【手続補正書】
【提出日】平成25年7月4日(2013.7.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
機能性非コードＲＮＡ  Ｅｖｆ１および／またはＥｖｆ２の発現減少を有することにより特徴づけられる、非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項２】
前記動物がＧＡＢＡ作動性介在ニューロンの異常発達を呈する、請求項１に記載の非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項３】
前記動物がヒトの自閉症または気分障害に類似する少なくとも１つの兆候を呈する、請求項１または２に記載の非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項４】
前記動物が機能性非コードＲＮＡ  Ｅｖｆ２の発現減少を有する、請求項１〜３のいずれかに記載の非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項５】
前記発現減少が、組換え核酸コンストラクトの遺伝子移入によって達成され、該組換え核酸コンストラクトは、Ｅｖｆ配列であって、該Ｅｖｆ配列のエクソン１中に挿入された転写停止配列を有するＥｖｆ配列を含む、請求項４に記載の非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項６】
前記動物が脳皮質において変化したドーパミン反応を呈する、請求項１に記載の非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項７】
前記動物が、依存症、統合失調症、学習障害、気分障害および行動障害からなる群より選択されるヒト症状に類似する少なくとも１種の兆候を呈する、請求項６に記載の非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項８】
前記動物が、非コードＲＮＡ  Ｅｖｆ１の発現減少を有する、請求項６または７に記載の非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項９】
前記発現減少が、組換え核酸コンストラクトの遺伝子移入によって達成され、該組換え核酸コンストラクトは、Ｅｖｆ配列であって、該Ｅｖｆ配列のエクソン３中に挿入された転写停止配列を有するＥｖｆ配列を含む、請求項８に記載の非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項１０】
前記非ヒト動物が、マウス、ラットおよびサルからなる群より選択される、請求項１〜９のいずれかに記載の非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項１１】
脳障害を処置するための治療剤の同定方法であって、
請求項１〜１０のいずれかに記載の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与する工程、
該試験薬剤に対する該非ヒトトランスジェニック動物の反応を解析する工程であって、少なくとも１種の脳障害の兆候の緩和が治療効果の指標となる工程、を含む、方法。
【請求項１２】
前記動物が、機能性非コードＲＮＡ  Ｅｖｆ２の発現減少を有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記少なくとも１種の脳障害の兆候が、自閉症または気分障害の兆候である、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記動物が、機能性非コードＲＮＡ  Ｅｖｆ１の発現減少を有する、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記少なくとも１種の脳障害の兆候が、統合失調症または薬物依存症の兆候である、請求項１４に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
さらなる実施態様において、本発明は、自閉症スペクトラム障害の処置のための薬剤をスクリーニングする方法であって、機能性ｎｃＲＮＡ  Ｅｖｆ２の発現減少を有する第１非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与する工程、自閉症スペクトラム障害の少なくとも１つの兆候を計測する工程、および該少なくとも１つの兆候の計測と、試験薬剤が投与されなかった同型の第２非ヒトトランスジェニック動物の少なくとも１つの兆候の計測とを、第１非ヒト動物における少なくとも１つの兆候の計測の改善を自閉症スペクトラム障害処置のための試験薬剤の効果の指標として比較する工程を含む方法を提供する。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
機能性非コードＲＮＡ  Ｅｖｆ１および／またはＥｖｆ２の発現減少を有することにより特徴づけられる、非ヒトトランスジェニック動物。
（項目２）
前記動物がＧＡＢＡ作動性介在ニューロンの異常発達を呈する、項目１に記載の非ヒトトランスジェニック動物。
（項目３）
前記動物がヒトの自閉症または気分障害に類似する少なくとも１つの兆候を呈する、項目１または２に記載の非ヒトトランスジェニック動物。
（項目４）
前記動物が機能性非コードＲＮＡ  Ｅｖｆ２の発現減少を有する、項目１〜３のいずれかに記載の非ヒトトランスジェニック動物。
（項目５）
前記発現減少が、組換え核酸コンストラクトの遺伝子移入によって達成され、該組換え核酸コンストラクトは、Ｅｖｆ配列であって、該Ｅｖｆ配列のエクソン１中に挿入された転写停止配列を有するＥｖｆ配列を含む、項目４に記載の非ヒトトランスジェニック動物。
（項目６）
前記動物が脳皮質において変化したドーパミン反応を呈する、項目１に記載の非ヒトトランスジェニック動物。
（項目７）
前記動物が、依存症、統合失調症、学習障害、気分障害および行動障害からなる群より選択されるヒト症状に類似する少なくとも１種の兆候を呈する、項目６に記載の非ヒトトランスジェニック動物。
（項目８）
前記動物が、非コードＲＮＡＥｖｆ１の発現減少を有する、項目６または７に記載の非ヒトトランスジェニック動物。
（項目９）
