【手続補正書】
【提出日】平成24年12月21日(2012.12.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ３４＋造血始原細胞から人工多能性幹細胞を作製する方法であって、
（ａ）ＣＤ３４＋造血始原細胞を含む細胞集団を入手する工程であって、前記ＣＤ３４＋造血始原細胞が、被験体に由来し、前記被験体の細胞が、外的に加えられる顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）で動員されていない、工程と、
（ｂ）前記細胞集団の前記ＣＤ３４＋造血始原細胞からｉＰＳ細胞を産生させて、ｉＰＳ細胞集団を提供する工程と、を含む、方法。
【請求項２】
Ｔ細胞から人工多能性幹細胞を作製する方法であって、
（ａ）Ｔ細胞を含む細胞集団を入手する工程と、
（ｂ）前記細胞集団の前記Ｔ細胞からｉＰＳ細胞を産生させて、ｉＰＳ細胞集団を提供する工程と、を含む、方法。
【請求項３】
前記細胞集団の供給源が、血液サンプル、血液成分、骨髄、リンパ節、胎児肝臓、または臍帯である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記細胞集団の供給源が、約１〜約５ｍｌの血液サンプルである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞集団の供給源が、約３ｍｌの血液サンプルである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
Ｔ細胞を含む前記細胞集団の供給源が被験体であり、前記被験体の細胞が、外的に加えられるＧ−ＣＳＦで動員されていない、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記細胞集団が凍結保存されている、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項８】
Ｔ細胞を含む前記細胞集団項は、前記Ｔ細胞を活性化させる条件下でｉｎ  ｖｉｔｒｏまたｉｎ  ｖｉｖｏで調製されたものである、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
Ｔ細胞を含む細胞集団を、抗ＣＤ３抗体の存在下で培養する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ＣＤ３４＋造血始原細胞を含む前記細胞集団を１つ以上のサイトカインと共にｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養して、その中で前記ＣＤ３４＋造血始原細胞の集団を増大させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
Ｔ細胞を含む前記細胞集団を１つ以上のサイトカインと共にｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養して、その中で前記Ｔ細胞の集団を増大させる、請求項２に記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞集団がＴ細胞を含み、前記１つ以上のサイトカインがＩＬ−２を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記細胞集団がＣＤ３４＋造血始原細胞を含み、前記１つ以上のサイトカインが、ＳＣＦ、Ｆｌｔ３Ｌ、またはＩＬ−３の少なくとも１つを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記Ｔ細胞がヒトＴ細胞である、請求項２に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＣＤ３４＋造血始原細胞が、ヒトＣＤ３４＋造血始原細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
前記Ｔ細胞が、Ｔヘルパー１（ＴＨ１）細胞、Ｔヘルパー２（ＴＨ２）細胞、ＴＨ１７細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、ナイーブＴ細胞、記憶Ｔ細胞、またはγδＴ細胞である、請求項２に記載の方法。
【請求項１８】
前記細胞集団が、約９０％〜約９９％のＴ細胞を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１９】
前記細胞集団が、約９７％〜約９９％のＴ細胞を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項２０】
前記細胞集団が、少なくとも１×１０３のＴ細胞を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項２１】
前記細胞集団が、少なくとも５×１０３のＴ細胞を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項２２】
前記細胞集団が、約１×１０６〜約２×１０６のＴ細胞を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項２３】
