【手続補正書】
【提出日】平成25年5月14日(2013.5.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
コレラ菌(Vibrio cholerae)O1細胞を含むワクチンであって、該細胞が小川血清型および稲葉血清型両方のO1抗原を含むことを特徴とする、ワクチン。
【請求項２】
小川血清型および稲葉血清型両方のO1抗原を含む複数のコレラ菌O1細胞を含む前記ワクチンであって、該細胞のO1抗原の平均で10〜90％が小川血清型である、請求項1記載のワクチン。
【請求項３】
前記細胞がCFA/I、CS2、またはCS5などの1種または複数種のETEC定着因子(CF)タンパク質をさらに含み、該CFタンパク質が一重線毛、二重線毛、またはハイブリッド線毛のいずれかとして発現される、前記請求項のいずれか一項記載のワクチン。
【請求項４】
小川血清型および稲葉血清型両方のO1抗原を含むコレラ菌O1細胞のほかには、免疫学的に活性なさらなる全細胞を全く含まないことを条件とする、前記請求項のいずれか一項記載のワクチン。
【請求項５】
経口投与用である、前記請求項のいずれか一項記載のワクチン。
【請求項６】
前記細胞がホルマリンによって不活化されている、前記請求項のいずれか一項記載のワクチン。
【請求項７】
コレラ菌O1宿主細胞においてタンパク質発現を誘導するのに適したプロモーターに機能的に連結された、SEQ ID NO:6に対して少なくとも70％の配列同一性を有するWbeTタンパク質をコードするDNAを含む、DNA構築物であって、該コードされるWbeTタンパク質が、SEQ ID NO:6と同一の配列を有するタンパク質の酵素活性と比べて該コードされるタンパク質の酵素活性を低下させる、SEQ ID NO:6に対する配列改変を含むことを特徴とする、DNA構築物。
【請求項８】
前記配列改変が、SEQ ID NO:6の158位のセリン残基の置換を含む、請求項7記載のDNA構築物。
【請求項９】
前記配列改変が、SEQ ID NO:6の158位のセリン残基のグリシン、プロリン、トレオニン、フェニルアラニン、またはトリプトファンへの置換を含む、請求項8記載のDNA構築物。
【請求項１０】
コレラ菌O1宿主細胞においてタンパク質発現を誘導するのに適したプロモーターに機能的に連結された、SEQ ID NO:6に対して少なくとも70％の配列同一性を有するWbeTタンパク質をコードするDNAを含む、DNA構築物であって、該プロモーターが、最初は稲葉表現型であるコレラ菌O1宿主細胞における該コードされるWbeTタンパク質の発現を、該宿主細胞による稲葉型抗原および小川型抗原両方の同時発現を可能にするようなトランスジェニックWbeTタンパク質の発現レベルまで誘導するのに適していることを特徴とする、DNA構築物。
【請求項１１】
前記プロモーターが、tacプロモーターまたはlacプロモーターなどの誘導性プロモーターである、請求項7〜10のいずれか一項記載のDNA構築物。
【請求項１２】
宿主細胞において複製が可能なプラスミドベクター、または宿主細胞において染色体組込みが可能なベクターである、請求項7〜11のいずれか一項記載のDNA構築物。
【請求項１３】
選択マーカーをさらに含む、請求項7〜12のいずれか一項記載のDNA構築物。
【請求項１４】
相同組換えを用いた宿主の内因性wbeT遺伝子の改変に適合化されていることを特徴とする、コレラ菌O1宿主細胞における相同組換えのためのDNA構築物。
【請求項１５】
選択マーカーをさらに含む、請求項14記載のDNA構築物。
【請求項１６】
以下を特徴とする、稲葉型抗原および小川型抗原の両方を同時に発現するコレラ菌O1細胞：
a.宿主細胞の内因性wbeT遺伝子またはそのコードされるタンパク質が不活性であること；
b.該細胞が、WbeT酵素活性の発現を誘導する組換えDNA構築物を含むこと；ならびにここで、
c.トランスジェニックWbeT酵素活性のレベルが、稲葉型抗原および小川型抗原を該細胞が同時に発現するようなレベルであること。
【請求項１７】
前記組換えDNA構築物が請求項7〜13のいずれか一項記載のDNA構築物である、請求項16記載のコレラ菌O1細胞。
【請求項１８】
以下を特徴とする、稲葉型抗原および小川型抗原の両方を同時に発現するコレラ菌O1細胞：
