(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）のコーティングされたクロミウム−コバルト−モリブデンアロイ材料：
［Ａｇ＋−−配位子−−Ａｇ＋］−−［リンカー］−−−−−ＣｒＣｏＭｏ（Ｉ）
式中、
ＣｒＣｏＭｏは、クロミウム、コバルトおよびモリブデンを含むアロイ基材であり、
−−−−は、配位結合または共有結合であり、
−配位子−は、下式のピリジン誘導体であり、
【化１】
0006653327.tif 000010
−リンカー−は、以下の一般式を有する二価の基であり、
【化２】
0006653327.tif 000011
ここで、Ｒは、以下から選択され、
【化３】
0006653327.tif 000012
【化４】
0006653327.tif 000013
【化５】
0006653327.tif 000014
ここで、ｍは２であり、
リンカーの末端芳香族環は、炭素原子の代わりに１個の窒素を含むヘテロ芳香族環であり、
配位子の２個の末端ピリジン窒素原子のそれぞれが、Ａｇ＋イオンに結合し、
リンカーは、ピリジン窒素原子によってＡｇ＋原子に結合し、Ｏ原子またはＳ原子によってＣｒＣｏＭｏ表面に結合する、
アロイ材料。
【請求項２】
ＣｒＣｏＭｏ基材が、２６〜３０％のＣｒ、５〜７％のＭｏ、１％のＮｉ、０．７５％のＦｅ、１％のＭｎ、１％のＳｉ、０．２５％のＮ、０．１４〜０．３５％のＣを含む、請求項１に記載のアロイ材料。
【請求項３】
請求項１または２に記載のアロイ材料の整形外科分野または歯科分野における使用（ただし、人間を適用対象とした使用を除く。）。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載のアロイ材料から作られる整形外科用または歯科用の人工関節。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載のアロイ材料を調製するためのプロセスであって、
（１）被コーティング材料であるＣｒＣｏＭｏアロイ材料の表面をグリットブラスト処理し、制御された粗さを達成する工程と、
（２）アロイ材料をアルカリ洗浄し、乾燥させる工程と、
（３）このように処理されたアロイ材料を酸性不動態化する工程と、
（４）表面にリンカーを配置する工程と、
（５）銀化合物を浸漬コーティングまたは噴霧し、乾燥させる工程と、
（６）多段階で洗浄する工程と、場合により、
（７）包装し、γ線によって殺菌する工程と、
を含む、プロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、銀（Ａｇ＋）錯体誘導体でコーティングされたクロミウム−コバルトモリブデン（ＣｒＣｏＭｏ）アロイから作られる抗菌性表面に関するものである。このようにして得られた表面は、例えば、整形外科用インプラントを調製するため、また、歯科用インプラントを調製するために有用であり得る。
【背景技術】
【０００２】
人工関節周囲の感染は、依然としてインプラント挿入後に起こる危険な結果であり、術中の汚染および血行性の原因によって引き起こされる。細菌は、インプラント表面にコロニーを形成し、免疫監視機構に耐性のあるバイオフィルムを形成する。
【０００３】
このような感染の平均発生率は、臀部および膝の全関節形成術の１％の範囲におさまっている。しかし、インプラントに関連する感染後の再置換から２年以内のさらなる再置換術の場合、可能性は１０％である。この発生率の増加は、関節の再置換（再手術）の間にインプラントを取り出す必要があり、新しいインプラントを埋め込む必要があり、感染のリスクが高まるという事実によって説明することができる。感染の治療によって、長期間の入院、再置換手術が余儀なくされ、時には死に至る場合もある。人工関節周囲の感染を防ぐための戦略は、整形外科用インプラントに抗菌性表面を作成することを伴う。この表面は、
（ａ）細菌付着を防ぎ、その表面が「滑らかである」（例えば、ヒドロゲルコーティング、または欧州特許第２３１８０６０号明細書にあるような架橋したシリコンを含有するコーティング層）、または
（ｂ）表面に到達したとき、細菌を壊す（またはその数を抑制する）ことによってバイオフィルムの形成を阻止する、または
（ｃ）バイオフィルム形成後にバイオフィルムを破壊する
場合に、抗菌効果を有する。
【０００４】
