【手続補正書】
【提出日】平成25年2月18日(2013.2.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単一の活性化可能なアクセプター部分に結合している、２つ以上の励起可能なドナー部分を含む化合物であって、前記ドナー部分はその励起エネルギーの少なくとも５０％を前記アクセプター部分に伝達し、前記アクセプター部分は、活性化されると、前記ドナー部分が励起されたときに検出可能な蛍光シグナルを生成することを特徴とする化合物。
【請求項２】
前記ドナー部分は、シアニン色素、ローダミン色素、フルオレセイン色素、アゾ色素、フルオレセイン、ウンベリフェロン、ピレン、レゾルフィン、ローダミン、ヒドロキシエステル、芳香族酸、スチリル色素、テトラメチルローダミン色素、オキサジン、チアジン、金属置換されているプタロシアニン（ｐｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ）、金属置換されているポルフィリン、多環芳香族色素、およびペリレンジイミン（perylenediimide）からなる群から選択される色素、またはであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記ドナー部分は蛍光色素であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
前記ドナー部分はシアニン色素であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
前記ドナー部分はＣｙ３であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
前記アクセプター部分は、マラカイトグリーン、インドシアニングリーン、アセチレン性マラカイトグリーン、およびジメチルインドールレッドから選択されることを特徴とする請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
前記ドナー部分は無蛍光色素であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
前記アクセプター部分はマラカイトグリーンであることを特徴とする請求項１〜５、および７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
５０ｋＤａ（キロダルトン）未満の平均分子量を有することを特徴とする請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
１０ｋＤａ未満の平均分子量を有することを特徴とする請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
前記アクセプター部分は、トリアリールメチン（triarylmethine）色素、ジアリールメチン（diarylmethine）色素、およびモノメチン（monomethine）色素からなる群から選択されることを特徴とする請求項１〜５、および７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
リンカーはデンドロンであることを特徴とする請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
デンドリマーまたはデンドロンはＰＡＭＡＭ、ＰＥＩ、またはＰＰＩデンドロンであることを特徴とする請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
請求項１に記載の化合物であって、蛍光ドナー部分は１つまたは複数のドナー部分および１つまたは複数のメディエータであり、前記ドナー部分のスペクトルは前記メディエータのスペクトルと重複し、前記メディエータのスペクトルは前記ドナー部分および前記アクセプター部分両方のスペクトルと重複することを特徴とする化合物。
【請求項１５】
請求項１〜５、７、９、１０、および１２〜１４のいずれか一項に記載の化合物であって、前記アクセプター部分は、
【化１】
2012518072.tif 000001
［式中、
Ｒ１〜Ｒ４は、−Ｈ、−ＣＨ3、（ＣＨ2）n−Ｔ、および置換されているアリールであり、
Ｒ５は、
【化２】
2012518072.tif 000002
［式中、
Ｒ１〜Ｒ５に対してｎ＝０〜６であり、
Ｔは、−Ｈ、−ＯＨ、ＣＯＯ−、ＳＯ3-、−ＰＯ4-、アミド、ハロゲン、置換されている単一もしくは複数個のアリール、エーテル、ポリエーテル、ＰＥＧ1~30、Ｎ、Ｓ、もしくはＯ原子を含んでいる複素環、置換されているアセチレン基、シアノ、および炭水化物基から選択され、任意選択によりダイドロンに結合するためのリンカーを含んでいる］
から選択される置換されているアリールである］
であることを特徴とする化合物。
【請求項１６】
請求項１〜５、７、９、１０、および１２〜１４のいずれか一項に記載の化合物であって、前記アクセプター部分は、
【化３】
2012518072.tif 000003
［式中、
Ｒ１は、芳香族、ヘテロ芳香族、ヒドロキシル、アミノ、Ｎ−アルキル、Ｎ−アルカノリル（ａｌｋａｎｏｌｙｌ）（アルコール、例えば、ｎ−ヒドロキシエチル）であり、
Ｒ２は、Ｈ、シアノ、芳香族、ヘテロ芳香族、アセチレン性、アルキルであり、
Ｘは、Ｎ、Ｏ、またはＳであり、
Ｒ３およびＲ４は非存在である、またはアルキル、アリール、もしくはヒドロキシエチルである］
であることを特徴とする化合物。
【請求項１７】
請求項１６に記載の化合物であって、
Ｒ１はジ−Ｃ1~3アルキルアミノであり、
Ｒ２は置換されているフェニルアセチレン、フェニル、−Ｎ−アルキル置換フェニル、−（ＣＨ2）nＲ５置換されているフェニルであり、
ｎは、１〜５であり、
Ｒ５はカルボキシルまたはアミノであり、
ＸはＮであり、
Ｒ３およびＲ４は独立に、Ｃ1~3アルキル、アルコキシル、アルカノイル、フェニル、Ｃ1~3アルキル置換フェニルであることを特徴とする化合物。
【請求項１８】
請求項１７に記載の化合物であって、
Ｒ２は、−Ｎ−（ＣＨ3）2−、−Ｎ−（ＣＨ3）（（ＣＨ2）nＯ（ＣＨ2）mＣＯＯＨ）である
［式中、ｎおよびｍは、独立に、１、２、３、または４である］
ことを特徴とする化合物。
【請求項１９】
請求項１７に記載の化合物であって、
Ｒ１は−Ｎ−（ＣＨ3）2であり、
Ｒ２は−Ｏ（ＣＨ2）3Ｒ５−置換されているフェニル、および
【化４】
2012518072.tif 000004
の１つである、または
