【手続補正書】
【提出日】平成24年11月30日(2012.11.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
共有結合でカップリングされたキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体を製造する方法であって、
キャリアポリペプチドの合成又は翻訳の間に第一の非天然アミノ酸残基をキャリアポリペプチド中に組み入れること；
標的ポリペプチドの合成又は翻訳の間に第二の非天然アミノ酸残基を標的ポリペプチド中に組み入れること；及び
第一の非天然アミノ酸残基と第二の非天然アミノ酸残基とを反応させて、共有結合でカップリングしたキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体を生成させること、
を含む、上記方法。
【請求項２】
第一の非天然アミノ酸を翻訳の間にキャリアポリペプチド中に組み入れることが：
（ａ）（ｉ）第一の非天然アミノ酸、
（ii）直交性ｔＲＮＡ−合成酵素（Ｏ−ＲＳ）、
（iii）Ｏ−ＲＳにより第一の非天然アミノ酸で特異的にアミノアシル化される直交性ｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）、及び
（iv）  キャリアペプチドをコードする核酸［ここで該核酸はＯ−ｔＲＮＡにより認識されるセレクターコドンを含む］
を含む翻訳系を備えること；ならびに
（ｂ）核酸を翻訳し、それにより翻訳の間に第一の非天然アミノ酸をキャリアポリペプチド中に組み入れること
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
キャリポリペプチド又は標的ポリペプチドがメチロトローフ酵母細胞、カンジダ属細胞、ハンゼヌラ属細胞、ピキア属細胞、又はトルロプシス属細胞において産生される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
キャリアポリペプチドが、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、抗体、ＨＥＲ２抗体、及びＯＫＴ３抗体、抗体フラグメント、Ｆａｂ、Ｆｃ、ｓｃＦｖ、アルブミン、血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、オボアルブミン、ｃ反応性タンパク質、コンアルブミン、ラク
トアルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、イオンキャリアタンパク質、アシルキャリアタンパク質、シグナル伝達アダプタータンパク質、アンドロゲン結合タンパク質、カルシウム結合タンパク質、カルモジュリン結合タンパク質、セルロプラスミン、コレステロールエステル輸送タンパク質、ｆボックスタンパク質、脂肪酸結合タンパク質、フォリスタチン、フォリスタチン関連タンパク質、ＧＴＰ結合タンパク質、インスリン様増殖因子結合タンパク質、鉄結合タンパク質、潜在型ＴＧＦベータ結合タンパク質、集光性タンパク質複合体、リンパ球抗原、膜輸送タンパク質、ニューロフィジン、周辺質結合タンパク質、リン酸結合タンパク質、ホスファチジルエタノールアミン結合タンパク質、リン脂質輸送タンパク質、レチノール結合タンパク質、ＲＮＡ結合タンパク質、ｓ期キナーゼ関連タンパク質、性ホルモン結合グロブリン、チロキシン結合タンパク質、トランスコバラミン、トランスコルチン、トランスフェリン結合タンパク質、又はビタミンＤ結合タンパク質であるか、又はこれらに対して相同である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
標的ポリペプチドが、ＴＳＰ−１、ＡＢＴ−５１０、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、リボソーム不活性化タンパク質（ＲＩＰ）、アンジオスタチン、エキセンディン−４、アポタンパク質、心房性ナトリウム利尿因子、心房性ナトリウム利尿ポリペプチド、心房性ペプチド、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン、Ｔ３９７６５、ＮＡＰ−２、ＥＮＡ−７８、ｇｒｏ−ａ、ｇｒｏ−ｂ、ｇｒｏ−ｃ、ＩＰ−１０、ＧＣＰ−２、ＮＡＰ−４、ＰＦ４、ＭＩＧ、カルシトニン、ｃ−ｋｉｔリガンド、サイトカイン、ＣＣケモカイン、単球走化性タンパク質−１、単球走化性タンパク質−２、単球走化性タンパク質−３、単球炎症性タンパク質−１アルファ、単球炎症性タンパク質−１ベータ、ＲＡＮＴＥＳ、Ｉ３０９、Ｒ８３９１５、Ｒ９１７３３、Ｔ５８８４７、Ｄ３１０６５、Ｔ６４２６２、ＣＤ４０リガンド、補体阻害剤、サイトカイン、上皮好中球活性化ペプチド−７８、ＧＲＯΥ、ＭＧＳＡ、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＭＩＰ１−α、ＭＩＰ１−β、ＭＣＰ−１、上皮好中球活性化ペプチド、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、表皮剥