【誤訳訂正書】
【提出日】平成24年12月19日(2012.12.19)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌細胞の表面のＰＳＣＡに特異的に結合するヒト化抗体断片であって、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖダイマー（ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ））、ｓｃ−Ｆｖ−ＣＨ３ダイマー（ミニボディ）、およびｓｃＦｖ−Ｆｃからなる群より選択され、ここで該抗体断片が、図１に示される可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）領域の配列を含む、ヒト化抗体断片。
【請求項２】
請求項１に記載のヒト化抗体断片であって、ここで前記ｓｃＦｖダイマーが、リンカーにより結合された二つのｓｃＦｖモノマーを含む、ヒト化抗体断片。
【請求項３】
請求項２に記載のヒト化抗体断片であって、ここで前記リンカーが、ペプチド配列を含む、ヒト化抗体断片。
【請求項４】
請求項３に記載のヒト化抗体断片であって、ここで前記ペプチド配列が、配列［（ＧＧＧＳ）２］を含む、ヒト化抗体断片。
【請求項５】
請求項１に記載のヒト化抗体断片であって、ここで前記抗体断片がＫＤ＝２．０ｎＭまたはそれより小さい親和性を有する、ヒト化抗体断片。
【請求項６】
請求項１に記載のヒト化抗体断片であって、ここで前記抗体断片がＫＤ＝５．５ｎＭまたはそれより小さい親和性を有する、ヒト化抗体断片。
【請求項７】
請求項１に記載のヒト化抗体断片であって、ここで前記抗体断片が、ｓｃＦｖダイマー（ダイアボディ）である、ヒト化抗体断片。
【請求項８】
請求項１に記載のヒト化抗体断片であって、ここで前記抗体断片が、ｓｃ−Ｆｖ−ＣＨ３ダイマー（ミニボディ）である、ヒト化抗体断片。
【請求項９】
細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する癌を診断する方法であって、該方法が、以下：
（ａ）ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖダイマー（ダイアボディ）、ｓｃ−Ｆｖ−ＣＨ３ダイマー（ミニボディ）、およびｓｃＦｖ−Ｆｃからなる群より選択される、癌細胞の表面上のＰＳＣＡに特異的に結合するヒト化抗体断片を、対象に投与する工程；および
（ｂ）ＰＳＣＡタンパクが、該対象において過剰発現されているか否かを分子インビボイメージングを用いて決定し、それによって、細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する癌を診断する工程、
を含む、方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法であって、ここで前記抗体断片が、図１に示される可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）領域の配列を含む、方法。
【請求項１１】
請求項９に記載の方法であって、ここで細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する前記癌が、前立腺癌、膀胱癌、および膵臓癌からなる群より選択される、方法。
【請求項１２】
請求項９に記載の方法であって、ここで細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する前記癌が、前立腺癌である、方法。
【請求項１３】
請求項９に記載の方法であって、ここで前記ヒト化抗体断片が、検出可能な部分に連結されている、方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法であって、ここで前記検出可能な部分が、放射性核種、ナノ粒子、蛍光色素、蛍光マーカー、および酵素からなる群より選択される、方法。
【請求項１５】
請求項１３に記載の方法であって、ここで前記検出可能な部分が放射性核種である、方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法であって、ここで前記放射性核種が、６４Ｃｕ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉまたは１３１Ｉからなる群より選択される、方法。
【請求項１７】
請求項９に記載の方法であって、ここで前記分子インビボイメージングが、ＭＲＩ、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、および平面ガンマカメライメージングからなる群より選択される、方法。
【請求項１８】
細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する癌の予後を提供する方法であって、該方法が、以下：
