【手続補正書】
【提出日】平成25年4月30日(2013.4.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質であって、該機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質は：
過剰に荷電されたタンパク質と、
機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と
を含み、ここで、
該過剰に荷電されたタンパク質は、該機能性ペプチドまたは該機能性タンパク質と会合しており、
該機能性ペプチドまたは該機能性タンパク質と会合している該過剰に荷電されたタンパク質は、細胞を透過することができ、かつ該機能性ペプチドまたは該機能性タンパク質を該細胞に送達することができる、
機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項２】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、前記機能性タンパク質または前記機能性ペプチドに共有結合している、請求項１に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項３】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、前記機能性タンパク質または前記機能性ペプチドにペプチド結合によって結合しており、従って融合タンパク質を形成している、請求項２に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項４】
前記過剰に荷電されたタンパク質および前記機能性タンパク質または前記機能性ペプチドが、該過剰に荷電されたタンパク質と該機能性ペプチドまたは該機能性タンパク質とを接続するリンカーに結合している、請求項１〜３のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項５】
前記リンカーが、アミド結合、エステル結合またはジスルフィド結合を含む、請求項４に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項６】
前記過剰に荷電されているタンパク質または前記リンカーが、細胞酵素によって切断され得る、請求項１〜５のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項７】
前記細胞酵素が、細胞プロテアーゼまたは細胞エステラーゼである、請求項６に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項８】
前記細胞プロテアーゼが、エンドソームプロテアーゼである、または前記細胞エステラーゼが、エンドソームエステラーゼである、請求項７に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項９】
前記細胞酵素が、ターゲット細胞または細胞タイプにおいて優先的に発現されるまたは特異的に発現される、請求項６〜８のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１０】
前記ターゲット細胞または細胞タイプが、癌細胞もしくは癌細胞タイプ、免疫系の細胞もしくは細胞タイプ、または病原性細胞もしくは細胞タイプである、請求項９に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１１】
前記過剰に荷電されたタンパク質または前記リンカーが、Ｘ−ＡＧＶＦ−Ｘ（配列番号：１３６）、Ｘ−ＧＦＬＧ−Ｘ（配列番号：１３７）、Ｘ−ＦＫ−Ｘ（配列番号：１３８）、Ｘ−ＡＬ−Ｘ（配列番号：１３９）、Ｘ−ＡＬＡＬ−Ｘ（配列番号：１４０）またはＸ−ＡＬＡＬＡ−Ｘ（配列番号：１４１）を含む群から選択されるアミノ酸配列を含み、ここで、Ｘは、該過剰に荷電されたタンパク質または前記機能性ペプチドもしくは前記機能性タンパク質を含む残部を示す、請求項４〜１０のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１２】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、過剰に荷電されたＧＦＰのものに類似した表面電荷密度または表面電荷分布を有する球状タンパク質である、請求項１〜１１のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１３】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、β−バレルを含むタンパク質である、請求項１〜１２のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１４】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、過剰に荷電されたＧＦＰである、請求項１〜１３のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１５】
前記過剰に荷電されたタンパク質が、＋３６ＧＦＰである、請求項１〜１４のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１６】
前記機能性タンパク質が、転写因子、腫瘍抑制因子、発生調節因子、成長因子、転移抑制因子、アポトーシス促進タンパク質、ジンク・フィンガー・ヌクレアーゼ、およびリコンビナーゼを含む群から選択されるタンパク質である、請求項１〜１５のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１７】
前記機能性タンパク質が、ｐ５３、Ｒｂ（網膜芽細胞腫タンパク質）、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＰＴＥＮ、ＡＰＣ、ＣＤ９５、ＳＴ７、ＳＴ１４、ＢＣＬ−２ファミリータンパク質、カスパーゼ；ＢＲＭＳ１、ＣＲＳＰ３、ＤＲＧ１、ＫＡＩ１、ＫＩＳＳ１、ＮＭ２３、ＴＩＭＰファミリータンパク質、ＢＭＰファミリー成長因子、ＥＧＦ、ＥＰＯ、ＦＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＧＤＦファミリー成長因子、ＨＧＦ、ＨＤＧＦ、ＩＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＰＯ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ；ヒトＣＣＲ５遺伝子内の部位をターゲットにするジンク・フィンガー・ヌクレアーゼ、Ｃｒｅ、Ｄｒｅ、およびＦＬＰリコンビナーゼを含む群から選択されるタンパク質である、請求項１６に記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質。
【請求項１８】
ペプチドまたはタンパク質を細胞に送達するための組成物であって、該ペプチドまたは該タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質を含み、該組成物は、該ペプチドまたは該タンパク質が該細胞に侵入するのに十分な条件下で該細胞と接触させられることを特徴とする、組成物。
【請求項１９】
前記ペプチドまたは前記タンパク質と会合している前記過剰に荷電されたタンパク質が、機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記機能性ペプチドまたは前記機能性タンパク質と会合している前記過剰に荷電されたタンパク質が、請求項１〜１７のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ペプチドまたは前記タンパク質が、核ペプチドまたは核タンパク質であり、前記接触させられることが、前記細胞の核への該タンパク質の送達をもたらす、請求項１８〜２０のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
前記細胞に送達される前記タンパク質が、転写因子である、請求項１８〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
