(57)【要約】【課題】  脂肪滴の形成にともなう好ましくない症変を予防、抑制し、治療することも可能な、従来のレチノイドに代わり得る物質を有効成分とする新しい処方剤を提供する。【解決手段】  水酸化フラーレン類および有機化合物により修飾もしくは包接されたフラーレン複合体のうちの１種以上を有効成分として含有している脂肪滴形成抑制剤とする。【選択図】図２
2008222645.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水酸化フラーレン類および有機化合物により修飾もしくは包接されたフラーレン複合体のうちの１種以上を有効成分として含有していることを特徴とする脂肪滴形成抑制剤。
【請求項２】
水酸化フラーレン類は、水酸基を１分子当り３０以上４０以下で結合しているフラーレンまたはその誘導体であることを特徴とする請求項１に記載の脂肪滴形成抑制剤。
【請求項３】
フラーレン複合体は、フラーレンおよびフラーレン誘導体のうちの１種以上と、有機オリゴマー、有機ポリマー、シクロデキストリンおよびクラウンエーテルとその類縁化合物のうちの１種以上の有機化合物との複合体であることを特徴とする請求項１に記載の脂肪滴形成抑制剤。
【請求項４】
γ−シクロデキストリンにより１.５〜２．０ｍｏｌ／ｍｏｌ比で包接されているフラーレン複合体であることを特徴とする請求項３に記載の脂肪滴形成抑制剤。
【請求項５】
請求項１から４のうちのいずれかの抑制剤からなることを特徴とする脂肪滴由来の細胞傷害の防御剤。
【請求項６】
請求項１から４のうちのいずれかの抑制剤からなることを特徴とする脂肪細胞分化抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は脂肪滴に係わる組織や細胞の好ましくない発現とその影響を抑制することのできる新しい組成物とその薬剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
脂肪滴の生成とその皮膚への付着は、脂肪性浮腫として好ましくない症状を呈することになる。このような脂肪滴に対する皮膚科学分野におけるスキンケアや皮膚治療のための処方剤として、レチノール、レチノイン酸、レチナール、レチニルアセテート等のレチノイドが有効であることが知られている（特許文献１−２）。
【０００３】
また、レチノイン酸は、脂肪細胞前躯体の脂肪細胞への増殖や分化を阻害することも知られている。
【０００４】
そこで、従来より、これらの知見に基づいてさらに効果的な治療剤やスキンケア組成物の探索、開発が試みられており、たとえば、ノチノイドとカフェインとの組成物を有効成分とする脂肪性浮腫の軽減方法やその化粧用組成物が提案されてもいる（特許文献３）。
【０００５】
しかしながら、脂肪滴の形成による浮腫や、脂肪滴に由来する細胞の傷害、そして脂肪細胞の分化については、その原因や秩序は依然として結論が出ておらず、このことからも、レチノイドに代わり得る、脂肪滴の形成等の抑制効果により優れた処方剤、その有効成分の開発については手さぐりの状況にある。そして実際に、より大きな抑制効果の実現が可能とされる、レチノイドに代わり得るものについては依然として見出されていないのが実情である。
【０００６】
一方、本発明者らは、活性酸素による皮膚傷害の防御についての検討を進めてきており、その過程において、フラーレンＣ６０、あるいはその誘導体が優れた作用を有することを見出し、これを有効成分とする抗酸化組成物、化粧品等の外用組成物、皮膚メラミン抑制剤やセルライト抑制剤等について提案してきている（特許文献４−６）。
【０００７】
しかしながら、脂肪滴形成の抑制については、検討は進められていなかった。たとえばセルライト抑制については提案していても、脂肪滴形成の抑制は、セルライトよりも上流、前段階での課題であって、脂肪についてのより予防的な抑制効果が求められることから、フラーレンの有効性については想到することも予測することも困難であった。
【特許文献１】米国特許第５，４６８，４９５号明細書
【特許文献２】米国特許第５，０５１，４４９号明細書
【特許文献３】特開２００１−３０２４９４号公報
【特許文献４】特開２００４−２５０６９０号公報
【特許文献５】ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１４１３９
【特許文献６】ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１４１５７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、上記のとおりの背景から、脂肪滴の形成にともなう好ましくない症変を予防、抑制し、治療することも可能な、従来のレチノイドに代わり得る物質を有効成分とする新しい処方剤を提供すること、特に、本発明者のこれまでの検討によるフラーレン類の知見を踏まえての新しい処方剤を提供することを課題としている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、上記の課題を解決するものとして、以下の処方剤を提供する。
