【手続補正書】
【提出日】平成21年7月17日(2009.7.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
レーザ光の照射によって励起された第１の分子のエネルギーが第２の分子に移動するＦＲＥＴ（Fluorescence Resonance Energy Transfer）を検出するＦＲＥＴ検出方法であって、
第１の分子を励起するために、第１の周波数で強度変調した第１のレーザ光を第１の分子に照射するとともに、第２の分子を励起するために、第１の周波数と異なる第２の周波数で強度変調した第２のレーザ光を第２の分子に照射するステップと、
第２の分子が発する蛍光を受光するステップと、
受光した第２の分子が発する蛍光の蛍光信号のうちの前記第１の周波数の信号成分の、第１のレーザ光の強度変調に対する第１の位相遅れと、受光した前記第２の分子が発する蛍光の蛍光信号のうちの前記第２の周波数の信号成分の、第２のレーザ光の強度変調に対する第２の位相遅れとを取り出し、この第１の位相遅れと第２の位相遅れとに基づいて、第１の分子のエネルギーが第２の分子に移動するエネルギー移動の有無を判定するステップと、を有することを特徴とするＦＲＥＴ検出方法。
【請求項２】
前記エネルギー移動は、前記第２の位相遅れに対する前記第１の位相遅れの比によって判定される請求項１に記載のＦＲＥＴ検出方法。
【請求項３】
前記第１のレーザ光は、前記第１のレーザ光の強度変調のために第１の周波数を有する第１の変調信号を用いて強度変調され、前記第２のレーザ光は、前記第２のレーザ光の強度変調のために第２の周波数を有する第２の変調信号を用いて強度変調され、前記第１の周波数の変調信号は、前記第２の周波数の変調信号に、前記差分周波数の生成信号を合成して得られた信号であり、
受光した前記第２の分子が発する蛍光の蛍光信号は、前記差分周波数の生成信号に同期して、前記差分周波数の整数倍の周波数をサンプリング周波数としてサンプリングされる請求項１又は２に記載のＦＲＥＴ検出方法。 
【請求項４】
前記サンプリングされた蛍光信号を前記差分周波数の整数分の１の周波数を周波数分解能として周波数分析をすることにより、前記蛍光信号のうちの前記第１の周波数の信号成分と蛍光信号のうちの前記第２の周波数の信号成分とを抽出する請求項３に記載のＦＲＥＴ検出方法。 
【請求項５】
前記第２の分子が発する蛍光を受光する際、さらに、前記第１の分子が発する蛍光を受光し、
受光した前記第１の分子の発する蛍光の蛍光信号の、第１のレーザ光の強度変調に対する第３の位相遅れを算出し、この第３の位相遅れをＦＲＥＴの発生の有無の判定に用いる請求項１〜４のいずれか１項に記載のＦＲＥＴ検出方法。 
【請求項６】
レーザ光の照射によって励起された第１の分子のエネルギーが第２の分子に移動するＦＲＥＴを検出するＦＲＥＴ検出装置であって、
第１の分子を励起するために、第１のレーザ光を第１の分子に照射するとともに、第２の分子を励起するために、第２のレーザ光を第２の分子に照射するレーザ光源部と、
第２の分子が発する蛍光を受光する受光部と、
前記レーザ光源部から出射する第１のレーザ光を第１の周波数で強度変調させ、かつ前記レーザ光源部から出射する第２のレーザ光を第１の周波数と異なる第２の周波数で強度変調させるために、変調信号を生成する光源制御部と、
受光した第２の分子が発する蛍光の蛍光信号のうちの前記第１の周波数の信号成分の、第１のレーザ光の強度変調に対する第１の位相遅れと、受光した前記第２の分子が発する蛍光の蛍光信号のうちの前記第２の周波数の信号成分の、第２のレーザ光の強度変調に対する第２の位相遅れとを取り出し、この第１の位相遅れと第２の位相遅れとに基づいて、第１の分子のエネルギーが第２の分子に移動するエネルギー移動の有無を判定する処理部と、を有することを特徴とするＦＲＥＴ検出装置。 
【請求項７】
前記処理部は、前記第２の位相差に対する前記第１の位相差の比によって前記エネルギー移動を判定する請求項６に記載のＦＲＥＴ検出装置。 
【請求項８】
前記光源制御部は、前記第１のレーザ光を、前記第１のレーザ光の強度変調のために第１の周波数を有する第１の変調信号を用いて強度変調させ、前記第２のレーザ光を、前記第２のレーザ光の強度変調のために第２の周波数を有する第２の変調信号を用いて強度変調させ、前記第１の周波数の変調信号は、前記第２の周波数の変調信号に、前記差分周波数の生成信号を合成して得られた信号であり、
前記処理部は、受光した前記第２の分子が発する蛍光の蛍光信号を、前記差分周波数の生成信号に同期して、前記差分周波数の整数倍の周波数をサンプリング周波数としてサンプリングする請求項６又は７に記載のＦＲＥＴ検出装置。 
【請求項９】
前記処理部は、前記サンプリングされた蛍光信号を前記差分周波数の整数分の１の周波数を周波数分解能として周波数分析をすることにより、前記蛍光信号のうちの前記第１の周波数の信号成分と前記蛍光信号のうちの前記第２の周波数の信号成分とを抽出する請求項８に記載のＦＲＥＴ検出装置。 
【請求項１０】
前記受光部は、前記第２の分子が発する蛍光の他に、前記第１の分子が発する蛍光を受光し、
前記処理部は、前記受光部で受光した第１の分子が発する蛍光の蛍光信号の、第１のレーザ光の強度変調に対する第３の位相遅れを算出し、この第３の位相遅れをＦＲＥＴの発生の有無の判定に用いる請求項６〜９のいずれか１項に記載のＦＲＥＴ検出装置。 
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
