(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ１２３に特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、
ａ．配列番号０１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号０１４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、配列番号０１５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０１６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０１７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、又は
ｂ．配列番号０５１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０５２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号０５３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、配列番号０２４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０２５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０５４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を有する重鎖及び軽鎖を含む、抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
前記抗体の重鎖は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖は、配列番号１６５のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
【請求項３】
前記抗体の重鎖は、配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖は、配列番号１６８のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
【請求項４】
前記抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４のアイソタイプである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
【請求項５】
第１の重鎖（ＨＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、該ＨＣ１と該ＬＣ１とが対を成して、ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、該ＨＣ２と該ＬＣ２とが対を成して、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成する、単離されたＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメントであって、
ｉ）ＨＣ１及びＬＣ１は、以下の対：
ａ．配列番号２０３及び配列番号２０４、又は
ｂ．配列番号２０５及び配列番号２０６のいずれかをそれぞれ含み、かつ、
ｉｉ）ＨＣ２及びＬＣ２は、以下の対：
ａ．配列番号１９３及び配列番号１９４、
ｂ．配列番号１９５及び配列番号１９６、
ｃ．配列番号１９７及び配列番号１９８、
ｄ．配列番号１９９及び配列番号２００、又は
ｅ．配列番号２０１及び配列番号２０２のいずれかをそれぞれ含む、二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメント。
【請求項６】
ＨＣ１は、配列番号２０３を含み、ＬＣ１は、配列番号２０４を含み、ＨＣ２は、配列番号１９３を含み、ＬＣ２は、配列番号１９４を含む、請求項５に記載の二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメント。
【請求項７】
ＨＣ１は、配列番号２０５を含み、ＬＣ１は、配列番号２０６を含み、ＨＣ２は、配列番号１９３を含み、ＬＣ２は、配列番号１９４を含む、請求項５に記載の二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメント。
【請求項８】
ａ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する一対の重鎖及び軽鎖であって、前記重鎖は、配列番号１８４を含み、前記軽鎖は、配列番号１９０を含む、一対の重鎖及び軽鎖と、
ｂ．ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する一対の重鎖及び軽鎖であって、
ｉ．前記重鎖は、配列番号１２０を含み、前記軽鎖は、配列番号１６５を含むか、又は
ｉｉ．前記重鎖は、配列番号１３６を含み、前記軽鎖は、配列番号１６８を含む、一対の重鎖及び軽鎖と、を含む、二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメント。
【請求項９】
単離されたＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又はＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメントであって、
ａ）第１の重鎖（ＨＣ１）；
ｂ）第２の重鎖（ＨＣ２）；
ｃ）第１の軽鎖（ＬＣ１）；及び
ｄ）第２の軽鎖（ＬＣ２）
を含み、ここで、前記ＨＣ１と前記ＬＣ１とが対を成して、ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、前記ＨＣ２と前記ＬＣ２とが対を成して、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、
ａ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する前記一対の重鎖および軽鎖において、該重鎖（ＨＣ２）は配列番号１８４を含み、該軽鎖（ＬＣ２）は配列番号１９０を含み、かつ、
ｂ．ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する前記一対の重鎖および軽鎖において、
ｉ．該重鎖（ＨＣ１）は配列番号１２０を含み、該軽鎖（ＬＣ１）は配列番号１６５を含むか、又は
ｉｉ．該重鎖（ＨＣ１）は配列番号１３６を含み、該軽鎖（ＬＣ１）は配列番号１６８を含む、
単離されたＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又はＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体又は抗体フラグメント又は請求項５〜９のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントを発現している、単離された細胞。
【請求項１１】
がんを処置するための医薬組成物であって、
請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体又は抗体フラグメント又は請求項５〜９のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントを含む、医薬組成物。
【請求項１２】
がん細胞の成長又は増殖を阻止するための医薬組成物であって、前記医薬組成物は、請求項５〜９のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントを含み、
治療的に有効な量の、請求項５〜９のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントを投与して、該がん細胞の成長又は増殖を阻止する工程を含む、方法において使用される、医薬組成物。
【請求項１３】
Ｔ細胞をＣＤ１２３発現がん細胞に向け直すための医薬組成物であって、前記医薬組成物は、請求項５〜９のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントを含み、
治療的に有効な量の、請求項５〜９のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントを投与して、Ｔ細胞をがんに向け直す工程を含む、方法において使用される、医薬組成物。
【請求項１４】
請求項５〜９のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントと、医薬的に許容され得る担体と、を含む、医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体又は抗体フラグメント又は請求項５〜９のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントをコードする、単離された合成ポリヌクレオチド。
【請求項１６】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体又は抗体フラグメント又は請求項５〜９のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントと、同抗体又はフラグメントのための包装と、を含む、キット。
【請求項１７】
前記二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントは、ＣＤ１２３  ＳＰ２（ＩＬ−３Ｒａ）及びＣＤ１２３  ＳＰ１（ＩＬ３Ｒａ）に免疫特異的に結合する、請求項５〜９のいずれか一項に記載の二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書で提供される開示は、（ＣＤ１２３、ＩＬ−３Ｒαとしても既知の）分化抗原群１２３に免疫特異的に結合するモノクローナル抗体に関し、ＣＤ１２３及び分化抗原群３（ＣＤ３）に免疫特異的に結合する多重特異性抗体、並びに記載された抗体を生成及び使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
およそ３分毎に、血液がんが新たに診断されている。最も一般的な血液がんは、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫であり、２０１４年に米国において新たに診断された人々は１５６，４２０名を占めるであろう。およそ１０分毎に、米国の誰かが血液がんで死亡している。血液がんは、骨髄、血球、リンパ節、及びリンパ系の他の部分に影響を及ぼし得る疾患である。これらのがんは、若者を過度に標的にし、白血病は、小児及び２０歳未満の若者において、最も一般的な種類のがんである。
【０００３】
ある種の血液がん細胞は、ＣＤ１２３（ＩＬ−３Ｒα）として既知の細胞マーカーを発現する。ＣＤ１２３を発現する血液がん細胞の例には、芽細胞及び白血病の幹細胞が挙げられる。ＣＤ１２３の発現に関連付けられる疾患には、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、低リスク及び高リスク）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ、全てのサブタイプ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm）（ＤＰＤＣＮ）が挙げられる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
現在、これらの疾患の処置には、研究及び臨床試験中のものも含めて、５０を超える個々の薬剤が挙げられる。放射線療法（ＲＴ）もまた、血液がんを処置するのに一般的に使用されており、薬物療法と共に行われる場合もある。免疫療法、遺伝子治療、及び個別化医療もまた使用されている。しかしながら、これらの治療は、著しい副作用及び有害反応を有する場合がある。このため、ＣＤ１２３（ＩＬ−３Ｒα）発現血液がんのための新たな、改善された処置に対する必要性が存在している。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本明細書において、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する抗体及びその抗原結合フラグメントが提供される。また、提供されたＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントをコード可能な関連するポリヌクレオチド、提供された抗体及び抗原結合フラグメントを発現している細胞、並びに関連するベクター、並びに検出可能に標識された抗体及び抗原結合フラグメントもまた記載されている。加えて、提供された抗体及び抗原結合フラグメントを使用する方法が記載されている。例えば、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントを使用して、ＣＤ１２３発現がんの進行、退行、又は安定性を診断若しくはモニタし、患者ががんを処置されるべきか否かを判定し、又は対象がＣＤ１２３発現がんに苦しんでいるため、ＣＤ１２３特異性抗がん治療剤、例えば、本明細書に記載されたＣＤ１２３及びＣＤ３に対する多重特異性抗体による処置を受けることができるか否かを判定することができる。
【０００６】
本明細書において、ＣＤ１２３及びＣＤ３に免疫特異的に結合する多重特異性抗体及びその多重特異性抗原結合フラグメントが更に提供される。提供されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体をコード可能な関連するポリヌクレオチド、提供された抗体を発現している細胞、並びに関連するベクター、並びに検出可能に標識された多重特異性抗体もまた記載されている。加えて、提供された多重特異性抗体を使用する方法が記載されている。例えば、ＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体を使用して、ＣＤ１２３発現がんの進行、退行、又は安定性を診断若しくはモニタし、患者ががんを処置されるべきか否かを判定し、又は対象がＣＤ１２３発現がんに苦しんでいるため、ＣＤ１２３特異性抗がん治療剤、例えば、本明細書に記載されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体による処置を受けることができるか否かを判定することができる。
【０００７】
ＣＤ１２３特異性抗体
本明細書において、ＣＤ１２３に特異的な抗体及び抗原結合フラグメントが記載されている。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、ヒトＣＤ１２３  ＳＰ１（配列番号１）に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、ヒトＣＤ１２３  ＳＰ２（配列番号２）に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、ヒトＣＤ１２３  ＳＰ１及びＳＰ２に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、ヒトＣＤ１２３  ＳＰ１及びカニクイザルＣＤ１２３（配列番号３）に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、（ｉ）残基１９５〜２０２（ＲＡＲＥＲＶＹＥ（配列番号２３４））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２細胞外ドメイン（ＥＣＤ）のセグメント及び／若しくは残基１５６〜１６１（ＲＫＦＲＹＥ（配列番号２３２））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメント及び／若しくは残基１７３〜１７８（ＴＥＱＶＲＤ（配列番号２３３））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメント、又は（ｉｉ）残基１６４〜１７５（ＩＱＫＲＭＱＰＶＩＴＥＱ（配列番号２２８））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメント及び／若しくは残基１８４〜１８９（ＬＬＮＰＧＴ（配列番号２２９））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメントからの１種又は２種以上の残基を含むエピトープに結合する。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。
【０００８】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、（ｉ）残基１９５〜２０２（ＲＡＲＥＲＶＹＥ（配列番号２３４））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメント、又は（ｉｉ）残基１６４〜１７５（ＩＱＫＲＭＱＰＶＩＴＥＱ（配列番号２２８））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメントからの１種又は２種以上の残基を含むエピトープに結合するＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントと、ＣＤ１２３に対する結合について競合する。これらのエピトープ中の少なくとも１種の残基に結合する抗体又はフラグメントはまた、（ｉ）残基１５６〜１６１（ＲＫＦＲＹＥ（配列番号２３２））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメント及び／若しくは残基１７３〜１７８（ＴＥＱＶＲＤ（配列番号２３３））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメントからの１つ若しくはそれ以上の残基、又は（ｉｉ）残基１８４〜１８９（ＬＬＮＰＧＴ（配列番号２２９））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメントからの１つ若しくはそれ以上の残基を含むＣＤ１２３  ＥＣＤ中の更なる残基に結合することができる。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。
【０００９】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメント、例えば、先の２つの段落で検討されたものは、中和抗体である。中和性のＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ｒｈＩＬ−３によるＴＦ−１細胞の刺激時のＳＴＡＴ５リン酸化の減少を測定することにより決定された場合、ＩＬ−３のＣＤ１２３への結合を阻害可能であるものを含む。
【００１０】
一部の実施形態では、ＣＤ３１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、ＣＤ１２３（ＩＬ３Ｒａ）／ＣＤ１３１（ＩＬ３Ｒｂ）受容体へのＩＬ−３結合を妨げ得る。他の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩＬ３Ｒ受容体のα鎖及びβ鎖（ＣＤ１２３（ＩＬ３Ｒａ）／ＣＤ１３１（ＩＬ３Ｒｂ））の会合を妨げ得る。抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩＬ３の結合を阻害可能であり、かつ／又はＣＤ１２３とＣＤ１３１との間の会合の低下を測定し、増大した抗体濃度によりヘテロマー化（heteromerization）の低下を測定することにより決定された場合、ＣＤ１２３／ＣＤ１３１のヘテロマー化を阻害可能であるものを含む。表１に、本明細書に記載された一部のＣＤ１２３特異性抗体の例の概要を提供する。
【００１１】
【表１−１】
0006805130.tif 000002
【００１２】
【表１−２】
0006805130.tif 000003
【００１３】
一部の実施形態では、表１に記載された抗体のうちいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖を含む、ＣＤ１２３特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。一部の実施形態では、表１に記載された抗体のうちいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖と、表１に記載された抗体のうちいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖と、を含む、ＣＤ１２３特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。本明細書に記載された一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、表１に記載された抗体のうちいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖と、表１に記載された抗体のうちいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖と、を含む抗体又は抗原結合と、ＣＤ１２３に対する結合について競合する。
【００１４】
ＩｇＧクラスは、ヒトにおいて、４つのアイソタイプ：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４に分割される。これらのアイソタイプは、Ｆｃ領域のアミノ酸配列において、９５％超の相同性を共有するが、ヒンジ領域のアミノ酸組成及び構造において、主な差異を示す。Ｆｃ領域は、エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を媒介する。ＡＤＣＣにおいて、抗体のＦｃ領域は、免疫エフェクター細胞、例えば、ナチュラルキラー及びマクロファージの表面上のＦｃ受容体（ＦｃｇＲ）に結合する。同免疫エフェクター細胞は、標的細胞の貪食又は溶解をもたらす。ＣＤＣにおいて、抗体は、標的細胞を、細胞表面における補体カスケードをトリガーすることにより殺傷する。本明細書に記載された抗体は、ＩｇＧアイソタイプのいずれかとの組み合わせで、可変ドメインの記載された特徴を有する抗体を含む。同ＩｇＧアイソタイプは、Ｆｃ配列が異なるエフェクター機能をもたらすために改変されている改変版を含む。
【００１５】
治療抗体の多くの用途について、Ｆｃ媒介性エフェクター機能は、作用のメカニズムの一部ではない。これらのＦｃ媒介性エフェクター機能は、オフメカニズムの毒性（off-mechanism toxicity）を引き起こすことにより、有害であるおそれがあり、安全性リスクを引き起こすおそれがある。エフェクター機能を改変することは、Ｆｃ領域を遺伝子操作して、ＦｃｇＲ又は補体因子への結合性を低下させることにより達成され得る。活性化（ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ、ＦｃｇＲＩＩＩａ、及びＦｃｇＲＩＩＩｂ）及び阻害性（ＦｃｇＲＩＩｂ）ＦｃｇＲ又は補体の第１のコンポーネント（Ｃ１ｑ）へのＩｇＧの結合性は、ヒンジ領域及びＣＨ２ドメイン中に位置する残基により決まる。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４に変異が導入されて、Ｆｃ機能を低下又はサイレンシングさせる。本明細書に記載された抗体は、これらの改変を含んでもよい。
【００１６】
一実施形態において、抗体は、下記特性：（ａ）親Ｆｃと比較した場合、低下したエフェクター機能、（ｂ）ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ、ＦｃｇＲＩＩｂ、ＦｃｇＲＩＩＩｂ、及び／又はＦｃｇＲＩＩＩａに対する低下した親和性、（ｃ）ＦｃｇＲＩに対する低下した親和性、（ｄ）ＦｃｇＲＩＩａに対する低下した親和性、（ｅ）ＦｃｇＲＩＩｂに対する低下した親和性、（ｆ）ＦｃｇＲＩＩＩｂに対する低下した親和性、又は（ｇ）ＦｃｇＲＩＩＩａに対する低下した親和性のうち１つ又は２つ以上を有するＦｃ領域を含む。
【００１７】
一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ又はその誘導体、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のアイソタイプである。抗体がＩｇＧ１アイソタイプを有する一部の実施形態では、抗体は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／又はＫ４０９Ｒ置換を、そのＦｃ領域中に含有する。抗体がＩｇＧ４アイソタイプを有する一部の実施形態では、抗体は、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換を、そのＦｃ領域中に含有する。本明細書に記載された抗体は、これらの改変を含んでもよい。
【００１８】
一部の実施形態では、記載された抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定された場合、５ｎＭ以下の解離定数で、ＣＤ１２３に結合可能である。一部の実施形態では、抗体は、上記表１で表わされた抗体のＣＤＲを含む。ＳＰＲにより親和性を測定するためのアッセイとしては、ＢＩＡｃｏｒｅ  ３０００又はＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００機器を使用して行われるアッセイが挙げられる。この場合、このアッセイは、室温（例えば、２５℃又は２５℃付近）で行われる。ＣＤ１２３に結合可能な抗体は、ＢＩＡｃｏｒｅセンサチップ上に、抗Ｆｃ抗体（例えば、ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異性抗体、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｐｒｏｄ＃１０９−００５−０９８）により、７５ＲＵ付近のレベルで捕捉され、続けて、４０μＬ／分の流量において、会合及び解離データが収集される。
【００１９】
記載されたＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントに加えて、記載された抗体及び抗原結合フラグメントをコード可能なポリヌクレオチド配列もまた提供される。記載されたポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供される。同様に、本明細書で提供されたＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントを発現している細胞が提供される。また、開示されたベクターを発現可能な細胞も記載されている。これらの細胞は、哺乳類細胞（例えば、２９３Ｆ細胞、ＣＨＯ細胞）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ７細胞）、酵母細胞、植物細胞、又は細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）でもよい。記載された抗体はまた、ハイブリドーマ細胞により生成することができる。
【００２０】
ＣＤ１２３特異性抗体を使用する方法
記載されたＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントを使用する方法もまた開示されている。このセクションで検討される方法において使用するための特定の抗体は、上記表１中の抗体について記載されたＣＤＲのセットを有するもの、又は表１中の抗体のうち１つとＣＤ１２３に対する結合について競合する抗体を含む。例えば、これらの抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩＬ−３がＩＬ−３Ｒに結合するのを妨げることによりＩＬ−３の生物学的作用を阻害することにより、がんを処置するのに有用であり得る。すなわち、抗体が毒物にコンジュゲートされ、この毒物をＣＤ１２３発現がんに標的化する。更に、これらの抗体又は抗原結合フラグメントは、生体サンプル、例えば、血液又は血清中におけるＣＤ１２３の存在を検出するのに、生体サンプル、例えば、血液又は血清中におけるＣＤ１２３の量を定量するのに、ＣＤ１２３発現がんを診断し、がんで苦しむ対象を処置する方法を決定し、又は対象におけるＣＤ１２３発現がんの進行をモニタするのに、有用であり得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３発現がんは、血液がん、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、低リスク又は高リスク）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ、全てのサブタイプを含む）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）であり得る。記載された方法は、対象がＣＤ１２３発現がんの処置、例えば、ＣＤ１２３及びＣＤ３に対する多重特異性抗体による処置を受ける前に行われてもよい。更に、記載された方法は、対象がＣＤ１２３発現がんの処置、例えば、本明細書に記載されたＣＤ１２３及びＣＤ３に対する多重特異性抗体による処置を受けた後に行われてもよい。
【００２１】
生体サンプル中のＣＤ１２３を検出する記載された方法は、生体サンプルを、本明細書に記載されたＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントのうち１つ又は２つ以上に曝すことを含む。
【００２２】
また、対象におけるＣＤ１２３発現がんを診断する記載された方法は、生体サンプルを、本明細書に記載されたＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントのうち１つ又は２つ以上に曝すことを伴う。ただし、この方法は、サンプル中に存在するＣＤ１２３の量を定量する工程と、サンプル中に存在するＣＤ１２３の量を、既知の標準又は参照サンプルと比較する工程と、対象のＣＤ１２３レベルががんに関連付けられるＣＤ１２３のレベル内に入るかどうかを判定する工程と、を含む。
【００２３】
本明細書において、対象中のＣＤ１２３発現がんをモニタする方法もまた記載されている。記載された方法は、生体サンプルを、本明細書に記載されたＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントのうち１つ又は２つ以上に曝す工程と、抗体又はその抗原結合フラグメントに結合したサンプル中に存在するＣＤ１２３の量を定量する工程と、サンプル中に存在するＣＤ１２３の量を、既知の標準若しくは参照サンプル、又は対象から以前に得られた類似するサンプル中のＣＤ１２３の量のいずれか一方と比較する工程と、比較されたサンプル中のＣＤ１２３の量における差異に基づいて、対象のＣＤ１２３レベルががんの進行、退行、又は不変を示すかどうかを判定する工程と、を含む。
【００２４】
対象から得られ、又は同対象に由来するサンプルは、生体サンプル、例えば、尿、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環細胞、組織会合していない循環腫瘍細胞、組織、外科手術的に切除された腫瘍組織、生検、微小針吸引サンプル、又は組織学的調製物である。
【００２５】
記載されたＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、記載された方法又は当業者に既知の他の方法での使用のために標識されてもよい。例えば、本明細書に記載された抗体又はその抗原結合フラグメントは、放射線標識、蛍光標識、エピトープタグ、ビオチン、発色団標識、ＥＣＬ標識、酵素、ルテニウム、111Ｉｎ−ＤＯＴＡ、111Ｉｎ−ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、及びベータガラクトシダーゼ、若しくはポリヒスチジン、又は当技術分野において既知の類似するこのような標識で標識されてもよい。
【００２６】
ＣＤ１２３特異性抗体キット
開示されたＣＤ１２３特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを含むキットが本明細書において記載されている。記載されたキットを使用して、本明細書で提供されたＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントを使用する方法、又は当業者に既知の他の方法を行うことができる。一部の実施形態では、記載されたキットは、本明細書に記載された抗体又は抗原結合フラグメントと、生体サンプル中のＣＤ１２３の存在を検出する際の使用のための試薬と、を含んでもよい。したがって、記載されたキットは、本明細書に記載された抗体又はその抗原結合フラグメントのうち１つ又は２つ以上と、使用していない時に抗体又はフラグメントを収容するための容器と、抗体又はフラグメントの使用のための取扱説明書と、本明細書に記載されたとおり、固体支持体に固定された抗体若しくはフラグメント及び／又は検出可能に標識された形態の抗体若しくはフラグメントを含んでもよい。
【００２７】
ＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体
本明細書において、ＣＤ１２３及びＣＤ３に結合する、単離された多重特異性抗体（「ＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体」）及びその多重特異性抗原結合フラグメントが記載されている。一部の実施形態では、ＣＤ１２３  ＳＰ２（ＩＬ３−Ｒα）及びＣＤ１２３  ＳＰ１（ＩＬ３−Ｒα）に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。
【００２８】
一部の実施形態では、多重特異性抗体のＣＤ１２３特異性アームは、ヒトＣＤ１２３及び／又はカニクイザルＣＤ１２３に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体又は抗原結合フラグメントのＣＤ１２３特異性アームは、ヒトＣＤ１２３のＳＰ１及び／又はＳＰ２フラグメントに結合する。好ましい実施形態では、ＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントである。一部の実施形態では、ａ）第１の重鎖（ＨＣ１）と、ｂ）第２の重鎖（ＨＣ２）と、ｃ）第１の軽鎖（ＬＣ１）と、ｄ）第２の軽鎖（ＬＣ２）と、を含み、ＨＣ１とＬＣ１とが対を成して、ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２とＬＣ２とが対を成して、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成する、単離されたＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体、又はそのＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性結合フラグメントが提供される。別の実施形態では、抗体又は二重特異性結合フラグメントを発現している単離された細胞が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体のＣＤ１２３結合アーム（又は「ＣＤ１２３特異性アーム」）は、本明細書に記載されたＣＤ１２３抗体から（例えば、表１で列記されたＣＤＲ配列を有する抗体から）得られる。
【００２９】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体又は抗原結合フラグメントのＣＤ１２３特異性アームは、ＩｇＧ又はその誘導体である。一部の実施形態では、記載されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体は、表面プラズモン共鳴又はＭＳＤ−ＣＡＴにより測定された場合、５ｎＭ以下の解離定数で、ＣＤ１２３に結合可能である。
【００３０】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体のＣＤ３結合アーム（又は「ＣＤ３特異性アーム」）は、マウスモノクローナル抗体ＳＰ３４、マウスＩｇＧ３／ラムダアイソタイプから得られる（Ｐｅｓｓａｎｏ，Ｓ．，ｅｔａｌ，１９９５．ＥＭＢＯ  Ｊ．４，３３７〜３４４）。一部の実施形態では、ＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体のＣＤ３結合アームは、表２から選択された１つのＶＨドメイン及び１つのＶＬドメインを含む。表２は、ＣＤ３特異性抗体及び抗原結合フラグメントの重鎖及び軽鎖の一部の例の概要を提供する。
【００３１】
【表２】
0006805130.tif 000004
【００３２】
一部の実施形態では、ＣＤ３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、表３からの重鎖と、表３からの軽鎖と、を含む。表３は、ＣＤ３特異性抗体及び抗原結合フラグメントの重鎖及び軽鎖のマトリクスの概要を提供する。
【００３３】
【表３】
0006805130.tif 000005
【００３４】
ＩｇＧクラスは、ヒトにおいて、４つのアイソタイプ：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４に分割される。これらのアイソタイプは、Ｆｃ領域のアミノ酸配列において、９５％超の相同性を共有するが、ヒンジ領域のアミノ酸組成及び構造において、主な差異を示す。Ｆｃ領域は、エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を媒介する。ＡＤＣＣにおいて、抗体のＦｃ領域は、免疫エフェクター細胞、例えば、ナチュラルキラー及びマクロファージの表面上のＦｃ受容体（ＦｃｇＲ）に結合する。同免疫エフェクター細胞は、標的細胞の貪食又は溶解をもたらす。ＣＤＣにおいて、抗体は、標的細胞を、細胞表面における補体カスケードをトリガーすることにより殺傷する。
【００３５】
治療抗体の多くの用途について、Ｆｃ媒介性エフェクター機能は、作用のメカニズムの一部ではない。これらのＦｃ媒介性エフェクター機能は、オフメカニズムの毒性を引き起こすことにより、有害であるおそれがあり、安全性リスクを引き起こすおそれがある。エフェクター機能を改変することは、Ｆｃ領域を遺伝子操作して、ＦｃｇＲ又は補体因子への結合性を低下させることにより達成され得る。活性化（ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ、ＦｃｇＲＩＩＩａ、及びＦｃｇＲＩＩＩｂ）及び阻害性（ＦｃｇＲＩＩｂ）ＦｃｇＲ又は補体の第１のコンポーネント（Ｃ１ｑ）へのＩｇＧの結合性は、ヒンジ領域及びＣＨ２ドメイン中に位置する残基により決まる。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４に変異が導入されて、Ｆｃ機能を低下又はサイレンシングさせる。サイレンシング変異としては、ＩｇＧ１  ＡＡ（Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）又はＩｇＧ４  ＰＡＡ（Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）又はＩｇＧ２  ＡＡ（Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ）又はＩｇＧ１  ＦＥＡ（Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ）又はＩｇＧ１  ＦＥＳ（Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ）を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００３６】
一実施形態において、抗体は、下記特性：（ａ）親Ｆｃと比較した場合、低下したエフェクター機能、（ｂ）ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ、ＦｃｇＲＩＩｂ、ＦｃｇＲＩＩＩｂ、及び／又はＦｃｇＲＩＩＩａに対する低下した親和性、（ｃ）ＦｃｇＲＩに対する低下した親和性、（ｄ）ＦｃｇＲＩＩａに対する低下した親和性、（ｅ）ＦｃｇＲＩＩｂに対する低下した親和性、（ｆ）ＦｃｇＲＩＩＩｂに対する低下した親和性、又は（ｇ）ＦｃｇＲＩＩＩａに対する低下した親和性のうち１つ又は２つ以上を有するＦｃ領域を含む。
【００３７】
一部の実施形態では、多重特異性抗体のＣＤ３特異性アームが得られるＣＤ３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ又はその誘導体である。一部の実施形態では、多重特異性抗体のＣＤ３特異性アームが得られるＣＤ３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１又はその誘導体である。一部の実施形態では、例えば、ＣＤ３結合アームが得られるＣＤ３特異性ＩｇＧ１抗体のＦｃ領域は、そのＦｃ領域中に、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ置換を含む。一部の実施形態では、多重特異性抗体のＣＤ３特異性アームが得られるＣＤ３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４又はその誘導体である。一部の実施形態では、例えば、ＣＤ３結合アームが得られるＣＤ３特異性ＩｇＧ４抗体のＦｃ領域は、そのＦｃ領域中に、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及びＲ４０９Ｋ置換を含む。一部の実施形態では、多重特異性抗体のＣＤ３特異性アームが得られるＣＤ３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ−ＡＡ  Ｆｃである。一部の実施形態では、多重特異性抗体のＣＤ３特異性アームが得られるＣＤ３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ−ＡＡ  Ｆｃ−Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ（ここで、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌは変異である）である。一部の実施形態では、多重特異性抗体のＣＤ３特異性アームが得られるＣＤ３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、初代ヒトＴ細胞及び／又は初代カニクイザルＴ細胞上のＣＤ３εに結合する。一部の実施形態では、多重特異性抗体のＣＤ３特異性アームが得られるＣＤ３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、初代ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又は初代カニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化する。一部の実施形態では、記載されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体は、既知の親和性を有する標識化抗ＣＤ３抗体との結合の競合により決定された場合、５００ｎＭ未満又は１００ｎＭ未満又は２０ｎＭ未満の解離定数で、ヒト又はカニクイザルのＴ細胞上のＣＤ３に結合可能である。
【００３８】
記載されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体に加えて、記載されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体をコード可能なポリヌクレオチド配列もまた提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントのＨＣ１、ＨＣ２、ＬＣ１、又はＬＣ２をコードする単離された合成ポリヌクレオチドが提供される。記載されたポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供され、同様に、本明細書で提供されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体を発現している細胞も提供される。開示されたベクターを発現可能な細胞もまた記載される。これらの細胞は、哺乳類細胞（例えば、２９３Ｆ細胞、ＣＨＯ細胞）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ７細胞）、酵母細胞、植物細胞、又は細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）でもよい。記載された抗体はまた、ハイブリドーマ細胞により生成することができる。一部の実施形態では、細胞を培養することにより、ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントを生成するための方法が提供される。
【００３９】
本明細書において、ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３多重特異性抗体又は抗原結合フラグメントと、医薬的に許容され得る担体とを含む医薬組成物が更に提供される。
【００４０】
ＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体を使用する方法
記載されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体及びその多重特異性抗原結合フラグメントを使用する方法もまた開示される。例えば、ＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体及びその多重特異性抗原結合フラグメントは、それを必要とする対象における、ＣＤ１２３発現がんの処置に有用であり得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３発現がんは、血液がん、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、低リスク又は高リスク）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ、全てのサブタイプを含む）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である。
【００４１】
ＣＤ１２３発現がんの処置を、それを必要とする対象において行う記載された方法は、この対象に、治療的に有効な量の記載されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体又はその多重特異性抗原結合フラグメントを投与する工程を含む。一部の実施形態では、対象は、哺乳類、好ましくは、ヒトである。好ましい実施形態では、治療的に有効な量のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントを、それを必要とする患者に、がんを処置するのに十分な時間投与することにより、がんを有する対象を処置するための方法が提供される。
【００４２】
がん細胞の成長又は増殖を阻害するために、治療的に有効な量のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントを投与することにより、がん細胞の成長又は増殖を阻害するための方法が更に提供される。
【００４３】
また、本明細書において、Ｔ細胞をがんに向け直す（redirect）ために、治療的に有効な量のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントを投与することにより、Ｔ細胞をＣＤ１２３発現がん細胞に向け直す方法もまた提供される。
【００４４】
ＣＤ１２３×ＣＤ３特異性抗体キット
本明細書において、開示されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体を含むキットが記載されている。記載されたキットを使用して、本明細書で提供されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体を使用する方法又は当業者に既知の他の方法を行うことができる。一部の実施形態では、記載されたキットは、本明細書に記載された抗体と、ＣＤ１２３発現がんを処置する際の使用のための試薬と、を含んでもよい。したがって、記載されたキットは、本明細書に記載された多重特異性抗体又はその多重特異性抗原結合フラグメントのうち１つ若しくは２つ以上、使用していない時に抗体又はフラグメントを収容するための容器、並びに／又は抗体若しくはフラグメントの使用のための取扱説明書、本明細書に記載されたとおりの、固体支持体に固定された抗体若しくはフラグメント及び／若しくは検出可能に標識された形態の抗体若しくはフラグメントを含んでもよい。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】ＣＤ１２３細胞外ドメインをクローニングするのに使用されるｐＤｉｓｐｌａｙベクターを示す図である。
【図２−１】図２Ａ、図２Ｂ、及び図２Ｃは、ＣＤ１２３発現細胞へのファージパネル陽性バインダーの結合可能性を証明した細胞結合アッセイを示す図である。
【図２−２】図２Ａ、図２Ｂ、及び図２Ｃは、ＣＤ１２３発現細胞へのファージパネル陽性バインダーの結合可能性を証明した細胞結合アッセイを示す図である。
【図２−３】図２Ａ、図２Ｂ、及び図２Ｃは、ＣＤ１２３発現細胞へのファージパネル陽性バインダーの結合可能性を証明した細胞結合アッセイを示す図である。
【図３】抗体パネルと抗ＣＤ１２３抗体７Ｇ３との間での競合ＥＬＩＳＡを示す図である。
【図４−１】図４Ａ及び図４Ｂは、ＣＤ１２３細胞系ＳＴＡＴ５機能アッセイを示す図であり、図４Ｃは、Ｉ３ＲＢ１８及び７Ｇ３抗体についての、用量依存性ＣＤ１２３細胞系ＳＴＡＴ５機能アッセイを示す図である。
【図４−２】図４Ａ及び図４Ｂは、ＣＤ１２３細胞系ＳＴＡＴ５機能アッセイを示す図であり、図４Ｃは、Ｉ３ＲＢ１８及び７Ｇ３抗体についての、用量依存性ＣＤ１２３細胞系ＳＴＡＴ５機能アッセイを示す図である。
【図５】図５Ａ、図５Ｂ、及び図５Ｃは、ＡＭＬ細胞株、ＯＣＩ−ＡＭＬ５上で発現させた外来性ＣＤ１２３に対するＭａｂ  Ｉ３ＲＢ２、Ｉ３ＲＢ１８、及び７Ｇ３の結合性を示す図である。
【図６】図６Ａ及び図６Ｂは、標識化Ｉ３ＲＢ２及びＩ３ＲＢ１８  ｍＡｂと、スクリーニングにおいて特定された他の抗ＣＤ１２３  Ａｂとの間での競合的結合アッセイを示す図である。
【図７】図７Ａ（配列番号２３２）及び図７Ｂ（配列番号２３２）は、Ｆａｂの存在下又は不在下における、ＣＤ１２３  ＳＰ２についての重水素レベルの差異を示す水素／重水素交換−質量分光法（ＨＤＸ−ＭＳ）による、エピトープマッピング研究の結果を示す図である。
【図８】Ｉ３ＲＢ１８由来ｓｃＦｖとＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤとの共結晶構造において観察された、ＣＤ１２３  ｓｐ２の結合性に関与する抗体残基を示す図である。ナンバリング：楕円がＣＤ１２３  ｓｐ２、四角がＩ３ＲＢ１８のＣＤＲ。
【図９】図９Ａは、ＣＤ１２３  ｓｐ２：Ｉ３ＲＢ１８（標識化Ｂ１８）の共結晶構造を示す図であり、図９Ｂは、ＣＤ１２３  ｓｐ１：ＣＳＬ３６２  Ｆａｂ（ＰＤＢエントリー４ＪＺＪからのｍＡｂ  ７Ｇ３のヒト化形態）の共結晶構造を示す図である。
【図１０】連続的なナンバリングを有するＳＰ３４のアミノ酸配列を示す図である。ＡｂＭ定義（Ｋ．Ｒ．Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ  ａｎｄ  Ａ．Ｃ．Ｍａｒｔｉｎ，２００８．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５，３８３２〜３８３９）におけるＣＤＲに下線を引いている。Ｓｅｒ２３０は、パパイン開裂Ｆａｂに存在する最後のＨＣ残基である。残基２３１〜４５５は、ＩＧＨＧ３＿マウス（マウスＩｇＧ３、アイソフォーム２）からのものである。
【図１１】図示されたＶＬ／ＶＨ界面において重要な残基を含むＳＰ３４の可変ドメインを示す。（標識された）ＶＬ中の残基３８、４８、及び５１は、ＣＤＲ−Ｈ３と接触している。
【図１２】ＶH（配列番号５及び１８４〜１８７、それぞれ表示順）及びＶL（配列番号４及び１８８〜１９０、それぞれ表示順）についての、ヒトフレームワーク適合（「ＨＦＡ」）変異体を示す図である。ナンバリングは、連番であり、ＡｂＭ定義におけるＣＤＲに下線を引いていて、ＳＰ３４とは異なる残基は太字で強調され、ＨＦＡ変異体における逆突然変異は、太字にし、下線を引いている。
【図１３】ＳＰ３４  ＨＦＡ変異体の初代ヒトＴ細胞への結合性を示す図である。
【図１４】ＳＰ３４  ＨＦＡ変異体の初代カニクイザルＴ細胞への結合性を示す図である。
【図１５】ＳＰ３４  ＨＦＡ変異体がインビトロにおいて初代ヒトＴ細胞を活性化することを示す図である。ネガティブコントロールを、白色で示し、ポジティブコントロールを、黒色で示す。
【図１６】ＳＰ３４  ＨＦＡ変異体がインビトロにおいて初代カニクイザルＴ細胞を活性化することを示す図である。ネガティブコントロールを、白色で示し、ポジティブコントロールを、黒色で示す。
【図１７】ＳＰ３４  ＨＦＡ変異体による結合性と活性化の相関を示す図である。ヒト（図１７Ａ）及びカニクイザル（図１７Ｂ）についての平均結合及びＣＤ６９平均蛍光強度（「ＭＦＩ」）値を互いに対してプロットした。
【図１８】ＭＶ４−１１細胞株に対する、ドナーＭ６５８７（図１８Ａ）及びドナーＭ７０２０（図１８Ｂ）についてのＴ細胞媒介性細胞傷害アッセイを示す図である。
【図１９】ＯＣＩ−Ｍ２細胞株に対する、ドナーＭ６５８７（図１９Ａ）及びドナーＭ７０２０（図１９Ｂ）についてのＴ細胞媒介性細胞傷害アッセイを示す図である。
【図２０】ＯＣＩ−ＡＭＬ細胞株に対する、ドナーＭ６５８７（図２０Ａ）及びドナーＭ７０２０（図２０Ｂ）についてのＴ細胞媒介性細胞傷害アッセイを示す図である。
【図２１】ＫＧ−１腫瘍異種移植モデルにおけるＩ３ＲＢ１８６の有効性を示す図である。
【図２２】末梢血の蛍光発色細胞選別（ＦＡＣＳ）分析による、ＣＤ４５＋（図２２Ａ）及びＣＤ８＋／ＣＤ４＋（図２２Ｂ）における３０日目での、ＫＧ−１腫瘍異種移植モデルにおけるＩ３ＲＢ１８６の有効性を示す図である。
【図２３】末梢血のＦＡＣＳ分析による、ＣＤ４５＋（図２３Ａ）及びＣＤ８＋／ＣＤ４＋（図２３Ｂ）における腫瘍移植後５３日目での、ＫＧ−１腫瘍異種移植モデルにおけるＩ３ＲＢ１８６の有効性を示す図である。
【図２４】処置による体重変化を示すことによる、ＫＧ−１腫瘍異種移植モデルにおけるＩ３ＲＢ１８６の有効性を示す図である。
【図２５】ＫＧ−１腫瘍異種移植モデルにおける、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性Ａｂ  Ｉ３ＲＢ１８６と、コントロールであるｎｕｌｌアーム二重特異性Ａｂ  Ｉ３ＲＢ１９１及びＩ３ＲＢ１９２との有効性を示す図である。
【図２６】ＣＤ４５＋（図２６Ａ）及びＣＤ８＋／ＣＤ４＋（図２６Ｂ）における腫瘍移植後３６日目でのＦＡＣＳ分析による、ＫＧ−１腫瘍異種移植モデルにおける、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性Ａｂ  Ｉ３ＲＢ１８６と、コントロールであるｎｕｌｌアーム二重特異性Ａｂ  Ｉ３ＲＢ１９１及びＩ３ＲＢ１９２との有効性を示す図である。
【図２７】ＣＤ４５＋（図２７Ａ）及びＣＤ８＋／ＣＤ４＋（図２７Ｂ）における腫瘍移植後６３日目でのＦＡＣＳ分析による、ＫＧ−１腫瘍異種移植モデルにおける、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性Ａｂ  Ｉ３ＲＢ１８６と、コントロールであるｎｕｌｌアーム二重特異性Ａｂ  Ｉ３ＲＢ１９１及びＩ３ＲＢ１９２との有効性を示す図である。
