(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１記載のヒトB7-H5に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントであって、
前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、
3つの軽鎖CDRを含む軽鎖可変領域であって、第１の軽鎖CDRが配列番号１１のアミノ酸27〜38を含み、第２の軽鎖CDRが配列番号１１のアミノ酸56〜58を含み、且つ第３の軽鎖CDRが配列番号１１のアミノ酸95〜102を含む、前記軽鎖可変領域と、
3つの重鎖CDRを含む重鎖可変領域であって、第１の重鎖CDRが配列番号９のアミノ酸26〜33を含み、第２の重鎖CDRが配列番号９のアミノ酸51〜58を含み、且つ第３の重鎖CDRが配列番号９のアミノ酸97〜106を含む、前記重鎖可変領域と、
を含み、
前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、
(A) B7-H5のCD28Hとの相互作用を遮断するか；
(B) B7-H5のCD28Hに対する結合能力を低下させるか；
(C) B7-H5のCD28Hへの結合の結果として生じるシグナル伝達を遮断するか；
(D) CD8+及びCD4+の両方の同種T細胞増殖反応を阻害するか；
(E) インビボで活性化脾臓又は末梢血由来T細胞の割合を低下させるか；
(F) インビボで特異的T細胞記憶応答の誘導を阻害するか；
(G) B7-H5のCD28Hへの結合を遮断することによって細胞傷害性T細胞の腫瘍細胞殺活性を阻害するか；
(H) B7-H5のCD28Hへの結合を遮断することによってナチュラルキラー細胞活性化を阻害するか；又は
(I) (A)〜(H)の組み合わせである、
前記抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
配列番号１記載のヒトB7-H5に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントであって、
前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、
3つの軽鎖CDRを含む軽鎖可変領域であって、第１の軽鎖CDRが配列番号１５のアミノ酸27〜38を含み、第２の軽鎖CDRが配列番号１５のアミノ酸56〜58を含み、且つ第３の軽鎖CDRが配列番号１５のアミノ酸95〜102を含む、前記軽鎖可変領域と、
3つの重鎖CDRを含む重鎖可変領域であって、第１の重鎖CDRが配列番号１３のアミノ酸26〜33を含み、第２の重鎖CDRが配列番号１３のアミノ酸51〜58を含み、且つ第３の重鎖CDRが配列番号１３のアミノ酸97〜106を含む、前記重鎖可変領域と、
を含み、且つ、
前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、B7-H5のCD28Hとの相互作用を遮断する、
前記抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
前記結合したB7-H5が、生細胞の表面に配置されているか、又は内因性若しくはトランスフェクトされた濃度で発現されており、前記生細胞はマクロファージ又は樹状細胞であってもよい、請求項１又は２記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項４】
(A) B7-H5のCD28Hに対する結合能力を低下させるか；
(B) B7-H5のCD28Hへの結合の結果として生じるシグナル伝達を遮断するか；
(C) CD8+及びCD4+の両方の同種T細胞増殖反応を阻害するか；
(D) インビボで活性化脾臓又は末梢血由来T細胞の割合を低下させるか；
(E) インビボで特異的T細胞記憶応答の誘導を阻害するか；
(F) B7-H5のCD28Hへの結合を遮断することによって細胞傷害性T細胞の腫瘍細胞殺活性を阻害するか；
(G) B7-H5のCD28Hへの結合を遮断することによってナチュラルキラー細胞活性化を阻害するか；又は
(H) (A)〜(G)の組み合わせである、
請求項２又は３記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
免疫グロブリン定常領域(Fc)の1つ以上の定常ドメインを含み、前記定常ドメインはヒト定常ドメインであってもよい、請求項１〜４のいずれか１項記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
前記ヒト定常ドメインは、IgM、IgA、IgD、IgE、IgG、IgG1、IgG2、IgG3又はIgG4ドメインである、請求項５記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項７】
検出可能に標識されるか、又はコンジュゲートされたトキシン、薬剤、受容体、酵素、若しくは受容体リガンドを含む、請求項１〜６のいずれか１項記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項８】
前記抗体は、キメラ抗体又はヒト化抗体である、請求項１〜７のいずれか１項記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項９】
前記抗体は、ヒト化抗体である、請求項８記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
前記抗体は、二重特異性、三重特異性又は多重特異性の抗体である、請求項１〜９のいずれか１項記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメントと、
生理学的に許容されるキャリア又は賦形剤と、
を含む、医薬組成物。
【請求項１２】
被験体の免疫系を下方調節する方法に使用するための、請求項１１記載の医薬組成物であって、
前記被験体が自己免疫疾患を有していてもよい、及び/又は
自己免疫疾患を治療するための、及び/又は
炎症性疾患を治療するための、及び/又は
前記被験体が移植を受けたことがあるか若しくは受ける予定がある、及び/又は
移植による拒絶反応を治療若しくは防止する方法に使用するための、
前記医薬組成物。
【請求項１３】
前記自己免疫疾患は、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、副腎の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎及び精巣炎、自己免疫性血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫機能障害症候群(CFIDS)、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、クレスト症候群、寒冷凝集素症、クローン病、円板状ループス、本態性混合性クリオグロブリン血症、線維筋痛症−線維筋炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギラン・バレー、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少症紫斑病(ITP)、IgAニューロパチー、若年性関節炎、扁平苔癬、ループスエリテマトーデス、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、視神経脊髄炎(NMO)、1型又は免疫性糖尿病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎及び皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身硬直症候群、全身性紅斑性狼瘡、紅斑性狼瘡、高安動脈炎、側頭動脈炎/巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ぶどう膜炎、血管炎、例えば疱疹状皮膚炎血管炎、白斑、並びにウェゲナー肉芽腫症から成る群より選択されるか、又は前記炎症性疾患は、喘息、脳炎、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、アレルギー性障害、敗血症性ショック、肺線維症、未分化脊椎関節症、未分化関節症、関節炎、炎症性骨溶解、及び慢性のウイルス感染若しくは細菌感染に起因する慢性炎症から成る群より選択される、請求項１２記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１〜１０のいずれか１項記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメントを含む、  被験体の免疫系を下方調節するための、又は
被験体の自己免疫疾患を治療するための、又は
被験体の炎症性疾患を治療するための、又は
被験体の移植による拒絶反応を治療又は防止するための、
薬剤。
【請求項１５】
疾患、障害又は感染症を検出又は診断するための指標を得るインビトロでの方法であって、
(a) 請求項１又は２記載の抗体又はその抗原結合フラグメントを用いて被験体から得られた細胞又は組織サンプルにおけるB7-H5の発現をアッセイすること、及び
(b) 前記B7-H5のレベルを対照レベルと比較すること
を含み、前記対照レベルと比較した、アッセイされたB7-H5レベルの上昇が、前記疾患、障害又は感染症を示唆する、前記方法。
【請求項１６】
疾患、障害又は感染症の進行をモニターするインビトロでの方法であって、
(a) 第１の時点で被験体から得られた細胞又は組織サンプルにおけるB7-H5の発現を、請求項１又は２記載の抗体又はその抗原結合フラグメントを用いてアッセイすること、及び
(b) 第２の時点で又は経時的に前記被験体から得られた前記細胞又は前記組織サンプルにおけるB7-H5の発現レベルを比較すること
を含み、アッセイされたB7-H5レベルの上昇が、前記疾患、障害又は感染症の進行を示唆する、前記方法。
【請求項１７】
治療に対する被験体の応答をモニターするインビトロでの方法であって、
(a) 治療前の被験体から得られた細胞又は組織サンプルにおけるB7-H5の発現を、請求項１又は２記載の抗体又はその抗原結合フラグメントを用いてアッセイすること、及び
(b) 治療後の1つ以上の時点で被験体から得られた細胞又は組織サンプルにおけるB7-H5の発現をアッセイして、B7-H5レベルを経時的に比較すること
を含み、前記治療前のB7-H5レベルと比較した、アッセイされたB7-H5レベルの低下が、治療に対する応答を示し、治療に対する被験体の応答をモニターする、前記方法。
【請求項１８】
前記B7-H5の発現が、酵素結合免疫吸着測定(ELISA)、ラジオイムノアッセイ(RIA)又は蛍光活性化セルソーティング(FACS)によってアッセイされる、請求項１５〜１７のいずれか１項記載の方法。
【請求項１９】
B7-H5の発現の増大を特徴とする疾患について被験体を治療するために使用するための請求項１１記載の医薬組成物であって、前記使用が
(i) 前記被験体がB7-H5の発現の増大を特徴とする疾患を有するか否かを
(a) 前記被験体から得られた細胞又は組織サンプルにおけるB7-H5の発現を、B7-H5に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを用いてアッセイし；そして
(b) アッセイされたB7-H5レベルを対照レベルと比較する
ことによって決定する工程であって、
前記対照レベルと比較した、前記アッセイされたB7-H5レベルの上昇が、前記被験体がB7-H5の発現の増大を特徴とする疾患を有することを示唆する工程
を含み；
また(ii) 前記被験体がB7-H5の発現の増大を特徴とする疾患を有する場合、治療上有効な量の請求項１１記載の医薬組成物を前記被験体に投与する工程を含んでもよい、
前記医薬組成物。
【請求項２０】
工程(i)(a)におけるB7-H5に結合する前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、請求項１又は２記載の抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項１９記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２１】
B7-H5の発現の増大を特徴とする前記疾患が、自己免疫疾患又は炎症性疾患である、請求項１９記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２２】
CD28Hの発現の増大を特徴とする疾患の被験体を治療するために使用するための請求項１１記載の医薬組成物であって、前記使用が
(i) 前記被験体がCD28Hの発現の増大を特徴とする疾患を有するか否かを
(a) 前記被験体の細胞又は組織サンプルにおけるCD28Hの発現を、抗CD28H抗体又はその抗原結合フラグメントを用いてアッセイし；そして
(b) アッセイされたCD28Hレベルを対照レベルと比較する
ことによって決定する工程であって、
前記対照レベルと比較した、前記アッセイされたCD28Hレベルの上昇が、前記被験体がCD28Hの発現の増大を特徴とする疾患を有することを示唆する工程
を含み；
また(ii) 前記被験体がCD28Hの発現の増大を特徴とする疾患を有する場合、治療上有効な量の請求項１１記載の医薬組成物を前記被験体に投与する工程を含んでもよい、
前記医薬組成物。
【請求項２３】
CD28Hの発現の増大を特徴とする前記疾患が自己免疫疾患である、請求項２２記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２４】
CD28Hの発現の増大を特徴とする前記疾患が炎症性疾患である、請求項２２記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２５】
1つ以上のヒトIgG4定常ドメインを含む、請求項９記載のヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
連邦政府による支援の研究または開発に関する記載
本発明は、国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）（ＮＩＨ）による助成金ＲＯ１  ＣＡ０９７０８５およびＲＯ１  Ａ１７２５９２、ならびに国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（ＮＣＩ）による助成金Ｕ１９  ＣＡ１１３３４１の下で、政府の支援によりなされた。政府は本発明において一定の権利を有する。
【０００２】
配列表の参照
本出願は、紙およびコンピューター読み取り可能な媒体の両方で開示される、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．１．８２１および以下参照に準拠した１つまたは複数の配列表を含み、紙およびコンピューター読み取り可能な開示内容はその全体を援用する。
【０００３】
本発明は、Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ経路のＢ７−Ｈ５リガンドに結合することができる、抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびに他の分子に関し、また、自己免疫疾患、移植による拒絶反応および他の炎症性疾患の治療および診断におけるそのような分子の使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
ヒトおよび他の哺乳動物の免疫系は、感染および疾患を防止する役割を担っている。こうした防止は、液性免疫反応および細胞性免疫反応により行われる。液性反応では、抗体と外来の標的（抗原）を認識し、中和することができる他の生体分子とが作られる。一方、細胞性免疫反応では、Ｔ細胞によりマクロファージ、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）および抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球が活性化し、抗原の認識に反応して様々なサイトカインが放出される（Ｄｏｎｇ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）「Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，」Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ．Ｒｅｓ．２８（１）：３９−４８）。
【０００５】
Ｔ細胞が抗原に対する免疫反応を最適に媒介できるには、２つの異なるシグナル伝達の相互作用を必要とする（Ｖｉｇｌｉｅｔｔａ，Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）「Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  Ｃｏ−Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，」Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ４：６６６−６７５；Ｋｏｒｍａｎ，Ａ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）「Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  Ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，」Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０：２９７−３３９）。最初に、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面に配置されている抗原が、抗原特異的ナイーブＣＤ４+Ｔ細胞に提示されなければならない。こうした提示があると、シグナルがＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を介して伝達され、提示された抗原に特異的となる免疫反応をＴ細胞が開始するように誘導する。次に、ＡＰＣと特有のＴ細胞表面分子との間の相互作用を介して行われるいくつかの共刺激および共抑制シグナルが、最初にＴ細胞の活性化および増殖の引き金を引き、最終的にＴ細胞の抑制を誘導する。こうして、第１のシグナルは免疫反応に特異性を付与するのに対し、第２のシグナルは反応の性質、大きさおよび持続期間を決定する役割を果たす。
【０００６】
免疫系は、共刺激および共抑制リガンドおよび受容体によりしっかりと制御されている。これらの分子は、Ｔ細胞活性化のための第２のシグナルを与え、正のシグナルおよび負のシグナルのネットワークのバランスを取って、自己に対する免疫を抑制しながら感染に対する免疫反応を最大化する（Ｗａｎｇ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（Ｍａｒｃｈ  ７，２０１１）「ＶＩＳＴＡ，Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｍｏｕｓｅ  Ｉｇ  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  Ｌｉｇａｎｄ  Ｔｈａｔ  Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１０．１０８４／ｊｅｍ．２０１００６１９：１−１６；Ｌｅｐｅｎｉｅｓ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）「Ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  Ｏｆ  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｓ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ｐａｒａｓｉｔｉｃ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，」Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ，Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ＆  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ−Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ８：２７９−２８８）。特に重要性なのは、抗原提示細胞のＢ７．１（ＣＤ８０）リガンドおよびＢ７．２（ＣＤ８６）リガンドと、ＣＤ４+Ｔリンパ球のＣＤ２８受容体およびＣＬＴＡ−４受容体との間の結合である（Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）「Ｔｈｅ  Ｂ７−ＣＤ２８  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ，」Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：１１６−１２６；Ｄｏｎｇ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）「Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，」Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ．Ｒｅｓ．２８（１）：３９−４８；Ｌｉｎｄｌｅｙ，Ｐ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）「Ｔｈｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｕｔｉｌｉｔｙ  Ｏｆ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ＣＤ２８−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，」Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２２９：３０７−３２１）。Ｂ７．１またはＢ７．２がＣＤ２８に結合すると、Ｔ細胞の活性化が刺激されるのに対し、Ｂ７．１またはＢ７．２がＣＴＬＡ４に結合すると、そうした活性化が阻害される（Ｄｏｎｇ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）「Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，」Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ．Ｒｅｓ．２８（１）：３９−４８；Ｌｉｎｄｌｅｙ，Ｐ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）「Ｔｈｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｕｔｉｌｉｔｙ  Ｏｆ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ＣＤ２８−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，」Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２２９：３０７−３２１；Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，Ｒ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）「Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ，」Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：５１５−５４８）。ＣＤ２８は、Ｔ細胞の表面に恒常的に発現する一方（Ｇｒｏｓｓ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＤ２８  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ，」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３８０−３８８）、ＣＴＬＡ４の発現は、Ｔ細胞活性化後に急速に上方制御される（Ｌｉｎｓｌｅｙ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）「Ｉｎｔｒａ��ｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ  Ｏｆ  ＣＴＬＡ４  Ａｎｄ  Ｆｏｃａｌ  Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｏｗａｒｄｓ  Ｓｉｔｅｓ  Ｏｆ  ＴＣＲ  Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ，」Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４：５３５−５４３）。ＣＴＬＡ４は高親和性受容体であるため（Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）「Ｔｈｅ  Ｂ７−ＣＤ２８  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ，」Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：１１６−１２６）、結合すると、最初にＴ細胞増殖を惹起し（ＣＤ２８を介して）、次いでＴ細胞増殖を阻害する（ＣＴＬＡ４の新たな発現により）ことで、増殖がもはや必要でなくなったときにその作用を抑制する。
【０００７】
ＣＤ２８受容体のリガンドに関する詳細な調査により、関連する一連のＢ７分子（「Ｂ７スーパーファミリー」）の同定および特徴付けが行われてきた（Ｃｏｙｌｅ，Ａ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）「Ｔｈｅ  Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  Ｂ７  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ：Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  Ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ  Ｉｎ  ＣｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙＳｉｇｎａｌｓ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，」Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２（３）：２０３−２０９；Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）「Ｔｈｅ  Ｂ７−ＣＤ２８  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ，」ＮａｔｕｒｅＲｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：１１６−１２６；Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，Ｒ．Ｊ．ｅｔａｌ．（２００５）「Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ，」Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：５１５−５４８；Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）「Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｌｉｇａｎｄｓ，」Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ．６：２２３．１−２２３．７；Ｌｏｋｅ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）「Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ：Ｔｈｅ  Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ａｎｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ．」Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．６：２０８−２１４；Ｋｏｒｍａｎ，Ａ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）「Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  Ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，」Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０：２９７−３３９；Ｆｌｉｅｓ，Ｄ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）「Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｂ７ｓ：Ｐｌａｙｉｎｇ  ａ  Ｐｉｖｏｔａｌ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３０（３）：２５１−２６０；Ａｇａｒｗａｌ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）「Ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  Ｏｆ  Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｉｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ，」Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｏｒｇａｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１３：３６６−３７２；Ｌｅｎｓｃｈｏｗ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）「ＣＤ２８／Ｂ７  Ｓｙｓｔｅｍ  ｏｆ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，」Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：２３３−２５８；Ｗａｎｇ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）「Ｃｏ−Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７−ＣＤ２８  Ｆａｍｉｌｙ  Ｉｎ  Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ａｎｄ  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，」Ｍｉｃｒｏｂｅｓ  Ｉｎｆｅｃｔ．６：７５９−７６６）。このファミリーには、現在、９つの公知のメンバー、すなわち、Ｂ７．１（ＣＤ８０）、Ｂ７．２（ＣＤ８６）、ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ  ｌｉｇａｎｄ（ＩＣＯＳ−Ｌ、Ｂ７−Ｈ２）、ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１  ｌｉｇａｎｄ（ＰＤ−Ｌ１；Ｂ７−Ｈ１）、ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−２  ｌｉｇａｎｄ（ＰＤ−Ｌ２；Ｂ７−ＤＣ）、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４（Ｂ７ｘ、Ｂ７−Ｈ６およびＢ７Ｓ１と���呼ばれる；Ｓｉｃａ，Ｇ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）「Ｂ７−４，Ａ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ，Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，」Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１８：８４９−８６１；Ｚａｎｇ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７ｘ：Ａ  Ｗｉｄｅｌｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１００：１０３８８−１０３９２；Ｐｒａｓａｄ，Ｄ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７Ｓ１，Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，」Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８６３−８７３），Ｂ７−Ｈ６（Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）「Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｌｉｇａｎｄｓ，」Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ．６：２２３．１−２２３．７）およびＢ７−Ｈ５（Ｆｌａｊｎｉｋ，Ｍ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（２０１２）「Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ：Ｃｏ−Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｂ７Ｈ６  Ａｎｄ  Ｎｋｐ３０，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｎｅｗ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ，Ｂ７Ｈ７，Ａｎｄ  Ｏｆ  Ｂ７’ｓ  Ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ  Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  Ｗｉｔｈ  Ｔｈｅ  ＭＨＣ，」Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ６４：５７１−５９０）が存在する。Ｂ７の遺伝子ファミリーは、適応免疫系の調節に不可欠である。ほとんどのＢ７ファミリーメンバーは、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）の可変（Ｖ）型と定常（Ｃ）型の両方のドメインを含有する。
【０００８】
