(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式１によって表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩
［式１］
【化１】
0006661010.tif 000030
（式１中、
Ｘは、単結合、−Ｏ−または−Ｓ−であり；
ｎは、１〜５の整数であり；
Ｙは、−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）ａＣＨ２ＣＨ２−であり、
ｍは、１または２の整数であり；および
ａ、ｂおよびｃは、独立して、０または１の整数である）。
【請求項２】
Ｘが単結合であり；ｎが３であり；
【化２】
0006661010.tif 000031
が、
【化３】
0006661010.tif 000032
である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容し得る塩。
【請求項３】
式１によって表される化合物の調製方法であって、以下の反応式１：
［反応式１］
【化４】
0006661010.tif 000033
（反応式１中、Ｘ、ｎ、Ｙ、ｍ、ａ、ｂ、およびｃは、請求項１に記載の式１に定義されるとおりである）
によって示されるように、式２によって表される化合物および式３によって表される化合物を反応させることによって、式１によって表される化合物を調製する工程（工程１）を含む、前記調製方法。
【請求項４】
請求項１に記載の式１によって表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩に金属性放射線同位体を配位させることによって調製された、標識化合物。
【請求項５】
金属性放射線同位体が、６７Ｇａ、６８Ｇａ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１１１Ｉｎ、９０Ｙ、１７７Ｌｕ、または１１７ｍＳｎである、請求項４に記載の標識化合物。
【請求項６】
活性成分として請求項４に記載の標識化合物を含む、医薬組成物。
【請求項７】
活性成分として、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容し得る塩を含む、医薬組成物。
【請求項８】
請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容し得る塩を含む、前立腺癌を処置または診断するためのキット。
【請求項９】
ｐＨ１〜９および１μＭ〜１０Ｍの濃度を有する緩衝液を含有する、請求項８に記載の前立腺癌を処置または診断するためのキット。
【請求項１０】
緩衝液が、酢酸、リン酸、クエン酸、フマル酸、アスコルビン酸、酪酸、コハク酸、酒石酸、炭酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルカル酸、ホウ酸またはそれらのナトリウム塩またはカリウム塩である、請求項９に記載の前立腺癌を処置または診断するためのキット。
【請求項１１】
前立腺癌を処置または診断するための、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１２】
前立腺癌を処置または診断するための、請求項４に記載の標識化合物。
【請求項１３】
前立腺癌を処置または診断するための医薬の製造のための、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容し得る塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
１．発明の分野
本発明は、ペプチドチオ尿素誘導体、これを含む放射線同位体標識化合物、およびこれを活性成分として含む前立腺癌を処置または診断するための医薬組成物に関する。
【０００２】
２．関連技術の説明
前立腺癌は、世界中で最も一般的な泌尿生殖器腫瘍のうちの１つである。米国では、１９９７年に約３８０，０００人が前立腺癌と診断され、そのうち４１，８００人が死亡し、このことは、この疾患の死亡率が肺癌についで二番目に高いことを示す。韓国では、前立腺癌は、高齢化および食事の西洋化に起因して、急速に増加している。したがって、前立腺癌の初期の画像診断および処置は、韓国だけでなく、世界中で大きな問題となっている。
【０００３】
前立腺癌は、前立腺の周囲の組織で増殖を開始し、肺および骨などの他の重要な器官に転移する。初期の段階では、ほとんど症状がないが、前立腺癌が増殖するにつれて、尿道圧迫および尿管閉塞などの問題を引き起こし、重篤な副作用と共に、脊髄または骨盤に転移する。
【０００４】
前立腺癌の診断のために、ＳＰＥＣＴ（単一光子放射型コンピュータ断層撮影法）およびＰＥＴ（陽電子放射型断層撮影法）などの画像診断方法が使用されており、ここでは、腫瘍細胞において生じる生化学的変化が、ガンマ線または陽電子を放出する放射線同位体標識物質を使用して、断層撮影画像および三次元画像で表され、癌の存在またはその分布を示す。
【０００５】
これらの画像診断方法は、ＣＴと組み合わせたＳＰＥＣＴ−ＣＴ／ＭＲＩおよびＰＥＴ−ＣＴ／ＭＲＩの開発により画像の質が改善したために、近年広がりをみせている。
【０００６】
前立腺癌のための画像化剤として使用される放射性医薬品は、前立腺癌において特異的に発現されるタンパク質（前立腺特異的膜抗原：ＰＳＭＡ）に結合するリガンドを使用する。ＰＳＭＡに結合する最も代表的なリガンドは、Ｇｌｕ−尿素−Ｌｙｓ（ＧＵＬ）またはＧｌｕ−尿素―Ｃｙｓ（ＧＵＣ）などのペプチド誘導体である。したがって、放射線同位体のかかるペプチドリガンドへの標識によって調製される放射性医薬品は、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴを用いてＰＳＭＡを発現する前立腺癌を特異的に画像化するため、または、前立腺癌を処置するために、使用され得る(M Eder, et. el., Bioconjugate Chem 2012, 23:688-697)。
【０００７】
ペプチドを標識するために使用される放射線同位体は、主に、アルファ線放出放射性核種、ベータ線放出放射性核種、ガンマ線放出放射性核種、および陽電子ビーム放出放射性核種である。これらの中で、アルファ線放出放射性核種およびベータ線放出放射性核種が、処置のために使用され、ガンマ線放出放射性核種および陽電子ビーム放出放射性核種は、核画像化による診断のために使用される。
【０００８】
放射線同位体を用いてリガンドを標識するための方法は、リガンドに直接放射性同位体を結合する方法、または、キレート化によって放射線同位体を用いてペプチドを標識する前に、ペプチドにＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ＴＥＴＡ、ＨＹＮＩＣ、Ｎ２Ｓ２、およびＭＡＧ３などの二官能性キレート剤（ＢＦＣＡ）を組み合わせる方法によって例示される。
【０００９】
直接結合方法は、主に、Ｉ−１２５を結合するために使用されるが、これは、種々の放射線同位体を結合することはできない。一方、二官能性キレート剤（ＢＦＣＡ）を使用する方法は、種々の放射線同位体を標識することができる。二官能性キレート剤（ＢＦＣＡ）の種類は、リガンドに従って適切に選択され、その可溶性が改善されている。
【００１０】
【表１】
0006661010.tif 000002
【００１１】
前立腺癌の画像化のための放射性医薬品に関連する技術に関して、US 2012/0269726 A1には、Ｔｃ−９９ｍまたはＲｅ−１８８などの放射線同位体を標識するためのＧＵＬ誘導体およびピリジン構造を含む化合物が記載されている。しかしながら、この明細書において、ＮＯＴＡまたはＤＯＴＡなどの二官能性キレート剤は含まれておらず、Ｇａ−６８のような同位体は標識することができない。
【００１２】
WO 2010/014933 A2には、チオ尿素結合によるフェニル環におけるハロゲンの導入後に、Ｆ−１８またはＩ−１２５で標識したＧＵＬ誘導体が記載されている。しかしながら、この明細書において、ＮＯＴＡまたはＤＯＴＡなどの二官能性キレート剤は含まれておらず、Ｇａ−６８のような金属同位体は標識することができない。
【００１３】
上記のヨウ素またはＦ−１８などの同位体で標識した化合物は、親油性放射性医薬品である。これらの親油性医薬品は、主に、胆道を介して小腸および大腸を通って排泄され、その結果、これらは長い間身体にとどまる。したがって、腹腔内を示す画像が非常に複雑であり、所望の領域の明瞭な画像を得ることは難しいことを意味する。これに関し、水溶性医薬は、腎臓を通って排泄されるため、これらは、腎臓および膀胱においてのみ集められ、迅速に排泄され、その後、放射活性はほとんど残らない。したがって、所望の領域の明瞭な画像を得ることができる。
【００１４】
今までに開発された画像化のための水溶性放射性医薬品は、二官能性キレート剤と組み合わせたペプチドリガンドである。ペプチドを二官能性キレート剤と連結させるリンカーは、アミド結合を有している。しかしながら、リンカーのアミド結合は、リガンドの種類に依存して、インビボでペプチダーゼまたはリソソーム酵素によって加水分解され得る。リンカーが加水分解によって破壊されると、二官能性キレート剤および放射性同位体で標識したペプチドリガンドは、お互いに分離されるので、放射性同位体は前立腺癌の領域に行くことができないことが示唆され、前立腺癌の処置または診断における困難性を生じている(Simone Dapp, et al. EJNMMI Res. 2012 Jun 9;2(1):24)。
【００１５】
