【手続補正書】
【提出日】平成25年9月27日(2013.9.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
造血前駆細胞(HSPC)中に対応するmiRNAを有するヌクレオチド配列に機能し得る形で連結された少なくとも1個のmiRNA配列標的を含む遺伝子療法における使用のための遺伝子ベクターであって、該miRNAは、HSPC中では該ヌクレオチド配列の発現を防止するか又は低下させるが、分化した細胞中では該発現を防止も低下もさせない、前記遺伝子ベクター。
【請求項２】
造血幹細胞(HSC)中に対応するmiRNAを有するヌクレオチド配列に機能し得る形で連結された少なくとも1個のmiRNA配列標的を含む遺伝子療法における使用のための遺伝子ベクターであって、該miRNAは、HSC中では該ヌクレオチド配列の発現を防止するか又は低下させるが、分化した細胞中では該発現を防止も低下もさせない、前記遺伝子ベクター。
【請求項３】
ヌクレオチド配列に機能し得る形で連結されたmir-130a、mir-126、mir-223、126/130aT(2/2の組合せ)及び126T(2個の標的)を含む群より選択されるmiRNAに対応する少なくとも1個のmiRNA配列標的を含む、遺伝子療法における使用のための遺伝子ベクター。
【請求項４】
mir-130a及びmir-126に対応するmiRNA配列標的を含む、請求項３に記載の遺伝子ベクター。
【請求項５】
前記ヌクレオチド配列が前記ベクターの発現を制御する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項６】
前記ヌクレオチド配列がトランスジーンである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項７】
前記ベクターがウイルスベクターである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項８】
前記ベクターがレンチウイルスから誘導可能である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項９】
前記ベクターが組織特異的プロモーターを含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項１０】
前記組織特異的プロモーターがCD11b、c-Fes及びCYBB及びTEK由来のプロモーターを含む群より選択される、請求項９に記載の遺伝子ベクター。
【請求項１１】
前記ベクターが骨髄特異的プロモーターを含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項１２】
前記トランスジーンが酵素をコードする、請求項６に記載の遺伝子ベクター。
【請求項１３】
前記酵素がリソソーム酵素ガラクトセレブロシダーゼ、gp91 phox及びインターフェロン-αの群より選択される、請求項１２に記載の遺伝子ベクター。
【請求項１４】
請求項１〜５のいずれか１項に定義された少なくとも1個のmiRNA配列標的と、必要に応じて、トランスジーンとを含む、パッケージ可能なウイルスベクターゲノムをコードするDNA構築物を含むウイルスベクター粒子を製造するためのDNA構築物のセット。
【請求項１５】
請求項１４に記載のDNA構築物のセットを宿主細胞中に導入し、ウイルスベクター粒子を取得することを含む、ウイルスベクター粒子を調製する方法。
【請求項１６】
前記宿主細胞が対応するmiRNAを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１５又は１６に記載の方法により製造されたウイルスベクター粒子。
【請求項１８】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター又は請求項１７に記載の粒子を含む医薬組成物。
【請求項１９】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター又は請求項１７に記載の粒子を感染させたか、又は該遺伝子ベクター又は粒子で形質導入された細胞。
【請求項２０】
造血幹細胞又は造血前駆細胞である、請求項１９に記載の細胞。
【請求項２１】
mir-130a、mir-126、mir-223及び126/130aT(2/2の組合せ)及び126T(2個の標的)を含む群より選択されるmiRNAに対応する少なくとも2個の異なるmiRNA配列標的の組合せ。
【請求項２２】
前記miRNA配列標的が同時、個別的又は連続的使用のためのものである、請求項２１に記載の組合せ。
【請求項２３】