（ａ）ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖダイマー（ダイアボディ）、ｓｃ−Ｆｖ−ＣＨ３ダイマー（ミニボディ）、およびｓｃＦｖ−Ｆｃからなる群より選択される、癌細胞の表面上のＰＳＣＡに特異的に結合するヒト化抗体断片を、対象に投与する工程；および
（ｂ）ＰＳＣＡタンパクが、該対象において過剰発現されているか否かを分子インビボイメージングを用いて決定し、それによって、細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する癌の予後を提供する工程、
を含む、方法。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法であって、ここで前記抗体断片が、図１に示される可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）領域の配列を含む、方法。
【請求項２０】
請求項１８に記載の方法であって、ここで細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する前記癌が、前立腺癌、膀胱癌、および膵臓癌からなる群より選択される、方法。
【請求項２１】
請求項１８に記載の方法であって、ここで細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する前記癌が、前立腺癌である、方法。
【請求項２２】
請求項１８に記載の方法であって、ここで前記ヒト化抗体断片が、検出可能な部分に連結されている、方法。
【請求項２３】
請求項２２に記載の方法であって、ここで前記検出可能な部分が、放射性核種、ナノ粒子、蛍光色素、蛍光マーカー、および酵素からなる群より選択される、方法。
【請求項２４】
請求項２２に記載の方法であって、ここで前記検出可能な部分が放射性核種である、方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法であって、ここで前記放射性核種が、６４Ｃｕ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉまたは１３１Ｉからなる群より選択される、方法。
【請求項２６】
請求項１８に記載の方法であって、ここで前記分子インビボイメージングが、ＭＲＩ、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、および平面ガンマカメライメージングからなる群より選択される、方法。
【請求項２７】
細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する癌の診断または予後を提供する方法であって、該方法が、以下：
（ａ）生物学的サンプルを、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖダイマー（ダイアボディ）、ｓｃ−Ｆｖ−ＣＨ３ダイマー（ミニボディ）、およびｓｃＦｖ−Ｆｃからなる群より選択され、癌細胞の表面上のＰＳＣＡに特異的に結合するヒト化抗体断片と接触させる工程であって、ここで前記抗体断片が、図１に示される可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）領域の配列を含む工程；および
（ｂ）ＰＳＣＡタンパクが、該生物学的サンプル中で過剰発現されているか否かを決定し、それによって、細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する該癌の診断または予後を提供する工程、
を含む、方法。
【請求項２８】
請求項２７に記載の方法であって、ここで細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する前記癌が、前立腺癌、膀胱癌、および膵臓癌からなる群より選択される、方法。
【請求項２９】
請求項２７に記載の方法であって、ここで細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する前記癌が、前立腺癌である、方法。
【請求項３０】
請求項２７に記載の方法であって、ここで前記生物学的サンプルが、組織生検または体液サンプルである、方法。
【請求項３１】
請求項３０に記載の方法であって、ここで前記体液サンプルが、血液、尿、または前立腺液である、方法。
【請求項３２】
請求項２７に記載の方法であって、ここで前記ヒト化抗体断片が、検出可能な部分に連結されている、方法。
【請求項３３】
請求項３２に記載の方法であって、ここで前記検出可能な部分が、放射性核種、ナノ粒子、蛍光色素、蛍光マーカー、および酵素からなる群より選択される、方法。
【請求項３４】
対象において、細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する癌を処置または予防する方法であって、該方法が、以下：
