(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
グラム陰性菌及び／又はグラム陽性菌に起因する疾患に対する非ヒト哺乳動物の治療において使用するための、リソバクチンと少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質の組み合わせ。
【請求項２】
前記非ヒト哺乳動物が乳房を有する雌動物である、請求項１に記載の治療において使用するための組み合わせ。
【請求項３】
乳房を有する前記雌非ヒト哺乳動物がウシであり、及び、前記疾患がウシ乳房炎である、請求項２に記載の治療において使用するための組み合わせ。
【請求項４】
前記組み合わせが乳房内に投与される、請求項２又は３に記載の治療において使用するための組み合わせ。
【請求項５】
前記ウシ乳房炎が臨床的に明らかなウシ乳房炎である、請求項３又は４に記載の治療において使用するための組み合わせ。
【請求項６】
前記ウシ乳房炎が無症状のウシ乳房炎である、請求項３又は４に記載の治療において使用するための組み合わせ。
【請求項７】
前記リソバクチンが、乳房の１／４当たり、２５〜１０００ｍｇの用量で投与される、請求項４〜６の１項に記載の治療において使用するための組み合わせ。
【請求項８】
前記少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質がカナマイシン又はネオマイシンであり、好ましくは、前記少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質がネオマイシンである、請求項１〜７の１項に記載の治療において使用するための組み合わせ。
【請求項９】
前記ウシ乳房炎が、ブドウ球菌属細菌、連鎖球菌属細菌、トゥルエペレラ属細菌、コリネバクテリウム属細菌及び／又はエシェリキア属細菌に起因する、請求項３〜８の１項に記載の治療において使用するための組み合わせ。
【請求項１０】
前記ウシ乳房炎が、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌（ｃｏａｇｕｌａｓｅ−ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）、ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）、ストレプトコッカス・ジスガラクチカエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉｃａｅ）、ストレプトコッカス・アガラクチカエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉｃａｅ）及び／又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に起因する、請求項９に記載の治療において使用するための組み合わせ。
【請求項１１】
前記ウシ乳房炎が、トゥルエペレラ・ピオゲネス（Ｔｒｕｅｐｅｒｅｌｌａ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）及び／又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に起因する、請求項９に記載の治療において使用するための組み合わせ。
【請求項１２】
前記ウシ乳房炎が、コリネバクテリウム・ボビス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ）及び／又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に起因する、請求項９に記載の治療において使用するための組み合わせ。
【請求項１３】
ウシの乳房への乳房内投与用に製剤された医薬組成物であって、該組成物がリソバクチン及び少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質を含んでおり、該少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質が、好ましくは、カナマイシン又はネオマイシンであることを特徴とする、前記医薬組成物。
【請求項１４】
非ヒト動物の乳房炎を治療するための医薬を調製するための、リソバクチンと少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質の使用。
【請求項１５】
乳房炎を治療する方法であって、乳房炎の治療を必要とする雌の非ヒト動物に治療有効量のリソバクチン及び少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質を投与する段階を含んでいる、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非ヒト動物におけるグラム陽性菌及びグラム陰性菌に起因する疾患の治療において使用するための、リソバクチンとアミノグリコシド系抗生物質の組み合わせに関する。本発明は、非ヒト動物の乳房炎の治療に関して特に有用であることが分かった。特に、ウシ乳房炎は、本発明により充分に対処することができる。
【背景技術】
【０００２】
乳房炎は、乳房組織の炎症であり、そして、乳牛の最も頻繁で費用のかかる疾患であり続けている。乳房炎に起因する金銭的損失は、該疾患の無症状期と臨床期の両方で生じる。無症状の乳房炎によって引き起こされる損失は充分に実証されている。５０，０００細胞／ｍＬを超える体細胞数（ＳＣＣ）が各々２倍になると、最初の泌乳牛及びそれ以降の乳牛において、それぞれ、１日あたり０．４ｋｇ及び０．６ｋｇの牛乳が失われる（Ｈｏｒｔｅｔ  Ｐ，  Ｈ．  Ｓｅｅｇｅｒｓ．  １９９８．  Ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｍｉｌｋ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｌｏｓｓｅｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｓｏｍａｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｃｏｕｎｔｓ  ｉｎ  ｄａｉｒｙ  ｃｏｗｓ：  ｒｅｖｉｅｗ  ａｎｄ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ．  Ｖｅｔ  Ｒｅｓ．  ２９（６）：４９７−５１０）。臨床的乳房炎に起因する損失としては、廃棄牛乳、牛乳生産量の一時的な減少及び早期淘汰などがある。乳房炎の治療は、可能な場合にはいつでも、原因細菌を対象とすべきである。
【０００３】
Ｐｙｏｒａｌａは、「Ｉｒｉｓｈ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ，  Ｖｏｌｕｍｅ  ６２  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ４０−４４  ２００９」において、種々の病原体による臨床的乳房炎の抗菌剤治療について以下のように示唆している：
【表１】
0006655771.tif 000002
【０００４】
乳牛の乳房炎を治療するための最近の医薬組成物は、ウブロレキシン（Ｕｂｒｏｌｅｘｉｎ）（登録商標）であり、これは、乳房炎を引き起こすグラム陽性菌及びグラム陰性菌の両方に対する広域抗生物質である。ウブロレキシン（登録商標）は、セファレキシンとカナマイシンの組み合わせであり、そして、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、ストレプトコッカス・ジスガラクチカエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉｃａｅ）、ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）及び大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）に起因する臨床的乳房炎の治療に適応される。セファロスポリン群の物質の抗生物質であるセファレキシンの作用機序は、細菌の細胞壁合成を妨害するＤ−アラニントランスペプチダーゼへの不可逆的結合である。アミノグリコシド系抗生物質であるカナマイシンは、膜結合リボソームの３０Ｓサブユニットに結合することによって作用し、そして、細菌のタンパク質合成を阻害又は妨害する。
【０００５】
従って、抗生物質の組み合わせ、特に、アミノグリコシド系と別の抗生物質の組み合わせは、それ自体知られている。
【０００６】
従来技術における抗生物質で繰り返し起こる問題は、病原体が、それらが引き起こす疾患の治療に用いられる薬物に対する耐性を発達させ得るということである。従って、新しい医薬活性成分が絶えず求められている。相乗効果は示さないが単に異なる病原体を標的とする抗生物質を併用した場合、耐性を発達させる問題はさらに悪化する。このような場合、第一の抗生物質の主要な標的ではない病原体は、そのような第一の抗生物質に対して完全な耐性を連続的に発達させ得る。
【０００７】
