【手続補正書】
【提出日】平成24年11月13日(2012.11.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
オオムギ植物体またはその一部から調製される飲料であって、前記飲料は、含むＴ２Ｎポテンシャルレベルが極めて低く、前記オオムギ植物体またはその一部が、機能的なリポキシゲナーゼ（ＬＯＸ）−１酵素の完全な喪失を結果としてもたらす第１の変異と、機能的なＬＯＸ−２酵素の完全な喪失を結果としてもたらす第２の変異とを含む飲料。
【請求項２】
モルト飲料である、請求項１に記載の飲料。
【請求項３】
ビールである、請求項１から２のいずれか一項に記載の飲料。
【請求項４】
オオムギビールである、請求項１に記載の飲料。
【請求項５】
３７℃で８週間にわたる保存後において、オオムギの栽培品種Ｐｏｗｅｒから同じ方法で調製した飲料と比較して、５０％未満、好ましくは４０％未満、より好ましくは３５％未満、なおより好ましくは３０％未満、さらにより好ましくは２５％未満の遊離Ｔ２Ｎを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の飲料。
【請求項６】
機能的ＬＯＸ−１酵素の完全な喪失を結果としてもたらす第１の変異と、機能的ＬＯＸ−２酵素の完全な喪失を結果としてもたらす第２の変異とを含む、オオムギ植物体またはその一部。
【請求項７】
前記植物体のＬＯＸ−１をコードする遺伝子が、未熟終止コドンを含む、請求項６に記載のオオムギ植物体またはその一部。
【請求項８】
前記植物体のＬＯＸ−１をコードする遺伝子が、ナンセンスコドンを含み、前記コドンが、配列番号１２の塩基番号３５７２〜３５７４に対応する、請求項７に記載のオオムギ植物体またはその一部。
【請求項９】
前記植物体のＬＯＸ−２をコードする遺伝子が、未熟終止コドンを含む、請求項６から８のいずれか一項に記載のオオムギ植物体またはその一部。
【請求項１０】
前記植物体のＬＯＸ−２をコードする遺伝子が、配列番号１の２６８９位のヌクレオチドにおいて終止コドンの形成をもたらす変異を有する、請求項９に記載のオオムギ植物体またはその一部。
【請求項１１】
前記植物体が「オオムギ（Ｈｏｒｄｅｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ  Ｌ．）：Ａ６８９系統」と称し、ＰＴＡ−９６４０の寄託番号でＡＴＣＣへと寄託された植物体と、それらの子孫植物体とからなる群から選択される、請求項６から９のいずれか一項に記載のオオムギ植物体またはその一部。
【請求項１２】
請求項６から１１のいずれか一項に記載のオオムギ植物体またはその一部から調製される、請求項１から５のいずれか一項に記載の飲料。
【請求項１３】
加工されたオオムギ植物体またはその一部を含む、植物生成物であって、前記オオムギ植物体が請求項６から１１のいずれかに記載のオオムギ植物体である、植物生成物。
【請求項１４】
前記植物生成物が、加工されたオオムギ植物体またはその一部を含む、モルト組成物であり、前記オオムギ植物体が、請求項６から１１のいずれかに記載のオオムギ植物体である、請求項１３に記載の植物生成物。
【請求項１５】
請求項６から１１のいずれかに記載のオオムギ植物体またはその一部を用いるか、あるいは前記オオムギ植物体もしくはその一部、またはこれらの混合物から調製されたモルト組成物を用いて調製されたウォート組成物である、請求項１３に記載の植物生成物。
【請求項１６】
前記ウォート組成物がオオムギのウォートである、請求項１５に記載の植物生成物。
【請求項１７】
請求項１４から１６のいずれか一項に記載の植物生成物から調製される、請求項１から５のいずれかに記載の飲料。
【請求項１８】
