【手続補正書】
【提出日】平成24年3月30日(2012.3.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経傷害を治療する薬剤において、
臍帯組織由来細胞、
を含み、
前記臍帯組織由来細胞は、実質的に血液のないヒト臍帯組織由来であり、
前記細胞は、培養中に自己再生および増殖することができ、少なくとも神経の表現型の細胞に分化する能力を有し、
前記細胞は、ＣＤ１１７を発現しない、薬剤。
【請求項２】
請求項１に記載の薬剤において、
前記神経傷害は、脳虚血、急性虚血後の再灌流、出生時低酸素虚血性傷害、心停止、頭蓋内出血、頭蓋内病変、揺さぶられ症候群である、薬剤。
【請求項３】
請求項１に記載の薬剤において、
前記細胞は、前記神経傷害の治療を促進する遺伝子産物を産生するように、遺伝子操作される、薬剤。
【請求項４】
請求項１に記載の薬剤において、
前記細胞は、少なくとも１つの他の細胞型と共に投与される、薬剤。
【請求項５】
請求項４に記載の薬剤において、
前記他の細胞型は、星状細胞、乏突起膠細胞、ニューロン、神経前駆細胞、神経幹細胞、または他の多分化能もしくは多能性幹細胞である、薬剤。
【請求項６】
請求項１に記載の薬剤において、
前記細胞は、患者の中枢または末梢神経系の所定部位に投与される、薬剤。
【請求項７】
請求項１に記載の薬剤において、
前記臍帯組織由来細胞は、ｈＴＥＲＴまたはテロメラーゼを発現しない、薬剤。
【請求項８】
請求項１に記載の薬剤において、
前記細胞は、注射または注入により投与される、薬剤。
【請求項９】
患者の脳室下帯（ＳＶＺ）の再生能力を刺激する薬剤において、
単離臍帯組織由来細胞、
を含み
前記臍帯組織由来細胞は、実質的に血液のないヒト臍帯組織由来であり、
前記細胞は、培養中に自己再生および増殖することができ、少なくとも神経の表現型の細胞に分化する能力を有し、
前記細胞は、ＣＤ１１７を発現しない、薬剤。
【請求項１０】
請求項９に記載の薬剤において、
前記細胞は、前記脳室下帯の前記再生能力を促進する遺伝子産物を産生するように、遺伝子操作される、薬剤。
【請求項１１】
請求項９に記載の薬剤において、
前記細胞は、少なくとも１つの他の細胞型と共に投与される、薬剤。
【請求項１２】
請求項１１に記載の薬剤において、
前記他の細胞型は、星状細胞、乏突起膠細胞、ニューロン、神経前駆細胞、神経幹細胞、または他の多分化能もしくは多能性幹細胞である、薬剤。
【請求項１３】
請求項９に記載の薬剤において、
前記細胞は、前記患者の中枢または末梢神経系の所定部位で投与される、薬剤。
【請求項１４】
請求項９に記載の薬剤において、
前記細胞は、注射または注入により投与される、薬剤。
【請求項１５】
請求項９に記載の薬剤において、
前記薬剤は、神経発生、血管新生、またはシナプス形成を増大させる、薬剤。
【請求項１６】
請求項１または９に記載の薬剤において、
前記細胞は、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＰＤＧＦｒ−α、およびＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃのそれぞれを発現する、薬剤。
【請求項１７】
請求項１、９、または１６に記載の薬剤において、
前記細胞は、ＣＤ３１、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ１４１、およびＨＬＡ−ＤＲ、ＤＰ、ＤＱのいずれも発現しない、薬剤。
【請求項１８】
請求項９に記載の薬剤において、
前記細胞は、ｈＴＥＲＴまたはテロメラーゼを発現しない、薬剤。
【請求項１９】
請求項９または１８に記載の薬剤において、
前記細胞は、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＰＤＧＦｒ−α、およびＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃのそれぞれを発現する、薬剤。
【請求項２０】
請求項９、１８、または１９に記載の薬剤において、
前記細胞は、ＣＤ３１、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ１４１、およびＨＬＡ−ＤＲ、ＤＰ、ＤＱのいずれも発現しない、薬剤。
【請求項２１】
神経傷害を有する患者を治療する医薬組成物において、
前記神経傷害を治療するのに有効な量の、医薬的に許容可能な担体、および単離臍帯組織由来細胞、
を含み、
前記臍帯組織由来細胞は、実質的に血液のないヒト臍帯組織由来であり、
前記細胞は、培養中に自己再生および増殖することができ、少なくとも神経の表現型の細胞に分化する能力を有し、
