【手続補正書】
【提出日】平成25年5月24日(2013.5.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＩＶ共受容体の発現を低減できる阻害核酸をコードする第１の核酸配列、ならびに標的細胞へのＨＩＶ融合もしくはＨＩＶ複製を阻害するタンパク質をコードする第２の核酸配列を含む、発現ベクター。
【請求項２】
ウイルスベクターである、請求項１の発現ベクター。
【請求項３】
ウイルスベクターがレンチウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターである、請求項２の発現ベクター。
【請求項４】
レンチウイルスベクターが自己不活性化する、請求項３の発現ベクター。
【請求項５】
ＨＩＶウイルス結合、標的細胞膜へのＨＩＶウイルス融合またはＨＩＶウイルス複製阻害物質をコードする第３の核酸配列をさらに含む、請求項１の発現ベクター。
【請求項６】
前記阻害核酸が二重鎖領域を有するｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡであり、前記二重鎖領域が前記ＨＩＶ共受容体の配列と実質的に同一および相補性の配列を含む、請求項１〜５のいずれか一項の発現ベクター。
【請求項７】
前記ＨＩＶ共受容体がＣＣＲ５またはＣＸＣＲ４である、請求項１〜６のいずれか一項の発現ベクター。
【請求項８】
ｓｈＲＮＡが配列番号１の配列を有する、請求項６の発現ベクター。
【請求項９】
標的細胞へのＨＩＶ融合を阻害するタンパク質がＣ４６タンパク質、Ｔ２０タンパク質、エンフビルチド、ＣＰ３２Ｍ、およびシフビルチドである、請求項１〜８のいずれか一項の発現ベクター。
【請求項１０】
ＨＩＶ複製を阻害するタンパク質がヒトＴＲＩＭ５α、アカゲザルＴＲＩＭ５α、キメラＴＲＩＭ５α、ヒトＴＲＩＭ５−シクロフィリン融合タンパク質、シクロフィリン、Ｅ３ユビキチン、ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ、および骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ−２）からなる群から選択される、請求項１〜９のいずれか一項の発現ベクター。
【請求項１１】
前記第１の核酸配列と第２の核酸配列がプロモーターと機能的に連結されている、請求項１〜１０のいずれか一項の発現ベクター。
【請求項１２】
前記プロモーターがＲＮＡポリメラーゼＩＩまたはＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターである、請求項１１の発現ベクター。
【請求項１３】
前記第１の核酸配列が第１のプロモーターと機能的に連結されており、前記第２の核酸配列が第２のプロモーターと機能的に連結されている、請求項１１の発現ベクター。
【請求項１４】
前記第１のプロモーターがＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターであり、前記第２のプロモーターがＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターである、請求項１３の発現ベクター。
【請求項１５】
前記第３の核酸配列が第３のプロモーターと機能的に連結されている、請求項５の発現ベクター。
【請求項１６】
前記ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターがＨ１  ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターであり、かつ／または前記ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターがユビキチンＣ  ｐｏｌ  ＩＩプロモーターである、請求項１２または１４の発現ベクター。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか一項の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１８】
造血前駆／幹細胞、単球、マクロファージ、末梢血単核球、ＣＤ４＋Ｔリンパ球、ＣＤ８＋Ｔリンパ球、または樹状細胞である、請求項１７の宿主細胞。
【請求項１９】