オオムギシロップ、モルトシロップ、オオムギ抽出物、およびモルト抽出物からなる群から選択される、請求項１３に記載の植物生成物。
【請求項１９】
Ｔ２Ｎポテンシャルレベルが極めて低い飲料を生成させる方法であって、
（ｉ）請求項６から１１のいずれかに記載のオオムギ植物体またはその一部を含む組成物を調製するステップと；
（ｉｉ）（ｉ）の組成物を飲料へと加工するステップと
を含み、これらにより、Ｔ２Ｎポテンシャルレベルが極めて低い飲料を得る方法。
【請求項２０】
遊離Ｔ２Ｎレベルが極めて低いモルト組成物を生成させる方法であって、
（ｉ）請求項６から１１のいずれか一項に記載のオオムギ植物体の穀粒を供給するステップと；
（ｉｉ）前記穀粒をスティーピングするステップと；
（ｉｉｉ）前記スティーピングされた穀粒を、所定の条件下で発芽させるステップと；
（ｉｖ）発芽した穀粒を加熱処理するステップと
を含み、これらにより、遊離Ｔ２Ｎレベルが極めて低いモルト組成物を生成させる方法。
【請求項２１】
ＡＴＣＣの受託番号がＰＴＡ−５４８７であるオオムギの変異体Ｄ１１２から同じ方法で調製したモルト組成物中における遊離Ｔ２Ｎと比較して、前記遊離Ｔ２Ｎの極めて低いレベルが、最大で５０％のＴ２Ｎである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
機能的ＬＯＸ−１酵素の完全な喪失を結果としてもたらす第１の変異と、機能的ＬＯＸ−２酵素の完全な喪失を結果としてもたらす第２の変異とを含むオオムギ植物体を調製する方法であって、
（ｉ）機能的ＬＯＸ−１酵素を完全に喪失させたオオムギ植物体またはその一部を供給するステップと；
（ｉｉ）前記オオムギ植物体、ならびに／または前記オオムギ植物体に由来するオオムギ細胞、および／もしくはオオムギ組織、および／もしくはオオムギ穀粒、および／もしくはオオムギ胚芽を変異誘発し、これにより、Ｍ０世代のオオムギを得るステップと；
（ｉｉｉ）前記変異誘発されたオオムギ植物体、オオムギ穀粒、および／またはオオムギ胚芽を、少なくとも２世代にわたり育種し、これにより、Ｍｘ（ここで、ｘは、≧２の整数である）世代のオオムギ植物体を得るステップと；
（ｉｖ）前記Ｍｘ世代のオオムギ植物体から胚芽を得るステップと；
（ｖ）前記胚芽を発芽させるステップと；
（ｖｉ）前記発芽させた胚芽またはその一部におけるＬＯＸ−１活性およびＬＯＸ−２活性を決定するステップと；
（ｖｉｉ）前記発芽させた胚芽におけるＬＯＸ−１活性およびＬＯＸ−２活性を完全に喪失させた植物体を選択するステップと；
（ｖｉｉｉ）ＬＯＸ−１をコードする遺伝子における、およびＬＯＸ−２をコードする遺伝子における変異の存在または不在を決定するステップと；
（ｉｘ）ＬＯＸ−１をコードする遺伝子における、およびＬＯＸ−２をコードする遺伝子における変異を保有する植物体を選択するステップと
を含み、これらにより、機能的ＬＯＸ−１酵素の完全な喪失を結果としてもたらす第１の変異と、機能的ＬＯＸ−２酵素の完全な喪失を結果としてもたらす第２の変異とを含むオオムギ植物体を得る、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
本発明はまた、（ＬＯＸ−１活性の機能の完全な喪失を結果としてもたらす第１の変異と、ＬＯＸ−２活性の機能の完全な喪失を結果としてもたらす第２の変異とを含むことに加え）１または複数のさらなる有用な変異も含むオオムギ植物体にも関する。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
オオムギ植物体またはその一部から調製される飲料であって、前記飲料は、含むＴ２Ｎポテンシャルレベルが極めて低く、前記オオムギ植物体またはその一部が、機能的なリポキシゲナーゼ（ＬＯＸ）−１酵素の完全な喪失を結果としてもたらす第１の変異と、機能的なＬＯＸ−２酵素の完全な喪失を結果としてもたらす第２の変異とを含む飲料。
