(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
シトラールと、ペリルアルデヒドとを有効成分として含有する抗微生物活性組成物であって、該組成物は、ペリルアルデヒドを１．２５〜２５ｍｇ／ｍＬ含有し、かつ、シトラールを０．６２５〜２５ｍｇ／ｍＬ含有し、
該微生物が、枯草菌、白癬菌、又はカンジダ菌である、抗微生物活性組成物。
【請求項２】
揮発用製剤である、請求項１に記載の抗微生物活性組成物。
【請求項３】
空気中の微生物に対して抗微生物活性を有する、請求項１又は請求項２に記載の抗微生物活性組成物。
【請求項４】
スプレー用液状製剤である、請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の抗微生物活性組成物。
【請求項５】
消臭用である、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の抗微生物活性組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、テルペンアルデヒドを含有する抗微生物活性組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
日常生活で使用する靴の内部は、細菌・真菌で汚染されているにもかかわらず、適切な殺菌方法が少ないという問題があった。特に、蒸れた靴の悪臭については、季節を問わず気にしている人が多い。また、足白癬患者の靴中の白癬菌は長期間成育するため、足を治療してもピンポン感染で再感染してしまう等の問題が指摘されている。また、様々な感染症対策として、学校・職場等の閉鎖空間等における空気中に浮遊するウイルスや細菌・真菌を除菌・殺菌することが有効であることが示されている。このような目的で主に人工的に合成された抗微生物活性物質が用いられてきたが、人工的に合成された物質は、抗微生物活性以外の副作用、環境汚染、及び耐性菌の発生等の問題もあり、自然由来の抗微生物活性を有する製剤が求められている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
よって、本発明は、優れた抗微生物活性を有する自然由来の物質からなる製剤を提供することを目的とする。特に、本発明は、併用することにより強力な抗微生物活性を発揮する自然由来成分の組み合わせからなる組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは鋭意検討した結果、非環式テルペンアルデヒドである第一のアルデヒドと、当該第一のアルデヒドとは異なるアルデヒドを併用することにより、優れた抗微生物効果を発揮することを見出した。特に、本発明者らは、シトラールと非環式脂肪族アルデヒド、テルペンアルデヒド及び芳香族アルデヒドから選択されるアルデヒドを組み合わせることにより、相乗的な抗微生物活性を示すことを見出した。また、本発明者らは、これらの併用剤組成物が、揮発により直接接触していない空間又は表面に対して抗微生物効果を発揮可能であることを見出し、本発明を完成させた。
【０００５】
具体的には、本発明は以下の発明に関する：
（１）  非環式テルペンアルデヒドである第一のアルデヒドと、前記テルペンアルデヒドとは異なるアルデヒドであって、非環式脂肪族アルデヒド、テルペンアルデヒド及び芳香族アルデヒドから選択される第二のアルデヒドとを有効成分として含有する抗微生物活性組成物。
（２）  前記第一のアルデヒド及び第二のアルデヒドが植物精油由来成分である、（１）に記載の抗微生物活性組成物。
（３）  前記第一のアルデヒドがシトラールである、（１）に記載の抗微生物活性組成物。
（４）  前記第二のアルデヒドが、直鎖又は分岐状のＣ６−１２アルカナールである、（１）〜（３）のいずれか１項に記載の抗微生物活性組成物。
（５）  前記第二のアルデヒドが、直鎖又は分岐状のＣ８−１０アルカナールである、（４）に記載の抗微生物活性組成物。
（６）  前記第二のアルデヒドが、オクタナール、ノナナール、デカナール、又はトリメチルヘキサナールである、（５）に記載の抗微生物活性組成物。
（７）  前記第二のアルデヒドが、直鎖、分岐又は環状のＣ８−１２テルペンアルデヒドである、（１）〜（３）のいずれか１項に記載の抗微生物活性組成物。
（８）  前記第二のアルデヒドが、直鎖、分岐又は環状のＣ１０テルペンアルデヒドである、（１）〜（３）のいずれか１項に記載の抗微生物活性組成物。
（９）  前記第二のアルデヒドが、水酸基で置換されていても良いシトロネラール又はペリルアルデヒドである、（８）に記載の抗微生物活性組成物。
