【誤訳訂正書】
【提出日】平成25年1月10日(2013.1.10)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
適応性のある骨移植片組成物であって、
（ａ）１〜９０重量パーセントのケラトースと、
（ｂ）１〜９０重量パーセントの粒子状充填剤と、
（ｃ）０．００１〜５重量パーセントの抗生物質と
（ｄ）残余の水と
を含み、３７℃の温度で少なくとも３センチポアズの粘度を有する骨移植片組成物。
【請求項２】
前記ケラトースが、アルファケラトース、ガンマケラトースまたはそれらの混合物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ケラトースが、アルファケラトースとガンマケラトースとの混合物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ケラトースが、１０〜９０重量パーセントのアルファケラトースと、９０〜１０重量パーセントのガンマケラトースとを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ケラトースが、架橋されたケラトースである、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記架橋されたケラトースが、カルシウムイニシエーターの存在下で、前記ケラトースとトランスグルタミナーゼとを組み合わせる方法により製造される、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
０．００１〜５重量パーセントの骨形態形成タンパク質をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記粒子状充填剤が骨伝導性である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
粒子状充填剤が、リン酸四カルシウム、リン酸三カルシウム、リン酸アルカリカルシウムセラミック、バイオガラス、炭酸カルシウム、水酸化カルシウム、酸化カルシウム、フッ化カルシウム、硫酸カルシウム、水酸化マグネシウム、ヒドロキシアパタイト、カルシウムリンアパタイト、酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム、フッ化マグネシウム、コラーゲン、その他の吸収性生体適合材料、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記生体適合の粒子状充填剤が、ヒドロキシアパタイト、リン酸三カルシウムまたはそれらの混合物を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記抗生物質が、セファゾリン、バンコマイシン、ゲンタマイシン、エリスロマイシン、バシトラシン、ネオマイシン、ペニシリン、ポリマイシンＢ、テトラサイクリン、バイオマイシン、クロロマイセチン、ストレプトマイシン、アンピシリン、アザクタム、トブラマイシン、クリンダマイシン、ゲンタマイシンおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物が無菌である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
滅菌容器で包装されている、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
水または生理食塩水を用いて再構成すると請求項１の組成物を生成する、凍結乾燥された組成物。
【請求項１５】
骨折治療のために、骨折と接触させて使用される、請求項１〜１４のいずれかに記載の組成物。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００２】
［発明の分野］
本発明は、バイオセラミック骨移植片組成物およびその使用法に関する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