a.該細胞が、内因性wbeT遺伝子を含むこと；ならびに
b.該細胞が、内因性wbeT遺伝子の発現レベルまたはその産物の酵素活性を調節することができる組換えDNA構築物を含むこと；ならびにここで、
c.WbeT酵素活性の調節されたレベルが、稲葉型抗原および小川型抗原を該細胞が同時に発現するようなレベルであること。
【請求項１９】
前記組換えDNA構築物が請求項14または15記載のDNA構築物である、請求項18記載のコレラ菌O1細胞。
【請求項２０】
前記細胞によって発現されるO1抗原の10〜90％が小川血清型である、請求項16〜19のいずれか一項記載のコレラ菌O1細胞。
【請求項２１】
前記細胞がCFA/I、CS2、またはCS5などの1種または複数種のETEC定着因子(CF)タンパク質をさらに発現し、該CFタンパク質が一重線毛、二重線毛、またはハイブリッド線毛のいずれかとして発現される、請求項16〜20のいずれか一項記載のコレラ菌O1細胞。
【請求項２２】
a.小川血清型および稲葉血清型両方のO1抗原を含むコレラ菌O1細胞を提供する段階；ならびに
b.該細胞を死滅させる段階
を含む、ワクチンを製造するための方法。
【請求項２３】
死滅段階がホルマリン処理によって実施される、請求項22記載の方法。
【請求項２４】
前記細胞が請求項16〜21のいずれか一項記載の細胞である、請求項22または23記載の方法。
【請求項２５】
前記細胞が請求項16〜21のいずれか一項記載の細胞である、請求項1〜6のいずれか一項記載のワクチン。
【請求項２６】
予防的免疫化において使用するための、請求項1〜6および25のいずれか一項記載のワクチン。
【請求項２７】
コレラおよび/または毒素原性大腸菌感染症(ETEC)に対する予防的免疫化において使用するための、請求項1〜6および25〜26のいずれか一項記載のワクチン。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
第10の局面において、本発明はまた、一単位の組成物として調製された、ワクチン接種において使用するためのキットにも関し、これにより該組成物は、該キットの一部分において提供され、使用説明書が別の部分において提供される。
[本発明1001]
コレラ菌(Vibrio cholerae)O1細胞を含むワクチンであって、該細胞が小川血清型および稲葉血清型両方のO1抗原を含むことを特徴とする、ワクチン。
[本発明1002]
小川血清型および稲葉血清型両方のO1抗原を含む複数のコレラ菌O1細胞を含む前記ワクチンであって、該細胞のO1抗原の平均で10〜90％が小川血清型である、本発明1001のワクチン。
[本発明1003]
前記細胞がCFA/I、CS2、またはCS5などの1種または複数種のETEC定着因子(CF)タンパク質をさらに含み、該CFタンパク質が一重線毛、二重線毛、またはハイブリッド線毛のいずれかとして発現される、前記本発明のいずれかのワクチン。
[本発明1004]
小川血清型および稲葉血清型両方のO1抗原を含むコレラ菌O1細胞のほかには、免疫学的に活性なさらなる全細胞を全く含まないことを条件とする、前記本発明のいずれかのワクチン。
[本発明1005]
経口投与用である、前記本発明のいずれかのワクチン。
[本発明1006]
前記細胞がホルマリンによって不活化されている、前記本発明のいずれかのワクチン。
[本発明1007]
前記細胞が、本発明1022〜1027のいずれかの細胞である、前記本発明のいずれかのワクチン。
[本発明1008]
予防的免疫化において使用するための、前記本発明のいずれかのワクチン。
[本発明1009]
コレラおよび/または毒素原性大腸菌感染症(ETEC)に対する予防的免疫化において使用するための、前記本発明のいずれかのワクチン。
[本発明1010]
免疫化しようとする対象に本発明1001〜1009のいずれかのワクチンを投与する段階を含む、予防的免疫を誘導するための方法。
[本発明1011]
前記予防的免疫が、コレラおよび/または毒素原性大腸菌感染症(ETEC)に対するものである、本発明1011の方法。
[本発明1012]
前記投与が経口的に行われる、本発明1010または1011の方法。
[本発明1013]
