【手続補正書】
【提出日】平成25年5月16日(2013.5.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＧＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＣＮＰ３７）（配列番号１４５）；
ＧＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｇｌｙ−ＣＮＰ５３）（配列番号１７９）；
ＰＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｐｒｏ−ＣＮＰ５３）（配列番号１８５）；
ＭＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｍｅｔ−ＣＮＰ５３）（配列番号１９０）；
ＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＣＮＰ−５３（Ｍ４８Ｎ）］（配列番号１８０）；
ＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−５２）（配列番号１４６）；
ＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−５１）（配列番号１４７）；
ＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−５０）（配列番号１４８）；
ＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４９）（配列番号１４９）；
ＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４８）（配列番号１５０）；
ＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４７）（配列番号１５１）；
ＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４６）（配列番号１５２）；
ＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４５）（配列番号１５３）；
ＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４４）（配列番号１５４）；
ＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４３）（配列番号１５５）；
ＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４２）（配列番号１５６）；
ＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４１）（配列番号１５７）；
ＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４０）（配列番号１５８）；
ＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３９）（配列番号１５９）；
ＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３８）（配列番号１６０）；
ＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３６）（配列番号１６１）；
ＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３５）（配列番号１６２）；
ＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３４）（配列番号１６３）；
ＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３３）（配列番号１６４）；
ＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３２）（配列番号１６５）；
ＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３１）（配列番号１６６）；
ＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３０）（配列番号１６７）；
ＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２９）（配列番号１６８）；
ＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２８）（配列番号１６９）；
ＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２７）（配列番号１７０）；
ＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２６）（配列番号１７１）；
ＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２５）（配列番号１７２）；
ＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２４）（配列番号１７３）；
ＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２３）（配列番号１７４）；
ＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２１）（配列番号１７５）；
ＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２０）（配列番号１７６）；
ＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−１９）（配列番号１７７）；
ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−１８）（配列番号１７８）；
ＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＣＮＰ３７（Ｍ３２Ｎ）］（配列番号１８２）；
ＰＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｐｒｏ−ＣＮＰ３７）（配列番号１８６）；
ＭＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｍｅｔ−ＣＮＰ３７）（配列番号１９２）；
ＧＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［Ｇｌｙ−ＣＮＰ３７（Ｍ３２Ｎ）］（配列番号１８１）；
ＭＧＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−ＣＮＰ３７）（配列番号１９１）；
ＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＨＳＡ−ＣＮＰ２７）（配列番号１４４）；
ＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＨＳＡ−ＣＮＰ２７（Ｍ２２Ｎ）］（配列番号１８３）；
ＰＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｐｒｏ−ＨＳＡ−ＣＮＰ２７）（配列番号１８８）；
ＭＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｍｅｔ−ＨＳＡ−ＣＮＰ２７）（配列番号１９３）；
ＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ，Ｍ２２Ｎ）］（配列番号１８４）；
ＰＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［Ｐｒｏ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］（配列番号１８９）；
ＭＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［Ｍｅｔ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］（配列番号１９４）；
ＰＥＧ１Ｋ−ＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＰＥＧ１Ｋ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ，Ｍ２２Ｎ）］（配列番号１８４）；
