(57)【要約】【課題】本発明が解決しようとするところは、ステント留置後の再狭窄の発生を効率的に抑制し、ステント血栓症のような重篤な副作用を低減させる薬剤コーティングステントを容易に提供することである。また、本発明は病変へのステント導入時あるいはステント留置時に薬剤コーティングの割れや剥がれを最小化する薬剤コーティングステントの提供も目的としている。【解決手段】基材から構成されるステントであって、前記ステントは前記基材の少なくとも一部の表面にカルシニューリン産生亢進を抑制する薬剤がコーティングされているステントを構成した。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
基材から構成されるステントであって、前記ステントは前記基材の少なくとも一部の表面にカルシニューリン産生亢進を抑制する薬剤がコーティングされていることを特徴とするステント。
【請求項２】
前記ステントを血管に留置して３ヶ月後に、前記ステントと接触する血管の内膜におけるカルシニューリン発現率が２３％以下であることを特徴とする請求項１記載のステント。
【請求項３】
前記ステントを血管に留置して３ヶ月後に、前記ステントと接触する血管の中膜におけるカルシニューリン発現率が２５％以下であることを特徴とする請求項１記載のステント。
【請求項４】
前記ステントを血管に留置して３ヶ月後に、前記内膜におけるカルシニューリン発現抑制率が７７%以上であることを特徴とする請求項１記載のステント。
【請求項５】
前記ステントを血管に留置して３ヶ月後に、前記中膜におけるカルシニューリン発現抑制率が６８％以上であることを特徴とする請求項１記載のステント。
【請求項６】
前記薬剤が免疫抑制剤であることを特徴とする請求項１から５の何れかに記載のステント。
【請求項７】
前記免疫抑制剤が、タクロリムス、シクロスポリン、ピメクロリムスもしくはこれらのアナログのいずれかであることを特徴とする請求項６記載のステント。
【請求項８】
前記免疫抑制剤がタクロリムスであることを特徴とする請求項７記載のステント。
【請求項９】
前記ステントの軸方向単位長さあたりにコーティングされる前記タクロリムス重量が、６μｇ／ｍｍ以上、１５μｇ／ｍｍ以下であることを特徴とする請求項８記載のステント。
【請求項１０】
前記薬剤と共に高分子がコーティングされていることを特徴とする請求項１から９のいずれかに記載のステント。
【請求項１１】
前記高分子が生分解性高分子であることを特徴とする請求項１０記載のステント。
【請求項１２】
前記生分解性高分子は、
体積比率で３５％のメタノールを含有し、ｐＨが３．０以上、４．０以下である緩衝液中に当該生分解性高分子を浸漬して３７℃に保持する浸漬条件下で、
（ａ）浸漬後６週間から１２週間の期間のいずれかの時点において当該生分解性高分子の重量が浸漬前の重量の５０％に減少する、および
（ｂ）浸漬後１４週間から１８週間の期間のいずれかの時点において当該生分解性高分子の重量が浸漬前の重量の１０％に減少する、
という特性を有することを特徴とする請求項１１記載のステント。
【請求項１３】
前記生分解性高分子は、前記浸漬条件下で、さらに
（ｃ）浸漬後８週間から１０週間の期間のいずれかの時点において当該生分解性高分子の重量が浸漬前の重量の５０％に減少する、および
（ｄ）浸漬後１４週間から１６週間の期間のいずれかの時点において当該生分解性高分子の重量が浸漬前の重量の１０％に減少する、
という特性を有することを特徴とする請求項１２記載のステント。
【請求項１４】
前記生分解性高分子は、
体積比率で３５％のメタノールを含有し、ｐＨが３．０以上、４．０以下である緩衝液中に当該生分解性高分子を浸漬して３７℃に保持する浸漬条件下で、
（ｅ）前記生分解性高分子の重量から算出した重量減少率が浸漬３週間後まで１日あたり２．０％を超えない、
という特性を有することを特徴とする請求項１１記載のステント。
【請求項１５】
前記生分解性高分子は、前記浸漬条件下で、さらに
（ｆ）前記生分解性高分子の重量から算出した重量減少率が、当該生分解性高分子が完全に分解する時点までの期間中、１日あたり２．０％を超えない、
という特性を有することを特徴とする請求項１４記載のステント。
【請求項１６】
前記生分解性高分子は、以下の：
（ｇ）前記ステントの軸方向単位長さあたりの当該生分解性高分子重量が２３μｇ／ｍｍ以上、２５μｇ／ｍｍ以下であり、かつ、