（項目２）
モルト飲料である、項目１に記載の飲料。
（項目３）
発酵モルト飲料である、項目１および２のいずれか一項に記載の飲料。
（項目４）
ビールである、項目１から３のいずれか一項に記載の飲料。
（項目５）
オオムギビールである、項目１および４のいずれか一項に記載の飲料。
（項目６）
非アルコールモルト飲料である、項目１から３のいずれか一項に記載の飲料。
（項目７）
前記飲料が、オオムギの栽培品種Ｐｏｗｅｒから同じ方法で調製した飲料のＴ２Ｎポテンシャルと比較して、５０％未満、好ましくは４０％未満、より好ましくは３５％未満のＴ２Ｎポテンシャルを含む、項目１から６のいずれか一項に記載の飲料。
（項目８）
前記飲料が、ヌルＬＯＸ−１オオムギ変異体から同じ方法で調製した飲料と比較して、７０％未満、好ましくは６０％未満のＴ２Ｎポテンシャルを含む、項目１から７のいずれか一項に記載の飲料。
（項目９）
３７℃で８週間にわたる保存後において、オオムギの栽培品種Ｐｏｗｅｒから同じ方法で調製した飲料と比較して、５０％未満、好ましくは４０％未満、より好ましくは３５％未満、なおより好ましくは３０％未満、さらにより好ましくは２５％未満の遊離Ｔ２Ｎを含む、項目１から８のいずれか一項に記載の飲料。
（項目１０）
２〜４ｐｐｍの範囲内の亜硫酸塩の存在下、３７℃で２週間にわたる保存後において、オオムギの栽培品種Ｐｏｗｅｒから同じ方法で調製した飲料と比較して、５０％未満、好ましくは４０％未満、より好ましくは３５％未満の遊離Ｔ２Ｎを含む、項目１から９のいずれか一項に記載の飲料。
（項目１１）
３７℃で８週間にわたる保存後において、ヌルＬＯＸ−１オオムギから同じ方法で調製した飲料と比較して、７０％未満、好ましくは６０％未満、なおより好ましくは５５％未満の遊離Ｔ２Ｎを含む、項目１から１０のいずれか一項に記載の飲料。
（項目１２）
３７℃で２週間にわたる保存後において、ヌルＬＯＸ−１オオムギから同じ方法で調製した飲料と比較して、８０％未満、好ましくは７５％未満の遊離Ｔ２Ｎを含む、項目１から１１のいずれか一項に記載の飲料。
（項目１３）
３７℃で２週間にわたる保存後において、熟練の試飲パネルが評価し、０を「なし」として５を「極めて強い」とする０〜５段階でスコア付けする場合の、栽培品種Ｐｏｗｅｒから同じ方法で調製した飲料の紙の風味についてのスコアより、少なくとも０．５、好ましくは少なくとも０．７、より好ましくは少なくとも１．０低い紙の風味についてのスコアを有する、項目１から１２のいずれか一項に記載の飲料。
（項目１４）
前記保存が、２〜６ｐｐｍの範囲内の亜硫酸塩の存在下で実施される、項目９から１
３のいずれか一項に記載の飲料。
（項目１５）
機能的ＬＯＸ−１酵素の完全な喪失を結果としてもたらす第１の変異と、機能的ＬＯＸ−２酵素の完全な喪失を結果としてもたらす第２の変異とを含む、オオムギ植物体またはその一部。
（項目１６）
前記植物体のＬＯＸ−１をコードする遺伝子が、未熟終止コドンを含む、項目１５に記載のオオムギ植物体またはその一部。
（項目１７）
前記植物体のＬＯＸ−１をコードする遺伝子が、開始コドンの最大で７０５コドン下流、好ましくは最大で６６５コドン下流に位置する未熟終止コドンを含む、項目１５から１６のいずれか一項に記載のオオムギ植物体またはその一部。
（項目１８）
前記植物体のＬＯＸ−１をコードする遺伝子が、ナンセンスコドンを含み、前記コドンが、ＷＯ２００５／０８７９３４の配列番号２の塩基番号３５７２〜３５７４に対応する、項目１６に記載のオオムギ植物体またはその一部。
（項目１９）
