入る前に二酸化炭素に加えられたアルコール、好ましくはエタノールまたはメタノールである。
【０１１５】
超臨界流体クロマトグラフィーに、米国特許第５，５１８，６２５号明細書および国際公開第０３／０５１８６７Ａ１号パンフレットに開示されているようなＳＭＢ−ＳＦＣ、すなわちＳＭＢ方式（ｓｅｔ  ｕｐ）を使用すると、レストリクターの後で発生する残渣の問題は、異なった実験方式の結果として、存在しなくなる。
【０１１６】
本発明のプロセスの工程ｂ）によって、式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の異性体の混合物が分離される。これらの異性体の少なくとも一方が、混合物から分離される。この異性体を捕集するのが好ましい。
【０１１７】
したがって、このプロセスには、望ましい異性体（Ｉｄｅｓ）を捕集する工程ｅ）が含まれる。
【０１１８】
個別に分離されるか、または残渣としての、望ましくない異性体（単一または複数）を異性化させてもよい。
【０１１９】
その異性化についての詳細は、国際公開第２０１２／１５２７７９Ａ１号パンフレットに見出すことができる（参照することによりそれらの内容をすべて本明細書に取り入れたものとする）。
【０１２０】
したがって、一つの実施態様においては、工程ｂ）のキラルクロマトグラフ分離によって、望ましい異性体（Ｉｄｅｓ）と残分の（Ｉ’）とが生成し、さらに以下の工程が含まれる：
ｃ）工程ｂ）で分離された残分（Ｉ’）の異性体の、式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の中で＊で示された環の中心でのキラリティを異性化させて、異性化された生成物を得る工程；
ｅ）望ましい異性体（Ｉｄｅｓ）を捕集する工程。
【０１２１】
好ましくは、工程ｃ）における式（Ｉ−Ａ）の化合物のキラリティ中心（単一または複数）の異性化を、その残分（Ｉ’）を１５０℃より高い温度、特に１６０〜５００℃の間の温度に暴露させることにより実施するのが好ましい。しかしながら、異性体の望ましくない分解を避けるために、あまり高い温度にするべきではない。１６０〜３００℃の間の温度が良好な結果を与えるということが見出された。
【０１２２】
また別な実施態様においては、工程ｃ）における異性化を、２よりは低い、特には１よりは低いｐＫａの酸に残分（Ｉ’）を暴露させることにより実施する。この異性化方法は、好ましいものである。
【０１２３】
この異性化では特に、２位だけのキラル中心のキラリティを変化させる。
【０１２４】
工程ｃ）における異性化によって、＊で示された中心でコンフィギュレーションの変化が起こり、その結果、異性化の後では、Ｒ−コンフィギュレーションにある分子とＳ−コンフィギュレーションにある分子との数の比が、約（５０：５０）となる。当業者には明らかなことであるが、異性化が完全に進行したとしても、本当の異性化は、５０：５０の比率から外れている。完全な異性化が望ましいが、異性化によって望ましい異性体の量が増えるのでありさえすれば、本発明においては不完全な異性化も有用である。異性化工程の後での望ましい異性体の量の、望ましくない異性体の量に対する比率は、少なくとも（２５：７５）、特には少なくとも（３０：７０）、好ましくは少なくとも（４０：６０）であることが見出された。
【０１２５】
異性化された生成物は、工程ｂ）のクロマトグラフ分離に導入することができる。したがって、そのプロセスには、好ましくは、さらなる工程ｄ）が含まれる：
ｄ）異性化された生成物を、工程ｂ）のクロマトグラフ分離に導入する工程。
【０１２６】
異性化によって、望ましくない異性体、特に、低い生理活性しか有さない異性体を、望ましい異性体、特に、高い生理活性を有する異性体へと変換させることができる。
【０１２７】
本明細書における式で＊印をつけたキラル中心でＲ−コンフィギュレーションであるものが、特に生理活性が高いことが観察された。このことは、たとえば、Ｓ．Ｋ．Ｊｅｎｓｅｎ，Ｖｉｔａｍｉｎｓ  ａｎｄ  Ｈｏｒｍｏｎｅｓ，２００７，Ｖｏｌ．７６，２８１−３０８に示されている（参照することによりそれらの内容をすべて本明細書に取り入れたものとする）。したがって、式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）で望ましいキラル異性体は、＊で印を付けた炭素でＲ−コンフィギュレーションを有しているのが好ましい。
【０１２８】
望ましい異性体（Ｉｄｅｓ）が、以下のものからなる群より選択されるのが好ましい：
（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェリルアセテート、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−β−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−β−トコフェリルアセテート、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−γ−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−γ−トコフェリルアセテート、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−δ−トコフェロール、および（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−δ−トコフェリルアセテート；
（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェリルアセテート、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−β−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−β−トコフェリルアセテート、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−γ−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−γ−トコフェリルアセテート、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−δ−トコフェロール、および（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−δ−トコフェリルアセテート；
（２Ｒ）−α−トコトリエノール、（２Ｒ）−α−トコトリエニルアセテート、（２Ｒ）−β−トコトリエノール、（２Ｒ）−β−トコトリエニルアセテート、（２Ｒ）−γ−トコトリエノール、（２Ｒ）−γ−トコトリエニルアセテート、（２Ｒ）−δ−トコトリエノール、および（２Ｒ）−δ−トコトリエニルアセテート；
そして、好ましくは（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロール、および（２Ｒ）−α−トコトリエノールからなる群より選択される。
【０１２９】
図１ｃ）は、そのような好ましいプロセスを模式的に示している。工程ａ）で得られた式（Ｉ−Ａ）の異性体の混合物６を、工程ｂ）において、移動相として超臨界二酸化炭素１３を使用し、そしてキラル固定相４としてシリカ担体の上にコーティングまたは固定化されたアミローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）を使用する、超臨界流体クロマトグラフィーの手段によって分離する。工程ｂ）のキラルクロマトグラフ分離によって、望ましい異性体（Ｉｄｅｓ）２３と残分（Ｉ’）２４とが得られる。残分（Ｉ’）２４を工程ｃ）で異性化すると、工程ｂ）で分離された残分（Ｉ’）の異性体の式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の中の＊で示された環の中の中心のところのキラリティから、異性化された生成物２５が生成する。
【０１３０】
工程ｄ）において、その異性化された生成物２５を、工程ｂ）のクロマトグラフ分離に導入して、工程ｅ）において、望ましい異性体（Ｉｄｅｓ）を捕集する。このプロセスが連続プロセスであるのが好ましく、それによって、異性化された生成物２５を、式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の異性体の混合物の入ってくるストリームであって、工程ｂ）の分離が実施されるカラムの入口のところの移動相に連続的にフィードする。望ましい異性体（Ｉｄｅｓ）の捕集もまた、連続的に捕集するのが好ましい。