前記細胞は、ＣＤ１１７を発現しない、医薬組成物。
【請求項２２】
請求項２１に記載の医薬組成物において、
前記細胞は、ｈＴＥＲＴまたはテロメラーゼを発現しない、医薬組成物。
【請求項２３】
請求項２１または２２に記載の医薬組成物において、
前記細胞は、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＰＤＧＦｒ−α、およびＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃのそれぞれを発現する、医薬組成物。
【請求項２４】
請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の医薬組成物において、
前記細胞は、ＣＤ３１、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ１４１、およびＨＬＡ−ＤＲ、ＤＰ、ＤＱのいずれも発現しない、医薬組成物。
【請求項２５】
神経傷害を有する患者を治療するキットであって、医薬的に許容可能な担体、単離臍帯組織由来細胞集団、および前記患者を治療する方法において前記キットを使用するための説明書を含む、キットにおいて、
前記臍帯組織由来細胞は、実質的に血液のないヒト臍帯組織由来であり、少なくとも神経の表現型の細胞に分化し、
前記細胞は、ＣＤ１１７を発現しない、キット。
【請求項２６】
請求項２５に記載のキットにおいて、
少なくとも１つの他の細胞型の集団、
をさらに含む、キット。
【請求項２７】
請求項２５に記載のキットにおいて、
前記細胞は、ｈＴＥＲＴまたはテロメラーゼを発現しない、キット。
【請求項２８】
請求項２５または２７に記載のキットにおいて、
前記細胞は、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＰＤＧＦｒ−α、およびＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃのそれぞれを発現する、キット。
【請求項２９】
請求項２５、２７、または２８に記載のキットにおいて、
前記細胞は、ＣＤ３１、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ１４１、およびＨＬＡ−ＤＲ、ＤＰ、ＤＱのいずれも発現しない、キット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７４】
さらに、本発明の方法に有用なＵＴＣは、遺伝子発現により特徴付けられることができ、遺伝子発現は、線維芽細胞、間葉系幹細胞、もしくは腸骨稜骨髄細胞であるヒト細胞に関し、interleukin 8; reticulon 1; chemokine (C-X-C motif) ligand 1 (melonoma growth stimulating activity, alpha); chemokine (C-X-C motif) ligand 6 (granulocyte chemotactic protein 2); chemokine (C-X-C motif) ligand 3; およびtumor necrosis factor, alpha-induced protein 3のうちの少なくとも１つをコード化する遺伝子について、増加する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７６】
さらに、本発明の方法に有用なＵＴＣは、以下のうち少なくとも１つの分泌により特徴付けられ得る：ＭＣＰ−１；ＩＬ−６；ＩＬ−８；ＧＣＰ−２；ＨＧＦ；ＫＧＦ；ＦＧＦ；ＨＢ−ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＴＰＯ；ＭＩＰ１ｂ；Ｉ３０９；ＭＤＣ；ＲＡＮＴＥＳ；ＴＭＰｌ。さらに、本発明の方法に有用なＵＴＣは、ＥＬＩＳＡにより検出されたときに、以下のうち少なくとも１つの分泌がないことにより特徴付けられ得る：ＴＧＦ−β２；ＡＮＧ２；ＰＤＧＦｂｂ；ＭＩＰ１ａ；ＶＥＧＦ。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３０】
ＣＮＳは、いくらか免疫特権の組織なので、ＵＴＣによる細胞療法を開始する前に、患者の免疫反応を抑制することが必要かまたは好ましいであろう。先に、ＵＴＣは、混合リンパ球反応において同種異系のＰＢＭＣを刺激しないことが示されている（米国特許出願第１０／８７７，２６９（現在は米国特許第７，５２４，４８９号）を参照）。したがって、同種または、さらには異種のＵＴＣによる移植は、場合によっては許容され得る。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３５０】
