(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする哺乳動物において、がんを処置する方法における同時または逐次使用のための医薬組合せ物であって、
ｉ）アルボシジブ、またはその薬学的に許容される塩、および
ｉｉ）ＯＴＸ０１５およびＩＢＥＴ７６２から選択される、ブロモドメイン（ＢＲＤ）インヒビター、またはその薬学的に許容される塩
を含む医薬組合せ物。
【請求項２】
前記ＢＲＤインヒビターが、ＯＴＸ０１５である、請求項１に記載の医薬組合せ物。
【請求項３】
前記ＢＲＤインヒビターが、ＩＢＥＴ７６２である、請求項１に記載の医薬組合せ物。
【請求項４】
前記がんが、白血病である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組合せ物。
【請求項５】
前記白血病が、急性骨髄性白血病である、請求項４に記載の医薬組合せ物。
【請求項６】
前記がんが、固形腫瘍である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組合せ物。
【請求項７】
前記がんが、乳房、前立腺、および結腸のがんである、請求項６に記載の医薬組合せ物。
【請求項８】
それを必要とする哺乳動物において、がんを処置する方法における使用のための医薬組成物であって、
前記医薬組成物は、アルボシジブ、またはその薬学的に許容される塩を含み、
前記医薬組成物は、ＯＴＸ０１５およびＩＢＥＴ７６２から選択される、ブロモドメイン（ＢＲＤ）インヒビター、またはその薬学的に許容される塩と同時または逐次投与されることを特徴とする、
医薬組成物。
【請求項９】
それを必要とする哺乳動物において、がんを処置する方法における使用のための医薬組成物であって、
前記医薬組成物は、ＯＴＸ０１５およびＩＢＥＴ７６２から選択される、ブロモドメイン（ＢＲＤ）インヒビター、またはその薬学的に許容される塩を含み、
前記医薬組成物は、アルボシジブ、またはその薬学的に許容される塩と同時または逐次投与されることを特徴とする、
医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（背景）
（技術分野）
本発明は、概して、スーパーエンハンサーにより調節される疾患を処置する方法および処置用の組成物を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
（関連技術の説明）
スーパーエンハンサーは、ＤＮＡの転写的に活性な領域の大型のクラスターであり、細胞の同一性を制御する遺伝子の発現を推進する。スーパーエンハンサーは、がんを含む、ただしこれに限定されない多重疾患症状においては調節不全に陥る。スーパーエンハンサーは、直鎖状のＤＮＡにおいて必ずしも近傍に位置する必要のない複数の遺伝子の発現を同時に調節する大型の複合体を形成する転写因子、補助因子、クロマチン調節因子、シグナリング酵素（例えば、キナーゼ）、および転写装置（例えば、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ）を補充する（SmithおよびShilatifard、２０１４年、Nature  Structural  and  Molecular  Biology、第２１巻（３号）：２１０〜２１９頁）。スーパーエンハンサーは、細胞が協働的に作用して細胞の同一性を決定または維持する遺伝子のグループを調節することにおいて能力を有することを可能にする。がん細胞は、がん細胞の転写活性が変化するようにスーパーエンハンサー複合体を再プログラムし、発がん、転移、および疾患進行に至ることが実証されている。実際、がんに限らず、多くの疾患が、スーパーエンハンサー複合体の異常に最終的に起因するものと仮定されている（Cell、２０１３年１１月７日、第１５５巻（４号）：９３４〜４７頁）。
【０００３】
スーパーエンハンサー複合体の公知の構成要素として、サイクリン依存性キナーゼ（例えば、Ｃｄｋ９）、ブロモおよびエキストラターミナル（ＢＥＴ）ドメインタンパク質（例えば、Ｂｒｄ４）、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（例えば、ｐ３００）、ヒストンデメチラーゼ（例えば、Ｌｓｄ１）、ヒストンメチルトランスフェラーゼ（例えば、Ｄｏｔ１Ｌ）等が挙げられる。これらの構成要素は、代表的な転写調節に一般的に関与している。しかし、スーパーエンハンサーの構成要素の機能を阻害すると、スーパーエンハンサーに制御される遺伝子に対して、代表的なエンハンサーエレメントにより制御された遺伝子と比較して、それよりも顕著な効果を有することが明らかにされている（Lovenら、２０１３年、Cell、第１５３巻（２号）：３２０〜３３４頁）。この観察所見に対する考え得る１つの理由は、代表的なエンハンサーと比較して、スーパーエンハンサーにおいては、転写調節タンパク質およびクロマチン修飾タンパク質が豊富なことであことである。例えば、メディエーター複合体（Ｃｄｋ８を含む）およびＢｒｄ４は、スーパーエンハンサーおよび代表的なエンハンサーの両方に存在する。しかし、代表的なエンハンサーと比較して、スーパーエンハンサーでは、メディエーターの量が２５倍上回ることが見出されている（Hniszら、２０１３年、Cell、第１５５巻：９３４〜９４７頁）。同様に、スーパーエンハンサーにおけるＢｒｄ４レベルは、代表的なエンハンサーよりも約２０倍高いことが明らかにされている（Hniszら、２０１３年、Cell、第１５５巻：９３４〜９４７頁）。
【０００４】
スーパーエンハンサーから発現した遺伝子は、一部のがんにおける疾患進行を媒介することが明らかにされている。例えば、多発性骨髄腫（ＭＭ）では、スーパーエンハンサーエレメントをＭＹＣ遺伝子に隣接して配置する転位が、腫瘍細胞に多くの場合認められる（Hniszら、２０１３年、Cell、第１５５巻：９３４〜９４７頁）。類似した変化は、急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、肺がん、膵がん、結腸直腸がん、乳がん、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、神経膠芽腫、リンパ芽球腫、子宮頚がん、および前立腺がんの患者に見出されている（Hniszら、２０１３年、Cell、第１５５巻：９３４〜９４７頁）。
進歩しているとは言え、スーパーエンハンサーの標的化の改善、およびスーパーエンハンサーが媒介する疾患を処置する方法に対するニーズが当技術分野においてなおも残っている。本発明は、本ニーズを満たし、関連する利益を提供する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】SmithおよびShilatifard、２０１４年、Nature  Structural  and  Molecular  Biology、第２１巻（３号）：２１０〜２１９頁
【非特許文献２】Hniszら、２０１３年、Cell、第１５５巻：９３４〜９４７頁
【非特許文献３】Lovenら、２０１３年、Cell、第１５３巻（２号）：３２０〜３３４頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（簡単な要旨）
端的には、本発明の実施形態は、スーパーエンハンサーの２つまたはそれ超の構成要素のインヒビターの投与を含む、疾患を処置する方法を提供する。一実施形態では、本開示は、それを必要とする哺乳動物において、スーパーエンハンサー媒介型疾患を処置する方法であって、下記の治療剤：
ｉ）サイクリン依存性キナーゼインヒビター、
ｉｉ）ブロモドメインインヒビター、
ｉｉｉ）ヒストンメチルトランスフェラーゼインヒビター、
ｉｖ）ヒストンデアセチラーゼインヒビター、および
ｖ）ヒストンデメチラーゼインヒビター
のうちの少なくとも２つの有効量を哺乳動物に投与するステップを含む、方法を提供する。
【０００７】
上記治療剤のうちの少なくとも２つを含む医薬組成物も提供される。
【０００８】
本発明のこれらおよび他の態様は、下記の詳細な説明を参照すれば明白となる。この目的を達成するために、様々な参考文献が本明細書に記載されているが、そのような文献は、ある特定のバックグラウンド情報、手順、化合物、および／または組成物について、より詳細に記載しており、それぞれが、本明細書にその全体が参考として組み込まれる。
【０００９】
図中、同一の参照番号は、類似した要素を識別する。図中の要素のサイズおよび相対的な位置は、正確な縮尺で必ずしも描かれたものではなく、これらの要素の一部は、図の読み取りやすさを改善するために任意に拡大および配置されている。さらに、描かれた要素の特定の形状は、特定の要素の実際の形状に関するあらゆる情報を伝達するようには意図されておらず、図中で認識し易いようにもっぱら選択されている。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、転写開始部位に対するＣｄｋ９のＢｒｄ４補充に関する、提案された機構を説明する図である。
【００１１】
【図２】図２は、Ｃｄｋ９インヒビターとＢｒｄ４インヒビターの間の相乗的効果のエビデンスを表す図である。
【００１２】
【図３】図３は、ビヒクル、アルボシジブ、ＪＱ１、またはアルボシジブとＪＱ１との組合せにより処置されたマウスの体重増加を示す図である。
【００１３】
【図４】図４は、スーパーエンハンサー媒介型転写のレベルにおける、Ｃｄｋ９インヒビターとＢｒｄ４インヒビターの間の相乗的効果のエビデンスを提供する図である。
【００１４】
【図５】図５Ａおよび５Ｂは、ＭＶ４−１１細胞における、アルボシジブによるＭＹＣ発現阻害（図５Ａ）、およびＭＣＬ−１（図５Ｂ）発現阻害を示す棒グラフである。
【００１５】
【図６】図６は、アルボシジブまたはＢＲＤ４インヒビター単独および組合せにより処置したＭＶ４−１１細胞のアポトーシスデータを示す図である。
【００１６】
【図７】図７Ａ〜Ｃは、アルボシジブ、ＪＱ１（７Ａ）、ＯＴＸ（７Ｂ）、およびＩＢＥＴ７６２（７Ｃ）が単一薬剤として、ならびに組合せで存在したときのＭＹＣ発現を示すグラフである。
【００１７】
【図８】図８Ａ〜Ｃは、アルボシジブ、ＪＱ１（８Ａ）、ＯＴＸ（８Ｂ）、およびＩＢＥＴ７６２（８Ｃ）が単一薬剤として、ならびに組合せで存在したときのＭＹＣ発現のウェスタンブロットである。
【００１８】
【図９】図９Ａ〜Ｃは、図８Ａ〜Ｃのウェスタンブロットの定量を示す棒グラフである。ＪＱ１に関するデータは図８Ａに提示し、ＯＴＸ０１５のデータは図８Ｂに提示し、そしてＩＢＥＴ７６２に関するデータは図９Ｃに示す。
【００１９】
【図１０】図１０Ａは、アルボシジブで処置したＭＶ４−１１細胞の代表的なウェスタンブロットである。図１０Ｂは、図１０Ａのウェスタンブロットの定量を提示する図である。
【００２０】
【図１１】図１１Ａは、アルボシジブで処置したＭＶ４−１１細胞における用量漸増実験の代表的なウェスタンブロットである。図１１Ｂは、図１１Ａのウェスタンブロットの定量を提示する図である。
【００２１】
