(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物であって、
【化１】
0006766273.tif 000132
式中、
ｎが、０、１、または２であり、
Ｘが、独立して、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｒ1が、−Ｃ1-3アルキルであり、
Ｒ2が、−Ｈまたは−ＣＨ3であり、
Ｒ3aおよびＲ3bが独立して、−Ｈ、−ＣＨ3、または−ＣＨ2ＣＨ3であり、
Ｒ4が、
【化２】
0006766273.tif 000133
、または−ＣＦ3で任意選択に置換されたチアゾリルであり、
Ｒ5が、ハロ、−ＣＮ、−ＣＦ3、オキサジアゾリル、またはＣＨ3で任意選択に置換されたオキサジアゾリルであり、
Ｒ6が、−Ｈ、−ＯＭｅ、ハロ、−ＣＨ3、または−ＣＦ3であり、
ただし、ｎが０であり、Ｘが−Ｎであり、Ｒ1が、−ＣＨ2ＣＨ3であり、Ｒ2が、−Ｏ−に隣接する位置にある−ＣＨ3であり、Ｒ3aおよびＲ3bが、−Ｈおよび−ＣＨ3である場合、Ｒ5は、−ＣＦ3であってはならない、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
以下の式の請求項１に記載の化合物であって、
【化３】
0006766273.tif 000134
式中、
ｎが、０または１であり、
Ｘが独立して、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｒ1が、−Ｃ1-3アルキルであり、
Ｒ2が、−Ｈまたは−ＣＨ3であり、
Ｒ3aおよびＲ3bが独立して、−Ｈ、−ＣＨ3、または−ＣＨ2ＣＨ3であり、
Ｒ6が、ハロまたは−ＣＨ3であり、
ただし、ｎが０であり、Ｘが−Ｎであり、Ｒ1が、−ＣＨ2ＣＨ3であり、Ｒ2が、−Ｏ−に隣接する位置にある−ＣＨ3である場合、Ｒ3aおよびＲ3bは、−Ｈおよび−ＣＨ3であってはならない、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
以下の式の請求項１に記載の化合物であって、
【化４】
0006766273.tif 000135
式中、
Ｘが、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｒ2が、−Ｈまたは−ＣＨ3であり、
Ｒ3aおよびＲ3bが独立して−Ｈまたは−ＣＨ3である、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
（５’Ｓ）−Ｎ−［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−５’−メチル−１−｛（１Ｒ）−１−［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル｝−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド：
【化５】
0006766273.tif 000136
である、請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
（５’Ｓ）−Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−５’−メチル−１−｛１−［２−（トリフルオロメチル）−１，３−チアゾール−５−イル］エチル｝−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド：
【化６】
0006766273.tif 000137
である、請求項１または３に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
１−［（１Ｓ）−１−（４−シアノフェニル）エチル］−Ｎ−［４−（メチルスルホニル）ベンジル］−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド：
【化７】
0006766273.tif 000138
である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
１−［（１Ｓ）−１−（４−シアノフェニル）エチル］−Ｎ−［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド：
【化８】
0006766273.tif 000139
である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせた、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、薬学的組成物。
【請求項９】
１つ以上の他の治療剤を含む、請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、乾癬を治療するための薬学的組成物。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、血清反応陰性脊椎関節症を治療するための薬学的組成物。
【請求項１２】
体軸性脊椎関節炎、強直性脊椎炎、または乾癬性関節炎を治療するための請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
療法に使用するための請求項１〜７のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
乾癬の治療に使用するための請求項１〜７のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
血清反応陰性脊椎関節症の治療に使用するための請求項１〜７のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６】
体軸性脊椎関節炎、強直性脊椎炎、または乾癬性関節炎の治療における請求項１５に記載の使用のための化合物またはその薬学的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、レチノイン酸受容体関連オーファン受容体ガンマ−ｔ（ＲＯＲγｔ）を阻害するのに有用な化合物、薬学的組成物、およびＲＯＲγ活性に関連する疾患を治療する方法に関する。
【０００２】
レチノイン酸受容体関連オーファン受容体（ＲＯＲ）は、多くの疾患において重要な病理学的調節因子として同定されている核内受容体（ＮＲ）スーパーファミリーのメンバーである。ＲＯＲサブファミリーは、ＲＯＲα、ＲＯＲβ、およびＲＯＲγからなる。マウスおよびヒトのＲＯＲγ遺伝子は、γ１およびγ２という２つのアイソフォームを生成し、後者は最も一般的にはγｔと呼ばれる。多くの場合にＩＬ−２３／ＩＬ−２３受容体シグナル伝達に応答して生じるＲＯＲγｔシグナル伝達は、未感作ＣＤ４＋  Ｔ細胞が、古典的なＴｈ１およびＴｈ２細胞とは異なるＴｈ１７と命名されているＴ細胞のサブセットに分化するのに必要であり、それらの維持を支援するものである。Ｔｈ１７細胞は、インターロイキン−１７Ａ（ＩＬ−１７）およびＩＬ−１７Ｆを産生する。加えて、Ｔｈ１７細胞は、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＸＣＬ１、およびＣＣＬ２０を含む、炎症応答を駆動することが知られている様々な他の因子を産生する。リンパ組織誘導因子（ＬＴｉ）様細胞などのＮＫ細胞および自然リンパ系細胞は、ＩＬ−２３受容体およびＲＯＲγｔを発現し、刺激およびＩＬ−２３に応答してＩＬ−１７を産生する。ＩＬ−２３応答性細胞、ＲＯＲγｔ細胞、およびＩＬ−１７発現細胞が、自己免疫疾患（ＡＩ）、炎症性疾患、および癌と関連しているという強固な証拠がある。このため、ＲＯＲγｔの標的阻害は、これらの疾患の病因を減少させるために重要であり得る。
【０００３】
ＡＩ疾患は、現在のところ治療法が存在しない慢性状態である。ＡＩ疾患の治療には、典型的には、抗炎症薬、抗疼痛薬、または免疫抑制薬を投与することによって疾患の過程を制御し症状を軽減する試みが伴う。残念なことに、抗炎症薬および抗疼痛薬の使用は効果がないときがあり、免疫抑制剤の使用は深刻な長期の副作用をもたらすことが多い。免疫抑制薬の最も重大な副作用は、感染の危険性の増加および癌のリスクの上昇である。
【０００４】
ＲＯＲγｔに対する天然および合成のリガンドが同定されている。ＲＯＲγｔに対する小分子阻害剤は、ＡＩに関する文献に報告されている。ＷＯ２０１５／０１７３３５およびＷＯ２０１４／１７９５６４を参照されたい。しかしながら、現在の治療の無効性または深刻な副作用と相まったＡＩ疾患の罹患率により、患者が利用可能な治療選択肢がより多くあることが必要となる。ＲＯＲγｔの標的化は、宿主防御の抑制のリスクを最小にしながら病原性免疫細胞を標的とすることによって治療上の利益を最大にすることで、現在のＡＩ療法を超える利点を提示し得る。
【０００５】
本発明は、ＲＯＲγｔ阻害剤である新規の化合物を提供する。そのような新しい化合物は、ブドウ膜炎、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、移植片対宿主病、クローン病、他の炎症性腸疾患、癌、乾癬、ならびに体軸性脊椎関節炎、強直性脊椎炎、または乾癬性関節炎などの血清反応陰性脊椎関節症の強力かつ有効な治療の必要性に対処し得る。
【０００６】
本発明は、以下の式の化合物であって、
【化１】
0006766273.tif 000002
式中、
ｎが、０、１、または２であり、
Ｘが独立して、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｒ1が、−Ｃ1-3アルキルであり、
Ｒ2が、−Ｈまたは−ＣＨ3であり、
Ｒ3aおよびＲ3bが独立して、−Ｈ、−ＣＨ3、または−ＣＨ2ＣＨ3であり、
Ｒ4が、
【化２】
0006766273.tif 000003
、または−ＣＦ3で任意に置換されたチアゾリルであり、
Ｒ5が、ハロ、−ＣＮ、−ＣＦ3、オキサジアゾリル、またはＣＨ3で任意に置換されたオキサジアゾリルであり、
Ｒ6が、−Ｈ、−ＯＭｅ、ハロ、−ＣＨ3、または−ＣＦ3であり、
ただし、ｎが０であり、Ｘが−Ｎであり、−Ｒ1が、−ＣＨ2ＣＨ3であり、Ｒ2が、−Ｏ−に隣接する位置にある−ＣＨ3であり、Ｒ3aおよびＲ3bが、−Ｈおよび−ＣＨ3である場合、Ｒ5は、−ＣＦ3であってはならない、化合物、
またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０００７】
本発明はまた、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、患者の乾癬の治療のための方法を提供する。さらに、本発明は、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、患者の血清反応陰性脊椎関節症の治療のための方法を提供する。該実施形態では、血清反応陰性脊椎関節症は、体軸性脊椎関節炎、強直性脊椎炎、または乾癬性関節炎である。
【０００８】
本発明は、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせた、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む薬学的組成物を提供する。さらなる実施形態では、本組成物は、１つ以上の他の治療剤をさらに含む。さらなる実施形態では、本発明は、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせた、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む乾癬の治療のための薬学的組成物を提供する。なおさらなる実施形態では、本発明は、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせた、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、血清反応陰性脊椎関節症の治療のための薬学的組成物を提供する。該実施形態では、血清反応陰性脊椎関節症は、体軸性脊椎関節炎、強直性脊椎炎、または乾癬性関節炎である。
【０００９】
さらに、本発明は、療法、特に乾癬の治療に使用するための本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。またさらに、本発明は、乾癬の治療に使用するための本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、乾癬治療用の薬剤を製造するための、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００１０】
さらに、本発明は、療法、特に血清反応陰性脊椎関節症の治療に使用するための本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。またさらに、本発明は、血清反応陰性脊椎関節症の治療に使用するための本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、血清反応陰性脊椎関節症治療用の薬剤を製造するための、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。該実施形態では、血清反応陰性脊椎関節症は、体軸性脊椎関節炎、強直性脊椎炎、または乾癬性関節炎である。
【００１１】
本発明はまた、本発明の化合物の合成に有用な中間体およびプロセスを含む。
【００１２】
本明細書で使用される場合、「治療すること」（または「治療する」もしくは「治療」）という用語は、既存の症状、状態、または障害の進行または重症度を抑制すること、遅延させること、停止させること、または回復させることを含む。
【００１３】
「脊椎関節症」という用語は、一般に脊柱と、靭帯および腱が骨に付着する領域とが関与するある数の慢性関節疾患を指す。脊椎関節症は、脊椎関節症（ｓｐｏｎｄｙｌｏａｒｔｈｒｏｐａｔｈｙ）または脊椎関節炎（ｓｐｏｎｄｙｌｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ）とも呼ばれることがある。
【００１４】
「血清反応陰性」という用語は、リウマチ因子について陰性である疾患を指す。
【００１５】
本発明の化合物は、反応して薬学的に許容される塩を形成してもよい。薬学的に許容される塩およびそれらを調製するための一般的な方法論は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌ，ｅｔ  ａｌ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ，２nd  Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２０１１）、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，”Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．６６，Ｎｏ．１，Ｊａｎｕａｒｙ  １９７７を参照されたい。
【００１６】
当業者であれば、（Ｉ）に示される本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩が、下記の＊によって表される少なくとも２つのキラル中心を含むコアで構成されることを理解することになる。
【化３】
0006766273.tif 000004
本発明は、全ての個々のエナンチオマーおよびジアステレオマー、ならびに全ての個々のエナンチオマー、およびラセミ体を含む該化合物のエナンチオマーの混合物を企図するが、以下の（ＩＩ）によって表される本発明の化合物
【化４】
0006766273.tif 000005
またはその薬学的に許容される塩が好ましい。
【００１７】
また、当業者であれば、全てのキラル中心に対するＣａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ（Ｒ）または（Ｓ）の指定が特定の化合物の置換パターンに応じて変わることを理解するであろう。単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーは、キラル試薬から始めるか、または立体選択的もしくは立体特異的合成技法によって調製してもよい。あるいは、単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーは、本発明の化合物の合成における任意の都合のよい時点で、標準的なキラルクロマトグラフィーまたは結晶化技法によって混合物から単離してもよい。本発明の化合物の単一のエナンチオマーが本発明の好ましい態様である。
【００１８】
本発明の化合物は、好ましくは、様々な経路で投与される薬学的組成物として製剤化される。そのような医薬組成物およびそれを調製するためのプロセスは、当該技術分野において周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，２２nd  ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，２０１２）を参照されたい。より特に好ましいのは、式
【化５】
0006766273.tif 000006
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および１つ以上の薬学的に許容される担体または希釈剤を含む、薬学的組成物である。
【００１９】
本発明の化合物の全てはＲＯＲγｔの有用な阻害剤であるが、ある種のクラスの化合物が好ましい。以下の段落では、このような好ましいクラスについて説明する：
ａ）Ｒ1が、エチルである；
ｂ）Ｒ1が、メチルである；
ｃ）Ｒ2が、−ＣＨ3である；
ｄ）Ｒ2が、酸素に隣接する炭素上の−ＣＨ3である；
ｅ）Ｒ3aおよびＲ3bが独立して−Ｈまたは−ＣＨ3である；
ｆ）Ｒ3aおよびＲ3bが、−Ｈおよび−Ｈである；
ｇ）Ｒ3aおよびＲ3bが、−Ｈおよび−ＣＨ3である；
ｈ）ｎが、０である；
ｉ）ｎが、１である；
ｊ）Ｒ4が、
【化６】
0006766273.tif 000007
であり、式中、Ｒ5が、−ＣＨ3または−ＣＦ3である；
ｋ）Ｒ4が、
【化７】
0006766273.tif 000008
であり、式中、Ｒ5が、−ＣＨ3または−ＣＦ3であり、ｎが１であり、Ｒ6が、−ＣＨ3である；
ｌ）Ｒ4が、
【化８】
0006766273.tif 000009
であり、式中、Ｒ5が、−ＣＦ3である；
ｍ）Ｒ4が、
【化９】
0006766273.tif 000010
であり、式中、Ｒ5が、−ＣＦ3であり、ｎが１であり、Ｒ6が、ハロまたは−ＣＨ3である；
ｎ）Ｒ4が、
【化１０】
0006766273.tif 000011
であり、式中、Ｒ5が、ハロ、シアノ、−ＣＦ3、オキサジアゾリル、または−ＣＨ3で任意に置換されたオキサジアゾリルである；
ｏ）Ｒ4が、
【化１１】
0006766273.tif 000012
であり、式中、Ｒ5が、ハロ、シアノ、−ＣＦ3、オキサジアゾリル、または−ＣＨ3で任意に置換されたオキサジアゾリルであり、ｎが１であり、Ｒ6が、−Ｈ、−ＯＣＨ3、ハロ、−ＣＨ3、または−ＣＦ3である；
ｐ）Ｒ4が、
【化１２】
0006766273.tif 000013
であり、式中、Ｒ5が、ハロ、シアノ、−ＣＦ3、オキサジアゾリル、または−ＣＨ3で任意に置換されたオキサジアゾリルであり、ｎが２であり、Ｒ6が、−Ｈ、−ＯＣＨ3、ハロ、−ＣＨ3、または−ＣＦ3である；
ｑ）Ｒ４が、−ＣＦ3で任意に置換されたチアゾリルである。
【００２０】
本発明の化合物の好ましい一実施形態は、以下の式の化合物であって、
【化１３】
0006766273.tif 000014
式中、
ｎが、０、１、または２であり、
Ｘが独立して、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｒ1が、−Ｃ1-3アルキルであり、
Ｒ2が、−Ｈまたは−ＣＨ3であり、
Ｒ3aおよびＲ3bが独立して、−Ｈ、−ＣＨ3、または−ＣＨ2ＣＨ3であり、
Ｒ4が、
【化１４】
0006766273.tif 000015
、または−ＣＦ3で任意に置換されたチアゾリルであり、
Ｒ5が、ハロ、−ＣＮ、−ＣＦ3、オキサジアゾリル、またはＣＨ3で任意に置換されたオキサジアゾリルであり、
Ｒ6が、−Ｈ、−ＯＭｅ、ハロ、−ＣＨ3、または−ＣＦ3であり、
ただし、ｎが０であり、Ｘが−Ｎであり、−Ｒ1が、−ＣＨ2ＣＨ3であり、Ｒ2が、−Ｏ−に隣接する位置にある−ＣＨ3であり、Ｒ3aおよびＲ3bが、−Ｈおよび−ＣＨ3である場合、Ｒ5は、−ＣＦ3であってはならない、化合物、
またはその薬学的に許容される塩に関する。
【００２１】
本発明の化合物の別の好ましい実施形態は、以下の式の化合物であって、
【化１５】
0006766273.tif 000016
式中、
ｎが、０または１であり、
Ｘが独立して、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｒ1が、−Ｃ1-3アルキルであり、
Ｒ2が、−Ｈまたは−ＣＨ3であり、
Ｒ3aおよびＲ3bが独立して、−Ｈ、−ＣＨ3、または−ＣＨ2ＣＨ3であり、
Ｒ6が、ハロまたは−ＣＨ3であり、
ただし、ｎが０であり、Ｘが−Ｎであり、−Ｒ1が、−ＣＨ2ＣＨ3であり、Ｒ2が、−Ｏ−に隣接する位置にある−ＣＨ3である場合、Ｒ3aおよびＲ3bは、−Ｈおよび−ＣＨ3であってはならない、化合物、
またはその薬学的に許容される塩に関する。
【００２２】
本発明の化合物の別の好ましい実施形態は、以下の式の化合物であって、
【化１６】
0006766273.tif 000017
式中、
ｎが、０または１であり、
Ｘが、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｒ1が、−Ｃ1-3アルキルであり、
Ｒ2が、−Ｈまたは−ＣＨ3であり、
Ｒ3aおよびＲ3bが独立して−Ｈまたは−ＣＨ3であり、
Ｒ6が、−ＣＨ3であり、
ただし、ｎが０であり、Ｘが−Ｎであり、−Ｒ1が、−ＣＨ2ＣＨ3であり、Ｒ2が、−Ｏ−に隣接する位置にある−ＣＨ3である場合、Ｒ3aおよびＲ3bは、−Ｈおよび−ＣＨ3であってはならない、化合物、
またはその薬学的に許容される塩に関する。
【００２３】
本発明の化合物のさらなる別の好ましい実施形態は、以下の式の化合物であって、
【化１７】
0006766273.tif 000018
式中、
ｎが、０または１であり、
Ｘが、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｒ1が、−Ｃ1-3アルキルであり、
Ｒ2が、−Ｈまたは−ＣＨ3であり、
Ｒ3aおよびＲ3bが独立して、−Ｈ、−ＣＨ3、または−ＣＨ2ＣＨ3であり、
Ｒ6が、ハロまたは−ＣＨ3である、化合物、
またはその薬学的に許容される塩に関する。
【００２４】
本発明の化合物の別の好ましい実施形態は、以下の式の化合物であって、
