(57)【要約】【課題】  肥満調節物質、血中インスリン調節物質又は血糖調節物質を効率よく評価又は選択する方法の提供。【解決手段】  動物に糖質及び脂質を投与し、インスリン分泌を低下又は上昇させる物質を評価又は選択することを特徴とする、肥満調節剤の評価又はスクリーニング方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物に糖質及び脂質を投与し、インスリン分泌を低下又は上昇させる物質を評価又は選択することを特徴とする、肥満調節剤の評価又はスクリーニング方法。
【請求項２】
以下の（１）〜（４）の工程を含むことを特徴とする、肥満調節剤の評価又はスクリーニング方法。
（１）動物に、次のａ）及び／又はｂ）の方法により被験物質を投与する工程
ａ）糖質及び脂質に被験物質を添加する
ｂ）糖質及び脂質の少なくとも一方の一部又は全部を被験物質に置換する
（２）血中インスリン濃度を測定し、インスリン分泌量を算出する工程、
（３）（２）で算出されたインスリン分泌量を、糖質及び脂質のみを投与した対照群におけるインスリン分泌量と比較する工程、
（４）（３）の結果に基づいて、インスリン分泌量を低下又は上昇させる被験物質を肥満調節剤として評価又は選択する工程。
【請求項３】
動物に糖質及び脂質を投与し、インスリン分泌を低下又は上昇させる物質を評価又は選択することを特徴とする、血中インスリン調節剤の評価又はスクリーニング方法。
【請求項４】
以下の（１）〜（４）の工程を含むことを特徴とする、血中インスリン調節剤の評価又はスクリーニング方法。
（１）動物に、次のａ）及び／又はｂ）の方法により被験物質を投与する工程
ａ）糖質及び脂質に被験物質を添加する
ｂ）糖質及び脂質の少なくとも一方の一部又は全部を被験物質に置換する
（２）血中インスリン濃度を測定し、インスリン分泌量を算出する工程、
（３）（２）で算出されたインスリン分泌量を、糖質及び脂質のみを投与した対照群におけるインスリン分泌量と比較する工程、
（４）（３）の結果に基づいて、インスリン分泌量を低下又は上昇させる被験物質を血中インスリン調節剤として評価又は選択する工程。
【請求項５】
動物に糖質及び脂質を投与し、インスリン分泌を低下又は上昇させる物質を評価又は選択することを特徴とする、血糖調節剤の評価又はスクリーニング方法。
【請求項６】
以下の（１）〜（４）の工程を含むことを特徴とする、血糖調節剤の評価又はスクリーニング方法。
（１）動物に、次のａ）及び／又はｂ）の方法により被験物質を投与する工程
ａ）糖質及び脂質に被験物質を添加する
ｂ）糖質及び脂質の少なくとも一方の一部又は全部を被験物質に置換する
（２）血中インスリン濃度を測定し、インスリン分泌量を算出する工程、
（３）（２）で算出されたインスリン分泌量を、糖質及び脂質のみを投与した対照群におけるインスリン分泌量と比較する工程、
（４）（３）の結果に基づいて、インスリン分泌量を低下又は上昇させる被験物質を血糖調節剤として評価又は選択する工程。
【請求項７】
糖質がグルコース、スクロース、マルトース、澱粉及びグリコーゲンから選ばれる１種以上であり、脂質がトリアシルグリセロール、１，３−ジアシルグリセロール及び１，２−ジアシルグリセロールから選ばれる１種以上である請求項１〜６のいずれか1項記載の方法。
【請求項８】
動物がげっ歯類である請求項１〜７のいずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肥満調節剤、血中インスリン調節剤又は血糖調節剤の評価又はスクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満は、脂肪組織が異常に増加した状態であり、糖尿病、心臓病、動脈硬化等の生活習慣病を引き起こすと考えられている。高脂肪食や過食、また運動不足の現代社会において、肥満は深刻な問題であり、肥満に対して予防・改善効果を発揮する物質の探索が重要な課題となっている。
【０００３】
