【手続補正書】
【提出日】平成25年6月12日(2013.6.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロテインＡ結合に関してヘテロ二量体である二重特異性抗原結合タンパク質であって、
（ａ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、第１のエピトープに選択的に結合する第１のエピトープ結合領域、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４から選択されるヒトＩｇＧの第１のＣＨ３領域を含む免疫グロブリン定常領域を含み、ここで該第１のＣＨ３領域がプロテインＡに結合する、第１のポリペプチド；ならびに
（ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、第２のエピトープに選択的に結合する第２のエピトープ結合領域、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４から選択されるヒトＩｇＧの第２のＣＨ３領域を含む免疫グロブリン定常領域を含む、第２のポリペプチド；
を含み、ここで、該第２のＣＨ３領域は、プロテインＡへの該第２のＣＨ３領域の結合を減少させるかまたは排除する改変を含む、二重特異性抗原結合タンパク質。
【請求項２】
前記第１のポリペプチドおよび前記第２のポリペプチドが、ヒトＩｇＧ重鎖である、請求項１に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項３】
免疫グロブリン軽鎖をさらに含む、請求項１に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項４】
前記免疫グロブリン軽鎖が、ヒト免疫グロブリン軽鎖である、請求項３に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項５】
前記第１のポリペプチドおよび前記第２のポリペプチドが各々、ヒトＩｇＧ１重鎖である、請求項１に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項６】
前記改変が、ＩＭＧＴエキソンナンバリングシステムにおける（ａ）９５Ｒならびに（ｂ）９５Ｒおよび９６Ｆ、またはＥＵナンバリングシステムにおける（ａ’）４３５Ｒならびに（ｂ’）４３５Ｒおよび４３６Ｆからなる群から選択される、請求項１に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項７】
ＩＭＧＴエキソンナンバリングシステムにおける１６Ｅ、１８Ｍ、４４Ｓ、５２Ｎ、５７Ｍおよび８２Ｉ、またはＥＵナンバリングシステムにおける３５６Ｅ、３５８Ｍ、３８４Ｓ、３９２Ｎ、３９７Ｍおよび４２２Ｉからなる群から選択される１から５つの改変をさらに含む、請求項６に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項８】
前記二重特異性抗体の前記ＣＨ３領域が、ヒトにおいて免疫原性でないかまたは実質的に免疫原性でない、請求項６に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項９】
前記二重特異性抗体の前記ＣＨ３領域が、ヒトにおいて免疫原性でないかまたは実質的に免疫原性でない、請求項７に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項１０】
プロテインＡ結合に関してヘテロ二量体である二重特異性抗体を作製するための方法であって、前記方法は：
（ａ）第１のエピトープを認識する第１の可変ドメインを含む第１の免疫グロブリン重鎖をコードする核酸配列を得る工程であって、ここで、該第１の免疫グロブリン重鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４から選択されるヒトＩｇＧの第１のＣＨ３領域を含み、そしてここで、該第１のＣＨ３領域はプロテインＡに結合する、工程；
（ｂ）第２のエピトープを認識する第２の可変ドメインを含む第２の免疫グロブリン重鎖をコードする第２の核酸配列を得る工程であって、ここで、該第２の免疫グロブリン重鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４から選択されるヒトＩｇＧの第２のＣＨ３領域を含み、そしてここで該第２のＣＨ３領域は、プロテインＡへの該第２のＣＨ３領域の結合を減少させるかまたは排除する改変を含む、工程；
（ｃ）該第１の免疫グロブリン重鎖および該第２の免疫グロブリン重鎖と対形成する免疫グロブリン軽鎖をコードする第３の核酸配列を得る工程；
（ｄ）該第１の核酸配列、該第２の核酸配列および該第３の核酸配列を哺乳動物細胞に導入する工程；
（ｅ）該細胞に二重特異性抗体を発現させる工程；ならびに
（ｆ）該二重特異性抗体がプロテインＡに結合する能力に基づいて該二重特異性抗体を単離する工程
を包含する、方法。
【請求項１１】