リソバクチンは、リソバクター属種（Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．）ＳＣ−１４０７６  （ＡＴＣＣ  ５３０４２）の発酵ブロスから最初に単離された。独立に、科学者は、サイトファーガ（Ｃｙｔｏｐｈａｇａ）属（産生株ＰＢＪ−５３５６）に関連する土壌細菌からカタノシン（ｋａｔａｎｏｓｉｎ）Ａ及びＢを発見した。カタノシンＢは、リソバクチンと同一であることが分かった。細菌の細胞壁生合成は、これらの抗生物質の主な標的である；しかしながら、その作用機序はバンコマイシンの作用機序とは異なっている。リソバクチンは、タンパク質を構成しない数個のＤ−アミノ酸及びＬ−アミノ酸を含有する環状デプシペチドである。
【０００８】
天然産物のリソバクチン及び一部の誘導体は、ＵＳ  ４，７５４，０１８において、抗菌活性を有すると記載されている。リソバクチンの単離及び抗菌活性は、ＥＰ  １９６０４２Ａ１及びＪＰ  ０１−１３２６００にも記載されている。
【０００９】
リソバクチン及びカタノシンＡの抗菌活性は、さらに、「Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ａｎｔｉｂｉｏｔ．  （１９８８）  ４１  ：１７４０−１７４４」、「Ｂｏｎｎｅｒ，  Ｄ．  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ａｎｔｉｂｉｏｔ．  （１９８８）  ４１：１７４５−１７５１」、「Ｓｈｏｊｉ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ａｎｔｉｂｉｏｔ．  （１９８８）  ４１：７１３−７１８」及び「Ｔｙｍｉａｋ，  Ａ．  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  （１９８９）  ５４：１１４９−１１５７」にも記載されている。
【００１０】
セファレキシン及びカナマイシンの作用機序とは対照的に、リソバクチンは、細菌細胞壁前駆体脂質ＩＩと直接相互作用することが示唆されている（「Ｌｅｅ，  Ｗ．  ｅｔ  ａｌ，  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  （２０１６）  １３８（１）：１００−１１３」及び「Ｂｒｅｕｋｉｎｋ  Ｅ．  ａｎｄ  ｄｅ  Ｋｒｕｉｊｆｆ  Ｂ．，  Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．  （２００６）  ５：３２１−３２３」）。リソバクチンの誘導体は、特許出願ＷＯ  ２００４／０９９２３９Ａ１、ＷＯ  ２００６／０４２６５３Ａ１、ＷＯ  ２００６／０４２６５４Ａ１、ＷＯ  ２００６／０４２６５５Ａ１、ＷＯ  ２００６／０４８１３９Ａ１、ＷＯ  ２００６／０４８１４０Ａ１、ＷＯ  ２００６／０４８１５６Ａ１、ＷＯ  ２００７／０８５４５６Ａ１、ＷＯ  ２００７／１１８６９１Ａ１及びＷＯ  ２００７／１１８６９３Ａ１の対象である。
【００１１】
挙げられている従来技術は、いずれも、リソバクチンを使用したウシ乳房炎の治療には関係していない。特に、乳房炎を治療するためのリソバクチンと別の抗生物質の併用に関する従来技術は存在しない。特に、商業的農業の損失の主要な原因であるウシ乳房炎の治療には、当技術分野において適切な選択肢がない。
【００１２】
最近、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１６／０６９３８０において、リソバクチン単独の使用が、驚くべきことに、主にグラム陽性病原体（特に、ブドウ球菌属細菌、連鎖球菌属細菌、トゥルエペレラ属細菌及び／又はコリネバクテリウム属細菌）に起因するウシ乳房炎の治療に非常に有益であることが分かったが、その抵抗性打破特性のために、グラム陰性病原体に対する潜在的な薬剤としてのリソバクチンの効力及び別の抗生物質との潜在的な相乗効果について、不確実性が残っている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】ＵＳ  ４，７５４，０１８
【特許文献２】ＥＰ  １９６０４２Ａ１
【特許文献３】ＪＰ  ０１−１３２６００
【特許文献４】ＷＯ  ２００４／０９９２３９Ａ１
【特許文献５】ＷＯ  ２００６／０４２６５３Ａ１
【特許文献６】ＷＯ  ２００６／０４２６５４Ａ１
【特許文献７】ＷＯ  ２００６／０４２６５５Ａ１
【特許文献８】ＷＯ  ２００６／０４８１３９Ａ１
【特許文献９】ＷＯ  ２００６／０４８１４０Ａ１
【特許文献１０】ＷＯ  ２００６／０４８１５６Ａ１
【特許文献１１】ＷＯ  ２００７／０８５４５６Ａ１
【特許文献１２】ＷＯ  ２００７／１１８６９１Ａ１
【特許文献１３】ＷＯ  ２００７／１１８６９３Ａ１
【特許文献１４】ＰＣＴ／ＥＰ２０１６／０６９３８０
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｈｏｒｔｅｔ  Ｐ，  Ｈ．  Ｓｅｅｇｅｒｓ．  １９９８．  Ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｍｉｌｋ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｌｏｓｓｅｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｓｏｍａｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｃｏｕｎｔｓ  ｉｎ  ｄａｉｒｙ  ｃｏｗｓ：  ｒｅｖｉｅｗ  ａｎｄ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ．  Ｖｅｔ  Ｒｅｓ．  ２９（６）：４９７−５１０
【非特許文献２】Ｉｒｉｓｈ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ，  Ｖｏｌｕｍｅ  ６２  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ４０−４４  ２００９
【非特許文献３】Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ａｎｔｉｂｉｏｔ．  （１９８８）  ４１  ：１７４０−１７４４
【非特許文献４】Ｂｏｎｎｅｒ，  Ｄ．  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ａｎｔｉｂｉｏｔ．  （１９８８）  ４１：１７４５−１７５１
【非特許文献５】Ｓｈｏｊｉ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ａｎｔｉｂｉｏｔ．  （１９８８）  ４１：７１３−７１８
【非特許文献６】Ｔｙｍｉａｋ，  Ａ．  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  （１９８９）  ５４：１１４９−１１５７
【非特許文献７】Ｌｅｅ，  Ｗ．  ｅｔ  ａｌ，  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  （２０１６）  １３８（１）：１００−１１３
【非特許文献８】Ｂｒｅｕｋｉｎｋ  Ｅ．  ａｎｄ  ｄｅ  Ｋｒｕｉｊｆｆ  Ｂ．，  Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．  （２００６）  ５：３２１−３２３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
従って、当該技術分野においては、活性成分に対する細菌耐性の欠点がなく且つグラム陽性病原体及びグラム陰性病原体を相乗的に対処することが可能な、乳房炎（特に、ウシ乳房炎）の治療が依然として求められている。本発明は、そのための解決策を提供するという目的を有する。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
従って、本発明は、特に、乳房炎の治療において使用するためのリソバクチンと少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質の組み合わせを対象とする。特に、このタイプの商業的に最も関連性のある疾患としてのウシ乳房炎の治療が、本発明の対象である。驚くべきことに、アミノグリコシド系抗生物質と組み合わされたリソバクチンは、相乗作用を示して、非ヒト動物においてグラム陽性病原体及びグラム陰性病原体によって引き起こされる疾患に関連するそれらグラム陽性病原体及びグラム陰性病原体の両方に対して抗菌特性を拡大させることが分かった。そのような相乗作用の効果は、当該病原体に起因する乳房炎に罹患した雌の動物において特に明白であるが、ウシの乳房炎が本明細書に記載されている発明の最も商業的に関連する用途であることが分かった。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明に関連して、用語「リソバクチン」は、「ＣＡＳ  Ｎｏ．１１８３７４−４７−３」を有する物質及びその生理学的に許容される塩を示している。リソバクチンは、下記構造を有する：
【化１】
0006655771.tif 000003
【００１８】
対処すべきウシ乳房炎は、特に、乳牛の乳房炎である。
【００１９】
リソバクチンの生理学的に許容される塩としては、鉱酸、カルボン酸及びスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸及び安息香酸の塩などがある。
【００２０】
