【手続補正書】
【提出日】平成25年10月24日(2013.10.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
コアおよびキャップを含む官能化発色性ポリマードット（Ｐドット）であって、前記コアが発色性ポリマーを含み、前記キャップが１つ以上の官能基を保有する官能基化剤を含むが、但し、キャップのすべてが有機ケイ酸塩というわけではないポリマードット。
【請求項２】
疎水性コアおよび親水性キャップを有する請求項１記載の官能化発色性ポリマードット（Ｐドット）であって、前記Ｐドットが、以下の：
（ａ）発色性ポリマー；ならびに
（ｂ）疎水性部分および反応性官能基と結合される親水性部分を有する両親媒性分子を含み、
前記発色性ポリマーが前記Ｐドットの疎水性コア内に包埋され；そして
前記両親媒性分子の一部分が前記Ｐドットのコア内に包埋されて、前記反応性官能基が親水性キャップ中に位置する
ポリマードット。
【請求項３】
前記ポリマードットが発色性ポリマーの配合物を含む請求項１または２記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項４】
前記発色性ポリマーが半導電性ポリマーである請求項１〜３のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項５】
前記ナノ粒子が半導電性ポリマーの配合物を含む請求項４記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項６】
前記両親媒性分子対発色性ポリマーの重量比が約１％〜約５０％である請求項１〜５のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項７】
前記両親媒性分子対発色性ポリマーの重量比が約５％〜約２５％である請求項６記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項８】
前記両親媒性分子が両親媒性ポリマーである請求項１〜７のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項９】
前記両親媒性ポリマーが両親媒性櫛型ポリマー、ポリエチレングリコール−グラフト化ポリスチレン、ポリ（スチレン−コ−無水マレイン酸）、半導電性ポリマーまたは非半導電性ポリマーである請求項８記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項１０】
前記両親媒性ポリマーの親水性部分が１つ以上の反応性官能基と結合され、前記反応性官能基が、カルボキシル、アミノ、メルカプト、アジド、アルキン、アルデヒド、ヒドロキシル、カルボニル、スルフェート、スルホネート、ホスフェート、シアネート、スクシンイミジルエステル、歪みアルキン、アジド、ジエン、アルケン、テトラジン、歪みアルケン、シクロオクチン、ホスフィン基、およびその誘導体からなる群から選択される請求項２〜９のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項１１】
前記反応性官能基が、アルキン、アジド、歪みアルキン、ジエン、アルケン、テトラジン、歪みアルケン、シクロオクチン、ホスフィン、または生体直交型反応を介して分子と共役され得るその他の部分である請求項１０記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項１２】
前記生体直交型反応がクリックケミストリー反応である請求項１１記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項１３】
前記ポリマードットが、前記ナノ粒子のコア内に包埋された、蛍光染料または無機発光物質をさらに含む請求項１〜１２のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項１４】
生物学的分子がポリマードットの反応性官能基と共役される請求項１〜１３のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項１５】
前記生物学的分子が、合成または天然タンパク質、糖タンパク質、ポリペプチド、アミノ酸、核酸、炭水化物、脂質、脂肪酸およびその組合せからなる群から選択される分子を含む請求項１４記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項１６】
前記生物学的分子がポリペプチド、核酸、抗体またはアプタマーである請求項１５記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項１７】
前記ポリマードットが１つ以上の非反応性化学基とさらに共役される請求項１〜１６のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項１８】
前記非反応性化学基が水溶性ポリマーである請求項１７記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項１９】
前記ポリマードットが約７００ｎｍ〜約１５００ｎｍのピーク発光を示す請求項１〜１８のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項２０】
前記ポリマードットが約６００ｎｍ〜約７００ｎｍのピーク発光を示す請求項１〜１８のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項２１】
前記ポリマードットが感温染料、ｐＨ感受性染料、またはカルシウム感受性染料と共役される請求項１〜２０のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
【請求項２２】
生物学的分子を官能化発色性ポリマードットと共役するための方法であって、生物学的分子を官能化発色性ポリマードットと共役するのに適した条件下で、遮断剤を含有する溶液中で、官能化発色性ポリマードットを生物学的分子とともにインキュベートすることを包含する方法であり、溶液中の遮断剤の存在がポリマードットへの生物学的分子の非特異的吸着を低減する方法。
【請求項２３】