前記改変が、ＩＭＧＴエキソンナンバリングシステムにおける（ａ）９５Ｒならびに（ｂ）９５Ｒおよび９６Ｆ、またはＥＵナンバリングシステムにおける（ａ’）４３５Ｒならびに（ｂ’）４３５Ｒおよび４３６Ｆからなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ＩＭＧＴエキソンナンバリングシステムにおける１６Ｅ、１８Ｍ、４４Ｓ、５２Ｎ、５７Ｍおよび８２Ｉ、またはＥＵナンバリングシステムにおける３５６Ｅ、３５８Ｍ、３８４Ｓ、３９２Ｎ、３９７Ｍおよび４２２Ｉからなる群から選択される１から５つの改変をさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記二重特異性抗体の前記ＣＨ３領域が、ヒトにおいて免疫原性でないかまたは実質的に免疫原性でない、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記二重特異性抗体の前記ＣＨ３領域が、ヒトにおいて免疫原性でないかまたは実質的に免疫原性でない、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記二重特異性抗体が、プロテインＡを備える固体支持体で単離される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記固体支持体が、プロテインＡアフィニティーカラムを含み、前記二重特異性抗体が、ｐＨ勾配を使用して単離される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ｐＨ勾配が、ｐＨ３とｐＨ５との間の１またはそれより多いｐＨ段階を含む段階勾配である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
プロテインＡ結合に関してヘテロ二量体である二重特異性抗体を単離するための方法であって、
破壊された細胞または抗体の混合物から、識別的に改変されたＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４のＣＨ３ドメインを有する重鎖定常領域を含む二重特異性抗体を単離する工程を包含し、ここで、該識別的に改変されたＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４のＣＨ３ドメインは、プロテインＡに結合する第１のＣＨ３領域およびプロテインＡへの第２のＣＨ３領域の結合を減少させるかまたは排除する改変を含む第２のＣＨ３領域を含み、ここで、該識別的に改変されたＣＨ３ドメインは、ヒトにおいて免疫原性でないかまたは実質的に免疫原性でなく、そしてここで、該二重特異性抗体は、プロテインＡに対するその親和性に基づいて、該破壊された細胞または該混合物から単離される、方法。
【請求項１９】
前記重鎖定常領域の一方のモノマーが、ヒトＩｇＧ１であり、該重鎖定常領域の他方のモノマーが、ＩＭＧＴエキソンナンバリングシステムにおける（ａ）Ｈ９５Ｒならびに（ｂ）Ｈ９５ＲおよびＹ９６Ｆ、またはＥＵナンバリングシステムにおける（ａ’）Ｈ４３５Ｒならびに（ｂ’）Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆからなる群から選択される改変を前記第２のＣＨ３領域に含む改変されたヒトＩｇＧ１である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記改変されたヒトＩｇＧ１が、ＩＭＧＴエキソンナンバリングシステムにおけるＤ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７ＭおよびＶ８２Ｉ、またはＥＵナンバリングシステムにおけるＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７ＭおよびＶ４２２Ｉからなる群から選択される改変を前記第２のＣＨ３領域にさらに含む、請求項１９に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４７】
本明細書中に記載される任意の実施形態および局面は、別段示されないかまたは文脈から明らかでない限り、互いと同時に使用され得る。次の記載を検討することにより、他の実施形態が当業者に明らかになるだろう。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
ａ．Ｎ末端からＣ末端に向かって、第１のエピトープに選択的に結合する第１のエピトープ結合領域、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４から選択されるヒトＩｇＧの第１のＣＨ３領域を含む免疫グロブリン定常領域を含む、第１のポリペプチド；ならびに
ｂ．Ｎ末端からＣ末端に向かって、第２のエピトープに選択的に結合する第２のエピトープ結合領域、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４から選択されるヒトＩｇＧの第２のＣＨ３領域を含む免疫グロブリン定常領域を含む、第２のポリペプチド；
を含むヘテロ二量体の二重特異性抗原結合タンパク質であって、ここで、前記第２のＣＨ３領域は、プロテインＡへの該第２のＣＨ３ドメインの結合を減少させるかまたは排除する改変を含む、ヘテロ二量体の二重特異性抗原結合タンパク質。
（項目２）
前記第１のポリペプチドおよび前記第２のポリペプチドが、ヒトＩｇＧ重鎖である、項目１に記載の二重特異性タンパク質。
（項目３）
免疫グロブリン軽鎖をさらに含む、項目１に記載の二重特異性タンパク質。
（項目４）
前記免疫グロブリン軽鎖が、ヒト免疫グロブリン軽鎖である、項目３に記載の二重特異性タンパク質。
（項目５）
前記第１のポリペプチドおよび前記第２のポリペプチドが各々、ヒトＩｇＧ１重鎖である、項目１に記載の二重特異性タンパク質。
（項目６）
前記改変が、ＩＭＧＴエキソンナンバリングシステムにおける（ａ）９５Ｒならびに（ｂ）９５Ｒおよび９６Ｆ、またはＥＵナンバリングシステムにおける（ａ’）４３５Ｒならびに（ｂ’）４３５Ｒおよび４３６Ｆからなる群から選択される、項目１に記載の二重特異性タンパク質。
