【手続補正書】
【提出日】平成21年9月24日(2009.9.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１を含み、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼ酵素をコードする単離された核酸分子であって、ここで該核酸分子は、配列番号１に関係する少なくとも２つの変異を含み、該核酸分子は、配列番号１０７または配列番号１０８を含むチミジンキナーゼ酵素をコードし、該配列番号１０７または配列番号１０８は、野生型アミノ酸について１５９〜１６１位および１６８〜１６９位にアミノ酸置換を含む、核酸分子。
【請求項２】
請求項１に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記アミノ酸置換が、１５９位にアミノ酸がなく、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＬｅｕ、１６８位にＰｈｅ、１６９位にＡｓｎを有する変異ＳＲ１１を生じる、核酸分子。
【請求項３】
請求項１に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記アミノ酸置換が、１５９位にアミノ酸がなく、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＡｌａ、１６８位にＰｈｅを有し、１６９位にアミノ酸がない変異ＳＲ２６を生じる、核酸分子。
【請求項４】
請求項１に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記アミノ酸置換が、１５９位にＩｌｅ、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＬｅｕ、１６８位にＰｈｅ、１６９位にＭｅｔを有する変異ＳＲ３９を生じる、核酸分子。
【請求項５】
請求項１に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記アミノ酸置換が、１５９位にＩｌｅ、１６０位にＬｅｕ、１６１位にＬｅｕ、１６８位にＴｙｒ、１６９位にＬｅｕを有する変異ＳＲ４を生じる、核酸分子。
【請求項６】
請求項１に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記アミノ酸置換が、１５９位にアミノ酸がなく、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＡｌａ、１６８位にＴｙｒ、１６９位にＴｙｒを有する変異ＳＲ１５を生じる、核酸分子。
【請求項７】
請求項１に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記アミノ酸置換が、１５９位にアミノ酸がなく、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＶａｌ、１６８位にＶａｌ、１６９位にＭｅｔを有する変異ＳＲ３２を生じる、核酸分子。
【請求項８】
請求項１に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記アミノ酸置換が、１５９位にＩｌｅ、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＶａｌ、１６８位にＰｈｅ、１６９位にＴｙｒを有する変異ＳＲ５３を生じる、核酸分子。
【請求項９】
請求項１に記載の核酸分子に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現ベクター。
【請求項１０】
請求項９に記載の発現ベクターであって、ここで前記プロモーターが、ＭｏＭＬＶ  ＬＴＲ、サイトメガロウイルス前初期プロモーター、およびサイトメガロウイルス前後期プロモーターからなる群より選択される、発現ベクター。
【請求項１１】
請求項９に記載の発現ベクターであって、ここで前記プロモーターが、組織特異的プロモーターである、発現ベクター。
【請求項１２】
請求項１１に記載の発現ベクターであって、ここで前記組織特異的プロモーターが、チロシンヒドロキシラーゼプロモーター、脂肪細胞Ｐ２プロモーター、ＰＥＰＣＫプロモーター、αフェトプロテインプロモーター、乳清酸性プロモーター、およびカゼインプロモーターからなる群より選択される、発現ベクター。
【請求項１３】
グアニル酸キナーゼ部分およびチミジンキナーゼ部分を含む融合タンパク質をコードする単離された核酸分子であって、ここで該融合タンパク質が、グアニル酸キナーゼの生物学的活性およびチミジンキナーゼの生物学的活性を有し、該チミジンキナーゼ部分が、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼまたは、非変異型チミジンキナーゼと比較して増加した生物学的活性を有する変異Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼのいずれかである、核酸分子。
【請求項１４】
請求項１３に記載の単離された核酸分子であって、前記グアニル酸キナーゼ部分および前記チミジンキナーゼ部分の少なくとも１つが短縮されている、核酸分子。
【請求項１５】
前記グアニル酸キナーゼ部分が哺乳動物グアニル酸キナーゼである、請求項１３に記載の核酸分子。
【請求項１６】
前記哺乳動物グアニル酸キナーゼ部分が、マウスグアニル酸キナーゼまたはヒトグアニル酸キナーゼである、請求項１５に記載の核酸分子。