前記集団の前記ＣＤ３４＋造血始原細胞からｉＰＳ細胞を産生させる工程が、１つ以上のリプログラミング因子を前記ＣＤ３４＋造血始原細胞に導入する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記集団の前記Ｔ細胞からｉＰＳ細胞を産生させる工程が、１つ以上のリプログラミング因子を前記Ｔ細胞に導入する工程を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項２５】
前記リプログラミング因子が、Ｓｏｘファミリータンパク質およびＯｃｔファミリータンパク質を含むリプログラミングタンパク質である、請求項２３または請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
１つ以上の前記リプログラミングタンパク質が、タンパク質形質導入ドメインに作用的に連結されている、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記リプログラミング因子が、１つ以上の発現カセットによってコードされ、Ｓｏｘファミリータンパク質およびＯｃｔファミリータンパク質を含む、請求項２３または請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
前記１つ以上の発現カセットが、少なくとも１つのポリシストロニック転写単位を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ポリシストロニック転写単位が、少なくとも２つのリプログラミング遺伝子を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ポリシストロニック転写単位が、Ｓｏｘ遺伝子およびＯｃｔ遺伝子を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ポリシストロニック転写単位が、ｃＭｙｃ遺伝子およびＫｌｆ４遺伝子を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記ポリシストロニック転写単位が、Ｎａｎｏｇ遺伝子およびＬｉｎ２８遺伝子を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
前記ポリシストロニック転写単位が、リプログラミング遺伝子および選択またはスクリーニングマーカーを含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
前記ポリシストロニック転写単位が、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、または少なくとも１つのプロテアーゼ切断部位および／またはポリシストロニック転写のための自己切断ペプチドをコードする配列を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３５】
前記１つ以上の発現カセットが、ウイルスベクター、エピソームベクター、またはトランスポゾンからなる群から選択されるリプログラミングベクターに含められている、請求項２７に記載の方法。
【請求項３６】
前記リプログラミングベクターが、レトロウイルスベクターである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記Ｓｏｘファミリータンパク質がＳｏｘ２である、請求項２５または２７のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
前記Ｏｃｔファミリータンパク質がＯｃｔ４である、請求項２５または２７のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
前記リプログラミングタンパク質が、Ｎａｎｏｇ、Ｌｉｎ２８、ｃ−Ｍｙｃ、Ｋｌｆ４、またはＥｓｒｒｂをさらに含む、請求項２５または２７のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
前記リプログラミングタンパク質が、Ｎａｎｏｇをさらに含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記リプログラミングタンパク質が、Ｋｌｆ４およびｃ−Ｍｙｃをさらに含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
前記集団の前記ＣＤ３４＋造血始原細胞からｉＰＳ細胞を産生させる工程が、胚性幹細胞の１つ以上の特性について前記ｉＰＳ細胞を選択する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４３】
前記集団の前記Ｔ細胞からｉＰＳ細胞を産生させる工程が、胚性幹細胞の１つ以上の特性について前記ｉＰＳ細胞を選択する工程をさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４４】
前記特性が、接着性、未分化形態、胚性幹細胞特異的マーカー、または多能性である、請求項４２または請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記特性が接着性である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記特性が未分化形態である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
