【手続補正書】
【提出日】平成24年11月15日(2012.11.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数のレプリコンを用いて植物細胞においてタンパク質複合体を産生させる方法であって、
プロモーター及び第１の対象となる産物をコードする第１の領域、並びに該プロモーター及び第１の領域をはさんで位置する２つの長い遺伝子間領域（ＬＩＲ）及び短い遺伝子間領域（ＳＩＲ）を含む第１のレプリコンであって、ＬＩＲ−（プロモーター−第１のコード領域）−ＳＩＲ−ＬＩＲ構造を有し、該ＬＩＲ及びＳＩＲはそれぞれ、ジェミニウイルスゲノムの長い遺伝子間領域（ＬＩＲ）及び短い遺伝子間領域（ＳＩＲ）である、第１のレプリコンを得ること、
プロモーター及び第２の対象となる産物をコードする第２の領域、並びに該プロモーター及び第２の領域をはさんで位置する２つの長い遺伝子間領域（ＬＩＲ）及び短い遺伝子間領域（ＳＩＲ）を含む第２のレプリコンであって、ＬＩＲ−（プロモーター−第２のコード領域）−ＳＩＲ−ＬＩＲ構造を有し、該ＬＩＲ及びＳＩＲはそれぞれ、ジェミニウイルスゲノムの長い遺伝子間領域（ＬＩＲ）及び短い遺伝子間領域（ＳＩＲ）である、第２のレプリコンを得ること、
プロモーター及びジェミニウイルスゲノムのＲｅｐ／ＲｅｐＡタンパク質をコードする核酸を含む核酸セグメントを得ること、
前記第１のレプリコン及び第２のレプリコン、並びに前記核酸セグメントを植物細胞に導入して、第１の領域及び第２の領域それぞれの複製及び一時的発現を引き起こすこと；並びに前記第１の対象となる産物と前記第２の対象となる産物とを含む前記タンパク質複合体を前記植物細胞において産生させることを含み、
前記第１のレプリコンと前記第２のレプリコンとは非競合であり、
前記第１のレプリコンと前記第２のレプリコンとは別個のレプリコンである、方法。
【請求項２】
前記タンパク質複合体は抗原である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗原はＢ型肝炎コア抗原（ＨＢｃ）又はノーウォークウイルスカプシドタンパク質（ＮＶＣＰ）である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
さらに、プロモーター、ジェミニウイルスゲノムのＬＩＲ及びＳＩＲの少なくとも一部、及び第３の対象となる産物をコードする第３の領域を含む第３のレプリコンを得ることを含み、
該第３のレプリコンは前記植物細胞に導入されて第３の対象となる産物をコードする第３の領域の複製及び一時的発現を引き起こされ；前記タンパク質複合体は前記第１の対象となる産物、前記第２の対象となる産物及び該第３の対象となる産物を含み；
前記第１のレプリコンと前記第２のレプリコンと該第３のレプリコンとは非競合であり；
前記第１のレプリコンと前記第２のレプリコンと該第３のレプリコンとは別個のレプリコンである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
さらに、プロモーター及びトマトブッシースタントウイルスに由来する遺伝子サイレンシング阻害因子Ｐ１９を含む核酸セグメントを得ることを含み、
該遺伝子サイレンシング阻害因子Ｐ１９を含む核酸セグメントは前記植物細胞に導入されて複製及び一時的発現を引き起こされる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
植物細胞において完全に集合した多成分系タンパク質複合体を産生させる方法であって、
（ａ）複数のレプリコンを含む単一のベクターであって、
（ｉ）それぞれが動作可能に連結したＬＩＲ−プロモーター１−コード領域１−ＳＩＲ−ＬＩＲ構造を含む第１のレプリコンであって、コード領域１は第１の対象となる産物をコードし、両側のＬＩＲはジェミニウイルスゲノムの長い遺伝子間領域の少なくとも一部であって、ＳＩＲはジェミニウイルスゲノムの短い遺伝子間領域の少なくとも一部である、第１のレプリコンと、
（ｉｉ）それぞれが動作可能に連結したＬＩＲ−プロモーター２−コード領域２−ＳＩＲ−Ｃ２／Ｃ１−ＬＩＲ構造を含む第２のレプリコンであって、コード領域２はコード領域１とは異なる第２の対象となる産物をコードし、両側のＬＩＲはジェミニウイルスゲノムの長い遺伝子間領域の少なくとも一部であって、Ｃ２／Ｃ１はジェミニウイルスゲノムのＲｅｐ／ＲｅｐＡタンパク質をコードし、ＳＩＲはジェミニウイルスゲノムの短い遺伝子間領域の少なくとも一部である、第２のレプリコンと、
を含み、
該第２のレプリコンは、該複数のレプリコンを含む単一のベクターにおいて、該第１のレプリコンに動作可能にタンデム結合して、該第１のレプリコンの一方の端のＬＩＲを共有することにより、タンデム結合した２つのレプリコンは、ＬＩＲ−プロモーター１−コード領域１−ＳＩＲ−ＬＩＲ−プロモーター２−コード領域２−ＳＩＲ−Ｃ２／Ｃ１−ＬＩＲ構造を有し、