肥満改善剤を選択する方法としては、成熟脂肪細胞のアディポネクチンの発現量を測定する方法（特許文献１）や、脱共役タンパク質(Uncoupling protein)の一つであるＵＣＰ−２の活性、或いは転写／ｍＲＮＡを測定する方法（特許文献２）、ＳＰＡＲＣ遺伝子、或いはタンパク質の発現レベルもしくは活性を測定する方法（特許文献３）等が知られている。また、体重増加抑制剤を選択する方法としては、リラキシン−３受容体を刺激する物質を評価する方法（特許文献４）が報告されている。
【０００４】
一方、インスリンは、主として血中グルコース、すなわち血糖値の上昇を主たる刺激として膵臓から分泌されるホルモンであり（非特許文献１）、糖質の摂取量や吸収速度に依存して食後インスリン分泌量が調節されることが知られている。
【０００５】
しかしながら、糖質と脂質を共に摂取した際に惹起される、インスリン分泌量の変化、更にはこれらと肥満との関係については何ら知られていない。
【特許文献１】特開２００６−２４９０６４号公報
【特許文献２】特開２００２−５０８７７０号公報
【特許文献３】特開２００４−５１７３０８号公報
【特許文献４】特開２００６−２９０８２６号公報
【非特許文献１】生化学辞典  第２版、株式会社 東京化学同人、1990年11月、P.141−142
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、肥満調節物質、血中インスリン調節物質又は血糖調節物質を効率よく評価又は選択する方法を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、食後のインスリン分泌について検討を行った結果、糖質のみを摂取した場合に比べて、糖質と脂質を共に摂取した場合に血中インスリン濃度の上昇が増加することを見出した。そして、さらに食後インスリン分泌量と肥満との関連性について検討を行ったところ、糖質と脂質を共に摂取した後の当該血中インスリン濃度の上昇が、食餌依存性の肥満の進行と高い相関性を有し、肥満調節剤を評価・選択するための指標となることを見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は、以下の１）〜６）に係るものである。
１）動物に糖質及び脂質を投与し、インスリン分泌を低下又は上昇させる物質を評価又は選択することを特徴とする、肥満調節剤の評価又はスクリーニング方法。
２）以下の（１）〜（４）の工程を含むことを特徴とする、肥満調節剤の評価又はスクリーニング方法。
（１）動物に、次のａ）及び／又はｂ）の方法により被験物質を投与する工程
ａ）糖質及び脂質に被験物質を添加する
ｂ）糖質及び脂質の少なくとも一方の一部又は全部を被験物質に置換する
（２）血中インスリン濃度を測定し、インスリン分泌量を算出する工程、
（３）（２）で算出されたインスリン分泌量を、糖質及び脂質のみを投与した対照群におけるインスリン分泌量と比較する工程、
（４）（３）の結果に基づいて、インスリン分泌量を低下又は上昇させる被験物質を肥満調節剤として評価又は選択する工程。
３）動物に糖質及び脂質を投与し、インスリン分泌を低下又は上昇させる物質を評価又は選択することを特徴とする、血中インスリン調節剤の評価又はスクリーニング方法。
４）以下の（１）〜（４）の工程を含むことを特徴とする、血中インスリン調節剤の評価又はスクリーニング方法。
（１）動物に、次のａ）及び／又はｂ）の方法により被験物質を投与する工程
ａ）糖質及び脂質に被験物質を添加する
ｂ）糖質及び脂質の少なくとも一方の一部又は全部を被験物質に置換する
（２）血中インスリン濃度を測定し、インスリン分泌量を算出する工程、
（３）（２）で算出されたインスリン分泌量を、糖質及び脂質のみを投与した対照群におけるインスリン分泌量と比較する工程、
（４）（３）の結果に基づいて、インスリン分泌量を低下又は上昇させる被験物質を血中インスリン調節剤として評価又は選択する工程。
５）動物に糖質及び脂質を投与し、インスリン分泌を低下又は上昇させる物質を評価又は選択することを特徴とする、血糖調節剤の評価又はスクリーニング方法。
６）以下の（１）〜（４）の工程を含むことを特徴とする、血糖調節剤の評価又はスクリーニング方法。
