(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノオキシ官能化生体ターゲティング分子凍結乾燥組成物の調製方法であって、
（ｉ）酸性移動相を使用して、次の式（ＩＡ）の保護化合物を逆相クロマトグラフィー精製して、前記移動相中の精製化合物（ＩＡ）を得る工程と、
［ＢＴＭ］−Ｘ１    （ＩＡ）
（ｉｉ）工程（ｉ）の後、冷凍乾燥を行わずに工程（ｉ）の精製化合物（ＩＡ）を脱保護して、次の式（ＩＩＡ）のアミノオキシ化合物の溶液を得る工程と、
［ＢＴＭ］−Ｏ−ＮＨ２    （ＩＩＡ）
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）の溶液を凍結乾燥して、式（ＩＩＡ）のアミノオキシ化合物の凍結乾燥組成物を得る工程と
を含む方法。
式中、
［ＢＴＭ］は、生体ターゲティング分子であり、
Ｘ１は、次式の保護アミノオキシ基である。
【化１】
0006650873.tif 000020
式中、Ｒ１及びＲ２は独立にＣ１−３アルキル、Ｃ１−３フルオロアルキル又はＣ４−６アリールから選択される。
【請求項２】
Ｒ１及びＲ２が独立にＣ１−２アルキルである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒ１及びＲ２が独立にメチル及びエチルから選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がエチルである、請求項１乃至請求項３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
ＢＴＭが、単一アミノ酸、３〜１００残基ペプチド、酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト、酵素阻害剤、又は受容体結合化合物を含む、請求項１乃至請求項４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
ＢＴＭがＡｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標）である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ＢＴＭが、以下で定義されるペプチドＡ、ペプチドＢ、ペプチドＣ及びペプチドＤから選択される３〜１００残基ペプチドを含む、請求項５に記載の方法。
（ｉ）ペプチドＡ＝Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド、
（ｉｉ）ペプチドＢ＝次式のフラグメントを含むＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド、
【化２】
0006650873.tif 000021
（ｉｉｉ）ペプチドＣ＝次のアミノ酸配列を含むｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチド、
−Ｃｙｓａ−Ｘ１−Ｃｙｓｃ−Ｘ２−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ３−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓｄ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓｂ−Ｔｙｒ−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−
（式中、
Ｘ１はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、
Ｘ２はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
Ｘ３はＴｈｒ又はＡｒｇであり、
Ｘ４はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、
Ｘ５はＳｅｒ又はＴｈｒであり、
Ｘ６はＡｓｐ又はＧｌｕであり、
Ｃｙｓａ―ｄの各々はシステイン残基であって、残基Ｃｙｓａ及びＣｙｓｂ並びに残基Ｃｙｓｃ及びＣｙｓｄは環化して２つの独立したジスルフィド結合を形成する。）
（ｉｖ）ペプチドＤ＝次式のランチビオティックペプチド、
Ｃｙｓａ−Ｘａａ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒｂ−Ｃｙｓｃ−Ｓｅｒｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒｃ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｃｙｓｂ−（ＨＯ−Ａｓｐ）−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｔｈｒａ−Ｌｙｓｄ
（式中、
ＸａａはＡｒｇ又はＬｙｓであり、
Ｃｙｓａ−Ｔｈｒａ、Ｓｅｒｂ−Ｃｙｓｂ及びＣｙｓｃ−Ｔｈｒｃはチオエーテル結合を介して共有結合しており、
Ｓｅｒｄ−Ｌｙｓｄはリシノアラニン結合を介して共有結合しており、
ＨＯ−Ａｓｐはβ−ヒドロキシアスパラギン酸である。）。
【請求項８】
工程（ｉ）の逆相クロマトグラフィー精製がＨＰＬＣを含む、請求項１乃至請求項７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
移動相が水性トリフルオロ酢酸を含む、請求項１乃至請求項８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
生体ターゲティング分子を１８Ｆで放射性標識する方法であって、
（ａ）請求項１乃至請求項９のいずれか１項に記載の方法を行って、式（ＩＩＡ）のアミノオキシ化合物の凍結乾燥組成物を得る工程と、
（ｂ）工程（ａ）の凍結乾燥組成物を下記の式（ＩＩＩＡ）のカルボニル化合物と適当な溶媒中で縮合して、下記の式（ＩＶＡ）の放射性標識コンジュゲートを得る工程と
を含む方法。
Ｑ−［リンカー］−（Ｃ＝Ｏ）Ｙ１    （ＩＩＩＡ）
［ＢＴＭ］−Ｏ−Ｎ＝（ＣＹ１）−［リンカー］−Ｑ    （ＩＶＡ）
式中、
Ｑは放射性同位体１８Ｆを含む基であり、
［ＢＴＭ］は、請求項１乃至請求項７のいずれか１項で定義した生体ターゲティング分子であり、
Ｙ１はＨ、Ｃ１−６アルキル又はＣ４−１０アリールであり、
［リンカー］はリンカー基である。
【請求項１１】
１８Ｆ標識生体ターゲティング分子が、１８Ｆ標識生体ターゲティング分子を哺乳類への投与に適した形態の生体適合性担体と共に哺乳類への投与に適した形態で含む放射性医薬組成物として得られる、請求項１０に記載の放射性標識方法。
【請求項１２】
自動合成装置を用いて実施される、請求項１０又は請求項１１に記載の放射性標識方法。
【請求項１３】
請求項１乃至請求項９のいずれか１項に記載の調製方法又は請求項１１に記載の放射性標識方法を実施するための自動合成装置の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インビボイメージング用の放射性医薬品の分野、特に、生体ターゲティング分子を放射性同位体18Ｆで標識する方法に関する。本発明は、アミノオキシ官能化生体分子の凍結乾燥組成物の調製方法、びに精製組成物を用いた放射性標識方法を提供する。かかる精製組成物を含む凍結乾燥組成物及びカセットも提供される。本発明は、自動合成装置での使用に特に適している。
【背景技術】
【０００２】
国際公開第２００４／０８０４９２号には、以下の式（Ｉ）の化合物と式（ＩＩ）の化合物との反応又は式（ＩＩＩ）の化合物と式（ＩＶ）の化合物との反応によってそれぞれ以下の式（Ｖ）又は（ＶＩ）のコンジュゲートを得ることを含む生体ターゲティングベクターの放射性フッ素化法が開示されている。
【０００３】
【化１】
0006650873.tif 000002
【０００４】
【化２】
0006650873.tif 000003
式中、
Ｒ１は、アルデヒド基、ケトン基、アセタールのような保護アルデヒド、ケタールのような保護ケトン、或いは酸化剤を用いてアルデヒド又はケトンに迅速かつ効率的に酸化することのできる官能基（例えばジオール又はＮ末端セリン残基）であり、
Ｒ２は、第一アミン、第二アミン、ヒドロキシルアミン、ヒドラジン、ヒドラジド、アミノオキシ、フェニルヒドラジン、セミカルバジド及びチオセミカルバジドから選択される基であり、
Ｒ３は、第一アミン、第二アミン、ヒドロキシルアミン、ヒドラジン、ヒドラジド、アミノオキシ、フェニルヒドラジン、セミカルバジド又はチオセミカルバジドから選択される基であり、
Ｒ４はアルデヒド基、ケトン基、アセタールのような保護アルデヒド、ケタールのような保護ケトン、或いは酸化剤を用いてアルデヒド又はケトンに迅速かつ効率的に酸化することのできる官能基（例えばジオール又はＮ末端セリン残基）である。
【０００５】
【化３】
0006650873.tif 000004
式中、Ｘは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＮＨＣＯＮＨ−又は−ＮＨＣＳＮＨ−であって、好ましくは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−又は−Ｏ−であり、ＹはＨ、アルキル又はアリール置換基であり、
式（ＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）及び（ＶＩ）のリンカー基は以下のものから選択される。
【０００６】
【化４】
0006650873.tif 000005
式中、ｎは０〜２０の整数であり、ｍは１〜１０の整数であり、ｐは０又は１の整数であり、ＺはＯ又はＳである。
【０００７】
