【手続補正書】
【提出日】平成25年3月29日(2013.3.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の（ａ）および（ｂ）を含む単離された抗ＦｃＲＨ５モノクローナル抗体：
（ａ）（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号２８の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号２９の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；
（ｉｉｉ）配列番号３０の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；
（ｂ）（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号３７の配列または配列番号２２のアミノ酸残基２６−３５を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号３８の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（ｉｉｉ）配列番号３９の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３。
【請求項２】
ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号２２のアミノ酸残基２６−３５を含む請求項１記載の抗体。
【請求項３】
ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号３７の配列を含む請求項１記載の抗体。
【請求項４】
Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖまたは（Ｆａｂ’）２断片から選択される請求項１記載の抗体。
【請求項５】
ヒト化されている請求項１−４のいずれかに記載の抗体。
【請求項６】
キメラ抗体である請求項１記載の抗体。
【請求項７】
抗体がフレームワーク配列を含み、前記フレームワーク配列の少なくとも一部がヒト共通フレームワーク配列である請求項１記載の抗体。
【請求項８】
ヒトκ亜群１共通フレームワーク配列を含む請求項１記載の抗体。
【請求項９】
重鎖ヒト亜群ＩＩＩ共通フレームワーク配列を含む請求項１記載の抗体。
【請求項１０】
重鎖可変領域が配列番号４２のアミノ酸配列を含む請求項１記載の抗体。
【請求項１１】
軽鎖可変領域が配列番号３２のアミノ酸配列を含む請求項１記載の抗体。
【請求項１２】
重鎖可変領域が配列番号４２のアミノ酸配列を含む請求項１１記載の抗体。
【請求項１３】
Ｆｃ領域に連結される単一Ｆａｂ領域を含む請求項１記載の抗体。
【請求項１４】
抗体が配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＨ１、および／または配列番号４１のアミノ酸配列を含むＦｃ配列を含む請求項１２記載の抗体。
【請求項１５】
抗体が配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＬ１配列を含む請求項１４記載の抗体。
【請求項１６】
（ａ）抗体の重鎖可変ドメインおよび請求項１の抗体の軽鎖可変ドメインを含む抗体を発現する細胞を培養するプロセス；ならびに
（ｂ）前記培養細胞から抗体を単離するプロセス
により製造される、抗ＦｃＲＨ５モノクローナル抗体。
【請求項１７】
１つ以上の遊離システインアミノ酸を含む請求項１記載の抗体。
【請求項１８】
１つ以上の遊離システインアミノ酸が、０．６〜１．０の範囲のチオ反応性値を有する請求項１７記載の抗体。
【請求項１９】
１つ以上の遊離システインアミノ酸残基が軽鎖中に位置する請求項１７記載の抗体。
【請求項２０】
重鎖配列が配列番号６０のアミノ酸配列を含む請求項１７記載の抗体。
【請求項２１】
軽鎖配列が配列番号５９または６１のアミノ酸配列を含む請求項２０記載の抗体。
【請求項２２】
重鎖配列が配列番号６２のアミノ酸配列を含む請求項１７記載の抗体。
【請求項２３】
軽鎖配列が配列番号５９または６１のアミノ酸配列を含む請求項２２記載の抗体。
【請求項２４】
遊離システインアミノ酸が、カバット番号付け規約による軽鎖の位置２０５、ＥＵ番号付け規約による重鎖の位置１１８および／または４００にある請求項１８記載の抗体。
