【手続補正書】
【提出日】平成21年1月19日(2009.1.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
近年、食事体系の西欧化による、所謂生活習慣病の急増が社会問題として大きく取り上げられるようになっている。即ち、食生活の西欧化に伴い、動物性脂質の摂取量が急増し、これにより血中のコレステロール含量が増加し、余分なコレステロールを貪食した貪食細胞が血管壁に積層し、アテロームを形成し、血栓を形成せしめ、血流量を阻害し、血圧を上昇せしめると言う、循環器の増悪コースを形成する駆動力となっている。この様な増悪をくい止めるためには、血栓の形成を阻害することが重要な課題となる。この様な血栓の形成阻害をする薬剤は、現在幾つかは開発されて実用に供されているが、一度投与を始めると、途中中断が出来なくなるため、思いもかけぬ副作用の発現などが発生する可能性が存し、結果、血栓形成は抑制されても、延命効果やＱＯＬの向上に結びつかない例も存し、通常の生活において、血栓形成を阻害する手段の開発が望まれていた。この様な手段としては、食事を介しての方法が特に期待されている。これは、この様な疾患そのものの発生が食事に起因するところが大きいことを勘案すれば当然のことと思われる。この様な食事を介しての血栓の形成阻害の手段としては、特定な食品成分によるプラスミノーゲンアクチベーターなどの線溶酵素の活性を高める方法と、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビターなどの線溶酵素活性阻害物質の阻害作用を抑制する方法の２種が存在する。前者としては、ヒラタケや納豆などが知られている（例えば、特許文献１、特許文献２を参照）。しかしながら、後者については、食品成分では未だ有効なものが見出されていないのが現状である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
本発明は、この様な状況下為されたものであり、特定の植物成分により、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ）を抑制する技術を提供することを課題とする。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
この様な状況に鑑みて、本発明者らは、特定な食品成分により、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ）を抑制する技術を求めて、鋭意研究努力を重ねた結果、バラ科プルナス属の植物の花及び／又は蕾の抽出物より、新規カフェオイルキナ酸誘導体である、４−ベンゾイル−５−カフェオイルキナ酸を単離し、このものに優れたＰＡＩを抑制する作用が存することを見いだし、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は以下に示すとおりである。
（１）次に示す、１−ベンゾイル−２−カフェオイル−４，６−ジヒドロキシ−４−ヒドロキシカルボニルシクロヘキサン及び／又はその塩を有効成分とする、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター抑制用の組成物。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
本発明によれば、特定の植物成分により、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ）を抑制する技術を提供することができる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
斯くして得られたカフェオイルキナ酸誘導体及び／又はその塩は、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビターを抑制する作用を有し、かかる誘導体を有効成分として組成物に含有せしめることにより、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビターを阻害する作用に優れる組成物とすることが出来る。該組成物としては、化粧料のような皮膚外用組成物、食品のような経口投与組成物が好適に例示でき、経口投与組成物に含有せしめることが特に好ましい。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
前記経口投与組成物と同様、マカデミアナッツ油、アボガド油、トウモロコシ油、オリーブ油、ナタネ油、ゴマ油、ヒマシ油、サフラワー油、綿実油、ホホバ油、ヤシ油、パーム油、液状ラノリン、硬化ヤシ油、硬化油、モクロウ、硬化ヒマシ油、ミツロウ、キャンデリラロウ、カルナウバロウ、イボタロウ、ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、ホホバロウ等のオイル、ワックス類；流動パラフィン、スクワラン、プリスタン、オゾケライト、パラフィン、セレシン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス等の炭化水素類；オレイン酸、イソステアリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、ウンデシレン酸等の高級脂肪酸類；セチルアルコール、ステアリルアル
コール、イソステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、オクチルドデカノール、ミリスチルアルコール、セトステアリルアルコール等の高級アルコール等；イソオクタン酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、イソステアリン酸ヘキシルデシル、アジピン酸ジイソプロピル、セバチン酸ジ−２−エチルヘキシル、乳酸セチル、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ−２−エチルヘキサン酸エチレングリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、ジ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキサン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキサン酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ−２−エチルヘキサン酸ペンタンエリトリット等の合成エステル油類；ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、ジフェニルポリシロキサン等の鎖状ポリシロキサン；オクタメチルシクロテトラシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、ドデカメチルシクロヘキサンシロキサン等の環状ポリシロキサン；アミノ変性ポリシロキサン、ポリエーテル変性ポリシロキサン、アルキル変性ポリシロキサン、フッ素変性ポリシロキサン等の変性ポリシロキサン等のシリコーン油等の油剤類；脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル等のアニオン界面活性剤類；塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類；イミダゾリン系両性界面活性剤（２−ココイル−２−イミダゾリニウムヒドロキサイド−１−カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類；ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン等）、グリセリン脂肪酸類（モノステアリン酸グリセリン等）、プロピレングリコール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコール等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類（ＰＯＥソルビタンモノオレエート、モノステアリン酸ポリオキエチレンソルビタン等）、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−ソルビットモノラウレート等）、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−グリセリンモノイソステアレート等）、ＰＯＥ脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコールモノオレート、ＰＯＥジステアレート等）、ＰＯＥアルキルエーテル類（ＰＯＥ２−オクチルドデシルエーテル等）、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル類（ＰＯＥノニルフェニルエーテル等）、プルロニック型類、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類（ＰＯＥ・ＰＯＰ２−デシルテトラデシルエーテル等）、テトロニック類、ＰＯＥヒマシ油・硬化ヒマシ油誘導体（ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類；ポリエチレングリコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ジグリセリン、イソプレングリコール、１，２−ペンタンジオール、２，４−ヘキサンジオール、１，２−ヘキサンジオール、１，２−オクタンジオール等の多価アルコール類；ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム等の保湿成分類；表面を処理されていても良い、マイカ、タルク、カオリン、合成雲母、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、無水ケイ酸（シリカ）、酸化アルミニウム、硫酸バリウム等の粉体類、；表面を処理されていても良い、ベンガラ、黄酸化鉄、黒酸化鉄、酸化コバルト、群青、紺青、酸化チタン、酸化亜鉛の無機顔料類；表面を処理されていても良い、雲母チタン、魚燐箔、オキシ塩化ビスマス等のパール剤類；レーキ化されていても良い赤色２０２号、赤色２２８号、赤色２２６号、黄色４号、青色４０４号、黄色５号、赤色５０５号、赤色２３０号、赤色２２３号、橙色２０１号、赤色２１３号、黄色２０４号、黄色２０３号、青色１号、緑色２０１号、紫色２０１号、赤色２０４号等の有機色素類；ポリエチレン末、ポリメタクリル酸メチル、ナイロン粉末、オルガノポリシロキサンエラストマー等の有機粉体類；パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤；アントラニル酸系紫外線吸収剤；サリチル酸系紫外線吸収剤；桂皮酸系紫外線吸収剤；ベンゾフェノン系紫外線吸収剤；糖系紫外線吸収剤；２−（２’−ヒドロキシ−５’−ｔ−オクチルフェニル)ベンゾトリアゾール、４−メトキシ−４’−ｔ−ブチルジベンゾイルメタン等の紫外線吸収剤類；エタノール、イソプ
ロパノール等の低級アルコール類；ビタミンＡ又はその誘導体、ビタミンＢ6塩酸塩、ビタミンＢ6トリパルミテート、ビタミンＢ6ジオクタノエート、ビタミンＢ2又はその誘導体、ビタミンＢ12、ビタミンＢ15又はその誘導体等のビタミンＢ類；α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、ビタミンＥアセテート等のビタミンＥ類、ビタミンＤ類、ビタミンＨ、パントテン酸、パンテチン、ピロロキノリンキノン等のビタミン類等；フェノキシエタノール等の抗菌剤などの任意成分とともに、常法に従って処理して、化粧料に加工することもできる。化粧料における、カフェオイルキナ酸誘導体及びその塩の好ましい含有量は、０．０００１〜１質量％であり、より好ましくは０．００１〜０．１質量％である。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
4-O-Benzoyl-5-O-caffeoylquinicacid  物性
淡黄色無晶形粉末C23H22O10．1HNMR(500MHz,重水+アセトン-d6)δ8.05(2H,d,J=8Hz),  7.61(1H,t,J=8Hz),7.52(1H,d,J=16Hz),7.49(2H,t,J=8Hz),7.10(1H,d,J=2Hz),6.95(1H,dd,J=2,8Hz),6.84(1H,d,J=8Hz),6.20(1H,d,J=16Hz),5.84(1H,m),5.26(1H,dd,J=3,10Hz),4.52(1H,d,J=3Hz),2.37(2H,m),2.24(2H,m),13CNMR(126MHz,重水+アセトン-d6)δ37.9,39.4,67.9,68.9,75.8,76.7,114.6,114.8,116.1,122.5,126.9,129.2(2C),130.3(2C),130.8,134.0,146.2,146.5,149.0,166.5,167.0,175.3.
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
４−ベンゾイル−５−カフェオイルキナ酸について、ＰＡＩに対する作用を調べた。ＰＡＩとしては、ＰＡＩ−１を用いた。即ち、市販のヒト臍帯静脈由来血管内皮細胞（Ｈｕｖｅｃ、クラボウ）を培養したものを２４穴コラーゲンコートプレートに１ｘ１０5  ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌでまき２４時間インキュベートした。無血清培地に交換し、更に一晩インキュベートし、低血清培地に交換すると共に上記の４−ベンゾイル−５−カフェオイルキナ酸をＤＭＳＯに溶かしたものを被検物として終濃度１μｇ／ｍＬで添加し、同時にＴＮＦ−αを終濃度１０ｎｇ／ｍＬで添加した。２４時間後に培地を回収し、遠心（３０００ｒｐｍ）後上清について、市販のＰＡＩ−１  ＥＬＩＳＡキットで培地中のＰＡＩ−１濃度を測定した。被検物のかわりにＤＭＳＯを添加したものをコントロールとして、コントロールのＰＡＩ−１量に対する１００分率で各被検物のＰＡＩ−１産生抑制率を求めた。ポジティブコントロールとしてはオールトランスレチノイン酸（終濃度１μｇ／ｍＬ）を用いた。結果を表１に示す。これより、本発明の化合物である、４−ベンゾイル−５−カフェオイルキナ酸は優れたＰＡＩ−１抑制作用を有することがわかる。