【手続補正書】
【提出日】平成25年6月28日(2013.6.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フレームワーク領域（ＦＲ）１内に位置する少なくとも２つのシステイン残基を含む免疫グロブリン可変領域を含む単離されたタンパク質であって、前記システイン残基の少なくとも２つが化合物にコンジュゲートされない場合に、前記システイン残基間のＦＲ１内にジスルフィド結合が形成可能である、タンパク質。
【請求項２】
免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）と免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む単離されたタンパク質であって、前記可変領域の少なくとも１つがフレームワーク領域（ＦＲ）１内に位置する少なくとも２つのシステイン残基を含み、前記システイン残基の少なくとも２つが別の化合物にコンジュゲートされない場合に前記システイン残基間にジスルフィド結合が形成可能である、タンパク質。
【請求項３】
免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）と免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）との互いの会合を可能にするには不十分な数のアミノ酸を含む領域によって連結された前記ＶＨと前記ＶＬとを各々が含む複数のポリペプチドを含む単離されたタンパク質であって、
（ｉ）前記ポリペプチドの少なくとも１つが、配列番号１１１に示される配列又はそれと少なくとも約６０％同一の配列を含むＶＨを含み；及び
（ｉｉ）少なくとも別の前記ポリペプチドが、配列番号１１３に示される配列又はそれと少なくとも約６０％同一の配列を含むＶＬを含み、
（ｉ）における前記ポリペプチドの前記ＶＨと（ｉｉ）における前記ポリペプチドの前記ＶＬとが会合して、腫瘍抗原ＴＡＧ−７２との特異的な結合能を有するＦｖを形成し、システイン残基の少なくとも２つが化合物にコンジュゲートされない場合に、前記システイン残基間のＦＲ１内にジスルフィド結合が形成可能である、タンパク質。
【請求項４】
前記ジスルフィド結合が非還元条件下で存在する、請求項１〜３のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項５】
前記システイン残基が、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して残基２と相補性決定領域（ＣＤＲ）１との間に位置する、請求項１〜４のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項６】
前記システイン残基がＶＨ内にあり、且つ以下の領域の１つ又は複数に位置する、請求項２〜５のいずれか一項に記載のタンパク質：
（ｉ）Ｋａｂａｔ付番方式による残基２から３０の間；
（ｉｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番して残基７から２０の間及び／又は残基２４から３０の間；及び／又は
（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番して残基７から２０の間。
【請求項７】
前記システイン残基がＶＬ内にあり、且つ以下の領域の１つ又は複数に位置する、請求項２〜５のいずれか一項に記載のタンパク質：
（ｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番して残基２から２２の間；
（ｉｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番して残基７から２０の間。
【請求項８】
前記システイン残基が、前記可変領域の前記保存されたシステイン残基に対して追加的なものであり、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して、前記ＶＬにおいて残基２３にあり及び／又は前記ＶＨにおいて残基２２にある、請求項１〜７のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項９】
前記システイン残基が、前記保存されたシステイン残基に対してＮ末端側に位置する、請求項８に記載のタンパク質。
【請求項１０】
前記システイン残基が、以下の１つ又は複数に位置する、請求項１〜９のいずれか一項に記載のタンパク質：
（ｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してκ  ＶＬの残基８及び残基１１；
（ｉｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してκ  ＶＬの残基１４及び残基１７；
（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してλ  ＶＬの残基７及び残基１１；
（ｉｖ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してλ  ＶＬの残基１４及び残基１７；
（ｖ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してλ  ＶＬの残基８及び残基１２；
（ｖｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してκ  ＶＬの残基１３及び残基１９；
（ｖｉｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してλ  ＶＬの残基１３及び残基１９；
（ｖｉｉｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してＶＨの残基７及び残基１０；
（ｉｘ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してＶＨの残基１３及び残基１６；
（ｘ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してＶＨの残基６及び残基９；及び／又は
（ｘｉ）Ｋａｂａｔ付番方式により付番してＶＨの残基１２及び残基１８。
【請求項１１】
前記ＶＨと前記ＶＬとを連結する前記領域が６個以下のアミノ酸を含む、請求項３に記載のタンパク質。
【請求項１２】
前記ＶＬが、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して５位にスレオニン及び／又はＫａｂａｔ付番方式による５３位にスレオニン及び／又はＫａｂａｔ付番方式により付番して７９位にグルタミン酸を含む、請求項３又は１１に記載のタンパク質。
【請求項１３】
前記ＶＨが、Ｋａｂａｔ付番方式により付番して８０位にロイシンを含む、請求項３、１１又は１２のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１４】
（ｉ）配列番号１１１に示される配列又はそれと少なくとも約６０％同一の配列を含むＶＨと、
（ｉｉ）配列番号１１３に示される配列又はそれと少なくとも約６０％同一の配列を含むＶＬと、
を各々が含む少なくとも２つのポリペプチドを含む、請求項３又は１１〜１３のいずれか一項に記載のタンパク質であって、一つのポリペプチドの前記ＶＨと別のポリペプチドの前記ＶＬとが会合して、ＴＡＧ７２との特異的な結合能を有するＦｖを形成する、タンパク質。
【請求項１５】
（ｉ）前記ポリペプチドの少なくとも１つが、配列番号１１１に示される配列を含むＶＨの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨを含み；及び
（ｉｉ）少なくとも別の前記ポリペプチドが、配列番号１１３に示される配列を含むＶＬのＣＤＲを含むＶＬを含む、
請求項３又は１１〜１４のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１６】
（ｉ）配列番号１１１に示される配列又はそのヒト化若しくは脱免疫化（deimmunized）形態を含むＶＨと、
（ｉｉ）配列番号１１３に示される配列又はそのヒト化若しくは脱免疫化形態を含むＶＬと、
を双方が含む少なくとも２つのポリペプチドを含む、請求項３又は１１〜１５のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１７】
少なくとも１つの請求項２〜１６のいずれか一項に記載のタンパク質を含むＦｖを含む単離されたタンパク質であって、少なくとも１つのＶＬが少なくとも１つのＶＨと結合して抗原結合部位を形成する、タンパク質。
【請求項１８】
前記抗原結合部位を形成する前記ＶＬと前記ＶＨとが単一のポリペプチド鎖又は前記抗原結合部位を形成する前記ＶＬとＶＨとが異なるポリペプチド鎖にある、請求項１７に記載のタンパク質。
【請求項１９】
ＶＬとＶＨとが単一のポリペプチド鎖にある場合、タンパク質は、
（ｉ）単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）；
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ−ｓｃＦｖ）；又は
（ｉｉｉ）Ｆｃ又は重鎖定常ドメイン（ＣＨ）２及び／又はＣＨ３に連結された（ｉ）
及び／又は（ｉｉ）の少なくとも１つ；又は
ＶＬとＶＨとが異なるポリペプチド鎖にある場合、タンパク質は、
（ｉｖ）ダイアボディ；
（ｖ）トリアボディ；又は
（ｖｉ）テトラボディ
（ｖｉｉ）免疫グロブリン
である、請求項１８に記載のタンパク質。
【請求項２０】
前記システイン残基がジスルフィド結合によって連結される、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項２１】
前記システイン残基の少なくとも１つにコンジュゲートした化合物を含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のタンパク質であって、前記化合物のコンジュゲーションが前記タンパク質の抗原との結合を妨害しない、タンパク質。
【請求項２２】
少なくとも１つのＮ末端スレオニン残基又はセリン残基をさらに含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項２３】
前記スレオニン残基又はセリン残基にコンジュゲートした化合物を含む、請求項２２に記載のタンパク質。
【請求項２４】
前記化合物が、放射性同位体、検出可能標識、治療化合物、コロイド、毒素、核酸、ペプチド、タンパク質、対象における前記タンパク質の半減期を増加させる化合物及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項２１又は２３に記載のタンパク質。
【請求項２５】
前記化合物が生理学的に許容可能なポリマーである、請求項２１又は２３に記載のタンパク質。
【請求項２６】
前記化合物がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、請求項２１又は２３のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項２７】
前記ＰＥＧが単分散ＰＥＧである、請求項２６に記載のタンパク質。
【請求項２８】
前記システイン残基の少なくとも１つにコンジュゲートした第１の化合物と、前記スレ
