【手続補正書】
【提出日】平成25年5月15日(2013.5.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(Ｉ)
【化１】
2012531454.tif 000001
〔式中、
Ａは記号＊で示す位置で分子の残りに縮合している非置換または置換アリール環または非置換または置換ヘテロ環式環であり；
Ｘ−Ｙは(ＣＨ２)ｒまたはＯ(ＣＨ２)ｔまたは(ＣＨ２)ｔＯであり、ここで、
ｒは１、２または３であり；
ｔは１または２であり；
ｎは０、１または２であり；
ｑは０、１、２、３または４であり；
Ｒ１は、独立して、
ハロ；
ヒドロキシ；
非置換または置換アリール；
非置換または置換アミノ；
非置換Ｃ１−Ｃ７−アルキル；
１回以上ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、非置換または置換アミノ、アリールまたはヘテロシクリル(ここで、アリールはハロで一置換または多置換されていてよい)により置換されているＣ１−Ｃ７−アルキルであるか；または
２個のＲ１置換基が一体となってアルカンジイルを形成し、場合よりヒドロキシまたはハロで置換されていてよい環基を形成する。〕
の化合物またはその塩。
【請求項２】
環Ａが、独立して
非置換または置換Ｃ１−Ｃ７−アルキル；
非置換または置換アミノ；
非置換または置換Ｃ３−Ｃ７−シクロアルキル
から選択される１個、２個または３個のＲ２基で置換されている、
請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項３】
Ｒ２が
非置換Ｃ１−Ｃ７−アルキル；
ジ(Ｃ１−Ｃ７−アルキル)アミノ；
Ｃ３−Ｃ７−シクロアルキルまたはハロで１回以上置換されているＣ１−Ｃ７−アルキル；
非置換Ｃ３−Ｃ７−シクロアルキル；
ハロ、(ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル)またはＣ１−Ｃ７−アルキルで１回以上置換されているＣ１−Ｃ７−シクロアルキルから選択される、
請求項２に記載の化合物またはその塩。
【請求項４】
環ＡがＮ、ＳまたはＯから選択される１個または２個のヘテロ原子を含む非置換または置換５員または６員環であり、ここで、少なくとも１個のヘテロ原子がＮである、
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物、またはその塩。
【請求項５】
環Ａが非置換または置換ピリジン環、非置換または置換ピリミジン環または非置換または置換チアゾール環から選択される、
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項６】
Ｘ−Ｙが(ＣＨ２)ｒまたはＯ(ＣＨ２)ｔ(式中、ｒは２であり、ｔは１である)である、
請求項１〜５のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項７】
Ｒ１が、独立して、
ハロ；
ヒドロキシ；
非置換または置換フェニル；
ジ(Ｃ１−Ｃ７−アルキル)アミノ；
非置換Ｃ１−Ｃ７−アルキル；
ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、ジ(Ｃ１−Ｃ７−アルキル)アミノ、ジ−(過重水素化Ｃ１−Ｃ７−アルキル)アミノ、フェニル、モルホリニル、アセチルアミノ、またはＮ−(Ｃ１−Ｃ７−アルキル)−Ｎ−(フェニルＣ１−Ｃ７−アルキル)アミノ(ここで、各フェニルはハロで一置換または多置換されていてよい)で１回以上置換されているＣ１−Ｃ７−アルキル
である、請求項１〜６のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項８】
ｎが１であり、ｑが１である、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物またはその塩。
【請求項９】
以下のものから選択される、請求項１に記載の化合物：
(２Ｓ,４Ｒ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｓ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｒ)−２−ベンジル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−２−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｒ)−２−メトキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｒ)−２−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
ｄ６−(Ｒ)−２−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｒ)−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
(Ｒ)−２−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
(Ｒ)−２−{[(３−フルオロ−ベンジル)−メチル−アミノ]−メチル}−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−２−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−アゼチジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