【図１２】図１２Ａは、アルボシジブを用いて異なる用量で２時間処置したＭＶ４−１１細胞の代表的なウェスタンブロットである。図１２Ｂは、図１２Ａのウェスタンブロットの定量を提示する図である。
【００２２】
【図１３】図１３Ａは、アルボシジブで処置したＡ５４９細胞における用量漸増実験の代表的なウェスタンブロットである。図１３Ｂは、特定の期間アルボシジブで処置したＡ５４９細胞に関する代表的なウェスタンブロットである。
【００２３】
【図１４】図１４Ａは、アルボシジブで処置したＡ５４９細胞に関する時間依存性実験の代表的なウェスタンブロットである。図１４Ｂは、ＳＫ−Ｎ−ＡＳ細胞に関する同様のウェスタンブロットである。
【００２４】
【図１５】図１５は、時間依存方式でアルボシジブにより処置する間のＭＶ４−１１細胞におけるｍＲＮＡ抑制の定量を提示する図である。
【００２５】
【図１６】図１６Ａ〜Ｃは、アルボシジブ、ＪＱ−１（１６Ａ）、ＯＴＸ（１６Ｂ）、およびＩＢＥＴ７６２（１６Ｃ）が単一薬剤として、ならびに組合せで存在したときの、ＭＣＬ−１発現を示すグラフである。
【００２６】
【図１７】図１７は、アルボシジブおよびＪＱ−１が、一連の投薬濃度にわたり単一薬剤として、ならびに組合せで存在したときの、ＭＣＬ−１発現を示すグラフである。
【図１８】図１８は、アルボシジブおよびＪＱ−１が単一薬剤として、ならびに組合せで存在したときの、Ａ５４９細胞内ｃ−ＭＹＣ発現を示す代表的なウェスタンブロットである。
【００２７】
【図１９】図１９は、アルボシジブまたはＪＱ−１インヒビターが単独で、および組合せで存在したときの、Ａ５４９細胞のアポトーシスデータを示す図である。
【００２８】
【図２０】図２０は、ジナシクリブまたはＪＱ−１インヒビターが単独で、および組合せで存在したときの、Ａ５４９細胞のアポトーシスデータを示す図である。
【００２９】
【図２１】図２１Ａおよび図２１Ｂは、一連の投薬濃度にわたり、アルボシジブが存在したときの、Ａ５４９細胞内ＭＹＣおよびＭＣＬ−１発現を示すグラフである。
【００３０】
【図２２】図２２Ａは、非標的化ｓｉＲＮＡで処置しなかった、処置したときの、およびＣＤＫ９特異的ｓｉＲＮＡで処置したときのＣＤＫ９レベルを示す代表的なウェスタンブロットである。図２２Ｂは、ＢＥＴインヒビター、および非標的型またはＣＤＫ９特異的ｓｉＲＮＡのいずれかで処置したときのＡ５４９細胞のアポトーシスデータを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
（詳細な説明）
以下の説明では、ある特定の具体的詳細が、本発明の様々な実施形態の完全な理解を提供するために記載される。しかし、当業者は、本発明は、これらの詳細情報がなくても実践可能であることを理解し得る。
【００３２】
文脈が別様に途要求しない限り、本明細書および特許請求の範囲全体を通じて、単語「含む（comprise）」、ならびにその変形形態、例えば「含む（comprises）」および「含む（comprising）」は、オープンで包括的な意味合い、すなわち「を含む、ただしこれらに限定されない」という意味合いを有するものと解釈されるものとする。
【００３３】
本明細書全体を通じて、「一実施形態」または「ある実施形態」への言及は、実施形態と関連して記載される特定の特性、構造、または特徴が、本発明の少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。したがって、本明細書全体を通じて様々な場所で、慣用句「一実施形態では」または「ある実施形態では」が現れても、それは必ずしもすべて同一の実施形態を指すものではない。さらに、特定の特性または特徴は、１つまたは複数の実施形態において任意の適する方式で組み合わせることができる。
【００３４】
「哺乳動物」には、ヒト、ならびに家畜、例えば実験動物および家庭用ペット（例えば、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウサギ）、および野生生物等の非家畜の両方が含まれる。
【００３５】
「医薬組成物」は、本発明の化合物の製剤、および生物学的に活性な化合物を哺乳動物、例えばヒトに送達するための当技術分野において一般的に許容される媒体を指す。そのような媒体として、その化合物用のすべての薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤が挙げられる。
【００３６】
「有効量」または「治療有効量」とは、哺乳動物、好ましくはヒトに投与したときに、本発明の化合物の量が、哺乳動物、好ましくはヒトにおけるスーパーエンハンサー関連の症状または疾患の、以下で定義するような処置を行うのに十分であることを意味する。「治療有効量」を構成する本発明の化合物の量は、化合物、症状とその重症度、投与方式、および処置される哺乳動物の年齢に応じて変化するが、独自の知識および本開示に関する知識を有する当業者によりルーチン的に決定することができる。
「処置する」または「処置」には、本明細書で使用する場合、目的の疾患または症状を有する哺乳動物、好ましくはヒトにおける目的の疾患または症状の処置が含まれ、
（ｉ）疾患または症状が哺乳動物に生ずるのを、特にそのような哺乳動物が、その症状について易罹患性であるが、その症状を有するものとまだ診断されないときに予防すること、
（ｉｉ）疾患または症状を阻害する、すなわちその発症を阻止すること、
（ｉｉｉ）疾患または症状を緩和する、すなわち疾患または症状の後退を引き起こすこと、あるいは
（ｉｖ）疾患または症状に起因する徴候を緩和する、すなわち基礎疾患または症状に対処することなく疼痛を緩和すること、
を含む。
本明細書で使用する場合、用語「疾患」および「症状」は、交換可能に使用可能であり得るか、あるいは特定の病気または症状は、公知の原因因子を有さない（したがって、病因はまだ解明されていない）場合もあり、したがって、望ましくない症状または症候群として認識されているに過ぎず、疾患としていまだ認識されておらず、多少の特別な一連の徴候が臨床医により識別されているという点において異なる可能性がある。
Ｉ．方法
【００３７】
ある特定の実施形態では、方法は、スーパーエンハンサー機能を破壊するか、そして／またはスーパーエンハンサー機能が関わる疾患、障害、もしくは病理学的症状、好ましくはヒトに苦痛を与えるものと関連した徴候を予防、処置、または寛解するのに有用である。一緒にまたは逐次的に投与したときに、スーパーエンハンサーの２つまたはそれ超の構成要素の活性を阻害する化合物は、がん、例えば急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）および肺がんの徴候または進行を、予防、処置、寛解、または軽減するのに有用である。本発明は、スーパーエンハンサーを阻害する方法であって、本明細書に記載するスーパーエンハンサーの構成要素の２つまたはそれ超のインヒビターを、治療有効量で、それを必要とする対象に投与するステップを含む、方法を提供する。対象は、ヒト、非ヒト霊長類、齧歯類、イヌ、ネコ、有蹄動物、ウシ、ウマ、または他の種であり得る。
【００３８】
したがって、一実施形態では、本開示は、それを必要とする哺乳動物において、スーパーエンハンサー媒介型疾患を処置する方法であって、下記の治療剤：
ｉ）サイクリン依存性キナーゼインヒビター、
ｉｉ）ブロモドメインインヒビター、
ｉｉｉ）ヒストンメチルトランスフェラーゼインヒビター、
ｉｖ）ヒストンデアセチラーゼインヒビター、および
ｖ）ヒストンデメチラーゼインヒビター、
のうちの少なくとも２つの有効量を哺乳動物に投与するステップを含む、方法を提供する。
【００３９】
一部の実施形態では、方法は、サイクリン依存性キナーゼインヒビターおよびブロモドメイン（ＢＥＴ）インヒビターを投与するステップを含む。
【００４０】
２つまたはそれ超の治療剤は、同時投与または逐次的に投与され得る。例えば、第１の治療剤が投与され得、十分な期間の後に第２の治療剤が投与される。当業者は、一般的技法および知識に基づき、適切な投薬スケジュールを導き出すことができる。
【００４１】
ある特定の実施形態では、治療剤のうちの少なくとも１つは、サイクリン依存性キナーゼ（Ｃｄｋ）タンパク質、例えばＣｄｋ４、Ｃｄｋ６、Ｃｄｋ７、Ｃｄｋ８、Ｃｄｋ９、Ｃｄｋ１０、および／またはＣｄｋ１１を阻害する。一部の実施形態では、サイクリン依存性キナーゼインヒビターは、Ｃｄｋ７、Ｃｄｋ９、または両方を阻害する。一部の実施形態では、治療剤は、ジナシクリブ（ACS  Med.  Chem.  Lett.、２０１０年５月１７日；第１巻（５号）：２０４〜８頁；Mol.  Cancer  Ther.、２０１０年８月；第９巻（８号）：２３４４〜５３頁；Merck、SharpおよびDohme）、ＡＴ７５１９（J.  Med.  Chem.、２００８年８月２８日；第５１巻（１６号）：４９８６〜９９頁；Astex  Pharmaceutical）、パルボシクリブ（J.  Med.  Chem.、２００５年４月７日；第４８巻（７号）：２３８８〜４０６頁；Pfizer）、またはアルボシジブ（Int.  J.  Oncol.、１９９６年１２月、第９巻（６号）：１１４３〜６８頁）、例えばアルボシジブである。一部の実施形態では、治療剤のうちの少なくとも１つは、ＣＤＫ９特異的ｓｉＲＮＡ、アルボシジブ、またはジナシクリブである。一部の実施形態では、治療剤のうちの少なくとも１つは、アルボシジブである。
【００４２】
他の実施形態では、治療剤のうちの少なくとも１つは、ブロモドメインタンパク質、例えば、Ｂｒｄ２、Ｂｒｄ３、Ｂｒｄ４、および／またはＢｒｄＴ、例えばＢｒｄ４を阻害する。これらの実施形態のうちの一部では、治療剤は、ＪＱ−１（Nature、２０１０年１２月２３日；第４６８巻（７３２７号）：１０６７〜７３頁）、ＢＩ２５３６（ACS  Chem.  Biol.、２０１４年５月１６日；第９巻（５号）：１１６０〜７１頁；Boehringer  Ingelheim）、ＴＧ１０１２０９（ACS  Chem.  Biol.、２０１４年５月１６日；第９巻（５号）：１１６０〜７１頁）、ＯＴＸ０１５（Mol.  Cancer  Ther.、２０１３年１１月１２日；Ｃ２４４；Oncoethix）、ＩＢＥＴ７６２（J.  Med.  Chem.、２０１３年１０月１０日；第５６巻（１９号）：７４９８〜５００頁；GlaxoSmithKline）、ＩＢＥＴ１５１（Bioorg.  Med.  Chem.  Lett.、２０１２年４月１５日；第２２巻（８号）：２９６８〜７２頁；GlaxoSmithKline）、ＰＦＩ−１（J.  Med.  Chem.、２０１２年１１月２６日；第５５巻（２２号）：９８３１〜７頁；Cancer  Res.、２０１３年６月１日；第７３巻（１１号）：３３３６〜４６頁；Structural  Genomics  Consortium）、またはＣＰＩ−０６１０（Constellation  Pharmaceuticals）である。さらなる実施形態では、治療剤のうちの少なくとも１つは、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）タンパク質を阻害する。