(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
硫酸化グルコサミノグリカンを含有し、花粉症（但し、アトピー性皮膚炎及び／又はアトピー性疾患を併発しているものを除く）の予防又は治療に使用されることを特徴とする、フィラグリン産生促進剤。
【請求項２】
前記硫酸化グルコサミノグリカンがヘパリン類似物質である、請求項１に記載のフィラグリン産生促進剤。
【請求項３】
皮膚外用剤である、請求項１又は２に記載のフィラグリン産生促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フィラグリンの産生を促進するフィラグリン産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
フィラグリンは、表皮顆粒細胞で産生される塩基性タンパク質の一種であり、角層内でケラチンフィラメントを凝集させ、角層の組織構造の構築において重要な役割を担っている。また、フィラグリンの生成過程については既に解明されており、次のように考えられている。先ず、表皮顆粒層において、フィラグリンの前駆体であるプロフィラグリンが産生される。産生されたプロフィラグリンは、リン酸化を受けて顆粒細胞内のケラトヒアリン顆粒を形成する。表皮のターンオーバーに従って顆粒細胞が角層細胞に移行すると、プロフィラグリンが脱リン酸化とプロテアーゼの作用を受けてフィラグリンが生成する。
【０００３】
近年、フィラグリンの機能低下がアトピー性皮膚炎や花粉症の発症要因の一つになっていることが報告され、フィラグリンが各種アレルギー疾患の発症に関与していることが明らかにされている。更に、フィラグリンの発現量の低下が、尋常性魚鱗癬の発症に関与していることも明らかにされている。
【０００４】
このようなフィラグリンが関連する疾患の予防又は治療には、生体内でフィラグリンの発現を促進させることが有効である。そこで、近年、フィラグリンの発現を促進させる成分について種々検討されている。例えば、フィラグリンの発現を促進させる成分として、月下美人の抽出物（特許文献１）、ロズマリン酸及び／又はエリオジクチオール７−Ｏ−ルチノシド（特許文献２）、サンショウエキス（特許文献３）等が見出されている。
【０００５】
しかしながら、製剤処方の多様化、フィラグリン産生促進作用の更なる向上等の要望に追従するために、フィラグリンの発現を促進させる新たな成分の開発が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００９−１０７９６５号公報
【特許文献２】特開２０１１−６８５９４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、フィラグリン産生の発現を促進するフィラグリン産生促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、前記課題を解決すべく鋭意検討を行ったところ、硫酸化グルコサミノグリカンには、表皮細胞においてプロフィラグリンのｍＲＮＡの発現量を増大させる作用があり、フィラグリン産生の発現を促進できることを見出した。本発明は、かかる知見に基づいて、更に検討を重ねることにより完成したものである。
【０００９】
即ち、本発明は、下記に掲げる態様の発明を提供する。
項１．  硫酸化グルコサミノグリカンを含有することを特徴とする、フィラグリン産生促進剤。
項２．  前記硫酸化グルコサミノグリカンがヘパリン類似物質である、項１に記載のフィラグリン産生促進剤。
項３．  皮膚外用剤である、項１又は２に記載のフィラグリン産生促進剤。
項４．  アトピー性皮膚炎、花粉症、又は尋常性魚鱗癬の予防又は治療に使用される、項１〜３のいずれかに記載のフィラグリン産生促進剤。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のフィラグリン産生促進剤によれば、表皮細胞のプロフィラグリンの発現を促進し、フィラグリン産生の産生を促進できるので、フィラグリンの機能低下が一因となって生じる疾患や症状の予防又は治療に有効である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ヘパリン類似物質の存在下で通常表皮モデル細胞を培養し、プロフィラグリンｍＲＮＡの発現量を測定した結果を示す図である。