【図２８】処置による体重変化を示すことによる、ＫＧ−１腫瘍異種移植モデルにおける、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性Ａｂ  Ｉ３ＲＢ１８６と、コントロールであるｎｕｌｌアーム二重特異性Ａｂ  Ｉ３ＲＢ１９１及びＩ３ＲＢ１９２との有効性を示す図である。
【図２９】初代ヒトＴ細胞（図２９Ａ）及びカニクイザルＴ細胞（図２９Ｂ）上でのＳＰ３４−２についての細胞結合親和性（Ｋｄ）を決定するのに使用される飽和結合曲線を示す図である。
【図３０】初代ヒトＴ細胞（図３０Ａ）及びカニクイザルＴ細胞（図３０Ｂ）上での、標識化抗体であるＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８Ｂ１４６を使用し、非標識のＣＤ１２３×ＣＤ３抗体の濃度を増大させた、競合結合実験を示す図である。
【図３１】ＯＣＩ−ＡＭＬ細胞株に対する、ドナーＭ６９４８（図３１Ａ）及びドナーＭ６５２１（図３１Ｂ）についてのＴ細胞媒介性細胞傷害アッセイを示す図である。
【図３２】ＫＧ−１細胞株に対する、ドナーＭ６９４８（図３２Ａ）及びドナーＭ６５２１（図３２Ｂ）についてのＴ細胞媒介性細胞傷害アッセイを示す図である。
【図３３】ＪＩＭ３細胞株に対する、ドナーＭ６９４８（図３３Ａ）及びドナーＭ６５２１（図３３Ｂ）についてのＴ細胞媒介性細胞傷害アッセイを示す図である。
【図３４】図３４Ａ、図３４Ｂ、図３４Ｃ、及び図３４Ｄは、Ｉ３ＲＢ２１８（図３４Ａ）、８７４７（図３４Ｂ）、Ｉ３ＲＢ２１７（図３４Ｃ）、及び７９５９（図３４Ｄ）についての、ＣＤ１２３とＣＤ１３１とのＩＬ−３誘引ヘテロマー化におけるＣＤ１２３×ＣＤ３抗体の効果を示す図である。
【図３５】ＫＧ−１腫瘍異種移植モデルにおける平均腫瘍体積の比較による、ＣＤ１２３×ＣＤ３  Ａｂ７９５９及びＡｂ９９５８の有効性を示す図である。
【図３６】ＫＧ−１腫瘍異種移植モデルにおける平均腫瘍体積の比較による、ＣＤ１２３×ＣＤ３  Ａｂ３９７８の有効性を示す図である。
【図３７】ＫＧ−１腫瘍異種移植モデルにおける平均腫瘍体積の比較による、ＣＤ１２３×ＣＤ３  Ａｂ８７４７の有効性を示す図である。
【図３８】ＫＧ−１腫瘍異種移植モデルにおける平均腫瘍体積の比較による、ＣＤ１２３×ＣＤ３  Ａｂ８８７６の有効性を示す図である。
【図３９】ＫＧ−１腫瘍異種移植モデルにおける処置による体重変化の比較による、ＣＤ１２３×ＣＤ３  Ａｂ７９５９及びＡｂ９９５８の有効性を示す図である。
【図４０】ＫＧ−１腫瘍異種移植モデルにおける処置による体重変化の比較による、ＣＤ１２３×ＣＤ３  Ａｂ３９７８の有効性を示す図である。
【図４１】ＫＧ−１腫瘍異種移植モデルにおける処置による体重変化の比較による、ＣＤ１２３×ＣＤ３  Ａｂ８７４７の有効性を示す図である。
【図４２】ＫＧ−１腫瘍異種移植モデルにおける処置による体重変化の比較による、ＣＤ１２３×ＣＤ３  Ａｂ８８７６の有効性を示す図である。
【図４３】ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体３９７８、７９５５、７９５９、９９５８のインビボでのマウスＰＫを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４６】
定義
本明細書及び特許請求の範囲を通して本明細書の諸態様に関する様々な用語が使用される。別途記載のない限り、そのような用語には、当該技術分野におけるそれらの通常の意味が与えられるものとする。その他の具体的に定義される用語は、本明細書に提供される定義と一致する様式で解釈されるものとする。
【００４７】
本明細書及び添付の「特許請求の範囲」において使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、その内容について別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を包含する。したがって、例えば、「細胞（a cell）」という言及には、２つ以上の細胞の組み合わせ、及びこれに類するものなどを含む。
【００４８】
本明細書で使用されるとき、測定値、例えば、量、持続時間等に言及する場合の「約」という用語は、指定された値から最大±１０％の偏差を包含することを意味する。同様に、このような偏差は、開示された方法を行うのに適している。別途記載のない限り、本明細書及び特許請求の範囲において使用される成分、分子量、反応条件等の特性の量を表わす全ての数字は、「約」という用語により、全ての事例において修飾されていると理解されたい。したがって、そうではないと示されない限り、下記明細書及び添付の特許請求の範囲で説明された数値パラメータは、本発明により得られるのが求められる所望の特性に応じて変動する場合がある近似値である。最低でも、特許請求の範囲の範囲に対して均等論の適用を制限することを試みてはならず、各数値パラメータは、報告された有効桁の数字を考慮し、通常の四捨五入の手法を適用することにより、少なくとも解釈されるべきである。
【００４９】
本発明の広い範囲を説明する数値範囲及びパラメータは近似値であるが、特定の実施例中で説明された数値は、可能な限り正確に報告される。ただし、任意の数値は、各試験測定において見出される標準偏差を必然的に生じる、一定の誤差を本質的に含有する。
【００５０】
「単離された」は、生物学的成分（例えば、核酸、ペプチド、又はタンパク質）が、これらの成分が本来存在する生物の他の生物学的成分、すなわち、他の染色体及び染色体外ＤＮＡ及びＲＮＡ、並びにタンパク質から、実質的に分離され、同他の成分とは別に生成され、又は同他の成分から離して精製されていることを意味する。このため、「単離」されている核酸、ペプチド、及びタンパク質は、標準的な精製法により精製された核酸及びタンパク質を含む。「単離された」核酸、ペプチド、及びタンパク質は、組成物の一部であることができ、このような組成物が核酸、ペプチド、又はタンパク質の本来の環境の一部ではない場合であっても単離されている。また、この用語は、宿主細胞中での組換え発現により調製された核酸、ペプチド、及びタンパク質、並びに化学合成された核酸も包含する。本明細書で使用されるとき、「単離された」抗体又は抗原結合フラグメントは、種々の抗原特異性を有する他の抗体又は抗原結合フラグメントを実質的に含まない抗体又は抗原結合フラグメントを意味することを意図している（例えば、ＣＤ１２３に特異的に結合する単離された抗体は、ＣＤ１２３以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。ただし、ＣＤ１２３のエピトープ、アイソフォーム、又は変異体に特異的に結合する単離された抗体は、例えば、他の種に由来する他の関連する抗原（例えば、ＣＤ１２３種間ホモログ）に対する交差反応性を有してもよい。
【００５１】
「ポリヌクレオチド」は、同義的に「核酸分子」、「ヌクレオチド」、又は「核酸」と呼ばれ、非修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又は修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡでもよい、任意のポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドを意味する。「ポリヌクレオチド」には、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ、並びに一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＲＮＡ、ＤＮＡ及びＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖、又はより典型的には、二本鎖、又は一本鎖及び二本鎖の領域の混合物でもよい）が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又はＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を意味する。用語、ポリヌクレオチドには、１つ以上の修飾塩基を含有するＤＮＡ又はＲＮＡ、及び安定性若しくは他の理由により修飾された主鎖を有するＤＮＡ又はＲＮＡも含む。「修飾」塩基は、例えば、トリチル化塩基及び異常な塩基、例えば、イノシンを含む。各種の修飾が、ＤＮＡ及びＲＮＡになされてもよい。したがって、ポリヌクレオチドは、典型的に天然に認められるポリヌクレオチドの化学的、酵素的又は代謝的に修飾された形態、並びにウイルス及び細胞のＤＮＡ及びＲＮＡの特徴を有する化学的形態を包含する。「ポリヌクレオチド」はまた、比較的短い核酸鎖（多くの場合、オリゴヌクレオチドと呼ばれる）も包含する。
【００５２】
「実質的に同じ」の意味は、この用語が使用される文脈に応じて異なる場合がある。天然の配列バリエーションが重鎖及び軽鎖並びにこれらをコードする遺伝子中におそらく存在するために、幾らかのレベルのバリエーションが本明細書に記載されたアミノ酸配列又は抗体若しくは抗原結合フラグメントをコードする遺伝子内に見出されると予測されるであろう。ただし、固有の結合特性（例えば、特異性及び親和性）にはほとんど影響しないか、又は影響しない。このような予測は、部分的には、遺伝暗号の縮重及び保存的アミノ酸配列バリエーションの進化的成功による。同バリエーションは、コードされたタンパク質の性質を認識できるほどには改変させない。したがって、核酸配列の文脈において、「実質的に同じ」は、２つ以上の配列間での少なくとも６５％の同一性を意味する。好ましくは、この用語は、２つ以上の配列間での少なくとも７０％の同一性、より好ましくは、少なくとも７５％の同一性、より好ましくは、少なくとも８０％の同一性、より好ましくは、少なくとも８５％の同一性、より好ましくは、少なくとも９０％の同一性、より好ましくは、少なくとも９１％の同一性、より好ましくは、少なくとも９２％の同一性、より好ましくは、少なくとも９３％の同一性、より好ましくは、少なくとも９４％の同一性、より好ましくは、少なくとも９５％の同一性、より好ましくは、少なくとも９６％の同一性、より好ましくは、少なくとも９７％の同一性、より好ましくは、少なくとも９８％の同一性、及びより好ましくは、少なくとも９９％以上の同一性を意味する。２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップ数及び各ギャップの長さを考慮して、配列により共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、相同性の割合（％）＝同一位置数／位置の総数×１００）。同考慮は、２つの配列の最適なアライメントを導くのに必要である。２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の同一性パーセントは、例えば、Ｅ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ  ４，１１〜１７（１９８８）のアルゴリズムを使用して決定されてもよい。同アルゴリズムは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれており、ＰＡＭ１２０重み付け残基テーブル、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を使用する。加えて、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，４４４〜４５３（１９７０）のアルゴリズムを使用して決定されてもよい。
【００５３】
タンパク質の機能に実質的な影響を有することなく、タンパク質のアミノ酸配列内に生じ得るバリエーションの度合いは、核酸配列のバリエーションの度合いより非常に小さい。これは、同じ縮重原理がアミノ酸配列には適用しないためである。したがって、抗体又は抗原結合フラグメントの文脈において、「実質的に同じ」は、記載された抗体又は抗原結合フラグメントに対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有する抗体又は抗原結合フラグメントを意味する。他の実施形態は、本明細書に記載された抗体及び抗原結合フラグメントと顕著な同一性を共有しないが、１つ又は２つ以上のＣＤＲ又は結合性を付与するのに必要とされる他の配列を組み込む、フレームワーク、スキャフォールド、又は他の非結合領域を有し、本明細書に記載されたこのような配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有する、ＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントを含む。「ベクター」は、別の核酸セグメントが操作可能に挿入されていることにより、このセグメントの複製又は発現をもたらし得る、レプリコン、例えば、プラスミド、ファージ、コスミド、又はウイルスである。
【００５４】
「クローン」は、有糸分裂により、単一の細胞又は共通する祖先から得られる細胞集団である。「細胞株」は、多くの世代の間、インビトロにおいて安定して増殖させることができる初代細胞のクローンである。本明細書で提供された一部の例では、細胞は、細胞をＤＮＡでトランスフェクションすることにより、形質転換される。
【００５５】
「発現」及び「生成」という用語は、本明細書において同義的に使用され、遺伝子産物の生合成を意味する。これらの用語は、遺伝子のＲＮＡへの転写を包含する。また、これらの用語は、ＲＮＡの１つ又は２つ以上のタンパク質への翻訳を包含し、全ての天然の転写後及び翻訳後修飾を更に包含する。抗体又はその抗原結合フラグメントの発現又は生成は、細胞の細胞質内、又は細胞外環境、例えば、細胞培養の増殖培地内でもよい。
【００５６】
「処置すること」又は「処置」という用語は、損傷、病理、又は病状の減弱又は改善における、何らかの成功又は成功の兆候を指し、これには、寛解、緩解、症状の減少、病状を患者にとってより許容できるものにすること、変性又は低落速度を遅くすること、変性による最終的な衰弱を和らげること、患者の肉体的又は精神的健康を改善すること、あるいは生存期間の長さを延長することなどの、何らかの客観的又は主観的パラメータを含む。処置は、客観的又は主観的なパラメータにより評価されてもよい。同パラメータには、身体的検査、神経学的検査、又は精神医学評価の結果が挙げられる。
【００５７】
「有効量」又は「治療的に有効な量」は、必要とされる用量及び期間において、所望の治療結果を達成するのに有効な量を意味する。治療的に有効な量のＣＤ１２３×ＣＤ３抗体は、個体の病態、年齢、性別、及び体重、並びに個体における所望の応答を引き出す抗体の能力等の要因に従って変動し得る。治療的に有効な量はまた、抗体又は抗体部分の任意の毒性又は有害作用より、治療的に有益な作用が上回る量でもある。
【００５８】
「抗体」は、特に断らない限り、免疫グロブリンの全てのアイソタイプ（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＹ）を意味し、種々の単量体、多量体、及びキメラ型を含む。ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、及び抗体様ポリペプチド、例えば、キメラ抗体及びヒト化抗体が、「抗体」という用語に具体的に包含される。
【００５９】
抗原結合フラグメントは、特定の抗原に対して結合親和性を示し得る、任意のタンパク質性構造体である。抗原結合フラグメントは、任意の既知の手法、例えば、酵素開裂、ペプチド合成、及び組換え手法により提供されたものを含む。一部の抗原結合フラグメントは、親抗体分子の抗原結合特性を保持しているインタクトな抗体の一部から構成される。例えば、抗原結合フラグメントは、特定の抗原に結合することが既知である抗体の、少なくとも１つの可変領域（重鎖若しくは軽鎖の可変領域のいずれか一方）、又は１つ若しくは２つ以上のＣＤＲを含んでもよい。適切な抗原結合フラグメントの例には、ディアボディ及び一本鎖分子、並びにＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆａｂｃ、及びＦｖ分子、一本鎖（Ｓｃ）抗体、個々の抗体軽鎖、個々の抗体重鎖、抗体鎖若しくはＣＤＲと他のタンパク質との間でのキメラ融合体、タンパク質スキャフォールド、重鎖単量体若しくは二量体、軽鎖単量体若しくは二量体、１本の重鎖と１本の軽鎖とからなる二量体、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント、国際公開第２００７０５９７８２号に記載された一価抗体、ヒンジ領域においてジスルフィド結合により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント、Ｖ．ｓｕｂ．Ｈ及びＣ．ｓｕｂ．Ｈ１ドメインから本質的になるＦｄフラグメント、抗体の１つのアームのＶＬ及びＶＨドメインから本質的になるＦｖフラグメント、ＶＨドメインから本質的になり、ドメイン抗体とも呼ばれる（Ｈｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００３  Ｎｏｖ．、２１（１１）：４８４〜９０）ｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，５４４〜５４６（１９８９））、ラクダ若しくはナノボディ（Ｒｅｖｅｔｓ  ｅｔ  ａｌ、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ．２００５  Ｊａｎ．、５（１）：１１１〜２４）、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）等が挙げられるが、これらに限定されない。全ての抗体アイソタイプが、抗原結合フラグメントを生成するのに使用されてもよい。加えて、抗原結合フラグメントは、対象となる所与の抗原に対する親和性を付与する方向にポリポペプチドセグメントをうまく包含させ得る、非抗体タンパク質性フレームワーク、例えば、タンパク質スキャフォールドを含んでもよい。抗原結合フラグメントは、組換え的に生成されてもよく、又はインタクトな抗体の酵素的若しくは化学的開裂により生成されてもよい。「抗体又はその抗原結合フラグメント」という表現は、所与の抗原結合フラグメントがこの表現において言及された抗体の１つ又は２つ以上のアミノ酸セグメントを組み込むことを示すのに使用されてもよい。２つ以上の抗体又は抗原結合フラグメントの文脈において本明細書で使用される場合、「〜と競合する」又は「〜と交差競合する」という用語は、２つ以上の抗体又は抗原結合フラグメントがＣＤ１２３に対する結合について競合する、例えば、実施例９で記載されたアッセイにおいてＣＤ１２３結合について競合することを示す。抗体又は抗原結合フラグメントのいくつかのペアについて、一方の抗体がプレート上にコートされ、他方が競合させるために使用される場合、また、���の逆の場合、実施例のアッセイにおいて競合又はブロックのみが観察される。文脈において別段に定義されるか、又は否定されない限り、本明細書で使用されるとき、「〜と競合する」又は「〜と交差競合する」という用語は、抗体又は抗原結合フラグメントのこのようなペアに及ぶことも意図している。
【００６０】
「エピトープ」という用語は、抗体に対する特異的結合が可能なタンパク質決定因子を意味する。エピトープは、通常、分子の表面グルーピング、例えば、アミノ酸又は糖側鎖からなり、通常、特定の三次元構造特性並びに特定の荷電特性を有する。構造的及び非構造的エピトープは、後者ではなく前者に対する結合が、変性溶媒の存在下で損失するという点で区別される。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基と、結合に直接関与しない他のアミノ酸残基、例えば、特異的に抗原に結合するペプチドにより効果的にブロックされるか、又は覆われるアミノ酸残基（すなわち、アミノ酸残基が、特異的に抗原に結合するペプチドのフットプリント内にある）とを含んでもよい。
【００６１】
抗体又は抗体フラグメントの文脈において使用されるとき、「特異的な結合」若しくは「免疫特異的な結合」又はそれらの派生語は、免疫グロブリン遺伝子又は免疫グロブリン遺伝子のフラグメントによりコードされたドメインを介して、分子の混合集団を含有するサンプル中の他の分子に優先的に結合することなく、対象となるタンパク質の１つ又は２つ以上のエピトープに結合することを表わす。典型的には、抗体は、表面プラズモン共鳴アッセイ又は細胞結合アッセイにより測定された場合、約１×１０-8Ｍ未満のＫdで、同じ性質の抗原に結合する。「［抗原］特異性」抗体（例えば、ＣＤ１２３特異性抗体）等の表現は、列挙された抗体が列挙された抗原に特異的に結合することを伝達することを意味する。
【００６２】
本明細書で使用されるとき、「ｋd」（秒-1）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度定数を意味する。前記値は、Ｋoff値とも呼ばれる。
【００６３】
本明細書で使用されるとき、「ｋa」（Ｍ-1秒-1）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度定数を意味する。
【００６４】
本明細書で使用されるとき、「ｋD」（Ｍ）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離平衡定数を意味する。
【００６５】
本明細書で使用されるとき、「ｋA」（Ｍ-1）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の会合平衡定数を意味し、ｋaをｋdで割ることにより得られる。
【００６６】
「対象」という用語は、ヒト及び非ヒト動物を意味し、全ての脊椎動物、例えば、哺乳類及び非哺乳類、例えば、非ヒト霊長類、マウス、ウサギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、及び爬虫類を意味する。記載された方法の多くの実施形態において、対象はヒトである。
【００６７】
本明細書で使用されるとき、「サンプル」という用語は、対象から単離された、類似する流体、細胞、又は組織（例えば、外科手術的に切除された腫瘍組織、微小針吸引を含む生検）の収集物、並びに対象内に存在する流体、細胞、又は組織を意味する。一部の実施形態では、サンプルは、体液である。体液は、典型的には、生理学的温度において液体であり、対象又は生物学的ソース中に存在し、これらから採取され、これらから外に出され、又は他の方法で抽出された自然発生する流体を含んでもよい。特定の組織、臓器、又は局所的な領域から得られた特定の体液及び特定の他の体液は、対象又は生物学的ソースにおいて、より全体的に又は全身的に適していてもよい。体液の例には、血液、血清及び漿膜液、血漿、リンパ、尿、唾液、嚢胞液、涙、糞、痰、分泌組織及び臓器の粘膜分泌物、膣分泌物、腹水液、例えば、非固体腫瘍に関連するもの、肋膜、心膜、腹膜、腹部及び他の体腔の流体、気管支洗浄により収集された流体等が挙げられる。体液はまた、対象又は生物学的ソースと接触した溶液、例えば、細胞又は臓器順化培地を含む細胞及び臓器培養培地、洗浄液等を含んでもよい。本明細書で使用されるとき、「サンプル」という用語は、被検体から取り出された材料又は被検体中に存在する材料を包含する。
【００６８】
「既知の標準」は、既知の量又は濃度のＣＤ１２３を有する溶液でもよい。この場合、この溶液は、自然発生する溶液、例えば、初期、中期、後期、進行性、又は静的がんを有することが既知の患者からのサンプルでもよく、又はこの溶液は、希釈された既知の量のＣＤ１２３を有する緩衝水等の合成溶液でもよい。本明細書に記載された既知の標準は、対象から単離されたＣＤ１２３、組換え若しくは精製されたＣＤ１２３タンパク質、又は病態に関連するＣＤ１２３濃度の値を含んでもよい。
【００６９】
「ＣＤ３」という用語は、ヒトＣＤ３タンパク質マルチサブユニット複合体を意味する。ＣＤ３タンパク質マルチサブユニット複合体は、６つの区別できるポリペプチド鎖から構成される。これらは、ＣＤ３γ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  Ｐ０９６９３）、ＣＤ３δ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  Ｐ０４２３４）、２つのＣＤ３ε鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  Ｐ０７７６６）、及び１つのＣＤ３ζ鎖ホモ二量体（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  ２０９６３）を含み、Ｔ細胞受容体α及びβ鎖と会合する。「ＣＤ３」という用語は、特に断らない限り、細胞（Ｔ細胞を含む）により本来発現されているか、又はそれらのポリペプチドをコードする遺伝子若しくはｃＤＮＡによりトランスフェクションされた細胞上に発現され得る任意のＣＤ３変異体、アイソフォーム、及び種間ホモログを含む。
【００７０】
本明細書で使用されるとき、「ＩＬ−３受容体のアルファサブユニット」、「ＩＬ３Ｒα」、「ＣＤ１２３」、「ＩＬ３Ｒα鎖」、及び「ＩＬ３Ｒαサブユニット」という用語は、白血病前駆細胞上で検出可能であり、インターロイキン−３（ＩＬ３）に免疫結合する、抗原決定因子を互換的に意味する。具体的な実施形態では、ＣＤ１２３は、ヒトＣＤ１２３である。具体的な実施形態では、ＣＤ１２３は、カニクイザルＣＤ１２３である。具体的な実施形態では、ＣＤ１２３は、ＣＤ１２３  ＳＰ１である。具体的な実施形態では、ＣＤ１２３は、ＣＤ１２３  ＳＰ２である。「ＣＤ１２３」という用語は、特に断らない限り、任意のＣＤ１２３変異体、アイソフォーム、及び種間ホモログを含む。
【００７１】
「ＣＤ１２３×ＣＤ３抗体」は、多重特異性抗体、場合により、二重特異性抗体であり、同二重特異性抗体は、２種類の異なる抗原結合領域を含み、一方の抗原結合領域は、抗原ＣＤ１２３に特異的に結合し、もう一方の抗原結合領域は、ＣＤ３に特異的に結合する。多重特異性抗体は、二重特異性抗体、ディアボディ、又は類似する分子であり得る（ディアボディの説明については、例えば、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９０（１４），６４４４〜８（１９９３）を参照のこと）。本明細書で提供された二重特異性抗体、ディアボディ等は、ＣＤ１２３の一部に加えて、任意の適切な標的に結合してもよい。「二重特異性抗体」という用語は、異なる抗体配列により定義された、２種類の抗原結合領域を有する抗体と理解されたい。これは、異なる標的結合と理解され得るが、１つの標的中の異なるエピトープに十分結合することを含む。
【００７２】
「参照サンプル」は、別のサンプル、例えば、試験サンプルに対して比較され、比較されたサンプルの特徴を決定することができるサンプルである。参照サンプルは、試験サンプルとの比較の基礎として機能する、いくつかの特徴付けられた特性を有するであろう。例えば、参照サンプルは、がんを有する対象を示すＣＤ１２３レベルについてのベンチマークとして使用することができる。参照サンプルは、試験サンプルと平行して分析されることを必ずしも必要としない。このため、一部の例では、参照サンプルは、所与の条件を特徴付けるために予め決定された数値又は範囲、例えば、対象中のがんを示すＣＤ１２３レベルでもよい。この用語はまた、生理学的状態又は病態、例えば、ＣＤ１２３発現がんに関連することが既知であるが、未知量のＣＤ１２３を有する、比較目的で使用されるサンプルを含む。
【００７３】
ＣＤ１２３発現がんの進行の文脈において使用されるとき、「進行」という用語は、より重篤でない状態からより重篤な状態へのがんの変化を含む。これは、腫瘍の数又は重症度、転移の程度、がんが成長又は増殖する速度等の増大を含むことができる。例えば、「結腸がんの進行」には、このようながんの、より重篤でない状態からより重篤な状態への進行、例えば、ステージＩからステージＩＩへ、ステージＩＩからステージＩＩＩへ等の進行が挙げられる。
【００７４】
ＣＤ１２３発現がんの退行の文脈において使用されるとき、「退行」という用語は、より重篤な状態からより重篤でない状態へのがんの変化を含む。これは、腫瘍の数又は重症度、転移の程度、がんが成長又は増殖する速度等の低下を含むことができると考えられる。例えば、「結腸がんの退行」には、このようながんの、より重篤な状態からより重篤でない状態への退行、例えば、ステージＩＩＩからステージＩＩへ、ステージＩＩからステージＩへ等の進行が挙げられる。
【００７５】
安定したＣＤ１２３発現がんの文脈において使用されるとき、「安定した」という用語は、進行性がん又は退行性がんであると考えられる臨床的に関連する期間にわたって有意に十分に変化しない、又は変化していなかった病態を説明するのを意図している。
【００７６】
本明細書に記載された実施形態は、特定の方法、試薬、化合物、組成物、又は生物系に限定されるものではなく、当然、変動し得る。
【００７７】
ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメント
本明細書において、ＣＤ１２３に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合フラグメントが記載されている。抗体分子の全体的な構造は、抗原結合ドメインを含む。同ドメインは、重鎖及び軽鎖並びにＦｃドメインを含み、補体固定及び結合抗体受容体を含む各種の機能を果たす。
【００７８】
記載されたＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、全てのアイソタイプである、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、並びに４本鎖免疫グロブリン構造の合成多量体を含む。記載された抗体又は抗原結合フラグメントはまた、雌鳥又はシチメンチョウの血清及び雌鳥又はシチメンチョウの卵黄中に一般的に見出されるＩｇＹアイソタイプも含む。
【００７９】
ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、任意の種から組換え手法により得ることができる。例えば、抗体又は抗原結合フラグメントは、マウス、ラット、ヤギ、ウマ、ブタ、ウシ、ニワトリ、ウサギ、ラクダ、ロバ、ヒト、又はそれらのキメラ版でもよい。ヒトへの投与において使用するために、非ヒト由来の抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトの患者への投与に基づいてほとんど抗原性がないように、遺伝的に又は構造的に改変することができる。
【００８０】
一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントはキメラである。本明細書で使用されるとき、「キメラ」という用語は、非ヒト哺乳類、げっ歯類、又は爬虫類の抗体アミノ酸配列に由来する少なくとも１つの可変ドメインの少なくとも一部の部分を有するが、抗体又はその抗原結合フラグメントの残り部分がヒトに由来する、抗体又はその抗原結合フラグメントを意味する。
【００８１】
一部の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンから得られた最少配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、その免疫グロブリン鎖、又はフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は抗体の他の抗原結合部分配列）でもよい。大部分は、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）、例えば、マウス、ラット、又はウサギからの残基により置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一般的には、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むこととなる。同可変ドメイン中、全て又は実質的に全てのＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、全て又は実質的に全てのフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域である。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンのうち少なくとも一部を含んでもよい。
【００８２】
本明細書に記載された抗体又は抗原結合フラグメントは、各種の形態で存在し得るが、表１に示された抗体ＣＤＲのうち１つ又は２つ以上を含むこととなる。
【００８３】
本明細書において、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する、単離された抗体及び抗原結合フラグメントが記載されている。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇＧ又はその誘導体である。本明細書で例示されたＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトであるが、例示された抗体又は抗原結合フラグメントは、キメラ化されてもよい。
【００８４】
一部の実施形態では、表１に記載された抗体のうちいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖を含む、ＣＤ１２３特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。一部の実施形態では、表１に記載された抗体のうちいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖と、表１に記載された抗体のうちいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖と、を含む、ＣＤ１２３特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。
【００８５】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号００６を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号００７を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号００８を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号００６を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号００７を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号００８を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号００９を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０１０を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０１１を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１１９と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１１９と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６４と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである二重特異性構築物への包含に適している。
【００８６】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０１２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０１３を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０１４を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０１２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０１３を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０１４を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０１５を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０１６を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０１７を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２０と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２０と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６５と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【００８７】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０１８を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０１９を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０２０を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０１８を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０１９を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０２０を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号００９を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０１０を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０１１を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２１と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２１と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６４と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインと、を含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【００８８】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０２１を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０２２を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０２３を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０２１を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０２２を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０２３を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０２４を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０２５を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０２６を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２２と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２２と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６６と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである二重特異性構築物への包含に適している。
【００８９】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０２７を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０２８を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０２９を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０２７を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０２８を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０２９を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２３と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２３と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【００９０】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３５を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０３５を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２４と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２４と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【００９１】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３６を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０３６を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２５と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２５と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【００９２】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３７を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０３７を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２６と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２６と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【００９３】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３８を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０３８を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２７と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２７と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【００９４】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０４０を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４１を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０４０を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０４１を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２８と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２８と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【００９５】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４２を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０４２を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２９と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１２９と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【００９６】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４３を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０４３を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３０と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３０と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【００９７】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０４４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４５を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０４４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０４５を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０１５を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０１６を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０１７を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３１と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３１と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６５と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【００９８】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０４６を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４７を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０４６を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０４７を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３２と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３２と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【００９９】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４８を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０４８を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３３と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３３と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１００】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４９を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０４９を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３４と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３４と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１０１】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０５０を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０５０を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３５と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３５と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１０２】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０５１を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０５２を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０５３を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０５１を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０５２を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０５３を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０２４を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０２５を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０５４を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３６と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３６と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６８と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１０３】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０５５を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０５６を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０５７を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０５５を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０５６を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０５７を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０５８を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０５９を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３７と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３７と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６９と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１０４】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０６０を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０６０を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３８と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３８と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１０５】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０６１を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０６１を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０６２を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０６３を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０６４を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３９と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１３９と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１７０と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１０６】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０６５を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０６５を