【手続補正書】
【提出日】平成25年2月21日(2013.2.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（a）異なるハイブリドーマ培養上清のアレイを、該上清中の抗体が抗体結合分子に結合することが可能な条件下で、固体支持体に連結された前記抗体結合分子のアレイに接触させる段階であって、ハイブリドーマクローンが非クローン性ハイブリドーマ培養物から生成される、段階；
（b）前記支持体から上清の非結合成分を分離する段階；
（c）前記固体支持体を取り囲む溶液の条件を変化させ、それにより抗体を抗体結合分子から溶出する段階；
（d）溶出された抗体を含む溶液から固体支持体を分離して、前記ハイブリドーマ由来の抗体を含む溶出液のアレイを作製する段階;および
（e）抗原に結合する第二の抗体の存在下で、溶出液のアレイ中の第一の抗体が前記抗原に結合する能力を決定し、それによりサンドイッチイムノアッセイにおいて使用されるモノクローナル抗体の対を同定する段階
をこの順序で含む、ハイブリドーマクローンの樹立の前に、サンドイッチイムノアッセイに使用されるモノクローナル抗体の対を同定する方法。
【請求項２】
段階（d）が、溶出された抗体および固体支持体を含む溶液を濾過することを含み、ここで、前記抗体がフィルターを通って流れ、前記支持体がフィルターによって遮断される、請求項1記載の方法。
【請求項３】
段階（d）が、溶出された抗体を含む溶液からの、固体支持体の磁気分離を含む、請求項1記載の方法。
【請求項４】
固体支持体がビーズである、請求項1記載の方法。
【請求項５】
ビーズがアガロースビーズ、ポリスチレンビーズ、磁気ビーズ、または常磁性ビーズである、請求項4記載の方法。
【請求項６】
抗体結合分子が抗体、プロテインA、プロテインG、および抗原からなる群より選択される、請求項1記載の方法。
【請求項７】
段階（a）〜（d）がマルチウェルフォーマットで実施され、ここで、異なるウェルが異なるハイブリドーマ由来の異なる抗体を含む、請求項1記載の方法。
【請求項８】
濾過が真空補助式濾過（vacuum assisted filtering）を含む、請求項2記載の方法。
【請求項９】
段階（d）の後に、抗体が固体支持体に連結されるかまたはビオチン化される、請求項1記載の方法。
【請求項１０】
段階（e）が、サンドイッチイムノアッセイを実施することを含み、ここで、該イムノアッセイにおいて、アレイ由来の抗体が異なる捕捉抗体として用いられ、かつ第二の抗体が一次検出抗体として用いられる、請求項1記載の方法。
【請求項１１】
段階（e）が、サンドイッチイムノアッセイを実施することを含み、ここで、該イムノアッセイにおいて、アレイ由来の抗体が異なる一次検出抗体として用いられ、かつ第二の抗体が捕捉抗体として用いられる、請求項1記載の方法。
【請求項１２】
段階（e）が、サンドイッチイムノアッセイを実施することを含み、ここで、該イムノアッセイにおいて、アレイ由来の抗体の第一のアリコットが捕捉抗体として用いられ、かつアレイ由来の抗体の第二の抗体アリコットが一次検出抗体として用いられる、請求項1記載の方法。
【請求項１３】
捕捉抗体が固体支持体に連結されている、請求項10〜12のいずれか1項記載の方法。
【請求項１４】
一次検出抗体がビオチン化されている、請求項13記載の方法。
【請求項１５】
決定されたハイブリドーマからハイブリドーマクローンを樹立して、抗原に結合する第一の抗体または第二の抗体を産生する段階を更に含む、請求項1記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
幾つかの態様において、段階（e）は、サンドイッチイムノアッセイを実施することを含み、該イムノアッセイにおいて、アレイ由来の抗体が異なる捕捉抗体として用いられ、かつ第二の抗体が一次検出抗体として用いられる。幾つかの態様において、捕捉抗体は、固体支持体に連結されている。幾つかの態様において、一次検出抗体は、ビオチン化されている。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
幾つかの態様において、段階（e）は、サンドイッチイムノアッセイを実施することを含み、該イムノアッセイにおいて、アレイ由来の抗体が異なる一次検出抗体として用いられ、かつ第二の抗体が捕捉抗体として用いられる。幾つかの態様において、捕捉抗体は、固体支持体に連結されている。幾つかの態様において、一次検出抗体は、ビオチン化されている。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
幾つかの態様において、段階（e）は、サンドイッチイムノアッセイを実施することを含み、該イムノアッセイにおいて、アレイ由来の抗体の第一のアリコットが捕捉抗体として用いられ、かつアレイ由来の抗体の第二の抗体アリコットが一次検出抗体として用いられる。幾つかの態様において、捕捉抗体は、固体支持体に連結されている。幾つかの態様において、一次検出抗体は、ビオチン化されている。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
