【手続補正書】
【提出日】平成25年7月19日(2013.7.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）（ｉ）１６０Ｘが存在しないか、もしくはグルタミン酸以外のアミノ酸である配列番号１のシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質、または樹状細胞に感染することができ、１６０Ｘが存在しないか、もしくはグルタミン酸以外のアミノ酸である、配列番号１に対して少なくとも８０％の同一性を有するその配列番号１の変異体を含むエンベロープであって、Ｅ２は、シンドビスウイルスＥ３との融合タンパク質の一部ではなく、好ましくは前記Ｅ２糖タンパク質またはＥ２糖タンパク質変異体は、ＤＣ−ＳＩＧＮに結合する、エンベロープと、
（ｂ）１つ以上の関心の配列を含む、レンチウイルスベクターゲノムと、
を含む、レンチウイルスベクター粒子。
【請求項２】
前記１６０Ｘは、存在しないか、またはグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、もしくはイソロイシンである、請求項１に記載のレンチウイルスベクター粒子。
【請求項３】
前記Ｅ２糖タンパク質変異体は、その正味正電荷を低減するように変更された少なくとも１つのアミノ酸を有する、請求項１または２に記載のレンチウイルスベクター粒子。
【請求項４】
（ａ）前記変更されたアミノ酸は、配列番号１のリシン７０、リシン７６、またはリシン１５９から成る群から選択され、そして随意に、置換がグルタミン酸またはアスパラギン酸から独立して選択される、および／あるいは（ｂ）配列番号１の残基７１〜７５の配列が未変化であるか、または前記変異体がＤＣに感染する能力に影響しないが、この領域内のアミノ酸の数を変更しない、１つもしくは２つの置換を有する、請求項３に記載のレンチウイルスベクター粒子。
【請求項５】
前記Ｅ２糖タンパク質変異体の配列は、配列番号３のアミノ酸残基６６〜４８８、配列番号４のアミノ酸残基６６〜４８８、配列番号５のアミノ酸残基６６〜４８８、またはそれらに対して少なくとも８０％同一、好ましくはそれらに対して８５％もしくは９０％同一なアミノ酸配列である、請求項１、２、３または４に記載のレンチウイルスベクター粒子。
【請求項６】
前記関心の配列は、１つ以上の抗原をコードする、請求項１〜５のいずれかに記載のレンチウイルスベクター粒子。
【請求項７】
前記抗原は、腫瘍特異的抗原またはウイルス由来抗原であり、随意に、前記腫瘍特異的抗原は、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ｇｐ１００、ｇｐ７５、ｍｄａ−７、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質、５Ｔ４、ＳＭ２２−α、炭酸脱水酵素Ｉ、ＨＩＦ−１α、ＨＩＦ−２α、ＰＳＭＡ、ＰＳＡ、ＳＴＥＡＰおよびＮＫＸ３．１からなる群より選択されるか、または随意に、前記ウイルス由来抗原は、ＨＩＶ抗原、ＳＩＶ抗原、アデノウイルス抗原、エンテロウイルス抗原、コロナウイルス抗原、カリシウイルス抗原、ジステンパーウイルス抗原、エボラウイルス抗原、フラビウイルス抗原、肝炎ウイルス抗原、ヘルペスウイルス抗原、感染性腹膜炎ウイルス抗原、インフルエンザウイルス抗原、白血病ウイルス抗原、マルバーグウイルス抗原、オルトミクソウイルス抗原、パピローマウイルス抗原、パラインフルエンザウイルス抗原、パラミクソウイルス抗原、パルボウイルス抗原、ペスチウイルス抗原、ピコルナウイルス抗原、ポリオウイルス抗原、ポックスウイルス抗原、狂犬病ウイルス抗原、レオウイルス抗原、レトロウイルス抗原またはロタウイルス抗原である、請求項６に記載のレンチウイルスベクター粒子。
【請求項８】
前記粒子は、少なくとも１０５／ｍＬのＩＵを有する、請求項１〜７のいずれかに記載のレンチウイルスベクター粒子。
【請求項９】
配列番号１のシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質または配列番号１に対して少なくとも８０％の同一性を有するその配列番号１の変異体をコードする核酸であって、ここで、
（ａ）１６０Ｘが存在しないか、もしくはグルタミン酸以外のアミノ酸であり、
（ｂ）（ｉ）配列番号１のリシン７０、リシン７６、もしくはリシン１５９のうちの１つ以上がグルタミン酸もしくはアスパラギン酸で置換されているか、あるいは（ｉｉ）配列番号１の残基７１〜７５の配列が未変化であるか、または前記変異体が樹状細胞に感染する能力に影響しない１つもしくは２つの置換を有するか、あるいは（ｉ）および（ｉｉ）の両方であり、そして
Ｅ２は発現された場合、シンドビスウイルスＥ３から開裂される、核酸。
【請求項１０】
偽型レンチウイルスベクター粒子を産生するためのレンチウイルスベクターパッケージ化システムであって、
