(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
桔梗抽出物を有効成分として単独で含む筋肉疾患の予防又は治療用薬学組成物であって、
前記筋肉疾患は、緊張減退症（atony)、筋萎縮症（muscular  atrophy）、筋異栄養症（muscular  dystrophy）、筋肉退化、筋硬直症、筋ジストロフィー、筋萎縮性軸索硬化症、筋無力症、悪液質（cachexia）及び筋肉減少症（sarcopenia）からなる群より選ばれる１つ以上である薬学組成物。
【請求項２】
水、炭素数1乃至6の有機溶媒、亜臨界流体、超臨界流体及びこれらの混合物からなる群より選ばれた一つ以上の溶媒による桔梗抽出物を有効成分として単独で含む筋肉疾患の予防又は治療用薬学組成物の製造方法であって、
前記筋肉疾患は、緊張減退症（atony)、筋萎縮症（muscular  atrophy）、筋異栄養症（muscular  dystrophy）、筋肉退化、筋硬直症、筋ジストロフィー、筋萎縮性軸索硬化症、筋無力症、悪液質（cachexia）及び筋肉減少症（sarcopenia）からなる群より選ばれる１つ以上である方法。
【請求項３】
前記炭素数1乃至6の有機溶媒は、炭素数1乃至6のアルコール（alcohol)、アセトン（acetone)、エーテル（ether)、ベンゼン（benzene)、クロロホルム（chloroform）、酢酸エチル（ethyl  acetate)、塩化メチレン（methylene  chloride）、ヘキサン（hexane）、シクロヘキサン（cyclohexane)及び石油エーテル（petroleum  ether)からなる群より選ばれたことを特徴とする請求項２記載の方法。
【請求項４】
100MPa乃至1000MPaの超高圧条件下で桔梗を抽出して収得した桔梗抽出物を有効成分として単独で含む筋肉疾患の予防又は治療用薬学組成物の製造方法であって、
前記筋肉疾患は、緊張減退症（atony)、筋萎縮症（muscular  atrophy）、筋異栄養症（muscular  dystrophy）、筋肉退化、筋硬直症、筋ジストロフィー、筋萎縮性軸索硬化症、筋無力症、悪液質（cachexia）及び筋肉減少症（sarcopenia）からなる群より選ばれる１つ以上である方法。
【請求項５】
桔梗抽出物を有効成分として単独で含む筋肉疾患の予防又は筋機能改善用食品組成物であって、
前記筋肉疾患は、緊張減退症（atony)、筋萎縮症（muscular  atrophy）、筋異栄養症（muscular  dystrophy）、筋肉退化、筋硬直症、筋ジストロフィー、筋萎縮性軸索硬化症、筋無力症、悪液質（cachexia）及び筋肉減少症（sarcopenia）からなる群より選ばれる１つ以上である食品組成物。
【請求項６】
桔梗抽出物を有効成分として単独で含む筋機能改善用化粧料組成物であって、
前記筋肉疾患は、緊張減退症（atony)、筋萎縮症（muscular  atrophy）、筋異栄養症（muscular  dystrophy）、筋肉退化、筋硬直症、筋ジストロフィー、筋萎縮性軸索硬化症、筋無力症、悪液質（cachexia）及び筋肉減少症（sarcopenia）からなる群より選ばれる１つ以上である化粧料組成物。
【請求項７】
桔梗抽出物の筋肉疾患の予防又は治療剤製造のための使用であって、
前記筋肉疾患は、緊張減退症（atony)、筋萎縮症（muscular  atrophy）、筋異栄養症（muscular  dystrophy）、筋肉退化、筋硬直症、筋ジストロフィー、筋萎縮性軸索硬化症、筋無力症、悪液質（cachexia）及び筋肉減少症（sarcopenia）からなる群より選ばれる１つ以上である使用。
【請求項８】
桔梗抽出物を、これを必要とする動物（ヒトを除く）に有効量で投与することを特徴とする筋肉疾患の予防又は治療方法であって、
前記筋肉疾患は、緊張減退症（atony)、筋萎縮症（muscular  atrophy）、筋異栄養症（muscular  dystrophy）、筋肉退化、筋硬直症、筋ジストロフィー、筋萎縮性軸索硬化症、筋無力症、悪液質（cachexia）及び筋肉減少症（sarcopenia）からなる群より選ばれる１つ以上である方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は2015年05月26日に出願された大韓民国特許出願第10-2015-0072731号を優先権主張し、前記明細書全体は参照により本出願に援用する。
【０００２】
本発明は、桔梗（balloon-flower;学名：Platycodon  grandiflorus)抽出物を含有する筋肉疾患の予防及び治療用又は筋機能改善用組成物に関するもので、より詳細には、桔梗抽出物を含む筋肉疾患の予防及び治療用薬学組成物、筋肉疾患の予防用又は筋機能改善用食品組成物又は筋機能改善用化粧料に関する。
【背景技術】
【０００３】
筋肉（Muscle）は人体で最も構成量が多い組織であって、人体の機能的能力（functional  capacity)を維持し、代謝性疾患を予防するためには適正筋肉量の確保が必須的に要求される。筋肉サイズ（muscle  size)は、筋肉内で起こる同化作用（anabolism)や異化作用（catabolism）を誘導する細胞内信号伝達過程（signalling  pathways)により調節される。筋肉タンパク質の分解より合成を誘導する信号伝達反応が多く起こる場合、筋肉タンパク質合成が増加され、結果的に筋肉の大きさが増加する筋肥大（hypertrophy)や筋繊維数の増加（hyperplasia)が発生する（The  Korea  Journal  of  Sports  Science、20（3)：1551-1561、2011）。
【０００４】
筋タンパク質合成に関与する因子は、筋細胞内でphosphatidylinositol-3  kinase（PI3K）/Akt  pathwayの刺激を起点に、ダウンストリームタンパク質（downstream  proteins)をリン酸化させることにより、タンパク質の合成を誘導する。PI3K/Akt信号伝達によるmammalian  target  of  rapamycin（mTOR）の活性は、細胞内で多様な成長信号を統合する中心成長信号伝達因子として認められている。mTORは、mRNA  translationを開始する二因子、4E-binding  protein（4EBP1)とphosphorylated  70-kDa  ribosomal  S6  kinase（p70S6K）を活性化させることにより筋タンパク質合成を誘導して筋肉量の増加に寄与する（The  Korea  Journal  of  Sports  Science、  20（3)：1551-1561、2011;  The  International  Journal  of  Biochemistry  and  Cell  Biology、43（9)：1267-1276、2011）。逆に転写因子（transcription  factor）であるforhead  box（FoxO）が細胞質から核内に移動すると、タンパク質分解に関与するE3  ubiquitin  ligase因子atrogin-1とMuRF-1の発現を増加させる（Disease  Models  and  Mechanisms、6：25  -39、2013）。これらの発現量が増加すると、筋肉内のタンパク質分解が促進されて筋肉量が減少することになる。従って、mTORの活性促進とatrogin-1とMuRF-1発現抑制は、筋肉タンパク質の量を増加させて筋肉量を増加させることになる。
