【手続補正書】
【提出日】平成24年11月13日(2012.11.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における炎症応答の阻害の際の使用のための、少なくとも4個、多くとも20個の連続MUC1残基のMUC1ペプチドを含み、かつ配列CQC（SEQ ID NO:4）を含む薬学的組成物であって、CQCのアミノ末端システインが、そのNH2末端において、ネイティブMUC-1膜貫通配列に相当しなくてもよい少なくとも1個のアミノ酸残基によりカバーされている、前記薬学的組成物。
【請求項２】
対象が、炎症性腸疾患、脊椎関節症、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、腸炎性関節炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸疾患、慢性関節リウマチ、若年性関節リウマチ、家族性地中海熱、筋萎縮性側索硬化症、シェーグレン症候群、初期関節炎、ウイルス性関節炎、多発性硬化症、または乾癬から選択される症状を有する、請求項1に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
炎症応答が、NF-κBにより媒介されるシグナル伝達またはSTATにより媒介されるシグナル伝達により引き起こされる、請求項1または2に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
対象における炎症応答の阻害が炎症応答の阻害または消散を含む、請求項1または2に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
炎症応答の阻害が、MUC1発現細胞における炎症シグナル伝達の阻害に起因する、請求項1に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
炎症シグナル伝達が、NF-κBにより媒介されるシグナル伝達またはSTATにより媒介されるシグナル伝達を含み、例えば、NF-κBにより媒介される炎症シグナル伝達が、Bcl-xLおよびMUC1からなる群より選択される標的遺伝子のNF-κBによる活性化を含むか、またはSTATにより媒介される炎症シグナル伝達が、サイクリンD1、サバイビン、Idp1、Idp2、Cdkn1C、Lefty1、Mest、Aes1、Zfp57、Zfp3611、Sh3bp1、Ccnd3、およびMUC1からなる群より選択される標的遺伝子のSTAT3による活性化などのSTAT3による活性化を含む、請求項5に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
MUC1陽性細胞が、腫瘍細胞、内皮細胞、またはマクロファージ、B細胞、T細胞、樹状細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、NK細胞、もしくは好中球より選択される炎症細胞などの炎症細胞である、請求項5に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記ペプチドが、少なくとも5個、6個、または7個の連続MUC1残基を含み、好ましくは、前記配列がCQCR、CQCRR、CQCRRR、CQCRRRR、CQCRRK、またはCQCRRKNを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記ペプチドが、MUC1の多くとも10個の連続残基、11個の連続残基、12個の連続残基、13個の連続残基、14個の連続残基、15個の連続残基、16個の連続残基、17個の連続残基、18個の連続残基、または19個の連続残基を含有している、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記ペプチドが、ポリD-R、ポリD-P、またはポリD-Kより選択される細胞送達ドメイン（cell delivery domain）などの細胞送達ドメインと融合している、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記ペプチドが、全てLアミノ酸を含む、全てDアミノ酸を含む、またはLアミノ酸とDアミノ酸との混合物を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記使用が、ステロイドまたはCOX-2阻害剤などの第二の抗炎症治療を前記対象または前記MUC1発現細胞へ投与する工程をさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記ペプチドが、第二の抗炎症治療が、前記ペプチドの前に投与される、前記ペプチドの後に投与される、または前記ペプチドと同時に投与される、請求項12に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記投与が、静脈内投与、動脈内投与、経口投与、腫瘍内投与、皮下投与、局所（topical）投与、または腹腔内投与を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記投与が、局所（local）投与、局部投与、全身投与、または連続投与を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