５−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,４Ｒ)−４−フルオロ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,４Ｓ)−４−フルオロ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(１Ｓ,５Ｒ)−２−アザ−ビシクロ[３.１.０]ヘキサン−１,２−ジカルボン酸１−アミド２−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(１Ｓ,５Ｒ)−２−アザ−ビシクロ[３.１.０]ヘキサン−１,２−ジカルボン酸１−アミド２−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,４Ｓ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
５−フェニル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
アゼチジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；(Ｓ)−アゼチジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,４Ｓ)−４−ヒドロキシ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,４Ｒ)−４−ヒドロキシ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ジエチルアミノ−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−２−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−アゼチジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,４Ｒ)−４−ジメチルアミノ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[７−(２−フルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル]−アミド}；
(Ｓ)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−シクロプロピルメチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｓ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(１Ｓ,５Ｒ)−２−アザ−ビシクロ[３.１.０]ヘキサン−１,２−ジカルボン酸１−アミド２−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｓ)−３−(アセチルアミノ−メチル)−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｓ)−３−モルホリン−４−イルメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−ヒドロキシ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−メチル−４Ｈ−５−オキサ−１−チア−３,７−ジアザ−シクロペンタ[ａ]ナフタレン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｓ)−３−モルホリン−４−イルメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メトキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｓ)−３−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[８−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル]−アミド}；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メトキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[８−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル]−アミド}；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４Ｈ−５−オキサ−１−チア−３,７−ジアザ−シクロペンタ[ａ]ナフタレン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｓ)−３−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４Ｈ−５−オキサ−１−チア−３,７−ジアザ−シクロペンタ[ａ]ナフタレン−２−イル)−アミド]；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[８−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４Ｈ−５−オキサ−１−チア−３,７−ジアザ−シクロペンタ[ａ]ナフタレン−２−イル]−アミド}；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[７−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル]−アミド}；
(２Ｓ,３Ｒ)−３−メトキシメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−{[７−(２,２,２−トリフルオロ−１,１−ジメチル−エチル)−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル]−アミド}；
