(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる、特異的にアミロイド−ベータ種に結合するペプチド。
【請求項２】
医薬において使用するための、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
アルツハイマー病の処置のための、請求項１または２に記載のペプチド。
【請求項４】
アルツハイマー病の診断のための、請求項１〜３のいずれか１つに記載のペプチド。
【請求項５】
本質的にＤ−アミノ酸からなることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１つに記載のペプチド。
【請求項６】
Ａ−ベータ−フィブリルの形成の阻害のための、請求項１〜５のいずれか１つに記載のペプチド。
【請求項７】
凝集したアミロイド−ベータ種に結合するための、請求項１〜６のいずれか１つに記載のペプチド。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１つに記載のペプチドを含むキット。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１つに記載のペプチドを含む組成物。
【請求項１０】
アミロイド−ベータ−モノマー、アミロイド−ベータ−フィブリルおよび／またはアミロイド−ベータ−オリゴマーの特異的同定、定量的および／または定性的測定のためのプローブとして使用するための、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
アミロイド−ベータ−オリゴマー及び／又はアミロイド−ベータ−ペプチド凝集体の形成を阻害するための、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
毒性のアミロイド−ベータ−オリゴマーおよび／または凝集体を無毒化するための、請求項９に記載の組成物。
【請求項１３】
アミロイド−ベータ−オリゴマー及び／又は凝集体が、請求項１〜７のいずれか１つに記載のペプチドと、無定形で非毒性の凝集体を形成することを特徴とする、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドを含む組成物であって、前記ペプチドのＡ−ベータ−モノマーへの特異的結合のための組成物。
【請求項１５】
アルツハイマー病の治療薬としての、およびアルツハイマー病の予防のための、請求項９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルツハイマー型認知症の治療および／または診断のための特定のＡ−ベータ種に結合するペプチドに関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー型認知症（ＡＤ）の原因療法のために認可された医薬はいまだに存在しない。典型的には、ＡＤ患者の脳では、死後に、プラークにいわゆるベータ−アミロイド−ペプチド（Ａβ）の堆積物が見られる。従って、ずっと以前より、種々の形態のＡ−ベータ（Ａβとも呼ばれる）、例えばフィブリルが、アルツハイマー型認知症の発生と進行の原因であるとされてきた。
【０００３】
数年来、特に、小さな自由拡散性のＡβ−オリゴマーが、アルツハイマー型認知症の発生と進行の主要な原因因子と考えられている。
【０００４】
Ａβ−モノマーは、我々の体内で常に発生しており、おそらくそれ自体では毒性でない。
【０００５】
Ａβ−モノマーは、最終的に形成速度および分解速度により体内で生じるそれらの濃度に依存して、偶発的に、従って加齢に伴い自然発生的に一緒に堆積してＡβ−オリゴマーを生じる可能性が益々大きくなるか推測されている。一度生じたＡβーオリゴマーはその後、プリオンと類似のメカニズムにより増加して最終的には疾患をもたらし得る。
【０００６】
これを考慮すると、毒性のＡβ−オリゴマーを完全に根絶させること、および／またはそのプリオンと類似の増加を阻止することを、原因療法の目標とすべきである。
【０００７】
ただし、アルツハイマー型認知症の治療のために原因的に作用する医薬は存在しない。従来技術で使用される医薬は最善の場合、いくつかの症状を緩和できるが、疾患の進行を遅らせることはできず、ましてや止めることもできない。
【０００８】
動物におけるアルツハイマー型認知症の予防（絶対に治療ではない）において幾つかの成功を達成できる一連の物質が存在する。
【０００９】
予防と治療との間の重要な相違点は、以下が考えられる：最初のＡβ−オリゴマーの形成を妨げるためには、場合によっては、わずかに親和性であり効果的なＡβ−リガンドですでに十分である。多くのＡβ−モノマーからのＡβ−オリゴマーの形成は、非常に高い次数の反応なので、それらは高度にＡβ−モノマー濃度に依存する。従って、活性なＡβ−モノマー濃度の小さな低下も、最初のＡβ−オリゴマーの形成を阻止できる。これが、予防の場合の状況である。しかしながら、既にＡβ−オリゴマーが生じていると、これらはプリオンと同様に増加し得、これは高い次数の反応ではなく、従ってもはやＡβ−モノマー濃度にはほとんど依存しない。これが、治療の場合の状況である。従って、Ａβ−オリゴマーが既に生じている場合、Ａβ−オリゴマーに対してできる限り高い親和性を有する物質によってこれに対処することが治療の目標でなければならない。適切な解離定数は、そのために、ｐＭの範囲またはさらにより低い範囲になければならない。
【００１０】
現在、最も多様な性質および方法で、例えばγ−セクレターゼモジュレーター、Ａβ−結合性リガンド等により、Ａβーモノマーの濃度を減少させるいくつかの物質が存在する。これは、動物実験において（ここでは、動物はたいていの場合、その疾患が十分に発症する前に処置される）成功裏に予防的効果を発揮するためには十分なようである。
【００１１】
ヒトの臨床試験（第ＩＩ相および第ＩＩＩ相）において、この場合には、明確にアルツハイマー型認知症と診断された人のみが処置されてよいが、これまでこれらの物質は全て成果を収められなかった。おそらく、ここでは、すなわち発病の開始前であっても、益々増加する量のＡβーオリゴマーの発生を阻止するためには、Ａβ−モノマー濃度の少しのまたはある程度の減少ではもはや十分ではないからである。
【００１２】
さらに、これまでにアルツハイマー型認知症が症状の発症前に確実に診断された可能性はない。アルツハイマー型認知症は、現在主に、既に認知症症状を患っているヒトの神経心理学検査により、認識される。さらに、他の疾患（精神的外傷）は、異なる検査方法により除外することができる。
【００１３】
しかしながら、Ａβ−オリゴマー及び時間的にそれに続くプラークは、症状が生じる２０年前まで遡って患者の脳内に生じており、不可逆的な損傷を引き起こすことが知られている。患者の静脈内に注射され、脳血液関門の通過後にＡβ−オリゴマーおよびプラークに結合する分子プローブは、像形成法を用いて可視可能にし、従ってＡＤのより早い診断を可能にする。
【００１４】
ＥＰ１３７９５４６Ｂ１（特許文献１）から、「Ｄ３」という名称を有するＤ−エナンチオマーペプチドが知られている。このペプチドは、モノマー状Ａβ（１−４２）を結合により安定化し、それが毒性のＡβ凝集体に変換されるのを阻害する計画の下に、主にモノマー状のＡβ（１−４２）に対する鏡像ファージディスプレイ選択により同定された。現在分かっていることによると、好ましくは、Ｄ３は、特に毒性のＡβオリゴマーをアミロイド非生成性でＴｈＴ陰性の非毒性の無定形凝集体に変化させる。動物モデルにおいて、飲料水を用いたＤ３の経口投与によってさえ、処置されたトランスジェニックＡＤマウスが明らかにより少ないプラークを含み、有意に改善された認知能力を有することが達成されている。
【００１５】
刊行物ＷＯ２０１４／０４１１１５Ａ２（特許文献２）から、Ｄ３から誘導された別のペプチドが公知である。
【００１６】
不利なことに、現存のＡβ−オリゴマー結合性物質は、Ａβ−オリゴマーの増加を阻止するために十分な親和性を有しない。
【００１７】
不利なことに、特にＡβ−オリゴマーに高い親和性で結合してこれを可視可能にするｉｎ−ｖｉｖｏイメージング法用のプローブは存在しない。病歴におけるＡβ−オリゴマーはとても重要かつ早期の役割を果たすので、これは非常に望ましい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１８】
【特許文献１】ＥＰ１３７９５４６Ｂ１
【特許文献２】ＷＯ２０１４／０４１１１５Ａ２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