（１）動物に、次のａ）及び／又はｂ）の方法により被験物質を投与する工程
ａ）糖質及び脂質に被験物質を添加する
ｂ）糖質及び脂質の少なくとも一方の一部又は全部を被験物質に置換する
（２）血中インスリン濃度を測定し、インスリン分泌量を算出する工程、
（３）（２）で算出されたインスリン分泌量を、糖質及び脂質のみを投与した対照群におけるインスリン分泌量と比較する工程、
（４）（３）の結果に基づいて、インスリン分泌量を低下又は上昇させる被験物質を血糖調節剤として評価又は選択する工程。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、肥満、血中インスリン及び血糖値を調節する効果を有する物質や組成物を、長期飼育試験を行うことなく効率よく評価又は選択することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
インスリンは、血糖値の上昇を主たる刺激として膵臓から分泌され、糖質の摂取量や吸収速度に依存してその分泌量が調節されることが知られているが、本発明において、糖質と脂質を共に摂取することにより、糖質だけを摂取した場合に比べて食後インスリン分泌（血中濃度、分泌量）が増加することが見出された。そして更に、糖質と脂質を共に摂取した後のインスリン分泌は、糖質のみ摂取後のインスリン分泌に比べ、飼育期間中の摂食量（１ｇ）当たりの体重増加（ｇ）と高い正の相関性が認められ、当該インスリン分泌量が、肥満と相関性が高い因子であることが判明した。
【００１１】
従って、本発明に係る肥満調節剤、血中インスリン調節剤又は血糖調節剤の評価又はスクリーニングは、対照となる糖質及び脂質を実験動物に投与することによって惹起されるインスリン分泌量を指標として行われるものであり、具体的には、以下の（１）〜（４）の工程からなるものである。
（１）動物に、次のａ）及び／又はｂ）の方法により被験物質を投与する工程
ａ）糖質及び脂質に被験物質を添加する
ｂ）糖質及び脂質の少なくとも一方の一部又は全部を被験物質に置換する
（２）血中インスリン濃度を測定し、インスリン分泌量を算出する工程、
（３）（２）で算出されたインスリン分泌量を、糖質及び脂質のみを投与した対照群におけるインスリン分泌量と比較する工程、
（４）（３）の結果に基づいて、インスリン分泌量を低下又は上昇させる被験物質を肥満調節剤、血中インスリン調節剤又は血糖調節剤として評価又は選択する工程。
【００１２】
本発明において、対照として用いられる糖質としては、インスリン分泌を促すものであればよく、単糖、オリゴ糖、多糖の何れでもよい。単糖としては、例えばグルコース、マンノース、フルクトース、ガラクトース等の糖や、グリセルアルデヒド、グルコサミン、アセチルグルコサミン等の糖誘導体が挙げられ、オリゴ糖としては、例えばスクロース、マルトース、ラクトース等が挙げられ、多糖としては、例えば、澱粉、デキストリン、グリコーゲン等が挙げられ、これらは単独で用いてもよく、２種以上を混合して用いてもよい。また、斯かる糖類を含有する糊化した米や小麦粉などを用いてもよい。
このうち、インスリン分泌量上昇の点から、グルコース、スクロース、マルトース、澱粉及びグリコーゲン等の１種以上を用いるのが好ましく、特にグルコースが好ましい。
【００１３】
脂質としては、インスリン分泌を高めるもの、例えばトリアシルグリセロール、１，３−ジアシルグリセロール、１，２−ジアシルグリセロールといった脂肪酸グリセロールエステルや、遊離脂肪酸等やこれらを含有する油脂などが挙げられる。具体的には、トリパルミチン、トリステアリン、トリオレイン、１，３−ジパルミチン、１，３−ジステアリン、１，３−ジオレイン、１，２−ジパルミチン、１，２−ジステアリン、１，２−ジオレイン、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、牛脂、ラード、カカオ脂、バター、コーン油、大豆油、ヒマワリ油、ゴマ油、菜種油、コメ油、オリーブ油、サフラワー油、ヤシ油、パーム油等が挙げられ、このうち、インスリン分泌量上昇の点から、トリオレイン、１，３−ジオレイン、コーン油、菜種油、コメ油、オリーブ油、ゴマ油、及びパーム油等の１種以上を用いるのが好ましく、特にトリオレイン、コーン油、菜種油、オリーブ油が好ましい。
