【手続補正書】
【提出日】平成25年11月5日(2013.11.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離されたクローン的に純粋な漿液性カテナであって、培養物中の浮遊性である細胞鎖であり、グリコカリックスを有し、漿液性癌幹細胞である、上記カテナ。
【請求項２】
クローン的に純粋であり、かつ自己複製する、請求項１に記載のカテナの集団であって、
該カテナは、対称的に分裂し、かつ培養物中の浮遊性である細胞鎖であり、
上記鎖は、３又は４個から約７２個又はそれ以上の細胞を含み、
上記鎖は、ヒアルロン酸を含むグリコカリックスに囲まれており、
上記細胞は、Ｅ−カドヘリン陰性であり、漿液性上皮腫瘍細胞と比較して生着能が高く、連続的な再クローニング潜在能を保持し、かつインビトロで少なくとも５０％の再クローニング能を示す、
上記カテナの集団。
【請求項３】
上記漿液が卵巣である、請求項１又は２に記載の漿液性カテナ。
【請求項４】
請求項１に記載の漿液性カテナを製造する方法であって、
（ａ）哺乳類漿液性上皮腫瘍細胞を、腹腔内腫瘍を生成する量及び条件下で、免疫不全非ヒト哺乳動物の腹腔内に注入する工程；
（ｂ）腹腔内腫瘍を有する非ヒト哺乳動物から腹水を採取する工程；
（ｃ）上記腹水を、漿液性カテナ及び白血球を含む第一の画分と、漿液性スフェロイドを含む第二の画分とに分画する工程；
（ｄ）上記第一の画分から白血球を除去し、カテナ濃縮画分を取得する工程；並びに
（ｅ）付着性の間葉細胞と、漿液性癌幹細胞が濃縮された漿液性カテナ懸濁液とを産生する時間及び条件下で、上記カテナ濃縮画分を培養する工程
を含む、上記方法。
【請求項５】
（ｆ）上記漿液性カテナ懸濁液を採取する工程；
（ｇ）形成され得る漿液性スフェロイドから、上記漿液性カテナを分離する工程；並びに
（ｈ）少なくとも５０〜１００％の漿液性癌幹細胞を含む浮遊性漿液性カテナの培養物を生成する時間及び条件下で、懸濁液中の上記カテナを連続継代する工程
をさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
漿液性カテナを単離する方法であって、
（ａ）哺乳類漿液性上皮腫瘍細胞を、腹腔内腫瘍を生成する量及び条件下で、免疫不全非ヒト哺乳動物の腹腔内に注入する工程；
（ｂ）腹腔内腫瘍を有する非ヒト哺乳動物から腹水を採取する工程；
（ｃ）上記腹水を、漿液性カテナ及び白血球を含む第一の画分と、漿液性スフェロイドを含む第二の画分とに分画する工程；並びに
（ｄ）上記第一の画分から白血球を除去し、カテナ濃縮画分を取得する工程
を含む、上記方法。
【請求項７】
上記細胞の注入の前後に、又は該注入と同時に、腹腔内腫瘍を生成するのに充分な時間、腹腔内の炎症を誘発する工程をさらに含む、請求項４から６の何れか１項に記載の方法。
【請求項８】
上記非ヒト哺乳動物がＴ細胞、Ｂ細胞及び／又はナチュラルキラー細胞を欠損したマウスである、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
上記マウスがＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス、ＮＳＧマウス又はＮＯＧマウスである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
分画工程が、３０〜６０μｍのフィルターを介して上記腹水をろ過し、上記漿液性カテナ及び白血球を含むフロースルー画分と漿液性スフェロイドを含む保持画分とを取得する工程を含む、請求項４から９の何れか１項に記載の方法。
【請求項１１】
漿液性カテナを製造するためのインビトロ培養方法であって、
（ａ）不死化間葉癌細胞を単層培養で、細胞の懸濁培養物を作製する時間及び培地中で増殖させる工程；
（ｂ）上記懸濁培養物から上記細胞を回収する工程；
（ｃ）上記の回収した細胞を新しい培地に移し、上記の回収した培養を更なる懸濁培養物を作製する条件下で培養する工程；及び
（ｄ）工程（ｂ）及び工程（ｃ）を繰り返すことにより上記さらなる懸濁培養物を周期的に継代することにより懸濁物にカタナ及びスフェロイドを豊かにする工程；
を含み、そして所望により、さらに
（ｅ）カテナ及びスフェロイドが豊かな上記懸濁物を回収する工程；及び
（ｆ）上記スフェロイドから上記カテナを分離する工程：
