【手続補正書】
【提出日】平成25年7月19日(2013.7.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞に化合物を送達するためのコンジュゲートであって、
（ａ）細胞の標的化を媒介し、細胞取り込みを容易にする少なくとも１つのモジュールと、
（ｂ）小胞体（ＥＲ）への輸送を容易にする少なくとも１つのモジュールと、
（ｃ）ＥＲからサイトゾルへの移行を媒介する少なくとも１つのモジュールと、
（ｄ）少なくとも１つの化合物と、
を含むか又はそれらからなり、モジュール（ａ）〜モジュール（ｃ）及び化合物（ｄ）が少なくとも１つのリンカー分子を介して互いに結合するものであり、該リンカー分子は少なくとも１つの分岐点を含み、かつ該化合物は該分岐点を介して結合する、細胞に化合物を送達するためのコンジュゲート。
【請求項２】
モジュール及び化合物が、
（ｉ）共有結合により互いに結合する、
（ｉｉ）非共有結合により互いに結合する、
（ｉｉｉ）少なくとも１つのアダプタ分子を介して互いに結合する、及び／又は
（ｉｖ）少なくとも１つのアダプタ分子を任意で含む少なくとも１つのリンカー分子を介して互いに結合する、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項３】
モジュール及び化合物が以下の配置で互いに結合する、請求項１又は２に記載のコンジュゲート：
（ｉ）（ａ）ｘが（ｃ）ｚと共有結合し、（ｃ）ｚが（ｄ）ｎと共有結合し、（ｃ）ｚが（ｂ）ｙと共有結合する；
（ｉｉ）（ａ）ｘが（ｃ）ｚと共有結合し、（ｃ）ｚが（ｄ）ｎと非共有結合し、（ｃ）ｚが（ｂ）ｙと共有結合する；
（ｉｉｉ）（ａ）ｘが（ｄ）ｎと共有結合し、（ａ）ｘが（ｃ）ｚと共有結合し、（ｃ）ｚが（ｂ）ｙと共有結合する；
（ｉｖ）（ａ）ｘが（ｄ）ｎと非共有結合し、（ａ）ｘが（ｃ）ｚと共有結合し、（ｃ）ｚが（ｂ）ｙと共有結合する；
（ｖ）（ａ）ｘがリンカー分子を介して（ｃ）ｚと共有結合し、（ｃ）ｚがリンカー分子を介して（ｄ）ｎと共有結合し、（ｃ）ｚがリンカー分子を介して（ｂ）ｙと共有結合する；
（ｖｉ）（ａ）ｘがリンカー分子を介して（ｃ）ｚと共有結合し、（ｃ）ｚが（ｃ）ｚと共有結合するアダプタ分子を介して（ｄ）ｎと非共有結合し、（ｃ）ｚがリンカー分子を介して（ｂ）ｙと共有結合する；
（ｖｉｉ）（ａ）ｘがリンカー分子を介して（ｄ）ｎと共有結合し、（ａ）ｘがリンカー分子を介して（ｃ）ｚと共有結合し、（ｃ）ｚがリンカー分子を介して（ｂ）ｙと共有結合する；又は
（ｖｉｉｉ）（ａ）ｘが（ａ）ｘと共有結合するアダプタ分子を介して（ｄ）ｎと非共有結合し、（ａ）ｘがリンカー分子を介して（ｃ）ｚと共有結合し、（ｃ）ｚがリンカー分子を介して（ｂ）ｙと共有結合する。
【請求項４】
共有結合が、ジスルフィド結合、アミド結合、オキシム結合又はヒドラゾン結合であり、非共有結合が、イオン結合又は疎水性結合である、請求項２又は３に記載のコンジュゲート。
【請求項５】
リンカー分子がペプチド若しくは修飾ペプチド、又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と共有結合したペプチドであり、アダプタ分子が二本鎖ＲＮＡ結合タンパク質（ＤＲＢＰ）又はその変異体である、請求項２又は３に記載のコンジュゲート。
【請求項６】
リンカー分子が、
（ｉ）少なくとも１つの分岐点、若しくはリジン側鎖、システイン側鎖、若しくは側鎖上にアミノオキシ部分を含有する非天然アミノ酸、及び／又は
（ｉｉ）少なくとも１つの切断部位、若しくはフューリン切断部位若しくはカルパイン切断部位、
を含む、請求項２〜５のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項７】