（ｈ）前記生分解性高分子をクロロホルムに０．５ｗｔ％から１ｗｔ％の濃度範囲内で溶解させた後、２５℃から３０℃の温度範囲内で測定した固有粘度が０．４ｄＬ／ｇ以上、０．７ｄＬ／ｇ以下であることを特徴とする請求項１１記載のステント。
【請求項１７】
前記ステント表面にコーティングされる前記薬剤／前記高分子の重量比が０．２０以上、０．７０以下であることを特徴とする請求項１０記載のステント。
【請求項１８】
前記生分解性高分子が乳酸、グリコール酸、γ−ブチロラクトン、δ−バレロラクトン、ε−カプロラクトン、テトラメチレンカーボネート、ジオキサノンのいずれかからなる重合体であることを特徴とする請求項１１から１７のいずれかに記載のステント。
【請求項１９】
前記生分解性高分子が乳酸、グリコール酸、γ−ブチロラクトン、δ−バレロラクトン、ε−カプロラクトン、テトラメチレンカーボネート、ジオキサノンのうち、少なくとも２種類からなる共重合体であることを特徴とする請求項１１から１７のいずれかに記載のステント。
【請求項２０】
前記重合体がポリ乳酸であることを特徴とする請求項１８記載のステント。
【請求項２１】
ゲル浸透クロマトグラフィーにより測定した前記ポリ乳酸の標準ポリスチレン換算重量平均分子量が４０，０００以上、１００，０００以下である請求項２０記載のステント。
【請求項２２】
前記共重合体が乳酸−グリコール酸共重合体であることを特徴とする請求項１９記載のステント。
【請求項２３】
ゲル浸透クロマトグラフィーにより測定した前記乳酸−グリコール酸共重合体の標準ポリスチレン換算重量平均分子量が８０，０００以上、１００，０００以下であり、前記乳酸−グリコール酸共重合体に乳酸が８０ｍｏｌ％以上、９０ｍｏｌ％以下含まれ、グリコール酸が１０ｍｏｌ％以上、２０ｍｏｌ％以下含まれることを特徴とする請求項２２記載のステント。
【請求項２４】
前記ステントにコーティングされる前記薬剤と前記高分子が層状構造を形成する請求項１０から２３のいずれかに記載のステント。
【請求項２５】
前記層状構造が単層構造である請求項２４に記載のステント。
【請求項２６】
前記層状構造が内層および外層から構成される二層構造であり、前記内層および前記外層の両方に前記薬剤および前記高分子が含まれ、前記内層における薬剤／生分解性高分子重量比が、前記外層における薬剤／生分解性高分子重量比よりも高いことを特徴とする請求項２４記載のステント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は血管の狭窄部分を拡張し、その状態を維持することを目的として留置されるステントに関する。特に、セリン／スレオニン脱リン酸化酵素であるカルシニューリン産生亢進を抑制する薬剤がコーティングされた薬剤コーティングステントに関する。
【背景技術】
【０００２】
体内で血液が循環するための流路である血管に狭窄が生じ、血液の循環が滞ることにより、様々な疾患が発生することが知られている。特に血液の循環の源である心臓自身に血液を供給する冠状動脈に狭窄が生じると、狭心症、心筋梗塞等の重篤な疾病をもたらし、死に至る危険性が極めて高いことが知られている。このような血管の狭窄部分を治療する方法のひとつとして、バルーンカテーテルを用いて狭窄部分を拡張させる血管形成術（ＰＴＡ、ＰＴＣＡ）があり、バイパス手術のような開胸術を必要としない低侵襲療法であることから広く行われている。しかし、血管形成術の場合、約４０％の頻度で拡張した狭窄部分に再狭窄が生じ、大きな問題として指摘されている。再狭窄が発生する頻度（再狭窄率）を低減する治療法として、血管形成術に代わってステント留置術が広く行われている。
【０００３】
ステントは、血管、胆管、尿道などの生体内管腔が狭窄した場合に、狭窄部位を拡張し、その状態を維持することを目的として留置される医療用具である。一般的に、ステントは金属や高分子、あるいはそれらの複合体から構成され、最も一般的には、ＳＵＳ３１６鋼、Ｃｏ−Ｃｒ系合金、Ｎｉ−Ｔｉ系合金などの金属から構成される。
【０００４】
ステントの拡張機構は、ステント自体の形状記憶性や超弾性により拡張する自己拡張型とバルーンカテーテルにより拡張されるバルーン拡張型に大別される。冠状動脈狭窄部の治療には主にバルーン拡張型が使用される。
【０００５】
