(57)【要約】【課題】常に微量のプローブ及び試料を用いて、短時間で被検物質等を測定することが可能であり、且つ、極めて安価に大量生産可能なマイクロアレイを提供すること。【解決手段】複数並列線状に固定化されたプローブ領域を有する基板面上に複数並列線状の溝が設けられたマイクロ流路形成体が貼着され、該溝と基板面とによって該プローブ領域の線状方向と直角方向に複数並列線状の試料用マイクロ流路が形成されて成るマイクロアレイ、及びその製造方法、並びに該マイクロアレイを使用する被検物質の検出方法。【選択図】    図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数並列線状に固定化されたプローブ領域を有する基板面上に、複数並列線状の溝が設けられたマイクロ流路形成体が貼着され、該溝と基板面とによって該プローブ領域の線状方向と直角方向に複数並列線状の試料用マイクロ流路が形成されて成る、マイクロアレイ。
【請求項２】
プローブ領域の各線が、幅０．１〜１００μｍ、及び、長さ１〜１００ｍｍであり、隣接する線の間隔が１０〜１００μｍである、請求項１記載のマイクロアレイ。
【請求項３】
試料用マイクロ流路が幅０．１〜１００μｍ、高さ１〜１００μｍ、及び、長さ１〜１００ｍｍであり、各マイクロ流路の間隔が１０〜１００μｍである、請求項１又は２記載のマイクロアレイ。
【請求項４】
マイクロ流路形成体が樹脂フィルムから成る、請求項１〜３のいずれか一項に記載のマイクロアレイ。
【請求項５】
フィルムの材質が、ポリジメチルシロキサン、ポリメチルメタクリレート、又は、シクロオレフィンポリマーから選択される合成樹脂である、請求項４記載のマイクロアレイ。
【請求項６】
プローブ領域において各線状に固定化されたプローブが夫々異なる種類のプローブである、請求項１〜５のいずれか一項に記載のマイクロアレイ。
【請求項７】
プローブが核酸分子である、請求項１〜６のいずれか一項に記載のマイクロアレイ。
【請求項８】
プローブが抗体分子である、請求項１〜７のいずれか一項に記載のマイクロアレイ。
【請求項９】
基板がガラス、石英、プラスチック、又はポリメチルシロキサンから成る、請求項１〜８のいずれか一項に記載のマイクロアレイ。
【請求項１０】
マイクロ流路形成体における複数並列線状の溝が上流部及び下流部にあたる位置に夫々設けられた貫通孔に連通しており、それらの貫通孔が溶液の注入口及び排出口として機能することを特徴とする請求項１〜９のいずれか一項に記載のマイクロアレイ。
【請求項１１】
各マイクロ流路の排出口として、一つの共通の貫通孔が設けられていることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のマイクロアレイ。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載のマイクロアレイの製造方法であって、
（１）基板上に形成された複数並列線状のプローブ用マイクロ流路内にプローブを含む溶液を導入することによって、該基板上の該マイクロ流路に対応する位置に該プローブを複数並列線状に固定化する工程、（２）複数並列線状の溝が設けられたマイクロ流路形成体を該基板と貼着させ、該溝と基板面とによって、該プローブ領域の線状方向と直角方向に複数並列線状の試料用マイクロ流路を形成する工程、から成る前記方法。
【請求項１３】
工程（１）において、複数並列線状の溝が設けられたマイクロ流路形成体を該基板と貼着させ、該溝と基板面とによって複数並列線状のプローブ用マイクロ流路を形成する、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
工程（１）及び／又は工程（２）で使用するマイクロ流路形成体の片面に設けられた溝が幅０．１〜１００μｍ、深さ１〜１００μｍ、及び、長さ 1〜１００ｍｍであり、各溝の間隔が１０〜１００μｍである、請求項１２又は１３記載の方法。
【請求項１５】