本発明の課題は、以下のためのペプチドを提供することである：
Ａ）毒性のアミロイド−β（Ａβ）−オリゴマーもしくは凝集体の形成の防止、またはそれらの無毒化による、アルツハイマー病の原因療法。
Ｂ）ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングのためのプローブとしてのＤ−ペプチドの使用によるアルツハイマー型認知症の診断。
【００２０】
課題はさらに、新規ペプチド、好ましくはＤ−エナンチオマーのＤ−ペプチドＤ３の誘導体であって、Ｄ３と比較してより有効な特性を有する誘導体、を提供することである。上記特性には、特に、Ａβ種に対する結合親和性および結合特異性、Ａβフィブリル形成の阻害、Ａβ細胞毒性の阻害、Ａβオリゴマー、フィブリルおよび他の凝集体の除去または無毒化、Ａβアミロイド−フィブリル、−プロトフィブリルもしくは−オリゴマーの非毒性、非アミロイド生成性種への変換が含まれる。
【００２１】
以下、「Ａ−ベータ」、「アミロイド−ベータ」、「アミロイド−β」または「Ａβ」という語句は互いに同義に使用される。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
本発明の課題は、請求項１によるペプチド、主請求項によるキットおよび組成物、ならびに従属請求項に従う方法および使用によって解決される。そのための有利な態様は、それぞれここで参照する特許請求の範囲から明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１ａ】Ａ−ベータ−モノマー、Ａ−ベータ−オリゴマーおよびＡ−ベータ−フィブリルにおける本発明のペプチドの結合シグナル。
【図１ｂ】本発明のペプチドの結合特異性。
【図２】本発明のペプチドによるアミロイド−ベータ−オリゴマーの減少。
【図３ａ】本発明のペプチドのＴＨＴアッセイ、
【図３ｂ】飽和点におけるアミロイド−ベータを基準としてＴＨＴ蛍光を用いて評価されたＴＨＴアッセイ
【図４ａ】Ａ−ベータ共インキュベーションなしでのＳＨ−ＳＹ５細胞のＭＴＴアッセイ。
【図４ｂ】Ａ−ベータ共インキュベーションありでのＳＨ−ＳＹ５細胞のＭＴＴアッセイ。
【００２４】
本発明の説明
この課題は、アルツハイマー型認知症の治療のための特異的にアミロイド−ベータ種に結合するペプチドにより解決される。その際、多くの場合に選択性とも称される特異性は、本発明によるリガンドまたは本発明によるペプチドが、基本的に異なるＡβ種、例えばＡβモノマーまたはＡβオリゴマーまたはＡβフィブリルと結合できることを意味する。各結合ペア（例えばリガンドとＡβモノマーおよびリガンドとＡβオリゴマーおよびリガンドとＡβフィブリル）は、１：１結合モデルの仮定の下に、解離定数（ＫＤ）または結合定数（ＫＡ＝１／ＫＤ）がそれぞれ割り当てられる。ＫＡ値が大きいほど、それぞれの結合の親和性は大きい。
【００２５】
競合物質と比べたデコイへのリガンドの特異性は、Ａβモノマーへの親和性と、ＡβオリゴマーまたはＡβフィブリルへの親和性との可能な限り大きな比（Ｑｕｏｔｉｅｎｔｅｎ）により表される。
【００２６】
したがって、本発明により特異性を調べるために、リガンドの、Ａβモノマーに対するＫＡ値と、Ａβオリゴマー（またはＡβフィブリル）に対するＫＡ値との比が用いられる。その比が大きいほど特異性は大きい。
【００２７】
本発明の意味において、種ＢへのリガンドのＫＡ値に対する種ＡへのリガンドのＫＡ値の比が少なくとも１よりも大きい、好ましくは１．２または１．５よりも大きい、好ましくは２、３、４、５、６、７、８、９、とりわけ１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、とりわけ１００よりも大きい場合の相対的特異性が挙げられ、その際、種Ａおよび種Ｂとして、異なるモノマー、オリゴマーおよびフィブリルを採用することができる。
【００２８】
その際、特異性または選択性を、種の１つとのリガンドの結合強度から明らかになる親和性と取り違えてはならない。異なるリガンドが同じ標的分子を競合するとき、特異性または選択性が小さいほど大きな結合親和性を有する可能性がある。本発明によると、モノマーまたはオリゴマーまたはフィブリルのような種に特に特異的に結合する、まさにそうしたリガンドを検出するべきである。生体分子は、治療剤および治療薬として適合するべきである。この方法により得られたリガンドまたはペプチドは、所望の特性を有し、本発明の課題を解決する。
【００２９】
特に、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１のアミノ酸配列および／またはホモログ、断片および部分を含有するリガンドとしての下記ペプチドが、本発明の課題を解決する。
【００３０】
この課題はまた、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０または配列番号１１のアミノ酸配列および／またはそれらのホモログ、断片および部分を含有するポリマーにより解決される。
【００３１】
上記配列の１つを含有するペプチドは、アミロイド−β−モノマーに特異的に結合する。
【００３２】
Ａ−ベータ−モノマーに対する特異的な結合はさらに、リガンド−オリゴマーの結合シグナルに対するリガンド−モノマーの結合シグナルの比および／またはリガンド−フィブリルの結合シグナルに対するリガンド−モノマーの結合シグナルの比が、１、例えば１．８より大きく、例えば１００までの値を取ることができることを意味し、ここで各中間値、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、特に１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、特に１００を取ることができる。
【００３３】
Ａ−ベータ−オリゴマーに対する特異的な結合は、リガンド−モノマーへの結合シグナルに対するリガンド−オリゴマーからの結合シグナルの比、またはリガンド−フィブリルへの結合シグナルに対するリガンド−モノマーからの結合シグナルの比が、１、例えば１．２より大きく、例えば１００までの値を取ることができることを意味し、ここで各中間値、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、特に１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、特に１００を取ることができる。
【００３４】
科学的なプラクティスにおいて慣用される奇数の数値の丸めにより、上記数値がもたらされる。
【００３５】
出発点として、例えばペプチドマイクロアレイ実験により得られたペプチドが使用される。これらは公知のペプチド「Ｄ３」から誘導することができる。
【００３６】
従って、本発明の意味においてアミロイド−ベータ−モノマーに特異的にまたはアミロイド−ベータ−オリゴマーに特異的に結合するペプチドの同定およびペプチドの結合特異性の決定のために、以下のように行うことができる。表面上に固定化された種々のペプチド、例えばＤ３の誘導体、を有するペプチドマイクロアレイを、各々の場合において、蛍光色素でラベルされた異なるＡ−ベータの種（例えば、モノマー、オリゴマーおよびフィブリル）とインキュベートする。コントロールとして、１つのペプチドマイクロアレイは、蛍光色素とだけインキュベートする。結果の再現性を保証するために、ペプチドマイクロアレイのインキュベーションは、種あたり少なくとも３回行うことができる。蛍光標識されたＡ−ベータと固定化ペプチドとの結合を、蛍光色素を介して検出する。ペプチドへＡ−ベータが多く結合するほど、蛍光シグナルが高くなる。複数回測定した蛍光シグナルを正規化し、該シグナルをコントロールから差し引いた。これにより、蛍光標識されたＡ−ベータの結合が色素を介して起こることを防ぐ。さらに、ペプチドへのＡ−ベータ種の結合シグナルを平均する。結合特異性の決定のために、他の種に対する、ペプチドが特異的に結合すべきである種の比を用いる。
【００３７】
例：ペプチドＸのＡ−ベータ−モノマーへの結合特異性＝モノマーへのペプチドＸの結合シグナル／オリゴマー（またはフィブリル）へのペプチドＸの結合シグナル。類似の方法により、特異的にＡ−ベータ−オリゴマーに結合するペプチドを検出する。
【００３８】
本発明のペプチドの断片および部分は、本発明のペプチドと類似または同一の作用を示す。
【００３９】
本発明の一変形では、最大で５００μＭ、好ましくは２５０、１００、５０μＭ、特に好ましくは２５、１０、６μＭ、特に４、２、１μＭまたはμＭ未満のＫＤで、Ａ−ベータ−モノマーまたはＡ−ベータ−オリゴマーまたはＡ−ベータ−フィブリルに結合するようなペプチドが検出され、使用される。
