(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号２と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＴＬＲ５アゴニスト活性を有するフラジェリンベースの薬剤およびアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩を含むアジュバントであって、前記フラジェリンベースの薬剤と前記アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩との比が約１：５００以下の比（ｗ／ｗ）であるアジュバントと、
（ｂ）抗原と
を含む、ワクチン組成物。
【請求項２】
前記フラジェリンベースの薬剤が、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記アルミニウム塩が、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムカリウムから選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記抗原が、以下のワクチン：ＤＴＰ（ジフテリア−破傷風−百日咳ワクチン）、ＤＴａＰ（ジフテリア−破傷風−無細胞百日咳ワクチン）、Ｈｉｂ（インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型）コンジュゲートワクチン、肺炎球菌コンジュゲートワクチン、Ａ型肝炎ワクチン、灰白髄炎ワクチン、黄熱病ワクチン、Ｂ型肝炎ワクチン、ＤＴａＰ、Ｔｄａｐ、Ｈｉｂ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）混合ワクチン、炭疽ワクチンおよび狂犬病ワクチンのうちの１つまたは複数のものの抗原である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ワクチンは、水中油型乳剤、サポニンアジュバント、オボアルブミン、フロイントアジュバント、サイトカインおよびキトサンから選択される追加のアジュバントをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記フラジェリンベースの薬剤および前記抗原のうちの１つまたは複数のものをアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩に吸着させる、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記フラジェリンベースの薬剤と前記アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを混合して安定な複合体を形成させる、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記フラジェリンベースの薬剤と前記アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを約１：５００、約１：６００、約１：７００、約１：８００、約１：９００、約１：１０００、約１：２０００、約１：５０００または約１：１００００の比（ｗ／ｗ）で混合する、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記フラジェリンベースの薬剤と前記アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを、前記アルミニウム塩の搭載能を実質的に下回る比で混合する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ワクチンおよび／または前記アジュバントが、ＴＨ１媒介性免疫応答およびＴＨ２媒介性免疫応答のうちの１つまたは複数のものの免疫刺激を引き起こす、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ワクチンおよび／または前記アジュバントが、前記抗原と前記アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを単独で含むワクチンよりも高いレベルでＴＨ１媒介性免疫応答の免疫刺激を引き起こす、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
対象に障害に対するワクチンを接種することにおいて使用するための医薬組成物であって、
（ａ）配列番号２と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＴＬＲ５アゴニスト活性を有するフラジェリンベースの薬剤およびアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩を含むアジュバントであって、前記フラジェリンベースの薬剤と前記アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩との比が約１：５００以下の比（ｗ／ｗ）であるアジュバントと、
（ｂ）前記障害の原因となる抗原と
を含む、医薬組成物。
【請求項１３】
前記障害が、感染症、癌およびアレルギーから選択される、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記障害が、ジフテリア、破傷風、百日咳、インフルエンザ、肺炎、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、ポリオ、黄熱病、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染症、炭疽、狂犬病、日本脳炎、髄膜炎、麻疹、流行性耳下腺炎、風疹、胃腸炎、痘瘡、腸チフス、水痘（水疱瘡）、ロタウイルスおよび帯状疱疹から選択される、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記フラジェリンベースの薬剤が配列番号２のアミノ配列を含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記フラジェリンベースの薬剤が、抗フラジェリン抗体を中和してアジュバントを中和する能力を阻害するか打ち消す、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記アルミニウム塩が、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムカリウムから選択される、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記フラジェリンベースの薬剤と前記アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを約１：５００、約１：６００、約１：７００、約１：８００、約１：９００、約１：１０００、約１：２０００、約１：５０００または約１：１００００の比（ｗ／ｗ）で混合する、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記ワクチンおよび／または前記アジュバントが、ＴＨ１媒介性免疫応答およびＴＨ２媒介性免疫応答のうちの１つまたは複数のものの免疫刺激を引き起こす、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記ワクチンおよび／または前記アジュバントが、前記抗原と前記アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを単独で含むワクチンよりも高いレベルでＴＨ１媒介性免疫応答の免疫刺激を引き起こす、請求項１２に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２０１４年７月３０日に出願された米国仮特許出願第６２／０３１，１１６号；２０１５年２月２日に出願された同第６２／１１０，７４４号；および２０１５年２月１７日に出願された同第６２／１１７，３６６号の利益を主張するものであり、上記出願の内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は特に、フラジェリンベースの薬剤を含むアジュバントを含めた新規な組成物およびワクチン接種の方法に関する。
【０００３】
（電子出願されるテキストファイルの説明）
本明細書とともに電子出願されるテキストファイル、すなわちコンピュータで読み取り可能な形式の配列表のコピー（ファイル名：ＣＬＥ０１９ＰＣ  ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ；データ記録日：２０１５年７月２４日；ファイルサイズ：２６１ＫＢ）の内容は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００４】
ワクチンは、感染症、癌およびアレルギーに対して用いることができる最も効果的な予防的保健手段のひとつである。ワクチン接種は、投与抗原に対する強力な免疫応答を生じさせ、長期間にわたって障害に対する保護をもたらすことを目的とするものである。しかし、多くの場合、抗原単独では防御免疫を刺激するのに不十分である。
【０００５】
ワクチンアジュバントは、ワクチンに含まれる抗原に対する特異的免疫応答を増強する化合物である。現時点で、数百種類の天然および合成の化合物にアジュバント活性があることが知られているが、米国でヒトへの使用が認可されているのはミョウバン塩およびＡＳ０４のみである。これだけの限られたアジュバントでは、効果的なワクチン接種の機能的な必要性を満たすには不十分である。例えば、ミョウバンは良好なＴＨ２応答を誘導することが可能であるが、多数の病原体からの保護に極めて重要な細胞性（ＴＨ１）免疫応答を刺激する能力はほとんどない。
【０００６】
このため、対象の免疫応答を効果的に刺激することができる改善されたワクチンおよび／またはアジュバントが依然として必要とされている。
【発明の概要】
【０００７】
したがって、いくつかの態様では、本発明は改善されたワクチンおよび／またはアジュバントを提供する。
【０００８】
いくつかの態様では、本発明は、フラジェリンベースの薬剤、例えばＣＢＬＢ５０２（ａ／ｋ／ａエントリモド）および本明細書に記載されるいずれかのフラジェリンベースの薬剤または誘導体（例えば、表１）などならびにアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩を含むアジュバントと、抗原と、任意選択で追加のアジュバントとを含む、ワクチン組成物を提供する。いくつかの態様では、本発明は、ＣＢＬＢ５０２および本明細書に記載されるいずれかのフラジェリンベースの薬剤または誘導体（例えば、表１）を含めたフラジェリンベースの薬剤と、アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを含むアジュバントを含む、アジュバント組成物を提供する。種々の実施形態では、本明細書に記載されるワクチンは、抗原とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを単独で含むワクチンに比してアジュバント特性に改善をもたらす。種々の実施形態では、本明細書に記載されるワクチンおよび／またはアジュバントは、抗原とアルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩とを単独で含むワクチンおよび／またはアルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩を単独で含むアジュバントよりも広範で多様性に富み、堅固で、長期間持続する免疫刺激効果を引き起こす。種々の実施形態では、本明細書に記載されるワクチンおよび／またはアジュバントは、ＴＨ１媒介性（mediated：仲介性）免疫応答およびＴＨ２媒介性（mediated：仲介性）免疫応答のうちの１つまたは複数（例えば、ＴＨ１媒介性免疫応答およびＴＨ２媒介性免疫応答の両方）の免疫刺激を引き起こし、かつ／あるいは、本明細書に記載されるワクチンおよび／またはアジュバントは、抗原とアルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩とを単独で含むワクチンおよび／またはアルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩を単独で含むアジュバントよりも高いレベルでＴＨ１媒介性免疫応答の免疫刺激を引き起こす。
【０００９】
いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、フラジェリン分子もしくはフラジェリンベースの薬剤またはＴＬＲ５アゴニスト活性を有するその変異体であり得る。フラジェリンベースの薬剤は、表１（配列番号１〜２５２）の１つもしくは複数の配列またはＴＬＲ５アゴニスト活性を有するその変異体を含み得るものであり、サルモネラ・ダブリン（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｄｕｂｌｉｎ）野生型フラジェリン（配列番号１）の変異体、ＣＢＬＢ５０２（配列番号２）またはその変異体（Ｓ３３ＭＬ（配列番号３５）、ＣＢＬＢ５０２−４８５ＣＴ（ＣＢＬＢ５３３、配列番号７１）およびＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３ＭＸ（配列番号１５０）などの近縁の変異体を含む）およびより遠縁の変異体、例えば好熱性微生物由来のフラジェリン誘導体またはヒトによる耐容性に優れた微生物由来のフラジェリン誘導体など（例えば、配列番号２４３〜２５２）を含み得る。いくつかの実施形態では、アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩は、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウムおよびＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬから選択される。
【００１０】
種々の実施形態では、本発明のワクチン組成物は、以下のワクチン：ＤＴＰ（ジフテリア−破傷風−百日咳ワクチン）、ＤＴａＰ（ジフテリア−破傷風−無細胞百日咳ワクチン）、Ｈｉｂ（インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型）コンジュゲートワクチン、肺炎球菌コンジュゲートワクチン、Ａ型肝炎ワクチン、灰白髄炎ワクチン、黄熱病ワクチン、Ｂ型肝炎ワクチン、ＤＴａＰ、Ｔｄａｐ、Ｈｉｂ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）混合ワクチン、炭疽ワクチンおよび狂犬病ワクチンの一部である（例えば、これらのワクチンの抗原を本発明のワクチンの抗原として使用し得る）。
【００１１】
種々の実施形態では、本明細書に記載されるワクチンは、部分的には、フラジェリンベースの薬剤とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを混合して安定な複合体を形成させることによって形成され、フラジェリンベースの薬剤とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩の比（ｗ／ｗ）が約１：５００以下（例えば、約１：５００、約１：６００、約１：７００、約１：８００、約１：９００、約１：１０００、約１：２０００または約１：５０００）である。いくつかの実施形態では、アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩の搭載能をはるかに下回る比でフラジェリンベースの薬剤とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを混合する。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤および抗原をアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩に吸着させる。
【００１２】
別の態様では、本発明は、対象に障害に対するワクチンを接種する方法であって、フラジェリンベースの薬剤およびアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩を含むアジュバントと、障害の原因となる抗原とを含む有効量のワクチンを投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本発明は、ワクチン接種に先立ってまたはそれと同時に対象に免疫刺激を実施する方法であって、フラジェリンベースの薬剤とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを含む有効量のアジュバントを投与することを含み、ＴＨ１媒介性免疫応答およびＴＨ２媒介性免疫応答がともに免疫刺激される、方法を提供する。種々の実施形態では、障害は、感染症、癌、アレルギーおよび自己免疫疾患（例を挙げれば、ジフテリア、破傷風、百日咳、インフルエンザ、肺炎、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、ポリオ、黄熱病、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染症、各種の癌、炭疽、狂犬病、日本脳炎、髄膜炎、麻疹、流行性耳下腺炎、風疹、胃腸炎、痘瘡、腸チフス、水痘（水疱瘡）、ロタウイルスおよび帯状疱疹）から選択される。
【００１３】
本発明の詳細については、以下の添付の説明に記載する。本発明の実施または検証には、本明細書に記載されるものとほぼ同じまたは同じ方法および材料を用いることができるが、例示的な方法および材料をこれより記載する。この説明および「特許請求の範囲」から本発明のその他の特徴、目的および利点が明らかになるであろう。本明細書および添付の「特許請求の範囲」では、文脈上明らかに別の意味を表す場合を除き、単数形は複数形をも包含する。別途明記されない限り、本明細書で使用される技術用語および科学用語はいずれも、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１Ａ】ＴＬＲ５活性に重要であると思われるフラジェリンの１３個の保存アミノ酸を示す図である。図１Ａは、２１種の細菌の保存されたアミノ末端のアミノ酸配列の比較を示している。ＴＬＲ５活性に重要な１３個の保存アミノ酸には影が施されている。アミノ酸配列は、ＴｒＥＭＢＬ（最初の文字がＱ）またはＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ（最初の文字がＰ）のアクセッション番号によって識別される。
【図１Ｂ】ＴＬＲ５活性に重要であると思われるフラジェリンの１３個の保存アミノ酸を示す図である。図１Ｂは、２１種の細菌の保存されたカルボキシ末端のアミノ酸配列の比較を示している。ＴＬＲ５活性に重要な１３個の保存アミノ酸には影が施されている。アミノ酸配列は、ＴｒＥＭＢＬ（最初の文字がＱ）またはＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ（最初の文字がＰ）のアクセッション番号によって識別される。
【図２】追加免疫後１週間の時点における５つのマウス処置群の平均応答に関するＥＬＩＳＡのデータを示す図である。パネルＡは総ＩｇＧ、パネルＢはＩｇＧ１、パネルＣはＩｇＧ２ａ、パネルＤはＩｇＧ２ｂ、パネルＥはＩｇＧ３である。グループ１〜５は表Ｂ（実施例２）に明記されるものである：グループ１は「未処置」、グループ２は「ＯＶＡ」、グループ３は「ＯＶＡ＋ミョウバン」、グループ４は「ＳＡ  １μｇ」、グループ５は「ＳＡ  １０μｇ」とも称される。
【図３】追加免疫後２週間の時点における５つのマウス処置群の平均応答に関するＥＬＩＳＡのデータを示す図である。パネルＡは総ＩｇＧ、パネルＢはＩｇＧ１、パネルＣはＩｇＧ２ａ、パネルＤはＩｇＧ２ｂ、パネルＥはＩｇＧ３である。グループ１〜５は表Ｂ（実施例２）に明記されるものである：グループ１は「未処置」、グループ２は「ＯＶＡ」、グループ３は「ＯＶＡ＋ミョウバン」、グループ４は「ＳＡ  １μｇ」、グループ５は「ＳＡ  １０μｇ」とも称される。
【図４】追加免疫後４週間の時点における５つのマウス処置群の平均応答に関するＥＬＩＳＡのデータを示す図である。パネルＡは総ＩｇＧ、パネルＢはＩｇＧ１、パネルＣはＩｇＧ２ａ、パネルＤはＩｇＧ２ｂ、パネルＥはＩｇＧ３である。グループ１〜５は表Ｂ（実施例２）に明記されるものである：グループ１は「未処置」、グループ２は「ＯＶＡ」、グループ３は「ＯＶＡ＋ミョウバン」、グループ４は「ＳＡ  １μｇ」、グループ５は「ＳＡ  １０μｇ」とも称される。
【図５】細胞ベースのＮＦ−κＢ活性化アッセイを用いてＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ活性を求めた図である。ＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ製剤（５μｇ／１００μｌ）およびＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ対照をアッセイ培地で２０００〜１３１２２０００倍（アルミニウム２．６〜０．０００４μｇ／ｍｌ）に連続希釈し、２９３−ｈＴＬＲ５−ＬａｃＺ細胞と２０時間インキュベートした。細胞溶解緩衝液およびＯＮＰＧ基質の添加後にβ−ガラクトシダーゼの活性を測定し、４１４ｎｍにおける吸光度（ＯＤ４１４）で表した。
【図６】様々なＣＢＬＢ５０２用量で調製したＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬのＮＦ−κＢ誘導活性を示す図である。２９３−ｈＴＬＲ５−ＬａｃＺ細胞と、２．５〜０．０００１５μｇ／１００μｌの範囲のＣＢＬＢ５０２用量で調製し培地で２００倍に希釈したＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ懸濁液とをインキュベートした。２０時間インキュベートした後、β−ガラクトシダーゼレポーター酵素の活性を測定した。
【図７】２９３−ｈＴＬＲ５−ＬａｃＺレポーター細胞を用いて作成した用量応答滴定曲線ＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬを示す図である。ＣＢＬＢ５０２を図示される用量（２０μｇ／１００μｌ：上段パネル、０．３１μｇ／１００μｌ：中段パネルおよび０．０７８μｇ／１００μｌ：下段パネル）でＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬに吸着させ、培地で連続希釈し、可溶性ＣＢＬＢ５０２標準品とともにアッセイした。