リソバクチンの生理学的に許容される塩としては、さらにまた、慣習的な塩基の塩、例えば、及び、好ましくは、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩及びカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩及びマグネシウム塩）、及び、アンモニア又は１〜１６個のＣ原子を有する有機アミン（例えば、及び、好ましくは、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、アルギニン、リシン、エチレンジアミン及びＮ−メチルピペリジン）から誘導されるアンモニウム塩などがある。
【００２１】
本発明に関連して、用語「アミノグリコシド系抗生物質」又は「アミノグリコシド」は、シクロヘキサン−糖基及びアミノ−糖基で構成され、そして、膜結合リボソームの３０Ｓサブユニットに結合する特徴を機能的に共有し、それによって（特に）細菌細胞のタンパク質生合成を妨害する、オリゴ糖物質を示している。本発明によるアミノグリコシドの群の非限定的及び非網羅的メンバーは、アミカシン、アプラマイシン、フラミセチン、ジェネティシン（Ｇ４１８）、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネチルマイシン、ネオマイシン、パロモマイシン、シソマイシン、スペクチノマイシン、ストレプトマイシン及びトブラマイシンからなるリストから選択されるものである。
【００２２】
リソバクチンと同様に、「アミノグリコシド系抗生物質」又は「アミノグリコシド」には、その生理学的に許容される塩も包含される。従って、アミノグリコシドの生理学的に許容される塩としては、鉱酸、カルボン酸及びスルホン酸の酸付加塩、並びに、本発明に関してリソバクチンとともに列挙されている慣習的な塩基の塩などがある。
【００２３】
リソバクチンとアミノグリコシド類は、全身的及び／又は局所的に作用し得る。この目的のために、それは、例えば、経口経路、非経口経路、肺経路、鼻経路、舌下経路、舌経路、頬経路、直腸経路、耳介内経路、皮膚経路若しくは経皮経路などの適切な方法で、又は、インプラント若しくはステントとして、投与することができる。
【００２４】
リソバクチン及びアミノグリコシド類は、これらの投与経路に適した投与形態で投与することができる。
【００２５】
経口投与に適しているのは、従来技術に従って機能し、リソバクチン及びアミノグリコシド類を迅速に及び／又は改変された様式で送達し、そして、リソバクチン及びアミノグリコシドを結晶形態及び／又は非晶質形態及び／又は溶解された形態で含んでいる投与形態、例えば、錠剤（素錠、又は、被覆錠剤、例えば、腸溶性コーティングを有する被覆錠剤又は不溶性であるか若しくは遅れて溶解してリソバクチンの放出を制御するコーティングを有する被覆錠剤）、口内で急速に崩壊する錠剤、又は、フィルム／ウエハー、フィルム／凍結乾燥物、カプセル剤（例えば、硬ゼラチンカプセル又は軟ゼラチンカプセル）、糖衣錠、顆粒剤、ペレット剤、粉末剤、エマルション剤、懸濁液剤、エアロゾル剤、又は、溶液剤である。
【００２６】
非経口投与は、吸収段階を回避して（例えば、乳房内、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内又は腰椎内に）、又は、吸収を含めて（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮的又は腹腔内に）、実施することができる。非経口投与に適した投与形態は、とりわけ、溶液、懸濁液、エマルション、凍結乾燥物又は滅菌粉末の形態にある注射及び注入用の調製物である。
【００２７】
その他の投与経路に適しているのは、例えば、水性懸濁液用の医薬形態（ローション、振盪混合物）、親油性懸濁液、軟膏、クリーム、経皮治療システム（例えば、パッチなど）、ミルク、ペースト、泡、散粉剤、インプラント又はステントである。
【００２８】
リソバクチン及びアミノグリコシド類は、上記投与形態に変換させることができる。これは、それ自体知られている方法で、不活性で無毒性の薬学的に適している賦形剤と混合させることによって実施することができる。これらの賦形剤としては、とりわけ、担体（例えば、微結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば、液体ポリエチレングリコール）、乳化剤及び分散剤又は湿潤剤（例えば、ドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えば、ポリビニルピロリドン）、合成ポリマー及び天然ポリマー（例えば、アルブミン）、安定化剤（例えば、抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸）、着色剤（例えば、無機顔料、例えば、酸化鉄）、並びに、マスキング用の香料及び／又は臭気などがある。
【００２９】
本発明について、以下の態様及び実施形態を参照して、さらに説明する。それらは、文脈上異なるように明確に示されていない限り、自由に組み合わせることができる。
【００３０】
一実施形態は、乳房炎の治療において使用するためのリソバクチンと少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質の組み合わせに関し、ここで、リソバクチンと少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質は、乳房内に投与される。好ましくは、該アミノグリコシド系抗生物質は、ネオマイシン又はカナマイシンである。さらに好ましくは、該乳房炎は、ウシ乳房炎である。
【００３１】
別の実施形態は、乳房炎の治療において使用するためのリソバクチンと少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質の組み合わせに関し、ここで、該乳房炎は、臨床的に明らかな乳房炎である。好ましくは、該アミノグリコシド系抗生物質は、ネオマイシン又はカナマイシンである。さらに好ましくは、該乳房炎は、ウシ乳房炎である。
【００３２】
別の実施形態は、乳房炎の治療において使用するためのリソバクチンと少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質の組み合わせに関し、ここで、該乳房炎は、無症状のウシ乳房炎である。好ましくは、該アミノグリコシド系抗生物質は、ネオマイシン又はカナマイシンである。さらに好ましくは、該乳房炎は、ウシ乳房炎である。
【００３３】
別の実施形態は、乳房炎の治療において使用するためのリソバクチンと少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質の組み合わせに関し、ここで、リソバクチンは、乳房１／４区域（ｕｄｄｅｒ  ｑｕａｒｔｅｒ）当たり２５〜１０００ｍｇの用量で、好ましくは、乳房１／４区域当たり５０〜５００ｍｇの用量で、さらに好ましくは、乳房１／４区域当たり１００〜３００ｍｇの用量で、投与される。最も好ましくは、該乳房炎は、ウシ乳房炎である。
【００３４】
この実施形態の好ましい実施形態では、リソバクチン（ｌｙｓｏｂａｃｔｉｏｎ）の該組み合わせは、ネオマイシン又はカナマイシンを用いて作られ、好ましくは、ネオマイシンを用いて作られる。
【００３５】
適切な場合は、上記量から逸脱することが必要なこともあり得る；特に、体重、投与経路、活性成分に対する個体の応答、調製物の性質及び投与を行う時間又は間隔の関数として。かくして、一部の場合では、上記で記載した最少量よりも少ない量で充分であり得るが、別の場合では、上記で記載した上限を上回ることが必要であり得る。より多くの量を投与する場合には、それらを１日にわたって複数の個別用量に分割することが望ましい。
【００３６】
本発明に従って実際に使用される実際のアミノグリコシド系抗生物質に応じて、上記で言及されているその用量は変化する可能性があり、従って、それに関連して、リソバクチンの比率も変化し得る。
【００３７】
グラム陰性病原体とグラム陽性病原体の両方に対する極めて良好な結果が達成され、従って、リソバクチンのアミノグリコシド系抗生物質に対する比が少なくとも０．１であれば、好ましい。少なくとも０．２の該比率はさらに良い結果をもたらすが、少なくとも１：１の比率を有することがさらに好ましく、一層さらに好ましいのは、少なくとも２：１の比率である。最も好ましいのは、少なくとも４：１の比率である。
【００３８】
別の実施形態は、乳房炎の治療において使用するためのリソバクチンと少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質の組み合わせに関し、ここで、該乳房炎は、グラム陽性菌及びグラム陰性菌に起因する。好ましくは、該乳房炎は、ウシ乳房炎である。
【００３９】
さらに好ましくは、これは、ウシ乳房炎の治療において使用するためのリソバクチンと少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質との組み合わせに関し、ここで、該ウシ乳房炎は、ブドウ球菌属細菌、連鎖球菌属細菌、トゥルエペレラ属細菌、コリネバクテリウム属細菌及び／又はエシェリキア属細菌に起因する。
【００４０】
