【手続補正書】
【提出日】平成25年6月25日(2013.6.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）ヒト血液癌と関係がある１つまたは複数のヒト癌遺伝子を発現するように遺伝子操作されたヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）を、免疫不全非ヒト哺乳動物に導入する工程；および
ｂ）前記哺乳動物を、前記哺乳動物中で前記ヒトＨＳＣにより前記非ヒト哺乳動物の血液細胞系統が再構成されて前記癌遺伝子が発現される条件下で維持する工程；
を含み、
それによってヒト血液癌のモデルである非ヒト哺乳動物を作製する、
ヒト血液癌のモデルである非ヒト哺乳動物を作製する方法。
【請求項２】
前記免疫不全非ヒト哺乳動物がマウスである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記マウスが、重症複合免疫不全変異を保持する非肥満糖尿病マウス（ＮＯＤ／ｓｃｉｄマウス）；重症複合免疫不全変異を保持し、かつサイトカイン受容体γ鎖の遺伝子を欠く非肥満糖尿病マウス（ＮＯＤ／ｓｃｉｄ  ＩＬ２Ｒγ−／−マウス）およびＢａｌｂ／ｃ  ｒａｇ−／− γｃ−／−マウスからなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＨＳＣを前記マウスに導入する前に、前記マウスが致死量以下で照射される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ヒトＨＳＣが、ＣＤ３４＋細胞、ＣＤ１３３＋細胞、ＣＤ３４＋ＣＤ１３３＋細胞またはそれらの組合せである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記マウスが、ヒトリンパ腫またはヒト白血病のモデルである、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記リンパ腫が、濾胞性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、またはマントル細胞リンパ腫であり；前記白血病が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞ＡＬＬ、プロＢ細胞ＡＬＬ、プレＢ  ＡＬＬもしくナイーブＢ  ＡＬＬ、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、または慢性骨髄性白血病である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記１つまたは複数の癌遺伝子が、ｍｙｃ、ｂｃｌ−２、ＡＢＬ、ＡＫＴ、ＲＡＳ、ＢＲＡＣ１、ＢＲＡＣ２、ＣＢＬ、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、ＰＭＬ、変異体ＩＤＨ１、変異体ＩＤＨ２またはそれらの組合せである、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記ＨＳＣが、前記ｍｙｃ癌遺伝子、前記ｂｃｌ−２癌遺伝子またはそれらの組合せを発現するウイルスでトランスフェクトされる、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ウイルスがレンチウイルスである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記レンチウイルスが、レポーター蛋白質をコード化する遺伝子をさらに発現する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記レポーター蛋白質が、緑色蛍光蛋白質（ＧＦＰ）、赤色蛍光蛋白質（ＲＦＰ）、抗生物質耐性蛋白質、ルシフェラーゼ、細胞表面蛋白質またはそれらの組合せである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記癌遺伝子および前記レポーター遺伝子が細胞特異的プロモーターに操作可能に連結される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞特異的プロモーターがヒトＢ細胞特異的プロモーターである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ヒトＢ細胞特異的プロモーターが、ヒトＣＤ１９プロモーターである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記レンチウイルスが、水疱性口内炎ウイルスＧ（ＶＳＶＧ）シュードタイプ化レンチウイルスである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＨＳＣが、成長因子を加えた無血清培地中で前記ＨＳＣを培養することによってインビトロで増殖される、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
