【手続補正書】
【提出日】平成21年4月1日(2009.4.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
培養容器からの細胞の剥離を判断する細胞剥離判断方法であって、
前記培養容器内の所定位置を撮像して第１の画像を取得するステップと、
前記第１の画像の取得後であって前記培養容器内の培養液の流動後に前記所定位置を撮像して第２の画像を取得するステップと、
前記第１の画像から特定される細胞の位置と、前記第２の画像から特定される細胞の位置とに基づいて、前記培養容器からの細胞の剥離を判断するステップと
を包含している細胞剥離判断方法。
【請求項２】
前記細胞の剥離を判断するステップにおいて、前記第１の画像及び前記第２の画像における細胞の位置は、前記第１の画像及び前記第２の画像における各細胞の重心により求められ、該重心位置が前記第１の画像と前記第２の画像とで同じものを付着細胞と判断するとともに異なるものを浮遊細胞と判断し、細胞全体に占める浮遊細胞の割合から前記培養容器からの細胞の剥離を判断する請求項１記載の細胞剥離判断方法。
【請求項３】
培養容器からの細胞の剥離を判断する細胞剥離判断方法であって、
前記培養容器内の所定位置を撮像して第１の画像を取得するステップと、
前記第１の画像の取得後であって前記培養容器内の培養液の流動後に前記所定位置を撮像して第２の画像を取得するステップと、
前記第１の画像において細胞が存在している部分の細胞面積率Ａと、前記第２の画像において細胞が存在している部分の細胞面積率Ｂとに基づいて、前記第１の画像と前記第２の画像の何れにも細胞が存在している部分の共通面積率Ｃを求め、前記細胞面積率Ａと前記細胞面積率Ｂと前記共通面積率Ｃから前記培養容器からの細胞の剥離を判断するステップと
を包含している細胞剥離判断方法。
【請求項４】
請求項３記載の細胞剥離判断方法であって、
前記培養容器に付着している付着細胞及び前記培養容器から剥離した浮遊細胞の何れも互いに重ならない場合に、
前記細胞の剥離を判断するステップは、前記培養容器に付着している付着細胞の細胞面積率と、前記剥離した浮遊細胞の細胞面積率との合計に対する前記浮遊細胞の細胞面積率の比率である剥離率ｘ1を、前記第１の画像及び前記第２の画像において共通の接着細胞面積率ｆ＝（Ｃ−ＡＢ）／（１＋Ｃ−Ａ−Ｂ）と、前記第１の画像における浮遊細胞総面積率ｓ1＝Ａ−ｆとに基づいて、以下の式：ｘ1＝ｓ1／（ｆ＋ｓ1）＝ｓ1／Ａから求め、該剥離率ｘ1に基づいて前記培養容器からの細胞の剥離を判断する細胞剥離判断方法。
【請求項５】
請求項３記載の細胞剥離判断方法であって、
前記培養容器に付着している付着細胞及び前記培養容器から剥離した浮遊細胞の何れも互いに重ならない場合に、
前記細胞の剥離を判断するステップは、前記培養容器に付着している付着細胞の細胞面積率と、前記培養容器から剥離した浮遊細胞の細胞面積率との合計に対する前記浮遊細胞の細胞面積率の比率である剥離率ｘ2を、前記第１の画像及び前記第２の画像において共通の接着細胞面積率ｆ＝（Ｃ−ＡＢ）／（１＋Ｃ−Ａ−Ｂ）と、前記第２の画像における浮遊細胞総面積率ｓ2＝Ｂ−ｆとに基づいて、以下の式：ｘ2＝ｓ2／（ｆ＋ｓ2）＝ｓ2／Ｂから求め、該剥離率ｘ2に基づいて前記培養容器からの細胞の剥離を判断する細胞剥離判断方法。
【請求項６】
請求項３記載の細胞剥離判断方法であって、
前記培養容器に付着している付着細胞に前記培養容器から剥離した浮遊細胞は重なる場合があるが、前記浮遊細胞同士は互いに重ならない場合に、