抗生物質含浸ポリ（メチルメタクリレート）（ＰＭＭＡ）ビーズも広く使用されるようになってきたが（Ｈｅｎｒｙ ＳＬ ｅｔ ａｌ．，Ｏｒｔｈｏ Ｒｅｖ １９９１；２０（３）：２４２−７；Ｐｏｐｈａｍ ＧＪ ｅｔ ａｌ．，Ｏｒｔｈｏ Ｒｅｖ １９９１；２０（４）：３３１−７；Ｋｌｅｍｍ ＫＷ． Ｃｌｉｎ Ｏｒｔｈｏ Ｒｅｌ Ｒｅｓ １９９３；２９５：６３−７６）、感染した偽関節または骨欠損の場合、この技術は典型的には二段階手術の中で用いられる。これらの場合、欠損部位または偽関節部位を必要に応じて創面切除し、欠損部位の中に抗生物質含浸ＰＭＭＡビーズを置くことにより感染を処置する。第二段階で、約６週間後に該ビーズを除去し、移植片を用いて骨欠損を修復する。該移植片はそれぞれ、ＣＯＬＬＡＧＲＡＦＴ（登録商標）骨移植片マトリックス、脱灰骨マトリックスまたは腸骨稜からの骨などの、動物由来、同種異型または自家のものであり得る。この二段階方法論も広く採用されている（Ｕｅｎｇ ＳＷＮ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｔｒａｕｍａ １９９６；４０（３）：３４５−５０；Ｕｅｎｇ ＳＷＮ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｔｒａｕｍａ １９９７；４３（２）：２６８−７４；Ｃｈｅｎ ＣＹ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｔｒａｕｍａ １９９７；４３（５）：７９３−８；Ｓｗｉｏｎｔｋｏｗｓｋｉ ＭＦ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｏｎｅ Ｊｏｉｎｔ Ｓｕｒｇ Ｂｒ １９９９；８１（Ｂ６）：１０４６−５０）。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００５】
技術の当然の進歩によって、二段階法の後に、間もなく一段階手法が続いた。この技術では、治療介入を一回の外科手術に限定するために、抗生物質を骨移植片材料と組み合わせる。理想的には、内在する抗生物質が感染の予防措置用に局所送達され、一方、移植片が新しい骨の成長ための環境を提供する。この方法論も広く採用されており、ヒトの自家移植片およびウシの移植片の両方ならびに合成移植片を用いて使用されている（Ｃｈａｎ ＹＳ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｔｒａｕｍａ １９９８；４５（４）：７５８−６４；Ｃｈａｎ ＹＳ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｔｒａｕｍａ：Ｉｎｊ Ｉｎｆ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ ２０００；４８（２）：２４６−５５；Ｗｉｎｋｌｅｒ Ｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｈｅｍｏ ２０００；４６：４２３−８；Ｓａｓａｋｉ Ｓ ａｎｄ Ｉｓｈｉｉ Ｙ．，Ｊ Ｏｒｔｈｏ Ｓｃｉ １９９９；４：３６１−９；ＭｃＫｅｅ ＭＤ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｏｒｔｈｏ Ｔｒａｕｍａ ２００２；１６（９）：６２２−７）。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００７】
移植片材料に抗生物質を含浸させるときに、同様の制限が存在する。典型的なグ移植片材料は、とりわけ、ドナー骨、脱灰された骨マトリックスまたは合成セラミック代替物（例えばヒドロキシアパタイト）である。これらのバイオマテリアルは、抗生物質と相容性でないことが多く、得られる複合材料は均質ではない。ＰＭＭＡまたは移植片材料への含浸法を採用しても、これらの方法は、臨床的にある程度効果的ではあるが、放出制御されたシステムではなく、抗生物質の治療的投薬のために決して最適化されたものではない。上記バイオマテリアルは骨伝導性であり、自家骨の場合には確かに骨誘導性であるが、自家骨を用いるいかなるアプローチでも、患者は別の創傷を受けやすい。これは患者に対するリスクを増大させて、ドナー部位を病的状態にする可能性があり、そのため当初の問題を複雑化することになる（Ｓｉｌｂｅｒ，ＪＳ ｅｔ ａｌ．，Ｓｐｉｎｅ ２００３；２８（２）：１３４−９）。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００９】
骨移植片代替物に関する最近の総説（Ｌｕｄｗｉｇ，ＳＣ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｓｐｉｎｅ Ｊ ２０００；９（Ｓ１）：Ｓ１１９−２５）は、理想的な生成物の最も重要な三つの要素を以下のように列記した。
１．血管浸入、細胞浸潤および新しい骨形成に対して伝導性のスキャフォールドを提供するという点で骨伝導性であること；
２．骨誘導性であること（即ち、前駆細胞から骨芽細胞への増殖因子媒介性分化が可能である）；および
３．新しい骨マトリックスを形成する細胞を送達することができること。
