【手続補正書】
【提出日】平成21年8月10日(2009.8.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
オーレオバシディウム属に属する微生物の菌体を含有してなる免疫調節剤。
【請求項２】
さらに、珪藻土を含有してなる請求項１記載の免疫調節剤。
【請求項３】
乾燥質量で、オーレオバシディウム属に属する微生物の菌体１質量部に対して珪藻土を０．０１質量部乃至２５質量部含有してなる請求項２記載の免疫調節剤。
【請求項４】
さらに、飼料、餌料又はペットフードに添加可能な、増量剤、糖類、ミネラル類、ビタミン類、医薬品、生理活性物質から選ばれる１種又は２種以上を含有してなる請求項１乃至３の何れかに記載の免疫調節剤。
【請求項５】
オーレオバシディウム属に属する微生物が、オーレオバシディウム  プルランスである請求項１乃至４の何れかに記載の免疫調節剤。
【請求項６】
オーレオバシディウム属に属する微生物が死菌体である請求項１乃至５の何れかに記載の免疫調節剤。
【請求項７】
イムノグロブリンＡ産生増強剤及び／又はイムノグロブリンＥ産生抑制剤としての請求項１乃至６の何れかに記載の免疫調節剤。
【請求項８】
請求項１乃至７の何れかに記載の免疫調節剤を経口摂取せしめるヒトを除く動物の免疫調節方法。
【請求項９】
請求項１乃至７の何れかに記載の免疫調節剤を含有してなる動物の飼料。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
しかしながら、濃厚飼料を与えることによる弊害も報告されている。一般にいわれている影響のひとつは体内の酸性化で、特に胃腸にかかる負担が大きく、阻害例としては家畜の成長性等の問題が挙げられる。また、微生物の感染に対して抗生物質を使用した場合には、その残留に伴う安全性の面、多用による耐性菌の出現等も問題視されるようになってきた。その結果、家畜に感染症などの様々な要因が複合し、下痢、軟便等の症状が多く見られ、特に幼畜の体重増加の鈍化が問題となっている。また、ペットについても、室内での飼育に伴う運動不足やストレスにより免疫能が低下し、微生物感染やアレルギーの発生が認められ、感染症に起因する下痢や軟便、体重の減少など、健康状態が悪化する例が多数発生している。このような家畜の症状を改善したり、飼料効果を賦与するための家畜用飼料添加剤も提案されているものの（例えば、特許文献１乃至３参照）、より効果的に、上記問題を解決し、動物の健康を維持・増進することのできる免疫調節剤の開発が求められている。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本発明の免疫調節剤は、本発明の作用効果を妨げない範囲で、必要に応じて、さらに、他の成分を任意に含有させることができる。例えば、ブドウ糖、果糖、マルトース、イソマルトースをはじめとするマルトオリゴ糖、水飴、ニゲロース、ニゲロオリゴ糖などの還元性糖類、α，α−トレハロース、α，α−トレハロースの糖質誘導体、α，β−トレハロース、ラクトスクロース、ラクトネオトレハロース、ラフィノース、エルロース、α−サイクロデキストリン、β−サイクロデキストリン、γ−サイクロデキストリン、国際公開ＷＯ ０２／１０３６１号明細書などに開示されたサイクロ｛→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→｝の構造を有する環状四糖（サイクロニゲロシルニゲロース：Ｃｙｃｌｏｎｉｇｅｒｏｓｙｌｎｉｇｅｌｏｓｅ）、特開平２００５−９５１４８号公報などに開示されたサイクロ｛→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→｝の構造を有する環状四糖（サイクロマルトシルマルトース：Ｃｙｃｌｏｍａｌｔｏｓｙｌｍａｌｔｏｓｅ）、国際特許願ＰＣＴ／ＪＰ２００５／１７６４２号明細書に開示されたサイクロ｛→６）−［α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］ｎ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→｝（ｎは４又は５を意味する）の構造を有する環状五糖や環状六糖や、これらの環状