【化１８】
0006766273.tif 000019
式中、
ｎが、０、１、または２であり、
Ｘが、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｒ1が、−Ｃ1-3アルキルであり、
Ｒ2が、−Ｈまたは−ＣＨ3であり、
Ｒ3aおよびＲ3bが独立して−Ｈまたは−ＣＨ3であり、
Ｒ5が、ハロ、−ＣＮ、−ＣＦ3、オキサジアゾリル、またはＣＨ3で任意に置換されたオキサジアゾリルであり、
Ｒ6が、−ＯＭｅ、ハロ、−ＣＨ3、または−ＣＦ3である、化合物、
またはその薬学的に許容される塩に関する。
【００２５】
本発明の化合物の別の好ましい実施形態は、以下の式の化合物であって、
【化１９】
0006766273.tif 000020
式中、
Ｘが、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｒ2が、−Ｈまたは−ＣＨ3であり、
Ｒ3aおよびＲ3bが独立して−Ｈまたは−ＣＨ3である、化合物、
またはその薬学的に許容される塩に関する。
【００２６】
本発明の化合物の別の好ましい実施形態は、以下の式の化合物であって、
【化２０】
0006766273.tif 000021
式中、
Ｘが、−Ｎ−または−ＣＨ−であり、
Ｒ2が、−Ｈまたは−ＣＨ3であり、
Ｒ3aおよびＲ3bが独立して−Ｈまたは−ＣＨ3である、化合物、
またはその薬学的に許容される塩に関する。
【００２７】
本発明の特に好ましい一実施形態は、化合物（５’Ｓ）−Ｎ−［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−５’−メチル−１−｛（１Ｒ）−１−［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル｝−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化２１】
0006766273.tif 000022
、またはその薬学的に許容される塩に関する。
【００２８】
本発明の別の特に好ましい実施形態は、以下の化合物に関する。
【化２２】
0006766273.tif 000023
【００２９】
本発明の別の特に好ましい実施形態は、化合物（５’Ｓ）−Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−５’−メチル−１−｛１−［２−（トリフルオロメチル）−１，３−チアゾール−５−イル］エチル｝−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化２３】
0006766273.tif 000024
、またはその薬学的に許容される塩に関する。
【００３０】
本発明の別の特に好ましい実施形態は、以下の化合物に関する。
【化２４】
0006766273.tif 000025
【００３１】
本発明の化合物は、概して、投薬量が幅広い範囲にわたって有効である。例えば、１日当たりの投薬量は約１ｍｇ〜１ｇの範囲内である。ある場合には、前述の範囲の下限よりも低い投薬量レベルが十二分である場合があり、他の場合には、優れたリスク対効果プロファイルを維持しながら、さらに多い用量を用いてもよく、したがって、上記の投薬量範囲は、決して本発明の範囲を限定することを意図するものではない。実際に投与される化合物の量は、治療される状態、選択された投与経路、投与される実際の化合物（単数または複数）、個々の患者の年齢、体重、および応答、ならびに患者の症状の重症度を含む関連する状況を考慮して、医師によって決定されることが理解される。
【００３２】
本発明の化合物またはその塩は、当業者に既知の様々な手順によって調製されてもよく、そのうちのいくつかが、以下のスキーム、調製物、および実施例で説明されている。本発明の化合物または塩を調製するために、記載される経路の各々についての特定の合成ステップを、異なる様式で組み合わせるか、または異なるスキームのステップと併せてもよい。以下のスキームにおける各ステップの生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、磨砕、および結晶化を含む、当該技術分野で周知の従来の方法によって回収することできる。以下のスキームにおいて、全ての置換基は、別途指示のない限り、すでに定義されたとおりである。試薬および出発材料は、当業者にとって容易に入手可能である。
【００３３】
加えて、以下のスキームに記載のある特定の中間体は、１つ以上の窒素または酸素保護基を含んでもよい。可変保護基は、実施される特定の反応条件および特定の変換に応じて、出現ごとに同じでも異なっていてもよい。保護および脱保護条件は、当業者に周知であり、文献に記載されている（例えば、“Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｂｙ  Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．２００７を参照されたい）。
【００３４】
明確にするために、以下のスキームにおいて、特定の立体化学中心は特定しないままであり、ある特定の置換基は排除してあるが、決して本スキームの範囲を限定することを意図するものではない。単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーは、キラル試薬から始めるか、または立体選択的もしくは立体特異的合成技法によって調製してもよい。あるいは、単一のエナンチオマーまたはラセミ体は、選択的結晶化技法またはキラルクロマトグラフィーなどの方法によって、本発明の化合物の合成における任意の都合のよい時点で、標準的なキラルクロマトグラフィーまたは結晶化技法によって、混合物から単離してもよい（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓ，ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９８１，ａｎｄ  Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ  ａｎｄ  Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，”Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４を参照されたい）。
【００３５】
本発明のいくつかの中間体または化合物は、１つ以上のキラル中心を有してもよい。本発明は、全ての個々のエナンチオマーまたはジアステレオマー、ならびにラセミ体を含む該化合物のエナンチオマーおよびジアステレオマーの混合物を企図する。少なくとも１つのキラル中心を含む本発明の化合物は単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーとして存在することが好ましい。単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーは、キラル試薬から始めるか、または立体選択的もしくは立体特異的合成技法によって調製してもよい。あるいは、単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーは、標準的なキラルクロマトグラフィーまたは結晶化技法によって混合物から単離してもよい。当業者であれば、状況によっては、クロマトグラフィーカラムおよび移動相が異なるためにエナンチオマーまたはジアステレオマーの溶出順序が異なり得ることを理解するであろう。「異性体１」および「異性体２」という名称は、それぞれキラルクロマトグラフィーから１番目および２番目に溶出する化合物を指し、キラルクロマトグラフィーが合成の早い段階で開始される場合、同じ名称が後続の中間体および実施例に適用される。
【００３６】
ある特定の略語は以下のように定義される。「ＡＣＮ」はアセトニトリルを指す。「ＡＵＣ」は曲線下面積を指す。「ＢＰＲ」は背圧調整器を指す。「ＢＳＡ」はウシ血清アルブミンを指す。「ＤＢＡ」は、薄茶色の非アグーチを指す。「ＤＣＣ」は１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドを指す。「ＤＣＭ」はジクロロメタンを指す。「ｄｅ」はジアステレオマー過剰を指す。「ＤＦＴ」は密度汎関数理論を指す。「ＤＩＣ」はジイソプロピルカルボジイミドを指す。「ＤＩＰＥＡ」は、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピル−プロパン−２−アミン、またはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを指す。「ＤＭＡＰ」は４−ジメチルアミノピリジンを指す。「ＤＭＥＭ」はダルベッコ改質イーグル培地を指す。「ＤＭＦ」はジメチルホルムアミドを指す。「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指す。「ＤＮＡ」はデオキシリボ核酸を指す。「ＤＰＢＳ」はダルベッコリン酸緩衝食塩水を指す。「ＥＤＣＩ」は１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を指す。「ＥＣ50」は最大応答の半分における有効濃度を指す。「ｅｅ」はエナンチオマー過剰を指す。「ＥＬＩＳＡ」は酵素結合免疫アッセイを指す。「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指す。「ＥｔＯＨ」はエタノールまたはエチルアルコールを指す。「Ｅｔ2Ｏ」はエチルエーテルを指す。「Ｅｘ」は実施例を指す。「ＦＢＳ」はウシ胎仔血清を指す。「Ｇ」は重力を指す。「ＧＡＬ」はベータ−ガラクトシダーゼＤＮＡ結合ドメインを指す。「ＧＰＩ」はグルコース−６−リン酸イソメラーゼを指す。「ＨＢＴＵ」は（２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）を指す。「ＨＥＣ」はヒドロキシエチルセルロースを指す。「ＨＥＫ」はヒト胎児腎臓を指す。「ＨＥＰＥＳ」は４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸を指す。「ＨＯＡｔ」は、１−ヒドロキシ−７−アゾベンゾトリアゾールを指す。「ＨＯＢｔ」は１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物を指す。「ＩＣ50」は、その薬剤について可能な最大阻害応答の５０％を生じる薬剤の濃度を指す。「ＩＬ」はインターロイキンを指す。「イオン交換クロマトグラフィー」は、ＭｅＯＨ中２ＭのＮＨ3で溶出するＩＳＯＬＵＴＥ（登録商標）Ｆｌａｓｈ  ＳＣＸ−２イオン交換クロマトグラフィーを用いる精製を指す。「ＩＰＡ」はイソプロピルアルコールまたはイソプロパノールを指す。「ＩＰＡｍ」はイソプロピルアミンを指す。「Ｋｄ」は解離定数を指す。「Ｋｉ」は阻害定数を指す。「分」は分（単数または複数）を指す。「ＭＥＭ」は最小必須培地を指す。「ＭｅＯＨ」はメタノールまたはメチルアルコールを指す。「ＭＳ」は質量分析を指す。「ＭＴＢＥ」はメチルｔ−ブチルエーテルを指す。「ＮＢＳ」はＮ−ブロモスクシンイミドを指す。「ＰＢＭＣ」は末梢血単核細胞を指す。「ＰＢＳ」はリン酸緩衝食塩水を指し、「ＰＥＭ」は光弾性変調器を指す。「Ｐｒｅｐ」は調製物を指す。「ＲＡＲ」はレチノイン酸受容体を指す。「ＲＰＭＩ」はＲｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅを指す。「ＲＴ」は室温を指す���「Ｒt」は保持時間を指す。「ＳＣＸ」は強陽イオン交換を指す。「ＳＦＣ」は超臨界液体クロマトグラフィーを指す。「Ｔ３Ｐ（登録商標）」は１−プロパンホスホン酸無水物溶液、２，４，６−トリプロピル−１，３，５，２，４，６−トリオキサトリホスホリナン−２，４，６−三酸化物溶液またはＰＰＡＣＡを指す。「ＴＥＡ」はトリエチルアミンを指す。「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指す。「ＶＣＤ」は振動円二色性を指し、「ＸＲＤ」はＸ線粉末回折を指す。
【００３７】
以下のスキームにおいて、全ての置換基は、別途指示のない限り、すでに定義されたとおりである。試薬および出発材料は、当業者にとって容易に入手可能である。他のものは、任意の新規な方法を含む以下の調製物および実施例に記載される方法および既知の構造的に同様の化合物の合成に類似する有機および複素環化学の標準的な技法によって製造することができる。
【化２５】
0006766273.tif 000026
【００３８】
スキーム１において、Ｒxは適切なアミン保護基であり、Ｒyは適切なアミン保護基または水素のいずれかである。アミン保護基は、当該技術分野で周知かつ理解されており、カルバメートおよびアミドを含んでもよい。当業者であれば、該保護基を付加および除去するための代替の試薬および手順を認識するであろう。Ｒzは、臭素または塩素などのハロゲンである。当業者は、ハロゲンを導入するための代替の試薬および手順があることを認識するであろう。
【００３９】
当業者であれば、置換ヒドロキシエチルチオフェンを調製するための様々な方法があることを認識するであろう。例えば、化合物（１）は、ｓｅｃ−ブチルリチウムまたはｎ−ブチルリチウムなどの強塩基の存在下、−７８〜−６０℃などの温度で、置換エポキシドを用いるブロミドの転置により、続いて三フッ化ホウ素ジエチルエーテラートのようなルイス酸による開環によって、３−ブロモチオフェンから調製してもよい。ステップ１において、置換ヒドロキシエチルチオフェン（１）および保護されたまたは保護されていない４−ケトピペリジン（２）をトリフルオロ酢酸などの酸の存在下で混合して、スピロチエニルピラノピペリジン（３）を得てもよい。保護基Ｒxがステップ１の間に除去される場合、またはＲyが水素である場合、化合物（３）中のアミンは、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルのような標準的なアミン保護基を使用して保護され得る。ステップ２ａにおいて、化合物（３）はハロゲン化されていてもよい。例えば、化合物（３）をＮＢＳおよびジメチルアミノピリジンなどの触媒で臭素化して、化合物（４）を得てもよい。あるいは、工程２ｂにおいて、化合物（３）をブチルリチウムなどの強塩基の存在下で二酸化炭素によってカルボキシル化して、化合物（５）を得ることができる。
【００４０】
ステップ３において、化合物（４）を、一酸化炭素およびアミン（６）と、４，５−ビス−（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテンなどの有機金属リガンド、酢酸パラジウム（ＩＩ）などの触媒、およびＤＩＰＥＡなどの塩基の存在下で反応させて、化合物（７）を得てもよい。当業者であれば、代替のリガンドおよび触媒があることを理解するであろう。あるいは、ステップ３において、化合物（５）を、標準的なカップリング条件下でアミン（７）に変換してもよい。カルボン酸（５）とアミン（６）とのカップリングは、Ｔ３Ｐ（登録商標）などの好適なカップリング剤およびＤＩＰＥＡなどの好適なアミン塩基の存在下で作用し得る。代替のカップリング剤としては、ＨＯＢｔ、ＨＢＴＵ、およびＨＯＡｔ、ならびにカルボジイミド、例えば、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＥＤＣＩが挙げられる。代替の塩基としては、トリメチルアミンおよびＴＥＡが挙げられる。当業者であれば、カルボン酸とアミンとの反応から生じるアミド形成のための他の方法および試薬が多数あることを認識するであろう。反応を促進するためにＤＭＡＰなどの添加剤を使用してもよい。あるいは、ＴＥＡまたはピリジンなどの塩基の存在下で化合物（５）の置換アシルクロリドを使用して、化合物（６）をアシル化することができる。
【００４１】
ステップ４において、化合物（７）を、当該技術分野で既知の適切な条件に従って脱保護してもよい。例えば、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル保護基をＨＣｌによって除去してもよい。遊離アミンを、ＤＩＰＥＡなどの有機塩基または炭酸カリウムなどの無機塩基の存在下で、適切に置換されたＲ4基（式中、Ｒyは、ハロゲンまたはスルホネートなどの脱離基である）でアルキル化して、式（Ｉ）の化合物を得てもよい。
【００４２】
塩酸塩などの本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、例えば、本発明の化合物の好適な遊離塩基、塩酸などの適切な薬学的に許容される酸を、Ｅｔ2Ｏなどの好適な溶媒中、当該技術分野で周知の標準的な条件下で反応させることによって、形成させることができる。加えて、そのような塩の形成は、窒素保護基の脱保護と同時に起こり得る。そのような塩の形成は、当該技術分野で周知であり、また理解されている。例えば、Ｇｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．，“Ｓａｌｔ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｂａｓｉｃ  ｄｒｕｇｓ，”Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，３３：２０１−２１７（１９８６）、Ｂａｓｔｉｎ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．“Ｓａｌｔ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｎｅｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｎｔｉｔｉｅｓ，”Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，４：４２７−４３５（２０００）、およびＢｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，”Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１−１９，（１９７７）を参照されたい。
【００４３】
本発明の化合物またはその塩は、当業者に既知の様々な手順によって調製されてもよく、そのうちのいくつかが、以下のスキーム、調製物、および実施例で説明されている。本発明の化合物またはその塩を調製するために、記載される経路の各々についての特定の合成ステップを異なる様式で組み合わせてもよい。以下の各ステップの生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、磨砕、および結晶化を含む、当該技術分野で周知の従来の方法によって回収することできる。試薬および出発材料は、当業者にとって容易に入手可能である。
【００４４】
以下の調製物および実施例は、本発明をさらに説明するものであり、本発明の化合物の典型的な合成を表す。
【００４５】
調製物および実施例
調製物１
１−（３−チエニル）プロパン−２−オン
【化２６】
0006766273.tif 000027
２−（３−チエニル）酢酸（２６．５ｇ、１４６．５ｍｍｏｌ）を無水酢酸（８７．９ｍＬ、９１３ｍｍｏｌ）中に懸濁し、１−メチルイミダゾール（７．５７ｇ、９１．３ｍｍｏｌ）を加える。窒素下、反応混合物を室温で４時間撹拌する。反応混合物を０℃に冷却し、水（１５０ｍＬ）を加え、１時間撹拌する。溶液をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で希釈し、２ＭのＮａＯＨ（２×２００ｍＬ）、水（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で連続して洗浄する。有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮乾燥し、黄色の油状物として表題化合物（２８．１６ｇ、７７％）を得る。1Ｈ  ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ２．１４（ｓ  ３Ｈ）、３．７（ｓ、２Ｈ）、６．９４（ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．０８（ｂｓ、１Ｈ）、７．２９−７．２６（ｍ、１Ｈ）。
【００４６】
調製物２
１−（３−チエニル）プロパン−２−オール
【化２７】
0006766273.tif 000028
水素化ホウ素ナトリウム（１．６１ｇ、４１．６７ｍｍｏｌ）および乾燥ＭｅＯＨ（６３ｍＬ）を一緒に加え、ＭｅＯＨを加えながら、反応混合物を−１０℃に冷却する。さらに−２０℃に冷却し、乾燥ＭｅＯＨ（２６．７ｍＬ）中の１−（３−チエニル）プロパン−２−オン（４．９２ｇ、３３．３４ｍｍｏｌ）の溶液を４０分かけて滴下して加え、−２０℃で１．５時間撹拌し、次いで、室温で１７時間攪拌する。溶液を−５℃（内部温度）に冷却し、塩化アンモニウムの飽和溶液（１５ｍＬ）で、次いで１ＮのＨＣｌ（１５ｍＬ）でクエンチする。水（３０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）を加える。混合物を減圧下で全容量の１／３に濃縮する。混合物をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出する。有機抽出物を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮乾燥し、表題化合物（４．７４ｇ、１００％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１２５（Ｍ−ＯＨ＋Ｈ）、１６４．８（Ｍ＋Ｎａ）。
【００４７】
代替的調製物２ａ
０℃で３０分かけて、水素化ホウ素ナトリウム（７．０６ｇ、１８２．８ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（２８２ｍＬ）中の１−（３−チエニル）プロパン−２−オン（２８．１６ｇ、１４０．６ｍｍｏｌ）の溶液に少しずつ加え、室温で一晩撹拌する。濃縮乾固し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、塩化アンモニウムの飽和溶液（１５０ｍＬ）で洗浄する。水層をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出する。有機抽出物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣を、ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０：１００〜５：９５）で溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、薄い赤色の油状物として表題化合物（１２．８５ｇ、６４％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１２５（Ｍ−ＯＨ＋Ｈ）。