Ｐｏｅｔｈｋｏ他［Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，４５（５），８９２−９０２（２００４）］には、放射性同位体18Ｆによるペプチドの放射性標識法であって、以下に示すように、アミノオキシ官能化ペプチドを［18Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドと縮合させてオキシムエーテル結合を有する標識ペプチドを得る方法が開示されている。
【０００８】
【化５】
0006650873.tif 000006
Ｓｃｈｏｔｔｅｌｉｕｓ他［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１９（６），１２５６−１２６８（２００８）］には、Ｐｏｅｔｈｋｏ他の方法の発展法が記載されている。Ｓｃｈｏｔｔｅｌｉｕｓ他は、アミノオキシ基のアミンをＮ−Ｂｏｃ（Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）保護基で保護したアミノオキシ官能化ペプチドを用いている。所望のアミノオキシ官能化ペプチドは、［18Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドの存在下、酸性ｐＨ（ｐＨ＝２）、７５℃でのＮ−Ｂｏｃ基の脱保護によってインサイチュで生成する。Ｓｃｈｏｔｔｅｌｉｕｓ他では、脱保護が反応条件下で定量的ではなかったので、５倍モル過剰のＢｏｃ保護前駆体を使用している。
【０００９】
Ｍｅｚｏ他［Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｓｃｉ．，１７，３９−４６（２０１０）］には、Ｂｏｃ保護アミノオキシ官能化ペプチドの上述のオキシムライゲーション化学に関する幾つかの問題について記載されている。例えば、Ｂｏｃ−アミノオキシ試薬は、生成したＢｏｃ保護アミノオキシペプチドをアシル化して、不都合な副生物を生じかねないことが知られている。また、官能化ペプチドの遊離アミノオキシ基のカルボニル化合物に対する反応性が高いことも知られている。その結果、不要な縮合が起こるおそれがあり、反応混合物又は後段の精製工程でアルデヒド又はケトンが紛れ込んでしまうおそれがある。かかるアルデヒド又はケトンとして、使用した溶媒中に存在する痕跡量のアセトン、又はホルムアルデヒド（例えば可塑剤に由来するもの）がある。Ｍｅｚｏ他の関心は、抗癌剤及び［18Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドとペプチドとのコンジュゲーションのためにこの問題を解決することである。Ｍｅｚｏ他では、この問題を解決するため、「カルボニル捕獲剤」としての１０倍モル過剰の遊離（アミノオキシ）酢酸（Ａｏａ）の存在下でＢｏｃ−アミノオキシペプチドの脱保護を行っている。次いで、脱保護アミノオキシペプチドと過剰のＡｏａを凍結乾燥し、４℃で保存する。オキシムライゲーション反応の直前に、凍結乾燥混合物を再構成し、過剰のＡｏａをＨＰＬＣ又はＳｅｐ−ＰａｋプラスＣ１８カートリッジで分離する。Ｍｅｚｏ他には、この技術を用いて非放射性（19Ｆ）４−フルオロベンズアルデヒドをアミノオキシ官能化ソマトスタチンペプチドとコンジュゲートした例が記載されている。Ｍｅｚｏ他には、18Ｆ−放射性標識に関するデータは記載されていない。
【００１０】
国際公開第２０１２／０７２７３６号には、官能化生体分子のアミノオキシ基のための別の保護基化学の使用が開示されている。保護アミノオキシ基は、次式のものである。
【００１１】
【化６】
0006650873.tif 000007
式中、Ｒ1及びＲ2は独立にＣ1-3アルキル、Ｃ1-3フルオロアルキル又はＣ4-6アリールから選択される。
【００１２】
国際公開第２０１２／０７２７３６号には、保護アミノオキシ基をインサイチュ（つまり、中間体を単離せずに、連結すべき放射性アルデヒドの存在下）で脱保護するのが好ましいと教示されている。しかし、国際公開第２０１２／０７２７３６号の実施例３には、かかる保護アミノオキシ基で官能化したペプチドを脱保護し、次に直接凍結乾燥して単離生成物を得ると開示されている。直接得られた凍結乾燥組成物は、純粋であったと記載されている。しかし、国際公開第２０１２／０７２７３６号では、本発明が教示するように、アセテートとの副反応で副生物が生成するという問題は認識されていない。
【００１３】
そこで、ペプチドその他の生体ターゲティング分子を調製及び放射性標識する代替法又は改良法に対するニーズが依然として存在する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】国際公開第２０１２／０７２７３６号
【発明の概要】
【００１５】
本発明
本発明は、アミノオキシ官能基が結合した生体ターゲティング分子（ＢＴＭ）の凍結乾燥組成物を調製する方法を提供する。
【００１６】
本発明は、精製アミノオキシ官能化ＢＴＭをかかる精製材料の凍結乾燥組成物として提供するとともに、後段の放射性標識にの使用を提供する。本発明は、保護前駆体の溶解性の増大による効率性に優れる脱保護工程を提供する。脱保護は、クロマトグラフィー精製に用いる移動相で起こるので、精製保護アミノオキシ誘導体を単離する必要がなく、本方法は一段と効率的である。凍結乾燥工程が省かれるので、これは特に重要である。保護アミノオキシ誘導体は時間のかかる凍結乾燥によって単離されるのが通例だからである。また、凍結乾燥材料は、放射性標識に使用する際に容易に溶解するが、これはＢＴＭの効率的標識及び精製に重要である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
第１の態様では、本発明は、アミノオキシ官能化生体ターゲティング分子凍結乾燥組成物の調製方法であって、
（ｉ）移動相を使用して、次の式（ＩＡ）の保護化合物を逆相クロマトグラフィー精製して、移動相中の精製化合物ＩＡを得る工程と、
［ＢＴＭ］−Ｘ1    （ＩＡ）
（ｉｉ）工程（ｉ）の精製化合物ＩＡを脱保護して、次の式（ＩＩＡ）のアミノオキシ化合物の溶液を得る工程と、
［ＢＴＭ］−Ｏ−ＮＨ2    （ＩＩＡ）
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）の溶液を凍結乾燥して、式（ＩＩＡ）のアミノオキシ化合物の凍結乾燥組成物を得る工程と
を含む方法を提供する。
式中、
［ＢＴＭ］は、生体ターゲティング分子であり、
Ｘ1は、次式の保護アミノオキシ基である。
【００１８】
【化７】
0006650873.tif 000008
式中、Ｒ1及びＲ2は独立にＣ１−３アルキル、Ｃ１−３フルオロアルキル又はＣ４−６アリールから選択される。
【００１９】
「生体ターゲティング部分」（ＢＴＭ）という用語は、投与後に、インビボで哺乳類の身体の特定の部位に選択的に取り込まれるか或いは局在化する化合物を意味する。かかる部位は、例えば、特定の病態に関係していることもあるし、臓器又は代謝過程がいかに機能しているかの指標となることもある。
【００２０】
「保護」という用語は、化学及び／又は放射化学の分野における通常の意味を有し、望ましくない反応から官能基を保護するための保護基の使用をいう。「脱保護」という用語は化学及び／又は放射化学の分野における通常の意味を有し、保護基の除去を意味する。
「保護基」（ＰGPと略す。）という用語は、望ましくない化学反応を阻止又は抑制するが、分子の残部を変質させない程度に温和な条件下で問題の官能基から脱離させるのに十分な反応性をもつように設計された基を意味する。脱保護後には所望の生成物が得られる。保護基の使用については、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ  Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．  Ｍ．  Ｗｕｔｓ，［Ｗｉｌｅｙ  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，（２００６）］に記載されている。
【００２１】
「アミノオキシ基」という用語は、その通常の意味をもち、式−Ｏ−ＮＨ2の置換基、好ましくは−ＣＨ2Ｏ−ＮＨ2をいう。
【００２２】
「逆相クロマトグラフィー精製」という用語はその通常の意味を有し、固定相が親油性で移動相が親水性（通例、水性媒体を含むもの）であるクロマトグラフィーをいう。好適なクロマトグラフィー技術としては、ＨＰＬＣ、中圧液体クロマトグラフィー（ＭＰＬＣ）又は固相抽出（ＳＰＥ）が挙げられる。好ましい逆相クロマトグラフィー技術は、ＨＰＬＣである。好適なＲＰ−ＨＰＬＣカラム材料はシリカ系であり、粒子表面のシラノール基との不都合な相互作用を避けるため末端封鎖すべきである。カラム材料は、精製すべき材料の中乃至高い分取ロードを受け入れる高い表面積範囲を有していて、様々なカラムフォーマットの充填状態で容易に入手でき、大量に必要とされる場合には大型分取カラムに充填するためのバルクとしても入手可能なものである。かかるＨＰＬＣカラムとして好ましいものには、ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘのＬｕｎａ  Ｃ−１８（２）（１０μｍ、１００Ａ）その他のシリカ系Ｃ−１８材料、例えばＥｋａのＫｒｏｍａｓｉｌ又はＹＭＣのＯＤＳ  ＡＱがある。ＨＰＬＣカラムは、最も好ましくは、Ｌｕｎａ  Ｃ−１８（２）（１０μｍ、１００Ａ）カラムである。
【００２３】
脱保護工程（ｉｉ）は、好適には、当技術分野で公知の通り実施される。［Ｄｕｌｅｒｙ他  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，６３，１１９５２−１１９５８（２００７）；及びＦｏｉｌｌａｒｄ他［Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，７３，９８３−９９１（２００８）］。