該タンデム結合したレプリコンの該コード領域１及び該コード領域２は、それぞれ同時に、だが独立して、増幅されることが可能であり；それぞれのコード領域の増幅は非競合かつ高レベルであり；該対象となる産物はタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドである、
複数のレプリコンを含む単一のベクターを得ること、
（ｂ）該複数のレプリコンを含む単一のベクターを植物細胞に導入すること、並びに
（ｃ）該複数のレプリコンを含む単一のベクターのそれぞれのコード領域を独立かつ非競合に増幅及び発現させ、その後、それぞれのコード領域の対象となる産物を含む該多成分系タンパク質複合体を完全に集合させること、
を含む方法。
【請求項７】
前記多成分系タンパク質複合体は６Ｄ８であり、前記コード領域１及び前記コード領域２からの産物はそれぞれ、６Ｄ８の重鎖及び軽鎖である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
複数のレプリコンを含む単一ベクター系であって、
それぞれが動作可能に連結したＬＩＲ−プロモーター１−コード領域１−ＳＩＲ−ＬＩＲ構造を含む第１のレプリコンであって、コード領域１は第１の対象となる産物をコードし、両側のＬＩＲはジェミニウイルスゲノムの長い遺伝子間領域の少なくとも一部であって、ＳＩＲはジェミニウイルスゲノムの短い遺伝子間領域の少なくとも一部である、第１のレプリコンと、
それぞれが動作可能に連結したＬＩＲ−プロモーター２−コード領域２−ＳＩＲ−Ｃ２／Ｃ１−ＬＩＲ構造を含む第２のレプリコンであって、コード領域２はコード領域１とは異なる第２の対象となる産物をコードし、両側のＬＩＲはジェミニウイルスゲノムの長い遺伝子間領域の少なくとも一部であって、Ｃ２／Ｃ１はジェミニウイルスゲノムのＲｅｐ／ＲｅｐＡタンパク質をコードし、ＳＩＲはジェミニウイルスゲノムの短い遺伝子間領域の少なくとも一部である、第２のレプリコンと、
を含み、
該第２のレプリコンは、該第１のレプリコンに動作可能にタンデム結合して、該第１のレプリコンの一方の端のＬＩＲを共有することにより、タンデム結合した２つのレプリコンは、ＬＩＲ−プロモーター１−コード領域１−ＳＩＲ−ＬＩＲ−プロモーター２−コード領域２−ＳＩＲ−Ｃ２／Ｃ１−ＬＩＲ構造を有し、
該タンデム結合したレプリコンの該コード領域１及び該コード領域２のそれぞれは、同時に、だが独立して、増幅されることが可能であり；それぞれのコード領域１の増幅は非競合かつ高レベルであり；該対象となる産物はタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドであり；該対象となるタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドは完全に集合させることにより多成分系タンパク質複合体を産生することが可能である、
複数のレプリコンを含む単一ベクター系。
【請求項９】
それぞれが動作可能に連結したＬＩＲ−コード領域ｎ−ＳＩＲ−ＬＩＲ構造を含む１又は複数のレプリコンをさらに含み、該追加の１又は複数のレプリコンは上流のレプリコンとタンデム結合し、それぞれの下流のレプリコンはその一方の端のＬＩＲを上流のレプリコンと共有し、コード領域ｎはコード領域１及びコード領域２とは異なる対象となる産物をコードし、該コード領域ｎの産物はタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドであり；該タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドは完全に集合させることにより多成分系タンパク質複合体を産生することが可能である、請求項８に記載の複数のレプリコンを含む単一ベクター系。
【請求項１０】
ひとつのレプリコンのコード領域ｎは遺伝子サイレンシング阻害因子をコードする、請求項９に記載の複数のレプリコンを含む単一ベクター系。
【請求項１１】
プロモーターｎはプロモーター１及びプロモーター２とは異なるプロモーターである、請求項９または１０に記載の複数のレプリコンを含む単一ベクター系。
【請求項１２】
プロモーター１、プロモーター２及びプロモーターｎは同じプロモーターである、請求項９または１０に記載の複数のレプリコンを含む単一ベクター系。
【請求項１３】
前記コード領域１及び前記コード領域２の産物は、完全に集合させることにより形成される多成分系タンパク質複合体の２つのサブユニットである、請求項８〜１２のいずれか１項に記載の複数のレプリコンを含む単一ベクター系。
【請求項１４】
前記２つのサブユニットはそれぞれ、６Ｄ８モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖である、請求項１３に記載の複数のレプリコンを含む単一ベクター系。
【請求項１５】
３つのレプリコンを含む単一ベクター系であって、