Ｂ７リガンドは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む様々な細胞型の細胞表面上に発現され、それとＴ細胞上の受容分子との相互作用により、Ｔ細胞の活性化および寛容性を調節する活性化シグナルおよび／または抑制シグナルが与えられる（Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）「Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｌｉｇａｎｄｓ，」Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ．６：２２３．１−２２３．７）。抑制性Ｂ７リガンドの一部は、腫瘍細胞上にも発現され、免疫応答の抑制がもたらされる（Ｋｅｉｒ，Ｍ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）「ＰＤ−１  Ａｎｄ  Ｉｔｓ  Ｌｉｇａｎｄｓ  Ｉｎ  Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，」Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：６７７−７０４；Ｚｏｕ，Ｗ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）「Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｂ７−Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｔｕｍｏｕｒ  Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，「Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：４６７−４７７）。したがって、Ｂ７リガンドとその受容体との相互作用の促進または減弱により、自己免疫疾患、癌および感染症の治療が可能になる可能性がある（国際公開第２０１１／０２００２４号パンフレット；Ｆｌａｊｎｉｋ，Ｍ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（２０１２）「Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ：Ｃｏ−Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｂ７Ｈ６  Ａｎｄ  Ｎｋｐ３０，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｎｅｗ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ，Ｂ７Ｈ７，Ａｎｄ  Ｏｆ  Ｂ７’ｓ  Ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ  Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  Ｗｉｔｈ  Ｔｈｅ  ＭＨＣ，」Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ６４：５７１−５９０）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際公開第２０１１／０２００２４号パンフレット
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｄｏｎｇ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）「Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，」Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ．Ｒｅｓ．２８（１）：３９−４８
【非特許文献２】Ｖｉｇｌｉｅｔｔａ，Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）「Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  Ｃｏ−Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，」Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ４：６６６−６７５
【非特許文献３】Ｋｏｒｍａｎ，Ａ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）「Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  Ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，」Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０：２９７−３３９
【非特許文献４】Ｗａｎｇ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（Ｍａｒｃｈ  ７，２０１１）「ＶＩＳＴＡ，Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｍｏｕｓｅ  Ｉｇ  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  Ｌｉｇａｎｄ  Ｔｈａｔ  Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１０．１０８４／ｊｅｍ．２０１００６１９：１−１６
【非特許文献５】Ｌｅｐｅｎｉｅｓ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）「Ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  Ｏｆ  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｓ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ｐａｒａｓｉｔｉｃ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，」Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ，Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ＆  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ−Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ８：２７９−２８８
【非特許文献６】Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）「Ｔｈｅ  Ｂ７−ＣＤ２８  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ，」Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：１１６−１２６
【非特許文献７】Ｌｉｎｄｌｅｙ，Ｐ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）「Ｔｈｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｕｔｉｌｉｔｙ  Ｏｆ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ＣＤ２８−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，」Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２２９：３０７−３２１
【非特許文献８】Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，Ｒ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）「Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ，」Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：５１５−５４８
【非特許文献９】Ｇｒｏｓｓ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＤ２８  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ，」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３８０−３８８
【非特許文献１０】Ｌｉｎｓｌｅｙ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）「Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ  Ｏｆ  ＣＴＬＡ４  Ａｎｄ  Ｆｏｃａｌ  Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｏｗａｒｄｓ  Ｓｉｔｅｓ  Ｏｆ  ＴＣＲ  Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ，」Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４：５３５−５４３
【非特許文献１１】Ｃｏｙｌｅ，Ａ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）「Ｔｈｅ  Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  Ｂ７  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ：Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  Ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ  Ｉｎ  ＣｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙＳｉｇｎａｌｓ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，」Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２（３）：２０３−２０９
【非特許文献１２】Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）「Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｌｉｇａｎｄｓ，」Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ．６：２２３．１−２２３．７
【非特許文献１３】Ｌｏｋｅ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）「Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ：Ｔｈｅ  Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ａｎｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ．」Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．６：２０８−２１４
【非特許文献１４】Ｆｌｉｅｓ，Ｄ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）「Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｂ７ｓ：Ｐｌａｙｉｎｇ  ａ  Ｐｉｖｏｔａｌ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３０（３）：２５１−２６０
【非特許文献１５】Ａｇａｒｗａｌ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）「Ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  Ｏｆ  Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｉｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ，」Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｏｒｇａｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１３：３６６−３７２
【非特許文献１６】Ｌｅｎｓｃｈｏｗ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）「ＣＤ２８／Ｂ７  Ｓｙｓｔｅｍ  ｏｆ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，」Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：２３３−２５８
【非特許文献１７】Ｗａｎｇ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）「Ｃｏ−Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７−ＣＤ２８  Ｆａｍｉｌｙ  Ｉｎ  Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ａｎｄ  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，」Ｍｉｃｒｏｂｅｓ  Ｉｎｆｅｃｔ．６：７５９−７６６
【非特許文献１８】Ｓｉｃａ，Ｇ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）「Ｂ７−４，Ａ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ，Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，」Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１８：８４９−８６１
【非特許文献１９】Ｚａｎｇ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７ｘ：Ａ  Ｗｉｄｅｌｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１００：１０３８８−１０３９２
【非特許文献２０】Ｐｒａｓａｄ，Ｄ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂ７Ｓ１，Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ  Ｔｈａｔ  Ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，」Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８６３−８７３
【非特許文献２１】Ｆｌａｊｎｉｋ，Ｍ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（２０１２）「Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ：Ｃｏ−Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｂ７Ｈ６  Ａｎｄ  Ｎｋｐ３０，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｎｅｗ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ，Ｂ７Ｈ７，Ａｎｄ  Ｏｆ  Ｂ７’ｓ  Ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ  Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  Ｗｉｔｈ  Ｔｈｅ  ＭＨＣ，」Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ６４：５７１−５９０
【非特許文献２２】Ｋｅｉｒ，Ｍ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）「ＰＤ−１  Ａｎｄ  Ｉｔｓ  Ｌｉｇａｎｄｓ  Ｉｎ  Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，」Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：６７７−７０４
【非特許文献２３】Ｚｏｕ，Ｗ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）「Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｂ７−Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｔｕｍｏｕｒ  Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，「Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：４６７−４７７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
炎症性疾患および自己免疫疾患の治療におけるこれまでのあらゆる進歩にもかかわらず、そうした状態の治療のために高度の免疫療法を提供することができる組成物が依然として求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、そのような、炎症性疾患、自己免疫疾患、および免疫系の活性亢進を特徴とする類似の疾患や状態を治療するための組成物、ならびに、それらの使用に関する。
【００１３】
Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ経路のＢ７−Ｈ５リガンドに免疫特異的に結合することができる、抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびに他の分子、また、自己免疫疾患、移植による拒絶反応および他の炎症性疾患の治療および診断におけるそのような分子の使用が提供される。
【００１４】
一実施形態は、哺乳類のＢ７−Ｈ５（特に、ヒトＢ７−Ｈ５）に免疫特異的に結合する、抗体、または抗体の抗原結合フラグメントを有する他の分子を提供する。Ｂ７−Ｈ５は、たとえば生細胞の表面に配置され得る。
【００１５】
生細胞の例としては、マクロファージ、樹状細胞などが挙げられるが、特にこれらに限定されない。
【００１６】
他の実施形態は、Ｂ７−Ｈ５に免疫特異的に結合し、かつＢ７−Ｈ５のＣＤ２８Ｈとの相互作用を実質的に遮断することができる分子を提供する。さらに他の実施形態は、Ｂ７−Ｈ５に免疫特異的に結合し、かつＢ７−Ｈ５のＣＤ２８Ｈとの相互作用を実質的に遮断することができない分子を提供する。
【００１７】
Ｂ７−Ｈ５結合分子は、６つのＣＤＲを含む抗原結合フラグメントを有し得る。これらのＣＤＲは、抗Ｂ７−Ｈ５抗体：２Ｄ３および１８Ｃ３、のＣＤＲの少なくとも１つのコンセンサスＣＤＲを含み、残りのすべてのＣＤＲは、
（Ａ）抗Ｂ７−Ｈ５抗体２Ｄ３の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲ；または
（Ｂ）抗Ｂ７−Ｈ５抗体１８Ｃ３の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲ
から選択され得る。
【００１８】
他の実施形態は、６つのＣＤＲが、
（Ａ）抗Ｂ７−Ｈ５抗体２Ｄ３の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲ；または
（Ｂ）抗Ｂ７−Ｈ５抗体１８Ｃ３の３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲ
である、Ｂ７−Ｈ５結合分子を提供する。
【００１９】
いくつかの実施形態では、分子は、２種以上の異なるＢ７−Ｈ５抗体の抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含むキメラ抗体である。
【００２０】
Ｂ７−Ｈ５結合分子は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、またはヒト化抗体であり得、かつ／あるいは二重特異性抗体、三重特異性抗体または多重特異性抗体である。
【００２１】
Ｂ７−Ｈ５結合分子は、検出可能に標識することができるか、またはコンジュゲートされたトキシン、薬剤、受容体、酵素、もしくは受容体リガンドを含む。
【００２２】
さらに他の実施形態は、治療上有効な量または予防上有効な量の上記Ｂ７−Ｈ５結合分子のいずれか、および生理学的に許容されるキャリアまたは賦形剤を含有する医薬組成物を提供する。
【００２３】
他の実施形態では、Ｂ７−Ｈ５とＣＤ２８Ｈとの相互作用を実質的に遮断することができる分子は、ＣＤ２８Ｈ融合タンパク質であり、好ましくはＣＤ２８Ｈ−Ｉｇ融合タンパク質である。
【００２４】
疾患の治療における、この医薬組成物の使用方法もまた提供される。
【００２５】
被験体の疾患を診断する方法は、被験体の細胞について、上記Ｂ７−Ｈ５結合分子のいずれかに結合するその能力をアッセイすることを含み、この方法は、被験体の疾患の存在を診断するための細胞学的アッセイを提供する。
【００２６】
開示されたＢ７−Ｈ５結合分子は、自己免疫疾患または移植による拒絶反応に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】図１は、Ｂ７−Ｈ５およびそのカウンター受容体ＣＤ２８Ｈの概略図を提供する。
【図２】図２、パネルＡ〜Ｊは、Ｂ７−Ｈ５がマクロファージ上で構成的に発現し、樹状細胞上で誘導的であることを示す。
【図３】図３、パネルＡ〜Ｄは、ＣＤ２８ＨがＴ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で発現するが、Ｂ細胞では発現しないことを示す。
【図４】図４Ａ〜４Ｂは、クローン２Ｄ３および１８Ｃ３によって産生される抗体の、ＣＨＯトランスフェクタントにより発現するヒトＢ７−Ｈ５に結合する能力を示す。
【図５】図５Ａ〜５Ｃは、単離された抗体と対照Ｉｇの、Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用を遮断する能力を示す。
【図６】図６は、Ｂ７−Ｈ５Ｉｇ融合の、Ｔ細胞反応を刺激する能力を示す。
【図７】図７は、Ｂ７−Ｈ５Ｉｇの、サイトカイン：ＩＬ−２、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１０の発現を誘導する能力を示す。
【図８】図８は、Ｂ７−Ｈ５がそのカウンター受容体ＣＤ２８Ｈと相互作用する能力を遮断するために、本発明の抗Ｂ７−Ｈ５抗体２Ｄ３がＢ７−Ｈ５に結合することができることを示す。
【図９】図９は、抗Ｂ７−Ｈ５抗体２Ｄ３の、同種Ｔ細胞反応を阻害する能力を示す。
【図１０】図１０Ａおよび図１０Ｂは、ヒトＰＢＭＣを移植されたＮＳＧマウスの脾臓（図１０Ａ）および末梢血（図１０Ｂ）の活性化（ＣＤ４５ＲＯ+）ヒトＴ細胞中のＣＤ２８Ｈ+の割合に対する抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体の効果を示す。
【図１１】図１１Ａおよび図１１Ｂは、ヒトＰＢＭＣを移植されたＮＳＧマウスの脾臓（図１１Ａ）および末梢血（図１１Ｂ）のナイーブ（ＣＤ４５ＲＯ-）ヒトＴ細胞中のＣＤ２８Ｈ+の割合に対する抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体の効果を示す。
【図１２】図１２Ａ〜１２Ｃは、組換え抗ヒトＢ７−Ｈ５キメラ抗体（２Ｄ３および１８Ｃ３）の結合特性を示す。図１２Ａ〜１２Ｃは、組換え技術によりマウスＩｇＧアイソタイプがヒトＩｇＧ４アイソタイプに変換された抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体（２Ｄ３および１８Ｃ３）の、ＣＨＯ細胞によって発現されたヒトＢ７−Ｈ５に結合する能力を示す。
【図１３】図１３（パネルＡ〜Ｃ）は、組換え抗ヒトＢ７−Ｈ５キメラ抗体（２Ｄ３および１８Ｃ３）の、ＣＨＯ  Ｂ７−Ｈ５トランスフェクタントへのＣＤ２８Ｈ融合タンパク質の結合を完全に遮断する能力を示す。ヒトＢ７−Ｈ５  ＦＬ  ＣＨＯトランスフェクタントを対照上清（パネルＡ）とともに、または組換えキメラ２Ｄ３上清（パネルＢ）および組換えキメラ１８Ｃ３上清（パネルＣ）とともにプレインキュベートし、その後、ビオチン化ＣＤ２８ＨｈＩｇ融合タンパク質で染色した。
【図１４】図１４Ａ〜１４Ｂは、抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体（２Ｄ３および１８Ｃ３）のエピトープ認識部位を示す。図１４Ａおよび図１４Ｂは、２Ｄ３および１８Ｃ３がＢ７−Ｈ５の第１のＩｇＶドメインを認識していることを示す。図１４Ｃは、Ｂ７−Ｈ５  ＩｇＶドメインがＢ７−Ｈ５のＣＤ２８Ｈとの相互作用を仲介していることを示す。
【図１５】図１５は、ＣＨＯ細胞の表面で発現したヒトＢ７−Ｈ５に対する抗体２Ｄ３および１８Ｃ３の結合親和性を比較する。
【図１６Ａ】図１６Ａ〜１６Ｂは、ＴＴ特異的メモリーＴ細胞のリコールに対するＢ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈの内因性相互作用の効果を示す。図１６Ａは、Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈの相互作用を遮断する抗体２Ｄ３（パネルＢ）または対照Ｉｇ（パネルＡ）の存在下、ＴＴワクチンで誘導されたＴ細胞の増殖を示す。図１６Ｂは、そのような応答に関連する発現サイトカイン（パネルＡ）およびＢｒｄＵ陽性細胞（パネルＢ）のレベルを示す。
【図１６Ｂ】図１６Ａ〜１６Ｂは、ＴＴ特異的メモリーＴ細胞のリコールに対するＢ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈの内因性相互作用の効果を示す。図１６Ａは、Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈの相互作用を遮断する抗体２Ｄ３（パネルＢ）または対照Ｉｇ（パネルＡ）の存在下、ＴＴワクチンで誘導されたＴ細胞の増殖を示す。図１６Ｂは、そのような応答に関連する発現サイトカイン（パネルＡ）およびＢｒｄＵ陽性細胞（パネルＢ）のレベルを示す。
【図１７】図１７Ａ〜１７Ｂは、２Ｄ３によるＢ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈの内因性相互作用の遮断が、ヒト化ＮＳＧマウスのＣＤ８＋Ｔ細胞（図１７Ａ、パネルＡ〜Ｂ）およびＣＤ４＋Ｔ細胞（図１７Ｂ、パネルＡ〜Ｂ）の両者の同種増殖反応を阻害することを示す。
【図１８】図１８は、ＴＣＲとＢ７−Ｈ５融合タンパク質の同時架橋が刺激３０分後にＡＫＴリン酸化反応を誘導したが、ＴＣＲ架橋単独では最小のＡＫＴリン酸化反応を誘起しただけであったことを示す。重要なことには、Ｂ７−Ｈ５抗体２Ｄ３が含まれるとＡＫＴ活性化を抑制した。これはＢ７−Ｈ５共刺激がＡＫＴ経路を使用してＴ細胞反応を促進することを示している。
【図１９】図１９は、おとり受容体融合タンパク質ＣＤ２８ＨＩｇによるＢ７−Ｈ５−ＣＤ２８Ｈ経路の遮断が、Ｂ７−Ｈ５をトランスフェクトされた６２４Ｍｅｌメラノーマ細胞株に対する同種ＣＤ８  Ｔ細胞の細胞障害性殺活性を抑制したことを示す。これはＢ７−Ｈ５−ＣＤ２８Ｈ経路が標的細胞上のＣＤ８  Ｔ細胞の細胞障害性殺活性を促進することを示している。
【図２０Ａ】図２０Ａ〜Ｂは、可溶性組換えヒトＩＬ−２の存在下、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）上のＣＤ１６およびＢ７−Ｈ５融合タンパク質の同時架橋が、ＮＫの活性化および脱顆粒（ＣＤ１０７ａ表面の上方制御）を誘導する一方、ＣＤ１６の関与のみではＮＫの有意な脱顆粒は誘導されなかったことを示す。Ｂ７−Ｈ５融合タンパク質の用量に応じてＮＫの活性化が変化することが観察された（図２０Ａ）。重要なことには、Ｂ７−Ｈ５抗体２Ｄ３が含まれるとＮＫの活性化を抑制した（図２０Ｂ）。これはＢ７−Ｈ５がＮＫの活性化を共刺激することを示している。
【図２０Ｂ】図２０Ａ〜Ｂは、可溶性組換えヒトＩＬ−２の存在下、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）上のＣＤ１６およびＢ７−Ｈ５融合タンパク質の同時架橋が、ＮＫの活性化および脱顆粒（ＣＤ１０７ａ表面の上方制御）を誘導する一方、ＣＤ１６の関与のみではＮＫの有意な脱顆粒は誘導されなかったことを示す。Ｂ７−Ｈ５融合タンパク質の用量に応じてＮＫの活性化が変化することが観察された（図２０Ａ）。重要なことには、Ｂ７−Ｈ５抗体２Ｄ３が含まれるとＮＫの活性化を抑制した（図２０Ｂ）。これはＢ７−Ｈ５がＮＫの活性化を共刺激することを示している。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明は、Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ経路のＢ７−Ｈ５リガンドに免疫特異的に結合することができる、抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびに他の分子に関し、また、自己免疫疾患、移植による拒絶反応および他の炎症性疾患の治療および診断におけるそのような分子の使用に関する。
【００２９】
Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ経路は、Ｂ７−Ｈ５リガンドおよびそのカウンター受容体ＣＤ２８Ｈを含む細胞性免疫経路である（図１）。Ｂ７−Ｈ５は抗原提示細胞上に発現し、それはマクロファージ上に構成的に発現し、樹状細胞上に誘導される（図２、パネルＡ〜Ｊ）。ＣＤ２８Ｈは特に、ナイーブＴ細胞、ＮＫ細胞および形質細胞様樹状細胞上に（特に脾臓、リンパ節および胸腺において）発現され、その発現は成熟細胞または活性化細胞上で下方制御される。それはγδＴ細胞またはＢ細胞上で発現しない（図３）が、Ｔn、ＴCM、ＴEMおよびＴEMRAのＴ細胞サブセット上で発現する。ヒト臍帯血Ｔ細胞はＣＤ２８Ｈを発現し、ＣＤ４+、ＣＤ８+およびＣＤ４+／ＣＤ８+胸腺細胞も同様である。Ｂ７−Ｈ５は、カウンター受容体ＣＤ２８Ｈと相互作用して免疫系を刺激し、それによって免疫反応の強化を促進する。ＣＤ２８Ｈの下方制御は、インビボで、活性化／メモリーＴ細胞の生存を損なうことが分かった。したがって、Ｂ７−Ｈ５とＣＤ２８Ｈとの間の相互作用は、インビボにおける、ネイティブＴ細胞プライミングおよび活性化／メモリーＴ細胞の生存にとって重要である。ＣＤ２８Ｈはまた、長期にわたって抗原に曝露された／消耗したＴ細胞で下方制御されると見られる。ＣＤ２８Ｈはナチュラルキラー細胞（ＮＫ）上に構成的に発現する。Ｂ７−Ｈ５−ＣＤ２８Ｈ経路は、ＣＤ１６架橋などの他のＮＫ活性化シグナルの存在下で、ＮＫの活性化および脱顆粒を促進する。
【００３０】
本発明は、Ｂ７−Ｈ５に免疫特異的に結合する抗体およびその抗原結合フラグメントなどの分子（「抗Ｂ７−Ｈ５抗体」）、特に抗Ｂ７−Ｈ５抗体、または、Ｂ７−Ｈ５のＣＤ２８Ｈへの結合能力を損なう（すなわち、防止または減弱する）ために、Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用を遮断するおとり受容体癒合タンパク質ＣＤ２８ＨＩｇなどの分子が、Ｂ７−Ｈ５の、ＣＤ２８Ｈとの相互作用による免疫反応の強化を促進する能力を低下させることができ、それ故、Ｔ細胞増殖、サイトカイン産生およびＮＫ活性化のアンタゴニストとして機能することができるという認識を一部反映したものである。こうした分子は、免疫系活性化の生理学的低下を仲介することができ、したがって、炎症性疾患および自己免疫疾患の治療に有用である。特に、そのような抗体は、インビボにおける活性化Ｔ細胞およびＮＫ細胞の割合を低減することができる。
【００３１】
Ａ．Ｂ７−Ｈ５
Ｂ７−Ｈ５アミノ酸配列は、機能が知られていなかった（Ｆｌａｊｎｉｋ，Ｍ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（２０１２）「Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ：Ｃｏ−Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｂ７Ｈ６  Ａｎｄ  Ｎｋｐ３０，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｎｅｗ  Ｂ７  Ｆａｍｉｌｙ  Ｍｅｍｂｅｒ，Ｂ７Ｈ７，Ａｎｄ  Ｏｆ  Ｂ７’ｓ  Ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ  Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  Ｗｉｔｈ  Ｔｈｅ  ＭＨＣ，」Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ６４：５７１−５９０）、以前に発見されたヒト遺伝子のＨＨＬＡ２（ｈｕｍａｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ−Ｈ  ｌｏｎｇ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ−ａｓｓｏｃｉａｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２（ＨＨＬＡ２）；Ｍａｇｅｒ，Ｄ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）「Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ  Ｐｒｏｖｉｄｅ  Ｔｈｅ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｐｏｌｙａｄｅｎｙｌａｔｉｏｎ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｆｏｒ  Ｔｗｏ  Ｎｅｗ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｓ（ＨＨＬＡ２  Ａｎｄ  ＨＨＬＡ３，」Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ５９：２５５−２６３）に類似していることが分かった。Ｂ７−Ｈ５は、本明細書その他において、Ｂ７−Ｈ７ともいう。したがって、Ｂ７−Ｈ５およびＢ７−Ｈ７という用語は、本明細書においては、交換可能な用語として使用される。
【００３２】
ヒトＢ７−Ｈ５配列は、ニワトリ、オポッサム、有蹄哺乳動物（たとえば、ウマ、ブタ）、サケおよびサメにホモログがあることが見出されている。しかしながら、げっ歯類（マウスおよびラット）ではこれまでに偽遺伝子のみが同定されている。こうした遺伝子のアミノ酸配列は、あらゆる種で類似のドメイン構造を示し、Ｉｇスーパーファミリードメインの基準残基が保存されている。
【００３３】
ヒトＢ７−Ｈ５ポリペプチドは、４１４アミノ酸長であり、以下のもの、すなわち、シグナル配列、３つの免疫グロブリン様（Ｉｇ様）ドメインを有する細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含有することが報告されている。特に、ヒトＢ７−Ｈ５ポリペプチドは、Ｉｇ様Ｖ型１ドメイン、Ｉｇ様Ｃ−１型ドメインおよびＩｇ様Ｖ型２ドメインを含有することが報告されている。Ｂ７−Ｈ５の複数の天然変異体が存在する（たとえば、受託番号Ｑ９ＵＭ４４−１（ヒト（ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ））、ＮＰ＿００９００３（ＧＩ：５９０１９６４、ヒト（ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ））およびＡＡＤ４８３９６（ＧＩ：１５７２６２８５、ヒト（ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ））；国際公開第２０１１／０２００２４号パンフレットを参照のこと）。
【００３４】
「ネイティブＢ７−Ｈ５」（「ネイティブＢ７−Ｈ５」ともいう）という用語は、未成熟形態、前駆形態および成熟形態を含む、任意の天然Ｂ７−Ｈ５アミノ酸配列をいう。代表的なヒトＢ７−Ｈ５、受託番号Ｑ９ＵＭ４４−１のアミノ酸配列は以下のとおりである（配列番号１）。
0006682426.tif 000002
【００３５】
ヒトＢ７−Ｈ５は、以下のもの、すなわち、配列番号１のアミノ酸残基約１〜２２のシグナル配列、配列番号１のアミノ酸残基約６１〜１３１のＩｇ様Ｖ型１ドメイン（上記下線で示す）、配列番号１のアミノ酸残基約１３８〜２２２のＩｇ様Ｃ−１型ドメイン、配列番号１のアミノ酸残基約２３５〜３２８のＩｇ様Ｖ型２ドメイン、および配列番号１のアミノ酸残基約３４５〜３６５の膜貫通ドメインを含有することが報告されている。ヒトＢ７−Ｈ５ポリペプチドに対して予測される二量体界面は、配列番号１のアミノ酸残基１４１〜１４４、１５６、１５８、１６０、１６２、１９３〜１９６、１９８、２００、２０１、２２４および２２５である。ヒトＢ７−Ｈ５ポリペプチドに対して予測されるＮ連結糖鎖付加部位は、配列番号１のアミノ酸残基９０、１０３および３１８である。ヒトＢ７−Ｈ５ポリペプチドの天然変異体としては、ＢＯＴ、Ｎ３４４ＫおよびＳ３４６Ｒ（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｑ９ＵＭ４４）が挙げられる（国際公開第２０１１／０２００２４号パンフレットを参照のこと、この文献は、ヒトＢ７−Ｈ５の構造および配列の教示のために、その内容全体を参照により本明細書に援用する）。