【００１０】
第１：水酸化フラーレン類および有機化合物により修飾もしくは包接されたフラーレン複合体のうちの１種以上を有効成分として含有している脂肪滴形成抑制剤。
【００１１】
第２：水酸化フラーレン類は、水酸基を１分子当り３０以上４０以下で結合しているフラーレンまたはその誘導体である上記の脂肪滴形成抑制剤。
【００１２】
第３：フラーレン複合体は、フラーレンおよびフラーレン誘導体のうちの１種以上と、有機オリゴマー、有機ポリマー、シクロデキストリンおよびクラウンエーテルとその類縁化合物のうちの１種以上の有機化合物との複合体である上記第１の脂肪滴形成抑制剤。
【００１３】
第４：γ−シクロデキストリンにより１.５〜２．０ｍｏｌ／ｍｏｌ比で包接されているフラーレン複合体である上記第３の脂肪滴形成抑制剤。
【００１４】
第５：上記いずれかの脂肪滴形成抑制剤からなることを特徴とする脂肪滴由来の細胞傷害の防御剤。
【００１５】
第６：上記いずれかの脂肪滴形成抑制剤からなることを特徴とする脂肪細胞分化抑制剤。
【発明の効果】
【００１６】
上記のとおりの特有のフラーレン物質を有効成分とする本発明によれば、従来のレチノイドに代わり得る高活性の脂肪滴形成の抑制が実現され、これによって、脂肪滴由来の細胞傷害の発生が効果的に防御される。そして脂肪細胞そのものの分化が抑制されることになる。
【００１７】
これらは、スキンケア、化粧品、皮膚活性剤等として有用なものとなる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
以下に本発明の実施の形態について説明する。
【００１９】
本発明における水酸化フラーレン類、そしてフラーレン複合体を形成するフラーレンは、Ｃｎ（ｎは６０以上の整数）として表わされるもので、Ｃ６０フラーレン、Ｃ７０フラーレン等をはじめ、さらにはカーボンチューブフラーレン等の球面状、チューブ等の炭素骨格構造を有する、従来公知のものをはじめとする各種のものが例として挙げられる。
【００２０】
そして、このような炭素骨格構造には、各種の置換基、たとえば炭化水素基、酸素架橋基、水酸基、アシル基、エーテル基、カルボキシル基等の含酸素基、アミノ基、シアノ基の含窒素基等を有していてもよい。
【００２１】
そしてまた、メチレン鎖等のアルキレン鎖を介して複数のフラーレンが結合したものも含まれる。フラーレンＣ６０の誘導体としては、フラーレン分子一個に対して修飾基が１個から４０個結合しているものや、フラーレンＣ７０の誘導体としては、フラーレン分子一個に対して修飾基が１個から５０個結合しているものが例示される。この場合の修飾基は、各々独立に水酸基またはその水酸基と無機もしくは有機酸とのエステル基または糖との配糖体基、もしくは水酸基とケトンとのケタール基もしくはアルデヒドとのアセタール基であればよく、このフラーレン修飾化合物またはその塩及びそこから選択される少なくとも一種であればよい。さらにこの出願の発明のフラーレンは、Ｃ６０フラーレン、Ｃ７０フラーレン又はナノチューブフラーレンでもよく、それらから選択される一種以上の混合物でもよい。
【００２２】
また、フラーレン含酸素誘導体については、フラーレン骨格の炭素原子に直接滴に、あるいはアルキレン鎖等の炭素鎖等を介して酸素原子が結合するものが考慮される。たとえば水酸化率が５０／モル・フラーレン程度までの−ＯＨ基が直接結合した水酸化フラーレンが例示される。
【００２３】
この水酸化フラーレン類は、本発明においては、必須の有効成分の一つとされている。特に、フラーレンの一分子当り３０〜４０個の範囲内の水酸基（ＯＨ）が結合している水酸化フラーレン類が本発明においては好適なものとして例示される。これらの水酸化フラーレン類は、各種の公知の方法によって合成されたもの、あるいは市販品として利用可能である。
【００２４】
また、たとえば以上のようなフラーレンまたはフラーレン誘導体を修飾もしくは包接する有機化合物としては、有機オリゴマー、有機ポリマーおよび包接化合物または包接錯体が形成可能なシクロデキストリン（ＣＤ）やクラウンエーテルもしくはそれらの類縁化合物の１種または２種以上のものが好適なものとして例示される。
【００２５】
なお、この場合の有機化合物による修飾、包接は、物理的なものであってもよいし、あるいは化学的な結合形成をともなうものであってもよい。
【００２６】