実施例２３
テロメラーゼ活性のアッセイ
テロメラーゼは、染色体の完全性を保護し、また細胞の複製寿命を延ばすのに役立つ、テロメア繰り返し体を合成するよう機能する（Ｌｉｕ，Ｋ，ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，１９９９；９６：５１４７−５１５２）。テロメラーゼは、２つの成分、テロメラーゼＲＮＡテンプレート（ｈＴＥＲ）、およびテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）のみからなる。テロメラーゼの調節は、ｈＴＥＲではなく、ｈＴＥＲＴの転写により決定される。ｈＴＥＲＴ  ｍＲＮＡのリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）は、ゆえに、細胞のテロメラーゼ活性を決定する、認められた方法である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３５１】
細胞単離
リアルタイムＰＣＲ実験が行われ、ヒト臍帯組織由来細胞のテロメラーゼ産生が決定された。ヒト臍帯組織由来細胞が、実施例１３〜１５、および、米国特許第７，５１０，８７３号として特許となった米国特許出願第１０／８７７，０１２号（‘０１２号出願）に記載される実施例に従って、準備された。概して、正常な運搬後にＮａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｃｈａｎｇｅ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．）から入手された臍帯が洗浄され、血液および残骸を除去し、機械的に解離される。組織は次に、コラゲナーゼ、ディスパーゼおよびヒアルロニダーゼを含む消化酵素で、培養培地において３７℃でインキュベートされる。ヒト臍帯組織由来細胞は、‘０１２号出願の実施例に記載された方法に従って培養された。間葉系幹細胞および正常な皮膚線維芽細胞（ｃｃ−２５０９  ロット＃  ９Ｆ０８４４）が、Ｃａｍｂｒｅｘ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．から入手された。多能性ヒト精巣胎児性癌（テラトーマ）細胞株ｎＴｅｒａ−２細胞（ＮＴＥＲＡ−  ２  ｃｌ．Ｄｌ）（Ｐｌａｉａ  ｅｔ  ａｌ，  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ，  ２００６；２４（３）：５３１−５４６を参照）を、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．）から購入し、‘０１２号出願に記載した方法に従って培養した。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３５３】
リアルタイムＰＣＲ
ＰＣＲが、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ａｓｓａｙｓ−Ｏｎ−Ｄｅｍａｎｄ（商標）（ＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイとしても知られる）を用いて、製造業者の仕様書（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に従って、ｃＤＮＡサンプルに対して行われた。この市販のキットは、ヒト細胞のテロメラーゼのアッセイに広く使われる。端的には、ｈＴＥＲＴ（ヒトテロメラーゼ遺伝子）（Ｈｓ００１６２６６９）およびヒトＧＡＰＤＨ（内部対照）が、ＡＢＩ  ｐｒｉｓｍ  ７０００  ＳＤＳソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）と共に７０００配列検出システムを用いて、ｃＤＮＡおよびＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲマスターミックスと混合された。熱サイクル条件は、最初は、５０℃で２分、９５℃で１０分、その後、９５℃で１５秒および６０℃で１分の４０サイクルであった。ＰＣＲデータは、製造業者の仕様書に従って分析された。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３５５】
ヒト臍帯組織由来細胞（ｉｓｏｌａｔｅ  ０２２８０３，ＡＴＣＣ受入番号ＰＴＡ−６０６７）およびｎＴｅｒａ−２細胞が、アッセイされ、結果は、ｈＵＴＣの２つのロットではテロメラーゼの発現を示さず、一方、テラトーマ細胞株は、高レベルの発現を表した（表２２−２）。
【表３０】
2012512910.tif 000001