【手続補正書】
【提出日】平成25年1月16日(2013.1.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(i) 配列番号：1;
(ii) 配列番号：1 および 2; または 
(iii) 配列番号：1, 2, および3; 
並びに非Stx2タンパク質骨格を含む、精製ポリペプチドであって、該配列番号：1、配列番号：1 および 2、または配列番号：1, 2, および3が該非Stx2タンパク質骨格に挿入されており、該ポリペプチドがStx2の抗原性を持つ、前記精製ポリペプチド。
【請求項２】
前記骨格が、Stx1と実質的に同一のタンパク質、またはその断片を含む、請求項1の精製ポリペプチド。
【請求項３】
配列番号：8に示されるアミノ酸配列と少なくとも92%の配列同一性を持つアミノ酸配列を含むか、または配列番号：8のアミノ酸64〜122と少なくとも80%の配列同一性を持つ断片を含む、請求項1または2の精製ポリペプチド。
【請求項４】
前記ポリペプチドがトキソイド化されている、請求項1〜3のいずれか1つの精製ポリペプチド。
【請求項５】
請求項1〜4のポリペプチドのいずれか1つをコードしている、単離された核酸分子。
【請求項６】
請求項5の核酸分子を含む、ポリペプチドを発現することができるベクター。
【請求項７】
請求項6のベクターを含む宿主細胞。
【請求項８】
志賀毒素タイプ2（Stx2）タンパク質の11E10 エピトープに特異的に結合する抗Stx2抗体の産生方法における、請求項1〜4のいずれか1つのポリペプチドの使用であって、該方法が、
- 請求項1〜4のいずれか1つのポリペプチドで哺乳動物を免疫する工程であって、任意でアジュバントを使用することをさらに含む、前記工程、
- 該哺乳動物の組織から、または該組織を使用して作られたハイブリドーマから、Stx2タンパク質の11E10エピトープに特異的に結合する前記抗Stx2抗体を精製する工程、および任意で
- インビトロ中和分析でStx2およびStx1に対する前記抗体をスクリーニングする工程であって、Stx2の細胞毒性作用の少なくとも50%を中和する抗体が、Stx2タンパク質の11E10エピトープに特異的に結合する抗Stx2抗体である、前記工程
を含む、前記使用。
【請求項９】
請求項1〜4のポリペプチドのいずれか1つを含む志賀毒素タイプ2（Stx2）タンパク質の11E10エピトープに特異的に結合する抗Stx2抗体またはその断片であって、該抗体が11E10抗体（ATCC 1907）、キメラ11E10抗体、またはヒト化11E10抗体の該Stx2タンパク質への結合を阻害するか、あるいは、該抗体が5C12抗体、キメラ5C12抗体、またはヒト化5C12抗体の前記Stx2タンパク質への結合を阻害する、前記抗体、またはその断片。
【請求項１０】
前記11E10エピトープが立体配座エピトープである、請求項9の抗体またはその断片。
【請求項１１】
前記抗体がStx2と11E10抗体の間の結合を阻害し、該11E10抗体が0.50 nM以下のKdを持つか、あるいは、前記抗体がStx2の酵素活性をブロックするかまたはStx2の細胞内分布を変化させる、請求項9の抗体またはその断片。
【請求項１２】
請求項9〜11のいずれか1つの抗体を産生するハイブリドーマ細胞株。
【請求項１３】
組織、細胞、細胞抽出物、体液、または生検からのものである生体試料中のStx2のインビトロでの検出方法であって：
- 前記生体試料を請求項9〜11のいずれか1つの抗体、またはその断片と、該抗体とStx2の間に複合体が形成できる条件下で接触させる工程、および
- 該複合体を検出する工程、
を含む、前記方法。
【請求項１４】
被験者の志賀毒素関連疾患の診断方法であって：
- 該被験者から生体試料を取得する工程、
- 該生体試料を請求項9〜11のいずれか1つの抗体と、該抗体とStx2の間に複合体が形成できる条件下で接触させる工程、および
- 該複合体を検出する工程、
を含み、
該試料中のStx2の存在は、被験者が志賀毒素関連疾患であると診断する、前記方法。
【請求項１５】