（ｉ）請求項１〜７のいずれか１項に記載のアミノ酸配列を有するシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質をコードする、第１の核酸分子と、
（ｉｉ）ｇａｇタンパク質およびｐｏｌタンパク質をコードする、第２の核酸分子と、
（ｉｉｉ）ｒｅｖをコードする、第３の核酸分子と、
（ｉｖ）１つ以上の関心の配列を含む、レンチウイルスベクターゲノムと、
（ｖ)パッケージ化細胞と、
を含む、パッケージ化システム。
【請求項１１】
前記ｐｏｌタンパク質は、非機能的インテグラーゼを有し、随意に、前記非機能的インテグラーゼは、Ｄ６４Ｖ変異を有する、請求項１０に記載のパッケージ化システム。
【請求項１２】
前記レンチウイルスベクターゲノムは、非組み込みレンチウイルスゲノムである、請求項１０および１１のいずれか１項に記載のパッケージ化システム。
【請求項１３】
前記レンチウイルスベクターゲノムは、組み込みレンチウイルスゲノムである、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載のパッケージ化システム。
【請求項１４】
前記レンチウイルスベクター粒子は、少なくとも１０５ＩＵ／ｍＬのタイターに産生される、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載のパッケージ化システム。
【請求項１５】
請求項１（ａ）（ｉ）または請求項１〜７のいずれか１項に記載のＥ２糖タンパク質または変異体をコードするヌクレオチド配列を含む、単離核酸分子。
【請求項１６】
請求項１５に記載の核酸分子を含む、発現ベクター。
【請求項１７】
請求項１６に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項１８】
細胞において、
（ｉ）１６０Ｘがグルタミン酸以外である配列番号１のシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質、または配列番号１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有し、１６０Ｘが存在しないか、もしくはグルタミン酸以外のアミノ酸である、樹状細胞に感染することができるその変異体をコードし、ここで、Ｅ２は、シンドビスウイルスＥ３との融合タンパク質の一部ではない、第１の核酸分子と、
（ｉｉ）第２の核酸分子であって、転写されることができ、前記転写物が偽型レンチウイルスベクター粒子へと構築される、第２の核酸分子と、
を発現させることを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター粒子を作製する方法。
【請求項１９】
ヒトまたは動物被検体の治療のための、請求項１〜７のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター粒子を含む組成物。
【請求項２０】
レンチウイルスベクター粒子をインビトロで細胞に送達する方法であって、前記細胞を、請求項１〜７のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター粒子と混合することを含む、方法。
【請求項２１】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター粒子、および薬学的に許容される賦形剤を含む、治療または予防ワクチンであって、随意に、前記治療または予防ワクチンは、アジュバントをさらに含み、随意に、前記アジュバントは、式（Ｉ）：
【化１】
2013500015.tif 000001
のアジュバントであり、
ここで：
（ａ）Ａ１は、リン酸またはリン酸塩であり、Ａ２は、水素であり、
（ｂ）（ｉ）Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は、Ｃ１１−Ｃ２０アルキルであり、Ｒ２およびＲ４はＣ１２−Ｃ２０ヒドロカルビルであるか；または
（ｉｉ）Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は、Ｃ１１アルキルであり、Ｒ２およびＲ４はＣ１３ヒドロカルビルであるか；または
（ｉｉｉ）Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は、ウンデシルであり、Ｒ２およびＲ４はトリデシルである、治療または予防ワクチン。
【請求項２２】
前記レンチウイルスベクターゲノムが、不活性化３’末端反復配列（ＬＴＲ）または自己不活性化３’末端反復配列（ＬＴＲ）を有し、随意に、前記レンチウイルスベクターゲノムは、エンハンサー配列、ＴＡＴＡボックス、Ｓｐ１部位、ＮＦ−κＢ部位またはポリプリン区画（ＰＰＴ）のうちの少なくとも１つの欠失を有するＵ３要素を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター粒子。
