(57)【要約】【課題】煩雑な作業を行うことなく溶出時間Ｔrが適切となる溶離液条件での逆相液体クロマトグラフィを実行することを可能とする。【解決手段】実測値記憶部２５ａが、第１の濃度制御部２２ａによって有機溶媒の濃度が制御された溶離液を用いて行われる予備の逆相液体クロマトグラフィにおいて測定される試料の溶出指数Ｔ0／Ｔrを、該クロマトグラフィにおける溶離液に含まれる有機溶媒の特定濃度に関連付けて記憶する。また、変化率記憶部２５ｂには、有機溶媒の濃度の変化に対する溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率が記憶されている。そして、濃度演算部２２ａが、実測値記憶部２５ａ及び変化率記憶部２５ｂの記憶内容に基づいて、特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0が得られる有機溶媒の濃度を求める。第２の濃度制御部２２ｂは、濃度演算部２２ａの演算結果に基づいて、有機溶媒の濃度を制御する。【選択図】図２
2008292378.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の成分からなる溶離液を用いて予備の逆相液体クロマトグラフィを行う際に前記溶離液に含まれる有機溶媒の濃度を制御する制御信号を出力する第１の濃度制御手段と、
前記予備の逆相液体クロマトグラフィにおいて測定される、溶離液がカラムの空隙に流入し始めてから流出し始めるまでの時間Ｔ0及び試料が溶出するまでの溶出時間Ｔrにより定まる溶出指数Ｔ0／Ｔrを、該クロマトグラフィでの前記溶出時間Ｔrまでの間における前記有機溶媒の濃度の時間積分値を前記溶出時間Ｔrで割った値である前記有機溶媒の特定濃度に関連付けて記憶するための実測値記憶手段と、
前記溶離液における前記有機溶媒の濃度の変化に対する溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率を記憶するための変化率記憶手段と、
前記実測値記憶手段に記憶された前記特定濃度に対する溶出指数Ｔ0／Ｔrと、前記変化率記憶手段に記憶された溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率とに基づいて、特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0が得られる前記溶離液の前記有機溶媒の濃度を求めるための濃度演算手段と、
前記濃度演算手段での演算結果に基づいて、試料の溶出指数Ｔ0／Ｔrが前記特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0となるようにカラムに送液される前記溶離液における前記有機溶媒の濃度を制御する制御信号を出力するための第２の濃度制御手段とを備えていることを特徴とする逆相液体クロマトグラフの制御装置。
【請求項２】
前記第１の濃度制御手段が、前記溶離液における前記有機溶媒の濃度を一定とするような制御信号を出力することを特徴とする請求項１に記載の逆相液体クロマトグラフの制御装置。
【請求項３】
前記第１の濃度制御手段が、前記溶離液における前記有機溶媒の濃度を経時的に変化させるよな制御信号を出力することを特徴とする請求項１に記載の逆相液体クロマトグラフィの制御装置。
【請求項４】
前記変化率記憶手段が、含有成分の組合せの異なる別種類の溶離液ごとに、前記有機溶媒の濃度の変化に対する試料の溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率を記憶することが可能であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の逆相液体クロマトグラフの制御装置。
【請求項５】
複数の成分からなる溶離液を用いて予備の逆相液体クロマトグラフィを行うことにより、溶離液がカラムの空隙に流入し始めてから流出し始めるまでの時間Ｔ0及び試料が溶出するまでの溶出時間Ｔrにより定まる溶出指数Ｔ0／Ｔrを求める第１の工程と、
前記第１の工程で求められた溶出指数Ｔ0／Ｔr、及び前記予備の逆相液体ロマトグラフィでの前記溶出時間Ｔrまでの間における前記溶離液に含まれる有機溶媒の濃度の時間積分値を前記溶出時間Ｔrで割った値である前記有機溶媒の特定濃度に基づいて、前記溶離液における前記有機溶媒の濃度の変化に対する試料の溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率を利用することにより、特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0が得られる前記溶離液の前記有機溶媒の濃度を求める第２の工程と、
前記第２の工程で求められた前記特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0が得られる前記有機溶媒の濃度を有する前記溶離液をカラムに送液する第３の工程とを備えていることを特徴とする逆相液体クロマトグラフィの実行方法。
【請求項６】
