(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ドライアイに関連する眼の状態または眼浮腫の予防または治療に用いるための、局所適用に適した医薬または化粧品組成物であって、（ａ）当該組成物の総重量に対し、０．００５０から１．００重量％の範囲のリポ酸、（ｂ）当該組成物の総重量に対し、０．１０から１．００重量％の範囲のタウリン、および薬学的または化粧品的に許容される担体を含んでなり、前記リポ酸：前記タウリンの重量比が、０．００５から０．５の範囲にあることを特徴とする、組成物。
【請求項２】
眼への適用に適したものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ドライアイが、マイボーム腺の機能不全、高蒸発性症候群、または涙欠乏症の徴候である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記眼浮腫が角膜浮腫である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
浸透圧の不均衡に関連した粘膜、眼の疾患の予防または治療のための浸透圧保護剤として用いられる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、浸透圧の不均衡に関連した皮膚および粘膜の疾患の予防および治療のための浸透圧保護剤としての用途のリポ酸とタウリンとの組み合わせに関する。また、浸透圧の不均衡に関連した皮膚および粘膜の疾患の予防および治療のための方法において、適切な量のリポ酸とタウリンとの組み合わせを、必要とする患者の皮膚または粘膜に適用する方法に関する。また、本発明は、リポ酸とタウリンとの組み合わせを含む局所適用又は眼科用組成物に適した薬学または化粧品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
浸透圧の不均衡は、哺乳動物、特にヒトの皮膚および粘膜の疾患において観察され、一般的に乾燥皮膚または乾燥症として見られ、これらはアトピー性皮膚炎、魚鱗癬、湿疹、乾癬の徴候である可能性があり、あるいはドライアイとして見られ、これはマイボーム腺の機能不全、高蒸発性症候群、又は涙欠乏症の徴候である可能性があり、また眼浮腫に観察されることがある。
【０００３】
これら皮膚や粘膜の疾患について通常の治療は、保湿・軟化クリーム、コルチドベースクリームまたは軟膏、または局所免疫調節剤を適用して行われる。
【０００４】
タウリンは、天然アミノスルホン酸であって、システインの変換によって哺乳類の膵臓によって産生される。その用途としては、エネルギードリンクへの食品添加物として知られている。タウリンの用途としては、また、眼科用組成物中にあって細胞におけるカルシウムイオンを調製する機能について、黄斑変性症を防止するものと記載されて（US 2006/188492）、あるいはキレート剤（US 5817630）として記載されている。
【０００５】
リポ酸（チオクト酸（CAS番号0001077-28-7）とも呼ばれる）およびその誘導体は、その抗酸化性により知られている。それはタブレットの形態で食品サプリメントとして（Liponsaure-ratiopharm（商標）、Ratiopharm社によりドイツで販売）利用され、あるいは注射用希釈溶液として注射用に（Neurium（商標）、Hexal社によりドイツで販売）、糖尿病患者の治療において用いられている。酸化防止剤としてリポ酸を含むことができる眼科用又は化粧用組成物が特許文献に記載されている（US2006/188492、US2004/265345、US5817630、WO02098345、DE10229995、WO01/93824、US2005/192229、BRPI0 800 818、CN103860 625、JP 2013-241398）。
【０００６】
また、その抗菌特性は、BDTを含むコンタクトレンズのクリーニング液の用途において記載がされている（US616239）。
【０００７】
