【手続補正書】
【提出日】平成25年4月9日(2013.4.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
加齢に伴う病気を予防又は治療する薬剤を同定又は検出するための方法であって、
細胞周期停止状態モデル又は分裂終了細胞モデルにおける１種類以上の化合物又は組成物をスクリーニングし、それらの抗老化作用を監視し、
テストされた化合物又は組成物の、細胞周期停止状態モデル又は分裂終了モデルの細胞のＧ０期を維持又は延長する能力が、その抗老化作用を示唆しており、そのようなテスト化合物又は組成物が、細胞の老化および加齢に伴う病気を予防又は治療する薬剤として役立つ、ことを特徴とする、加齢に伴う病気を予防又は治療する薬剤を同定又は検出するための方法。
【請求項２】
抗老化作用が、
(a)老化細胞又は分裂終了細胞における細胞周期停止状態の悪化を防ぐこと、
(b)ミトコンドリア機能を刺激、改善または維持すること、
(c)ミトコンドリア又はテロメアの機能喪失に関連する加齢に伴う病気を予防すること、及び、
(d)活性酸素種(ROS)の増大又はテロメア機能不全によって誘発されるアポトーシス死の増加を防ぐこと、
から選ばれるものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
細胞周期停止状態モデルが、
(a)機能障害性テロメアを含む変異酵母、
(b)不十分なテロメラーゼ活性を示す初代ヒト細胞系、
(c)テロメア結合タンパク質又はテロメラーゼの変異又は欠陥に起因するテロメア機能不全を示すヒト細胞系、
(d)化学薬剤に起因するテロメア機能不全モデル、
(e)癌遺伝子活性化又は／及びＤＮＡ損傷応答の活性化によって生じるモデル、及び、
(f)テロメア機能不全を示すマウス、ラット、もしくは分裂酵母の細胞系、
から選ばれるものである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法であって、加齢に伴う病気（疾患または障害）が、異常増殖性疾患、変性疾患、または機能低下疾患である、方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法であって、
(i)  テロメア機能不全又はＤＮＡ損傷により細胞周期が止められた条件のもとで化合物又は組成物を酵母細胞と培養する工程と、
(ii)  アポトーシスアッセイを使って死んだ酵母細胞の個体群を測定する、或いは、
(iii)  細胞周期が止められる条件を取り除き、生き残った細胞の数を測定する工程と、
（これにより化合物又は組成物は、細胞増殖を抑止せず、又、テロメア機能不全又はＤＮＡ損傷により生じた細胞周期の停止を迂回することもしない）
(iv)  前記工程(ii)で得られた死細胞の個体群または前記工程(iii)で得られた生き残った細胞の数をそれぞれ、前記工程(i)と同じ条件の下、しかし前記化合物又は組成物の不存在下の対照実験で得られた死細胞の個体群または生き残った細胞の数と比較する工程と、
を含み、
前記対照実験との比較で、前記工程(ii)で得られた死んだ個体群の減少、又は、段階(iii)で得られた生き残った細胞の数の増加は、その培養された化合物又は組成物が抗老化剤の候補であることを示すものである、方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法であって、
(v)  同定される化合物又は組成物を一定時間、哺乳類の老化細胞と培養する工程と、
(vi)  生き残った老化細胞の個体群を測定する工程と、
(vii)  前記(vi)の生き残った哺乳類の老化細胞の個体群を、対照実験で得られた生き残った老化細胞の個体群と比較する工程と、
を更に含み、
前記対照実験との比較で、生き残った老化細胞の個体群の増加は、細胞と共に培養された化合物又は組成物が抗老化剤の候補であることを確認するものである、方法。
【請求項７】
請求項５又は６に記載の方法であって、
(viii)  同定される化合物又は組成物を一定期間、正常増殖ヒト細胞と培養する工程と、
(ix)  ミトコンドリア質量、ミトコンドリアＤＮＡ含量、又はミトコンドリア転写因子の発現を測定することによってヒト細胞のミトコンドリア生合成を測定する工程と、
(x)  前記工程(ix)の結果を対照実験の結果と比較する工程と、
を更に含み、
対照実験と比べて前記工程(ix)で得られたミトコンドリア生合成の増進は、同定された化合物又は組成物が抗老化剤の候補であることを更に確認する、方法。
【請求項８】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法であって、