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０６６を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０６７を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０６８を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４０と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４０と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１７１と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１０７】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０６９を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０６９を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０７０を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４１と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４１と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１７２と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１０８】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０７１を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０７１を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４２と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４２と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１０９】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０７２を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０７３を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０７２を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０７３を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４３と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４３と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１１０】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０７４を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０７４を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０７５を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０７６を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０７７を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４４と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４４と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１７３と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１１１】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０７８を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０７８を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０７９を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０６３を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０８０を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４５と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４５と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１７４と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１１２】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０８１を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０８１を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４６と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４６と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１１３】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０８２を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０８２を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０８３を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０８４を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４７と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４７と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１７５と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１１４】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０８５を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０８６を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０８５を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０８６を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０８７を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０６７を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０８８を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４８と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４８と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１７６と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１１５】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０８９を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９０を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０８９を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０９０を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０９１を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０７６を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４９と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１４９と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１７７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１１６】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９３を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０９３を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５０と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５０と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１１７】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９４を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０９４を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０９５を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０７６を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９６を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５１と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５１と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１７８と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１１８】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９７を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０９７を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０９８を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０６７を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９９を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５２と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５２と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１７９と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１１９】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１００を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１００を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０１を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５３と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５３と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１８０と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１２０】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０２を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０２を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５４と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５４と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１２１】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０３を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０３を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１０４を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０５を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５５と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５５と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１８１と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１２２】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０６を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０６を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５６と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５６と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１２３】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０７を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０７を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１０８を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１０９を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１０を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５７と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５７と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１８２と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１２４】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１１を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１１を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１１２を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０７６を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１３を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５８と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５８と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１８３と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１２５】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１１４を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０２２を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１５を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１１４を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０２２を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１５を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０２４を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０２５を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０２６を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５９と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１５９と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６６と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１２６】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１１４を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０２２を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１６を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１１４を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０２２を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１６を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０１５を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０１６を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０１７を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１６０と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１６０と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６５と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１２７】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１１７を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０１３を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１８を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１１７を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０１３を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１８を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０１５を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０１６を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０１７を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１６１と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１６１と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６５と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１２８】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０５１を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０５２を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０５３を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０５１を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０５２を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０５３を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１６２と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１６２と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１２９】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４２を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号０３３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号０４２を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号０３０を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。このＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ１２３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１６３と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号１６３と実質的に同じか又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１６７と実質的に同じか又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＣＤ１２３アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
【０１３０】
本発明により提供された抗ＣＤ１２３抗体及び抗原結合フラグメントはまた、上記された抗体に対する結合について競合する抗体を含む。結合についての競合は、競合結合ＥＬＩＳＡを使用し、以下の実施例５で記載された手法に則して決定され得る。競合的結合は、抗体がＣＤ１２３に結合する順序に関わらず、第１の抗体の結合の、第２の抗体による少なくとも２０％阻害を検出することにより決定されてもよい（すなわち、抗体Ａが抗体Ｂの前にＣＤ１２３に結合する場合、１０％阻害のみが観察されるが、抗体Ｂが抗体Ａの前にＣＤ１２３に結合する場合、３０％阻害が観察されるため、２０％超の阻害が、１つの実験において観察され、競合的結合を終了してもよい）。
【０１３１】
一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ又はその誘導体、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のアイソタイプである。抗体がＩｇＧ１アイソタイプを有する一部の実施形態では、抗体は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＫ４０９Ｒ置換を、そのＦｃ領域中に含有する。抗体がＩｇＧ４アイソタイプを有する一部の実施形態では、抗体は、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換を、そのＦｃ領域中に含有する。上記段落において検討された、ＣＤＲ及び／又は可変ドメイン配列により定義された特異性抗体は、これらの変形例を含んでもよい。
【０１３２】
ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する抗体又は抗原結合フラグメントをコードする単離されたポリヌクレオチドもまた開示される。本明細書で提供された可変ドメインセグメントをコード可能な単離されたポリヌクレオチドは、抗体又は抗原結合フラグメントを生成する同一の又は異なるベクターに含まれてもよい。
【０１３３】
組換え抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドもまた、本開示の範囲内である。一部の実施形態では、記載されたポリヌクレオチド（及びこのポリヌクレオチドがコードするペプチド）は、リーダー配列を含む。当技術分野において既知の任意のリーダー配列を利用することができる。リーダー配列には、制限部位又は翻訳開始部位を挙げることができるが、これらに限定されない。
【０１３４】
本明細書に記載されたＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、記載されたＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントの生物学的特性（例えば、結合親和性又は免疫エフェクター活性）を保持している、１つ又は複数のアミノ酸置換、欠失、又は付加を有する変異体を含む。本発明の文脈において、下記注釈は、別途記載のない限り、変異を説明するのに使用される。ｉ）所与の位置におけるアミノ酸の置換は、例えば、Ｋ４０９Ｒと記載される。Ｋ４０９Ｒは、４０９位におけるリジンのアルギニンによる置換を意味する。ｉｉ）特定の変異体について、特定の三文字又は一文字コードは、コードＸａａ及びＸを含めて、アミノ酸残基を示すのに使用される。このため、４０９位におけるリジンについてのアルギニンの置換は、Ｋ４０９Ｒと指定され、又は４０９位におけるリジンについての任意のアミノ酸残基の置換は、Ｋ４０９Ｘと指定される。４０９位におけるリジンの欠失の場合には、この欠失は、Ｋ４０９*により示される。当業者であれば、１つ又は複数のアミノ酸置換、欠失、又は付加を有する変異体を生成することができる。
【０１３５】
これらの変異体としては、（ａ）１つ又は２つ以上のアミノ酸残基が保存的又は非保存的アミノ酸により置換されている変異体、（ｂ）１つ又は２つ以上のアミノ酸がポリペプチドに付加され、又は同ポリペプチドから欠失されている変異体、（ｃ）１つ又は２つ以上のアミノ酸が置換基を含む変異体、及び（ｄ）ポリペプチドが別のペプチド又はポリペプチド、例えば、融合パートナー、タンパク質タグ、又は他の化学部分と融合した変異体を挙げることができる。これらは、ポリペプチドに有用な特性、例えば、抗体についてのエピトープ、ポリヒスチジン配列、ビオチン部分等を付与してもよい。本明細書に記載された抗体又は抗原結合フラグメントは、保存的又は非保存的位置のいずれかにおいてある種からのアミノ酸残基が別の種における対応する残基に置換されている変異体を含んでもよい。他の実施形態では、非保存的位置におけるアミノ酸残基は、保存的又は非保存的残基により置換される。これらの変異体を得るための手法は、遺伝的（欠失、変異等）、化学的、及び酵素的手法を含めて、当業者に既知である。
【０１３６】
本明細書に記載されたＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、複数の抗体アイソタイプ、例えば、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを具現化することができる。一部の実施形態では、抗体アイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプ、好ましくは、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４のアイソタイプである。抗体又はその抗原結合フラグメントの特異性は、ＣＤＲのアミノ酸配列及び配置により主に決定される。したがって、あるアイソタイプのＣＤＲは、抗原特異性を変化させることなく、別のアイソタイプに変更することができる。あるいは、抗原特異性を変化させることなく、ハイブリドーマに、ある抗体アイソタイプを別のものにスイッチさせる技術（アイソタイプスイッチング）が確立されてきた。したがって、このような抗体アイソタイプは、記載された抗体又は抗原結合フラグメントの範囲内にある。
【０１３７】
本明細書に記載されたＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、約５×１０-7Ｍ未満、好ましくは、約５×１０-8Ｍ未満の解離定数（ＫD）を含む、ＣＤ１２３  ＳＰ１に対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載されたＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、約５×１０-7Ｍ未満、好ましくは、約５×１０-8Ｍ未満の解離定数（ＫD）を含む、ＣＤ１２３  ＳＰ２に対する結合親和性を有する。記載されたＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントの親和性は、当技術分野において既知の各種の方法、例えば、表面プラズモン共鳴又はＥＬＩＳＡベース法により決定することができる。ＳＰＲにより親和性を測定するためのアッセイは、ＢＩＡｃｏｒｅ  ３０００機器を使用して行われるアッセイを含む。この場合、このアッセイは、室温（例えば、２５℃又は２５℃付近）で行われる。ＣＤ１２３に結合可能な抗体は、ＢＩＡｃｏｒｅセンサチップ上に、抗Ｆｃ抗体（例えば、ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異性抗体、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｐｒｏｄ＃１０９−００５−０９８）により、７５ＲＵ付近のレベルで捕捉され、続けて、４０μＬ／分の流量において、会合及び解離データが収集される。
【０１３８】
本明細書に記載されたポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供される。ベクターは、発現ベクターであり得る。このため、対象となるポリペプチドをコードする配列を含有する組換え発現ベクターは、本開示の範囲内であると想到される。発現ベクターは、１つ又は２つ以上の追加配列を含有してもよい。同追加配列には、例えば、制御配列（例えば、プロモータ、エンハンサー）、選択マーカー、及びポリアデニル化シグナルが挙げられるが、これらに限定されない。広い各種の宿主細胞を形質転換するためのベクターは周知であり、プラスミド、ファージミド、コスミド、バキュロウイルス、バクミド、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、並びに、他の細菌、酵母、及びウイルスのベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３９】
本説明の範囲内にある組換え発現ベクターは、適切な調節エレメントに操作可能に連結することができる少なくとも１つの組換えタンパク質をコードする、合成的、遺伝的、又はｃＤＮＡ由来の核酸フラグメントを含む。このような調節エレメントには、転写プロモータ、適切なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、並びに転写及び翻訳の終了を制御する配列を挙げることができる。発現ベクター、特に、哺乳類の発現ベクターはまた、１つ又は２つ以上の非転写エレメント、例えば、複製の起点、発現される遺伝子に連結された適切なプロモータ及びエンハンサー、他の５’又は３’フランキング非転写配列、５’又は３’非翻訳配列（例えば、必須リボソーム結合部位）、ポリアデニル化部位、スプライスドナー及びアクセプター部位、又は転写終了配列を含んでもよい。宿主において複製する能力を付与する複製の起点もまた包含されてもよい。
【０１４０】
脊椎動物細胞を形質転換するのに使用される発現ベクター中の転写及び翻訳コントロール配列は、ウイルスソースにより提供することができる。例示的なベクターは、Ｏｋａｙａｍａ  ａｎｄ  Ｂｅｒｇ，３  Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２８０（１９８３）に記載されたように構築されてもよい。
【０１４１】
一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントのコード配列は、強力な構成的プロモータ、例えば、下記遺伝子：ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、ベータアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋クレアチン等のためのプロモータの制御下に置かれる。加えて、多くのウイルスプロモータが、真核細胞中で構成的に機能し、記載された実施形態での使用に適している。このようなウイルスプロモータには、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）中間初期プロモータ、ＳＶ４０の初期及び後期プロモータ、マウス乳がんウイルス（ＭＭＴＶ）プロモータ、モロニー白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、及び他のレトロウイルスの長端末反復配列（ＬＴＲ）、並びに単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモータが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、ＣＤ１２３特異性抗体又はその抗原結合フラグメントのコード配列は、誘引性プロモータ、例えば、メタロチオネインプロモータ、テトラサイクリン誘引性プロモータ、ドキシサイクリン誘引性プロモータ、１つ又は２つ以上のインターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）、例えば、プロテインキナーゼＲ  ２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素、ＭＸ遺伝子、ＡＤＡＲ１等を含有するプロモータの制御下に置かれる。
【０１４２】
本明細書に記載されたベクターは、１つ又は２つ以上の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含有してもよい。ＩＲＥＳ配列の融合ベクター内への包含は、一部のタンパク質の発現を向上させるのに有益であり得る。一部の実施形態では、ベクター系は、１つ又は２つ以上のポリアデニル化部位（例えば、ＳＶ４０）を含むこととなる。同部位は、前述の核酸配列のうちいずれかの上流又は下流にあってもよい。ベクターのコンポーネントは、近接して連結されてもよく、又は遺伝子産物を発現させるのに最適な間隔を提供するように（すなわち、ＯＲＦ間に「スペーサ」ヌクレオチドを導入することにより）配置されてもよく、若しくは別の方法で位置付けられてもよい。調節エレメント、例えば、ＩＲＥＳモチーフはまた、発現に最適な間隔を提供するように配置されてもよい。
【０１４３】
ベクターは、当技術分野において既知の選択マーカーを含んでもよい。選択マーカーには、陽性及び陰性選択マーカー、例えば、抗生物質抵抗性遺伝子（例えば、ネオマイシン抵抗性遺伝子、ヒグロマイシン抵抗性遺伝子、カナマイシン抵抗性遺伝子、テトラサイクリン抵抗性遺伝子、ペニシリン抵抗性遺伝子）、グルタミン酸合成酵素遺伝子、ガンシクロビル選択用のＨＳＶ−ＴＫ、ＨＳＶ−ＴＫ誘導体、又は６−メチルプリン選択用の細菌のプリンヌクレオシドホスホリラーゼ遺伝子（Ｇａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，７  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１７３８〜１７４３（２０００））が挙げられる。選択マーカーをコードする核酸配列又はクローニング部位は、対象となるポリペプチドをコードする核酸配列又はクローニング部位の上流又は下流にあってもよい。
【０１４４】
本明細書に記載されたベクターを使用して、記載された抗体又は抗原結合フラグメントをコードする遺伝子で、種々の細胞を形質転換することができる。例えば、ベクターを使用して、ＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントの生成細胞を生じさせることができる。このため、別の態様は、ＣＤ１２３に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント、例えば、本明細書に記載され、例示された抗体又は抗原結合フラグメントをコードする核酸配列を含むベクターで形質転換された宿主細胞を特徴とする。
【０１４５】
外来性遺伝子を細胞内に導入するための数多くの手法が、当技術分野において既知であり、本明細書に記載され、例示された種々の実施形態に従って、記載された方法を行う目的で組換え細胞を構築するのに使用することができる。使用される手法により、異種遺伝子配列を宿主細胞に適切に形質転換されるべきであり、その結果、異種遺伝子配列は、細胞の子孫により遺伝され、発現されることができ、レシピエント細胞の必須の成育及び生理学的機能が損なわれない。使用することができる手法としては、染色体導入法（例えば、細胞融合、染色体媒介性遺伝子導入、マイクロ細胞媒介性遺伝子導入）、物理的方法（例えば、トランスフェクション、スフェロプラスト融合、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、リポソーム担体）、ウイルスベクター導入（例えば、組換えＤＮＡウイルス、組換えＲＮＡウイルス）等が挙げられる（Ｃｌｉｎｅ，２９  Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．６９〜９２（１９８５）に記載）が、これらに限定されない。哺乳類細胞による細菌プロトプラストのリン酸カルシウム沈殿及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）誘因融合を使用しても、細胞を形質転換することができる。
【０１４６】
本明細書に記載されたＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントの発現に使用するのに適した細胞は、好ましくは、真核細胞、より好ましくは、植物、げっ歯類、又はヒト起源の細胞である。これらの細胞には、例えば、ＮＳＯ、ＣＨＯ、ＣＨＯＫ１、ｐｅｒＣ．６、Ｔｋ−ｔｓ１３、ＢＨＫ、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ−７、Ｔ９８Ｇ、ＣＶ−１／ＥＢＮＡ、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＮＳ１、Ｓｐ２／０骨髄腫細胞、及びＢＨＫ細胞株等が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、抗体の発現は、ハイブリドーマ細胞を使用して達成されてもよい。ハイブリドーマを生成するための方法は、当技術分野において十分確立されている。
【０１４７】
本明細書に記載された発現ベクターにより形質転換された細胞は、本明細書に記載された抗体又は抗原結合フラグメントの組換え発現について選択され、又はスクリーニングされてもよい。組換え陽性細胞は、タンパク質改変又は変化させた翻訳後修飾により、所望の表現型、例えば、高レベルの発現、向上した増殖特性、又は所望の生化学的特性を有するタンパク質を生成する能力を示すサブクローンについて、増殖され、スクリーニングされる。これらの表現型は、所与のサブクローンの本来の特性又は変異により得る。変異は、化学薬品、ＵＶ波長光、照射、ウイルス、挿入変異、ＤＮＡミスマッチ修復の阻害、又はこのような方法の組み合わせにより得られる。
【０１４８】
処置のためにＣＤ１２３特異性抗体を使用する方法
本明細書において、治療に使用するための、ＣＤ１２３特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。特に、これらの抗体又は抗原結合フラグメントは、がん、例えば、ＣＤ１２３発現がんを治療するのに有用であり得る。したがって、本発明は、本明細書に記載されたとおりの抗体、例えば、ＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントを投与することを含むがんを処置する方法を提供する。例えば、この使用は、ＩＬ−３がＩＬ−３Ｒに結合するのを妨げることにより、ＩＬ−３の生物学的作用を阻害することにより、又は抗体が毒物にコンジュゲートされ、この毒物をＣＤ１２３発現がんに標的化することによってもよい。一部の実施形態では、ＣＤ１２３発現がんとしては、血液がん、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、低リスク又は高リスク）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ、全てのサブタイプを含む）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）が挙げられる。これらの方法において使用するための抗体は、本明細書において上記されたもの、例えば、残基１９５〜２０２（ＲＡＲＥＲＶＹＥ（配列番号２３４））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメント及び／若しくは残基１５６〜１６１（ＲＫＦＲＹＥ（配列番号２３２））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメント及び／若しくは残基１７３〜１７８（ＴＥＱＶＲＤ（配列番号２３３））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメントからの１つ又は２つ以上の残基を含むエピトープに結合する、ＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントを含む。表１及びこれらの抗体の更なる検討において列記された特徴、例えば、ＣＤＲ又は可変ドメイン配列を有する抗体もまた、これらの方法において使用するのに有用である。
【０１４９】
本明細書に記載された一部の実施形態では、ＣＤ１２３特異性抗体の免疫エフェクター特性は、当業者に既知の技術によるＦｃ改変によって向上するか、又はサイレンシングされることができる。例えば、Ｆｃエフェクター機能、例えば、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性貪食（ＡＤＣＰ）、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）のダウンレギュレーション等が、これらの活性を担うＦｃ中の残基を改変することにより提供され、かつ／又は制御され得る。
【０１５０】
「抗体依存性細胞媒介性細胞毒性」又は「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現している非特異的細胞毒性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が標的細胞上に結合した抗体を認識し、続けて、標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応を意味する。
【０１５１】
ＡＤＣＣを誘引するモノクローナル抗体の能力は、そのオリゴ糖成分を操作することにより向上され得る。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３は、Ａｓｎ２９７において、Ｎ−グリコシル化される。ここで、グリカンの大部分は、周知の二分岐Ｇ０、Ｇ０Ｆ、Ｇ１、Ｇ１Ｆ、Ｇ２、又はＧ２Ｆの形態にある。操作されていないＣＨＯ細胞により生成される抗体は、典型的には、少なくとも約８５％のグリカンフコース含量を有する。Ｆｃ領域に付着した二分岐の複雑なタイプのオリゴ糖からのコアフコースの除去により、改善されたＦｃ．ガンマ．ＲＩＩＩａ結合を介して、抗原結合性又はＣＤＣ活性を変化させることなく、抗体のＡＤＣＣが向上される。このようなｍＡｂは、二分岐の複雑なタイプのＦｃオリゴ糖を有する、比較的高い脱フコシル化抗体の成功した発現をもたらすことが報告された種々の方法、例えば、培養浸透圧の制御（Ｋｏｎｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６４：２４９〜６５，２０１２）、宿主細胞株としての変異体ＣＨＯ株Ｌｅｃ１３の適用（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：２６７３３〜２６７４０，２００２）、宿主細胞株としての変異体ＣＨＯ株ＥＢ６６の適用（Ｏｌｉｖｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＡｂｓ；２（４），２０１０、Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ、ＰＭＩＤ：２０５６２５８２）、宿主細胞株としてのラットハイブリドーマ細胞株ＹＢ２／０の適用（Ｓｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８：３４６６〜３４７３，２００３）、アルファ．１，６−フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）遺伝子に対して特異的な低分子干渉ＲＮＡの導入（Ｍｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ８８：９０１〜９０８，２００４）、又はベータ−１，４−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩとゴルジアルファ−マンノシダーゼＩＩとの共発現又は強力なアルファ−マンノシダーゼＩ阻害剤であるキフネンシン（Ｆｅｒｒａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８１：５０３２〜５０３６；２００６、Ｆｅｒｒａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ９３：８５１〜８６１，２００６；Ｘｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ９９：６５２〜６５，２００８）を使用して達成され得る。
【０１５２】
本明細書において記載された一部の実施形態では、ＣＤ１２３抗体により引き出されたＡＤＣＣはまた、抗体Ｆｃ中の特定の置換によって向上され得る。例示的な置換は、例えば、米国特許第６，７３７，０５６号に記載されたように、アミノ酸位置２５６、２９０、２９８、３１２、３５６、３３０、３３３、３３４、３６０、３７８、又は４３０（ＥＵインデックスに従った残基ナンバリング）における置換である。
【０１５３】
ＣＤ１２３を検出する方法
本明細書において、サンプルを、本明細書に記載された抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させることにより、生体サンプル中のＣＤ１２３を検出するための方法が提供される。本明細書に記載されたように、サンプルは、尿、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環細胞、循環腫瘍細胞、組織会合していない細胞（すなわち、遊離細胞）、組織（例えば、外科手術的に切除された腫瘍組織、微小針吸引を含む生検）、組織学的調製物等から得ることができる。一部の実施形態では、記載された方法は、サンプルを、本明細書に記載されたＣＤ１２３特異性抗体又はその抗原結合フラグメントのいずれかと接触させることにより、生体サンプル中のＣＤ１２３を検出することを含む。
【０１５４】
一部の実施形態では、サンプルを、本明細書に記載されたＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントの２つ以上と接触させてもよい。例えば、サンプルを、第１のＣＤ１２３特異性抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させ、ついで、第２のＣＤ１２３特異性抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させてもよく、この場合、第１の抗体又は抗原結合フラグメントと第２の抗体又は抗原結合フラグメントとは、同じ抗体又は抗原結合フラグメントではない。一部の実施形態では、第１の抗体又はその抗原結合フラグメントは、サンプルと接触させる前に、表面、例えば、マルチウェルプレート、チップ又は類似する基材に固定されてもよい。他の実施形態では、第１の抗体又はその抗原結合フラグメントは、サンプルと接触させる前に、全く固定されず又は付着されなくてもよい。
【０１５５】
記載されたＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、検出可能に標識されてもよい。一部の実施形態では、標識された抗体及び抗原結合フラグメントは、本明細書に記載された方法により、ＣＤ１２３の検出を容易にし得る。多くのこのような標識が、当業者に容易に既知である。例えば、適切な標識には、放射線標識、蛍光標識、エピトープタグ、ビオチン、発色団標識、ＥＣＬ標識、又は酵素が挙げられるが、これらに限定されると考えられるべきではない。より具体的には、記載された標識には、ルテニウム、111Ｉｎ−ＤＯＴＡ、111Ｉｎ−ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、及びベータガラクトシダーゼ、ポリヒスチジン（ＨＩＳタグ）、アクリジン染料、シアニン染料、フルオロン染料、オキサジン染料、フェナントリジン染料、ローダミン染料、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）染料等が挙げられる。
【０１５６】
記載されたＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントは、生体サンプル中のＣＤ１２３を検出するための各種のアッセイに使用されてもよい。一部の適切なアッセイには、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴、免疫蛍光測定法、免疫沈澱法、平衡透析法、免疫拡散法、電気化学発光（ＥＣＬ）免疫アッセイ、免疫組織化学法、蛍光発色細胞選別（ＦＡＣＳ）又はＥＬＩＳＡアッセイが挙げられるが、これらに限定されると考えられるべきではない。
【０１５７】
本明細書に記載された一部の実施形態では、対象におけるＣＤ１２３発現がん細胞の検出を使用して、対象がＣＤ１２３に向けられる治療剤により処置されてもよいことを判定することができる。
【０１５８】
ＣＤ１２３は、血液及び血清サンプル中に、検出可能なレベルで存在する。このため、本明細書において、サンプルを、ＣＤ１２３に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させることにより、血液から得られたサンプル、例えば、血清サンプル中のＣＤ１２３を検出するための方法が提供される。血液サンプル又はその派生物は、希釈され、画分され、又は他の方法で処理されて、記載された方法が行われ得るサンプルを生成することができる。一部の実施形態では、ＣＤ１２３は、当技術分野において既知の任意の回数のアッセイにより、血液サンプル又はその派生物中で検出することができる。例えば、同アッセイには、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴、免疫蛍光測定法、免疫沈澱法、平衡透析法、免疫拡散法、電気化学発光（ＥＣＬ）免疫アッセイ、免疫組織化学法、蛍光発色細胞選別（ＦＡＣＳ）又はＥＬＩＳＡアッセイが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５９】
がんを診断するための方法
本明細書において、対象におけるＣＤ１２３発現がんを診断するための方法が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１２３発現がんとしては、血液がん、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、低リスク又は高リスク）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ、全てのサブタイプを含む）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）が挙げられる。一部の実施形態では、上記されたように、生体サンプル、例えば、血液サンプル又は血清サンプル中のＣＤ１２３を検出することは、サンプルが得られた対象中のがんを診断する能力を提供する。あるいは、一部の実施形態では、他のサンプル、例えば、組織学的サンプル、微小針吸引サンプル、切除された腫瘍組織、循環細胞、循環腫瘍細胞等もまた、サンプルが得られた対象ががんを有するかどうかを評価するのに使用されてもよい。一部の実施形態では、サンプルが得られた対象ががんを有することが既に分かっていてもよいが、対象を苦しめているがんの種類は、未だに診断されていなくてもよく、又は予備的診断では未知であるため、対象から得られた生体サンプル中のＣＤ１２３を検出することにより、がんの診断を可能にし、又は明確にすることができる。例えば、対象ががんを有することが分かっていてもよいが、分かっていなくてもよく、又は、対象のがんがＣＤ１２３を発現しているかどうかが、不明であってもよい。