脱毒素、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ＦＧＦ２１、Ｇ−ＣＳＦ、ゴナドトロピン、増殖因子、ヒルジン、ＬＦＡ−１、ヒトインスリン、ヒトインスリン様増殖因子（ｈＩＧＦ）、ｈＩＧＦ−Ｉ、ｈＩＧＦ−ＩＩ、ヒトインターフェロン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、インターロイキン、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）、白血病抑制因子、ニュールツリン、ＰＤＧＦ、ペプチドホルモン、プレイオトロフィン、発熱性外毒素Ａ、発熱性外毒素Ｂ、発熱性外毒素Ｃ、レラキシン、ソマトスタチン、スーパーオキシドジムスターゼ、チモシンアルファ１、ヒト腫瘍壊死因子（ｈＴＮＦ）、ヒト腫瘍壊死因子アルファ、ヒト腫瘍壊死因子ベータ、Ｒａｓ、Ｔａｔ、炎症性分子、シグナル伝達分子、ウシ膵臓トリプシン阻害剤（ＢＰＴＩ）、又はＢＰ３２０抗原であるか、又はこれらに対して相同である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
第一の非天然アミノ酸と第二の非天然アミノ酸とを：求電子剤−求核剤反応、求核剤とケトンの反応、オキシム連結反応、求核剤とアルデヒドの反応、カルボニル基と求核剤との間の反応、スルホニル基と求核剤との間の反応、エステル化反応、立体障害エステル基と求核剤との間の反応、チオエステル基と求核剤との間の反応、安定イミン基と求核剤との間の反応、エポキシド基と求核剤との間の反応、アジリジン基と求核剤との間の反応、求電子剤と脂肪族若しくは芳香族アミンとの間の反応、求電子剤とヒドラジドとの間の反応、求電子剤とカルボヒドラジドとの間の反応、求電子剤とセミカルバジドとの間の反応、求電子剤とチオセミカルバジドとの間の反応、求電子剤とカルボニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とチオカルボニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とスルホニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とカルバジドとの間の反応、求電子剤とチオカルバジドとの間の反応、求電子剤とヒドロキシルアミンとの間の反応、ヒドロキシル若しくはジオールのような一つ若しくは複数の求核剤とボロン酸若しくはエステルとの間の反応、遷移金属触媒反応、パラジウム触媒反応、銅触媒ヘテロ原子アルキル化反応、付加環化反応、１，３付加環化反応、２，３付加環化反応、アルキン−アジド反応、ディールズアルダー反応、又はスズキカップリング反応のうちの１つ又はそれ以上を介して反応させる、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
反応が、５０％より高い効率、７０％より高い効率、又は９０％より高い効率である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
請求項１に記載の方法により製造される、キャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項９】
キャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体が、標的ポリペプチドより長い血清半減期を有する、請求項８に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項１０】
第一の非天然アミノ酸残基を含むキャリアポリペプチドドメイン；及び
第二の非天然アミノ酸残基を含む標的ポリペプチドドメイン、
を含むキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体であって、
ここでキャリアポリペプチドドメイン及び標的ポリペプチドドメインは、第一の非天然アミノ酸残基及び第二の非天然アミノ酸残基を通して一緒に接合される、キャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項１１】
キャリアポリペプチドドメインが、抗体、抗体フラグメント、アルブミン、血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、オボアルブミン、ｃ反応性タンパク質、コンアルブミン、ラクトアルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、イオンキャリアタンパク質、アシルキャリアタンパク質、シグナル伝達アダプタータンパク質、アンドロゲン結合タンパク質、カルシウム結合タンパク質、カルモジュリン結合タンパク質、セルロプラスミン、コレステロールエステル輸送タンパク質、ｆボックスタンパク質、脂肪酸結合タンパク質、フォリスタチン、フォリスタチン関連タンパク質、ＧＴＰ結合タンパク質、インスリン様増殖因子結合タンパク質、鉄結合タンパク質、潜在型ＴＧＦベータ結合タンパク質、集光性タンパク質複合体、リンパ球抗原、膜輸送タンパク質、ニューロフィジン、周辺質結合タンパク質、リン酸結合タンパク質、ホスファチジルエタノールアミン結合タンパク質、リン脂質輸送タンパク質、レチノール結合タンパク質、ＲＮＡ結合タンパク質、ｓ期キナーゼ関連タンパク質、性ホルモン結合グロブリン、チロキシン結合タンパク質、トランスコバラミン、トランスコルチン、トランスフェリン結合タンパク質、又はビタミンＤ結合タンパク質を含む、請求項１０に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項１２】
