【手続補正書】
【提出日】平成25年4月19日(2013.4.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離したスパイダーシルクタンパク質の重合体を産生する方法であって：
（ｉ）１７０ないし７６０のアミノ酸残基からなり：
スパイダーシルクタンパク質のＮ末端断片由来の１００ないし１６０のアミノ酸残基のうちの少なくとも１の断片からなるＮ末端断片と；
スパイダーシルクタンパク質の反復断片由来の７０ないし３００のアミノ酸残基の反復断片と；
を含み；
７０ないし１２０のアミノ酸残基であって、スパイダーシルクタンパク質のＣ末端断片由来であるＣ末端断片；
を任意に含むスパイダーシルクタンパク質を提供するステップと；
（ｉｉ）ｐＨが６．４以上であり、かつ／あるいは前記スパイダーシルクタンパク質の重合を阻止するイオン組成である液体培地において、前記スパイダーシルクタンパク質の溶液を提供するステップであって、リポ多糖類及び他の発熱物質の除去を任意に含むステップと；
（ｉｉｉ）６．３以下のｐＨ、及び前記スパイダーシルクタンパク質の重合を可能にするイオン組成に、前記液体培地の特性を調節するステップと；
（ｉｖ）前記スパイダーシルクタンパク質が前記液体培地において重合体を形成できるようにするステップであって、前記液体培地はｐＨが６．３以下であり、かつ前記スパイダーシルクタンパク質の重合を可能にするイオン組成であるステップと；
（ｖ）前記スパイダーシルクタンパク質の重合体を前記液体培地から単離するステップと；
を具えることを特徴とする方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、ステップ（ｉｉｉ）及びステップ（ｉｖ）の前記液体培地のｐＨが６．２以下、例えば６．０以下であり、かつ／あるいは、ステップ（ｉｉｉ）及びステップ（ｉｖ）の前記液体培地のｐＨが３以上、例えば４．２以上であることを特徴とする方法。
【請求項３】
請求項１又は２のいずれか１項に記載の方法において、ステップ（ｉｉｉ）及びステップ（ｉｖ）の前記液体培地のイオン強度の範囲が１ないし２５０ｍＭであることを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項１ないし３のいずれか１項に記載の方法において、ステップ（ｉｉ）の前記液体培地のｐＨが６．７以上、例えば７．０以上であることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項１ないし３のいずれか１項に記載の方法において、ステップ（ｉｉ）の前記液体培地のｐＨの範囲が６．４ないし６．８であることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項１ないし５のいずれか１項に記載の方法において、前記重合体が繊維、薄膜、発泡樹脂、ネット、又はメッシュであることを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項１ないし６のいずれか１項に記載の方法において、前記タンパク質が式ＮＴ２−ＲＥＰ−ＣＴ、ＮＴ−ＲＥＰ−ＣＴ、ＮＴ２−ＲＥＰ、及びＮＴ−ＲＥＰによって規定されるタンパク質の群から選択され；
ＮＴが１００ないし１６０のアミノ酸残基であって、スパイダーシルクタンパク質由来のＮ末端断片であるタンパク質断片であり；
ＲＥＰが７０ないし３００のアミノ酸残基であって、Ｌ（ＡＧ）ｎＬ、Ｌ（ＡＧ）ｎＡＬ、Ｌ（ＧＡ）ｎＬ、Ｌ（ＧＡ）ｎＧＬの群から選択されるタンパク質断片であり；
ｎが２ないし１０の整数であり；
各々の独立したＡセグメントが８ないし１８のアミノ酸残基のアミノ酸配列であり、０ないし３の前記アミノ酸残基がＡｌａではなく、残余の前記アミノ酸残基がＡｌａであり；
各々の独立したＧセグメントが１２ないし３０のアミノ酸残基のアミノ酸配列であり、少なくとも４０％のアミノ酸残基がＧｌｙであり；
各々の独立したＬセグメントが０ないし２０のアミノ酸残基のリンカーアミノ酸配列であり；
ＣＴが７０ないし１２０のアミノ酸残基であって、スパイダーシルクタンパク質由来のＣ末端断片であるタンパク質断片である；
ことを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法において、前記タンパク質が式ＮＴ２−ＲＥＰ−ＣＴ及びＮＴ−ＲＥＰ−ＣＴによって規定されるタンパク質の群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項７又は８のいずれか１項に記載の方法において、前記ＮＴの断片が配列番号８と少なくとも５０％同一、及び／又は配列番号６若しくは表１：
