【誤訳訂正書】
【提出日】平成25年2月28日(2013.2.28)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
酵母宿主細胞中で、そのシャペロンをコードする遺伝子を欠失するか、あるいは不活性化するとき、該宿主細胞が培養において生存不能であり、そして培地への添加または培地の改変により欠陥を補足することができないという意味において、酵母宿主細胞の生存可能性に対して必須であるシャペロン（HSP10を除く）をコードする遺伝子を、唯一の酵母選択可能なマーカーとして、含んでなる、プラスミド。
【請求項２】
必須シャペロンが酵母シャペロンである、請求項１に記載のプラスミド。
【請求項３】
必須シャペロンがサッカロミセス・セレビシエ由来のシャペロンであり、該シャペロンがCCT2、CCT3、CCT4、CCT5、CCT6、CCT7、CCT8、CNS1、ERO1、HSP60、PDI1、CDC37、KAR2、MGE1、MRS11、NOB1、SSC1、PSE1、TIM9、PAM18およびTCP1から選択される遺伝子によりコードされるタンパク質またはこれらの任意の1つの変異型（この変異型はアミノ酸の保存的置換により得られるものであり、元のタンパク質に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、かつ、元のタンパク質のシャペロン活性を保持しているものである）の配列を含んでなる、請求項２に記載のプラスミド。
【請求項４】
所望の異種タンパク質をコードする遺伝子をさらに含んでなる、請求項１〜３のいずれか１項に記載のプラスミド。
【請求項５】
２μｍファミリープラスミドである、請求項１〜４のいずれか１項に記載のプラスミド。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載のプラスミドを含んでなる酵母またはフィラメント状真菌宿主細胞であって、前記プラスミドの非存在下において宿主細胞が生存不能であり、成長培地中で宿主細胞を増殖させ、前記成長培地に栄養を添加するか、あるいは前記培地を改変することによって生存可能とすることができない、宿主細胞。
【請求項７】
前記プラスミドが、当該宿主に天然に存在する１又は複数の他の遺伝子によってコードされるタンパク質とは異なる配列を有する所望の異種タンパク質をコードする遺伝子を含む、請求項６に記載の宿主細胞。
【請求項８】
所望の異種タンパク質が、非−酵母タンパク質である、請求項７に記載の宿主細胞。
【請求項９】
第１シャペロンタンパク質の配列を含んでなるタンパク質をコードする第１組換え遺伝子と、第２シャペロンタンパク質の配列を含んでなるタンパク質をコードする第２組換え遺伝子とを含んでなるプラスミドを含んでなる酵母またはフィラメント状真菌宿主細胞であって、ここで前記プラスミドによってコードされる第１シャペロンが該宿主細胞の生存可能性に対して必須であり、前記プラスミドの非存在下に、宿主細胞が前記第１シャペロンを産生しない、宿主細胞。
【請求項１０】
所望の異種タンパク質の製造方法において、
（ａ）第１シャペロンタンパク質の配列を含んでなるタンパク質をコードする第１組換え遺伝子、第２シャペロンタンパク質の配列を含んでなるタンパク質をコードする第２組換え遺伝子、及び所望の異種タンパク質をコードする第３組換え遺伝子、を含んでなる宿主細胞を用意し、ここで、前記第１シャペロンと第２シャペロンは異なるものであり；そして
（ｂ）前記宿主細胞を培地中で培養して前記第１遺伝子、第２遺伝子及び第３遺伝子の発現を得る；
ことを含んでなり、前記宿主細胞が請求項９に記載の宿主細胞である、方法。
【請求項１１】
所望の組換えタンパク質を製造する方法において、
プラスミドを含んでなる宿主細胞を準備し、前記プラスミドは宿主細胞の生存のために必須であるシャペロン（「必須シャペロン」）をコードする第１組換え遺伝子を含んでなり、そしてここで、前記プラスミドの非存在下には、宿主細胞はその必須シャペロンを産生することができず、そしてさらに、宿主細胞は所望のタンパク質をコードする遺伝子を含んでなり；
前記必須シャペロンおよび所望のタンパク質の発現を可能とする条件下に宿主細胞を培地中で培養する；
ことを含んでなる、方法。
【請求項１２】
発現された所望のタンパク質を、培養した宿主細胞または培地から単離し；そして／または
こうして単離された所望のタンパク質を商業的に許容される純度に精製し；そして／または
こうして精製されたタンパク質を凍結乾燥するか、あるいは精製された所望のタンパク質を薬学上許容される担体または希釈剤と配合し；そして／または
こうして配合された所望のタンパク質を単位投与形態で提供する；
