(57)【要約】【課題】生体温度よりも低温の所定温度（Ｔ）よりも低い温度では親水性であり、該所定温度よりも高い温度では疎水性となる温度応答性を有した、ヒアルロン酸又はその誘導体含有ＣＤ４４認識性コーティング剤を提供する。【解決手段】ヒアルロン酸又はその誘導体を担持したポリマー材料よりなるＣＤ４４認識性コーティング剤において、該ポリマー材料は、生体温度よりも低温の所定温度（Ｔ）よりも低い温度では親水性であり、該所定温度（Ｔ）よりも高い温度では疎水性であることを特徴とするＣＤ４４認識性コーティング剤。該ポリマー材料は、生体温度よりも低温の所定温度（Ｔ）よりも低い温度では親水性であり、該所定温度（Ｔ）よりも高い温度では疎水性である。このポリマー材料は、好ましくはＮ，Ｎ−ジアルキル−ジチオカルバミルメチル分子団を同一分子内に３個以上有する化合物をイニファターとし、これに３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミドと、Ｎ−イソプロピルアクリルアミドをブロック重合させたものである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒアルロン酸又はその誘導体を担持したポリマー材料よりなるＣＤ４４認識性コーティング剤において、
該ポリマー材料は、生体温度よりも低温の所定温度（Ｔ）よりも低い温度では親水性であり、該所定温度（Ｔ）よりも高い温度では疎水性であることを特徴とするＣＤ４４認識性コーティング剤。
【請求項２】
請求項１において、前記ポリマー材料は、カチオン性モノマーとＮ−イソプロピルアクリルアミド又はその誘導体とのブロック共重合鎖を有することを特徴とするＣＤ４４認識性コーティング剤。
【請求項３】
請求項２において、カチオン性ポリマーブロックの分子量が２，０００〜５００，０００であることを特徴とするＣＤ４４認識性コーティング剤。
【請求項４】
請求項３において、該ブロック共重合体の分子量が３，０００〜６００，０００であることを特徴とするＣＤ４４認識性コーティング剤。
【請求項５】
請求項１ないし４のいずれか１項において、前記所定温度（Ｔ）は、２５〜３５℃の間の温度であることを特徴とするＣＤ４４認識性コーティング剤。
【請求項６】
請求項１ないし５のいずれか１項において、前記カチオン性ホモポリマーは、Ｎ，Ｎ−ジアルキル−ジチオカルバミルメチル分子団を同一分子内に３個以上有する化合物をイニファターとし、これにビニル系モノマーを光照射リビング重合させた分岐型重合体であることを特徴とするＣＤ４４認識性コーティング剤。
【請求項７】
請求項６において、Ｎ，Ｎ−ジアルキル−ジチオカルバミルメチル分子団を同一分子内に３個以上有する化合物は、ベンゼン環を核とし、この核に分岐鎖として３個以上の該Ｎ，Ｎ−ジアルキル−ジチオカルバミルメチル分子団が結合していることを特徴とするＣＤ４４認識性コーティング剤。
【請求項８】
請求項６又は７において、ビニル系モノマーが３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミドであることを特徴とするＣＤ４４認識性コーティング剤。
【請求項９】
請求項１ないし８のいずれか１項のＣＤ４４認識性コーティング剤がコーティングされた多孔体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＤ４４陽性細胞を認識する特性を有したＣＤ４４認識性コーティング剤と、このＣＤ４４認識性コーティング剤がコーティングされた多孔体とに関する。
【背景技術】
【０００２】