ＰＥＧ１Ｋ−ＰＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［ＰＥＧ１Ｋ−Ｐｒｏ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］（配列番号１８９）；
ＰＥＧ１Ｋ−ＭＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［ＰＥＧ１Ｋ−Ｍｅｔ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］（配列番号１９４）；
ＰＥＯ１２−ＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＰＥＯ１２−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ，Ｍ２２Ｎ）］（配列番号１８４）；
ＰＥＯ１２−ＰＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［ＰＥＯ１２−Ｐｒｏ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］（配列番号１８９）；
ＰＥＯ１２−ＭＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［ＰＥＯ１２−Ｍｅｔ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］（配列番号１９４）；
ＰＥＯ２４−ＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＰＥＯ２４−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ，Ｍ２２Ｎ）］（配列番号１８４）；
ＰＥＯ２４−ＰＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［ＰＥＯ２４−Ｐｒｏ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］（配列番号１８９）；および
ＰＥＯ２４−ＭＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［ＰＥＯ２４−Ｍｅｔ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］（配列番号１９４）
からなる群から選択されるＣ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）の変異体であって、該ＣＮＰ変異体は、疎水性酸および骨ターゲティングに有用な１個〜２０個のアミノ酸のアミノ酸配列から選択される部分に結合され得る、ＣＮＰ変異体。
【請求項２】
請求項１に記載のＣＮＰ変異体および薬学的に許容される賦形剤、キャリアまたは希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項３】
約４から約６までのｐＨを有するクエン酸／クエン酸緩衝液または酢酸／酢酸緩衝液を含む製剤から調製された凍結乾燥製剤である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記凍結乾燥製剤を、
（ａ）等張性調節剤、および／または増量剤、あるいは
（ｂ）抗酸化剤
をさらに含む製剤から調製する、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
軟骨無形成症、低軟骨形成症、低身長、低身長症、およびホモ接合性軟骨無形成症からなる群から選択される骨関連障害または骨格異形成症の治療のための請求項１に記載のＣＮＰ変異体または請求項２から４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記骨関連障害または骨格異形成症が軟骨無形成症である、請求項５に記載のＣＮＰ変異体または医薬組成物。
【請求項７】
高血圧、再狭窄、アテローム動脈硬化症、急性非代償性心不全、鬱血性心不全、心臓浮腫、腎性浮腫、肝性浮腫、急性腎不全および慢性腎不全からなる群から選択される血管平滑筋障害の治療のための請求項１に記載のＣＮＰ変異体または請求項２から４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
ＣＮＰ変異体の組換え産生のための方法であって、該方法は、
切断可能なペプチドもしくはタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドに連結された、ＣＮＰ変異体ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含む宿主細胞を、該第１および該第２のポリヌクレオチドによりコードされる融合ポリペプチドの発現をもたらす条件下で培地中で培養するステップ
を含み、該融合ポリペプチドは、該切断可能なペプチドもしくはタンパク質に直接的に連結されたか、またはリンカーを介して該切断可能なペプチドもしくはタンパク質に間接的に連結された該ＣＮＰ変異体ポリペプチドを含み、該ＣＮＰ変異体は、
Ｒ−ＣＮＰ２２（Ｋ４Ｒ）（類似体ＡＺ）（配列番号４１）；
ＥＲ−ＣＮＰ２２（Ｋ４Ｒ）（類似体ＢＡ）（配列番号３９）；
ＧＡＮＰＲ−ＣＮＰ２２（Ｋ４Ｒ）（類似体ＣＩ）（配列番号３７）；
ＧＡＮＱＱ−ＣＮＰ２２（Ｋ４Ｒ）（類似体ＣＨ）（配列番号６９）；
ＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡ−ＣＮＰ２２（類似体ＣＡ）（配列番号６１）；
ＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲ−ＣＮＰ２２（類似体ＣＢ）（配列番号６２）；
ＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲ−ＣＮＰ２２（類似体ＣＣ）（配列番号６３）；
ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳ−ＣＮＰ２２（類似体ＣＦ）（配列番号７９）；
ＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱ−ＣＮＰ２２（類似体ＣＥ）（配列番号８１）；
ＧＨＨＳＨＥＱＨＰＨＧＡＮＱＱ−ＣＮＰ２２（類似体ＣＱ）（配列番号７６）；
ＧＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＰＫ−ＣＮＰ２２（類似体ＣＳ）（配列番号７１）；
ＧＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＱＫ−ＣＮＰ２２（類似体ＣＴ）（配列番号１３０）；
ＧＡＨＨＰＨＥＨＤＴＨＧＡＮＱＱ−ＣＮＰ２２（類似体ＣＲ）（配列番号７７）；
ＧＱＴＨＳＳＧＴＱＳＧＡＮＱＱ−ＣＮＰ２２（Ｋ４Ｒ）（類似体ＣＮ）（配列番号８７）；
ＳＰＫＭＶＱＧＳＧ−ＣＮＰ１７−ＫＶＬＲＲＨ（類似体ＣＤ）（配列番号６８）；
ＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３４）；
ＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］（配列番号３６）；
ＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ，Ｍ２２Ｎ）］）（配列番号１８４）；
ＰＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［Ｐｒｏ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］）（配列番号１８９）；
ＭＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［Ｍｅｔ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］）（配列番号１９４）；
ＰＧＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＣＮＰ３７）（配列番号１４５）；
ＧＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｇｌｙ−ＣＮＰ５３）（配列番号１７９）；
ＰＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｐｒｏ−ＣＮＰ５３）（配列番号１８５）；
ＭＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｍｅｔ−ＣＮＰ５３）（配列番号１９０）；
ＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＣＮＰ−５３（Ｍ４８Ｎ）］（配列番号１８０）；
ＧＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｇｌｙ−ＣＮＰ３７）（配列番号７５）；
ＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＨＳＡ−ＣＮＰ２７）（配列番号１４４）；
ＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＨＳＡ−ＣＮＰ２７（Ｍ２２Ｎ）］）（配列番号１８３）；
ＰＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｐｒｏ−ＨＳＡ−ＣＮＰ２７））（配列番号１８８）；
ＭＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｍｅｔ−ＨＳＡ−ＣＮＰ２７））（配列番号１９３）；
ＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−５２）（配列番号１４６）；
ＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−５１）（配列番号１４７）；
ＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−５０）（配列番号１４８）；
ＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４９）（配列番号１４９）；
ＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４８）（配列番号１５０）；
ＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４７）（配列番号１５１）；
ＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４６）（配列番号１５２）；
ＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４５）（配列番号１５３）；
ＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４４）（配列番号１５４）；
ＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４３）（配列番号１５５）；
ＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４２）（配列番号１５６）；
ＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４１）（配列番号１５７）；
ＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４０）（配列番号１５８）；
ＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３９）（配列番号１５９）；
ＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３８）（配列番号１６０）；
ＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３６）（配列番号１６１）；
ＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３５）（配列番号１６２）；
ＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３４）（配列番号１６３）；
ＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３３）（配列番号１６４）；
ＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３２）（配列番号１６５）；
ＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３１）（配列番号１６６）；
ＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３０）（配列番号１６７）；
ＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２９）（配列番号１６８）；
ＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２８）（配列番号１６９）；
ＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２７）（配列番号１７０）；
ＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２６）（配列番号１７１）；
ＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２５）（配列番号１７２）；
ＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２４）（配列番号１７３）；
ＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２３）（配列番号１７４）；
ＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２１）（配列番号１７５）；
ＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２０）（配列番号１７６）；
ＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−１９）（配列番号１７７）；
ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−１８）（配列番号１７８）；
ＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＣＮＰ３７（Ｍ３２Ｎ）］（配列番号１８２）；
ＰＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｐｒｏ−ＣＮＰ３７）（配列番号１８６）；
ＭＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｍｅｔ−ＣＮＰ３７）（配列番号１９２）；
ＧＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｇｌｙ−ＣＮＰ３７）（配列番号７５）；
ＧＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［Ｇｌｙ−ＣＮＰ３７（Ｍ３２Ｎ）］（配列番号１８１）；
ＭＧＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−ＣＮＰ３７）（配列番号１９１）；
ＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＨＳＡ−ＣＮＰ２７（Ｍ２２Ｎ）］（配列番号１８３）；
ＰＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｐｒｏ−ＨＳＡ−ＣＮＰ２７）（配列番号１８８）；
ＭＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｍｅｔ−ＨＳＡ−ＣＮＰ２７）（配列番号１９３）；
ＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ，Ｍ２２Ｎ）］（配列番号１８４）；
ＰＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［Ｐｒｏ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］（配列番号１８９）；および
ＭＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［Ｍｅｔ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］（配列番号１９４）