【００４８】
調製物３
（２Ｓ）−１−（３−チエニル）プロパン−２−オール
【化２８】
0006766273.tif 000029
３−ブロモチオフェン（６．８８ｇ、４２．２ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）およびトルエン（１００ｍＬ）中に溶解する。−７８℃に冷却する。これに、シリンジを介して１５分かけてｓｅｃ−ブチルリチウム（シクロヘキサン中１．３ｍｏｌ／Ｌ、３４ｍＬ、４４ｍｍｏｌ）を加える。温度を−６０℃未満に維持し、１０分間撹拌し、次いで、（２Ｓ）−２−メチルオキシラン（４．９ｇ、８４．４ｍｍｏｌ）を滴下して加える。５分後、滴下漏斗を介して三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（５．３ｍＬ、４２ｍｍｏｌ）を１５分かけて加える。温度を−５５℃未満に維持する。添加が完了した後、−７８℃で２時間撹拌する。飽和重炭酸ナトリウムで−７８℃でクエンチし、Ｅｔ2Ｏを加え、周囲温度に温める。飽和重炭酸ナトリウム（２×）、続いて飽和ブラインで洗浄する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。１５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物（３．８５ｇ、６４．２％）を得る。混合画分を再精製して、無色の液体として総量の表題化合物（４．２９ｇ、７１．５％）を得る。1Ｈ  ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ７．２８−７．２６（ｄｄ、Ｊ＝２．９、５．０、１Ｈ）、７．０３−７．０１（ｍ、１Ｈ）、６．９６（ｄｄ、Ｊ＝１．２、４．９、１Ｈ）、４．０４−３．９５（ｍ、１Ｈ）、２．８３−２．６８（ｍ、２Ｈ）、１．６３（ｓ、１Ｈ）、１．２２（ｄ、Ｊ＝６．２、３Ｈ）、または［α］20Ｄ＋２５．５０（ｃ  １．００，ＣＨＣｌ3）。
【００４９】
本質的に調製物３の方法によって、以下の化合物を調製する。
【表１】
0006766273.tif 000030
【００５０】
調製物５
（４Ｓ）−４−ベンジル−３−［（２Ｓ）−２−（３−チエニル）プロパノイル］オキサゾリジン−２−オン
【化２９】
0006766273.tif 000031
窒素雰囲気下、−７８℃で、ＴＨＦ中のナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（１ｍｏｌ／Ｌ、４０ｍＬ、４０．０ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（７５ｍＬ）中の（４Ｓ）−４−ベンジル−３−［２−（３−チエニル）アセチル］オキサゾリジン−２−オン（１０．２０ｇ、３３．８６ｍｍｏｌ）の溶液に加え、１時間撹拌する。反応混合物に純ヨードメタン（２．５ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）を加え、−７８℃で１．５時間攪拌し、その後、室温まで昇温させておく。１時間後、飽和水性塩化アンモニウム（７５ｍＬ）でクエンチし、濃縮乾燥させる。残渣をＥｔＯＡｃ中に溶解し、有機相を０．５Ｎの水性ＨＣｌ、飽和水性ＮａＨＣＯ3、水、およびブラインで連続して洗浄する。塩基性層をＥｔＯＡｃで再抽出し、有機抽出物を集め、ブライン洗浄液と合わせる。有機層を分け、全ての有機抽出物を合わせる。この材料を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮乾燥させる。ＥｔＯＡｃ／イソヘキサンの勾配（０：１００〜５０：５０）で溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより、粗材料を精製し、表題化合物（８．６２ｇ、６９％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３１６（Ｍ＋Ｈ）、３３８（Ｍ＋Ｎａ）。
【００５１】
調製物６
（５’Ｓ）−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］
【化３０】
0006766273.tif 000032
ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソピペリジン−１−カルボキシレート（６．５０ｇ、３２．６ｍｍｏｌ）および（２Ｓ）−１−（３−チエニル）プロパン−２−オール（４．６４ｇ、３２．６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１００ｍＬ）中に溶解する。トリフルオロ酢酸（２０ｍＬ、２６４．５ｍｍｏｌ）を加える。混合物を周囲温度で１８時間撹拌する。混合物を減圧下で濃縮し、次いで、水およびＥｔ2Ｏを加える。有機層を水で洗浄し、水性洗浄液を合わせ、固体炭酸ナトリウムでｐＨを塩基性に調整する。水層を固体塩化ナトリウムで飽和させ、次いで、水層をＥｔＯＡｃ（５×）で洗浄する。ＥｔＯＡｃ層を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物（４．６１ｇ、６３％）を淡黄色油状物として得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２２４．２（Ｍ＋Ｈ）。
【００５２】
本質的に調製物６の方法によって、以下の化合物を調製する。
【表２】
0006766273.tif 000033
【００５３】
調製物８
ｔｅｒｔ−ブチル（５’Ｓ）−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロ−１Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−１−カルボキシレート
【化３１】
0006766273.tif 000034
（５’Ｓ）−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］（１０．３９ｇ、４６．５３ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１００ｍＬ）中に溶解する。ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（１１．５２ｍＬ、５１．１８ｍｍｏｌ）を滴下して加え、混合物を周囲温度で１．５時間撹拌する。追加のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（２．００ｍＬ、９．１７ｍｍｏｌ）を加え、３０分間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮する。イミダゾール（２．２１ｇ、３２．５ｍｍｏｌ）を加えて、過剰のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートを破壊する（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、２００１、Ｎｏ．４，５５０）。Ｅｔ2Ｏを加え、ブラインで洗浄する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。１５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより、再度精製し、無色の油状物として表題化合物（１２．９２ｇ、８６％）を得る。1Ｈ  ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ｄ6−ＤＭＳＯ）δ７．３３（ｄ、Ｊ＝５．１、１Ｈ）、６．７７（ｄ、Ｊ＝５．１、１Ｈ）、３．９２〜３．７２（ｍ、３Ｈ）、３．１５〜２．９１（ｓ、２Ｈ）、２．６２（ｄｄ、Ｊ＝１５．８、３．０、１Ｈ）、２．３０（ｄｄ、Ｊ＝１５．８、１０．６、１Ｈ）、２．１（ｍ、１Ｈ）、１．７６〜１．６３（ｍ、２Ｈ）、１．５１〜１．４０（ｍ、１Ｈ）、１．３８（ｓ、９Ｈ）、１．２４（ｄ、Ｊ＝６．２、３Ｈ）、ＳＦＣクロマトグラフィー、Ｌｕｘアミロース−２、５ｍＬ／分、２２５ｎｍ、Ｒt＝１．７５分、または［α］20D＋８２．１（ｃ  １．００、ＣＨＣｌ3）に基づいて１００％ｅｅ。
【００５４】
本質的に調製物８の方法によって、以下の化合物を調製する。
【表３】
0006766273.tif 000035
【００５５】
調製物１０
ｔｅｒｔ−ブチル−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロ−１Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−１−カルボキシレート
【化３２】
0006766273.tif 000036
トリフルオロ酢酸（３４．１６ｍＬ、４５１．８ｍｍｏｌ）を０℃で、１−（３−チエニル）プロパン−２−オール（１２．８５ｇ、９０．３５ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチル４−オキソピペリジン−１−カルボキシレート（２３．４０ｇ、１１７．５ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１３５ｍＬ）中の溶液に滴下して加え、室温で１７時間撹拌を続ける。混合物を濃縮乾固し、残渣をＭｅＯＨで希釈し、次いで、溶媒を減圧下で除去する。残渣をＭｅＯＨ中に溶解し、イオン交換クロマトグラフィーにより精製する。所望の生成物を含有する画分を合わせ、減圧下でトルエン（３×）と共蒸発させて濃縮することで、粗５−メチルスピロ［４，５−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］の淡橙色固体を得る。ＤＭＡＰ（２．２３ｇ、１８．０７ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（３７．８ｍＬ、２７１．１ｍｍｏｌ）を、０℃に冷却した、５−メチルスピロ［４，５−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］（２０．１８ｇ、９０．３５ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（９０．３５ｍＬ）中の溶液に滴下して加える。これに、乾燥ＤＣＭ（２７．１ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（３０．４９ｇ、１３５．５ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加える。室温で一晩撹拌する。水（１００ｍＬ）を加え、水層をＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出し、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、減圧下で濃縮する。ＥｔＯＡｃ：イソヘキサン（０：１００〜２０：８０）で溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。残渣をＤＣＭ（３×）で共蒸発させて、白色固体として表題化合物（２７．６４ｇ、９２．７％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３４６（Ｍ＋Ｎａ）。
【００５６】
代替的調製物１０ａ
ｔｅｒｔ−ブチル−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロ−１Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−１−カルボキシレート
トリフルオロ酢酸（２０．１７ｍＬ、２６６．７２ｍｍｏｌ）を０℃で、１−（３−チエニル）プロパン−２−オール（４．７４ｇ、３３．３４ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチル４−オキソピペリジン−１−カルボキシレート（７．８０ｇ、３８．３４ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の溶液に滴下して加え、室温で一晩撹拌する。混合物を濃縮乾固し、残渣をＭｅＯＨで希釈する。粗物質をイオン交換クロマトグラフィーにより精製する。所望の生成物を含有する層を合わせ、減圧下でＤＣＭ（３×）と共蒸発させて濃縮することで、粗５−メチルスピロ［４，５−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］（８．１７ｇ）を得る。ＤＭＡＰ（０．８３１ｇ、６．６７ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（９．２９ｍＬ、６６．６８ｍｍｏｌ）を、０℃に冷却した、５−メチルスピロ［４，５−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］（８．１７ｇ）の乾燥ＤＣＭ（６６．７ｍＬ）中の溶液に滴下して加える。これに、乾燥ＤＣＭ（１６．７ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（１８．１９ｇ、８３．３５ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加える。室温で３日間撹拌する。水（６０ｍＬ）を加え、水層をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出し、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、相分離器により濾過し、減圧下で濃縮する。ＥｔＯＡｃ：イソヘキサン（０：１００〜２０：８０）で溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより、残渣を精製する。残渣をＤＣＭ（２×）で共蒸発させて、表題化合物（９．４１ｇ、８０％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３４６（Ｍ＋Ｎａ）。
【００５７】
本質的に代替的調製物１０ａの方法によって、以下の化合物を調製する。
【表４】
0006766273.tif 000037
【００５８】
調製物１３
ｔｅｒｔ−ブチル２−ブロモ−４−メチル−スピロ［４，５−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
【化３３】
0006766273.tif 000038
ｔｅｒｔ−ブチル４’−メチル−４’，５’−ジヒドロ−１Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−１−カルボキシレート（４．７３ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（１１２ｍＬ）中の溶液を０℃に冷却し、次いで、ＤＭＡＰ（０．１６２ｇ、１．３２ｍｍｏｌ）およびＮＢＳ（２．６０ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、２．５時間攪拌を続けた。ＭＴＢＥ／イソヘキサン（１：１、１００ｍＬ）の混合物を反応混合物に加え、５０分間撹拌し、次いで、濃縮乾固する。残渣をＤＣＭ（１００ｍＬ）中に溶解し、飽和水性Ｎａ2Ｓ2Ｏ3（４５ｍＬ）、次いで、ブライン（２５ｍＬ）で洗浄する。相分離カートリッジを通して濾過し、濃縮乾固させて、黄色油状物として表題化合物（５．６９ｇ、８８．１％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４２４／４２６（Ｍ＋Ｎａ）。
【００５９】
本質的に調製物１３の方法によって、以下の化合物を調製する。
【表５】
0006766273.tif 000039
【００６０】
調製物１５
１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボン酸
【化３４】
0006766273.tif 000040
ｔｅｒｔ−ブチル−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロ−１Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−１−カルボキシレート（７．１６ｇ、２１．７１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０８．５ｍＬ）中に溶解し、−７８℃に冷却する。これにブチルリチウム（ヘキサン中２．５Ｍ、１３ｍＬ、３２．５６ｍｍｏｌ）を２０分かけて滴下して加え、添加が完了した後さらに３０分混合物を撹拌する。カニューレを介してＣＯ2の気泡を添加し、連続的にＣＯ2を添加しながら、この温度で撹拌を続ける。ＣＯ2を連続的に添加しながら反応物を２時間かけて０℃に温め、水（８０ｍＬ）で注意深くクエンチする。反応混合物を水に注ぎ、水層をＥｔ2Ｏ（１００ｍＬ）で抽出する。有機相を、２ＮのＮａＯＨ（３×１５ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で洗浄する。水層を２ＮのＨＣｌ（３×）でｐＨ＝６に酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機抽出物を合わせ、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物（７．８９ｇ、９７％）をオフホワイト色固体として得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３９０（Ｍ＋Ｎａ）。
【００６１】
調製物１６
１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボン酸
【化３５】
0006766273.tif 000041
ｔｅｒｔ−ブチル−４’，５’−ジヒドロ−１Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−１−カルボキシレート（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２０１１、５４、（８）、ｐｐ２６８７−２７００およびＷＯ２０１１／０６００３５に記載されているように調製する）（１０ｇ、３２．３２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）中に溶解し、−７８℃に冷却する。これにブチルリチウム（２２．２２ｍＬ、３５．５５ｍｍｏｌ）を１５分かけて滴下して加え、添加が完了した後さらに１５分間混合物を撹拌する。カニューレを介してＣＯ2の気泡を添加し、連続的にＣＯ2を添加しながら、混合物を室温まで温めておく。２時間後、混合物を０℃に冷却し、水、次いで、Ｅｔ2Ｏを加える。水層のｐＨを１ＮのＮａＯＨで塩基性ｐＨに調整し、有機層を１ＮのＮａＯＨで洗浄する（３×）。塩基洗浄液を合わせ、５ＮのＨＣｌでｐＨ２に酸性化する。水層をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出し、有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄する。硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物（１１．１１ｇ、９７．２７％）を白色の固体として得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３５２．２（Ｍ−Ｈ）。
【００６２】
本質的に調製物１６の方法によって、以下の化合物を調製する。
【表６】
0006766273.tif 000042
【００６３】
調製物１８
（５’Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボン酸
【化３６】
0006766273.tif 000043
ｔｅｒｔ−ブチル（５’Ｓ）−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロ−１Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−１−カルボキシレート（１１．１９ｇ、３４．６０ｍｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ（２００ｍＬ）中に溶解し、−７８℃に冷却する。ｎ−ブチルリチウム（２１ｍＬ、３４．６４ｍｍｏｌ）を２０分かけて滴下して加える。添加が完了した後、−７８℃で２０分間撹拌し、次いで、カニューレを介して６０分間ＣＯ2ガスの気泡を添加する。ＣＯ2を連続的に添加しながら、混合物を室温に温める。室温で１時間撹拌した後、水（３ｍＬ）でクエンチし、減圧下で２５％の容量まで濃縮する。Ｅｔ2Ｏおよび水を加える。水で洗浄し（２×）、水性洗浄液を合わせる。１ＮのＨＣｌでｐＨを酸性ｐＨに調整する。水層を塩化ナトリウムで飽和させ、ＥｔＯＡｃ（２×）で抽出する。ＥｔＯＡｃ抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物（１３．４０ｇ、１００％）を白色の泡状物質として得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３６６（Ｍ−Ｈ）。
【００６４】
調製物１９
Ｏ１’−ｔｅｒｔ−ブチルＯ２−メチル−スピロ［４，５−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−１’，２−ジカルボキシレート
【化３７】
0006766273.tif 000044
１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボン酸（４０．０ｇ、１２９．２７ｍＬ）をＴＨＦ（７５０ｍＬ）中に溶解し、−７８℃に冷却する。Ｔ＜−６０℃になるように、４５分間かけてｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中１．６Ｍ、８８．８ｍＬ、１４２．２ｍｍｏｌ）を滴下して加える。添加後、１５分間撹拌し、−７８℃に冷却する。Ｔ＜−５０℃になるように、クロロギ酸メチル（１５．０ｍＬ、１９３．９ｍｍｏｌ）を１５分かけて滴下して加える。添加後、６０分間撹拌し、−７８℃に冷却する。飽和水性重炭酸ナトリウム（１００ｍＬ）でゆっくりクエンチし、周囲温度に温める。減圧下で約２５％の容量まで濃縮し、Ｅｔ2Ｏおよび水を加える。層を分離し、有機層を飽和水性重炭酸ナトリウム、次いで、ブラインで洗浄する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃで溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより、残渣を精製し、無色の泡状物質として表題化合物（３７．３９ｇ、７９％）を得る。1Ｈ  ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ７．４６（ｓ、１Ｈ）、３．９７（ｍ、２Ｈ）、３．９１（ｔ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、２Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．１２（ｍ、２Ｈ）、２．６９（ｔ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．９７（ｍ、２Ｈ）、１．７６（ｍ、２Ｈ）、１．４６（ｓ、９Ｈ）。
