【手続補正書】
【提出日】平成25年6月25日(2013.6.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）ヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）および１つまたは複数のヒトサイトカイン類をコード化する核酸を、免疫不全非ヒト哺乳動物に導入すること；ならびに
ｂ）前記非ヒト哺乳動物を、前記非ヒト哺乳動物において前記核酸が発現されて前記ヒトＨＳＣが機能的ヒト血液細胞系統に分化する条件下で、維持すること
を含み、
それによって、前記非ヒト哺乳動物において、機能的ヒト血液細胞系統を再構成する、
非ヒト哺乳動物において、機能的ヒト血液細胞系統を再構成する方法。
【請求項２】
前記ＨＳＣが前記非ヒト哺乳動物導入された後に、前記１つまたは複数のヒトサイトカイン類をコード化する前記核酸が導入される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記１つまたは複数のヒトサイトカイン類をコード化する前記核酸が、裸のＤＮＡとして、またはベクターで導入される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ベクターが、プラスミド、ウイルスベクター、またはそれらの組合せである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ウイルスベクターが、レンチウイルスウイルスまたはアデノウイルスベクターである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記１つまたは複数のヒトサイトカイン類をコード化する前記核酸が、流体力学的注入を使用してプラスミドＤＮＡとして導入される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記１つまたは複数のヒトサイトカイン類が、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）、Ｆｌｔ３Ｌ（Ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３リガンド）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記非ヒト哺乳動物がマウスである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記マウスが、重症複合免疫不全変異を保持する非肥満糖尿病マウス（ＮＯＤ／ｓｃｉｄマウス）；重症複合免疫不全変異を保持し、かつサイトカイン受容体γ鎖の遺伝子を欠く非肥満糖尿病マウス（ＮＯＤ／ｓｃｉｄ  ＩＬ２Ｒγ−／−マウス）およびＢａｌｂ／ｃ  ｒａｇ−／− γｃ−／−マウスからなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
再構成される前記機能的ヒト血液細胞系統が、機能的ヒト骨髄性細胞、機能的ヒトリンパ系細胞またはそれらの組合せである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記ヒト骨髄性細胞が、ヒト単球、ヒトマクロファージ、ヒト樹状細胞、ヒト赤血球、またはそれらの組合せであり；また前記ヒトリンパ系細胞が、ヒトＮＫ細胞、ヒトＢ細胞、ヒトＴ細胞、またはそれらの組合せである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記１つまたは複数のヒトサイトカイン類が、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）およびＦｍｓ関連チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３Ｌ）であり、前記非ヒト哺乳動物において再構成される前記機能的血液細胞系統がヒトＮＫ細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記１つまたは複数のヒトサイトカイン類が、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）およびインターロイキン４（ＩＬ−４）であり、前記非ヒト哺乳動物において再構成される前記機能的血液細胞系統が、ヒト樹状細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記１つまたは複数のサイトカイン類が、マクロファージコロニー刺激因子（ＭＣＳＦ）であり、前記非ヒト哺乳動物において再構成される前記機能的血液細胞系統が、ヒト単球／マクロファージである、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記１つまたは複数のサイトカイン類が、エリスロポエチン（ＥＰＯ）およびインターロイキン３（ＩＬ−３）であり、前記非ヒト哺乳動物において再構成される前記機能的血液細胞系統が、ヒト赤血球である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
ａ）ヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）および１つまたは複数のヒトサイトカイン類をコード化する核酸を、免疫不全非ヒト哺乳動物に導入すること、ここで前記ヒトサイトカイン類は、前記非ヒト哺乳動物において発現されるとき、前記ヒトＨＳＣの機能的ヒトＮＫ細胞への分化を促進する；ならびに
ｂ）前記非ヒト哺乳動物を、前記非ヒト哺乳動物において前記核酸が発現されて前記ヒトＨＳＣが前記非ヒト哺乳動物において機能的ヒトＮＫ細胞に分化する条件下で維持すること
を含み、
