(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
顕微鏡法用撮像システム内のサンプルホルダの測定場所の合焦画像を生成する方法であって、前記方法は、
（ａ）モーションコントローラによって、カメラセンサおよび集束光学のアレイを前記サンプルホルダから第１の事前判定された位置に移動させることと、
（ｂ）前記カメラセンサを使用して、前記第１の事前判定された位置において、測定場所の第１の画像を取得することと、
（ｃ）前記モーションコントローラによって、前記カメラセンサおよび前記集束光学のアレイを前記サンプルホルダから第２の事前判定された位置に移動させることと、
（ｄ）前記カメラセンサを使用して、前記第２の事前判定された位置において、前記測定場所の第２の画像を取得することと、
（ｅ）前記第１の画像の一部を前記第２の画像の一部を用いて、前記第１の画像の前記一部の画素と前記第２の画像の前記一部の対応する画素との比較に従って更新することにより、第１の更新された画像を生成するようにすることと、
（ｆ）前記カメラセンサおよび前記集束光学のアレイの焦点位置が事前判定された焦点範囲を横断するか否かを決定することであって、
前記焦点位置が前記事前判定された焦点範囲を横断したと決定された場合に、前記第１の更新された画像を、前記測定場所の合焦画像として提供し、
前記焦点位置が前記事前判定された焦点範囲を横断していないと決定された場合に、前記第１の画像として前記第１の更新された画像を使用してステップ（ｃ）から（ｆ）を繰り返し、前記ステップ（ｃ）から（ｆ）の繰り返しにおける前記第２の事前判定された位置は、前記ステップ（ｃ）から（ｆ）の繰り返しの前における前記第２の事前判定された位置および前記第１の事前判定された位置と異なる事前判定された位置である、ことと、
を含む、方法。
【請求項２】
前記第１の画像の前記一部を更新することは、前記第１の画像の前記一部の前記画素を更新することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第１の画像の前記一部を更新することはさらに、前記第１の画像の前記一部の前記画素の強度値をその近傍画素の強度値と比較することにより、焦点の第１の評価を展開することと、前記第２の画像の前記対応する画素の強度値をその近傍画素と比較することにより、焦点の第２の評価を展開することとを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記第１の画像の前記一部の前記画素を更新することはさらに、前記焦点の第２の評価が前記焦点の第１の評価を上回る場合、前記第１の画像の前記一部の前記画素の前記強度値を前記第２の画像の前記対応する画素の前記強度値と置換することを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
（ｇ）前記集束光学のアレイを伴う前記カメラセンサが、前記サンプルホルダから第３の事前判定された位置にある第２の測定場所と整合されるように、前記モーションコントローラによって、前記集束光学のアレイを伴う前記カメラセンサと前記サンプルホルダとの間に相対的移動を引き起こすことと、
（ｈ）前記カメラセンサを使用して、前記第３の事前判定された位置において、前記第２の測定場所の第１の画像を取得することと、
（ｉ）前記モーションコントローラによって、前記カメラセンサおよび前記集束光学のアレイを前記サンプルホルダから第４の事前判定された位置に移動させることと、
（ｊ）前記カメラセンサを使用して、前記第４の事前判定された位置において、前記第２の測定場所の第２の画像を取得することと、
（ｋ）前記第２の測定場所の前記第１の画像の一部を前記第２の測定場所の前記第２の画像の一部を用いて、前記第２の測定場所の前記第１の画像の前記一部の画素と前記第２の測定場所の前記第２の画像の前記一部の対応する画素との比較に従って更新することにより、第２の更新された画像を生成するようにすることと、
（ｌ）前記カメラセンサおよび前記集束光学のアレイの焦点位置が事前判定された焦点範囲を横断するか否かを決定することであって、
前記焦点位置が前記事前判定された焦点範囲を横断したと決定された場合に、前記第２の更新された画像を、前記第２の測定場所の合焦画像として提供し、
前記焦点位置が前記事前判定された焦点範囲を横断していないと決定された場合に、前記第２の測定場所の前記第１の画像として前記第２の更新された画像を使用してステップ（ｉ）から（ｌ）を繰り返し、前記ステップ（ｉ）から（ｌ）の繰り返しにおける前記第４の事前判定された位置は、前記ステップ（ｉ）から（ｌ）の繰り返しの前における前記第４の事前判定された位置および前記第３の事前判定された位置と異なる事前判定された位置である、ことと、
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記第１の画像が複数の第１の画像に分割される、ステップ（ｂ）の後の第１の付加的ステップと、前記第２の画像が複数の第２の画像に分割される、ステップ（ｄ）の後の第２の付加的ステップとをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
サンプルホルダの複数の測定場所の合焦画像を取得するための顕微鏡法用撮像システムであって、
カメラセンサと、
集束光学のアレイと、
前記サンプルホルダに対して前記集束光学のアレイを伴う前記カメラセンサを移動させるためのモーションコントローラと、
前記カメラセンサによって取得された画像を受信するための事前処理モジュールと、
を備え、