【０１６０】
一部の実施形態では、記載された方法は、対象から得られた生体サンプル中に存在するＣＤ１２３の量を決定し、観察されたＣＤ１２３の量をコントロール又は参照サンプル中のＣＤ１２３の量と比較することにより、対象がＣＤ１２３発現がんに苦しんでいるどうかを評価することを含む。この場合、対象から得られたサンプル中のＣＤ１２３の量とコントロール又は参照サンプル中のＣＤ１２３の量との間の差は、対象がＣＤ１２３発現がんに苦しんでいることの指標である。別の実施形態では、対象から得られた生体サンプル中に観察されたＣＤ１２３の量は、特定の形態又はステージのがんに関連することが既知のＣＤ１２３のレベルと比較されて、対象のがんの形態又はステージを決定することができる。一部の実施形態では、対象から得られたサンプル中のＣＤ１２３の量は、サンプルを、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント、例えば、本明細書に記載されたＣＤ１２３特異性抗体と接触させることにより評価される。ＣＤ１２３の存在について評価されるサンプルは、尿、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環細胞、循環腫瘍細胞、組織会合していない細胞（すなわち、遊離細胞）、組織（例えば、外科手術的に切除された腫瘍組織、微小針吸引を含む生検）、組織学的調製物等から得られてもよい。一部の実施形態では、ＣＤ１２３発現がんとしては、血液がん、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、低リスク又は高リスク）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ、全てのサブタイプを含む）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）が挙げられる。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
【０１６１】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３発現がんを診断する方法は、対象の生体サンプルを、ＣＤ１２３特異性抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、表１で提供された抗体及びフラグメントから得られたもの）と接触させること、抗体又はその抗原結合フラグメントによって結合したサンプル中に存在するＣＤ１２３の量を定量すること、サンプル中に存在するＣＤ１２３の量を既知の標準又は参照サンプルと比較すること、及び対象のＣＤ１２３レベルががんに関連するＣＤ１２３のレベル内に入るかどうかを判定することを含むであろう。更なる実施形態では、診断方法は、がん特異的処置を投与又は処方する更なる工程が続き得る。別の実施形態では、診断方法は、がんの処置を容易にするために、判定の結果を伝送する更なる工程が続き得る。一部の実施形態では、がん特異的処置は、例えば、本明細書に記載されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体などのＣＤ１２３発現がんに対して向けられてもよい。
【０１６２】
一部の実施形態では、記載された方法は、対象から得られた血液又は血清サンプル中に存在するＣＤ１２３の量を決定することと、観察されたＣＤ１２３の量をコントロール又は参照サンプル中のＣＤ１２３の量と比較することと、により、対象がＣＤ１２３発現がんに苦しんでいるかどうかを評価することを含む。この場合、対象から得られたサンプル中のＣＤ１２３の量とコントロール又は参照サンプル中のＣＤ１２３の量との間の差は、対象がＣＤ１２３発現がんに苦しんでいることの指標である。
【０１６３】
一部の実施形態では、コントロール又は参照サンプルは、ＣＤ１２３発現がんに苦しんでいない対象から得られてもよい。一部の実施形態では、コントロール又は参照サンプルは、ＣＤ１２３発現がんに苦しんでいる対象から得られてもよい。コントロール又は参照サンプルがＣＤ１２３発現がんに苦しんでいない対象から得られる一部の実施形態では、コントロール又は参照サンプルについて観察されたＣＤ１２３の量に対して、試験サンプル中に存在するＣＤ１２３の量における観察された増大は、評価された対象がＣＤ１２３発現がんに苦しんでいることの指標である。コントロールサンプルがＣＤ１２３発現がんに苦しんでいない対象から得られる一部の実施形態では、コントロール又は参照サンプルについて観察されたＣＤ１２３の量に対して、試験サンプル中に存在するＣＤ１２３の量における観察された減少又は類似性は、評価された対象がＣＤ１２３発現がんに苦しんでいないことの指標である。コントロール又は参照サンプルがＣＤ１２３発現がんに苦しんでいる対象から得られる一部の実施形態では、コントロール又は参照サンプルについて観察されたＣＤ１２３の量に対して、試験サンプル中に存在するＣＤ１２３の量における観察された類似性は、評価された対象がＣＤ１２３発現がんに苦しんでいることの指標である。コントロール又は参照サンプルがＣＤ１２３発現がんに苦しんでいる対象から得られる一部の実施形態では、コントロール又は参照サンプルについて観察されたＣＤ１２３の量に対して、試験サンプル中に存在するＣＤ１２３の量における観察された減少は、評価された対象がＣＤ１２３発現がんに苦しんでいないことの指標である。
【０１６４】
一部の実施形態では、対象から得られたサンプル中のＣＤ１２３の量は、サンプルを、ＣＤ１２３に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント、例えば、本明細書に記載された抗体と接触させることにより評価される。ＣＤ１２３の存在について評価されるサンプルは、血液サンプル、血清サンプル、循環細胞、循環腫瘍細胞、組織会合していない細胞（すなわち、遊離細胞）、組織（例えば、外科手術的に切除された腫瘍組織、微小針吸引を含む生検）、組織学的調製物等から得られてもよい。
【０１６５】
種々の態様において、ＣＤ１２３の量は、サンプルを、ＣＤ１２３に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させることにより決定される。一部の実施形態では、サンプルを、ＣＤ１２３に特異的に結合する２つ以上の種類の抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させてもよい。一部の実施形態では、サンプルを、ＣＤ１２３に特異的に結合する第１の抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させ、ついで、ＣＤ１２３に特異的に結合する第２の抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させてもよい。本明細書に記載されたものなどのＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントを、この能力において使用してもよい。
【０１６６】
ＣＤ１２３特異性抗体及び抗原結合フラグメントの種々の組み合わせを使用して、記載された診断方法を行うための「第１」及び「第２」の抗体又は抗原結合フラグメントを提供することができる。一部の実施形態では、ＣＤ１２３発現がんとしては、血液がん、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、低リスク又は高リスク）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ、全てのサブタイプを含む）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）が挙げられる。
【０１６７】
特定の実施形態では、ＣＤ１２３の量は、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光測定法、免疫沈澱法、平衡透析法、免疫拡散法、電気化学発光（ＥＣＬ）免疫アッセイ、免疫組織化学法、蛍光発色細胞選別（ＦＡＣＳ）又はＥＬＩＳＡアッセイにより決定される。
【０１６８】
記載された診断方法の種々の実施形態では、コントロール又は参照サンプルが使用される。このサンプルは、使用されるアッセイが適切に機能していることを保証する陽性又は陰性のアッセイコントロールでもよい。例えば、この性質のアッセイコントロールは、免疫組織化学アッセイに一般的に使用されてもよいと考えられる。あるいは、サンプルは、健康な対象からの生体サンプル中のＣＤ１２３の量について標準化された参照であってもよい。一部の実施形態では、試験された対象の観察されたＣＤ１２３レベルは、ＣＤ１２３発現がんを有することが分かっている対象からのサンプル中に観察されたＣＤ１２３レベルと比較されてもよい。一部の実施形態では、コントロール対象は、対象となる特定のがんに苦しんでいてもよい。一部の実施形態では、コントロール対象は、初期段階のがんを有することが既知であり、同初期段階のがんは、ＣＤ１２３発現がんであってもよく、又はＣＤ１２３発現がんでなくてもよい。一部の実施形態では、コントロール対象は、中間段階のがんを有することが既知であり、同中間段階のがんは、ＣＤ１２３発現がんであってもよく、又はＣＤ１２３発現がんでなくてもよい。一部の実施形態では、コントロール対象は、後期段階を有することが既知であり、同後期段階は、ＣＤ１２３発現がんであってもよく、又はＣＤ１２３発現がんでなくてもよい。
【０１６９】
がんをモニタするための方法
本明細書において、対象におけるＣＤ１２３発現がんをモニタするための方法が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１２３発現がんとしては、血液がん、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、低リスク又は高リスク）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ、全てのサブタイプを含む）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）が挙げられる。一部の実施形態では、記載された方法は、対象から得られた試験サンプル中に存在するＣＤ１２３の量を決定することと、観察されたＣＤ１２３の量をより早い時点で対象から同様にして得られた生体サンプル中のＣＤ１２３の量と比較することと、により、ＣＤ１２３発現がんが進行性、退行性、又は不変なままであるかどうかを評価することを含む。この場合、試験サンプル中のＣＤ１２３の量とより早期のサンプル中のＣＤ１２３の量との間の差は、がんが、進行性、退行性、又は不変なままであるかどうかの指標を提供する。これに関して、より早期のサンプルについて観察された量に対して増大した量のＣＤ１２３を含む試験サンプルは、ＣＤ１２３発現がんの進行を示すことができる。逆に、より早期のサンプルについて観察された量に対して減少した量のＣＤ１２３を含む試験サンプルは、ＣＤ１２３発現がんの退行を示すことができる。
【０１７０】
したがって、より早期のサンプルについて観察された量に対してＣＤ１２３の量におけるわずかな差しか有さない試験サンプルは、ＣＤ１２３発現がんについて不変の病態を示すことができる。一部の実施形態では、対象から得られた生体サンプル中のＣＤ１２３の量は、サンプルを、ＣＤ１２３に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント、例えば、本明細書に記載された抗体と接触させることにより評価される。ＣＤ１２３の存在について評価されるサンプルは、尿、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環細胞、循環腫瘍細胞、組織会合していない細胞（すなわち、遊離細胞）、組織（例えば、外科手術的に切除された腫瘍組織、微小針吸引を含む生検）、組織学的調製物等から得られてもよい。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
【０１７１】
一部の実施形態では、ＣＤ１２３発現がんをモニタする方法は、対象の生体サンプルを、ＣＤ１２３特異性抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、表１で提供された抗体及びフラグメントから得られたもの）と接触させることと、サンプル中に存在するＣＤ１２３の量を定量することと、サンプル中に存在するＣＤ１２３の量をより早い時点において同じ対象から同様にして得られた生体サンプル中に存在することが決定されたＣＤ１２３の量と比較することと、対象のＣＤ１２３レベルが経時的に変化していたかどうかを判定することと、を含むであろう。より早期のサンプルについて観察された量に対して増大した量のＣＤ１２３を含む試験サンプルは、がんの進行を示すことができる。逆に、より早期のサンプルについて観察された量に対して減少した量のＣＤ１２３を含む試験サンプルは、ＣＤ１２３発現がんの退行を示すことができる。したがって、より早期のサンプルについて観察された量に対してＣＤ１２３の量におけるわずかな差しか有さない試験サンプルは、ＣＤ１２３発現がんについて不変の病態を示すことができる。一部の実施形態では、サンプルのＣＤ１２３レベルは、単独で、又はより早い時点において評価されたサンプルについて観察されたＣＤ１２３レベルに加えて、既知の標準又は参照サンプルと比較されてもよい。更なる実施形態では、診断方法は、がん特異的処置を投与する更なる工程が続き得る。一部の実施形態では、がん特異的処置は、例えば、本明細書に記載されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体などのＣＤ１２３発現がんに対して向けられてもよい。
【０１７２】
種々の態様において、ＣＤ１２３の量は、サンプルを、ＣＤ１２３に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させることにより決定される。一部の実施形態では、サンプルを、ＣＤ１２３に特異的に結合する２つ以上の種類の抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させてもよい。一部の実施形態では、サンプルを、ＣＤ１２３に特異的に結合する第１の抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させ、ついで、ＣＤ１２３に特異的に結合する第２の抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させてもよい。本明細書に記載されたもの等の抗体を、この能力において使用されてもよい。
【０１７３】
表１で記載された抗体及び抗原結合フラグメントの種々の組み合わせを使用して、記載されたモニタ方法を行うための「第１」及び「第２」の抗体又は抗原結合フラグメントを提供することができる。一部の実施形態では、ＣＤ１２３発現がんとしては、血液がん、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、低リスク又は高リスク）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ、全てのサブタイプを含む）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）が挙げられる。
【０１７４】
特定の実施形態では、ＣＤ１２３の量は、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光測定法、免疫沈澱法、平衡透析法、免疫拡散法、電気化学発光（ＥＣＬ）免疫アッセイ、免疫組織化学法、蛍光発色細胞選別（ＦＡＣＳ）又はＥＬＩＳＡアッセイにより決定される。
【０１７５】
ＣＤ１２３を検出するためのキット
本明細書において、生体サンプル中のＣＤ１２３を検出するためのキットが提供される。これらのキットは、本明細書に記載されたＣＤ１２３特異性抗体又はその抗原結合フラグメントのうち１つ又は２つ以上と、このキットを使用するための取扱説明書とを含む。
【０１７６】
提供されたＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、溶液の中に存在してもよく、凍結乾燥されていてもよく、基材、キャリア、又はプレートに固着されていてもよく、又は検出可能に標識化されていてもよい。
【０１７７】
記載されたキットはまた、本明細書に記載された方法を行うのに有用な更なる構成要素を含んでもよい。例として、キットは、対象からサンプルを得るための手段、コントロール若しくは参照サンプル、例えば、ゆっくり進行するがんを有する対象及び／若しくはがんを有さない対象からのサンプル、１つ若しくはそれ以上のサンプル区画、及び／又は本発明の方法の実施を説明する取扱説明書、並びに組織特異的コントロール若しくは標準をも含んでもよい。
【０１７８】
ＣＤ１２３のレベルを決定するための手段は、例えば、ＣＤ１２３のレベルを決定するためのアッセイに使用するためのバッファ又は他の試薬を更に含み得る。取扱説明書は、例えば、アッセイを行うための印刷された取扱説明書及び／又はＣＤ１２３の発現レベルを評価するための取扱説明書であり得る。
【０１７９】
記載されたキットはまた、対象からサンプルを単離するための手段を含んでもよい。これらの手段は、対象から流体又は組織を得るのに使用され得る機器又は試薬のうち１つ又は２つ以上の品目を含み得る。対象からサンプルを得るための手段はまた、血液サンプルから血液成分、例えば、血清を単離するための手段を含んでもよい。好ましくは、キットは、ヒト対象で使用するために設計されている。
【０１８０】
多重特異性抗体
本明細書に記載された抗ＣＤ１２３抗体の結合ドメインは、その表面上にＣＤ１２３を発現している細胞を認識する。上記されたように、ＣＤ１２３の発現は、がん細胞を示し得る。特定の部分集合の細胞に対するより特異的な標的化は、二重特異性分子、例えば、ＣＤ１２３及び別の標的に結合する抗体又は抗体フラグメントを作製することにより達成され得る。このような更なる標的の例には、ＣＤ３及びＣＤ３３が挙げられる。これは、ＣＤ１２３に結合する第１の領域及び更なる抗原に結合する第２の結合領域を含む分子を作製することにより達成される。これらの抗原結合領域は、標的の特異的な認識を可能にする任意の形態をとることができ、例えば、結合領域は、重鎖可変ドメイン又はＦｖ（重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとの組み合わせ）をあってもよく、又はこれらを含んでもよい。したがって、ＣＤ１２３及び別の抗原にそれぞれに結合する２種類の異なる抗原結合領域を含む二重特異性分子が提供される。
【０１８１】
本明細書に記載された一部の多重特異性抗体は、ＣＤ１２３及びＣＤ３にそれぞれ結合する２種類の異なる抗原結合領域を含む。好ましい実施形態では、ＣＤ１２３及びＣＤ３に結合する多重特異性抗体（ＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体）及びその多重特異性抗原結合フラグメントが提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体は、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成するために対を成す第１の重鎖（ＨＣ１）及び第１の軽鎖（ＬＣ１）と、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成するために対を成す第２の重鎖（ＨＣ２）及び第２の軽鎖（ＬＣ２）と、を含む。好ましい実施形態では、ＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体は、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成するために対を成す第１の重鎖（ＨＣ１）及び第１の軽鎖（ＬＣ１）を含むＣＤ１２３特異性アームと、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成するために対を成す第２の重鎖（ＨＣ２）及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含むＣＤ３特異性アームと、を含む二重特異性抗体である。一部の実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、全長抗体構造を有する抗体を含む。本明細書で使用されるとき、「全長抗体」は、２本の全長抗体重鎖と２本の全長抗体軽鎖とを有する抗体を意味する。全長抗体重鎖（ＨＣ）は、重鎖可変ドメイン及び定常ドメイン、ＶＨ、ＣＨＩ、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。全長抗体重鎖（ＬＣ）は、軽鎖可変ドメイン及び定常ドメイン、ＶＬ及びＣＬを含む。全長抗体は、一方又は両方の重鎖のいずれかにおいて、Ｃ末端リジン（Ｋ）を欠いていてもよい。「Ｆａｂアーム」又は「半分子」という用語は、抗原に特異的に結合する一対の重鎖−軽鎖を意味する。
【０１８２】
本明細書で提供された多重特異性抗体のＣＤ１２３結合アームは、上記されたＣＤ１２３特異性抗体のいずれかから得られてもよい。一部の実施形態では、ＣＤ１２３結合アームは、（ｉ）残基１９５〜２０２（ＲＡＲＥＲＶＹＥ（配列番号２３４））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメント及び／若しくは残基１５６〜１６１（ＲＫＦＲＹＥ（配列番号２３２））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメント及び／若しくは若しくは若しくは（or or）残基１７３〜１７８（ＴＥＱＶＲＤＲ（配列番号２３３））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメント、又は（ｉｉ）残基１６４〜１７５（ＩＱＫＲＭＱＰＶＩＴＥＱ（配列番号２２８））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤセグメント、及び／若しくは残基１８４〜１８９（ＬＬＮＰＧＴ（配列番号２２９））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメントからの１つ又は２つ以上の残基を含むエピトープに結合する。一部の実施形態では、ＣＤ１２３結合アームは、（ｉ）残基１９５〜２０２（ＲＡＲＥＲＶＹＥ（配列番号２３４））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメント及び／若しくは残基１５６〜１６１（ＲＫＦＲＹＥ（配列番号２３２））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメント及び／若しくは残基１７３〜１７８（ＴＥＱＶＲＤＲ（配列番号２３３））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメント、又は（ｉｉ）残基１６４〜１７５（ＩＱＫＲＭＱＰＶＩＴＥＱ（配列番号２２８））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメント及び／若しくは残基１８４〜１８９（ＬＬＮＰＧＴ（配列番号２２９））を含むＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤのセグメントからの１つ又は２つ以上の残基を含むエピトープに結合するＣＤ１２３特異性抗体又は抗原結合フラグメントと、ＣＤ１２３に対する結合について競合する。これらのエピトープにおける少なくとも１つの残基に結合するＣＤ１２３結合アームはまた、ＣＤ１２３  ＥＣＤにおいて更なる残基と結合することができる。一部の実施形態では、ＣＤ１２３結合アームは、中和性である。中和性のＣＤ１２３結合アームは、ｒｈＩＬ−３によるＴＦ−１細胞の刺激時のＳＴＡＴ５リン酸化の減少を測定することにより決定された場合、ＩＬ−３のＣＤ１２３への結合を阻害可能であるものを含む。二重特異性抗体の一部の実施形態では、ＣＤ１２３結合アームは、ヒトＣＤ１２３  ＳＰ１、好ましくは、その細胞外ドメインに結合する。
【０１８３】
このようなＣＤ１２３  ＳＰ１結合アームの一部の例示的な実施形態では、ＣＤ１２３に結合する第１の抗原結合領域は、表１で記載された抗体クローンから得られた重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。このようなＣＤ１２３  ＳＰ１結合アームの一部の例示的な実施形態では、ＣＤ１２３に結合する第１の抗原結合領域は、表１で記載されたとおり抗体クローンから得られた、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含む。このようなＣＤ１２３  ＳＰ１結合アームの一部の例示的な実施形態では、ＣＤ１２３に結合する第１の抗原結合領域は、クローンＩ３ＲＢ１、Ｉ３ＲＢ２、Ｉ３ＲＢ５、Ｉ３ＲＢ６、Ｉ３ＲＢ７、Ｉ３ＲＢ８、Ｉ３ＲＢ９、Ｉ３ＲＢ１１、Ｉ３ＲＢ１２、Ｉ３ＲＢ１６、Ｉ３ＲＢ１７、Ｉ３ＲＢ１８、Ｉ３ＲＢ１９、Ｉ３ＲＢ２０、Ｉ３ＲＢ２１、Ｉ３ＲＢ２２、Ｉ３ＲＢ２４、Ｉ３ＲＢ２８、Ｉ３ＲＢ２９、Ｉ３ＲＢ３０、Ｉ３ＲＢ３２、Ｉ３ＲＢ３３、Ｉ３ＲＢ３４、Ｉ３ＲＢ３５、Ｉ３ＲＢ３６、Ｉ３ＲＢ３７、Ｉ３ＲＢ３８、Ｉ３ＲＢ４０、又はＩ３ＲＢ４７の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。このようなＣＤ１２３  ＳＰ１結合アームの一部の例示的な実施形態では、ＣＤ１２３に結合する第１の抗原結合領域は、クローンＩ３ＲＢ１、Ｉ３ＲＢ２、Ｉ３ＲＢ５、Ｉ３ＲＢ６、Ｉ３ＲＢ７、Ｉ３ＲＢ８、Ｉ３ＲＢ９、Ｉ３ＲＢ１１、Ｉ３ＲＢ１２、Ｉ３ＲＢ１６、Ｉ３ＲＢ１７、Ｉ３ＲＢ１８、Ｉ３ＲＢ１９、Ｉ３ＲＢ２０、Ｉ３ＲＢ２１、Ｉ３ＲＢ２２、Ｉ３ＲＢ２４、Ｉ３ＲＢ２８、Ｉ３ＲＢ２９、Ｉ３ＲＢ３０、Ｉ３ＲＢ３２、Ｉ３ＲＢ３３、Ｉ３ＲＢ３４、Ｉ３ＲＢ３５、Ｉ３ＲＢ３６、Ｉ３ＲＢ３７、Ｉ３ＲＢ３８、Ｉ３ＲＢ４０、又はＩ３ＲＢ４７の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含む。このようなＣＤ１２３  ＳＰ１結合アームの一部の例示的な実施形態では、ＣＤ１２３に結合する第１の抗原結合領域は、表１に記載されたとおり抗体クローンから得られた重鎖可変ドメインを含む。このようなＣＤ１２３  ＳＰ１結合アームの一部の例示的な実施形態では、ＣＤ１２３に結合する第１の抗原結合領域は、表１に記載された抗体クローンから得られた重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む。このようなＣＤ１２３  ＳＰ１結合アームの一部の例示的な実施形態では、ＣＤ１２３に結合する第１の抗原結合領域は、クローンＩ３ＲＢ１、Ｉ３ＲＢ２、Ｉ３ＲＢ５、Ｉ３ＲＢ６、Ｉ３ＲＢ７、Ｉ３ＲＢ８、Ｉ３ＲＢ９、Ｉ３ＲＢ１１、Ｉ３ＲＢ１２、Ｉ３ＲＢ１６、Ｉ３ＲＢ１７、Ｉ３ＲＢ１８、Ｉ３ＲＢ１９、Ｉ３ＲＢ２０、Ｉ３ＲＢ２１、Ｉ３ＲＢ２２、Ｉ３ＲＢ２４、Ｉ３ＲＢ２８、Ｉ３ＲＢ２９、Ｉ３ＲＢ３０、Ｉ３ＲＢ３２、Ｉ３ＲＢ３３、Ｉ３ＲＢ３４、Ｉ３ＲＢ３５、Ｉ３ＲＢ３６、Ｉ３ＲＢ３７、Ｉ３ＲＢ３８、Ｉ３ＲＢ４０、又はＩ３ＲＢ４７の重鎖可変ドメインを含む。このようなＣＤ１２３  ＳＰ１結合アームの一部の例示的な実施形態では、ＣＤ１２３に結合する第１の抗原結合領域は、クローンＩ３ＲＢ１、Ｉ３ＲＢ２、Ｉ３ＲＢ５、Ｉ３ＲＢ６、Ｉ３ＲＢ７、Ｉ３ＲＢ８、Ｉ３ＲＢ９、Ｉ３ＲＢ１１、Ｉ３ＲＢ１２��Ｉ３ＲＢ１６、Ｉ３ＲＢ１７、Ｉ３ＲＢ１８、Ｉ３ＲＢ１９、Ｉ３ＲＢ２０、Ｉ３ＲＢ２１、Ｉ３ＲＢ２２、Ｉ３ＲＢ２４、Ｉ３ＲＢ２８、Ｉ３ＲＢ２９、Ｉ３ＲＢ３０、Ｉ３ＲＢ３２、Ｉ３ＲＢ３３、Ｉ３ＲＢ３４、Ｉ３ＲＢ３５、Ｉ３ＲＢ３６、Ｉ３ＲＢ３７、Ｉ３ＲＢ３８、Ｉ３ＲＢ４０、又はＩ３ＲＢ４７の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む。
【０１８４】
二重特異性抗体の一部の実施形態では、ＣＤ１２３結合アームは、ヒトＣＤ１２３  ＳＰ２、好ましくは、その細胞外ドメインに結合する。二重特異性抗体の好ましい実施形態では、ＣＤ１２３結合アームは、ヒトＣＤ１２３  ＳＰ１及びヒトＣＤ１２３  ＳＰ２、及びより好ましくは、それらの細胞外ドメインに結合する。このようなＣＤ１２３  ＳＰ２結合アームの一部の例示的な実施形態では、ＣＤ１２３に結合する第１の抗原結合領域は、クローンＩ３ＲＢ１、Ｉ３ＲＢ２、Ｉ３ＲＢ５、Ｉ３ＲＢ１８、Ｉ３ＲＢ１９、又はＩ３ＲＢ３０の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。このようなＣＤ１２３  ＳＰ２結合アームの一部の例示的な実施形態では、ＣＤ１２３に結合する第１の抗原結合領域は、クローンＩ３ＲＢ１、Ｉ３ＲＢ２、Ｉ３ＲＢ５、Ｉ３ＲＢ１８、Ｉ３ＲＢ１９、又はＩ３ＲＢ３０の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む。このようなＣＤ１２３  ＳＰ２結合アームの一部の例示的な実施形態では、ＣＤ１２３に結合する第１の抗原結合領域は、クローンＩ３ＲＢ１、Ｉ３ＲＢ２、Ｉ３ＲＢ５、Ｉ３ＲＢ１８、Ｉ３ＲＢ１９、又はＩ３ＲＢ３０の重鎖可変ドメインを含む。このようなＣＤ１２３  ＳＰ２結合アームの一部の例示的な実施形態では、ＣＤ１２３に結合する第１の抗原結合領域は、クローンＩ３ＲＢ１、Ｉ３ＲＢ２、Ｉ３ＲＢ５、Ｉ３ＲＢ１８、Ｉ３ＲＢ１９、又はＩ３ＲＢ３０の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む。
【０１８５】
二重特異性抗体の一部の実施形態では、ＣＤ１２３結合アームは、カニクイザルＣＤ１２３、好ましくは、その細胞外ドメインにも結合する。
【０１８６】
二重特異性抗体の一部の実施形態では、ＣＤ１２３結合アームは、抗体クローンＩ３ＲＢ２、Ｉ３ＲＢ６０、Ｉ３ＲＢ７０、Ｉ３ＲＢ７９、又はＩ３ＲＢ１１８と、ＣＤ１２３に対する結合について競合するＣＤ１２３特異性抗体から得られる。二重特異性抗体の一部の実施形態では、ＣＤ１２３結合アームは、抗体クローンＩ３ＲＢ１８、Ｉ３ＲＢ４９、又はＩ３ＲＢ５５と、ＣＤ１２３に対する結合について競合するＣＤ１２３特異性抗体から得られる。結合についての競合は、競合結合ＥＬＩＳＡを使用し、以下の実施例５で記載された手法に則して決定され得る。競合的結合は、抗体がＣＤ１２３に結合する順序に関わらず、第１の抗体の結合の、第２の抗体による少なくとも２０％阻害を検出することにより決定されてもよい（すなわち、抗体Ａが抗体Ｂの前にＣＤ１２３に結合する場合、１０％阻害のみが観察されるが、抗体Ｂが抗体Ａの前にＣＤ１２３に結合する場合、３０％阻害が観察されるため、２０％超の阻害が、１つの実験において観察され、競合的結合を終了してもよい）。
【０１８７】
一部の実施形態では、多重特異性抗体のＣＤ１２３結合アームは、ＩｇＧ又はその誘導体、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のアイソタイプである。ＣＤ１２３結合アームがＩｇＧ１アイソタイプを有する一部の実施形態では、ＣＤ１２３結合アームは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＫ４０９Ｒ置換を、そのＦｃ領域中に含有する。ＣＤ１２３結合アームがＩｇＧ４アイソタイプを有する一部の実施形態では、ＣＤ１２３結合アームは、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換を、そのＦｃ領域中に含有する。
【０１８８】
二重特異性抗体の一部の実施形態では、第２の抗原結合アームは、ヒトＣＤ３に結合する。一部の好ましい実施形態では、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体のＣＤ３特異性アームは、ヒト初代Ｔ細胞及び／又はカニクイザル初代Ｔ細胞に結合し、これらを活性化するＣＤ３特異性抗体から得られる。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、ＣＤ３εのＮ末端において、エピトープに結合する。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、ＣＤ３εの６つのＮ末端アミノ酸を含むエピトープと接触する。一部の実施形態では、二重特異性抗体のＣＤ３特異性結合アームは、マウスモノクローナル抗体ＳＰ３４、マウスＩｇＧ３／ラムダアイソタイプから得られる。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、抗体ＳＰ３４のＣＤＲを含む。このようなＣＤ３結合アームは、５×１０-7Ｍ以下、例えば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ３に結合し得る。ＣＤ３特異性結合アームは、マウスモノクローナル抗体ＳＰ３４のヒト化版のアームでもよい。ヒトフレームワーク適合（ＨＦＡ）は、ＣＤ３特異性アームが得られる抗ＣＤ３抗体をヒト化するのに使用されてもよい。二重特異性抗体の一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、表２から選択される重鎖と軽鎖とのペアを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体のＣＤ３結合アームは、表３から得られる。
【０１８９】
一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、ＩｇＧ又はその誘導体である。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４である。ＣＤ３結合アームがＩｇＧ１アイソタイプを有する一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ置換を、そのＦｃ領域中に含有する。ＣＤ３結合アームがＩｇＧ４アイソタイプを有する一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及びＲ４０９Ｋ置換を、そのＦｃ領域中に含有する。一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ−ＡＡ  Ｆｃである。一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ−ＡＡ  Ｆｃ−Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌである。一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、初代ヒトＴ細胞上のＣＤ３εに結合する。一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、初代カニクイザルＴ細胞上のＣＤ３εに結合する。一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、初代ヒト及びカニクイザルＴ細胞上のＣＤ３εに結合する。一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、初代ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化する。一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、初代カニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化する。
【０１９０】
一部の実施形態では、抗体クローンＩ３ＲＢ１７９、Ｉ３ＲＢ１８０、Ｉ３ＲＢ１８１、Ｉ３ＲＢ１８２、Ｉ３ＲＢ１８３、Ｉ３ＲＢ１８６、Ｉ３ＲＢ１８７、Ｉ３ＲＢ１８８、Ｉ３ＲＢ１８９、ＣＤ３Ｂ１９１、Ａｂ  ７９５９、Ａｂ３９７８、Ａｂ  ７９５５、Ａｂ  ９９５８、Ａｂ  ８７４７、Ａｂ  ８８７６、Ａｂ  ４４３５、又はＡｂ  ５４６６の重鎖を含むＣＤ１２３結合アームを有するＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体が提供される。一部の実施形態では、抗体クローンＩ３ＲＢ１７９、Ｉ３ＲＢ１８０、Ｉ３ＲＢ１８１、Ｉ３ＲＢ１８２、Ｉ３ＲＢ１８３、Ｉ３ＲＢ１８６、Ｉ３ＲＢ１８７、Ｉ３ＲＢ１８８、Ｉ３ＲＢ１８９、ＣＤ３Ｂ１９１、Ａｂ  ７９５９、Ａｂ３９７８、Ａｂ  ７９５５、Ａｂ  ９９５８、Ａｂ  ８７４７、Ａｂ  ８８７６、Ａｂ  ４４３５、又はＡｂ  ５４６６の重鎖及び軽鎖を含むＣＤ１２３結合アームを有するＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体が提供される。一部の実施形態では、抗体クローンＩ３ＲＢ１７９、Ｉ３ＲＢ１８０、Ｉ３ＲＢ１８１、Ｉ３ＲＢ１８２、Ｉ３ＲＢ１８３、Ｉ３ＲＢ１８６、Ｉ３ＲＢ１８７、Ｉ３ＲＢ１８８、Ｉ３ＲＢ１８９、ＣＤ３Ｂ１９１、Ａｂ  ７９５９、Ａｂ３９７８、Ａｂ  ７９５５、Ａｂ  ９９５８、Ａｂ  ８７４７、Ａｂ  ８８７６、Ａｂ  ４４３５、又はＡｂ  ５４６６の重鎖を含むＣＤ３結合アームを有するＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体が提供される。一部の実施形態では、抗体クローンＩ３ＲＢ１７９、Ｉ３ＲＢ１８０、Ｉ３ＲＢ１８１、Ｉ３ＲＢ１８２、Ｉ３ＲＢ１８３、Ｉ３ＲＢ１８６、Ｉ３ＲＢ１８７、Ｉ３ＲＢ１８８、Ｉ３ＲＢ１８９、ＣＤ３Ｂ１９１、Ａｂ  ７９５９、Ａｂ３９７８、Ａｂ  ７９５５、Ａｂ  ９９５８、Ａｂ  ８７４７、Ａｂ  ８８７６、Ａｂ  ４４３５、又はＡｂ  ５４６６の重鎖及び軽鎖を含むＣＤ３結合アームを有するＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体が提供される。一部の実施形態では、抗体クローンＩ３ＲＢ１７９、Ｉ３ＲＢ１８０、Ｉ３ＲＢ１８１、Ｉ３ＲＢ１８２、Ｉ３ＲＢ１８３、Ｉ３ＲＢ１８６、Ｉ３ＲＢ１８７、Ｉ３ＲＢ１８８、Ｉ３ＲＢ１８９、ＣＤ３Ｂ１９１、ｍＡＢ  ７９５９、Ａｂ３９７８、Ａｂ  ７９５５、Ａｂ  ９９５８、Ａｂ  ８７４７、Ａｂ  ８８７６、Ａｂ  ４４３５、又はＡｂ  ５４６６の重鎖を含むＣＤ１２３結合アームと、抗体クローンＩ３ＲＢ１７９、Ｉ３ＲＢ１８０、Ｉ３ＲＢ１８１、Ｉ３ＲＢ１８２、Ｉ３ＲＢ１８３、Ｉ３ＲＢ１８６、Ｉ３ＲＢ１８７、Ｉ３ＲＢ１８８、Ｉ３ＲＢ１８９、ＣＤ３Ｂ１９１、ＡｂＢ  ７９５９、Ａｂ３９７８、Ａｂ  ７９５５、Ａｂ  ９９５８、Ａｂ  ８７４７、Ａｂ  ８８７６、Ａｂ  ４４３５、又はＡｂ  ５４６６の重鎖を含むＣＤ３結合アームと、を有するＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体が提供される。一部の実施形態では、抗体クローンＩ３ＲＢ１７９、Ｉ３ＲＢ１８０、Ｉ３ＲＢ１８１、Ｉ３ＲＢ１８２、Ｉ３ＲＢ１８３、Ｉ３ＲＢ１８６、Ｉ３ＲＢ１８７、Ｉ３ＲＢ１８８、Ｉ３ＲＢ１８９、ＣＤ３Ｂ１９１、Ａｂ  ７９５９、Ａｂ３９７８、Ａｂ  ７９５５、Ａｂ  ９９５８、Ａｂ  ８７４７、Ａｂ  ８８７６、Ａｂ  ４４３５、又はＡｂ  ５４６６の重鎖及び軽鎖を含むＣＤ１２３結合アームと、抗体クローンＩ３ＲＢ１７９、Ｉ３ＲＢ１８０、Ｉ３ＲＢ１８１、Ｉ３ＲＢ１８２、Ｉ３ＲＢ１８３、Ｉ３ＲＢ１８６、Ｉ３ＲＢ１８７、Ｉ３ＲＢ１８８、Ｉ３ＲＢ１８９、ＣＤ３Ｂ１９１、Ａｂ  ７９５９、Ａｂ３９７８、Ａｂ  ７９５５、Ａｂ  ９９５８、Ａｂ  ８７４７、Ａｂ  ８８７６、Ａｂ  ４４３５、又はＡｂ  ５４６６の重鎖及び軽鎖を含むＣＤ３結合アームと、を有するＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体が提供される。
【０１９１】
好ましいＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体は、表１３及び１７に提供される。
【０１９２】
種々のフォーマットの二重特異性抗体が記載されてきており、Ｃｈａｍｅｓ  ａｎｄ  Ｂａｔｙ（２００９）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ  Ｄｅｖ  １２：２７６に近年レビューされた。
【０１９３】
一部の実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、本発明において記載されたもの等の制御されたＦａｂアーム交換により得られたディアボディ、クロスボディ、又は二重特異性抗体である。
【０１９４】
一部の実施形態では、二重特異性抗体には、ヘテロ二量体化する相補性ＣＨ３ドメインを有するＩｇＧ様分子、組換えＩｇＧ様デュアル標的化分子（この分子の２つの側面はそれぞれ少なくとも２種類の抗体のＦａｂフラグメント又はＦａｂフラグメントの一部を含有する）、ＩｇＧ融合分子（全長ＩｇＧ抗体がエクストラＦａｂフラグメント又はＦａｂフラグメントの一部に融合されている）、Ｆｃ融合分子（一本鎖Ｆｖ分子又は安定化ディアボディが重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域又はその一部に融合されている）、Ｆａｂ融合分子（異なるＦａｂフラグメントが互いに融合されている）、ＳｃＦｖ−及びディアボディ−ベース及び重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）（異なる一本鎖Ｆｖ分子又は異なるディアボディ若しくは異なる重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）が互いに又は別のタンパク質若しくは担体分子に融合されている）が挙げられる。
【０１９５】
一部の実施形態では、相補性ＣＨ３ドメイン分子を有するＩｇＧ様分子には、Ｔｒｉｏｍａｂ／Ｑｕａｄｒｏｍａ（Ｔｒｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−Ｈｏｌｅｓ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＣｒｏｓｓＭＡｂｓ（Ｒｏｃｈｅ）及び静電的マッチされた抗体（Ａｍｇｅｎ）、ＬＵＺ−Ｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ストランド交換操作ドメインボディ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤ  Ｓｅｒｏｎｏ）、Ｂｉｃｌｏｎｉｃ（Ｍｅｒｕｓ）、並びにＤｕｏＢｏｄｙ（Ｇｅｎｍａｂ  Ａ／Ｓ）が挙げられる。
【０１９６】
一部の実施形態では、組換えＩｇＧ様デュアル標的化分子には、Ｄｕａｌ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ（ＤＴ）−Ｉｇ（ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ）、Ｔｗｏ−ｉｎ−ｏｎｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｄ  Ｍａｂｓ（Ｋａｒｍａｎｏｓ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ）、ｍＡｂ２（Ｆ−Ｓｔａｒ）、及びＣｏｖＸ−ｂｏｄｙ（ＣｏｖＸ／Ｐｆｉｚｅｒ）が挙げられる。
【０１９７】
一部の実施形態では、ＩｇＧ融合分子には、Ｄｕａｌ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎ（ＤＶＤ）−Ｉｇ（Ａｂｂｏｔｔ）、ＩｇＧ−ｌｉｋｅ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（ＩｎｎＣｌｏｎｅ／Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、Ｔｓ２Ａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡＺ）、及びＢｓＡｂ（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＨＥＲＣＵＬＥＳ（Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）、並びにＴｖＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）が挙げられる。
【０１９８】
一部の実施形態では、Ｆｃ融合分子には、ＳｃＦｖ／Ｆｃ  Ｆｕｓｉｏｎｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、ＳＣＯＲＰＩＯＮ（Ｅｍｅｒｇｅｎｔ  ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ，Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ）、Ｄｕａｌ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｆｃ−ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、及びＤｕａｌ（ＳｃＦｖ）．ｓｕｂ．２−Ｆａｂ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ−−Ｃｈｉｎａ）が挙げられる。
【０１９９】
一部の実施形態では、Ｆａｂ融合二重特異性抗体には、Ｆ（ａｂ）２（Ｍｅｄａｒｅｘ／ＡＭＧＥＮ）、Ｄｕａｌ−Ａｃｔｉｏｎ  ｏｒ  Ｂｉｓ−Ｆａｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｄｏｃｋ−ａｎｄ−Ｌｏｃｋ（ＤＮＬ）（ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ）、Ｂｉｖａｌｅｎｔ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ）、及びＦａｂ−Ｆｖ（ＵＣＢ−Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）が挙げられる。ＳｃＦｖ−、ディアボディ−ベース及びドメイン抗体には、Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｇａｇｅｒ（ＢＩＴＥ）（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ）、Ｔａｎｄｅｍ  Ｄｉａｂｏｄｙ（Ｔａｎｄａｂ）（Ａｆｆｉｍｅｄ）、Ｄｕａｌ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、Ｓｉｎｇｌｅ−ｃｈａｉｎ  Ｄｉａｂｏｄｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ）、ＴＣＲ−ｌｉｋｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ＡＩＴ，ＲｅｃｅｐｔｏｒＬｏｇｉｃｓ）、Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｂｕｍｉｎ  ＳｃＦｖ  Ｆｕｓｉｏｎ（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ）、及びＣＯＭＢＯＤＹ（Ｅｐｉｇｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、二重標的指向性ナノボディ（dual targeting nanobody）（Ａｂｌｙｎｘ）、二重標的指向性の重鎖のみのドメイン抗体（dual targeting heavy chain only domain antibody）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２００】
本発明の全長二重特異性抗体は、例えば、２つの単特異性二価抗体間でのＦａｂアーム交換（又は半分子交換）を使用して、インビトロでのセルフリー環境において又は共発現を使用するかのいずれか一方において、異なる特異性を有する２つの抗体半分子の好ましいヘテロ二量体形成のために、各半分子における重鎖ＣＨ３界面に置換を導入することにより生成されてもよい。Ｆａｂアーム交換反応は、ジスルフィド結合異性化反応及びＣＨ３ドメインの解離−会合の結果である。親単特異性抗体のヒンジ領域における重鎖ジスルフィド結合は減少する。親単特異性抗体のうち１つの得られた遊離システインは、第２の親単特異性抗体分子のシステイン残基と重鎖内ジスルフィド結合を形成し、同時に、親抗体のＣＨ３ドメインは、解離−会合により開放及び再形成する。ＦａｂアームのＣＨ３ドメインは、ホモ二量体化より好ましいヘテロ二量体化に操作されてもよい。得られた生成物は、それぞれ異なるエピトープ、すなわち、ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）上のエピトープ及びＣＤ３上のエピトープに結合する、２つのＦａｂアーム又は半分子を有する二重特異性抗体である。
【０２０１】
本明細書で使用されるとき、「ホモ二量体化」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用されるとき、「ホモ二量体」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
【０２０２】
本明細書で使用されるとき、「ヘテロ二量体化」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用されるとき、「ヘテロ二量体」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
【０２０３】
「ノブ−ｉｎ−ホール」戦略（例えば、国際公開第２００６／０２８９３６号を参照のこと）が、全長二重特異性抗体を生成するのに使用されてもよい。簡潔に、ヒトＩｇＧにおけるＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸は、ヘテロ二量体形成を促進するために、ＣＨ３ドメイン相互作用に影響を及ぼす位置において変異され得る。小さな側鎖を有するアミノ酸（ホール）が、第１の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入され、大きな側鎖を有するアミノ酸（ノブ）が、第２の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入される。２つの抗体の共発現後に、ヘテロ二量体が、「ホール」を有する重鎖と「ノブ」を有する重鎖との優先的な相互作用の結果として形成される。ノブ及びホールを形成する例示的なＣＨ３置換ペアは、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表現）。
【０２０４】
他の戦略、例えば、あるＣＨ３表面における正に荷電した残基及び第２のＣＨ３表面における負に荷電した残基を置換することによる静電的相互作用を使用する重鎖ヘテロ二量体化の促進が、米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号、米国特許出願公開第２００９／０１８２１２７号、米国特許出願公開第２０１０／０２８６３７号、又は米国特許出願公開第２０１１／０１２３５３２号に記載されたように使用されてもよい。他の戦略では、ヘテロ二量体化は、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号又は米国特許出願公開第２０１３／０１９５８４９号に記載されたように、下記置換：Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ  Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ  Ｋ４０９Ｆ  Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ  Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表現）により促進されてもよい。
【０２０５】
上記された方法に加えて、本発明の二重特異性抗体は、国際公開第２０１１／１３１７４６号に記載された方法に従って、セルフリー環境でのインビトロにおいて、２つの単特異性ホモ二量体抗体のＣＨ３領域中に非対称な変異を導入し、ジスルフィド結合を異性化させる還元条件下において、２つの親単特異性ホモ二量体抗体から二重特異性ヘテロ二量体抗体を形成することにより生成されてもよい。この方法において、第１の単特異性二価抗体（例えば、抗ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）抗体）及び第２の単特異性二価抗体（例えば、抗ＣＤ３抗体）は、ヘテロ二量体の安定性を促進するＣＨ３ドメインにおける特定の置換を有するように操作される。これらの抗体は、ヒンジ領域におけるシステインがジスルフィド結合異性化を受けるのに十分な還元条件下において共にインキュベートされる。これにより、Ｆａｂアーム交換による二重特異性抗体が生成される。インキュベーション条件は、最適には、非還元条件に戻されてもよい。使用されてもよい例示的な還元剤は、２−メルカプトエチルアミン（２−ＭＥＡ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（ＤＴＥ）、グルタチオン、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、Ｌ−システイン、及びベータ−メルカプトエタノール、好ましくは、２−メルカプトエチルアミン、ジチオスレイトール、及びトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンからなる群から選択される還元剤である。例えば、少なくとも２０℃の温度において、少なくとも２５ｍＭ  ２−ＭＥＡの存在下又は少なくとも０．５ｍＭ  ジチオスレイトールの存在下で、ｐＨ５〜８、例えば、ｐＨ７．０又はｐＨ７．４において、少なくとも９０分のインキュベーションが使用されてもよい。
【０２０６】
記載されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体に加えて、記載されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体をコード可能なポリヌクレオチド配列も提供される。記載されたポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供され、同様に、本明細書で提供されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体を発現している細胞も提供される。また、開示されたベクターを発現可能な細胞も記載される。これらの細胞は、哺乳類細胞（例えば、２９３Ｆ細胞、ＣＨＯ細胞）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ７細胞）、酵母細胞、植物細胞、又は細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）でもよい。記載された抗体はまた、ハイブリドーマ細胞により生成することができる。
【０２０７】
多重特異性抗体及びその多重特異性抗原結合フラグメントを使用する治療組成物及び処置方法
