【誤訳訂正書】
【提出日】平成25年8月28日(2013.8.28)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌の浸潤性を減少させることから成る、癌の治療のための医薬組成物を製造するためのＡＸＬタンパク質に対する抗体及び／又はＡＸＬ遺伝子のドミナントネガティブ突然変異体の使用。
【請求項２】
ＡＸＬタンパク質の受容体チロシンキナーゼ活性を抑制することから成る、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
ＡＸＬタンパク質及びそのリガンド間の相互作用を抑制することから成る、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
ＡＸＬタンパク質に対する抗体及び／又はＡＸＬ遺伝子のドミナントネガティブ突然変異体により製造された医薬組成物が、癌の浸潤性を減少させるのに効果的な量でそれを必要としている被験者に投与される、請求項１から３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
癌が、乳癌、前立腺癌、腎臓癌、肺癌、結腸癌、神経膠芽腫及びその他の癌から選択される、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
癌が神経膠芽腫である、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
被験者が哺乳類である、請求項４から６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
薬理学的活性希釈剤、キャリア及び／又はアジュバントと一緒に、活性剤としてのＡＸＬタンパク質に対する抗体及び／又はＡＸＬ遺伝子のドミナントネガティブ突然変異体を含有する、癌の浸潤性を減少させることから成る癌の治療のための医薬組成物。
【請求項９】
癌の浸潤性を減少させるための請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
薬理学的活性希釈剤、キャリア及び／又はアジュバントと一緒に、活性剤としてのＡＸＬタンパク質に対する抗体及び／又はＡＸＬ遺伝子のドミナントネガティブ突然変異体を含有する、癌の転移形成を減少させるための医薬組成物。
【請求項１１】
癌が神経膠芽腫である、請求項９又は１０に記載の組成物。
【請求項１２】
少なくとも１種のその他の活性剤を含む、請求項８から１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
その他の活性剤が細胞毒性又は細胞増殖抑制剤である、請求項１２に記載の組成物。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
更に、悪性神経膠腫の生物学に関与する新規受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を同定するために、ヒト神経膠腫細胞系におけるＲＴＫ発現プロファイルをｃＤＮＡマイクロアレイ法により判定した。ＥＧＦＲ及びＰＤＧＦＲ−αの他に受容体ＵＦＯ／ＡＸＬが最も顕著に発現したＲＴＫの一つであった。試験した９中７のヒト神経膠腫細胞系で、ＵＦＯ／ＡＸＬｍＲＮＡがＥＧＦＲ用のｍＲＮＡより高い発現レベルを有した（第４表）。ＵＦＯ／ＡＸＬのドミナントネガティブ突然変異体を過剰発現させることによるＵＦＯ／ＡＸＬシグナル形質導入の抑制は、ＵＦＯ／ＡＸＬ野生型形を過剰発現させる細胞と比較すると、マウスで腫瘍進行を抑制し、生存を延ばした。