2012531889.tif 000001
における任意の別個のアミノ酸配列と８０％同一であり、かつ／あるいは、前記ＣＴの断片が配列番号９と少なくとも５０％同一、及び／又は配列番号７若しくは表２：
2012531889.tif 000002
における任意の別個のアミノ酸配列と８０％同一であることを特徴とする方法。
【請求項１０】
単離したスパイダーシルクタンパク質であって、１７０ないし７６０のアミノ酸残基からなり、式ＮＴ２−ＲＥＰ−ＣＴ及びＮＴ−ＲＥＰ−ＣＴによって規定されるタンパク質の群から選択され；
ＮＴが１００ないし１６０のアミノ酸残基であって、スパイダーシルクタンパク質由来のＮ末端断片であるタンパク質断片であり；
ＲＥＰが７０ないし３００のアミノ酸残基であって、Ｌ（ＡＧ）ｎＬ、Ｌ（ＡＧ）ｎＡＬ、Ｌ（ＧＡ）ｎＬ、Ｌ（ＧＡ）ｎＧＬからなる群から選択されるタンパク質断片であり；
ｎが２ないし１０の整数であり；
各々の独立したＡセグメントが８ないし１８のアミノ酸残基のアミノ酸配列であり、０ないし３の前記アミノ酸残基がＡｌａではなく、残余の前記アミノ酸残基がＡｌａであり；
各々の独立したＧセグメントが１２ないし３０のアミノ酸残基のアミノ酸配列であり、少なくとも４０％のアミノ酸残基がＧｌｙであり；
各々の独立したＬセグメントが０ないし２０のアミノ酸残基のリンカーアミノ酸配列であり；
ＣＴが７０ないし１２０のアミノ酸残基であって、スパイダーシルクタンパク質由来のＣ末端断片であるタンパク質断片である；
ことを特徴とする、単離したスパイダーシルクタンパク質。
【請求項１１】
請求項１０に記載の単離したスパイダーシルクタンパク質において、前記ＮＴの断片が配列番号８と少なくとも５０％同一、及び／又は配列番号６若しくは表１：
2012531889.tif 000003
における任意の別個のアミノ酸配列と８０％同一であり、かつ／あるいは、前記ＣＴの断片が配列番号９と少なくとも５０％同一、及び／又は配列番号７若しくは表２：
2012531889.tif 000004
における任意の別個のアミノ酸配列と８０％同一であることを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項１０に記載の単離したスパイダーシルクタンパク質が、配列番号３ないし５、１７、１９ないし２３、２５及び３１からなる群から選択されることを特徴とする、単離したスパイダーシルクタンパク質。
【請求項１３】
スパイダーシルクタンパク質の重合体であって、該タンパク質が１７０ないし７６０のアミノ酸残基からなり：
スパイダーシルクタンパク質のＮ末端断片由来の１００ないし１６０のアミノ酸残基のうちの少なくとも１の断片からなるＮ末端断片と；
スパイダーシルクタンパク質の反復断片由来の７０ないし３００のアミノ酸残基の反復断片と；
を含み、
７０ないし１２０のアミノ酸残基であって、スパイダーシルクタンパク質のＣ末端断片由来であるＣ末端断片；
を含むことを特徴とする、スパイダーシルクタンパク質の重合体。
【請求項１４】
請求項１３に記載のスパイダーシルクタンパク質の重合体において、該タンパク質が請求項１０ないし１２のいずれか１項に記載の単離したスパイダーシルクタンパク質であることを特徴とする、スパイダーシルクタンパク質の重合体。
【請求項１５】
請求項１３又は１４のいずれか１項に記載のスパイダーシルクタンパク質の重合体において、前記重合体が繊維、薄膜、発泡樹脂、ネット、又はメッシュであることを特徴とする、スパイダーシルクタンパク質の重合体。
【請求項１６】
請求項１５に記載のスパイダーシルクタンパク質の重合体において、前記重合体は、直径が０．１μｍを超え、長さが５ｍｍを超える繊維であることを特徴とする、スパイダーシルクタンパク質の重合体。
【請求項１７】
請求項１０ないし１２のいずれか１項に記載の単離したスパイダーシルクタンパク質を含む組成物であって、ｐＨが６．４以上で、かつ／あるいは前記スパイダーシルクタンパク質の重合を阻止するイオン組成である液体培地において溶解されることを特徴とする組成物。
【請求項１８】
単離した核酸分子であって：
配列番号１４ないし１６、１８及び２４からなる群から選択される核酸配列と；
配列番号３ないし５、１７、１９ないし２３、２５及び３１をコードする核酸配列と；
請求項１０ないし１２のいずれか１項に記載のスパイダーシルクタンパク質をコードする核酸配列と；
その相補的な核酸配列と；
を含むことを特徴とする、単離した核酸分子。