【０００５】
筋肉細胞の分化と筋肉の形成は、多様な筋肉の調節因子（muscle  regulatory  factors)により調節される。その中で、MyoDは筋肉特異遺伝子の発現を開始させて筋肉衛星細胞（muscle  satellite  cells）が筋原細胞（myoblast）に分化することを誘導する。MyoDの活性によるmyogenin発現の誘導は、筋原細胞の結合（fusion）に最も重要な要素として筋管細胞（myotube)の形成に関与する。このような過程を通じて形成された筋繊維は束をなして、最終的に筋肉を形成することになる（Cellular  and  Molecular  Life  Sciences、70：4117-4130、2013）。
【０００６】
桔梗は別名トラジとも呼ばれるキキョウ科（Campanulaceae)桔梗属(Platycodon)の植物で、学名はプラチコドングランディフロルス（Platycodon  grandiflorus)である。桔梗は韓国、日本、中国など東アジアなどに多く分布しており、主な成分としては、サポニン（saponin)系列がよく知られている。桔梗は伝統的な民間療法として鎮咳去痰、解熱、下痢などの症状を治癒するために使用された。桔梗の生理活性としては肝硬変抑制（Food  and  Chemical  Toxicology、56：231-239、2013）、抗肥満及びインスリン抵抗性の緩和（Evidence-Based  Complementary  and  Alternative  Medicine、2012：759143、2012年）、アレルギー性アトピー皮膚炎抑制（Environmental  Toxicology  and  Pharmacology、33（3)：446-452、2012）、抗がん効果（International  Journal  of  Hepatology、38：280-283、2011）などが報告された。しかし、本発明以前には桔梗の筋肉量増加効果ついては知られていなかった。
【０００７】
そこで、本発明者らは桔梗抽出物が筋タンパク質合成及び筋肉細胞の分化を介して筋肉の形成に関与することにより、筋肉量を増加させることを見出だして本発明を完成した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
そこで、本発明者らは優れた筋機能調節活性を有して、安全に適用できる天然物質を探索した結果、桔梗抽出物が筋肉疾患の予防及び治療又は筋機能改善活性があることを確認して本発明を完成した。
【０００９】
従って、本発明の目的は、桔梗抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防又は治療用薬学組成物を提供することである。
【００１０】
本発明の他の目的は、桔梗抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防又は筋機能改善用食品組成物を提供することである。
【００１１】
本発明の他の目的は、桔梗抽出物を有効成分として含む筋機能改善用化粧料組成物を提供することである。
【００１２】
本発明の他の目的は、桔梗抽出物の筋肉疾患の予防又は治療剤製造のための使用を提供することである。
【００１３】
本発明の他の目的は、桔梗抽出物を、これを必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする筋肉疾患の予防又は治療方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
前記本発明の目的を達成するために、本発明は桔梗抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防又は治療用薬学組成物を提供する。
【００１５】
本発明の他の目的を達成するために、本発明は桔梗抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防又は筋機能改善用食品組成物を提供する。
【００１６】
本発明の他の目的を達成するために、本発明は桔梗抽出物を有効成分として含む筋機能改善用化粧料組成物を提供する。
【００１７】
本発明の他の目的を達成するために、本発明は桔梗抽出物の筋肉疾患の予防又は治療剤製造のための使用を提供する。
【００１８】
本発明の他の目的を達成するために、本発明は桔梗抽出物を、これを必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする筋肉疾患の予防又は治療方法を提供する。
【００１９】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明は、桔梗抽出物を有効成分として含む筋肉疾患の予防又は治療用薬学組成物を提供する。
【００２０】
前記抽出物はこれに限定はされないが、桔梗の地下部（subterranean  part)抽出物でもある。
【００２１】
本明細書で“筋”とは腱、筋肉、腱を包括的に指称し“筋機能”とは筋肉の収縮により力を発揮する能力を意味し、筋肉が抵抗に打ち勝つために最大限に収縮力を発揮できる能力の筋力、筋肉が与えられた重量にどれほど長く又はどれほど複数回の収縮と弛緩を繰り返すことができるかを示す能力の筋持久力、短時間で強い力を発揮する能力である瞬発力を含む。このような筋機能は肝臓が主管して筋肉量に比例する。用語“筋機能改善”とは筋機能をより良く向上させることを意味する。
【００２２】
本発明の筋肉疾患の予防及び治療用又は筋機能改善用組成物は、桔梗抽出物を単独で含有するか、又は桔梗抽出物とその類似した機能を示す有効成分を一種以上含むことができる。追加的な成分を含むと本発明の組成物の筋機能改善効果がさらに増進する。前記成分の追加時には、複合使用による皮膚安全性、剤形化の容易性、有効成分らの安定性を考慮することができる。
【００２３】
本発明の桔梗抽出物は、公知の天然物抽出方法により抽出ができる。好ましくは水、炭素数１乃至６の有機溶媒及び亜臨界又は超臨界流体からなる群より選ばれた複数の溶媒で抽出できる。前記炭素数１乃至６の有機溶媒は、炭素数１乃至６のアルコール（alcohol)、アセトン（acetone)、エーテル（ether)、ベンゼン（benzene)、クロロホルム（chloroform）、酢酸エチル（ethyl  acetate)、塩化メチレン（methylene  chloride）、ヘキサン（hexane）、シクロヘキサン（cyclohexane)及び石油エーテル（petroleum  ether)からなる群より選ばれたものでもあるが、これらに制限されるものではない。
【００２４】
さらに、本発明の桔梗抽出物は、乾燥した桔梗の地下部を食品加工に適した精製水、エタノール及び亜臨界水又は超臨界二酸化炭素を利用して抽出、精製して得られるか又は桔梗植物を直接圧搾して得たオイルから分離精製して得ることができる。例えば、100MPa以上の超高圧条件下で桔梗を抽出して抽出物を得ることができる。好ましくは100MPa乃至1000MPaの超高圧条件でもあり得るが、これらに制限されるものではない。
【００２５】
本発明に係る組成物は、経口投与剤、経皮投与剤、吸込投与剤などの薬学的組成物の形態、機能性食品、栄養補助剤、健康食品及び食品添加剤などの食品組成物の形態又は化粧料組成物の形態で製造されて体内に投与することができる。
【００２６】
本発明の桔梗抽出物は、筋肉疾患の予防及び治療効果又は筋機能改善効果が優れている。
【００２７】