【００４０】
本発明の一変形において、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および／または配列番号１１のペプチドおよびそれらのホモログ、断片および部分は、本質的に、好ましくは少なくとも６０％、７５％、８０％、特に好ましくは８５％、９０％、９５％、特に９６％、９７％、９８％、９９％、１００％、Ｄ−アミノ酸から構成される。
【００４１】
本発明の意味において、ポリマーは、少なくとも２、または３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはそれ以上の、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および／または配列番号１１からなる群から選択されるモノマーまたはモノマー単位ならびにそれらのホモログ、断片または部分から形成され、それらは既にＡ−ベータ−モノマーまたはＡ−ベータ−オリゴマーまたはＡ−ベータ−フィブリルを結合する。
【００４２】
本発明において、上記ポリマーは、同一のモノマー単位から構成されるか、または２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１個の種々の異なる上記モノマーの組み合わせから、いわゆるコンビネーション−ポリマー（Ｋｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ−Ｐｏｌｙｍｅｒｅ）として構成される。該モノマーは、部分的に同一であることもできる。コンビネーションポリマーにおける同一モノマーの数は、自由に選択可能である。
【００４３】
１つの代替において、上記のコンビネーションポリマーは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および／または配列番号１１ならびにそれらのホモログおよびそれらの断片または部分からなる群から選択される少なくとも１つのモノマーと、少なくとも１つの、Ａ−ベータ−モノマーにまたはＡ−ベータ−オリゴマーもしくはＡ−ベータ−フィブリルに結合するペプチドであって、さらなるモノマーとして、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および／または配列番号１１ならびにそれらのホモログおよびそれらの断片または部分からなる群から選択されるモノマーとは区別されるペプチドとを含む。
【００４４】
ポリマーは、例えば、化学合成またはペプチド合成により製造することができる。
【００４５】
本発明の１つの実施態様において、上記モノマーは互いに共有結合で連結されている。本発明の別の実施態様において、上記モノマーは、非共有結合で互いに結合されている。
【００４６】
モノマー単位の共有結合での結合または連結は、本発明の意味において、ペプチドがヘッドｔｏヘッド、テイルｔｏテイル又はヘッドｔｏテイルで、その間にリンカーもしくはリンカー基を使用せずに、直鎖状に相互に連結される場合に存在する。
【００４７】
上記モノマーが、ビオチンとストレプトアビジン、特にストレプトアビジン−テトラマー、を介して互いに連結している場合、本発明の意味において、共有結合は存在しない。
【００４８】
本発明の１つの変形において、上記モノマーは、特に上記のように、直線状に互いに連結されることができる。別の一変形において、上記モノマーは、互いに分岐状に連結して本発明のポリマーとなる。
【００４９】
分岐状ポリマーの場合、本発明においてそれはデンドリマーであることができ、そこではモノマーは、共有結合により、または共有結合によらずに、互いに連結されている。
【００５０】
あるいは、上記モノマーはまた、プラットフォーム分子（例えばＰＥＧまたは糖のような）を用いて連結することができ、それにより分岐状ポリマーが形成する。
【００５１】
あるいはこれらの選択肢の組み合わせも可能である。
【００５２】
Ａ−ベータ−モノマーまたはＡベータ−オリゴマーまたはＡ−ベータ−フィブリルにそこで結合する、本発明のペプチドから本発明に従って合成されたポリマーは、Ａ−ベータ−モノマーへのそれらの選択性および親和性に関して、個々のペプチドと比較して、有利には相乗効果を示す。すなわち：本発明のポリマーは、これらのベースとなる個々のペプチドよりも優れている。本発明の意味における相乗効果は、Ａ−ベータ−モノマーまたはＡ−ベータ−オリゴマーまたはＡ−ベータ−フィブリルに関して、個々のペプチド単位と比較して、より高い選択性もしくは特異性および／または親和性（特にＡ−ベータ−モノマーまたはＡ−ベータ−オリゴマーまたはＡ−ベータ−フィブリルへの結合に関するＫＤ値の）を示す効果である。
【００５３】
本発明のさらなる特に有利な態様において、上記ポリマーおよび特にダイマーは、動物モデル試験（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ）において、有利には、個々のペプチド単位よりも有効である。
【００５４】
本発明の１つの変形において、Ａ−ベータ−モノマーまたはＡ−ベータ−オリゴマーまたはＡ−ベータ−フィブリルに、最大で５００μＭ、好ましくは２５０、１００、５０μＭ、特に好ましくは２５、１０、１μＭの解離定数（ＫＤ値）で、特に好ましくは最大で５００ｎＭ、２５０、１００、５０、特に好ましくは２５、１０、１ｎＭ、５００ｐＭ、１００、５０、２５、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１ｐＭ〜ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ値）で、結合するようなペプチドまたはポリマーが使用される（それぞれの中間値が採用され得る）。
【００５５】
本発明の１つの実施態様において、親和性は、解離定数（ＫＤ値）によって定義される。その際、本発明のペプチドの解離定数（ＫＤ値）は、本発明の１つの実施態様において、低下する。より高い結合親和性ならびに毒性のアミロイドβオリゴマーの分解および／または当該オリゴマー形成の阻止のより高い有効性は、これに関連する。しかしながら、これは特に、専らＡ−ベータ−モノマーまたはＡ−ベータ−オリゴマーの高親和性部位でのより低いＫＤ値に関するわけではない。
【００５６】
断片および部分は、有利には、本発明のペプチドと類似または同一の作用を示す。
【００５７】
以下、モノマーおよびポリマーを本発明のペプチドと呼ぶ。
【００５８】
本発明のペプチドは、本発明の１つの実施態様において、遊離のＣ−末端に酸性アミド基を備える。本発明のペプチド、例えば配列番号１〜１１のペプチドは、その場合に、１２番目における遊離のＣ末端でアミド化されている。それのダイマーは、２４番目における遊離のＣ末端でアミド化等がされている。
【００５９】
本発明のペプチド、特に配列番号１〜１１のペプチドは、本発明のさらなる態様において、遊離のＣ末端で遊離のＮ末端と相互に共有結合しており、従ってその場合環状化されて存在している。また閉環により、有利には、カルボキシル基が遊離Ｃ末端にもはや存在しないということがもたらされる。
【００６０】
本発明のペプチドは、有利には、例えば、最初のアミノ酸と最後のアミノ酸との共有結合、例えば縮合反応による共有結合により、直鎖状分子の環化が起こるアミノ酸配列を有する。もちろん、環化の別の可能性、例えば別のアミノ酸を相互に連絡させることによる可能性も存在する。単なる例示としては、２番目のアミノ酸と最後のアミノ酸との連結が挙げられる。いずれの可能な他の連結も同様に考慮され得る。
【００６１】
ペプチドの最初と最後のアミノ酸が互いに連結される場合、有利には、ペプチド鎖（アミノ酸配列）に開放端が存在しなくなる。
【００６２】
この処置によりさらに、直鎖状のアミノ酸配列を有する全てのペプチドが、環化後に同種のもはや区別できないアミノ酸の順序を生じ、この意味において同一となる。
【００６３】
例：公知のペプチドＤ３の直鎖状のアミノ酸配列は、ｒｐｒｔｒｌｈｔｈｒｎｒである。適切なＮ末端アミノ基とＣ末端カルボキシル基の間のアミド結合により連結した対応の環化ペプチド「ｃＤ３」は、環化ペプチドｐｒｔｒｌｈｔｈｒｎｒｒ、ｒｔｒｌｈｔｈｒｎｒｒｐ、ｔｒｌｈｔｈｒｎｒｒｐｒ、ｒｌｈｔｈｒｎｒｒｐｒｔ、ｌｈｔｈｒｎｒｒｐｒｔｒ、ｈｔｈｒｎｒｒｐｒｔｒｌ、ｔｈｒｎｒｒｐｒｔｒｌｈ、ｈｒｎｒｒｐｒｔｒｌｈｔ、ｒｎｒｒｐｒｔｒｌｈｔｈ、ｎｒｒｐｒｔｒｌｈｔｈｒまたはｒｒｐｒｔｒｌｈｔｈｒｎからもはや区別されない。ｃＤ３はさらに、これらの配列それぞれから誘導することもできる。