前記遮断剤がポリアルキレングリコール、洗剤または炭水化物である請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
前記ポリアルキレングリコールがポリエチレングリコールである請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
前記洗剤がトリトンＸ−１００である請求項２３記載の方法。
【請求項２６】
前記炭水化物がデキストランである請求項２３記載の方法。
【請求項２７】
官能化発色性ポリマードットが、以下の：
発色性ポリマー；および
反応性官能基と結合される両親媒性分子
を含み、前記両親媒性分子の一部分が前記ポリマードットのコア内に包埋され、前記反応性官能基がポリマーの表面に位置する請求項２２〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記発色性ポリマーが半導電性ポリマーである請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
前記両親媒性ポリマーが１つ以上の反応性官能基と結合される請求項２７または２８記載の方法。
【請求項３０】
前記官能基がカルボキシル基である請求項２２〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
細胞性標的の生体直交型標識のための方法であって、生体直交型反応に関与し得る第一表面曝露官能基を有する細胞性標的を官能化発色性ポリマードットと接触させることを包含する方法であり、官能化発色性ポリマードットが、以下の：
半導電性ポリマー；および
生体直交型反応において第一官能基と反応し得る第二官能基と結合される両親媒性分子
を含み、前記両親媒性分子の一部分が前記ポリマードットのコア内に包埋され、第二官能基が前記ポリマードットの表面に位置する方法。
【請求項３２】
前記両親媒性ポリマーが１つより多い反応性官能基と結合される請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
前記生体直交型反応がクリックケミストリー反応である請求項３１または３２記載の方法。
【請求項３４】
前記細胞性標的がその側鎖中にアルキン基またはアジド基を保有する非天然アミノ酸を含有するポリペプチドである請求項３１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記第二官能基が、アルキン、アジド、歪みアルキン、アジド、ジエン、アルケン、テトラジン、歪みアルケン、シクロオクチンおよびホスフィン基からなる群から選択される請求項３１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
半導電性ポリマーの配合物を含む発色性ポリマーであって、前記半導電性ポリマーの１つがＰＦＴＢＴコポリマーである発色性ポリマードット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
さらに別の実施形態では、本発明は、赤方偏移発光ピークを有する発色性ポリマードットを提供する。一実施形態では、赤方偏移Ｐドットは、遠赤外領域でピーク発光を有する。他の実施形態では、赤方偏移Ｐドットは、近ＩＲ領域でピーク発光を有する。一実施形態では、赤方偏移Ｐドットは、ＰＦＴＢＴポリマーを含む。ある実施形態では、ポリマードットは、２つ以上の異なる発色性ポリマーの、を含む。例えば、一実施形態では、ＰドットはＰＦＢＴおよびＰＦＴＢＴポリマーの、を含む。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
コアおよびキャップを含む官能化発色性ポリマードット（Ｐドット）であって、前記コアが発色性ポリマーを含み、前記キャップが１つ以上の官能基を保有する官能基化剤を含むが、但し、キャップのすべてが有機ケイ酸塩というわけではないポリマードット。
（項目２）
疎水性コアおよび親水性キャップを有する項目１記載の官能化発色性ポリマードット（Ｐドット）であって、前記Ｐドットが、以下の：
（ａ）発色性ポリマー；ならびに
（ｂ）疎水性部分および反応性官能基と結合される親水性部分を有する両親媒性分子を含み、
前記発色性ポリマーが前記Ｐドットの疎水性コア内に包埋され；そして
前記両親媒性分子の一部分が前記Ｐドットのコア内に包埋されて、前記反応性官能基が親水性キャップ中に位置する
ポリマードット。
（項目３）
前記ポリマードットが発色性ポリマーの配合物を含む項目１または２記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目４）
前記発色性ポリマーが半導電性ポリマーである項目１〜３のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目５）
前記ナノ粒子が半導電性ポリマーの配合物を含む項目４記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目６）
前記半導電性ポリマーの配合物がＰＦ−ＴＢＴ半導電性ポリマーを包含する項目５記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目７）
前記ＰＦ−ＴＢＴ半導電性ポリマーがＰＦ−０．１ＴＢＴである項目６記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目８）
前記両親媒性分子対発色性ポリマーの重量比が約１％〜約５０％である項目１〜７のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目９）
前記両親媒性分子対発色性ポリマーの重量比が約５％〜約２５％である項目８記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目１０）
前記両親媒性分子の親水性部分がポリアルキレングリコールを含む項目２〜８のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目１１）
前記ポリアルキレングリコールがポリエチレングリコールである項目１０記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目１２）
前記両親媒性分子が両親媒性ポリマーである項目１〜１１のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目１３）