【００６５】
調製物２０
４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボン酸メチル塩酸塩
【化３８】
0006766273.tif 000045
１，４−ジオキサン（７０ｍＬ、２８０ｍｍｏｌ）中、Ｏ１’−ｔｅｒｔ−ブチルＯ２−メチル−スピロ［４，５−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−１’，２−ジカルボキシレート（５．０ｇ、１３ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサン（５０ｍＬ）、ＭｅＯＨ（７０ｍＬ）、およびＨＣｌ（４ｍｏｌ／Ｌ）を合わせる。４５分間撹拌する。反応物を減圧下で濃縮して、オフホワイト色の固体として表題化合物（４．２５ｇ、１００％粗製）を得、これをさらに精製することなく用いる。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２６８（Ｍ−ＨＣｌ＋Ｈ）。
【００６６】
調製物２１
１−（２，４−ジクロロベンジル）−４’，５’−ジヒドロベンジル）−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボン酸メチル
【化３９】
0006766273.tif 000046
４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボン酸メチル塩酸塩（４．２５ｇ、１４．０ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（７０ｍＬ）、２，４−ジクロロベンジルクロリド（２．２ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（１０ｍＬ、５７．３ｍｍｏｌ）を合わせる。反応物を７５℃に温め、１．７５時間攪拌する。反応物を周囲温度に冷却し、減圧下で濃縮する。ヘキサン中０〜３５％のＥｔＯＡｃで溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、薄い茶色の泡状物質として表題化合物（５．５ｇ、９２％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４２６／４２８／４３０（Ｍ＋Ｈ）。
【００６７】
調製物２２
１’−［（２，４−ジクロロフェニル）メチル］スピロ［４，５−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−２−カルボン酸
【化４０】
0006766273.tif 000047
１−（２，４−ジクロロベンジル）−４’，５’−ジヒドロベンジル）−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボン酸メチル（５．５ｇ、１３ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（２２ｍＬ）、ＴＨＦ（４５ｍＬ）、および水（１３ｍＬ）を合わせる。水酸化リチウム（１ｇ、４１．７６ｍｍｏｌ）を反応物に加え、周囲温度で６時間撹拌する。１ＮのＨＣｌでｐＨを４に調整する。水およびＥｔＯＡｃを加えて、白色固体を濾別する。真空オーブン中、５０℃で２日間乾燥して、表題生成物（５．２５ｇ、９９％）を白色の固体として得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４１２／４１４／４１６（Ｍ＋Ｈ）。
【００６８】
調製物２３
５−（エチルスルファニル）ピリジン−２−カルボニトリル
【化４１】
0006766273.tif 000048
５−ブロモピリジン−２−カルボニトリル（４９．４２ｇ、２７０．１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１１３．５ｇ、８２１．２ｍｍｏｌ）を１−メチル−２−ピロリジノン（２８０ｍＬ）中に溶解し、温度が５０℃未満になるように、エタンチオール（２６．４ｍＬ、３５６ｍｍｏｌ）を３０分かけて少しずつ加える。反応物を室温に冷却し、一晩撹拌する。ＥｔＯＡｃ（１２００ｍＬ）および水（２２００ｍＬ）で希釈する。有機層を収集し、ブライン（３×３００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで有機層を乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物（４４．８７ｇ、１００％）をオフホワイト色固体として得る。1Ｈ  ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ｄ6−ＤＭＳＯ）δ８．６３（ｓ、１Ｈ）、７．９３（ｓ、２Ｈ）、３．１７（ｑ、Ｊ＝７．３、２Ｈ）、１．２９（ｔ、Ｊ＝７．３、３Ｈ）。
【００６９】
調製物２４
５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−カルボニトリル
【化４２】
0006766273.tif 000049
５−（エチルスルファニル）ピリジン−２−カルボニトリル（４４．３６ｇ、２７０．１ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（５４０ｍＬ）中に溶解し、−２０℃に冷却する。内部温度を０℃〜−１０℃に維持しながら、３−クロロペルオキシ安息香酸（１３０ｇ、５６５．０ｍｍｏｌ）を１０〜１２ｇずつ１時間かけて加える。反応混合物を冷浴中で撹拌し、一晩で室温に温める。１ＮのＮａＯＨ（１Ｌ）、水、１ＮのＮａＯＨ（２ｘ５００ｍＬ）、およびブラインで洗浄する。硫酸ナトリウムで有機層を乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物（４９．５２ｇ、９３％）を白色の固体として得る。1Ｈ  ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ｄ6−ＤＭＳＯ）δ９．２０（ｄ、Ｊ＝１．９，１Ｈ）、８．５６（ｄｄ、Ｊ＝２．０、８．１、１Ｈ）、８．３６（ｄ、Ｊ＝８．１、１Ｈ）、３．５２（ｑ、Ｊ＝７．３、２Ｈ）、１．１６（ｔ、Ｊ＝７．５、３Ｈ）。
【００７０】
調製物２４
１−［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メタンアミン塩酸塩
【化４３】
0006766273.tif 000050
５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−カルボニトリル（４９．５２ｇ、２５２．４ｍｍｏｌ）を１６．５ｇずつ３つに分割する。２２５０ｍＬのＰａｒｒボトル中のＮ2下で、この容器に１０％のＰｄ／Ｃ（１．６５ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）を加え、ＭｅＯＨ（７５０ｍＬ）で湿らせる。ＭｅＯＨ（７５０ｍＬ）中に溶解した５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−カルボニトリル（１６．５ｇ、８４．０９ｍｍｏｌ）を加える。ＨＣｌ（６Ｎ水溶液、１７．１ｍＬ、１０２．６ｍｍｏｌ）を添加する。ボトルを密閉し、Ｎ2でパージし、Ｈ2でパージし、３時間室温で水素下で６８．９ｋＰａに加圧する。Ｎ2でパージし、次いで、混合物を濾過する。５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−カルボニトリルの残りの部分について繰り返す。全ての濾液を合わせ、減圧下で濃縮して、表題化合物（５９．６１ｇ、９９％）をベージュ色の固体として得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２０１（Ｍ＋Ｈ−ＨＣｌ）。
【００７１】
調製物２５
１−［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エタノール
【化４４】
0006766273.tif 000051
２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−カルバルデヒド（１１．３１ｍｍｏｌ、１．９９２ｇ）をＴＨＦ（５６．５６ｍＬ）中に溶解し、０℃に冷却し、臭化メチルマグネシウム（Ｅｔ2Ｏ中３Ｍ）（３３．９４ｍｍｏｌ、１１．３１ｍＬ）をゆっくり加える。反応物を室温に温め、２．５時間撹拌する。１ＮのＨＣｌで反応をクエンチする。ＥｔＯＡｃを加え、１ＮのＨＣｌで洗浄する。硫酸ナトリウムで有機層を乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物（１．６６３ｇ、７６．５％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１９３．０（Ｍ＋Ｈ）。
【００７２】
調製物２６
５−（１−ブロモエチル）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン
【化４５】
0006766273.tif 000052
１−［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エタノール（１．６６３ｇ、８．６５５ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（３．４０５ｇ、１２．９８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（８６．５５ｍＬ）中に溶解し、室温でＮＢＳ（１２．９８ｍｍｏｌ、２．３１１ｇ）を加える。３時間後、反応液を減圧下で濃縮する。１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにより残存する残渣を精製し、表題化合物（１．６４１ｇ、７４．３４％）を得る。1Ｈ  ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ｄ6−ＤＭＳＯ）δ９．２６（ｓ、２Ｈ）、５．６３（ｑ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．０９（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）。
【００７３】
調製物２７
３−（１−ブロモプロピル）−２−メチル−６−（トリフルオロメチル）ピリジン
【化４６】
0006766273.tif 000053
２−メチル−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルバルデヒド（０．２５ｇ、１．３２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６ｍＬ）中に溶解し、０℃に冷却する。臭化エチルマグネシウム（Ｅｔ2Ｏ中３．０Ｍ、１．３２ｍＬ、３．９６ｍｍｏｌ）をゆっくり加える。混合物を０℃で９０分間撹拌し、周囲温度に温める。混合物を１ＮのＨＣｌで洗浄し、有機物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、３０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、１−［６−（トリフルオロメチル）−３−ピリジル］プロパン−１−オールの中間体（０．１３ｇ、０．６１ｍｍｏｌ）を得る。ＤＣＭ（６ｍＬ）中に、１−［６−（トリフルオロメチル）−３−ピリジル］プロパン−１−オール（０．１３ｇ、０．６１ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（０．２７ｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を溶解し、次いで、Ｎ−ブロモスクシンアミド（０．１８ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を加える。周囲温度で１６時間撹拌する。減圧下で濃縮し、３０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにより得られた残渣を精製し、表題化合物（０．１３ｇ、７６％）を得る。1Ｈ  ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ７．９６（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．５８（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．０９（ｍ、１Ｈ）、２．７０（ｓ、３Ｈ）、２．３４（ｍ、１Ｈ）、２．２１（ｍ、１Ｈ）、１．０９（ｔ、Ｊ＝７．３，３Ｈ）。
【００７４】
調製物２８
１−［２−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−イル］エタノール
【化４７】
0006766273.tif 000054
２−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−カルバルデヒド（２．００ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５５ｍＬ）中に溶解し、０℃に冷却し、次いで、臭化メチルマグネシウム（Ｅｔ2Ｏ中３．０Ｍ、５．５０ｍＬ、１７．０ｍｍｏｌ）をゆっくり加える。周囲温度に温め、２時間撹拌する。１ＮのＨＣｌでクエンチする。ＥｔＯＡｃを加え、１ＮのＨＣｌで洗浄する。有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、表題化合物（２．２４ｇ、１００％）を油状物として得る。1Ｈ  ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ｄ6−ＤＭＳＯ）δ７．９７（ｓ、１Ｈ）、６．０８（ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、１Ｈ）、５．１２（ｍ、１Ｈ）、１．４８（ｄ、Ｊ＝６．４、３Ｈ）。
【００７５】
調製物２９
５−［１−ブロモエチル］−２−（トリフルオロメチル）−１，３−チアゾール
【化４８】
0006766273.tif 000055
１−［２−（トリフルオロメチル）チアゾール−５−イル］エタノール（２．２４ｇ、１１．３９ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（４．７９ｇ、１７．０８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１１３ｍＬ）中に溶解し、次いで、Ｎ−ブロモスクシンアミド（３．０４ｇ、１７．０８ｍｍｏｌ）を加える。周囲温度で１８時間撹拌する。減圧下で濃縮し、０〜２０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにより得られた残渣を精製し、表題化合物（２．３５ｇ、７９％）を黄色油状物として得る。1Ｈ  ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ｄ6−ＤＭＳＯ）δ８．２６（ｓ、１Ｈ）、５．９８（ｑ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．１０（ｄ、Ｊ＝６．８、３Ｈ）。
【００７６】
調製物３０
［４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］メタノール
【化４９】
0006766273.tif 000056
４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−カルボン酸エチル（４．０５ｇ、１７．３２ｍｍｏｌ）を乾燥トルエン（８７ｍＬ）中に溶解する。混合物を−１０℃に冷却し、水素化ジイソブチルアルミニウム（ヘキサン中１．０Ｍ、３９．８ｍＬ）を滴下して加える。混合物を一晩撹拌し、混合物を室温に温める。反応液を０℃に冷却し、硫酸ナトリウム十水和物（１７．７５ｇ、１２１．２ｍｍｏｌ）を少しずつ加える。混合物を室温に温め、３時間撹拌し、混合物を珪藻土を通して濾過し、トルエンですすぐ。全ての濾液を減圧下で濃縮して、表題化合物（２．５５ｇ、６９％）を黄色油状物として得る。1Ｈ  ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ８．８２（ｓ、１Ｈ）、４．８３（ｓ、２Ｈ）、２．６２（ｓ、３Ｈ）。
【００７７】
調製物３１
［４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］メチルメタンスルホネート
【化５０】
0006766273.tif 000057
［４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］メタノール（１．２５ｇ、５．８６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１２．５ｍＬ）中に溶解し、塩化メタンスルホニル（０．２ｍＬ、３ｍｍｏｌ）、続いてトリメチルアミン（１ｍＬ、７．１０ｍｍｏｌ）を加える。２．５時間後、追加の塩化メタンスルホニル（０．２ｍＬ、３ｍｍｏｌ）およびトリメチルアミン（１ｍＬ、７．１０ｍｍｏｌ）を加え、次いで、３０分間撹拌する。ＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈し、水、次いで、ブラインで洗浄する。有機層を乾燥し、減圧下で濃縮して、表題化合物（１．７６ｇ、１００％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２７１（Ｍ＋Ｈ）。
【００７８】
調製物３２
４−（ヒドロキシメチル）−２−メトキシ−５−メチル−ベンゾニトリル
【化５１】
0006766273.tif 000058
４−ホルミル−２−メトキシ−５−メチル−ベンゾニトリル（２０４ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（６ｍＬ）中に溶解し、水素化ホウ素ナトリウムを少しずつ加える（１３５ｍｇ、３．４９ｍｍｏｌ）。周囲温度で１時間撹拌し、減圧下で濃縮する。ＥｔＯＡｃを加え、飽和水性塩化アンモニウムで洗浄する。水層をＥｔＯＡｃで洗浄し、有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、表題化合物（１８６ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１７８（Ｍ＋Ｈ）。
【００７９】
調製物３３
（４−シアノ−５−メトキシ−２−メチル−フェニル）メチルメタンスルホネート
【化５２】
0006766273.tif 000059
４−（ヒドロキシメチル）−２−メトキシ−５−メチル−ベンゾニトリル（０．１９ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）およびトリメチルアミン（０．４ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３．５ｍＬ）中に溶解し、塩化メタンスルホニル（０．１ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を加え、周囲温度で２時間撹拌する。混合物を減圧下で濃縮し、ＥｔＯＡｃ中に再溶解する。水で洗浄し、硫酸ナトリウムで有機層を乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物（０．２５ｇ、７８％）を得、これをさらに精製することなく用いる。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２７１（Ｍ＋Ｈ＋Ｈ2Ｏ）。
【００８０】
調製物３４
［２−メチル−６−（トリフルオロメチル）−３−ピリジル］メチルメタンスルホネート
【化５３】
0006766273.tif 000060
［２−メチル−６−（トリフルオロメチル）−３−ピリジル］メタノール（１７０ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２．５ｍＬ）中に溶解し、０℃に冷却する。トリメチルアミン（０．２３ｍＬ、１．６４ｍｍｏｌ）、続いてメタンスルホニルクロリド（０．０７６ｍＬ、０．９８ｍｍｏｌ）を滴下して加え、周囲温度に温め、３０分間撹拌する。水およびＤＣＭを加える。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物（０．１７ｇ、７７％）を得、これをさらに精製することなく用いる。この物質は表題化合物と３−（クロロメチル）−２−メチル−６−（トリフルオロメチル）ピリジンとの混合物である。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２７０（Ｍ＋Ｈ）。
【００８１】
調製物３５
１−［５−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）−３−ピリジル］エタノン
【化５４】
0006766273.tif 000061
５−ブロモ−３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）ピリジン（０．８４ｍＬ、６．１ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（３１ｍＬ）中に溶解し、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．３６ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、続いてトリメチルアミン（１．３ｍＬ、９．３ｍｍｏｌ）を加える。Ｎ2中で１０分間バブリングすることによって混合物を脱気し、次いで、トリブチル（１−エトキシビニル）スタンナン（２．７ｍＬ、８．０ｍｍｏｌ）を加え、４時間にわたって１００℃に加熱する。反応物を周囲温度に冷却し、１ＮのＨＣｌ（２５ｍＬ、２５ｍｍｏｌ）を加え、一晩撹拌する。水性飽和重炭酸ナトリウムで混合物をクエンチし、次いでＥｔＯＡｃで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮する。ＥｔＯＡｃおよびヘキサンで溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーを用いて精製する。この物質をＤＣＭ中に再溶解し、飽和水性フッ化カリウム（２５ｍＬ）を加えて、１時間撹拌する。層を分け、有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物（１．３ｇ、１００％）を得る。1Ｈ  ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ｄ6−ＤＭＳＯ）δ９．０５（ｓ、１Ｈ）、８．４９（ｄ、Ｊ＝１０．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．６９（ｓ、３Ｈ）。