多くの抗菌性コーティングは、銀だけではなく、銅、抗生物質、ペプチド、キトサン、又はこれらの混合物をも含む。
【０００５】
米国特許第２００９０３５３４１号明細書は、例えば、銀、銅および亜鉛、およびこれらの混合物から選択される殺生物剤層を含む、抗菌性で非細胞毒性のコーティング組成物を開示する。
【０００６】
しかし、長期間にわたる移植および滅菌保証に関連する整形外科での厳しい要求は、可能性のあるリストを、主に抗生物質および銀イオンに制限してしまう。例として、チタンインプラント表面にうまく共有結合するゲンタマイシンおよびロバマイシン、ある基材（特に、金およびチタン）のコーティングのために使用されるイソニコチン酸に由来する銀配位網目構造を挙げることができる。
【０００７】
Ｖｉｇ  Ｓｌｅｎｔｅｒｓら（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００８、１８、５３５９−６２）は、整形外科用インプラントとして有用な、チタンまたは金アロイ基材のコーティングのためのある種のイソニコチン酸誘導体の使用を記載する。
【０００８】
Ｓａｇｕｅら（ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２０１０、３、３４０７−２９）は、抗菌性表面を調製するために使用可能な、ある種の他のＩＮＡ（イソニコチン酸）リンカーを記載する。
【０００９】
コーティングされた基材を作成する材料の多様性は、抗菌性人工関節の生体適合性と作用有効性に重要な役割をはたし得る。一般的に、汎用性と製造の容易さから、チタン基材が最も一般的に用いられる材料である。
【００１０】
米国特許第２００６０１６１２５６号明細書は、整形外科での移植に有用な生体適合性のコーティングされた酸化チタン基材を調製するための方法を記載する。
【００１１】
酸化チタンは、この種の用途に有効な基材の代表ではあるが、チタンでコーティングされた人工関節は、予想したほど良好ではない骨結合を示す場合があることを考慮しなければならない。実際に、装着中に、表面から酸化チタンの小さな粒子がはがれ、インプラント付近で炎症が起こることが観察されている。このようにして起こる感染は、抗菌性銀でコーティングされた酸化チタン人工関節の使用に潜在的に関連する一連の問題の１つにすぎない。
【００１２】
従って、整形外科用または外科用の人工関節の調製に使用することができ、非常に生体適合性であり、上に引用した感染を防ぐことができ、そのため、治癒時間を短くし、医療コストを下げる材料を見出すことが必要である。
【００１３】
本願出願人は、クロミウム、コバルトおよびモリブデンで構成されるアロイ（本明細書では、一般的に、Ｃｒ−Ｃｏ−Ｍｏアロイと示す）から作られるという事実を特徴とする銀コーティングされたアロイ材料を用いることによって、上述の問題を克服することができることを発見した。本発明の抗菌性材料は、整形外科分野または外科分野のいずれかで簡便に適用することができ、本明細書に記載する実験の章に示されるような高い安全性と抗菌作用を有する人工関節を実現することができる。
【発明の概要】
【００１４】
一態様において、本発明は、式（Ｉ）のクロミウム−コバルト−モリブデンアロイ（本明細書でＣｒＣｏＭｏと示す）材料に依存し、
［Ａｇ＋−−配位子−−Ａｇ＋］−−［リンカー］−−−−−ＣｒＣｏＭｏ（Ｉ）
式中、
ＣｒＣｏＭｏは、クロミウム、コバルトおよびモリブデンを含むアロイ基材であり、
−−−−は、配位結合または共有結合であり、
−配位子−は、
【００１５】
【化１】
0006653327.tif 000002
から選択される二価の基であり、
ここで、
【００１６】
【化２】
0006653327.tif 000003
ｎ＝１または２であり、
−リンカー−は、
【００１７】
【化３】
0006653327.tif 000004
から選択される二価の基であり、
ここで、
【００１８】
【化４】
0006653327.tif 000005
であり、
リンカーまたは配位子の末端芳香族環は、ヘテロ芳香族環であり、好ましくは、炭素原子の代わりに少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、窒素）を含み、リンカーまたは配位子の末端の環は、場合により、１個以上の−ＮＨ2基で置換されていてもよく、
