【手続補正書】
【提出日】平成25年1月28日(2013.1.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）（ｉ）第１のハイブリダイズ可能な領域を含む少なくとも１つの第１のリンカーと、（ｉｉ）共有結合を形成することが可能な少なくとも１つの第１の基が共有結合する、第１の成分を準備することと；
（ｂ）（ｉ）前記第１のハイブリダイズ可能な領域とハイブリダイズ可能な第２のハイブリダイズ可能な領域を含む少なくとも１つの第２のリンカーと、（ｉｉ）前記第１の基と共有結合を形成することが可能な少なくとも１つの第２の基が共有結合する、第２の成分を準備することと；
（ｃ）前記第１および第２のハイブリダイズ可能な領域が前記成分とハイブリダイズし、前記成分を連結することを可能にする条件下で、前記第１および第２の成分を接触させることと；及び、
（ｄ）前記連結した成分を、前記第１および第２の基の間で共有結合の形成が可能となる条件に曝露すること；
を含む、２つ以上の成分を共有結合させる方法。
【請求項２】
（ａ）(i) 前記少なくとも１つの第１の基が、前記第１の成分と直接的に共有結合しているか、または、別のリンカーを介して前記第１の成分と結合しており；かつ／または、
(ii) 前記少なくとも１つの第２の基が、第２の成分と直接的に共有結合しているか、または、別のリンカーを介して第２の成分と結合しているか、又は、
（ｂ）前記少なくとも１つの第１の基が、前記第１のリンカーを介して前記第１の成分と共有結合しており、かつ／または、前記少なくとも１つの第２の基が、前記第２のリンカーを介して前記第２の成分と共有結合している請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第１の成分は、２、３または４つの第１のリンカーが、そこに共有結合し、かつ、前記第２の成分は、対応する数の第２のリンカーが、そこに結合し、前記リンカーは、第１および第２のリンカーの１つ以上の対を形成し、各対におけるハイブリダイズ可能な領域は、互いに特異的にハイブリダイズするが、その他の対におけるハイブリダイズ可能な領域のいずれともハイブリダイズしない、請求項１又は２に記載の方法であって、適宜、
（ａ）（ｉ）第１のハイブリダイズ可能な領域を含む第１のリンカー、（ｉｉ）共有結合を形成することが可能な第１の基、（ｉｉｉ）第３のハイブリダイズ可能な領域を含む第３のリンカー、および（ｉｖ）共有結合を形成することが可能な第３の基が共有結合する、第１の成分を準備することと；
（ｂ）（ｉ）第１のハイブリダイズ可能な領域とハイブリダイズ可能な第２のハイブリダイズ可能な領域を含む第２のリンカー、（ｉｉ）第１の基と共有結合を形成することが可能な第２の基、（ｉｉｉ）第３のハイブリダイズ可能な領域とハイブリダイズ可能な第４のハイブリダイズ可能な領域を含む第４のリンカー、および（ｉｖ）第３の基と共有結合を形成することが可能な第４の基が共有結合する、第２の成分を準備することと；
（ｃ）前記第１および第２のハイブリダイズ可能な領域がハイブリダイズし、かつ、前記第３および第４のハイブリダイズ可能な領域がハイブリダイズして、前記成分を連結することが可能な条件下で、前記第１および第２の成分を接触させることと;及び、
（ｄ）前記連結した成分を、前記第１および第２の基と前記第３および第４の基との間で共有結合の形成が可能となる条件に曝露すること；
を含む、前記方法。
【請求項４】
前記第１の成分は、（ｉ）第１のハイブリダイズ可能な領域を含む第１のリンカー、（ｉｉ）共有結合を形成することが可能な第１の基、（ｉｉｉ）第３のハイブリダイズ可能な領域を含む第３のリンカー、および（ｉｖ）共有結合を形成することが可能な第３の基が共有結合し、かつ、前記第２の成分は、（ｉ）前記第１のハイブリダイズ可能な領域とハイブリダイズすることができる第２のハイブリダイズ可能な領域と、前記第３のハイブリダイズ可能な領域とハイブリダイズすることができる第４のハイブリダイズ可能な領域とを含む、第２のリンカー、（ｉｉ）前記第１の基と共有結合を形成することが可能な第２の基、および（ｉｉｉ）前記第３の基と共有結合を形成することが可能な第４の基が共有結合する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
各成分が、（ｉ）異なる成分におけるリンカーのハイブリダイズ可能な領域とハイブリダイズすることができるハイブリダイズ可能な領域を含む少なくとも１つのリンカー、および（ｉｉ）異なる成分における基と共有結合を形成することが可能な少なくとも１つの共有結合基が共有結合する、３、４または５つの成分を結合させることを含む、請求項１に記載の方法であって、適宜、
（ａ）（ｉ）第１のハイブリダイズ可能な領域を含む第１のリンカー、および（ｉｉ）共有結合を形成することが可能な第１の基が共有結合する、第１の成分を準備することと；
（ｂ）（ｉ）前記第１のハイブリダイズ可能な領域とハイブリダイズすることができる第２のハイブリダイズ可能な領域を含む第２のリンカー、（ｉｉ）前記第１の基と共有結合を形成することが可能な第２の基、（ｉｉｉ）第３のハイブリダイズ可能な領域を含む第３のリンカー、および（ｉｖ）共有結合を形成することが可能な第３の基が共有結合する、第２の成分を準備することと；
（ｃ）（ｉ）前記第３のハイブリダイズ可能な領域とハイブリダイズすることができる第４のハイブリダイズ可能な領域を含む第４のリンカー、および（ｉｉ）前記第３の基と共有結合を形成することが可能な第４の基が共有結合する、第３の成分を準備することと；
