(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）に示されるグローコカリキシンＡ誘導体又はその塩。
【化１】
0006694894.tif 000011
（式中、Ｒは、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基又はこれらの塩のうちのいずれか１種である。）
【請求項２】
グローコカリキシンＡとＲ基のドナー化合物を触媒の作用下で付加反応させて得るステップを含む請求項１に記載のグローコカリキシンＡ誘導体の調製方法。
【請求項３】
前記触媒は、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、ピリジン、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムのうちのいずれか１種又は複数種であることを特徴とする請求項２に記載の調製方法。
【請求項４】
Ｒ基とグローコカリキシンＡのモル数比は（１〜１０）：１であることを特徴とする請求項２に記載の調製方法。
【請求項５】
前記触媒とグローコカリキシンＡのモル数比は（１〜１０）：１であることを特徴とする請求項２に記載の調製方法。
【請求項６】
前記反応は−３０〜６０℃で行われることを特徴とする請求項２に記載の調製方法。
【請求項７】
前記反応は溶剤で行われ、
前記溶剤は、アルコール、ケトン、エーテル、エステル及びハロアルカンのうちのいずれか１種又は複数種を含むことを特徴とする請求項２に記載の調製方法。
【請求項８】
前記アルコールは、メタノール、エタノール、イソプロパノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノールのうちのいずれか１種又は複数種を含み、前記ケトンは、アセトン、２−ブタノンのうちの１種又は複数種を含み、前記エーテルは、エーテル、ジオキサン、イソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、テトラヒドロフランのうちのいずれか１種又は複数種を含み、前記エステルは、酢酸メチル、酢酸エチル及び酢酸ブチルのうちのいずれか１種又は複数種を含み、前記ハロアルカンは、ジクロロメタン、クロロホルムを含むことを特徴とする請求項７に記載の調製方法。
【請求項９】
前記調製方法は、反応後に溶剤を蒸発除去し及び／又はＴＬＣ及び／又はＨＰＬＣで検出するステップをさらに含むことを特徴とする請求項７に記載の調製方法。
【請求項１０】
前記グローコカリキシンＡ誘導体を有機溶剤に溶解して溶液を形成し、得た溶液と酸を塩形成反応させ、溶液のｐＨ値を制御して、グローコカリキシンＡ誘導体塩を得るステップを含む請求項１に記載のグローコカリキシンＡ誘導体の塩の調製方法。
【請求項１１】
前記酸は有機酸及び無機酸からなる群より選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項１０に記載の調製方法。
【請求項１２】
前記無機酸は、次亜ヨウ素酸、次亜塩素酸、次亜臭素酸、ヨウ素酸、過塩素酸、ペルオキソ二硫酸、ペルオキソ二炭酸、過炭酸、ピロリン酸、ピロ硫酸、ピロ亜硫酸、テトラチオン酸、リン酸、チオ硫酸、硫酸、塩素酸、メタリン酸、ヨウ化水素酸、アジ化水素酸、フッ化水素酸、硫化水素、塩化水素酸、臭化水素酸、四ホウ酸、炭酸、硝酸、臭素酸、亜硫酸、亜リン酸、亜塩素酸、塩酸、亜硝酸、オルトリン酸、オルト硫酸及びオルト炭酸のうちのいずれか１種を含み、
前記有機酸は、酒石酸、蓚酸、リンゴ酸、クエン酸、アスコルビン酸、サリチル酸、カフェイン酸、乳酸、ソルビン酸、アロマレイン酸、蟻酸、酢酸、安息香酸、エタン二酸、コハク酸、アセトン酸、α−ケトコハク酸、ベンゼンスルホン酸、エタンスルホン酸、樹脂酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、テトラスルホン酸、メタンスルホン酸、フマル酸及びアミノ酸のうちのいずれか１種を含むことを特徴とする請求項１１に記載の調製方法。
【請求項１３】
前記有機溶剤は、アルコール、ケトン、エーテル、エステル及びハロアルカンのうちのいずれか１種又は複数種を含むことを特徴とする請求項１０に記載の調製方法。