上記で検討されたＣＤ１２３二重特異性抗体、例えば、上記で検討されたＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体は、治療に有用である。特に、ＣＤ１２３二重特異性抗体は、がんを処置するのに有用である。また、本明細書において、治療的に有効な量の、本明細書に記載された多重特異性抗体又は多重特異性抗原結合フラグメントと、医薬的に許容され得る担体とを含む、哺乳類における過剰増殖性障害を処置するための治療組成物が提供される。好ましい実施形態では、多重特異性抗体は、本明細書に記載されたようなＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体又はその多重特異性抗原結合フラグメントであり、より好ましくは、本明細書に記載されたようなＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメントである。一実施形態において、前記医薬組成物は、ＣＤ１２３発現がんを処置するためのものである。同がんには、下記：ＣＤ１２３発現血液がん、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、低リスク又は高リスク）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ、全てのサブタイプを含む）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）、ＣＤ１２３が発現していると今のところ判定される他のがんが挙げられる（が、これらに限定されない）。がん、例えば、上記で検討された特定のがんを含む血液がんを処置するのに使用されてもよい特定の二重特異性抗体には、抗体７９５９、３９７８、７９５５、９９５８、８７４７、４４３５、及び５４６６が挙げられる。がん、例えば、これらの特定のがんを含む血液がんを処置するのに有用な二重特異性抗体の一例は、抗体９９５８である。がん、例えば、これらの特定のがんを含む血液がんを処置するのに有用な二重特異性抗体の別の例は、抗体３９７８である。がん、例えば、これらの特定のがんを含む血液がんを処置するのに有用な二重特異性抗体の別の例は、抗体８７４７である。がん、例えば、これらの特定のがんを含む血液がんを処置するのに有用な二重特異性抗体の別の例は、抗体７９５９である。
【０２０８】
本明細書で提供された医薬組成物は、ａ）有効量の本発明の多重特異性抗体又は抗体フラグメントと、ｂ）不活性でも又は生理学的に活性でもよい医薬的に許容され得る担体とを含む。好ましい実施形態では、多重特異性抗体は、本明細書に記載されたようなＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体又はその多重特異性抗原結合フラグメントであり、より好ましくは、本明細書に記載されたようなＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメントである。本明細書で使用されるとき、「医薬的に許容され得る担体」という用語は、生理学的に適合性である、任意かつ全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤、及び抗真菌剤等を含む。適切な担体、希釈剤、及び／又は賦形剤の例には、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール等のうち１種又は２種以上、並びにそれらの任意の組み合わせが挙げられる。多くの場合には、等張性剤、例えば、糖、ポリアルコール、又は塩化ナトリウムを組成物中に含むのが好ましいであろう。特に、適切な担体の関連する例には、（１）ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ約７．４、約１ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミンを含有又は非含有、（２）０．９％生理食塩水（０．９％ｗ／ｖ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ））、及び（３）５％（ｗ／ｖ）デキストロースが挙げられ、抗酸化剤、例えば、トリプタミン及び安定化剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ  ２０（登録商標）をも含有してもよい。
【０２０９】
本明細書における組成物はまた、処置される特定の障害に応じて、更なる治療剤を含有してもよい。好ましくは、多重特異性抗体又は抗体フラグメントと補助的な活性化合物とは、互いに有害に影響を及ぼさない補完的な活性を有するであろう。好ましい実施形態では、更なる治療剤は、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２である。好ましい実施形態では、更なる治療剤は、化学療法剤である。
【０２１０】
本発明の組成物は、各種の形態でもよい。これらには、例えば、液体、半固体、及び固体の剤形が挙げられるが、好ましい形態は、意図された投与方式及び治療用途により決まる。典型的に好ましい組成物は、注射用液又は注入用液の形態である。好ましい投与方式は、非経口（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下）である。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、静脈内に、ボーラスとして又は一定期間にわたる連続的な注入により投与される。別の好ましい実施形態では、本組成物は、局所及び全身性の治療効果を発揮するために、筋肉内、皮下、関節内、関節滑液嚢内、腫瘍内、腫瘍周囲、病巣内、又は病巣周囲の経路により投与される。
【０２１１】
非経口投与用の無菌組成物が、本発明の抗体、抗体フラグメント、又は抗体コンジュゲートを、必要とされる量で適切な溶媒に包含させ、続けて、マイクロフィルター法により滅菌することにより調製され得る。溶媒又は媒体として、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール等、並びにこれらの組み合わせを使用することができる。多くの場合には、等張性剤、例えば、糖、ポリアルコール、又は塩化ナトリウムを組成物中に含むのが好ましいであろう。これらの組成物はまた、補助剤、特に、湿潤剤、等張化剤、乳化剤、分散剤、及び安定化剤を含有してもよい。非経口投与用の無菌組成物はまた、使用時に滅菌水又は任意の他の注射用無菌媒体中に溶解されてもよい、無菌の固体組成物の形態に調製されてもよい。
【０２１２】
多重特異性抗体又は抗体フラグメントはまた、経口投与されてもよい。経口投与用の固体組成物として、錠剤、丸剤、粉末剤（ゼラチンカプセル剤、サッシェ剤）、又は顆粒剤が使用されてもよい。これらの組成物において、本発明による活性成分は、１つ又は２つ以上の不活性な希釈剤、例えば、デンプン、セルロース、スクロース、ラクトース、又はシリカと、アルゴン流下において混合される。これらの組成物はまた、希釈剤以外の物質、例えば、１つ又は２つ以上の滑材、例えば、ステアリン酸マグネシウム又はタルク、着色剤、コーティング（糖衣錠）、又はグレーズを含んでもよい。
【０２１３】
経口投与用の液体組成物として、不活性な希釈剤、例えば、水、エタノール、グリセロール、植物油、又はパラフィンオイルを含有する、医薬的に許容され得る液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、及びエリキシル剤が使用されてもよい。これらの組成物は、希釈剤以外の物質、例えば、湿潤剤、甘味料、増粘剤、着香剤、又は安定化製品を含んでもよい。
【０２１４】
用量は、所望の効果、処置の持続期間、及び使用される投与経路により決まる。用量は、一般的には、成人１日あたりに経口で５ｍｇ〜１０００ｍｇであり、単位用量は、活性物質１ｍｇ〜２５０ｍｇの範囲である。一般的には、医師は、適切な用量を、処置される対象の年齢、体重、及び同対象に固有の任意の他の要因に応じて決定するであろう。
【０２１５】
また、本明細書において、ＣＤ１２３＋細胞を殺傷するための方法であって、それを必要とする患者に、前記ＣＤ１２３に結合し、Ｔ細胞を補充して、前記ＣＤ１２３＋細胞を殺傷する（すなわち、Ｔ細胞を向け直す）ことが可能な多重特異性抗体を投与することにより、ＣＤ１２３＋細胞を殺傷するための方法が提供される。本発明の多重特異性抗体又は抗体フラグメントのいずれかは、治療的に使用されてもよい。好ましい実施形態では、多重特異性抗体は、本明細書に記載されたようなＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体又はその多重特異性抗原結合フラグメントであり、より好ましくは、本明細書に記載されたようなＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメントである。
【０２１６】
好ましい実施形態では、本発明の多重特異性抗体又は抗体フラグメントは、哺乳類における過剰増殖性障害を処置するために使用される。より好ましい実施形態では、本発明の多重特異性抗体又は抗体フラグメントを含有する、上記で開示された医薬組成物のうち１つは、哺乳類における過剰増殖性障害を処置するために使用される。一実施形態において、この障害は、がんである。特に、このがんは、ＣＤ１２３発現がんであり、同がんには、下記：ＣＤ１２３発現血液がん、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ；低リスク又は高リスク）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ；全てのサブタイプを含む）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）及びＣＤ１２３が発現されることが未だに決定されていない他のがんが挙げられる（が、これらに限定されない）。好ましい実施形態では、多重特異性抗体は、本明細書に記載されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体又はその多重特異性抗原結合フラグメント、及びより好ましくは、本明細書に記載されたＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメントである。
【０２１７】
したがって、本発明の医薬組成物は、各種のがんの治療又は予防に有用である。同がんには、下記：ＣＤ１２３発現がんが挙げられる（が、これに限定されない）。同ＣＤ１２３発現がんには、下記：ＣＤ１２３発現血液がん、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、低リスク又は高リスク）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ、全てのサブタイプを含む）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）及びＣＤ１２３が発現されることが今のところ判定される他のがんが挙げられる（が、これらに限定されない）。
【０２１８】
同様に、本明細書において、選択された細胞集団の成長を阻害するための方法であって、ＣＤ１２３発現標的細胞又はこのような標的細胞を含有する組織を、有効量の本発明の多重特異性抗体又は抗体フラグメントと、単独で、又は他の細胞毒性剤若しくは治療剤との組み合わせにおいてかのいずれか一方で、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の存在下で接触させることを含む、方法が更に提供される。好ましい実施形態では、多重特異性抗体は、本明細書に記載されたようなＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体又はその多重特異性抗原結合フラグメントであり、より好ましくは、本明細書に記載されたようなＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメントである。好ましい実施形態では、更なる治療剤は、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２である。好ましい実施形態では、更なる治療剤は、化学療法剤である。選択された細胞集団の成長を阻害するための方法は、インビトロ、インビボ、又はエクスビボにおいて実施され得る。
【０２１９】
インビトロでの使用例には、疾患細胞又は悪性細胞を殺傷するための同じ患者への移植前の自家骨髄の処理、適格性Ｔ細胞を殺傷し、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を防止するための移植前の骨髄の処理、標的抗原を発現していない所望の変異体を除く全ての細胞を殺傷し、又は不要な抗原を発現している変異体を殺傷するための細胞培養物の処理が挙げられる。非臨床的なインビトロでの使用条件は、当業者により容易に決定される。
【０２２０】
臨床的なエクスビボでの使用例は、がん処置における自家移植前での、骨髄から腫瘍細胞を除去することである。処置は、下記のように行われ得る。骨髄を、患者又は他の個体から収集し、ついで、本発明の細胞毒性剤を添加された血清含有培地中でインキュベートする。濃度は、約１０ｕＭ〜１ｕＭの範囲であり、約３０分〜約４８時間であり、約３７℃である。濃度及びインキュベーション時間、すなわち、用量の正確な条件は、当業者により容易に決定される。インキュベーション後、骨髄細胞を、血清含有培地で洗浄し、既知の方法に従って、ｉ．ｖ．注入により患者に戻す。患者が他の処置、例えば、一連の骨髄破壊的化学療法又は全身照射を受けている状況において、骨髄の収集と処理された細胞の再注入との時間の間、処理された骨髄細胞は、標準的な医療機器を使用して、液体窒素中で凍結保存される。
【０２２１】
臨床的なインビボでの使用について、治療的に有効な量の多重特異性抗体又は抗原結合フラグメントがそれを必要とする対象に投与される。例えば、ＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体及びその多重特異性抗原結合フラグメントは、それを必要とする対象における、ＣＤ１２３発現がんの処置に有用であり得る。一部の実施形態では、ＣＤ１２３発現がんは、血液がん、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、低リスク又は高リスク）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ、全てのサブタイプを含む）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である。好ましい実施形態では、多重特異性抗体は、本明細書に記載されたＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体又はその多重特異性抗原結合フラグメント、及びより好ましくは、本明細書に記載されたＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメントである。一部の実施形態では、対象は、哺乳類、好ましくは、ヒトである。一部の実施形態では、多重特異性抗体又は多重特異性抗原結合フラグメントは、無菌試験済みの溶液として投与されるであろう。
【０２２２】
処置及び使用の上記方法における投与計画は、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調節される。例えば、単一ボーラスを投与してもよく、いくつかの分離用量を、時間をかけて投与してもよく、又は用量を治療状況の緊急性によって示されるように、比例して減少又は増加させてよい。非経口組成物は、投与の容易性及び用量の均一性のための投与形態に製剤化されてもよい。
【０２２３】
多重特異性抗体及びフラグメントの効率的な投与及び投与計画は、処置される疾患又は状態により決まり、当業者により決定されてもよい。本発明の化合物の治療的に有効な量の例示的で非限定的な範囲は、約０．００１〜１０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００１〜５ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００１〜２ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００１〜１ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００１、約０．０１、約０．１、約１、又は約１０ｍｇ／ｋｇである。
【０２２４】
当技術分野において通常の技能を有する医師又は獣医師は、必要とされる医薬組成物の有効量を、容易に決定し、処方することができる。例えば、医師又は獣医師は、所望の治療効果を達成するのに必要されるより少ないレベルで医薬組成物中に利用される多重特異性抗体又はフラグメントの用量で開始し、所望の効果が達成されるまで、用量を徐々に増大させることができる。一般的には、本発明の二重特異性抗体の適切な日量は、治療効果を生じさせるのに有効な最も少ない用量である化合物量であろう。投与は、例えば、非経口、例えば、静脈内、筋肉内、又は皮下でもよい。一実施形態において、多重特異性抗体又はフラグメントは、ｍｇ／ｍ2で算出された毎週投与での注入により投与されてもよい。このような用量は、例えば、下記：用量（ｍｇ／ｋｇ）×７０：１．８に従って、上記で提供されたｍｇ／ｋｇ用量に基づくことができる。このような投与は、例えば、１〜８回、例えば、３〜５回繰り返されてもよい。投与は、２〜２４時間、例えば、２〜１２時間の期間にわたる連続的な注入により行われてもよい。一実施形態において、多重特異性抗体又はフラグメントは、毒性の副作用を減少させるために、長期間、例えば、２４時間超にわたるゆっくりとした連続的な注入により投与されてもよい。
【０２２５】
一実施形態において、多重特異性抗体又はフラグメントは、１週間に１回で与えられる場合、最大８回、例えば、４〜６回の固定用量として算出された毎週投与において投与されてもよい。このような計画は、例えば、６ケ月又は１２ケ月後に、必要に応じて１回又は２回以上の回数繰り返されてもよい。このような固定用量は、例えば、上記で提供されたｍｇ／ｋｇ用量に基づくことができる。ここで、体重は、７０ｋｇと仮定する。用量は、例えば、生体サンプルを採取し、本発明の多重特異性抗体のＣＤ１２３抗原結合領域を標的にする抗イディオタイプ抗体を使用することによって、本発明の二重特異性抗体の投与時の血中量を測定することにより、決定又は調節されてもよい。
【０２２６】
一実施形態において、多重特異性抗体又はフラグメントは、維持治療、例えば、６ケ月以上の期間に週一回等により投与されてもよい。
【０２２７】
多重特異性抗体又はフラグメントはまた、がんの進行リスクを低下させ、がんの進行におけるイベントの発生の開始を遅延させ、かつ／又はがんが緩解した際の再発リスクを低下させるために、予防的に投与されてもよい。
【０２２８】
本明細書に記載された多重特異性抗体及びそのフラグメントはまた、組み合わせ治療において投与されてもよい、すなわち、処置される疾患又は状態に関連する他の治療剤と組み合わせられてもよい。したがって、一実施形態において、抗体含有医薬は、１種又は２種以上の他の治療剤、例えば、化学療法剤と組み合わせるためのものである。一部の実施形態では、他の治療剤は、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２である。このような組み合わせ投与は、同時、任意の順序において、別々又は連続的でもよい。同時投与について、薬剤は、必要に応じて、１つの組成物又は別々の組成物として投与されてもよい。
【０２２９】
一実施形態において、対象においてＣＤ１２３を発現している細胞が関与する障害を処置するための方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の、本明細書に記載された多重特異性抗体又はフラグメント、例えば、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体と放射線治療とを投与することを含む方法が提供される。一実施形態において、がんを治療又は予防するための方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の、本明細書に記載された多重特異性抗体又はフラグメント、例えば、ＣＤ１２３×ＣＤ３抗体と放射線治療とを投与することを含む方法が提供される。放射線治療としては、提供される患者に対する、放射線又は放射性医薬の関連する投与を含んでもよい。放射線源は、処置される患者の外側又は内側のいずれか一方であってもよい（放射線処置は、例えば、放射線外部照射（ＥＢＲＴ）又は組織内照射療法（ＢＴ）の形態でもよい）。このような方法を実施するのに使用されてもよい放射性元素には、例えば、ラジウム、セシウム−１３７、イリジウム−１９２、アメリシウム−２４１、金−１９８、コバルト−５７、銅−６７、テクネチウム−９９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、及びインジウム−１１１が挙げられる。
【０２３０】
キット
また、本明細書において、例えば、記載された多重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントと、特定の細胞種を殺傷するための抗体又はフラグメントを使用するための取扱説明書と、を含むキットも提供される。好ましい実施形態では、多重特異性抗体は、本明細書に記載されたようなＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体又はその多重特異性抗原結合フラグメントであり、より好ましくは、本明細書に記載されたようなＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメントである。取扱説明書は、多重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを、インビトロ、インビボ、又はエクスビボにおいて使用するための指示を含んでもよい。
【０２３１】
典型的には、キットは、多重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを含有する区画を有するであろう。多重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、凍結乾燥状態、液状、又はキットに含ませるのに修正可能な他の形態でもよい。キットはまた、キットの取扱説明書に記載された方法を実施するのに必要とされる、更なる要素を含有してもよい。同要素は、例えば、凍結乾燥粉末を再構成するための滅菌溶液、患者への投与の前に多重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントと組み合わせるための更なる薬剤、及び多重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを患者に投与するのを支援するツールである。
【０２３２】
診断的使用
本明細書に記載された多重特異性抗体及びフラグメントはまた、診断目的に使用されてもよい。このため、本明細書で定義されたような多重特異性抗体又はフラグメントを含む診断組成物及びその使用もまた提供される。好ましい実施形態では、多重特異性抗体は、本明細書に記載されたようなＣＤ１２３×ＣＤ３多重特異性抗体又はその多重特異性抗原結合フラグメントであり、より好ましくは、本明細書に記載されたようなＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメントである。一実施形態において、本発明は、二重特異性ＣＤ１２３×ＣＤ３抗体と、ＣＤ１２３に対する抗体の結合を検出するための１種又は２種以上の試薬と、を含む容器を含む、がんを診断するためのキットを提供する。試薬には、例えば、蛍光タグ、酵素タグ、又は他の検出可能なタグを挙げることができる。試薬はまた、酵素反応のための二次若しくは三次抗体又は試薬を含んでもよい。この場合、酵素反応は、可視化することができる生成物を生じる。例えば、本明細書に記載された多重特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、放射線標識、蛍光標識、エピトープタグ、ビオチン、発色団標識、ＥＣＬ標識、酵素、ルテニウム、111Ｉｎ−ＤＯＴＡ、111Ｉｎ−ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、及びベータガラクトシダーゼ、若しくはポリヒスチジン、又は、当技術分野において公知の類似するこのような標識で標識されてもよい。
【０２３３】
下記実施例は、先の開示を補い、本明細書に記載された主題のより良好な理解を提供するために提供される。これらの実施例は、記載された主題を限定すると解釈されるべきでない。本明細書に記載された実施例及び実施形態は、例示のみを目的とするものであり、それらを考慮して種々の改変又は変更が、当業者に明らかであろう。また、本明細書に記載された実施例及び実施形態は、本発明の真の範囲内に含まれ、本発明の真の範囲を逸脱することなくなされ得ることが理解される。
【実施例】
【０２３４】
実施例１：材料
ＣＤ１２３細胞株の生成
ヒトＣＤ１２３  ＳＰ１  ＥＣＤ（アミノ酸２０〜３０５）（配列番号１）、ヒトＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤ（配列番号２のアミノ酸１９〜２２７）、及びｃｙｎｏＣＤ１２３  ＥＣＤ（配列番号３のアミノ酸１９〜３０５）を提示するｐＤｉｓｐｌａｙ（商標）ベクターのセットを、抗ＣＤ１２３リードを評価するためのスクリーニングツールとして使用するために生成した。細胞表面上におけるタンパク質の提示を可能にする哺乳類の発現ベクターであるｐＤｉｓｐｌａｙ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用した（図１）。ｐＤｉｓｐｌａｙ（商標）から発現されるタンパク質を、Ｎ末端において、マウスＩｇκ鎖リーダー配列（同リーダー配列は、タンパク質を分泌経路に向かわせる）、及びＣ末端において、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）膜貫通ドメイン（同ドメインは、タンパク質を細胞膜にアンカーし、そのタンパク質を細胞外側上に提示させる）に融合させる。ｐＤｉｓｐｌａｙ（商標）から発現される組換えタンパク質は、ウェスタンブロット又は免疫蛍光法による検出のためのヘマグルチニンＡ及びｍｙｃエピトープを含有する。ＣＭＶプロモータは、発現を駆動させる。
【０２３５】
標準的な方法を使用して、ベクターを、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞内に一過性にトランスフェクションした。トランスフェクションされた２９３Ｆ付着細胞を、安定したプラスミド組込み用に選択した。ついで、単一細胞を選別し、ＣＤ１２３表面受容体発現を、ＢａｎｇｓＬａｂｓ  Ｑｕａｎｔｕｍ  ＦＩＴＣ−５キット（カタログ＃８５５，Ｂａｎｇｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ）を使用するＦＡＣＳにより定量した。各細胞株について、１０個の単一細胞クローンのセットを、スクリーニング用に選択し、ＣＤ１２３  ＥＣＤ発現について定量した。後続のヒットスクリーニングに使用される細胞株は、細胞１個あたりに約５００，０００個のＣＤ１２３  ＥＣＤコピーの表面発現を有した。
【０２３６】
可溶性ＣＤ１２３  ＥＣＤタンパク質の生成
ＣＤ１２３  ＳＰ１（配列番号１）のアミノ酸２０〜３０５に相当する、組換えヒトＣＤ１２３  ＳＰ１  ＥＣＤ−Ｈｉｓタグタンパク質（ロット＃ＬＶ０８１１１０Ａ）を、ファージパニング及びヒットスクリーニングに使用するために、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（＃３０１−Ｒ３／ＣＦ）から得た。このタンパク質を、使用前にエンドトキシンについて検査し、ファージパニング試験のためにビオチン化した。この材料をまた、結合性及び親和性の測定にも使用した。
【０２３７】
ヒトＣＤ１２３  ＳＰ２（配列番号２）のアミノ酸１８〜２２５に相当する、組換えヒトＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤタンパク質を、結合性及び親和性の測定に使用するために精製した。ｃＤＮＡを、遺伝子合成手法（米国特許第６，６７０，１２７号、米国特許第６，５２１，４２７号）を使用して調製した。標準的な分子生物学的手法を使用して、合成の可溶性ＣＤ１２３  ＥＣＤ  ＳＰ２の発現用プラスミドを調製した。Ｎ末端ｇｐ６７シグナル配列及びｃ末端６−Ｈｉｓタグを有するＣＤ１２３  ＥＣＤ  ＳＰ２遺伝子ブラグメントを、ｐＦａｓｔｂａｃ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のＥｃｏ  ＲＩ及びＮｏｔ  Ｉ部位にクローニングし、Ｈｉｇｈ  Ｆｉｖｅ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中において、Ｂａｃ  ｔｏ  Ｂａｃシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）により発現させた。分泌されたタンパク質（配列番号２２６）を、ＨｉｓＴｒａｐ（ＧＥ）及びＳｕｐｅｒｄｅｘ  ７５（ＧＥ）カラムにより精製した。この材料を、結合性及び親和性の測定並びにエピトープマッピングに使用した。
【０２３８】
ＳｕｒｅＬｉｎｋビオチン化キット（ＫＰＬ  ＃８６−００−０１）を使用し、製造の取扱説明書メーカに従って、可溶性ＣＤ１２３  ＥＣＤタンパク質をビオチン化した。タンパク質を、ＳＤＳ／ＰＡＧＥにランして、単量体状態を確認した。
【０２３９】
ｘ−線結晶構造解析用の抗ＣＤ３抗体
ＳＰ３４  ｍＡｂであるマウスＩｇＧ３／ラムダアイソタイプを、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）（Ｃａｔ．Ｎｏ．５５６６１１）から購入した。これは、それぞれ、配列番号４及び５において示される軽鎖及び重鎖を含んでいた。
【０２４０】
実施例２：抗ヒトＣＤ１２３ｍＡｂの特定
Ｖｋ１−３９、３−１１、３−２０、及び４−１軽鎖ライブラリと対を成すＶＨ１−６９、３−２３、及び５−５１重鎖ライブラリからなる、新規なＨｕｍａｎ  Ｆａｂ−ｐＩＸライブラリ［Ｓｈｉ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，２０１０．３９７（２）：ｐ．３８５〜３９６．国際公開第２００９／０８５４６２号］の溶液パニングを、記載されたビオチン化抗原−ストレプトアビジン磁性ビーズ捕捉法（Ｒｏｔｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３７６：１１８２〜１２００，２００８、Ｓｔｅｉｄｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４６：１３５〜１４４，２００８）を使用して、４回のその後のラウンドで行った。
【０２４１】
ｐＩＸ遺伝子を、４回目のラウンドのパニング後に、ファージミドＤＮＡから切除して、可溶性ｈｉｓタグ付きＦａｂコード領域を生成した。Ｆａｂを、Ｅ．ｃｏｌｉ中において発現させ、組換えヒトＣＤ１２３  ＳＰ１  ＥＣＤ−Ｈｉｓタグタンパク質への結合性について、ＥＬＩＳＡでスクリーニングした。簡潔に、９６ウェルのＮｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｐプレート（Ｎｕｎｃ  ＃４３７１１１）を、ＰＢＳ中のヒツジ抗ヒトＦｄ（Ｔｈｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ  ＃ＰＣ０７５）により、１μｇ／ｍＬで、４℃において一晩コートした。Ｆａｂ発現ベクターを含有する細菌コロニーを、ディープウェル培養プレートにおいて、４５０μＬの２×ＹＴ（Ｃａｒｂｅｎｅｃｉｌｌｉｎ）中で、濁る（ＯＤ６００≒０．６）まで増殖させた。Ｆａｂ発現を、濃度１ｍＭにＩＰＴＧの付加により誘引した。培養物を、３０℃で一晩増殖させ、ついで、遠心分離により分類した。抗ＦｄコートＭａｘｉｓｏｒｐプレートを、ＴＢＳ、０．５％  Ｔｗｅｅｎ−２０（Ｓｉｇｍａ  ＃７９０３９−１０ＰＡＫ）で１回洗浄し、ウェルあたりに２００μＬのＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．５％）＋脱脂粉乳（３％）で、室温において１時間ブロッキングした。この工程及び後続の全ての工程において、プレートを、ＴＢＳ、０．５％  Ｔｗｅｅｎ−２０（Ｓｉｇｍａ  ＃７９０３９−１０ＰＡＫ）で３回洗浄した。各ウェルに、５０μＬのＦａｂ上清を入れ、続けて、室温において１時間インキュベートした。洗浄後、５０ｕＬのビオチン化ＣＤ１２３を加え、室温において１時間インキュベートした。洗浄後、５０μＬのストレプトアビジン：ＨＲＰ（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃２１１３０）を、１：５０００希釈で加えた。プレートを、室温において１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、５０ｕＬの化学発光基質ＰｏＤ（Ｒｏｃｈｅ  ＃１２１−５８２９５００００１）を、製造の取扱説明書メーカに従って加えた。ついで、プレートを、発光について、ＥｎＶｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）プレートリーダーにおいて読み取った。バックグラウンドを５倍超上回るシグナルを示すウェルを、ヒットと考えた。
【０２４２】
組換えヒトＣＤ１２３  ＳＰ１  ＥＣＤ−Ｈｉｓタグタンパク質に対する結合性を示すクローンを、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）の可変領域において配列決定した。合計５２個の固有のＦａｂ配列を、ファージパニングにより特定し、４５個を、インフュージョンクローニングにより、ＩｇＧ１アイソタイプに最終的に変換した（表１）。ＰＣＲ  ＳｕｐｅｒＭｉｘ  Ｈｉｇｈ  Ｆｉｄｅｌｉｔｙキット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＃１０７９０−０２０）を使用して、ＨＣ及びＬＣ可変領域をＰＣＲ増幅し、Ｉｎ−Ｆｕｓｉｏｎ（登録商標）ＨＤ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｐｌｕｓキット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  ＃６３８９０９）を使用して、ＨＣについてｖＤＲ１４９及びＬＣについてｖＤＲ１５７中のＥｓｐ３Ｉ部位にクローニングすることにより、インフュージョンクローニングを行った。ヒットのＶＨ及びＶＬを以下の表４に示す。
【０２４３】
【表４−１】
0006805130.tif 000006
【０２４４】
【表４−２】
0006805130.tif 000007
【０２４５】
【表５−１】
0006805130.tif 000008
【０２４６】
【表５−２】
0006805130.tif 000009
【０２４７】
【表５−３】
0006805130.tif 000010
【０２４８】
【表５−４】
0006805130.tif 000011
【０２４９】
実施例３：ｈＣＤ１２３  ＳＰ１、ｈＣＤ１２３  ＳＰ２、及びｃｙｎｏＣＤ１２３  ＳＰ１に対するＭＳＤ細胞の結合性
ＭＳＤ（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ）細胞結合アッセイを使用して、操作されたｐＤｉｓｐｌａｙ細胞に対するＣＤ１２３抗体の結合性を評価した。スクリーニングアッセイの目的は、ｈＣＤ１２３  ＳＰ１及びＳＰ２を発現している細胞に結合した抗体を特定すること、並びにｃｙｎｏＣＤ１２３  ＳＰ１を発現している細胞との交叉反応性を特定することとした。
【０２５０】
細胞を固定し、ファージを、トリプリケートでアッセイした。簡潔に、発現上清又は精製ＣＤ１２３抗体を、１０μｇ／ｍＬに正規化した。ウェルあたりに５０００個の細胞を、３８４ウェルプレート（ＭＡ６０００，ｃａｔ．Ｌ２１ＸＢ，ＭＳＤ）に播種し、２時間付着させた。ついで、細胞を、ＰＢＳ中の２０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）で、１５分間ブロッキングした。ついで、抗体上清を加え、ＲＴで１時間放置した。細胞を、ＰＢＳで３回洗浄し、ついで、ルテニウム標識化二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を、１μｇ／ｍＬで加え、室温において１時間インキュベートした。ついで、更なる洗浄工程を適用し、ついで、ウェルあたり３５μＬの（界面活性剤を含まない）ＭＳＤリードバッファＴを加え、検出のために、３０分間インキュベートした。ついで、Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ２４００（ＭＳＤ）を使用して、プレートを読み取った。データを、コントロールに対して正規化し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ５を使用してグラフ化した。陽性のバインダーを、バックグラウンドより３倍高いシグナルを有するヒットであると決定した（図２Ａ、Ｂ、及びＣ）。アッセイを、データ整合性のために繰返し、トップバインダーを、更なる開発のために選択した。下記ヒット：Ｉ３ＲＢ２、Ｉ３ＲＢ５、Ｉ３ＲＢ８、Ｉ３ＲＢ１８、Ｉ３ＲＢ２０、Ｉ３ＲＢ２１、及びＩ３ＲＢ３５は、３つ全ての細胞株に対する結合性について陽性であった。
【０２５１】
実施例４：ＳＰＲによる親和性測定
ＰｒｏｔｅＯｎ親和性測定
組換えヒトＣＤ１２３  ＳＰ１  ＥＣＤ及びＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤに対する２９個の抗ＣＤ１２３候補の親和性を、ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６タンパク質相互作用アレイシステム（ＢｉｏＲａｄ）を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定した。
【０２５２】
ＣＤ１２３  ＳＰ１  ＥＣＤ又はＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤの会合及び解離の速度を、各変異体について測定した。アミンカップリング化学についての製造業者の取扱説明書を使用して、ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）をＧＬＣチップ（ＢｉｏＲａｄ）の表面に共有結合させることにより、バイオセンサ表面を調製した。約８８００ＲＵ（応答単位）のヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｐｒｏｄ  ＃１０９−００５−０９８）を固定した。固定されたＲＵはまた、他の抗体を捕捉するのに加えられたヤギ抗マウスＦｃ抗体も含んだが、ここで報告したものに含めなかった。１：１で混合したため、これらの固定されたＲＵの約５０％は、ヤギ抗ヒトＦｃであると予測される。動力学実験を、ランニングバッファ（ＰＢＳ  ｐＨ７．４、０．００５％  Ｐ２０、３ｍＭ  ＥＤＴＡ）中において２５℃で行った。４倍（１：３）系列希釈のヒトＣＤ１２３  ＳＰ１  ＥＣＤ及びＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤを、４００ｎＭで開始して、ランニングバッファにおいて調製した。平均３００ＲＵのｍＡｂ（１７４〜６００）を、センサチップの各チャネルにおいて捕捉した。捕捉された候補を含有していない参照スポット（ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）−修飾表面）を、参照表面として使用した。ｍＡｂの捕捉を、４０μＬ／分での抗原の３分の注入（会合段階）により行い、続けて、１０分のバッファフロー（解離段階）を行った。チップ表面を、１００μＬ／分での、０．８５％リン酸の注入により再生した。機器のソフトウェアにおいてデータを処理した。分析物の注入についてのレファレンスを引いた曲線からバッファ注入によって作成した曲線を減じることによって、レファレンスデータのダブルレファレンスサブトラクションを実施した。グループフィットを有する１：１ラングミュア結合モデルを使用して、データの動力学分析を行った。各ｍＡｂについての結果を、Ｋa（ｋｏｎ又はｏｎ速度）、Ｋｄ（ｋｏｆｆ又はｏｆｆ速度）、ＫD（平衡解離定数）の形式で報告した（表５）。
【０２５３】
結果から、２９個全てのｍＡｂがＣＤ１２３  ＳＰ１  ＥＣＤに結合したが、それらのうち６個のみが、ＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤに対する結合性を示したことが示された。データの再現性を評価するために、抗体のうち４つの少なくとも２連でランした。全体的に、結果から、遅いｏｎ速度を有するＩ３ＲＢ１を除いて、複製間で良好な再現性が示された。
【０２５４】
【表６】
0006805130.tif 000012
1ＮＢＯ＝結合が観察されなかった
【０２５５】
Ｂｉａｃｏｒｅ親和性測定
ＣＤ１２３  ＳＰ１  ＥＣＤ及びＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤに対する複数の抗体の親和性もまた、Ｂｉａｃｏｒｅ機器を使用するｍＡｂ及びＦａｂフォーマットの両方における表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定した。Ｂｉａｃｏｒｅ  ３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ、Ｉｎｃ．，現在は、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅの一部門）を使用して、動力学試験を、２５℃において行った。ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）特異性抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｐｒｏｄ  ＃１０９−００５−０９８）を、カルボキシメチルデキストランコート金表面（ＣＭ−５チップ、Ｂｉａｃｏｒｅ）の２つのフローセル（通常、１及び２）に共有結合させた。ヒツジ抗ヒトＦｄ特異性抗体（Ｔｈｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  Ｐｒｏｄ  ＃ＰＣ０７５）を、カルボキシメチルデキストランコート金表面（ＣＭ−５チップ、Ｂｉａｃｏｒｅ）の２つのフローセル（通常、３及び４）に共有結合させた。デキストランのカルボキシメチル基を、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化させた。抗体を、１０ｍＭ酢酸ナトリウム中でｐＨ４．５においてカップリングさせた。表面上の残りの任意の反応部位は、エタノールアミンを用いた反応により遮断された。動力学的結合測定について、抗ＣＤ１２３分子を５又は６μＬ／分の流速で注入することにより、Ｆａｂを、抗Ｆｄ特異性抗体上に捕捉する一方、抗ＣＤ１２３抗体を、抗ヒトＦｃγ特異性抗体上に捕捉した。約７５ＲＵの抗体及び約５０ＲＵのＦａｂをそれぞれ捕捉した。Ａｂ及びＦａｂ捕捉を、１．６ｎＭ〜４００ｎＭの濃度での、ヒトＣＤ１２３  ＳＰ１又はヒトＣＤ１２３  ＳＰ２の４０μＬ／分での注入により行った。会合データを２分間収集した後、解離データを１０分間収集した。表面を、３０μＬの１００ｍＭ  Ｈ３ＰＯ４で１００μＬ／分で再生した。全試料は、３ｍＭ  ＥＤＴＡ及び０．００５％の表面活性剤Ｐ２０を含有するＤ−ＰＢＳ中で調製された。報告されたデータは、捕捉された抗体又はＦａｂを含有するフローセルと、捕捉された抗体又はＦａｂを含まない参照セルとの間のＳＰＲシグナルの差である。基準−除算シグナル（reference-subtracted signal）からブランク注入のデータを除算することによって、シグナルに対する器具の追加の寄与を除去した。データを、３連で行い、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．）を使用して、１：１結合モデルによる、全ての濃度（グローバルフィット）における会合及び解離段階を当て嵌めることにより分析した。２連実験を行い、良好に一致した。表わされたデータは、平均である。
【０２５６】
結果から、ｍＡｂ（Ｉ３ＲＢ２、Ｉ３ＲＢ１８、Ｉ３ＲＢ３５、Ｉ３ＲＢ３７）に結合するＣＤ１２３  ＳＰ１  ＥＣＤ及びＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤの親和性は、その対応するＦａｂ（Ｉ３ＲＢ１２０、Ｉ３ＲＢ１１９、Ｉ３ＲＢ１２１、Ｉ３ＲＢ１２２）と一致することが示された（表６）。また、分析された全ての抗ＣＤ１２３についての結果から、ＣＤ１２３  ＳＰ１  ＥＣＤ及びＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤに結合するＦａｂについての親和性の範囲はそれぞれ、１．８〜４６．９ｎＭ及び０．４〜１２．５ｎＭであり、一方、ｍＡｂ結合についての親和性の範囲はそれぞれ、１．２〜５２ｎＭ及び０．３〜１１．７ｎＭであることが示された。
【０２５７】
【表７】
0006805130.tif 000013
**アッセイ応答が予測より低い
ＮＤ：見掛けの結合、ただし、許容基準外のシグナル、（５ＲＵ未満であり、不良データ品質又は不規則なセンサグラム）
【０２５８】
実施例５：７Ｇ３との競合
ＥＬＩＳＡによるＣＤ１２３競合アッセイ
ＣＤ１２３抗体パネルを、７Ｇ３結合競合ＥＬＩＳＡにおいてスクリーニングした。７Ｇ３は、ＣＤ１２３  ＳＰ１抗原の最初の５０個のアミノ酸内に位置するエピトープに対する、中和性のモノクローナル抗体である（米国特許第６１７７０７８号）。７Ｇ３  ｍＡｂをＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）（Ｃａｔ．Ｎｏ．５５４５２６）から購入し、製造業者の取扱説明書（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）に従って、ＭＳＤ  Ｓｕｌｆｏ−Ｔａｇ（商標）ＮＨＳ−エステルで標識した。
【０２５９】
ＣＤ１２３競合的ＥＬＩＳＡについて、９６ウェルの透明なｍａｘｉｓｏｒｂプレートを、炭酸バッファ、ｐＨ９．４（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃：２８３８２）中で製造された、２μｇ／ｍＬの抗６×ヒスチジン（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃａｔ＃：ＭＡＢ０５０）の１００μＬ／ウェルで処理し、４℃で一晩インキュベートした。ついで、プレートを、ＥＬＩＳＡ洗浄バッファ（ＰＢＳ、０．０１％  Ｔｗｅｅｎ−２０）で３回洗浄し、ついで、３００μＬ／ウェルのＳｔａｒｔｉｎｇＢｌｏｃｋ（Ｔｗｅｅｎ−２０、ＰＢＳＴを含有）（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＃：３７５３９）でブロッキングした。全てのウェルを、１ｎｇの組換えｈｕＣＤ１２３  ＥＣＤ  ＳＰ１で処理し、プレートを、室温において１時間インキュベートした。結合しなかったｈｕＣＤ１２３  ＥＣＤ  ＳＰ１を、ＥＬＩＳＡ洗浄バッファで洗浄した。７Ｇ３又はマウスＩｇＧ２Ａ（ｍＩｇＧ２Ａ）を、発現培地（ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｍｅｄｉａ．Ｇｉｂｃｏ  ＃：１２３３８−０１８）中において、２０μｇ／ｍＬで調製し、プレートの各ウェルに、５０μＬ／ウェルに２連で加えた。一方、試験抗ＣＤ１２３  ｍＡｂを、残りのウェルに、２μｇ／ｍＬ又は適切な量の５０μＬ／ウェルで加えた。プレートを、適度に振盪しながら、室温において１時間インキュベートした。ついで、ビオチン化７Ｇ３を、全てのウェルに対して、終濃度１００ｎｇ／ｍＬに加えた。プレートを、更に１時間インキュベートした。ついで、プレートを、ＥＬＩＳＡ洗浄バッファで３回洗浄した。ＳＡ−ＨＲＰコンジュゲートを使用して、４５０ｎｍの光学密度において、結合したビオチン化７Ｇ３を検出した。
【０２６０】
７Ｇ３を阻害した抗ＣＤ１２３  ｍＡｂＣＤ１２３結合は、活性の２０％阻害において定義された。すなわち、抗体は、ヒトＣＤ１２３  ＥＣＤに対するビオチン化７Ｇ３の結合を少なくとも２０％だけ阻害することができた場合、阻害剤であると考えられた。この選択基準に基づいて、３つの阻害剤：１３ＲＢ１８、１３ＲＢ３４、及び１３ＲＢ４４が特定された（図３）。
【０２６１】
実施例６：機能性ｐＳＴＡＴ５アッセイ
抗体のアゴニスト又はアンタゴニスト活性を評価するために、（購入された）ＴＦ−１細胞を使用するＩＬ−３誘引性ＳＴＡＴ５リン酸化の細胞ベースアッセイにおいて、パネルをスクリーニングした。抗ＣＤ１２３  ｍＡｂ阻害剤の存在により、ｒｈＩＬ−３による刺激時のＳＴＡＴ５リン酸化の低下が引き起こされる。２０％阻害基準を、ＳＴＡＴ５機能性アッセイ（ｒｈＩＬ−３活性の２０％阻害）において使用した。
【０２６２】
約５０，０００個のＴＦ−１（ヒト赤白血病）細胞を、９６ウェルプレートの各ウェルの６０μＬ  ＲＰＭＩ（１０％ＦＢＳ含有）中に播種し、３７℃において、５％ＣＯ2インキュベーターで一晩インキュベートした。全てのサンプルを、発現培地（ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｍｅｄｉａ．Ｇｉｂｃｏ  ＃：１２３３８−０１８）中において調製した。コントロールサンプルに、７０μＬ／ウェルで、２０μｇ／ｍＬ  ７Ｇ３又はｍＩｇＧ２Ａアイソタイプコントロールのいずれかを入れた。残りのウェルに、２μｇ／ｍＬ又は適切な量の抗ヒトＣＤ１２３  ｍＡｂサンプルを、７０μＬ／ウェルで加えた。全てのサンプルを、３７℃において、５％  ＣＯ2インキュベーターで１時間インキュベートした。ついで、ゼロ−、７Ｇ３−、又はアイソタイプのみで処理された細胞を除いて、組換えヒトＩＬ−３であるｒｈＩＬ−３（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ  カタログ＃：２００−０３）により、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ中の終濃度１０ｎｇ／ｍＬにおいて、細胞を処理した。ついで、サンプルを、３７℃において、５％  ＣＯ2インキュベーターで、更に１５分間インキュベートした。細胞を、ウェルあたりに４６．７μＬの氷冷完全溶解バッファで溶解させた。サンプルを、氷上で３０分間インキュベートした。溶解物を、ピペットで１０回上下させることにより混合した。ついで、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  ＤｉｓｃｏｖｅｒｙからのＰｈｏｓｐｈｏ（Ｔｙｒ６９４）／Ｔｏｔａｌ  ＳＴＡＴ５ａ，ｂキット（ＭＳＤ  ＃：Ｋ１５１６３Ｄ−２）を使用し、製造業者の取扱説明書に従って、リン酸化ＳＴＡＴ５（ｐＳＴＡＴ５ａ、ｂ）を決定した。
【０２６３】
ｒｈＩＬ−３によるＳＴＡＴ５リン酸化を阻害した抗ＣＤ１２３  ｍＡｂを、活性の２０％阻害において定義した。すなわち、抗体は、ｒｈＩＬ−３によるＳＴＡＴ５のリン酸化を少なくとも２０％だけ阻害可能であった場合、阻害剤であると考えられた。
【０２６４】
５つのｍＡｂについて、ＳＴＡＴ５のＩＬ−３刺激をブロックする能力が証明された（図４Ａ）。これらの５つは、１３ＲＢ１８並びに１３ＲＢ１９、１３ＲＢ３０、１３ＲＢ３４、及び１３ＲＢ４４を含んだ。ただし、１μｇ／ｍＬで試験した場合、１つの抗体１３ＲＢ１８のみが、ＴＦ−１細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化のＩＬ−３刺激をブロックした（図４Ｂ）。更に、１３ＲＢ１８（Ｂ１８）は、このアッセイにおける用量依存性を示した（図４Ｃ）。これらのデータから、１３ＲＢ１８のみが、アンタゴニスト抗体であるとまとめられた。
【０２６５】
実施例７：ｈＣＤ１２３における一価親和性の確認
細胞表面に発現させたヒト又はｃｙｎｏＣＤ１２３  ＳＰ１に対する２つの抗ＣＤ１２３ヒット（Ｉ３ＲＢ１２０（Ｉ３ＲＢ２  Ｆａｂ）、Ｉ３ＲＢ１１９（Ｉ３ＲＢ１８  Ｆａｂ））のＦａｂ結合性を、ＭＳＤ−細胞親和性技術により、２連で分析して、細胞表面Ｃ１２３に対する一価結合性の測定値を得た。
【０２６６】
細胞表面に発現させたｈＣＤ１２３又はｃｙｎｏＣＤ１２３について選択された抗ＣＤ１２３リードの一価親和性を、ＭＳＤ−細胞親和性技術（ＭＳＤ−ＣＡＴ）法を使用して行った。ＭＳＤ−ＣＡＴは、ハイスループット方式において、インタクトな細胞を使用して親和性を決定するための標識フリー法として社内で開発された。細胞表面ヒト又はカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＣＤ１２３  ＳＰ１に対する抗ＣＤ１２３候補の結合親和性及び特異性を評価するために、これらの実験を行った。この分析により、組換え可溶性ｃｙｎｏＣＤ１２３の不在下において、ヒト及びカニクイザル抗原に対する抗ＣＤ１２３候補の親和性を比較することが可能となった。使用された細胞株は、ヒトｐＤｉｓｐｌａｙ  ＣＤ１２３ＳＰ１及びｃｙｎｏ  ｐＤｉｓｐｌａｙ  ＣＤ１２３ＳＰ１であった。ＭＳＤ−ＣＡＴ法を使用してこれらの相互作用の親和性を測定するために、固定濃度の抗ＣＤ１２３（１０００、２００、４０、及び／又は８ｐＭ）及び可変濃度の細胞（１．５×１０7〜０．７６２×１０7個／ｍＬ）を含む一連の混合物を調製し、プレートを４℃で２４時間回転させることにより、平衡にさせた。これらのサンプルを、０．０５％アジ化物、１％ＢＳＡ、３ｍＭ  ＥＤＴＡを含有するＤＭＥＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ培地中において調製した。（３．１５〜４．１８）×１０6個のｈＣＤ１２３／細胞及び（４．７８〜９．２４）１０6個のｃｙＣＤ１２３／細胞の受容体数を、反応の体積、細胞密度（個／Ｌ）、及びアボガドロ数に基づいて、混合物中におけるＭ受容体濃度に変換した。これにより、ヒトＣＤ１２３について１０４ｎＭ〜５．３ｐＭの濃度範囲がもたらされ、ｃｙｎｏＣＤ１２３について１２ｎＭ〜０．６ｐＭの濃度範囲がもたらされた。平衡化後、プレートを、約１０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。遊離した抗ＣＤ３を、上清において検出した。混合物中の遊離した抗ＣＤ１２３を、Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）読取り機器を使用する電気化学発光（ＥＣＬ）により検出した。電気化学発光免疫アッセイ（ＥＣＬ）検出による平衡化混合物中の遊離した抗ＣＤ１２３の検出のために、プレートを準備した。検出プレート（ＳＡ−ＭＳＤプレート上に抗原を結合させたプレート）を準備するために、ＭＳＤストレプトアビジン標準プレートを、５０μＬ／ウェルのアッセイバッファ（ＰＢＳ（Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＧＩＢＣＯ  １４１９０−１３６）、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０、０．２％ＢＳＡ）で、５分間ブロッキングした。このアッセイバッファを、洗浄することなく除去し、アッセイバッファ中の０．７μｇ／ｍＬのビオチン化抗原を、５０μＬ／ウェルで、ＭＳＤプレートに加え、一晩（４℃で約１６時間）インキュベートした。一晩のインキュベーション後、コーティング抗原を除去することなく、アッセイバッファを１５０μＬ／ウェルで加えることにより、プレートをブロッキングし、周囲温度において約１時間インキュベートし、洗浄バッファ（ＢＳＡを含まないアッセイバッファ）で５回洗浄した。サンプルプレートからの上清を、５０μＬ／ウェルで、抗原コートプレートに移し、６０分間インキュベートし、ついで、洗浄バッファで３回洗浄した。この後に、ル���ニウム標識化検出抗体（抗ヒトＨ＋Ｌ）を、ウェルあたりに５０μＬで加え、１時間インキュベートした。１時間後、このプレートを洗浄し、ウェルあたり１５０μＬのＭＳＤリードバッファ（ｄ．Ｈ2Ｏにストックを１：４で希釈することにより調製）を加えた。このプレートを、発光レベルについて、ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ６０００リーダーにおいて、直ちに読み取った。ＭＳＤにより検出されたＥＣＬシグナルを、混合物中の遊離抗体の割合に関して表した。データを分析して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアに導入された（質量作用の法則から得られた）ユーザ定義等式を使用して、親和性を決定した。データから、Ｉ３ＲＢ１８及びそのＦａｂ（Ｉ３ＲＢ１１９）が、ｐＭの親和性（又はｍＡｂについての見掛けの親和性）で、細胞表面ＣＤ１２３  ＳＰ１に対する最もタイトなバインダーであり、ｃｙｎｏＣＤ１２３  ＳＰ１に対して１０倍超弱く結合していることが示される。Ｉ３ＲＢ１８及びそのＦａｂ（Ｉ３ＲＢ１１９）について、カニクイザルＳＰ１発現細胞に対するｍＡｂ又はＦａｂのいずれについても、親和性値を得ることができなかった。全て、親和性は、１２ｎＭより大きいと言うことができる。ただし、Ｉ３ＲＢ１２０は、ｎＭの親和性で、両方の抗原に結合し、その結合は、ヒト及びｃｙｎｏＣＤ１２３  ＳＰ１に対して、５倍以下の親和性を有する。ｈＣＤ１２３  ＳＰ１についてＳＰＲにより得られた親和性は、細胞上で観察されるより弱い。この差は、おおよそ、細胞表面上での抗原提示と抗体エピトープの位置とによるであろう。結果を表７に示す。