特に、該ウシ乳房炎は、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌（ｃｏａｇｕｌａｓｅ−ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）、ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）、ストレプトコッカス・ジスガラクチカエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉｃａｅ）、ストレプトコッカス・アガラクチカエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉｃａｅ）及び／又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に起因し得る。
【００４１】
さらに、該ウシ乳房炎は、トゥルエペレラ・ピオゲネス（Ｔｒｕｅｐｅｒｅｌｌａ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）及び／又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に起因し得る。さらに、該ウシ乳房炎は、コリネバクテリウム・ボビス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ）及び／又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に起因し得る。
【００４２】
黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌（ｃｏａｇｕｌａｓｅ−ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）、ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）、ストレプトコッカス・ジスガラクチカエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉｃａｅ）、ストレプトコッカス・アガラクチカエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉｃａｅ）、トゥルエペレラ・ピオゲネス（Ｔｒｕｅｐｅｒｅｌｌａ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）及びコリネバクテリウム・ボビス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ）は、ウシ乳房炎の場合に見られる最も一般的な病原体であるが、エシェリキア属との重複感染が一般的であり、それらは、集団として、本発明によるリソバクチンと少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質の組み合わせを用いた治療に対して特に感受性であるということが分かった。乳房炎は、さらにまた、エシェリキア属細菌の存在によってのみ、臨床的に関連するようになり得る。
【００４３】
本発明の別の態様は、乳房への乳房内投与用に製剤された医薬組成物であり、ここで、該組成物は、リソバクチン及び少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質を含んでいる。好ましくは、該組成物は、ウシの乳房に投与されるように製剤される。さらに好ましくは、該組成物は、さらに、薬学的に許容される賦形剤、及び、特に、薬学的に許容される担体も含んでいる。
【００４４】
これらの賦形剤としては、とりわけ、担体（例えば、微結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば、液体ポリエチレングリコール）、乳化剤及び分散剤又は湿潤剤（例えば、ドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えば、ポリビニルピロリドン）、合成ポリマー及び天然ポリマー（例えば、アルブミン）、安定化剤（例えば、抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸）、着色剤（例えば、無機顔料、例えば、酸化鉄）、並びに、マスキング用の香料及び／又は臭気などがある。
【００４５】
本発明の別の態様は、乳房炎を治療するための医薬を調製するための、リソバクチン及び少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質の使用である。ウシ乳房炎を治療するための医薬を調製するための使用が好ましい。
【００４６】
本発明による使用の一実施形態では、該ウシ乳房炎は、臨床的に明らかなウシ乳房炎である。
【００４７】
本発明による使用の別の実施形態では、該ウシ乳房炎は、無症状のウシ乳房炎である。
【００４８】
本発明による使用の別の実施形態では、該ウシ乳房炎は、ブドウ球菌属細菌、連鎖球菌属細菌、トゥルエペレラ属細菌、コリネバクテリウム属細菌及び／又はエシェリキア属細菌に起因する。
【００４９】
特に、該ウシ乳房炎は、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌（ｃｏａｇｕｌａｓｅ−ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）、ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）、ストレプトコッカス・ジスガラクチカエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉｃａｅ）、ストレプトコッカス・アガラクチカエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉｃａｅ）及び／又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に起因し得る。
【００５０】
さらに、該ウシ乳房炎は、トゥルエペレラ・ピオゲネス（Ｔｒｕｅｐｅｒｅｌｌａ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）及び／又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に起因し得る。さらに、該ウシ乳房炎は、コリネバクテリウム・ボビス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ）及び／又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に起因し得る。
【００５１】
本発明はさらに、乳房炎を治療する方法に関し、ここで、該方法は、乳房を有し且つ乳房炎の治療を必要とする雌の非ヒト動物に治療有効量のリソバクチン及び少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質を投与する段階を含んでいる。好ましくは、乳房を有する雌の非ヒト動物は、ウシである。
【００５２】
最後に、本発明の主要な態様は、商業的適用性の理由から、（特に、ウシの）乳房炎の治療を対象としているが、本発明において驚くべきことに見いだされた相乗効果は、（特に、ウシの）乳房の特定の治療に限定されるものではないことが分かった。本明細書中において提供されている実験データは、上記相乗効果が、グラム陰性菌及びグラム陽性菌によって引き起こされる任意の疾患を患っている非ヒト動物の任意の治療に当てはまるということを示している。
【００５３】
従って、本発明の包括的な実施形態は、一般的に、グラム陰性菌及びグラム陽性菌に起因する疾患に対する非ヒト哺乳動物の治療において使用するための、リソバクチンと少なくとも１種類のアミノグリコシド系抗生物質の組み合わせに関する。
【実施例】
【００５４】
実施例：
本発明について、以下の実施例及び図面を参照してさらに説明するが、本発明は、それら実施例及び図面に限定されることはない。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）及びストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）に対するリソバクチンの殺細菌動態を示す図である（実施例２）。
【図２】連続継代中の黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）及びストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）に対するリソバクチンのＭＩＣ変化を示す図である（実施例４）。
【図３】黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）急性マウス乳房炎モデルにおけるリソバクチンの効力を示す図である（実施例５）。
【図４】ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）チャレンジマウス乳房炎モデルにおけるリソバクチンの効力を示す図である（実施例６）。
【図５】泌乳中のホルスタイン牛への乳房内（ＩＭＡＭ）投与後の乳中のリソバクチンの濃度−時間プロフィールを示す図である（実施例７）。
【図６】黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）及びストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）に対する、単独の又は１：１及び２：１の用量比で組み合わされたリソバクチン及びネオマイシンの、乳中の殺細菌動態を示す図である（実施例１０）。