オリゴ糖の糖質誘導体などの非還元性糖類、グルコサミン、ガラクトサミン、マンノサミンなどのアミノ糖、マルチトール、マルトトリイトール、ラクチトールなどのオリゴ糖の糖アルコール、エリスリトール、キシリトール、ソルビトール、マンニトールなどの単糖類の糖アルコール類、アスパルテーム、ステビア抽出物、スクラロース、アセスルファムＫなどの高甘味度甘味料、プルラン、カラギーナン、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸やその塩類、キチン、キトサンなどの天然ガム類、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルセルロースなどの合成高分子ポリマー、コラーゲン、ゼラチンなどの増粘剤の何れか１種又は２種以上を添加することができる。なかでも、環状四糖、環状五糖、環状六糖、α，α−トレハロース、ラクトスクロース、キチン、キトサンなどは、何れも、腸管における免疫調節能、及び、ビフィズス菌や乳酸菌などの酸（有機酸）生成菌の増殖促進活性を有し、本発明の免疫調節剤の免疫調節能を増強すると共に、腸内環境の改善にも役立つことから、特に望ましい。これらの免疫調節能を有する糖質を併用する場合の糖質の使用量は、オーレオバシディウム菌の菌体のもつ免疫調節能を増強できる量であれば、特に制限はなく、通常は、該菌体（乾燥質量）１質量部に対して、０．０１質量部乃至１００質量部添加すればよく、０．１質量部乃至１０質量部の添加が望ましく、０．５質量部乃至１０質量部の添加が特に望ましい。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
これらの結果は、マウスにオーレオバシディウム菌の菌体を摂取せしめることにより、糞中及び血液中へのＩｇＡの分泌を増強すると共に、腸内の酸生成菌数を増加させて、腸内の免疫を増強すると共に、腸内環境を整えることができることを物語っている。また、マウスにオーレオバシディウム菌の菌体を摂取せしめることにより、ＩｇＥ抗体の産生を増強する作用を有するＩＬ−４の産生を抑制することから、アレルギーを抑制することができることを物語っている。さらに、これらのＩｇＡやＩｇＥの産生に関わる免疫調節作用は何れも、オーレオバシディウム菌の菌体を単独で摂取させた場合よりも、珪藻土に混合したものを摂取させた方が効果的であること、及び、生菌と死菌とはほぼ同等の効果を有していることを物語っている。また、これらの効果は、オーレオバシディウム菌のなかでもオーレオバシディウム プルランスで特に強いことを物語っている。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
＜実験５＞
＜オーレオバシディウム  プルランスの菌体を経口摂取した場合の菌体と珪藻土との配合割合の、ＩｇＡ産生、ＩｇＥ産生及びリンパ球からのＩＬ−４産生に及ぼす影響＞
実験１で調製したオーレオバシディウム  プルランス（ＩＦＯ  ６３５３）の死菌体（試験標品２）１質量部を２０質量部の水に懸濁し、これに、珪藻土を適量加えて撹拌し、濾過して、オーレオバシディウム
プルランスの死菌体と珪藻土との混合割合が、表５に示す比率（乾燥質量比）となるように試験標品を調製した。これらの試験試料を、８週齢雄性ＢＡＬＢ／ｃマウスに、菌体摂取量として、乾燥質量で、１０ｍｇ／ｋｇ・体重／匹となるように、試験試料の摂取量に応じて０．２ｍｌ乃至０．４ｍｌのＰＢＳに懸濁して毎日強制的に摂取させた。摂取は、ゾンデを用いて胃腔内に、毎日１回、４週間投与した。対照として、試験標品の調製に使用した珪藻土を、ＰＢＳに乾燥質量で５０ｍｇ／ｍｌとなるように懸濁した溶液を、０．２ｍｌ／匹（珪藻土を、乾燥質量で、１０ｍｇ／ｋｇ・体重／匹摂取）、ゾンデを用いて胃腔内に、毎日１回、４週間投与した。試験には、各群１０匹のマウスを使用した。試験標品或いは対照を４週間投与した翌日に、実験４と同様に、採糞、採血後、脾臓を採取し、１×１０６細胞／ｍｌの単細胞の懸濁液を調製した。血液中のＩｇＡ量、ＩｇＥ量、糞中のＩｇＡ量、酸生成菌数、脾細胞をＬＰＳで刺激した際のＩＬ−４産生量を測定し、試験標品を投与した時の各測定項目の値を、対照を投与した群の各測定項目の測定値を１００とした相対値として表５に示す。