【手続補正書】
【提出日】平成24年12月3日(2012.12.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
溶血活性を除去するためのステムドメインにおける欠失を有する、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)の組換え一本鎖α溶血素ポリペプチドであって、少なくとも1つの異種配列が、配列番号1の野生型配列に対してアミノ酸第108位〜第151位、アミノ酸第1位〜第5位、アミノ酸第288位〜第293位、アミノ酸第43位〜第48位、アミノ酸第235位〜第240位、アミノ酸第92位〜第97位、アミノ酸第31位〜第36位、及びアミノ酸第156位〜第161位のそれぞれで定義される領域からなる群から選択される、少なくとも１つの領域に挿入されている、ただし、異種配列が5以上の連続したヒスチジン残基を含有する場合、前記5以上の連続したヒスチジン残基によって表される部分以外の異種配列の部分は11アミノ酸残基の最小長を有することを特徴とする、上記組換え一本鎖α溶血素ポリペプチド；又は
その変異体であって、ステムドメインにおける前記欠失および異種配列の前記挿入に加えて、配列番号1の野生型配列に対して1〜50のアミノ酸残基が付加、置換または欠失されており、かつオリゴマーを形成し、かつ脂質単分子層および脂質二重層を含む脂質二重層または細胞膜に結合する活性を有する、上記変異体。
【請求項２】
ステムドメインが、配列番号1の野生型配列に対して、Thr109からGln150までのアミノ酸配列内に存在し、かつ部分的または完全に除去されている、請求項１に記載の組換えα溶血素ポリペプチド又は変異体。
【請求項３】
異種配列が、少なくとも５アミノ酸残基の長さを有する、請求項１又は２に記載の組換えα溶血素ポリペプチド又は変異体。
【請求項４】
異種配列が、少なくとも８、１０、１２、１５、２０、３０、５０、７５、１００、１５０、２００又は３００アミノ酸残基の長さを有する、請求項１から３のいずれか１項に記載の組換えα溶血素ポリペプチド又は変異体。
【請求項５】
挿入部位の同一箇所に挿入されているか、或いは挿入部位の異なる箇所に挿入されている少なくとも2つの異種配列を含む、請求項１から４のいずれか１項に記載の組換えα溶血素ポリペプチド又は変異体。
【請求項６】
異種配列又は複数の異種配列が、ブドウ球菌種(Staphylococcus species)のみに由来する、請求項１から５のいずれか１項に記載の組換えα溶血素ポリペプチド又は変異体。
【請求項７】
異種配列または複数の異種配列が、SEB（黄色ブドウ球菌エンテロトキシンB）、TSST（毒素性ショック症候群毒素）、FnBP（フィブロネクチン結合タンパク質）、BlaZ（βラクタマーゼ）、ClfA（クランピング因子A）、PBP2a（ペニシリン結合タンパク質2a）、及びプロテインA、但し、これらは全てブドウ球菌種(Staphylococcus species)に由来する、請求項１から６のいずれか１項に記載の組換えα溶血素ポリペプチド又は変異体。
【請求項８】
α溶血素部分が、配列番号3（ICHA I）または配列番号5（ICHA II）の配列を有しているか、或いはα溶血素部分が配列番号3または配列番号5の配列に対して８５％以上のアミノ酸同一性を有するその変異体である、請求項１から７のいずれか１項に記載の組換えα溶血素ポリペプチド又は変異体。
【請求項９】
請求項１から８のいずれか１項に記載の組換えα溶血素ポリペプチド又は変異体をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１０】
請求項９に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項１１】
請求項９に記載のポリヌクレオチド又は請求項１０に記載のベクターを含む、形質転換体。
【請求項１２】
溶血活性を除去するためのステムドメインにおける欠失を有する、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)の組換え一本鎖α溶血素ポリペプチドであって、少なくとも1つの異種配列がα溶血素ポリペプチドの溶媒曝露ループに挿入されており、異種配列または複数の異種配列はブドウ球菌種(Staphylococcus species)から選択される、上記組換え一本鎖α溶血素ポリペプチド；又は
その変異体であって、ステムドメインにおける前記欠失および異種配列の前記挿入に加えて、配列番号1の野生型配列に対して1〜50のアミノ酸残基が付加、置換または欠失され、かつオリゴマーを形成し、かつ脂質単分子層および脂質二重層を含む脂質二重層又は細胞膜に結合する活性を有する、上記変異体
を含む、薬剤又はワクチン。
【請求項１３】
少なくとも一つの異種配列が、配列番号1の野生型配列に対して、アミノ酸第108位〜第151位、アミノ酸第1位〜第5位、アミノ酸第288位〜第293位、アミノ酸第43位〜第48位、アミノ酸第235位〜第240位、アミノ酸第92位〜第97位、アミノ酸第31位〜第36位、及びアミノ酸第156位〜第161位のそれぞれで定義される領域からなる群から選択される、少なくとも１つの領域に挿入されている、請求項１２に記載の薬剤又はワクチン。
【請求項１４】
少なくとも一つの異種配列が、配列番号1の野生型配列に対して、アミノ酸第108位〜第151位で定義される領域に挿入されている、請求項１２又は１３に記載の薬剤又はワクチン。
【請求項１５】
抗体の調製のための、請求項１から８のいずれか１項に記載の組換え一本鎖α溶血素ポリペプチド又は変異体の使用。
【請求項１６】
α溶血素に対する抗体、及び各異種配列又は複数の異種配列に対する抗体を含む抗体の混合物が得られる、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