ＨＤＡＣタンパク質は、酵母菌ＨＤＡＣタンパク質に対する相同性に基づきクラスにグループ化可能であり、クラスＩはＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、およびＨＤＡＣ８からなり；クラスＩＩａはＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７、およびＨＤＡＣ９からなり；クラスＩＩｂはＨＤＡＣ６およびＨＤＡＣ１０からなり；ならびにクラスＩＶはＨＤＡＣ１１からなる。これらの実施形態の一部では、治療剤は、トリコスタチンＡ、ボリノスタット（Proc.  Natl.  Acad.  Sci.、米国、１９９８年３月１７日；第９５巻（６号）：３００３〜７頁）、ギビノスタット、アベキシノスタット（Mol.  Cancer  Ther.、２００６年５月；第５巻（５号）：１３０９〜１７頁）、ベリノスタット（Mol.  Cancer  Ther.、２００３年８月；第２巻（８号）：７２１〜８頁）、パノビノスタット（Clin.  Cancer  Res.、２００６年８月１日；第１２巻（１５号）：４６２８〜３５頁）、レスミノスタット（Clin.  Cancer  Res.、２０１３年１０月１日；第１９巻（１９号）：５４９４〜５０４頁）、キシノスタット（Clin.  Cancer  Res.、２０１３年８月１日；第１９巻（１５号）：４２６２〜７２頁）、デプシペプチド（Blood、２００１年１１月１日；第９８巻（９号）：２８６５〜８頁）、エンチノスタット（Proc.  Natl.  Acad.  Sci.、米国、１９９９年４月１３日；第９６巻（８号）：４５９２〜７頁）、モセチノスタット（Bioorg.  Med.  Chem.  Lett.、２００８年２月１日；第１８巻（３号）：１０６７〜７１頁）、またはバルプロ酸（EMBO  J.、２００１年１２月１７日；第２０巻（２４号）：６９６９〜７８頁）である。例えば、一部の実施形態では、治療剤は、パノビノスタットである。他の実施形態では、少なくとも１つの治療剤は、パノビノスタットまたはＳＡＨＡである。
【００４３】
なおもさらなる実施形態では、治療剤のうちの少なくとも１つは、ヒストンメチルトランスフェラーゼタンパク質、例えばＤＯＴ１様ヒストンメチルトランスフェラーゼ（Ｄｏｔ１Ｌ）を阻害する。これらの実施形態の一部では、治療剤は、ＥＰＺ００４７７７、ＥＰＺ−５６７６（Blood、２０１３年８月８日；第１２２巻（６号）：１０１７〜２５頁）、またはＳＧＣ０９４６（Nat.  Commun.、２０１２年；第３巻：１２８８頁）、例えばＥＰＺ−５６７６である。
【００４４】
一部の実施形態では、選択された治療薬のうちの１つは、ヒストンデメチラーゼ、例えばリシン特異的デメチラーゼ１Ａ（Ｌｓｄ１）等のリシン特異的デメチラーゼを阻害する。これらの実施形態の一部では、治療剤は、ＨＣＩ−２５０９（BMC  Cancer、２０１４年１０月９日；第１４巻：７５２頁）、トラニルシプロミン、またはＯＲＹ−１００１（J.  Clin.  Oncol.、第３１巻、２０１３年（補遺；要約ｅ１３５４３）である。他の実施形態では、治療剤は、ＨＣＩ−２５０９である。
【００４５】
一部の他の実施形態では、方法は、有効量のサイクリン依存性キナーゼインヒビターおよびブロモドメインインヒビターを哺乳動物に投与するステップを含む。例えば、一部の実施形態では、サイクリン依存性キナーゼインヒビターは、ＣＤＫ９特異的ｓｉＲＮＡまたはアルボシジブである。一部の他の実施形態では、サイクリン依存性キナーゼインヒビターは、アルボシジブである。上記の異なる実施形態では、ブロモドメインインヒビターは、ＪＱ１である。上記の他の異なる実施形態では、ブロモドメインインヒビターは、ＩＢＥＴ７６２である。上記のさらに他の実施形態では、ブロモドメインインヒビターは、ＯＴＸ０１５である。
【００４６】
したがって、一部の実施形態では、方法は、有効量のアルボシジブおよび有効量のＪＱ１を哺乳動物に投与するステップを含む。他の実施形態では、方法は、有効量のアルボシジブおよび有効量のＩＢＥＴ７６２を哺乳動物に投与するステップを含む。さらに他の実施形態では、方法は、有効量のアルボシジブおよび有効量のＯＴＸ０１５を哺乳動物に投与するステップを含む。
【００４７】
他の具体的な実施形態では、方法は、有効量のサイクリン依存性キナーゼインヒビターおよびヒストンデアセチラーゼインヒビターを哺乳動物に投与するステップを含む。これらの実施形態の一部では、サイクリン依存性キナーゼインヒビターは、アルボシジブである。上記の他の実施形態では、ヒストンデアセチラーゼインヒビターは、パノビノスタットである。
【００４８】
他の具体的な実施形態では、方法は、有効量のサイクリン依存性キナーゼインヒビターおよびヒストンメチルトランスフェラーゼインヒビターを哺乳動物に投与するステップを含む。これらの実施形態の一部では、サイクリン依存性キナーゼインヒビターは、アルボシジブである。
【００４９】
他の具体的な実施形態では、方法は、有効量のサイクリン依存性キナーゼインヒビターおよびヒストンデメチラーゼインヒビターを哺乳動物に投与するステップを含む。これらの実施形態の一部では、サイクリン依存性キナーゼインヒビターは、アルボシジブである。
【００５０】
多種多様ながんは、固形腫瘍および白血病（例えば、急性骨髄性白血病）を含め、本明細書に開示の方法から影響を受けやすい。様々な実施形態で処置され得るがんの種類として、乳房、前立腺、および結腸の腺癌；肺の気管支原性癌のすべての形態；骨髄；メラノーマ；ヘパトーマ；神経芽細胞腫；乳頭腫；アプドーマ；分離腫；鰓腫；悪性カルチノイド症候群；カルチノイド心疾患；および癌腫（例えば、ウォーカー、基底細胞、基底扁平上皮、ブラウン−ピアース、腺管、エールリッヒ腫瘍、クレブス２、メルケル細胞、粘液性、非小細胞肺、燕麦細胞、乳頭状、スキルス、細気管支、気管支原性、扁平上皮細胞、および移行上皮細胞）が挙げられるが、ただし、これらに限定されない。処置され得るがんの追加の種類として、組織球性障害；白血病；悪性組織球症；ホジキン病；免疫増生性小腸；非ホジキンリンパ腫；形質細胞腫；細網内皮症；メラノーマ；軟骨芽細胞腫；軟骨腫；軟骨肉腫；線維腫；線維肉腫；巨細胞腫瘍；組織球腫；脂肪腫；脂肪肉腫；中皮腫；粘液腫；粘液肉腫；骨腫；骨肉腫；脊索腫；頭蓋咽頭腫；未分化胚細胞腫；過誤腫；間葉細胞腫；中腎腫；筋肉腫；エナメル上皮腫；セメント質腫；歯牙腫；テラトーマ；胸腺腫；絨毛性腫瘍が挙げられる。さらに、下記の種類のがんも、処置の影響を受けやすいと考えられる：腺腫；胆管腫；コレステリン腫；円柱腫（cyclindroma）；嚢胞腺癌；嚢胞腺腫；顆粒膜細胞腫；半陰陽性卵巣腫瘍；ヘパトーマ；汗腺腫；膵島細胞腫瘍；ライディッヒ細胞腫；乳頭腫；セルトリ細胞腫；莢膜細胞腫；平滑筋腫（leimyoma）；平滑筋肉腫；筋芽細胞腫；筋腫；筋肉腫；横紋筋腫；横紋筋肉腫；上衣腫；神経節神経腫；神経膠腫；髄芽細胞腫；髄膜腫；神経鞘腫；神経芽細胞腫；神経上皮腫；神経線維腫；神経腫；傍神経節腫；非クロム親和性傍神経節腫。処置され得るがんの種類として、被角血管腫；好酸球増加症を伴う血管リンパ様過形成；硬化性血管腫；血管腫症；グロムス血管腫；血管内皮腫；血管腫；血管外皮細胞腫；血管肉腫；リンパ管腫；リンパ管筋腫；リンパ肉腫；松果体腫；癌肉腫；軟骨肉腫；葉状嚢胞性肉腫；線維肉腫；血管肉腫；平滑筋肉腫；白血肉腫；脂肪肉腫；リンパ肉腫；筋肉腫；粘液肉腫；卵巣癌；横紋筋肉腫；肉腫；新生物；神経線維腫症（nerofibromatosis）；および子宮頚部異形成も挙げられるが、ただしこれらに限定されない。
ＩＩ．医薬組成物
【００５１】
他の実施形態は、医薬組成物を対象とする。医薬組成物は、上記インヒビターのいずれかの任意の２つ（またはそれ超）、および薬学的に許容される担体を含む。例えば、一部の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体または賦形剤、ならびに下記の治療剤：
ｉ）サイクリン依存性キナーゼインヒビター、
ｉｉ）ブロモドメインインヒビター、
ｉｉｉ）ヒストンメチルトランスフェラーゼインヒビター、
ｉｖ）ヒストンデアセチラーゼインヒビター、および
ｖ）ヒストンデメチラーゼインヒビター
のうち少なくとも２つを含む。
【００５２】
治療薬は、本明細書に記載するまたは当技術分野において公知の治療剤のいずれかであり得る。一部の実施形態では、組成物は、サイクリン依存性キナーゼインヒビター、例えばアルボシジブまたはジナシクリブを含む。
【００５３】
他の具体的な実施形態では、医薬組成物は、サイクリン依存性キナーゼインヒビターおよびブロモドメインインヒビターを含む。例えば、これらの実施形態の一部では、サイクリン依存性キナーゼインヒビターは、アルボシジブである。上記実施形態の他では、ブロモドメインインヒビターは、ＪＱ１である。上記の他の異なる実施形態では、ブロモドメインインヒビターは、ＩＢＥＴ７６２である。上記のさらに他の実施形態では、ブロモドメインインヒビターは、ＯＴＸ０１５である。
【００５４】
したがって、一部の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体または賦形剤、アルボシジブおよびＪＱ１を含む。他の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体または賦形剤、アルボシジブおよびＩＢＥＴ７６２を含む。さらに他の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体または賦形剤、アルボシジブおよびＯＴＸ０１５を含む。
【００５５】
異なる実施形態では、医薬組成物は、サイクリン依存性キナーゼインヒビターおよびヒストンデアセチラーゼインヒビターを含む。これらの実施形態の一部では、サイクリン依存性キナーゼインヒビターは、アルボシジブである。上記実施形態の他では、ヒストンデアセチラーゼインヒビターは、パノビノスタットである。
【００５６】
異なる実施形態では、医薬組成物は、サイクリン依存性キナーゼインヒビターおよびヒストンメチルトランスフェラーゼインヒビターを含む。これらの実施形態の一部では、サイクリン依存性キナーゼインヒビターは、アルボシジブである。
【００５７】
異なる実施形態では、医薬組成物は、サイクリン依存性キナーゼインヒビターおよびヒストンデメチラーゼインヒビターを含む。これらの実施形態の一部では、サイクリン依存性キナーゼインヒビターは、アルボシジブである。
【００５８】
一部の実施形態では、医薬組成物は、経口投与用として製剤化される。他の実施形態では、医薬組成物は、注射用として製剤化される。
【００５９】
適する投与経路として、経口、静脈内、直腸、エアゾール、非経口、眼、肺、経粘膜、経皮、膣腔、耳腔、鼻腔、および局所的投与が挙げられるが、ただしこれらに限定されない。さらに、ほんの一例として、非経口送達として、筋肉内、皮下、静脈内、髄内の注射、ならびに髄腔内、直接脳室内、腹腔内、リンパ内、および鼻腔内の注射が挙げられる。