有機オリゴマーや有機ポリマーとしては、たとえば、カルボン酸エステル類、アルコール類、糖類、多糖類、多価アルコール類、ポリエチレングリコール、ブチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、等のポリアルキレングリコール又は多価アルコール類の重合体、デキストラン、ブルラン、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン及びヒドロキシプロピルデンプンのようなデンプン誘導体を含む非イオン性水溶性高分子、アルギン酸、ヒアルロン酸、キトサン、キチン誘導体、並びにこれらの高分子のアニオン性又はカチオン性誘導体及びこれらの高分子グリセリン及び脂肪酸類、油類、炭酸プロピオン、ラウリルアルコール、エトキシル化ひまし油、ポリソルベート類、及びこれらのエステル類又はエーテル類、及びこれらの重合体、及びこれらのポリエステル重合体類、ポリビニルピロリドン等のピロリドン重合体類、不飽和アルコール重合体類のエステル類またはエーテル類およびポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体等のものがフラーレン又はその誘導体に結合したものが好ましく、それらの一種以上の混合物であってよい。なかでも、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等のポリアルキレングリコール、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、等の各種のものが好ましいものとして例示される。ＰＥＧ、ＰＶＰ等のポリマーの場合には、その平均分子量については、一般的には、２０００〜１００，０００程度が好ましい、フラーレンまたはフラーレン含酸素誘導体との比率としては、モル比として１０／１以下程度とすることが考慮される。この出願の発明において好適なフラーレン類としては、水酸化フラーレン、水酸化フラーレンのエステル類、たとえばモノエステル類、ジエステル類、トリエステル類、ポリエステル類やそれらの塩類より選択される一種または二種以上の混合物も例示される。
【００２７】
そして、本発明では、γ−シクロデキストリンにより包接されたフラーレン複合体が好適なものの一つとして考慮される。
【００２８】
ただ、γ−シクロデキストリンによる包接はフラーレン類が、１．５〜２．０ｍｏｌ／ｍｏｌ比の範囲内で包接されたものとする。この比率未満、あるいは逆にこの比率を超える場合には、本発明の効果は低下する。
【００２９】
フラーレン類として水溶性のあるフラーレン誘導体や有機化合物による修飾体あるいは包接体、そしてフラーレン類の塩類は安定性が高く、水に溶けやすく、またｐＨが調整可能なため、細胞毒性が低く生体適合性が高いので、本発明に使用するのにより適している。たとえば水酸化フラーレンや、フラーレンと高分子ポリマーとしてＰＥＧ（ポリエチレングリコール）、ＰＶＰ（ポロビニルピロリドン）や、ＣＤ（シクロデキストリン）による修飾あるいは包接体である。
【００３０】
また水分付加物または結晶水付加物はその無水物よりも水に対する溶解性が高いことから有用である。
【００３１】
水分付加物または結晶付加物の水分または結晶水の含量は特に限定されないが、より良好な溶解性を保持するためには水分含量が１％から５０重量％、より好ましくは５％から２０重量％、結晶水の場合は１から２０水塩の範囲の水分子を保持する水分付加物または結晶水付加物が望ましい。
【００３２】
本発明の脂肪滴形成抑制剤、そして脂肪滴由来の細胞傷害の防御剤や脂肪細胞分化抑制剤については、化粧品、あるいは医療品としての外用剤として、より有用、有効なものとなる。
【００３３】
そのための形態としてはたとえば以下のことが考慮される。
１．投与量
この出願の発明のフラーレン類の濃度は、０．００００１％から３０％重量濃度であればよいが使用感的側面から好ましくは５％以下が良い。皮膚に投与する場合外用組成物の量は皮膚面積１平方メートル当たり液体０．００１〜２０ｍｌ好ましくは０．０１〜５．０ｍｌを外用塗布、湿布または粉霧するのがのぞましい。
２．投与形態
皮膚外用組成物の形態の例としては、特に限定されず、たとえば、水溶剤、軟膏、乳液、クリーム、ジェル剤、パック、浴剤、洗浄剤、パップ剤、分散液等のあらゆる外用剤の形態を取ることができ、その剤型についても特に制限はなく、ペースト状、ムース状、ジェル状、粉末状、溶液系、可溶化系、乳化系とすることができる。特に水溶液、乳剤、軟膏剤、ジェル剤、水溶製剤、美容液、パック剤については、これらの剤を外用した後に加湿導入器、振動導入器、イオン導入器、音波導入器、電磁波導入器を用いることによりフラーレン類の皮膚への浸透を促進することができより大きな効果を発揮できる。
【００３４】
塗布方法は、液剤の場合、スプレー、貼布、湿布、ディッピング、マスク等物理的に可能な全ての方法を用いることができる。
３．配合成分
