【手続補正書】
【提出日】平成25年9月13日(2013.9.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的試料中のAβ標的ペプチドの検出のための方法であって、以下の工程:
i)生物学的試料を少なくとも2つの異なる捕捉抗体と接触させること、
ii)得られる免疫複合体の検出、
iii)前記免疫複合体の破壊、及び
iv)捕捉されたAβペプチドを定量すること
を含む、前記方法。
【請求項２】
前記方法が内部標準試料の存在下で実施される、請求項1記載の方法。
【請求項３】
前記内部標準試料が、血漿試料、脳脊髄液試料、尿試料、リンパ液試料、唾液試料、汗試料、胸水試料、滑液試料、房水試料、涙液試料、胆汁試料、膵分泌物試料から選択される、請求項1又は2記載の方法。
【請求項４】
前記内部標準試料が内部標準血漿試料(ITS)である、請求項1〜3のいずれか一項記載の方法。
【請求項５】
前記方法が、さらなる工程として、生物学的試料の前記Aβ標的ペプチド濃度、例えば、Aβ(1-40)又はAβ(1-42)濃度を、前記内部標準試料中で決定されたそれぞれのAβ標的ペプチドの濃度に対して正規化し、各々の生物学的試料の相対的なAβ標的ペプチドレベルを生じさせることを含む、請求項1〜4のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
前記Aβ標的ペプチドが、その機能的等価物を含むAβ(1-40)又はAβ(1-42)である、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
前記Aβ標的ペプチドが、その機能的等価物を含む、配列番号:2のAβ(1-40)又は配列番号:1のAβ(1-42)である、請求項1〜6のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
前記生物学的試料が、血液、血清、尿、脳脊髄液(CSF)、血漿、リンパ液、唾液、汗、胸水、滑液、涙液、胆汁、及び膵分泌物からなる群から選択される、請求項1〜7のいずれか一項記載の方法。
【請求項９】
前記生物学的試料が血漿である、請求項1〜8のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０】
前記少なくとも2つの異なる捕捉抗体が各々、前記Aβ標的ペプチド上の異なるエピトープに特異的である、請求項1〜9のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
前記捕捉抗体が、
3D6、エピトープ:1-5、
pAb-EL16、エピトープ:1-7、
2H4、エピトープ:1-8、
1E11、エピトープ:1-8、
20.1、エピトープ:1-10、
ウサギ抗Aβポリクローナル抗体、エピトープ:1-14(Abcam)、
AB10、エピトープ:1-16、
82E1、エピトープ:1-16、
pAb1-42、エピトープ:1-11、
NAB228、エピトープ:1-11、
DE2、エピトープ:1-16、
DE2B4、エピトープ:1-17、
6E10、エピトープ:1-17、
10D5、エピトープ:3-7、
WO-2、エピトープ:4-10、
1A3、エピトープ5-9、
pAb-EL21、エピトープ5-11、
310-03、エピトープ5-16、
ニワトリ抗ヒトAβポリクローナル抗体、エピトープ12-28(Abcam)、
ニワトリ抗ヒトAβポリクローナル抗体、エピトープ25-35(Abcam)、
ウサギ抗ヒトAβポリクローナル抗体、エピトープ:N-末端(ABR)、
ウサギ抗ヒトAβポリクローナル抗体(Anaspec)、
12C3、エピトープ10-16、
16C9、エピトープ10-16、
19B8、エピトープ9-10、
pAb-EL26、エピトープ:11-26、
BAM90.1、エピトープ:13-28、
ウサギ抗β-アミロイド(汎)ポリクローナル抗体、エピトープ:15-30(MBL)、
22D12、エピトープ:18-21、
266、エピトープ:16-24、
pAb-EL17;エピトープ:15-24、
4G8、エピトープ:17-24、
ウサギ抗Aβポリクローナル抗体、エピトープ:22-35(Abcam)
G2-10;エピトープ:31-40、
ウサギ抗Aβ、aa 32-40ポリクローナル抗体(GenScript Corporation)、
EP1876Y、エピトープ:x-40、
G2-11、エピトープ:33-42、
16C11、エピトープ:33-42、
21F12、エピトープ:34-42、
1A10、エピトープ:35-40、及び
D-17ヤギ抗Aβ抗体、エピトープ:C-末端
