【手続補正書】
【提出日】平成25年6月24日(2013.6.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造：
【化５１】
2012532839.tif 000001
を含む化合物であって、
ここで、ｍは０であり、ｎは０であり、Ｄは−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−であり、Ｒ１−Ａ−はオレイルであり、Ｒ２−Ｂ−は、８〜２４個の炭素原子と１個または２個の不飽和結合を有するアルキル基であり、前記荷電したイミノ基は、アミノエチル、グアニジノエチル、ピリド−４−イル、ピリド−４−イル−メチル、Ｎ−メチルピリド−４−イル、Ｎ−メチルピリド−４−イル−メチル、
【化５２】
2012532839.tif 000002
または
【化５３】
2012532839.tif 000003
である、化合物。
【請求項２】
以下の構造：
【化５４】
2012532839.tif 000004
【化５５】
2012532839.tif 000005
のうちの一つを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
以下の構造：
【化５６】
2012532839.tif 000006
を含む化合物であって、
ここで、ｎは０または１であり、Ｄは−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−または−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−であり、前記荷電したイミノ基は、アミノエチル、グアニジノエチル、ピリド−４−イル、ピリド−４−イル−メチル、Ｎ−メチルピリド−４−イル、Ｎ−メチルピリド−４−イル−メチル、
【化５７】
2012532839.tif 000007
または
【化５８】
2012532839.tif 000008
である、化合物。
【請求項４】
以下の構造：
【化５９】
2012532839.tif 000009
を含む、化合物。
【請求項５】
リチウムジイソプロピルアミドの存在下で、オレイン酸とオレイルアルコールとの反応の生成物を含む、化合物。
【請求項６】
Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムおよびＮ−メチルモルホリンの存在下で、請求項５に記載の化合物と４−ピコリルアミンとの反応の生成物を含む、化合物。
【請求項７】
請求項６に記載の化合物と硫酸ジメチルとの反応の生成物を含む、化合物。
【請求項８】
１，１’−カルボニルジイミダゾールの存在下で、請求項５に記載の化合物とエチレンジアミンとの反応の生成物を含む、化合物。
【請求項９】
１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミジンの存在下で、請求項８に記載の化合物とＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンとの反応の生成物を含む、化合物。
【請求項１０】
Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドの存在下で、請求項５に記載の化合物とｐ−アミノベンズアミジンおよび４−ジメチルアミノピリジンとの反応の生成物を含む、化合物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物を含む、細胞をトランスフェクトするための脂質アセンブリであって、必要に応じて、アニオン性脂質を含む、脂質アセンブリ。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物を含む、細胞をトランスフェクトするための脂質アセンブリを含む組成物であって、前記脂質アセンブリは、活性薬剤を封入する、組成物。
【請求項１３】
前記活性薬剤は、核酸またはＲＮＡである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
細胞に核酸を送達するための非治療的方法であって、前記細胞を、請求項１１に記載の脂質アセンブリと接触させる工程を含む、方法。
【請求項１５】
ヒトにおける疾患の治療において使用するための、請求項１２に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
アニオン性とカチオン性部分の混合物を含む外側表面であって、該カチオン性部分の少なくとも一部分が生理学的条件下で本質的に電荷イミノ部分である外側表面を有する脂質集合体またはリポソームを用いると、血清抵抗性トランスフェクションを行なうことができることが予期せずに見い出された。数多くの実施形態において、本発明の脂質集合体およびリポソームは、ＷＯ０８／０４３５７５に記載され、また、本明細書においてもより詳細に記載する方法を用いて製剤化される。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