「固体支持体」は、一つまたは複数の剛性または半剛性表面を有する物質または物質群を指す。幾つかの態様において、固体支持体は、非限定的にミクロスフェアを含む、薄膜または膜、ビーズ、ボトル、皿、繊維、繊維織物、成形ポリマー、粒子、および微粒子の形態をとる。固体支持体は、例えば、天然材料、例えばガラスおよびコラーゲン、または合成材料、例えばアクリルアミド、セルロース、ニトロセルロース、シリコーンゴム、ポリスチレン、ポリエチレンビニルアセタート、ポリプロピレン、ポリメタクリラート、ポリエチレン、ポリシリカート、ポリエチレンオキシド、ポリカーボナート、テフロン、フルオロカーボン、ナイロン、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリオルトエステル、ポリプロピルフマラート、グリコサミノグリカンおよびポリアミノ酸、の不活性支持体から形成させることができる。多くの場合、担体の表面に天然に存在する幾つかの官能基、例えばカルボン酸基(-COOH）、遊離アミン基（-NH2）、およびスルフヒドリル基（-SH）を、ペプチド結合に用いることができる。そのような官能基が天然から入手できない場合、所望の官能基、例えばカルボン酸基、または結合相互作用のパートナーであることが公知の部分（例えば、ビオチンと結合することが可能なアビジン）を、そのような固体支持体に付着させてもよい。幾つかの態様において、固体支持体は、カルボキシル化されたラテックスまたは磁性ミクロスフェアである。
[本発明1001]
（a）異なるハイブリドーマ培養上清のアレイを、該上清中の抗体が抗体結合分子に結合することが可能な条件下で、固体支持体に連結された前記抗体結合分子のアレイに接触させる段階であって、ハイブリドーマクローンが非クローン性ハイブリドーマ培養物から生成される、段階；
（b）前記支持体から上清の非結合成分を分離する段階；
（c）前記固体支持体を取り囲む溶液の条件を変化させ、それにより抗体を抗体結合分子から溶出する段階；
（d）溶出された抗体を含む溶液から固体支持体を分離して、前記ハイブリドーマ由来の抗体を含む溶出液のアレイを作製する段階;および
（e）抗原に結合する第二の抗体の存在下で、溶出液のアレイ中の第一の抗体が前記抗原に結合する能力を決定し、それによりサンドイッチイムノアッセイにおいて使用されるモノクローナル抗体の対を同定する段階
をこの順序で含む、ハイブリドーマクローンの樹立の前に、サンドイッチイムノアッセイに使用されるモノクローナル抗体の対を同定する方法。
[本発明1002]
段階（d）が、溶出された抗体および固体支持体を含む溶液を濾過することを含み、ここで、前記抗体がフィルターを通って流れ、前記支持体がフィルターによって遮断される、本発明1001の方法。
[本発明1003]
段階（d）が、溶出された抗体を含む溶液からの、固体支持体の磁気分離を含む、本発明1001の方法。
[本発明1004]
固体支持体がビーズである、本発明1001の方法。
[本発明1005]
ビーズがアガロースビーズ、ポリスチレンビーズ、磁気ビーズ、または常磁性ビーズである、本発明1001の方法。
[本発明1006]
抗体結合分子が抗体、プロテインA、プロテインG、および抗原からなる群より選択される、本発明1001の方法。
[本発明1007]
段階（a）〜（d）がマルチウェルフォーマットで実施され、ここで、異なるウェルが異なるハイブリドーマ由来の異なる抗体を含む、本発明1001の方法。
[本発明1008]
濾過が真空補助式濾過（vacuum assisted filtering）を含む、本発明1001の方法。
[本発明1009]
段階（d）の後に、抗体が固体支持体に連結されるかまたはビオチン化される、本発明1001の方法。
[本発明1010]
段階（e）が、サンドイッチイムノアッセイを実施することを含み、ここで、該イムノアッセイにおいて、アレイ由来の抗体が異なる捕捉抗体として用いられ、かつ第二の抗体が一次検出抗体として用いられる、本発明1001の方法。
[本発明1011]
段階（e）が、サンドイッチイムノアッセイを実施することを含み、ここで、該イムノアッセイにおいて、アレイ由来の抗体が異なる一次検出抗体として用いられ、かつ第二の抗体が捕捉抗体として用いられる、本発明1001の方法。
[本発明1012]
段階（e）が、サンドイッチイムノアッセイを実施することを含み、ここで、該イムノアッセイにおいて、アレイ由来の抗体の第一のアリコットが捕捉抗体として用いられ、かつアレイ由来の抗体の第二の抗体アリコットが一次検出抗体として用いられる、本発明1001の方法。
[本発明1013]
捕捉試薬が固体支持体に連結されている、本発明1010〜1012のいずれかの方法。
[本発明1014]
一次検出抗体がビオチン化されている、本発明1013の方法。
[本発明1015]
決定されたハイブリドーマからハイブリドーマクローンを樹立して、抗原に結合する第一の抗体または第二の抗体を産生する段階を更に含む、本発明1001の方法。