（ｄ）前記第１、第２および第３の成分を、前記ハイブリダイズ可能な領域が前記成分とハイブリダイズし、連結させることが可能な条件下で、接触させることと；及び、
（ｅ）前記連結した成分を、前記基の間で共有結合の形成が可能となる条件に曝露すること；
を含む、前記方法。
【請求項６】
前記基が、前記１つ以上のハイブリダイズ可能な領域を含むリンカーを介して、それぞれの各成分と共有結合する、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記基のいずれも、それら自体とは反応しない、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
(a) 前記第１の成分および／または前記第２の成分が、ポリペプチド、タンパク質、核酸、化学基、色素、アフィニティータグ、ポリマー、ビーズ、抗体、支持体、固定化金属アフィニティーマトリックス、グルタチオンセファロース、デキストリンセファロース、アフィニティーマトリックス、ＩｇＧセファロース、活性化チオール−セファロース、金属フィルム、ナノ粒子、ガラス、処理ガラス、プラスチック、樹脂表面、固体ナノ細孔、センサー表面および単一分子検出器であるか;
(b) 前記第１の成分が、タンパク質であり、前記第２の成分が、タンパク質、核酸、レポーター基、アフィニティータグまたは支持体であるか;
(c) 前記第１の成分が、核酸結合タンパク質であり、前記第２の成分が、膜貫通タンパク質細孔であるか;
(d) 前記第１の成分が、核酸結合タンパク質であり、前記核酸結合タンパク質が、エキソヌクレアーゼ、ヌクレアーゼ、ポリメラーゼ、ヘリカーゼまたはトポイソメラーゼから得られるか；
(e) 前記第１の成分がエキソヌクレアーゼから得られる核酸結合タンパク質であり、前記エキソヌクレアーゼが、配列番号６またはその変異体のいずれかに示される配列を含むか；
(f) 前記第１の成分がエキソヌクレアーゼから得られる核酸結合タンパク質であり、前記エキソヌクレアーゼが、配列番号６、５２、５４および５６、または、その変異体のいずれかに示される配列を含むか；
(g) 前記第１の成分が、膜貫通タンパク質細孔であり、該膜貫通タンパク質細孔がα−ヘモリジン（α−ＨＬ）であるか；
(h) 前記第１の成分が、α−ヘモリジンであり、該細孔が配列番号２または４またはその変異体のいずれかに示される配列を含むか；
(i) 前記第１の成分が核酸結合タンパク質であり、前記第２の成分が膜貫通タンパク質細孔であり、それぞれの成分から０．０５ｎｍ〜１０ｎｍの距離にあるか；又は
(j) 前記第１の成分が核酸結合タンパク質であり、前記第２の成分が膜貫通タンパク質細孔であり、前記結合した第１の成分と第２の成分との間の距離が、０．１ｎｍ〜５００ｎｍである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記第１および第２のハイブリダイズ可能な領域が核酸を含み、且つ、適宜、前記核酸が、６〜１５ヌクレオチド長である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
(a) 前記第１および第２のハイブリダイズ可能な領域が、１ｐＭ〜１ｍＭの濃度で、０．１ｆＭ〜０．１μＭの親和性を有するか；
(b) 前記第１のハイブリダイズ可能な領域が、配列番号５７の５’末端から初めの１５、２５または３５ヌクレオチドに相当するか、及び／又は、
(c) 前記第１および第２のハイブリダイズ可能な領域が、それぞれ、以下の配列：
（i）配列番号５８および６１に示されるヌクレオチド配列；
（ii）配列番号５９および６２に示されるヌクレオチド配列；
（iii）配列番号６０および６３に示されるヌクレオチド配列；
（iv）配列番号６４および６５に示されるヌクレオチド配列；
（v）配列番号６６および６８に示されるヌクレオチド配列；
（vi）配列番号６７および６９に示されるヌクレオチド配列；
（vii）配列番号７０および７３に示されるヌクレオチド配列；
（viii）配列番号７１および７４に示されるヌクレオチド配列；
（ix）配列番号７２および７５に示されるヌクレオチド配列；
（x）配列番号７６および７７に示されるヌクレオチド配列；又は、
（xi）配列番号７８および６７に示されるヌクレオチド配列；
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記第１および第２の基が、
(a) クリック化学により共有結合を形成し、適宜、前記第１の基が、アジド基であり、前記第２の基が、アルキン基であるか；又は、
(b) 前記第１および第２の基が、ジスルフィド結合、ヨードアセトアミド結合、またはメタセシス反応を介した結合を形成する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法を用いて結合した第１および第２の成分。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の第１および第２のリンカーを用いて、第２の成分と結合した第１の成分。
【請求項１４】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の第１および第２のリンカーの対。
【請求項１５】
第１の成分を第２の成分と結合させるための、請求項１４に記載の一対のリンカーの使用。