前記モーションコントローラは、前記カメラセンサおよび前記集束光学のアレイの焦点位置が事前判定された焦点範囲を横断すると前記事前処理モジュールが決定するまで、前記集束光学のアレイを伴う前記カメラセンサを、前記サンプルホルダから複数の事前判定された位置に移動させ、前記カメラセンサは、測定場所の複数の画像を取得し、複数の画像の各々は、前記複数の事前判定された位置のうちのそれぞれの１つにおいて取得され、前記事前処理モジュールは、（ｉ）前記複数の画像のうちの第１の画像の一部の画素と前記複数の画像のうちの第２の画像の一部の対応する画素とを比較することと、（ｉｉ）前記第１の画像の一部を前記第２の画像の一部を用いて、前記比較に従って更新することにより、第１の更新された画像を生成するようにすることと、（ｉｉｉ）前記複数の画像のうちの残りの画像の各々に対して、前記複数の画像のうちの前記第１の画像として前記第１の更新された画像を使用し、前記複数の画像のうちの前記第２の画像として前記複数の画像のうちの残りの画像の前記各々を使用してステップ（ｉ）から（ｉｉ）を繰り返すことと、（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）の後に、前記第１の更新された画像を、前記測定場所の合焦画像として提供することとを行う、顕微鏡法用撮像システム。
【請求項８】
前記複数の事前判定された位置は、事前判定された距離範囲内にある、請求項７に記載の顕微鏡法用撮像システム。
【請求項９】
前記モーションコントローラは、（１）前記カメラセンサおよび前記集束光学のアレイが第２の測定場所と整合されるように、前記集束光学のアレイを伴う前記カメラセンサと前記サンプルホルダとの間に相対的移動を引き起こし、（２）前記カメラセンサおよび前記集束光学のアレイの焦点位置が事前判定された焦点範囲を横断すると前記事前処理モジュールが決定するまで、前記集束光学のアレイを伴う前記カメラセンサを、前記サンプルホルダから複数の事前判定された位置に移動させ、前記カメラセンサは、前記第２の測定場所の第２の複数の画像を取得し、第２の複数の画像の各々は、前記複数の事前判定された位置のうちのそれぞれの１つにおいて取得され、前記事前処理モジュールは、（ｖ）前記第２の複数の画像のうちの第１の画像の一部の画素の強度値と前記第２の複数の画像のうちの第２の画像の一部の対応する画素の強度値とを比較することと、（ｖｉ）前記第２の複数の画像のうちの前記第１の画像の一部を前記第２の複数の画像のうちの前記第２の画像の一部を用いて、前記比較に従って更新することにより、第２の更新された画像を生成するようにすることと、（ｖｉｉ）前記第２の複数の画像のうちの残りの画像の各々に対して、前記第２の複数の画像のうちの前記第１の画像として前記第２の更新された画像を使用し、前記第２の複数の画像のうちの前記第２の画像として前記第２の複数の画像のうちの残りの画像の前記各々を使用してステップ（ｖ）から（ｖｉ）を繰り返すことと、（ｖｉｉｉ）ステップ（ｖｉｉ）の後に、前記第２の更新された画像を、前記第２の測定場所の合焦画像として提供することとを行う、請求項７に記載の顕微鏡法用撮像システム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本願は、２０１３年４月３０日に出願された米国仮特許出願第６１／８１７，８６９号に関連している。
【０００２】
本発明は、細胞生物学および他の類似する研究のための自動化および半自動化顕微鏡法に関し、特に、高含有量スクリーニング顕微鏡法用撮像システムに関する。
【背景技術】
【０００３】
研究者は、顕微鏡法用サンプルの画像を得るために、高含有量スクリーニング（ＨＣＳ）中に顕微鏡法用撮像システムを使用し得る。サンプルホルダ、例えば、マイクロタイタプレート、スライド、皿等は、スクリーニングプロセス中に顕微鏡法用サンプルを支持し得る。自動化された顕微鏡法用撮像システムは、電荷結合デバイス（ＣＣＤ）または相補型金属酸化膜半導体（ＣＭＯＳ）チップ等の電子撮像デバイスに結合される対物レンズを含み、顕微鏡法用サンプルの画像を生産し得る。サンプルホルダに対する対物レンズの位置は、顕微鏡法用サンプルを撮像デバイス上で合焦させるように調節され得る。
【０００４】
顕微鏡法用サンプルは、サンプルホルダの上面上の種々の測定場所（例えば、ウェル）に存在し得る。故に、顕微鏡法用撮像システムの対物レンズは、顕微鏡法用サンプルの合焦画像を得るために、サンプルホルダの上部または底部に対する焦点位置に位置付けられ得る。しかしながら、サンプルホルダの厚さまたは曲率の変動は、測定場所の範囲にわたる正確な焦点を妨害し得る。その結果、対物レンズの焦点位置は、全ての測定場所に対するそれぞれの合焦画像を得るために、各測定場所において補正される必要があり得る。高含有量スクリーニングは、数百また数千の測定サンプルを撮像し得るため、いくつかの顕微鏡法用撮像システムは、各測定場所において焦点維持を自動的に実施するように構成され得る。
【０００５】
撮像の効率を増加させるために、複数の撮像デバイスが、並行して（すなわち、同時に）複数のウェルを撮像するために使用されてもよい。しかしながら、複数の撮像デバイスのそれぞれの対物レンズを合焦させるために要求される時間は、並行撮像から得られ得る、いずれの効率も排除し得る。さらに、各対物レンズを個々に合焦させることはまた、撮像システムの複雑性を増加させ得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、高含有量スクリーニング顕微鏡法用撮像システムにおいて並行して動作する撮像デバイスを使用して、複数の測定場所の合焦画像を生成するための改良されたシステムおよび方法が、必要とされる。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
顕微鏡法用撮像システム内のサンプルホルダの測定場所の合焦画像を生成する方法が、提供される。集束光学のアレイおよびカメラセンサが、サンプルホルダから第１の焦点距離に位置付けられる。測定場所の第１の画像が、カメラセンサを使用して取得される。カメラセンサと関連付けられる候補出力画像が、第１の画像に従って展開される。集束光学のアレイおよびカメラセンサは、サンプルホルダから第２の距離に位置付けられ、測定場所の第２の画像が、カメラセンサを使用して取得される。候補出力画像の一部が、選択基準に従って、第２の画像の一部を用いて更新される。更新された候補画像は、伝送される。
