【誤訳訂正書】
【提出日】平成25年8月23日(2013.8.23)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物であって、
【化１】
2007514643.tif 000001
ここにおいて、
Ｔ１は、Ｈ、ヒドロキシル保護基、ホスホルアミダイト、或いは−Ｌｓ−ＳＳであり、
Ｔ２は、ジイソプロピル−シアノエトキシ  ホスホルアミダイト（−Ｐ［Ｎ［（ＣＨ（ＣＨ３）２）２］Ｏ（ＣＨ２）２ＣＮ）、或いは−Ｌｓ−ＳＳであり、Ｌｓは、Ｃ１−Ｃ１２アルキレン、Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキレン、６〜１２の炭素原子を有する一環系または二環系アリーレン基、及び４〜１２の炭素原子を有する一環系または二環系ヘテロアリーレン基であって、環部分が部分的に脱水素化され、１〜４のＮ、Ｏ、Ｓのようなヘテロ原子を有する基からなる群から選択される結合部分であり、
ＳＳは、固体支持媒体であり、
Ｂｘは、核酸塩基であり、
Ｘは、Ｆ、−Ｏ−ＣＨ３、或いは−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３である、化合物。
【請求項２】
Ｔ１或いはＴ２の１つは、−Ｌｓ−ＳＳである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
式（ＩＩ）のヌクレオシドの少なくとも１つを有するオリゴマーであって、
【化２】
2007514643.tif 000002
ここにおいて、
Ｌ１及びＬ２はそれぞれ独立して、前記ヌクレオシドを前記オリゴマー化合物に連結するヌクレオシド間結合、Ｈ、ヒドロキシル保護基、又はコンジュゲート基であり、Ｌ１及びＬ２の少なくとも１つは、前記ヌクレオシドを前記オリゴマー化合物に連結させるヌクレオシド間結合であり、
Ｂｘは、核酸塩基であり、
Ｘは、Ｆ、−Ｏ−ＣＨ３、或いは−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３であり、
前記ヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるものであり、
前記コンジュゲート基は、コレステロール、脂質、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、およびクマリンからなる群から選択されるものである、オリゴマー。
【請求項４】
前記Ｌ１或いはＬ２の少なくとも１つは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、請求項３記載のオリゴマー化合物。
【請求項５】
前記Ｌ１或いはＬ２の少なくとも１つは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項３記載のオリゴマー化合物。
【請求項６】
８〜８０のヌクレオチドを含む、請求項３記載のオリゴマー化合物。
【請求項７】
８〜５０のヌクレオチドを含む、請求項３記載のオリゴマー化合物。
【請求項８】
８〜３０のヌクレオチドを含む、請求項３記載のオリゴマー化合物。
【請求項９】
１０〜３０のヌクレオチドを含む、請求項３記載のオリゴマー化合物。
【請求項１０】
１５〜３０のヌクレオチドを含む、請求項３記載のオリゴマー化合物。
【請求項１１】
１５〜２５のヌクレオチドを含む、請求項３記載のオリゴマー化合物。
【請求項１２】
第１のオリゴヌクレオチド及び第２のオリゴヌクレオチドを含む組成物であって、前記第１のオリゴヌクレオチドは、前記第２のオリゴヌクレオチドと選択された標的核酸に対して相補的であり且つハイブリダイズすることができ、
前記第１或いは第２のオリゴヌクレオチドの少なくとも１つは、以下の式（ＩＩ）の４’−チオヌクレオシドを有する修飾を有する少なくとも１つのヌクレオシドを含み、
【化３】
2007514643.tif 000003
ここにおいて、
Ｌ１及びＬ２はそれぞれ独立して、前記ヌクレオシドを前記オリゴマー化合物に連結させるヌクレオシド間結合、Ｈ、ヒドロキシル保護基、又はコンジュゲート基であり、Ｌ１及びＬ２の少なくとも１つは、前記ヌクレオシドが前記オリゴマー化合物に連結するヌクレオシド間結合であり、
Ｂｘは、核酸塩基であり、
Ｘは、Ｆ、−Ｏ−ＣＨ３、或いは−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３であり、
前記ヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるものであり、
前記コンジュゲート基は、コレステロール、脂質、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、およびクマリンからなる群から選択されるものである、組成物。
【請求項１３】
前記第１或いは第２のオリゴヌクレオチドの少なくとも１つにおいて、それらに含まれる式（ＩＩ）の少なくとも１つのヌクレオシドに対して、Ｌ１或いはＬ２の少なくとも１つは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合である、請求項１２記載の組成物。
【請求項１４】
前記第１或いは第２のオリゴヌクレオチドの少なくとも１つにおいて、それらに含まれる式（ＩＩ）の少なくとも１つのヌクレオシドに対して、Ｌ１或いはＬ２の少なくとも１つは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項１２記載の組成物。
【請求項１５】
前記第１或いは第２のオリゴヌクレオチドの少なくとも１つにおいて、それらに含まれる式（ＩＩ）の少なくとも１つのヌクレオシドに対して、Ｌ１或いはＬ２の少なくとも１つは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合であり、もう一方は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項１２記載の組成物。
【請求項１６】
前記第１及び第２のオリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドの相補性対である、請求項１２記載の組成物。
【請求項１７】
前記第１及び第２のオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドのアンチセンス／センス対である、請求項１２記載の組成物。
【請求項１８】
前記第１及び第２のオリゴヌクレオチドのそれぞれは、１０〜４０ヌクレオチドを含む、請求項１２記載の組成物。
【請求項１９】
前記第１及び第２のオリゴヌクレオチドのそれぞれは、１８〜３０ヌクレオチドを含む、請求項１２記載の組成物。
【請求項２０】
前記第１及び第２のオリゴヌクレオチドのそれぞれは、１８〜２４ヌクレオチドを含む、請求項１２記載の組成物。
【請求項２１】
前記第１のオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項１２記載の組成物。
【請求項２２】
前記第２のオリゴヌクレオチドは、センスオリゴヌクレオチドである、請求項２１記載の組成物。
【請求項２３】
前記第２のオリゴヌクレオチドは、複数のリボースヌクレオチドユニットを有する、請求項２１記載の組成物。
【請求項２４】
前記第１のオリゴヌクレオチドは、式（ＩＩ）の少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項１２記載の組成物。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００３年９月１８日に出願された米国仮出願番号第６０／５０３，９９７号に優先権を主張するものであり、その全体はこの参照によって本明細書に組み込まれる。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３８】
ここにおいて、ＢｘおよびＸは、本明細書で定義され、Ｌ１およびＬ２は、本明細書で定義されるようにヌクレオシド間結合である。本発明のオリゴマーに好ましいヌクレオシド間結合は、これに限定されるものではないが、ホスホジエステル結合、ホスホチオエート結合、およびそれらの混合物を含む。本発明の好適なオリゴマーは、これに限定されるものではないが、オリゴマー８〜８０ヌクレオチド、８〜５０ヌクレオチド、８〜３０ヌクレオチド、１０〜３０ヌクレオチド、１５〜３０ヌクレオチド、１５〜２５ヌクレオチド、などを含む。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４０】
他の好適な修飾は、２’−メトキシ（２’−Ｏ−ＣＨ３）、２’−アミノプロポキシ（２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、２’−アリル（２’−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２）、２’−Ｏ−アリル（２’−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２）および２’−フルオロ（２’−Ｆ）を含む。２’−修飾は、アラビノ（上）位置またはリボ（下）位置である。好適な２’−アラビノ修飾は、２’−Ｆである。同様な修飾は、オリゴヌクレオチドの他の位置、特に３’末端ヌクレオチド上或いは２’−５’連結したオリゴヌクレオチドにおける糖の３’ヌクレオチド、若しくは５’末端ヌクレオチドの５’位でなされ得る。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４１】
特に有用な糖置換基は、Ｏ［（ＣＨ２）ｇＯ］ｈＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｇＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｇＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｇＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｇＯＮＨ２、及びＯ（ＣＨ２）ｇＯＮ［（ＣＨ２）ｇＨ）］２を含み、ｇおよびｈは１〜約１０まである。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４３】
本発明の更なる実施形態は、化学式Ｉによって記載されたヌクレオシドのホスホルアミダイトを含み、Ｔ１またはＴ２の１つは、活性化リン酸基である。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５２】
本発明の１実施形態において、１，４−アンヒドロ−２−Ｏ−（２，４−ジメトキシベンゾイル）−３，５−Ｏ−（１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサン−１，３−ジイル）−４−スルフィニル−Ｄ−リビトールを製造するための方法が開示されており、この方法は：
適切な溶媒中のＴｉ（ＩＶ）イソプロポキシドの溶液へジエチル−Ｌ酒石酸を添加し、その後前記適切な溶媒に適切な過酸化物を添加することによって酸化混合物を調整する工程と；
適切な溶媒中の１，４−アンヒドロ−３，５−Ｏ−（１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサン−１，３−ジイル）−４−チオ−Ｄ−リビトールを、前記酸化混合物で処理し、１，４−アンヒドロ−２−Ｏ−（２，４−ジメトキシベンゾイル）−３，５−Ｏ−（１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサン−１，３−ジイル）−４−スルフィニル−Ｄ−リビトールを生成する工程とを含む。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５５】
本発明の４’−チオヌクレオシドは、これに限定されるものではないが、ヘミマー、ギャップマー、均一体、他の化学物質での改変体を含む、様々なモチーフに有用である。これらのモチーフと関連して、多様な連結はまた、これに限定されるものではないが、均一に使用されるリン酸ジエステルおよびホスホロチオネート結合を含むように使用される、または組み合わせにおいて使用されることができる。４’−チオヌクレオシドの位置決め、および結合戦略の使用は、特定の標的のための最高な活性を容易に最適化され得る。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５６】
ほとんどの部分に対して、本発明の４’−チオヌクレオシドは、対応するリボヌクレオシドに同様な立体配座を有する天然リボヌクレオシドで見出される機能基の化学反応性および立体的位置決めを保持している。それゆえに、オリゴヌクレオチドに組み込まれるときに、結果として生じる４’−チオＲＮＡは、安定性の期待された増加を有する天然ＲＮＡに類似した立体配座を有する。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５７】
ＮＭＲ実験は、未修飾リボヌクレオシドに見られるような核酸塩基の優性抗立体配座を示していた。重要なことに、４’−チオヌクレオシドの核酸塩基のｐＫａ値は変化しない。これは、未変性ＲＮＡで見つけられる期待されるハイブリダイゼーション特性の保持に起因する。従って、４’−チオヌクレオシドは、未変性のホスホジエステル結合ＲＮＡと比較して、匹敵しうるハイブリダイゼーションを有し、強化したヌクレアーゼ安定性をもつＴｍ特性を有することが考えられる。本発明のホスホジエステル４’−チオヌクレオシド修飾オリゴマー化合物は、タンパク質結合、改変組織−分布、およびｐＫ特性の強化が予想される。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６２】
本発明は、１，４−アンヒドロ−２−Ｏ−（２，４−ジメトキシベンゾイル）−３，５−Ｏ−（１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサン−１，３−ジイル）−４−スルフィニル−Ｄ−リビトールを製造するための新しい方法も開示し、この方法は、ジエチル−Ｌ−酒石酸を適切な溶媒中のＴｉ（ＩＶ）イソプロポキシドの溶液に添加し、その後適切な溶媒中の適切なパーオキシドを添加することによって、酸化混合物を調合する工程と；
適切な溶媒中の１，４−アンヒドロ−３，５−Ｏ−（１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサン−１，３−ジイル）−４−チオ−Ｄ−リビトールを前記酸化混合物で処理することによって、１，４−アンヒドロ−２−Ｏ−（２，４−ジメトキシベンゾイル）−３，５−Ｏ−（１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサン−１，３−ジイル）−４−スルフィニル−Ｄ−リビトールを形成する工程とを有する。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６３】
リボヌクレオチド、および取り入れられる少なくとも一つのリボヌクレオシドとこれらの２つの極度間に属する全ての可能な構造とを有するオリゴマー化合物の調合は、本発明に取り込まれている。対応するオリゴマー化合物は、二本鎖（二重鎖）オリゴマー化合物を形成するために相補的な部位を有するオリゴリボヌクレオチドを含む更なるオリゴマー化合物とハイブリッド形成することができる。そのような二本鎖オリゴヌクレオチド部位は、従来技術において、標的発現を調節し、翻訳、さらにはアンチセンス・メカニズムを経たＲＮＡプロセシングを調節することが示された。さらに、前記二本鎖部位は、化学修飾さらされてもよい（Ｆｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９８，３９１，８０６〜８１１；Ｔｉｍｍｏｎｓ  ａｎｄ  Ｆｉｒｅ，Ｎａｔｕｒｅ  １９９８，３９５，８５４、Ｔｉｍｍｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，２００１，２６３，１０３〜１１２、Ｔａｂａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９８，２８２，４３０〜４３１、Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９８，９５，１５５０２〜１５５０７、Ｔｕｓｃｈｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．，１９９９，１３，３１９１〜３１９７、Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２００１，４１１，４９４〜４９８、Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．２００１，１５，１８８〜２００）。例えば、そのような二本鎖部位は、標的への二本鎖のアンチセンス鎖の古典的なハイブリダイゼーションによって、標的を抑制し、それによって標的の酵素的分解のトリガーを引くことが示された（Ｔｉｊｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２，２９５，６９４〜６９７）。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６９】
本発明の適切な置換基は、これらに限定されるものではないが、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、保護ヒドロキシル、脂肪族エーテル、芳香族エーテル、オキソ、アジド、 −ＮＯ２、−ＣＮ、任意にハロゲンで置換された−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル（例えば、ペルハロアルキル）、ハロゲンで任意に置換されたＣ２−Ｃ１２−アルケニル、ハロゲンで任意に置換された−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨ２、保護アミノ、−ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨ−アリール、−ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ジアルキルアミノ、−ジアリールアミノ、−ジヘテロアリールアミノ、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｏ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｏ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｏ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｏ−アリール、−Ｏ−ヘテロアリール、−Ｏ−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＣＯＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＣＯＮＨ−アリール、−ＣＯＮＨ−ヘテロアリール、−ＣＯＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＣＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＣＯ２−アリール、−ＣＯ２−ヘテロアリール、−ＣＯ２−ヘテロシクロアルキル、 −ＯＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＯＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＯＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＯＣＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＯＣＯ２−アリール、−ＯＣＯ２−ヘテロアリール、−ＯＣＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＯＣＯＮＨ２、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＯＣＯＮＨ−アリール、−ＯＣＯＮＨ−ヘテロアリール、−ＯＣＯＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−アリール、−ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣＯ２−アリール、−ＮＨＣＯ２−ヘテロアリール、−ＮＨＣＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ���−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ２、ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−アリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−アリール、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロアリール、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｓ（Ｏ）−アリール、−Ｓ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｓ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＳＯ２ＮＨ−アリール、−ＳＯ２ＮＨ−ヘテロアリール、−ＳＯ２ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＳＯ２−アリール、−ＮＨＳＯ２−ヘテロアリール、−ＮＨＳＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、−アリール、−アリールアルキル、−ヘテロアリール、−ヘテロアリールアルキル、−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、ポリアルコキシアルキル、ポリアルコキシ、−メトキシメトキシ、−メトキシエトキシ、−ＳＨ、−Ｓ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｓ−Ｃ２−Ｃ１２−アルケニル、−Ｓ−Ｃ２−Ｃ１２−アルキニル、−Ｓ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｓ−アリール、−Ｓ−ヘテロアリール、−Ｓ−ヘテロシクロアルキル、或いはメチルチオメチルを含む。アリール、ヘテロアリール、アルキル、及びそれらの同等物はさらに置換され得ることが理解されるであろう。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７１】
