【手続補正書】
【提出日】平成25年3月27日(2013.3.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）陰イオン界面活性剤および非イオン性界面活性剤を含む回収培地でサンプルを懸濁する工程と、
ｂ）標的核酸分子を変性させる工程と、
ｃ）ポリヌクレオチドプローブおよび標的核酸分子のハイブリダイズまたは結合を可能にする条件下で、１つまたは複数の該プローブを標的核酸分子と接触させる工程と、
ｄ）二本鎖核酸ハイブリッドに特異的な一次抗体でコーティングされた固体支持体上で二本鎖核酸ハイブリッドを捕捉する工程と
を含む、サンプル中の標的核酸分子の存在を測定する方法。
【請求項２】
ａ）陰イオン界面活性剤および非イオン性界面活性剤を含む回収培地でサンプルを懸濁する工程と、
ｂ）標的核酸分子を変性させる工程と、
ｃ）ポリヌクレオチドプローブおよび標的核酸分子のハイブリダイズを可能にする条件下で、１つまたは複数の該プローブを標的核酸分子と接触させ、それにより二本鎖核酸ハイブリッドを形成させる工程と、
ｄ）二本鎖核酸ハイブリッドに特異的な一次抗体でコーティングされた固体支持体上で二本鎖核酸ハイブリッドを捕捉し、それにより二本鎖核酸ハイブリッド／固体支持体複合体を形成させる工程と、
ｅ）二本鎖核酸ハイブリッド／固体支持体複合体を、結合していない核酸から分離する工程と、
ｆ）複合体と、二本鎖核酸ハイブリッドまたは一次抗体のいずれかに特異的な、検出可能なマーカーで標識された二次抗体とを結合させて、二本鎖核酸ハイブリッド／固体支持体抗体複合体を形成させる工程と、
ｇ）二本鎖核酸ハイブリッド／固体支持体抗体複合体を、界面活性剤を含む洗浄緩衝液で洗浄する工程と、
ｈ）二次抗体の標識を検出する工程であって、該検出によって標的核酸分子の存在が示される工程と
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
固体支持体が、電磁ビーズを含み、かつ好ましくは、コーティングされた修飾常磁性ビーズ、または二本鎖ハイブリッド核酸に対して免疫特異的である一次抗体を付着させた修飾常磁性ビーズを含み、かつ、結合していない核酸から二本鎖核酸−電磁ビーズ−抗体複合体を分離するのに、磁場を使用する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
回収培地中の陰イオン界面活性剤がデオキシコール酸ナトリウムであり、非イオン性界面活性剤がＮＰ−４０である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
（ａ）陰イオン界面活性剤および非イオン性界面活性剤を含む回収培地に懸濁された生物学的サンプルと、
（ｂ）変性試薬と、
（ｃ）標的核酸分子に結合することができる、少なくとも１つのポリヌクレオチドプローブと、
（ｄ）一次抗体でコーティングされた支持体と、
（ｅ）検出可能なマーカーで標識された二次抗体と
を含む組成物。
【請求項６】
前記回収培地が、ＮＰ−４０、デオキシコール酸ナトリウムおよびＥＤＴＡを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記回収培地が、約０．５〜約２．０％のＮＰ−４０、約０．１０〜約０．４０％のデオキシコール酸ナトリウム、および約１０〜約５０ｍＭのＥＤＴＡを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
前記少なくとも１つのポリヌクレオチドプローブが、高リスク型ＨＰＶである１６、１８、２６、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６６、６８および８２型に対するプローブからなる群から選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項９】
（ａ）約０．５〜約２．０％のＮＰ−４０、約０．１０〜約０．４０％のデオキシコール酸ナトリウム、および約１０〜約５０ｍＭのＥＤＴＡを含む回収培地に懸濁された生物学的サンプルと、
（ｂ）ポリヌクレオチドプローブと
（ｃ）一次抗体でコーティングされた支持体と
を含む組成物。
【請求項１０】
（ｄ）検出可能なマーカーで標識された、二次抗体