(２Ｓ,３Ｓ)−３−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(７−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−ベンゾ[１,２−ｄ；３,４−ｄ']ビスチアゾール−２−イル)−アミド]。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかに記載の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩、および場合によりさらなる治療剤を薬学的に許容される担体と共に含む、医薬組成物。
【請求項１１】
脂質および／またはタンパク質キナーゼ依存性疾患の処置に使用するための、請求項１〜９のいずれかに記載の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
脂質および／またはタンパク質キナーゼ依存性疾患の処置用医薬組成物の製造のための、請求項１〜９のいずれかに記載の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１３】
疾患がクラスＩ  ＰＩ３Ｋに依存する脂質キナーゼ依存性疾患である、請求項１１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
疾患がＰＩ３Ｋアルファ、ＰＩ３Ｋベータ、ＰＩ３Ｋデルタ、ＰＩ３Ｋガンマからなる群から選択されるクラスＩ  ＰＩ３Ｋに依存する脂質キナーゼ依存性疾患である、請求項１１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
疾患が増殖性疾患；良性または悪性腫瘍；次のものから選択される癌；肉腫；肺；気管支；前立腺；乳房(孤発性乳癌およびカウデン病罹患者を含む)；膵臓；消化器癌；結腸；直腸；結腸癌腫；結腸直腸腺腫；甲状腺；肝臓；肝内胆管；肝細胞；副腎；胃；胃の；神経膠腫；神経膠芽腫；子宮内膜；黒色腫；腎臓；腎盂；膀胱；子宮体；子宮頸；膣；卵巣；多発性骨髄腫；食道；白血病；急性骨髄性白血病；慢性骨髄性白血病；リンパ性白血病；骨髄性白血病；脳；脳の癌腫；口腔および咽頭；喉頭；小腸；非ホジキンリンパ腫；黒色腫；絨毛結腸腺腫；新生物；上皮特性の新生物；リンパ腫；乳癌腫；基底細胞癌腫；扁平上皮細胞癌腫；光線性角化症；固形腫瘍を含む腫瘍疾患；頭頚部の腫瘍；真性多血症；本態性血小板血症；および骨髄異型を伴う骨髄線維症である、請求項１１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６】
疾患がクラスＩ  ＰＩ３Ｋに依存する脂質キナーゼ依存性疾患である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１７】
疾患がＰＩ３Ｋアルファ、ＰＩ３Ｋベータ、ＰＩ３Ｋデルタ、ＰＩ３Ｋガンマからなる群から選択されるクラスＩ  ＰＩ３Ｋに依存する脂質キナーゼ依存性疾患である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１８】
疾患が増殖性疾患；良性または悪性腫瘍；次のものから選択される癌；肉腫；肺；気管支；前立腺；乳房(孤発性乳癌およびカウデン病罹患者を含む)；膵臓；消化器癌；結腸；直腸；結腸癌腫；結腸直腸腺腫；甲状腺；肝臓；肝内胆管；肝細胞；副腎；胃；胃の；神経膠腫；神経膠芽腫；子宮内膜；黒色腫；腎臓；腎盂；膀胱；子宮体；子宮頸；膣；卵巣；多発性骨髄腫；食道；白血病；急性骨髄性白血病；慢性骨髄性白血病；リンパ性白血病；骨髄性白血病；脳；脳の癌腫；口腔および咽頭；喉頭；小腸；非ホジキンリンパ腫；黒色腫；絨毛結腸腺腫；新生物；上皮特性の新生物；リンパ腫；乳癌腫；基底細胞癌腫；扁平上皮細胞癌腫；光線性角化症；固形腫瘍を含む腫瘍疾患；頭頚部の腫瘍；真性多血症；本態性血小板血症；および骨髄異型を伴う骨髄線維症である、請求項１２に記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
第一の面において、本発明は式(Ｉ)
【化１】
2012531454.tif 000002
〔式中、
Ａは、記号＊で示す位置で分子の残りに縮合している非置換または置換アリール環または非置換または置換ヘテロ環式環であり；
Ｘ−Ｙは(ＣＨ２)ｒまたはＯ(ＣＨ２)ｔまたは(ＣＨ２)ｔＯであり、ここで、
ｒは１、２または３であり；
ｔは１または２であり；
ｎは０、１または２であり；
ｑは０、１、２、３または４であり；
Ｒ１は、独立して、
ハロ；
ヒドロキシ；
非置換または置換アリール；
非置換または置換アミノ；
非置換Ｃ１−Ｃ７−アルキル；
１回以上ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、非置換または置換アミノ、アリールまたはヘテロシクリル(ここで、アリールはハロで一置換または多置換されていてよい)により置換されているＣ１−Ｃ７−アルキルであるか；または
２個のＲ１置換基が一体となってアルカンジイルを形成し、場合よりヒドロキシまたはハロで置換されていてよい環基を形成する。〕
の化合物、またはその塩、溶媒和物、水和物またはプロドラッグを提供する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５５】
本発明のさらなる態様は、ｎが１であり、そして、２個のＲ１がピロリジン環の３位に結合し、互いにアルカンジイル、好ましくはＣ３−Ｃ８−シクロアルキル、特にシクロプロピルを形成する、すなわち式(ＩＣ)：
【化６】
2012531454.tif 000003
〔式中、置換基は式(Ｉ)の化合物について定義した通りであり、第三のＲ１基は任意であり、存在するならば、好ましくはピロリジン環の４位に結合している。〕