【００３６】
ヒトＢ７−Ｈ５（配列番号１）をコードするＤＮＡ配列（配列番号２）は、以下のとおりである。
0006682426.tif 000003
【００３７】
代表的なヒトＢ７−Ｈ５  ＩｇＶドメイン  ヒトＩｇＧ４融合タンパク質は、以下のとおりである（配列番号３）（Ｂ７−Ｈ５配列はボールド体で示し、ＩｇＧ４配列は下線を付す）。
0006682426.tif 000004
【００３８】
融合タンパク質は、以下のような、Ｎ末端リーダー配列（配列番号１の残基１〜２２のような、すなわち、天然に存在するＢ７−Ｈ５リーダー配列（配列番号４）をさらに含み得る。
0006682426.tif 000005
【００３９】
天然に存在するＢ７−Ｈ５リーダー配列をコードするＤＮＡ配列（配列番号５）は、以下のとおりである。
0006682426.tif 000006
【００４０】
本発明においては、Ｂ７−Ｈ５配列はヒトＩｇＧ４領域へ融合したものを示すが、そのような配列は、任意のＩｇアイソタイプ、または、実際のところ、任意の他のタンパク質に融合することができる。
【００４１】
Ｂ７−Ｈ５ＩｇＶ−ｈＩｇＧ４（配列番号３）をコードするＤＮＡ配列（配列番号６）は、以下のとおりである。
0006682426.tif 000007
【００４２】
Ｂ７−Ｈ５の細胞外ドメインを含んでいる、代表的なヒトＢ７−Ｈ５ヒトＩｇＧ４Ｐ融合タンパク質のアミノ酸配列は、以下のとおりである（配列番号２４）（Ｂ７−Ｈ５  ＥＣＤのａａ１−３４０に下線を付したＢ７−Ｈ５ＥＣＤ−ｈＩｇＧ４Ｐ、セリン２２８からプロリンへの突然変異には二重下線を付す。
0006682426.tif 000008
【００４３】
シグナル配列はネイティブシグナル配列であり得る（配列番号２９）
0006682426.tif 000009
【００４４】
融合タンパク質は核酸配列（配列番号２５）によってコードされ得る。
0006682426.tif 000010
【００４５】
発現が広範囲にわたるヒトＢ７−Ｈ４とは対照的に、ヒトＢ７−Ｈ５は、発現が限定されている（たとえば、腸、腎臓、肺、上皮細胞およびリンパ球での発現）ことが見出されている。ヒトＨＨＬＡ２は、Ｂ７．１およびＢ７．２の近傍の染色体３ｑ１３．３３上に見出されている。Ｂ７−Ｈ５は、マクロファージ上で構成的に発現され、樹状細胞（ＤＣ）上で誘導される。
【００４６】
Ｂ．ＣＤ２８Ｈ
本明細書その他においてＨ７ＣＲとも呼ばれるＣＤ２８Ｈは、Ｂ７−Ｈ５のカウンター受容体である。したがって、ＣＤ２８ＨおよびＨ７ＣＲという用語は、本明細書においては、交換可能な用語として使用される。本明細書で使用する場合、「ネイティブＣＤ２８Ｈ」という用語は（また「ネイティブＨ７ＣＲ」も）、天然に存在するＢ７−Ｈ７またはその変異体のカウンター受容体をいう。ＣＤ２８Ｈは、Ｔ細胞、ＮＫ細胞および形質細胞様樹状細胞により発現する。ヒトＣＤ２８Ｈポリペプチドは、そうでなければ、文献／データベース中で膜貫通および免疫グロブリンドメイン含有２（ＴＭＩＧＤ２）と呼ばれるが（Ｒａｈｉｍｉ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（Ｅｐｕｂ  ２０１２  Ｍａｒ  １４）「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  ＩＧＰＲ−１  Ａｓ  Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ａｄｈｅｓｉｏｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｉｎｖｏｌｖｅｄ  Ｉｎ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，」Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ．２３（９）：１６４６−１６５６）、ＣＤ２８Ｈの機能はこれまでに解明されなかった。こうしたネイティブＣＤ２８Ｈ分子のアミノ酸配列に対する受託番号の非限定例としては、以下のものが挙げられる：Ｑ９６ＢＦ３−１（ヒト（ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ））、Ｑ９６ＢＦ３−２（ヒト（ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ））、ＮＰ＿６５３２１６．１（ＧＩ：２１３８９４２９；ヒト（ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ））およびＮＰ＿６５３２１６．２（ＧＩ：２８１３０６８３８；ヒト（ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ））。ネイティブＣＤ２８Ｈ分子の代表的なアミノ酸配列（Ｑ９６ＢＦ３−２）を、配列番号７として以下に示す。
0006682426.tif 000011
【００４７】
ヒトＣＤ２８Ｈ（配列番号７）をコードするＤＮＡ配列（配列番号８）は、以下のとおりである。
0006682426.tif 000012
【００４８】
Ｃ．定義
本明細書で使用する場合、ある分子が第２の分子に「免疫特異的に結合する」ことができるとされるのは、そうした結合が抗体に対応する抗原に対して抗体の特異性および親和性を示す場合である。抗体が抗原（特に、抗原Ｂ７−Ｈ５）の標的領域または立体構造（「エピトープ」）に「免疫特異的に結合する」ことができるとされるのは、そうした結合が免疫グロブリン分子の抗原認識部位を含む場合である。特定の抗原に免疫特異的に結合する抗体は、たとえば、イムノアッセイ、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイまたは当該技術分野において公知の他のアッセイで判定して、他の抗原が抗原認識部位により認識される配列または立体構造に類似性をある程度有する場合、より低い親和性を持つ他の抗原に結合することもあるが、まったく無関係の抗原には結合しないと考えられる。ただし、抗体（およびその抗原結合フラグメント）は、他の抗原と交差反応しないことが好ましい。また、抗体は、Ｆｃ領域など、抗原認識部位を含まない分子の他の領域／ドメインの結合ドメインによって、免疫特異的でない形でＦｃＲ受容体など他の分子に結合することができる。
【００４９】
結合または示された効果の文脈で使用する「実質的に」という用語は、観察された効果が生理学上または治療上意味があることを表すことを意図している。したがって、たとえば、遮断の程度が生理学上または治療上意味がある場合、分子はＢ７−Ｈ５の活性を実質的に遮断することができる（たとえば、そうした程度が、６０％超完全、７０％超完全、７５％超完全、８０％超完全、８５％超完全、９０％超完全、９５％超完全、または９７％超完全である場合）。同様に、ある分子が別の分子と実質的に同じ免疫特異性および／または特性を有するとされるのは、そうした免疫特異性および特性が、６０％超同一、７０％超同一、７５％超同一、８０％超同一、８５％超同一、９０％超同一、９５％超同一、または９７％超同一である場合である。
【００５０】
本明細書で使用する場合、「被検体」という用語は、非霊長類（たとえば、雌ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット等）および霊長類（たとえば、サルおよびヒト）、最も好ましくはヒトなど、哺乳動物を意味することを意図している。「患者」という用語は、診断、治療または予防を目的として、本発明の組成物を投与される被験体を意味することを意図している。
【００５１】
本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、「可変領域」抗原認識部位を有する免疫グロブリン分子を意味することを意図している。「可変領域」という用語は、免疫グロブリンのそうしたドメインと、抗体により広く共有されるドメイン（抗体のＦｃドメインなど）を区別することを意図している。可変領域は、その残基が抗原結合を担う「超可変領域」を含む。超可変領域は、「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」のアミノ酸残基（すなわち、典型的には軽鎖可変ドメインの約２４〜３４残基（Ｌ１）、５０〜５６残基（Ｌ２）および８９〜９７残基（Ｌ３）と、重鎖可変ドメインの約２７〜３５残基（Ｈ１）、５０〜６５残基（Ｈ２）および９５〜１０２残基（Ｈ３）；Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））および／または「超可変ループ」のアミノ酸残基（すなわち、軽鎖可変ドメインの２６〜３２（Ｌ１）残基、５０〜５２（Ｌ２）残基および９１〜９６（Ｌ３）残基と、重鎖可変ドメインの２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）および９６〜１０１（Ｈ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）を含む。「フレームワーク領域」すなわち「ＦＲ」残基は、本明細書で定義したような超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。抗体という用語は、モノクローナル抗体、多重特異的抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、合成抗体、キメラ抗体、ラクダ化抗体（たとえば、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２６：２３０；Ｎｕｔｔａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｃｕｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１：２５３；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，１９９９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２３１：２５；国際公開第９４／０４６７８号パンフレットおよび国際公開第９４／２５５９１号パンフレット；米国特許第６，００５，０７９号明細書を参照）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（たとえば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、イントラボディおよび抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（たとえば、開示されるＢ７−Ｈ５抗体に対する抗Ｉｄおよび抗−抗Ｉｄ抗体）を含む。特に、そうした抗体は、任意の種類（たとえば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（たとえば、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4、ＩｇＡ1およびＩｇＡ2）またはサブクラスの免疫グロブリン分子を含む。
【００５２】
本明細書で使用する場合、抗体の「抗原結合フラグメント」という用語は、抗体の相補性決定領域（「ＣＤＲ」）と、任意に抗体の「可変領域」抗原認識部位を含むフレームワーク残基とを含み、抗原に免疫特異的に結合する能力を示す抗体の１つまたは複数の部分をいう。そうしたフラグメントは、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｖ、一本鎖（ＳｃＦｖ）およびこれらのミュータント、天然変異体、ならびに抗体の「可変領域」抗原認識部位と異種タンパク質（たとえば、トキシン、別の抗原の抗原認識部位、酵素、受容体または受容体リガンド等）とを含む融合タンパク質を含む。本明細書で使用する場合、「フラグメント」という用語は、少なくとも５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも２５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも４０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも５０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも６０個の連続するアミノ残基、少なくとも７０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも８０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも９０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１００個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１２５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１５０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１７５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも２００個の連続するアミノ酸残基、または少なくとも２５０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含むペプチドまたはポリペプチドをいう。
【００５３】
ヒト抗体、キメラ抗体または抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体のヒト化誘導体は、ヒトにおけるインビボでの使用に特に好ましいものであるが、しかしながら、マウス抗体または他の種の抗体も多くの用途（たとえば、インビトロまたはインサイツ検出アッセイ、インビボでの急性使用等）に有利に利用することができる。ヒト化抗体は、１つまたは複数の非ヒトＣＤＲにアミノ酸残基の置換、欠失または付加を含むことができる。ヒト化抗体誘導体は、非誘導体ヒト化抗体に比較すると、結合が実質的に同じでも、結合がより強くても、あるいは結合がより弱くてもよい。特定の実施形態では、ＣＤＲの１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸残基が置換、欠失または付加されている（すなわち、変異している）。完全なヒト抗体は、ヒト被験者の治療処置に特に望ましい。
【００５４】
ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを用いた上記のファージディスプレイ法など当該技術分野において公知の種々の方法により作製することができる（米国特許第４，４４４，８８７号明細書および同第４，７１６，１１１号明細書；ならびに国際公開第９８／４６６４５号パンフレット、国際公開第９８／５０４３３号パンフレット、国際公開第９８／２４８９３号パンフレット、国際公開第９８／１６６５４号パンフレット、国際公開第９６／３４０９６号パンフレット、国際公開第９６／３３７３５号パンフレットおよび国際公開第９１／１０７４１号パンフレットを参照）。ヒト抗体は、機能的内因性免疫グロブリンを発現できないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを用いて製造してもよい。たとえば、ヒト重鎖および軽鎖の免疫グロブリン遺伝子の複合体は、ランダムにまたは相同組換えによりマウス胚性幹細胞に導入することができる。あるいは、ヒト重鎖遺伝子および軽鎖遺伝子に加えて、ヒト可変領域、定常領域および多様性領域をマウス胚性幹細胞に導入してもよい。マウス重鎖および軽鎖の免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入と別に非機能的にしても、あるいは同時に非機能的にしてもよい。特に、ＪH領域がホモ接合性に欠失すると、内因性抗体の産生が妨げられる。改変された胚性幹細胞は、増殖させ、胚盤胞に微量注入してキメラマウスを作製する。次いでキメラマウスを交配して、ヒト抗体を発現するホモ接合性子孫を得る。このトランスジェニックマウスを、選択された抗原、たとえば、Ｂ７−Ｈ５ポリペプチドの全部または一部で従来の方法を用いて免疫する。従来のハイブリドーマ技術を用いれば、免疫したトランスジェニックマウスから、抗原に対するモノクローナル抗体を得ることができる（たとえば、米国特許第５，９１６，７７１号明細書を参照）。トランスジェニックマウスが持つヒト免疫グロブリン導入遺伝子はＢ細胞分化において再編成し、その後クラススイッチおよび体細胞突然変異が起こる。このように、こうした技術を用いて、治療上有用なＩｇＧ抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＭ抗体およびＩｇＥ抗体を作製することができる。このヒト抗体の作製に関する技術の概要については、ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ（その全体を本明細書に援用する１９９５，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３）を参照されたい。このヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体に関する技術の詳細な考察と、そうした抗体を作製するためのプロトコールに関しては、たとえば、本明細書にその全体を援用する国際公開第９８／２４８９３号パンフレット、国際公開第９６／３４０９６号パンフレットおよび国際公開第９６／３３７３５号パンフレット；ならびに米国特許第５，４１３，９２３号明細書、同第５，６２５，１２６号明細書、同第５，６３３，４２５号明細書、同第５，５６９，８２５号明細書、同第５，６６１，０１６号明細書、同第５，５４５，８０６号明細書、同第５，８１４，３１８号明細書および同第５，９３９，５９８号明細書を参照されたい。さらに、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，ＣＡ）およびＭｅｄａ��ｅｘ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）などの会社は、上述の技術と同様の技術を用いて、選択された抗原に対するヒト抗体の提供に従事している場合がある。
【００５５】
「キメラ抗体」は、非ヒト抗体に由来する可変領域とヒト免疫グロブリン定常領域とを有する抗体などの分子であって、抗体の様々な部分が、異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。キメラ抗体を作製する方法は、当該技術分野において知られている。たとえば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２；Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４；Ｇｉｌｌｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２；ならびに米国特許第６，３１１，４１５号明細書、同第５，８０７，７１５号明細書、同第４，８１６，５６７号明細書および同第４，８１６，３９７号明細書を参照されたい。非ヒト種由来の１つまたは複数のＣＤＲと、ヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域とを含むキメラ抗体は、当該技術分野において知られる種々の技術、たとえば、ＣＤＲ移植法（欧州特許第２３９，４００号明細書；国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；ならびに米国特許第５，２２５，５３９号明細書、同第５，５３０，１０１号明細書および同第５，５８５，０８９号明細書）、ベニヤリングまたはリサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（欧州特許第５９２，１０６号明細書；欧州特許第５１９，５９６号明細書；Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７：８０５；およびＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：９６９）、および鎖シャフリング（米国特許第５，５６５，３３２号明細書）などを用いて作製することができる。
【００５６】
本発明は特に「ヒト化抗体」に関する（たとえば、欧州特許第２３９，４００号明細書、欧州特許第５９２，１０６号明細書および欧州特許第５１９，５９６号明細書；国際公開第９１／０９９６７号パンフレットおよび国際公開第９３／１７１０５号パンフレット；米国特許第５，２２５，５３９号明細書、同第５，５３０，１０１号明細書、同第５，５６５，３３２号明細書、同第５，５８５，０８９号明細書、同第５，７６６，８８６号明細書および同第６，４０７，２１３号明細書；ならびにＰａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５−８１４；Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ  ９１：９６９−９７３；Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９−１１２５；Ｃａｌｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１３：３５３−３６０；Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０：２６７−７９；Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４；Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．９：８９５−９０４；Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５（２３  Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ；Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５：１７１７−２２；Ｓａｎｄｈｕ，１９９４，Ｇｅｎｅ  １５０：４０９−１０；Ｐｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３５：９５９−９７３；Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９；およびＰｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６などを参照されたい）。本明細書で使用する場合、「ヒト化抗体」という用語は、ヒトフレームワーク領域および非ヒト（通常、マウスまたはラット）免疫グロブリン由来の１つまたは複数のＣＤＲを含む免疫グロブリンをいう。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンを「ドナー」と呼び、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンを「アクセプター」と呼ぶ。定常領域は存在しなくてもよいが、存在する場合、定常領域はヒト免疫グロブリン定常領域と実質的に同一、すなわち、少なくとも約８５〜９０％、好ましくは約９５％以上同一でなければならない。このため、おそらくＣＤＲを除くヒト化免疫グロブリンのすべての部分は、天然のヒト免疫グロブリン配列の対応する部分と実質的に同一である。ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖およびヒト化重鎖免疫グロブリンを含む抗体である。たとえば、ヒト化抗体は、典型的なキメラ抗体を包含しないと考えられる。たとえば、キメラ抗体の全可変領域は非ヒトであるためである。ドナー抗体は、「ヒト化」のプロセスにより「ヒト化」されてきたと言われる。得られるヒト化抗体が、ＣＤＲを提供するドナー抗体と同じ抗原に結合すると予想されるからである。ほとんどの場合、ヒト化抗体はヒト免疫��ロブリン（レシピエント抗体）であり、レシピエントの超可変領域残基が、非ヒト種（ドナー抗体）、たとえばマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類由来の、所望の特異性、親和性および能力を有する超可変領域残基で置き換えられている。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基で置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体に見られない残基を含んでもよい。これらの修飾は、抗体の性能をさらに向上させるために施される。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインを実質的に全部含むもので、超可変領域の全部または実質的に全部が非ヒト免疫グロブリンの超可変領域に対応し、ＦＲの全部または実質的に全部がヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。また、ヒト化抗体は、任意選択により、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはアミノ酸残基の置換、欠失または付加（すなわち、突然変異）の導入により変化したＦｃ  ＲＩＩＢポリペプチドに免疫特異的に結合するヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部を含む。
【００５７】
好ましいヒトアクセプターのフレームワーク配列をコードするＤＮＡ配列には、ヒト生殖系列ＶＨセグメントＶＨ１〜１８およびＪＨ６と、ヒト生殖系列ＶＬセグメントＶＫ−Ａ２６およびＪＫ４とに由来するＦＲセグメントがあるが、これに限定されるものではない。特定の実施形態では、通常の組換えＤＮＡ技術を用いて１つまたは複数のＣＤＲをフレームワーク領域内に挿入する。フレームワーク領域は天然のフレームワーク領域でも、あるいはコンセンサスフレームワーク領域でもよく、好ましくはヒトフレームワーク領域である（たとえば、ヒトフレームワーク領域のリストに関するＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，「Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  Ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎ，」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７８：４５７−４７９を参照）。
【００５８】
ヒト化抗体またはキメラＢ７−Ｈ５抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインを実質的に全部含んでもよく、ＣＤＲ領域の全部または実質的に全部が非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のＣＤＲ領域に対応し、フレームワーク領域の全部または実質的に全部がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である。好ましくは、Ｂ７−Ｈ５抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部をさらに含む。Ｂ７−Ｈ５抗体の定常ドメインは、抗体の想定される機能、特に必須である場合があるエフェクター機能に関連して選択してもよい。いくつかの実施形態では、Ｂ７−Ｈ５抗体の定常ドメインは、ヒトＩｇＡドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩｇＥドメイン、ＩｇＧドメインまたはＩｇＭドメインである（または、それらを含む）。特定の実施形態では、ヒト化Ｂ７−Ｈ５抗体が治療用途を意図し、抗体エフェクター機能、たとえば抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を必要とする場合、ヒトＩｇＧ定常ドメイン、特にＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプのヒトＩｇＧ定常ドメインを使用する。代替の実施形態では、Ｂ７−Ｈ５抗体が治療目的を意図し、抗体エフェクター機能を必要とする場合、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４アイソタイプを使用する。本発明は、米国特許出願公開第２００５／００３７０００号明細書および同第２００５／００６４５１４号明細書に開示されているアミノ酸修飾など、抗体エフェクター機能を変化させる、１つまたは複数のアミノ酸修飾を含むＦｃ定常ドメインを包含する。
【００５９】
いくつかの実施形態では、Ｂ７−Ｈ５抗体は、軽鎖と少なくとも重鎖の可変ドメインとの両方を含む。他の実施形態では、Ｂ７−Ｈ５抗体は、重鎖のＣＨ１領域、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域およびＣＨ４領域の１つまたは複数をさらに含んでもよい。抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥなど免疫グロブリンの任意のクラス、ならびにＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3およびＩｇＧ4などの任意のアイソタイプから選択することができる。いくつかの実施形態では、定常ドメインは補体結合定常ドメインであり、抗体が細胞障害活性を示し、クラスは典型的にはＩｇＧ1であることが望ましい。そうした細胞障害活性が望ましくない他の実施形態では、定常ドメインはＩｇＧ2クラスのものであってもよい。Ｂ７−Ｈ５抗体は、２つ以上のクラスまたはアイソタイプ由来の配列を含んでもよく、所望のエフェクター機能を最適化する特定の定常ドメインを選択することは、当業者の技術の範囲である。
【００６０】
ヒト化抗体のフレームワーク領域およびＣＤＲ領域は、親配列に正確に一致する必要はなく、たとえば、少なくとも１つの残基の置換、挿入または欠失により、ドナーＣＤＲまたはコンセンサスフレームワークに変異を誘発して、その部位のＣＤＲ残基またはフレームワーク残基がコンセンサスあるいはドナー抗体に一致しないようにしてもよい。ただし、そうした突然変異は、好ましくは大規模なものではない。通常、ヒト化抗体残基は、親フレームワーク領域（ＦＲ）配列およびＣＤＲ配列の残基と少なくとも７５％、より頻繁には９０％、最も好ましくは９５％超一致する。ヒト化抗体は、当該技術分野において公知の様々な技術、以下に限定されるものではないが、ＣＤＲ移植法（欧州特許第２３９，４００号明細書；国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；ならびに米国特許第５，２２５，５３９号明細書、同第５，５３０，１０１号明細書および同第５，５８５，０８９号明細書）、ベニヤリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）またはリサーフィシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（欧州特許第５９２，１０６号明細書および欧州特許第５１９，５９６号明細書；Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５−８１４；およびＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９１：９６９−９７３）、鎖シャフリング（米国特許第５，５６５，３３２号明細書）および、たとえば、米国特許第６，４０７，２１３号明細書、同第５，７６６，８８６号明細書、同第５，５８５，０８９号明細書、国際公開第９３１７１０５号パンフレット、Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９−２５，Ｃａｌｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１３：３５３−６０，Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０：２６７−７９，Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−８４，Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．９：８９５−９０４，Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５（２３  Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ，Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５：１７１７−２２，Ｓａｎｄｈｕ，１９９４，Ｇｅｎｅ  １５０：４０９−１０，Ｐｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３５：９５９−７３，Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５，Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３およびＰｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６に開示されている技術を用いて作製することができる。多くの場合、フレームワーク領域のフレームワーク残基は、抗原結合を変化させる、好ましくは向上させるため、ＣＤＲドナー抗体由来の対応する残基で置換される。こうしたフレームワークの置換は、当該技術分野において周知の方法、たとえば、抗原結合に重要なフレー���ワーク残基を特定するための、ＣＤＲ残基とフレームワーク残基との相互作用のモデル化、および特定の位置の特殊なフレームワーク残基を特定するための配列比較により確認される。（たとえば、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，５８５，０８９号明細書；米国特許出願公開第２００４／００４９０１４号明細書および同第２００３／０２２９２０８号明細書；米国特許第６，３５０，８６１号明細書；同第６，１８０，３７０号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書；同第５，６９３，７６１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；および同第５，５３０，１０１号明細書、ならびにＲｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３を参照）。
【００６１】
本発明の方法に使用される抗体は、単一特異性であり得る。Ｂ７−Ｈ５に加えて免疫系の他の分子など、異なる標的に特異性を示す二重特異性抗体、３重特異性抗体、またはより多重の特異性抗体も対象となる。たとえば、そのような抗体は、Ｂ７−Ｈ５と、抗体が特定の細胞型または組織を標的とするのに重要な抗原（たとえば、治療している腫瘍の癌抗原に関連する抗原）との両方に結合することができる。他の実施形態では、そのような多重特異性抗体は、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＧＩＴＲ、４−１−ＢＢ、ＣＤ２７／ＣＤ７０、ＩＣＯＳ、Ｂ７−Ｈ４、ＬＩＧＨＴ、ＰＤ−１またはＬＡＧ３など、代替的または補足的免疫調節経路に関与する分子（受容体またはリガンド）に結合し、免疫調節効果をさらに弱める。さらに、多重特異性抗体は、急性および慢性免疫反応の両方の抑制的調節に特に関係し得るエフェクター分子、たとえばサイトカイン（たとえば、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−１２、ＩＬ−４  ＴＧＦ−ベータ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７、ＩＦＮｇ、Ｆｌｔ３、ＢＬｙｓ）およびケモカイン（たとえば、ＣＣＬ２１）などに結合してもよい。
【００６２】
本発明の抗体は、たとえば、インビトロ合成、組換えＤＮＡ作製および同種のものなど、ポリペプチドの製造に有用な当該技術分野において公知のどのような方法により作製してもよい。好ましくは、抗体は、組換えＤＮＡ技術により作製する。Ｂ７−Ｈ５抗体は、組換え免疫グロブリン発現技術を用いて作製してもよい。ヒト化抗体を含む免疫グロブリン分子の組換え体の作製については、米国特許第４，８１６，３９７号明細書（Ｂｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．）、米国特許第６，３３１，４１５号明細書および同第４，８１６，５６７号明細書（どちらもＣａｂｉｌｌｙｅｔ  ａｌ．）、英国特許第２，１８８，６３８号明細書（Ｗｉｎｔｅｒｅｔ  ａｌ．）、および英国特許第２，２０９，７５７号明細書に記載されている。ヒト化免疫グロブリンを含む免疫グロブリンの組換え発現の技術は、Ｇｏｅｄｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．１８５  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９９１）、およびＢｏｒｒｅｂａｃｋ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ（１９９２）でも確認することができる。組換え抗体の生成、設計および発現に関する追加情報は、Ｍａｙｆｏｒｔｈ，Ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ（１９９３）で確認することができる。
