【手続補正書】
【提出日】平成25年3月15日(2013.3.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リソソーム酵素；および
ＩＧＦ−ＩＩムテインであって、該ＩＧＦ−ＩＩムテインは：
変異が少なくとも１つのフューリンプロテアーゼ切断部位を無効にするように、配列番号１のアミノ酸３０〜４０に対応する領域内に変異を含む、成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号１）と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を有し、かつ、
インスリンレセプターに対する天然に存在するヒトＩＧＦ−ＩＩの親和性と比べて該インスリンレセプターに対して低い結合親和性を有し、
ここで、該変異は、配列番号１のアミノ酸３０〜４０の欠失または配列番号１のＡｒｇ３７に対応する位置におけるＡｌａへの置換からなる、
ＩＧＦ−ＩＩムテイン；
を含む、標的化された治療用融合タンパク質であって、
ここで、該ＩＧＦ−ＩＩムテインは、フューリンの切断に対して抵抗性であり、かつ、マンノース−６−リン酸非依存的様式でヒトカチオン非依存性マンノース−６−リン酸レセプターに結合する、標的化された治療用融合タンパク質。
【請求項２】
前記ＩＧＦ−ＩＩムテインが、配列番号１のアミノ酸３０〜４０の欠失を含む、請求項１に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
【請求項３】
前記ＩＧＦ−ＩＩムテインが、配列番号１のＡｒｇ３７に対応する位置におけるＡｌａへの置換を含む、請求項１に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
【請求項４】
前記ＩＧＦ−ＩＩムテインが、
（ａ）配列番号１の２〜７位に対応するアミノ酸の欠失または置き換え；および／または
（ｂ）配列番号１の１〜７位に対応するアミノ酸の欠失または置き換え；および／または
（ｃ）配列番号１の６２〜６７位に対応するアミノ酸の欠失または置き換え；および／または
（ｄ）配列番号１のＴｙｒ２７、Ｌｅｕ４３またはＳｅｒ２６に対応する位置におけるアミノ酸の置換であって、必要に応じて、Ｔｙｒ２７Ｌｅｕ、Ｌｅｕ４３Ｖａｌ、Ｓｅｒ２６Ｐｈｅおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される、アミノ酸の置換；および／または
（ｅ）配列番号１の４８〜５５位に対応するアミノ酸；および／または
（ｆ）配列番号１の８、４８、４９、５０、５４および５５位に対応するアミノ酸からなる群から選択される少なくとも３つのアミノ酸；および／または
（ｇ）配列番号１の５４および５５位に対応する位置において、各々がｐＨ７．４において無電荷であるかまたは負に帯電しているアミノ酸；
をさらに含む、請求項１に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
【請求項５】
前記ＩＧＦ−ＩＩムテインが、ＩＧＦ−Ｉレセプターに対する天然に存在するヒトＩＧＦ−ＩＩの親和性と比べて該ＩＧＦ−Ｉレセプターに対して低い結合親和性を有する、請求項１に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
【請求項６】
前記リソソーム酵素が、ヒト酸性アルファ−グルコシダーゼ（ＧＡＡ）またはその機能的バリアントである、請求項１記載の標的化された治療用融合タンパク質。
【請求項７】
前記リソソーム酵素が、ヒトＧＡＡのアミノ酸７０〜９５２を含む、請求項６に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
【請求項８】
前記標的化された治療用融合タンパク質が、前記リソソーム酵素と前記ＩＧＦ−ＩＩムテインとの間にスペーサーをさらに含む、請求項１に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
【請求項９】
前記スペーサーが、アミノ酸配列Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏを含む、請求項８に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
【請求項１０】
前記リソソーム酵素が、以下：
酸性−α１，４−グルコシダーゼ；β−ガラクトシダーゼ；β−ヘキソサミニダーゼＡ；β−ヘキソサミニダーゼＢ；α−ガラクトシダーゼＡ；グルコセレブロシダーゼ；アリールスルファターゼＡ；ガラクトシルセラミダーゼ；酸性スフィンゴミエリナーゼ；酸性セラミダーゼ；酸性リパーゼ；α−Ｌ−イズロニダーゼ；イズロン酸スルファターゼ；ヘパランＮ−スルファターゼ；α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ；アセチル−ＣｏＡ−グルコサミニドアセチルトランスフェラーゼ；Ｎ−アセチルグルコサミン−６−スルファターゼ；ガラクトサミン−６−スルファターゼ；β−ガラクトシダーゼ；アリールスルファターゼＢ；β−グルクロニダーゼ；α−マンノシダーゼ；β−マンノシダーゼ；α−Ｌ−フコシダーゼ；Ｎ−アスパルチル−β−グルコサミニダーゼ；α−ノイラミニダーゼ；リソソームの保護タンパク質；α−Ｎ−アセチル−ガラクトサミニダーゼ；Ｎ−アセチルグルコサミン−１−ホスホトランスフェラーゼ；およびパルミトイル−タンパク質チオエステラーゼ
からなる群より選択される、請求項１に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
【請求項１１】
前記リソソーム酵素が、酸性リパーゼである、請求項１０に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
【請求項１２】