を含む、上記方法。
【請求項１２】
上記スフェロイドから上記カテナを分離する工程が、３０〜６０μｍのフィルターを介して上記の豊かな懸濁物をろ過して、上記漿液性カテナを含むフロースルー画分を得ることを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
増殖抑制効果又は形態学的効果について試験化合物をスクリーニングする方法であって、
（ａ）漿液性カテナを解離し、かつ単一細胞の均質な集団を調製する工程；
（ｂ）定着したグリコカリックスの被覆を有するカテナを生成するのに充分な時間及び条件下で、上記細胞を播種し、かつ培養する工程；
（ｃ）未処理培養物がコンフルエントに達することなく増殖するのに充分な時間、上記培養物を少なくとも一つの試験化合物に接触させる工程；並びに
（ｄ）処理された培養物において上記試験化合物が上記カテナの増殖を阻害するか否か、又は該試験化合物が上記カテナの形態を変化させるか否かを判定する工程
を含む、上記方法。
【請求項１４】
播種後約３日、４日、５日、６日又は７日から、上記培養物を上記試験化合物に接触させる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
工程（ｂ）の後かつ工程（ｃ）の前に、上記カテナのグリコカリックス被覆を除去又は破壊するのに充分な時間、上記カテナのグリコカリックス被覆を除去又は破壊するのに充分な量のヒアルロニダーゼ、コラゲナーゼ又はその両方と共に上記培養物をインキュベートする工程をさらに含む、請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
上記インキュベートする工程を３７℃かつ約１０分間で実施する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
化合物の増殖への効果の判定は、細胞を染色して又は染色せずに手作業で計数することによって、又は蛍光シグナル若しくは発光シグナルを測定することによって、或いはアラマーブルー（ａｌａｍａｒＢｌｕｅ）による染色及び検出によって実施する、請求項１３から１６の何れか１項に記載の方法。
【請求項１８】
培養は、ハイスループット・スクリーニングを可能にする３８４ウェルプレート又は１５３６ウェルプレートにおいて実施される、請求項１３から１７の何れか１項に記載の方法。
【請求項１９】
転移阻害剤又は転移エフェクターをスクリーニングする方法であって、
（ａ）漿液性カテナ又はカテナ細胞の調製物を免疫不全非ヒト哺乳動物に静脈内注入する工程；
（ｂ）注入の前後又は注入と同時に、上記哺乳動物に一以上の試験化合物を投与する工程；並びに
（ｃ）対照哺乳動物の対照哺乳動物の腫瘍産生及び/又は腫瘍部位に対して、上記哺乳動物における腫瘍産生及び/又は腫瘍部位の経時変化を評価することによって、カテナ細胞の転移を阻害する化合物を特定する工程
を含む、上記方法。
【請求項２０】
腫瘍産生の減少又は腫瘍部位の変化により、上記一以上の試験化合物を転移阻害剤または転移エフェクターとして特定する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
薬効をスクリーニングするインビボ方法であって、
（ａ）カテナ又はカテナ細胞の調製物を免疫不全非ヒト哺乳動物に腹腔内注入する工程；
（ｂ）注入の前後又は注入と同時に、上記哺乳動物に一以上の試験化合物を投与する工程；並びに
（ｃ）
（ｉ）上記哺乳動物における腫瘍産生の経時変化、
（ｉｉ）上記哺乳動物における漿液産生の経時変化、
（ｉｉｉ）上記哺乳動物における腫瘍の形態、及び/又は
（ｉｖ）上記哺乳動物の腹水における漿液性癌幹細胞の量、及び/又は漿液性癌幹細胞産生の経時変化
を、対照哺乳動物のそれと比較して評価することによって、漿液性癌の治療における薬剤化合物の潜在的若しくは実際の有効性を判定する工程
を含む、上記方法。
【請求項２２】
原発漿液性腫瘍由来のカテナ又は転移性腫瘍細胞からスフェロイドを製造する方法であって、
スフェロイド形成を誘導し、かつスフェロイド培養系を作製するのに充分な量のマトリゲルを含有する第一の血清含有培地で、かつスフェロイド形成を誘導し、かつスフェロイド培養系を作製するのに充分な時間で、上記カテナ又は上記細胞の懸濁液を培養する工程、並びに
