【手続補正書】
【提出日】平成25年5月17日(2013.5.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２と比較して胃における不安定性が増加しておりかつ耐熱性が増加している、フィターゼ活性を有する単離、合成または組換えポリペプチドであって、配列番号２のアミノ酸配列において以下から選ばれる一つの変異を有するアミノ酸配列を有する、前記ポリペプチド：A109V、A232P、A236H、A236T、A248L、A248T、A274F、A274I、A274L、A274T、A274V、A429P、C155Y、D139Y、E113P、F147Y、F194L、G171M、G171S、G257A、G257R、G353C、G395E、 G395I、G395L、G395Q、G395T、G67A、H263P、H272W、I107H、I107P、I108A、I108Q、I108R、I108S、I108Y、I174F、I174P、I427G、I427S、I427T、K151H、K151P、L126R、L146R、L146T、L150T、L150Y、L157C、L157P、L167S、L216T、L235I、L244S、L269I、L269T、L296T、L379S、L379V、L50W、M51A、M51G、M51L、N148K、N148M、N148R、N161K、N266P、N339E、N348K、N348W、P100A、P145L、P149L、P149N、P217D、P217G、P217L、P217S、P254S、P269L、P343E、P343I、P343L、P343N、P343R、P343V、Q137F、Q137L、Q137V、Q137Y、Q246W、Q247H、Q275H、Q381S、Q86H、S102A、S102Y、S173G、S173H、S173V、S197G、S211H、S218I、S218Y、S389H、S389V、T163P、T282H、T291V、T291W、T341D、T48F、T48H、T48I、T48K、T48L、T48M、T48V、T48W、T48Y、V162L、V162T、V191A、V422M、W265L、Y79H、Y79N、Y79SまたはY79W。
【請求項２】
胃における不安定性が増加しておりかつ耐熱性が増加している、フィターゼ活性を有する単離、合成または組換えポリペプチドであって、配列番号２のアミノ酸配列において以下から選ばれる変異の組合せを有するアミノ酸配列を有する、前記ポリペプチド：A109V、A232P、A236H、A236T、A248L、A248T、A274F、A274I、A274L、A274T、A274V、A429P、C155Y、D139Y、E113P、F147Y、F194L、G171M、G171S、G257A、G257R、G353C、G395E、 G395I、G395L、G395Q、G395T、G67A、H263P、H272W、I107H、I107P、I108A、I108Q、I108R、I108S、I108Y、I174F、I174P、I427G、I427S、I427T、K151H、K151P、L126R、L146R、L146T、L150T、L150Y、L157C、L157P、L167S、L216T、L235I、L244S、L269I、L269T、L296T、L379S、L379V、L50W、M51A、M51G、M51L、N148K、N148M、N148R、N161K、N266P、N339E、N348K、N348W、P100A、P145L、P149L、P149N、P217D、P217G、P217L、P217S、P254S、P269L、P343E、P343I、P343L、P343N、P343R、P343V、Q137F、Q137L、Q137V、Q137Y、Q246W、Q247H、Q275H、Q381S、Q86H、S102A、S102Y、S173G、S173H、S173V、S197G、S211H、S218I、S218Y、S389H、S389V、T163P、T282H、T291V、T291W、T341D、T48F、T48H、T48I、T48K、T48L、T48M、T48V、T48W、T48Y、V162L、V162T、V191A、V422M、W265L、Y79H、Y79N、Y79SまたはY79W。
【請求項３】
変異の組合せが以下から選ばれる請求項２記載のポリペプチド：
（ａ）配列番号：28（配列番号：27によってコードされる）の配列によって特定される変異、
