【手続補正書】
【提出日】平成24年11月22日(2012.11.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１８〜２３ヌクレオチドの長さを有するアンチセンス鎖と１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８または１９ヌクレオチドの長さを有するセンス鎖とを含む二重鎖ＲＮＡ分子であって、
該アンチセンス鎖が該センス鎖よりも長く；
該センス鎖が該アンチセンス鎖と少なくとも７０％相補的であり、該アンチセンス鎖と１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８または１９ヌクレオチド塩基対の二本鎖領域を形成し、
該アンチセンス鎖が標的ｍＲＮＡ配列に対して少なくとも７０％相補的であり、
該アンチセンス鎖が該センス鎖に対して１〜９ヌクレオチドの３’末端突出および該センス鎖に対して０〜８ヌクレオチドの５’末端突出を有し、
該アンチセンス鎖の該３’末端突出が、該標的ｍＲＮＡと塩基対合し、
該アンチセンス鎖の該５’末端が、該標的ｍＲＮＡに対して実質的に相補的でなく、そして必要に応じて、Ａ、ＵまたはｄＴからなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチドを含み；そして
該二重鎖ＲＮＡ分子は、真核生物細胞内における選択的な遺伝子サイレンシングを実施することが可能である、二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項２】
１８〜２３ヌクレオチドの長さを有するアンチセンス鎖と１２〜１７ヌクレオチドの長さを有するセンス鎖とを含む二重鎖ＲＮＡ分子であって、
該センス鎖が該アンチセンス鎖と少なくとも７０％相補的であり、該アンチセンス鎖と１２、１３、１４または１５ヌクレオチド塩基対の二本鎖領域を形成し、
該アンチセンス鎖が標的ｍＲＮＡ配列に対して少なくとも７０％相補的であり、
該アンチセンス鎖が該センス鎖に対して１〜９ヌクレオチドの３’末端突出および該センス鎖に対して０〜８ヌクレオチドの５’末端突出を有し、
該アンチセンス鎖の該３’末端突出が、該標的ｍＲＮＡと塩基対合し、そして
該二重鎖ＲＮＡ分子は、真核生物細胞内における選択的な遺伝子サイレンシングを実施することが可能である、二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項３】
１８〜２３ヌクレオチドの長さを有するアンチセンス鎖と１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８または１９ヌクレオチドの長さを有するセンス鎖とを含む二重鎖ＲＮＡ分子であって、
該アンチセンス鎖が該センス鎖よりも長く；
該センス鎖が該アンチセンス鎖と少なくとも７０％相補的であり、該アンチセンス鎖と１３、１４、１５、１６、１７、１８または１９ヌクレオチド塩基対の二本鎖領域を形成し、
該アンチセンス鎖が標的ｍＲＮＡ配列に対して少なくとも７０％相補的であり、
該アンチセンス鎖が該センス鎖に対して１〜９ヌクレオチドの３’末端突出および該センス鎖に対して０〜８ヌクレオチドの５’末端突出を有し、
該アンチセンス鎖の該３’末端突出が、該標的ｍＲＮＡと塩基対合し、
該二重鎖ＲＮＡ分子は、真核生物細胞内における選択的な遺伝子サイレンシングを実施することが可能であり、そして
選択的な遺伝子サイレンシングが、該アンチセンス鎖と同じｍＲＮＡ配列に標的化された対称二本鎖ｓｉＲＮＡを用いた遺伝子サイレンシングと比較して同等またはそれよりも効果が高く、該対称ｓｉＲＮＡは、１９〜２１ヌクレオチドの長さであり、該センス鎖および該アンチセンス鎖の両方に３’末端突出を有する、二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項４】
１８〜２３ヌクレオチドの長さを有するアンチセンス鎖と１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８または１９ヌクレオチドの長さを有するセンス鎖とを含む二重鎖ＲＮＡ分子であって、
該アンチセンス鎖が該センス鎖よりも長く；
該センス鎖が該アンチセンス鎖と少なくとも７０％相補的であり、該アンチセンス鎖と１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８または１９ヌクレオチド塩基対の二本鎖領域を形成し、
該アンチセンス鎖が標的ｍＲＮＡ配列に対して少なくとも７０％相補的であり、
該アンチセンス鎖が該センス鎖に対して１〜９ヌクレオチドの３’末端突出および該センス鎖に対して０〜８ヌクレオチドの５’末端突出を有し、
該アンチセンス鎖の該３’末端突出が、該標的ｍＲＮＡと塩基対合し、かつｄＴｄＴを含まず；そして
該二重鎖ＲＮＡ分子は、真核生物細胞内における選択的な遺伝子サイレンシングを実施することが可能である、二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項５】
１８〜２３ヌクレオチドの長さを有するアンチセンス鎖と１２〜１７ヌクレオチドの長さを有するセンス鎖とを含む二重鎖ＲＮＡ分子であって、