【００６３】
組換えキメラＢ７−Ｈ５抗体を作製するための例示的方法は、ａ）従来の分子生物学法により、抗体重鎖をコードし発現する発現ベクターであって、マウス抗ヒトＢ７−Ｈ５モノクローナル抗体のＣＤＲおよび可変領域を、ヒト免疫グロブリンに由来するＦｃ領域に融合した発現ベクターを構築することで、キメラ抗体重鎖発現用のベクターを作製すること；ｂ）従来の分子生物学法により、マウス抗ヒトＢ７−Ｈ５モノクローナル抗体の抗体軽鎖をコードし発現する発現ベクターを構築することで、キメラ抗体軽鎖発現用のベクターを作製すること；ｃ）従来の分子生物学法により発現ベクターを宿主細胞に導入して、キメラ抗体発現用のトランスフェクトされた宿主細胞を作製すること；およびｄ）キメラ抗体を産生するように、トランスフェクト細胞を従来の細胞培養技術により培養することを含んでもよい。
【００６４】
組換えヒト化Ｂ７−Ｈ５抗体を作製するための例示的方法は、ａ）従来の分子生物学法により、抗ヒトＢ７−Ｈ５重鎖をコードし発現する発現ベクターであって、ドナー抗体結合特異性の保持に必要とされているＣＤＲおよび可変領域フレームワークの最小限の部分が非ヒト免疫グロブリン、たとえばマウス抗ヒトＢ７−Ｈ５モノクローナル抗体に由来し、抗体の残りの部分がヒト免疫グロブリンに由来する発現ベクターを構築することで、ヒト化抗体重鎖の発現用のベクターを作製すること；ｂ）従来の分子生物学法により、抗体軽鎖をコードし発現する発現ベクターであって、ドナー抗体結合特異性の保持に必要とされるＣＤＲおよび可変領域フレームワークの最小限の部分が非ヒト免疫グロブリン、たとえばマウス抗ヒトＢ７−Ｈ５モノクローナル抗体に由来し、抗体の残りの部分がヒト免疫グロブリンに由来する発現ベクターを構築することで、ヒト化抗体軽鎖発現用のベクターを作製すること；ｃ）発現ベクターを従来の分子生物学法により宿主細胞に導入して、ヒト化抗体の発現用のトランスフェクトされた宿主細胞を作製すること；およびｄ）ヒト化抗体を産生するように、トランスフェクト細胞を従来の細胞培養技術により培養することを含んでもよい。
【００６５】
どちらの例示的な方法に関しても、そうした各発現ベクターを宿主細胞にコトランスフェクトしてもよく、各発現ベクターは、様々な選択可能なマーカーを含んでもよいが、重鎖コード配列および軽鎖コード配列以外は、同一であることが好ましい。この手順により、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドが同等に発現される。あるいは、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方をコードする単一のベクターを使用してもよい。重鎖および軽鎖のコード配列は、ｃＤＮＡもしくはゲノムＤＮＡまたは両方を含んでもよい。組換えＢ７−Ｈ５抗体の発現に使用する宿主細胞は、細菌細胞、たとえばエシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）でも、あるいは一層好ましくは真核細胞（たとえば、チャイニーズハムスターの卵巣（ＣＨＯ）細胞またはＨＥＫ−２９３細胞）でもよい。発現ベクターの選択は宿主細胞の選択によって異なり、選択された宿主細胞において所望の発現および制御特性を有するように選択してもよい。使用し得る他の細胞株として、ＣＨＯ−Ｋ１、ＮＳＯおよびＰＥＲ．Ｃ６（Ｃｒｕｃｅｌｌ，  Ｌｅｉｄｅｎ，  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）があるが、これに限定されるものではない。
【００６６】
当業者によく知られている技術により、上記の抗体のいずれかを用いて抗イディオタイプ抗体を生成してもよい（たとえば、Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ，Ｎ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９８９）「Ｉｄｉｏｔｙｐｅｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ，」ＦＡＳＥＢ  Ｊ．７：４３７−４４４；およびＮｉｓｉｎｏｆｆ，Ａ．（１９９１）「Ｉｄｉｏｔｙｐｅｓ：Ｃｏｎｃｅｐｔｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（８）：２４２９−２４３８を参照）。
【００６７】
上記の抗体のいずれの結合特性も、必要に応じて、そうした所望の特性を示す変異体をスクリーニングすることによりさらに改良してもよい。たとえば、そうした抗体は、当該技術分野において公知の様々なファージディスプレイ法を用いて作製することができる。ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインがそれをコードするポリヌクレオチド配列を持つファージ粒子の表面上に提示される。特定の実施形態では、そうしたファージを利用して、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（たとえば、ヒトまたはマウス）から発現した抗原結合ドメイン、たとえばＦａｂおよびＦｖまたはジスルフィド結合安定化Ｆｖを提示させてもよい。目的の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原を用いて、たとえば、標識抗原、あるいは、固体表面もしくはビーズに結合または捕捉された抗原を用いて選択または特定することができる。こうした方法に使用されるファージは典型的にはｆｄおよびＭ１３などの繊維状ファージである。抗原結合ドメインは、ファージ遺伝子ＩＩＩタンパク質あるいはファージ遺伝子ＶＩＩＩタンパク質との組換え融合タンパク質として発現される。本発明の免疫グロブリンまたはそのフラグメントの製造に使用できるファージディスプレイ法の例として、Ｂｒｉｎｋｍａｎ，Ｕ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）「Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ｏｆ  Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ−Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｆｖ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ，」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１８２：４１−５０，１９９５；Ａｍｅｓ，Ｒ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）「Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ  Ｏｆ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｆａｂｓ  Ｉｓｏｌａｔｅｄ  Ｆｒｏｍ  Ａ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｔｏ  Ｆｕｌｌ  Ｌｅｎｇｔｈ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１８４：１７７−１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，Ｃ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）「Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｓｉｎｇｌｅ−Ｃｈａｉｎ  Ｆｖ  Ｆｒｏｍ  Ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ  Ｍｉｃｅ  Ｕｓｉｎｇ  Ｐｈａｇｅ−Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｔｈｅ  Ｒｅ−Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｗｈｏｌｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｒｏｍ  Ｔｈｅｓｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ，」Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：９５２−９５８，１９９４；Ｐｅｒｓｉｃ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）「Ａｎ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  Ａｆｔｅｒ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  Ｆｒｏｍ  Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ，」Ｇｅｎｅ，１８７：９−１８；Ｂｕｒｔｏｎ，Ｄ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）「Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｒｏｍ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ，」Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５７：１９１−２８０；国際公開第９２／００１０４７号パンフレット；国際公開第９０／０２８０９号パンフレット；国際公開第９１／１０７３７号パンフレ���ト；国際公開第９２／０１０４７号パンフレット；国際公開第９２／１８６１９号パンフレット；国際公開第９３／１１２３６号パンフレット；国際公開第９５／１５９８２号パンフレット；国際公開第９５／２０４０１号パンフレット；および米国特許第５，６９８，４２６号明細書；同第５，２２３，４０９号明細書；同第５，４０３，４８４号明細書；同第５，５８０，７１７号明細書；同第５，４２７，９０８号明細書；同第５，７５０，７５３号明細書；同第５，８２１，０４７号明細書；同第５，５７１，６９８号明細書；同第５，４２７，９０８号明細書；同第５，５１６，６３７号明細書；同第５，７８０，２２５号明細書；同第５，６５８，７２７号明細書；同第５，７３３，７４３号明細書および同第５，９６９，１０８号明細書に開示されているものがある。
【００６８】
上記の参考文献に記載されているように、ファージの選択後、抗体をコードする領域をファージから単離し、これを使用して全抗体、たとえばヒト化抗体または他の任意の所望のフラグメントを作製し、たとえば、以下に詳述するように所望の宿主、たとえば哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細菌で発現させることができる。また、たとえば、当該技術分野において公知の方法により、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメントおよびＦ（ａｂ’）2フラグメントを組換えにより作製する技術を利用してもよい（たとえば国際公開第９２／２２３２４号パンフレット；Ｍｕｌｌｉｎａｘ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃ  Ｆａｂ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎ  Ｏｎｅ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｓｔｅｐ，」ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１２（６）：８６４−８６９；およびＳａｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）「Ｄｉｒｅｃｔ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｆａｂ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ  Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｆｒｏｍ  Ｔｈｅ  Ｓｐｅｒｍ  Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｕｓｉｎｇ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  ｃＤＮＡ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ，」Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４：２６−３４；およびＢｅｔｔｅｒ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（１９８８）「Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａｎ  Ａｃｔｉｖｅ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ，」Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３に開示されている方法）。一本鎖Ｆｖおよび抗体の作製に使用できる技術の例として、米国特許第４，９４６，７７８号明細書および同第５，２５８，４９８号明細書；Ｈｕｓｔｏｎ，Ｊ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｏｆ  Ｓｉｎｇｌｅ−Ｃｈａｉｎ  Ｆｖ  Ａｎａｌｏｇｓ  Ａｎｄ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，」Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２０３：４６−８８；Ｓｈｕ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，「Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｓｉｎｇｌｅ−Ｇｅｎｅ−Ｅｎｃｏｄｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｒｏｍ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｃｅｌｌｓ，」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９０：７９９５−７９９９；およびＳｋｅｒｒａ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９８８）「Ａｓｓｅｍｂｌｙ  Ｏｆ  Ａ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｖ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ  Ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ，」Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０３８−１０４０に記載されているものが挙げられる。
【００６９】
ファージディスプレイ技術は、Ｂ７−Ｈ５に対する抗体の親和性を高めるために使用してもよい。この技術は、開示されるコンビナトリアル法に使用し得る高親和性抗体を得るのに有用であると考えられる。この技術は、親和性成熟と呼ばれ、変異誘発またはＣＤＲウォーキング、およびそうした受容体もしくはリガンド（またはそれらの細胞外ドメイン）またはその抗原性フラグメントを用いた再選択を利用して、最初の抗体または親抗体と比較すると、より高い親和性で抗原に結合する抗体を特定する（たとえば、Ｇｌａｓｅｒ，Ｓ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｂｙ  Ｃｏｄｏｎ−Ｂａｓｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｉｎ  Ａ  Ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ  Ｐｈａｇｅ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ，」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３９０３−３９１３を参照）。単一のヌクレオチドではなく全コドンに変異を誘発すると、アミノ酸突然変異をセミランダムに導入したレパートリーが得られる。各々が単一のＣＤＲに単一のアミノ酸変化を含み、かつＣＤＲ残基ごとに可能なそれぞれのアミノ酸置換を示す変異体を含む、変異体クローンのプールからなるライブラリーを構築してもよい。抗原に対する結合親和性が増加したミュータントは、固定化したミュータントを標識抗原と接触させることによりスクリーニングすることができる。当該技術分野において公知の任意のスクリーニング法を用いれば、抗原に対するアビディティーが向上したミュータント抗体を特定することができる（たとえば、ＥＬＩＳＡ）（たとえば、Ｗｕ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（１９９８）「Ｓｔｅｐｗｉｓｅ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｖｉｔａｘｉｎ，Ａｎ  Ａｌｐｈａｖ  Ｂｅｔａ３−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍａｂ，」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５（１１）：６０３７−６０４２；Ｙｅｌｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）「Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  ＢＲ９６  Ａｎｔｉ−Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｂｙ  Ｃｏｄｏｎ−Ｂａｓｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ，」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４を参照されたい）。軽鎖にランダム変異を導入するＣＤＲウォーキングを使用してもよい（Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）「Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｐｉｃｏｍｏｌａｒ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ａｎｔｉ−Ｃ−Ｅｒｂｂ−２  Ｓｉｎｇｌｅ−Ｃｈａｉｎ  Ｆｖ  Ｂｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  Ｒｅｇｉｏｎｓ  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ，」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：５５１−５６７を参照）。
【００７０】
本発明は、したがって、ランダム変異誘発を使用して、改良されたＣＤＲを特定することを想定している。あるいは、ファージディスプレイ技術を、ＣＤＲ親和性を増加（または減少）させるために使用することができる。この技術は、親和性成熟と呼ばれ、変異誘発または「ＣＤＲウォーキング」、および標的抗原もしくはその抗原性フラグメントを用いた再選択を利用して、最初の抗体または親抗体と比較すると、より高い（またはより低い）親和性で抗原に結合するＣＤＲを有する抗体を特定する（たとえば、Ｇｌａｓｅｒ，Ｓ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｂｙ  Ｃｏｄｏｎ−Ｂａｓｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｉｎ  Ａ  Ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ  Ｐｈａｇｅ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ，」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３９０３−３９１３を参照）。単一のヌクレオチドではなく全コドンに変異を誘発すると、アミノ酸突然変異をセミランダムに導入したレパートリーが得られる。各々が単一のＣＤＲに単一のアミノ酸変化を含み、かつＣＤＲ残基ごとに可能なそれぞれのアミノ酸置換を示す変異体を含む、変異体クローンのプールからなるライブラリーを構築してもよい。抗原に対する結合親和性が増加（または減少）したミュータントは、固定化したミュータントを標識抗原と接触させることによりスクリーニングすることができる。当該技術分野において公知の任意のスクリーニング法を用いれば、抗原に対するアビディティーが向上（低下）したミュータント抗体を特定することができる（たとえば、ＥＬＩＳＡ）（Ｗｕ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（１９９８）「Ｓｔｅｐｗｉｓｅ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｖｉｔａｘｉｎ，Ａｎ  Ａｌｐｈａｖ  Ｂｅｔａ３−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍａｂ，」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５（１１）：６０３７−６０４２；Ｙｅｌｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）「Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  ＢＲ９６  Ａｎｔｉ−Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｂｙ  Ｃｏｄｏｎ−Ｂａｓｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ，」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４を参照されたい）。軽鎖にランダム変異を導入するＣＤＲウォーキングを使用してもよい（Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔａｌ．（１９９６）「Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｐｉｃｏｍｏｌａｒ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ａｎｔｉ−Ｃ−Ｅｒｂｂ−２  Ｓｉｎｇｌｅ−Ｃｈａｉｎ  Ｆｖ  Ｂｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  Ｒｅｇｉｏｎｓ  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ，」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：５５１−５６７を参照）。
【００７１】
そうした親和性成熟を達成するための方法は、たとえば、Ｋｒａｕｓｅ，Ｊ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）「Ａｎ  Ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  Ｔｈａｔ  Ｄｉｓｔｏｒｔｓ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ  Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ，」ＭＢｉｏ．２（１）ｐｉｉ：ｅ００３４５−１０．ｄｏｉ：１０．１１２８／ｍＢｉｏ．００３４５−１０；Ｋｕａｎ，Ｃ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）「Ａｆｆｉｎｉｔｙ−Ｍａｔｕｒｅｄ  Ａｎｔｉ−Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ＮＭＢ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎｓ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｇｌｉｏｍａｓ  Ａｎｄ  Ｍｅｌａｎｏｍａｓ，」Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １０．１００２／ｉｊｃ．２５６４５；Ｈａｃｋｅｌ，Ｂ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）「Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  Ａｎｄ  ＣＤＲ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  Ｂｉａｓｅｓ  Ｅｎｒｉｃｈ  Ｂｉｎｄｅｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ  Ｌａｎｄｓｃａｐｅｓ，」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４０１（１）：８４−９６；Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，Ｄ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）「Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ａｇａｉｎｓｔ  ＨＩＶ−１  ｇｐ４１，」ＭＡｂｓ  １（５）：４６２−４７４；Ｇｕｓｔｃｈｉｎａ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）「Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  Ｂｙ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  ＣＤＲ−Ｈ２  Ｌｏｏｐ  Ｏｆ  Ａ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ｆａｂ  Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｆｒｏｍ  Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｎａｉｖｅ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ａｎｄ  Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｔｒｉｍｅｒｉｃ  Ｃｏｉｌｅｄ−Ｃｏｉｌ  Ｏｆ  Ｇｐ４１  Ｙｉｅｌｄｓ  Ａ  Ｓｅｔ  Ｏｆ  Ｆａｂｓ  Ｗｉｔｈ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ＨＩＶ−１  Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｐｏｔｅｎｃｙ  Ａｎｄ  Ｂｒｅａｄｔｈ，」Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ３９３（１）：１１２−１１９；Ｆｉｎｌａｙ，Ｗ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）「Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｒａｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｏｒ  Ａｎｔｉ−ＲＡＧＥ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｒｅｖｅａｌｓ  Ａ  Ｈｉｇｈ  Ｌｅｖｅｌ  Ｏｆ  Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  Ｂｏｔｈ  Ｉｎｓｉｄｅ  Ａｎｄ  Ｏｕｔｓｉｄｅ  Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ−Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  Ｒｅｇｉｏｎｓ，」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８８（３）：５４１−５５８；Ｂｏｓｔｒｏｍ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）「Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ａｎｄ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，」Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５２５：３５３−３７６；Ｓｔｅｉｄｌ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）「Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  ＧＭ−ＣＳＦ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｂｙ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ＣＤＲ−Ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ，」Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４６（１）：１３５−１４４；およびＢａｒｄｅｒａｓ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）「Ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｂｙ  ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ，」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１０５（２６）：９０２９−９０３４に記載されている。
【００７２】
本発明は、特に、上記抗体およびその抗原結合フラグメントのいずれかの「誘導体」の作製および使用を想定している。
【００７３】
「誘導体」という用語は、抗原に免疫特異的に結合するが、「親」（または野生型）分子に対して１、２、３、４、５またはそれを上回るアミノ酸の置換、付加、欠失または修飾を含む抗体またはその抗原結合フラグメントをいう。そうしたアミノ酸の置換または付加は、天然の（すなわち、ＤＮＡによりコードされた）アミノ酸残基を導入しても、あるいは非天然のアミノ酸残基を導入してもよい。「誘導体」という用語は、たとえば、抗体１．３、４．５または７．８のいずれかのキメラ変異体またはヒト化変異体、ならびにたとえばエフェクター特性または結合特性が増強または障害された変異Ｆｃ領域を有する抗体等を形成させるように改変されたＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３またはＣＨ４の領域を有する変異体を包含する。「誘導体」という用語は、非アミノ酸修飾、たとえば、グリコシル化（たとえば、マンノース、２−Ｎ‐アセチルグルコサミン、ガラクトース、フクトース（ｆｕｃｔｏｓｅ）、グルコース、シアル酸、５−Ｎ−アセチルノイラミン酸、５−グリコルノイラミン酸等の含量の変更）、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結等を施し得るアミノ酸をさらに包含する。いくつかの実施形態では、変化させた糖鎖修飾により、抗体の可溶化、細胞内輸送および抗体の分泌の促進、抗体形成の促進、立体構造の安定性および抗体のエフェクター機能のうち１つまたは複数が調節される。特定の実施形態では、変化させた糖鎖修飾により、糖鎖修飾がない抗体と比較して抗体のエフェクター機能が増強される。抗体のエフェクター機能を変化させる糖鎖修飾は、当該技術分野において周知である（たとえば、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）「Ｌａｃｋ  Ｏｆ  Ｆｕｃｏｓｅ  Ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  Ｎ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  Ｉｍｐｒｏｖｅｓ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｆｃｇａｍｍａ  ＲＩＩＩ  Ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ．，」Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（３０）：２６７３３−２６７４０；Ｄａｖｉｅｓ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｆ  ＧｎＴＩＩＩ  Ｉｎ  Ａ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ２０  ＣＨＯ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ：Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｗｉｔｈ  Ａｌｔｅｒｅｄ  Ｇｌｙｃｏｆｏｒｍｓ  Ｌｅａｄｓ  Ｔｏ  Ａｎ  Ｉｎｃｒｅａｓｅ  Ｉｎ  ＡＤＣＣ  Ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｈｉｇｈｅｒ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｆｏｒ  ＦＣ  Ｇａｍｍａ  ＲＩＩＩ，」Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＆  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７４（４）：２８８−２９４を参照）。糖鎖量を変化させる方法は当業者に公知であり、たとえば、Ｗａｌｌｉｃｋ，Ｓ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９８８）「Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ａ  ＶＨ  Ｒｅｓｉｄｕｅ  Ｏｆ  Ａ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ａｌｐｈａ（１−−−−６）Ｄｅｘｔｒａｎ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  Ｉｔｓ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｆｏｒ  Ａｎｔｉｇｅｎ，」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６８���３）：１０９９−１１０９；Ｔａｏ，Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（１９８９）「Ｓｔｕｄｉｅｓ  Ｏｆ  Ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｍｏｕｓｅ−Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ．Ｒｏｌｅ  Ｏｆ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎｄ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｂｙ  Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  Ｃｏｎｓｔａｎｔ  Ｒｅｇｉｏｎ，」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４３（８）：２５９５−２６０１；Ｒｏｕｔｌｅｄｇｅ，Ｅ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）「Ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ｏｆ  Ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  Ｏｎ  Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  Ｏｆ  Ａ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ＣＤ３  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ，」Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６０（８）：８４７−５３；Ｅｌｌｉｏｔｔ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）「Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  Ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  Ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｇｌｙｃｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，」Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：４１４−２１；Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）「Ｌａｃｋ  Ｏｆ  Ｆｕｃｏｓｅ  Ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  Ｎ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  Ｉｍｐｒｏｖｅｓ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｆｃｇａｍｍａ  ＲＩＩＩ  Ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ．，」Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（３０）：２６７３３−２６７４０）を参照されたい。