癌細胞が多く発現しているＣＤ４４のリガンドとしてモノクローナル抗体を利用する技術は公知である。モノクローナル抗体は、選択特異性が極めて高く、表面が異種タンパクなどの非特異吸着で被覆されなければＣＤ４４のみ認識させることが可能である。しかしながら、モノクローナル抗体は非常に高価であり、免疫染色のような微量で最大限の効果を得ることができる実験系であれば実用的であるが、細胞吸着除去や細胞分離カラムのように量が必要な場合はコスト面で不利となる。
【０００３】
安価でＣＤ４４を認識するリガンドとしてヒアルロン酸が公知である（例えば下記特許文献１の従来の技術の欄）。ヒアルロン酸は、分子量約５万〜８００万程度のβ（１−３)グルクロン酸とβ（１−４)グロコサミンからなるムコ多糖であり、分子内にカルボキシル基を有する高分子である。
【０００４】
細胞分離カラムは、そこに細胞浮遊液を通液させることでカラムへ固定したリガンドへの親和性により細胞を分離することができるものであり、基材に多孔体やビーズなどを使用し、リガンドを水不溶性に固定したものである。
【０００５】
ヒアルロン酸をリガンドとして多孔材料へ水不溶性に固定する場合、多孔材料の表面にアミノ基など化学的に活性な官能基を導入し、ヒアルロン酸と化学架橋剤を用いて固定する方法が考えられるが、表面処理に使用した有機溶媒は多孔体内部の微細孔へ浸潤し除去が困難で残留してしまう問題がある。多孔体を形成する高分子の分子間に存在する溶媒分子も除去が困難である。化学架橋剤の場合は溶媒と比較して高活性な化合物であるため、残留の問題はより大きい。さらには有機溶剤に犯される多孔体基材もあり、多孔体基材の種類も規制される。
【特許文献１】特開平９−２５２９９号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、上記従来の問題点を解消し、生体温度よりも低温の所定温度（Ｔ）よりも低い温度では水溶性（親水性）であり、該所定温度よりも高い温度では非水溶性（疎水性）となる温度応答性を有した、ヒアルロン酸又はその誘導体含有ＣＤ４４認識性コーティング剤及びこのＣＤ４４認識性コーティング剤がコーティングされた多孔体を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明のＣＤ４４認識性コーティング剤は、ヒアルロン酸又はその誘導体を担持したポリマー材料よりなるＣＤ４４認識性コーティング剤において、該ポリマー材料は、生体温度よりも低温の所定温度（Ｔ）よりも低い温度では親水性であり、該所定温度（Ｔ）よりも高い温度では疎水性であることを特徴とするものである。
【０００８】
この所定温度（Ｔ）は、２５〜３５℃の間の温度であることが好ましい。
【０００９】
前記ポリマー材料は、カチオン性モノマーとＮ−イソプロピルアクリルアミド又はその誘導体とのブロック共重合鎖を有することが好ましい。
【００１０】
前記ポリマー材料は、Ｎ，Ｎ−ジアルキル−ジチオカルバミルメチル分子団を同一分子内に３個以上有する化合物をイニファターとし、これにビニル系モノマーとＮ−イソプロピルアクリルアミド又はその誘導体とを光照射リビング重合させた分岐型重合体であることが好ましい。
【００１１】
このＮ，Ｎ−ジアルキル−ジチオカルバミルメチル分子団を同一分子内に３個以上有する化合物としては、ベンゼン環を核とし、この核に分岐鎖として３個以上の該Ｎ，Ｎ−ジアルキル−ジチオカルバミルメチル分子団が結合しているものが好ましい。このイニファターに対しては、カチオン性モノマーとＮ−イソプロピルアクリルアミド又はその誘導体のいずれを先に重合させてもよい。
【００１２】
本発明の多孔体は、かかる本発明のＣＤ４４認識性コーティング剤がコーティングされたものである。
【発明の効果】
【００１３】