【請求項２３】
前記レンチウイルスベクターゲノムは、樹状細胞成熟／刺激因子をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、随意に、前記樹状細胞成熟／刺激因子は、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＴＮＦα、Ｂ７．１、Ｂ７．２、４−１ＢＢ、ＣＤ４０リガンドおよび薬物誘導ＣＤ４０からなる群より選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター粒子。
【請求項２４】
抗原をコードするヌクレオチド配列の発現は、ヒトユビキチンＣプロモーター（ＵｂｉＣ）、サイトメガロウイルス前初期プロモーター（ＣＭＶ）、ラウス肉腫ウイルスプロモーター（ＲＳＶ）およびテトラサイクリン応答性プロモーターからなる群より選択されるプロモーターによって制御される、請求項１〜７のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター粒子。
【請求項２５】
偽型レンチウイルスベクター粒子を産生するためのレンチウイルスベクターパッケージ化システムであって、
（ｉ）配列番号１のシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質または配列番号１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するその変異体をコードする、第１の核酸分子と、
（ｉｉ）ｇａｇタンパク質およびｐｏｌタンパク質をコードする、第２の核酸分子であって、前記ｐｏｌタンパク質は、非機能的インテグラーゼを有する、第２の核酸分子と、
（ｉｉｉ）ｒｅｖをコードする、第３の核酸分子と、
（ｉｖ）関心の配列を含む、レンチウイルスベクターゲノムであって、前記レンチウイルスベクターゲノムが機能的なポリプリン路（ＰＰＴ）を欠失している、レンチウイルスベクターゲノムと、
（ｖ)パッケージ化細胞と、
を含む、パッケージ化システム。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
本発明のこれらの態様および他の態様は、以下の詳細な説明および添付の図面を参照するときに明らかとなるであろう。さらに、２００９年７月２４日に出願された米国特許出願第６１／２２８，４９１号は、あらゆる目的で、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
（ａ）１６０Ｘが存在しないか、もしくはグルタミン酸以外のアミノ酸である配列番号１のシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質、または樹状細胞に感染することができ、１６０Ｘが存在しないか、もしくはグルタミン酸以外のアミノ酸である、配列番号１に対して少なくとも８０％の同一性を有するその配列番号１の変異体を含むエンベロープであって、Ｅ２は、シンドビスウイルスＥ３との融合タンパク質の一部ではない、エンベロープと、
（ｂ）関心の配列を含む、レンチウイルスベクターゲノムと、
を含む、レンチウイルスベクター粒子。
（項目２）
前記Ｅ２糖タンパク質または変異体は、ＤＣ−ＳＩＧＮに結合する、項目１に記載のレンチウイルスベクター粒子。
（項目３）
前記１６０Ｘは、存在しないか、またはグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、もしくはイソロイシンであり、例えば、グリシン、バリン、ロイシン、またはイソロイシンから選択される、項目１または項目２に記載のレンチウイルスベクター粒子。
（項目４）
１６０Ｘは、グリシンである、項目１または項目２に記載のレンチウイルスベクター粒子。
（項目５）
前記Ｅ２糖タンパク質変異体は、その正味正電荷を低減するように変更された少なくとも１つのアミノ酸を有する、項目１、２、３、または４に記載のレンチウイルスベクター粒子。
（項目６）
前記変更されたアミノ酸は、配列番号１のリシン７０、リシン７６、またはリシン１５９から成る群から選択され、置換がグルタミン酸またはアスパラギン酸から随意に独立して選択される、項目５に記載のレンチウイルスベクター粒子。
（項目７）
前記Ｅ２変異体配列は、配列番号２、３、または４であり（変異体１、２、および３）、１つ以上のさらなる置換、挿入、または欠失を随意に含む、項目１、２、３、４、５、または６に記載のレンチウイルスベクター粒子。
（項目８）
配列番号１の残基７１〜７５の配列が未変化である変異体か、または前記変異体がＤＣに感染する能力に影響しないが、この領域内のアミノ酸の数を変更しない、１つもしくは２つの置換を有する変異体である、項目１、２、３、４、５、６、または７に記載のレンチウイルスベクター粒子。
（項目９）
