【手続補正書】
【提出日】平成25年8月9日(2013.8.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マンナナーゼ活性と、親/野生型トリコデルマ・リーゼイマンナナーゼのアミノ酸配列(配列番号1)から変異したアミノ酸配列とを有するマンナナーゼ変異体であって、マンナナーゼ変異体のアミノ酸配列が、201S、207F及び274Lの変異と、66P、215T及び259Rの変異とを含み、かつ配列番号１と少なくとも90%の配列同一性を有するマンナナーゼ変異体。
【請求項２】
変異3Rをさらに含む、請求項１に記載のマンナナーゼ変異体。
【請求項３】
変異181A/Hをさらに含む、請求項１又は請求項２に記載のマンナナーゼ変異体。
【請求項４】
一つ又は複数の追加の変異をさらに含み、変異の位置が、31、97、113、146、149、173、181、280、282、331又は344である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体。
【請求項５】
変異が、31Y、97R、113Y、146Q、149K、173H/T、181H/A、280S/L/R、282D、331S又は344Dである、請求項４に記載のマンナナーゼ変異体。
【請求項６】
マンナナーゼ活性と、親/野生型トリコデルマ・リーゼイマンナナーゼのアミノ酸配列(配列番号1)から変異したアミノ酸配列とを有するマンナナーゼ変異体であって、マンナナーゼ変異体のアミノ酸が、201S、207F及び274Lの変異と、少なくとも、
1) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280R/N282D/N331S
2) S66P/Q97R/N113Y/N173H/V181A/A215T/Q259R/Q280S/N331S
3) F31Y/S66P/Q97R/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280R/N282D
4) F31Y/S66P/Q97R/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280S/N282D/N331S
5) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280R/N282D
6) F31Y/S66P/Q97R/Q149K/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280L
7) S66P/Q97R/N113Y/N173H/V181A/A215T/Q259R
8) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280S/N282D/N331S
9) S66P/N113Y/N173H/V181H/A215T/Q259R
10) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/K146Q/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280L/N282D
11) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/K146Q/N173H/V181A/A215T/Q259R/Q280L/N282D/N331S
12) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/K146Q/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280L
13) F31Y/S66P/Q97R/N173H/V181H/A215T/Q259R/N282D
14) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/K146Q/N173H/V181A/A215T/Q259R/Q280R/N282D
15) S66P/N113Y/V181H/A215T/Q259R
16) S66P/Q97R/N113Y/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280L/N282D
17) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/K146Q/N173H/V181A/A215T/Q259R/Q280L/N282D
18) F31Y/S66P/N173H/V181H/A215T/Q259R/N282D
19) F31Y/S66P/Q97R/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280L
20) S66P/Q97R/N113Y/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280R/N282D
21) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/N173T/V181H/A215T/Q259R/Q280R/N282D
22) F31Y/S66P/Q97R/N173T/V181H/A215T/Q259R/Q280R/N282D
23) F31Y/S66P/Q97R/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280S/N282D
24) S66P/N113Y/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280S/N282D
25) S66P/Q97R/N113Y/N173H/V181A/A215T/Q259R/Q280S/N282D/N331S
26) S66P/Q97R/N113Y/V181H/A215T/Q259R/Q280L/N282D
27) S66P/N113Y/N173H/V181H/A215T/Q259R/N331S
28) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/K146Q/N173H/V181A/A215T/Q259R/Q280R/N282D/N331S
29) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/K146Q/V181H/A215T/Q259R/Q280S/N282D/N331S
30) S66P/Q97R/N113Y/N173T/V181A/A215T/Q259R
31) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/K146Q/N173H/V181A/A215T/Q259R/Q280S/N331S
32) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/V181H/A215T/Q259R
33) S66P/Q97R/N113Y/N173H/V181A/A215T/Q259R/N331S
34) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/V181H/A215T/Q259R/Q280L
35) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/K146Q/V181H/A215T/Q259R/Q280L
36) F31Y/S66P/Q97R/K146Q/V181H/A215T/Q259R/Q280R/N282D
37) S66P/N113Y/V181H/A215T/Q259R/N282D
38) F31Y/S66P/Q97R/V181H/A215T/Q259R/N282D
39) S66P/N113Y/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280S/N331S
40) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/K146Q/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280S/N331S
41) S66P/V181H/A215T/Q259R/N282D
42) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/K146Q/V181H/A215T/Q259R/Q280L/N331S
43) S66P/Q97R/N113Y/N173H/V181H/A215T/Q259R/N282D
44) S66P/Q97R/N113Y/V181H/A215T/Q259R/N282D
45) S66P/V181H/A215T/Q259R
46) S66P/Q97R/N113Y/V181H/A215T/Q259R/Q280R/N282D
47) F31Y/S66P/N173T/V181H/A215T/Q259R/N282D
48) F31Y/S66P/N113Y/V181H/A215T/Q259R/Q280R/N344D
49) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280R/N282D
50) F31Y/S66P/Q97R/N113Y/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280S/N282D/N331S
51) S66P/N113Y/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280S
52) S66P/Q97R/N113Y/N173H/V181A/A215T/Q259R
53) S66P/Q97R/N113Y/N173H/V181A/A215T/Q259R/Q280S
54) S66P/N113Y/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280S/N282D
55) F31Y/S66P/Q97R/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280R/N282D
56) S66P/N113Y/N173H/V181H/A215T/Q259R
57) S66P/Q97R/N113Y/N173H/V181A/A215T/Q259R/N331S
58) F31Y/S66P/Q97R/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280S/N282D/N331S
59) S66P/N113Y/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280S/N331S
60) S66P/Q97R/N113Y/N173H/V181A/A215T/Q259R/Q280S/N331S
61) F31Y/S66P/Q97R/Q149K/N173H/V181H/A215T/Q259R/Q280S/N331S
62) S66P/A215T/Q259R
63) S3R/S66P/A215T/Q259R
からなる群より選択される変異とを含み、かつ配列番号１と少なくとも90％の配列同一性を有するマンナナーゼ変異体。
【請求項７】
請求項1〜６のいずれか一項に記載のマンナナーゼをコードする核酸分子。
【請求項８】
請求項７に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項９】
請求項８に記載のベクターで形質転換され、かつ/又は請求項７に記載の核酸分子を含む宿主細胞。
【請求項１０】
配列番号5の配列を有する核酸分子。
【請求項１１】
請求項1〜６のいずれか一項に記載の改変マンナナーゼを調製する方法であって、請求項９に記載の宿主細胞を培養するステップと、培養物から改変マンナナーゼを単離するステップとを含む方法。
【請求項１２】
食物及び飼料加工のため、食物及び飼料への補充物質として、紙パルプの酵素補助漂白のため、水圧破砕による油井及びガス井刺激のため、洗浄剤として、生物膜の除去のため、又は送達系において適切な、請求項1〜６のいずれか一項に記載の改変マンナナーゼを含む組成物。
【請求項１３】
食物及び飼料加工のため、
コーヒー抽出のため、
コーヒー廃棄物の加工のため、
食物及び飼料への補充物質として、
紙パルプの酵素補助漂白のため、
繊維産業における漂白剤及び/又は糊抜き剤として、
水圧破砕による油井及びガス井刺激のため、
洗浄剤として、
生物膜の除去のため、
送達系において、並びに/或いは
バイオ燃料の生産を意図する再生可能資源の加工のための、
請求項1〜６のいずれか一項に記載の改変マンナナーゼの使用。