本発明のＣＤ４４認識性コーティング剤は、上記所定温度よりも低い温度では親水性であり、水溶性である。従って、このＣＤ４４認識性コーティング剤は、これを水に溶解させて生体あるいは多孔体に塗布し、その後、所定温度よりも高い温度とすることにより、疎水性（水不溶性）となり、生体あるいは多孔体に付着する。付着したＣＤ４４認識性コーティング剤は、担持したヒアルロン酸又はその誘導体によってＣＤ４４認識性作用が発現される。従って、本発明のコーティング剤によれば、有機溶媒や化学架橋剤などを使用することなく水溶液から材料表面へヒアルロン酸を固定してＣＤ４４陽性細胞への選択的親和性を付与し、水不溶性に固定することができる。
【００１４】
このＣＤ４４認識性コーティング剤は、水溶液として安定して長期保存することができ、また、ハイブリッド材料あるいは生体に対しても適用できる。
【００１５】
このＣＤ４４認識性コーティング剤を構成するポリマー材料がカチオン性ポリマーブロックを有する場合、ヒアルロン酸又はその誘導体は、ｐＫａの高いカルボキシル基を有するためマイナスチャージを有しており、このカチオン性ポリマーブロックに対しイオン錯体を形成する如くして担持される。
【００１６】
このポリマー材料がカチオン性モノマーとＮ−イソプロピルアクリルアミド又はその誘導体とのブロック共重合体よりなる分岐鎖を複数個有する場合、ＣＤ４４認識性コーティング剤の多孔体等に対する付着力が高いものとなる。すなわち、複数個の該分岐鎖を有するＣＤ４４認識性コーティング剤では、多孔体等の表面に疎水結合している１分子中の複数の分岐鎖のすべてが同時に剥離しなければ、当該分子（ポリマー）を材料表面から剥離させることができず、１本が剥離しても残りの分岐鎖が結合していれば、一度剥離した分岐鎖も材料表面に再結合することができる。これに対して、１分子中に１本のポリマー鎖のみを有する直線型のブロックポリマーでは、この１本のポリマー鎖が剥離すればその分子はそのまま剥離してしまうため、付着力は弱いものと考えられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明のＣＤ４４認識性コーティング剤は、ヒアルロン酸又はその誘導体を担持したポリマー材料よりなり、このポリマー材料は、好ましくは、カチオン性ポリマーブロックとＮ−イソプロピルアクリルアミド又はその誘導体のブロックとを有したブロック共重合鎖を有している。
【００１８】
上記のポリマー材料としては、Ｎ，Ｎ−ジアルキル−ジチオカルバミルメチル分子団を同一分子内に３個以上有する化合物をイニファターとし、これにカチオン性モノマーとＮ−イソプロピルアクリルアミド又はその誘導体とを光照射リビング重合させた分岐型重合体が好適である。
【００１９】
なお、本明細書において、イニファターとは、光照射によりラジカルを発生させる重合開始剤、連鎖移動剤としての機能と共に、成長末端と結合して成長を停止する機能、さらに光照射が停止すると重合を停止させる重合開始・重合停止剤として機能する分子のことである。
【００２０】
Ｎ，Ｎ−ジアルキル−ジチオカルバミルメチル分子団を同一分子内に３個以上有する化合物としては、ベンゼン環に該Ｎ，Ｎ−ジアルキル−ジチオカルバミルメチル分子団が３個以上分岐鎖として結合しているものが好適であり、具体的には次が例示される。即ち、３分岐鎖としては、１，３，５−トリ（ブロモメチル）ベンゼンとＮ，Ｎ−ジチオカルバミル酸ナトリウム（ナトリウムＮ，Ｎ−ジチオカルバメート）とをエタノール中で付加反応させて得られる１，３，５−トリ（Ｎ，Ｎ−ジチオカルバミルメチル）ベンゼンであり、４分岐鎖としては、１，２，４，５−テトラキス（ブロモメチル）ベンゼンとＮ，Ｎ−ジチオカルバミル酸ナトリウム（ナトリウムＮ，Ｎ−ジチオカルバメート）とをエタノール中で付加反応させて得られる１，２，４，５−テトラキス（Ｎ，Ｎ−ジチオカルバミルメチル）ベンゼンであり、６分岐鎖としては、ヘキサキス（ブロモメチル）ベンゼンとナトリウムＮ，Ｎ−ジチオカルバメートとをエタノール中で付加反応させて得られるヘキサキス（Ｎ，Ｎ−ジチオカルバミルメチル）ベンゼンである。
