【手続補正書】
【提出日】平成25年4月15日(2013.4.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも３つの別々のポリヌクレオチドのポリヌクレオチド複合体であって：
（ａ） 第１の標的配列に相補的である標的特異的領域、５’領域、および３’領域を含
む第１のポリヌクレオチド；
（ｂ） 第２の標的配列に相補的である標的特異的領域、５’領域、および３’領域を含
む第２のポリヌクレオチド；ならびに
（ｃ）ヌル領域または第３の標的配列に相補的である標的特異的領域、５’領域、および３’領域を含む第３のポリヌクレオチド
を含み、
ここでは、前記標的特異的領域の少なくとも２つは、異なる標的配列に相補的であり、
ここでは、前記第１のポリヌクレオチドの５’領域は前記第３のポリヌクレオチドの３’領域に相補的であり、前記第１のポリヌクレオチドの３’領域は前記第２のポリヌクレオチドの５’領域に相補的であり、そして前記第２のポリヌクレオチドの３’領域は前記第３のポリヌクレオチドの５’領域に相補的であり、
そしてここでは、前記３つの別々のポリヌクレオチドがそれらの相補的３’領域と５’領域を介してハイブリダイズして、第１、第２、および第３の１本鎖領域と、第１、第２、および第３の自己相補性領域とともにポリヌクレオチド複合体を形成する、ポリヌクレオチド複合体。
【請求項２】
前記第１、第２、および／または第３のポリヌクレオチドに約１５〜３０ヌクレオチドが含まれる、請求項１に記載のポリヌクレオチド複合体。
【請求項３】
前記第１、第２、および／または第３のポリヌクレオチドに約１７〜２５ヌクレオチドが含まれる、請求項１に記載のポリヌクレオチド複合体。
【請求項４】
前記自己相補性領域の１つ以上に約５〜１０ヌクレオチド対が含まれる、請求項１に記載のポリヌクレオチド複合体。
【請求項５】
前記自己相補性領域の１つ以上に約７〜８ヌクレオチド対が含まれる、請求項１に記載のポリヌクレオチド複合体。
【請求項６】
前記第１、第２、および第３のポリヌクレオチドの前記標的特異的領域それぞれは、異なる標的配列に相補的である、請求項１に記載のポリヌクレオチド複合体。
【請求項７】
前記第１、第２、および第３の標的配列それぞれが、同じ遺伝子、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、またはｍｉｃｒｏＲＮＡの中に存在する、請求項１に記載のポリヌクレオチド複合体。
【請求項８】
前記第１、第２、および第３の標的配列のうちの少なくとも２つが、異なる遺伝子、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、またはｍｉｃｒｏＲＮＡの中に存在する、請求項１に記載のポリヌクレオチド複合体。
【請求項９】
ポリヌクレオチドそれぞれの５’領域および／または３’領域の全体あるいは一部が、そのポリヌクレオチドの標的配列にも相補的である、請求項１に記載のポリヌクレオチド複合体。
【請求項１０】
前記自己相補性領域の１つ以上に３’突出が含まれる、請求項１に記載のポリヌクレオチド複合体。
【請求項１１】
自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子であって：
（ａ）第１の標的配列に相補的である標的特異的領域、５’領域、および３’領域を含む第１のヌクレオチド配列；
（ｂ）第２の標的配列に相補的である標的特異的領域、５’領域、および３’領域を含む第２のヌクレオチド配列；ならびに
（ｃ）ヌル領域または第３の標的配列に相補的である標的特異的領域、５’領域、および３’領域を含む第３のヌクレオチド配列
を含み、
ここでは、前記標的特異的領域の少なくとも２つは、異なる標的配列に相補的であり、
ここでは、前記第１のヌクレオチド配列の５’領域は前記第３のヌクレオチド配列の３’領域に相補的であり、前記第１のヌクレオチド配列の３’領域は前記第２のヌクレオチド配列の５’領域に相補的であり、そして前記第２のヌクレオチド配列の３’領域は前記第３のヌクレオチド配列の５’領域に相補的であり、
そしてここでは、５’領域それぞれがそれらの相補的な３’領域にハイブリダイズして、第１、第２、および第３の１本鎖領域と、第１、第２、および第３の自己相補性領域とともに、自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子を形成する、自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
【請求項１２】
前記第１、第２、または第３のヌクレオチド配列に約１５〜６０ヌクレオチドが含まれる、請求項１１に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
【請求項１３】
前記標的特異的領域それぞれに約１５〜３０ヌクレオチドが含まれる、請求項１１に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
【請求項１４】
前記自己相補性領域の１つ以上に約１０〜５４ヌクレオチドが含まれる、請求項１１に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
【請求項１５】
前記自己相補性領域の１つ以上に３’突出が含まれる、請求項１１に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
【請求項１６】
前記自己相補性領域の１つ以上がステム−ループ構造を形成する、請求項１１に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
【請求項１７】
前記自己相補性領域の１つ以上に、前記標的特異的領域の外側にある２ヌクレオチドＡＧ／ＵＵの近位ボックスが含まれる、請求項１１に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
【請求項１８】
前記自己相補性領域の１つ以上に、前記標的特異的領域の外側にある４ヌクレオチドの遠位ボックスが含まれ、ここでは前記遠位ボックスの３番目のヌクレオチドはＧではない、請求項１１に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
【請求項１９】
前記第１、第２、および第３のポリヌクレオチドの前記標的特異的領域それぞれは、異なる標的配列に相補的である、請求項１１に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