追加のマトリゲルを含まない血清含有培地を定期的に上記培養系に添加する工程を含む、上記方法。
【請求項２３】
第一の血清含有培地のマトリゲルに対する比率が５０：１であり、かつ上記培養系が毎週添加される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
漿液が卵巣である、請求項４から２３の何れか1項に記載の方法。
【請求項２５】
ヒアルロン酸合成酵素阻害剤、ヒアルロニダーゼ、コラゲナーゼ、又はそれらの組合せを含む、化学療法又は放射線治療を受けている患者において漿液性癌を治療するための薬剤であって、上記薬剤が、上記療法若しくは治療を増強するのに、患者の生存期間を改善若しくは延長するのに、又は症状の寛解を引き起こすのに充分な時間及び量で投与される、上記の薬剤。
【請求項２６】
ヒアルロン酸合成酵素阻害剤、ヒアルロニダーゼ、コラゲナーゼ、又はそれらの組合せを含む、放射線治療と併用される、患者において漿液性癌を治療するための薬剤であって、上記薬剤は、症状の寛解、又は癌の根絶若しくは減少のその他指標を引き起こすのに充分な時間及び量で投与される、上記の薬剤。
【請求項２７】
上記ヒアルロン酸合成酵素阻害剤、ヒアルロニダーゼ、及びコラゲナーゼのいずれか一つは、インビボにおいてその半減期を増加させるためにＰＥＧ化又はその他の方法により修飾されている、請求項２５又は２６に記載の薬剤。
【請求項２８】
グリコカリックス形成阻害剤又はグリコカリックスを分解する薬剤を含む、患者において癌幹細胞の自己複製又は形成を阻害するための薬剤であって、上記薬剤は、患者においてグリコカリックス形成を阻害するか、若しくはＣＳＣのグリコカリックスを分解して上記ＣＳＣの自己複製又は形成を阻害するか、或いはＣＳＣの分化を引き起こして該ＣＳＣを致死させやすくするか、或いはカテナがスフェロイド形成を経ることを防止するか、或いはそれらの任意の組合せ起こすために充分な時間及び量で投与される、上記の薬剤。
【請求項２９】
上記阻害剤又は薬剤が、インビボにおいてその半減期を増加させるためにＰＥＧ化又はその他の方法により修飾されている、請求項２８に記載の薬剤。
【請求項３０】
漿液が卵巣である、請求項２５から２９の何れか1項に記載の薬剤。
【請求項３１】
漿液性癌幹細胞を製造する方法であって、
（ａ）哺乳類漿液性上皮腫瘍細胞を、腹腔内腫瘍を生成する量及び条件下で、免疫不全非ヒト哺乳動物の腹腔内に注入する工程；
（ｂ）腹腔内腫瘍を有する非ヒト哺乳動物から腹水を採取する工程；
（ｃ）上記腹水を、漿液性カテナ及び白血球を含む第一の腹水画分と、漿液性スフェロイドを含む第二の腹水画分とに分画する工程；
（ｄ）付着性の間葉細胞、及び浮遊性カテナと腫瘍スフェロイドとの懸濁培養物を産生する時間並びに条件下で、上記第二の画分を培養する工程；並びに
（ｅ）上記懸濁培養物を、漿液性癌幹細胞が濃縮された浮遊性カテナを含む第一の培養画分と、漿液性癌幹細胞が濃縮された浮遊性腫瘍スフェロイドを含む第二の培養画分とに分画する工程
を含む、上記方法。
【請求項３２】
（ｆ）浮遊性カテナと腫瘍スフェロイドとのさらなる懸濁培養物を産生する時間及び条件下で、上記第二の培養画分を培養する工程；
（ｇ）上記さらなる懸濁培養物を浮遊性あカテナ画分と腫瘍スフェロイド画分に分画する工程；並びに
（ｈ）浮遊性腫瘍スフェロイド画分を用いて、少なくとも１０〜３０％の漿液性癌幹細胞を含む浮遊性腫瘍スフェロイドの懸濁培養物を生成する時間及び条件下で、工程（ｆ）及び工程（ｇ）を繰り返す工程
をさらに含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
漿液性スフェロイドを単離する方法であって、
（ａ）哺乳類漿液性上皮腫瘍細胞を、腹腔内腫瘍を生成する量及び条件下で、免疫不全非ヒト哺乳動物の腹腔内に注入する工程；
（ｂ）腹腔内腫瘍を有する非ヒト哺乳動物から腹水を採取する工程；
（ｃ）上記腹水を、漿液性カテナ及び白血球を含む第一の画分と、漿液性スフェロイドを含む第二の画分とに分画する工程；並びに
（ｄ）上記漿液性スフェロイドを単離する工程
を含む、上記方法。
【請求項３４】
漿液性癌幹細胞に対する増殖抑制効果について試験化合物をスクリーニングする方法であって、
（ａ）解離した漿液性カテナ細胞、解離した漿液性スフェロイド細胞、及び解離した漿液性癌付着細胞のいずれか一つ以上を培養する工程、但し、上記細胞は蛍光を発し得るか、又は発光し得る；