前記溶離液における前記有機溶媒の濃度を一定として前記予備の逆相液体クロマトグラフィを行うことを特徴とする請求項５に記載の逆相液体クロマトグラフィの実行方法。
【請求項７】
前記溶離液における前記有機溶媒の濃度を経時的に変化させつつ前記予備の逆相液体クロマトグラフィを行うことを特徴とする請求項５に記載の逆相液体クロマトグラフィの実行方法。
【請求項８】
複数の成分からなる溶離液を用いて予備の逆相液体クロマトグラフィを行う際に前記溶離液に含まれる有機溶媒の濃度を制御する制御信号を出力する第１の濃度制御手段、
前記予備の逆相液体クロマトグラフィにおいて測定される、溶離液がカラムの空隙に流入し始めてから流出し始めるまでの時間Ｔ0及び試料が溶出するまでの溶出時間Ｔrにより定まる溶出指数Ｔ0／Ｔrを、該クロマトグラフィでの前記溶出時間Ｔrまでの間における前記有機溶媒の濃度の時間積分値を前記溶出時間Ｔrで割った値である前記有機溶媒の特定濃度に関連付けて記憶するための実測値記憶手段、
前記溶離液における前記有機溶媒の濃度の変化に対する溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率を記憶するための変化率記憶手段、
前記実測値記憶手段に記憶された前記特定濃度に対する溶出指数Ｔ0／Ｔrと、前記変化率記憶手段に記憶された溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率とに基づいて、特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0が得られる前記溶離液の前記有機溶媒の濃度を求めるための濃度演算手段、及び、
前記濃度演算手段での演算結果に基づいて、試料の溶出指数Ｔ0／Ｔrが前記特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0となるようにカラムに送液される前記溶離液における前記有機溶媒の濃度を制御する制御信号を出力するための第２の濃度制御手段としてコンピュータを機能させるための逆相液体クロマトグラフの制御プログラム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、逆相液体クロマトグラフィに関し、より詳細には、逆相液体クロマトグラフィを行う際の条件検討に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、カラム内に充填された固定相内に、複数の溶媒が混合された溶離液である移動相に溶解された試料を通過させることによって、試料内の各成分を分離する液体クロマトグラフィが知られている。係るクロマトグラフィにおいては、カラム内に導入された試料内の各成分は、溶離液との親和性やカラムの固定相との相互作用の違いにより、カラムを通過する時間が異なるので、カラムから排出される時点で各成分が分離される。
【０００３】
上述のような液体クロマトグラフィにおける分離度ＲSは、試料が溶出するまでの溶出時間Ｔrが増加するのに伴って単調増加し、溶出時間Ｔrが十分に大きくなると所定の大きさに飽和する。すなわち、溶出時間Ｔrが短い場合には、十分に成分の分離を行うことができないこととなり、他方溶出時間Ｔrを長くし過ぎた場合には、時間及び溶離液が無駄となってしまう。ここで、溶出時間Ｔｒは、溶離液の混合比条件によって変化する。したがって、液体クロマトグラフィを行う際には、溶出時間Ｔrが、成分の分離に必要な時間を十分に確保しつつ、時間及び溶離液の無駄が大きくならない程度の長さとなるように、溶離液の混合比条件を調整する必要がある。
【０００４】
特許文献１には、予備実験として、液体クロマトグラフィにおいて固定相として用いられる物質を薄層とした薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）を行い、溶離液の混合比条件を調整する方法が記載されている。薄層クロマトグラフィは、薄層状の固定相を移動相となる溶離液に浸漬することによって行われ、毛管現象により溶離液が薄層に吸い上げられると共に試料が吸い上げられる作用により試料の溶離液に対する移動度Ｒｆを求めることができる。ここで、溶離液が特定混合比である場合に液体クロマトグラフィで測定される溶出指数Ｔ0／Ｔr（Ｔ0：溶離液がカラムの空隙に流入し始めてから流出し始めるまでの時間）と、薄層クロマトグラフィで測定される移動度Ｒｆとは、互いに等しくなるという相関関係を有している。また、溶離液の混合比と移動度Ｒｆとの関係は比例関係であり、溶離液の混合比の変化に対する移動度Ｒｆの変化率は、試料の種類が変わっても一定である。
【０００５】
すなわち、まず予備実験として特定混合比の溶離液を用いて薄層クロマトグラフィを行い、移動度Ｒｆを測定する。このとき、溶離液の混合比の変化に対する移動度Ｒｆの変化率が一定であるという性質より、横軸を混合比、縦軸を移動度Ｒｆとするグラフの直線が一意に定まる。さらに、移動度Ｒｆが液体クロマトグラフィにおける溶出指数Ｔ0／Ｔrと等しいという関係を考慮すると、かかるグラフから所望の溶出指数Ｔ0／Ｔrとなる溶離液の混合比を求めることができる。