本明細書において使われたように、「置換アルケニル」という用語は、以前に定義されたような「Ｃ２−Ｃ１２アルケニル」または「Ｃ２−Ｃ６アルケニル」基が、１、２、３若しくはそれ以上の置換基によって置換されたことを言及している。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７９】
本明細書において用いられたように、「アリールアルキル」という用語は、Ｃ１−Ｃ３アルキルまたはＣ１−Ｃ６アルキル残基を介して親化合物に結合されたアリール基を意味する。例としては、ベンジル、フェネチルなどを含むが、これに限定されるものではない。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８７】
本明細書において用いられたように、「ヘテロアリールアルキル」という用語は、Ｃ１−Ｃ３アルキルまたはＣ１−Ｃ６アルキル残基を介して親化合物に結合したヘテロアリール基を意味している。例としては、ピリジニルメチル、ピリジニルメチルなどを含むが、これに限定されるものではない。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８９】
「アルキルアミノ」という用語は、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）という構造を有する基を意味する。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９０】
「ジアルキルアミノ」という用語は、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ１２アルキル（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）、及び環状アミンの構造を有する基を意味する。ジアルキルアミノの例としては、これに限定されるものではないが、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルエチルアミノ、ピペリジノ、モルフォリノなどである。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９４】
本明細書において用いられたように、「カルボキサミド」という用語は、化学式−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）、または、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）、Ｎ（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）などを意味している。    
本明細書において用いられたように、「保護基」という用語は、合成手順の間、望んでいない反応に対してヒドロキシル或いはアミノ基を保護するための、当該技術分野において公知である不安定な化学部分を意味する。前記合成の手順の後、本願明細書において記載された保護基（「ブロッキング基」ともいう）は、選択的に除去されることができる。当業者には既知であるブロッキング基は、Ｔ．Ｈ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  &  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９９）に一般的に記載されている。ヒドロキシル保護基の例としては、これらに限定されるものではないが、ベンジルオキシカルボニル、４−ニトロベンジルオキシカルボニル、４−ブロモベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、メトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ジフェニルメトキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニル、２−フルフリルオキシカルボニル（ｆｕｒｆｕｒｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）、アリルオキシカルボニル、アセチル、ホルミル、クロロアセチル、トリフルオロアセチル、メトキシアセチル、フェノキシアセチル、ベンゾイル、メチル、ｔ−ブチル、２，２，２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、１，１−ジメチル−２−プロペニル、３−メチル−３−ブテニル、アリル、ベンジル、パラ−メトキシベンジルジフェニルメチル、トリフェニルメチル（トリチル）、４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル（ＤＭＴ）、置換或いは非置換ピキシル、テトラヒドロフリル、メトキシメチル、メチルチオメチル、ベンジルオキシメチル、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル、メタンスルフォニル、パラ−トルエンスルホニル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリルなどを含む。本発明のための好適なヒドロキシルブロッキング基は、ＤＭＴおよび置換或いは非置換ピキシルである。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９６】
本明細書において用いられたように、「保護ヒドロキシル基」という用語は、上で定義されたように、保護基によって保護されているヒドロキシル基を意味する。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１０】
本分野において既知であるように、ヌクレオシドは、塩基−糖鎖組合わせである。ヌクレオシドの塩基部分は、通常複素環塩基部位である。そのような複素環塩基の２つの最も共通したクラスは、プリンとピリミジンである。ヌクレオチドは、さらに、ヌクレオシドの糖部分に共有結合的に連結したリン酸基を含むヌクレオシドである。ペンタフラノシル糖を含むそれらのヌクレオシドに対して、リン酸基は、糖の２’、３’、或いは５’ヒドロキシル基と連結され得る。オリゴヌクレオチドの形成において、リン酸基は、共有結合で隣接するヌクレオシドと別のヌクレオシドを連結し、直線ポリマー化合物を形成する。この直線ポリマー構造のそれぞれの末端は、ハイブリダイゼーションによって、或いは共有結合の形成によって、環状構造を形成するように連結され得るが、開環構造は一般的に望ましい。オリゴヌクレオチド構造内において、リン酸基は、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合を形成するものとして一般的に言及される。ＲＮＡ及びＤＮＡの通常のヌクレオシド間結合は、３’〜５’リン酸ジエステル結合である。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１１】
本発明の文脈において、「オリゴヌクレオチド」という用語は、リボ核酸（ＲＮＡ）或いはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）のオリゴマー或いはポリマーを意味する。この用語は、天然由来の核酸塩基、糖、及び共有結合ヌクレオシド間結合から成るオリゴヌクレオチドを含む。「オリゴヌクレオチド類似体」という用語は、オリゴヌクレオチドと同じ方法で機能する１若しくはそれ以上の非天然由来部分を有するオリゴヌクレオチドを意味する。そのような非天然由来オリゴヌクレオチドは、例えば、増強された細胞性取り込み、核酸標的への増強された親和性、及びヌクレアーゼの存在下における増加した安定性などの望ましい特性のため、しばしば天然由来形態よりも望ましい。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１２】
本発明の文脈において、「オリゴヌクレオシド」という用語は、リン原子を持たないヌクレオシド間結合によって連結されたヌクレオシドの配列を意味する。このタイプのヌクレオシド間結合は、短鎖アルキル、シクロアルキル、混合へテロ原子アルキル、混合へテロ原子シクロアルキル、１若しくはそれ以上の短鎖ヘテロ原子、及び１若しくはそれ以上の短鎖複素環を含む。これらの内部ヌクレオシド結合は、これに限定されるものではないが、シロキサン、スルフィド、スルホン、アセチル、ホルムアセチル、チオホルムアセチル、メチレン、ホルムアセチル、チオホルムアセチル、アルケニル、スルファミン酸、メチレンイミノ、メチレンヒドラジノ、スルホン酸、スルホンアミド、アミド、及び混合Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＣＨ２構成成分部分を有する他のものを含む。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４４】
更なるヘリックス−安定特性は、シトシン類似体／置換基が、強固な１，３−ジアザフェノキサジン−２−オン足場へ結合したアミノエトキシ部分を有する場合に観察された（（Ｒ１０＝Ｏ、Ｒ１１＝−Ｏ−（ＣＨ２）２−ＮＨ２、Ｒ１２−１４＝Ｈ）［Ｌｉｎ，Ｋ．−Ｙ．；Ｍａｔｔｅｕｃｃｉ，Ｍ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９８，１２０，８５３１〜８５３２］）。結合研究は、単一取り込みは、単一修飾に対して最も高い既知親和性増強である５−メチルシトシン（ｄＣ５ｍｅ）と相対的に、１８゜までのΔＴｍを有する相補的標的ＤＮＡ或いはＲＮＡに対するモデルオリゴヌクレオチドの結合親和性を増強することができることを実証した。一方、ヘリカル安定性が増すことは、オリゴヌクレオチドの特異性を妥協するものではない。Ｔｍデータは、ｄＣ５ｍｅと比較して、完璧なマッチとミスマッチ配列との間のより大きな判別を示していた。テザーアミノ基は付加的水素結合ドナーとして働き、Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎフェース、すなわち、相補的グアニンのＯ６と相互作用し、それによって４つの水素結合を形成すると示唆された。これは、Ｇ−クランプの増加された親和性は、拡張塩基スタッキング及び付加的な特異的水素結合の組み合わせによって仲介される。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７０】
代表的なアセトアミド置換基は、米国特許第６，１４７，２００号に開示されており、その全体はこの参照によって本明細書に組み込まれる。代表的なジメチルアミノエチルオキシエチル置換基は、１９９９年８月６日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ９９／１７８９５号（題名「２’−Ｏ−Ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｅｔｈｙｌｏｘｙｅｔｈｙｌ−Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」）に開示されており、その全体はこの参照により本明細書に組み込まれる。ペントフラノシル糖を含むそれらのヌクレオシドに対して、リン酸基は、糖の２’、３’、或いは５’ヒドロキシ部位に連結され得る。オリゴヌクレオチドを形成する場合、リン酸基は隣接するヌクレオシドを他の１つと共有結合的に連結させ、直線ポリマー化合物を形成する。この直線ポリマー構造のそれぞれの末端は、ハイブリダイゼーションによって、或いは共有結合を形成することによって、環状構造を形成するように連結され得るが、開環直線構造が一般的に好ましい。オリゴヌクレオチド構造内で、一般的にリン酸基は、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合を形成するものとして言及される。ＲＮＡ及びＤＮＡの通常のヌクレオシド間結合は、３’から５’ホスホジエステル結合である。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７５】
オリゴマー及びモノマー修飾
本分野では既知であるように、ヌクレオシドは、塩基−糖の組み合わせである。ヌクレオシドの塩基部位は通常、複素環塩基である。そのような複素環塩基の２つの最も共通したクラスは、プリン及びピリミジンである。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの糖部位に共有結合したリン酸基をさらに含むヌクレオシドである。ペントフラノシル糖を含むそれらヌクレオシドに対して、リン酸基は、糖の２’、３’、或いは５’ヒドロキシル部位に結合され得る。オリゴヌクレオチドを形成する場合、リン酸基は、隣接するヌクレオシドを別のものと共有結合させ、直線ポリマー化合物を形成する。言い換えると、この直線ポリマー化合物のそれぞれの末端はさらに、環状化合物を形成するように結合され得るが、直線化合物が一般的に好ましい。加えて、直線化合物は、内部核酸塩基相補性を有し、従って、完全な或いは部分的な二本鎖化合物を産生するような方法で折り畳まれる。オリゴヌクレオチド内で、リン酸基は一般的に、ヌクレオシド間結合を形成するものとして、或いは糖鎖環と連結してオリゴヌクレオチドのバックボーンを形成するものとして言及される。
ＲＮＡとＤＮＡのバックボーンを形成する通常のヌクレオシド間結合は、３’から５’ホスホジエステル結合である。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８０】
別の修飾は、架橋型核酸（ＬＮＡｓ）を含み、ここにおいて２’−ヒドロキシ基は糖環の４’炭素原子に連結しており、２’−Ｃ，４’−オキシメチレン結合を形成し、二環性糖部位を形成するものである。前記結合は、好ましくはメチレン、エチレンＥＮＡとして本分野では言及されている）、或いは２’酸素原子及び４’炭素原子を架橋している（−ＣＨ２−）ｎ基（ｎは１〜１０）であり得る（Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９８，４，４５５〜４５６）。ＬＮＡ類似体は、相補的ＤＮＡ及びＲＮＡとの非常に高い二本鎖熱安定性（Ｔｍ＝＋３〜＋１０Ｃ）、３’−エキソ核酸分解に対する安定性、及び優れた可溶特性を示す。二環性環状系を示すＬＮＡの基礎構造は、以下に示されている：
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８２】
２Ｄ  ＮＭＲ分光法によって検出されたＬＮＡの立体配座は、ＬＮＡヌクレオチドの架橋型（固定）配向、一本鎖ＬＮＡ及び二本鎖においての両方が、Ｎ−型立体配座のより高い集団を導入するような方法においてリン酸バックボーンを拘束することを示していた（Ｐｅｔｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．，２０００，１３，４４〜５３）。これらの立体配座は、核酸塩基の改善されたスタッキングに関与している（Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９９，１８，１３６５〜１３７０）。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８８】
ＬＮＡ、ホスホロチオエート−ＬＮＡ、及び２’−チオ−ＬＮＡの第１の類似体も調合された（Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９〜２２２２）。核酸ポリメラーゼに対する基質としてのオリゴデオキシリボヌクレオチド二本鎖を含む架橋型ヌクレオシド類似体の調合も報告されていた（Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＣＴ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ９８−ＤＫ３９３    １９９８０９１４）。さらに、ハンドルを有する新規の立体配座的に制限された高親和性オリゴヌクレオチド類似体２’−アミノ−ＬＮＡの合成は、本分野において記載されていた（Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５〜１００３９）。さらに、２’−アミノ、及び２’−メチルアミノ−ＬＮＡは調合され、相補性ＲＮＡ及びＤＮＡ鎖を有するそれらの二本鎖の熱安定性は、以前に報告された。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９６】
修飾ヌクレオシド間結合
本発明において有用なアンチセンスオリゴマー化号物の特定の例としては、修飾された、例えば非天然由来ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドを含む。本明細書において定義されたように、修飾ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドは、リン原子を保持するヌクレオシド間結合、及びリン原子を持たないヌクレオシド間結合を含む。本明細書の目的として、さらにしばしば本分野で言及されるように、それらのヌクレオシド間バックボーンにおいてリン原子を持たない修飾オリゴヌクレオチドも、オリゴヌクレオシドであると考えられている。
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９７】
線虫システムにおいて、ヌクレオチド間結合（ホスホロチオエート）の修飾は、ＲＮＡｉ活性を有意に干渉しなかった。この観察に基づいて、本発明の特定のオリゴマー化合物は、１若しくはそれ以上の修飾ヌクレオシド間結合も有し得ると示唆される。修飾ヌクレオシド間結合を含む１つのリンは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９８】
リン原子をその中に含む修飾オリゴヌクレオチドバックボーンは、例えば、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチル及び他のアルキルホスホネート（３’−アルキレンホスホネート、５’−アルキレンホスホネート、及びキラルホスホネートを含む）、ホスフィネート、ホスホルアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ）（３’−アミノホスホルアミデート及びアミノアルキルホスホルアミデートを含む）、チオノホスホルアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、セレノホスフェート並びに標準の３’−５’結合を有するおよびボラノホスフェート、これらの２’−５’結合類似体、および逆極性を有するそれらを含み、ここにおいて１若しくはそれ以上のヌクレオシド間結合は３’〜３’、５’〜５’、または２’〜２’結合である。逆極性を有するオリゴヌクレオチドは、３’−末端ヌクレオチド間での単３’〜３’結合、すなわち脱塩基（核酸塩基が欠損またはその場所にヒドロキシル基を有する）である単逆位ヌクレオシド残基を含むことができる。様々な塩類、混合塩類、および遊離酸形態も含まれる。
【誤訳訂正３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２００
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２００】