【請求項１４】
前記アルコールは、メタノール、エタノール、イソプロパノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノールのうちのいずれか１種又は複数種を含み、前記ケトンは、アセトン、２−ブタノンのうちの１種又は複数種を含み、前記エーテルは、エーテル、ジオキサン、イソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、テトラヒドロフランのうちのいずれか１種又は複数種を含み、前記エステルは、酢酸メチル、酢酸エチル及び酢酸ブチルのうちのいずれか１種又は複数種を含み、前記ハロアルカンは、ジクロロメタン、クロロホルムを含むことを特徴とする請求項１３に記載の調製方法。
【請求項１５】
塩化水素溶液で溶液のｐＨ値を制御することを特徴とする請求項１０に記載の調製方法。
【請求項１６】
前記塩化水素溶液は、塩化水素の水溶液、塩化水素のメタノール溶液、塩化水素のエタノール溶液、塩化水素のイソプロパノール溶液、塩化水素のノルマルプロパノール溶液、塩化水素のイソブタノール溶液、塩化水素の酢酸エチル溶液、塩化水素のアセトン溶液、塩化水素のエーテル溶液、塩化水素のジオキサン溶液のうちのいずれか１種を含むことを特徴とする請求項１５に記載の調製方法。
【請求項１７】
溶液のｐＨ値は６．０〜８．０に制御されることを特徴とする請求項１５に記載の調製方法。
【請求項１８】
前記反応は−３０〜６０℃の温度で行われることを特徴とする請求項１０に記載の調製方法。
【請求項１９】
請求項１に記載のグローコカリキシンＡ誘導体又はその塩の、自己免疫疾患及び／又は癌を治療するための薬物の製造における使用。
【請求項２０】
前記自己免疫疾患は全身性エリテマトーデス又は乾癬であり、
前記癌は、トリプルネガティブ乳癌、神経膠腫、子宮頸癌、食道癌、肺癌、肝癌、絨毛癌、口腔扁平上皮癌、前立腺癌、直腸癌のいずれか１種又は複数種を含むことを特徴とする請求項１９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は化学薬品分野に属し、具体的には、グローコカリキシンＡ誘導体及びその調製方法と応用に関する。
【背景技術】
【０００２】
グローコカリキシンＡ（ＧｌａｕｃｏｃａｌｙｘｉｎＡ、以下、ＧＬＡと略称する）は、シソ科植物のヒキオコシＲａｂｄｏｓｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ（Ｂｕｒｍ．ｆ．）Ｈａｒａ  ｖａｒ．ｇｌａｕｃｏｃａｌｙｘ（Ｍａｘｉｍ．）Ｈａｒａの地上全草から抽出したものである。グローコカリキシンＡは、化学名がカウラ−１６−エン−３，１５−ジオン，（７α，１４Ｒ）−、分子式がＣ２０Ｈ２８Ｏ４、分子量が３３２．４３、構造式が以下のとおりである。
【０００３】
【化１】
0006694894.tif 000002
【０００４】
ヒキオコシの乾燥葉には、グローコカリキシンＡが１．０３％含まれている［張元桶、沙東旭、沙明等．中国漢方薬雑誌、１９９１，１６（１１）：６７９］。その構造はオリドニンと類似し、エント−カウラン系ジテルペンであり、且つ構造には、オリドニンと類似する抗腫瘍ファーマコフォアであるα，β−不飽和シクロペンタノンの構造ユニットも含まれている。インビボおよびインビトロでの抗腫瘍実験から明らかなように、それは、複数種のヒト癌細胞株（ＣＥ−１、Ｕ８７、Ａ５４９、ＭＣＦ−７、Ｈｅｌａ、Ｋ５６２、ＨｅｐＧ２、ＮＣＩ−Ｈ４６０、ＫＢ、ＪＥＧ−３、Ｋ５６２、ＨＬ−６０等に対して顕著な増殖抑制作用を有し、特に非ホルモン依存性前立腺癌（ＤＵ−１４５）、直腸癌（Ｌｏｖｏ）細胞に対して最も感受性があり、抗腫瘍スペクトルが広く、Ｌｅｗｉｓ肺癌、Ｓ１８０固形腫瘍及びＨＣＡ固形腫瘍等の固形腫瘍の成長を抑制して、Ｓ１８０腹水腫瘍担癌マウスとＨＣＡ腹水腫瘍担癌マウスの生存時間を延長させ、その抗腫瘍強度が用量依存性を呈する。２０１１年の最新の文献［ＬｉＷｅｎＧａｏ、ＪｉａｎＺｈａｎｇ、ＷｅｎＨｕａＹａｎｇ、ＢｉｎＷａｎｇ、ＪｉａｎＷｅｎＷａｎｇ．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ２０１１，２５：５１−６３］において、グローコカリキシンＡはミトコンドリアにより死経路を調節することによってアポトーシスを誘導して、ヒト前骨髄球性白血病細胞の増殖を抑制し、将来性が期待できる抗腫瘍活性を有するリード化合物であることが報道されている。