【００２４】
アルデヒド及びケトンは、好適には、工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）から除外すべきである。痕跡量又は又は実験室雰囲気の空気中に存在していても、式ＩＩＡのアミノオキシ化合物との望ましくない副反応を起こすからである。
【００２５】
「凍結乾燥」という用語は、通常の意味を有し、凍結乾燥組成物、好ましくは滅菌状態で調製されたものをいう。
【００２６】
好ましい特徴
工程（ｉ）で使用される移動相は、好ましくは、酸性である。酸性移動相は、ＢＴＭが塩基性基（ペプチド又はタンパク質のアミノ基など）を含んでいると、それらがプロトン化されて適切にクロマトグラフィー分離を達成できるという利点を有する。
【００２７】
好ましくは、工程（ｉ）の移動相に使用される酸は、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、さらに好ましくは水性ＴＦＡを含む。工程（ｉ）の移動相中の好適なＴＦＡ濃度は、０．０１〜５％、好ましくは０．０５〜１％、さらに好ましくは０．１〜０．３％ｖ／ｖの範囲である。ＴＦＡは揮発性であり、第２の態様の凍結乾燥組成物を調製する際に酢酸アンモニウムよりも除去が容易であるという利点を有する。
【００２８】
例えば、工程（ｉ）で移動相として水性ＴＦＡを使用すると、ＨＰＬＣクロマトグラフィーでは化合物ＩＡの脱保護がほとんど起こらないことを本発明者らは見出した。水性ＴＦＡ移動相との接触時間が短く（２０〜４０分間）、化合物ＩＡが固定相に結合していて脱保護に利用できないからである。ただし、水性ＴＦＡ移動相の溶液中で保存する際は、数分間の接触時間で脱保護が起こる。
【００２９】
移動相が酸性である場合、脱保護は、好ましくは、分離した精製化合物ＩＡを酸性移動相中に５〜６０℃の温度で所定時間放置して反応せしめ、及び／又は溶液に酸を追加することによって、実施される。例えば、アルゴン中周囲温度で、０．１％ＴＦＡ水溶液中で一晩保存すると、残留保護形（化合物ＩＡ）は約０．８％であることが判明した。完全な脱保護及び／又は反応時間の短縮には、例えば、ＴＦＡの追加（例えば、０．１３〜０．１５％ＴＦＡ）を要する。
【００３０】
したがって、第１の態様の工程（ｉ）は、好ましくは、精製化合物ＩＡを単離せずに実施され、これを工程（ｉｉ）で工程（ｉ）の移動相中の溶液として使用する。これは効率の向上という利点を有する。本発明者らの得た知見では、精製化合物ＩＡは、単離（例えば凍結乾燥などによって）すると、脱保護媒体中で低い溶解性を示す傾向があり、希釈したとしても懸濁液として使用する必要があるからである。すると、工程（ｉｉｉ）の凍結乾燥の溶媒量が増し、そのため凍結乾燥時間が長くなり、毎回処理できる最大バッチサイズが減る。最大処理容量に関する凍結乾燥機の容量は、通常、バッチサイズを決定する。
【００３１】
第１の態様では、Ｒ1及びＲ2は好ましくはいずれも独立にＣ1-2アルキルである。さらに好ましくは、Ｒ1及びＲ2はメチル及びエチルから選択され、最も好ましくはＲ1がメチルでＲ2がエチルのもの、すなわちエトキシエチリジン（「Ｅｅｉ」）保護基である。
【００３２】
ＢＴＭは、合成したものでも、天然のものでもよいが、好ましくは合成品である。「合成品」という用語とは、その通常の意味を有しており、天然の起源（例えば哺乳類の身体）から単離したものとは対照的に、人工のものを意味する。かかる化合物は、その製造及び不純物プロファイルを十分に制御できるという利点を有する。したがって、天然起源のモノクローナル抗体及びそのフラグメントは、本明細書で用いる「合成品」には属さない。ＢＴＭの分子量は、好ましくは３００００ダルトン以下である。さらに好ましくは、分子量は２００〜２００００ダルトン、最も好ましくは３００〜１８０００ダルトンであり、４００〜１６０００ダルトンが特に好ましい。ＢＴＭが非ペプチドである場合、ＢＴＭの分子量は好ましくは３０００ダルトン以下であり、さらに好ましくは２００〜２５００ダルトン、最も好ましくは３００〜２０００ダルトンであり、４００〜１５００ダルトンが特に好ましい。
【００３３】
ＢＴＭには、好ましくは、線状又は環状ペプチド又はその組合せのいずれでもよい３〜１００残基ペプチド、ペプチド類似体、ペプトイド又はペプチド模倣体、１個のアミノ酸、酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト（部分アゴニストを含む）又は酵素阻害剤、受容体結合化合物（受容体基質、アンタゴニスト、アゴニスト又は基質を含む）、オリゴヌクレオチド又はオリゴＤＮＡ若しくはオリゴＲＮＡフラグメントがある。さらに好ましくは、ＢＴＭは、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（商標）又は１個のアミノ酸、３〜１００残基ペプチド、酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト、酵素阻害剤又は受容体結合化合物を含む。
【００３４】
「ペプチド」という用語は、ペプチド結合（つまり、あるアミノ酸のアミンと別のアミノ酸のカルボキシルとを連結するアミド結合）で連結した２以上のアミノ酸（以下で定義）を含む化合物を意味する。「ペプチド模倣体」又は「模倣体」という用語は、ペプチド又はタンパク質の生物活性を模倣するが、化学的性状がペプチドでない（つまり、ペプチド結合（アミノ酸間のアミド結合）を含まない）生物活性化合物をいう。ここでは、ペプチド模倣体という用語は広義に用いられ、性状が完全にはペプチドでない分子（例えば、プソイドペプチド、セミペプチド及びペプトイド）を包含する。「ペプチド類似体」という用語は、以下に記載する１種以上のアミノ酸類似体を含むペプチドをいう。“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ”，  Ｍ．  Ｇｏｏｄｍａｎ他，  Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ  Ｅ２２ｃ，  Ｔｈｉｅｍｅ参照。
【００３５】
「アミノ酸」という用語は、Ｌ−又はＤ−アミノ酸、アミノ酸類似体（例えば、ナフチルアラニン）又はアミノ酸模倣体を意味し、天然のものでも純粋な合成品であってもよく、光学的に純粋つまり単一の鏡像異性体（したがってキラルなもの）であってもよいし、鏡像異性体の混合物であってもよい。本明細書では、アミノ酸の慣用三文字略語又は一文字略語を用いる。好ましくは、本発明のアミノ酸は光学的に純粋なものである。「アミノ酸模倣体」という用語は、アイソスター（つまり、天然化合物の立体構造及び電子構造を模倣するように設計されたもの）である天然アミノ酸の合成類似体を意味する。かかるアイソスターは当業者に周知であり、特に限定されないが、デプシペプチド、レトロ−インベルソペプチド、チオアミド、シクロアルカン又は１，５−二置換テトラゾールが挙げられる［Ｍ．Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２４，１３７，（１９８５）参照］。チロシン、ヒスチジン又はプロリンのような放射性標識アミノ酸は有用なインビボイメージング剤として知られている。
【００３６】
Ａｆｆｉｂｏｄｙ（商標）分子は、ブドウ球菌プロテインＡのＩｇＧ結合性ドメインの１つから誘導された５８アミノ酸残基ドメインに基づく。Ａｆｆｉｂｏｄｙは単量体又は二量体の形態で使用でき、Ｎｙｇｒｅｎ［ＦＥＢＳ  Ｊ．，２７５，２６６８−２６７６（２００８）］及びＮｉｌｓｓｏｎ他［Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃ．Ｄｅｖ．，１０，１６７−１７５（２００７）］による総説がある。これらのＡｆｆｉｂｏｄｙはサイズが比較的小さいので、１０〜２０倍も大きな抗体（〜１５０ｋＤａ）と比べて標的組織浸透及び血液クリアランスに優れているはずである。Ａｆｆｉｂｏｄｙは、あるｐＨ域条件（ｐＨ５．５〜１１）で安定であるという利点も有する。本発明の好ましいＡｆｆｉｂｏｄｙは、ＨＥＲ２をターゲティングするものである。以下に述べる通り、好ましいＨＥＲ２ターゲティングＡｆｆｉｂｏｄｙは、Ａｆｆｉｂｏｄｙ１を含む。
【００３７】
ＢＴＭが、酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト、酵素阻害剤又は受容体結合化合物である場合、ＢＴＭは好ましくは非ペプチド、さらに好ましくは合成品である。「非ペプチド」という用語は、ペプチド結合（２つのアミノ酸残基間のアミド結合）を全く含まない化合物を意味する。好適な酵素基質、アンタゴニスト、アゴニスト又は阻害剤には、グルコース及びグルコース類似体、脂肪酸、又はエラスターゼ、アンジオテンシンＩＩ又はメタロプロテイナーゼ阻害剤がある。好適な合成受容体結合化合物には、エストラジオール、エストロゲン、プロゲスチン、プロゲステロンその他のステロイドホルモン、ドーパミンＤ−１又はＤ−２受容体リガンド、及びトロパンのようなドーパミン輸送体用リガンド、並びにセロトニン受容体用リガンドがある。
【００３８】
ＢＴＭは、最も好ましくは３〜１００残基ペプチド又はペプチド類似体である。ＢＴＭがペプチドである場合、好ましくは４〜３０残基ペプチド、最も好ましくは５〜２８残基ペプチドである。
【００３９】
ＢＴＭが酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト又は酵素阻害剤である場合、本発明の好ましいかかる生体ターゲティング分子は合成薬物様低分子（即ち、医薬品分子）である。好ましいのは、トロパンのようなドーパミン輸送体リガンド、脂肪酸、ドーパミンＤ−２受容体リガンド、ベンズアミド類、アンフェタミン類、ベンジルグアニジン類、イオマゼニル、ベンゾフラン（ＩＢＦ）又は馬尿酸である。