（ａ）ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖダイマー（ダイアボディ）、ｓｃ−Ｆｖ−ＣＨ３ダイマー（ミニボディ）、およびｓｃＦｖ−Ｆｃからなる群より選択され癌細胞の表面上のＰＳＣＡに特異的に結合する、治療上有効な量のヒト化抗体断片を、対象に投与する工程であって、ここで該抗体断片が、図１に示される可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）領域の配列を含み、それによって、対象において細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する癌を処置または予防する工程、
を含む、方法。
【請求項３５】
請求項３４に記載の方法であって、ここで細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する前記癌が、前立腺癌、膀胱癌、および膵臓癌からなる群より選択される、方法。
【請求項３６】
請求項３４に記載の方法であって、ここで細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する前記癌が、前立腺癌である、方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
最初の実施態様において、本発明は、癌細胞の表面のＰＳＣＡに特異的に結合する、ヒト化抗体断片を提供する。本発明の抗体断片の例は、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖダイマー（ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ））、ｓｃ−Ｆｖ−ＣＨ３ダイマー（ミニボディ）、およびｓｃＦｖ−Ｆｃを含み、ここでその抗体断片は、図１に示すような、可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）領域の配列を含む。この実施態様の局面において、ｓｃＦｖダイマーは、リンカーによって連結した２つのｓｃＦｖモノマーを含み得る。適当なリンカーは、ペプチド配列を含み、そのうち、配列［（ＧＧＧＳ）２］は、都合のよい例である。この実施態様の他の局面において、その抗体断片は、ＫＤ＝２．０ｎＭまたはそれより低い、またはＫＤ＝５．５ｎＭまたはそれより低い親和性を有する。本発明の実施に都合のよい抗体断片は、ｓｃＦｖダイマー（ダイアボディ）およびｓｃ−Ｆｖ−ＣＨ３ダイマー（ミニボディ）を含む。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００９】
２つめの実施態様において、本発明は、（ａ）患者に、癌細胞表面のＰＳＣＡに特異的に結合するヒト化抗体断片を投与すること、ここでその抗体断片は、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖダイマー（ダイアボディ）、ｓｃ−Ｆｖ−ＣＨ３ダイマー（ミニボディ）、またはｓｃＦｖ−Ｆｃを含む、および（ｂ）分子インビボイメージングを用いて、患者においてＰＳＣＡタンパク質が過剰発現しているかどうかを決定し、従って細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する癌を診断することによって、細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する癌を診断する方法を提供する。有利な局面において、その抗体断片は、図１に示すような、可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）領域の配列を含む。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１０】
３番目の実施態様において、本発明は、（ａ）患者に、癌細胞表面のＰＳＣＡに特異的に結合するヒト化抗体断片を投与すること、ここでその抗体断片は、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖダイマー（ダイアボディ）、ｓｃ−Ｆｖ−ＣＨ３ダイマー（ミニボディ）、またはｓｃＦｖ−Ｆｃを含む、および（ｂ）分子インビボイメージングを用いて、患者においてＰＳＣＡタンパク質が過剰発現しているかどうかを決定し、従って細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する癌の予後を提供することによって、細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する癌の予後を提供する方法を提供する。有利な局面において、その抗体断片は、図１に示すような、可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）領域の配列を含む。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
