【手続補正書】
【提出日】平成24年12月12日(2012.12.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも1つの反応性チオール基を有するポリペプチドを修飾する方法であって、前記方法は、ポリペプチドの少なくとも1つのチオール基と反応することができるビニル置換基を有する、窒素を含む複素環式芳香環を含む官能基化試薬と、ポリペプチドとを接触させる工程を含み、前記官能基化試薬は、グリカン群と共有結合して、官能基化試薬のビニル置換基がポリペプチドのチオール基と反応し、これによりグリカン群をポリペプチドに共有結合する方法。
【請求項２】
(a) ビニル置換基を有する、窒素を含む複素環式芳香環を含む前駆体官能基化試薬を、前記グリカン群と反応させて、前記官能基化試薬を生成する初期工程; および/または
(b) 前記ポリペプチド内の反応性チオール基の位置を決める工程、および場合によってそのうちのいくつかを保護する工程; および/または
(c) 化学反応によって、または部位特異的変異導入によって、元のポリペプチドを修飾して、前記ポリペプチドの1つ以上の所望の位置にチオール基を含むバリアントポリペプチドを生成する初期工程
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
(a) 前記窒素を含む複素環式芳香環が、ピリジン、ピリミジンまたはアジジン環である; または
(b) 前記チオール基がシステイン残基に存在する、
請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ビニル置換基を有する、窒素を含む複素環式芳香環を含む前記官能基化試薬が、以下の一般式:
【化１】
2012512858.tif 000001
(ここで、
XおよびYは、独立に、CHまたはNから選択され;
少なくともR1、場合によってR2は、グリカン群に共有結合され、
R1、場合によってR2は、独立に、
-(CH2)n-Z-(CH2)o-C(O)-R(ここで、ZはO、SまたはNHであり、nは0から10であり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である); あるいは
-(CH2)n-Z-(CH2)o-R(ここで、ZはO、SまたはNHであり、nは0から10であり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である); あるいは
-C(O)-Z-(CH2)o-R(ここで、ZはO、SまたはNHであり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である); あるいは
-(CH2)n-Z-C(O)-(CH2)o-R(ここで、ZはO、SまたはNHであり、nは0から10であり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である);
-Y-(CH2)n-Z-C(O)-(CH2)o-R(ここで、Yはアリール基、O、SまたはNHであり、ZはOまたはNHであり、nは0から10であり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である); あるいは
-Y-R(ここで、YはOまたはSであり、Rは水素、グリカン、ポリ(アルキレングリコール)分子、アリールまたはC1〜10アルキルである);
から選択され、
ただし、R2がポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群に結合されていない場合、それは、水素または電子吸引性基、例えばハロゲン(F、Cl、またはBr)、-NO2、-CO2H、-CO2R4、COR4、-CHO、-CN、-CF3、-SO2NR4R5、アルキルまたはフェニルからさらに選択されてもよく、ここで、R4およびR5は、独立に、水素またはC1〜10アルキルから選択され;
あるいは、R2とR3とが一緒に、縮合(ヘテロ)芳香環置換基を形成し、これには、これに限定されないが、インドール、インダゾール、ベンズイミダゾール、キノリン、イソキノリン、アジラジンまたはプリンが含まれてもよく;
あるいは、R3は、水素、または、ハロ、ヒドロキシ、エーテル、ホルミル、アシル、カルボキシ、エステル、アシルオキシ、アミド、アシルアミド、チオアミド、テトラゾリル、アミノ、ニトロ、ニトロソ、アジド、シアノ、イソシアノ、シアナート、イソシアナート、チオシアノ、イソチオシアノ、チオエーテル、スルホン酸、スルホネート、スルホン、スルホニルオキシ、スルフィニルオキシ、スルファミノ、スルホンアミノ、スルフィンアミノ、スルファミル、スルホンアミド、C1〜7アルキルから選択される置換基から選択される)
で表される、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
(a) XとYが両方CHであるか、またはXとYのうちの1つがCHであり、もう1つがNである; および/または
(b) R1またはR2のうちの1つがグリカン群を含み、場合によってR1とR2のうちのもう1つがポリ(アルキレングリコール)分子を含む、あるいは、R1とR2の両方がグリカン群を含む; および/または