【０２６７】
【表８】
0006805130.tif 000014
aこのＫDは、列記された値より大きいが、実際の値を決定することができなかった。
bこの適合において、Ｂｏと呼ばれるパラメータを制限して、近似値に代えて正確な数字を得た。適合アルゴリズムは、場合により、曲線に可変性が存在する場合、近似値を与える。
cこれは、二価結合により結合活性により影響を受けると考えられるため、見掛けのＫDである。
【０２６８】
Ｉ３ＲＢ２  Ｆａｂについて測定された親和性は、Ｐｒｏｔｅｏｎにより得られたｍＡｂデータと一致する。加えて、このＦａｂによるｃｙｎｏＣＤ１２３細胞結合性は良好である。これは、Ｉ３ＲＢ２が交叉反応性ヒットであることを明確に示している。Ｉ３ＲＢ１８  ｍＡｂ及びその対応するＦａｂ（Ｉ３ＲＢ１１９）の評価から、組換えＣＤ１２３  ＳＰ１についてＰｒｏｔｅｏｎにより得られた親和性は、細胞上で観察されるより弱いことが示されている。すなわち、組換えタンパク質に対する１ｎＭ対細胞に対する５５〜３００ｐＭ。この差は、おおよそ、細胞表面上での抗原の提示と抗体エピトープの位置とによるであろう。ｍＡｂ又はＦａｂのいずれについても、親和性値を得ることができなかった（親和性＞１２ｎＭ）。これにより、抗体は、一価フォーマットにおいて交叉反応性でないことが示唆されるであろう。先の細胞結合データから、交叉反応性が示された。同交叉反応性は、おおよそ、細胞表面に対する二価結合により促進されたであろう。
【０２６９】
実施例８：内因性細胞結合
ＡＭＬ細胞上の内在性ＣＤ１２３に対するＩ３ＲＢ２及びＩ３ＲＢ１８の結合の確認を測定した。細胞表面上に約７５，０００個のコピーのＣＤ１２３を発現しているＯＣＩ−ＡＭＬ５細胞（ＤＳＭＺ）を、用量依存性ＭＳＤ細胞結合アッセイに使用した。ＭＳＤ（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ）細胞結合アッセイを使用して、ＡＭＬ細胞に対するＣＤ１２３抗体の結合性を評価した。簡潔に、発現上清又は精製ＣＤ１２３抗体を、４０μｇ／ｍＬ〜０．０３９μｇ／ｍＬの用量範囲で使用した。ウェルあたりに５０，０００個の細胞を、９６ウェルプレート（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ  ｈｉｇｈ  ｂｉｎｄプレート）に播種し、２時間付着させた。ついで、細胞を、Ｆｃブロッカーを加えたＰＢＳ中の２０％ＦＢＳで、１５分間ブロックした（Ｆｃブロッカーは、パピン（papin）開裂抗体の精製Ｆｃ部分（配列番号２０９）である）。ついで、抗体上清を加え、ＲＴで１時間放置した。細胞を、ＰＢＳで３回洗浄し、ついで、ルテニウム標識化二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を１μｇ／ｍＬで加え、室温において１時間インキュベートした。ついで、更なる洗浄工程を適用し、ついで、ウェルあたり１５０μＬｕｌの（界面活性剤を含まない）ＭＳＤリードバッファＴを加え、検出のために、３０分間インキュベートした。ついで、Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ２４００（ＭＳＤ）を使用して、プレートを読み取った。データを、コントロールに対して正規化し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ５を使用してグラフ化した。
【０２７０】
結果から、Ｉ３ＲＢ２及びＩ３ＲＢ１８は、ＯＣＩ−ＡＭＬ５細胞上に発現された内在性ＣＤ１２３に、用量依存性の方法で結合することが示された（図５Ａ及びＢ）。陽性コントロールであるｍＡｂ  ７Ｇ３も、比較対象としてこのアッセイに含めた（図５Ｃ）。
【０２７１】
実施例９：ＣＤ１２３  ｍＡＢとＩ３ＲＢ２及びＩ３ＲＢ１８との競合結合分析
競合試験を、Ｉ３ＲＢ２及びＩ３ＲＢ１８について、他の交叉反応性ＣＤ１２３  ＳＰ１／ＳＰ２ヒット及び７Ｇ３コントロールに対して行い、抗ＣＤ１２３抗体競合グループ又は「エピトープビニング」を決定した。
【０２７２】
競合的ＥＬＩＳＡのために、実施例１で記載されたように生成された、５μＬ（２０μｇ／ｍＬ）の精製ヒトＣＤ１２３  ＥＣＤタンパク質を、ＭＳＤ  ＨｉｇｈＢｉｎｄプレート（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）上に、ウェル毎に室温において２時間コートした。５％  ＭＳＤブロッカーＡバッファ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）の１５０μＬアリコートを、各ウェルに加え、室温において２時間インキュベートした。プレートを、０．１Ｍ  ＨＥＰＥＳバッファ、ｐＨ７．４で３回洗浄し、続けて、標識化抗ＣＤ１２３  ｍＡｂと種々の競合対象である抗ＣＤ１２３  ｍＡｂとの混合物を加えた。標識化抗体（２０ｎＭ）を、２μＭの非標識抗ＣＤ１２３競合抗体とインキュベートし、ついで、指定されたウェルに、混合物を体積２５μＬで加えた。室温での穏やかな振盪を伴う２時間のインキュベーション後、プレートを、０．１Ｍ  ＨＥＰＥＳバッファ（ｐＨ７．４）で３回洗浄した。ＭＳＤリードバッファＴを蒸留水で希釈し、（４倍）ウェル１個あたり体積１５０μＬで分配し、ＳＥＣＴＯＲ  Ｉｍａｇｅｒ  ６０００で分析した。製造業者の取扱説明書（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）に従って、抗体を、ＭＳＤ  Ｓｕｌｆｏ−Ｔａｇ（商標）ＮＨＳ−エステルで標識した。
【０２７３】
競合ＥＬＩＳＡの結果から、Ｉ３ＲＢ２は、１３ＲＢ６０、１３ＲＢ７０、１３ＲＢ７９、及び１３ＲＢ１１８と競合するが、Ｉ３ＲＢ１８を含む他の抗体とは競合しないことが示される（図６Ａ）。Ｉ３ＲＢ２を標識した場合、Ｉ３ＲＢ６０との競合が観察された一方で、Ｉ３ＲＢ６０を標識した場合、競合は観察されなかったことに留意されたい。これについての１つの可能性のある理由は、幾らかの非特異的結合相互作用である。Ｉ３ＲＢ１８を評価した場合、１３ＲＢ４９及び１３ＲＢ５５と競合することが見出されたが、１３ＲＢ２とは競合しなかった（図６Ｂ）。
【０２７４】
競合ビニング分析により、交叉反応性のＣＤ１２３  ＳＰ１／ＳＰ２抗体について、２つの競合グループが定義された（表８）。モノクローナル抗体であるＩ３ＲＢ２は、Ｉ３ＲＢ１８と競合せず、それらは、異なるエピトープグループに属する。グループ１（暗い灰色）は、ｍＡｂ  １３ＲＢ２、１３ＲＢ６０、Ｉ３ＲＢ７０、Ｉ３ＲＢ７９、及びＩ３Ｒ１１８を含む。グループ２（薄い灰色）は、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ１８、Ｉ３ＲＢ４９、及びＩ３ＲＢ５５からなる。市販のｍＡｂ  ７Ｇ３は、自社の抗ＣＤ１２３抗体のいずれとも競合しない。
【０２７５】
【表９】
0006805130.tif 000015
【０２７６】
実施例１０：Ｉ３ＲＢ２及びＩ３ＲＢ１８のエピトープマッピング
Ｈ／Ｄ交換試験
ヒトＣＤ１２３上のＩ３ＲＢ２及びＩ３ＲＢ１８についてのエピトープを特定するために、対応するＦａｂを使用して、溶液水素／重水素交換質量分析法（ＨＤＸ−ＭＳ）を行った。Ｈ／Ｄ交換のために、Ｆａｂ摂動を分析するのに使用される手順を、一部改変を加えて、以前に記載された手順（Ｈａｍｕｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １４：１７１〜１８２，２００３、Ｈｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４５：８４８８〜８４９８，２００６）と同様とした。ＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤ抗原を、これらの試験に使用した。この抗原は、グリコシル化部位数が減少していることにより、Ｓｐ１分子ほどは複雑でないためである。組換えＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤ（配列番号２２６）を、重水素化水溶液中において所定の時間インキュベートし、交換可能な水素原子に重水素を包含させた。重水素化ＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤは、Ｉ３ＲＢ１１９（Ｉ３ＲＢ１８のＦａｂ）又はＩ３ＲＢ１２０（Ｉ３ＲＢ２のＦａｂ）のいずれか一方と、４３μＬの重水（Ｄ2Ｏ）中において、４℃で３０秒、２分、１０分、及び６０分間、複合体にあった。交換反応を、低いｐＨにより停止させ、タンパク質を、ペプシンで消化した。特定されたペプチドにおける重水素レベルを、ＬＣ−ＭＳでの質量シフトからモニタした。参照コントロールとして、ＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤサンプルを、Ｆａｂ分子との複合体になかったことを除いて、同様に処理した。Ｆａｂに結合した領域は、交換に対して比較的保護された部位であると推察されたため、参照であるＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤサンプルより高い比率の重水素を含有する。タンパク質の約９４％を特定のペプチドにマッピングすることができた。
【０２７７】
ＣＤ１２３  ＥＣＤ  ＳＰ２とＩ３ＲＢ１１９及びＩ３ＲＢ１２０との溶液ＨＤＸ−ＭＳ摂動マップをそれぞれ、図７Ａ及び７Ｂに示す。ＣＤ１２３  ｓｐ２のアミノ酸残基１９５〜２０２に対応する１つのセグメントである残基１７６〜１８４（ＲＡＲＥＲＶＹＥＦ（配列番号２２７））は、Ｉ３ＲＢ１１９により強力に保護される。ＣＤ１２３  ｓｐ２の残基１６４〜１７５及び残基１８４〜１８９にそれぞれ対応する、２つの異なる領域である残基１４５〜１５６（ＩＱＫＲＭＱＰＶＩＴＥＱ（配列番号２２８））及び残基１６５〜１７０（ＬＬＮＰＧＴ（配列番号２２９））は、Ｉ３ＲＢ１２０により認識された。これらのＨＤＸ−ＭＳ結果から、Ｉ３ＲＢ１１９及びＩ３ＲＢ１２０についてのペプチドレベルでのエピトープが示唆される。これらの２つの抗体について、エピトープ領域は重なっていなかった。これらの結果は、Ｉ３ＲＢ２とＩ３ＲＢ１８とが互いに競合しないという先の競合結合データと一致している。
【０２７８】
実施例１１：結晶構造による抗ＣＤ１２３抗体Ｉ３ＲＢ１８のエピトープマッピング
抗体Ｉ３ＲＢ１８の結合エピトープを、Ｘ線結晶構造解析により決定した。
【０２７９】
抗ＣＤ１２３  ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ１８の一本鎖Ｆｖフラグメントを、ＶＬ−（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４−ＶＨ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ６（配列番号２３０）の形態で生成した。これを、ＨＥＫ２９３  Ｅｘｐｉ細胞中で発現させ、親和性（ＨｉｓＴｒａｐ）及びイオン交換（Ｓｏｕｒｃｅ  １５Ｓ及びＭｏｎｏ  Ｓ）クロマトグラフィーにより精製した。
【０２８０】
Ｃ末端８×Ｈｉｓタグを有するヒトＣＤ１２３  ＥＣＤのｓｐ２アイソフォーム（配列番号２３１）を、バキュロウイルス感染昆虫細胞中において発現させ、親和性（ＨｉｓＴｒａｐ）及びサイズ排除（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ７５）クロマトグラフィーにより精製した。
【０２８１】
ＣＤ１２３：Ｉ３ＲＢ１８  ｓｃＦｖ複合体を、１．８ｍｇのＣＤ１２３（１．１ｍｇ／ｍＬ）と２．４ｍｇのｓｃＦｖ（１．６ｍｇ／ｍＬ）とを混合することにより、約１：１．２のモル比（ｓｃＦｖ過剰）で調製し、４℃で一晩インキュベートした。小型（１５０μｇ）のＳＥＣから、複合体形成が示された。このタンパク質を、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１００ｍＭ  ＮａＣｌ中において、１８ｍｇ／ｍＬに濃縮した。
【０２８２】
結晶化を、ＭＲＣ２−ウェル結晶化プレート（Ｓｗｉｓｓｃｉ）において、シッティングドロップ方式での蒸気拡散法により、２０℃で行った。Ｘ線実験に適した複合体の結晶を、条件：２．０Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４、０．１Ｍ  ＭＥＳバッファ、ｐＨ６．５下において得た。結晶データを、表９に与える。１つの結晶を、２４％グリセロールを加えた母液に移し、液体窒素中で凍結させ、Ｘ線回折データ収集に使用した。構造を、３．５Å解像において決定した。
【０２８３】
【表１０】
0006805130.tif 000016
最高解像シェルについての値は丸括弧内である。
【０２８４】
Ｉ３ＲＢ１８は、ＣＤ１２３  ｓｐ２に、ＥＣＤの（細胞表面に近接する）Ｃ末端ドメインにおいて結合する。エピトープは、立体構造的であり、ＣＤ１２３  ｓｐ１の残基２３４〜２３９、２５１〜２５６、及び２７３〜２８０に対応する、ＣＤ１２３  ｓｐ２鎖の３つのセグメント、残基１５６〜１６１（ＲＫＦＲＹＥ、（配列番号２３２））、１７３〜１７８（ＴＥＱＶＲＤ、（配列番号２３３））、及び１９５〜２０２（ＲＡＲＥＲＶＹＥ（配列番号２３４））を含む。抗体−抗原相互作用は、主に静電的である。ＣＤ１２３  ｓｐ２上のエピトープは、多数の塩基性残基を含有する。一方、Ｉ３ＲＢ１８のＣＤＲには、酸性残基が集まっている。ＣＤ１２３の結合性に関与する抗体残基は、軽鎖からの７つの残基と、重鎖からの９つの残基とを含む（図８）。ＬＣＤＲ２を除く全てのＣＤＲが、結合に関与している。
【０２８５】
ＣＤ１２３  ｓｐ２に対するＩ３ＲＢ１８の結合性（図９Ａ）は、別の抗ＣＤ１２３抗体である７Ｇ３とは異なる。同７Ｇ３は、ヒト化７Ｇ３  Ｆａｂ、ＣＳＬ３６２の結晶構造に示されたように、ＣＤ１２３  ｓｐ１との複合体において、ＣＤ１２３  ｓｐ１  ＥＣＤのＮ末端ドメイン１に結合する（図９Ｂ）（ｐｄｂ：４ＪＺＪＢｒｏｕｇｈｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ．２０１４、８：４１０〜４１９）。
【０２８６】
実施例１１：抗ＣＤ３  Ｆａｂの結晶構造
ＳＰ３４  Ｆａｂの結晶構造を、２．１Å解像度で決定した。完全なアミノ酸配列が明らかにされ、ＳＰ３４  ｍＡｂが得られる可能性のあるマウス生殖細胞系が特定された。
【０２８７】
材料
ＳＰ３４  ｍＡｂであるマウスＩｇＧ３／ラムダアイソタイプを、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）（Ｃａｔ．Ｎｏ．５５６６１１）から購入した。技術データシートに従って、同アイソタイプを、親和性クロマトグラフィーにより組織培養上清から精製し、４℃で保存した。Ｆａｂフラグメントを、ｍＡｂ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｃａｔ＃４４９８５，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）のパパイン消化により生成し、Ｎａｂ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  Ｐｌｕｓ  Ｓｐｉｎカラム（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｃａｔ＃４４９８５，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）を使用し、製造業者のプロトコルに従って、Ｆｃから分離した。Ｆａｂを、２０ｍＭ  ＭＥＳ、ｐＨ６．５（バッファＡ）で平衡化したＭｏｎｏＳカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で更に精製した。溶出を、バッファＡで、５０カラム体積において、１Ｍ  ＮａＣｌの１３〜２８％勾配で行った。主なピークに対応する画分をプールし、９．２ｍｇ／ｍＬに濃縮し、結晶化に使用した。
【０２８８】
結晶化
結晶化を、９６ウェルＣｏｒｎｉｎｇ３５５０プレートにおいて、シッティングドロップ方式での蒸気拡散法により２０℃で行った。Ｘ線分析に使用されるＦａｂ結晶を、１２％ＰＥＧ３３５０、０．２Ｍ  Ｋ／Ｎａ酒石酸（ｐＨ７．４）、３％イソプロパノール、及び３％ジオキサンから得た。結晶データを表１０に与える。
【０２８９】
【表１１】
0006805130.tif 000017
*丸括弧中の数字は、最高解像シェルについてのものである。
【０２９０】
Ｘ線データ収集及び構造決定
Ｘ線データ収集のために、１つの結晶を、２０％グリセロールを補足した母液中に数秒間浸し、液体窒素中で瞬間冷凍した。回折データを、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｈｏｔｏｎ  Ｓｏｕｒｃｅ（Ａｒｇｏｎｎｅ，ＩＬ）ＩＭＣＡビームラインで、Ｐｉｌａｔｕｓ  ＣＣＤ検出器を使用して収集した。Ｘ線データ統計を表１０に示す。
【０２９１】
マウス抗Ｔｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原抗体Ｊａａ−Ｆ１１（ＰＤＢ  ３ｇｎｍ）から構築されたＦａｂモデルを使用する分子置換により構造を解いた。Ｊａａ−Ｆ１１は、ＩｇＧ３／カッパアイソタイプである。全ての結晶学的計算を、ＣＣＰ４プログラムスーツ（CCP4 suite of program）［ＣＣＰ４．１９９４，Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ５０：７６０〜７６３．］により行った。プログラムＣＯＯＴ［Ｅｍｓｌｅｙ  Ｐ，ａｎｄ  Ｃｏｗｔａｎ  Ｋ．２００４．Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ６０：２１２６〜２１３２．］を使用して、モデル調節を行った。精密化統計値を表１０に提供する。
【０２９２】
ＳＰ３４の配列を、図１０に示す。同配列は、電子密度マップから直接得られた軽鎖の残基１〜２１５及び重鎖の残基１〜２３０と、ＩＧＨＧ３＿ＭＯＵＳＥ（マウスＩｇＧ３、アイソフォーム２）から得られた残基２３１〜４５５とを含む。
【０２９３】
実施例１２：抗ＣＤ３抗体ＳＰ３４のヒトフレームワーク適合
抗ＣＤ３マウス抗体ＳＰ３４を、ヒトフレームワーク適合法（Ｆｒａｎｓｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ，ＪＭＢ，２０１０  ３９８（２）：２１４〜３１）によりヒト化した。４種類の重鎖を、３種類の異なる軽鎖と組み合わせて、１２個のヒト化変異体を生成した。
【０２９４】
ＳＰ３４のヒト化及び親和性成熟
ヒト生殖細胞系の選択
４つのヒト重ｖ領域及び３つの軽ｖ領域配列のマトリクスを、試験のために選択した。ヒト生殖細胞系の選択は、フレームワーク領域（ＦＲ）における、ＳＰ３４に対する全体的な配列類似性のみに基づいた。ＣＤＲ配列も、その長さ又は標準構造も、この選択には考慮しなかった。
【０２９５】
重鎖について最も近いマッチは、ヒトＧＬ  ＩＧＨＶ３−７２及びＩＧＨＶ３−７３である。ヒトＢ細胞レパートリーにおけるその高い発生頻度のために、別のＧＬであるＩＧＨＶ３−２３を選択した。
【０２９６】
軽鎖について最も近いマッチは、ヒトラムダＧＬ  ＩＧＬＶ７−４３（ａｋａ  ７ａ）、ＩＧＬＶ７−４６（ａｋａ  ７ｂ）、及びＩＧＬＶ１−５１（ａｋａ  １ｂ）である。ＩＧＬＶ７−４６は、仮想的にＩＧＬＶ７−４３と同一であるが、２位におけるＡｌａの利点を有する、すなわち、ＳＰ３４におけるのと同様である。
【０２９７】
選択されたＪ領域は、下記：重鎖に対してＩＧＨＪ１、ラムダ軽鎖に対してＩＧＬＪ３である。
【０２９８】
逆突然変異
ＣＤＲ−Ｈ３の立体構造を保持するために、ＶＬ中の複数のフレームワーク位置における残基、とりわけ、Ｖａｌ３８、Ｇｌｙ４８、及びＧｌｙ５１位（図１１）が保持されるべきである。これらの「逆突然変異」を、ヒト化計画に加えた。
【０２９９】
重鎖の５７位におけるＡｓｎは、この構造における良好な側鎖密度を有さない。同Ａｓｎはまた、ＣＤＲ−Ｈ２の中間に位置し、典型的な結合部位から離れて位置している。この分析に基づいて、同Ａｓｎは、結合に有意に影響し得ない。加えて、骨格の幾何形状は、ＲａｍａｃｈａｄｒａｎプロットにおけるＧｌｙ残基に最も好ましい領域にある。このため、同Ａｓｎを、必須のフレキシビリティを実現し、（非グリシン関連位置構造歪みを減少させることにより）安定性を潜在的に改善する一方で、結合性に影響を及ぼさないために、成熟計画において、Ｇｌｙにトランケートした。
【０３００】
ヒト化設計に行われる複数の他の考察が存在した。まず、ヒトＧＬ  ＩＧＬＶ７−４６及びＩＧＬＶ７−４３は、望ましくない酸化電位を有する５９位にＴｒｐを導入する。２つの他のＧＬは、この位置にＧｌｙを有する。このＧｌｙは、マウス配列に対応する。したがって、Ｇｌｙ５９を、ＩＧＬＶ７−４６及びＩＧＬＶ７−４３の両方の変異体において保持した。最後に、ＶＨの４９位におけるＡｌａは必須であり得る。また、９９位における残基（ＳＰ３４ではＶａｌ）は、抗原結合性に影響を及ぼし得る。これらの位置を検査するために、逆突然変異を、一部の変異体に導入した（図１２）。
【０３０１】
ＨＦＡマトリクス
ＨＦＡマトリクス（表１１）は、ＶＨの４つの変異体と、ＶＬの３つの変異体とから構成される（図１２）。ＨＦＡの目的で、ＡｂＭ  ＣＤＲ定義（Ｋ．Ｒ．Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ  ａｎｄ  Ａ．Ｃ．Ｍａｒｔｉｎ，２００８．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５，３８３２〜３８３９）を使用する。
【０３０２】
ＶＨについての変異体：
ＣＤ３Ｈ１４１（配列番号１８４）：マウスＣＤＲ＋Ｇｌｙ４９Ａｌａを有するＩＧＨＶ３−７２*０１
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＣＤ３Ｈ１４２（配列番号１８５）：マウスＣＤＲ＋Ｓｅｒ４９Ａｌａを有するＩＧＨＶ３−２３*０１
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＣＤ３Ｈ１４３（配列番号１８６）：マウスＣＤＲ＋Ｓｅｒ４９Ａｌａ、Ａｌａ９９Ｖａｌを有するＩＧＨＶ３−２３*０１
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＫＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＣＤ３Ｈ１４４（配列番号１８７）：マウスＣＤＲ＋Ａｓｎ５７Ｇｌｙを有するＩＧＨＶ３−７３*０１
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＲＳＫＹＮＧＹＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０３０３】
ＶＬについての変異体：
ＣＤ３Ｌ６３（配列番号１８８）：マウスＣＤＲ＋Ｆ３８Ｖ、Ａ４８Ｇ、Ｙ５１Ｇ、Ｗ５９Ｇを有するＩＧＬＶ７−４６*０１
ＱＡＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＮＫＲＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＡＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＡＬＷＹＳＮＬＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
ＣＤ３Ｌ６４（配列番号１８９）：マウスＣＤＲ＋Ｙ３８Ｖ、Ｌ４８Ｇ、Ｙ５１Ｇを有するＩＧＬＶ１−５１*０１
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮＷＶＱＱＬＰＧＴＡＰＫＧＬＩＧＧＴＮＫＲＡＰＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＡＬＷＹＳＮＬＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
ＣＤ３Ｌ６６（配列番号１９０）：マウスＣＤＲ＋Ｆ３８Ｖ、Ａ４８Ｇ、Ｙ５１Ｇ、Ｗ５９Ｇを有するＩＧＬＶ７−４３*０１
ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＮＫＲＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＡＬＷＹＳＮＬＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
【０３０４】
【表１２】
0006805130.tif 000018
【０３０５】
アミノ酸配列を、ＤＮＡに逆翻訳させ、遺伝子合成手法（米国特許第６，６７０，１２７号、米国特許第６，５２１，４２７号）を使用して、ｃＤＮＡを調製した。ＣＭＶプロモータを含む自社製発現ベクターを使用し、標準的な分子生物学的手法を使用して、重鎖（ＨＣ）ｖ領域を、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ変異を含有するヒトＩｇＧ１−ＡＡ  Ｆｃ上にサブクローニングした。ＣＭＶプロモータを含む自社製発現ベクターを使用し、標準的な分子生物学的手法を使用して、軽鎖（ＬＣ）可変領域を、ヒトラムダ（λ）定常領域上にサブクローニングした。得られたプラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）内にトランスフェクションし、ｍＡｂを発現させた。プロテインＡカラム（ｈｉＴｒａｐ  ＭＡｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅカラム）を使用する標準的な方法により精製した。溶出後、プールを、Ｄ−ＰＢＳ、ｐＨ７．２内へ透析した。抗体のＶＨ及びＶＬ配列を、表１２に示す。
【０３０６】
【表１３−１】
0006805130.tif 000019
【０３０７】
【表１３−２】
0006805130.tif 000020
【０３０８】
配列番号１８４のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ置換を有するＩｇＧ１定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ１４３を生成した。配列番号１８４のＶＨ及び配列番号１８９のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ置換を有するＩｇＧ１定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ１４４を生成した。配列番号１８４のＶＨ及び配列番号１９０のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ置換を有するＩｇＧ１定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ１４６を生成した。配列番号１８５のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ置換を有するＩｇＧ１定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ１４７を生成した。配列番号１８５のＶＨ及び配列番号１８９のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ置換を有するＩｇＧ１定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ１４８を生成した。配列番号１８５のＶＨ及び配列番号１９０のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ置換を有するＩｇＧ１定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ１５０を生成した。配列番号１８６のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ置換を有するＩｇＧ１定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ１５１を生成した。配列番号１８６のＶＨ及び配列番号１８９のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ置換を有するＩｇＧ１定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ１５２を生成した。配列番号１８６のＶＨ及び配列番号１９０のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ置換を有するＩｇＧ１定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ１５４を生成した。配列番号１８７のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ置換を有するＩｇＧ１定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ１５５を生成した。配列番号１８７のＶＨ及び配列番号１８９のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ置換を有するＩｇＧ１定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ１５６を生成した。配列番号１８７のＶＨ及び配列番号１９０のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ置換を有するＩｇＧ１定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ１５８を生成した。
【０３０９】
実施例１３：初代Ｔ細胞に対するヒト化抗ＣＤ３ヒットの内因性細胞結合
抗ＣＤ３抗体の得られたパネルを、初代ヒトＴ細胞上の細胞表面ＣＤ３εに対する結合性について試験した。この試験を行うために、ポリクローナル抗ヒト二次抗体を使用して、発現上清からの抗体の結合を可視化し、フローサイトメトリーにより分析した。簡潔に、細胞表面ＣＤ３εに対する抗ＣＤ３抗体の結合性を、陰性選択により精製された初代ヒトＴリンパ球（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ，Ｃｏｌｍａｒ，ＵＳＡ）を使用するフローサイトメトリーにより評価した。発現上清又は精製抗体をそれぞれ培地又はＦＡＣＳバッファ（ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）中において１０μｇ／ｍＬに正規化した。２×１０5個の細胞を、９６ウェル丸底プレート（ＣｏＳｔａｒ）のウェルに、標識化のためにアリコートした。発現上清中の抗体を、細胞に加え、４℃で４５分間インキュベートした。１３００ｒｐｍで３分間の遠心分離及び上清の除去後、５０μＬの抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７二次抗体（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．）を、終濃度１０μｇ／ｍＬで、４℃において、直接光を避けて、細胞と共に３０分間インキュベートした。続けて、洗浄し、３０μＬのＦＡＣｓバッファ（ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）中に再懸濁させた。サンプル収集を、ＦｏｒｅＣｙｔソフトウェアを使用するＩｎｔｅｌｌｉｃｙｔ  ＨＴＦＣシステムにおいて行った。結合分析の前に、緑色又は赤色のｆｉｘａｂｌｅ  ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ染料（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．）と、前方／側方散乱面積及び高さパラメータをそれぞれ使用して、生きた単一の細胞をゲーティングした。平均蛍光強度値を使用して、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ５においてグラフ化した。
【０３１０】
滴定系列をランしたが、中間濃度を、明確性のために、図１３に表わす。治療抗体として、同じＦｃ領域を有する２つの自社製ファージ由来抗体；Ｇ１１（ＨＣ  配列番号２２２、ＬＣ  配列番号２２３）（非ｃｙｎｏ交叉反応性、アゴニスト抗体を、陽性コントロールとして使用した）及びＣＤ３Ｂ９４（ＨＣ−配列番号２２４、ＬＣ−配列番号２２５）（非バインダー／非アゴニスト抗体を、非特異的結合を評価するのに使用した）を、コントロールとして使用した。市販のＳＰ３４抗体を、このアッセイでは比較対象として使用しなかった。ＳＰ３４抗体は、マウス抗体であり、異なる二次検出試薬の使用は、試験された変異体との直接的な比較を妨げるであろうためである。
【０３１１】
データから、ヒト化抗ＣＤ３ヒットのパネル内での結合可能性のアレイが証明される。ここで、２つの抗体（ＣＤ３Ｂ１４４、ＣＤ３Ｂ１５２）は、ヒトＴ細胞に対する結合性の完全な損失を示す。残りの抗体は、任意の閾値としてＧ１１結合を使用して強いバインダーと弱いバインダーとに広く分割され得る結合可能性の範囲を示した。これらのパラメータを使用して、７つの強いバインダーと、７つの弱いバインダーとを、変異体のネルから特定した（図１３）。
【０３１２】
ついで、初代カニクイザルＣＤ４+Ｔ細胞に対する抗ＣＤ３ヒットの結合分析を、交叉反応性の保持を評価するために試験した。カニクイザルの末梢血から精製されたＣＤ４+Ｔ細胞（Ｚｅｎ  Ｂｉｏ，Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ，ＵＳＡを使用した）。アッセイプロトコルは、上記されたものと同様とした。Ｇ１１は、カニクイザルＣＤ３εと交叉反応しないため、マウスフレームワーク及びヒトＩｇＧ１  Ｆｃを有するＳＰ３４のＶＨ及びＶＬを有する自社製キメラＳＰ３４由来抗体であるＣＤ３Ｂ１２４を、このアッセイにおける陽性コントロールとして使用した（図１４）。興味深いことに、複数の変異体が、ヒト細胞について見られた結合可能性と比較して、低下した結合可能性を示した。これには、強いバインダーであるＣＤ３Ｂ１５０、ＣＤ３Ｂ１５１、及びＣＤ３Ｂ１５４が含まれ、結合性が低下した。複数の弱いバインダーは、もはや、バックグラウンドを上回って結合を検出することができなかった。結合性のこの損失は、特定の免疫グロブリン鎖に関係しなかった。このことは、重鎖と軽鎖との組み合わせが、交叉反応性の損失において役割を果たすことを示唆している。まとめると、これらのアッセイにより、ヒトとカニクイザルのＣＤ３εとの間での種間交叉反応性を保持した変異体の特定が可能となった。
【０３１３】
実施例１４：初代Ｔ細胞におけるヒト化抗ＣＤ３ヒットの機能性分析
結合性分析により、ヒト化抗ＣＤ３ヒットのパネルが、ヒト及びカニクイザルＴ細胞に対する結合可能性の範囲を示したことが証明された。ＣＤ３ε架橋を介して活性化を誘引する各変異体の能力を調査するために、初代Ｔ細胞を、ビーズコンジュゲート抗体の存在下において、一晩培養した。翌日、細胞を収集し、抗ＣＤ６９抗体で標識し、活性化を測定した（図１５）。ヒト化抗ＣＤ３抗体を、プロテインＡコート磁性ビーズ（ＳｐｈｅｒｏＴｅｃｈ，Ｌａｋｅ  ｆｏｒｅｓｔ，ＵＳＡ）に、１０μｇ／ｍＬでの抗体と一晩ンキュベートすることにより結合させた。翌日、２×１０5個の初代ヒトＴ細胞を、丸底細胞培養プレートに３連で播種し、２×１０5個のコートビーズを加えた。３７℃で一晩培養した後、細胞を収集し、抗ＣＤ６９  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８抗体（クローンＦＮ５０、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で標識して、この活性化マーカーのアップレギュレーションを評価した。サンプルの収集及び分析を、結合性について上記されたように行った。複数の陰性コントロールをランした。同コントロールには、Ｔ細胞単独、Ｔ細胞と非コートビーズ、及びＴ細胞とアイソタイプコントロール（ＣＤ３Ｂ９４）コートビーズが挙げられる。これらは全て、非染色Ｔ細胞と比較して、同様の平均蛍光強度値を示した。このことは、バックグラウンドがこのアッセイにおいて低かったことを示している。複数の陽性コントロールを、比較のためにランした。同コントロールには、ＯＫＴ３（米国特許第５９２９２１２号）及び市販のＳＰ３４−２抗体が挙げられる。
【０３１４】
ついで、ヒト化抗ＣＤ３ヒットを、同じアッセイにおいて、初代カニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｚｅｎ  Ｂｉｏ，Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ，ＵＳＡ）を活性化するその能力について試験した（図１６）。ＦＮ５０抗ＣＤ６９抗体は、非ヒトタンパク質と交叉反応性であると説明されてきたため、これらの細胞の活性化を試験するために使用することができた。
【０３１５】
ヒト及びカニクイザルでの活性化データは、ヒットのパネルが活性化の可能性の範囲を示した結合データと関連した。数多くの強いバインダーが、市販のＳＰ３４−２と比較して同等又は上回る程度に、ヒトＴ細胞を活性化する能力を示した。複数の変異体は、ＳＰ３４−２と比較して低い活性化可能性を示した。一方、一部のバインダーは、ＣＤ６９刺激の証拠を示さなかった。活性化能力がないのは、結合性が無いか又は弱い結合を示した変異体においてのみ見られ、強いバインダーは全て、あるレベルの活性化を示した。このことは、ヒト（図１７Ａ）及びカニクイザル（図１７Ｂ）の両方についての、結合性と活性化可能性との間の相関性を示唆している。
【０３１６】
実施例１５：ＩｇＧ１  Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａの二重特異性フォーマットにおける抗体の調製
複数の単特異性ＣＤ１２３抗体を、Ｆｃ置換であるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＫ４０９Ｒ（抗ＣＤ１２３上）（ＥＵインデックスに従ったナンバリング）をそのＦｃ領域中に有するＩｇＧ１として発現させた。単特異性抗体を、ＨＥＫ細胞株において発現させた。単特異性ＣＤ３抗体を、Ｆｃ置換であるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌを有するＩｇＧ１とした。
【０３１７】
配列番号１２０のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬを有する抗ＣＤ１２３抗体Ｉ３ＲＢ２のＶＨ及びＶＬ領域と、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＫ４０９Ｒ置換を有するＩｇＧ１定常領域とを含む、単特異性抗ＣＤ１２３抗体Ｉ３ＲＢ１３５−Ｋ４０９Ｒを生成した。
【０３１８】
配列番号１３６のＶＨ及び配列番号１６８のＶＬを有する抗ＣＤ１２３抗体Ｉ３ＲＢ１８のＶＨ及びＶＬ領域と、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＫ４０９Ｒ置換を有するＩｇＧ１定常領域とを含む、単特異性抗ＣＤ１２３抗体Ｉ３ＲＢ１２５−Ｋ４０９Ｒを生成した。
【０３１９】
コントロールとして、二重特異性抗体のＣＤ３又はＣＤ１２３アームのいずれか一方を有するｎｕｌｌアームとしてのパートナーに対する、配列番号１９１のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＫ４０９Ｒ又はＦ４０５Ｌのいずれか一方を有するＩｇＧ１定常領域とを含む、単特異性抗ＲＳＶ抗体Ｂ２１Ｍを生成した。
【０３２０】
プロテインＡカラム（ＨｉＴｒａｐ  ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅカラム）を使用する標準的な方法を使用して、単特異性抗体を精製した。溶出後、プールを、Ｄ−ＰＢＳ、ｐＨ７．２内へ透析した。
【０３２１】
単特異性抗ＣＤ１２３抗体を、インビトロでのＦａｂアーム交換において、マトリクス状に組み合わせて、その後に更に特徴決定された二重特異性抗体を生成した（表１３）。
【０３２２】
【表１４】
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【０３２３】
二重特異性ＣＤ１２３×ＣＤ３抗体を、（国際公開第２０１１／１３１７４６号に記載されたような）インビトロでのＦａｂアーム交換において、単特異性ＣＤ３  ｍＡｂと単特異性ＣＤ１２３  ｍＡｂとを組み合わせることにより生成した。簡潔に、ＰＢＳ、ｐＨ７〜７．４中の約１〜２０ｍｇ／ｍＬの抗ＣＤ１２３／抗ＣＤ３抗体（モル比１．０８：１）と、７５ｍＭ  ２−メルカプトエタノールアミン（２−ＭＥＡ）とを互いに混合し、２５〜３７℃において２〜６時間インキュベートし、続けて、透析、透析ろ過、タンジェント流ろ過により、２−ＭＥＡを除去し、かつ／又は、標準的な方法を使用して、細胞ろ過をスピンした。抗ＲＳＶ−（Ｂ２１Ｍ）アームを有するコントロール二重特異性抗体を同様に生成した。
【０３２４】
生成された単特異性抗ＣＤ３及びＣＤ１２３抗体を、インビトロでＦａｂアーム交換のためにマトリクス状に混合し、種々のアッセイにおいて特徴決定した。二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１７９−Ａｂは、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ１４６−Ｆ４０５ＬのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ１３５−Ｋ４０９ＲのＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１８６−Ａｂは、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ１４６−Ｆ４０５ＬのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ１２５−Ｋ４０９ＲのＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１８０−Ａｂは、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ１４７−Ｆ４０５ＬのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ１３５−Ｋ４０９ＲのＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１８７−Ａｂは、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ１４７−Ｆ４０５ＬのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ１２５−Ｋ４０９ＲのＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１８１−Ａｂは、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ１５１−Ｆ４０５ＬのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ１３５−Ｋ４０９ＲのＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１８８−Ａｂは、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ１５５−Ｆ４０５ＬのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ１２５−Ｋ４０９ＲのＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１８２−Ａｂは、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ１５４−Ｆ４０５ＬのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ１３５−Ｋ４０９ＲのＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１８９−Ａｂは、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ１５４−Ｆ４０５ＬのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ１２５−Ｋ４０９ＲのＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１８３−Ａｂは、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ１５５−Ｆ４０５ＬのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ１３５−Ｋ４０９ＲのＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体ＣＤ３Ｂ１９１−Ａｂは、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ１５５−Ｆ４０５ＬのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ１２５−Ｋ４０９ＲのＣＤ１２３結合アームとを含む。
【０３２５】
コントロール二重特異性抗体について、抗ＲＳＶ抗体であるＢ２１Ｖ（ＨＣ  配列番号２０７、Ｆ４０５Ｌ変異を有するのが示される、ＬＣ配列番号２０８）を、以下のようにして、ＣＤ３アーム又はＣＤ１２３アームのいずれか一方と組み合わせた。二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１８５−Ａｂは、ｍＡｂ  Ｂ２１Ｍ−Ｆ４０５Ｌの抗ＲＳＶ結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ１３５−Ｋ４０９ＲのＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１９１−Ａｂは、ｍＡｂ  Ｂ２１Ｍ−Ｆ４０５Ｌの抗ＲＳＶ結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ１２５−Ｋ４０９ＲのＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１９２−Ａｂは、ｍＡｂ  Ｂ２１Ｍ−Ｋ４０９Ｒの抗ＲＳＶ結合アームと、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ１４６−Ｆ４０５ＬのＣＤ３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１９３−Ａｂは、ｍＡｂ  Ｂ２Ｍ−Ｆ４０９ＲのＲＳＶ結合アームと、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ１４７−Ｆ４０５ＬのＣＤ３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１９４−Ａｂは、ｍＡｂ  Ｂ２Ｍ−Ｆ４０９Ｒの抗ＲＳＶ結合アームと、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ１５１−Ｆ４０５ＬのＣＤ３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１９５−Ａｂは、ｍＡｂ  Ｂ２１Ｍ−Ｋ４０９Ｒの抗ＲＳＶ結合アームと、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ１５４−Ｆ４０５ＬのＣＤ３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１９６−Ａｂは、ｍＡｂ  Ｂ２１Ｍ−Ｋ４０９ＲのＲＳＶ結合アームと、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ１５５−Ｆ４０５ＬのＣＤ３結合アームとを含む。
【０３２６】
ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性Ａｂについての重鎖及び軽鎖を以下の表１４に示す。
【０３２７】
【表１５−１】
0006805130.tif 000022
【０３２８】
【表１５−２】
0006805130.tif 000023
【０３２９】
【表１５−３】
0006805130.tif 000024
【０３３０】
【表１５−４】
0006805130.tif 000025
【０３３１】
【表１５−５】
0006805130.tif 000026
【０３３２】
実施例１６：機能性細胞殺傷アッセイにおける二重特異性抗体の評価
Ｔ細胞媒介性細胞傷害アッセイは、健康なドナーからのＴ細胞を使用して、細胞溶解についてＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体を評価するための機能性アッセイである。
【０３３３】
Ｌａｓｚｌｏ，ｅｔ  ａｌのプロトコルに従った（Ｌａｓｚｌｏ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ  ２０１４  ＢＬＯＯＤ  １２３：４，５５４〜５６１）。簡潔に、エフェクター細胞を収集し、カウントし、洗浄し、ＲＰＭＩ（１０％  ＦＢＳ）細胞培地中において、１×１０の６乗個／ｍＬに再懸濁させた。標的細胞を、ＣＦＳＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃Ｃ３４５５４）で標識し、１０％ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１００８２−１４７）を含むＲＰＭＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃６１８７０−０３６）中において、２×１０5個／ｍＬに再懸濁させた。エフェクター細胞とＣＦＳＥ標識化標的細胞とを、無菌の９６ウェル丸底プレート中において、Ｅ：Ｔ＝５：１で混合した。種々の濃度を含有する各二重特異性抗体の５μＬアリコートを各ウェルに加えた。培養物を、３７℃において、５％ＣＯ2下で４８時間インキュベートした。４８時間後、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ  Ｎｅａｒ−ＩＲ  Ｄｅａｄ  Ｃｅｌｌ  Ｓｔａｉｎバッファ（ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃａｔ＃Ｌ１０１１９）を、サンプルに加えた。培養物を、暗所でＲＴにおいて、２０分間インキュベートし、洗浄し、１７０μＬ  ＦＡＣｓバッファ中に再懸濁させた。ＣＡＮＴＯ  ＩＩフローサイトメータ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、薬剤誘引細胞傷害を決定し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア又はＤｉｖｅソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により分析した。対象となる集団は、二重陽性ＣＦＳＥ＋／ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ＋細胞である。
【０３３４】
３７℃、５％  ＣＯ2における４８時間のインキュベーション後の、ＡＭＬ細胞株ＭＶ４−１１（図１８Ａ及び図１８Ｂ）、ＯＣＩ−ＡＭＬ５（図１９Ａ及び図１９Ｂ）、及びＯＣＩ−Ｍ２（図２０Ａ及び図２０Ｂ）のＴ細胞媒介性細胞溶解の結果を示す。ＭＶ４−１１及びＯＣＩ−ＡＭＬ５は、ＣＤ１２３発現細胞株である。ＯＣＩ−Ｍ２は、明らかに低いＣＤ１２３発現を有する。この試験についてのエフェクター／標的比は、５：１とした。Ｆｃブロッカーの２ｍｇ／ｍＬのアリコートを、Ｆｃ機能をブロックするために加えた。
【０３３５】
Ｉ３ＲＢ２及びＩ３ＲＢ１８抗体は両方とも、二重特異性フォーマット内で抗ＣＤ３抗体と組み合わせた場合、ＣＤ１２３＋細胞を特異的に殺傷するのに有効である。加えて、データから、Ｉ３ＲＢ１３５（Ｉ３ＲＢ２系）と、Ｉ３ＲＢ１２５（Ｉ３ＲＢ１８系）二重特異性抗体との間において、明確な順位付けが可能である。ここで、Ｉ３ＲＢ１２５×ＣＤ３二重特異性抗体は、Ｉ３ＲＢ１３５×ＣＤ３二重特異性抗体より活性である。各ファミリー内では、ＣＤ３Ｂ１４６系二重特異性抗体及びＣＤ３Ｂ１５５系二重特異性抗体（より高い親和性のｍＡｂ）は、ＣＤ３Ｂ１５１系二重特異性抗体及びＣＤ３Ｂ１５４系二重特異性抗体より有効であった。低レベルの用量依存性バックグラウンド細胞傷害が、低いＣＤ１２３発現細胞株ＯＣＩ−Ｍ２で見られる。
【０３３６】
実施例１７：腫瘍疾患モデルにおける二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１８６の評価材料及び方法
細胞株インビボにおける二重特異性抗体Ｉ３ＲＢ１８６の有効性を決定するために、高いＣＤ１２３発現を有する市販の腫瘍細胞株を、有効性試験に選択した。ＫＧ−１（ＤＳＭＺ，カタログ番号ＡＣＣ  １４）ヒト急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）腫瘍細胞を、インビトロにて、熱不活性化ウシ胎児血清（１０％ｖ／ｖ）を加えたＲＰＭＩ培地中で、空気中における５％  ＣＯ2雰囲気において３７℃で維持した。この細胞を、１週間に２〜３回、ルーチンに継代培養した。指数増殖期において増殖している細胞を収集し、腫瘍細胞接種用にカウントした。
【０３３７】