本発明のいくつかの実施形態において、オリゴマー化合物は、１若しくはそれ以上のホスホロチオエート及び／若しくはヘテロ原子ヌクレオシド間結合、特に、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−ＣＨ２−（メチレン（メチルイミノ）或いはＭＭＩバックボーンとして知られている）、−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、及び−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ２−（ここにおいて未変性ホスホジエステルヌクレオチド間結合は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−ＣＨ２−として表されている）を有するものである。ＭＭＩ型ヌクレオシド間結合は、上で参照した米国特許第５，４８９，６７７号に開示されている。適切なアミドヌクレオシド間結合は、上で参照した米国特許第５，６０２，２４０号に開示されている。
【誤訳訂正３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０１】
その中にリン原子を含まない修飾オリゴヌクレオチドバックボーンは、短鎖アルキル或いはシクロアルキルヌクレオシド間結合、混合ヘテロ原子及びアルキル或いはシクロアルキルヌクレオシド間結合、或いは、１若しくはそれ以上の短鎖ヘテロ原子或いは複素環ヌクレオシド間結合によって形成される。これらは、モルフォリノ結合（ヌクレオシドの糖部分からの一部で形成される）を有するもの、シロキサンバックボーン；スルフィド、スルホキシド及びスルホンバックボーン；ホルムアセチル及びチオホルムアセチルバックボーン；メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチルバックボーン；リボアセチルバックボーン；アルケン含有バックボーン；スルファミン酸バックボーン；メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノバックボーン；スルホネート及びスルホンアミドバックボーン；アミドバックボーン；及び混合Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＣＨ２構成成分を有する他のものを含む。
【誤訳訂正３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２１４】
コンジュゲート
本発明のオリゴマー化合物に付け加えられる別の置換としては、結果として生じるオリゴマー化合物の活性、細胞分布あるいは細胞への取り込みを強化する、１若しくはそれ以上の部分またはコンジュゲートとの結合が含まれる。そのような修飾されたオリゴマー化合物の実施形態の１つにおいて、オリゴマー化合物は、ヒドロキシル基やアミノ基のような官能基にコンジュゲート基を共有結合させることで調製される。本発明のコンジュゲート基には、インターカレーター、レポーター分子、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、ポリエーテルのようなオリゴマーの薬物動態の特性を強化したり、薬力学的な特性を強化する基が含まれる。典型的なコンジュゲート基には、コレステロール、脂質、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸(folate)、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリンおよび染料が含まれる。本発明に関して、薬物動態の特性を強化する基には、オリゴマーの取り込みを改善したり、オリゴマーが分解されにくくしたり、そして／またはＲＮＡとの配列特異的なハイブリッド形成を強めるような基が含まれる。本発明に関して、薬物力学的な特性を強化する基には、オリゴマーの取り込み、分布、代謝や排泄を改善するような基が含まれる。代表的なコンジュゲート基については、１９９２年１０月２３日に出願された国際出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９１９６号に開示されてあり、その全体はこの参照によって、本明細書に組み込まれる。
【誤訳訂正３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２１５】
コンジュゲート部分には、これらに制限されるわけではないが、コレステロール部分（Ｌｅｓｔｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８９，８６，６５５３〜６５５６）、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９４，４，１０５３〜１０６０）、例えば、ヘキシル−Ｓ−トリチルチオールのようなチオエーテル（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９２，６６０，３０６〜３０９；Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９３，３，２７６５〜２７７０）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９９２，２０，５３３〜５３８）、例えば、ドデカンジオールまたはウンデシル残基のような脂肪族鎖（Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｌｍｏａｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１９９１，１０，１１１１〜１１１８；Ｋａｂａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，１９９０，２５９，３２７〜３３０；Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５，４９〜５４）、ジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロール、または、１，２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−リン酸トリエチルアンモニウムのようなリン脂質（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１〜３６５４；Ｓｈｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９９０，１８，３７７７〜３７８３）、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  &  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４，９６９〜９７３）、あるいは酢酸アダマンタン（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１〜３６５４）、パルミチル分子（Ｍｉｓｈｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９５，１２６４，２２９〜２３７）またはオクタデシルアミンあるいはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール分子部分（Ｃｒｏｏｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１９９６，２７７，９２３〜９３７）が含まれる。
【誤訳訂正３７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２１６】
本発明のオリゴマー化合物はまた、活性のある薬物物質、例えば、アスピリン、ワルファリン、フェニルブタゾン、イブプロフェン、スプロフェン、フェンブフェン、ケトプロフェン、（Ｓ）−（＋）−プラノプロフェン、カルプロフェン、ダンシルサルコシン、２，３，５−トリヨード安息香酸、フルフェナミン酸、フォリン酸、ベンゾチアジアジド、クロロチアジド、ジアゼピン、インドメタシン、バルビツール酸、セファロスポリン、サルファ剤、抗糖尿病薬、抗微生物薬、抗生物質などとコンジュゲート形成されていてもよい。オリゴヌクレオチド−薬物のコンジュゲートとその調製については、米国特許出願公開第０９／３３４，１３０号（１９９９年６月１５日に出願）に記載されており、その全体はこの参照により本明細書に組み込まれる。
【誤訳訂正３８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２１７】
そのようなオリゴヌクレオチドコンジュゲートの調製について教示した代表的な米国特許としては、これらに限定されるものではないが、米国特許第４，８２８，９７９号；第４，９４８，８８２号；第５，２１８，１０５号；第５，５２５，４６５号；第５，５４１，３１３号；第５，５４５，７３０号；第５，５５２，５３８号；第５，５７８，７１７号；第５，５８０，７３１号；第５，５８０，７３１号；第５，５９１，５８４号；第５，１０９，１２４号；第５，１１８，８０２号；第５，１３８，０４５号；第５，４１４，０７７号；第５，４８６，６０３号；第５，５１２，４３９号；第５，５７８，７１８号；第５，６０８，０４６号；第４，５８７，０４４号；第４，６０５，７３５号；第４，６６７，０２５号；第４，７６２，７７９号；第４，７８９，７３７号；第４，８２４，９４１号；第４，８３５，２６３号；第４，８７６，３３５号；第４，９０４，５８２号；第４，９５８，０１３号；第５，０８２，８３０号；第５，１１２，９６３号；第５，２１４，１３６号；第５，０８２，８３０号；第５，１１２，９６３号；第５，２１４，１３６号；第５，２４５，０２２号；第５，２５４，４６９号；第５，２５８，５０６号；第５，２６２，５３６号；第５，２７２，２５０号；第５，２９２，８７３号；第５，３１７，０９８号；第５，３７１，２４１号；第５，３９１，７２３号；第５，４１６，２０３号；第５，４５１，４６３号；第５，５１０，４７５号；第５，５１２，６６７号；第５，５１４，７８５号；第５，５６５，５５２号；第５，５６７，８１０号；第５，５７４，１４２号；第５，５８５，４８１号；第５，５８７，３７１号；第５，５９５，７２６号；第５，５９７，６９６号；第５，５９９，９２３号；第５，５９９，９２８号；そして第５，６８８，９４１号があり、このうちのいくつかのものは本願と共通に所有されているものであり、これらはこの参照によって本明細書に組み込まれる。
【誤訳訂正３９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２０】
ヌクレオシドの立体配座は、ペントフラノシル糖の２’、３’、または４’位における置換を含めた多様な因子によって影響を受ける。電気陰性の置換は、一般的に軸上の位置を好み、立体的に強要的な置換は、一般的に赤道上の位置が好ましい（「核酸構造の原則」、Ｗｏｌｆｇａｎｇ  Ｓａｎｇｅｒ，１９８４年，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ）。下記に示すスキーム（計画案）１ａ（Ｇａｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｏｒｏｎ（２００１），５７，５７０７〜５７１３），Ｈａｒｒｙ−Ｏ’ｋｕｒｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，（１９９７），６２（６），１７５４〜１７５９およびＴａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９９９），６４，７４７〜７５４）に示すように、認識部分としての２’−ＯＨを残しながら２’位を３’−エンド立体配座に向けた修飾が可能である。或いは、３’−エンドの立体配座への選択は、電気陰性的なフッ素原子を軸位に配置した３’−エンドの立体配座をとる、２’デオキシ−２’Ｆ−ヌクレオシド（Ｋａｗａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９９３），３６、８３１〜８４１）に例証されるように、２’−ＯＨを削除することにより可能である。例えば、４’位での置換により４’−Ｆ修飾ヌクレオシド（Ｇｉｌｌｅｒｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（１９９５），５，１４５５〜１４６０およびＯｗｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ，Ｃｈｅｍ．（１９７６），４１，３０１０〜３０１７）とする置換や、例えば、メタノカルバヌクレオシド類似体（Ｊａｃｏｂｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．（２０００），４３，２１９６〜２２０３、及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（２００１），１１，１３３３〜１３３７）に変換するような、リボース環のその他の修飾もまた、３’−エンド立体配座を好ましいとする修飾をもたらす。同様に、ＲＮＡｉ反応の引き金となるオリゴマーは、Ｃ３’−エンド型の立体配座にロックされるような、すなわち架橋型核酸（ＬＮＡ，Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．（１９９８），４，４５５〜４５６）やエチレン架橋核酸（ＥＮＡ，Ｍｏｒｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａ；Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（２００２），１２，７３〜７６）の立体配座をとるように修飾されたヌクレオシドの１若しくはそれ以上からなる。本発明に含まれる修飾ヌクレオシドの例を下記のスキーム（計画案）Ｉａに示した。これらの例は代表的なものであって、これらが全てであるという意味ではない。
【誤訳訂正４０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３３】
本発明に含まれる支持媒体についてさらに挙げると、これらに限定されることなく、ペンダント長鎖ポリスチレン（ＰＳ）とのグラフト（分子量が１０６のオーダーである（Ｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９８９，１１１，８０２４と国際出願番号第ＷＯ９０／０２７４９号）を参照）共重合体によるポリスチレン（ＰＥ）フィルムであるＰＥＰＳが含まれる。フィルムの負荷許容量は、ビーズマトリックスと同程度に高く、加えて、複数の合成が同時に可能である柔軟性がある。ＰＥＰＳフィルムは、それぞれが個別の反応区画となる不連続なラベルされた薄板の形式で作られてもよい。合成サイクルの全て同一のステップの間、これらの薄板は、従来の方法により単一のペプチドを調整した場合に近い速度で複数のペプチドを同時に調製することができるように、一つの反応管に一緒に保たれる。また、例えば、織りのないフェルト、編んだネットあるいはマイクロウェルプレートのようなその他の幾何学配置をとったＰＥＰＳの実験では、合成効果の制限はないことを示した。
【誤訳訂正４１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９１】
ａ）０．５％ＨＣｌのメタノール溶液；ｂ）ＢｎＢｒ、ＮａＨ、ＤＭＦ；ｃ）２Ｎ  ＨＣｌ、還流；ｄ）ＮａＢＨ４；ｅ）ＴＢＤＰＳ−Ｃｌ、ピリジン；ｆ）ｐ−ニトロ安息香酸、ＰＰｈ３、ジイソプロピルアゾジカルボン酸エステル、ＴＨＦ；ｇ）ＮａＯＭｅ，次にＴＲＥＡＴ．ＨＦ；ｈ）ＭｓＣｌ，ピリジン、次にＮａ２Ｓ．９Ｈ２Ｏ、ＤＭＦ、１００°Ｃ；ｉ）ＢＣｌ３、ジクロロメタン、−９８°Ｃ。Ｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２２，７２３３−７２４３を参照。
【誤訳訂正４２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９２】
スキーム３：４’−チオ−Ｕホスホルアミダイトの合成。
【誤訳訂正４３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９４】
ｊ）ＴＩＰＤＳ（Ｃｌ）２、ピリジン；ｋ）２，４−ジメトキシベンゾイルクロライド、ピリジン；ｌ）ｍＣＰＢＡ、ＣＨ２Ｃｌ２（Ｒ：Ｓ＝３：１、で回収率８０％）またはオゾン分解、−７８°Ｃ（Ｒ：Ｓ＝１６：１、で回収率７５％）またはＴｉ（ＩＶ）イソプロポキサイド、ｔ−ＢｕＯＯＨ、Ｌ−ジエチル酒石酸エステル、−２０°Ｃ（選択的にＲを得る；回収率９０％）；ｍ）ウラシル、ＴＭＳ−トリフラート、ＴＥＡ；ｎ）ＴＲＥＡＴ．ＨＦ、ＴＥＡ；ｏ）ＮａＯＭｅ；ｐ）ＤＭＴ−Ｃｌ、ＤＭＡＰ；ｑ）ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ、硝酸銀、ピリジン、ＴＨＦ；ｒ）β−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’−テトライソプロピルホスホルアミデート、ＤＭＦ。
【誤訳訂正４４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９５】
スキーム４：４’−チオ−Ｃホスホルアミダイトの合成。
【誤訳訂正４５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９７】
ａ）プンメラーの条件；ｂ）ＴＲＥＡＴ．ＨＦ；ｃ）ＤＭＴ−Ｃｌ、ピリジン；ｄ）ジオキサン−アンモニア；ｅ）ＴＭＳ−Ｃｌ、ピリジン、Ｂｚ２Ｏ、ＴＲＥＡＴ．ＨＦ；ｆ）ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ、硝酸銀、ピリジン、ＴＨＦ；ｇ）β−シアノエチル−Ｎ，Ｎ．Ｎ’Ｎ’−テトライソプロピルホスホルアミデート、ＤＭＦ。
【誤訳訂正４６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９８】
スキーム５：４’−チオ−Ｇホスホルアミデートの合成。
【誤訳訂正４７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３００
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３００】
ａ）プンメラーの条件；ｂ）ＴＲＥＡＴ．ＨＦ；ｃ）ＤＭＴ−Ｃｌ、ピリジン；ｄ）ジオキサン−アンモニア；ｅ）ＴＥＳ−Ｃｌ、ピリジン、塩化イソブチリル、ＴＲＥＡＴ．ＨＦ；ｆ）ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ、硝酸銀、ピリジン、ＴＨＦ；ｇ）β−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ‘Ｎ’−テトライソプロピルホスホルアミデート、ＤＭＦ。
【誤訳訂正４８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１０】
実施例
本発明の化合物と方法は実施例を用いて、特に好ましい実施形態についてさらにその詳細が説明されるが、これらは説明のためにのみ示されるものであって、本発明の範囲を限定する意図ではないことは了解の上である。開示された実施形態に対する多様な変更や修飾ができることは技術分野の専門家には明らかであり、制限なしに、本発明の化学構造、置換基、誘導体、製剤処方、そして／または方法を含むそれらの変更や修飾は、本発明の真意や添付の請求項の範囲から外れることはない。
【実施例１】
【誤訳訂正４９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１６】
化合物２（１５０ｇ、０．９１４ｍｏｌｅ）を乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルフォルムアミド（ＤＭＦ、１．５Ｌ）に、機械的攪拌棒と滴下漏斗を装備した三つ首フラスコ中で、窒素気流下に溶解させた。溶液を氷槽中で０°Ｃに冷却した。ＮａＨ（２２０ｇ、ミネラルオイルに６０％となるように分散させた液、５．４８ｍｏｌｅ、６ｅｑ．）を、反応を制御し、過剰加熱をさけるようにすこしづつ加えた。ＮａＨをすべて加えた後に、ベンジルブロマイド（６５０ｍＬ、５．４８ｍｏｌｅ、６ｅｑ．）を滴下漏斗から滴下を開始した。全てのベンジルブロマイドが加えられた時点で、反応を室温まで戻し、５時間攪拌した。次に反応を６０°Ｃまで加熱して、その温度で一夜攪拌した。反応をメタノールで止め、真空下に濃縮させ、エーテルと水の間に分配した。エーテル層を１０％クエン酸溶液で一度洗い、飽和重炭酸ナトリウム溶液で一度洗い食塩水で一度洗った。そのエーテル層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮して、淡黄色のシロップを得た。このシロップを５％酢酸エチルを含むヘキサンに溶解させ、２Ｌの半融ガラス漏斗に詰めたシリカゲルにかけた。５％酢酸エチルを含むヘキサンを使い希望する生成物を２Ｌの分画に溶出した。標的分画を減圧下に濃縮し化合物３（３００ｇ）を収率７５％で得た。
【実施例３】
【誤訳訂正５０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２８】