造血幹細胞又は造血前駆細胞中でのトランスジーンの発現を防止するか、又は低下させるための医薬の製造における、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のベクター、請求項１７に記載の粒子、請求項１８に記載の医薬組成物、請求項１９若しくは２０に記載の細胞、又は請求項２１若しくは２２に記載の組合せの使用。
【請求項２４】
球様細胞白質萎縮症、慢性肉芽腫性疾患、重症複合免疫不全症(SCID)及び固形腫瘍から選択される疾患を治療するための医薬の製造における、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター、請求項１７に記載の粒子、請求項１８に記載の医薬組成物、請求項１９若しくは２０に記載の細胞、又は請求項２１若しくは２２に記載の組合せの使用。
【請求項２５】
遺伝子療法に関連する造血幹細胞又は造血前駆細胞の生存機会を増加させるための医薬の製造における、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター、請求項１７に記載の粒子、請求項１８に記載の医薬組成物、請求項１９若しくは２０に記載の細胞、又は請求項２１若しくは２２に記載の組合せの使用。
【請求項２６】
遺伝子療法の安全性及び/又は効果を増加させるための医薬の製造における、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター、請求項１７に記載の粒子、請求項１８に記載の医薬組成物、請求項１９若しくは２０に記載の細胞、又は請求項２１若しくは２２に記載の組合せの使用。
【請求項２７】
造血幹細胞又は造血前駆細胞のトランスジーンの発現により引き起こされるアポトーシスを防止するための医薬の製造における、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター、請求項１７に記載の粒子、請求項１８に記載の医薬組成物、請求項１９若しくは２０に記載の細胞、又は請求項２１若しくは２２に記載の組合せの使用。
【請求項２８】
造血幹細胞又は造血前駆細胞の分化段階をモニターするための医薬の製造における、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター、請求項１７に記載の粒子、請求項１８に記載の医薬組成物、請求項１９若しくは２０に記載の細胞、又は請求項２１若しくは２２に記載の組合せの使用。
【請求項２９】
前記医薬が造血細胞療法のためのものである、請求項２３〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３０】
造血幹細胞又は造血前駆細胞中でのトランスジーンの発現を防止するか、又は低下させるための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター、請求項１７に記載の粒子、請求項１８に記載の医薬組成物、請求項１９若しくは２０に記載の細胞、又は請求項２１若しくは２２に記載の組合せ。
【請求項３１】
球様細胞白質萎縮症、慢性肉芽腫性疾患、重症複合免疫不全症(SCID)及び固形腫瘍から選択される疾患を治療するための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター、請求項１７に記載の粒子、請求項１８に記載の医薬組成物、請求項１９若しくは２０に記載の細胞、又は請求項２１若しくは２２に記載の組合せ。
【請求項３２】
遺伝子療法に関連する造血幹細胞又は造血前駆細胞の生存機会を増加させるための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター、請求項１７に記載の粒子、請求項１８に記載の医薬組成物、請求項１９若しくは２０に記載の細胞、又は請求項２１若しくは２２に記載の組合せ。
【請求項３３】
遺伝子療法の安全性及び/又は効果を増加させるための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター、請求項１７に記載の粒子、請求項１８に記載の医薬組成物、請求項１９若しくは２０に記載の細胞、又は請求項２１若しくは２２に記載の組合せ。
【請求項３４】
造血幹細胞又は造血前駆細胞のトランスジーンの発現により引き起こされるアポトーシスを防止するための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター、請求項１７に記載の粒子、請求項１８に記載の医薬組成物、請求項１９若しくは２０に記載の細胞、又は請求項２１若しくは２２に記載の組合せ。
【請求項３５】
造血幹細胞又は造血前駆細胞の分化段階をモニターするための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター、請求項１７に記載の粒子、請求項１８に記載の医薬組成物、請求項１９若しくは２０に記載の細胞、又は請求項２１若しくは２２に記載の組合せ。