【請求項２５】
請求項１記載の抗体と同一のエピトープに結合する単離された抗体。
【請求項２６】
抗体が一価であり、Ｆｃ領域を含む請求項１記載の抗体。
【請求項２７】
二重特異性抗体である請求項１記載の抗体。
【請求項２８】
ＣＤ３に特異的に結合する請求項２７記載の抗体。
【請求項２９】
請求項１−２８のいずれかに記載の抗体をコードするポリヌクレオチド。
【請求項３０】
請求項２９記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項３１】
請求項３０記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項３２】
細胞傷害性物質と共有結合される請求項１−２８のいずれかに記載の抗体を含む免疫接合体。
【請求項３３】
細胞傷害性物質が、毒素、化学療法薬、薬剤部分、抗生物質、放射性同位体および核酸分解酵素から選択される請求項３２記載の免疫接合体。
【請求項３４】
捕捉標識、検出標識または固体支持体に共有結合される請求項１−２８のいずれかに記載の抗体を含む免疫接合体。
【請求項３５】
抗体がビオチン捕捉標識に共有結合される請求項３４記載の免疫接合体。
【請求項３６】
抗体が蛍光染料検出標識に共有結合される請求項３４記載の免疫接合体。
【請求項３７】
蛍光染料が、フルオレセイン型、ローダミン型、ダンシル、リサミン、シアニン、フィコエリトリン、テキサスレッドおよびその類似体から選択される請求項３６記載の免疫接合体。
【請求項３８】
抗体が、３Ｈ、１１Ｃ、１４Ｃ、１８Ｆ、３２Ｐ、３５Ｓ、６４Ｃｕ、６８Ｇａ、８６Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１３３Ｘｅ、１７７Ｌｕ、２１１Ａｔおよび２１３Ｂｉから選択される放射性核種検出標識に共有結合される請求項３４記載の免疫接合体。
【請求項３９】
式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有する免疫接合体であって：
（ａ）Ａｂは請求項１記載の抗体であり；
（ｂ）Ｌはリンカーであり；
（ｃ）Ｄは薬剤部分であり；及び
（ｄ）ｐは１から８である、
免疫接合体。
【請求項４０】
Ｌが、６−マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロパノイル（ＭＰ）、バリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｌａ−ｐｈｅ）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、４−（２−ピリジルジチオ）酪酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＳＰＤＢ）およびＮ−スクシンイミジル（４−ヨード−アセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）から選択される請求項３９記載の免疫接合体。
【請求項４１】
Ｄが、アウリスタチンまたはドロスタチンであり、Ｄは以下の式ＤＥまたはＤＦの薬剤部分である請求項３９記載の免疫接合体：
2012522513.tif 000001
（式中、Ｒ２およびＲ６は各々メチルであり、Ｒ３およびＲ４は各々イソプロピルであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ８の各存在は独立して−ＣＨ３、−Ｏ−ＣＨ３、−ＯＨおよびＨであり、Ｒ９はＨであり、Ｒ１０はアリールであり、Ｚは−Ｏ−または−ＮＨ−であり、Ｒ１１はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキルまたは−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ３であり、Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリールである。）
【請求項４２】
ＤがＭＭＡＥおよびＭＭＡＦから選択される請求項３９記載の免疫接合体。
【請求項４３】
免疫接合体が式Ａｂ−（Ｌ−ＭＭＡＥ）ｐを有する請求項３９記載の免疫接合体（式中、ｐは２から５である）。
【請求項４４】
免疫接合体が式Ａｂ−（Ｌ−ＭＭＡＦ）ｐを有する請求項３９記載の免疫接合体（式中、ｐは２から５である）。
【請求項４５】
Ｌがｖａｌ−ｃｉｔ、ＭＣ、ＰＡＢおよび／またはＭＣ−ＰＡＢを含む請求項４３記載の免疫接合体。