ことをさらに含んでなる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記宿主細胞が、請求項６〜９のいずれか１項に記載の宿主細胞である、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
所望の異種タンパク質の製造方法において、
（ａ）請求項６〜８のいずれか１項に記載の宿主細胞を準備し、そして
（ｂ）必須シャペロンおよび所望のタンパク質の発現を可能とする条件下に宿主細胞を培地中で培養する、
工程を含んでなる、方法。
【請求項１５】
ポリヌクレオチドをプラスミド中に組込んで修飾されたプラスミドを産生することによって酵母またはフィラメント状真菌宿主細胞中のプラスミドの安定性を増加させるための、該宿主細胞の生存可能性に対して必須であるシャペロン（「必須シャペロン」）（HSP10を除く）をコードする配列を含んでなるポリヌクレオチドの使用であって、ここで宿主細胞はプラスミドの非存在下に前記必須シャペロンを産生することができない、使用。
【請求項１６】
前記プラスミドが2μｍファミリープラスミドである、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記プラスミドが所望の異種タンパク質をコードする遺伝子をさらに含んでなる、請求項１５または１６に記載の使用。
【請求項１８】
前記必須シャペロンがサッカロミセス・セレビシエ由来のシャペロンである、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１９】
前記必須シャペロンがサッカロミセス・セレビシエ由来のシャペロンであり、該シャペロンがCCT2、CCT3、CCT4、CCT5、CCT6、CCT7、CCT8、CNS1、ERO1、HSP60、PDI1、CDC37、KAR2、MGE1、MRS11、NOB1、SSC1、PSE1、TIM9、PAM18およびTCP1から選択される遺伝子によりコードされるタンパク質またはこれらの任意の1つの変異型（この変異型はアミノ酸の保存的置換により得られるものであり、元のタンパク質に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、かつ、元のタンパク質のシャペロン活性を保持しているものである）の配列を含んでなる、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２０】
同時に、宿主細胞中のプラスミドの安定性を増加させ、かつ、タンパク質産物を産生する宿主細胞の能力を増加させるための、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２１】
前記宿主細胞が、非選択培地において培養される、請求項１０〜２０のいずれか１項に記載の方法又は使用。
【請求項２２】
非選択培地が、富培地または複合培地である、請求項２１に記載の方法又は使用。
【請求項２３】
請求項４または５に記載のプラスミドにおいて、異種タンパク質が、
（ｉ）宿主細胞からの分泌を生じさせるのに有効なリーダー配列を含んでなり；そして／又は
（ii）真核生物タンパク質、そのフラグメントまたは変異型であり；そして／又は
（iii）治療的、診断的、工業的、家庭的または栄養的に有用なタンパク質であり；そして／又は
（iv）アルブミン、モノクローナル抗体、エトポシド、血清タンパク質、アンチスタシン、ダニ抗凝固ペプチド、トランスフェリン、ラクトフェリン、エンドスタチン、アンギオスタチン、コラーゲン、免疫グロブリン、dAb、Fab’F(ab’)2、scAb、scFv、クニッツ型ドメインタンパク質、インターフェロン、インターロイキン、IL10、IL11、IL12、インターフェロンα種、インターフェロンβ種、インターフェロンγ種、レプチン、CNTF、CNTFAX15 (AxokineTM) 、IL1-レセプターアンタゴニスト、エリトロポイエチン (EPO) およびEPO模倣物、トロンボポイエチン (TPO) およびTPO模倣物、プロサプチド、シノビリン-N、5-ヘリックス、T20ペプチド、T1249ペプチド、HIV gp41、HIV gp120、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、tPA、ヒルジン、血小板由来増殖因子、副甲状腺ホルモン、プロインスリン、インスリン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド、インスリン様増殖因子、カルシトニン、成長ホルモン、トランスフォーミング増殖因子β、腫瘍壊死因子、G-CSF、GM-CSF、M-CSF、FGF、前形態および活性形態の両方の凝固因子、プラスミノーゲン、フィブリノゲン、トロンビン、プレトロンビン、プロトロンビン、フォン・ウィルブランド因子、α1-抗トリプシン、プラスミノーゲンアクチベーター、神経増殖因子、LACI、血小板由来内皮細胞増殖因子 (PD-ECGF) 、グルコースオキシダーゼ、血清コリンエステラーゼ、アプロチニン、アミロイド前駆体タンパク質、インターαトリプシンインヒビター、アンチトロンビンIII、アポリポタンパク質種、タンパク質C、タンパク質S、代謝物、抗生物質、または上記のいずれかの変異型またはフラグメント、から選択される配列を含んでなり；そして／又は