【図８】４℃で２日間および６日間保管したＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ（用量１μｇ／１００μｌ）の活性を示す図である。２９３−ｈＴＬＲ５−ＬａｃＺレポーター細胞アッセイを用いてＮＦ−κＢ誘導活性を測定した。
【図９】ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ２％に吸着させたＣＢＬＢ５０２を１μｇ用量皮下注射した後のマウス血清中のＣＢＬＢ５０２の薬物動態を示す図である。グラフは、各時点における１グループ当たりの血清中ＣＢＬＢ５０２濃度の平均値とＳＥＭ（平均の標準誤差）を示している。
【図１０】ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ２％に吸着させたＣＢＬＢ５０２を１μｇ用量ｓ．ｃ．投与した後のＫＣ、Ｇ−ＣＳＦおよびＩＬ−６の誘導を示す図である。Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社のＤｕｏＳｅｔキットＤＹ４５３（ＫＣ、上段パネル）、ＤＹ４１４（Ｇ−ＣＳＦ、中段パネル）およびＤＹ４０６（ＩＬ−６、下段パネル）を用いてサイトカインの血清中濃度を求めた。グラフは、各時点における１グループ当たりの血清中サイトカイン濃度の平均値とＳＥＭ（平均の標準誤差）を示している。
【図１１】５０２アジュバントの免疫賦活効果を示す図である。初回ワクチン接種から２週間後、４週間後および６週間後に採取しプールした血清中、ミョウバンまたはエントリモド（０〜２０μｇの範囲で変化させた）の存在下および不在下でのＥＬＩＳＡによるＴＴ−ＳＭＡワクチンに対する抗ＭＡ  ＩｇＧ（μｇ／ｍｌ）応答（パネルＡ）および抗５０２抗体応答（パネルＢ）が示されている。データは、各グループ（ｎ＝５／グループ）からプールした試料中の抗体のレベルを表している。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
（発明の詳細な説明）
本発明はこのほか、ＣＢＬＢ５０２を含めたフラジェリンベースの薬剤および本明細書に記載されるいずれかのフラジェリンベースの薬剤（例えば、ＭＸ−３３を含めた表１の配列を含む薬剤）と、アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩（および任意選択で抗原）とを、アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩の搭載能／吸着能をはるかに下回る比（例えば、１：５００）で混合し、抗原とアルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩とを単独で含むワクチンおよび／またはアルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩を単独で含むアジュバントよりも広範で多様性に富み、堅固で、長期間持続する免疫刺激効果をもたらすことが可能であるという驚くべき発見に部分的に基づく。また、本発明者らは驚くべきことに、その免疫刺激効果が免疫応答のＴＨ１媒介性の部分およびＴＨ２媒介性の部分の両方に影響を及ぼし得ることを発見した。また、本発明者らは驚くべきことに、ＣＢＬＢ５０２を含めたフラジェリンベースの薬剤およびいずれかのフラジェリンベースの薬剤（例えば、ＭＸ−３３を含めた表１の配列を含む薬剤）が抗原に対して少ない量で免疫刺激に効果があることを発見した。
【００１６】
一態様では、本発明は、フラジェリンベースの薬剤およびアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩を含むアジュバントと、抗原と、任意選択で追加のアジュバントとを含むワクチン組成物を提供する。一態様では、本発明は、フラジェリンベースの薬剤と、アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを含むアジュバントを提供する。
【００１７】
いくつかの実施形態では、記載されるワクチンは、抗原とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを単独で含むワクチンに比してアジュバント特性の改善をもたらす。種々の実施形態では、本明細書に記載されるワクチンおよび／またはアジュバントは、抗原とアルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩とを単独で含むワクチンよりも（または抗原とフラジェリンベースの薬剤とを単独で含むワクチンと比較して）、および／またはアルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩を単独で含むアジュバントよりも（またはフラジェリンベースの薬剤を単独で含むアジュバントと比較して）広範で多様性に富み、堅固で、長期間持続する免疫刺激効果をもたらす。
【００１８】
いくつかの実施形態では、記載されるワクチンおよび／または記載されるアジュバントは、ＴＨ１媒介性免疫応答およびＴＨ２媒介性免疫応答のうちの１つまたは複数のものの免疫刺激を引き起こす。いくつかの実施形態では、記載されるワクチンおよび／または記載されるアジュバントは、ＴＨ１媒介性免疫応答およびＴＨ２媒介性免疫応答の両方の免疫刺激を引き起こす。いくつかの実施形態では、記載されるワクチンおよび／または記載されるアジュバントは、抗原とアルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩とを単独で含むワクチンまたはアルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩を単独で含むアジュバントよりも高いレベルでＴＨ１媒介性免疫応答の免疫刺激を引き起こす。
【００１９】
ＴＨ１媒介性免疫応答（または「１型応答」）は概ね、マクロファージおよびＣＤ８＋Ｔ細胞との相互作用を含むものであり、インターフェロン−γ、ＴＮＦ−β、インターロイキン−２およびインターロイキン−１０の産生と関係があり得る。ＴＨ１媒介性免疫応答は細胞性免疫系を促進し、マクロファージの殺作用効果および細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を最大限に高める。ＴＨ１媒介性免疫応答はこのほか、オプソニン化抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭおよびＩｇＡ）の産生を促進する。１型サイトカインのＩＦＮ−γは、樹状細胞およびマクロファージによるインターロイキン−１２の産生を増大させ、ＩＬ−１２は、正のフィードバックを介してヘルパーＴ細胞のＩＦＮ−γ産生を刺激し、これによりＴＨ１プロファイルが促進される。インターフェロン−γはこのほか、２型応答と関連するサイトカインであるインターロイキン−４などのサイトカインの産生を阻害し、これにより、それ自体の応答の維持にも働く。
【００２０】
ＴＨ２媒介性免疫応答（または「２型応答」）は概ね、Ｂ細胞、好酸球および肥満細胞との相互作用を含むものであり、インターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−９、インターロイキン−１０およびインターロイキン−１３と関係があり得る。ＴＨ２媒介性免疫応答は体液性免疫系を促進するものであり、Ｂ細胞の増殖を刺激し、Ｂ細胞の抗体クラススイッチングを誘導し、中和抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭおよびＩｇＡならびにＩｇＥ抗体）の産生を増大させ得る。２型応答のその他の機能としては、２種類の異なるサイトカインを用いた自らのプロファイルの促進が挙げられる。インターロイキン−４は、ヘルパーＴ細胞に作用してＴＨ２サイトカイン（それ自体を含む；自己制御である）の産生を促進するのに対し、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）は、ヘルパーＴ細胞のインターロイキン−２およびＩＦＮ−γのほか樹状細胞およびマクロファージのＩＬ−１２を含めた様々なサイトカインを阻害する。この２種類のサイトカインが組み合わさって作用するということは、Ｔ細胞がこれらのサイトカインを産生することを決定すれば、その決定が維持される（他のＴ細胞にも同じことをするよう促す）ことを示唆している。
【００２１】
この分割は医学的には、理論に束縛されることを望むものではないが、ミョウバンアジュバントがＴＨ２媒介性応答の誘導にのみ効果があり、ＴＨ１媒介性応答には効果がないという事実に特に関連するものである（例えば、内容全体が参照により本明細書に組み込まれるＳｍｉｔｈ  Ｋｏｒｓｈｏｌｍら，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｊａｎ  ２０１０；１２９（１）：７５−８６を参照されたい）。
【００２２】
種々の実施形態では、ＴＨ１媒介性応答およびＴＨ２媒介性応答の刺激は、多数の抗体代用アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡなど）を含めた当該技術分野で公知のアッセイによって測定され得る。例えば、理論に束縛されることを望むものではないが、ＩｇＧ１はＴＨ２様応答と関係があるのに対し、ＴＨ１応答はＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＧ３抗体の誘導と関係がある。
【００２３】
いくつかの実施形態では、記載されるワクチンおよび／または記載されるアジュバントは、（例えば、アルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩またはフラジェリンベースの薬剤を単独で含むアジュバントと比較して、あるいは抗原とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩（またはフラジェリンベースの薬剤）とを単独で含むワクチンと比較して）ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＧ３抗体のうちの１つまたは複数の力価の増大をもたらす。いくつかの実施形態では、記載されるワクチンおよび／または記載されるアジュバントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＧ３抗体すべての力価の相対的増大をもたらす。いくつかの実施形態では、記載されるワクチンおよび／または記載されるアジュバントは、フラジェリンベースの薬剤の不在下での記載されるワクチンおよび／または記載されるアジュバント（あるいは、アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩のみの不在下での記載されるワクチンおよび／または記載されるアジュバント）よりも多数のＩｇＧ３抗体の力価の相対的増大をもたらす。
【００２４】
したがって、いくつかの実施形態では、記載されるワクチンおよび／または記載されるアジュバントは多様化された免疫応答を引き起こす。例えば、いくつかの実施形態では、記載されるワクチンおよび／またはアジュバントによって生じる総ＩｇＧは、フラジェリンベースの薬剤を含まない記載されるワクチンおよび／またはアジュバントよりも多い。
【００２５】
いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、フラジェリン分子もしくはフラジェリン関連ポリペプチドまたはＴＬＲ５アゴニスト活性を有するその変異体であり得る。フラジェリンベースの薬剤は、各種のグラム陽性細菌種およびグラム陰性細菌種を含めた様々な入手源に由来するものであり得る。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、例えば米国特許出願公開第２００３／００４４４２９号（その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）の図７に図示されている細菌種のフラジェリンのいずれかに由来するアミノ酸配列を有し得る。フラジェリンベースの薬剤は、例えば米国特許出願公開第２００３／００４４４２９号の図７に記載されているフラジェリンポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に関連するヌクレオチド配列であって、ＮＣＢＩ  Ｇｅｎｂａｎｋデータベースを含めた入手源で公開されているヌクレオチド配列を有し得る。
【００２６】
フラジェリンベースの薬剤は、細菌鞭毛の主成分であり得る。フラジェリンベースの薬剤は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つまたは７つのドメインまたはそのフラグメントからなるものであり得る（例えば、内容全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，３２４，１６３号の図１０を参照されたい）。ドメインは、ＮＤ０、ＮＤ１、ＮＤ２、Ｄ３、ＣＤ２、ＣＤ１およびＣＤ０から選択され得る。ドメイン０（Ｄ０）、１（Ｄ１）および２（Ｄ２）は不連続なものであり得、ヘアピン構造の形成によってアミノ末端およびカルボキシ末端の残基が並置されたときに形成され得る。Ｄ１ドメインとＤ２ドメインとを含むアミノ末端およびカルボキシ末端が最も保存されたものであり得るのに対し、中央の超可変ドメイン（Ｄ３）は極めて可変性が高いものであり得る。保存されないＤ３ドメインは鞭毛繊維の表面に存在し得るものであり、主要な抗原エピトープを含有し得る。フラジェリンの強力な炎症誘発活性は、高度に保存されたＮ、ＣＤ１およびＤ２領域内に存在し得る。
【００２７】
フラジェリンベースの薬剤は、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属の種に由来するものであり得、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種の代表的な例にはＳ．チフィリウム（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）およびＳ．ダブリン（Ｓ．ｄｕｂｌｉｎ）（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｍ８４９７２によってコード化されている）がある。フラジェリン関連ポリペプチドは、野生型フラジェリン（配列番号１）のフラグメント、変異体、類似体、ホモログもしくは誘導体またはその組合せであり得る。フラジェリンのフラグメント、変異体、類似体、ホモログまたは誘導体は、フラジェリンのドメイン構造およびＴＬＲ５によって認識される保存された構造に基づく理論的設計によって入手し得る。
【００２８】
フラジェリンベースの薬剤は、特に限定されないが、米国特許出願公開第２００３／００４４４２９号（その内容が本明細書に組み込まれる）に開示されているフラジェリンポリペプチドおよび米国特許出願公開第２００３／００４４４２９号の図７（パネルＡ〜Ｆ）に示されるＢＬＡＳＴの結果に記載されているアクセッション番号に対応するフラジェリンペプチドまたはその変異体を含めた、任意のグラム陽性細菌種またはグラム陰性細菌種に由来するフラジェリンポリペプチドに関連するものであり得る。
【００２９】
いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、表１に記載されるポリペプチドまたは前記ポリペプチドをコードする核酸のうちのいずれかを含むか、これよりなるものである。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、表１に記載されるヌクレオチド配列によってコードされる。さらなる実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、表１に記載されるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、配列番号１〜２５２のうちの１つまたは複数のものを含む。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は柔軟なリンカーを含む。さらなる実施形態では、柔軟なリンカーは配列番号１６を含む。さらなる実施形態では、柔軟なリンカーは配列番号２４２を含む。
【００３０】
いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は配列番号１の変異体である。種々の実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は配列番号１ではない。
【００３１】
いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、ＣＢＬＢ５０２（配列番号２）を含むか、これよりなるものまたはＣＢＬＢ５０２（配列番号２）の変異体である。種々の実施形態では、ＣＢＬＢ５０２によって、特に中和抗フラジェリン抗体を生じさせるエピトープを除去するという利点が得られ、したがって、ミョウバンと併用することで本明細書にみられる驚くべきアジュバント特性がもたらされる。
【００３２】
いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、中和抗ＣＢＬＢ５０２抗体によって認識されるエピトープに変異を含む。フラジェリンベースの薬剤は、中和抗ＣＢＬＢ５０２抗体によって認識されるエピトープに１つまたは複数の変異を含み得るものであり、その変異は、中和抗ＣＢＬＢ５０２抗体が組成物を中和する能力を阻害するか打ち消す。さらなる実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、１つまたは複数のエピトープに短縮および変異を含む。さらなる実施形態では、変異はアラニンによるエピトープ残基の置換を含む。さらなる実施形態では、変異エピトープは、以下の残基：Ｅ１５３、Ｓ４４４、Ｔ１５４、Ｎ４４０、Ｑ１４２、Ｆ１３１、Ｄ４４３、Ｎ６８、Ｔ４４７、Ｓ１１０、Ｑ１１７、Ｒ１２４、Ｄ１１３、Ｅ１２０、Ｎ１２７およびＱ１２８のうちの１つまたは複数のものを含む。
【００３３】
フラジェリンベースの薬剤は、Ｄ０、Ｄ１、Ｄ２および可変Ｄ３ドメインのいずれか１つに対する挿入、欠失、トランスポゾン挿入および改変を含み得る。Ｄ３ドメインは、変異体がＴＬＲ５活性を刺激するようＤ１およびＤ２ドメインを適切にフォールディングさせるヒンジポリペプチドまたはリンカーポリペプチドで一部または全体が置換されたものであり得る。
【００３４】
いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、例えば既に短縮されたＣＢＬＢ５０２分子に対していくつかの残基が欠失した、フラジェリンの最小限の機能的コアであり得る。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、欠失、付加および置換含め、活性の改善がもたらされるよう野生型に対するアミノ酸同一性が変化している。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤はＣＢＬＢ５０２（配列番号２）に由来するものである。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は１つまたは複数のドメインに短縮を含む。さらなる実施形態では、フラジェリンベースの薬剤はＮ末端ドメインに欠失を含む。さらなる実施形態では、フラジェリンベースの薬剤はＮＤ０ドメインに欠失を含む。さらなる実施形態では、フラジェリンベースの薬剤はＮＤ０ドメイン全体の欠失を含む。さらなる実施形態では、フラジェリンベースの薬剤はＣ末端ドメインに欠失を含む。さらに別の実施形態では、フラジェリンベースの薬剤はＣＤ０ドメインに欠失を含む。さらに別の実施形態では、フラジェリンベースの薬剤はＣＤ０ドメインのアミノ酸４７０〜４８５を保持している。さらなる実施形態では、フラジェリンベースの薬剤はＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３（配列番号１７）である。
【００３５】
フラジェリンベースの薬剤は、図１Ａおよび図１Ｂに示される１３個の保存アミノ酸（８９位、９０位、９１位、９５位、９８位、１０１位、１１５位、４２２位、４２３位、４２６位、４３１位、４３６位および４５２位）のうちの少なくとも１０個、１１個、１２個または１３個を含み得る。フラジェリンは、配列番号１のアミノ酸１〜１７４および４１８〜５０５と少なくとも３０〜９９％同一であり得る。
【００３６】
いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤はタグを含む。さらなる実施形態では、タグはフラジェリンベースの薬剤のＮ末端に付加されている。さらに別の実施形態では、タグはフラジェリンベースの薬剤のＣ末端に付加されている。
【００３７】
いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は柔軟なリンカーを含む。さらなる実施形態では、柔軟なリンカーは配列番号１６を含む。さらなる実施形態では、柔軟なリンカーは配列番号２４２を含む。
【００３８】
種々の実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、配列番号２に由来するフラジェリン関連組成物のうちの１つまたは複数のものである。種々の実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、ＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３ＭＬ（配列番号３５）、ＣＢＬＢ５０２−４８５ＣＴ（ＣＢＬＢ５３３、配列番号７１）およびＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３ＭＸ（配列番号１５０）のうちの１つまたは複数のものである。
【００３９】