【００２１】
上記のイニファターは、アルコール等の極性溶媒に対しては殆ど不溶であるが、非極性溶媒には易溶である。この非極性溶媒としては炭化水素、ハロゲン化アルキル又はハロゲン化アルキレンが好適であり、特に、ベンゼン、トルエン、クロロホルム又は塩化メチレン特にトルエン、クロロホルムが好適である。
【００２２】
このイニファターに重合させるモノマーは、カチオン性モノマーとＮ−イソプロピルアクリルアミドであり、いずれを先に重合させてもよい。なお、（メタ）アクリレートはアクリレート及び／又はメタクリレートを表す。
【００２３】
カチオン性モノマーとしては、ビニル系モノマー特に３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミドが好適である。
【００２４】
イニファターと上記モノマーとを反応させるには、イニファター及び一方のモノマーを含んでなる原料溶液を調製し、これに光照射することによって、イニファターに対し該一方のモノマーが結合した第１工程反応生成物を生成させる。この際の溶媒としては、上記イニファターの溶媒を用いればよい。次いで、この第１工程反応生成物の各分岐鎖に他方のモノマーをブロック共重合させる。
【００２５】
カチオン性モノマーの該原料溶液中の濃度は例えば０．１Ｍ以上、例えば０．１〜２．５Ｍが好適である。Ｎ−イソプロピルアクリルアミド又はその誘導体の濃度は０．１Ｍ以上、例えば０．１〜２．５Ｍ程度が好適である。
【００２６】
イニファターの濃度は０．１〜１００ｍＭ程度が好適である。
【００２７】
照射する光の波長は２００〜４００ｎｍが好適である。光の照射時間は照射強度にも依存するが、１〜６０分程度が好適であり、１μＷ／ｃｍ２〜１０ｍＷ／ｃｍ２程度の低い照射強度で１分〜３０分程度が特に好適である。
【００２８】
なお、一方のモノマーを用いた光照射工程（第１の光照射工程）で生じた反応生成物を好ましくは精製した後、好ましくはアルコールに溶解させ、他方のモノマーを用いた第２の光照射工程を行う。このアルコールとしてはメタノール又はエタノール、特にメタノールが好適である。アルコール溶液中の第１工程反応生成物濃度としては、０．０１ｍＭ〜１００ｍＭ程度が好適である。
【００２９】
カチオン性モノマーの重合度は特に１０〜６０００が好適であり、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド又はその誘導体のポリマーブロックの数平均分子量は２，０００〜５００，０００、特に特に３,０００〜１５０,０００程度が好適である。
【００３０】
この光照射により、反応液中に目的とする分岐型重合体が生成するので、必要に応じ精製して分岐型重合体よりなるＣＤ４４認識性コーティング剤が得られる。
【００３１】
この分岐型重合体の分子量は分岐鎖の鎖数によるが、３，０００〜６００，０００、特に３，０００〜１５０，０００、とりわけ３，０００〜１００，０００程度が好ましい。
【００３２】
このようにして生成した分岐型重合体は、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド又はその誘導体のポリマーブロックを有する。このＮ−イソプロピルアクリルアミド又はその誘導体のポリマー鎖は、３０℃よりも低温度では親水性、３０℃よりも高温では疎水性となる温度依存性を有し、これによりＣＤ４４認識性コーティング剤は、約３０℃よりも高い温度で水不溶性であり、約３０℃よりも低い温度で水溶性であるものとなる。
【００３３】