（ｖ）アルブミンまたはその変異型またはフラグメントの配列を含んでなり；そして／または
（vi）トランスフェリンファミリーのメンバーまたはそれらの変異型またはフラグメントの配列を含んでなり；そして／又は
（vii）他のタンパク質の配列に直接的または間接的に融合した融合タンパク質を含んでなる；
前記プラスミド。
【請求項２４】
酵母宿主細胞が、下記のメンバーである請求項２３に記載のプラスミド: サッカロマイセス (Saccharomyces) 、クライベロマイセス (Kluyveromayces) 、アルクスラ (Arxula) 、ヤロウィア (Yarrowia) 、カンジダ (Candida) 、シゾサッカロマイセス (Schizosaccharomyces) 、デバリオマイセス (Debaryomyces) 、キサントフィロマイセス (Xanthophyllomyces) 、ゲオトリクム (Geotrichum) 、アシュブヤ (Ashbya) 、ホルテア (Hortaea) 、シュワンニオマイセス (Schwanniomyces) 、トリコスポロン (Trichosporon) 、キサントフィロマイセス (Xanthophyllomyces) 、またはピキア (Pichia) 属。
【請求項２５】
宿主細胞が、サッカロマイセス・セレビシエ (Saccharomyces cerevisiae) 、 クライベロマイセス・ラクチス (Kluyveromyces lactis) 、ピキア・パストリス (Pichia pastoris) 、ピキア・メンブラネファシエンス (Pichia membranaefaciens) 、ジゴサッカロマイセス・ロウキシ (Zygosaccharomyces rouxii) 、ジゴサッカロマイセス・バイリイ (Zygosaccharomyces bailii) 、ジゴサッカロマイセス・フェルメンタチ (Zygosaccharomyces fermentati) 、クライベロマイセス・ドロスフィラルム (Kluyveromayces drosphilarum) 、ピキア・メタノリカ (Pichia methanolica) 、ハンゼヌラ・ポリモルファ (Hansenula polymorpha) (また、ピキア・アウグスタ (Pichia augusta) として知られている) 、アルクスラ・アデニニボランス (Arxula adeninivorans) 、ヤロウィア・リポリチカ (Yarrowia lipolytica) 、カンジダ・ボイディニイ (Candida boidinii) 、カンジダ・ウチリス (Candida utilis) またはシゾサッカロマイセス・ポンベ (Schizosaccharomyces pombe)である、請求項２４に記載のプラスミド。
【請求項２６】
前記プラスミドが2μmファミリープラスミドであり、そして下記の条件：
（ａ）プラスミドはpSR1、pSB3またはpSB4であり、そして宿主細胞はジゴサッカロマイセス・ロウキシ (Zygosaccharomyces rouxii) であり、
（ｂ）プラスミドはpSB1またはpSB2であり、そして宿主細胞はジゴサッカロマイセス・バイリイ (Zygosaccharomyces bailii) であり、
（ｃ）プラスミドがpSM1であり、そして宿主細胞はジゴサッカロマイセス・フェルメンタチ (Zygosaccharomyces fermentati) であり、
（ｄ）プラスミドがpKD1であり、そして宿主細胞はクライベロマイセス・ドロスフィラルム (Kluyveromayces drosphilarum) であり、
（ｅ）プラスミドがpPM1であり、そして宿主細胞はピキア・メンブラネファシエンス (Pichia membranaefaciens) であるか、あるいは
（ｆ）プラスミドが2μmプラスミドであり、そして宿主細胞はサッカロマイセス・セレビシエ (Saccharomyces cerevisiae) またはサッカロマイセス・カールスバーゲンシス (Saccharomyces carlsbergensis) である、
を満足する、請求項２４または２５に記載のプラスミド。
【請求項２７】
前記プラスミドが2μmプラスミドであり、そして宿主細胞がサッカロマイセス・セレビシエ (Saccharomyces cerevisiae) またはサッカロマイセス・カールスバーゲンシス (Saccharomyces carlsbergensis) である、請求項２６に記載のプラスミド。