切断部位が、モジュール（ａ）とモジュール（ｃ）との間、又はモジュール（ａ）と化合物（ｄ）との間に存在する、請求項６に記載のコンジュゲート。
【請求項８】
化合物が、分岐点と共有結合する、又はリジン側鎖とのアミド結合により、システイン側鎖とのジスルフィド結合により、若しくは側鎖上にアミノオキシ部分を含有する非天然アミノ酸を介して分岐点と共有結合する、請求項６又は７に記載のコンジュゲート。
【請求項９】
化合物が、システイン側鎖とのジスルフィド結合により共有結合したＤＲＢＤ又はその変異体とのイオン結合又は疎水性結合により分岐点と非共有結合する、請求項６又は７に記載のコンジュゲート。
【請求項１０】
（ｉ）モジュール（ａ）が細胞表面受容体リガンド、抗体、糖、脂質又はナノ粒子を含み、
（ｉｉ）モジュール（ｂ）がアミノ酸配列X1X2X3X4（配列番号１４０）（ここで、
Ｘ１がＥ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ若しくはＳ、又はＫ若しくはＲであり、
Ｘ２がＤ、Ｅ、Ａ、Ｔ、Ｖ、Ｇ、Ｓ若しくはＮ、又はＤ若しくはＥであり、
Ｘ３がＥ若しくはＤ、又はＥであり、
Ｘ４がＬ若しくはＦ、又はＬである）を１つ又は複数含むオリゴペプチドを含み、任意でＮ末端及び／又はＣ末端が１個〜３個の更なるアミノ酸残基を含み、
（ｉｉｉ）モジュール（ｃ）が、
（ａ）ＣＯＸ２、ＩｇＭ（μ）、Ｓｇｋ１、ＭＡＴα２、ＭＦ（α）１、ＣＰＹ、毒素サブユニットＡ、その断片若しくはその変異体からなる群から選択されるタンパク質のペプチド、又は
（ｂ）ＣＬ１（配列番号１６４）、ＣＬ２（配列番号１６５）、ＣＬ６（配列番号１６６）、ＣＬ９（配列番号１６７）、ＣＬ１０（配列番号１６８）、ＣＬ１１（配列番号１６９）、ＣＬ１２（配列番号１７０）、ＣＬ１５（配列番号１７１）、ＣＬ１６（配列番号１７２）若しくはＳＬ１７（配列番号１７３）を含むアミノ酸配列、
を含み、
（ｉｖ）化合物（ｄ）が核酸又はペプチドを含む、
請求項１〜９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１１】
（ｉ）細胞表面受容体リガンドが、成長因子、リポタンパク質、トランスフェリン、表面結合レクチン、ガレクチン、ｃ型レクチン、毒素、その断片及びその変異体からなる群から選択され、
（ｉｉ）抗体が、抗ＴＧＮ３８／４６、抗トランスフェリン受容体及び抗成長因子受容体からなる群から選択され、
（ｉｉｉ）脂質が、リン脂質、糖脂質、スフィンゴ脂質及びステロール脂質からなる群から選択され、
（ｉｖ）ナノ粒子が、金属、シリケート及びポリマーからなる群から選択される、
請求項１０に記載のコンジュゲート。
【請求項１２】
細胞表面受容体リガンドが、リシンのＢ鎖、アブリンのＢ鎖、モデシンのＢ鎖、ボルケンシンのＢ鎖、コレラ毒素のＢ鎖、志賀毒素のＢ鎖、ベロ毒素のＢ鎖、シュードモナス外毒素ＡのドメインＩ、ドメインＩＩ及びドメインＩＶ、並びに大腸菌の易熱性腸毒素のＢ鎖からなる群から選択される毒素である、請求項１１に記載のコンジュゲート。
【請求項１３】
モジュール（ｃ）が、
（ｉ）NX1SX2X3X4X5X6X7X8X9INPTX10X11X12X13（配列番号１７８）（ここでＸ１がＡ、Ｓ又はＶであり、Ｘ２がＳ、Ａ又はＴであり、Ｘ３がＳ又はＶであり、Ｘ４がＲ、Ｈ又はＮであり、Ｘ５がＳ又はＴであり、Ｘ６がＧ、Ｒ、Ｔ又はＡであり、Ｘ７がＬ、Ｖ又はＭであり、Ｘ８がＤ、Ｎ又はＥであり、Ｘ９がＤ又はＮであり、Ｘ１０がＶ又はＬであり、Ｘ１１がＬ又はＶであり、Ｘ１２がＬ又はＩであり、Ｘ１３がＫ又はＮである）、
（ｉｉ）GKPTLYX1VSLX2MSDTX3GTX4Y（配列番号１９０）（ここでＸ１がＮ又はＱであり、Ｘ２がＩ又はＶであり、Ｘ３がＧ又はＡであり、Ｘ４がＣ又はＳである）、
