【手続補正書】
【提出日】平成25年5月16日(2013.5.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
心臓組織生成に関与する細胞であって、前記細胞は、Ｎｋｘ２．５、Ｔｂｘ５、ＭＥＦ２Ｃ、ＧＡＴＡ４、ＧＡＴＡ６、Ｍｅｓｐ１、ＦＯＧ１、ＦＯＧ２、Ｆｌｋ１およびこれらのホモログからなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子の対照と比して、観察される発現レベルの増加を示す、細胞と、
少なくとも１つの製薬学的に許容し得る賦形剤とを含み、前記少なくとも１つの製薬学的に許容し得る賦形剤は保存溶液であることを特徴とする医薬組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の医薬組成物であり、観察される発現レベルの増加が、ｑＰＣＲにおいて、対照と比して最低２倍である、ことを特徴とする医薬組成物。
【請求項３】
前記請求項のいずれか一項に記載の医薬組成物であり、前記保存溶液は、−１９６℃〜０℃の温度における凍結保存を可能にする保存溶液および０℃〜＋４０℃の温度における保存を可能にする保存溶液からなる群から選択されることを特徴とする医薬組成物。
【請求項４】
前記請求項のいずれか一項に記載の医薬組成物であり、前記保存溶液は、イオン、ｐＨ緩衝液、非透過物、コロイドおよび代謝物質、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、グリセロール、スクロース、血清アルブミン、トレハロースまたはそれらの任意の組合せを含み得る保存溶液であることを特徴とする医薬組成物。
【請求項５】
請求項４に記載の医薬組成物であり、前記イオンは、Ｎａ+、Ｋ+、Ｃａ2+、Ｍｇ2+、Ｃｌ-および前記イオンの組合せからなる群から選択されることを特徴とする医薬組成物。
【請求項６】
請求項４に記載の医薬組成物であり、前記ｐＨ緩衝液は、Ｈ2ＰＯ4-、ＨＣＯ3-、４‐（２‐ヒドロキシエチル）‐１‐ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）およびそれらの混合物からなる群から選択されることを特徴とする医薬組成物。
【請求項７】
請求項４に記載の医薬組成物であり、前記非透過物は、ラクトビオネート、スクロース、マンニトール、グルコースおよびそれらの組合せからなる群から選択されることを特徴とする医薬組成物。
【請求項８】
請求項４に記載の医薬組成物であり、前記コロイドはデキストラン４０であることを特徴とする医薬組成物。
【請求項９】
請求項４に記載の医薬組成物であり、前記代謝物質は、アデノシン、グルタチオンおよびそれらの組合せからなる群から選択されることを特徴とする医薬組成物。
【請求項１０】
前記請求項のいずれか一項に記載の医薬組成物であり、前記少なくとも１つの製薬学的に許容し得る賦形剤は、増殖因子、サイトカイン、器官形成シグナリングに関係するタンパク質、医薬、血小板溶解物、血清、同位体、細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ追跡手段、希釈剤、潤滑剤、基質または骨格材料およびそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの成分を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項１１】
前記請求項のいずれか一項に記載の医薬組成物であり、前記心臓組織生成に関与する細胞は幹細胞であることを特徴とする医薬組成物。
【請求項１２】