本発明の一実施例では、桔梗の地下部を利用して、メタノール、熱水抽出物、エタノール、ヘキサン、酢酸エチル抽出物を製造した（実施例１参照）。
【００２８】
本発明の他の一実施例では、桔梗メタノール抽出物がL6筋肉細胞においてp-mTOR、p-p70S6Kのタンパク質発現を効果的に増加させた（実施例２、３参照）。
【００２９】
本発明の一実施例では、桔梗ヘキサン抽出物、酢酸エチル抽出物、エタノール抽出物、熱水抽出物がL6筋肉細胞においてMyoD、myogeninのmRNA発現を効果的に増加させた（実施例４参照）。
【００３０】
本発明の他の一実施例では、桔梗メタノール抽出物がL6筋肉細胞においてMyoD、myogeninのmRNA発現を効果的に増加させた（実施例５参照）。
【００３１】
本発明の他の一実施例では、桔梗ヘキサン抽出物、酢酸エチル抽出物、エタノール抽出物、熱水抽出物がL6筋肉細胞においてatrogin-1とMuRF-1のmRNA発現を効果的に減少させた（実施例６参照）。
【００３２】
従って、本発明の組成物は筋肉量の増加促進効果を有し、筋肉はその種類を制限しない。筋肉の増加は身体成分の中でも特に筋肉の性能を向上させることにより肉体的運動及び持久力の向上を介して筋肉量を増加させることができ、筋肉の増加効果を有する物質を体内に投与する方法で筋肉量を増加させることができる。
【００３３】
本発明の桔梗抽出物は、筋肉量の増加活性が優れているので薬学的組成物の有効成分として利用することができる。
【００３４】
また、本発明の桔梗抽出物は、筋肉量の増加活性が優れているので食品組成物の有効成分として利用することができる。
【００３５】
また、本発明の桔梗抽出物は、筋肉量の増加活性が優れているので化粧料組成物の有効成分として利用することができる。
【００３６】
本発明の薬学組成物は桔梗抽出物を薬学的に許容可能な塩を含むことができる。本明細書において用語“薬学的に許容可能な”とは、生理学的に許容され、ヒトに投与されるとき通常的にアレルギー反応又はこれと類似した反応を起こさないことを意味し、前記塩としては薬学的に許容可能な遊離酸（free  acid)により形成された酸付加塩が好ましい。
【００３７】
前記桔梗抽出物の薬学的に許容可能な塩は、有機酸又は無機酸を用いて形成された酸付加塩でもあって、前記有機酸は例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、乳酸、酪酸、イソ酪酸、トリフルオロ酢酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、フマル酸、コハク酸、コハク酸モノアミド、グルタミン酸、酒石酸、シュウ酸、クエン酸、グリコール酸、グルクロン酸、アスコルビン酸、安息香酸、フタル酸、サリチル酸、アントラキノン酸、ジクロロ酢酸、アミノオキシアセテート、ベンゼンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸又はメタンスルホン酸を含む。無機酸は、例えば塩酸、臭素酸、硫酸、リン酸、硝酸、炭酸、又は硼酸を含む。酸付加塩は、好ましくは塩酸塩又は酢酸塩の形態でもあってより好ましくは塩酸塩の形態でもある。
【００３８】
前記の酸付加塩はａ）桔梗抽出物及び酸を直接混合するか、ｂ）これらの内一つを溶媒又は鹹水溶媒中に溶解させて混合させるか又はｃ）桔梗抽出物を溶媒又は垂下溶媒中の酸に位置させてこれらを混合する一般的な塩の製造方法で製造される。
【００３９】
前記とは別に追加的に塩が可能な形態は、ガバ塩、ガバペンチン塩、プレガバリン塩、ニコチン酸塩、アジペート酸塩、ヘミマロン酸塩、システイン塩、アセチルシステイン塩、メチオニン塩、アルギニン塩、リシン塩、オルニチン塩又はアスパラギン酸塩などがある。
【００４０】
また、本発明の筋肉疾患の予防及び治療用薬学組成物は薬学的に許容可能な担体をさらに含むことができる。
【００４１】
薬学的に許容される担体には、例えば、経口投与用担体又は非経口投与用担体をさらに含むことができる。経口投与用担体はラクトース、デンプン、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などを含むことができる。さらに、非経口投与用担体は水、適切な油、食塩水、水性グルコース及びグリコールなどを含むことができる。
【００４２】
また、安定化剤及び保存剤を追加して含むことができる。適切な安定化剤には亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム又はアスコルビン酸のような抗酸化剤がある。適切な保存剤には、塩化ベンザルコニウム、メチル-又はプロピール-パラベン及びクロロブタノールがある。その他の薬学的に許容される担体には下記の文献に記載されていることを参考にすることができる（Remington's  Pharmaceutical  Sciences、19th  ed.,Mack  Publishing  Company、Easton、PA、1995）。
【００４３】
本発明の薬学組成物は、ヒトをはじめとする哺乳動物にいかなる方法でも投与することができる。例えば、経口又は非経口で投与することができ、非経口的な投与方法にはこれに限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髄内、境膜内、心臓内、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸管、局所、舌下又は直腸内投与でもある。
【００４４】
本発明の薬学組成物は上述した通り、投与経路により経口投与用又は非経口投与用の製剤に剤形化することができる。剤形化する場合には、一つ以上の緩衝剤（例えば、生理食塩水又はＰＢＳ）、抗酸化剤、静菌剤、キレート剤（例えば、EDTA又はグルタチオン）、充填剤、増量剤、結合剤、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）、懸濁剤、濃厚剤、湿潤剤、崩解剤又は界面活性剤、希釈剤、又は賦形剤を使用して調剤することができる。
【００４５】
経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁液又はカプセル剤などが含まれ、これらの固形製剤は本発明の薬学組成物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、デンプン（トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプンなどを含む）、炭酸カルシウム（calcium  carbonate)、スクロース（sucrose)、ラクトース（lactose)、デキストロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、セルロース、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース及びヒドロキシプロピルメチル-セルロース又はゼラチンなどを混合して調剤することができる。例えば、活性成分を固体賦形剤と配合してこれを粉砕し、適切な補助剤を添加した後、顆粒混合物に加工することにより、錠剤又は糖衣錠剤を得ることができる。
【００４６】
単純な賦形剤以外にステアリン酸マグネシウムタルクのような潤滑剤も使用される。経口のための液状製剤には、懸濁剤、内用液剤、乳剤又はシロップ剤などが該当するが、広く使用される単純希釈剤である水又は液体パラフィン以外に多様な賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤、又は保存剤などが含まれる。
