(57)【要約】【課題】バイアリニンＡ誘導体の抗アレルギー活性を検討し、バイアリニンＡ誘導体を有効成分として含む抗アレルギー剤を提供することを目的とする。【解決手段】下記式（１）にて示されるバイアリニンＡ誘導体又は薬理学的に許容される塩を有効成分とする抗アレルギー剤により解決する。【化１】2008001675.tif 000007（上記式中、Ｒ1〜Ｒ4は、同時に又は各々独立に、水素原子、アルキル基、アシル基を表す。また、Ｒ2及びＲ3は（ＣＨ2）nで結合した環構造を形成してもよい。ここで、ｎは１又は２の整数を表す。）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）にて示されるバイアリニンＡ誘導体又は薬理学的に許容される塩を有効成分とする抗アレルギー剤。
【化１】
2008001675.tif 000006
（上記式中、Ｒ1〜Ｒ4は、同時に又は各々独立に、水素原子、アルキル基、アシル基を表す。また、Ｒ2及びＲ3は（ＣＨ2）nで結合した環構造を形成してもよい。ここで、ｎは１又は２の整数を表す。）
【請求項２】
前記バイアリニンＡ誘導体又は薬理学的に許容される塩が、キノコ由来であることを特徴とする請求項１記載の抗アレルギー剤。
【請求項３】
前記キノコが、セレフォラ ヴァイアリス（Thelephora vialis）であることを特徴とする請求項１又は２に記載の抗アレルギー剤。
【請求項４】
請求項１に記載のバイアリニンＡ誘導体又は薬理学的に許容される塩を有効成分とする、β−ヘキソサミニダーゼ放出抑制剤。
【請求項５】
請求項１記載のバイアリニンＡ誘導体又は薬理学的に許容される塩を有効成分とする、ＴＮＦ−α産生抑制剤。
【請求項６】
請求項１記載のバイアリニンＡ誘導体又は薬理学的に許容される塩を有効成分とする、ＭＣＰ−１産生抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バイアリニンＡ誘導体又は薬理学的に許容される塩を有効成分とする抗アレルギー剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
担子菌類イボタケ科に属するセレフォラ ヴァイアリス（中国名「gan-ba-jun」、和名「ツブイボタケ」）は、中国雲南省の松の木の付近に自生する茸で、古くから最も好まれる食用茸の一つである。その芳香が食欲を増進させることから、セレフォラ属茸の揮発性成分についての研究はその芳香との関連において精力的に行われている。
【０００３】
一方、非揮発性成分については揮発成分ほど研究は進んでいなかったが、近年になり生体調節機能との関連から注目されている。これまでに報告されたセレフォラ属の非揮発成分としては、例えば、抗生物質としてフェラン酸phellanic acid (フェロ メラロイカスPhello melaleucus)、色素成分として５−O−メチル−キレセリスリン5-O-methyl-xylerythrin、ペニオフォリンpeniophorinとペニオサンギンpeniosanguin (ペニオフォラ サンギネアPeniophora sanguinea) などがある。また、抗アレルギー性物質としては、帽菌目イボタケ科の食用キノコの菌糸体または子実体またはその培地から抽出した１６種類以上のアミノ酸、Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノースが、副作用の極めて少ない抗アレルギー作用を有する旨が報告されている（特許文献１）。
【特許文献１】特開平６−１８３９９２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
これまで、担子菌類イボタケ科に属するキノコのうち、セレフォラ ヴァイアリス（Thelephora vialis）に含まれるバイアリニンＡ（vialinin A）が、合成抗酸化剤ＢＨＴと同等ないしそれ以上の強い抗酸化物質であることが知られている。そして、今般、セレフォラ ヴァイアリス（Thelephora vialis）に含まれる他の物質の抗酸化作用および抗アレルギー作用について研究していたところ、偶然にも、バイアリニンＡ（vialinin A）が抗アレルギー活性を有する可能性があるとの知見を得た。
【０００５】
本発明はかかる知見に基づきなされたものであり、バイアリニンＡ誘導体の抗アレルギー活性を検討し、バイアリニンＡ誘導体を有効成分として含む抗アレルギー剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、下記式（１）にて示されるバイアリニンＡ誘導体又は薬理学的に許容される塩を有効成分とする抗アレルギー剤である。
【化１】
2008001675.tif 000002
（上記式中、Ｒ1〜Ｒ4は、同時に又は各々独立に、水素原子、アルキル基、アシル基を表す。また、Ｒ2及びＲ3は（ＣＨ2）nで結合した環構造を形成してもよい。ここで、ｎは１又は２の整数を表す。）