前記植物体のＬＯＸ−２をコードする遺伝子が、未熟終止コドンを含む、項目１５から１８のいずれか一項に記載のオオムギ植物体またはその一部。
（項目２０）
前記植物体のＬＯＸ−２をコードする遺伝子が、開始コドンの最大で７０７コドン下流、好ましくは最大で６８４コドン下流に位置する未熟終止コドンを含む、項目１５から１９のいずれか一項に記載のオオムギ植物体またはその一部。
（項目２１）
前記植物体のＬＯＸ−２をコードする遺伝子が、配列番号１の２６８９位のヌクレオチドにおいて変異を有し、終止コドンの形成をもたらす、項目２０に記載のオオムギ植物体またはその一部。
（項目２２）
「オオムギ（Ｈｏｒｄｅｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ  Ｌ．）：Ａ６８９系統」と称し、ＰＴＡ−９６４０の寄託番号でＡＴＣＣへと寄託された植物体と、それらの子孫植物体とからなる群から選択される、項目１５から２１のいずれか一項に記載のオオムギ植物体またはその一部。
（項目２３）
前記オオムギ植物体の前記一部が、穀粒（複数可）である、項目１５から２２のいずれか一項に記載のオオムギ植物体またはその一部。
（項目２４）
（ｉ）ＬＯＸ−１活性を完全に喪失させたオオムギ植物体またはその一部を供給するステップと；
（ｉｉ）前記オオムギ植物体、ならびに／または前記オオムギ植物体に由来するオオムギ細胞、および／もしくはオオムギ組織、および／もしくはオオムギ穀粒、および／もしくはオオムギ胚芽を変異誘発し、これにより、Ｍ０世代のオオムギを得るステップと；
（ｉｉｉ）前記変異誘発されたオオムギ植物体、オオムギ穀粒、および／またはオオムギ胚芽を、少なくとも２世代にわたり育種し、これにより、Ｍｘ（ここで、ｘは、≧２の整数である）世代のオオムギ植物体を得るステップと；
（ｉｖ）前記Ｍｘ世代のオオムギ植物体から胚芽を得るステップと；
（ｖ）前記胚芽を発芽させるステップと；
（ｖｉ）前記発芽させた胚芽またはその一部におけるＬＯＸ−１活性およびＬＯＸ−２活性を決定するステップと；
（ｖｉｉ）前記発芽させた胚芽におけるＬＯＸ−１活性およびＬＯＸ−２活性を完全に喪失させた植物体を選択するステップと；
（ｖｉｉｉ）ＬＯＸ−１をコードする遺伝子における、およびＬＯＸ−２をコードする遺伝子における変異の存在または不在を決定するステップと；
（ｉｘ）ＬＯＸ−１をコードする遺伝子における、およびＬＯＸ−２をコードする遺伝子における変異を保有する植物体を選択するステップと
を含み、これらにより、ＬＯＸ−１をコードする遺伝子における、およびＬＯＸ−２をコードする遺伝子における変異を保有し、ＬＯＸ−１活性の完全な喪失およびＬＯＸ−２活性の完全な喪失を引き起こすオオムギ植物体を得る方法により作製されるか、またはこの方法により作製される植物体の子孫である、項目１５から２３のいずれかに記載のオオムギ植物体またはその一部。
（項目２５）
項目１５から２４のいずれか一項に記載のオオムギ植物体またはその一部から調製される、項目１から１４のいずれか一項に記載の飲料。
（項目２６）
項目１５から２４のいずれかに記載のオオムギ植物体またはその一部を含む組成物。
（項目２７）
項目１５から２４のいずれかに記載のオオムギ植物体である加工オオムギ植物体またはその一部を含む、植物生成物。
（項目２８）
項目１５から２４のいずれかに記載のオオムギ植物体である加工オオムギ植物体またはその一部を含む、モルト組成物である、項目２７に記載の植物生成物。
（項目２９）
前記オオムギ植物体の前記一部が、穀粒（複数可）である、項目２８に記載のモルト組成物。
（項目３０）
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）の受託番号がＰＴＡ−５４８７であるオオムギの変異体Ｄ１１２から同じ方法で調製したモルト組成物と比較して、最大で６０％の遊離Ｔ２Ｎを含む、項目２８から２９のいずれかに記載のモルト組成物。