【請求項２０】
前記第１、第２、および第３の標的配列それぞれが、同じ遺伝子、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、またはｍｉｃｒｏＲＮＡの中に存在する、請求項１１に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
【請求項２１】
前記第１、第２、および第３の標的配列の少なくとも２つが、異なる遺伝子、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、またはｍｉｃｒｏＲＮＡの中に存在する、請求項１１に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
【請求項２２】
請求項１１に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子をコードするベクター。
【請求項２３】
遺伝子の発現を低下させるための組成物であって、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド複合体、請求項１１〜２１のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド分子、または請求項２２に記載のベクターを含み、前記ポリヌクレオチド複合体、前記ポリヌクレオチド分子、または前記ベクターが、細胞に導入されることを特徴とする、組成物。
【請求項２４】
前記ポリヌクレオチド複合体、前記ポリヌクレオチド分子、または前記ベクターが、インビトロで導入されることを特徴とする、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ポリヌクレオチド複合体、前記ポリヌクレオチド分子、または前記ベクターが、インビボで導入されることを特徴とする、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２６】
前記第１、第２、および／または第３の標的特異的領域の２つ以上がそれぞれ、ＨＩＶ遺伝子のｍＲＮＡ転写物中の異なる標的領域に相補的である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド複合体、請求項１１〜２１のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド分子、請求項２２に記載のベクター、あるいは、請求項２３〜２５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記第１、第２、および／または第３の標的特異的領域の２つ以上がそれぞれ、ヒトのアポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ）遺伝子のｍＲＮＡ転写物中の１つの異なる標的領域に相補的である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド複合体、請求項１１〜２１のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド分子、請求項２２に記載のベクター、あるいは、請求項２３〜２５のいずれか１項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
別の実施形態においては、突然変異した遺伝子は、突然変異体ｐ５３ポリペプチドをコードする遺伝子から発現された遺伝子である。別の実施形態においては、遺伝子はウイルスであり、これには、１つ以上の異なる遺伝子が含まれ得る。特異的な実施形態においては、上記遺伝子はＨＩＶ遺伝子（例えば、本明細書中に記載される、当該分野で公知であるものの中でも、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、またはｔａｔ）である。他の実施形態においては、上記遺伝子はＡｐｏＢである。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
少なくとも３つの別々のポリヌクレオチドのポリヌクレオチド複合体であって：
（ａ） 第１の標的配列に相補的である標的特異的領域、５’領域、および３’領域を含
む第１のポリヌクレオチド；
（ｂ） 第２の標的配列に相補的である標的特異的領域、５’領域、および３’領域を含
む第２のポリヌクレオチド；ならびに
（ｃ）ヌル領域または第３の標的配列（ｔｈｉｒｄ  ｔａｒｇｅｔ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）に相補的である標的特異的領域、５’領域、および３’領域を含む第３のポリヌクレオチド
を含み、
ここでは、前記第１、第２、および第３のポリヌクレオチドの前記標的特異的領域それぞれが、異なる標的配列に相補的であり、
ここでは、前記第１のポリヌクレオチドの５’領域は前記第３のポリヌクレオチドの３’領域に相補的であり、前記第１のポリヌクレオチドの３’領域は前記第２のポリヌクレオチドの５’領域に相補的であり、そして前記第２のポリヌクレオチドの３’領域は前記第３のポリヌクレオチドの５’領域に相補的であり、
そしてここでは、前記３つの別々のポリヌクレオチドがそれらの相補的３’領域と５’領域を介してハイブリダイズして、第１、第２、および第３の１本鎖領域と、第１、第２、および第３の自己相補性領域とともにポリヌクレオチド複合体を形成する、ポリヌクレオチド複合体。
（項目２）
前記第１、第２、および／または第３のポリヌクレオチドに約１５〜３０ヌクレオチドが含まれる、項目１に記載のポリヌクレオチド複合体。
（項目３）
前記第１、第２、および／または第３のポリヌクレオチドに約１７〜２５ヌクレオチドが含まれる、項目１に記載のポリヌクレオチド複合体。
（項目４）
前記自己相補性領域の１つ以上に約５〜１０ヌクレオチド対が含まれる、項目１に記載のポリヌクレオチド複合体。
（項目５）
前記自己相補性領域の１つ以上に約７〜８ヌクレオチド対が含まれる、項目１に記載のポリヌクレオチド複合体。
（項目６）
前記第１、第２、および第３の標的配列それぞれが、同じ遺伝子、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、またはｍｉｃｒｏＲＮＡの中に存在する、項目１に記載のポリヌクレオチド複合体。
（項目７）
前記第１、第２、および第３の標的配列のうちの少なくとも２つが、異なる遺伝子、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、またはｍｉｃｒｏＲＮＡの中に存在する、項目１に記載のポリヌクレオチド複合体。