標的ポリペプチドドメインが：ＴＳＰ−１、ＡＢＴ−５１０、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、リボソーム不活性化タンパク質（ＲＩＰ）、アンジオスタチン、エキセンディン−４、アポタンパク質、心房性ナトリウム利尿因子、心房性ナトリウム利尿ポリペプチド、心房性ペプチド、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン、Ｔ３９７６５、ＮＡＰ−２、ＥＮＡ−７８、ｇｒｏ−ａ、ｇｒｏ−ｂ、ｇｒｏ−ｃ、ＩＰ−１０、ＧＣＰ−２、ＮＡＰ−４、ＰＦ４、ＭＩＧ、カルシトニン、ｃ−ｋｉｔリガンド、サイトカイン、ＣＣケモカイン、単球走化性タンパク質−１、単球走化性タンパク質−２、単球走化性タンパク質−３、単球炎症性タンパク質−１アルファ、単球炎症性タンパク質−１ベータ、ＲＡＮＴＥＳ、Ｉ３０９、Ｒ８３９１５、Ｒ９１７３３、Ｔ５８８４７、Ｄ３１０６５、Ｔ６４２６２、ＣＤ４０リガンド、補体阻害剤、サイトカイン、上皮好中球活性化ペプチド−７８、ＧＲＯΥ、ＭＧＳＡ、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＭＩＰ１−α、ＭＩＰ１−β、ＭＣＰ−１、上皮好中球活性化ペプチド、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、表皮剥脱毒素、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ＦＧＦ２１、Ｇ−ＣＳＦ、ゴナドトロピン、増殖因子、ヒルジン、ＬＦＡ−１、ヒトインスリン、ヒトインスリン様増殖因子（ｈＩＧＦ）、ｈＩＧＦ−Ｉ、ｈＩＧＦ−ＩＩ、ヒトインターフェロン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、インターロイキン、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）、白血病抑制因子、ニュールツリン、ＰＤＧＦ、ペプチドホルモン、プレイオトロフィン、発熱性外毒素Ａ、発熱性外毒素Ｂ、発熱性外毒素Ｃ、レラキシン、ソマトスタチン、スーパーオキシドジムスターゼ、チモシンアルファ１、ヒト腫瘍壊死因子（ｈＴＮＦ）、ヒト腫瘍壊死因子アルファ、ヒト腫瘍壊死因子ベータ、Ｒａｓ、Ｔａｔ、炎症性分子、シグナル伝達分子、ウシ膵臓トリプシン阻害剤（ＢＰＴＩ）、又はＢＰ３２０抗原のうち１つ又はそれ以上を含む、請求項１１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項１３】
第一の非天然アミノ酸及び第二の非天然アミノ酸が：求電子剤−求核剤反応、求核剤とケトンの反応、オキシム連結反応、求核剤とアルデヒドの反応、カルボニル基と求核剤との間の反応、スルホニル基と求核剤との間の反応、エステル化反応、立体障害エステル基と求核剤との間の反応、チオエステル基と求核剤との間の反応、安定イミン基と求核剤との間の反応、エポキシド基と求核剤との間の反応、アジリジン基と求核剤との間の反応、求電子剤と脂肪族若しくは芳香族アミンとの間の反応、求電子剤とヒドラジドとの間の反応、求電子剤とカルボヒドラジドとの間の反応、求電子剤とセミカルバジドとの間の反応、求電子剤とチオセミカルバジドとの間の反応、求電子剤とカルボニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とチオカルボニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とスルホニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とカルバジドとの間の反応、求電子剤とチオカルバジドとの間の反応、求電子剤とヒドロキシルアミンとの間の反応、ヒドロキシル若しくはジオールのような一つ若しくは複数の求核剤とボロン酸若しくはエステルとの間の反応、遷移金属触媒反応、パラジウム触媒反応、銅触媒ヘテロ原子アルキル化反応、付加環化反応、１，３付加環化反応、２，３付加環化反応、アルキン−アジド反応、ディールズアルダー反応、又はスズキカップリング反応のうち１つ又はそれ以上により共有結合でカップリングされる、請求項１１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項１４】
請求項１１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体を含む細胞。