【手続補正書】
【提出日】平成25年6月1日(2013.6.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
1,4-ブタンジオール(BDO)を生成するのに十分な量で発現されるBDO経路酵素をコードする少なくとも1つの外因性核酸を含む、BDO経路を有する非天然微生物体であって、外因性4-ヒドロキシブタナールレダクターゼの発現;外因性スクシニル-CoAシンテターゼの発現;外因性アルファ-ケトグルタレートデカルボキシラーゼの発現、外因性スクシネートセミアルデヒドデヒドロゲナーゼ及び4-ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ並びに場合により4-ヒドロキシブチリル-CoA/アセチル-CoAトランスフェラーゼの発現;外因性ブチレートキナーゼ及びホスホトランスブチリラーゼの発現;外因性4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼの発現;外因性ピルベートデヒドロゲナーゼの発現;好気性呼吸器制御調節系をコードする遺伝子の破壊;外因性NADH非感受性シトレートシンターゼの発現;及び外因性ホスホエノールピルベートカルボキシキナーゼの発現から選択される１以上の遺伝子改変を組み込むように遺伝子改変されている、前記非天然微生物体。
【請求項２】
a)前記スクシニル-CoAシンテターゼが大腸菌sucCD遺伝子によってコードされるか；
b)前記アルファ-ケトグルタレートデカルボキシラーゼがウシ結核菌sucA遺伝子によってコードされるか；
c)前記スクシネートセミアルデヒドデヒドロゲナーゼ(CoA-依存性)、4-ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ及び4-ヒドロキシブチリル-CoA/アセチル-CoAトランスフェラーゼがポルフィロモナス・ギンギバリスW83遺伝子によってコードされるか；
d)前記ブチレートキナーゼ及びホスホトランスブチリラーゼがクロストリジウム・アセトブチリクムbuk1及びptb遺伝子によってコードされるか；
e)前記4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼがクロストリジウム・ベイジェリンキーald遺伝子によってコードされるか；
f)前記4-ヒドロキシブタナールレダクターゼがゲオバシルス・サーモグルコシダシウスadh1遺伝子によってコードされるか；
g)前記外因性ピルベートデヒドロゲナーゼがクレブシエラ・ニューモニアlpdA遺伝子によってコードされるか；
h)NADH非感受性シトレートシンターゼがgltAによってコードされるか；
i)前記NADH非感受性シトレートシンターゼがgltAのR163L突然変異体によってコードされるか；又は
j)前記ホスホエノールピルベートカルボキシキナーゼがヘモフィルス・インフルエンザホスホエノールピルベートカルボキシキナーゼ遺伝子によってコードされる、
請求項1記載の非天然微生物体。
【請求項３】
前記外因性ピルベートデヒドロゲナーゼがNADH非感受性である、請求項1記載の非天然微生物体。
【請求項４】
前記微生物体のピルベートデヒドロゲナーゼサブユニット遺伝子の1つ以上が、ピルベートホルメートリアーゼプロモーターの制御下にある、請求項1記載の非天然微生物体。
【請求項５】
前記嫌気性呼吸器制御調節系の破壊がarcA遺伝子の破壊である、請求項1記載の非天然微生物体。
【請求項６】
マレートデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子の破壊をさらに含む、請求項1記載の非天然微生物体。
【請求項７】
前記外因的に発現される酵素をコードする1つ以上の遺伝子が宿主生物体のfimD座に組み込まれている、請求項1記載の非天然微生物体。
【請求項８】
前記生物体が非ホスホトランスフェラーゼスクロース取込み系を発現する、請求項1記載の非天然微生物体。
【請求項９】
前記生物体が、内因性ラクテートデヒドロゲナーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ及びピルベートホルメートリアーゼの破壊をさらに含む、請求項1記載の非天然微生物体。
【請求項１０】
a)前記BDO経路が、4-ヒドロキシブタノエートデヒドロゲナーゼ、スクシニル-CoAシンテターゼ、CoA依存性コハク酸セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ、4-ヒドロキシブチレート:CoAトランスフェラーゼ、4-ブチレートキナーゼ、ホスホトランスブチリラーゼ、アルファ-ケトグルタレートデカルボキシラーゼ、アルデヒドデヒドロゲナーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ又はアルデヒド/アルコールデヒドロゲナーゼを含むか；