【請求項１７】
請求項１３に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記変異チミジンキナーゼは、１つ以上の変異を含む酵素であり、該変異の少なくとも１つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＮ末端方向に位置するアミノ酸置換をコードする、核酸分子。
【請求項１８】
請求項１３に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記変異チミジンキナーゼは、１つ以上の変異を含む酵素であり、該変異の少なくとも１つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位内のアミノ酸置換である、核酸分子。
【請求項１９】
請求項１３に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記変異チミジンキナーゼは、少なくとも３つの変異を含む酵素であり、該変異の少なくとも２つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＮ末端方向に１、２、または３のアミノ酸に位置するアミノ酸置換をコードし、そして該変異の少なくとも１つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＣ末端方向に４または５のアミノ酸に位置するアミノ酸置換をコードする、核酸分子。
【請求項２０】
前記変異チミジンキナーゼが、Ｑ基質結合ドメイン中に少なくとも１つの変異を含む酵素である、請求項１７に記載の単離された核酸分子。
【請求項２１】
前記チミジンキナーゼが、単純ヘルペスウイルス１型チミジンキナーゼおよび単純ヘルペスウイルス２型チミジンキナーゼからなる群より選択される、請求項１３に記載の単離された核酸分子。
【請求項２２】
請求項１３に記載の単離された核酸分子を含む、発現ベクター。
【請求項２３】
前記核酸分子に作動可能に連結されるプロモーターをさらに含む、請求項２２に記載の発現ベクター。
【請求項２４】
請求項１３に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記変異チミジンキナーゼが、１５９位にアミノ酸がなく、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＬｅｕ、１６８位にＰｈｅ、１６９位にＡｓｎを有する変異ＳＲ１１を生じるアミノ酸置換を含む、核酸分子。
【請求項２５】
請求項１３に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記変異チミジンキナーゼが、１５９位にアミノ酸がなく、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＡｌａ、１６８位にＰｈｅを有し、１６９位にアミノ酸がない変異ＳＲ２６を生じるアミノ酸置換を含む、核酸分子。
【請求項２６】
請求項１３に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記変異チミジンキナーゼが、１５９位にＩｌｅ、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＬｅｕ、１６８位にＰｈｅ、１６９位にＭｅｔを有する変異ＳＲ３９を生じるアミノ酸置換を含む、核酸分子。
【請求項２７】
請求項１３に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記変異チミジンキナーゼが、１５９位にＩｌｅ、１６０位にＬｅｕ、１６１位にＬｅｕ、１６８位にＴｙｒ、１６９位にＬｅｕを有する変異ＳＲ４を生じるアミノ酸置換を含む、核酸分子。
【請求項２８】
請求項１３に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記変異チミジンキナーゼが、１５９位にアミノ酸がなく、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＡｌａ、１６８位にＴｙｒ、１６９位にＴｙｒを有する変異ＳＲ１５を生じるアミノ酸置換を含む、核酸分子。
【請求項２９】
請求項１３に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記変異チミジンキナーゼが、１５９位にアミノ酸がなく、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＶａｌ、１６８位にＶａｌ、１６９位にＭｅｔを有する変異ＳＲ３２を生じるアミノ酸置換を含む、核酸分子。
【請求項３０】
請求項１３に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記変異チミジンキナーゼが、１５９位にＩｌｅ、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＶａｌ、１６８位にＰｈｅ、１６９位にＴｙｒを有する変異ＳＲ５３を生じるアミノ酸置換を含む、核酸分子。
【請求項３１】
請求項１３に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記変異チミジンキナーゼが、１５９位にＩｌｅ、１６０位にＬｅｕ、１６１位にＡｌａ、１６８位にＴｙｒ、１６９位にＰｈｅを有する変異体３０を生じるアミノ酸置換を含む、核酸分子。