従って、約３０℃よりも低い温度例えば１０〜２５℃程度のＣＤ４４認識性コーティング剤の水溶液（濃度は好ましくは、３〜１５０ｍｇ／ｍＬ程度）を生体あるいは多孔体に塗布などにより付着させ、３０℃よりも高い温度に昇温させ、必要に応じ乾燥させることにより、水不溶性の、カチオン性ポリマーブロックを有したＣＤ４４認識性コーティングが形成される。生体の場合、この際の昇温は生体の体温によって行われる。形成されたＣＤ４４認識性コーティングは、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド又はその誘導体のポリマーブロックを含んだ複数の分岐鎖を有しているため、生体あるいは多孔体に対する付着力が高く、剥れにくい。
【００３４】
また、このようにして生成した分岐型重合体は、カチオン性ポリマーブロックを有する。このカチオン性ポリマーブロックに対しヒアルロン酸又はその誘導体がイオン錯体を形成する如くして担持される。このポリマー材料にヒアルロン酸又はその誘導体を担持させるには、ヒアルロン酸又はその誘導体の水溶液をポリマー材料の低温水溶液に添加し、混合するのが好ましい。
【００３５】
この多孔体としては、
ポリスチレンビーズやキトサンビーズを充填したカラム、
ポリオレフィンスポンジ、ポリウレタンスポンジなどの多孔構造体、
ｅ−ＰＴＦＥ膜やポリプロピレン膜などの多孔性フィルム、
ポリサルホンや再生セルロースなどの多孔性中空糸、
不織布や織布の積層体
などが例示される。
【００３６】
多孔体の表面にＣＤ４４認識性コーティング剤を付着させるには、このコーティング剤の０．０１〜１０重量％水溶液に多孔体を接触させ、前記所定温度以上の温度で乾燥させればよい。
【００３７】
この多孔体は、例えば次のようにして用いることができる。即ち、平均孔径２００μｍのポリウレタンスポンジへＣＤ４４認識性コーティング剤を付着させ、ここへ細胞浮遊液を通液させて通過時間に遅延傾向を示す細胞を回収することによりＣＤ４４陽性細胞を濃縮する。また、ＣＤ４４陽性細胞の有無を判定する細胞診や、分化誘導の過程でＣＤ４４陽性細胞を選択する場合などにも使用することが可能である。
【実施例】
【００３８】
実施例１
ｉ）イニファターの合成
下記反応式に従って、１，２，４，５−テトラキス（Ｎ−Ｎジエチルジチオカルバミルメチル）ベンゼンを次のようにして合成した。
【００３９】
１，２，４，５−テトラキス（ブロモメチルベンゼン）２．０ｇとＮ，Ｎ−ジエチルジチオカルバミル酸ナトリウム１２．０ｇをエタノール１０ｍＬ中へ加え、遮光下で室温で４日間攪拌した。沈殿物を濾過し、減圧乾燥後、クロロホルム４０ｍＬへ溶解し、５０ｍＬの水を加えて液液抽出分離し、臭化ナトリウムを除去した。この操作を３回繰り返した後、クロロホルム層を約１０ｇの硫酸マグネシウムで２４時間乾燥させて、濾過後、ｎ−ヘキサンを加え、再結晶を行って精製し、微かに淡青色を帯びた白色の１，２，４，５−テトラサキス（Ｎ，Ｎ−ジエチルジチオカルバミルメチル）ベンゼンの針状結晶を得た（収率９０％）。高速液体クロマトグラフィーにより原料ピークが消滅し、精製物が単一物質であることを確認した。
【００４０】
１Ｈ  ＮＭＲ（ｉｎ  ＣＤＣｌ３）の測定結果はσ７．４８（ｓ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），σ４．５７（ｓ，２Ｈ×４，Ａｒ−ＣＨ２Ｓ−），σ４．０３（ｑ，２Ｈ×４，Ｎ−ＣＨ２−，Ｊ＝１０．７Ｈｚ），σ３．７２（ｑ，２Ｈ×４，Ｎ−ＣＨ２−，Ｊ＝１０．７Ｈｚ）,σ１．２６−１．３１（ｔ，３Ｈ×８，−ＣＨ２−ＣＨ３，Ｊ＝６．６Ｈｚ）となった。
【００４１】
【化１】
2008267822.tif 000002
【００４２】
ii)光重合による４分岐型スター型重合体よりなるカチオン性ホモポリマーの合成