医薬として使用するための、請求項1〜4のいずれか1つのポリペプチドまたは請求項9〜11のいずれか1つの抗体。
【請求項１６】
被験者の志賀毒素関連疾患を治療または予防するための、請求項1〜4のいずれか1つのポリペプチドまたは請求項9〜11のいずれか1つの抗体。
【請求項１７】
前記志賀毒素関連疾患が溶血性尿毒症症候群、または大腸菌もしくはシゲラ・ディゼンテリエ感染に関連する疾患である、請求項16のポリペプチドまたは抗体。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
「志賀毒素関連疾患」とは、志賀毒素を発現する病原体から生じる任意の疾患を意味する。「志賀毒素関連疾患」という用語は、溶血性尿毒症症候群、細菌性赤痢、および志賀毒素産生大腸菌およびシゲラ・ディゼンテリエ感染から生じる疾患を含む。
[本発明1001]
薬剤的に許容可能な担体と、少なくとも1つの精製ポリペプチドとを含む、Stx2に対する免疫反応を刺激するための組成物であって、該ポリペプチドが：
(i) 配列番号：1;
(ii) 配列番号：1 および 2; または
(iii) 配列番号：1, 2, および3; 
並びに非Stx2タンパク質骨格を含み、該配列番号：1、配列番号：1 および 2、または配列番号：1, 2, および3が該非Stx2タンパク質骨格に挿入されており、該ポリペプチドがStx2の抗原性を持つ、前記組成物。
[本発明1002]
前記骨格がStx1と実質的に同一のタンパク質、またはその断片を含む、本発明1001の組成物。
[本発明1003]
前記ポリペプチドが配列番号：1, 2, および3 並びに非Stx2タンパク質骨格を含む、本発明1001の組成物。
[本発明1004]
前記ポリペプチドが配列番号：1および2 並びに非Stx2タンパク質骨格を含む、本発明1001の組成物。
[本発明1005]
前記組成物がStx1に対する免疫反応を刺激しない、本発明1001の組成物。
[本発明1006]
前記ポリペプチドが配列番号：8で示されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含む、本発明1001の組成物。
[本発明1007]前記ポリペプチドが配列番号：8で示されるアミノ酸配列を含む、本発明1001の組成物。
[本発明1008]
薬剤的に許容可能な担体と、配列番号：8に示されるアミノ酸配列と少なくとも92%の同一性を持つアミノ酸配列を含む少なくとも1つの精製ポリペプチドとを含む、Stx2に対する免疫反応を刺激するための組成物であって、該ポリペプチドがStx2の抗原性を持つ、前記組成物。
[本発明1009]
前記組成物がさらにアジュバントを含む、本発明1001または1008の組成物。
[本発明1010]
(i) 配列番号：1;
(ii) 配列番号：1 および 2; または 
(iii) 配列番号：1, 2, および3; 
並びに非Stx2タンパク質骨格を含む、精製ポリペプチドであって、該配列番号：1、配列番号：1 および 2、または配列番号：1, 2, および3が該非Stx2タンパク質骨格に挿入されており、該ポリペプチドがStx2の抗原性を持つ、前記精製ポリペプチド。
[本発明1011]
前記骨格が、Stx1と実質的に同一のタンパク質、またはその断片を含む、本発明1010の精製ポリペプチド。
[本発明1012]
前記ポリペプチドが配列番号：1, 2, および3 並びに非Stx2タンパク質骨格を含む、本発明1010の精製ポリペプチド。
[本発明1013]
前記ポリペプチドが配列番号：1 および2 並びに非Stx2タンパク質骨格を含む、本発明1010の精製ポリペプチド。
[本発明1014]
配列番号：8に示されるアミノ酸配列と少なくとも92%の配列同一性を持つアミノ酸配列を含む精製ポリペプチドであって、該ポリペプチドが配列番号：1, 2, および3に示されるアミノ酸配列の少なくとも1つを含み、該ポリペプチドがStx2の抗原性を持つ、前記精製ポリペプチド。
[本発明1015]
前記ポリペプチドが配列番号：8に示されるアミノ酸配列と93%の配列同一性を持つアミノ酸配列を含む、本発明1014の精製ポリペプチド。
[本発明1016]