化合物６（１１０ｇ、１３８．５４ｍｍｏｌｅ）をメタノール（５００ｍＬ）に溶解させ、メトキシドナトリウム（１１ｇ、２０４．０ｍｍｏｌｅ、１．５ｅｑ．）を加え、その溶液を室温で２時間攪拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残渣をエーテルと水の間に分配した。分離した有機層を食塩水で洗って、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。残渣を真空下に３時間乾燥させ、窒素気流下に乾燥ＴＨＦに溶解させた。トリエチルアミン（ＴＥＡ）（１００ｍＬ、０．７５２ｍｏｌｅ、５ｅｑ．）を加え、続いて、トリエチルアミントリヒドロフルオライド（ＴＲＥＡＴ．ＨＦ）（２２０ｍＬ、１．３８ｍｏｌｅ，１０ｅｑ．）を加え、混合物を室温で一夜攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、残渣をエーテルと水の間に分配した。エーテル層を食塩水で洗って、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーで（４０％酢酸エチルを含むヘキサン）精製し、５１ｇの化合物７を収率９０％で得た（文献には、収率８１％と報告されている）。
【実施例７】
【誤訳訂正５１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３４３】                                                                    
表題化合物は、新しい経路で（同様な先行技術で、不斉１，３−ジチオレインヌクレオシド類似体を合成するＲｏｍｕａｌｏ  Ｃａｐｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００３、３４６〜３５０の方法に従った）調製された。Ｔｉ（ＩＶ）イソプロポキシド（０．３ｍＬ、１．１０ｍｍｏｌｅ、０．４５ｅｑ．）の乾燥ジクロロメタン（５ｍＬ）溶液に窒素気流下にＬ−酒石酸ジエチルエステル（０．６ｍＬ、１．１５ｍｍｏｌｅ、１．５ｅｑ．）を激しく攪拌しながら、加えた。この溶液を−１５℃〜−２０℃へ冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシドを加えた（デカン中６Ｍ溶液の０．４ｍＬ、２．４ｍｍｏｌｅ）。攪拌は、室温で、澄明な麦藁色のような黄色の溶液が得られるまで２０分間続けた。この溶液を同じ温度で５分間攪拌し、化合物１０（１．３ｇ、２．３ｍｍｏｌｅ）の乾燥ジクロロメタン（５ｍＬ）溶液を加えた。反応混合物を、同じ温度で、ＴＬＣによって出発物質が完全になくなるまで２４時間攪拌した。反応を水を加えて止め、室温になるまで放置した。反応混合物を分離漏斗に移し、食塩水とジクロロメタンの間で分配した。食塩水の層をジクロロメタンで数回抽出し、その抽出液を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濁った溶液をセライトパッドを通してろ過し、減圧下に濃縮してシロップとした。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで、溶出剤としてジクロロメタン中の５から１０％の酢酸エチル溶液を用いて溶出し、化合物１１（１．２ｇ）を収率９０％で得た。１Ｈ  ＮＭＲは、生成物が希望する（Ｒ）異性体のみを含み、文献値に相当することを示した。生成物は、残存するＬ−酒石酸ジエチルエステルを含んでいたが、この不純物は次のステップを妨げないので、さらに精製することなしに使用した。
【実施例１２】
【誤訳訂正５２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３５６】
化合物１４（４．３ｇ、７．６６ｍｍｏｌ）、硝酸銀（３．１ｇ、１８．５ｍｍｏｌ），無水ピリジン（４．５ｍＬ、５６．０ｍｍｏｌ）とＴＢＤＭＳ−Ｃｌ（２．８ｇ、１８．５７ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（７５ｍＬ）に溶解させ、室温で一夜攪拌した。沈殿した塩化銀をセライトパッドで濾過して除き、ＴＨＦで数回洗った。洗液を合わせて濃縮し、泡状物を得、それをフラッシュクロマトグラフィー（４０％酢酸エチルのヘキサン溶液）で精製して、化合物１５ａ（３．２ｇ、６３％）、１５ｂ（１．２ｇ、２３％）と１５ｃ（０．４３ｇ、８．３％）を得た。それらの構造を１Ｈ  ＮＭＲ  で確認した。
【実施例１６】
【誤訳訂正５３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３５７】
１−（３−Ｏ−（２−シアノエトキシ（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）−５−Ｏ−（４，４‘−ジメトキシトリチル）−２−Ｏ−ｔｅｒｔ．ブチルジメチルシリル）−４−チオ−β−Ｄ−リボフラノシル）ウラシル（１６）
【誤訳訂正５４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３５９】
化合物１５ａ（２．５ｇ、３．７ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１３ｍＬ）溶液に，乾燥１Ｈ−テトラゾール（０．２ｇ、２．８ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルイミダゾール（０．０７７ｇ、０．９ｍｍｏｌ）と２−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホルアミダイト（１．６ｇ、５．３０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で８時間攪拌した。それをＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）にとり、食塩水で洗った（５ｘ５０ｍＬ）。有機層を濃縮し、その結果のオイルをカラムクロマトグラフィーにかけ、１０％アセトンのジクロロメタン溶液で溶出して精製した。適切な分画を集めて、濃縮して泡を形成させ、それを高真空下で二日間乾燥させて、純粋なアミダイトを２．９６ｇ、収率９１．６％で得た。１Ｈ  および３１Ｐ  ＮＭＲは化合物１６の正しい構造を示した。
【実施例１７】
【誤訳訂正５５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３６６】
１−［２，３−ジ−Ｏ−アセチル−５−（４，４’−ジメトキシトリチル）−４−チオ−β−Ｄ−リボフラノシル］ウラシル（１９）
【誤訳訂正５６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３７１】
１，２，４−トリアゾール（３．７３ｇ、５４ｍｍｏｌ）を乾燥アセトニトリル（４２ｍＬ）に懸濁させ、氷槽中で０°Ｃに冷やした。ＰＯＣｌ３（１．４４ｍＬ，１５．４ｍｍｏｌ）を、攪拌しながら滴下して加えた。ＴＥＡ（１０．７３ｍＬ、７７ｍｍｏｌ）を激しく攪拌しながらゆっくりと加え、混合物をこの温度でさらに３０分間攪拌した。化合物１９の（２．４３ｇ、３．８５ｍｍｏｌ）の乾燥アセトニトリル（１４ｍＬ）溶液を加え、混合物を０°Ｃで２時間、室温で１時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、残渣を酢酸エチルにとった。酢酸エチル溶液を飽和重炭酸ナトリウム溶液で二度洗い、食塩水で一度洗って、無水炭酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を減圧下に除去し、残渣をジオキサン（４０ｍＬ）にとって、３０％水酸化アンモニウム溶液（２０ｍＬ）を加えた。混合物を、封をしたフラスコ内で一夜、室温で攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（１０％メタノールのジクロロメタン溶液）で精製して、化合物２０（２．０ｇ）を収率７５％で得た。
【実施例２１】
【誤訳訂正５７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３７７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３７７】
化合物２１（２００ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、硝酸銀（１００ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）とＴＢＤＭＳ−Ｃｌ（７０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦに溶解させ、室温で一夜攪拌した。反応物を酢酸エチルで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム溶液、水と食塩水で洗った。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（３０％酢酸エチルのヘキサン溶液）で精製し、化合物２３（１００ｍｇ）を収率４５％で得た。３−位を保護された類似体（Ｎ−ベンゾイル−１−［５−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−（ｔ−ブチルジメチルシリル）−４−チオ−β−Ｄ−リボフラノシル］シトシン）もまたマイナー生成物として分離された。
【実施例２３】
【誤訳訂正５８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３７８】
Ｎ４−Ｂｚ−１−（３−Ｏ−（２−シアノエトキシ（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）−５−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｏ−ｔｅｒｔ．ブチルジメチルシリル）−４−チオ−β−Ｄ−リボフラノシル）シトシン（２４）
【誤訳訂正５９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３８０】
化合物２３（０．４９ｇ、０．６２８ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液に、乾燥させた１Ｈ−テトラゾール（０．０４ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルイミダゾール（０．０１３ｇ）と２−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホルアミダイト（０．２８６ｇ、０．９４８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で８時間攪拌し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）にとり、食塩水（５ｘ１０ｍＬ）で洗った。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮した。結果として得られたオイルをカラムクロマトグラフィーで、１０％アセトンのジクロロメタン溶液を溶出液に用いて、精製した。適切な分画を集めて、濃縮し泡を形成させ、それを高真空下で二日間乾燥させて、純粋なアミダイトを０．５５２ｍｇ、収率８９％で得た。１Ｈと３１Ｐ  ＮＭＲによって化合物２４の正しい構造が示された。
【実施例２４】
【誤訳訂正６０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３８１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３８１】
４’−チオアデノシンの合成
この化合物の合成は、Ｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｖｏｌ．１２２，Ｎｏ．３０，２０００、に記載された手順に従って行う。
【実施例２５】
【誤訳訂正６１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３８２】
Ｎ６−ベンゾイル−５’−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−３’−Ｏ−（シアノエトキシ−Ｎ，Ｎジイソプロピル−ホスホルアミダイト）−４’−チオ−アデノシン
この表題の化合物は、４’−チオアデノシンから、標準的な方法によって調製された（Ｃｌａｕｄｉｎｅ  Ｌｅｙｄｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、「アンチセンス研究と開発５」、１９９５、１６７、とそれに掲載される文献およびＣｌａｕｄｉｎｅ  Ｌｅｙｄｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．「ヌクレオシドとヌクレオチド」、１３、１９９４、２０３５とそれに掲載される文献）。
【実施例２６】
【誤訳訂正６２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３８６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３８６】
Ｎ２−イソブチリル−５’−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−３’−Ｏ−（シアノエトキシ−Ｎ，Ｎジイソプロピル−ホスホルアミダイト）−４−チオ−グアノシン（３４）
【誤訳訂正６３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３８８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３８８】
この化合物は、４’−チオグアノシンから、多数の文献上の方法の一つを使って調製される（Ｍａｓａｄ  Ｊ．Ｄａｈｍａ  ＆  Ｋｅｌｖｉｎ  Ｋ．Ｏｇｉｌｖｉｅによる「分子生物学の手法」２０巻、８１頁、（とそこに掲載された文献）；「オリゴヌクレオチドとその類似体のプロトコール」、Ｅｄ．Ｓ．Ａｇａｒｗａｌ、Ｈｕｍａｎａ  ＰｒｅｓｓＩｎｃ、Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ；「オリゴヌクレオチド合成の実際的手法」（１９８４）、Ｅｄ．Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ＩＲＳ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ；Ｓｃａｒｉｎｇｅ，Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ａ．；Ｆｒａｎｋｌｙｎ，Ｃｈｒｉｓｏｐｈｅｒ；Ｕｓｍａｎ，Ｎａｓｓｉｍ，「ｂ−シアノエチル保護リボヌクレオシドホスホルアミダイトを用いた生物学的に活性なオリゴリボヌクレオチドの化学合成」、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９０），１８（１８），５４３３−４１）。
【実施例２８】
【誤訳訂正６４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３８９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３８９】
２’−ＯＭｅ−４’−チオ−Ｕホスホルアミダイト
【誤訳訂正６５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３９１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３９１】
ａ）ＴＩＰＤＳＣｌ２、ピリジン；ｂ）塩化ベンゾイル、テトラブチルアンモニウムブロマイド、ＣＨ２Ｃｌ２、飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液、ジクロロエタン；ｃ）酸化銀、ヨードメタン；ｄ）ＴＲＥＡＴ．ＨＦ、ＴＥＡ、ＴＨＦ、メタノール性アンモニア；ｅ）ＤＭＴｒ−Ｃｌ、ＤＭＡＰ、ピリジン；ｆ）標準的方法。
【誤訳訂正６６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３９３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３９３】
３−Ｎ−ベンゾイル−１−［３，５−Ｏ−（１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサン−１，３−ジイル）−４−チオ−β−Ｄ−リボフラノシル］ウラシル（３６）：
化合物３５（２５０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌｅ），Ｎａ２ＣＯ３（４２４ｍｇ，４  ｍｍｏｌｅ）とテトラブチルアンモニウムブロマイド（７ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌｅ）との混合物を二相性のＣＨ２Ｃｌ２−Ｈ２Ｏの混合液に溶解させた。塩化ベンゾイル（８７μＬ、０．７５ｍｍｏｌｅ）を加え、混合物を室温で化合物３５が使いきられるまで攪拌した。その混合物を分離漏斗に移した。有機相を集め、水相をＣＨ２Ｃｌ２で二回抽出した。有機抽出液を合わせて、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。残渣を１，２−ジクロロエタンにとり、６０°Ｃで１５分間加熱した。溶媒を減圧下に除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（１０％アセトンのジクロロメタン溶液）で精製し、化合物３６（２２５ｍｇ、収率７５％）を得た。
【誤訳訂正６７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３９５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３９５】
１−（２−Ｏ−メチル−４−チオ−β−Ｄ−リボフラノシル］ウラシル（３８）：
化合物３７（２６０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌｅ）を乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解させた。ＴＲＥＡＴ．ＨＦ（１．５ｍＬ）とＴＥＡ（０．７５ｍＬ）を加え、混合物を４時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、続いて乾燥トルエンで二回共蒸発させた。残渣をメタノール性アンモニアに（５ｍＬ）にとり、封をした試験管内で一夜攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（１０％メタノールのジクロロメタン溶液）で精製し、化合物３８（１００ｍｇ、収率８５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．３５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．０（ｄ、１Ｈ）、５．９７（ｄ、１Ｈ）、５．６４（ｄ、１Ｈ）、５．２（ｂｒｓ、２Ｈ）、４．２（ｄ、１Ｈ）、３．９（ｄ、１Ｈ）、３．５８（ｄｄ、２Ｈ）、３．２６（ｓ、３Ｈ）、１．１８（ｍ、１Ｈ）。
【誤訳訂正６８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３９７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３９７】
２’−Ｏ−メチル−４−チオ−Ｕホスホルアミダイト（４０）：
化合物３９を、標準的な方法に従って、相当するホスホルアミダイト化合物１０７に変換させた（「オリゴヌクレオチド合成：実際的方法」Ｇａｉｔ、Ｍ．Ｊ．（Ｅｄ．），ＵＫ（１９８４），ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ）。
【実施例２９】
【誤訳訂正６９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４０３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４０３】
化合物４１（１ｅｑ．）を乾燥ＤＭＦに溶解させた。ショウノウスルホン酸（０．２ｅｑ．）とｐ−メトキシベンズアルデヒド−ジメチルアセタール（４ｅｑ．）を加え、反応液を室温で全ての出発物質がなくなるまで攪拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和重炭酸ナトリウムの溶液（２ｘ）、水（１ｘ）と食塩水（１ｘ）で洗って、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。続いて減圧下に濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、化合物４２を得た。
【実施例３１】
【誤訳訂正７０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４０５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４０５】
３’，５’−Ｏ−ｐ−メトキシベンジリデン−４’−チオ−Ｏ２，２’  −アンヒドロウリジン（４４）