種々の実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は好熱性微生物由来のフラジェリン誘導体である。種々の実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、ヒトによる耐容性に優れた微生物由来のフラジェリン誘導体である。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は配列番号２４３〜２５２のうちの１つまたは複数のものである。
【００４０】
いくつかの実施形態では、変異体は、ＴＬＲ５アゴニスト活性を有する分子を含む。いくつかの実施形態では、変異体は、配列番号１または配列番号２と少なくとも約７０％（例えば、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％または約９９％）配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、分子を含む。
【００４１】
いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、表１に記載されるポリペプチドまたは前記ポリペプチドをコードする核酸のうちのいずれかを含むか、これよりなるものである。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、表１に記載されるヌクレオチド配列によってコードされる。さらなる実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、表１に記載されるポリペプチドのうちの１つまたは複数のものを含む。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、配列番号６９または７０のいずれかによってコードされるポリペプチドを含むか、これよりなるものである。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、配列番号７１のポリペプチドである「ＣＢＬＢ５４３」を含むか、これよりなるものである。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、配列番号１４９または１５１のいずれかによってコードされるポリペプチドを含むか、これよりなるものである。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤は、配列番号１５０のポリペプチドである「ＣＢＬＢ５３３」を含むか、これよりなるものである。
【００４２】
【表１】
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【００４３】
いくつかの実施形態では、アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩は、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、ＡＳ０４（アルミニウム塩とＭＰＬとからなる）およびＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬから選択される。いくつかの実施形態では、アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩は、本明細書に記載されるいずれかの追加のアジュバントとの製剤または混合物である。
【００４４】
いくつかの実施形態では、記載されるフラジェリンベースの薬剤およびアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩に追加する形でアジュバントを本発明に使用する。いくつかの実施形態では、追加のアジュバントは、水中油型乳剤、サポニンアジュバント、オボアルブミン、フロイントアジュバント、サイトカインおよびキトサンから選択される。例示的な追加のアジュバントとしては、特に限定されないが：（１）生化学的研究によく用いられるオボアルブミン（例えば、ＥＮＤＯＦＩＴ）；（２）水中油型乳剤（ムラミルペプチドまたは細菌細胞壁成分などの他の特定の免疫刺激物質の有無を問わない）、例えば、（ａ）マイクロフルイダイザー、例えばＭｏｄｅｌ  ＨＯｙマイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ社、ニュートン、マサチューセッツ州）などを用いてサブミクロンの粒子に調製した５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０および０．５％Ｓｐａｎ  ８５を含有する（任意選択で、様々な量のＭＴＰ−ＰＥを含有する）ＭＦ５９（国際公開第９０／１４８３７号）、（ｂ）サブミクロンの乳濁液に微小流体化するか、ボルテックスしてこれよりも粒子径の大きい乳濁液にした１０％スクアラン、０．４％Ｔｗｅｅｎ  ８０、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１およびｔｈｒ−ＭＤＰを含有するＳＡＦ、（ｃ）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ  ８０および任意選択で、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤＥＴＯＸ（商標））を含めたモノホスホリリピド（ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｉｐｉｄ）Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコラート（ＴＤＭ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）の群のうちの１つまたは複数の細菌細胞壁成分を含有するＲＩＢＩアジュバントシステム（ＲＡＳ）（ＲＩＢＩ  ＩＭＭＵＮＯＣＨＥＭ社、ハミルトン、モンタナ州）；ならびに（ｄ）ＡＤＤＡＶＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）など；（３）サポニンアジュバント、例えばＳＴＩＭＵＬＯＮ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、ウスター、マサチューセッツ州）などまたはこれより生成されるＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）などの粒子を使用し得る；（４）フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）；（５）サイトカイン、例えばインターロイキン（非限定的な例として、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２など）、インターフェロン（例えば、ガンマインターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）など；（６）加水分解によってＮ−アセチル基の大部分が除去されたキトサンをはじめとするキチンまたはポリ−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの誘導体（例えば、粘膜吸収促進剤としてキトサンを含む医薬製剤を開示している欧州特許出願公開第４６００２０号（全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）；ならびに（７）組成物の効果を増強する免疫刺激剤として作用するその他の物質、例えばモノホスホリルリピドＡが挙げられる。他の実施形態では、追加のアジュバントは、フラジェリンベースの薬剤（例えば、ＣＢＬＢ５０２または表１のいずれかの薬剤）、アルミニウム塩またはアルミニウムゲル、パターン認識受容体（ＰＲＲ）アゴニ���ト、ＣｐＧ  ＯＤＮおよびイミダゾキノリンのうちの１つまたは複数のものである。いくつかの実施形態では、追加のアジュバントは、環状［Ｇ（３’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（例えば、３’３’−ｃＧＡＭＰ  ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ）；環状［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］２’３’（例えば、２’３’ｃＧＡＭＰ  ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ）；環状［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（２’，５’）ｐ］（例えば、２’２’−ｃＧＡＭＰ  ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ）、環状ジアデニル酸一リン酸（例えば、ｃ−ｄｉ−ＡＭＰ  ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ）；環状ジグアニル酸一リン酸（例えば、ｃ−ｄｉ−ＧＭＰ  ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ）；ＴＬＲ７アゴニスト−イミダゾキノリン化合物（例えば、ＴＬＲ７アゴニスト、例えばガーディキモドＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ、イミキモドＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ、Ｒ８４８  ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥなど）；リポ多糖類（例えば、ＴＬＲ４アゴニスト）、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）０１１１：Ｂ４株由来のもの（例えば、ＬＰＳ−ＥＢ  ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ）など；モノホスホリルリピドＡ（例えば、ＭＰＬＡ−ＳＭ  ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥおよびＭＰＬＡ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ）；Ｎ−グリコリル化ムラミルジペプチド（例えば、Ｎ−グリコリル−ＭＤＰ  ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ）；ＣｐＧ  ＯＤＮ、クラスＡおよび／またはＣｐＧ  ＯＤＮ、クラスＢおよび／またはＣｐＧ  ＯＤＮ、クラスＣ（例えば、ＯＤＮ１５８５  ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ、ＯＤＮ１８２６  ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ、ＯＤＮ２００６  ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ、ＯＤＮ２３９５  ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ）、トリアシル化リポタンパク質（例えば、Ｐａｍ３ＣＳＫ４  ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ）；ポリイノシン−ポリシチジル酸（例えば、ポリ（Ｉ：Ｃ）（ＨＭＷ）ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ）；ならびにコードファクター（すなわち、マイコバクテリウム細胞壁成分であるトレハロース６，６’ジミコラート（ＴＤＭ））またはその類似体（例えば、ＴＤＢ  ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ、ＴＤＢ−ＨＳ１５  ＶＡＣＣＩＧＲＡＤＥ）のうちの１つまたは複数のものである。いくつかの実施形態では、追加のアジュバントは、ＴＬＲアゴニスト（例えば、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２および／またはＴＬＲ１３）、ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン（ＮＯＤ）アゴニスト、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）リガンドまたはその関連物質である。
【００４５】
いくつかの実施形態では、追加のアジュバントは、鉱物アジュバント、ゲルベースのアジュバント、界面活性剤、細菌生成物、油乳剤、微粒化アジュバント、融合タンパク質およびリポペプチドのうちの１つまたは複数のものである。他の箇所に記載されるアルミニウムアジュバント以外の鉱物塩アジュバントとしては、カルシウム塩（例えば、リン酸カルシウム）、鉄塩およびジルコニウム塩が挙げられる。他の箇所に記載されるアルミニウムゲルベースのアジュバント以外のゲルベースのアジュバントとしては、アセマンナンが挙げられる。界面活性剤としては、キラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ）樹皮の水抽出物由来のサポニンであるＱｕｉｌ  Ａ；サポニン、炭水化物鎖が結合したトリテルペノイド構造の疎水核を含む界面活性グリコシドおよびＱＳ−２１が挙げられる。細菌生成物としては、グラム陰性菌（例えば、マイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属菌種、コリネバクテリウム・パルバム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ）、Ｃ．グラヌロスム（Ｃ．ｇｒａｎｕｌｏｓｕｍ）、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）および髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ））の細胞壁ペプチドグリカンまたはリポ多糖、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ＭＤＰ）、ＭＤＰ由来の様々な化合物（例えば、スレオニル−ＭＤＰ）、リポ多糖（ＬＰＳ）（例えば、グラム陰性菌の細胞壁由来のもの）、トレハロースジミコラート（ＴＤＭ）およびＣｐＧモチーフを含むＤＮＡが挙げられる。油乳剤としては、ＦＩＡ、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ、Ａｄｊｕｖａｎｔ  ６５、Ｌｉｐｏｖａｎｔ、油ベースのアジュバントのｍｏｎｔａｎｉｄｅファミリーおよび各種リポソームが挙げられる。微粒化系およびポリマー系のなかでも、ポリ（ＤＬ−ラクチド−コグリコリド）マイクロスフェアが盛んに研究されており、本明細書で使用される。
【００４６】
さらに、いくつかの実施形態では、サイトカインが本発明のアジュバントとなる（例えば、ＩＦＮ−γおよび顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ））。このほか、炭水化物アジュバント（例えば、ガンマイヌリン、アルガムリン（γ−イヌリンと水酸化アルミニウムの組合せ）などのイヌリン由来アジュバントおよびグルコースおよびマンノースをベースとする多糖類、例えばグルカン、デキストラン、レンチナン、グルコマンナンおよびガラクトマンナンなど）が本発明に使用される。いくつかの実施形態では、アジュバント製剤が本発明に有用であり、このようなものとしては、他のアジュバント、例えばリピドＡ、アルガムリン、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）（Ｑｕｉｌ  Ａと脂質とコレステロールとからなり十二面体構造を有する、３０〜４０ｎｍのウイルス様粒子）と組み合わせたミョウバン塩が挙げられる。
【００４７】
いくつかの実施形態では、追加のアジュバントは、Ｂｒｏｗｎ  Ｆ，Ｈａａｈｅｉｍ  ＬＲ（編）．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ，Ｖｏｌ．９２．Ｂａｓｅｌ：Ｋａｒｇｅｒ  １９９８；１９−２８のＪｅｎｎｉｎｇｓら，Ａｄｊｕｖａｎｔｓ  ａｎｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｆｏｒ  Ｖｉｒａｌ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ−Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．、Ｓａｙｅｒｓら，Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１２；２０１２：８３１４８６ならびに／あるいはＰｅｔｒｏｖｓｋｙおよびＡｇｕｉｌａｒ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００４）８２，４８８−４９６（その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものである。
【００４８】
種々の実施形態では、本発明のアジュバント（例えば、フラジェリンベースの薬剤およびアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩）は、弱毒化生ワクチン、死菌ワクチンもしくは不活化ワクチン、トキソイドワクチン、サブユニットワクチンまたはコンジュゲートワクチンの一部であり得る。
【００４９】
種々の実施形態では、本発明のアジュバント（例えば、フラジェリンベースの薬剤およびアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩）は、１つもしくは複数の承認済みワクチンの一部であり得、かつ／または１つもしくは複数の承認済みワクチンの抗原は、本発明の抗原であり得る。いくつかの実施形態では、承認済みワクチンとしては、アデノウイルス；炭疽（Ｂｉｏｔｈｒａｘ）；ＢＣＧ（Ｔｉｃｅ）；ＤＴ（Ｓａｎｏｆｉ）；ＤＴａＰ（Ｄａｐｔａｃｅｌ）；ＤＴａＰ（Ｉｎｆａｎｒｉｘ）；ＤＴａＰ−ＨｅｐＢ−ＩＰＶ（Ｐｅｄｉａｒｉｘ）；ＤＴａＰ−ＩＰＶ（Ｋｉｎｒｉｘ）；ＤＴａＰ−ＩＰＶ／Ｈｉｂ（Ｐｅｎｔａｃｅｌ）；Ｈｉｂ（ＡｃｔＨＩＢ）；Ｈｉｂ（Ｈｉｂｅｒｉｘ）；Ｈｉｂ（ＰｅｄｖａｘＨＩＢ）；Ｈｉｂ／Ｈｅｐ  Ｂ（Ｃｏｍｖａｘ）；Ｈｉｂ／Ｍｅｎｉｎｇ．ＣＹ（ＭｅｎＨｉｂｒｉｘ）；Ｈｅｐ  Ａ（Ｈａｖｒｉｘ）；Ｈｅｐ  Ａ（Ｈａｖｒｉｘ）；Ｈｅｐ  Ｂ（Ｅｎｇｅｒｉｘ−Ｂ）；Ｈｅｐ  Ｂ（Ｒｅｃｏｍｂｉｖａｘ）；Ｈｅｐ  Ａ／Ｈｅｐ  Ｂ（Ｔｗｉｎｒｉｘ）；ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）（Ｃｅｒｖｅｒｉｘ）；ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）（Ｇａｒｄａｓｉｌ）；インフルエンザ（Ａｆｌｕｒｉａ）；インフルエンザ（Ａｇｒｉｆｌｕ）；インフルエンザ（Ｆｌｕａｒｉｘ）；インフルエンザ（Ｆｌｕｂｌｏｋ）；インフルエンザ（Ｆｌｕｃｅｌｖａｘ）；インフルエンザ（Ｆｌｕｖｉｒｉｎ）；インフルエンザ（Ｆｌｕｌａｖａｌ）；インフルエンザ（Ｆｌｕｚｏｎｅ：標準、高用量および皮内）；インフルエンザ（ＦｌｕＭｉｓｔ）；日本脳炎（Ｉｘｉａｒｏ）；髄膜炎菌（ＭＣＶ４−Ｍｅｎａｃｔｒａ）；髄膜炎菌（ＭＣＶ４−Ｍｅｎｖｅｏ）；髄膜炎菌（ＭＰＳＶ４−Ｍｅｎｏｍｕｎｅ）；ＭＭＲ（ＭＭＲ−ＩＩ）；ＭＭＲＶ（ＰｒｏＱｕａｄ）；肺炎球菌（ＰＣＶ１３−Ｐｒｅｖｎａｒ  １３）；肺炎球菌（ＰＰＳＶ−２３−Ｐｎｅｕｍｏｖａｘ）；ポリオ（ＩＰＶ−Ｉｐｏｌ）；狂犬病（Ｉｍｏｖａｘ）；狂犬病（ＲａｂＡｖｅｒｔ）；ロタウイルス（ＲｏｔａＴｅｑ）；ロタウイルス（Ｒｏｔａｒｉｘ）；痘瘡（Ｖａｃｃｉｎｉａ−ＡＣＡＭ２０００）；Ｔｄ（Ｄｅｃａｖａｃ）；Ｔｄ（Ｔｅｎｉｖａｃ）；Ｔｄ（Ｍａｓｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ社）；Ｔｄａｐ（Ａｄａｃｅｌ）；Ｔｄａｐ（Ｂｏｏｓｔｒｉｘ）；チフス（不活化−Ｔｙｐｈｉｍ  Ｖｉ）；チフス（経口−Ｔｙ２１ａ）；水痘（Ｖａｒｉｖａｘ）；黄熱病（ＹＦ−Ｖａｘ）；および帯状疱疹（Ｓｈｉｎｇｌｅｓ−Ｚｏｓｔａｖａｘ）が挙げられる。
【００５０】