バルーン拡張型ステントにより冠状動脈の狭窄部分を治療する場合、ステントはバルーンカテーテルに保持された状態で挿入され、拡張される。ステント留置術後の再狭窄率は約２０％から３０％程度である。バルーンカテーテルのみによる血管形成術後と比べて有意に低減されているものの、依然として再狭窄は高い頻度で生じている。
【０００６】
ステントの留置により狭窄部分には物理的な損傷が生じる。この損傷の修復反応として生じる過度の新生内膜の肥厚がステント留置術後の再狭窄の原因とされている。新生内膜の肥厚は、血管中膜における平滑筋細胞の増殖、増殖した平滑筋細胞の内膜への遊走、Ｔ細胞やマクロファージの内膜への遊走等により生じる。
【０００７】
近年、特許文献１に示すようにステント留置術後の再狭窄率低減を目的として、各種の高分子を用いてステントに薬剤を被覆する技術が開示されている。薬剤を被覆したステントは薬剤コーティングステントと称され、抗凝固薬、抗血小板薬、抗菌薬、抗腫瘍薬、抗微生物薬、抗炎症薬、抗物質代謝薬等の多数の適応が検討されている。
【０００８】
また、特許文献２ではシロリムス（ラパマイシン）を被覆したステントが開示され、特許文献３では抗腫瘍薬であるタキソール（パクリタキセル）を被覆したステントが開示されている。さらに、特許文献４および特許文献５ではタクロリムス（ＦＫ５０６）を被覆したステントが開示されている。
【０００９】
タクロリムス（ＦＫ５０６）はＣＡＳ番号１０４９８７−１１−３の化合物であり、例えば特許文献６で開示されている。タクロリムス（ＦＫ５０６）は細胞内のＦＫ５０６結合蛋白（ＦＫＢＰ）と複合体を形成して、主として分化・増殖因子であるＩＬ−２やＩＮＦ−γなどのサイトカインのＴ細胞からの産生を阻害することが示されている。従って、臓器移植時の拒絶反応や自己免疫疾患の予防薬または治療薬として使用されている。また、非特許文献１には、タクロリムス（ＦＫ５０６）はヒト血管平滑筋細胞に対する抗増殖活性を有することが確認されている（非特許文献１）。
【００１０】
ステントに薬剤を保持する方法として、特許文献１では高分子を用いて薬剤を担持することが開示されており、生分解性高分子を用いることも開示されている。特許文献７にも生分解性高分子を用いることが開示され、ポリ乳酸等の高分子が具体的に例示されている。
【００１１】
非特許文献２において、生体内で分解しない高分子を用いてシロリムスやパクリタキセルを被覆したステントをこれらの高分子に対する過敏性を有する患者に留置した場合、慢性期においてステント血栓症のような重篤な副作用が生じることが報告されている。
【００１２】
非特許文献３において、新生内膜の肥厚は、薬剤コーティングステントの留置後３ヶ月程度から顕著になり、６ヶ月程度までは少なくとも継続することが示唆されている。
【００１３】
カルシニューリンは、Ｃａ２＋／カルモジュリン（ＣａＭ）依存性のセリン／スレオニン脱リン酸化酵素で、活性基を有する分子量６１ｋＤａのカルシニューリンＡ（ＣｎＡ）と制御サブユニットである分子量１９ｋＤａのカルシニューリンＢ（ＣｎＢ）からなるヘテロ二重体タンパク質である。
【００１４】
カルシニューリンは、免疫抑制剤であるシクロスポリンやタクロリムスの標的分子であり、これらの薬剤により活性が阻害されることが知られている。この活性阻害はシクロスポリンやタクロリムスがそれぞれに特異的なイムノフィリンと呼ばれる細胞内結合タンパク質と結合して複合体を形成することに起因する。この複合体はＣｎＢを介してカルシニューリンと結合し脱リン酸化活性を阻害することで、Ｔ細胞の転写因子であるＮＦ−ＡＴ（Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｆａｃｔｏｒ  ｏｆ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｔ−ｃｅｌｌ）を介したサイトカイン産生を抑制し免疫抑制作用を発現することが知られている。
【００１５】
近年、カルシニューリンおよびそのシグナル伝達メカニズムがバルーンによる血管損傷後の新生内膜肥厚に影響を与える可能性が示唆されているが、ステント留置後の再狭窄への関連性は明らかになっていない。
【特許文献１】特表平５−５０２１７９号公報
【特許文献２】特開平６−００９３９０号公報
【特許文献３】特表平９−５０３４８８号公報
【特許文献４】国際公報第ＷＯ０２／０６５９４７号公報
【特許文献５】欧州特許出願公開第ＥＰ１２５４６７４号公報
【特許文献６】特開昭６１−１４８１８１号公報