【００４７】
また、場合によっては架橋結合ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸又はナトリウムアルギン酸などを崩解剤に添加することができ、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤及び防腐剤などをさらに含むことができる。
【００４８】
非経口的に投与する場合、本発明の薬学組成物は適切な非経口用担体と共に注射剤、経皮投与剤及び鼻腔吸込の形態で当業界に公知された方法により剤形化することができる。前記注射剤の場合には必ず滅菌しなければならず、細菌及び真菌のような微生物の汚染から保護されるべきである。注射剤の場合適切な担体の例としてはこれに限定はされないが、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、これらの混合物及び／又は植物油を含む溶媒又は分散媒質でもある。より好ましくは、適切な担体にはハンクス液、リンゲル液、トリエタノールアミンが含有されたPBS（phosphate  buffered  saline)又は注射用滅菌水、10％エタノール、40％プロピレングリコール及び５％デキストロースのような等張溶液などを使用することができる。前記注射剤を微生物汚染から保護するためには、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどのような多様な抗菌剤及び抗真菌剤を追加して含むことができる。さらに、前記注射剤は殆どの場合糖又はナトリウムクロライドのような等張化剤をさらに含むことができる。
【００４９】
経皮投与剤の場合、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、外用液剤、パスタ剤、リニメント剤、エアロ剤などの形態が含まれる。前記で“経皮投与”とは薬学組成物を局所的に皮膚に投与して薬学組成物に含有された有効な量の活性成分が皮膚内に伝達されることを意味する。
【００５０】
吸込投与剤の場合には、本発明により使用される化合物は適切な推進剤、例えば、ジクロロフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の適切な気体を使用して加圧パック又は煙霧器からエアロゾルスプレーの形態で便利に伝達することができる。加圧エアロゾルの場合、投薬単位は計量された量を伝達するバルブを提供して決定することができる。例えば、吸込器又は取込器に使用されるゼラチンカプセル及びカートリッジは化合物及びラクトース又はデンプンのような適切な粉末基剤の粉末混合物を含有するように剤形化することができる。非経口投与用剤形は、全ての製薬化学に一般的に公知された処方箋の文献（Remington's  Pharmaceutical  Science、15th  Edition、1975年Mack  Publishing  Company、Easton、Pennsylvania  18042、Chapter  87：Blaug、Seymour)に記載されている。
【００５１】
本発明の筋肉疾患の予防及び治療用薬学組成物は、桔梗抽出物を有効量で含むとき好ましい筋肉疾患の予防及び治療効果を提供することができる。本明細書で“有効量”とは、陰性対照群に比べてそれ以上の反応を示す量を意味し、好ましくは筋機能を向上させるに十分な量を意味する。本発明の薬学組成物に桔梗抽出物が0.01乃至99.99％含まれることができ、残量は薬学的に許容可能な担体が占めることができる。本発明の薬学組成物に含まれる桔梗抽出物の有効量は組成物が製品化される形態などにより異なる。
【００５２】
本発明の薬学組成物の総有効量は単一投与（single  dose)で患者に投与でき、多重投与（multiple  dose)で長期間投与される分割治療方法（fractionated  treatment  protocol)により投与することもできる。本発明の薬学組成物は疾患の程度により有効成分の含量を変更することができる。非経口投与の際には桔梗抽出物を基準に、一日に体重1kg当り好ましくは、0.01乃至50mg、より好ましくは0.1乃至30mgの量で投与できるようにし、さらに、経口投与時には桔梗抽出物を基準に、一日に体重1kg当り好ましくは、0.01乃至100mg、より好ましくは0.01乃至10mgの量で投与できるように１乃至数回に分けて投与することができる。しかし、前記桔梗抽出物の容量は薬学組成物の投与経路及び治療回数だけでなく、患者の年齢、体重、健康状態、性別、疾患の重症度、食餌及び排泄率など、多様な要因らを考慮して患者に対する有効投与量が決定されるので、このような点を考慮すると当分野の通常の知識を有する者であれば、前記桔梗抽出物を筋肉疾患の予防及び治療のための特定の用途に応じた適切な有効投与量を決定することができる。本発明に係る薬学組成物は本発明の効果を示す限り、その剤形、投与経路及び投与方法に対して特に制限されない。
【００５３】
本発明の筋肉疾患の予防及び治療用薬学組成物は単独で、又は手術、放射線治療、ホルモン療法、化学療法、又は生物学的反応調節剤を使用する方法と併用して使用することができる。
【００５４】
本発明の筋肉疾患の予防及び治療用薬学組成物は、桔梗抽出物を有効成分として含む外用剤の剤形で提供することができる。
【００５５】
本発明の筋肉疾患の予防及び治療用薬学組成物を皮膚外用剤として使用する場合、追加して脂肪物質、有機溶媒、溶解剤、濃縮剤及びゲル化剤、軟化剤、抗酸化剤、懸濁化剤、安定化剤、発泡剤（foaming  agent)、芳香剤、界面活性剤、水、イオン性乳化剤、非イオン性乳化剤、充填剤、金属イオン封鎖剤、キレート剤、保存剤、ビタミン、遮断剤、湿潤化剤、エッセンシャルオイル、染料、顔料、親水性活性剤、親油性活性剤又は脂質小胞など皮膚外用剤に通常使用される任意の他の成分などの、皮膚科学の分野で通常的に使用される補助剤を含有できる。また、前記成分らは皮膚科学分野で一般的に使用される量で導入できる。
【００５６】
本発明の筋肉疾患の予防及び治療用の薬学組成物が皮膚外用剤として提供される場合、これらに限定されるものではないが、軟膏、パッチ、ゲル、クリーム、又はスプレーなどの剤形でもある。
【００５７】
本発明の筋肉疾患の予防及び筋機能改善用組成物は食品組成物でもある。本発明の筋肉疾患の予防及び筋機能改善用が食品組成物の場合、筋肉の消耗又は退化による筋肉疾患の予防又は改善に使用することができる。筋肉消耗及び退化は遺伝的要因、後天的要因、老化などを原因として発生し、筋肉消耗は筋肉量の漸進的損失、筋肉、特に骨格筋又は随意筋及び心筋の弱化及び退行を特徴とする。これと関連した疾患の例には緊張減退症（atony)、筋萎縮症（muscular  atrophy）、筋異栄養症（muscular  dystrophy）、筋肉退化、筋無力症、悪液質（cachexia）及び筋肉減少症（sarcopenia）などを挙げられる。本発明の組成物は筋肉量の増大効果があり筋肉はその種類を制限しない。
【００５８】
本発明の食品組成物は、機能性食品（functional  food)、栄養補助剤（nutritional  supplement）、健康食品（health  food)、食品添加剤（food  additives）及び飼料などのすべての形態を含み、ヒト又は家畜をはじめとする動物を取食対象とする。前記類型の食品組成物は当業界に公知された通常の方法により多様な形態で製造できる。
【００５９】