【請求項４６】
Ｌがｖａｌ−ｃｉｔ、ＭＣ、ＰＡＢおよび／またはＭＣ−ＰＡＢを含む請求項４４記載の免疫接合体。
【請求項４７】
Ｄがメイタンシノイドであり、メイタンシノイドがＤＭ１、ＤＭ３およびＤＭ４から選択される請求項３９記載の免疫接合体。
【請求項４８】
以下の構造式から選択される請求項３９記載の免疫接合体：
2012522513.tif 000002
2012522513.tif 000003
（式中、Ｖａｌはバリンであり；Ｃｉｔはシトルリンである。）
【請求項４９】
請求項１−２８のいずれかに記載の抗体または請求項３９−４８のいずれかに記載の免疫接合体、および製薬上許容可能な担体を含む薬学的組成物。
【請求項５０】
ＦｃＲＨ５を発現する細胞の増殖の抑制するための医薬剤の調整における請求項１−２８のいずれかに記載の抗体または請求項３９−４８のいずれかに記載の免疫接合体の使用。
【請求項５１】
抗体が細胞障害性物質に接合している請求項５０記載の使用。
【請求項５２】
医薬剤がさらに有効量の別の治療薬を含む請求項５０記載の使用。
【請求項５３】
増殖性障害を治療するための医薬剤の調整における請求項１−２８のいずれかに記載の抗体または請求項３９−４８のいずれかに記載の免疫接合体の使用。
【請求項５４】
前記増殖性障害が癌である請求項５３記載の使用。
【請求項５５】
前記癌が、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、攻撃性ＮＨＬ、再発性攻撃性ＮＨＬ、再発性無痛性ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、難治性無痛性ＮＨＬ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫、白血病、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）およびマントル細胞リンパ腫から選択される請求項５４記載の使用。
【請求項５６】
抗体が細胞障害性物質に接合している請求項５３記載の使用。
【請求項５７】
医薬剤がさらに有効量の別の治療薬を含む請求項５３記載の使用。
【請求項５８】
治療薬が、抗体、化学療法薬、細胞傷害性物質、抗血管新生剤、免疫抑制剤、プロドラッグ、サイトカイン、サイトカインアンタゴニスト、細胞傷害性放射線療法、コルチコステロイド、抗嘔吐薬、癌ワクチン、鎮痛薬または増殖阻害剤からなる群から選択される請求項５７記載の使用。
【請求項５９】
治療薬が、ベルケード、レブリミド、タモキシフェン、レトロゾール、エキセメスタン、アナストロゾール、イリノテカン、セツキシマブ、フルベストラント、ビノレルビン、エルロチニブ、ベカシズマブ、ビンクリスチン、イマチニブ、ソラフェニブ、ラパチニブまたはトラスツズマブ、シスプラチン、ゲムシタビン、メトトレキセート、ビンブラスチン、カルボプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、ボルテゾミブ、レナリドミド、メルファラン、プレドニソン、デキサメタゾンまたはドセタキセルからなる群から選択される請求項５８記載の使用。
【請求項６０】
ＦｃＲＨ５を含有することが推測される生物学的試料中のＦｃＲＨ５の存在の確定するためのin vitroでの方法であって、前記試料を請求項１−２８のいずれかに記載の抗体にin vitroで曝露すること、ならびに前記抗体と前記試料中のＦｃＲＨ５との結合を確定することを包含し、ここで、前記抗体の前記試料中のＦｃＲＨ５への結合が前記試料中の前記タンパク質の存在を示す方法。
【請求項６１】
請求項１−２８のいずれかに記載の抗ＦｃＲＨ５抗体（Ａｂ）、およびアウリスタチンまたはマイタンシノイド薬剤部分（Ｄ）を含む抗体−薬剤接合体であって、抗体が１つ以上のシステインアミノ酸を介して、リンカー部分（Ｌ）によりＤに結合され；当該化合物が式Ｉ：
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐ                    Ｉ
（式中、ｐは１、２、３または４である）
を有する抗体−薬剤接合体の製造方法であって、
（ａ）抗体の操作されたシステイン基をリンカー試薬と反応させて抗体−リンカー中間体Ａｂ−Ｌを形成することと；
（ｂ）Ａｂ−Ｌを活性化薬剤部分Ｄと反応させて、それにより抗体−薬剤接合体が形成されるステップ
を包含するか、あるいは