（ｂ）上記細胞を上記試験化合物に接触させる工程；
（ｃ）当該培養物が発する蛍光又は発光を検出することによって、上記細胞がカテナ、スフェロイド及び付着細胞を増殖させるか否かを検出する工程；並びに
（ｄ）上記試験化合物が上記カテナ、スフェロイド又は付着細胞の増殖を阻害するか否かを判定する工程
を含む、上記方法。
【請求項３５】
（ｅ）上記試験化合物がスフェロイド又は付着細胞と比較して上記カテナの増殖を差示的に阻害するか否かを判定する工程をさらに含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
（ｅ）上記試験化合物がスフェロイド又は付着細胞と比較して上記カテナの形態を差示的に変化させるか否かを判定する工程をさらに含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
増殖抑制効果又は形態学的効果について試験化合物をスクリーニングする方法であって、
（ａ）漿液性スフェロイドを解離し、かつ単一細胞の均質な集団を調製する工程；
（ｂ）定着したグリコカリックスの被覆を有する十分な数かつサイズのスフェロイドを生成するのに充分な時間及び条件下で、上記細胞を播種し、かつ培養する工程；
（ｃ）未処理培養物がコンフルエントに達することなく増殖するのに充分な時間、上記培養物を少なくとも一つの試験化合物に接触させる工程；並びに
（ｄ）処理された培養物において上記試験化合物が上記スフェロイドの増殖を阻害するか否か、又は該試験化合物が上記スフェロイドの形態を変化させるか否かを判定する工程
を含む、上記方法。
【請求項３８】
播種後約8日から約14日に上記培養物を上記試験化合物に接触させる、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
工程（ｂ）の後かつ工程（ｃ）の前に、上記スフェロイドのグリコカリックス被覆を除去又は破壊するのに充分な時間、上記スフェロイドのグリコカリックス被覆を除去又は破壊するのに充分な量のヒアルロニダーゼ、コラゲナーゼ又はその両方と共に上記培養物をインキュベートする工程をさらに含む、請求項３７又は３８に記載の方法。
【請求項４０】
上記インキュベートする工程を３７℃かつ約１０分間で実施する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
化合物の増殖への効果の判定は、細胞を染色して若しくは染色せずに手作業で計数することによって、又は蛍光シグナル若しくは発光シグナルを測定することによって実施する、請求項３７から４０の何れか１項に記載の方法。
【請求項４２】
培養は、ハイスループット・スクリーニングを可能にする３８４ウェルプレート又は１５３６ウェルプレートにおいて実施される、請求項３７から４１の何れか１項に記載の方法。
【請求項４３】
哺乳類ＨＡＳ２スプライス変異体をコードする、単離された核酸。
【請求項４４】
ＨＡＳ２スプライス変異体をコードするｍＲＮＡ又はｃＤＮＡ配列を有する、請求項４３に記載の核酸。
【請求項４５】
上記核酸が、５’から３’方向に、ＨＡＳ２遺伝子のエクソン２の全体又は一部、並びにＨＡＳ２遺伝子のエクソン３の全体から実質的になる、連続したヌクレオチド配列を含む、請求項４４に記載の核酸。
【請求項４６】
上記ＨＡＳ２スプライス変異体が、ヒトＨＡＳ２コード配列の第２１５位から第５５２位までのアミノ酸から実質的になる、請求項４３に記載の単離された核酸。
【請求項４７】
請求項４３から４６の何れか１項に記載の核酸を含む、ベクター。
【請求項４８】
請求項４７に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項４９】
哺乳類ＨＡＳ２スプライス変異体ＲＮＡ、又は表１７及び１８に特定される変異から選択される任意の一以上のＨＡＳ２変異の検出に特異的な単離された核酸プローブ。
【請求項５０】
ＨＡＳ２スプライス変異体ｍＲＮＡ又は対応するｃＤＮＡによってコードされる、単離された哺乳類ＨＡＳ２タンパク質。
【請求項５１】
請求項４３から４６の何れか１項に記載の核酸によってコードされる、単離されたＨＡＳ２タンパク質。
【請求項５２】
哺乳類変異ＨＡＳ２又は哺乳類変異ＨＡＳ２スプライス変異体をコードする、単離された核酸。