【００６４】
本発明によって請求される、より高い親和性、特異性および有効性の効果は、さらにまた、環化または他の方法で改変された本発明のペプチドを誘導できる結合性ペプチド、好ましくはそれどころか各直鎖状結合性ペプチドに対しても生じる。
【００６５】
環化ペプチドの製造は、その他の点については従来技術であり、例えばＤＥ１０２００５０４９５３７Ａ１に記載されるような方法に従って行うことができる。
【００６６】
有利には、ペプチドの最初および最後のアミノ酸を介した環化により、細胞、動物またはヒトにおいて多くの場合に、例えばアミノペプチダーゼおよびカルボキシペプチダーゼによるペプチド分解活性に関しての弱点である、ペプチド鎖の「開いている」末端がもはや存在しなくなる。
【００６７】
例えば配列番号１によるＡＮＫ６のような本発明による環化ペプチドを用いると、有利には、これらの本発明の環化ペプチドまたはポリマーが、状況によっては副次効果として容易に分解されなくなるということもさらに生じるが、この効果は決定的ではない。ちんみに、示されたように、この効果も、直鎖状ペプチドの対応する両端が相互に連結されるヘッドｔｏテイル−環化またはテイルｔｏヘッド環化の場合だけに当てはまる。
【００６８】
本発明の一変形において、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および／または配列番号１１のアミノ酸配列を有するペプチド、および／または少なくとも５０％の同一性を有するそれらのホモログが対象である。
【００６９】
本発明の意味において、「ホモログ配列」または「ホモログ」は、あるアミノ酸配列が、上記のモノマーのアミノ酸配列と、少なくとも５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９の同一性を有することを意味する。語句「同一性」の代わりに、本明細書では、「相同の」または「相同性」  が同義で使用される。２つの核酸配列またはポリペプチド配列の間の同一性は、Ｓｍｉｔｈ，Ｔ．Ｆ．  ｕｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ｍ．Ｓ（Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９（１９８１）のアルゴリズムをベースとするＢＥＳＴＦＩＴプログラムを使用する比較により、アミノ酸に関しては、以下のパラメーター：ギャップ作成ペナルティー：８およびギャップ伸長ペナルティー：２；そして核酸に関しては以下のパラメーター：ギャップ作成ペナルティー：５０およびギャップ伸長ペナルティー：３、を用いて算出する。好ましくは、２つの核酸配列またはポリペプチド配列の間の同一性は、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．  ｕｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｃ．Ｄ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３）のアルゴリズムをベースとするＧＡＰプログラムを用いた比較により、アミノ酸に関しては、以下のパラメーター：ギャップ作成ペナルティー：８およびギャップ伸長ペナルティー：２；そして核酸に関しては以下のパラメーター：ギャップ作成ペナルティー：５０およびギャップ伸長ペナルティー：３を用いて算出されるような、それぞれの全体の配列長に関する核酸配列／ポリペプチド配列の同一性によって定義される。
【００７０】
本発明の意味において、２つのアミノ酸配列は、これらが同一のアミノ酸配列を有する場合に同一である。
【００７１】
ホモログとは、一変形において、上述のモノマーの相応するレトロインバース（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｅ）配列と理解されるべきである。「レトロインバース配列」という語句は、本発明では、エナンチオマーの形態のアミノ酸から構成され（ｉｎｖｅｒｓｅ：α−Ｃ原子のキラリティーが反転している）、さらに元のアミノ酸配列に対する配列の順序が逆転した（ｒｅｔｒｏ＝逆向き）アミノ酸配列を表す。
【００７２】
更なる一変形において、本発明のペプチドは、アミロイドβ−ペプチドの部分に結合する。
【００７３】
更なる一変形において、本発明のペプチドは、上記の配列とは、最大３個のアミノ酸が異なる配列を有する。
【００７４】
さらに、ペプチドとして、上述の配列を含む配列も使用される。
【００７５】
更なる一変形において、ペプチドは、上述の配列の断片を有するか、又は上述の配列に対して相同な配列を有する。
【００７６】
本発明において、医薬において使用するための、好ましくはアルツハイマー病の治療または診断のためのペプチドが対象となる。
【００７７】
本発明の１つの実施態様において、上記ペプチドは本質的にＤ−アミノ酸からなる。
【００７８】
本発明の意味において、「本質的にＤ−アミノ酸から」という語句は、本発明において使用されるべきモノマーは、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、好ましくは７５％、８０％、特に好ましくは８５％、９０％、９５％、特に９６％、９７％、９８％、９９％、１００％が、Ｄ−アミノ酸から構成されることを意味する。
【００７９】
本発明の１つの実施態様において、本発明のペプチドは、Ｄ−エナンチオマーのＤ−ペプチドＤ３の誘導体である。本発明の意味における誘導体は、Ｄ３から誘導されたペプチド配列であり、これは以下の３つの方法により得られる：
ａ）Ｄ３におけるアミノ酸構成要素の順序および／または数の変更。ここでは、Ｄ３配列に存在しているアミノ酸だけが使用される。
ｂ）Ｄ３配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１個のアミノ酸の欠失。
ｃ）１、２、３、４、５または６個のアミノ酸の、他のアミノ酸、好ましくはＤ−エナンチオマーとの交換。
【００８０】
更なる一変形においては、アミロイド−ベータ−ペプチドのフィブリル形成の阻害のための本発明のペプチドが対象である。本発明のペプチドおよび／またはポリマーは、それらが例えばＡ−ベータ−モノマーに結合し、そうして毒性でない化合物に変換することで、Ａ−ベータ−オリゴマー又はそこから形成されるポリマー並びにフィブリルを無毒化する。従って、本発明の対象はまた、Ａ−ベータ−オリゴマーおよびそこから形成されるポリマー又はフィブリルの無毒化のための方法である。
【００８１】
１つの実施態様において、本発明の対象はまた、更なる物質と連結している本発明のペプチドである。
【００８２】
連結とは、本発明の意味において、化学結合、例えばＲｏｅｍｐｐ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｌｅｘｉｋｏｎ，第９版，第１巻，６５０頁〜，Ｇｅｏｒｇ  Ｔｈｉｅｍｅ  Ｖｅｒｌａｇ  Ｓｔｕｔｔｇａｒｔに定義されている化学結合であり、好ましくは主原子価結合、特に共有結合である。
【００８３】
１つの一変形において、上記物質は、薬事法（§２又は§４（１９）、２０１２年９月現在）に定義されている医薬品又は作用物質である。代替的に、作用物質は、薬学的に作用物質として使用される、治療的に活性な物質である。好ましくは、炎症抑制剤が使用される。
【００８４】
さらなる１つの変法において、上記物質は、ペプチドの作用を強化する化合物である。
【００８５】
代替において、そのような化合物は、アミノピラゾール及び／又はアミノピラゾール誘導体である。アミノピラゾール誘導体は、本発明の意味において、３−アミノピラゾール−５−カルボン酸又は３−ニトロピラゾール−５−カルボン酸並びに、複素環のＣＨ−基が−ＣＲ−又は−Ｎ−又は−Ｏ−又は−Ｓ−により交換された全ての誘導体、並びにそれらから誘導される全てのペプチド性のダイマー、トライマー又はテトラマー、好ましくはアミノピラゾール−トライマーである。
【００８６】
更なる代替においては、ペプチドの溶解性及び／又は脳血液関門の通過を改善する化合物を対象とする。
【００８７】
代替において、上記ペプチドは、本発明によれば、上述の変法、実施態様及び／又は代替物の少なくとも２以上の特徴のいずれの任意の組み合わせも有する。
【００８８】
本発明の枠内においてさらに、アミド化および／または環化されたペプチドが、遊離のＣ末端、すなわちＣ末端のカルボキシル基が修飾されておらず、従って負の電荷を有する直鎖状の結合性ペプチドと比較して、より高い親和性でＡベータ−モノマーに結合することが認められた。すなわち、遊離のＣ末端、すなわちＣ末端カルボキシル基が修飾されておらず、従って負の電荷を有する直鎖状ペプチドにおけるよりも、修飾されたペプチドにおけるＫＤ値は低い。