【００７４】
いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は誘導体である。こうしたヒト化抗体は、１つまたは複数の非ヒトＣＤＲにアミノ酸残基の置換、欠失または付加を含む。ヒト化抗体誘導体は、非誘導体ヒト化抗体に比較すると、結合が実質的に同じでも、結合がより良くても、あるいは結合がより悪くてもよい。特定の実施形態では、ＣＤＲの１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸残基が置換、欠失または付加されている（すなわち、変異している）。
【００７５】
誘導体抗体または抗体フラグメントは、以下に限定されるものではないが、特異的な化学的切断、アセチル化、製剤、ツニカマイシンの代謝合成等の、当業者に公知の技術を用いて化学修飾により修飾してもよい。一実施形態では、抗体誘導体は、親抗体と類似または同一の機能を有する。別の実施形態では、抗体誘導体は、親抗体と比較して活性の変化を示す。たとえば、誘導体抗体（またはそのフラグメント）は親抗体より、そのエピトープに密接に結合してもよいし、あるいはタンパク質分解に対する耐性が強くてもよい。
【００７６】
誘導体化抗体を用いて、哺乳動物、好ましくはヒトにおける親抗体の半減期（たとえば、血清中半減期）を変化させてもよい。好ましくは、そうした変化の結果、半減期は１５日を超える、好ましくは２０日を超える、２５日を超える、３０日を超える、３５日を超える、４０日を超える、４５日を超える、２ヶ月を超える、３ヶ月を超える、４ヶ月を超える、または５ヶ月を超える。哺乳動物、好ましくはヒトにおける、本発明のヒト化抗体またはそのフラグメントの半減期の延長の結果、哺乳動物における前記抗体または抗体フラグメントの血清中力価が上昇し、したがって、前記抗体または抗体フラグメントの投与頻度が減少する、および／または、投与される前記抗体または抗体フラグメントの濃度が低下する。インビボ半減期を延長した抗体またはそのフラグメントは、当業者に公知の技術により作製することができる。たとえば、インビボ半減期を延長した抗体またはそのフラグメントは、ＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体との間の相互作用に関与すると判定されたアミノ酸残基を修飾する（たとえば、置換、欠失または付加する）ことにより作製することができる。ヒト化Ｂ７−Ｈ５抗体は、生物学的半減期を延長するように操作してもよい（たとえば米国特許第６，２７７，３７５号明細書を参照）。たとえば、ヒト化Ｂ７−Ｈ５抗体は、Ｆｃ−ヒンジドメインにおいてインビボまたは血清中半減期を延長するように操作してもよい。
【００７７】
インビボ半減期を延長した抗体またはそのフラグメントは、前記抗体または抗体フラグメントにポリマー分子、たとえば高分子量ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を結合することにより作製することができる。ＰＥＧは、多機能リンカーを用いてあるいは用いずに、前記抗体または抗体フラグメントのＮ末端またはＣ末端にあるいはリジン残基上にあるε−アミノ基を介して、ＰＥＧを部位特異的にコンジュゲートすることにより前記抗体または抗体フラグメントに結合することができる。生物活性の低下を最小限にとどめる直鎖または分岐ポリマー誘導体化を使用する。コンジュゲーションの程度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析法により詳細にモニターして、ＰＥＧ分子の抗体への適切なコンジュゲーションを確かなものにする。未反応ＰＥＧは、たとえば、サイズ排除またはイオン交換クロマトグラフィーにより抗体−ＰＥＧコンジュゲートから分離することができる。
【００７８】
また、Ｂ７−Ｈ５抗体は、実質的に免疫原性反応を伴わない、哺乳動物の循環系に注入してもよい組成物を得るため、Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（米国特許第４，１７９，３３７号明細書を参照）に記載された方法およびカップリング剤により修飾してもよい。
【００７９】
一実施形態は、ヒト化Ｂ７−Ｈ５抗体のフレームワーク残基の修飾を包含する。フレームワーク領域のフレームワーク残基は、抗原結合を変化させる、好ましくは向上させるため、ＣＤＲドナー抗体由来の対応する残基で置換してもよい。こうしたフレームワークの置換は、当該技術分野において周知の方法、たとえば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を特定するための、ＣＤＲ残基とフレームワーク残基との相互作用のモデル化、および特定の位置の特殊なフレームワーク残基を特定するための配列比較により確認される。（たとえば、米国特許第５，５８５，０８９号明細書；およびＲｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９８８）「Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，」Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７を参照）。
【００８０】
なお別の実施形態は、異種分子（すなわち、無関係の分子）に組換え技術で融合させたまたは化学的にコンジュゲートした（共有結合および非共有結合の両方）抗ヒトＢ７−７５抗体（一層好ましくは、ヒト化抗体）およびその抗原結合フラグメントを包含する。融合は、必ずしも直接でなくてもよく、リンカー配列を介して行ってもよい。
【００８１】
一実施形態では、そうした異種分子は、少なくとも１０個のアミノ酸、少なくとも２０個のアミノ酸、少なくとも３０個のアミノ酸、少なくとも４０個のアミノ酸、少なくとも５０個のアミノ酸、少なくとも６０個のアミノ酸、少なくとも７０個のアミノ酸、少なくとも８０個のアミノ酸、少なくとも９０個のアミノ酸または少なくとも１００個のアミノ酸を有するポリペプチドである。あるいは、そうした異種分子は、酵素でも、ホルモンでも、細胞表面受容体でも、薬剤部分、たとえば、トキシン（たとえばアブリン、リシンＡ、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素（すなわち、ＰＥ−４０）、ジフテリア毒素、リシン、ゲロニンもしくはアメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質）、タンパク質（たとえば腫瘍壊死因子、インターフェロン（たとえば、α−インターフェロン、β−インターフェロン）、神経成長因子、血小板由来増殖因子、組織プラスミノーゲン活性化因子またはアポトーシス剤（たとえば、腫瘍壊死因子−α、腫瘍壊死因子−β））、生物学的応答調節剤（たとえば、リンホカイン（たとえば、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」））、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）もしくはマクロファージコロニー刺激因子、（「Ｍ−ＣＳＦ」））、または増殖因子（たとえば、成長ホルモン（「ＧＨ」）））、細胞毒（たとえば、細胞増殖抑制剤もしくは殺細胞薬、たとえばパクリタキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムプロミド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにこれらのアナログまたはホモログ）、代謝拮抗薬（たとえば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（たとえば、メクロレタミン、チオエパ  クロラムブシル、メルファラン、ＢｉＣＮＵ（登録商標）（カルムスチン；ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトスフアミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣおよびシスジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（たとえば、ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（たとえば、ダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシンおよびアントラマイシン（ＡＭＣ））、または有糸分裂阻害薬（たとえば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）でもよい。
【００８２】
そうした治療部分を抗体にコンジュゲートする技術は、よく知られている。たとえば、Ａｒｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」、ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），１９８５，ｐｐ．２４３−５６，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」，ｉｎ  ＣＯＮＴＲＯＬＬＥＤ  ＤＲＵＧ  ＤＥＬＩＶＥＲＹ（２ｎｄ  Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），１９８７，ｐｐ．６２３−５３，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．）；Ｔｈｏｒｐｅ，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ」、ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ’８４：ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＡＮＤ  ＣＬＩＮＩＣＡＬ  ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）、１９８５，ｐｐ．４７５−５０６）；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」、ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＦＯＲ  ＣＡＮＣＥＲ  ＤＥＴＥＣＴＩＯＮ  ＡＮＤ  ＴＨＥＲＡＰＹ，Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），１９８５，ｐｐ．３０３−１６、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；およびＴｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２）「Ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ＴｏｘｉｎＣｏｎｊｕｇａｔｅｓ」、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−１５８を参照されたい。
【００８３】
一実施形態では、Ｂ７−Ｈ５抗体またはＢ７−Ｈ５融合分子はＦｃ部分を含む。そうした分子のＦｃ部分は、たとえばエフェクター機能、半減期の制御、組織への到達性の向上のため、安定性などの生物物理学的特徴の増強のため、さらに製造効率の改善（および費用削減）のため、アイソタイプまたはサブクラスが異なってもよいし、キメラまたはハイブリッドでもよいし、および／または、修飾してもよい。開示された融合タンパク質の構築に有用な多くの修飾、およびそれを行う方法については当該技術分野において公知であり、たとえばＭｕｅｌｌｅｒ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）「Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｐｏｒｃｉｎｅ  ＶＣＡＭ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｗｉｔｈ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ＩｇＧ２／Ｇ４  Ｃｏｎｓｔａｎｔ  Ｒｅｇｉｏｎｓ  Ｂｌｏｃｋ  Ｈｕｍａｎ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｔｏ  Ｐｏｒｃｉｎｅ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌｓ，」Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（６）：４４１−４５２、Ｓｗａｎｎ，Ｐ．Ｇ．（２００８）「Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｏｆ  ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，」Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．２０：４９３−４９９（２００８）、およびＰｒｅｓｔａ，Ｌ．Ｇ．（２００８）「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ａｎｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，」Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．２０：４６０−４７０を参照されたい。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は天然のＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４のＦｃ領域である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はハイブリッド、たとえばＩｇＧ２／ＩｇＧ４のＦｃ定常領域からなるキメラである。Ｆｃ領域の修飾には、Ｆｃγ受容体および補体への結合を防止するように修飾されたＩｇＧ４、１つまたは複数のＦｃγ受容体への結合を改善するように修飾されたＩｇＧ１、エフェクター機能を最小限に抑えるように修飾されたＩｇＧ１（アミノ酸変化）、グリカンを変化させた／含まないＩｇＧ１（典型的には発現宿主の変更による）、およびＦｃＲｎへのｐＨ依存性結合を変化させたＩｇＧ１、および安定性を増強するためにヒンジ領域のアミノ酸残基番号２２８のセリンをプロリンに変化させた（Ｓ２２８Ｐ）ＩｇＧ４があるが、これに限定されるものではない。Ｆｃ領域は全ヒンジ領域を含むことも、あるいは全ヒンジ領域より小さい領域を含むこともある。
【００８４】
非ホジキンリンパ腫またはワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症用のリツキシマブ（ＣＤ２０に対するキメラマウス／ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体）で処置した患者の治療結果は、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインに対する固有の親和性が異なるＦｃγ受容体の対立遺伝子変異体の個々の発現に相関した。特に、低親和性活性化Ｆｃ受容体ＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩＡ）の高親和性対立遺伝子を持つ患者は、より高い反応率を示し、非ホジキンリンパ腫の場合、無増悪生存期間が改善した。別の実施形態では、Ｆｃドメインは、低親和性抑制性Ｆｃ受容体ＣＤ３２Ｂ（ＦｃγＲＩＩＢ）への結合を抑え、低親和性活性化Ｆｃ受容体ＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩＡ）への野生型レベルの結合を保持するまたはその結合を増強する、１つまたは複数のアミノ酸の挿入、欠失または置換を含んでもよい。
【００８５】
別の実施形態は、ＦｃＲへの結合を抑制してあるＩｇＧ２−４ハイブリッドおよびＩｇＧ４ミュータントを含み、それらの半減期が延長される。代表的なＩＧ２−４ハイブリッドおよびＩｇＧ４ミュータントについては、Ａｎｇａｌ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）「Ａ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  Ａｂｏｌｉｓｈｅｓ  Ｔｈｅ  Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ  Ｏｆ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｍｏｕｓｅ／Ｈｕｍａｎ（Ｉｇｇ４）Ａｎｔｉｂｏｄｙ，」Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０（１）：１０５−１０８；Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）「Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｐｏｒｃｉｎｅ  ＶＣＡＭ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｗｉｔｈ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｉｇｇ２／Ｇ４  Ｃｏｎｓｔａｎｔ  Ｒｅｇｉｏｎｓ  Ｂｌｏｃｋ  Ｈｕｍａｎ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｔｏ  Ｐｏｒｃｉｎｅ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌｓ，」Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（６）：４４１−４５２；および米国特許第６，９８２，３２３号明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１ドメインおよび／またはＩｇＧ２ドメインを欠失する。たとえば、Ａｎｇａｌ，ｓ．ｅｔ  ａｌ．は、プロリンで置換したセリン２４１を有するＩｇＧ１およびＩｇＧ２について記載している。
【００８６】
誘導体化抗体の置換、付加または欠失は抗体のＦｃ領域にあってもよく、それにより１つまたは複数のＦｃ  Ｒに対する抗体の結合親和性の改変に貢献することができる。抗体を修飾して１つまたは複数のＦｃ  Ｒに対する結合を改変する方法は、当該技術分野において知られており、たとえば、国際公開第０４／０２９２０７号パンフレット、国際公開第０４／０２９０９２号パンフレット、国際公開第０４／０２８５６４号パンフレット、国際公開第９９／５８５７２号パンフレット、国際公開第９９／５１６４２号パンフレット、国際公開第９８／２３２８９号パンフレット、国際公開第８９／０７１４２号パンフレット、国際公開第８８／０７０８９号パンフレット、ならびに米国特許第５，８４３，５９７号明細書および同第５，６４２，８２１号明細書を参照されたい。特定の一実施形態では、Ｆｃ領域の修飾の結果、抗体は、抗体のエフェクター機能の変化、他のＦｃ受容体（たとえば、Ｆｃ活性化受容体）に対する結合の変化、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性の変化、Ｃ１ｑ結合活性の変化、補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）の変化、食作用活性、またはこれらの任意の組み合わせを有する。
【００８７】
いくつかの実施形態では、本発明は、その分子がＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合活性の変化を示すように、たとえば、ＦｃγＲＩＩＡもしくはＦｃγＲＩＩＩＡなどの活性化受容体に対する活性の低下を示すように、あるいは、ＦｃγＲＩＩＢなどの抑制性受容体に対する活性の増大を示すように、Ｆｃ領域が修飾された抗体を包含する。好ましくは、そのような抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性の低下（野生型Ｆｃ受容体と比較して）を示すであろう。
【００８８】
Ｆｃのエフェクター機能に影響を与える修飾は、当該技術分野においてよく知られている（米国特許第６，１９４，５５１号明細書および国際公開第００／４２０７２号パンフレット；Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ，Ｊ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）「Ｆｃ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ｔｈｅｉｒ  Ａｂｉｌｉｔｙ  Ｔｏ  Ｋｉｌｌ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｓ  Ｔｕｍｏｒ  Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｖｉａ  Ｌｏｗ−Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  Ｆｃｇａｍｍａ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ」，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７（１８）：８８８２−８８９０；Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）「Ｈｉｇｈ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１  ｆｏｒ  ＦｃγＲＩ，ＦｃγＲＩＩ，ＦｃγＲＩＩＩ，ａｎｄ  ＦｃＲｎ  ａｎｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ＩｇＧ１  Ｖａｒｉａｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＦｃγＲ」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１−６６０４を参照）。ＦｃγＲＩＩＡまたはＦｃγＲＩＩＩＡへの結合を減少させるが、ＦｃγＲＩＩＢへの結合は変化させないか、または増加させるヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメインの変異体の例としては、Ｓ２３９Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｓ２６７Ｇ、Ｅ２６９Ａ、Ｅ２９３Ａ、Ｅ２９３Ｄ、Ｙ２９６Ｆ、Ｒ３０１Ａ、Ｖ３０３Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ｋ３３８Ａ、Ａ３３９Ａ、Ｄ３７６Ａが挙げられる。
【００８９】
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｆｃ領域が欠失されている抗体（たとえば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ）2など）を包含する。
【００９０】
精製しやすくするため、本発明の分子のいずれかをペプチドなどのマーカー配列に融合してもよい。好ましい実施形態では、マーカーアミノ酸配列は、ヘキサ−ヒスチジンペプチド、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来するエピトープに相当するヘマグルチニン「ＨＡ」タグ（Ｗｉｌｓｏｎ，Ｉ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９８４）「Ｔｈｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｏｆ  Ａｎ  Ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ  Ｉｎ  Ａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ，」Ｃｅｌｌ，３７：７６７−７７８）および「ｆｌａｇ」タグ（Ｋｎａｐｐｉｋ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）「Ａｎ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｔａｇ  Ｂａｓｅｄ  Ｏｎ  Ｔｈｅ  ＦＬＡＧ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ，」Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １７（４）：７５４−７６１）である。
【００９１】
本発明は、診断薬もしくは治療薬、または血清中半減期が延長されると望ましいいずれかの他の分子にコンジュゲートし得る抗体またはその抗原結合フラグメントも包含する。この抗体は、たとえば、臨床試験手順の一部として疾患、障害または感染症の発症または進行をモニターするため診断（インビボ、インサイツまたはインビトロでの）に使用して、たとえば、特定の処置レジメンの有効性を判定してもよい。抗体を検出可能な物質に結合することで検出を行いやすくすることができる。検出可能な物質の例として、様々な酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、生物発光材料、放射性物質、ポジトロン放出金属および非放射性常磁性金属イオンが挙げられる。検出可能な物質は、当該技術分野において公知の技術を用いて抗体に直接結合またはコンジュゲートしても、あるいは、中間体（たとえば、当該技術分野において公知のリンカー）を介して間接的に結合またはコンジュゲートしてもよい。たとえば、本発明による診断で使用される抗体にコンジュゲートできる金属イオンに関する米国特許第４，７４１，９００号明細書を参照されたい。そうした診断および検出は、以下に限定されるものではないが、様々な酵素、以下に限定されるものではないが、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼなどの酵素；以下に限定されるものではないが、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンなどの補欠分子族複合体；以下に限定されるものではないが、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリンなどの蛍光材料；以下に限定されるものではないが、ルミノールなどの発光材料；以下に限定されるものではないが、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンなどの生物発光材料；以下に限定されるものではないが、ビスマス（213Ｂｉ）、炭素（14Ｃ）、クロム（51Ｃｒ）、コバルト（57Ｃｏ）、フッ素（18Ｆ）、ガドリニウム（153Ｇｄ、159Ｇｄ）、ガリウム（68Ｇａ、67Ｇａ）、ゲルマニウム（68Ｇｅ）、ホルミウム（166Ｈｏ）、インジウム（115Ｉｎ、113Ｉｎ、112Ｉｎ、111Ｉｎ）、ヨウ素（131Ｉ、125Ｉ、123Ｉ、121Ｉ）、ランタン（140Ｌａ）、ルテチウム（177Ｌｕ）、マンガン（54Ｍｎ）、モリブデン（99Ｍｏ）、パラジウム（103Ｐｄ）、リン（32Ｐ）、プラセオジム（142Ｐｒ）、プロメチウム（149Ｐｍ）、レニウム（186Ｒｅ、188Ｒｅ）、ロジウム（105Ｒｈ）、ルテミウム（97Ｒｕ）、サマリウム（153Ｓｍ）、スカンジウム（47Ｓｃ）、セレン（75Ｓｅ）、ストロンチウム（85Ｓｒ）、硫黄（35Ｓ）、テクネチウム（99Ｔｃ）、タリウム（201Ｔｉ）、スズ（113Ｓｎ、117Ｓｎ）、トリチウム（3Ｈ）、キセノン（133Ｘｅ）、イッテルビウム（169Ｙｂ、175Ｙｂ）、イットリウム（90Ｙ）、亜鉛（65Ｚｎ）などの放射性物質；様々なポジトロン断層法を用いたポジトロン放出金属、および非放射性常磁性金属イオンなどの検出可能な物質に抗体を結合することにより達成することができる。
【００９２】
米国特許第４，６７６，９８０号明細書でＳｅｇａｌにより記載されたように、本発明の分子を第２の抗体にコンジュゲートして抗体のヘテロコンジュゲートを形成してもよい。そうしたヘテロコンジュゲート抗体はさらに、ハプテン（たとえばフルオレセイン等）に結合しても、あるいは細胞マーカー（たとえば、ＰＤ−１、４−１−ＢＢ、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ５、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、ＣＴＬＡ４、ＧＩＴＲ、ＬＡＧ−３、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＴＬＲ２、ＬＩＧＨＴ等）に結合しても、あるいはサイトカイン（たとえば、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−１２、ＩＬ−４  ＴＧＦ−β、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７、ＩＦＮｇ、Ｆｌｔ３、ＢＬｙｓ）に結合しても、あるいはケモカイン（たとえば、ＣＣＬ２１）等に結合してもよい。
【００９３】
標的抗原、または支持体に固定化した標的抗原に本発明の抗体もしくは抗原結合フラグメントへの結合を介して結合することができる他の分子のイムノアッセイまたは精製に特に有用である固体支持体に本発明の分子を結合させてもよい。そうした固体支持体には、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニルまたはポリプロピレンがあるが、これに限定されるものではない。
【００９４】
本発明は、追加的に、任意のそうした抗体、融合タンパク質またはフラグメントをコードする核酸分子（ＤＮＡまたはＲＮＡ）、ならびにそうした核酸分子の送達または複製、および細胞株中でのそうした抗体、融合タンパク質またはフラグメントの発現を可能にするベクター分子を含む。核酸は、一本鎖でも、二本鎖でもよく、一本鎖部分と二本鎖部分の両方を含んでも構わない。
【００９５】
Ｄ．本発明の好ましいモジュレーター組成物
本明細書で使用する場合、「調節する」という用語は、ある作用または結果を変化させる能力に関する。特に、本発明は、抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体、またはヒトＢ７−Ｈ５に免疫特異的に結合する、抗体の任意の抗原結合フラグメント、もしくはＢ７−Ｈ５に生理学特異的に結合する分子を含むポリペプチドに関し、それらは、Ｂ７−Ｈ５とその対応するリガンドとの間の結合を調節すること、および／またはＢ７−Ｈ５−対応カウンター受容体結合の結果として生じるシグナル伝達を調節することができる。加えて、多重特異性抗Ｂ７−Ｈ５抗体、抗Ｂ７−Ｈ５抗原結合フラグメント、およびＣＤ２８Ｈまたは他の細胞リガンドもしくは受容体に結合する追加の能力を有するそれらそれぞれの融合生成物は、そうしたリガンドまたは受容体を発現する細胞とＣＤ２８を発現する細胞との共局在化を促進するのに特に有用である。
【００９６】
本発明は、抗体もしくはそのフラグメント、またはＢ７−Ｈ５に免疫特異的に結合し、インビトロまたはレシピエント被験体または患者において、Ｂ７−Ｈ５のＣＤ２８との相互作用を実質的に遮断することができる抗体もしくはフラグメントを含む融合分子に関する。本明細書で使用する場合、「Ｂ７−Ｈ５のＣＤ２８との相互作用を実質的に遮断することができる」分子とは、本明細書に開示される任意のアッセイで測定した場合に、そうした分子の供給によって、Ｂ７−Ｈ５−ＣＤ２８相互作用が、５０％超、一層好ましくは６０％超、７０％超、８０％超、９０％超、９５％超、９９％超減弱されること、または最も好ましくはそうした相互作用が完全に減弱されることを意味する。こうした抗体、フラグメントおよび融合分子は、Ｂ７−Ｈ５−ＣＤ２８相互作用の生物学的効果を減弱するのに特に有用である。
【００９７】
このように本発明は、ヒト化抗体およびフラグメント、またはヒト抗体およびフラグメントを含むそのような実施形態の分子に特に関する。
【００９８】
最も好ましくは、そうした分子は、被験体の細胞の表面上に内因性濃度で発現した場合に、Ｂ７−Ｈ５に結合するのに十分な親和性およびアビディティーを有する。「内因性濃度」という用語は、正常細胞、癌細胞、または病原体感染細胞で、分子が本来（すなわち、発現ベクターまたは組換えプロモーターの非存在下で）発現するレベルをいう。
【００９９】
（１）好ましい抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体およびそのＣＤＲ
本発明によれば、そうした分子はハイブリドーマ株についてヒトＢ７−Ｈ５に免疫特異的な抗体を産生する株をスクリーニングし、次いで、場合によってはそうした株の中で調節活性（たとえば、中和活性、促進活性、変化したシグナルの伝達活性など）を示す株をスクリーニングすることにより作製することができる。本発明は、特に、ハムスター抗ヒトＢ７−Ｈ５クローン：２Ｄ３および１８Ｃ３を提供する。抗体２Ｄ３および１８Ｃ３はヒトＢ７−Ｈ５に結合することができ、かつＢ７−Ｈ５のＣＤ２８Ｈとの相互作用を実質的に遮断することができる。Ｂ７−Ｈ５のＣＤ２８Ｈとの相互作用を実質的に遮断することができる抗体は、炎症性疾患および自己免疫疾患の治療に特に有用である。Ｂ７−Ｈ５のＣＤ２８Ｈとの相互作用を実質的に遮断することができない抗体は、Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用の存在、場所および発現率を検出するために使用できるため、診断に特に有用である。
【０１００】
Ｂ７−Ｈ５のＣＤ２８Ｈとの相互作用を遮断することができる、抗ヒトＢ７−Ｈ５クローンに発現する抗体の配列を決定して、その可変ドメインを明らかにした。以下に可変ドメインのＣＤＲ配列を太字および下線で示す。