配位子は、末端芳香族環の少なくとも１個のヘテロ原子によって、好ましくは、ピリジン窒素原子によってＡｇ＋イオンに結合し、リンカーは、１つの末端芳香族環の少なくとも１個のヘテロ原子によって、好ましくは、ピリジン窒素原子によってＡｇ＋原子に結合し、Ｏ、ＮおよびＳから選択される原子によってＣｒＣｏＭｏ表面に結合する。
【００１９】
さらなる態様において、本発明は、上述の材料の整形外科分野または歯科分野における使用に関する。
【００２０】
別の態様において、本発明は、本発明のコーティングされた材料から作られる整形外科用または歯科用の人工関節に関する。
【００２１】
さらなる態様において、本発明は、上述のコーティングされた材料を調製するためのプロセスに関し、このプロセスは、
（１）被コーティング表面であるＣｒＣｏＭｏアロイ表面をグリットブラスト処理し、制御された粗さを達成する工程と、
（２）グリットブラスト処理された表面をアルカリ洗浄し、乾燥させる工程と、
（３）このように処理されたアロイ材料を酸性不動態化する工程と、
（４）イソニコチン酸を用いてリンカーを配置する工程と、
（５）銀化合物を浸漬コーティングまたは噴霧し、乾燥させる工程と、
（６）多段階の生物学的洗浄工程と、場合により、
（７）包装およびγ線による殺菌工程と、を含む。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】実施例３．１のＣｒＣｏＭｏアロイ表面にコーティングされた銀化合物のＸＲＤディフラクトグラム
【図２】実施例３．１のコーティングされたＣｒＣｏＭｏアロイ表面の銀放出プロフィール
【図３】実施例３．１のＳ．ａｕｒｅｕｓ保持量を変えた３種類を用いた、銀化合物でコーティングされたＣｒＣｏＭｏ表面のｉｎ ｖｉｔｒｏでのＫｉｒｂｙ−Ｂａｕｅｒ試験を示す図
【図４】実施例３．２のＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓおよびＳ．ａｕｒｅｕｓの保持量を変えた３種類（１０ｅ＋０４、１０ｅ＋６、１０ｅ＋０７）を用いた、ＣｒＣｏＭｏアロイ表面のｉｎ ｖｉｔｒｏでのＫｉｒｂｙ−Ｂａｕｅｒ試験を示す図
【図５】実施例３．２の２４時間、４８時間および７２時間の培養物で行った、銀化合物でコーティングされたＣｒＣｏＭｏ表面のＭＴＴアッセイに基づくｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞生存率を示す図
【図６】本発明の好ましい実施形態の模式的な代表を示す図
【発明を実施するための形態】
【００２３】
「Ｃ1−Ｃ4Ａｌｋ」という用語は、１〜４個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖の二価アルキル鎖、例えば、−ＣＨ2−、−ＣＨ2−ＣＨ2−などを意味する。
【００２４】
本発明のコーティングされたＣｒＣｏＭｏアロイは、調製が容易であり、高い生体適合性を有し、細菌の成長を阻害することによって人工関節周囲の感染を防ぐように設計された整形外科用人工関節の実現のために特に有用である。
【００２５】
本発明の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の配位子およびリンカー両方の構造において、末端芳香族環は、パラ位がＲ／Ｒ１基で置換されたピリジンである。
【００２６】
さらに詳細には、本発明のＣｒＣｏＭｏアロイは、好ましくは、式（Ｉ）の錯体でコーティングされており、配位子は、上述の式を有し、Ｘ＝酸素である。
【００２７】
ｎ＝２の配位子がさらに好ましい。
【００２８】
さらに好ましい実施形態において、配位子部分は、下式のピリジン誘導体であり、
【００２９】
【化５】
0006653327.tif 000006
または
【００３０】
【化６】
0006653327.tif 000007
ここで、２個の末端ピリジン窒素原子が、それぞれ銀イオン（Ａｇ＋）に結合する。
【００３１】
好ましい実施形態において、本発明のアロイは、一般式：
【００３２】
【化７】
0006653327.tif 000008
のリンカーでコーティングされており、
ここで
【００３３】
【化８】
0006653327.tif 000009
である。
【００３４】
好ましくは、Ｒはパラ位にあり、その環はピリジン環である。
【００３５】
例えば、図６に示す好ましい実施形態で示されるように、上述のＲ基のＣ1−Ｃ4Ａｌｋ基が−ＣＨ2−ＣＨ2−部分であるリンカーが特に好ましい。
