【手続補正書】
【提出日】平成25年5月31日(2013.5.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプル中の分析物を質量分析するための方法であって、該方法は、
アルデヒド官能基もしくはケトン官能基を含む分析物を、末端アミンオキシ部分およびレポーター基を含む標識試薬で誘導体化して、標識された分析物を形成する工程；
該標識された分析物をイオン化に供する工程；ならびに
該分析物を、質量分析によって検出する工程、
を包含する、方法。
【請求項２】
サンプル中の前記分析物の濃度を決定する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記標識試薬は、永久的に荷電したアミンオキシ試薬を含む、請求項１または２のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
前記標識試薬は、式：
【化１７】
2012529010.tif 000001
の化合物を含み、ここでｎは、１〜１００の整数であり、Ｙは、以下：
【化１８】
2012529010.tif 000002
からなる群より選択される、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
ｎは、２〜１０の整数である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記標識試薬は、以下：
【化１９】
2012529010.tif 000003
およびこれらの組み合わせ、からなる群より選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項７】
前記標識された分析物をイオンフラグメント化に供して、イオン化されたレポーター基を生成する工程をさらに包含する、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記分析物を検出する工程は、質量分析器において前記レポーター基のイオンを検出する工程から構成される、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記検出する工程は、第１の伝達される親イオンおよび娘イオンフラグメントを、親−娘イオン移動モニタリングによって検出する工程から構成される、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
標準化合物のアルデヒド官能基もしくはケトン官能基を誘導体化する工程、および前記分析物の相対的濃度を測定する工程をさらに包含する、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記標識試薬は、２種以上の重原子で同位体富化される、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも２種の分析物の化合物は、前記標識試薬で誘導体化され、前記方法は、少なくとも２種の分析物の間の相対的濃度を決定する工程をさらに包含する、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
少なくとも２種の分析物の化合物は、前記標識試薬で誘導体化され、前記方法は、少なくとも１種の分析物の絶対的濃度を決定する工程をさらに包含する、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記イオン化は、構造的に特異的なフラグメントイオンおよびＱ３  ＭＲＭイオンを生成し、前記標識試薬は、該構造的に特異的なフラグメントイオン中に、全体的もしくは部分的に含まれ、前記方法は、該Ｑ３  ＭＲＭイオンの感度および特異性の両方を提供する、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
一般式（ＩＩ）：Ｚ−Ｒ１の２種以上の化合物を含む質量標識のセットであって、ここで該標識のセットにおける化合物のうちの１種以上は、１種以上の重原子同位体を含み、Ｚは、置換されたかもしくは置換されていない、直鎖、分枝鎖もしくは環式のアルキル；置換されたかもしくは置換されていないアリール；置換されたかもしくは置換されていないヘテロアリール；置換されたかもしくは置換されていないアミノ；または置換されたかもしくは置換されていないチオから構成される質量レポーター基を表し；そしてＲ１は、末端アミンオキシ基を表す、質量標識のセット。
【請求項１６】
前記２種以上の化合物のうちの各々は、永久的に荷電したアミンオキシ試薬を個々に含む、請求項１５に記載の標識のセット。
【請求項１７】
前記２種以上の化合物のうちの少なくとも１つは、式：
【化１５】
2012529010.tif 000004
の化合物であり、ｎは、１〜１００の整数であり、Ｙは、以下：
【化１６】
2012529010.tif 000005
からなる群より選択される、請求項１５に記載の標識のセット。
【請求項１８】
ｎは、２〜１０の整数である、請求項１７に記載の標識のセット。
【請求項１９】
Ｒ１は、以下：
【化１４】
2012529010.tif 000006
からなる基から選択される、請求項１５に記載の標識のセット。
【請求項２０】
前記標識のセットの一般式（ＩＩ）の化合物のうちの１種以上は、２種以上の重原子で同位体富化されている、請求項１５〜１９のいずれかに記載の標識のセット。
【請求項２１】
前記標識のセットの一般式（ＩＩ）の化合物のうちの１種以上は、３種以上の重原子で同位体富化されている、請求項１５〜１９のいずれかに記載の標識のセット。
【請求項２２】
前記重原子同位体は、各々独立して、１３Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、３３Ｓ、もしくは３４Ｓである、請求項１５に記載の標識のセット。
【請求項２３】
前記標識は、非塩化形態もしくは非水和形態では同重体であり、該同重体標識のうちの各々は、１種以上の重原子同位体を含む、請求項１５〜２２のいずれかに記載の標識のセット。
【請求項２４】
前記標識のセットにおける各標識は、約１ａｍｕより大きい質量差異によって、該セットにおける別の標識とは区別される、請求項１５〜２３のいずれかに記載の標識のセット。
【請求項２５】
請求項１５〜２４のいずれかに記載の質量標識のセット、および１種以上の他のアッセイ構成要素を含む、キット。
【請求項２６】