リポ酸の抗酸化特性については、また、ラットの糖尿病性白内障への有効性の研究が提案されている（Masami Kojima & col., Japanese Journal of Ophthalmology, January 2007, Volume 51, Issue 1, pp 10-13）。
【０００８】
角膜細胞においてリポ酸を試験したところ、本発明者らは、観察された抗酸化効果は比較的低く、栄養補助食品として記載されているものの観点から期待される効果よりも低いとの知見を得た。
【０００９】
本発明者らは、上述の皮膚および粘膜、とりわけ眼における疾患の予防および治療において、リポ酸が有意におよび有利に用いられることを見出し、これは従来の治療に代わるまたはそれに加わるものであり、さらに従来、リポ酸を含む組成物により治療されている状態とは無関係なものであった。とりわけ、リポ酸とタウリンとの組み合わせは、それぞれの成分について別個に観察された浸透圧保護の効果を増強しまた拡張することを見出した。タウリンの浸透圧保護剤の効果が表れる一方で、リポ酸は、その適用後、直ちに効果を示し、リポ酸の効果が減少しはじめるときでもその効果を延長させる。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、リポ酸とタウリンの組み合わせに関し、特に、浸透圧不均衡に関連した皮膚および粘膜、とりわけ眼の疾患の予防および治療のための浸透圧保護剤としての用途に関する。
【００１１】
本発明は、また、浸透圧の不均衡に関連した皮膚および粘膜の疾患の予防および治療方法に関し、適切な量のリポ酸とタウリンの組み合わせが、浸透圧保護剤として、必要とする患者の皮膚または粘膜に適用される。
【００１２】
本発明は、また、リポ酸とタウリンとの組み合わせを含む局所適用または眼科用組成物に適した医薬組成物または化粧品組成物に関する。
【００１３】
前記の組み合わせは、リポ酸とタウリンとを含んでなる組み合わせ物である。当該組み合わせ物の前記二つの成分は、同一の組成物に含まれるか、または組み合わせて用いられる二つの組成物に別々に含まれ、使用の前に調合調製され、または共に使用されるものである。
【００１４】
有利には、組み合わせは、リポ酸とタウリンとが、リポ酸：タウリンとして0.002から0.2重量比、より有利には約0.004から約0.05、特には0.005、0.01、0.02または0.1である。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】リポ酸単独の種々の濃度における浸透圧ストレス後の細胞生存率の結果を示す図である。
【図２】リポ酸単独、またはグリセリンとの組み合わせの浸透圧ストレス後の細胞生存率の結果を示す図である。
【図３】リポ酸単独、またはタウリンとの組み合わせの浸透圧ストレス後の細胞生存率の結果を示す図である。
【図４】リポ酸、グリセリンおよびタウリン、それらの組み合わせの浸透圧ストレス後の細胞生存率の結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、リポ酸とタウリンの組み合わせに関し、特に、浸透圧の不均衡に関連した皮膚および粘膜、特に眼の疾患の予防および治療のための浸透圧保護剤としての用途に関する。
【００１７】
本発明において「リポ酸」は、5-（1,2-ジチオラン-3-イル）ペンタン酸を意味し、ラセミ体または任意の比率のそのエナンチオマーであり、特にR-エナンチオマー、純粋の、またはR-鏡像異性体の割合がSエナンチオマーのそれよりも大きい混合物、およびその薬学的に許容される塩である。
【００１８】
本発明において、「薬学的に許容される塩」は、有利には、リポ酸と薬学的に許容される塩基とからなる付加塩であり、有機塩基としては、アンモニアのようなアミノ基を含むもの、リジン、アルギニンおよび薬局方に公知の化合物が、また無機塩基としては水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウムおよび薬局方に公知の他の無機塩基がある。好ましくは、薬学的に許容される塩は、アルカリ金属塩（ナトリウム、カリウム）、アルカリ土類金属（カルシウム、マグネシウム）、またはより好ましくはアルミニウムイオン、ナトリウム塩である。