マイクロ流路形成体が樹脂フィルムから成る、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載のマイクロアレイ。
【請求項１６】
工程（１）において、各マイクロ流路内に異なる種類のプローブを含む溶液を流すことを特徴とする、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
工程（１）で作製された基板を分割して、元の基板と同数の複数並列線状に固定化されたプローブ領域を有する基板を作製し、得られた複数の基板の夫々に、工程（２）を行うことを特徴とする、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載のマイクロアレイに形成された複数並列線状の試料用マイクロ流路に試料溶液を導入し、固定化されたプローブと被検物質との反応に基づき該被検物質を検出する方法。
【請求項１９】
被検物質の蛍光標識による蛍光を測定する、請求項１８記載の検出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、複数並列線状に固定化されたプローブ領域を有する基板面上に複数並列線状の溝が設けられたマイクロ流路形成体が貼着され、該溝と基板面とによって該プローブ領域の線状方向と直角方向に複数並列線状の試料用マイクロ流路が形成されて成るマイクロアレイ、及びその製造方法、並びに該マイクロアレイを使用する被検物質の検出方法等に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、多種類の被検物質の網羅的な解析方法には様々な種類のマイクロアレイが使用されている。その代表的な例として、ＤＮＡマイクロアレイ（ＤＮＡチップ）を挙げることができる。
【０００３】
このＤＮＡマイクロアレイは、所謂、アフィメトリックス型（光リソグラフィータイプ）とスタンフォード型（スポッティングタイプ）に大別される。光リソグラフィータイプは光リソグラフィーとコンビナトリアルケミストリー技術を利用してオリゴヌクレオチドを基板上に合成することによって製造される（特許文献１）。一方、スポッティングタイプは、予め調製したＤＮＡプローブを基板上に高密度にスポットするものであり、研究者の要望に応じて独自のDNAマイクロアレイをつくることができる（特許文献２）。
【０００４】
しかしながら、光リソグラフィータイプは、設計及び作製等に手間がかかり高価である。又、スポッティングタイプは、基板上にＤＮＡプローブを含む液滴を微量滴下するため、滴下された液滴が基板表面で拡散し、隣接するスポット間でコンタミネーションが生じる危険性があり、更に、各スポットの密度と均一性にばらつきが見られ、精度及び再現性等の面でも十分とはいえない。
【０００５】
更に、マルチチャンネルモジュールによってセンサーチップ上に相互作用アレイ（6x6=36種類）が形成された、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）光学バイオセンサー（ProteOn XPR36 システム）が開発されている（非特許文献１）。これは直交して交叉するリガンドチャネルとアナライトチャネルを有するものである。この装置を使用した測定では、夫々のリガンドチャネルに数百μLの測定試料（アナライト）を注入している。
【０００６】
一方、各種のタンパク質等の測定にはマイクロウェル等を使用した固相酵素免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）等が用いられているが、この場合には、一検体当りの試料量として数十μLが必要であり、その為に、総反応時間として数時間を要する。
【０００７】
又、ポリジメチルシロキサン （polydimethylsiloxane、以下、「ＰＤＭＳ」と略する）のような樹脂を使用して形成した流路を利用する被検物質マイクロアレイ（特許文献３）及びオンチップバイオアッセイキット（特許文献４）等が開発されている。
