【手続補正書】
【提出日】平成25年11月5日(2013.11.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第1及び第2の発現カセットを含む1ベクター発現系：ここで、
前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1; EC 3.5.4.16)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、
前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH; EC 1.14.16.2)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、
前記1ベクター発現系は、アデノ随伴ベクター(AAV)であり、
前記第2のヌクレオチド配列は、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節要素(WPRE)と作動可能に連結され、かつ、
前記第1及び前記第2のプロモーターは、シナプシン1プロモーターである。
【請求項２】
前記GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1; EC 3.5.4.16)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70％同一であり、かつ、前記チロシンヒドロキシラーゼ(TH; EC 1.14.16.2)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70％同一である、請求項1記載の1ベクター発現系。
【請求項３】
芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ(AADC)ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含まない、請求項1又は2記載の1ベクター発現系。
【請求項４】
1乃至40kb、例えば1乃至30kb、例として1乃至20kb、例えば1乃至15kb、例として1乃至10、例えば1乃至8kb、例として2乃至7kb、例えば3乃至6kb、例として4乃至5kbのパッケージング容量を有する、請求項1記載の1ベクター発現系。
【請求項５】
4.5乃至4.8kbのパッケージング容量を有する、請求項1記載の1ベクター発現系。
【請求項６】
前記アデノ随伴ベクター(AAV)は、AAV2ベクターである、請求項1記載の1ベクター発現系。
【請求項７】
前記AAV2ベクターのカプシドは、AAV2カプシド以外のAAVカプシドにパッケージされる、請求項6記載の1ベクター発現系。
【請求項８】
前記AAV2ベクターは、AAV5カプシドにパッケージされる、請求項7記載の1ベクター発現系。
【請求項９】
哺乳類細胞において機能する、請求項1乃至8の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項１０】
前記生物活性を有する断片は、少なくとも50個の隣接アミノ酸を含み、選択される配列において指定された任意のアミノ酸が異なるアミノ酸へ変化するのは、このように変化する配列内のアミノ酸残基が15個以内の場合である、請求項1記載の1ベクター発現系。
【請求項１１】
前記生物活性を有する断片は、チロシンヒドロキシラーゼの触媒ドメインである、請求項10記載の1ベクター発現系。
【請求項１２】
前記生物活性を有する変異体は、突然変異したチロシンヒドロキシラーゼポリペプチドであり、残基S19、S31、S40、又はS404の1つ以上が別のアミノ酸残基に変化している、請求項1記載の1ベクター発現系。
【請求項１３】
前記GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチドは、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも75％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも80％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも85％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも90％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも95％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも96％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも97％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも98％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも99％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと100％同一である、請求項1乃至12の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項１４】
前記チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチドは、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも75％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも80％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも85％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも90％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも95％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも96％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも97％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも98％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも99％同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと100％同一である、請求項1乃至13の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項１５】