b)前記BDO経路が、4-アミノブチレートCoAトランスフェラーゼ、4-アミノブチリル-CoAヒドロラーゼ、4-アミノブチレート-CoAリガーゼ、4-アミノブチリル-CoAオキシドレダクターゼ(脱アミノ化)、4-アミノブチリル-CoAトランスアミナーゼ又は4-ヒドロキシブチリル-CoAデヒドロゲナーゼを含むか；
c)前記BDO経路が、4-アミノブチレートCoAトランスフェラーゼ、4-アミノブチリル-CoAヒドロラーゼ、4-アミノブチレート-CoAリガーゼ、4-アミノブチリル-CoAレダクターゼ(アルコール形成)、4-アミノブチリル-CoAレダクターゼ、4-アミノブタン-1-オールデヒドロゲナーゼ、4-アミノブタン-1-オールオキシドレダクターゼ(脱アミノ化)又は4-アミノブタン-1-オールトランスアミナーゼを含むか；
d)前記BDO経路が、4-アミノブチレートキナーゼ、4-アミノブチルアルデヒドデヒドロゲナーゼ(リン酸化)、4-アミノブタン-1-オールデヒドロゲナーゼ、4-アミノブタン-1-オールオキシドレダクターゼ(脱アミノ化)、4-アミノブタン-1-オールトランスアミナーゼ、[(4-アミノブタノリル)オキシ]ホスホン酸オキシドレダクターゼ(脱アミノ化)、[(4-アミノブタノリル)オキシ]ホスホン酸トランスアミナーゼ、4-ヒドロキシブチリルホスフェートデヒドロゲナーゼ又は4-ヒドロキシブチルアルデヒドデヒドロゲナーゼ(リン酸化)を含むか；
e)前記BDO経路が、アルファ-ケトグルタレート5-キナーゼ、2,5-ジオキソペンタン酸セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ(リン酸化)、2,5-ジオキソペンタン酸レダクターゼ、アルファ-ケトグルタレートCoAトランスフェラーゼ、アルファ-ケトグルタリル-CoAヒドロラーゼ、アルファ-ケトグルタリル-CoAリガーゼ、アルファ-ケトグルタリル-CoAレダクターゼ、5-ヒドロキシ-2-オキソペンタン酸デヒドロゲナーゼ、アルファ-ケトグルタリル-CoAレダクターゼ(アルコール形成)、5-ヒドロキシ-2-オキソペンタン酸デカルボキシラーゼ又は5-ヒドロキシ-2-オキソペンタン酸デヒドロゲナーゼ(脱カルボキシル化)を含むか；
f)前記BDO経路が、グルタメートCoAトランスフェラーゼ、グルタミル-CoAヒドロラーゼ、グルタミル-CoAリガーゼ、グルタメート5-キナーゼ、グルタメート-5-セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ(リン酸化)、グルタミル-CoAレダクターゼ、グルタメート-5-セミアルデヒドレダクターゼ、グルタミル-CoAレダクターゼ(アルコール形成)、2-アミノ-5-ヒドロキシペンタン酸オキシドレダクターゼ(脱アミノ化)、2-アミノ-5-ヒドロキシペンタン酸トランスアミナーゼ、5-ヒドロキシ-2-オキソペンタン酸デカルボキシラーゼ、5-ヒドロキシ-2-オキソペンタン酸デヒドロゲナーゼ(脱カルボキシル化)を含むか；
g)前記BDO経路が、3-ヒドロキシブチリル-CoAデヒドロゲナーゼ、3-ヒドロキシブチリル-CoAデヒドラターゼ、ビニルアセチル-CoAΔ-イソメラーゼ又は4-ヒドロキシブチリル-CoAデヒドラターゼを含むか；
h)前記BDO経路が、ホモセリンデアミナーゼ、ホモセリンCoAトランスフェラーゼ、ホモセリン-CoAヒドロラーゼ、ホモセリン-CoAリガーゼ、ホモセリン-CoAデアミナーゼ、4-ヒドロキシブタ-2-エノイル-CoAトランスフェラーゼ、4-ヒドロキシブタ-2-エノイル-CoAヒドロラーゼ、4-ヒドロキシブタ-2-エノイル-CoAリガーゼ、4-ヒドロキシブタ-2-エノエートレダクターゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAトランスフェラーゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAヒドロラーゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAリガーゼ又は4-ヒドロキシブタ-2-エノイル-CoAレダクターゼを含むか；
i)前記BDO経路が、スクシニル-CoAレダクターゼ(アルコール形成)、4-ヒドロキシブチリル-CoAヒドロラーゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAリガーゼ又は4-ヒドロキシブタナールデヒドロゲナーゼ(リン酸化)を含むか；又は