（１０）  前記第二のアルデヒドが、１〜２個の置換基で置換されていても良いベンズアルデヒド、又は１〜２個の置換基で置換されていても良いシンナムアルデヒドであって、ここで、前記置換基は、水酸基、Ｃ１−４アルキル基、及びＣ１−４アルコキシ基からなる群から選択される基である、（１）〜（３）のいずれか１項に記載の抗微生物活性組成物。
（１１）  前記第二のアルデヒドが、１〜２個の置換基で置換されていても良いベンズアルデヒド、又はシンナムアルデヒドであって、ここで、前記置換基は、水酸基、プロピル基、及びメトキシ基からなる群から選択される基である、（１０）に記載の抗微生物活性組成物。
（１２）  揮発用製剤である、（１）〜（１１）のいずれか１項に記載の抗微生物活性組成物。
（１３）  空気中の微生物に対して抗微生物活性を有する、（１２）に記載の抗微生物活性組成物。
（１４）  スプレー用液状製剤である、（１）〜（１１）のいずれか１項に記載の抗微生物活性組成物。
（１５）  消臭用である、（１）〜（１４）のいずれか１項に記載の抗微生物活性組成物。
（１６）  微生物がウイルス、細菌又は真菌である、（１）〜（１５）のいずれか１項に記載の抗微生物活性組成物。
（１７）  微生物が、枯草菌、白癬菌、又はカンジダ菌である、（１６）に記載の抗微生物活性組成物。
【０００６】
本明細書において「テルペンアルデヒド」は、テルペン系アルデヒドとも呼ばれ、イソプレン構造を含むアルデヒドのことであり、非環式テルペンアルデヒドと環式テルペンアルデヒドを含む。本明細書において、「非環式テルペンアルデヒド」とは、環状構造を含まないテルペンアルデヒドであり、シトラール（ゲラニアール、ネラール）、シトロネラール、ヒドロキシシトロネラール等を挙げることができる。明細書において、「環式テルペンアルデヒド」とは、環状構造を含むテルペンアルデヒドであり、ペリルアルデヒドを挙げることができる。
【０００７】
本明細書において、「非環式脂肪族アルデヒド」とは、ホルミル基（ＣＨＯ）で置換された、環状構造を持たない直鎖又は分岐状のアルキル基を意味する。非環式脂肪族アルデヒドとしては、例えば、Ｃ１−２０アルカナール、Ｃ６−１２アルカナール、Ｃ８−１０アルカナールなどを挙げることができ、メタナール 、エタナール、プロパナール、イソプロパナール、ブタナール、イソブタナール、ｔｅｒｔ−ブタナール、ペンタナール、２−メチルブタナール、３−メチルブタナール、２，２−ジメチルプロパナール、ヘキサナール、２−メチルペンタナール、３−メチルペンタナール、４−メチルペンタナール、２，２−ジメチルブタナール、２，３−ジメチルブタナール、３，３−ジメチルブタナール、２−エチルブタナール、３−エチルブタナール、ヘプタナール、２−メチルヘキサナール、３−メチルヘキサナール、４−メチルヘキサナール、５−メチルヘキサナール、２，２−ジメチルペンタナール、２，３−ジメチルペンタナール、２，４−ジメチルペンタナール、３，３−ジメチルペンタナール、３，４−ジメチルペンタナール、４，４−ジメチルペンタナール、２−エチルペンタナール、３−エチルペンタナール、２−プロピルペンタナール、２，２，３−トリメチルブタナール、２，３，３−トリメチルブタナール、２−メチル２−エチルブタナール、２−エチル３−メチルブタナール、オクタナール、２−メチルヘプタナール、３−メチルヘプタナール、４−メチルヘプタナール、５−メチルヘプタナール、６−メチルヘプタナール、２，２−ジメチルヘキサナール、２，３−ジメチルヘキサナール、２，４−ジメチルヘキサナール、２，５−ジメチルヘキサナール、３，３−ジメチルヘキサナール、３，４−ジメチルヘキサナール、３，５−ジメチルヘキサナール、４，４−ジメチルヘキサナール、４，５−ジメチルヘキサナール、５，５−ジメチルヘキサナール、２−エチルヘキサナール、３−エチルヘキサナール、４−エチルヘキサナール、２，２，３−トリメチルペンタナール、２，２，４−トリメチルペンタナール、２，３，３−トリメチルペンタナール、２，３，４−トリメチルペンタナール、２，４，４−トリメチルペンタナール、３，３，４−トリメチルペンタナール、３，４，４−トリメチルペンタナール、２−メチル２−エチルペンタナール、２−メチル３−エチルペンタナール、２−エチル３−メチルペンタナール、３−エチル３−メチルペンタナール、２−エチル４−メチルペンタナール、３−エチル４−メチルペンタナール、２−プロピルペンタナール、２，２，３，３−テトラメチルブタナール、２，２，３，４−テトラメチルブタナール、２，２，４，４−テトラメチルブタナール、２，３，３，４−テトラメチルブタナール、２，３，４，４−テトラメチルブタナール、３，３，４，４−テトラメチルブタナール、２，２−ジエチルブタナール、ノナナール、２−メチルオクタナール、３−メチルオクタナール、４−メチルオクタナール、５−メチルオクタナール、６−メチルオクタナール、７−メチルオクタナール、２，２−ジメチルヘプタナール、２，３−ジメチルヘプタナール、２，４−ジメチルヘプタナール、２，５−ジメチルヘプタナール、２，６−ジメチルヘ��タナール、３，３−ジメチルヘプタナール、３，４−ジメチルヘプタナール、３，５−ジメチルヘプタナール、３，６−ジメチルヘプタナール、４，４−ジメチルヘプタナール、４，５−ジメチルヘプタナール、４，６−ジメチルヘプタナール、５，５−ジメチルヘプタナール、５，６−ジメチルヘプタナール、６，６−ジメチルヘプタナール、２−エチルヘプタナール、３−エチルヘプタナール、４−エチルヘプタナール、５−エチルヘプタナール、２，２，３−トリメチルヘキサナール、２，２，４−トリメチルヘキサナール、２，２，５−トリメチルヘキサナール、２，３，３−トリメチルヘキサナール、２，３，４−トリメチルヘキサナール、２，３，５−トリメチルヘキサナール、２，４，４−トリメチルヘキサナール、２，４，５−トリメチルヘキサナール、２，５，５−トリメチルヘキサナール、３，３，４−トリメチルヘキサナール、３，３，５−トリメチルヘキサナール、３，４，４−トリメチルヘキサナール、３，４，５トリメチルヘキサナール、３，５，５−トリメチルヘキサナール、２−メチル２−エチルヘキサナール、２−メチル３−エチルヘキサナール、２−メチル４−エチルヘキサナール、２−エチル３−メチルヘキサナール、３−メチル３−エチルヘキサナール、３−メチル４−エチルヘキサナール、２−エチル４−メチルヘキサナール、３−エチル４−メチルヘキサナール、４−エチル４−メチルヘキサナール、２−プロピルヘキサナール、３−プロピルヘキサナール、２，２，３，３−テトラメチルペンタナール、２，２，３，４−テトラメチルペンタナール、２，２，３，５−テトラメチルペンタナール、２，２，４，４−テトラメチルペンタナール、２，２，４，５−テトラメチルペンタナール、２，３，３，４−テトラメチルペンタナール、２，３，３，５−テトラメチルペンタナール、２，３，４，４−テトラメチルペンタナール、２，３，４，５テトラメチルペンタナール、２，３，５，５−テトラメチルペンタナール、３，３，４，４−テトラメチルペンタナール、３，３，４，５−テトラメチルペンタナール、３，３，５，５−テトラメチルペンタナール、３，４，４，５−テトラメチルペンタナール、３，４，５，５−テトラメチルペンタナール、４，４，５，５−テトラメチルペンタナール、２，２−ジエチルペンタナール、２，３−ジエチルペンタナール、３，３−ジエチルペンタナール、２−メチル２−プロピルペンタナール、３−メチル２−プロピルペンタナール、４−メチル２−プロピルペンタナール、デカナール、ウンデカナール、ドデカナール、トリデカナール、テトラデカナール、ペンタデカナール、ヘキサデカナール、ヘプタデカナール、オクタデカナール、ノナデカナール、及びイコサナールを含む。非環式脂肪族アルデヒドとして、好ましくは天然に存在するアルデヒドであり、より好ましくは、オクタナール、ノナナール、デカナール、及びトリメチルヘキサナールである。
【０００８】
本明細書において、「芳香族アルデヒド」とは、芳香族炭化水素環がアルデヒド基（ホルミル基を含む）で置換された物質を意味する。芳香族炭化水素環としては、ベンゼン、ナフタレン、アズレン、アントラセン、クリセン、ピレン、コロネン、ケクレンを挙げることができ、好ましくはベンゼンである。芳香族炭化水素環が置換基として有するアルデヒド基としては、ホルミル基、Ｃ１−６アルカナール基、Ｃ２−６アルケナール基、及びＣ２−６アルキナール基を挙げることができ、好ましくは、ホルミル基、Ｃ１−４アルカナール基、Ｃ２−４アルケナール基、及びＣ２−４アルキナール基であり、より好ましくは、ホルミル基又はプロペナール基である。芳香族炭化水素環は、１〜２個のアルデヒド基以外の置換基で置換されていてもよく、そのような置換基としては、水酸基、直鎖又は分岐状のＣ１−６アルキル基、直鎖又は分岐状のＣ１−６アルコキシ基を挙げることができ、好ましくは、水酸基、イソプロピル基、又はメトキシ基である。芳香族アルデヒドとしては、好ましくは、天然に存在するアルデヒドである。芳香族アルデヒドとしては、例えば、１〜２個の置換基で置換されていても良いベンズアルデヒド、又は１〜２個の置換基で置換されていても良いシンナムアルデヒドであってもよく、好ましくは、ベンズアルデヒド、シンナムアルデヒド、クミンアルデヒド、及びバニリンである。