【０１３１】
このプロセスでは、これにより、工程ｅ）で捕集される望ましい異性体（Ｉｄｅｓ）を連続的に製造する、すなわち、工程ｂ）における望ましい異性体（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）と残分（Ｉ’）とを分離した直後に製造する、極めてコスト的に有利な方法が可能となるので、はるかに好適である。
【０１３２】
キラルクロマトグラフ分離で疑似移動床（ＳＭＢ）クロマトグラフィーを使用すると、特に良好な分離が可能となることが見出された。疑似移動床（ＳＭＢ）クロマトグラフィーは、ラセミ混合物を分離するための公知の方法であって、たとえば米国特許第５，５１８，６２５号明細書および国際公開第０３／０５１８６７Ａ１号パンフレットに開示されている（参照することによりそれらの内容のすべてを本明細書に取り入れたものとする）。式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）のキラルの異性体の混合物を大スケール、特に工業的スケールで分離しようとすると、超臨界流体クロマトグラフィーのためにＳＭＢ方式を使用すること、すなわちＳＭＢ−ＳＦＣが極めて有利である。たとえば、米国特許第５，７７０，０８８号明細書および欧州特許出願公開第０６８７４９１Ａ１号明細書において、ＳＭＢ−ＳＦＣが論じられている（参照することによりそれらの内容のすべてを本明細書に取り入れたものとする）。
【０１３３】
それは、超臨界二酸化炭素を使用するこの用途では特に有用であるが、その理由は、低粘度で低密度であるために、大型で長いカラムにおける圧力損失が小さくなるためである。この文脈において重要なこととして、低い圧力、特に臨界圧力の７．３９ＭＰａに近い圧力で、その分離がさらに良好になることが見出されたということを述べておく。さらに、ＳＭＢ方式では、すでに先に説明したような、装置の出口のところでの残渣による汚染の問題が生じない。これらの観点全てから、ＳＭＢとＳＦＣを組み合わせると、極めて有利である。
【０１３４】
さらに、ＳＦＣ−ＳＭＢにより捕集された異性体のフラクションは、高度に濃縮されているが、その理由は、超臨界ＣＯ２が膨張してガス状態になる（ＳＭＢの出口では常圧）ので、高度に濃縮され、キラル分離のために使用された極めて少量の変性剤によって希釈されただけの高度に純粋な異性体の形で捕集することが可能となるという事実のために、サンプル混合物に何の希釈も加わらないからである。
【０１３５】
本発明によって、定量的な方法で分離することが可能となる。さらに、本発明によって、式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）のキラルの異性体の混合物から、望ましい異性体の少なくとも一つを高い異性体純度で異性体分離をすることが可能となる。
【０１３６】
具体的には、生理学的に最も活性の高い異性体（単一または複数）、特に（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールを単離することができる。
【０１３７】
重要なのは、この分離が定量的であって、高い異性体純度を得ることが可能であるということを認識することである。
【０１３８】
一方では、本発明のプロセスが極めて良好な異性体の分離を示し、他方では、その方法が極めて高速である。この方法では、分析スケールで５分以内、準分取スケールでは９分以内でキラル異性体を分離できることがわかった。分離するべき異性体の数が極めて少ないので、（２−ａｍｂｏ）−トコフェロールの分離は、分析スケール、さらには準分取スケールでも、５分以内で分離することが可能である。
【０１３９】
クロマトグラフ分離における、個々のキラル異性体に相当するピークのほとんどが、ベースラインで十分に分離されていることが観察された。したがって、異性体を個別に単離することが可能であり、単離したキラル異性体で極めて高い異性体純度を達成することができる。
【０１４０】
最後に、この方法は、その移動相が、完全にまたは少なくとも大部分が二酸化炭素で構成されており、それが減圧によって、超臨界凝集状態からガス凝集状態へと移行するという点で極めて有利である。したがって、分離の最後に得られる生成物は、溶媒またはさらなる成分が移動相の一部であるケースでは、その純品の形態、またはほとんど純品の形態にある。それらの分離は、慣用される溶媒クロマトグラフ分離法でのそれらの除去に比べれば、はるかに容易である。
【０１４１】
このように溶媒が存在しないこと、あるいは溶媒の量が少ないことが、速度およびコストの面から極めて有利である。さらに、標準的な溶媒に比較して、二酸化炭素は、比較的安価で容易にリサイクル可能な媒体であり、不活性であり、毒性が低い。さらに、ガス状の二酸化炭素は、得られた生成物（単一または複数）が分解／酸化されることも連続的に防止している。
【０１４２】
二酸化炭素は天然の化合物、すなわち、有機化合物の酸化反応の副生物である。具体的には、二酸化炭素は大量に生成しており、地球温暖化の原因物質とみなされてきた。したがって、天然物または廃棄物から単離または回収した二酸化炭素で製造した二酸化炭素は、エコバランス上極めてプラスの方向である。
【０１４３】
移動相の主要部分の移動相として超臨界二酸化物を使用すると、分離における有機溶媒の使用を回避または減少できるだけではない。
【０１４４】
さらに、二酸化炭素は、ほとんど無制限に利用可能であり、廃棄物と考えられている。
【０１４５】
これらすべてのことが、二酸化炭素の使用が、エコロジーおよび作業安全性の面だけではなく、コストの面でも極めて有利であるという事実につながっている。
【０１４６】
分析法ないしは半分取法から、定量的で工業的スケールへのスケールアップは、当業者によって達成可能である。これは特に、疑似移動床（ＳＭＢ）クロマトグラフィーの技術を使用することにより達成される。
【０１４７】
一つの実施態様においては、Ｒ２が水素を表している式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）のキラルの異性体を分離した後、工程ｆ）で反応させる：
ｆ）Ｒ２＝Ｈを有する望ましい異性体（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）を保護剤と反応させて、その中でＲ２がフェノール保護基を表している式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の異性体を生成させる。
【０１４８】
したがって、好ましくは、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−トコフェロール、特に（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールを、先に詳しく説明したようにして、望ましい異性体（Ｉｄｅｓ）として分離し、そして捕集し、工程ｆ）において保護剤と反応させて、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−トコフェロール、特に（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールをその保護された形、好ましくは（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−トコフェリルアセテート、特に（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェリルアセテートを生成させる。
【０１４９】