j)前記BDO経路が、グルタメートデヒドロゲナーゼ、4-アミノブチレートオキシドレダクターゼ(脱アミノ化)、4-アミノブチレートトランスアミナーゼ、グルタメートデカルボキシラーゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAヒドロラーゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAリガーゼ又は4-ヒドロキシブタナールデヒドロゲナーゼ(リン酸化)を含む、
請求項1記載の非天然微生物体。
【請求項１１】
前記BDO経路が、4-アミノブチレートCoAトランスフェラーゼ、4-アミノブチリル-CoAヒドロラーゼ、4-アミノブチレート-CoAリガーゼ、4-アミノブチリル-CoAオキシドレダクターゼ(脱アミノ化)、4-アミノブチリル-CoAトランスアミナーゼ又は4-ヒドロキシブチリル-CoAデヒドロゲナーゼを含み、かつ、4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ(アルコール形成)、4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ又は1,4-ブタンジオールデヒドロゲナーゼをさらに含む、請求項10記載の非天然微生物体。
【請求項１２】
前記BDO経路が、4-アミノブチレートキナーゼ、4-アミノブチルアルデヒドデヒドロゲナーゼ(リン酸化)、4-アミノブタン-1-オールデヒドロゲナーゼ、4-アミノブタン-1-オールオキシドレダクターゼ(脱アミノ化)、4-アミノブタン-1-オールトランスアミナーゼ、[(4-アミノブタノリル)オキシ]ホスホン酸オキシドレダクターゼ(脱アミノ化)、[(4-アミノブタノリル)オキシ]ホスホン酸トランスアミナーゼ、4-ヒドロキシブチリルホスフェートデヒドロゲナーゼ又は4-ヒドロキシブチルアルデヒドデヒドロゲナーゼ(リン酸化)を含み、かつ、1,4-ブタンジオールデヒドロゲナーゼをさらに含む、請求項10記載の非天然微生物体。
【請求項１３】
前記BDO経路が、アルファ-ケトグルタレート5-キナーゼ、2,5-ジオキソペンタン酸セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ(リン酸化)、2,5-ジオキソペンタン酸レダクターゼ、アルファ-ケトグルタレートCoAトランスフェラーゼ、アルファ-ケトグルタリル-CoAヒドロラーゼ、アルファ-ケトグルタリル-CoAリガーゼ、アルファ-ケトグルタリル-CoAレダクターゼ、5-ヒドロキシ-2-オキソペンタン酸デヒドロゲナーゼ、アルファ-ケトグルタリル-CoAレダクターゼ(アルコール形成)、5-ヒドロキシ-2-オキソペンタン酸デカルボキシラーゼ又は5-ヒドロキシ-2-オキソペンタン酸デヒドロゲナーゼ(脱カルボキシル化)を含み、かつ、4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ(アルコール形成)、4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ又は1,4-ブタンジオールデヒドロゲナーゼをさらに含む、請求項10記載の非天然微生物体。
【請求項１４】
前記BDO経路が、グルタメートCoAトランスフェラーゼ、グルタミル-CoAヒドロラーゼ、グルタミル-CoAリガーゼ、グルタメート5-キナーゼ、グルタメート-5-セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ(リン酸化)、グルタミル-CoAレダクターゼ、グルタメート-5-セミアルデヒドレダクターゼ、グルタミル-CoAレダクターゼ(アルコール形成)、2-アミノ-5-ヒドロキシペンタン酸オキシドレダクターゼ(脱アミノ化)、2-アミノ-5-ヒドロキシペンタン酸トランスアミナーゼ、5-ヒドロキシ-2-オキソペンタン酸デカルボキシラーゼ、5-ヒドロキシ-2-オキソペンタン酸デヒドロゲナーゼ(脱カルボキシル化)を含み、かつ、4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ(アルコール形成)、4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ又は1,4-ブタンジオールデヒドロゲナーゼをさらに含む、請求項10記載の非天然微生物体。
【請求項１５】
