【誤訳訂正書】
【提出日】平成21年9月1日(2009.9.1)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】特許請求の範囲
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  少なくとも平滑筋細胞および／または内皮細胞に対する組織向性が与えられた遺伝子送達ビヒクルであって、アデノウイルス１１、アデノウイルス１６、アデノウイルス３５およびアデノウイルス５１からなる群より選択される血清型のアデノウイルスのファイバータンパク質の少なくとも１つの組織向性決定断片を含むキャプシドをコードする核酸を含むＣ亜群由来の血清型の組換えアデノウイルスである遺伝子送達ビヒクル。
【請求項２】  Ｃ亜群由来の血清型がアデノウイルス５である請求項１記載のビヒクル。
【請求項３】  アデノウイルス１６のファイバータンパク質の少なくとも１つの組織向性決定断片を含むキャプシドをコードする核酸を含む請求項１または２記載のビヒクル。
【請求項４】  前記組換えアデノウイルスが、該アデノウイルス核酸の標的細胞中での複製能力を低減されるかまたは無くすように修飾されたアデノウイルス核酸を含む請求項１〜３のいずれかに記載のビヒクル。
【請求項５】  さらに少なくとも１つの非アデノウイルス核酸を含む請求項１〜４のいずれかに記載のビヒクル。
【請求項６】  少なくとも１つの前記非アデノウイルス核酸が、アポリポタンパク質、酸化窒素シンターゼ、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ、インターロイキン−３、インターロイキン−１α、アンギオスタチンなどの（抗）血管新生タンパク質、抗増殖性タンパク質、平滑筋細胞抗遊走タンパク質、血管内皮生長因子（ＶＧＥＦ）、塩基性線維芽細胞生長因子、低酸素症誘導因子１α（ＨＩＦ−１α）またはＰＡＩ−１をコードする遺伝子の群から選択された遺伝子である請求項５記載のビヒクル。
【請求項７】  平滑筋細胞および／または内皮細胞への遺伝子送達方法であって、請求項１〜６のいずれかに記載の遺伝子送達ビヒクルをエクソビボにおいて平滑筋細胞および／または内皮細胞へ供給する工程を含む方法。
【請求項８】  アデノウイルス５の配列２１５６２−３１０９４および３２７９４−３５９３８を含む構築物ｐＢｒ／Ａｄ．ＢａｍＲΔＦｉｂ。
【請求項９】  アデノウイルス５の配列２１５６２−３１０９４および３２７９４−３５９３８を含み、さらにファイバータンパク質をコードするアデノウイルス１６遺伝子を含む構築物ｐＢｒ／Ａｄ．ＢａｍＲｆｉｂ１６。
【請求項１０】  アデノウイルス５の配列２１５６２−３１０９４および３２７９４−３５９３８を含み、さらにファイバータンパク質をコードするアデノウイルス１６遺伝子を含み、かつさらに該構築物の非アデノウイルス配列骨格中、アデノウイルス５右末端反復配列付近に唯一のＰａｃＩ部位を含む構築物ｐＢｒ／ＡｄＢａｍＲ.ｐａｃ／ｆｉｂ１６。
【請求項１１】  アデノウイルス５配列３５３４−３１０９４および３２７９４−３５９３８を含み、さらにファイバータンパク質をコードするアデノウイルス１６遺伝子を含む構築物ｐＷＥ／Ａｄ．ＡｆｌＩＩｒＩＴＲｆｉｂ１６。
【請求項１２】  アデノウイルス５配列３５３４−２２４４３、２４０３３−３１０９４および３２７９４−３５９３８を含み、さらにファイバータンパク質をコードするアデノウイルス１６遺伝子を含む構築物ｐＷＥ／Ａｄ．ＡｆｌＩＩｒＩＴＲＤＥ２Ａｆｉｂ１６。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１９】
発明の要旨
本発明は遺伝子治療法、化合物および医薬品を提供する。本発明は内皮細胞および/または平滑筋細胞が標的細胞型を形成する遺伝子治療の適用でとりわけ有用である。本発明は少なくとも内皮細胞および/または平滑筋細胞への組織向性を与えられた遺伝子送達ビヒクルに関する。さらに本発明は肝細胞への組織向性が除去された遺伝子送達ビヒクルに関する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２３】