それぞれが動作可能に連結したＬＩＲ−プロモーター１−コード領域１−ＳＩＲ−ＬＩＲ構造を含む第１のレプリコンであって、コード領域１は対象となる産物をコードし、両側のＬＩＲはジェミニウイルスゲノムの長い遺伝子間領域の少なくとも一部であって、ＳＩＲはジェミニウイルスゲノムの短い遺伝子間領域の少なくとも一部である、第１のレプリコンと、
それぞれが動作可能に連結したＬＩＲ−プロモーター２−コード領域２−ＳＩＲ−Ｃ２／Ｃ１−ＬＩＲ構造を含む第２のレプリコンであって、コード領域２はコード領域１とは異なる対象となる産物をコードし、両側のＬＩＲはジェミニウイルスゲノムの長い遺伝子間領域の少なくとも一部であって、Ｃ２／Ｃ１はジェミニウイルスゲノムのＲｅｐ／ＲｅｐＡタンパク質をコードし、ＳＩＲはジェミニウイルスゲノムの短い遺伝子間領域の少なくとも一部である、第２のレプリコンと、
それぞれが動作可能に連結したＬＩＲ−プロモーター３−コード領域３−ＳＩＲ−ＬＩＲ構造を含む第３のレプリコンであって、コード領域３はトマトブッシースタントウイルスに由来する遺伝子サイレンシング阻害因子Ｐ１９をコードする、第３のレプリコンと、
を含み、
該第２のレプリコンは、該第１のレプリコンに動作可能にタンデム結合して、該第１のレプリコンの一方の端のＬＩＲを共有し；該第３のレプリコンは、該第２のレプリコンに動作可能にタンデム結合して、該第２のレプリコンの、該第１のレプリコンとタンデム結合を形成しない側の端のＬＩＲを共有し、
該タンデム結合したレプリコンの該コード領域１、該コード領域２及び該コード領域３のそれぞれは、同時に、だが独立して、増幅されることが可能であり；それぞれのコード領域の増幅は非競合かつ高レベルであり；それぞれのコード領域の対象となる産物は同時にかつ独立して放出され；該対象となる産物はタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドであり；該対象となるタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドは完全に集合させることにより多成分系タンパク質複合体を産生することが可能である、
単一ベクター系。
【請求項１６】
４つのレプリコンを含む単一ベクター系であって、
それぞれが動作可能に連結したＬＩＲ−プロモーター１−コード領域１−ＳＩＲ−ＬＩＲ構造を含む第１のレプリコンであって、コード領域１は対象となる産物をコードし、両側のＬＩＲはジェミニウイルスゲノムの長い遺伝子間領域の少なくとも一部であって、ＳＩＲはジェミニウイルスゲノムの短い遺伝子間領域の少なくとも一部である、第１のレプリコンと、
それぞれが動作可能に連結したＬＩＲ−プロモーター２−コード領域２−ＳＩＲ−Ｃ２／Ｃ１−ＬＩＲ構造を含む第２のレプリコンであって、コード領域２はコード領域１とは異なる対象となる産物をコードし、両側のＬＩＲはジェミニウイルスゲノムの長い遺伝子間領域の少なくとも一部であって、Ｃ２／Ｃ１はジェミニウイルスゲノムのＲｅｐ／ＲｅｐＡタンパク質をコードし、ＳＩＲはジェミニウイルスゲノムの短い遺伝子間領域の少なくとも一部である、第２のレプリコンと、
それぞれが動作可能に連結したＬＩＲ−プロモーター３−コード領域３−ＳＩＲ−ＬＩＲ構造を含む第３のレプリコンであって、コード領域３はコード領域１及びコード領域２とは異なる対象となる産物をコードする、第３のレプリコンと、
それぞれが動作可能に連結したＬＩＲ−プロモーター４−コード領域４−ＳＩＲ−ＬＩＲ構造を含む第４のレプリコンであって、コード領域４はトマトブッシースタントウイルスに由来する遺伝子サイレンシング阻害因子Ｐ１９をコードする、第４のレプリコンと、
を含み、
該第２のレプリコンは、該第１のレプリコンに動作可能にタンデム結合して、該第１のレプリコンの一方の端のＬＩＲを共有し；該第３のレプリコンは、該第２のレプリコンに動作可能にタンデム結合して、該第２のレプリコンの、該第１のレプリコンとタンデム結合を形成しない側の端のＬＩＲを共有し；該第４のレプリコンは、該第３のレプリコンに動作可能にタンデム結合して、該第３のレプリコンの、該第２のレプリコンとタンデム結合を形成しない側の端のＬＩＲを共有し、
該タンデム結合したレプリコンの該コード領域１、該コード領域２、該コード領域３及び該コード領域４のそれぞれは、同時に、だが独立して、増幅されることが可能であり；それぞれのコード領域の増幅は非競合かつ高レベルであり；それぞれのコード領域の対象となる産物は同時にかつ独立して放出され；該対象となる産物はタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドであり；該対象となるタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドは完全に集合させることにより多成分系タンパク質複合体を産生することが可能である、
単一ベクター系。