前記請求項のいずれか一項に記載の医薬組成物であり、前記心臓組織生成に関与する細胞は幹細胞に由来することを特徴とする医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１１または１２に記載の医薬組成物であり、前記幹細胞は、成体幹細胞、胚性幹細胞、人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞、ＭＩＡＭＩ細胞、常在性心臓幹細胞、植物幹細胞またはそれらの任意の組合せからなる群から選択されることを特徴とする医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の医薬組成物であり、前記幹細胞は、骨髄、脂肪組織、臍帯血、羊水、月経液、血液からなる群から選択される適切な組織源から採取される間葉系幹細胞であることを特徴とする医薬組成物。
【請求項１５】
前記請求項のいずれか一項に記載の医薬組成物であり、前記心臓組織生成に関与する細胞は哺乳類細胞であることを特徴とする医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１５に記載の医薬組成物であり、前記哺乳類細胞は、ヒト、ネコ、イヌ、ブタ、ウマ、マウス、ラット、およびハムスターからなる群から選択されることを特徴とする医薬組成物。
【請求項１７】
前記請求項のいずれか一項に記載の医薬組成物であり、前記細胞は、自己細胞、同種異系細胞、異種細胞、またはそれらの任意の組合せであることを特徴とする医薬組成物。
【請求項１８】
前記請求項のいずれか一項に記載の医薬組成物であり、前記心臓組織生成に関与する細胞は、ヒト成人間葉系幹細胞、ヒト胚性幹細胞（生産によりヒト胚破壊が生起しないことを条件とする）、胚様幹細胞、人工多能性幹細胞、常在性心臓幹細胞もしくは他の任意の適合ソースまたはそれらの組合せに由来し得る心臓形成細胞であることを特徴とする医薬組成物。
【請求項１９】
請求項１８に記載の医薬組成物であり、それだけに限らないが、心臓筋細胞、造血細胞、血管内皮前駆細胞、脂肪芽細胞、脂肪細胞、軟骨芽細胞、軟骨細胞、骨芽細胞、骨細胞、神経芽細胞および神経細胞を含む検出可能な非心臓形成細胞を含有しないことを特徴とする医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１９に記載の医薬組成物であり、非心臓形成細胞の合計含有量が総細胞数の０％〜５０％、好ましくは総細胞数の０％〜１５％であることを特徴とする医薬組成物。
【請求項２１】
請求項１９に記載の医薬組成物であり、各カテゴリの非心臓形成細胞の含有量が総細胞数の０％〜５０％、好ましくは総細胞数の０％〜１５％であることを特徴とする医薬組成物。
【請求項２２】
虚血性心筋症、急性心筋梗塞、慢性心筋梗塞、非虚血性心不全、虚血性心不全、先天性心筋症またはそれらの組合せの治療に使用するための請求項１〜２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記請求項のいずれか一項に記載の医薬組成物の製造方法であり、
心臓組織生成に関与する細胞のソースとなり得る細胞を取得するステップと、
前記細胞を、心臓組織生成に関与する細胞の取得が可能となる条件下で培養するステップと、
前記関与細胞を採取するステップと、
前記関与細胞に少なくとも１つの製薬学的に許容し得る賦形剤を添加するステップとを備え、前記少なくとも１つの製薬学的に許容し得る賦形剤は保存溶液であることを特徴とする方法。
【請求項２４】
請求項２３に記載の方法であり、心臓組織生成に関与する細胞のソースとなり得る前記細胞を：アクチビン‐Ａ；α‐トロンビン；アンギオポエチン；ＢＭＰ‐１、ＢＭＰ‐２、ＢＭＰ‐４、ＢＭＰ‐５、ＢＭＰ‐６等の骨形成タンパク質（ＢＭＰ）；カルジオトロフィン１；カルジオゲノールＣ；上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；ＦＧＦ‐１、ＦＧＦ‐２、ＦＧＦ‐４、ＦＧＦ‐５、ＦＧＦ‐１２、ＦＧＦ‐１３、ＦＧＦ‐１５、ＦＧＦ‐２０等の線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）；顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ‐ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ‐ＣＳＦ）；増殖分化因子‐９（ＧＤＦ‐９）；肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