本発明者らは、インビボで容易に加水分解されないように安定性が増加し、前立腺癌に対する特異的な結合活性を有する放射活性医薬品を開発することを試みた。その結果、本発明者らは、血清中のプロテアーゼによって加水分解されないリンカーを介して、二官能性キレート剤を前立腺特異的ペプチドリガンドと結合体化することによって調製された誘導体が、インビボで投与される場合、ヒト血清中における安定性が優れていること、前立腺癌において競合的に発現されるＰＳＭＡへの結合が優れていること、そして、低濃度でＰＳＭＡを抑制するのに優れていることを確認した。
【００１６】
上記の放射線同位体で標識した化合物はまた、上記と同じ効果を示し、そして、高い水溶性を示し、その結果、胆道ではなく、腎臓に排泄され得るので、前立腺癌の領域の明瞭な画像を得ることができることが示唆される。したがって、本発明者らは、本発明の誘導体が、前立腺癌を処置または診断するための医薬組成物として有効に使用できることを確認し、本発明を完成するに至った。
【発明の概要】
【００１７】
本発明の目的は、ペプチドチオ尿素誘導体またはその薬学的に許容し得る塩を提供することである。
【００１８】
本発明の別の目的は、上記ペプチドチオ尿素の調製方法を提供することである。
【００１９】
本発明のさらなる目的は、金属性放射線同位体をペプチドチオ尿素誘導体またはその薬学的に許容し得る塩に配位させることによって調製された標識化合物を提供することである。
【００２０】
本発明の目的はまた、活性成分として、上記標識化合物を含む、前立腺癌を処置または診断するための医薬組成物を提供することである。
【００２１】
本発明の目的はまた、活性成分として、ペプチドチオ尿素誘導体またはその薬学的に許容し得る塩を含む、前立腺癌を画像化するための放射性医薬品を提供することである。
【００２２】
本発明の目的はまた、活性成分として、ペプチドチオ尿素誘導体またはその薬学的に許容し得る塩を含む、前立腺癌を処置または診断するためのキットを提供することである。
【００２３】
上記目的を達成するために、本発明は、以下の式１によって表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を提供する。
［式１］
【化１】
0006661010.tif 000003
（式１中、
Ｘは、単結合、−Ｏ−または−Ｓ−であり；
ｎは、１〜５の整数であり；
Ｙは、−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）ａＣＨ２ＣＨ２−であり、
ｍは、１または２の整数であり；および
ａ、ｂおよびｃは独立して、０または１の整数である）
【００２４】
本発明はまた、以下の反応式１おいて示されるように、式１によって表される化合物の調製方法を提供し、これは、式２によって表される化合物および式３によって表される化合物と反応させることによって、式１によって表される化合物を調製する工程（工程１）を含む。
［反応式１］
【化２】
0006661010.tif 000004
（反応式１中、
Ｘ、ｎ、Ｙ、ｍ、ａ、ｂ、およびｃは、式１に定義されるとおりである）
【００２５】
また、本発明は、金属性放射性同位体を、ペプチドチオ尿素誘導体またはその薬学的に許容し得る塩に配位することによって調製される標識化合物を提供する。
【００２６】
本発明はまた、活性成分として、上記標識化合物を含む、前立腺癌を処置または診断するための医薬組成物を提供する。
【００２７】
本発明はまた、活性成分として、式１によって表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を含む、前立腺癌を画像化するための放射性医薬品を提供する。
【００２８】
さらに、本発明は、活性成分として、式１によって表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を含む、前立腺癌を処置または診断するためのキットを提供する。
【発明の効果】
【００２９】
有利な効果
本発明のペプチドチオ尿素誘導体は、インビボで投与される場合、ヒト血清中における安定性が優れており、前立腺癌において競合的に発現されるＰＳＭＡへの結合に優れているだけでなく、低濃度でＰＳＭＡを抑制するのにも優れている。そして、本発明の誘導体は、その高い水溶性に起因して、胆道ではなく腎臓に排泄されるので、前立腺癌組織において蓄積され、前立腺癌領域への放射線を放出し、このことは、本発明の誘導体が、前立腺癌を処置および診断するための医薬組成物として有効に使用できることを示唆する。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
本発明の好ましい態様の適用は、添付の図面を参照して最も理解される。
【００３１】
【図１】図１ａ〜１ｃは、本発明に従うＧａ−６８−ＮＯＴＡ−ＧＵＬのＴＬＣ（移動相：０．１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３、固定相：ＩＴＬＣ）結果を示すグラフであり、ここで、図１ａは、非標識Ｇａ−６８を示し、図１ｂは、Ｇａ−６８−ＮＯＴＡ−ＧＵＬを示し、図１ｃは、ヒト血清と共に２時間培養したＧａ−６８−ＮＯＴＡ−ＧＵＬを示す。
【００３２】
【図２】図２ａ〜２ｃは、本発明に従うＧａ−６８−ＤＯＴＡ−ＧＵＬのＴＬＣ（移動相：０．１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３、固定相：ＩＴＬＣ）結果を示すグラフであり、ここで、図２ａは、非標識Ｇａ−６８を示し、図２ｂは、Ｇａ−６８−ＤＯＴＡ−ＧＵＬを示し、図２ｃは、ヒト血清と共に２時間培養したＧａ−６８−ＤＯＴＡ−ＧＵＬを示す。
【００３３】
【図３】図３ａは、本発明のＧａ−６８−ＤＯＴＡ−ＧＵＬの濃度に従う、ＰＳＭＡ陽性２２Ｒｖ１細胞とＩ−１２５−ＭＩＰ−１０７２との間の結合の阻害率を示すグラフである。図３ｂは、非線形回帰分析によるＧａ−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬのＩＣ５０を示すグラフである（ｙ＝−１７．７７ｌｎ（ｘ）−２６６．５７，Ｒ２＝０．９９８），ＩＣ５０＝１８．３ｎＭ）。
【００３４】
【図４】図４ａ〜４ｂは、２２Ｒｖ１細胞を移植したマウスにおける本発明のＧＵＬのＧａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬの静脈内注射１時間後に得たＰＥＴ画像である。図４ａにおいて、２２Ｒｖ１癌は、左側底部において示されるが、図４ｂにおいて、Ｇａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬは、ＭＩＰ−１０７２の注射後に癌の領域において観察されない。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
ベストモード
本明細書の以下において、本発明の例および実験例を具体的に記載および例示する。しかしながら、本発明は、以下の例および実験例によって限定されない。
【００３６】
例１：（Ｓ）−２−（３−（（Ｓ）−１−カルボキシ−５−（３−（４−（（１，４，７−トリス（カルボキシメチル）−１，４，７−トリアゾナン−２−イル）メチル）フェニル）チオウレイド）ペンチル）ウレイド）ペンタン二酸（ＧＵＬ−ＳＣＮ−ＮＯＴＡ）の調製
工程１：（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル２−（１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキシアミド）ペンタンジオアートの調製
【化３】
0006661010.tif 000005
【００３７】
Ｌ−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルグルタメートハイドロクロライド（１．５０ｇ、５．１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１５ｍＬ）中に溶解し、次いで、０℃に冷却し、これに、トリエチルアミン（１．７４ｍＬ、１２．５ｍｍｏｌ）および４−（ジメチルアミノ）ピリジンを添加した。混合物を、５分間撹拌し、次いで、これに１，１’−カルボニルジイミダゾール（９８１ｍｇ、６．０５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物の温度を室温まで上昇させて、その後１８時間撹拌した。これに、３０ｍＬのジクロロメタンを希釈のために添加した。混合物を、飽和重炭酸ナトリウム溶液（１０ｍＬ）、水（２ｘ１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。次いで、有機層を硫酸ナトリウムで脱水した。混合物をろ過し、ろ液を減圧下で乾燥し、続いて、ヘキサン／酢酸エチル溶液の処理を行った。結果として、白色固形物質を得た。得られた白色固形物質をヘキサン（５０ｍＬ）で洗浄し、最終白色固形物質を、機器分析により分析した。
【００３８】
収率：１．４４ｇ、８０％；
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ 8.29 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 4.24 (m, 1H), 2.36 (t, J = 7.26 Hz, 2H), 2.03 (m, 1H), 1.87 (m, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.39 (s, 9H)。
質量スペクトル(ESI+), m/z = 354 [M+H]+。
【００３９】
工程２：（９Ｓ，１３Ｓ）−トリ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３，１１−ジオキソ−１−フェニル−２−オキサ−４，１０，１２−トリアザペンタデカン−９，１３，１５−トリカルボキシラートの調製