種々の実施形態では、本発明のアジュバント（例えば、フラジェリンベースの薬剤およびアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩）は、１つもしくは複数の例示的ワクチンの一部であり得、かつ／または１つもしくは複数の例示的ワクチンの抗原は、本発明の抗原であり得る。例示的ワクチンとしては、例として、サブユニットワクチンおよび不活化または「死菌」ワクチン（例えば、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ＩＰＶ／Ｈｉｂ（百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ））、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ＩＰＶ／Ｈｉｂ（インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ））、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ＩＰＶ／Ｈｉｂ（ポリオウイルス）、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ＩＰＶ／Ｈｉｂ（破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ））、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ＩＰＶ／Ｈｉｂ（ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ））、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ｈｅｘａ（百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ））、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ｈｅｘａ（インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ））、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ｈｅｘａ（ポリオウイルス）、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ｈｅｘａ（Ｂ型肝炎ウイルス）、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ｈｅｘａ（破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ））、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ｈｅｘａ（ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ））、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ＩＰＶ（百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ））、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ＩＰＶ（ポリオウイルス）、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ＩＰＶ（破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ））、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ＩＰＶ（ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ））、Ｉｎｆａｎｒｉｘ／Ｈｉｂ（ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ））、Ｐｅｄｉａｒｉｘ（破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ））、Ｐｅｄｉａｒｉｘ（ポリオウイルス）、Ｐｅｄｉａｒｉｘ（Ｂ型肝炎ウイルス）、ＶｉＶａｘｉｍ（サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）菌種）、ＶｉＶａｘｉｍ（Ａ型肝炎ウイルス）；サブユニットワクチン（例えば、５ＣＶＭＢ（髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ））、百日咳菌（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）ＣｙａＡタンパク質ワクチン（百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ））、百日咳菌（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）ＰＴｘタンパク質ワクチン（百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ））、癌ＶＥＧＦＡタンパク質ワクチン（癌）、インチミンポリペプチドを用いた大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ワクチン（大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ））、Ｅｎｇｅｒｉｘ−Ｂ（Ｂ型肝炎ウイルス）、ピロリ菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）ＶａｃＡタンパク質ワクチン（ピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ））、Ｃ型およびＤ型ＨＣ（ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ））、Ｉｎｆａｎｒｉｘ／Ｈｉｂ（百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ））、Ｉｎｆａｎｒｉｘ／Ｈｉｂ（インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕ��  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ））、Ｉｎｆａｎｒｉｘ／Ｈｉｂ（破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ））、Ｍ．ガリセプチカム（Ｍ．ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ）ＴＭ−１タンパク質サブユニットワクチン（マイコプラズマ・ガリセプチカム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ））、ＭＤＡ修飾ヒトアポＢ−１００ペプチドワクチン（アテローム性動脈硬化症）、水酸化アルミニウム含有ＭＳＰ３−ＬＳＰ（プラスモジウム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）種）、流行性耳下腺炎ＨＮタンパク質サブユニットワクチン（ムンプスウイルス）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｉｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ＴＢＰ２タンパク質ワクチン（髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ））、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯｐｒＩタンパク質ワクチン（緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ））、熱帯熱マラリア原虫（Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）サブユニットＳＥ３６タンパク質ワクチン（プラスモジウム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）種）、オオアワガエリ（Ｐｈｌｅｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ）アレルギーＰｈｌ  ｐ１２サブユニットワクチン（アレルギー）、Ｒｅｃｏｍｂｉｖａｘ  ＨＢ（Ｂ型肝炎ウイルス）、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＣｌｐＰタンパク質ワクチン（肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ））；トキソイドワクチン（例えば、ＢｏＮＴ／Ｆ（Ｈｃ）（ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ））、ＤＡＰＴＡＣＥＬ（ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ））、Ｉｎｆａｎｒｉｘ（百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ））、Ｉｎｆａｎｒｉｘ（破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ））、ＫＩＮＲＩＸ（破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ））、ＰＢＴ（ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ））、Ｐｅｄｉａｒｉｘ（百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ））、不活化または「死菌」ワクチン（例えば、Ａｖａｘｉｍ（Ａ型肝炎ウイルス）、Ａｖａｘｉｍ−Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ（Ａ型肝炎ウイルス）、ＦＳＭＥ−ＩＭＭＵＮ（ダニ媒介脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ））、Ｉｎｆａｎｒｉｘ（ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ））、Ｉｘｉａｒｏ（日本脳炎ウイルス）、ＫＩＮＲＩＸ（ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ））およびＰｅｄｉａｒｉｘ（ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）））；ならびにコンジュゲートワクチン（例えば、アラビノマンナン−破傷風トキソイドコンジュゲート（結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））、ＣＣＰＳ−Ｐ６４ｋＲ（髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ））、ＣＯＭＶＡＸ（インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ））、Ｍｅｎｊｕｇａｔｅ（髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ））、Ｎｅｉｓｖａｃ−Ｃ（髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ））およびＰｅｄｖａｘＨＩＢ（インフルエンザ��（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ））が挙げられる。
【００５１】
いくつかの実施形態では、本発明のアジュバント（例えば、フラジェリンベースの薬剤およびアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩）を物質乱用を標的とするワクチン中で組み合わせる。例えば、一実施形態では、本発明のアジュバントをフェンタニル、ヘロイン、モルヒネ、アヘン、オキシコドン、ヒドロコドン、ケタミン、ＰＣＰ、バルビツラート、ベンゾジアゼピン、フルニトラゼパム、ＧＨＢ、メタカロン、ハシッシュ、マリファナ、ＬＳＤ、メスカリン、シロシビン、アンフェタミン、コカイン、ＭＤＭＡ、メタンフェタミン、メチルフェニデートおよびニコチンへの追加に対するワクチン（例えば、ＴＡ−ＣＤ（Ｃｅｌｔｉｃ  Ｐｈａｒｍａ社）、米国特許出願公開第２０１３／００１１４３２号（その内容が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている（例えば、６−（２Ｒ，３Ｓ）−３−（ベンゾイルオキシ）−８−メチル−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−２−カルボニルオキシ−ヘキサン酸（ＧＮＣ）または６−（（２Ｒ，３Ｓ）−３−（ベンゾイルオキシ）−８−メチル−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−２−カルボキサミド）ヘキサン酸）（ＧＮＥ）を抗原として使用する）ワクチンおよびＴＡ−ＮＩＣ（Ｃｅｌｔｉｃ  Ｐｈａｒｍａ社））に使用する。
【００５２】
いくつかの実施形態では、本発明のアジュバント（例えば、フラジェリンベースの薬剤およびアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩）および／または本発明のワクチンは、ＶＩＯＬＩＮまたはＶａｘｊｏデータベースの注釈付きのアジュバントまたは抗原（Ｈｅら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１４．４２（Ｄ１）：Ｄ１１２４−Ｄ１１３２およびＸｉａｎｇら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２００８  Ｊａｎ；３６：Ｄ９２３−８（その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている）のうちのいずれか１つを含み得る。
【００５３】
種々の実施形態では、本発明のアジュバント（例えば、フラジェリンベースの薬剤およびアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩）は、１つもしくは複数の癌ワクチンの一部であり得、かつ／または１つもしくは複数の癌ワクチンの抗原は、本発明の抗原であり得る。例示的癌ワクチンとしては、治療ワクチンおよび予防ワクチンが挙げられる。例えば、癌ワクチンとしては、ＯＮＣＯＰＨＡＧＥ（ＡＮＴＩＧＥＮＩＣＳ社、２００８年にロシアで腎癌に承認）、ＡＰＣ８０１５／シプロイセル−Ｔ／ＰＲＯＶＥＮＧＥ（ＤＥＮＤＲＥＯＮ社、例えば転移性ホルモン抵抗性前立腺癌に承認）、ＣＡＮＣＥＲＶＡＸ（ＣＡＮＶＡＸＩＮ）、ＧＥＮＩＴＯＰＥ  ＣＯＲＰ（ＭＹＶＡＸ個別化免疫療法）およびＦＡＶＲＩＬＬＥ社（ＦＡＶＩＤ）、発癌性ウイルスであるヒトパピローマウイルス（例えば、ＣＥＲＶＡＲＩＸ（ＧＳＫ社）およびＧＡＲＤＡＳＩＬ（ＭＥＲＣＫ社））、Ａ型肝炎ウイルス（例えば、ＣＥＲＶＡＲＩＸ（ＧＳＫ社）およびＧＡＲＤＡＳＩＬ（ＭＥＲＣＫ社））およびＢ型肝炎ウイルス（例えば、ＲＥＣＯＭＢＩＶＡＸ  ＨＢ（ＭＥＲＣＫ社）、ＥＮＧＥＲＩＸ−Ｂ（ＧＳＫ社）、ＥＬＯＶＡＣ  Ｂ（ＨＵＭＡＮ  ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬＳ  ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ社）、ＧＥＮＥＶＡＣ  Ｂ（ＳＥＲＵＭ  ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ社）、ＳＨＡＮＶＡＣ  Ｂ）を攻撃する予防ワクチンなどが挙げられる。
【００５４】
種々の実施形態では、本発明のアジュバント（例えば、フラジェリンベースの薬剤およびアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩）は、１つもしくは複数のアレルゲンワクチンの一部であり得、かつ／または１つもしくは複数のアレルゲンワクチンの抗原は、本発明の抗原であり得る。例えば、皮下免疫療法（ＳＣＩＴ）のアレルゲン組成物および方法が本発明に適用できる（例えば、「アレルギー注射」）。例えば、アレルギー性の鼻炎および結膜炎（例えば、花粉（ブタクサを含む）、イエダニ、動物皮屑および浮遊カビ胞子）；アレルギー性または外因性の気管支喘息（例えば、イエダニ、花粉、動物皮屑、カビ（クラドスポリウム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ））、ラテックス）；ならびに昆虫毒過敏症に対するワクチン接種がある。アレルゲンとしては、花粉（例えば、木、イネ科草本、雑草）、ペット皮屑（例えば、ネコの皮膚）、イエダニ、浮遊カビ、職業性空中アレルゲン、ミツバチ毒、スズメバチ毒およびヒアリ毒が挙げられる。
【００５５】
種々の実施形態では、本発明のワクチンの抗原は、弱毒化生ワクチン、死菌ワクチンもしくは不活化ワクチン、トキソイドワクチン、サブユニットワクチンまたはコンジュゲートワクチンの抗原であり得る。種々の実施形態では、本発明のワクチンの抗原は、本明細書に記載されるいずれかのワクチンの抗原である。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の抗原は、以下のワクチン：ＤＴＰ（ジフテリア−破傷風−百日咳ワクチン）、ＤＴａＰ（ジフテリア−破傷風−無細胞百日咳ワクチン）、Ｈｉｂ（インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型）コンジュゲートワクチン、肺炎球菌コンジュゲートワクチン、Ａ型肝炎ワクチン、灰白髄炎ワクチン、黄熱病ワクチン、Ｂ型肝炎ワクチン、ＤＴａＰ、Ｔｄａｐ、Ｈｉｂ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）混合ワクチン、炭疽ワクチン、カルメット・ゲラン桿菌（Ｔｂ）ワクチンおよび狂犬病ワクチンのうちの１つまたは複数のものの抗原である。
【００５６】
種々の実施形態では、フラジェリンベースの薬剤および抗原をアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩に吸着させる。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを混合して安定な複合体を形成させる。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを、アルミニウム塩の搭載能をはるかに下回る比で混合する。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とが、アルミニウム塩の搭載能をはるかに下回る比で存在する。種々の実施形態では、フラジェリンベースの薬剤とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを、約１：５００、約１：６００、約１：７００、約１：８００、約１：９００、約１：１０００、約１：２０００、約１：５０００、約１：６０００、約１：７０００、約１：８０００、約１：９０００または約１：１００００の比（ｗ／ｗ）で混合するか、両者が上記の比で存在する。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを、約１：５００以下の比（ｗ／ｗ）で混合する。いくつかの実施形態では、抗原の存在下でも、フラジェリンベースの薬剤とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とが、アルミニウム塩の搭載能をはるかに下回る比で存在する。
【００５７】
アジュバント（例えば、アルミニウムゲルまたはアルミニウム塩）の搭載（吸着）能は、様々な分析方法を用いて測定することができる。一般に、アジュバントに搭載または吸着させる薬剤の水相（例えば、フラジェリンベースの薬剤および／または抗原の溶液）中のタンパク質含有量を吸着の前後で比較することによってそれを実施する。例えば、ラモンフロキュレーションテストを用い得る（同じく、ジフテリアおよび破傷風トキソイドの吸着を判定するのに用いられる）。さらに、免疫沈降技術（例えば、定量的免疫電気泳動法または一元放射免疫拡散法）または分光測光技術（例えば、ＢＣＡ法）を用いて搭載を測定することができる。このほか、ＥＬＩＳＡ方法を用いてもよく、同じく免疫電気泳動またはＨＰＬＣを用いることができる。最終ワクチンのアルミニウム含有量は、例えば原子吸着分光測定などの分光測定法を含めた多数の既知の技術を用いてモニターすることができる。
【００５８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチンおよび／またはアジュバント中のアルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩の量はｍｇ／用量、約０．０５〜約１．０ｍｇ／用量または約０．１２５〜約０．６２５ｍｇ／用量である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるワクチンおよび／またはアジュバント中のアルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩の量は、約０．０５ｍｇ／用量、約０．１０ｍｇ／用量、約０．１５ｍｇ／用量、約０．２０ｍｇ／用量、約０．２５ｍｇ／用量、約０．３０ｍｇ／用量、約０．３５ｍｇ／用量、約０．４０ｍｇ／用量、約０．４５ｍｇ／用量、約０．５０ｍｇ／用量、約０．５５ｍｇ／用量、約０．６０ｍｇ／用量、約０．６５ｍｇ／用量、約０．７０ｍｇ／用量、約０．７５ｍｇ／用量、約０．８０ｍｇ／用量、約０．８５ｍｇ／用量、約０．９０ｍｇ／用量、約０．９５または約１．０ｍｇ／用量である。
【００５９】
いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの薬剤の量は、約０．０３〜約５μｇ／用量（例えば、約０．０３μｇ／用量、約０．１μｇ／用量、約０．３μｇ／用量、約０．５μｇ／用量（約１．０μｇ／用量、約１．５μｇ／用量、約２．０μｇ／用量、約２．５μｇ／用量、約３．０μｇ／用量、約４．０μｇ／用量、約４．５μｇ／用量、約５．０μｇ／用量）である。種々の実施形態では、本発明の組成物および方法は、約５μｇ／用量未満、４μｇ／用量未満、３μｇ／用量未満、２μｇ／用量未満、１μｇ／用量未満または０．５μｇ／用量未満の用量のフラジェリンベースの薬剤を含む。いくつかの実施形態では、本発明の組成物および方法は、低用量のフラジェリンベースの薬剤を含む。
【００６０】
種々の実施形態では、本発明の組成物および方法は、融合タンパク質としても、化学的コンジュゲーションを介するものであっても、抗原とフラジェリンベースの薬剤とを共有結合させることを含まない。種々の実施形態では、本発明の組成物は、フラジェリンベースの薬剤に対して等モル比の抗原を有する（融合物である場合）ことも、フラジェリンベースの薬剤１分子当たり複数個のハプテン分子を有する（化学的コンジュゲーションの場合）こともない。種々の実施形態では、本発明のいずれかのワクチンのフラジェリンベースの薬剤の量は、抗原の量よりも少ない。種々の実施形態では、本発明のいずれかのワクチンのフラジェリンベースの薬剤の量は、抗原の量よりも少ない。種々の実施形態では、本発明のいずれかのワクチンのフラジェリンベースの薬剤の量は、抗原の量よりもはるかに少ない。種々の実施形態では、本発明のいずれかのワクチンのフラジェリンベースの薬剤の量は、抗原の約５００分の１、約４５０分の１、約４００分の１、約３５０分の１、約３２５分の１、約３００分の１、約２５０分の１、約２００分の１、約１５０分の１、約１００分の１または約５０分の１である。
【００６１】
種々の実施形態では、フラジェリンベースの薬剤とミョウバンとの組合せは、フラジェリンベースの薬剤によるＴＬＲ５相互作用に実質的に影響を及ぼさない。
【００６２】
種々の実施形態では、本発明の組成物および方法はＴＮＦαの産生を誘導しない。
【００６３】
種々の実施形態では、本発明のフラジェリンベースの薬剤とミョウバンとの組合せは、低温で約１週間（例えば、約４℃で約３日間、約５日間、約６日間、約７日間または約１０日間）、実質的に安定である。
【００６４】