【０００８】
更に、非特許文献２には、アビジン被覆されたスライドガラス上に、2mmの間隔で設けられた６本の流路（1.5mm x 22mm）を有するフローチャンバーモジュール（ＰＤＭＳ製）を用いて、ビオチン標識抗体を流して固定し、その後、固定化された抗体パターンと流路が直角方向になるように同様のフローチャンバーモジュールをスライドガラス上に置き、その各流路に試料を流し（0.3 mL/min., １５分間）、更に、洗浄後、各流路に蛍光標識二次抗体を流し（各流路当り0.75 mL）、ＣＣＤカメラを用いて蛍光を測定するサンドイッチイムノアッセイ系が記載されている。
【特許文献１】米国特許第５，７４４，３０５号明細書
【特許文献２】米国特許第５，８０７，５２２号明細書
【特許文献３】特開２００５−３０９２７号公報
【特許文献４】特開２００５−４６１２１号公報
【非特許文献１】Tsafrir Bravman, et al., Anal. Biochem. 2006, 358, 281-288
【非特許文献２】Chris A. Rowe, et al., Anal. Chem. 1999, 71, 433-439
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、上記したようなマイクロアレイ技術等における課題を解決し、非常に微量のプローブ及び試料を用いて、短時間で被検物質等を測定することが可能であり、且つ、極めて安価に大量生産可能なマイクロアレイを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
即ち、本発明は以下の態様に係る。
［１］複数並列線状に固定化されたプローブ領域を有する基板面上に、複数並列線状の溝が設けられたマイクロ流路形成体が貼着され、該溝と基板面とによって該プローブ領域の線状方向と直角方向に複数並列線状の試料用マイクロ流路が形成されて成る、マイクロアレイ。
［２］上記のマイクロアレイの製造方法であって、
（１）基板上に形成された複数並列線状のプローブ用マイクロ流路内にプローブを含む溶液を導入することによって、該基板上の該マイクロ流路に対応する位置に該プローブを複数並列線状に固定化する工程、（２）複数並列線状の溝が設けられたマイクロ流路形成体を該基板と貼着させ、該溝と基板面とによって、該プローブ領域の線状方向と直角方向に複数並列線状の試料用マイクロ流路を形成する工程、から成る前記方法。
［３］上記のマイクロアレイに形成された複数並列線状の試料用マイクロ流路に試料溶液を導入し、固定化されたプローブと被検物質との反応に基づき該被検物質を検出する方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明のマイクロアレイにおいては、プローブが固定化される面積は極めて小さいので、極めて微量のプローブ溶液しか必要としない。その為にプローブの固定化密度等が均一となり、測定の精度及び再現性が非常に優れたものとなる。更に、試料溶液をマイクロ流路に流すことによって固定化されたプローブと反応させるために、使用する試料溶液も極めて少量ですみ、その結果、非常に短時間で、非常に微量の被検物質を測定することが可能である。更に、形成される検出（反応）スポットの単位面積も微小であるので、プローブ領域全体を高密度で形成することが可能である。
このように微小領域にマイクロアレイを作製することが可能となれば、顕微鏡の一視野の中に複数の被検物質に対する反応性を検出することが可能なマイクロアレイ全領域を収めることが可能となる。その結果、蛍光シグナルなどによって結合を検出する際に、従来のマイクロアレイ蛍光検出装置で必要とされるスキャニング等の機械的な駆動部が不要となり、検出装置の高感度化、簡易化に寄与することができる。
更に、マイクロアレイを製造する際の品質管理も容易であり、極めて安価に大量生産することが出来る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