前記発現減少が、組換え核酸コンストラクトの遺伝子移入によって達成され、該組換え核酸コンストラクトは、Ｅｖｆ配列であって、該Ｅｖｆ配列のエクソン３中に挿入された転写停止配列を有するＥｖｆ配列を含む、項目８に記載の非ヒトトランスジェニック動物。
（項目１０）
前記非ヒト動物が、マウス、ラットおよびサルからなる群より選択される、項目１〜９のいずれかに記載の非ヒトトランスジェニック動物。
（項目１１）
自閉症の動物モデルの製造方法であって、
該動物において機能性ｎｃＲＮＡ  Ｅｖｆ２の発現を減少または排除することが可能な組換え核酸コンストラクトで該細胞を形質転換する工程、および
脳組織における機能性ｎｃＲＮＡ  Ｅｖｆ２の発現減少を有する変異動物を再生する工程を含む、方法。
（項目１２）
前記発現の減少または排除が、Ｅｖｆ配列のエクソン１中に転写停止配列を含む安定に導入された組換えコンストラクトの使用により達成される、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記再生された動物が、海馬において機能性ｎｃＲＮＡ  Ｅｖｆ２の発現減少を有する、項目１１または１２に記載の方法。
（項目１４）
薬物依存症または統合失調症の動物モデルの製造方法であって、
該動物における機能性ｎｃＲＮＡ  Ｅｖｆ１の発現を減少または排除することが可能な組換え核酸コンストラクトで動物細胞を形質転換する工程、および
脳組織における機能性ｎｃＲＮＡ  Ｅｖｆ１の発現減少を有する変異動物を再生する工程を含む、方法。
（項目１５）
前記発現の減少または排除が、Ｅｖｆ配列のエクソン３中に転写停止配列を含む安定に導入された組換えコンストラクトの使用により達成される、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記再生された動物が、前頭前皮質における機能性ｎｃＲＮＡ  Ｅｖｆ１の発現減少を有する、項目１４または１５に記載の方法。
（項目１７）
脳障害の動物モデルの製造方法であって、
項目１に記載の第１トランスジェニック非ヒト動物と第２非ヒト動物とを交差する工程、および
少なくとも１つの第１組換え核酸を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物を、第１世代子孫から選択する工程であって、該第１組換え核酸は、Ｅｖｆ配列のエクソン中に転写停止配列を導入するための配列を含む、工程を含む、方法。
（項目１８）
前記組換え核酸が、エクソン１およびエクソン２からなる群より選択されるＥｖｆ配列のエクソン中に転写停止配列を導入するための配列を含む、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
脳障害を処置するための治療剤の同定方法であって、
項目１〜１０のいずれかに記載の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与する工程、
該試験薬剤に対する該非ヒトトランスジェニック動物の反応を解析する工程であって、少なくとも１種の脳障害の兆候の緩和が治療効果の指標となる工程、を含む、方法。
（項目２０）
前記非ヒトトランスジェニック動物がマウスである、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記動物が、機能性非コードＲＮＡ  Ｅｖｆ２の発現減少を有する、項目１９または２０に記載の方法。
（項目２２）
前記少なくとも１種の脳障害の兆候が、自閉症または気分障害の兆候である、項目１９〜２１のいずれかに記載の方法。
（項目２３）
前記動物が、機能性非コードＲＮＡ  Ｅｖｆ１の発現減少を有する、項目１９または２０に記載の方法。
（項目２４）
前記少なくとも１種の脳障害の兆候が、統合失調症または薬物依存症の兆候である、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
試験薬剤の治療効果を決定するための方法であって、
試験薬剤を項目１に記載の第１非ヒトトランスジェニック動物に投与する工程、
脳障害の兆候のレベルを計測する工程、および
該兆候レベルと該試験薬剤が投与されなかった同型の第２非ヒトトランスジェニック動物のレベルとを比較する工程であって、該第１非ヒト動物における兆候の改善が試験薬剤の効果の指標となる工程を含む、方法。
（項目２６）
薬物依存症の予防または処置のための薬剤をスクリーニングするための方法であって、
機能性ｎｃＲＮＡ  Ｅｖｆ１の発現減少を有する第１非ヒトトランスジェニック動物に
試験薬剤を投与する工程、
精神刺激薬物に対する該第１動物の反応を計測する工程、および、
該反応と該試験薬剤が投与されなかった同型の第２非ヒトトランスジェニック動物の反応とを比較する工程であって、該第１非ヒト動物における精神刺激薬物に対する反応の改善が、薬物依存症を処置または予防するための該試験薬剤の効果の指標となる工程を含む、方法。
（項目２７）
自閉症スペクトラム障害の処置のための薬剤をスクリーニングするための方法であって、
機能性ｎｃＲＮＡ  Ｅｖｆ２の発現減少を有する第１非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与する工程、
自閉症スペクトラムの少なくとも１つの兆候を計測する工程、および
該少なくとも１つの兆候の計測と、該試験薬剤が投与されなかった同型の第２非ヒトトランスジェニック動物の少なくとも１つの兆候の計測とを比較する工程であって、第１非ヒト動物における少なくとも１つの兆候の計測の改善が、自閉症スペクトラム障害処置のための該試験薬剤の効果の指標となる工程を含む、方法。
（項目２８）
気分障害の処置のための薬剤をスクリーニングするための方法であって、
機能性ｎｃＲＮＡ  Ｅｖｆ２の発現減少を有する第１非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与する工程、
気分障害の少なくとも１つの兆候を計測する工程、および
該少なくとも１つの兆候の計測と、試験薬剤が投与されなかった同型の第２非ヒトトランスジェニック動物の少なくとも１つの兆候の計測とを比較する工程であって、該第１非ヒト動物における少なくとも１つの兆候計測の改善が、該気分障害の処置のための該試験薬剤の効果の指標となる工程を含む、方法。