をさらに含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記回収培地が約０．０１〜約０．１０％のアジ化ナトリウムをさらに含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
前記生物学的サンプルが子宮頸部細胞サンプルである、請求項５または９に記載の組成物。
【請求項１３】
前記生物学的サンプルが、３３℃で少なくとも２１日間にわたり前記回収培地で保存されたときに安定である、請求項５または９に記載の組成物。
【請求項１４】
一次抗体でコーティングされた支持体が、電磁ビーズを含む、請求項５または９に記載の組成物。
【請求項１５】
サンプル中の標的核酸分子の検出用キットであって、
ａ）陰イオン界面活性剤および非イオン性界面活性剤を含む回収培地と、
ｂ）変性試薬と、
ｃ）抗ハイブリッド一次抗体でコーティングされた支持体と、
ｄ）検出可能に標識された抗ポリハイブリッド二次抗体を含む、検出試薬と、
ｅ）界面活性剤ベースの洗浄緩衝液と、
ｆ）前記二次抗体の標識に対する基質を含む第２検出試薬と
を含むキット。
【請求項１６】
前記回収培地が以下の特徴のうち１つを有する、請求項１５に記載のキット：
ａ）ＮＰ−４０、デオキシコール酸塩およびＥＤＴＡを含む；
ｂ）ＮＰ−４０、デオキシコール酸塩およびＥＤＴＡを含み、かつアジ化ナトリウムをさらに含む；
ｃ）前記界面活性剤ベースの洗浄緩衝液が、約０．５〜約２．０％のＮＰ−４０、約０．１０〜約０．４０％のデオキシコール酸ナトリウム、約２５〜約７５ｍＭのトリス−ＨＣｌ、約１０〜約５０ｍＭのＥＤＴＡ、約５０〜約２００ｍＭのＮａＣｌ、および約０．０１〜約０．１０％のアジ化ナトリウムを含む；
ｄ）前記界面活性剤ベースの洗浄緩衝液が、約４０ｍＭのトリスｐＨ８．２、１００ｍＭのＮａＣｌ、０．１〜０．５％のＴｒｉｔｏｎ  ｘ−１００、および０．０５％のアジ化ナトリウムを含む；
ｅ）前記希釈液が、ＢＥＳ、ポリアクリル酸、ＮａＯＨおよびアジ化ナトリウムを含む；
ｆ）前記変性試薬が１．７５のＮａＯＨである。
【請求項１７】
ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）およびその遺伝的変異体に結合することができる、少なくとも１つのポリヌクレオチドプローブをさらに含み、好ましくは、前記少なくとも１つのポリヌクレオチドプローブが、高リスク型ＨＰＶである１６、１８、２６、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６６、６８および８２型に対するプローブからなる群から選択される、請求項１５に記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
さらなる態様は、標的核酸分子を含むサンプルが回収される回収培地中の試薬に関する。数週間または数カ月にわたって、標的核酸分子の分解が最低限である状態で、標的核酸分子をこの回収培地に保持することができる。１つの態様において、数週間または数カ月にわたって、標的核酸分子の分解が最低限である状態で、ＤＮＡベースの標的サンプル物質をこの回収培地に保持することができる。１つの態様において、界面活性剤ベースの回収培地は、迅速なサンプルの分析および処理を可能にする。
[本発明1001]
（ａ）少なくとも1種の界面活性剤を含む回収培地に懸濁された生物学的サンプルと、
（ｂ）変性試薬と、
（ｃ）標的核酸分子に結合することができる、少なくとも1つのポリヌクレオチドプローブと、
（ｄ）一次抗体でコーティングされた支持体と、
（ｅ）検出可能なマーカーで標識された二次抗体と
を含む組成物。
[本発明1002]
前記生物学的サンプルが子宮頸部細胞サンプルである、本発明1001の組成物。
[本発明1003]
前記回収培地が、ＮＰ−40、デオキシコール酸ナトリウムおよびＥＤＴＡを含む、本発明1001の組成物。
[本発明1004]
前記回収培地が、約0．5〜約2．0％のＮＰ−40、約0．10〜約0．40％のデオキシコール酸ナトリウム、および約10〜約50ｍＭのＥＤＴＡを含む、本発明1001の組成物。
[本発明1005]
前記生物学的サンプルが、33℃で少なくとも21日間にわたり前記回収培地で保存されたときに安定である、本発明1001の組成物。