別の態様では、本発明は、対象に障害に対するワクチンを接種する方法であって、フラジェリンベースの薬剤およびアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩を含むアジュバントと、障害の原因となる抗原とを含む有効量のワクチンを投与することを含む、方法に関する。別の態様では、本発明は、対象に障害に対するワクチンを接種するための、フラジェリンベースの薬剤およびアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩を含むアジュバントと、障害の原因となる抗原とを含むワクチンの使用に関する。別の態様では、本発明は、対象に障害に対するワクチンを接種するための薬剤の製造への、フラジェリンベースの薬剤およびアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩を含むアジュバントと、障害の原因となる抗原とを含む有効量のワクチンの使用に関する。
【００６５】
別の態様では、本発明は、ワクチン接種に先立ってまたはそれと同時に対象に免疫刺激を実施する方法であって、フラジェリンベースの薬剤とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを含む有効量のアジュバントを投与することを含み、ＴＨ１媒介性免疫応答およびＴＨ２媒介性免疫応答がともに免疫刺激される方法に関する。別の態様では、本発明は、ワクチン接種に先立ってまたはそれと同時に対象に免疫刺激を実施するための、フラジェリンベースの薬剤とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを含む有効量のアジュバントの使用に関する。別の態様では、本発明は、ワクチン接種に先立ってまたはそれと同時に対象に免疫刺激を実施するための薬剤の製造への、フラジェリンベースの薬剤とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを含む有効量のアジュバントの使用に関する。
【００６６】
種々の実施形態では、本明細書に記載されるワクチンは、抗原とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とを単独で含む（またはフラジェリンベースの薬剤と抗原とを単独で含む）ワクチンに比してアジュバント特性の改善をもたらす。種々の実施形態では、本明細書に記載されるワクチンおよび／またはアジュバントは、抗原とアルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩とを単独で含む（もしくはフラジェリンベースの薬剤と抗原とを単独で含む）ワクチンおよび／またはアルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩を単独で含むアジュバント（もしくはフラジェリンベースの薬剤を単独で含むアジュバント）よりも広範で多様性に富み、堅固で長期間持続する免疫刺激効果をもたらす。
【００６７】
いくつかの実施形態では、記載されるワクチンおよび／または記載されるアジュバントは、（例えば、アルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩またはフラジェリンベースの薬剤を単独で含むアジュバントに比して、あるいは抗原とアルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩またはフラジェリンベースの薬剤とを単独で含むワクチンに比して）ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＧ３抗体のうちの１つ以上、２つ以上、３つ以上または全部の力価の増大をもたらす。いくつかの実施形態では、記載されるワクチンおよび／または記載されるアジュバントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＧ３抗体すべての力価の相対的増大をもたらす。いくつかの実施形態では、記載されるワクチンおよび／または記載されるアジュバントは、フラジェリンベースの薬剤の不在下での記載されるワクチンおよび／または記載されるアジュバント（あるいはアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩のみの不在下での記載されるワクチンおよび／または記載されるアジュバント）よりも多数のＩｇＧ３抗体の力価の相対的増大をもたらす。
【００６８】
いくつかの実施形態では、抗原をアジュバントと同時に、または逐次的に投与する。
【００６９】
いくつかの実施形態では、障害は、感染症、癌、アレルギーおよび自己免疫疾患から選択される。
【００７０】
いくつかの実施形態では、障害は、ジフテリア、破傷風、百日咳、インフルエンザ、肺炎、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、ポリオ、黄熱病、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染症、炭疽、狂犬病、日本脳炎、髄膜炎、麻疹、流行性耳下腺炎、風疹、胃腸炎、痘瘡、腸チフス、水痘（水疱瘡）、ロタウイルスおよび帯状疱疹から選択される。
【００７１】
いくつかの実施形態では、障害は、特に限定されないが、基底細胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脳および中枢神経系癌；乳癌；腹膜癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸および直腸癌；結合組織癌；消化器系癌；子宮内膜癌；食道癌；眼癌；頭頸部癌；胃癌（消化管癌を含む）；膠芽腫；肝癌；肝細胞癌；上皮内新生物；腎臓癌または腎癌；喉頭癌；白血病；肝癌；肺癌（例えば、小細胞肺癌，非小細胞肺癌，肺腺癌および肺扁平上皮癌）；メラノーマ；骨髄腫；神経芽腫；口腔癌（口唇，舌，口腔および咽頭）；卵巣癌；膵癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌；呼吸器系癌；唾液腺癌；肉腫；皮膚癌；扁平上皮癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮または子宮内膜癌；尿路系癌；外陰癌；ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含めたリンパ腫ならびにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小非分割細胞ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンストレームマクログロブリン血症；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；有毛細胞性白血病；慢性骨髄芽球性白血病；ならびにその他の癌腫および肉腫；および移植後リンパ球増殖性疾患（ＰＴＬＤ）ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、浮腫（脳腫瘍に関連する浮腫など）およびメイグス症候群から選択される癌である。
【００７２】
いくつかの実施形態では、障害は、非限定的な例としてアレルギー性の鼻炎および結膜炎、アレルギー性または外因性の気管支喘息ならびに昆虫毒過敏症から選択されるアレルギーである。
【００７３】
いくつかの実施形態では、障害は、（例えば、フェンタニル、ヘロイン、モルヒネ、アヘン、オキシコドン、ヒドロコドン、ケタミン、ＰＣＰ、バルビツラート、ベンゾジアゼピン、フルニトラゼパム、ＧＨＢ、メタカロン、ハシッシュ、マリファナ、ＬＳＤ、メスカリン、シロシビン、アンフェタミン、コカイン、ＭＤＭＡ、メタンフェタミン、メチルフェニデートおよびニコチンの）物質乱用障害である。
【００７４】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物（例えば、記載されるアジュバントおよびワクチン）は、無機酸もしくは有機酸と反応して薬学的に許容される塩を形成し得る十分な塩基性を示す官能基または無機酸もしくは有機酸と反応して薬学的に許容される塩を形成し得るカルボキシル基を有し得る。薬学的に許容される酸付加塩は、当該技術分野で周知の通り、薬学的に許容される酸から形成される。このような塩としては、例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２−１９（１９７７）ならびにＴｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ．Ｐ．Ｈ．ＳｔａｈｌおよびＣ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（編），Ｖｅｒｌａｇ，Ｚｕｒｉｃｈ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）２００２（全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている薬学的に許容される塩が挙げられる。
【００７５】
薬学的に許容される塩としては、非限定的な例として、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、クロリド、ブロミド、ヨージド、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸、グルカロン酸塩（ｇｌｕｃａｒｏｎａｔｅ）、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ショウノウスルホン酸塩、パモ酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ−アセトキシ安息香酸塩、ナフタレン−２−安息香酸塩、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、α−ヒドロキシ酪酸塩、ブチン−１，４−ジカルボン酸塩、ヘキシン−１，４−ジカルボン酸塩、カプリン酸塩、カプリル酸塩、桂皮酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、馬尿酸塩、リンゴ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ニコチン酸塩、フタル酸塩、テラフタル酸塩（ｔｅｒａｐｈｔｈａｌａｔｅ）、プロピオル酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、セバシン酸塩、スベリン酸塩、ｐ−ブロモベンゼンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エチルスルホン酸塩、２−ヒドロキシエチルスルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、ナフタレン−１，５−スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩および酒石酸塩が挙げられる。
【００７６】
「薬学的に許容される塩」という用語はほかにも、カルボン酸官能基などの酸性官能基と塩基とを有する本発明の組成物の塩を指す。適切な塩基としては、特に限定されないが、ナトリウム、カリウムおよびリチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウムおよび亜鉛などのその他の金属の水酸化物；アンモニアならびに有機アミン、例えば非置換またはヒドロキシ置換モノ−、ジ−またはトリ−アルキルアミン、ジシクロヘキシルアミンなど；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ−メチル，Ｎ−エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ−、ビス−またはトリス−（２−ＯＨ−低級アルキルアミン）、例えばモノ−；ビス−またはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミンまたはトリス−（ヒドロキシメチル）メチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジ−低級アルキル−Ｎ−（ヒドロキシル−低級アルキル）−アミン、例えばＮ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミンまたはトリ−（２−ヒドロキシエチル）アミンなど；Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン；およびアルギニン、リジンなどのアミノ酸が挙げられる。
【００７７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の組成物（例えば、記載されるアジュバントおよびワクチン）は、薬学的に許容される塩の形態である。
【００７８】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物（例えば、記載されるアジュバントおよびワクチン）は、薬学的に許容される担体または媒体を含み得る。このような組成物は任意選択で、適切な投与のための形態になるよう適切な量の薬学的に許容される補形剤を含み得る。
【００７９】
薬学的補形剤は液体、例えば水のほか、石油、動物、植物または合成由来の油、例えばラッカセイ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などを含めた油などであり得る。薬学的補形剤は、例えば、生理食塩水、アラビアゴム、ゼラチン、デンプンペースト、タルク、ケラチン、コロイドシリカ、尿素などであり得る。さらに、助剤、安定化剤、増粘剤、潤滑剤および着色剤を使用し得る。一実施形態では、薬学的に許容される補形剤は、対象に投与する際に無菌状態である。水は、本明細書に記載される任意の薬剤を静脈内に投与する場合に有用である。このほか、特に注射用液剤の液体補形剤として生理食塩水、デキストロース水溶液およびグリセロール水溶液を使用することができる。適切な薬学的補形剤としてはほかにも、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアラート、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。本明細書に記載される任意の組成物はほかにも、必要に応じて少量の湿潤剤、乳化剤またはｐＨ緩衝剤を含み得る。
【００８０】
本発明は、種々の製剤の形の本発明の組成物（例えば、記載されるアジュバントおよびワクチン）を含む。本発明の任意の組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、滴剤、錠剤、丸剤、ペレット、カプセル剤、液体含有カプセル剤、散剤、徐放性製剤、坐剤、乳剤、エアゾール剤、スプレー剤、懸濁剤の形態をはじめとする使用に適した任意の形態をとり得る。一実施形態では、組成物はカプセル剤の形態である（例えば、米国特許第５，６９８，１５５号を参照されたい）。適切な薬学的補形剤のその他の例については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １４４７−１６７６（Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、第１９版，１９９５）（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【００８１】
本発明の組成物は必要に応じて、可溶化剤も含み得る。ほかにも、当該技術分野で公知の適切な媒体または送達装置で薬剤を送達することができる。本明細書で概説される併用治療剤は、単一の送達媒体または送達装置で共送達することができる。投与する組成物は任意選択で、局所麻酔薬、例えば注射部位の疼痛を軽減するリグノカインなどを含み得る。
【００８２】
本発明の組成物を含む製剤は、単位投与剤形で提供するのが好都合であり得、製薬技術分野で周知のいずれかの方法によって調製され得る。このような方法は一般に、治療剤と、１つまたは複数の補助成分を構成する担体とを混合する段階を含む。通常、製剤は、治療剤と、液体担体、微粉化した固体担体またはその両方とを均一かつ密に混合した後、必要に応じて、生成物を所望の製剤の剤形に成形する（例えば、当該技術分野で公知の従来の方法を用いて、湿式または乾式造粒、粉末混合などを実施した後、打錠する）ことによって調製される。
【００８３】
一実施形態では、日常的な手順に従って、本発明の任意の組成物を本明細書に記載される投与様式に適合する組成物として製剤化する。
【００８４】
投与経路としては、例えば注射または注入による筋肉内経路が挙げられる。いくつかの実施形態では、記載されるフラジェリンベースの薬剤（例えば、ＣＢＬＢ５０２）とアルミニウムゲルまたはアルミニウム塩とのアジュバントは、フラジェリンベースの薬剤の全身送達を妨げ得るものであり、局所送達を誘導する。他の実施形態では、投与経路としては、経鼻送達、経口送達および舌下送達が挙げられる。
【００８５】
投与経路はこのほか、真皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、経口、舌下、鼻腔内、経皮または吸入によるものであり得る。いくつかの実施形態では、投与を経口的に、または非経口注射によって実施する。投与様式は実施者の裁量に委ねられ得るものであり、一部は医学的状態の部位に左右される。ほとんどの場合、投与によって、本明細書に記載される任意の薬剤が血流中に放出される。
【００８６】
本発明の任意の組成物（例えば、記載されるアジュバントおよびワクチン）は経口的に投与することができる。このような組成物はほかにも、他の任意の好都合な経路によって、例えば静脈内注入またはボーラス注射、上皮または皮膚粘膜を裏打ちする層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など）からの吸収によって投与することができるほか、別の生物学的に活性な薬剤とともに投与することができる。投与は全身投与であっても、局所投与であってもよい。様々な送達システム、例えばリポソーム、微粒子、マイクロカプセル、カプセルなどへの封入が知られており、これを投与に用いることができる。
【００８７】
非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下および関節内への注射および注入）に適した剤形としては、例えば液剤、懸濁剤、分散液剤、乳剤などが挙げられる。このような剤形はほかにも、使用直前に無菌注射媒体に溶解または懸濁させることが可能な無菌固形組成物（例えば、凍結乾燥組成物）の形態でも製造され得る。これらは例えば、当該技術分野で公知の懸濁化剤または分散剤を含有し得る。
【００８８】
本発明の任意の組成物（例えば、記載されるアジュバントおよびワクチン）の用量および投与スケジュールは、特に限定されないが、治療する障害、対象の全般的健康状態および投与を実施する医師の裁量を含めた様々なパラメータに左右され得る。
【００８９】
至適用量幅を明らかにするのにｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイを用いることができる。例えば、参考文献Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，第６６版，ＰＤＲ  Ｎｅｔｗｏｒｋ；２０１２年版（２０１１年１２月２７日）（その内容全体が参照により組み込まれる）を用いて用量を決定し得る。
【００９０】
本発明の組成物（例えば、記載されるアジュバントおよびワクチン）を非経口注射によって投与するには、用量を通常、約０．１ｍｇ／日〜約２５０ｍｇ／日、約１ｍｇ／日〜約２０ｍｇ／日または約３ｍｇ／日〜約５ｍｇ／日とする。注射は１日最大４回実施し得る。一般に、経口的または非経口的に投与する場合、本明細書に記載される任意の薬剤の用量を通常、約０．１ｍｇ／日〜約１５００ｍｇ／日、約０．５ｍｇ／日〜約１０ｍｇ／日または約０．５ｍｇ／日〜約５ｍｇ／日とする。最大約３０００ｍｇ／日の用量を投与することができる。
【００９１】
別の実施形態では、送達は小胞、特にリポソームによるものであり得る（Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３；Ｔｒｅａｔら，ｉｎ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ−ＢｅｒｅｓｔｅｉｎおよびＦｉｄｌｅｒ（編），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３５３−３６５（１９８９）を参照されたい）。
【００９２】
本発明の任意の組成物（例えば、記載されるアジュバントおよびワクチン）は、当業者に周知の制御放出もしくは徐放手段または送達装置によって投与することができる。例としては、特に限定されないが、米国特許第３，８４５，７７０号；同第３，９１６，８９９号；同第３，５３６，８０９号；同第３，５９８，１２３号；同第４，００８，７１９号；同第５，６７４，５３３号；同第５，０５９，５９５号；同第５，５９１，７６７号；同第５，１２０，５４８号；同第５，０７３，５４３号；同第５，６３９，４７６号；同第５，３５４，５５６号；および同第５，７３３，５５６号（それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものが挙げられる。このような剤形は、例えばヒドロプロピルメチルセルロース、その他のポリマーマトリックス、ゲル、透過性膜、浸透圧システム、多層コーティング、微粒子、リポソーム、マイクロスフェアまたはその組合せを用いて１つまたは複数の有効成分を制御放出または徐放させて、様々な割合の所望の放出プロファイルをもたらすのに有用であり得る。当業者に公知の適切な制御放出製剤または徐放性製剤は、本明細書に記載されるものを含み、本明細書に記載される薬剤の有効成分に用いるのに容易に選択することができる。したがって、本発明は、経口投与、例えば特に限定されないが、制御放出または徐放に適合させた錠剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤およびカプレット剤などに適した単一の単位投与剤形を提供する。
【００９３】
有効成分の制御放出または徐放は、特に限定されないが、ｐＨの変化、温度の変化、しかるべき波長の光による刺激、酵素の濃度もしくは利用効率、水の濃度もしくは利用効率をはじめとする生理的条件または化合物を含めた様々な条件によって刺激され得る。
【００９４】