コレラ菌O1宿主細胞においてタンパク質発現を誘導するのに適したプロモーターに機能的に連結された、SEQ ID NO:6に対して少なくとも70％の配列同一性を有するWbeTタンパク質をコードするDNAを含む、DNA構築物であって、該コードされるWbeTタンパク質が、SEQ ID NO:6と同一の配列を有するタンパク質の酵素活性と比べて該コードされるタンパク質の酵素活性を低下させる、SEQ ID NO:6に対する配列改変を含むことを特徴とする、DNA構築物。
[本発明1014]
前記配列改変が、SEQ ID NO:6の158位のセリン残基の置換を含む、本発明1013のDNA構築物。
[本発明1015]
前記配列改変が、SEQ ID NO:6の158位のセリン残基のグリシン、プロリン、トレオニン、フェニルアラニン、またはトリプトファンへの置換を含む、本発明1014のDNA構築物。
[本発明1016]
コレラ菌O1宿主細胞においてタンパク質発現を誘導するのに適したプロモーターに機能的に連結された、SEQ ID NO:6に対して少なくとも70％の配列同一性を有するWbeTタンパク質をコードするDNAを含む、DNA構築物であって、該プロモーターが、最初は稲葉表現型であるコレラ菌O1宿主細胞における該コードされるWbeTタンパク質の発現を、該宿主細胞による稲葉型抗原および小川型抗原両方の同時発現を可能にするようなトランスジェニックWbeTタンパク質の発現レベルまで誘導するのに適していることを特徴とする、DNA構築物。
[本発明1017]
前記プロモーターが、tacプロモーターまたはlacプロモーターなどの誘導性プロモーターである、本発明1013〜1016のいずれかのDNA構築物。
[本発明1018]
宿主細胞において複製が可能なプラスミドベクター、または宿主細胞において染色体組込みが可能なベクターである、本発明1013〜1017のいずれかのDNA構築物。
[本発明1019]
選択マーカーをさらに含む、本発明1013〜1018のいずれかのDNA構築物。
[本発明1020]
相同組換えを用いた宿主の内因性wbeT遺伝子の改変に適合化されていることを特徴とする、コレラ菌O1宿主細胞における相同組換えのためのDNA構築物。
[本発明1021]
選択マーカーをさらに含む、本発明1020のDNA構築物。
[本発明1022]
以下を特徴とする、稲葉型抗原および小川型抗原の両方を同時に発現するコレラ菌O1細胞：
a.宿主細胞の内因性wbeT遺伝子またはそのコードされるタンパク質が不活性であること；
b.該細胞が、WbeT酵素活性の発現を誘導する組換えDNA構築物を含むこと；ならびにここで、
c.トランスジェニックWbeT酵素活性のレベルが、稲葉型抗原および小川型抗原を該細胞が同時に発現するようなレベルであること。
[本発明1023]
前記組換えDNA構築物が本発明1013〜1019のいずれかのDNA構築物である、本発明1022のコレラ菌O1細胞。
[本発明1024]
以下を特徴とする、稲葉型抗原および小川型抗原の両方を同時に発現するコレラ菌O1細胞：
a.該細胞が、内因性wbeT遺伝子を含むこと；ならびに
b.該細胞が、内因性wbeT遺伝子の発現レベルまたはその産物の酵素活性を調節することができる組換えDNA構築物を含むこと；ならびにここで、
c.WbeT酵素活性の調節されたレベルが、稲葉型抗原および小川型抗原を該細胞が同時に発現するようなレベルであること。
[本発明1025]
前記組換えDNA構築物が本発明1020または1021のDNA構築物である、本発明1024のコレラ菌O1細胞。
[本発明1026]
前記細胞によって発現されるO1抗原の10〜90％が小川血清型である、本発明1022〜1025のいずれかのコレラ菌O1細胞。
[本発明1027]
前記細胞がCFA/I、CS2、またはCS5などの1種または複数種のETEC定着因子(CF)タンパク質をさらに発現し、該CFタンパク質が一重線毛、二重線毛、またはハイブリッド線毛のいずれかとして発現される、本発明1022〜1026のいずれかのコレラ菌O1細胞。
[本発明1028]
a.小川血清型および稲葉血清型両方のO1抗原を含むコレラ菌O1細胞を提供する段階；ならびに
b.該細胞を死滅させる段階
を含む、ワクチンを製造するための方法。
[本発明1029]
死滅段階がホルマリン処理によって実施される、本発明1028の方法。
[本発明1030]
前記細胞が本発明1022〜1027のいずれかの細胞である、本発明1028または1029の方法。