【手続補正書】
【提出日】平成25年8月14日(2013.8.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト又はマウスのＬＯＸ又はＬＯＸＬ２タンパク質の触媒ドメインを含む単離されたポリペプチドであって、
前記触媒ドメインが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、最初のＧＬ残基がないＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、最初のＴＡ残基がないＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、最初のＧＬ残基がないＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、及び最初のＴＡ残基がないＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７からなる群から選択されるアミノ酸を含み；及び、
前記ポリペプチドが、前記ヒト又はマウスのＬＯＸ又はＬＯＸＬ２タンパク質の触媒ドメインの外側の前記ヒト又はマウスのＬＯＸ又はＬＯＸＬ２タンパク質由来の配列を含まない
ことを特徴とする単離されたポリペプチド。
【請求項２】
前記触媒ドメインが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１において記載されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項３】
前記触媒ドメインが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３において記載されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項４】
前記触媒ドメインが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５において記載されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項５】
前記触媒ドメインが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７において記載されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項６】
シグナル配列、エピトープタグ及び精製タグを更に含む請求項１から５のいずれか１項のポリペプチド。
【請求項７】
前記シグナル配列が、免疫グロブリンカッパシグナル配列であることを特徴とする請求項６のポリペプチド。
【請求項８】
前記エピトープタグが、ｍｙｃタグであることを特徴とする請求項６又は請求項７のポリペプチド。
【請求項９】
前記精製タグが、Ｈｉｓ６タグであることを特徴とする請求項６から８のいずれか１項のポリペプチド。
【請求項１０】
前記ポリペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項６から９のいずれか１項のポリペプチド。
【請求項１１】
前記ポリペプチドが、前記触媒ドメイン、前記シグナル配列、前記エピトープタグ、及び前記精製タグから構成されることを特徴とする請求項６から９のいずれか１項のポリペプチド。
【請求項１２】
前記ポリペプチドが、前記触媒ドメインから構成されることを特徴とする請求項１から５のいずれか１項のポリペプチド。
【請求項１３】
請求項１から１２のいずれか１項のポリペプチドをエンコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、
前記ポリヌクレオチドが、前記ヒト又はマウスのＬＯＸ又はＬＯＸＬ２の触媒ドメインの外側の前記ヒト又はマウスのＬＯＸ又はＬＯＸＬ２の配列をエンコードしない
ことを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１４】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する請求項１３のポリヌクレオチド。
【請求項１５】
請求項１３又は請求項１４のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
（形態２４）更に、任意の１つのプロモーター、任意の組み合わせのプロモーター又は、全てのプロモーター、薬剤選択マーカー及び複製起点を含む形態２３の発現ベクター。
（形態２５）ヒト又はマウスのＬＯＸ又はＬＯＸＬ２タンパク質の触媒ドメインを含む単離されたポリペプチドであって、
前記触媒ドメインが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、最初のＧＬ残基がないＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、最初のＴＡ残基がないＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、最初のＧＬ残基がないＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、及び最初のＴＡ残基がないＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７からなる群から選択されるアミノ酸を含み；及び、
前記ポリペプチドが、前記ヒト又はマウスのＬＯＸ又はＬＯＸＬ２タンパク質の触媒ドメインの外側の前記ヒト又はマウスのＬＯＸ又はＬＯＸＬ２タンパク質由来の配列を含まない
ことを特徴とする単離されたポリペプチド。
（形態２６）前記触媒ドメインが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１において記載されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする形態２５の単離されたポリペプチド。
（形態２７）前記触媒ドメインが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３において記載されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする形態２５の単離されたポリペプチド。