【００１９】
本発明の好ましい実施態様によれば、「リポ酸」は、リポ酸のR-鏡像異性体の塩、特にナトリウム塩（CAS 1761年10-81-9）またはマグネシウム塩である。
【００２０】
本発明において、「タウリン」は、2-アミノエタンスルホン酸、そのジアステレオ異性体、それらの純粋物、それらの任意の比率の混合物、その薬学的に許容される塩を意味する。
【００２１】
当該物質は、天然または器官において合成されたものであることができる。
【００２２】
タウリンの塩は、酸または塩基の塩であることできる。有利には、本発明による組み合わせに使用されるタウリンは、特に化学合成によって得られた2-アミノエタンスルホン酸のジアステレオマーの混合物である。
【００２３】
有利には、リポ酸とタウリンを含んでなる組み合わせは、リポ酸：タウリンの重量比が、0.002から0.2の範囲にあり、より有利には0.004から0.05の範囲にあり、好ましくは約0.005から約0.02であり、特に約0.005、0.01、0.02または0.04である。
【００２４】
本発明による組合せは、リポ酸とタウリンとを含んでなる組み合わせ物である。組み合わせ物の当該二つの成分は、同一の組成物に含まれるか、または組み合わせて用いられる二つの組成物に別々に含まれ、使用の前に調合調製され、または同時に使用されるものとされてよい。
【００２５】
組み合わせて同時に使用される二つの別々の組成物にあっては、各組成物は、有利には、皮膚または粘膜、とりわけ眼への適用に適した局所用組成物とされる。
【００２６】
調合調製に組み合わせて使用される二つの別々の組成物にあっては、リポ酸またはタウリンを含む組成物の少なくとも一つは、有利には、皮膚または粘膜、とりわけ眼への適用に適した局所用組成物とされる。
【００２７】
組み合わせにおける前記二成分間の重量比は、調合調製におけるそれぞれの成分に対応し、あるいは同時使用される場合、リポ酸およびタウリンを含んでなるそれぞれの組成物の相対的な量比に対応する。
【００２８】
有利には、リポ酸とタウリンとの組み合わせは、皮膚または粘膜、特に眼への適用のための適切な局所用組成物として使用される。
【００２９】
局所用組成物は、化粧品および医薬品の分野の当業者において周知である。
【００３０】
これらは当業者に周知のすべての標準的な局所用組成物であり、特に溶媒または脂肪性物質中の懸濁液または分散液の形で、または小胞分散液の形態で、またはクリームまたは乳液のようなエマルションの形態で、軟膏、ゲル、軟膏、固形スティック、エアゾールの形態またはスプレーである。
【００３１】
本発明による組成物は、上記剤型の調製のための従来知られた添加剤を含むことでき、例えば、脂質、有機溶媒、両性イオン性または非イオン性界面活性剤、柔軟剤、酸化防止剤、乳白剤、安定剤、イオン性または非イオン性増粘剤、シリコーン、消泡剤、保湿剤、ビタミン類、香料、防腐剤、充填剤、金属イオン封鎖剤、染料、pH調整のための塩基または酸、または通常化粧品または医薬組成物の調製に使用される任意の他の成分が挙げられる。本発明の組成物は、当該分野で周知の技術に従って調製される。
【００３２】
本発明の一つの実施態様によれば、リポ酸とタウリンとの組み合わせは、他の活性物質と組み合わせて使用され、例えば別の浸透圧保護剤、抗炎症および／または抗酸化剤がある。
【００３３】
本発明において使用され得る他の浸透圧保護剤としては、グリセリン、L-カルニチン、エリトリトール、トレハロース、エクトイン、ベタイン、サルコシン、および尿素が挙げられ、好ましくはグリセロールである。
【００３４】
リポ酸と共に使用することができる抗炎症活性を有する薬剤としては、デキサメタゾン、フルルビプロフェン、フルオロメトロン、サリチル酸、ヒドロコルチゾン、トリアムシノロンが挙げられ、好ましくはフルルビプロフェンリメキソロンおよびデキサメタゾンである。
【００３５】