さらなる態様においては、本発明は、移動相として超臨界二酸化炭素そしてキラル固定相（ＣＳＰ）としてシリカ担体の上にコーティングまたは固定化されたアミローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）を用いた超臨界流体クロマトグラフィーの、クロマンまたはクロメンを９５重量％よりも高い異性体純度で調製するための使用に関するが、それらのクロマンまたはクロメンは、以下のものからなる群より選択される：（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−β−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−γ−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−δ−トコフェロール；（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−β−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−γ−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−δ−トコフェロール、（２Ｒ）−α−トコトリエノール、（２Ｒ）−β−トコトリエノール、（２Ｒ）−γ−トコトリエノール、および（２Ｒ）−δ−トコトリエノール；
特には（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロール、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロール、および（２Ｒ）−α−トコトリエノールからなる群より選択されるもの、
好ましくは（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロール。
【０１５０】
さらなる態様においてはさらに、本発明は、食品または飼料または補助食品または補助飼料または医薬品組成物を製造するプロセスに関し、それには以下の工程が含まれる：
ｉ）先に詳しく説明したプロセスによって、９５重量％よりも高い異性体純度を有する式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の化合物を調製する工程；
ｉｉ）工程ｉ）の式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の化合物を、少なくとも１種の食品成分または少なくとも１種の飼料成分または少なくとも１種の補助食品成分または少なくとも１種の補助飼料成分または少なくとも１種の医薬品組成物のための成分に添加する工程。
【０１５１】
したがって、食品または飼料または補助食品または補助飼料または医薬品組成物を、すぐ上で説明したプロセスによって調製することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１５２】
【図１ａ−１】図１ａ）および１）は、キラルクロマトグラフ分離のため、および超臨界流体クロマトグラフィーのための装置を模式的に示したものである。
【図１ｂ】図１ｂ）は、図１ａ）に示したものよりも優れた実施態様を模式的に示したものであり、ここでは、溶媒を用いて装置を洗い流している。
【図１ｃ】図１ｃ）は、異性化工程を含むプロセスを模式的に示したものである。
【図２】図２ａ）に、（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールで得られたクロマトグラムを示す。（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールの８種の異性体から、３種の異性体を、良好なベースライン分離（３．５７分、３．７０分、および４．０１分）で分離した。保持時間３．７０分に最大値を有するピークは、同一のカラムと同一の条件で（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールの参照サンプルについて対照実験をすることにより、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールと同定することができた。この参照（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールのクロマトグラムを図２ｂ）に示す。
【図３】図３ａ）に、（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールで得られたクロマトグラムを示す。さらに、（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェロール（ＤＳＭ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）（１０ｍｇ）のｎ−ヘプタン（１０ｍＬ）中溶液を調製して、キラル固定相（ダイセルＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−３、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、直列接続した２本のカラム；溶離剤：超臨界ＣＯ２／１０容積％メタノール、４０℃、背圧９０ｂａｒ；流量３．０ｍＬ／分；検出２１０ｎｍ、５μＬ注入）に注入し、分離させた。図３ｂ）に、得られた２−ａｍｂｏ−α−トコフェロールのクロマトグラムを示す。（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールの８種の異性体から、４種の異性体が、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝９．５６分、８．７８分、８．５２分、および８．１７分）で分離された。２−ａｍｂｏ−α−トコフェロールの２種の異性体も、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝８．７８分および７．８６分）で分離された。（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールおよび２−ａｍｂｏ−α−トコフェロールの、保持時間８．７８分に最大値を有するピークは、同一のカラムと同一の条件で（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールの参照サンプルについて対照実験をすることにより、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールと同定することができた。こうして得られた、この参照（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールのクロマトグラムを図３ｃ）に示す。
【図４】図４ａ）に、（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールで得られたクロマトグラムを示す。さらに（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェロール（１０ｍｇ）のｎ−ヘプタン（１０ｍＬ）中溶液を調製して、キラル固定相（ダイセルＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−３、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、直列接続した２本のカラム；溶離剤：超臨界ＣＯ２／１０容積％メタノール、３５℃、背圧１１０ｂａｒ；流量４．０ｍＬ／分；検出２９５ｎｍ、５μＬ注入）に注入し、分離させた。図４ｂ）に、（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェロールで得られたクロマトグラムを示す。（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールの８種の異性体から、４種の異性体が、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝６．６５分、６．０５分、５．８１分、および５．５２分）で得られた。（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェロールの２種の異性体も、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝６．０５分および５．２９分）で分離された。（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールおよび（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェロールの、保持時間６．０５分に最大値を有するピークは、同一のカラムと同一の条件で（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールの参照サンプルについて対照実験をすることにより、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールと同定することができた。この参照（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールのクロマトグラムを図４ｃ）に示す。