【特許文献７】特表２００２−５３１１８３号公報
【非特許文献１】Ｐａｕｌ  Ｊ．  Ｍｏｈａｃｓｉ  ＭＤ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅａｒｔ  ａｎｄ  Ｌｕｎｇ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｍａｙ  １９９７  Ｖｏｌ．１６，  Ｎｏ．５，  ４８４−４９１
【非特許文献２】Ｊｏｎａｔｈａｎ  Ｒ．  Ｎｅｂｅｋｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ．  ２００６年４７巻１７５−１８１
【非特許文献３】Ｒ  Ｖｉｒｍａｎｉ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｈｅａｒｔ．  ２００３年８９巻１３３−１３８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明が解決しようとするところは、ステント留置後の再狭窄の発生を効率的に抑制し、ステント血栓症のような重篤な副作用を低減させる薬剤コーティングステントを容易に提供することである。また、本発明は病変へのステント導入時あるいはステント留置時に薬剤コーティングの割れや剥がれを最小化する薬剤コーティングステントの提供も目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
上記の課題の解決のために本発明者らが鋭意検討した結果、以下の複数の特徴を有する本発明を完成するに至った。
【００１８】
（１）本発明の特徴の一つは、基材から構成されるステントであって、前記ステントは前記基材の少なくとも一部の表面にカルシニューリン産生亢進を抑制する薬剤がコーティングされている。
【００１９】
（２）本発明の別の特徴は、前記ステントを血管に留置して３ヶ月後に、前記ステントと接触する血管の内膜におけるカルシニューリン発現率が２３％以下である。
【００２０】
（３）本発明の別の特徴は、前記ステントを血管に留置して３ヶ月後に、前記ステントと接触する血管の中膜におけるカルシニューリン発現率が２５％以下である。
【００２１】
（４）本発明の別の特徴は、前記ステントを血管に留置して３ヶ月後に、前記内膜におけるカルシニューリン発現抑制率が７７%以上である。
【００２２】
（５）本発明の別の特徴は、前記ステントを血管に留置して３ヶ月後に、前記中膜におけるカルシニューリン発現抑制率が６８％以上である。
【００２３】
（６）本発明の別の特徴は、前記薬剤が免疫抑制剤である。
【００２４】
（７）本発明の別の特徴は、前記免疫抑制剤が、タクロリムス、シクロスポリン、ピメクロリムスもしくはこれらのアナログのいずれかである。
【００２５】
（８）本発明の別の特徴は、前記免疫抑制剤がタクロリムスである。
【００２６】
（９）本発明の別の特徴は、前記ステントの軸方向単位長さあたりにコーティングされる前記タクロリムス重量が、６μｇ／ｍｍ以上、１５μｇ／ｍｍ以下である。
【００２７】
（１０）本発明の別の特徴は、前記薬剤と共に高分子がコーティングされている。
【００２８】
（１１）本発明の別の特徴は、前記高分子が生分解性高分子である。
【００２９】
（１２）本発明の別の特徴は、前記生分解性高分子は、体積比率で３５％のメタノールを含有し、ｐＨが３．０以上、４．０以下である緩衝液中に当該生分解性高分子を浸漬して３７℃に保持する浸漬条件下で、
（ａ）浸漬後６週間から１２週間の期間のいずれかの時点において当該生分解性高分子の重量が浸漬前の重量の５０％に減少する、および
（ｂ）浸漬後１４週間から１８週間の期間のいずれかの時点において当該生分解性高分子の重量が浸漬前の重量の１０％に減少する、
という特性を有する。
【００３０】
（１３）本発明の別の特徴は、前記生分解性高分子は、前記浸漬条件下で、さらに
（ｃ）浸漬後８週間から１０週間の期間のいずれかの時点において当該生分解性高分子の重量が浸漬前の重量の５０％に減少する、および
（ｄ）浸漬後１４週間から１６週間の期間のいずれかの時点において当該生分解性高分子の重量が浸漬前の重量の１０％に減少する、
という特性を有する。
【００３１】
（１４）本発明の別の特徴は、前記生分解性高分子は、体積比率で３５％のメタノールを含有し、ｐＨが３．０以上、４．０以下である緩衝液中に当該生分解性高分子を浸漬して３７℃に保持する浸漬条件下で、