［マイクロアレイ］
本発明のマイクロアレイにおいて、複数並列線状に固定化されたプローブ領域の各線の数、幅、長さ、及び隣接する線の間隔は、必要とされるプローブの数・種類等に応じて当業者が適宜選択することが出来るが、網羅的な検出を効率的に行なうには、検出感度及び密度等も考慮して、プローブが固定化される各線の幅及び間隔は出来るだけ小さいことが好ましい。例えば、マイクロアレイを本発明の製造方法で作製することにより、プローブ領域の各線の幅０．１〜１００μｍ、及び、長さ１〜１００ｍｍであり、各プローブの間隔が１０〜１００μｍとすることが出来る。
【００１３】
基板上に形成される試料用マイクロ流路の数、幅、長さ及び各マイクロ流路の間隔は、同時に測定したい試料の数等に応じて当業者が適宜選択することが出来るが、網羅的な検出を効率的に行なうには、検出感度及び密度等も考慮して、各マイクロ流路の幅及び間隔は出来るだけ小さいことが好ましい。例えば、マイクロアレイを本発明の製造方法で作製することにより、試料用マイクロ流路の幅  ０．１〜１００μｍ、高さ（深さ）1〜１００μｍ、及び、長さ  １〜１００ｍｍであり、各マイクロ流路の間隔が１０〜１００μｍとすることが可能である。
【００１４】
従って、使用されるマイクロ流路形成体の片面に設けられた溝は、幅０．１〜１００μｍ、深さ１〜１００μｍ、及び、長さ１〜１００ｍｍであり、各溝の間隔が１０〜１００μｍであるものが好ましい。
【００１５】
マイクロメートルおよびナノメートル加工により上記のようなマイクロ流路を設けることが可能な限り、マイクロ流路形成体の材質に特に制限はなく、は当業者に公知の任意のものを適宜選択することが可能である。その代表例として、フォトリソグラフィーによる加工が可能な紫外および可視光感受性高分子、鋳造加工可能なPDMS（ポリジメチルシロキサン：ＰＤＭＳ）に代表される透明シリコンゴム類、射出成形可能なPMMA(ポリメチルメタクリレート)等の熱可塑性樹脂、及び、ナノメートルサイズの構造を転写するナノインプリントに適応可能なCOP（シクロオレフィンポリマー）等の熱可塑性樹脂および光硬化樹脂等を樹脂フィルムを挙げることが出来る。更に、各種プラスチック、ガラス、及び、石英等の材質も使用することが出来る。
【００１６】
ＰＤＭＳはシリコンエラストマーの一種である。透明性が極めて高く、光学的特性に優れており、広い波長領域、特に、可視光領域での吸収が極めて小さく、蛍光検出に適している。また、鋳型法を用いることによりナノからミクロンオーダーの任意の微細構造を有するマイクロ構造体の微細加工が容易である。更に、ＰＤＭＳ自体が、ガラス及びアクリル樹脂等のプラスチックに対する良好な吸着性及び剥離性を有しており、微細加工を施されたＰＤＭＳ部材にこれら素材から成る基板を貼着させることにより、マイクロ流路やチャンバーを容易に形成することが可能である。更に、ＰＤＭＳは弾力性に優れ、生体適合性材料でもある。
又、ＣＯＰ（シクロオレフィンポリマー）は光学用を目的とした,透明性，低複屈折性，耐熱性，低吸湿性を兼ね備えた樹脂として開発、製品化が進んでいる樹脂であり、携帯電話のカメラ部のレンズや光ピックアップ用レンズの材料として利用されている。特に近年熱転写ナノインプリント技術によってＣＯＰ樹脂にナノメートルおよびマイクロメートルサイズの任意の微細構造を構築することが可能となっている。さらに、蛍光観察において問題となる自家蛍光も石英と同程度なため、顕微鏡下での蛍光観察にも適している。
【００１７】