【図２】ヘパリン類似物質の存在下で表皮上層モデル細胞を培養し、プロフィラグリンｍＲＮＡの発現量を測定した結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明のフィラグリン産生促進剤は、硫酸化グルコサミノグリカンを含有することを特徴とする。以下、本発明のフィラグリン産生促進剤について詳述する。
【００１３】
硫酸化グルコサミノグリカン
硫酸化グルコサミノグリカンとは、アミノ糖を構成単位の１つとして含み、硫酸基を有しているムコ多糖である。
【００１４】
本発明で使用される硫酸化グルコサミノグリカンの種類については、薬学的に許容されることを限度として、特に制限されないが、例えば、ヘパリン類似物質、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパリン等が挙げられる。なお、硫酸化グルコサミノグリカンは、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、マンガン等の金属塩；アンモニウム塩等の塩の形態であってもよい。
【００１５】
これらの硫酸化グルコサミノグリカンは、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。これらの中でも、より一層効果的にフィラグリン産生を促進させるという観点から、好ましくはヘパリン類似物質が挙げられる。
【００１６】
また、硫酸化グルコサミノグリカンの由来については、特に制限されず、例えば、ムコ多糖類を多硫酸化することにより得られたもの、食用獣の組織（例えば、ヘパリン類似物質の場合であれば、ウシやブタ等の気管軟骨を含む肺臓）等から抽出したもの等が挙げられる。
【００１７】
また、例えば、硫酸化グルコサミノグリカンとしてヘパリン類似物質を使用する場合であれば、日本薬局方外医薬品規格に収戴されているヘパリン類似物質が好適である。
【００１８】
本発明のフィラグリン産生促進剤における硫酸化グルコサミノグリカンの配合量については、当該フィラグリン産生促進剤の製剤形態等に応じて適宜設定すればよいが、例えば０．０１〜５重量％、好ましくは０．０５〜３重量％、更に好ましくは０．１〜１重量％が挙げられる。
その他の成分
本発明のフィラグリン産生促進剤は、前記硫酸化グルコサミノグリカンの他に、必要に応じて、他の薬理成分を含有していてもよい。このような薬理成分としては、例えば、抗ヒスタミン剤（グリチルリチン酸二カリウム、グリチルリチン酸、ジフェンヒドラミン、塩酸ジフェンヒドラミン等）、局所麻酔剤（プロカイン、テトラカイン、ブピパカイン、メピパカイン、クロロプロカイン、プロパラカイン、メプリルカイン又はこれらの塩、オルソカイン、オキセサゼイン、オキシポリエントキシデカン、ロートエキス、ペルカミンパーゼ、テシットデシチン等）、抗炎症剤（アラントイン、インドメタシン、フェルビナク、ジクロフェナクナトリウム、ロキソプロフェンナトリウム等）、皮膚保護剤（コロジオン、ヒマシ油等）、血行促進成分（ノニル酸ワニリルアミド、ニコチン酸ベンジルエステル、カプサイシン、トウガラシエキス等）、清涼化剤（メントール、カンフル等）、ビタミン類（ビタミンＡ等）、ムコ多糖類（コンドロイチン硫酸ナトリウム、グルコサミン等）等が挙げられる。
【００１９】
また、本発明のフィラグリン産生促進剤は、所望の製剤形態にするために、必要に応じて、基剤や添加剤が含まれていてもよい。このような基剤や添加剤については、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、水、低級アルコール（エタノール、イソプロパノール等）、多価アルコール（グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等）等の水性基剤；油類（オリーブ油、サフラワー油、大豆油、つばき油、とうもろこし油、なたね油、ひまわり油、綿実油、落花生油、ラード、スクワラン、魚油等）、鉱物油（流動パラフィン、パラフィン、ゲル化炭化水素、ワセリン等）、ワックス類・ロウ類（ミツロウ、カルナウバロウ、キャンデリラロウ、セレシン、ライスワックス、マイクロクリスタリンワックス等）、エステル油（ミリスチン酸イソプロピル、アジピン酸イソプロピル、セバシン酸ジエチル、セバシン