【図７】黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）及びストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）に対する、単独の又は１：５及び１：１０の用量比で組み合わされたリソバクチン及びネオマイシンの、乳中の殺細菌動態を示す図である（実施例１０）。
【図８】大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に対する、単独の又は組み合わされたリソバクチン及びネオマイシンの、乳中の殺細菌動態を示す図である（実施例１０）。
【図９】黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）に対する、リソバクチンとネオマイシン又はカナマイシンのいずれかとの組み合わせの殺細菌動態を示す図である（実施例１１）。
【図１０】黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）及びストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）に対する、リソバクチンとフロルフェニコールの組み合わせの殺細菌動態を示す図である（実施例１２）。
【図１１】黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）急性マウス乳房炎モデルにおける、組み合わされた又は単独のリソバクチン及びネオマイシンの効力を示す図である（実施例１３）。
【図１２】ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）急性マウス乳房炎モデルにおける、組み合わされた又は単独のリソバクチン及びネオマイシンの効力を示す図である（実施例１４）。
【００５６】
実施例１：  乳房炎病原体に対するリソバクチン単独のインビトロ抗菌活性
細菌の視認できる増殖を防止する物質の最小濃度として定義される最小阻害濃度（ＭＩＣ）を得るために、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌（Ｃｏａｇｕｌａｓｅ−ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）、ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）、ストレプトコッカス・ジスガラクチアエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）、ストレプトコッカス・アガラクチアエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、トゥルエペレラ・ピオゲネス（Ｔｒｕｅｐｅｒｅｌｌａ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）又はクレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）などの一般的な乳房炎病原体に対するリソバクチンのインビトロ抗菌活性を、「Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  （ＣＬＳＩ）」によって記載されているマイクロブロス希釈ＭＩＣ法（ｍｉｃｒｏｂｒｏｔｈ  ｄｉｌｕｔｉｏｎ  ＭＩＣ  ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ）によって評価した。結果は、ＭＩＣ９０として表し、下記表中に要約されている。ここで、ＭＩＣ９０は、所与の種の株の少なくとも９０％の増殖が阻害される濃度として定義される。
【表２】
0006655771.tif 000004
【００５７】
実施例２：  乳房炎病原体に対するリソバクチン単独のインビトロ殺細菌動態
リソバクチンが乳中の細菌を死滅させる能力を評価するために、市販の全脂肪乳の中の種々の濃度のリソバクチンを含んでいるフラスコに、１−２×１０６コロニー形成単位／ｍＬの黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）又はストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）のいずれかの代表的な株を接種した。そのフラスコを３５＋／−２℃の振盪水浴中で２４〜４８時間インキュベートし、そして、サンプルを希釈し、寒天プレートで平板培養することによって、各フラスコ中の生菌数を数回の時点で決定した。初期接種材料中の生菌の数が少なくとも９９．９％の低減した場合、それを殺細菌活性と定義する。
【００５８】
乳中の黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）ＡＴＣＣ  ２９７４０及びストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）ＡＴＣＣ  ２７９５８に対するリソバクチンの殺細菌動態を、４、８、１６、３２及び６４μｇ／ｍＬの濃度のリソバクチンについて測定した。結果は、図１（ＣＦＵ：コロニー形成単位）に示されている。２４時間及び４８時間における殺細菌性（ｃｉｄａｌｉｔｙ）を、それぞれ、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）及びストレプトコッカス・ウベリス（Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ）について主張することができる。
【００５９】
実施例３：  リソバクチン単独に対する自発的な耐性発達のインビトロでの評価
少なくとも１×１０９コロニー形成単位のそれぞれの細菌株を、４×ＭＩＣ又は８×ＭＩＣでリソバクチンを含有する寒天プレート上で平板培養し、その寒天プレートを３５＋／−２℃でインキュベートすることによって、自発的な耐性発達の頻度について評価した。４８時間経過した後、ＭＩＣを上回るリソバクチン濃度の該寒天プレート上で増殖したコロニーの数を、最初に播種した細菌の数で除した。得られた数字は、自発的な耐性頻度として定義され、そして、耐性分離株が感染中に出現する可能性の指標である。
【００６０】
結論として、ＭＩＣの４倍及び８倍のリソバクチンは、極めて良好な耐性プロフィールを示す：耐性分離株は検出されなかった。結果は、下記表中に要約されている。
【表３】
0006655771.tif 000005
【表４】
0006655771.tif 000006
【００６１】
実施例４：  連続継代中におけるリソバクチン単独に対する耐性発達のインビトロでの評価
細菌をＭＩＣ以下の濃度のリソバクチンに連続的に晒している間のＭＩＣの変化の出現について、連続継代実験によって評価した。１日目に、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）及びストレプトコッカス・ウベリス（Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ）のＭＩＣを、「Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  （ＣＬＳＩ）」によって記載されているマイクロブロス希釈ＭＩＣ法によって評価した。その後の連続する３３日間、毎日、完全な増殖が可能な最大濃度を含有するウェルから細菌を回収し、そして、新しい９６ウェルプレートに接種し、リソバクチンに連続的に晒している間のＭＩＣを評価するために使用した。それぞれの日に得られたＭＩＣを、経時的にプロットした。結果は図２に示されている。ＭＩＣの急速の変化をもたらすことが知られているリファンピシンを陽性対照として使用した。
【００６２】
黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）及びストレプトコッカス・ウベリス（Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ）のＭＩＣは３３日間にわたって一定のままであったので、上記結果は、連続して晒されている間の耐性発達に関して、リソバクチンの極めて良好なプロフィールを示している。
【００６３】
実施例５：  黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）による急性マウス乳房炎モデルにおけるリソバクチン単独の効力
リソバクチン（ｐＨ４．７のヒドロゲルに配合したもの）の効力について、シャーブルック大学（カナダ）で確立された黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）急性マウス乳房炎モデル（「Ｂｒｏｕｉｌｌｅｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ，  Ｖｅｔ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  （２００４）  ４：２５３−２６２」、これは、参照により本明細書に組み入れる）において試験した。泌乳しているＣＤ−１マウスの両方の腹部乳腺（Ｌ４及びＲ４）に、１００ＣＦＵ（コロニー形成単位）の黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）を用いて乳房内感染させた。そのマウスを、感染の４時間後、リソバクチンで乳房内処理した。各処理群は、少なくとも３匹のマウス（６×乳房１／４区域）を含んでいた。１４時間（接種後１８時間）経過した後、マウスを殺し、乳腺を摘出し、そして、乳腺ホモジネートの１０倍連続希釈物を平板培養することによってＣＦＵ含有量を評価した。そのＣＦＵ含有量は、ＣＦＵ含量はｌｏｇ１０（総数）として表した。検出限界は、２００ＣＦＵ／ｇ（乳腺）であった。２００ＣＦＵ／ｇ未満である乳腺は、除菌されたとみなした。結果は、図３に示されている。