【図５】図５ａ）に、（ａｌｌ−ｒａｃ）−γ−トコフェロールで得られたクロマトグラムを示す。さらに、２−ａｍｂｏ−γ−トコフェロール（１０ｍｇ）のｎ−ヘプタン（１０ｍＬ）中溶液を調製して、キラル固定相（ダイセルＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−３、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、直列接続した２本のカラム；溶離剤：超臨界ＣＯ２／１０容積％メタノール、４０℃、背圧９０ｂａｒ；流量３．０ｍＬ／分；検出２１０ｎｍ、１５μＬ注入）に注入し、分離させた。図５ｂ）に、（２−ａｍｂｏ）−γ−トコフェロールで得られたクロマトグラムを示す。（ａｌｌ−ｒａｃ）−γ−トコフェロールの場合においては、３本のピークが、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝８．３９分、８．８５分、および９．３６分）で得られた（図５ａ）。（２−ａｍｂｏ）−γ−トコフェロールの２種の異性体も、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝８．８６分および９．３６分）で分離された（図５ｂ）。（２−ａｍｂｏ）−γ−トコフェロールの、保持時間９．３６分に最大値を有するピークは、同一のカラムと同一の条件で（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−γ−トコフェロールの参照サンプルについて対照実験をすることにより、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−γ−トコフェロールと同定することができた。この参照（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−γ−トコフェロールのクロマトグラムを図５ｃ）に示す。
【図６】図６ａ）に、（ａｌｌ−ｒａｃ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールで得られたクロマトグラムを示す。さらに、（２−ａｍｂｏ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロール（１０ｍｇ）のｎ−ヘプタン（１０ｍＬ）中溶液を調製して、キラル固定相（ダイセルＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−３、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、直列接続した２本のカラム；溶離剤：超臨界ＣＯ２／１０容積％メタノール、４０℃、背圧９０ｂａｒ；流量３．０ｍＬ／分；検出２９５ｎｍ、１５μＬ注入）に注入し、分離させた。図６ｂ）に、（２−ａｍｂｏ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールで得られたクロマトグラムを示す。（ａｌｌ−ｒａｃ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールの８種の異性体から、３種の異性体が、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝６．６０分、７．１５分、および７．８２分）で得られた。さらに、ｔｒｅｔ＝６．８１分、６．９２分および８．０７分に極大値を有する重なり合ったピークを観察することができた（図６ａ）。（２−ａｍｂｏ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールの２種の異性体も、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝６．６０分および７．８２分）で分離された（図６ｂ）。（ａｌｌ−ｒａｃ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールおよび（２−ａｍｂｏ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールの保持時間７．８２分に最大値を有するピークは、同一のカラムと同一の条件で（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールの参照サンプルについて対照実験をすることにより、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールと同定することができた。こうして得られた、この参照（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールのクロマトグラムを図６ｃ）に示す。
【図７】図７ａ）に、（ｒａｃ）−α−トコトリエノールで得られたクロマトグラムを示す。（ｒａｃ）−α−トコトリエノールの２種の異性体（＝鏡像異性体）は、２本の重なり合ったピーク（ｔｒｅｔ＝１０．６８分および１０．８８分）（図７ａ）として観察された。（ｒａｃ）−α−トコトリエノールの保持時間１０．６８分に最大値を有するピークは、同一のカラムと同一の条件で（２Ｒ）−α−トコトリエノールの参照サンプルについて対照実験をすることにより、（２Ｒ）−α−トコトリエノールと同定することができた。この参照の（２Ｒ）−α−トコトリエノールで得られたクロマトグラムを図７ｂ）に示す。したがって、２−ａｍｂｏ−α−トコトリエノールの保持時間１０．８８分に最大値を有するピークは、（２Ｓ）−α−トコトリエノールと同定することができた。
【図８】図８ａ）に、（ｒａｃ）−γ−トコトリエノールで得られたクロマトグラムを示す。（ｒａｃ）−γ−トコトリエノールの２種の異性体は、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝１２．４９分および１３．１５分）で分離された（図８ａ）。（ｒａｃ）−γ−トコトリエノールの保持時間１２．４９分に最大値を有するピークは、同一のカラムと同一の条件で（２Ｒ）−γ−トコトリエノールの参照サンプルについて対照実験をすることにより、（２Ｒ）−γ−トコトリエノールと同定することができた。この参照の（２Ｒ）−γ−トコトリエノールで得られたクロマトグラムを図８ｂ）に示す。したがって、（ｒａｃ）−γ−トコトリエノールの保持時間１３．１５分に最大値を有するピークは、（２Ｓ）−γ−トコトリエノールと同定することができた。
【図９】図９ａ）に、（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェロールのクロマトグラムを示す。分離する物質の量が実施例２の場合の約５００倍であるので、クロマトグラムのピークがブロードになっているが、しかしながら、それでもまだ分離されている。カラムの出口から出てくる生成物を第一のガラス容器の中に捕集した。検出が極小となった保持時間のところでカラム出口のバルブをひねって、その切り替え後に排出される物質は第二のガラス容器の中に捕集させた。それぞれのガラス容器の内容物をメタノール中に溶解させて、すぐに注入できる分析溶液とした。それらの溶液を、先に示したのと同じやり方（実施例２の条件、しかしながら、別のロットのカラムを使用したので、実施例２の場合よりも少し早くピークが溶出した）で、５μＬの注入量で注入して、捕集したフラクションの同定のための分析および純度の分析を行った。第一の容器のクロマトグラムを図９ｂ）に示し、第二の容器のクロマトグラムを図９ｃ）に示す。これらのクロマトグラムから、第一のガラス容器は純品の（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロール（ＲＲＲ−異性体は検出できず）であるのに対して、第二のガラス容器には、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールと少量の（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールとが存在していることがわかった。（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールの異性体純度は、クロマトグラム（図９ｃ）の中の面積から計算して、８９％であった。