別の実施形態では、ポリマー材料を使用し得る（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌｌ（編），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）；ＲａｎｇｅｒおよびＰｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照されたい；このほか、Ｌｅｖｙら，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇら，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄら，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５を参照されたい）。
【００９５】
別の実施形態では、治療する標的領域の近傍に放出制御システムを設置し、これにより全身用量の一部のみを要求することができる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，上記，第２巻，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）を参照されたい）。Ｌａｎｇｅｒによる総説（１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３）で論じられているその他の放出制御システムを用いてもよい。
【００９６】
本発明の組成物（例えば、記載されるアジュバントおよびワクチン）の投与は、独立したものとして１人の患者に１回実施しても、追加免疫戦略に用いてもよい。投与は、１日に約１回〜約４回、１か月に約１回〜約４回、１年に約１回〜約６回または２年、３年、４年もしくは５年に１回であり得る。投与は、約１日または約１か月、約２か月、約３か月、約６か月、約１年、約２年、約３年の期間であってよく、場合によっては対象の生涯にわたるものであり得る。投与は、単回投与で実施しても、複数回投与に分割して実施してもよい。
【００９７】
本明細書に記載される任意のフラジェリン関連組成物（および／または追加の薬剤）を用いる投与レジメンは、対象のタイプ、種、年齢、体重、性別および医学的状態；治療する状態の重症度；投与経路；対象の腎機能または肝機能；個体の薬理ゲノムの構成；ならびに用いる具体的な本発明の化合物を含めた様々な因子に応じて選択することができる。本明細書に記載される任意のフラジェリン関連組成物（および／または追加の薬剤）を単一の１日量で投与することができ、また総１日量を１日２回、３回または４回の用量に分割して投与することができる。さらに、本明細書に記載される任意のフラジェリン関連組成物（および／または追加の薬剤）は投与レジメン全体を通じて、間欠的にではなく、連続的に投与することができる。
【００９８】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物（例えば、記載されるアジュバントおよびワクチン）を１つまたは複数の追加の薬剤とともに用い得る。いくつかの実施形態では、本発明は共投与および／または共製剤化に関する。本明細書に記載されるいずれかの組成物を共製剤化および／または共投与し得る。
【００９９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される任意の組成物は、別の薬剤と共投与し、このような薬剤を単独療法として用いる場合によく用いられる用量よりも低い用量で投与すると、相乗的に作用する。種々の実施形態では、本明細書で言及される任意の薬剤を本明細書に記載される任意の組成物と併用し得る。
【０１００】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書の他の箇所に記載される追加の薬剤に関する。一実施形態では、任意のフラジェリン関連薬剤またはそれを含む組成物を、ＮＯＤ受容体を刺激する薬剤（例えば、ＮＯＤ１アゴニストおよびＮＯＤ２アゴニスト、例えばペプチドグリカン、Ｃ１２−ｉＥ−ＤＡＰおよびＬ１８−ＭＤＰなど）とともに、Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．Ｏｃｔ  ２０１３；８１（１０）：３８５５−３８６４（その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている通りに使用し得る。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、本発明は、追加の薬剤としての化学療法剤に関する。
【０１０２】
化学療法剤の例としては、特に限定されないが、チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮシクロスホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパおよびウレドパなどのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレン（ｅｔｈｉｙｌｅｎｅ）チオホスホルアミドおよびトリメチロロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含めたエチレンイミンおよびメチラメラミン；アセトゲニン（例えば、ブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオシタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（例えば、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エロイテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えばクロランブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなど；ニトロスウレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムヌスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）など；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマ１Ｉおよびカリケアマイシンオメガ１Ｉ（例えば、Ａｇｎｅｗ、Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．、３３：１８３−１８６（１９９４）を参照されたい）などの抗生物質；ジネミシンＡを含めたジネミシン；クロドロン酸などのビスホスホナート；エスペラマイシン；ならびにネオカルチノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン）（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン（マイトマイシンＣなど）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの抗代謝産物；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなど；アンドロゲン、例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなど；ミノグルテチミド（ｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）などの葉酸補給剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォルミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシンおよびアンサマイトシンなどのマイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（例えば、Ｔ−２毒素、ベラキュリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、ＴＡＸＯＬパクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、ＡＢＲＡＸＡＮＥクレモフォールフリー、パクリタキセルのアルブミン設計ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ社、シャウムベルク、１１１．）およびＴＡＸＯＴＥＲＥドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ社、アントニー、フランス）；クロランブシル；ＧＥＭＺＡＲゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチンなどの白金類似体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ．ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロン酸；イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、ＣＰＴ−１１）（イリノテカンと５−ＦＵおよびロイコボリンとの治療レジメンを含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン治療レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）を含めたオキサリプラチ��；ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ）；細胞増殖を減少させるＰＫＣ−α、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、ＥＧＦＲ（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ））およびＶＥＧＦ−Ａの阻害剤ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が挙げられる。さらに、治療方法は放射線照射の使用をさらに含み得る。さらに、治療方法は光線力学療法の使用をさらに含み得る。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるフラジェリンベースの薬剤（および／または追加の薬剤）には、修飾された誘導体、すなわち、組成物の活性を妨げないように任意の種類の分子と組成物とを共有結合させることによって修飾された誘導体が含まれる。例えば、特に限定されないが、誘導体には、特に、既知の保護／ブロック基、タンパク質分解による切断、細胞リガンドをはじめとするタンパク質との結合などによるグリコシル化、脂質化、アセチル化、ＰＥＧ化、リン酸化、アミド化、誘導体化によって修飾された組成物が含まれる。特に限定されないが、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツリカマイシンの代謝合成などを含めた既知の技術によって、多数の化学修飾のいずれかを実施することができる。さらに、誘導体は、１つまたは複数の非標準的アミノ酸を含有し得る。
【０１０４】
また別の実施形態では、本明細書に記載されるフラジェリンベースの薬剤（および／または追加の薬剤）は、例示的な実施形態において毒素、化学療法剤、放射性同位元素およびアポトーシスまたは細胞死を引き起こす薬剤を含む細胞毒性薬をさらに含む。このような薬剤を本明細書に記載される組成物とコンジュゲートさせ得る。
【０１０５】
したがって、本明細書に記載されるフラジェリンベースの薬剤（および／または追加の薬剤）を翻訳後修飾して、化学的リンカーなどのエフェクター部分、検出可能部分、例えば蛍光色素、酵素、基質、生物発光物質、放射性物質および化学発光部分などまたは機能的部分、例えばストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒素、細胞毒性薬および放射性物質などを付加し得る。
【０１０６】
例示的な細胞毒性薬としては、特に限定されないが、メトトレキサート、アミノプテリン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン；アルキル化剤、例えばメクロレタミン、チオエパ（ｔｈｉｏｅｐａ）クロランブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、マイトマイシンＣ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、１−メチルニトロソウレア、シクロトスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、メクロレタミン、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、シス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチンおよびカルボプラチン（パラプラチン）など；ダウノルビシン（旧ダウノマイシン）、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、デトルビシン、カルミノマイシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロンおよびビサントレンを含めたアントラサイクリン；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、カリケアマイシン、ミトラマイシンおよびアントラマイシン（ＡＭＣ）を含めた抗生物質；ならびにビンカアルカロイド、ビンクリスチンおよびビンブラスチンなどの有糸分裂阻害剤が挙げられる。その他の細胞毒性薬としては、パクリタキセル（タキソール）、リシン、シュードモナスエキソトキシン、ゲムシタビン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、エトポシド、テノポシド、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、副腎皮質ステロイド、ミトタン（Ｏ，Ｐ’−（ＤＤＤ））、インターフェロンおよび上記細胞毒性薬の混合物が挙げられる。
【０１０７】
さらなる細胞毒性薬としては、特に限定されないが、化学療法剤、例えばカルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、カリケアマイシン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、シクロホスファミド、ビンクリスチン、ブレオマイシン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、プラチン、タキソール、イリノテカン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、ロイコボリン、ステロイド、シクロホスファミド、メルファラン、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン）、ムスチン、チロシンキナーゼ阻害剤、放射線療法、性ホルモンアンタゴニスト、選択的アンドロゲン受容体モジュレーター、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、ＰＤＧＦアンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１アンタゴニスト、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１２またはＩＬ−２）、ＩＬ−１２Ｒアンタゴニスト、毒素コンジュゲートモノクローナル抗体、腫瘍抗原特異的モノクローナル抗体、Ｅｒｂｉｔｕｘ、Ａｖａｓｔｉｎ、ペルツズマブ、抗ＣＤ２０抗体、Ｒｉｔｕｘａｎ、オクレリズマブ、オファツムマブ、ＤＸＬ６２５、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）またはその任意の組合せなどが挙げられる。植物および細菌由来の毒性酵素、例えばリシン、ジフテリア毒素およびシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）毒素と治療剤（例えば、抗体）とをコンジュゲートさせて、細胞型特異的死滅試薬を作製し得る（Ｙｏｕｌｅら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：５４８３（１９８０）；Ｇｉｌｌｉｌａｎｄら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４５３９（１９８０）；Ｋｒｏｌｉｃｋら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：５４１９（１９８０））。
【０１０８】
その他の細胞毒性薬としては、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇにより米国特許第６，６５３，１０４号に記載されている細胞毒性リボヌクレアーゼが挙げられる。本発明の実施形態はほかにも、錯形成剤の使用の有無に関係なく、アルファ粒子またはベータ粒子を放射する放射性核種と抗体またはその結合フラグメントとを安定にカップリングさせる、放射性免疫複合体に関する。このような放射性核種としては、ベータ放射体、例えばリン−３２、スカンジウム−４７、銅−６７、ガリウム−６７、イットリウム−８８、イットリウム−９０、ヨウ素−１２５、ヨウ素−１３１、サマリウム−１５３、ルテチウム−１７７、レニウム−１８６またはレニウム−１８８などおよびアルファ放射体、例えばアスタチン−２１１、鉛−２１２、ビスマス−２１２、ビスマス−２１３またはアクチニウム−２２５などが挙げられる。
【０１０９】
例示的な検出可能部分としてはさらに、特に限定されないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼおよびルシフェラーゼが挙げられる。さらなる例示的蛍光物質としては、特に限定されないが、ローダミン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ウンベリフェロン、ジクロロトリアジニルアミン、フィコエリトリンおよびダンシルクロリドが挙げられる。さらなる例示的化学発光部分としては、特に限定されないがルミノールが挙げられる。さらなる例示的生物発光物質としては、特に限定されないが、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられる。さらなる例示的放射性物質としては、特に限定されないが、ヨウ素−１２５、炭素−１４、硫黄−３５、トリチウムおよびリン−３２が挙げられる。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、対象および／または動物は哺乳動物、例えば、ヒト、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ウサギ、ヒツジまたは非ヒト霊長類、例えばサル、チンパンジーもしくはヒヒなどである。他の実施形態では、対象および／または動物は非哺乳動物、例えばゼブラフィッシュなどである。いくつかの実施形態では、対象および／または動物は、（例えば、ＧＦＰにより）蛍光標識した細胞を含み得る。いくつかの実施形態では、対象および／または動物は、蛍光細胞を含むトランスジェニック動物である。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、対象および／または動物はヒトである。いくつかの実施形態では、ヒトはヒト小児である。他の実施形態では、ヒトはヒト成人である。他の実施形態では、ヒトはヒト老人である。他の実施形態では、ヒトを患者と呼ぶことがある。
【０１１２】
ある特定の実施形態では、ヒトは、約０か月〜約６か月、約６〜約１２か月、約６〜約１８か月、約１８〜約３６か月、約１〜約５歳、約５〜約１０歳、約１０〜約１５歳、約１５〜約２０歳、約２０〜約２５歳、約２５〜約３０歳、約３０〜約３５歳、約３５〜約４０歳、約４０〜約４５歳、約４５〜約５０歳、約５０〜約５５歳、約５５〜約６０歳、約６０〜約６５歳、約６５〜約７０歳、約７０〜約７５歳、約７５〜約８０歳、約８０〜約８５歳、約８５〜約９０歳、約９０〜約９５歳または約９５〜約１００歳の範囲の様々な年齢である。
【０１１３】
他の実施形態では、対象は非ヒト動物であり、したがって、本発明は獣医学的使用に関する。特定の実施形態では、非ヒト動物は家庭用ペットである。別の特定の実施形態では、非ヒト動物は家畜動物である。
【０１１４】
本発明は、本明細書に記載される任意の薬剤の投与を容易にすることができるキットを提供する。例示的な本発明のキットは、本明細書に記載される任意の組成物を単位投与剤形の形で含む。一実施形態では、単位投与剤形は、無菌であり、本明細書に記載される任意の薬剤と、薬学的に許容される担体、希釈剤、補形剤または媒体とを含み得る、予め充填したシリンジなどの容器である。キットは、本明細書に記載される任意の薬剤の使用を指示するラベルまたは印刷された指示書をさらに含み得る。キットはほかにも、開瞼器、局所麻酔薬および投与部位の洗浄剤を含み得る。キットはほかにも、本明細書に記載される１つまたは複数の追加の薬剤をさらに含み得る。一実施形態では、キットは、有効量の本発明の組成物と、本明細書に記載されるような有効量の別の組成物とを含む容器を含む。
【０１１５】
以下の定義は、本明細書に開示される本発明に関連して使用されるものである。別途定義されない限り、本明細書で使用される技術用語および科学用語はいずれも、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。
【０１１６】
本明細書で使用される「ａ」、「ａｎ」または「ｔｈｅ」は、１つまたは２つ以上を意味する。
【０１１７】
さらに、参照数値表記に関連して使用される「約」という用語は、その参照数値表記にその数値の最大１０％をプラスまたはマイナスしたものを意味する。例えば、「約５０」という語は４５〜５５の範囲を包含する。
【０１１８】
医学的使用に関連して使用される「有効量」とは、目的とする疾患の測定可能な治療、予防または発病速度の低下をもたらす効果のある量のことである。
【０１１９】