【００４０】
ＢＴＭがペプチドである場合、好ましいかかるペプチドとしては、後で定義するペプチドＡ、ペプチドＢ、ペプチドＣ及びペプチドＤの他に、以下のものがある。
・ソマトスタチン、オクトレオチド及び類似体。
・ＳＴ受容体に結合するペプチド（ＳＴとは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）その他の微生物によって産生される耐熱性毒素をいう。）。
・ボンベシン。
・血管作用性小腸ペプチド。
・ニューロテンシン。
・ラミニンフラグメント、例えば、ＹＩＧＳＲ、ＰＤＳＧＲ、ＩＫＶＡＶ、ＬＲＥ及びＫＣＱＡＧＴＦＡＬＲＧＤＰＱＧ。
・白血球集積部位をターゲティングするためのＮ−ホルミル走化性ペプチド。
・血小板第４因子（ＰＦ４）及びそのフラグメント。
・α2−抗プラスミン、フィブロネクチン、β−カゼイン、フィブリノーゲン又はトロンボスポンジンのペプチドフラグメント。α2−抗プラスミン、フィブロネクチン、β−カゼイン、フィブリノーゲン又はトロンボスポンジンのアミノ酸配列は、以下の参考文献に見出すことができる。α2−抗プラスミン前駆体［Ｍ．Ｔｏｎｅ他，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，１０２，１０３３（１９８７）］、β−カゼイン［Ｌ．Ｈａｎｓｓｏｎ他，Ｇｅｎｅ，１３９，１９３（１９９４）］、フィブロネクチン［Ａ．Ｇｕｔｍａｎ他，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，２０７，１４５（１９９６）］、トロンボスポンジン１前駆体［Ｖ．Ｄｉｘｉｔ他，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８３，５４４９（１９８６）］、Ｒ．Ｆ．Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５３，１９５（１９８４）。
・アンジオテンシンＩＩ：Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ（Ｅ．Ｃ．Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ他，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９７９，Ｖｏｌ  ２２，９，１０３８−１０４４）及び［Ｓａｒ，Ｉｌｅ］アンジオテンシンＩＩ：Ｓａｒ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ（Ｒ．Ｋ．Ｔｕｒｋｅｒ他，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７２，１７７，１２０３）のようなアンジオテンシンの基質又は阻害剤であるペプチド。
・アンジオテンシンＩ：Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ。
【００４１】
さらに好ましいＢＴＭペプチドは以下の通り定義されるペプチドＡ、ペプチドＢ、ペプチドＣ及びペプチドＤから選択される。
（ｉ）ペプチドＡ＝Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド。
（ｉｉ）ペプチドＢ＝次式のフラグメントを含むＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド。
【００４２】
【化８】
0006650873.tif 000009
（ｉｉｉ）ペプチドＣ＝以下のアミノ酸配列を含むｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチド。
【００４３】
−Ｃｙｓa−Ｘ1−Ｃｙｓc−Ｘ2−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ3−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓd−Ｔｒｐ−Ｃｙｓb−Ｔｙｒ−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−
（式中、Ｘ1はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、
Ｘ2はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
Ｘ3はＴｈｒ又はＡｒｇであり、
Ｘ4はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、
Ｘ5はＳｅｒ又はＴｈｒであり、
Ｘ6はＡｓｐ又はＧｌｕであり、
Ｃｙｓa-dの各々はシステイン残基であって、残基ａ及びｂ並びに残基ｃ及びｄは環化して２つの独立したジスルフィド結合を形成している。）。
（ｉｖ）ペプチドＤ＝次式のランチビオティックペプチド。
【００４４】
Ｃｙｓa−Ｘａａ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒb−Ｃｙｓc−Ｓｅｒd−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒc−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｃｙｓb−（ＨＯ−Ａｓｐ）−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｔｈｒa−Ｌｙｓd
（式中、
ＸａａはＡｒｇ又はＬｙｓであり、
Ｃｙｓa−Ｔｈｒa、Ｓｅｒb−Ｃｙｓb及びＣｙｓc−Ｔｈｒcはチオエーテル結合を介して共有結合しており、
Ｓｅｒd−Ｌｙｓdはリシノアラニン結合を介して共有結合しており、
ＨＯ−Ａｓｐはβ−ヒドロキシアスパラギン酸である。）。
【００４５】
特に好ましいＢＴＭペプチドはペプチドＢ、ペプチドＣ及びペプチドＤである。
【００４６】
最も好ましいかかるペプチドＢペプチドは次の式（Ａ）のものである。
【００４７】
【化９】
0006650873.tif 000010
式中、Ｘ1は−ＮＨ2又は次式のものである。
【００４８】
【化１０】
0006650873.tif 000011
式中、ａは１〜１０の整数である。
【００４９】
式Ａにおいて、ａは好ましくは１である。
【００５０】
好ましいｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドは以下の配列を有する。
Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓa−Ｔｙｒ−Ｃｙｓc−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓd−Ｔｒｐ−Ｃｙｓb−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ。
【００５１】
ＢＴＭがペプチドである場合、ペプチドの一端又は両端（好ましくは両端）に代謝阻害基（ＭIG）が結合している。このように両方のペプチド末端を保護することは、インビボイメージング用途で重要である。さもないと、急速な代謝が起こって、ＢＴＭペプチドに対する選択的結合親和性が失われてしまうと予想されるからである。「代謝阻害基（ＭIG）」という用語は、アミノ末端又はカルボキシ末端でのＢＴＭペプチドの酵素（特にカルボキシペプチダーゼのようなペプチダーゼ）代謝を阻害又は抑制する生体適合性基を意味する。かかる基はインビボ用途で特に重要であり、当業者に周知であり、好適には、ペプチドアミン末端に関してはＮ−アシル化基−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＲG（式中、アシル基−（Ｃ＝Ｏ）ＲGは、Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-10アリールから選択されるＲGを有しているか或いはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロックを含む。）から選択される。かかるアミノ末端ＭIG基として好ましいのはアセチル、ベンジルオキシカルボニル又はトリフルオロアセチルであり、最も好ましくはアセチルである。
【００５２】
ペプチドカルボキシル末端に適した代謝阻害基には、カルボキサミド、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、ベンジルエステル、シクロヘキシルエステル、アミノアルコール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロックがある。ＢＴＭペプチドのカルボキシ末端アミノ酸残基に適したＭIG基は、アミノ酸残基の末端アミンをＣ1-4アルキル基（好ましくはメチル基）でＮ−アルキル化したものである。かかるＭIG基として好ましいのはカルボキサミド又はＰＥＧであり、最も好ましい基はカルボキサミドである。
【００５３】
式ＩＡにおいて、Ｘ1基は、好適には以下に述べる通りＢＴＭの官能基に結合している。例えば、Ｎ−（１−エトキシエチリデン）−２−アミノオキシ酢酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（Ｅｅｉ−ＡＯＡｃ−ＯＳｕ）は、Ｉｒｉｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＧｍｂＨ（Ｗａｌｄｅｒｓｈｏｆｅｒ  Ｓｔｒ．４９−５１，９５６１５  Ｍａｒｋｔｒｅｄｗｉｔｚ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から市販されている。そのＥｅｉ保護アミノオキシ活性エステルをアミン含有ＢＴＭ（例えば、Ｌｙｓ残基を有するもの）に直接コンジュゲートすれば式ＩＡの保護化合物を得ることができる。アミノオキシ官能化マレイミドＭａｌ−ＡＯは、Ｐａｄｉｌｌａ  ｄｅ  Ｊｅｓｕｓ他［米国特許第７，９０２，３３２号及びＭｏｌ．Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｂｉｏｌ．，１０，１７７−１８１（２００８）］に記載されている：
