【手続補正書】
【提出日】平成25年6月21日(2013.6.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
グラム陰性細菌の細胞壁を分解する活性を有するエンドリシン、および、該エンドリシンのN末端もしくはC末端、または両方の末端において融合される両親媒性ペプチドストレッチから構成される融合タンパク質であって、該両親媒性ペプチドが、約5〜約100個のアミノ酸残基を含み、該アミノ酸残基の1つまたは複数が、正に荷電したアミノ酸残基であるリジンおよび／またはアルギニンであり、該アミノ酸残基の少なくとも60％が、疎水性のアミノ酸残基であるバリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、システイン、アラニン、チロシン、スレオニン、セリン、プロリン、および／またはグリシンである、前記融合タンパク質。
【請求項２】
両親媒性ペプチドストレッチが、5〜50個のアミノ酸残基を含む、請求項1記載の融合タンパク質。
【請求項３】
両親媒性ペプチドストレッチが、天然に存在するペプチドである、請求項1または2記載の融合タンパク質。
【請求項４】
前記アミノ酸残基の少なくとも30％が、正に荷電したアミノ酸残基であるリジン、アルギニン、および／またはヒスチジンである、前記請求項のいずれか一項記載の融合タンパク質。
【請求項５】
両親媒性ペプチドストレッチが、SEQ ID NO: 11、6、7、8、9、12、13、14、15、16、19、26、27、28、29、30、および31からなる群より選択される、前記請求項のいずれか一項記載の融合タンパク質。
【請求項６】
エンドリシンが、カンピロバクター属（Campylobacter）に対して細胞壁分解活性を有する、前記請求項のいずれか一項記載の融合タンパク質。
【請求項７】
エンドリシンが、シュードモナス・エルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）ファージΦKZおよびELのエンドリシンに由来する、前記請求項のいずれか一項記載の融合タンパク質。
【請求項８】
エンドリシンが、SEQ ID NO: 25、22、24、2、3、4、5、18、20、21もしくは23に記載のアミノ酸を有するエンドリシン、またはそれぞれの野生型エンドリシンの溶解活性の少なくとも60％を有するそれらの改変されたエンドリシンである、請求項1〜6のいずれか一項記載の融合タンパク質。
【請求項９】
N末端に追加的なアミノ酸残基を呈する、前記請求項のいずれか一項記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
C末端および／またはN末端にタグまたは追加的なタンパク質を含む、前記請求項のいずれか一項記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
タグまたは追加的なタンパク質が、1つまたは複数の追加的なアミノ酸残基によって融合タンパク質に連結されている、請求項10記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
ペプチドストレッチが、1つまたは複数の追加的なアミノ酸残基によって融合タンパク質に連結されている、前記請求項のいずれか一項記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
SEQ ID NO: 46、82、95、36、37、38、39、40、43、45、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、77、78、81、83、84、85、86、87、88、89、90、96、97、98、または99に記載のアミノ酸配列を示す、前記請求項のいずれか一項記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
請求項1〜13のいずれか一項記載の融合タンパク質をコードする、単離された核酸分子。
【請求項１５】
請求項14記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項１６】
請求項14記載の核酸分子、または請求項15記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項１７】
細菌細胞または酵母細胞である、請求項16記載の宿主細胞。
【請求項１８】
請求項1〜13のいずれか一項記載の融合タンパク質を含む、薬学的組成物。
【請求項１９】
医用薬剤、診断手段、または美容用物質として使用するための、請求項18記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
グラム陰性細菌感染症の処置または予防用の医用薬剤として使用するための、請求項18記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
殺菌剤として使用するための、請求項18記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
食材の、食品加工器具の、食品加工設備の、食材と接触する表面の、医療装置の、病院および手術室における表面の、グラム陰性細菌汚染の処置または予防のための、請求項1〜13のいずれか一項記載の融合タンパク質の使用。
【請求項２３】
医薬、食品もしくは飼料における診断手段、または環境診断法として使用するための、請求項18記載の薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本目的は、添付の特許請求の範囲において定義される事項によって解決される。
[本発明1001]
グラム陰性細菌の細胞壁を分解する活性を有する酵素、および、該酵素のN末端もしくはC末端、または両方の末端において融合されるペプチドストレッチから構成される融合タンパク質であって、該ペプチドストレッチが、両親媒性ペプチド、スシ（sushi）ペプチド、デフェンシン、疎水性ペプチド、または抗微生物ペプチドである、融合タンパク質。
[本発明1002]
SEQ ID NO: 63〜90記載のアミノ酸配列を呈する、本発明1001の融合タンパク質。
[本発明1003]
N末端に追加的なアミノ酸残基を呈する、本発明1001または1002の融合タンパク質。
[本発明1004]