【請求項３６】
造血幹細胞療法における使用のための、請求項３０〜３５のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項３７】
遺伝子療法における使用のための医薬の製造における、mir-130a、mir-126、mir-223及び126/130aT(2/2の組合せ)及び126T(2個の標的)の群より選択されるmiRNAに対応するmiRNA配列標的の使用。
【請求項３８】
遺伝子療法における使用のためのmir-130a、mir-126及びmir-223の群より選択されるmiRNAに対応するmiRNA配列標的。
【請求項３９】
造血幹細胞又は造血前駆細胞の分化段階を決定する方法であって、該細胞中で、ヌクレオチド配列に機能し得る形で連結されたmiRNA標的配列に対応し、造血前駆細胞(HSPC)又は造血幹細胞(HSC)中では前記ヌクレオチド配列の発現を防止するか、又は低下させるが、分化した細胞中では該発現を防止も低下もさせないmiRNAの発現レベルを決定することを含む、前記方法。
【請求項４０】
造血幹細胞又は造血前駆細胞の分化段階を決定する方法であって、該細胞中で、ヌクレオチド配列に機能し得る形で連結されたmiRNA標的配列に対応し、造血前駆細胞(HSPC)又は造血幹細胞(HSC)中では前記ヌクレオチド配列の発現を防止するか、又は低下させるが、分化した細胞中では該発現を防止も低下もさせない、少なくとも2種の異なるmiRNAの発現レベルを決定すること、及び該異なるmiRNAの発現レベルを比較することを含む、前記方法。
【請求項４１】
造血幹細胞又は造血前駆細胞の分化段階を決定する方法であって、該造血幹細胞又は造血前駆細胞中でのトランスジーンの発現レベルを決定することを含み、該トランスジーンが、miRNA配列標的に機能し得る形で連結され、対応するmiRNAが造血前駆細胞(HSPC)又は造血幹細胞(HSC)中ではトランスジーンの発現を防止するか、又は低下させるが、分化した細胞中では該発現を防止も低下もさせない、前記方法。
【請求項４２】
miRNAがmir-130a、mir-126、mir-223、126/130aT(2/2の組合せ)及び126T(2個の標的)を含む群より選択される、請求項３９〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９４】
本発明に従うベクター系による1個以上の治療的遺伝子の送達を、単独で、または他の治療もしくは治療成分と組合わせて用いることができる。治療することができる疾患としては、限定されるものではないが、癌、神経疾患、遺伝病、心疾患、卒中、関節炎、ウイルス感染および免疫系の疾患が挙げられる。好適な治療的遺伝子としては、腫瘍抑制タンパク質、酵素、プロドラッグ活性化酵素、免疫調節分子、抗体、遺伝子操作された免疫グロブリン様分子、融合タンパク質、ホルモン、膜タンパク質、血管作動性タンパク質またはペプチド、サイトカイン、ケモカイン、抗ウイルスタンパク質、アンチセンスRNAおよびリボザイムをコードするものが挙げられる。
以下、本発明の実施形態を示す。
（１）造血前駆細胞(HSPC)中に対応するmiRNAを有するヌクレオチド配列に機能し得る形で連結された少なくとも1個のmiRNA配列標的を含む遺伝子療法における使用のための遺伝子ベクターであって、該miRNAは、HSPC中では該ヌクレオチド配列の発現を防止するかまたは低下させるが、分化した細胞中では該発現を防止も低下もさせない、前記遺伝子ベクター。
（２）造血幹細胞(HSC)中に対応するmiRNAを有するヌクレオチド配列に機能し得る形で連結された少なくとも1個のmiRNA配列標的を含む遺伝子療法における使用のための遺伝子ベクターであって、該miRNAは、HSC中では該ヌクレオチド配列の発現を防止するかまたは低下させるが、分化した細胞中では該発現を防止も低下もさせない、前記遺伝子ベクター。
（３）ヌクレオチド配列に機能し得る形で連結されたmir-130a、mir-126、mir-223、126/130aT(2/2の組合せ)および126T(2個の標的)を含む群より選択されるmiRNAに対応する少なくとも1個のmiRNA配列標的を含む、遺伝子療法における使用のための遺伝子ベクター。
（４）mir-130aおよびmir-126に対応するmiRNA配列標的を含む、（３）に記載の遺伝子ベクター。
（５）前記ヌクレオチド配列が前記ベクターの発現を制御する、（１）〜（４）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター。
（６）前記ヌクレオチド配列がトランスジーンである、（１）〜（５）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター。