【図１０】図１０ａ）に、高流量での分離の場合のクロマトグラムを再度示す。図１０ｂ）に、第一のガラス容器からのサンプルのクロマトグラムを示す。それは、純品の（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールと同定できた（この場合もまた、ＲＲＲは検出できなかった）。図１０ｃ）に、第二のガラス容器からのサンプルのクロマトグラムを示す。それは、このサンプルがほとんど純品であることを示している。極めて純粋な（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールと、トレース量のフラクション（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールが捕集された。図１０ｄ）に、ｙ−軸を拡大した図１０ｃ）のクロマトグラムを示す。クロマトグラム（図１０ｃ、図１０ｄ）における面積から（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールの異性体純度を計算すると、９９．７％であった。
【図１１】図１１ａ）に、高流量での分離の場合のクロマトグラムを示す。図１１ｂ）に、第一のガラス容器からのサンプルのクロマトグラムを示す。それは、純品の（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールと同定できた（この場合もまた、ＲＲＲ異性体は検出できなかった）。図１１ｃ）に、第二のガラス容器からのサンプルのクロマトグラムを示す。それは、このサンプルが高純度の（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールであることを示している。図１１ｄ）［図１１ｃ）のクロマトグラムを、ｙ−軸を拡大して表したものである］に明らかに示されているように、トレース量の（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールも検出できなかった。
【符号の説明】
【０１５３】
１  二酸化炭素ボンベ
２  アルコール
３  クロマトグラフのカラム
４  キラル固定相
５  ＳＦＣポンプ
６  式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の異性体の混合物
７  加熱装置、ＳＦＣオーブン
８  溶出液
９  検出手段、ダイオードアレー検出器
１０  コンピューター
１１  ＳＦＣ装置
１１’  改良したＳＦＣ装置
１２  レストリクター
１３  超臨界二酸化炭素
１４  ガス状の二酸化炭素
１５，１５’  分離した異性体
１６，１６’  容器、第一の容器、第二の容器
１７  バルブ
１８  レストリクター１２とバルブ１７との間のチューブ
１９  残渣
２０  Ｔ字形接続部
２１  フラッシュ／リンス溶媒
２２  ポンプ
２３  望ましい異性体（Ｉｄｅｓ）
２４  残分（Ｉ’）
２５  異性化された生成物
【０１５４】
［実施例］
以下の実験によって本発明をさらに説明する。
【０１５５】
［１．クロマトグラフ分離］
［出発物質：］
入手したままで使用した溶媒および反応剤は以下のものであった：メタノール（Ｍｅｒｃｋ  Ｌｉｃｈｒｏｓｏｌｖ  Ｒｅａｇ  Ｐｈ  Ｅｕｒ、液体クロマトグラフィー用グラジエントグレード、カタログ番号１．０６００７．２５００）、ｎ−ヘプタン（Ｍｅｒｃｋ  Ｌｉｃｈｒｏｓｏｌｖ、液体クロマトグラフィー用、カタログ番号１．０４３９０．１０００）、ＣＯ２（Ｑｕａｌｉｔｙ  ４．８、Ｃａｒｂａｇａｓ，Ｓｃｈｗｅｉｚ）。
【０１５６】
［クロマトグラフィー：］
分離には、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  １２６０  Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ＳＦＣ  Ｓｙｓｔｅｍを使用したが、それには以下のものが含まれている：Ａｕｒｏｒａ  ＳＦＣ  ｆｕｓｉｏｎ  Ａ５  ｍｏｄｕｌｅ、ＳＦＣ  二連ポンプ（モデル  Ｇ４３０２Ａ）、デガッサー、ＳＦＣオートサンプラー、ＤＡＤ（ダイオードアレー検出器）（ＤＡＤ  ＳＬ、モデルＧ１３１５Ｃ）、温度調節付きカラム槽、およびＳＦＣアクセサリーキット。
【０１５７】
使用および捕集したＤＡＤ検出範囲は、１９０〜５００ｎｍであった。濃度に応じて、以下においては２１０ｎｍ、２９０ｎｍ、２９５ｎｍの信号を使用した。
【０１５８】
得られたクロマトグラムを、図２〜１１に示す。クロマトグラムのｘ軸は、保持時間（ｔｒｅｔ）（単位：分）を表している。クロマトグラムのｙ軸は、任意の単位（ＡＵまたはｍＡＵ）の吸光度（Ａ）を表し、それによって異性体の分布を検出している。
【０１５９】
［（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールの分離］
［実施例１：］
（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロール（ＤＳＭ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）のｎ−ヘプタン中５０重量％溶液を注入し、キラル固定相（ダイセルＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−３、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ；溶離剤：超臨界ＣＯ２／１０容積％メタノール、４０℃、背圧１５０ｂａｒ；流量３．０ｍＬ／分；検出２９５ｎｍ、５μＬ注入）で分離させた。
【０１６０】
図２ａ）に、（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールで得られたクロマトグラムを示す。（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールの８種の異性体から、３種の異性体を、良好なベースライン分離（３．５７分、３．７０分、および４．０１分）で分離した。保持時間３．７０分に最大値を有するピークは、同一のカラムと同一の条件で（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールの参照サンプルについて対照実験をすることにより、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールと同定することができた。この参照（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールのクロマトグラムを図２ｂ）に示す。
【０１６１】
実施例１は、移動相として超臨界二酸化炭素、そしてキラル固定相（ＣＳＰ）としてシリカ担体の上にコーティングまたは固定化されたアミローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）を用いた超臨界流体クロマトグラフィーを用いた分離で、（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールを５分以内で分離することが可能であることを示している。それはさらに、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールが、ベースラインで分離されているピークであって、容易に単離することができることも示している。
【０１６２】
［直列接続の２本のカラムによる（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールおよび２−ａｍｂｏ−α−トコフェロールの分離］
［実施例２：］