薬剤または刺激の存在下での活性および／または効果の読取り値が、そのような調節の不在下での値に比して有意な量、例えば少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％以上、最大で少なくとも約１００％など減少した場合、本明細書では、何かが「減少」という形で使用される。当業者には理解されるように、いくつかの実施形態では、活性が低下して、下流の読取り値が減少することもあれば、増加することもある。
【０１２０】
これとは逆に、薬剤または刺激の存在下での活性および／または効果の読取り値が、そのような薬剤または刺激の不在下での値に比して有意な量、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％以上、最大で少なくとも約１００％以上、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍増加した場合、活性が「増加」したことになる。
【０１２１】
本明細書で言及される組成のパーセントはいずれも、特に明記されない限り、組成物全体に対する重量パーセントである。本明細書で使用される「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」という語およびその変化形は非限定的なものであって、いくつかの項目が列挙された場合、それは本技術の組成物および方法に有用であり得る他の同様の項目を除外するものではないものとする。同様に、「〜し得る（ｃａｎ）」および「〜し得る（ｍａｙ）」という用語ならびにその変化形も非限定的なものであって、ある実施形態が特定の要素または特徴を含み得ると言う場合、それは、そのような要素または特徴を含まない本発明の技術の他の実施形態を除外するものではないものとする。
【０１２２】
本明細書では、本発明の記載および特許請求にオープンエンドな用語「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」が用語「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「〜を含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」または「〜を有する（ｈａｖｉｎｇ）」などの同義語として使用されるが、本発明またはその実施形態はほかにも、「〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」または「〜から実質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」などの代替的な用語を用いて記載され得る。
【０１２３】
本明細書で使用される「好ましい」および「好ましくは」という語は、特定の状況下で特定の利益をもたらす本技術の実施形態を指す。しかし、同じ状況下または他の状況下で他の実施形態が好ましい場合もある。さらに、１つまたは複数の好ましい実施形態と言う場合、それは他の実施形態が有用ではないことを意味するものではなく、また他の実施形態を本技術の範囲から除外することを意図するものでもない。
【０１２４】
治療効果を得るのに必要な本明細書に記載の組成物の量は、特定の目的に合わせた従来の手順に従って実験的に決定され得る。一般に、治療剤（例えば、フラジェリンベースの薬剤、本明細書に記載されるフラジェリンベースの薬剤（および／または追加の薬剤））を治療目的で投与する際には、薬学的有効量で投与する。「薬学的有効量（ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」、「薬学的有効量（ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｄｏｓｅ）」、「治療有効量」または「有効量」は、特に障害または疾患の治療で所望の生理学的効果をもたらすのに十分な量または所望の結果を得ることが可能な量を指す。本明細書で使用される有効量には、例えば、障害または疾患の症状の発現を遅らせる、障害または疾患の症状の経過を変化させる（例えば、疾患の症状の進行速度を遅らせる）、障害または疾患の１つまたは複数の症状または徴候を軽減または解消する、および障害または疾患の症状を正常な状態に戻すのに十分な量が含まれ得る。例えば、基礎状態が消失または改善する場合のみならず、患者に疾患による症状の重症度または持続期間の減少、例えば、腫瘍量の減少、循環血中腫瘍細胞の減少、無進行生存期間の増大が認められる場合にも、癌患者に治療剤を投与することによって治療利益が得られるということになる。治療利益はほかにも、改善がみられるかどうかに関係なく、基礎となる疾患または障害の進行が停止するか、その速度が低下することを含む。
【０１２５】
有効量、毒性および治療効果は、細胞培養または実験動物を用いて、例えばＬＤ５０（集団の約５０％に対する致死量）およびＥＤ５０（集団の約５０％に治療効果がみられる量）を決定する標準的な薬学的手順を実施することによって決定され得る。用量は、用いる剤形および投与経路によって異なり得る。毒性と治療効果との間の用量比が治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比で表すことができる。いくつかの実施形態では、治療指数が大きい組成物および方法が好ましい。治療有効量は最初に、例えば細胞培養アッセイを含めたｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイから推定することができる。このほか、動物モデルで用量を定式化して、細胞培養またはしかるべき動物モデルで決定したＩＣ５０を含む循環血漿中濃度範囲を求めることができる。記載される組成物の血漿中レベルは、例えば高速液体クロマトグラフィーによって測定することができる。任意の特定の用量の効果は、適切なバイオアッセイによってモニターすることができる。医師が用量を決定し、必要に応じて、観察される治療効果に合わせてこれを調整することができる。
【０１２６】
ある特定の実施形態では、効果は、定量化が可能な少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７０％または少なくとも約９０％の変化をもたらすものである。いくつかの実施形態では、効果は、定量化が可能な約１０％、約２０％、約３０％、約５０％、約７０％または場合によっては約９０％以上の変化をもたらすものである。治療利益はほかにも、改善がみられるかどうかに関係なく、基礎となる疾患または障害の進行が停止するか、その速度が低下することを含む。
【０１２７】
ある特定の実施形態では、癌を治療する薬学的有効量は、症状を通常少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％または少なくとも約５０％調節するものである。例示的な実施形態では、このような調節は、例えば、癌性細胞数に統計的に有意で定量化が可能な変化をもたらすものである。
【０１２８】
以下の非限定的な実施例によって本発明をさらに説明する。
【０１２９】
実施例
実施例１：モデルワクチンの調製
ミョウバンアジュバント（ＩＭＪＥＣＴ  ＡＬＵＭ、ＴＨＥＲＭＯ社）をＣＢＬＢ５０２とともに用いて、マウスにモデル抗原のオボアルブミン（ＯＶＡ）を負荷した。ワクチンは、表Ａに示す以下の成分からなるものとした：
【表２】
0006646039.tif 000085
【０１３０】
優れた吸収性を得るため、ＣＢＬＢ５０２（１μｇまたは１０μｇ）をＯＶＡ  １０ｍｇおよびミョウバンアジュバント５００μｇと室温で３０分間、３００ｒｐｍで混合した。
【０１３１】
実施例２：マウス免疫感作試験
Ｃ５７Ｂｌ／６雄マウス（１０週齢、各実験ともｎ＝６）を注射に用いた。マウスを各グループ６匹からなる５つのグループに分けた（ｎ＝６）。マウスの両後肢に、上記ワクチン１００μｌ（マウス１匹当たり計２００μｌ）を表Ｂに示す通りに注射した。
【表３】
0006646039.tif 000086
【０１３２】
初回免疫感作から２週間後、最初の注射と同じ手順に従ってマウスに追加免疫を実施した。追加免疫から１週間、２週間および４週間後、下顎静脈から血漿を採取した。ＥＬＩＳＡベースのアッセイを用いて、ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＧ３の総量を測定した。結果を図２〜３に示す。図中、グループ１は「未処置」、グループ２は「ＯＶＡ」、グループ３は「ＯＶＡ＋ミョウバン」、グループ４は「ＳＡ  １μｇ」、グループ５は「ＳＡ  １０μｇ」とも称される。
【０１３３】
図２は、追加免疫後１週間の時点における上記の５つのマウス処置群の平均応答に関するＥＬＩＳＡのデータを示している。図３は、追加免疫後２週間の時点における上記の５つのマウス処置群の平均応答に関するＥＬＩＳＡのデータを示している。図４は、追加免疫後４週間の時点における上記の５つのマウス処置群の平均応答に関するＥＬＩＳＡのデータを示している。
【０１３４】
実施例３：ＣＢＬＢ５０２とＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬとの結合の評価
ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬのＣＢＬＢ５０２に対する結合能を評価した。水酸化アルミニウム湿潤ゲル（コロイド）懸濁液であるＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬアジュバント２％（ＩＮＶＩＶＩＧＥＮ社、カタログ番号ｖａｃ−ａｌｕ−２５０）を様々な体積比でＣＢＬＢ５０２と混合し、反応物中１０〜５２％のＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ懸濁液を得た。ＣＢＬＢ５０２の濃度を接種量１μｇ／１００μｌに相当する１０μｇ／ｍｌに維持した（接種体積１００μｌは、抗原／アジュバント混合物を皮下注射する際にマウスの注射部位当たりに推奨される最大体積である）。４℃で一晩インキュベートした後、チューブを遠心分離してＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬおよび未結合ＣＢＬＢ５０２を沈降させ、溶液中に残ったものをＥＬＩＳＡにより測定した。吸着したＣＢＬＢ５０２の量を、混合物に加えた総タンパク質と未結合ＣＢＬＢ５０２との間の差として計算した（表Ｃ）。反応物を４０〜５２μｌ  ＡＬＨＹＤＲＯＧＥｌ／１００μｌで調製したときにＣＢＬＢ５０２の吸着が最大（結合率９９．９％超）となり、これよりも比を小さくすると、結合効率が徐々に低下し、１０μｌ／１００μｌのＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ懸濁液では約８３％になった。
【０１３５】
【表４】
0006646039.tif 000087
【０１３６】
ほかにも、様々なＣＢＬＢ５０２用量でのＣＢＬＢ５０２とＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬとの結合を評価した。１００μｌ当たり約０．０２〜２０μｇの範囲のＣＢＬＢ５０２用量におけるＣＢＬＢ５０２のＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ（５２μｌ／１００μｌのＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬアジュバント２％）への吸着量を求めた。反応物を上記の通りにインキュベートし、未結合ＣＢＬＢ５０２をＥＬＩＳＡにより測定した。その結果（表Ｄ）から、いずれの被験ＣＢＬＢ５０２濃度でも、薬物がほぼすべてＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬと結合する（結合率９９．８２〜９９．９９％）ことが明らかになった。
【０１３７】
【表５】
0006646039.tif 000088
【０１３８】
ＴＴ−ＳＭＡワクチンの存在下でのＣＢＬＢ５０２とＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬとの結合を評価した。破傷風トキソイドとコンジュゲートしたスクシニルメタンフェタミン（ＳＭＡ）ハプテンであるワクチン候補物質ＴＴ−ＳＭＡの存在下でのＣＢＬＢ５０２とＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬとの結合効率を試験した。下に示す別の試験では、このワクチンを用量３２μｇ／１００μｌでマウスに投与して、ＣＢＬＢ５０２を含む場合と含まない場合とで効果を比較した。この用量のＴＴ−ＳＭＡを標準条件下でＣＢＬＢ５０２（０．０２〜２０μｇ／１００μｌ）およびＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ（５２μｌ／１００μｌ）と同時にインキュベートし、未結合ＣＢＬＢ５０２をＥＬＩＳＡにより測定した。結合効率は全被験ＣＢＬＢ５０２濃度とも９９．７〜９９．９％となり、反応混合物にＴＴ−ＳＭＡを添加してもＣＢＬＢ５０２のＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬへの吸着は影響を受けないことが示された。
【０１３９】
【表６】
0006646039.tif 000089
【０１４０】
実施例４：ＣＢＬＢ５０２のＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ吸着後のｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性の分析
２９３−ｈＴＬＲ５−ＬａｃＺレポーター細胞を用いたＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬの活性アッセイを実施した。ＨＥＫ２９３−ｈＴＬＲ５：：ＮＦ−κＢ−ｌａｃＺ（２９３−ｈＴＬＲ５−ＬａｃＺ）細胞におけるＮＦ−κＢ制御下のレポーター酵素β−ガラクトシダーゼの活性化を測定するｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを用いて、ＣＢＬＢ５０２のＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ吸着後の生物活性を試験した。２９３−ｈＴＬＲ５−ＬａｃＺ細胞は細胞膜結合Ｔｏｌｌ様受容体であるヒトＴＬＲ５  １種類のみを発現するため、ＬＰＳ（内毒素）などの他のＴｏｌｌ様受容体リガンドによる干渉を受けずにＣＢＬＢ５０２活性を求めることができた。
【０１４１】
細胞増殖培地での２０００倍希釈から始めてＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ吸着ＣＢＬＢ５０２の濃度範囲を２５〜０．００４ｎｇ／ｍｌにした連続希釈ＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ製剤（５μｇ／１００μｌ）と細胞とをインキュベートしたところ、ＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬによるβ−ガラクトシダーゼレポーターの特異的誘導がみられた（図５）。β−ガラクトシダーゼ活性はＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ吸着ＣＢＬＢ５０２が０．９３ｎｇ／ｍｌのときに最大となり、この値は、可溶性ＣＢＬＢ５０２を用いて実施しレポーター酵素活性が通常１ｎｇ／ｍｌ前後でピークとなるアッセイの典型的な結果と一致していた。ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ単独では、同じ希釈率で試験してもレポーターは誘導されなかった。したがって、特に、ＣＢＬＢ５０２が、ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬに吸着した後、その生物活性を保持し、通常の細胞培養条件下でその標的受容体（ＴＬＲ５）と相互作用させるのに容易に用いることができるようになるという結論を導くことができた。
【０１４２】
次に、ＣＢＬＢ５０２接種量が２．５〜０．０００１５μｇ／１００μｌの範囲のＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ懸濁液を調製し、２００倍希釈で２９３−ｈＴＬＲ５−ＬａｃＺ細胞に加えた（図６）。ＮＦ−κＢ誘導活性は典型的な用量応答パターンに従ったものとなり、サブナノグラム用量（０．００１μｇ／１００μｌ未満）のＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬで測定されたことから、ＣＢＬＢ５０２が、このような低用量でもミョウバンアジュバントと不可逆的に結合し、活性を保持することが示された。
【０１４３】
様々なＣＢＬＢ５０２用量でのＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬの活性滴定を実施した。ＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ懸濁液を細胞培地で漸増させ、２９３−ｈＴＬＲ５−ＬａｃＺ細胞とインキュベートした。アッセイにはＣＢＬＢ５０２標準品を用いて、回復した活性を比較した。タンパク質はすべて利用可能であるものと仮定し、得られたレポーター酵素活性をＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ結合ＣＢＬＢ５０２の理論的濃度に対してプロットした（図７）。
【０１４４】
漸増アッセイの結果から、製剤用量２０μｇ／１００μｌでは、ＣＢＬＢ５０２の活性は予想濃度に沿う形となり、実質的に可溶性標準品の活性と一致することが明らかになった。しかし、用量を６４分の１および２５６分の１のそれぞれ約０．３１μｇ／１００μｌおよび０．０７８μｇ／１００μｌに減少させると、ＮＦ−κＢ誘導活性の相対的回復が約１５〜３０％に低下した。この見かけのＣＢＬＢ５０２活性減少は、製剤中のミョウバン量に比して特定量のタンパク質の結合が強いことに起因する可能性が考えられる。２０μｇ／１００μｌなどの高用量では、このような固定量が占める割合はＣＢＬＢ５０２全体のごく一部であり、測定される活性にはあまり影響を及ぼさないものと考えられる。しかし、低用量では、この堅く吸着した部分はタンパク質全体に対して相当な割合となり、これにより測定可能なＣＢＬＢ５０２の活性が低下するものと思われる。
【０１４５】
実施例５：ＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬの４℃での短期間保管の安定性の評価
１μｇ／１００μｌ  ＣＢＬＢ５０２（５２μｌ／１００μｌ  ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ２％）の製剤を調製し、４℃で２日間および６日間保管した後の活性を試験した。２９３−ｈＴＬＲ５−ＬａｃＺレポーター細胞を用いたＣＢＬＢ５０２の活性アッセイの結果を図８に示す。可溶性ＣＢＬＢ５０２標準品との比較に基づけば、この保管条件下で６日間保管してもＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ吸着ＣＢＬＢ５０２のＮＦ−κＢ誘導活性は変化しなかったとする結論を導くことができる。
【０１４６】
実施例６：ＰＢＳおよび細胞培地中でのＣＢＬＢ５０２のＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬからの解離の評価
一部のＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ（用量１μｇ／１００μｌ；５２μｌ／１００μｌ  ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ２％）をＰＢＳまたは細胞培地（１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ）に再懸濁させ、２２℃および３７℃で３時間インキュベートした。遠心分離によりＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬを除去した後、上清中の解離したＣＢＬＢ５０２をＥＬＩＳＡにより測定した。インキュベーション時に回収したＣＢＬＢ５０２量を計算したところ、ＰＢＳ中ではタンパク質とＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬとの安定な結合が維持されるが、細胞培地中では、２２℃および３７℃でそれぞれＣＢＬＢ５０２の２８％および５３％が複合体から解離することが明らかになった（表Ｆ）。培地中でこのように短時間でＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬから解離したのは、ミョウバンとの複合体からＣＢＬＢ５０２を解離させた可能性のある血清タンパク質によるものであると思われ、細胞ベースの活性アッセイでタンパク質が容易に利用可能になる仕組みを説明するものである。
【０１４７】
【表７】
0006646039.tif 000090
【０１４８】
実施例７：ＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬを皮下投与した後のマウス血清中のＣＢＬＢ５０２およびサイトカインレベルの定量化
ＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ製剤投与後の血清中のＣＢＬＢ５０２およびサイトカインのレベルを求める方法の実現可能性を評価するため、動物試験を実施した。試験デザインを表Ｇに示す。この試験では、５２μｌ／１００μｌのＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ２％に吸着させた用量１μｇのＣＢＬＢ５０２をマウスの皮下に注射し、接種後０．５〜２４時間の間に血清試料を採取した。
【０１４９】
【表８】
0006646039.tif 000091
【０１５０】
ＥＬＩＳＡによりＣＢＬＢ５０２の血清中濃度を求めたところ、ＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬを接種したマウスのグループではいずれも測定可能なレベルであることがわかった。１グループ当たりの平均血清中ＣＢＬＢ５０２濃度を表す薬物動態プロファイルを図９に示す。最初の血液採取の時点である投与後０．５時間で平均ＣＢＬＢ５０２濃度の最大値０．５１６ｎｇ／ｍｌが観察され、最小濃度は２４時間後の０．０１２ｎｇ／ｍｌであった。ＣＢＬＢ５０２の消失半減期は２．４時間であると算出された。上述の通り、１０％ウシ胎児血清を含有する細胞培地中でＣＢＬＢ５０２をインキュベートすると、ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬとの複合体から短時間で解離した。したがって、接種後短時間でタンパク質がミョウバンからマウス血流中に放出されることが予想されるはずである。