前記対象がヒトである、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
前記ペプチドが、0.1〜500mg/kg/d、任意で10〜100mg/kg/dで投与される、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
前記ペプチドが、毎日、任意で7日間、2週間、3週間、4週間、1ヶ月間、6週間、8週間、2ヶ月間、12週間、または3ヶ月間、毎日投与される、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
毎週、任意で2週間、3週間、4週間、6週間、8週間、10週間、または12週間、毎週投与される、請求項1〜17のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
本発明の他の目的、特色、および利点は、以下の詳細な説明から明白になるであろう。しかしながら、本発明の本旨および範囲に含まれる様々な変化および修飾が、この詳細な説明から当業者には明白になるため、詳細な説明および具体例は、本発明の特定の態様を示すが、例示として与えられるに過ぎないことが、理解されるべきである。
[本発明1001]
MUC1発現細胞における炎症シグナル伝達を阻害する方法であって、該細胞をMUC1ペプチドに接触させる工程を該方法が含み、該MUC1ペプチドが、少なくとも4個、多くとも20個の連続MUC1残基でありかつ配列CQCを含み、CQCのアミノ末端システインが、そのNH2末端において、ネイティブMUC-1膜貫通配列に相当しなくてもよい少なくとも1個のアミノ酸残基によりカバーされている、方法。
[本発明1002]
前記ペプチドが、少なくとも5個、6個、または7個の連続MUC1残基を含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
配列が、CQCR、CQCRR、CQCRRR、CQCRRRR、CQCRRK、またはCQCRRKNを含む、本発明1002の方法。
[本発明1004]
前記ペプチドが、MUC1の多くとも10個の連続残基、11個の連続残基、12個の連続残基、13個の連続残基、14個の連続残基、15個の連続残基、16個の連続残基、17個の連続残基、18個の連続残基、または19個の連続残基を含有している、本発明1001の方法。
[本発明1005]
MUC1陽性細胞が、腫瘍細胞、内皮細胞、または炎症細胞である、本発明1001の方法。
[本発明1006]
炎症細胞が、マクロファージ、B細胞、T細胞、樹状細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、NK細胞、または好中球である、本発明1005の方法。
[本発明1007]
前記ペプチドが細胞送達ドメイン（cell delivery domain）と融合している、本発明1001の方法。
[本発明1008]
前記細胞送達ドメインが、ポリD-R、ポリD-P、またはポリD-Kである、本発明1007の方法。
[本発明1009]
前記細胞を第二の抗炎症剤と接触させる工程をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1010]
第二の抗炎症剤が、ステロイドまたはCOX-2阻害剤である、本発明1009の方法。
[本発明1011]
第二の抗炎症剤が、前記ペプチドの前に接触させられる、本発明1009の方法。
[本発明1012]
第二の抗炎症剤が、前記ペプチドの後に接触させられる、本発明1009の方法。
[本発明1013]
第二の抗炎症剤が、前記ペプチドと同時に接触させられる、本発明1009の方法。
[本発明1014]
前記ペプチドが全てLアミノ酸を含む、本発明1001の方法。
[本発明1015]
前記ペプチドが全てDアミノ酸を含む、本発明1001の方法。
[本発明1016]
前記ペプチドがLアミノ酸とDアミノ酸との混合物を含む、本発明1001の方法。
[本発明1017]
炎症シグナル伝達が、NF-κBにより媒介されるシグナル伝達またはSTATにより媒介されるシグナル伝達を含む、本発明1001の方法。
[本発明1018]