斯かる脂質は単独で用いてもよく、２種以上を混合して用いてもよい。
【００１４】
斯かる糖質及び脂質は、同時に投与することでも、時間差を設けて別個に投与することでもよい。また、両者を混合し、レシチンなどの乳化剤を用いて乳化した乳化組成物とすることもできる。
【００１５】
糖質の投与量は、０．０１〜１００ mg/g体重、望ましくは０．１〜３０ mg/g体重、更に望ましくは０．５〜１０ mg/g体重である。
脂質の投与量は、０．０１〜１００ mg/g体重、望ましくは０．１〜３０ mg/g体重、更に望ましくは０．５〜１０ mg/g体重である。
【００１６】
被験物質は、糖質及び脂質と一緒に投与してもよいし、別個に投与してもよい。
被験物質は、糖質又は脂質、或いはその両方であってもよく、この場合には、当該被験糖質又は脂質が低インスリン性であるか否か、当該被験物質の併用効果を評価することができる。また、糖質又は脂質以外の被験物質と、糖質又は脂質からなる被験物質を組み合わせて評価することもできる。
被験物質が糖質である場合は、比較対照となる糖質の全部又は一部を被験物質（被験糖質）に置換して、脂質とともに投与すればよく、また、被験物質が脂質である場合は、比較対照となる脂質の全部又は一部を被験物質（被験脂質）に置換して、糖質とともに投与すればよい。
【００１７】
本発明において用いられる動物は、血中にインスリンを分泌する非ヒト哺乳類であれば、性別、月齢を問わず、いかなる種類の動物でもよい。例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ又はサルを挙げることができるが、入手が容易であり、取り扱い易いラットやマウスなどのげっ歯類が好ましく、更にC57BL/6J、AKR、DBA、C3Hといったマウス系統を用いるのが望ましい。また、絶食した動物を用いるのが望ましい。
【００１８】
本発明において、対照糖質及び脂質、被験物質を動物に投与する方法としては、例えば、経口投与、消化管内投与、腹腔内投与、血管内投与、皮内投与、皮下投与等が挙げられるが、簡便さや侵襲性が低いなどの点から、経口投与する方法が好ましい。
【００１９】
血中インスリンの測定は、投与前、及び投与後１〜３００分、好ましくは５〜２４０分において、経時的（例えば、投与後１０分、３０分、６０分、１２０分後等）に採血し、各時刻における血中インスリン濃度を測定することにより行われる。尚、採血は、眼窩静脈或いは尾静脈など一般的な採血部位から血液を採取すればよい。
インスリンの定量は、採血された血液から、血清或いは血漿を調製後、例えば酵素抗体法（ＥＬＩＳＡ法）やラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ法）、或いは高速液体クロマトグラフィー法などにより行うことができる。
【００２０】
インスリン分泌量は、投与後各時刻における血中インスリン濃度から、最大インスリン濃度又は曲線下面積（ＡＵＣ）によって求めることができ、対照糖質及び脂質への被験物質の添加、或いは対照糖質又は脂質の被験物質（糖質又は脂質）への置換による当該インスリンに関する値の変化を、糖質及び脂質のみを投与した対照群のそれと比較し、そのいずれかが小さくなった場合、被験物質には血中インスリン低下効果及び肥満改善効果、血糖上昇効果があると評価でき、斯かる物質を選択することができる。また、上述のインスリンに関する値のいずれかが大きくなった場合、被験物質には血中インスリン上昇効果、肥満促進効果、血糖低下効果、体重増加効果、及び成長促進効果が有ると評価でき、斯かる物質を選択することができる。また、近年、老化や加齢変化にインスリンが関与すること、すなわちインスリン分泌量が多いと加齢が進むものと考えられている（Parr T. "Insulin exposure and aging theory." Gerontology. 1997;43(3):182-200）。よって、本発明の評価方法は老化調節剤の評価及びスクリーニング方法としても使用できる。