プローブ領域において各線状に固定化されたプローブを夫々異なる種類のプローブとすることによって、同時に多数の種類の被検物質を測定することが可能である。プローブは、検出の対象となる被検物質と特異的に認識して結合し得る物質であり、被検物質に応じて、当業者が適宜選択することが出来る。例えば、ＤＮＡ等の各種核酸分子及びオリゴヌクレオチド等のその断片、抗体等のタンパク質及びペプチド類、脂質及び糖類、または薬剤等の低分子化合物等を挙げることが出来る。これらは血液等の体液及び細胞・組織等から適当な抽出又は精製方法によって調製されたもの、又は、自然界及び環境から取得されたもの、更には、各種の合成物質であっても良い。従って、本発明のマイクロアレイは、プローブとして固定される物質の種類に応じて、ＤＮＡチップ、プロテインチップ、抗体チップ、及び、糖鎖チップ等の様々な用途に使用することが可能である。
【００１８】
基板として使用する材質は、本発明のマイクロアレイを用いる検出方法に使用する測定手段・装置等に応じて、公知の物質から当業者が適宜選択することができ、例えば、ガラス、石英、プラスチック、又はＰＤＭＳ等の透明シリコンゴム類に代表される合成樹脂等を挙げることができる。尚、基板の大きさは、試料用マイクロ流路を形成するマイクロ流路形成体の大きさ、複数並列線状に固定化されたプローブ領域の面積、検出の使用する測定手段・装置等に応じて、当業者が適宜選択することができるが、通常、縦：15〜30ｍｍ、横：15〜50ｍｍ、厚さ： 1.0〜3.0ｍｍ程度である。
【００１９】
又、基板面に貼着されるマイクロ流路形成体に設けられた複数並列線状の溝の上流部及び下流部にあたる位置には、溶液の注入口及び排出口としての貫通孔が夫々設けられており、それらを介して溶液をマイクロ流路内に流すことが出来る。このマイクロ流路形成体における複数並列線状の溝は上流部及び下流部にあたる位置に夫々設けられた貫通孔に連通しており、それらの貫通孔が溶液の注入口及び排出口として機能する。又、複数の溝は下流部において合流して一つの溝になり、それが一つの共通の貫通孔（排出口）に連通させるようにすることも可能である。更に、溶液を注入する際の操作をより容易にするために、複数並列線状の溝は、それらの上流部においては、互いに扇状に広がり、各注入口は、例えば、2.0〜5.0ｍｍ程度の間隔を有していることが好ましい。又、注入口及び排出口である貫通孔に適当な長さのマイクロチューブ等の細管を接続することによって、溶液の注入及び排出が容易となる。
【００２０】
［マイクロアレイの製造方法］
本発明のマイクロアレイは、例えば、以下の工程で製造することができる。
（１）基板上に形成された複数並列線状のプローブ用マイクロ流路内にプローブを含む溶液を導入することによって、該基板上の該マイクロ流路に対応する位置に該プローブを複数並列線状に固定化する工程、（２）複数並列線状の溝が設けられたマイクロ流路形成体を該基板と貼着させ、該溝と基板面とによって、該プローブ領域の線状方向と直角方向に複数並列線状の試料用マイクロ流路を形成する工程。
【００２１】
工程（１）において、工程（２）で使用するマイクロ流路形成体と同様のマイクロ流路形成体を該基板と貼着させることによって、複数並列線状のプローブ用マイクロ流路を形成することが好ましい。
【００２２】
本発明で使用するマイクロ流路形成体はその材質等に応じて当業者に公知の任意の方法で容易に製造・加工することが出来る。基板面に溝を形成する方法としては、例えば、微細加工用ドリル、ブロード等を用いて機械的切削加工法により溝部分を取り除く方法、フォトリソグラフィー、電子ビームリソグラフィー等の電離放射線リソグラフィーまたはＡＦＭリソグラフィー、物理的、化学的エッチングにより、溝部分を取り除く方法等、あるいは、これらの方法を組み合わせて用いることによって、マイクロ流路形成体上に溝を直接的に形成することが出来る。更に、こうした方法で作製した所望の溝構造と反転する凸部構造を有する鋳型を用いて、該空間構造を転写することにより、間接的に溝を形成することも可能であり、例えば、鋳型を用いた射出成形、もしくは高温でのプレスモールド等を用いることができる。特に、素材としてＰＤＭＳを用いる場合には、ＰＤＭＳは鋳型に対する追従性が高いので、鋳型を用いて形成する方法が特に好ましい。一度鋳型を作製すると、製造コストを下げ、簡便かつ安価に大量のマイクロアレイを生産できる。
【００２３】