いかなる効果的な再生スキームであっても、機能的な骨を再現するためには、これらのパラメーターの３つをすべて最適化する努力をしなければならない。したがって、骨移植片材料として有用な新しい組成物には絶え間ない需要がある。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１０】
本発明の第一態様は、
（ａ）１〜９０重量パーセントのケラトースと、
（ｂ）１〜９０重量パーセントの粒子状充填剤（例えば骨伝導性充填剤）と、
（ｃ）０．００１〜５重量パーセントの抗生物質と、
（ｄ）残余の水と
を含み、またはこれらからなり、または本質的にこれらからなる適応性のある骨移植片組成物であって、３７℃の温度で少なくとも３センチポアズの粘度を有する。ある実施形態では、ケラトースがアルファケラトース、ガンマケラトースまたはそれらの混合物である。ある実施形態では、ケラトースがアルファケラトースおよびガンマケラトースの混合物である。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２２】
特定の実施形態では、本発明の組成物は、練り歯磨きまたは塑像用粘土に似た粘稠度を有する。さらに、代表的な実施形態では、組成物の粘性は流動的且つ適応性があり、支持構造体がなくても形態または形状を保持することができる。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２８】
使用に際しては、必要に応じて組成物を再水和することもでき、該組成物を処置有効量で骨折に接触させることによって、公知技術に従い被験体の骨折を処置する（例えば、骨欠損を充填する）ために使用することができる。骨折は、いかなる骨の骨折でもよく、篩骨、前頭骨、鼻骨、後頭骨、頭頂骨、側頭骨、下顎骨、上顎骨、頬骨、頚椎、胸椎、腰椎、仙骨、肋骨、胸骨、鎖骨、肩甲骨、上腕骨、橈骨、尺骨、手根骨、中手骨、指骨、腸骨、坐骨、恥骨、大腿骨、脛骨、腓骨、膝蓋骨、踵骨、足根骨、または中足骨などの骨折を含むがこれらに限定されない。実際、Ｂｏｙｃｅ ｅｔ ａｌ．による米国特許第６，８６３，６９４号に記載されているように、組成物は、骨移植片または骨形成性インプラントが使用される、適切ないかなる目的にも使用することができる。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
この研究では、骨伝導性、骨誘導性および抗生物質の放出制御をもたらすケラチンバイオセラミック抗生物質パテ（ＫＢＡＰ）を試験する。該パテは、セラミック充填剤および抗生物質を備えるケラチンヒドロゲルで構成されている。ＫＢＡＰは適応性があり、更に調製を行わなくても形をつくることができ、骨欠損部位に押し入れることができる。これにより、一段階手術プロトコールでの骨再生のために即時的で予防的な抗生物質の放出ならびに骨伝導性および骨誘導性環境が与えられる。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３２】
ケラチンタンパク質は、適切に処理された場合、分子が自己集合するという固有の能力を有する。これは、ケラチンタンパク質が本来の三次構造に対する何らかの類似体を再構築するプロセスである（Ｓａｕｋ ＪＪ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ １９８４；９９：１５９０−７；Ｔｈｏｍａｓ Ｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｍａｃｒｏｍｏｌ １９８６；８：２５８−６４；ｖａｎ ｄｅ Ｌｏｅｃｈｔ Ｍ．Ｍｅｌｌｉａｎｄ Ｔｅｘｔｉｌｂｅｒｉｃｈｔｅ １９８７；１０：７８０−６）。これは、２つの理由により骨移植片代替物にとって特に有用な特性である。第一の理由は、自己集合する結果、再現可能な構築、次元性および間隙率を有する高度に規則的な構造になることである。第二の理由は、温和な条件下でこれらの構築物が自発的に形成されることにより、マトリックスの形成につれて細胞が取り込まれることが可能になっていることである。これらの２つの特徴は、天然のＥＣＭを模倣しようとするいかなる系においても極めて重要である。図１に示すケラチンスキャフォールドは、ヒドロゲルの自発的な自己集合によって作られたものであり、細胞浸潤および組織再生に関して伝導性のある構築物のタイプを示している。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３７】