【０００５】
また、抗自己免疫疾患薬として、グローコカリキシンＡは全身性エリテマトーデスや乾癬等の疾患の治療に対しても画期的な発展が得られ、治療効果が高い。文献である薬コウチャサイの研究発展［宿玉、崔佳、施務務等．亜太伝統医薬，２０１１，０６］において、コウチャサイから得たグローコカリキシンＡは、抗癌、抗菌、肝臓や心臓血管保護作用以外、自己免疫抑制に対しても活性を有することが記載されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、グローコカリキシンＡは極性が小さく、水溶性が悪く、薬物として直接投与するのに不適であり、インビトロでは強い抗自己免疫作用と抗腫瘍作用を有するが、インビボでは薬効を発生させるために多くの用量と長い時間が必要である。薬物はインビボにおいて消えるのが早く、半減期が短く、生物学的利用能が低く、まだ薬物として直接使用できない。したがって、ファーマコフォアであるα，β−不飽和シクロペンタノンを保留する上で、その環外二重結合に対して構造修飾を行い、抗自己免疫と抗腫瘍の薬効がさらに高い誘導体を合成することは、薬物として使用される時の欠陥を解決するために有効な手段である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記技術的問題を解決するために、本発明はグローコカリキシンＡ誘導体、及びそれらの調製方法と用途を提供する。
【０００８】
具体的に、第一態様によれば、本発明は式（Ｉ）に示されるグローコカリキシンＡ誘導体又はその塩を提供する。
【０００９】
【化２】
0006694894.tif 000003
【００１０】
（式中、Ｒは、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ピペリジン−１−イル、ピペラジン−１−イル、ヘキサメチレンイミニル、モルホリン−１−イル、Ｎ−フェニル−Ｎ−（３−オキソシクロヘキサニル）アミノ、Ｎ−ｐ−クロロフェニル−Ｎ−（３−オキソ−ブタニル）アミノ、Ｎ−２−クロロフェニル−Ｎ−（３−オキソ−ブタニル）アミノ、ベンジルアミノ、プリニル−９−イル、２−アミノ−６−オキソプリン−９−イル、４−メチルピペラジン−１−イル、Ｎ−フェニル−Ｎ−メチル−アミノ、ジベンジル−アミノ、イミダゾール−１−イル、２−メチルイミダゾール−１−イル、Ｎ−フェニル−Ｎ−（３−オキソ−ブタニル）アミノ、ピロール−１−イル、２−カルボキシピロール−１−イル、２−メチルピロリジン−１−イル、３−メチルピロール−１−イル、２−ピロリドン−１−イル、３−アミノフェニルカルボニルアミノ、ｐ−アミノフェニルカルボニルアミノ、アミノ酸置換又はこれらの塩のうちのいずれか１種である。）
【００１１】
本発明で提供されるグローコカリキシンＡ誘導体は、抗自己免疫作用と抗腫瘍作用の目標性に優れ、活性化合物として、自己免疫疾患や癌を治療する新しい化学療法剤を更に開発することができる。特に、本発明のグローコカリキシンＡ誘導体は、全身性エリテマトーデス、乾癬やトリプルネガティブ乳癌を治療する薬物の空白を埋めることが期待できる。
【００１２】
好ましい一実施形態では、Ｒ基はジメチルアミノ基であり、前記グローコカリキシンＡ誘導体はジメチルアミノグローコカリキシンＡ塩酸塩であり、構造式が下記式ＩＩのとおりである。
【００１３】
【化３】
0006694894.tif 000004
【００１４】
式ＩＩに示されるジメチルアミノグローコカリキシンＡ塩酸塩の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルと１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルはそれぞれ図１と図２に示され、そのＬＣ−ＭＳスペクトルは図３に示される。図１〜図３から明らかなように、ジメチルアミノグローコカリキシンＡ塩酸塩の分子式は、Ｃ２２Ｈ３６ＣｌＮＯ４・ＨＣｌである。
