【手続補正書】
【提出日】平成21年5月21日(2009.5.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
目的のヌクレオチド配列によりウキクサを安定的に形質転換するための方法であって、
前記ヌクレオチド配列は選択剤に対する耐性を付与する遺伝子を含む少なくとも１つの発現カセットを含み、
該方法は、
（ａ）細胞壁を備える細胞を含むウキクサ標的組織を用意するステップと、
（ｂ）前記ヌクレオチド配列が前記ウキクサ標的組織の細胞の細胞壁を突き抜けて当該組織の細胞内に配置されるのに十分な速度で、前記ウキクサ標的組織に前記ヌクレオチド配列を発射することによって安定的に形質転換された組織を生成するステップと
を含み、
前記ヌクレオチド配列が微小発射体により運搬されるとともに、
前記組織に前記微小発射体を発射することにより前記ヌクレオチド配列が前記組織に発射される
ことを特徴とする方法。
【請求項２】
前記微小発射体が金属粒子を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記微小発射体が約２分の１マイクロメーターないし約３マイクロメーターの直径を有することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記微小発射体が複数用意され、各微小発射体の上に前記ヌクレオチド配列が固定されて、各微小発射体が前記ウキクサ標的組織に発射されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
目的のヌクレオチド配列によりウキクサを安定的に形質転換するための方法であって、
（ａ）前記ヌクレオチド配列は選択剤に対する耐性を付与する遺伝子を含む少なくとも１つの発現カセットを含み、前記ヌクレオチド配列を含むベクターを含むアグロバクテリウムをウキクサ植物体組織に接種するステップと、
（ｂ）前記組織を前記アグロバクテリウムと共生培養することによって安定的に形質転換された組織を生成するステップと
を含む方法。
【請求項６】
前記アグロバクテリウムの増殖を抑制するために十分な抗生物質を含む培地で安定的に形質転換された組織を培養するステップをさらに含む請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記安定的に形質転換した組織を、前記選択剤を含む培地で培養するステップをさらに含む請求項１または請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記形質転換した組織から安定的に形質転換したウキクサ植物体を再生するステップをさらに含む請求項１または請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記組織がカルス組織または分裂組織または葉組織であることを特徴とする請求項１または請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記ウキクサ組織がウキクサ（Spirodela）属、ミジンコウキクサ（Wolffia）属、ウォルヒエラ（Wolfiella）属、およびアオウキクサ（Lemna）属のウキクサ組織からなる群から選択されることを特徴とする請求項１または請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
前記ウキクサ組織がレムナ・ミノール（Lemna minor）、レムナ・ミニスキュラ（Lemna miniscula）、およびイボウキクサ（Lemna gibba）のウキクサ組織からなる群から選択されることを特徴とする請求項１または請求項５に記載の方法。
【請求項１２】
前記アグロバクテリウムがアグロバクテリウム・ツメファシエンスまたはアグロバクテリウム・リゾゲネスであることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項１３】
前記ベクターがスーパーバイナリーベクターまたはＣ５８由来ベクターであることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項１４】
前記ヌクレオチド配列が目的の遺伝子を２つ含むことを特徴とする請求項１または請求項５に記載の方法。
【請求項１５】
前記ヌクレオチド配列が、インスリン、成長ホルモン、αインターフェロン、βグルコセレブロシダーゼ、網膜芽細胞腫タンパク質、ｐ５３タンパク質、アンジオスタチン、レプチン、および血清アルブミンからなる群から選択されるタンパク質またはペプチドをコード化することを特徴とする請求項１または請求項５に記載の方法。
【請求項１６】
前記ヌクレオチド配列が、ヘモグロビン、コラーゲン、Ｐ４５０オキシダーゼ、およびモノクローン抗体からなる群から選択される多量体タンパク質の少なくとも１つのタンパク質またはペプチドサブユニットをコード化することを特徴とする請求項１または請求項５に記載の方法。
【請求項１７】
目的のヌクレオチド配列によりウキクサ細胞を安定的に形質転換するための方法であって、前記ヌクレオチド配列は選択剤に対する耐性を付与する遺伝子を含む少なくとも１つの発現カセットを含み、電気穿孔法によりウキクサ細胞内に前記ヌクレオチド配列を導入するステップを含む方法。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか一項の方法により生成される安定的に形質転換されたウキクサ組織、ウキクサ組織培養株またはウキクサ細胞。
【請求項１９】
ゲノムに組込まれた目的の異種核酸を含む安定的に形質転換されたウキクサ組織、ウキクサ組織培養株またはウキクサ細胞。
【請求項２０】
前記目的の核酸がゲノムに組込まれたＴ−ＤＮＡ境界配列によりフランキングされていることを特徴とする請求項１９に記載の安定的に形質転換されたウキクサ組織、ウキクサ組織培養株またはウキクサ細胞。
【請求項２１】