前記第1の発現カセット又は前記第2の発現カセットは、更に、ポリアデニル化配列を含む、請求項1記載の1ベクター発現系。
【請求項１６】
前記第1の発現カセット及び前記第2の発現カセットは、更に、ポリアデニル化配列を含む、請求項1記載の1ベクター発現系。
【請求項１７】
前記ポリアデニル化配列は、SV40ポリアデニル化配列である、請求項15又は16記載の1ベクター発現系。
【請求項１８】
前記ポリアデニル化配列の5’は、前記第1及び/又は前記第2のヌクレオチド配列の3’と作動可能に連結される、請求項15乃至17の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項１９】
GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする前記第1のヌクレオチド配列は、SEQ ID NO.18の配列を含む、請求項1記載の1ベクター発現系。
【請求項２０】
チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする前記第2のヌクレオチド配列は、SEQ ID NO.21の配列を含む、請求項1記載の1ベクター発現系。
【請求項２１】
前記ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節要素はSEQ ID NO.22と少なくとも85％の配列同一性、好ましくは少なくとも90から95％の配列同一性、より好ましくは少なくとも99％の配列同一性を有する配列を含む、請求項1記載の1ベクター発現系。
【請求項２２】
前記ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節要素は、SEQ ID NO.22の配列を含む、請求項1記載の1ベクター発現系。
【請求項２３】
前記発現カセットは、5’末端反復及び3’末端反復を含む、請求項1乃至22の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項２４】
前記5’及び3’末端反復は、逆方向末端反復[ITR]及び長末端反復[LTR]から選択される、請求項23記載の1ベクター発現系。
【請求項２５】
前記5’及び3’末端反復は、AAV逆方向末端反復[ITR]である、請求項23記載の1ベクター発現系。
【請求項２６】
前記逆方向末端反復は、SEQ ID NO.15及びSEQ ID NO.16の配列を含む、請求項25記載の1ベクター発現系。
【請求項２７】
TH:GCH1の比は、少なくとも3:1、例として4:1、例えば5:1、例として6:1、例えば7:1、例として10:1、例えば15:1、例として20:1、例えば25:1、例として30:1、例えば35:1、例として40:1、例えば45:1、例として50:1である、請求項1乃至26の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項２８】
TH:GCH1の比は、7:1である、請求項1乃至27の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項２９】
前記比は、発現したTH及びGCH1酵素の活性を測定することにより決定される、請求項27乃至28の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項３０】
前記比は、テトラヒドロビオプテリン(BH4)の量を測定することにより決定される、請求項27乃至28の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項３１】
前記比は、転写されたmRNAの量を測定することにより決定される、請求項27乃至28の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項３２】
前記比は、発現したタンパク質の量を測定することにより決定される、請求項27乃至28の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項３３】
図6において定義された、請求項の1乃至32の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項３４】
最小限の組み込みを行う、請求項1乃至33の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項３５】
薬剤として使用するための請求項1乃至34の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項３６】
請求項1乃至35の何れかに記載の1ベクター発現系を含む単離宿主細胞。
【請求項３７】
前記細胞は、真核細胞、好ましくは哺乳類細胞、より好ましくは霊長類細胞、より好ましくはヒト細胞から成る群から選択される、請求項36記載の宿主細胞。
【請求項３８】
前記細胞は、チャイニーズハムスター卵巣細胞、CHO-K1、ベビーハムスター腎臓細胞、マウス線維芽細胞-3T3細胞、アフリカミドリザル細胞株、ラット副腎褐色細胞腫、AT3細胞、ラットグリア腫瘍細胞、ラット神経細胞、及びラット海馬細胞から成る群から選択される、請求項37記載の宿主細胞。
【請求項３９】
カテコールアミン機能不全に関連する疾患を治療するための、請求項1乃至35の何れかに記載の1ベクター発現系を含む薬剤。
【請求項４０】
前記カテコールアミン機能不全は、カテコールアミン欠乏である、請求項39記載の薬剤。
【請求項４１】
前記カテコールアミン機能不全は、カテコールアミン過多である、請求項39記載の薬剤。
【請求項４２】
前記カテコールアミン欠乏は、ドーパミン欠乏である、請求項40記載の薬剤。
【請求項４３】
前記カテコールアミン過多は、ドーパミン過多である、請求項41記載の薬剤。
【請求項４４】
カテコールアミン機能不全に関連する前記疾患は、中枢及び/又は末梢神経系の疾患、障害、又は損傷である、請求項39乃至43の何れかに記載の薬剤。
【請求項４５】
中枢及び/又は末梢神経系の前記疾患、障害、又は損傷は、神経変性障害である、請求項44記載の薬剤。
【請求項４６】
カテコールアミン機能不全に関連する前記疾患は、大脳基底核の疾患である、請求項39乃至45の何れかに記載の薬剤。
【請求項４７】
前記疾患は、パーキンソン病(PD)、DOPA反応性ジストニア、L-DOPA誘発性ジスキネジア、ADHD、統合失調症、鬱病、血管性パーキンソニズム、本態性振戦、慢性ストレス、遺伝的ドーパミン受容体異常、慢性的なオピオイド、コカイン、アルコール、又はマリファナの使用、副腎不全、高血圧、ノルアドレナリン欠乏、外傷後ストレス障害、病的賭博障害、認知症、レヴィー小体認知症から成る群から選択される、請求項39乃至46の何れかに記載の薬剤。
【請求項４８】
前記神経変性障害は、パーキンソン病(PD)である、請求項39乃至46の何れかに記載の薬剤。
