【手続補正書】
【提出日】平成25年7月16日(2013.7.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１記載のアミノ酸配列の５６位に対応する位置でアミノ酸残基ＡｓｎをＡｌａ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、ＳｅｒおよびＶａｌから選択されるアミノ酸残基で置換することにより改変された変異体フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ。
【請求項２】
野生型フルクトシルアミノ酸オキシダーゼと比較して減少されたオキシダーゼ活性を有し、かつ野生型フルクトシルアミノ酸オキシダーゼと比較して増加したデヒドロゲナーゼ活性を有する請求項１記載の変異体フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ。
【請求項３】
野生型フルクトシルアミノ酸オキシダーゼの３０％以下のオキシダーゼ活性を有し、かつ野生型フルクトシルアミノ酸オキシダーゼの５０％以上のデヒドロゲナーゼ活性を有する請求項１記載の変異体フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ。
【請求項４】
野生型フルクトシルアミノ酸オキシダーゼと比較して増加したデヒドロゲナーゼ活性を有する請求項１記載の変異体フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ。
【請求項５】
配列番号１〜１２からなる群より選択されるアミノ酸配列であり、配列番号１記載のアミノ酸配列の５６位に対応する位置のアミノ酸残基Ａｓｎが、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、ＳｅｒおよびＶａｌから選択されるアミノ酸残基で置換されているアミノ酸配列を有する請求項１記載の変異体フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ。
【請求項６】
配列番号１記載のアミノ酸配列であり、５６位のアミノ酸残基Ａｎｓが、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、ＳｅｒおよびＶａｌから選択されるアミノ酸残基で置換されているアミノ酸配列を有する請求項１記載の変異体フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ。
【請求項７】
配列番号１の１０９〜１２４位でアミノ酸配列：Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｕが、配列：Ｌｙｓ  Ｇｌｎ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｈｉｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｈｉｓ  Ａｌａに置き換えられている請求項６記載の変異体フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ。
【請求項８】
配列番号２記載のアミノ酸配列であり、４７位のアミノ酸残基Ａｓｎが、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、ＳｅｒおよびＶａｌから選択されるアミノ酸残基で置換されている請求項１記載の変異体フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ。
【請求項９】
配列番号３記載のアミノ酸配列であり、５２位のアミノ酸残基Ａｓｎが、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、ＳｅｒおよびＶａｌから選択されるアミノ酸残基で置換されている請求項１記載の変異体フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ。
【請求項１０】
配列番号７記載のアミノ酸配列であり、５６位のアミノ酸残基Ａｓｎが、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、ＳｅｒおよびＶａｌから選択されるアミノ酸残基で置換されている請求項１記載の変異体フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ。
【請求項１１】
配列番号７の６１〜７２位でアミノ酸配列：Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ｓｅｒが、配列：Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ａｌａに置き換えられている請求項１０記載の変異体フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の変異体フルクトシルアミノ酸オキシダーゼをコードする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１３】
請求項１２記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項１４】
請求項１３記載のベクターにより形質転換された宿主細胞。
【請求項１５】
試料中の糖化タンパク質をアッセイする方法であって、該試料を請求項１〜１１のいずれか１項に記載のフルクトシルアミノ酸オキシダーゼと接触させること、および該フルクトシルアミノ酸オキシダーゼにより酸化された糖化タンパク質の量を測定することを含む方法。
【請求項１６】
試料中のＨｂＡ１ｃを消化してフルクトシルバリンまたはフルクトシルバリルヒスチジンを生成すること、該フルクトシルバリンまたはフルクトシルバリルヒスチジンを請求項１〜１１のいずれか１項に記載のフルクトシルアミノ酸オキシダーゼと接触させること、および酸化されたフルクトシルバリンまたはフルクトシルバリルヒスチジンの量を測定することを含むＨｂＡ１ｃをアッセイする方法。
【請求項１７】
試料中のフルクトシルバリン、フルクトシルバリルヒスチジン、ＨｂＡ１ｃまたはフルクトシルヘキサペプチドをアッセイするための装置であって、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のフルクトシルアミノ酸オキシダーゼおよび電子移動メディエーターを含む装置。
【請求項１８】
試料中のフルクトシルバリン、フルクトシルバリルヒスチジン、ＨｂＡ１ｃまたはフルクトシルヘキサペプチドをアッセイするためのキットであって、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のフルクトシルアミノ酸オキシダーゼおよび電子移動メディエーターを含むキット。
【請求項１９】
電極上に固定された請求項１〜１１のいずれか１項に記載のフルクトシルアミノ酸オキシダーゼを有する酵素電極。
【請求項２０】
フルクトシルバリン、フルクトシルバリルヒスチジン、ＨｂＡ１ｃまたはフルクトシルヘキサペプチドをアッセイするための酵素センサーであって、請求項１９記載の酵素電極を作用電極として含む酵素センサー。
【請求項２１】
配列番号１記載のアミノ酸配列であり、配列番号１の６１〜７２位のアミノ酸配列：Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ａｌａが、配列：Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ｓｅｒで置き換えられているアミノ酸配列を有する変異体フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ。
【請求項２２】
配列番号１記載のアミノ酸配列であり、配列番号１の１０９〜１２４位のアミノ酸配列：Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｕが、配列：Ｌｙｓ  Ｇｌｎ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｈｉｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｈｉｓ  Ａｌａで置き換えられているアミノ酸配列を有する変異体フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ。
【請求項２３】
配列番号７記載のアミノ酸配列であり、配列番号７の６１〜７２位のアミノ酸配列：Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ｓｅｒが、配列：Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ａｌａで置き換えられているアミノ酸配列を有する変異体フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ。
【請求項２４】
配列番号７記載のアミノ酸配列であり、配列番号７の１０９〜１２６位のアミノ酸配列：Ｌｙｓ  Ｇｌｎ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｈｉｓ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ  Ｈｉｓ  Ａｌａが、配列：Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｕで置き換えられているアミノ酸配列を有する変異体フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ。