【手続補正書】
【提出日】平成25年9月27日(2013.9.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
絹スフェアを調製する方法であって、
絹フィブロインとポリビニルアルコール(PVA)とを含む絹/PVAブレンドフィルムを水に溶解する工程;および
PVAの少なくとも一部を除去し、それによって、ナノメートルからマイクロメートルの範囲のサイズを有する絹スフェアを形成する工程
を含む、前記方法。
【請求項２】
絹/PVAブレンドフィルムが、絹フィブロインとPVAとを含むブレンド水溶液を乾燥させて絹/PVAブレンドフィルムを形成することによって生成される、請求項1記載の方法。
【請求項３】
フィルムを水に溶解する工程の前に、絹/PVAブレンドフィルムに制約を加えて、絹スフェアの形状を変える工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項４】
フィルムを水に溶解する工程の前に、絹/PVAブレンドフィルムを引き伸ばし、それによって、紡錘状の絹スフェアを形成する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項５】
フィルムを水に溶解する工程の前に、絹/PVAブレンドフィルムを水鈍し、それによって、円板状の絹スフェアを形成する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項６】
絹スフェアのサイズが、以下のうちの1つまたは複数を調節することによって制御される、請求項2記載の方法: (a)ブレンド溶液中の絹フィブロインおよびPVAの重量比;(b)ブレンド溶液中の絹フィブロインおよびPVAの濃度;(c)PVAの分子量;(d)絹/PVAブレンド溶液を乾燥させてフィルムを形成する前に該溶液に加えられる超音波処理のエネルギー出力;(d)絹/PVAブレンド溶液へのグリセリンもしくは他のヒドロキシル基に富む化合物もしくはポリマーの添加;(e)絹/PVAブレンド溶液のpHの調節;または(f)絹/PVAブレンド溶液への塩の添加、および任意で塩濃度の調節。
【請求項７】
ブレンド溶液中の絹の濃度が約15wt％以下である、請求項2記載の方法。
【請求項８】
ブレンド溶液中の絹フィブロインの濃度が約0.02％〜約15wt％である、請求項7記載の方法。
【請求項９】
ブレンド溶液中の絹フィブロインの濃度が約0.2％〜約5wt％である、請求項8記載の方法。
【請求項１０】
ブレンド溶液を乾燥させてフィルムを形成する前に、該溶液を超音波処理する工程をさらに含む、請求項2記載の方法。
【請求項１１】
超音波処理のエネルギー出力が約4ワット以上である、請求項10記載の方法。
【請求項１２】
望ましくないサイズの形成された絹スフェアを除去する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項１３】
PVAが30,000〜124,000の平均分子量を有する、請求項1記載の方法。
【請求項１４】
PVAの濃度が約0.8wt％までである、請求項2記載の方法。
【請求項１５】
PVAの濃度が約0.16wt％までである、請求項14記載の方法。
【請求項１６】
絹とPVAの濃度比が1:4までである、請求項2記載の方法。
【請求項１７】
超音波処理のエネルギー出力が約8ワット以上である、請求項11記載の方法。
【請求項１８】
除去する工程が、濾過、遠心分離、またはそれらの組み合わせを含む、請求項12記載の方法。
【請求項１９】
絹スフェアに活性物質を封入する方法であって、
a. 絹フィブロイン水溶液および活性物質をポリビニルアルコール(PVA)水溶液と混合する工程;
b. 工程(a)の溶液を乾燥させてフィルムを形成する工程;
c. フィルムを水に溶解する工程;および
d. PVAの少なくとも一部を除去し、それによって、活性物質が封入された絹スフェアを形成する工程
を含む、前記方法。
【請求項２０】
活性物質が、化学物質、タンパク質、ペプチド、核酸、核酸類似体、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチドまたは配列、ペプチド核酸、アプタマー、抗体、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、増殖因子または組換え増殖因子ならびにその断片および変種、サイトカイン、酵素、抗生物質、ウイルス、抗ウイルス剤、毒素、プロドラッグ、化学療法剤、低分子、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項19記載の方法。
【請求項２１】
請求項19または20記載の方法に従って調製された、活性物質が封入されている多孔性絹スフェアを含む、薬学的組成物。
【請求項２２】
請求項19または20記載の方法に従って調製された、活性物質が封入されている多孔性絹スフェアを含む、生物送達システム。
【請求項２３】
活性物質が封入されている絹ナノスフェアを含む、薬物送達システム。