【００６０】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する化合物は、全身的よりはむしろ局部的に、例えば、化合物を臓器に直接注射することにより、しばしばデポ調製物または持続放出型製剤で投与される。具体的な実施形態では、長時間作用型製剤が、移植により（例えば、皮下または筋肉内）、または筋肉内注射により投与される。さらに、他の実施形態では、薬物は、標的化薬物送達系、例えば臓器特異的抗体でコーティングされたリポソーム中で送達される。そのような実施形態では、リポソームは、臓器を標的とし、臓器により選択的に取り込まれる。なおも他の実施形態では、本明細書に記載する化合物は、速放型製剤の形態、徐放型製剤の形態、または中間放出型製剤の形態で提供される。なおも他の実施形態では、本明細書に記載する化合物は、局所的に投与される。
【００６１】
本発明による化合物は、幅広い投薬量範囲にわたり有効である。例えば、成人ヒトの処置では、１日当たり０．０１〜１０００ｍｇ、０．５〜１００ｍｇ、１〜５０ｍｇ、および１日当たり５〜４０ｍｇの投薬量が、一部の実施形態で使用される投薬量の例である。例示的な投薬量は、１日当たり１０〜３０ｍｇである。正確な投薬量は、投与経路、化合物が投与される形態、処置される対象、処置される対象の体重、および担当の医師の好みや経験に依存する。
【００６２】
一部の実施形態では、本発明の化合物は、単回用量で投与される。代表的には、そのような投与は、薬剤を迅速に導入するために、注射、例えば静脈内注射による。しかし、他の経路も適宜使用される。本発明の化合物の単回用量は、急性の症状の処置でも使用可能である。
【００６３】
一部の実施形態では、本発明の化合物は、複数回用量で投与される。一部の実施形態では、投薬は、１日当たり約１回、２回、３回、４回、５回、６回、または６回超である。他の実施形態では、投薬は、１ヶ月に約１回、２週間毎に１回、週１回、または１日おきに１回である。別の実施形態では、本発明の化合物および別の薬剤は、１日約１回〜１日約６回、一緒に投与される。別の実施形態では、本発明の化合物および薬剤の投与は、約７日間未満継続する。なおも別の実施形態では、投与は、約６、１０、１４、２８日、２ヶ月、６ヶ月、または１年を超えて継続する。場合によっては、連続投薬が実施され、必要である限り維持される。
【００６４】
本発明の化合物の投与は、必要である限り継続し得る。一部の実施形態では、本発明の化合物は、１、２、３、４、５、６、７、１４、または２８日を超えて投与される。一部の実施形態では、本発明の化合物は、２８、１４、７、６、５、４、３、２、または１日未満投与される。一部の実施形態では、本発明の化合物は、例えば慢性的効果の処置を目的として継続的に、慢性的に投与される。
【００６５】
一部の実施形態では、本発明の化合物は、投薬量で投与される。化合物の薬物動態における対象間変動に起因して、投薬レジメンの個別化は、ある特定の実施形態において提供される。本発明の化合物の投与は、本開示に照らしルーチン実験法により見出され得、および／または当業者により導出可能である。
【００６６】
一部の実施形態では、本明細書に記載する化合物は、医薬組成物に製剤化される。具体的な実施形態では、医薬組成物は、賦形剤、および活性化合物を薬学的に使用可能である調製物に処理するのを促進する助剤を含む、１つまたは複数の生理学的に許容される担体を使用して従来方式で製剤化される。適切な製剤は、選択した投与経路に依存する。任意の薬学的に許容される技法、担体、および賦形剤が、本明細書に記載する医薬組成物を製剤化するのに適するものとして使用される：Remington:  The  Science  and  Practice  of  Pharmacy、第１９版（Easton,  Pa.:  Mack  Publishing  Company、１９９５年）；Hoover,  John  E.、Remington's  Pharmaceutical  Sciences、Mack  Publishing  Co.、Easton、Pennsylvania、１９７５年；Liberman,  H.  A.およびLachman,  L.編、Pharmaceutical  Dosage  Forms、Marcel  Decker、New  York、N.Y.、１９８０年；ならびにPharmaceutical  Dosage  Forms  and  Drug  Delivery  Systems、第７版（Lippincott  Williams  &  Wilkins、１９９９年）。
【００６７】
ｉ）サイクリン依存性キナーゼ（Ｃｄｋ）；ｉｉ）ブロモドメインタンパク質のブロモドメインおよびエキストラターミナル（ＢＥＴ）サブファミリー；ｉｉｉ）ＤＯＴ１様ヒストンメチルトランスフェラーゼ（Ｄｏｔ１Ｌ）；ｉｖ）クラスＩ、ＩＩ、およびＩＶヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）；ならびにｖ）リシン特異的デメチラーゼ１Ａ（Ｌｓｄ１）から選択される、少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビター、ならびに薬学的に許容される希釈剤（複数可）、賦形剤（複数可）、または担体（複数可）を含む医薬組成物が本明細書で提供される。下記の併用療法セクションにおいて、および本開示全体を通じて記載する活性成分のすべての組合せが本明細書に包含される。
【００６８】
医薬組成物とは、本明細書で使用する場合、少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターと、他の化学構成要素、例えば担体、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、および／または賦形剤との混合物を指す。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、生物への化合物の投与を促進する。一部の実施形態では、本明細書で提供する処置法または使用法を実践する際には、本明細書で提供する少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とする２つまたはそれ超のインヒビターが医薬組成物として、処置されるべき疾患、障害、または医学的症状を有する哺乳動物に、治療有効量で投与される。具体的な実施形態では、哺乳動物はヒトである。ある特定の実施形態では、治療有効量は、疾患の重症度、対象の年齢および相対的な健康、使用される化合物の効力、ならびに他の因子に応じて変化する。本明細書に記載する化合物は、単独で、または混合物の構成要素として１つもしくは複数の治療剤と組み合わせて使用される。
【００６９】
一実施形態では、少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターは、水溶液中で製剤化される。具体的な実施形態では、水溶液は、ほんの一例として、生理学的に適合する緩衝剤、例えばハンクス溶液、リンガー溶液、または生理食塩緩衝液から選択される。他の実施形態では、少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターは、経粘膜投与用として製剤化される。具体的な実施形態では、経粘膜製剤は、バリヤーを貫通するのに適する透過性物質を含む。本明細書に記載する化合物が、他の非経口注射用として製剤化されるさらに他の実施形態では、適する製剤として、水性溶液または非水性溶液が挙げられる。具体的な実施形態では、そのような溶液は、生理学的に適合する緩衝剤および／または賦形剤を含む。
【００７０】
別の実施形態では、本明細書に記載する化合物は、経口投与用として製剤化される。本明細書に記載する化合物は、活性化合物を、例えば薬学的に許容される担体または賦形剤と組み合わせることにより製剤化される。様々な実施形態では、本明細書に記載する化合物は、経口用の剤形として製剤化され、ほんの一例として、錠剤、散剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、エリキシル剤、スラリー剤、懸濁剤等を含む。
【００７１】
ある特定の実施形態では、経口使用のための医薬調製物は、１つまたは複数の固体賦形剤を本明細書に記載する化合物のうちの１つまたは複数と混合し、任意選択で、得られた混合物を粉砕し、そして所望の場合には、錠剤または糖衣錠コアが得られるように、適する助剤を添加した後に顆粒の混合物を処理することにより得られる。適する賦形剤は、特に、充填剤、例えばラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖；セルロース調製物、例えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガントガム、メチルセルロース、微結晶セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム；またはその他、例えばポリビニルピロリドン（ＰＶＰもしくはポビドン）もしくはリン酸カルシウムである。具体的な実施形態では、崩壊剤が任意選択で添加される。崩壊剤として、ほんの一例として、架橋型クロスカルメロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムが挙げられる。
【００７２】
一実施形態では、剤形、例えば糖衣錠コアおよび錠剤に、１つまたは複数の適するコーティングが施される。具体的な実施形態では、濃縮糖溶液が、剤形をコーティングするのに使用される。糖溶液は、追加の構成要素、例えばほんの一例として、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、ならびに／または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適する有機溶媒もしくは溶媒混合物を任意選択で含有する。染料および／または顔料も、識別目的でコーティングに任意選択で添加される。さらに、染料および／または顔料は、活性化合物用量の異なる組合せを特徴付けるのに任意選択で利用される。
【００７３】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターの治療有効量は、他の経口用の剤形に製剤化される。経口用の剤形には、ゼラチンからなるプッシュフィットカプセル剤の他に、ゼラチンおよび可塑剤、例えばグリセロールまたはソルビトールからなるソフトシールドカプセル剤が含まれる。具体的な実施形態では、プッシュフィットカプセル剤は、１つまたは複数の充填剤と混合された有効成分を含有する。充填剤には、ほんの一例として、ラクトース、デンプン等の結合剤、および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、および任意選択で安定剤が含まれる。他の実施形態では、ソフトカプセル剤は、適する液体に溶解または懸濁した１つまたは複数の活性化合物を含有する。適する液体として、ほんの一例として、１つもしくは複数の脂肪油、液体パラフィン、または液体ポリエチレングリコールが挙げられる。さらに、安定剤が任意選択で添加される。