【０００８】
サンプルホルダの複数の測定場所の合焦画像を取得するための顕微鏡法用撮像システムもまた、提供される。本システムは、カメラセンサと、集束光学のアレイと、モーションコントローラと、モーション制御モジュールとを備える。モーションコントローラは、集束光学のアレイおよびカメラセンサをサンプルホルダに対して位置付ける。カメラセンサまたはモーションコントローラまたは取得システムコントローラのいずれかと関連付けられる事前処理モジュールが、画像を受信する。モーションコントローラは、それから複数の画像を取得するために、サンプルホルダから複数の距離に集束光学のアレイおよびカメラセンサを位置付け、複数の画像はそれぞれ、複数の距離のうちのそれぞれ１つにおいて取得される。事前処理モジュールは、複数の画像からカメラセンサと関連付けられる合焦画像を展開する。
本明細書は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
顕微鏡法用撮像システム内のサンプルホルダの測定場所の合焦画像を生成する方法であって、
（ａ）カメラセンサおよび集束光学のアレイを前記サンプルホルダから第１の焦点距離に位置付けるステップと、
（ｂ）前記カメラセンサを使用して、測定場所の第１の画像を取得するステップと、
（ｃ）前記第１の画像に従って、前記カメラセンサおよび前記集束光学のアレイと関連付けられた候補出力画像を展開するステップと、
（ｄ）前記カメラセンサおよび前記集束光学のアレイを前記サンプルホルダから第２の焦点距離に位置付けるステップと、
（ｅ）前記カメラセンサを使用して、前記測定場所の第２の画像を取得するステップと、
（ｆ）選択基準に従って、前記候補出力画像の一部を前記第２の画像の一部を用いて更新するステップと、
（ｇ）前記更新された候補出力画像を伝送するステップと、
を含む、方法。
（項目２）
前記カメラセンサが事前判定された焦点範囲をトラバースするまで、ステップ（ｄ）−（ｆ）を繰り返すステップをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記候補出力画像の一部を更新するステップは、前記候補出力画像の画素を更新するステップを含む、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記候補出力画像の一部を更新するステップはさらに、候補画像の画素の強度値をその近傍画素の強度値と比較し、焦点の第１の評価を展開し、前記第２の画像の対応する画素の強度値をその近傍画素と比較し、焦点の第２の評価を展開するステップを含む、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記候補出力画像の画素を更新するステップはさらに、前記焦点の第２の評価が前記焦点の第１の評価を上回る場合、前記候補出力画像の画素の強度値を前記第２の画像の対応する画素の強度値と置換するステップを含む、項目４に記載の方法。
（項目６）
（ｈ）前記集束光学のアレイを伴うカメラセンサが、第２の測定場所と整合されるように、前記集束光学のアレイを伴うカメラセンサと前記サンプルホルダとの間に相対的移動を引き起こすステップと、
（ｉ）第２の更新された候補出力画像を展開するステップであって、前記第２の更新された候補出力画像は、前記第２の測定場所と関連付けられる、ステップと、
をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目７）
撮像デバイスは、画像取得電子機器を含み、
（ｈ）前記測定場所と前記カメラセンサとの間の光路内に第１のフィルタを位置付けるステップであって、前記第１のフィルタは、前記第１の画像が取得されるとき、前記光路内に位置付けられる、ステップと、
（ｉ）前記光路内に第２のフィルタを位置付けるステップと、
（ｊ）前記カメラセンサを使用して、前記測定場所の第２の画像を取得するステップであって、前記第２のフィルタは、前記第２の画像が取得されるとき、前記光路内に位置付けられる、ステップと、
をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記第１の画像が取得されるときの前記サンプルホルダに対する前記集束光学のアレイを伴うカメラセンサの位置は、前記第２の画像が取得されるときの前記サンプルホルダに対するカメラセンサおよび前記集束光学のアレイの位置と実質的に同じである、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記カメラセンサおよび前記集束光学のアレイを使用して前記測定場所の第２の画像を取得するステップをさらに含み、前記第１の画像は、第１の照明条件を使用して取得され、前記第２の画像は、第２の照明条件を使用して取得される、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記第１の画像が複数の第１の画像に分割される、ステップ（ｂ）と（ｃ）との間の第１の付加的ステップと、前記第２の画像が複数の第２の画像に分割される、ステップ（ｅ）と（ｆ）との間の第２の付加的ステップとをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目１１）
サンプルホルダの複数の測定場所の合焦画像を取得するための顕微鏡法用撮像システムであって、
カメラセンサと、
集束光学のアレイと、
前記サンプルホルダに対して、前記集束光学のアレイを伴うカメラセンサを位置付けるためのモーションコントローラと、
前記カメラセンサによって取得された画像を受信するための事前処理モジュールと、
を備え、
前記モーションコントローラは、前記集束光学のアレイを伴うカメラセンサを、前記サンプルホルダから複数の焦点距離に位置付け、前記カメラセンサは、複数の画像を取得し、複数の画像の各々は、前記複数の焦点距離のうちのそれぞれ１つにおいて取得され、前記事前処理モジュールは、前記複数の画像から撮像デバイスと関連付けられる合焦画像を展開する、
顕微鏡法用撮像システム。
