【手続補正書】
【提出日】平成25年3月5日(2013.3.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料中のインタクトなウイルス粒子の量を定量するための方法であって、以下のステップ：
ａ）遊離のウイルスＲＮＡを前記試料から除去するステップ、
ｂ）前記試料中の残存インフルエンザウイルスＲＮＡを検出するための方法を適用するステップであって、インフルエンザゲノム内の保存された領域を増幅することを特徴とするステップ、
ｃ）ステップｂ）によって発生したシグナルを標準ＲＮＡにより発生したシグナルと比較するステップ、
ｄ）インタクトなウイルス粒子の量を決定するステップ
を実施することを特徴とする方法。
【請求項２】
前記保存された領域がＭタンパク質を部分的にまたは完全にコードしている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
配列番号３または配列番号９を含むアンプリコンを提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
１ステップＲＴ−ｑＰＣＲを実施することを特徴とする、請求項１〜３のうちの一項に記載の方法。
【請求項５】
表１のプライマーまたはプローブ（配列番号１〜１１）のうちの少なくとも１つを使用することを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ステップ（ａ）におけるＲＮＡをリボヌクレアーゼ処理によって除去する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
請求項１〜６のうちの一項に記載の方法が適用される、インフルエンザワクチンを製造するための方法。
【請求項８】
細胞培養ベースの製造プロセスの発酵ステップ内で前記方法が適用され、ウイルスを収穫するための最適時間を決定するためにウイルス粒子の量を定量することをさらに特徴とする、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
インフルエンザワクチンの細胞培養ベースの製造のための方法であって、以下のステップ：
・細胞を発酵容器において増殖するステップ；
・種ウイルスを添加するステップ；
・前記ウイルスの増殖を請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法を使用してモニタリングするステップ；
・前記ウイルスの懸濁液を遠心分離し、濾過するステップ；
・前記ウイルスをクロマトグラフィーおよび限外濾過／ダイアフィルトレーションステップにより精製し、不活化し、破壊して、ウイルス表面抗原ＨＡおよびＮＡを可溶化するステップ；
・前記抗原を濾過して一価バルクを得るステップ；ならびに
・任意選択で、前記一価バルクを多価バルク（典型的には三価バルク）にブレンドし、最終容器に充填するステップ
を実施することを特徴とする方法。
【請求項１０】
請求項７または８に記載の方法により製造されるインフルエンザワクチン。
【請求項１１】
請求項１から６のうちの一項において定量されたインタクトなウイルス粒子の量をインフルエンザの指標とするための方法。
【請求項１２】
配列番号１、３、４、６〜１１に示される配列から選択される、プライマーオリゴヌクレオチドまたはプローブオリゴヌクレオチド。
【請求項１３】
請求項１２に記載のプライマーオリゴヌクレオチドまたはプローブオリゴヌクレオチドのうちの少なくとも１つと、少なくとも１つの追加の成分、たとえば、追加のプライマーもしくはプローブまたは核酸増幅を行うための試薬とを含有するキット。
【請求項１４】
インフルエンザワクチン製造またはインフルエンザ診断のための、請求項１２に記載のプライマーオリゴヌクレオチドもしくはプローブオリゴヌクレオチドを含む組成物、および／または請求項１３に記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
本発明は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸も提供する。これらの核酸は、長さが８０ヌクレオチド未満、たとえば、５０ヌクレオチド未満または３０ヌクレオチド未満の一本鎖であるべきである。前記核酸は、インフルエンザウイルスを検出するためのプライマーおよび／またはプローブとして有用であることが可能である。前記核酸は、関連する配列番号と同じ３’残基を有し得る、すなわち前記核酸は配列５’−Ｘ−Ｙ−３’（Ｙは配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１から選択される配列であり、Ｘは１つまたは複数のヌクレオチドのヌクレオチド配列である）を含み得る。配列５’−Ｘ−Ｙ−３’を有する核酸は、インフルエンザウイルスマトリックス核酸にハイブリダイズすることが可能である。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
インフルエンザウイルスＲＮＡを検出するための方法であって、インフルエンザゲノム内の保存された領域を増幅することを特徴とする方法。
（項目２）
前記保存された領域がＭタンパク質を部分的にまたは完全にコードしている、項目１に記載の方法。
（項目３）
配列番号３または配列番号９を含むアンプリコンを提供する、項目１に記載の方法。
（項目４）
１ステップＲＴ−ｑＰＣＲを実施することを特徴とする、前記項目の一項に記載の方法。
（項目５）
表１のプライマーまたはプローブ（配列番号１〜１１）のうちの少なくとも１つを使用することを特徴とする、項目４に記載の方法。
（項目６）
インフルエンザウイルスＲＮＡの量を定量するための方法であって、
ａ）項目１から５の一項に記載の方法を適用するステップ、
ｂ）発生したシグナルを標準ＲＮＡにより発生したシグナルと比較するステップ、
ｃ）ウイルスＲＮＡの量を決定するステップ
を実施することを特徴とする方法。
（項目７）
試料中のインタクトなウイルス粒子の量を定量するための方法であって、
ａ）遊離のウイルスＲＮＡを前記試料から除去するステップ、
ｂ）項目１から５の一項に記載の方法を適用するステップ、
ｃ）発生したシグナルを標準ＲＮＡにより発生したシグナルと比較するステップ、
ｄ）インタクトなウイルス粒子の量を決定するステップ
を実施することを特徴とする方法。
（項目８）
ステップ（ａ）におけるＲＮＡをリボヌクレアーゼ処理によって除去する、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記項目の一項に記載の方法が適用される、インフルエンザワクチンを製造するための方法。
（項目１０）
細胞培養ベースの製造プロセスの発酵ステップ内で前記方法が適用され、ウイルスを収穫するための最適時間を決定するためにウイルス粒子の量を定量することを特徴とする、項目９に記載の方法。
（項目１１）
インフルエンザワクチンの細胞培養ベースの製造のための方法であって、
・細胞を発酵容器において増殖するステップ；
・種ウイルスを添加するステップ；
・前記ウイルスの増殖を項目７に記載の方法を使用してモニタリングするステップ；
・前記ウイルスの懸濁液を遠心分離し、濾過するステップ；
・前記ウイルスをクロマトグラフィーおよび限外濾過／ダイアフィルトレーションステップにより精製し、不活化し、破壊して、ウイルス表面抗原ＨＡおよびＮＡを可溶化するステップ；
・前記抗原を濾過して一価バルクを得るステップ；ならびに
・任意選択で、前記一価バルクを多価バルク（典型的には三価バルク）にブレンドし、最終容器に充填するステップ
を実施することを特徴とする方法。
（項目１２）
項目９または１０に記載の方法により製造されるインフルエンザワクチン。
（項目１３）
項目１から６の一項に記載の方法を適用することを特徴とする、インフルエンザの診断のための方法。
（項目１４）
表１に示されるプライマーオリゴヌクレオチドおよびプローブオリゴヌクレオチド（配列番号１〜１１）。
（項目１５）
項目１４に記載のプライマーまたはプローブのうちの少なくとも１つを含み、任意選択で、追加の成分、たとえば、核酸増幅を行うための試薬および前記増幅を行うための使用説明書を含有するキット。
（項目１６）
インフルエンザワクチン製造またはインフルエンザ診断のための、項目１３に記載のオリゴヌクレオチドおよび項目１４に記載のキットの使用。