オニン残基又はセリン残基にコンジュゲートした第２の化合物であって、前記第１の化合
物と異なる第２の化合物とを含む、請求項２２又は２３に記載のタンパク質。
【請求項２９】
ヒト上皮成長因子（Ｈｅｒ）２、腫瘍関連糖タンパク質ＴＡＧ７２、ＭＵＣ１又は前立
腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に特異的に結合する、請求項１〜２８のいずれか一項に記載
のタンパク質。
【請求項３０】
（ｉ）ＦＲ１内に位置する２つ以上のシステイン残基を含むように修飾された、配列番号５５、５９、６１又は１０９のいずれか１つに示される配列と少なくとも約８０％同一の配列を含む；又は
（ｉｉ）ＦＲ１内に位置する２つ以上のシステイン残基を含むように修飾された、配列番号５７、６３、６５、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３又は１０５、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１又は１３３のいずれか１つ又は複数に示される配列と少なくとも約８０％同一の配列を含む、
請求項２９に記載のタンパク質。
【請求項３１】
請求項１〜３０のいずれか一項に記載のタンパク質と薬学的に許容可能な担体とを含む
組成物。
【請求項３２】
請求項１〜２０、２２、２９又は３０のいずれか一項に記載のタンパク質をコードする単離核酸。
【請求項３３】
プロモーターに作動可能に連結された請求項３２に記載の核酸を含む発現コンストラクト。
【請求項３４】
請求項３２に記載の外因性核酸及び／又は請求項３３に記載の発現コンストラクトを含む単離細胞であって、前記タンパク質を発現する細胞。
【請求項３５】
請求項１〜２０、２２、２９又は３０のいずれか一項に記載のタンパク質の作製方法であって、請求項３３に記載の発現コンストラクトを、前記コードされたタンパク質が作製されるのに十分な条件下に維持するステップ及び場合により前記タンパク質を単離するステップを含む方法。
【請求項３６】
前記コードされたタンパク質が作製されるのに十分な（sufficient the encoded for the protein to be produced）条件下で請求項３４に記載の細胞を培養するステップを含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
請求項２１〜２８のいずれか一項に記載のタンパク質の作製方法であって、
（ｉ）請求項１〜２０、２２、２９又は３０のいずれか一項に記載のタンパク質を得るステップと、
（ｉｉ）前記タンパク質のＦＲ１における前記システイン残基の少なくとも１つに化合物
をコンジュゲートするステップであって、それにより前記タンパク質を作製するステップ
と、
を含む方法。
【請求項３８】
前記タンパク質が少なくとも１つのＮ末端セリン残基又はスレオニン残基を含み、及び
前記方法が、化合物を前記セリン残基又はスレオニン残基にコンジュゲートするステップ
をさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
請求項２３に記載のタンパク質の作製方法であって、
（ｉ）請求項２２に記載のタンパク質を得るステップと、
（ｉｉ）前記タンパク質の前記Ｎ末端にある少なくとも１つのセリン残基又はスレオニン残基に化合物をコンジュゲートするステップであって、それにより前記タンパク質を作製するステップと、
を含む方法。
【請求項４０】
医薬における請求項１〜３０のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項３１に記載の組成物の使用。
【請求項４１】
対象における病態の治療又は予防方法であって、請求項１〜３０のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項３１に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法。
【請求項４２】
細胞への化合物の送達方法であって、請求項２１又は２３〜２８のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項３１に記載の組成物に前記細胞を接触させるステップを含む方法。
【請求項４３】
対象に前記タンパク質又は組成物を投与することによって前記細胞を接触させる、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
対象における抗原を位置特定又は検出する方法であって、
（ｉ）請求項２１又は２３〜２８のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項３１に記載の組成物を抗原に結合するのに十分な時間にわたり、且つそのような条件下で、対象に投与するステップであって、前記タンパク質が検出可能標識にコンジュゲートされる、ステップと、
（ｉｉ）前記検出可能標識をインビボで検出又は位置特定するステップと、
を含む方法。
【請求項４５】
対象における病態の診断又は予後判定方法であって、請求項１〜３０のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項３１に記載の組成物を抗原に結合して複合体を形成するのに十分な時間にわたり、且つそのような条件下で、前記対象からの試料と接触させるステップと、前記複合体を検出するステップであって、前記複合体の検出が前記対象における前記病態の診断又は予後判定をもたらすステップとを含む方法。
【請求項４６】
前記複合体のレベルを測定するステップであって、前記複合体のレベルの亢進又は低下が、前記対象における前記病態の診断又は予後判定をもたらすステップを含む、請求項４５に記載の方法。