【００８２】
調製物３６
１−［５−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）−３−ピリジル］エタノール
【化５５】
0006766273.tif 000062
１−［５−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）−３−ピリジル］エタノン（１．４ｇ、６．８ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（３５ｍＬ）中に溶解し、水素化ホウ素ナトリウム（１００ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）を１５分かけて少しずつ加え、次いで、周囲温度で１時間撹拌する。飽和塩化アンモニウム（５０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）を加え、次いで、ＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物（１．２ｇ、８８％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２１０（Ｍ＋Ｈ）。
【００８３】
調製物３７
１‐［５‐フルオロ‐６‐（トリフルオロメチル）‐３‐ピリジル］エチルメタンスルホナート
【化５６】
0006766273.tif 000063
１−［５−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）−３−ピリジル］エタノール（１．３ｇ、６．２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３１ｍＬ）およびトリメチルアミン（２．２ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）中に溶解する。メタンスルホニルクロリド（０．５４ｍＬ、６．８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３１ｍＬ）中溶液を加え、周囲温度で２時間撹拌する。減圧下で濃縮して、表題化合物（４．４ｇ、７７％）を得るが、これは、依然としてトリエチルアミン塩を含有している。さらに精製することなく、この材料を使用する。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２８８（Ｍ＋Ｈ）。
【００８４】
調製物３８
５−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボン酸メチル
【化５７】
0006766273.tif 000064
５−ブロモ−３−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）ピリジン（１．００ｇ、３．９７ｍｍｏｌ）を、無水ＭｅＯＨ（１２ｍＬ）／ＡＣＮ（１８ｍＬ）中に溶解する。トリメチルアミン（１．５ｍＬ、１１ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（９３ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）、および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（２７６ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を加え、次いで、密封し、ＣＯ（ガス）でパージする。ＣＯで６８９ｋＰａに加圧し、１．５時間８５℃に加熱し、周囲温度に冷却する。珪藻土を通して濾過し、減圧下で濾液を濃縮する。ヘキサン中の０〜１００％のＥｔＯＡｃで溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーを用いて精製して、白色の固体として表題化合物（０．６７ｇ、７３％）を得る。1Ｈ  ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ｄ6−ＤＭＳＯ）δ９．０５（ｓ、１Ｈ）、８．５０（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．９３（ｓ、３Ｈ）。
【００８５】
調製物３９
［５−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）−３−ピリジル］メタノール
【化５８】
0006766273.tif 000065
５−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボン酸メチル（０．６０ｇ、２．６９ｍｍｏｌ）をトルエン（３０ｍＬ）中に溶解し、０℃に冷却し、水素化ジイソブチルアルミニウム（ヘキサン中１．０Ｍ、５．４ｍＬ、５．４０ｍｍｏｌ）を加える。０℃で２時間撹拌し、次いで、周囲温度に温めて、１６時間撹拌する。混合物を０℃に冷却し、追加の水素化ジイソブチルアルミニウム（ヘキサン中１．０Ｍ、５．４ｍＬ、５．４０ｍｍｏｌ）を加える。４時間後、反応物を周囲温度に温め、硫酸ナトリウム（３００ｍｇ、２．１１ｍｍｏｌ）を加える。１時間攪拌し、減圧下で濃縮して、表題化合物（０．２７ｇ、５１％）を白色の固体として得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１９６（Ｍ＋Ｈ）。
【００８６】
調製物４０
［５−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）−３−ピリジル］メチルメタンスルホネート
【化５９】
0006766273.tif 000066
［５−フルオロ−６−（トリフルオロメチル）−３−ピリジル］メタノール（２６８ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）およびトリメチルアミン（０．３５ｍＬ、２．５０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）中に溶解し、塩化メタンスルホニル（０．１２ｍＬ、２．３０ｍｍｏｌ）を加える。２時間周囲温度で攪拌し、減圧下で濃縮して、粗製表題化合物（９８７ｍｇ、９９％）を白色の固体として得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２７４（Ｍ＋Ｈ）。
【００８７】
調製物４１
４−（１−ブロモエチル）−２−フルオロ−ベンゾニトリル
【化６０】
0006766273.tif 000067
ＤＣＭ（３７ｍＬ）中に、２−フルオロ−４−（１−ヒドロキシエチル）ベンゾニトリル（０．６２ｇ、３．７７ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（１．４８ｇ、５．６６ｍｍｏｌ）を溶解し、ＮＢＳ（１．０１ｇ、５．６６ｍｍｏｌ）を加える。混合物を周囲温度で一晩攪拌し、減圧下で濃縮し、ヘキサン中０〜４０％のＥｔＯＡｃの勾配で溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーを用いて精製し、淡黄色の油状物として表題化合物（０．６３ｇ、７３％）を得る。1Ｈ  ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ｄ6−ＤＭＳＯ）δ７．９５（ｍ、１Ｈ）、７．７３（ｄ、Ｊ＝１０．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．５７（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、５．５４（ｑ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、１Ｈ）、１．９９（ｄ、Ｊ＝６．８ｈｚ，３Ｈ）。
【００８８】
調製物４２
４−［（Ｚ）−Ｎ’−ヒドロキシカルバムイミドイル］−２−メチル−安息香酸メチル
【化６１】
0006766273.tif 000068
４−シアノ−２−メチル−安息香酸メチル（１．００ｇ、５．７１ｍｍｏｌ）および塩酸ヒドロキシルアミン（０．５９ｇ、８．５６ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（２９ｍＬ）中で合わせ、ＤＩＰＥＡ（１．６ｍＬ、９．１３ｍｍｏｌ）を加え、７０℃で一晩加熱する。周囲温度に冷却し、減圧下で濃縮し、水を加え、１ＮのＨＣｌでｐＨを５に調整する。１０％のイソプロピルアルコール／ＤＣＭ（２×）で抽出する。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物（１．１９ｇ、１００％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２０９（Ｍ＋Ｈ）。
【００８９】
調製物４３
２−メチル−４−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸メチル
【化６２】
0006766273.tif 000069
スクリューキャップバイアル中で、４−［（Ｚ）−Ｎ’−ヒドロキシカルバムイミドイル］−２−メチル−安息香酸メチル（０．３４ｇ、１．６６ｍｍｏｌ）および無水酢酸（５．４ｇ、５１．１０ｍｍｏｌ）を合わせ、密封し、１００℃に一晩加熱する。周囲温度に冷却し、Ｅｔ2Ｏを加え、水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮する。ヘキサン中２０〜５０％のＥｔＯＡｃの勾配で溶離する残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーを用いて精製し、表題化合物（０．３７ｇ、９７％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２３３（Ｍ＋Ｈ）。
【００９０】
調製物４４
［２−メチル−４−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）フェニル］メタノール
【化６３】
0006766273.tif 000070
２−メチル−４−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸メチル（０．３７ｇ、１．６１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１６ｍＬ）中で合わせ、０℃に冷却し、水素化ジイソブチルアルミニウム（ＴＨＦ中１．０Ｍ、６．２ｍＬ、６．２ｍｍｏｌ）を加える。０℃で１０分間撹拌し、周囲温度に温め、一晩撹拌する。飽和塩化アンモニウムでクエンチし、１ＮのＨＣｌを加え、ＥｔＯＡｃ（２×）で抽出する。有機抽出物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物（０．１３ｇ、４０％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２０５（Ｍ＋Ｈ）。
【００９１】
調製物４５
［２−メチル−４−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）フェニル］メチルメタンスルホナート
【化６４】
0006766273.tif 000071
ＴＨＦ（２．５ｍＬ）中で、［２−メチル−４−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）フェニル］メタノール（０．１３ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）およびトリメチルアミン（０．１８ｍＬ、１．２８ｍｍｏｌ）を合わせ、０℃に冷却し、無水メタンスルホン酸（０．１４ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を加える。一晩撹拌して、反応物を周囲温度に温める。Ｅｔ2Ｏを加え、水、続いてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物（０．１８ｇ、５１％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２８３（Ｍ＋Ｈ）。
【００９２】
調製物４６
［４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］メタノール
【化６５】
0006766273.tif 000072
４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−カルボン酸（１．５ｇ、７．３ｍｍｏｌ）を１，２−ジメトキシエタン（３６ｍＬ）中に溶解し、−１５℃に冷却する。４−メチルモルホリン（０．８１ｍＬ、７．３ｍｍｏｌ）、続いてクロロギ酸イソブチル（０．９５ｍＬ、７．３ｍｍｏｌ）を加え、１５分間撹拌する。溶液を濾過し、濾液を０℃に冷却する。水（５ｍＬ）中の水素化ホウ素ナトリウム（０．４１ｇ、１０．８ｍｍｏｌ）の溶液を加える。５分間撹拌し、水（３５ｍＬ）およびＥｔＯＡｃを加える。分離させ、有機層を収集し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮乾固させて、表題化合物（１．１６ｇ、８３％）を黄色油状物として得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１９３（Ｍ＋Ｈ）。
【００９３】
調製物４７
４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−カルバルデヒド
【化６６】
0006766273.tif 000073
［４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−５−ピリジル］メタノール（１．１６ｇ、６．０４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（６０ｍＬ）中に溶解し、０℃に冷却する。二酸化マンガン（２．６７ｇ、３０．７ｍｍｏｌ）を加え、周囲温度に温め、１８時間撹拌する。得られた混合物を珪藻土を通して濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。ＤＣＭ中０〜５％のＭｅＯＨの勾配で溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、透明な油状物として表題化合物（０．２６ｇ、２２％）を得る。1Ｈ  ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ｄ6−ＤＭＳＯ）δ１０．３２（ｓ、１Ｈ）、９．３１（ｓ、１Ｈ）、２．８７（ｓ、３Ｈ）。
【００９４】
調製物４８
１−［４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エタノール
【化６７】
0006766273.tif 000074
４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−カルバルデヒド（７００ｍｇ、３．６８ｍｍｏｌ）をＥｔ2Ｏ（３７ｍＬ）中に溶解し、０℃に冷却する。臭化メチルマグネシウム溶液（Ｅｔ2Ｏ中３．０Ｍ、１．２ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）を滴下して加え、０℃で２時間撹拌する。飽和塩化アンモニウムでクエンチし、水を加える。水層をＥｔ2Ｏ（４×）で抽出し、有機抽出物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物（０．６８ｇ、８９％）を黄色油状物として得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２０７（Ｍ＋Ｈ）。
【００９５】
調製物４９
１−［４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチルメタンスルホネート
【化６８】
0006766273.tif 000075
１−［４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エタノール（０．６８ｇ、３．３ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（１．２ｍＬ、８．６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１７ｍＬ）中に溶解する。塩化メタンスルホニルを加え、周囲温度で１時間撹拌する。混合物を減圧下で濃縮し、粗製表題化合物（２．２ｇ、３０％の純度、７１％の収率）を得、これをさらに精製することなく用いる。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２８５（Ｍ＋Ｈ）。
【００９６】
調製物５０
ｔｅｒｔ−ブチル（５’Ｓ）−２’−｛［４−（エチルスルホニル）ベンジル）カルバモイル｝−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロ−１Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−１−カルボキシレート
【化６９】
0006766273.tif 000076
ＤＩＰＥＡ（７．４ｍＬ、４２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（１．８０ｇ、１３ｍｍｏｌ）、およびＥＤＣＩ（３．１３ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）を、（５’Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボン酸（４．４４ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）および４−（エチルスルホニルフェニル）メタンアミン（３．４２ｇ、１４．５ｍｍｏｌ））のＤＣＭ（１００ｍＬ）中スラリーに加え、周囲温度で１６時間撹拌する。水を加え、ＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出する。ＤＣＭ抽出物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ヘキサン中５０〜１００％のＥｔＯＡｃで溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより、残渣を精製し、白色固体として表題化合物（４．２４ｇ、６４％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：５４８（Ｍ＋Ｈ）、５７１（Ｍ＋Ｎａ）。
【００９７】
適切なアミンを用いて、本質的に調製物５０の方法によって、以下の化合物を調製する。
【表７】
0006766273.tif 000077
【００９８】
調製物５４
ｔｅｒｔ−ブチル（５’Ｓ）−２’−（｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝カルバモイル）−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロ−１Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−１−カルボキシレート
【化７０】
0006766273.tif 000078
１−［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メタンアミン塩酸塩（２．８６ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）、（５’Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボン酸（３．５０ｇ、９．５２ｍｍｏｌ）、およびＨＯＢｔ（１．４４ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）およびＤＭＦ（５０ｍＬ）中に溶解する。ＤＩＰＥＡ（４．９８ｍＬ、２８．６ｍｍｏｌ）、続いてＥＤＣＩ（２．０１ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌しておく。減圧下で濃縮して、約４０％の容量にし、次いで、ＥｔＯＡｃを加える。飽和重炭酸ナトリウム（２×）、水（２×）、ブライン（２×）で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮する。８０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるシリカゲル上のクロマトグラフィーにより、灰色の泡状物質として表題化合物（４．５１ｇ、８６％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：５５０（Ｍ＋Ｈ）。
【００９９】
調製物５５
ｔｅｒｔ−ブチル２’−｛［４−（エチルスルホニル）ベンジル）カルバモイル｝−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロ−１Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−１−カルボキシレート
【化７１】
0006766273.tif 000079