抗ヒトＢ７−Ｈ５クローン２Ｄ３
重鎖可変領域（配列番号９）：
0006682426.tif 000013
重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号１０）：
0006682426.tif 000014
軽鎖可変領域（配列番号１１）：
0006682426.tif 000015
軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号１２）：
0006682426.tif 000016
抗ヒトＢ７−Ｈ５クローン１８Ｃ３
重鎖可変領域（配列番号１３）：
0006682426.tif 000017
重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号１４）：
0006682426.tif 000018
軽鎖可変領域（配列番号１５）：
0006682426.tif 000019
軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド（配列番号２８）：
0006682426.tif 000020
【０１０１】
（２）Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用を遮断する、本発明の抗ヒトＢ７−Ｈ３抗体のコンセンサスＣＤＲ
コンセンサスＣＤＲ配列と、おそらく類似の結合性を与えると考えられる変異ＣＤＲ配列とを特定するため、特定された抗体のＣＤＲの解析を行った。そうした変異ＣＤＲは、表１に従いＢｌｏｓｕｍ６２．ｉｉｊ解析を用いてコンピューター処理した。表１は、Ｂｌｏｓｕｍ６２．ｉｉｊ置換スコアである。スコアが高いほど、置換はより保存的になり、したがって置換が機能に影響を与える可能性が低くなる。
【０１０２】
【表１】
0006682426.tif 000021
【０１０３】
本発明は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの変異ＣＤＲを有する、新規の抗体および抗原結合フラグメントの生成を可能にする。本発明の方法が、相当数の異なるＣＤＲを特定したため、具体的に特定されたＣＤＲの任意の変異体に必要とされる可能性のあるＣＤＲ残基の識別が可能になる。そうした残基を表２および表３に太字で示す。比較されたＣＤＲの中で異なることが分かっているこれらの残基については、表１の置換スコアが、許容される置換の内容を判定する手段となる。たとえば、特定のＣＤＲの特定の残基がＲまたはＳとして変化することが見出されている場合、ＲとＳが−１の置換スコアを有する以上、−１以上の置換スコアを有する、ＲまたはＳのいかなる置換も、その特定のＣＤＲに十分類似した結合性を有する変異ＣＤＲを生み出して、特定のＣＤＲの代わりに使用される変異ＣＤＲが機能的な抗Ｂ７−Ｈ５抗体または抗原結合フラグメントを形成できる可能性が、観察された変異体（ＲまたはＳ）と同様にある（あるいはＲまたはＳよりも高い）。各位置について、より低い置換スコアを有する残基を選択するよりも、より高い置換スコアを有する残基を選択することが好ましい。
【０１０４】
表２は、抗Ｂ７−Ｈ５抗体の重鎖ＣＤＲの解析結果であり、本発明の、観察された好ましい変異軽鎖（「ＬＣ」）抗Ｂ７−Ｈ５のＣＤＲのコンセンサス配列を示す。
【０１０５】
【表２】
0006682426.tif 000022
【０１０６】
表３は、抗Ｂ７−Ｈ５抗体の軽鎖ＣＤＲの解析結果であり、本発明の、観察された好ましい変異抗Ｂ７−Ｈ５重鎖（「ＨＣ」）ＣＤＲのコンセンサス配列を示す。
【０１０７】
【表３】
0006682426.tif 000023
【０１０８】
したがって、抗Ｂ７−Ｈ５抗体：２Ｄ３および１３Ｃ３のＣＤＲを保有する抗体ならびにその抗原結合フラグメントに加えて、本発明は、追加的に、上記軽鎖および／または重鎖コンセンサス配列を有するＣＤＲを保有する抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。
【０１０９】
本発明は、上記クローンのいずれかにより産生されたハムスターモノクローナル抗体の可変重鎖および／または軽鎖のアミノ酸配列に対して、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であり、かつＢ７−Ｈ５に対して免疫特異的結合を示す可変重鎖および／または可変軽鎖のアミノ酸配列を含む、抗体またはそのフラグメントを包含する。。本発明は、さらに、上記列挙のクローンのＣＤＲのアミノ酸配列に対して、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であり、かつＢ７−Ｈ５に対して免疫特異的結合を示すＣＤＲを含む、抗体およびそのフラグメントを包含する。２つのアミノ酸配列の同一性パーセントの判定は、ＢＬＡＳＴタンパク質比較により判定することができる。
【０１１０】
好ましい実施形態では、抗体は、１つ、２つまたは３つの軽鎖ＣＤＲ、および１つ、２つまたは３つの重鎖ＣＤＲ（最も好ましくは、３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン分子（たとえば、抗体、二重特異性抗体、融合タンパク質など）であって、軽鎖ＣＤＲは：
（１）抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体２Ｄ３／１８Ｃ３の軽鎖ＣＤＲ１；
（２）抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体２Ｄ３もしくは抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体１８Ｃ３の軽鎖ＣＤＲ２、またはそのような抗体のＣＤＲ２のコンセンサス配列；および
（３）抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体２Ｄ３／１８Ｃ３の軽鎖ＣＤＲ３
を含む。
【０１１１】
代替の好ましい実施形態では、ヒト化免疫グロブリン分子は、１つ、２つまたは３つの軽鎖ＣＤＲおよび１つ、２つまたは３つの重鎖ＣＤＲ（最も好ましくは３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲ）を含み、重鎖ＣＤＲは、
（１）抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体２Ｄ３／１８Ｃ３の重鎖ＣＤＲ１；
（２）抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体２Ｄ３／１８Ｃ３の重鎖ＣＤＲ２；および
（２）抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体２Ｄ３／１８Ｃ３の重鎖ＣＤＲ３
を含む。
【０１１２】
特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、上記好ましい抗体の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはより好ましくは６つすべてのＣＤＲを含み、ヒトＢ７−Ｈ５への結合能力を示すであろう。
【０１１３】
（３）ＣＤ２８Ｈ融合タンパク質
ＣＤ２８Ｈ融合タンパク質は、Ｂ７−Ｈ５とＣＤ２８Ｈの間のシグナル伝達のアンタゴニストであり得る。したがって、ＣＤ２８Ｈ融合タンパク質、および免疫システムの下方調節のためのその使用方法もまた開示される。したがって、受容体融合ポリペプチドは、通常、リガンドの膜貫通ＣＤ２８Ｈへの結合能力を遮断し、Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ仲介シグナル伝達を誘発または維持させる。
【０１１４】
本明細書で開示されているＣＤ２８Ｈ融合ポリペプチドは、（ｉ）直接第２のポリペプチドに融合した、あるいは（ｉｉ）任意選択により、第２のポリペプチドに融合したリンカーペプチド配列に融合した、ＣＤ２８Ｈポリペプチドの全部または一部を含む、第１の融合パートナーを有する。そのような融合タンパク質は二量体または多量体を形成し得る。ペプチド／ポリペプチドリンカードメインは、分離したドメインであるか、または融合タンパク質の他のドメイン（ＣＤ２８Ｈポリペプチドまたは第２のポリペプチド）の１つに含まれているかのいずれかであり得る。同様に、融合タンパク質を二量体化または多量体化する機能を有するドメインは、分離したドメインであるか、または融合タンパク質の他のドメイン（ＣＤ２８Ｈポリペプチド、第２のポリペプチドまたはペプチド／ポリペプチドリンカードメイン）の１つに含まれているかのいずれかであり得る。一実施形態では、二量体化／多量体化ドメインとペプチド／ポリペプチドリンカードメインは同じものである。
【０１１５】
本明細書で開示された融合タンパク質は、式Ｉ：Ｎ−Ｒ1−Ｒ2−Ｒ3−Ｃのとおりである。ここで「Ｎ」は融合タンパク質のＮ−末端を表し、「Ｃ」は融合タンパク質のＣ−末端を表す。好ましい実施形態では、「Ｒ1」はＣＤ２８Ｈポリペプチドであり、「Ｒ2」は任意にペプチド／ポリペプチドリンカードメインであり、「Ｒ3」は第２のポリペプチドである。あるいは、Ｒ3はＣＤ２８Ｈポリペプチドであり得、Ｒ1は第２のポリペプチドであり得る。
【０１１６】
ａ．第１の融合パートナー
受容体融合タンパク質は、完全長ＣＤ２８Ｈポリペプチドを含むことができるか、あるいは完全長ＣＤ２８Ｈのフラグメントまたは変異体を含むことができる。好ましい実施形態では、第１の融合パートナーは、ＣＤ２８Ｈの可溶性フラグメント、たとえば、ＣＤ２８Ｈの細胞外ドメインの一部もしくは全部、またはその変異体である。任意の哺乳類の配列ＣＤ２８Ｈを使用することができる。一例として、上記配列のヒト配列、ならびに既知のそのアイソフォームおよび変異体が示される。いくつかの実施形態では、他の哺乳類の配列、たとえばマウス配列などが、当該技術分野で知られており、使用することができる。開示された融合タンパク質に有用な、ヒトＣＤ２８Ｈポリペプチドは、配列番号７に対して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の配列同一性を示すか、または、好ましくは、配列番号７の細胞外ドメインに対して、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の配列同一性を示すアミノ酸配列を有することができる。開示された融合タンパク質に有用な、ヒトＣＤ２８Ｈポリペプチドは、配列番号８に対して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の配列同一性を示すか、または、好ましくは、配列番号８の核酸配列によりコードされた細胞外ドメインに対して、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の配列同一性を示す核酸配列によりコードされ得る。
【０１１７】
ｂ．第２の融合パートナー
ＣＤ２８Ｈポリペプチドは第２のポリペプチドに融合し得る。第２のポリペプチドの存在は、融合ポリペプチドの可溶性、安定性、親和性および／または結合価を変えることができる。本明細書で使用する場合、「結合価」は、１分子当たり利用できる結合部位の数をいう。一実施形態では、第２のポリペプチドは異なるソースまたは異なるタンパク質からのポリペプチドである。
【０１１８】
一実施形態では、第２のポリペプチドは、好ましくは、ヒト免疫グロブリンＣγ１鎖のヒンジ領域、ＣH２領域およびＣH３領域に、またはマウス免疫グロブリンＣγ２ａ鎖のヒンジ領域、ＣH２領域およびＣH３領域に対応するアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖定常領域の１つまたは複数のドメインを含む。
【０１１９】
好ましい二量体融合タンパク質では、二量体は、二量体化した通常のＩｇ重鎖において、ジスルフィド結合しているＣｙｓ残基と同じ２つのＩｇ重鎖のヒンジ領域で、Ｃｙｓ残基が共有結合することにより得られる。そのようなタンパク質は、ＣＤ２８Ｈ−Ｉｇと呼ぶことができる。
【０１２０】
一実施形態では、免疫グロブリン定常ドメインは、特定の細胞型への結合を増強し、生物学的利用性を増大させ、あるいはＣＤ２８Ｈポリペプチド、融合タンパク質またはそのフラグメントの安定性を高める、１つまたは複数のアミノ酸の挿入、削除または置換を含み得る。適切なアミノ酸の置換は、上記のように、保存的および非保存的置換を含む。
【０１２１】
他の実施形態では、第２のポリペプチドは、さらなる分子がそれを介してＣＤ２８Ｈ融合タンパク質に結合できる、コンジュゲーションドメインを有し得る。そのような実施形態の１つでは、コンジュゲートされた分子は、特定の器官または組織を融合タンパク質の標的にすることができる。他のそのような実施形態では、コンジュゲートされた分子は、ＣＤ２８Ｈ融合タンパク質の効果を高める、または増大させることができる、別の免疫調節性作用物質である。他の実施形態では、コンジュゲートされた分子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。
【０１２２】
融合タンパク質のＦｃ領域は、たとえばエフェクター機能、半減期の制御、組織への到達性の向上のため、安定性などの生物物理学的特徴の増強のため、さらに製造効率の改善（および費用削減）のため、アイソタイプまたはサブクラスが異なってもよいし、キメラまたはハイブリッドでもよいし、かつ／または、修飾してもよい。開示された融合タンパク質の構築に有用な多くの修飾、およびそれを行う方法については当該技術分野において知られており、たとえば、Ｍｕｅｌｌｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．，３４（６）：４４１−４５２（１９９７）、Ｓｗａｎｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．，２０：４９３−４９９（２００８）、およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．２０：４６０−４７０（２００８）を参照されたい。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はネイティブＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４のＦｃ領域である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はハイブリッド、たとえばＩｇＧ２／ＩｇＧ４のＦｃ定常領域からなるキメラである。Ｆｃ領域に対する薬剤としては、Ｆｃガンマ受容体および補体への結合を妨げるように修飾されたＩｇＧ４、１つまたは複数のＦｃガンマ受容体への結合を改善するように修飾されたＩｇＧ１、エフェクター機能を最小限に抑えるように修飾されたＩｇＧ１（アミノ酸変化）、グリカンを変化させた／含まないＩｇＧ１（典型的には発現宿主の変更による）、およびＦｃＲｎへのｐＨ依存性結合を変化させたＩｇＧ１が挙げられるが、これらに限定されるものではない。Ｆｃ領域は全ヒンジ領域を含むことも、あるいは全ヒンジ領域より小さい領域を含むこともある。
【０１２３】
非ホジキンリンパ腫またはワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症用のリツキシマブ（ＣＤ２０に対するキメラマウス／ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体）で治療した患者の治療結果は、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインに対する固有の親和性が異なるＦｃγ受容体の対立遺伝子変異体の個々の発現に相関した。特に、低親和性活性化Ｆｃ受容体ＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩＡ）の高親和性対立遺伝子を持つ患者は、より高い応答率を示し、非ホジキンリンパ腫の場合、無増悪生存期間が改善した。他の実施形態では、Ｆｃドメインは、低親和性抑制性Ｆｃ受容体ＣＤ３２Ｂ（ＦｃγＲＩＩＢ）への結合を抑え、低親和性活性化Ｆｃ受容体ＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩＡ）への野生型レベルの結合を保持または増強する、１つまたは複数のアミノ酸の挿入、欠失または置換を含んでもよい。
【０１２４】
他の実施形態は、ＦｃＲへの結合を抑制してあるＩｇＧ２−４ハイブリッドおよびＩｇＧ４ミュータントを含み、それらの半減期が延長される。代表的なＩＧ２−４ハイブリッドおよびＩｇＧ４ミュータントについては、Ａｎｇａｌ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３０（１）：１０５−１０８（１９９３）；Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｏｎｏｌｏｇｙ，３４（６）：４４１−４５２（１９９７）；およびＷａｎｇらの米国特許第６，９８２，３２３号明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１ドメインおよび／またはＩｇＧ２ドメインを欠失する。たとえば、Ａｎｇａｌらは、プロリンで置換したセリン２４１を有するＩｇＧ１およびＩｇＧ２について記載している。
【０１２５】
好ましい実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＤ１６Ａへの結合を増強するアミノ酸の挿入、欠失または置換を含む。ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインにおいてＣＤ１６Ａへの結合を増加させ、ＣＤ３２Ｂへの結合を減少させる多くの置換が当該技術分野において知られており、Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５７（１８）：８８８２−９０（２００７）に記載されている。ＣＤ３２Ｂへの結合を減少させる、および／または、ＣＤ１６Ａへの結合を増加させるヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメインの変異体としては、たとえばＦ２４３Ｌ置換、Ｒ９２９Ｐ置換、Ｙ３００Ｌ置換、Ｖ３０５Ｉ置換またはＰ２９６Ｌ置換が挙げられる。これらのアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメインに、どのような組み合わせで存在してもよい。一実施形態では、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメイン変異体は、Ｆ２４３Ｌ置換、Ｒ９２９Ｐ置換およびＹ３００Ｌ置換を含む。他の実施形態では、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメイン変異体は、Ｆ２４３Ｌ置換、Ｒ９２９Ｐ置換、Ｙ３００Ｌ置換、Ｖ３０５Ｉ置換およびＰ２９６Ｌ置換を含む。他の実施形態では、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメイン変異体がＮ２９７Ｑ置換を含むため、この突然変異はＦｃＲ結合を消失させる。
【０１２６】
ｃ．ペプチドまたはポリペプチドリンカードメイン
開示されたＣＤ２８Ｈ融合タンパク質は、任意選択により、第２のポリペプチドからＣＤ２８Ｈポリペプチドを分離する、ペプチドまたはポリペプチドリンカードメインを含有する。
【０１２７】
１．抗体のヒンジ領域
一実施形態では、リンカードメインは免疫グロブリンのヒンジ領域を含有する。好ましい実施形態では、ヒンジ領域はヒト免疫グロブリンに由来する。ヒンジを得ることができる、適切なヒト免疫グロブリンは、ＩｇＧ、ＩｇＤおよびＩｇＡを含む。好ましい実施形態では、ヒンジ領域はヒトＩｇＧに由来する。免疫グロブリンヒンジ領域および他のドメインのアミノ酸配列は当該技術分野でよく知られている。
【０１２８】
２．他のペプチド／ポリペプチドリンカードメイン
他の適切なペプチド／ポリペプチドリンカードメインは、天然に存在するか、または天然には存在しないペプチドまたはポリペプチドを含む。ペプチドリンカーの配列は、少なくとも２アミノ酸長さである。好ましくは、ペプチドまたはポリペプチドのドメインは、柔軟性ペプチドまたはポリペプチドである。本明細書では、「柔軟性リンカー」とは、ペプチド結合で繋がれた２つ以上のアミノ酸残基を含む、ペプチドまたはポリペプチドであって、２つの結合したポリペプチドが柔軟性リンカーの非存在下に有するであろうより、大きな回転自由度をペプチド結合で繋がれた２つのポリペプチドに与えるペプチドまたはポリペプチドをいう。そのような回転自由度は、柔軟性リンカーで繋がれた、２つ以上の抗原結合部位が、それぞれの標的抗原により効率的に接近することを可能にする。柔軟性ペプチド／ポリペプチドの例としては、アミノ酸配列Ｇｌｙ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（配列番号１６）、Ａｌａ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（配列番号１７）、（Ｇｌｙ4−Ｓｅｒ）3（配列番号１８）、および（Ｇｌｙ4−Ｓｅｒ）4（配列番号１９）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。さらなる柔軟性ペプチド／ポリペプチド配列は当該技術分野でよく知られている。
【０１２９】
一実施形態では、第１の融合パートナーはＣＤ２８Ｈのフラグメントである。好ましい実施形態では、融合タンパク質は、ＩｇのＦｃ領域に融合したＣＤ２８Ｈの細胞外ドメインまたはそのフラグメントを含む。組換えＣＤ２８Ｈ−Ｉｇ融合タンパク質は、ニューロピリン、プレキシンまたはそれらのフラグメントの細胞外ドメインのコーディング領域を、先述した（Ｃｈａｐｏｖａｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，４５：２４７−２５５（２０００））ように、ヒトＩｇＧ１もしくはマウスＩｇＧ２ａ、または適切なＩｇドメインに融合することにより調製することができる。
【０１３０】
ｄ．融合タンパク質の例
代表的なヒトＣＤ２８Ｈ−Ｉｇ融合タンパク質、ＣＤ２８Ｈ−ｈＩｇ４（ＣＤ２８Ｈ  ＥＣＤ  ａａ２３−１４０、軽鎖カッパシグナルペプチド：ＣＤ２８Ｈ配列は太字で示され；突然変異したヒトＩｇＧ４  Ｆｃ配列は下線を付して示され、セリン２２８からプロリンへの突然変異は二重下線で示されている）のアミノ酸配列（配列番号２０）は、以下のとおりである：
0006682426.tif 000024
融合タンパク質は、さらに、Ｎ−末端リーダー配列（軽鎖カッパリーダー配列）（配列番号２１の残基１〜２０）
0006682426.tif 000025
または、次のような天然に存在するＣＤ２８Ｈリーダー配列（配列番号２２）：
0006682426.tif 000026
を含んでもよい。ＣＤ２８Ｈ配列は、本発明においては、ヒトＩｇＧ４領域に融合したものが示されているが、そのような配列は代わりに任意のＩｇアイソタイプに、または、実際のところ、任意の他のタンパク質に融合することができる。配列番号２１のシグナル配列を含む、配列番号２０のヒトＣＤ２８Ｈ−ＩｇをコードするＤＮＡ配列（配列番号２３）は、以下のとおりである（配列番号２３）。
0006682426.tif 000027
【０１３１】
Ｅ．本発明の好ましい組成物の治療および予防のための使用
本明細書で使用する場合、「処置する」、「処置すること」、「処置」および「治療用途」という用語は、免疫反応の増大または低下から利益を受けるであろう疾患または障害の１つまたは複数の症状が消失、減少または軽減することをいう。本明細書で使用する場合、「治療上有効な量」とは、免疫反応の変化を媒介するのに十分な治療薬のそうした量、一層好ましくは、臨床的意義のある免疫反応の変化であり、疾患または状態の症状の減少または軽減を媒介するのに十分な治療薬のそうした量をいう。ある作用は、その大きさがレシピエント被検体の健康または予後に影響を与えるのに十分である場合、臨床的意義がある。治療上有効な量とは、疾患の進行を遅延させるまたは最小限に抑える、たとえば、自己免疫応答、または炎症反応、または移植による拒絶反応を遅延させるまたは最小限に抑えるのに十分な治療薬の量をいう場合がある。治療上有効な量はまた、疾患の処置または管理において治療上の利益をもたらす治療薬の量をいうこともある。さらに、治療薬、Ｂ７−Ｈ５抗体、またはＢ７−Ｈ５融合タンパク質もしくはＣＤ２８Ｈ融合タンパク質に関する治療上有効な量は、疾患の処置または管理に治療上の利益をもたらす、たとえば、治療用抗体の薬効を増強するのに十分で、疾患を処置または管理するのに十分な、治療薬単独または他の療法薬と組み合わせたそうした量を意味する。
【０１３２】
本明細書で使用する場合、「予防薬」という用語は、障害または疾患の任意の症状が検出される前にそうした障害または疾患の予防に使用することができる薬をいう。「予防上有効な」量は、そうした保護作用を媒介するのに十分な予防薬の量をいう。予防上有効な量はまた、疾患の予防において予防上の利益をもたらす予防薬の量もいう。さらに、予防薬に関する予防上有効な量は、疾患の予防において予防上の利益をもたらす予防薬単独または他の薬と組み合わせたそうした量を意味する。
【０１３３】
本明細書に記載される投薬量および投与頻度は、治療上有効なおよび予防上有効なという用語により包含される。投薬量および頻度はさらに、典型的には投与される個々の治療薬または予防薬、癌の重症度および種類、投与経路のほか、患者の年齢、体重、反応および既往歴によって、各患者に特有の要因に応じて異なる。当業者であれば、そうした要因を考慮し、たとえば、文献に報告され、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（５６ｔｈ  Ｅｄ．，２００２）に推奨されている投与量に従うことで好適なレジメンを選択することができる。
【０１３４】
本発明は、Ｂ７−Ｈ５に結合することにより、Ｂ７−Ｈ５の機能および／またはＣＤ２８Ｈへの結合を拮抗させる（すなわち、減弱化または害し）、したがってＴ細胞の増殖および／またはサイトカインの産生を弱めまたは害する、抗Ｂ７−Ｈ５抗体（および、Ｂ７−Ｈ５に結合するそうした抗体のフラグメント）またはＣＤ２８ＨＩｇなどの分子に関する。そのような分子の被験体への投与は、被験体の免疫系を下方調節する。
【０１３５】
そうした免疫系の下方調節は、炎症性疾患および自己免疫疾患ならびに移植による拒絶反応の処置に望ましい。本発明の抗体の投与により処置され得る自己免疫障害の例として、以下に限定されるものではないが、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、副腎の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎および精巣炎、自己免疫性血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー−皮膚炎、慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、クレスト症候群、寒冷凝集素症、クローン病、円板状ループス、本態性混合性クリオグロブリン血症、線維筋痛症−線維筋炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギラン・バレー、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少症紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡニューロパチー、若年性関節炎、扁平苔癬、ループスエリテマトーデス、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、１型または免疫性糖尿病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身硬直症候群、全身性紅斑性狼瘡、紅斑性狼瘡、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ぶどう膜炎、血管炎、たとえば疱疹状皮膚炎血管炎、白斑ならびにウェゲナー肉芽腫症がある。
【０１３６】
開示された抗Ｂ７−Ｈ５抗体、抗原結合フラグメント、およびＣＤ２８Ｈ融合タンパク質、特にそのＣＤ２８Ｈ−Ｉｇ融合タンパク質で、予防、治療または管理することができる炎症性疾患の例としては、喘息、脳炎、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アレルギー性障害、敗血症性ショック、肺線維症、未分化脊椎関節症、未分化関節症、関節炎、炎症性骨溶解、および慢性のウイルス感染または細菌感染に起因する慢性炎症が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１３７】
抗Ｂ７−Ｈ５抗体は、Ｂ７−Ｈ５の抗イディオタイプペプチドまたは抗体（Ｗａｌｌｍａｎｎ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）「Ａｎｔｉ−Ｉｄｓ  ｉｎ  Ａｌｌｅｒｇｙ：Ｔｉｍｅｌｉｎｅｓｓ  ｏｆ  ａ  Ｃｌａｓｓｉｃ  Ｃｏｎｃｅｐｔ，」Ｗｏｒｌｄ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｏｒｇａｎｉｚ．Ｊ．３（６）：１９５−２０１；Ｎａｒｄｉ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）「Ａｎｔｉｉｄｉｏｔｙｐｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｐｌａｔｅｌｅｔ  Ａｎｔｉ−ＧｐＩＩＩａ  Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  Ｔｏ  Ｔｈｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ  Ｉｎ  ＨＩＶ−１−ＩＴＰ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ，」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１（１２）：２０９３−２１００）または模倣体（Ｚａｎｇ，Ｙ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）「Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ−Ｉｄｉｏｔｙｐｉｃ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｂｙ  ＴＣＲ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ  Ｔｏ  Ａ  Ｃｏｍｍｏｎ  ＣＤＲ３  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｍｏｔｉｆ  Ｉｎ  Ｍｙｅｌｉｎ  Ｂａｓｉｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ，」Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５（９）：１０７３−１０８０；Ｌｏｉａｒｒｏ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（Ｅｐｕｂ  ２０１０  Ａｐｒ  ８）「Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＴＬＲ／ＩＬ−１Ｒ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  Ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，」Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  Ｉｎｆｌａｍｍ．２０１０：６７４３６３）を作製するために使用することができる。そのような分子は、Ｂ７−Ｈ５の代理として機能し、したがって、そうした分子を被験体に投与すると、ＣＤ２８Ｈカウンター受容体を結合し、それが内因性Ｂ７−Ｈ５受容体に結合することを妨げることによって、被験体の免疫系を下方調節する。そのような分子は、移植片対宿主病、炎症性疾患および自己免疫疾患の処置に有用である。
【０１３８】
したがって、本発明の抗体および抗原結合フラグメントならびに融合タンパク質は、移植片対宿主病、炎症性疾患および自己免疫疾患の処置に有用である。
【０１３９】
同様に、そのような抗体とそのような受容体／リガンドとの間の結合を増強するアゴニスト抗体、およびＢ７−Ｈ５融合タンパク質のような他の受容体アゴニストは、Ｂ７−Ｈ５シグナル伝達のアゴニストとして有用であり、したがって癌および炎症性疾患の治療に有用である。したがって、本発明はまた、ＣＤ２８Ｈに結合することにより、ＣＤ２８Ｈの機能（すなわち、シグナル伝達）および／またはＢ７−Ｈ５への結合を拮抗させる、したがってＴ細胞増殖および／またはサイトカインの産生を増大または刺激する、Ｂ７−Ｈ５−Ｉｇ融合タンパク質などのＣＤ２８Ｈアゴニスト分子に関する。そのような分子を被験体に投与すると、被験体の免疫系を上方調節し、癌または感染症罹患被験体の治療に使用することができる。Ｂ７−Ｈ５経路はＴ細胞活性化に関連するため、そのような分子はワクチンと組み合わせると特に有用である。
【０１４０】
本願で提供されるＣＤ２８Ｈアゴニストは、一般に、免疫反応刺激療法としてインビボおよびエクスビボで有用である。たとえば、ＣＤ２８Ｈアゴニストは、被験体に一定量のＣＤ２８Ｈアゴニストを投与する癌の治療で、宿主の免疫反応を刺激または増強するのに有用である。提供される組成物および方法で治療し得る癌の種類としては、膀胱癌、脳癌、乳癌、子宮頚癌、結腸直腸癌、食道癌、腎臓癌、肝癌、肺癌、鼻咽頭癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、胃癌、子宮癌、卵巣癌、精巣腫瘍および血液癌が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１４１】
本明細書では、治療し得る悪性腫瘍は、腫瘍が由来する組織の胚性起源にしたがって分類される。癌腫は、皮膚または内臓および腺の上皮内層などの、内胚葉性または外肺葉性組織から生じる腫瘍である。あまり発生しない肉腫は、骨、脂肪、軟骨などの中胚葉性結合組織由来である。白血病およびリンパ腫は骨髄の造血細胞の悪性腫瘍である。白血病は単細胞として増殖するが、リンパ腫は腫瘍塊として成長する傾向がある。悪性腫瘍は、身体の多くの器官または組織に発生し、癌を形成し得る。
【０１４２】
免疫不全（たとえば、ＨＩＶ）、乳頭腫（たとえば、ＨＰＶ）、ヘルペス（たとえばＨＳＶ）、脳炎、インフルエンザ（たとえば、ヒトインフルエンザウイルスＡ）および感冒（たとえば、ヒトライノウイルス）ウイルス感染症などの、局所または全身性ウイルス感染症の治療に、ＣＤ２８Ｈアゴニストを投与することができるが、それらに限定されるものではない。たとえば、ヘルペス病変もしくは帯状疱疹または性器疣贅などのウイルス性皮膚疾患の治療に、ＣＤ２８Ｈアゴニスト組成物を含む医薬製剤を局所的に投与することができる。ＡＩＤＳ、インフルエンザ、感冒または脳炎を含む、全身性ウイルス疾患の治療にも、ＣＤ２８Ｈアゴニスト組成物の医薬製剤を投与することができるが、それらに限定されるものではない。
【０１４３】