本発明の４番目の実施態様は、（ａ）生物学的サンプルを、癌細胞表面のＰＳＣＡに特異的に結合するヒト化抗体断片と接触させること、ここでその抗体断片は、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖダイマー（ダイアボディ）、ｓｃ−Ｆｖ−ＣＨ３ダイマー（ミニボディ）、およびｓｃＦｖ−Ｆｃであり得る、そしてその抗体断片は、図１に示すような、可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）領域の配列を含む；および（ｂ）その生物学的サンプルにＰＳＣＡタンパク質が過剰発現しているかどうかを決定し、従って細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する癌の診断または予後を提供することによって、細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する癌の診断または予後を提供する方法を提供する。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１４】
本発明の５番目の実施態様は、（ａ）治療的に有効な量の、癌細胞表面のＰＳＣＡに特異的に結合するヒト化抗体断片を患者に投与すること、ここでその抗体断片は、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖダイマー（ダイアボディ）、ｓｃ−Ｆｖ−ＣＨ３ダイマー（ミニボディ）、およびｓｃＦｖ−Ｆｃであり得る、そしてその抗体断片は、図１に示すような、可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）領域の配列を含む、従って患者において細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する癌を治療または予防することによって、患者において細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する癌を治療または予防する方法を提供する。この実施態様のいくつかの局面において、細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する癌は、前立腺癌、膀胱癌、および膵臓癌を含む。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１５】
（詳細な説明）
本発明は、遺伝子操作したＰＳＣＡ特異的ヒト化抗体断片、例えばｓｃＦｖダイマー（ダイアボディ）、ｓｃＦｖ−ＣＨ３ダイマー（ミニボディ）、およびｓｃＦｖ−Ｆｃを提供し、それらは前立腺、膀胱、および膵臓癌細胞のような、細胞表面ＰＳＣＡを過剰発現する癌細胞の診断、予後、および治療において使用するための、以前に公知のＰＳＣＡに対する未処理の抗体の使用に関連する欠点を克服する、インビボにおける薬物動態学的および標的化可能性を有する。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２１】
未処理のＰＳＣＡ抗体を使用することに伴う伝達および安定性の問題を克服するために、我々は一連の遺伝子操作したＰＳＣＡ特異的ヒト化抗体断片（ダイアボディ（ｓｃＦｖダイマー、５０ｋＤａ）、ミニボディ（ｓｃＦｖ−ＣＨ３ダイマー、８０ｋＤａ）、およびｓｃＦｖ−Ｆｃ、１１０ｋＤａ）を開発し、それらは好ましいインビボ薬物動態学的特徴および標的化可能性を示す。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２３】
我々は最初、ヒト化過程が、できた抗体のＰＳＣＡへの結合親和性を４倍減少させることを見出した。タンパク質モデリングによって、結合親和性の潜在的な増加に関して試験するために、６つのフレームワーク変異が特異的に選択された。この仕事の結果として、親の、そして親和性が発達した、両方とも８アミノ酸のリンカーペプチド［（ＧＧＧＳ）２］を有する、２つの別々のダイアボディが産生された。見かけの親和性が、Ｂｉａｃｏｒｅによって、それぞれＫＤ＝５．４１ｎＭおよび１．８９ｎＭと決定された。サイズ排除クロマトグラフィーは、均一なダイマーが、親のダイアボディには好都合であるが、親和性が発達したものにはそうでないことを明らかにした。それに加えて、均一なダイマー調製物を得るために、異なるリンカーの長さ（５対８アミノ酸）および保存条件を調査した。インビトロにおけるＰＳＣＡ結合を、ＰＳＣＡ陽性前立腺癌細胞系統を用いた免疫蛍光によって示した。ダイアボディを放射ヨウ素標識して、親および親和性が発達したダイアボディに関して、それぞれ１７％および２２％の免疫反応性を保持した。１２４Ｉ標識ダイアボディを用いたマイクロＰＥＴ研究は、ＬＡＰＣ−９異種移植ＳＣＩＤマウスにおけるＰＳＣＡ陽性腫瘍への有効な局在化を示した。１２４Ｉ標識ダイアボディによる体内分布研究は、１．２２％ＩＤ／ｇの腫瘍取り込みを示した。そのようなタンパク質工学方法によって、我々は、２Ｂ３ダイアボディの結合親和性およびコンフォメーションのようなパラメーターを最適化した。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２４】