【実施例】
【００２１】
実施例１  糖質と脂質との摂取による食後インスリン分泌の増加
絶食したマウス（C57BL/6J雄、７〜８週令）を１群１０匹とし、糖質としてグルコース（和光純薬工業）２ｍｇ／ｇ体重のみ、及びさらに脂質としてトリオレイン（Ｓｉｇｍａ）０．５、１．０、２．０ｍｇ／ｇ体重を０．０２ｍｇ／ｇ体重を卵黄レシチンにより乳化させたもの（それぞれ糖質＋脂質０，糖質＋脂質１，糖質＋脂質２，糖質＋脂質３）を、ゾンデにより経口投与した。投与物の組成を表１に示す。投与前、及び投与１０、３０分後に眼窩静脈より採血し、血中インスリンを測定し、グラフの曲線下面積（ＡＵＣ）を算出した。インスリンは、ＥＬＩＳＡ法（インスリン測定キット、森永生化学研究所）により測定を行った。
投与１０分後の血中インスリン濃度、及び投与後３０分間のインスリン分泌量（ＡＵＣ）の値を表２に示す。
【００２２】
【表１】
2008145136.tif 000002
【００２３】
【表２】
2008145136.tif 000003
【００２４】
表２の結果から、脂質（トリオレイン）を摂取することにより、糖質（グルコース）だけを摂取した場合に比べて食後インスリン分泌（血中濃度、分泌量）が増加することがわかる。
【００２５】
実施例２  食後インスリン分泌と肥満との関連性
（１）食後インスリン分泌の測定
脂質として、トリオレイン（Ｓｉｇｍａ）、糖質として、甘薯、タピオカ、馬鈴薯、葛、サゴ、ワキシーコーン、もち米、コーン、小麦、うるち米由来の澱粉（α化、日澱化学(株)より入手）を用いた。
絶食したマウス（C57BL/6J雄、１０〜１１週令）を１群４〜５匹とし、糖質２ｍｇ／ｇ体重、及びさらにトリオレイン２ｍｇ／ｇ体重を０．０８ｍｇ／ｇ体重を加えたものを、ゾンデにより経口投与した。投与１０分後、眼窩静脈より採血し、血糖値、及び血中インスリンを測定した。血糖値は血糖簡易測定器（グルコースデヒドロゲナーゼ/電位差測定法、ロシュ・ダイアノグスティック社製）を用いて測定した。インスリンは、ＥＬＩＳＡ法（インスリン測定キット、森永生化学研究所）により測定を行った。
【００２６】
（２）飼育試験
試験食中の試験澱粉は上述のものを用い、ラード、カゼイン、セルロース、AIN76ミネラル混合、AIN76ビタミン混合、α化ポテト澱粉はオリエンタル酵母工業（株）製、蔗糖は和光純薬（株）製スクロース細粒（特級）を使用した。また、使用した油脂（TG）は、ハイリノールサフラワー油、ナタネ油、エゴマ油の混合物で、脂肪酸の主構成成分は、オレイン酸、リノール酸、α-リノレン酸、パルミチン酸である。
試験食の組成は、澱粉28.5%、TG 25%、ラード5%、蔗糖13%、カゼイン20%、AIN76ミネラル混合3.5%、AIN76ビタミン混合1%である。
【００２７】
7週齢雄性マウスC57BL/6J  Jcl（日本クレア）を１週間通常食（ＣＲＦ−１：オリエンタル酵母工業製）で飼育後、8週齢時に初期体重がほぼ一定になるように群分けし、試験を開始した。マウスの飼育は１ケージ5匹とし、それぞれの試験食群について2ケージ（N=10）とした。給餌は、ローデンカフェ（オリエンタル酵母工業製）を用いた自由摂取とし、２〜３日ごとに新しい試験食と交換した。試験食はあらかじめ２〜３日分ずつ小分けし、使用時まで4℃で冷蔵保存しておいたものを用いた。給水は専用給水器を用いて水道水を自由摂取させ、試験飼育期間中、毎週摂食量と体重を測定した。
【００２８】
（３）食後インスリン分泌と肥満との関連性解析
糖質のみ、及び糖質と脂質を共に摂取した後の最大血糖値、及び最大血中インスリン値と、飼育期間中の体重増加との相関解析を行った。
結果を表３に示す。10週間の飼育期間中の摂食量（１ｇ）当たりの体重増加（ｇ）は、血糖上昇、及び糖質（試験澱粉）のみ摂取後のインスリン分泌に比べ、糖質（試験澱粉）を脂質と共に摂取した後のインスリン分泌との間に高い正の相関性が認められ、糖質と脂質を共に摂取した後のインスリン分泌は、肥満との相関性が高い因子であることが分かる。
【００２９】
【表３】