からなる群から選択される、方法。
【請求項９】
前記宿主細胞が、前記切断可能なペプチドもしくはタンパク質をコードする前記ポリヌクレオチドに連結された、前記ＣＮＰ変異体ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドを含む発現ベクターにより形質転換されている、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記切断可能なペプチドもしくはタンパク質がヒスチジンタグ、ヒト転写因子ＴＡＦ１２、ＴＡＦ１２断片、ＴＡＦ１２ヒストン折りたたみドメイン、ＴＡＦ１２の突然変異体およびその断片、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ）、ＴＡＦ１２（Ｄ／Ｅ）、ＴＡＦ１２（４Ｄ／４Ｅ）、ＴＡＦ１２（６Ｄ／６Ｅ）、ＴＡＦ１２（１０Ｄ／１０Ｅ）、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ＆Ｄ／Ｅ）、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ＆４Ｄ／４Ｅ）、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ＆６Ｄ／６Ｅ）、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ＆１０Ｄ／１０Ｅ）、ケトステロイドイソメラーゼ、マルトース結合タンパク質、β−ガラクトシダーゼ、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、チオレドキシン、キチン結合ドメイン、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−２突然変異体、ＢＭＰ−２（Ｃ／Ａ）ならびにそれらの突然変異体および断片からなる群から選択される、請求項８および９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記宿主細胞が細菌宿主細胞である、請求項８から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記融合ポリペプチドを可溶性タンパク質または封入体として発現させる、請求項８から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記発現した融合ポリペプチドを前記宿主細胞または培地から単離するステップをさらに含む、請求項８から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記単離した融合ポリペプチドを、ギ酸、臭化シアン（ＣＮＢｒ）、ヒドロキシルアミン、自己切断タンパク質、Ｘａ因子、エンテロキナーゼ、ＰｒｏＴＥＶおよびＳＵＭＯプロテアーゼからなる群から選択される切断剤と接触させるステップをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３４）；
ＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ，Ｍ２２Ｎ）］；
ＰＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［Ｐｒｏ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］；
ＭＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［Ｍｅｔ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］；
ＧＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｇｌｙ−ＣＮＰ５３）（配列番号１７９）；
ＰＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｐｒｏ−ＣＮＰ５３）（配列番号１８５）；
ＭＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｍｅｔ−ＣＮＰ５３）（配列番号１９０）；
ＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＣＮＰ−５３（Ｍ４８Ｎ）］（配列番号１８０）；
ＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＣＮＰ３７（Ｍ３２Ｎ）］（配列番号１８２）；
ＰＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｐｒｏ−ＣＮＰ３７）（配列番号１８６）；
ＭＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｍｅｔ−ＣＮＰ３７）（配列番号１９２）；
ＧＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［Ｇｌｙ−ＣＮＰ３７（Ｍ３２Ｎ）］（配列番号１８１）；
ＰＧＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＣＮＰ３７）（配列番号１４５）；
ＭＧＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−ＣＮＰ３７）（配列番号１９１）；
ＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＨＳＡ−ＣＮＰ２７）（配列番号１４４）；
ＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＨＳＡ−ＣＮＰ２７（Ｍ２２Ｎ）］（配列番号１８３）；
ＰＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｐｒｏ−ＨＳＡ−ＣＮＰ２７）（配列番号１８８）；および
ＭＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｍｅｔ−ＨＳＡ−ＣＮＰ２７）（配列番号１９３）
からなる群から選択される、請求項８から１４のいずれか一項に記載の方法により産生されるＣＮＰ変異体。
【請求項１６】
発現ベクターを含む宿主細胞であって、該ベクターは、切断可能なペプチドもしくはタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドに連結された、ＣＮＰ変異体ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含み、該ＣＮＰ変異体は、
ＧＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｇｌｙ−ＣＮＰ５３）（配列番号１７９）；
ＰＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｐｒｏ−ＣＮＰ５３）（配列番号１８５）；
ＭＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｍｅｔ−ＣＮＰ５３）（配列番号１９０）
ＤＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＣＮＰ−５３（Ｍ４８Ｎ）］（配列番号１８０）；
ＬＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−５２）（配列番号１４６）；
ＲＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−５１）（配列番号１４７）；
ＶＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−５０）（配列番号１４８）；
ＤＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４９）（配列番号１４９）；
ＴＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４８）（配列番号１５０）；
ＫＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４７）（配列番号１５１）；
ＳＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４６）（配列番号１５２）；
ＲＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４５）（配列番号１５３）；
ＡＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４４）（配列番号１５４）；
ＡＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４３）（配列番号１５５）；
ＷＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４２）（配列番号１５６）；
ＡＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４１）（配列番号１５７）；
ＲＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−４０）（配列番号１５８）；
ＬＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３９）（配列番号１５９）；
ＬＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３８）（配列番号１６０）；
ＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３７）（配列番号６０）；
ＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３６）（配列番号１６１）；
ＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３５）（配列番号１６２）；
ＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３４）（配列番号１６３）；
ＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３３）（配列番号１６４）；
ＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３２）（配列番号１６５）；
ＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３１）（配列番号１６６）；
ＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−３０）（配列番号１６７）；
ＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２９）（配列番号１６８）；
ＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２８）（配列番号１６９）；
ＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２７）（配列番号１７０）；
ＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２６）（配列番号１７１）；
ＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２５）（配列番号１７２）；
ＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２４）（配列番号１７３）；
ＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２３）（配列番号１７４）；
ＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２１）（配列番号１７５）；
ＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−２０）（配列番号１７６）；
ＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−１９）（配列番号１７７）；
ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＣＮＰ−１８）（配列番号１７８）；
ＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＣＮＰ３７（Ｍ３２Ｎ）］（配列番号１８２）；
ＰＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｐｒｏ−ＣＮＰ３７）（配列番号１８６）；
ＭＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｍｅｔ−ＣＮＰ３７）（配列番号１９２）；
ＧＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｇｌｙ−ＣＮＰ３７）（配列番号７５）；
ＧＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［Ｇｌｙ−ＣＮＰ３７（Ｍ３２Ｎ）］）（配列番号１８１）；
ＰＧＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＣＮＰ３７））（配列番号１４５）；
ＭＧＱＥＨＰＮＡＲＫＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−ＣＮＰ３７））（配列番号１９１）；
ＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（ＨＳＡ−ＣＮＰ２７）（配列番号１４４）；
ＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＨＳＡ−ＣＮＰ２７（Ｍ２２Ｎ））（配列番号１８３）］；
ＰＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｐｒｏ−ＨＳＡ−ＣＮＰ２７））（配列番号１８８）；
ＭＧＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＧＡＮＫＫＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（Ｍｅｔ−ＨＳＡ−ＣＮＰ２７））（配列番号１９３）；
ＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］（配列番号３６）；
ＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ，Ｍ２２Ｎ）］）（配列番号１８４）；
ＰＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［Ｐｒｏ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］）（配列番号１８９）；
ＭＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［Ｍｅｔ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］）（配列番号１９４）；
ＰＥＧ１Ｋ−ＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［ＰＥＧ１Ｋ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］（配列番号３６）；
ＰＥＧ１Ｋ−ＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＰＥＧ１Ｋ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ，Ｍ２２Ｎ）］）（配列番号１８４）；
ＰＥＧ１Ｋ−ＰＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［ＰＥＧ１Ｋ−Ｐｒｏ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］）（配列番号１８９）；
ＰＥＧ１Ｋ−ＭＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［ＰＥＧ１Ｋ−Ｍｅｔ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］）（配列番号１９４）；
ＰＥＯ１２−ＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［ＰＥＯ１２−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］（配列番号３６）；