【００５４】
【化１１】
0006650873.tif 000012
二官能性リンカーＭａｌ−ＡＯを使用して、チオールとＭａｌ−ＡＯのマレイミド官能基との選択的反応によってアミノオキシ官能基をチオール含有ＢＴＭに結合させることができる。Ｐａｄｉｌｌａ  ｄｅ  Ｊｅｓｕｓ（上記）は、これをＨＥＲ２選択的Ａｆｆｉｂｏｄｙのコンジュゲーションに応用している。
【００５５】
Ｅｅｉ保護ペプチドを得る別の経路がＤｕｌｅｒｙ他［Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，６３，１１９５２−１１９５８（２００７）］及びＦｏｉｌｌａｒｄ他［Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，７３，９８３−９９１（２００８）］に記載されている。Ｄｕｌｅｒｙ及びＦｏｉｌｌａｒｄには、Ｅｅｉ保護基の脱保護に適した条件についても記載されている。
【００５６】
第２の態様では、本発明は、第１の態様の工程（ｉｉｉ）で定義した式ＩＩＡの凍結乾燥アミノオキシ化合物を含む凍結乾燥組成物を提供する。
【００５７】
第２の態様の式ＩＩＡの精製アミノオキシ化合物の好ましい実施形態は、第１の態様（上記）に記載した通りである。
【００５８】
第２の態様の凍結乾燥組成物は、アルデヒド及びケトンを含まない。
【００５９】
第２の態様の凍結乾燥組成物は、好ましくは、残留ＴＦＡを含まない。残留ＴＦＡは、式ＩＩＡのアミノオキシ化合物の安定性を低下させかねないからである。
【００６０】
第２の態様の凍結乾燥組成物は重要である。追加の反応（特に第３の態様に記載の放射性標識）には、格段に濃縮された形態が必要とされるからである。凍結乾燥組成物は無菌状態で得ることができるが、これは、放射性医薬組成物を調製する場合に重要である。これについては、第３の態様（下記）で説明する。凍結乾燥組成物は、第４、第５及び第６の態様（下記）で記載する通り、自動合成装置及び関連カセットで好適に使用できる。
【００６１】
凍結乾燥組成物は、凍結乾燥を容易にするための充填剤又は可溶化剤から選択される１種以上の追加の賦形剤を適宜含有していてもよい。
【００６２】
「充填剤」という用語は、製造及び凍結乾燥時における材料の取扱いを容易にすることができる薬学的に許容される増量剤を意味する。好適な充填剤には、塩化ナトリウムのような無機塩、及びスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースのような水溶性の糖又は糖アルコールがある。
【００６３】
「可溶化剤」という用語は、組成物に存在する添加剤であって、再構成のための溶媒中での物質の溶解度を高める添加剤を意味する。かかる溶媒として好ましいのは水性媒質であり、従って可溶化剤は好ましくは水中での溶解度を高める。かかる可溶化剤として適したものとしては、Ｃ1-4アルコール、グリセリン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノオレエート、ポリソルベート、ポリ（オキシエチレン）ポリ（オキシプロピレン）ポリ（オキシエチレン）ブロック共重合体（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標））、シクロデキストリン（例えば、α−、β−又はγ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン或いはヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン）及びレシチンがある。
【００６４】
第３の態様では、本発明は、生体ターゲティング分子を18Ｆで放射性標識する方法であって、
（ａ）第１の態様の方法を行って、第２の態様の凍結乾燥組成物を得る工程と、
（ｂ）工程（ａ）の凍結乾燥組成物を下記の式（ＩＩＩＡ）のカルボニル化合物と適当な溶媒中で縮合して、下記の式（ＩＶＡ）の放射性標識コンジュゲートを得る工程と
を含む方法を提供する。
【００６５】
Ｑ−［リンカー］−（Ｃ＝Ｏ）Ｙ1    （ＩＩＩＡ）
［ＢＴＭ］−Ｏ−Ｎ＝（ＣＹ1）−［リンカー］−Ｑ    （ＩＶＡ）
式中、
Ｑは放射性同位体18Ｆを含む基であり、
［ＢＴＭ］は第１の態様で定義した生体ターゲティング分子であり。
Ｙ1はＨ、Ｃ1-6アルキル又はＣ4-10アリールであり、
［リンカー］はリンカー基である。
【００６６】
第３の態様における式ＩＩＡのアミノオキシ化合物、ＢＴＭ、Ｙ1及び［リンカー］の好ましい実施形態は、第１の態様（上記）に記載した通りである。第３の態様における凍結乾燥組成物の好ましい実施形態は、第２の態様（上記）に記載した通りである。
【００６７】
「放射性同位体を含む基」という用語は、ある官能基が放射性同位体を含んでいるか、或いは放射性同位体が追加の化学種として結合していることを意味する。ある官能基が放射性同位体を含んでいる場合、これは、その化学元素が化学構造に既に含まれており、その元素の放射性同位体がその天然存在比を超えるレベルで存在することを意味する。このような同位体の増大又は濃縮レベルは好適には５倍以上、好ましくは１０倍以上、最も好ましくは２０倍以上であり、理想的にはその同位体の天然存在比の５０倍以上であるか或いは同位体の濃縮度が９０〜１００％となるレベルで存在する。かかる官能基の例としては、高レベルの18Ｆを有するフルオロアルキル基であって18Ｆ原子が化学構造に存在するものが挙げられる。
【００６８】
「リンカー基」という用語は、式−（Ａ）m−の二価基を意味する。式中、各Ａは独立に−ＣＲ2−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ2ＣＯ2−、−ＣＯ2ＣＲ2−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ2ＮＲ−、−ＮＲＳＯ2−、−ＣＲ2ＯＣＲ2−、−ＣＲ2ＳＣＲ2−、−ＣＲ2ＮＲＣＲ2−、Ｃ4-8シクロヘテロアルキレン基、Ｃ4-8シクロアルキレン基、Ｃ5-12アリーレン基又はＣ3-12ヘテロアリーレン基であり、各Ｒは独立にＨ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、Ｃ1-4アルコキシアルキル又はＣ1-4ヒドロキシアルキルから選択され、ｍは１〜２０の整数である。
【００６９】
第３の態様では、Ｙ1は好ましくはＨである（すなわち、式ＩＩＩＡのカルボニル化合物は、アルデヒドである）。式ＩＩＩＡの好ましいカルボニル化合物は、18Ｆ−４−フルオロベンズアルデヒドである。
【００７０】
好ましくは、アニリン又はその塩（例えば、アニリン塩酸塩）の存在下で、第３の態様の縮合工程（ｂ）を行う。オキシムライゲーションによるアニリンの使用は、全体的な反応速度を増加させるのに有効であり、かかる反応を弱酸性ｐＨ値で起こすことができるようになることが示されている［Ｄｉｒｋｓｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，４５，７５８１−７５８４（２００６）］。第３の態様の方法の工程（ｂ）の後、好ましくは、クロマトグラフィーなどの標準的な技術を使用して、式ＩＶＡの生成物コンジュゲートを分離及び／又は精製し得る。
【００７１】
第３の態様の調製方法は、好ましくは、18Ｆ標識生体ターゲティング分子が、18Ｆ標識生体ターゲティング分子を生体適合性担体と共に哺乳類への投与に適した形態で含む放射性医薬組成物として得られるように実施される。18Ｆは、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）イメージングに適しているという利点を有する。
【００７２】
「哺乳類への投与に適した形態」という記載は、無菌でパイロジェンフリーであり、毒性又は有害作用を生じる化合物を含まず、生体適合性ｐＨ（約ｐＨ４．０〜１０．５）で製剤化される組成物を意味する。かかる組成物は、インビボで塞栓を生じる危険性のある粒状物質を含んでおらず、しかも体液（例えば、血液）と接触しても沈殿を生じないように製剤化される。かかる組成物は、生物学的に適合性の賦形剤のみを含み、好ましくは等張性である。
【００７３】
「生体適合性担体」とは、放射性コンジュゲートを懸濁又は好ましくは溶解できる流体、特に液体であって、組成物が生理学的に認容できるもの、つまり毒性も耐え難い不快感も伴わずに哺乳類の身体に投与することができるようなものである。生体適合性担体は好適には注射可能な担体液であり、例えば、パイロジェンフリーの注射用滅菌水、食塩液のような水溶液（これは注射用の最終製剤が等張性となるように調整するのに都合がよい）、生体適合性緩衝剤を含む水性緩衝液（例えばリン酸緩衝液）、１種以上の張度調節物質（例えば血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えばグルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えばソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えばグリセロール）その他の非イオン性ポリオール材料（例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液である。好ましくは、生体適合性担体はパイロジェンフリーの注射用水又は等張食塩水又はリン酸緩衝液である。
【００７４】
