(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
オオムギを添加することを特徴とする、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの皮膚線維芽細胞又は歯肉線維芽細胞のｂＦＧＦ産生促進方法。
以上
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オオムギを含有する塩基性線維芽細胞増殖因子（以下、ｂＦＧＦという。）産生促進剤に関する。より詳しくは、オオムギを含有する皮膚潰瘍治療剤、皮膚創傷治癒剤、口腔用歯周組織再生剤、歯周病予防改善剤、及びこれらを含有する食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ、ｂａｓｉｃ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ）は、ＦＧＦ−２とも呼ばれ、成長因子ファミリーの一つで、多種の作用を持つたんぱく質であり、血管形成、傷治癒，胎児の発育等に関係する成長因子であることが知られている（特許文献１）。加えて、血管内皮細胞の増殖作用、線維芽細胞の増殖作用、創傷治癒、創傷治癒時の肉芽組織を作る作用等が知られている。さらに、中枢神経系の発達に重要な役割を果たし、脳（海馬）内の神経形成、シナプスの柔軟性、記憶、学習プロセス等に関係していると考えられている。
【０００３】
ｂＦＧＦは発生、器官形成、生体の恒常性維持等、非常に幅広い生理活性を有するため、各分野において、ｂＦＧＦに着目した疾患の治療方法が提案されている。例えば、皮膚分野において、創傷治癒を目的とした皮膚再生や皮膚潰瘍の治療に、ｂＦＧＦを有効成分として配合した治療剤が発売されている（科研製薬株式会社：フィブラストスプレー）。また、骨疾患治療剤としての利用も提案されている（特許文献２）。
【０００４】
また、口腔分野においては、歯周病患者に対して、手術時にｂＦＧＦを歯肉に直接投与する臨床治験が試みられ、歯周組織再生誘導薬として、その効果性が明らかになりつつある（非特許文献１）。
【０００５】
以上のことから、ｂＦＧＦは、皮膚や歯肉の再生、あるいは皮膚創傷や皮膚潰瘍の治療に重要である。これまでに、ｂＦＧＦを有効成分とする皮膚化粧料（特許文献３）、骨疾患治療剤（特許文献２）等、ｂＦＧＦを有効成分として配合した化粧料や治療剤が提案されている。しかし、ｂＦＧＦ自体が非常に高額であることから、日常的に、安価に使用できないのが現状である。そこで、化粧料や治療剤に直接ｂＦＧＦを配合するのではなく、本発明で示す様に、治療部位に存在する細胞に働きかけて、細胞のｂＦＧＦ産生能を促進させることで効果を発揮する成分が求められていた。細胞のｂＦＧＦ産生を促進する成分を含有することで、安価な医薬品、化粧料、医薬部外品、食品を提供することが可能となる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１２−１５８５７３号公報
【特許文献２】特開平０５−１２４９７５号公報
【特許文献３】特開平０５−０４３４４２号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】村上,日歯周誌,５４,３８−４５,２０１２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、オオムギを含有するｂＦＧＦ産生促進剤、より詳しくは、オオムギを含有する皮膚潰瘍治療剤、皮膚創傷治癒剤、口腔用歯周組織再生剤、歯周病予防改善剤、及びこれらを含有する食品組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、鋭意研究した結果、イネ科オオムギ属に属するオオムギにｂＦＧＦ産生促進作用があることを見出した。ｂＦＧＦの産生を促進することで、皮膚潰瘍治療剤、皮膚創傷治癒剤、口腔用歯周組織再生剤、歯周病予防改善剤、及びこれらを含有する食品組成物として利用できることから本発明を完成するに至った。
【００１０】
本発明に用いるオオムギ（Ｈｏｒｄｅｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ  Ｌ．）は、イネ科オオムギ属に属し、主に北半球と南米の温帯及び南アフリカに広く分布する一年草あるいは多年草のイネ科の植物である。オオムギは、穂の形状の違いから、二条オオムギ、四条オオムギ、六条オオムギ、裸オオムギ、野生オオムギ等に分類されるが、いずれも本発明に用いることができる。また、例えば頴や頴果が紫色、黒色、白色（有色ではない）等のオオムギを用いることもできる。場合によっては、茎や葉も有色であるオオムギも本発明に用いることができる。使用するオオムギの部位は、特に限定されないが、例えば、植物体全体、器官（花、葉、茎、根、樹皮、果実、果皮、種子もしくは発芽種子又はこれらの混合物等）等が挙げられ、特に茎、葉及び種子を使用することが好ましい。
【００１１】
本発明は、オオムギの植物体そのもの、あるいはオオムギの部位や器官をそのまま用いても良く、乾燥、粉砕、細切等の処理を行ったものでも良い。また、溶媒での抽出物を用いても良い。抽出には、オオムギの植物体そのもの、あるいはオオムギの部位や器官をそのまま用いても良く、乾燥、粉砕、細切等の処理を行ってから抽出を行っても良い。抽出する溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール類（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。これらの溶媒は、１種又は２種以上を混合して用いても良い。好ましくは、水、低級アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、水である。
【００１２】
上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈、濾過、活性炭等による脱色、脱臭、エタノール沈殿等の処理をして用いても良い。さらには、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。
【００１３】
上記抽出物の含有量は、外用剤の場合、特に限定されないが、０．００００１〜１０重量％、より好ましくは０．０００１〜１重量％、特に好ましくは０．０００１〜０．１重量％である。口腔用歯周組織再生剤、歯周病予防改善剤、食品組成物など口腔用を含む内服剤の場合は、形態、使用目的、年齢、体重等によって異なるが、抽出物の１日当りの使用量として、０．１〜１０００μｇが好ましい。上記範囲より少ない量で十分な場合もあるし、また、範囲を超えて含有する必要がある場合もある。
【００１４】
本発明は、医薬品、医薬部外品、化粧品、食品に用いることができる。製剤形態は種々のものを選択でき、例えば、化粧水、クリーム、乳液、ローション、ヘアクリーム、ヘアコンディショナー、ヘアジェル、ヘアミスト、ヘアフォーム、シャンプー、リンス、浴用剤、ファンデーション、パック、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、坐剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤等を含む）等が挙げられる。また、口腔用としては、例えば、練歯磨き、洗口液、トローチ等が挙げられる。さらに、飲料、タブレット、飴、ガム等の食品の形態を採用することもできる。