【請求項４９】
カテコールアミン機能不全に関連する疾患を治療する方法において使用するための請求項1乃至35の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項５０】
前記カテコールアミン機能不全は、カテコールアミン欠乏である、請求項49記載の1ベクター発現系。
【請求項５１】
前記カテコールアミン機能不全は、カテコールアミン過多である、請求項49記載の1ベクター発現系。
【請求項５２】
前記カテコールアミン欠乏は、ドーパミン欠乏である、請求項50記載の1ベクター発現系。
【請求項５３】
前記カテコールアミン過多は、ドーパミン過多である、請求項51記載の1ベクター発現系。
【請求項５４】
カテコールアミン機能不全に関連する前記疾患は、中枢及び/又は末梢神経系の疾患、障害、又は損傷である、請求項49乃至53の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項５５】
中枢及び/又は末梢神経系の前記疾患、障害、又は損傷は、神経変性障害である、請求項54記載の1ベクター発現系。
【請求項５６】
カテコールアミン機能不全に関連する前記疾患は、大脳基底核の疾患である、請求項49乃至55の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項５７】
前記疾患は、パーキンソン病(PD)、DOPA反応性ジストニア、L-DOPA誘発性ジスキネジア、ADHD、統合失調症、鬱病、血管性パーキンソニズム、本態性振戦、慢性ストレス、遺伝的ドーパミン受容体異常、慢性的なオピオイド、コカイン、アルコール、又はマリファナの使用、副腎不全、高血圧、ノルアドレナリン欠乏、外傷後ストレス障害、病的賭博障害、認知症、レヴィー小体認知症から成る群から選択される、請求項49乃至55の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項５８】
前記神経変性障害は、パーキンソン病(PD)である、請求項49乃至56の何れかに記載の1ベクター発現系。
【請求項５９】
1ベクター発現系と、前記1ベクター発現系を大脳基底核へ送達するための処方とを含む、パーキンソン病の治療方法において使用するための医薬組成物：
ここで、前記1ベクター発現系は、第1及び第2の発現カセットを含み、
前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1; EC 3.5.4.16)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、
前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH; EC 1.14.16.2)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記第2のヌクレオチド配列は、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節要素(WPRE)と作動可能に連結され、
前記1ベクター発現系は、アデノ随伴ベクター(AAV)であり、かつ、
前記第1及び前記第2のプロモーターは、シナプシン1プロモーターである。
【請求項６０】
前記GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70％同一であり、かつ、前記チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70％同一である、請求項59記載の組成物。
【請求項６１】
前記処方は、マニトール、ヘパリン、又はガドリニウムに基づくMRI造影剤を含む、請求項59又は60記載の医薬組成物。
【請求項６２】
更に、栄養素又は可逆的プロテアソーム阻害剤を含む、請求項59乃至61の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項６３】
更に、医薬的に許容可能な担体又は希釈剤を含む、請求項59乃至62の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項６４】
注入、舌下錠又はスプレー、皮膚投与、又は吸入による投与用に処方される、請求項59乃至63の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項６５】
前記注入は、頭蓋内、大脳内、静脈内、硝子体内、鼻腔内、筋肉内、髄腔内、腹腔内、皮下、ボーラス又は連続投与である、請求項64記載の医薬組成物。
【請求項６６】
前記組成物のpHは、pH4乃至pH10である、請求項59乃至65の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項６７】
前記1ベクター発現系の用量は、被殻灰白質1ミリリットル当たり1.5E+10乃至2.2E+12のベクターゲノムコピーである、請求項59乃至66の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項６８】
投与は、30分乃至24時間の間隔で行われる、請求項59乃至66の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項６９】
投与は、1乃至6時間の間隔で行われる、請求項59乃至66の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項７０】
治療の継続時間は、6乃至72時間である、請求項59乃至66の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項７１】
治療の継続時間は、一生涯である、請求項59乃至66の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項７２】
GTPシクロヒドロキシラーゼ1ポリペプチド(SEQ ID NO.1、2、3、4、5、及び6)及びチロシンヒドロキシラーゼポリペプチド(SEQ ID NO.7、8、9、10、11、12、13、及び14)それぞれの、又はその変異体の、発現比を決定する方法であって、前記ポリペプチドは、請求項1乃至34の何れかに記載の1ベクター発現系によりコードされ、
a.前記ポリペプチドの酵素活性、又は
b.生成されたBH4の量、又は
c.前記ポリペプチドの発現量、又は
d.GTPシクロヒドロキシラーゼ1ポリペプチド及びチロシンヒドロキシラーゼのポリペプチドにそれぞれ対応する転写mRNAのレベル、を測定することを備える方法。
【請求項７３】
前記比は、前記ポリペプチドの活性と前記ポリペプチドの存在量との組み合わせにより決定される、請求項72記載の方法。
【請求項７４】
複数の部分に分かれたキットであって、請求項59乃至73の何れかに記載の医薬組成物と、投与に関する指示とを備えるキット。