下記反応式に従い、次のようにして、１，２，４，５−テトラキス［（Ｎ，Ｎ−ジエチルジチオカルバミル（ポリ（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミド）−メチル］ベンゼン（以下、ｐＤＭＡＰＡＡｍと記載することがある。）よりなるカチオン性ホモポリマーの合成を行った。
【００４３】
即ち、上記ｉ)により合成した１，２，４，５−テトラサキス（Ｎ，Ｎ−ジエチルジチオカルバミルメチル）ベンゼン０．０４３ｇを１０ｍＬのトルエンへ溶解し、３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミド（３−Ｎ，Ｎ−ＤＭＡＰＡＡｍ）５．２ｇを加えて混合し、全量をトルエンで２０ｍＬに調整した。石英セル中で激しく攪拌しながら高純度窒素ガスで５分間パージした後に、２００Ｗ高圧水銀灯で紫外光を１０分間照射した。照射強度は照度計（ＵＶＲ−１，ＴＯＰＣＯＮ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を使用して１ｍＷ／ｃｍ２（２５０ｎｍ）に調整した。重合溶液をエバポレーターで濃縮し、ジエチルエーテルで重合物を再沈殿させて精製し、少量の水へ溶解し、０．２μｍフィルターで濾過してから凍結乾燥させて４分岐型スター型ホモポリマー１，２，４，５−テトラキス［（Ｎ，Ｎ−ジエチルジチオカルバミル（ポリ（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミド）−メチル］ベンゼン（ｐＤＭＡＰＡＡｍ）よりなるカチオン性ポリマーを得た（重合率４０％）。分子量はＧＰＣにより３７００と測定された。
【００４４】
１Ｈ  ＮＭＲ（ｉｎ  ＣＤＣｌ３）の測定結果は、σ３．１０−３．３９（ｂｒ、−ＮＨ−ＣＨ２−）、σ２．２５−２．４２（ｂｒ、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）２）、σ２．２１（ｂｒ、−Ｎ（ＣＨ３）２）、σ１．４８−１．７６（ｂｒ，−ＣＨ２−ＣＨ−，−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−）となった。
【００４５】
【化２】
2008267822.tif 000003
【００４６】
iii)カチオン性ホモポリマーへのＮ−イソプロピルアクリルアミドのブロック共重合によるポリマー材料（４分岐型ｐＤＭＡＰＡＡｍ−ｂ−ｐＮＩＰＡＭ）の合成
下記反応式に従い、次のようにして、テトラキス［（Ｎ,Ｎ−ジエチルジチオカルバミル（ポリ（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミド）−ブロック−ポリ−（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）−メチル］ベンゼン（以下、ｐＤＭＡＰＡＡｍ−ｂ−ｐＮＩＰＡＭと記すことがある。）の合成を行った。
【００４７】
即ち、上記ii）で合成した４分岐型ｐＤＭＡＰＡＡｍホモポリマー６４５ｍｇを１０ｍＬのメタノールへ溶解し，Ｎ−イソプロピルアクリルアミド（ＮＩＰＡＭ）１．２ｇを混合して全量をメタノールで２０ｍＬに調整した。ii）と同様の条件で光照射重合を行って、メタノール／ジエチルエーテル系で精製を行って４分岐型ｐＤＭＡＰＡＡｍとポリＮ−イソプロピルアクリルアミド（ｐＮＩＰＡＭ）とのブロックポリマーよりなるポリマー材料ｐＤＭＡＰＡＡｍ−ｂ−ｐＮＩＰＡＭを得た（重合率８０％）。分子量はＧＰＣにより９，３００と測定された。
【００４８】
１Ｈ  ＮＭＲ（ｉｎ  ＣＤＣｌ３）の測定結果は、σ３．１０−３．３９（ｂｒ，−ＮＨ−ＣＨ２−），σ２．２５−２．４２（ｂｒ，−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）２），σ２．２１（ｂｒ，−Ｎ（ＣＨ３）２），σ１．４８−１．７６（ｂｒ,−ＣＨ２−ＣＨ−，−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−）,σ１．０８−１．２３（ｂｒ,−ＣＨ−（ＣＨ３）２）となった。