前記BDO経路が、ホモセリンデアミナーゼ、ホモセリンCoAトランスフェラーゼ、ホモセリン-CoAヒドロラーゼ、ホモセリン-CoAリガーゼ、ホモセリン-CoAデアミナーゼ、4-ヒドロキシブタ-2-エノイル-CoAトランスフェラーゼ、4-ヒドロキシブタ-2-エノイル-CoAヒドロラーゼ、4-ヒドロキシブタ-2-エノイル-CoAリガーゼ、4-ヒドロキシブタ-2-エノエートレダクターゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAトランスフェラーゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAヒドロラーゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAリガーゼ又は4-ヒドロキシブタ-2-エノイル-CoAレダクターゼを含み、かつ、4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ(アルコール形成)、4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ又は1,4-ブタンジオールデヒドロゲナーゼをさらに含む、請求項10記載の非天然微生物体。
【請求項１６】
前記BDO経路が、スクシニル-CoAレダクターゼ(アルコール形成)、4-ヒドロキシブチリル-CoAヒドロラーゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAリガーゼ又は4-ヒドロキシブタナールデヒドロゲナーゼ(リン酸化)を含み、かつ、スクシニル-CoAレダクターゼ、4-ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAトランスフェラーゼ、4-ヒドロキシブチレートキナーゼ、ホスホトランス-4-ヒドロキシブチリラーゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ(アルコール形成)又は1,4-ブタンジオールデヒドロゲナーゼをさらに含む、請求項10記載の非天然微生物体。
【請求項１７】
前記BDO経路が、グルタメートデヒドロゲナーゼ、4-アミノブチレートオキシドレダクターゼ(脱アミノ化)、4-アミノブチレートトランスアミナーゼ、グルタメートデカルボキシラーゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAヒドロラーゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAリガーゼ又は4-ヒドロキシブタナールデヒドロゲナーゼ(リン酸化)を含み、かつ、アルファ-ケトグルタレートデカルボキシラーゼ、4-ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAトランスフェラーゼ、4-ヒドロキシブチレートキナーゼ、ホスホトランス-4-ヒドロキシブチリラーゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ、4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ(アルコール形成)又は1,4-ブタンジオールデヒドロゲナーゼをさらに含む、請求項10記載の非天然微生物体。
【請求項１８】
1,4-ブタンジオール(BDO)を生成するのに十分な量で発現されるBDO経路酵素をコードする少なくとも1つの外因性核酸を含む、BDO経路を有する微生物体を含む非天然微生物体であって、表28の菌株3〜20のいずれかに記載するように遺伝子改変されている、前記非天然微生物体。
【請求項１９】
1,4-ブタンジオール(BDO)を生成するのに十分な量で発現されるBDO経路酵素を含むBDO経路を含む非天然細菌性生物体であって、該細菌性生物体は遺伝子改変されており、かつ該細菌性生物体は、
(A)以下から選択されるBDO経路を含み：  
(i)以下を含むBDO経路：
(a)アルファ-ケトグルタレートデカルボキシラーゼ；又は
アルファ-ケトグルタレートデヒドロゲナーゼ及びCoA依存性スクシネートセミアルデヒドデヒドロゲナーゼ；又は
グルタメート:スクシネートセミアルデヒドトランスアミナーゼ及びグルタメートデカルボキシラーゼ；
(b)4-ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ；
(c)4-ヒドロキシブチリル-CoAトランスフェラーゼ；又は
4-ヒドロキシブチレートキナーゼ及びホスホトランス-4-ヒドロキシブチリラーゼ；
(d)4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ；及び