前記両親媒性ポリマーが両親媒性櫛型ポリマーである項目１２記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目１４）
前記両親媒性ポリマーがポリエチレングリコール−グラフト化ポリスチレンである請求
項１２または１３記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目１５）
前記両親媒性ポリマーのポリエチレングリコール部分が１つ以上のカルボキシル基と結合される項目１４記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目１６）
前記両親媒性ポリマーがポリ（スチレン−コ−無水マレイン酸）である項目１２または１３記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目１７）
前記両親媒性ポリマーが半導電性ポリマーである項目１２または１３記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目１８）
前記両親媒性ポリマーが非半導電性ポリマーである項目１２または１３記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目１９）
前記両親媒性ポリマーの親水性部分が１つ以上の反応性官能基と結合される項目２〜１８のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目２０）
前記反応性官能基が、カルボキシル、アミノ、メルカプト、アジド、アルキン、アルデヒド、ヒドロキシル、カルボニル、スルフェート、スルホネート、ホスフェート、シアネート、スクシンイミジルエステル、歪みアルキン、アジド、ジエン、アルケン、テトラジン、歪みアルケン、シクロオクチン、ホスフィン基、およびその誘導体からなる群から選択される項目１〜１８のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目２１）
前記反応性官能基が、アルキン、アジド、歪みアルキン、ジエン、アルケン、テトラジン、歪みアルケン、シクロオクチン、ホスフィン、または生体直交型反応を介して分子と共役され得るその他の部分である項目２０記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目２２）
前記生体直交型反応がクリックケミストリー反応である項目２１記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目２３）
前記ポリマードットが、蛍光染料、無機発光物質、磁気物質、およびナノ粒子のコア内に包埋された金属からなる群から選択される構成成分をさらに含む項目１〜２２のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目２４）
生物学的分子がポリマードットの表面の反応性官能基と共役される項目１〜２３のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目２５）
前記生物学的分子が、合成または天然タンパク質、糖タンパク質、ポリペプチド、アミノ酸、核酸、炭水化物、脂質、脂肪酸およびその組合せからなる群から選択される分子を含む項目２４記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目２６）
前記生物学的分子がポリペプチドまたは核酸である項目２５記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目２７）
前記生物学的分子が抗体である項目２５記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目２８）
前記生物学的分子がアプタマーである項目２５記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目２９）
前記ポリマードットが１つ以上の非反応性化学基とさらに共役される項目１〜２８のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目３０）
前記非反応性化学基が水溶性ポリマーである項目２９記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目３１）
前記水溶性ポリマーがポリエチレングリコールである項目３０記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目３２）
前記ポリマードットが約７００ｎｍ〜約１５００ｎｍのピーク発光を示す項目１〜３１のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目３３）
前記ポリマードットが約６００ｎｍ〜約７００ｎｍのピーク発光を示す項目１〜３１のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目３４）
前記ポリマードットが感温染料と共役される項目１〜３３のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目３５）
前記ポリマードットがｐＨ感受性染料と共役される項目１〜３３のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目３６）
前記ポリマードットがカルシウム感受性染料と共役される項目１〜３３のいずれか一項に記載の官能化発色性ポリマードット。
（項目３７）
官能化発色性ポリマードットの製造方法であって、発色性ポリマーと非プロトン溶媒中で溶媒和化される反応性官能基と結合される両親媒性分子との混合物をプロトン溶媒を含む溶液中に導入するステップを包含する方法。
（項目３８）
以下の：
（ａ）発色性ポリマーと非プロトン溶媒中の反応性官能基と結合される両親媒性分子との混合物を調製するステップ；
（ｂ）混合物の全部または一部をプロトン溶媒を含む溶液中に注入し、それにより前記発色性ポリマーおよび前記両親媒性分子を潰してナノ粒子にするステップ；ならびに
（ｃ）ステップ（ｂ）で生成された混合物から前記非プロトン溶媒を除去し、それにより官能化発色性ポリマードットの懸濁液を生成するステップ