（項目１２）
前記事前処理モジュールは、カメラコントローラと関連付けられ、前記事前処理モジュールは、前記複数の画像から前記カメラセンサと関連付けられる合焦画像を展開する、項目１１に記載の顕微鏡法用撮像システム。
（項目１３）
前記事前処理モジュールは、前記集束光学のアレイと関連付けられ、前記事前処理モジュールは、前記複数の画像から前記集束光学のアレイと関連付けられる合焦画像を展開する、項目１１に記載の顕微鏡法用撮像システム。
（項目１４）
前記事前処理モジュールは、前記取得システムと関連付けられ、前記事前処理モジュールは、前記複数の画像から前記取得システムと関連付けられる合焦画像を展開する、項目１１に記載の顕微鏡法用撮像システム。
（項目１５）
前記複数の焦点距離は、事前判定された範囲内にあり、前記事前判定された範囲は、前記サンプルホルダと関連付けられる、項目１１に記載の顕微鏡法用撮像システム。
（項目１６）
前記モーションコントローラは、前記カメラセンサおよび前記集束光学のアレイが第２の測定場所と整合されるように、前記集束光学のアレイを伴うカメラセンサと前記サンプルホルダとの間に相対的移動を引き起こし、前記撮像デバイスは、前記第２の測定場所の第２の複数の画像を取得し、前記事前処理モジュールは、前記第２の複数の画像から第２の合焦画像を展開する、項目１１に記載の顕微鏡法用撮像システム。
（項目１７）
前記事前処理モジュールは、前記カメラセンサと関連付けられる第２の合焦画像を展開する、項目１６に記載の顕微鏡法用撮像システム。
（項目１８）
前記事前処理モジュールは、カメラコントローラと関連付けられる第２の合焦画像を展開する、項目１６に記載の顕微鏡法用撮像システム。
（項目１９）
前記事前処理モジュールは、前記取得システムと関連付けられる第２の合焦画像を展開する、項目１６に記載の顕微鏡法用撮像システム。
（項目２０）
前記第１の複数の画像が取得されるとき、前記サンプルホルダと前記カメラセンサとの間の光路内に配置される第１のフィルタと、前記第２の複数の画像が取得されるとき、前記サンプルホルダと前記カメラセンサとの間の光路内に配置される第２のフィルタとを備える、項目１１に記載の顕微鏡法用撮像システム。
（項目２１）
前記複数の画像が取得されるときの前記サンプルホルダに対する前記カメラセンサおよび前記集束光学のアレイの位置は、前記第２の複数の画像が取得されるときの前記サンプルホルダに対する前記カメラセンサおよび前記集束光学のアレイの位置と実質的に同じである、項目２０に記載の顕微鏡法用撮像システム。
（項目２２）
第１の照明源および第２の照明源をさらに備え、前記第１の照明源は、前記複数の画像が捕捉されるときに作動され、前記第２の照明源は、前記第２の複数の画像が取得されるときに作動される、項目１１に記載の顕微鏡法用撮像システム。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、並行画像取得システムの概略図面である。
【図２】図２は、図１の並行画像取得システムにおいて使用され得る焦点光学の構成要素を示す、分解図である。
【図３】図３は、図１の撮像デバイスのカメラアレイおよびサンプルホルダの分解図である。
【図４】図４Ａ−図４Ｃは、いくつかの実施形態に関する、図１の並行撮像取得システムの要素を伴う事前処理モジュールの関連付けの分解図である。
【図５】図５は、合焦画像を並行して展開するために、並行画像取得システムによって施行される処理のフローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
図１を参照すると、試験プレートを並行して撮像するためのシステム１００が、事前処理ユニットが内蔵されるカメラセンサ１０２と、モーション制御モジュール１０４と、カメラ制御モジュール１０６と、集束光学のアレイ１０８と、コントローラ１１０とを備える。以下にさらに説明されるように、集束光学のアレイ１０８は、２次元パターンにおけるホルダ上に配置される集束光学を含み得る。
【００１１】
動作中、集束光学のアレイ１０８およびカメラセンサ１０２は、撮像されるべきサンプルホルダの下に位置付けられる。いくつかの実施形態では、集束光学のアレイがサンプルホルダのウェルまたはウェルの一部の下に位置付けられるように、集束光学のアレイおよびカメラセンサは、最初に位置付けられる。コントローラ１１０は、モーション制御モジュール１０４に命令し、カメラセンサ１０２がサンプルホルダの底部から少なくとも事前判定された初期距離にあるように、カメラセンサ１０２を初期位置に移動させる。いくつかの実施形態では、事前判定された初期距離は、カメラセンサ１０２の上部表面から、サンプルホルダの底部または上部表面のいずれかまで測定される。他の実施形態では、事前判定された初期距離は、カメラセンサ１０２内の特定のカメラと関連付けられる対物レンズの上部表面から、サンプルホルダの底部または上部表面のいずれかまで測定される。事前判定された初期距離を確立する他の方法も、当業者に明白となるであろう。
【００１２】
コントローラ１１０は、次いで、カメラ制御モジュール１０６に命令し、カメラセンサ１０２を作動させ、それから第１の候補画像を得る。画像は、事前処理モジュールと関連付けられるメモリ内に候補出力画像セットとして記憶される。いくつかの実施形態では、候補画像は、カメラ制御モジュールに提供され、カメラ制御モジュールと関連付けられるメモリ内に記憶される。いくつかの実施形態では、カメラ制御モジュールは、候補画像を取得システムコントローラ１１０に提供する。
【００１３】
取得システムコントローラ１１０は、その後、モーション制御モジュール１０４に命令し、焦点を上向きに調節するために、集束光学のアレイ１０８およびカメラセンサ１０２を事前判定された漸増距離だけ移動させる。一実施形態では、事前判定された漸増距離は、集束光学のアレイの被写界深度から判定される。例えば、事前判定された漸増距離は、そのような被写界深度または被写界深度の分数倍と実質的に同じであり得る。取得システムコントローラ１１０は、カメラ制御モジュール１０６に命令し、カメラセンサ１０２を作動させ、さらなる画像のセットを取得する。いくつかの実施形態では、さらなる画像もまた、カメラ制御モジュール１０６に提供される。いくつかの実施形態では、カメラ制御モジュールは、さらなる画像を取得システムコントローラ１１０に提供する。
