【手続補正書】
【提出日】平成24年4月25日(2012.4.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣＸＣＲ４（配列番号２５４）と特異的に結合する１つ又は複数のナノボディ、及び血清タンパク質と特異的に結合可能な１つ又は複数のナノボディを含むポリペプチドであって、
ヒトＣＸＣＲ４と特異的に結合する該ナノボディが、
ａ）生きた状態でかつ細胞表面で該ヒトＣＸＣＲ４を発現する細胞全体を、ラマに免疫付与する工程と、
ｂ）ヒトＣＸＣＲ４との結合に関して選択する工程と、
ｃ）任意で該選択工程において、洗浄剤を用いずにＰＢＳを含むバッファーで穏やかに洗浄する工程とを少なくとも含む方法により生成され、並びに
ａ）該ポリペプチドが、競合結合アッセイでヒトＣＸＣＲ４と結合する場合、高濃度（１００ｎＭ以上）でヒトＣＸＣＬ１２（配列番号２６７）の５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％超若しくは９５％超を置換する、及び／又は
ｂ）該ポリペプチドが、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下若しくは０．１ｎＭ以下の濃度でヒトＣＸＣＲ４に対するヒトＣＸＣＬ１２の化学誘因物質の効果を完全にアンタゴナイズする、
並びに該ポリペプチドがナノボディを２つ以上含む場合、該ポリペプチドが任意でペプチドリンカーをさらに１つ又は複数含む、ポリペプチド。
【請求項２】
ヒトＣＸＣＲ４と特異的に結合するナノボディを２つ以上含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
ヒトＣＸＣＲ４と特異的に結合する２つのナノボディを含む、請求項１又は２に記載のポリペプチド。
【請求項４】
少なくとも１つのナノボディが４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから本質的に成り、
ＣＤＲ１が、
ａ）配列番号１４２、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１４２、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１４２、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ又は１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、かつ
ＣＤＲ２が、
ｄ）配列番号１７４、配列番号１７５に示されるアミノ酸配列；
ｅ）配列番号１７４、配列番号１７５に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）配列番号１７４、配列番号１７５に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ又は１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、かつ
ＣＤＲ３が、
ｇ）配列番号２０６、配列番号２０７に示されるアミノ酸配列；
ｈ）配列番号２０６、配列番号２０７に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）配列番号２０６、配列番号２０７に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ又は１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項５】
ヒトＣＸＣＲ４と特異的に結合する該２つのナノボディが４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから本質的に成り、
ＣＤＲ１が、
ａ）配列番号１４２、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１４２、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１４２、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ又は１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、かつ
ＣＤＲ２が、
ｄ）配列番号１７４、配列番号１７５に示されるアミノ酸配列；
ｅ）配列番号１７４、配列番号１７５に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）配列番号１７４、配列番号１７５に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ又は１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、かつ
ＣＤＲ３が、
ｇ）配列番号２０６、配列番号２０７に示されるアミノ酸配列；
ｈ）配列番号２０６、配列番号２０７に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）配列番号２０６、配列番号２０７に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ又は１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項６】
ヒトＣＸＣＲ４と特異的に結合するナノボディの１つが４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから本質的に成り、
ＣＤＲ１が、
ａ）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列の少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列の、３つ、２つ又は１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、かつ
ＣＤＲ２が、
ｄ）配列番号１７４に示されるアミノ酸配列；
ｅ）配列番号１７４に示されるアミノ酸配列の少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）配列番号１７４に示されるアミノ酸配列の、３つ、２つ又は１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、かつ
ＣＤＲ３が、
ｇ）配列番号２０６に示されるアミノ酸配列；
ｈ）配列番号２０６に示されるアミノ酸配列の少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）配列番号２０６に示されるアミノ酸配列の、３つ、２つ又は１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、
ヒトＣＸＣＲ４と特異的に結合する別のナノボディが４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから本質的に成り、ＣＤＲ１が、
ｊ）配列番号１４３に示されるアミノ酸配列；
ｋ）配列番号１４３に示されるアミノ酸配列の少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｌ）配列番号１４３に示されるアミノ酸配列の、３つ、２つ又は１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、かつ
ＣＤＲ２が、
ｍ）配列番号１７５に示されるアミノ酸配列；
ｎ）配列番号１７５に示されるアミノ酸配列の少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｏ）配列番号１７５に示されるアミノ酸配列の、３つ、２つ又は１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、かつ
ＣＤＲ３が、
ｐ）配列番号２０７に示されるアミノ酸配列；
ｑ）配列番号２０７に示されるアミノ酸配列の少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｒ）配列番号２０７に示されるアミノ酸配列の、３つ、２つ又は１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項７】
ナノボディが、配列番号２３８、配列番号２３９に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するナノボディから成る群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項８】
配列番号２６１〜配列番号２６４、又は配列番号２６３、配列番号２６４に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドから成る群から選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから本質的に成るナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）配列番号１４２、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１４２、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１４２、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ又は１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、かつ
ＣＤＲ２が、
ｄ）配列番号１７４、配列番号１７５に示されるアミノ酸配列；
ｅ）配列番号１７４、配列番号１７５に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）配列番号１７４、配列番号１７５に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ又は１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、かつ
ＣＤＲ３が、
ｇ）配列番号２０６、配列番号２０７に示されるアミノ酸配列；
ｈ）配列番号２０６、配列番号２０７に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）配列番号２０６、配列番号２０７に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ又は１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される、ナノボディ。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のポリペプチド又はナノボディをコードする、核酸又はヌクレオチド。
【請求項１１】
好適な状況下で請求項１〜９のいずれか一項に記載のポリペプチド又はナノボディを発現することが可能である宿主細胞。
【請求項１２】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のポリペプチド又はナノボディを含む薬学的組成物。
【請求項１３】
少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、希釈剤又は賦形剤、及び／又はアジュバントをさらに含み、任意で１つ又は複数のさらなる薬学的に活性のあるポリペプチド及び／又は化合物を含む、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
ａ）アミノ酸配列をコードする核酸のセット、コレクション又はライブラリを準備する工程と、
ｂ）ヒトＣＸＣＲ４と結合することができ、及び／又はヒトＣＸＣＲ４に対する親和性を有し、並びに、ヒトＣＸＣＲ４が交差遮断されるか又は請求項１〜９のいずれか一項に記載のポリペプチド若しくはナノボディを交差遮断する、アミノ酸配列をコードする核酸に関して、前記核酸のセット、コレクション又はライブラリをスクリーニングする工程と、
ｃ）前記核酸を単離し、その後前記核酸がコードするアミノ酸配列を発現する工程とを少なくとも含む、ヒトＣＸＣＲ４（配列番号２５４）に指向性を有するポリペプチドをスクリーニングする方法。
【請求項１５】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の少なくとも１つのポリペプチド又はナノボディを有効成分として含む、癌又はＡＩＤＳを治療するための薬剤。