C末端および／またはN末端にタグまたは追加的なタンパク質を含む、前記本発明のいずれかの融合タンパク質。
[本発明1005]
タグまたは追加的なタンパク質が、1つまたは複数の追加的なアミノ酸残基によって融合タンパク質に連結されている、本発明1004の融合タンパク質。
[本発明1006]
ペプチドストレッチが、1つまたは複数の追加的なアミノ酸残基によって融合タンパク質に連結されている、前記本発明のいずれかの融合タンパク質。
[本発明1007]
酵素が、エンドリシン、オートリシン、またはバクテリオシンである、本発明1001の融合タンパク質。
[本発明1008]
酵素が、SEQ ID NO: 22〜25記載のアミノ酸配列を呈する、本発明1007の融合タンパク質。
[本発明1009]
抗微生物ペプチドが、SEQ ID NO: 6〜16または26〜31記載のアミノ酸配列を呈する、本発明1001の融合タンパク質。
[本発明1010]
スシペプチドが、SEQ ID NO: 32記載のアミノ酸配列を呈する、本発明1001の融合タンパク質。
[本発明1011]
疎水性ペプチドが、SEQ ID NO: 28、33、または35記載のアミノ酸配列を呈する、本発明1001の融合タンパク質。
[本発明1012]
グラム陰性細菌が、
腸内細菌科（Enterobacteriaceae）、
とりわけエシェリキア属（Escherichia）、サルモネラ属（Salmonella）、シゲラ属（Shigella）、シトロバクター属（Citrobacter）、エドワードシエラ属（Edwardsiella）、エンテロバクター属（Enterobacter）、ハフニア属（Hafnia）、クレブシエラ属（Klebsiella）、モルガネラ属（Morganella）、プロテウス属（Proteus）、プロビデンシア属（Providencia）、セラチア属（Serratia）、およびエルシニア属（Yersinia）、
シュードモナス科（Pseudomonadaceae）、
とりわけシュードモナス属（Pseudomonas）、バークホルデリア属（Burkholderia）、ステノトロホモナス属（Stenotrophomonas）、シェワネラ属（Shewanella）、スフィンゴモナス属（Sphingomonas）およびコマモナス属（Comamonas）、
ナイセリア属（Neisseria）、モラクセラ属（Moraxella）、ビブリオ属（Vibrio）、アエロモナス属（Aeromonas）、ブルセラ属（Brucella）、フランシセラ属（Francisella）、ボルデテラ属（Bordetella）、レジオネラ属（Legionella）、バルトネラ属（Bartonella）、コクシエラ属（Coxiella）、ヘモフィルス属（Haemophilus）、パスツレラ属（Pasteurella）、マンヘミア属（Mannheimia）、アクチノバチルス属（Actinobacillus）、ガードネレラ属（Gardnerella）、
スピロヘータ科（Spirochaetaceae）、
とりわけトレポネーマ属（Treponema）およびボレリア属（Borrelia）、
レプトスピラ科（Leptospiraceae）、カンピロバクター属（Campylobacter）、ヘリコバクター属（Helicobacter）、スピリルム属（Spirillum）、ストレプトバチルス属（Streptobacillus）、
バクテロイデス科（Bacteroidaceae）、
とりわけバクテロイデス属（Bacteroides）、フゾバクテリウム属（Fusobacterium）、プレボテラ属（Prevotella）およびポルフィロモナス属（Porphyromonas）、ならびに
アシネトバクター属（Acinetobacter）、
とりわけA. バウマニ（A. baumanii）
からなる群より選択される、前記本発明のいずれかの融合タンパク質。
[本発明1013]
両親媒性ペプチドが、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、システイン、アラニン、チロシン、ヒスチジン、スレオニン、セリン、プロリン、およびグリシン残基からなる群より選択される少なくとも1つの疎水性アミノ酸残基と組み合わせて、リジン、アルギニン、およびヒスチジン残基からなる群より選択される少なくとも1つの正に荷電したアミノ酸残基を含む、本発明1001の融合タンパク質。
[本発明1014]
両親媒性ペプチドにおけるアミノ酸残基の少なくとも約70％が、アルギニンまたはリジン残基のいずれかであり、かつ該両親媒性ペプチドにおける該アミノ酸残基の少なくとも約30％が、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、システイン、アラニン、チロシン、ヒスチジン、スレオニン、セリン、プロリン、またはグリシン残基である、本発明1001の融合タンパク質。
[本発明1015]
ペプチドストレッチが、約5〜約100個のアミノ酸残基、とりわけ約5〜50個のアミノ酸残基、とりわけ約5〜30個のアミノ酸残基を含む、前記本発明のいずれかの融合タンパク質。
[本発明1016]
本発明1001〜1015のいずれかの融合タンパク質をコードする、単離された核酸分子。
[本発明1017]
本発明1016の核酸分子を含む、ベクター。
[本発明1018]
本発明1016の核酸分子、または本発明1017のベクターを含む、宿主細胞。
[本発明1019]
細菌細胞または酵母細胞である、本発明1018の宿主細胞。
[本発明1020]
医用薬剤、診断手段、または美容用物質としての使用のための、本発明1001〜1015のいずれかの融合タンパク質。
[本発明1021]
グラム陰性細菌感染症の処置または予防用の医用薬剤としての使用のための、本発明1001〜1015のいずれかの融合タンパク質。
[本発明1022]
殺菌剤としての使用のための、本発明1001〜1015のいずれかの融合タンパク質。
[本発明1023]
食材の、食品加工器具の、食品加工設備の、食材と接触する表面の、医療装置の、病院および手術室における表面の、グラム陰性細菌汚染の処置または予防のための、本発明1001〜1015のいずれかの融合タンパク質の使用。
[本発明1024]
医薬、食品、もしくは飼料における診断手段、または環境診断法としての、本発明1001〜1015のいずれかの融合タンパク質の使用。
[本発明1025]
本発明1001〜1015のいずれかの融合タンパク質を含む、薬学的組成物。