[本発明1006]
前記少なくとも1つのポリヌクレオチドプローブが、高リスク型ＨＰＶである16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68および82型に対するプローブからなる群から選択される、本発明1001の組成物。
[本発明1007]
（ａ）約0．5〜約2．0％のＮＰ−40、約0．10〜約0．40％のデオキシコール酸ナトリウム、および約10〜約50ｍＭのＥＤＴＡを含む回収培地に懸濁された生物学的サンプルと、
（ｂ）ポリヌクレオチドプローブと
を含む組成物。
[本発明1008]
前記回収培地が約0．01〜約0．10％のアジ化ナトリウムをさらに含む、本発明1007の組成物。
[本発明1009]
前記生物学的サンプルが子宮頸部細胞サンプルである、本発明1007の組成物。
[本発明1010]
前記生物学的サンプルが、33℃で少なくとも21日間にわたり前記回収培地で保存されたときに安定である、本発明1007の組成物。
[本発明1011]
前記生物学的サンプル中の核酸分子が変性している、本発明1007の組成物。
[本発明1012]
（ｃ）一次抗体でコーティングされた支持体
をさらに含む、本発明1007の組成物。
[本発明1013]
（ｄ）二次抗体
をさらに含む、本発明1012の組成物。
[本発明1014]
前記二次抗体が検出可能なマーカーで標識される、本発明1013の組成物。
[本発明1015]
サンプル中の標的核酸分子の検出用キットであって、
ａ）界面活性剤を含む回収培地と、
ｂ）変性試薬と、
ｃ）抗ハイブリッド一次抗体でコーティングされた支持体と、
ｄ）検出可能に標識された抗ポリハイブリッド二次抗体を含む、検出試薬と、
ｅ）界面活性剤ベースの洗浄緩衝液と、
ｆ）前記二次抗体の標識に対する基質を含む第2検出試薬と
を含むキット。
[本発明1016]
前記回収培地がＮＰ−40、デオキシコール酸塩およびＥＤＴＡを含む、本発明1015のキット。
[本発明1017]
前記回収培地がアジ化ナトリウムをさらに含む、本発明1016のキット。
[本発明1018]
前記界面活性剤ベースの洗浄緩衝液が、約0．5〜約2．0％のＮＰ−40、約0．10〜約0．40％のデオキシコール酸ナトリウム、約25〜約75ｍＭのトリス−ＨＣｌ、約10〜約50ｍＭのＥＤＴＡ、約50〜約200ｍＭのＮａＣｌ、および約0．01〜約0．10％のアジ化ナトリウムを含む、本発明1015のキット。
[本発明1019]
前記界面活性剤ベースの洗浄緩衝液が、約40ｍＭのトリスｐＨ8．2、100ｍＭのＮａＣｌ、0．1〜0．5％のＴｒｉｔｏｎ  ｘ−100、および0．05％のアジ化ナトリウムを含む、本発明1015のキット。
[本発明1020]
前記希釈液が、ＢＥＳ、ポリアクリル酸、ＮａＯＨおよびアジ化ナトリウムを含む、本発明1015のキット。
[本発明1021]
前記変性試薬が1．75のＮａＯＨである、本発明1015のキット。
[本発明1022]
ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）およびその遺伝的変異体に結合することができる、少なくとも1つのポリヌクレオチドプローブをさらに含む、本発明1015のキット。
[本発明1023]
前記少なくとも1つのポリヌクレオチドプローブが、高リスク型ＨＰＶである16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68および82型に対するプローブからなる群から選択される、本発明1022のキット。
[本発明1024]
サンプル中の標的核酸の存在を検出するように構成された装置をさらに含む、本発明1015のキット。
[本発明1025]
システムがルミノメーターである、本発明1024のキット。
[本発明1026]
サンプル中の標的核酸分子の存在を検出するための携帯用システムであって、
（ａ）複数のサンプルを加熱するために構成されたヒーターと、
（ｂ）一次抗体でコーティングされかつ検出可能なマーカーで標識された二次抗体と結合した支持体上での、標的核酸分子の化学発光を検出するため設計されたルミノメーターと、
（ｃ）化学発光データを記録するように構成されたモニターと
を含む、携帯用システム。