前記細胞の剥離を判断するステップは、前記培養容器に付着している付着細胞の細胞面積率と、前記培養容器から剥離した浮遊細胞の細胞面積率との合計に対する前記浮遊細胞の細胞面積率の比率である剥離率ｘ1を、前記第１の画像及び前記第２の画像において共通の接着細胞面積率ｆ＝（Ｃ−ＡＢ）／（１＋Ｃ−Ａ−Ｂ）と、前記第１の画像における浮遊細胞総面積率ｓ1＝（Ａ−ｆ）／（１−ｆ）とに基づいて、以下の式：ｘ1＝ｓ1／（ｆ＋ｓ1）から求め、該剥離率ｘ1に基づいて前記培養容器からの細胞の剥離を判断する細胞剥離判断方法。
【請求項７】
請求項３記載の細胞剥離判断方法であって、
前記培養容器に付着している付着細胞に前記培養容器から剥離した浮遊細胞は重なる場合があるが、前記浮遊細胞同士は互いに重ならない場合に、
前記細胞の剥離を判断するステップは、前記培養容器に付着している付着細胞の細胞面積率と、前記培養容器から剥離した浮遊細胞の細胞面積率との合計に対する前記浮遊細胞の細胞面積率の比率である剥離率ｘ2を、前記第１の画像及び前記第２の画像において共通の接着細胞面積率ｆ＝（Ｃ−ＡＢ）／（１＋Ｃ−Ａ−Ｂ）と、前記第２の画像における浮遊細胞総面積率ｓ2＝（Ｂ−ｆ）／（１−ｆ）とに基づいて、以下の式：ｘ2＝ｓ2／（ｆ＋ｓ2）から求め、該剥離率ｘ2に基づいて前記培養容器からの細胞の剥離を判断する細胞剥離判断方法。
【請求項８】
請求項３記載の細胞剥離判断方法であって、
前記培養容器に付着している付着細胞に前記培養容器から剥離した浮遊細胞が重なることがあり、前記浮遊細胞同士も２重まで互いに重なることがある場合に、
前記細胞の剥離を判断するステップは、前記培養容器に付着している付着細胞の細胞面積率と、前記培養容器から剥離した浮遊細胞の細胞面積率との合計に対する前記浮遊細胞の細胞面積率の比率である剥離率ｘ1を、前記第１の画像及び前記第２の画像において共通の接着細胞面積率ｆ＝（Ｃ−ＡＢ）／（１＋Ｃ−Ａ−Ｂ）と、前記第１の画像における浮遊細胞の投影面積率ｔ1＝（Ａ−ｆ）／（１−ｆ）と、前記第１の画像における浮遊細胞総面積率ｓ1＝２−２（１−ｔ1）1/2とに基づいて、以下の式：ｘ1＝ｓ1／（ｆ＋ｓ1）から求め、該剥離率ｘ1に基づいて前記培養容器からの細胞の剥離を判断する細胞剥離判断方法。
【請求項９】
請求項３記載の細胞剥離判断方法であって、
前記培養容器に付着している付着細胞に前記培養容器から剥離した浮遊細胞が重なることがあり、前記浮遊細胞同士も２重まで互いに重なることがある場合に、
前記細胞の剥離を判断するステップは、前記培養容器に付着している付着細胞の細胞面積率と、前記培養容器から剥離した浮遊細胞の細胞面積率との合計に対する前記浮遊細胞の細胞面積率の比率である剥離率ｘ2を、前記第１の画像及び前記第２の画像において共通の接着細胞面積率ｆ＝（Ｃ−ＡＢ）／（１＋Ｃ−Ａ−Ｂ）と、前記第２の画像における浮遊細胞の投影面積率ｔ2＝（Ｂ−ｆ）／（１−ｆ）と、前記第２の画像における浮遊細胞総面積率ｓ2＝２−２（１−ｔ2）1/2とに基づいて、以下の式：ｘ2＝ｓ2／（ｆ＋ｓ2）から求め、該剥離率ｘ2に基づいて前記培養容器からの細胞の剥離を判断する細胞剥離判断方法。
【請求項１０】
請求項３記載の細胞剥離判断方法であって、
前記培養容器に付着している付着細胞に前記培養容器から剥離した浮遊細胞が重なることがあり、前記培養容器に付着している付着細胞の有無に拘わらず前記浮遊細胞同士が何重にも重なることがある場合に、