前記ウキクサ組織、ウキクサ組織培養株またはウキクサ細胞が前記目的の異種核酸の５つより少ないコピーを含むことを特徴とする請求項２０に記載の安定的に形質転換されたウキクサ組織、ウキクサ組織培養株またはウキクサ細胞。
【請求項２２】
前記ウキクサ組織、ウキクサ組織培養株またはウキクサ細胞がウキクサ（Spirodela）属、ミジンコウキクサ（Wolffia）属、ウォルヒエラ（Wolfiella）属、およびアオウキクサ（Lemna）属のウキクサ組織、ウキクサ組織培養株またはウキクサ細胞からなる群から選択されることを特徴とする請求項１９または請求項２０に記載の安定的に形質転換されたウキクサ組織、ウキクサ組織培養株またはウキクサ細胞。
【請求項２３】
前記ウキクサ組織、ウキクサ組織培養株またはウキクサ細胞がレムナ・ミノール（Lemna minor）、レムナ・ミニスキュラ（Lemna miniscula）、およびイボウキクサ（Lemna gibba）のウキクサ組織、ウキクサ組織培養株またはウキクサ細胞からなる群から選択されることを特徴とする請求項２０に記載の安定的に形質転換されたウキクサ組織、ウキクサ組織培養株またはウキクサ細胞。
【請求項２４】
前記核酸が選択剤に対する耐性を付与する遺伝子を含む少なくとも１つの発現カセットを含むことを特徴とする請求項２０に記載の安定的に形質転換されたウキクサ組織、ウキクサ組織培養株またはウキクサ細胞。
【請求項２５】
前記核酸が目的の遺伝子を２つ含むことを特徴とする請求項２０に記載の安定的に形質転換されたウキクサ組織、ウキクサ組織培養株またはウキクサ細胞。
【請求項２６】
前記核酸が、インスリン、成長ホルモン、αインターフェロン、βグルコセレブロシダーゼ、網膜芽細胞腫タンパク質、ｐ５３タンパク質、アンジオスタチン、レプチン、および血清アルブミンからなる群から選択されるタンパク質またはペプチドをコード化することを特徴とする請求項２０に記載の安定的に形質転換されたウキクサ組織、ウキクサ組織培養株またはウキクサ細胞。
【請求項２７】
前記核酸が、ヘモグロビン、コラーゲン、Ｐ４５０オキシダーゼ、およびモノクローン抗体からなる群から選択される多量体タンパク質の少なくとも１つのタンパク質またはペプチドサブユニットをコード化することを特徴とする請求項２０に記載の安定的に形質転換されたウキクサ組織、ウキクサ組織培養株またはウキクサ細胞。
【請求項２８】
組換えタンパク質またはペプチドを生成する方法において、
（ａ）少なくとも１つの異種タンパク質またはペプチドを発現する安定的に形質転換されたウキクサ植物体または安定的に形質転換されたウキクサ組織を培養するステップと、
（ｂ）前記安定的に形質転換されたウキクサ植物体またはウキクサ組織から少なくとも１つのタンパク質またはペプチドを採集するステップと
を含む方法。
【請求項２９】
前記安定的に形質転換されたウキクサ植物体またはウキクサ組織が廃水で増殖されることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記安定的に形質転換されたウキクサ植物体またはウキクサ組織が多量体タンパク質のサブユニットすべてを発現するとともにアセンブルすることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記多量体タンパク質が、コラーゲン、ヘモグロビン、Ｐ４５０オキダーゼ、およびモノクローン抗体からなる群から選択されることを特徴とする請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記安定的に形質転換されたウキクサ植物体またはウキクサ組織がバイオレアクタ管で増殖されることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
【請求項３３】
１つの組換えタンパク質またはペプチドが生成されることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
前記少なくとも１つの異種タンパク質またはペプチドが治療的タンパク質またはペプチドであることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
【請求項３５】
前記少なくとも１つの異種タンパク質またはペプチドが、インスリン、成長ホルモン、αインターフェロン、βグルコセレブロシダーゼ、網膜芽細胞腫タンパク質、ｐ５３タンパク質、アンジオスタチン、レプチン、および血清アルブミンからなる群から選択されることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
【請求項３６】
前記少なくとも１つの異種タンパク質またはペプチドが酵素であることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
【請求項３７】
前記少なくとも１つの異種タンパク質またはペプチドが、前記形質転換されたウキクサ植物体またはウキクサ組織から分泌されることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
【請求項３８】
前記安定的に形質転換されたウキクサ植物体またはウキクサ組織がウキクサ（Spirodela）属、ミジンコウキクサ（Wolffia）属、ウォルヒエラ（Wolfiella）属、およびアオウキクサ（Lemna）属のウキクサ植物体またはウキクサ組織からなる群から選択されることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
【請求項３９】
前記安定的に形質転換されたウキクサ植物体またはウキクサ組織がレムナ・ミノール（Lemna minor）、レムナ・ミニスキュラ（Lemna miniscula）、およびイボウキクサ（Lemna gibba）のウキクサ植物体またはウキクサ組織からなる群から選択されることを特徴とする請求項２８に記載の方法。