【０００９】
本明細書において、「抗微生物活性組成物」は、微生物の増殖を抑制させるために使用される組成物であれば特に限定されるものではないが、ヒトの体内に摂取することを目的とするものではなく、好ましくは、生体の皮膚の表面（例えば、足、手など）、靴・靴下や衣類等の生体の皮膚と直接接触する物、あるいは、室内や車内などの空間（特には、閉鎖された空間）における微生物の増殖を抑制させるために使用される組成物である。よって、本発明の抗微生物活性組成物は、当該組成物を塗布した表面に存在する微生物に対する抗微生物活性を有する組成物のほか、当該組成物が存在する空間の空気中の微生物に対しても抗微生物活性を有する組成物を含有する。よって、本発明の抗微生物活性組成物は、消臭剤、又は抗菌剤とすることができる。
【００１０】
一例として、本発明の抗微生物活性組成物は、前記第一のアルデヒド及び前記第二のアルデヒドを、それぞれ１〜１０ｍｇ／ｍｌ（好ましくは、１〜３ｍｇ／ｍｌ）含有することができる。あるいは、本発明の抗微生物活性組成物は、前記第一のアルデヒド及び前記第二のアルデヒドを、それぞれ１〜１５％（ｗ／ｖ）（好ましくは、２〜６％（ｗ／ｖ））含有することができる。
【００１１】
本発明の抗微生物活性組成物の剤形は、本発明の目的に使用される形態であれば特に限定されるものではないが、例えば、揮発用製剤又は塗布用製剤とすることができ、具体的には、液体、スプレー、ゲル、ゲル生成用キット、ポリマー又は多孔質素材に含浸させた形態を挙げることができる。
【００１２】
本明細書において、「抗微生物活性」とは、微生物の増殖を抑制することを意味し、必ずしも微生物を殺傷することを必要とするものではない。「微生物」とは、ウイルス、細菌及び真菌を意味し、バシラス属、スタフィロコッカス属、トリコフィトン属、ミクロスポルム属、エピデルモフィトン属の細菌及び、あるいは、カンジダ属の真菌を含む。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の非環式テルペンアルデヒドである第一のアルデヒドと、前記テルペンアルデヒドとは異なるアルデヒドであって、非環式脂肪族アルデヒド、テルペンアルデヒド及び芳香族アルデヒドから選択される第二のアルデヒドとを有効成分として含有する抗微生物活性組成物は、単剤で使用する場合と比較して抗微生物活性に優れることから、抗菌剤又は消臭剤として使用することができる。また、本発明の天然性由来のアルデヒドを含有する抗微生物活性組成物は、活性物質が天然由来成分であることから、より環境への負担の少ない抗菌剤又は消臭剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】（Ａ）Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ（枯草菌）に対するシトラールとペリルアルデヒド併用による抗菌効果試験の手順を示した図及び写真である。（Ｂ）シトラールとペリルアルデヒド併用によるＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ（枯草菌）に対する抗菌効果の結果を、スコア０となるそれぞれの濃度についてプロットしたグラフである。縦軸はペリルアルデヒド濃度（ｍｇ／ｍｌ）を示し、横軸はシトラール濃度（ｍｇ／ｍｌ）を示す。星印は、ＦＩＣ  ｉｎｄｅｘ＝０．５（相乗効果）となる点を示す。（Ｃ）シトラールとペリルアルデヒド併用によるＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ（枯草菌）に対する抗菌試験の結果、形成されたコロニーの写真である。
【図２】（Ａ）白癬菌（Ａｒｔｈｒｏｄｅｒｍａ  ｖａｎｂｒｅｕｓｅｇｈｅｍｉｉ  ＴＩＭＭ２７８９）に対するペリルアルデヒドとシトラールの併用効果試験の手順を示した図及び写真である。（Ｂ）ペリルアルデヒドとシトラール併用による白癬菌（Ａｒｔｈｒｏｄｅｒｍａ  ｖａｎｂｒｅｕｓｅｇｈｅｍｉｉ  ＴＩＭＭ２７８９）に対する抗菌効果の結果を、スコア０となるそれぞれの濃度についてプロットしたグラフである。縦軸はペリルアルデヒド濃度（ｍｇ／ｍｌ）を示し、横軸はシトラール濃度（ｍｇ／ｍｌ）を示す。星印は、ＦＩＣ  ｉｎｄｅｘ＝０．３７５（相乗効果）となる点を示す。
