(57)【要約】【課題】化粧品用素材として最適で、マトリックスメタロプロテアーゼ１の産生を効率的に阻害するマトリックスメタロプロテアーゼ１産生阻害剤を提供する。【解決手段】活性炭処理をした酵母エキスを有効成分として含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ−１産生阻害剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性炭処理をした酵母エキスを有効成分として含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ−１産生阻害剤。
【請求項２】
前記酵母エキスがビール酵母エキスであることを特徴とする請求項１に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ−１産生阻害剤。
【請求項３】
請求項１または２に記載されたマトリックスメタロプロテアーゼ−１産生阻害剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マトリックスメタロプロテアーゼ−１の産生を阻害するマトリックスメタロプロテアーゼ−１産生阻害剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、皮膚の老化、しわの増大や弾性の低下に細胞外マトリックスを分解する酵素であるマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰｓ）が強く関与していることが知られるようになった。マトリックスメタロプロテアーゼは主として細胞外マトリックスを基質とする一群のメタロプロテアーゼからなる遺伝子ファミリーで、基質特異性とドメイン構造の違いから５群に分けられる。マトリックスメタロプロテアーゼはヒトでは２３種類の分子から構成され、コラゲナーゼ群（ＭＭＰ−１、−８、１３）、ゼラチナーゼ群（ＭＭＰ−２，−９）、ストロムライシン群(ＭＭＰ-３、−１０)、膜型ＭＭＰ群（ＭＴ−ＭＰＰｓ＝ｍｍｐ−１４、−１５、−１６、１７、−２４、−２５）、その他の群（ｍｍｐ−７、−１１、−１２、−１９、−２０、−２１、−２３、−２６、−２７、−２８）に分類される。
【０００３】
特にマトリックスメタロプロテアーゼ１（以下「ＭＭＰ−１」と略称する場合がある）は、細胞外マトリックスの１種であるコラーゲンを分解する酵素（コラゲナーゼ）であり、マトリックスメタロプロテアーゼ１の産生を阻害することにより、皮膚の老化や、しわの増大や弾性の低下を予防することが期待される。マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害剤としては、以下のような物質が知られている。
【０００４】
特許文献１には、紫外線、特に長波長紫外線（ＵＶＡ）の照射により真皮線維芽細胞において促進されるＩ型マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害剤で、スルフヒドリル基を有する化合物及びジスルフィド結合を有する化合物より選択した１種又２種以上を含有してなる、Ｉ型マトリクスメタロプロテアーゼ産生阻害剤が開示されている。
【０００５】
特許文献２には、トウキ及びその近縁植物、ニオイウド、クチナシ及びその同属植物、ワレモコウの各植物抽出物、リポ酸、その塩及びその誘導体より成る群から選択した１種又は２種以上を含有して成るマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤が開示されている。
【０００６】
特許文献３には、歯周病予防あるいは治療に用いることを特徴とする、ブドウ種子エキスを含有してなるマトリックスメタロプロテアーゼ阻害物口腔剤組成物が開示されている。
【０００７】
特許文献４には、細胞のコラーゲン合成促進効果及び細胞のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害作用を有する、ブドウ種子エキス、ビタミンＣ及びビタミンＥを含有する歯周病予防または治療用の喫煙者乃至受動喫煙者向け食品組成物あるいは口腔用組成物が開示されている。
【０００８】
特許文献５には、（Ａ）天然ポリフェノールを含む抽出物から選ばれる１種又は２種以上、並びに、（Ｂ）ビタミンＣ及びその塩、ビタミンＥ、ビタミンＡ並びにベータカロチンからなる群より選ばれる１種又は２種以上を含有する、ニコチン刺激による歯周組織細胞由来マトリックスメタロプロテアーゼ産生の抑制作用を有する、喫煙者に特に有用な歯周病予防又は治療用食品組成物が開示されている。
【０００９】
特許文献６には、柑橘類に由来するフラボノイドを含有するマトリクスメタロプロテアーゼまたはその前駆体の賛成を阻害するための薬剤が開示されている。
【００１０】