化合物４３（１ｅｑ．）を乾燥ＤＭＦ中で、ジフェニル炭酸エステル（２１．２ｅｑ．）で処理し、９０°Ｃに加熱し、重炭酸ナトリウム（化合物４３の１ｇあたり１０ｇ）を加えた。反応を１１０°Ｃに２．５時間保ち、冷やしてろ過した。残渣を酢酸エチルで数回洗って、洗液を最初のろ液と合わせた。あわせたろ液を水（２ｘ）、食塩水（１ｘ）で洗い、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を減圧下に除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、化合物４４を得た。
【実施例３３】
【誤訳訂正７１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４０７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４０７】
あるいは、化合物４５は、化合物４４を乾燥ＤＭＦ中で、１８−クラウン−６（５ｅｑ．）とＫＦ（２０ｅｑ．）の存在下に、１１０°Ｃで加熱し、続いて上記の作業とフラッシュクロマトグラフィーを行うことによっても得られる。
【実施例３４】
【誤訳訂正７２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４１１】
１−［３，５−Ｏ−ｐ−メトキシベンジリデン−２−フルオロ−４−チオ−β−Ｄ−リボフラノシル］ウラシル（４５）
化合物４８（１ｅｑ．）を乾燥ＤＭＦに溶解させた。ＴＢＡＦ（１０ｅｑ．）を反応混合物に加え、出発物質がなくなるまで、１００°Ｃで加熱して反応させた。溶媒を減圧下に除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、化合物４５を得た。
あるいは、化合物４５は化合物４８を乾燥ＤＭＦ中で、１８−クラウン−６（５ｅｑ．）とＫＦ（２０ｅｑ．）の存在下に、１１０°Ｃで加熱し、続いて上記の作業とフラッシュクロマトグラフィーを行うことによっても得られる。
【実施例３８】
【誤訳訂正７３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４１７】
５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−Ｏ−［２−（メトキシ）エチル］−４’−チオウリジン−３’−［（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル］ホスホルアミダイト（５３）
【誤訳訂正７４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４１９】
（Ａ）（ＰｈＯ）２ＣＯ、ＮａＨＣＯ３、ＤＭＡ、１００°Ｃ；（Ｂ）Ａｌ（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＭｅ）３、還流、４８時間；（Ｃ）ＤＭＴＣｌ、ＤＭＡＰ、ピリジン、ＲＴ：（Ｄ）テトラゾール、ＮＭＩ、ホスフィチル化試薬、ＤＭＦ、ＲＴ。
【誤訳訂正７５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４２０】
化合物１３をジフェニル炭酸エステルおよび重炭酸ナトリウムとジメチルアセトアミド中で１００°Ｃに加熱して化合物５０を得る。化合物５０を無水２−メトキシエタノールおよびアルミニウム２−メトキシエトキシドと還流すると化合物５１が得られる。化合物５１の、触媒量のＤＭＰＡの存在下にピリジン中で、ＤＭＴＣｌによる５’位での選択的トリチル化することによって化合物５２を得、それを３’位でホスフィチル化することで化合物５３を得る。
【実施例４３】
【誤訳訂正７６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４２１】
Ｎ４−ベンゾイル−５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−Ｏ−［２−（メトキシ）エチル］−４’−チオシチジン−３’−［（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル］ホスホルアミダイト（５６）
【誤訳訂正７７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４２４】
化合物５２の３’−ヒドロキシル基を、ピリジン中でＴＭＳＣｌで処理して、トリメチルシリル基で一時的に保護する。この一時的に保護された化合物をさらに、アセトニトリル中で１，２，４−トリアゾールとＰＯＣｌ３で処理してこの塩基の４−位のトリアゾール化合物を得る。このトリアゾリドをジオキサン中で水酸化アンモニウムで処理して、化合物５４を得、それを室温でＤＭＦ中で無水安息香酸で処理して化合物５５に変換させる。化合物５５のホスフィチル化で化合物５６を得る。
【実施例４３】
【誤訳訂正７８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４２５】
５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−Ｏ−［２−（メトキシ）エチル］−Ｎ２−イソブチリル−４’−チオグアノシン−３’−［（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル］ホスホルアミダイト（６６）
【誤訳訂正７９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４２７】
（Ａ）Ｃｓ２ＣＯ３、トルエン−スルフォン酸−２−メトキシエチルエステル、ＤＭＦ；（Ｂ）アデノシンデアミナーゼ、リン酸緩衝液、ｐＨ７．５、ＲＴ；（Ｃ）ＴＭＳＣｌ、ピリジン、塩化イソブチリルに続いてＮＨ４ＯＨ；（Ｄ）ＤＭＴＣｌ、ピリジン、ＤＭＡＰ；（Ｅ）１−Ｈテトラゾール、ＮＭＩ、ＤＭＦ、２−シアノエチル−テライソプロピルホスホアミダイト、ＲＴ。
【誤訳訂正８０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４２８】
化合物６６の合成は、スキーム１３に説明されている。化合物６１は、ＤＭＦ中でＣｓ２ＣＯ３およびトルエン−４−スルフォン酸−２−メトキシエチルエステルで処理することにより化合物６２を生じる。化合物６２をｐＨ７．５のリン酸緩衝液中でアデノシンデアミナーゼで処理することで化合物６３を得る。化合物６３の環外アミノ基は、一時的な保護条件下でイソブチリル基の処理で保護されて、化合物６４を生じる。化合物６４は室温で、触媒量のＤＭＡＰの存在下にピリジン中でＤＭＴＣｌで処理すると化合物６５を得る。化合物６５のホスフィチル化は化合物６６を生じる。
【実施例４４】
【誤訳訂正８１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４３０】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ２）δ０．０６（ｓ、３Ｈ）、０．０７（ｓ、３Ｈ）、０．９１（ｓ、９Ｈ）、２．４５−２．６７（ｍ、４Ｈ）、３．３５−３．５０（ｍ、２Ｈ）、３．７９（ｓ、６Ｈ）、４．３２（ｄ、Ｊ＝３．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．１９（ｄｄ、Ｊ＝３．２と５．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．５５（ｄ、Ｊ＝８．２０Ｈｚ、１Ｈ）、６．４５（ｄ、Ｊ＝８．８０Ｈｚ、４Ｈ）、６．８４（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．２３−７．４５（ｍ、９Ｈ）、７．５９（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、１０．１２（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ−４．３、−４．８、２５．５、２８．５、２９．０、５５．１、６０．６、６０．３、６４．９、７３．６、７７．４、８７．２、１０３．２、１１３．２、１２７．０、１２７．９、１２８．１、１３０．１，１３５．０、１３５．３、１４０．８、１４４．２、１５１．３、１５８．６、１６３．８、１７１．３，１７５．７；ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ７９９．２０［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【実施例４５】
【誤訳訂正８２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４３１】
５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−４’−チオウリジン−２’−Ｏ−スクシニルＣＰＧ（６８）
化合物６７を、標準的な合成法（官能化ＣＰＧ合成のＴＢＴＵによる合成：Ｂａｙｅｒ，Ｅ；Ｂｌｅｉｃｈｅｒ，Ｋ；Ｍａｉｅｒ，Ｍ．Ａ．；Ｚ．Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ．，１９９５，５０ｂ，１０９６〜１１００）に従って、アミノアルキル制御細孔ガラス（ＣＰＧ）にかけて官能化された固体支持相６８（４９μｍｏｌ／ｇ）を得た。
【誤訳訂正８３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４３３】
５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−Ｏ−［２−（メトキシ）エチル］−Ｎ６−ベンゾイル−４’−チオアデノシン−３’−［（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル］ホスホルアミダイト（６９）
【誤訳訂正８４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４３５】
化合物６９は、まず４’−チオアデノシン（実施例２４）をＣｓ２ＣＯ３とトルエン−４−スルフォン酸２−メトキシ−エチルエステルをＤＭＦ中で処理して、２’−Ｏ−メトキシエチル中間体を提供することで調製した。この物質はさらにピリジン中ＴＭＳＣｌで一時的に保護を行い、塩化ベンゾイルでさらに処理してＮ６−Ｂｚ保護の中間体を得る。そのＮ６−Ｂｚ保護中間体の５’−ヒドロキシル基はジメトキシトリチルクロライドを使って選択的に保護される。ＤＭＴ保護の化合物は、実施例１６に前述したように、２−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホルアミダイトを使って標準的な条件下でホスフィチル化されて、標題の化合物が得られる。
【実施例４７】
【誤訳訂正８５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４３６】
４’−チオ修飾ＲＮＡ合成
４’−チオ修飾を有するオリゴヌクレオチドが合成された。無水アセトニトリル中の０．１Ｍのアミダイト溶液が修飾ヌクレオチドの合成に使われた。ホスホルアミダイト溶液は二回に分けて加え、一回毎にカップリングのための待ち時間を５分かけた。標準的な２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳホスホルアミダイトと市販の固体支持相（Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．）をＡ，Ｃ，ＧとＵ残基の組み込みに用いた。ヌクレオチド間の亜リン酸エステルトリエステルをリン酸トリエステルに変える酸化はｔｅｒｔ−ブチルヒドロ過酸化物／アセトニトリル／水（１０：８７：３）を用い待ち時間を１０分かけた。他の全てのステップについては、ミリポアのプロトコールを修飾しないで用いた。カップリングの効率は９７％より高かった。合成を終えた後で、ＣＰＧを水酸化アンモニウムの水溶液（３０ｗｔ．％）：エタノール（２：１）に懸濁し、室温で２時間放置した。ＣＰＧをろ過し、ろ液を５５°Ｃで６時間加熱して、２’位のＴＢＤＭＳ基以外の保護基を全て除去した。残渣を無水ＴＥＡ．ＨＦ／ＮＭＰ溶液（１．５ｍＬＮ−メチルピロリドン、７５０μｌＴＥＡ，及び１ｍｌＴＥＡ．３ＨＦから得た１．４ＭＨＦ濃縮物の１ｍＬ溶液）中で再懸濁し、６５°Ｃで１．５時間加熱して２’位のＴＢＤＭＳを除去した。反応を１．５Ｍ重炭酸アンモニウム（１ｍＬ）で止め、混合物をセファデックスＧ−２５のカラム（ＮＡＰ  カラム、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．）にかけた。オリゴヌクレオチドを水で溶出し、オリゴヌクレオチドを含む分画を集めて、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ、ウォータース、Ｃ−１８、７．８ｘ３００ｍｍ、Ａ＝１００  ｍＭトリエチルアンモニウムアセテート、ｐＨ＝７、Ｂ＝アセトニトリル、４０分間に５から２０％、続いて６０％Ｂを６０分間、流速２．５ｍＬｍｉｎ−１，λ＝２６０ｎｍ）で精製した。完全鎖のオリゴヌクレオチドを含む分画を集めて（ＣＧＥ分析で評価して＞９０％）蒸発させた。残渣を滅菌１０Ｍ酢酸アンモニウム溶液（０．３ｍＬ）に溶解させた。エタノール（１ｍＬ）を加えて、−７８°Ｃへ一時間冷却して、沈殿を形成させ、それをマイクロヒュージ（ＮＹＣｅｎｔｒｉｆｕｇｅ５４１５Ｃ；Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ，Ｗｅｓｔｂｕｒｙ、ニューヨーク州）で３０００ｒｐｍ（７３５ｇ）で１５分間、ペレット化した。上清を傾けて捨て、そのペレットを集めた。ペレット化したオリゴヌクレオチドを滅菌水（０．３ｍＬ）に溶解させ、エタノール（１ｍＬ）を加え、その混合物を−７８°Ｃで１時間冷却して沈殿させた。形成された沈殿物をペレット化し、上記のように回収した。修飾オリゴヌクレオチドの単離された収率は３０−３５％であった。オリゴヌクレオチドはＥＳ  ＭＳ分析で性格付けし、純度は毛細管ゲル電気泳動とＨＰＬＣ（ウォータース、Ｃ−１８、３．９ｘ３００ｍｍ、Ａ＝１００ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム、ｐＨ＝７、Ｂ＝アセトニトリル、４０分間に５から６０％Ｂ、流速１．５ｍＬｍｉｎ−１、λ＝２６０ｎｍ）で評価した。
【実施例４８】
【誤訳訂正８６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４３７】
２’−ＯＭｅ−４’−チオ−Ｕホスホルアミダイトの合成（４０）
【誤訳訂正８７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４３９】
（ａ）ジフェニル炭酸エステル、重炭酸ナトリウム、Ｎ、Ｎ−ジメチルアセトアミド、加熱；（ｂ）トリメチルホウ酸エステル、トリメチルオルトホウ酸エステル、重炭酸ナトリウム、メタノール、加熱；（ｃ）塩化４，４’−ジメトキシトリチル、ピリジン、ＤＭＡＰ、；（ｄ）２−シアノエチル  ジイソプロピルクロロホスホルアミダイト、ジイソプロピルエチルアミン、塩化メチレン
２、２’−アンヒドロ−４’−チオ−ウリジン（５０）：
４’−チオ−ウリジン（１３）（１ｇ、３．８ｍｍｏｌｅ），重炭酸ナトリウム（５ｍｇ）、ジフェニル炭酸エステル（９００ｍｇ、４．０ｍｍｏｌｅ）を１０ｍＬの乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドに溶解させ、１００°Ｃで２時間加熱した。反応混合物を室温まで冷まして、急速に攪拌しながらエーテルに注いだ。その結果の沈殿を遠心分離によって単離し（８００ｍｇ、収率７６％）そのままつぎのステップに使った。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．８（ｄ、１Ｈ）、６．２（ｄ、１Ｈ）、５．８２（ｍ、２Ｈ）、５．４（ｄ、１Ｈ）、５．２（ｍ、１Ｈ）、４．６（ｍ、１Ｈ）、３．２−３．４（ｍ、３Ｈ）。ＥＳＭＳ＝２４３（ＭＨ＋），計算値はＣ９Ｈ１０Ｎ２Ｏ４Ｓ＝２４２．０３。
【誤訳訂正８８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４４０】
２’−Ｏ−メチル−４’−チオ−ウリジン（３８）：
化合物５０（１ｇ、４．０ｍｍｏｌｅ）、トリメチルホウ酸エステル（２ｍＬ）、トリメチルオルトホウ酸エステル（１ｍＬ）、重炭酸ナトリウム（５ｍｇ）そしてメタノール（３ｍＬ）を鋼鉄製のボンベに入れ、１５０°Ｃで２日間加熱した。ボンベを室温まで冷まして、残渣を減圧下に濃縮しメタノールと数回共蒸発を行った。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（２％メタノールのジクロロメタン溶液）で精製し、化合物３８（８００ｍｇ、収率７５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．０（ｄ、１Ｈ）、５．９５（ｄ、１Ｈ）、５．６（ｄ、１Ｈ）、５．１５−５．２５（ｂｒ、２Ｈ）、４．２（ｍ、１Ｈ）、３．８２（ｍ、１Ｈ）、３．６２（ｍ、２Ｈ）、３．５（ｓ、３Ｈ）、３．３８（ｍ、１Ｈ）。ＥＳＭＳ＝２７５（ＭＨ＋），計算値はＣ１０Ｈ１４Ｎ２Ｏ５Ｓ＝２７４．０６。
【誤訳訂正８９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４４２】
３’−［（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト］−５’−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−Ｏ−メチル−４’−チオ−ウリジン（４０）：
化合物３９（４００ｍｇ、０．７ｍｍｏｌｅ）を２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホルアミダイト（１２５μｌ）とジイソプロピルエチルアミン（２００μＬ）を乾燥ジクロロメタン（５ｍＬ）中で０°Ｃで２時間処理した。反応混合物を酢酸エチル（５０ｍＬ）と飽和重炭酸ナトリウム溶液（２０ｍＬ）間に分配した。酢酸エチル層を飽和重炭酸ナトリウム溶液（２０ｍＬ）で二回洗って、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（１０％アセトンのメチレンクロライド溶液）で精製し、化合物４０（４００ｍｇ、収率６０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）：δ８．１（ｄ、０．５Ｈ）７．９（ｄ、０．５Ｈ）、７．２−７．５（ｍ、１０Ｈ）、６．８５（ｍ、４Ｈ）、６．０５（ｄｄ、１Ｈ）、５．５５（ｄｄ、１Ｈ）、４．３（ｍ、１Ｈ）、３．８（ｍ、７Ｈ）３．５５（ｍ、５Ｈ）、２．６（ｍ、１．２Ｈ）、２．４（ｍ、０．８Ｈ）、１．０−１．２（ｍ、１２Ｈ）。ＦＡＢＭＳ＝７７７．３００（ＭＨ＋），計算値はＣ４０Ｈ４９Ｎ４Ｏ８ＰＳ＝７７６．３００９。
【実施例４９】
【誤訳訂正９０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４４３】
２’−ＯＭｅ−４’−チオＣホスホルアミダイト
【誤訳訂正９１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４４５】
ａ）ＴＩＰＤＳＣｌ２、ピリジン；ｂ）ＰＯＣｌ３，ＴＥＡ，ＣＨ３ＣＮ，続いて、１，４−ジオキサン、ＮＨ４ＯＨ；ｃ）無水安息香酸、ＤＭＡＰ、ピリジン；ｄ）ＴＲＥＡＴ．ＨＦ、ＴＥＡ、ＴＨＦ；ｅ）ＤＭＴｒ−Ｃｌ，ＤＭＡＰ，ピリジン；ｆ）２−シアノエチルジイソプロピルクロロホスホルアミダイト、ジイソプロピルエチルアミン、メチレンクロライド
１−［３，５−Ｏ−（１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサン−１，３−ジイル）−２−Ｏ−メチル−４−チオ−β−Ｄ−リボフラノシル］ウラシル（１０８）：
化合物３８（７０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌｅ）を無水ピリジン（３ｍＬ）に窒素気流下で溶解させて、氷槽中で冷却した。ＴＩＰＤＳ−Ｃｌ２（１６６μＬ、０．５２ｍｍｏｌｅ）を、激しく攪拌しながら、滴下して加えた。攪拌を同じ温度でさらに２から４時間続けた。化合物３８が全て使いきられた時点で氷上に注いで、反応を止めた。その混合物を酢酸エチルと水の間に分離させ、酢酸エチル層を冷えた飽和重炭酸ナトリウム溶液で３回洗って、食塩水で１回洗った。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで（５％メタノールのジクロロメタン溶液）で精製し、化合物１０８を得た（１２０ｍｇ、収率９０％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）：δ８．０２（ｄ、１Ｈ）、６．０２（ｄ、１Ｈ）、５．６（ｄ、１Ｈ）、４．２（ｂｒ、１Ｈ）、３．６２（ｍ、３Ｈ）３．５５（ｓ、３Ｈ）、３．４（ｂｒ、１Ｈ）、１．１−０．９（ｍ、２８Ｈ）。ＥＳＭＳ＝５１７（ＭＨ＋），計算値はＣ２２Ｈ４０Ｎ２Ｏ６ＳＳｉ２＝５１６．０２。
【誤訳訂正９２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４４６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４４６】
１−［３，５−Ｏ−（１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサン−１，３−ジイル）−２−Ｏ−メチル−４−チオ−β−Ｄ−リボフラノシル］−Ｎ−ベンゾイル−シトシン（１０９）：
