【手続補正書】
【提出日】平成25年5月16日(2013.5.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つの容器内における２つ以上の細胞型が刺激または試験試薬に対して示す示差的応答を検出する方法であって、前記２つ以上の細胞型が検出可能な標識を含まず、
（ａ）前記２つ以上の細胞型を、前記１つの容器へと適用するステップであって、前記容器が、比色共鳴反射光バイオセンサー表面、回折格子ベース導波路バイオセンサー表面、または誘電積層膜バイオセンサー表面を含み、前記バイオセンサー表面が、その表面に１または複数の特異的結合物質を固定化させており、かつ、前記１または複数の特異的結合物質が、前記２つ以上の細胞型のうちの１または複数に結合しうるステップ；
（ｂ）前記２つ以上の細胞型を、前記１または複数の特異的結合物質に結合させるステップ；および
（ｃ）前記２つ以上の細胞型が示す前記示差的応答を検出するステップ
を含む方法。
【請求項２】
（ｄ）前記２つ以上の細胞型を、１または複数の試験試薬または刺激へと曝露するステップ；および
（ｅ）前記２つ以上の細胞型が示す前記示差的応答を検出するステップ
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ｄ）前記２つ以上の細胞型を、第１の試験試薬または第１の刺激へと曝露するステップ；
（ｅ）前記２つ以上の細胞型が前記第１の試験試薬または第１の刺激に対して示す応答を検出するステップ；
（ｆ）前記２つ以上の細胞型を、第２の試験試薬または第２の刺激へと曝露するステップであって、前記２つ以上の細胞型における細胞型のうちの１つが前記第２の試験試薬または第２の刺激に対して示す応答が知られているステップ；
（ｇ）前記２つ以上の細胞型が前記第２の試験試薬または第２の刺激に対して示す応答を検出するステップ；
（ｈ）前記第２の試験試薬または第２の刺激に対する応答が知られている、前記２つ以上の細胞型における細胞型のうちの１つを、前記バイオセンサー上において同定するステップ；
（ｉ）前記２つ以上の細胞型が示す前記示差的応答を検出するステップ
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
細胞混合集団内に第１の細胞型が存在することを検出する方法であって、前記細胞混合集団内の細胞が検出可能な標識を含まず、
（ａ）前記細胞混合集団を、１つの容器へと適用するステップであって、前記容器が、比色共鳴反射光バイオセンサー表面、回折格子ベース導波路バイオセンサー表面、または誘電積層膜バイオセンサー表面を含み、前記バイオセンサー表面が、その表面に１または複数の特異的結合物質を固定化させているステップ；
（ｂ）前記細胞混合集団を、前記１または複数の特異的結合物質に結合させるステップであって、前記第１の細胞型が、前記１または複数の特異的結合物質への結合に対して、
前記細胞混合集団の他の細胞と示差的な応答を示すステップ；および
（ｃ）前記細胞混合集団の示差的応答を検出するステップであって、前記第１の細胞型が存在することが、それらの示差的応答により検出されるステップ
を含む方法。
【請求項５】
細胞混合集団内に第１の細胞型が存在することを検出する方法であって、前記細胞混合集団内における細胞のいずれもが検出可能な標識を含まず、
（ａ）前記細胞混合集団を、１つの容器へと適用するステップであって、前記容器が、比色共鳴反射光バイオセンサー表面、回折格子ベース導波路バイオセンサー表面、または誘電積層膜バイオセンサー表面を含み、前記バイオセンサー表面が、その表面に１または複数の特異的結合物質を固定化させているステップ；
（ｂ）前記細胞混合集団を、前記１または複数の特異的結合物質に結合させるステップ；
（ｃ）前記細胞混合集団を、１または複数の試験試薬または刺激へと曝露するステップであって、前記第１の細胞型が、前記細胞混合集団内における他の細胞と比較して、前記１または複数の試験試薬または刺激に対して示差的応答を示すステップ；