（ｅ）前記生分解性高分子の重量から算出した重量減少率が浸漬３週間後まで１日あたり２．０％を超えない、
という特性を有する。
【００３２】
（１５）本発明の別の特徴は、前記生分解性高分子は、前記浸漬条件下で、さらに
（ｆ）前記生分解性高分子の重量から算出した重量減少率が、当該生分解性高分子が完全に分解する時点までの期間中、１日あたり２．０％を超えない、
という特性を有する。
【００３３】
（１６）本発明の別の特徴は、
（ｇ）前記ステントの軸方向単位長さあたりの当該生分解性高分子重量が２３μｇ／ｍｍ以上、２５μｇ／ｍｍ以下であり、かつ、
（ｈ）前記生分解性高分子をクロロホルムに０．５ｗｔ％から１ｗｔ％の濃度範囲内で溶解させた後、２５℃から３０℃の温度範囲内で測定した固有粘度が０．４ｄＬ／ｇ以上、０．７ｄＬ／ｇ以下である。
【００３４】
（１７）本発明の別の特徴は、前記ステント表面にコーティングされる前記薬剤／前記高分子の重量比が０．２０以上、０．７０以下であることを特徴とする。
【００３５】
（１８）本発明の別の特徴は、前記生分解性高分子が乳酸、グリコール酸、γ−ブチロラクトン、δ−バレロラクトン、ε−カプロラクトン、テトラメチレンカーボネート、ジオキサノンのいずれかからなる重合体であることを特徴とする。
【００３６】
（１９）本発明の別の特徴は、前記生分解性高分子が乳酸、グリコール酸、γ−ブチロラクトン、δ−バレロラクトン、ε−カプロラクトン、テトラメチレンカーボネート、ジオキサノンのうち、少なくとも２種類からなる共重合体であることを特徴とする。
【００３７】
（２０）本発明の別の特徴は、前記重合体がポリ乳酸である。
【００３８】
（２１）本発明の別の特徴は、ゲル浸透クロマトグラフィーにより測定した前記ポリ乳酸の標準ポリスチレン換算重量平均分子量が４０，０００以上、１００，０００以下である。
【００３９】
（２２）本発明の別の特徴は、前記共重合体が乳酸−グリコール酸共重合体である。
【００４０】
（２３）本発明の別の特徴は、ゲル浸透クロマトグラフィーにより測定した前記乳酸−グリコール酸共重合体の標準ポリスチレン換算重量平均分子量が８０，０００以上、１００，０００以下であり、前記乳酸−グリコール酸共重合体に乳酸が８０ｍｏｌ％以上、９０ｍｏｌ％以下含まれ、グリコール酸が１０ｍｏｌ％以上、２０ｍｏｌ％以下含まれる。
【００４１】
（２４）本発明の別の特徴は、前記ステントにコーティングされる前記薬剤と前記高分子が層状構造を形成する。
【００４２】
（２５）本発明の別の特徴は、前記層状構造が単層構造である。
【００４３】
（２６）本発明の別の特徴は、前記層状構造が内層および外層から構成される二層構造であり、前記内層および前記外層の両方に前記薬剤および前記高分子が含まれ、前記内層における薬剤／生分解性高分子重量比が、前記外層における薬剤／生分解性高分子重量比よりも高い。
【発明の効果】
【００４４】
本発明に係るステントにより、ステント留置後の再狭窄の発生を効率的に抑制し、ステント血栓症のような重篤な副作用を低減させる薬剤コーティングステントが容易に提供される。また、生分解性高分子を用いて薬剤をコーティングする場合であっても、生分解性高分子の分解による炎症反応を最小限に抑えることが可能になる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４５】
以下、本発明に係る「ステント」を、実施形態に基づいて説明する。実施形態の「ステント」は、ほぼ管状体に形成され、その管状体の半径方向外方に伸長可能である。
【００４６】
１．基材
本発明の実施形態としての「基材」はステントの骨格を形成するものである。例えば、筒状の材料チューブをレーザーカット等によりステントデザインにカットすることで作製可能である。
【００４７】
本発明における「基材」は生体内で実質的に非分解性の材料から構成される。本発明で用いる「生体内で実質的に非分解性の材料」とは生分解性がないことを意味するが、生体内で全く分解しないことを要求するものではない。すなわち、５年から１０年程度の長期間にわたり形状と機能を維持することが可能であれば足りるものであり、これらを含めて「生体内で実質的に非分解性の材料」と呼ぶ。
【００４８】