【００３６】
本発明のこの実施形態において、二価のリンカーは、その一端がチオール硫黄原子によって表面に結合し、他端がピリジン窒素原子によってＡｇ＋イオンに結合する。一方、配位子は、ピリジン窒素原子によってこの後者のＡｇ＋イオンに結合し、他端でも同様にピリジン窒素原子によって別のＡｇ＋イオンに結合する。
【００３７】
本発明に使用されるＣｒＣｏＭｏアロイは、整形外科用インプラントに従来から使用されているＣｏＣｒＭｏ  ＩＳＯ  ５８３２−１２である。このアロイは、２６〜３０％のＣｒ、５〜７％のＭｏ、１％のＮｉ、０．７５％のＦｅ、１％のＭｎ、１％のＳｉ、０．２５％のＮ、０．１４〜０．３５％のＣを含む。
【００３８】
本発明の一実施形態において、ＣｒＣｏＭｏアロイは、金属フォーム、好ましくは、チタンフォームでコーティングされていてもよく、これらは、当該技術分野で知られている加熱噴霧技術、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｕｒｏｃｏａｔｉｎｇ．ｉｔ／ｐｌａｓｍａ＿ｓｐｒａｙ＿ｃｏａｔｉｎｇｓ／ｇｒｏｗｔｈ／ｄｅｆａｕｌｔ．ａｓｐｘ．からの技術を用い、アロイに適用することができる。
【００３９】
金属コーティングは、アロイを式（Ｉ）の錯体でコーティングする前に適用する。
【００４０】
本発明のアロイ材料は、本明細書に示すような式（Ｉ）の錯体を含む抗菌性組成物で部分的に、または完全にコーティングされてもよい。
【００４１】
「部分的にコーティングされる」とは、アロイ材料が、８０％までの割合のコーティングされた表面を有することを意味し、一方、「完全にコーティングされる」とは、アロイ材料が、その表面の８０〜１００％がコーティングされていることを意味する。
【００４２】
好ましくは、アロイ材料は、その表面の７０〜９０％がコーティングされた表面を有する。
【００４３】
本願出願人は、酸化チタンアロイの使用に関連する主な問題を避けつつ、このようなアロイ組成物を上述のＡｇ＋／リンカー／配位子系を用いて容易に保持させることができることを発見した。
【００４４】
本発明の式（Ｉ）の錯体は、例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００８、１８、５３５９−６２に記載されるように、極性有機溶媒、例えば、低級アルコール（すなわち、炭素原子数が１〜４）、ＴＨＦ、ＣＨ3ＣＮなどの存在下、配位子と適切な銀塩とを混合することによって、調製することができる。
【００４５】
本発明によれば、リンカー部分は、好ましくは共有結合によってＣｒ−Ｃｏ−Ｍｏアロイ表面に結合し、これにより、表面に対する強く耐久性のある接続が可能になる。このようなポリマー網目構造は、その後、銀（Ａｇ＋）イオンの入れ物として作用することができ、安全な濃度で長期間にわたって抗菌レベルのＡｇ＋イオンを放出することができる。この様式で、得られた材料は、光安定性および機械安定性、長期間にわたる抗菌活性、再現性、非毒性および高いバイオインテグレーションを有する。
【００４６】
さらなる態様において、本発明は、整形外科分野または歯科分野において、特に、整形外科用または歯科用のインプラントを調製するための上述のＣｒ−Ｃｏ−Ｍｏアロイでコーティングされた式（Ｉ）の材料の使用に関する。この観点で、本発明の好ましい整形外科用インプラントは、臀部、膝、肩、手首および脊椎から選択される。
【００４７】
有利なことに、このインプラントは、現行の人工関節製造プロセスをほんのわずか改変することによって調製することができ、患者の健康を脅かす影響を与える感染も減る。
【００４８】
本発明は、上述の抗菌性材料を調製するためのプロセスにも関する。本発明の好ましい実施形態において、この製造プロセスは、
（１）コーティングするＣｒＣｏＭｏアロイ表面をグリットブラスト処理し、制御された粗さを達成する工程と、
（２）超音波浴中、エタノールアミンでアルカリ洗浄し、その後、乾燥機で乾燥させ、油性残渣と破片屑を除去する工程と、
（３）クエン酸または硝酸または硫酸を用いて不動態化する工程と、
（４）数時間から５日間かけて、浸漬コーティングまたは噴霧を用いてリンカーを配置する工程と、
（５）浸漬コーティングまたは噴霧の技術を用いて銀化合物を適用する工程と、
（６）
（ａ）メタケイ酸ナトリウムおよびメタケイ酸カリウム、次いで、クエン酸で中和、または