【図３】（Ａ）Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ（枯草菌）の発育に対するペリルアルデヒドとシトラールの併用効果試験において、寒天培地表面に配置した厚手濾紙上に滴下した被検物質の濃度と位置を表す図である。（Ｂ）Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ（枯草菌）の発育に対するペリルアルデヒドとシトラールの併用効果試験の結果得られたシャーレの写真である。左が対照試験（ペリルアルデヒド単独）の結果を表し、右がペリルアルデヒドとシトラールとの併用試験の結果を示す。上段の図はそれぞれのシャーレにおいて滴下された被検物質の濃度と位置を表す。
【図４】（Ａ）Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ（ＴＩＭＭ１７６８）の発育に対する各種アルデヒドとシトラールの併用効果試験において、寒天培地表面に配置した厚手濾紙上に滴下した被検物質の濃度と位置を表す図である。（Ｂ）Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ（ＴＩＭＭ１７６８）の発育に対する各種アルデヒドとシトラールの併用効果試験の結果得られたシャーレの写真である。左が対照試験（バニリン単独）の結果を表し、右がバニリンとシトラールとの併用試験の結果を示す。上段の図はそれぞれのシャーレにおいて滴下された被検物質の濃度と位置を表す。
【図５】（Ａ）Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ  ＴＩＭＭ１７６８に対するペリルアルデヒドとシトラールの併用効果試験中のシャーレの切断面を表す図である。図中にペーパーディスク、シャーレ、培地、ビニールテープの位置関係を示す。矢印は、ペーパーディスクからのアルデヒドの拡散を示す。（Ｂ）Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ  ＴＩＭＭ１７６８に対するペリルアルデヒドとシトラールの併用効果の結果得られたシャーレの写真である。白い部分がＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ  ＴＩＭＭ１７６８が増殖した部分を示し、中央の黒くなっている部分は増殖が抑制されていることを示す。
【図６】図５で得られた阻止円の面積を計測し、面積が３ｃｍ２となる点（黒丸）と５ｃｍ２となる点（黒四角）をプロットした結果を示すグラフである。ＦＩＣ  ｉｎｄｅｘが０．５８３、０．６５、又は０．７となる点を矢印で示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の抗微生物活性組成物は、非環式テルペンアルデヒドである第一のアルデヒドと、前記テルペンアルデヒドとは異なるアルデヒドであって、非環式脂肪族アルデヒド、テルペンアルデヒド及び芳香族アルデヒドから選択される第二のアルデヒドとを混合することにより得ることができる。
【００１６】
また、本発明の抗微生物活性組成物は、キットの形態で、外箱、容器、希釈剤、ゲル化剤、及び／又は調製方法・投与方法に関する説明書と共に含めることができる。本発明の抗微生物活性組成物がキットとして供給される場合、該抗微生物活性組成物のうち異なる構成成分が別々の容器中に包装され、一つのキットに含まれていてもよいし、あるいは、該抗微生物活性組成物のうち一以上の一部の構成成分（少なくとも、第一のアルデヒドと第二のアルデヒド）のみがキットに含まれ、別の構成成分がキットとは別に提供されていてもよい。また、本発明の抗微生物活性組成物がキットとして供給される場合、本発明の抗微生物活性組成物を得るため、好ましくは、必要な構成成分が使用直前に混合される。例えば、本発明のキットは、非環式テルペンアルデヒドである第一のアルデヒドと、前記テルペンアルデヒドとは異なるアルデヒドであって、非環式脂肪族アルデヒド、テルペンアルデヒド及び芳香族アルデヒドから選択される第二のアルデヒドを備える、抗微生物活性組成物を調製するためのキットとすることができる。
【００１７】
一態様において、本発明は、非環式テルペンアルデヒドである第一のアルデヒドと、前記テルペンアルデヒドとは異なるアルデヒドであって、非環式脂肪族アルデヒド、テルペンアルデヒド及び芳香族アルデヒドから選択される第二のアルデヒドとを混合することを含む、抗微生物活性組成物の調製方法であってもよい。
【００１８】
