【手続補正書】
【提出日】平成25年11月6日(2013.11.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
３以上の異なる単離されたペプチドを含む単離されたペプチドの混合物であって、それぞれの単離されたペプチドが配列番号１の配列
Ｍ−Ｋ−Ｘ３−Ｘ４−Ｄ−Ｘ６−Ｉ−Ａ−Ａ−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｖ−Ｌ−Ｘ１４−Ｇ−Ｍ−Ａ−Ｋ−Ｘ１９−Ｇ−Ｘ２１−Ｆ−Ａ−Ｘ２４−Ｘ２５（配列番号１）
を含み、ここで、Ｘ３は、ＲおよびＱからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ４は、ＮおよびＤからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ６は、ＮおよびＥからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ１０は、Ｖ、ＦおよびＬからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ１１は、ＩおよびＭからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ１４は、Ｋ、ＱおよびＨからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ１９は、Ｎ、ＱおよびＥからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ２１は、ＥおよびＱからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ２４は、Ｉ、Ｖ、ＹおよびＷからなる群から選択されるアミノ酸であり、そしてＸ２５は、ＫおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸である、単離されたペプチドの混合物。
【請求項２】
配列番号１によって定義されるすべての可能なペプチドを含む、請求項1記載の混合物。
【請求項３】
配列番号３〜７０から選択される配列を有する異なる単離されたペプチドを含む、請求項1記載の混合物。
【請求項４】
それぞれの単離されたペプチドがさらなるＮ末端ペプチド配列を含み、該さらなるＮ末端ペプチド配列が、天然ＶｌｓＥ配列または非ＶｌｓＥボレリア（Ｂｏｒｒｅｌｉａ）抗原である、請求項１記載の混合物。
【請求項５】
さらなるＮ末端ペプチド配列が、配列番号７３の配列、ｎ１−ｎ２−Ｓ−Ｐ−ｎ５−ｎ６−Ｐ（配列番号７３）またはその断片であり、ここで、ｎ１が、ＡおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、ｎ２が、ＥおよびＤからなる群から選択されるアミノ酸であり、ｎ５が、ＫおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸であり、そしてｎ６が、ＫおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸である、請求項４記載の混合物。
【請求項６】
それぞれの単離されたペプチドがさらなるＣ末端ペプチド配列を含み、該さらなるＣ末端ペプチド配列が天然ＶｌｓＥ配列または非ＶｌｓＥボレリア抗原である、請求項１記載の混合物。
【請求項７】
さらなるＣ末端ペプチド配列が、配列番号７４の配列、Ｖ−ｃ２−Ｅ−Ｇ−ｃ５−Ｑ−Ｑ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｑ−Ｑ−Ｐ−Ｓ（配列番号７４）またはその断片であり、ここで、ｃ２は、ＱおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸であり、そしてｃ５は、ＶおよびＡからなる群から選択されるアミノ酸である、請求項６記載の混合物。
【請求項８】
さらなるＣ末端ペプチド配列が、配列番号７６の配列、Ａ−Ｖ−ｃ３−Ｅ−Ｇ−ｃ６−Ｑ−Ｑ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｑ−Ｑ−Ｐ−Ｓ（配列番号７６）またはその断片であり、ここで、ｃ３は、ＱおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸であり、そしてｃ６は、ＶおよびＡからなる群から選択されるアミノ酸である、請求項６記載の混合物。
【請求項９】
それぞれの単離されたペプチドがリガンドに結合している、請求項1〜８のいずれか一項記載の混合物。
【請求項１０】
単離されたペプチドの１以上がビオチン化されている、請求項1〜８のいずれか一項記載の混合物。
【請求項１１】
単離されたペプチドの１以上が
(a)ストレプトアビジンまたはアビジン、
(b)ペプチドをストレプトアビジンまたはアビジンと会合させるためのビオチン、または
(c)血清アルブミン
と結合しており、任意で１以上の単離されたペプチドがストレプトアビジン、アビジン、ビオチンまたは血清アルブミンとシステイン残基を介して結合している、請求項1〜８のいずれか一項記載の混合物。
【請求項１２】
それぞれの単離されたペプチドが固体支持体に固定化されている、請求項1〜８のいずれか一項記載の混合物。
【請求項１３】
個体支持体がビーズ、ラテラルフローイムノアッセイ装置中の流路、マイクロタイタープレート中のウェル、またはローター中の流路である、請求項１２記載の混合物。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項記載の単離されたペプチドの混合物と該３以上の単離されたペプチドのエピトープを認識する抗体と結合することができる標識試薬とを含む、キット。
【請求項１５】
標識試薬が、検出可能な標識に結合した抗ヒトＩｇＧ抗体、抗イヌＩｇＧ抗体、タンパク質Ａ、またはタンパク質Ｇである、請求項１４記載のキット。
【請求項１６】
検出可能な標識がコロイド状金粒子である、請求項１５記載のキット。
【請求項１７】
以下の工程を含む、試料において、ボレリア抗原のエピトープに対する抗体を検出する方法：
試料を請求項１〜１２のいずれか一項記載の単離されたペプチドの混合物と接触させる工程；および
