【手続補正書】
【提出日】平成24年2月10日(2012.2.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
膵β細胞塊を特異的に測定するための、ＦＸＹＤ２−γアイソフォームから選択されるマーカーの使用。
【請求項２】
膵β細胞塊を測定する方法であって、
ａ）ＦＸＹＤ２−γアイソフォームに特異的に結合する標識分子を用いて、試料中の膵β細胞を可視化する工程、及び
ｂ）標識された膵β細胞の量を定量化する工程を含む、方法。
【請求項３】
膵β細胞関連障害のｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断及びｉｎ  ｖｉｖｏ診断のための診断用組成物の調製における、ＦＸＹＤ２−γアイソフォームに特異的に結合する結合分子の使用。
【請求項４】
膵β細胞関連障害のｉｎ  ｖｉｖｏ診断の判断材料を提供する方法であって、
ａ）被験体に導入されたＦＸＹＤ２−γアイソフォームに特異的に結合する同位体標識トレーサー分子を準備する工程、
ｂ）膵臓中のβ細胞集団に特異的に位置する該トレーサー分子を、ＰＥＴ、ＰＥＴ−ＣＴ、ＳＰＥＣＴ、又はＭＲＩを用いてｉｎ  ｖｉｖｏで可視化する工程、
ｃ）前記被験体における膵β細胞の量を定量化する工程、
ｄ）工程ｃ）において得られた膵β細胞塊のデータを健常被験体の膵β細胞塊のデータ、又は同じ被験体の以前の分析の膵β細胞塊のデータと比較する工程、及び
ｅ）工程ｃ）において得られた膵β細胞塊のレベルが、健常被験体の膵β細胞塊のレベルと比較して低下している場合に、該被験体を糖尿病であるか、又は糖尿病を患う危険性があり、かつ工程ｃ）において得られた膵β細胞塊のレベルが、健常被験体の膵β細胞塊のレベル、又は同じ被験体の以前の分析の膵β細胞塊のレベルと比較して上昇している場合に、該被験体を高インスリン血症であるか、又は高インスリン血症を患う危険性がある、と診断する判断材料を提供する工程を含む、方法。
【請求項５】
膵β細胞関連障害が１型真性糖尿病、２型真性糖尿病、高インスリン血症、又は膵癌である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用又は方法。
【請求項６】
被験体において膵β細胞塊を特異的に測定するか、及び／又は膵β細胞関連障害を診断するか、及び／又は膵β細胞を精製するためのキットであって、
ａ）バイオマーカーＦＸＹＤ２−γ−ａ、ＦＸＹＤ２−γ−ｂ及び／又はＦＸＹＤ２−γ−ｃと結合する標識分子を含む、キット。
【請求項７】
結合分子が、前記バイオマーカーと特異的に結合する、特異抗体若しくはその断片、ナノボディ、アフィボディ、一本鎖抗体、アプタマー、フォトアプタマー、低分子、相互作用パートナー、同位体標識トレーサー、又はリガンドである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法、使用又はキット。
【請求項８】
抗体がＦＸＹＤ２−γ−ａ、ＦＸＹＤ２−γ−ｂ及び／又はＦＸＹＤ２−γ−ｃバイオマーカーに指向性を有する、請求項７に記載の方法、使用又はキット。
【請求項９】
抗体が、配列番号１〜配列番号５に記載のペプチドのいずれか１つに、より特異的に指向性を有する、請求項８に記載の方法、使用又はキット。
【請求項１０】
被験体における膵β細胞移植の成功を追跡調査する方法であって、
ａ）被験体に膵β細胞を移植した後一定期間内の該被験体における膵β細胞の量を測定する工程、及び
ｂ）膵β細胞塊を経時的に比較することにより該移植の成功を決定する工程を含む、方法。
【請求項１１】
膵β細胞を膵臓組織の非β細胞と区別し精製又は単離する方法であって、
ａ）膵β細胞を、ＦＸＹＤ２−γアイソフォームに特異的に指向性を有する標識結合分子でタグ付けする工程、及び
ｂ）標識された膵β細胞を、非標識細胞から膵β細胞上のタグによって単離し、それにより実質的に純粋な膵β細胞調製物を得る工程を含む、方法。
【請求項１２】
再生された膵β細胞を特定する方法であって、
ａ）膵β細胞を、ＦＸＹＤ２−γアイソフォームに特異的に指向性を有する標識結合分子でタグ付けする工程、
ｂ）標識された膵β細胞を、非標識細胞から膵β細胞上のタグによって単離し、それにより実質的に純粋な再生膵β細胞調製物を得る工程、
ｃ）免疫組織化学を実行し、それにより新たに再生された膵β細胞の数を特定すると共に、新たな膵β細胞塊を確定する工程、及び
ｄ）治療戦略を追跡調査すると共に、膵β細胞塊の回復を検出する工程を含む、方法。
【請求項１３】
タグが磁性ビーズ、常磁性ビーズであり、膵β細胞塊がＭＲＩ（核磁気共鳴画像法）によって測定され得る、請求項１１又は１２に記載の方法。