（７）前記ベクターがウイルスベクターである、（１）〜（６）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター。
（８）前記ベクターがレンチウイルスから誘導可能である、（１）〜（７）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター。
（９）前記ベクターが組織特異的プロモーターを含む、（１）〜（８）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター。
（１０）前記組織特異的プロモーターがCD11b、c-FesおよびCYBBおよびTEKを含む群より選択される、（１）〜（９）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター。
（１１）前記トランスジーンが酵素をコードする、（１）〜（１０）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター。
（１２）前記酵素がリソソーム酵素ガラクトセレブロシダーゼ、gp91 phoxおよびインターフェロン-αの群より選択される、（１１）に記載の遺伝子ベクター。
（１３）（１）〜（５）のいずれか１に定義された少なくとも1個のmiRNA配列標的と、必要に応じて、トランスジーンとを含む、パッケージ可能なウイルスベクターゲノムをコードするDNA構築物を含むウイルスベクター粒子を製造するためのDNA構築物のセット。
（１４）（１３）に記載のDNA構築物のセットを宿主細胞中に導入し、ウイルスベクター粒子を取得することを含む、ウイルスベクター粒子を調製する方法。
（１５）前記宿主細胞が対応するmiRNAを含む、（１４）に記載の方法。
（１６）（１４）または（１５）に記載の方法により製造されたウイルスベクター粒子。
（１７）（１）〜（１２）または（１６）のいずれか１に記載の遺伝子ベクターまたは粒子を含む医薬組成物。
（１８）（１）〜（１２）または（１６）のいずれか１に記載の遺伝子ベクターまたは粒子を感染させたか、または該遺伝子ベクターまたは粒子で形質導入された細胞。
（１９）造血幹細胞または造血前駆細胞である、（１８）に記載の細胞。
（２０）mir-130a、mir-126、mir-223および126/130aT(2/2の組合せ)および126T(2個の標的)を含む群より選択されるmiRNAに対応する少なくとも2個の異なるmiRNA配列標的の組合せ。
（２１）前記miRNA配列標的が同時、個別的または連続的使用のためのものである、（２０）に記載の組合せ。
（２２）造血幹細胞または造血前駆細胞中でのトランスジーンの発現を防止するか、または低下させるための医薬の製造における、（１）〜（１２）のいずれか１に記載のベクター、（１６）に記載の粒子、（１７）に記載の医薬組成物、（１８）もしくは（１９）に記載の細胞、または（２０）もしくは（２１）に記載の組合せの使用。
（２３）球様細胞白質萎縮症、慢性肉芽腫性疾患、重症複合免疫不全症(SCID)および固形腫瘍から選択される疾患を治療するための医薬の製造における、（１）〜（１２）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター、（１６）に記載の粒子、（１７）に記載の医薬組成物、（１８）もしくは（１９）に記載の細胞、または（２０）もしくは（２１）に記載の組合せの使用。
（２４）遺伝子療法に関連する造血幹細胞または造血前駆細胞の生存機会を増加させるための医薬の製造における、（１）〜（１２）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター、（１６）に記載の粒子、（１７）に記載の医薬組成物、（１８）もしくは（１９）に記載の細胞、または（２０）もしくは（２１）に記載の組合せの使用。
（２５）遺伝子療法の安全性および／または効果を増加させるための医薬の製造における、（１）〜（１２）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター、（１６）に記載の粒子、（１７）に記載の医薬組成物、（１８）もしくは（１９）に記載の細胞、または（２０）もしくは（２１）に記載の組合せの使用。
（２６）造血幹細胞または造血前駆細胞のトランスジーンの発現により引き起こされるアポトーシスを防止するための医薬の製造における、（１）〜（１２）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター、（１６）に記載の粒子、（１７）に記載の医薬組成物、（１８）もしくは（１９）に記載の細胞、または（２０）もしくは（２１）に記載の組合せの使用。
（２７）造血幹細胞または造血前駆細胞の分化段階をモニターするための医薬の製造における、（１）〜（１２）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター、（１６）に記載の粒子、（１７）に記載の医薬組成物、（１８）もしくは（１９）に記載の細胞、または（２０）もしくは（２１）に記載の組合せの使用。