【００１５】
本発明には、上記抽出物をそのまま使用しても良く、抽出物の効果を損なわない範囲内において、医薬品、医薬部外品、化粧品、食品に用いられる他の成分を含有することもできる。他の成分としては、固体、液体、半固体でも良く、例えば、研磨剤、発泡剤、湿潤剤、保湿剤、結合剤、他の薬効成分等を含有することができる。さらに、ビタミン、ミネラル、アミノ酸等の他に、乳糖、デンプン、セルロース、マルチトール、デキストリン等の賦形剤、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル等の界面活性剤、ゼラチン、プルラン、シェラック、ツェイン等の被膜剤、小麦胚芽油、米胚芽油、サフラワー油等の油脂類、ミツロウ、米糠ロウ、カルナウバロウ等のワックス類、ショ糖、ブドウ糖、果糖、ステビア、サッカリン、スクラロース等の甘味料、並びにクエン酸、リンゴ酸、グルコン酸等の酸味料等を適宜含有することができる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明は、オオムギがｂＦＧＦ産生促進作用を発揮することで、皮膚潰瘍治療作用、皮膚創傷治癒作用、口腔用歯周組織再生作用及び歯周病予防改善作用を有する。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明を詳細に説明するため実施例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す含有量の％は重量％を示す。
【００１８】
以下に、オオムギを用いた溶媒抽出物の製造例を示す。
【実施例１】
【００１９】
製造例１  オオムギの熱水抽出物
オオムギの種子の破砕物２５ｇに精製水５００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した。ろ液を減圧下で濃縮し、凍結乾燥することでオオムギの熱水抽出物２．１ｇを得た。
【００２０】
製造例２  オオムギの５０％エタノール抽出物
オオムギの種子の破砕物２５ｇに５０（ｖ／ｖ）％エタノール５００ｍＬを加え、常温で５日間抽出した。ろ液を減圧下で濃縮乾固してオオムギの５０％エタノール抽出物を０．９ｇ得た。
【００２１】
製造例３  オオムギのエタノール抽出物
オオムギの種子の破砕物１００ｇにエタノール１Ｌを加え、常温で７日間抽出した。ろ液を減圧下で濃縮乾固して、オオムギのエタノール抽出物を３．１ｇ得た。
【実施例２】
【００２２】
処方例１  化粧水
処方                                                            含有量(％)
１．オオムギの熱水抽出物（製造例１）                              ０．００１
２．１，３−ブチレングリコール                                    ８．０
３．グリセリン                                                    ２．０
４．キサンタンガム                                                ０．０２
５．クエン酸                                                      ０．０１
６．クエン酸ナトリウム                                            ０．１
７．エタノール                                                    ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）                ０．１
１０．香料                                                          適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００２３】
処方例２  クリーム
処方                                                            含有量(％)
１．オオムギの５０％エタノール抽出物（製造例２）                  ０．０１
２．スクワラン                                                    ５．５
３．オリーブ油                                                    ３．０
４．ステアリン酸                                                  ２．０
５．ミツロウ                                                      ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル                                  ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）              ３．０
８．ベヘニルアルコール                                            １．５
９．モノステアリン酸グリセリン                                    ２．５
１０．香料                                                          ０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２５
１２．１，３−ブチレングリコール                                    ８．５
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２４】
処方例３  乳液
処方                                                            含有量(％)
１．オオムギのエタノール抽出物（製造例３）                        ０．０００１
２．スクワラン                                                    ５．０
３．オリーブ油                                                    ５．０
４．ホホバ油                                                      ５．０
５．セタノール                                                    １．５
６．モノステアリン酸グリセリン                                    ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）              ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．）    ２．０
９．香料                                                          ０．１