ポジトロンエミッター１２４Ｉ（ｔ１／２＝４．２ｄ）による組み換え断片の放射ヨウ素標識、およびマイクロＰＥＴスキャニングによる評価によるインビボイメージングの最適なフォーマットを決定するために、さらなる研究を行った。中間サイズのミニボディは、ＰＳＣＡ発現ＬＡＰＣ−９異種移植片（ｎ＝１２）において、注射の２１時間後に、１ｇあたり注射した投与量の５．２（±１．６）％（％ＩＤ／ｇ）の高い腫瘍取り込みを示した；血液および正常組織からの迅速なクリアランスは、高いコントラストのマイクロＰＥＴ画像を生じた（図１２）。コントロール腫瘍（ＰＣ−３）に対する陽性腫瘍の取り込み比は２．０であり、腫瘍対死体比は４．３であった。より小さい断片（抗−ＰＳＣＡダイアボディ）は、循環から迅速に一掃され、そしてＬＡＰＣ−９異種移植片において、２１時間（ｎ＝４）で０．９（±０．３）％ＩＤ／ｇに達したのみであった（図１１）。迅速なクリアランスのために操作された、より大きなｓｃＦｖ−Ｆｃ断片は、ＰＣ−３（１．７±０．２％ＩＤ／ｇ）と比較して、ＬＡＰＣ−９異種移植片において３．１（±０．４）％ＩＤ／ｇを達成した（ｎ＝４）（図１３）。よって、本明細書中で記載したように、本発明は、前立腺、膀胱、および膵臓癌のような、ＰＳＣＡを発現する癌の、非常に改善されたインビボ臨床イメージング薬剤を提供し、そして従って、ＰＳＣＡに対する試薬の有用性を、組織サンプルにおける治療および診断のためのみに認可された、以前に記載された抗体の能力を超えて拡大する。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４０】
ＩＩＩ．抗体および断片
「抗体」という用語は、一般的に、特定の抗原と免疫学的に反応性の、免疫グロブリン分子を指し、そしてポリクローナルおよびモノクローナル抗体の両方を含む。その用語はまた、キメラ抗体（例えばヒト化マウス抗体）および異種結合抗体（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）（例えば二種特異性抗体）のような、遺伝的に操作した形式も含む。「抗体」という用語はまた、プロテアーゼ処理または組み換えによるような、当該分野で公知のあらゆる手段によって産生された、抗原結合能力を有する断片（例えばＦａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、ＦｖおよびｒＩｇＧ。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃａｔａｌｏｇ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、１９９４−１９９５（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌも参照のこと））を含む、抗体の抗原結合形式も含む。また例えば、Ｋｕｂｙ，Ｊ．、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３．ｓｕｐ．ｒｄ  Ｅｄ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ&Ｃｏ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９８）も参照のこと。その用語はまた、組み換え１本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）も指す。抗体という用語はまた、二価または二重特異性分子、ダイアボディ、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）、およびテトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）、ミニボディ、およびｓｃＦｖ−Ｆｃ構造を含む。例えばＷｅｉｎｅｒら（２０００）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９：６１４４；Ｑｕｉｏｃｈｏ（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２９３を参照のこと。二価および二重特異性分子が、例えばＫｏｓｔｅｌｎｙら（１９９２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８：１５４７；ＰａｃｋおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９２）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３１：１５７９；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、１９９３、前出；Ｇｒｕｂｅｒら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．