(e)4-ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ；又は
4-ヒドロキシブチリル-CoAを1,4-ブタンジオールに変換する、アルデヒド/アルコールデヒドロゲナーゼ；
(ii)以下を含むBDO経路：
(a)アルファ-ケトグルタレートデカルボキシラーゼ；又は
スクシニル-CoAシンテターゼ及びCoA依存性スクシネートセミアルデヒドデヒドロゲナーゼ；
(b)4-ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ；
(c)4-ヒドロキシブチリル-CoAトランスフェラーゼ；又は
4-ヒドロキシブチレートキナーゼ及びホスホトランス-4-ヒドロキシブチリラーゼ；及び
(d)4-ヒドロキシブチリル-CoAを4-ヒドロキシブチルアルデヒドに変換するアルデヒドデヒドロゲナーゼ；及び4-ヒドロキシブチルアルデヒドを1,4-ブタンジオールに変換するアルコールデヒドロゲナーゼ；又は4-ヒドロキシブチリル-CoAを1,4-ブタンジオールに変換する、アルデヒド/アルコールデヒドロゲナーゼ；
(iii)以下を含むBDO経路：
(a)アルファ-ケトグルタレートデカルボキシラーゼ；又は
グルタメートデヒドロゲナーゼ；グルタメートデカルボキシラーゼ；及び脱アミノ化4-アミノブチレートオキシドレダクターゼ若しくは4-アミノブチレートトランスアミナーゼ；又は
アルファ-ケトグルタレートデヒドロゲナーゼ及びCoA依存性スクシネートセミアルデヒドデヒドロゲナーゼ；
(b)4-ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ；及び
(c)4-ヒドロキシブチレートキナーゼ；ホスホトランス-4-ヒドロキシブチリラーゼ；4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ；及び4-ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ；又は
4-ヒドロキシブチレートキナーゼ；リン酸化4-ヒドロキシブタナールデヒドロゲナーゼ；及び4-ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ；又は
4-ヒドロキシブチレートキナーゼ；ホスホトランス-4-ヒドロキシブチリラーゼ；及びアルコール形成4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ；又は
4-ヒドロキシブチリル-CoAトランスフェラーゼ若しくは4-ヒドロキシブチリル-CoAヒドロラーゼ若しくは4-ヒドロキシブチリル-CoAリガーゼ；4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ；及び4-ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ；又は
4-ヒドロキシブチリル-CoAトランスフェラーゼ若しくは4-ヒドロキシブチリル-CoAヒドロラーゼ若しくは4-ヒドロキシブチリル-CoAリガーゼ；及びアルコール形成4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ；及び
(iv)以下を含むBDO経路：
(a)グルタメートCoAトランスフェラーゼ若しくはグルタミル-CoAヒドロラーゼ若しくはグルタミル-CoAリガーゼ；グルタミル-CoAレダクターゼ；及びグルタメート-5-セミアルデヒドレダクターゼ；又は
グルタメートCoAトランスフェラーゼ若しくはグルタミル-CoAヒドロラーゼ若しくはグルタミル-CoAリガーゼ；及びアルコール形成グルタミル-CoAレダクターゼ；又は
グルタメート5-キナーゼ；リン酸化グルタメート-5-セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ；及びグルタメート-5-セミアルデヒドレダクターゼ；
(b)脱アミノ化2-アミノ-5-ヒドロキシペンタン酸オキシドレダクターゼ若しくは2-アミノ-5-ヒドロキシペンタン酸トランスアミナーゼ；及び
(c)5-ヒドロキシ-2-オキソペンタン酸デカルボキシラーゼ；及び4-ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ；又は
脱カルボキシル化5-ヒドロキシ-2-オキソペンタン酸デヒドロゲナーゼ；4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ；及び4-ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ；又は