（項目３１）
栽培品種Ｐｏｗｅｒから同じ方法で調製したモルト組成物と比較して３０％未満、より好ましくは２０％未満、なおより好ましくは１０％未満の遊離Ｔ２Ｎを含む、項目２０から２２のいずれかに記載のモルト組成物。
（項目３２）
項目１５から２４のいずれかに記載のオオムギ植物体またはその一部を用いるか、あるいは前記オオムギ植物体もしくはその一部、またはこれらの混合物から調製されたモルト組成物を用いて調製されたウォート組成物である、項目２７に記載の植物生成物。
（項目３３）
前記植物体の前記一部が、穀粒（複数可）である、項目３２に記載のウォート組成物。
（項目３４）
前記ウォート組成物がオオムギのウォートである、項目３２および３３のいずれか一項に記載のウォート組成物。
（項目３５）
野生型オオムギから同じ方法で調製したウォート組成物と比較して、５０％未満、より好ましくは４０％未満、なおより好ましくは３０％未満の遊離Ｔ２Ｎを含む、項目３２から３４のいずれか一項に記載のウォート組成物。
（項目３６）
野生型オオムギから同じ方法で調製したウォート組成物と比較して、５０％未満、より好ましくは４０％未満、なおより好ましくは３０％未満の遊離Ｔ２Ｎを含む、項目３２から３５のいずれか一項に記載のウォート組成物。
（項目３７）
前記モルト組成物が、項目２８から３１のいずれかに記載のモルト組成物である、項目３２から３６のうちのいずれか一項に記載のウォート組成物。
（項目３８）
７０℃を超えない温度、好ましくは６９℃を超えない温度においてマッシングするステップを用いて生成させた、項目３２から３７のいずれか一項に記載のウォート組成物。
（項目３９）
マッシングするステップの間に、７０℃より高温の時間が２５分間を超えない方法により生成させた、項目３２から３８のいずれか一項に記載のウォート組成物。
（項目４０）
（ｉ）項目１５から２４のいずれかに記載のオオムギ植物体またはその一部を含む組成物と；
（ｉｉ）項目２８から３１のいずれかに記載のモルト組成物と
の混合物から調製される組成物である、項目２７に記載の植物生成物。
（項目４１）
項目４０に記載の組成物から調製したウォート組成物であるか、または飲料である、項目２７に記載の植物生成物。
（項目４２）
項目２８から３１のいずれか一項に記載のモルト組成物、または項目３２から３９のいずれか一項に記載のウォート組成物から調製される、項目１から１４のいずれかに記載の飲料。
（項目４３）
オオムギシロップ、モルトシロップ、オオムギ抽出物、およびモルト抽出物からなる群から選択される、項目２７に記載の植物生成物。
（項目４４）
Ｔ２Ｎポテンシャルレベルが極めて低い飲料を生成させる方法であって、
（ｉ）項目１５から２４のいずれかに記載のオオムギ植物体またはその一部を含む組成物を調製するステップと；
（ｉｉ）（ｉ）の組成物を飲料へと加工するステップと
を含み、これらにより、Ｔ２Ｎポテンシャルレベルが極めて低い飲料を得る方法。
（項目４５）
前記極めて低レベルのＴ２Ｎポテンシャルが、オオムギの栽培品種Ｐｏｗｅｒから同じ方法で調製した飲料のＴ２Ｎポテンシャルの最大で５０％、好ましくは最大で４０％、より好ましくは最大で３５％である、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記極めて低レベルのＴ２Ｎポテンシャルが、ヌルＬＯＸ−１オオムギ変異体から同じ方法で調製した飲料と比較して、７０％未満、好ましくは６０％未満である、項目４２または４３のいずれか一項に記載の方法。
（項目４７）