【請求項５３】
請求項５２に記載の核酸を含む、ベクター。
【請求項５４】
請求項５３に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項５５】
被験者において漿液性癌を監視及び／又は病期分類する方法であって、
（ａ）癌患者から得た腹水からカテナを調製する工程；
（ｂ）上記カテナが一以上のＨＡＳ２変異を有するか否か、及び／又は上記カテナが一以上のＨＡＳ２スプライス変異体を発現しているか否かを検出する工程；並びに
（ｃ）上記変異及び／又は変異体を、上記患者における癌の存在及び／又は進行と関連付ける工程
を含む、上記方法。
【請求項５６】
患者試料において漿液性癌幹細胞の存在を特定又は監視する方法であって、
（ａ）患者から細胞試料を取得する工程；
（ｂ）任意に、上記試料の白血球を枯渇させる工程；
（ｃ）上記試料の残りからＤＮＡ、ＲＮＡ又はその両方を調製する工程；並びに
（ｄ）上記ＤＮＡ、ＲＮＡ又はその両方がＨＡＳ２変異を有するか否か、又は上記ＤＮＡ、ＲＮＡ又はその両方がＨＡＳ２スプライス変異体を発現しているか否かを検出する工程であって、変異又はスプライス変異の特定は上記試料における漿液性癌幹細胞の存在を示す、上記工程
を含む、上記方法。
【請求項５７】
ＨＡＳ２変異を有するか、又はＨＡＳ２スプライス変異体を発現しているＤＮＡ、ＲＮＡ又はその両方の量を定量する工程、並びに
上記量を上記患者における癌の存在及び／又は進行に関連付ける工程
をさらに含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
患者試料において漿液性癌幹細胞の存在を特定及び／又は監視する方法であって、
（ａ）患者から細胞試料を取得する工程；
（ｂ）上記試料の白血球を枯渇させる工程；
（ｃ）一群の検出可能な表面抗原抗体と上記試料を反応させる工程；
（ｄ）上記反応した細胞を単一細胞又は多細胞試料にソーティングする工程；並びに
（ｅ）上記単一細胞又は多細胞試料の何れかが、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ９０、ＣＤ１６６、ＰＤＧＦＲＡ及びＧＭ２タンパク質の存在にについて陽性であり、かつＣＤ３４、ＣＤ１３３、ＭＵＣ１６及びＥＰＣＡＭタンパク質の存在について陰性であるか否かを検出する工程であって、上記タンパク質の有無が、上記反応した細胞を、漿液性癌幹細胞を含むものとして特定するか、或いは単一細胞を漿液性癌幹細胞として特定する、上記工程、
を含む、上記方法。
【請求項５９】
ソーティングは蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）によって実施される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
患者試料において漿液性癌幹細胞の存在を特定及び／又は監視する方法であって、
（ａ）患者から細胞試料を取得する工程；
（ｂ）上記試料の白血球を枯渇させる工程；
（ｃ）上記試料の残りからＲＮＡを抽出する工程；
（ｄ）ヒトｍＲＮＡトランスクリプトームの発現レベルについて上記ＲＮＡを解析する工程；並びに
（ｅ）ＨＡＳ２及びＰＤＧＦＲＡが上方制御されており、ＭＵＣ１６及びＥＰＣＡＭが下方制御されており、かつ表１１に記載の少なくとも７つのその他遺伝子が上方制御されている試料として、サーフェソーム関連カテナ遺伝子特性を有する試料を特定する工程であって、それら特性を有することは、上記患者試料が漿液性癌幹細胞を含むことを示す、上記工程
を含む、上記方法。
【請求項６１】
患者試料において漿液性癌幹細胞の存在を特定及び／又は監視する方法であって、
（ａ）患者の細胞試料から内在性膜タンパク質画分を取得する工程、但し、細胞試料は白血球が任意に枯渇されている；
（ｂ）質量分析法によって上記膜タンパク質画分のタンパク質含有量を分析する工程；並びに
（ｃ）スペクトルデータが表１６に記載されている少なくとも４０個のタンパク質の存在を示す試料として、サーフェソーム関連のカテナタンパク質特性を有する試料を特定する工程であって、それらタンパク質の存在は、上記患者試料が漿液性癌幹細胞を含むことを示す、上記工程
を含む、上記方法。
【請求項６２】
