【誤訳訂正書】
【提出日】平成25年2月25日(2013.2.25)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号３に示されるアミノ酸配列を有し、分泌ストレス解消反応に参与する遺伝子の発現を増加させる活性を示すタンパク質。
【請求項２】
請求項１のタンパク質をコードする核酸。
【請求項３】
配列番号１または２に示されるヌクレオチド配列を有する、請求項２に記載の核酸。
【請求項４】
請求項２の核酸を含む組み換えベクター。
【請求項５】
配列番号２に示されるＤＮＡ遺伝子を含む組み換えベクター。
【請求項６】
寄託番号第ＫＣＴＣ１０９６０ＢＰ号で寄託された組み換えベクター。
【請求項７】
請求項４の組み換えベクターで形質転換されたハンセヌラポリモルファ変異株。
【請求項８】
ハンセヌラポリモルファ由来の転写因子遺伝子ＨｐＨＡＣ１を欠損または変異させることにより、小胞体ストレス反応が減少したハンセヌラポリモルファ変異株。
【請求項９】
分泌ストレス解消反応に参与する遺伝子の発現を増加させる転写因子遺伝子ＨｐＨＡＣ１であって、配列番号２に示されるヌクレオチド配列を有する、前記転写因子遺伝子。
【請求項１０】
請求項７または８の変異株を用いる段階を含む、組み換えタンパク質の製造方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
本発明の別の目的は、前記組み換えベクターで形質転換されたハンセヌラポリモルファ宿主細胞を提供することにある。
本発明の別の目的は、分泌ストレス解消反応に参与する遺伝子の発現を増加させる新規の転写因子遺伝子ＨｐＨＡＣ１を欠損または変異させ、小胞体ストレス反応が減少したハンセヌラポリモルファ変異株を提供することにある。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
【図４】図４はハンセヌラポリモルファのＨｐＨＡＣ１遺伝子を欠損するための融合重合酵素連鎖反応と細胞内遺伝子組み換えに関する模式図である。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１８】
【図５】図５Ａはハンセヌラポリモルファ野生型とＨｐＨＡＣ１欠損変異（ＨｐＨＡＣ１Δ）株の成長特性を分析した図である。液体培養では、前記２つの菌株をＯＤ６００＝０．１として初期培養を開始して２時間間隔でＯＤ６００を測定した。また、指数成長期にある前記２つの菌株の培養液を１０倍ずつ連続して希釈し、２μＬずつ最小固体培地、イノシトール(inositol)を添加した最小固体培地、イノシトールとツニカマイシンを添加した固体培地にそれぞれ点滴した後、２日間培養して成長特性を分析した（図５Ｂ）。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２０】
【図７】図７Ａおよび図７Ｂはハンセヌラポリモルファ野生型菌株とＨｐＨＡＣ１Δ変異株を指数成長期（ＯＤ６００＝０．５）でマイクロアレイ実験によって全体的な遺伝子発現様相の差異を分析した図である。図７Ａは全体的なマイクロアレイ実験のデザインを示す模式図、図７Ｂは個別遺伝子の発現差異を比較した散布図である。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３３】
本発明において、ＨｐＨＡＣ１遺伝子を特異的に欠損させるためには融合重合酵素連鎖反応と細胞内相同組み換え方法(homologous recombination)が利用できる。ＨｐＨＡＣ１遺伝子の５'−末端の切片と３'−末端の切片との間に選別マーカーを含むベクターでハンセヌラポリモルファを形質転換させることにより、ゲノムとベクター間の組み換えを誘導した。
別の様態として、本発明は、ＨｐＨＡＣ１遺伝子を欠損または変異させることにより、小胞体ストレス反応が減少したハンセヌラポリモルファ変異株を提供する。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３６】