【化４】
0006661010.tif 000006
工程１で調製された（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル２−（１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキサミド）ペンタンジオアート（７８０ｍｇ、２．２０８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（７．８ｍＬ）中に溶解し、次いで、０℃に冷却し、これに、トリエチルアミン（０．６１５ｍＬ、４．４１７ｍｍｏｌ）およびメチルトリフルオロメタンスルホネート（ＭｅＯＴｆ）（０．２５２ｍＬ、２．２３０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物の温度を、撹拌しながら、室温まで上昇させて、続いて、室温で３０分さらに撹拌した。反応混合物に（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−アミノ−６−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）ヘキサノアート（７４３ｍｇ、２．２０８ｍｍｏｌ）を添加して、４０℃で加熱し、続いて、一晩撹拌した。反応の完了後、溶液を減圧下で乾燥した。次いで、固形生成物を、エーテルおよびヘキサンを使用して得た。
【００４０】
収率：１．１８ｇ、８６％；
質量スペクトル(ESI+), m/z = 622 [M+H]+。
【００４１】
工程３：（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−（（Ｓ）−６−アミノ−１−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−オキソヘキサン−２−イル）ウレイド）ペンタンジオアートの調製
【化５】
0006661010.tif 000007
【００４２】
ギ酸アンモニウム（３１４ｍｇ、４．９８６ｍｍｏｌ）および１０ｗｔ％パラジウム炭素（１００ｍｇ）を、工程２で調製した（９Ｓ，１３Ｓ）−トリ−ｔｅｒｔ−ブチル３，１１−ジオキソ−１−フェニル−２−オキサ−４，１０，１２−トリアザペンタデカン−９，１３，１５−トリカルボキシレート（３１０ｍｇ、０．４９９ｍｍｏｌ）エタノール（５ｍＬ）溶液に添加し、続いて、室温で４時間撹拌した。反応の完了後、混合物をＣｅｌｉｔｅ  ５４５を使用してろ過し、次いで、酢酸エチル（２５ｍＬｘ３）を用いて洗浄した。白色固形生成物を、減圧下でろ液を蒸留することによって得た。
【００４３】
収率：２４３ｍｇ、９８％。
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ 8.43 (s, 1H), 8.10-7.10 (br, 1H), 6.50 (m, 2H), 4.01 (m, 1H), 3.92 (m, 1H), 2.69 (m, 2H), 2.17 (m, 2H), 1.83 (m, 1H), 1.70-1.49 (m, 4H), 1.38 (m, 27H), 1.29 (m, 2H)。
質量スペクトル(ESI+), m/z = 488 [M+H]+。
【００４４】
工程４：２，２’，２’’−（２−（４−（３−（（Ｓ）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−（３−（（Ｓ）−１，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１，５−ジオキソペンタン−２−イル）ウレイド）−６−オキソヘキシル）チオウレイド）ベンジル）−１，４，７−トリアゾナン−１，４，７−トリチル）三酢酸の調製
【化６】
0006661010.tif 000008
【００４５】
工程３で調製した（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−（（Ｓ）−６−アミノ−１−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−オキソヘキサン−２−イル）ウレイド）ペンタンジオアート（４７．８ｍｇ，０．０９８２ｍｍｏｌ）、２，２’，２’’−（２−（４−イソチオシアネートベンジル）−１，４，７−トリアゾナン−１，４，７−トリイル）三酢酸（ＳＣＮ−Ｂｚ−ＮＯＴＡ，５５ｍｇ，０．０９８２ｍｍｏｌ）およびトリメチルアミン（０．０６８ｍＬ，０．４９１ｍｍｏｌ）を、クロロホルム（１．０  ｍＬ）に溶解し、続いて、室温で一晩撹拌した。反応の完了後、溶媒を、減圧下で乾燥した。生成物を、ＬＣ／ＭＣによって確認した。
質量スペクトル(ESI+), m/z = 939 [M+H]+。
【００４６】
工程５：（Ｓ）−２−（３−（（Ｓ）−１−カルボキシ−５−（３−（４−（（１，４，７−トリス（カルボキシメチル）−１，４，７−トリアゾナン−２−イル）メチル）フェニル）チオウレイド）ペンチル）ウレイド）ペンタン二酸の調製
【化７】
0006661010.tif 000009
【００４７】
工程４で調製した２，２’，２’’−（２−（４−（３−（（Ｓ）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−（３−（（Ｓ）−１，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１，５−ジオキソペンタン−２−イル）ウレイド）−６−オキソヘキシル）チオウレイド）ベンジル）−１，４，７−トリアゾナン−１，４，７−トリチル）三酢酸を、トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（ｖ／ｖ  １／１，  ２．０ｍＬ）に溶解し、続いて、室温で４時間撹拌した。混合物を、減圧下で乾燥し、続いて、ＭｅＣＮおよび蒸留水を使用するＨＰＬＣによって精製し、ＧＵＬ−ＮＯＴＡを得た。
【００４８】
収率：４７．８ｍｇ，６３％（２工程全体の収率）。
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ 12.4 (br, 6H), 9.45 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.38 (d, J = 8.10 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 8.16 Hz, 2H) , 6.76 ~ 6.41 (br, 2H), 6.30 (m, 2H), 4.12-2.61 (m, 22H), 2.19 (m, 2H), 1.86 (m, 1H), 1.74-1.51 (m, 4H), 1.29 (m, 2H).: 質量スペクトル(ESI+), m/z = 770 [M+H]+。
【００４９】
例２：Ｇａ−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬの調製
【化８】
0006661010.tif 000010
【００５０】
例１で調製したＧＵＬ−ＮＯＴＡ（４７．８ｍｇ，０．０６２１ｍｍｏｌ）を、１．０Ｍ  ＮａＯＡｃ緩衝液（２．０ｍＬ，ｐＨ５．６）およびペンタン中に溶解した０．５Ｍ  ＧａＣｌ３（１．２４２ｍＬ，０．６２１ｍｍｏｌ）に溶解し、続いて、室温で８時間撹拌した。反応混合物を、０．２μｍシリンジフィルターを通してろ過し、ろ液を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ｎ−ヘキサン＝１：１，ｖ／ｖ）によって分離した。結果として、白色固形化合物を得た。
【００５１】
収率：２６８ｍｇ，５８％。
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ 12.4 (br, 3H), 9.45 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.38 (d, J = 8.10 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 8.16 Hz, 2H) , 6.76 ~ 6.41 (br, 2H), 6.30 (m, 2H), 4.12-2.61 (m, 22H), 2.19 (m, 2H), 1.89 (m, 1H), 1.74-1.51 (m, 4H), 1.29 (m, 2H). : 質量スペクトル(ESI+), m/z = 837 [M+H]+。
【００５２】
例３：Ｇａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬの調製
【化９】
0006661010.tif 000011
【００５３】
Ｇａ−６８−Ｃｌ３（２００μＬ，１１１ＭＢｑ）を、０．１Ｍ  ＨＣｌに溶解し、これを、１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝５．６，２００μＬ）に添加した。これに、例１で調製したＧＵＬ−ＮＯＴＡ含有ＭｅＣＮ溶液（１０μＬ，１ｍｇ／ｍＬ）を添加し、１分間激しく撹拌し、続いて、室温で１０分間反応させた。標識効率を、展開溶媒として０．１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３を使用するＩＴＬＣ−ＳＧを実施することによって計算した。この時点で、標識Ｇａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬは上部に移動し（Ｒｆ＝１．０）（図１ａ）、未標識Ｇａ−６８は、元のままであった（Ｒｆ＝０．０）（図１ｂ）。結果として、標識効率は、９９％超であった。
【００５４】