（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロール（ＤＳＭ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）（１０ｍｇ）のｎ−ヘプタン（１０ｍＬ）中溶液を調製して、キラル固定相（ダイセルＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−３、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、直列接続した２本のカラム；溶離剤：超臨界ＣＯ２／１０容積％メタノール、４０℃、背圧９０ｂａｒ；流量３．０ｍＬ／分；検出２１０ｎｍ、５μＬ注入）に注入し、分離させた。
【０１６３】
図３ａ）に、（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールで得られたクロマトグラムを示す。
【０１６４】
さらに、（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェロール（ＤＳＭ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）（１０ｍｇ）のｎ−ヘプタン（１０ｍＬ）中溶液を調製して、キラル固定相（ダイセルＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−３、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、直列接続した２本のカラム；溶離剤：超臨界ＣＯ２／１０容積％メタノール、４０℃、背圧９０ｂａｒ；流量３．０ｍＬ／分；検出２１０ｎｍ、５μＬ注入）に注入し、分離させた。
【０１６５】
図３ｂ）に、得られた２−ａｍｂｏ−α−トコフェロールのクロマトグラムを示す。
【０１６６】
（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールの８種の異性体から、４種の異性体が、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝９．５６分、８．７８分、８．５２分、および８．１７分）で分離された。２−ａｍｂｏ−α−トコフェロールの２種の異性体も、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝８．７８分および７．８６分）で分離された。
【０１６７】
（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールおよび２−ａｍｂｏ−α−トコフェロールの、保持時間８．７８分に最大値を有するピークは、同一のカラムと同一の条件で（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールの参照サンプルについて対照実験をすることにより、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールと同定することができた。こうして得られた、この参照（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールのクロマトグラムを図３ｃ）に示す。
【０１６８】
したがって、２−ａｍｂｏ−α−トコフェロールの保持時間７．８５分に最大値を有するピークは、（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールと同定することができた。
【０１６９】
実施例１の実験と比較すると、実施例２のデータから、２本のカラムを連結し、低い背圧を使用することによって、ピークの分離がさらによくなり、しかも分離時間はわずかに延びるだけ、すなわちクロマトグラフ分離全体が１０分未満の時間枠の内に達成されるということがわかる。
【０１７０】
［実施例３：］
（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロール（ＤＳＭ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）（１０ｍｇ）のｎ−ヘプタン（１０ｍＬ）中溶液を調製して、キラル固定相（ダイセルＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−３、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、直列接続した２本のカラム；溶離剤：超臨界ＣＯ２／１０容積％メタノール、３５℃、背圧１１０ｂａｒ；流量４．０ｍＬ／分；検出２９５ｎｍ、５μＬ注入）に注入し、分離させた。
【０１７１】
図４ａ）に、（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールで得られたクロマトグラムを示す。
【０１７２】
さらに（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェロール（１０ｍｇ）のｎ−ヘプタン（１０ｍＬ）中溶液を調製して、キラル固定相（ダイセルＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−３、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、直列接続した２本のカラム；溶離剤：超臨界ＣＯ２／１０容積％メタノール、３５℃、背圧１１０ｂａｒ；流量４．０ｍＬ／分；検出２９５ｎｍ、５μＬ注入）に注入し、分離させた。
【０１７３】
図４ｂ）に、（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェロールで得られたクロマトグラムを示す。
【０１７４】
（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールの８種の異性体から、４種の異性体が、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝６．６５分、６．０５分、５．８１分、および５．５２分）で得られた。（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェロールの２種の異性体も、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝６．０５分および５．２９分）で分離された。
【０１７５】
（ａｌｌ−ｒａｃ）−α−トコフェロールおよび（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェロールの、保持時間６．０５分に最大値を有するピークは、同一のカラムと同一の条件で（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールの参照サンプルについて対照実験をすることにより、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールと同定することができた。この参照（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールのクロマトグラムを図４ｃ）に示す。
【０１７６】
したがって、（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェロールの保持時間５．２９分に最大値を有するピークは、（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールと同定することができた。
【０１７７】
実施例２の実験と比較すると、実施例３のデータからは、より高い圧力を使用したにもかかわらず、温度を下げると、それでもなお、クロマトグラフ分離全体で７分未満の極めて早い分離時間で優れた分離が得られたということがわかる。
【０１７８】
［直列接続の２本のカラムによる（ａｌｌ−ｒａｃ）−γ−トコフェロールおよび２−ａｍｂｏ−γ−トコフェロールの分離］
［実施例４：］
（ａｌｌ−ｒａｃ）−γ−トコフェロール（１０ｍｇ）のｎ−ヘプタン（１０ｍＬ）中溶液を調製して、キラル固定相（ダイセルＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−３、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、直列接続した２本のカラム；溶離剤：超臨界ＣＯ２／１０容積％メタノール、４０℃、背圧９０ｂａｒ；流量３．０ｍＬ／分；検出２１０ｎｍ、１５μＬ注入）に注入し、分離させた。