前記１種以上の他のアッセイ構成要素は、緩衝液、試薬、分離カラム、およびアッセイを行うための指示書を含む、請求項２５に記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
上記方法は、ケトステロイドの定量的分析のためのＭＲＭワークフローを使用する工程を包含し得る。上記試薬は、個々のケト化合物もしくはケト化合物の一団の定量的分析のために同位体コード化され得る。低衝突エネルギーでの上記ＭＳ／ＭＳフラグメント化は、非常に放射性降下物が少なく（ｃｌｅａｎ）このことは、１つの主なシグナチャーイオンを生じる。上記シグナチャーイオンは、上記アミンオキシ誘導体化生成物からの中性子損失から生じ得る。上記ＭＲＭ移動は、Ｑ１における誘導体化ステロイドの質量およびＱ３における中性子損失フラグメントの質量であり得る。本教示は、誘導体化を介してバックグラウンドノイズを有意に減少させるためのプロセスを提供し、このことは、改善された特異性を生じるＱ３フラグメントの改善された感度および標的化された選択を生じる。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
一般式（ＩＩ）：Ｚ−Ｒ１の２種以上の化合物を含む質量標識のセットであって、ここで該標識のセットにおける化合物のうちの１種以上は、１種以上の重原子同位体を含み、Ｚは、置換されたかもしくは置換されていない、直鎖、分枝鎖もしくは環式のアルキル；置換されたかもしくは置換されていないアリール；置換されたかもしくは置換されていないヘテロアリール；置換されたかもしくは置換されていないアミノ；または置換されたかもしくは置換されていないチオから構成される質量レポーター基を表し；そしてＲ１は、末端アミンオキシ基を表す、質量標識のセット。
（項目２）
Ｒ１は、以下：
【化１４】
2012529010.tif 000007
からなる基から選択される、項目１に記載の標識のセット。
（項目３）
前記標識のセットの一般式（ＩＩ）の化合物のうちの１種以上は、２種以上の重原子で同位体富化されている、項目１に記載の標識のセット。
（項目４）
前記標識のセットの一般式（ＩＩ）の化合物のうちの１種以上は、３種以上の重原子で同位体富化されている、項目１に記載の標識のセット。
（項目５）
前記重原子同位体は、各々独立して、１３Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、３３Ｓ、もしくは３４Ｓである、項目１に記載の標識のセット。
（項目６）
前記標識は、非塩化形態もしくは非水和形態では同重体であり、該同重体標識のうちの各々は、１種以上の重原子同位体を含む、項目１に記載の標識のセット。
（項目７）
前記標識のセットにおける各標識は、約１ａｍｕより大きい質量差異によって、該セットにおける別の標識とは区別される、項目１に記載の標識のセット。
（項目８）
前記２種以上の化合物のうちの少なくとも１つは、式：
【化１５】
2012529010.tif 000008
の化合物であり、ｎは、１〜１００の整数であり、Ｙは、以下：
【化１６】
2012529010.tif 000009
からなる群より選択される、項目１に記載の標識のセット。
（項目９）
ｎは、２〜１０の整数である、項目８に記載の標識のセット。
（項目１０）
前記２種以上の化合物のうちの各々は、永久的に荷電したアミンオキシ試薬を個々に含む、項目１に記載の標識のセット。
（項目１１）
項目１に記載の質量標識のセット、および１種以上の他のアッセイ構成要素を含む、キット。
（項目１２）
前記１種以上の他のアッセイ構成要素は、緩衝液、試薬、分離カラム、およびアッセイを行うための指示書を含む、項目１１に記載のキット。
（項目１３）
サンプル中の分析物を質量分析するための方法であって、該方法は、
アルデヒド官能基もしくはケトン官能基を含む分析物を、末端アミンオキシ部分およびレポーター基を含む標識試薬で誘導体化して、標識された分析物を形成する工程；
該標識された分析物をイオン化に供する工程；ならびに
該分析物を、質量分析によって検出する工程、
を包含する、方法。
（項目１４）
サンプル中の前記分析物の濃度を検出する工程をさらに包含する、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記標識試薬は、永久的に荷電したアミンオキシ試薬を含む、項目１３に記載の方法。
（項目１６）
前記標識試薬は、式：
【化１７】
2012529010.tif 000010
の化合物を含み、ここでｎは、１〜１００の整数であり、Ｙは、以下：
【化１８】
2012529010.tif 000011
からなる群より選択される、項目１３に記載の方法。
（項目１７）
ｎは、２〜１０の整数である、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記標識試薬は、以下：
【化１９】
2012529010.tif 000012
およびこれらの組み合わせ、からなる群より選択される、項目１３に記載の方法。
（項目１９）
前記標識された分析物をイオンフラグメント化に供して、イオン化されたレポーター基を生成する工程をさらに包含する、項目１３に記載の方法。
（項目２０）
前記分析物を検出する工程は、質量分析器において前記レポーター基のイオンを検出する工程から構成される、項目１３に記載の方法。
（項目２１）
検出する工程は、第１の伝達される親イオンおよび娘イオンフラグメントを、親−娘イオン移動モニタリングによって検出する工程から構成される、項目１３に記載の方法。
（項目２２）
前記標準化合物のアルデヒド官能基もしくはケトン官能基を誘導体化する工程、および前記分析物の相対的濃度を測定する工程をさらに包含する、項目１３に記載の方法。
（項目２３）
前記標識試薬は、２種以上の重原子で同位体富化される、項目１３に記載の方法。
（項目２４）
少なくとも２種の分析物の化合物は、前記標識試薬で誘導体化され、前記方法は、少なくとも２種の分析物の間の相対的濃度を決定する工程をさらに包含する、項目１３に記載の方法。
（項目２５）
少なくとも２種の分析物の化合物は、前記標識試薬で誘導体化され、前記方法は、少なくとも１種の分析物の絶対的濃度を決定する工程をさらに包含する、項目１３に記載の方法。
（項目２６）
前記イオン化は、構造的に特異的なフラグメントイオンおよびＱ３  ＭＲＭイオンを生成し、前記標識試薬は、該構造的に特異的なフラグメントイオン中に、全体的もしくは部分的に含まれ、前記方法は、該Ｑ３  ＭＲＭイオンの感度および特異性の両方を提供する、項目１３に記載の方法。