【請求項２４】
絹とPVAの濃度比が約1:1〜約1:4である、請求項16記載の方法。
【請求項２５】
除去する工程が、1μmもしくは5μmより小さいスフェアを除去すること;または330nmもしくは500nmより大きいスフェアを除去することを含む、請求項12記載の方法。
【請求項２６】
ブレンド溶液中の絹フィブロインの濃度が約0.2wt％までである、請求項7記載の方法。
【請求項２７】
ブレンド溶液中の絹フィブロインの濃度が約0.04wt％までである、請求項26記載の方法。
【請求項２８】
絹スフェアが約1μm〜約30μmのサイズである、請求項1記載の方法。
【請求項２９】
絹スフェアが約5μm〜約10μmのサイズである、請求項28記載の方法。
【請求項３０】
絹スフェアの平均スフェアサイズが、500nm未満である、請求項1記載の方法。
【請求項３１】
絹スフェアの平均スフェアサイズが、330nm未満である、請求項30記載の方法。
【請求項３２】
絹スフェアが、0.4未満の多分散指数(PDI)を有する、請求項1記載の方法。
【請求項３３】
絹スフェアが、0.3未満の多分散指数(PDI)を有する、請求項32記載の方法。
【請求項３４】
絹スフェアが多孔性である、請求項1記載の方法。
【請求項３５】
ブレンド溶液が活性物質をさらに含む、請求項2記載の方法。
【請求項３６】
請求項1〜18または24〜35のいずれか一項に記載の方法に従って調製された、絹フィブロインナノスフェア組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
本発明の態様はまた、活性物質(例えば、抗体、薬物、または低分子)を、多孔性の絹ナノスフェアもしくはマイクロスフェアまたはナノメートルからマイクロメートルのスフェアサイズを有するスフェアの中に封入する方法も提供する。前記方法は、(a)絹フィブロイン水溶液および活性物質をPVA溶液と混合する工程;(b)溶液を乾燥させてフィルムを形成する工程;(c)フィルムを水に溶解する工程;ならびに(d)PVAの少なくとも一部を除去し、それによって、活性物質が封入された絹スフェアを形成する工程を含む。
[本発明1001]
ナノメートルからマイクロメートルのスフェアサイズを有する絹スフェアを調製する方法であって、
(a)絹フィブロイン水溶液をPVA水溶液と混合する工程;
(b)工程(a)の溶液を乾燥させてフィルムを形成する工程;
(c)フィルムを水に溶解する工程;および
(d)PVAの少なくとも一部を除去し、それによって、ナノメートルからマイクロメートルのスフェアサイズを有する絹スフェアを形成する工程
を含む、前記方法。
[本発明1002]
ナノメートルからマイクロメートルのスフェアサイズを有する絹スフェアを調製する方法であって、
a.絹フィブロイン水溶液をPVA水溶液と混合して、ブレンド溶液を形成する工程であって、PVAが30,000〜124,000の平均分子量を有し、ブレンド溶液中の絹の濃度が約15wt％以下であり、絹:PVAの濃度比が約1:1〜約1:4である、工程;
b.ブレンド溶液を乾燥させてフィルムを形成する工程;
c.フィルムを水に溶解する工程;および
d.PVAの少なくとも一部を除去し、それによって、ナノメートルからマイクロメートルのスフェアサイズを有する絹スフェアを形成する工程
を含む、前記方法。
[本発明1003]
フィルムを水に溶解する工程の前に、絹/PVAブレンドフィルムに制約を加えて、絹スフェアの形状を変える工程をさらに含む、本発明1001または1002の方法。
[本発明1004]
フィルムを水に溶解する工程の前に、絹/PVAブレンドフィルムを引き伸ばし、それによって、紡錘状の絹スフェアを形成する工程をさらに含む、本発明1001または1002の方法。
[本発明1005]
フィルムを水に溶解する工程の前に、絹/PVAブレンドフィルムを水鈍し、それによって、円板状の絹スフェアを形成する工程をさらに含む、本発明1001または1002の方法。
[本発明1006]
溶液を乾燥させてフィルムを形成する工程の前に、絹スフェアのサイズが、(a)ブレンド溶液中の絹フィブロインおよびPVAの重量比;(b)ブレンド溶液中の絹フィブロインおよびPVAの濃度;(c)PVAの分子量;または(d)絹/PVAブレンド溶液に加えられる超音波処理のエネルギー出力のうちの1つまたは複数を調節することによって制御される、本発明1001または1002の方法。
[本発明1007]
スフェアのサイズが、(a)絹/PVAブレンド溶液へのグリセリンもしくは他のヒドロキシル基に富む化合物もしくはポリマーの添加;(b)絹/PVAブレンド溶液のpHの調節;または(c)絹/PVAブレンド溶液への塩の添加、任意で、塩濃度の調節のうちの1つまたは複数によって制御される、本発明1001または1002の方法。
[本発明1008]
約1μm〜約30μmのスフェアサイズを有する絹マイクロスフェアを調製する方法であって、
a.絹フィブロイン水溶液をPVA水溶液と混合して、ブレンド溶液を形成する工程であって、PVAが30,000〜124,000の平均分子量を有し、ブレンド溶液中の絹の濃度が約0.02％〜約15wt％であり、絹:PVAの濃度比が約1:1〜約1:4である、工程;
