【手続補正書】
【提出日】平成25年3月11日(2013.3.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内におけるヒトキネシンファミリーメンバー１１（Ｅｇ５／ＫＳＰ）遺伝子の発現を阻害する第１の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）と、細胞内におけるヒトＶＥＧＦの発現を阻害する第２のｄｓＲＮＡとを含む核酸脂質粒子を含む組成物であって、
前記核酸脂質粒子が、４５〜６５モル％の陽イオン性脂質、５モル％〜約１０モル％の非陽イオン性脂質、２５〜４０モル％のステロール、および０．５〜５モル％のＰＥＧまたはＰＥＧ改変脂質を含む脂質製剤を含み、
前記第１のｄｓＲＮＡが、第１のセンス鎖と第１のアンチセンス鎖とからなり、前記第１のセンス鎖が、第１の配列を含み、前記第１のアンチセンス鎖が、
配列番号１３１１（５’−ＵＣＧＡＧＡＡＵＣＵＡＡＡＣＵＡＡＣＵ−３’）
のうちの少なくとも１５の連続ヌクレオチドと相補的な第２の配列を含み、
前記第１の配列が、前記第２の配列と相補的であり、前記第１のｄｓＲＮＡが、１５〜３０塩基対の長さであり；
前記第２のｄｓＲＮＡが、第２のセンス鎖と第２のアンチセンス鎖とからなり、前記第２のセンス鎖が、第３の配列を含み、前記第２のアンチセンス鎖が、
配列番号１５３８（５’−ＧＣＡＣＡＵＡＧＧＡＧＡＧＡＵＧＡＧＣＵＵ−３’）
のうちの少なくとも１５の連続ヌクレオチドと相補的な第４の配列を含み、
前記第３の配列が、前記第４の配列と相補的であり、前記第２のｄｓＲＮＡが、１５〜３０塩基対の長さである組成物。
【請求項２】
前記陽イオン性脂質が、ＭＣ３（（（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート）を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記陽イオン性脂質が、ＭＣ３を含み、前記脂質製剤が、
【表４４】
2012520082.tif 000001
からなる群から選択される、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記第１のｄｓＲＮＡが、配列番号１５３４（５’−ＵＣＧＡＧＡＡＵＣＵＡＡＡＣＵＡＡＣＵＴＴ−３’）からなるセンス鎖と、配列番号１５３５（５’−ＡＧＵＵＡＧＵＵＵＡＧＡＵＵＣＣＵＧＡＴＴ−３’）からなるアンチセンス鎖とからなり、前記第２のｄｓＲＮＡが、配列番号１５３６（５’−ＧＣＡＣＡＵＡＧＧＡＧＡＧＡＵＧＡＧＣＵＵ−３’）からなるセンス鎖と、配列番号１５３７（５’−ＡＡＧＣＵＣＡＵＣＵＣＵＣＣＵＡＵＧＵＧＣＵＧ−３’）からなるアンチセンス鎖とからなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
小文字の「ｃ」または「ｕ」により示される２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドと、小文字の「ｓ」により示されるホスホロチオエートとを包含するように、各鎖が、以下：
前記第１のｄｓＲＮＡが、
配列番号１２４０（５’−ｕｃＧＡＧＡＡｕｃｕＡＡＡｃｕＡＡｃｕＴｓＴ−３’）
からなるセンス鎖と、
配列番号１２４１（５’−ＡＧＵｕＡＧＵＵｕＡＧＡＵＵＣＵＣＧＡＴｓＴ）
からなるアンチセンス鎖とからなり；
前記第２のｄｓＲＮＡが、
配列番号１２４２（５’−ＧｃＡｃＡｕＡＧＧＡＧＡＧＡｕＧＡＧＣＵｓＵ−３’）
からなるセンス鎖と、
配列番号１２４３（５’−ＡＡＧＣＵｃＡＵＣＵＣＵＣＣｕＡｕＧｕＧＣｕｓＧ−３’）からなるアンチセンス鎖とからなる、
ように改変される、
請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記第１および第２のｄｓＲＮＡが、少なくとも１つの改変ヌクレオチドを含む、請求
項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記改変ヌクレオチドが、２’−Ｏ−メチル改変ヌクレオチド、５’−ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、およびコレステリル誘導体またはドデカン酸ビスデシルアミド基に連結された末端ヌクレオチドからなる群から選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記改変ヌクレオチドが、２’−デオキシ−２’−フルオロ改変ヌクレオチド、２’−デオキシ改変ヌクレオチド、ロックトヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’−アミノ改変ヌクレオチド、２’−アルキル改変ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデートを含むヌクレオチド、および非天然塩基を含むヌクレオチドからなる群から選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