１０．プロピレングリコール                                          １．０
１１．グリセリン                                                    ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２５】
処方例４  パック
処方                                                            含有量(％)
１．オオムギのエタノール抽出物（製造例３）                        ０．０００１
２．ポリビニルアルコール                                        １２．０
３．エタノール                                                    ５．０
４．１，３−ブチレングリコール                                    ８．０
５．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２
６．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）                ０．５
７．クエン酸                                                      ０．１
８．クエン酸ナトリウム                                            ０．３
９．香料                                                            適量
１０．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１０を均一に溶解し製品とする。
【００２６】
処方例５  ファンデーション
処方                                                            含有量（％）
１．オオムギの熱水抽出物（製造例１）                              ０．０１
２．ステアリン酸                                                  ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）  １．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）              ２．０
５．セタノール                                                    １．０
６．液状ラノリン                                                  ２．０
７．流動パラフィン                                                ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル                                      ６．５
９．カルボキシメチルセルロースナトリウム                          ０．１
１０．ベントナイト                                                  ０．５
１１．プロピレングリコール                                          ４．０
１２．トリエタノールアミン                                          １．１
１３．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２
１４．二酸化チタン                                                  ８．０
１５．タルク                                                        ４．０
１６．ベンガラ                                                      １．０
１７．黄酸化鉄                                                      ２．０
１８．香料                                                          適量
１９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１０〜１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４〜１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この油相に水相をかき混ぜながら加え、乳化する。その後冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００２７】
処方例６  浴用剤
処方                                                            含有量(％)
１．オオムギの５０％エタノール抽出物（製造例２）                  ０．1
２．炭酸水素ナトリウム                                          ５０．０
３．黄色２０２号（１）                                            適量
４．香料                                                          適量
５．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５を均一に混合し製品とする。
【００２８】
処方例７  練歯磨き１
処方                                                            含有量（％）
１．リン酸水素カルシウム                                        ４２．０
２．ラウリル硫酸ナトリウム                                        １．２
３．オオムギの熱水抽出物（製造例１）                              ０．０００１
４．グリセリン                                                  １８．０
５．カラギーナン                                                  ０．９
６．サッカリンナトリウム                                          １．０
７．グルコン酸クロルヘキシジン                                    ０．１
８．香料                                                          ０．１