【０１５１】
採取したマウス血清試料中の３種類のサイトカイン、ＫＣ、Ｇ−ＣＳＦおよびＩＬ−６の濃度をＥＬＩＳＡにより測定した（図１０）。ＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ投与後１時間でＫＣおよびＩＬ−６の急速な誘導が検出され、２時間後の時点で１グループ当たりの最大平均濃度２９６２４ｐｇ／ｍｌおよび４７９ｐｇ／ｍｌがそれぞれ測定された。最大値に達した後、サイトカインの血中レベルは注射から４〜８時間後にベースラインまで減少した。血清中Ｇ−ＣＳＦ濃度はＫＣおよびＩＬ−６より約１時間遅れて増大し、ＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ投与後２時間および４時間で最大となった（２時間後および４時間後の１グループ当たりの平均濃度はそれぞれ７１４１ｐｇ／ｍｌおよび７１６９ｐｇ／ｍｌであった）。しかし、ＣＢＬＢ５０２誘導によるＧ−ＣＳＦレベルは減少速度が遅く、２４時間後の時点でもベースラインを上回っていた。全般的に、ＣＢＬＢ５０２／ＡＬＨＹＤＲＯＧＥＬ投与後のサイトカイン誘導の動態は、可溶性ＣＢＬＢ５０２調製物の注射後に観察されたものとほぼ同じであり、この薬物製剤に一貫した効果があることが示唆された。
【０１５２】
実施例８：メタンフェタミンワクチンとのＣＢＬＢ５０２アジュバント
この試験は、マウスを用いて、抗ＭＡ抗体が高レベルで長期間持続するようヒトメタンフェタミンワクチン（ＳＭＡ−ＴＴ）の用量３２μｇのＣＢＬＢ５０２アジュバントを評価したものである。０．０３〜２０μｇの範囲の低用量から高用量のＣＢＬＢ５０２をＴＴ−ＳＭＡおよびミョウバンとともに試験した。１０グループ（ｎ＝５）のＢａｌｂ／ｃ雌マウスを用いて、ＴＴ−ＳＭＡ  ３２μｇおよびミョウバン１．５ｍｇと組み合わせた０μｇ、０．０３μｇ、０．１μｇ、０．３μｇ、１μｇ、３μｇ、１０μｇ、２０μｇの５０２をワクチン未接種対照およびＴＴ−ＳＭＡと５０２単独と比較し試験した。ワクチン接種群にはいずれも、初回ワクチン接種から３週間後および６週間後に追加免疫を２回実施した。初回ワクチン接種から２週間後、４週間後および６週間後に採取しプールした血清試料中の抗ＭＡ  ＩｇＧのレベルをＥＬＩＳＡにより評価した。０．０３〜０．３μｇの５０２の方が、これよりも高用量（１〜２０μｇ）の５０２よりも抗体レベルが高かった。この実験では、図１１（パネルＡ）に示されるように、５０２  ０．１μｇとＴＴ−ＳＭＡおよびミョウバンとを組み合わせたグループ（グループ４）の抗体レベルが、ＴＴ−ＳＭＡとミョウバン単独の比較群（グループ１）の２倍であり、ＴＴ−ＳＭＡと５０２単独のグループ（グループ２）との比較ではその約４倍であった。同じ血清試料中の抗５０２抗体も評価した。図１１（パネルＢ）に示されるように、抗５０２抗体のレベルは低用量の範囲の５０２で最小となり、高用量の５０２では増大している。
【０１５３】
実施例９：様々な抗原を用いたワクチンの作製
この実施例では、様々な用量のＣＢＬＢ５０２および特に限定されないがＮＯＤ１アゴニストであるＣ１２−ｉＥ−ＤＡＰなどの抗原と任意選択で組み合わせたＣＢＬＢ５０２を試験することによって、アジュバント増強ワクチンのためのアジュバント成分の組成物を確立する。さらに、これらの薬剤がモデル抗原（オボアルブミン）に対する体液性免疫応答に及ぼす効果の特徴付けを実施する。
【０１５４】
上に示したように、水酸化アルミニウムとＣＢＬＢ５０２は複合体を形成し、この複合体は、理論に束縛されることを望むものではないが、水性媒体中で静電力により反対の電荷をもつ物質として安定化される。ワクチンのアジュバント成分の様々な組成物の相対的効果を試験するため、様々な用量のＣＢＬＢ５０２（最大３０μｇとし、１０μｇ、３μｇ、１μｇ、０．３μｇおよび０．１μｇを含む）を搭載した標準用量のアルミニウムを用いる（注射１回当たり１．５μｇ）。ＣＢＬＢ５０２の水溶液をミョウバンのＰＢＳ懸濁液に加え、室温で１０分間攪拌する。次いで、遠心分離により水酸化アルミニウムを沈殿させ、２種類の定量分析アッセイ、すなわち（ｉ）ＥＬＩＳＡベースのアッセイおよび（ｉｉ）レポーター細胞ベースのアッセイ（ＮＦ−ｋＢ応答性レポーターを有し、培地中のＣＢＬＢ５０２の検出用に校正されたＴＬＲ５陽性２９３細胞）を用いて、上清中のＣＢＬＢ５０２の痕跡を測定する。特に上記の実施例を踏まえれば、これらの条件下、選択したＴＬＲ５アゴニストの用量範囲内で、相当な割合のＣＢＬＢ５０２がミョウバンと安定に結合することが予想される。
【０１５５】
このアジュバントがワクチン注射部位に局在し続けるかどうかを明らかにするため、生殖系列にＮＦ−ｋＢ応答性プロモーターの制御下にあるホタルルシフェラーゼｃＤＮＡを有する成体ＢＡＬＢ／ｃ雌マウス（ｎ＝１０）を用いる。この「ＮＦ−ｋＢレポーターマウス」は、肝臓または小腸などのＴＬＲ５陽性組織でのルシフェラーゼ活性をモニタリングすることによって、注射部位からのＣＢＬＢ５０２の放出を高感度で検出するツールとなる。ＣＢＬＢ５０２含有アジュバント製剤の用量として、ミョウバンとの組成物としてｉｎ  ｖｉｔｒｏで安定であることが明らかになった最高用量（３０μｇであると推定される）に相当する用量１種類のみを用いる。比較には、ＴＬＲ５アゴニストを全身分布させる陽性対照として２種類の用量の遊離ＣＢＬＢ５０２（水溶液中１μｇおよび３μｇ、皮下注射）を用いる。アジュバントの注射から２時間後、４時間後、６時間後および１８時間後、ルシフェリンを注射し、発光撮像装置を用いてルシフェラーゼ検出をｉｎ  ｖｉｖｏで実施する。検出の精度および感度を高めるため、アジュバント製剤の注射から６時間後に各グループから３匹を屠殺し、注射部位、注射部位に最も近いリンパ節および肝臓から組織を採取する。組織を溶解させた後、上記の組織試料中のＣＢＬＢ５０２の存在を示すルシフェラーゼ活性のレベルを定量化する。予想されるＮＦ−ｋＢ誘導活性に基づくＣＢＬＢ５０２の機能検出に加え、もう１つの分析法として、組織抽出物中のＣＢＬＢ５０２を高感度で直接検出する確立されたＥＬＩＳＡアッセイを用いる。
【０１５６】
上記の用量範囲のＣＢＬＢ５０２を含有するアジュバント製剤と、オボアルブミン１０ｍｇとを混合し、本明細書に記載される通りにワクチン接種を実施した後、ＥＬＩＳＡにより様々なクラスの抗アルブミンＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＧ３）抗体の力価を求める。その結果を「ミョウバン単独」対照と比較する。様々な種類のＩｇＧに対する効果を明らかにすることによって、アジュバントが様々な免疫感作経路（例えば、ＴＨ１媒介性経路対ＴＨ２媒介性経路）にどの程度関与しているのかが明らかになる。
【０１５７】
（抗オボアルブミン抗体誘導効果の観点から）アジュバントの組成物を明らかにした後、製剤にＮＯＤ１アゴニストであるＣ１２−ｉＥ−ＤＡＰを添加することによって、免疫感作のさらなる増強を試験する。
【０１５８】
このほか、マウスを用いて、ワクチンが抗原に対する抗体を生成させる効果を様々なＣＢＬＢ５０２用量で求める。マウスは雄よりも免疫応答が強い雌を選択し、ＢＡＬＢ／ｃマウスは免疫応答が堅固であることから、免疫学的研究によく用いられる系統のひとつとなっている。試験開始時、マウスの体重を約２５ｇとし、トウモロコシ穂軸床敷ポリカーボネートおよび蓋を備えた標準的なアクリルケージ（７インチ（約１８ｃｍ）×１１インチ（約２８ｃｍ）×５インチ（約１３ｃｍ））で集団飼育（１ケージ当たり５匹）する。餌（Ｈａｒｌａｎ）および水は自由摂取とする。飼育施設は２２±１℃、１２時間：１２時間の明暗サイクル（午前６時に点灯）を維持する。実験手順はいずれも、動物管理使用委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）（ＩＡＣＵＣ）による承認を受け、実験動物の管理と使用に関する指針（Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ）に詳細に記載されている指針の範囲内に収まるものとする。
【０１５９】
マウスの殿筋にワクチンを筋肉内注射する。初回免疫感作から３週間後および６週間後、各グループに任意選択で同じワクチン製剤による追加免疫を実施して免疫感作する。持続性の抗体レベルが少なくとも４週間維持されない場合、第１０週に追加の免疫感作を実施する。
【０１６０】
初回免疫感作から１４日後、２８日後、４２日後、５６日後および８４日後に血液を採取し、室温で２時間凝固させる。４０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した後、血清を収集する。酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）を実施する準備が整うまで試料を−８０℃で保管する。抗原Ｘを含むワクチンの場合、抗抗原Ｘ特異的抗体をＥＬＩＳＡにより評価する。抗体を測定するため、異種担体タンパク質の魚ゼラチンをＳＭＡのコンジュゲートパートナーに用いて、炭酸塩緩衝液（０．０５Ｍ；ｐＨ９．６）中で一晩、ＥＬＩＳＡプレート（Ｉｍｍｕｌｏｎ  ２ＨＢ、Ｄａｉｇｇｅｒ社、ヴァーノンヒルズ、イリノイ州）をコートする。プールした血清試料または個々の血清試料をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）−Ｔｗｅｅｎ（０．１％）中１Ｋから開始する２倍連続希釈でプレートに加え、２時間インキュベートする。プレートをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社、バーミンガム、アラバマ州）とコンジュゲートしたヤギ抗マウスＩｇＧを加える。プレートをさらに３０分間インキュベートし、洗浄後、基質（テトラメチルベンジジン、Ｓｉｇｍａ社、セントルイス、ミズーリ州）を加える。プレートを暗所で４５分間インキュベートした後、１Ｍ  ＨＣｌで反応を停止させる。マイクロプレートリーダー（ｉＭａｒｋ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ  Ｒｅａｄｅｒ）にＭｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｍａｎａｇｅｒ  ｖ６．１ソフトウェアを用い、抗体と抗原Ｘが結合してプレート上に生じた暗色スポットの吸光度（ＯＤ）を用いて力価レベルを測定する。
【０１６１】
ＳｉｇｍａＰｌｏｔ（Ｓｙｓｔａｔ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ社）を用いてＥＬＩＳＡデータを解析し、各試料から担体のみと結合したバックグラウンド抗体を差し引く。連続希釈でウェルに直接結合させた精製マウスＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ社）の標準曲線と各プレートとを比較する。
【０１６２】
実施例１０：ＣＢＬＢ５０２ベースのアジュバント／ワクチンとフラジェリンベースのアジュバント／ワクチンとの比較
例えば実施例９（任意選択で抗原を用いる）の方法および試験デザインを用いて、上の実施例のＣＢＬＢ５０２／ミョウバンアジュバントをフラジェリン／ミョウバンアジュバントと直接比較して試験する。さらに、ミョウバンとの結合および解離に関する試験のほかにも、マウス評価試験、上の実施例に記載したあらゆる試験をフラジェリン／ミョウバンアジュバントに再び実施してＣＢＬＢ５０２／ミョウバンアジュバントと比較する。このほか、ＣＢＬＢ５０２の変異体、すなわちＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３ＭＸの効果を試験する。
【０１６３】
１つの比較実験では、メタンフェタミンワクチンであり、例えばフラジェリン、ＣＢＬＢ５０２またはＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３ＭＸのいずれかとともにＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌに吸着させて用いる、ＴＴ−ＳＭＡでマウスの１グループ（ｎ＝６）を免疫感作する。試験第０日、第１４日および第２８日にイムニケーション（ｉｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ）を実施する。各免疫感作用量は、ＴＴ−ＳＭＡ  ３２μｇと、以下のアジュバント：グループ１：フラジェリン０．０３μｇ、グループ２：フラジェリン０．１μｇ、グループ３：フラジェリン０．３μｇ、グループ４：フラジェリン１μｇ、グループ５：ＣＢＬＢ５０２  ０．０３μｇ、グループ６：ＣＢＬＢ５０２  ０．１μｇ、グループ７：ＣＢＬＢ５０２  ０．３μｇ、グループ８：ＣＢＬＢ５０２  １μｇ、グループ９：ＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３ＭＸ  ０．０３μｇ、グループ１０：ＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３ＭＸ  ０．１μｇ、グループ１１：ＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３ＭＸ  ０．３μｇおよびグループ１２：ＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３ＭＸ  １μｇとを含むものとする。
【０１６４】
第−１日（免疫感作前の血清）、第１４日（初回抗原刺激後）、第２８日（１回目の追加免疫後）および第３５日（２回目の追加免疫後）に血清試料を採取して分析する。例えば、血清試料の抗メタンフェタミン抗体および抗エントリモド抗体のレベルを分析する。分析から、ＣＢＬＢ５０２／ミョウバンおよびＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３ＭＸ／ミョウバンの方が、フラジェリン／ミョウバンよりも広範で多様性に富み、堅固で長期間持続する免疫刺激効果をもたらすことが明らかになる。さらに、ＣＢＬＢ５０２／ミョウバンおよびＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３ＭＸ／ミョウバンは、ＴＨ１媒介性免疫応答およびＴＨ２媒介性免疫応答の両方を活性化し、フラジェリン／ミョウバンよりも大きいＴＨ１媒介性免疫応答を活性化する。
【０１６５】
（均等物）
ここまで本発明をその特定の実施形態と関連させて記載してきたが、さらなる修正が可能であり、本願が、全般的に本発明の原理に従って本発明を変形する、使用する、または適合させることのほか、そのような本開示からの逸脱であって、本発明が属する技術分野の既知の実施または慣習的な実施の範囲内に含まれるもの、本明細書に記載してきた不可欠な特徴に適用され得るものおよび添付の「特許請求の範囲」の範囲内に含まれるものをいずれも包含することを意図するものであることが理解されよう。
【０１６６】
当業者であれば、日常的な実験のみを用いて、本明細書に具体的に記載される特定の実施形態に対する均等物を多数認識するか、確認することができるであろう。このような均等物は、のちの請求項の範囲に包含されるものとする。
【０１６７】
（参照による組込み）
本明細書で言及される特許および刊行物はいずれも、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１６８】
本明細書に記載される刊行物は、単に本願の出願日よりも前に開示されたという理由で記載されるものである。本明細書のいかなる記載も、先行発明であることを理由に本発明がそのような刊行物に先行する権利を有さないことを認めるものとして解釈されるべきではない。
【０１６９】
本明細書で使用される見出しはいずれも、単に構成上のものであって、決して本開示を限定するものではないものとする。任意の個々の節の内容は、あらゆる節に等しく適用され得る。
【０１７０】
（参考文献）
１．Ｙｏｏｎ  ＳＩ，Ｋｕｒｎａｓｏｖ  Ｏ，Ｎａｔａｒａｊａｎ  Ｖ，Ｈｏｎｇ  Ｍ，Ｇｕｄｋｏｖ  ＡＶ，Ｏｓｔｅｒｍａｎ  ＡＬ，Ｗｉｌｓｏｎ  ＩＡ．，２０１２．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ＴＬＲ５−Ｆｌａｇｅｌｌｉｎ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３５：８５９−８６４（ＰＭＩＤ：２２３４４４４４）
２．Ｓｍｉｔｈ  ＫＤ，Ａｎｄｅｒｓｅｎ−Ｎｉｓｓｅｎ  Ｅ，Ｈａｙａｓｈｉ  Ｆ，Ｓｔｒｏｂｅ  Ｋ，Ｂｅｒｇｍａｎ  ＭＡ，Ｂａｒｒｅｔｔ  ＳＬ，Ｃｏｏｋｓｏｎ  ＢＴ，Ａｄｅｒｅｍ  Ａ．２００３．Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ５  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｓ  ａ  ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ  ｓｉｔｅ  ｏｎ  ｆｌａｇｅｌｌｉｎ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｏｆｉｌａｍｅｎｔ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ．Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：１２４７−５３（ＰＭＩＤ：１４６２５５４９）
３．Ｍｉｚｅｌ，Ｓ．Ｂ．，Ａ．Ｐ．Ｗｅｓｔ，Ｒ．Ｒ．Ｈａｎｔｇａｎ．２００３．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ５  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  Ｇｒａｍ−ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｆｌａｇｅｌｌｉｎ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２３６２４−２３６２９（ＰＭＩＤ：１２７１１５９６）
４．Ｍｕｒｔｈｙ，Ｋ．Ｇ．，Ｄｅｂ，Ａ．，Ｇｏｏｎｅｓｅｋｅｒａ，Ｓ．，Ｓｚａｂｏ，Ｃ．＆  Ｓａｌｚｍａｎ，Ａ．Ｌ．（２００４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：５６６７−５６７５（ＰＭＩＤ：１４６３４０２２）
５．Ａｎｄｅｒｓｅｎ−Ｎｉｓｓｅｎ  Ｅ．，Ｓｍｉｔｈ  Ｋ．Ｄ．，Ｓｔｒｏｂｅ  Ｋ．Ｌ．，Ｂａｒｒｅｔｔ  Ｓ．Ｌ．，Ｃｏｏｋｓｏｎ  Ｂ．Ｔ．，Ｌｏｇａｎ  Ｓ．Ｍ．，Ａｄｅｒｅｍ  Ａ．（２００５）Ｅｖａｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ５  ｂｙ  ｆｌａｇｅｌｌａｔｅｄ  ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０２：９２４７−９２５２（ＰＭＩＤ：１５９５６２０２）
６．Ａｎｄｅｒｓｅｎ−Ｎｉｓｓｅｎ  Ｅ，Ｓｍｉｔｈ  ＫＤ，Ｂｏｎｎｅａｕ  Ｒ，Ｓｔｒｏｎｇ  ＲＫ，Ａｄｅｒｅｍ  Ａ．２００７．Ａ  ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｏｎ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ５  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｓ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｆｌａｇｅｌｌｉｎ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２０４：３９３−４０３（ＰＭＩＤ：１７２８３２０６）
７．Ｂｕｒｄｅｌｙａ  ＬＧ，Ｋｒｉｖｏｋｒｙｓｅｎｋｏ  ＶＩ，Ｔａｌｌａｎｔ  ＴＣ，Ｓｔｒｏｍ  Ｅ，Ｇｌｅｉｂｅｒｍａｎ  ＡＳ，Ｇｕｐｔａ  Ｄ，Ｋｕｒｎａｓｏｖ  ＯＶ，Ｆｏｒｔ  ＦＬ，Ｏｓｔｅｒｍａｎ  ＡＬ，Ｄｉｄｏｎａｔｏ  ＪＡ，Ｆｅｉｎｓｔｅｉｎ  Ｅ，Ｇｕｄｋｏｖ  ＡＶ．，２００８．Ａｎ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｏｆ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ５  ｈａｓ  ｒａｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｐｒｉｍａｔｅ  ｍｏｄｅｌｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２０：２２６−２３０（ＰＭＩＤ：１８４０３７０９）．
８．Ｈｕｌｅａｔｔ  ＪＷ，Ｎａｋａａｒ  Ｖ，Ｄｅｓａｉ  Ｐ，Ｈｕａｎｇ  Ｙ，Ｈｅｗｉｔｔ  Ｄ，Ｊａｃｏｂｓ  Ａ，Ｔａｎｇ  Ｊ，ＭｃＤｏｎａｌｄ  Ｗ，Ｓｏｎｇ  Ｌ，Ｅｖａｎｓ  ＲＫ  ｅｔ  ａｌ．２００８．Ｐｏｔｅｎｔ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａ  ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ  ａ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｎｋｉｎｇ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ｍ２ｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＴＲＬ５  ｌｉｇａｎｄ  ｆｌａｇｅｌｌｉｎ．Ｖａｃｃｉｎｅ．２６：２０１−２１４．
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【配列表】
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