【００１５】
発明者は、実験によって、式ＩＩに示されるジメチルアミノグローコカリキシンＡ塩酸塩は優れた水溶性を有し、且つ薬物として使用される時に、経口投与による生物学的利用能が高く、さらに、抗自己免疫作用と抗腫瘍作用の目標性に優れ、全身性エリテマトーデス、乾癬やトリプルネガティブ乳癌等の疾患を治療する薬物の空白を埋めることが期待できる。
【００１６】
第二態様によれば、本発明は第一態様に記載のグローコカリキシンＡ誘導体の調製方法を提供し、それはグローコカリキシンＡとＲ基のドナー化合物を触媒の作用下で付加反応させて得るステップを含む。
【００１７】
上記調製方法において、好ましくは、前記触媒はナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、ピリジン、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムのうちのいずれか１種又は複数種である。
【００１８】
好ましくは、Ｒ基とグローコカリキシンＡのモル数比は（１〜１０）：１であり、
好ましくは、前記触媒とグローコカリキシンＡのモル数比は（１〜１０）：１である。
【００１９】
好ましくは、前記反応は−３０〜６０℃で行われ、
好ましくは、前記反応は溶剤で行われ、
より好ましくは、前記溶剤は、アルコール、ケトン、エーテル、エステル及びハロアルカンのうちのいずれか１種又は複数種を含み、さらに好ましくは、前記アルコールは、メタノール、エタノール、イソプロパノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノールのうちのいずれか１種又は複数種を含み、前記ケトンは、アセトン、２−ブタノンのうちの１種又は複数種を含み、前記エーテルは、エーテル、ジオキサン、イソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、テトラヒドロフランのうちのいずれか１種又は複数種を含み、前記エステルは、酢酸メチル、酢酸エチル及び酢酸ブチルのうちのいずれか１種又は複数種を含み、前記ハロゲン化炭化水素は、ジクロロメタン、クロロホルムを含み、
より好ましくは、前記調製方法は、反応後に溶剤を蒸発除去し及び／又はＴＬＣ及び／又はＨＰＬＣで検出するステップをさらに含む。
【００２０】
第三態様によれば、本発明は第一態様に記載のグローコカリキシンＡ誘導体の塩の調製方法を提供し、それは、
前記グローコカリキシンＡ誘導体を有機溶剤に溶解して溶液を形成し、得た溶液と酸を塩形成反応させ、溶液のｐＨ値を制御して、グローコカリキシンＡ誘導体塩を得るステップを含む。
【００２１】
前記調製方法において、好ましくは、前記酸は有機酸と無機酸を含み、
より好ましくは、前記無機酸は、次亜ヨウ素酸、次亜塩素酸、次亜臭素酸、ヨウ素酸、過塩素酸、ペルオキソ二硫酸、ペルオキソ二炭酸、過炭酸、ピロリン酸、ピロ硫酸、ピロ亜硫酸、テトラチオン酸、リン酸、チオ硫酸、硫酸、塩素酸、メタリン酸、ヨウ化水素酸、アジ化水素酸、フッ化水素酸、硫化水素、塩化水素酸、臭化水素酸、四ホウ酸、炭酸、硝酸、臭素酸、亜硫酸、亜リン酸、亜塩素酸、塩酸、亜硝酸、オルトリン酸、オルト硫酸及びオルト炭酸のうちのいずれか１種を含み、
より好ましくは、前記有機酸は、酒石酸、蓚酸、リンゴ酸、クエン酸、アスコルビン酸、安息香酸、サリチル酸、カフェイン酸、乳酸、ソルビン酸、アロマレイン酸、蟻酸、酢酸、安息香酸、エタン二酸、コハク酸、アセトン酸、α−ケトコハク酸、ベンゼンスルホン酸、エタンスルホン酸、樹脂酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、テトラスルホン酸、メタンスルホン酸、フマル酸及びアミノ酸のうちのいずれか１種を含む。
【００２２】
好ましくは、前記有機溶剤は、アルコール、ケトン、エーテル、エステル及びハロアルカンのうちのいずれか１種又は複数種を含み、