実施形態における「生体内で実質的に非分解性の材料」としては、ステンレススチール、Ｎｉ−Ｔｉ合金、Ｃｕ−Ａｌ−Ｍｎ合金、タンタリウム、Ｃｏ−Ｃｒ合金、イリジウム、イリジウムオキサイド、ニオブ等の金属材料、セラミックス、ハイドロキシアパタイト等の無機材料が好適に使用される。
【００４９】
ステント基材の作製は、当業者が通常作製する方法が採用可能であり、例えば、前述したとおり、筒状の材料チューブをレーザーカット等によりステントデザインにカットすることで作製できる。レーザーカット後に電解研磨を施しても良い。また、実施形態における「生体で実質的に非分解性の材料」は、金属材料あるいは無機材料に限定されず、ポリオレフィン、ポリオレフィンエラストマー、ポリアミド、ポリアミドエラストマー、ポリウレタン、ポリウレタンエラストマー、ポリエステル、ポリエステルエラストマー、ポリイミド、ポリアミドイミド、ポリエーテルエーテルケトン等の高分子材料も使用され得る。これらの高分子材料を用いたステント基材の作製方法は、本発明の効果を制限するものではなく、それぞれの材料に適した加工方法を任意に選択することができる。尚、本発明のステント基材は生体内で実質的に非分解性の材料から構成されるため、ステント基材が生分解性の材料から構成されるステントと比較した場合、十分なステント強度が長期間にわたって維持され、狭窄部分の拡張維持効果は極めて高いものとなる。
【００５０】
２．コーティング
本発明のステントは、前記基材表面の少なくとも一部にカルシニューリン産生亢進を抑制する薬剤がコーティングされていればよいが、基材の外表面、内表面および側表面のほぼ全面にコーティングされていることが好ましい。基材のほぼ全ての表面にコーティング層を有することにより、ステント留置術後に前記ステントの表面に血小板が付着しにくくなる。このような血小板の付着の抑制により、ステント留置術後の急性期における過度の血栓形成や血管の閉塞が生じる危険性を著しく低減させることができる。
【００５１】
３．薬剤
本発明に用いられる薬剤はカルシニューリン産生亢進を抑制する特性を有するものである。前記薬剤は免疫抑制剤であることが好ましく、前記免疫抑制剤はタクロリムス、シクロスポリン、ピメクロリムスもしくはこれらのアナログのいずれかであることが好ましく、タクロリムスであることが特に好ましい。これらの薬剤を使用することでカルシニューリン産生亢進を効率的に抑制させることができ、ステント留置後の再狭窄が効率よく抑制される。
【００５２】
薬剤としてタクロリムスを使用する場合、ステントの軸方向単位長さあたりにコーティングされるタクロリムス重量は、６μｇ／ｍｍ以上、１５μｇ／ｍｍ以下であることが好ましい。タクロリムス重量が６μｇ／ｍｍを超えない場合はタクロリムス重量の絶対値が小さく、再狭窄を抑制することが困難になる。一方、タクロリムス重量が１５μｇ／ｍｍを超える場合、タクロリムスを前記ステントにコーティングするために使用する生分解性高分子重量は前記ステントの軸方向単位長さあたり２３μｇ／ｍｍ以上、２５μｇ／ｍｍ以下であるため、生分解性高分子重量に対するタクロリムス重量が大きくなり、結果としてタクロリムスのステントからの溶出が速くなり好ましくない。
【００５３】
４．カルシニューリン産生亢進の抑制
本発明にかかるステントはカルシニューリン産生亢進を抑制する薬剤がコーティングされていることを特徴とするが、前記ステントを血管に留置して３ヶ月後に、前記ステントと接触する血管の内膜におけるカルシニューリン発現率が２３％以下であることが好ましい。また、前記ステントを血管に留置して３ヶ月後に、前記ステントと接触する血管の中膜におけるカルシニューリン発現率が２５％以下であることが好ましい。カルシニューリン発現率を上述の範囲とすることで、ステント留置後の再狭窄が効率よく抑制される。
【００５４】
カルシニューリン発現率の評価方法は病理学的に一般的な免疫染色を利用した方法であり、その評価方法の種類は本発明の効果を妨げるものではない。一例を挙げると、ステントを実験動物の血管に留置して３ヶ月後に、血管ごとステントを摘出し、任意の固定液に浸漬して固定する。（浸漬固定）好適な固定液として中性緩衝ホルマリン溶液が使用され得る。また、固定方法は上記の浸漬固定に限定されず、血管ごとステントを摘出する前に固定液を血管内に潅流することで固定してもよい。（潅流固定）潅流固定時に使用する固定液の種類は特に限定されないが、中性緩衝ホルマリン溶液が好適に使用される。さらに、潅流固定と浸漬固定を組み合わせて実施してもよい。定法に従い、固定後の血管をパラフィンで包埋したブロックを作製する。当該ブロックからミクロトームを用いて連続した薄切切片を２枚作製する。薄切切片作製時に血管からステントを除去しても良いし、除去しなくても構わない。ステントの除去の有無は本評価方法に影響を与えるものではない。好適な切片の厚さは１μｍから３０μｍである。