例４：（Ｓ）−２−（３−（（Ｓ）−１−カルボキシ−５−（３−（４−（（１，４，７，１０−テトラキス（カルボキシメチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−２−イル）メチル）フェニル）チオウレイド）ペンチル）ウレイド）ペンタン二酸（ＧＵＬ−ＳＣＮ−ＤＯＴＡ）の調製
工程１：２，２’，２’’−（２−（４−（３−（（Ｓ）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−（３−（（Ｓ）−１，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１，５−ジオキソペンタン−２−イル）ウレイド）−６−オキソヘキシル）チオウレイド）ベンジル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトリイル）四酢酸の調製
【化１０】
0006661010.tif 000012
【００５５】
例１の工程３で調製した（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−（（Ｓ）−６−アミノ−１−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−オキソヘキサン−２−イル）ウレイド）ペンタンジオアート（３０ｍｇ，０．０６１５ｍｍｏｌ）、２，２’，２’’，２’’’−（２−（４−イソチオシアネートベンジル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトライル）四酢酸（ＳＣＮ−Ｂｚ−ＤＯＴＡ，５０ｍｇ，０．０７２７ｍｍｏｌ）、およびトリメチルアミン（０．０４３ｍＬ，０．３０８ｍｍｏｌ）を、クロロホルム（１．０ｍＬ）中に溶解し、続いて、室温で撹拌した。溶媒を、減圧下で乾燥し、最終生成物の分子量をＬＣ／ＭＳによって計算した。
観察された質量スペクトル(ESI+), m/z = 1040 [M+H]+。
【００５６】
工程２：（Ｓ）−２−（３−（（Ｓ）−１−カルボキシ−５−（３−（４−（（１，４，７，１０−テトラキス（カルボキシメチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−２−イル）メチル）フェニル）チオウレイド）ペンチル）ウレイド）ペンタン二酸の調製
【化１１】
0006661010.tif 000013
【００５７】
工程１で調製された２，２’，２’’−（２−（４−（３−（（Ｓ）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−（３−（（Ｓ）−１，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１，５−ジオキソペンタン−２−イル）ウレイド）−６−オキソヘキシル）チオウレイド）ベンジル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトリイル）四酢酸を、２．０  ｍＬのＴＦＡ／ＤＣＭ（ｖ／ｖ：１／１）溶液に溶解し、続いて、室温で４時間撹拌した。反応完了後、反応混合物を、減圧下で乾燥した。生成物を、ＤＣ含有１０％ＭｅＯＨで洗浄し、その結果、４３％の収率で白色粉末としてＧＵＬ−ＤＯＴＡを得た。生成物の分子量は、ＬＣ／ＭＳによって計算した。
観察された質量スペクトル(ESI+), m/z = 871 [M+H]+。
【００５８】
例５：Ｇａ−６８−ＤＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬの調製
【化１２】
0006661010.tif 000014
【００５９】
これに、例４で調製したＧＵＬ−ＤＯＴＡを含有するＭｅＣＮ溶液（１０μＬ，１ｍｇ／ｍＬ）を添加し、これを、１分間激しく撹拌し、続いて、９５℃で１０分間反応させた。標識効率を、展開溶媒として０．１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３を使用するＩＴＬＣ−ＳＧを実施することによって計算した。この時点で、標識Ｇａ−６８−ＤＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬは、上部に移動し（Ｒｆ＝１．０）（図２ａ）、非標識Ｇａ−６８は、元のままであった（Ｒｆ＝０．０）（図２ｂ）。結果として、標識効率は、９５％超であった。
【００６０】
好ましい態様の説明
本発明は、以下に詳細に説明される。
本発明は、以下の式１によって表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を提供する。
［式１］
【化１３】
0006661010.tif 000015
（式１において、
Ｘは、単結合、−Ｏ−または−Ｓ−であり；
ｎは、１〜５の整数であり；
Ｙは、−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）ａＣＨ２ＣＨ２−であり、
ｍは、１または２の整数であり；および
ａ、ｂおよびｃは、独立して、０または１の整数である）
【００６１】
本発明の式１によって表される化合物は、前立腺癌において特異的に発現されるＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）に結合するペプチドリガンドが、アミド結合なしでプロテアーゼによって加水分解されないリンカーを介して、放射線同位体で標識することに適した二官能性キレート剤に結合する構造を有する。
【００６２】
上記のペプチドリガンドは、前立腺癌において特異的に発現されるＰＳＭＡに結合できるリガンドである限り、特に限定されない。しかしながら、好ましくは、グルタミン酸−尿素−リジン、グルタミン酸−尿素−システイン、またはグルタミン酸−尿素−セリンが、本明細書で使用される。
【００６３】
二官能性キレート剤は、放射線同位体を標識できる物質である限り、特に限定されない。本明細書中では、
【化１４】
0006661010.tif 000016
が好ましくは使用され、ＮＯＴＡ（１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸）またはＤＯＴＡ（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸）がより好ましい。
【００６４】
本発明の式１によって表されるペプチドチオ尿素誘導体は、好ましくは、以下の化合物によって例示され得る：
（１）２−（３−（１−カルボキシ−５−（３−（４−（（１，４，７−トリス（カルボキシメチル）−１，４，７−トリアゾナン−２−イル）メチル）フェニル）チオウレイド）フェニル）ウレイド）ペンタン二酸（ＧＵＬ−ＳＣＮ−ＮＯＴＡ）；および
（２）２−（３−（１−カルボキシ−５−（３−（４−（（１，４，７，１０−テトラキス（カルボキシメチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−２−イル）メチル）フェニル）チオウレイド）ペンチル）ウレイド）ペンタン二酸（ＧＵＬ−ＳＣＮ−ＤＯＴＡ）。
【００６５】
本発明の式１によって表される化合物は、薬学的に許容し得る塩の形態として使用され得、ここで、塩は、好ましくは、薬学的に許容し得る遊離酸によって形成される酸付加塩である。本明細書では、薬学的に許容し得る塩は、式１によって表される塩基性化合物の任意の有機または無機付加塩を指し、これは、患者に対して相対的に非毒性であり、その副作用が式１によって表される上記塩基性化合物の有益な効果を低減させない非有害活性を有する。無機または有機に関わらず、薬学的に受容可能であれば、遊離酸が使用され得る。無機遊離酸の例としては、塩酸、臭素酸、硝酸、硫酸、過塩素酸、およびリン酸が挙げられる。
【００６６】
利用可能な有機遊離酸は、クエン酸、酢酸、乳酸、リンゴ酸、フマル酸、グルコン酸、コハク酸、酒石酸、ガラクツロン酸、エンボン酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、シュウ酸、（Ｄ）または（Ｌ）リンゴ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、サリチル酸、クエン酸、安息香酸、およびマロン酸によって例示される。
【００６７】
本明細書中の塩としてはまた、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カルシウム塩など）およびアルカリ土類金属塩（カルシウム塩、マグネシウム塩など）が挙げられる。
【００６８】
例としては、酸付加塩として、酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、炭酸水素塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、ホウ酸塩、カンシル酸塩、クエン酸塩、エジシル酸塩、エシレート、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプテート、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩／塩化物、臭化水素酸塩／臭化物、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メチラート、メチルスルファート、ナフチレート、２−ナフシレート、ニコチナート、硝酸塩、オロト酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、サッカラート、ステアリン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トシレート、トリフルオロ酢酸塩、アルミニウム、アルギニン、ベンザチン、カルシウム、コリン、ジエチルアミン、ジオールアミン、グリシン、リジン、マグネシウム、メグルミン、オラミン、カリウム、ナトリウム、トロメタミン、および亜鉛の塩が挙げられ得る。これらの中で、塩酸塩またはトリフルオロ酢酸塩が好ましい。