前記類型の食品組成物は、当業界に公知された通常の方法により多様な形態で製造することができる。一般食品ではこれに限定はされないが、飲料（アルコール性飲料を含む）、果実及びその加工食品（例えば、果物缶詰、瓶詰、ジャム、ママレード等）、魚類、肉類及びその加工食品（例：ハム、ソーセージ、コンビーフ等）、パン類及び麺類（例：うどん、そば、ラーメン、スパゲッティ、マカロニ等）、果汁、各種ドリンク、クッキー、飴、乳製品（例、バター、チーズなど）、食用植物油脂、マーガリン、植物性タンパク質、レトルト食品、冷凍食品、各種調味料（例、味噌、醤油、ソース等）等に前記桔梗抽出物を添加して製造することができる。また、栄養補助剤にはこれに限定はされないが、カプセル、錠剤、丸剤等に桔梗抽出物を添加して製造できる。また、健康機能食品にはこれに限定はされないが例えば、前記桔梗抽出物自体を茶、ジュース及びドリンクの形態で製造して飲用（健康飲料）できるように液状化、顆粒化、カプセル化、及び粉末化して摂取することができる。また、前記桔梗抽出物を食品添加剤の形態で使用するためには、粉末又は濃縮液形態で製造して使用することができる。また、桔梗抽出物と筋肉疾患の予防及び筋機能の改善効果があると知られている公知の活性成分と共に混合して組成物の形態で製造することができる。
【００６０】
本発明の筋肉疾患の予防及び筋機能改善用組成物が健康飲料組成物として利用される場合、前記の健康飲料組成物は、通常の飲料のように多様な香味剤又は天然炭水化物などを追加成分として含有することができる。上述した天然炭水化物はブドウ糖、果糖のような単糖類;マルトース、スクロースのような二糖類;デキストリン、シクロデキストリンのような多糖類;キシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールでもある。甘味剤は、タウマーチン、ステビア抽出物のような天然甘味剤;サッカリン、アスパルテームのような合成甘味剤などを使用することができる。前記天然炭水化物の比率は、本発明の組成物100mL当たり一般的に約0.01〜0.04g、好ましくは約0.02〜0.03gである。
【００６１】
桔梗抽出物は筋肉疾患の予防及び筋機能改善用食品組成物の有効成分として含有できるものの、その量は筋肉疾患の予防及び筋機能改善用作用達成に有効な量で特に限定されるものではないが、全体組成物の総重量に対して0.01乃至100重量％であることが好ましい。本発明の食品組成物は桔梗抽出物と共に筋肉疾患の予防及び筋機能改善用組成物に効果があると知られている他の活性成分と共に混合して製造することができる。
【００６２】
前記の他に本発明の健康食品は多様の栄養剤、ビタミン、電解質、風味剤、着色剤、ペクト酸、ペクト酸塩、アルギン酸、アルギン酸の塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、pH調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、又は炭酸化剤などを含むことができる。その他、本発明の健康食品は天然フルーツジュース、フルーツジュース飲料又は野菜飲料の製造のための果肉を含有することができる。これらの成分は独立的に、又は混合して使用できる。このような添加剤の比率はそれほど重要ではないが、本発明の組成物100重量部当り0.01〜0.1重量部の範囲で選択されるのが一般的である。
【００６３】
本発明の筋機能改善用組成物は、さらに、化粧料組成物でもある。本発明の化粧料組成物は桔梗抽出物を有効成分として含有し、皮膚学的に許容可能な賦形剤と共に基礎化粧品組成物（化粧水、クリーム、エッセンス、クレンジングフォーム、及びクレンジングウォーターのような洗顔剤、パック、ボディオイル）、色調化粧品組成物（ファンデーション、口紅、マスカラ、メイキャップベース、頭髪製品組成物（シャンプー、リンス、ヘアコンディショナー、ヘアジェル）及び石鹸などの形態で製造することができる。
【００６４】
前記賦形剤にはこれに限定はされないが、例えば、皮膚軟化剤、皮膚浸透増強剤、着色剤、芳香剤、乳化剤、濃化剤及び溶媒を含む。また、香料、色素、殺菌剤、酸化防止剤、防腐剤、及び保湿剤などを追加して含むことができ、物性改善を目的に漸増剤、無機塩類、合成高分子物質などを含むことができる。例えば、本発明の化粧料組成物で洗顔剤及び石鹸を製造する場合には、通常の洗顔剤及び石鹸ベースに前記桔梗抽出物を添加して容易に製造することができる。クリームを製造する場合には、一般的な水中油滴型（O/W)のクリームベースに桔梗抽出物又はその塩を添加して製造することができる。ここで香料、キレート剤、色素、酸化防止剤、防腐剤などと物性改善を目的としたタンパク質、ミネラル、ビタミンなどの合成又は天然素材を追加して添加できる。
【００６５】
本発明の化粧料組成物に含有される桔梗抽出物の含量は、これに限定はされないが、全体組成物の総重量に対して、0.001乃至10重量％であることが好ましく、0.01乃至5重量％であることがより好ましい。前記含量が0.001重量％未満では目的とする抗老化又はシワ改善効果を期待できず、10重量％を超えると安全性又は剤形上の製造に困難が伴うこともある。
【００６６】
本発明は、桔梗抽出物の筋肉疾患の予防又は治療剤製造のための使用を提供する。
【００６７】
本発明は、桔梗抽出物を、これを必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする筋肉疾患の予防又は治療方法を提供する。
【００６８】
本発明の前記“有効量”とは個体に投与したとき、筋肉疾患及び筋機能の改善、治療及び予防効果を示す量を意味し、前記“個体”とは動物、好ましくは哺乳動物、特にヒト、家畜を含む動物でもあって動物から由来した細胞、組織、器官等でもある。前記個体は治療が必要な患者（patient)又は家畜でもある。
【発明の効果】
【００６９】
本発明の桔梗抽出物はmTOR、p70S6K、MyoD、myogeninを活性化させることにより、筋タンパク質合成及び筋肉細胞の分化を起こして筋肉の形成を増加させる。したがって、本発明の桔梗抽出物は天然物であるため、副作用なく安全に使用することができ、筋肉疾患の予防及び治療用又は筋機能の改善に優れた効果を示す組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】図１は、L6筋肉細胞について、５種の桔梗抽出物（1.メタノール抽出物、2.エタノール抽出物、3.酢酸エチル抽出物、4.ヘキサン抽出物、5.熱水抽出物）によるp-mTORのタンパク質発現を測定した結果ある。
【図２】図２は、L6筋肉細胞について桔梗メタノール抽出物によるp-mTOR及びp-p70S6Kのタンパク質発現を測定した結果である。
【図３】図３は、L6筋肉細胞について桔梗ヘキサン抽出物、酢酸エチル抽出物、エタノール抽出物、熱水抽出物の処理によるMyoDとmyogeninのmRNA発現を測定した結果である。
【図４】図４は、L6筋肉細胞について桔梗メタノール抽出物によるMyoD及びmyogeninのmRNA発現を測定した結果である。
【図５】図５は、L6筋肉細胞について桔梗ヘキサン抽出物、酢酸エチル抽出物、エタノール抽出物、熱水抽出物の処理によるatrogin-1とMuRF-1のmRNA発現を測定した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００７１】
以下、本発明を、実施例を通じてより詳細に説明する。
但し、下記の実施例は本発明を例示するのみであり、本発明の内容が下記の実施例に限定されるものではない。
【００７２】
＜実施例１＞
桔梗抽出物の製造