【００８９】
従って、本発明のさらなる好ましい実施態様において、Ｃ末端に負の電荷を持たない本発明の修飾されたペプチドの結合の親和性は、Ｃ末端に負の電荷を有するがその他の点は同一のアミノ酸配列を有する直鎖状ペプチドと比較して、約１％、２、３、４、５、６、７、８、９、特に１０％、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、特に１００％、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、特に２００％、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、特に３００％、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、特に４００％、４０１、４０２、４０３、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、４０９、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、４２５、４２６、４２７、４２８、４２９、４３０、４３１、４３２、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７７、４７８、４７９、４８０、４８１、４８２、４８３、４８４、４８５、４８６、４８７、４８８、４８９、４９０、４９１、４９２、４９３、４９４、４９５、４９６、４９７、４９８、４９９、有利にはそれどころか５００％、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、５１１、５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、５２４、５２５、５２６、５２７、５２８、５２９、５３０、５３１、５３２、５３３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８、５３９、５４０、５４１、５４２、５４３、５４４、５４５、５４６、５４７、５４８、５４９、５５０、５５１、５５２、５５３、５５４、５５５、５５６、５５７、５５８、５５９、５６０、５６１、５６２、５６３、５６４、５６５、５６６、５６７、５６８、５６９、５７０、５７１、５７２、５７３、５７４、５７５、５７６、５７７、５７８、５７９、５８０、５８１、５８２、５８３、５８４、５８５、５８６、５８７、５８８、５８９、５９０、５９１、５９２、５９３、５９４、５９５、５９６、５９７、５９８、５９９、特に有利には６００％、６０１、６０２、６０３、６０４、６０５、６０６、６０７、６０８、６０９、６１０、６１１、６１２、６１３、６１４、６１５、６１６、６１７、６１８、６１９、６２０、６２１、６２２、６２３、６２４、６２５、６２６、６２７、６２８、６２９、６３０、６３１、６３２、６３３、６３４、６３５、６３６、６３７、６３８、６３９、６４０、６４１、６４２、６４３、６４４、６４５、６４６、６４７、６４８、６４９、６５０、６５１、６５２、６５３、６５４、６５５、６５６、６５７、６５８、６５９、６６０、６６１、６６２、６６３、６６４、６６５、６６６、６６７、６６８、６６９、６７０、６７１、６７２、６７３、６７４、６７５、６７６、６７７、６７８、６７９、６８０、６８１、６８２、６８３、６８４、６８５、６８６、６８７、６８８、６８９、６９０、６９１、６９２、６９３、６９４、６９５、６９６、６９７、６９８、６９９、特に有利には７００％、７０１、７０２、７０３、７０４、７０５、７０６、７０７、７０８、７０９、７１０、７１１、７１２、７１３、７１４、７１５、７１６、７１７、７１８、７１９、７２０、７２１、７２２、７２３、７２４、７２５、７２６、７２７、７２８、７２９、７３０、７３１、７３２、７３３、７３４、７３５、７３６、７３７、７３８、７３９、７４０、７４１、７４２、７４３、７４４、７４５、７４６、７４７、７４８、７４９、７５０、７５１、７５２、７５３、７５４、７５５、７５６、７５７、７５８、７５９、７６０、７６１、７６２、７６３、７６４、７６５、７６６、７６７、７６８、７６９、７７０、７７１、７７２、７７３、７７４、７７５、７７６、７７７、７７８、７７９、７８０、７８１、７８２、７８３、７８４、７８５、７８６、７８７、７８８、７８９、７９０、７９１、７９２、７９３、７９４、７９５、７９６、７９７、７９８、７９９、同様に特に有利には８００％、８０１、８０２、８０３、８０４、８０５、８０６、８０７、８０８、８０９、８１０、８１１、８１２、８１３、８１４、８１５、８１６、８１７、８１８、８１９、８２０、８２１、８２２、８２３、８２４、８２５、８２６、８２７、８２８、８２９、８３０、８３１、８３２、８３３、８３４、８３５、８３６、８３７、８３８、８３９、８４０、８４１、８４２、８４３、８４４、８４５、８４６、８４７、８４８、８４９、８５０、８５１、８５２、８５３、８５４、８５５、８５６、８５７、８５８、８５９、８６０、８６１、８６２、８６３、８６４、８６５、８６６、８６７、８６８、８６９、８７０、８７１、８７２、８７３、８７４、８７５、８７６、８７７、８７８、８７９、８８０、８８１、８８２、８８３、８８４、８８５、８８６、８８７、８８８、８８９、８９０、８９１、８９２、８９３、８９４、８９５、８９６、８９７、８９８、８９９、同様に特に有利には９００％、９０１、９０２、９０３、９０４、９０５、９０６、９０７、９０８、９０９、９１０、９１１、９１２、９１３、９１４、９１５、９１６、９１７、９１８、９１９、９２０、９２１、９２２、９２３、９２４、９２５、９２６、９２７、９２８、９２９、９３０、９３１、９３２、９３３、９３４、９３５、９３６、９３７、９３８、９３９、９４０、９４１、９４２、９４３、９４４、９４５、９４６、９４７、９４８、９４９、９５０、９５１、９５２、９５３、９５４、９５５、９５６、９５７、９５８、９５９、９６０、９６１、９６２、９６３、９６４、９６５、９６６、９６７、９６８、９６９、９７０、９７１、９７２、９７３、９７４、９７５、９７６、９７７、９７８、９７９、９８０、９８１、９８２、９８３、９８４、９８５、９８６、９８７、９８８、９８９、９９０、９９１、９９２、９９３、９９４、９９５、９９６、９９７、９９８、９９９、またはそれどころか約１０００％、またはそれどころか約１００００％、またはそれどころか最大で約１０００００％もしくは１００００００％高められており、ここでそれぞれの中間値を取ることもできる。これは特に、ＡーベーターモノマーまたはＡ−ベーターオリゴマーの高親和性部位への高められた親和性に関する。
【００９０】
これは、相応に低下したＫＤ値によって表される。アミロイドーベーターモノマーまたはアミロイド−ベータ−オリゴマーへの修飾された、特に環化されたペプチドの結合の親和性に関する尺度としてのＫＤ値は、遊離Ｃ末端に負の電荷を有する直鎖状の結合性ペプチドと比較して、約１％、２、３、４、５、６、７、８、９、特に１０％、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、特に９９．１、９９．２、９９．３、９９．４、９９．５％、９９．６、９９．７、９９．８、９９．９、最大９９．９９またはそれどころか９９．９９９％低下しており、ここでそれぞれの中間値を取ることもできる。
【００９１】
これらの低下したＫＤ値は、有利には特にＡ−ベータ−モノマーまたはＡ−ベータ−オリゴマーの高親和性部位に関するが、これらに限定されるわけではない。
【００９２】
従って、上記の修飾ペプチドは、診断の目的のためのプローブとして、遊離Ｃ末端に負の電荷を有する直鎖状の結合性ペプチドより効果的に使用することができ、特にまた同一のアミノ酸配列を有するそれらの直鎖状ペプチド対応物より有効に使用することができる。
【００９３】
それらはまた、特に、治療剤としても、遊離Ｃ末端に負の電荷を有する直鎖状の結合性ペプチドよりも、特に同一のアミノ酸配列を有するそれらの直鎖状ペプチド対応物よりも効果的に使用することができる。
【００９４】
本発明の枠内においてさらに、このような修飾ペプチドが、遊離Ｃ末端に負の電荷を有するペプチドと比較して、特に同一のアミノ酸配列を有するそれらのペプチド対応物と比較して、さらにまたより高い効果または効率で、特に毒性のアミロイド−ベータ−オリゴマーの形成を阻止し、またはその破壊および／または無毒化をもたらすことが認められた。この効果は特に、約１％、２、３、４、５、６、７、８、９、特に１０％、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、特に有利にはそれどころか約１００％高められる。