異種配列に結合する物質を検出および／又は選択するためのアッセイにおける、請求項１から８のいずれか１項に記載の組換え一本鎖α溶血素ポリペプチド又は変異体の使用。
【請求項１８】
溶血活性を除去するためのステムドメインにおける欠失を有する、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)の組換え一本鎖α溶血素ポリペプチドであって、少なくとも1つの異種配列が許容部位に挿入されており、異種配列はブドウ球菌種(Staphylococcus species)のプロテインAの免疫グロブリンG結合ドメインの断片を含み；プロテインAの免疫グロブリンG結合ドメインの前記断片は5アミノ酸残基の最小長を有し、かつ完全長のプロテインAと比較して免疫グロブリンGのFcまたはFabドメインに対する結合活性を有さないか、または低下した結合活性を有することを特徴とする、上記組換え一本鎖α溶血素ポリペプチド；又は
その変異体であって、ステムドメインにおける前記欠失および異種配列の前記挿入に加えて、配列番号1の野生型配列に対して1〜50のアミノ酸残基が付加、置換または欠失され、かつオリゴマーを形成し、かつ脂質単分子層及び脂質二重層を含む脂質二重層または細胞膜に結合する活性を有する、上記変異体。
【請求項１９】
プロテインAの免疫グロブリンG結合ドメインの断片は、5〜35アミノ酸残基の長さを有する、請求項１８に記載の組換えα溶血素ポリペプチド又は変異体。
【請求項２０】
プロテインAの免疫グロブリンG結合ドメインの断片が2以下の完全なαへリックスを含む、請求項１８又は１９に記載の組換えα溶血素ポリペプチド又は変異体。
【請求項２１】
許容部位が、溶媒曝露ループ内に位置する、請求項１８から２０のいずれか１項に記載の組換えα溶血素ポリペプチド又は変異体。
【請求項２２】
溶媒暴露ループが、配列番号1の野生型配列に対して、アミノ酸第108位〜第151位、アミノ酸第1位〜第5位、アミノ酸第288位〜第293位、アミノ酸第43位〜第48位、アミノ酸第235位〜第240位、アミノ酸第92位〜第97位、アミノ酸第31位〜第36位、及びアミノ酸第156位〜第161位のそれぞれで定義される領域からなる群から選択される、請求項２１に記載の組換えα溶血素ポリペプチド又は変異体。
【請求項２３】
ステムドメインが、配列番号1の野生型配列に対して、Thr109からGln150までのアミノ酸配列内に存在し、かつ部分的又は完全に除去されている、請求項１８から２２のいずれか１項に記載の組換えα溶血素ポリペプチド又は変異体。
【請求項２４】
α溶血素部分が、配列番号3（ICHA I）または配列番号5（ICHA II）の配列を有しているか、或いはα溶血素部分が配列番号3または配列番号5の配列に対して８５％以上のアミノ酸同一性を有するその変異体である、請求項１８から２３のいずれか１項に記載の組換えα溶血素ポリペプチド又は変異体。
【請求項２５】
請求項１８から２４のいずれか１項に記載の組換えα溶血素ポリペプチド又は変異体をコードするポリヌクレオチド。
【請求項２６】
請求項２５に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項２７】
請求項２５に記載のポリヌクレオチド又は請求項２６に記載のベクターを含む、形質転換体。
【請求項２８】
請求項１８から２４のいずれか１項に記載の組換えα溶血素ポリペプチド又は変異体を含む、薬剤又はワクチン。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
さらに好ましい異種配列または複数の異種配列は、SEB（黄色ブドウ球菌エンテロトキシンB）、TSST（毒素性ショック症候群毒素）、FnBP（フィブロネクチン結合タンパク質）、BlaZ（βラクタマーゼ）、ClfA（クランピング因子A;Clumping Factor A）、PBP2a（ペニシリン結合タンパク質2a）、及びプロテインA、但し、これらは全てブドウ球菌種、好ましくは黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)に由来する、からなる群から選択される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６０】
薬剤またはワクチンの好ましい態様において、異種配列または複数の異種配列は、SEB（黄色ブドウ球菌エンテロトキシンB）、TSST（毒素性ショック症候群毒素）、FnBP（フィブロネクチン結合タンパク質）、BlaZ（βラクタマーゼ）、ClfA（クランピング因子A）、PBP2a（ペニシリン結合タンパク質2a）、及びプロテインA、但し、これらは全てブドウ球菌種、好ましくは黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)に由来する、からなる群から選択される。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４６】
1つの態様において、特異的IVIG組成物は、黄色ブドウ球菌α溶血素抗原に特異的に結合する（および任意にα溶血素抗原を中和する）抗体、および、相同配列によって表される、別の抗原に特異的に結合する（および任意にその別の抗原を中和する）抗体の両者を含む。抗体および抗原は、これまでに記載したもののいずれであってもよい。例えば、別の抗原は、SEB（黄色ブドウ球菌エンテロトキシンB）、TSST（毒素性ショック症候群毒素）、FnBP（フィブロネクチン結合タンパク質）、BlaZ（βラクタマーゼ）、ClfA（クランピング因子A）、PBP2a（ペニシリン結合タンパク質2a）、又はプロテインA、但し、これらは全てブドウ球菌種、好ましくは黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)に由来する、であってもよい。