例えば、本発明は、非環式テルペンアルデヒドである第一のアルデヒドと、前記テルペンアルデヒドとは異なるアルデヒドであって、非環式脂肪族アルデヒド、テルペンアルデヒド及び芳香族アルデヒドから選択される第二のアルデヒドを備える抗微生物活性組成物を塗布又は揮発（拡散）させることによる微生物の増殖を抑制する方法に関する。好ましくは、本発明は、前記抗微生物活性組成物を、皮膚の表面（例えば、足、手など）、又は靴・靴下や衣類等の生体の皮膚と直接接触する物に塗布することを備える微生物の増殖を抑制する方法に関する。あるいは、本発明は、前記抗微生物活性組成物を、室内や車内などの空間（特には、閉鎖された空間）中に揮発拡散させることを含む、空気中の微生物の増殖を抑制する方法に関する。これらの方法において、微生物の増殖を抑制する方法は、適宜、消臭する方法と読み替えても良い。
【００１９】
本発明の抗微生物活性組成物を塗布により使用する場合、必要に応じて、一日１回〜数回目的の箇所に塗布することができる。また、本発明の抗微生物活性組成物を揮発・拡散により使用する場合、必要に応じて、数時間〜数ヶ月間空間内に静置又は必要に応じて揮発を促進させる方法で設置することができる。
【００２０】
以下に実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、これは本発明の範囲を限定するものではない。なお、本願明細書全体を通じて引用する文献は、参照によりその全体が本願明細書に組み込まれる。
【００２１】
（実施例１）  悪臭の原因細菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ（枯草菌））に対するシトラールとペリルアルデヒド併用による抗菌効果
３５ｍｍシャーレ内のＳＤＡ培地にＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ（枯草菌）を接種し、当該シャーレ２個を密閉箱（内径１５０×１００×９８；役１．４７Ｌ）中に設置した。４０％イソプロパノールで希釈した、シトラール単独溶液、ペリルアルデヒド単独溶液、又はシトラールとペリルアルデヒドの混合溶液のそれぞれ２００μｌを密閉箱のフタに添付した濾紙（直径９ｃｍ）の中央部に滴下し、すぐに蓋をして密閉した。２３〜２６℃で６時間静置後、密閉箱からシャーレを取り出し、蓋をしてパラフィルムでシャーレを密閉して、３７℃で２０時間培養した。シャーレの培地上に出現した枯草菌のコロニー数をカウントしてスコア化した（図１Ａ）。
【００２２】
チェッカーボード方式で２種類の成分のそれぞれの混合比での溶液の抗菌効果を寒天培地上のコロニー数で表示し、コロニー数の多さによって０〜２までの３段階のスコアとして表示した。スコア０となるそれぞれの濃度についてプロットしたものを図１Ｂに示す。星印の値でのＦＩＣ  ｉｎｄｅｘ＝０．５（相乗効果）が得られた。また、形成されたコロニーの写真を図１Ｃに示す。写真からもわかるとおり、ペリルアルデヒド１．２５ｍｇ／ｍｌシトラール２．５ｍｇ／ｍｌにおいては、コロニー数だけでなく、コロニーのサイズも小さくなる効果が観察された
【００２３】
（実施例２）白癬菌（Ａｒｔｈｒｏｄｅｒｍａ  ｖａｎｂｒｅｕｓｅｇｈｅｍｉｉ  ＴＩＭＭ２７８９）の発育に対するペリルアルデヒドとシトラールの併用効果（密閉箱）
３５ｍｍシャーレ中のＳＤＡ培地にＡｒｔｈｒｏｄｅｒｍａ  ｖａｎｂｒｅｕｓｅｇｈｅｍｉｉ  ＴＩＭＭ２７８９を１万分生子接種した後、実施例１と同様にシャーレ２個を密閉箱に設置した。４０％イソプロパノールで希釈したシトラール単独溶液、ペリルアルデヒド単独溶液、又はシトラールとペリルアルデヒド混合溶液のそれぞれ２００μｌを密閉箱のフタに添付した濾紙（直径９ｃｍ）の中央部に滴下し、すぐに蓋をして密閉した。２３〜２６℃で１６時間静置後、密閉箱からシャーレを取り出し、蓋をしてパラフィルムでシャーレを密閉して、３０℃で１４４時間培養した。シャーレの培地上に出現した白癬菌の菌糸の生育程度をスコア化して表示した（図２Ａ）。
【００２４】
チェッカーボード方式で２種類の成分のそれぞれの混合比での溶液の抗真菌効果を寒天培地上の白癬菌菌糸の発育程度によって０〜３までの４段階のスコアとして表示した。スコア０となるそれぞれの濃度についてプロットしたものを図２Ｂに示す。星印の値でのＦＩＣ  ｉｎｄｅｘ＝０．３７５（相乗効果）が得られた。
【００２５】
（実施例３）Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ（枯草菌）の発育に対するペリルアルデヒドを含む各種アルデヒドとシトラールの併用効果（アロマトグラム）