前記細胞に送達される前記タンパク質が、リプログラミング因子である、請求項１８〜２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
前記細胞が、疾患を有すると診断された被験体からの体細胞である、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記細胞が、該細胞の多能性状態へのリプログラミングの誘導に十分な量のリプログラミング因子と会合している過剰に荷電されたタンパク質と、該誘導に十分な時間、および該誘導に十分な条件下で接触させられることを特徴とする、請求項２３または２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記体細胞から産生された多能性細胞が単離されることを特徴とする、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
単離された前記多能性細胞、またはその後代、が、分化した細胞タイプに分化させられることを特徴とする、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記多能性細胞、またはその分化された後代、が、細胞補充療法アプローチにおいて使用されることを特徴とする、請求項２６または２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記細胞が、望ましくないゲノム対立遺伝子を有する細胞であり、前記過剰に荷電されたタンパク質が、該対立遺伝子を特異的にターゲットにするヌクレアーゼと会合している、請求項１８〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項３０】
前記望ましくない対立遺伝子が、疾患と関連づけられ、前記ヌクレアーゼが、該対立遺伝子の変異を誘発する、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記細胞がエクスビボで接触させられ、前記ヌクレアーゼによる前記望ましくない対立遺伝子のターゲッティング成功後に前記被験体に再投与されることを特徴とする、請求項２９または３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記ヌクレアーゼが、ジンク・フィンガー・ヌクレアーゼである、請求項２９〜３１のいずれかに記載の組成物。
【請求項３３】
前記ヌクレアーゼが、ヒトＣＣＲ５遺伝子をターゲットにする、請求項２９〜３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記被験体が、ＨＩＶ／ＡＩＤＳと診断された被験体であり、前記細胞が、Ｔリンパ球である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記タンパク質が、リコンビナーゼであり、前記細胞が、そのゲノム内に該リコンビナーゼによって認識される組み換え部位を含む、請求項１８〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項３６】
前記細胞が、前記リコンビナーゼによって認識される複数の組み換え部位を含み、該複数の組み換え部位のリコンビナーゼ媒介組み換えが、ゲノム領域の欠失をもたらす、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
前記細胞が、腫瘍細胞であり、前記タンパク質が、腫瘍抑制タンパク質、転移抑制タンパク質、細胞増殖抑制タンパク質または細胞毒性タンパク質である、請求項１８〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項３８】
ペプチドまたはタンパク質を細胞に送達するインビトロでの方法であって、該ペプチドまたは該タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質と該細胞を、該ペプチドまたは該タンパク質が該細胞に侵入するのに十分な条件下で接触させることを含む、方法。
【請求項３９】
前記ペプチドまたは前記タンパク質と会合している前記過剰に荷電されたタンパク質が、機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記機能性ペプチドまたは前記機能性タンパク質と会合している前記過剰に荷電されたタンパク質が、請求項１〜１７のいずれかに記載の機能性ペプチドまたは機能性タンパク質と会合している過剰に荷電されたタンパク質である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記ペプチドまたは前記タンパク質が、核ペプチドまたは核タンパク質であり、前記接触させることが、前記細胞の核への該タンパク質の送達をもたらす、請求項３８〜４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
前記細胞に送達される前記タンパク質が、転写因子である、請求項３８〜４１のいずれかに記載の方法。
【請求項４３】
前記細胞に送達される前記タンパク質が、リプログラミング因子である、請求項３８〜４２のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
前記細胞が、疾患を有すると診断された被験体からの体細胞である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記細胞を、該細胞の多能性状態へのリプログラミングの誘導に十分な量のリプログラミング因子と会合している過剰に荷電されたタンパク質と、該誘導に十分な時間、および該誘導に十分な条件下で接触させる、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記体細胞から産生された多能性細胞を単離することをさらに含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
単離された前記多能性細胞、またはその後代、を分化した細胞タイプに分化させることをさらに含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記多能性細胞、またはその分化された後代、を細胞補充療法アプローチにおいて使用することをさらに含む、請求項４６または４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記細胞が、望ましくないゲノム対立遺伝子を有する細胞であり、前記過剰に荷電されたタンパク質が、該対立遺伝子を特異的にターゲットにするヌクレアーゼと会合している、請求項３８〜４１のいずれかに記載の方法。
【請求項５０】
前記望ましくない対立遺伝子が、疾患と関連づけられ、前記ヌクレアーゼが、該対立遺伝子の変異を誘発する、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記細胞がエクスビボで接触させられ、前記ヌクレアーゼによる前記望ましくない対立遺伝子のターゲッティング成功後に前記被験体に再投与されるものであることを特徴とする、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記ヌクレアーゼが、ジンク・フィンガー・ヌクレアーゼである、請求項４９〜５１のいずれかに記載の方法。
【請求項５３】
前記ヌクレアーゼが、ヒトＣＣＲ５遺伝子をターゲットにする、請求項４９〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記被験体が、ＨＩＶ／ＡＩＤＳと診断された被験体であり、前記細胞が、Ｔリンパ球である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記タンパク質が、リコンビナーゼであり、前記細胞が、そのゲノム内に該リコンビナーゼによって認識される組み換え部位を含む、請求項３８〜４１のいずれかに記載の方法。
【請求項５６】
前記細胞が、前記リコンビナーゼによって認識される複数の組み換え部位を含み、該複数の組み換え部位のリコンビナーゼ媒介組み換えが、ゲノム領域の欠失をもたらす、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記細胞が、腫瘍細胞であり、前記タンパク質が、腫瘍抑制タンパク質、転移抑制タンパク質、細胞増殖抑制タンパク質または細胞毒性タンパク質である、請求項３８〜４１のいずれかに記載の方法。