【００７４】
他の実施形態では、本明細書に記載する少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターの治療有効量は、バッカルまたは舌下投与用として製剤化される。バッカルまたは舌下投与に適する製剤として、ほんの一例として、錠剤、ロゼンジ剤、またはゲル剤が挙げられる。さらに他の実施形態では、本明細書に記載する化合物は、ボーラス注射または持続注入に適する製剤を含む非経口注射用として製剤化される。具体的な実施形態では、注射用の製剤は、単位剤形（例えば、アンプル）で、または多回用量容器内に提示される。保存剤が、注射製剤に、任意選択で添加される。さらに他の実施形態では、医薬組成物は、無菌の懸濁液、溶液、または油性もしくは水性ビヒクル中の乳濁液として、非経口注射に適する形態で製剤化される。非経口注射製剤は、懸濁化剤、安定化剤、および／または分散剤等の調合剤を任意選択で含有する。具体的な実施形態では、非経口投与用の医薬製剤として、水溶性形態の活性化合物の水溶液剤が挙げられる。さらなる実施形態では、活性化合物（例えば、構造（Ｉ）の化合物）の懸濁剤は、適切な油性注射懸濁剤として調製される。本明細書に記載する医薬組成物で使用するのに適した親油性溶媒またはビヒクルとして、ほんの一例として、ゴマ油等の脂肪油、またはエチルオレエート等の合成脂肪酸エステル、またはトリグリセリド、またはリポソームが挙げられる。ある特定の具体的な実施形態では、水性注射懸濁剤は、懸濁物の粘度を高める物質、例えばカルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランを含む。任意選択で、懸濁剤は、適する安定剤、または化合物の溶解性を高めて、高度に濃縮した溶液の調製を可能にする作用剤を含む。あるいは、他の実施形態では、適するビヒクル、例えば滅菌発熱性物質除去蒸留水を用いて使用前に構成するために、有効成分は粉末形態である。
【００７５】
さらに他の実施形態では、少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターは、局所的に投与される。本明細書に記載する化合物は、局所的に投与可能な様々な組成物、例えば溶液剤、懸濁剤、ローション剤、ゲル剤、ペースト剤、薬用スティック剤、バーム剤、クリーム剤、または軟膏剤に製剤化される。そのような医薬組成物は、溶解剤、安定剤、等張性増強剤、緩衝剤、および保存剤を任意選択で含有する。
【００７６】
さらに他の実施形態では、少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターは、経皮投与用として製剤化される。具体的な実施形態では、経皮製剤は、経皮送達デバイスおよび経皮送達パッチを用い、ポリマーまたは接着剤に溶解および／または分散した親油性乳剤または緩衝化された水溶液剤であり得る。様々な実施形態では、そのようなパッチは、医薬品を連続的、脈動的に、またはオンデマンドで送達するように構築される。さらなる実施形態では、少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターの経皮送達は、イオントフォレーシス式パッチ等によって実現する。ある特定の実施形態では、経皮パッチは、少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターの制御式送達をもたらす。具体的な実施形態では、吸収速度は、速度制御メンブレンを使用することにより、または化合物をポリマーマトリックスもしくはゲル内でトラップすることにより低速化する。代替的実施形態では、吸収エンハンサーが、吸収を高めるのに使用される。吸収エンハンサーまたは担体は、皮膚の通過を補助する吸収可能な薬学的に許容される溶媒を含む。例えば、一実施形態では、経皮デバイスは、裏打ちメンバー、任意選択で担体と共に化合物を含有するリザーバー、任意選択で制御および事前に決定された速度で長期間にわたり、化合物を宿主の皮膚に送達する速度制御バリヤー、ならびにデバイスを皮膚に固定する手段を備える包帯の形態である。
【００７７】
他の実施形態では、少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターは、吸入式投与用として製剤化される。吸入式投与に適する様々な形態として、エアゾール、ミスト、または粉末が挙げられるが、これらに限定されるものではない。少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターの医薬組成物は、エアゾールスプレー形式の形態で、適する噴霧剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適する気体）を使用しながら、加圧パックまたはネブライザーから好都合に送達される。具体的な実施形態では、加圧式エアゾールの投薬量単位は、計量された量を送達するバルブを設けることにより決定される。ある特定の実施形態では、ほんの一例として、吸入器または注入器で使用されるゼラチン等からなるカプセルおよびカートリッジが、化合物およびラクトースまたはデンプン等の適する粉末基剤の粉末ミックスを含有して製剤化される。
【００７８】
さらに他の実施形態では、少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターは、直腸用組成物、例えば従来型の坐剤基剤、例えばカカオバターまたは他のグリセリド、ならびに例えばポリビニルピロリドン、ＰＥＧ等の合成ポリマーを含有する浣腸剤、直腸用ゲル剤、直腸用フォーム剤、直腸用エアゾール剤、坐剤、ゼリー坐剤、または停留浣腸剤として製剤化される。坐剤形態の組成物では、任意選択でカカオバターと組み合わせた脂肪酸グリセリドの混合物等の、ただしこれに限定されない低融点ワックスが最初に融解する。
【００７９】
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、１つまたは複数の生理学的に許容される担体を使用して、任意の従来の様式で製剤化されるが、担体は、活性化合物を薬学的に使用可能な調製物に処理するのを促進する賦形剤および助剤を含む。適切な製剤は、選択した投与経路に依存する。任意の薬学的に許容される技法、担体、および賦形剤が、任意選択で好適に使用される。少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターを含む医薬組成物は、例えばほんの一例として、従来式の混合、溶解、顆粒化、糖衣化、湿式粉砕、乳化、カプセル化、捕捉または圧縮プロセスによって従来の様式で製造される。
【００８０】
医薬組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤、および有効成分として本明細書に記載する少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターを含む。有効成分は、遊離酸もしくは遊離塩基の形態、または薬学的に許容される塩の形態である。さらに、本明細書に記載する方法および医薬組成物は、Ｎ−酸化物、結晶形態（多形体としても公知）、ならびに同じタイプの活性を有するこれらの化合物の活性な代謝物の使用を含む。本明細書に記載する化合物のすべての互変異性体が、本明細書に提示する化合物の範囲に含まれる。さらに、本明細書に記載する化合物には、薬学的に許容される溶媒、例えば水、エタノール等と共に、非溶媒和ならびに溶媒和の形態が包含される。本明細書に提示する少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターの溶媒和の形態も、本明細書に開示されていると考えられる。さらに、医薬組成物は、他の薬用もしくは医薬品；担体；アジュバント、例えば保存剤、安定化剤、湿潤剤、もしくは乳化剤；溶解促進剤；浸透圧調節用の塩；緩衝剤；および／または他の治療上価値のある物質を任意選択で含む。
【００８１】
本明細書に記載する少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターを含む組成物の調製方法は、固体、半固体、または液体を形成するための１つまたは複数の不活性な薬学的に許容される賦形剤または担体と共に、化合物を製剤化するステップを含む。固体組成物として、散剤、錠剤、分散性顆粒剤、カプセル剤、カシェ剤、および坐剤が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。液体組成物として、化合物が溶解している溶液剤、化合物を含む乳剤、または本明細書に開示する化合物を含むリポソーム、ミセル、もしくはナノ粒子を含有する溶液剤が挙げられる。半固体組成物として、ゲル剤、懸濁剤、およびクリーム剤が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。本明細書に記載する医薬組成物の形態として、液体溶液、または懸濁液、使用前に液体中で溶解もしくは懸濁するのに適する固体形態、または乳濁液が挙げられる。これらの組成物は、微量の非毒性の補助物質、例えば湿潤剤、または乳化剤、ｐＨ緩衝剤等も任意選択で含有する。
【００８２】
一部の実施形態では、少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターを含む医薬組成物は、薬剤が溶液、懸濁液、またはその両方で存在する液体の形態を例としてとる。代表的には、組成物が溶液または懸濁液として投与されるとき、液体マトリックス中の懸濁液において、薬剤の第１の部分は溶液に存在し、薬剤の第２の部分は、粒子状で存在する。一部の実施形態では、液体組成物としてゲル製剤が挙げられる。他の実施形態では、液体組成物は水性である。
【００８３】
ある特定の実施形態では、有用な水性懸濁液は、１つまたは複数のポリマーを懸濁化剤として含有する。有用なポリマーとして、セルロースポリマー等の水溶性ポリマー、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース、および架橋型カルボキシル含有ポリマー等の水不溶性ポリマーが挙げられる。本明細書に記載するある特定の医薬組成物は、例えばカルボキシメチルセルロース、カルボマー（アクリル酸ポリマー）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリアクリルアミド、ポリカルボフィル、アクリル酸／ブチルアクリレートコポリマー、アルギン酸ナトリウム、およびデキストランから選択される粘膜付着性ポリマーを含む。
【００８４】
有用な医薬組成物は、少なくとも２つのスーパーエンハンサー構成要素を標的とするインヒビターの溶解性に役立つ可溶化剤も任意選択で含む。用語「可溶化剤」には、薬剤のミセル溶液または真正溶液の形成を引き起こす薬剤が一般的に含まれる。ある特定の許容される非イオン性界面活性剤、眼科的に許容されるグリコール、ポリグリコール、例えばポリエチレングリコール４００、およびグリコールエーテルのように、例えばポリソルベート８０が可溶化剤として有用である。