前記関心の配列は、腫瘍特異的抗原またはウイルス由来抗原、例えば、ＨＩＶもしくはＳＩＶ抗原をコードする、前記項目のいずれかに記載のレンチウイルスベクター粒子。
（項目１０）
前記粒子は、少なくとも１０５／ｍＬのＩＵを有する、前記項目のいずれかに記載のレンチウイルスベクター粒子。
（項目１１）
シンドビスウイルスＥ２糖タンパク質変異体を含むエンベロープ内に偽型化されたレンチウイルスベクターゲノムであって、前記ゲノムは、関心の配列を含み、
前記Ｅ２糖タンパク質変異体は、前記レンチウイルスベクター粒子による樹状細胞の感染を促進し、前記Ｅ２糖タンパク質変異体は、上記項目１〜１０のいずれか１項に記載のアミノ酸配列を有する、レンチウイルスベクターゲノム。
（項目１２）
偽型レンチウイルスベクター粒子を産生するためのレンチウイルスベクターパッケージ化システムであって、
（ｉ）１６０Ｘが存在しないか、もしくはグルタミン酸以外のアミノ酸である配列番号１のシンドビスＥ２糖タンパク質、または配列番号１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有し、１６０Ｘが存在しないか、もしくはグルタミン酸以外のアミノ酸である、樹状細胞に感染することができるその変異体をコードする、第１の核酸分子と、
（ｉｉ）ｇａｇタンパク質およびｐｏｌタンパク質をコードする、第２の核酸分子と、
（ｉｉｉ）ｒｅｖをコードする、第３の核酸分子と、
（ｉｖ）関心の配列を含む、レンチウイルスベクターゲノムと、
を含む、パッケージ化システム。
（項目１３）
前記Ｅ２糖タンパク質は、上記項目１〜９のいずれか１項に記載のアミノ酸配列を有する、項目１２に記載のパッケージ化システム。
（項目１４）
前記ｐｏｌタンパク質は、非機能的インテグラーゼを有する、項目１２または１３に記載のパッケージ化システム。
（項目１５）
前記非機能的インテグラーゼは、Ｄ６４Ｖ変異を有する、項目１４に記載のパッケージ化システム。
（項目１６）
前記第４の核酸分子は、非組み込みレンチウイルスゲノムである、項目１２、１３、１４、または１５に記載のパッケージ化システム。
（項目１７）
前記レンチウイルスベクター粒子は、少なくとも１０５ＩＵ／ｍＬのタイターに産生される、項目１２、１３、１４、１５、または１６に記載のパッケージ化システム。
（項目１８）
項目１２、１３、１４、１５、１６、または１７のいずれか１項に記載の第１および第４の核酸分子でトランスフェクトされた細胞。
（項目１９）
項目１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のいずれか１項に記載のタンパク質、または随意にシンドビスＥ３／Ｅ２／６Ｋ／Ｅ１ポリタンパク質の形態であるＥ３／Ｅ２糖タンパク質、または前記Ｅ３配列が、配列番号２０の残基１〜６５に対応する、Ｅ３／Ｅ２糖タンパク質、または配列番号２０の残基１〜６５に対して少なくとも８０％の同一性を有するその変異体をコードする単離核酸分子であって、残基６２〜６５がＲＳＫＲであり（配列番号２７）、前記変異体は、偽型ウイルスエンベロープに組み込まれることができ、随意にさらに、Ｅ２ポリタンパク質の残基１はＳｅｒである、単離核酸分子。
（項目２０）
項目１９に記載の核酸分子を含む、発現ベクター。
（項目２１）
項目２０に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
（項目２２）
細胞において、
（ｉ）１６０Ｘがグルタミン酸以外である配列番号１のシンドビスウイルスＥ２糖タンパク質、または配列番号１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有し、１６０Ｘが存在しないか、もしくはグルタミン酸以外のアミノ酸である、樹状細胞に感染することができるその変異体をコードする、第１の核酸分子と、
（ｉｉ）第２の核酸分子であって、転写されることができ、前記転写物が偽型レンチウイルスベクター粒子へと構築される、第２の核酸分子と、
を発現させることを含む、項目１〜１１のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター粒子を作製する方法。
（項目２３）
ヒトまたは動物被検体の治療方法において使用するための、項目１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター粒子。
（項目２４）
レンチウイルスベクター粒子をインビトロで細胞に送達する方法であって、前記細胞を、項目１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター粒子と混合することを含む、方法。
（項目２５）
項目１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター粒子、および薬学的に許容される賦形剤を含む、治療または予防ワクチン。