【手続補正書】
【提出日】平成25年6月14日(2013.6.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖アクセプターと3-フルオロシアル酸化合物との共有結合性抱合体を形成させることを含むポリペプチドをグリコシル化するための方法であって、前記方法が糖アクセプターと3-フルオロシアル酸化合物を接触させるステップを含み、前記接触させるステップが前記3-フルオロシアル酸化合物を糖アクセプターと反応させて共有結合させるのに適した条件下で実施され、
前記3-フルオロシアル酸化合物がシチジンモノリン酸(CMP)基を含まず、
糖アクセプターが、ポリペプチド上に存在するか、またはポリペプチドとの結合のために存在する、方法。
【請求項２】
糖アクセプター、3-フルオロシアル酸化合物、および前記3-フルオロシアル酸化合物を前記糖アクセプターへ転移させることができる酵素を接触させるステップを含む方法であって、前記接触させるステップを、3-フルオロシアル酸化合物を糖アクセプターに転移させて共有結合させるのに適した条件下で実施し、
3-フルオロシアル酸化合物を糖アクセプターと共有結合させるステップを、合成化学反応により実施する、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記3-フルオロシアル酸化合物との共有結合性抱合体の生成が、糖アクセプターまたは糖アクセプターを含む治療用部分の生物学的特性を調節する、請求項1または2に記載の方法であって、
任意選択で、前記生物学的特性が、酵素加水分解に対する耐性、生物学的安定性または薬物速度論的特性である、方法。
【請求項４】
インビトロでの無細胞法である、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記3-フルオロシアル酸化合物が一般式(I):
【化１】
2012530119.tif 000001
[式中、Y1は-O-、-S-または-NR-から選択され、Rは独立に、H、C1〜7アルキル、C3〜10ヘテロシクリルまたはC5〜20アリールから選択され;
R1は良好な脱離基であるが、ただし、それはシチジンモノリン酸(CMP)基ではなく;
X1は-CO2Rであり、Rは上記定義通りであり;
R2はH、または、ハライドから選択され;
R3およびR4はそれぞれ独立に、H、-OR、-NR2または-Z1(CH2)mZ2から選択され、Rは上記定義通りであり、Z1は-O-、-NR-、-CR2-および-S-から選択され、mは0〜5であり、Z2は-OR、-NR2または-CNから選択され;ただし、R3とR4は両方がHであることはできず;
R5はHであり;
R6はC1〜7アルキル;C1〜7ヒドロキシアルキル、C1〜7アミノアルキルまたはC1〜7チオアルキルから選択され;
R7は式:
【化２】
2012530119.tif 000002
(式中、Y2はN、O、SおよびCHから選択され;Z3はH、ヒドロキシル、ハライド、C1〜7アルキル、C1〜7アミノアルキル、C1〜7ヒドロキシアルキルまたはC1〜7チオアルキルから選択され;R9およびR10は独立にH、ヒドロキシル、C1〜7ヒドロキシアルキル、C1〜7アルキル、C5〜20アリール、C(O)Z4から選択され、Z4はC1〜7アルキルまたはC5〜20アリールから選択され、ただし、Y2がOまたはSである場合、R10は存在しない)
の基であるか、
またはR4はヒドロキシル以外であり、R7は追加的にC1〜7ヒドロキシアルキルであってよく;
R8は水素である]
で表される化合物または式(I)の2つ以上の分子のオリゴマー;
およびその異性体、塩、溶媒和物または化学的に保護された形態である、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
R1が、メタンスルホネート、4-トルエンスルホネート、トリフルオロメチルスルホネート、トリフルオロメチルトルエンスルホネート、イミダゾールスルホネートまたはハライド(F、Cl、Br、I)である、請求項5に記載の方法。
【請求項７】
前記転移反応が、3-フルオロシアル酸化合物と糖アクセプターの間のアノマー結合での酵素的な反転を伴うものである、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記糖アクセプターがグリコシル化構造体の一部である、請求項1から7のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
(a)  前記グリコシル化構造体が、一分岐型構造体、二分岐型構造体、三分岐型構造体または複合型グリコシル化構造体を含み；および／または
(b)  グリコシル化構造体が、天然由来または合成のモノサッカリド、オリゴサッカリドまたはポリサッカリドを含み；および／または
(c)   前記グリコシル化構造体が、N-結合またはO-結合サッカリド基を含む；
請求項8に記載の方法。
【請求項１０】
グリコシル化構造体から末端グリコシル基を取り外して糖アクセプター基を生成させるステップをさらに含み、
任意選択で、前記末端グリコシル基を取り外すステップを、シアリダーゼを用いて酵素的に実施する、
請求項8または9に記載の方法。
【請求項１１】
複数の3-フルオロシアル酸化合物を糖アクセプターに転移させるステップを含み、
任意選択で、前記複数の3-フルオロシアル酸化合物を、オリゴマーとして、または抱合反応を繰り返すことによって転移させる、
請求項1から10のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記抱合体をポリペプチドと結合させるステップを含む、請求項1から11のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
複数の3-フルオロシアル酸基を、ポリペプチド上に存在するグリコシル化構造体の1つまたは複数の末端グリコシル残基へ転移させるステップを含む、請求項1から12のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記3-フルオロシアル酸基を転移させるための酵素がシアリルトランスフェラーゼまたはトランス-シアリダーゼであり、