（２８）前記医薬が造血細胞療法のためのものである、（２２）〜（２７）のいずれか１に記載の使用。
（２９）造血幹細胞または造血前駆細胞中でのトランスジーンの発現を防止するか、または低下させるための、（１）〜（１２）のいずれか１項に記載の遺伝子ベクター、（１６）に記載の粒子、（１７）に記載の医薬組成物、（１８）もしくは（１９）に記載の細胞、または（２０）もしくは（２１）に記載の組合せ。
（３０）球様細胞白質萎縮症、慢性肉芽腫性疾患、重症複合免疫不全症(SCID)および固形腫瘍から選択される疾患を治療するための、（１）〜（１２）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター、（１６）に記載の粒子、（１７）に記載の医薬組成物、（１８）もしくは（１９）に記載の細胞、または（２０）もしくは（２１）に記載の組合せ。
（３１）遺伝子療法に関連する造血幹細胞または造血前駆細胞の生存機会を増加させるための、（１）〜（１２）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター、（１６）に記載の粒子、（１７）に記載の医薬組成物、（１８）もしくは（１９）に記載の細胞、または（２０）もしくは（２１）に記載の組合せ。
（３２）遺伝子療法の安全性および／または効果を増加させるための、（１）〜（１２）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター、（１６）に記載の粒子、（１７）に記載の医薬組成物、（１８）もしくは（１９）に記載の細胞、または（２０）もしくは（２１）に記載の組合せ。
（３３）造血幹細胞または造血前駆細胞のトランスジーンの発現により引き起こされるアポトーシスを防止するための、（１）〜（１２）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター、（１６）に記載の粒子、（１７）に記載の医薬組成物、（１８）もしくは（１９）に記載の細胞、または（２０）もしくは（２１）に記載の組合せ。
（３４）造血幹細胞または造血前駆細胞の分化段階をモニターするための、（１）〜（１２）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター、（１６）に記載の粒子、（１７）に記載の医薬組成物、（１８）もしくは（１９）に記載の細胞、または（２０）もしくは（２１）に記載の組合せ。
（３５）造血幹細胞療法における使用のための、（２９）〜（３４）のいずれか１に記載の遺伝子ベクター。
（３６）遺伝子療法における使用のための医薬の製造における、mir-130a、mir-126、mir-223および126/130aT(2/2の組合せ)および126T(2個の標的)の群より選択されるmiRNAに対応するmiRNA配列標的の使用。
（３７）遺伝子療法における使用のためのmir-130a、mir-126およびmir-223の群より選択されるmiRNAに対応するmiRNA配列標的。
（３８）造血幹細胞または造血前駆細胞の分化段階を決定する方法であって、該細胞中で、ヌクレオチド配列に機能し得る形で連結されたmiRNA標的配列に対応し、造血前駆細胞(HSPC)または造血幹細胞(HSC)中では前記ヌクレオチド配列の発現を防止するか、または低下させるが、分化した細胞中では該発現を防止も低下もさせないmiRNAの発現レベルを決定することを含む、前記方法。
（３９）造血幹細胞または造血前駆細胞の分化段階を決定する方法であって、該細胞中で、ヌクレオチド配列に機能し得る形で連結されたmiRNA標的配列に対応し、造血前駆細胞(HSPC)または造血幹細胞(HSC)中では前記ヌクレオチド配列の発現を防止するか、または低下させるが、分化した細胞中では該発現を防止も低下もさせない、少なくとも2種の異なるmiRNAの発現レベルを決定すること、および該異なるmiRNAの発現レベルを比較することを含む、前記方法。
（４０）造血幹細胞または造血前駆細胞の分化段階を決定する方法であって、該造血幹細胞または造血前駆細胞中でのトランスジーンの発現レベルを決定することを含み、該トランスジーンが、miRNA配列標的に機能し得る形で連結され、対応するmiRNAが造血前駆細胞(HSPC)または造血幹細胞(HSC)中ではトランスジーンの発現を防止するか、または低下させるが、分化した細胞中では該発現を防止も低下もさせない、前記方法。
（４１）miRNAがmir-130a、mir-126、mir-223、126/130aT(2/2の組合せ)および126T(2個の標的)を含む群より選択される、（３８）〜（４０）のいずれか１に記載の方法。