上記内在性膜タンパク質画分がトリトンＸ−１１４を用いた相分配プロセスにより調製される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
患者試料において漿液性癌幹細胞の存在を特定及び／又は監視する方法であって、
（ａ）患者から細胞試料を取得する工程；
（ｂ）上記試料の白血球を枯渇させる工程；
（ｃ）上記試料の残りからＲＮＡを抽出する工程；
（ｄ）ヒトｍｉＲＮＡの発現レベルについて上記ＲＮＡを解析する工程；並びに
（ｅ）ｌｅｔ−７及び２００ファミリーのｍｉＲＮＡが下方制御されており、ｈｓａ−ｍｉＲ−２３ｂ及びｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂが下方制御されており、かつ表８に記載の少なくとも４つのその他ｍｉＲＮＡが上方制御されている試料として、ｍｉＲＮＡ関連カテナ特性を有する試料を特定する工程であって、それら特性を有することは、上記患者試料が漿液性癌幹細胞を含むことを示す、上記工程
を含む、上記方法。
【請求項６４】
患者試料において漿液性癌幹細胞の存在を特定及び／又は監視する方法であって、
（ａ）患者から細胞試料を取得する工程；
（ｂ）上記試料の白血球を枯渇させる工程；
（ｃ）上記試料の残りからＲＮＡを抽出する工程；
（ｄ）ヒトｍＲＮＡトランスクリプトームの発現レベルについて上記ＲＮＡを解析する工程；並びに
（ｅ）ＨＡＳ２及びＰＤＧＦＲＡが上方制御されており、かつ表５に記載の少なくとも５つのその他遺伝子が上方制御されている試料として、カテナ遺伝子特性を有する試料を特定する工程であって、それら特性を有することは、上記患者試料が漿液性癌幹細胞を含むことを示す、上記工程
を含む、上記方法。
【請求項６５】
患者試料において漿液性癌幹細胞の存在を特定及び／又は監視する方法であって、
（ａ）患者から細胞試料を取得する工程；
（ｂ）上記試料の白血球を任意に枯渇させる工程；
（ｃ）上記試料の残りからＲＮＡを抽出する工程；
（ｄ）ヒトｍＲＮＡトランスクリプトームの発現レベルについて上記ＲＮＡを解析する工程；並びに
（ｅ）表７のリスト１における９つの遺伝子のうち少なくとも６つが上方制御されており、かつ表７のリスト２における遺伝子のうち少なくとも５つが上方制御されている試料として、カテナ・クラスタ規定遺伝子特性を有する試料を特定する工程であって、カテナ・クラスタ規定遺伝子特性を有することは、上記患者試料が漿液性癌幹細胞を含むことを示す、上記工程
を含む、上記方法。
【請求項６６】
被験者において漿液性癌を特定する方法であって、
（ａ）組織試料において表５に記載の１０以上の遺伝子の発現レベルを検出する工程であって、表５に記載の通りの、かつ漿液性間葉系単層細胞内における発現に対する当該遺伝子発現レベルの増加又は減少は、漿液性癌幹細胞の存在を示す、上記工程
を含む、上記方法。
【請求項６７】
患者試料において漿液性癌幹細胞の存在を特定及び／又は監視する方法であって、
（ａ）患者試料から、単離されたエキソソームを取得する工程；
（ｂ）質量分析法、抗体結合又はその他方法によって上記エキソソームのタンパク質含有量を分析する工程；並びに
（ｃ）スペクトルデータ又はその他データがＣＤ６３、ＣＯＬ１Ａ２、及び表１３に記載されている少なくとも５つのその他タンパク質の存在を示す試料として、エキソソームのカテナタンパク質特性を有する試料を特定する工程であって、上記タンパク質の存在は、上記患者試料が漿液性癌幹細胞を含むことを示す、上記工程
を含む、上記方法。
【請求項６８】
患者試料において漿液性癌幹細胞の存在を特定及び／又は監視する方法であって、
（ａ）患者試料から、単離されたエキソソームを取得する工程；
（ｂ）上記エキソソームをＣＤ６３、ＣＯＬ１Ａ２及び表１３に記載される少なくとも５つのその他タンパク質に特異的な一つ以上の抗体と反応させる工程；並びに
（ｃ）ＣＤ６３、ＣＯＬ１Ａ２及び表１３に記載される少なくとも５つのその他タンパク質の存在が陽性である試料として、エキソソームのカテナタンパク質特性を有する試料を特定する工程であって、上記タンパク質の存在は、患者試料が漿液性癌幹細胞を含むことを示す、上記工程
を含む、上記方法。
【請求項６９】
患者試料において漿液性癌幹細胞の存在を特定及び／又は監視する方法であって、
（ａ）細胞と、細胞残屑と、エキソソームとが除去された患者試料から上清画分を取得する工程；
