【手続補正書】
【提出日】平成25年8月26日(2013.8.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−４レセプターαに対する結合親和性を有するヒト涙液リポカリンのムテインであって、
26の位置におけるPro, Leu, Asn, Tyr, Lys若しくはGlu；32の位置におけるLys；34の位置におけるTrp, Asn, Val, His若しくはArg；56の位置におけるLeu,Ala, His, Lys若しくはMet；58の位置におけるLeu；または、63の位置におけるLys,Ser, Gln若しくはProからなる群から選択される成熟ヒト涙リポカリンのアミノ酸ｐに対応する位置の少なくとも１つの置換を特徴とするヒト涙液リポカリンのムテイン。
【請求項２】
（i）成熟ヒト涙液リポカリンの直鎖状ポリペプチド配列の27, 28, 30, 31,33, 53, 57, 61, 64, 66, 80, 83, 104〜106及び108の配列位置の１つ又はそれ以上に変異されたアミノ酸残基を含み、
（ii）前記成熟ヒト涙液リポカリンの直鎖状ポリペプチド配列の26, 32, 34, 55,56, 58及び63の配列位置の２つ又はそれ以上に変異されたアミノ酸残基を含み、
前記ムテインのアミノ酸配列は、
(1)Ser 26, Glu34, Leu 55, Lys 58,
(2)Ser 26, Asn34, Ala 55, Lys 58,
(3)Ser 26, Val34, 
(4)Pro 26, Ser34,
(5)Pro 26, Ala 55,
(6)Leu 26, Trp 34, Ala 55, 
(7)Leu 26, Trp 34, Ile 58,
(8)Asn 26, Asp34, 
(9)Asn 26, Ala55, 
(10)Tyr 26, His 34, Ala 55, 
(11)Tyr 26, His 34, Ala 58, 
(12)Lys 26, Arg 34, Ala 55,
(13)Lys 26, Arg 34, Asn 58, 
(14)Glu 26, Gly 34, Ala 55, 
(15)Glu 26, Gly 34, Leu 58,
のアミノ酸の組み合わせのいずれか１つを含む請求項１に記載のヒト涙液リポカリンのムテイン。
【請求項３】
Ala 31, Tyr 33, Trp 61, Ser 80, Leu 104, Pro 106及びGln 108の少なくとも１つをさらに含む請求項１又は２に記載のヒト涙液リポカリンのムテイン。
【請求項４】
Phe 53, Leu 53, Tyr 64, Met 64, Leu 66及びAsp66の少なくとも１つをさらに含む請求項１又は２に記載のヒト涙液リポカリンのムテイン。
【請求項５】
Arg 27; Cys 28, Arg 30, Ala 31, Tyr 33, Arg 57, Trp 61, Ser 80, Arg83, Leu 104, Cys 105, Pro 106及びGln 108の少なくとも１つをさらに含む請求項１又は２に記載のヒト涙液リポカリンのムテイン。
【請求項６】
(1)Phe 53, Tyr 64, Leu 66と、
(2)Leu 53, Met 64, Asp 66と、
のうちの一方又は両方の群をさらに含む請求項１〜５に記載のヒト涙液リポカリンのムテイン。
【請求項７】
(1)Ser 26; Tyr 32; Leu 55; Gln 56; Lys 58;
(2)Pro 26; Tyr32; Ser 34; Ala 55; Gln 56; Lys 63;
(3)Leu 26; Phe32; Trp 34; Ala 55; Ile 58; Ser 63;
(4)Ser 26; Tyr32; Val 34; Ala 55; Ala 56; Ile 58; Ser 63;
(5)Ser 26; Val32; Asn 34; Ala 55; Gln 56; Lys 58; Lys 63;
(6)Asn 26; Lys 32; Asp 34; Ala 55; His 56; Arg 58; Gln 63;
(7)Tyr 26; Tyr 32; His 34; Ala 55; His 56; Ala 58; Lys 63;
(8)Lys 26; Tyr 32; Arg 34; Ala 55; Lys 56; Asn 58; Pro 63;及び
(9)Glu 26; His 32; Gly 34; Ala 55; Met 56; Leu 58; Lys 63