【００９５】
本発明の特に好ましい実施形態において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏにおいても、Ａ−ベータ−モノマーまたはＡ−ベータ−オリゴマーまたはＡ−ベータ−フィブリルに対して増加した親和性の効果、ならびにそれに関連した同時のＡ−ベータ−オリゴマーの除去、無毒化（あるいは形成）の効果が生じる。
【００９６】
本発明の対象はまた、凝集したＡ−ベータ−ペプチドに結合するための本発明のペプチドである。
【００９７】
本発明のさらなる対象は、ペプチド合成、例えば当業者に公知の、低い分子量を有する任意の化合物（低分子量化合物）のための有機合成法、および／または突然変異誘発および組換え体製造による、本発明のペプチドを製造するための方法である。
【００９８】
本発明はさらにまた、特にアルツハイマー病の治療および診断のための、本発明のペプチドを含む組成物に関する。
【００９９】
本発明の対象は、さらに、特に毒性Ａ−ベータ−オリゴマーの阻止のための、またはそこから形成したポリマーまたはフィブリルの破壊のための、本発明のペプチドを含む組成物である。
【０１００】
本発明の「組成物」は、例えば、本発明のペプチドを専門知識に基づいて製造される処方物において含む、ワクチン、医薬（例えば、錠剤形態にある）、注入溶液、食品又は食品補助剤であることができる。
【０１０１】
本発明は、さらに、本発明のペプチドを含むキットにも関する。
【０１０２】
このようなキットにおいて、本発明のペプチドは、容器において、任意選択的に、緩衝液又は溶液と共に／緩衝液又は溶液の中に、包装されていてよい。キットの全ての成分は、同一の容器において又は相互に別個に包装されていてよい。さらに、キットは、その使用のための指示書を含んでよい。このようなキットは、例えば、本発明に従うものを、栓及び／又はセプタムを有する注入バイアルにおいて含んでよい。さらに、その中には、例えばディスポーザブルシリンジが含まれていてもよい。
【０１０３】
本発明の更なる対象は、アミロイド−ベータ−モノマー、アミロイド−ベータ−オリゴマー又はＡ−ベータ−フィブリルの同定、定性的および／または定量的測定のためのプローブとしての本発明のペプチドの使用である。
【０１０４】
本発明の対象はまた、アミロイド−ベータ−モノマーまたはアミロイド−ベータ−オリゴマーの同定、定性的および／または定量的測定のための、本発明のペプチドを含むプローブである。
【０１０５】
このようなプローブは、それを用いてアルツハイマー型認知症の早期診断が可能になるため、重大な意義をもつ。早期診断を用いて、疾病は既に、極めて早期の段階で対抗処置できる。
【０１０６】
このような分子プローブは、本発明のポリマー及び任意選択的に色素、蛍光色素、放射性同位体（ＰＥＴ他）、ガドリニウム（ＭＲＩ）並びにプローブの像形成に適した代替的な物質を含み、かつ、例えば静脈内注射によって、患者に注射されてよい。脳血液関門の通過後に、プローブはＡ−ベータ−モノマー、Ａ−ベータ−オリゴマー及び／又はプラークに結合することができる。そうしてマーキングされたＡ−ベータ−オリゴマー及び／又はプラークは、例えばＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、ＣＴ、ＭＲＴ、プロトン−ＭＲ−分光法等の像形成法を用いて、可視可能にすることができる。
【０１０７】
さらに、本発明は、アミロイド−ベータ−オリゴマー及び／又はアミロイド−ベータ−ペプチド−凝集体及び／又はアミロイド−ベータ−フィブリルの阻止のためのペプチドの使用にも関する。
【０１０８】
本発明のペプチドはまた、毒性アミロイド−ベータ−オリゴマー及び／又は凝集体の無毒化のために使用される。特にそれは、アミロイド−ベータ−オリゴマー及び／又は凝集体に結合し、そうして無定形の、非毒性の凝集体を形成するために、使用される。
【０１０９】
Ａβ−オリゴマーが既に生じている場合、Ａ−ベータ−モノマーに対してできる限り高い親和性を有する物質によってこれに対処することが治療の目標でなければならないことが認められた。事実上、Ａ−ベータ−モノマーに対する親和性は全然十分に大きくないことがあり得、その場合に本発明のペプチドの適切な解離定数は、μＭ未満の範囲に、より良好にはさらにｐＭの範囲あるいはさらにより低い範囲にある。
【０１１０】
本発明の枠内において、Ａ−ベータ−モノマーが、Ａ−ベータ−オリゴマーの構成成分として、ヒトの体内で常に発生しており、恐らくそれ自体では毒性でないことが認められた。それどころか、モノマーは、ポジティブな機能を有する可能性さえある。Ａ−ベータ−モノマーは、その濃度に依存して偶発的に一緒に堆積し得る。この濃度は、体内のそれらの形成速度及び分解速度に依存する。年齢が増加すると共に、体内でのＡ−ベータ−モノマーの濃度の上昇が起こり、そして前記モノマーが自然発生的に一緒に堆積してＡ−ベータ−オリゴマーを生じる可能性が益々大きくなる。そうして発生したＡ−ベータ−オリゴマーは、プリオンに類似して増加し、そして最終的にはアルツハイマー病−疾患を引き起こし得る。
【０１１１】
さらに、アルツハイマー型認知症の予防と治療又はましてや治癒との間の重要な相違点は、予防は場合によっては、最初のＡ−ベータ−オリゴマーの形成を妨げることによって既に達成できる、という事実にあると認められた。このためには、Ａ−ベータ−オリゴマーに対して同時にわずかに親和性であり選択的（もしくは特異的）である、いくつかの、わずかな高親和性Ａ−ベータ−モノマーリガンドで十分である。
【０１１２】
アルツハイマー型認知症の診断（プローブ）および治療に関するこの要求は、本発明のペプチドの提供により満たされる。本発明のペプチドは、診断および／または治療の目的で、Ａ−ベータ−モノマーまたはＡ−ベータオリゴマーに、適切に低い解離定数で結合する。さらなる対象は、従って、本発明のペプチドのアルツハイマー病の治療薬としての使用である。
【０１１３】
本発明のペプチドの標的分子への特に強力な結合は、本発明のペプチドの標的分子への高い特異性および／または親和性によりもたらされる。従って、形成した複合体は、低い解離定数（ＫＤ値）を有する。
【０１１４】
チオフラビンＴ試験により、本発明のペプチドが、Ａ−ベータ−ペプチドのフィブリル形成を非常に効果的に抑制することを示すことができた。
【０１１５】
更なる対象は、本発明のペプチドの、血液、血液製剤および／または器官の処置（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ）のための方法における使用であって、上記血液、血液製剤および／または器官が、ヒトまたは動物の体から取り出されたものであり、Ａ（アミロイド）−ベータ−オリゴマーが除去され、および／または無毒化されることを特徴とする使用である。
【０１１６】
本発明の意味において、結合親和性という語句は、タンパク質−リガンド相互作用における結合パートナー間の結合の強さのための尺度であり、Ａ−ベータ−モノマーに対する結合特異性は、結合がＡ−ベータ−モノマーにのみ存在し、他のＡ−ベータ種には結合が存在しないかまたは弱い結合のみが存在することを表す。特異性の値として、Ａ−ベータ−オリゴマーへの結合シグナルに対するＡ−ベータ−モノマーへの結合シグナルの比、またはＡ−ベータ−フィブリルへの結合シグナルに対するＡ−ベータ−モノマーへの結合シグナルの比、またはＡ−ベータ−オリゴマーに関する同等物が挙げられる。特異的結合とは、上記比が１より大きいことを意味する。
【０１１７】
これと同様に、Ａ−ベータ−オリゴマーに対する結合親和性は、結合がＡ−ベータ−オリゴマーにのみ存在し、他のＡ−ベータ種には結合が存在しないかまたは弱い結合のみが存在することを表す。特異性の値として、Ａ−ベータ−モノマーへの結合シグナルに対するＡ−ベータ−オリゴマーへの結合シグナルの比、またはＡ−ベータ−フィブリルへの結合シグナルに対するＡ−ベータ−オリゴマーへの結合シグナルの比、またはＡ−ベータ−モノマーに関する同等物が挙げられる。再度、特異的結合とは、上記比が１より大きいことを意味する。
【０１１８】
Ａ−ベータ−オリゴマーが既に生じている場合、Ａ−ベータ−オリゴマーを除去するために、Ａ−ベータ−モノマーに対してできる限り高い親和性および特異性を有する物質によってこれに対処することが治療の目標でなければならない。これは本発明のペプチドを用いて成功する。
【０１１９】