【請求項１４】
機能的インスリン発現細胞を誘導するために幹細胞集団を特定する方法であって、
ａ）処理した幹細胞を、ＦＸＹＤ２−γアイソフォームに特異的に指向性を有する標識結合分子でタグ付けする工程、及び
ｂ）標識した該幹細胞を、非標識細胞から潜在的膵β細胞幹細胞上のタグによって単離し、それにより実質的に純粋な膵β細胞幹細胞調製物を得る工程を含む、方法。
【請求項１５】
ｃ）免疫組織化学を実行し、それにより膵β細胞幹細胞の数を特定すると共に、新たなβ細胞塊を確定する工程、及び
ｄ）治療戦略を追跡調査すると共に、新たに形成されたβ細胞の量を検出する工程をさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
膵β細胞に対する特異的バイオマーカーを特定する方法であって、かかるマーカーを以下の５つの基準：
ａ）ヒト膵臓全体と比べてヒト膵島において５０倍〜１００倍を超えて高レベルで発現していること、
ｂ）精製ラットβ細胞において精製ラット非β細胞と比べて高レベルで発現しており、比較的β細胞特異的となっていること、
ｃ）グルコキナーゼと同じか、又はそれよりも高いレベルで発現されること、
ｄ）細胞膜に存在し、特異的抗体又はペプチドによる標的化に使用することができること、及び
ｅ）選択した遺伝子／タンパク質の発現レベルが炎症時に変化していないこと
に基づき選択することを含む、方法。
【請求項１７】
得られる発現データが、ＭＰＳＳ及び／又は遺伝子発現（ｍＲＮＡ）マイクロアレイ技術に由来するものである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ＦＸＹＤ２−γ陽性細胞に特異的に結合する新たなトレーサー分子を特定する方法であって、
ａ）候補トレーサー分子をＦＸＹＤ２−γ陽性細胞型又は細胞株と接触させると共に、該候補トレーサー分子と該細胞との相互作用を測定する工程、
ｂ）該候補トレーサー分子をＦＸＹＤ２−γ陰性細胞型又は細胞株と接触させると共に、該候補トレーサー分子と該細胞との相互作用を測定する工程、及び
ｃ）工程ａ）の該細胞と結合するが、工程ｂ）の該細胞とは結合しない候補トレーサー分子をβ細胞塊トレーサー分子として保持する工程を含む、方法。
【請求項１９】
ＦＸＹＤ２−γ陽性細胞型又は細胞株が、齧歯類膵島、ラットＩＮＳ−１Ｅ、ＡＲ４２Ｊ細胞、及びヒトのＣＡＰＡＮ−２細胞から成る群から選択され、並びにＦＸＹＤ２−γ陰性細胞型又は細胞株がＰＡＮＣ−１である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ＦＸＹＤ２−γ陽性細胞に特異的に結合する新たなトレーサー分子を特定するためのキットであって、一方がＦＸＹＤ２−γ陽性細胞型又は細胞株であり、他方がＦＸＹＤ２−γ陰性細胞型又は細胞株である２つの細胞型又は細胞株を含む、キット。
【請求項２１】
ＦＸＹＤ２−γ陽性細胞型又は細胞株が、齧歯類膵島、ラットＩＮＳ−１Ｅ、ＡＲ４２Ｊ細胞、及びヒトのＣＡＰＡＮ−２細胞から成る群から選択され、並びにＦＸＹＤ２−γ陰性細胞型又は細胞株がＰＡＮＣ−１である、請求項２０に記載のキット。
【請求項２２】
ＦＸＹＤ２−γ陽性細胞に特異的に結合する新たなトレーサー分子を特定する方法であって、
候補トレーサー分子をＦＸＹＤ２−γ分子と接触させると共に、該候補トレーサー分子と該ＦＸＹＤ２−γ分子との相互作用を測定する工程、及び
工程ａ）の該ＦＸＹＤ２−γ分子に結合する候補トレーサー分子を、β細胞塊トレーサー分子として保持する工程を含む、方法。
【請求項２３】
ＦＸＹＤ２−γアイソフォームが、ＦＸＹＤ２−γ−ａ、ＦＸＹＤ２−γ−ｂ、及びＦＸＹＤ２−γ−ｃから成る群から選択される、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法、使用、又はキット。
【請求項２４】
ＦＸＹＤ２−γアイソフォームがＦＸＹＤ２−γ−ａである、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法、使用、又はキット。
【請求項２５】
膵β細胞塊を特異的に測定するため、又は請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法、使用、又はキットに使用するための、ＦＸＹＤ２−γ、ＧＮＡＳ−ＸＬａｓ、ＧＮＡＳ−Ａｌｅｘ、ＣＤＩＰＴ、ＶＡＴ１、ＣＬＳＴＮ１、ＳＬＣ７Ａ５、ＣＴＴＮ、ＢＡＩＡＰ３、ＬＹＰＤ１、ＡＮＸＡ７、ＤＭＢＴ１、ＫＩＡＡ１５４３、及びＳＬＣ７Ａ８から成る群から選択される１つ又は複数のマーカーの使用。