【００６９】
本発明の式１によって表される化合物は、薬学的に許容し得る塩だけだなく、従来の方法によって調製することができる全ての塩、異性体、水和物、および溶媒和物を含む。
【００７０】
本発明における付加塩は、当業者に公知の従来の方法によって調製することができる。例えば、式１の化合物は、アセトン、メタノール、エタノール、またはアセトニトリルのような水混和性有機溶媒中に溶解され、これに、過剰な有機酸または無機酸の酸水溶液を添加して、沈殿または結晶化を誘導する。次いで、溶媒または過剰な酸を混合物から蒸発させ、続いて、混合物を乾燥して付加塩を得るか、または、沈殿した塩を吸引ろ過して付加塩を得る。
【００７１】
本発明はまた、式１によって表される化合物の調製方法を提供し、これは、以下の反応式１に示されるように、式２によって表される化合物および式３によって表される化合物を反応させることによって、式１によって表される化合物を調製する工程を含む。
［反応式１］
【化１５】
0006661010.tif 000017
【００７２】
反応式１において、
Ｘ、ｎ、Ｙ、ｍ、ａ、ｂ、およびｃは、式１に定義されるとおりである。
本明細書中の以下において、本発明の調製方法は、より詳細に記載される。
【００７３】
本発明の調製方法に従って、式１によって表される化合物は、塩基の存在下、ペプチド誘導体である式２によって表される化合物のアミン基（−ＮＨ２）を、式３によって表される化合物のイソチオシアネート（−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ）と反応させることによって調製される。
【００７４】
前立腺癌において発現されるＰＳＭＡに結合したペプチド誘導体部分の末端が−ＯＨまたは−ＳＨである場合、Ｃ１〜Ｃ５アルキルアミン部分を導入する工程がさらに実施され得る。
【００７５】
この時点において、本明細書中の塩基は、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］−７−ウンデセン（ＤＢＵ）、およびピリジンなどの有機塩基；または、ナトリウムｔ−ブトキシド、カリウムｔ−ブトキシド、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、および水素化ナトリウムなどの無機塩基によって例示される。塩基は、単独でまたは組み合わせて、等量または過剰な量で使用することができるが、常にこれに限定されるわけではない。
【００７６】
本明細書で使用される反応溶媒は、クロロホルム、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、トルエン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、メチレンクロライド、ジクロロエタン、水、酢酸エチル、アセトニトリル；イソプロパノール、メタノール、エタノール、プロパノール、およびブタノールを含む低級アルコール；ならびに、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサン、エチルエーテルおよび１，２−ジメトキシエタンを含むエーテル溶媒によって例示される。上記の溶媒は、独立してまたは組み合わせて使用され得る。また、反応温度は、好ましくは室温であるが、反応の進行に従って調整することができ、これに限定されない。
【００７７】
本発明の調製方法に従って、式１によって表される化合物は、穏やかな条件下で単一工程で、ペプチド誘導体の末端のアミン基（−ＮＨ２）と、二官能性キレート剤のイソチオシアネートを直接反応させることによって容易に調製することができる。
【００７８】
さらに、本発明は、上記の式１によって表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩に金属性放射線同位体を配位することによって調製される標識化合物を提供する。
本明細書中の金属性放射線同位体は、好ましくは、６７Ｇａ、６８Ｇａ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１１１Ｉｎ、９０Ｙ、１７７Ｌｕ、または１１７ｍＳｎである。
【００７９】
タンパク質が、メディエータとして本発明の式１によって表される化合物の二官能性キレート剤、詳細には、
【化１６】
0006661010.tif 000018
（Ｙ、ｍ、ｂ、およびｃは、式１に定義されるとおりである）を使用して発生装置で生成される陽電子放出核種で標識される場合、金属性放射線同位体は、高い効率で標識される。
【００８０】
本発明の標識化合物は、インビボで血清中のプロテアーゼによって加水分解されないリンカーを含有し、その結果、ヒト血清における優れた安定性を示し、このことは、化合物が、標識化合物として有効に使用できることを示す（実験例１を参照）。
【００８１】
本発明はまた、活性成分として、上記の標識化合物を含む、前立腺癌を処置または診断するための医薬組成物を提供する。さらに、本発明は、活性成分として、上記の標識化合物を含む、前立腺癌を画像化するための放射性医薬品を提供する。
【００８２】
この時点において、放射線同位体は、主に、アルファ線放出放射性核種、ベータ線放出放射性核種、ガンマ線放出放射性核種、および陽電子ビーム放出放射性核種などである。これらの中で、アルファ線放出放射性核種およびベータ線放出放射性核種が処置のために使用され、ガンマ線放出放射性核種および陽電子ビーム放出放射性核種が核画像化による診断のために使用される。
【００８３】
本発明の医薬組成物が、前立腺癌を画像化するために使用される場合、標識化合物の放射線同位体は、好ましくは、６７Ｇａ、６８Ｇａ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、または１１１Ｉｎである。本発明の医薬組成物が前立腺癌を処置するために使用される場合、放射線同位体は、好ましくは、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１７７Ｌｕ、または１１７ｍＳｎである。
【００８４】
放射線同位体の中で、Ｇａ−６８は、周知の陽電子ビーム放出放射性核種であり、これは、６８分の短い半減期を有する。また、これは、ＰＥＴに有用であり、詳細には、発生装置の開発に起因する経済的な利益のために、将来の使用についての大きい可能性を有する。Ｇａ−６８は、ほとんどが、二官能性キレート剤として、ＤＯＴＡ（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸）またはＮＯＴＡ（１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸）で標識される。
【００８５】
ＤＯＴＡは、Ｉｎ−１１１、Ｙ−９０、Ｌｕ−１７７、およびＧａ−６８などの放射線同位体の標識のために広範に利用される。ＮＯＴＡを使用して、モノクローナル抗体Ｔ１０１でＩｎ−１１１およびＧａ−６７を標識し、このモノクローナル抗体は、Ｉｎ−１１１で安定ではないが、Ｇａ−６７での標識で安定である(Lee J, et el. Nucl Med Biol 1997;24:225-30)。
【００８６】
本発明の医薬組成物は、インビボで投与される場合、ヒト血清中における安定性が優れており、前立腺癌において競合的に発現されるＰＳＭＡに結合するのに優れているだけでなく、低濃度でＰＳＭＡを抑制するのにも優れている。本発明の組成物は、その高い水溶性に起因して、胆道ではなく、腎臓に排泄される。そのため、本発明の組成物は、前立腺癌組織に吸収されることができ、前立腺癌領域に放射線を放出する。したがって、本発明の組成物は、前立腺癌を処置または診断するための医薬組成物として有効に使用できる。
【００８７】
また、本発明は、上記の式１によって表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を含む前立腺癌を処置または診断するためのキットを提供し、非発熱性の滅菌形態で、薬学的に許容し得る金属性放射線同位体で標識されている。
【００８８】
詳細には、本発明の前立腺癌を処置または診断するためのキットは、式１によって表される化合物を、１０ｎｇ〜１００ｍｇの濃度で含有する。
【００８９】
本発明の前立腺癌を処置または診断するためのキットは、式１によって表される化合物が、冷蔵庫、フリーザーでまたは凍結乾燥されて、密封して貯蔵されている金属性放射線同位体で容易に標識されるように、適切な緩衝液中に、式１によって表される化合物を含有する滅菌バイアルを含んでおり、必要に応じて使用される。
【００９０】
この時点で、放射線同位体標識の過程においてｐＨを調節するために、０．０１ｍＬ〜１０ｍＬの緩衝液（ｐＨ１〜９、濃度１μＭ〜１０Ｍ）を添加し、これを溶解状態、凍結状態、または凍結乾燥状態で密封することができる。
【００９１】
本明細書において、緩衝液は、好ましくは、酢酸、リン酸、クエン酸、フマル酸、アスコルビン酸、酪酸、コハク酸、酒石酸、炭酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルカル酸、ホウ酸またはそれらのナトリウム塩またはカリウム塩である。
【００９２】
さらに、本発明のキットは、抗酸化剤をさらに含有し得る。抗酸化剤は、好ましくはビタミンＣまたはゲンチジン酸によって例示され、放射線分解によって引き起こされる、放射線同位体で標識された式１によって表される化合物の分解を防ぐ。抗酸化剤は、好ましくは、本発明のキットにおいて、単位用量当たり、０〜５００ｍｇの量で含有される。