しかしながら、従来のマトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害剤は、阻害活性が十分ではないものや不安定なものもあり、色や臭いの点で化粧品の素材として用いるには不向きなものもあった。
【００１１】
酵母抽出物または酵母分解物を含有するメラニン生成抑制作用を有する化粧品等の出願が多数行われている。
【００１２】
特許文献７には、人胎盤組織抽出物と酵母エキスを混合させることを特徴とするメラニン生成抑制剤を製造する方法が記載されている。
【００１３】
特許文献８には、水溶性セレン化合物を添加した培地で培養処理したサッカロミセス属酵母を抽出又は自己消化して得られるエキスを含有するメラニン生成抑制作用等の美白効果、光加齢抑制作用などの美容効果を有する化粧料組成物が開示されている。
【００１４】
特許文献９には、ラズベリーケトン配糖体及びイーストエキス又はそれを含む菌培養物を配合することを特徴とする美白化粧料が開示されている。
【００１５】
特許文献１０には、Ｎ−メチル−Ｌ−セリン、ニコチン酸アミド、抗炎症剤、イーストエキスを含む菌培養物からなる群より選ばれる１種以上と、メラノサイトのメタロチオネイン産生を誘導する物質を含有することを特徴とする美白化粧料が開示されている。
【００１６】
特許文献１１には、Ｌ−アスコルビン酸誘導体、油溶性甘草エキス、ウワウルシ流エキスよりなる群から選ばれた２種以上と、ポリエチレングリコールと、酵母及び／又は酵母抽出物とを含有することを特徴とする美白化粧料が開示されている。
【００１７】
また、酵母抽出物または酵母分解物を含有するヒアルロン酸合成促進作用を有する化粧品等の出願が多数行われている。
【００１８】
特許文献１２には、酵母エキスを有効成分として含有することを特徴とするヒアルロン酸産生促進剤が開示されている。
【００１９】
特許文献１３には、アロエ抽出物、オクラ中抽出物、水溶性β−グルカン誘導体、酵母抽出物から選ばれる１種又は２種以上を含有することを特徴とするヒアルロン酸合成促進剤が開示されている。
【００２０】
特許文献１４には、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸及びその塩の少なくとも１種０．０１〜２質量％と、酵母及び／又は酵母抽出物０．０００１〜２０質量％とからなる角質層のターンオーバー速度改善剤が開示されている。また、酵母抽出物または酵母分解物が紫外線ストレス耐性作用を有することが知られている。
【００２１】
非特許文献１には、酵母から抽出した熱ショックタンパク質およびその誘導因子である熱ショック因子を含むエキスであるバイオファクターＨＳＰが、培養細胞、ヒト皮膚での耐熱ストレス、ＵＶ（特にＵＶＢ）ストレス耐性を示すことが開示されている。
【００２２】
そのほかに、特許文献１５（Ｃｉｔｒｕｓ属に属する植物エキス又は酵母エキスを有効成分とするプロフィラグリン及び／又はフィラグリン蛋白産生阻害促進剤）、特許文献１６（オリゴ糖と酵母及び／又は酵母抽出物を含むことを特徴とする皮膚化粧料）、特許文献１７（イーストエキス又はそれを含む菌培養物を有効成分として含有することを特徴とするセラミド合成促進剤）、特許文献１８（酵母及び／又は酵母抽出物０．０１％〜２０．０％と納豆エキス０．０１％〜２０．０％を含有し、さらにキサンタンガム及び／又はプルラン０．００１％〜１０．０％を配合したことを特徴とした化粧料）、特許文献１９（日本酒を製造する際に使用する清酒酵母エキスを含有することを特徴とする化粧料）、特許文献２０（ヘチマ水と酵母エキスを配合したことを特徴とする保湿化粧料）、特許文献２１（酵母及び／又は酵母抽出物とムコ多糖類とを必須成分として含有することを特徴とする化粧料）、特許文献２２（酵母抽出物とブナ属植物幼芽抽出物とを含有するコラーゲン産生促進剤）などがある。
【００２３】
以上のように、活性炭処理をした酵母エキスがＭＭＰ−１産生阻害作用を有することは知られていなかった。
【特許文献１】特開２００２−４７１７８号公報
【特許文献２】特開２０００−３１９１５５号公報
【特許文献３】特開２０００−１９１４８７号公報
【特許文献４】特開２００２−２９９５３号公報
【特許文献５】特開平１１−３０２１４２号公報
【特許文献６】特開２０００−８００３５号公報
【特許文献７】特公昭５６−４４０４６号公報
【特許文献８】特開平０７−３００４０９号公報
【特許文献９】特開２０００−１０９４０８号公報
【特許文献１０】特開２００１−３０２４８８号公報
【特許文献１１】特開２００２−２３４８２８号公報
【特許文献１２】特許第３２１３１８９号公報
【特許文献１３】特開２００４−５１５３３号公報
【特許文献１４】特許第３１１９９６１号公報
【特許文献１５】特開２００１−２６１５６８号公報
【特許文献１６】特開平６−２１９９３６号公報
【特許文献１７】特開平８−２１７６５８号公報
