【手続補正書】
【提出日】平成25年4月22日(2013.4.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的試料から標的バイオエンティティを分離する方法であって、
（ａ）上記生物学的試料を、上記標的バイオエンティティまたは上記標的バイオエンティティ上の決定基に対して選択的な結合親和性を有する磁気的に標識が付けられたリガンドと接触させて、上記生物学的試料中に標的バイオエンティティ／標識付きリガンド複合体を形成し、
（ｂ）磁気モジュールの磁場中に、画定された流体流路を有する分離モジュールを配置し、上記画定された流体流路は、共通の入口と共通の出口を有する複数の管状要素を任意に含み、上記磁気モジュールは少なくとも２つの磁石のアレイを有し、上記アレイ内の隣接する磁石は反対の極性で整列されており、
（ｃ）上記分離モジュールを通して上記生物学的試料を通過させて、上記試料が上記画定された流体流路を通して通過している間、上記生物学的試料を磁場に晒し、上記画定された流体流路内で上記複合体の移動を阻止または阻害することによって、上記標的バイオエンティティ／標識付きリガンド複合体を磁気的に捕捉し、
（ｄ）任意に、かつ好ましくは、上記複合体が上記流体流路内で磁気的に捕捉される間、上記画定された流体流路を通して洗浄液を通過させ、
（ｅ）上記磁場から上記分離モジュールを取り除くとともに、上記流体流路から上記標的バイオエンティティ／標識付きリガンド複合体を回収するステップを含む方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、
上記生物学的試料は、血液、血漿または血清試料であることを特徴とする方法。
【請求項３】
請求項２に記載の方法において、
上記標的バイオエンティティは、核酸、蛋白質または炭水化物であることを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項２に記載の方法において、
上記標的バイオエンティティは、稀な又は非常に稀な循環腫瘍細胞、またはその循環腫瘍細胞のサブ細胞成分であることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法において、
上記生物学的試料は母体の血液試料であり、かつ、上記標的バイオエンティティは循環胎児細胞であることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項１から５までのいずれか一つに記載の方法において、
上記磁気的に標識が付けられたリガンドは、磁性粒子またはビーズに結合された、上記標的バイオエンティティまたは上記標的バイオエンティティ上の決定基に対して特定の結合親和性を有するリガンドを含み、好ましくは、上記リガンドは、抗体、アプタマまたは核酸であることを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項１から６までのいずれか一つに記載の方法において、
（ｉ）上記ステップ（ａ）では、上記生物学的試料は複数の磁気的に標識が付けられたリガンドと接触されるか、または、（ii）上記ステップ（ａ）では、上記生物学的試料の後、洗浄液の１つ以上のアリコートが上記画定された流体流路を通して通過され、また、上記生物学的試料と上記洗浄液との間に、および任意に上記洗浄液のアリコート間に、空気気泡が上記画定された流体流路を通して通過されることを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項１から７までのいずれか一つに記載の方法において、
上記標的バイオエンティティ／標識付きリガンド複合体の回収は、洗浄液の１つ以上のアリコートを、任意に洗浄液のアリコート間の空気気泡とともに、上記流路を通して通過させることによって、上記画定された流体流路から上記複合体を洗い流すステップを含み、好ましくは、上記洗い流すステップは、上記画定された流体流路を通して逆へ洗い流すことを含むことを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項１から８までのいずれか一つに記載の方法において、
上記標的バイオエンティティ／標識付きリガンド複合体の回収は、非結合の磁気的に標識が付けられたリガンドからの上記複合体の分離の、さらなるステップを含み、好ましくは、（ｉ）上記分離のステップは物理的な分離のステップであるか、または、（ii）上記分離のステップでは、第２の結合剤が上記標的バイオエンティティ／標識付きリガンド複合体を捕捉し、固体サポート上に上記標的バイオエンティティ／標識付きリガンド複合体を固定化するために用いられることを特徴とする方法。
【請求項１０】
請求項１から９までのいずれか一つに記載の方法において、
ステップ（ｆ）で上記流体流路から回収された上記標的バイオエンティティ／標識付きリガンドの複合体は、さらに磁気モジュールの磁場内に配置された第２の分離モジュールを通して上記回収された複合体を通過させることによって精製され、任意に上記捕捉された複合体を洗浄し、かつ、上記第２の分離モジュールが上記磁場から取り除かれた後、上記第２の分離モジュールから上記標的バイオエンティティ／標識付きリガンド複合体を回収することを特徴とする方法。
【請求項１１】