（ｂ）配列番号：32（配列番号：31によってコードされる）の配列によって特定される変異、
（ｃ）配列番号：34（配列番号：33によってコードされる）の配列によって特定される変異、
（ｄ）配列番号：36（配列番号：35によってコードされる）の配列によって特定される変異、
（ｅ）配列番号：38（配列番号：37によってコードされる）の配列によって特定される変異、
（ｆ）配列番号：24（配列番号：23によってコードされる）の配列によって特定される変異、
（ｇ）配列番号：26（配列番号：25によってコードされる）の配列によって特定される変異、
（ｈ）配列番号：40（配列番号：39によってコードされる）の配列によって特定される変異、
（ｉ）配列番号：30（配列番号：29によってコードされる）の配列によって特定される変異、
（ｊ）A47F, T136H, N159V, C226D, V233W, T291V, およびT349Y、
（ｋ）A47F, T136H, N159V, C226D, V233W, A236T, およびT349Y、
（ｌ）A47F, T136H, L157 P, N159V, C226D, V233W, およびT349Y、
（ｍ）A47F, T136H, L157P, N159V, D164R, G179R, C226D, V233W, Q275V, およびT349Y、
（ｎ）A47F, T136H, N159V, D164R, G179R, C226D, V233W, S236T Q275V, およびT349Y、
（ｏ）A47F, T136H, N159V, D164R, G179R, C226D, V233W, Q275V, T291V, およびT349Y、
（ｐ）A47F, T136H, N159V, L192F, C226D, V233W,およびT349Y、
（ｑ）A47F, T136H, N159V, L192F, C226D, V233W, T291V, およびT349Y、
（ｒ）A47F, T136H, N159V, D164R, G179R, L192F, C226D, V233W, Q275V, およびT349Y、
（ｓ）A47F, T136H, N159V, D164R, G179R, C226D, V233W, Q275V, T291V, およびT349Y、
（ｔ）A47F, T136H, N159V, D164R, G179R, L192F, C226D, V233W, Q275V, T291V, およびT349Y、
（ｕ）A47F, T136H, N159V, L192F, C226D, V233W, A236T, およびT349Y、
（ｖ）A47F, T136H, N159V, C226D, V233W, A236T, T291V, およびT349Y、
（ｗ）A47F, T136H, N159V, L192F, C226D, V233W, A236T, T291V, およびT349Y、
（ｘ）A47F, T136H, N159V, D164R, G179R, L192F, C226D, V233W, A236T, Q275V, およびT349Y、
（ｙ）A47F, T136H, N159V, D164R, G179R, C226D, V233W, A236T, Q275V, T291V, およびT349Y、および、
（ｚ）A47F, T136H, N159V, D164R, G179R, L192F, C226D, V233W, A236T, Q275V, T291V, およびT349Y。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項記載のポリペプチドをコードする核酸を含む、単離、合成または組換え核酸。
【請求項５】
請求項４記載の核酸を含む、発現カセット、ベクター、クローニングベヒクル、発現ベクターまたはクローニングベクター。
【請求項６】
請求項４記載の核酸を含む、形質転換細胞または単離宿主細胞。
【請求項７】
請求項１〜３のいずれか１項記載のポリペプチドを含むタンパク質調製物であって、液体、スラリー、粉末、スプレー、懸濁物、凍結乾燥組成物/処方物、固体、ゲルタブ、ピル、インプラント、ゲル；または医薬処方物、食品または飼料またはそのサプリメントを含む、前記タンパク質調製物。
【請求項８】