【０１７９】
図５ａ）に、（ａｌｌ−ｒａｃ）−γ−トコフェロールで得られたクロマトグラムを示す。
【０１８０】
さらに、２−ａｍｂｏ−γ−トコフェロール（１０ｍｇ）のｎ−ヘプタン（１０ｍＬ）中溶液を調製して、キラル固定相（ダイセルＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−３、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、直列接続した２本のカラム；溶離剤：超臨界ＣＯ２／１０容積％メタノール、４０℃、背圧９０ｂａｒ；流量３．０ｍＬ／分；検出２１０ｎｍ、１５μＬ注入）に注入し、分離させた。
【０１８１】
図５ｂ）に、（２−ａｍｂｏ）−γ−トコフェロールで得られたクロマトグラムを示す。
【０１８２】
（ａｌｌ−ｒａｃ）−γ−トコフェロールの場合においては、３本のピークが、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝８．３９分、８．８５分、および９．３６分）で得られた（図５ａ）。
【０１８３】
（２−ａｍｂｏ）−γ−トコフェロールの２種の異性体も、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝８．８６分および９．３６分）で分離された（図５ｂ）。
【０１８４】
（２−ａｍｂｏ）−γ−トコフェロールの、保持時間９．３６分に最大値を有するピークは、同一のカラムと同一の条件で（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−γ−トコフェロールの参照サンプルについて対照実験をすることにより、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−γ−トコフェロールと同定することができた。この参照（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−γ−トコフェロールのクロマトグラムを図５ｃ）に示す。
【０１８５】
したがって、（２−ａｍｂｏ）−γ−トコフェロールの保持時間８．８６分に最大値を有するピークは、（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−γ−トコフェロールと同定することができた。
【０１８６】
［直列接続の２本のカラムによる（ａｌｌ−ｒａｃ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールおよび（２−ａｍｂｏ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールの分離］
［実施例５：］
（ａｌｌ−ｒａｃ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロール（１０ｍｇ）のｎ−ヘプタン（１０ｍＬ）中溶液を調製して、キラル固定相（ダイセルＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−３、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、直列接続した２本のカラム；溶離剤：超臨界ＣＯ２／１０容積％メタノール、４０℃、背圧９０ｂａｒ；流量３．０ｍＬ／分；検出２９５ｎｍ、１５μＬ注入）に注入し、分離させた。
【０１８７】
図６ａ）に、（ａｌｌ−ｒａｃ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールで得られたクロマトグラムを示す。
【０１８８】
さらに、（２−ａｍｂｏ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロール（１０ｍｇ）のｎ−ヘプタン（１０ｍＬ）中溶液を調製して、キラル固定相（ダイセルＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−３、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、直列接続した２本のカラム；溶離剤：超臨界ＣＯ２／１０容積％メタノール、４０℃、背圧９０ｂａｒ；流量３．０ｍＬ／分；検出２９５ｎｍ、１５μＬ注入）に注入し、分離させた。
【０１８９】
図６ｂ）に、（２−ａｍｂｏ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールで得られたクロマトグラムを示す。
【０１９０】
（ａｌｌ−ｒａｃ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールの８種の異性体から、３種の異性体が、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝６．６０分、７．１５分、および７．８２分）で得られた。さらに、ｔｒｅｔ＝６．８１分、６．９２分および８．０７分に極大値を有する重なり合ったピークを観察することができた（図６ａ）。
【０１９１】
（２−ａｍｂｏ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールの２種の異性体も、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝６．６０分および７．８２分）で分離された（図６ｂ）。
【０１９２】
（ａｌｌ−ｒａｃ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールおよび（２−ａｍｂｏ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールの保持時間７．８２分に最大値を有するピークは、同一のカラムと同一の条件で（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールの参照サンプルについて対照実験をすることにより、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールと同定することができた。
【０１９３】
こうして得られた、この参照（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールのクロマトグラムを図６ｃ）に示す。
【０１９４】
したがって、（２−ａｍｂｏ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールおよび（ａｌｌ−ｒａｃ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールの保持時間６．６０分に最大値を有するピークは、（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−３，４−デヒドロ−α−トコフェロールと同定することができた。
【０１９５】
［直列接続の２本のカラムによる（ｒａｃ）−α−トコトリエノールの分離］
［実施例６：］
（ｒａｃ）−α−トコトリエノール（１０ｍｇ）のｎ−ヘプタン（１０ｍＬ）中溶液を調製して、キラル固定相（ダイセルＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−３、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、直列接続した２本のカラム；溶離剤：超臨界ＣＯ２／１０容積％メタノール、４０℃、背圧９０ｂａｒ；流量３．０ｍＬ／分；検出２９５ｎｍ、１５μＬ注入）に注入し、分離させた。
【０１９６】
図７ａ）に、（ｒａｃ）−α−トコトリエノールで得られたクロマトグラムを示す。
【０１９７】
（ｒａｃ）−α−トコトリエノールの２種の異性体（＝鏡像異性体）は、２本の重なり合ったピーク（ｔｒｅｔ＝１０．６８分および１０．８８分）（図７ａ）として観察された。
【０１９８】
（ｒａｃ）−α−トコトリエノールの保持時間１０．６８分に最大値を有するピークは、同一のカラムと同一の条件で（２Ｒ）−α−トコトリエノールの参照サンプルについて対照実験をすることにより、（２Ｒ）−α−トコトリエノールと同定することができた。