該センス鎖が該アンチセンス鎖と少なくとも７０％相補的であり、該アンチセンス鎖と１２、１３、１４、１５、１６または１７ヌクレオチド塩基対の二本鎖領域を形成し、
該アンチセンス鎖が標的ｍＲＮＡ配列に対して少なくとも７０％相補的であり、
該アンチセンス鎖が該センス鎖に対して１〜９ヌクレオチドの３’末端突出および該センス鎖に対して０〜８ヌクレオチドの５’末端突出を有し、
該アンチセンス鎖の該３’末端突出が、該標的ｍＲＮＡと塩基対合し、かつｄＴｄＴを含まず；そして
該二重鎖ＲＮＡ分子は、真核生物細胞内における選択的な遺伝子サイレンシングを実施することが可能である、二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項６】
１８〜２３ヌクレオチドの長さを有するアンチセンス鎖と１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８または１９ヌクレオチドの長さを有するセンス鎖とを含む二重鎖ＲＮＡ分子であって、
該アンチセンス鎖が該センス鎖よりも長く；
該センス鎖が該アンチセンス鎖と少なくとも７０％相補的であり、該アンチセンス鎖と１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８または１９ヌクレオチド塩基対の二本鎖領域を形成し、
該アンチセンス鎖が標的ｍＲＮＡ配列に対して少なくとも７０％相補的であり、
該アンチセンス鎖が該センス鎖に対して１〜９ヌクレオチドの３’末端突出および該センス鎖に対して０〜８ヌクレオチドの５’末端突出を有し、
該アンチセンス鎖の該３’末端突出が、該標的ｍＲＮＡと塩基対合し、かつｄＴｄＴを含まず； 
該アンチセンス鎖の該５’末端が、該標的ｍＲＮＡに対して実質的に相補的でなく、そして必要に応じて、Ａ、ＵまたはｄＴからなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチドを含み；そして
該二重鎖ＲＮＡ分子は、真核生物細胞内における選択的な遺伝子サイレンシングを実施することが可能である、二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項７】
前記センス鎖が、前記アンチセンス鎖に対して９０％相補的である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項８】
前記センス鎖が１４、１５または１６ヌクレオチドの長さを有する、請求項１、３、４、５または６に記載の二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項９】
前記センス鎖が１５ヌクレオチドの長さを有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項１０】
前記アンチセンス鎖の前記５’末端が、前記標的ｍＲＮＡに実質的に相補的でなく、必要に応じて、Ａ、ＵまたはｄＴからなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチドを含む、請求項２、３、４または５に記載の二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項１１】
前記アンチセンス鎖の前記５’末端がＡ、ＵまたはｄＴを含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項１２】
前記アンチセンス鎖が、１９〜２２ヌクレオチドの長さを有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項１３】
前記アンチセンス鎖が、前記アンチセンス鎖に対して１〜５ヌクレオチドの３’末端突出および前記センス鎖に対して１〜８ヌクレオチドの５’末端突出を有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項１４】
前記アンチセンス鎖が、前記アンチセンス鎖に対して２〜３ヌクレオチドの３’末端突出および前記センス鎖に対して０〜４ヌクレオチドの５’末端突出を有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項１５】
前記センス鎖が、前記アンチセンス鎖と１２、１３、１４、１５または１６ヌクレオチドの塩基対二本鎖領域を形成する、請求項１、３、４または６に記載の二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項１６】
前記センス鎖が、１５ヌクレオチドの長さであり、前記アンチセンス鎖が、２１ヌクレオチドの長さであり、該センス鎖が、該アンチセンス鎖と１５塩基対のヌクレオチド二本鎖領域を形成し、該アンチセンス鎖が、該センス鎖に対して１〜５ヌクレオチドの３’末端突出および該センス鎖に対して１〜４ヌクレオチドの５’末端突出を有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項１７】