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、優れた抗アレルギー活性を有する抗アレルギー剤を低コストで提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明者らは、上記式（１）で示されるバイアリニンＡ誘導体又は薬理学的に許容される塩は、β−ヘキソサミニダーゼ放出抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用およびＭＣＰ−１産生抑制作用等の抗アレルギー活性を有することを確認した。
【０００９】
β−ヘキソサミニダーゼはヒスタミン等と同様にアレルギー発症過程の早期（数十分）に細胞内から脱顆粒される物質である。また、ＴＮＦ−αとＭＣＰ−１は炎症性サイトカインと呼ばれており、アレルギー発症過程の後期（３〜６時間）に産生される物質である。
【００１０】
β−ヘキソサミニダーゼ、ＴＮＦ−αおよびＭＣＰ−１は、花粉症（アレルギー性鼻炎）、アレルギー性結膜炎、虫刺され、アトピー性皮膚炎、ペニシリンショック、気管支喘息、蕁麻疹等などのＩ型アレルギーに関与している化学物質である。
【００１１】
従って、上記式（１）で示されるバイアリニンＡ誘導体又は薬理学的に許容される塩は、抗アレルギー剤を製造するための化合物として利用することができる。そして、当該化合物を有効成分とする抗アレルギー剤は、Ｉ型アレルギーの予防または治療に有効であるといえる。また、一度発症した場合であっても、症状の悪化を抑制する効果があると考えられる。
【００１２】
上記式（１）において、Ｒ1〜Ｒ4は、同時に又は各々独立に、水素原子、アルキル基、アシル基を表す。また、Ｒ2及びＲ3は（ＣＨ2）nで結合した環構造を形成してもよい。ここで、ｎは１又は２の整数を表す。また、薬理学的に許容される塩としては、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機塩類；酢酸、乳酸、プロピオン酸、マレイン酸、オレイン酸、パルミチン酸、クエン酸、コハク酸、酒石酸、フマル酸、グルタミン酸、パントテン酸、ラウリルスルホン酸等の有機塩などが挙げられる。
【００１３】
前記バイアリニンＡ誘導体又は薬理学的に許容される塩は、キノコから分離・精製されたものを使用することが好ましい。キノコとしては、担子菌類イボタケ科に属するセレフォラ ヴァイアリス（Thelephora vialis）、セレフォラ テレストリス（Thelephora terrestris）等を挙げることができ、特に、セレフォラ ヴァイアリス（Thelephora vialis）を用いることが材料の安全性、安定供給、バイアリニンＡを含む機能性食品としての応用の可能性などの観点からより好ましい。
【００１４】
上記式（１）で示されるバイアリニンＡ誘導体又は薬理学的に許容される塩を治療目的で使用するためには、当該化合物及びその無毒性塩を有効成分とし、経口または非経口的に投与される。投与量は症状、年齢、性別、体重、投与形態等により異なるが、例えば成人に経口的に投与する場合には、通常１日量は０．１−１０００ｍｇである。
【００１５】
上記式（１）で示されるバイアリニンＡ誘導体又は薬理学的に許容される塩を製剤化するための剤型に制限はなく、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤等の固形剤、溶液、懸濁液、乳剤などの液状製剤を経口的に、静脈内、筋肉内、皮下などの注射剤、坐剤、貼付剤などを非経口的に使用することができる。
【００１６】
固形剤となす場合には澱粉、乳糖、グルコース、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、カルボキシメチルセルロースなどの賦形剤を用いることができ、必要であれば滑沢剤、崩壊剤、被覆剤、着色剤なども使用することができる。注射剤、及び液状製剤になす場合には安定化剤、溶液助剤、懸濁化剤、乳化剤、緩衝剤、保存剤などを含有させることができる。
【００１７】
［製造例］
次に、上記式（１）で示されるバイアリニンＡ誘導体の製造例を説明する。セレフォラ ヴァイアリスThelephora vialisの乾燥子実体４２０．０ｇを８０％のアセトン８．０Ｌで抽出し、セレフォラ ヴァイアリスのアセトン抽出液を得た。それを真空条件下で濃縮し、アセトン抽出液の濃縮液１．６Ｌを得た。この濃縮液を1Ｎ塩酸でｐＨ３．０に調整し、等量の酢酸エチルにより溶媒抽出を行い、水層と有機層に分離した。
【００１８】
このうち、有機層を真空条件下で濃縮し、中・酸性画分３６．５ｇを得た。そして、中・酸性画分のうち１０．０ｇをＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ3／ＣＨ3ＯＨ＝６：４）を用いて分離し、ＡとＢの２つの画分を得た。
【００１９】
Ａ画分は、シリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ3／ＣＨ3ＯＨ＝４９：１）、次いで中圧液体クロマトグラフィー（ＣＨ3ＣＮ：0.15％ＫＨ2ＰＯ4（ｐＨ３．５）＝６：４）により精製し、ＴＶＥＡ−ａ（１６０．３ｍｇ）、ＴＶＥＡ−ｂ（７９．８ｍｇ）、ＴＶＥＡ−ｃ（８７．９ｍｇ）及びＴＶＥＡ−ｄ（５．８ｍｇ）の４種の物質を単離した。