）；ＩＧＦ１、ＩＧＦ２等のインスリン様増殖因子（ＩＧＦ）；ミオスタチン（ＧＤＦ‐８）；ＮＴ‐３、ＮＴ‐４、ＮＴ‐１等のニューロトロフィン；神経増殖因子（ＮＧＦ）；ＰＤＧＦ‐β、ＰＤＧＦ‐ＡＡ、ＰＤＧＦ‐ＢＢ等の血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＴＧＦ‐（トランスフォーミング増殖因子α）；ＴＧＦ‐β１、ＴＧＦ‐β２、ＴＧＦ‐β３等のトランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ‐β）；ＶＥＧＦ‐Ａ、ＶＥＧＦ‐Ｃ等のＶＥＧＦ（血管内皮細胞増殖因子）；ＴＮＦ‐α；白血病抑制因子（ＬＩＦ）；インターロイキン６（ＩＬ‐６）；レチノイン酸；Ｃ  ＳＤＦ‐１（ストロマ細胞由来因子１）；ＢＤＮＦ（脳由来神経栄養因子）；ペリオスチン；アンギオテンシンＩＩ；Ｆｌｔ３リガンド；グリア細胞由来神経栄養因子；インスリン様増殖因子結合タンパク質３；インスリン様増殖因子結合タンパク質５；インターロイキン３；インターロイキン８；ミッドカイン；プロゲステロン；プトレシン；幹細胞因子；ＴＧＦα；Ｗｎｔｌ；Ｗｎｔ３ａ；Ｗｎｔ５ａ；カスパーゼ‐４；ケモカインリガンド１；ケモカインリガンド２；ケモカインリガンド５；ケモカインリガンド７；ケモカインリガンド１１；ケモカインリガンド２０；ハプトグロビン；レクチン；コレステロール２５‐ヒドロキシラーゼ；シンタキシン８；シンタキシン１１；セルロプラスミン；補体成分１；補体成分３；インテグリンα６；リソソーム酸性リパーゼ１；β‐２ミクログロブリン；ユビキチン；マクロファージ遊走阻止因子；コフィリン；シクロフィリンＡ；ＦＫＢＰ１２；ＮＤＰＫ；プロフィリン１；シスタチンＣ；カルサイクリン；スタニオカルシン１；ＰＧＥ２；ｍｐＣＣＬ２；ＩＤＯ；ｉＮＯＳ；ＨＬＡ‐Ｇ５；Ｍ‐ＣＳＦ；ＰＩＧＦ；ＭＣＰ‐１；細胞外基質分子；ＣＣＬ２（ＭＣＰ‐１）；ＣＣＬ３（ＭＩＰ‐１α）；ＣＣＬ４（ＭＩＰ‐１β）；ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）；ＣＣＬ７（ＭＣＰ‐３）；ＣＣＬ２０（ＭＩＰ‐３α）；ＣＣＬ２６（エオタキシン‐３）；ＣＸ３ＣＬ１（フラクタルカイン）；ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ‐７８）；ＣＸＣＬ１１（ｉ‐ＴＡＣ）；ＣＸＣＬ１（ＧＲＯα）；ＣＸＣＬ２（ＧＲＯβ）；ＣＸＣＬ８（ＩＬ‐８）；ＣＣＬ１０（ＩＰ‐１０）；およびそれらの組合せからなる群から選択される１以上の心臓形成物質で構成された心臓形成組成物と接触させることを特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項２３および２４のいずれか一項に記載の方法であり、前記心臓形成組成物は、ウシ胎仔血清、ヒト血清、血小板溶解物、血小板由来増殖因子およびそれらの混合物からなる群から選択される化合物と、
−ＴＧＦβ‐１、ＢＭＰ‐４、α‐トロンビン、カルジオトロフィン１およびＩＬ‐６からなる群から選択される化合物、ならびにカルジオゲノールＣおよびレチノイン酸からなる群から選択される化合物からなる第１群；
−ＴＧＦβ‐１、ＢＭＰ‐４、α‐トロンビン、カルジオトロフィン１、ＩＬ‐６：レチノイン酸、カルジオゲノールＣからなる第２群；
−アクチビン‐Ａ、ＦＧＦ‐２、ＩＬ‐６、ＩＧＦ１、レチノイン酸からなる第３群；および
−ＴＧＦ‐β１、ＴＧＦ‐β２、ＴＮＦ‐α、ＢＭＰ‐１、ＢＭＰ‐２、ＢＭＰ‐４、ＢＭＰ‐６、ＦＧＦ‐２、ＦＧＦ‐４、ＦＧＦ‐５、ＦＧＦ‐１２、ＦＧＦ‐１３、ＦＧＦ‐１５、ＦＧＦ‐２０、白血病抑制因子、ＶＥＧＦ‐Ａ、ＶＥＧＦ‐Ｃ、インスリン様増殖因子１、インターロイキン６（ＩＬ‐６）、アクチビン‐Ａ、α‐トロンビン、レチノイン酸、カルジオトロフィン１、カルジオゲノールＣ、およびそれらの組合せからなる第４群；
から選択される化合物とを含有する培地中で希釈されることを特徴とする方法。