【００５５】
作製した当該切片のうちの１枚に対して定法に従い、ヘマトキシリン−エオジン染色（Ｈ．Ｅ．染色）を行う。残りの１枚に対して、カルシニューリンの抗体を使用した免疫染色を行う。Ｈ．Ｅ．染色を行った切片の染色像から、血管内膜または中膜に存在する全ての細胞数（以下、全細胞数）を顕微鏡下でカウントする。また、カルシニューリンの免疫染色を行った切片の染色像から、血管内膜または中膜に存在するカルシニューリン陽性の細胞数を顕微鏡下でカウントする。（以下、「細胞数カウント法」と呼称する。）式１に従って、血管内膜または中膜における発現率が算出される。
【００５６】
ここで血管内膜とは、一般的に三層構造を呈する動脈において、内弾性板より血管内腔側の部分に該当する。また、中膜とは、一般的に三層構造を呈する動脈において、内弾性板より外側で且つ外弾性板より内側の部分に該当する。
【００５７】
本発現率の評価方法において、実験動物として使用する動物種は問わないが、ブタの冠状動脈を使用することが好ましい。
（式１）  発現率（％）＝［（カルシニューリンの陽性細胞数）／（内膜または中膜における全細胞数）］×１００
【００５８】
また、別な方法として、得られた免疫染色像の画像から血管内膜または中膜の面積と染色部分の面積を測定する。各面積値から、式２に従ってそれぞれにおける発現率を算出してもよい。（以下、「面積測定法」と呼称する。）面積測定方法としては、コンピューターを使用した測定が好ましく市販の画像処理ソフトが使用可能であるが、好適なソフトとして、米国国立衛生研究所により開発された「ＮＩＨ  Ｉｍａｇｅ」が使用され得る。
（式２）  発現率（％）＝［（カルシニューリンの免疫染色で染色された面積）／（内膜または中膜の総面積）］×１００
【００５９】
また、本発明にかかるステントは、前記ステントを血管に留置して３ヶ月後に、前記内膜におけるカルシニューリン発現抑制率が７７%以上であることが好ましい。さらに、前記ステントを血管に留置して３ヶ月後に、前記中膜におけるカルシニューリン発現抑制率が６８％以上であることが好ましい。カルシニューリン発現抑制率を上述の範囲とすることで、ステント留置後の再狭窄が効率よく抑制される。
【００６０】
カルシニューリン発現抑制率の評価方法は本発明の効果を妨げるものではない。一例を挙げると上述した細胞数カウント法または面積測定法で内膜または中膜におけるカルシニューリン発現率を算出する。さらに、基材のみで構成されるステントを同様の方法で評価し、カルシニューリン発現率を算出する。式３に従ってカルシニューリン発現抑制率が求められる。
（式３）  発現抑制率（％）＝［１−｛（本発明にかかるステントにおける発現率）／（基材のみで構成されるステントにおける発現率）｝］×１００
【００６１】
５−１．高分子
実施形態のステントには前記薬剤と共に高分子がコーティングされていることが好ましい。高分子と共にコーティングすることにより、前記薬剤の放出が徐放化するだけでなく、ステントの拡張に伴うコーティング層の割れや剥がれの危険性を著しく低減できる。さらに、前記薬剤のみをコーティングする場合と比較して、より多くの薬剤量をコーティングすることも可能になる。尚、本願において「高分子」とは、高分子化合物を意味する。
【００６２】
前記高分子は生分解性高分子であることが好ましい。生分解性高分子を用いることでステント留置後の慢性期には前記高分子はすべて生分解により消失し、基材のみが体内に残留することになる。基材として実績のある材料、一例を挙げるとＳＵＳ３１６ＬやＣｏ−Ｃｒ合金、Ｎｉ−Ｔｉ合金を使用することにより、慢性期においても安全性ならびに信頼性の高いステントを容易に実現可能である。
【００６３】
５−２．生分解性高分子の分解特性
実施形態の生分解性高分子は、体積比率で３５％のメタノールを含有し、ｐＨが３．０以上、４．０以下である緩衝液中に当該生分解性高分子を浸漬して３７℃に保持する浸漬条件下で、以下の、（ａ）浸漬後６週間から１２週間の期間のいずれかの時点において当該生分解性高分子の重量が浸漬前の重量の５０％に減少する、（ｂ）浸漬後１４週間から１８週間の期間のいずれかの時点において当該生分解性高分子の重量が浸漬前の重量の１０％に減少する、という特性を有することが好ましい。