より好ましくは、前記アルコールは、メタノール、エタノール、イソプロパノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノールのうちのいずれか１種又は複数種を含み、前記ケトンは、アセトン、２−ブタノンのうちの１種又は複数種を含み、前記エーテルは、エーテル、ジオキサン、イソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、テトラヒドロフランのうちのいずれか１種又は複数種を含み、前記エステルは、酢酸メチル、酢酸エチル及び酢酸ブチルのうちのいずれか１種又は複数種を含み、前記ハロゲン化炭化水素は、ジクロロメタン、クロロホルムを含む。
【００２３】
好ましくは、塩化水素溶液で溶液のｐＨ値を制御し、
より好ましくは、前記塩化水素溶液は、塩化水素の水溶液、塩化水素のメタノール溶液、塩化水素のエタノール溶液、塩化水素のイソプロパノール溶液、塩化水素のノルマルプロパノール溶液、塩化水素のイソブタノール溶液、塩化水素の酢酸エチル溶液、塩化水素のアセトン溶液、塩化水素のエーテル溶液、塩化水素のジオキサン溶液のうちのいずれか１種を含み、
好ましくは、溶液のｐＨ値は６．０〜８．０に制御され、
好ましくは、前記反応は−３０〜６０℃の温度で行われる。
【００２４】
第四態様によれば、本発明は、第一態様に記載のグローコカリキシンＡ誘導体又はその塩の、自己免疫疾患及び／又は癌を治療するための薬物の調製における用途を提供する。
【００２５】
好ましくは、前記自己免疫疾患は全身性エリテマトーデス又は乾癬であり、
好ましくは、前記癌は、トリプルネガティブ乳癌、神経膠腫、子宮頸癌、食道癌、肺癌、肝癌、絨毛癌、口腔扁平上皮癌、前立腺癌、直腸癌のいずれか１種又は複数種を含む。
【発明の効果】
【００２６】
グローコカリキシンＡに比べて、本発明のグローコカリキシンＡ誘導体は、抗自己免疫作用と抗腫瘍作用の目標性に優れ、活性化合物として、自己免疫疾患や癌を治療する新しい化学療法剤を更に開発することができる。特に、本発明のグローコカリキシンＡ誘導体は、全身性エリテマトーデス、乾癬やトリプルネガティブ乳癌等の疾患を治療する薬物の空白を埋めることが期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
本発明の実施例における解決手段を明瞭に説明するために、以下で、実施例の説明に必要な図面を簡単に説明するが、勿論、以下で説明される図面は本発明の一部の実施例に過ぎず、当業者であれば、創造的な労働を必要とせずにこれらの図面に基づいて他の図面を得ることができる。
【図１】図１は本発明に係るグローコカリキシンＡ誘導体の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルである。
【図２】図２は本発明に係るグローコカリキシンＡ誘導体の１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルである。
【図３】図３は本発明に係るグローコカリキシンＡ誘導体塩のＬＣ−ＭＳスペクトルである。
【図４】図４は本発明に係るグローコカリキシンＡ誘導体による５種類の細胞系に対する増殖抑制ＩＣ５０（すなわち半数阻害濃度）図である。
【図５】図５はＧＬＡによる５種類の細胞系に対する増殖抑制ＩＣ５０図である。
【図６】図６は本発明に係るグローコカリキシンＡ誘導体、ＧＬＡによる各種の細胞に対する増殖抑制作用のＩＣ５０比較図である。
【図７】図７は本発明に係るグローコカリキシンＡ誘導体の濃度と抑制率のＸＹ散布図である。
【図８】図８はＧＬＡ濃度と抑制率のＸＹ散布図である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下、本発明の実施例における図面を利用して、本発明の実施例の解決手段を明瞭且つ完全に説明し、勿論、説明される実施例は本発明の一部の実施例に過ぎず、全ての実施例ではない。本発明の実施例に基づいて、当業者が創造的な労働を必要とせずに得るすべての他の実施例は、本発明の保護範囲に属する。
【００２９】
実施例１
本実施例では、グローコカリキシンＡ誘導体の調製方法が開示されている。すなわち、グローコカリキシンＡを修飾してグローコカリキシンＡ窒素置換誘導体を得て、次にグローコカリキシンＡ窒素置換誘導体と酸を反応させて、水溶性に優れたグローコカリキシンＡ窒素置換誘導体塩を生成する。
【００３０】