前記リソソーム酵素が、α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼである、請求項１０に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
【請求項１３】
請求項１に記載の標的化された治療用融合タンパク質をコードする核酸。
【請求項１４】
請求項１３に記載の核酸を含む細胞。
【請求項１５】
請求項１に記載の標的化された治療用融合タンパク質を含む、リソソーム蓄積症の処置に適した薬学的組成物。
【請求項１６】
標的化された治療用融合タンパク質を生成する方法であって：
細胞培養培地中で哺乳動物細胞を培養する工程
を包含し、ここで、
該哺乳動物細胞は、請求項１３に記載の核酸を保有し；そして
該培養する工程は、該標的化された治療用融合タンパク質の発現を可能にする条件下で行われる、方法。
【請求項１７】
標的化された治療用融合タンパク質を生成する方法であって：
細胞培養培地中でフューリン欠損細胞を培養する工程
を包含し、ここで、
該フューリン欠損細胞は、リソソーム酵素、および成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号１）と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を有するＩＧＦ−ＩＩムテインを含む融合タンパク質をコードする核酸を保有し、ここで、該ＩＧＦ−ＩＩムテインは、マンノース−６−リン酸非依存的様式でヒトカチオン非依存性マンノース−６−リン酸レセプターに結合し；そして
ここで、該培養する工程は、該標的化された治療用融合タンパク質の発現を可能にする条件下で行われる、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
本発明の他の特徴、目的および利点は、以下の詳細な説明において明らかになる。しかしながら、詳細な説明は、本発明の実施形態を示すが、単に例示の目的で与えられるものであり、限定を目的としないことが理解されるべきである。本発明の範囲内での様々な変更および改変は、詳細な説明から当業者に明らかになるだろう。
したがって、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
リソソーム酵素；および
成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号１）と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を有するＩＧＦ−ＩＩムテインであって、ここで、該ＩＧＦ−ＩＩムテインは、フューリンの切断に対して抵抗性であり、かつ、マンノース−６−リン酸非依存的様式でヒトカチオン非依存性マンノース−６−リン酸レセプターに結合する、ＩＧＦ−ＩＩムテイン
を含む、標的化された治療用融合タンパク質。
（項目２）
リソソーム酵素；および
成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号１）と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を有し、かつ、インスリンレセプターに対する天然に存在するヒトＩＧＦ−ＩＩの親和性と比べて該インスリンレセプターに対して低い結合親和性を有する、ＩＧＦ−ＩＩムテイン；
を含む、標的化された治療用融合タンパク質であって、
ここで、該ＩＧＦ−ＩＩムテインは、マンノース−６−リン酸非依存的様式でヒトカチオン非依存性マンノース−６−リン酸レセプターに結合する、標的化された治療用融合タンパク質。
（項目３）
リソソーム酵素；および
成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号１）と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を有し、かつ、インスリンレセプターに対する天然に存在するヒトＩＧＦ−ＩＩの親和性と比べて該インスリンレセプターに対して低い結合親和性を有する、ＩＧＦ−ＩＩムテイン；
を含む、標的化された治療用融合タンパク質であって、
ここで、該ＩＧＦ−ＩＩムテインは、フューリンの切断に対して抵抗性であり、かつ、マンノース−６−リン酸非依存的様式でヒトカチオン非依存性マンノース−６−リン酸レセプターに結合する、標的化された治療用融合タンパク質。
（項目４）
上記ＩＧＦ−ＩＩムテインが、配列番号１のアミノ酸３０〜４０に対応する領域内に変異を含む、項目１〜３のいずれか１項に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目５）
変異が少なくとも１つのフューリンプロテアーゼ切断部位を無効にするように、上記ＩＧＦ−ＩＩムテインが、配列番号１のアミノ酸３４〜４０に対応する領域内に該変異を含む、前述の項目のいずれか１項に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目６）
上記変異が、アミノ酸の置換、欠失および／または挿入である、項目４または５に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目７）
上記変異が、配列番号１のＡｒｇ３７またはＡｒｇ４０に対応する位置におけるアミノ酸の置換である、項目６に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目８）
上記アミノ酸の置換が、ＬｙｓまたはＡｌａへの置換である、項目７に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目９）
上記変異が、配列番号１の３１〜４０、３２〜４０、３３〜４０、３４〜４０、３０〜３９、３１〜３９、３２〜３９、３４〜３７、３２〜３９、３３〜３９、３４〜３９、３５〜３９、３６〜３９、３７〜４０、３４〜４０およびそれらの組み合わせからなる群から選択される位置に対応するアミノ酸残基の欠失または置き換えである、項目６に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目１０）