【特許文献１】特開２００３−２４０７６５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ここで、固定相と試料との疎水性相互作用により分離を行う逆相液体クロマトグラフィにおいては、一般的に固定相として、シリカゲル表面にオクタデシル（Ｃ１８）基を化学結合したオクタデシルシリル化シリカゲル（ＯＤＳ）が用いられる。ＯＤＳは撥水性が高いために、ＯＤＳを薄層として薄層クロマトグラフィを行った場合には、溶離液や試料が薄層内に入って行き難い。よって、逆相液体クロマトグラフィを行う場合には、予備実験である薄層クロマトグラフィを正確に行うことが困難であり、上述の特許文献１に記載の溶離液の混合比条件の調整方法は適用することができない。
【０００７】
したがって、現状では、逆相液体クロマトグラフィを行う際に溶離液の混合比条件を調整するには、まず溶離液の混合比を変化させつつ繰り返し予備実験を行い、好適な溶出時間Ｔrとなる混合比を探索する。そのため、作業が煩雑で時間がかかり、溶離液が多量に必要とされるという問題がある、
【０００８】
そこで、本発明の目的は、煩雑な作業を行うことなく溶出時間Ｔrが適切となる溶離液条件で逆相液体クロマトグラフィを実行することができる逆相液体クロマトグラフィの制御装置、逆相液体クロマトグラフィの実行方法及び逆相液体クロマトグラフィの制御プログラムを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の逆相液体クロマトグラフの制御装置は、複数の成分からなる溶離液を用いて予備の逆相液体クロマトグラフィを行う際に前記溶離液に含まれる有機溶媒の濃度を制御する制御信号を出力する第１の濃度制御手段と、前記予備の逆相液体クロマトグラフィにおいて測定される、溶離液がカラムの空隙に流入し始めてから流出し始めるまでの時間Ｔ0及び試料が溶出するまでの溶出時間Ｔrにより定まる溶出指数Ｔ0／Ｔrを、該クロマトグラフィでの前記溶出時間Ｔrまでの間における前記有機溶媒の濃度の時間積分値を前記溶出時間Ｔrで割った値である前記有機溶媒の特定濃度に関連付けて記憶するための実測値記憶手段と、前記溶離液における前記有機溶媒の濃度の変化に対する溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率を記憶するための変化率記憶手段と、前記実測値記憶手段に記憶された前記特定濃度に対する溶出指数Ｔ0／Ｔrと、前記変化率記憶手段に記憶された溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率とに基づいて、特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0が得られる前記溶離液の前記有機溶媒の濃度を求めるための濃度演算手段と、前記濃度演算手段での演算結果に基づいて、試料の溶出指数Ｔ0／Ｔrが前記特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0となるようにカラムに送液される前記溶離液における前記有機溶媒の濃度を制御する制御信号を出力するための第２の濃度制御手段とを備えている。
【００１０】
また、本発明の逆相液体クロマトグラフィの実行方法は、複数の成分からなる溶離液を用いて予備の逆相液体クロマトグラフィを行うことにより、溶離液がカラムの空隙に流入し始めてから流出し始めるまでの時間Ｔ0及び試料が溶出するまでの溶出時間Ｔrにより定まる溶出指数Ｔ0／Ｔrを求める第１の工程と、前記第１の工程で求められた溶出指数Ｔ0／Ｔr、及び前記予備の逆相液体ロマトグラフィでの前記溶出時間Ｔrまでの間における前記溶離液に含まれる有機溶媒の濃度の時間積分値を前記溶出時間Ｔrで割った値である前記有機溶媒の特定濃度に基づいて、前記溶離液における前記有機溶媒の濃度の変化に対する試料の溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率を利用することにより、特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0が得られる前記溶離液の前記有機溶媒の濃度を求める第２の工程と、前記第２の工程で求められた前記特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0が得られる前記有機溶媒の濃度を有する前記溶離液をカラムに送液する第３の工程とを備えている。
【００１１】
さらに、本発明の逆相液体クロマトグラフィの制御プログラムは、複数の成分からなる溶離液を用いて予備の逆相液体クロマトグラフィを行う際に前記溶離液に含まれる有機溶媒の濃度を制御する制御信号を出力する第１の濃度制御手段、前記予備の逆相液体クロマトグラフィにおいて測定される、溶離液がカラムの空隙に流入し始めてから流出し始めるまでの時間Ｔ0及び試料が溶出するまでの溶出時間Ｔrにより定まる溶出指数Ｔ0／Ｔrを、該クロマトグラフィでの前記溶出時間Ｔrまでの間における前記有機溶媒の濃度の時間積分値を前記溶出時間Ｔrで割った値である前記有機溶媒の特定濃度に関連付けて記憶するための実測値記憶手段、前記溶離液における前記有機溶媒の濃度の変化に対する溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率を記憶するための変化率記憶手段、前記実測値記憶手段に記憶された前記特定濃度に対する溶出指数Ｔ0／Ｔrと、前記変化率記憶手段に記憶された溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率とに基づいて、特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0が得られる前記溶離液の前記有機溶媒の濃度を求めるための濃度演算手段、及び、前記濃度演算手段での演算結果に基づいて、試料の溶出指数Ｔ0／Ｔrが前記特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0となるようにカラムに送液される前記溶離液における前記有機溶媒の濃度を制御する制御信号を出力するための第２の濃度制御手段としてコンピュータを機能させる。
【００１２】
なお、上述のプログラムは、ＣＤ−ＲＯＭ、ＦＤ、ＭＯなどのリムーバブル型記録媒体やハードディスクなどの固定型記録媒体に記録して配布可能である他、有線又は無線の電気通信手段によってインターネットなどの通信ネットワークを介して配布可能である。
【００１３】
これらの構成によると、予備の逆相液体クロマトグラフィにより任意の特定濃度における試料の溶出指数Ｔ0／Ｔrを求めておけば、所望の特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0での溶離液の濃度を知ることができる。したがって、煩雑な作業を行うことなく適切な溶出指数Ｔ0／Ｔr0となる溶離液条件で逆相液体クロマトグラフィを実行することができる。
【００１４】
本発明の逆相液体クロマトグラフの制御装置では、前記第１の濃度制御手段が、前記溶離液における前記有機溶媒の濃度を一定とするような制御信号を出力してもよい。
【００１５】
また、本発明の逆相液体クロマトグラフィの実行方法では、前記溶離液における前記有機溶媒の濃度を一定として前記予備の逆相液体クロマトグラフィを行ってもよい。
【００１６】
これらの構成によると、予備の逆相液体クロマトグラフィを簡易に行うことができる。
【００１７】
本発明の逆相液体クロマトグラフの制御装置では、前記第１の濃度制御手段が、前記溶離液における前記有機溶媒の濃度を経時的に変化させるよな制御信号を出力してもよい。
【００１８】
また、本発明の逆相液体クロマトグラフィの実行方法では、前記溶離液における前記有機溶媒の濃度を経時的に変化させつつ前記予備の逆相液体クロマトグラフィを行ってもよい。
【００１９】
これらの構成によると、溶離液に含まれる有機溶媒の濃度を一定として予備の逆相液体クロマトグラフィを行う場合のように、試料が溶出されるまでの時間が非常に長くなってしまうのを避けることができる。
【００２０】
本発明の逆相液体クロマトグラフの制御装置は、前記変化率記憶手段が、含有成分の組合せの異なる別種類の溶離液ごとに、前記有機溶媒の濃度の変化に対する試料の溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率を記憶することが可能であることが好ましい。
【００２１】
この構成によると、逆相液体クロマトグラフの制御装置を、含有成分の組合せの異なる多様な種類の溶離液に対して使用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
以下、本発明の好適な実施の形態について、図面を参照しつつ説明する。
＜第１の実施の形態＞
図１は、本実施の形態にかかる逆相液体クロマトグラフ装置の概略構成を示す図である。図１に示すように、逆相液体クロマトグラフ装置１１は、溶媒Ａが貯留された容器１２と、溶媒Ｂが貯留された容器１３と、溶媒Ａと溶媒Ｂとが連結された位置に設けられた電磁弁１４と、溶離液１０が貯留される混合器１５と、ポンプ１６と、インジェクター１７と、カラム１８と、検出器１９と、フラクションコレクター２０とが、この順に配置され経路が形成されている。そして、電磁弁１４に逆相液体クロマトグラフ制御装置２１が接続されている。
【００２３】
容器１２には溶媒Ａが、容器１３には溶媒Ｂが貯留されている。なお、用いられる溶媒は２種類に限定されず、使用状態・目的に応じて数を増やしてもよい。一般に、溶媒Ａ・溶媒Ｂには、極性溶媒と有機溶媒との組合せで用いられる。
【００２４】
ポンプ１６は、逆相液体クロマトグラフ装置１１の回路において、混合器１５・電磁弁１４を介して溶媒Ａ・溶媒Ｂを汲み上げる。電磁弁１４は、逆相液体クロマトグラフ制御装置２１からの制御信号により、汲み上げられる溶媒を溶媒Ａ又は溶媒Ｂから選択する。電磁弁１４での各溶媒の選択時間に応じて混合器１５内での溶媒Ａ、Ｂの混合比が決定される。混合器１５は、汲み上げられた溶媒Ａ及び溶媒Ｂが一旦貯留され、溶離液１０とされる。この溶離液１０は、その有機溶媒の濃度が、後述するように逆相液体クロマトグラフ制御装置２１の濃度演算部２２ａ（図２参照）で算出された濃度となる混合比を有するものである。
