【手続補正書】
【提出日】平成21年3月12日(2009.3.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
尿試料中の酵母様真菌の細胞膜に損傷を与える真菌細胞膜損傷物質；
赤血球の蛍光強度よりも損傷を受けた酵母様真菌の蛍光強度が強くなるように酵母様真菌を染色できる第１色素；及び
前記損傷を受けた酵母様真菌の蛍光強度よりも精子の蛍光強度が強くなるように精子を染色する第２色素；
を含有する尿試料分析用試薬。
【請求項２】
前記真菌細胞膜損傷物質は、赤血球の細胞膜を実質的に損傷しないものである請求項１に記載の試薬。
【請求項３】
前記真菌細胞膜損傷物質は、精子の細胞膜を実質的に損傷しないものである請求項１又は２に記載の試薬。
【請求項４】
前記真菌細胞膜損傷物質は、芳香族アルコール、酢酸フェニル及びベンゾチアゾール化合物からなる群より選択される請求項１〜３のいずれかに記載の試薬。
【請求項５】
前記芳香族アルコールが、フェノキシエタノールである請求項４に記載の試薬。
【請求項６】
前記第１色素が、損傷を受けた酵母様真菌の核酸を染色し、精子の細胞膜を染色する請求項１〜５のいずれかに記載の試薬。
【請求項７】
前記第２色素は、第１色素よりも細胞膜透過性が高い色素である請求項１〜６のいずれかに記載の試薬。
【請求項８】
前記第１色素及び第２色素が、それぞれ下記（１）式、（２）式、及び（３）式で表される蛍光色素からなる群より選択される請求項１〜７のいずれかに記載の試薬。
【化１】
2007255954.tif 000001
（式中、Ａ１は酸素原子、硫黄原子、セレン原子、又はＣ（ＣＨ３）２基であり；Ｒ１は低級アルキル基；Ｘはハロゲン又は過塩素酸；Ｙは−ＣＨ＝基又は−ＮＨ−；ｍは１又は２；ｎは０又は１；
Ｂは下記（４）式
【化２】
2007255954.tif 000002
（式中、Ａ２は酸素原子、硫黄原子、セレン原子、又は−Ｃ（ＣＨ３）２−であり、Ｒ２は低級アルキル基）；２つの低級アルコキシ基若しくは１つのジ低級アルキルアミノ基（この低級アルキルはシアノ基で置換されていてもよい）で置換されたフェニル基；又は
下記（５）式
【化３】
2007255954.tif 000003
である。）
【請求項９】
前記第１色素の極大吸収波長が６３０〜６４０ｎｍであり、前記第２色素の極大吸収波長が６４０〜６６０ｎｍである請求項１〜８のいずれかに記載の試薬。
【請求項１０】
前記真菌細胞膜損傷物質と、前記第１色素及び第２色素とが、別々の容器に収容されている請求項１〜９のいずれかに記載の試薬。
【請求項１１】
尿試料中に含まれる赤血球の細胞膜を実質的に損傷させることなく酵母様真菌の細胞膜に損傷を与え、赤血球の蛍光強度よりも酵母様真菌の蛍光強度が強く、且つ酵母様真菌の蛍光強度よりも精子の蛍光強度が強くなるように、前記尿試料を蛍光染色処理して測定用試料を調製する工程；
前記測定用試料に、光を照射して散乱光情報及び蛍光情報を取得する工程；及び
前記散乱光情報及び前記蛍光情報に基づいて、前記測定用試料に含まれる精子を計数する工程を含む尿試料の分析方法。
【請求項１２】
前記散乱光情報が前方散乱光強度であり、前記蛍光情報が蛍光強度である請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記計数工程において、前記測定用試料に含まれる赤血球、酵母様真菌及び精子を弁別し、それぞれを計数する請求項１１又は１２に記載の分析方法。
【請求項１４】
前記計数工程において、前記散乱光情報及び前記蛍光情報を二軸とする散布図を作成し、  前記散布図中に前記精子が出現する領域を特定することにより、前記精子を計数する請求項１１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記散布図において、前記赤血球が出現する領域と、前記酵母様真菌が出現する領域とをさらに特定することにより、前記赤血球及び前記酵母様真菌をそれぞれ計数する請求項１４に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
前記第１色素及び第２色素が、それぞれ下記（１）式、（２）式、及び（３）式で表される蛍光色素からなる群より選択されることが好ましい。
【化４】
2007255954.tif 000004
（式中、Ａ１は酸素原子、硫黄原子、セレン原子、又はＣ（ＣＨ３）２基であり；Ｒ１は低級アルキル基；Ｘはハロゲン又は過塩素酸；Ｙは−ＣＨ＝基又は−ＮＨ−；ｍは１又は２；ｎは０又は１；
Ｂは下記（４）式
【化５】
2007255954.tif 000005
（式中、Ａ２は酸素原子、硫黄原子、セレン原子、又は−Ｃ（ＣＨ３）２−であり、Ｒ２は低級アルキル基）；２つの低級アルコキシ基若しくは１つのジ低級アルキルアミノ基（この低級アルキルはシアノ基で置換されていてもよい）で置換されたフェニル基；又は
下記（５）式
【化６】
2007255954.tif 000006
である。）
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
このような第１色素は、下記（１）式、（２）式、及び（３）式で表される色素からなる群より選択されることが好ましい。
前記第１色素及び第２色素が、それぞれ下記（１）式、（２）式、及び（３）式で表される蛍光色素からなる群より選択されることが好ましい。
【化７】
2007255954.tif 000007
（式中、Ａ１は酸素原子、硫黄原子、セレン原子、又はＣ（ＣＨ３）２基であり；Ｒ１は低級アルキル基；Ｘはハロゲン又は過塩素酸；Ｙは−ＣＨ＝基又は−ＮＨ−；ｍは１又は２；ｎは０又は１；
Ｂは下記（４）式
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
【化８】
2007255954.tif 000008
（式中、Ａ２は酸素原子、硫黄原子、セレン原子、又は−Ｃ（ＣＨ３）２−であり、Ｒ２は低級アルキル基）；２つの低級アルコキシ基若しくは１つのジ低級アルキルアミノ基（この低級アルキルはシアノ基で置換されていてもよい）で置換されたフェニル基；又は
下記（５）式
【化９】
2007255954.tif 000009
である。）
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
【化１０】
2007255954.tif 000010
【化１１】
2007255954.tif 000011
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
このような第２色素は、下記（１）式、（２）式、及び（３）式で表される色素からなる群より選択されることが好ましい。
【化１２】
2007255954.tif 000012
（式中、Ａ１は酸素原子、硫黄原子、セレン原子、又はＣ（ＣＨ３）２基であり；Ｒ１は低級アルキル基；Ｘはハロゲン又は過塩素酸；Ｙは−ＣＨ＝基又は−ＮＨ−；ｍは１又は２；ｎは０又は１；
Ｂは下記（４）式
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
【化１３】
2007255954.tif 000013
（式中、Ａ２は酸素原子、硫黄原子、セレン原子、又は−Ｃ（ＣＨ３）２−であり、Ｒ２は低級アルキル基）；２つの低級アルコキシ基若しくは１つのジ低級アルキルアミノ基（この低級アルキルはシアノ基で置換されていてもよい）で置換されたフェニル基；又は
下記（５）式
【化１４】
2007255954.tif 000014
である。）
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
【化１５】
2007255954.tif 000015
【化１６】
2007255954.tif 000016