他の成分としては、レチノイン酸の誘導体または類似体が挙げられ、特にレチノールおよびその誘導体、とりわけそのエステル、さらに脂肪酸エステル、例えばパルミチン酸レチノールが挙げられる。
【００３６】
リポ酸と、抗炎症活性を有する他の薬剤、特にヒドロコルチゾンおよびデキサメタゾンは、同じ組成物中においてまたは別々の組成物中において共に使用される。
【００３７】
リポ酸と共に使用することができる酸化防止剤としては、ビタミンE、グルタチオン、ビタミンA、ビタミンCが挙げられる。
【００３８】
リポ酸とタウリンと、または他の抗酸化剤の組み合わせは、同じ組成物中においてまたは別々の組成物中において共に使用することができる。有利には、同じ組成物中でまたは別々の組成物に適用されるリポ酸：抗酸化剤比は0.001から0.01の範囲である。
【００３９】
本発明の一つの実施態様によれば、リポ酸とタウリンとの組み合わせは、他の浸透圧保護剤と他の薬剤および／または少なくとも１つの抗炎症剤および／または少なくとも一つの酸化防止剤と、同じ組成物中に、好ましくは上記の割合で用いられる。
【００４０】
本発明の別の実施態様によれば、組成物はまた、粘膜模倣ポリマー、特にヒアルロン酸およびその塩を含む。
【００４１】
本発明によるリポ酸およびタウリンの組み合わせを含む組成物は、さらに保湿剤、瘢痕形成、抗炎症、抗老化、鎮静、抗刺激剤、再編、皮膚軟化剤を、それら単独でまたは混合物として、任意の割合で含んでいてもよい。
【００４２】
本発明の一つの実施態様によれば、当該組成物はさらにヒアルロン酸またはその塩を含んでなり、好ましくは、組成物の全重量に対して0.05から2重量％の範囲の量で含む。
医薬また化粧品組成物で使用されるヒアルロン酸およびその塩の種々の形態は、当該技術分野において周知であり、本発明による組成物に使用することができる。特にこれらの中でも1から2.5m3/ kgの固有粘度を有するヒアルロン酸ナトリウムである。
【００４３】
本発明の好ましい実施態様によれば、本発明のリポ酸とタウリンとの組み合わせを含む組成物は、保存剤を含まない組成物である。
【００４４】
局所用組成物（化粧品、医薬品、眼科、等）に、それらの汚染を避けるために一般的に使用される防腐剤は当該技術分野の当業者に周知であり、例えば、第四級アンモニウム化合物、特に塩化ベンザルコニウム、アルキルジメチルベンジルアンモニウム、セトリミド、セチルピリジニウムクロライド、ベンゾドデシニウムブロマイド、ベンゾチオニウムクロライド、セタルコニウムクロライド、硝酸／酢酸／ホウ酸フェニル水銀のような水銀保存剤、チメロサール、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエタノール、フェニルエチルアルコールのようなアルコール防腐剤、ソルビン酸のようなカルボン酸、フェノール類、特にメチル／プロピルパラベン、アミジン、例えばグルコン酸クロルヘキシジン、EDTA、少なくとも一つの防腐剤と併用して防腐剤の効力を増強するキレート剤の単独またはこれらの混合物が挙げられる。
【００４５】
本発明において「保存剤を含まない」とは、「防腐剤を含まない」と表示できる、保存剤を実質的に含まない組成物を意味する。その含有量は10ppmまたはそれ以下、1ppmまたはそれ以下、好ましくは0 ppmであり、全く保存剤を含まない組成物も包含する。
【００４６】
防腐剤なしの場合、本組成物は、その製造およびパッケージングにおいて、病原体による汚染を防ぐために特別な扱いがなされなければならない。これらの扱いおよび手順は、当該分野において周知である。この意味で、本発明による保存剤なしの組成物は、本発明による組成物、特に眼科用組成物を得るための無菌状態を得るためのこれらの特別な注意、または工程を経ることなく得られた通常の組成物とは異なるものである。
【００４７】
本発明の一つの実施態様によれば、リポ酸とタウリンとの組み合わせは、皮膚への局所適用に適した組成物の形態で使用され、特に、クリーム、軟膏、ゲル、軟膏剤、液剤およびローションから選択される。
【００４８】