【００２５】
インジェクター１７は、試料３を有しており、溶離液１０が通過することで試料３が送出されるようになっている。なお、インジェクター１７は１本に限定されず、選択的に経路を選ぶことができる並設された複数のインジェクターとし、複数の試料について連続的
に作業を行うことも可能である。
【００２６】
カラム１８には固定相が充填されており、溶離液１０が通過することで逆相液体クロマトグラフが行われる。本実施の形態においては、この固定相としては、ＯＤＳが用いられている。なお、カラムは１本に限定されず、選択的に経路を選ぶことができる並設された複数のカラムとし、複数種類の逆相液体クロマトグラフィを行うことも可能である。
【００２７】
検出器１９は、カラム１８にて行われる逆相液体クロマトグラフィの結果の検出を行う。そして、フラクションコレクター２０は、複数の試験管を有しており、検出器１９の分析結果により、試料３に含まれる成分毎に各試験管に分取されるようになっている。
【００２８】
また、逆相液体クロマトグラフ制御装置２１は、例えば汎用のパーソナルコンピュータなどの情報処理装置によって構成されており、図２に示すように、濃度演算部２２ａ、第１の濃度制御部２２ｂ、及び第２の濃度制御部２２ｃを有するＣＰＵ２２と、実測値記憶部２５ａ及び変化率記憶部２５ｂを有するメモリ２５と、ハードディスク２６と、入出力部２８とを備えている。入出力部２８には、例えばキーボードやマウスなどから構成された入力部２９と、逆相液体クロマトグラフィの実行過程における様々な情報をオペレータに知らせるためのディスプレイ３０と、ＣＰＵ２２の第１及び第２の濃度制御部２２ｂ、２２ｃからの指示に基づいて電磁弁１４の開閉信号を送出する電磁弁操作部３１とが接続されている。
【００２９】
ハードディスク２６には、本実施形態による逆相液体クロマトグラフの制御プログラムを含む各種のソフトウェアが記憶されている。そして、これらのハードウェア及びソフトウェアが組み合わされることによって、上述の各部２２ａ、２２ｂ、２２ｃ、２５ａ、２５ｂが構築されている。なお、このプログラムは、ＣＤ−ＲＯＭ、ＦＤ、ＭＯなどのリムーバブル型記録媒体に記録しておくことにより、任意のコンピュータにインストールすることが可能である。
【００３０】
実測値記憶部２５ａは、逆相液体クロマトグラフ装置１１を用いて試料３の分取作業を本格的に開始する前に少量の試料３で行われる予備の逆相液体クロマトグラフィで測定される溶出指数Ｔ0／Ｔrを、該クロマトグラフィにおける有機溶媒の特定濃度に関連付けて記憶する。なお、Ｔ0は、逆相液体クロマトグラフィにおいて溶離液１０がカラム１８の空隙に流入し始めてから流出し始めるまでの時間であり、Ｔrは、試料３が溶出するまでの溶出時間である。ここで、予備の逆相液体クロマトグラフィにおける特定濃度とは、溶出時間Ｔrまでの間における有機溶媒の濃度の時間積分値、すなわち有機溶媒の積算濃度を、溶出時間Ｔrで割った値であり、溶出時間Ｔrまでの有機溶媒の平均濃度を意味する。実測値記憶部２５ａに記憶すべきデータは、オペレータによって入力部２９から入力されてよい。
【００３１】
なお、本実施の形態においては、予備の逆相液体クロマトグラフィは、図３に示すように、溶離液に含まれる有機溶媒の濃度を一定とするイソクラテックモードで行われる。したがって、図３に示すように、有機溶媒の濃度がＢ1である溶離液を用いた予備の逆相液体クロマトグラフィでの溶出時間がＴr1である場合には、実測値記憶部２５ａには、特定濃度Ｂ1に対する溶出指数Ｔ0／Ｔrとして、Ｔ0／Ｔr1が記憶される。
【００３２】
変化率記憶部２５ｂは、溶離液における有機溶媒の濃度の変化に対する試料３の溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率を記憶している。ここで、溶離液に含まれる有機溶媒の濃度と試料３の溶出指数Ｔ0／Ｔrとの関係は比例関係である。すなわち、溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率は、図４に示すように、横軸を有機溶媒の濃度、縦軸を溶出指数Ｔ0／Ｔrとするグラフを描いた際の直線の傾きで示される。なお、溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率は、図４において破線で示すように、試料の種類が変わっても一定である。また、図４において一点鎖線で示すように、含有成分の組合せが異なる別種類の溶離液を用いた場合には別の値をとる。
【００３３】
なお、溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率は、図５に示すように、事前に、溶離液１０に含まれる有機溶媒の濃度を一定とするイソクラテックモードでの逆相液体クロマトグラフィを複数回行うことによって得られる。すなわち、図５から、有機溶媒の濃度を４０％、３０％、２０％、１０％として逆相液体クロマトグラフィを行った際の溶出時間Ｔrは、それぞれａＴ0、ｂＴ0、ｃＴ0、ｄＴ0となる。よって、有機溶媒の濃度が４０％、３０％、２０％、１０％である際の溶出指数Ｔ0／Ｔrが、それぞれ１／ａ、１／ｂ、１／ｃ、１／ｄとなることが分かる。これにより、図４に示すようなグラフをプロットし、その傾きを求めることで、溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率を求めることができる。