（ｂ）酵素洗浄、次いで、メタケイ酸塩とエタノールアミンで洗浄、または
（ｃ）他の溶媒、例えば、ヒドロフルオロエーテルおよびイソプロピルアルコール蒸気を用いた洗浄
といった、超音波浴中、多段階で洗浄する工程と、
場合により、（７）包装し、γ線（２５Ｋｒａｙ）によって殺菌する工程と、を含む。
【００４９】
コバルトクロミウムモリブデンアロイから作られ、上述のプロセスを用いて製造される整形外科用製品は、使用時に以下の驚くべき特徴を有する。
【００５０】
（ａ）その表面に測定可能な量の銀を含有する。
【００５１】
（ｂ）少なくとも２４日間にわたって、体液に銀イオン（Ａｇ＋）を放出する。
【００５２】
（ｃ）接触点でＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓおよびＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓの細菌成長を阻害する（Ｋｉｒｂｙ−Ｂａｕｅｒ試験）。
【００５３】
（ｄ）リンカー／配位子コーティングが洗浄工程に耐える。
【００５４】
（ｅ）リンカー／配位子コーティングが、γ線による滅菌サイクルに耐える。従来技術は、配位子が、光安定性を示すことを示しているが、γ線滅菌中に照射される２５Ｋｒａｙは、「１０センチメートルの距離で１５ワット球を数ヶ月」で経変する光よりも高い放射エネルギーを有する（例えば、Ｖｉｇ  Ｓｌｅｎｔｅｒｓら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００８、１８、５３５９−６２を参照）。
【００５５】
（ｆ）マウス細胞株（Ｌ−９２９）は、他の銀系化合物に対する他の刊行物と異なり、損傷を受けていない（例えば、Ｐｅｅｔｓｃｈら、ｃｏｌｌｏｉｄ  ｓｕｒｆａｃｅｓ  Ｂ、２０１３、１０２、７２４−２９を参照）。この銀配位網目構造は、水に比較的不溶性であるため、銀イオンの放出を細胞毒性限界未満に保つ。しかし、驚くべきことに、放射線による殺菌の後でさえ、この低い溶解度によって細菌阻害は損なわれない。
【００５６】
ここで、以下の限定されない実験の章を用いて本発明を記載する。
【実施例】
【００５７】
（実験の章）
実施例１：式（Ｉ）の錯体を含む抗菌性組成物の調製（一般的な手順）：
リンカー（Ｌ）ＩＮＡ誘導体（記載した比率Ｍ：Ｌに依存して、１当量または２当量）の溶媒ＴＨＦ溶液を管の片端に入れ、銀塩（ＡｇＸ）のＨ2Ｏ溶液またはＥｔＯＨ溶液またはＣＨ3ＣＮ溶液を他端に入れる。両溶液を凍結させ、拡散溶媒ＴＨＦを加えて両者を接続する。次いで、この管を室温に暗状態で放置し、拡散が起こり得る。
【００５８】
ゆっくりとした拡散：
１当量（または２当量）の銀塩（比率Ｍ：Ｌに依存する）と、１当量の配位子とを、ＣＨ3ＯＨ中、ＴＨＦ中またはＣＨ3ＣＮ中で混合する。室温で約２４時間の間に反応が起こる。溶解度が問題となる場合には、Ｓｃｈｌｅｎｋ管中の反応溶液を環流状態で加熱する。濾過した後、このゆっくりとした拡散方法を使用し、１つの結晶生成物を得る。フラスコの底部に母液が溜まり、これは上述の溶液の全体積の約３０％を示す。フラスコの上部で、溶媒の第２の相（ヘキサン、ＣＨ3ＣＮまたはＴＨＦ）を２相が混合しないように注意深くシリンジで層状に配置する。室温でゆっくりとした拡散を行う。
【００５９】
実施例２：本発明の銀でコーティングされたＣｏ−Ｃｒ−Ｍｏアロイ表面の調製
ＣｏＣｒＭｏ  ＩＳＯ  ５８３２−１２から作られ、直径が１０ｍｍ、厚みが２ｍｍの円形物を、３ミクロンの粗さ因子（Ｒａ）を得るために、アルミナ微小球を用いてその片面をグリットブラスト処理した。これに対し、以下のプロセスパラメータを用い、本発明のコーティング製造プロセスを行った。
【００６０】
−Ｄｅｃｏｎｎｅｘ（ＭＥＡ）を用い、１２分間アルカリ洗浄、
−硝酸（３２％）を用い、室温で１時間不動態化、
−ＩＮＡ（５ｍＭ）リンカーを３時間、５時間、２４時間、１２０時間かけて配置、
−Ｌ１ＡＧ（２ｍＭ）をコーティングし、３時間かけて乾燥を２回、
−ＨＦＥ／ＩＰＡ溶媒洗浄。
【００６１】
この円形物を包装し、γ線によって殺菌した（実施例３．１の結果を参照）か、または殺菌しなかった（実施例３．２の結果を参照）。
【００６２】
実施例３：抗菌活性
実施例２で得た本発明の殺菌した円形物と、殺菌していない円形物に、本明細書で上に示したような分析およびｉｎ ｖｉｔｒｏ分析を行った。