NF-κBにより媒介される炎症シグナル伝達が、Bcl-xLおよびMUC1からなる群より選択される標的遺伝子のNF-κBによる活性化を含む、本発明1017の方法。
[本発明1019]
STATにより媒介される炎症シグナル伝達が、STAT3による活性化を含む、本発明1017の方法。
[本発明1020]
STAT3により媒介される炎症シグナル伝達が、サイクリンD1、サバイビン、Idp1、Idp2、Cdkn1C、Lefty1、Mest、Aes1、Zfp57、Zfp3611、Sh3bp1、Ccnd3、およびMUC1からなる群より選択される標的遺伝子のSTAT3による活性化を含む、本発明1019の方法。
[本発明1021]
MUC1発現細胞におけるMUC1のNF-κBまたはSTATへの結合を阻害する方法であって、該細胞をMUC1ペプチドに接触させる工程を該方法が含み、該MUC1ペプチドが、少なくとも4個、多くとも20個の連続MUC1残基でありかつ配列CQCを含み、CQCのアミノ末端システインが、そのNH2末端において、ネイティブMUC1膜貫通配列に相当しなくてもよい少なくとも1個のアミノ酸残基によりカバーされている、方法。
[本発明1022]
MUC1発現細胞におけるNF-κBへの結合についてのMUC1とIκBαとの競合を阻害する方法であって、該細胞をMUC1ペプチドに接触させる工程を該方法が含み、該MUC1ペプチドが、少なくとも4個、多くとも20個の連続MUC1残基でありかつ配列CQCを含み、CQCのアミノ末端システインが、そのNH2末端において、ネイティブMUC1膜貫通配列に相当しなくてもよい少なくとも1個のアミノ酸残基によりカバーされている、方法。
[本発明1023]
MUC1発現細胞におけるMUC1により誘導されるNF-κBの核移行を阻害する方法であって、該細胞をMUC1ペプチドに接触させる工程を該方法が含み、該MUC1ペプチドが、少なくとも4個、多くとも20個の連続MUC1残基でありかつ配列CQCを含み、CQCのアミノ末端システインが、そのNH2末端において、ネイティブMUC1膜貫通配列に相当しなくてもよい少なくとも1個のアミノ酸残基によりカバーされている、方法。
[本発明1024]
対象における炎症応答を阻害する方法であって、該対象にMUC1ペプチドを投与する工程を該方法が含み、該MUC1ペプチドが、少なくとも4個、多くとも20個の連続MUC1残基でありかつ配列CQC（SEQ ID NO:4）を含み、CQCのアミノ末端システインが、そのNH2末端において、ネイティブMUC-1膜貫通配列に相当しなくてもよい少なくとも1個のアミノ酸残基によりカバーされている、方法。
[本発明1025]
前記ペプチドが、少なくとも5個、6個、または7個の連続MUC1残基を含む、本発明1024の方法。
[本発明1026]
配列が、CQCR、CQCRR、CQCRRR、CQCRRRR、CQCRRK、またはCQCRRKNを含む、本発明1025の方法。
[本発明1027]
前記ペプチドが、MUC1の多くとも10個の連続残基、11個の連続残基、12個の連続残基、13個の連続残基、14個の連続残基、15個の連続残基、16個の連続残基、17個の連続残基、18個の連続残基、または19個の連続残基を含有している、本発明1024の方法。
[本発明1028]
炎症応答が、NF-κBにより媒介されるシグナル伝達またはSTATにより媒介されるシグナル伝達により引き起こされる、本発明1024の方法。
[本発明1029]
前記ペプチドが細胞送達ドメインと融合している、本発明1021の方法。
[本発明1030]
前記細胞送達ドメインが、ポリD-R、ポリD-P、またはポリD-Kである、本発明1029の方法。
[本発明1031]
投与する工程が、静脈内投与、動脈内投与、経口投与、腫瘍内投与、皮下投与、局所（topical）投与、または腹腔内投与を含む、本発明1024の方法。
[本発明1032]
投与する工程が、局所（local）投与、局部投与、全身投与、または連続投与を含む、本発明1024の方法。
[本発明1033]
阻害が炎症応答の阻害または消散を含む、本発明1024の方法。
[本発明1034]
第二の抗炎症治療を前記対象へ適用する工程をさらに含む、本発明1024の方法。
[本発明1035]
第二の抗炎症治療がステロイドまたはCOX-2阻害剤である、本発明1034の方法。
[本発明1036]
第二の抗炎症治療が、前記ペプチドの前に適用される、本発明1034の方法。
[本発明1037]
第二の抗炎症治療が、前記ペプチドの後に適用される、本発明1034の方法。
[本発明1038]
第二の抗炎症治療が、前記ペプチドと同時に適用される、本発明1034の方法。
[本発明1039]
前記対象がヒトである、本発明1024の方法。
[本発明1040]
前記ペプチドが0.1〜500mg/kg/dで投与される、本発明1024の方法。
[本発明1041]
前記ペプチドが10〜100mg/kg/dで投与される、本発明1024の方法。