ＰＥＯ１２−ＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＰＥＯ１２−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ，Ｍ２２Ｎ）］）（配列番号１８４）；
ＰＥＯ１２−ＰＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［ＰＥＯ１２−Ｐｒｏ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］）（配列番号１８９）；
ＰＥＯ１２−ＭＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［ＰＥＯ１２−Ｍｅｔ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］）（配列番号１９４）；
ＰＥＯ２４−ＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［ＰＥＯ２４−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］（配列番号３６）；
ＰＥＯ２４−ＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＮＳＧＬＧＣ［ＰＥＯ２４−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ，Ｍ２２Ｎ）］）（配列番号１８４）；
ＰＥＯ２４−ＰＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［ＰＥＯ２４−Ｐｒｏ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］）（配列番号１８９）；および
ＰＥＯ２４−ＭＧＡＮＲＲＧＬＳＲＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［ＰＥＯ２４−Ｍｅｔ−ＣＮＰ２７（Ｋ４，５，９Ｒ）］）（配列番号１９４）
からなる群から選択される、宿主細胞。
【請求項１７】
前記宿主細胞は、前記第１および前記第２のポリヌクレオチドによりコードされる融合ポリペプチドの発現に適する条件下で培地中で培養され、ここで、該融合ポリペプチドは、前記切断可能なペプチドもしくはタンパク質に直接的に連結されたか、またはリンカーを介して該切断可能なペプチドもしくはタンパク質に間接的に連結された前記ＣＮＰ変異体ポリペプチドを含む、請求項１６に記載の宿主細胞。
【請求項１８】
ＣＮＰ反応性の状態もしくは障害を治療するための組成物であって、
該組成物は、ＣＮＰペプチドまたは変異体を含み、
該組成物は被験体に投与されて、該被験体における少なくとも１つの骨関連バイオマーカーまたは軟骨関連バイオマーカーのレベルがモニターされることを特徴とし、
該少なくとも１つの骨関連バイオマーカーまたは軟骨関連バイオマーカーのレベルの増加が該被験体または該状態もしくは障害に対する該ＣＮＰペプチドまたは変異体の治療効果を示すことを特徴とし、
該ＣＮＰ変異体は請求項１に記載のものである、組成物。
【請求項１９】
前記少なくとも１つの骨関連バイオマーカーまたは軟骨関連バイオマーカーがＣＮＰ、ｃＧＭＰ、ＩＩ型コラーゲンのプロペプチドおよびその断片、ＩＩ型コラーゲンおよびその断片、オステオカルシン、増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）、Ｉ型プロコラーゲンのプロペプチド（ＰＩＮＰ）およびその断片、Ｉ型コラーゲンおよびその断片、アグリカンコンドロイチン硫酸ならびにアルカリホスファターゼからなる群から選択される、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
長骨の成長を必要とする被験体において、長骨の成長を増加させるための組成物であって、該組成物は、請求項１に記載のＣＮＰ変異体を含み、ここで、長骨の成長が増加される、組成物。
【請求項２１】
長骨の成長の増加、または軟骨無形成症、低軟骨形成症、低身長、低身長症、もしくはホモ接合性軟骨無形成症の治療を必要とする被験体において、長骨の成長を増加させるか、または、軟骨無形成症、低軟骨形成症、低身長、低身長症、もしくはホモ接合性軟骨無形成症を治療するための組成物であって、該組成物は、請求項１に記載のＣＮＰ変異体を含む、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９８】
特定の実施形態において、宿主細胞は、ポリヌクレオチドによりコードされる融合ポリペプチドの発現に適する条件下で培地中で培養することが意図される。１つの実施形態において、融合ポリペプチドは、可溶性タンパク質として、または封入体として発現する。関連実施形態において、発現した融合ポリペプチドを宿主細胞または培地から単離する。また他の実施形態において、本明細書で記載するように、単離した融合ポリペプチドを切断剤と接触させる。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
【化２４】
2012527244.tif 000001
【化２５】
2012527244.tif 000002
【化２６】
2012527244.tif 000003
【化２７】
2012527244.tif 000004
からなる群から選択されるＣ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）の変異体。
（項目２）
ＣＮＰ変異体および薬学的に許容される賦形剤、キャリアまたは希釈剤を含む医薬組成物。
（項目３）
凍結乾燥製剤である、項目２に記載の組成物。
（項目４）
前記凍結乾燥製剤を、約４から約６までのｐＨを有する緩衝液を含む製剤から調製する、項目３に記載の組成物。
（項目５）
前記緩衝液がクエン酸／クエン酸塩緩衝液または酢酸／酢酸塩緩衝液である、項目４に記載の組成物。
（項目６）
前記凍結乾燥製剤を、等張性調節剤および／または増量剤をさらに含む製剤から調製する、項目４または５に記載の組成物。
（項目７）
前記等張性調節剤および／または前記増量剤がマンニトール、スクロース、ソルビトールおよびそれらの組合せからなる群から選択される、項目６に記載の組成物。
（項目８）
前記凍結乾燥製剤を、抗酸化剤をさらに含む製剤から調製する、項目４から７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目９）
前記抗酸化剤がメチオニン、アスコルビン酸、アスコルビン酸の塩の形態、チオグリセロールおよびそれらの組合せからなる群から選択される、項目８に記載の組成物。
（項目１０）
前記ＣＮＰ変異体が項目１に記載のＣＮＰ変異体である、項目２から９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１１）
骨関節症、低リン酸血症性くる病、軟骨無形成症、低軟骨形成症、低身長、低身長症、骨軟骨異形成症、致死性異形成症、骨形成不全症、軟骨無発生症、点状軟骨異形成症、ホモ接合性軟骨無形成症、点状軟骨異形成症、弯曲肢異形成症、先天性致死性低リン酸血症、周生期致死型骨形成不全症、短肋骨多指症候群、低軟骨形成症、近節短縮型点状軟骨異形成症、ジャンセン型骨幹端異形成症、先天性脊椎骨端異形成症、骨形成不全症、捻曲性骨異形成症、先天性大腿骨短縮症、ランガー型中間肢異形成症、ニーバーゲルト型中間肢異形成症、ロビノウ症候群、ラインハルド症候群、先端異骨症、末梢性骨形成不全症、クニースト異形成症、線維軟骨形成、ロバーツ症候群、遠位中間肢異形成症、小肢症、モルキオ症候群、クニースト症候群、変容性骨異形成症および脊椎骨端骨幹端異形成症からなる群から選択される骨関連障害または骨格異形成症の治療で使用するための項目１に記載のＣＮＰ変異体または項目２から１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目１２）
前記骨関連障害または骨格異形成症が軟骨無形成症である、項目１１に記載のＣＮＰ変異体または医薬組成物。
（項目１３）
高血圧、再狭窄、アテローム動脈硬化症、急性非代償性心不全、鬱血性心不全、心臓浮腫、腎性浮腫、肝性浮腫、急性腎不全および慢性腎不全からなる群から選択される血管平滑筋障害の治療で使用するための項目１に記載のＣＮＰ変異体または項目２から１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目１４）