（項目８）
ポリヌクレオチドそれぞれの５’領域および／または３’領域の全体あるいは一部が、そのポリヌクレオチドの標的配列にも相補的である、項目１に記載のポリヌクレオチド複合体。
（項目９）
前記自己相補性領域の１つ以上に３’突出が含まれる、項目１に記載のポリヌクレオチド複合体。
（項目１０）
自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子であって：
（ａ）第１の標的配列に相補的である標的特異的領域、５’領域、および３’領域を含む第１のヌクレオチド配列；
（ｂ）第２の標的配列に相補的である標的特異的領域、５’領域、および３’領域を含む第２のヌクレオチド配列；ならびに
（ｃ）ヌル領域または第３の標的配列に相補的である標的特異的領域、５’領域、および３’領域を含む第３のヌクレオチド配列
を含み、
ここでは、前記第１、第２、および第３のヌクレオチド配列それぞれの標的特異的領域は、異なる標的配列に相補的であり、
ここでは、前記第１のヌクレオチド配列の５’領域は前記第３のヌクレオチド配列の３’領域に相補的であり、前記第１のヌクレオチド配列の３’領域は前記第２のヌクレオチド配列の５’領域に相補的であり、そして前記第２のヌクレオチド配列の３’領域は前記第３のヌクレオチド配列の５’領域に相補的であり、
そしてここでは、５’領域それぞれがそれらの相補的な３’領域にハイブリダイズして、第１、第２、および第３の１本鎖領域と、第１、第２、および第３の自己相補性領域とともに、自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子を形成する、自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
（項目１１）
前記第１、第２、または第３のヌクレオチド配列に約１５〜６０ヌクレオチドが含まれる、項目１０に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
（項目１２）
前記標的特異的領域それぞれに約１５〜３０ヌクレオチドが含まれる、項目１０に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
（項目１３）
前記自己相補性領域の１つ以上に約１０〜５４ヌクレオチドが含まれる、項目１０に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
（項目１４）
前記自己相補性領域の１つ以上に３’突出が含まれる、項目１０に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
（項目１５）
前記自己相補性領域の１つ以上がステム−ループ構造を形成する、項目１０に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
（項目１６）
前記自己相補性領域の１つ以上に、前記標的特異的領域の外側にある２ヌクレオチドＡＧ／ＵＵの近位ボックスが含まれる、項目１０に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
（項目１７）
前記自己相補性領域の１つ以上に、前記標的特異的領域の外側にある４ヌクレオチドの遠位ボックスが含まれ、ここでは前記遠位ボックスの３番目のヌクレオチドはＧではない、項目１０に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
（項目１８）
前記第１、第２、および第３の標的配列それぞれが、同じ遺伝子、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、またはｍｉｃｒｏＲＮＡの中に存在する、項目１０に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
（項目１９）
前記第１、第２、および第３の標的配列の少なくとも２つが、異なる遺伝子、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、またはｍｉｃｒｏＲＮＡの中に存在する、項目１０に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子。
（項目２０）
項目１０に記載の自己ハイブリダイズするポリヌクレオチド分子をコードするベクター。
（項目２１）
遺伝子の発現を低下させる方法であって、項目１〜９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド複合体、項目１０〜１９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド分子、または項目２０に記載のベクターを細胞に導入する工程を含む、方法。
（項目２２）
前記方法がインビトロで実施される、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記方法がインビボで実施される、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記第１、第２、および／または第３の標的特異的領域の２つ以上がそれぞれ、ＨＩＶ遺伝子のｍＲＮＡ転写物中の異なる標的領域に相補的である、項目１〜９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド複合体、項目１０〜１９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド分子、項目２０に記載のベクター、あるいは、項目２１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
（項目２５）
前記第１、第２、および／または第３の標的特異的領域の２つ以上がそれぞれ、ヒトのアポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ）遺伝子のｍＲＮＡ転写物中の１つの異なる標的領域に相補的である、項目１〜９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド複合体、項目１０〜１９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド分子、項目２０に記載のベクター、あるいは、項目２１〜２３のいずれか１項に記載の方法。