【００４９】
【化３】
2008267822.tif 000004
【００５０】
iv）ヒアルロン酸とのイオン錯体化
上記iii）で合成したポリマー材料（４分岐型ｐＤＭＡＰＡＡｍ−ｂ−ｐＮＩＰＡＭ）とヒアルロン酸を２０℃程度の水溶液中で混合することでイオン錯体化が可能であった。
【００５１】
ＣＤ４４認識性処理剤として水不溶性又は難溶性とするために、ヒアルロン酸との混合比を以下のように決定した。４分岐型ｐＤＭＡＰＡＡｍ−ｂ−ｐＮＩＰＡＭを２０ｍｇ、ヒアルロン酸を０ｍｇ〜５０ｍｇの範囲で水２ｍＬへ溶解した溶液の吸光度と温度の関係をプロットし、曇点を測定した。ヒアルロン酸の導入量が多いと低温領域に曇点がシフトすることが認められた。ヒト体温付近で水不溶性であるためにはヒアルロン酸の量は約２０ｍｇ以下である必要があった。
【００５２】
ｖ）コーティング処理
２０ｍｇの上記ポリマー材料（４分岐型ｐＤＭＡＰＡＡｍ−ｂ−ｐＮＩＰＡＭブロック共重合体）と１５ｍｇのヒアルロン酸を水へ溶解し全量を２ｍＬに調整した。この溶液１０μＬを２ｃｍ×３ｃｍ角のＰＥＴフィルムへ均質に流延し、ドライヤーで乾燥させることでコーティング処理した。フィルムを３７℃に温調したプレート上へ乗せ、接触角を測定した。この状態での接触角は１５°であり、ヒアルロン酸に起因すると推定されるフィルム表面の親水化現象が確認された。このフィルムを３７℃の温水で洗浄で洗浄を続けると、洗浄時間とともに表面の接触角は徐々に上昇し約４４°でプラトーに達した。ＰＥＴフィルムの接触角７４°へ近づいたが、ヒアルロン酸が不溶化されて固定されたことが確認された。
【００５３】
比較例１
１，２，４，５−テトラキス（ブロモメチルベンゼン）の代わりに（ブロモメチル）ベンゼンを使用したこと以外は実施例１のｉ）と同様にして（Ｎ、Ｎ−ジエチルジチオカルバミルメチル）ベンゼンを合成した。精製物は無色液体で、収率は約９３％であった。
【００５４】
１Ｈ  ＮＭＲ（ｉｎ  ＣＤＣｌ３）の測定結果はσ７．４１〜７．２７ｐｐｍ（ｍ、５Ｈ、Ａｒ−Ｈ）、σ４．５４ｐｐｍ（ｓ、２Ｈ、Ａｒ−ＣＨ２−Ｓ−）、σ４．０８〜４．０１ｐｐｍ（ｑ、２Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−）、σ３．７２ｐｐｍ（ｑ、２Ｈ、Ｎ−ＣＨ２−）、σ１．２５−１．３１ｐｐｍ（ｍ、６Ｈ、−ＣＨ２−ＣＨ３）となった。
【００５５】
次いで、上記ii)及びiii)の手法に準じて、１本の直鎖のみを有した直線型ブロックポリマーｐＤＭＡＰＡＡｍ−ｂ−ｐＮＩＰＡＭを合成し、上記（ｖ）のＰＥＴフィルムへのコーティング処理と水洗浄実験を行った。３７℃で軽く洗浄するだけで接触角は１５°から７４°まで上昇し、コーティングしたポリマーが速やかにＰＥＴフィルムから剥離していることが確認された。
【００５６】
以上より、実施例１の分岐型の構造の優位性が確認された。すなわち、実施例１のＣＤ４４認識性コーティング剤では、材料表面に疎水結合している１分子中の複数の分岐鎖のｐＮＩＰＡＭブロックのすべてが同時に材料表面から剥離しなければ、分子を材料表面から剥離させることができず、１本が剥離しても残りの分岐鎖が結合していれば、一度剥離した分岐鎖も再結合することができため、材料表面に頑強に固定されていると考えられる。これに対して、比較例１で合成した直線型のブロックポリマーでは、１分子中に１本のｐ−ＮＩＰＡＭポリマー鎖しかなく、このＰ−ＮＩＰＡＭポリマー鎖が材料表面から剥離すればその分子はそのまま材料表面から剥離してしまうため、洗浄処理に弱いものと考えられる。