2008145136.tif 000004
【００３０】
実施例３  グリコーゲンの低インスリン性
脂質としてトリオレイン（Ｓｉｇｍａ）、糖質としてグルコース（和光純薬工業）、或いはグリコーゲン（スイートコーン由来、キューピー製）を用いた。
絶食したマウス（C57BL/6J雄、10〜１１週令）を１群９〜１０匹とし、グルコース２ｍｇ／ｇ体重、及びさらにトリオレイン２ｍｇ／ｇ体重を０．０８ｍｇ／ｇ体重を卵黄レシチンにより乳化させたもの（それぞれグルコース、グルコース＋脂質）、またはグリコーゲン２ｍｇ／ｇ体重、及びさらにトリオレイン（ＴＡＧ）２ｍｇ／ｇ体重を０．０２ｍｇ／ｇ体重を卵黄レシチンにより乳化させたもの（それぞれグリコーゲン、グリコーゲン＋脂質）を、ゾンデにより経口投与した。投与物の組成を表４に示す。投与前、及び投与１０、３０分後に眼窩静脈より採血し、血中インスリンを測定し、グラフの曲線下面積（ＡＵＣ）を算出した。インスリンは、ＥＬＩＳＡ法（インスリン測定キット、森永生化学研究所）により測定を行った。
【００３１】
【表４】
2008145136.tif 000005
【００３２】
投与後３０分間のインスリン分泌量（ＡＵＣ）の値を表５に示す。
【００３３】
【表５】
2008145136.tif 000006
【００３４】
表５の結果から、グルコース、或いはグリコーゲンだけを摂取した場合、食後インスリン分泌は同等であるが、脂質と共に摂取した場合、グリコーゲンはグルコースに比べて食後インスリン分泌量が低く、脂質共存下においてグリコーゲンは低インスリン性であることがわかる。
【００３５】
実施例４  グリコーゲンの抗肥満効果
（１）試験食
試験食（粉末食）の組成を表６に示した。低脂肪食は5%脂質（トリグリセリド）、高脂肪食は30%脂質（5%ラード+25%ＴＧ）とした。
【００３６】
グリコーゲン配合食は、高脂肪食にグリコーゲンを5％、10％、28.5％配合した。試験食中のグリコーゲンはスイートコーン由来（キューピー製）を用い、ラード、カゼイン、セルロース、AIN76ミネラル混合、AIN76ビタミン混合、α化ポテト澱粉はオリエンタル酵母工業（株）製、蔗糖は和光純薬（株）製スクロース細粒（特級）を使用した。また、使用した油脂（TG）は、ハイリノールサフラワー油、ナタネ油、エゴマ油の混合物で、脂肪酸の主構成成分は、オレイン酸、リノール酸、α-リノレン酸、パルミチン酸である。
【００３７】
【表６】
2008145136.tif 000007
【００３８】
（２）試験動物およびその飼育
７週齢雄性マウスC57BL/6J  Jcl（日本クレア）を１週間通常食（ＣＲＦ−１：オリエンタル酵母工業製）で飼育後、８週齢時に初期体重がほぼ一定になるように群分けし、試験を開始した。マウスの飼育は１ケージ５匹とし、それぞれの試験食群について２ケージ（N=10）とした。給餌は、ローデンカフェ（オリエンタル酵母工業製）を用いた自由摂取とし、２〜３日ごとに新しい試験食と交換した。試験食はあらかじめ２〜３日分ずつ小分けし、使用時まで4℃で冷蔵保存しておいたものを用いた。給水は専用給水器を用いて水道水を自由摂取させた。
【００３９】
（３）体重測定、内臓脂肪の採取
試験飼育期間中、毎週体重を測定した。実験最終日は解剖直前まで自由摂取とし、非絶食下で、以下に示すとおり、内臓脂肪を採取した。マウスを麻酔下で直ちに開腹し、腹部大静脈より採血し、脱血死させた。さらに内臓脂肪（副精巣周囲脂肪、腎周囲脂肪、後腹膜脂肪、腸間膜脂肪）を採取し、重量を測定し、その合計値を算出し、内臓脂肪量とした。
【００４０】
（４）結果
５匹/ケージの集団飼育のため、15週間の飼育期間中にマウス同士のファイティングがあり、突然かつ急激な体重減少を認めた２匹を除き、集計した。
結果を表７に示す。１５週間の飼育により高脂肪食（コントロール）は低脂肪食に比べ、体重および内臓脂肪量が増加し、肥満となっていることがわかった。
グリコーゲン配合量が増加するに従い、体重、内臓脂肪量が減少した。
【００４１】
【表７】
2008145136.tif 000008
【００４２】
実施例５  １−ＭＡＧのインスリン分泌低減効果