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、パルミチン酸セチル、オレイン酸エチル等）、脂肪酸アルキルエステル、脂肪酸（ステアリン酸、オレイン酸、パルミチン酸、ベヘン酸、リノール酸、ラノリン等）、脂肪酸エステル（パルミチン酸セチル、パルミチン酸イソプロピル、リノール酸エチル等）、高級アルコール（ステアリルアルコール、セタノール、ベヘニルアルコール、ミリスチルアルコール、オレイルアルコール、ヘキサデシルアルコール、ラノリンアルコール等）、コレステロール、トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル、２−エチルヘキサン酸セチル、シリコーンオイル（ジメチルポリシロキサン、環状シリコーン等）等の油性基剤；ＰＯＥ（１０〜５０モル）フィトステロールエーテル、ＰＯＥ（１０〜５０モル）ジヒドロコレステロールエーテル、ＰＯＥ（１０〜５０モル）２−オクチルドデシルエーテル、ＰＯＥ（１０〜５０モル）デシルテトラデシルエーテル、ＰＯＥ（１０〜５０モル）オレイルエーテル、ＰＯＥ（２〜５０モル）セチルエーテル、ＰＯＥ（５〜５０モル）ベヘニルエーテル、ＰＯＥ（５〜３０モル）ポリオキシプロピレン（５〜３０モル）２−デシルテトラデシルエーテル、ＰＯＥ（１０〜５０モル）ポリオキシプロピレン（２〜３０モル）セチルエーテルなどのポリオキシエチレンアルキルエーテル、これらのリン酸・リン酸塩（ＰＯＥセチルエーテルリン酸ナトリウムなど）、ＰＯＥ（２０〜６０モル）ソルビタンモノオレート、ＰＯＥ（１０〜６０モル）ソルビタンモノイソステアレート、ＰＯＥ（１０〜８０モル）グリセリルモノイソステアレート、ＰＯＥ（１０〜３０モル）グリセリルモノステアレート、ＰＯＥ（２０〜１００モル）・ポリオキシプロピレン変性シリコーン、ＰＯＥ・アルキル変性シリコーン、モノラウリン酸ポリエチレングリコール、モノパルミチン酸ポリエチレングリコール、モノステアリン酸ポリエチレングリコール、ジラウリン酸ポリエチレングリコール、ジパルミチン酸ポリエチレングリコール、ジステアリン酸ポリエチレングリコール、ジオレイン酸ポリエチレングリコール、ジリシノレイン酸ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（５〜１００）、ポリソルベート（２０〜８５）、グリセリン脂肪酸エステル（モノステアリン酸グリセリン等）、水素添加大豆リン脂質、水素添加ラノリンアルコール等の界面活性剤；清涼化剤（メントール、カンフル、ボルネオール、ハッカ水、ハッカ油等）、防腐剤（メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸等）、着香剤（シトラール、１，８−シオネール、シトロネラール、ファルネソール等）、着色剤（タール色素（褐色２０１号、青色２０１号、黄色４号、黄色４０３号等）、カカオ色素、クロロフィル、酸化アルミニウム等）、粘稠剤（カルボキシビニルポリマー、ヒプロメロース、ポリビニルピロリドン、アルギン酸ナトリウム、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、キサンタンガム、カラギーナン等）、ｐＨ調整剤（リン酸、塩酸、クエン酸、クエン酸ナトリウム、コハク酸、酒石酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリエタノールアミン、トリイソプロパノールアミン等）、湿潤剤（ｄｌ−ピロリドンカルボン酸ナトリウム液、Ｄ−ソルビトール液、マクロゴール等）、安定化剤（ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、エデト酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アスパラギン酸、ＤＬ−アラニン、グリシン、エリソルビン酸ナトリウム、没食子酸プロピル、亜硫酸ナトリウム、二酸化硫黄、クロロゲン酸、カテキン、ローズマリー抽出物等）、酸化防止剤、紫外線吸収剤、キレート剤、粘着剤、緩衝剤、溶解補助剤、可溶化剤、保存剤等の添加剤が挙げられる。
【００２０】
製剤形態
本発明のフィラグリン産生促進剤は、皮膚外用剤、内服剤等のいずれの剤型であってもよいが、フィラグリンの産生をより一層効果的に促進させるという観点から、好ましくは皮膚外用剤が挙げられる。