本発明は、一側面として、Ｂ亜群に属するアデノウイルスのファイバータンパク質の少なくとも１断片を含むアデノウイルスベクターを提供する。該ファイバータンパク質はそのアデノウイルスベクターの天然のファイバータンパク質であってもよいし、そのアデノウイルスベクターの基礎になっている血清型とは異なる血清型に由来してもよい。後者の場合、本発明のアデノウイルスベクターは、Ｂ亜群アデノウイルスに由来するファイバータンパク質の少なくとも１断片、その断片は少なくともレセプター結合配列からなる断片をディスプレーするキメラアデノウイルスである。通例、そのようなウイルスはベクター（通例、プラスミド、コスミドまたはバキュロウイルスベクター）を用いて産生されるだろう。そのようなベクターも本発明の主題である。好ましいベクターは、治療しようとする宿主と治療しようとする障害にとりわけ適したキメラ組換えウイルスを作製するために使用できるベクターである。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２４】
本発明は、アデノウイルス５型に基づくが、アデノウイルス16型由来のファイバー配列の少なくとも１断片を有するキメラアデノウイルスであって、そのAd16のファイバーの断片が宿主細胞の結合に関与するファイバータンパク質の断片を含むものをも提供する。また本発明は、特定の宿主細胞、たとえば、ヒトまたは動物起源の内皮細胞や平滑筋細胞など、ただしこれらに限らない宿主細胞で、他の亜群に属するアデノウイルスと比較して改善された感染性を示すキメラアデノウイルスベクターも提供する。本発明の重要な特徴は、キメラウイルスを産生するための手段である。通例、複製コンピテントアデノウイルスを含有するアデノウイルスのバッチを宿主細胞に投与することは望まれない。したがって、一般に、いくつかの遺伝子（ただし少なくとも１つ）を、キメラウイルスをコードするベクター上のアデノウイルスゲノムから除外し、そのベクターにキメラアデノウイルスを産生させる細胞のゲノムにそれらの遺伝子を供給することが望ましい。そのような細胞は通例、パッケージング細胞と呼ばれる。したがって本発明は、アデノウイルスの生産に必要な配列であって本発明のアデノウイルスベクター上に存在しない要素すべてをトランスに含む、本発明キメラアデノウイルス産生用のパッケージング細胞も提供する。通例、ベクターとパッケージング細胞は、それらが必要な要素をすべてもつが、組換えによって複製コンピテントウイルスを生じさせる重複要素はもたないという点で、互いに適合していなければならない。したがって本発明は、本発明のパッケージング細胞と本発明の組換えベクターを含む部品のキットを提供し、該細胞と該ベクターのあいだに複製コンピテントアデノウイルスの産生をもたらす組換えにつながる配列の重複が本質的にないものもある。たとえば腫瘍細胞の根絶を目的とする治療などといった一定の適用のために、本発明のアデノウイルスベクターが複製コンピテントであるか、たとえば腫瘍細胞や腫瘍内皮細胞のような特定の細胞型内で、一定の条件下に複製可能でありうる。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２６】
ウイルスベクターを精密に適合させ、そのキメラウイルスに自由に所望の性質を与えることができるためには、アデノウイルス遺伝子のライブラリーを用意して、交換しようとする遺伝子をプラスミド系またはコスミド系アデノウイルス構築物上に配置し、交換しようとする遺伝子または配列に制限部位を隣接させることが好ましい。好ましい遺伝子または配列をそのライブラリーから選択し、本ウイルスを作製するために使用されるアデノウイルス構築物に挿入することができる。通例、そのような方法は、いくつかの制限および連結段階と、パッケージング細胞のトランスフェクションを含む。アデノウイルスベクターは１部をトランスフェクションするか、２つ以上の重複断片としてトランスフェクションし、相同組換えによってウイルスが生成される。たとえばアデノウイルスベクターは、たとえばE1領域内での目的遺伝子の挿入または置換、ペントンおよび/またはヘキソン配列内での挿入または置換、またはファイバー配列への挿入または置換用の２つ以上の重複配列から組み立てることができる。したがって本発明は、望ましい宿主域や減少した抗原性など、１つ以上の望ましい性質をもつキメラアデノウイルスを生産する方法であって、望ましい挿入部位をもつ１つ以上の本発明ベクターを用意し、所望の宿主域をもつアデノウイルス血清型に由来するファイバータンパク質の少なくとも機能的部分を該ベクターに挿入し、かつ/または、比較的低い抗原性をもつアデノウイルス血清型に由来するキャプシドタンパク質の機能的部分を挿入し、該ベクターを本発明のパッケージング細胞にトランスフェクションし、キメラウイルス粒子を産生させることを含む方法を提供する。もちろん、異なる血清型に由来する他のウイルス遺伝子の他の組み合わせも本明細書で上記開示されるように挿入できる。E1領域での目的遺伝子の挿入または置換に加えて非天然配列を１つだけもつキメラウイルスも本発明の範囲に含まれる。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３２】