移植用のヒトＰＢＭＣの調製Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｃｏｌｍａｒ，ＰＡ）から得られたヒト単核エンリッチ細胞（カタログ２１３−１５−０４）を、ｈＩｇＧ１−ＡＡ分子の試験に使用した。ＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配分離（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（商標）Ｐｌｕｓ，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＡＢ，カタログ１７−１４４０−０３）により単離し、凍結培地（Ｒｅｃｏｖｅｒｙ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｆｒｅｅｚｉｎｇ  Ｍｅｄｉｕｍ，Ｇｉｂｃｏ，カタログ１２６４８−０１０）中において、バイアルあたりに５０×１０6個の細胞においてアリコートした。バイアルを、−８０℃において、約２４時間保存し、ついで、長期保存用に液体窒素に移した。ＨｅｍａＣａｒｅ（Ｖａｎ  Ｎｕｙｓ，ＣＡ）から得られた、凍結された単離末梢血単核球バイアル（１００×１０6個／バイアル、カタログＰＢ００９−３）を、ＩｇＧ４分子の試験に使用した。ＰＢＭＣを溶かすために、凍結されたバイアルを、３７℃の水浴に入れた。細胞を、冷たい解凍培地を含有するコニカルチューブに移した。コニカルチューブを遠心分離し、細胞を無菌のＰＢＳ中に再懸濁させた。トリパンブルー排除法を使用して、細胞の生存率を評価した。細胞を、注入用の無菌のＰＢＳ中に１ｍＬあたり５０×１０6個の細胞濃度に再懸濁させた。
【０３３８】
ＦＡＣＳ分析用の末梢血収集このために、５０μＬの血液を、各動物から、後眼窩洞を介してリチウムヘパリンコートチューブに収集した。各サンプルからの血液の２５μＬのアリコートを、２つの９６ウェルプレートのそれぞれにおける、１７５μＬの培地（１０％  ＦＢＳを含むＲＰＭＩ）に入れた。プレートを遠心分離し、ＡＣＫ溶解バッファによる３回の処理を使用して、赤血球を溶解させた。残った細胞を、各サンプルについて固定し、循環性ヒトＴリンパ球を定量するために、ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ８、及びＣＤ４について染色した（マウス末梢血収集／染色：白血球単離及びＦＡＣＳ分析用プロトコルを参照のこと）。
【０３３９】
白血球ＦＡＣＳ分析用プロトコル。白血球ＦＡＣＳ分析用プロトコル。末梢血を、循環性ヒトＰＢＭＣの蛍光発色細胞選別（ＦＡＣＳ）分析についての試験中に、最大２回収集した。全血（２５μＬ）を９６ウェルプレート中において、１７５μＬのＲＰＭＩ培地中に希釈した。プレートを、１４００ｒｐｍで４分間遠心分離し、上清をデカントした。細胞を、２００μＬのＡＣＫ溶解バッファ中に再懸濁させ、氷上で５分間インキュベートした。１３００ｒｐｍで５分間の遠心分離後、上清を吸引した。細胞を、ＡＣＫ溶解バッファで２回以上再処理し、２００μＬのＰＢＳ中において１回洗浄し、１５００ｒｐｍで５分間、再度遠心分離した。細胞ペレットを、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ  ｓｔａｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ｃａｔ＃Ｌ１０１１９，ストックの０．２５μＬ／ウェル、ストックは、１５０μＬのＤＭＳＯ中に希釈された１バイアルである）を含有するＰＢＳ中の５０μＬ／ウェルの抗体カクテルに再懸濁させ、室温において、暗所で３０分間インキュベートした。以下の抗体を使用して、細胞を標識化した。ＣＤ４（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｃａｔ．５５７９２２，０．５μＬ／ウェル）、ＣＤ８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｑ０１００５５，ＰＢＳ／ウェルにおける０．５μＬの１：１０希釈物）、ＣＤ３（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ｃａｔ．５５８１１７，０．５μＬ／ウェル）、ＣＤ４５（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ  ｃａｔ．３０４００６，０．５μＬ／ウェル）を使用した。細胞を、ＦＡＣＳバッファ（２００μＬ／ウェル）で３回洗浄し、１７０μＬ  ＦＡＣＳバッファ中において再懸濁させた。サンプル収集を、ＢＤ  ＬＳＲ  Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメトリー分析器において行った。Ｎｅａｒ−ＩＲ  ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ染料（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．）と、前方／側方散乱面積及び高さパラメータとをそれぞれ使用して、生きた単一の細胞を、分析前にゲーティングした。ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｄｉｖａ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ７を使用してデータを分析した。
【０３４０】
インビボの設計メスのＮＳＧ（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃscid  Ｉｌ２ｒｇtm1Wjl／ＳｚＪ）マウスに対して、各動物の背中側脇腹に、ＫＧ−１細胞（体積２００μＬのリン酸緩衝生理食塩水中の５×１０6個）を皮下接種した。腫瘍細胞接種日を０日目とした。腫瘍の測定を、移植後７日で開始して、腫瘍体積が１００〜１５０ｍｍ3の範囲になるまで（移植後１４日）、１週間に２回モニタした。移植後１４日の時点で、マウスを、腫瘍体積により、処置群にランダム化した。ついで、マウスに、ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）（体積２００μＬのリン酸緩衝生理食塩水中の１０×１０6個）を、静脈内（側面尾静脈）に移植した。ＰＢＭＣ移植直後に、マウスに、静脈内治療二重特異性Ａｂ  Ｉ３ＲＢ１８６（ＰＢＳ中に希釈させ、体積１００μＬで投与した二重特異性抗体）を受けさせた。おおよそ２日に１回、合計５回の投与で処置を行った（正確な投与日については、表１５を参照のこと）。腫瘍測定及び体重を１週間に２回記録した。
【０３４１】
試験のエンドポイントを、腫瘍成長阻害、最大腫瘍量（群平均１５００ｍｍ3超）、及び処置開始時体重の２０％超の体重減少とした。キャリパーを使用して、腫瘍サイズを、１週間に２回、二次元で測定した。式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ2（式中、及びｂはそれぞれ、腫瘍の長径及び短径である）を使用して、体積を、ｍｍ3単位で表した。完全な腫瘍退縮（ＣＲ）は、触診の限界（５０ｍｍ3）を下回って低減された腫瘍として定義される。部分的な腫瘍退縮（ＰＲ）は、初回の腫瘍体積から低減された腫瘍として定義される。３回以上の連続的な腫瘍測定でのＣＲ又はＰＲの最短期間が、ＣＲ又はＰＲが持続的であると考えられるのに必要とされる。
【０３４２】
ヒトＰＢＭＣ移植は、マウスにおいて最終的には移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）をもたらす。この場合、移植されたドナーＴ細胞は活性化され、宿主組織を浸潤して、臓器不全、極端な体重減少をもたらし、死亡を回避できない。このモデルにおけるＧＶＨＤの開始及び重症度をモニタするために、体重を、１週間に２回記録し、グラム（ｇ）単位で表した。式：体重変化＝［（Ｃ−Ｉ）／Ｉ］*１００（式中、Ｃは、現在の体重であり、Ｉは、処置開始時の体重である）を使用して、体重増減率を算出した。
【０３４３】
平均値及び平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を含む要約統計量を、各時点における各群間の腫瘍体積の差の腫瘍体積に関して提供し、対応する試験表に示す。２要因ＡＮＯＶＡ反復測定試験、続けて、ボンフェローニ事後試験を使用し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ５．０１を使用して、群間の腫瘍体積における差の統計学的分析を評価した。ｐ＜０．０５を、統計学的に有意であると考えた。
【０３４４】
ＣＤ１２３×ＣＤ３  ＩｇＧ１、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ二重特異性Ａｂの有効性
ＮＳＧマウスに、ＫＧ−１細胞を皮下接種し、ついで、先に記載されたヒトＰＢＭＣを静脈内に移植し、先に記載されたように、腫瘍が確立された（平均腫瘍体積＝１０２＋／−５．９ｍｍ3）時点で、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性Ａｂ  ３ＲＢ１８６を、動物あたりに０．０１、０．１、１、及び１０μｇの用量で投与した。コントロール二重特異性Ａｂの不在下における二重特異性のメカニズムのためのコントロールとして、腫瘍を有するマウスの部分集合には、ＰＢＭＣを移植しなかったが、投与は行った。また、末梢血ＦＡＣＳ分析のためのコントロールとして、腫瘍を有さないマウスの部分集合に、ＰＢＭＣを移植し、投与を行った（試験設計については表１５を参照のこと）。
【０３４５】
【表１６】
0006805130.tif 000027
【０３４６】
インビボでの有効性試験の結果
図２１は、ヒトＰＢＭＣが存在し、動物あたりに０．１μｇ及び１μｇの２つの用量での、ＫＧ−１ヒトＡＭＬ異種移植片における、ＣＤ１２３×ＣＤ３  ＩｇＧ１−ＡＡ二重特異性Ｉ３ＲＢ１８６−ＩｇＧ１、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａの有効性を示す（ｐ＜０．００１）。動物あたりに１μｇ（灰色の塗りつぶした四角）における二重特異性は、０．１μｇの場合より即時の抗腫瘍効果を示した。３／８の動物において、完全な退縮が生じた。３／８の動物において、部分的な退縮が生じた。ただし、６／８のマウスにおいて、腫瘍移植後５５日目において始まる腫瘍の再成長が見られた。動物あたり０．１μｇ（灰色の塗りつぶした菱形）における二重特異性は、遅いが、全ての動物において完全及び部分的な退縮が生じるより良好な有効性を示した。データから、二重特異性抗体による標的細胞の殺傷には、エフェクターＴリンパ球の存在が必須であることが証明されている。
【０３４７】
図２２は、腫瘍移植後３０日目におけるマウスから収集された末梢血のＦＡＣＳ分析を示す。ＣＤ８＋Ｔリンパ球の増大によりもたらされたＣＤ４５＋細胞の増大が、０．１μｇ及び１μｇの二重特異性抗体により処置された腫瘍を有する動物において明らかであった。ＣＤ８＋Ｔリンパ球のこの増大は、抗腫瘍効果が観察された群において、標的細胞（ＫＧ−１）が存在した場合にのみ生じた。あるいは、１０μｇの二重特異性抗体は、末梢血からＣＤ４５＋ＰＢＭＣを消去することが明らかであった。エフェクター細胞のこの消去は、この用量において見られた有効性の欠如を説明することができる。
【０３４８】
図２３は、腫瘍移植後５３日目における、マウスから収集された末梢血のＦＡＣＳ分析を示す。ＣＤ４５＋、ＣＤ８＋、及びＣＤ４＋細胞は、０．１μｇ及び１μｇの二重特異性で処置された腫瘍を有するマウスにおいて、ＰＢＳ並びに０．０１μｇ及び０．１μｇの二重特異性で処置された腫瘍を有さないマウスと、同様のレベルであった。１μｇ及び１０μｇの二重特異性で処置された腫瘍を有さないマウスは、非常に低いレベルのＣＤ４５＋、ＣＤ８＋、及びＣＤ４＋細胞を有したが、この原因は、現時点では不明である。
【０３４９】
図２４は、処置群の経時的な平均体重変化を示す。先に記載されたように、体重減少は、ＧＶＨＤの開始及び重症度に相関し、ＧＶＨＤは、活性化されたＴ細胞により生じる。腫瘍を有するマウス及び腫瘍を有さないマウスの両方において、体重減少は、０．１μｇの二重特異性抗体による処置により最も重篤であった。１μｇの二重特異性抗体で処置された腫瘍を有するマウスは、重篤な体重減少を経験しなかった。Ｔリンパ球は、腫瘍移植後５３日目において存在した（ＦＡＣＳ分析による、図２３）が、体重減少及びＧＶＨＤ開始の欠如は、活性化されたＴ細胞の欠如を示す。この欠如は、腫瘍移植後５５日目において始まる、この群において見られた腫瘍の再成長を説明することができる（図２１）。
【０３５０】
実施例１８インビボでのＩ３ＲＢ１８６及びコントロール二重特異性Ａｂ（Ｉ３ＲＢ１９１及びＩ３ＲＢ１９２）の評価
２回目のインビボ実験において、二重特異性Ａｂコントロール、Ｉ３ＲＢ１９１、ＣＤ３  ｎｕｌｌアーム及びＩ３ＲＢ１９２、ＣＤ１２３  ｎｕｌｌアームＡｂを追加した。プロトコルは、実施例１６と同一とした。ＫＧ−１ヒトＡＭＬ腫瘍異種移植片を、メスのＮＳＧマウスの皮下に移植した。移植後１４日において、マウスを、腫瘍体積により、処置群にランダム化した。ヒトＰＢＭＣを、静脈内移植し、続けて、Ｉ３ＲＢ１８６並びにＩ３ＲＢ１９１及びＩ３ＲＢ１９２のコントロール二重特異性Ａｂにより、動物あたりに１μｇで静脈内処置した（表１６の投与スケジュールを参照のこと）。処置を、腫瘍移植後１４、１６、１８、２１、及び２３日目に行った。図中の矢印は、二重特異性Ａｂの投与日を示す。
【０３５１】
【表１７】
0006805130.tif 000028
【０３５２】
二重特異性Ａｂの抗腫瘍活性を、経時的な腫瘍サイズ（ｍｍ3）における変化として示す（図２５）。１μｇでのＩ３ＲＢ１８６による処置は、ＰＢＳ及びコントロール二重特異性Ａｂ処置動物の腫瘍成長と比較して、腫瘍成長を顕著に阻害した（ｐ＜０．００１）。
【０３５３】
腫瘍移植後３６日目において、末梢血を、循環性ヒトＰＢＭＣのＦＡＣＳ分析のために収集した。１回目の試験とは異なり、ＰＢＳ及びＩ３ＲＢ１９１と比較して、Ｉ３ＲＢ１８６で処置された動物において、ヒトＣＤ４５＋ＰＢＭＣの頻度（ａ）又はＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔリンパ球の頻度（ｂ）の差は存在しなかった（図２６）。ＣＤ４５＋、ＣＤ８＋、及びＣＤ４＋細胞は、ＣＤ１２３  ｎｕｌｌアームコントロール二重特異性ＡｂであるＩ３ＲＢ１９２で処置された、腫瘍を有する動物及び腫瘍を有さない動物においてより低い頻度であった。
【０３５４】
腫瘍移植後６３日目において、末梢血を、循環性ヒトＰＢＭＣのＦＡＣＳ分析のために収集した。腫瘍を有する動物の内、１μｇにおいてＩ３ＲＢ１８６で処置された動物のみが残った（図２７）。１μｇのＩ３ＲＢ１８６で処置された腫瘍を有する動物において、ＰＢＳ又は１μｇのＩ３ＲＢ１８６で処置された腫瘍を有さない動物と比較して、ＣＤ４５＋ヒトＰＢＭＣ（ａ）及びＣＤ８＋Ｔリンパ球（ｂ）の頻度が上昇した（図２５）。ＣＤ４＋Ｔリンパ球は、残り全ての群において同様の頻度であった。ＰＢＳ及び１μｇのＩ３ＲＢ１８６で処置された腫瘍を有さない動物は、非常に低い頻度のＣＤ４５＋、ＣＤ８＋、及びＣＤ４＋細胞を有した。
【０３５５】
図２８は、処置群の経時的な平均体重変化を示す。先に記載されたように、体重減少は、ＧＶＨＤの開始及び重症度に相関し、ＧＶＨＤは、活性化されたＴ細胞により生じる。腫瘍を有するマウスにおいて、１μｇの二重特異性抗体による処置により、他の全ての群と比較して、最も大きく体重が減少した。これは、１μｇの二重特異性で処置された腫瘍を有するマウスが重篤な体重減少を経験しなかった１回目の試験と矛盾している。Ｔリンパ球は、腫瘍移植後６３日目において存在した（図２７）。しかしながら、１μｇ用量での有効性は、１回目の試験のように顕著ではなかった（図２１、２５）。
【０３５６】
実施例１９ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａにおける二重特異性フォーマットでの抗体の調製
複数の単特異性ＣＤ３及びＣＤ１２３抗体を、Ｆｃ置換Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａｘ（ＣＤ１２３アーム）又はＳ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及びＲ４０９Ｋ（ＣＤ３アーム）（ＥＵインデックスに従ったナンバリング）をそのＦｃ領域に有するＩｇＧ４として発現させた。単特異性抗体を、ＣＭＶプロモータ下において、ＣＨＯ細胞株中で発現させた。
【０３５７】
配列番号１８４のＶＨ及び配列番号１９０のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及びＲ４０９Ｋ置換を有するＩｇＧ４定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１９を生成した。配列番号１８６のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及びＲ４０９Ｋ置換を有するＩｇＧ４定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１７を生成した。配列番号１８６のＶＨ及び配列番号１９０のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及びＲ４０９Ｋ置換を有するＩｇＧ４定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１８を生成した。配列番号１８７のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及びＲ４０９Ｋ置換を有するＩｇＧ４定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２２０を生成した。
【０３５８】
配列番号１２０のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬを有する抗ＣＤ１２３抗体Ｉ３ＲＢ２のＶＨ及びＶＬ領域と、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ４定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ１２３抗体Ｉ３ＲＢ２１８を生成した。配列番号１３６のＶＨ及び配列番号１６８のＶＬを有する抗ＣＤ１２３抗体Ｉ３ＲＢ１８のＶＨ及びＶＬ領域と、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ４定常領域とを含む単特異性抗ＣＤ１２３抗体Ｉ３ＲＢ２１７を生成した。
【０３５９】
コントロールとして、二重特異性抗体のＣＤ３又はＣＤ１２３アームのいずれか一方を有するｎｕｌｌアームとしてのパートナーに対する、配列番号１９１のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ又はＦ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｒ４０９Ｋ、Ｆ４０５Ｌを有するＩｇＧ４定常領域とを含む、Ｂ２１Ｍから得られた単特異性抗ＲＳＶ抗体を生成した。
【０３６０】
これらの単特異性抗体を精製し、生成された単特異性抗ＣＤ３及びＣＤ１２３抗体を、実施例１５において先に記載されたように、インビトロでのＦａｂアーム交換のために、マトリクス状に混合し（表１２）、種々のアッセイにおいて特徴決定した。二重特異性抗体Ａｂ７９５９は、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ２１９−Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ２１７−Ｒ４０９のＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ａｂ３９７８は、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ２１７−Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ２１７−Ｒ４０９のＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ａｂ７９５５は、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ２１８−Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ２１７−Ｒ４０９のＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体９９５８Ａｂは、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ２２０−Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ２１７−Ｒ４０９のＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ａｂ８７４７は、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ２１９−Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ２１８−Ｒ４０９のＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ａｂ８８７６は、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ２１７−Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ２１８−Ｒ４０９のＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ａｂ４４３５は、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ２１８−Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ２１８−Ｒ４０９のＣＤ１２３結合アームとを含む。二重特異性抗体Ａｂ５４６６は、ｍＡｂ  ＣＤ３Ｂ２２０−Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ  Ｉ３ＲＢ２１８−Ｒ４０９のＣＤ１２３結合アームとを含む。
【０３６１】
コントロール二重特異性抗体のために、ＩｇＧ４  ＰＡＡフォーマットにおけるＢ２Ｍ１を生成し、精製し、以下の表１７におけるマトリクスに従って、ＣＤ３アーム又はＣＤ１２３アームのいずれかと組み合わせた。
【０３６２】
【表１８】
0006805130.tif 000029
【０３６３】
ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体についての重鎖及び軽鎖を表１８に示す。
【０３６４】
【表１９−１】
0006805130.tif 000030
【０３６５】
【表１９−２】
0006805130.tif 000031
【０３６６】
【表１９−３】
0006805130.tif 000032
【０３６７】
【表１９−４】
0006805130.tif 000033
【０３６８】
実施例２０．組換え抗原を使用したＩｇＧ４−ＰＡＡフォーマットにおける二重特異性抗体のＣＤ１２３一価親和性
ヒトＣＤ１２３  ＳＰ１  ＥＣＤ及びＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤに対するＣＤ３×ＣＤ１２３二重特異性抗体の結合についての動力学及び親和性を決定するために、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）実験を行った。
【０３６９】
組換えヒトＣＤ１２３  ＳＰ１及び組換えヒトＣＤ１２３  ＳＰ２  ＥＣＤ用の抗ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性Ａｂ３９７８、７９５５、７９５９、９９５８、８８７６、８７４７、５４６６の親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ機器を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定した。Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，現在はＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅの一部門）を使用して、動力学試験を、２５℃において行った。ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）特異性抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｐｒｏｄ  ＃１０９−００５−０９８）を、ＣＭ−５センサチップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）のカルボキシメチルデキストランコート金表面に共有結合させた。デキストランのカルボキシメチル基を、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化させた。抗Ｆｃ抗体を、ｐＨ４．５において、１０ｍＭ酢酸ナトリウム中でカップリングさせた。表面上の残りの任意の反応部位は、エタノールアミンを用いた反応により遮断された。動力学結合測定のために、抗ＣＤ１２３抗体を、抗ヒトＦｃγ特異性抗体上で捕捉した。４０〜７０ＲＵの抗体を捕捉した。Ａｂ捕捉を、０．４ｎＭ〜４００ｎＭの濃度におけるヒトＣＤ１２３  ＳＰ１又はヒトＣＤ１２３  ＳＰ２の、４０μＬ／分での注入により行った。会合データを２分間収集した後、解離データを１０分間収集した。表面を、３０μＬの１００ｍＭ  Ｈ３ＰＯ４  １００μＬ／分、続けて、５０ｍＭ  ＮａＯＨで再生した。動力学分析用のサンプルを、ＰＢＳ系バッファ（３ｍＭ  ＥＤＴＡ及び０．０５％界面活性剤Ｐ２０を含有するＤ−ＰＢＳ）中において調製した。データは、捕捉抗体を含む流動細胞と、捕捉抗体を含まない参照細胞との間のＳＰＲシグナルの差異を報告した。基準−除算シグナル（reference-subtracted signal）からブランク注入のデータを除算することによって、シグナルに対する器具の追加の寄与を除去した。ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．）を使用して、１：１結合モデルにより、全ての濃度（グローバルフィット）における会合及び解離段階を当て嵌めることにより、データを分析した。表２０及び２１に、Ｂｉａｃｏｒｅにより得られた動力学及び親和性の結果をまとめる。両方の表は、３回以上の独立した実験中に得られたデータを示す。
【０３７０】
Ｂｉａｃｏｒｅデータは、同じファミリー内において、Ｉ３ＲＢ１８由来の二重特異性Ａｂ及びＩ３ＲＢ２由来の二重特異性Ａｂは、ＣＤ１２３  ＳＰ１に対する類似する親和性（表１９）及びＣＤ１２３  ＳＰ２に対する類似する親和性（表２０）で結合し、Ｉ３ＲＢ１８由来の二重特異性Ａｂは、組換えＣＤ１２３  ＳＰ１に対して、Ｉ３ＲＢ２由来の二重特異性Ａｂより１０倍超タイトに、それぞれ(１ｎＭ及び１４ｎＭの親和性で結合することを示している。組換えＣＤ１２３  ＳＰ２に結合させた場合、Ｉ３ＲＢ１８由来の二重特異性Ａｂは、Ｉ３ＲＢ２由来の二重特異性Ａｂより５倍超タイトに、それぞれ(０．３ｎＭ及び１．７ｎＭの親和性で結合する。表１９及び２０における標準偏差は、非常にデータに再現性があったことを示している。
【０３７１】
【表２０】
0006805130.tif 000034
ＮＢ−結合せず
【０３７２】
【表２１】
0006805130.tif 000035
ＮＢ−結合せず
【０３７３】
実施例２１ＭＳＤ−ＣＡＴによる細胞表面発現抗体に対するＩｇＧ４−ＰＡＡフォーマットにおける二重特異性抗体のＣＤ１２３一価親和性
ＭＳＤ細胞親和性技術（ＭＳＤ−ＣＡＴ）法を使用して、細胞表面発現ｈＣＤ１２３  ＳＰ１及びＳＰ２に対して選択された抗ＣＤ１２３二重特異性抗体の一価親和性を行った。ＭＳＤ−ＣＡＴは、ハイスループット方式において、インタクトな細胞を使用して親和性を決定するための標識フリー法として社内で開発された。これらの実験を、細胞表面ヒトＣＤ１２３  ＳＰ１及びＣＤ１２３  ＳＰ２に対する抗ＣＤ１２３候補の結合親和性及び特異性を評価するために行った。使用された細胞株は、ヒトｐＤｉｓｐｌａｙ  ＣＤ１２３  ＳＰ１及びｐＤｉｓｐｌａｙ  ＣＤ１２３  ＳＰ２であった。陰性コントロール抗体を使用して、二重特異性Ａｂスキャフォールドがこれらの細胞に非特異的に結合するかどうかを試験し、ＣＤ１２３に対する非特異的な結合と特異的な結合とを区別した。ＭＳＤ−ＣＡＴ法を使用してこれらの相互作用の親和性を測定するために、固定濃度の抗ＣＤ１２３（８００、１６０、３２、及び６ｐＭ）及び可変濃度の細胞（２０００万個〜１０１６個／ｍＬ）を含む一連の混合物を調製し、プレートを４℃で２４時間回転させることにより、平衡にした。これらのサンプルを、０．０５％アジ化物、１％ＢＳＡ、３ｍＭ  ＥＤＴＡを含有するＤＭＥＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ培地中において調製した。（０．２９〜１．０８）×１０6個のｈＣＤ１２３  ＳＰ１／細胞及び（０．５７〜１．５）×１０6個ｈＣＤ１２３  ＳＰ２／細胞の受容体数を、反応体積、細胞密度（個／Ｌ）、及びアボガドロ数に基づいて、混合物中におけるＭ受容体濃度に変換した。これにより、ヒトＣＤ１２３  ＳＰ１について３５ｎＭ〜０．５Ｍの濃度範囲がもたらされ、ヒトＣＤ１２３  ＳＰ２について４９ｎＭ〜０．９７ｐＭの濃度範囲がもたらされた。平衡化後、プレートを、約１０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。遊離した抗ＣＤ３を、上清において検出した。混合物中の遊離した抗ＣＤ１２３を、ｍｅｓｏｓｃａｌｅ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）読取り機器を使用する電気化学発光法（ＥＣＬ）により検出した。電気化学発光免疫アッセイ（ＥＣＬ）検出による平衡化混合物中の遊離した抗ＣＤ１２３の検出のために、プレートを準備した。検出プレート（ＳＡ−ＭＳＤプレート上に抗原を結合させたプレート）を準備するために、ＭＳＤストレプトアビジン標準プレートを、アッセイバッファ（ＰＢＳ（Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＧＩＢＣＯ  １４１９０−１３６）、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０、０．２％  ＢＳＡ）の５０ｕＬ／ウェルで、５分間ブロッキングした。このアッセイバッファを、洗浄することなく除去し、アッセイバッファ中の０．７ｕｇ／ｍＬのビオチン化抗原５０ｕＬ／ウェルをＭＳＤプレートに加え、一晩（４℃において約１６時間）インキュベートした。一晩のインキュベーション後、コーティング抗原を除去することなく、１５０ｕＬ／ウェルのアッセイバッファを加えることにより、プレートをブロッキングし、周囲温度において約１時間インキュベートし、洗浄バッファ（ＢＳＡを含まないアッセイバッファ）で５回洗浄した。サンプルプレートから５０ｕＬ／ウェルの上清を抗原コートプレートに移し、６０分間インキュベートし、ついで、洗浄バッファで３回洗浄した。この後に��ルテニウム標識化検出抗体（抗ヒトＨ＋Ｌ）を、ウェルあたり５０ｕＬ加え、１時間インキュベートした。１時間後、このプレートを洗浄バッファで洗浄し、ウェルあたり１５０ｕＬのＭＳＤリードバッファ（リードバッファＴ  ４Ｘ、Ｒ９２ＴＤ−２、ＭＳＤ）を加えた。このプレートを、発光レベルについて、ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ６０００ａリーダー上で直ちに読み取った。ＭＳＤにより検出されたＥＣＬシグナルを、混合物中の遊離抗体の割合に関して表した。データを分析し、Ｐｒｉｓｍソフトウェアに導入された（質量作用の法則から得られた）ユーザ定義等式を使用して、親和性を決定した。ＭＳＤ−ＣＡＴ実験についての結果を表２１に示す。
【０３７４】
【表２２】
0006805130.tif 000036
ＮＡ＝該当せず、アッセイを行わなかった
【０３７５】
細胞表面ＣＤ１２３  ＳＰ１に対する二重特異性ＡｂのＭＳＤ−ＣＡＴ親和性は、組換えＣＤ１２３  ＳＰ１についてのＳＰＲデータより６倍超タイトである。しかしながら、細胞表面ＣＤ１２３  ＳＰ２に対する親和性は、組換えＣＤ１２３  ＳＰ２と類似する（２倍未満の差）。ＣＤ１２３  ＳＰ１に対するＳＰＲとＭＳＤ−ＣＡＴとの親和性の差は、大部分は、組換え抗原と比較して、細胞表面上での抗原の提示によるであろう。ＭＳＤ−ＣＡＴは、Ｉ３ＲＢ１８由来二重特異性Ａｂ（３９７８、７９５５、７９５９、９９５８）が細胞表面ヒトＣＤ１２３  ＳＰ１及びヒトＣＤ１２３  ＳＰ２に対する、ｐＭの親和性を有する最もタイトなバインダーであること示した。Ｉ３ＲＢ１８由来の親和性は、細胞表面ＣＤ１２３  ＳＰ１及びＣＤ１２３  ＳＰ２それぞれに対するＩ３ＲＢ２由来二重特異性Ａｂより、約１０倍かつ約５倍タイトである。親和性は、同じファミリー内の二重特異性Ａｂに関して類似していた。
【０３７６】
全体として、Ｂｉａｃｏｒｅ及びＭＳＤ−ＣＡＴを使用する分子相互作用分析は、Ｉ３ＲＢ１８由来二重特異性ＡｂがＩ３ＲＢ２由来二重特異性Ａｂより、組換え及び細胞表面ヒトＣＤ１２３（ＳＰ１及びＳＰ２）に対してタイトに結合することを示して一致している。
【０３７７】
実施例２２フローサイトメトリーによる細胞表面発現抗原に対するＩｇＧ４−ＰＡＡフォーマットにおける二重特異性抗体のＣＤ１２３一価親和性
ヒトＴ細胞（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ，Ｃｏｌｍａｒ，ＵＳＡ）及びカニクイザルＴ細胞（Ｚｅｎ  Ｂｉｏ，Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ，ＵＳＡ）上のＣＤ３に対する、複数のＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性Ａｂの親和性値を測定するために、フローサイトメトリーを使用した。この方式は、固定濃度の既知の親和性を有する標識化抗ＣＤ３  ｍＡｂ及び増大濃度の非標識試験Ａｂ（Ａｓｈｋｅｎａｚｉ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ：８８：１０５３５，１９９１）を使用する競合結合を含む。使用された抗ＣＤ３  ｍＡｂは、ＳＰ３４−２に類似する親和性値を有するＣＤ３Ｂ１４６  ｈｕＩｇＧ１−ＡｌａＡｌａ  Ｆ４０５Ｌ抗体であった。飽和結合を使用して、ＳＰ３４−２についてのＫｄを決定した。ヒト及びカニクイザルのＴ細胞結合曲線の例を、図２９に示す。図３０は、ヒト（図３０Ａ）及びカニクイザル（図３０Ｂ）Ｔ細胞について得られた、標識化Ｂ１４６と、種々の濃度の非標識ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体との競合結合を示す。比較可能な値を、ヒト及びカニクイザルＴ細胞について得た。分析されたサンプルの中から、３つのＣＤ３親和性群：高（９〜１５ｎＭ）、中（２５〜５０ｎＭ）、及び低（１１０〜２７０ｎＭ）が存在すると考えられる。これらを、表２２にまとめる。
【０３７８】
【表２３】
0006805130.tif 000037
【０３７９】
実施例２３  機能性細胞殺傷アッセイにおけるＩｇＧ４−ＰＡＡ  ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性Ａｂの評価
２名の健康なドナーからのＴ細胞を使用して、細胞溶解についてＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性Ａｂを評価するために、実施例１６に記載されたＴ細胞媒介性細胞傷害アッセイを使用した。これらの実験のために、ＯＣＩ−ＡＭＬ５、ＫＧ−１及びＪＩＭ３細胞を使用した。ＪＩＭ３は、ＣＤ１２３発現を有さない骨髄腫腫瘍株であり、コントロールとして使用した。細胞を二重特異性Ａｂで４８時間処理した。この試験についてのエフェクター／標的比を５：１とした。Ｆｃ機能をブロックするために、２ｍｇ／ｍＬのＦｃブロッカーを加えた。
【０３８０】
３７℃、５％  ＣＯ2での４８時間のインキュベーション後の、ＡＭＬ細胞株ＯＣＩ−ＡＭＬ（図３１）、ＫＧ−１（図３２）、及びＪＩＭ３（図３３）のＴ細胞媒介性細胞溶解の結果を示す。ＭＶ４−１１及びＯＣＩ−ＡＭＬ５は、ＣＤ１２３発現細胞株である。ＪＩＭ３は、非常に少しのＣＤ１２３発現を有するか、又はＣＤ１２３発現を有さない。この試験についてのエフェクター／標的比は、５：１であった。Ｆｃブロッカーの２ｍｇ／ｍＬのアリコートを、Ｆｃ機能をブロックするために加えた。
【０３８１】
結果は、ＩｇＧ１−ＡＡフォーマットにおけるＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性Ａｂによる先の細胞殺傷実験に類似する。Ｉ３ＲＢ２１７（Ｉ３ＲＢ１８）及びＩ３ＲＢ２１８（Ｉ３ＲＢ２）抗体は両方とも、二重特異性フォーマットにおいて抗ＣＤ３抗体と組み合わせた場合、ＣＤ１２３＋細胞を特異的に殺傷するのに有効である。ＪＩＭ３細胞に効果が無かったことにより証明されたように、細胞殺傷は、ＣＤ１２３含有細胞に特異的である。加えて、データから、Ｉ３ＲＢ２１８（Ｉ３ＲＢ２系）二重特異性抗体と、Ｉ３ＲＢ２１７（Ｉ３ＲＢ１８系）二重特異性抗体との間において、明確な順位付けが可能である。ここで、Ｉ３ＲＢ２１７×ＣＤ３二重特異性Ａｂは、先の細胞殺傷データと一致して、Ｉ３ＲＢ２１８×ＣＤ３二重特異性Ａｂより活性である。
【０３８２】
実施例２４受容体ヘテロ二量体化アッセイにおける二重特異性抗体の評価
ＩＬ３Ｒα（ＣＤ１２３）／ＩＬ３Ｒβ（ＣＤ１３１）のＩＬ−３誘引性ヘテロ二量体化を妨げるＣＤ１２３抗体の能力を評価するために、ＩＬ３ＲＡ／ＣＤ１３１（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ  ９３−０９６９−Ｃ１）についてのＤｉｓｃｏｖｅＲｘ受容体二量体化アッセイを使用した。ＣＤ１２３及びＣＤ１３１を、ＰｒｏＬｉｎｋ（商標）（ＰＫ）又は酵素アクセプター（ＥＡ）によりタグ付けした。ＩＬ−３誘引活性化に基づいて、タンパク質は二量体化してＩＬ３受容体を形成すると、２つのβ−ｇａｌコンポーネントが補い合って、活性な酵素を構成する。活性なβ−ｇａｌは、基質の存在下において、化学発光シグナルを生成する。抗体濃度の増大により減少したシグナルを示す抗ＣＤ１２３抗体又は二重特異性抗体は、ヘテロ二量体化を妨げることについて陽性である。
【０３８３】
ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）検出試薬（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ）を使用して、製造業者のプロトコルに従って、ＩＬ−３リガンドの存在下における酵素活性の増大について、細胞を試験した。ＨＥＫ２９３  ＩＬ３ＲＡ−ＰＫ／ＣＳＦ２ＲＢ−ＥＡ細胞株を、５，０００個／ウェルの細胞を有する３８４ウェルプレート上の２０ｕＬのアッセイ培地中に４連で播種した。抗体ストックを、高濃度の化合物が１０ｕｇ／ｍＬとなるように、０．１％  ＢＳＡ／ＰＢＳ中に順次希釈した。高用量を、試験した１１通りの用量に順次１：３に希釈した。５μＬの希釈抗体をウェルに加えた。細胞を、３７℃において１時間インキュベートした。１００μｇ／ｍＬでの組換えヒトＩＬ−３ストック溶液を、６０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−３希釈を各ウェルに５μＬ加えるように希釈した。使用されたＩＬ−３の終濃度は、１０ｎｇ／ｍＬであった。細胞を、３７℃において、更に６時間インキュベートした。溶解バッファ及び酵素基質を含有するＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ  Ｆｌａｓｈ検出試薬を、細胞に加え、室温において３０分間インキュベートし、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  ｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒにおいて読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６を使用して、データを分析した。可変傾斜（４つのパラメータ）を有するＳ字状用量応答を使用して、曲線を適合させる。制約なし、適合法＝最小二乗法（正規フィット）。
【０３８４】
ＩｇＧ４  ＰＡＡ二重特異性抗体８７４７及び７９５９並びに親抗体Ｉ３ＲＢ２１８及びＩ３ＲＢ２１７を、アッセイにランした。アッセイを、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−３の存在下において、２回独立してランした。陽性コントロールのＣＤ１２３抗体７Ｇ３を、アッセイにおける比較対象として使用した。抗ＣＤ１２３アームＩ３ＲＢ１８配列を含有した抗体、Ｉ３ＲＢ２１７、及び７９５９（図３４Ｃ及び図３４Ｄ）は、ＩＬ−３リガンドの存在下において、機能性ＩＬ−３受容体の形成を妨げることができた。抗ＣＤ１２３アームＩ３ＲＢ２を含有した抗体、Ｉ３ＲＢ２１８及び８７４７（図３４Ａ及び図３４Ｂ）は、このアッセイにおいて、機能性ＩＬ−３受容体の形成を妨げなかった。このことは、Ｉ３ＲＢ１８が機能性ＩＬ−３受容体に関連する下流のシグナル伝達を阻害できたことを示した先のデータと相関している。
【０３８５】
実施例２４．ＫＧ−１腫瘍モデルにおける複数の二重特異性抗体の評価
複数のＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性Ａｂを、先に記載されたように、ＫＧ−１  ＡＭＬマウスモデルにおける有効性について評価した。ＨｅｍａＣａｒｅ（Ｖａｎ  Ｎｕｙｓ，ＣＡ）から得られた、凍結させた単離末梢血単核球バイアル（バイアルあたりに１００×１０6個の細胞、カタログＰＢ００９−３）をＩｇＧ４二重特異性抗体を試験するのに使用したこと以外は、この試験についてのプロトコルを、実施例１６及び１７におけるものと同一とした。ＮＳＧマウスに、ＫＧ−１細胞を皮下に接種し、ついで、腫瘍が確立された時点（平均腫瘍体積＝１３５．７＋／−４．７ｍｍ3）で、ヒトＰＢＭＣを静脈内に移植した。ついで、マウスに、種々の親和性を有するＩｇＧ４  ＰＡＡ  ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性Ａｂと、対応するコントロール二重特異性Ａｂとを、表２３に記載されたような用量範囲において投与した。
【０３８６】
【表２４】
0006805130.tif 000038
【０３８７】
複数のＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性Ａｂについてのインビボｏでの有効性試験の結果を、図３５〜４２に示す。図３５〜３８は、ＫＧ−１ヒトＡＭＬ異種移植片における、種々の親和性及び用量でのＣＤ１２３×ＣＤ３  ＩｇＧ４−ＰＡＡ二重特異性Ａｂの有効性を示す。図３５において、高親和性のＣＤ１２３及びＣＤ３アームを有する二重特異性Ａｂは、ＰＢＳ及びコントロール二重特異性Ａｂと比較して、腫瘍移植後２５〜３６日目において、顕著な有効性を有した（ｐ＜０．００１）。１μｇ用量での二重特異性Ａｂ  ９９５８は、０．１μｇ及び両方の用量の二重特異性Ａｂ  ７９５９と比較して、腫瘍移植後３６日目まで、顕著な有効性を有した（ｐ＜０．０１）。このことは、高親和性のＣＤ１２３及びＣＤ３アームが、このモデルにおける顕著な有効性に必要であることを示している。
【０３８８】
図３６において、１０μｇ用量での二重特異性Ａｂ  ３９７８は、ＰＢＳ及びコントロール二重特異性Ａｂと比較して、腫瘍移植後２８日目（ｐ＜０．０５）〜３６日目（ｐ＜０．００１）において、１μｇ用量と比較して、腫瘍移植後３２日目（ｐ＜０．０５）〜３６日目（ｐ＜０．０１）において、０．１μｇ用量と比較して、腫瘍移植後３２日目（ｐ＜０．０１）〜３６日目（ｐ＜０．００１）において、顕著な有効性を有した。この二重特異性Ａｂについて、用量依存性応答が存在する。このことは、高用量での高親和性ＣＤ１２３アームがこのモデルにおける有効性をもたらし得ることを示している。
【０３８９】
図３７において、０．１μｇ用量での二重特異性Ａｂ  ８７４７は、ＰＢＳ及びコントロール二重特異性Ａｂと比較して、腫瘍移植後３２日目〜３６日目（ｐ＜０．００１）において、１μｇ用量及び１０μｇ用量と比較して、腫瘍移植後３６日目まで（ｐ＜０．００１）、顕著な有効性を有した。このことは、低用量での高親和性ＣＤ３アームがこのモデルにおける有効性をもたらし得ることを示している。
【０３９０】
図３８において、二重特異性Ａｂ  ８８７６は、ＰＢＳ及び任意の用量におけるコントロール二重特異性Ａｂと比較して、顕著な有効性を有しなかった。
【０３９１】
図３９〜４２は、処置群の経時的な平均体重変化を示す。先に記載されたように、体重減少は、ＧＶＨＤの開始及び重症度に相関し、ＧＶＨＤは、活性化されたＴ細胞により生じる。
【０３９２】
０．１μｇでの二重特異性Ａｂ  ７９５９及び１μｇでの二重特異性Ａｂ  ９９５８で処置された動物は、ＰＳＢ、コントロール二重特異性Ａｂ、並びに他の用量の二重特異性Ａｂ  ７９５９及び二重特異性Ａｂ  ９９５８で処置された動物より、重篤で早期に体重減少が開始された（図３９）。このことは、１μｇの二重特異性Ａｂ  ９９５８で見られた顕著な高腫瘍効果に相関する（図３５）。
【０３９３】
１０μｇ用量での二重特異性Ａｂ  ３９７８で処置された動物は、ＰＳＢ及びコントロール二重特異性Ａｂで処置された動物と比較して、より重篤で早期に体重減少が開始された（図４０）。１μｇ及び０．１μｇ用量で処置されたマウスの体重減少は、用量依存的な様式で起こった。用量依存的な体重減少は、図３６において見られた用量依存的抗腫瘍効果と相関している。
【０３９４】
０．１μｇ用量での二重特異性Ａｂ  ８７４７で処置された動物は、ＰＢＳ処置群の体重減少と同様に体重が減少した。ただし、マウスは、腫瘍移植後３９日目から開始して、体重が回復した（図４１）。１μｇ用量又は１０μｇ用量では、体重は減少しなかった。０．１μｇ用量において見られた体重減少は、この用量において見られた抗腫瘍効果と相関している（図３７）。
【０３９５】
二重特異性Ａｂ  ８８７６で処置された動物は、ＰＳＢ又はコントロール二重特異性抗体処置マウスの体重減少とは異なり、体重減少を示さなかった（図４２）。このことは、この二重特異性抗体で見られた抗腫瘍効果の欠如に対応する（図３８）。
【０３９６】
まとめると、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性Ａｂは、エフェクター細胞（Ｔリンパ球）の存在下においてのみ、ＣＤ１２３発現ヒトＡＭＬ細胞株であるＫＧ−１において、一貫した有効性を示す。Ｔ細胞増殖は、疾患（ＫＧ−１異種移植片）の存在下においてのみ、投与期間後短く見られた。更に、二重特異性の有効性は、体重減少により測定されたＧＶＨＤの開始と相関する。このことは、活性化されたＴリンパ球が存在することを示している。まとめると、これらのデータから、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体は、提案されたメカニズムの標的及びエフェクター細胞会合及びＴ細胞殺傷により、抗腫瘍効果を有することが示される。
【０３９７】
実施例２４インビボにおけるマウスＰＫ試験
試験用Ａｂ物品を、リン酸緩衝生理食塩水中に０．２ｍｇ／ｍＬで製剤化した。Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光計を使用して、濃度を確認し、ついで、０．２ミクロンシリンジフィルタにより滅菌ろ過した。
【０３９８】
これらの試験に使用されたトランスジェニック動物は、Ｃ５７ＢＬ／６マウス由来である。Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ）からライセンスされたＴｇ３２は、その内在性マウスＦｃＲｎ  α遺伝子ノックアウトを有し、天然のヒト遺伝子プロモータの制御下において、ヒトＦｃＲｎ  α遺伝子を遺伝子導入されている。Ｔｇ３２  ｈｅｍｉは、ＦｃＲｎ導入遺伝子についてのマウス半接合を意味する。後者は、ホモ接合トランスジェニックマウスをＦｃＲｎ  αノックアウトマウスと交尾させることにより得られる。顕著な相関性が、Ｔｇ３２  ｈｅｍｉマウスモデルについて、ヒト抗体のＰＫと霊長類におけるＰＫとの間で観察された。したがって、Ａｂ半減期を評価するために、同モデルを、下記ＰＫ試験に使用した。全てのマウスの飼育を、ＳＡＧＥ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｓ  Ｂｏｙｅｒｔｏｗｎ，ＰＡ  Ｆａｃｉｌｉｔｙにおいて行った。
【０３９９】
この試験について、６週齢のマウスを使用し、４８匹のメスのＴｇ３２  ｈｅｍｉマウスに、群あたりに５匹のマウスを使用して、ｈＩｇＧ４−ＰＡＡ二重特異性ＡｂをＩＶ注入した。後眼窩出血を、同じ時点で採取した。
【０４００】
サンプル収集後、血清分析を行った。血清サンプル中のヒトＩｇＧの濃度を、ＭＥＳＯ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）フォーマットによる電気化学発光免疫アッセイにより決定した。ストレプトアビジンＭＳＤプレートを、Ｓｔａｒｔｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋ  Ｔ２０（Ｔｈｅｒｍｏ）中の２μｇ／ｍＬビオチン化Ｆ（ａｂ’）２ヤギ抗ｈｕＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ，Ｊａｃｋｓｏｎロット１０９−０６６−０８）により、５０μＬ／ウェルで、４℃において一晩コートした。プレートを、ＰＢＳバッファで洗浄し、サンプルを、Ｓｔａｒｔｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋ  Ｔ２０中の１０％マウス血清（Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎｓ，ＮＹ）に希釈した。各プレートに、各試験物品の標準曲線を含ませた。同標準曲線は、０．１ｍｇ／ｍＬで開始し、系列２倍希釈とした。プレートを、振盪器において、ＲＴで２〜３時間インキュベートし、洗浄し、ついで、２μｇ／ｍＬのＭＳＤ−ＴＡＧ（ルテニウム標識化抗ヒトＩｇＧ  ｍＡｂ，Ｒ１０Ｚ８Ｅ９，ＭＳＤ）と共に、振盪器において、ＲＴで１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、２００μＬのＭＳＤリードバッファ（ＭＳＤ）を加え、ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ６０００において読み取った。
【０４０１】
ＰＫ血清サンプルが試験サンプルのＰＫに影響を及ぼすと考えられる顕著な免疫力価を有するかどうかを決定するために、ＥＬＩＳＡを、１０μｇ／ｍＬでの各試験物品でコートしたＭａｘｉｓｏｒｂプレート（Ｎｕｎｃ）において行い、４℃において一晩インキュベートした。血清サンプルを、１％ＢＳＡ−ＰＢＳ中において希釈し、プレートにおいて、振盪しながら、ＲＴで２〜３時間インキュベートした。西洋わさびペルオキシダーゼコンジュゲートロバ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を使用して、捕捉抗体を検出し、続けて、基質発色のために、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ）を加えた。プレートを読み取り、バッファ又はコントロール血清値を３倍上回った分光計読取り値を陽性と考えた。免疫力価を１／血清希釈として表した。免疫力価は観察されなかった（データを示さず）。
【０４０２】
最後に、これらの分子についての薬力学を決定した。自然対数濃度対時間の線形回帰により適合させた１−相指数関数的減衰モデルを使用し、Ｐｒｉｓｍ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ５．０１ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．）を使用して、ＰＫ試験のための排出期の終末半減期（ｔ１／２）算出を決定した。各試験物品のために、２相モデルを排除した。ベストフィットモデルは、大部分の動物について、余分平方和Ｆ検定（extra sum of squares F test）（ｐ＞０．０５）の有意差なしにより決定されたような１−相指数関数的減衰モデルであった。最小二乗非線形減衰モデルを、１／適合された濃度により重み付けした。式ｔ１／２＝ｌｎ２／β（式中、βは、１回目の投与後に始まる最小二乗回帰分析により適合された直線の傾斜である）を使用して、排出期の半減期算出を決定した。
【０４０３】
ここで記載されたＰＫ試験において、試験群内の各動物について算出されたｔ１／２値の平均をとることにより、抗体についての終末相半減期値を決定した。試験の外れ値を、投与後約７日目において１〜１０００超のマウス抗ヒトＩｇＧ力価、又はおそらく完全に投与されなかったために、群中において他のマウスについての値より２倍超低かった初期血清値のいずれか一方を示す動物として特定した。
【０４０４】
マウスデータからのヒトＰＫの予測は、クリアランスがマウス又はヒトのいずれか一方における標的結合性により顕著に影響を受けなかったと考えられる８つのヒトＩｇＧ抗体のパネルについての、ｈｕＦｃＲｎ−トランスジェニックマウス対ヒトにおいて観察された半減期差に基づいている。それらの分析に基づいて、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性Ａｂについてのヒトにおける終末相半減期は、ｈｕＦｃＲｎ−トランスジェニックマウスにおいて観察されたものより、２〜４倍長いであろうと推測された。クリアランスにおける標的結合性の影響を推定する外挿法は、マウス及びヒトにおいて比較可能である。表２４に、種々の二重特異性抗体の変異体について観察されたマウス半減期値と、その推測を反映させた対応する予測されたヒトでの値とをまとめる。マウスＰＫデータを使用する種間相対成長率に基づく周知のヒトＰＫ予測法は、妥当ではなかったため、相対成長率を、予測には使用しなかった。ＰＫの結果を、血清濃度対時間について、図４３に示す。ＰＫプロファイルは、２８日の経過にわたる血清濃度の線形減衰を表わす。全てのＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体Ａｂについて推測されたマウス半減期値は類似し、５．２〜６．６日であった。最少免疫力価（＜１：４０）が、全ての群において観察された。マウスＰＫデータ（平均＋／−標準偏差）を、予測されたヒトクリアランス及びヒト半減期値と共に、表２４にまとめる。ヒト半減期予測から、ヒトにおける標的結合性がマウスにおけるものより高くないことが推測される。
【０４０５】
ＩｇＧ４−ＰＡＡ二重特異性抗体Ａｂは、マウスにおいて、Ｉ３ＲＢ２とＩ３ＲＢ１８との群間において類似する値を示した。記載されたような自然対数濃度対時間の線形回帰により適合された１−相指数関数的減衰モデルを使用して、排除期のマウス半減期算出を決定した。Ｔｇ３２  ｈｅｍｉマウスにおいて、８つの二重特異性抗体Ａｂについて算出された半減期値は、３９７８、６．６＋／−０．７日、７９５５、５．２＋／−０．４日、７９５９、６．６＋／−０．６日、９９５８、６．４＋／−０．７日、８８７６、４．１＋／−０．７日、４４３５、５．４＋／−１．０日、８７４７、６．４＋／−０．４日、５４６６、５．６＋／−０．１日であった。マウスデータからのヒトＰＫ予測は、ｈｕＦｃＲｎ−トランスジェニックマウス対ヒトにおいて観察された半減期差に基づいている。それらの分析に基づいて、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体についてのヒトにおける推定終末半減期は、ｈｕＦｃＲｎ−トランスジェニックマウスにおいて観察されたものより、２〜４倍長いであろう。クリアランスにおける標的結合性の影響を推定すると、マウス及びヒトにおいて比較可能である。二重特異性抗体の変異体について観察されたマウス半減期値と、その推定を反映させた対応する予測されたヒトでの値とを、表２４にまとめる。