【特許文献１８】特許第３４７９０４８号公報
【特許文献１９】特開２００２−２３４８２９号公報
【特許文献２０】特開平１０−２７９４２７号公報
【特許文献２１】特開昭６１−１７１４０５号公報
【特許文献２２】特許第３２７８１３８号公報
【非特許文献１】Fragr.J. Vol.31、No.3、107-108(2003)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２４】
本発明が解決しようとする課題は、化粧品用素材として最適で、マトリックスメタロプロテアーゼ１の産生を効率的に阻害するマトリックスメタロプロテアーゼ１産生阻害剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、酵母エキスを活性炭処理したものがマトリックスメタロプロテアーゼ１の産生を阻害することを見出し本発明を完成するに至った。
【００２６】
すなわち本発明は、以下の（１）〜（３）を要旨とするものである。
（１）  活性炭処理をした酵母エキスを有効成分として含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ−１産生阻害剤。
（２）  前記酵母エキスがビール酵母エキスであることを特徴とする（１）項に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ−１産生阻害剤。
（３）  （１）または（２）に記載されたマトリックスメタロプロテアーゼ−１産生阻害剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【発明の効果】
【００２７】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１産生阻害剤は、活性炭処理をした酵母エキスであり、天然物由来のものであり、臭いも少なく、皮膚の老化や、しわの増大や弾性の低下を予防する化粧品素材として最適である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
本発明におけるマトリックスメタロプロテアーゼ−１産生阻害剤は、活性炭処理された酵母エキスを有効成分とするものである。
【００２９】
本発明における酵母エキスとは、自己消化型酵母エキスおよび酵素分解型酵母エキスを挙げることができる。
【００３０】
自己消化型エキスを製造する方法は通常の方法でよく、例えば酵母スラリーをアルカリ洗浄し、ビール酵母を原料とする場合はホップ由来の苦味成分を除去した後、45〜65℃にて5〜20時間静置し、その後遠心分離した上清を乾燥すればよい。
【００３１】
酵母分解型酵母エキスを製造する方法は通常の方法でよく、例えば酵母スラリーをアルカリ洗浄し、ビール酵母を原料とする場合はホップ由来の苦味成分を除去した後、加熱により酵母由来の酵素を失活させ、エキス調製に必要な酵素を添加する。酵素の至適ｐＨ、至適温度にて5〜20時間反応させ、再度加熱により酵素を失活させた後、遠心分離上清を乾燥すればよい。
【００３２】
本発明における活性炭処理について特に制限はないが、無色・透明な酵母エキスを得るためには通常、固形分に対して25〜400％の割合で活性炭を用い、30分間以上攪拌処理すれば良い。活性炭処理後、遠心分離、珪藻土濾過、限外濾過、精密濾過などの方法により活性炭を除去しておく。
【００３３】
自己消化法等によって得られた酵母エキスを活性炭処理する一実施形態を以下に例示するが、本発明がこの実施形態に限定されない。
【００３４】
自己消化法等により得られた菌体分離エキスに水酸化カルシウムを添加し、ｐＨを7.5に調整し、酵母エキス中のリン酸成分をリン酸カルシウムとして沈殿させる。次いで、遠心分離、フィルタープレス等の濾過手段により除去した後、ｐＨを5.5
に調整して、元の酵母エキスのｐＨにもどす。次いで固形分に対し200wt％の活性炭を添加し、３０分以上攪拌した後、遠心分離し、上清を回収する。遠心分離では取りきれない活性炭の微粒子を除去するため、限外濾過膜で濾過し、透過エキスを回収して、活性炭処理された酵母エキスを得る。粉末にする場合は、活性炭処理酵母エキスを凍結乾燥するか、減圧濃縮してスプレードライ等により乾燥する。
【００３５】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１産生阻害剤を皮膚外用剤として用いると、加齢や紫外線により促進される皮膚老化の防止、改善に有効な皮膚外用剤を提供することができる。