（ｂ）質量分析法によって上記上清画分のタンパク質含有量を分析する工程；並びに
（ｃ）スペクトルデータが表１５に記載される少なくとも２０個のタンパク質の存在を示す試料として、セクレトームのカテナタンパク質特性を有する試料を特定する工程であって、それらタンパク質の存在は、上記患者試料が漿液性癌幹細胞を含むことを示す、上記工程
を含む、上記方法。
【請求項７０】
患者試料において漿液性癌幹細胞の存在を特定及び／又は監視する方法であって、
（ａ）細胞と、細胞残屑と、エキソソームとが除去された患者試料から上清画分を取得する工程；
（ｂ）質量分析法によって上記上清画分のタンパク質含有量を分析する工程；並びに
（ｃ）スペクトルデータが表４に記載されるグリコカリックスで見出される少なくとも６つのタンパク質の存在、並びにＥＬＮ、ＦＮ１及び表４に記載のカテナで下方制御されている少なくとも２つのタンパク質の非存在を示す試料として、グリコカリックス特性を有する試料を特定する工程であって、それらタンパク質の存在及び非存在は、上記患者試料が漿液性癌幹細胞を含むことを示す、上記工程
を含む、上記方法。
【請求項７１】
患者試料において漿液性癌幹細胞の存在を特定及び／又は監視する方法であって、
（ａ）患者から、細胞試料、又は細胞試料からの細胞溶解物を取得する工程、但し、該試料の白血球は枯渇されている；
（ｂ）ヒトチロシンキナーゼ受容体に特異的な抗体の一群とパンホスホチロシン抗体とともに上記試料又は上記溶解物をインキュベートする工程；並びに
（ｃ）上記試料または溶解物が、ＰＤＧＦＲＡと、ＰＤＧＦＲβ、ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ４、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、インスリン‐Ｒ（Ｉｎｓｕｌｉｎ−Ｒ）、ＩＧＦ１Ｒ、ＤＴＫ／ＴＹＲＯ３、ＭＥＲ／ＭＥＲＴＫ、ＭＳＰＲ／ＲＯＮ、Ｆｌｔ−３、ｃ−ｒＲＥＴ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、Ｔｉｅ−１、Ｔｉｅ−２、ＴｒｋＡ／ＮＴＲＫ１、ＶＥＧＦＲ３、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ４、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＢ２、ＥｐｈＢ４及びＥｐｈＢ６からなる群から選択される少なくとも６個のタンパク質とからなる群から選択される活性化リンタンパク質について陽性であるか否かを検出する工程であって、上記活性化リンタンパク質の検出は、上記患者試料が漿液性癌幹細胞を含むものとして特定する、上記工程
を含む、上記方法。
【請求項７２】
患者試料において漿液性癌幹細胞の存在を特定及び／又は監視する方法であって、
（ａ）細胞と、細胞残屑とが除去された患者試料から上清画分を取得する工程；
（ｂ）上記試料を抗ＣＯＬ１Ａ２抗体と反応させる工程；
（ｃ）上記抗体が、ヒアルロン酸とコラーゲンとの２０，０００ダルトン未満の低分子量複合体と結合するか否かを検出する工程であって、上記複合体の検出は、患者試料が漿液性癌幹細胞を含むことを示す、上記工程
を含む、上記方法。
【請求項７３】
上記試料が哺乳類の漿液、腹水、血液又は腫瘍組織である、請求項５６から７２の何れか１項に記載の方法。
【請求項７４】
核酸の検出又は発現レベルの決定が、マイクロアレイ解析、ＲＮＡ若しくはＤＮＡの配列決定法、ＲＴ−ＰＣＲ、又はＱ−ＲＴ−ＰＣＲによって達成される、請求項５５、５６、５７、６０、及び６３から６６の何れか１項に記載の方法。
【請求項７５】
漿液性癌患者において、漿液性癌を検出し、癌治療計画の有効性を監視し、治療のために患者を分類し、薬効を監視し、癌治療計画に対する患者の応答を予測する方法であって、
（ａ）患者からの試料を用いて、請求項５５から７４に記載の一以上の方法を定期的に実施する工程；並びに
（ｂ）上記方法から得られた結果を上記患者の状態と関連付けることにより、漿漿液性癌を検出し、癌治療計画の有効性を監視し、治療のために患者を分類し、薬効を監視し、又は癌治療計画に対する患者の応答を予測する工程
を含む、上記方法。
【請求項７６】
漿液性癌を治療する方法であって、
