【手続補正書】
【提出日】平成25年3月13日(2013.3.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）少なくとも１つの水性キャビティを取り囲む少なくとも１つの脂質二重層であって、前記脂質はホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質を含む、少なくとも１つの脂質二重層と、
ｂ）前記少なくとも１つの水性キャビティ内に含有される少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）と、
ｃ）前記少なくとも１つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも１つの疎水性薬物物質と、
を含む、小胞薬物送達系。
【請求項２】
前記脂質が、少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質又は陰イオン性脂質を更に含む、請求項１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項３】
前記少なくとも１つのｓｉＲＮＡが、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、又はそれらの組み合わせを含む、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項４】
前記ｓｉＲＮＡのヌクレオチド配列が、アンチセンスオリゴヌクレオチド、血漿ＤＮＡ又はヒトゲノムに由来する、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項５】
前記疎水性薬物が、タキソイド、ドセタキセル、パクリタキセル、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリコマイシン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲン受容体結合剤、タキソール、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランスプラチナム、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキサート、シクロスポリン、ミケラミンＢ、ブリオスタチン−１、ハロモン、シスプラチン、ＥＰＯ９０６又はそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項６】
前記疎水性薬物がＥＰＯ９０６である、請求項５に記載の小胞薬物送達系。
【請求項７】
前記少なくとも１つの更なる中性脂質が、コレステロール、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＬＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジラウリルオイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、１−ミリストイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）、１−パルミトイル−２−ミリストイルホスファチジルコリン（ＰＭＰＣ）、１−パルミトイル−２−ステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）、１−ステアロイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＳＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＡＰＣ）、１，２−ジアラキドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＢＰＣ）、１，２−ジエイコセノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＥＰＣ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、リソホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン  ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、リソホスファチジルエタノールアミン、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＥＧ−７５０−ＤＳＰＥ、−ＭＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ及びＭＰＥＧ−５０００−ＤＳＰＥ）、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＥＧ−２０００−ＤＰＰＥ及びＭＰＥＧ−５０００−ＤＰＰＥ）、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＥＧ−２０００−ＤＭＰＥ及びＭＰＥＧ−５０００−ＤＭＰＥ）又はそれらの組み合わせである、請求項２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項８】
前記中性脂質が、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＣ、ＤＭＰＣ、ＰＬＰＣ、ＰＥ、ＭＰＥＧ−２０００−ＤＭＰＥ又はそれらの組み合わせである、請求項７に記載の小胞薬物送達系。
【請求項９】
前記少なくとも１つの更なる陽イオン性脂質が、Ｎ−１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−（４’−トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジオレオイル−３−（４’−トリメチルアンモニオ）ブタノイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＯＴＢ）、１，２−ジオレオイル−３−スクシニル−ｓｎ−グリセロールコリンエステル（ＤＯＳＣ）、コレステリル（４’−トリメチルアンモニオ）ブタノエート（ＣｈｏＴＢ）、１，２−ジオレオイル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド  ＤＯＲＩ、１，２−ジオレイルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、Ｏ，Ｏ’−ジドデシル−Ｎ−ｐ−（２−トリメチルアンモニオエチルオキシ）ベンゾイル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド、リポスペルミン、ＤＣ−Ｃｈｏｌ（３ａ−Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’’−ジメチルアミノエタン）カルボニルコレステロール）、リポポリ（Ｌ−リシン）、Ｎ−（ａ−トリメチルアンモニオアセチル）−ジドデシル−Ｄ−グルタメートクロリド（ＴＭＡＧ）、又はそれらの組み合わせである、請求項２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１０】
前記少なくとも１つの更なる陰イオン性脂質が、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、脳ホスファチジルセリン（ＢＰＳ）、ジラウリルオイルホスファチジルグリセロール（ＤＬＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、又はそれらの組み合わせである、請求項２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１１】
更なる医薬上許容される賦形剤を更に含む、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１２】
前記更なる医薬上許容される賦形剤が、コレステロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はトコフェロールからなる群から選択される、安定剤である、請求項１１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１３】