グローコカリキシンＡを修飾してグローコカリキシンＡ窒素置換誘導体を得る反応式は以下のとおりである。
【００３１】
【化４】
0006694894.tif 000005
【００３２】
グローコカリキシンＡＧＬＡを原料として、触媒と原料であるグローコカリキシンＡのモル比が１〜１０となる量で触媒を用い、温度を−３０〜６０℃の範囲に制御する。
【００３３】
ＲＨ中のＲは窒素源ドナーであり、ＲＨ中のＲとグローコカリキシンＡ誘導体中のＲとの構造は同様である。Ｒは、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ピペリジン−１−イル、ピペラジン−１−イル、ヘキサメチレンイミニル、モルホリン−１−イル、Ｎ−フェニル−Ｎ−（３−オキソシクロヘキサニル）アミノ、Ｎ−ｐ−クロロフェニル−Ｎ−（３−オキソ−ブタニル）アミノ、Ｎ−２−クロロフェニル−Ｎ−（３−オキソ−ブタニル）アミノ、ベンジルアミノ、プリニル−９−イル、２−アミノ−６−オキソプリン−９−イル、４−メチルピペラジン−１−イル、Ｎ−フェニル−Ｎ−メチル−アミノ、ジベンジル−アミノ、イミダゾール−１−イル、２−メチルイミダゾール−１−イル、Ｎ−フェニル−Ｎ−（３−オキソ−ブタニル）アミノ、ピロール−１−イル、２−カルボキシピロール−１−イル、２−メチルピロリジン−１−イル、３−メチルピロール−１−イル、２−ピロリドン−１−イル、３−アミノフェニルカルボニルアミノ、ｐ−アミノフェニルカルボニルアミノ、各種のアミノ酸置換又はこれらの塩の基から選ばれるいずれか１種である。
【００３４】
得たグローコカリキシンＡ誘導体の構造式は以下のとおりである。
【００３５】
【化５】
0006694894.tif 000006
【００３６】
上記構造式におけるＲの構造は表１の基の構造のうちのいずれか１種であってもよい。
【００３７】
表１、Ｒ基の名称及びその構造
【００３８】
【表１】
0006694894.tif 000007
0006694894.tif 000008
【００３９】
上記グローコカリキシンＡ誘導体を酸と反応させて、水溶性に優れたグローコカリキシンＡ誘導体塩を生成する。グローコカリキシンＡ誘導体と反応可能な酸の種類は表２に示される。
【００４０】
表２  グローコカリキシンＡ誘導体と反応する酸
【００４１】
【表２】
0006694894.tif 000009
【００４２】
実施例２
本実施例には、ジメチルアミノグローコカリキシンＡ塩酸塩の調製方法が開示されており、主に以下のステップを含む。
【００４３】
ステップ１、ジメチルアミノグローコカリキシンＡを調製する。
【００４４】
１、グローコカリキシンＡ  １．００ｇと有機溶剤２０ｍｌを混合して室温で、グローコカリキシンＡが完全に溶解するまで撹拌する。
【００４５】
２、濾過後、撹拌しながら３３％のジメチルアミン溶液０．６８ｍｌを滴下して、混合液を室温で１〜２ｈ撹拌し、ＴＬＣにより検出する。
【００４６】
３、反応終了後、系を４０〜５０℃で減圧蒸留して、ジメチルアミノグローコカリキシンＡの粉末１．０５ｇを得た。ジメチルアミノグローコカリキシンＡの収率は９３．０％、ＨＰＬＣによる純度は９９．２％である。
【００４７】
ステップ２、ジメチルアミノグローコカリキシンＡ塩酸塩を調製する。
【００４８】
１、氷浴条件において、ジメチルアミノグローコカリキシンＡ  １．００ｇを有機溶剤１０ｍｌに加えて、溶解するまで十分に撹拌する。
【００４９】
２、濾過し、温度を０℃に制御し、それに塩化水素溶液を滴下し、ｐＨ値を７に調整し、３０ｍｉｎ撹拌して、白色固体を得る。
【００５０】
３、沈殿を濾過して、略白色のジメチルアミノグローコカリキシンＡ塩酸塩固体１．００ｇを得た。収率は９２．０％、ＨＰＬＣによる純度は９９．５％である。
【００５１】
実際に、上記ステップ１とステップ２において、有機溶剤は、アルコール、ケトン、エーテル、エステル及びハロアルカンのうちの１種又は複数種であってもよい。本実施例では、ステップ１の有機溶剤はメタノール、ステップ２の有機溶剤はイソプロパノールである。
【００５２】