【００８５】
さらに、有用な医薬組成物は、１つまたは複数のｐＨ調整剤または緩衝剤を任意選択で含み、酸、例えば酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸、および塩酸；塩基、例えば水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、およびトリス−ヒドロキシメチルアミノメタン；ならびに緩衝剤、例えばクエン酸塩／デキストロース、重炭酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムが挙げられる。そのような酸、塩基、および緩衝剤は、組成物のｐＨを許容範囲内に維持するのに必要とされる量で含まれる。
【００８６】
さらに、有用な組成物は、１つまたは複数の塩も、組成物の重量モル浸透圧濃度を許容範囲に収めるのに必要とされる量で、任意選択で含む。そのような塩は、ナトリウム、カリウム、またはアンモニウムのカチオン、および塩化物、クエン酸、アスコルビン酸、ホウ酸、リン酸、重炭酸、硫酸、チオ硫酸、または亜硫酸水素のアニオンを有する塩を含む；適する塩として、塩化ナトリウム、塩化カリウム、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、および硫酸アンモニウムが挙げられる。
【００８７】
他の有用な医薬組成物は、微生物の活性を阻害する１つまたは複数の保存剤を任意選択で含む。適する保存剤として、水銀含有物質、例えばメルフェン（merfen）およびチオメルサール；安定化二酸化塩素；ならびに四級アンモニウム化合物、例えば塩化ベンザルコニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、および塩化セチルピリジニウムが挙げられる。
【００８８】
さらに他の有用な組成物は、物理的安定性を増強するために、または他の目的で、１つまたは複数の界面活性剤を含む。適する非イオン性界面活性剤として、ポリオキシエチレン脂肪酸グリセリドおよび植物油、例えばポリオキシエチレン（６０）水素化ヒマシ油；ならびにポリオキシエチレンアルキルエーテル、およびアルキルフェニルエーテル、例えばオクトキシノール１０、オクトキシノール４０が挙げられる。
【００８９】
さらに他の有用な組成物は、必要な場合に化学安定性を増強するために、１つまたは複数の抗酸化剤を含む。適する抗酸化剤として、ほんの一例として、アスコルビン酸およびメタ重亜硫酸ナトリウムが挙げられる。
【００９０】
ある特定の実施形態では、水性懸濁組成物が、単回用量再閉鎖不可能容器に包装される。あるいは、複数回用量再閉鎖可能容器が使用されるが、この場合、組成物中に保存剤が代表的には含まれる。
【００９１】
代替的実施形態では、疎水性医薬品化合物用の他の送達系が用いられる。リポソームおよび乳濁液が、本明細書で有用な送達ビヒクルまたは担体の例である。ある特定の実施形態では、有機溶媒、例えばＮ−メチルピロリドンも用いられる。さらなる実施形態では、本明細書に記載する化合物は、治療剤を含有する固体の疎水性ポリマーの半透過性マトリックス等の持続放出系を使用して送達される。様々な持続放出材料が本明細書で有用である。一部の実施形態では、持続放出カプセルは、数週間から最大１００日間にわたり化合物を放出する。治療試薬の化学的性質および生物学的安定性に応じて、タンパク質を安定化させる追加の方策が採用される。
【００９２】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する製剤は、１つもしくは複数の抗酸化剤、金属キレート剤、チオール含有化合物、および／または他の一般的安定化剤を含む。そのような安定化剤の例として、（ａ）約０．５％〜約２％ｗ／ｖのグリセロール、（ｂ）約０．１％〜約１％ｗ／ｖのメチオニン、（ｃ）約０．１％〜約２％ｗ／ｖのモノチオグリセロール、（ｄ）約１ｍＭ〜約１０ｍＭのＥＤＴＡ、（ｅ）約０．０１％〜約２％ｗ／ｖのアスコルビン酸、（ｆ）０．００３％〜約０．０２％ｗ／ｖのポリソルベート８０、（ｇ）０．００１％〜約０．０５％ｗ／ｖのポリソルベート２０、（ｈ）アルギニン、（ｉ）ヘパリン、（ｊ）デキストラン硫酸、（ｋ）シクロデキストリン、（ｌ）ポリ硫酸ペントサンおよびその他のヘパリン類似物質、（ｍ）二価のカチオン、例えばマグネシウムおよび亜鉛；または（ｎ）それらの組合せが挙げられるが、ただしこれらに限定されない。
【００９３】
一部の実施形態では、本発明の医薬組成物に提供される１つまたは複数のインヒビターの濃度は、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％、または０．０００１％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖ未満である。
【００９４】
一部の実施形態では、本発明の１つまたは複数のインヒビターの濃度は、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９．７５％、１９．５０％、１９．２５％、１９％、１８．７５％、１８．５０％、１８．２５％、１８％、１７．７５％、１７．５０％、１７．２５％、１７％、１６．７５％、１６．５０％、１６．２５％、１６％、１５．７５％、１５．５０％、１５．２５％、１５％、１４．７５％、１４．５０％、１４．２５％、１４％、１３．７５％、１３．５０％、１３．２５％、１３％、１２．７５％、１２．５０％、１２．２５％、１２％、１１．７５％、１１．５０％、１１．２５％、１１％、１０．７５％、１０．５０％、１０．２５％、１０％、９．７５％、９．５０％、９．２５％、９％、８．７５％、８．５０％、８．２５％、８％、７．７５％、７．５０％、７．２５％、７％、６．７５％、６．５０％、６．２５％、６％、５．７５％、５．５０％、５．２５％、５％、４．７５％、４．５０％、４．２５％、４％、３．７５％、３．５０％、３．２５％、３％、２．７５％、２．５０％、２．２５％、２％、１．７５％、１．５０％、１２５％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％、または０．０００１％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖ超である。
【００９５】
一部の実施形態では、本発明の１つまたは複数のインヒビターの濃度は、約０．０００１％〜約５０％、約０．００１％〜約４０％、約０．０１％〜約３０％、約０．０２％〜約２９％、約０．０３％〜約２８％、約０．０４％〜約２７％、約０．０５％〜約２６％、約０．０６％〜約２５％、約０．０７％〜約２４％、約０．０８％〜約２３％、約０．０９％〜約２２％、約０．１％〜約２１％、約０．２％〜約２０％、約０．３％〜約１９％、約０．４％〜約１８％、約０．５％〜約１７％、約０．６％〜約１６％、約０．７％〜約１５％、約０．８％〜約１４％、約０．９％〜約１２％、約１％〜約１０％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖの範囲内にある。
【００９６】
一部の実施形態では、本発明の１つまたは複数のインヒビターの濃度は、約０．００１％〜約１０％、約０．０１％〜約５％、約０．０２％〜約４．５％、約０．０３％〜約４％、約０．０４％〜約３．５％、約０．０５％〜約３％、約０．０６％〜約２．５％、約０．０７％〜約２％、約０．０８％〜約１．５％、約０．０９％〜約１％、約０．１％〜約０．９％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖの範囲内にある。
【００９７】
一部の実施形態では、本発明の１つまたは複数のインヒビターの量は、１０ｇ、９．５ｇ、９．０ｇ、８．５ｇ、８．０ｇ、７．５ｇ、７．０ｇ、６．５ｇ、６．０ｇ、５．５ｇ、５．０ｇ、４．５ｇ、４．０ｇ、３．５ｇ、３．０ｇ、２．５ｇ、２．０ｇ、１．５ｇ、１．０ｇ、０．９５ｇ、０．９ｇ、０．８５ｇ、０．８ｇ、０．７５ｇ、０．７ｇ、０．６５ｇ、０．６ｇ、０．５５ｇ、０．５ｇ、０．４５ｇ、０．４ｇ、０．３５ｇ、０．３ｇ、０．２５ｇ、０．２ｇ、０．１５ｇ、０．１ｇ、０．０９ｇ、０．０８ｇ、０．０７ｇ、０．０６ｇ、０．０５ｇ、０．０４ｇ、０．０３ｇ、０．０２ｇ、０．０１ｇ、０．００９ｇ、０．００８ｇ、０．００７ｇ、０．００６ｇ、０．００５ｇ、０．００４ｇ、０．００３ｇ、０．００２ｇ、０．００１ｇ、０．０００９ｇ、０．０００８ｇ、０．０００７ｇ、０．０００６ｇ、０．０００５ｇ、０．０００４ｇ、０．０００３ｇ、０．０００２ｇ、または０．０００１ｇに等しい、またはそれ未満である。
【００９８】
一部の実施形態では、本発明の１つまたは複数のインヒビターの量は、０．０００１ｇ、０．０００２ｇ、０．０００３ｇ、０．０００４ｇ、０．０００５ｇ、０．０００６ｇ、０．０００７ｇ、０．０００８ｇ、０．０００９ｇ、０．００１ｇ、０．００１５ｇ、０．００２ｇ、０．００２５ｇ、０．００３ｇ、０．００３５ｇ、０．００４ｇ、０．００４５ｇ、０．００５ｇ、０．００５５ｇ、０．００６ｇ、０．００６５ｇ、０．００７ｇ、０．００７５ｇ、０．００８ｇ、０．００８５ｇ、０．００９ｇ、０．００９５ｇ、０．０１ｇ、０．０１５ｇ、０．０２ｇ、０．０２５ｇ、０．０３ｇ、０．０３５ｇ、０．０４ｇ、０．０４５ｇ、０．０５ｇ、０．０５５ｇ、０．０６ｇ、０．０６５ｇ、０．０７ｇ、０．０７５ｇ、０．０８ｇ、０．０８５ｇ、０．０９ｇ、０．０９５ｇ、０．１ｇ、０．１５ｇ、０．２ｇ、０．２５ｇ、０．３ｇ、０．３５ｇ、０．４ｇ、０．４５ｇ、０．５ｇ、０．５５ｇ、０．６ｇ、０．６５ｇ、０．７ｇ、０．７５ｇ、０．８ｇ、０．８５ｇ、０．９ｇ、０．９５ｇ、１ｇ、１．５ｇ、２ｇ、２．５、３ｇ、３．５、４ｇ、４．５ｇ、５ｇ、５．５ｇ、６ｇ、６．５ｇ、７ｇ、７．５ｇ、８ｇ、８．５ｇ、９ｇ、９．５ｇ、または１０ｇ超である。
【００９９】
一部の実施形態では、本発明の１つまたは複数のインヒビターの量は、０．０００１〜１０ｇ、０．０００５〜９ｇ、０．００１〜８ｇ、０．００５〜７ｇ、０．０１〜６ｇ、０．０５〜５ｇ、０．１〜４ｇ、０．５〜４ｇ、または１〜３ｇの範囲内にある。
【実施例】
【０１００】
（実施例１）
腫瘍容積に対する併用治療の効果
【０１０１】