(c) 前記窒素を含む複素環式芳香環への前記ポリ(アルキレングリコール)分子および/または前記グリカン群の結合のための前記R1および/またはR2基が、独立に、-(CH2)n-Z-(CH2)o-Rまたは-C(O)-Z-(CH2)o-Rから選択される; または
(d) 前記R1およびR2基において、oが0であり、前記基が-(CH2)n-Z-Rまたは-C(O)-Z-Rとして表される、
請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記官能基化試薬が、一般式:
【化２】
2012512858.tif 000002
(ここで、
少なくともR1、場合によってR2は、グリカン群に共有結合され、
さらに、R1、場合によってR2は、独立に、
-(CH2)n-Z-(CH2)o-C(O)-R(ここで、ZはO、SまたはNHであり、nは0から10であり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である); あるいは
-(CH2)n-Z-(CH2)o-R(ここで、ZはO、SまたはNHであり、nは0から10であり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である); あるいは
-C(O)-Z-(CH2)o-R(ここで、ZはO、SまたはNHであり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である); あるいは
-(CH2)n-Z-C(O)-(CH2)o-R(ここで、ZはO、SまたはNHであり、nは0から10であり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である);
-Y-(CH2)n-Z-C(O)-(CH2)o-R(ここで、Yはアリール基、O、SまたはNHであり、ZはOまたはNHであり、nは0から10であり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である); あるいは
-Y-R(ここで、YはOまたはSであり、Rは水素、グリカン、ポリ(アルキレングリコール)分子、アリールまたはC1〜10アルキルである);
から選択され、
ただし、R2がポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群に結合されていない場合、それは、水素または電子吸引性基、例えばハロゲン(F、Cl、またはBr)、-NO2、-CO2H、-CO2R4、COR4、-CHO、-CN、-CF3、-SO2NR4R5、アルキルまたはフェニルからさらに選択されてもよく、ここで、R4およびR5は、独立に、水素またはC1〜10アルキルから選択される)
のうちの1つで表される、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
(a) 前記グリカンが、ポリペプチドをグリコシル化するための炭化水素基である; または
(b) 前記炭化水素基が、天然に存在する、または合成の単糖類、オリゴ糖類もしくは多糖類である; または
(c) 前記グリカンが、N-結合したまたはO-結合した糖類である; または
(d) 前記ポリ(アルキレングリコール)分子の基が、1kDaから50kDaの間の分子量を有する;
(e) 前記ポリ(アルキレングリコール)またはグリカン群が前記ポリペプチドに結合して、ポリペプチドの薬理学的特性、例えば前記ポリペプチドの、安定性、生物学的半減期、水溶性および/または免疫学的特徴を改変させる、
請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ポリペプチドが、エリスロポエチン、インターフェロン、インターロイキン、ケモカイン、リンホカイン、サイトカイン、インスリン、モノクローナル抗体またはそのフラグメント、組み換え抗体またはそのフラグメント、血液凝固因子、コロニー刺激因子、成長ホルモン、プラスミノゲン活性化因子、ウイルス由来ペプチド、生殖ホルモン、治療用酵素または共役ワクチンのための担体タンパク質であり、場合によって前記共役ワクチンが、担体タンパク質と、抗原性多糖類である1つ以上のグリカン群との間で形成される、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
以下の式:
【化３】
2012512858.tif 000003
(ここで、
XおよびYは、独立に、CHまたはNから選択され;
少なくともR1、場合によってR2は、グリカン群に共有結合され、
R1、場合によってR2は、独立に、
-(CH2)n-Z-(CH2)o-R(ここで、ZはO、SまたはNHであり、nは0から10であり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である); あるいは
-C(O)-Z-(CH2)o-R(ここで、ZはO、SまたはNHであり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である); あるいは
-(CH2)n-Z-C(O)-(CH2)o-R(ここで、ZはO、SまたはNHであり、nは0から10であり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である);
-Y-(CH2)n-Z-C(O)-(CH2)o-R(ここで、Yはアリール基、O、SまたはNHであり、ZはOまたはNHであり、nは0から10であり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である); あるいは
