【手続補正書】
【提出日】平成25年8月15日(2013.8.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エンテロバクター（Enterobacter）種638の単離培養物。
【請求項２】
さらにpENT638-1プラスミドを含む、請求項1に記載の培養物。
【請求項３】
エンテロバクター種638の単離培養物および生物学的に許容できる媒体を含む、植物のための接種物。
【請求項４】
前記媒体が植物ホルモン及び／又は抗微生物性化合物を含む、請求項3に記載の接種物。
【請求項５】
前記植物ホルモンがアセトイン、2,3-ブタンジオール及びインドール-酢酸から選択される、請求項4に記載の接種物。
【請求項６】
前記抗微生物性化合物がフェニルエタノール及び4-ヒドロキシベンゾエートから選択される、請求項4に記載の接種物。
【請求項７】
さらに植物生長促進微生物を含む、請求項3に記載の接種物。
【請求項８】
前記微生物が、アクチノバクター（Actinobacter）、アルカリゲネス（Alcaligenes）、バシルス（Bacillus）、ブルクホルデリア（Burkhplderia）、ブッチアウキセラ（Buttiauxella）、エンテロバクター（Enterobacter）、クレブシーラ（Klebsiella）、クルイベラ（Kluyvera）、プシュードモナス（Pseudomonas）、ラーネラ（Rahnella）、ラルストニア（Ralstonia）、リゾビウム（Rhizobium）、セラチア（Serratia）およびステノトロホモナス（Stenotrophomonas）から成る群から選択される、請求項7に記載の接種物。
【請求項９】
植物で生長を増進させる方法であって、前記植物に、前記植物の生長を増進させるために有効な量で組成物を適用する工程を含み、前記組成物がエンテロバクター種638の単離培養物を含む、前記方法。
【請求項１０】
前記組成物を前記植物の根、シュート、葉および／または種子に適用する工程を含む、請求項9に記載の方法。
【請求項１１】
前記植物が被子植物である、請求項9に記載の方法。
【請求項１２】
前記被子植物がトマト、ヒマワリ、タバコ及びポプラから選択される、請求項11に記載の方法。
【請求項１３】
植物でバイオマスを増加させる方法であって、前記植物に、前記植物でバイオマスを増加させるために有効な量で組成物を適用する工程を含み、前記組成物がエンテロバクター種638の単離培養物を含む、前記方法。
【請求項１４】
前記組成物を前記植物の根、シュート、葉および／または種子に適用する工程を含む、請求項13に記載の方法。
【請求項１５】
前記植物が被子植物である、請求項13に記載の方法。
【請求項１６】
前記被子植物がトマト、ヒマワリ、タバコ及びポプラから選択される、請求項15に記載の方法。
【請求項１７】
植物で果実および／または種子の生産性を増進させる方法であって、前記植物に、前記植物で果実および／または種子の生産性を増進させるために有効な量で組成物を適用する工程を含み、前記組成物がエンテロバクター種638の単離培養物を含む、前記方法。
【請求項１８】
前記組成物を前記植物の根、シュート、葉および／または種子に適用する工程を含む、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
前記植物が被子植物である、請求項17に記載の方法。
【請求項２０】
前記被子植物がトマト、ヒマワリ、タバコ及びポプラから選択される、請求項19に記載の方法。
【請求項２１】
植物で病気耐性を増進させる方法であって、前記植物に、前記植物で病気耐性を増進させるために有効な量で組成物を適用する工程を含み、前記組成物がエンテロバクター種638の単離培養物を含む、前記方法。
【請求項２２】
病気が真菌性、細菌性またはウイルス性である、請求項21に記載の方法。
【請求項２３】
前記組成物を前記植物の根、シュート、葉および／または種子に適用する工程を含む、請求項21に記載の方法。
【請求項２４】
前記植物が被子植物である、請求項21に記載の方法。
【請求項２５】
前記被子植物がトマト、ヒマワリ、タバコ及びポプラから選択される、請求項24に記載の方法。
【請求項２６】
植物で乾燥耐性を増進させる方法であって、前記植物に、前記植物で病気耐性を増進させるために有効な量で組成物を適用する工程を含み、前記組成物がエンテロバクター種638の単離培養物を含む、前記方法。
【請求項２７】
前記組成物を前記植物の根、シュート、葉および／または種子に適用する工程を含む、請求項26に記載の方法。
【請求項２８】
前記植物が被子植物である、請求項26に記載の方法。
【請求項２９】
前記被子植物がトマト、ヒマワリ、タバコ及びポプラから選択される、請求項28に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
【図１】種々の内生細菌を接種したポプラの挿穂の生長インデックスを示す。生長インデックスは、接種して挿穂を砂質土壌に植えてから10週間後に決定した。各条件につき、7植物を用いた。植物は温室で生長させた。非接種植物を参照として用いた。棒線は標準誤差を示す。生長インデックスは、接種および非接種植物を10週間生長させた後で（Mt−M0）／M0として計算した。M0は0週の植物の重量（g）であり、Mtは10週間後の植物の重量（g）である。非接種コントロール植物のバイオマス生産と比較した接種植物のバイオマス生産増加の統計的有意は、Dunnett検定を用いて5％レベル（**）で確認した。
【図２】ポプラDN-34のシュートおよび根の形成におけるエンテロバクター種638の作用を示す。株638の非存在下（コントロール）または存在下（638）の2/1濃度のホアグランド（Hoagland）溶液中で植物を水耕法によりインキュベートした。根およびシュートの発育は1週後（A）および10週後（B）に提示される。
【図３】4ヶ月の生長期間にわたって収穫したトマトの全重量を示す。エンテロバクター種638を接種した植物は、非接種コントロール植物と比較して10％高い収量を示した。
【図４】コントロールとしての非接種ヒマワリと比較して、エンテロバクター種638を接種した植物のヒマワリの接種から開花までの時間の短縮を示す。
【図５】植物抽出物の非存在下（上段のクロマトグラフ）または存在下（下段のクロマトグラフ）で増殖させたエンテロバクター種638の抽出物のクロマトグラフの比較を示す。植物抽出物の存在下におけるアセトニンおよび2,3-ブタンジオールの産生に留意されたい。この結果はシュクロースを含む限定培地で確認した。
【図６】それらの遺伝学的局在性に依存する、特定のCOGクラス由来遺伝子のパーセンテージを示す：染色体またはpENT638-1。COGクラスの説明：D：細胞周期制御、細胞分裂、染色体分配；M：細胞壁／膜／エンベロープのバイオジェネシス；N：細胞運動性；O：翻訳後改変、タンパク質転換、シャペロン；T：シグナルトランスダクションメカニズム；U：細胞内輸送、分泌および小胞内輸送；V：防衛メカニズム；W：細胞外構造物；J：翻訳、リボソーム構造物およびバイオジェネシス；K：転写；L：複製、組換えおよび修復；C：エネルギー生産および変換；E：アミノ酸輸送および代謝；F：ヌクレオチド輸送および代謝；G：炭水化物輸送および代謝；H：補酵素輸送および代謝；I：脂質輸送および代謝；P：無機イオン輸送および代謝；Q：二次代謝物生合成、輸送および異化；R：一般的機能の予想のみ；S：機能不明。
【図７】エンテロバクター種638を接種したときのタバコのバイオマス生産の増加を示す。比較のために、非接種コントロール植物およびシュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida）W619を接種した植物を加えた。タバコについては、エンテロバクター種638を接種した植物はもっとも高い生長増進を示しただけでなく、ヒマワリで観察されたようにより速い開花の開始を示した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図２】
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【図７】
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