（４−エチルスルホニルフェニル）メタンアミン塩酸塩（４．８ｇ、２０ｍｍｏｌ）１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボン酸（６．６ｇ、１７ｍｍｏｌ）、およびＴＥＡ（９．５ｍＬ、６８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６６ｍＬ）中の溶液に、０℃で、Ｔ３Ｐ（登録商標）（１．６７ｍｏｌ／Ｌ／ＥｔＯＡｃ、１５ｍＬ、２６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌する。過剰の（４−エチルスルホニルフェニル）メタンアミン塩酸塩（０．８０ｇ、３．４ｍｍｏｌ）およびＴ３Ｐ（登録商標）（ＥｔＯＡｃ中１．６７ｍｏｌ／Ｌ、２．０ｍＬ、３．４ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、０℃に冷却し、室温で３０分間撹拌する。ＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ3の飽和溶液（１００ｍＬ）でクエンチする。１５分間撹拌し、次いで、有機層を相分離器を通して濾過し、減圧下で濃縮する。残渣を、ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０：１００〜５：９５）で溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、オフホワイト色の固体として表題化合物（７．４５ｇ、７６％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：５４８（Ｍ＋Ｈ）、５７１（Ｍ＋Ｎａ）。
【０１００】
調製物５６
ｔｅｒｔ−ブチル２’−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝カルバモイル）−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロ−１Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−１−カルボキシレート
【化７２】
0006766273.tif 000080
１−［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メタンアミン塩酸塩（３．１ｇ、１３ｍｍｏｌ）、１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボン酸（３．９ｇ、１０ｍｍｏｌ）を、無水ＤＣＭ（５２ｍＬ）中に溶解する。０℃に冷却し、トリメチルアミン（１０ｍＬ、７３ｍｍｏｌ）、続いてＥｔＯＡｃ中のＴ３Ｐ（登録商標）（８．６ｇ、１４ｍｍｏｌ）の１．６７Ｍ溶液を滴下して加える。混合物を室温に温め、一晩撹拌する。注意深く水（５０ｍＬ）を加え、室温で１０分間撹拌する。水層をＤＣＭ（２×）で抽出し、次いで、有機層を合わせる。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。５０％〜１００％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配で溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにより粗製材料を精製し、表題化合物（４．８９ｇ、８３％）を黄色の泡状物質として得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：５５０（Ｍ＋Ｈ）。
【０１０１】
調製物５７
ｔｅｒｔ−ブチル（５’Ｓ）−２’−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝カルバモイル）−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロ−１Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−１−カルボキシレート
【化７３】
0006766273.tif 000081
１−［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メタンアミン塩酸塩（２．８６ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）、（５’Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボン酸（３．５０ｇ、９．５２ｍｍｏｌ）、およびＨＯＢＴ（１．４４ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）およびジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中に溶解する。ＤＩＰＥＡ（４．９８ｍＬ、２８．６ｍｍｏｌ）、続いて１−（３−ジメチルアミノプロピ）−３−エチルカルボジイミデ塩酸塩を加え、室温で一晩撹拌しておく。減圧下で濃縮して、約４０％の容量にし、次いで、ＥｔＯＡｃを加える。飽和重炭酸ナトリウム（２×）、水（２×）、ブライン（２×）で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮する。８０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるシリカゲル上のクロマトグラフィーにより、灰色の泡状物質として表題化合物（４．５１ｇ、８６％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：５５０（Ｍ＋Ｈ）。
【０１０２】
調製物５８
ｔｅｒｔ−ブチル２−［（５−エチルスルホニル−２−ピリジル）メチルカルバモイル］−４−メチル−スピロ［４，５−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
【化７４】
0006766273.tif 000082
トルエン（５６．８ｍＬ）中、ｔｅｒｔ−ブチル２−ブロモ−４−メチル−スピロ［４，５−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（５．６８ｇ、１１．６ｍｍｏｌ）、１−［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メタンアミン塩酸塩（３．２９ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（５．０５ｍＬ、２８．９ｍｍｏｌ）を一緒に加え、続いて酢酸パラジウム（ＩＩ）（８５．８ｍｇ、０．３８２ｍｍｏｌ）、および４，５−ビス−（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（０．４２９ｇ、０．７４１ｍｍｏｌ）を加える。反応物を脱気し、ＣＯ（４３４ｋＰａ）を補充し、次いで、一晩９０℃に加熱する。珪藻土のパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（２×１２０ｍＬ）で洗浄し、溶媒を濃縮して、茶色の泡状物質を得る。ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１００：０〜９５：５）で溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、茶色の泡状物質として表題化合物（５．３３ｇ、７１％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：５７２（Ｍ＋Ｎａ）。
【０１０３】
適切なアミンを用いて、本質的に調製物５８の方法によって、以下の化合物を調製する。
【表８】
0006766273.tif 000083
【０１０４】
調製物６０
ｔｅｒｔ−ブチル（４’Ｓ）−２’−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝カルバモイル）−４’−メチル−４’，５’−ジヒドロ−１Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−１−カルボキシレート
【化７５】
0006766273.tif 000084
ｔｅｒｔ−ブチル（４’Ｓ）−４’−メチル−４’，５’−ジヒドロ−１Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−１−カルボキシレート（２．７８ｇ、８．５９ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（５６ｍＬ）中の溶液を０℃に冷却し、次いで、ＮＢＳ（２．２ｇ、１２．３５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１０７ｍｇ、０．８６５ｍｍｏｌ）を加え、室温で攪拌する。１時間後、濃縮乾固し、残渣をＤＣＭ中に溶解する。チオ硫酸ナトリウムの飽和水溶液、次いで、ブラインで洗浄する。有機物を集め、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、粗ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ）−２−ブロモ−４−メチル−スピロ［４，５−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートを得る。質量スペクトル４２４／４２６（Ｍ＋Ｎａ）。圧力容器に、トルエン（３４．６ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ）−２−ブロモ−４−メチル−スピロ［４，５−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（３．４６ｇ、８．５９ｍｍｏｌ）、（５−エチルスルホニル−２−ピリジル）メタンアミン塩酸塩（２．４４ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（３．７５ｍＬ、２１．５ｍｍｏｌ）、続いて酢酸パラジウム（ＩＩ）（６３．６ｍｇ、０．２８３ｍｍｏｌ）および４，５−ビス−（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（０．３２８ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を充填する。反応物を脱気し、一酸化炭素（４３４ｋＰａ）を補充し、次いで、一晩８５℃に加熱する。珪藻土のパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（２×１２０ｍＬ）で洗浄し、溶媒を減圧下で濃縮する。ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１００：０〜９５：５）で溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、茶色の泡状物質として表題化合物（２．６４ｇ、５６％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４９４（Ｍ−ｔ−ブチル）、５７２（Ｍ＋Ｎａ）。
【０１０５】
調製物６１
Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド二塩酸塩
【化７６】
0006766273.tif 000085
ｔｅｒｔ−ブチル２’−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝カルバモイル）−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロ−１Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−１−カルボキシレート（０．９５ｇ、１．６８ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中に溶解し、ジオキサン（４．５ｍＬ、１８ｍｍｏｌ）中の４ＭのＨＣｌを加える。室温で１時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮して、表題化合物（０．８６ｇ、１００％）を白色の固体として得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４５０（Ｍ＋Ｈ−２ＨＣｌ））。
【０１０６】
調製物６２
（５’Ｓ）−Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−５’−メチル−４’，５’，ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３，ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド二塩酸塩
【化７７】
0006766273.tif 000086
ｔｅｒｔ−ブチル（５’Ｓ）−２’−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝カルバモイル）−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロ−１Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−１−カルボキシレート（１．１４ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を、１，４ジオキサン（１０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（５ｍＬ）中に溶解する。ジオキサン（５．０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）中４ＭのＨＣｌを加え、室温で２時間撹拌する。約１０ｍＬに濃縮し、次いで、Ｅｔ2Ｏを加え、一晩激しく撹拌する。ヘキサンを加え、濾過し、ヘキサンですすぎ、表題化合物（０．９９ｇ、９１％）を淡黄色の固体として得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４５０（Ｍ＋Ｈ−２ＨＣｌ））。
【０１０７】
調製物６３
（５’Ｓ）−Ｎ−｛［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド塩酸塩
【化７８】
0006766273.tif 000087
ｔｅｒｔ−ブチル（５’Ｓ）−２’−｛［４−（エチルスルホニル）ベンジル）カルバモイル｝−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロ−１Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−１−カルボキシレート（８．５４ｇ、１５．５７ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（５０ｍＬ）中の溶液へ、ＨＣｌ（１，４−ジオキサン中４ｍｏｌ／Ｌ、１５．６ｍＬ、６２．４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を周囲温度で１．５時間撹拌する。得られた固体を濾過し、ＤＣＭですすぐ。固体を真空下で乾燥させて、表題化合物（６．５７ｇ、８７％粗製）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４４９（Ｍ＋Ｈ−ＨＣｌ）。
【０１０８】
本質的に調製物６３の方法によって、以下の化合物を調製する。
【表９−１】
0006766273.tif 000088
【表９−２】
0006766273.tif 000089
【０１０９】
調製物７１
（５Ｓ）−Ｎ−［（４−エチルスルホニルフェニル）メチル］−１’−［１−［３−フルオロ−４−［（Ｅ）−Ｎ’−ヒドロキシカルバムイミドイル］フェニル］エチル］−５−メチル−スピロ［４，５−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−２−カルボキサミド
【化７９】
0006766273.tif 000090
（５’Ｓ）−１−［１−（４−シアノ−３−フルオロフェニル）エチル］−Ｎ−［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド（０．１７ｇ、０．２８ｍｍｏｌ）および塩酸ヒドロキシルアミン（０．０２９ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）中に懸濁させて、ＤＩＰＥＡ（０．０７９ｍＬ、０．４５ｍｍｏｌ）を加え、次いで、６０℃に１５時間加熱する。周囲温度に冷却し、追加の塩酸ヒドロキシルアミン（０．０２９ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０７９ｍＬ、０．４５ｍｍｏｌ）を加え、次いで、６０℃で３時間加熱を再開する。周囲温度に冷却し、減圧下で濃縮する。残渣をＥｔＯＡｃ中に再溶解し、水で洗浄する。得られた固体をＭｅＯＨで溶解し、次いで、減圧下で濃縮して、スクシンアミド塩が混入した表題化合物（０．２５ｇ、１３８％）を得る。さらに精製することなく、この材料を使用する。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６２９（Ｍ＋Ｈ）。
【０１１０】
調製物７２
１−［１−（４−シアノフェニル）エチル］−Ｎ−［４−（メチルスルホニル）ベンジル］−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化８０】
0006766273.tif 000091
Ｎ−［４−（メチルスルホニル）ベンジル］−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド塩酸塩（１ｇ、２．１９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．６８ｇ、４．８１ｍｍｏｌ）を一緒にＡＣＮ（２５ｍＬ）中に加え、４−（１−ブロモエチル）ベンゾニトリル（０．５９ｇ、２．４１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で一晩撹拌する。溶液をＥｔＯＡｃで希釈し、水（２×）、重炭酸塩（２×）、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮乾固する。０％〜５％のＭｅＯＨ／ＤＣＭの勾配で溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製し、表題化合物（１．０５ｇ、１００％粗製）を得る。
【０１１１】
実施例１
（５’Ｓ）−Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−５’−メチル−１−｛［４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］メチル｝−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３，ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化８１】
0006766273.tif 000092
実施例２
（５’Ｒ）−Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−５’−メチル−１−｛［４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］メチル｝−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３，ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化８２】
0006766273.tif 000093
［４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］メタノール（０．５３ｇ、２．２２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）中に溶解し、ＴＥＡ（１．０ｍＬｍＬ、７．１０ｍｍｏｌ）、続いてメタンスルホニルクロリド（０．２ｍＬ、３ｍｍｏｌ）を加える。混合物を４５分間撹拌する。ＤＣＭで希釈し、水で洗浄し、次いで、反応混合物を相分離器に通して、減圧下で濃縮し、［４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］メチルメタンスルホネートの中間体を得る。分離容器にて、Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド二塩酸塩（１．０８ｇ、２．２３ｍｍｏｌ）にＡＣＮ（２０ｍＬ）を加え、ＤＩＰＥＡ（２．０ｍＬ、１１．５ｍｍｏｌ）を加え、混合物が全て溶解するまで撹拌する。［４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］メチルメタンスルホネートを加え、混合物を５０℃で１．５時間加熱し、次いで、室温に冷却し、減圧下で濃縮する。ＤＣＭを加え、飽和重炭酸ナトリウムで洗浄し、次いで、混合物を相分離器に通過させる。有機層を減圧下で濃縮し、０％〜１０％のＥｔＯＨ／クロロホルムの勾配で溶離するシリカゲル上のクロマトグラフに付して、ラセミ表題化合物を得る。ラセミ混合物を、ＳＦＣ［ＡＤ−ＩＣカラム（３０×２５０ｍｍ、５μ）、および５０％のＩＰＡ（２０ｍＭのＮＨ3）で溶離、１２５ｍＬ／分、１６分毎に８．５ｍＬ（２００ｍｇ）の注入；温度＝３５℃、背圧＝１００バール、２６０ｎｍでのＵＶ検出］によるキラルクロマトグラフィーにより分離する。分析条件：ＳＦＣ（２２０ｎｍ  ＵＶ）、カラム：ＡＤ−ＩＣ  ３０×２５０ｍｍ、５μ、移動相：５０％のＩＰＡ（２０ｍＭのＮＨ3）。分離した生成物をＡＣＮ（０．６ｍＬ）中に溶解し、次いで、室温で結晶化させる。過剰の溶媒をＮ2流下で除去して、０．４１ｇ、４４％、＞９９％ｅｅ、Ｒt＝１．８５分、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６２４（Ｍ＋Ｈ）の実施例１の表題化合物、および０．４１ｇ、４４％、９７．９％ｅｅ、Ｒt＝２．５９分、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６２４（Ｍ＋Ｈ））の実施例２の表題化合物を得る。
【０１１２】
本質的に実施例１の方法によって、以下の化合物を調製する。反応温度は、約５０℃〜６５℃の範囲であり得る。
【表１０】
0006766273.tif 000094
【０１１３】
代替的合成例１
（５’Ｓ）−Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−５’−メチル−１−｛［４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］メチル｝−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３、ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化８３】
0006766273.tif 000095
