【手続補正書】
【提出日】平成25年3月18日(2013.3.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式I:
2012520933.tif 000001
(I)
[式中、R1、R2およびR3は、それぞれ独立してH、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ、ヒドロキシまたはハロであり;またはR1およびR2あるいはR2およびR3は、それらが結合している原子と一緒になって、1、2、3または4つのアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ、ヒドロキシまたはハロ基で任意に置換される縮合ベンゾ環を形成し;
YはS、O、CF2またはNR4であり;
R4は(C1〜C8)アルキル、アリールまたは(C1〜C8)アルカリールであり;
Wは、それが結合する原子と一緒になって、5、6、7または8員複素環であり;
nは0、1または2であり;
QはQ1またはQ2:
2012520933.tif 000002
;
(式中、Yは-CR13=CR14-であり;mおよびpは0または1であり、ここでm+p=1であり;
R6は(C1〜C8)アルキル、アリールまたは(C1〜C8)アルカリールであり;
R7、R8、R9、R10、R11およびR12は、それぞれ独立してH、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノまたはハロであり;
R13およびR14の1つはHであり、もう一方はNR15R16であり;
R15は(C1〜C6)アルキルまたは(C1〜C6)アルキル-NR17R18であり、ここでR17およびR18は、それぞれ独立してHまたは(C1〜C6)アルキルであり;
R16は(C1〜C6)アルキル-NR17R18であり、ここでR17およびR18は、それぞれ独立してHまたは(C1〜C6)アルキルである)である]
で表される化合物またはその塩。
【請求項２】
R1、R2およびR3がそれぞれHであり;YがSであり;nが0である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
R1およびR2が、それらが結合している原子と一緒になって縮合ベンゾ環を形成し、あるいはR2およびR3が、それらが結合している原子と一緒になって縮合ベンゾ環を形成し;YがSであり;nが0である、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Wが、それが結合する原子と一緒になって6員複素環である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
QがQ1であり;mが1であり;R6がメチル、エチル、プロピル、フェニル、ベンジル、2-フェニルエチルまたは3-フェニルプロピルであり;R7およびR8が共にHであり;R13がHであり;R14がNR15R16であり、ここでR15がメチル、エチル、プロピルまたはブチルである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
QがQ2であり;mが1であり;R6がメチル、エチル、プロピル、フェニル、ベンジル、2-フェニルエチルまたは3-フェニルプロピルであり;R9、R10、R11およびR12がそれぞれHであり;R13がHであり;R14がNR15R16であり、ここでR15がメチル、エチル、プロピルまたはブチルである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
R16が(C1〜C3)アルキル-N(Me)2である、請求項５または６に記載の化合物。
【請求項８】
化合物が式II:
2012520933.tif 000003
(II)
(式中、R6がメチル、エチル、プロピル、フェニル、ベンジル、2-フェニルエチルまたは3-フェニルプロピルであり;R14が
2012520933.tif 000004
である)
で表される、請求項１記載の化合物。
【請求項９】
in vitroまたはin vivo環境のいずれかにおいて、核酸を含まない同じ環境における蛍光発光と比較して、核酸の存在下で、化合物が増強された蛍光発光を示す、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
核酸増幅に供した試料中の目的とする核酸の量を定量する方法であって、
a)請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物と試料とを接触させ;
b)増幅反応における蛍光を検出し;
c)増幅反応における蛍光量とその反応における核酸量とを関連付けること
を含む前記方法。
【請求項１１】
増幅前に、目的とする核酸の量を測定することをさらに含む、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
増幅反応が、核酸濃度範囲にわたって実質的に蛍光を変化させない色素をさらに含む、請求項１０又は１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
核酸増幅に供した試料中の核酸量を定量する方法であって、
a)標的核酸分子、増幅される核酸の標的配列に特異的な1種以上の核酸プライマー、ポリメラーゼおよび、請求項１〜９のいずれかに記載の化合物を含む試料中の核酸を増幅して、増幅された核酸を含む混合物を得;
b)前記混合物における蛍光を検出し;
c)前記混合物における蛍光量と前記混合物における核酸量を関連付けること
を含む前記方法。
【請求項１４】
核酸増幅反応のリアルタイムモニタリング方法であって、
a)標的核酸分子、標的の配列に特異的な1種以上の核酸プライマーおよび、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物を有する試料を含む反応混合物中の、標的核酸分子の標的核酸配列を増幅し;
b)前記化合物に吸収される選択された波長の光で前記反応混合物を照射し;
c)前記反応混合物における蛍光発光を検出すること
を含む前記方法。
【請求項１５】
ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を用いて標的核酸配列が増幅される、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
蛍光量が、増幅前の標的核酸の量に関連づけられる、請求項１３または１５に記載の方法。
【請求項１７】
反応混合物が、核酸レベルを正規化するための対照色素を含む、請求項１３〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
反応混合物が、既知量の内部対照核酸およびそれに特異的なプライマーをさらに含む、請求項１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
標的核酸および対照核酸の増幅産物の比を測定することをさらに含む、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
増幅が、初期の所定温度および時間パラメータを用いて試料を熱サイクルにかけることを含む、請求項１３〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物および任意に1種以上の酵素または使用説明書を含むキット。
【請求項２２】
耐熱性ポリメラーゼをさらに含む、請求項２１記載のキット。
【請求項２３】
二本鎖DNAに結合しない色素をさらに含む、請求項２１または２２に記載のキット。
【請求項２４】
式I
2012520933.tif 000005
(I)
[式中、R1、R2およびR3はそれぞれ独立してH、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ、ヒドロキシまたはハロであり;またはR1およびR2あるいはR2およびR3は、それらが結合している原子と一緒になって、1、2、3または4つのアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ、ヒドロキシまたはハロ基で任意に置換される縮合ベンゾ環を形成し;
YはS、O、CF2またはNR4であり;
R4は(C1〜C8)アルキル、アリールまたは(C1〜C8)アルカリールであり;
Wは、それが結合する原子と一緒になって5、6、7または8員複素環であり;
nは0、1または2であり;
QはQ1またはQ2:
2012520933.tif 000006
;
(式中、Yは-CR13=CR14-であり;mおよびpは0または1であり、ここでm+p=1であり;
R6は(C1〜C8)アルキル、アリールまたは(C1〜C8)アルカリールであり;
R7、R8、R9、R10、R11およびR12は、それぞれ独立してH、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノまたはハロであり;
R13およびR14の1つはHであり、もう一方はNR15R16であり;
R15は(C1〜C6)アルキルまたは(C1〜C6)アルキル-NR17R18であり、ここでR17およびR18は、それぞれ独立してHまたは(C1〜C6)アルキルであり;
R16は(C1〜C6)アルキル-NR17R18であり、ここでR17およびR18は、それぞれ独立してHまたは(C1〜C6)アルキルである)である]
で表される化合物の製造方法であって、アセトニトリルおよびオキシ塩化リンの存在下で、
2012520933.tif 000007
を
2012520933.tif 000008
と反応させることを含む前記製造方法。