前記第１および第２のｄｓＲＮＡの各々が、少なくとも１つの２’−Ｏ−メチル改変リボヌクレオチドと、５’−ホスホロチオエート基を含む少なくとも１つのヌクレオチドとを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
各ｄｓＲＮＡの各鎖が、１９〜２３塩基の長さである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
各ｄｓＲＮＡの各鎖が、２１〜２３塩基の長さである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記第１のｄｓＲＮＡの各鎖が、２１塩基の長さであり、前記第２のｄｓＲＮＡの前記センス鎖が２１塩基の長さであり、前記第２のｄｓＲＮＡの前記アンチセンス鎖が２３塩基の長さである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記第１および第２のｄｓＲＮＡが、等モル比で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
ソラフェニブをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
リポタンパク質をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
Ｅｇ５を発現する細胞と接触させると、Ｅｇ５の発現を少なくとも４０％阻害する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
ＶＥＧＦを発現する細胞と接触させると、ＶＥＧＦの発現を少なくとも４０％阻害する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物を細胞に投与すると、前記細胞におけるＥｇ５およびＶＥＧＦの発現が低下する、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
ｎＭ濃度で投与される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記組成物を細胞に投与すると、前記細胞における単星の形成が増大する、請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物を哺乳動物に投与すると、前記哺乳動物における腫瘍増殖の防止、腫瘍増殖の低減、または生存の延長からなる群から選択される少なくとも１つの効果がもたらされる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記効果が、体重の決定、器官重量の決定、視診、ｍＲＮＡ解析、血清ＡＦＰ解析、および生存のモニタリングからなる群から選択される少なくとも１つのアッセイを用いて測定される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
細胞内におけるＥｇ５／ＫＳＰおよびＶＥＧＦの発現を阻害するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項２５】
癌の治療を必要とする哺乳動物において、腫瘍の増殖を防止するか、腫瘍の増殖を低減するか、または生存を延長させるための、請求項１に記載の組成物。
【請求項２６】
前記哺乳動物が、肝臓癌を有する、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記哺乳動物が、肝臓癌を有するヒトである、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２８】
前記組成物が、０．２５ｍｇ／ｋｇ〜４ｍｇ／ｋｇのｄｓＲＮＡを含有する用量で前記哺乳動物に投与されることを特徴とする、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２９】
前記組成物が、約０．０１、０．１、０．５、１．０、２．５、または５．０ｍｇ／ｋｇの前記ｄｓＲＮＡの用量でヒトに投与されることを特徴とする、請求項２５に記載の組成物。
【請求項３０】
癌の治療を必要とする哺乳動物において腫瘍の増殖を低減するための、請求項１に記載の組成物であって、前記組成物の投与によって腫瘍の増殖が少なくとも２０％低減される、組成物。
【請求項３１】
前記組成物の投与によってＫＳＰの発現が少なくとも６０％低下される、請求項３０に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
さらに別の実施形態では、本発明が、癌の治療を必要とする哺乳動物において腫瘍の増殖を低減する方法を提供する。該方法は、本発明の組成物を該哺乳動物に投与する工程を包含し、腫瘍の増殖を少なくとも２０％低減する。別の実施形態では、該方法により、ＫＳＰの発現が少なくとも６０％低下する。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