間葉幹細胞（ＭＳＣ）の支持細胞層を導入する工程をさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記成長因子が、幹細胞因子、トロンボポエチン、線維芽細胞成長因子１、インスリン成長因子結合蛋白質２（ＩＧＦＢＰ２）、アンギオポエチン様蛋白質５（Ａｎｇｐｔｌ５）、またはそれらの組合せである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＨＳＣが、前記ＨＳＣのインビトロ増殖中に、前記レンチウイルスでトランスフェクトされる、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＨＳＣが癌患者から得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記癌患者がリンパ性癌または白血病を有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記リンパ性癌が濾胞性リンパ腫であり、前記白血病が急性リンパ芽球性白血病である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記非ヒト哺乳動物の血液細胞系統の再構成を、前記非ヒト哺乳動物中の前記ヒトＨＳＣによって評価する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記再構成が、前記非ヒト哺乳動物で前記１つまたは複数のヒト癌遺伝子を発現するヒト白血球を検出することによって評価される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
ｃ）工程ｂ）の前記非ヒト哺乳動物から得られる前記１つまたは複数のヒト癌遺伝子を発現する前記ヒト細胞を、前記１つまたは複数の免疫不全非ヒト哺乳動物に導入する工程；および
ｄ）ｃ）の前記１つまたは複数の非ヒト哺乳動物を、前記１つまたは複数の非ヒト哺乳動物中で前記ヒトＨＳＣにより前記１つまたは複数の非ヒト哺乳動物の血液細胞系統が再構成されて前記癌遺伝子が発現される条件下で維持する工程；
を含み、
それによって、ヒト血液癌のモデルである１つまたは複数の非ヒト哺乳動物を作製する、
ヒト血液癌のモデルである１つまたは複数の非ヒト哺乳動物を作製することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
工程ｃ）の前記非ヒト哺乳動物から得られる前記１つまたは複数のヒト癌遺伝子を発現する前記ヒト細胞が、前記非ヒト哺乳動物の脾臓、骨髄、またはそれらの組合せから得られる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
１つまたは複数の腫瘍サプレッサー遺伝子を抑制する核酸を前記ＨＳＣ、前記ＨＳＣの子孫またはそれらの組合せに含むように遺伝子操作されたＨＳＣを導入する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
ａ）１つまたは複数の腫瘍サプレッサー遺伝子を抑制する核酸をヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）、前記ＨＳＣの子孫またはそれらの組合せに含むように遺伝子操作されたヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）を、免疫不全非ヒト哺乳動物に導入する工程；および
ｂ）前記哺乳動物を、前記哺乳動物中で前記ヒトＨＳＣにより前記非ヒト哺乳動物の血液細胞系統が再構成されて前記１つまたは複数の腫瘍サプレッサー遺伝子の発現が抑制される条件下で維持する工程；
を含み、
それによって、ヒト血液癌のモデルである非ヒト哺乳動物を作製する、
ヒト血液癌のモデルである非ヒト哺乳動物を作製する方法。
【請求項３０】
前記血液癌患者の造血幹細胞（ＨＳＣ）を、免疫不全非ヒト哺乳動物に導入する工程、および
前記非ヒト哺乳動物を、前記哺乳動物中で前記ＨＳＣにより前記非ヒト哺乳動物の血液細胞系統が再構成されて前記癌患者の前記１つまたは複数の癌遺伝子が発現される条件下で維持する工程
を含み、
それによって血液癌患者のモデルである非ヒト哺乳動物を作製する、ヒト血液癌患者のモデルである非ヒト哺乳動物を作製する方法。
【請求項３１】
薬剤または治療を、前記血液癌患者のモデルである前記非ヒト哺乳動物に投与する工程、および
前記癌患者を治療するために前記薬剤または前記治療を使用できるかどうかを決定する工程をさらに含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
請求項１〜３１のいずれかに記載の方法で作られる非ヒト哺乳動物。
【請求項３３】
ａ）１つまたは複数の薬剤を、請求項３２に記載の非ヒト哺乳動物に投与する工程；および
ｂ）前記非ヒト哺乳動物におけるヒト血液癌が緩和されるかどうかを決定する工程；
を含み、
前記非ヒト哺乳動物における前記癌が、前記非ヒト哺乳動物で緩和されるのであれば、その場合は前記１つまたは複数の薬剤または治療プロトコールを、前記ヒト血液癌の治療に使用できる、
ヒト血液癌を治療するために使用できる１つまたは複数の薬剤または治療方式を同定する方法。
【請求項３４】
有効量の抗ＣＤ５２抗体および１つまたは複数の化学療法剤を含む、白血病の治療を必要としている個体において白血病を治療するための医薬組成物であって、該抗ＣＤ５２抗体および該化学療法剤が該個体に同時に投与される、医薬組成物。
【請求項３５】
前記抗ＣＤ５２抗体がアレムツズマブであり、前記１つまたは複数の化学療法剤がシクロホスファミドである、請求項３４に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
前記アレムツズマブおよび前記シクロホスファミドの投与後、前記個体の骨髄における癌細胞負荷が１０，０００分の１に減少する、請求項３５に記載の医薬組成物。