の化合物となる、式(Ｉ)の化合物を含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
上または下において温度が記載されているとき、記載した数値からの僅かな逸脱、例えば、±１０％の逸脱が一般的に耐容性であるため、“約”を付けるべきである。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４８】
工程Ａ.３：Ｎ−(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アセトアミド
【化１４】
2012531454.tif 000004
ピリジン(１３mL)をＮ−(６−ホルミル−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−ベンゾチアゾール−２−イル)−アセトアミド(工程Ａ.４、３.０５ｇ、１２.８mmol)およびｔｅｒｔ.ブチルアミジンヒドロクロライド(１.７８８ｇ、１２.８mmol)に添加し、混合物を密閉容器で、１６０℃で６.５時間加熱した。冷却後反応混合物を濾過して、固体を得た。濾過母液を蒸発させて、さらに固体物質を得た。合わせた固体を熱ＣＨ３ＣＮで素早く摩砕し、ＣＨ３ＣＮ母液を蒸発させて、固体を得て、それは主として表題生成物であることが示された。粗生成物を約１０mlのＭｅＯＨ中１０％ＤＭＳＯに溶解して、僅かに濁った橙色溶液を得て、それを濾過し、水(１００ml)にｒｔで撹拌しながら滴下した。沈殿した固体を濾過により回収して、表題化合物を橙色固体として得た。LCMS: tR 1.37分およびM+H=303.0(方法A3)。1H-NMR in DMSO-d6, 400MHz: 12.40 (s, 1H); 8.44 (s, 1H); 2.88 - 3.00 (m, 4H); 2.17 (s, 3H); 1.32 (s, 9H)。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４９】
工程Ａ.４：Ｎ−(６−ホルミル−７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−ベンゾチアゾール−２−イル)−アセトアミド
【化１５】
2012531454.tif 000005
ＬｉＨＭＤＳ溶液(１Ｍ、２７.７mL)を、１０分間かけて、−７８℃に冷却したＮ−(７−オキソ−４,５,６,７−テトラヒドロ−ベンゾチアゾール−２−イル)−アセトアミド(工程Ａ.５、２.０ｇ、９.２３mmol)の乾燥ＴＨＦ(２０mL)懸濁液にアルゴン雰囲気下滴下した。ＲＭを次いで−７８℃で２.５時間撹拌し、ギ酸メチル(２.３０８mL、３６.９mmol)を３０分間かけて滴下した。ＲＭをゆっくりｒｔに温め、１８時間、ｒｔで撹拌した。ＲＭを水性１Ｍ  ＨＣｌ(７０mL)に取り、ＤＣＭで３回抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、表題化合物を固体として得た。HPLC: tR 3.65分(方法D)。MS: M-H=237。1H-NMR in DMSO-d6 (400MHz): 12.50 (s, br, 1H); 7.55 (s, 1H); 2.90 - 2.60 (m, 4H); 2.15 (s, 3H)。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０１】
実施例７：ｄ６−(Ｒ)−２−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−アミド１−[(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド]
【化６７】
2012531454.tif 000006
イミダゾール−１−カルボン酸(８−ｔｅｒｔ−ブチル−４,５−ジヒドロ−チアゾロ[４,５−ｈ]キナゾリン−２−イル)−アミド(中間体Ａ、９１mg、０.２５６mmol)およびトリエチルアミン(０.０３６mL、０.２５６mmol)を、ＤＭＦ(２mL)に懸濁したｄ６−(Ｒ)−２−ジメチルアミノメチル−ピロリジン−２−カルボン酸アミド(中間体Ｉ、５０mg、０.２８２mmol)にアルゴン雰囲気下添加した。ＲＭを２.７５時間、４０℃で撹拌し、直接２回分取ＨＰＬＣ(方法Ｂ、方法Ｃ)で精製した。各回、生成物含有フラクションを合わせ、３００mg  Bond Elut-SCXカートリッジを通して濾過した。カートリッジをＭｅＯＨ中７Ｍ  アンモニア溶液で溶出し、蒸発させて、黄色固体を得た。固体をＤＣＭに懸濁し、濾過し、真空乾燥して、表題化合物を黄色固体として得た。LCMS: tR 1.21分およびM+H=464.0(方法A1)。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２８１】
５μLのＰＩ／ＯＧとＰＩ３Ｋサブタイプの混合物を添加した(表１)。キナーゼ反応を、最終体積１０μL中１０mM  ＴＲＩＳ−ＨＣｌ  ｐＨ７.５、３mM  ＭｇＣｌ２、５０mM  ＮａＣｌ、０.０５％ＣＨＡＰＳ、１mM  ＤＴＴおよび１μM  ＡＴＰを含む５μlのＡＴＰミックスの添加により開始させ、室温で反応させた。１０μlのKinaseGloで反応を停止させ、プレートを１０分後Synergy2リーダーで、ウェルあたり０.１秒の積分時間を使用して読んだ。２.５μMのパン−クラス１  ＰＩ３キナーゼ阻害剤(標準)をアッセイプレートに添加して、キナーゼ反応の１００％阻害とし、０％阻害を溶媒媒体(９０％ＤＭＳＯの水溶液)で作製した。標準を参照化合物として使用し、全アッセイプレートに１６希釈点のデュプリケートの形態で包含させた。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２８３】
ＰＩ３Ｋのクローニング
ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３ＫβおよびＰＩ３Ｋδ構築物は、ｐ８５α  ｉＳＨ２ドメインおよび各ｐ１１０アイソフォームの構築物である。ｐ８５αフラグメントおよびｐ１１０アイソフォーム遺伝子を、以下に記載する胎盤、精巣および脳由来の市販ＲＮＡからＲＴ−ＰＣＲにより作製した第一鎖ｃＤＮＡからＰＣＲにより得た。ＰＩ３Ｋγ構築物をRoger Williams lab, MRC Laboratory of Molecular Biology, Cambridge, UK (November, 2003)から得て、記載する(Pacold, Michael E.; Suire, Sabine; Perisic, Olga; Lara-Gonzalez, Samuel; Davis, Colin T.; Walker, Edward H.; Hawkins, Phillip T.; Stephens, Len; Eccleston, John F.; Williams, Roger L. Crystal structure and functional analysis of Ras binding to its effector phosphoinositide 3-kinase gamma. Cell (2000), 103(6), 931-943)。
【表３】
2012531454.tif 000007
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２８４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２８４】
BV1075：バキュロウイルスBV-1075のための構築物を、ｐ８５フラグメントおよびベクターpBlueBac4.5にクローン化したｐ１１０αフラグメントから成る３パートライゲーションにより作製した。ｐ８５フラグメントはＮｈｅ／Ｓｐｅで消化したプラスミドp1661-2であった。このクローン由来のｐ１１０αフラグメントを配列決定により確認し、LR410においてＳｐｅＩ／ＨｉｎｄIIIフラグメントとして使用した。バキュロウイルス発現ベクターLR410の作製のために、インサートをGateway適合pBlueBac4.5(Invitrogen)ベクターに移すためのゲイトウェイＬＲ反応を使用した。クローニングベクターpBlueBac4.5(Invitrogen)をＮｈｅ／ＨｉｎｄIIIで消化させた。これは構築物PED 153.8をもたらした。ｐ８５要素(ｉＳＨ２)を、鋳型としてORF 318(上記)および順方向プライマーKAC1028(5'-GCTAGCATGCGAGAATATGATAGAT-TATATGAAG-AATATACC)(配列番号１)および２種の逆方向プライマーKAC1029(5'-GCCTCCACCAC-CTCCGCCTG-GTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC)(配列番号２)およびKAC1039(5'-TACTAGTC-CGCCTCCAC-CACCTCCGCCTCCACCACCTCCGCC)(配列番号３)を使用するＰＣＲにより作製した。２種の逆方向プライマーは重複し、１２×Ｇｌｙリンカーおよびｐ１１０α遺伝子のＮ末端配列をＳｐｅＩ部位に取り込む。１２×Ｇｌｙリンカーは、BV1052構築物の１個のＧｌｙリンカーを置き換える。ＰＣＲフラグメントをpCR2.1 TOPO(Invitrogen)にクローニングした。得られたクローン中、p1661-2が配列決定により正しいと確認された。このプラスミドをＮｈｅおよびＳｐｅＩで消化し、得られたフラグメントをサブクローニングのためにゲル単離および精製した。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２８５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２８５】
ｐ１１０αクローニングフラグメントを、クローンLR410(上記の)ＳｐｅＩおよびＨｉｎｄIIIでの酵素消化により作製した。ＳｐｅＩ部位はｐ１１０α遺伝子のコーディング部位である。得られたフラグメントをサブクローニングのためにゲル単離および精製した。クローニングベクターpBlueBac4.5(Invitrogen)をＮｈｅおよびＨｉｎｄIIIでの酵素消化により作製した。切断ベクターをQiagenカラムから精製し、ウシ腸アルカリホスファターゼ(ＣＩＰ)(BioLabs)で脱リン酸化した。ＣＩＰ反応完了後、切断ベクターを再びカラム精製して、最終ベクターを作製した。Roche Rapidリガーゼおよびベンダー明細を使用して３パートライゲーションを行った。最終プラスミドを配列決定により確認した。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２８８】
ＢＶ９４９：ｐ８５  ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３ＫβおよびＰＩ３ＫδサブユニットのインターＳＨ２ドメイン(ｉＳＨ２)のためのおよび完全長ｐ１１０βサブユニットのためのＰＣＲ産物を、オーバーラッピングＰＣＲにより作製し、融合させた。ｉＳＨ２  ＰＣＲ産物を胎盤、精巣および脳(Clontech)由来の市販ヒトＲＮＡから、最初にプライマーgwG130-p01(5'-CGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3')(配列番号５)およびgwG130-p02(5'-TGGTTT-AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3')(配列番号６)を使用してＲＴ−ＰＣＲにより作製した第一鎖ｃＤＮＡから得た。