【手続補正書】
【提出日】平成24年12月17日(2012.12.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
マスキングリガンドについては、ポリペプチドリンカーは、好ましくは、少なくとも1つのタンパク質分解酵素認識部位を含み、かつそのタンパク質分解酵素は、好ましくは、マトリックスメタロプロテアーゼであり、そのうち、マトリックスメタロプロテアーゼ2およびマトリックスメタロプロテアーゼ9は、きわめて好ましい。ポリペプチドリンカーは、好ましくは、アミノ酸配列(SSGS)ｎ-VPLSLYS-(SSGS)ｍ〔式中、n=1〜3かつm=1〜3）（配列番号5、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、または配列番号19）を含む。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
本発明はまた、多価マスキングリガンドの調製方法を特徴とする。一般的には、この方法は、少なくとも1つのタンパク質分解酵素認識部位を含む切断可能なポリペプチドリンカーに抗体のエピトープの少なくとも2つのコピーを連結することを含む。エピトープの各コピーは、切断可能なポリペプチドリンカーに結合可能な部分を含むように化学修飾可能である。好ましくは、切断可能なポリペプチドリンカーは、アミノ酸配列(SSGS)ｎ-VPLSLYS-(SSGS)ｍ〔式中、n=1〜3かつm=1〜3）（配列番号5、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、または配列番号19）を有する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
リンカーは、標的組織内に存在する1種以上の酵素により消化されるタンパク質分解切断部位を含みうる。いくつかの好ましい態様では、タンパク質分解酵素は、疾患に罹患した標的組織内でのみ特異的に発現されるであろう。たとえば、前立腺特異的抗原は、前立腺で特異的に見いだされるタンパク質分解酵素であり、これは、特定のアミノ酸配列を認識して切断する（Khan and Denmeade, The Prostate 45: 80-83, 2000、DeFeo-Jones, et al., Mol. Cancer Therap. 1: 451-459, 2002）。いくつかの態様では、正常組織内よりも疾患組織内でより高度に発現され、かつ腫瘍の形成、浸潤、および転移で本質的な機能を担うタンパク質分解酵素、たとえば、レグマインおよびマトリックスメタロプロテイナーゼにより、その切断部位が認識されるであろう（Liu, et al., Cancer Research 63: 2957-2964, 2003、Egeblad and Werb, Nat. Rev. Cancer 2: 161-174, 2002、Overall and Lopez-Otin, Nat. Rev. Cancer 2: 657-672, 2002）。特に、MMP-9およびMMP-2は、腫瘍進行のすべてのステージに関連しており、広範にわたるさまざまな固形腫瘍の浸潤性の一因となる（Kline, et al., Mol. Pharmaceutics 1: 9-22, 2004）。いくつかの好ましい態様では、ポリペプチドリンカーは、アミノ酸配列(SSGS)ｎ-VPLSLYS-(SSGS)ｍ〔式中、n=1〜3かつm=1〜3）（配列番号5、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、または配列番号19）を含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
特定の酵素に特異的な切断部位を含有するフレキシブルリンカーは、たとえば実施例2に記載されるような任意の適切な方法により調製される。好ましいリンカーは、アミノ酸配列(SSGS)ｎ-VPLSLYS-(SSGS)ｍ〔式中、n=1〜3かつm=1〜3、かつVPLSLYSは、MMP-9に対するタンパク質分解部位である〕（配列番号5、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、または配列番号19）（たとえば、配列番号5）を有する。しかしながら、マスクの正しいコンフォメーションおよび機能を可能にするリンカー配列はいずれも使用可能である。いくつかの適切なリンカーおよびその調製方法は、米国特許第6,541,219号明細書に記載されている。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６３】
配列(SSGS)ｎ-VPLSLYS-(SSGS)ｍ〔式中、m=1かつn=1〕（配列番号５）を有する連結ペプチドは、標準的製造プロトコルに従って化学合成可能である。連結ペプチドは、一方の末端にアルコキシアミンおよび他方の末端に反応性硫黄基を含有可能である。リンカーは、第1のマスク上の反応性基に結合可能であり、非反応性リンカーは、限外濾過により除去可能である。第2のマスクは、N末端システインまたはC末端システインを有するように工学操作可能である。リンカー上の反応性スルフヒドリル基は、二官能性マレイミド反応を介してこのシステイン部分に結合可能である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体が特異的に結合する抗原のエピトープの2つのコピーと、該エピトープの各コピーに連結された切断可能なポリペプチドリンカーと、を含む、抗体の抗原結合部位を可逆的に覆い隠すためのマスキングリガンド。