放射性標識コンジュゲート及び生体適合性担体は各々、無菌健全性及び／又は放射能安全性、さらに適宜ヘッドスペースの不活性ガス（例えば、窒素又はアルゴン）を維持できるとともに、注射器又はカニューレでの溶液の添加及び吸引も行うことのできる密封容器からなる適当なバイアル又は容器に入れた状態で供給される。かかる容器として好ましいのは、セプタムシールバイアルであり、気密蓋をオーバーシール（通常はアルミニウム製）と共にクリンプオンする。蓋は、無菌健全性を維持したまま皮下注射針で１回又は複数回穿刺するのに適したもの（例えば、クリンプオン式セプタムシール蓋）である。かかる容器は、所望に応じて（例えばヘッドスペースガスの変更又は溶液の脱気のため）真空に蓋が耐えるとともに、酸素や水蒸気のような外部雰囲気ガスを侵入させずに減圧のような圧力変化に耐えるという追加の利点がある。
【００７５】
好ましい多用量用容器は、患者の複数回分の用量を収容した単一バルクバイアル（例えば容積１０〜５０ｃｍ3のもの）からなり、臨床症状に応じて製剤の有効期間中様々な時間間隔で１回分の用量を臨床グレードの注射器に吸引することができる。プレフィルド型注射器は患者の１回分の用量つまり「単位用量」を収容するように設計され、そのため好ましくは使い捨てその他臨床用に適した注射器である。
【００７６】
放射性医薬組成物は、抗菌保存剤、ｐＨ調整剤、充填剤、放射線防護剤、可溶化剤又はモル浸透圧濃度調整剤のような追加の添加剤を適宜含んでいてもよい。「充填剤」及び「可溶化剤」という用語は、第２の態様（上記）で定義した通りである。「放射線防護剤」という用語は、水の放射線分解で生じる含酸素フリーラジカルのような反応性の高いフリーラジカルを捕捉することによって、酸化還元反応のような分解反応を抑制する化合物を意味する。本発明の放射線防護剤は、好適には、アスコルビン酸、パラアミノ安息香酸（つまり４−アミノ安息香酸）、ゲンチシン酸（つまり２，５−ジヒドロキシ安息香酸）及びそれらの生体適合性陽イオンとの塩から選択される。
「生体適合性陽イオン」（Ｂc）という用語は、イオン化した負荷電基と塩を形成する正荷電の対イオンを意味するが、正荷電対イオンも無毒性であって哺乳類の身体（特に人体）への投与に適している。好適な生体適合性陽イオンの具体例としては、アルカリ金属であるナトリウム及びカリウム、アルカリ土類金属であるカルシウム及びマグネシウム、並びにアンモニウムイオンが挙げられる。好ましい生体適合性陽イオンはナトリウム及びカリウムであり、最も好ましくはナトリウムである。
【００７７】
「抗菌保存剤」という用語は、細菌、酵母又はカビなどの有害微生物の増殖を阻害する薬剤を意味する。抗菌保存剤は、使用する用量に応じてある程度の殺菌作用を示すこともある。本発明の抗菌保存剤の主な役割は、医薬組成物におけるかかる微生物の増殖を阻止することである。ただし、抗菌保存剤は、投与に先立って組成物の製造に使用されるキットの１種以上の成分における有害微生物の増殖の防止にも適宜使用できる。好適な抗菌保存剤には、パラベン類（即ち、メチル、エチル、プロピル又はブチルパラベン或いはこれらの混合物）、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールがある。好ましい抗菌保存剤はパラベン類である。
【００７８】
「ｐＨ調整剤」という用語は、組成物のｐＨがヒト又は哺乳類への投与のための許容範囲（約ｐＨ４．０〜１０．５）内に確実に収まるようにするのに有用な化合物又は化合物混合物を意味する。好適なかかるｐＨ調整剤には、トリシン、リン酸塩又はＴＲＩＳ［つまりトリス（ヒドロキシルメチル）アミノメタン］のような薬学的に許容される緩衝剤、及び炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物のような薬学的に許容される塩基がある。組成物をキットの形態で使用する場合には、キットのユーザーが多段操作の一部としてｐＨを調整できるように、ｐＨ調整剤を適宜別個のバイアル又は容器に入れて供給してもよい。
【００７９】
放射性医薬組成物を得るため、第３の態様の方法は、次のような様々な方法で実施し得る。
ａ）クリーンルーム環境で各工程を実施する無菌製造技術、
ｂ）無菌製造を用いずに第１の態様の工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）を実施し、最後の工程として滅菌する［例えば、ガンマ線照射、オートクレーブ乾式加熱又は化学的処理（例えばエチレンオキシド）］最終滅菌、
ｃ）第２の態様の凍結乾燥組成物を任意成分の賦形剤と共に含む無菌の非放射性キット製剤を式ＩＩＩＡの放射性化合物と反応させるキット法、
ｄ）自動合成装置を用いて各工程を実施する無菌製造技術。
【００８０】
方法（ｄ）が好ましい。そこで、好ましくは自動合成装置を使用して、第３の態様の方法を実施する。かかる自動合成装置については、第４の態様（下記）で説明する。
【００８１】
式ＩＩＩＡのカルボニル化合物は、以下のように得ることができる。18Ｆフッ素化アルデヒドには、18Ｆ−フルオロベンズアルデヒド又はｐ−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−18Ｆ−フルオロシリル）ベンズアルデヒド（18Ｆ−ＳｉＦＡ−Ａ）がある。式18Ｆ（ＣＨ2）2Ｏ［ＣＨ2ＣＨ2Ｏ］qＣＨ2ＣＨＯ（式中、ｑは、３である）の18Ｆ標識脂肪族アルデヒドは、Ｇｌａｓｅｒ他［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１９（４），９５１−９５７（２００８）］の方法で得ることができる。18Ｆ−フルオロベンズアルデヒドは、Ｇｌａｓｅｒ他［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，５２，３２７−３３０（２００９）］の方法で得ることができる。18Ｆ−フルオロベンズアルデヒドの前駆体つまりＭｅ3Ｎ+−Ｃ6Ｈ4−ＣＨＯ。ＣＦ3ＳＯ3-は、Ｈａｋａ他［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２７，８２３−８３３（１９８９）］の方法で得ることができる。
【００８２】
式ＩＩＩＡのカルボニル化合物は、場合により、好適な保護誘導体の脱保護によってインサイチュで作製され得る。カルボニル保護基の使用は、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，［Ｗｉｌｅｙ  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，（２００６）］に記載されている。
【００８３】
第４の態様では、本発明は、第２の態様の凍結乾燥組成物を含む自動合成装置を提供する。
【００８４】
第４の態様における式ＩＩＡの精製アミノオキシ化合物及び凍結乾燥組成物の好ましい態様は、それぞれ、第１及び第２の態様（上記）に記載した通りである。
【００８５】
「自動合成装置」という用語は、Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙ他［Ｃｌｉｎ．Ｐｏｓｉｔｒ．Ｉｍａｇ．，２（５），２３３−２５３（１９９９）］に記載されているような単位操作の原理に基づく自動化モジュールを意味する。「単位操作」という用語は、複雑なプロセスが一連の簡単な操作又は反応に集約されることを意味し、広範な材料に適用できる。かかる自動合成装置は、本発明の方法、特に放射性医薬品生成物が所望される場合の本発明の方法に好ましい。これらは、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、ＣＴＩ社．、Ｉｏｎ  Ｂｅａｍ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ社（ベルギー国、Ｂ−１３４８ルヴァン・ラ・ヌーブ、シュマン・デュ・シクロトロン３）、Ｒａｙｔｅｓｔ社（ドイツ）及びＢｉｏｓｃａｎ社（米国）を始めとする様々な供給業者から市販されている［Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙ他、上掲］。
【００８６】
市販の自動合成装置は、放射性医薬品の製造の結果として生じる液体放射性廃棄物用の適当な容器も提供する。自動合成装置は、適切に設計された放射能作業セル内で使用するように設計されているので、通例、放射線遮蔽が設けられていない。放射能作業セルは、潜在的な放射線量からオペレーターを保護するのに適した放射線遮蔽をもたらすとともに、化学薬品蒸気及び／又は放射性蒸気を除去するための換気装置を与える。自動合成装置は、好ましくはカセットを備える。
【００８７】
「カセット」という用語は、合成装置の可動部材の機械的運動がカセットの外側から（つまり外部から）カセットの動作を制御するように、自動合成装置（上述）に着脱自在かつ交換可能に装着できるように設計された装置を意味する。好適なカセットは直線状に並んだ弁の列を含み、その各々は倒立セプタムシールバイアルの針穿刺又は気密連結継手によって試薬又はバイアルを装着することができるポートに結合している。各弁は、自動合成装置の対応する可動アームとかみ合うはめ込み型継手を有している。カセットを自動合成装置に装着した場合、アームの外部回転が弁の開閉を制御する。自動合成装置の追加の可動部材は、注射器のプランジャー先端をつかみ、注射器外筒を上昇又は降下させるように設計されている。
【００８８】