：５３６８；Ｚｈｕら（１９９７）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ  ６：７８１；Ｈｕら（１９９６）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６：３０５５；Ａｄａｍｓら（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：４０２６；およびＭｃＣａｒｔｎｅｙら（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８：３０１において記載されている。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４９】
「ｓｃＦｖダイマー」および「ダイアボディ」という用語は、一般的に上記で記載したような、および例えば図７（ａ）で図示したような、２つの１本鎖Ｆｖモノマーの間の相互作用によって形成されたダイマーを含む抗体断片を指す。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９４】
実施例４：１２４Ｉ抗ＰＳＣＡダイアボディを用いた、異種移植片のマイクロＰＥＴイメージング
１２４Ｉミニボディの腫瘍標的化を評価するために、抗原陽性（ＬＡＰＣ−９前立腺癌腫）または抗原陰性（ＰＣ−３前立腺癌腫）異種移植片を、８匹のＳＣＩＤマウスにおいて皮下接種によって確立した。マイクロＰＥＴイメージング研究を、平均４８８ｍｇ（６４−１２３６ｍｇの範囲）および５７４ｍｇのＰＳＣＡ陽性腫瘍を有する動物に対して行った。１１８．２４μＣｉの平均投与量の１２４Ｉ親ミニボディをマウスに注射し、そして投与後４時間で始まり、そして２１時間で終わる、全身ＰＥＴスキャンを得た。２１時間におけるマイクロＰＥＴ画像（図６）は、陽性（ＬＡＰＣ−９）腫瘍への取り込み、およびコントロール（ＰＣ−３）腫瘍および他の生きた臓器での低い活性を示した。２１時間の時点のスキャン後、動物を屠殺し、そして様々な組織における活性を、ガンマカウンターを用いて定量した。その結果、ＬＡＰＣ−９モデルにおける取り込みを確認し、平均（ｎ＝８）の取り込みは４．６５％ＩＤ／ｇ（２．１４−７．０６％ＩＤ／ｇの範囲）であった。コントロールＰＣ−３異種移植片による取り込み、および肝臓および脾臓における活性は、陽性腫瘍における取り込みより有意に低かった。２１時間において、ミニボディは依然として循環中にあり、平均３．８０％ＩＤ／ｇの血液活性を示した。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９５】
実施例５：１２４Ｉ抗ＰＳＣＡダイアボディを用いた、異種移植片のさらなるマイクロＰＥＴイメージング
さらなるＰＳＣＡ特異的な遺伝子操作したヒト化抗体断片［ダイアボディ（ｓｃＦｖダイマー、５０ｋＤａ）、ミニボディ（ｓｃＦｖ−ＣＨ３ダイマー、８０ｋＤａ）およびｓｃＦｖ−Ｆｃ、１１０ｋＤａ］を産生し、それらはインビボにおける薬物動態および標的化能力において異なっていた。インビボにおけるイメージングのために最適な形式を決定するために、組み換え断片を、ポジトロンエミッター１２４Ｉ（ｔ１／２＝４．２ｄ）で放射ヨウ素標識し、そしてマイクロＰＥＴスキャニングによって評価した。図１２に示すように、中間サイズのミニボディは、ＰＳＣＡ発現ＬＡＰＣ−９異種移植片（ｎ＝１２）において注射の２１時間後に、１ｇあたり５．２（±１．６）パーセントの注射投与量（％ＩＤ／ｇ）の優れた腫瘍取り込みを示した。血液および正常組織からの迅速なクリアランスは、高いコントラストのマイクロＰＥＴ画像を生じた。コントロール腫瘍（ＰＣ−３）に対する陽性腫瘍の取り込み比は２．０であり、そして腫瘍対死体比は４．３であった。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９６】
図１１に示すように、より小さい断片（抗ＰＳＣＡダイアボディ）は、循環から迅速に排泄され、そしてＬＡＰＣ−９異種移植片において２１時間で０．９（±０．３）％ＩＤ／ｇにしか達しなかった（ｎ＝４）。迅速なクリアランスのために遺伝子操作された、より大きなｓｃＦｖ−Ｆｃ断片は、ＰＣ−３（１．７±０．２％ＩＤ／ｇ）と比較して、ＬＡＰＣ−９異種移植片において３．１（±０．４）％ＩＤ／ｇを達成した（ｎ＝４）（図１３）。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９８】
【図１−１】図１は、ヒト化抗ＰＳＣＡミニボディのＤＮＡ配列および翻訳されたタンパク質配列を示す。以下のタンパク質部分の始まりも示される：シグナルペプチド（哺乳類の分泌のため）、ヒト化２Ｂ３抗ＰＳＣＡ抗体からの軽鎖可変領域（ＶＬ）、１８アミノ酸のドメイン間リンカーペプチド、ヒト化２Ｂ３からの重鎖可変領域（ＶＨ）、ヒトＩｇＧ１ヒンジ配列および１０アミノ酸の延長、およびヒトＩｇＧ１ＣＨ３ドメインに続く２つの停止コドン。