【０１９９】
この参照の（２Ｒ）−α−トコトリエノールで得られたクロマトグラムを図７ｂ）に示す。したがって、２−ａｍｂｏ−α−トコトリエノールの保持時間１０．８８分に最大値を有するピークは、（２Ｓ）−α−トコトリエノールと同定することができた。
【０２００】
［直列接続の２本のカラムによる（ｒａｃ）−γ−トコトリエノールの分離］
［実施例７：］
（ｒａｃ）−γ−トコトリエノール（１０ｍｇ）のｎ−ヘプタン（１０ｍＬ）中溶液を調製して、キラル固定相（ダイセルＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−３、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、直列接続した２本のカラム；溶離剤：超臨界ＣＯ２／１０容積％メタノール、４０℃、背圧９０ｂａｒ；流量３．０ｍＬ／分；検出２９５ｎｍ、１５μＬ注入）に注入し、分離させた。
【０２０１】
図８ａ）に、（ｒａｃ）−γ−トコトリエノールで得られたクロマトグラムを示す。
【０２０２】
（ｒａｃ）−γ−トコトリエノールの２種の異性体は、良好なベースライン分離（ｔｒｅｔ＝１２．４９分および１３．１５分）で分離された（図８ａ）。
【０２０３】
（ｒａｃ）−γ−トコトリエノールの保持時間１２．４９分に最大値を有するピークは、同一のカラムと同一の条件で（２Ｒ）−γ−トコトリエノールの参照サンプルについて対照実験をすることにより、（２Ｒ）−γ−トコトリエノールと同定することができた。
【０２０４】
この参照の（２Ｒ）−γ−トコトリエノールで得られたクロマトグラムを図８ｂ）に示す。したがって、（ｒａｃ）−γ−トコトリエノールの保持時間１３．１５分に最大値を有するピークは、（２Ｓ）−γ−トコトリエノールと同定することができた。
【０２０５】
［準分取スケールにおける（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェロールの分離］
［実施例８：（リンス／フラッシュなし）］
（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェロールのｎ−ヘプタン中５０重量％の溶液を、キラル固定相（ダイセルＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＤ−３、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、直列接続した２本のカラム；溶離剤：超臨界ＣＯ２／１０容積％メタノール、４０℃、背圧９０ｂａｒ；流量３ｍＬ／分；検出２９０ｎｍ、５μＬ注入）に注入し、分離させた。
【０２０６】
図９ａ）に、（２−ａｍｂｏ）−α−トコフェロールのクロマトグラムを示す。分離する物質の量が実施例２の場合の約５００倍であるので、クロマトグラムのピークがブロードになっているが、しかしながら、それでもまだ分離されている。
【０２０７】
カラムの出口から出てくる生成物を第一のガラス容器の中に捕集した。検出が極小となった保持時間のところでカラム出口のバルブをひねって、その切り替え後に排出される物質は第二のガラス容器の中に捕集させた。
【０２０８】
それぞれのガラス容器の内容物をメタノール中に溶解させて、すぐに注入できる分析溶液とした。それらの溶液を、先に示したのと同じやり方（実施例２の条件、しかしながら、別のロットのカラムを使用したので、実施例２の場合よりも少し早くピークが溶出した）で、５μＬの注入量で注入して、捕集したフラクションの同定のための分析および純度の分析を行った。
【０２０９】
第一の容器のクロマトグラムを図９ｂ）に示し、第二の容器のクロマトグラムを図９ｃ）に示す。
【０２１０】
これらのクロマトグラムから、第一のガラス容器は純品の（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロール（ＲＲＲ−異性体は検出できず）であるのに対して、第二のガラス容器には、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールと少量の（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールとが存在していることがわかった。（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールの異性体純度は、クロマトグラム（図９ｃ）の中の面積から計算して、８９％であった。
【０２１１】
［実施例９（ｎ−ヘプタンによるリンス／フラッシュ）］
実施例９は、実施例８と同様に処理および分析をしたが、ただし図１ｂ）に示した概略図のようにして、検出器とレストリクターとの間に、モジュール型の（スタンドアローン）ＨＰＬＣポンプの手段により、ｎ−ヘプタンの連続の流れ（１ｍＬ／分）を加えた。
【０２１２】
図１０ａ）に、高流量での分離の場合のクロマトグラムを再度示す。
【０２１３】
図１０ｂ）に、第一のガラス容器からのサンプルのクロマトグラムを示す。それは、純品の（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールと同定できた（この場合もまた、ＲＲＲは検出できなかった）。
【０２１４】
図１０ｃ）に、第二のガラス容器からのサンプルのクロマトグラムを示す。それは、このサンプルがほとんど純品であることを示している。極めて純粋な（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールと、トレース量のフラクション（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールが捕集された。図１０ｄ）に、ｙ−軸を拡大した図１０ｃ）のクロマトグラムを示す。クロマトグラム（図１０ｃ、図１０ｄ）における面積から（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールの異性体純度を計算すると、９９．７％であった。
【０２１５】
［実施例１０（メタノールによるリンス／フラッシュ）］
実施例１０は、実施例９と同様に処理および分析をしたが、ただしメタノールを、フラッシュ／リンス溶媒として使用し、さらには溶媒を移動相の一部とした、すなわち、分離カラムに入る前の二酸化炭素にアルコールを添加した。図１１ａ）に、高流量での分離の場合のクロマトグラムを示す。
【０２１６】
図１１ｂ）に、第一のガラス容器からのサンプルのクロマトグラムを示す。それは、純品の（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールと同定できた（この場合もまた、ＲＲＲ異性体は検出できなかった）。
【０２１７】
図１１ｃ）に、第二のガラス容器からのサンプルのクロマトグラムを示す。それは、このサンプルが高純度の（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールであることを示している。図１１ｄ）［図１１ｃ）のクロマトグラムを、ｙ−軸を拡大して表したものである］に明らかに示されているように、トレース量の（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールも検出できなかった。
【０２１８】
したがって、この実施例４は、この開示されたプロセスでは、最適の条件下では、（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールおよび（２Ｓ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−トコフェロールを、前記異性体の混合物から、異性体的に完全に純品の異性体（他の異性体が検出不能）として、得ることができることを示している。
【図１ａ）】
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【図１ｂ）】
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【図１ｃ）】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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