脱カルボキシル化5-ヒドロキシ-2-オキソペンタン酸デヒドロゲナーゼ及びアルコール形成4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼ、かつ
(B)好気性呼吸器制御調節系のタンパク質をコードする遺伝子の破壊を含むか;外因性NADH非感受性シトレートシンターゼを発現するか;又は外因性ホスホエノールピルベートカルボキシキナーゼを発現する、
前記非天然細菌性生物体。
【請求項２０】
a)前記スクシニル-CoAシンテターゼが大腸菌sucCD遺伝子によってコードされるか；
b)前記アルファ-ケトグルタレートデカルボキシラーゼがウシ結核菌sucA遺伝子によってコードされるか；
c)前記スクシネートセミアルデヒドデヒドロゲナーゼ(CoA-依存性)、4-ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ及び4-ヒドロキシブチリル-CoA/アセチル-CoAトランスフェラーゼがポルフィロモナス・ギンギバリスW83遺伝子によってコードされるか；
d)前記ブチレートキナーゼ及びホスホトランスブチリラーゼがクロストリジウム・アセトブチリクムbuk1及びptb遺伝子によってコードされるか；
e)前記4-ヒドロキシブチリル-CoAレダクターゼがクロストリジウム・ベイジェリンキーald遺伝子によってコードされるか；
f)前記4-ヒドロキシブタナールレダクターゼがゲオバシルス・サーモグルコシダシウスadh1遺伝子によってコードされるか；
g)前記外因性ピルベートデヒドロゲナーゼがクレブシエラ・ニューモニアlpdA遺伝子によってコードされるか；
h)NADH非感受性シトレートシンターゼがgltAによってコードされるか；
i)前記NADH非感受性シトレートシンターゼがgltAのR163L突然変異体によってコードされるか；
j)前記ホスホエノールピルベートカルボキシキナーゼがヘモフィルス・インフルエンザホスホエノールピルベートカルボキシキナーゼ遺伝子によってコードされるか；
k)前記外因性ピルベートデヒドロゲナーゼがNADH非感受性であるか；
l)前記微生物体のピルベートデヒドロゲナーゼサブユニット遺伝子の1つ以上が、ピルベートホルメートリアーゼプロモーターの制御下にあるか；
m)前記嫌気性呼吸器制御調節系の破壊がarcA遺伝子の破壊であるか；
o)前記微生物体がマレートデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子の破壊をさらに含むか；
p)前記外因的に発現される酵素をコードする1つ以上の遺伝子が宿主生物体のfimD座に組み込まれているか；
q)前記生物体が非ホスホトランスフェラーゼスクロース取込み系を発現するか；又は
r)前記生物体が、内因性ラクテートデヒドロゲナーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ及びピルベートホルメートリアーゼの破壊をさらに含む、
請求項19記載の非天然微生物体。
【請求項２１】
1,4-ブタンジオール(BDO)を生成するための方法であって、請求項1〜20のいずれかに記載の非天然微生物体を、BDOを生成するための条件下で、且つそれに十分な期間にわたって培養することを含む、前記方法。
【請求項２２】
蒸留を使用して前記BDOを精製する、請求項21記載の方法。
【請求項２３】
単離された又は精製された1,4-ブタンジオール(BDO)を生成するための方法であって、請求項1〜20のいずれかに記載の非天然微生物体を、BDOを生成するための条件下で、且つそれに十分な期間にわたって培養すること、及び、該BDOの単離工程又は精製工程を含む、前記方法。
【請求項２４】
前記単離工程又は精製工程が蒸留を含む、請求項23記載の方法。
【請求項２５】
生合成された1,4-ブタンジオール、及び、請求項1〜20のいずれか1項に記載の非天然微生物体又はその細胞溶解物若しくは培養上清を含む、組成物。
【請求項２６】
培地をさらに含む、請求項25記載の組成物。
【請求項２７】
請求項1〜20のいずれか1項に記載の微生物体によって生成された生合成された1,4-ブタンジオールを、化学的に又は酵素的にポリマーに変換することを含む、ポリマーの製造方法。
【請求項２８】
請求項1〜20のいずれか1項に記載の微生物体によって生成された、生合成的に生成された1,4-ブタンジオール。
【請求項２９】
請求項1〜20のいずれか1項に記載の微生物体によって生成された、生合成的に生成された1,4-ブタンジオールを含む、又は、それを変換することによって得られた、ポリマー。