細胞内におけるヒトキネシンファミリーメンバー１１（Ｅｇ５／ＫＳＰ）遺伝子の発現を阻害する第１の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）と、細胞内におけるヒトＶＥＧＦの発現を阻害する第２のｄｓＲＮＡとを含む核酸脂質粒子を含む組成物であって、
前記核酸脂質粒子が、４５〜６５モル％の陽イオン性脂質、５モル％〜約１０モル％の非陽イオン性脂質、２５〜４０モル％のステロール、および０．５〜５モル％のＰＥＧまたはＰＥＧ改変脂質を含む脂質製剤を含み、
前記第１のｄｓＲＮＡが、第１のセンス鎖と第１のアンチセンス鎖とからなり、前記第１のセンス鎖が、第１の配列を含み、前記第１のアンチセンス鎖が、
配列番号１３１１（５’−ＵＣＧＡＧＡＡＵＣＵＡＡＡＣＵＡＡＣＵ−３’）
のうちの少なくとも１５の連続ヌクレオチドと相補的な第２の配列を含み、
前記第１の配列が、前記第２の配列と相補的であり、前記第１のｄｓＲＮＡが、１５〜３０塩基対の長さであり；
前記第２のｄｓＲＮＡが、第２のセンス鎖と第２のアンチセンス鎖とからなり、前記第２のセンス鎖が、第３の配列を含み、前記第２のアンチセンス鎖が、
配列番号１５３８（５’−ＧＣＡＣＡＵＡＧＧＡＧＡＧＡＵＧＡＧＣＵＵ−３’）
のうちの少なくとも１５の連続ヌクレオチドと相補的な第４の配列を含み、
前記第３の配列が、前記第４の配列と相補的であり、前記第２のｄｓＲＮＡが、１５〜３０塩基対の長さである組成物。
（項目２）
前記陽イオン性脂質が、式Ａを含み、
式Ａが、
【化８】
2012520082.tif 000002
、または
【化９】
2012520082.tif 000003
［式中、Ｒ１およびＲ２が、独立してアルキル、アルケニル、またはアルキニルであり、各々が、必要に応じて置換されていてもよく、Ｒ３およびＲ４が、独立して低級アルキルであるか、またはＲ３およびＲ４が一緒になって、必要に応じて置換されるヘテロ環式環を形成し得る］である、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記陽イオン性脂質が、ＸＴＣ（２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン）を含む、項目２に記載の組成物。
（項目４）
前記陽イオン性脂質が、ＸＴＣを含み、前記非陽イオン性脂質が、ＤＳＰＣを含み、前記ステロールが、コレステロールを含み、前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ−ＤＭＧを含む、項目２に記載の組成物。
（項目５）
前記陽イオン性脂質が、ＸＴＣを含み、前記製剤が、
【表４２】
2012520082.tif 000004
からなる群から選択される、項目２に記載の組成物。
（項目６）
前記陽イオン性脂質が、ＡＬＮＹ−１００（（３ａＲ，５ｓ，６ａＳ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，２−ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエニル）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−アミン））を含む、項目１に記載の組成物。
（項目７）
前記陽イオン性脂質が、ＡＬＮＹ−１００を含み、前記製剤が、
【表４３】
2012520082.tif 000005
からなる、項目６に記載の組成物。
（項目８）
前記陽イオン性脂質が、ＭＣ３（（（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目９）
前記陽イオン性脂質が、ＭＣ３を含み、前記脂質製剤が、
【表４４】
2012520082.tif 000006
からなる群から選択される、項目８に記載の組成物。
（項目１０）
前記第１のｄｓＲＮＡが、配列番号１５３４（５’−ＵＣＧＡＧＡＡＵＣＵＡＡＡＣＵＡＡＣＵＴＴ−３’）からなるセンス鎖と、配列番号１５３５（５’−ＡＧＵＵＡＧＵＵＵＡＧＡＵＵＣＣＵＧＡＴＴ−３’）からなるアンチセンス鎖とからなり、前記第２のｄｓＲＮＡが、配列番号１５３６（５’−ＧＣＡＣＡＵＡＧＧＡＧＡＧＡＵＧＡＧＣＵＵ−３’）からなるセンス鎖と、配列番号１５３７（５’−ＡＡＧＣＵＣＡＵＣＵＣＵＣＣＵＡＵＧＵＧＣＵＧ−３’）からなるアンチセンス鎖とからなる、項目１に記載の組成物。
（項目１１）
小文字の「ｃ」または「ｕ」により示される２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドと、小文字の「ｓ」により示されるホスホロチオエートとを包含するように、各鎖が、以下：
前記第１のｄｓＲＮＡが、
配列番号１２４０（５’−ｕｃＧＡＧＡＡｕｃｕＡＡＡｃｕＡＡｃｕＴｓＴ−３’）