化合物１０８（４７５ｍｇ、０．９２ｍｏｌｅ）を乾燥アセトニトリル（４ｍＬ）に溶解させた。別のフラスコに１，２，４−トリアゾール（０．８９ｇ、１２．８８ｍｍｏｌｅ）を、窒素気流下に、乾燥アセトニトリル（１２ｍＬ）に懸濁させて、氷槽中で０°Ｃへ冷却した。ＰＯＣｌ３（０．３３ｍＬ、３．６８ｍｍｏｌｅ）を、激しく攪拌しながら滴下して加え、続いてＴＥＡ（２．６ｍＬ、１８．４ｍｍｏｌｅ）のアセトニトリル（６ｍＬ）溶液を滴下して加えた。ＴＥＡを加え終わった後に、反応混合物を同じ温度でさらに３０分間攪拌した。化合物１０８の溶液を加え、０°Ｃで１時間、室温で１２時間攪拌して反応させた。反応が終わった時点で、粗生成物を酢酸エチルと飽和重炭酸ナトリウムに分配した。酢酸エチル層を飽和重炭酸ナトリウム溶液で二回洗い、食塩水で一回洗った。無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた後に、溶媒を減圧下に除去した。その結果のオイル状の残渣を１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）にとり、アンモニア水（５ｍｌ）を加えた。封をしたフラスコで１２時間攪拌して反応させた。反応混合物を酢酸エチルと水に分配させた。酢酸エチル層を水で二回、食塩水で一回洗い、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。その結果の粗な残渣を乾燥アセトニトリル（２２０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌｅ）に溶解させた。ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（５５ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌｅ）と無水安息香酸（１５０ｍｇ、０．８５３ｍｍｏｌｅ）を加え、６５°Ｃで２０分間攪拌して反応させた。反応物を酢酸エチルと水に分配し、酢酸エチル層を飽和重炭酸ナトリウム溶液で三回洗い、食塩水で一回洗って、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を減圧下に除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（５０％酢酸エチルのジクロロメタン溶液）で精製し、化合物１０９（４８０ｍｇ、収率８５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）：δ８．９（ｄ、１Ｈ）８．７（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．９（ｄ、２Ｈ）、７．５（ｍ、３Ｈ）、５．９６（ｓ、１Ｈ）、４．１５（ｍ、３Ｈ）、３．８５（ｍ、５Ｈ）、１．１５−０．８（ｍ、２８Ｈ）。ＥＳＭＳ＝６２０（ＭＨ＋），計算値はＣ２９Ｈ４５Ｎ３Ｏ６ＳＳｉ２＝６１９．２。
【誤訳訂正９３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４４７】
１−［５−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｏ−メチル−４−チオ−β−Ｄ−リボフラノシル］−Ｎ−ベンゾイル−シトシン（１１０）：
化合物１０９（２００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌｅ）を乾燥ＴＨＦに溶解させた。ＴＲＥＡＴ．ＨＦ（１．５ｍＬ）とＴＥＡ（０．７５ｍＬ）を加え、混合物を４時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、続いて、乾燥トルエンと共蒸発を二回行った。残渣をさらに二回無水ピリジン（１０ｍＬ）と共蒸発させ、五酸化リン上で一夜乾燥させた。残渣を冷やした乾燥ピリジン（５ｍＬ）に溶解させた。ＤＭＡＰ（８ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌｅ）とジメトキシトリチルクロライド（２００ｍｇ、０．６ｍｍｏｌｅ）を加えて、混合物を室温で２４時間攪拌した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（１０％メタノールのジクロロメタン溶液）で精製し、化合物１１０（１８０ｍｇ、収率８０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ８．８（ｄ、１Ｈ）８．６（ｄ、１Ｈ）、７．９（ｄ、２Ｈ）、７．６−７．２（ｍ、１３Ｈ）、６．９（ｄ、４Ｈ）、６．１５（ｓ、１Ｈ）、４．２（ｂｒ、１Ｈ）、３．８（ｓ、６Ｈ）、３．７６（ｍ、１Ｈ）、３．７３（ｓ、３Ｈ）、３．６６（ｍ、３Ｈ）。ＦＡＢＭＳ＝６８０．２（ＭＨ＋），計算値はＣ３８Ｈ３７Ｎ３Ｏ７Ｓ＝６７９．２３５。
【誤訳訂正９４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４４８】
３’−［（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト］−５’−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−Ｏ−メチル−４’−チオ−Ｎ−ベンゾイル−シチジン（１１１）：
化合物１１０（１９０ｍｇ）を２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホルアミダイト（１２５μＬ）とジイソプロピルエチルアミン（２００μＬ）を乾燥ジクロロメタン（５ｍＬ）中で０°Ｃで２時間処理した。反応混合物を酢酸エチル（５０ｍＬ）と飽和重炭酸ナトリウム溶液（２０ｍＬ）間に分配した。酢酸エチル層を飽和重炭酸ナトリウム溶液（２０ｍＬ）で二回洗って、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（３０％酢酸エチルのヘキサン溶液）で精製し、化合物１１３（１５０ｍｇ、収率７５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）：δ８．８（ｄ、０．５Ｈ）８．６（ｄ、０．５Ｈ）、７．９（ｄ、２Ｈ）、６．９ｄ（４Ｈ）、７．６−７．２（１５Ｈ）、６．１（ｄ、１Ｈ）、４．４（ｍ、０．５Ｈ）、４．２（ｍ、０．５Ｈ）、３．９（ｍ、１Ｈ）、３．８（ｄ、６Ｈ）、３．７−３．３（ｍ、７Ｈ）、２．５５（ｍ、０．５Ｈ）、２．４（ｍ、０．５Ｈ）、１．３−１．０（ｍ、１２Ｈ）。ＦＡＢＭＳ＝８８０．３（ＭＨ＋），計算値はＣ４７Ｈ５４Ｎ５Ｏ８ＰＳ＝８７９．３４３１。
【実施例５０】
【誤訳訂正９５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４４９】
２’−Ｏ−メチル−４’−チオ−修飾型ｓｉＲＮＡ
Ａ、Ｕ、ＧとＣ残基の組み込みには、標準的なホスホルアミダイトと固体の支持相が使われた。０．１Ｍ  アミダイトの無水アセトニトリル溶液を合成に用いた。米国、ヴァージニア州のＧｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．から入手した、化学的リン酸化試薬を用いて、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端をリン酸化した。修飾オリゴヌクレオチドは、自動的固相ＤＮＡ合成装置で、官能化制御細孔ガラス（ＣＰＧ）上に合成された。一般的な固相支持体を用いて、エンドの２’−デオキシ−２’−フルオロ修飾部分をもったオリゴヌクレオチドの合成を行った。４３１２当量のホスホルアミダイト溶液を二回に分け、一回ごとに６分間のカップリングの待ち時間をとって、加えた。他の全てのステップは、製造業者からのプロトコールに、修飾を加えないで従った。ｔｅｒｔ−ブチルヒドロ過酸化物／アセトニトリル／水（１０：８７：３）の溶液を用いて、ヌクレオシド間の亜リン酸をリン酸に酸化した。カップリングの効率は９７％より高かった。合成の完了後、固体支持相を水酸化アンモニウムの水溶液（３０ｗｔ．％）：エタノール（３：１）に懸濁し、５５°Ｃで６時間加熱して、２’位のＴＢＤＭＳ基以外の保護基を全て除去した。固体の支持相を濾過してろ液を集め濃縮して乾燥させた。残渣を無水トリエチルアミントリヒドロフルオライド／トリエチルアミン／１−メチル−２−ピロリジノン溶液（１ｍＬ  トリエチルアミン  トリヒドロフルオライド、７５０μｌトリエチルアミンと１．５ｍＬ  １−メチル−２−ピロリドンから得た１．４Ｍ  ＨＦ濃縮物の０．７５ｍＬ溶液）中で再懸濁させて、６５°Ｃで１．５時間加熱して２’位のＴＢＤＭＳを除去した３７。反応を１．５Ｍ重炭酸アンモニウム（０．７５ｍＬ）で止め、混合物をセファデックスＧ−２５のカラム（ＮＡＰ  カラム、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．）にかけた。オリゴヌクレオチドを水で溶出し、オリゴヌクレオチドを含む分画を集めて、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で強陰イオン交換カラム（モノＱ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、１６／１０、２０ｍＬ、１０μｍ、イオン許容量０．２７〜０．３７ｍｍｏｌ／ｍＬ，Ａ＝１００ｍＭ酢酸アンモニウム、３０％アセトニトリル水溶液、Ｂ＝１．５Ｍ  ＮａＢｒのＡ溶液、４０分間に０〜６０％のＢの勾配、流速１．５ｍＬ／ｍｉｎ−１、λ＝２６０ｎｍ）を使って精製した。完全鎖のオリゴヌクレオチドを含む分画を集めて（ＣＧＥ分析で評価して＞９０％）蒸発させた。残渣を滅菌水（０．３ｍＬ）に溶解させ、無水エタノール（１ｍＬ）を加えて、ドライアイス（−７８°Ｃ）で一時間冷却して、沈殿を形成させ、これを遠心分離（ＮＹＣｅｎｔｒｉｆｕｇｅ５４１５Ｃ；Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、Ｗｅｓｔｂｕｒｙ、ニューヨーク州）３０００ｒｐｍ（７３５ｇ）することによってペレット化した。上清を傾けて捨て、そのペレットを１０ｍＭ酢酸アンモニウム（０．３ｍＬ）溶液に再懸濁した。エタノール（１ｍＬ）を加え、その混合物を−７８°Ｃへ１時間冷却して沈殿させ、沈殿物を遠心分離（ＮＹＣｅｎｔｒｉｆｕｇｅ５４１５Ｃ；Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、Ｗｅｓｔｂｕｒｙ、ニューヨーク州）３０００ｒｐｍ（７３５ｇ）１５分間す���ことでペレット化した。上清を傾けることによってこのペレットを回収した。ペレット化したオリゴヌクレオチドを、滅菌水（０．３ｍＬ）に再懸濁させ、エタノール（１ｍＬ）を加えて、混合物を−７８°Ｃで１時間冷却することによって沈殿させた。形成された沈殿物をペレット化して、上記の要領で集めた。オリゴヌクレオチドはＥＳ  ＭＳで性格付けし、純度は毛細管ゲル電気泳動とＨＰＬＣ（ウォータース、Ｃ−１８、３．９ｘ３００ｍｍ、Ａ＝１００ｍＭ  酢酸トリエチルアンモニウム、ｐＨ＝７、Ｂ＝アセトニトリル、４０分間に５から６０％のＢの勾配、流速１．５ｍＬｍｉｎ−１、λ＝２６０ｎｍ）で評価した。
【誤訳訂正９６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４５３】
（ｉ）ＴＢＤＰＳＣｌ、Ｐｙ、ｒｔ、９１％（ｉｉ）（ＰｈＯ）２ＣＯ、ＮａＨＣＯ３、ＤＭＡ、１００°Ｃ、８０％；（ｉｉｉ）Ｂ（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＭｅ）３、ＨＯＣＨ２ＣＨ２ＯＭｅ、還流、２１ｈ、６３％、（ｉｖ）１Ｍ  ＴＢＡＦのＴＨＦ溶液、ＴＨＦ、酢酸、（ｉＶ）ＤＭＴＣｌ、ＤＭＡＰ、Ｐｙ、ｒｔ、６０％、２−シアノエチル  ジイソプロピルクロロホスホルアミダイト、ジイソプロピルエチルアミン、メチレンクロライド。
【誤訳訂正９７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４５４】
５’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル−４−チオウリジン（１１２）：
４’−チオ−ウリジン（２．９５ｇ、１１．４３ｍｍｏｌｅ）をＤＭＡＰ  （０．０２ｇ、０．１５ｍｍｏｌｅ）に混ぜ、減圧下にＰ２Ｏ５上で乾燥させた。反応混合物を無水ピリジン（１５ｍＬ）に溶解させ、塩化ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（３．２７ｍＬ、１３ｍｍｏｌｅ）を加えた。反応混合物を室温で、アルゴン気流下に１２時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、残渣を酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解させた。有機相をＮａＨＣＯ３（５％、５０ｍＬ）水溶液、食塩水（５０ｍＬ）で洗った。有機層を分離し無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。得られた残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、メタノール量を増加させた（５−１０％）ジクロロメタンで溶出し、化合物１１２（５．２１ｇ、収率９１％）を泡として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：１１．３３（ｓ、１Ｈ）、７．８４（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．６６−７．３３（ｍ、１０Ｈ）、５．８６（ｄ、Ｊ＝６．４  Ｈｚ、１Ｈ）、５．５８（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．４７（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．３４（ｄ、Ｊ＝４．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．０９（ｍ、２Ｈ）、３．９７（ｍ、１Ｈ）、３．７７（ｍ、１Ｈ）、３．３５（ｍ、１Ｈ）、１．０１（ｓ、９Ｈ）；ＭＳ（ＡＰＩ−ＥＳ）ｍ／ｚ４９９．１［ＭＨ＋］。
【誤訳訂正９８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４５５】
２，２’−アンヒドロ−５’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル−４’−チオ−ウリジン（１１３）：
化合物１１２（１．１ｇ、２．２０ｍｍｏｌｅ），ジフェニルカーボネイト（０．５５ｇ、２．４２ｍｍｏｌ），無水ＮａＨＣＯ３（７３．７ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌｅ）の乾燥させた混合物にジメチルアセトアミド（５．５ｍＬ）を加えた。反応混合物を１００°Ｃで５時間加熱した。溶媒を減圧下に蒸留して除去し、オイルを得、そのオイルをフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、５から１０％のメタノールの勾配のジクロロメタン溶液で溶出し、化合物１１３（０．８７ｇ、８２％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．８１（ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．５７−７．３４（ｍ、１０Ｈ）、６．１９（ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．９８（ｄ、Ｊ＝４．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．３９（ｄ、１Ｈ）、５．５８（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．７６（ｂｒｓ、１Ｈ）、３．４０−３．７（ｍ、３Ｈ）、１．００（ｓ、９Ｈ）；ＭＳ（ＡＰＩ−ＥＳ）ｍ／ｚ４８１．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【誤訳訂正９９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４５６】
５’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−４’−チオ−ウリジン（１１４）：
化合物１１３（０．７ｇ、１．４５ｍｍｏｌ）をトリス（２−メトキシエチル）ホウ酸（０．６３ｇ、２．９３ｍｍｏｌ）、ＮａＨＣＯ３（０．０２ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）と２−メトキシエタノール（７ｍＬ）に混合した。混合物を１４０°Ｃで２１時間加熱した。溶媒を減圧下に除去し、残渣に水（５ｍＬ）を加えて、水槽の温度を５０−６０°Ｃに保って溶媒をロータリーエヴァポレーターで濃縮した。この操作を二回繰り返して、得られた残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、ＣＨ２Ｃｌ２の５％メタノール溶液で溶出し、化合物１１４（０．５１ｇ、６６％）を泡状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：１１．３８（ｓ、１Ｈ）、７．８９（ｄ、１Ｈ）、７．６７−７．４４（ｍ、１０Ｈ）、５．９２（ｄ、１Ｈ）、５．６９（ｄ、１Ｈ）、５．４６（ｄ、１Ｈ）、５．３０（ｄ、１Ｈ）、４．１７（ｍ、１Ｈ）、４．０１−３．９４（ｍ、２Ｈ）、３．８２（ｍ、１Ｈ）、３．５８（ｍ、１Ｈ）、３．５２−３．３８（ｍ、４Ｈ）、３．２０（ｓ、３Ｈ）、１．０１（ｓ、９Ｈ）；ＭＳ（ＡＰＩ−ＥＳ）ｍ／ｚ５７９．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【誤訳訂正１００】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４５８】
２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−４’−チオ−ウリジン（５２）：
化合物５１（０．２７ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）をＤＭＡＰ（０．０５ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）に混ぜて、減圧下に乾燥させた。その混合物を無水ピリジンに溶解させ、４，４’−ジメトキシトリチルクロライド（０．３６ｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を加えて、その結果の溶液を不活性ガス気流下に室温で２０時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、得られた残渣をジクロロメタン（５０ｍｌ）に溶解させ、ＮａＨＣＯ３（５ｗｔ％、４０ｍＬ）の水溶液と食塩水（４０ｍｌ）で洗った。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に蒸発させた。得られた残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、０−５％メタノールのＣＨ２Ｃｌ２溶液で溶出して化合物５２（０．３２ｇ、６１％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：１１．３９（ｓ、１Ｈ）、７．７６（ｄ、１Ｈ）、７．７４−７．１５（ｍ、９Ｈ）、６．９０（ｄ、４Ｈ）、５．８９（ｄ、１Ｈ）、５．５０（ｄｄ、１Ｈ）、５．２５（ｄ、１Ｈ）、４．０５（ｍ、１Ｈ）、３．８８（ｍ、１Ｈ）、３．７３（ｓ、６Ｈ）、３．５３（ｍ、１Ｈ）、３．４８−３．５３（ｍ、５Ｈ）、３．１８（ｓ、３Ｈ）；ＭＳ（ＡＰＩ−ＥＳ）ｍ／ｚ６４３．２［Ｍ＝Ｎａ］＋。
【実施例５２】
【誤訳訂正１０１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４５９】
ヌクレオシドホスホルアミダイトの合成