【００３４】
ハードディスク２６には、含有成分の組合せの異なる別種類の溶離液について、それぞれ溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率が格納されている。そして、本実施の形態による制御プログラムが実行されるときに、実測値記憶部２５ａに記憶された特定濃度にかかる種類の溶離液に対する溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率だけがメモリ２５にロードされる。
【００３５】
濃度演算部２２ａは、実測値記憶部２５ａに記憶された特定濃度に対する溶出指数Ｔ0／Ｔrの実測値と、変化率記憶部２５ｂに記憶された溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率とに基づいて、特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0が得られる溶離液における有機溶媒の濃度を求める。すなわち、例えば、実測値記憶部２５ａに記憶された溶出指数がＴ0／Ｔr1であり、その特定濃度がＢ1である場合には、横軸を有機溶媒の濃度、縦軸を溶出指数Ｔ0／Ｔrとするグラフの直線は、図６に示すように、座標（Ｂ1、Ｔ0／Ｔr1）を通り、且つ変化率記憶部２５ｂに記憶された溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率に従った傾きを有する直線として同一の溶媒系においては一意に決まる。よって、図６に示す直線の傾きをＦとすると、所望の特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0が得られる有機溶媒の濃度Ｂ0は、以下の（式１）により求めることができる。
【数１】
2008292378.tif 000003
【００３６】
ここで、特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0について説明する。一般に、液体クロマトグラフィにおいては、溶出時間Ｔrが４Ｔ0であるときに分離度Ｒが最適となる。したがって、本実施の形態においては、逆相液体クロマトグラフィを行った際に溶出時間Ｔrが４Ｔ0となるように調整することとする。ただし、溶出時間Ｔrは、必ずしも４Ｔ0に調整しなければならないものではなく、異なる値に調整されてもよい。例えば、図７に示すようなイソクラテックモードで本格的な逆相液体クロマトグラフィを行う場合には、溶出指数Ｔ0／Ｔrが０．２５となるような有機溶媒の濃度を有する溶離液１０を用いると、試料３の溶出時間Ｔrが４Ｔ0となる。よって、イソクラテックモードで溶出が行われる場合には、濃度演算部２２ａは、特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0が０．２５となるような有機溶媒の濃度Ｂ0を求める。
【００３７】
また、例えば、図８に示すように、経過時間が１Ｔ0となるまでの時間巾「Ｗ（ｗａｉｔ）」の間は、溶出指数Ｔ0／Ｔrが０．２となるような有機溶媒の濃度を有する溶離液１０を用い、その後経過時間が４Ｔ0となるまでの時間巾「Ｇ（ｇｒａｄｉｅｎｔ）」の間は、溶離液１０に含まれる有機溶媒の濃度が、溶出指数Ｔ0／Ｔrが０．２に対応する濃度から０．５に対応する濃度となるまで徐々に変化させて、さらにその後経過時間が６Ｔ0となるまでの時間巾「Ｔ（ｔｏｐ）」の間は、溶出指数Ｔ0／Ｔrが０．５となるような有機溶媒の濃度を有する溶離液１０を用いるようなグラジエントモードで本格的な逆相液体クロマトグラフィを行うと、試料３の溶出時間Ｔrが４Ｔ0となる。よって、このようなグラジエントモードで溶出が行われる場合には、濃度演算部２２ａは、特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0wが０．２となるような有機溶媒の濃度Ｂ0w、及び特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0tが０．５となるような有機溶媒の濃度Ｂ0tを求める。
【００３８】
第１の濃度制御部２２ｂは、予備の逆相液体クロマトグラフィを行う際にカラム１８送液される溶離液１０に含まれる有機溶媒の濃度を制御する制御信号を出力する。上述のように、本実施の形態においては、イソクラテックモードで予備の逆相液体クロマトグラフィを行うので、第１の濃度制御部２２ｂは、有機溶媒の濃度が常に一定となるような制御信号を出力する。第２の濃度制御部２２ｃは、濃度演算部２２ａでの演算結果に基づいて、試料３の溶出指数Ｔ0／Ｔrが特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0となるようにカラム１８に送液される溶離液１０に含まれる有機溶媒の濃度を制御する制御信号を出力する。そして、第１及び第２の濃度制御部２２ｂ、２２ｃから出力される制御信号は、いずれも入出力部２８から電磁弁操作部３１に供給される。