前記ポリペプチドが配列番号：8に示されるアミノ酸配列と95%の配列同一性を持つアミノ酸配列を含む、本発明1015の精製ポリペプチド。
[本発明1017]
前記ポリペプチドが配列番号：8に示されるアミノ酸配列を含む、本発明1016の精製ポリペプチド。
[本発明1018]
前記ポリペプチドが配列番号：8に示されるアミノ酸配列から成る、本発明1017の精製ポリペプチド。
[本発明1019]
前記ポリペプチドが、配列番号：8に示されるアミノ酸配列の断片であり、前記ポリペプチドが配列番号：8のアミノ酸64〜122と少なくとも80%の配列同一性を持つ断片を含み、該断片が配列番号：1を含む、精製ポリペプチド。
[本発明1020]
前記断片が配列番号：1 および2 を含む、本発明1019の精製ポリペプチド。
[本発明1021]
前記断片が配列番号：1、2 および3 を含む、本発明1020の精製ポリペプチド。 
[本発明1022]
前記ポリペプチドがトキソイド化されている、本発明1010〜1021のいずれか1つの精製ポリペプチド。
[本発明1023]
本発明1010〜1022のポリペプチドのいずれか1つをコードしている、単離された核酸分子。
[本発明1024]
前記核酸分子が発現制御配列に動作可能なように結合されている、本発明1023の単離された核酸分子。
[本発明1025]
本発明1023の核酸分子を含む、ポリペプチドを発現することができるベクター。
[本発明1026]
本発明1025のベクターを含む宿主細胞。
[本発明1027]
本発明1010〜1022のポリペプチドのいずれか1つを含むポリペプチドの製造方法であって：
(a) 本発明1023の核酸を宿主細胞に導入する工程、および
(b) 宿主細胞からの該ポリペプチドを精製する工程、
を含む、前記方法。
[本発明1028]
志賀毒素タイプ2（Stx2）タンパク質の11E10 エピトープに特異的に結合する抗Stx2抗体の産生方法であって、
a) 本発明1010〜1022のポリペプチドのいずれか1つで哺乳動物を免疫する工程、および
b) 該哺乳動物の組織から、または該組織を使用して作られたハイブリドーマから、Stx2タンパク質の11E10エピトープに特異的に結合する前記抗Stx2抗体を精製する工程、
を含む、前記方法。
[本発明1029]
Stx2タンパク質の11E10エピトープに特異的に結合する前記抗Stx2抗体がStx1に結合しない、本発明1028の方法。
[本発明1030]
c) インビトロ中和分析でStx2およびStx1に対する前記抗体をスクリーニングする工程であって、Stx2の細胞毒性作用の少なくとも50%を中和する抗体が、Stx2タンパク質の11E10エピトープに特異的に結合する抗Stx2抗体である、前記工程
をさらに含む、本発明1028の方法。
[本発明1031]
工程（a）がアジュバントを使用することをさらに含む、本発明1028の方法。
[本発明1032]
前記抗体がポリクローナル抗体またはその断片である、本発明1028の方法。
[本発明1033]
前記抗体がモノクローナル抗体またはその断片である、本発明1028の方法。
[本発明1034]
前記抗体が修飾抗体である、本発明1028の方法。
[本発明1035]
前記抗体がキメラまたはヒト化抗体である、本発明1028の方法。
[本発明1036]
本発明1001〜1009の組成物のいずれか1つを投与することを含む、被験者にStx2への免疫反応を誘導する方法。
[本発明1037]
本発明1001〜1009の組成物のいずれか1つを投与することを含む、被験者の志賀毒素関連疾患を治療または予防する方法。
[本発明1038]
前記志賀毒素関連疾患が溶血性尿毒症症候群である、本発明1037の方法。
[本発明1039]
前記志賀毒素関連疾患が大腸菌またはシゲラ・ディゼンテリエ感染に関連している、本発明1037の方法。
[本発明1040]
本発明1010〜1022のポリペプチドのいずれか1つを含む志賀毒素タイプ2（Stx2）タンパク質の11E10エピトープに特異的に結合する抗Stx2抗体またはその断片であって、該抗体が11E10抗体（ATCC 1907）、キメラ11E10抗体、またはヒト化11E10抗体の該Stx2タンパク質への結合を阻害する、前記抗体、またはその断片。