前記センス鎖が１５ヌクレオチドの長さであり、前記アンチセンス鎖が、２１ヌクレオチドの長さであり、該センス鎖が該アンチセンス鎖と１５塩基対のヌクレオチドの二本鎖領域を形成し、該アンチセンス鎖が該センス鎖に対して３ヌクレオチドの３’末端突出および該センス鎖に対して３ヌクレオチドの５’末端突出を有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項１８】
前記アンチセンス鎖の前記３’末端突出がｄＴｄＴを含まない、請求項１〜３のいずれか１項に記載の二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項１９】
選択的な遺伝子サイレンシングが、前記アンチセンス鎖と同じｍＲＮＡ配列に標的化された対称二本鎖ｓｉＲＮＡを用いた遺伝子サイレンシングと比較して同等またはそれよりも効果が高く、該対称ｓｉＲＮＡは、１９〜２１ヌクレオチドの長さを有し、該センス鎖および該アンチセンス鎖の両方に３’末端突出を有する、請求項１、２、４、５または６に記載の二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項２０】
（１）前記二本鎖領域のＧＣ含量が３０％〜７０％である；
（２）前記二重鎖ＲＮＡ分子が少なくとも１つの修飾ヌクレオチドまたはその類似体を含む；
（３）前記二重鎖ＲＮＡ分子が、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドまたはその類似体を含み、該少なくとも１個の修飾ヌクレオチドまたはその類似体は、糖、骨格、および／または塩基が修飾されたリボヌクレオチドである；
（４）前記二重鎖ＲＮＡ分子が、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドまたはその類似体を含み、該少なくとも１個の修飾ヌクレオチドまたはその類似体が糖、骨格および／または塩基が修飾されたリボヌクレオチドであり、該骨格が修飾されたリボヌクレオチドが別のリボヌクレオチドとのホスホジエステル結合において修飾を有する；
（５）前記二重鎖ＲＮＡ分子が、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドまたはその類似体を含み、該少なくとも１個の修飾ヌクレオチドまたはその類似体が糖、骨格および／または塩基が修飾されたリボヌクレオチドであり、該骨格が修飾されたリボヌクレオチドが別のリボヌクレオチドとのホスホジエステル結合において修飾を有し、該ホスホジエステル結合が窒素または硫黄へテロ原子のうちの少なくとも１個を含むように修飾されている；
（７）前記二重鎖ＲＮＡ分子が、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドまたはその類似体を含み、該少なくとも１個の修飾ヌクレオチドまたはその類似体が非天然塩基または修飾塩基である；
（８）前記二重鎖ＲＮＡ分子が、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドまたはその類似体を含み、該少なくとも１個の修飾ヌクレオチドまたはその類似体がイノシンまたはトリチル化塩基を含む；
（９）前記二重鎖ＲＮＡ分子が、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドまたはその類似体を含み、該ヌクレオチド類似体が、糖が修飾されたリボヌクレオチドであり、ここで２’−ＯＨ基が、Ｈ、ＯＲ、Ｒ、ハロ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２またはＣＮから選択される基によって置換されており、各Ｒが独立してＣ１〜Ｃ６のアルキル、アルケニルまたはアルキニルであり、ハロがＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである；
（１０）前記二重鎖ＲＮＡ分子が、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドまたはその類似体を含み、該ヌクレオチド類似体が、ホスホチオエート基を含む、骨格が修飾されたリボヌクレオチドである；
（１１）前記二重鎖ＲＮＡ分子が少なくとも１つの修飾ヌクレオチドまたはその類似体を含み、前記アンチセンス鎖が少なくとも１つのデオキシヌクレオチドを含む；
（１２）前記二重鎖ＲＮＡ分子が少なくとも１つの修飾ヌクレオチドまたはその類似体を含み、前記アンチセンス鎖が、少なくとも１つのデオキシヌクレオチドを含み、該少なくとも１つのデオキシヌクレオチドが３’突出、５’突出および二本鎖領域からなる群から選択される１つまたは複数の領域内にある；
（１３）前記二重鎖ＲＮＡ分子が少なくとも１つの修飾ヌクレオチドまたはその類似体を含み、前記センス鎖が少なくとも１つのデオキシヌクレオチドを含む；あるいは
（１４）前記真核生物細胞が哺乳動物細胞または鳥類細胞である；
請求項１〜６のいずれか１項に記載の二重鎖ＲＮＡ分子。
【請求項２１】
選択的な遺伝子のサイレンシングが、対称センス鎖およびアンチセンス鎖を含む標準構造のｓｉＲＮＡと比較してオフターゲットサイレンシングの除去または有意な低減と関連している、請求項１、２、４、５または６に記載の二重鎖ＲＮＡ分子。