（ａ）漿液性癌患者に対して抗癌療法計画を実施する工程；
（ｂ）上記患者からの試料を用いて実施した請求項５５から７４に記載の一以上の方法から得られた結果を定期的に再検討する工程；並びに
（ｃ）上記結果に応じて、かつ該結果に一致するように治療法を変更する工程
を含む、上記方法。
【請求項７７】
漿液からカテナを製造する方法であって、
（ａ）癌患者から漿液の試料を取得する工程；
（ｂ）上記液から細胞を採取する工程；
（ｃ）無細胞漿液を添加した血清含有培地中で上記細胞を培養する工程；並びに
（ｄ）無細胞漿液を添加した新鮮血清含有培地中に、上記細胞によって産生された懸濁培養液を定期的に継代することによって、カテナを取得する工程
を含む、上記方法。
【請求項７８】
上記漿液は、同一の癌患者から取得されたものであり、かつ１：１の割合で培地を添加される、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
上記細胞が毎週継代される、請求項７７又は７８に記載の方法。
【請求項８０】
（ａ）ＣＤ４９ｆ、ＣＤ９０、ＣＤ１６６、ＰＤＧＦＲＡ、及びＧＭ２遺伝子；
（ｂ）ＣＤ４９ｆ、ＣＤ９０、ＣＤ１６６、ＰＤＧＦＲＡ、ＧＭ２、ＣＤ３４、ＣＤ１３３、ＭＵＣ１６、及びＥＰＣＡＭ遺伝子；
（ｃ）ＨＡＳ２、ＰＤＧＦＲＡ、及び表１１に記載の少なくとも１０個の上方制御される遺伝子；
（ｄ）ＨＡＳ２、ＰＤＧＦＲＡ、ＭＵＣ１６、ＥＰＣＡＭ、及び表１１に記載の少なくとも１０個の上方制御される遺伝子；
（ｅ）表１６に記載の少なくとも４０個の蛋白質の遺伝子；
（ｆ）ｌｅｔ−７及び２００のｍｉＲＮＡファミリー、ｈｓａ−ｍｉＲ−２３ｂ及びｈｓａ−ｍｉＲ−２７ｂ、並びに表８に記載の少なくとも４つのその他ｍｉＲＮＡ；
（ｇ）ＨＡＳ２、ＰＤＧＦＲＡ、及び表５に記載の少なくとも5つのその他遺伝子；
（ｈ）表７のリスト１の９つの遺伝子、及び表７のリスト２の少なくとも５つの遺伝子；
（ｉ）表５からの１０以上の遺伝子；
（ｊ）ＣＤ６３、ＣＯＬ１Ａ２、及び表１３に記載のタンパク質の少なくとも５つのその他遺伝子；
（ｋ）表１５に記載の少なくとも２０個のタンパク質の遺伝子；
（ｌ）表４に記載の少なくとも６個のグリコカリックスタンパク質の遺伝子；
（ｍ）ＥＬＮ、ＦＮ１、表４に記載の少なくとも６個のグリコカリックスタンパク質の遺伝子、及び表４に下方制御されているものとして記載されている少なくとも２つのタンパク質の遺伝子；並びに
（ｎ）ＰＤＧＦＲＡと、ＰＤＧＦＲβ、ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ４、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、インスリン‐Ｒ（Ｉｎｓｕｌｉｎ−Ｒ）、ＩＧＦ１Ｒ、ＤＴＫ／ＴＹＲＯ３、ＭＥＲ／ＭＥＲＴＫ、ＭＳＰＲ／ＲＯＮ、Ｆｌｔ−３、ｃ−ｒＲＥＴ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、Ｔｉｅ−１、Ｔｉｅ−２、ＴｒｋＡ／ＮＴＲＫ１、ＶＥＧＦＲ３、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ４、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＢ２、ＥｐｈＢ４及びＥｐｈＢ６とからなる群から選択される少なくとも６種のタンパク質の遺伝子
からなる群から選択される哺乳類遺伝子用のＰＣＲプライマーを含む、ＰＣＲプライマーセット。
【請求項８１】
電子顕微鏡法用にグリコカリックス被覆を有する細胞を調製する方法であって、
（ａ）電子顕微鏡における使用に適合したカチオン性表面上に上記細胞を分注する工程；
（ｂ）上記カチオン性表面上に上記細胞を定着及び付着させる工程；
（ｃ）上記分注した細胞に、固定剤、及び任意に一以上の染色剤を添加し、かつ該細胞及びグリコカリックスを固定し得る時間及び条件下でインキュベートする工程；並びに
（ｄ）上記表面から、上記固定剤、及び使用されている場合は染色剤を洗い流す工程
を含む、上記方法。
【請求項８２】
漿液が卵巣である、上記請求項の何れか１項に記載の方法。
【請求項８３】
哺乳類がヒト、マウス、ブタ、ウシ又はヒツジである、上記請求項の何れか１項に記載の方法、細胞、核酸、ベクター、タンパク質又は遺伝子。