b.ブレンド溶液を乾燥させてフィルムを形成する工程;
c.フィルムを水に溶解する工程;および
d.PVAの少なくとも一部を除去し、それによって、絹マイクロスフェアを形成する工程
を含む、前記方法。
[本発明1009]
ブレンド溶液中の絹の濃度が約0.2％〜約5wt％である、本発明1008の方法。
[本発明1010]
溶液を乾燥させてフィルムにする前に、ブレンド溶液を超音波処理し、それによって、5μm〜10μmのサイズを有する絹マイクロスフェアを形成する工程をさらに含む、本発明1008または1009の方法。
[本発明1011]
超音波処理のエネルギー出力が約4ワット以上である、本発明1010の方法。
[本発明1012]
濾過、遠心分離、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される工程をさらに含み、それによって、1μmまたは5μmより小さいスフェアが除去される、本発明1008〜1011のいずれかの方法。
[本発明1013]
本発明1008〜1012のいずれかの方法に従って調製された、絹フィブロインマイクロスフェア組成物。
[本発明1014]
500nm未満のナノスフェア平均スフェアサイズを有し、0.3未満のPDIを有し、かつ2μmより大きいスフェアを有さない絹ナノスフェアを調製する方法であって、
a.絹フィブロイン水溶液をPVA水溶液と混合して、ブレンド溶液を形成する工程であって、PVAが30,000〜124,000の平均分子量を有し、ブレンド溶液中の絹の濃度が約0.2wt％までであり、PVAの濃度が約0.8wt％までである、工程;
b.ブレンド溶液を乾燥させてフィルムを形成する工程;
c.フィルムを水に溶解する工程;および
d.PVAの少なくとも一部を除去し、それによって、絹ナノスフェアを形成する工程
を含む、前記方法。
[本発明1015]
ブレンド溶液中の絹の濃度が約0.04wt％までであり、PVAの濃度が約0.16wt％までである、本発明1014の方法。
[本発明1016]
330nm未満のナノスフェア平均スフェアサイズを有し、0.4未満のPDIを有し、かつ2μmより大きいスフェアを有さない絹ナノスフェアを調製する方法であって、
a.絹フィブロイン水溶液をPVA水溶液と混合して、ブレンド溶液を形成する工程であって、PVAが30,000〜124,000の平均分子量を有し、ブレンド溶液中の絹の濃度が15wt％までであり、絹とPVAの濃度比が1:4までである、工程;
b.ブレンド溶液を超音波処理する工程;
c.超音波処理した溶液を乾燥させてフィルムを形成する工程;
d.フィルムを水に溶解する工程;および
e.PVAの少なくとも一部を除去し、それによって、絹ナノスフェアを形成する工程
を含む、前記方法。
[本発明1017]
超音波処理のエネルギー出力が約8ワット以上である、本発明1016の方法。
[本発明1018]
濾過、遠心分離、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される工程をさらに含み、それによって、330nmまたは500nmより大きいスフェアが除去される、本発明1016または1017の方法。
[本発明1019]
本発明1014〜1018のいずれかの方法に従って調製された、絹フィブロインナノスフェア組成物。
[本発明1020]
ナノメートルからマイクロメートルのスフェアサイズを有する多孔性絹スフェアに、活性物質を封入する方法であって、
a.絹フィブロイン水溶液および活性物質をポリビニルアルコール(PVA)水溶液と混合する工程;
b.工程(a)の溶液を乾燥させてフィルムを形成する工程;
c.フィルムを水に溶解する工程;および
d.PVAの少なくとも一部を除去し、それによって、活性物質が封入された絹スフェアを形成する工程
を含む、前記方法。
[本発明1021]
活性物質が、化学物質、タンパク質、ペプチド、核酸、核酸類似体、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチドまたは配列、ペプチド核酸、アプタマー、抗体、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、増殖因子または組換え増殖因子ならびにその断片および変種、サイトカイン、酵素、抗生物質、ウイルス、抗ウイルス剤、毒素、プロドラッグ、化学療法剤、低分子、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される、本発明1020の方法。
[本発明1022]
本発明1020または1021の方法に従って調製された、活性物質が封入されている多孔性絹スフェアを含む、薬学的組成物。
[本発明1023]
本発明1020または1021の方法に従って調製された、活性物質が封入されている多孔性絹スフェアを含む、生物送達システム。
[本発明1024]
活性物質が封入されている絹ナノスフェアを含む、薬物送達システム。