請求項１〜３のいずれか１項記載のポリペプチドを含む、動物またはヒト用食品、飼料、食品サプリメントまたは飼料サプリメントであって、ペレット、ピル、錠剤、カプセル、ゲルタブ、スプレー、散剤、スラリー、懸濁物または液体形で製造されるか、またはポリマー被覆添加物を用いて製造されるか、または顆粒形で製造されるか、または噴霧乾燥によって製造される、前記食品、飼料、食品サプリメントまたは飼料サプリメント。
【請求項９】
細胞、小胞、リポソーム、フィルム、メンブレン、金属、樹脂、ポリマー、セラミック、ガラス、微小電極、グラファイト粒子、ビーズ、ゲル、プレート、アレイ、キャピラリー管、結晶、錠剤、ピル、カプセル、散剤、凝集物、表面、または多孔性構造物上にまたは前記の内部に固定化された請求項１〜３のいずれか１項記載のポリペプチド。
【請求項１０】
（a）請求項１〜３のいずれか１項記載のポリペプチドを提供する工程；
（b）イノシトール-ヘキサホスフェートまたはフィチン酸を含む組成物を提供する工程；および、
（c）（a）のポリペプチドを（b）の組成物と、前記ポリペプチドがイノシトール-ヘキサホスフェートを加水分解してイノシトールおよび無機ホスフェートを生成する条件下で接触させる工程、を含む、
イノシトール-ヘキサホスフェートをイノシトールおよび無機ホスフェートに加水分解する方法。
【請求項１１】
（ｉ）請求項１〜３のいずれか１項記載のポリペプチドを提供すること、を含む動物飼料または食品、または飼料サプリメントもしくは食品サプリメントを製造する方法；
（ii）ポリヌクレオチドが発現ベクターに含まれる、（ｉ）の方法；
（iii）ベクターが植物細胞で核酸を発現することができる発現制御配列を含む、（ii）の方法；
（iv）動物が単胃動物である、（ii）または（iii）の方法；
（v）動物が反芻動物である、(iv)の方法；
（vi）動物用飼料または食品、または飼料もしくは食品サプリメントがデリバリーマトリックス、ペレット、錠剤、ゲル、液体、スプレー、ひき割り穀物または粉の形である、（i）から（v）のいずれかの方法；
（vii）ポリペプチドがグリコシル化されるか、またはポリペプチドがグリコシル化されてペレット化条件で耐熱性または熱安定性を提供する（i）から（vi）のいずれかの方法；
（viii）デリバリーマトリックスが穀物胚芽およびポリペプチドを含む混合物をペレット化して粒子を生成することによって形成される（vi）または（vii）の方法；
（ix）ペレットが水蒸気の適用を含む条件下で製造される、（vi）〜（viii）のいずれかの方法；
（x）ペレットが5分間80℃を超える温度の適用を含む条件下で製造される、（vi）〜(ix)のいずれかの方法；または、
（xi）ペレットが、1ミリグラム当たり少なくとも350から900単位の比活性を含むポリペプチドを含む、（vi）〜（x）のいずれかの方法。
【請求項１２】
請求項１〜３のいずれか１項記載のポリペプチドを含む組成物。
【請求項１３】
（Ａ）（ａ）請求項４に記載の核酸を提供する工程；および
（ｂ）（a）の核酸で宿主細胞を形質転換し、続いて（a）の核酸を発現させ、それによって形質転換宿主細胞で組換えポリペプチドを生成する工程を含む、
請求項１〜３のいずれか１項記載のポリペプチドを製造する方法；または、
（Ｂ）（ｉ）宿主細胞が、エスケリキア、バシルス、ストレプトミセス、サルモネラ、シュードモナス、ラクトコッカス、およびスタヒロコッカス属内の任意の種の細菌細胞、大腸菌、ラクトコッカス・ラクチス、枯草菌、バシルス・セレウス、ネズミチフス菌、シュードモナス・フルオレセンス、
（ii）宿主細胞が、アスペルギルス属内の菌類細胞またはアスペルギルス・ニゲル、または、
（iii）宿主細胞が、ピキア、サッカロミセス、シゾサッカロミセスまたはシュワンニオミセス属内の任意の酵母細胞、またはキア・パストリス、サッカロミセス・セレビシアエ、またはシゾサッカロミセス・ポンベである、
（Ａ）の方法。
【請求項１４】
請求項１〜３のいずれか１項記載のポリペプチドを発酵、エタノール産生またはアルコール産生に使用する方法であって、前記ポリペプチドがエタノール収量を増加させる、カルシウム塩およびマグネシウム塩を含むスラッジを加水分解する、またはフィチン酸およびフィチン酸の塩を低下させるまたは除去する、前記方法。
【請求項１５】
配列番号２と比較して胃における不安定性が増加しかつ耐熱性が増加している、フィターゼ活性を有する単離、合成または組換えポリペプチドであって、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも95％の同一のアミノ酸配列を有し、請求項１〜３のいずれか１項に規定された変異を有する前記ポリペプチド。