インビトロおよびインビボで特定の細胞型を標的にすることができ、したがって一定の細胞型に対して改変された向性をもつキメラキャプシドの作製法を提供することが本発明の目的である。アデノウイルスまたはアデノウイルスキャプシドを特定の細胞型または組織へのタンパク質または核酸送達ビヒクルとして使用できるようにする方法と手段を提供することが本発明のさらなる目的である。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４１】
一態様として、本発明は、少なくとも平滑筋細胞および/または内皮細胞への組織向性が与えられている遺伝子送達ビヒクルを提供する。もう一つの態様として、本発明は、少なくとも肝細胞への組織向性が除去された遺伝子送達ビヒクルを提供する。好ましくは、該遺伝子送達ビヒクルには、少なくとも平滑筋細胞および/または内皮細胞への組織向性が与えられ、少なくとも肝細胞への組織向性が除去される。本発明の好ましい態様として、該遺伝子送達ビヒクルには、Ｂ亜群アデノウイルス、好ましくはアデノウイルス16由来のファイバータンパク質を用いて、少なくとも平滑筋細胞および/または内皮細胞への組織向性が与えられ、および/または少なくとも肝細胞への組織向性が除去される。本発明の好ましい側面として、該遺伝子送達ビヒクルはウイルスキャプシドを含む。好ましくは、該ウイルスキャプシドは、全部または一部がＢ亜群のアデノウイルス、好ましくはアデノウイルス16に由来するウイルスキャプシドを含むか、またはＢ亜群のアデノウイルス、好ましくはアデノウイルス16由来のタンパク質またはその一部を含む。本発明の好ましい態様として、該ウイルスキャプシドは、少なくとも２つの異なるウイルス、好ましくはアデノウイルスに由来するタンパク質またはその断片を含む。本発明のこの側面の好ましい態様では、該ウイルスの少なくとも１つがＢ亜群のアデノウイルス、好ましくはアデノウイルス16である。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４２】
本発明の好ましい態様として、該遺伝子送達ビヒクルはアデノウイルスファイバータンパク質またはその断片を含む。該ファイバータンパク質は、好ましくはＢ亜群のアデノウイルス、好ましくはアデノウイルス16に由来する。該遺伝子送達ビヒクルはさらに、他のアデノウイルスに由来する他のファイバータンパク質またはその断片を含みうる。該遺伝子送達ビヒクルは他のアデノウイルスタンパク質を含んでも含まなくてもよい。核酸はファイバータンパク質またはその断片に直接結合しうるが、間接的に結合してもよい。間接的結合の例には、核酸のアデノウイルスキャプシドへのパッケージングまたは核酸のリポソームへのパッケージングがあり、ファイバータンパク質またはその断片はアデノウイルスキャプシドに組み込まれるかリポソームに結合されるが、これらに限定されない。ファイバータンパク質またはその断片への核酸の直接的結合は、該ファイバータンパク質またはその断片が複合体の一部でない場合、または該ファイバータンパク質またはその断片がアデノウイルスキャプシドなどの複合体の一部である場合に行ないうる。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４３】
本発明の一態様として、アデノウイルスファイバータンパク質を含む遺伝子送達ビヒクルであって、そのファイバータンパク質がＢ亜群アデノウイルス、好ましくはアデノウイルス16の組織決定断片を含むものが提供される。アデノウイルスファイバータンパク質は、３つの機能ドメインを含む。１つのドメイン・ベース（base）は、アデノウイルスキャプシドのペントンベースへのファイバーの固定を担っている。もう一つのドメイン・ノブ（knob）はレセプター認識を担っており、一方、シャフト（shaft）ドメインはベースをノブから分離するスペーサーとして機能する。さまざまなドメインは他の機能ももちうる。たとえば、シャフトはおそらく標的細胞特異性にも関与するだろう。前記したドメインのそれぞれは、ファイバーの断片を限定するために使用できる。しかし、断片は別の方法でも同定できる。たとえばノブドメインはレセプター結合断片とシャフト結合断片を含む。ベースドメインはペントンベース結合断片とシャフト結合断片を含む。さらに、シャフトは反復するアミノ酸のストレッチを含む。これらの反復されたストレッチのそれぞれは断片でありうる。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４４】