又、基板面にマイクロ流路形成体を貼着させる際には、プラズマエッチング装置等を用いて基板表面を酸素で処理するとより強固な接着が可能となる。又、マイクロ流路形成体としてＰＤＭＳを用いた場合は、適当な洗剤を用いてガラス等の基板から有機物、ゴミなどを取り除けば接着剤なしで貼着させることが可能となる。
【００２４】
工程（１）において、、各マイクロ流路内に異なる種類のプローブを含む溶液を流すことによって、並列線状に異なる種類のプローブを固定化することができる。尚、固定化はプローブの種類等に応じて、物理的吸着法、共有結合、静電結合及びイオン結合等の化学的固定化法、生物学的特異結合等の担体結合法、架橋法、高分子物質で包み込む包括法等の、当業者に公知の任意の方法で行なうことが出来る。更に、プローブの固定化に際して、必要に応じて、適宜、紫外線照射、化学架橋剤によるクロスリンク形成、基板表面のブロッキング、洗浄等の処理を行うことが出来る。
【００２５】
尚、工程（１）で作製された基板を分割して、元の基板と同数の複数並列線状に固定化されたプローブ領域を有する基板を作製し、得られた複数の基板の夫々に、工程（２）を行うことによって、より迅速に本発明のマイクロアレイを製造することが可能となる。
【００２６】
［マイクロアレイを使用する被検物質の検出方法］。
上記マイクロアレイに形成された複数並列線状の試料用マイクロ流路に試料溶液を導入することによって、試料溶液中に固定化されたプローブと特異的に結合する被検物質が含まれている場合には、被検物質がプローブを介して基板に固定され、その結果、該被検物質を検出することが出来る。
【００２７】
ここで、試料溶液は生物の細胞・組織・器官、水若しくは土壌等の自然界から抽出又は分離されたもの、又は、人工的に製造された物等に由来し、当業者に公知の適当な方法・手段によって適宜前処理等を施して調製されたものである。この場合に、測定の対象となる被検物質には、当業者に公知の任意の方法で、蛍光物質、酵素、及びビオチン等の適当な化合物で標識しておくことが好ましい。
【００２８】
又、マイクロ流路へのプローブ用溶液及び試料用溶液の導入は、当業者に公知の適当な供給手段及び回収手段を用いて行なうことが出来る。このよう手段の例として、例えば、ガラス製シリンジ、プラスチックシリンジ、マイクロピペッター、フッ化エチレン樹脂チューブ・シリコンチューブ、塩ビチューブ、ペリスタポンプ、プランジャーポンプ、マイクロシリンジポンプ、またはこれらの適当な組み合わせを挙げることが出来る。
【００２９】
例えば、本発明のマイクロアレイにおいて、複数並列線状に固定化されたプローブの一つの線の幅が約１０μｍであり、試料用マイクロ流路の幅も約１０μｍである場合には、形成される各検出（反応）スポットは１０μｍの略四角という極めて微小な面積となる。又、基板に１０本のプローブが固化されており、各プローブ間の距離を約２０μｍとすると、約２８０μｍの中に１０本のプローブが納まることになり、反応（プローブ）領域における検出（反応）スポットの密度は、従来のアフィメトリックス型マイクロアレイに匹敵するものである。更に、試料用のマイクロ流路の幅１０μｍ、高さ（深さ）２０μｍとすると、この流路の体積は僅か約５６ｐＬとなる。従って、プローブ用及び試料用のマイクロ流路に導入する各溶液の量もわずか１μL程度で充分である。
【００３０】
尚、被検物質は蛍光物質等の適当な化合物で標識されていることが好ましい。或るいは、標識抗体のような二次反応体を試料用マイクロ流路に導入して、結合した被検物質に更に、このような二次反応体を結合させた後に測定することも可能である。被検物質の検出は、被検物質又はその標識物質の種類等に応じて、当業者に公知の任意の測定方法及び装置を用いて行うことが出来る。又、検出に際して、工程（１）と同様に、当業者に公知の適当な方法でマイクロ流路内の洗浄・ブロッキング等を適宜行うことが出来る。
【００３１】