【請求項２８】
請求項１０〜２２のいずれか１項に記載の方法または使用において、異種タンパク質が、
（ｉ）宿主細胞からの分泌を生じさせるのに有効なリーダー配列を含んでなり；そして／又は
（ii）真核生物タンパク質、そのフラグメントまたは変異型であり；そして／又は
（iii）治療的、診断的、工業的、家庭的または栄養的に有用なタンパク質であり；そして／又は
（iv）アルブミン、モノクローナル抗体、エトポシド、血清タンパク質、アンチスタシン、ダニ抗凝固ペプチド、トランスフェリン、ラクトフェリン、エンドスタチン、アンギオスタチン、コラーゲン、免疫グロブリン、dAb、Fab’F(ab’)2、scAb、scFv、クニッツ型ドメインタンパク質、インターフェロン、インターロイキン、IL10、IL11、IL12、インターフェロンα種、インターフェロンβ種、インターフェロンγ種、レプチン、CNTF、CNTFAX15 (AxokineTM) 、IL1-レセプターアンタゴニスト、エリトロポイエチン (EPO) およびEPO模倣物、トロンボポイエチン (TPO) およびTPO模倣物、プロサプチド、シノビリン-N、5-ヘリックス、T20ペプチド、T1249ペプチド、HIV gp41、HIV gp120、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、tPA、ヒルジン、血小板由来増殖因子、副甲状腺ホルモン、プロインスリン、インスリン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド、インスリン様増殖因子、カルシトニン、成長ホルモン、トランスフォーミング増殖因子β、腫瘍壊死因子、G-CSF、GM-CSF、M-CSF、FGF、前形態および活性形態の両方の凝固因子、プラスミノーゲン、フィブリノゲン、トロンビン、プレトロンビン、プロトロンビン、フォン・ウィルブランド因子、α1-抗トリプシン、プラスミノーゲンアクチベーター、神経増殖因子、LACI、血小板由来内皮細胞増殖因子 (PD-ECGF) 、グルコースオキシダーゼ、血清コリンエステラーゼ、アプロチニン、アミロイド前駆体タンパク質、インターαトリプシンインヒビター、アンチトロンビンIII、アポリポタンパク質種、タンパク質C、タンパク質S、代謝物、抗生物質、または上記のいずれかの変異型またはフラグメント、から選択される配列を含んでなり；そして／又は
（ｖ）アルブミンまたはその変異型またはフラグメントの配列を含んでなり；そして／または
（vi）トランスフェリンファミリーのメンバーまたはそれらの変異型またはフラグメントの配列を含んでなり；そして／又は
（vii）他のタンパク質の配列に直接的または間接的に融合した融合タンパク質を含んでなる；
前記方法または使用。
【請求項２９】
真核生物タンパク質が脊椎動物タンパク質である、請求項２８に記載の方法または使用。
【請求項３０】
酵母宿主細胞が、下記のメンバーである請求項１０〜２２および２８のいずれか一項に記載の方法または使用: サッカロマイセス (Saccharomyces) 、クライベロマイセス (Kluyveromayces) 、アルクスラ (Arxula) 、ヤロウィア (Yarrowia) 、カンジダ (Candida) 、シゾサッカロマイセス (Schizosaccharomyces) 、デバリオマイセス (Debaryomyces) 、キサントフィロマイセス (Xanthophyllomyces) 、ゲオトリクム (Geotrichum) 、アシュブヤ (Ashbya) 、ホルテア (Hortaea) 、シュワンニオマイセス (Schwanniomyces) 、トリコスポロン (Trichosporon) 、キサントフィロマイセス (Xanthophyllomyces) 、またはピキア (Pichia) 属。
【請求項３１】
宿主細胞が、サッカロマイセス・セレビシエ (Saccharomyces cerevisiae) 、 クライベロマイセス・ラクチス (Kluyveromyces lactis) 、ピキア・パストリス (Pichia pastoris) 、ピキア・メンブラネファシエンス (Pichia membranaefaciens) 、ジゴサッカロマイセス・ロウキシ (Zygosaccharomyces rouxii) 、ジゴサッカロマイセス・バイリイ (Zygosaccharomyces bailii) 、ジゴサッカロマイセス・フェルメンタチ (Zygosaccharomyces fermentati) 、クライベロマイセス・ドロスフィラルム (Kluyveromayces drosphilarum) 、ピキア・メタノリカ (Pichia methanolica) 、ハンゼヌラ・ポリモルファ (Hansenula polymorpha) (また、ピキア・アウグスタ (Pichia augusta) として知られている) 、アルクスラ・アデニニボランス (Arxula adeninivorans) 、ヤロウィア・リポリチカ (Yarrowia lipolytica) 、カンジダ・ボイディニイ (Candida boidinii) 、カンジダ・ウチリス (Candida utilis) またはシゾサッカロマイセス・ポンベ (Schizosaccharomyces pombe)である、請求項３０に記載の方法または使用。