【００２１】
本発明のフィラグリン産生促進剤を皮膚外用剤として使用する場合、その形状については、経皮適用できることを限度として特に制限されないが、例えば、液状、固形状、半固形状（ゲル状、軟膏状、ペースト状）等が挙げられる。
【００２２】
また、本発明のフィラグリン産生促進剤を皮膚外用剤として使用する場合、その製剤形態については、経皮適用できることを限度として特に制限されないが、例えば、皮膚外用医薬品、皮膚外用医薬部外品、化粧料、皮膚洗浄料等が挙げられる。本発明のフィラグリン産生促進剤を皮膚外用剤にする場合の製剤形態として、具体的には、クリーム剤、ローション剤、ジェル剤、乳液剤、液剤、貼付剤、エアゾール剤、軟膏剤、パック剤等の皮膚外用医薬品；クリーム剤、ローション剤、ジェル剤、乳液剤、液剤、貼付剤、エアゾール剤、軟膏剤、パック剤等の皮膚外用医薬部外品；クリーム剤、ローション剤、ジェル剤、乳液剤、液剤、軟膏剤、パック剤等の化粧料；ボディーシャンプー、ヘアシャンプー、リンス等の皮膚洗浄料等が挙げられる。これらの製剤形態の中でも、好ましくは皮膚外用医薬品、更に好ましくはクリーム剤、ローション剤、ジェル剤、乳液剤、パック剤が挙げられる。
【００２３】
用途・用量
本発明のフィラグリン産生促進剤は、表皮細胞(特に、表皮の上層に存在する細胞)においてフィラグリンの前駆体であるプロフィラグリンｍＲＮＡの発現量を増大させることにより、フィラグリンの産生を促進することができる。従って、本発明のフィラグリン産生促進剤は、フィラグリンの機能低下が発症要因の一つになっている疾患や症状の予防又は治療に有効である。フィラグリンの機能低下が発症要因の一つになっている疾患や症状としては、具体的には、アトピー性皮膚炎、喘息、鼻炎、花粉症、金属アレルギー等のアレルギー疾患、尋常性魚鱗癬、ウイルスや細菌による皮膚感染症等が挙げられる。
【００２４】
また、本発明のフィラグリン産生促進剤の用量については、剤形、製剤形態、適用する症状の程度等に応じて適宜設定すればよい。例えば、本発明のフィラグリン産生促進剤を皮膚外用剤として使用する場合であれば、その用量の一例として、１回当たり、皮膚１ｃｍ2当たり、硫酸化グルコサミノグリカンが０．１〜３ｍｇ程度となる量で、１日１〜数回程度の頻度が挙げられる。
【実施例】
【００２５】
以下に実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２６】
試験例１：硫酸化グルコサミノグリカンによるフィラグリン産生への影響
硫酸化グルコサミノグリカンが表皮細胞のフィラグリン産生に与える影響を評価するために以下の実験を行った。
【００２７】
１．実験材料
（細胞）
本試験例において細胞は以下の２種類を使用した。
（Ａ）通常表皮モデル細胞（ＨａＣａＴ細胞）
通常表皮モデル細胞として、ＨａＣａＴ細胞（ヒト表皮角化細胞（Ｄｅｕｔｓｃｈｅｓ  Ｋｒｅｂｓｆｏｒｓｃｈｕｎｇｓｚｅｎｔｒｕｍ，Ｓｔｉｆｔｕｎｇ  ｄｅｓoｆｆｅｎｔｌｉｃｈｅｎ  Ｒｅｃｈｔｓ（ＤＫＦＺ），Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ））を使用した。
（Ｂ）表皮上層モデル細胞（シンタキシン４高発現ＨａＣａＴ細胞）
ある程度分化が進んだ表皮上層部の細胞モデルを作製し、試験に使用した。（i）表皮細胞は角化すると基底層から有棘層・顆粒層に移動すること、（ii）上層に移動するに従い、細胞外にシンタキシン４が多く分泌されること、及び（iii）ＨａＣａＴ細胞においてシンタキシン４を高発現させると角化が進行すること（Ｋａｄｏｎｏ Ｎ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｅｄ ２０１５）が知られている。そこで、表皮上層モデル細胞として、シンタキシン４が高発現しているＨａＣａＴ細胞を作製し、本試験例において使用した。作製方法は、以下の通りである。