（ｃ）薬剤部分の求核性基をリンカー試薬と反応させて、薬剤−リンカー中間体Ｄ−Ｌを形成することと；
（ｄ）Ｄ−Ｌを抗体の操作されたシステイン基と反応させて、それにより抗体−薬剤接合体を形成するステップ
を包含する方法。
【請求項６２】
式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有する免疫接合体であって、
（ａ）Ａｂは以下を含む単離された抗ＦｃＲＨ５モノクローナル抗体である抗体であり：
（ｉ）  （ａ）ないし（ｃ）を含む軽鎖可変領域：
（ａ）配列ＫＡＳＱＮＶＧＳＮＶＡ（配列番号２８）を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列ＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号２９）を含むＨＶＲ−Ｌ２；
（ｃ）配列ＱＱＹＫＴＷＴ（配列番号３０）を含むＨＶＲ−Ｌ３；
（ｉｉ）  （ａ）ないし（ｃ）を含む重鎖可変領域：
（ａ）配列ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３７）を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列ＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧ（配列番号３８）を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列ＡＲＲＳＩＰＹＹＹＡＭＤＹ（配列番号３９）を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（ｂ）ＬはＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢであるリンカーであり；
（ｃ）ＤはＭＭＡＥである薬剤部分であり；および
（ｄ）ｐは１から８である
免疫接合体。
【請求項６３】
式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有する免疫接合体であって、
（ａ）Ａｂは以下を含む単離された抗ＦｃＲＨ５モノクローナル抗体である抗体であり：
（ｉ）  （ａ）ないし（ｃ）を含む軽鎖可変領域：
（ａ）配列ＫＡＳＱＮＶＧＳＮＶＡ（配列番号２８）を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列ＳＡＳＹＲＹＳ（配列番号２９）を含むＨＶＲ−Ｌ２；
（ｃ）配列ＱＱＹＫＴＷＴ（配列番号３０）を含むＨＶＲ−Ｌ３；
（ｉｉ）  （ａ）ないし（ｃ）を含む重鎖可変領域：
（ａ）配列ＧＹＴＦＴＮＹＧＩＮ（配列番号２２のアミノ酸残基２６−３５）を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列ＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧ（配列番号３８）を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列ＡＲＲＳＩＰＹＹＹＡＭＤＹ（配列番号３９）を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（ｂ）ＬはＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢであるリンカーであり；
（ｃ）ＤはＭＭＡＥである薬剤部分であり；および
（ｄ）ｐは１から８である
免疫接合体。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７３】
【図１】キメラ抗ヒトＦｃＲＨ５  ７Ｄ１１軽鎖（ＤＮＡ）を示す。
【図２】キメラ抗ヒトＦｃＲＨ５  ７Ｄ１１軽鎖（アミノ酸）を示す。
【図３】キメラ抗ヒトＦｃＲＨ５  ７Ｄ１１重鎖（ＤＮＡ）を示す。
【図４】キメラ抗ヒトＦｃＲＨ５  ７Ｄ１１重鎖（アミノ酸）を示す。
【図５】キメラ抗ヒトＦｃＲＨ５（ｍＡｂ１３Ｇ９）軽鎖（ＤＮＡ）（配列番号５２）を示す。
【図６】キメラ抗ヒトＦｃＲＨ５（ｍＡｂ１３Ｇ９）軽鎖（アミノ酸）（配列番号５３）を示す。
【図７】キメラ抗ヒトＦｃＲＨ５（ｍＡｂ１３Ｇ９）重鎖（ＤＮＡ）（配列番号５４）を示す。
【図８】キメラ抗ヒトＦｃＲＨ５（ｍＡｂ１３Ｇ９）重鎖（アミノ酸）（配列番号５５）を示す。