上記の議論は、ＫＢＡＰが従来の骨移植片代替物に優る複数の重要な利点を示し、優れた製品の開発という目的を達成するために本発明者らが専門知識を活用する方向性を示す。抗生物質充填剤を備えるケラチンバイオマテリアルは、抗生物質の持続放出を実現し、以下の理由から、この目的を達成する潜在力を有する。
ケラチンバイオマテリアルは、容易に得られ、加工される。
ケラチンは、高度に生体適合性である。
ケラチンは、細胞の付着および増殖に対して伝導性の構築物へと自己集合する。
ケラチンは、細胞認識部位を含み、効果的なＥＣＭ代替物である。
ケラチンは、抗生物質などの薬剤化合物の封入材またはコンジュゲートとして働き、該薬剤化合物の放出動態を制御することができる。
ケラチンバイオマテリアルは、細胞の増殖および分化を調節し、したがって骨誘導性を付与する潜在力を有するＢＭＰなどの増殖因子を含む。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３８】
［結果］
１．抗生物質マイクロカプセルを取り込み得る、鉱物成分を有するケラチンマトリックスを使用する骨移植片パテの調製
毛髪繊維からケラチンを抽出する方法が多数公開されている。一般に、弾力性の毛髪繊維構造を化学的に分解し、目的の皮質ケラチンタンパク質に水溶性を付与するために、１）酸化、２）還元、および３）亜硫酸分解の３つの方法が用いられる（例えば、Ｃｒｅｗｔｈｅｒ ＷＧ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９６５）．Ａｎｆｉｎｓｅｎ ＣＢ Ｊｒ．，Ａｎｓｏｎ ＭＬ，Ｅｄｓａｌｌ ＪＴ，ａｎｄ Ｒｉｃｈａｒｄｓ ＦＭ（編者）．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：１９１−３４６；Ｇｏｄｄａｒｄ ＤＲ ａｎｄ Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ Ｌ．，Ｊ Ｂｉｏ Ｃｈｅｍ １９３４；１０６：６０５−１４；Ｋｅｌｌｅｙ ＲＪ ｅｔ ａｌ．，ＰＣＴ国際公開公報第０３／０１１８９４号；Ｚａｃｋｒｏｆｆ ＲＶ ａｎｄ Ｇｏｌｄｍａｎ ＲＤ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １９７９；７６（１２）：６２２６−３０を参照のこと）。効率的な抽出は、第一に、これらの３つの方法のうちの１つを使用してジスルフィド結合を切断すること、第二に遊離タンパク質を穏やかに変性させて、その分解に影響を与えることに依存する。この第二のステップの重要性は、競争反応であるケラチン主鎖中のペプチド結合の加水分解があるため、強調しすぎることはない。タンパク質主鎖の加水分解は、ケラチンの有用な特性の多くを損なうため、避けなければならない。本発明者らは、骨欠損を修復するために用いることができる適応性のあるパテを製造することを目的として、以下に詳細に記載するように、これら３つの方法をすべて評価した。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５６】
４．結論
本発明者らは、ケラチンバイオセラミック抗生物質パテまたはＫＢＡＰと称される骨移植片代替物製剤における適格性について、３つの型のケラチンバイオマテリアルを評価した。タンパク質が所望の粘弾特性を有するように、ヒト毛髪繊維からケラチンを抽出するための低加水分解法が開発された。本発明者らは、高分子量ケラチンが得られる場合、該高分子量ケラチンは細胞浸潤および増殖に対して伝導性である繊維性微小構築物へと自己集合できることを発見した。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５７】
本発明者らは、この自己集合したヒドロゲルの物理的特性を架橋するストラテジーによって更に改善した。本発明者らは、このケラチンに基づくヒドロゲルから、抗生物質を放出することができる薬物送達システムを含む適応性のあるＫＢＡＰのプロトタイプ製剤を開発した。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５８】
ＫＢＡＰのプロトタイプ製剤は、黄色ブドウ球菌を使用するインビトロモデルでの抗生物質の放出について試験され、この細菌種を効果的に殺菌することが示された。本発明者らは、インビトロでの放出動態を決定することにより、抗生物質の放出を更に特徴づけた。複数の異なるＫＢＡＰ製剤の生体適合性は、ウシ骨芽細胞を用いるインビトロで実証され、ヒト毛髪ケラチンの骨誘導性は、細胞遊走アッセイを使用して明らかにされた。これらのデータは、ケラチンバイオマテリアルから抗生物質を放出する適応性のある骨移植片代替物の製剤化が実現可能であることを示す。