アミダイトおよびそれらの中間体を含めて、以下の化合物は米国特許番号第６，４２６，２２０号および国際出願番号第ＰＣＴ／ＷＯ／０２／３６７４３号に記載された方法に従って調製された；５−メチルｄＣアミダイトのための５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−チミジン中間体、５−メチルｄＣアミダイトのための５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−デオキシ５−メチルシチジン中間体、５−メチルｄＣアミダイトのための５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−デオキシ−Ｎ４−ベンゾイル−５−メチルシチジンの最後から二番目の中間体、［５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−デオキシ−Ｎ４−ベンゾイル−５−メチルシチジン−３’−Ｏ−イル］−２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト（５−メチルｄＣアミダイト）、２’−フルオロデオキシアデノシン、２’−フルオロデオキシグアノシン、２’−フルオロウリジン、２’−フルオロデオキシシチジン、２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）修飾型アミダイト、２’Ｏ−（２−メトキシエチル）−５−メチルウリジン中間体、５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−５−メチルウリジン、最後から二番目の中間体、［５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−５−メチルウリジン−３’−Ｏ−イル］−２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト（ＭＯＥ  Ｔアミダイト）、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−５−メチルシチジン中間体、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−Ｎ４−ベンゾイル−５−メチルシチジン、最後から二番目の中間体、［５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−Ｎ４−ベンゾイル−５−メチルシチジン−３’−Ｏ−イル］−２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト（ＭＯＥ  ５−Ｍｅ−Ｃアミダイト）、［５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−  Ｏ−（２−メトキシエチル）−Ｎ６−ベンゾイルアデノシン−３’−Ｏ−イル］−２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト（ＭＯＥ  Ａ  アミダイト）、［５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）−Ｎ４−イソブチリルグアノシン−３’−Ｏ−イル］−２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト（ＭＯＥ  Ｇ  アミダイト）、２’−Ｏ−（アミノオキシエチル）ヌクレオシドアミダイトおよび２’−Ｏ−（ジメチルアミノオキシエチル）ヌクレオシドアミダイト、２’−（ジメチルアミノオキシエトキシ）ヌクレオシドアミダイト、５’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル−Ｏ２−２’−アンヒドロ−５−メチルウリジン、５’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル−２’−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−５−メチルウリジン、２’−Ｏ−［（２−フタルイミドオキシ）エチル］−５’−ｔ−ブチルジフェニルシリル−５−メチルウリジン、５’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル−２’−Ｏ−［（２−ホルマドキシイミノオキシ）エチル］−５−���チルウリジン、５’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル−２’−Ｏ−［Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノオキシエチル］−５−メチルウリジン、２’−Ｏ−（ジメチルアミノオキシエチル）−５−メチルウリジン、５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−（ジメチルアミノオキシエチル）−５−メチルウリジン、５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノオキシエチル）−５−メチルウリジン−３’−［（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト］、２’−（アミノオキシエトキシ）ヌクレオシドアミダイト、Ｎ２−イソブチリル−６−Ｏ−ジフェニルカルバモイル−２’−Ｏ−（２−エチルアセチル）−５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）グアノシン−３’−［（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト］、２’−ジメチルアミノ−エトキシエトキシ（２’−ＤＭＡＥＯＥ）ヌクレオシドアミダイト、２’−Ｏ−［２（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）エチル］−５−メチルウリジン、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−［２（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−エチル］−５−メチルウリジンおよび５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−［２（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキシ）−エチル］−５−メチルウリジン−３’−Ｏ−（シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホルアミダイト。
【実施例５３】
【誤訳訂正１０２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４６１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４６１】
オリゴヌクレオチド：非置換型、および置換型ホスホジエステル（Ｐ＝Ｏ）オリゴヌクレオチドは、ヨウ素による酸化を伴う標準的なホスホルアミダイト化学を用いて、自動ＤＮＡ合成機（アプライド  バイオシステムズ  モデル３９４）で合成される。
【誤訳訂正１０３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４６２】
ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）は以下の例外事項以外は、ホスホジエステル  オリゴヌクレオチドと同様に合成される：チエート化は、亜リン酸結合の酸化のための、１０％ｗ／ｖの３，Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン１，１−ジオキシドのアセトニトリル溶液を用いることでおこなわれる。チエート化の反応ステップの時間を、１８０秒に増やし、通常のキャッピングステップを先行させた。ＣＰＧカラムからの切断および濃縮水酸化アンモニウム中、５５°Ｃ（１２−１６時間）での脱ブロックの後でオリゴヌクレオチドは１Ｍ  ＮＨ４ＯＡｃ溶液から＞３容量のエタノールで沈殿させて回収した。オリゴヌクレオチドのホスフィネートは米国特許第５，５０８，２７０号に記載された要領で調製され、それはこの参照によって本明細書に組み込まれる。
【誤訳訂正１０４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４６３】
アルキルホスホネートオリゴヌクレオチドは、米国特許第４，４６９，８６３号の記載に従って、調製され、それはこの参照によって本明細書に組み込まれる。
３’−デオキシ−３’−メチレンホスホネートオリゴヌクレオチドは、米国特許第５，６１０，２８９または５，６２５，０５０号の記載に従って調製し、それはこの参照によって本明細書にくみこまれる。
ホスホルアミダイトオリゴヌクレオチドは米国特許第５，２５６，７７５号または米国特許第５，３６６，８７８号の記載に従って調製され、それはこの参照によって本明細書に組み込まれる。
【誤訳訂正１０５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４６４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４６４】
アルキルホスホノチオエートオリゴヌクレオチドは公開された、国際出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ９４／００９０２号および第ＰＣＴ／ＵＳ９３／０６９７６（それぞれＷＯ  ９４／１７０９３およびＷＯ  ９４／０２４９９として公開）の記載に従って調製され、それはこの参照によって本明細書に組み込まれる。
【誤訳訂正１０６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４６５】
３’−デオキシ−３’−アミノホスホルアミデートオリゴヌクレオチドは米国特許公開第５，４７６，９２５号の記載に従って、調製し、それはこの参照によって本明細書に組み込まれる。
【誤訳訂正１０７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４６６】
ホスホトリエステルオリゴヌクレオチドは、米国特許第５，０２３、２４３号に記載の方法で調製され、それはこの参照によって本明細書に組み込まれる。
【誤訳訂正１０８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４６８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４６８】
オリゴヌクレオシド：ＭＭＩ結合オリゴヌクレオシドとも同定されるメチレンメチルイミノ結合オリゴヌクレオシド、ＭＤＨ結合オリゴヌクレオシドとも同定されるメチレンジメチルヒドラゾ結合オリゴヌクレオシド、そしてアミド−３−結合オリゴヌクレオシドとも同定されるメチレンカルボニルアミノオリゴヌクレオシド、そしてアミド−４−結合オリゴヌクレオシドとも同定されるメチレンアミノカルボニル結合オリゴヌクレオシドも、混合バックボーンの、例えば、ＭＭＩそしてＰ＝ＯまたはＰ＝Ｓの結合を交互に持ったオリゴマー化合物と同様に米国特許第５，３７８，８２５、５，３８６，０２３、５，４８９，６７７、５，６０２，２４０、および５，６１０，２８９号の記載に従って調製され、それは全てこの参照によって本明細書に組み込まれる。
ホルムアセタールとチオホルムアセタール結合のオリゴヌクレオシドは米国特許第５，２６４，５６２号と第５，２６４，５６４号の記載に従って調製され、それはこの参照によって本明細書に組み込まれる。
エチレンオキシド結合オリゴヌクレシドは米国特許第５，２２３，６１８号の記載に従って調製され、それはこの参照によって本明細書に組み込まれる。
【実施例５４】
【誤訳訂正１０９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４６９】
ＲＮＡ合成
一般的に、ＲＮＡ合成の化学は、策戦的な中間反応においての多様な保護基の選択的な組み込みに基づくものである。その分野の当業者は、有機合成における保護基の使用について理解するけれども、有用な部類の保護基にはシリルエーテルが含まれる。特に、かさばったシリルエーテルは、２’−ヒドロキシルの酸に不安定なオルトエステル保護基との組み合わせで、５’−ヒドロキシルを保護するために使われる。そこで、この組み合わせの保護基は標準的な固相合成技術に使われる。他の全ての合成ステップの後で、酸に不安定なオルトエステルを最後に除去することは重要である。さらに、合成中の初期にシリル保護基を使うことは、望ましくない２’ヒドロキシルの脱保護なしに、希望に応じて、容易な除去を確実にする。
【誤訳訂正１１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４７１】
ＲＮＡオリゴヌクレオチドは段階的に合成される。各ヌクレオチドは、固相支持体結合オリゴヌクレオチドに連続的に（３’から５’への方向で）加えられる。分子鎖の最初のヌクレオシドは固相支持体に、３’−エンドで共有結合されている。ヌクレオチド前駆物質であるリボヌクレオシドホスホルアミダイトと活性化剤が加えられ、最初のヌクレオシドの５’−エンドに二番めの塩基がカップリングされる。支持体を洗って、未反応の５’−ヒドロキシル基は全て無水酢酸で覆われ、５’−アセチル部分となる。その結合は、さらに安定となるように酸化され、最終的には望ましいＰ（Ｖ）結合となる。ヌクレオチド付加サイクルの終わりに、５’−シリル基はフッ化物で切断される。サイクルはヌクレオチド毎に順次繰り返される。
【誤訳訂正１１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４７２】
合成に続いて、リン酸エステルのメチル保護基は、１Ｍ  ２−カルバモイル−２−シアノエチレン−１，１ジチオレート二ナトリウム三水和物（Ｓ２Ｎａ２）のＤＭＦ溶液を用いて、３０分間で切断される。脱保護溶液は、水を使って、固相支持体結合のオリゴヌクレオチドから洗い流される。次に支持体は４０％メチルアミンの水溶液で５５°Ｃで１０分間処理される。これによって、ＲＮＡオリゴヌクレオチドを溶液中に遊離し、環外アミンを脱保護し、２’−基を修飾する。この段階で、オリゴヌクレオチドは陰イオン交換ＨＰＬＣで分析できる。
【誤訳訂正１１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４７３】
２’−オルトエステル基は、最後に除去される保護基である。ダーマコンリサーチ  インク（ラファイエット、コロラド州）によって開発されたエチレングリコールモノアセテートオルトエステル保護基は、次のような重要な特性を持った有用なオルトエステル保護基の一例である。それは、ヌクレオシドホスホルアミダイト合成やオリゴヌクレオチド合成の条件下で安定である。しかしながら、オリゴヌクレオチド合成の後で、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドを固相支持体から切断するばかりでなくまたオルトエステルからアセチル基を除去するメチルアミンで処理される。その結果として生じるオルトエステル上の２−エチル−ヒドロキシ置換基は、アセチル化された前駆体よりも電子引力が低い。その結果、修飾されたオルトエステルは、酸触媒の加水分解により不安定となる。特に、切断の速度は、アセチル基が除去された後は、ほぼ１０倍も速くなる。従って、オルトエステルは、オリゴヌクレオチド合成に適合し、なお続いて修飾された時に、最終的なＲＮＡオリゴヌクレオチド生成物に適合する比較的穏やかな水溶性の条件下で脱保護を可能とするのに十分な安定性を持っている。
【誤訳訂正１１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４７４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４７４】
さらに、ＲＮＡ合成の方法は当該技術分野では、よく知られている（Ｓｃａｒｉｎｇｅ，Ｓ．Ａ．Ｐｈ．Ｄ．Ｔｈｅｓｉｓ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃｏｌｏｒａｄｏ，１９９６；Ｓｃａｒｉｎｇｅ，Ｓ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９８，１２０，１１８２０〜１１８２１；Ｍａｔｔｅｒｕｃｃｉ，Ｍ．Ｄ．ａｎｄ  Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ，Ｍ．Ｈ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９８１，１０３，３１８５〜３１９１；Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．ａｎｄ  Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ，Ｍ．Ｈ．Ｔｅｔｒａｈｅｔｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９８１，２２，１８５９〜１８６２；Ｄａｈｌ，Ｂ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｃｈｅｍ．Ｓｃａｎｄ．，１９９０，４４，６３９〜６４１；Ｒｅｄｄｙ，Ｍ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９９４，２５，４３１１〜４３１４；Ｗｉｎｃｏｔｔ，Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９９５，２３，２６７７〜２６８４；Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｂ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９６７，２３，２３０１〜２３１３；Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｂ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９６７，２３，２３１５〜２３３１）。
【誤訳訂正１１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４７５】
本発明のＲＮＡアンチセンスオリゴマー化合物（ＲＮＡオリゴヌクレオチド）はここに掲載された方法で合成されても良いし、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｉｎｃ．（ラファイエット、コロラド州）から購入されてもよい。一度、合成されれば、相補的アンチセンスオリゴマー化合物は当該技術分野で知られる方法でアニールされ、二本鎖の（二重鎖の）アンチセンスオリゴマー化合物を形成することができる。例えば、ＲＮＡオリゴヌクレオチドの相補鎖の各々３０μｌ（５０μＭ  ＲＮＡオリゴヌクレオチド溶液）と１５μｌの５Ｘ  アニーリング緩衝液（１００ｍＭ酢酸カリウム、３０ｍＭＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ  ｐＨ７．４、２ｍＭ酢酸マグネシウム）を合わせて、９０°Ｃで１分間、次に３７°Ｃで１時間加熱することで二重鎖が形成されることができる。その結果としての二重鎖のアンチセンスオリゴマー化合物は標的核酸の役割を調べるためのキット、アッセイ、スクリーニングやその他の方法に用いられることが出来る。
【実施例５５】
【誤訳訂正１１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４７６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４７６】
キメラオリゴヌクレオチドの合成
本発明のキメラ型のオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシドやオリゴヌクレオチド／オリゴヌクレオシドの混合型には、異なった数種類のタイプがある。これらには、結合ヌクレオシドの「ギャップ」断片が結合ヌクレオシドの５’と３’の「ウィング」断片の間に位置されている最初のタイプと、“ギャップ”断片がオリゴマー化合物の３’または５’エンドのいずれかに位置する“開放エンド”の二番目のタイプが含まれる。最初のタイプのオリゴヌクレオチドは、また当該技術分野では、「ギャップマー‘あるいはギャップのあるオリゴヌクレオチドとしても知られる。二番目のタイプのオリゴヌクレオチドは、技術分野ではまた、「ヘミマー」あるいは「ウィングマー」として知られる。
【誤訳訂正１１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４７７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４７７】
［２’−Ｏ−Ｍｅ］−［２’−デオキシ］−［２’-Ｏ−Ｍｅ］キメラホスホロチオエートオリゴヌクレオチド：
２’−Ｏ−アルキルホスホチオエートと２’−デオキシホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの断片をもったキメラオリゴヌクレオチドは、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓの自動ＤＮＡ合成機  モデル３９４で合成される。オリゴヌクレオチドは、自動合成機で、ＤＮＡ部分に２’−デオキシ−５’−ジメトキシトリチル−３’−Ｏ−ホスホルアミダイトそして５’と３’のウィングに５’−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−メチル−３’−Ｏ−ホスホルアミダイトを使って合成される。標準的な合成サイクルは、カップリングステップに、５’−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−メチル−３’−Ｏ−ホスホルアミダイトの反応時間を長くすることを組み入れて修飾される。完全に保護されたオリゴヌクレオチドは支持体から切断され、濃アンモニア水（ＮＨ４ＯＨ）で５５°Ｃで１２−１６時間脱保護される。脱保護されたオリゴは次に、適切な方法で（沈殿、カラムクロマトグラフィー、真空下での減量とキャピラリー電気泳動と質量分析による収量と純度の光学的分析）によって回収される。
【誤訳訂正１１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４７８】