請求項１から１０までのいずれか一つに記載の方法において、
第１の分離モジュール内で血液試料から循環腫瘍細胞が分離され、捕捉および洗浄された循環腫瘍細胞は上記第１の分離モジュール内で溶解され、上記循環腫瘍細胞からの溶解物質は上記第１分離モジュールから回収され、上記回収された溶解物質は、或る標的分子のための磁気的に標識が付けられたリガンドと接触し、磁気モジュールの磁場に配置された第２の分離モジュールを通して通過されて、磁性粒子および結合した標的分子が磁気的に捕捉され、そして、上記第２の分離モジュールが上記磁場から取り除かれた後、上記磁性粒子および結合した標的分子は上記第２の分離モジュールから回収され、好ましくは、上記標的分子は、核酸、タンパク質、または炭水化物であることを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項１から１１までのいずれか一つに記載の方法において、
第１の分離モジュールから回収された、捕捉および洗浄された磁気的に結合した循環腫瘍細胞を、リンパ球に標識を付ける大規模な非磁性ビーズに結合した抗リンパ球抗体と接触させることによって、リンパ球のような非特異的に捕捉された細胞は、上記第１分離モジュールで血液試料から分離された循環腫瘍細胞から取り除かれ、磁気モジュールの磁場に配置された第２の分離モジュールを通して上記混合物を通過させて、磁気的に結合した循環腫瘍細胞を捕捉するとともに非磁気結合したリンパ球から分離し、そして、上記第２の分離モジュールが上記磁場から取り除かれた後、上記磁気的に結合した循環腫瘍細胞は上記第２の分離モジュールから回収されることを特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項１に記載の方法において、
ステップ（ａ）では、上記生物学的試料と上記磁気的に標識が付けられたリガンドとの間の接触は、
（ｉ）試料の収集点で上記生物学的試料を上記磁気的に標識が付けられたリガンドと接触させて、上記標的バイオエンティティ／標識付きリガンド複合体が収集サイトと試験サイトとの間で輸送中になることによって、または（ii）上記生物学的試料およびリガンドを含む容器のベースの下に配置された磁石によって上記磁気的に標識が付けられたリガンドを濃縮し、かつ上記試料およびリガンドを上記容器内で再循環させることによって、または（iii）上記流路の周りを又は上記流路に沿って移動する磁石によって、上記生物学的試料の上記流体流路中に、浮遊した磁気的に標識が付けられたリガンドの粒子の雲を形成することによって、
増進されることを特徴とする方法。
【請求項１４】
生物学的試料から標的バイオエンティティを分離するのに使用される装置であって、
（ｉ）画定された流体流路を有する分離モジュールを備え、上記画定された流体流路は、共通の入口と共通の出口を有する複数の管状要素を任意に含み、
（ii）磁場をもつ磁気モジュールを備え、上記磁気モジュールは少なくとも２つの磁石のアレイを有し、上記アレイ内の隣接する磁石は反対の極性で整列されており、
上記分離モジュールは、上記流体流路が上記磁気モジュールの上記磁場内に配置されている第１の位置と、上記流体流路が上記磁気モジュールから除去されている第２の位置とを有し、
（iii）上記分離モジュールが提供する上記画定された流体流路を通して上記生物学的試料と、任意に洗浄液とを通過させるための手段を有するコントローラを備え、それによって、上記試料が上記画定された流体流路を通して通過している間、上記生物学的試料は上記磁気モジュールの磁場に晒される装置。
【請求項１５】
請求項１４に記載の装置において、
上記画定された流体流路は、不活性で可撓性をもつプラスチック製のチューブから形成されており、好ましくは、上記チューブは、０．５ｍｍから５ｍｍまで、好ましくは０．８ｍｍから１．６ｍｍまでの内径を有し、５０ｍｍから２００ｍｍまで、好ましくは１００ｍｍから１２５ｍｍまでの長さを有することを特徴とする装置。
【請求項１６】
請求項１４または請求項１５に記載の装置において、
上記磁気モジュールは少なくとも２つ以上の希土類永久磁石のアレイを含み、それらの磁石は隣り合わせに整列され、隣接する磁石が反対の磁気極性を有していることを特徴とする装置。
【請求項１７】
請求項１４または請求項１５に記載の装置において、
（ｉ）上記分離モジュールは、固定された又は静止している上記磁気モジュールに対して可動であるか、または、（ii）上記磁気モジュールは、固定された又は静止している上記分離モジュールに対して可動であるかのいずれかであることを特徴とする装置。
【請求項１８】
請求項１から１３までのいずれか一つに記載の方法において、
（i）上記生物学的試料を、第１の点又は収集点で収集し、
（ii）上記第１の点で上記試料を、上記磁気的に標識が付けられたリガンドを含む収集媒体に追加し、
（iii）続いて、上記生物学的試料と上記磁気的に標識が付けられたリガンドとを含む上記収集媒体を、第２の点又は試験点に転送し、
（iv）上記第２の点で上記方法を完了するステップを含み、
上記第１の点と第２の点とは分離されており、例えば、互いに遠隔されまたは離れており、および／または、一方での上記試料の収集のステップおよび上記収集媒体に対する上記試料の追加のステップ、および他方での上記方法の完了のステップは、互いに時間的に分離されていることを特徴とする方法。