<1-1>桔梗メタノール抽出物の製造
乾燥した桔梗地下部をミキサーで粉砕し、粉砕した桔梗試料100gを100％メタノール1Lに入れて48時間常温で抽出した。抽出した試料はワットマン（Whatman)2番濾紙で濾過して、濾過された抽出液を真空回転濃縮機で濃縮して溶媒成分を除去した後、桔梗メタノール抽出物を得た。
【００７３】
<1-2>桔梗エタノール抽出物の製造
乾燥した桔梗地下部をミキサーで粉砕し、粉砕した桔梗試料100gを100％エタノール1Lに入れて48時間常温で抽出した。抽出した試料はワットマン（Whatman)2番濾紙で濾過して、濾過された抽出液を真空回転濃縮機で濃縮して溶媒成分を除去した後、桔梗エタノール抽出物を得た。
【００７４】
<1-3>桔梗酢酸エチル抽出物の製造
乾燥した桔梗地下部をミキサーで粉砕し、粉砕した桔梗試料100gを100％酢酸エチル1Lに入れて48時間常温で抽出した。抽出した試料はワットマン（Whatman)2番濾紙で濾過して、濾過された抽出液を真空回転濃縮機で濃縮して溶媒成分を除去した後、桔梗酢酸エチル抽出物を得た。
【００７５】
<1-4>桔梗ヘキサン抽出物の製造
乾燥した桔梗地下部をミキサーで粉砕し、粉砕した桔梗試料100gを100％ヘキサン1Lに入れて48時間常温で抽出した。抽出した試料はワットマン（Whatman)2番濾紙で濾過して、濾過した抽出液を真空回転濃縮機で濃縮して溶媒成分を除去した後、桔梗ヘキサン抽出物を得た。
【００７６】
<1-5>桔梗熱水抽出物の製造
乾燥した桔梗地下部をミキサーで粉砕し、粉砕した桔梗試料100gを水1Lに入れて100℃で2時間攪拌しながら抽出した。抽出された試料はワットマン（Whatman)2番濾紙で濾過して、濾過した抽出液を真空回転濃縮機で濃縮して溶媒成分を除去した後、桔梗熱水抽出物を得た。
【００７７】
<1-6>桔梗超高圧抽出物の製造
乾燥した桔梗地下部をミキサーで粉砕し、粉砕した桔梗試料1gと18％エタノール76mLをポリエチレン（polyethylene）パックに入れて密封した後、超高圧抽出装置（Frescal  MFP-7000;  Mitsubishi  Heavy  Industries、Tokyo、Japan)を用いて抽出した。超高圧抽出条件は抽出圧力が320MPa、抽出時間は5minであった。抽出された試料はワットマン（Whatman)2番濾紙で濾過して、濾過された抽出液を真空回転濃縮機で濃縮して溶媒成分を除去することにより、桔梗超高圧抽出物を得た。
【００７８】
<1-7>桔梗超臨界流体抽出物の製造
乾燥した桔梗をミキサーで粉砕し、粉砕した桔梗試料1gを試料カートリッジに充填して超臨界流体抽出装置（SFX  3560、Isco  Inc.、Lincoln、NE、USA)を用いて抽出した。超臨界流体抽出条件は、抽出圧力が40MPa、抽出温度は50℃、超臨界二酸化炭素の流速は60mL/min、抽出時間は60minであった。超臨界流体抽出が完了すると、抽出装置の圧力を下げて超臨界流体状態を解除して、桔梗超臨界流体抽出物を得た。
【００７９】
<1-8>桔梗亜臨界流体抽出物の製造
乾燥した桔梗をミキサーで粉砕し、粉砕した桔梗試料1gを蒸留水10mLに入れて亜臨界流体抽出装置（DIONEX  Accelerated  Solvent  Extractor  100、DIONEX  co.,USA)を用いて抽出した。亜臨界流体抽出条件は2.5MPa、抽出温度150℃、抽出時間15分の条件下で亜臨界抽出を行った。抽出された試料はワットマン２番濾紙で濾過して濾過された抽出液を−40℃で凍結乾燥して、桔梗亜臨界流体抽出物を得た。
【００８０】
＜実施例２＞
桔梗抽出物の筋タンパク質合成の増加効果
筋肉細胞であるL6  myoblast(ATCC、Manassas、VA、USA)を10％fetal  bovine  serum（FBS;  Hyclone、Logan、UT、USA)が含有されたDulbecco's  modified  Eagle's  Media（DMEM;  Hyclone)と共に6ウェルプレートに1X105cell/mlになるように入れた。細胞密度が約80〜85％になったとき、ウェルの培地を除去して2％  horse  serum（HS;  Hyclone)が含有されたDMEMに実施例1-1乃至1-5の桔梗抽出物をそれぞれ10μg/mLの濃度で溶解して細胞に処理してmyotube分化を誘導した。このとき、試料の代わりに0.01％DMSOを処理した群を対照群とした。この過程を2日ずつ6日間進行して分化させた後、proteinase  inhibitor  cocktailが含まれたNP-40緩衝溶液（ELPIS-Biotech、Daejeon、Korea)で溶解させた。緩衝溶液に溶解された細胞を1.5mlチューブ（tube）に移して13,000rpmで10分間遠心分離して上澄み液だけを採った。上澄み液をブラッドフォード（Bradford、Bio-Rad  Laboratories  Inc.,Hercules、CA、USA)法を用いて定量した。定量されたタンパク質を5分間煮沸後、10％SDS-PAGEで電気泳動して分離し、分離されたタンパク質をニトロセルロース膜にトランスファーした。p-mTOR  1次抗体（Cell  signaling  technology、Beverly、MA、USA)を2.5％bovine  serum  albumin（BSA)に1：1000の割合で希釈して、ニトロセルロース膜にトランスファーされたタンパク質と20時間常温で反応させた。1次抗体を反応させた後Tris-buffer  Saline  Tween20（TBST）を用いて、ニトロセルロース膜を10分間3回洗浄した。洗浄後、1次抗体を認知するhorseradish  peroxidaseが接合されたanti-rabbit  2次抗体（Bethyl  Laboratories、Inc.,Montgomery、TA、USA)を2.5％BSAに1：5000になるように希釈して、ニトロセルロース膜と2時間常温で反応させ、TBSTを用いて10分ずつ3回洗浄した。Protein  bandはECL  western  blotting  detection  reagents（Amersham、Tokyo、Japan)を用いて発色し、G;  BOX  EF  imaging  system（Syngene、Cambridge、UK）を用いて発色されたProtein  bandを確認した。その結果を図1に示した。
【００８１】
その結果、図1に示した通り、桔梗抽出物処理によってL6筋肉細胞でp-mTORの発現量が増加したことを確認できた。これは、本発明の桔梗抽出物が筋肉細胞内で筋肉の生成を増加させる能力が優れていることを意味する。
【００８２】
＜実施例３＞
桔梗メタノール抽出物の筋タンパク質合成の増加効果
前記実施例1-1の桔梗メタノール抽出物を1及び10μg/mLの濃度で前記実施例2と同じ方法で実験を行った。p-mTOR  1次抗体（Cell  signaling  technology)とp-p70S6K抗体（Santa  Cruz  Biotechnology、Santa  Cruz、CA、USA)を処理してprotein  bandを確認した。
その結果、図2に示した通り、桔梗メタノール抽出物を処理することにより、L6筋肉細胞においてp-mTORとp-p70S6Kの発現量が増加したことを確認できた。これは、本発明の桔梗メタノール抽出物が筋肉細胞内で筋肉の生成を増加させる能力が優れていることを意味する。
【００８３】
＜実施例４＞
桔梗抽出物の筋肉分化活性