トリアシルグリセロールとしてトリオレイン（Ｓｉｇｍａより入手）、モノアシルグリセロールとして１−モノオレイン（Ｓｉｇｍａより入手）を用いた。糖質としては、グルコース（関東化学）を用いた。
【００４３】
絶食したマウス（C57BL/6J雄、8週令）を１群８匹とし、グルコース２ｍｇ／ｇ体重のみ、及びさらにトリオレイン（ＴＡＧ）２ｍｇ／ｇ体重を０．０２ｍｇ／ｇ体重を卵黄レシチンにより乳化させたもの（それぞれグルコース、ＴＡＧ／ＭＡＧ０）、またはこの乳化物に０．０８，０．２，０．４ｍｇ／ｇ体重の１−モノオレイン（ＭＡＧ）を添加したもの（それぞれＴＡＧ／ＭＡＧ１，ＴＡＧ／ＭＡＧ２，ＴＡＧ／ＭＡＧ３）を、ゾンデにより経口投与した。乳化物の組成を表８に示す。投与前、及び投与１０、３０分後に眼窩静脈より採血し、血中インスリンを測定し、グラフの曲線下面積（ＡＵＣ）を算出した。インスリンは、ＥＬＩＳＡ法（インスリン測定キット、森永生化学研究所）により測定を行った。
グルコースのみ摂取したマウスのインスリンＡＵＣを１００とした、投与後３０分間のインスリン分泌量（ＡＵＣ）の相対値を表９に示す。
【００４４】
【表８】
2008145136.tif 000009
【００４５】
【表９】
2008145136.tif 000010
【００４６】
表９の結果から、脂質（ＴＡＧ）を摂取することにより、糖質（グルコース）だけを摂取した場合に比べて食後インスリン分泌量が増加するが、ＴＡＧ／ＭＡＧ０に対して１０分の１量、５分の１量のＭＡＧを摂取したマウスでは、食後インスリン分泌量が低く、食後血中インスリン分泌抑制効果が認められることがわかる。
【００４７】
実施例６  １−ＭＡＧの抗肥満効果
（１）試験食
試験食（粉末食）の組成を表１０に示した。低脂肪食は5%脂質（ＴＧ）、高脂肪食は30%脂質（ＴＧ）とした。
１−モノアシルグリセリド（１−ＭＡＧ）配合食は、高脂肪食に１−ＭＡＧを3％、6％配合した。
試験食中の１−ＭＡＧはエキセルＯ−９５Ｒ（花王(株)製）を用い、カゼイン、セルロース、AIN76ミネラル混合、AIN76ビタミン混合、α化ポテト澱粉はオリエンタル酵母工業（株）製、蔗糖は和光純薬（株）製スクロース細粒（特級）を使用した。また、使用した油脂（TG）は、ハイリノールサフラワー油、ナタネ油、エゴマ油の混合物で、脂肪酸の主構成成分は、オレイン酸、リノール酸、α-リノレン酸、パルミチン酸である。
【００４８】
【表１０】
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【００４９】
（１）試験動物およびその飼育
7週齢雄性マウスC57BL/6J  Jcl（日本クレア）を１週間通常食（ＣＥ−２：日本クレア製）で飼育後、8週齢時に初期体重がほぼ一定になるように群分けし、試験を開始した。マウスの飼育は１ケージ4匹とし、それぞれの試験食群について2ケージ（N=8）とした。給餌は、ローデンカフェ（オリエンタル酵母工業製）を用い自由摂取とし、2〜３日ごとに新しい試験食と交換した。試験食はあらかじめ２〜３日分ずつ小分けし、使用時まで4℃で冷蔵保存しておいたものを用いた。給水は専用給水器を用いて水道水を自由摂取させた。
【００５０】
（２）体重測定、内臓脂肪の採取
試験飼育期間中、毎週体重を測定した。実験最終日は解剖直前まで自由摂取とし、非絶食下で、以下に示すとおり、内臓脂肪を採取した。マウスを麻酔下で直ちに開腹し、腹部大静脈より採血し、脱血死させた。さらに内臓脂肪（副精巣周囲脂肪、腎周囲脂肪、後腹膜脂肪、腸間膜脂肪）を採取し、重量を測定し、その合計値を算出し、内臓脂肪量とした。
【００５１】
（３）結果
結果を表１１に示す。９週間の飼育により高脂肪食（コントロール）は低脂肪食に比べ、体重および内臓脂肪量が増加し、肥満となっていることがわかった。
１−ＭＡＧ配合量が増加するに従い、体重、内臓脂肪量が減少した。
【００５２】
【表１１】
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【００５３】
実施例７  ヒドロキシプロピル化リン酸架橋澱粉の低インスリン性