からなるセンス鎖と、
配列番号１２４１（５’−ＡＧＵｕＡＧＵＵｕＡＧＡＵＵＣＵＣＧＡＴｓＴ）
からなるアンチセンス鎖とからなり；
前記第２のｄｓＲＮＡが、
配列番号１２４２（５’−ＧｃＡｃＡｕＡＧＧＡＧＡＧＡｕＧＡＧＣＵｓＵ−３’）
からなるセンス鎖と、
配列番号１２４３（５’−ＡＡＧＣＵｃＡＵＣＵＣＵＣＣｕＡｕＧｕＧＣｕｓＧ−３’）からなるアンチセンス鎖とからなる、
ように改変される、
項目１０に記載の組成物。
（項目１２）
前記第１および第２のｄｓＲＮＡが、少なくとも１つの改変ヌクレオチドを含む、請求
項１に記載の組成物。
（項目１３）
前記改変ヌクレオチドが、２’−Ｏ−メチル改変ヌクレオチド、５’−ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、およびコレステリル誘導体またはドデカン酸ビスデシルアミド基に連結された末端ヌクレオチドからなる群から選択される、項目１２に記載の組成物。
（項目１４）
前記改変ヌクレオチドが、２’−デオキシ−２’−フルオロ改変ヌクレオチド、２’−デオキシ改変ヌクレオチド、ロックトヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’−アミノ改変ヌクレオチド、２’−アルキル改変ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデートを含むヌクレオチド、および非天然塩基を含むヌクレオチドからなる群から選択される、項目１２に記載の組成物。
（項目１５）
前記第１および第２のｄｓＲＮＡの各々が、少なくとも１つの２’−Ｏ−メチル改変リボヌクレオチドと、５’−ホスホロチオエート基を含む少なくとも１つのヌクレオチドとを含む、項目１に記載の組成物。
（項目１６）
各ｄｓＲＮＡの各鎖が、１９〜２３塩基の長さである、項目１に記載の組成物。
（項目１７）
各ｄｓＲＮＡの各鎖が、２１〜２３塩基の長さである、項目１に記載の組成物。
（項目１８）
前記第１のｄｓＲＮＡの各鎖が、２１塩基の長さであり、前記第２のｄｓＲＮＡの前記センス鎖が２１塩基の長さであり、前記第２のｄｓＲＮＡの前記アンチセンス鎖が２３塩基の長さである、項目１に記載の組成物。
（項目１９）
前記第１および第２のｄｓＲＮＡが、等モル比で存在する、項目１に記載の組成物。
（項目２０）
ソラフェニブをさらに含む、項目１に記載の組成物。
（項目２１）
リポタンパク質をさらに含む、項目１に記載の組成物。
（項目２２）
アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）をさらに含む、項目１に記載の組成物。
（項目２３）
Ｅｇ５を発現する細胞と接触させると、Ｅｇ５の発現を少なくとも４０％阻害する、項目１に記載の組成物。
（項目２４）
ＶＥＧＦを発現する細胞と接触させると、ＶＥＧＦの発現を少なくとも４０％阻害する、項目１に記載の組成物。
（項目２５）
前記組成物を細胞に投与すると、前記細胞におけるＥｇ５およびＶＥＧＦの発現が低下する、項目１に記載の組成物。
（項目２６）
ｎＭ濃度で投与される、項目２５に記載の組成物。
（項目２７）
前記組成物を細胞に投与すると、前記細胞における単星の形成が増大する、項目１に記載の組成物。
（項目２８）
前記組成物を哺乳動物に投与すると、前記哺乳動物における腫瘍増殖の防止、腫瘍増殖の低減、または生存の延長からなる群から選択される少なくとも１つの効果がもたらされる、項目１に記載の組成物。
（項目２９）
前記効果が、体重の決定、器官重量の決定、視診、ｍＲＮＡ解析、血清ＡＦＰ解析、および生存のモニタリングからなる群から選択される少なくとも１つのアッセイを用いて測定される、項目２８に記載の組成物。
（項目３０）
細胞内におけるＥｇ５／ＫＳＰおよびＶＥＧＦの発現を阻害する方法であって、項目１に記載の組成物を前記細胞に投与する工程を含む方法。
（項目３１）
癌の治療を必要とする哺乳動物において、腫瘍の増殖を防止するか、腫瘍の増殖を低減するか、または生存を延長させる方法であって、項目１に記載の組成物を前記哺乳動物に投与する工程を含む方法。
（項目３２）
前記哺乳動物が、肝臓癌を有する、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記哺乳動物が、肝臓癌を有するヒトである、項目３１に記載の方法。
（項目３４）
０．２５ｍｇ／ｋｇ〜４ｍｇ／ｋｇのｄｓＲＮＡを含有する用量が前記哺乳動物に投与される、項目３１に記載の方法。
（項目３５）
前記ｄｓＲＮＡが、約０．０１、０．１、０．５、１．０、２．５、または５．０ｍｇ／ｋｇでヒトに投与される、項目３１に記載の方法。
（項目３６）
癌の治療を必要とする哺乳動物において腫瘍の増殖を低減する方法であって、項目１に記載の組成物を前記哺乳動物に投与する工程を含み、腫瘍の増殖を少なくとも２０％低減する方法。
（項目３７）
ＫＳＰの発現を少なくとも６０％低下させる、項目３６に記載の方法。