［２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）］−−［２’−デオキシ］−−［２’−Ｏ−（メトキシエチル）］キメラホスホロチオエートオリゴヌクレオチド：
［２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）］−−［２’−デオキシ］−−［２’−Ｏ−（メトキシエチル）］キメラホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、上記の２’−Ｏ−メチルキメラオリゴヌクレオチドの方法によって、２’−Ｏ−メチル−アミダイトを２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）アミダイトで置換して調整された。
【誤訳訂正１１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４７９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４７９】
［２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）ホスホジエステル］−−［２’−デオキシ  ホスホロチオエート］−−［２’−Ｏ−（メトキシエチル）ホスホジエステル］キメラオリゴヌクレオチド：
［２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）ホスホジエステル］−−［２’−デオキシ  ホスホロチオエート］−−［２’−Ｏ−（メトキシエチル）ホスホジエステル］キメラオリゴヌクレオチドは、上記の２’−Ｏ−メチルキメラオリゴヌクレオチドの方法によって、２’−Ｏ−メチル−アミダイトを２’−Ｏ−（メトキシエチル）アミダイトで置換し、キメラ型の構造のウィング部分にヌクレオチド間のホスホジエステル結合を形成するためにヨウ素で酸化し、３，Ｈ−１，２ベンゾジチオール−３−オン１，１ジオキシド（ボーケイジ試薬）を用いて硫化して、中央のギャップにヌクレオチド間のホスホロチオエートを形成することによって調製された。
【誤訳訂正１１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４８０】
その他のオリゴヌクレオチド、キメラ型オリゴヌクレオシドやオリゴヌクレオチド／オリゴヌクレオシドの混合型は米国特許番号第５，６２３，０６５号に記載の方法によって調製され、それはこの参照によって本明細書に組み込まれる。
【実施例５６】
【誤訳訂正１２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４８１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４８１】
選択的標的に対する二本鎖のアンチセンスオリゴマー化合物のデザインとスクリーニング
本発明に従って、本発明のアンチセンスオリゴマー化合物を含む一連の核酸二本鎖およびそれらの相補体は、標的をターゲットとするデザインが可能である。二本鎖のエンドは１若しくはそれ以上の天然のあるいは修飾された核酸塩基によって、オーバーハングを形成するための付加を行って修飾されてもよい。続いて、ｄｓＲＮＡのセンス鎖が、アンチセンス鎖の相補体としてデザインされ、合成され、それもまたいずれか一方の末端に修飾や付加を含んでいてもよい。例えば、実施形態のある例では、ｄｓＲＮＡ二本鎖の両鎖は中央の核酸塩基で相補的であり、それぞれが一方のあるいは両方の末端にオーバーハングを有する。
【誤訳訂正１２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４８２】
例えば、ＣＧＡＧＡＧＧＣＧＧＡＣＧＧＧＡＣＣＧの配列をもち、デオキシチミジン（ｄＴ）の二核酸塩基オーバーハングをもったアンチセンス鎖を含む二本鎖は以下のような構造をとる。
【誤訳訂正１２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４８４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４８４】
二本鎖のＲＮＡ鎖はここに開示された方法によって合成されたり、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．（ラファイエット、コロラド州）から購入されたりできる。一度、合成されれば、相補鎖がアニールされる。一本鎖は、分注され、５０μＭの濃度に希釈される。希釈した後に、それぞれ３０μＬの核酸鎖を１５μＬの５ｘアニール緩衝液と混ぜる。その緩衝液の最終濃度は、１００ｍＭ酢酸カリウム、３０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ  ｐＨ７．４、そして２ｍＭ酢酸マグネシウムである。最終容量は７５μＬである。この溶液を１分間９０°Ｃでインキュベートし１５秒間遠心する。試験管を３７°Ｃで一時間放置した後に、ｄｓＲＮＡ二本鎖を実験に用いることが出来る。ｄｓＲＮＡ二本鎖の最終濃度は２０μＭである。この溶液は、凍結保存し（−２０°Ｃ）、５回まで凍結融解が可能である。
【誤訳訂正１２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４８７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４８７】
オリゴヌクレオチド単離
制御細孔ガラス支持体からの切断と、濃水酸化アンモニウム中で５５°Ｃで１２−１６時間の脱保護を行った後で、オリゴヌクレオチドあるいはオリゴヌクレオシドは、１Ｍ  ＮＨ４ＯＡｃから＞３容量のエタノールを用いて沈殿させて回収する。合成ヌクレオチドは、エレクトロスプレイ質量分析（分子量決定）とキャピラリー電気泳動によって分析され、少なくとも全長の７０％の長さをもっているかを評価された。合成で得られたホスホロチオエートとホスホジエステル結合の量比は正しい分子量の−１６ａｍｕ生成物の比によって決定された（＋／−３２、＋／−４８）。ある例においては、オリゴヌクレオチドは、Ｃｈｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９１，２６６，１８１６２〜１８１７１の記載によって、ＨＰＬＣで精製された。ＨＰＬＣ精製物質で得られた結果は、ＨＰＬＣによらない精製物のそれと同様であった。
【実施例５８】
【誤訳訂正１２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４８８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４８８】
オリゴヌクレオチド合成―９６ウェルプレートフォーマット
オリゴヌクレオチドが、９６ウェルフォーマットで９６配列を同時に組み立てることの出来る自動合成機で、固相Ｐ（ＩＩＩ）ホスホルアミダイトの化学によって合成された。ヌクレオチド間のホスホジエステル結合は、ヨウ素水溶液で酸化することで提供された。ヌクレオチド間のホスホロチオエート結合は、３，Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン１，１ジオキシド（ボーケイジ試薬）の無水アセトニトリル溶液を用いて硫化することによって生成した。標準的な塩基保護ベータ−シアノエチル−ジイソ−プロピルホスホアミダイトは、販売元（例えば、ＰＥ−アプライドシステムズ、フォスターシティ、カリフォルニア州、あるいはファーマシア、ピスカタウェイ、ニュージャージィ州）から購入した。標準的でないヌクレオシドは、標準的なあるいは特許上の方法で合成された。それらは、塩基保護ベータ−シアノエチル−ジイソ−プロピル  ホスホルアミダイトとして使用された。
オリゴヌクレオチドは支持体から切断され、温度を高めて（５５−６０°Ｃ）１２−１６時間、濃ＮＨ４ＯＨで脱保護され、放出した生成物は真空下で乾燥された。乾燥生成物は、続いて、滅菌水に再懸濁され、そこから全ての分析用あるいは試験用のサンプルがロボット製のピぺッターで希釈されるべく、マスタープレートとした。
【実施例５９】
【誤訳訂正１２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４８９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４８９】
オリゴヌクレオチド分析−９６ウェルプレートフォーマット
各ウェルのオリゴヌクレオチドの濃度はサンプルの希釈度とＵＶ吸収分光法で評価された。各生成物の完全長鎖の度合いは、キャピラリー電気泳動（ＣＥ）で、９６ウェルフォーマット（ベックマンＰ／ＡＣＥ（商標）ＭＤＱ）または個別に調製されたサンプルについて市販のＣＥ装置で測定した（例えば、ベックマン  Ｐ／ＡＣＥ（商標）５０００、ＡＢＩ２７０）。塩基と骨格組成はオリゴマー化合物のエレクトロスプレイ質量分光法を使って質量分析で確認した。全てのアッセイテストプレートは、シングルあるいはマルチチャンネルロボット製ピペッターでマスタープレートから希釈された。プレートは、プレート上のオリゴマー化合物の少なくとも８５％が、少なくとも完全鎖の８５％のものである場合に許容できると判断された。
【実施例６０】
【誤訳訂正１２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４９０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４９０】
細胞培養とオリゴヌクレオチド処理
標的核酸の発現に対するアンチセンス化合物の影響は、標的核酸が測定可能なレベルで発現されている提供された多様な細胞種でテストすることができる。これは例えば、ＰＣＲ  やノーザンブロット分析で日常的に決定できる。その他の細胞種も選んだ細胞種に標的核酸が発現されていることが示されれば、日常的に使用できるが、以下の細胞種が説明のために提供される。これは、例えば、ノーザンブロット、リボヌクレアーゼプロテクションアッセイ、あるいはＲＴ−ＰＣＲのような当該技術分野では決まった方法で、容易に決定できる。
【誤訳訂正１２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４９１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４９１】
Ｔ−２４細胞：ヒトの移行性膀胱癌細胞株Ｔ−２４はアメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）（マナッサス、バージニア州）から入手された。Ｔ−２４は、１０％牛胎児血清（インビトロジェン  コーポレーション、カールスバッド、カリフォルニア州）、ペニシリン  １００  ｕｎｉｔｓ／ｍＬ，ストレプトマイシン  １００μｇ／ｍＬ（インビトロジェン  コーポレーション、カールスバッド、カリフォルニア州）を含む完全マッコイ５Ａ基礎培養液（インビトロジェン  コーポレーション、カールスバッド、カリフォルニア州）で日常的に培養された。細胞は９０％の集密度に達した時点でトリプシン処理と希釈によって決まって継代された。ＲＴ−ＰＣＲ分析のためには、細胞は９６ウェルプレートに（ファルコン−プリマリア  ＃３５３８７２）に７０００ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度で播種した。
【誤訳訂正１２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４９２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４９２】
ノーザンブロット又はその他の分析のためには、細胞は１００ｍｍあるいはその他の標準的な培養プレートに播種し、適当量の培養液とオリゴヌクレオチドを用いて、同様に処理してもよい。
【誤訳訂正１２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４９４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４９４】
ＮＨＤＦ細胞：ヒトの新生児皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）はクロネティックス  コーポレーション（ウォーカースビル、メリーランド州）から入手された。ＮＨＤＦは、供給元によって推薦された補給物質を加えた、線維芽細胞増殖培養液（クロネティックス  コーポレーションウォーカースビル、メリーランド州）で日常的に維持された。供給元から推薦されたように、細胞は１０継代まで維持した。
【誤訳訂正１３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４９５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４９５】
ＨＥＫ細胞：ヒトの胎児ケラチノサイト（ＨＥＫ）はクロネティックス  コーポレーション（ウォーカースビル、メリーランド州）から入手された。ＨＥＫは供給元によって推薦されたように処方されたケラチノサイト増殖培養液（クロネティックス  コーポレーションウォーカースビル、メリーランド州）で日常的に維持された。供給元から推薦されたように、細胞は１０継代まで維持した。
【誤訳訂正１３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４９６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４９６】
アンチセンスオリゴマー化合物による処理：細胞が６５−７５％の集密度に達した時点で、細胞をオリゴヌクレオチドで処理した。９６ウェルプレートに増殖した細胞について、ウェルを１００μＬのＯＰＴＩ−ＭＥＭＴＭ−１低血清培養液（インビトロジェン  コーポレーション、カールスバッド、カリフォルニア州）で一回洗い、３．７５μｇ／ｍＬのリポフェクチン（インビトロジェン  コーポレーション、カールスバッド、カリフォルニア州）と希望の濃度のオリゴヌクレオチドを含む１３０μＬのＯＰＴＩ−ＭＥＭＴＭ−１で処理した。３７°Ｃで処理４−７時間後に、培養液を新鮮な培養液に代えた。細胞をオリゴヌクレオチドで処理後１６−２４時間で採取した。
【誤訳訂正１３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４９７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４９７】
用いるオリゴヌクレオチドの濃度は細胞株によって異なる。特定の細胞株についてのオリゴヌクレオチド最適濃度を決めるために、細胞は、一定の範囲の濃度の陽性コントロールであるオリゴヌクレオチドで処理される。ヒトの細胞については、陽性コントロールのオリゴヌクレオチドは、ヒトのＨ−ｒａｓを標的とするＩＳＩＳ１３９２０、
【化８５】
2007514643.tif 000004
あるいはヒトのジュン−Ｎ−エンド  キナーゼ−２（ＪＮＫ２）を標的とするＩＳＩＳ  １８０７８、
【化８６】
2007514643.tif 000005
のどちらかが選ばれる。両方のコントロールはホスホロチオエートの骨格をもつ、２’−Ｏ−メトキシエチル  ギャップマー（２’−Ｏ−メトキシエチルは太字で示されている）である。マウスまたはラットの細胞についての陽性コントロールはＩＳＩＳ  １５７７０、
【化８７】
2007514643.tif 000006
で、マウスとラットの両方のｃ−ｒａｆを標的とする、ホスホロチオエートの骨格を持つ２’−Ｏ−メトキシエチルギャップマー（２’−Ｏ−メトキシエチルは太字で示されている）である。ｃ−Ｈ−ｒａｓ（ＩＳＩＳ  １３９２０について）、ＪＮＫ２（ＩＳＩＳ  １８０７８について）またはｃ−ｒａｆ（ＩＳＩＳ  １５７７０について）ｍＲＮＡの発現を８０％阻害した陽性コントロールのオリゴヌクレオチドの濃度を、その細胞株の次の実験の新しいオリゴヌクレオチドのスクリーニングの濃度とする。もしも８０％の阻害が得られなければ、ｃ−Ｈ−ｒａｓ、ＪＮＫ２、またはｃ−ｒａｆ  ｍＲＮＡを６０％阻害した陽性コントロールオリゴヌクレオチドの最低濃度をその細胞株の次の実験のスクリーニング濃度とする。もしも、６０％の阻害が得られなければ、その特定の細胞株は、オリゴヌクレオチドのトランスフェクションの実験には不適であると考えられる。ここで用いられるアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は５０ｎＭから３００ｎＭである。
【実施例６１】
【誤訳訂正１３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４９８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４９８】
標的核酸発現のオリゴヌクレオチドによる阻害の分析
標的核酸発現のアンチセンスによる調節は、当該技術分野で知られる多様な方法でアッセイ可能である。例えば、標的ｍＲＮＡのレベルは、例えば、ノーザンブロット分析、競合的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、あるいはリアルタイムＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）で測定できる。リアルタイム定量的ＰＣＲが現在では望ましい。ＲＮＡ分析は全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡを用いてできる。本発明のＲＮＡ分析の一方法は、ここに含めた他の実施例に記載されたように全細胞ＲＮＡを用いる方法である。ＲＮＡの単離方法は当該技術分野ではよく知られている。ノーザンブロット分析もまた当該技術分野では決まって使われる方法である。リアルタイム定量的（ＰＣＲ）方法は、ＰＥ−アプライドバイオシステムズ、フォスターシティ、カリフォルニア州、から入手できる市販のＡＢＩプリズム（ＡＢＩＰＲＩＳＭ（商標））７６００、７７００または７９００配列検出システムを用いて、製造業者の取り扱い説明書に従って、簡便に達成できる。
【誤訳訂正１３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４９９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４９９】
標的核酸のタンパク質レベルは、免疫沈降法、ウェスタンブロット分析（イムノブロッティング）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）あるいは蛍光細胞分析分離法（ＦＡＣＳ）のような技術分野ではよく知られる多様な方法で定量できる。標的タンパク質に対する抗体は、同定され、ＭＳＲＳの抗体カタログ（エーリー  コーポレーション、バーミングハム、ミシガン州）のような多様な入手源から入手できるし、あるいは、技術分野でよく知られたモノクローナルまたはポリクローナル抗体を作成する通常の方法で調製できる。
【実施例６２】
【誤訳訂正１３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５０８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５０８】
ＲＮＡの単離
ポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡの単離
ポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡはＭｉｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．，１９９６，４２，１７５８−１７６４）の方法に従って単離された。ポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡ単離の他の方法は、当該技術分野では日常的に使われる。簡単に言えば、９６ウェルプレートに増殖した細胞は、細胞から増殖用培養液を除去して、各ウェルを２００μｌの冷たいＰＢＳで洗った。６０μＬの溶解緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、ｐＨ７．６、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５Ｍ  ＮａＣｌ，０．５％ＮＰ−４０、２０ｍＭ  バナジル−リボヌクレオシド複合体）を各ウェルに加え、プレートを静かにゆすり、室温で５分間インキュベートした。５５μＬの溶解液をオリゴｄ（Ｔ）でコートした９６ウェルプレートに移した（ＡＧＣＴ  インク、アービン、カリフォルニア州）。プレートを室温で６０分間インキュベートし、２００μＬの洗浄緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．６）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．３Ｍ  ＮａＣｌ）で３回洗った。最後の洗浄の後で、プレートから紙タオルで余分な洗浄緩衝液を除き、５分間空気乾燥させた。７０°Ｃに予め加熱してあった６０μＬの溶出緩衝液を（５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．６）を各ウェルに加えて、プレートを９０°Ｃのホットプレート上で５分間インキュベートし、溶出液を次に新しい９６ウェルプレートに移した。