治療が可能な代表的な感染症は、以下に限定されるものではないが、アクチノミセス属（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ）、アナベナ属（Ａｎａｂａｅｎａ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ブデロビブリオ属（Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ）、ボルデテラ属（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）、ボレリア属（Ｂｏｒｒｅｌｉａ）、カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、カウロバクター属（Ｃａｕｌｏｂａｃｔｅｒ）、クラミジア属（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、クロロビウム属（Ｃｈｌｏｒｏｂｉｕｍ）、クロマチウム属（Ｃｈｒｏｍａｔｉｕｍ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、サイトファーガ属（Ｃｙｔｏｐｈａｇａ）、ディノコッカス属（Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、フランシセラ属（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ）、ハロバクテリウム属（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ヘリコバクター属（Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ）、ヘモフィルス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ヘモフィルス・インフルエンザＢ型（Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｔｙｐｅ  Ｂ）（ＨＩＢ）、ヒストプラスマ属（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）、ハイフォミクロビウム属（Ｈｙｐｈｏｍｉｃｒｏｂｉｕｍ）、レジオネラ属（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、リーシュマニア属（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）、レプトスピロシス属（Ｌｅｐｔｓｐｉｒｏｓｉｓ）、リステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、メニンゴコッカス（Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｕｓ）Ａ、ＢおよびＣ、メタノバクテリウム属（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ミクロコッカス属（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）、マイコバクテリウム属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、マイコプラズマ属（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）、ミキソコッカス属（Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ）、ナイセリア属（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、ニトロバクター属（Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）、オシラトリア属（Ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｉａ）、プロクロロン属（Ｐｒｏｃｈｌｏｒｏｎ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、ロドスピリルム属（Ｒｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）、リケッチア属（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、シゲラ属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、スピリルム属（Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）、スピロヘータ属（Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔａ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、スルフォロブス属（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ）、サーモプラズマ属（Ｔｈｅｒｍｏｐｌａｓｍａ）、チオバチルス属（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、およびトレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ）、ビブリオ属（Ｖｉｂｒｉｏ）、エルシニア属（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、ノカルジア・アステロイデス（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ）、リケッチア・リケッチィ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｓｉｉ）、リケッチア・チフィ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｔｙｐｈｉ）、マイコプラズマ・ニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、クラミジア・シタッシ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ）、クラジミア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、トリパノソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ）、赤痢アメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、トキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、膣トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）およびマンソン住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉ）などの微生物により引き起こされる感染症が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１４４】
開示されたＣＤ２８Ｈアゴニストまたはそれをコードする核酸は、単独で、または他の適切な治療と組み合わせて投与することができる。一実施形態では、ＣＤ２８Ｈアゴニストは、ワクチン組成物と共に、またはワクチン組成物の成分として投与することができる。ワクチンの適切な成分、抗原および／またはアジュバント。開示されたＣＤ２８Ｈアゴニストは、ワクチンの投与の前に、同時に、または後で投与することができる。一実施形態では、ＣＤ２８Ｈアゴニスト組成物は、ワクチンの投与と同時に投与される。
【０１４５】
開示されたＣＤ２８Ｈアゴニスト組成物は、癌被験体の腫瘍抗原などの、前から存在する抗原に対して被験体の免疫反応を開始または増強するために使用できる、予防ワクチンまたは治療ワクチンと共に投与し得る。
【０１４６】
予防の、治療のまたは脱感作した免疫応答の目的とする結果は、疾患によって、当該技術分野でよく知られた原理によって変化し得る。同様に、癌、アレルゲンまたは感染因子に対する免疫反応は、疾患を完全に治療し得、症状を緩和し得、あるいは疾患に対する総体的な治療介入の一面であり得る。たとえば、癌に対する免疫反応を刺激することは、治療に対して影響を与えるように、外科的、化学療法的、放射線学的、ホルモン的および他の免疫学的アプローチと結びついている。
【０１４７】
Ｆ．投与方法
様々な送達系、たとえば、リポソーム、微小粒子、マイクロカプセルへの封入、抗体または融合タンパク質を発現することができる組換え細胞、受容体を介したエンドサイトーシス（たとえば、Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照）、レトロウイルスベクターまたは他のベクターの一部としての核酸の構築等が知られており、治療用または予防用組成物の投与に使用することができる。
【０１４８】
抗体および融合タンパク質の投与方法としては、非経口投与（たとえば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内および皮下）、硬膜外投与および粘膜投与（たとえば、経鼻経路および経口経路）があるが、これに限定されるものではない。特定の実施形態では、抗体または融合タンパク質を筋肉内投与、静脈内投与または皮下投与する。本組成物は、任意の好都合な経路により、たとえば、注入またはボーラス注射により、上皮層または皮膚粘膜層（たとえば、口腔粘膜、直腸および腸の粘膜等）からの吸収により投与してもよく、他の生物活性薬と一緒に投与してもよい。投与は全身性でも、あるいは局所でもよい。さらに、たとえば、吸入器またはネブライザーの使用、およびエアロゾル化剤を用いた処方により経肺投与を利用してもよい。たとえば、米国特許第６，０１９，９６８号明細書；同第５，９８５，２０号明細書；同第５，９８５，３０９号明細書；同第５，９３４，２７２号明細書；同第５，８７４，０６４号明細書；同第５，８５５，９１３号明細書；同第５，２９０，５４０号明細書；および同第４，８８０，０７８号明細書；ならびに国際公開第９２／１９２４４号パンフレット；国際公開第９７／３２５７２号パンフレット；国際公開第９７／４４０１３号パンフレット；国際公開第９８／３１３４６号パンフレット；および国際公開第９９／６６９０３号パンフレットを参照されたい。特定の実施形態では、医薬組成物は、処置を必要とする領域に局所投与することが望ましい場合がある。これは、たとえば、以下に限定されるものではないが、局所注入、注射またはインプラントにより達成することができ、前記インプラントは、多孔性物質、非多孔性物質またはゼラチン様物質、たとえばシアラスティック膜または繊維などの膜である。好ましくは、抗体または融合タンパク質を投与するときは、抗体または融合タンパク質が吸収されない物質を使用するように注意しなければならない。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、抗体または融合タンパク質は、抗体または融合タンパク質を標的送達するためリポソームとして製剤化する。リポソームは、同心円状に重なった、内部に水相を持つリン脂質二重層からなるベジクルである。リポソームは典型的には、様々な種類の脂質、リン脂質および／または界面活性剤を含む。リポソームの成分は、二重層構造で配列しており、生体膜の脂質の配列と類似している。リポソームは、その生体適合性、低免疫原性および低毒性などのため特に好ましい送達ビヒクルである。リポソームの調製方法は、当該技術分野において公知であり、本発明に包含される。たとえば、Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８；Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４０３０−４；米国特許第４，４８５，０４５号明細書および同第４，５４４，５４５号明細書を参照されたい。
【０１５０】
米国特許第５，０１３，５５６号明細書に開示されているものなど、血清中半減期が長い、すなわち、循環時間が長いリポソームの調製方法を用いて、リポソーム抗体組成物を作製することができる。好ましいリポソームは、すぐには循環から除去されない、すなわち、単核食細胞系（ＭＰＳ）に取り込まれない。本発明は、当業者に公知の一般的な方法を使用して調製される立体安定化リポソームを包含する。特定の作用機序に拘泥するつもりはないが、立体安定化リポソームは、嵩高く非常にフレキシブルな親水性部分を持つ脂質成分を含み、この親水性部分は、リポソームと血清タンパク質との望ましくない反応を抑制し、血清成分によるオプソニン化を防ぎ、ＭＰＳによる認識を低下させる。立体安定化リポソームは、好ましくはポリエチレングリコールを使用して調製される。リポソームおよび立体安定化リポソームの調製については、たとえば、Ｂｅｎｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１  ＢｉｏＤｒｕｇｓ，１５（４）：２１５−２２４；Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．２２３：４２−６；Ｋｌｉｂａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，２６８：２３５−７；Ｂｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．，１０２９：９１−７；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｒｅｓ．６：９９−１１６；Ｌｉｔｚｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１１９０：９９−１０７；マルヤマ（Ｍａｒｕｙａｍａ）  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，３９：１６２０−２；Ｋｌｉｂａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ，１０６２；１４２−８；Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ，１３：２８５−３０９を参照されたい。本発明は、特定の臓器ターゲティング、たとえば、米国特許第４，５４４，５４５号明細書を参照されたい、または特定の細胞ターゲティング、たとえば、米国特許出願公開第２００５／００７４４０３号明細書を参照されたい、に適したリポソームも包含する。開示される組成物および方法に使用するのに特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発法により作製することができる。所望の直径を有するリポソームを得るには、リポソームを規定の細孔サイズのフィルターを通して押し出す。いくつかの実施形態では、以前に記載された方法を用いて、リポソームに抗体のフラグメント、たとえば、Ｆ（ａｂ’）をコンジュゲートしてもよい。たとえば、Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：２８６−２８８を参照されたい。
【０１５１】
また、Ｂ７−Ｈ５抗体またはＢ７−Ｈ５もしくはＣＤ２８Ｈ融合タンパク質は、イムノリポソームとして製剤化してもよい。イムノリポソームとは、抗体またはそのフラグメントがリポソーム表面に共有結合または非共有結合したリポソーム組成物をいう。リポソーム表面に抗体を結合する化学は当該技術分野において公知であり、本発明に包含される。たとえば、米国特許第６，７８７，１５３号明細書；Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｓｔｅａｌｔｈ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，Ｂｏｃａ  Ｒｏｔａｎ：ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，２３３−４４；Ｈａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１２３９：１３３−１４４を参照されたい。最も好ましい実施形態では、開示された方法および組成物で使用するイムノリポソームは、さらに立体的に安定化されている。好ましくは、抗体または融合タンパク質は共有結合または非共有結合で、リポソームの脂質二重層に安定して根を下ろしている疎水性アンカーに結合している。疎水性アンカーの例としては、リン脂質、たとえばホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、フォスファチジルイノシトール（ＰＩ）が挙げられる。抗体と疎水性アンカーを共有結合させるために、当該技術分野で知られているいかなる生化学的方法も使用することができる（たとえば、Ｊ．Ｔｈｏｍａｓ  Ａｕｇｕｓｔ，ｅｄ．，１９９７，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４０，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ｐ．３９９−４３５を参照されたい）。たとえば、抗体分子上の官能基は、リポソーム関連疎水性アンカー上の活性基と反応し得、たとえば抗体上のリシン側鎖のアミノ基は、水溶性カルボジイミドにより活性化されたリポソーム関連Ｎ−グルタリル−ホスファチジルエタノールアミンと結合し得る；あるいは還元された抗体のチオール基は、ピリジルチオプロピオニルフォスファチジルエタノールアミンなどのチオールの反応性アンカーを介してリポソームと結合することができる。たとえば、Ｄｉｅｔｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３５：１１００−１１０５；Ｌｏｕｇｈｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，９０１：１５７−１６０；Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：２８６−２８８；Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０：４４２９−３８を参照されたい。特定の作用機構に縛られることを意図するものではないが、抗体または融合タンパク質を含むイムノリポソーム製剤は、抗体または融合タンパク質を標的細胞の細胞質に、すなわち抗体または融合タンパク質が結合する受容体を含む細胞に送達するものであるから、治療薬剤として特に有効である。イムノリポソームは、血液中で、特に標的細胞中で長い半減期を有し、標的細胞の細胞質中へ内部移行することができ、それにより治療薬の損失またはリソソーム内経路による変質を回避することが好ましい。
【０１５２】
イムノリポソーム組成物は、１つまたは複数の小嚢形成性脂質、抗体、そのフラグメントもしくは誘導体、または融合タンパク質および任意に親水性ポリマーを含む。小嚢形成性脂質は、アシル鎖などの２つの炭化水素鎖および極性先端基を有する脂質であることが好ましい。小嚢形成性脂質の例としては、リン脂質、たとえば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリンおよび糖脂質、たとえば、セレブロシド、ガングリオシドが挙げられる。当業者には、製剤に有用なさらなる脂質が知られており、本発明に含まれる。いくつかの実施形態では、イムノリポソーム組成物は、リポソームの漿液半減期を延長する親水性ポリマー、たとえば、ポリエチレングリコールおよびガングリオシドＧＭ１をさらに含む。親水性ポリマーをリポソームにコンジュゲートする方法は当該技術分野でよく知られており、本発明に包含される。イムノリポソームのレビューおよびその調製方法については、たとえば、米国特許出願公開第２００３／００４４４０７号明細書、国際公開第９７／３８７３１号パンフレット、Ｖｉｎｇｅｒｈｏｅａｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，４：２５９−７２；Ｍａｒｕｙａｍａ，２０００，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２３（７）：７９１−７９９；Ａｂｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１２（１＆２）：１−３；Ｐａｒｋ，２００２，Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，２２（２）：２６７−２８１；Ｂｅｎｄａｓｅｔ  ａｌ．，２００１  ＢｉｏＤｒｕｇｓ，１４（４）：２１５−２２４，Ｊ．Ｔｈｏｍａｓ  Ａｕｇｕｓｔ，ｅｄ．，１９９７，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４０，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ｐ．３９９−４３５を参照されたい。
【０１５３】
抗体および融合タンパク質は、抗体の量を表示する、アンプルまたはサッシェ（ｓａｃｈｅｔｔｅ）などの密封容器にパッケージすることができる。一実施形態では、抗体は、乾燥滅菌した凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物として密封容器に提供され、たとえば、水または食塩水で被検体への投与に適した濃度に再構成することができる。好ましくは、抗体または融合タンパク質は、乾燥滅菌凍結乾燥粉末として、少なくとも５ｍｇ、一層好ましくは少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、または少なくとも７５ｍｇの単位投薬量で密封容器に提供される。凍結乾燥抗体または融合タンパク質は、その本来の容器で２〜８℃の間にて保存する必要があり、抗体は、再構成後１２時間以内、好ましくは６時間以内、５時間以内、３時間以内または１時間以内に投与すべきである。代替の実施形態では、抗体または融合タンパク質は、抗体、融合タンパク質またはコンジュゲートされた分子の量および濃度を表示する密封容器に液体形態で提供される。好ましくは、液体形態の抗体または融合タンパク質は、密封容器に抗体または融合タンパク質を少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、一層好ましくは少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２００ｍｇ／ｍｌで提供される。
【０１５４】
また、処方に用いられる正確な用量は投与経路および状態の重篤度によって異なり、開業医の判断および各患者の状況に応じて決定されるべきである。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得られた用量反応曲線から外挿することができる。抗体および融合タンパク質の場合、患者に投与される投薬量は典型的には、０．０００１ｍｇ／ｋｇ患者体重〜１００ｍｇ／ｋｇ患者体重である。好ましくは、患者に投与される投薬量は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ患者体重〜２０ｍｇ／ｋｇ患者体重、０．０００１ｍｇ／ｋｇ患者体重〜１０ｍｇ／ｋｇ患者体重、０．０００１ｍｇ／ｋｇ患者体重〜５ｍｇ／ｋｇ患者体重、０．０００１〜２ｍｇ／ｋｇ患者体重、０．０００１〜１ｍｇ／ｋｇ患者体重、０．０００１ｍｇ／ｋｇ患者体重〜０．７５ｍｇ／ｋｇ患者体重、０．０００１ｍｇ／ｋｇ患者体重〜０．５ｍｇ／ｋｇ患者体重、０．０００１ｍｇ／ｋｇ患者体重〜０．２５ｍｇ／ｋｇ患者体重、０．０００１〜０．１５ｍｇ／ｋｇ患者体重、０．０００１〜０．１０ｍｇ／ｋｇ患者体重、０．００１〜０．５ｍｇ／ｋｇ患者体重、０．０１〜０．２５ｍｇ／ｋｇ患者体重または０．０１〜０．１０ｍｇ／ｋｇ患者体重である。一般に、ヒト抗体は、外来ポリペプチドに対する免疫反応により人体内で他の種由来の抗体より長い半減期を有する。このため、ヒト抗体の投薬量を少なくし、投与頻度を低くすることが可能である場合が多い。さらに、抗体もしくはそのフラグメントまたは融合タンパク質の投薬量および投与頻度は、修飾、たとえば、脂質化などにより抗体または融合タンパク質の取り込みおよび組織移行性を高めることで抑えてもよい。
【０１５５】
なお別の実施形態では、本組成物は、放出制御システムまたは持続放出システムで送達してもよい。当業者に公知の任意の技術を使用して、１つまたは複数の抗体または融合タンパク質を含む持続放出製剤を製造することができる。たとえば、米国特許第４，５２６，９３８号明細書；国際公開第９１／０５５４８号パンフレット；国際公開第９６／２０６９８号パンフレット；Ｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，「Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｈｙ  ｏｆ  ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｇｅｌ，」Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３９：１７９−１８９，Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｌｕｎｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｏｎｇ−Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，」ＰＤＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ５０：３７２−３９７；Ｃｌｅｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，「Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｆｏｒ  ａ  ｂＦＧＦ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，」Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３−８５４；およびＬａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，「Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｌｏｃａｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，」Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９−７６０を参照されたい。一実施形態では、放出制御システムにポンプを使用してもよい（Ｌａｎｇｅｒ，ｓｕｐｒａ；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０；Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７；およびＳａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４を参照）。別の実施形態では、高分子材料を使用して、抗体の放出制御を達成してもよい（たとえば、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照；さらに、Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７  １：１０５）；米国特許第５，６７９，��７７号明細書；米国特許第５，９１６，５９７号明細書；米国特許第５，９１２，０１５号明細書；米国特許第５，９８９，４６３号明細書；米国特許第５，１２８，３２６号明細書；国際公開第９９／１５１５４号パンフレット；および国際公開第９９／２０２５３号パンフレットも参照）。持続放出製剤に使用されるポリマーの例として、ポリ（２−ヒドロキシメタクリル酸エチル）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−ｃｏ−酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ酸無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）およびポリオルトエステルがあるが、これに限定されるものではない。なお別の実施形態では、放出制御システムを治療標的（たとえば、肺）の近くに導入し、それにより必要とされるのは、全身用量のごく一部のみである（たとえば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）を参照）。別の実施形態では、Ｄｕｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（米国特許第５，９４５，１５５号明細書を参照）に従い、放出制御インプラントとして有用なポリマー組成物を使用する。この特定の方法は、ポリマーシステムからの生理活性材料のインサイツ放出制御の治療効果に基づく。移植は一般に、治療処置を必要とする患者体内のどこで行ってもよい。別の実施形態では、被検体体内の非ポリマーインプラントを薬物送達システムとして使用する、非ポリマー持続送達システムを使用する。体内に移植すると、インプラントの有機溶媒が組成物から周囲の組織液に散逸、分散または浸出し、非ポリマー材料が徐々に凝固または沈殿して固体の微孔性マトリックスを形成する（米国特許第５，８８８，５３３号明細書を参照）。放出制御システムについては、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３）による概説で考察されている。当業者に公知の任意の技術を使用して１つまたは複数の治療薬、すなわち、Ｂ７−Ｈ５抗体またはＣＤ２８Ｈ融合タンパク質を含む持続放出製剤を製造することができる。たとえば、米国特許第４，５２６，９３８号明細書；国際公開第９１／０５５４８号パンフレットおよび国際公開第９６／２０６９８号パンフレット；Ｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３９：１７９−１８９；Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，ＰＤＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ５０：３７２−３９７；Ｃｌｅｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３−８５４；およびＬａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９−７６０を参照されたい。
【０１５６】
治療用または予防用組成物が、Ｂ７−Ｈ５抗体もしくはその抗原結合フラグメントをコードする核酸、またはＣＨ２８Ｈ融合タンパク質、たとえば、ＣＨ２８ＨＩｇ融合タンパク質をコードする核酸である特定の実施形態では、核酸を適切な核酸発現ベクターの一部として構築し、たとえば、レトロウイルスベクターを使用して（米国特許第４，９８０，２８６号明細書を参照）、または直接注射により、または微小粒子銃を使用して（たとえば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）、または脂質もしくは細胞表面受容体もしくはトランスフェクション剤でコーティングして、または核に進入することが分かっているホメオボックス様ペプチドに連結して核酸を投与して（たとえば、Ｊｏｌｉｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１８６４−１８６８を参照）、細胞内に移行するように投与することにより、核酸をインビボ投与してコードされている抗体の発現または融合を促進してもよい。あるいは、相同組換えにより発現させるため、核酸を細胞内に導入し、宿主細胞ＤＮＡに組み込ませてもよい。
【０１５７】
治療上または予防上有効な量の抗体または融合タンパク質を用いた被検体の処置は、単回処置を含んでもよいし、あるいは、好ましくは何回かの処置を含んでもよい。
【０１５８】
Ｇ．医薬組成物
組成物は、医薬組成物の製造に有用なバルク薬剤組成物（たとえば、不純物を含むまたは非無菌の組成物）、および単位剤形の調製に使用することができる医薬組成物（すなわち、被検体または患者への投与に好適な組成物）を含む。そうした組成物は、本明細書に開示された予防上または治療上有効な量の予防薬および／または治療薬、またはそうした薬と薬学的に許容されるキャリアとの組み合わせを含む。好ましくは、開示される組成物は、予防上または治療上有効な量の抗体または融合タンパク質および薬学的に許容されるキャリアを含む。
【０１５９】
特定の実施形態では、「薬学的に許容される」という用語は、米国連邦政府または州政府の規制当局により承認されている、または動物、より詳細にはヒトにおける使用について米国薬局方または他の一般に認められた薬局方に記載されていることを意味する。「キャリア」という用語は、療法剤と共に投与される希釈液、アジュバント（たとえば、フロイントアジュバント（完全および不完全）、賦形剤またはビヒクルをいう。そうした薬学的キャリアは、無菌液、たとえば水、および、たとえば石油起源、動物起源、植物起源または合成起源の油、たとえばピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油および同種のものであってもよい。医薬組成物を静脈投与する場合、水は好ましいキャリアである。また、特に注射溶液の液体キャリアとして食塩水溶液、ならびにデキストロースおよびグリセロール水溶液を使用してもよい。好適な医薬品賦形剤として、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、白亜、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールおよび同種のものが挙げられる。本組成物は、必要に応じて、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤をさらに含んでもよい。これらの組成物は、溶液剤、懸濁剤、エマルジョン、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、持続放出製剤および同種のものの形態をとってもよい。
【０１６０】
一般に、組成物の成分は、たとえば、密封容器、たとえば有効成分の量を表示するアンプルまたはサッシェ（ｓａｃｈｅｔｔｅ）に乾燥凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物として、別々に提供されるか、あるいは単位剤形中に混ぜ合わされる。本組成物を注入により投与する場合、無菌の医薬品グレードの水または食塩水を含む輸液ボトルに組成物を混注してもよい。組成物を注射により投与する場合、無菌注射用水または食塩水のアンプルを用意して、投与前に成分を混合できるようにしてもよい。
【０１６１】
組成物は、中性形態として製剤化しても、あるいは塩形態として製剤化してもよい。薬学的に許容される塩として、アニオンとで形成される塩、たとえば塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸等から得られる塩、およびカチオンとで形成される塩、たとえばナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等から得られる塩があるが、これに限定されるものではない。
【０１６２】
Ｈ．キット
一実施形態は、抗体または融合タンパク質が入った１つまたは複数の容器を含む医療パックまたはキットを提供する。加えて、医療パックまたはキットには、疾患の処置に有用な１つまたは複数の他の予防薬または治療薬がさらに含まれていてもよい。一実施形態は、医薬組成物の成分の１つまたは複数が入った１つまたは複数の容器を含む医療パックまたはキットを提供する。そうした容器には任意に、医薬品または生物学的製剤の製造、使用または販売を規制する政府機関より定められた形式の注意書が添付されていてもよい。注意書には、ヒト投与を目的とした製造、使用または販売に関するその機関の承認が反映される。
【０１６３】
本発明は、上記の方法に使用することができるキットを提供する。一実施形態では、キットは、１つまたは複数のヒト化抗体または融合タンパク質を含む。別の実施形態では、キットは、癌の処置に有用な１つまたは複数の他の予防薬または治療薬を１つまたは複数の容器にさらに含む。別の実施形態では、キットは、癌に関連する１つまたは複数の癌抗原に結合する１つまたは複数の細胞傷害性抗体をさらに含む。ある種の実施形態では、他の予防薬または治療薬は化学療法剤である。他の実施形態では、予防薬または治療薬は、生物療法剤またはホルモン療法剤である。
【０１６４】
Ｉ．診断方法
Ｂ７−Ｈ５抗体およびその抗原結合フラグメントは、Ｂ７−Ｈ５の発現に関連する疾患、障害または感染症を検出、診断またはモニターすることなど、診断目的に使用することができる。本発明は、疾患、障害または感染症、特に自己免疫疾患の検出または診断を提供し、それは、（ａ）被検体の細胞または組織サンプルにおけるＢ７−Ｈ５の発現を、そうした抗原に免疫特異的に結合する１つまたは複数の抗体（またはそのフラグメント）を使用してアッセイすること；および（ｂ）抗原のレベルを対照レベル、たとえば、正常組織サンプルのレベルと比較することによって実施することができ、抗原の対照レベルと比較した、アッセイされた抗原レベルの上昇または低下から疾患、障害または感染症が示唆される。そうした抗体およびフラグメントは、好ましくはイムノアッセイ、たとえば酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）および蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）に利用される。
【０１６５】
一実施形態は、そうした抗体およびフラグメント、特にヒトＢ７−Ｈ５に結合するそうした抗体およびフラグメントの、インビトロまたはインサイツ組織サンプルの細胞、またはインビボでの細胞におけるＩＨＣ解析の試薬としての使用に関する。以上のように、本発明の抗体およびフラグメントは、ヒトの疾患、障害または感染症の検出および診断に有用である。一実施形態では、そうした診断は、ａ）Ｂ７−Ｈ５に免疫特異的に結合する有効量の標識抗体または抗原結合フラグメントを被検体に（たとえば、非経口、皮下または腹腔内）投与すること；ｂ）投与後、Ｂ７−Ｈ５が発現する被検体の部位に標識分子が優先的に濃縮する（および、結合していない標識分子がバックグラウンドレベルまで除去される）ことができる時間間隔を置くこと；ｃ）バックグラウンドレベルを判定すること；およびｄ）被検体の標識抗体を検出することを含み、標識抗体のバックグラウンドレベルを上回る検出から、被検体が疾患、障害または感染症であることが示唆される。この実施形態では、当業者に公知のイメージングシステムを用いて検出が可能なイメージング部分で抗体を標識する。バックグラウンドレベルは、検出された標識分子の量を個々のシステムに対して以前に判定された標準値と比較するなど様々な方法により判定することができる。