Ｒ３およびＲ４はＣＨ3であることを特徴とする化合物。
【請求項２０】
前記アクセプター部分は、
【化５】
2012518072.tif 000005
の１つまたは複数であることを特徴とする請求項１〜５、７、９、１０、および１２〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
【化６】
2012518072.tif 000006
から選択される構造を有することを特徴とする請求項１〜５、７、９、１０、および１２〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
アクチベーターが化合物に結合しているときにドナー部分が励起されると前記化合物の蛍光の増大を引き起こすアクチベーターに結合している請求項１〜２１のいずれか一項に記載の化合物を含むことを特徴とする複合体。
【請求項２３】
前記蛍光の増大が少なくとも１００倍であることを特徴とする請求項２２に記載の複合体。
【請求項２４】
前記蛍光の増大が少なくとも１０００倍であることを特徴とする請求項２２に記載の複合体。
【請求項２５】
前記アクチベーターは選択性成分に付着していることを特徴とする請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の複合体。
【請求項２６】
前記選択性成分は、前記アクチベーターおよび前記選択性成分を含む融合タンパク質であることを特徴とする請求項２５に記載の複合体。
【請求項２７】
前記選択性成分は前記アクチベーターに架橋結合していることを特徴とする請求項２６に記載の複合体。
【請求項２８】
前記アクチベーターはｓｃＦｖフラグメントであることを特徴とする請求項２２に記載の複合体。
【請求項２９】
前記アクチベーターは配列番号３〜１１の１つであることを特徴とする請求項２２に記載の複合体。
【請求項３０】
前記ドナーはＣｙ３であり、前記デンドロンはＰＡＭＡＭデンドロンであり、前記アクセプターはマラカイトグリーンであることを特徴とする請求項２９に記載の複合体。
【請求項３１】
前記化合物はＢＣＭまたはＴＣＭであることを特徴とする請求項２９に記載の複合体。
【請求項３２】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載の化合物を、前記化合物のアクチベーターに結合している選択性成分を含む融合タンパク質と接触させてダイドロン複合体を生成するステップと、細胞中の前記ダイドロン複合体を検出するステップとを含むことを特徴とする細胞中の細胞成分を同定する方法。
【請求項３３】
前記選択性成分および前記アクチベーターは近接するポリペプチド上にあることを特徴とする請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記アクチベーターはｓｃＦｖフラグメントであることを特徴とする請求項３２または３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
前記融合タンパク質は、前記細胞中に導入された遺伝子によって生成されることを特徴とする請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記アクセプターはマラカイトグリーンであることを特徴とする請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
前記アクチベーターは、配列番号３〜９の１つまたは複数を含むポリペプチドであることを特徴とする請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記化合物はＴＣＭまたはＢＣＭであることを特徴とする請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記化合物はＴＣＭおよびＢＣＭの一方であることを特徴とする請求項３２に記載の方法。
【請求項４０】
前記ドナーはＣｙ３であることを特徴とする請求項３２に記載の方法。
【請求項４１】
前記ダイドロン複合体は蛍光画像化によって検出されることを特徴とする請求項３２に記載の方法。
【請求項４２】
ＱＡＶＶＴＱＥＰＳＶＴＶＳＰＧＧＴＶＩＬＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＨＹＡＮＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＡＬＩＦＤＴＤＫＫＹＰＷＴＰＧＲＦＳＧＳＬＬＧＶＫＡＡＬＴＩＳＤＡＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＬＬＳＤＶＤＧＹＬＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬＳ（配列番号４、塩基６−１１５）；
ＱＡＶＶＴＱＥＰＳＶＴＶＳＰＧＧＴＶＩＬＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴＳＧＨＹＡＮＷＦＱＱＫＰＱＡＰＲＡＬＩＦＥＴＤＫＫＹＰＷＴＰＧＲＦＳＧＳＬＬＧＶＫＡＡＬＴＩＳＤＡＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＳＬＳＤＶＤＧＹＬＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬＳ（配列番号５、塩基６−１１５）；および
ＱＡＶＶＴＱＥＰＳＶＴＶＳＰＧＧＴＶＩＬＴＣＧＳＧＴＧＡＶＴＳＧＨＹＡＮＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＡＬＩＦＤＴＤＫＫＹＰＷＴＰＧＲＦＳＧＳＬＬＧＶＫＡＡＬＴＩＳＤＡＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＳＬＳＤＶＤＧＹＬＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬＳ（配列番号６、塩基６−１１５）
から選択される配列を含むことを特徴とするポリペプチド。
【請求項４３】
選択性成分のアミノ酸配列をさらに含むことを特徴とする請求項４２に記載のポリペプチド。
【請求項４４】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載の化合物を、前記化合物のアクチベーターと接触させるステップと、前記ドナー部分を励起するステップとを含むことを特徴とする蛍光シグナルを生成する方法。