（ｄ）前記第１の細胞型が前記１または複数の試験試薬または刺激に対して示す示差的応答を検出するステップであって、前記示差的応答が検出される場合に、前記第１の細胞型が前記細胞混合集団内に存在するステップ
を含む方法。
【請求項６】
前記示差的応答が、（ｉ）前記１または複数の試験試薬または刺激に応答して前記第１の細胞型によって提示される異なる細胞形態、（ｉｉ）前記第１の細胞型または２つ以上の細胞型による、前記１または複数の特異的結合物質への異なる時点での結合、（ｉｉｉ）前記１または複数の特異的結合物質に対して前記第１の細胞型または２つ以上の細胞型によって提示される異なる細胞結合形態、（ｉｖ）前記２つ以上の細胞型による、前記１または複数の特異的結合物質への異なる強度の結合、（ｖ）前記２つ以上の細胞型による、前記１または複数の試験試薬または刺激に対する異なる強度の応答、（ｖｉ）１または複数の試験試薬または刺激に応答して前記２つ以上の細胞型によって提示される異なる細胞形態、（ｖｉｉ）前記第１の細胞型または２つ以上の細胞型による、ある時間にわたる前記１または複数の試験試薬または刺激に対する異なる細胞応答、または（ｖｉｉｉ）前記第１の細胞型または２つ以上の細胞型による、ある時間にわたる異なる応答動態である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記バイオセンサー表面上に存在する、前記細胞混合集団のうちの１または複数の細胞により、前記１または複数の試験試薬または刺激が発現される、請求項１または５に記載の方法。
【請求項８】
第１の細胞集団が１または複数の試験試薬または刺激に対して示す応答を検出する方法であって、
（ａ）（ｉ）１もしくは複数の細胞外マトリックスリガンドを、比色共鳴反射光バイオセンサー、回折格子ベース導波路バイオセンサー、もしくは誘電積層膜バイオセンサーの表面へと固定化するステップであって、前記第１の細胞集団が、前記１もしくは複数の細胞外マトリックスリガンドに特異的な細胞表面受容体を有するステップ；および前記第１の細胞集団を、前記バイオセンサーへと添加するステップ；または
（ｉｉ）前記第１の細胞集団を、１もしくは複数の細胞外マトリックスリガンドと混合するステップであって、前記第１の細胞集団が、前記１もしくは複数の細胞外マトリックスリガンドに特異的な細胞表面受容体を有するステップ；および１もしくは複数の細胞外マトリックスリガンドを伴う前記第１の細胞集団を、比色共鳴反射光バイオセンサー、回折格子ベース導波路バイオセンサー、もしくは誘電積層膜バイオセンサーの表面へと添加するステップ；
（ｂ）ゲルもしくはゲル様物質、または第２の細胞集団を、前記バイオセンサー表面へと添加するステップ；
（ｃ）前記１または複数の試験試薬または刺激を、前記ゲルもしくはゲル様物質、または前記第２の細胞集団へと添加するステップ；ならびに
（ｄ）前記第１の細胞集団が前記１または複数の試験試薬または刺激に対して示す応答を検出し、場合により前記第２の細胞集団の応答を検出するステップ
を含む方法。
【請求項９】
第１の細胞集団が１または複数の試験試薬または刺激に対して示す応答を検出する方法であって、
（ａ）１または複数の試験試薬または刺激を、比色共鳴反射光バイオセンサー、回折格子ベース導波路バイオセンサー、または誘電積層膜バイオセンサーの表面へと添加するステップ；
（ｂ）基底膜マトリックス、アルギン酸ゲル、コラーゲンゲル、アガロースゲル、合成ハイドロゲル、または第２の細胞集団を、前記バイオセンサー表面へと添加するステップ；
（ｃ）前記第１の細胞集団を、１または複数の細胞外マトリックスリガンドと混合するステップであって、前記第１の細胞集団が、前記１または複数の細胞外マトリックスリガンドに特異的な細胞表面受容体を有するステップ；および前記第１の細胞集団を、前記バイオセンサー表面へと添加するステップ；