他の実施例では、上記アルコールは、メタノール、エタノール、イソプロパノール、イソブタノール及びｔｅｒｔ−ブタノールのうちのいずれか１種又は複数種の混合物であってもよく、上記ケトンは、アセトン又は２−ブタノンであり、上記エーテルは、エーテル、ジオキサン、イソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル及びテトラヒドロフランのうちのいずれか１種又は複数種の混合物であってもよく、上記エステルは、酢酸メチル、酢酸エチル及び酢酸ブチルのうちのいずれか１種又は複数種の混合物であってもよく、上記ハロゲン化炭化水素はジクロロメタン又はクロロホルムである。
【００５３】
上記ステップ２の塩化水素溶液は、塩化水素水溶液、塩化水素メタノール溶液、塩化水素エタノール溶液、塩化水素イソプロパノール溶液、塩化水素ノルマルプロパノール溶液、塩化水素イソブタノール溶液、塩化水素酢酸エチル溶液、塩化水素アセトン溶液、塩化水素エーテル溶液及び塩化水素ジオキサン溶液のうちのいずれか１種であってもよい。
【００５４】
本実施例において、上記塩化水素溶液は塩化水素イソプロパノール溶液であることが好ましい。
【００５５】
本実施例において、核磁気共鳴法により、水素スペクトルを用いてジメチルアミノグローコカリキシンＡ塩酸塩に対してキャラクタリゼーションを行い、その結果を図１〜２に示す。
【００５６】
図１から明らかなように、ジメチルアミノグローコカリキシンＡ塩酸塩の分子式はＣ２２Ｈ３６ＣｌＮＯ４・ＨＣｌである。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ：０．９８（６Ｈ，ｄ，２×ＣＨ３），１．０５（３Ｈ，ｍ，ＣＨ３），１．７４（６Ｈ，ｍ，２×ＣＨ３），３．９１（１Ｈ，ｓ，Ｃ−Ｈ），６．２０（１Ｈ，ｓ，Ｃ−Ｈ），４．８３（１Ｈ，ｓ，Ｃ−Ｈ），５．８６（１Ｈ，ｓ，Ｃ−Ｈ），６．２０（１Ｈ，ｓ，Ｃ−Ｈ），１０．５８（１Ｈ，ｓ，Ｏ−Ｈ）。
【００５７】
図２から明らかなように、ジメチルアミノグローコカリキシンＡ塩酸塩の分子式はＣ２２Ｈ３６ＣｌＮＯ４・ＨＣｌである。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ：
【００５８】
【化６】
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【００５９】
本実施例において、得られたジメチルアミノグローコカリキシンＡ塩酸塩に対してＬＣ−ＭＳ検出を行い、検出結果を図３に示す。
【００６０】
図３のスペクトルから明らかなように、ジメチルアミノグローコカリキシンＡ塩酸塩の分子式はＣ２２Ｈ３６ＣｌＮＯ４・ＨＣｌである。ＭＳｍ／ｅ：３７８．６（Ｍ＋）。
【００６１】
実施例３
ステップ２においてジメチルアミノグローコカリキシンＡ塩酸塩を調製する時に制御した反応温度及びｐＨ値と異なり、本実施例において、反応温度が−３０℃に制御され、ｐＨ値が６に調整される以外、実施例３の各ステップは実施例２と同様である。
【００６２】
実施例４
ステップ２においてジメチルアミノグローコカリキシンＡ塩酸塩を調製する時に制御した反応温度及びｐＨ値と異なり、本実施例において、反応温度が６０℃に制御され、ｐＨ値が８に調整される以外、実施例４の各ステップは実施例２と同様である。
【００６３】
実施例５
実施例５と実施例２のステップの区別は、ステップ２においてジメチルアミノグローコカリキシンＡ塩酸塩を調製する時に、反応温度が−１０℃に制御され、ｐＨ値が７に調整されることである。
【００６４】
実施例６
実施例６と実施例２の区別は、ステップ２においてジメチルアミノグローコカリキシンＡ塩酸塩を調製する時に、反応温度が２０℃に制御され、ｐＨ値が７に調整されることである。
【００６５】
上記実施例２−実施例６において、使用される反応溶剤は実施例で挙げられた有機溶剤であり、塩化水素溶液として、塩化水素イソプロパノール溶液と塩化水素エタノール溶液が好ましく、さらに、ステップ２において反応温度は−１０〜２０℃であることが好ましく、ｐＨ値は７に調整されることが好ましい。
【００６６】