筋肉細胞であるL6  myoblast（ATCC）を、10％FBS（Hyclone)が含まれたDMEM（Hyclone)と共に6ウェルプレートに2X105cell/mlになるように入れた。細胞密度が約80〜85％になったとき、ウェルの培地を除去し、2％HS（Hyclone)が含まれたDMEM（Hyclone)に前記実施例1-2乃至実施例1-5で製造した桔梗ヘキサン抽出物、酢酸エチル抽出物、エタノール抽出物、熱水抽出物を10μg/mLの濃度で溶解した後、細胞に処理してmyotube分化を誘導した。このとき、試料の代わりに0.01％DMSOを処理した群を対照群とした。この過程を2日ずつ6日間進行して分化させた後、TRIzol試薬（Invitrogen、Carlsbad、CA、USA)を用いて総RNAを分離した。分離した総RNAはナノドロップ（NanoDrop  1000;  Thermo  Fisher  Scientific  Inc.,MA,USA)を用いて定量した。定量された16μLのRNAをReverse  Transcriptase  Premix（ELPIS-Biotech)とPCR装置（Gene  Amp  PCR  System  2700;  Applied  Biosystems、MA、USA)を用いて、42℃で55分、70℃で15分の条件でcDNAに合成した。16μLの生成されたcDNAのうち4μLのcDNA、下記の特定のプライマー（Bioneer、Daejeon、Korea)及びPCR  premix（ELPIS-Biotech)で、95℃で30秒、60℃で1分、72℃で1分を30回繰り返してPCRを行った。
【００８４】
MyoD
Forward  primer：5'-TTTCGACTCACCAGACCTGC-3'（配列番号1)
Reverse  primer：5'-CAGAGCCTGCAGACCTTCAA-3'（配列番号2)
【００８５】
Myogenin
Forward  primer：5'-TTTCGCACCTGATGGACCTG-3'（配列番号3)
Reverse  primer：5'-CTTTCTTGAGCCTGCGCTTC-3'（配列番号4)
【００８６】
β-Actin
Forward  primer：5'-AGCCATGTACGTAGCCATCC-3'（配列番号5)
Reverse  primer：5'-CTCTCAGCTGTGGTGCTGAA-3'（配列番号6)
【００８７】
PCRの結果、増幅されたcDNAを1.5％  agarose  gelで電気泳動して分離し、G;  BOX  EF  imaging  system（Syngene)を利用して、cDNA  bandを確認した。その結果を図3に示した。
その結果、図３に示した通り、桔梗ヘキサン抽出物、酢酸エチル抽出物、エタノール抽出物、熱水抽出物を処理することにより、L6筋肉細胞からMyoD及びmyogeninのmRNA発現が増加することが分かった。これは、本発明の桔梗抽出物が筋肉細胞内で筋肉分化を促進する能力が優れていることを意味する。
【００８８】
＜実施例５＞
桔梗メタノール抽出物による筋肉分化活性
前記実施例４と同じ方法で筋肉細胞のL6  myoblast（ATCC）を培養した後、2％HS（Hyclone)が含まれたDMEM（Hyclone)に前記実施例1-1で製造した桔梗メタノール抽出物を1と10μg/mLの濃度で溶解した後、細胞に処理してmyotube分化を誘導した。このとき、試料の代わりに0.01％DMSOを処理した群を対照群とした。この過程を2日ずつ6日間進行して分化させた後、実施例4と同じ方法でRT-PCRを行った。
【００８９】
その結果、図4に示した通り、桔梗メタノール抽出物を処理することにより、L6筋肉細胞からMyoD及びmyogeninのmRNA発現が増加することが分った。これは、本発明の桔梗メタノール抽出物が筋肉細胞内で筋肉分化を促進する能力が優れていることを意味する。
【００９０】
＜実施例６＞
桔梗の筋タンパク質分解抑制活性
筋肉細胞であるL6  myoblast（ATCC）を、10％FBS（Hyclone)が含まれたDMEM（Hyclone)と共に6ウェルプレートに2X105cell/mlになるように入れた。細胞密度が約80〜85％になったとき、ウェルの培地を除去して2％HS（Hyclone)が含まれたDMEM（Hyclone)を細胞に処理してmyotube分化を誘導した。2日に1度ずつ新たな培地と交換して合計6日間分化を行った。分化した後、50ng/mL  tumor  necrosis  factor  alpha（TNF-α;  PeproTech、Rocky  Hills、NJ、USA)が含まれたDMEM（Hyclone)に前記実施例1-2乃至実施例1-5で製造した桔梗ヘキサン抽出物、酢酸エチル抽出物、エタノール抽出物、熱水抽出物を10μg/mLの濃度で溶解した後、細胞に処理した。6時間後、TRIzol試薬（Invitrogen）を使用して総RNAを分離した。分離した総RNAはナノドロップ（NanoDrop  1000;  Thermo  Fisher  Scientific  Inc)を用いて定量した。定量された16μLのRNAをReverse  Transcriptase  Premix（ELPIS-Biotech)とPCR装置（Gene  Amp  PCR  System  2700;  Applied  Biosystems）を用いて42℃で55分、70℃で15分の条件でcDNAで合成した。16μLの生成されたcDNAのうち4μLのcDNA、下記特定のプライマー（Bioneer)とPCR  premix（ELPIS-Biotech)で、95℃で30秒、60℃で1分、72℃で1分を30回繰り返してPCRを行った。
【００９１】
Atrogin-1
Forward  primer：5'-CCCTGAGTGGCATCGCCCAA-3'（配列番号7)
Reverse  primer：5'-AGGTCCCGCCCATCGCTCA-3'（配列番号8)
【００９２】
MuRF-1
Forward  primer：5'-GAAATGCTATGCAGAACCTG-3'（配列番号9)
Reverse  primer：5'-ATTCCTGCTTGTAGATGTCG-3'（配列番号10）
【００９３】
β-Actin
Forward  primer：5'-AGCCATGTACGTAGCCATCC-3'（配列番号11）
Reverse  primer：5'-CTCTCAGCTGTGGTGCTGAA-3'（配列番号12）
【００９４】
PCRの結果、増幅されたcDNAを1.5％agarose  gelで電気泳動して分離し、G;  BOX  EF  imaging  system（Syngene)を利用して、cDNA  bandを確認した。その結果を図5に示した。
その結果、図5に示した通り、桔梗を処理することにより、L6筋肉細胞からgin-1及びMuRF-1のmRNA発現が減少することが分かった。これは、本発明の桔梗が筋肉細胞内で筋タンパク質分解を抑制する能力が優れていることを意味する。
【００９５】
＜実施例７＞
桔梗高圧抽出物による筋肉生成活性
前記実施例1-6で製造した桔梗超高圧抽出物、実施例1-7で製造した桔梗超臨界流体抽出物、実施例1-8で製造した桔梗亜臨界流体抽出物を20ppmの濃度で前記実施例2と同じ方法で筋肉細胞に処理した。ECLウェスタンブロット検出試薬（western  blotting  detection  reagents;  Amersham、Tokyo、Japan)を使用してp-mTORタンパク質バンドを発色し、G;  BOX  EF  imaging  system（Syngene、Cambridge、UK）を用いて発色されたタンパク質バンドのdensityを測定した。このとき、対照群タンパク質バンドのdensityを100％にして、試料を処理した実験群の相対的なタンパク質バンドのdensityをパーセント（％）で示した。