ファイバータンパク質の組織向性決定断片は、ファイバータンパク質の単一の断片であるか、少なくとも１つのファイバータンパク質の断片の組み合わせであることができ、ここに該組織向性決定断片は、単独で、またはウイルスキャプシドと組み合わせて、好ましくはポジティブに、ただし必ずしもその必要はないが、遺伝子送達ビヒクルが所定の細胞または細胞型を形質導入できる効率を決定する。肝細胞への組織向性とは、肝臓に存在する細胞、好ましくは肝実質細胞への組織向性を意味する。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４８】
本発明の一側面として、あるアデノウイルスに由来する核酸を含む遺伝子送達ビヒクルが提供される。本発明の好ましい態様として、該アデノウイルス核酸は、少なくともＢ亜群アデノウイルスファイバータンパク質の、好ましくはアデノウイルス16の組織向性決定断片を含むファイバータンパク質をコードする少なくとも１つの核酸配列を含む。好ましい側面として、該アデノウイルスは、少なくとも２つの異なるアデノウイルスに由来する核酸を含む。好ましい側面として、該アデノウイルスは、少なくとも２つの異なるアデノウイルスに由来する核酸を含み、少なくとも１つの核酸配列は、少なくともＢ亜群アデノウイルスファイバータンパク質の、好ましくはアデノウイルス16の組織向性決定断片を含むファイバータンパク質をコードする。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５０】
もう一つの好ましい態様として、該アデノウイルス核酸は、該アデノウイルス核酸によってコードされるアデノウイルスタンパク質に対して免疫応答を開始するという宿主免疫系の能力が弱められるか不能になるように修飾される。これは、初期領域２および/または初期領域４のタンパク質をコードする遺伝子の欠失によって達成できる。あるいは、初期領域３タンパク質をコードする遺伝子を欠失させるか、反対に、初期領域３中の遺伝子によってコードされるタンパク質の一部がもつ抗免疫系機能を考慮すると、初期領域３タンパク質の発現をいくつかの目的で強化させうる。また、本アデノウイルス核酸は、前記したアデノウイルス核酸の具体的改変の２つ以上の組み合わせによって改変しうる。必須遺伝子をアデノウイルス核酸から欠失させた場合は、アデノウイルス核酸、アデノウイルスベクター、ビヒクルまたはキメラキャプシドを生産しようとする細胞内で、それらの遺伝子を補完しなければならないことは明らかである。また、アデノウイルス核酸は、前記以外の方法で、たとえばキャプシドタンパク質またはその断片を人間がそれに対する中和抗体をもたないか、低レベルでしかもたない他の血清型に由来するキャプシドタンパク質またはその断片で交換することによって、該アデノウイルス核酸によってコードされるアデノウイルスタンパク質に対して免疫応答を開始するという宿主免疫系の能力が弱められるか不能になるようにも修飾できる。これのもう一つの例は、キャプシドタンパク質をコードする遺伝子の、他の血清型に由来するキャプシドタンパク質をコードする遺伝子との交換である。キャプシドタンパク質またはその断片は、各個体がそれに対する免疫応答を生じさせることができないまたはその能力が低い他のキャプシドタンパク質またはその断片にも交換できる。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５５】
もう一つの側面として、本発明は、少なくとも平滑筋細胞および/または内皮細胞への組織向性を与えられた遺伝子送達ビヒクルを生産するための細胞を提供する。もう一つの側面として、本発明は、少なくとも肝細胞への組織向性が除去された遺伝子送達ビヒクルを生産するための細胞を提供する。もう一つの側面として、本発明は、少なくとも平滑筋細胞および/または内皮細胞への組織向性が与えられ、少なくとも肝細胞への組織向性が除去された遺伝子送達ビヒクルを産生するための細胞を提供する。本発明の好ましい態様では、該細胞がアデノウイルスパッケージング細胞であり、そこでアデノウイルス核酸がアデノウイルスキャプシドにパッケージングされる。本発明のアデノウイルスパッケージング細胞の一側面として、アデノウイルス核酸の複製とパッケージングに必要なすべてのタンパク質が、初期領域１によってコードされるタンパク質を除いて、該アデノウイルス核酸に組み込まれた遺伝子によって提供される。