ＡＭＬ細胞系統であるＭＶ４−１１は、ＭＬＬ融合およびＦＬＴ３−ＩＴＤ陽性である。ＭＬＬ融合により、この細胞系統は、発がん性を推進するためのスーパーエンハンサー機能に対して特に依存的にする。ＭＶ４−１１細胞を、胸腺欠損Ｎｕ／Ｎｕマウスに皮下移植し、腫瘍が１００〜２００ｍｍ３に到達するまで定着させた。薬物（複数可）の腫瘍容積に対する効果を決定するために、ＢＥＴタンパク質インヒビターであるＪＱ−１、およびＣｄｋインヒビターであるアルボシジブを単独で、および組み合わせて使用した。動物を４群に階層化し、４つの処置：ビヒクル、ＪＱ−１を２５ｍｇ／ｋｇ、アルボシジブを２．５ｍｇ／ｋｇ、またはこれら用量による両薬物の組合せのうちの１つを投与した。薬物を、１日１回、５日間、のべ３週間、腹腔内に投与した。腫瘍容積を、毎週２回、カリパス測定により測定した。結果を図２に示す。２５ｍｇ／ｋｇのＪＱ−１は、ビヒクル対照をほぼ踏襲して測定可能な活性を示さなかった。２．５ｍｇ／ｋｇのアルボシジブは、試験全体を通じて中等度の活性を示し、腫瘍は、ビヒクルのサイズの約５０％であった。驚くべきことに、これらの用量レベルでのこれら２つの薬剤の組合せは、これらマウス内の腫瘍増殖を、８日目までに完全に停止した。併用群では、試験終了時にマウス（ｎ＝８）のいずれからも、腫瘍は検出されなかった。すべての動物の体重は、試験全体を通じて同等であった。ビヒクルおよび個々の薬物処置マウスの重量増加は、腫瘍増殖に起因し得る。併用治療を受けたマウスにおける重量増加は、マウスの全身的な健康および食物摂取に起因し得る。
【０１０２】
これらの結果は、アルボシジブとＪＱ−１の間の相乗作用、および２つまたはそれ超の点でスーパーエンハンサー複合体を標的とする概念に対しても強固なエビデンスとなる。
（実施例２）
ｃ−ＭＹＣ発現に対する併用治療の効果
【０１０３】
ｃ−ＭＹＣ遺伝子は、ＡＭＬ細胞においてスーパーエンハンサー複合体により調節されていることが周知である。薬物（複数可）のｃ−ＭＹＣ発現に対する効果を決定するために、ＢＥＴタンパク質インヒビターであるＪＱ−１、およびＣｄｋインヒビターであるアルボシジブを、単独で、および組み合わせて使用した。ＭＶ４−１１細胞を、様々な濃度のアルボシジブおよび／またはＪＱ−１で２時間処置した。ＤＭＳＯ処置対照も含まれた。細胞を溶解し、ＲＴ−ｑＰＣＲ分析用にＲＮＡを単離することにより治療を中止した。ｃ−ＭＹＣの発現を決定し、ハウスキーピング遺伝子、ＨＰＲＴ１、およびＤＭＳＯ処置対照に対して標準化した。結果を図３に示す。アルボシジブおよびＪＱ−１は、単独で使用したとき、ｃ−ＭＹＣの発現を下方調節したが、しかしながら、ｃ−ＭＹＣの下方調節は、２つ薬剤を組み合わせて使用したときの方がはるかに顕著であった。やはり、これらのデータは、これら２つ薬剤間の強い相乗作用を実証し、また多重機構を通じてスーパーエンハンサー複合体を標的とするアプローチに対する十分な根拠を提供する。
（実施例３）
ＩＣ５０に対する併用治療の効果
【０１０４】
ＭＯＬＭ１３およびＭＶ４−１１は、ＭＬＬ融合およびＦＬＴ３−ＩＴＤ陽性の、ＡＭＬ細胞系統である。両細胞系統を、２０ｎＭのＣｄｋインヒビターであるアルボシジブで４８時間、またはＤＭＳＯ対照で、その後に様々な濃度（１０μＭ〜０．０００３μＭ）のＢＥＴタンパク質のインヒビターであるＪＱ−１を添加、または様々な濃度（１０μＭ〜０．０００３μＭ）のＨＤＡＣのインヒビターであるパノビノスタットを添加して、さらに４８時間処置した。終了時に、細胞生存率をＣｅｌｌｔｉｔｅｒＧＬＯ試薬により測定した。ＪＱ−１およびパノビノスタットについて、低用量のアルボシジブを用いて、および用いないでＩＣ５０値を決定した。結果を下記の表１に示す。２０ｎＭのアルボシジブを添加すると、ＩＣ５０値が１／２に低下したことから明らかなように、ＪＱ−１の効力が高まった。２０ｎＭのアルボシジブを添加すると、ＩＣ５０値が１／３〜１／６に低下したことから実証されるように、パノビノスタット（ＨＤＡＣインヒビター）の効力が高まった。これらのデータは、ＣｄｋインヒビターとＢＥＴタンパク質インヒビターとを、およびＣｄｋインヒビターとＨＤＡＣインヒビターとを組み合わせると、個々のインヒビターと比較して、活性が高まることを実証する。
【表１】
0006689841.tif 000002
【０１０５】
（実施例４）
アルボシジブによるＭＹＣおよびＭＣＬ−１発現の阻害
アルボシジブのＭＹＣおよびＭＣＬ−１阻害活性を決定するために、ＭＶ４−１１細胞をアルボシジブで２時間処置し、ＨＰＲＴと比較してＭＹＣおよびＭＣＬ−１の発現を決定した。データは、アルボシジブは、単一の薬剤としてＭＶ４−１１細胞におけるＭＹＣ発現を完全に排除し（図５Ａ）、ＭＣＬ−１発現を６０％低下させる（図５Ｂ）ことを示す。
（実施例５）
ＢＲＤ４インヒビターと組み合わせたアルボシジブは、ＭＶ４−１１細胞におけるアポトーシスを増加させる
【０１０６】
ＭＶ４−１１細胞を、１ウェル当たり細胞１，０００個で、３８４ウェルプレートに播種した。ＢＲＤ４インヒビター（ＩＢＥＴ７６２、ＯＴＸ０１５、またはＪＱ１）を、細胞に単回用量で２４時間添加した。アルボシジブを、２４時間目に用量希釈で添加した。ＣｅｌｌｔｉｔｅｒＧＬＯおよびカスパーゼＧＬＯを添加し、４８時間目に発光を測定した。連続希釈によるアルボシジブと組み合わせたＢＲＤ４インヒビターの単回用量により、カスパーゼ活性の相乗的増加が実証され、それは、ＢＲＤ４インヒビターと組み合わせたアルボシジブにより、アルボシジブまたは個々のＢＲＤ４インヒビター単独と比較して、ＭＶ４−１１がん細胞におけるアポトーシスが相乗的に増加することを示す（図６）。
（実施例６）
ＢＲＤ４インヒビターと組み合わせたアルボシジブにより、ＭＶ４−１１細胞におけるＭＹＣおよびＭＣＬ−１発現が、個々の処置よりも良好に低下する
【０１０７】
ＭＶ４−１１細胞を６ウェルプレートに播種し（細胞百万個）、アルボシジブもしくはＢＲＤ４インヒビター（ＩＢＥＴ７６２、ＯＴＸ０１５、またはＪＱ１）単独で処置、またはアルボシジブおよびＢＤＲ４インヒビター（ＩＢＥＴ７６２、ＯＴＸ０１５、またはＪＱ１）の組合せで処置した。処置後、細胞をＲＴ−ＰＣＲにより分析した。アルボシジブおよびＢＲＤ４インヒビターの組合せにより、個々の処置よりも良好にＭＹＣ発現が低下した（図７Ａ〜Ｃ）。アルボシジブおよびＢＲＤ４インヒビターの組合せにより、やはり個々の処置よりも良好にＭＣＬ−１発現が低下した（図１６Ａ〜Ｃ）。
【０１０８】
関連実験では、ＭＶ４−１１細胞をＴ７５フラスコに播種し（細胞３百万個）、３時間、アルボシジブもしくはＢＲＤ４インヒビター（ＩＢＥＴ７６２、ＯＴＸ０１５、またはＪＱ１）単独で処置、またはアルボシジブおよびＢＤＲ４インヒビター（ＩＢＥＴ７６２、ＯＴＸ０１５、またはＪＱ１）の組合せで処置した。細胞を、ウェスタンブロッティングにより分析し、すべての処置された試料についてＭＹＣ発現の減少が認められた（図８Ａ〜Ｃ）。ウェスタンブロットの定量により、アルボシジブ（０．１ｍＭ）およびＢＲＤ４インヒビター（０．１ｍＭ）の組合せが、個々の処置よりも良好にＭＹＣ発現を低下させることが示される（図９Ａ〜Ｃ）。
（実施例７）
アルボシジブは、時間および用量に依存してＣＤＫ９とＨｅｘｉｍ１タンパク質との会合を増加させる
【０１０９】
ＭＶ４−１１細胞を播種し、同一の濃度および用量のアルボシジブで処置した。細胞を所定の時間に収集し、高塩濃度の溶解緩衝液に、そして免疫沈降法、その後にウェスタンブロッティングに供した。データは、１ｍＭのアルボシジブが、時間に依存してＣＤＫ９とＨｅｘｉｍ１との会合を増加させることを示す。代表的なウェスタンブロットを図１０Ａに提示し、ウェスタンブロットの定量を図１０Ｂに示す。図１１Ａおよび１１Ｂは、上記の一般手順に従って実施した用量漸増試験の結果を提示する。データは、アルボシジブの用量が異なれば、ＣＤＫ９とＨｅｘｉｍ１との会合が、０．５時間の時点で変化することを示す。５００ｎＭの用量のアルボシジブでは、ＣＤＫ９／Ｈｅｘｉｍ１会合が増加することが実証された。代表的なウェスタンブロットを、図１１Ｂのウェスタンブロットの定量と共に、図１１Ａに提示する。
【０１１０】
類似実験が示すところによれば、異なる用量のアルボシジブを用いて２時間処置すると、用量に依存してＣＤＫ９／Ｈｅｘｉｍ１会合が増加することが実証される。代表的なウェスタンブロットを、図１２Ｂのウェスタンブロットの定量と共に、図１２Ａに提示する。
（実施例８）
アルボシジブは、スーパーエンハンサー複合体調節型遺伝子を、時間および用量に依存して抑制する
【０１１１】
Ａ５４９細胞は、ＩＩ型肺上皮モデル（固形腫瘍）として使用される腺癌性のヒト肺胞基底上皮細胞である。この細胞を播種し、同一の濃度および用量のアルボシジブで処置した。細胞を溶解し、ＲＴ−ｑＰＣＲ分析用にＲＮＡを単離することにより処置を中止した。データは、アルボシジブが、固形腫瘍細胞内のスーパーエンハンサー複合体で調節される遺伝子を、時間に依存して抑制することを示す。代表的なウェスタンブロットを図１３Ａに提示する。ｍＲＮＡの発現を決定し、β−アクチンおよび対照に対して標準化した。アルボシジブは、２４時間および４８時間の時点でｍＲＮＡの発現を完全に下方調節した。
【０１１２】
図１３Ｂは、アルボシジブによる処置後、２時間経過して細胞溶解が起こる本実施例に提示する手順に従って実施した用量漸増試験の結果を提示する。Ａ５４９細胞において、ｍＲＮＡの発現と後退が、用量に依存してアルボシジブに応答することを示すのに、投薬範囲（０．０５μＭ〜８μＭ）を使用した。データは、アルボシジブの用量が異なれば、２時間の時点においてｍＲＮＡ発現が変化し、０．１μＭの用量のアルボシジブでは顕著に抑制されたことを示す。１μＭから最大８μＭの用量でのアッセイにおいて、β−アクチンおよびビヒクル対照と比較して完全な抑制が認められた。
（実施例９）
アルボシジブは、固形腫瘍および神経芽細胞腫細胞におけるタンパク質の発現を、時間に依存して抑制する
【０１１３】
Ａ５４９細胞およびＳＫ−Ｎ−ＡＳ細胞（ヒト副腎神経芽細胞腫細胞系統）を播種し、１００ｎＭおよび３００ｎＭの濃度のアルボシジブでそれぞれ処置した。所定の時間において細胞を収集し、総タンパク質を抽出し、そしてウェスタンブロッティングを使用して検出した。データは、アルボシジブが、ＣＤＫ９の阻害を通じてＭＣＬ−１およびｃ−ＭＹＣ／Ｎ−ＭＹＣのタンパク質の発現を時間に依存して抑制することを示す。代表的なウェスタンブロットを図１４Ａおよび１４Ｂに提示する。
（実施例１０）
アルボシジブは、ＭＶ４−１１細胞におけるｍＲＮＡ発現を時間に依存して抑制する
【０１１４】
ＭＶ４−１１細胞を播種し、１００ｎＭの濃度のアルボシジブで処置した。細胞を、処置後０．５、１、３、４、８、および１６時間目に収集した。細胞を捕集し、ｍＲＮＡの検出を、従前の実施例に記載する様式で、ＲＴ−ｑＰＣＲ分析を使用して実施した。ＭＣＬ−１の発現を、対照および未処置細胞の発現と比較した。図１５は、アルボシジブが、ＭＣＬ−１  ｍＲＮＡ発現を時間に依存して抑制することを示す。ＭＣＬ−１の発現は、３０分の時点で抑制され、投与後１時間で最大抑制に到達し、２時間の時点で抑制は低下する。３時間の時点では、発現阻害はないように見える。
（実施例１１）
ＪＱ−１と組み合わせたアルボシジブは、個々の処置よりも良好に、Ａ５４９細胞におけるＭＣＬ−１およびｃ−ＭＹＣ発現を低減する
【０１１５】
Ａ５４９細胞を播種し、０ｎＭ〜５０ｎＭの範囲の濃度のＪＱ−１と組み合わせて、０ｎＭ〜１００ｎＭの範囲の濃度のアルボシジブで処置した。細胞を、最初にＪＱ−１で１時間処置し、その後、アルボシジブで２時間処置した。固形腫瘍細胞の処置後、細胞を捕集し、ｍＲＮＡを、従前の実施例に記載する様式で、ＲＴ−ｑＰＣＲを使用して検出した。図１７は、アルボシジブが、ＣＤＫ９の阻害を通じて、ＭＣＬ−１  ｍＲＮＡ発現を時間に依存して抑制することを示す。