９０ｍｍシャーレ内の標準寒天培地表面に  Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ（枯草菌）をマクファーランド値０．５（１×１０８ＣＦＵ／ｍｌ）の１０倍希釈液１００μｌをコンラージ棒で塗布した（１０６個／シャーレ）。４０％イソプロパノールで段階希釈したペリルアルデヒドを図３Ａに示した様に寒天培地表面に配置した厚手濾紙の３箇所に５０μｌずつ滴下した。同様のシャーレを２枚作成し、１枚目のシャーレの中央には対照として４０％イソプロパノールを５０μｌ、２枚目のシャーレの中央には５０μｌのシトラール希釈液を滴下した。できるだけ素早く全ての溶液を厚手濾紙に滴下し、シャーレの蓋をして周囲をビニールテープで厳重に密閉した後、３７℃で２０時間静置培養した。培養後の寒天培地上の阻止円の直径を計測し、対照のペリルアルデヒドのみの場合とシトラールを中央に添加した場合の大きさの差を検討した。
【００２６】
シャーレの写真を図３Ｂに示す。この写真に菌の生育阻止領域に近い大きさの阻止円を重ねてその円の直径を計測した結果を表１に示す。寒天培地の中央に４０％イソプロパノールのみでなく、５％シトラールを添加した際には、周囲のペリルアルデヒドによる阻止円が急激に大きくなるという結果が得られた。同様に、シンナムアルデヒド、クミンアルデヒド、バニリン、シトロネラールとシトラールでも併用効果が検出された。
【００２７】
【表１】
0006775181.tif 000002
【００２８】
（実施例４）Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ（ＴＩＭＭ１７６８）の発育に対する各種アルデヒドとシトラールの併用効果（アロマトグラム）
９０ｍｍシャーレ内のサブロー寒天培地表面に２×１０６個のＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ  ＴＩＭＭ１７６８をコンラージ棒で塗布した。４０％イソプロパノールで段階希釈したバニリンを寒天培地表面に配置した厚手濾紙のそれぞれ図４Ａに示す３箇所に５０μｌずつ滴下した。同様のシャーレを３枚作成し、１枚目のシャーレの中央には対照として４０％イソプロパノールを５０μｌ、２枚目、３枚目のシャーレの中央には５％又は１０％のシトラール希釈液５０μｌを滴下した。操作をできるだけ素早く遂行し、全ての溶液を厚手濾紙に滴下後にシャーレの蓋をして、周囲をビニールテープで厳重に密閉した。３７℃で２０時間静置培養後、寒天培地上の阻止円の直径を計測し、対照のバニリンと４０％イソプロパノールの場合とシトラールを中央に添加した場合の大きさの差を検討した。
【００２９】
結果を図４Ｂに示す。バニリン、５％および１０％シトラールの添加により、いずれも阻止円が確認された。図４Ｂに示した写真に菌の生育阻止領域に近い大きさの阻止円を重ねてその円の直径を計測した。各種濃度のバニリンを滴下した部位における阻止円の直径を表２に示す。寒天培地の中央に４０％イソプロパノールのみを滴下した場合と比較して、５％および１０％シトラールを添加した場合には、バニリン添加による阻止円が大きくなるという結果が得られた。よって、シトラールがバニリンの作用を増強させることが示された。
【００３０】
【表２】
0006775181.tif 000003
【００３１】
バニリンの代わりにシンナムアルデヒド、又はペリルアルデヒドを用いてシトラールとの併用作用について同様の実験を行ったところ、シンナムアルデヒド及びペリルアルデヒドのいずれもシトラールとの強い併用効果が検出された。
【００３２】
（実施例５）真菌に対するペリルアルデヒドとシトラールの併用効果（揮発性成分の併用効果）
寒天気体法（アロマトグラム下降法）で、水虫の原因菌である白癬菌と同様な真菌類に属するカンジダ菌に対する気体成分による抗菌効果を検出した。材料として、シトラール（ナカライ０９１−０３    Ｍ５Ｅ４５１８）、ペリルアルデヒド（Ａｌｄｒｉｃｈ  ２１、８２９−４  １３８１２ＤＮ）を用いた。シャーレ（φ＝９０ｍｍ）中のサブロ−寒天（ＳＤＡ）培地にＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ  ＴＩＭＭ１７６８をシャーレあたり２×１０６個となるように植菌した。シャーレのフタ中央部分に厚手濾紙（φ＝８ｍｍ；ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）を両面テープで添付した。シトラールおよびペリルアルデヒド溶液を４０％イソアミルアルコールで希釈して、濃度０、２．５、５、７．５、１０、１２．５、又は１５ｗ／ｖ％のペリアルデヒドと、濃度０、２．５、５、７．５、１０、１２．５、又は１５ｗ／ｖ％のシトラールとの組み合わせとなるように混合し、各々５０μｌをシャーレフタに添付した厚手濾紙に滴下した。
