【手続補正書】
【提出日】平成25年4月18日(2013.4.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
外部刺激を検出するためのインジケータ系であって、一般式
【化１】
2012526086.tif 000001
（式中：
ＸはＯ、ＮＨまたはＳであり、
ＬＧは不安定基であって、Ｘ−ＬＧ部分は、前記外部刺激の作用による変換に対して感受性であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、独立して、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、縮合アリールもしくは直鎖状に結合したアリール、縮合ヘテロアリールもしくは直鎖状に結合したヘテロアリール、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ホルミル、および任意に置換されたアミノ、カルボキシ、カルボニル、ヒドロキシおよびスルホニルからなる群より選択され、
Ｒ５は、水素またはＲ１２のいずれかであり、ここでＲ１２は、
【化２】
2012526086.tif 000002
（式中：
Ｚは、Ｏ、ＮＨまたはＳであり、
Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、独立して、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、縮合アリールもしくは直鎖状に結合したアリール、縮合ヘテロアリールもしくは直鎖状に結合したヘテロアリール、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ホルミル、ならびに任意に置換されたアミノ、カルボキシ、カルボニル、ヒドロキシおよびスルホニルからなる群より選択される）であるインジケータ化合物を含み、かつ、
Ｒ５が水素である場合、インジケータ系はさらに一般式
【化３】
2012526086.tif 000003
（式中：
ＲａおよびＲｂは独立して水素およびＣ１〜４アルキルから選択される）の受容体化合物を含む、インジケータ系。
【請求項２】
Ｒ５が水素であり、前記受容体化合物（Ｂ）が２−メトキシ−４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ベンズアルデヒドである、請求項１記載のインジケータ系。
【請求項３】
ＬＧが、ベータ−Ｄ−ガラクトピラノシド、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ（ＴＢＤＭＳ）、アセテート、コリンホスフェート、アルファ−Ｄ−グルコピラノシド、ベータ−Ｄ−グルクロニドナトリウム塩、Ｎ−アセチル−ベータ−Ｄ−ガラクトサミニドおよびベータ−Ｄ−グルコピラノシドからなる群より選択される、請求項１記載のインジケータ系。
【請求項４】
Ｒ１０が水素、メチル、メトキシ、フェニル、ＤＭＰ、ＣＦｕｒ、Ｆｕｒ、ＮＰｙｒ（ここで、
【化４】
2012526086.tif 000004
である）
からなる群より選択される、請求項１記載のインジケータ系。
【請求項５】
対象の領域における外部刺激を検出する方法であって、
対象の領域にインジケータ系を提供するステップ、および
前記外部刺激の結果として形成されるシグナロフォア種からのシグナルについてモニタリングするステップ
を含み、
前記インジケータ系が請求項１で定義した通りであり、Ｘ−ＬＧ部分が前記外部刺激の作用による変換に対して感受性であり、前記変換が、エノール部分（前記エノール部分において、ＸＨは、二重結合によってさらなる炭素原子に結合した炭素原子と結合している）を含むシグナロゲン種の形成をもたらし、前記シグナロフォア種が前記エノール部分と、カルボニル、イミノおよびチオカルボニルから選択される受容体部分との反応により形成されることを特徴とする方法。
【請求項６】
前記受容体部分がカルボニル部分である、請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記カルボニル部分が、一般式
【化５】
2012526086.tif 000005
（式中：
ＲａおよびＲｂは、独立して水素およびＣ１〜４アルキルから選択される）
の受容体化合物を添加することによって提供される、請求項６記載の方法。
【請求項８】
受容体化合物（Ｂ）が２−メトキシ−４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ベンズアルデヒドである、請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記受容体部分がインジケータ分子の一部である、請求項５記載の方法。
【請求項１０】
インジケータ系が請求項１で定義された通りであり、Ｒ５が水素である場合、シグナロフォア種は、構造式
【化６】
2012526086.tif 000006
を有する２−ベンジリデンインドリンであり、Ｒ５がＲ１２である場合、シグナロフォア種は、構造式
【化７】
2012526086.tif 000007
（式中、Ｒ１３はＯＨまたはＲ１０のいずれかである）を有する１０Ｈ−インドロ［１，２−ａ］インドールである、請求項５記載の方法。
【請求項１１】
酸素が枯渇した条件下で実施される、請求項５記載の方法。
【請求項１２】
一般式
【化８】
2012526086.tif 000008
（式中、
ＸはＯ、ＮＨまたはＳであり、
ＬＧは不安定基であって、Ｘ−ＬＧ部分は、前記外部刺激の作用による変換に対して感受性であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、独立して、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、縮合アリールもしくは直鎖状に結合したアリール、縮合ヘテロアリールもしくは直鎖状に結合したヘテロアリール、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ホルミル、および任意に置換されたアミノ、カルボキシ、カルボニル、ヒドロキシおよびスルホニルからなる群より選択され、
Ｒ５がＲ１２
【化９】
2012526086.tif 000009
（式中、
Ｚは、Ｏ、ＮＨまたはＳであり、
Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、独立して、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、縮合アリールもしくは直鎖状に結合したアリール、縮合ヘテロアリールもしくは直鎖状に結合したヘテロアリール、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ホルミル、ならびに任意に置換されたアミノ、カルボキシ、カルボニル、ヒドロキシおよびスルホニルからなる群より選択される）である）
のインジケータ化合物を調製する方法であって、
一般式
【化１０】
2012526086.tif 000010
のインドキシル化合物を一般式
【化１１】
2012526086.tif 000011
（式中、Ｑは、ヨード、ブロモ、トリフレートおよびトシレート、好ましくはヨードまたはブロモから選択される脱離基である）
のベンゼン誘導体でＮ−アリール化するステップを含むことを特徴とする方法。
【請求項１３】
構造式
【化１２】
2012526086.tif 000012
（式中、ＸはＯ、ＮＨまたはＳであり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１３は、独立して、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、縮合アリールもしくは直鎖状に結合したアリール、縮合ヘテロアリールもしくは直鎖状に結合したヘテロアリール、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ホルミル、ならびに任意に置換されたアミノ、カルボキシ、カルボニル、ヒドロキシおよびスルホニルからなる群より選択される）
の化合物であって、以下の化合物：
【化１３】
2012526086.tif 000013
2012526086.tif 000014
を除く化合物。
【請求項１４】
外部刺激を検出するためのインジケータ系における、構造式
【化１４】
2012526086.tif 000015
（式中、ＸはＯ、ＮＨまたはＳであり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１３は、独立して、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、縮合アリールもしくは直鎖状に結合したアリール、縮合ヘテロアリールもしくは直鎖状に結合したヘテロアリール、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ホルミル、ならびに任意に置換されたアミノ、カルボキシ、カルボニル、ヒドロキシおよびスルホニルからなる群より選択される）
の化合物の使用方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６６】
いくつかの式（Ｇ）の化合物が、２００９年４月１４日より入手可能になったとされるＲｏｇｎｅｓｓおよびＬａｒｏｃｋ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００９，５０，４００３−４００８）で言及されている。したがって、好ましい実施形態は、ＲｏｇｎｅｓｓおよびＬａｒｏｃｋの表２および３に記載されている化合物を除く構造式（Ｇ）の上記に定義された化合物を包含する（請求項１３を参照）。