【００９３】
キットは、緩衝液、滅菌バイアル、生理食塩水、シリンジ、フィルター、カラム、および衛生検査技師または技術者によって使用するための注射可能な薬物を生成するための他の補助装備を備えていてもよい。当該分野における通常の知識を有する当業者には、キットが患者の個人的な必要性または食事に従って変更または改変され得ること、そしてまた、放射線同位体が提供または得られる様式が変更され得ることが周知である。
【００９４】
上記のキットは、式１によって表される化合物に、化合物１ｍｇ当たり、０．１〜５００または１〜５００ｍＣｉの放射線同位体を添加し、続いて使用直前に０．１〜３０分間反応させることによって、放射線同位体標識化合物を提供することができる。
【００９５】
本発明の実践的なおよび現在好ましい態様は、以下の例において示されるように例示的である。
しかしながら、本開示を考慮して、本発明の精神および範囲内で改変および改善できることが当業者に理解される。
【００９６】
例１：（Ｓ）−２−（３−（（Ｓ）−１−カルボキシ−５−（３−（４−（（１，４，７−トリス（カルボキシメチル）−１，４，７−トリアゾナン−２−イル）メチル）フェニル）チオウレイド）ペンチル）ウレイド）ペンタン二酸（ＧＵＬ−ＳＣＮ−ＮＯＴＡ）の調製
工程１：（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル２−（１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキサアミド）ペンタンジオアートの調製
【化１７】
0006661010.tif 000019
【００９７】
Ｌ−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルグルタメートハイドロクロライド（１．５０ｇ、５．１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１５ｍＬ）中に溶解し、次いで、０℃に冷却し、これに、トリエチルアミン（１．７４ｍＬ、１２．５ｍｍｏｌ）および４−（ジメチルアミノ）ピリジンを添加した。混合物を、５分間撹拌し、次いで、これに１，１’−カルボニルジイミダゾール（９８１ｍｇ、６．０５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物の温度を室温まで上昇させて、その後１８時間撹拌した。これに、３０ｍＬのジクロロメタンを希釈のために添加した。混合物を、飽和重炭酸ナトリウム溶液（１０ｍＬ）、水（２ｘ１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。次いで、有機層を硫酸ナトリウムで脱水した。混合物をろ過し、ろ液を減圧下で乾燥し、続いて、ヘキサン／酢酸エチル溶液の処理を行った。結果として、白色固形物質を得た。得られた白色固形物質をヘキサン（５０ｍＬ）で洗浄し、最終白色固形物質を、機器分析により分析した。
【００９８】
収率：１．４４ｇ、８０％；
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ 8.29 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 4.24 (m, 1H), 2.36 (t, J = 7.26 Hz, 2H), 2.03 (m, 1H), 1.87 (m, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.39 (s, 9H)。
質量スペクトル(ESI+), m/z = 354 [M+H]+。
【００９９】
工程２：（９Ｓ，１３Ｓ）−トリ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３，１１−ジオキソ−１−フェニル−２−オキサ−４，１０，１２−トリアザペンタデカン−９，１３，１５−トリカルボキシラートの調製
【化１８】
0006661010.tif 000020
工程１で調製された（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル２−（１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキサミド）ペンタンジオアート（７８０ｍｇ、２．２０８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（７．８ｍＬ）中に溶解し、次いで、０℃に冷却し、これに、トリエチルアミン（０．６１５ｍＬ、４．４１７ｍｍｏｌ）およびメチルトリフルオロメタンスルホネート（ＭｅＯＴｆ）（０．２５２ｍＬ、２．２３０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物の温度を、撹拌しながら、室温まで上昇させて、続いて、室温で３０分さらに撹拌した。反応混合物に（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−アミノ−６−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）ヘキサノアート（７４３ｍｇ、２．２０８ｍｍｏｌ）を添加して、４０℃で加熱し、続いて、一晩撹拌した。反応の完了後、溶液を減圧下で乾燥した。次いで、固形生成物を、エーテルおよびヘキサンを使用して得た。
【０１００】
収率：１．１８ｇ、８６％；
質量スペクトル(ESI+), m/z = 622 [M+H]+。
【０１０１】
工程３：（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−（（Ｓ）−６−アミノ−１−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−オキソヘキサン−２−イル）ウレイド）ペンタンジオアートの調製
【化１９】
0006661010.tif 000021
【０１０２】
ギ酸アンモニウム（３１４ｍｇ、４．９８６ｍｍｏｌ）および１０ｗｔ％パラジウム炭素（１００ｍｇ）を、工程２で調製した（９Ｓ，１３Ｓ）−トリ−ｔｅｒｔ−ブチル３，１１−ジオキソ−１−フェニル−２−オキサ−４，１０，１２−トリアザペンタデカン−９，１３，１５−トリカルボキシレート（３１０ｍｇ、０．４９９ｍｍｏｌ）エタノール（５ｍＬ）溶液に添加し、続いて、室温で４時間撹拌した。反応の完了後、混合物をＣｅｌｉｔｅ５４５を使用してろ過し、次いで、酢酸エチル（２５ｍＬｘ３）を用いて洗浄した。白色固形生成物を、減圧下でろ液を蒸留することによって得た。
【０１０３】
収率：  ２４３ｍｇ、９８％。
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ 8.43 (s, 1H), 8.10-7.10 (br, 1H), 6.50 (m, 2H), 4.01 (m, 1H), 3.92 (m, 1H), 2.69 (m, 2H), 2.17 (m, 2H), 1.83 (m, 1H), 1.70-1.49 (m, 4H), 1.38 (m, 27H), 1.29 (m, 2H)。
質量スペクトル(ESI+), m/z = 488 [M+H]+。
【０１０４】
工程４：２，２’，２’’−（２−（４−（３−（（Ｓ）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−（３−（（Ｓ）−１，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１，５−ジオキソペンタン−２−イル）ウレイド）−６−オキソヘキシル）チオウレイド）ベンジル）−１，４，７−トリアゾナン−１，４，７−トリチル）三酢酸の調製
【化２０】
0006661010.tif 000022
【０１０５】
工程３で調製した（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−（（Ｓ）−６−アミノ−１−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−オキソヘキサン−２−イル）ウレイド）ペンタンジオアート（４７．８ｍｇ，０．０９８２ｍｍｏｌ）、２，２’，２’’−（２−（４−イソチオシアネートベンジル）−１，４，７−トリアゾナン−１，４，７−トリイル）三酢酸（ＳＣＮ−Ｂｚ−ＮＯＴＡ，５５ｍｇ，０．０９８２ｍｍｏｌ）およびトリメチルアミン（０．０６８ｍＬ，０．４９１ｍｍｏｌ）を、クロロホルム（１．０ｍＬ）に溶解し、続いて、室温で一晩撹拌した。反応の完了後、溶媒を、減圧下で乾燥した。生成物を、ＬＣ／ＭＣによって確認した。
質量スペクトル(ESI+), m/z = 939 [M+H]+。
【０１０６】
工程５：（Ｓ）−２−（３−（（Ｓ）−１−カルボキシ−５−（３−（４−（（１，４，７−トリス（カルボキシメチル）−１，４，７−トリアゾナン−２−イル）メチル）フェニル）チオウレイド）ペンチル）ウレイド）ペンタン二酸の調製
【化２１】
0006661010.tif 000023
【０１０７】
工程４で調製した２，２’，２’’−（２−（４−（３−（（Ｓ）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−（３−（（Ｓ）−１，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１，５−ジオキソペンタン−２−イル）ウレイド）−６−オキソヘキシル）チオウレイド）ベンジル）−１，４，７−トリアゾナン−１，４，７−トリチル）三酢酸を、トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（ｖ／ｖ  １／１，２．０ｍＬ）に溶解し、続いて、室温で４時間撹拌した。混合物を、減圧下で乾燥し、続いて、ＭｅＣＮおよび蒸留水を使用するＨＰＬＣによって精製し、ＧＵＬ−ＮＯＴＡを得た。