[本発明1042]
前記ペプチドが毎日投与される、本発明1024の方法。
[本発明1043]
前記ペプチドが、7日間、2週間、3週間、4週間、1ヶ月間、6週間、8週間、2ヶ月間、12週間、または3ヶ月間、毎日投与される、本発明1042の方法。
[本発明1044]
前記ペプチドが毎週投与される、本発明1024の方法。
[本発明1045]
前記ペプチドが、2週間、3週間、4週間、6週間、8週間、10週間、または12週間、毎週投与される、本発明1044の方法。
[本発明1046]
前記ペプチドが全てLアミノ酸を含む、本発明1024の方法。
[本発明1047]
前記ペプチドが全てDアミノ酸を含む、本発明1024の方法。
[本発明1048]
前記ペプチドがLアミノ酸とDアミノ酸との混合物を含む、本発明1024の方法。
[本発明1049]
（i）少なくとも4個、多くとも20個の連続MUC1残基でありかつ配列CQCを含むMUC1ペプチドであって、CQCのアミノ末端システインが、そのNH2末端において、ネイティブMUC-1膜貫通配列に相当しなくてもよい少なくとも1個のアミノ酸残基によりカバーされているMUC1ペプチドと；（ii）（i）以外の第二の抗炎症剤とを含む薬学的組成物。
[本発明1050]
第二の抗炎症剤がステロイドまたはCOX-2阻害剤である、本発明1049の組成物。
[本発明1051]
少なくとも7残基、多くとも20残基のMUC1ペプチドであって、該MUC1ペプチドが、3〜20個の連続MUC1残基を有しかつ配列CQCを含み、CQCのアミノ末端システインが、そのNH2末端において、ネイティブMUC-1膜貫通配列に相当しなくてもよい少なくとも1個のアミノ酸残基によりカバーされており、該ペプチドが、第一のアミノ酸側鎖に付着した第一の連結部分と第二のアミノ酸側鎖に付着した第二の連結部分とをさらに含み、第一の連結部分と第二の連結部分とが、（a）相互に結合しており、かつ（b）3個の介在アミノ酸残基により分離されている、MUC1ペプチド。
[本発明1052]
8〜20残基長、8〜17残基長、9〜17残基長、10〜17残基長、10〜16残基長、または10〜15残基長である、本発明1051のペプチド。
[本発明1053]
8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20残基長である、本発明1051のペプチド。
[本発明1054]
連続MUC1残基の数が、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、または17である、本発明1051のペプチド。
[本発明1055]
前記ペプチドが、第三のアミノ酸側鎖に付着した第三の連結部分をさらに含みかつ少なくとも10残基長であり、第二の連結部分と第三の連結部分とが相互に結合しており、かつ第二のアミノ酸側鎖と第三のアミノ酸側鎖とが3個の介在アミノ酸残基により分離されている、本発明1051のペプチド。
[本発明1056]
2012528191.tif 000001
を含む、本発明1051のペプチド。
[本発明1057]
第一のアミノ酸側鎖および第二のアミノ酸側鎖が、それぞれ、Y4およびA8に位置する、本発明1051のペプチド。
[本発明1058]
第一のアミノ酸側鎖および第二のアミノ酸側鎖が、それぞれ、A8およびR12に位置する、本発明1055のペプチド。
[本発明1059]
2012528191.tif 000002
を含む、本発明1055のペプチド。
[本発明1060]
第一のアミノ酸側鎖、第二のアミノ酸側鎖、および第三のアミノ酸側鎖が、それぞれ、Y4、A8、およびR12に位置する、本発明1059のペプチド。
[本発明1061]
少なくとも10残基、多くとも20残基のMUC1ペプチドであって、該MUC1ペプチドが、3〜20個の連続MUC1残基を有しかつ配列CQCを含み、CQCのアミノ末端システインが、そのNH2末端において、ネイティブMUC-1膜貫通配列に相当しなくてもよい少なくとも1個のアミノ酸残基によりカバーされており、該ペプチドが、第一のアミノ酸側鎖に付着した第一の連結部分と第二のアミノ酸側鎖に付着した第二の連結部分とをさらに含み、第一の連結部分と第二の連結部分とが、（a）相互に結合しており、かつ（b）7個の介在アミノ酸残基により分離されている、MUC1ペプチド。
[本発明1062]
11〜20残基長、11〜19残基長、11〜18残基長、12〜18残基長、12〜19残基長、または12〜18残基長である、本発明1061のペプチド。
[本発明1063]
10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20残基長である、本発明1061のペプチド。
[本発明1064]
連続MUC1残基の数が、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、または17である、本発明1061のペプチド。