該混合物中の単離されたペプチドの１以上を含む抗体−ペプチド複合体の形成を検出する工程であって、該複合体の形成が、ボレリア抗原のエピトープに対する抗体が該試料中に存在することを表す、工程。
【請求項１８】
前記ボレリア抗原が、ボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、ボレリア・アフゼリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ａｆｚｅｌｌｉ）、またはボレリア・ガリニ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｇａｒｉｎｉｉ）種由来である、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
以下の工程を含む、対象においてライム病を検出するための方法：
対象由来の試料を請求項１〜１２のいずれか一項記載の単離されたペプチドの混合物と接触させる工程；および
該混合物中の単離されたペプチドの１以上を含む抗体−ペプチド複合体の形成を検出する工程であって、該複合体の形成が、対象がライム病に罹っていることを表す、工程。
【請求項２０】
前記検出工程が、（ｉ）ＥＬＩＳＡアッセイを実施すること、（ｉｉ）ラテラルフローアッセイを実施すること、（ｉｉｉ）凝集アッセイを実施すること、または（ｉｖ）分析ローターを通じて試料を流すことを含む、請求項１７〜１９のいずれか一項記載の方法。
【請求項２１】
前記試料がヒトまたはイヌ対象由来であるか、血液、血清、脳脊髄液、尿、または唾液からなる群より選択される、請求項１７〜２０のいずれか一項記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
[本発明1001]
配列番号1の式の配列
Ｍ−Ｋ−Ｘ3−Ｘ4−Ｄ−Ｘ6−Ｉ−Ａ−Ａ−Ｘ10−Ｘ11−Ｖ−Ｌ−Ｘ14−Ｇ−Ｍ−Ａ−Ｋ−Ｘ19−Ｇ−Ｘ21−Ｆ−Ａ−Ｘ24−Ｘ25（配列番号1）
を含む、単離されたペプチドであって、ここで、Ｘ3は、ＲおよびＱからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ4は、ＮおよびＤからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ6は、ＮおよびＥからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ10は、Ｖ、ＦおよびＬからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ11は、ＩおよびＭからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ14は、Ｋ、ＱおよびＨからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ19は、Ｎ、ＱおよびＥからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ21は、ＥおよびＱからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ24は、Ｉ、Ｖ、ＹおよびＷからなる群から選択されるアミノ酸であり、およびＸ25は、ＫおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸である、単離されたペプチド。
[本発明1002]
Ｘ3が、ＲおよびＱからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ4がＮであり、Ｘ6が、ＮおよびＥからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ10が、Ｖ、ＦおよびＬからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ11がＩであり、Ｘ14が、Ｋ、ＱおよびＨからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ19が、Ｎ、ＱおよびＥからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ21がＥであり、Ｘ24は、Ｉ、Ｗ、およびＹからなる群から選択されるアミノ酸であり、そしてＸ25がＫである、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1003]
Ｘ3が、ＲおよびＱからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ4がＤであり、Ｘ6が、ＮおよびＥからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ10が、Ｖ、ＦおよびＬからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ11が、ＩおよびＭからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ14が、Ｋ、ＱおよびＨからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ19が、Ｎ、ＱおよびＥからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ21が、ＥおよびＱからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ24が、Ｉ、Ｗ、およびＹからなる群から選択されるアミノ酸であり、そしてＸ25が、ＫおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸である、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1004]
さらなるＮ末端ペプチド配列を含み、該さらなるＮ末端ペプチド配列が、天然ＶｌｓＥ配列または非ＶｌｓＥボレリア（Ｂｏｒｒｅｌｉａ）抗原である、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1005]