【００６４】
５０μｇのリソバクチンを乳房内に滴下注入することによって、ＣＦＵ含有量の中央値が約４ｌｏｇ１０だけ低減され、４００μｇのリソバクチンでは、感染した全ての乳腺から感染が除去される。
【００６５】
実施例６：  ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ）による急性マウス乳房炎モデルにおけるリソバクチン単独の効力
リソバクチン（ｐＨ４．７のヒドロゲルに配合したもの）の効力について、ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）チャレンジマウス乳房炎モデルにおいて試験した。結果は、図４に示されている。
【００６６】
子マウスの出産から約１２〜１５日経過した後、泌乳している２０匹のマウスの４番目の乳腺対に、ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ）を実験的に感染させた。接種の４時間後、４匹のマウスからなる群を、同じ乳腺において、１００、２００、４００又は８００μｇ／乳腺のヒドロゲルとして製剤されたリソバクチンで処理した。５番目の群は、陰性対照として、ヒドロゲルビヒクルのみで処理した。感染させてから１８時間経過した後、該動物を安楽死させ、乳腺を取り出し、ホモジナイズし、そして、細菌のコロニー形成単位（ＣＦＵ）を確立された微生物学的方法によって決定した。その後、ＣＦＵ／ｍＬ（ホモジネート）及びＣＦＵ／ｇ（乳腺）を計算した。検出限界は、約１００ＣＦＵ／ｇ（乳腺）であった。ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐ  ｕｂｅｒｉｓ）に対するリソバクチンの抗菌活性を、種々の投薬群と陰性対照群のＣＦＵ／乳腺の平均値を比較することによって決定した。
【００６７】
対照群の全ての動物の乳腺は、感染の１８時間後には、最適の感染率（≧１０７ＣＦＵ／ｇ（乳腺））を示した。最大投薬群における１つを除いて、リソバクチン処理群における全ての乳腺では、その細菌数は、検出限界（１０２ＣＦＵ／ｇ）を下回った。ヒドロゲルとして製剤されたリソバクチンは、１００〜８００μｇ／乳腺の乳房内投与量でストレプトコッカス・ウベリス（Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ）に対して顕著な抗菌効力を有すると結論付けることができる。
【００６８】
実施例７：  リソバクチン単独のインビボウシデータ  −  泌乳しているホルスタイン牛における乳薬物動態学的研究
この研究は、泌乳している乳牛へ１回嚢内投与（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｒｎａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）された後の活性物質リソバクチンの乳薬物動態を調べるのに適した、非枢要的な研究として設計された。
【００６９】
該活性物質は、１０ｇの油性懸濁液中に１５０ｍｇのリソバクチンを含有する、嚢内投与に適したパラフィンベースの常用製剤（ｓｅｒｖｉｃｅ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）の形態で提供された。
【００７０】
該被験物質（ｔｅｓｔ  ｉｔｅｍ）は、泌乳している４頭の乳牛の各々の後部の乳房１／４区域１つに対して、１５０ｍｇのリソバクチンの投与量で、１回の嚢内処理（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｒｎａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）として投与した。
【００７１】
該被験乳牛（ホルスタイン牛）は、年齢、泌乳数、泌乳段階、乳生産量及び品種における目標集団を代表した。該動物は、牛小屋（ｔｉｅ−ｂａｒｎ）に入れて、トウモロコシと牧草サイレージ（ｇｒａｓ  ｓｉｌａｇｅ）からなる乳牛用の標準的な飼料及び泌乳能力を高める飼料（ｍｉｌｋ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｆｅｅｄ）を与えた。搾乳は、バケット型搾乳装置を使用して、１２時間間隔で１日２回実施した。
【００７２】
処理前（０時間）及び処理後１６８時間にわたって（０．５時間、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、６０時間、７２時間、８４時間、９６時間、１２０時間、１４４時間、及び、１６８時間）、それぞれの乳房１／４区域を手で後搾りすることによって、処理された乳房１／４区域及びそれぞれの対照乳房１／４区域から、頻繁に乳のサンプリングを実施した。日常的な搾乳時における乳サンプルは、搾乳の前に集めた。
【００７３】
乳中の活性物質リソバクチンの濃度は、タンデム質量分析による検出を伴うＨＰＬＣによって分析した。定量限界は０．０５ｍｇ／Ｌであった。
【００７４】
乳濃度データの薬物動態学的評価は、非コンパートメント法に基づくものであり、そして、乳中の活性物質の吸収、分布及び消失プロフィールを適切に記載するＰＫパラメータを含んでいた。
【００７５】
処理した乳房１／４区域から得られた要約された結果は、下記表に示されている。対照サンプル（処理されていない乳房１／４区域）では、リソバクチンは検出されなかった。
【表５】
0006655771.tif 000007
【００７６】
リソバクチンの濃度時間曲線は、図５に示されている。
【００７７】
実施例８：  リソバクチン単独のインビボウシデータ  −  黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）による乳牛乳房感染モデル
１５頭の健康な泌乳している乳牛の４つの全ての乳房１／４区域に、乳房炎の病原体である黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）を実験的に感染させた。乳房１／４区域が乳房炎の臨床症状（例えば、腫脹、痛み、乳の異常な稠度）を示したら直ぐに、２種類の異なる濃度のリソバクチン（パラフィンベースの軟膏）又はウブロレキシン（登録商標）（セファレキシン＋カナマイシン、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）又は陰性対照としての生理食塩水のいずれかで処理した。処理は、合計で４２の乳房１／４区域に、乳房１／４区域当たり５０ｍｇのリソバクチン（１１の乳房１／４区域）又は１５０ｍｇのリソバクチン（１１の乳房１／４区域）又はウブロレキシン（登録商標）（９の乳房１／４区域）又は生理食塩水（１１の乳房１／４区域）を無作為に割り当てた。処理の直前にチャレンジ微生物について細菌学的に陽性であった乳房１／４区域（ｎ＝４２）のみが、微生物学的及び臨床的治癒の評価に適格であった。罹患した乳房１／４区域を、２４時間の間隔を開けて、これらの乳房内用製剤で２回処理した。乳房を臨床的に調べ、そして、処理前と処理後数回（２回目の投与後、３週間まで）、乳サンプルを採取した。乳をその稠度の異常性について視覚的に検査し、そして、サンプルをチャレンジ微生物の存在及び体細胞数について評価して、乳房炎の診断を確認した。処理の直前の乳サンプルの中に見られた黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）が、２回目の処理の後の第３日から第２１日の間の期間内に採取された乳サンプルから単離することができなかった場合、罹患した乳房１／４区域は微生物学的に治癒したとみなした。臨床的な治癒は、乳房炎の局所的な症状が完全に消失した場合に達成され、そして、乳房炎のパラメータとしての体細胞数（ＳＣＣ）の回復は、上記期間において全ての体細胞数が５００．０００細胞／ｍＬ（乳）よりも低いままであった場合に達成された。
【００７８】
２回目の処理の後の第３日及び第２１日における微生物学的な治癒率は、それぞれ、リソバクチン５０ｍｇについては、７３％及び２７％であり、リソバクチン１５０ｍｇについては、７３％及び４５％であり、ウブロレキシン（登録商標）については、７８％及び４４％であり、並びに、生理食塩水については、０％及び０％であった。２回目の処理の後の第３日及び第２１日における局所的な臨床的治癒率は、それぞれ、リソバクチン５０ｍｇについては、４５％及び７３％であり、リソバクチン１５０ｍｇについては、３７％及び８２％であり、ウブロレキシン（登録商標）については、３３％及び６７％であり、並びに、生理食塩水については、５５％及び７３％であった。２回目の処理の後の第３日及び第２１日におけるＳＣＣ回復率は、それぞれ、リソバクチン５０ｍｇについては、３６％及び４５％であり、リソバクチン１５０ｍｇについては、３６％及び９１％であり、ウブロレキシン（登録商標）については、５６％及び６７％であり、並びに、生理食塩水については、３６％及び２７％であった。
【００７９】