[本発明1065]
前記ペプチドが、第三のアミノ酸側鎖に付着した第三の連結部分をさらに含みかつ少なくとも18残基長であり、第二の連結部分と第三の連結部分とが相互に結合しており、かつ第二のアミノ酸側鎖と第三のアミノ酸側鎖とが7個の介在アミノ酸残基により分離されている、本発明1061のペプチド。
[本発明1066]
2012528191.tif 000003
を含む、本発明1061のペプチド。
[本発明1067]
第一のアミノ酸側鎖および第二のアミノ酸側鎖が、それぞれ、I2およびQ10に位置する、本発明1067のペプチド。
[本発明1068]
第一のアミノ酸側鎖および第二のアミノ酸側鎖が、それぞれ、A8およびY16に位置する、本発明1067のペプチド。
[本発明1069]
2012528191.tif 000004
を含む、本発明1065のペプチド。
[本発明1070]
第一のアミノ酸側鎖、第二のアミノ酸側鎖、および第三のアミノ酸側鎖が、それぞれ、Y2、R12、およびD20に位置する、本発明1069のペプチド。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４３】
MUC1-Cは核においてNF-κB p65と会合する。ZR-75-1細胞の共焦点分析は、MUC1-CとNF-κB p65との核における共局在を示した（図3A）。さらに、MUC1-CDがNF-κB p65への結合について競合することと一致して、ZR-75-1細胞におけるMUC1のサイレンシングは、核のNF-κB p65の細胞質への局在に関連していた（図3A）。以前の研究は、MUC1がBcl-xL発現のアップレギュレーションに寄与すると証明した（Ahmad et al.,2007）。MUC1-CがNF-κB p65転写複合体に影響を与えるか否かを決定するため、本発明者らは、抗p65によるChIPアッセイを実施した。Bcl-xL遺伝子のプロモーター内のNF-κB応答要素（RE）（GGGACTGCCC（SEQ ID NO:59）；-366〜-356）（Grillot et al.,1997）の免疫沈降を、半定量的PCRにより分析した。ZR-75-1細胞において、NF-κB p65によるBcl-xLプロモーターの占有は、MUC1のサイレンシングにより減少した（図3B）。対照として、非免疫IgGにより実施された免疫沈降物には、検出可能なシグナルが存在しなかった（図3B）。NF-κB-REの上流のBcl-xLプロモーターの対照領域（CR；-1001〜-760）の検出可能なNF-κB p65占有も存在しなかった（図3B）。HeLa細胞の分析は、外来性MUC1の発現がBcl-xLプロモーターのNF-κB p65占有の増加に関連していることをさらに証明した（図3C）。MUC1-CがNF-κB転写複合体内に存在するか否かを決定するため、抗MUC1-CによるChIPアッセイを実施した。ZR-75-1細胞からのクロマチンを使用したところ、MUC1-C占有は、NF-κB-RE上に検出可能であったが、対照領域上には検出可能でなかった（図3D、左）。Re-ChIPアッセイにおいて、抗MUC1-C複合体を放出させ、抗p65により再免疫沈降させ、次いで、PCRにより分析した。抗p65は、抗MUC1-Cからの放出の後、NF-κB-RE領域を沈降させ（図3D、右）、このことから、MUC1-Cが、NF-κB転写複合体により占有されるBcl-xLプロモーター領域に構成性に存在することが示された。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５４】
本発明者らは、MUC1-C末端内在性ペプチド配列
2012528191.tif 000005
を使用し、炭化水素ステープリングを使用して、2種のαヘリックス状ペプチドGO-200-1BおよびGO-200-2Bを作成した。
2012528191.tif 000006
【手続補正５】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１Ｄ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１Ｄ】
2012528191.tif 000007
【手続補正６】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図４】
2012528191.tif 000008
【手続補正７】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１５】
2012528191.tif 000009
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2012528191000001.app