[本発明1041]
志賀毒素タイプ2（Stx2）タンパク質の11E10エピトープに特異的に結合する抗Stx2抗体、またはその断片であって、該エピトープが本発明1010〜1022のポリペプチドのいずれか1つを含み、該抗体が5C12抗体、キメラ5C12抗体、またはヒト化5C12抗体の前記Stx2タンパク質への結合を阻害する、前記抗体、またはその断片。
[本発明1042]
前記抗体が、配列番号：1, 2, および3に示される配列を含む前記ポリペプチド中のエピトープに特異的に結合する、本発明1040または1041の抗体またはその断片。
[本発明1043]
前記11E10エピトープが立体配座エピトープである、本発明1040または1041の抗体またはその断片。
[本発明1044]
前記抗体がモノクローナル抗体である、本発明1040または1041の抗体、またはその断片。
[本発明1045]
前記抗体がキメラ、ヒト化、または完全ヒト抗体である、本発明1040または1041の抗体、またはその断片。
[本発明1046]
前記抗体がポリクローナル抗体である、本発明1040または1041の抗体、またはその断片。
[本発明1047]
前記抗体がStx2と11E10抗体の間の結合を阻害し、該11E10抗体が0.50 nM以下のKdを持つ、本発明1040の抗体またはその断片。
[本発明1048]
前記抗体がStx2の酵素活性をブロックするかまたはStx2の細胞内分布を変化させる、本発明1040の抗体。
[本発明1049]
前記抗体がIgG、IgM、IgE、IgD、またはIgAである、本発明1040または1041の抗体、またはその断片。
[本発明1050]
前記抗体またはその断片がFab またはFv断片である、本発明1040または1041の抗体、またはその断片。
[本発明1051]
本発明1040〜1050の抗体のいずれか1つおよび薬剤的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
[本発明1052]
本発明1040〜1050の抗体のいずれか1つを産生するハイブリドーマ細胞株。
[本発明1053]
生体試料中のStx2の検出方法であって：
(a) 前記生体試料を本発明1040〜1050の抗体、またはその断片と、該抗体とStx2の間に複合体が形成できる条件下で接触させる工程、および
(b) 該複合体を検出する工程、
を含む、前記方法。
[本発明1054]
前記生体試料が組織、細胞、細胞抽出物、体液、または生検からのものである、本発明1053の方法。
[本発明1055]
前記複合体がELISA、RIA、ウェスタンブロット、免疫沈降、またはフローサイトメトリーを使用して検出される、本発明1053の方法。
[本発明1056]
被験者の志賀毒素関連疾患の診断方法であって：
(a) 該被験者から生体試料を取得する工程、
(b) 該生体試料を本発明1040〜1050の抗体のいずれか1つと、該抗体とStx2の間に複合体が形成できる条件下で接触させる工程、および
(c) 工程(b)の該複合体を検出する工程、
を含み、
該試料中のStx2の存在は、被験者が志賀毒素関連疾患であると診断する、前記方法。
[本発明1057]
前記志賀毒素関連疾患が溶血性尿毒症症候群である、本発明1056の方法。
[本発明1058]
前記志賀毒素関連疾患が大腸菌またはシゲラ・ディゼンテリエ感染である、本発明1056の方法。
[本発明1059]
志賀毒素関連疾患を検出するための免疫検査キットであって、本発明1040〜1050の抗体のいずれか1つと、該抗体を検出する手段とを含む、前記キット。
[本発明1060]
被験者の志賀毒素関連疾患を治療または予防する方法であって、本発明1040〜1050の抗体のいずれか1つの薬剤的有効量を該被験者に投与することを含む、前記方法。
[本発明1061]
前記志賀毒素関連疾患が溶血性尿毒症症候群である、本発明1060の方法。
[本発明1062]
前記志賀毒素関連疾患が大腸菌またはシゲラ・ディゼンテリエ感染に関連している、本発明1060の方法。