前記細胞の剥離を判断するステップは、前記培養容器に付着している付着細胞の細胞面積率と、前記培養容器から剥離した浮遊細胞の細胞面積率との合計に対する前記浮遊細胞の細胞面積率の比率である剥離率ｘ1を、前記第１の画像及び前記第２の画像において共通の接着細胞面積率ｆ＝（Ｃ−ＡＢ）／（１＋Ｃ−Ａ−Ｂ）と、前記第１の画像における浮遊細胞の投影面積率ｔ1＝（Ａ−ｆ）／（１−ｆ）と、前記第１の画像における浮遊細胞総面積率ｓ1＝−ｌｎ（１−ｔ1）とに基づいて、以下の式：ｘ1＝ｓ1／（ｆ＋ｓ1）から求め、該剥離率ｘ1に基づいて前記培養容器からの細胞の剥離を判断する細胞剥離判断方法。
【請求項１１】
請求項３記載の細胞剥離判断方法であって、
前記培養容器に付着している付着細胞に前記培養容器から剥離した浮遊細胞が重なることがあり、前記培養容器に付着している付着細胞の有無に拘わらず前記浮遊細胞同士が何重にも重なることがある場合に、
前記細胞の剥離を判断するステップは、前記培養容器に付着している付着細胞の細胞面積率と、前記培養容器から剥離した浮遊細胞の細胞面積率との合計に対する前記浮遊細胞の細胞面積率の比率である剥離率ｘ2を、前記第１の画像及び前記第２の画像において共通の接着細胞面積率ｆ＝（Ｃ−ＡＢ）／（１＋Ｃ−Ａ−Ｂ）と、前記第２の画像における浮遊細胞の投影面積率ｔ2＝（Ｂ−ｆ）／（１−ｆ）と、前記第２の画像における浮遊細胞総面積率ｓ2＝−ｌｎ（１−ｔ2）とに基づいて、以下の式：ｘ2＝ｓ2／（ｆ＋ｓ2）から求め、該剥離率ｘ2に基づいて前記培養容器からの細胞の剥離を判断する細胞剥離判断方法。
【請求項１２】
培養容器から培養細胞を剥離させるための剥離液を該培養容器に投入するステップと、
請求項１乃至１１の何れかに記載の細胞剥離判断方法によって前記培養容器からの細胞の剥離を判断するステップと、
前記培養容器に剥離停止液を投入するステップと
を包含している培養細胞の剥離方法。
【請求項１３】
請求項１２記載の培養細胞の剥離方法であって、
前記細胞の剥離を判断するステップにおいて、前記培養容器からの細胞の剥離が不十分な場合に、該細胞の剥離を判断するステップを繰り返す培養細胞の剥離方法。
【請求項１４】
請求項１又は２記載の細胞剥離判断方法を実施するための細胞剥離判断装置であって、
前記培養容器中の培養液を流動状態とする加振装置と、
前記第１の画像及び前記第２の画像を得るための画像取得装置と、
前記第１の画像から特定される細胞の位置と、前記第２の画像から特定される細胞の位置とに基づいて、前記培養容器からの細胞の剥離を判断する細胞剥離判断手段と
を包含している細胞剥離判断装置。
【請求項１５】
請求項３乃至１１の何れかに記載の細胞剥離判断方法を実施するための細胞剥離判断装置であって、
前記培養容器中の培養液を流動状態とする加振装置と、
前記第１の画像及び前記第２の画像を得るための画像取得装置と、
前記細胞面積率Ａと、前記細胞面積率Ｂとに基づいて前記共通面積率Ｃを求めるとともに、前記細胞面積率Ａと前記細胞面積率Ｂと前記共通面積率Ｃから前記培養容器からの細胞の剥離を判断する細胞剥離判断手段と
を包含している細胞剥離判断装置。
【請求項１６】
請求項１４又は１５に記載の細胞剥離判断装置と、
培養容器の搬送を行う操作ロボットと
を備えた自動細胞培養装置。
【請求項１７】
前記操作ロボットは、前記細胞剥離判断装置における加振装置としても機能すること特徴とする請求項１６記載の自動細胞培養装置。