切断可能なペプチドもしくはタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドに連結されたＣＮＰ変異体ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含む宿主細胞を、該第１および該第２のポリヌクレオチドによりコードされる融合ポリペプチドの発現をもたらす条件下で培地で培養するステップを含み、該融合ポリペプチドが該切断可能なペプチドもしくはタンパク質に直接的に連結された、またはリンカーを介して該切断可能なペプチドもしくはタンパク質に間接的に連結された該ＣＮＰ変異体ポリペプチドを含む、ＣＮＰ変異体の組換え産生の方法。
（項目１５）
前記宿主細胞が、前記切断可能なペプチドもしくはタンパク質をコードする前記第２のポリヌクレオチドに連結された前記ＣＮＰ変異体ポリペプチドをコードする前記第１のポリヌクレオチドを含む発現ベクターにより形質転換されている、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
イソプロピルβ−Ｄ−１−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）誘導ベクターを用いて、前記融合ポリペプチドをコードする前記第１および前記第２のポリヌクレオチドの発現を増大させる、項目１４または１５に記載の方法。
（項目１７）
前記宿主細胞を約０．４ｍＭ〜約１．５ｍＭ  ＩＰＴＧの存在下で約２０℃〜約４０℃の温度で一定の期間培養する、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記ベクターがプラスミドである、項目１５から１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記プラスミドがｐＪｅｘｐｒｅｓｓ、ｐＪｅｘｐｒｅｓｓ４０１、ｐＪｅｘｐｒｅｓｓ４０４、ｐＥＴ−１５ｂ、ｐＥＴ−２１ａ、ｐＥＴ−２２ｂ、ｐＥＴ−３１ｂ、ｐＥＴ−３２ａ、ｐＥＴ−４１ａ、ｐＭＡＬ、ｐＭＡＬ−ｃ２Ｘ、ｐＱＥ−３０、ｐＥＴ−ＳＵＭＯおよびｐＴＹＢ１１からなる群から選択される、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記切断可能なペプチドもしくはタンパク質がヒスチジンタグ、ヒト転写因子ＴＡＦ１２、ＴＡＦ１２断片、ＴＡＦ１２ヒストン折りたたみドメイン、ＴＡＦ１２の突然変異体およびその断片、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ）、ＴＡＦ１２（Ｄ／Ｅ）、ＴＡＦ１２（４Ｄ／４Ｅ）、ＴＡＦ１２（６Ｄ／６Ｅ）、ＴＡＦ１２（１０Ｄ／１０Ｅ）、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ＆Ｄ／Ｅ）、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ＆４Ｄ／４Ｅ）、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ＆６Ｄ／６Ｅ）、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ＆１０Ｄ／１０Ｅ）、ケトステロイドイソメラーゼ、マルトース結合タンパク質、β−ガラクトシダーゼ、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、チオレドキシン、キチン結合ドメイン、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−２突然変異体、ＢＭＰ−２（Ｃ／Ａ）ならびにそれらの突然変異体および断片からなる群から選択される、項目１４から１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記切断可能なペプチドもしくはタンパク質がヒト転写因子ＴＡＦ１２、ＴＡＦ１２断片、ＴＡＦ１２ヒストン折りたたみドメイン、ＴＡＦ１２の突然変異体およびその断片、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ）、ＴＡＦ１２（Ｄ／Ｅ）、ＴＡＦ１２（４Ｄ／４Ｅ）、ＴＡＦ１２（６Ｄ／６Ｅ）、ＴＡＦ１２（１０Ｄ／１０Ｅ）、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ＆Ｄ／Ｅ）、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ＆４Ｄ／４Ｅ）、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ＆６Ｄ／６Ｅ）およびＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ＆１０Ｄ／１０Ｅ）からなる群から選択される、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記切断可能なペプチドもしくはタンパク質が切断剤により切断される、項目１４から２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記切断剤がギ酸、臭化シアン（ＣＮＢｒ）、ヒドロキシルアミン、自己切断タンパク質、Ｘａ因子、エンテロキナーゼ、ＰｒｏＴＥＶおよびＳＵＭＯプロテアーゼからなる群から選択される、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記宿主細胞が細菌宿主細胞である、項目１４から２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記細菌宿主細胞がＥ．ｃｏｌｉである、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記Ｅ．ｃｏｌｉ細胞がＢＬ２１、ＢＬ２１（ＤＥ３）、ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ、ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＧｒｏ７、ＡｒｃｔｉｃＥｘｐｒｅｓｓ（ＤＥ３）、Ｃ４１（ＤＥ３）、Ｃ４３（ＤＥ３）、ＯｒｉｇａｍｉＢ（ＤＥ３）、ＯｒｉｇａｍｉＢ（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ、ＫＲＸおよびＴｕｎｅｒ（ＤＥ３）からなる群から選択される、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記Ｅ．ｃｏｌｉ細胞がＢＬ２１（ＤＥ３）である、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記融合ポリペプチドを可溶性タンパク質または封入体として発現させる、項目１４から２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記発現した融合ポリペプチドを前記宿主細胞または培地から単離するステップをさらに含む、項目１４から２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記単離した融合ポリペプチドを、ギ酸、臭化シアン（ＣＮＢｒ）、ヒドロキシルアミン、自己切断タンパク質、Ｘａ因子、エンテロキナーゼ、ＰｒｏＴＥＶおよびＳＵＭＯプロテアーゼからなる群から選択される切断剤と接触させるステップをさらに含む、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記切断剤がギ酸である、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記単離した融合ポリペプチドを切断剤と接触させる前記ステップを約１％〜約１０％ギ酸の存在下で約５０℃〜約７０℃の温度で行う、項目３０または３１に記載の方法。
（項目３３）
ギ酸の存在下で接触させる前記ステップを約５時間から約３６時間の期間にわたり行う、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
【化２８】
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【化２９】
2012527244.tif 000006
【化３０】
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からなる群から選択されるＣＮＰ変異体を産生させる、項目１４から３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