前記ｓｉＲＮＡが、過形成細胞又は癌性細胞の増殖を促進する遺伝子の翻訳を阻害する、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１４】
前記ｓｉＲＮＡが１５〜５０個の核酸塩基である、請求項１又は２に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１５】
前記遺伝子が、ＥｐｈＡ２、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）、［ベータ］２−アドレナリン受容体（［ベータ］２ＡＲ）、ＥＳＲ１、腫瘍抑制タンパク質ｐＲＢ、ＭＤＲ−１、ＮＫカッパＢ及びＮｅｋ２からなる群から選択される、請求項１３に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１６】
標的化部分を更に含む、請求項１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１７】
前記標的化部分が、葉酸−ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥトランスフェリン、アルファ−トコフェロール、レチノイン酸及びＲＧＤペプチドからなる群から選択される、請求項１６に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１８】
コレステロール、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミンポリエチレングリコール２０００（ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２０００）及びトコフェロールを更に含む、請求項９に記載の小胞薬物送達系。
【請求項１９】
ＰＣ：コレステロール：ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２０００：トコフェロールの比が、約８１．９：１５．４：２：０．７（モル濃度）である、請求項１８に記載の小胞薬物送達系。
【請求項２０】
脂質：ｓｉＲＮＡの比が、１０：１（質量）から２０：１（質量）の間の範囲である、請求項１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項２１】
リン脂質：ｓｉＲＮＡの比が、１４：１（質量）である、請求項２０に記載の小胞薬物送達系。
【請求項２２】
前記疎水性薬物の濃度が少なくとも約０．５ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項２３】
前記ｓｉＲＮＡの濃度が約１〜１．２ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の小胞薬物送達系。
【請求項２４】
請求項１に記載の小胞薬物送達系を作製する方法であって、前記方法は、
ａ）ホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質、少なくとも１つの疎水性薬物及び水混和性有機溶媒を含む第１の溶液を形成する工程と、
ｂ）前記第１の溶液から前記水混和性有機溶媒を蒸発させることによって脂質薄膜を形成する工程と、
ｃ）少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及び水溶液を含む第２の溶液を形成する工程と、
ｄ）前記（ｂ）の脂質薄膜と前記（ｃ）の第２の溶液とを混合して、前記小胞薬物送達系を形成する工程と
を含む、方法。
【請求項２５】
請求項２に記載の小胞薬物送達系を作製する方法であって、前記方法は、
ａ）ホスファチジルコリンである少なくとも１つの中性脂質；少なくとも１つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質又は陰イオン性脂質；少なくとも１つの疎水性薬物及び水混和性有機溶媒を含む第１の溶液を形成する工程と、
ｂ）前記第１の溶液から前記水混和性有機溶媒を蒸発させることによって脂質薄膜を形成する工程と、
ｃ）少なくとも１つの低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及び水溶液を含む第２の溶液を形成する工程と、
ｄ）前記（ｂ）の脂質薄膜と前記（ｃ）の第２の溶液とを混合して、前記小胞薬物送達系を形成する工程と
を含む、方法。
【請求項２６】
標的化部分が前記（ａ）の第１の溶液に加えられる、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記疎水性薬物が、タキソイド、カンプトテシン、ドキソルビシン、ミケラミンＢ、ビンクリスチン、ブリオスタチン−１、ハロモン、シスプラチン、ＥＰＯ９０６、ドセタキセル、パクリタキセル、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリコマイシン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲン受容体結合剤、タキソール、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランスプラチナム、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキサート、及びシクロスポリン、又はそれらの組み合わせである、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記水混和性有機溶媒が、アルコール、アセトン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド又はポリエチレングリコールからなる群から選択される、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記水混和性有機溶媒が、メタノール、グリコール、グリセロール、プロピレングリコール又はエタノールからなる群から選択されるアルコールである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記少なくとも１つの更なる中性脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＬＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジラウリルオイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、１−ミリストイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）、１−パルミトイル−２−ミリストイルホスファチジルコリン（ＰＭＰＣ）、１−パルミトイル−２−ステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）、１−ステアロイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＳＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＡＰＣ）、１，２−ジアラキドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＢＰＣ）、１，２−ジエイコセノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＥＰＣ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、リソホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン  ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、パルミトイルオエオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、及びリソホスファチジルエタノールアミン又はそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項３１】
安定剤が前記（ａ）の第１の溶液に加えられる、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項３２】
前記安定剤が、コレステロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はトコフェロールである、請求項３１に記載の方法。