（ｉｉｉ）MTX1X2X3X4EX5X6X7X8X9X10X11LTYSX12X13RGX14VAX15LX16AFMKQRX17MGLNDFIQKX18X19X20NX21YACKHX22EVQSX23LX24X25（配列番号２００）（ここでＸ１がＶ又はＩであり、Ｘ２がＫ又はＱであり、Ｘ３がＡ又はＴであり、Ｘ４がＸ（Ｘは０個のアミノ酸である）又はＡであり、Ｘ５がＡ又はＴであり、Ｘ６がＡ又はＳであり、Ｘ７がＲ、Ｋ、Ｇ又はＶであり、Ｘ８がＳ、Ｇ又はＰであり、Ｘ９がＴ、Ｐ又はＡであり、Ｘ１０がＸ又はＰであり、Ｘ１１がＸ又はＤであり、Ｘ１２がＲ又はＫであり、Ｘ１３がＭ又はＴであり、Ｘ１４がＭ又はＬであり、Ｘ１５がＩ又はＮであり、Ｘ１６がＩ又はＳであり、Ｘ１７がＲ又はＫであり、Ｘ１８がＩ又はＬであり、Ｘ１９がＡ又はＳであり、Ｘ２０がＳ、Ｎ、Ａ又はＴであり、Ｘ２１がＴ又はＳであり、Ｘ２２がＡ、Ｐ又はＴであり、Ｘ２３がＩ又はＹであり、Ｘ２４がＫ又はＮであり、Ｘ２５がＭ、Ｉ又はＬである）、
（ｉｖ）MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVX1TTTEDETAQIPAEAVIGYLDLEGDFDVAVLPFSX1STNNGLLFIX1TTIASIAAKEEGVSLDKREAEAWHWLQLKPGQPMYKREAEAEAWHWLQLKPGQPMYKREADAEAWHWLQLKPGQPMYKREADAEAWHWLQLKPGQPMY（配列番号２２０）（ここでＸ１がＮ又はＱである）、並びに
（ｖ）MNKIPIKDLLNPQITDEFKSSILDINKKLFSICCNLPKLPESVTTEEEVELRDILX1FLSRAN（配列番号２１４）（ここでＸ１がＧ、Ｖ又はＬである）、
からなる群から選択される、請求項１３に記載のコンジュゲート。
【請求項１４】
モジュール（ｃ）が、
（ｉ）NASSSRSGLDDINPTVLLK（配列番号１７６）、
（ｉｉ）NASASHSRLDDINPTVLIK（配列番号１７９）、
（ｉｉｉ）NASSSHSGLDDINPTVLLK（配列番号１８０）、
（ｉｖ）GKPTLYNVSLIMSDTGGTCY（配列番号１８４）、
（ｖ）GKPTLYNVSLVMSDTAGTCY（配列番号１８５）、
（ｖｉ）GKPTLYQVSLIMSDTGGTCY（配列番号１８６）、
（ｖｉｉ）GKPTLYQVSLIMSDTGGTSY（配列番号１８７）、
（ｖｉｉｉ）MTVKAEAARSTLTYSRMRGMVAILIAFMKQRRMGLNDFIQKIASNTYACKHAEVQSILKM（配列番号１９３）、
（ｉｘ）MTVKTEAAKGTLTYSRMRGMVAILIAFMKQRRMGLNDFIQKIANNSYACKHPEVQSILKI（配列番号１９７）、
（ｘ）MNKIPIKDLLNPQITDEFKSSILDINKKLFSICCNLPKLPESVTTEEEVELRDILGFLSRAN（配列番号２１２）、
（ｘｉ）MNKIPIKDLLNPQITDEFKSSILDINKKLFSICCNLPKLPESVTTEEEVELRDILVFLSRAN（配列番号２１５）、又は
（ｘｉｉ）MNKIPIKDLLNPQITDEFKSSILDINKKLFSICCNLPKLPESVTTEEEVELRDILLFLSRAN（配列番号２１６）、
である、請求項１３に記載のコンジュゲート。
【請求項１５】
モジュール（ｃ）が、
（ｉ）MRGMVAILIAFMKQRRMGLNDFIQKIASNTYACKHAEVQSILKM（配列番号２０５）、
（ｉｉ）MRGMVAILIAFMKQ（配列番号２０６）、
（ｉｉｉ）GMVAILIAF（配列番号２０７）、
（ｉｖ）MRGMVAILIAFMKQRRMGLNDFIQKIANNSYACKHPEVQSILKI（配列番号２１０）、