前記方法が、前記ｉＰＳ細胞を分化細胞に分化させる工程をさらに含む、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４８】
前記分化細胞が、心筋細胞、造血細胞、ニューロン、線維芽細胞、または表皮細胞を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記ｉＰＳ細胞集団が、組み込まれた外来性ウイルス要素を本質的に含まない、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項５０】
請求項１〜４９のいずれか１項に記載の方法に従って産生させた人工多能性幹細胞。
【請求項５１】
胚性幹細胞と比較して、不完全なセットのＴ細胞受容体遺伝子のＶ、Ｄ、およびＪセグメントを含むゲノムを含む人工多能性幹細胞。
【請求項５２】
前記人工多能性幹細胞がヒト細胞である、請求項５１に記載の人工多能性幹細胞。
【請求項５３】
前記人工多能性幹細胞が、組み込まれた外来性ウイルス要素を含まない、または組み込まれた外来性ウイルス要素を本質的に含まない、請求項５１に記載の人工多能性幹細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
以下の図面は、本明細書の一部を構成し、本発明の特定の態様をさらに実証するために含められている。本発明は、本明細書に示される特定の実施形態の詳細な説明と共にこれらの図面の１つ以上を参照することによってより良く理解できる。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
Ｔ細胞またはＣＤ３４＋造血始原細胞から人工多能性幹細胞を作製する方法であって、
（ａ）Ｔ細胞またはＣＤ３４＋造血始原細胞を含む細胞集団を入手する工程であって、前記ＣＤ３４＋造血始原細胞が、被験体に由来し、前記被験体の細胞が、外的に加えられる顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）で動員されていない、工程と、
（ｂ）前記細胞集団の前記Ｔ細胞またはＣＤ３４＋造血始原細胞からｉＰＳ細胞を産生させて、ｉＰＳ細胞集団を提供する工程と、を含む、方法。
（項目２）
前記細胞集団の供給源が、血液サンプル、血液成分、骨髄、リンパ節、胎児肝臓、または臍帯である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記細胞集団の供給源が、約１〜約５ｍｌの血液サンプルである、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記細胞集団の供給源が、約３ｍｌの血液サンプルである、項目３に記載の方法。
（項目５）
Ｔ細胞を含む前記細胞集団の供給源が被験体であり、前記被験体の細胞が、外的に加えられるＧ−ＣＳＦで動員されていない、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記細胞集団が凍結保存されている、項目１に記載の方法。
（項目７）
Ｔ細胞を含む前記細胞集団を、前記Ｔ細胞を活性化させる条件下でｉｎ  ｖｉｔｒｏまたｉｎ  ｖｉｖｏで調製する、項目１に記載の方法。
（項目８）
Ｔ細胞を含む細胞集団を、抗ＣＤ３抗体の存在下で培養する、項目７に記載の方法。
（項目９）
Ｔ細胞またはＣＤ３４＋造血始原細胞を含む前記細胞集団を１つ以上のサイトカインと共にｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養して、その中で前記Ｔ細胞またはＣＤ３４＋造血始原細胞の細胞集団を増大させる、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記細胞集団がＴ細胞を含み、前記１つ以上のサイトカインがＩＬ−２を含む、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記細胞集団がＣＤ３４＋造血始原細胞を含み、前記１つ以上のサイトカインが、ＳＣＦ、Ｆｌｔ３Ｌ、またはＩＬ−３の少なくとも１つを含む、項目９に記載の方法。
（項目１２）
前記Ｔ細胞がヒトＴ細胞である、項目１に記載の方法。
（項目１３）
前記ＣＤ３４＋造血始原細胞が、ヒトＣＤ３４＋造血始原細胞である、項目１に記載の方法。
（項目１４）
前記Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞である、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記Ｔ細胞が、Ｔヘルパー１（ＴＨ１）細胞、Ｔヘルパー２（ＴＨ２）細胞、ＴＨ１７細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、ナイーブＴ細胞、記憶Ｔ細胞、またはγδＴ細胞である、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記細胞集団が、約９０％〜約９９％のＴ細胞を含む、項目１に記載の方法。
（項目１７）
前記細胞集団が、約９７％〜約９９％のＴ細胞を含む、項目１に記載の方法。
（項目１８）
前記細胞集団が、少なくとも１×１０３のＴ細胞を含む、項目１に記載の方法。
（項目１９）
