【手続補正書】
【提出日】平成24年3月30日(2012.3.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
肺疾患、障害もしくは傷害、およびそれにより生じた損傷を治療する薬剤において、
臍帯組織由来細胞、
を含み、
前記臍帯組織由来細胞は、実質的に血液のないヒト臍帯組織由来であり、培養中に自己再生および増殖することができ、少なくとも肺組織の細胞に分化する能力を有し、ＣＤ１１７に対して陰性である、薬剤。
【請求項２】
請求項１に記載の薬剤において、
前記肺疾患、障害もしくは傷害は、閉塞性の疾患もしくは障害、拘束性の疾患もしくは障害、または直接的もしくは間接的な傷害であるか、あるいはそれらにより生じる、薬剤。
【請求項３】
肺疾患を治療する薬剤において、
臍帯組織由来細胞、
を含み
前記細胞は、実質的に血液のないヒト臍帯組織由来であり、培養中に自己再生および増殖することができ、ＣＤ１１７およびＣＤ４５に対して陰性であり、テロメラーゼまたはｈＴＥＲＴを発現しない、薬剤。
【請求項４】
請求項１または３に記載の薬剤において、
前記臍帯組織由来細胞は、ｈＴＥＲＴまたはテロメラーゼを発現しない、薬剤。
【請求項５】
請求項１または３に記載の薬剤において、
前記細胞は、肺組織に分化するようにｉｎ  ｖｉｔｒｏで誘導される、薬剤。
【請求項６】
請求項１または３に記載の薬剤において、
少なくとも１つの他の細胞型、
をさらに含む、薬剤。
【請求項７】
請求項６に記載の薬剤において、
前記他の細胞型は、肺前駆細胞、血管平滑筋細胞、血管平滑筋前駆細胞、周皮細胞、血管内皮細胞、血管内皮前駆細胞、または他の多分化能もしくは多能性幹細胞から選択される、肺組織細胞である、薬剤。
【請求項８】
請求項１または３に記載の薬剤において、
前記細胞は、少なくとも１つの他の薬剤と共に投与される、薬剤。
【請求項９】
請求項８に記載の薬剤において、
前記薬剤は、抗血栓薬、抗炎症薬、免疫抑制剤、免疫調節剤、血管新生促進剤、または抗アポトーシス薬である、薬剤。
【請求項１０】
請求項２に記載の薬剤において、
前記細胞は、前記肺疾患、障害もしくは傷害の部位で投与される、薬剤。
【請求項１１】
請求項１または３に記載の薬剤において、
前記臍帯組織由来細胞は、注入、注射、患者に植え込まれた装置によって、または前記細胞を含有するマトリックスもしくは足場の植え込みによって、投与される、薬剤。
【請求項１２】
請求項１または３に記載の薬剤において、
前記細胞は、患者の前記肺組織に栄養作用を及ぼす、薬剤。
【請求項１３】
請求項１または３に記載の薬剤において、
前記細胞は、患者の血管平滑筋または血管内皮に栄養作用を及ぼす、薬剤。
【請求項１４】
請求項１３に記載の薬剤において、
前記血管平滑筋に対する前記栄養作用は、血管平滑筋細胞の増殖である、薬剤。
【請求項１５】
請求項１３に記載の薬剤において、
前記血管内皮に対する前記栄養作用は、血管内皮細胞の増殖である、薬剤。
【請求項１６】
請求項１または３に記載の薬剤において、
前記細胞は、前記肺疾患、障害もしくは傷害の部位への、血管内皮細胞、血管内皮前駆細胞、血管平滑筋細胞、血管平滑筋前駆細胞、または周皮細胞のうち１つまたは複数の遊走を誘発する、薬剤。
【請求項１７】
肺疾患、障害もしくは傷害を有する患者を治療するための医薬組成物において、
前記肺疾患、障害もしくは傷害を治療するのに有効な量の、医薬的に許容可能な担体および臍帯組織由来細胞、
を含み、
前記臍帯組織由来細胞は、実質的に血液のないヒト臍帯組織由来であり、培養中に自己再生および増殖することができ、少なくとも肺組織の細胞に分化する能力を有し、ＣＤ１１７に対して陰性である、医薬組成物。
【請求項１８】
肺疾患、障害もしくは傷害を有する患者を治療するためのキットにおいて、
医薬的に許容可能な担体と、
臍帯組織由来細胞集団と、
前記患者を治療する方法において前記キットを使用するための説明書と、
を含み、
前記臍帯組織由来細胞は、実質的に血液のないヒト臍帯組織由来であり、培養中に自己再生および増殖することができ、少なくとも肺組織の細胞に分化する能力を有し、ＣＤ１１７に対して陰性である、キット。
【請求項１９】
肺疾患、障害もしくは傷害を有する患者を治療するための医薬組成物において、
医薬的に許容可能な担体と、
臍帯組織由来細胞から作られた製剤と、
を含み、
前記臍帯組織由来細胞は、実質的に血液のないヒト臍帯組織由来であり、培養中に自己再生および増殖することができ、少なくとも肺組織の細胞に分化する能力を有し、ＣＤ１１７に対して陰性である、医薬組成物。
【請求項２０】
肺疾患、障害もしくは傷害を有する患者を治療するためのキットにおいて、
請求項１９に記載の医薬組成物、
を含む、キット。
【請求項２１】
請求項１７または１９に記載の医薬組成物において、
前記臍帯組織由来細胞は、ｈＴＥＲＴまたはテロメラーゼを発現しない、医薬組成物。
【請求項２２】
請求項１８に記載のキットにおいて、
前記臍帯組織由来細胞は、ｈＴＥＲＴまたはテロメラーゼを発現しない、キット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６９】