以下の実施例では、本発明で得たグローコカリキシンＡ誘導体に対して薬効実験を行い、実験から明らかなように、前記グローコカリキシンＡ誘導体は抗自己免疫疾患や抗腫瘍薬物、たとえば、トリプルネガティブ乳癌、神経膠腫、子宮頸癌、食道癌、肺癌、肝癌、絨毛癌、口腔扁平上皮癌、前立腺癌、直腸癌の治療薬の調製に用いられ得る。特にトリプルネガティブ乳癌と神経膠腫に対しては、抗癌の目標性に優れており、トリプルネガティブ乳癌の治療薬に用いることで、トリプルネガティブ乳癌用の薬物の空白を埋める。自己免疫疾患は全身性エリテマトーデス、乾癬である。
【００６７】
実施例７
細胞増殖実験（ＭＴＴ）
ジメチルアミノグローコカリキシンＡ塩酸塩（以下、ＧＨ０２と呼ばれる）とグローコカリキシンＡ（すなわちＧＬＡ）による腫瘍細胞系に対する細胞増殖抑制実験：腫瘍細胞系の細胞密度を１０４／１００μｌに調整して、各ウェルに１００μｌを加えて９６ウェルプレートに接種し、一晩培養する。細胞が完全に付着して、７０〜８０％まで成長すると、完全培地を用いてＧＨ０２とＧＬＡ母液（濃度はいずれも１００ｍＭである）を希釈し、その最終濃度を１、３．１２５、６．２５、１２．５、２５、５０、１００μｍｏｌ／Ｌにして、９６ウェルプレートに接種し、各濃度ごとに４つのウェルを繰り返し、同時に空白対照群（すなわち無細胞群）を設置して、５％ＣＯ２を含有する３７℃のインキュベータにおいて４８ｈ培養した後、各ウェルにＭＴＴを最終濃度が０．５ｍｇ／ｍｌになるまで加え、次に５％ＣＯ２を含有する３７℃のインキュベータにおいて４ｈ培養して、上澄みを捨て、各ウェルに１５０μｌのＤＭＳＯを加えて、１０ｍｉｎ振盪培養し、マイクロプレートリーダーを用いて４９０ｎｍでの吸光度値を検出する。
【００６８】
細胞増殖抑制率＝［（対照群の吸光度値−空白群の吸光度値）−（薬物投与群の吸光度値−空白群の吸光度値）］／（対照群の吸光度値−空白群の吸光度値）％。
【００６９】
図４〜６に示すように、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＣＦ−７は乳癌細胞系、ＳＧＣ−７９０１は胃癌細胞系、Ｕ２５１は神経膠腫細胞系、Ａ５４９は肺癌細胞系である。
【００７０】
図４はＧＨ０２による上記５種類の細胞系に対するＩＣ５０であり、図から分かるように、ＧＨ０２によるＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞系に対するＩＣ５０は最も低く、つまり、ＧＨ０２は乳癌に対する薬効が最も高い。
【００７１】
図５はＧＬＡによる上記５種類の細胞系に対するＩＣ５０であり、図から分かるように、ＧＬＡによるＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞系に対するＩＣ５０は最も低く、且つ、図６と比較した結果、ＧＨ０２とＧＬＡは乳癌に対する薬効が最も高い。
【００７２】
図７に示すように、ＧＨ０２濃度の増大に伴い、ＧＨ０２による上記５種類の細胞系に対する抑制作用がすべて向上し、すなわち腫瘍細胞増殖を抑制できる。
【００７３】
図８に示すように、ＧＬＡ濃度の増大に伴い、ＧＨ０２による上記５種類の細胞系に対する抑制作用がすべて向上し、すなわち腫瘍細胞増殖を抑制できる。
【００７４】
図７と図８から明らかなように、ＧＨ０２とＧＬＡによるＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞系に対するＩＣ５０は最も低く、且つ、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞系に対する抑制率は最も高く、したがって、本発明のグローコカリキシンＡ誘導体は乳癌に対する抑制効果が最も高い。
【００７５】
開示されている実施例の上記説明をもって、当業者は本発明を実施又は使用できる。これら実施例に対する様々な変更は当業者にとって明らかであり、本明細書で定義された原理は、本発明の主旨又は範囲を脱逸せずに、他の実施例によっても実現できる。したがって、本発明は、本明細書に示されたこれら実施例に制限されず、本明細書で開示されている原理と新規特徴に対応した最も広範な範囲に属する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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