ＵＦＯ／ＡＸＬシグナリングの機序及びその神経膠腫増殖における役割を調べるために、腫瘍細胞形態学及び腫瘍細胞挙動を増殖、凝集能、遊走性及び浸潤性に関して試験管内で評価した。更に、腫瘍細胞挙動、腫瘍起因性血管形成及び腫瘍還流を生体内で生体内多蛍光顕微鏡法により分析した。この試験により、ＵＦＯ／ＡＸＬの新しい役割、即ち、神経膠腫細胞間相互作用、神経膠腫細胞遊走及び神経膠腫浸潤を媒介する役割が示される。ＵＦＯ／ＡＸＬは、悪性脳腫瘍の瀰漫性−浸潤性、局所転移性増殖を媒介に寄与しうる最初のＲＴＫである。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００９】
更に、ＡＸＬ遺伝子のドミナントネガティブ突然変異体の安定過剰発現が、細胞浸潤性及び遊走を強力に抑制することができ、ＡＸＬ機能の抑制が高浸潤性悪性疾患、例えば乳癌又は脳癌、例えば神経膠芽腫で転移生成を抑制し、減少させることを示すことを見出した。ＡＸＬの細胞外部分に対するポリクローナル抗体は、癌細胞、例えば乳癌又は前立腺癌細胞系の遊走及び浸潤度に対して非常に強力な抑制活性を有する。更に、弱浸潤性乳癌、前立腺癌細胞系及び神経膠腫細胞における野生型ＡＸＬの過剰発現はそれらの浸潤度を増加させた。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２１】
更に有利な態様では、阻害剤は、生物学的活性核酸、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ又は合成核酸類似物である。生物学的活性核酸の有利な例は、ＡＸＬ遺伝子又はＡＸＬリガンド遺伝子又はその転写物に対するアンチセンス核酸、リボザイム又はＲＮＡ干渉分子である。更に有利な生物学的活性核酸の例は、ＡＸＬ遺伝子のドミナントネガティブ突然変異体である。生物学的活性核酸は公知方法により、例えばウィルス性又は非ウィルス性遺伝子導入ベクターを使用することによって得られる。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２３】
更に本発明のもう一つの態様は、薬理学的活性希釈剤、キャリア及び／又はアジュバントと一緒に、活性剤としてＡＸＬ遺伝子、ＡＸＬリガンド遺伝子、ＡＸＬタンパク質又はそのリガンド（例えばＧＡＳ６、特に前記したようなＧＡＳ６−ＬＧからの残基）の阻害剤を含有する医薬組成物に関する。この組成物は特に悪性疾患の浸潤度を減らしかつ／又は悪性疾患で転移生成を減少させるために好適である。活性剤として使用される阻害剤の種類に応じて、医薬組成物は液体、固体、例えば粉末、錠剤など、乳濁液又は懸濁液であってよい。組成物は、注入、経口、局所、直腸、鼻腔内又はその他の好適な方法により投与することができる。組成物中の活性剤の有効量は、化合物の種類及び治療すべき疾患に応じて過度の負担なしに当業者により決定することができる。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４０】
第８図．
Ａ．対照ベクターを発現するＳＦ１２６神経膠腫細胞クローン（ＳＦ１２６−ｍｏｃｋ）、ＵＦＯ／ＡＸＬの野生型（ＳＦ１２６−Ｕｆｏ−ＷＴ）及びＵＦＯ／ＡＸＬの切端形ドミナントネガティブ突然変異体（ＳＦ１２６−Ｕｆｏ−ＤＮ）のウェスタンブロット分析。血清−減少細胞を処理しないまま（−）か又は２００μｇ／ｍｌＧａｓ６で処理した（＋）。溶解物を抗ホスホチロシン血清（上部パネル）又はヒトＵＦＯ／ＡＸＬの細胞外ドメインに対する抗体（下の列）でブロットした。ＳＦ１２６−ｍｏｃ細胞と比較して、分析により、各々ＳＦ１２６−ＵＦＯ−ＷＴ及びＳＦ１２６−ＵＦＯ−ＤＮ細胞で増加（約３０％）及び全廃のＧａｓ６／ＵＦＯ／ＡＸＬ媒介シグナリングが実証された。Ｂ〜Ｄ。ＳＦ１２６細胞（Ｂ）におけるＵＦＯ／ＡＸＬの切端形ドミナントネガティブ突然変異体の発現は、ＳＦ１２６−ｍｏｃ及びＳＦ１２５−ＵＦＯ−ＷＴ細胞（Ｂ及びＣ）に比べた場合に、それらの形態学を変化させた。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４１】