（ｄ）前記第１の細胞集団が前記１または複数の試験試薬または刺激に対して示す応答を検出し、場合により前記第２の細胞集団の応答を検出するステップ
を含む方法。
【請求項１０】
第１の細胞集団の分化を検出する方法であって、
（ａ）前記第１の細胞集団を、比色共鳴反射光バイオセンサーまたは誘電積層膜バイオセンサーの表面へと添加するステップであって、前記バイオセンサーが、２つ以上の表面セクターを有し、各表面セクターが、他の表面セクターとは共鳴値が異なる回折格子を有するステップ；
（ｂ）前記２つ以上の表面セクターの各々に由来する２つ以上のピーク波長値を検出するステップ；および
（ｃ）前記バイオセンサー表面上において、前記第１の細胞集団の分化を検出するステップ
を含む方法。
【請求項１１】
前記２つ以上の表面セクターの各々に由来する２つ以上のピーク波長値を検出する前に、前記１または複数の試験試薬または刺激を、前記バイオセンサーへと適用する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記１または複数の試験試薬または刺激が、走化作用物質であるか、または試験試薬もしくは刺激をもたらす第３の細胞集団である、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記第１の細胞集団が、幹細胞集団であり、前記第２の細胞集団が、上皮細胞集団または内皮細胞集団である、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
検出標識を用いない、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
特定の幹細胞集団に特異的な生物学的応答の特徴を同定する生物学的発現プロファイリングの方法であって、
（ａ）（ｉ）１もしくは複数の細胞外マトリックスリガンドを、比色共鳴反射光バイオセンサー、回折格子ベース導波路バイオセンサー、もしくは誘電積層膜バイオセンサーの２つ以上の表面へと固定化するステップであって、前記幹細胞集団が、前記１もしくは複数の細胞外マトリックスリガンドに特異的な細胞表面受容体を有するステップ；および前記幹細胞集団を、前記バイオセンサーの２つ以上の地点へと添加するステップ；または
（ｉｉ）前記幹細胞集団を、１もしくは複数の細胞外マトリックスリガンドと混合するステップであって、前記幹細胞が、前記１もしくは複数の細胞外マトリックスリガンドに特異的な細胞表面受容体を有するステップ；および１もしくは複数の細胞外マトリックスリガンドを伴う前記幹細胞集団を、比色共鳴反射光バイオセンサー、回折格子ベース導波路バイオセンサー、もしくは誘電積層膜バイオセンサーの２つ以上の表面へと添加するステップ；
（ｂ）前記バイオセンサーの２つ以上の表面を、２つ以上の試験試薬または刺激へと曝露するステップ；
（ｃ）前記バイオセンサーの２つ以上の表面の各々において、前記幹細胞が前記試験試薬または刺激に対して示す応答を検出するステップ；
（ｄ）特定の幹細胞集団が２つ以上の試験試薬または刺激に対して特異的に示す生物学的応答の特徴を同定するステップ
を含む方法。
【請求項１６】
前記幹細胞、前記第１の細胞集団、または前記第２の細胞集団の応答を検出するステップを、リアルタイムで行う、請求項８〜１０および１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
候補化合物を、細胞分化を調節するその能力についてスクリーニングする方法であって、（ａ）１または複数の細胞型を、比色共鳴反射光バイオセンサー、回折格子ベース導波路バイオセンサー、または誘電積層膜バイオセンサーの表面へと添加するステップ；（ｂ）前記１または複数の細胞型を誘導して分化させるステップ；（ｃ）前記候補化合物の存在下または不存在下におけるピーク波長値または有効屈折率変化を比較することにより、前記候補化合物の存在下または不存在下における細胞分化の変化を検出するステップであって、前記候補化合物の不在下における細胞分化活性と比べた、前記候補化合物の存在下における細胞分化活性の変化によって、細胞分化を調節する前記候補化合物の能力が示されるステップを含む方法。