【図１−２】図１は、ヒト化抗ＰＳＣＡミニボディのＤＮＡ配列および翻訳されたタンパク質配列を示す。以下のタンパク質部分の始まりも示される：シグナルペプチド（哺乳類の分泌のため）、ヒト化２Ｂ３抗ＰＳＣＡ抗体からの軽鎖可変領域（ＶＬ）、１８アミノ酸のドメイン間リンカーペプチド、ヒト化２Ｂ３からの重鎖可変領域（ＶＨ）、ヒトＩｇＧ１ヒンジ配列および１０アミノ酸の延長、およびヒトＩｇＧ１ＣＨ３ドメインに続く２つの停止コドン。
【図１−３】図１は、ヒト化抗ＰＳＣＡミニボディのＤＮＡ配列および翻訳されたタンパク質配列を示す。以下のタンパク質部分の始まりも示される：シグナルペプチド（哺乳類の分泌のため）、ヒト化２Ｂ３抗ＰＳＣＡ抗体からの軽鎖可変領域（ＶＬ）、１８アミノ酸のドメイン間リンカーペプチド、ヒト化２Ｂ３からの重鎖可変領域（ＶＨ）、ヒトＩｇＧ１ヒンジ配列および１０アミノ酸の延長、およびヒトＩｇＧ１ＣＨ３ドメインに続く２つの停止コドン。
【図２】図２は、非還元（１）および還元（２）条件下での、抗ＰＳＣＡミニボディのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示し、９５ｋＤａの共有結合ダイマーおよび４７ｋＤａのモノマーサブユニットを示す。
【図３】図３は、抗ＰＳＣＡミニボディのサイズ排除ＨＰＬＣを示し、予測される分子サイズにおける均一なピークを示す。
【図４ａ】図４は、抗ＰＳＣＡミニボディのフローサイトメトリー結合研究を示す。パネル１、抗原陰性Ｂ細胞系統；パネル２、ＰＳＣＡを発現するよう安定にトランスフェクトしたＢ細胞系統、パネル３、ＰＳＣＡ発現ＬＮＣａＰヒト前立腺癌細胞。
【図４ｂ】図４は、抗ＰＳＣＡミニボディのフローサイトメトリー結合研究を示す。パネル１、抗原陰性Ｂ細胞系統；パネル２、ＰＳＣＡを発現するよう安定にトランスフェクトしたＢ細胞系統、パネル３、ＰＳＣＡ発現ＬＮＣａＰヒト前立腺癌細胞。
【図４ｃ】図４は、抗ＰＳＣＡミニボディのフローサイトメトリー結合研究を示す。パネル１、抗原陰性Ｂ細胞系統；パネル２、ＰＳＣＡを発現するよう安定にトランスフェクトしたＢ細胞系統、パネル３、ＰＳＣＡ発現ＬＮＣａＰヒト前立腺癌細胞。
【図５】図５は、免疫蛍光顕微鏡による、抗原陽性細胞に対する抗ＰＳＣＡミニボディの結合を示す。
【図６】図６は、ＬＡＰＣ−９（ＰＳＣＡ陽性ヒト前立腺癌）およびＰＣ−３（ＰＳＣＡ陰性前立腺癌）異種移植片を有するヌードマウスの、同時記録マイクロＰＥＴ／マイクロＣＴスキャンを示す。マウスにＩ−１２４放射性標識抗ＰＳＣＡを注射した。
【図７ａ】図７（ａ）は、本発明の抗体断片の概略図表示を提供する。図７（ｂ）は、時間につれた（ａ）の抗体断片の相対的な腫瘍取り込みおよび血液活性を示す。
【図７ｂ】図７（ａ）は、本発明の抗体断片の概略図表示を提供する。図７（ｂ）は、時間につれた（ａ）の抗体断片の相対的な腫瘍取り込みおよび血液活性を示す。
【図８−１】図８（シート１のパネル）は、本発明のヒト化ＰＳＣＡダイアボディの概略図表示、およびＳＤＳ−ＰＡＧＥにおける〜２５ｋＤａタンパク質としてのダイアボディの移動を示す。シート２のパネルは、ＦＡＣＳによる、ＰＳＣＡ陽性細胞へのダイアボディの結合を示す。
【図８−２】図８（シート１のパネル）は、本発明のヒト化ＰＳＣＡダイアボディの概略図表示、およびＳＤＳ−ＰＡＧＥにおける〜２５ｋＤａタンパク質としてのダイアボディの移動を示す。シート２のパネルは、ＦＡＣＳによる、ＰＳＣＡ陽性細胞へのダイアボディの結合を示す。
【図９−１】図９（シート１のパネル）は、本発明のＰＳＣＡミニボディの概略図表示、および還元および非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥにおけるミニボディの移動を示す。免疫蛍光顕微鏡による、抗原陽性細胞への抗ＰＳＣＡミニボディの結合も示す。シート２のパネルは、ＦＡＣＳによる、ＰＳＣＡ陽性細胞へのミニボディの結合、およびミニボディを用いた競合的ＥＬＩＳＡアッセイを示す。
【図９−２】図９（シート１のパネル）は、本発明のＰＳＣＡミニボディの概略図表示、および還元および非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥにおけるミニボディの移動を示す。免疫蛍光顕微鏡による、抗原陽性細胞への抗ＰＳＣＡミニボディの結合も示す。シート２のパネルは、ＦＡＣＳによる、ＰＳＣＡ陽性細胞へのミニボディの結合、およびミニボディを用いた競合的ＥＬＩＳＡアッセイを示す。
【図１０】図１０は、ＬＡＰＣ−９（ＰＳＣＡ陽性ヒト前立腺癌）およびＰＣ−３（ＰＳＣＡ陰性前立腺癌）異種移植片を有するヌードマウスの、同時記録マイクロＰＥＴ／マイクロＣＴスキャンを示す。マウスにＩ−１２４放射性標識抗ＰＳＣＡダイアボディを注射した（左のパネル）、またはＬＡＰＣ−９（ＰＳＣＡ陽性ヒト前立腺癌）およびＰＣ−３（ＰＳＣＡ陰性前立腺癌）異種移植片を有するヌードマウスの、同時記録マイクロＰＥＴ／マイクロＣＴスキャンを示す。マウスにＩ−１２４放射性標識抗ＰＳＣＡミニボディを注射した（右のパネル）。