第９図．
Ａ．ＳＦ１２６細胞クローンに関する腫瘍容量の分析。腫瘍細胞をヌードマウス（ｎ＝４群当たりの動物）中に皮下に移植し、１４日間追跡した。平均±ＳＥＭ値を表す。＊ｐ＜０．０５対ＳＦ１２６−ｍｏｃ細胞。Ｂ．生体内多蛍光ビデオ顕微鏡法により評価した、ＳＦ１２６細胞クローンをヌードマウスのｄｏｒｓａｌ  ｓｋｉｎｆｏｌｄ  ｃｈａｍｂｅｒ中に移植後の腫瘍面積の定量的分析（左パネル）及び機能性血管密度（右パネル）（ｎ＝４、群当たりの動物）。平均±ＳＤ値を表す。統計分析をＡＮＯＶＡ、次いで適切な事後検定（ｐｏｓｔ  ｈｏｃ  ｔｅｓｔ）により群間の個別比較を実施した；＊ｐ＜０．０５対ＳＦ１２６−Ｕｆｏ−ＤＮ細胞。Ｃ及びＤ．腫瘍容量の差異を示すＳＦ１２６−ＵＦＯ−ＷＴ腫瘍（Ｃ）及びＳＦ１２６−ＵＦＯ−ＤＮ腫瘍（Ｄ）の代表的組織形態学像。バーは１ｍｍを表す。Ｈ＆Ｅ染色。Ｅ及びＦ．腫瘍浸潤の差異を示すＳＦ１２６−ＵＦＯ−ＷＴ腫瘍（Ｅ）及びＳＦ１２６−ＵＦＯ−ＤＮ腫瘍（Ｆ）の代表的組織形態学像。ＳＦ１２６−ＵＦＯ−ＷＴ腫瘍は、隣接皮膚筋肉及び皮下組織を広範囲に浸潤した（Ｅ）（矢印は破壊された筋肉層の残遺物を示す）が、ＳＦ１２６−ＵＦＯ−ＤＮ腫瘍細胞浸潤はほぼ完全に抑制された（Ｆ）。（Ｆ）中で筋肉層の構造は保持された。バーは１００μｍを表す。Ｈ＆Ｅ染色。Ｈ及びＩ．蛍光顕微鏡を単独（Ｇ）及び位相差と組み合わせて（Ｈ）、隣接組織層中へのＳＦ１２６−ＵＦＯ−ＤＮ腫瘍細胞の浸潤の不在を確認。腫瘍細胞は移植の前にＤｉｌで標識付けした。バーは１００μｍを表す。全試料は、ヌードマウスのｄｏｒｓａｌ  ｓｋｉｎｆｏｌｄ  ｃｈａｍｂｅｒ中へ移植後２１日目に摘出した。ｔ、腫瘍塊；ｍ、皮膚筋肉層；ｓｃ、皮下組織。ＳＦ１２６−ｍｏｃ、対照；ＳＦ１２６−Ｕｆｏ−ＷＴ、ＵＦＯ／ＡＸＬの野生型を発現する細胞；ＳＦ１２６−Ｕｆｏ−ＤＮ、ＵＦＯ／ＡＸＬの切端形ドミナントネガティブ突然変異体を発現する細胞。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４２】
第１０図．
Ａ．ＳＦ１２６細胞クローンのＭＴＴ増殖アッセイ。Ｇａｓ６（２００μｇ／ｍｌ）の不在及び存在下。細胞は左未処理（−Ｇａｓ６）又は２００μｇ／ｍｌのＧａｓ６で処理した（＋Ｇａｓ６）。分析は培養４８時間後に実施した。増殖率は刺激しなかったＳＦ１２６−ｍｏｃ細胞に関して表す。平均値を表す。Ｂ及びＣ．ＵＦＯ／ＡＸＬ機能の抑制に付随する変化のない凝集能を実証するＳＦ１２６−Ｕｆｏ−ＷＴ及びＳＦ１２６−Ｕｆｏ−ＤＮ細胞クローンによる多細胞凝集体形成。Ｄ．７日間の観察期間中のＳＦ１２６細胞クローンの遊走性。遊走面積を画像分析システムを用いて面積測定法により分析した。平均±ＳＤ値を表す。統計分析は、ＡＮＯＶＡ、次いで対応のないスチューデントｔ検定を使用して行った。＊ｐ＜０，０５対ＳＦ１２６−ｍｏｃ。Ｅ及びＦ。胎児ラット脳凝集体を用いるＳＦ１２６−ＵＦＯ−ＷＴ腫瘍細胞スフェロイド（Ｅ）又はＳＦ１２６−ＵＦＯ−ＤＮ腫瘍細胞スフェロイド（Ｆ）の４８時間対比による腫瘍細胞浸潤の分析。ＳＦ１２６−ＵＦＯ−ＤＮ腫瘍細胞スフェロイドと脳細胞凝集体の間の輪郭の鮮明な境界は、ＵＦＯ／ＡＸＬ機能の抑制による浸潤性の欠如を示す。Ｂ，脳細胞凝集体；Ｓ、腫瘍スフェロイド、ＳＦ１２６−ｍｏｃｋ、対照；ＳＦ−１２６−Ｕｆｏ−ＷＴ、ＵＦＯ／ＡＸＬの野生型を発現する細胞；ＳＦ１２６−Ｕｆｏ−ＤＮ、ＵＦＯ／ＡＸＬの切端形ドミナントネガティブ突然変異体を発現する細胞。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６９】