【００１４】
カメラセンサ１０２は、事前定義された選択基準を使用し、候補画像の任意の部分が、さらなる画像の対応する部分を用いて更新されるべきかどうかを判定する。そのような選択基準は、さらなる画像の一部が、候補画像の対応する部分よりも高い強度値、低い強度値、高い勾配、良好な焦点、および同等物を有するかどうかを含んでもよい。選択基準が満たされる場合、候補画像の一部は、さらなる画像の対応する部分と置換される。一実施形態では、事前処理モジュールを有するカメラセンサは、撮像デバイスによって取得されるさらなる画像の各画素を、そのような撮像デバイスと関連付けられる候補出力画像の対応する画素と比較する。さらなる画像の画素が、候補出力画像内の対応する画素よりも良好な焦点を有する場合、候補出力画像内の画素と関連付けられる強度値は、さらなる画像内の画素の強度値と置換される。一実施形態では、第１の画素は、第１の画素とその直近のものとの間のコントラストが第２の画素とその直近のものとの間のコントラストを上回る場合、第２の画素よりも良好な焦点を有する。いくつかの実施形態では、画素とその直近のものとの間のコントラストは、そのような画素と各直近のものとの間の強度における差異の平均を計算することによって推定され得る。いくつかの実施形態では、さらなる画像の画素が、候補出力画像の対応する画素よりも高い強度値を有する場合、候補画像の画素の強度値は、さらなる画像の画素の強度値と置換される。そのような実施形態は、画像が蛍光性のサンプルである場合、有用であり得る。他の実施形態では、さらなる画像の画素が、候補出力画像の対応する画素よりも低い強度値を有する場合、候補画像の画素の強度値は、さらなる画像の画素の強度値と置換される。
【００１５】
また別の実施形態では、さらなる画像の画素の強度値は、候補画像の対応する画素の強度値に追加される。そのような実施形態からもたらされる画像は、サンプル内に存在する蛍光物質の量を定量化する際に有用であり得る。当業者に明白な候補出力画像を展開する他の方法が、使用されてもよい。
【００１６】
取得システムコントローラ１１０は、次いで、モーション制御モジュール１０４に命令し、集束光学のアレイ１０８およびカメラセンサ１０２を移動させ、焦点を事前判定された間隔距離と同じ位置に調節する。取得システムコントローラ１１０は、その後、カメラ制御モジュール１０６に命令し、カメラセンサ１０２を作動させ、またさらなる画像のセットを取得する。またさらなる画像は、上記に説明されるように処理され、候補出力画像を含む画像を更新する。並行画像取得システム１００は、集束光学のアレイ１０８およびカメラセンサ１０２の焦点位置がサンプルホルダに向かって事前判定された距離をトラバースするまで、本方式において動作される。いくつかの実施形態では、そのような事前判定された範囲は、サンプルホルダの底部表面の曲率または他の変数の予期される変動に基づいてもよい。いくつかの実施形態では、サンプルホルダの製造者は、そのような予期される変動に関する情報を提供してもよい。他の実施形態では、１つまたはそれを上回るサンプルホルダを測定することは、そのような予期される変動を展開し得る。いくつかの実施形態では、事前判定された範囲は、約５０ｍｍ〜約５００ｍｍである。事前判定された範囲を確立する他の方法も、当業者に明白となるであろう。
【００１７】
いくつかの実施形態では、集束光学のアレイ１０８およびカメラセンサ１０２が、サンプルホルダに向かって事前判定された範囲をトラバースした後、コントローラ１１０は、合焦画像を提供するようにカメラセンサに命令する。いくつかの実施形態では、カメラコントローラは、その独自のメモリから合焦画像を読み出す。カメラコントローラは、合焦事前処理モジュール４１８を提供し、並行画像取得システム１００の合焦出力画像として候補出力画像を提供する。合焦出力画像は、システム１００と関連付けられる画像記憶サブシステムおよび／または画像処理ならびに測定サブシステムに提供され得る。いくつかの場合では、コントローラ１１０は、さらなる処理のために、（例えば、ネットワークまたは通信チャネルを経由して）合焦出力画像のセットを別個のシステムに伝送してもよい。いくつかの実施形態では、事前処理モジュール４１８は、候補出力画像を事前処理モジュール４１８のメモリから消去する。
【００１８】
いくつかの実施形態では、着目サンプル場所を含む各画像の区分のみが、カメラセンサ１０２からカメラ制御モジュール１０６に提供されるであろう。いくつかの実施形態では、これらの区分は、サンプルホルダ内の個々のサンプルに対応するであろう。いくつかの実施形態では、各区分は、カメラ制御に提供され、後で取得システムコントローラ１１０に提供される、独立した画像である。いくつかの実施形態では、画像全体または画像の１つの連続区分が、カメラセンサからカメラ制御モジュールに提供される。いくつかの実施形態では、着目サンプル場所を含む各画像の区分のみが、取得システムコントローラ１１０に提供されるであろう。またいくつかの実施形態では、画像全体が、取得システムコントローラに提供される一方、いくつかの実施形態では、着目サンプル場所を含む各画像の区分のみが、取得システムコントローラによって記憶または処理されるであろう。
【００１９】
加えて、取得システムコントローラ１１０は、モーション制御モジュール１０４に命令し、集束光学のアレイ１０８およびカメラセンサ１０２とサンプルホルダとの間の距離が、事前判定された初期距離と実質的に同じになるまで、集束光学のアレイ１０８およびカメラセンサ１０２をサンプルホルダから離れるように移動させる。取得システムコントローラ１１０は、その後、モーション制御モジュール１０４に命令し、カメラアレイ１０２の撮像デバイスが、まだ撮像されていないさらなる測定場所の下に位置付けられるように、集束光学のアレイおよびカメラセンサ１０２をサンプルホルダと実質的に平行な方向に移動させる。いくつかの実施形態では、撮像デバイスの視野がウェルよりも小さい場合、さらなる測定場所は、ちょうど捕捉されたウェルの別の部分であってもよい。取得システムコントローラ１１０は、モーション制御モジュール１０４およびカメラ制御モジュール１０６に命令する。合焦出力画像の付加的セットが、サンプルホルダの測定場所の全てが撮像されるまで、本様式において展開される。