【請求項３２】
グアニル酸キナーゼ部分およびチミジンキナーゼ部分を含む融合タンパク質であって、ここで該融合タンパク質は、該グアニル酸キナーゼの生物学的活性および該チミジンキナーゼの生物学的活性を有し、ここで該チミジンキナーゼ部分は、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼ、または非変異型チミジンキナーゼと比較して増加した生物学的活性を有する変異Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼのいずれかである、融合タンパク質。
【請求項３３】
前記グアニル酸キナーゼ部分および前記チミジンキナーゼ部分のうちの少なくとも１つが短縮型である、請求項３２に記載の融合タンパク質。
【請求項３４】
前記グアニル酸キナーゼ部分が哺乳動物グアニル酸キナーゼである、請求項３２に記載の融合タンパク質。
【請求項３５】
前記哺乳動物グアニル酸キナーゼ部分が、マウスグアニル酸キナーゼまたはヒトグアニル酸キナーゼである、請求項３４に記載の融合タンパク質。
【請求項３６】
請求項３２に記載の融合タンパク質であって、ここで前記変異チミジンキナーゼは、１つ以上の変異を含む酵素であり、該変異の少なくとも１つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＮ末端方向に位置するアミノ酸置換をコードする、融合タンパク質。
【請求項３７】
請求項３２に記載の融合タンパク質であって、ここで前記変異チミジンキナーゼは、１つ以上の変異を含む酵素であり、該変異の少なくとも１つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位内のアミノ酸置換である、融合タンパク質。
【請求項３８】
請求項３２に記載の融合タンパク質であって、ここで前記変異チミジンキナーゼは、少なくとも３つの変異を含む酵素であり、該変異の少なくとも２つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＮ末端方向に１、２、または３のアミノ酸に位置するアミノ酸置換をコードし、そして該変異の少なくとも１つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＣ末端方向に４または５のアミノ酸に位置するアミノ酸置換をコードする、融合タンパク質。
【請求項３９】
前記変異チミジンキナーゼが、Ｑ基質結合ドメイン中に少なくとも１つの変異を含む酵素である、請求項３６に記載の融合タンパク質。
【請求項４０】
前記チミジンキナーゼが、単純ヘルペスウイルス１型チミジンキナーゼおよび単純ヘルペスウイルス２型チミジンキナーゼからなる群より選択される、請求項３２に記載の融合タンパク質。
【請求項４１】
請求項３２に記載の融合タンパク質であって、ここで前記変異チミジンキナーゼが、１５９位にアミノ酸がなく、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＬｅｕ、１６８位にＰｈｅ、１６９位にＡｓｎを有する変異ＳＲ１１を生じるアミノ酸置換を含む、融合タンパク質。
【請求項４２】
請求項３２に記載の融合タンパク質であって、ここで前記変異チミジンキナーゼが、１５９位にアミノ酸がなく、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＡｌａ、１６８位にＰｈｅを有し、１６９位にアミノ酸がない変異ＳＲ２６を生じるアミノ酸置換を含む、融合タンパク質。
【請求項４３】
請求項３２に記載の融合タンパク質であって、ここで前記変異チミジンキナーゼが、１５９位にＩｌｅ、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＬｅｕ、１６８位にＰｈｅ、１６９位にＭｅｔを有する変異ＳＲ３９を生じるアミノ酸置換を含む、融合タンパク質。
【請求項４４】
請求項３２に記載の融合タンパク質であって、ここで前記変異チミジンキナーゼが、１５９位にＩｌｅ、１６０位にＬｅｕ、１６１位にＬｅｕ、１６８位にＴｙｒ、１６９位にＬｅｕを有する変異ＳＲ４を生じるアミノ酸置換を含む、融合タンパク質。
【請求項４５】
請求項３２に記載の融合タンパク質であって、ここで前記変異チミジンキナーゼが、１５９位にアミノ酸がなく、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＡｌａ、１６８位にＴｙｒ、１６９位にＴｙｒを有する変異ＳＲ１５を生じるアミノ酸置換を含む、融合タンパク質。
【請求項４６】
請求項３２に記載の融合タンパク質であって、ここで前記変異チミジンキナーゼが、１５９位にアミノ酸がなく、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＶａｌ、１６８位にＶａｌ、１６９位にＭｅｔを有する変異ＳＲ３２を生じるアミノ酸置換を含む、融合タンパク質。
【請求項４７】
請求項３２に記載の融合タンパク質であって、ここで前記変異チミジンキナーゼが、１５９位にＩｌｅ、１６０位にＰｈｅ、１６１位にＶａｌ、１６８位にＰｈｅ、１６９位にＴｙｒを有する変異ＳＲ５３を生じるアミノ酸置換を含む、融合タンパク質。
【請求項４８】
請求項３２に記載の融合タンパク質であって、ここで前記変異チミジンキナーゼが、１５９位にＩｌｅ、１６０位にＬｅｕ、１６１位にＡｌａ、１６８位にＴｙｒ、１６９位にＰｈｅを有する変異体３０を生じるアミノ酸置換を含む、融合タンパク質。