リポ酸とタウリンとの組み合わせは、アトピー性皮膚炎、魚鱗癬、湿疹、乾癬を含む皮膚の乾燥を示す皮膚状態の予防および治療のための、浸透圧保護剤として有利に用いられる。
【００４９】
当業者に、種々の局所医薬組成物または化粧用組成物を調製する方法は知られており、それらは油中水型または水中油型のエマルジョン、水溶液、懸濁液またはゲルである。これらに用いられる成分およびその割合は、当業者には周知であり、例えば、フランス薬局方に記載されている。
【００５０】
有利には、本発明による局所用組成物は、防腐剤を含まない。
【００５１】
皮膚への適用のための局所用組成物において、リポ酸の含有量は、組成物の総重量に対して、有利には0.0001から0.1％であり、好ましくは0.001から0.05％であり、特に約0.01％である。
【００５２】
タウリン含有量は、組成物の全重量に対して、有利には0.001から1. 0％であり、好ましくは0.01から.0.1％であり、特に好ましくは約0.05％である。
【００５３】
化粧品組成物中のリポ酸：タウリンの重量比は、好ましくは0.002から0.2であり、有利には0.004から0.05であり、特に0.01から0.05であり、特に好ましくは約0.02である。
【００５４】
有利には、乾燥物含有量は0.001から0.05％である。当該乾燥物は、水を除いた、製剤の組成に含まれるすべての成分からなる。
【００５５】
別の実施態様によれば、リポ酸とタウリンとの組み合わせは、眼科用組成物（溶液、ゲル、エマルジョン、懸濁液）の形態で使用され、また、本発明は、リポ酸とタウリンの組み合わせであって、マイボーム腺の機能不全、高蒸発性症候群、または涙欠乏症の徴候であるかもしれないドライアイに関連した眼科疾患、さらに眼浮腫、とりわけ角膜浮腫の予防または治療に用いられる。
【００５６】
リポ酸とタウリンの組み合わせは、有利には、ヒトまたは動物、特にヒトの眼への適用のために適切な眼科用組成物の形態で使用される。それゆえ、眼科用組成物は、その成分の選択において特に、眼科用組成物の特定の技術的特性を満たさなければならない。「眼科的に許容される」成分は、個別にまたは組成物に関連し、組成物およびその活性成分により意図された効果以外の副作用を生じさせてはならない。眼は環境ストレスに敏感な器官であるから、意図した用途、とりわけ眼科疾患の治療に意図された眼科用組成物にとり悪影響となる寄生刺激またはアレルギー型反応を起こしてはならない。当該組成物の成分の選択は、それゆえ特に重要であり、その結果、眼科用組成物は、眼科用には用いられない単純な組成物と区別される。当業者は、眼科用組成物と、他の用途のための単純な組成物とを区別する前記成分を選択できる。
【００５７】
眼科用組成物は5乃至7.5の間のpHを有するものとされてよい。それゆえ、眼科用として当業者に知られた緩衝剤を一般的には含む。その例としては、クエン酸三ナトリウム二水和物およびクエン酸一水和物の単独または混合物が挙げられる。
【００５８】
本眼科用組成物は、眼における合併症に繋がる、あるいは引き起こす可能性ある病原体を生じさせないため、無菌でなければならない。本発明において「無菌」とは、欧州薬局方第8版（2014年）の意義の範囲内で細菌の不在を意味する。好ましくは、本発明のリポ酸を含む眼科用組成物は、保存剤なしの組成物である。
【００５９】
本眼科用組成物は、一般的には液剤、水溶液またはエマルジョンの形態であり、またゲルまたは軟膏の形態であることもできる。本発明の眼科用組成物は、好ましくは眼に一つ以上の液滴を点眼することにより適用される液剤または液体エマルジョンとされる。液剤の粘度は、眼において特に角膜において、活性を発揮するのに十分な時間、それを保持することを可能にするよう選択される。
【００６０】
本発明による眼科用組成物は、好ましくは、5から100センチポアズの範囲の粘度を有する。当該粘度は、25℃、100秒-1で回転粘度計を用いて、欧州薬局方2.2.10の推奨法に従って測定される。溶液の粘度を測定するのに適した他の測定装置および方法は、当技術分野において公知であり、同様の結果を得ることができる。