【００２０】
いくつかの実施形態では、各候補出力画像を画素毎ベースで更新する代わりに、カメラセンサによって実施される事前処理は、捕捉された画像の焦点を対応する候補出力画像の焦点と比較する。捕捉された画像は、捕捉された画像の焦点がより良好であると評価される場合、対応する候補出力画像に取って代わる。画像の焦点は、例えば、勾配または縁検出フィルタを画像にわたって適用し、勾配または検出された縁の平均を生成することによって評価されてもよい。画像の焦点を評価する、または２つの画像の焦点を比較する他の方法も、当業者に明白となるであろう。さらに、画素よりも大きく、候補画像全体より小さい候補画像の一部は、さらなる画像からの対応する部分と比較され、候補画像を更新し得ることが、明白となるはずである。
【００２１】
並行画像取得システム１００のいくつかの実施形態では、集束光学のアレイ１０８およびカメラセンサ１０２は、固定して保持され、モーション制御モジュール１０４は、集束光学のアレイおよびカメラセンサに対するサンプルホルダの移動を引き起こす。さらに他の実施形態では、モーション制御モジュール１０４は、サンプルホルダとカメラセンサ１０２を伴う集束光学のアレイ１０８とを両方とも移動させる。例えば、モーション制御モジュール１０４は、集束光学のアレイを伴うカメラセンサを、それらとサンプルホルダとの間の距離を増加または減少させることによって移動させ、サンプルホルダをそれらと平行な方向に移動させ、サンプルホルダ上の種々の測定場所の撮像を可能にし得る。カメラセンサ１０２を伴う集束光学のアレイ１０８とサンプルホルダとの間の相対的移動を可能にする他の方法も、当業者に明白となるであろう。
【００２２】
いくつかの実施形態では、モーション制御モジュール１０４は、カメラセンサまたはサンプルホルダのいずれかを移動させる代わりに、集束光学のアレイを移動させる、または調節してもよい。
【００２３】
図２および３を参照すると、撮像デバイス２０４は、例えば、ＣＣＤまたはＣＭＯＳチップおよび関連付けられる電子機器を含む、画像取得電子機器４０２を備える。１つまたはそれを上回るフィルタ４０４および／もしくはレンズ４０６が、サンプルホルダ２００と画像取得電子機器４０２との間の光路内に配置される。発光ダイオード（ＬＥＤ）等の光源４０８もまた、画像取得電子機器４０２とサンプルホルダ２００との間に配置され得る。光源４０８は、光源４０８がサンプルホルダ２００と画像取得電子機器４０２との間の光路に干渉しないように配置される。動作中、光源４０８によって放出される光は、撮像されるべき測定場所２０２から反射し、レンズ４０６およびフィルタ４０４を通過し、画像取得電子機器４０２によって感知される。他の実施形態では、光源４０８によって放出される光は、測定場所２０２において、サンプルの蛍光分子を励起する。そのような励起に応答して、そのような蛍光分子によって放出される光は、レンズ４０６およびフィルタ４０４を通過し、画像取得電子機器４０２によって感知される。
【００２４】
いくつかの実施形態では、さらなる光源４１６が、サンプルホルダ２００がさらなる光源４１６と画像取得電子機器４０２との間にあるように配置されてもよい。さらなる光源４１６からの光は、撮像されるべき測定場所２０２においてサンプルホルダ２００内に配置されるサンプルを通して、かつレンズ４０６およびフィルタ４０４を通して伝送され、画像取得電子機器４０２によって感知される。いくつかの用途では、光源４０８のみが、サンプルホルダ２００内に配置されるサンプルを照射するために使用されてもよい。他の用途では、さらなる光源４１６からの光のみが、そのような測定場所を照射するために使用されてもよい。さらに他の用途では、光源４０８およびさらなる光源４１６の両方からの光が、同時または別個に、そのような測定場所を照射するために使用されてもよい。いくつかの実施形態では、光源４０８およびさらなる光源４１６の両方からの光が、特定の測定場所２０２を撮像するために別個に使用される場合、合焦出力画像の第１のセットが、光源４０８を使用して展開される。
【００２５】
いくつかの実施形態では、カメラ制御モジュール１０６は、集束光学のアレイおよびカメラセンサ１０２が複数の画像チャネルを展開するように再位置付けされる度に、測定場所の複数の画像を捕捉するようにカメラセンサ１０２に命令し得る。例えば、１つのチャネルは、測定場所が光源４０８によって照射されるときに展開されてもよく、別のチャネルは、測定場所が光源４１６によって照射されるときに展開されてもよい。いくつかの実施形態では、光源４０８（または、光源４１６）は、異なる光の波長を生産することが可能であってもよい。そのような場合では、サンプルは、各そのような波長の光を用いて照射され、そのような波長の光と関連付けられた画像チャネルが、取得される。例えば、光源４０８は、複数のＬＥＤを含み得、各ＬＥＤは、特定の色の光を放出する。カメラ制御モジュール１０６は、取得される画像チャネル毎にそのようなＬＥＤの１つまたはその組み合わせを作動させてもよい。いくつかの実施形態では、フィルタ４０４は、１つまたはそれを上回るサブフィルタを含み得、各サブフィルタは、１つまたはそれを上回る波長の光が、それを通して通過することを可能にする。モーション制御モジュール１０４は、画像チャネルが取得される前に、各サブフィルタを測定場所とそのような測定場所と関連付けられるカメラ取得デバイスとの間の光路内に位置付けてもよい。本様式では、画像チャネルは、そのようなサブフィルタ毎に生産されてもよい。いくつかの実施形態では、測定場所と関連付けられる出力画像が、チャネル毎に展開される。他の実施形態では、チャネルは、１つの出力画像を生産するように組み合わせられる。いくつかの実施形態では、２〜６つの画像チャネルが、測定場所毎に取得される。