続いて、二次ＰＣＲ反応において、Gateway組み換えAttB1部位およびリンカー配列をそれぞれｐ８５  ｉＳＨ２フラグメントの５'端および３'端に、プライマーgwG130-p03(5'-GGGACAAGTT-TGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACATATGCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3')(配列番号７)およびｇwG130-p05(5'-ACTGAAGCATCCTCCTC-CTCCTCCT-CCTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC-3')(配列番号８)を使用して付加した。ｐ１１０βフラグメントを、鋳型としてｐ１１０βクローン(配列を確認した未知源由来)を使用し、リンカー配列およびｐ１１０βの５'端を含むプライマーgwG130-p04(5'-ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAGGATGCTT-CAGTTTCATAATGCCTCCTGCT-3')(配列番号９)およびヒスチジンタグに融合したｐ１１０−βの３'端の配列を含むプライマーgwG130-p06(5'-AGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCCAGATC-TGTAGTCTTTCCGAA-CTGTGTG-3')(配列番号１０)を使用するＰＣＲにより得た。ｐ８５−ｉＳＨ２／ｐ１１０β融合タンパク質を、上記ｇｗG130-p03プライマーおよびオーバーラッピングヒスチジンタグおよびＡｔｔＢ２組み換え配列(5'-GGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTTAAGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCC-3')(配列番号11)を含むプライマーを使用して、ｉＳＨ２フラグメントの３'端とｐ１１０βフラグメントの５'端でのリンカーの反応であるオーバーラッピングＰＣＲにより集合させた。この最終生成物をGateway(Invitrogen)OR反応によりドナーベクターｐDONR201(Invitrogen)に組み換えして、ORF253エントリークローンを作製した。このクローンを配列決定により確認し、バキュロウイルス発現ベクターLR280作製のためにインサートをGateway適合pBlueBac4.5(Invitrogen)に移すGatewayLR反応(Invitrogen)に使用した。このLR280はｐ８５配列にアミノ酸変異を有する。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２９４】
ＢＶ１０６０：ｐ８５サブユニットのインターＳＨ２ドメイン(ｉＳＨ２)のためのおよび完全長ｐ１１０δサブユニットのためのＰＣＲ産物をオーバーラッピングＰＣＲにより作製し、融合させた。ｉＳＨ２  ＰＣＲ産物を鋳型としてORF318(上記)およびプライマーgwG130-p03(5'-GGGACAAG-TTTGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACATATGC-GAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3')(配列番号７)およびgwG154-p04(5'-TCCTCCTCCT-CCTCCTCCTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC-3')(配列番号１４)を使用して作製した。ｐ１１０δフラグメントを、胎盤、精巣および脳(Clontech)由来の市販ヒトＲＮＡから、最初にプライマーgwG154-p01(5'-ATGCCCCCTGGGGTGGACTGCCCCAT-3')(配列番号１５)およびgwG154-p02(5'-CTACTGCCTGT-TGTCTTTGGACACGT-3')(配列番号１６)を使用してＲＴ−ＰＣＲにより作製した第一鎖ｃＤＮＡから得た。続くＰＣＲ反応において、リンカー配列およびヒスチジンタグを、プライマーｇw154-p03(5'-ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAGGACCCCCTGGGGTGGAC-TGCCCCATGGA-3')(配列番号１７)およびgwG154-p06(5'-AGCTCCGTGATGGTGATGGTGAT-GTGCT-CCCTGCCTGTTGTCTTTGGACACGTTGT-3')(配列番号１８)を使用して、それぞれのｐ１１０δフラグメントの５'端および３'端に付加した。ｐ８５−ｉＳＨ２／ｐ１１０δ融合タンパク質を、第三のＰＣＲ反応において、オーバーラッピングリンカーにより、ｉＳＨ２フラグメントの３'端とｐ１１０δフラグメントの５'端で、上記gwG130-p03プライマーおよびオーバーラッピングヒスチジンタグおよびGateway(Invitrogen)AttB2組み換え配列(5'-GGG-ACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTTAA-GCTCCGTGATGGTGATGGTGAGTGCTCC-3')(配列番号１９)を含むプライマーを使用して、集合させた。この最終産物をGateway OR反応でドナーベクターpDONR201(Invitrogen)に組み換えし、ＯＲＦ３１９エントリークローンを作製した。このクローンを配列決定により確認し、バキュロウイルス発現ベクターLR415を作製するためのインサートのGateway適合pBlueBac4.5(Invitrogen)ベクターへの移動のためのGatewayＬＲ反応(Invitrogen)に使用した。