【０１０８】
収率：４７．８ｍｇ，６３％（２工程全体の収率）。
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ 12.4 (br, 6H), 9.45 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.38 (d, J = 8.10 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 8.16 Hz, 2H) , 6.76 ~ 6.41 (br, 2H), 6.30 (m, 2H), 4.12-2.61 (m, 22H), 2.19 (m, 2H), 1.86 (m, 1H), 1.74-1.51 (m, 4H), 1.29 (m, 2H).: 質量スペクトル(ESI+), m/z = 770 [M+H]+。
【０１０９】
例２：Ｇａ−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬの調製
【化２２】
0006661010.tif 000024
【０１１０】
例１で調製したＧＵＬ−ＮＯＴＡ（４７．８ｍｇ，０．０６２１ｍｍｏｌ）を、１．０Ｍ  ＮａＯＡｃ緩衝液（２．０ｍＬ，ｐＨ５．６）およびペンタン中に溶解した０．５Ｍ  ＧａＣｌ３（１．２４２ｍＬ，０．６２１ｍｍｏｌ）に溶解し、続いて、室温で８時間撹拌した。反応混合物を、０．２μｍシリンジフィルターを通してろ過し、ろ液を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ｎ−ヘキサン＝１：１，ｖ／ｖ）によって分離した。結果として、白色固形化合物を得た。
【０１１１】
収率：２６８ｍｇ，５８％。
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ 12.4 (br, 3H), 9.45 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.38 (d, J = 8.10 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 8.16 Hz, 2H) , 6.76 ~ 6.41 (br, 2H), 6.30 (m, 2H), 4.12-2.61 (m, 22H), 2.19 (m, 2H), 1.89 (m, 1H), 1.74-1.51 (m, 4H), 1.29 (m, 2H). : 質量スペクトル(ESI+), m/z = 837 [M+H]+。
【０１１２】
例３：Ｇａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬの調製
【化２３】
0006661010.tif 000025
【０１１３】
Ｇａ−６８−Ｃｌ３（２００μＬ，１１１ＭＢｑ）を、０．１Ｍ  ＨＣｌに溶解し、これを、１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝５．６，２００μＬ）に添加した。これに、例１で調製したＧＵＬ−ＮＯＴＡ含有ＭｅＣＮ溶液（１０μＬ，１ｍｇ／ｍＬ）を添加し、１分間激しく撹拌し、続いて、室温で１０分間反応させた。標識効率を、展開溶媒として０．１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３を使用するＩＴＬＣ−ＳＧを実施することによって計算した。この時点で、標識Ｇａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬは上部に移動し（Ｒｆ＝１．０）（図１ａ）、未標識Ｇａ−６８は、元のままであった（Ｒｆ＝０．０）（図１ｂ）。結果として、標識効率は、９９％超であった。
【０１１４】
例４：（Ｓ）−２−（３−（（Ｓ）−１−カルボキシ−５−（３−（４−（（１，４，７，１０−テトラキス（カルボキシメチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−２−イル）メチル）フェニル）チオウレイド）ペンチル）ウレイド）ペンタン二酸（ＧＵＬ−ＳＣＮ−ＤＯＴＡ）の調製
工程１：２，２’，２’’−（２−（４−（３−（（Ｓ）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−（３−（（Ｓ）−１，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１，５−ジオキソペンタン−２−イル）ウレイド）−６−オキソヘキシル）チオウレイド）ベンジル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトリイル）四酢酸の調製
【化２４】
0006661010.tif 000026
【０１１５】
例１の工程３で調製した（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−（（Ｓ）−６−アミノ−１−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−オキソヘキサン−２−イル）ウレイド）ペンタンジオアート（３０ｍｇ，０．０６１５ｍｍｏｌ）、２，２’，２’’，２’’’−（２−（４−イソチオシアネートベンジル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトライル）四酢酸（ＳＣＮ−Ｂｚ−ＤＯＴＡ，５０ｍｇ，０．０７２７ｍｍｏｌ）、およびトリメチルアミン（０．０４３ｍＬ，０．３０８ｍｍｏｌ）を、クロロホルム（１．０ｍＬ）中に溶解し、続いて、室温で撹拌した。溶媒を、減圧下で乾燥し、最終生成物の分子量をＬＣ／ＭＳによって計算した。
観察された質量スペクトル(ESI+), m/z = 1040 [M+H]+。
【０１１６】
工程２：（Ｓ）−２−（３−（（Ｓ）−１−カルボキシ−５−（３−（４−（（１，４，７，１０−テトラキス（カルボキシメチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−２−イル）メチル）フェニル）チオウレイド）ペンチル）ウレイド）ペンタン二酸の調製
【化２５】
0006661010.tif 000027
【０１１７】
工程１で調製された２，２’，２’’−（２−（４−（３−（（Ｓ）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−５−（３−（（Ｓ）−１，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１，５−ジオキソペンタン−２−イル）ウレイド）−６−オキソヘキシル）チオウレイド）ベンジル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトリイル）四酢酸を、２．０ｍＬのＴＦＡ／ＤＣＭ（ｖ／ｖ：１／１）溶液に溶解し、続いて、室温で４時間撹拌した。反応完了後、反応混合物を、減圧下で乾燥した。生成物を、ＤＣ含有１０％ＭｅＯＨで洗浄し、その結果、４３％の収率で白色粉末としてＧＵＬ−ＤＯＴＡを得た。生成物の分子量は、ＬＣ／ＭＳによって計算した。
観察された質量スペクトル(ESI+), m/z = 871 [M+H]+。
【０１１８】
例５：Ｇａ−６８−ＤＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬの調製
【化２６】
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【０１１９】
これに、例４で調製したＧＵＬ−ＤＯＴＡを含有するＭｅＣＮ溶液（１０μＬ，１ｍｇ／ｍＬ）を添加し、これを、１分間激しく撹拌し、続いて、９５℃で１０分間反応させた。標識効率を、展開溶媒として０．１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３を使用するＩＴＬＣ−ＳＧを実施することによって計算した。この時点で、標識Ｇａ−６８−ＤＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬは、上部に移動し（Ｒｆ＝１．０）（図２ａ）、非標識Ｇａ−６８は、元のままであった（Ｒｆ＝０．０）（図２ｂ）。結果として、標識効率は、９５％超であった。
【０１２０】
実験例１：ヒト血清中での安定性試験
ヒト血清における安定性を、化合物がヒト血清と接触した際に、化合物の安定性を試験することによって調査した。インビボ安定性をインビトロで試験した。
【０１２１】
１．Ｇａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬ
ヒト血清中における本発明のＧａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬの安定性を調査するために、例３で調製した、３．７ＭＢｑ（１００μＬ）のＧａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬを、１ｍＬのヒト血清に添加し、これを十分に混合し、続いて、３６．５℃で振盪培養した。２時間後、反応混合物をＩＴＬＣによって分析した。
その結果、Ｇａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬは、Ｇａ−６８に崩壊することなく、そのほとんどがそのまま存在することが確認された（図１ｃ）。
【０１２２】
２．Ｇａ−６８−ＤＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬ
ヒト血清中における本発明のＧａ−６８−ＤＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬの安定性を調査するために、例５で調製した３．７ＭＢｑ（１００μＬ）のＧａ−６８−ＤＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬを、１ｍＬのヒト血清に添加し、これを十分に混合し、続いて、３６．５℃で振盪培養した。２時間後、反応混合物をＩＴＬＣによって分析した。
その結果、Ｇａ−６８−ＤＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬのほとんどがそのまま存在し、９％のＧａ−６８−ＤＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬのみがＧａ−６８に崩壊した（図２ｃ）。
したがって、本発明のＧａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬまたはＧａ−６８−ＤＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬは、血清中のプロテアーゼによって分解されないチオ尿素結合を含有し、アミド結合を含まず、その結果、ヒト血清中における安定性が優れており、明瞭な画像が得られる。
【０１２３】
実験例２：インビトロ競合阻害細胞結合試験
Ｇａ−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬのインビトロ競合阻害細胞細胞結合試験を実施するために、以下の実験を行った。
ＰＳＭＡ陽性前立腺癌細胞株２２Ｒｖ１を、２ｘ１０５細胞／ウェルの密度で、２４ウェルプレートにロードし、続いて、３７℃、５％ＣＯ２インキュベータで２４時間培養した。例２で調製したＧａ−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬを、０．５％ウシ血清アルブミンを含有する細胞培養培地で２倍に連続希釈した。希釈したサンプルを、培養細胞（０．５ｍＬ／ウェル）に添加し、これに、１．８５ｋＢｑ  （Ｓ）−２−（３−（（Ｓ）−１−カルボキシ−５−（（４−ヨードベンジル）アミノ）ペンチル）ウレイド）ペンタン二酸（Ｉ−１２５−ＭＩＰ−１０７２）を添加した（０．５ｍＬ／ウェル）。十分に混合した後、混合物を、３７℃、５％ＣＯ２インキュベータで１時間培養した。培養培地を、廃棄し、細胞を新鮮な培地で二回洗浄し、これに、ＰＢＳ中に溶解した０．５％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を添加した（１ｍＬ／ウェル）。混合物を、完全な溶解のために穏やかに撹拌し、次いで、５ｍＬ使い捨てプラスチック試験管にロードした。次いで、放射活性を、ガンマカウンターで測定した。
【０１２４】
結果として、本発明のＧａ−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬの濃度が増加するにつれて、Ｉ−１２５−ＭＩＰ−１０７２と前立腺癌細胞との間の結合は減少した（図３ａ）。ＩＣ５０値は、非線形回帰分析によって、１８．３ｎＭと計算された（図３ｂ）。
したがって、本発明のＧａ−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬは、前立腺癌細胞への競合的結合において優れているだけでなく、低濃度で前立腺癌細胞を抑制するのに優れていることが確認された。
【０１２５】
実験例３：癌移植実験動物のＰＥＴ画像
本発明のＧａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬを、前立腺癌を移植された動物に投与し、続いて、ＰＥＴ画像化し、以下のように癌組織標的化を調査した。
詳細には、５ｘ１０６細胞の２２Ｒｖ１細胞を含有する０．１ｍＬのＲＰＭＩ１６４０を、４週齢の雄性ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの左側に皮下注射した。２〜３週間後、腫瘍組織は、適切なサイズを有することが確認され、実験に使用した。Ｇａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬを、注射可能な生理食塩水に希釈して、動物注射のための１０．２ＭＢｑ／１００  μＬ溶液を得た。調製した溶液を、癌細胞を移植されたマウスの尾静脈に注射した。１時間後、動物で１０分間、ＰＥＴ画像化を実施した。
【０１２６】
結果として、本発明のＧａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬは、腎臓において排泄され、前立腺癌組織において吸収された（図４ａ）。これらの腎臓排泄画像は、典型的には、同位体標識低分子ペプチドのＰＥＴ画像において観察され、このことは、前立腺癌の画像化が可能であることを示す。
【０１２７】
ＰＳＭＡに結合し得るＭＩＰ−１０７２が、Ｇａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬ投与の前に注射される場合、Ｇａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬは、前立腺癌組織において吸収されなかった（図４ｂ）。この結果は、前立腺癌画像が、Ｇａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬとＰＳＭＡとの間の特異的結合によって得られ得ることを裏付けている。
したがって、本発明のＧａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬＧＵＬは、ＰＳＭＡに特異的に結合することができ、従って、前立腺癌を画像化するために効果的に使用できることが確認された。
【０１２８】
実験例４：癌移植実験動物のインビボ分布試験
本発明のＧａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬまたはＧａ−６８−ＤＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬを、前立腺癌を移植された動物へ投与し、続いて、癌組織が実際にそこで観察されるか否かを調査するためにインビボ分布を行った。
詳細には、５ｘ１０６細胞の２２Ｒｖ１細胞を含有する０．１ｍＬのＲＰＭＩ１６４０を、４週齢の雄性ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの左側に皮下注射した。２〜３週間後、腫瘍組織が、適切なサイズを有することを確認し、実験に使用した。例３で調製されたＧａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬまたは例５で調製されたＧａ−６８−ＤＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬを、注射可能な生理食塩水中に希釈し、動物注射のための０．７４ＭＢｑ／１００μＬ溶液を得た。調製された溶液を、癌細胞を移植されたマウスの尾静脈に注射した。１時間後、腫瘍、血液、筋肉、心臓、肺、肝臓、脾臓、胃、小腸、腎臓、および骨を抽出し、これらの重量および放射活性を測定した。このデータに基づいて、用量についての単位組織当たりの取り込み（％ＩＤ／ｇ）を計算した。その結果を表２に示す。
【表２】
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（表２において、データは平均±標準偏差％ＩＤ／ｇ（ｎ＝４）を示す。）
【０１２９】
表２に示されるように、本発明のＧａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬまたはＧａ−６８−ＤＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬは、腎臓において高度に吸収され、その結果、腎臓における取り込みは、ペプチド画像化についての従来の放射性医薬品と同等に高いかまたはそれよりも高かった。取り込みは、癌組織において最も高かった。脾臓におけるＧａ−６８−ＤＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬの取り込みは、癌組織よりも少し高かったが、統計学的に有意ではなかった。
したがって、本発明のＧａ−６８−ＮＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬまたはＧａ−６８−ＤＯＴＡ−ＳＣＮ−ＧＵＬは、前立腺癌の画像化において効率的であるため、放射活性医薬品として効果的に使用できることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【０１３０】
本発明は、ペプチドチオ尿素誘導体、その薬学的に許容し得る塩、これを含む放射線同位体標識化合物、およびこれを活性成分として含む前立腺癌を処置または診断するための医薬組成物に関する。本発明のペプチドチオ尿素誘導体は、インビボで投与される場合、ヒト血清中における安定性が優れており、前立腺癌において発現されるＰＳＭＡに十分に結合するだけでなく、低濃度でのＰＳＭＡの阻害にも優れている。加えて、本発明の誘導体は、高い水溶性を有し、胆道ではなく、腎臓に排泄され得るので、その結果、前立腺癌の腫瘍領域の明瞭な画像を得ることができる。したがって、本発明の誘導体は、前立腺癌を処置および診断するための医薬組成物として有効に使用できる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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