【図１１−１】図１１（シート１のパネル）は、本発明の抗体断片の概略図表示を提供する。図１１（シート２のパネル）は、ＬＡＰＣ−９（ＰＳＣＡ陽性ヒト前立腺癌）およびＰＣ−３（ＰＳＣＡ陰性前立腺癌）異種移植片を有するヌードマウスの、同時記録マイクロＰＥＴ／マイクロＣＴスキャンを示す。マウスにＩ−１２４放射性標識抗ＰＳＣＡダイアボディを注射した。
【図１１−２】図１１（シート１のパネル）は、本発明の抗体断片の概略図表示を提供する。図１１（シート２のパネル）は、ＬＡＰＣ−９（ＰＳＣＡ陽性ヒト前立腺癌）およびＰＣ−３（ＰＳＣＡ陰性前立腺癌）異種移植片を有するヌードマウスの、同時記録マイクロＰＥＴ／マイクロＣＴスキャンを示す。マウスにＩ−１２４放射性標識抗ＰＳＣＡダイアボディを注射した。
【図１２−１】図１２（シート１のパネル）は、ＬＡＰＣ−９（ＰＳＣＡ陽性ヒト前立腺癌）およびＰＣ−３（ＰＳＣＡ陰性前立腺癌）異種移植片を有するヌードマウスの、同時記録マイクロＰＥＴ／マイクロＣＴスキャンを示す。マウスにＩ−１２４放射性標識抗ＰＳＣＡミニボディを注射した。シート２のパネルは、異なるマウス体組織における、ミニボディおよび不活性化ミニボディの２１時間体内分布を示す表である。
【図１２−２】図１２（シート１のパネル）は、ＬＡＰＣ−９（ＰＳＣＡ陽性ヒト前立腺癌）およびＰＣ−３（ＰＳＣＡ陰性前立腺癌）異種移植片を有するヌードマウスの、同時記録マイクロＰＥＴ／マイクロＣＴスキャンを示す。マウスにＩ−１２４放射性標識抗ＰＳＣＡミニボディを注射した。シート２のパネルは、異なるマウス体組織における、ミニボディおよび不活性化ミニボディの２１時間体内分布を示す表である。
【図１３−１】図１３（シート１のパネル）は、Ｉ−１２４放射性標識抗ＰＳＣＡ野生型ｓｃＦｖ−Ｆｃ抗体を注射した後の、ＬＡＰＣ−９（ＰＳＣＡ陽性ヒト前立腺癌）異種移植片を有するヌードマウスの、同時記録マイクロＰＥＴ／マイクロＣＴスキャンを示す。シート２のパネルは、Ｉ−１２４放射性標識二重変異体抗ＰＳＣＡｓｃＦｖ−Ｆｃ抗体を注射した後の、ＬＡＰＣ−９（ＰＳＣＡ陽性ヒト前立腺癌）およびＰＣ−３（ＰＳＣＡ陰性前立腺癌）異種移植片を有するヌードマウスの、同時記録マイクロＰＥＴ／マイクロＣＴスキャンを示す。
【図１３−２】図１３（シート１のパネル）は、Ｉ−１２４放射性標識抗ＰＳＣＡ野生型ｓｃＦｖ−Ｆｃ抗体を注射した後の、ＬＡＰＣ−９（ＰＳＣＡ陽性ヒト前立腺癌）異種移植片を有するヌードマウスの、同時記録マイクロＰＥＴ／マイクロＣＴスキャンを示す。シート２のパネルは、Ｉ−１２４放射性標識二重変異体抗ＰＳＣＡｓｃＦｖ−Ｆｃ抗体を注射した後の、ＬＡＰＣ−９（ＰＳＣＡ陽性ヒト前立腺癌）およびＰＣ−３（ＰＳＣＡ陰性前立腺癌）異種移植片を有するヌードマウスの、同時記録マイクロＰＥＴ／マイクロＣＴスキャンを示す。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図７ａ
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図７ａ】
2009531324.tif 000001
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図７ｂ
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図７ｂ】
2009531324.tif 000002
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図８−１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図８−１】
2009531324.tif 000003
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図８−２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図８−２】
2009531324.tif 000004
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１０】
2009531324.tif 000005
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１１−１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１１−１】
2009531324.tif 000006
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１１−２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１１−２】
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