【請求項１８】
前記細胞分化活性の変化が、細胞分化活性の上昇、細胞分化活性の低下、細胞分化活性の阻害、幹細胞の自己複製の増大もしくは減少、分化した細胞の細胞型の変化、コラーゲン生成の増大もしくは減少、または石灰化結節形成の増大もしくは減少である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
候補化合物を、細胞分化を調節するその能力についてスクリーニングする方法であって、（ａ）１または複数の細胞型を、比色共鳴反射光バイオセンサー、回折格子ベース導波路バイオセンサー、または誘電積層膜バイオセンサーの表面へと添加するステップ；（ｂ）前記１または複数の細胞型を誘導して分化させるステップ；（ｃ）前記候補化合物の存在下または不存在下におけるピーク波長値または有効屈折率変化を比較することにより、前記候補化合物の存在下または不存在下における１または複数の細胞分化生成物の生成を検出するステップであって、前記候補化合物の不存在下における１または複数の細胞分化生成物と比べた、前記候補化合物の存在下における１または複数の細胞分化生成物の変化によって、細胞分化を調節する前記候補化合物の能力が示されるステップを含む方法。
【請求項２０】
前記細胞分化生成物が、コラーゲンまたは石灰化結節である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記１または複数の細胞型が、幹細胞または間葉幹細胞である、請求項１７または１９に記載の方法。
【請求項２２】
バイオセンサー回折格子表面に固定化されるかまたはこれと会合した１または複数の特異的結合物質；および前記１または複数の特異的結合物質を覆うゲルまたはゲル様物質の層を含む、比色共鳴反射光バイオセンサー回折格子表面、回折格子ベース導波路バイオセンサー回折格子表面、または誘電積層膜バイオセンサー回折格子表面。
【請求項２３】
１もしくは複数の比色共鳴反射光バイオセンサー回折格子表面、１もしくは複数の回折格子ベース導波路バイオセンサー回折格子表面、または１もしくは複数の誘電積層膜バイオセンサー回折格子表面、およびゲルまたはゲル様物質の１または複数の容器を含むキットであって、該キットは、以下に示す任意の要素：１または複数の特異的結合物質の容器；前記バイオセンサー回折格子表面に固定化されるかまたはこれと会合した、１または複数の特異的結合物質を含む、比色共鳴反射光バイオセンサー回折格子表面、回折格子ベース導波路バイオセンサー回折格子表面、もしくは、誘電積層膜バイオセンサー回折格子表面；または液体含有容器の内部表面を形成するバイオセンサー回折格子表面をさらに含むことができるキット。
【請求項２４】
比色共鳴反射光バイオセンサー回折格子表面上、回折格子ベース導波路バイオセンサー回折格子表面上、または誘電積層膜バイオセンサー回折格子表面上において、特異的結合物質と結合パートナーとの反応を検出する改良法であって、
１または複数の特異的結合物質が前記バイオセンサー回折格子表面に固定化されるかまたはこれと会合するように、前記１または複数の特異的結合物質を、前記バイオセンサー回折格子表面へと適用するステップ；
ゲルまたはゲル様物質を、前記バイオセンサー表面へと適用するステップを含む方法。
【請求項２５】
細胞混合集団から２つ以上の細胞型を分取し、かつ、前記分取された細胞が刺激、インキュベーション、または試験試薬に対して示す応答を検出する方法であって、前記分取および前記検出を、１つのバイオセンサー表面上で行い、
（ａ）細胞混合集団を、１つの比色共鳴反射光バイオセンサー表面、１つの回折格子ベース導波路バイオセンサー表面、または１つの誘電積層膜バイオセンサー表面へと適用するステップであって、前記１つのバイオセンサー表面が、その１つの表面に２種類以上の特異的結合物質を固定化させており、かつ、前記２つ以上の特異的結合物質が、前記細胞混合集団内における１または複数の細胞型に潜在的に結合しうるステップ；
