【手続補正書】
【提出日】平成25年7月23日(2013.7.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水溶性ポリマーを、血液凝固タンパク質の酸化炭水化物部分に共役させる方法であって、共役を可能にする条件下で、前記酸化炭水化物部分を、活性化水溶性ポリマーと接触させることを含み、
前記血液凝固タンパク質は、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）、第ＦＶ因子（ＦＶ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）、トロンビン（ＦＩＩ）、プロテインＣ、プロテインＳ、ｔＰＡ、ＰＡＩ−１、組織因子（ＴＦ）、およびＡＤＡＭＴＳ１３プロテアーゼ、またはその生物学的に活性なフラグメント、誘導体、もしくは変異体から成る群より選択され、
前記水溶性ポリマーは、活性アミノオキシ基を含有し、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、デンプン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボン酸塩、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）から成る群より選択され、
前記炭水化物部分は、過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）、四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）、および過ルテニウム酸カリウム（ＫＲｕＯ４）から成る群より選択される酸化剤を含む緩衝液でのインキュベーションによって酸化され、オキシム連結が、前記酸化炭水化物部分と前記水溶性ポリマー上の前記活性アミノオキシ基との間に形成される、方法。
【請求項２】
前記水溶性ポリマーは、ＰＳＡである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＰＳＡは、１０〜３００個のシアル酸単位から成る、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記血液凝固タンパク質は、ＦＩＸである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記血液凝固タンパク質は、ＦＶＩＩａである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記血液凝固タンパク質は、ＦＶＩＩＩである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記血液凝固タンパク質の前記酸化炭水化物部分は、前記血液凝固タンパク質の活性化ペプチド内に位置する、請求項４〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＰＳＡは、活性化アミノオキシリンカーを、酸化ＰＳＡと反応させることによって、調製され、
前記アミノオキシリンカーは、
ａ）式：
【化１】
2013500343.tif 000001
の３−オキサ−ペンタン−１，５−ジオキシアミンリンカー、および
ｂ）式：
【化２】
2013500343.tif 000002
の３，６，９−トリオキサ−ウンデカン−１，１１−ジオキシアミンリンカーから成る群より選択され、
前記ＰＳＡは、酸化剤でのインキュベーションによって酸化され、前記ＰＳＡの非還元末端において、末端アルデヒド基を形成する、請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
前記アミノオキシリンカーは、３−オキサ−ペンタン−１，５−ジオキシアミンである、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記酸化剤は、ＮａＩＯ４である、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
前記酸化炭水化物部分を、前記活性化水溶性ポリマーと接触させることは、アニリンおよびアニリン誘導体から成る群より選択される求核触媒を含む緩衝液中で生じる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
シアノ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ３）およびアスコルビン酸（ビタミンＣ）から成る群より選択される還元化合物を含む、緩衝液中で、前記共役させた血液凝固タンパク質をインキュベートすることによって、前記共役させた血液凝固タンパク質中のオキシム連結を還元させるステップをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１４】
前記還元化合物は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ３）である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法によって産生される、修飾された血液凝固タンパク質。
【請求項１６】
（ａ）ＦＩＸ分子、またはその生物学的に活性なフラグメント、誘導体、もしくは変異体と、
（ｂ）前記（ａ）のＦＩＸ分子に結合した少なくとも１つのアミノオキシＰＳＡであって、１つまたは複数の炭水化物部分を介して前記ＦＩＸに付着する、アミノオキシＰＳＡと、を含む、修飾されたＦＩＸ。
【請求項１７】
（ａ）ＦＶＩＩａ分子、またはその生物学的に活性なフラグメント、誘導体、もしくは変異体と、
（ｂ）前記（ａ）のＦＶＩＩａ分子に結合した少なくとも１つのアミノオキシＰＳＡであって、１つまたは複数の炭水化物部分を介して前記ＦＶＩＩａに付着する、アミノオキシＰＳＡと、を含む、修飾されたＦＶＩＩａ。
【請求項１８】
（ａ）ＦＶＩＩＩ分子、またはその生物学的に活性なフラグメント、誘導体、もしくは変異体と、
（ｂ）前記（ａ）のＦＶＩＩＩ分子に結合した少なくとも１つのアミノオキシＰＳＡであって、１つまたは複数の炭水化物部分を介して前記ＦＶＩＩＩに付着する、アミノオキシＰＳＡと、を含む、修飾されたＦＶＩＩＩ。
【請求項１９】
（ａ）ＦＩＸ分子、またはその生物学的に活性なフラグメント、誘導体、もしくは変異体と、
（ｂ）前記（ａ）のＦＩＸ分子に結合した少なくとも１つのアミノオキシＰＥＧであって、１つまたは複数の炭水化物部分を介して前記ＦＩＸに付着する、アミノオキシＰＥＧと、を含む、修飾されたＦＩＸ。
【請求項２０】
（ａ）ＦＶＩＩａ分子、またはその生物学的に活性なフラグメント、誘導体、もしくは変異体と、
（ｂ）前記（ａ）のＦＶＩＩａ分子に結合した少なくとも１つのアミノオキシＰＥＧであって、１つまたは複数の炭水化物部分を介して前記ＦＶＩＩａに付着する、アミノオキシＰＥＧと、を含む、修飾されたＦＶＩＩａ。
【請求項２１】
（ａ）ＦＶＩＩＩ分子、またはその生物学的に活性なフラグメント、誘導体、もしくは変異体と、
（ｂ）前記（ａ）のＦＶＩＩＩ分子に結合した少なくとも１つのアミノオキシＰＥＧであって、１つまたは複数の炭水化物部分を介して前記ＦＶＩＩＩに付着する、アミノオキシＰＥＧと、を含む、修飾されたＦＶＩＩＩ。
【請求項２２】
活性アミノオキシリンカーを含む水溶性ポリマーであって、前記水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、分岐ＰＥＧ、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、デンプン、デキストラン、カルボキシメチル−デキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボン酸塩、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリスチレン−コ−マレイン酸無水物、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）、２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）から成る群より選択され、前記活性アミノオキシリンカーは、
ａ）式：
【化３】
2013500343.tif 000003
の３−オキサ−ペンタン−１，５−ジオキシアミンリンカー、および
ｂ）式：
【化４】
2013500343.tif 000004
の３，６，９−トリオキサ−ウンデカン−１，１１−ジオキシアミンリンカーから成る群より選択される、水溶性ポリマー。