本発明の抗酸化組成物、そして外用組成物は、基本的に従来より知られている化粧品や外用薬剤を構成する各種成分との組合わせとして実現される。
【００３５】
たとえば、保温剤、顔料、基材としてアルコール類や水溶性高分子、細胞賦活剤、アスコルビン酸またはその誘導体、活性酸素消去剤、抗菌剤等である。
【００３６】
そこで以下に実施例を示し、さらに詳しく説明する。もちろん以下の例によって発明が限定されることはない。
【実施例】
【００３７】
＜参考例＞
ｔ−ＢｕＯＯＨ添加による細胞傷害に及ぼす脂肪滴の影響について評価した。図１はその結果を示したものである。
【００３８】
この図１においては、オレイン酸の添加の有無で脂肪滴の影響を示している。Ｏｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ（＋）での、オレイン酸の添加量は０．０１％である。
【００３９】
この評価試験では、細胞生存を支える生体エネルギーを産生するミトコンドリアの活動度を計測して細胞生存率と見なしている。ミトコンドリアの活動を担う脱水素酵素活性、特にサクシネートデヒドロゲナーゼが働くと水溶性テトラゾリウムが有色のフォルマザンに変換されるので、吸光プレートリーダーで計測することができる。
【００４０】
図１より、脂肪滴が細胞に傷害を及ぼすことがよくわかる。
＜実施例１＞
マウス前駆脂肪細胞３Ｔ３−Ｌ１での脂肪滴形成に対する水酸化フラーレンの抑制効果について、既存の脂肪滴抑制剤として知られるレチノイン酸（Ｒ．Ａ）と対比して評価した。
【００４１】
水酸化フラーレン(S.F./Star Fullerene)は、結合する水酸化数は３３〜３６であり、ビタミンＣ６０バイオリサーチ株式会社製のものを用いた。
【００４２】
結果は図２に示した。ここで、図中のＮＣは、Negative Control（無処理）を、ＰＣは、Postive Control（オレイン酸の投与）を示し、縦軸は、脂肪滴の形成割合を示している。なお、測定方法としては、細胞内脂肪滴（トリグリセリドが主成分）をオイルレッドＯで選択的に染色し、その細胞内色素を抽出して吸光プレートリーダで計測した。
【００４３】
この図２の結果から、黒色バーで表示されている水酸化フラーレン（Ｓ．Ｆ．）は、レチノイン酸（Ｒ．Ａ．）の場合よりも、より効果的に脂肪滴蓄積を抑制することがわかる。
＜実施例２＞
実施例１と同様にしてＣ６０フラーレンをγ−シクロデキストリンにより包接したCrown-Fullereneの投与による細胞内脂肪滴蓄積抑制の効果を評価した。
【００４４】
Crown-Fullereneは、Ｃ６０フラーレンとシクロデキストリンとを１：７（ｗｔ／ｗｔ）で粉体混合し、バイブレーションで加圧して調製した。シクロデキストリンにより２．０ｍｏｌ／ｍｏｌ比で包接されている。
【００４５】
オレイン酸の添加（０．０１％）にともなうCrown-Fullereneの添加量（ｐｐｍ）の変化による抑制効果を、実施例１と同様の吸光プレートリーダーで５３０ｎｍでの吸光度として評価した。その結果を図３に示した。
【００４６】
Crown-Fullerene添加による脂肪滴蓄積の抑制効果が確認された。
＜実施例３＞
ホルモン様混合体(Insulin、Isobutyl methy xanthine,Dexamethazone)処理によるマウス前駆脂肪細胞３Ｔ３−Ｌ１の細胞分化脂肪滴形成に対する実施例１で用いた水酸化フラーレン（Ｓ．Ｆ．）の抑制効果を評価した。そして、レチノイン酸（Ｒ．Ａ．）の場合と対比した。図４はその結果を示したものである。
【００４７】
水酸化フラーレンの抑制効果が顕著であることがわかる。
＜実施例４＞
実施例１〜３の脂肪滴の形成と蓄積に対する予防効果とは別に、すでに蓄積（存在）している細胞内脂肪滴の減量の効果についても評価した。図５はその結果を示している。水酸化フラーレン（Ｓ．Ｆ．）による効果は、極めて顕著であることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】参考例としての細胞傷害に及ぼす脂肪滴の影響を例示した図である。
【図２】実施例１での水酸化フラーレンによる脂肪滴形成の抑制効果について示した図である。
【図３】実施例２でのシクロデキストリン包接体による脂肪蓄積抑制効果について示した図である。
【図４】実施例３での脂肪細胞分化脂肪滴形成に対する水酸化フラーレンの抑制効果について示した図である。
【図５】実施例４での水酸化フラーレンによる細胞内に蓄積された脂肪滴の減量効果について示した図である。
【図５】
2008222645.tif 000003
【図１】
2008222645.tif 000004
【図２】
2008222645.tif 000005
【図３】
2008222645.tif 000006
【図４】
2008222645.tif 000007