【請求項２６】
請求項２３〜２５のいずれか一項に記載の方法であり、該方法の任意のステップにおいて品質管理操作を実施するためにサンプルを採取するステップを含む国際的に認知された医薬品製造規格に従って実行されることを特徴とする方法。
【請求項２７】
請求項２３〜２６のいずれか一項に記載の方法であり、活性物質の品質管理を実施するために細胞培養の最終工程でサンプルを採取するステップを含む国際的に認知された医薬品製造規格に従って実行されることを特徴とする方法。
【請求項２８】
請求項２３〜２７のいずれか一項に記載の方法であり、活性物質の品質管理基準は、同一性検査、均質性検査、純度検査およびそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの検査を含むことを特徴とする方法。
【請求項２９】
請求項２３〜２８のいずれか一項に記載の方法であり、心臓組織生成に関与する細胞が心臓形成細胞である場合に、前記心臓形成細胞の同一性は、Ｎｋｘ２．５、Ｔｂｘ５、ＭＥＦ２Ｃ、ＧＡＴＡ４、ＧＡＴＡ６、Ｍｅｓｐ１、ＦＯＧ１、ＦＯＧ２、Ｆｌｋ１およびそれらのホモログからなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子について観察される発現レベルの増加に対応することを特徴とする方法。
【請求項３０】
請求項２９に記載の方法であり、前記遺伝子発現の増加は、ｑＰＣＲ法により基準と比較して少なくとも２倍であることが判定されることを特徴とする方法。
【請求項３１】
請求項２３〜３０のいずれか一項に記載の方法であり、心臓組織生成に関与する細胞が心臓形成細胞である場合に、前記心臓形成細胞の同一性は、基準と比較して、Ｎｋｘ２．５、Ｔｂｘ５、ＭＥＦ２Ｃ、ＧＡＴＡ４、ＧＡＴＡ６、Ｍｅｓｐ１、ＦＯＧ１、ＦＯＧ２、Ｆｌｋ１およびそれらのホモログからなる群から選択される少なくとも１つのポリペプチド種の存在が観察され、更にＮｋｘ２．５もしくはＭＥＦ２Ｃまたはその両方が前記心臓形成細胞の核に移行したことをもって満足されたものと見なされることを特徴とする方法。
【請求項３２】
請求項３１に記載の方法であり、観察される前記少なくとも１つのポリペプチド種の存在は、抗Ｎｋｘ２．５、抗Ｔｂｘ５、抗ＭＥＦ２Ｃ、抗ＧＡＴＡ４、抗ＧＡＴＡ６、抗Ｍｅｓｐ１、抗ＦＯＧ１、抗ＦＯＧ２、抗Ｆｌｋ１およびそれらのホモログからなる群から選択される少なくとも１つの抗体の免疫標識によって示されることを特徴とする方法。
【請求項３３】
請求項２３〜３２のいずれか一項に記載の方法であり、均質性は所与のサンプル中少なくとも５０％が心臓形成細胞である場合に満足されることを特徴とする方法。
【請求項３４】
請求項３３に記載の方法であり、均質性は所与のサンプル中少なくとも５０％、好ましくは少なくとも８５％が心臓形成細胞である場合に満足されることを特徴とする方法。
【請求項３５】
請求項２３〜３４のいずれか一項に記載の方法であり、採取した細胞中の間葉系幹細胞の存在は、ＣＤ１０５、ＣＤ９０、ＣＤ１３３、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６、ＣＤ２９およびＣＤ４４からなる群から選択される表面マーカーに対する抗体の陽性免疫標識と、ＣＤ１４、ＣＤ３４およびＣＤ４５からなる群から選択される表面マーカーに対する抗体で検出可能な免疫標識の欠如とによって示されることを特徴とする方法。
【請求項３６】
請求項２３〜３５のいずれか一項に記載の方法であり、前記純度は、ＣＤ３４、ＦＡＢＰ４、オステオカルシン、ネスチン、Ｓｏｘ９およびＭＹＨ７遺伝子ならびにそれらのホモログの発現レベルの増加が基準と比較して２倍以上になると満足されなくなることを特徴とする方法。
【請求項３７】
請求項３６に記載の方法であり、前記遺伝子発現の増加はｑＰＣＲ法により基準と比較して判定されることを特徴とする方法。
【請求項３８】
請求項３０、３６または３７のいずれか一項に記載の方法であり、前記基準は非心臓形成細胞からなることを特徴とする方法。
【請求項３９】
請求項３８に記載の方法であり、前記基準は心臓形成物質の不存在下で培養された細胞からなることを特徴とする方法。