【００３６】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１産生阻害剤を用いた皮膚外用剤としては、ローション、懸濁液、乳剤、クリーム、軟膏、粉末等の形態をとることができる。またさらに、柔軟性化粧水、収斂性化粧水、洗浄用化粧水等の化粧水類、エモリエントクリーム、モイスチュアクリーム、マッサージクリーム、クレンジングクリーム、メイクアップクリーム等のクリーム類、エモリエント乳液、ナリシング乳液、クレンジング乳液等の乳液類、ゼリー状パック、ピールオフパック、洗い流しパック、粉末パック等のパック類、美容液、洗顔料、化粧下地用ローションまたはクリーム、乳液状、クリーム状、軟膏状、固形状の各種ファンデーション等のメイクアップ化粧料、日焼け止めローションまたはクリーム等の日焼け止め化粧料、ハンドローションまたはクリーム、レッグローションまたはクリーム、ボディローションまたはクリーム等のボディ化粧料といった種々の製剤形態として提供することができる。（また、リポソームやマイクロカプセルに内包させた状態とすることもできる。）
【００３７】
なお、本発明に係るマトリックスメタロプロテアーゼ−１産生阻害剤には、本発明の特徴を損なわない範囲で、保湿剤、美白剤、抗酸化剤、防菌防黴剤、紫外線吸収剤、顔料、色素類、香料等、一般的な皮膚外用剤添加成分を加えることもできる。
【００３８】
（製造例１）
自己消化法によって得られたビール酵母エキスに水酸化カルシウムを添加し、水酸化ナトリウムによりｐＨを７．５に調整した。沈殿物を遠心分離により除去し、上清を回収した。硫酸によりｐＨを５．５に調整し、50％水分含有のウエットタイプの活性炭をエキス固形分に対して200wt％添加した（ビール酵母エキス固形分に対する活性炭固形分の添加量：100wt％）。活性炭は木質を原料とした、高度に賦活精製された粉末タイプのもので、平均粒径35ミクロン、比表面積は1,250ｍ２/gのものを用いた。３０分以上攪拌し、遠心分離により活性炭を除去した。上清を回収し、精密濾過で活性炭の微粒子を除去した後、凍結乾燥して粉末とした。
【実施例１】
【００３９】
正常ヒト線維芽細胞を２．０×１０４ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌの細胞密度で９６穴マイクロプレートに播種した。２４時間５％牛胎仔血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコ基礎培地（ＤＭＥＭ）にて培養後、試料を含むＨａｎｋ'ｓ緩衝液に交換し、ＵＶＡ１５Ｊ／ｃｍ２（株式会社東芝製「ＦＬ２０Ｓ  ＢＬＢランプ」）を照射した。対照試料にはアジ化ナトリウムを用いた。照射後、緩衝液を０．１％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）含有ＤＭＥＭに交換し、２４時間培養後培養上清中のＭＭＰ−１活性を測定した。ＭＭＰ−１の活性はフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）で標識したＩ型コラーゲンを基質として測定した。ＭＭＰ−１酵素液（５０μｌ）、０．５ｍｇ／ｍｌＦＩＴＣ標識Ｉ型コラーゲン（２５μｌ）及び試料（２５μｌ）を加え、３７℃にて２時間酵素反応後、分解されたコラーゲンの蛍光強度（励起波長４９５ｎｍ、蛍光波長５２ｎｍ）を測定した。対照試料にはエチレンジアミン四酢酸ナトリウム（ＥＤＴＡ）を用いた。酵素活性は１分間に１μｇのコラーゲンを分解する酵素活性を１ユニットと定義した。同時に細胞の蛋白量をＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｇｅａｔを用いて定量し、培養上清中のＭＭＰ−１活性をタンパク量で除することにより、単位タンパク量あたりのＭＭＰ−１活性を算出し、これをＭＭＰ−１産生量とした。結果を図１、図２に示す。
【００４０】
製造例１の活性炭処理酵母エキスでは、２５〜５０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲で、有意にＵＶＡ照射後のＭＭＰ−１産生を阻害した（図１）。一方、未処理酵母エキスでは６．２５〜５０ｍｇ／ｍｌにおいて効果は認められず（図２）、５０ｍｇ／ｍｌでは細胞毒性が認められた。
【産業上の利用可能性】
【００４１】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１産生阻害剤は、活性炭処理をした酵母エキスであり、天然物由来のものであり、臭いも少なく、皮膚の老化や、しわの増大や弾性の低下を予防する化粧品素材として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】活性炭処理酵母エキスのＭＭＰ−１産生量を示すグラフ。
【図２】活性炭未処理酵母エキスのＭＭＰ−１産生量を示すグラフ。
【図１】
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【図２】
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