肥満改善効果が知られている加工澱粉を脂質と共に摂取した際のインスリン分泌について、高アミロース澱粉と比較した。
糖質として、ヒドロキシプロピル化リン酸架橋澱粉（以下、加工澱粉）（タピオカ由来、ナショナルフリジェックス、ナショナルスターチアンドケミカルより入手）、高アミロース澱粉（高アミロースコーン由来、ファイボース、日澱化学より入手）、脂質としてトリオレイン（Ｓｉｇｍａ）を用いた。
絶食したマウス（C57BL/6J雄、８週令）を１群８匹とし、加工澱粉、或いは高アミロース澱粉２ｍｇ／ｇ体重、及びさらに脂質２ｍｇ／ｇ体重を０．０２ｍｇ／ｇ体重を卵黄レシチンにより乳化させたもの（それぞれ加工澱粉＋脂質、高アミロース澱粉＋脂質）を、ゾンデにより経口投与した。投与前、及び投与１０、３０、６０分後に眼窩静脈より採血し、血中インスリンを測定し、グラフの曲線下面積（ＡＵＣ）を算出した。インスリンは、ＥＬＩＳＡ法（インスリン測定キット、森永生化学研究所）により測定を行った。
投与後６０分間のインスリン分泌量（ＡＵＣ）の値を表１２に示す。
【００５４】
【表１２】
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【００５５】
表１２の結果から、脂質と共に摂取した場合、加工澱粉は高アミロース澱粉に比べて食後インスリン分泌量が低く、脂質共存下において加工澱粉は高アミロース澱粉に対して低インスリン性であることがわかる。
加工澱粉は高アミロース澱粉に対して、肥満改善効果を有することが知られている（特開２００４−２６９４５８号公報）。
【００５６】
実施例８  ＤＡＧ、魚油の低インスリン性
肥満改善効果が知られている脂質であるジアシルグリセロール、及び魚油を糖質と共に摂取した際のインスリン分泌について、トリアシルグリセロールと比較した。
【００５７】
脂質として、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ、花王(株)製）、魚油（日本油脂化学より入手、ＤＨＡ含量４７％）を用いた。また、使用した油脂（TAG）は、ハイリノールサフラワー油、ナタネ油、エゴマ油の混合物で、脂肪酸の主構成成分は、オレイン酸、リノール酸、α-リノレン酸、パルミチン酸であり、ＤＡＧと同様である。
【００５８】
絶食したマウス（C57BL/6J雄、８週令）を１群１０匹とし、グルコース２ｍｇ／ｇ体重のみ、及びさらにトリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、或いはジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、或いは魚油、それぞれ２ｍｇ／ｇ体重を０．０２ｍｇ／ｇ体重を卵黄レシチンにより乳化させたもの（それぞれ糖質のみ、糖質＋ＴＡＧ、糖質＋ＤＡＧ、糖質＋魚油）を、ゾンデにより経口投与した。投与前、及び投与１０、３０分後に眼窩静脈より採血し、血中インスリンを測定し、グラフの曲線下面積（ＡＵＣ）を算出した。インスリンは、ＥＬＩＳＡ法（インスリン測定キット、森永生化学研究所）により測定を行った。
グルコースのみ摂取したマウスのインスリンＡＵＣを１００とした、投与後３０分間のインスリン分泌量（ＡＵＣ）の相対値を表１３に示す。
【００５９】
【表１３】
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【００６０】
表１３の結果から、脂質としてトリアシルグリセロールを摂取することにより、糖質（グルコース）だけを摂取した場合に比べて食後インスリン分泌量が増加するが、脂質としてジアシルグリセロール、或いは魚油を摂取したマウスでは、糖質＋ＴＡＧに比べて食後インスリン分泌量が少なく、食後血中インスリン分泌抑制効果が認められることがわかる。
【００６１】
ＤＡＧ（Murase T et al. J Lipid Res 2001 42:372-378.）、及び魚油（Ikemoto S et al.Metabolism 1996 45:1539-1546.）は通常の脂質に対して、肥満改善効果を有することが知られている。