【００６３】
３．１  殺菌していない円形物
（ａ）表面Ｘ線回折（銀化合物でコーティングされたアロイ表面にＸ線回折光を当てた）から、２４時間および１２０時間のリンカー配置で、表面に銀が存在することを確認した（図１を参照）。
【００６４】
（ｂ）ＰＢＳ中のＩＣＰ−ＯＥＳ（誘導結合プラズマ発光分析）測定（銀化合物でコーティングされたアロイ表面をＰＢＳ溶液に所定期間浸した後、別のＰＢＳ溶液に以下の期間入れる。それぞれの表面から除去した溶液を、硝酸を含む水で希釈し、測定した）は、少なくとも２４日間、Ａｇ＋イオンの放出を示した（図２を参照）。
【００６５】
（ｃ）ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＫｉｒｂｙ−Ｂａｕｅｒ試験（コーティングされたアロイ表面を、異なる保持量の細菌を含むＭｕｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ  Ａｇａｒ混合物を層状にしたペトリ皿に入れ、３７℃で２４時間インキュベートした後、細菌が成長しなかった阻害ゾーンの出現で抗菌活性を確認した）は、２４時間および１２０時間のリンカー配置でＳ．ａｕｒｅｕｓについて阻害ゾーン（Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  Ｚｏｎｅ）を示した（図３を参照）。
【００６６】
３．２  殺菌した円形物
−ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＫｉｒｂｙ−Ｂａｕｅｒ細菌阻害試験をＳ．ａｕｒｅｕｓ株およびＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ株を用い、殺菌後のＣｏＣｒＭｏ円形物を用いて行った。驚くべきことに、多くの処理（洗浄および殺菌）をこれらの円形物に行ったにもかかわらず、両菌株を用いて大きな阻害ゾーンを示した（図４を参照）。
【００６７】
−Ｌ−９２９細胞株は、光学密度によって測定した場合（細胞生存率は、テトラゾリウム染料ＭＴＴを、紫色を与える不溶性のホルマザンに還元する細胞酵素の活性を測定する比色ＭＴＴ系アッセイで評価した。銀化合物でコーティングされたアロイ表面を、細胞接種前に培地中であらかじめインキュベートし、培養２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後、１２０時間後に、それぞれの表面に３７℃で３時間かけてＭＴＴ試薬を加え、光学分光法で検出可能なホルマザンを生成させた）、３日後および５日後に、両表面で依然として生存している（図５を参照）。
【００６８】
この結果は、他の銀コーティングした材料について行われた他の試験が顕著な細胞毒性を示すのに対し、驚くべきことである（例えば、Ａ．Ｐｅｅｔｓｃｈら、Ｃｏｌｌｏｉｄ  Ｓｕｒｆａｃｅｓ  Ｂ、２０１３、１０２：７２４−７２９およびＣ．Ｇｒｅｕｌｉｃｈら、Ｌａｎｇｅｎｂｅｃｋｓ  Ａｒｃｈ  Ｓｕｒｇ、２００９、３９４：４９５−５０２を参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００６９】
【特許文献１】欧州特許第２３１８０６０号明細書
【特許文献２】米国特許第２００９０３５３４１号明細書
【特許文献３】米国特許第２００６０１６１２５６号明細書
【非特許文献】
【００７０】
【非特許文献１】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００８、１８、５３５９−６２
【非特許文献２】ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２０１０、３、３４０７−２９
【非特許文献３】Ｃｏｌｌｏｉｄ  ｓｕｒｆａｃｅｓ  Ｂ、２０１３、１０２、７２４−７２９
【非特許文献４】Ｌａｎｇｅｎｂｅｃｋｓ  Ａｒｃｈ  Ｓｕｒｇ、２００９、３９４：４９５−５０２
【図１】
0006653327.tif 000015
【図２】
0006653327.tif 000016
【図３】
0006653327.tif 000017
【図４】
0006653327.tif 000018
【図５】
0006653327.tif 000019
【図６】
0006653327.tif 000020