【００３３】
図５Ａに示すとおり、溶液を厚手濾紙に滴下した後、素早くシャーレの蓋を閉じて、ビニールテープで密封した。３７℃で２０時間培養し、カンジダ菌の発育状態と、アルデヒドによる阻止円をデジタルカメラで撮影した。撮影した画像から、阻止円の大きさを面積計算ソフトｌｅｎａｒａｆ２２０ｂで計測し、抗真菌効果の強さとして判定した。（その際に、厚手濾紙の直径が８０ｍｍであることと、シャーレの直径が９０ｍｍである事を基準とした。）
【００３４】
図５Ｂに示すとおり、カンジダ菌は寒天培地上で酵母として発育し、培地表面に白くコロニーを形成した。シトラール、ペリルアルデヒドのそれぞれ単独でも濃度が濃くなると、溶液を添加した厚手濾紙下方に、菌の生育を阻止した「阻止円」が形成されたが、ペリルアルデヒドとシトラールを混合した溶液では、単独の場合よりも明らかに大きな阻止円が形成されていた。
【００３５】
培養シャーレの阻止円の写真を撮り、画像解析で阻止円の面積を計測した結果から、面積が３ｃｍ２となる点（グラフ中、下部の点をプロットしたライン）と５ｃｍ２となる点（グラフ中、上部の点をプロットしたライン）をプロットした結果を図６に示す。このグラフから併用効果の指標となるＦＩＣ  ｉｎｄｅｘを求めた。その結果、０．５８３、０．６５、０．７の値が得られ、相乗的な効果が得られていることが明らかとなった。
【００３６】
また、ペリルアルデヒドの代わりにクミンアルデヒドを用いて同様の実験を行った結果、クミンアルデヒドとシトラールの併用についても併用効果が確認された（結果は非図示）。
【００３７】
（実施例６）液体中での真菌に対する各種アルデヒドとシトラールの併用抗菌効果
実施例１〜５において確認された精油成分の揮発性による併用抗菌効果について、更にスプレーなどで直接噴霧した際の併用抗菌効果を検討するために、溶液中での培養真菌に対する併用効果を検討した。使用菌株としては、代表的な真菌としてＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ  ＴＩＭＭ１７６８株を用いた。菌は１／３ＲＰＭＩ１６４０培地（２．５％ウシ血清含）に懸濁し、９６穴プレートに１０４個／１００μｌ／穴になるように分注した。シトラールとデカナールを１０％ｗ／ｗになるようにＤＭＳＯで希釈し、更に、１／３ＲＰＭＩ１６４０培地で希釈した（ｖ／ｖ）。調製したデカナールとシトラールの溶液の各５０μｌを表３に記載された終濃度となるように、菌を播種した９６穴プレートに添加した。全ての実験はトリプリケート（ｎ＝３）で行った。有効成分の揮発拡散を抑えるために、９６穴プレートに蓋をするように透明プレートシールを張り、更にプレートの蓋をして、３７℃で２０時間培養した。Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ  ＴＩＭＭ１７６８株はこの培養条件では、酵母形から菌糸形発育すること、また、菌糸はプラスチック底面に付着する事、そして、それらの菌糸の定量にはクリスタルバイオレットという色素（ＣＶ）の菌糸表面への吸着量で計測できることが判明している。このＣＶ染色法を用いた。
【００３８】
表３に示した様に、シトラール単独でＣ．ａｌｂｉｃａｎｓの菌糸形発育を７０％以上抑制するためには、今回行った実験の最高濃度である０．００１％よりも濃い濃度のシトラールが必要であった。また、デカナール単独でＣ．ａｌｂｉｃａｎｓの菌糸形発育を７０％以上抑制するためには、０．００６％の濃度が必要であった。それに対し、これら２種類のアルデヒドを併用することで、シトラールの量を０．０００２％、デカナールの量を０．００２％にまで減らして同様の抗菌効果を得ることができた。すなわち、シトラールについては５倍以上、デカナールについては３倍薄い溶液で抗菌効果を発揮できることが分かった。
【００３９】
【表３】
0006775181.tif 000004
【００４０】
デカナールの代わりに、オクタナール、ノナナール、トリメチルヘキサナール、ヒドロキシシトロネラール、ペリルアルデヒド、ベンズアルデヒド、クミンアルデヒド、又はバニリンを用いて同様の試験を行った結果、いずれもデカナールと同様にシトラールとの併用抗菌効果が得られた（結果は非図示）。
【図１】
0006775181.tif 000005
【図２】
0006775181.tif 000006
【図３】
0006775181.tif 000007
【図４】
0006775181.tif 000008
【図５】
0006775181.tif 000009
【図６】
0006775181.tif 000010