カセットは汎用性であって、通例は試薬を装着することができる複数の位置、及び試薬のシリンジバイアル又はクロマトグラフィーカートリッジ（例えば、固相抽出（ＳＰＥ））を装着するのに適した複数のポートを有している。カセットは常に反応容器を含んでいる。かかる反応容器は好ましくは１〜１０ｃｍ3、最も好ましくは２〜５ｃｍ3の容積を有しており、カセットの様々なポートから試薬又は溶媒を移送できるように、カセットの３以上のポートが反応容器に連結されるように構成されている。好ましくは、カセットは直線状に並んだ１５〜４０個の弁、最も好ましくは２０〜３０個の弁を有しており、２５個の弁が特に好ましい。カセットの弁は好ましくは各々同一であり、最も好ましくは三方弁である。本発明のカセットは放射性医薬品の製造に適するように設計され、医薬グレードの材料であって理想的には放射線分解にも耐える材料で製造される。
【００８９】
本発明の好ましい自動合成装置は、放射性フッ素化された放射性医薬品の所定バッチの製造を実施するのに必要なすべての試薬、反応容器及び機器を含むディスポーザブルつまり使い捨てカセットを備える。かかるカセットは、単にカセットを交換するだけで、自動合成装置が相互汚染のリスクを最小限に抑えながら各種の放射性医薬品を製造できる柔軟性をもつことを意味する。カセットアプローチには、装置構成の単純化とそれに伴うオペレーターエラーのリスクの低減、ＧＭＰ（Good Manufacturing Practice）コンプライアンスの向上、マルチトレーサー能力、生産作業間の迅速な変更、カセット及び試薬の作業前自動診断検査、実施すべき合成と化学試薬との自動バーコードクロスチェック、試薬のトレーサビリティ、使い捨てであり、そのため相互汚染のリスクがなく、改竄及び誤用を防ぐことができるという利点がある。
【００９０】
第５の態様では、本発明は、第１の態様の調製方法又は第３の態様の放射性標識方法を実施するための自動合成装置の使用を提供する。
【００９１】
第５の態様における式ＩＩＡの精製アミノオキシ化合物及び精製方法の好ましい実施形態は、第１の態様（上記）に記載した通りである。第５の態様における放射性標識方法の好ましい実施形態は、第３の態様（上記）に記載した通りである。
【００９２】
第６の態様では、本発明は、第４の態様の自動合成装置に使用するのに好適な単回使用の使い捨てカセットであって、第２の態様の凍結乾燥組成物を含む単回使用の使い捨てカセットを提供する。
【００９３】
第６の態様における自動合成装置及びカセットの好ましい態様は、第４の態様（上記）に記載した通りである。第６の態様における式ＩＩＡのアミノオキシ化合物の好ましい態様は、第１の態様に記載した通りである。第６の態様における凍結乾燥組成物の好ましい態様は、第２の態様（上記）に記載した通りである。
【実施例】
【００９４】
以下に詳述する非限定的な実施例によって、本発明を説明する。
【００９５】
実施例１は、本発明のｃ−Ｍｅｔターゲティングペプチド（「ペプチド１」）の合成を提供する。
【００９６】
実施例２は、アミノオキシ官能基が保護基（Ｅｅｉ）で保護されているアミノオキシ官能化ペプチド１（「化合物２」）の合成を提供する。
【００９７】
実施例３は、二官能性アミノオキシマレイミドリンカー（化合物４）の合成を提供する。
【００９８】
実施例４は、Ａｆｆｉｂｏｄｙと化合物４との反応による、アミノオキシ官能化Ａｆｆｉｂｏｄｙ（化合物６）の合成、精製及び凍結乾燥を提供する。
【００９９】
実施例５は、化合物６の18Ｆ標識を提供し、本発明の方法が実行可能な放射性標識前駆体を提供することを示す。
【０１００】
実施例６は、本発明の方法（方法２）が、従来の方法（方法１）を使用した場合と比較して改善された純度の化合物２を提供することを示す。方法２はまた、放射性標識のための溶媒により容易に可溶性の凍結乾燥材料を提供した。後者の影響は、化合物３の精製時間が３１％減少したことであった（ＦａｓｔＬａｂ（商標）放射性合成装置を使用して、１２８７秒対８８５秒）。方法２によって前駆体を調製した場合に得られた化合物３のＲＣＰは、方法１と同程度に良好であり、化合物３の非放射性ペプチド不純物（総ペプチド含量）は２６％減少した。
【０１０１】
【表１】
0006650873.tif 000013
略語
通常の１文字又は３文字アミノ酸略語を使用する。
【０１０２】
Ａｃ：アセチル
Ａｃｍ：アセトアミドメチル
ＡＣＮ：アセトニトリル
ＡｃＯＨ：酢酸．
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
ｔＢｕ：第３級ブチル
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
Ｅｅｉ：エトキシエチリデン；
Ｅｅｉ−ＡＯＡｃ−ＯＳｕ：Ｎ−（１−エトキシエチリデン）−２−アミノオキシ酢酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル；
Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメトキシカルボニル；
ＨＢＴＵ：Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート；
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー；
ＭＷ：分子量；
ＮＨＳ：Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド；
ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン；
ＮＭＰ：１−メチル−２−ピロリジノン；
Ｐｂｆ：２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル；
ＲＰ−ＨＰＬＣ：逆相高速液体クロマトグラフィー；
ＳＰＥ：固相抽出；
ｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブチル；
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン；
ＴＩＳ：トリイソプロピルシラン；
Ｔｒｔ：トリチル。
【０１０３】
実施例１：ペプチド１の合成
工程（ａ）：保護前駆体線状ペプチドの合成
前駆体線状ペプチドは、構造：Ａｃ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ2を有する。
【０１０４】
０．１ｍｍｏｌのＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  Ｎｏｖａｇｅｌ樹脂から出発してＦｍｏｃ化学を使用してＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３３Ａペプチド合成装置によって、ペプチジル樹脂Ｈ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｈｒ（ψMe,Meｐｒｏ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ポリマーをアセンブルした。カップリング工程では、過剰の１ｍｍｏｌの予備活性化アミノ酸（ＨＢＴＵを使用）をアプライした。Ｇｌｕ−Ｔｈｒシュードプロリン（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ  ０５−２０−１１２２）を配列に組み込んだ。樹脂を窒素バブラー装置に移し、ＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した無水酢酸（１ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（１ｍｍｏｌ）の溶液で６０分間処理した。無水物溶液をろ過により除去し、樹脂をＤＣＭで洗浄し、窒素気流下で乾燥した。
【０１０５】
２．５％のＴＩＳ、２．５％の４−チオクレゾール及び２．５％の水を含有するＴＦＡ（１０ｍＬ）中で、側鎖保護基の同時除去及び樹脂からのペプチドの切断を２時間３０分間行った。樹脂をろ過により除去し、ＴＦＡを真空中で除去し、ジエチルエーテルを残留物に追加した。形成した沈殿をジエチルエーテルで洗浄し、風乾して２６４ｍｇの粗ペプチドを得た。
【０１０６】
分取ＨＰＬＣ（勾配：２０〜３０％Ｂ、４０分間、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ  ２１４ｎｍ、生成物の保持時間：３０分間）によって粗ペプチドを精製して、１００ｍｇの純粋なペプチド１線状前駆体を得た。分析ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％Ｂ、１０分間、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ  ２１４ｎｍ、生成物の保持時間：６．５４分間）によって、純粋な生成物を分析した。エレクトロスプレー質量分析を使用して、生成物のさらなる特性評価を行った（ＭＨ22+計算値：１４６４．６、ＭＨ22+実測値：１４６５．１）。
【０１０７】
工程（ｂ）：単環式Ｃｙｓ４−１６ジスルフィド架橋の形成
Ｃｙｓ４−１６；Ａｃ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ2
工程（ａ）の線状前駆体（１００ｍｇ）を５％ＤＭＳＯ／水（２００ｍＬ）に溶解し、アンモニアを使用して溶液をｐＨ６に調整した。反応混合物を５日間撹拌した。次いで、ＴＦＡを使用してこの溶液をｐＨ２に調整し、真空中で蒸発により溶媒のほとんどを除去した。生成物精製のために、残留物（４０ｍＬ）を分取ＨＰＬＣカラムに少しずつ注入した。
【０１０８】