のいずれか１つの群を含む請求項１又は２に記載のヒト涙液リポカリンのムテイン。
【請求項８】
SEQ ID Nos:3-11のいずれか１つに示された請求項１又は２に記載のヒト涙液リポカリンのムテイン、又はそれらの断片若しくは変異体のヒト涙液リポカリンのムテイン。
【請求項９】
ＩＬ−４レセプターαに結合するヒト涙液リポカリンのムテインを生成する方法であって、
（i）成熟ヒト涙液リポカリンの直鎖状ポリペプチド配列の27, 28, 30, 31, 33, 53, 57, 61, 64, 66, 80, 83, 104〜106及び108のアミノ酸配列位置の１つ又はそれ以上と、
（ii）前記成熟ヒト涙液リポカリンの直鎖状ポリペプチド配列の26, 32, 34, 55,56, 58及び63のアミノ酸配列位置の２つ又はそれ以上とにおいて、
ヒト涙液リポカリンをコードする核酸分子に突然変異誘発させることにより、ヒト涙液リポカリンのムテインをコードする１つ又はそれ以上の核酸を得、
26の位置において突然変異された場合、突然変異体は、Ser, Pro, Leu,Asn, Tyr, Lys又はGluを含み；
32の位置において突然変異された場合、突然変異体は、Tyr, Val, Lys又はHisを含み；
34の位置において突然変異された場合、突然変異体は、Glu, Ser, Trp,Asn, Val, Asp, His, Arg又はGlyを含み；
55の位置において突然変異された場合、突然変異体は、Leu又はAlaを含み；
56の位置において突然変異された場合、突然変異体は、Gln, Leu, Ala,His, Lys又はMetを含み；
58の位置において突然変異された場合、突然変異体は、Lys, Ser, Ile,Arg, Ala, Asn又はLeuを含み；
63の位置において突然変異された場合、突然変異体は、Glu, Lys, Ser, Gln又はProを含むステップ（ａ）と、
（ａ）において得られた１つ又はそれ以上の前記ムテインの核酸分子を発現システムで発現することにより、１つ又はそれ以上のムテインを得るステップ（ｂ）と、
（ｂ）において得られた１つ又はそれ以上の前記ムテインを濃縮し、選択及び／又は単離により１０ｎＭ未満の解離定数でＩＬ−４レセプターαに結合するムテインを選択するステップ（ｃ）とを備えていることを特徴とする方法。
【請求項１０】
前記ステップ（ｃ）は、
ＩＬ−４レセプターα又はその免疫原性の断片を準備するステップ（ｃｉ）と、
１つ又はそれ以上の前記ムテインと前記ＩＬ−４レセプターα又はその免疫原性の断片とを接触させることにより、前記ＩＬ−４レセプターα又はその免疫原性の断片と結合親和力を有するムテインとの複合体を形成させるステップ（ｃｉｉ）とを含む請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ステップ（ｃ）の前記選択は、競合条件下で行われる請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ムテインは、
(1)Ser 26, Glu34, Leu 55, Lys 58,
(2)Ser 26, Asn34, Ala 55, Lys 58,
(3)Ser 26, Val34,
(4)Pro 26, Ser34,
(5)Pro 26, Ala 55,
(6)Leu 26, Trp 34, Ala 55,
(7)Leu 26, Trp 34, Ile 58,
(8)Asn 26, Asp34,
(9)Asn 26, Ala55,
(10)Tyr 26, His 34, Ala 55,
(11)Tyr 26, His 34, Ala 58,
(12)Lys 26, Arg 34, Ala 55,
(13)Lys 26, Arg 34, Asn 58,
(14)Glu 26, Gly 34, Ala 55,
(15)Glu 26, Gly 34, Leu 58
のアミノ酸の組み合わせのうちの１つを含む請求項９〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
請求項９〜１２のいずれか１項に従って取得可能である、又は、取得されることを特徴とするムテイン。
【請求項１４】
請求項１〜８および１３のいずれか１項に記載のムテインをコードするヌクレオチド配列を含むことを特徴とする核酸分子。
【請求項１５】
請求項１４に記載の核酸分子を含むことを特徴とする宿主細胞。
【請求項１６】
請求項１〜８及び１３のいずれか１項に記載のムテインを含むことを特徴とする医薬又は診断用の組成物。