【０４０６】
【表２５】
0006805130.tif 000039
【０４０７】
ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体についてのマウスＰＫ試験の結果から、Ｔｇ３２  ｈｅｍｉマウスにおいて観察されたｔ１／２値は、同じ方法（Ｔａｍ，ｅｔ  ａｌ，ＭＡｂｓ（２０１３）５（３）：３９８７〜４０５）においてプロファイルされる８つの臨床抗体に対して好ましく比較することが示される。
本発明は、以下の態様を包含し得る。
［１］
ＣＤ１２３  ＳＰ２（ＩＬ−３Ｒａ）及びＣＤ１２３  ＳＰ１（ＩＬ３Ｒａ）に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
［２］
ａ．配列番号００６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号００７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号００８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｂ．配列番号０１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０１４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｃ．配列番号０２７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号０５１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０５２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０５３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｅ．配列番号０５５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０５６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０５７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、又は
ｆ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０８５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０８６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む、上記［１］に記載の単離された抗体又は抗原結合フラグメント。
［３］
ａ．配列番号００６のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号００７のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号００８のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号００９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０１０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０１１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｂ．配列番号０１２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０１３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０１４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０１５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０１６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０１７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｃ．配列番号０２７のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０２８のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０２９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｄ．配列番号０５１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０５２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０５３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０２４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０２５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０５４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｅ．配列番号０５５のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０５６のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０５７のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０５８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０５９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、又は
ｆ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０８５のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０８６のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０８７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０６７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０８８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含む、上記［２］に記載の単離された抗体又は抗原結合フラグメント。
［４］
（ａ）の抗体の重鎖は、配列番号１１９のアミノ酸配列を含み、（ｂ）の抗体の重鎖は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、（ｃ）の抗体の重鎖は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含み、（ｄ）の抗体の重鎖は、配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、（ｅ）の抗体の重鎖は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、又は（ｆ）の抗体の重鎖は、配列番号１４８のアミノ酸配列を含む、上記［１］〜［３］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［５］
（ａ）の抗体の軽鎖は、配列番号１６４のアミノ酸配列を含み、（ｂ）の抗体の軽鎖は、配列番号１６５のアミノ酸配列を含み、（ｃ）の抗体の軽鎖は、配列番号１６７のアミノ酸配列を含み、（ｄ）の抗体の軽鎖は、配列番号１６８のアミノ酸配列を含み、（ｅ）の抗体の軽鎖は、配列番号１６９のアミノ酸配列を含み、又は（ｆ）の抗体の軽鎖は、配列番号１７６のアミノ酸配列を含む、上記［１］〜［４］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［６］
前記抗体の重鎖は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖は、配列番号１６５のアミノ酸配列を含む、上記［１］に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［７］
前記抗体の重鎖は、配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖は、配列番号１６８のアミノ酸配列を含む、上記［１］に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［８］
前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号００２のアミノ酸配列を有するポリペプチドに結合する、上記［１］〜［７］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［９］
前記抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトの抗体又は抗原結合フラグメントである、上記［１］〜［８］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［１０］
前記抗体又は抗原結合フラグメントは、組換え体である、上記［１］〜［９］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［１１］
前記抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ２フラグメント、又は一本鎖抗体である、上記［１］〜［１０］のいずれか一項に記載の抗原結合フラグメント。
［１２］
前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、表面プラズモン共鳴により測定された場合、少なくとも５ｎＭの親和性で、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する、上記［１］〜［１１］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［１３］
前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、表面プラズモン共鳴により測定された場合、少なくとも５ｎＭの親和性で、ＣＤ１２３  ＳＰ１又はＣＤ１２３  ＳＰ２に免疫特異的に結合する、上記［１］〜［１２］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［１４］
前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、表面プラズモン共鳴により測定された場合、少なくとも５ｎＭの親和性で、ＣＤ１２３  ＳＰ１及びＣＤ１２３  ＳＰ２に免疫特異的に結合する、上記［１］〜［１３］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［１５］
前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプである、上記［１］〜［１４］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［１６］
ＩｇＧ１又はＩｇＧ４のアイソタイプである、上記［１］〜［１５］のいずれかに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［１７］
ＩｇＧ１アイソタイプである、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［１８］
ＩｇＧ１は、そのＦｃ領域中に、Ｋ４０９Ｒ置換を有する、上記［１７］に記載の抗体。
［１９］
そのＦｃ領域中に、Ｌ２３４Ａ置換及び／又はＬ２３５Ａ置換を更に含む、上記［１８］に記載の抗体。
［２０］
ＩｇＧ４アイソタイプである、上記［１］〜［１６］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［２１］
前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＣＤ１２３及びカニクイザルＣＤ１２３に免疫特異的に結合する、上記［１］〜［２０］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［２２］
前記抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトＳＰ１に対する前記抗体又はフラグメントの結合親和性の１０倍以内の結合親和性で、カニクイザルＣＤ１２３に免疫特異的に結合する、上記［２１］に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［２３］
前記抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトＳＰ１に対する前記抗体又はフラグメントの結合親和性の５倍以内の結合親和性で、カニクイザルＣＤ１２３に免疫特異的に結合する、上記［２１］に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［２４］
前記抗体は、
ａ．配列番号００６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号００７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号００８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｂ．配列番号０１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０１４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｃ．配列番号０２６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０２７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号０５１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０５２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０５３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｅ．配列番号０５５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０５６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０５７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、又は
ｆ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０８５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０８６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む抗体と、ＣＤ１２３  ＳＰ２（ＩＬ３−Ｒα）に対する結合について競合する、上記［１］に記載の単離された抗体又は抗原結合フラグメント。
［２５］
前記ＣＤ１２３  ＳＰ２（ＩＬ３−Ｒα）は、配列番号００２のアミノ酸配列を有する、上記［２４］に記載の単離された抗体又は抗原結合フラグメント。
［２６］
ヒトＣＤ１２３  ＳＰ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、前記抗体は、
ａ．配列番号０１８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０１９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０２０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｂ．配列番号０２１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０２３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｃ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｅ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｆ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｇ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０４０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｈ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｉ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｊ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０４４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｋ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０４６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｌ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｍ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｎ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０５０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｏ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０６０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｐ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０６１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｑ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｒ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０６９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｓ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０７１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｔ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０７２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｕ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０７４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｖ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０７８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｗ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０８１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｘ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０８２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｙ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０８９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｚ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ａａ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｂｂ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｃｃ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｄｄ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｅｅ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｆｆ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｇｇ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｈｈ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｉｉ．配列番号１１４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｊｊ．配列番号１１４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｋｋ．配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｌｌ．配列番号０５１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０５２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０５３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、又は
ｍｍ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む、単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
［２７］
ａ．配列番号０１８のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０１９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０２０のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号００９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０１０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０１１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｂ．配列番号０２１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０２２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０２３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０２４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０２５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｃ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３５のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｄ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３６のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｅ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３７のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｆ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３８のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｇ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０４０のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体が、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｈ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｉ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｊ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０４４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４５のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体が、配列番号０１５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０１６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０１７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｋ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０４６のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４７のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｌ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４８のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｍ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体が、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｎ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０５０のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｏ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０６０のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｐ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０６１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体が、配列番号０６２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０６３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０６４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｑ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０６５のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０６６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０６７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０６８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｒ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０６９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０７０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｓ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０７１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｔ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０７２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０７３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｕ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０７４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０７５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０７６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０７７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｖ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０７８のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０７９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０６３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０８０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｗ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０８１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体が、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｘ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０８２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０８３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０８４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｙ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０８９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９０のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０７６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｚ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体が、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ａａ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０９５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０７６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｂｂ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９７のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０９８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０６７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０９９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｃｃ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体が、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｄｄ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｅｅ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号１０４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｆｆ．配列番号０３９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０６のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体が、配列番号３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｇｇ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号１０８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１０９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｈｈ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号１１２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０７６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｉｉ．配列番号１１４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０２２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１５のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体が、配列番号０２４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０２５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｊｊ．配列番号１１４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０２２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１６のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０１５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０１６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０１７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｋｋ．配列番号１１７のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０１３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１８のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０１５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０１６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０１７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｌｌ．配列番号０５１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０５２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０５３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、又は
ｍｍ．配列番号０３３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号０３４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０４２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む前記抗体は、配列番号０３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号０３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号０３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含む、上記［２６］に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
［２８］
上記［１］〜［２７］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントを発現している単離された細胞。
［２９］
前記細胞は、ハイブリドーマである、上記［２８］に記載の細胞。
［３０］
前記抗体は、組換え的に生成される、上記［２８］に記載の細胞。
［３１］
ａ）第１の重鎖（ＨＣ１）、
ｂ）第２の重鎖（ＨＣ２）、
ｃ）第１の軽鎖（ＬＣ１）、及び
ｄ）第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、
該ＨＣ１と該ＬＣ１とが対を成して、ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、該ＨＣ２と該ＬＣ２とが対を成して、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成する、単離されたＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性結合フラグメント。
［３２］
前記ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）は、ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）ＳＰ１である、上記［３１］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［３３］
前記ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）は、ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）ＳＰ２である、上記［３１］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［３４］
前記ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）は、ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）ＳＰ１及びＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）ＳＰ２である、上記［３１］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［３５］
前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプである、上記［３１］〜［３４］のいずれかに記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［３６］
前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４のアイソタイプである、上記［３１］〜［３５］のいずれかに記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［３７］
前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプである、上記［３１］〜［３６］のいずれかに記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［３８］
前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、ＩｇＧ４アイソタイプである、上記［３１］〜［３６］のいずれかに記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［３９］
ＨＣ１は、配列番号２０３を含み、ＬＣ１は、配列番号２０４を含む、上記［３１］〜［３７］のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４０］
ＨＣ２は、配列番号１９３を含み、ＬＣ２は、配列番号１９４を含む、上記［３９］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４１］
ＨＣ２は、配列番号１９５を含み、ＬＣ２は、配列番号１９６を含む、上記［３９］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４２］
ＨＣ２は、配列番号１９７を含み、ＬＣ２は、配列番号１９８を含む、上記［３９］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４３］
ＨＣ２は、配列番号１９９を含み、ＬＣ２は、配列番号２００を含む、上記［３９］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４４］
ＨＣ２は、配列番号２０１を含み、ＬＣ２は、配列番号２０２を含む、上記［３９］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４５］
ＨＣ１は、配列番号２０５を含み、ＬＣ１は、配列番号２０６を含む、上記［３１］〜［３７］のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４６］
ＨＣ２は、配列番号１９３を含み、ＬＣ２は、配列番号１９４を含む、上記［４５］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４７］
ＨＣ２は、配列番号１９５を含み、ＬＣ２は、配列番号１９６を含む、上記［４５］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４８］
ＨＣ２は、配列番号１９７を含み、ＬＣ２は、配列番号１９８を含む、上記［４５］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４９］
ＨＣ２は、配列番号１９９を含み、ＬＣ２は、配列番号２００を含む、上記［４５］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［５０］
ＨＣ２は、配列番号２０１を含み、ＬＣ２は、配列番号２０２を含む、上記［４５］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［５１］
前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、表面プラズモン共鳴により測定された場合、少なくとも５ｎＭの親和性で、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する、上記［３１］〜［５０］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［５２］
前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、表面プラズモン共鳴により測定された場合、少なくとも１５ｎＭの親和性で、ＣＤ３に免疫特異的に結合する、上記［３９］、［４０］、［４５］、［４６］、及び［５１］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［５３］
前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、表面プラズモン共鳴により測定された場合、少なくとも７５ｎＭの親和性で、ＣＤ３に免疫特異的に結合する、上記［３９］、［４１］〜［４４］、［４７］〜［５１］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［５４］
ＨＣ１は、配列番号２２０を含み、ＬＣ１は、配列番号２２１を含む、上記［３１］〜［３６］及び［３８］のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［５５］
ＨＣ２は、配列番号２１０を含み、ＬＣ２は、配列番号２１１を含む、上記［５４］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［５６］
ＨＣ２は、配列番号２１２を含み、ＬＣ２は、配列番号２１３を含む、上記［５４］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［５７］
ＨＣ２は、配列番号２１４を含み、ＬＣ２は、配列番号２１５を含む、上記［５４］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［５８］
ＨＣ２は、配列番号２１６を含み、ＬＣ２は、配列番号２１７を含む、上記［５４］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［５９］
ＨＣ１は、配列番号２１８を含み、ＬＣ１は、配列番号２１９を含む、上記［３１］〜［３６］及び［３８］のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［６０］
ＨＣ２は、配列番号２１０を含み、ＬＣ２は、配列番号２１１を含む、上記［５９］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［６１］
ＨＣ２は、配列番号２１２を含み、ＬＣ２は、配列番号２１３を含む、上記［５９］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［６２］
ＨＣ２は、配列番号２１４を含み、ＬＣ２は、配列番号２１５を含む、上記［５９］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［６３］
ＨＣ２は、配列番号２１６を含み、ＬＣ２は、配列番号２１７を含む、上記［４５］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［６４］
前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、表面プラズモン共鳴により測定された場合、少なくとも５ｎＭの親和性で、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する、上記［５４］〜６３］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［６５］
前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、表面プラズモン共鳴により測定された場合、少なくとも１５ｎＭの親和性で、ＣＤ３に免疫特異的に結合する、上記［５４］、［５５］、［５９］、［６０］、及び［６４］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［６６］
前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、表面プラズモン共鳴により測定された場合、少なくとも７５ｎＭの親和性で、ＣＤ３に免疫特異的に結合する、上記［５９］、［５６］〜［５８］、［６１］〜［６４］に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［６７］
上記［３１］〜［５３］のいずれか一項に記載の抗体又は二重特異性結合フラグメントを発現している、単離された細胞。
［６８］
前記細胞は、ハイブリドーマである、上記［６７］に記載の細胞。
［６９］
前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、組換え的に生成される、上記［６７］に記載の細胞。
［７０］
がんを有する対象を処置するための方法であって、前記方法は、
治療的に有効な量の、上記［３１］〜［５１］のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントを、同抗体又はフラグメントを必要とする患者に、該がんを処置するのに十分な時間投与する工程を含む、方法。
［７１］
がん細胞の成長又は増殖を阻止するための方法であって、前記方法は、
治療的に有効な量の、上記［３１］〜［５１］のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントを投与して、該がん細胞の成長又は増殖を阻止する工程を含む、方法。
［７２］
Ｔ細胞をＣＤ１２３発現がん細胞に向け直す方法であって、前記方法は、
治療的に有効な量の、上記［３１］〜［５１］のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントを投与して、Ｔ細胞をがんに向け直す工程を含む、方法。
［７３］
前記がんは、血液がんである、上記［７０］、［７１］、又は［７２］に記載の方法。
［７４］
前記血液がんは、ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）発現血液がんである、上記［７３］に記載の方法。
［７５］
前記ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）発現血液がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である、上記［７４］に記載の方法。
［７６］
前記ＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）発現血液がんは、ＡＭＬである、上記［７５］に記載の方法。
［７７］
第２の治療剤を投与する工程を含む、上記［７０］に記載の方法。
［７８］
前記第２の治療剤は、化学療法剤又は標的化抗がん治療である、上記［７７］に記載の方法。
［７９］
前記化学療法剤は、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２である、上記［７８］に記載の方法。
［８０］
前記第２の治療剤を、前記二重特異性抗体と同時に、連続的に、又は二重特異性抗体とは別個に、前記対象に投与する、上記［７７］に記載の方法。
［８１］
上記［３１］〜［６６］のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントと、医薬的に許容され得る担体と、を含む、医薬組成物。
［８２］
上記［５４］〜［５６］のいずれか一項に記載の細胞を培養することにより、上記［３１］〜［６６］のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントを生成するための方法。
［８３］
上記［３１］〜［６６］のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントの、ＨＣ１、ＨＣ２、ＬＣ１、又はＬＣ２をコードする、単離された合成ポリヌクレオチド。
［８４］
上記［３１］〜［６６］のいずれか一項に記載のＣＤ１２３（ＩＬ３−Ｒα）×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントと、同抗体又はフラグメントのための包装と、を含む、キット。
［８５］
配列番号２２６のアミノ酸配列を含むポリペプチドに免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
［８６］
配列番号２３４及び配列番号２２８のアミノ酸配列を含むポリペプチドに免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
【図１】
0006805130.tif 000040
【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
0006805130.tif 000043
【図３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図５】
0006805130.tif 000047
【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【配列表】
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