本発明者らは、野生型およびＨｐＨＡＣ１欠損菌株を対象として成長の差異が現れる直前の指数成長期でマイクロアレイ実験を行い、遺伝体の発現様相にどんな差異が現れるかを分析した。野性型に比べてＨｐｈａｃ１Δ菌株における発現が減少した遺伝子は、殆ど転写調節因子であるＨｐＨａｃ１タンパク質によって調節される遺伝子と予想され、伝統酵母においてＵＰＲターゲット遺伝子として知られている遺伝子が含まれる。これに対し、野生型に比べてＨｐｈａｃ１Δ菌株における発現が増加した遺伝子には、ＵＰＲターゲット遺伝子以外のストレス反応遺伝子が多く含まれる。すなわち、小胞体ストレス反応を緩和させて分泌発現効率を増加させるＨｐＨＡＣ１遺伝子の欠損の際に、一般な成長環境でも細胞はストレスを受ける。このストレスを解消するために、他のストレス反応遺伝子の発現量が大きく増加するのである。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４９】
（実施例３）
ＨｐＨＡＣ１遺伝子欠損および過発現菌株の製作と特性分析
ＨｐＨＡＣ１遺伝子が欠損されたハンセヌラポリモルファ変異株を製作するために、融合重合酵素連鎖反応（ＰＣＲ）と細胞内遺伝子組み換え(in vivo DNA recombination)技術を用いて遺伝子を欠損した(Oldenburg et al., Nucleic Acid Res., 25, 451, 1997)。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５０】
一次重合酵素連鎖反応では、表１に記述された４対のプライマーを用いてＬＥＵ２遺伝子（Ｎ末端；ＬｅｕＮ−ｆｏｒ、ＬｅｕＮ−ｒｅｖ、Ｃ末端：ＬｅｕＣ−ｆｏｒ、ＬｅｕＣ−ｒｅｖ）とＨｐＨＡＣ１遺伝子（Ｎ末端；ＨｐＨＡＣ１−Ｎ−ｆｏｒ、ＨｐＨＡＣ１−Ｎ−ｒｅｖ、Ｃ末端；ＨｐＨＡＣ１−Ｃ−ｆｏｒ、ＨｐＨＡＣ１−Ｃ−ｒｅｖ）それぞれのＮ末端とＣ末端を増幅した後、二次融合重合酵素連鎖反応で２対のプライマーを用いてＨｐＨＡＣ１遺伝子のＮ末端とＬＥＵ２遺伝子のＮ末端とを連結（ＨｐＨＡＣ１−Ｎ−ｆｏｒ、ＬｅｕＮ−ｒｅｖし、ＬＥＵ２遺伝子のＣ末端とＨｐＨＡＣ１遺伝子のＣ末端とを連結（ＬｅｕＣ−ｆｏｒ、ＨｐＨＡＣ１−Ｃ−ｒｅｖ）した。確保したそれぞれのＤＮＡ切片を酵母細胞内に導入した後、細胞内遺伝子組み換えによってＨｐＨＡＣ１遺伝子が欠損された形質転換体を選別した（図４）。まず、ＬＥＵ２選別標識によって、ロイシンが欠乏した最小培地で成長する形質転換体を選別した後、重合酵素連鎖反応によって、野性型菌株とは異なるように増幅されたＤＮＡ切片を確認し、ＨｐＨＡＣ１遺伝子が欠損されたハンセヌラポリモルファ変異株であるＨｐｈａｃ１Δ（ｈａｃ１：：ＬＥＵ２）菌株を製作した。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６０】
第１のマイクロアレイ実験では、ツニカマイシンまたはＤＴＴ処理の際に発現が増加する全ての遺伝子を選別し、分泌または類似ストレスに反応する遺伝子群を取ることができた。第２のマイクロアレイ実験は、分泌ストレス条件の下で野生型とＨｐｈａｃ１Δ菌株の遺伝子発現様相の差異を比較分析することにより、ＨｐＨＡＣ１が直接調節するＵＰＲターゲット遺伝子を選別するためのものである。よって、第１のマイクロアレイ実験で選別された全体遺伝子群の中から、第２のマイクロアレイ実験でＨｐＨａｃ１タンパク質依存的に発現が増加する遺伝子群のみを選別し、Ｈｐｈａｃ１欠損により発生しうる間接効果を除去した。また、前記２つの実験において、タンパク質の二硫化結合を妨害するＤＴＴ処理とタンパク質のグリコシル化を阻害するツニカマイシン処理という２種の分泌ストレスをそれぞれ与え、２種の分泌ストレスの下ではいずれも発現量が増加する遺伝子のみを選別することにより、それぞれの処理によって発生しうる副反応を除去した。