リソバクチン１５０ｍｇは、微生物学的治癒、臨床的治癒及びＳＣＣ回復のパラメータにおいて、陽性対照の製品ウブロレキシン（登録商標）と比較して同程度の効力又は一層優れた効力を示し、そして、リソバクチン５０ｍｇ及び生理食塩水よりも優れていると結論付けることができる。
【００８０】
実施例９：  リソバクチン単独のインビボウシデータ  −  ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ）による乳牛乳房感染モデル
７２頭の健康な泌乳している乳牛の、乳牛１頭あたり２つの乳房１／４区域に、乳房炎の病原体であるストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）を実験的に感染させた。乳房１／４区域が乳房炎の臨床症状（例えば、熱、腫脹、発赤、痛み、乳の異常な稠度）を示したら直ぐに、２種類の異なる濃度のリソバクチン（パラフィンベースの軟膏）又はウブロレキシン（登録商標）（セファレキシン＋カナマイシン、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）のいずれかで処理した。
【００８１】
処理は、合計で４１（臨床的）又は３７（微生物学的）の乳房１／４区域に、乳房１／４区域当たり５０ｍｇのリソバクチン（１５／１３の乳房１／４区域）又は１５０ｍｇのリソバクチン（１５／１４の乳房１／４区域）又は陽性対照としてのウブロレキシン（登録商標）（１１／１０の乳房１／４区域）を無作為に割り当てた。罹患した乳房１／４区域を、２４時間の間隔を開けて、これらの乳房内用製剤で２回処理した。乳房を臨床的に調べ、そして、処理前と処理後数回（２回目の投与後、３週間まで）、乳サンプルを採取した。乳をその稠度の異常性について視覚的に検査し、そして、サンプルをチャレンジ微生物の存在について評価して、乳房炎の診断を確認した。処理の直前の乳サンプルの中に見られたストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）が、２回目の処理の後の第７日から第２１日の間の期間内に採取された乳サンプルから単離することができなかった場合、罹患した乳房１／４区域は微生物学的に治癒したとみなした。臨床的な治癒は、乳房炎の局所的な症状が完全に消失したか又は多くても非常にわずかな性質であった場合に達成された。
【００８２】
２回目の処理の後の第７日及び第２１日における微生物学的な治癒率は、それぞれ、リソバクチン５０ｍｇについては、８４．６％及び９２．３１％であり、リソバクチン１５０ｍｇについては、７１．４％及び８５．７１％であり、並びに、ウブロレキシン（登録商標）については、３０％及び３０％であった。２回目の処理の後の第７日における局所的な臨床的治癒率は、それぞれ、リソバクチン５０ｍｇ及びリソバクチン１５０ｍｇについては、いずれも８６．７％であり、並びに、ウブロレキシン（登録商標）については、３６．４％であった。
【００８３】
リソバクチン５０ｍｇ及び１５０ｍｇは、陽性対照の製品ウブロレキシン（登録商標）と比較して、微生物学的治癒及び臨床的治癒の重要なパラメータにおいて、明らかにより有効であったと結論付けることができる。
【００８４】
実施例１０：  乳房炎病原体に対するリソバクチンとネオマイシンの組み合わせのインビトロ殺細菌動態
市販の全脂肪乳の中のリソバクチンとネオマイシンの相乗活性をインビトロで評価するために、種々の濃度のリソバクチン及びネオマイシンを単独で又は組み合わせて含んでいるフラスコに、１−２×１０６コロニー形成単位／ｍＬの黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のいずれかの代表的な株を接種した。
【００８５】
そのフラスコを３５＋／−２℃の振盪水浴中で２４〜４８時間インキュベートし、そして、サンプルを希釈し、寒天プレートで平板培養することによって、各フラスコ中の生菌数を数回の時点で決定した。
【００８６】
最も活性が高い単一化合物と比較して２４時間後に少なくとも９９％の生菌数の低減が当該組み合わせによって達成された場合、それを相乗活性と定義する（ＮＣＣＬＳ／ＣＬＳＩ  Ｍ２６−Ａ  Ｖｏｌ．１９、Ｎｏ．１８）。
【００８７】
乳中の黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）ＡＴＣＣ  ２９７４０に対する単独の又は組み合わされたリソバクチン及びネオマイシンの殺細菌動態を、リソバクチン：ネオマイシンの１：１（各々２μｇ／ｍＬ）及び２：１（２μｇ／ｍＬのリソバクチン及び１μｇ／ｍＬのネオマイシン）の濃度比について測定した。
【００８８】
結果は、図６に示されている。
【００８９】
２４時間経過した後、リソバクチン：ネオマイシンの組み合わせの相乗活性を観察することができた。該相乗作用は、少なくとも２：１の比率、特に１：１の比率で、極めて明白である。
【００９０】
乳中のストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）ＡＴＣＣ  ２７９５８に対する単独の又は組み合わされたリソバクチン及びネオマイシンの殺細菌動態を、リソバクチン：ネオマイシンの１：１（各々１６μｇ／ｍＬ）及び２：１（１６μｇ／ｍＬのリソバクチン及び８μｇ／ｍＬのネオマイシン）の濃度比について測定した。
【００９１】
結果は、図６に示されている。
【００９２】
２４時間経過した後、リソバクチン：ネオマイシンの組み合わせの相乗活性を、両方の比率で観察することができた。
【００９３】
乳中の黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）ＡＴＣＣ  ２９７４０に対する単独の又は組み合わされたリソバクチン及びネオマイシンの殺細菌動態を、リソバクチン：ネオマイシンの１：５（それぞれ、１μｇ／ｍＬのリソバクチン＋５μｇ／ｍＬのネオマイシン、及び、１．５μｇ／ｍＬのリソバクチン＋７．５μｇ／ｍＬのネオマイシン）の濃度比について測定した。
【００９４】
結果は、図７に示されている。
【００９５】
２４時間経過した後、相乗活性を観察することができた。少なくとも１：５（即ち、０．２）のリソバクチン：ネオマイシンの比率で、既に、該相乗作用は極めて明白である。該相乗作用は、図７から明らかなように、使用されるリソバクチン及びネオマイシンの絶対量に依存しない。
【００９６】
乳中のストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）ＡＴＣＣ  ２７９５８に対する単独の又は組み合わされたリソバクチン及びネオマイシンの殺細菌動態を、リソバクチン：ネオマイシンの１：１０（それぞれ、１μｇ／ｍＬのリソバクチン＋１０μｇ／ｍＬのネオマイシン、及び、２μｇ／ｍＬのリソバクチン＋２０μｇ／ｍＬのネオマイシン）の濃度比について測定した。
【００９７】
結果は、図７に示されている。
【００９８】
２４時間経過した後、相乗活性を観察することができた。リソバクチン：ネオマイシンの比率が１：１０（０．１）では、該相乗効果は、リソバクチンとネオマイシンの絶対量に関係なく、極めて明白である。
【００９９】
まとめると、リソバクチン：ネオマイシンの組み合わせの相乗活性を示すことができた。該相乗活性は、それぞれ、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）ＡＴＣＣ  ２９７４０及びストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）ＡＴＣＣ  ２７９５８について、２：１〜１：５（０．２）及び２：１〜１：１０（０．１）の範囲の比率で極めて明白である。
【０１００】
乳中の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｐ４：Ｏ３２に対する単独の又は組み合わされたリソバクチン及びネオマイシンの殺細菌動態を、リソバクチン：ネオマイシンの４：１（２５６μｇ／ｍＬのリソバクチン及び３２μｇ／ｍＬのネオマイシン）の濃度比について測定した。
【０１０１】
結果は、図８に示されている。
【０１０２】
ネオマイシン、及び、リソバクチン：ネオマイシンの組み合わせは、８時間後に、細菌細胞数を検出限界以下に低減させることができたが、該組み合わせは、殺細菌作用の開始がより早かった。
【０１０３】
さらに、該組み合わせは、それぞれの単独の活性物質では達成することができない２４時間後の該細菌の再増殖を実質的に防止した。
【０１０４】
従って、ここでも、グラム陰性の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に関して相乗活性が観察された。
【０１０５】
実施例１１：  黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）ＡＴＣＣ  ２９７４０に対するリソバクチンとネオマイシンの組み合わせ又はリソバクチンとカナマイシンの組み合わせのインビトロ殺細菌動態
上記相乗作用が、リソバクチンと組み合わされたネオマイシン以外のさらなるアミノグリコシド系抗生物質にも当てはまるかどうかを調べるために、組み合わせ相手剤としてのカナマイシンの殺細菌動態についても同様に試験した。
【０１０６】
殺細菌動態は、実施例１０に記載されているのと同様にして実施した。
【０１０７】