（項目７）
ＩＭＧＴエキソンナンバリングシステムにおける１６Ｅ、１８Ｍ、４４Ｓ、５２Ｎ、５７Ｍおよび８２Ｉ、またはＥＵナンバリングシステムにおける３５６Ｅ、３５８Ｍ、３８４Ｓ、３９２Ｎ、３９７Ｍおよび４２２Ｉからなる群から選択される１から５つの改変をさらに含む、項目６に記載の二重特異性タンパク質。
（項目８）
前記二重特異性抗体のＣＨ３ドメインが、ヒトにおいて免疫原性でないかまたは実質的に免疫原性でない、項目６に記載の二重特異性タンパク質。
（項目９）
前記二重特異性抗体のＣＨ３ドメインが、ヒトにおいて免疫原性でないかまたは実質的に免疫原性でない、項目７に記載の二重特異性タンパク質。
（項目１０）
二重特異性抗体を作製するための方法であって、前記方法は：
ａ．第１のエピトープを認識する第１の可変ドメインを含む第１の免疫グロブリン重鎖をコードする核酸配列を得る工程であって、ここで、該第１の免疫グロブリン重鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４のアイソタイプ定常ドメインを含む、工程；
ｂ．第２のエピトープを認識する第２の可変ドメインを含む第２の免疫グロブリン重鎖をコードする第２の核酸配列を得る工程であって、ここで、該第２の免疫グロブリン重鎖は、プロテインＡへの結合を無くすかまたは減少させる改変をそのＣＨ３ドメインに含むＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４のアイソタイプ定常ドメインを含む、工程；
ｃ．該第１の免疫グロブリン重鎖および該第２の免疫グロブリン重鎖と対形成する免疫グロブリン軽鎖をコードする第３の核酸配列を得る工程；
ｄ．該第１の核酸配列、該第２の核酸配列および該第３の核酸配列を哺乳動物細胞に導入
する工程；
ｅ．該細胞が二重特異性抗体を発現するのを可能にする工程；ならびに
ｆ．該二重特異性抗体がプロテインＡに結合する能力に基づいて該二重特異性抗体を単離する工程
を包含する、方法。
（項目１１）
前記改変が、ＩＭＧＴエキソンナンバリングシステムにおける（ａ）９５Ｒならびに（ｂ）９５Ｒおよび９６Ｆ、またはＥＵナンバリングシステムにおける（ａ’）４３５Ｒならびに（ｂ’）４３５Ｒおよび４３６Ｆからなる群から選択される、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
ＩＭＧＴエキソンナンバリングシステムにおける１６Ｅ、１８Ｍ、４４Ｓ、５２Ｎ、５７Ｍおよび８２Ｉ、またはＥＵナンバリングシステムにおける３５６Ｅ、３５８Ｍ、３８４Ｓ、３９２Ｎ、３９７Ｍおよび４２２Ｉからなる群から選択される１から５つの改変をさらに含む、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記二重特異性抗体の前記ＣＨ３ドメインが、ヒトにおいて免疫原性でないかまたは実質的に免疫原性でない、項目１１に記載の方法。
（項目１４）
前記二重特異性抗体の前記ＣＨ３ドメインが、ヒトにおいて免疫原性でないかまたは実質的に免疫原性でない、項目１２に記載の方法。
（項目１５）
前記二重特異性抗体が、プロテインＡを備える固体支持体で単離される、項目１０に記載の方法。
（項目１６）
前記固体支持体が、プロテインＡアフィニティーカラムを含み、前記二重特異性抗体が、ｐＨ勾配を使用して単離される、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記ｐＨ勾配が、ｐＨ３とｐＨ５との間の１またはそれより多いｐＨ段階を含む段階勾配である、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
二重特異性抗体を単離するための方法であって、
破壊された細胞または抗体の混合物から、識別的に改変されたＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４のＣＨ３ドメインを有する二重特異性抗体を単離する工程を包含し、ここで、該識別的に改変されたＣＨ３ドメインは、ヒトにおいて免疫原性でないかまたは実質的に免疫原性でなく、該改変は、プロテインＡに対するモノマーの親和性が互いに異なるヘテロ二量体の重鎖定常領域を有する二重特異性抗体をもたらし、該二重特異性抗体は、プロテインＡに対するその親和性に基づいて、該破壊された細胞または該混合物から単離される、方法。
（項目１９）
前記ヘテロ二量体の重鎖定常領域の一方のモノマーが、ヒトＩｇＧ１であり、該ヘテロ二量体の重鎖定常領域の他方のモノマーが、ＩＭＧＴエキソンナンバリングシステムにおける（ａ）Ｈ９５Ｒならびに（ｂ）Ｈ９５ＲおよびＹ９６Ｆ、またはＥＵナンバリングシステムにおける（ａ’）Ｈ４３５Ｒならびに（ｂ’）Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆからなる群から選択される改変を含む改変されたヒトＩｇＧ１である、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記改変されたヒトＩｇＧ１が、ＩＭＧＴエキソンナンバリングシステムにおけるＤ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７ＭおよびＶ８２Ｉ、またはＥＵナンバリングシステムにおけるＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍおよ
びＶ４２２Ｉからなる群から選択される改変をさらに含む、項目１９に記載の方法。