さらなるＮ末端ペプチド配列が、配列番号73の配列、ｎ1−ｎ2−Ｓ−Ｐ−ｎ5−ｎ6−Ｐ（配列番号73）またはその断片であり、ここで、ｎ1が、ＡおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、ｎ2が、ＥおよびＤからなる群から選択されるアミノ酸であり、ｎ5が、ＫおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸であり、そしてｎ6が、ＫおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸である、本発明1004の単離されたペプチド。
[本発明1006]
さらなるＣ末端ペプチド配列を含み、該さらなるＣ末端ペプチド配列が天然ＶｌｓＥ配列または非ＶｌｓＥボレリア抗原である、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1007]
さらなるＣ末端ペプチド配列が、配列番号74の配列、Ｖ−ｃ2−Ｅ−Ｇ−ｃ5−Ｑ−Ｑ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｑ−Ｑ−Ｐ−Ｓ（配列番号74）またはその断片であり、ここで、ｃ2は、ＱおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸であり、そしてｃ5は、ＶおよびＡからなる群から選択されるアミノ酸である、本発明1006の単離されたペプチド。
[本発明1008]
さらなるＣ末端ペプチド配列が、配列番号76の配列、Ａ−Ｖ−ｃ3−Ｅ−Ｇ−ｃ6−Ｑ−Ｑ−Ｅ−Ｇ−Ａ−Ｑ−Ｑ−Ｐ−Ｓ（配列番号76）またはその断片であり、ここで、ｃ3は、ＱおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸であり、そしてｃ6は、ＶおよびＡからなる群から選択されるアミノ酸である、本発明1006の単離されたペプチド。
[本発明1009]
少なくとも30、35、40または45アミノ酸を含む、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1010]
リガンドに結合している、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1011]
ビオチン化されている、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1012]
ストレプトアビジンと結合している、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1013]
固体支持体に付着しているかまたは固定化されている、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1014]
ビーズ、ラテラルフローイムノアッセイ装置中の流路、マイクロタイタープレート中のウェル、またはローター中の流路に付着しているかまたは固定化されている、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1015]
配列番号3〜70からなる群から選択される配列を含む、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1016]
配列番号2の配列
ｎ1−ｎ2−ｎ3−ｎ4−ｎ5−ｎ6−ｎ7−Ｑ−Ｄ−ｎ10−Ｍ−Ｋ−Ｘ13−Ｘ14−Ｄ−Ｘ16−Ｉ−Ａ−Ａ−Ｘ20−Ｘ21−Ｖ−Ｌ−Ｘ24−Ｇ−Ｍ−Ａ−Ｋ−Ｘ29−Ｇ−Ｘ31−Ｆ−Ａ−Ｘ34−Ｘ35−Ｄ−Ｎ−Ｅ−ｃ39−Ｄ−ｃ41−Ａ−Ｅ−ｃ44−Ｇ（配列番号2）
からの少なくとも30、35、40または45の連続したアミノ酸を含み、ここで、ｎ1は、ＮおよびＤからなる群から選択されるアミノ酸であり、ｎ2は、ＮおよびＤからなる群から選択されるアミノ酸であり、ｎ3は、ＡおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、ｎ4は、ＡおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、ｎ5は、ＡおよびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、ｎ6は、ＦおよびＹからなる群から選択されるアミノ酸であり、ｎ7は、ＳおよびＴからなる群から選択されるアミノ酸であり、ｎ10は、Ｄ、ＮおよびＱからなる群から選択されるアミノ酸であり、ｃ39は、ＨおよびＤからなる群から選択されるアミノ酸であり、ｃ41は、ＫおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸であり、そしてｃ44は、ＫおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸である、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1017]
Ｘ14がＮであり、Ｘ21がＩであり、Ｘ31がＥであり、Ｘ34が、Ｉ、Ｗ、およびＹからなる群から選択されるアミノ酸であり、そしてＸ35がＫである、本発明1014の単離されたペプチド。
[本発明1018]
Ｘ14がＤであり、Ｘ34が、Ｉ、Ｗ、およびＹからなる群から選択されるアミノ酸である、本発明1014の単離されたペプチド。
[本発明1019]
第1の単離されたペプチドおよび第2の単離されたペプチドを含む単離されたペプチドの混合物であって、第1の単離されたペプチドが第2の単離されたペプチドと異なり、第1および第2の単離されたペプチドのそれぞれが、配列番号1の配列
Ｍ−Ｋ−Ｘ3−Ｘ4−Ｄ−Ｘ6−Ｉ−Ａ−Ａ−Ｘ10−Ｘ11−Ｖ−Ｌ−Ｘ14−Ｇ−Ｍ−Ａ−Ｋ−Ｘ19−Ｇ−Ｘ21−Ｆ−Ａ−Ｘ24−Ｘ25（配列番号1）