先ず、細胞外に強制的に提示させるために２１アミノ酸残基からなるマウス由来ＩＬ−２シグナルペプチドをコードする遺伝子をマウスシンタキシン４遺伝子のＮ末端に付加し、これをｐＱＣＸＩＮレトロウイルスベクターのマルチクローニングサイトに挿入した。次に、これをトランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＰＬＵＳ（サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社製）を用いて、パッケージング細胞ＰＴ６７に導入した。得られた細胞の培養上清からレトロウイルスを得た。得られたウイルスをＨａＣａＴ細胞に感染させることにより、細胞外にシンタキシン４を強制発現したＨａＣａＴ細胞（表皮上層モデル細胞）を作製した。
【００２８】
（培地）
Ｄ−ＭＥＭ／Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２（和光純薬工業株式会社）／１０％ＦＣＳ添加
【００２９】
（被験物質）
ヘパリン類似物質
【００３０】
２．実験方法
（１）通常表皮モデル細胞におけるプロフィラグリンｍＲＮＡの発現量
１２ウェルプレートの各ウェルにモデル細胞を１×１０5個／ウェルの濃度でそれぞれ播種し、３７℃、５％ＣＯ2条件下で培養した。翌日に、各ウェルにヘパリン類似物質を０．５ｍｇ／ｍＬとなるように添加し、３７℃、５％ＣＯ2条件下で培養した。その翌日に、モデル細胞を回収しＲＮｅａｓｙ  ｍｉｎｉ  ｋｉｔ（株式会社キアゲン製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。その後、ＲｅｖｅｒＴｒａ  Ａｃｅ（東洋紡株式会社製）を用いて逆転写を行い、ｃＤＮＡを合成した。次いで、Ｆａｓｔ  Ｓｔａｒｔ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ＤＮＡ  Ｇｒｅｅｎ  Ｍａｓｔｅｒ  ｏｎ  ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ  Ｎａｎｏ  ｓｙｓｔｅｍ（ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社製）を用いて、ｑＲＴ−ＰＣＲにてプロフィラグリン遺伝子の増幅を行った。β−アクチンを内部標準として使用し、プロフィラグリンｍＲＮＡの発現量を標準化した。このｍＲＮＡの発現量を、ヘパリン類似物質を添加しなかった以外は前記と同様にして確認したｍＲＮＡの発現量（コントロール）で除算した。
【００３１】
（２）表皮上層モデル細胞におけるプロフィラグリンｍＲＮＡの発現量
通常表皮モデル細胞に代えて表皮上層モデル細胞を使用した以外は、前記（１）と同様に操作し、プロフィラグリンｍＲＮＡの発現量を確認し、コントロール（ヘパリン類似物質を添加しなかった場合のｍＲＮＡ発現量）で除算した。
【００３２】
得られた結果を図１及び２に示す。図１及び２から分かるように、通常表皮モデル細胞及び表皮上層モデル細胞いずれも、ヘパリン類似物質を添加した条件では、フィラグリンの前駆体であるプロフィラグリンｍＲＮＡの発現量の増加が認められ、特に、表皮上層モデル細胞ではその発現量の増加が著しかった。即ち、本結果から、ヘパリン類似物質等の硫酸化グルコサミノグリカンは、表皮細胞、特に表皮上層の細胞（投与された硫酸化グルコサミノグリカンが直接影響する細胞）のプロフィラグリンｍＲＮＡの発現量を増大させる作用があり、フィラグリンの産生を促進できることが明らかとなった。なお、通常表皮モデル細胞におけるコントロールと、表皮上層モデル細胞におけるコントロールとでは、ｍＲＮＡの発現量に大きな差はなかった。
【００３３】
処方例
表１〜２に示す組成のクリーム剤（処方例１〜８）、表３に示すローション剤（処方例９〜１４）、表４に示すジェル剤（処方例１５〜１９）、及び表５〜６に示す乳液剤（処方例２０〜２９）を調製した。これらの製剤は、いずれも、前記試験例１の場合と同様に、表皮細胞のプロフィラグリンｍＲＮＡの発現量を増大させる効果が期待され、フィラグリンの産生促進に有効である。
【００３４】
【表１】
0006656890.tif 000002
【００３５】
【表２】
0006656890.tif 000003
【００３６】
【表３】
0006656890.tif 000004
【００３７】
【表４】
0006656890.tif 000005
【００３８】
【表５】
0006656890.tif 000006
【００３９】
【表６】
0006656890.tif 000007
【図１】
0006656890.tif 000008
【図２】
0006656890.tif 000009