からなる群から選択される、請求項1〜10のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
以下の抗体ペア:
4G8及び11A5-B10、
3D6及び4G8、
6E10及び4G8、
82E1及び4G8、
4G8及び12F4、
4G8及び21F12、
3D6及び21F12、
6E10及び21F12、
BAN50及び4G8、
3D6及び11A5-B10、
3D6及び1A10、
3D6及びBA27、
6E10及び11A5-B10、
6E10及び1A10、
6E10及びBA27、
4G8及び11A5-B10、
4G8及び1A10、
4G8及びBA27、
4G8及び12F4、並びに
4G8及び21F12
が捕捉抗体として用いられる、請求項1〜11のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
前記複合体の検出が、各捕捉抗体と特異的に反応する二次抗体を用いることによって実施される、請求項1〜12のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
前記二次抗体が、抗マウス抗体又は抗ウサギ抗体である、請求項1〜13のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
前記二次抗体が標識されている、かつ／又は、磁気ビーズ上に固定されている、請求項13又は14記載の方法。
【請求項１６】
前記免疫複合体を担持する前記磁気ビーズが、磁気分離装置を用いて前記生物学的試料から分離される、請求項1〜15のいずれか一項記載の方法。
【請求項１７】
前記免疫複合体の破壊が、50％(v/v)メタノール/0.5％(v/v)ギ酸の存在下で行なわれる、請求項1〜16のいずれか一項記載の方法。
【請求項１８】
前記検出された免疫複合体が定量される、請求項1〜17のいずれか一項記載の方法。
【請求項１９】
前記捕捉されたAβペプチドが、サンドイッチELISA、アミロイドβ1-40 HTRF(登録商標)アッセイ、Alphascreen(商標)アッセイ、マルチプレックスアッセイシステム、質量分析、及びウェスタンブロット解析からなる群から選択される定量手段によって定量される、請求項1〜18のいずれか一項記載の方法。
【請求項２０】
前記サンドイッチELISAが、Aβ(1-40)の完全なN-末端に特異的である第1の抗体;及びAβ(1-40)のアミノ酸40で終わるC-末端に特異的である検出抗体を含むか、又は
前記サンドイッチELISAが、Aβ(1-42)の完全なN-末端に特異的である第1の抗体;及びAβ(1-42)のアミノ酸42で終わるC-末端に特異的である検出抗体を含む、請求項19記載の方法。
【請求項２１】
前記サンドイッチELISAが、Aβ(1-40)のC-末端に特異的である第1の抗体;及びAβ(1-40)のAsp-Ala-Gluで始まる完全なN-末端に特異的である検出抗体を含むか、又は
前記サンドイッチELISAが、Aβ(1-42)のC-末端に特異的である第1の抗体;及びAβ(1-42)のAsp-Ala-Gluで始まる完全なN-末端に特異的である検出抗体を含む、請求項19記載の方法。
【請求項２２】
前記第1の抗体が固定されている、請求項20又は21記載の方法。
【請求項２３】
前記検出抗体が標識されている、請求項20又は21記載の方法。
【請求項２４】
Aβ(1-40)の定量のためのELISAキット、又は、Aβ(1-42)の定量のためのELISAキットが用いられる、請求項19記載の方法。
【請求項２５】
前記生物学的試料のドナーである対象の神経変性疾患の状態が、1以上の心理テストで特徴付けられる、請求項1〜24のいずれか一項記載の方法。
【請求項２６】
前記心理テストが、DemTectテスト、ミニメンタルステートテスト(Mini-Mental-State Test)、時計描画テスト、ADAS-Cog、聖なるテスト(Blessed Test)、CANTAB、Cognistat、NPI、BEHAVE-AD、CERAD、CSDD、GDS、及び7分間スクリーニング(The 7 Minute Screen)から選択される、請求項1〜25のいずれか一項記載の方法。
【請求項２７】
アルツハイマー病の診断のための、アルツハイマー病の初期段階の診断のための、アルツハイマー病の鑑別診断のための、又は、軽度認知障害の診断のための、請求項1〜26のいずれか一項記載のAβ標的ペプチドの検出のための方法の使用。
【請求項２８】
請求項1〜26のいずれか一項記載のAβ標的ペプチドの検出のための方法が用いられる、アルツハイマー病の診断のためのインビトロ法。