（形態２８）前記触媒ドメインが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５において記載されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする形態２５の単離されたポリペプチド。
（形態２９）前記触媒ドメインが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７において記載されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする形態２５の単離されたポリペプチド。
（形態３０）シグナル配列、エピトープタグ及び精製タグを更に含む形態２５から２９のいずれか１つの形態のポリペプチド。
（形態３１）前記シグナル配列が、免疫グロブリンカッパシグナル配列であることを特徴とする形態３０のポリペプチド。
（形態３２）前記エピトープタグが、ｍｙｃタグであることを特徴とする形態３０又は形態３１のポリペプチド。
（形態３３）前記精製タグが、Ｈｉｓ６タグであることを特徴とする形態３０から３２のいずれか１つの形態のポリペプチド。
（形態３４）前記ポリペプチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有することを特徴とする形態３０から３３のいずれか１つの形態のポリペプチド。
（形態３５）前記ポリペプチドが、前記触媒ドメイン、前記シグナル配列、前記エピトープタグ、及び前記精製タグから構成されることを特徴とする形態３０から３３のいずれか１つの形態のポリペプチド。
（形態３６）前記ポリペプチドが、前記触媒ドメインから構成されることを特徴とする形態２５から２９のいずれか１つの形態のポリペプチド。
（形態３７）形態２５から３６のいずれか１つの形態のポリペプチドをエンコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、
前記ポリヌクレオチドが、前記ヒト又はマウスのＬＯＸ又はＬＯＸＬ２の触媒ドメインの外側の前記ヒト又はマウスのＬＯＸ又はＬＯＸＬ２の配列をエンコードしない
ことを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
（形態３８）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する形態３７のポリヌクレオチド。
（形態３９）形態３７又は形態３８のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７７】
［実施例５：哺乳類細胞におけるヒトＬＯＸ触媒ドメインの発現］
ヒトＬＯＸ触媒ドメインを含むポリペプチドの発現に使用する発現カセットを、ヒトＬＯＸ  ｃＤＮＡを鋳型として使用してＰＣＲ増幅により構成した（GenBank NM_002317、Genecopoeia, Germantown, MDから入手した）。触媒ドメインをエンコードする配列を含む増幅産物を、ｐＳｅｃＴａｇ２／Ｈｙｇｒｏ  Ｂ  ベクター（Invitrogen, Carlsbad, CA）にクローン化し、ｐＳｅｃＴａｇ２ｈｙｇｒｏ−ｈＬＯＸ  ＭＣＤ（以下、ｐｈＬＯＸＭＣＤとも称する）プラスミドを作成した。Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼを使用したこのクローンの転写により、（Ｎ末端側から、Ｃ末端側へ順に）免疫グロブリンカッパシグナル配列、ヒトＬＯＸ触媒ドメイン、ｍｙｃエピトープタグ及びＨｉｓ６精製タグを含むポリペプチドをエンコードするｍＲＮＡを作成する。このポリペプチドは、次のアミノ酸配列を有する。
2013502226.tif 000001
（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９）
シグナルペプチド及びｍｙｃタグの配列には、下線が引かれている。イタリック体で表される配列は、ベクター配列における全部又は一部及びクローニングに使用する制限部位（ＡＡＱＰＡ及びＧＰ）及びリンカー配列（ＮＳＡＶＤ）の配列でエンコードされるアミノ酸配列を表す。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９５】
［実施例９：哺乳類細胞におけるマウスＬＯＸ触媒ドメインの発現］
マウスＬＯＸ触媒ドメインを含むポリペプチドの発現に使用する発現カセットを、マウスＬＯＸ  ｃＤＮＡを鋳型として使用してＰＣＲ増幅により構成した（GenBank BC018439、Invitrogen, Carlsbad, CAから入手した）。触媒ドメインをエンコードする配列を含む増幅産物を、ｐＳｅｃＴａｇ２／Ｈｙｇｒｏ  Ｂ  ベクター（Invitrogen, Carlsbad, CA）にクローン化し、ｐＳｅｃＴａｇ２ｈｙｇｒｏ−ｍＬＯＸ  ＭＣＤ（以下、pmLOXMCDとも称する）発現ベクターを作成した。Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼを使用したこのクローンの転写は、（Ｎ末端側から、Ｃ末端側へ順に）免疫グロブリンカッパシグナル配列、マウスＬＯＸ触媒ドメイン、ｍｙｃエピトープタグ及びＨｉｓ６精製タグを含むポリペプチドをエンコードするｍＲＮＡを作成する。このポリペプチドは、次のアミノ酸配列を有する。
2013502226.tif 000002
（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３）
シグナルペプチド及びｍｙｃタグの配列は下線が引かれている。イタリック体で表される配列は、ベクター配列における全部又は一部及びクローニングに使用する制限部位（ＡＡＱＰＡ及びＧＰ）及びリンカー配列（ＮＳＡＶＤ）の配列でエンコードされるアミノ酸配列を表す。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０２】
シグナルペプチド及びｍｙｃタグの配列は下線が引かれている。イタリック体で表される配列は、ベクター配列における全部又は一部及びクローニングに使用する制限部位（ＡＡＱＰＡ及びＧＰ）及びリンカー配列（ＮＳＡＶＤ）の配列でエンコードされるアミノ酸配列を表す。