高浸潤性ＢＣ細胞系中で安定過剰発現されたＡＸＬ遺伝子（ｄｎＡＸＬ）のドミナントネガティブ突然変異体は強力に、幾つかのＢＣ細胞系の浸潤性、遊走性及び生存度を抑制した：ＭＤＡ−Ｍｂ−４３５Ｓ、ＢＴ５４９及び部分的にＭＤＡ−ＭＢ−２３１（第５Ａ及びＢ）。安定なｄｎ−ＡＸＬ発現を有するクローンは全て、非浸潤性又は弱浸潤性乳癌細胞系、例えばＭＣＦ７のように、マトリゲルマトリックス上で３Ｄ−増殖を有した。ｄｎ−ＡＸＬ発現は有意にＧＡＳ６シグナリングを抑制し、その結果ＧＡＳ処理でＡＸＬ燐酸化は減少又は欠如する。これらの細胞中のＥＲＫシグナリングも遮断された。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７３】
１．３  発現コントラクト及び安定細胞系の生成
ＡＸＬ用コード２．７ｋｂｐのｃＤＮＡシークエンスをレトロウィルスベクターｐＬＸＳＮのＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ制限部位中にクローンした。ドミナントネガティブ突然変異体を１．５ｋｂｐのＥｃｏＲＩ／Ｆｓｐｌフラグメントを同じベクター中にサブクローンすることによって産生した。発現プラスミド及び空ベクターを燐酸カルシウム共沈殿法を用いてＰｈｏｅｎｉｘ−Ａｍｐｈｏ細胞中にトランスインフェクションした。組換えレトロウィルスを含有する上澄みをトランスインフェクション後２８時間ハーベストし、最終濃度８μｇ／ｍｌでポリブレンと混合し、サブコンフルエントＳＦ１２６細胞に３時間適用した。感染を同じプロデューサー細胞の新しい上澄みを用いて２回繰り返した。感染した細胞を１日後に通過させ、１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を用いて２週間選別した。モノクローナル細胞系をウェスタンブロット分析によりモニターしたようにＡＸＬの高発現用に選択した。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９２】
ＵＦＯ／ＡＸＬの生物学的機能を調べるために、このヒト神経膠腫細胞のお互いの相互作用の複合力及びマトリックスを詳細に分析した。結果として、切端形ドミナントネガティブ受容体突然変異体を発現させることによるＵＦＯ／ＡＸＬ機能の抑制が細胞の健康な脳組織中への遊走及び浸潤力をほぼ完全に抑制することを実証することができた。本実験で使用したＵＦＯ／ＡＸＬの突然変異体が細胞内ドメインを欠き、細胞外ドメインはなお機能的に無傷であることを特記すべきである。従って、ＵＦＯ／ＡＸＬは腫瘍細胞浸潤を単に受容体のマトリックスとの相互作用だけによって媒介するのではなく、むしろ複合シグナリングカスケード下流受容体を巻き込むことによって媒介する。更に、本結果は、ＵＦＯ／ＡＸＬが潜在的に再び細胞間及び細胞−マトリックス相互作用を調整することにより腫瘍細胞増殖に関与していることも示す。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９９】
２．ＡＸＬのドミナントネガティブ突然変異体（ｄｎ−ＡＸＬ）は、高浸潤性乳癌細胞系を強力に抑制し、それらの血清停止（アポトーシス）に対するそれらの感受性を増加させる。ＡＸＬの細胞外部分に対するポリクローナル抗体（アミノ酸残基１−４１０、Ｅｘ−ＡＸＬを含む）は治療した癌細胞の攻撃性を抑制することができる。