【００６１】
本発明の眼科用組成物の粘度は、その形態（溶液またはエマルジョン）に依存し、また増粘剤を添加することによって「眼科的に許容される」粘度とすることが出来る。当業者には、眼科用組成物の調製において用いられる増粘剤は周知であり、また望まれる粘度を得るための量もよく知られた事項である。その例としては、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボマー、寒天ゲル、ポリビニルピロリドンおよびポリビニルアルコールが挙げられる。
【００６２】
好ましくは、本発明の眼科用組成物は、カルボキシメチルセルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースを含み、好ましくは、0.05から0.5重量％の範囲のヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはカルボキシメチルセルロースを含み、有利には0.1から0.4重量％であり、より有利には0.2から0.3重量％であり、特に約0.25重量％である。
【００６３】
特に断らない限り、百分率は、組成物の総重量に対するものである。
【００６４】
本発明によるリポ酸を含む眼科用組成物は、有利には、組成物の総重量に対し0.0001から0.1重量％のリポ酸を含み、好ましくは少なくとも0.001重量％であり、より好ましくは約0.001重量％含む。
【００６５】
タウリンの含有量は、組成物の全重量に対して、有利には0.01から1. 0重量％であり、好ましくは0.01から0.05重量％である。
【００６６】
眼科用組成物中のリポ酸：タウリンの重量比は、好ましくは0.002から0.2であり、有利には0.004から0.05である。
【００６７】
本発明の好ましい眼科用組成物として、以下の組成物を挙げることができる。
【００６８】
本発明の好ましい実施態様によれば、本発明のリポ酸を含む眼科用組成物は、水中油型エマルジョンである。
【００６９】
本発明は、また、浸透圧の不均衡に関連した皮膚および粘膜の疾患の予防および治療方法に関し、適切な量のリポ酸とタウリンの組み合わせが、浸透圧保護剤として、必要とする患者の皮膚または眼を含む粘膜に適用される。
【００７０】
上記および実施例に定義されるようなリポ酸とタウリンとの組み合わせは、有利には、組成物として、皮膚、粘膜または眼に適用される。
【００７１】
適用されるリポ酸とタウリンの組み合わせの適切な量は、処置される状態、その重症度に依存する。患者の年齢や肥満度にも影響され、適用量は医師の選択となる。
【００７２】
適切な用量の適用は、一度の適用、または複数回の毎日の適用として、所望の効果を得るために必要な時間、つまり皮膚または粘膜、特に浸透圧不均衡に関連した眼の治療または予防のためになされる。
【００７３】
点眼用眼科用組成物の場合には、適切な量は滴下の数により与えられる。
【実施例】
【００７４】
以下の実施例に与えられた組成物は、当該技術分野における標準的な方法に従って調製される。汚染を避けるため、防腐剤なしで組成物の製造およびパッケージングにおいて特別な衛生上措置が取られる。
【００７５】
実施例1：皮膚用組成物
【表１】
0006785796.tif 000002
【００７６】
実施例２：皮膚用組成物
【表２】
0006785796.tif 000003
【００７７】
実施例３：皮膚用組成物
【表３】
0006785796.tif 000004
【００７８】
実施例４：皮膚用組成物
【表４】
0006785796.tif 000005
【００７９】
実施例５：眼科用組成物 
【表５】
0006785796.tif 000006
【００８０】
実施例６：眼科用組成物
【表６】
0006785796.tif 000007
【００８１】
実施例４  リポ酸およびタウリンの単独または混合物の浸透圧保護活性
試験は、ヒト結膜（WKD）および角膜（HCE）細胞に高浸透圧性ストレスをかけ、リポ酸ナトリウム（A）の浸透圧保護活性を定めることで行った。