アニオン性両親媒性物質とカチオン性両親媒性物質とを含む脂質集合体であって、前記カチオン性両親媒性物質の少なくとも一部分が、生理学的条件下で実質的に荷電したイミノ脂質であり、前記アニオン性両親媒性物質はカルボキシル脂質またはリン酸脂質であり、さらに、前記カチオン性両親媒性物質と前記アニオン性両親媒性物質との間の電荷比率が１．５以下である、脂質集合体。
（項目２）
アニオン性両親媒性物質とカチオン性両親媒性物質を含む、項目１に記載の脂質集合体であって、前記カチオン性両親媒性物質の少なくとも一部分が、生理学的条件下で実質的に荷電したイミノ脂質であり、さらに、前記アニオン性両親媒性物質の少なくとも一部分がカルボキシル脂質であり、前記カチオン性両親媒性物質と前記アニオン性両親媒性物質との間の比率が１．５であるか、またはそれより小さい、脂質集合体。
（項目３）
脂質の組合せを含む、項目１または２記載の脂質集合体であって、前記組合せの前記カチオン性脂質がグアニド部分を含み、前記組合せの前記アニオン性脂質がカルボキシル基を含み、さらに、前記グアニド部分と前記カルボキシル基との間の比率が１．５であるか、またはそれより小さいことを特徴とする、脂質集合体。
（項目４）
アニオン性両親媒性物質とカチオン性両親媒性物質を含む、項目１に記載の脂質集合体であって、前記カチオン性両親媒性物質の少なくとも一部分が、生理学的条件下で実質的に荷電したイミノ脂質であり、さらに、前記アニオン性両親媒性物質の少なくとも一部分がリン酸脂質であり、前記カチオン性両親媒性物質と前記アニオン性両親媒性物質との間の電荷比率が１．５であるか、またはそれより小さい、脂質集合体。
（項目５）
さらに、前記カチオン性両親媒性物質の前記荷電したイミノ基が、７．５より大きいｐＫを有し、イミン、アミジン、ピリジン、２−アミノピリジン、複素環式窒素塩基、グアニド部分、イソ尿素またはチオイソ尿素から選択されることを特徴とする、項目１〜４のいずれかに記載の脂質集合体。
（項目６）
カチオン性両親媒性物質がＩ１〜Ｉ１１３の構造、構造Ａ１〜Ａ２１または構造Ｌ１〜Ｌ１７を含む群から選択され、前記群のメンバーが、さらに、７．５より大きいｐＫに従って選択される、項目１〜５のいずれかに記載の脂質集合体。
（項目７）
さらに、前記カチオン性脂質がＰＯＮＡ、ＣＨＯＬＧＵＡ、ＧＵＡＤＡＣＡ、ＭＰＤＡＣＡまたはＳＡＩＮＴ−１８の群から選択されることを特徴とする、前記項目のいずれかに記載の脂質集合体。
（項目８）
さらに、前記アニオン性脂質がＣＨＥＭＳ、ＤＭＧＳ、ＤＯＧＳ、ＤＯＰＡまたはＰＯＰＡの群から選択されることを特徴とする、前記項目のいずれかに記載の脂質集合体。
（項目９）
さらに、０．５〜１．５である前記カチオン性脂質と前記アニオン性脂質の電荷比率を有することを特徴とする、前記項目のいずれかに記載の脂質集合体。
（項目１０）
さらに、リポソームであることを特徴とする、項目１〜９のいずれかに記載の脂質集合体。
（項目１１）
さらに、コレステロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴミエリンまたはその混合物から選択される中性脂質または両性イオン脂質を含む、項目１０に記載のリポソーム。
（項目１２）
さらに、前記中性脂質がコレステロールであり、脂質混合物中のコレステロールのモル分率が１０ｍｏｌ％〜５０ｍｏｌ％であることを特徴とする、項目１１に記載のリポソーム。
（項目１３）
さらにＰＥＧ脂質を含む、項目１０、１１または１２に記載のリポソーム。
（項目１４）
さらに、前記ＰＥＧ脂質が最外膜リーフレット（ｏｕｔｅｒｍｏｓｔ  ｍｅｍｂｒａｎｅ
ｌｅａｆｌｅｔ）内に存在していることを特徴とする、項目１３に記載のリポソーム。
（項目１５）
さらに活性医薬成分を含む、項目１０〜１４のいずれかに記載のリポソーム。
（項目１６）
前記医薬成分がオリゴヌクレオチドである、項目１５に記載のリポソーム。
（項目１７）
前記オリゴヌクレオチドが、デコイオリゴヌクレオチド、およびアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、転写に影響を及ぼす因子、リボザイム、ＤＮＡザイムまたはアプタマーである、項目１６に記載のリポソーム。
（項目１８）
前記オリゴヌクレオチドが、そのホスホジエステル形態またはホスホチオエート形態においてＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡ、ＰＮＡ、２’ＯＭｅ  ＲＮＡ、２’ＭＯＥ  ＲＮＡ、２’Ｆ  ＲＮＡなどの修飾ヌクレオシドを含む、項目１７に記載のリポソーム。
（項目１９）
工程（ｉ）活性成分の存在下でのリポソームの形成および密封、ならびに工程（ｉｉ）前記工程（ｉ）後のＰＥＧ−脂質の別個の添加を含む方法によって作製される、項目１４に記載のリポソーム。
（項目２０）
細胞のインビボ、インビトロまたはエキソビボでのトランスフェクションのための項目１０〜１９のいずれかに記載のリポソームの使用。
（項目２１）
肺細胞のトランスフェクションのための項目１０〜１９のいずれかに記載のリポソームを含むエーロゾルの使用。