以下、実施例を参照して本発明を説明する。尚、本発明の技術的範囲はこれら実施例の記載に限定されるものではなく、これら記載に基づき当業者が適宜変更・修正したものも本発明に含まれる。尚、本発明のマイクロアレイ、その製造方法、及び、それを使用した検出方法の概略を図１に示す。
【実施例１】
【００３２】
［プローブの固定］タンパク質固定用スライドガラス（Nunc #231641:epoxy silane）を基板として用い、その上に、幅２５μｍ、深さ３０μｍ、長さ２０ｍｍであり、及び、各溝の間隔が２５μｍ（溝の中心線の間隔：５０mm）である複数並列線状の溝を有するＰＤＭＳフィルムを貼着し、その後、スライドガラスとＰＤＭＳフィルムとの間に形成されたプローブ用マイクロ流路内に、０．５mg/ml Alexa488-conjugated proteinA （Invitrogen  ＃P11047）を導入した。４℃で一晩静置し、proteinAを基板面に固定化した。次に、プローブ用マイクロ流路内を洗浄して、未結合のproteinAを除去した後、ＰＤＭＳフィルムを剥がした。
【００３３】
［洗浄・ブロッキング］0.05% PBS-Tween20を用いて、プローブが固定されたスライドガラスを洗浄した（１０分ｘ３）。Quenching buffer（0.5M Ethanol amine, 0.5M NaCl, pH. 8.3） を用いて１時間室温でインキュベーションすることによって、基板上の未反応の活性基を失活させた。その後、0.05% PBS-Tween20を用いて洗浄し（１０分ｘ３）、0.5% α−カゼイン（sigma＃ C3082）/0.05% PBST 中、１時間室温でインキュベーションし、その後、再度、0.05% PBS-Tween20を用いて洗浄した（１０分ｘ３）。次に、プローブの固定に使用したものと同じＰＤＭＳフィルムを充分に乾燥させたスライドガラスに貼着して、固定された複数並列線状のプローブと直角方向に複数並列線状の試料用マイクロ流路を有するマイクロアレイを作製した。こうして得られたマイクロアレイでは、基板上に、幅25μｍ、長さ20ｍｍに亘り、複数並列線状のAlexa488が検出された（図２（Ａ））。
【００３４】
［ウサギＩｇＧとの反応］
この試料用マイクロ流路内にＣｙ３及びＣｙ５標識された０．５mg/mlウサギＩｇＧを導入した。３０分〜１時間程度室温でインキュベーションした。次に、マイクロ流路内を洗浄して、未結合のＩｇＧを除去した後、ＰＤＭＳフィルムを剥がし、0.05% PBS-Tween20を用いて洗浄した（１０分ｘ３）。
【００３５】
これをKEYENCE BioZero（BZ8000）倒立型蛍光顕微鏡を用いて測定したところ、Alexa488による蛍光シグナルは図２（Ａ）に示す通り25μｍ幅の線状のシグナルを呈し、Cy3(図２（Ｂ）)及びCy5(図２（Ｃ）)においては25μｍ四方の矩形状蛍光シグナルを得た。尚、以上の結果をまとめて、図３に模式的に示した。又、図３には、本発明のマイクロアレイ及びそれを使用した検出方法の概略を示す。
【産業上の利用可能性】
【００３６】
本発明のマイクロアレイを利用することにより、微量の試料中に含まれる多数種類の被検物質を同時に短時間で、且つ、高感度で検出する手段・方法を構築することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】本発明のマイクロアレイ及びそれを使用した検出方法の概略を示す。
【図２】本発明のマイクロアレイを用いた被検物質（ウサギＩｇＧ）の検出結果を示す。
【図３】本発明のマイクロアレイ使用した被検物質の検出方法について概略を示す
【図１】
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【図２】
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【図３】
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