【図９】ネズミ１３Ｇ９（配列番号１８）およびヒト化１３Ｇ９ｖ１（配列番号１９）に関する可変軽鎖のアラインメントを示す。図９は、配列番号５６として「ｈｕｍＩＩＩ」配列を開示する。
【図１０】ネズミ１３Ｇ９（配列番号２０）およびヒト化１３Ｇ９ｖ１（配列番号５７）に関する可変重鎖のアラインメントを示す。図１０は、配列番号５８として「ｈｕｍＩＩＩ」配列を開示する。
【図１１】ヒト化１３Ｇ９（配列番号２１）およびヒト化１３Ｇ９ｖ３（配列番号２２）およびヒト化１３Ｇ９ｖ８（配列番号２３）に関する可変重鎖のアラインメントを示す。
【図１２】本発明の抗体のアミノ酸配列（ｈｕ１３Ｇ９ｖ１）を示す。図１２は、出現順に、それぞれ、配列番号２４〜４２を開示する。
【図１３】本発明のチオ−Ｍａｂのシステイン操作操作されたポリペプチド鎖のアミノ酸配列を示す。図１３は、出現順に、それぞれ、配列番号５９および６０を開示する。
【図１４】本発明のチオ−Ｍａｂのシステイン操作操作されたポリペプチド鎖のアミノ酸配列を示す。図１４は、出現順に、それぞれ、配列番号６１および６２を開示する。
【図１５】ＦｃＲＨ５抗体の交差反応性を示す。
【図１６】ＦｃＲＨ５抗体の交差反応性を示す。
【図１７】ＦｃＲＨ５抗体の交差反応性を示す。
【図１８】ＦｃＲＨ５抗体滴定を示す。
【図１９】ＦｃＲＨ５抗体滴定を示す。
【図２０】平均腫瘍体積に及ぼす本発明の抗体の作用を示す。
【図２１】平均体重に及ぼす本発明の抗体の作用を示す。
【図２２】平均腫瘍体積に及ぼす本発明の抗体の作用を示す。
【図２３】平均体重に及ぼす本発明の抗体の作用を示す。
【図２４】単一化合物用量応答分析を示す。
【図２５】単一化合物用量応答分析を示す。
【図２６】ＰＲＯ８２０  ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号６３）を示す。この場合、配列番号６３は、「ＤＮＡ５６０４１−１４１６」（本明細書中では「ＦｃＲＨ５」とも呼ばれる）と本明細書中で呼ばれるクローンである。ヌクレオチド配列は、太字で示され、下線を付された開始および停止コドンを有するＦｃＲＨ５をコードする（米国特許第７４９１５２９号（Goddard等）参照）。
【図２７】図２６で示される配列番号６３のコード配列由来のアミノ酸配列（配列番号６４）を示す（米国特許第７４９１５２９号（Goddard等）参照）。
【図２８Ａ】ＰＲＯ５２３８７  ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号６５）を示す。この場合、配列番号６５は、「ＤＮＡ２５７８４５」（本明細書中では「ＦｃＲＨ５」とも呼ばれる）と本明細書中で呼ばれるクローンである。ヌクレオチド配列は、太字で示され、下線を付された開始および停止コドンを有するＦｃＲＨ５をコードする（米国公開特許出願番号２００６０２５１６６２（Chang等）参照）。
【図２８Ｂ】ＰＲＯ５２３８７  ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号６５）を示す。この場合、配列番号６５は、「ＤＮＡ２５７８４５」（本明細書中では「ＦｃＲＨ５」とも呼ばれる）と本明細書中で呼ばれるクローンである。ヌクレオチド配列は、太字で示され、下線を付された開始および停止コドンを有するＦｃＲＨ５をコードする（米国公開特許出願番号２００６０２５１６６２（Chang等）参照）。
【図２９】図２８Ａ〜Ｂで示される配列番号６５のコード配列由来のアミノ酸配列（配列番号６６）を示す（米国公開特許出願番号２００６０２５１６６２（Chang等）参照）。
【図３０】ＰＲＯ３１４９９２  ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号６７）を示す。この場合、配列番号６７は、カニクイザルからの「ＤＮＡ６７６９６９」（本明細書中では「ｃｙｎｏＦｃＲＨ５」とも呼ばれる）と本明細書中で呼ばれるクローンである。
【図３１】図３０に示される配列番号６７のコード配列由来のアミノ酸配列（配列番号６８）を示す。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2012522513000001.app
【手続補正４】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１０】
2012522513.tif 000004
【手続補正５】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１２】
2012522513.tif 000005