【００２０】
このうち、ＴＶＥＡ−ａ（１６０．３ｍｇ）という化合物が本発明に用いる化合物であるバイアリニンＡである。下記にＴＶＥＡ−ａ（バイアリニンＡ）の構造式（２）を示す。
【００２１】
【化２】
2008001675.tif 000003
以上、本発明に用いる化合物をセレフォラ ヴァイアリスThelephora vialisから抽出した例を説明したが、上記の製造方法には限定されず、他の担子菌類から抽出することもできる。
【００２２】
［試験例１］β−ヘキソサミニダーゼの放出抑制試験
上述した製造例で得られたＴＶＥＡ−ａ（実施例１）をサンプルとして、以下の要領で抗アレルギー活性の測定を行った。RBL−2H3細胞を抗DNP−IgE抗体で感作させ、2.0×105個/mLになるように 24-wellプレートに播種し、37℃で24時間培養した。各wellを洗浄後、サンプルを10-3〜104nM添加して15分間37℃で保持した。その後、DNP-BSAを加え37℃で3時間反応させた。各wellの培養上清を回収し、脱顆粒時に細胞内から放出されるβ−ヘキソサミニダーゼの遊離量から脱顆粒の抑制率を求めた。なお、参考例として、免疫抑制剤として利用されているＦＫ−５０６（参考例１）を用い、上記の要領で測定を行った。結果を表１及び図１に示す。
【００２３】
［試験例２］ＴＮＦ−α産生阻害試験
試験例１で得られた培養上清を用い、この培養上清中に放出されたTNF-αをRat TNF-α Immunoassay kit (Biosource社)を用いてELISA法（酵素免疫測定法）にて測定した。結果を表１及び図２に示す。
【００２４】
［試験例３］ＭＣＰ−１産生阻害試験
試験例１で得られた培養上清を用い、この培養上清中に放出されたＭＣＰ−１をRat TNF-α Immunoassay kit (Biosource社)を用いてELISA法（酵素免疫測定法）にて測定した。結果を表１及び図３に示す。
【００２５】
【表１】
2008001675.tif 000004
【００２６】
表１に示すＩＣ50の値及び図１及び図３に示す曲線が類似していたことから、β−ヘキソサミニダーゼの放出抑制とＭＣＰ−１産生阻害の作用部位は同じであると推察された。一方、ＴＮＦ−α産生阻害は、陽性対象であるＦＫ５０６よりもＩＣ50が低かったことから、バイアリニンＡが非常に強い活性を有していることが判明した。
【００２７】
［試験例４］抗アレルギー活性の抑制経路特定試験
ＴＶＥＡ−ａ（実施例１）をサンプルとして、以下の要領で抗アレルギー活性の抑制経路の特定を行った。2.0×105個/mLになるように調製したRBL−2H3細胞を 24-wellプレートに播種し、37℃で24時間培養した。各wellを洗浄後、試料を添加して15分間37℃で保持した。その後、プロテインキナーゼCの活性化剤であるTPA(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate phorbol ester)及びカルシウムイオノフォアーの一種であるDTBHQ(2,5-di-tert-butyl-1,4-hydroquinone)を加え37℃で3時間反応させた。各wellの培養上清を回収し、脱顆粒時に細胞内から放出されるβ−ヘキソサミニダーゼの遊離量から脱顆粒の抑制率を求め、試験例１の結果と比較した。結果を表２に示す。なお、表２中、「IgE - mediated」の欄は上述した試験例１の結果を示し、「TPA + DTBHQ」の欄は本試験例の結果を示す。
【００２８】
【表２】
2008001675.tif 000005
【００２９】
前述した試験例１では抗原・抗体反応を介してβ-ヘキソサミニダーゼの放出を誘導したが、本試験例では抗原・抗体反応の過程を省略してβ−ヘキソサミニダーゼの放出を誘導した。表２に示す結果によれば、試験例１（IgE - mediated）においてはβ−ヘキソサミニダーゼ放出が抑制されているのに対し、本試験例においては抑制がみられなかった。このことから、β−ヘキソサミニダーゼ放出抑制の作用部位は、本試験例で省略した部分にあるということが考えられた。即ち、β−ヘキソサミニダーゼ放出抑制に対するＴＶＥＡ−ａ（バイアリニンＡ）の作用部位は、抗原・抗体反応からプロテインキナーゼＣの活性化と細胞内カルシウムイオン濃度の上昇までの過程にあると考えられた。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】β−ヘキソサミニダーゼの放出抑制試験（試験例１）の試験結果を示す図である。
【図２】ＴＮＦ−α産生阻害試験（試験例２）の試験結果を示す図である。
【図３】ＭＣＰ−１産生阻害試験（試験例３）の試験結果を示す図である。
【図１】
2008001675.tif 000008
【図２】
2008001675.tif 000009
【図３】
2008001675.tif 000010