をさらに包含する項目３７記載の方法であって、前記両親媒性分子の一部分が前記ポリマードットのコア内に包埋され、前記反応性官能基が前記ポリマードットの表面に位置する方法。
（項目３９）
以下の：
（ｄ）前記懸濁液を濾過して、特定サイズのポリマードットの集団を単離するステップ
をさらに包含する項目３８記載の方法。
（項目４０）
前記非プロトン溶媒の沸点が前記プロトン溶媒の沸点より低く、窒素ストリッピングによりステップ（ｂ）で生成された前記混合物から前記非プロトン溶媒が除去される項目３８または３９記載の方法。
（項目４１）
前記プロトン溶媒が水である項目３７〜４０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
前記発色性ポリマーが半導電性ポリマーである項目３７〜４１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記両親媒性ポリマーがさらに、プロトン溶媒を含む溶液中に混合物を導入する前に反応性官能基を介してエフェクター分子と共役される項目３７〜４２のいずれか一項に記載の方法。
（項目４４）
生物学的分子を官能化発色性ポリマードットと共役するための方法であって、生物学的分子を官能化発色性ポリマードットと共役するのに適した条件下で、遮断剤を含有する溶液中で、官能化発色性ポリマードットを生物学的分子とともにインキュベートすることを包含する方法であり、溶液中の遮断剤の存在がポリマードットの表面への生物学的分子の非特異的吸着を低減する方法。
（項目４５）
前記遮断剤がポリアルキレングリコールである項目４４記載の方法。
（項目４６）
前記ポリアルキレングリコールがポリエチレングリコールである項目４５記載の方法。
（項目４７）
前記遮断剤が洗剤である項目４４記載の方法。
（項目４８）
前記洗剤がトリトンＸ−１００である項目４７記載の方法。
（項目４９）
前記遮断剤が炭水化物である項目４４記載の方法。
（項目５０）
前記炭水化物がデキストランである項目４９記載の方法。
（項目５１）
官能化発色性ポリマードットが、以下の：
（ａ）発色性ポリマー；および
（ｂ）反応性官能基と結合される両親媒性分子
を含み、前記両親媒性分子の一部分が前記ポリマードットのコア内に包埋され、前記反応性官能基がポリマーの表面に位置する項目４４〜５０のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
前記発色性ポリマーが半導電性ポリマーである項目５１記載の方法。
前記両親媒性ポリマーが１つ以上の反応性官能基と結合される項目５１または５２記載の方法。
（項目５３）
前記官能基がカルボキシル基である項目４４〜５２のいずれか一項に記載の方法。
（項目５４）
生物学的試料中の標的分子を標識するための方法であって、生物学的試料を生体共役化発色性ポリマードットと接触させることを包含する方法であり、生体共役化発色性ポリマードットが、以下の：
（ａ）発色性ポリマー；および
（ｂ）反応性官能基を介して標的部分と結合される両親媒性分子
を含み、前記両親媒性分子の一部分が前記ポリマードットのコア内に包埋され、前記標的部分が前記ポリマードットの表面に位置する方法。
（項目５５）
前記発色性ポリマーが半導電性ポリマーである項目５４記載の方法。
（項目５６）
前記両親媒性ポリマーが１つより多い反応性官能基と結合される項目５４または５５記載の方法。
（項目５７）
前記標的分子が細胞の表面に存在する受容体である項目５４または５５記載の方法。
（項目５８）
前記細胞が癌細胞である項目５７記載の方法。
（項目５９）
前記標的部分がポリペプチドまたは核酸である項目５４〜５８のいずれか一項に記載の方法。
（項目６０）
前記標的部分が抗体である項目５９記載の方法。
（項目６１）
前記標的部分がアプタマーである項目５９記載の方法。
（項目６２）
細胞性標的の生体直交型標識のための方法であって、生体直交型反応に関与し得る第一表面曝露官能基を有する細胞性標的を官能化発色性ポリマードットと接触させることを包含する方法であり、官能化発色性ポリマードットが、以下の：
（ａ）半導電性ポリマー；および
（ｂ）生体直交型反応において第一官能基と反応し得る第二官能基と結合される両親媒性分子
を含み、前記両親媒性分子の一部分が前記ポリマードットのコア内に包埋され、第二官能基が前記ポリマードットの表面に位置する方法。
（項目６３）
前記両親媒性ポリマーが１つより多い反応性官能基と結合される項目６２記載の方法。
（項目６４）
前記生体直交型反応がクリックケミストリー反応である項目６２または６３記載の方法。
（項目６５）
前記細胞性標的がその側鎖中にアルキン基を保有する非天然アミノ酸を含有するポリペプチドである項目６２〜６４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６６）
前記細胞性標的がその側鎖中にアジド基を保有する非天然アミノ酸を含有するポリペプチドである項目６２または６４記載の方法。
（項目６７）
前記第二官能基が、アルキン、アジド、歪みアルキン、アジド、ジエン、アルケン、テトラジン、歪みアルケン、シクロオクチンおよびホスフィン基からなる群から選択される項目６２〜６６のいずれか一項に記載の方法。
（項目６８）
前記第二官能基がアルキン基である項目６７記載の方法。
（項目６９）
前記第二官能基がアジド基である項目６７記載の方法。
（項目７０）
半導電性ポリマーの配合物を含む発色性ポリマーであって、前記半導電性ポリマーの１つがＰＦＴＢＴコポリマーである発色性ポリマードット。
（項目７１）
前記半導電性ポリマーの配合物がＰＦＢＴおよびＰＦ−０．１ＴＢＴを含む項目７０記載の発色性ポリマードット。
（項目７２）
前記ＰＦＢＴ対ＰＦ−０．１ＴＢＴの比が多くても１９：１である項目７１記載の発色性ポリマードット。
（項目７３）
前記ＰＦＢＴ対ＰＦ−０．１ＴＢＴの比が多くても９：１である項目７２記載の発色性ポリマードット。
（項目７４）
前記発色性ポリマードットが反応性官能基と結合される両親媒性分子をさらに含み、前記両親媒性分子の一部分が両親媒性分子ポリマードットのコア内に包埋され、両親媒性分子反応性官能基が両親媒性分子ポリマードットの表面に位置する項目７０〜７３のいずれか一項に記載の発色性ポリマードット。