-Y-R(ここで、YはOまたはSであり、Rは水素、グリカン、ポリ(アルキレングリコール)分子、アリールまたはC1〜10アルキルである);
から選択され、
ただし、R2がポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群に結合されていない場合、それは、水素または電子吸引性基、例えばハロゲン(F、Cl、またはBr)、-NO2、-CO2H、-CO2R4、COR4、-CHO、-CN、-CF3、-SO2NR4R5、アルキルまたはフェニルからさらに選択されてもよく、ここで、R4およびR5は、独立に、水素またはC1〜10アルキルから選択され;
あるいは、R2とR3とが一緒に、縮合(ヘテロ)芳香環置換基を形成し、これには、これに限定されないが、インドール、インダゾール、ベンズイミダゾール、キノリン、イソキノリン、アジラジンまたはプリンが含まれてもよく;
あるいは、R3は、水素、または、ハロ、ヒドロキシ、エーテル、ホルミル、アシル、カルボキシ、エステル、アシルオキシ、アミド、アシルアミド、チオアミド、テトラゾリル、アミノ、ニトロ、ニトロソ、アジド、シアノ、イソシアノ、シアナート、イソシアナート、チオシアノ、イソチオシアノ、チオエーテル、スルホン酸、スルホネート、スルホン、スルホニルオキシ、スルフィニルオキシ、スルファミノ、スルホンアミノ、スルフィンアミノ、スルファミル、スルホンアミド、C1〜7アルキルから選択される置換基から選択される)
で表される、グリカン群でポリペプチドを官能基化するための化合物。
【請求項１０】
(a) XとYが両方CHであるか、またはXとYのうちの1つがCHであり、もう1つがNである; および/または
(b) R1またはR2のうちの1つがグリカン群を含み、場合によってR1とR2のうちのもう1つがポリ(アルキレングリコール)分子を含む、あるいは、R1とR2の両方がグリカン群を含む; および/または
(c) 前記窒素を含む複素環式芳香環への前記ポリ(アルキレングリコール)分子および/または前記グリカン群の結合のための前記R1および/またはR2基が、独立に、-(CH2)n-Z-(CH2)o-Rまたは-C(O)-Z-(CH2)o-Rから選択される; または
(d) 前記R1およびR2基において、oが0であり、前記基が-(CH2)n-Z-Rまたは-C(O)-Z-Rとして表される、
請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
以下の一般式:
【化４】
2012512858.tif 000004
(ここで、
少なくともR1、場合によってR2は、ポリ(アルキレングリコール)分子および/またはグリカン群に共有結合され、
さらに、R1、場合によってR2は、独立に、
-(CH2)n-Z-(CH2)o-R(ここで、ZはO、SまたはNHであり、nは0から10であり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である); あるいは
-C(O)-Z-(CH2)o-R(ここで、ZはO、SまたはNHであり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である); あるいは
-(CH2)n-Z-C(O)-(CH2)o-R(ここで、ZはO、SまたはNHであり、nは0から10であり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である);
-Y-(CH2)n-Z-C(O)-(CH2)o-R(ここで、Yはアリール基、O、SまたはNHであり、ZはOまたはNHであり、nは0から10であり、oは0から10であり、Rは水素、ポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群である); あるいは
-Y-R(ここで、YはOまたはSであり、Rは水素、グリカン、ポリ(アルキレングリコール)分子、アリールまたはC1〜10アルキルである);
から選択され、
ただし、R2がポリ(アルキレングリコール)分子またはグリカン群に結合されていない場合、それは、水素または電子吸引性基、例えばハロゲン(F、Cl、またはBr)、-NO2、-CO2H、-CO2R4、COR4、-CHO、-CN、-CF3、-SO2NR4R5、アルキルまたはフェニルからさらに選択されてもよく、ここで、R4およびR5は、独立に、水素またはC1〜10アルキルから選択される)
のうちの1つで表される、グリカン群でポリペプチドを官能基化するための化合物。
【請求項１２】
請求項９から１１のいずれか一項に記載の化合物と、ポリペプチドの1つ以上のチオール基との反応によって形成された結合体。
【請求項１３】
医療処置の方法における使用のための、請求項９から１１のいずれか一項に記載の化合物と、ポリペプチドの1つ以上のチオール基との反応によって形成された結合体。
【請求項１４】
前記処置が治療または診断である、請求項１３に記載の処置の方法における使用のための結合体。
【請求項１５】
前記結合体がワクチンであり、場合によって前記ワクチンが、担体タンパク質と、抗原多糖類である1つ以上のグリカン群との間で形成される、請求項１３に記載の処置の方法における使用のための結合体。