前記細胞集団が、少なくとも５×１０３のＴ細胞を含む、項目１に記載の方法。
（項目２０）
前記細胞集団が、約１×１０６〜約２×１０６のＴ細胞を含む、項目１に記載の方法。
（項目２１）
前記集団の前記Ｔ細胞またはＣＤ３４＋造血始原細胞からｉＰＳ細胞を産生させる工程が、１つ以上のリプログラミング因子を前記Ｔ細胞またはＣＤ３４＋造血始原細胞に導入する工程を含む、項目１に記載の方法。
（項目２２）
前記リプログラミング因子が、Ｓｏｘファミリータンパク質およびＯｃｔファミリータンパク質を含むリプログラミングタンパク質である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
１つ以上の前記リプログラミングタンパク質が、タンパク質形質導入ドメインに作用的に連結されている、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記リプログラミング因子が、１つ以上の発現カセットによってコードされ、Ｓｏｘファミリータンパク質およびＯｃｔファミリータンパク質を含む、項目２１に記載の方法。
（項目２５）
前記１つ以上の発現カセットが、少なくとも１つのポリシストロニック転写単位を含む、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記ポリシストロニック転写単位が、少なくとも２つのリプログラミング遺伝子を含む、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記ポリシストロニック転写単位が、Ｓｏｘ遺伝子およびＯｃｔ遺伝子を含む、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記ポリシストロニック転写単位が、ｃＭｙｃ遺伝子およびＫｌｆ４遺伝子を含む、項目２６に記載の方法。
（項目２９）
前記ポリシストロニック転写単位が、Ｎａｎｏｇ遺伝子およびＬｉｎ２８遺伝子を含む、項目２６に記載の方法。
（項目３０）
前記ポリシストロニック転写単位が、リプログラミング遺伝子および選択またはスクリーニングマーカーを含む、項目２５に記載の方法。
（項目３１）
前記ポリシストロニック転写単位が、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、または少なくとも１つのプロテアーゼ切断部位および／またはポリシストロニック転写のための自己切断ペプチドをコードする配列を含む、項目２５に記載の方法。
（項目３２）
前記１つ以上の発現カセットが、ウイルスベクター、エピソームベクター、またはトランスポゾンからなる群から選択されるリプログラミングベクターに含められている、項目２４に記載の方法。
（項目３３）
前記リプログラミングベクターが、レトロウイルスベクターである、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記Ｓｏｘファミリータンパク質がＳｏｘ２である、項目２２または２４のいずれかに記載の方法。
（項目３５）
前記Ｏｃｔファミリータンパク質がＯｃｔ４である、項目２２または２４のいずれかに記載の方法。
（項目３６）
前記リプログラミングタンパク質が、Ｎａｎｏｇ、Ｌｉｎ２８、ｃ−Ｍｙｃ、Ｋｌｆ４、またはＥｓｒｒｂをさらに含む、項目２２または２４のいずれかに記載の方法。
（項目３７）
前記リプログラミングタンパク質が、Ｎａｎｏｇをさらに含む、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記リプログラミングタンパク質が、Ｋｌｆ４およびｃ−Ｍｙｃをさらに含む、項目３６に記載の方法。
（項目３９）
前記集団の前記Ｔ細胞またはＣＤ３４＋造血始原細胞からｉＰＳ細胞を産生させる工程が、胚性幹細胞の１つ以上の特性について前記ｉＰＳ細胞を選択する工程をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目４０）
前記特性が、接着性、未分化形態、胚性幹細胞特異的マーカー、または多能性である、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記特性が接着性である、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記特性が未分化形態である、項目４０に記載の方法。
（項目４３）
前記方法が、前記ｉＰＳ細胞を分化細胞に分化させる工程を含む、項目１に記載の方法。
（項目４４）
前記分化細胞が、心筋細胞、造血細胞、ニューロン、線維芽細胞、または表皮細胞を含む、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記ｉＰＳ細胞集団が、組み込まれた外来性ウイルス要素を本質的に含まない、項目１に記載の方法。
（項目４６）
項目１〜４５のいずれか１項に記載の方法に従って産生させた人工多能性幹細胞。
（項目４７）
胚性幹細胞と比較して、不完全なセットのＴ細胞受容体遺伝子のＶ、Ｄ、およびＪセグメントを含むゲノムを含む人工多能性幹細胞。
（項目４８）
前記人工多能性幹細胞がヒト細胞である、項目４７に記載の人工多能性幹細胞。
（項目４９）
前記人工多能性幹細胞が、組み込まれた外来性ウイルス要素を含まない、または組み込まれた外来性ウイルス要素を本質的に含まない、項目４７に記載の人工多能性幹細胞。