配列番号１の配列を有するｓｈＲＮＡをコードする第１の核酸配列およびＣ４６タンパク質をコードする第２の核酸配列を含み、前記第１の核酸配列がＨ１  ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターと機能的に連結されており、前記第２の核酸配列がユビキチンＣ  ｐｏｌ  ＩＩプロモーターと機能的に連結されている、発現ベクター。
【請求項２０】
請求項１〜１６のいずれか一項または請求項１９の発現ベクターの有効量および薬学的に許容可能な担体を含む、患者におけるＨＩＶ感染の治療または予防のための薬学的組成物。
【請求項２１】
請求項１〜１６のいずれか一項または請求項１９の発現ベクターにより形質導入された造血細胞を含む、患者におけるＨＩＶ感染の治療または予防のための薬学的組成物。
【請求項２２】
前記造血細胞が造血前駆／幹細胞（ＨＰＳＣ）、ＣＤ４＋Ｔリンパ球、ＣＤ８＋Ｔリンパ球、単球／マクロファージ、またはそれらの組み合わせである、請求項２１の薬学的組成物。
【請求項２３】
前記造血細胞が自家性または同種異系間である、請求項２１の薬学的組成物。
【請求項２４】
患者が：ＨＡＡＲＴ未施行であるか、ＨＡＡＲＴレジメンを受けているか、またはＨＡＡＲＴレジメンが奏効していないか奏効しなかった、請求項２０または２１の薬学的組成物。
【請求項２５】
患者にＨＩＶ感染リスクがある、請求項２０または２１の薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
[本発明1001]
ＨＩＶ共受容体の阻害物質をコードする第1の核酸配列、ならびに標的細胞へのＨＩＶ融合もしくはＨＩＶ複製を阻害するタンパク質をコードする第2の核酸配列を含む、発現ベクター。
[本発明1002]
ウイルスベクターである、本発明1001の発現ベクター。
[本発明1003]
ウイルスベクターがレンチウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターである、本発明1002の発現ベクター。
[本発明1004]
レンチウイルスベクターが自己不活性化する、本発明1003の発現ベクター。
[本発明1005]
宿主細胞内で発現時にＸ4向性ＨＩＶ株およびＲ5向性ＨＩＶ株による感染に対する耐性を付与する、本発明1001の発現ベクター。
[本発明1006]
宿主細胞内で発現時に高活性抗レトロウイルス剤療法（ＨＡＡＲＴ）耐性ＨＩＶ株による感染に対する耐性を付与する、本発明1001の発現ベクター。
[本発明1007]
ＨＩＶウイルス結合、標的細胞膜へのＨＩＶウイルス融合またはＨＩＶウイルス複製阻害物質をコードする第3の核酸配列をさらに含む、本発明1001の発現ベクター。
[本発明1008]
ＨＩＶ共受容体の阻害物質が二重鎖領域を有するｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡであり、前記二重鎖領域が前記ＨＩＶ共受容体の配列と実質的に同一および相補性の配列を含む、本発明1001の発現ベクター。
[本発明1009]
前記ＨＩＶ共受容体がＣＣＲ5またはＣＸＣＲ4である、本発明1008の発現ベクター。
[本発明1010]
ｓｈＲＮＡが配列番号1の配列を有する、本発明1009の発現ベクター。
[本発明1011]
阻害物質が、前記ベクターが宿主細胞内で発現時にＨＩＶ共受容体の発現を低減できる、本発明1001の発現ベクター。
[本発明1012]
標的細胞へのＨＩＶ融合を阻害するタンパク質がＣ46タンパク質、Ｔ20タンパク質、エンフビルチド、ＣＰ32Ｍ、およびシフビルチドである、本発明1001の発現ベクター。
[本発明1013]
ＨＩＶ複製を阻害するタンパク質がヒトＴＲＩＭ5α、アカゲザルＴＲＩＭ5α、キメラＴＲＩＭ5α、ヒトＴＲＩＭ5−シクロフィリン融合タンパク質、シクロフィリン、Ｅ3ユビキチン、ＡＰＯＢＥＣ3Ｇ、および骨髄間質細胞抗原2（ＢＳＴ−2）からなる群から選択される、本発明1001の発現ベクター。
[本発明1014]
キメラＴＲＩＭ5αがヒトＴＲＩＭ5αタンパク質由来のアミノ末端ドメインおよびアカゲザルＴＲＩＭ5αタンパク質由来のカルボキシ末端ＰＲＹＳＰＲＹドメインを含む、本発明1013の発現ベクター。
[本発明1015]
前記第1の核酸配列と第2の核酸配列がプロモーターと機能的に連結されている、本発明1001の発現ベクター。
[本発明1016]