（ｂ）前記バイオセンサーの前記１つの表面から、結合しなかった細胞を洗い流して、前記１または複数の細胞型が、前記バイオセンサーの前記表面に結合し、かつ、この上で分取されるようにするステップ；
（ｃ）前記１または複数の結合した細胞型を、刺激、インキュベーション、または試験試薬へと曝露するステップ；および
（ｄ）前記１または複数の結合した細胞型が前記刺激、インキュベーション、または試験試薬に対して示す応答を検出するステップ
を含む方法。
【請求項２６】
前記２つ以上の特異的結合物質が、１または複数の細胞外マトリックスタンパク質と、１または複数の他の特異的結合物質との組合せを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
１つのバイオセンサー表面上において、細胞混合集団から１または複数の細胞型を分取し、かつ、前記１または複数の細胞型から細胞内分析物を検出する方法であって、
（ａ）細胞混合集団を、１つの比色共鳴反射光バイオセンサー表面、１つの回折格子ベース導波路バイオセンサー表面、または１つの誘電積層膜バイオセンサー表面へと適用するステップであって、前記１つのバイオセンサー表面が、その表面に２つ以上の特異的結合物質を固定化させており、前記２つ以上の特異的結合物質が、（ｉ）前記細胞混合集団内における１または複数の細胞型に特異的に結合する第１の特異的結合物質、および（ｉｉ）前記１または複数の細胞型に由来する１または複数の細胞内分析物に特異的に結合する第２の特異的結合物質を含むステップ；
（ｂ）前記バイオセンサーの前記表面から、結合しなかった細胞を洗い流して、前記１または複数の細胞型が、前記バイオセンサーの前記表面に結合し、かつ、この上で分取されるようにするステップ；
（ｃ）前記１または複数の結合した細胞型を、溶解させるかまたは透過処理するステップ；
（ｄ）前記バイオセンサーの前記表面から、結合しなかったいかなる分析物も洗い流すステップ；ならびに
（ｅ）前記バイオセンサーの前記表面に固定化された前記細胞内分析物を検出するステップ
を含む方法。
【請求項２８】
前記１または複数の結合した細胞型を溶解させるかまたは透過処理する前に、細胞をある時間間隔にわたりインキュベートするか、または刺激に曝露するか、または試験試薬に曝露する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
１つのバイオセンサー表面上において、細胞混合集団から１または複数の細胞型を分取し、かつ、前記１または複数の細胞型から分析物を検出する方法であって、
（ａ）細胞混合集団を、１つの比色共鳴反射光バイオセンサー表面、１つの回折格子ベース導波路バイオセンサー表面、または１つの誘電積層膜バイオセンサー表面へと適用するステップであって、前記１つのバイオセンサー表面が、その表面に２つ以上の特異的結合物質を固定化させており、前記２つ以上の特異的結合物質が、（ｉ）前記細胞混合集団内における１または複数の細胞型に特異的に結合する第１の特異的結合物質、および（ｉｉ）前記１または複数の細胞型に由来する１または複数の分析物に特異的に結合する第２の特異的結合物質を含むステップ；
（ｂ）前記バイオセンサーの前記表面から、結合しなかった細胞を洗い流して、前記１または複数の細胞型が、前記バイオセンサーの前記表面に結合し、かつ、この上で分取されるようにするステップ；
（ｃ）試験試薬を前記細胞に適用するか、もしくは前記細胞をインキュベートするか、もしくは前記細胞を刺激下に置くか、またはこれらの組合せを行うステップ；ならびに
（ｄ）前記バイオセンサーの前記表面に固定化された分析物を検出するステップ
を含む方法。
【請求項３０】
前記２つ以上の細胞型、試験試薬、細胞混合集団および前記２つ以上の特異的結合物質が、検出可能な標識を含まない、請求項２５、２７、および２９のいずれか一項に記載の方法。