（５’Ｓ）−Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−５’−メチル−４’，５’，ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３，ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド二塩酸塩（３．０ｇ、４．９ｍｍｏｌ）および［４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］メチルメタンスルホネート（１．５８ｇ、５．８６ｍｍｏｌ）を無水ＡＣＮ（６５ｍＬ）中に溶解し、次いで、ＤＩＰＥＡ（５．１ｍＬ、２９ｍｍｏｌ）を加え、６５℃で１．７５時間加熱する。室温に冷却し、減圧下で濃縮する。ＤＣＭを加え、水で、続いてブラインで洗浄し、混合物を相分離器に通過させる。有機層を減圧下で濃縮し、０％〜５％のＭｅＯＨ／ＤＣＭの勾配で溶離するシリカゲル上のクロマトグラフに付す。ＡＣＮから材料を再結晶し、濾過し、Ｅｔ2Ｏですすぎ、得られた固体を真空オーブン中で乾燥させて、表題化合物（１．６５ｇ、５４％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６２４（Ｍ＋Ｈ）。
【０１１４】
本質的に代替的実施例１の方法により、以下の化合物を調製する。反応温度は室温から約４０〜７０℃まで変化し、反応時間は約１時間から３日間まで変化し得る。
【表１１−１】
0006766273.tif 000096
【表１１−２】
0006766273.tif 000097
【表１１−３】
0006766273.tif 000098
【０１１５】
実施例１３
（５’Ｒ）−Ｎ−［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−５’−メチル−１−｛（１Ｓ）−１−［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル｝−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化８４】
0006766273.tif 000099
実施例１４
（５’Ｓ）−Ｎ−［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−５’−メチル−１−｛（１Ｓ）−１−［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル｝−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化８５】
0006766273.tif 000100
実施例１５
（５’Ｒ）−Ｎ−［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−５’−メチル−１−｛（１Ｒ）−１−［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル｝−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化８６】
0006766273.tif 000101
実施例１６
（５’Ｓ）−Ｎ−［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−５’−メチル−１−｛（１Ｒ）−１−［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル｝−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化８７】
0006766273.tif 000102
Ｎ−｛［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド塩酸塩（１４．０９ｇ，２６．４４ｍｍｏｌ）および５−（１−ブロモエチル）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン（８．７６７ｇ、３４．３７ｍｍｏｌ）をＡＣＮ（５ｍＬ／ｇ、５５．２ｇ、１３４０ｍｍｏｌ、７０．４７ｍＬ）中に懸濁し、ＤＩＰＥＡ（２７．７ｍＬ、１５８．６ｍｍｏｌ）を加え、次いで、反応混合物を６０℃で７５分間加熱する。混合物を濃縮乾固させ、ＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、水（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄する。硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、残渣を減圧下で濃縮する。残渣を、ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０：１００〜５：９５）で溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、ラセミ混合物（１１．１ｇ）を得る。エナンチオマーを、ＳＦＣ［ＡＤ−Ｈカラム（３０×２５０ｍｍ、５μ）、および３５％のＩＰＡ（２０ｍＭのＮＨ3）を用いる、２８０ｍＬ／分、８分毎に８ｍＬ（１７５ｍｇ）の注入；温度＝３５℃、背圧＝１００バール、２６０ｎｍでのＵＶ検出］によるキラルクロマトグラフィーにより分離する。ＡＣＮ／水（１：２）中で凍結乾燥して、表題化合物を得る。分析条件：ＳＦＣ（２２０ｎｍＵＶ）、カラム：ＡＤ−Ｈ１００×４．６ｍｍ、５μ、移動相：２７％のＩＰＡ（１％のＭｅＯＨ中２ＭのＮＨ3）／７３％のＣＯ2、均一溶媒、カラム温度３５℃、流速＝５ｍＬ／分、背圧＝１００バール］。実施例１３の表題化合物（２．６６ｇ、１５％、１００％ｅｅ、Ｒt＝１．７０分）、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６２３（Ｍ＋Ｈ）、実施例１４の表題化合物（２．７８ｇ、１６％、９８．６４％ｅｅ、９７．３％ｄｅ、Ｒt＝２．１０分）、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６２３（Ｍ＋Ｈ）、および実施例１５の表題化合物（２．７４ｇ、１６％、９８％ｅｅ、９６．５％ｄｅ、Ｒt＝２．６０分）、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６２３（Ｍ＋Ｈ）。同じ条件を用いるＳＦＣによるキラルクロマトグラフィーを用いて実施例１６を再度精製して、マイナーな異性体を除去し、ＡＣＮ／水中で凍結乾燥し、実施例１６の表題化合物（２．６０ｇ、１６％、１００％ｅｅ）、Ｒt＝４．０２分、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６２３（Ｍ＋Ｈ）を得る。
【０１１６】
ＶＣＤにより、これらの材料の絶対配置を割り当てる。ＶＣＤ分光計＝ＤｕａｌＰＥＭを備えたＣｈｉｒａｌＩＲ−２Ｘ；８．９ｍｇ／１００μＬ、４．６ｍｇ／１００μＬ；解像度＝ｃｍ−1；ＰＥＭ＝１４００ｃｍ−1；７２０００スキャン、２４時間；ＢａＦ2セル、経路長＝１００μｍ。ＭｏｌＭｅｃ計算で使用される力場＝ＭＭＦ９４Ｓ、ＭＭＦＦ、ＳＹＢＹＬ。ＤＦＴ計算のための方法論と基底設定＝ＳＣＲＦ−Ｂ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ（ｄ）。信頼度＝９９％。
【０１１７】
実施例１４の代替的調製：
（５’Ｓ）−Ｎ−［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−５’−メチル−１−｛（１Ｓ）−１−［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル｝−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
代替調製実施例１６
（５’Ｓ）−Ｎ−［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−５’−メチル−１−｛（１Ｒ）−１−［２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル｝−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
（５’Ｓ）−Ｎ−［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド塩酸塩（１０．７３ｇ、２２．１１ｍｍｏｌ）および５−（１−ブロモエチル）−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン（６．８５ｇ、２６．８５ｍｍｏｌ）を、ＡＣＮ（１００ｍＬ）中に懸濁し、炭酸カリウム（５．００ｇ、３６．１７ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を２時間還流しながら加熱する。混合物を周囲温度に冷却し、炭酸カリウム（１０．００ｇ、７２．３４ｍｍｏｌ）を加え、１８時間撹拌する。炭酸カリウム（２．５０ｇ、１８．０８ｍｍｏｌ）を加え、１時間加熱還流し、次いで、周囲温度に冷却する。混合物を濾過し、ＥｔＯＡｃですすぎ、次いで、混合物を減圧下で濃縮する。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、水（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄する。硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、残渣を減圧下で濃縮して、粗生成物（１４．７４ｇ）を得る。エナンチオマーを、ＳＦＣ［ＡＤ−Ｈカラム（５×１５ｃｍ、２７％のＩＰＡ（２０ｍＭのＮＨ3）を用いる、３００ｍＬ／分、８分毎に８ｍＬ（１７５ｍｇ）の注入；温度＝３５℃、背圧＝１００バール、２８０ｎｍでのＵＶ検出］によるキラルクロマトグラフィーにより分離する。分析条件：ＳＦＣ（２２０ｎｍ  ＵＶ）、カラム：ＡＤ−Ｈ  １００×４．６ｍｍ、５μ、移動相：４０％のＩＰＡ／６０％のＣＯ2、均一溶媒。分離した生成物をＡＣＮ（５ｍＬ）中に溶解し、次いで、室温で結晶化させる。過剰の溶媒をＮ2流下で除去して、実施例１４の表題化合物（５．３５ｇ、３９％、＞９９％ｅｅ、＞９９％ｄｅ、Ｒt＝０．９５分）、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６２３（Ｍ＋Ｈ）、および実施例１６の表題化合物（５．４９ｇ、４０％、＞９９％ｅｅ、＞９９％ｄｅ、Ｒt＝１．６８分）、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６２３（Ｍ＋Ｈ）を得る。
【０１１８】
実施例１７
Ｎ−［４−（メチルスルホニル）ベンジル］−１−［４−（トリフルオロメチル）ベンジル］−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化８８】
0006766273.tif 000103
Ｎ−［４−（メチルスルホニル）ベンジル］−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド塩酸塩（０．９５ｇ、２．０８ｍｍｏｌ）および４−トリフルオロメチルベンジルブロミド（０．５５ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）をＡＣＮ（４２ｍＬ／ｇ、４０ｍＬ）中に懸濁し、ＤＩＰＥＡ（０．８０ｍＬ、４．５７ｍｍｏｌ）を加え、次いで、周囲温度で１８時間撹拌する。混合物を濃縮乾固し、ＥｔＯＡｃで希釈し、水性飽和重炭酸ナトリウムおよびブラインで洗浄する。硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、残渣を減圧下で濃縮する。残渣を、ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（０：１００〜５：９５）で溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、凍結乾燥して、白色の固体として表題化合物（０．８４ｇ、７０％の収率）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：５７９（Ｍ＋Ｈ）。
【０１１９】
適切な臭化ベンジルまたは塩化ベンジル出発物質を使用して、室温〜約７５℃の範囲の温度で、かつ１〜２３時間または適切な場合は２３時間以上撹拌して、本質的に実施例１７の方法により、以下の化合物を調製する。
【表１２−１】
0006766273.tif 000104
【表１２−２】
0006766273.tif 000105
【表１２−３】
0006766273.tif 000106
【表１２−４】
0006766273.tif 000107
【０１２０】
実施例３７
（５’Ｒ）−Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−５’−メチル−１−｛１−［２−（トリフルオロメチル）−１，３−チアゾール−５−イル］］エチル｝−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド異性体１
【化８９】
0006766273.tif 000108
および実施例３８
（５’Ｒ）−Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−５’−メチル−１−｛１−［２−（トリフルオロメチル）−１，３−チアゾール−５−イル］］エチル｝−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド異性体２
【化９０】
0006766273.tif 000109
（５’Ｒ）−Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−５’−メチル−１−｛１−［２−（トリフルオロメチル）−１，３−チアゾール−５−イル］］エチル｝−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド（１３７ｍｇ）を、ＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）、ＤＣＭ（０．２ｍＬ）の混合物中に溶解し、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）ですすぐ。（５’Ｒ）−Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−５’−メチル−１−｛１−［２−（トリフルオロメチル）−１，３−チアゾール−５−イル］］エチル｝−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミドの異性体を、ＨＰＬＣによるキラルクロマトグラフィー［ＣｈｉｒａｌｐａｋＩＡカラム（３０×２５０ｍｍ）、２０ｍＬ／分で、２０％のＡＣＮ：８０％のＩＰＡ（ｗ／０．２％ＩＰＡｍ）を用いる、２．７ｍＬの総容量、０．２ｍＬの注入（注入あたり約１０．１ｍｇ）、２２５ｎｍにてＵＶ検出（２５０ｎｍにてモニター）］を用いて分離する。分析条件：４／１のＩＰＡ（０．２％のＩＰＡｍ）／ＡＣＮ１．０ｍＬ／分、２２５ｎｍで検出するＣｈｉｒａｌｐａｋカラム［ＩＡ（４．６×１５０ｍｍ）］。実施例３７、異性体１（４７．７８ｍｇ、ｄｅ＞９９％、Ｒt＝３．２２分）および実施例３８、異性体２（４２ｍｇ）を得る。同じ条件を用いて実施例３８、異性体２を再処理し、実施例３８、異性体２（２６．２３ｍｇ、ｄｅ９１．４％、Ｒt＝４．２４分）を得る。凍結乾燥して、実施例３７、異性体１の表題化合物（４３ｍｇ、３０．７％）、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６２９．２（Ｍ＋Ｈ）、および実施例３８、異性体２（２３ｍｇ、１６．４％）、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６２９．２（Ｍ＋Ｈ）をオフホワイト色の固体として得る。
【０１２１】
ＨＰＬＣキラルクロマトグラフィーまたはＳＦＣキラルクロマトグラフィーを使用して、本質的に実施例３７および３８の方法により、以下の化合物を精製する。典型的なＳＦＣシステムは、カラム：ＣｈｉｒａｌｐａｋＡＤ−Ｈ、２０×１５０ｍｍ。移動相：４０％のＥｔＯＨ（ｗ／０．２％のＩＰＡｍ）：６０％のＣＯ2；流速：８０ｍＬ／分；ＢＰＲ設定点：１００バール；ＢＰＲ温度：２０℃；カラム温度：４０℃；検出：２８０ｎｍ、である。
【表１３−１】
0006766273.tif 000110
【表１３−２】
0006766273.tif 000111
【表１３−３】
0006766273.tif 000112
【表１３−４】
0006766273.tif 000113
【表１３−５】
0006766273.tif 000114
【表１３−６】
0006766273.tif 000115
【表１３−７】
0006766273.tif 000116
【０１２２】
実施例７０
１−（２，４−ジクロロベンジル）−Ｎ−［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化９１】
0006766273.tif 000117
１’−［（２，４−ジクロロフェニル）メチル］スピロ［４，５−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−２−カルボン酸（６００ｍｇ、１．４５５ｍｍｏｌ）、（４−エチルスルホニルフェニル）メタンアミン塩酸塩（０．３７７ｇ、１．６０ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（６８６ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１ｍＬ、７．１７ｍｍｏｌ）、およびＤＣＭ（１５ｍＬ）を合わせ、４時間撹拌する。反応を水でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出する。有機抽出物を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、無色の残渣を得る。残渣にアセトニトリルを加えて、超音波処理する。残渣を濾過し、真空オーブン中５０℃で一晩乾燥させて、表題化合物（６２７ｍｇ、７２．６％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：５９３．２／５９５．２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２３】
実施例７１
１−（３−ブロモ−２，４−ジフルオロベンジル）−Ｎ−［４−（メチルスルホニル）ベンジル］−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化９２】
0006766273.tif 000118
Ｎ−｛［４−（メチルスルホニル）ベンジル］−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド塩酸塩（０．３０ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）、および３−ブロモ−２，４−ジフルオロ−ベンズアルデヒド（０．４３ｇ、１．９７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（０．０５Ｍ、１３ｍＬ）中に溶解し、ＤＩＰＥＡ（０．３４ｍＬ、１．９７ｍｍｏｌ）、続いてトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（０．６９ｇ、３．２８ｍｍｏｌ）を加え、容器を密閉し、４０℃で１８時間加熱する。周囲温度に冷却し、水を加える。水層をＤＣＭ（３×）で抽出し、有機抽出物を合わせる。減圧下で材料を濃縮し、ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（３：９７〜５：９５）中の２Ｍのアンモニアで溶離する回転式シリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製し、表題化合物（０．３６８ｇ、９０％）を白色の泡状物質として得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６２７（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２４】
本質的に実施例７１の方法によって、以下の化合物を調製する。反応時間は、約３時間から一晩まで変動し得る。
【表１４】
0006766273.tif 000119
【０１２５】
実施例７５
１−（４−シアノ−３−メチルベンジル）−Ｎ−［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化９３】
0006766273.tif 000120
マイクロ波バイアル中、Ｎ−｛［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド塩酸塩（０．２５ｇ，０．５３ｍｍｏｌ）、および４−ホルミル−２−メチル−ベンゾニトリル（０．１２ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（８ｍＬ）および水（２ｍＬ）中に溶解する。容器を密封し、マイクロ波で１００℃に５分間加熱する。周囲温度に冷却し、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（０．２３ｇ、１．０６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に加える。反応物を１２時間撹拌し、ＤＣＭで抽出する。有機層を窒素流下で濃縮し、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物（０．１４ｇ、４７％）を白色の泡状物質として得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：５６４（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２６】
実施例７６
１−［１−（４−シアノフェニル）エチル］−Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−４’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’］−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化９４】
0006766273.tif 000121
実施例７７
（４’Ｓ）−１−［（１Ｓ）−１−（４−シアノフェニル）エチル］−Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−４’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化９５】