(i)  任意的に、生物試料を溶媒で希釈する工程、
(ii)  テロメア機能不全又はDNA損傷により酵母細胞の細胞周期が止められた条件の下で前記希釈された試料を変異酵母細胞と培養する工程、
(iii)  細胞周期が止められる条件を取り除くと共に、生き残った酵母細胞の数を測定する工程、及び、
(iv)  工程(iii)で得られた生き残った細胞の数を、培養工程(ii)と同じ条件での対照実験（但し、その対照実験では前記の生物試料を含まない）において生き残った細胞の数と比較する工程、を含み、
前記対照実験での生き残り細胞数と比較して前記工程(iii)で得られた生き残り細胞の数が増えていることは、前記生物試料が抗老化剤を内包することを示唆するものである、ことを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法であって、
(i)  任意的に、生物試料を溶媒で希釈する工程、
(ii)  テロメア機能不全又はDNA損傷により酵母細胞の細胞周期が止められた条件の下で前記希釈された試料を変異酵母細胞と培養する工程、
(iii)  細胞周期が止められる条件を取り除くと共に、生き残った酵母細胞の数を測定する工程、
(iv)  工程(iii)で得られた生き残った細胞の数を、培養工程(ii)と同じ条件での対照実験（但し、その対照実験では前記の生物試料を含まない）において生き残った細胞の数と比較する工程、
(v)  対象となる生物試料を希釈するために使われた溶媒を用いて、異なる既知濃度の精製抗老化剤を有する複数の標準溶液を調製する工程、
(vi)  上記の（ii）から(iv)の各工程を繰り返す工程、
(vii)  工程(vi)で得られた生き残り細胞数をその対応する抗老化剤濃度に対してプロットして、標準方程式及び／又は標準曲線を得る工程、
(viii)  工程(iv)で得られた生き残った酵母細胞の数を、工程(vii)で得られた抗老化剤の濃度と生き残り酵母細胞の数との間の予め確立された標準方程式又は標準曲線にあてはめて、抗老化剤の生物学的濃度を計算する工程、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１０】
機能障害性テロメアを含む変異酵母がcdc13-1、cdc13-2、stn1-1、cdc17-1、cdc17-2、hdf1、hdf2、est1、est2及びest3から選ばれるものである、請求項３〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
不十分なテロメラーゼ活性を示す初代ヒト細胞系が、線維芽細胞、内皮細胞及び上皮細胞のうちの少なくとも一つを含み、
テロメア機能不全を示すヒト細胞系が、TRF２、POT１、TERT、TERC、又はWRNの変異体を含み、
化学薬剤が、ブレオマイシン、アドリアマイシン、又はＧ四重リガンドである、
請求項３〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法であって、当該方法は更に、
栄養素、TOR、AMPK、ミトコンドリア、老化経路のうちの少なくとも一つの構成成分に対して当該方法で同定される薬剤の活性を測定すること、を含み、
但し、前記薬剤は、
(a)  老化もしくは分裂終了細胞においてＧ０期もしくは細胞周期停止状態を維持する、
(b)  ミトコンドリアの劣化を防止する、
(c)  老化もしくは分裂終了細胞におけるＧ０期もしくは細胞周期停止状態の劣化を防止する、又は、
(d)  老化悪化もしくはＧ０期に続く異常増殖もしくは細胞死を防止する、
ことを特徴とする方法。
【請求項１３】
被験者の細胞のＧ０期又は非分裂状態を延ばすことで、細胞加齢又は加齢に伴う病気を予防又は治療するための組成物であって、
請求項１〜１２のいずれか一項の方法により同定される薬剤、又は、その薬剤の薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを含む、組成物。
【請求項１４】
前記薬剤は、ラパマイシンの標的(TOR)阻害剤である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記TOR阻害剤が、ラパマイシン、又は、
デホロリムス、AP-23675、AP-23841、ゾタロリムス、CCI779/テムシロリムス、RAD-001/エベロリムス、7-エピ-ラパマイシン、7-チオメチル-ラパマイシン、7-エピ-トリメトキシ-ラパマイシン、2-desメチル-ラパマイシン、及び42-0-(2-ヒドロキシ)エチル-ラパマイシンからなる群から選択されるところの、ラパマイシン類似物であり、
