【手続補正書】
【提出日】平成24年12月7日(2012.12.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘテロ三量体Ｇ遺伝子のＧアルファｑサブユニット（ＧＮＡＱ）の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）であって、配列番号７４、７５、９１、９２、９６、１００、１０３、１０４、１１２、８８８、８８９、８９０、８９２、８９３、８９４および８９６のいずれか１つの少なくとも１５個の連続したヌクレオチドに相補性の領域を含むセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、それぞれの鎖が、１５〜３０ヌクレオチド長である、二本鎖リボ核酸。
【請求項２】
前記センス鎖は配列番号１５７９（ｃＡＡｕｕｕＧｃＡｕＡＡｕＡｃｕＡＡｕｄＴｄＴ）からなり、前記アンチセンス鎖は配列番号１５８０（ＡＵｕＡＧｕＡＵｕＡＵＧｃＡＡＡＵＵＧｄＴｄＴ）からなり、それぞれの鎖が小文字の「ｃ」および「ｕ」で示される２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドを含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項３】
前記アンチセンス鎖は、
（ａ）配列番号１４２１の少なくとも１５個の連続するヌクレオチド、または
（ｂ）配列番号１４２１の少なくとも最初の１１個のヌクレオチド
に相補的である、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項４】
（ａ）前記センス鎖は、配列番号１４２１または配列番号１５７９の１５個以上の連続するヌクレオチドを含み、および／または
（ｂ）前記アンチセンス鎖は、配列番号１４２２または配列番号１５８０の１５個以上の連続するヌクレオチドを含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項５】
前記センス鎖配列は、配列番号１４２１を含み、前記アンチセンス鎖配列は、配列番号１４２２を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項６】
（ａ）Ａ３７５細胞への０．１ｎＭの前記ｄｓＲＮＡの投与は、リアルタイムＰＣＲアッセイによって測定される際に、ＧＮＡＱのｍＲＮＡの発現の約６６％の阻害をもたらすか、またはＡ３７５細胞への１ｎＭの前記ｄｓＲＮＡの投与は、リアルタイムＰＣＲアッセイによって測定される際に、ＧＮＡＱのｍＲＮＡの発現の約６１％の阻害をもたらすか、またはＡ５７９細胞への１ｎＭの前記ｄｓＲＮＡの投与は、リアルタイムＰＣＲアッセイによって測定される際に、ＧＮＡＱのｍＲＮＡの発現の約８２％の阻害をもたらすか、またはＯＭＭ１．３細胞への１０ｎＭの前記ｄｓＲＮＡの投与は、リアルタイムＰＣＲアッセイによって測定される際に、ＧＮＡＱのｍＲＮＡの発現の約４２％の阻害をもたらすか、またはＵＭＥＬ２０２細胞への前記ｄｓＲＮＡの投与は、リアルタイムＰＣＲアッセイによって測定される際に、ＧＮＡＱのｍＲＮＡの発現の約８１％の阻害をもたらし、
（ｂ）前記ｄｓＲＮＡは、前記ＧＮＡＱを発現する細胞と接触すると、そのように接触しない細胞と比較して、前記ＧＮＡＱ遺伝子の発現を少なくとも４０％阻害し、または
（ｃ）前記ｄｓＲＮＡは、１０ｐＭ未満のＩＣ５０を有する、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項７】
前記相補性の領域は、少なくとも１５ヌクレオチド長である、請求項１および３〜６のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項８】
前記相補性の領域は、１９〜２１ヌクレオチド長である、請求項７に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項９】
前記相補性の領域は、１９ヌクレオチド長である、請求項７に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１０】
それぞれの鎖が２１ヌクレオチド長である、請求項１および３〜９のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１１】
（ａ）少なくとも１つの鎖が、少なくとも１個のヌクレオチドの３’オーバーハングを含み、または
（ｂ）それぞれの鎖が、２個のヌクレオチドからなる３’オーバーハングを含む、請求項１および３〜１０のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１２】
前記ｄｓＲＮＡに生体試料中での増加した安定性を持たせる修飾を含む、請求項１および３〜１１のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１３】
前記ｄｓＲＮＡは、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項１および３〜１２のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１４】
前記修飾ヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチド、５’−ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、コレステリル誘導体またはドデカン酸ビスデシルアミド（ｄｏｄｅｃａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｂｉｓｄｅｃｙｌａｍｉｄｅ）基と結合した末端ヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−フルオロ修飾ヌクレオチド、２’−デオキシ−修飾ヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’−アミノ−修飾ヌクレオチド、２’−アルキル−修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミダート、およびヌクレオチドを含む非天然塩基の群から選択される、請求項１３に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１５】
（ａ）少なくとも１つの２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチドおよび５’−ホスホロチオエート基を含む少なくとも１つの２’−デオキシチミジン−３’−リン酸ヌクレオチドを含み、または
（ｂ）前記センス鎖は、全ての２’−Ｏ−メチル修飾ピリミジンを含み、かつ
（ｉ）前記アンチセンス鎖は、前記ピリミジンがＡに隣接する時に、２’−Ｏ−メチル修飾ピリミジンを含み、それぞれの鎖が３’末端にｄＴｄＴを含み、
（ｉｉ）前記アンチセンス鎖は、前記ピリミジンがＡに隣接する時に、２’−Ｏ−メチル修飾ピリミジンを含み、それぞれの鎖が３’末端にｄＴｓｄＴを含み、または
（ｉｉｉ）前記アンチセンス鎖は、ａ）前記ピリミジンがＡに隣接するか、またはｂ）前記ピリミジンがＵまたはＧに隣接するウラシルである時に、２’−Ｏ−メチル修飾ピリミジンを含み、それぞれの鎖が３’末端にｄＴｓｄＴを含む、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１６】
リガンドをさらに含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１７】
前記リガンドは、前記ｄｓＲＮＡの前記センス鎖の３’末端にコンジュゲートする、請求項１６に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡおよび医薬製剤を含む、ＧＮＡＱ遺伝子の発現を阻害するための組成物。
【請求項１９】
前記医薬製剤は、脂質製剤である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記医薬製剤は、ＬＮＰ製剤、ＬＮＰ０１製剤、またはＬＮＰ１１製剤である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡを含有する、単離した細胞。
【請求項２２】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡの少なくとも１つの鎖をコード化するヌクレオチド配列を含む、ベクター。
【請求項２３】
請求項２２に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項２４】
細胞内のＧＮＡＱ発現を阻害する方法であって、前記方法は、
（ａ）請求項１〜１７のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡを前記細胞に導入することと、
（ｂ）ＧＮＡＱ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るために十分な時間の間、ステップ（ａ）で産生された前記細胞を維持し、それによって、前記細胞内の前記ＧＮＡＱ遺伝子の発現を阻害することとを含む方法であって、但し、人体を処置するいずれの方法も排除される、方法。
【請求項２５】
ＧＮＡＱ発現によって媒介される疾患を治療する方法における使用のための、請求項１〜１７のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項２６】
前記ヒトは、ブドウ膜黒色腫、皮膚黒色腫、青色母斑、太田母斑、小細胞肺腫瘍、または神経内分泌腫瘍を有する、請求項２５に記載のｄｓＲＮＡ。