他の実施形態では、ＵＴＣは、遺伝子発現により特徴付けられることができ、遺伝子発現は、線維芽細胞、間葉系幹細胞、もしくは腸骨稜骨髄細胞であるヒト細胞に関し、interleukin 8; reticulon 1; chemokine (C-X-C motif) ligand 1 (melonoma growth stimulating activity, alpha); chemokine (C-X-C motif) ligand 6 (granulocyte chemotactic protein 2); chemokine (C-X-C motif) ligand 3; およびtumor necrosis factor, alpha-induced protein 3のうちの少なくとも１つをコード化する遺伝子について、増加する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７１】
他の実施形態では、ＵＴＣは、ＭＣＰ−１；ＩＬ−６；ＩＬ−８；ＧＣＰ−２；ＨＧＦ；ＫＧＦ；ＦＧＦ；ＨＢ−ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＴＰＯ；ＭＩＰ１ｂ；Ｉ３０９；ＭＤＣ；ＲＡＮＴＥＳ；およびＴＩＭＰ１のうち少なくとも１つの分泌により特徴付けられ得る。いくつかの実施形態では、ＵＴＣは、ＥＬＩＳＡにより検出されたときにＴＧＦ−β２；ＡＮＧ２；ＰＤＧＦｂｂ；ＭＩＰ１ａ；ＶＥＧＦのうち少なくとも１つの分泌がないことにより特徴付けられ得る。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２９４】
実施例１５
テロメラーゼ活性のアッセイ
テロメラーゼは、染色体の完全性を保護し、また細胞の複製寿命を延ばすのに役立つ、テロメア繰り返し体を合成するよう機能する（Ｌｉｕ，  Ｋ，  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，１９９９；９６：５１４７−５１５２）。テロメラーゼは、２つの成分、テロメラーゼＲＮＡテンプレート（ｈＴＥＲ）、およびテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）のみからなる。テロメラーゼの調節は、ｈＴＥＲではなく、ｈＴＥＲＴの転写により決定される。ｈＴＥＲＴ  ｍＲＮＡのリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）は、ゆえに、細胞のテロメラーゼ活性を決定する、認められた方法である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２９５】
細胞単離
リアルタイムＰＣＲ実験が行われ、ヒト臍帯組織由来細胞のテロメラーゼ産生が決定された。ヒト臍帯組織由来細胞が、実施例５〜７、および、米国特許第７，５１０，８７３号として特許となった米国特許出願第１０／８７７，０１２号（’０１２号出願）に記載される実施例に従って、準備された。概して、正常な運搬後にＮａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｃｈａｎｇｅ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．）から入手された臍帯が洗浄され、血液および残骸を除去し、機械的に解離される。組織は次に、コラゲナーゼ、ディスパーゼおよびヒアルロニダーゼを含む消化酵素で、培養培地において３７℃でインキュベートされる。ヒト臍帯組織由来細胞は、’０１２号出願の実施例に記載された方法に従って培養された。間葉系幹細胞および正常な皮膚線維芽細胞（ｃｃ−２５０９  ロット番号９Ｆ０８４４）が、Ｃａｍｂｒｅｘ，  Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，  Ｍｄ．から入手された。多能性ヒト精巣胎児性癌（テラトーマ）細胞株ｎＴｅｒａ−２細胞（ＮＴＥＲＡ−２  ｃｌ．Ｄｌ）（Ｐｌａｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ，２００６；２４（３）：５３１−５４６を参照）をＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．）から購入し、’０１２号出願に記載した方法に従って培養した。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２９７】
リアルタイムＰＣＲ
ＰＣＲが、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ａｓｓａｙｓ−Ｏｎ−Ｄｅｍａｎｄ（商標）（ＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイとしても知られる）を用いて、製造業者の仕様書（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に従って、ｃＤＮＡサンプルに対して行われた。この市販のキットは、ヒト細胞のテロメラーゼのアッセイに広く使われる。手短に言えば、ｈＴＥＲＴ（ヒトテロメラーゼ遺伝子）（Ｈｓ００１６２６６９）およびヒトＧＡＰＤＨ（内部対照）が、ＡＢＩ  ｐｒｉｓｍ  ７０００  ＳＤＳソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）と共に７０００配列検出システムを用いて、ｃＤＮＡおよびＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲマスターミックスと混合された。熱サイクル条件は、最初は、５０℃で２分、９５℃で１０分、その後、９５℃で１５秒および６０℃で１分の４０サイクルであった。ＰＣＲデータは、製造業者の仕様書に従って分析された。