低用量のTOR阻害剤は、細胞周期のＧ１期におけるタンパク質翻訳および細胞増殖を阻害する、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
ラパマイシン又はその薬学的に許容されるラパマイシンの塩の低用量が、治療量の約10%以下、約8%以下、約6%以下、約4%以下、約2%以下、約1%以下、約0.1%以下、約0.01%以下、または約0.001%以下であり、
前記治療量が、１ｍｇ／日〜５ｍｇ／日の範囲にあり、
前記低用量のラパマイシンが、約０．０１μｇ／日〜約５０μｇ／日の範囲にある、
請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
低用量のラパマイシンは、単離化合物、生エキス、又はラパマイシンを含む純化されていない微生物として投与される、請求項１５又は１６に記載の組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１２のいずれか一項の方法により同定される薬剤が、AMPK活性化因子であり、このAMPK活性化因子は、AICAR、２−デオキシグルコース、３−Ｏ−メチルグルコース、メトホルミン、ベルベリン、フェンホルミン、A-769662、チアゾリジンジオン類、デキサメタゾン、スタチン類、レプチン、アディポネクチン、及び、シロスタゾールを含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１９】
請求項１〜１２のいずれか一項の方法により同定される薬剤が、EGCG、ブドウ種子エキス、ビルベリー抽出物、亜セレン酸塩(selenite)、ゲニステイン(genistein)、リコピン、LY294002、ジアリルトリスルフィド、イソチオシアン酸アリル、ベンジルイソチオシアネート、フェニルイソチオシアネート、及び、イソチオシアン酸フェネチル、から選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物は更に、第二の薬剤を含んでおり、
この第二の薬剤は、酸化防止剤、抗高血圧薬、脂質低下薬、抗卒中薬、抗癌剤、及び、請求項１〜１２のいずれか一項の方法により同定されるところの異なる抗老化剤、から選択される、
請求項１３〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記第二の薬剤が、ビタミンC、ビタミンE、β−カロテン及びその他のカロチノイド、セレン、リポ酸、リコピン、ルテイン(lutein)、ゼアキサンチン、補酵素Q10、グルタチオン、Ｎ−アセチルシステイン、メラトニン、ゲニステイン、エストラジオール、茶抽出物、並びに、ブドウ種子エキスからなる群から選択される酸化防止剤である、
請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物が、薬学的に許容される担体を更に含む、請求項１３〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
加齢に伴う病気が、異常増殖性疾患、変性疾患、又は機能低下疾患である、請求項１３〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
加齢に伴う病気が、分裂終了細胞又は老化細胞でのＧ０期又は非分裂状態の劣化、およびそれに続く細胞消失、異常増殖もしくは機能低下、又は、ミトコンドリア機能不全もしくはテロメア機能不全、に関係があるものである、請求項１３〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
加齢に伴う病気が、
癌発生における前癌状態の細胞又は老化した癌細胞での細胞周期の再入（即ちＧ０期の劣化）、変形性関節炎、特発性肺線維症、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、皮膚の老化、多発性硬化症、シェーグレン症候群、白内障、関節リウマチ、アテローム性動脈硬化症、心不全、高血圧、小脳梗塞、脳卒中、心筋梗塞(心臓発作)、骨粗鬆症、肥満、糖尿病、並びに、
テストステロン、エストロゲン、成長ホルモン、IGF-I、又はエネルギー産生の減少に起因する疾患、
から選択される、請求項１３〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
加齢に伴う病気が、癌発生における前癌状態の細胞又は老化した癌細胞での細胞周期の再入、パーキンソン病、脳卒中、小脳梗塞、高血圧、糖尿病、又は、心筋梗塞(心臓発作)、
である、請求項２５に記載の組成物。