【００９６】
その結果を下記表1に示した。
【表１】
0006728344.tif 000002
【００９７】
前記表１に示した通り、桔梗超高圧抽出物、超臨界流体抽出物、亜臨界流体抽出物は、筋機能改善に関与する主要遺伝子p-mTORのタンパク質発現量を増加させることが分かった。
【００９８】
＜実施例８＞
動物モデルから筋肉量増加効果を確認
5週齢のWistar  ratを1週間適応させ、TNF-α  100ng/gを2週間供給して筋萎縮を誘導させた後、体重を基に無作為的に群を配置してそれぞれ8匹ずつ合計3群に分けて実験に利用した。実験群には、実施例1-2で製造した桔梗エタノール抽出物500mg/kg体重、実施例1-5で製造した桔梗熱水抽出物500mg/kg体重の濃度で0.25％カルボキシメチルセルロース（carboxymethylcellulose）に懸濁して1日1回ずつ8週間一定の時間に投与した。このとき、対照群には実験群が摂取するのと同じ量の0.25％カルボキシメチルセルロースにTNF-αを投与した群を使用した。
【００９９】
8週間試料を投与した後、右側のふくらはぎの下方の筋肉を切除してmicrobalance（Mettler  PE160、USA)で重量を測定した。その結果、表2に示した通り、桔梗エタノール抽出物と桔梗熱水抽出物を投与した群において筋肉の重さが対照群と比べてそれぞれ有意的（p<0.01)に21.18％と18.23％増加した。このような結果は、本発明の桔梗抽出物が筋肉量の増大に効果的に作用していることを意味する。
【０１００】
【表２】
0006728344.tif 000003
【０１０１】
以下、本発明による前記実施例１桔梗抽出物を有効成分として含有する筋肉疾患の予防及び治療用医薬品、筋肉疾患の予防又は筋機能改善食品又は筋機能改善化粧品の製造例を説明するが、本発明はこれを限定するのではなく、単に具体的に説明するためである。前記桔梗抽出物で下記のような組成成分及び組成比によって製造例１乃至３の医薬品、食品又は化粧料組成物を通常の方法により製造した。
【０１０２】
＜製造例１＞食品
＜１−１＞健康食品の製造
前記実施例１の桔梗抽出物  1000mg、ビタミンA酢酸塩  70μg、ビタミンE  1.0mg、ビタミンB1  0.13mg、ビタミンB2  0.15mg、ビタミンB6  0.5mg、ビタミンB12  0.2μg、ビタミンC  10mg、ビオチン10μg、ナイアシンアミド  1.7mg、葉酸  50μg、パントテン酸カルシウム  0.5mg、硫酸第一鉄  1.75mg、酸化亜鉛  0.82mg、炭酸マグネシウム  25.3mg、第1リン酸カリウム  15mg、第2リン酸カルシウム  55mg、クエン酸カリウム  90mg、炭酸カルシウム  100mg、塩化マグネシウム  24.8mgを混合して製造することができ、その配合比を任意に変更して実施してもよく、通常の健康食品の製造方法により前記の成分を混合した後、顆粒を製造して通常の方法により健康食品組成物の製造に使用することができる。
【０１０３】
＜１−２＞健康飲料の製造
前記実施例1の桔梗抽出物  1000mg、クエン酸  1000mg、オリゴ糖  100g、梅濃縮液  2g、タウリン  1gに精製水を加えて全体  900mlとし、通常の健康飲料製造方法により前記の成分を混合した後、約1時間の間85℃で攪拌加熱した後、作製された溶液を濾過して滅菌された2Lの容器に取得して密封滅菌した後、冷蔵保管して健康飲料組成物の製造に使用することができる。
【０１０４】
＜１−３＞チューインガム
ガムベース  20重量％、砂糖  76.9重量％、香料  1重量％及び水  2重量％と、実施例1の桔梗抽出物  0.1重量％を配合して通常の方法でチューインガムを製造した。
【０１０５】
＜１−４＞キャンディー
砂糖  60重量％、水飴  39.8重量％及び香料  0.1重量％と実施例１の桔梗抽出物  0.1重量％を配合して通常の方法でキャンディーを製造した。
【０１０６】
＜１−５＞ビスケット
小麦粉（薄力1級)  25.59重量％、小麦粉（中力1級)  22.22重量％、精白糖  4.80重量％、食塩  0.73重量％、グルコース  0.78重量％、パームショートニング  11.78重量％、アンモニウム  1.54重量％、重曹  0.17重量％、亜硫酸水素ナトリウム  0.16重量％、米粉  1.45重量％、ビタミンB  0.0001重量％、ミルク香料  0.04重量％、水  20.6998重量％、全脂粉乳  1.16重量％、代用粉乳  0.29重量％、第1リン酸カルシウム  0.03重量％、散布塩  0.29重量％及び噴霧油  7.27重量％と、前記実施例１の桔梗抽出物  1.0重量％を配合して通常の方法でビスケットを製造した。
【０１０７】
＜製造例２＞医薬品
＜２−１＞散剤
前記実施例１の桔梗抽出物を50mg、結晶セルロース  2gを混合した後、通常の散剤の製造方法により機密包に充填して散剤を製造した。
【０１０８】
＜２−２＞錠剤
前記実施例１の桔梗抽出物を50mg、結晶セルロース  400mg、ステアリン酸マグネシウム  5mgを混合した後、通常の錠剤の製造方法により打錠して錠剤を製造した。
【０１０９】
＜２−３＞カプセル剤
前記実施例１の桔梗抽出物を30mg、乳清タンパク質  100mg、結晶セルロース  400mg、ステアリン酸マグネシウム  6mgを混合した後、通常のカプセル剤の製造方法によりゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。
【０１１０】
＜製造例３＞化粧品
＜３−１＞栄養化粧水（ミルクローション）
前記実施例１の桔梗抽出物を下記表3の栄養化粧水剤形の割合の通り通常の方法により栄養化粧水を製造した。
【０１１１】
【表３】
0006728344.tif 000004
【０１１２】
＜３−２＞柔軟化粧水（スキンローション）
前記実施例１の桔梗抽出物を下記の表4の柔軟化粧水製剤の比率の通り通常の方法により柔軟化粧水を製造した。
【０１１３】
【表４】
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【０１１４】
＜３−３＞栄養クリーム
前記実施例１の桔梗抽出物を下記表5の栄養クリーム剤形比率の通り通常の方法により栄養クリームを製造した。
【０１１５】
【表５】
0006728344.tif 000006
【０１１６】
＜３−４＞マッサージクリーム
前記実施例１の桔梗抽出物を下記の表6のマッサージクリーム剤形比率の通り通常の方法によりマッサージクリームを製造した。
【０１１７】
【表６】
0006728344.tif 000007
【０１１８】
＜３−５＞パック
桔梗抽出物を下記表5のパック剤形比率の通り通常の方法によりパックを製造した。
【０１１９】
【表７】
0006728344.tif 000008
【０１２０】
＜３−６＞ジェル
前記実施例１の桔梗抽出物を下記の表8のゲル剤形比率の通り通常の方法によりジェルを製造した。
【０１２１】
【表８】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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