既に公知のペプチドＤ３の最適化により、作用メカニズムは類似または同一のままであるべきだが、物質はより効果的な特性を有するべきである。当該特性は、特に、Ａ−ベータ−モノマーまたは−オリゴマーに対する結合親和性および−特異性、Ａ−ベータ−フィブリル形成の阻害、Ａ−ベータ−細胞毒性の抑制、Ａ−ベータ−オリゴマーの析出、Ａ−ベータ−フィブリルの非毒性非アミロイド種への変換である。
【０１２０】
最適化は、元のＤ３ペプチドの４、５、６または７個のアミノ酸の置換、および欠失により達成された。
【０１２１】
ペプチドマイクロアレイを用いてＤ３を最適化した。そのために、第１段階において、１２ｍｅｒのペプチドのそれぞれのアミノ酸を、１９個の天然アミノ酸およびＤ−エナンチオマー形態の１３個のさらなるアミノ酸で置換した。第２段階において、有望な置換を相互に組み合わせた。その際に、元のＤ３ペプチドの４、５、６または７個のアミノ酸を置換した。更に、１個のアミノ酸を欠失させた。ペプチドの結合はＡ−ベータ−の１つの種（モノマー、オリゴマーまたはフィブリル）に特異的に向けられるべきなので、マイクロアレイは異なる種で処理し、計算上、場合によりインキュベーション調製物中に存在する他の種の結合を排除した。
【０１２２】
Ａ−ベータ−モノマーに対して特異的かつ高親和性で結合する１１個のペプチドを検出した。これらは、配列番号１〜１１による、ＡＮＫ１〜７およびＡＮＫ１５〜１８で表されるペプチドである。ここで、高親和性はＤ３よりも２倍〜１０倍低いＫＤ値を有することを意味する。
Ｄ３（技術水準）：ｒｐｒｔｒＩｈｔｈｒｎｒ
ａ）「ＡＮＫ１」（遊離のＮ末端、アミド化されたＣ末端）：ｒｋｒｉｒｌｖｙｈｉｎｒ
ｂ）「ＡＮＫ２」（遊離のＮ末端、アミド化されたＣ末端）：ｒｋｒｉｒｌ０６ｙｈｉｎｒ
ｃ）「ＡＮＫ３」（遊離のＮ末端、アミド化されたＣ末端）：ｒｋｒｉｒｌ０６ｙｈｗｎｒ
ｄ）「ＡＮＫ４」（遊離のＮ末端、アミド化されたＣ末端）：ｒｋｒｉｒｌｖｙｈｗｎｒ
ｅ）「ＡＮＫ５」（遊離のＮ末端、アミド化されたＣ末端）：ｒｋｒｖｒｌｖｙｈｋｋｒ
ｆ）「ＡＮＫ６」（遊離のＮ末端、アミド化されたＣ末端）：ｒｋｒｉｒｌｖｔｋｋｋｒ
ｇ）「ＡＮＫ７」（遊離のＮ末端、アミド化されたＣ末端）：ｒｋｒｖｒｌ０２ｔｈｉｋｒ
ｈ）「ＡＮＫ１５」（遊離のＮ末端、アミド化されたＣ末端）：ｒｐｒｖｒｌ０６ｙｈｗｎｒ
ｉ）「ＡＮＫ１６」（遊離のＮ末端、アミド化されたＣ末端）：ｒｋｒ０７ｒｌｖｔｋｒｎｒ
ｊ）「ＡＮＫ１７」（遊離のＮ末端、アミド化されたＣ末端）：ｒｋｒｉｒｌ０６ｙｈｉｋｒ
ｋ）「ＡＮＫ１８」（遊離のＮ末端、アミド化されたＣ末端）：ｒｐｒ０７ｒｌｈｔｋｋｋｒ
ここで
０２：４−フルオロ−フェニルアラニン（Ｄ）
０６：フェニルグリシン（Ｄ）
０７：Ｄ−ホモアルギニン
【０１２３】
全てのペプチドはまた、本発明において、二重ペプチド（Ｄｏｐｐｅｌｐｅｐｔｉｄｅ）としておよび／または環化形態において利用される。それにより、ペプチドの効果をさらに増強することができる。
【０１２４】
ペプチドＡＮＫ１〜７およびＡＮＫ１５〜１８は、Ａ−ベータ−モノマーへの結合により、アルツハイマー型認知症に対する医薬として使用することができる。オリゴマー特異的ペプチドは、Ａ−ベータ−オリゴマーへのそれらの特異的な結合のために、さらに診断用プローブとして利用することができる。
【実施例】
【０１２５】
実施例
さらに、本発明を実施例および添付の図に基づいてより詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【０１２６】
以下を示す：
図１：ａ）Ａ−ベータ−モノマー、Ａ−ベータ−オリゴマーおよびＡ−ベータ−フィブリルにおける本発明のペプチドの結合シグナル。ｂ）本発明のペプチドの結合特異性。
【０１２７】
図２：本発明のペプチドによるアミロイド−ベータ−オリゴマーの減少。
【０１２８】
図３：ａ）本発明のペプチドのＴＨＴアッセイ、ｂ）飽和点におけるアミロイド−ベータを基準としてＴＨＴ蛍光を用いて評価されたＴＨＴアッセイ
図４：ａ）Ａ−ベータ共インキュベーションなしでのＳＨ−ＳＹ５細胞のＭＴＴアッセイ。ｂ）Ａ−ベータ共インキュベーションありでのＳＨ−ＳＹ５細胞のＭＴＴアッセイ。
【０１２９】
Ｄ３誘導体を用いるペプチドマイクロアレイのために、該誘導体をスライドグラス上にＣ末端を介して以下に示すように共有結合させた。
・第１世代：１９の天然アミノ酸とのおよび１３の非天然アミノ酸とのそれぞれ１個の置換を有するＤ３
・第２世代：Ａ−ベータへのペプチドのより効果的な結合をもたらす置換を相互に組合わせた。
【０１３０】
−ペプチドマイクロアレイスライドの前処理
・３回エタノール（９６％）に短時間浸し、続いてＨ２Ｏで洗浄（３０分）
・短時間の乾燥、遠心分離
【０１３１】
−モノマーおよびオリゴマーの調製
・Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．２００６（Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ，Ａ．−Ｓ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｈｙｓｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ａβ１-４２Ａｒｃｔｉｃ  ａｎｄ  Ａβ１-４２ｗｔ．  ＦＥＢＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２７３，２６１８−２６３０（２００６））に従うサイズ排除クロマトグラフィー。
・オリゴマーを８〜９ｍｌずつ、モノマーを１６〜１７ｍｌずつ分画化した。
【０１３２】
−フィブリルの調製
・３日間にわたるＡ−ベータのインキュベーション、遠心分離、上清除去およびバッファーへの再懸濁（３ｘ繰り返し）
【０１３３】
−ペプチドマイクロアレイの実施
・ＦＩＴＣ−Ａ−ベータモノマー、−オリゴマー、−フィブリルおよびＦＩＴＣと室温で１時間インキュベーション。
・洗浄：ＴＢＳ−Ｔ  ３ｘ  短時間（ただしＴＢＳ−Ｔバッファー交換）、Ｆａｌｃｏｎ中にて３ｘ１０分、３ｘＨ２Ｏ、３ｘ１０分
・遠心分離による乾燥  
【０１３４】
−蛍光標識されたＡ−ベータと固定化ペプチドとの結合を、Ｆｕｊｉ  Ｆｉｌｍ製Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  Ｒｅａｄｅｒ  ＦＬＡ８００を用いて蛍光色素により検出する。ペプチドへＡ−ベータが多く結合するほど、蛍光シグナルが高くなる。
・Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｅｔ  Ｍｏｄｅ：スライド
・Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ：１０μｍ
・Ｓｃａｎ  Ｍｏｄｅ：Ｈｉｇｈ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  （Ｓｌｏｗ）：  Ｓｃａｎ  ｐｉｘｅｌ  ａｔ  ２００  ｍｍ／ｓ
・Ｌａｓｅｒ：  ４７３  ｎｍ
・Ｆｉｌｔｅｒ：  ５３０  ＤＦ  ２０
・Ｐｈｏｔｏ−ｍｕｌｔｉｐｌｉｅｒ  ｔｕｂｅ  （ＰＭＴ）  ＨＶ  （％）：  １００
・画像は．ｔｉｆデータファイルとして保存
蛍光シグナルの評価は、Ｒａｙｔｅｓｔ製ソフトウェアＡＩＤＡ  Ｍｅｔｒｉｘを用いて行う：
【０１３５】
【表１】
0006714610.tif 000002
【０１３６】
結果の再現性を保証するために、ペプチドマイクロアレイのインキュベーションは種あたり少なくとも３回行う。
【０１３７】
複数回測定した蛍光シグナルをメジアンに基づく正規化により正規化し、コントロールをシグナルから差し引いた。これにより、蛍光標識されたＡ−ベータの結合が色素を介して起こることを防いだ。
【０１３８】
ペプチドへのＡ−ベータ種の結合シグナルを平均した。
【０１３９】
結合特異性の決定のために、他の種に対する、ペプチドが特異的に結合すべきである種の比を用いる。
【０１４０】
例：ペプチドＸのＡ−ベータ−モノマーへの結合特異性＝モノマーへのペプチドＸの結合シグナル／オリゴマーへのペプチドＸの結合シグナル。
【０１４１】
本発明のペプチドＡＮＫ１〜７およびＡＮＫ１５〜１８は、Ａ−ベータ−フィブリル化の阻害、Ａ−ベータ−細胞毒性の阻害、Ａ−ベータ−オリゴマーの除去、ならびにＡ−ベータ−フィブリルの非毒性非アミロイド種への変換をもたらす。その際、Ａ−ベータ−モノマーへの結合親和性および特異性がもたらされる。
【０１４２】