９．パラオキシ安息香酸エチル                                      ０．１
１０．水にて全量を１００とする
［製造方法］成分３〜１０をよく混合した後、成分１〜２を加えて練和し、脱泡後チューブに充填して練歯磨きを得た。１回に１ｇ、１日３回使用する。
【００２９】
処方例８  練歯磨き２
処方                                                            含有量（％）
１．炭酸カルシウム                                            ４２．０
２．ラウリル硫酸ナトリウム                                      １．２
３．オオムギの熱水抽出物（製造例１）                            ０．００００１
４．グリセリン                                                １８．０
５．カラギーナン                                                ０．９
６．サッカリンナトリウム                                        １．０
７．香料                                                        ０．１
８．パラオキシ安息香酸エチル                                    ０．１
９．水にて全量を１００とする
［製造方法］成分３〜９をよく混合した後、成分１〜２を加えて練和し、脱泡後チューブに充填して練歯磨きを得た。１回に１ｇ、１日３回使用する。
【００３０】
処方例９  洗口液
処方                                                            含有量（％）
１．エタノール                                                  ２０．０
２．グリセリン                                                  １０．０
３．オオムギの５０％エタノール抽出物（製造例２）                  ０．００１
４．サッカリンナトリウム                                          ０．１
５．香料                                                          ０．１
６．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）                １．５
７．パラオキシ安息香酸エチル                                      ０．１
８．水にて全量を１００とする
［製造方法］成分８に成分２〜７を溶解した後、成分１を加えて洗口液を得た。１回に１０ｍＬ、１日３回使用する。
【００３１】
処方例１０  粒チューインガム
処方                                                              含有量（％）
１．オオムギの熱水抽出物（製造例１）                                ０．００１
２．ガムベース                                  全量が１００となる様に加える
３．キシリトール                                                  １０．０
４．スクラロース                                                    ０．０１
５．アスパルテーム                                                  ０．０１
６．香料                                                            １．０
［製造方法］成分１〜６を混合し、混練し、成形してチューインガムを得た。１粒２．２ｇ、１日９粒摂取する。
【実施例３】
【００３２】
以下に、実施例１で示した製造例１〜３のオオムギの抽出物を用いた、ｂＦＧＦ産生促進効果の実験例とその結果を示す。
【００３３】
実験例１  皮膚線維芽細胞におけるｂＦＧＦ産生促進効果
２４ｗｅｌｌプレートに、ヒト皮膚線維芽細胞（Ｒｉｋｅｎ  ＲＢＣ  ＣＥＬＬ  ＢＡＮＫより購入）を播種し、製造例１〜３のオオムギ抽出物を最終濃度が１００μｇ／ｍＬとなるように添加し、培養を行った。培養後、培養上清を回収し、培養上清中のｂＦＧＦ濃度をＨｕｍａｎ  ｂＦＧＦ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ社製）を用いて測定することにより、皮膚線維芽細胞におけるｂＦＧＦ産生促進効果を評価した。陽性対象として、一般的に線維芽細胞の増殖促進因子として使用されるＴＧＦβ１  １０ｎｇ／ｍＬ（Ｐｅｐｒｏ  Ｔｅｃｈ社製）を用い、比較対象とした。
【００３４】
試験結果を表１に示した。その結果、全ての抽出物に皮膚線維芽細胞に対する、顕著なｂＦＧＦ産生促進効果が認められた。また、いずれの抽出物においても、陽性対象のＴＧＦβ１よりも高い効果を示した。
【００３５】
【表１】
0006646534.tif 000002
【００３６】
実験例２  歯肉線維芽細胞におけるｂＦＧＦ産生促進効果
２４ｗｅｌｌプレートに、ヒト歯肉線維芽細胞（ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ社製）を播種し、製造例１〜３のオオムギ抽出物を最終濃度が１００μｇ／ｍＬとなるように添加し、培養を行った。培養後、培養上清を回収し、培養上清中のｂＦＧＦ濃度をＨｕｍａｎ  ｂＦＧＦ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ社製）を用いて測定することにより、歯肉線維芽細胞におけるｂＦＧＦ産生促進効果を評価した。陽性対象として、一般的に線維芽細胞の増殖促進因子として使用されるＴＧＦβ１  １０ｎｇ／ｍＬ（Ｐｅｐｒｏ  Ｔｅｃｈ社製）を用い、比較対象とした。
【００３７】
試験結果を表２に示した。その結果、全ての抽出物に歯肉線維芽細胞に対する、顕著なｂＦＧＦ産生促進効果が認められた。また、いずれの抽出物においても、陽性対象のＴＧＦβ１よりも高い効果を示した。
【００３８】
【表２】
0006646534.tif 000003
【００３９】
オオムギの抽出物は、皮膚線維芽細胞及び歯肉線維芽細胞におけるｂＦＧＦの産生を促進することが明らかとなった。以上の作用を有することで、皮膚潰瘍治療剤、皮膚創傷治癒剤、口腔用歯周組織再生剤、歯周病予防改善剤、及びこれらを含有する食品組成物に利用することができる。また、皮膚分野と口腔分野への適用の他にも、ｂＦＧＦの産生促進が寄与する各種医療分野においても、オオムギの有用性は当然期待できる。
【産業上の利用可能性】
【００４０】
本発明は、ｂＦＧＦ産生促進効果を有することから、皮膚潰瘍治療、皮膚創傷治癒、歯周組織再生、歯周病予防改善を目的とした医薬品、医薬部外品、化粧品、食品に利用できる。また、これらの産業分野において、安価な製剤を提供することが可能となる。