任意選択で、前記酵素が、転移反応の速度を改善する、および/または、供与体3-フルオロシアル酸分子の結合を改善するために遺伝子操作されている、シアリルトランスフェラーゼまたはトランス-シアリダーゼである、
請求項1から13のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
グリコシル化構造体をポリペプチドの部位に導入する初期ステップを含む、請求項8から14のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記グリコシル化構造体がポリ(アルキレングリコール)分子を含む、請求項1から15のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ポリペプチドが次の概略式:
ポリペプチド-AA-L1-Gly
(式中、
AAは、ポリペプチドの末端または内部アミノ酸残基であり;
L1は、アミノ酸AAと共有結合している任意選択のリンカー基であり;
Glyは、任意選択でグリコシル化構造体の部分である糖アクセプター基を表す)
で表される、請求項1から16のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
(a)  3-フルオロシアル酸化合物の糖アクセプターおよびポリペプチドへの前記抱合が、ポリペプチドの安定性、生物学的半減期、クリアランス特性、水溶性および/または免疫学的特徴を改変し；および／または、
(b)  シアリダーゼによる加水分解に対するポリペプチドのグリコシル化構造体の耐性を改善するためであり；および／または、
(c)   前記ポリペプチドが、エリスロポエチン、インターフェロン、インターロイキン、ケモカイン、リンホカイン、サイトカイン、インスリン、モノクローナル抗体もしくはそのフラグメント、組換え抗体もしくはそのフラグメント、血液凝固因子、コロニー刺激因子、成長ホルモン、プラスミノゲン活性化因子、ウイルス由来ペプチド、生殖ホルモンまたは治療用酵素である、
請求項1から17のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
請求項1から18のいずれか一項に記載の方法によって得られる抱合体。
【請求項２０】
グリコシル化構造体を含む治療用ポリペプチドの抱合体であって、前記グリコシル化構造体が1つまたは複数の3-フルオロシアル酸基と共有結合しており、前記3-フルオロシアル酸基がグリコシル化構造体の末端グリコシル基を形成している、抱合体。
【請求項２１】
前記治療用部分がポリペプチドであり、ならびに、前記グリコシル化構造体が、グリコシル化部位において、および/または、前記ポリペプチドのアミノ酸残基を介し、任意選択でリンカー基を介して前記ポリペプチドと結合している、請求項20に記載の抱合体。
【請求項２２】
1つまたは複数の3-フルオロシアル酸基を含み、前記3-フルオロシアル酸基がグリコシル化構造体の1つまたは複数の末端グリコシル基と共有結合しているグリコシル化構造体であって、
任意選択で、少なくとも1つの3-フルオロシアル酸基と、さらに2つのサッカリド単位を含む、グリコシル化構造体。
【請求項２３】
1つまたは複数の末端3-フルオロシアル酸基を含むグリコシル化構造体であって、次式:
【化３】
2012530119.tif 000003
[式中、Y1は-O-、-S-または-NR-から選択され、Rは独立に、H、C1〜7アルキル、C3〜10ヘテロシクリルまたはC5〜20アリールから選択され;
X1は-CO2Rであり、Rは上記定義通りであり;
X2はグリコシル化構造体の残りの部分を表し、少なくとも2つのサッカリド単位を含み;
R2はH、または、ハライドから選択され;
R3およびR4はそれぞれ独立にH、-OR、-NR2または-Z1(CH2)mZ2から選択され、Rは上記定義通りであり、Z1は-O-、-NR-、-CR2-および-S-から選択され、mは0〜5であり、Z2は-OR、-NR2または-CNから選択され;ただし、R3とR4は両方がHであることはできず;
R5はHであり;
R6はC1〜7アルキル;C1〜7ヒドロキシアルキル、C1〜7アミノアルキルまたはC1〜7チオアルキルから選択され;
R7は式:
【化４】
2012530119.tif 000004
(式中、Y2はN、O、SおよびCHから選択され;Z3はH、ヒドロキシル、ハライド、C1〜7アルキル、C1〜7アミノアルキル、C1〜7ヒドロキシアルキルまたはC1〜7チオアルキルから選択され;R9およびR10は独立にH、ヒドロキシル、C1〜7ヒドロキシアルキル、C1〜7アルキル、C5〜20アリール、C(O)Z4から選択され、Z4はC1〜7アルキルまたはC5〜20アリールから選択され、ただし、Y2がOまたはSである場合、R10は存在しない)
の基であるか、
またはR4はヒドロキシル以外であり、R7は追加的にC1〜7ヒドロキシアルキルであってよく;
R8は水素である]
で表される構造体または式(I)の2つ以上の分子のオリゴマー;
およびその異性体、塩、溶媒和物または化学的に保護された形態。
【請求項２４】
(a)  前記グリコシル化構造体が、一分岐型構造体、二分岐型構造体、三分岐型構造体または複合型グリコシル化構造体を含み；および／または、
(b)  前記グリコシル化構造体が天然由来または合成のモノサッカリド、オリゴサッカリドまたはポリサッカリドを含み；および／または、
(c)  前記グリコシル化構造体がN-結合またはO-結合サッカリド基を含む；
請求項23に記載のグリコシル化構造体。
【請求項２５】
前記グリコシル化構造体が1つまたは複数の3-フルオロシアル酸基と共有結合しており、前記3-フルオロシアル酸基がグリコシル化構造体の末端グリコシル基を形成している、請求項23または24に記載のグリコシル化構造体と治療用ポリペプチドの抱合体。
【請求項２６】
治療において使用するための、請求項19から21、または25のいずれか一項に記載の抱合体。
【請求項２７】
請求項19から21、または25のいずれか一項に記載の抱合体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。