【請求項２】
前記ポリペプチドリンカーが少なくとも1つのタンパク質分解酵素認識部位を含む、請求項１に記載のマスキングリガンド。
【請求項３】
前記タンパク質分解酵素がマトリックスメタロプロテアーゼである、請求項２に記載のマスキングリガンド。
【請求項４】
前記マトリックスメタロプロテアーゼがマトリックスメタロプロテアーゼ9である、請求項３に記載のマスキングリガンド。
【請求項５】
前記ポリペプチドリンカーが配列番号5、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、および配列番号19からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のマスキングリガンド。
【請求項６】
前記エピトープが、前記エピトープに対する前記抗体の親和性を低下させる少なくとも1つのアミノ酸突然変異を有する、請求項１に記載のマスキングリガンド。
【請求項７】
前記抗体が上皮増殖因子に特異的に結合する、請求項１に記載のマスキングリガンド。
【請求項８】
前記エピトープが、配列番号7、配列番号8、配列番号9、および配列番号10からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７に記載のマスキングリガンド。
【請求項９】
前記抗体の抗原結合部位に非共有結合された請求項１に記載のマスキングリガンドを含む、複合体。
【請求項１０】
前記抗体が、検出可能な標識を含む、請求項９に記載の複合体。
【請求項１１】
前記抗体が、少なくとも1つの翻訳後修飾を含む、請求項９に記載の複合体。
【請求項１２】
請求項９に記載の複合体と製薬上許容される担体とを含む、組成物。
【請求項１３】
少なくとも1つのタンパク質分解酵素認識部位を含む切断可能なポリペプチドリンカーに抗体のエピトープの少なくとも2つのコピーを連結することを含む、多価マスキングリガンドの調製方法。
【請求項１４】
前記エピトープの各コピーが、前記切断可能なポリペプチドリンカーに結合可能な部分を含むように、化学修飾される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記切断可能なポリペプチドリンカーが配列番号5、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、および配列番号19からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
有効量の請求項９に記載の複合体を含む医薬組成物であって、該医薬組成物が、前記切断可能なポリペプチドリンカーを切断できるタンパク質分解酵素を発現する標的組織への投与により被験体を治療するためのものであり、かつ前記マスキングリガンドが、該タンパク質分解酵素が前記切断可能なポリペプチドリンカーを切断した後、該標的組織で前記抗体の抗原結合部位から解離する、医薬組成物。
【請求項１７】
前記標的組織が、腫瘍、潰瘍、創傷であるか、または炎症を起こしている、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
各抗原結合部位が他の抗原結合部位とは異なる特異性を有する２つ以上の抗原結合部位を有する抗体の各抗原結合部位を可逆的に覆い隠すためのマスキングリガンドであって、該抗体の各抗原結合部位に対するエピトープのコピーと、該エピトープの各コピーに連結された切断可能なポリペプチドリンカーと、を含む、上記マスキングリガンド。
【請求項１９】
前記ポリペプチドリンカーが少なくとも1つのタンパク質分解酵素認識部位を含む、請求項１８に記載のマスキングリガンド。
【請求項２０】
前記ポリペプチドリンカーが配列番号5、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、および配列番号19からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載のマスキングリガンド。
【請求項２１】
抗体の抗原結合部位を可逆的に覆い隠すためのマスキングリガンドであって、切断可能なペプチドリンカーによって連結された２つのポリペプチドを含み、その各ポリペプチドは抗体のフレームワーク領域に特異的に結合し、該フレームワーク領域は抗体アイソタイプに共通のものである、マスキングリガンド。
【請求項２２】
抗体アイソタイプがＩｇＧ１である、請求項２１に記載のマスキングリガンド。
【請求項２３】
配列番号６のアミノ酸配列を有する、請求項２２に記載のマスキングリガンド。
【請求項２４】
抗体のフレームワーク残基に特異的に結合する非共有結合性リガンドをさらに含む、請求項１に記載のマスキングリガンド。