【請求項４０】
請求項２３〜３９のいずれか一項に記載の方法であり、培養条件はバイオリアクタを使用するステップを含み、該バイオリアクタを使用するステップは、前記細胞を粒子上または基質上に固定化またはカプセル化するステップと、細胞培養基が該粒子または基質の層を通過するようにさせるステップとを含むことを特徴とする方法。
【請求項４１】
心臓病障害または障害の素因の治療方法であり、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の医薬組成物が個体に有効量だけ送達されることを特徴とする方法。
【請求項４２】
請求項４１に記載の方法であり、前記個体は心臓血管系の機能不全を示す個体であることを特徴とする方法。
【請求項４３】
請求項４２に記載の方法であり、前記個体は虚血性心筋症、心筋梗塞、虚血性心不全もしくは非虚血性心不全、先天性心筋症またはそれらの組合せに罹患した個体であることを特徴とする方法。
【請求項４４】
請求項４１〜４３のいずれか一項に記載の方法であり、前記医薬組成物は、心筋内投与、心臓内投与、冠動脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、腹膜内投与、子宮内投与、非経口投与または全身投与からなる群から選択される投与経路を使用して送達されることを特徴とする方法。
【請求項４５】
請求項４１〜４４のいずれか一項に記載の方法であり、前記医薬組成物は、カテーテルもしくはシリンジまたはそれらの組合せを使用して心筋内送達されることを特徴とする方法。
【請求項４６】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載の医薬組成物の投与キットであり、前記医薬組成物を収容した容器を備えることを特徴とするキット。
【請求項４７】
請求項４６に記載のキットであり、前記容器は生体適合性容器であり、該生体適合性容器は細胞の生存および世界中の輸送を可能にし、医療提供者もしくはスタッフがレシピエントへの送達を行う際の取扱いを容易にすることができることを特徴とするキット。
【請求項４８】
請求項４６または４７に記載のキットであり、前記容器は密閉されていることを特徴とするキット。
【請求項４９】
請求項４６〜４８のいずれか一項に記載のキットであり、前記容器は前記賦形剤および保存条件に適合することを特徴とするキット。
【請求項５０】
請求項４６〜４９のいずれか一項に記載のキットであり、前記容器は閉止ガラス容器であることを特徴とするキット。
【請求項５１】
請求項４６〜５０のいずれか一項に記載のキットであり、前記容器は穿刺可能なセプタムキャップを有することを特徴とするキット。
【請求項５２】
請求項５１に記載のキットであり、前記穿刺可能なセプタムキャップは、前記容器から流体を引き出すためのルアー作動バルブを含むバイアルアダプタを受け入れることを特徴とするキット。
【請求項５３】
請求項５２に記載のキットであり、前記穿刺可能なセプタムキャップは針を貫通させることができることを特徴とするキット。
【請求項５４】
請求項４６〜５３に記載のキットであり、前記医薬組成物は凍結保存に適した密閉容器に保管されることを特徴とするキット。
【請求項５５】
請求項４６〜５４に記載のキットであり、前記容器内の医薬組成物の有効保存期間は少なくとも４８時間であることを特徴とするキット。
【請求項５６】
請求項４６〜５５に記載のキットであり、前記容器内の医薬組成物の有効保存期間は少なくとも７２時間であることを特徴とするキット。
【請求項５７】
請求項４６〜５６に記載のキットであり、少なくとも１つのカテーテルを更に備えることを特徴とするキット。
【請求項５８】
請求項４６〜５７に記載のキットであり、少なくとも１つのシリンジを更に備えることを特徴とするキット。
【請求項５９】
虚血性心筋症、急性心筋梗塞、慢性心筋梗塞、非虚血性心不全、虚血性心不全、先天性心筋症またはそれらの組合せの治療のための請求項１〜２１のいずれか一項に記載の医薬組成物の製造における、心臓組織生成に関与する細胞の使用。