【００３９】
次に、本実施の形態における逆相液体クロマトグラフ装置１１における処理手順を示すフローチャートである図９を参照しつつ、逆相液体クロマトグラフィの実行方法について説明する。
【００４０】
まず、オペレータにより、予備の逆相液体クロマトグラフィを行う旨の指示が入力部２９から入力されたか否かを繰り返し判断する（Ｓ１）。そして、予備の逆相液体クロマトグラフィの実行指示が入力された場合には（Ｓ１：ＹＥＳ）、予備の逆相液体クロマトグラフィが実行される（Ｓ２）。このとき、第１の濃度制御部２２ｂは、有機溶媒の濃度が一定に保たれた溶離液１０がカラム１８に送液されるような制御信号を電磁弁操作部３１に出力する。続いて、予備の逆相液体クロマトグラフィにおける試料３の溶出指数Ｔ0／Ｔrの実測値及び該クロマトグラフィでの溶離液の特定濃度がメモリ２５の実測値記憶部２５ａに記憶される（Ｓ３）。
【００４１】
次に、実測値記憶部２５ａに記憶された特定濃度にかかる種類の溶離液について、有機溶媒の濃度の変化に対する試料３の溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率のデータがハードディスク２６から読み出され、変化率記憶部２５ｂにロードされる（Ｓ４）。
【００４２】
続いて、濃度演算部２２ａが、実測値記憶部２５ａに記憶された特定濃度に対する溶出指数Ｔ0／Ｔrの実測値と、変化率記憶部２５ｂに記憶された溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率とに基づいて、溶離液１０に含まれる有機溶媒の濃度と試料３の溶出指数Ｔ0／Ｔrとの関係を、図６に示すように一対一に定める（Ｓ５）。ここで、逆相液体クロマトグラフ装置１１で試料３の分取を本格的に行う際の溶出モードが、オペレータにより入力部２９から入力されたか否かを繰り返し判断する（Ｓ６）。
【００４３】
溶出モードが入力された場合には（Ｓ６：ＹＥＳ）、濃度演算部２２ａは、本格的な逆相液体クロマトグラフィを行う際に必要となる特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0に対する濃度を、ステップＳ５で定められた一対一の関係に基づいて算出する（Ｓ７）。すなわち、ステップＳ６において、図７に示すようなイソクラテックモードで溶出を行う旨の指示が入力された場合には、濃度演算部２２ａは、上述のように、特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0が０．２５となるような有機溶媒の濃度Ｂ0を求める。また、図８に示すようなグラジエントモードで溶出を行う旨の指示が入力された場合には、濃度演算部２２ａは、上述のように、特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0wが０．２となるような有機溶媒の濃度Ｂ0w、及び特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0tが０．５となるような有機溶媒の濃度Ｂ0tを求める。
【００４４】
そして、第２の濃度制御部２２ｃが、有機溶媒の濃度がステップＳ７で求められた濃度Ｂとなるような溶離液１０が所定時間だけカラム１８に送液されるような制御信号を電磁弁操作部３１に順次出力する（Ｓ８）。電磁弁操作部３１はこの制御信号に基づいて電磁弁１４を開閉させる信号を電磁弁１４に供給する。これにより、カラム１８内での試料の溶出指数Ｔ0／Ｔrを、確実に特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0又はその近傍とすることができるので、良好な試料の分離を行わせることができる。
【００４５】
また、本実施の形態では、予備の逆相液体クロマトグラフィをイソクラテックモードで行うので、第１の濃度制御部２２ｂによる制御が簡易化される。
【００４６】
さらに、本実施の形態では、含有成分の組合せの異なる別種類の溶離液ごとに、有機溶媒の濃度の変化に対する試料３の溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率がハードディスク２６に記憶されており、必要な変化率だけを変化率記憶部２５ｂに記憶させることができる。そのため、逆相液体クロマトグラフ制御装置２１を、含有成分の組合せの異なる多様な種類の溶離液に対して使用することができる。
【００４７】
＜第２の実施の形態＞
次に、図１０を参照しつつ、本発明の第２の実施の形態について説明する。図１０は、本実施の形態にかかる予備の逆相液体クロマトグラフィを説明するためのグラフである。本実施の形態は、予備の逆相液体クロマトグラフィの態様を除いて上述の第１の実施の形態とほぼ同様である。以下の説明において、第１の実施の形態と同様の構成を有するものについては、同じ符号を付して適宜その説明を省略する。