を含み、ここで、Ｘ3は、ＲおよびＱからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ4は、ＮおよびＤからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ6は、ＮおよびＥからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ10は、Ｖ、ＦおよびＬからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ11は、ＩおよびＭからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ14は、Ｋ、ＱおよびＨからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ19は、Ｎ、ＱおよびＥからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ21は、ＥおよびＱからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ24は、Ｉ、Ｖ、ＹおよびＷからなる群から選択されるアミノ酸であり、そしてＸ25は、ＫおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸である、単離されたペプチドの混合物。
[本発明1020]
3以上の異なる単離されたペプチドを含む単離されたペプチドの混合物であって、それぞれの単離されたペプチドが配列番号1の配列
Ｍ−Ｋ−Ｘ3−Ｘ4−Ｄ−Ｘ6−Ｉ−Ａ−Ａ−Ｘ10−Ｘ11−Ｖ−Ｌ−Ｘ14−Ｇ−Ｍ−Ａ−Ｋ−Ｘ19−Ｇ−Ｘ21−Ｆ−Ａ−Ｘ24−Ｘ25（配列番号1）
を含み、ここで、Ｘ3は、ＲおよびＱからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ4は、ＮおよびＤからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ6は、ＮおよびＥからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ10は、Ｖ、ＦおよびＬからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ11は、ＩおよびＭからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ14は、Ｋ、ＱおよびＨからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ19は、Ｎ、ＱおよびＥからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ21は、ＥおよびＱからなる群から選択されるアミノ酸であり、Ｘ24は、Ｉ、Ｖ、ＹおよびＷからなる群から選択されるアミノ酸であり、そしてＸ25は、ＫおよびＲからなる群から選択されるアミノ酸である、単離されたペプチドの混合物。
[本発明1021]
それぞれの単離されたペプチドがリガンドに結合している、本発明1019または1020の混合物。
[本発明1022]
単離されたペプチドの1以上がビオチン化されている、本発明1019または1020の混合物。
[本発明1023]
単離されたペプチドの1以上がストレプトアビジンと結合している、本発明1019または1020の混合物。
[本発明1024]
それぞれの単離されたペプチドが固体支持体に固定化されている、本発明1019または1020の混合物。
[本発明1025]
以下の工程を含む、試料において、ボレリア抗原のエピトープに対する抗体を検出する方法：
試料を本発明1001の単離されたペプチドと接触させる工程；および
該単離されたペプチドを含む抗体−ペプチド複合体の形成を検出する工程であって、該複合体の形成が、ボレリア抗原のエピトープに対する抗体が該試料中に存在することを表す、工程。
[本発明1026]
前記ボレリア抗原が、ボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、ボレリア・アフゼリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ａｆｚｅｌｌｉ）、またはボレリア・ガリニ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｇａｒｉｎｉｉ）種由来である、本発明1025の方法。
[本発明1027]
前記単離されたペプチドが固体支持体に固定化されている、本発明1025の方法。
[本発明1028]
前記固体支持体が、ビーズ、ラテラルフローアッセイ装置中の流路、マイクロタイタープレート中のウェル、またはローター中の流路である、本発明1027の方法。
[本発明1029]
前記検出工程が、（ｉ）ＥＬＩＳＡアッセイを実施すること、（ｉｉ）ラテラルフローアッセイを実施すること、（ｉｉｉ）凝集アッセイを実施すること、または（ｉｖ）分析ローターを通じて試料を流すことを含む、本発明1025の方法。
[本発明1030]
前記試料がヒトまたはイヌ対象由来である、本発明1025の方法。
[本発明1031]
前記試料が血液、血清、脳脊髄液、尿、または唾液の試料である、本発明1025の方法。
[本発明1032]
前記試料を本発明1001の2以上の単離されたペプチドと接触させる工程を含む、本発明1025の方法。
[本発明1033]
以下の工程を含む、対象においてライム病を診断するための方法：
対象由来の試料を本発明1001の単離されたペプチドと接触させる工程；および
該ペプチドを含む抗体−ペプチド複合体の形成を検出する工程であって、該複合体の形成が、対象がライム病に罹っていることを表す、工程。
[本発明1034]
本発明1001の1以上の単離されたペプチドと該1以上の単離されたペプチドのエピトープを認識する抗体と結合することができる標識試薬とを含む、キット。
[本発明1035]
前記1以上の単離されたペプチドが固体支持体に付着している、本発明1034のキット。
[本発明1036]
前記1以上の単離されたペプチドが、ビーズ、管若しくはウェル、ラテラルフローアッセイ装置、または分析ローターに付着している、本発明1034のキット。
[本発明1037]
標識試薬が、検出可能な標識に結合した抗ヒトまたは抗イヌＩｇＧ抗体である、本発明1034のキット。
[本発明1038]
検出可能な標識がコロイド状金粒子である、本発明1037のキット。
本発明のさらなる態様および実施形態は、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。