乳中の黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）ＡＴＣＣ  ２９７４０に対するネオマイシン又はカナマイシンのいずれかと一緒のリソバクチンの殺細菌動態を、リソバクチン：ネオマイシン又はリソバクチン：カナマイシンの１：４（それぞれ、０．５μｇ／ｍＬのリソバクチン＋２μｇ／ｍＬのネオマイシン又はカナマイシン、１μｇ／ｍＬのリソバクチン＋４μｇ／ｍＬのネオマイシン又はカナマイシン、及び、２μｇ／ｍＬのリソバクチン＋８μｇ／ｍＬのネオマイシン又はカナマイシン）の濃度比について測定した。
【０１０８】
結果は、図９に示されている。
【０１０９】
評価したすべての濃度で、リソバクチン：カナマイシンの組み合わせは、リソバクチン：ネオマイシンの組み合わせと比較して、同様の活性を示した。
【０１１０】
そのことから、リソバクチンとアミノグリコシド系抗生物質の組み合わせは、それら自体、予期されない相乗作用をもたらすと結論付けることができる。
【０１１１】
比較実施例１２：  黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）ＡＴＣＣ  ２９７４０及びストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）ＡＴＣＣ  ２７９５８に対するリソバクチンとフロルフェニコールの組み合わせのインビトロ殺細菌動態
以下に示されているように、２種類の異なる抗生物質の相乗活性は、確実に予測することはできない。
【０１１２】
例えば、リソバクチンとフロルフェニコールの組み合わせは、図１０に示されている試験条件下で、乳中の黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）ＡＴＣＣ  ２９７４０又はストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）ＡＴＣＣ  ２７９５８のいずれに対しても相乗作用を示さなかった。
【０１１３】
実施例１３：  黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）による急性マウス乳房炎モデルにおけるリソバクチンとネオマイシン三硫酸塩の組み合わせの効力
単独の又は組み合わされたリソバクチン及びネオマイシン三硫酸塩の効力について、実施例５に記載されているように、シャーブルック大学（カナダ）で確立された黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）急性マウス乳房炎モデル（Ｂｒｏｕｉｌｌｅｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ，  Ｖｅｔ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  （２００４）  ４：２５３−２６２）において試験した。サンプルは、パラフィンで製剤した。
【０１１４】
結果は、図１１に示されている。
【０１１５】
５０μｇのリソバクチン、１６００μｇのネオマイシン三硫酸塩及び組み合わされた５０μｇのリソバクチン＋１６００μｇのネオマイシン三硫酸塩を乳房内に滴下注入することによって、ＣＦＵ含有量の中央値が、それぞれ、２．７ｌｏｇ１０、２．５ｌｏｇ１０及び５．９ｌｏｇ１０だけ低減される。
【０１１６】
実施例１４：  ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ）による急性マウス乳房炎モデルにおけるリソバクチンとネオマイシン三硫酸塩の組み合わせの効力
子マウスの出産から１０〜１５日経過した後、２３匹の泌乳しているＣＤ−１マウスの左右の第４乳腺に、乳房炎の病原体であるストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）（ＡＴＣＣ  ２７９５８）を実験的に感染させた。
【０１１７】
感染させてから４時間経過した後、該動物を被験物質（ｔｅｓｔ  ｉｔｅｍ）で乳房内処理した。この研究は、それぞれ４匹のマウスを含む４つの処理群と７匹のマウスを含む対照群を含んでいた。
【０１１８】
処理群のマウスには、１５μｇ／乳腺のリソバクチンのパラフィン製剤、又は、１６００μｇ／乳腺のネオマイシン三硫酸塩のパラフィン製剤、又は、乳腺当たり１５μｇのリソバクチンと８００μｇ若しくは１６００μｇのネオマイシン三硫酸塩の２種類の組み合わせのパラフィン製剤を、投与した。
【０１１９】
感染させてから１８時間経過した後、マウスを殺し、乳腺を取り出し、そして、細菌のＣＦＵを微生物学的に評価した。
【０１２０】
結果は、図１２に示されている。
【０１２１】
プラセボとしてパラフィンを投与された対照群は、ＣＦＵの約７ｌｏｇ１０／ｇ（組織）の予期された範囲内にあった。１５μｇのリソバクチン、１６００μｇのネオマイシン三硫酸塩及び組み合わされた１５μｇのリソバクチン＋１６００μｇのネオマイシン三硫酸塩を乳房内に滴下注入することによって、ＣＦＵ含有量の平均値が、それぞれ、２．６ｌｏｇ１０、１．５ｌｏｇ１０及び３．８ｌｏｇ１０だけ低減される。
【０１２２】
１５／１６００μｇ／乳腺で投与されたリソバクチン／ネオマイシン三硫酸塩の組み合わせは、ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ）ＡＴＣＣ  ２７９５８に対するその効力において、同じ投与量でのそれらの単独の成分よりも優れていたと結論付けることができる。
【０１２３】
実施例１５：  リソバクチン及びネオマイシン三硫酸塩インビボウシデータ  −  黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）による乳牛乳房感染モデル
１５頭の健康な泌乳している乳牛の４つの全ての乳房１／４区域に、乳房炎の病原体である黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）を実験的に感染させた。乳房１／４区域が乳房炎の臨床症状（例えば、腫脹、痛み、乳の異常な稠度）を示したら直ぐに、５０ｍｇの投与量のリソバクチンミグリオールベース懸濁液又は４００ｍｇの投与量のネオマイシン三硫酸塩ミグリオールベース懸濁液又はそれら両方の組み合わせ（即ち、５０ｍｇのリソバクチンと４００ｍｇのネオマイシン三硫酸塩）のいずれかで、処理した。
【０１２４】
さらに、第４の群の乳房１／４区域には、陰性対照としてのミグリオールを投与した。処理は、合計で６０の乳房１／４区域に無作為に割り当てた。処理の直前にチャレンジ微生物について細菌学的に陽性であった乳房１／４区域（ｎ＝４９）のみが、微生物学的及び臨床的治癒の評価に適格であった。罹患した乳房１／４区域を、２４時間の間隔を開けて、これらの乳房内用製剤で２回処理した。乳房を臨床的に調べ、そして、処理前と処理後数回（２回目の投与後、３週間まで）、処理に対して盲検化された研究職員が乳サンプルを採取した。
【０１２５】
乳をその稠度の異常性について視覚的に検査し、そして、サンプルをチャレンジ微生物の存在及び体細胞数について評価して、乳房炎の診断を確認した。処理の直前の乳サンプルの中に見られた黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）が、２回目の処理の後の第３日から第２１日の間の期間内に採取された乳サンプルから単離することができなかった場合、罹患した乳房１／４区域は微生物学的に治癒したとみなした。臨床的な治癒は、乳房炎の局所的な症状が完全に消失した場合に達成され、そして、乳房炎のパラメータとしての体細胞数（ＳＣＣ）の回復は、上記期間において全ての体細胞数が２００．０００細胞／ｍＬ（乳）よりも低いままであった場合に達成された。
【０１２６】
２回目の処理の後の第３日及び第２１日における微生物学的な治癒率は、それぞれ、リソバクチン５０ｍｇについては、７１％及び１４％であり、ネオマイシン三硫酸塩４００ｍｇについては、１００％及び４２％であり、リソバクチン５０ｍｇ＋ネオマイシン三硫酸塩４００ｍｇの組み合わせについては、６９％及び５４％であり、並びに、陰性対照のミグリオールについては、１０％及び３０％であった。
【０１２７】
２回目の処理の後の第３日及び第２１日における局所的な臨床的治癒率は、それぞれ、リソバクチン５０ｍｇについては、７１％及び７１％であり、ネオマイシン三硫酸塩４００ｍｇについては、６７％及び１００％であり、リソバクチン５０ｍｇ＋ネオマイシン三硫酸塩４００ｍｇの組み合わせについては、７７％及び８５％であり、並びに、陰性対照のミグリオールについては、８０％及び７０％であった。
【０１２８】
２回目の処理の後の第３日及び第２１日におけるＳＣＣ回復率は、それぞれ、リソバクチン５０ｍｇについては、３５％及び３６％であり、ネオマイシン三硫酸塩４００ｍｇについては、１７％及び５０％であり、リソバクチン５０ｍｇ＋ネオマイシン三硫酸塩４００ｍｇの組み合わせについては、４６％及び６９％であり、並びに、陰性対照のミグリオールについては、３０％及び３０％であった。
【要約】
本発明は、非ヒト動物におけるグラム陽性菌及びグラム陰性菌に起因する疾患の治療において使用するための、リソバクチンとアミノグリコシド系抗生物質の組み合わせに関する。本発明は、非ヒト動物の乳房炎の治療に関して特に有用であることが分かった。特に、ウシ乳房炎は、本発明により充分に対処することができる。【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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