【００８２】
第二の段階として、リポ酸、グリセリン（B）、およびタウリン（C）の効果を比較するために、個々に、そして組み合わせた場合について、高浸透圧性ストレス下のHCE細胞において試験した。
【００８３】
A、そしてAと、BおよびCの浸透圧保護活性を、細胞生存率を測定することにより評価した。この目的のために、細胞を17時間、試験物質とともにプレインキュベートした。次いで、培地を除去し、培地（WKD細胞についてM199、およびHCE細胞についてKSFM）に塩化ナトリウム（100mM  NaCl）を添加することにより、細胞に高浸透圧ストレスを与えた。対照の細胞増殖細胞は、等張培地と接触させた。細胞生存率は、17時間のインキュベーションのために細胞と接触したままでの浸透圧ストレス前（0時間）、そして4時間、8時間および24時間の浸透圧ストレス誘導後に測定した。細胞生存率の測定は、XTTアッセイにより行った。
【００８４】
Aの異なる濃度における「単独分子」試験：0.0005％、0.001％、0.005％、0.01％、および0.05％w / vにおいて試験した。混合物についての試験のために、以下の濃度を試験した：Aについて0.001％、0.005％および0.01％w / v、Bについて0.25％w / v、およびCについて0.5％および1％w / v。
【００８５】
データの妥当性と優位性を確保するために、結果を統計学的に分析した。以下に示す結果は、異なる日に行った3回の独立した反復試験の平均値である。
【００８６】
【表７】
0006785796.tif 000008
【００８７】
HCE細胞を用いたリポ酸（リポ酸ナトリウム）の種々の濃度における細胞生存率の測定は、図１に示されるとおりであった。
【００８８】
リポ酸は、ストレス後4時間および8時間、0.005％および0.001％（w / v）において浸透圧ストレスに対して高い浸透圧保護活性を示した。
【００８９】
図２乃至図４は、Aと、B、CおよびB + Cとの種々の混合物を用いて得られた生存率の結果を表す。
【００９０】
グリセリン（B）と、およびタウリン（C）と、またはその両方と組み合わせた場合、リポ酸の改善された浸透圧保護の効果が観察された。この改善は、リポ酸単独、またはタウリン単独の場合に観察されるものよりも高い細胞生存率によって表現される。特にリポ酸とタウリンの組み合わせ（図3）が、ストレス後24時間まで、浸透圧保護作用を増加させることは顕著である。
【００９１】
実施例５  リポ酸とタウリンの混合物の浸透圧保護活性
実施例4の手順を、リポ酸ナトリウム（A）とタウリン（B）の１１の組み合わせ（1Mから11M）について繰り返した。得られた細胞生存率の結果は、実施例4の混合物について観察された浸透圧保護の増加を確認するものである。
【００９２】
【表８】
0006785796.tif 000009
【００９３】
改善された浸透圧保護効果が、好ましいリポ酸：タウリン重量比について示され、その範囲は約0.004から約0.05（M3から M9の混合物）である。
【００９４】
参考文献
−  US 5,817,630
−  US 6,162,393
−  US 2004/265345
−  US 2005/192229
−  US 2006/188492
−  WO 01/93824
−  WO 02098345
−  DE10229995
−  BR PI0 800 818
−  CN 103 860 625
−  JP 2013 241398
−  Masami Kojima et al., Japanese Journal of Ophthalmology, January 2007, Volume 51, Issue
【図１】
0006785796.tif 000010
【図２】
0006785796.tif 000011
【図３】
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【図４】
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