【００２６】
一実施形態では、画像取得電子機器４０２によって生成される画像データは、カメラセンサ上で事前処理される。撮像デバイスの画像データは、インターフェース４１０を通して付加的事前処理モジュール４１８に提供される。付加的事前処理モジュール４１８は、付加的事前処理モジュール４１８によって展開される出力画像セットを、インターフェース４１２を通して他のシステム（図示せず）に伝送する。インターフェース４１０および４１２は、ユニバーサルシリアルバス（ＵＳＢ）インターフェース、ＦｉｒｅＷｉｒｅ（登録商標）もしくはＩＥＥＥ１３９４インターフェース、Ｅｔｈｅｒｎｅｔ（登録商標）インターフェース、または当業者に明白な任意の他のインターフェースに従ってもよい。一実施形態では、インターフェース４１０および４１２ならびに事前処理モジュールの全てまたは一部を実装する電子機器が、単一基板コンピュータ４１４上に実装される。
【００２７】
再び図３を参照すると、フィルタ４０４は、フィルタホルダ５００上に配置され得、レンズ４０６は、レンズホルダ５０２上に配置され得、光源４０８は、光源ホルダ５０４上に配置され得る。本様式では、フィルタ５００、レンズ４０６、および光源４０８は、撮像される測定場所２０４に配置されるサンプルに基づいて、所望されるように、他のフィルタ４０６、レンズ４０６、および／または光源４０８と容易に交換され得る。
【００２８】
フィルタホルダ５００、レンズホルダ５０２、および光源ホルダ５０４が相互に対して配置される順序は、変動され得ることが明白となるはずである。いくつかの実施形態では、レンズホルダ５０２は、サンプルホルダ２００とフィルタホルダ５００との間に配置されてもよい。他の実施形態では、フィルタホルダ５００は、サンプルホルダ２００とフィルタホルダ５００との間に配置されてもよい。いくつかの場合では、レンズホルダ５０２および光源ホルダ５０４は、光源４０８からの光が、サンプルホルダ２００に到達する前にレンズ４０６を通過するように配置されてもよい。他の場合では、フィルタホルダ５００、レンズホルダ５０２、および光源ホルダ５０４は、光源４０８からの光が、サンプルホルダ２００に到達する前にフィルタ４０４およびレンズ４０６の一方または両方を通過するように配置されてもよい。
【００２９】
集束光学のアレイ１０８およびカメラセンサ１０２が、１つまたはそれを上回るモータ５０６によって動作されるＸ−Ｙ−Ｚステージ上に搭載され得ることが、当業者に明白となるはずである。代替として、上記に説明されるように、サンプルホルダ２００は、モータ５０６によって動作されるＸ−Ｙ−Ｚステージ上に搭載されてもよい。
【００３０】
図５を参照すると、フローチャート６００は、合焦出力画像のセットを並行して展開するために、並行画像取得システム１００によって施行される例示的ステップを示す。ステップ６０２において、モーション制御モジュール１０４は、集束光学のアレイ上に配置される撮像デバイス２０４がサンプルホルダ２００の測定場所２０２と整合されるように、サンプルホルダ２００に対してカメラセンサ１０２を位置付ける。ステップ６０４において、モーション制御モジュール１０４は、その間の距離が事前判定された初期距離と実質的に同じであるように、サンプルホルダ２００に対して集束光学のアレイ１０８およびカメラセンサ１０２を位置付ける。ステップ６０６において、カメラ制御モジュールは、光源４０８および４１６の一方または両方を作動させることによって、測定場所２０２を照射する。上記に説明されるように、いくつかの実施形態では、光源４０８は、測定場所２０２に配置されるサンプルを励起し、そのようなサンプルの蛍光を引き起こす光を放出してもよい。ステップ６０８において、カメラ制御モジュール１０６は、画像を捕捉するようにカメラセンサ１０２に命令する。システム１００が、上記に説明されるように、複数の画像チャネルを捕捉すべき場合、ステップ６０８において、画像チャネルは全て、サンプルプレート２００に対するカメラセンサ１０２の位置を改変することなく捕捉される。
【００３１】
ステップ６１０において、カメラセンサは、上記に説明されるように、画像を処理し、そのようなデバイスと関連付けられる候補出力画像を更新する。
【００３２】
ステップ６１２において、コントローラ１１０は、次いで、集束光学のアレイおよびカメラセンサ１０２が事前判定された範囲をトラバースしたかどうかを判定する。集束光学のアレイ１０８およびカメラセンサ１０２が事前判定された範囲をトラバースしていない場合、モーション制御モジュール１０４は、ステップ６１４において、事前判定された漸増距離と同じ距離だけサンプルホルダ２００に向かって（すなわち、Ｚ軸と平行な方向に）集束光学のアレイ１０８およびカメラセンサ１０２を移動させる。その後、並行画像取得システム１００は、ステップ６０６に進む。
【００３３】
ステップ６１２において、コントローラ１１０が事前判定された範囲がトラバースされたと判定する場合、コントローラ１１０は、カメラセンサに命令する。次のステップでは、コントローラは、ステップ６１６において、インターフェース４１２を通して更新された候補画像を伝送するようにカメラ制御モジュールに命令する。
【００３４】
ステップ６１８において、コントローラ１１０は、サンプルホルダ２００の測定場所２０２の全てが撮像されたかどうかを判定する。その場合、並行画像取得システム１００は、終了する。そうでなければ、ステップ６２０において、モーション制御モジュール１０４は、撮像デバイス２０４が撮像されていない測定場所２０２と整合されるように、サンプルホルダ２００に対して集束光学のアレイ１０８およびカメラセンサ１０２を位置付ける（すなわち、それぞれ、Ｘ軸およびＹ軸と平行な距離ΔＸおよびΔＹだけ集束光学のアレイ１０８およびカメラセンサ１０２を移動させる）。並行画像取得システム１００は、次いで、ステップ６０４に進み、そのような場所を撮像する。