前記プロモーターがＲＮＡポリメラーゼＩＩまたはＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターである、本発明1015の発現ベクター。
[本発明1017]
前記第1の核酸配列が第1のプロモーターと機能的に連結されており、前記第2の核酸配列が第2のプロモーターと機能的に連結されている、本発明1001の発現ベクター。
[本発明1018]
前記第1のプロモーターと第2のプロモーターが同じである、本発明1017の発現ベクター。
[本発明1019]
前記第1のプロモーターと第2のプロモーターが異なる、本発明1017の発現ベクター。
[本発明1020]
前記第1のプロモーターがＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターであり、前記第2のプロモーターがＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターである、本発明1019の発現ベクター。
[本発明1021]
前記第3の核酸配列が第3のプロモーターと機能的に連結されている、本発明1007の発現ベクター。
[本発明1022]
前記第3のプロモーターが第1のプロモーターおよび第2のプロモーターと同じまたは異なる、本発明1021の発現ベクター。
[本発明1023]
前記ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターがＨ1  ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターである、本発明1016の発現ベクター。
[本発明1024]
前記ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターがユビキチンＣ  ｐｏｌ  ＩＩプロモーターである、本発明1016の発現ベクター。
[本発明1025]
本発明1001の発現ベクターを含む宿主細胞。
[本発明1026]
Ｘ4向性ＨＩＶ株またはＲ5向性ＨＩＶ株による感染に対して耐性である、本発明1025の宿主細胞。
[本発明1027]
ＨＡＡＲＴ耐性ＨＩＶ株による感染に対して耐性である、本発明1026の宿主細胞。
[本発明1028]
造血前駆／幹細胞、単球、マクロファージ、末梢血単核球、ＣＤ4＋Ｔリンパ球、ＣＤ8＋Ｔリンパ球、または樹状細胞である、本発明1025の宿主細胞。
[本発明1029]
配列番号1の配列を有するｓｈＲＮＡをコードする第1の核酸配列およびＣ46タンパク質をコードする第2の核酸配列を含み、前記第1の核酸配列がＨ1  ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターと機能的に連結されており、前記第2の核酸配列がユビキチンＣ  ｐｏｌ  ＩＩプロモーターと機能的に連結されている、発現ベクター。
[本発明1030]
第1のｓｈＲＮＡをコードする第1の核酸配列、第2のｓｈＲＮＡをコードする第2の核酸配列、および標的細胞へのＨＩＶウイルス融合もしくはＨＩＶ複製阻害物質をコードする第3の核酸配列を含む、発現ベクター。
[本発明1031]
前記第1の核酸配列が第1のプロモーターと機能的に連結されており、前記第2の核酸配列が第2のプロモーターと機能的に連結されており、前記第3の核酸配列が第3のプロモーターと機能的に連結されている、本発明1030の発現ベクター。
[本発明1032]
前記第1のｓｈＲＮＡがＣＣＲ5を標的とし、前記第2のｓｈＲＮＡがＣＸＣＲ4を標的とする、本発明1030の発現ベクター。
[本発明1033]
本発明1001の発現ベクターを造血細胞に形質導入する工程、および患者への前記形質導入された造血細胞を移植する工程を含み、前記形質導入された造血細胞がＨＩＶ感染に対して耐性である、患者におけるＨＩＶ感染の治療または予防の方法。
[本発明1034]
前記造血細胞が造血前駆／幹細胞（ＨＰＳＣ）、ＣＤ4＋Ｔリンパ球、ＣＤ8＋Ｔリンパ球、単球／マクロファージ、またはそれらの組み合わせである、本発明1033の方法。
[本発明1035]
前記移植されたＨＰＳＣがＨＩＶ感染に対して耐性である顆粒球、単球／マクロファージ、およびリンパ球を生成する、本発明1034の方法。
[本発明1036]
前記造血細胞が自家性または同種異系間である、本発明1033の方法。
[本発明1037]
前記第1の核酸配列が二重鎖領域を有するｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡをコードし、前記二重鎖領域が、ＣＣＲ5配列と実質的に同一および相補性の配列を含む、本発明1033の方法。