ステップ（ｉ）が、前記オオムギ植物体またはその一部の穀粒に由来するモルト組成物を調製するステップを含む、項目４４から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４８）
前記組成物を飲料へと加工するステップが、マッシングするステップを含み、これによりウォート組成物を生成させる、項目４４から４７のいずれかに記載の方法。
（項目４９）
前記組成物を飲料へと加工するステップが、マッシングするステップおよびスパージングするステップを含み、これらによりウォート組成物を生成させる、項目４４から４８のいずれかに記載の方法。
（項目５０）
前記マッシングするステップが、破砕モルトのマッシング、または破砕オオムギのマッ
シング、または破砕モルトおよび破砕オオムギの混合物のマッシングを伴う、項目４８および４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５１）
前記組成物を飲料へと加工するステップが、前記ウォートの発酵を含む、項目４８から５０のいずれかに記載の方法。
（項目５２）
遊離Ｔ２Ｎレベルが極めて低いモルト組成物を生成させる方法であって、
（ｉ）項目２３に記載の穀粒を供給するステップと；
（ｉｉ）前記穀粒をスティーピングするステップと；
（ｉｉｉ）前記スティーピングされた穀粒を、所定の条件下で発芽させるステップと；
（ｉｖ）発芽した穀粒を加熱処理するステップと
を含み、これらにより、遊離Ｔ２Ｎレベルが極めて低いモルト組成物を生成させる方法。
（項目５３）
ＡＴＣＣの受託番号がＰＴＡ−５４８７であるオオムギの変異体Ｄ１１２から同じ方法で調製したモルト組成物中における遊離Ｔ２Ｎと比較して、前記遊離Ｔ２Ｎの極めて低いレベルが、最大で５０％のＴ２Ｎである、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
機能的ＬＯＸ−１酵素の完全な喪失を結果としてもたらす第１の変異と、機能的ＬＯＸ−２酵素の完全な喪失を結果としてもたらす第２の変異とを含むオオムギ植物体を調製する方法であって、
（ｉ）機能的ＬＯＸ−１酵素を完全に喪失させたオオムギ植物体またはその一部を供給するステップと；
（ｉｉ）前記オオムギ植物体、ならびに／または前記オオムギ植物体に由来するオオムギ細胞、および／もしくはオオムギ組織、および／もしくはオオムギ穀粒、および／もしくはオオムギ胚芽を変異誘発し、これにより、Ｍ０世代のオオムギを得るステップと；
（ｉｉｉ）前記変異誘発されたオオムギ植物体、オオムギ穀粒、および／またはオオムギ胚芽を、少なくとも２世代にわたり育種し、これにより、Ｍｘ（ここで、ｘは、≧２の整数である）世代のオオムギ植物体を得るステップと；
（ｉｖ）前記Ｍｘ世代のオオムギ植物体から胚芽を得るステップと；
（ｖ）前記胚芽を発芽させるステップと；
（ｖｉ）前記発芽させた胚芽またはその一部におけるＬＯＸ−１活性およびＬＯＸ−２活性を決定するステップと；
（ｖｉｉ）前記発芽させた胚芽におけるＬＯＸ−１活性およびＬＯＸ−２活性を完全に喪失させた植物体を選択するステップと；
（ｖｉｉｉ）ＬＯＸ−１をコードする遺伝子における、およびＬＯＸ−２をコードする遺伝子における変異の存在または不在を決定するステップと；
（ｉｘ）ＬＯＸ−１をコードする遺伝子における、およびＬＯＸ−２をコードする遺伝子における変異を保有する植物体を選択するステップと
を含み、これらにより、機能的ＬＯＸ−１酵素の完全な喪失を結果としてもたらす第１の変異と、機能的ＬＯＸ−２酵素の完全な喪失を結果としてもたらす第２の変異とを含むオオムギ植物体を得る、方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2012513744000001.app