上記ＩＧＦ−ＩＩムテインが、配列番号１の２〜７位に対応するアミノ酸の欠失または置き換えをさらに含む、前述の項目のいずれか１項に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目１１）
上記ＩＧＦ−ＩＩムテインが、配列番号１の１〜７位に対応するアミノ酸の欠失または置き換えをさらに含む、項目１〜１０のいずれか１項に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目１２）
上記ＩＧＦ−ＩＩムテインが、配列番号１の６２〜６７位に対応するアミノ酸の欠失または置き換えをさらに含む、前述の項目のいずれか１項に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目１３）
上記ＩＧＦ−ＩＩムテインが、配列番号１のＴｙｒ２７、Ｌｅｕ４３またはＳｅｒ２６に対応する位置におけるアミノ酸の置換をさらに含む、前述の項目のいずれか１項に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目１４）
上記ＩＧＦ−ＩＩムテインが、Ｔｙｒ２７Ｌｅｕ、Ｌｅｕ４３Ｖａｌ、Ｓｅｒ２６Ｐｈｅおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸の置換を含む、項目１３に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目１５）
上記ＩＧＦ−ＩＩムテインが、配列番号１の４８〜５５位に対応するアミノ酸を含む、前述の項目のいずれか１項に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目１６）
上記ＩＧＦ−ＩＩムテインが、配列番号１の８、４８、４９、５０、５４および５５位に対応するアミノ酸からなる群から選択される少なくとも３つのアミノ酸を含む、前述の項目のいずれか１項に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目１７）
上記ＩＧＦ−ＩＩムテインが、配列番号１の５４および５５位に対応する位置において、各々がｐＨ７．４において無電荷であるかまたは負に帯電しているアミノ酸を含む、前述の項目のいずれか１項に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目１８）
上記ＩＧＦ−ＩＩムテインが、ＩＧＦ−Ｉレセプターに対する天然に存在するヒトＩＧＦ−ＩＩの親和性と比べて該ＩＧＦ−Ｉレセプターに対して低い結合親和性を有する、前述の項目のいずれか１項に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目１９）
上記リソソーム酵素が、ヒト酸性アルファ−グルコシダーゼ（ＧＡＡ）またはその機能的バリアントである、前述の項目のいずれか１項に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目２０）
上記リソソーム酵素が、ヒトＧＡＡのアミノ酸７０〜９５２を含む、項目１８に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目２１）
上記標的化された治療用融合タンパク質が、上記リソソーム酵素と上記ＩＧＦ−ＩＩムテインとの間にスペーサーをさらに含む、前述の項目のいずれか１項に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目２２）
上記スペーサーが、アミノ酸配列Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏを含む、項目２１に記載の標的化された治療用融合タンパク質。
（項目２３）
前述の項目のいずれか１項に記載の標的化された治療用融合タンパク質をコードする核酸。
（項目２４）
項目２３に記載の核酸を含む細胞。
（項目２５）
前述の項目のいずれか１項に記載の標的化された治療用融合タンパク質を含む、リソソーム蓄積症の処置に適した薬学的組成物。
（項目２６）
リソソーム蓄積症を処置する方法であって、処置の必要のある被験体に、前述の項目のいずれか１項に記載の標的化された治療用融合タンパク質を投与することを包含する、方法。
（項目２７）
上記リソソーム蓄積症が、ポンペ病である、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
上記リソソーム蓄積症が、ファブリー病である、項目２６に記載の方法。
（項目２９）
上記リソソーム蓄積症が、ゴーシェ病である、項目２６に記載の方法。
（項目３０）
標的化された治療用融合タンパク質を生成する方法であって：
細胞培養培地中で哺乳動物細胞を培養する工程
を包含する方法であって、ここで、
該哺乳動物細胞は、項目２３に記載の核酸を保有し；そして
該培養する工程は、該標的化された治療用融合タンパク質の発現を可能にする条件下で行われる、方法。
（項目３１）
標的化された治療用融合タンパク質を生成する方法であって：
細胞培養培地中でフューリン欠損細胞を培養する工程
を包含し、ここで、
該フューリン欠損細胞は、リソソーム酵素、および成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号１）と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を有するＩＧＦ−ＩＩムテインを含む融合タンパク質をコードする核酸を保有し、ここで、該ＩＧＦ−ＩＩムテインは、マンノース−６−リン酸非依存的様式でヒトカチオン非依存性マンノース−６−リン酸レセプターに結合し；そして
ここで、該培養する工程は、該標的化された治療用融合タンパク質の発現を可能にする条件下で行われる、方法。