本発明のこの側面において、初期領域１がコードするタンパク質は、細胞ゲノムDNAに組み込まれた遺伝子によってコードされうる。本発明の好ましい態様では、該細胞がPER.C6（ECACC受託番号96022940）である。一般に、アデノウイルス核酸の複製とアデノウイルスキャプシドへのパッケージングに必要な遺伝子産物がアデノウイルス核酸によって提供されない場合、それらは、該パッケージング細胞の一過性トランスフェクションか、安定な形質転換により、パッケージング細胞によって提供される。しかし、パッケージング細胞によって提供される遺伝子産物は、該アデノウイルス核酸上に存在する遺伝子によっても提供されうる。たとえばファイバータンパク質はパッケージング細胞によって、たとえば一過性トランスフェクションを介して提供されうるし、アデノウイルス核酸によってもコードされうる。この特徴は、とりわけ、２つの異なるウイルスに由来するファイバータンパク質を含むアデノウイルスキャプシドを作製するために使用できる。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５６】
本発明の遺伝子送達ビヒクルは、心血管疾患または内皮細胞もしくは平滑筋細胞への核酸送達によって治療できる疾患の治療に役立つ。後者の非限定的な例は、たとえば癌であって、移入される核酸が抗血管新生タンパク質をコードする遺伝子を含む。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５７】
本発明の遺伝子送達ビヒクルは前記疾患治療用の薬剤として使用できる。あるいは、本発明の遺伝子送達ビヒクルは、前記疾患治療用の医薬の製造に使用できる。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５８】
一側面として、本発明は、平滑筋細胞および/または内皮細胞への組織向性をもつまたは与えられたアデノウイルスキャプシドであって、該キャプシドが好ましくは少なくとも２つの異なるアデノウイルスに由来するタンパク質を含み、少なくともファイバータンパク質の組織向性決定断片がＢ亜群アデノウイルス、好ましくはアデノウイルス16に由来するものを提供する。もう一つの側面として、本発明は、肝細胞への組織向性が除去されたアデノウイルスキャプシドであって、該キャプシドが好ましくは少なくとも２つの異なるアデノウイルスに由来するタンパク質を含み、少なくともファイバータンパク質の組織向性決定断片がＢ亜群アデノウイルス−好ましくはアデノウイルス16に由来するものを提供する。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６７】
本発明の好ましい態様では、前記構築物が、平滑筋細胞および/または内皮細胞への組織向性をもつ遺伝子送達ビヒクルまたはアデノウイルスキャプシドの作製に使用される。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６８】
もう一つの側面として、本発明は、選択された多数の非アデノウイルス核酸を含むアデノウイルスベクターまたは全く同一でもそうでなくてもよい遺伝子送達ビヒクルのライブラリーを提供する。本発明のもう一つの側面として、キャプシドタンパク質をコードするアデノウイルス遺伝子が、少なくとも２つの異なるアデノウイルスに由来するタンパク質を含むアデノウイルスキャプシドのライブラリーを作製するために使用され、該アデノウイルスは好ましくは２つの異なる血清型に由来し、好ましくは１つの血清型がＢ亜群のアデノウイルスである。本発明のとりわけ好ましい態様として、少なくとも２つの異なるアデノウイルスに由来するタンパク質を含むアデノウイルスキャプシドのライブラリーであって、少なくともファイバータンパク質の組織向性決定断片がＢ亜群のアデノウイルス−好ましくはアデノウイルス16に由来するものが作製される。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６９】
アデノウイルス16のファイバータンパク質は、好ましくは図9に記載の配列を含む。しかし、本発明の範囲で、コドンの縮重性を用いることにより、類似の配列を得ることができる。あるいは、組織向性決定性が有意に変更されない限り、アミノ酸の置換または挿入または欠失を行なってもよい。そのようなアミノ酸置換は同じ極性グループの範囲内またはその範囲外で行ないうる。