【手続補正書】
【提出日】平成24年1月24日(2012.1.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸−脂質粒子であって、ＰＣＳＫ９遺伝子に標的化されたｄｓＲＮＡおよび２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソランを含み、ここで該ｄｓＲＮＡが配列番号１５２３に相補的な領域を有する、核酸−脂質粒子。
【請求項２】
核酸−脂質粒子であって、ＰＣＳＫ９遺伝子に標的化されたｄｓＲＮＡおよび１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパンを含み、ここで該ｄｓＲＮＡが配列番号１５２３に相補的な領域を有する、核酸−脂質粒子。
【請求項３】
前記ｄｓＲＮＡのセンス鎖が配列番号１２２７からなり、該ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖が配列番号１２２８からなる、請求項１または２に記載の核酸−脂質粒子。
【請求項４】
前記ｄｓＲＮＡがＡＤ−９６８０である、請求項１または２に記載の核酸−脂質粒子。
【請求項５】
前記ｄｓＲＮＡのうちの少なくとも１つの鎖が少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項１または２に記載の核酸−脂質粒子。
【請求項６】
前記ｄｓＲＮＡのうちの少なくとも１つの鎖は、２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチド、５’−ホスホロチオエート基を有するヌクレオチド、コレステリル誘導体に結合した末端ヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−フルオロ修飾ヌクレオチド、２’−デオキシ−修飾ヌクレオチド、ロックされたヌクレオチド、無塩基ヌクレオチド、２’−アミノ−修飾ヌクレオチド、２’−アルキル−修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホロアミデート、および非天然塩基を含むヌクレオチドからなる群より選択される少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項５に記載の核酸−脂質粒子。
【請求項７】
脂質製剤は４０％  ２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン、１０％  ＤＳＰＣ、４０％  コレステロール、および１０％  ＰＥＧ−ＤＯＭＧを含む、請求項１および３〜６のいずれか一項に記載の核酸−脂質粒子。
【請求項８】
脂質製剤は約４０％の１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパンを含む、請求項２〜６のいずれか一項に記載の核酸−脂質粒子。
【請求項９】
前記ｄｓＲＮＡが、リガンド、または肝臓細胞を越えた取込みを促進する薬剤、またはＣｈｏｌ−ｐ−（ＧａｌＮＡｃ）３（Ｎ−アセチルガラクトサミンコレステロール）もしくはＬＣＯ（ＧａｌＮＡｃ）３（Ｎ−アセチルガラクトサミン−３’−リトコール−オレオイル）からなる群より選択される薬剤にコンジュゲートされている、請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸−脂質粒子。
【請求項１０】
対象におけるＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害するための、請求項１〜９のいずれか一項記載の核酸−脂質粒子を含む組成物であって、該組成物の第１の用量と、時間間隔を置いた後に、任意でその第２の用量とが投与され、該時間間隔が７日以上であることを特徴とする、組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、前記対象における血清ＬＤＬコレステロールを低減させるか、総血清コレステロールを低減させるか、ＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）レベルを増大させるか、または肝臓トリグリセリドレベルまたは肝臓コレステロールレベルの変化を引き起こさない、請求項の１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ｄｓＲＮＡの第１の用量または前記第２の用量が、約０．０１、０．１、０．３、０．５、１．０、２．５、３．０または５ｍｇ／ｋｇで投与されることを特徴とする、請求項１０または１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記対象が霊長類または高脂肪血症のヒトである、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、真皮下または皮下または静脈内に投与されることを特徴とする、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
第２の化合物が前記ｄｓＲＮＡとともに共投与されることを特徴とする、請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記第２の化合物が、高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化症、および脂質代謝異常を治療するための薬剤ならびにスタチンからなる群から選択される、請求項１５に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
組成物のさらなる一実施形態では、ｄｓＲＮＡは、脂質製剤、例えば、ＬＮＰまたはＳＮＡＬＰ製剤中にある。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
対象におけるＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害するための方法であって、ＰＣＳＫ９を標的とする第１の用量のｄｓＲＮＡを投与する工程と、時間間隔を置いた後に、任意で第２の用量のｄｓＲＮＡを投与する工程であって、前記時間間隔が７日以上である工程とを含む方法。
（項目２）
前記方法が、少なくとも４０％または少なくとも３０％、ＰＣＳＫ９遺伝子発現を阻害する、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記方法が、前記対象における血清ＬＤＬコレステロールを低減させる、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目４）
前記方法が、前記対象における血清ＬＤＬコレステロールを、少なくとも７日間、少なくとも１４日間、または少なくとも２１日間低減させる、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目５）
前記方法が、前記対象における血清ＬＤＬコレステロールを少なくとも３０％低減させる、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
前記方法が、前記第１の用量を投与してから２日以内にまたは３日以内にまたは７日以内に血清ＬＤＬコレステロールを低減させる、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記方法が、３日以内に血清ＬＤＬコレステロールを少なくとも３０％低減させる、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
循環血清ＡｐｏＢが低下するか、またはＨＤＬｃレベルが安定となるか、またはトリグリセリドレベルが安定となる、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
前記方法が、前記対象における総血清コレステロールを低減させる、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
前記方法が、前記対象における総コレステロールを、少なくとも７日間、少なくとも１０日間、少なくとも１４日間、または少なくとも２１日間低減させる、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
前記方法が、前記対象における総コレステロールを少なくとも３０％低減させる、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
前記方法が、投与してから２日以内にまたは３日以内にまたは７日以内に総コレステロールを低減させる、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