[本発明1038]
ｓｈＲＮＡが配列番号1の配列を有する、本発明1037の方法。
[本発明1039]
前記形質導入された造血細胞が、形質導入されていない造血細胞と比較して低いレベルのＣＣＲ5タンパク質を発現する、本発明1037の方法。
[本発明1040]
前記第2の核酸配列がヒトＴＲＩＭ5α、アカゲザルＴＲＩＭ5α、キメラＴＲＩＭ5α、ヒトＴＲＩＭ5−シクロフィリン融合タンパク質およびＣ46タンパク質からなる群から選択されるタンパク質をコードする、本発明1033の方法。
[本発明1041]
キメラＴＲＩＭ5αがヒトＴＲＩＭ5αタンパク質由来のアミノ末端ドメインおよびアカゲザルＴＲＩＭ5αタンパク質由来のカルボキシ末端ＰＲＹＳＰＲＹドメインを含む、本発明1040の方法。
[本発明1042]
前記形質導入された造血細胞が、形質導入されていない造血細胞と比較して高いレベルの前記タンパク質を発現する、本発明1040の方法。
[本発明1043]
前記顆粒球、単球／マクロファージ、およびリンパ球がＲ5向性ＨＩＶ株およびＸ4向性ＨＩＶ株による感染に対して耐性である、本発明1035の方法。
[本発明1044]
前記顆粒球、単球／マクロファージ、およびリンパ球がＨＡＡＲＴ耐性ＨＩＶ株による感染に対して耐性である、本発明1043の方法。
[本発明1045]
患者がＨＡＡＲＴ未施行である、本発明1033の方法。
[本発明1046]
患者がＨＡＡＲＴレジメンを受けている、本発明1033の方法。
[本発明1047]
患者にＨＡＡＲＴレジメンが奏効していないか奏効しなかった、本発明1033の方法。
[本発明1048]
有効量の本発明1001の発現ベクターおよび薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物。
[本発明1049]
ＨＩＶ感染患者の治療のための薬の製造における、本発明1048の薬学的組成物の使用。
[本発明1050]
本発明1048の薬学的組成物を患者に投与することを含む、患者におけるＨＩＶ感染の治療または予防方法。
[本発明1051]
組成物の投与後、患者がＲ5向性ＨＩＶ株およびＸ4向性ＨＩＶ株による感染に対して耐性である、本発明1050の方法。
[本発明1052]
組成物の投与後、患者がＨＡＡＲＴ耐性ＨＩＶ株による感染に対して耐性である、本発明1051の方法。
[本発明1053]
患者がＨＡＡＲＴ未施行である、本発明1050の方法。
[本発明1054]
患者がＨＡＡＲＴレジメンを受けている、本発明1050の方法。
[本発明1055]
患者にＨＡＡＲＴレジメンが奏効していないか奏効しなかった、本発明1050の方法。
[本発明1056]
患者にＨＩＶ感染リスクがある、本発明1050の方法。
[本発明1057]
ＨＩＶ感染患者の治療のための薬の製造における、本発明1001のウイルス発現ベクターの使用。
[本発明1058]
細胞に存在時、細胞へのＨＩＶ結合を阻害でき、かつ細胞内へのＨＩＶ融合またはＨＩＶ複製を防止できるウイルス発現ベクターの産生方法であって、以下の工程を含む産生方法：
細胞内へのＨＩＶ融合もしくはＨＩＶ複製を防止できるタンパク質を発現する遺伝子のｃＤＮＡを合成する段階；
ウイルスベクターの制限部位へ、合成したｃＤＮＡをクローニングする工程；ならびに
ＨＩＶ共受容体の発現を下方制御できる発現単位をベクターの制限部位へ挿入する工程。
[本発明1059]
ｃＤＮＡがＣ46  ｃＤＮＡまたはＴＲＩＭ5α  ｃＤＮＡであり、発現単位がＣＣＲ5を標的とするｓｈＲＮＡである、本発明1058の方法。
[本発明1060]
ｓｈＲＮＡが配列番号1の配列を有する、本発明1059の方法。
[本発明1061]
ウイルスベクターがＦＧ11Ｆレンチウイルスベクターである、本発明1059の方法。
[本発明1062]
Ｃ46またはＴＲＩＭ5α  ｃＤＮＡがＦＧ11ＦベクターのＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩ制限部位へクローニングされている、本発明1061の方法。
[本発明1063]
ｓｈＲＮＡがＦＧ11ＦベクターのＸｂａｌ／Ｘｈｏｌ制限部位間に挿入されている、本発明1062の方法。
本発明がより明確に理解され得るように、以下の図面の簡単な説明および実施例に関連して好ましい実施形態を記載する。