上記目的を達成するために、本発明は、レーザ光の照射によって励起された第１の分子のエネルギーが第２の分子に移動するＦＲＥＴ（Fluorescence Resonance Energy Transfer）を検出するＦＲＥＴ検出方法であって、第１の分子を励起するために、第１の周波数で強度変調した第１のレーザ光を第１の分子に照射するとともに、第２の分子を励起するために、第１の周波数と異なる第２の周波数で強度変調した第２のレーザ光を第２の分子に照射するステップと、第２の分子が発する蛍光を受光するステップと、受光した第２の分子が発する蛍光の蛍光信号のうちの前記第１の周波数の信号成分の、第１のレーザ光の強度変調に対する第１の位相遅れと、受光した前記第２の分子が発する蛍光の蛍光信号のうちの前記第２の周波数の信号成分の、第２のレーザ光の強度変調に対する第２の位相遅れとを取り出し、この第１の位相遅れと第２の位相遅れとに基づいて、第１の分子のエネルギーが第２の分子に移動するエネルギー移動の有無を判定するステップと、を有することを特徴とするＦＲＥＴ検出方法を提供する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
ここで、前記エネルギー移動は、前記第２の位相遅れに対する前記第１の位相遅れの比によって判定されることが好ましい。
又、前記第１のレーザ光は、前記第１のレーザ光の強度変調のために第１の周波数を有する第１の変調信号を用いて強度変調され、前記第２のレーザ光は、前記第２のレーザ光の強度変調のために第２の周波数を有する第２の変調信号を用いて強度変調され、前記第１の周波数の変調信号は、前記第２の周波数の変調信号に、前記差分周波数の生成信号を合成して得られた信号であり、受光した前記第２の分子が発する蛍光の蛍光信号は、前記差分周波数の生成信号に同期して、前記差分周波数の整数倍の周波数をサンプリング周波数としてサンプリングされることが好ましい。その際、前記サンプリングされた蛍光信号を前記差分周波数の整数分の１の周波数を周波数分解能として周波数分析をすることにより、前記蛍光信号のうちの前記第１の周波数の信号成分と蛍光信号のうちの前記第２の周波数の信号成分とを抽出することが好ましい。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
又、前記第２の分子が発する蛍光を受光する際、さらに、前記第１の分子が発する蛍光を受光し、受光した前記第１の分子の発する蛍光の蛍光信号の、第１のレーザ光の強度変調に対する第３の位相遅れを算出し、この第３の位相遅れをＦＲＥＴの発生の有無の判定に用いることもできる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本発明は、さらに、レーザ光の照射によって励起された第１の分子のエネルギーが第２の分子に移動するＦＲＥＴを検出するＦＲＥＴ検出装置であって、第１の分子を励起するために、第１のレーザ光を第１の分子に照射するとともに、第２の分子を励起するために、第２のレーザ光を第２の分子に照射するレーザ光源部と、第２の分子が発する蛍光を受光する受光部と、前記レーザ光源部から出射する第１のレーザ光を第１の周波数で強度変調させ、かつ前記レーザ光源部から出射する第２のレーザ光を第１の周波数と異なる第２の周波数で強度変調させるために、変調信号を生成する光源制御部と、受光した第２の分子が発する蛍光の蛍光信号のうちの前記第１の周波数の信号成分の、第１のレーザ光の強度変調に対する第１の位相遅れと、受光した前記第２の分子が発する蛍光の蛍光信号のうちの前記第２の周波数の信号成分の、第２のレーザ光の強度変調に対する第２の位相遅れとを取り出し、この第１の位相遅れと第２の位相遅れとに基づいて、第１の分子のエネルギーが第２の分子に移動するエネルギー移動の有無を判定する処理部と、を有することを特徴とするＦＲＥＴ検出装置を提供する。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
その際、前記処理部は、前記第２の位相差に対する前記第１の位相差の比によって前記エネルギー移動を判定することが好ましい。
又、前記光源制御部は、前記第１のレーザ光を、前記第１のレーザ光の強度変調のために第１の周波数を有する第１の変調信号を用いて強度変調させ、前記第２のレーザ光を、前記第２のレーザ光の強度変調のために第２の周波数を有する第２の変調信号を用いて強度変調させ、前記第１の周波数の変調信号は、前記第２の周波数の変調信号に、前記差分周波数の生成信号を合成して得られた信号であり、前記処理部は、受光した前記第２の分子が発する蛍光の蛍光信号を、前記差分周波数の生成信号に同期して、前記差分周波数の整数倍の周波数をサンプリング周波数としてサンプリングすることが好ましい。その際、前記処理部は、前記サンプリングされた蛍光信号を前記差分周波数の整数分の１の周波数を周波数分解能として周波数分析をすることにより、前記蛍光信号のうちの前記第１の周波数の信号成分と前記蛍光信号のうちの前記第２の周波数の信号成分とを抽出することが好ましい。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
又、前記受光部は、前記第２の分子が発する蛍光の他に、前記第１の分子が発する蛍光を受光し、前記処理部は、前記受光部で受光した第１の分子が発する蛍光の蛍光信号の、第１のレーザ光の強度変調に対する第３の位相遅れを算出し、この第３の位相遅れをＦＲＥＴの発生の有無の判定に用いることもできる。