0006766273.tif 000122
実施例７８
１−［１−（４−シアノフェニル）エチル］−Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−４’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド異性体４
【化９６】
0006766273.tif 000123
Ｎ−［（５−エチルスルホニル−２−ピリジル）メチル］−４−メチル−スピロ［４，５−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−２−カルボキサミド塩酸塩（１．０２ｇ、１．５７ｍｍｏｌ）、および４−（１−ブロモエチル）ベンゾニトリル（０．４３９ｇ、１．９８ｍｍｏｌ）を、乾燥ＡＣＮ（１１ｍＬ）中に懸濁し、ＤＩＰＥＡ（２．７５ｍＬ、１５．７ｍｍｏｌ）を加え、次いで、反応混合物を６０℃で２．５時間加熱する。過剰な４−（１−ブロモエチル）ベンゾニトリル（０．２２６ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で一晩加熱する。濃縮乾固し、ＳＣＸカートリッジを使用して、ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）、続いてＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中２ＮのＮＨ3で溶離することにより、残渣を精製する。ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（０：１００〜１０：９０）で溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによりさらに精製し、橙色の泡状物質として実施例７６の表題化合物（０．８９８ｍｇ、９１％）を得る。異性体を、ＳＦＣ、ＡＤ−Ｈカラム（３０×２５０ｍｍ、５μ）、および６０％のＩＰＡ（２０ｍＭのＮＨ3）を用いる、１００ｍＬ／分、８分毎に２ｍＬの注入；温度＝３５℃、背圧＝１００バール、２６０ｎｍでのＵＶ検出］によるキラルクロマトグラフィーにより分離して、実施例７８、異性体４と、実施例７７の不純な混合物とを得る。実施例７７を、ＳＦＣ、ＯＤ−Ｈカラム（２１．２×２５０ｍｍ、５μ）、３５％のＭｅＯＨ（２０ｍＭのＮＨ3）を７０ｍＬ／分で用いる、３８４秒毎に２．４ｍＬの注入、温度＝３５℃、背圧＝１００バール、２６０ｎｍでのＵＶ検出、によるキラルクロマトグラフィーにより分離する。ＡＣＮ／水（１：２）中で凍結乾燥して、実施例７７の表題化合物を得る。分析条件：ＳＦＣ（２２０ｎｍＵＶ）、カラム：ＡＤ−Ｈ１００×４．６ｍｍ、５μ、移動相：４０％のＩＰＡ（１％のＭｅＯＨ中２ＭのＮＨ3）／７３％のＣＯ2、均一溶媒、カラム温度３５℃、流速＝５ｍＬ／分、背圧＝１００バール。実施例７７の表題化合物（０．１４４ｇ、１８％、Ｒt＝２．６６分）、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：５７９（Ｍ＋Ｈ）、および実施例７８の表題化合物（０．１７３ｇ、２０％、１００％ｅｅ、Ｒt＝６．５８分）、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：５７９（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２７】
代替調製実施例７７
（４’Ｓ）−１−［（１Ｓ）−１−（４−シアノフェニル）エチル］−Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−４’−メチル−４’、５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化９７】
0006766273.tif 000124
（４’Ｓ）−Ｎ−｛［５−（エチルスルホニル）ピリジン−２−イル］メチル｝−４’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド（１．２８ｇ、２．６７２ｍｍｏｌ）を、［（１Ｒ）−１−（４−シアノフェニル）エチル］メタンスルホネート（１．３４ｇ、４．９４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１．４８ｇ、１０．６９ｍｍｏｌ）ＡＣＮ（１２．８ｍＬ）中懸濁液へ加え、室温で攪拌する。おおよそ２２時間後に過剰の炭酸カリウム（０．３６９ｇ、２．６７ｍｍｏｌ）を加え、２４時間にわたり撹拌を維持する。ＭｅＯＨで希釈し、無機物を濾過し、濃縮乾固する。イオン交換クロマトグラフィーおよびシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：０：１００〜５：９５）により残渣を精製する。残渣を凍結乾燥して、表題化合物（６４９．７５ｍｇ、４２％）を得る。残りの残渣をＤＣＭ中に溶解し、溶媒を除去し、凍結乾燥して、表題化合物の第二のバッチを得、合わせた収量は（８１０．１３ｍｇ、５２％）である。分析条件：ＳＦＣ（２２０ｎｍＵＶ）、カラム：ＯＤ−Ｈ１００×４．６ｍｍ、５μ、移動相：２７％のＭｅＯＨ（ＭｅＯＨ中１％の２ＭのＮＨ3）／７３％のＣＯ2、均一溶媒、カラム温度３５℃、流速＝５ｍＬ／分、背圧＝１００バール］、１００％ｅｅ、Ｒt＝３．８６分。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：５７９（Ｍ＋Ｈ）、６０１（Ｍ＋Ｎａ）。
【０１２８】
実施例７９
（５’Ｓ）−Ｎ−［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−１−｛１−［３−フルオロ−４−（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）フェニル］エチル｝−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド
【化９８】
0006766273.tif 000125
（５Ｓ）−Ｎ−［（４−エチルスルホニルフェニル）メチル］−１’−［１−［３−フルオロ−４−［（Ｅ）−Ｎ’−ヒドロキシカルバムイミドイル］フェニル］エチル］−５−メチル−スピロ［４］，５−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−２−カルボキサミド（０．２４ｇ、０．３９ｍｍｏｌ）、およびオルトギ酸トリメチル（０．９５ｇ、９．０ｍｍｏｌ）を含有するスクリューキャップバイアル中に、三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（０．００５ｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）を加え、次いで、バイアルを密封し、一晩１００℃に加熱する。周囲温度に冷却し、ＭｅＯＨ（３％）／ＥｔＯＡｃ（５０〜８０％）／ヘキサンで溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより得られた残渣を精製し、表題化合物（０．１１ｇ、４４％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６３９（Ｍ＋１）。
【０１２９】
実施例８０
（５’Ｓ）−Ｎ−［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−１−｛１−［３−フルオロ−４−（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）フェニル］エチル｝−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド異性体１
【化９９】
0006766273.tif 000126
実施例８１
（５’Ｓ）−Ｎ−［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−１−｛１−［３−フルオロ−４−（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）フェニル］エチル｝−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド異性体２
【化１００】
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キラルクロマトグラフィー：キラルパックＩＡカラム（３０×２５０ｍｍ、３０ｍＬ／分で２０ｍＭのＮＨ3を含む４０％のＡＣＮ／６０％のＥｔＯＨを用いて、０．３ｍＬの注入（１回の注入につき７０ｍｇ）により、（５’Ｓ）−Ｎ−［４−（エチルスルホニル）ベンジル］−１−｛１−［３−フルオロ−４−（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）フェニル］エチル｝−５’−メチル−４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］−２’−カルボキサミド、実施例６７のエナンチオマーを分離する。分析条件：キラルパックＩＡ（４．６×１５０ｍｍ、２２５ｎｍ）、３／２のＥｔＯＨ／ＡＣＮ０．２％のＩＰＡｍで溶離、流速１．０ｍＬ／分、ならびに実施例８０の表題化合物（３９ｍｇ、３７％、Ｒt＝２．３５、１００％ｄｅ）、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６３９（Ｍ＋１）、および実施例８１（３３ｍｇ、３１％、Ｒt＝４．２５、＞９９％ｄｅ）、質量スペクトル（ｍ／ｚ）：６３９（Ｍ＋１）。
【０１３０】
生物学的アッセイ
ＲＯＲα、β、およびγ結合阻害剤
Ｈｉｓタグ付きヒトＲＡＲ関連オーファン受容体アルファ（ｈＲＯＲα）、ヒトＲＡＲ関連オーファン受容体ベータ（ｈＲＯＲβ）、およびヒトＲＡＲ関連オーファン受容体ガンマ（ｈＲＯＲγ）を受容体−リガンド競合結合アッセイに使用して、Ｋi値を決定する。典型的な手順を以下に提供する。
【０１３１】
受容体競合結合アッセイを、ＤＰＢＳ（１Ｌ）（Ｈｙｃｌｏｎｅ  ＃ＳＨ３００２８．０３）、２．２ｇのＢＳＡ  Ｆｒａｃｔｉｏｎ  ｖ（Ｒｏｃｈｅ  ＃９０４８−４６−８）、１００ｍＬのグリセロール（Ｆｉｓｃｈｅｒ  ＃５６−８１−５）、および４０ｍＬのＤＭＳＯ（試薬グレード）からなる緩衝液中で行う。最終ウェルは、２０μｇ／ｍＬのアプロチニンおよび２０μｇ／ｍＬのロイペプチンおよび１０μＭのＰｅｆａｂｌｏｃを含有する。典型的には、受容体結合アッセイは、ウェル当たり、アルファ結合用の７ｎＭの［3Ｈ］−２５−ヒドロキシコレステロール、ベータ結合用の２０ｎＭの［3Ｈ］−３−［［４−［［３−（２，６−ジクロロフェニル）−５−イソプロピル−イソキサゾール−４−イル］メトキシ］−Ｎ，２−ジメチル−アニリノ］メチル］安息香酸、およびガンマ結合用の６ｎＭの［3Ｈ］−２５−ヒドロキシコレステロール、ならびに０．５μｇのＲＯＲα受容体、０．０３μｇのＲＯＲβ受容体、または０．１３μｇのＲＯＲγ受容体が含まれる。アッセイは、典型的には、９６ウェル形式で行う。競合する試験化合物を約０．４ｎＭから２５μＭの範囲の様々な濃度で添加する。非特異的結合を、ＲＯＲαおよびＲＯＲγの結合については２５０ｎＭの２５−ヒドロキシコレステロール、ＲＯＲβ結合については２５０ｎＭの３−［［４−［［３−（２，６−ジクロロフェニル）−５−イソプロピル−イソキサゾール−４−イル］メトキシ］−Ｎ，２−ジメチル−アニリノ］メチル］安息香酸の存在下で決定する。試料、標識、および受容体の溶液を、９６ウェルアッセイプレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３６３２）中で組み合わせ、室温で一晩インキュベートした後、最終ビーズ濃度１ｍｇ／ウェルの２５μｌのビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ＹＳｉ（２〜５ミクロン）ｃｏｐｐｅｒ  Ｈｉｓ−ｔａｇ  Ｓｐａ  Ｂｅａｄｓ、＃ＲＰＮＱ００９６）を各反応物に添加する。プレートをオービタルシェーカー上で室温で３０分間混合する。４時間インキュベートした後、プレートをＷａｌｌａｃ  ＭＩＣＲＯＢＥＴＡ（登録商標）計数器で読み取る。
【０１３２】
このデータは、４パラメータロジスティック適合を使用して推定ＩＣ50を計算するために使用する。ＲＯＲａおよびＲＯＲｇについての［3Ｈ］−２５−ヒドロキシコレステロール、ならびにＲＯＲｂについての［3Ｈ］−３−［［４−［［３−（２，６−ジクロロフェニル）−５−イソプロピル−イソキサゾール−４−イル］メトキシ］−Ｎ，２−ジメチル−アニリノ］メチル］安息香酸のＫｄを、飽和結合によって決定する。化合物のＩＣ50値を、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｈｏｆｆ式を使用してＫｉに変換する。
【０１３３】
次の例示化合物の結果を以下の表１５に示す。
【表１５】
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【０１３４】
これらの結果により、表１５の化合物が、ＲＯＲαおよびＲＯＲβに対してＲＯＲγに選択的であることが示される。
【０１３５】
ＨＥＫ２９３  ＲＯＲｇ  ＧＡＬ４受容体−レポーターアッセイ
逆作動薬活性の指標として、ＲＡＲ関連オーファン受容体ガンマ（ＲＯＲｇ）受容体−受容体アッセイ（ＲＯＲｇ−ＧＡＬ４／ｐＧＬ４．３１）をＨＥＫ２９３細胞において実施する。ＨＥＫ２９３細胞を、Ｆｕｇｅｎｅ（登録商標）試薬を使用して同時トランスフェクトする。ＧＡＬ４結合ドメインおよび蛍ルシフェラーゼ遺伝子の上流の最小アデノウイルスプロモーターを含有するレポータープラスミドを、酵母ＧＡＬ４  ＤＮＡ結合ドメインに融合したヒトＲＯＲｇリガンド結合ドメインを構成的に発現するプラスミドと同時トランスフェクトする。細胞を、ＦＢＳを含まないＭＥＭ培地においてＴ１５０ｃｍ2フラスコ中でトランスフェクトする。１８時間インキュベートした後、トランスフェクトした細胞をトリプシン処理し、１０％ＦＢＳを含有する３：１のＤＭＥＭ−Ｆ１２培地中の９６ウェルマイクロタイタープレートにプレーティングし、４時間インキュベートした後、約０．０５ｎＭ〜１０μＭの範囲の様々な濃度の試験化合物に暴露する。化合物と共に１８時間インキュベートした後、細胞を溶解し、標準的な技法を用いてルシフェラーゼ活性を定量する。データを４パラメータ適合ロジスティクスに適合させて、ＩＣ50値を決定する。
【０１３６】
次の例示化合物の結果を以下の表１６に示す。
【表１６】
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【０１３７】
これらの結果により、表１６の化合物がヒトＲＯＲｇ受容体に対する逆作動薬であることが実証される。
【０１３８】
ＰＢＭＣ  ＩＬ−１７分泌ＥＬＩＳＡおよびＣｅｌｌ  ＴｉｔｅｒＧｌｏ生存性アッセイ
最初に新鮮なバフィーコートを等量のリン酸緩衝食塩水と組み合わせることによって、ＰＢＭＣを全血バフィーコートから単離する。次に、３５ｍＬのＰＢＳ／バフィーコート溶液を５０ｍＬのコニカルチューブ中の１５ｍＬのＦｉｃｏｌｌ上に静かに重層する。５００×ｇで３０分間遠心した後（緩徐な加速および減速による）、血漿の最上層を破棄し、Ｆｉｃｏｌｌ界面に沿った細胞の層を収集し、プールする。各２５０ｍＬチューブを室温のＲＰＭＩ−１６４０培地で最上部まで満たす。チューブを５００×Ｇで１０分間回転させ（緩徐な加速および減速による）、培地を吸引により除去し、そして洗浄ステップを繰り返す。細胞を、氷上でＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製の氷冷Ｒｅｃｏｖｅｒｙ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｆｒｅｅｚｉｎｇ  Ｍｅｄｉｕｍ（カタログ番号１２６４８−０１０）に再懸濁する。細胞濃度を６６７０万細胞／ｍＬに調整する。細胞を、１億個の細胞を含むバイアル中で−１℃／分で緩徐に凍結し、液体窒素中で保存する。
【０１３９】
ＩＬ−１７分泌および化合物添加の刺激
ＰＢＭＣを、１ｍＬの完全培地（３０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００単位／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、３．２５ｍＭのＬ−グルタミン、０．２μＭのベータ−メルカプトエタノール、および１０％のＦＢＳを含有する、ＲＰＭＩ−１６４０）を用いて再懸濁し、続いて２ｍＬ、４ｍＬ、８ｍＬ、および１６ｍＬの完全培地を穏やかに渦状に混ぜながら滴下添加することによって、解凍する。細胞を５分間遠沈し、細胞ペレットを完全培地に再懸濁する。細胞溶液を２３ゲージの注射針および４０μＭの細胞濾過器に通すことによって、細胞の塊を粉砕する。１ウェル当たり１０万個の細胞を３８４ウェルのポリスチレン組織培養処理平底プレートに合計３０μＬで添加する。完全培地中で調製された、抗ヒトＣＤ３抗体、抗ヒトＣＤ２８抗体、ＩＬ−２３、および化合物を含有する刺激カクテルを、総体積３０μＬで同時に細胞に添加する。添加した刺激剤の最終濃度は、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２８抗体、およびＩＬ−２３について、それぞれ１６０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、および５ｎｇ／ｍＬ、ならびにＤＭＳＯについては０．３％である。プレートをＡＥＲＡＳＥＡＬ（登録商標）シーリングフィルムで密閉し、３７℃、湿度９５％、および５％ＣＯ2で４８時間インキュベートする。
【０１４０】
インキュベーション期間後、プレートを２００×ｇで５分間回転させる。上清を等量の１％ＢＳＡ／ＰＢＳで１：１に希釈し、キットに入っている基質の代わりに発色基質ＯＰＤ（ｏ−フェニレンジアミン二塩酸塩、Ｓｉｇｍａカタログ＃Ｐ６９１２）を使用するという１つの例外を除き、キットと共に提供されるプロトコルに従って、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍからのヒトＩＬ−１７  ＥＬＩＳＡキット（カタログ＃Ｄ３１７Ｅ）を用いてＩＬ−１７について試験する。４９２ｎｍでの吸光度をＥｎｖｉｓｉｏｎマルチラベルプレートリーダーで測定する。Ａ４９２値は、以下に示すとおりに、ＩＬ−１７標準曲線に基づいてＩＬ−１７の濃度に変換する。
ｐｇ／ｍＬ  ＩＬ−１７＝ＥＣ５０＊［［（上方−下方）／（Ａ４９２−下方）］−１］（１／−傾斜）。ＩＬ−１７分泌の阻害についてのＩＣ50は、刺激剤も化合物も添加していないウェルの平均値から決定した最大阻害と、刺激剤のみを添加し化合物は添加していないウェルの平均値からの最小阻害とによる標準的な４パラメータ適合を使用して、変換した値に基づいて計算する。
【０１４１】
等量のＣｅｌｌ  ＴＩＴＥＲＧＬＯ（登録商標）細胞生存性試験試薬（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ＃Ｇ７５７３）をプレートに残っている細胞に添加し、室温で穏やかに振盪しながら１５分間インキュベートした後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチラベルプレートリーダーで測定する。細胞死のパーセントを、１００％活性（細胞死）をゼロ発光単位に、最小活性（最大生細胞数）を刺激剤のみを含み化合物を添加していないウェルの平均発光単位として設定することによって計算する。ＩＣ50を、標準的な４パラメータ適合を使用して計算する。
【０１４２】
次の例示化合物の結果を以下の表１７に示す。
【表１７】
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【０１４３】
これらの結果により、表１７の化合物が、測定可能な細胞傷害効果なしに、ＰＢＭＣにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８／ＩＬ−２３刺激によるＩＬ−１７分泌を阻害することが示される。
【０１４４】
グルコース−６−リン酸イソメラーゼ（ＧＰＩ）誘発関節炎モデル：
ＧＰＩ誘発関節炎モデルは、Ｋ．Ｉｗａｎａｍｉら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ５８、７５４〜７６３、２００８およびＤ．Ｓｃｈｕｂｅｒｔら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １７２、４５０３〜４５０９、２００４から適合されている。マウス（８〜９週齢の雄ＤＢＡ／１マウス）（Ｈａｒｌａｎ）を、免疫化日（０日目）に収集した体重に基づいて無作為に処置群に割り当てる。免疫化の日（０日目）に、組換えヒトＧＰＩ（ＰＢＳ、Ｇｉｂｃｏ中で４ｍｇ／ｍＬに希釈）と完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ、Ｓｉｇｍａ）との１：１（ｖ：ｖ）混合物を、低温室で４０分間、高速ホモジナイザー（Ｏｍｎｉ）にて混合する。エマルジョン中で２ｍｇ／ｍＬのＧＰＩの最終濃度が達成される。マウスの尾の付け根にＧＰＩエマルジョンを注射する（２箇所の注射部位、皮下に、各部位１００μＬ）。試験化合物は、免疫化と同日（０日目）に経口投与を開始される。０日目に開始して、各足を、０〜３のスコアリングシステムに基づいて関節腫脹の重症度についてスコア付けする（Ｋ．Ｉｗａｎａｍｉら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ５８、７５４〜７６３、２００８を参照のこと）。臨床スコアは、全４足の合計スコアを表す（最大スコア＝１２）。臨床スコアは、０、２、４、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、および２１日目に評価される。
【０１４５】
ＡＵＣは、免疫化日（０日目）〜２１日目までの経時的な臨床スコアについて台形法によって計算される。検定のｐ値は、スチューデントのｔ検定から導き出された。
【０１４６】
実施例５５（１００ｍｇ／Ｋｇ）およびビヒクル（精製水中、１％のＨＥＣ、０．２５％のポリソルベート８０、および０．０５％の消泡剤）処理（ｎ＝８／群）を０日目に開始し、１日１回経口投与する。実施例５５は、ビヒクル群と比較して、足の腫脹の重症度を軽減し、かつ疾患の経過を通してより低い平均臨床スコアを維持する。この効果は、臨床スコアＡＵＣ、すなわち経時的な足の腫脹の累積測定値において９４％の減少をもたらし、それは表１８に示すようにビヒクル群と比較して統計的に有意である。
【表１８】
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