ここで、結合親和性は、タンパク質−リガンド相互作用における結合パートナー間の結合の強さのための尺度であり、結合特異性は、結合がＡ−ベータ−モノマーにのみ存在し、他のＡ−ベータ種には結合が存在しないかまたは弱い結合のみが存在することを表す。ここでは、特異性の値として、Ａ−ベータ−オリゴマーへの結合シグナルに対するＡ−ベータ−モノマーへの結合シグナルの比、またはＡ−ベータ−フィブリルへの結合シグナルに対するＡ−ベータ−モノマーに対する結合シグナルの比、またはＡ−ベータ−オリゴマーに関する同等物が挙げられる。特異的結合とは、上記比が１より大きいことを意味する。
【０１４３】
詳細には、以下のデータが決定された
【０１４４】
【表２】
0006714610.tif 000003
【０１４５】
図１ａは、Ｄ３と比較した、ＡＮＫ１〜ＡＮＫ７およびＡＮＫ１５〜１８に関するＡ−ベータ−モノマー、−オリゴマーおよび−フィブリルへの結合シグナルを示す。上記ペプチドは、Ａ−ベータ−オリゴマーおよびＡ−ベータ−フィブリルよりも、Ａ−ベータ−モノマーにはるかに効率的に結合し、これは、結合シグナルの明確な差により認められる。明確な差は、Ａ−ベータ−モノマーの結合シグナルとＡ−ベータ−オリゴマーおよび／またはＡ−ベータ−フィブリルの結合シグナルとの間の少なくとも１．５ｒｆｕの差を意味する。
【０１４６】
図１ｂは、ＡＮＫ１〜７およびＡＮＫ１５〜１８に関する結合特異性を示す。本発明の全てのペプチドにおいて、Ａ−ベータ−モノマーに対する結合特異性が１より大きいことが明らかである。対照的に、Ｄ３は、１未満のＡ−ベータ−モノマーに対する結合特異性を有する。
【０１４７】
サンプル中のアミロイドペプチドおよび／またはタンパク質の定量的特性分析のためのＱＩＡＤ法により、上記物質の特性を定量化することができた。プレインキュベートしたＡ−ベータを上記ペプチドと共インキュベートした。密度勾配遠心を用いて、種々のＡ−ベータ種を分離し、ＲＰ−ＨＰＬＣにより、個々のフラクションにおけるＡベータを定量化した。フラクション４〜６におけるＡ−ベータ−オリゴマーの除去を解析した。
【０１４８】
図２からわかるように、特にＡＮＫ５、ＡＮＫ６およびＡＮＫ７が、Ｄ３よりも効果的にＡ−ベータ−オリゴマーを除去することが示される。一方では、モノマーへの特異的な結合は、オリゴマーの形成を妨げることができ、その際にＡ−ベータ−モノマーの濃度を減少させることなく、他方では、既に発生したＡ−ベータ−オリゴマーは、Ａ−ベータ−モノマーを安定化する作用物質での処理により、ルシャトリエの原理に合致する種々の凝集体種の動的平衡から、除去され、それによってＡ−ベータ−オリゴマーのＡ−ベータ−モノマーへの分解が実現される。
【０１４９】
ＴｈＴアッセイでは、被験物質との共インキュベーション後のＴｈＴ陽性Ａ−ベータ−フィブリルの明確な減少が示される（図３ａおよび３ｂ）。これは、凝集が阻害されるか、または無定形の凝集体が形成されることを示す。
【０１５０】
治療的に適切な濃度において、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の（当業者に公知の）ＭＴＴアッセイにおいて、言うに値するほどの本発明のペプチドの毒性は確認されなかった（図４）。対照的に、Ａ−ベータにより生じた毒性は、上記物質ＡＮＫ４、ＡＮＫ５、ＡＮＫ６およびＡＮＫ７により減少することを示すことができた。現在の常識に従うと、Ａ−ベータ−オリゴマーは、毒性種である。上記ペプチドを用いるとＡ−ベータ−オリゴマーが除去されるので、Ａ−ベータに誘発される毒性も減少する。
【０１５１】
詳細：
図２は、８：１のＡ−ベータとペプチドとの比において、ペプチドＡＮＫ５、ＡＮＫ６およびＡＮＫ７がＡ−ベータ−オリゴマーをＤ３よりも大幅に効果的に減少させることを示す。他のペプチドは、この濃度では、Ｄ３と同等に効果的である。Ｄ３は、Ａ−ベータ−オリゴマーを、５０±１０％除去し、ＡＮＫ１は５１±６％、ＡＮＫ２は５４±７％、ＡＮＫ３は６２±１０％、ＡＮＫ４は５９±１６％、ＡＮＫ５は７２±２％、ＡＮＫ６は８１±３％、ＡＮＫ７は７３±１％除去する。
【０１５２】
従って、本発明のペプチドは、Ｄ３と比較して、Ａ−ベータ−オリゴマーの減少の１．６倍までの上昇を示す。
【０１５３】
図３は、ＡＮＫ１〜７が明確にＴｈＴ陽性Ａ−ベータ−フィブリルの形成を減少させることを示す。ＴｈＴ蛍光は、ペプチドＡＮＫ１、ＡＮＫ２およびＡＮＫ３に関しては、全測定時間（４８ｈ）の間、最初の測定値のレベルに留まり、ペプチドＡＮＫ４、ＡＮＫ６およびＡＮＫ７に関しては対照的にわずかな増加が認められ（４８時間後に、ＡベータのＴｈＴ蛍光の１３〜２１％に相当）、ＡＮＫ５に関しては１０２９ｒｆｕに増加し、これは４８時間後のＡ−ベータコントロールのＴｈＴ蛍光の５３％に相当する。
【０１５４】
図４ａは、ＡＮＫ４、ＡＮＫ５、ＡＮＫ６およびＡＮＫ７が単独で細胞に対する毒性効果を有しないことを示す。図４ｂからわかるように、Ａ−ベータと種々の濃度のＡＮＫ４、ＡＮＫ５、ＡＮＫ６およびＡＮＫ７との共インキュベーションにより、Ａ−ベータ毒性の減少を達成できる。この減少は、Ｄ３を用いるよりも、物質ＡＮＫ４およびＡＮＫ６を用いた場合のほうがより効果的である。有意性は、Ｄ３を用いた場合の各濃度を基準とする（＊ｐ≦０．０５；＊＊ｐ≦０．０１；＊＊＊ｐ≦０．００１；ｎ．ｓ．有意性なし）
なお、本願は、特許請求の範囲に記載の発明に関するものであるが、他の態様として以下も包含し得る。
１．配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および／または配列番号１１およびホモログ、断片および部分、ならびに配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および／または配列番号１１のポリマーおよびそれらのホモログ、断片および部分からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含む、特異的にアミロイド−ベータ種に結合するペプチド。
２．医薬において使用するための、上記１に記載のペプチド。
３．アルツハイマー病の処置のための、上記１または２に記載のペプチド。
４．アルツハイマー病の診断のための、上記１〜３のいずれか１つに記載のペプチド。
５．本質的にＤ−アミノ酸からなることを特徴とする、上記１〜４のいずれか１つに記載のペプチド。
６．Ａ−ベータ−フィブリルの形成の阻害のための、上記１〜５のいずれか１つに記載のペプチド。
７．凝集したアミロイド−ベータ種に結合するための、上記１〜６のいずれか１つに記載のペプチド。
８．上記１〜７のいずれか１つに記載のペプチドを含むキット。
９．上記１〜７のいずれか１つに記載のペプチドを含む組成物。
１０．アミロイド−ベータ−モノマー、アミロイド−ベータ−フィブリルおよび／またはアミロイド−ベータ−オリゴマーの特異的同定、定量的および／または定性的測定のためのプローブとしての、上記１〜７のいずれか１つに記載のペプチドの使用。
１１．アミロイド−ベータ−オリゴマー及び／又はアミロイド−ベータ−ペプチド凝集体の阻害のための、上記１〜７のいずれか１つに記載のペプチドの使用。
１２．毒性のアミロイド−ベータ−オリゴマーおよび／または凝集体の無毒化のための、上記１〜７のいずれか１つに記載のペプチドの使用。
１３．アミロイド−ベータ−オリゴマー及び／又は凝集体が、上記１〜８のいずれか１つに記載のペプチドと、無定形で非毒性の凝集体を形成することを特徴とする、上記１２に記載の使用。
１４．配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および／または配列番号１１およびホモログ、断片および部分、ならびに配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および／または配列番号１１のポリマーおよびそれらのホモログ、断片および部分からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列の、Ａ−ベータ−モノマーへの特異的結合のための使用。
１５．アルツハイマー病の治療薬としての、およびアルツハイマー病の予防のための、上記１〜７のいずれか１つに記載のペプチドの使用。
【図１ａ】
0006714610.tif 000004
【図１ｂ】
0006714610.tif 000005
【図２】
0006714610.tif 000006
【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【配列表】
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