【０１１６】
図１８は、アルボシジブをＪＱ−１と組み合わせれば、ｃ−ＭＹＣのタンパク質の発現がＡ５４９細胞において抑制されることを示す。本実施例に記載する方法と同様に細胞を調製し、次に図１８に示すように、１００ｎＭのアルボシジブおよび１００ｎＭのＪＱ−１で２時間処置した。処置後、細胞を捕集し、標準免疫ブロッティング技法を使用してタンパク質の検出を実施した。
（実施例１２）
ＪＱ−１と組み合わせたアルボシジブは、Ａ５４９細胞におけるアポトーシスを用量に依存して増加させる
【０１１７】
Ａ５４９細胞を、０．０３〜１０μＭの範囲の濃度のＪＱ−１で２４時間処置した（図１９）。ＪＱ−１で２４時間処置した後、アルボシジブを、１００ｎＭの濃度で添加した。ＣｅｌｌｔｉｔｅｒＧＬＯおよびカスパーゼＧＬＯを添加し、投与後４８時間において発光を測定した。用量が一定のアルボシジブと組み合わせて、ＪＱ−１の用量を段階的に増加させると、カスパーゼ活性の相乗的な増加が実証された。１μＭのＪＱ−１の投薬を、１００ｎＭのアルボシジブの用量と組み合わせると、３倍を超えるアポトーシス応答の増加が認められる。この増加は、アルボシジブをＪＱ−１と組み合わせれば、アルボシジブまたはＪＱ−１単独と比較して、Ａ５４９がん細胞におけるアポトーシスを相乗的に増加させることを示す（図１９）。
（実施例１３）
ＪＱ−１組み合わせたジナシクリブは、Ａ５４９細胞におけるアポトーシスを用量に依存して増加させる
【０１１８】
Ａ５４９細胞を、０．０３〜１０μＭの範囲の濃度のＪＱ−１で２４時間処置した（図２０）。ＪＱ−１で２４時間処置した後、ジナシクリブを３ｎＭの濃度で添加した。ＣｅｌｌｔｉｔｅｒＧＬＯおよびカスパーゼＧＬＯを添加し、投与後４８時間において発光を測定した。用量が一定のジナシクリブと組み合わせてＪＱ−１の用量を段階的に増加させると、カスパーゼ活性の相乗的な増加が実証された。１μＭのＪＱ−１の投薬を、３ｎＭのジナシクリブの用量と組み合わせると、４倍を超えるアポトーシス応答の増加が認められる。この増加は、ジナシクリブをＪＱ−１と組み合わせれば、ジナシクリブまたはＪＱ−１単独と比較して、Ａ５４９がん細胞におけるアポトーシスを相乗的に増加させることを示す（図２０）。
（実施例１４）
アルボシジブは、Ａ５４９細胞におけるＭＣＬ−１およびｃ−ＭＹＣ発現を低減する
【０１１９】
Ａ５４９細胞を播種し、０μＭ〜８μＭの範囲の濃度のアルボシジブで２時間処置した。固形腫瘍細胞の処置後、細胞を捕集し、従前の実施例に記載する様式で、ＲＴ−ｑＰＣＲを使用して、ｍＲＮＡを検出した。図２１Ａは、アルボシジブが、ＨＰＲＴ１と比較して、ＭＹＣ  ｍＲＮＡ発現を用量に依存して抑制することを示す。図２１Ｂは、アルボシジブが、ＨＰＲＴ１と比較して、ＭＣＬ−１  ｍＲＮＡ発現を用量に依存して抑制することを示す。
（実施例１５）
ＣＤＫ９特異的ｓｉＲＮＡをＢＥＴインヒビターと協同させると、Ａ５４９細胞におけるタンパク質の発現は低減し、アポトーシスは増加する
【０１２０】
Ａ５４９細胞を播種し、非標的型ｓｉＲＮＡまたはＣＤＫ９特異的ｓｉＲＮＡで４８時間処置した。タンパク質の発現を、対照と比較して、未処置、非標的型ｓｉＲＮＡ、およびＣＤＫ９特異的ｓｉＲＮＡについて測定した。図２２Ａは、β−アクチンは一定のままであるのに対して、未処置および非標的型ｓｉＲＮＡと比較して、ＣＤＫ９で明確に減少することを示す。
【０１２１】
アポトーシスの誘発を評価するために、上記手順を実施し、その後に０．０３μＭの濃度のＢＥＴインヒビター（ＩＢＥＴ７６２、ＪＱ−１、またはＯＴＸ０１５）で４８時間処置した。ＢＥＴインヒビターで４８時間処置した後に、ＣｅｌｌｔｉｔｅｒＧＬＯおよびカスパーゼＧＬＯを添加し、発光を測定して細胞生存率およびアポトーシスを評価した。図２２Ｂは、ＣＤＫ９特異的ｓｉＲＮＡと組み合わせたＢＥＴインヒビターと比較して、非標的型ｓｉＲＮＡと組み合わせたＢＥＴインヒビターで細胞を処置したとき、活性が約２〜３倍増加したことを示す。
【０１２２】
本明細書で参照するすべての米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、および非特許公表文献を、本説明と矛盾しない範囲で本明細書に参照によりその全体を組み込む。
【０１２３】
上記より、本発明の具体的な実施形態を説明目的で本明細書に記載してきたが、本発明の精神および範囲から逸脱せずに様々な変更を加えることができるものと認識される。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲による場合を除き、限定されない。
一実施形態において、例えば、以下の項目が提供される。
（項目１）
それを必要とする哺乳動物において、スーパーエンハンサー媒介型疾患を処置する方法であって、下記の治療剤：
ｉ）サイクリン依存性キナーゼインヒビター、
ｉｉ）ブロモドメインインヒビター、
ｉｉｉ）ヒストンメチルトランスフェラーゼインヒビター、
ｉｖ）ヒストンデアセチラーゼインヒビター、および
ｖ）ヒストンデメチラーゼインヒビター、
のうちの少なくとも２つの有効量を前記哺乳動物に投与するステップを含む方法。
（項目２）
前記治療剤のうちの少なくとも１つが、サイクリン依存性キナーゼインヒビターである、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記サイクリン依存性キナーゼインヒビターが、Ｃｄｋ７、Ｃｄｋ９、または両方を阻害する、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記少なくとも１つの治療剤が、ＣＤＫ９特異的ｓｉＲＮＡ、アルボシジブ、またはジナシクリブである、項目２に記載の方法。
（項目５）
前記治療剤のうちの少なくとも１つが、ブロモドメインインヒビターである、項目１から４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
前記ブロモドメインインヒビターが、Ｂｒｄ４を阻害する、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記少なくとも１つの治療剤が、ＪＱ−１、ＢＩ２５３６、ＴＧ１０１２０９、ＯＴＸ０１５、ＩＢＥＴ７６２、ＩＢＥＴ１５１、ＣＰＩ−０６１０、またはＰＦＩ−１である、項目５または６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記治療剤のうちの少なくとも１つが、ヒストンメチルトランスフェラーゼインヒビターである、項目１から７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
前記少なくとも１つの治療剤が、Ｄｏｔ１Ｌ阻害剤ＥＰＺ−５６７６である、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記治療剤のうちの少なくとも１つが、ヒストンデアセチラーゼインヒビターである、項目１から９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
前記少なくとも１つの治療剤が、パノビノスタットまたはＳＡＨＡである、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記治療剤が、ヒストンデメチラーゼインヒビターである、項目１から１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
前記少なくとも１つの治療剤が、ＨＣＩ−２５０９である、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
有効量のサイクリン依存性キナーゼインヒビターおよびブロモドメインインヒビターを、前記哺乳動物に投与するステップを含む、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記サイクリン依存性キナーゼインヒビターが、ＣＤＫ９特異的ｓｉＲＮＡまたはアルボシジブである、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記ブロモドメインインヒビターが、ＪＱ１である、項目１４または１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
有効量のサイクリン依存性キナーゼインヒビターおよびヒストンデアセチラーゼインヒビターを、前記哺乳動物に投与するステップを含む、項目１に記載の方法。
（項目１８）
前記サイクリン依存性キナーゼインヒビターが、アルボシジブである、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記ヒストンデアセチラーゼインヒビターが、パノビノスタットである、項目１７または１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記スーパーエンハンサー媒介型疾患が、がんである、項目１から１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記スーパーエンハンサー媒介型疾患が、急性骨髄性白血病である、項目１から１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
薬学的に許容される担体または賦形剤、ならびに下記の治療剤：
ｉ）サイクリン依存性キナーゼインヒビター、
ｉｉ）ブロモドメインインヒビター、
ｉｉｉ）ヒストンメチルトランスフェラーゼインヒビター、
ｉｖ）ヒストンデアセチラーゼインヒビター、および
ｖ）ヒストンデメチラーゼインヒビター、
のうちの少なくとも２つを含む医薬組成物。
（項目２３）
サイクリン依存性キナーゼインヒビターを含む、項目２２に記載の医薬組成物。
（項目２４）
前記サイクリン依存性キナーゼインヒビターが、ＣＤＫ９特異的ｓｉＲＮＡ、アルボシジブ、またはジナシクリブである、項目２３に記載の医薬組成物。
（項目２５）
サイクリン依存性キナーゼインヒビターおよびブロモドメインインヒビターを含む、項目２２に記載の医薬組成物。
（項目２６）
前記サイクリン依存性キナーゼインヒビターが、ＣＤＫ９特異的ｓｉＲＮＡまたはアルボシジブである、項目２５に記載の医薬組成物。
（項目２７）
前記ブロモドメインインヒビターが、ＪＱ１である、項目２５または２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目２８）
サイクリン依存性キナーゼインヒビターおよびヒストンデアセチラーゼインヒビターを含む、項目２２に記載の医薬組成物。
（項目２９）
前記サイクリン依存性キナーゼインヒビターが、アルボシジブである、項目２８に記載の医薬組成物。
（項目３０）
前記ヒストンデアセチラーゼインヒビターが、パノビノスタットである、項目２８または２９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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