【００３５】
図１−５に関連して説明される、モジュール、プロセス、サブプロセス、およびプロセスステップのうちの１つまたはそれを上回るものは、１つまたはそれを上回る電子もしくはデジタル制御デバイス上のハードウェア、ソフトウェア、またはハードウェアおよびソフトウェアの組み合わせによって実施され得ることを理解および認識されたい。ソフトウェアは、例えば、図１−４に図式的に描写される、機能性システム、コントーラ、デバイス、構成要素、モジュール、またはサブモジュールのうちの１つもしくはそれを上回るもの等、好適な電子処理構成要素もしくはシステム内のソフトウェアメモリ（図示せず）に常駐し得る。ソフトウェアメモリは、論理機能（すなわち、デジタル回路もしくはソースコード等のデジタル形態、またはアナログ電気、音声、もしくはビデオ信号等のアナログ源等のアナログ形態で実装され得る、「論理」）を実装するための実行可能命令の順序付けられたリストを含み得る。命令は、例えば、１つまたはそれを上回るマイクロプロセッサ、汎用プロセッサ、プロセッサの組み合わせ、デジタル信号プロセッサ（ＤＳＰ）、フィールドプログラマブルゲートアレイ（ＦＰＧＡ）、もしくは特定用途向け集積回路（ＡＳＩＣ）を含む、処理モジュールまたはコントーラ（例えば、モーション制御モジュール１０４、カメラ制御モジュール１０６、事前処理モジュール４１８、撮像デバイス２０４）内で実行され得る。さらに、概略図は、機能のアーキテクチャまたは物理的レイアウトによって限定されない、物理的（ハードウェアおよび／またはソフトウェア）実装を有する、機能の論理分割を説明する。本願に説明される例示的システムは、種々の構成で実装され、単一ハードウェア／ソフトウェアユニット、または別個のハードウェア／ソフトウェアユニットにおいて、ハードウェア／ソフトウェア構成要素として動作し得る。
【００３６】
実行可能命令は、電子システムの処理モジュールによって実行されると、電子システムに命令を実行するように命令する、その中に記憶された命令を有する、コンピュータプログラム製品として実装され得る。コンピュータプログラム製品は、命令実行システム、装置、またはデバイスから命令を選択的にフェッチし、命令を実行し得る、電子コンピュータベースのシステム、プロセッサ含有システム、もしくは他のシステム等、命令実行システム、装置、もしくはデバイスによって、またはそれと関連して使用するために、任意の非一過性コンピュータ可読記憶媒体内で選択的に具現化され得る。本文書の文脈では、コンピュータ可読記憶媒体は、命令実行システム、装置、もしくはデバイスによって、またはそれと関連して使用するためのプログラムを記憶し得る、任意の非一過性手段である。非一過性コンピュータ可読記憶媒体は、選択的に、例えば、電子、磁気、光学、電磁、赤外線、または半導体システム、装置、もしくはデバイスであってもよい。非一過性コンピュータ可読媒体のより具体的な実施例の非包括的リストは、１つまたはそれを上回るワイヤを有する電気接続（電子）、ポータブルコンピュータディスケット（磁気）、ランダムアクセス、すなわち、揮発性のメモリ（電子）、読取専用メモリ（電子）、例えば、フラッシュメモリ等の消去可能プログラマブル読取専用メモリ（電子）、例えば、ＣＤ−ＲＯＭ、ＣＤ−Ｒ、ＣＤ−ＲＷ等のコンパクトディスクメモリ（光学）、およびデジタル多用途ディスクメモリ、すなわち、ＤＶＤ（光学）を含む。非一過性コンピュータ可読記憶媒体は、プログラムが、例えば、紙または他の媒体の光学走査を介して、電子的に捕捉され、次いで、コンパイル、解釈、または必要に応じて好適な様式において別様に処理され、次いで、コンピュータメモリまたは機械メモリ内に記憶され得るため、プログラムが印刷される紙また別の好適な媒体でもあり得ることに留意されたい。
【００３７】
また、本文書で使用されるようなデータの受信および伝送は、２つまたはそれを上回るシステム、デバイス、構成要素、モジュール、もしくはサブモジュールが、あるタイプの信号経路を経由して進行する信号を介して、相互に通信することが可能であることを意味することも理解されたい。信号は、第１および第２のシステム、デバイス、構成要素、モジュール、またはサブモジュール間の信号経路に沿って、第１のシステム、デバイス、構成要素、モジュール、またはサブモジュールから、第２のシステム、デバイス、構成要素、モジュール、またはサブモジュールに情報、電力、またはエネルギーを通信し得る、通信、電力、データ、またはエネルギー信号であってもよい。信号経路は、物理的、電気、磁気、電磁、電気化学、光学、有線、または無線接続を含んでもよい。信号経路はまた、第１および第２のシステム、デバイス、構成要素、モジュール、またはサブモジュール間に付加的システム、デバイス、構成要素、モジュール、またはサブモジュールを含んでもよい。
【００３８】
図４Ａ、図４Ｂ、および図４Ｃを参照すると、画像事前処理モジュールが、複数の画像から合焦画像を展開し得る。いくつかの実施形態（図４Ａ）では、事前処理モジュール４１８は、カメラセンサ４０２と関連付けられる。一実施形態では、プリプロセッサは、兼用ＣＭＯＳセンサおよびプロセッサとしてセンサと関連付けられる。いくつかの実施形態（図４Ｂ）では、事前処理モジュールは、カメラコントローラ４１４と関連付けられる。いくつかの実施形態では、事前処理モジュールは、取得システムコントローラ１１０（図４Ｃ）と関連付けられる。
【００３９】
（産業上の可用性）
本発明の多数の修正が、前述の説明の観点から当業者に明白となるであろう。故に、本説明は、例証のみとして解釈されるべきであり、当業者が本発明を作製および使用することを可能にすることを目的として、かつ同一物を実行する最良の形態を教示するために提示される。添付される請求項の範囲内にある、あらゆる修正に対する排他的権利が、留保される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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