（ｖ）ITDEFKSSILDINKKLFSI（配列番号２１７）、又は
（ｖｉ）ITDEFKSSILDINKKLFSICCNLPKLPESV（配列番号２１８）、
である、請求項１４に記載のコンジュゲート。
【請求項１６】
核酸が、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）又はモルホリノ修飾ｉＲＮＡである、請求項１０に記載のコンジュゲート。
【請求項１７】
核酸が化学修飾されている、請求項１０に記載のコンジュゲート。
【請求項１８】
医薬品として使用される、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１９】
医薬組成物であって、
（ｉ）請求項１〜１７のいずれか一項に記載のコンジュゲートと、
（ｉｉ）薬学的に許容可能な賦形剤、担体及び／又は希釈剤と、
を含む、医薬組成物。
【請求項２０】
細胞に化合物（ｄ）を送達する方法であって、以下の工程を含む方法：
（ａ）得られた細胞を準備する工程と、
（ｂ）化合物（ｄ）を含む請求項１〜１７のいずれか一項に記載のコンジュゲートを前記細胞に接触させる工程であって、該接触は細胞によりコンジュゲートが内部移行され、それにより化合物（ｄ）が細胞に送達される条件下で行われる工程。
【請求項２１】
細胞が、真核細胞、無脊椎動物細胞、脊椎動物細胞、線形動物細胞、真菌細胞、アスペルギルス属の細胞、酵母細胞、サッカロミセス属の細胞、ピチア属の細胞、昆虫細胞、Ｓｆ９細胞、動物細胞、非ヒト動物細胞、哺乳動物細胞、非ヒト哺乳動物細胞、ＣＨＯ、霊長類細胞、非ヒト霊長類細胞、ヒト細胞又は植物細胞である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
患者に化合物（ｄ）を送達することにより患者を治療するための医薬の製造における、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のコンジュゲートの使用。
【請求項２３】
細胞における遺伝子発現を変更する方法であって、以下の工程を含む方法：
（ａ）得られた細胞を準備する工程と、
（ｂ）化合物（ｄ）を含む請求項１〜１７のいずれか一項に記載のコンジュゲートを前記細胞に接触させる工程であって、該接触は細胞によりコンジュゲートが内部移行され、コンジュゲートの化合物（ｄ）が細胞のサイトゾル又は核に送達される条件下で行われるものであって、該化合物（ｄ）が該細胞における遺伝子発現を変更することが可能な核酸又はペプチドである、工程と、
を含み、
（ｃ）該化合物（ｄ）が、該細胞のサイトゾル又は核に達すると、該細胞における遺伝子発現を変更する工程。
【請求項２４】
コンジュゲートを調製する方法であって、細胞の標的化を媒介し、細胞取り込みを容易にする少なくとも１つのモジュール（ａ）と、小胞体（ＥＲ）への輸送を容易にする少なくとも１つのモジュール（ｂ）と、ＥＲからサイトゾルへの移行を媒介する少なくとも１つのモジュール（ｃ）と、少なくとも１つの化合物（ｄ）とをカップリングすることを含み、モジュール（ａ）、モジュール（ｂ）及びモジュール（ｃ）並びに化合物（ｄ）が任意の配置で及び任意の化学量論で互いに結合する、方法。
【請求項２５】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載のコンジュゲートを調製するための構成要素を含むキットであって、該キットがモジュール（ａ）、モジュール（ｂ）、モジュール（ｃ）及び／又は化合物（ｄ）を含み、該キットが任意的なペプチドリンカー及び／又は切断部位を含む任意的なペプチドを含む、キット。
【請求項２６】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載のコンジュゲートを含む送達システムを含むキット。