ｄｓＲＮＡの単回投与を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記方法が、ＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）レベルを増大させる、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記方法が、肝臓トリグリセリドレベルまたは肝臓コレステロールレベルの変化を引き起こさない、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記ｄｓＲＮＡが、表１ａ、表２ａ、表５ａ、もしくは表６に記載のｄｓＲＮＡまたはＡＤ-３５１１である、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
ＰＣＳＫ９標的が配列番号１５２３である、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記ｄｓＲＮＡが、配列番号１５２３に対する少なくとも１つの内部ミスマッチを含むセンス鎖を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記ｄｓＲＮＡが、配列番号１２２７からなるセンス鎖と配列番号１２２８からなるアンチセンス鎖を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記ｄｓＲＮＡがＡＬＤＰ-９６８０である、上記項目のいずれか一項に記載の方法
。
（項目２１）
前記ｄｓＲＮＡが、配列番号１５２４を標的とする、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記ｄｓＲＮＡが、配列番号１５２４に対する少なくとも１つの内部ミスマッチを含むセンス鎖を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記ｄｓＲＮＡが、配列番号４５７からなるセンス鎖と配列番号４５８からなるアンチセンス鎖を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
前記ｄｓＲＮＡがＡＬＤＰ-１０７９２である、上記項目のいずれか一項に記載の方
法。
（項目２５）
前記ｄｓＲＮＡが、ＰＣＳＫ９をコードするｍＲＮＡの３０個未満の連続するヌクレオチドに実質的に相補的なアンチセンス鎖を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記ｄｓＲＮＡが、ＰＣＳＫ９をコードするｍＲＮＡの１９〜２４個のヌクレオチドに実質的に相補的なアンチセンス鎖を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記ｄｓＲＮＡの各々の鎖が、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヌクレオチドの長さである、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記ｄｓＲＮＡの少なくとも１つの鎖が、少なくとも１つの追加の修飾ヌクレオチドを含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記ｄｓＲＮＡの少なくとも１つの鎖が、２'-Ｏ-メチル修飾ヌクレオチド、５'-ホス
ホロチオエート基を有するヌクレオチド、コレステリル誘導体に結合した末端ヌクレオチド、２'-デオキシ-２'-フルオロ修飾ヌクレオチド、２'-デオキシ-修飾ヌクレオチド、ロックされたヌクレオチド、無塩基ヌクレオチド、２'-アミノ-修飾ヌクレオチド、２'-ア
ルキル-修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホロアミデート、および非天
然塩基を含むヌクレオチドからなる群から選択される少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記ｄｓＲＮＡがリガンドにコンジュゲートされている、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記ｄｓＲＮＡが、肝臓細胞を越えた取込みを促進する薬剤にコンジュゲートされている、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
前記ｄｓＲＮＡが、肝臓細胞を越えた取込みを促進する薬剤にコンジュゲートされており、前記薬剤が、Ｃｈｏｌ-ｐ-（ＧａｌＮＡｃ）３（Ｎ-アセチルガラクトサミンコレス
テロール）またはＬＣＯ（ＧａｌＮＡｃ）３（Ｎ-アセチルガラクトサミン-３'-リトコール-オレオイルを含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記ｄｓＲＮＡが脂質製剤中で投与される、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記ｄｓＲＮＡがＬＮＰまたはＳＮＡＬＰ製剤中で投与される、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
前記ｄｓＲＮＡの第１または第２の用量が、約０．０１、０．１、０．５、１．０、２．５、または５ｍｇ／ｋｇで投与される、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記対象が霊長類である、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記対象がヒトである、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
前記対象が高脂肪血症のヒトである、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
前記ｄｓＲＮＡが、真皮下または皮下または静脈内に投与される、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
第２の化合物がｄｓＲＮＡとともに共投与される、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
第２の化合物が、高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化症、および脂質代謝異常を治療するための薬剤からなる群から選択される、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
第２の化合物がスタチンを含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
表６に記載の単離されたｄｓＲＮＡのいずれかまたはＡＤ-３５１１を含む組成物。
（項目４４）
前記ｄｓＲＮＡの少なくとも１つの鎖が、少なくとも１つの追加の修飾ヌクレオチドを含む、項目４２に記載の組成物。
（項目４５）
前記ｄｓＲＮＡの少なくとも１つの鎖が、２'-Ｏ-メチル修飾ヌクレオチド、５'-ホス
ホロチオエート基を有するヌクレオチド、コレステリル誘導体に結合した末端ヌクレオチド、２'-デオキシ-２'-フルオロ修飾ヌクレオチド、２'-デオキシ-修飾ヌクレオチド、ロックされたヌクレオチド、無塩基ヌクレオチド、２'-アミノ-修飾ヌクレオチド、２'-ア
ルキル-修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホロアミデート、または非天
然塩基を含むヌクレオチドからなる群から選択される少なくとも１つの追加の修飾ヌクレオチドを含む、項目４２または４３に記載の組成物。
（項目４６）
前記ｄｓＲＮＡがリガンドにコンジュゲートされている、上記の組成物の項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４７）
前記ｄｓＲＮＡが、肝臓細胞を越えた取込みを促進する薬剤にコンジュゲートされている、上記の組成物の項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４８）
前記ｄｓＲＮＡが、Ｃｈｏｌ-ｐ-（ＧａｌＮＡｃ）３（Ｎ-アセチルガラクトサミンコ
レステロール）またはＬＣＯ（ＧａｌＮＡｃ）３（Ｎ-アセチルガラクトサミン-３'-リトコール-オレオイルからなる群から選択される薬剤にコンジュゲートされている、上記の
組成物の項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４９）
前記ｄｓＲＮＡが脂質製剤中にある、上記の組成物の項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５０）
前記ｄｓＲＮＡがＬＮＰまたはＳＮＡＬＰ製剤である、上記の組成物の項目のいずれか一項に記載の組成物。