ＣＮＰ−２２またはＣＮＰ−５３を産生しない、項目１４から３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
【化３１】
2012527244.tif 000008
【化３２】
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からなる群から選択される、項目１４から３３のいずれか一項に記載の方法により産生されるＣＮＰ変異体。
（項目３７）
切断可能なペプチドもしくはタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドに連結されたＣＮＰ変異体ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む宿主細胞。
（項目３８）
前記切断可能なペプチドもしくはタンパク質がヒスチジンタグ、ヒト転写因子ＴＡＦ１２、ＴＡＦ１２断片、ＴＡＦ１２ヒストン折りたたみドメイン、ＴＡＦ１２の突然変異体およびその断片、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ）、ＴＡＦ１２（Ｄ／Ｅ）、ＴＡＦ１２（４Ｄ／４Ｅ）、ＴＡＦ１２（６Ｄ／６Ｅ）、ＴＡＦ１２（１０Ｄ／１０Ｅ）、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ＆Ｄ／Ｅ）、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ＆４Ｄ／４Ｅ）、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ＆６Ｄ／６Ｅ）、ＴＡＦ１２（Ｃ／Ａ＆１０Ｄ／１０Ｅ）、ケトステロイドイソメラーゼ、マルトース結合タンパク質、β−ガラクトシダーゼ、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、チオレドキシン、キチン結合ドメイン、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−２突然変異体、ＢＭＰ−２（Ｃ／Ａ）ならびにそれらの突然変異体および断片からなる群から選択される、項目３７に記載の宿主細胞。
（項目３９）
前記宿主細胞が細菌宿主細胞である、項目３７または３８に記載の宿主細胞。
（項目４０）
前記細菌宿主細胞がＥ．ｃｏｌｉである、項目３９に記載の宿主細胞。
（項目４１）
前記Ｅ．ｃｏｌｉ細胞がＢＬ２１、ＢＬ２１（ＤＥ３）、ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ、ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＧｒｏ７、ＡｒｃｔｉｃＥｘｐｒｅｓｓ（ＤＥ３）、Ｃ４１（ＤＥ３）、Ｃ４３（ＤＥ３）、ＯｒｉｇａｍｉＢ（ＤＥ３）、ＯｒｉｇａｍｉＢ（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ、ＫＲＸおよびＴｕｎｅｒ（ＤＥ３）からなる群から選択される、項目４０に記載の宿主細胞。
（項目４２）
前記Ｅ．ｃｏｌｉ細胞がＢＬ２１（ＤＥ３）である、項目４１に記載の宿主細胞。
（項目４３）
前記ベクターがプラスミドである、項目３７から４２のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目４４）
前記プラスミドがｐＪｅｘｐｒｅｓｓ、ｐＪｅｘｐｒｅｓｓ４０１、ｐＪｅｘｐｒｅｓｓ４０４、ｐＥＴ−１５ｂ、ｐＥＴ−２１ａ、ｐＥＴ−２２ｂ、ｐＥＴ−３１ｂ、ｐＥＴ−３２ａ、ｐＥＴ−４１ａ、ｐＭＡＬ、ｐＭＡＬ−ｃ２Ｘ、ｐＱＥ−３０、ｐＥＴ−ＳＵＭＯおよびｐＴＹＢ１１からなる群から選択される、項目４３に記載の宿主細胞。
（項目４５）
細胞培養前に前記ベクターで形質転換される、項目３７から４４のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目４６）
前記切断可能なペプチドもしくはタンパク質に直接的に連結された、またはリンカーを介して該切断可能なペプチドもしくはタンパク質に間接的に連結された前記ＣＮＰ変異体ポリペプチドを含み、前記第１および前記第２のポリヌクレオチドによりコードされる融合ポリペプチドの発現に適する条件下で培地中で培養される、項目３７から４５のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目４７）
前記融合ポリペプチドが可溶性タンパク質または封入体として発現される、項目４６に記載の宿主細胞。
（項目４８）
前記宿主細胞または培地から前記発現した融合ポリペプチドが単離される、項目４６または４７に記載の宿主細胞。
（項目４９）
前記単離した融合ポリペプチドが、ギ酸、臭化シアン（ＣＮＢｒ）、ヒドロキシルアミン、自己切断タンパク質、Ｘａ因子、エンテロキナーゼ、ＰｒｏＴＥＶおよびＳＵＭＯプロテアーゼからなる群から選択される切断剤と接触される、項目４８に記載の宿主細胞。
（項目５０）
前記ＣＮＰ変異体ポリペプチドがＣＮＰ−２２でもＣＮＰ−５３でもない、項目３７から４９のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目５１）
ＣＮＰペプチドまたは変異体が投与されている被験体からの生物学的試料中の少なくとも１つの骨関連バイオマーカーまたは軟骨関連バイオマーカーのレベルをアッセイするステップを含む、被験体における少なくとも１つの骨関連バイオマーカーまたは軟骨関連バイオマーカーのレベルに対するＣＮＰペプチドまたは変異体の効果を評価する方法。
（項目５２）
前記少なくとも１つの骨関連バイオマーカーまたは軟骨関連バイオマーカーのレベルをアッセイする前に前記ＣＮＰペプチドまたは変異体を前記被験体に投与するステップをさらに含む、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
ＣＮＰ反応性の状態もしくは障害を治療する方法であって、
ＣＮＰペプチドまたは変異体を被験体に投与するステップと、
該被験体における少なくとも１つの骨関連バイオマーカーまたは軟骨関連バイオマーカーのレベルをモニターするステップとを含み、
該少なくとも１つの骨関連バイオマーカーまたは軟骨関連バイオマーカーのレベルの増加が該被験体または該状態もしくは障害に対する該ＣＮＰペプチドまたは変異体の治療効果を示す、方法。
（項目５４）
前記ＣＮＰペプチドまたは変異体の投与の量または頻度を調節するステップをさらに含み、
ｉ）前記少なくとも１つの骨関連バイオマーカーまたは軟骨関連バイオマーカーのレベルが標的レベルを下回っている場合、前記ＣＮＰペプチドまたは変異体の投与の量または頻度を増加させ、
ｉｉ）該少なくとも１つの骨関連バイオマーカーまたは軟骨関連バイオマーカーのレベルが標的レベルを上回っている場合、該ＣＮＰペプチドまたは変異体の投与の量または頻度を減少させる、
項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記少なくとも１つの骨関連バイオマーカーまたは軟骨関連バイオマーカーがＣＮＰ、ｃＧＭＰ、ＩＩ型コラーゲンのプロペプチドおよびその断片、ＩＩ型コラーゲンおよびその断片、オステオカルシン、増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）、Ｉ型プロコラーゲンのプロペプチド（ＰＩＮＰ）およびその断片、Ｉ型コラーゲンおよびその断片、アグリカンコンドロイチン硫酸ならびにアルカリホスファターゼからなる群から選択される、項目５１から５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
前記ＣＮＰペプチドまたは変異体が
【化３３】
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【化３４】
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【化３５】
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【化３６】
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【化３７】
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からなる群から選択される、項目５１から５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５７）
前記ＣＮＰペプチドまたは変異体がＣＮＰ−２２でもＣＮＰ−５３でもない、項目５６に記載の方法。