それによって、前記非ヒト哺乳動物におけるヒトＮＫ細胞の再構成を強化する、
非ヒト哺乳動物において機能的ヒトＮＫ細胞を再構成する方法。
【請求項１７】
ａ）ヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）および１つまたは複数のヒトサイトカイン類をコード化する核酸を、免疫不全非ヒト哺乳動物に導入すること、ここで前記ヒトサイトカイン類は、前記非ヒト哺乳動物において発現されるとき、前記ヒトＨＳＣの機能的ヒト樹状細胞への分化を促進する；ならびに
ｂ）前記非ヒト哺乳動物を、前記非ヒト哺乳動物において前記核酸が発現されて前記ヒトＨＳＣが前記非ヒト哺乳動物において機能的ヒト樹状細胞に分化する条件下で維持すること
を含み、
それによって、前記非ヒト哺乳動物における機能的ヒト樹状細胞の再構成を強化する、
非ヒト哺乳動物において機能的ヒト樹状細胞を再構成する方法。
【請求項１８】
ａ）ヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）および１つまたは複数のヒトサイトカイン類をコード化する核酸を、免疫不全非ヒト哺乳動物に導入すること、ここで前記ヒトサイトカイン類は、前記非ヒト哺乳動物において発現されるとき、前記ヒトＨＳＣの機能的ヒト単球／マクロファージへの分化を促進する；ならびに
ｂ）前記非ヒト哺乳動物を、前記非ヒト哺乳動物において前記核酸が発現されて前記ヒトＨＳＣが前記非ヒト哺乳動物において機能的ヒト単球／マクロファージに分化する条件下で維持すること
を含み、
それによって、前記非ヒト哺乳動物における機能的ヒト単球／マクロファージの再構成を強化する、
非ヒト哺乳動物において機能的ヒト単球／マクロファージを再構成する方法。
【請求項１９】
ａ）ヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）および１つまたは複数のヒトサイトカイン類をコード化する核酸を、免疫不全非ヒト哺乳動物に導入すること、ここで前記ヒトサイトカイン類は、前記非ヒト哺乳動物において発現されるとき、前記ヒトＨＳＣの機能的ヒト赤血球への分化を促進する；ならびに
ｂ）前記非ヒト哺乳動物を、前記非ヒト哺乳動物において前記核酸が発現されて前記ヒトＨＳＣが前記非ヒト哺乳動物において機能的ヒト赤血球に分化する条件下で維持すること
を含み、
それによって、前記非ヒト哺乳動物における機能的ヒト赤血球の再構成を強化する、
非ヒト哺乳動物において機能的ヒト赤血球を再構成する方法。
【請求項２０】
ａ）ヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）および１つまたは複数のヒトサイトカイン類をコード化する核酸を、免疫不全非ヒト哺乳動物に導入すること、ここで前記ヒトサイトカイン類は、前記非ヒト哺乳動物において発現されるとき、前記ヒトＨＳＣの機能的ヒトＴ細胞およびヒトＢ細胞への分化を促進する；ならびに
ｂ）前記非ヒト哺乳動物を、前記非ヒト哺乳動物において前記核酸が発現されて前記ヒトＨＳＣが前記非ヒト哺乳動物において機能的ヒトＴ細胞およびヒトＢ細胞に分化する条件下で維持すること
を含み、
それによって、前記非ヒト哺乳動物において、機能的ヒトＴ細胞およびヒトＢ細胞を再構成する、
非ヒト哺乳動物において機能的ヒトＴ細胞およびヒトＢ細胞を再構成する方法。
【請求項２１】
ｃ）前記非ヒト哺乳動物を免疫原で免疫すること；および
ｄ）前記非ヒト哺乳動物を、前記非ヒト哺乳動物が前記免疫原に対するヒト抗体を産生する条件下で維持すること；
をさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ａ）ヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）および１つまたは複数のヒトサイトカイン類をコード化する核酸を、免疫不全非ヒト哺乳動物に導入すること、ここで前記ヒトサイトカイン類は、前記ヒトＨＳＣの機能的ヒトＴ細胞およびヒトＢ細胞への分化を促進する；
ｂ）前記非ヒト哺乳動物において前記核酸が発現されて前記ＨＳＣが前記非ヒト哺乳動物において機能的ヒトＴ細胞およびヒトＢ細胞に分化する条件下で、前記非ヒト哺乳動物を維持すること；
ｃ）前記非ヒト哺乳動物を、免疫原で免疫すること；ならびに
ｄ）前記非ヒト哺乳動物を、前記非ヒト哺乳動物において前記ヒトＢ細胞が前記免疫原に対するヒト抗体を産生する条件下で維持すること
を含み、
それによって、前記非ヒト哺乳動物において、前記免疫原に対するヒト抗体を生成する、
非ヒト哺乳動物において免疫原に対するヒト抗体を生成する方法。
【請求項２３】
前記ヒト抗体を産生するヒトＢ細胞を前記非ヒト哺乳動物から単離することをさらに含み、それによって単離されたヒトＢ細胞を作製する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記単離されたヒトＢ細胞を不死化細胞と接触させ、それによって組合せを作製すること；ならびに前記ヒトＢ細胞および前記不死化細胞が融合して、前記免疫原に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを形成する条件下で、前記組合せを維持することをさらに含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ヒトＢ細胞により発現される前記ヒト抗体の全部または機能的部分をコード化する配列をクローニングすることをさらに含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
請求項１〜２５のいずれかに記載の方法で作製される非ヒト哺乳動物。
【請求項２７】
請求項２４に記載の方法で作製されるハイブリドーマ。
【請求項２８】
請求項２７に記載のハイブリドーマにより分泌されるモノクローナル抗体。