【００４８】
本実施の形態においては、第１の濃度制御部２２ｂは、予備の逆相液体クロマトグラフィが、図１０に示すようなグラジエントモードで行われるように、カラム１８送液される溶離液１０に含まれる有機溶媒の濃度を制御する制御信号を出力する。すなわち、経過時間が４Ｔ0となるまでの間に、溶離液１０に含まれる有機溶媒の濃度が０％〜１００％まで徐々に変化し、その後有機溶媒の濃度は１００％に保たれる。そして、実測値記憶部２５ａには、このようなグラジエントモードで行われた予備の逆相液体クロマトグラフィで測定された溶出指数Ｔ0／Ｔrを、該クロマトグラフィにおける有機溶媒の特定濃度に関連付けて記憶する。ここで、上述のように、特定濃度とは、溶出時間Ｔrまでの間における有機溶媒の濃度の時間積分値を溶出時間Ｔrで割った値である。
【００４９】
なお、溶出時間Ｔrまでの間における有機溶媒の濃度の時間積分値とは、積算濃度であるので、図１１（ａ）において斜線で示す部分の面積となる。したがって、かかる時間積分値を溶出時間Ｔrで割った値を特定濃度Ｂ1とすると、図１１（ａ）の斜線で示す部分の面積が、特定濃度Ｂ1で時間Ｔrだけイソクラテック溶出を行った際の積算濃度である図１１（ｂ）において斜線で示す部分の面積と等しくなる。
【００５０】
そして、第１の実施の形態と同様に、濃度演算部２２ａが、実測値記憶部２５ａに記憶された特定濃度に対する溶出指数Ｔ0／Ｔrの実測値と、変化率記憶部２５ｂに記憶された溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率とに基づいて、特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0が得られる溶離液１０における有機溶媒の濃度を求め、第２の濃度制御部２２ｃは、濃度演算部２２ａでの演算結果に基づいて、カラム１８に送液される溶離液１０に含まれる有機溶媒の濃度を制御する制御信号を出力する。したがって、第１の実施の形態と同様に、カラム１８内での試料３の溶出指数Ｔ0／Ｔrを、確実に特定溶出指数Ｔ0／Ｔr0又はその近傍とすることができるので、良好な試料３の分離を行わせることができる。
【００５１】
また、本実施の形態では、予備の逆相液体クロマトグラフィをグラジエントモードで行うので、イソクラテックモードで予備の逆相液体クロマトグラフィを行う場合のように、試料３が溶出されるまでの時間が非常に長くなってしまうのを避けることができる。
【００５２】
以上、本発明の好適な実施の形態について説明したが、本発明は上述の実施の形態に限られるものではなく、特許請求の範囲に記載した限りにおいて様々な設計変更が可能なものである。例えば、逆相液体クロマトグラフ装置１１の具体的な構成は様々な形態に変更することができる。また、変化率記憶部２５ｂは、有機溶媒の濃度の変化に対する試料３の溶出指数Ｔ0／Ｔrの変化率を１種類の溶離液だけについて記憶可能であってもよい。また、逆相液体クロマトグラフ制御装置２１のハードウェア構成は任意に変更可能である。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】本発明の第１の実施の形態にかかる逆相液体クロマトグラフ装置の概略構成を示す図である。
【図２】図１に示す逆相液体クロマトグラフ制御装置の概略構成を示すブロック図である。
【図３】図１に示す逆相液体クロマトグラフ装置で行われる予備の逆相液体クロマトグラフィを説明する図である。
【図４】図２に示す変化率記憶部に記憶される有機溶媒の濃度の変化に対する溶出指数の変化率をグラフで示した図である。
【図５】図２に示す変化率記憶部に記憶される有機溶媒の濃度の変化に対する溶出指数の変化率を求める方法を説明する図である。
【図６】図２に示す濃度演算部における濃度の演算方法を説明する図である。
【図７】図１に示す逆相液体クロマトグラフ装置で本格的に試料の分取を行う際の溶出モードの一例であり、イソクラテックモードを示す図である。
【図８】図１に示す逆相液体クロマトグラフ装置で本格的に試料の分取を行う際の溶出モードの一例であり、グラジエントモードを示す図である。
【図９】図１に示す逆相液体クロマトグラフ装置における処理手順を示すフローチャートである。
【図１０】本発明の第２の実施の形態にかかる予備の逆相液体クロマトグラフィを説明する図である。
【図１１】図１０に示す予備の逆相液体クロマトグラフィを行った際の特定濃度を説明する図である。
【符号の説明】
【００５４】
１０  溶離液
１１  逆相液体クロマトグラフ装置
１８  カラム
２１  逆相液体クロマトグラフ制御装置
２２ａ  濃度演算部（濃度演算手段）
２２ｂ  第１の濃度制御部（第１の濃度制御手段）
２２ｃ  第２の濃度制御部（第２の濃度制御手段）
２５ａ  実測値記憶部（実測値記憶手段）
２５ｂ  変化率記憶部（変化率記憶手段）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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