【請求項３２】
前記プラスミドが2μmファミリープラスミドであり、そして下記の条件：
（ａ）プラスミドはpSR1、pSB3またはpSB4であり、そして宿主細胞はジゴサッカロマイセス・ロウキシ (Zygosaccharomyces rouxii) であり、
（ｂ）プラスミドはpSB1またはpSB2であり、そして宿主細胞はジゴサッカロマイセス・バイリイ (Zygosaccharomyces bailii) であり、
（ｃ）プラスミドがpSM1であり、そして宿主細胞はジゴサッカロマイセス・フェルメンタチ (Zygosaccharomyces fermentati) であり、
（ｄ）プラスミドがpKD1であり、そして宿主細胞はクライベロマイセス・ドロスフィラルム (Kluyveromayces drosphilarum) であり、
（ｅ）プラスミドがpPM1であり、そして宿主細胞はピキア・メンブラネファシエンス (Pichia membranaefaciens) であるか、あるいは
（ｆ）プラスミドが2μmプラスミドであり、そして宿主細胞はサッカロマイセス・セレビシエ (Saccharomyces cerevisiae) またはサッカロマイセス・カールスバーゲンシス (Saccharomyces carlsbergensis) である、
を満足する、請求項３０または３１に記載の方法または使用。
【請求項３３】
前記プラスミドが2μmプラスミドであり、そして宿主細胞がサッカロマイセス・セレビシエ (Saccharomyces cerevisiae) またはサッカロマイセス・カールスバーゲンシス (Saccharomyces carlsbergensis) である、請求項３２に記載の方法または使用。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７５】
1つの研究において、世界中からの自然サッカロマイセス・セレビシエ (Saccharomyces cerevisiae) の約80%は2μmに対して相同的であるDNAを含有した (サザンブロット分析による) (Hollenberg、1982、Current Topics in Microbiology and Immunobiology 96、119) 。さらに、変動 (遺伝的形態) がサッカロマイセス・セレビシエ (S. cerevisiae) およびサッカロマイセス・カールスバーゲンシス (S. carlsbergensis) の中に見出される2μmプラスミドの自然集団内で発生し、NCBI配列 (受け入れ番号NC 001398) は1例である。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６０】
例えば、プラスミドがpSR1、pSR3およびpSR4に基づく場合、適当な酵母はジゴサッカロマイセス・ロウキシ (Zygosaccharomyces rouxii) である; プラスミドがpSR1またはpSR2に基づく場合、適当な酵母はジゴサッカロマイセス・バイリイ (Zygosaccharomyces bailii) である; プラスミドがpSR1に基づく場合、適当な酵母はジゴサッカロマイセス・フェルメンタチ (Zygosaccharomyces fermentati) である; プラスミドがpKD1に基づく場合、適当な酵母はクライベロマイセス・ドロスフィラルム (Kluyveromayces drosphilarum) である ; プラスミドがpPM1に基づく場合、適当な酵母はピキア・メンブラネファシエンス (Pichia membranaefaciens) である; プラスミドが2μmプラスミドに基づく場合、適当な酵母はサッカロマイセス・セレビシエ (Saccharomyces cerevisiae) またはサッカロマイセス・カールスバーゲンシス (Saccharomyces carlsbergensis) である。プラスミドは2μmプラスミドに基づき、そして酵母細胞はサッカロマイセス・セレビシエ (Saccharomyces cerevisiae) であることが特に好ましい。