【０１６６】
当該技術分野においては、被検体の大きさおよび使用するイメージングシステムにより、診断画像を得るのに必要なイメージング部分の量が決定されることが理解されよう。インビボでの腫瘍イメージングについては、Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ，」（Ｃｈａｐｔｅｒ  １３  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ：Ｔｈｅ  Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌ  ａｎｄ  Ｂ．Ａ．Ｒｈｏｄｅｓ，ｅｄｓ．，Ｍａｓｓｏｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｉｎｃ．（１９８２）に記載されている。
【０１６７】
投与後、標識分子が被検体の部位に優先的に濃縮でき、結合していない標識分子がバックグラウンドレベルまで除去される時間間隔は、使用する標識の種類および投与モードなどいくつかの変数に応じて、６〜４８時間または６〜２４時間または６〜１２時間である。別の実施形態では、投与後の時間間隔は５〜２０日または５〜１０日である。
【０１６８】
一実施形態では、疾患、障害または感染症のモニタリングは、疾患、障害または感染症の診断方法を、たとえば、最初の診断から１ヶ月後、最初の診断から６ヶ月後、最初の診断から１年後等に繰り返すことにより行う。
【０１６９】
被検体における標識分子の存在は、インビボスキャニングのための当該技術分野において公知の方法を用いて検出することができる。こうした方法は、使用する標識の種類によって異なる。当業者であれば、特定の標識を検出するのに適切な方法を決定することができる。開示された診断方法に使用してもよい方法および装置として、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、全身スキャン、たとえばポジション断層法（ＰＥＴ）、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）および超音波検査があるが、これに限定されるものではない。
【０１７０】
特定の実施形態では、分子を放射性同位元素で標識し、患者において放射線応答性手術装置を用いて検出する（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．米国特許第５，４４１，０５０号明細書）。別の実施形態では、分子を蛍光性化合物で標識し、患者において蛍光応答性スキャニング装置を用いて検出する。別の実施形態では、分子をポジトロン放出金属で標識し、患者においてポジトロン断層法を用いて検出する。なお別の実施形態では、分子を常磁性標識で標識し、患者において磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）を用いて検出する。
【０１７１】
以下、本発明の実施形態を示す。
（１）６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記ＣＤＲが、（１）３つの配列番号１１の軽鎖ＣＤＲおよび３つの配列番号９の重鎖ＣＤＲ；または（２）３つの配列番号１５の軽鎖ＣＤＲおよび３つの配列番号１３の重鎖ＣＤＲを含み、かつ前記抗体またはその抗原結合フラグメントがＢ７−Ｈ５に結合する、抗体またはその抗原結合フラグメント。
（２）前記３つの軽鎖ＣＤＲが、配列番号１１のアミノ酸２７〜３８を含む第１の軽鎖ＣＤＲ、配列番号１１のアミノ酸５６〜５８を含む第２の軽鎖ＣＤＲ、および配列番号１１のアミノ酸９５〜１０２を含む第３の軽鎖ＣＤＲを含む、（１）に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（３）前記３つの重鎖ＣＤＲが、配列番号９のアミノ酸２６〜３３を含む第１の重鎖ＣＤＲ、配列番号９のアミノ酸５１〜５８を含む第２の重鎖ＣＤＲ、および配列番号９のアミノ酸９７〜１０６を含む第３の重鎖ＣＤＲを含む、（１）または（２）に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（４）配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、（１）〜（３）のいずれか一に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（５）配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、（１）〜（４）のいずれか一に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（６）前記３つの軽鎖ＣＤＲが、配列番号１５のアミノ酸２７〜３８を含む第１の軽鎖ＣＤＲ、配列番号１５のアミノ酸５６〜５８を含む第２の軽鎖ＣＤＲ、および配列番号１５のアミノ酸９５〜１０２を含む第３の軽鎖ＣＤＲを含む、（１）に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（７）前記３つの重鎖ＣＤＲが、配列番号１３のアミノ酸２６〜３３を含む第１の重鎖ＣＤＲ、配列番号１３のアミノ酸５１〜５８を含む第２の重鎖ＣＤＲ、および配列番号１３のアミノ酸９７〜１０６を含む第３の重鎖ＣＤＲを含む、（１）または（２）に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（８）配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、（１）〜（３）のいずれか一に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（９）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、（１）〜（４）のいずれか一に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（１０）配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、（１）に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（１１）配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、（１）に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（１２）前記結合したＢ７−Ｈ５が、生細胞の表面に配置されているか、または内因性もしくはトランスフェクトされた濃度で発現されている、（１）に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（１３）前記生細胞が、マクロファージまたは樹状細胞である、（７）に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（１４）前記Ｂ７−Ｈ５が、ヒトＢ７−Ｈ５である、（１）に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（１５）（Ａ）Ｂ７−Ｈ５のリガンドのＣＤ２８Ｈに対する結合能力を低下させ；（Ｂ）Ｂ７−Ｈ５のＣＤ２８Ｈへの結合の結果として生じるシグナル伝達を遮断し；（Ｃ）同種Ｔ細胞反応を阻害し；（Ｄ）それらの組み合わせである、（１）に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（１６）免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の１つまたは複数の定常ドメインを含む、（１）〜（１５）のいずれか一に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（１７）前記定常ドメインは、ヒト定常ドメインである、（１６）に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（１８）前記ヒト定常ドメインは、ヒトＩｇＡドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩｇＥドメイン、ＩｇＧドメインまたはＩｇＭドメインである、（１７）に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（１９）前記ヒトＩｇＧ定常ドメインは、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ２ドメイン、ＩｇＧ３ドメインまたはＩｇＧ４ドメインである、（１８）に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（２０）検出可能に標識されるか、またはコンジュゲートされたトキシン、薬剤、受容体、酵素、受容体リガンドを含む、（１）〜（１９）のいずれか一に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（２１）前記抗体は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、またはヒト化抗体である、（１）〜（２０）のいずれか一に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（２２）前記抗体は、二重特異性、三重特異性または多重特異性の抗体である、（１）〜（２１）のいずれか一に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（２３）１つまたは複数のヒトＩｇＧ４定常ドメイン、および配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント。
（２４）（１）〜（２３）のいずれか一に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、あるいはＣＤ２８Ｈ−Ｉｇ融合タンパク質、および生理学的に許容されるキャリアまたは賦形剤を含む、医薬組成物。
（２５）被験体の免疫系を下方調節する方法に使用するための、（２４）に記載の医薬組成物。
（２６）前記被験体が自己免疫疾患を有する、（２５）に記載の使用のための医薬組成物。
（２７）自己免疫疾患を治療する方法で使用するための、（２４）に記載の医薬組成物。
（２８）前記自己免疫疾患は、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、副腎の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎および精巣炎、自己免疫性血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、クレスト症候群、寒冷凝集素症、クローン病、円板状ループス、本態性混合性クリオグロブリン血症、線維筋痛症−線維筋炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギラン・バレー、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少症紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡニューロパチー、若年性関節炎、扁平苔癬、ループスエリテマトーデス、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、１型または免疫性糖尿病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身硬直症候群、全身性紅斑性狼瘡、紅斑性狼瘡、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ぶどう膜炎、血管炎、たとえば疱疹状皮膚炎血管炎、白斑、ならびにウェゲナー肉芽腫症からなる群から選択される、（２６）または（２７）に記載の使用のための医薬組成物。
（２９）前記被験体が炎症性疾患を有する、（２５）に記載の使用のための医薬組成物。
（３０）炎症性疾患を治療する方法で使用するための、（２４）に記載の医薬組成物。
（３１）前記炎症性疾患は、喘息、脳炎、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アレルギー性障害、敗血症性ショック、肺線維症、未分化脊椎関節症、未分化関節症、関節炎、炎症性骨溶解、および慢性のウイルス感染もしくは細菌感染に起因する慢性炎症からなる群から選択される、（２９）または（３０）に記載の使用のための医薬組成物。
（３２）前記被験体が移植を受けたことがあるか、または受ける予定がある、（２５）に記載の使用のための医薬組成物。
（３３）移植による拒絶反応を治療または防止する方法で使用するための、（２４）に記載の医薬組成物。
（３４）被験体の免疫系を下方調節する薬剤の製造における、（１）〜（２３）のいずれか一に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、あるいはＣＤ２８Ｈ−Ｉｇ融合タンパク質の使用。
（３５）被験体の自己免疫疾患を治療するための薬剤の製造における、（１）〜（２３）のいずれか一に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、あるいはＣＤ２８Ｈ−Ｉｇ融合タンパク質の使用。
（３６）被験体の炎症性疾患を治療するための薬剤の製造における、（１）〜（２３）のいずれか一に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、あるいはＣＤ２８Ｈ−Ｉｇ融合タンパク質の使用。
（３７）被験体の移植による拒絶反応を治療または防止するための薬剤の製造における、（１）〜（２３）のいずれか一に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、あるいはＣＤ２８Ｈ−Ｉｇ融合タンパク質の使用。
（３８）疾患、障害または感染症を検出または診断する方法であって、（ａ）（１）〜（２３）のいずれか一に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを用いて被験体の細胞または組織サンプルにおけるＢ７−Ｈ５の発現をアッセイすること、および（ｂ）前記Ｂ７−Ｈ５のレベルを対照レベルと比較することを含み、前記対照レベルと比較した、前記アッセイされたＢ７−Ｈ５レベルの上昇が、前記疾患、障害または感染症を示唆する、方法。
（３９）前記Ｂ７−Ｈ５の発現が、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）によってアッセイされる、（３８）に記載の方法。
（４０）疾患、障害または感染症の進行をモニターする方法であって、（ａ）第１の時点で、被験体の細胞または組織サンプルにおけるＢ７−Ｈ５の発現を、（１）〜（２３）のいずれか一に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを用いてアッセイすること、および（ｂ）第２の時点で、または経時的に、前記被験体の前記細胞または前記組織サンプルにおけるＢ７−Ｈ５の発現レベルを比較することを含み、前記アッセイされたＢ７−Ｈ５レベルの上昇が、前記疾患、障害または感染症の進行を示唆する、方法。
（４１）前記Ｂ７−Ｈ５の発現が、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）によってアッセイされる、（３０）に記載の方法。
（４２）治療に対する応答をモニターする方法であって、（ａ）治療前に、被験体の細胞または組織サンプルにおけるＢ７−Ｈ５の発現を、（１）〜（２３）のいずれか一に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを用いてアッセイすること、および（ｂ）治療後、１つまたは複数の時点の前に、被験体の細胞または組織サンプルにおけるＢ７−Ｈ５の発現をアッセイして、Ｂ７−Ｈ５レベルを経時的に比較することを含み、前記治療前のＢ７−Ｈ５レベルと比較した、前記アッセイされたＢ７−Ｈ５レベルの低下が、治療に対する応答を示す、方法。
（４３）前記Ｂ７−Ｈ５の発現が、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）によってアッセイされる、（４２）に記載の方法。
（４４）Ｂ７−Ｈ５の発現の増大を特徴とする疾患の被験体を治療する方法において使用するための医薬組成物であって、前記方法が（ｉ）前記被験体がＢ７−Ｈ５の発現の増大を特徴とする疾患を有するか否かを（ａ）前記被験体の細胞または組織サンプルにおける前記Ｂ７−Ｈ５の発現を、Ｂ７−Ｈ５に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを用いてアッセイし；（ｂ）前記Ｂ７−Ｈ５レベルを対照レベルと比較することによって決定する工程であって、前記対照レベルと比較した、前記アッセイされたＢ７−Ｈ５レベルの上昇が、前記被験体がＢ７−Ｈ５の発現の増大を特徴とする疾患を有することを示唆する工程と；（ｉｉ）前記被験体がＢ７−Ｈ５の発現の増大を特徴とする疾患を有する場合、治療上有効な量の（２４）に記載の医薬組成物を前記被験体に投与する工程とを含む、医薬組成物。
（４５）前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、（１）〜（２３）のいずれか一に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントである、（４４）に記載の方法。
（４６）Ｂ７−Ｈ５の発現の増大を特徴とする前記疾患が、自己免疫疾患である、（４４）に記載の使用のための医薬組成物。
（４７）Ｂ７−Ｈ５の発現の増大を特徴とする前記疾患が、炎症性疾患である、（４４）に記載の使用のための医薬組成物。
（４８）ＣＤ２８Ｈの発現の増大を特徴とする疾患の被験体を治療する方法において使用するための医薬組成物であって、前記方法が（ｉ）前記被験体がＣＤ２８Ｈの発現の増大を特徴とする疾患を有するか否かを（ａ）前記被験体の細胞または組織サンプルにおける前記ＣＤ２８Ｈの発現を、抗ＣＤ２８Ｈ抗体またはその抗原結合フラグメントを用いてアッセイし；（ｂ）前記ＣＤ２８Ｈレベルを対照レベルと比較することによって決定する工程であって、前記対照レベルと比較した、前記アッセイされたＣＤ２８Ｈレベルの上昇が、前記被験体がＣＤ２８Ｈの発現の増大を特徴とする疾患を有することを示唆する工程と；（ｉｉ）前記被験体がＣＤ２８Ｈの発現の増大を特徴とする疾患を有する場合、治療上有効な量の（２４）に記載の医薬組成物を前記被験体に投与する工程とを含む、医薬組成物。
（４９）ＣＤ２８Ｈの発現の増大を特徴とする前記疾患が、自己免疫疾患である、（４８）に記載の使用のための医薬組成物。
（５０）ＣＤ２８Ｈの発現の増大を特徴とする前記疾患が、炎症性疾患である、（４８）に記載の使用のための医薬組成物。
これまで本発明について一般的に記載してきたが、以下の例を参照することで本発明をより容易に理解することができるであろう。以下の例は例示として提供するものであり、記載がない限り、本発明を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【０１７２】
実施例１
抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体の単離および特性評価
ハムスターにＢ７−Ｈ５を接種し、Ｂ７−Ｈ５免疫反応性抗体を発現するハイブリドーマを単離することによって抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体を得た。抗体産生クローン２Ｄ３および１８Ｃ３を単離した。図４Ａ〜４Ｂに、クローン２Ｄ３および１８Ｃ３によって産生された抗体の、ＣＨＯトランスフェクタントによって発現されたヒトＢ７−Ｈ５に結合する能力を示す。
【０１７３】
単離された抗体のＢ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用に対する遮断能力を、そのような抗体の存在下、ヒトＢ７−Ｈ５発現ＣＨＯトランスフェクタントをインキュベートし、ＣＤ２８Ｈ  Ｉｇ（配列番号２０）および抗ヒトＩｇ  ＰＥの濃度を増大させることによって測定した。
【０１７４】
そのような実験において、非遮断性抗体の存在下でインキュベートした細胞は、ＣＤ２８Ｈ  Ｉｇに結合することができる（第２の移動ピークとして見られる）（図５Ａ〜５Ｂ）。抗体２Ｄ３および１８Ｃ３は、Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用を遮断することが分かった。
【０１７５】
本発明の抗Ｂ７−Ｈ５抗体（２Ｄ３）のＢ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用に対する遮断能力を試験した。Ｂ７−Ｈ５  Ｉｇ融合を作製し、ＣＤ２８Ｈに結合し、それによりＴ細胞反応を促進することができることが分かった（図６）。融合タンパク質は、マウスＩｇＧ２ａ配列に融合した、以下のＢ７−Ｈ５の細胞外ドメインである（配列番号２６）である。
0006682426.tif 000028
ＩｇＧ２ａ配列は以下のとおりであり得る（配列番号２７）。
0006682426.tif 000029
【０１７６】
ｍＩｇＧ２ａは、Ｆａｂ腕またはＣ末端Ｌｙｓの欠失の安定化のために、Ｓ−＞Ｐ修飾（以下に詳細に説明、配列番号２０に示す）を必要としない。融合タンパク質はまた、他のＩｇ配列、たとえばヒトＩｇＧ４とともに作製することができる。ヒトＩｇＧ４では、好ましくは、上述したｈＩｇＧ４の例で説明したように、Ｓ−＞Ｐ修飾および／または最終Ｌｙｓ残基の欠失を含み得る。
【０１７７】
融合タンパク質は、ＣＤ３３シグナルペプチド（天然シグナルペプチドではない）をコードするベクターから発現された。
【０１７８】
実施例２
図７に、サイトカイン（ＩＬ−２、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１０）を誘発し、それによってＢ７−Ｈ５  Ｉｇの能力を示す。これにより、その分子の免疫系を刺激する能力が確認される。抗Ｂ７−Ｈ５抗体２Ｄ３の供給によってそうした刺激が阻害された（図８）。抗体はまた、同種Ｔ細胞反応を阻害することができることが分かった（図９）。これらの結果は、Ｂ７−Ｈ５に結合して、Ｂ７−Ｈ５がＣＤ２８Ｈと相互作用する能力を遮断することができる、本発明のそれらの抗体が、免疫系の活性化の生理的低下を仲介し得ることを示している。
【０１７９】
抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体は、インビボにおいて、活性化Ｔ細胞の割合を低下させる
抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体のインビボでの効果を調べるために、２０００万個の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＮＯＤ  ｓｃｉｄ  ＩＬ２受容体ガンマ鎖ノックアウト（ＮＳＧ）マウス（たとえば、Ｉｏｒｎｓ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（Ｅｐｕｂ  ２０１２  Ｏｃｔ  ３１）「Ａ  Ｎｅｗ  Ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｄｅｌ  Ｆｏｒ  Ｓｔｕｄｙ  Ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ」，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ７（１０）：ｅ４７９９５；Ｍｉｓｈａｒｉｎ，Ａ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２０１２）「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｏｆ  Ａ  Ｎｅｗ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｄｅｌ  Ｔｏ  Ｓｔｕｄｙ  Ａｃｕｔｅ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ」，Ｊ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．１０：１９０；Ｗａｌｄｒｏｎ−Ｌｙｎｃｈ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（Ｅｐｕｂ  ２０１２  Ａｕｇ  １７）「Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ  Ｗｉｔｈ  Ａ  Ｍｏｕｓｅ  Ｓｋｉｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｍｏｄｅｌ  Ｉｎ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍｉｃｅ」，Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１２（１０）：２６５２−２６６２；Ｖｏｌｋ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２０１２）「Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  Ｏｆ  Ｔｈｒｅｅ  Ｈａｒｍｏｎｉｚｅｄ  Ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｄｅｌｓ  Ｆｏｒ  Ａｄｏｐｔｉｖｅ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ」，Ｊ．Ｇｅｎｅ  Ｍｅｄ．１４（８）：５４０−５４８；Ｒａｃｋｉ，Ｗ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）「ＮＯＤ−ｓｃｉｄＩＬ２ｒｇａｍｍａ（ｎｕｌｌ）Ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｄｅｌ  Ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｋｉｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ａｌｌｏｇｒａｆｔ  Ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ」，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ８９（５）５２７−５３６を参照）の腹腔内に注入した。リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）または抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体（２Ｄ３）を動物の尾の静脈に注入し、ＣＤ４５ＲＯ+細胞中のＣＤ２８Ｈ+細胞の割合を測定した。
【０１８０】
図１０Ａおよび図１０Ｂに示すように、脾臓（図１０Ａ）および末梢血（図１０Ｂ）における活性化（ＣＤ４５ＲＯ+）ヒトＴ細胞中のＣＤ２８Ｈ+細胞の割合は抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体（図１０Ａ）による処理により低下した。このようにＢ７−Ｈ５抗体による処理は、インビボにおいて、活性化Ｔ細胞の割合を低下させる。その一方、そのような処理は、ナイーブ（ＣＤ４５ＲＯ-）Ｔ細胞集団に対しては限られた効果を示しただけであった（図１１Ａおよび図１１Ｂ）。
【０１８１】
実施例３
組換え抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体は抗原特異性を保持する
ＩｇＧ４抗体は特有の構造特性および機能特性を有し、インビボで「半抗体交換（ｈａｌｆ−ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｅｘｃｈａｎｇｅ）」を受け、２つの異なる結合特異性からなる組換え抗体が形成される（Ｎｉｒｕｌａ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）「Ｗｈａｔ  Ｉｓ  Ｉｇｇ４？  Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｆ  Ａ  Ｕｎｉｑｕｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｓｕｂｔｙｐｅ」，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２３（１）：１１９−１２４；．Ａａｌｂｅｒｓｅ，ｅｔ  ａｌ．（２００９）「Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ４：Ａｎ  Ｏｄｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ」，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ  ３９（４）：４６９−４７７）。Ｓｅｒ２２８がＰｒｏに変化して腕が安定化する。キメラｈＩｇＧ４Ｐは「半抗体交換（ｈａｌｆ−ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｅｘｃｈａｎｇｅ）」をしない。
【０１８２】
本発明の抗ヒトＢ７−Ｈ５結合抗体（抗体２Ｄ３および１８Ｃ３）を、それらのネイティブハムスターアイソタイプから、組換え技術のよって、ヒトＩｇＧ４Ｐアイソタイプに変換した。その後、ヒトＢ７−Ｈ５を発現するＣＨＯトランスフェクタントを、組換え抗体の存在下でインキュベートした。図１２Ａ〜Ｃに示すように、両ヒトＩｇＧ４Ｐ誘導体抗体は、ヒトＢ７−Ｈ５に免疫特異的に結合する能力、およびＢ７−Ｈ５−ＣＤ２８Ｈ相互作用を妨げる遮断能力を保持していることが分かった（図１３、パネルＡ〜Ｃ）。図１４Ａ〜１４Ｂは、抗体２Ｄ３および１８Ｃ３が、Ｂ７−Ｈ５とＣＤ２８Ｈとの相互作用を仲介する（図１４Ｃ）、Ｂ７−Ｈ５の第１のＩｇＶドメインを認識していることを示している。図１５は、ＣＨＯ細胞の表面に発現しているヒトＢ７−Ｈ５に対する、抗体２Ｄ３および１８Ｃ３の結合親和性を比較したものである。
【０１８３】
実施例４
Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用の遮断は、破傷風トキソイド（ＴＴ）特異的Ｔ細胞反応を阻害する
メモリー特異的Ｔ細胞リコールに対するＢ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用の効果を調べるために、ヒトＰＢＭＣと自己樹状細胞で再構成したＮＳＧマウスに破傷風トキソイド（「ＴＴ」）ワクチンを接種した。同日に、マウスを対照Ｉｇまたは抗ヒトＢ７−Ｈ５抗体２Ｄ３で処理した。７日後、腹腔内の細胞を採取し、ＴＴ抗原で再刺激した。Ｔ細胞の分裂をＢｒｄＵを取り込ませることによって分析した。培養上清中のサイトカインをヒトＴｈ１／Ｔｈ２  ＣＢＡキットにより試験した。
【０１８４】
そのような試験結果を図１６Ａ〜１６Ｂに示す。これらの図に示すように、内因性Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用は、ＢｒｄＵの取り込みによって示されるように、Ｂ７−Ｈ５遮断性ｍＡｂ  ２Ｄ３のマウスへの注入によって、ＴＴワクチンで誘導されるＴ細胞の増殖が顕著に阻害されることから、ＴＴ特異的メモリーＴ細胞のリコールに重要であると考えられる（図１６Ａ、パネルＡ〜Ｂ）。その結果、培養上清中のＩＦＮ−γ、ＩＬ−５およびＩＬ−１０などのサイトカインはいずれも２Ｄ３  ｍＡｂによって実質的に減少した（図１６Ｂ、パネルＡ〜Ｂ）。まとめると、この結果はＢ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用がメモリーＴ細胞のリコールに重要な役割を果たしていることを示している。
【０１８５】
実施例５
Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用の遮断は、同種Ｔ細胞反応を阻害する
インビボでの同種反応に対するＢ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用の効果を調べるために、ヒト化ＮＳＧマウスに同種ヒトマクロファージを注入した。同日に、マウスを対照または２Ｄ３  ｍＡｂとともにインキュベートした。７日目に、脾細胞を採取し、同種のＣＤ４およびＣＤ８のＴ細胞の増殖を、細胞内染色によりＫｉ−６７の発現を観察することによって評価した。
【０１８６】
そのような試験結果を図１７に示す。図１７に示すように、内因性Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用は、Ｋｉ−６７発現によって示されるように、Ｂ７−Ｈ５遮断性ｍＡｂ  ２Ｄ３のマウスへの注入によって、ＣＤ８＋（図１７Ａ）およびＣＤ４＋（図１７Ｂ）の両Ｔ細胞の増殖が顕著に阻害されることから、同種Ｔ細胞反応に重要であると考えられる。
【０１８７】
実施例６
Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用の遮断は、ヒトＴ細胞におけるＡＫＴ活性化を阻害する
そのような試験結果を図１８に示す。図１８に示すように、内因性Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用は、ＴＣＲシグナルの存在下でのＡＫＴ経路の活性化に重要であると考えられる。ＴＣＲとＢ７−Ｈ５融合タンパク質の同時架橋は、刺激後３０分にＡＫＴリン酸化反応を誘起したが、ＴＣＲ単独の架橋ではＡＫＴリン酸化反応の誘起は最小限であった。Ｂ７−Ｈ５遮断性抗体２Ｄ３が含まれることによって、ＡＫＴ活性化が妨げられ、これによりＢ７−Ｈ５遮断がＴ細胞ＡＫＴ経路の活性化を遮断し得ることが示された。
【０１８８】
実施例７
Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用の遮断は、癌細胞に対する細胞傷害性Ｔリンパ球の殺活性を抑制する
そのような試験結果を図１９に示す。図１９に示すように、おとり受容体融合タンパク質によるＢ７−Ｈ５−ＣＤ２８Ｈ経路の遮断は、いくつかのエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比の条件でＣＴＬ殺活性を阻害するため、癌に関連するＢ７−Ｈ５と、ＣＤ２８Ｈを発現する細胞障害性Ｔ細胞との相互作用は細胞障害性殺活性を共刺激する。
【０１８９】
実施例８
Ｂ７−Ｈ５：ＣＤ２８Ｈ相互作用の遮断は、ナチュラルキラー細胞活性を抑制する
そのような試験結果を図２０Ａ〜Ｂに示す。図２０Ａに示すように、可溶性組換えヒトＩＬ−２の存在下でのナチュラルキラー細胞（ＮＫ）上のＣＤ１６およびＢ７−Ｈ５融合タンパク質の同時架橋は、ＮＫ活性化および脱顆粒を誘発した（ＣＤ１０７ａ表面の上方制御）が、ＣＤ１６結合単独では、さほど顕著なＮＫの脱顆粒は誘発されなかった。Ｂ７−Ｈ５抗体２Ｄ３によるＢ７−Ｈ５−ＣＤ２８Ｈ経路の遮断は、ＮＫの脱顆粒を抑制し（図２０Ｂ）、これはＢ７−Ｈ５がＮＫの活性化を共刺激することを示すものである。
【０１９０】
本明細書に言及した刊行物および特許はすべて、１つ１つの刊行物または特許出願を、その全体を援用するために具体的に個々に示してあるのと同じ程度に本明細書に援用する。本発明についてその特定の実施形態と共に記載してきたが、本発明はさらに修正を行うことができ、本出願は、一般に本発明の原理に従う本発明の任意の変更、使用または適合を包含することを意図しており、さらに本発明の属する技術分野において既知または一般的な慣行の範囲内にあり、上記に記載した本質的特徴に適用し得る本開示からの逸脱を含むことが理解されよう。
【図１】
0006682426.tif 000030
【図２】
0006682426.tif 000031
【図３】
0006682426.tif 000032
【図４】
0006682426.tif 000033
【図５】
0006682426.tif 000034
【図６】
0006682426.tif 000035
【図７】
0006682426.tif 000036
【図８】
0006682426.tif 000037
【図９】
0006682426.tif 000038
【図１０】
0006682426.tif 000039
【図１１】
0006682426.tif 000040
【図１２】
0006682426.tif 000041
【図１３】
0006682426.tif 000042
【図１４】
0006682426.tif 000043
【図１５】
0006682426.tif 000044
【図１６Ａ】
0006682426.tif 000045
【図１６Ｂ】
0006682426.tif 000046
【図１７】
0006682426.tif 000047
【図１８】
0006682426.tif 000048
【図１９】
0006682426.tif 000049
【図２０Ａ】
0006682426.tif 000050
【図２０Ｂ】
0006682426.tif 000051
【配列表】
0006682426000001.app