分取ＨＰＬＣ（勾配：０％Ｂで１０分間、次いで０〜４０％Ｂで４０分間、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ  ２１４ｎｍ、生成物の保持時間：４４分間）によって残留物を精製して、７２ｍｇの純粋なペプチド１単環式前駆体を得た。分析ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％Ｂ、１０分間、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ  ２１４ｎｍ、生成物の保持時間：５．３７分間（Ｐ１）；５．６１分間（Ｐ２）；６．０５分間（Ｐ３））によって、純粋な生成物（異性体Ｐ１〜Ｐ３の混合物）を分析した。エレクトロスプレー質量分析を使用して、生成物のさらなる特性評価を行った（ＭＨ22+計算値：１４６３．６、ＭＨ22+実測値：１４６４．１  Ｐ１）；１４６４．４（Ｐ２）；１４６４．３（Ｐ３））。
【０１０９】
工程（ｃ）：第２のＣｙｓ６−１４ジスルフィド架橋（ペプチド１）の形成
窒素雰囲気下で、工程（ｂ）の単環式前駆体（７２ｍｇ）を７５％ＡｃＯＨ／水（７２ｍＬ）に溶解した。１Ｍ  ＨＣｌ（７．２ｍＬ）及び０．０５Ｍ  Ｉ2のＡｃＯＨ（４．８ｍＬ）溶液をこの順に追加し、混合物を４５分間撹拌した。１Ｍアスコルビン酸（１ｍＬ）を追加して、無色の混合物を得た。溶媒のほとんどを真空中で蒸発させ、残留物（１８ｍＬ）を水／０．１％ＴＦＡ（４ｍＬ）で希釈し、分取ＨＰＬＣを使用して生成物を精製した。分取ＨＰＬＣ（勾配：０％Ｂで１０分間、次いで２０〜３０％Ｂで４０分間、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ  ２１４ｎｍ、生成物の保持時間：４３〜５３分間）によって残留物を精製して、５２ｍｇの純粋なペプチド１を得た。分析ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％Ｂ、１０分間、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ  ２１４ｎｍ、生成物の保持時間：６．５４分間）によって、純粋な生成物を分析した。エレクトロスプレー質量分析を使用して、生成物のさらなる特性評価を行った（ＭＨ22+計算値：１３９１．５、ＭＨ22+実測値：１３９２．５）。
【０１１０】
実施例２：化合物２の合成、精製及び凍結乾燥
ペプチド１（０．７９７ｇ）及びＥｅｉ−ＡＯＡｃ−ＯＳｕ（ＩＲＩＳ  Ｂｉｏｔｅｃｈ；１２７ｍｇ）をＤＭＦ（１２ｍＬ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（１００μＬ）を追加し、反応混合物を２６分間振盪した。第２のアリコートのＤＩＰＥＡ（８０μＬ）を追加し、反応混合物を２時間振盪した。次いで、１０％ＡＣＮ／水／０．ｌ％酢酸アンモニウム（４０ｍＬ）で反応混合物を希釈し、Ａ＝０．１％ＴＦＡ／水及びＢ＝ＡＣＮ（２０〜４０％Ｂ、４０分間の勾配溶出）を使用して分取ＨＰＬＣによって精製した。純粋な生成物を含有する画分（これらは、化合物１及び化合物２の混合物である）をフラスコにプールし、アルゴンでフラスコをフラッシュした。この溶液を一晩撹拌して、Ｅｅｉ保護基を完全に除去した。脱保護生成物を凍結乾燥して、５５０ｍｇ（収率６９％）の化合物２を得た。
【０１１１】
分析ＬＣ−ＭＳ（勾配：１０〜４０％Ｂ、５分間、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ  ＴＦＡ、流速：０．６ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）２０×２ｍｍ、検出：ＵＶ  ２１４ｎｍ、生成物の保持時間：３．００分間）によって、純粋な生成物を分析した。ＭＨ22+計算値：１４２８．１、ＭＨ22+実測値：１４２７．９）。
【０１１２】
実施例３：二官能性リンカー（化合物４）の合成
【０１１３】
【化１２】
0006650873.tif 000014
ＮＭＰ（２ｍＬ）中で、Ｎ−（２−アミノエチル）マレイミドＴＦＡ塩（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ；１５１ｍｇ．）及びＥｅｉ−ＡＯＡｃ−ＯＳｕ（ＩＲＩＳ  Ｂｉｏｔｅｃｈ；７７ｍｇ）を周囲温度で撹拌した。トリメチルピリジン（８０μＬ）を追加し、反応混合物を周囲温度で７０分間撹拌した。０．１％酢酸（７ｍＬ）で希釈することによって、反応をクエンチした。以下のように分取ＨＰＬＣによって、生成物を精製した：
【０１１４】
【表２】
0006650873.tif 000015
精製化合物４を凍結乾燥した。収量４３ｍｇ（７５％）、純度：＞９７面積％。
【０１１５】
分析ＬＣ−ＭＳ（勾配：１０〜４０％Ｂ、５分間、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．６ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）２０×２ｍｍ、検出：ＵＶ  ２１４ｎｍ、生成物の保持時間：１．９３分間）によって、純粋な生成物を分析した。ＭＨ+計算値：２８４．１、ＭＨ+実測値：２８４．１）。
【０１１６】
実施例４：化合物６の合成、精製及び凍結乾燥
工程（ａ）：化合物５の合成
Ａｆｆｉｂｏｄｙ  １（Ａｆｆｉｂｏｄｙ  ＡＢ；１．００ｇ）及び化合物４（８１ｍｇ）を３０％アセトニトリル水溶液に溶解した。酢酸アンモニウムを追加して、ｐＨを６に調整した。次いで、混合物を周囲温度で３４分間撹拌したところ、反応はこの時点までに完了した（ＬＣ−ＭＳによるモニタリング）。
【０１１７】
工程（ｂ）：化合物５の精製
工程（ａ）の反応混合物を水（２０ｍＬ）で希釈した。以下のように分取ＨＰＬＣによって、希釈混合物を精製した：
【０１１８】
【表３】
0006650873.tif 000016
所望の勾配を適用することによって化合物５を溶出したところ、約３５分間の保持時間を示した。
【０１１９】
工程（ｃ）：化合物６を得るための化合物５の脱保護
工程（ｂ）の精製画分（約０．５Ｌ）を混ぜ合せた。これらは、化合物５及び化合物６の混合物である。ＴＦＡ（５ｍＬ）を追加し、反応混合物をアルゴン下、周囲温度で撹拌し、ＨＰＬＣによってモニタリングした。脱保護は、１０５分以内に完了した。
【０１２０】
工程（ｄ）：精製化合物６の凍結乾燥
次いで、アルゴンの緩流下でフラスコをフラッシュしながら、工程（ｃ）の脱保護化合物６溶液を凍結した。次いで、凍結化合物６溶液を凍結乾燥した。収量：１．０１ｇ（９８％）、純度：８９面積％ＨＰＬＣ
分析ＨＰＬＣ（勾配：１０〜４０％Ｂ、５分間、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流速：０．６ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）２０×２ｍｍ、検出：ＵＶ  ２１４ｎｍ、生成物の保持時間：３．１３分間）によって、純粋な生成物を分析した。ＭＳ（ＭH88+計算値：９０６．２、ＭH88+実測値：９０６．３）。
【０１２１】
実施例５：化合物７の放射性合成
工程（ａ）：［18Ｆ］−フルオロベンズアルデヒド（18Ｆ−ＦＢＡ）の合成
銀標的を有するＧＥＭＳ  ＰＥＴｔｒａｃｅサイクロトロンを使用して、［18Ｏ］（ｐ，ｎ）［18Ｆ］核反応によって、［18Ｆ］−フッ化物を生産した。１．５〜３．５ｍＬの全目標量を使用した。放射性フッ化物を（カルボネートでプレコンディショニングした）Ｗａｔｅｒｓ  ＱＭＡカートリッジ上に捕捉し、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ2.2.2.（４ｍｇ、１０．７μＭ）及び炭酸カリウム（０．５６ｍｇ、４．１μＭ）の水（８０μＬ）及びアセトニトリル（３２０μＬ）溶液を用いて、このフッ化物を溶出した。窒素を使用して、ＱＭＡカートリッジから反応容器にこの溶液を移した。定常窒素気流及び真空の下で、［18Ｆ］−フッ化物を１２０℃で９分間乾燥した。メチルアンモニウムベンズアルデヒドトリフレート［Ｈａｋａ他，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２７，８２３−８３３（１９８９）］（３．３ｍｇ，１０．５μＭ）のＤＭＳＯ（１．１ｍＬ）溶液を乾燥［18Ｆ］−フッ化物に追加し、混合物を１０５℃で７分間加熱して、４−［18Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドを生成した。
【０１２２】
工程（ｂ）：化合物６への18Ｆ−ＦＢＡのコンジュゲーション
工程（ａ）の18Ｆ−ＦＢＡ及びＦａｓｔＬａｂ（商標）放射性合成装置（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｔｄ）を使用して、実施例４（ｄ）の凍結乾燥化合物６を18Ｆで放射性標識して、収率２５％及びＲＣＰ９５％で化合物７を得た。
【０１２３】
実施例６：化合物３を得るための化合物２の合成、凍結乾燥及び放射性フッ素化−本方法と従来法との比較
従前の方法（スキーム１）及び本発明の方法（スキーム２）にしたがって、即時に放射性フッ素化可能な最終中間体（「ＦＩ」）として化合物２の凍結乾燥組成物を調製し、結果を比較した。これら２つの方法をスキーム１及び２に要約する：
スキーム１：従来の処理方法のフローチャート（方法１）
【０１２４】
【化１３】
0006650873.tif 000017
スキーム２：本発明の方法のフローチャート（方法２）
【０１２５】
【化１４】
0006650873.tif 000018
スキーム１及び２において、「保護ＦＩ」は化合物１に対応し、「ＦＩ」は化合物２に対応する。
【０１２６】
方法１及び２の凍結乾燥生成物の純度並びに含水量及びＴＦＡ含量を測定した。次いで、実施例５の方法にしたがって、方法１及び方法２の凍結乾燥材料を18Ｆ−ＦＢＡによる放射性フッ素化に使用し、化合物３の放射化学純度を決定した。分析ＨＰＬＣによって、化合物３の生成物の放射性ペプチド含量も決定した。作製したデータを表１に要約する。
【０１２７】
【表４】
0006650873.tif 000019
【配列表】
0006650873000001.app