前記緩衝液としては、酸性リン酸緩衝液（ｐＨ３．４，ＮａＣｌ：６．１ｇ／Ｌ，ＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ：７．１ｇ／Ｌ，Ｈ３ＰＯ４：２６３μＬ／Ｌ）が用いられる。
【００６４】
上記（ａ）および（ｂ）の両方の特性を有する生分解性高分子を使用することで、ステント留置術後の生分解性高分子の分解による炎症反応を抑制できる。また、有効量の薬剤が長期にわたり溶出可能となる。
【００６５】
生分解性高分子の分解による炎症反応をより低く抑える観点からは、上記浸漬条件下で、（ｃ）浸漬後８週間から１０週間の期間のいずれかの時点において当該生分解性高分子の重量が浸漬前の重量の５０％に減少する、（ｄ）浸漬後１４週間から１６週間の期間のいずれかの時点において当該生分解性高分子の重量が浸漬前の重量の１０％に減少する、という特性を有する生分解性高分子を使用することが好ましい。
【００６６】
一方、上記（ａ）の特性を満たさない場合、すなわち、浸漬後６週間から１２週間のいずれかの期間において重量が浸漬前の５０％まで減少しない場合は有効量の薬剤の溶出が起こらず、好ましくない。また、浸漬後６週間以前に重量が浸漬前の５０％よりも少なくなる場合は、生分解性高分子の分解による炎症反応の惹起が大きくなり好ましくない。
【００６７】
さらに、上記（ａ）の特性は満たすが（ｂ）の特性を満たさない場合、すなわち、浸漬後６週間から１２週間の期間のいずれかの時点において重量が浸漬前の５０％に減少する場合であっても、浸漬後１４週間から１８週間の期間のいずれかの時点において重量が浸漬前の１０％まで減少しない場合は、有効量の薬剤の溶出が起こらず、好ましくない。また、浸漬後６週間から１２週間の期間のいずれかの時点において重量が浸漬前の５０％に減少する場合であっても、浸漬後１４週間までに重量が浸漬前の１０％よりも少なくなる場合は、生分解性高分子の分解による炎症反応の惹起が大きくなり好ましくない。
【００６８】
実施形態の生分解性高分子は、体積比率で３５％のメタノールを含有し、ｐＨが３．０以上、４．０以下である緩衝液中に当該生分解性高分子を浸漬して３７℃に保持する浸漬条件下で、以下の、（ｅ）１週間おきに測定した重量から算出した重量減少率が浸漬３週間後まで１日あたり２．０％を超えない特性を有することが好ましい。
【００６９】
浸漬３週間後まで１日あたり２．０％を超えない重量減少率を示す生分解性高分子を使用することで、ステント留置術後の生分解性高分子の分解による炎症反応を抑制できる。また、有効量の薬剤が長期にわたり溶出可能となる。浸漬２１日後まで１日あたり２．０％を超える重量減少率を示す生分解性高分子を使用すると、生分解性高分子の分解に起因する炎症反応の惹起が大きくなり好ましくない。
【００７０】
さらに、コーティング層の強度を維持したまま長期にわたって有効量の薬剤が溶出可能とする観点からは、前記生分解性高分子は、上記浸漬条件下で、（ｆ）１週間おきに測定した前記生分解性高分子の重量から算出した重量減少率が、当該生分解性高分子が完全に分解する時点までの期間中、１日あたり２．０％を超えない、という特性を有することが好ましい。また、この特性に加えて、前記生分解性高分子の重量が浸漬前の１０％に減少する特性を有することが好ましい。この特性は、「（ｆ’）生分解性高分子の重量が浸漬前の重量の１０％に減少する時点までの期間中に、常に、重量減少率が２．０％を超えない」と表現することができる。
【００７１】
上述した特性を備えることにより、生分解性高分子の生分解に伴うコーティング層の強度低下を最小限に抑制し、コーティング層の割れや剥離などの危険性を著しく低減可能である。
【００７２】
一方、重量減少率が浸漬２１日後まで１日あたり２．０％を超えない特性を有するものの、重量が浸漬前の１０％に減少するまでの間に重量減少率が２．０％を超える特性を有する生分解性高分子の場合、生分解性高分子の生分解に起因する炎症反応の惹起は抑制されるものの、コーティング層の剥離がごく軽度に見られる。
【００７３】
５−３．生分解性高分子の固有粘度とコーティング量
実施形態における前記ステントの軸方向単位長さあたりの前記生分解性高分子重量は、２３μｇ／ｍｍ以上、２５μｇ／ｍｍ以下であり、かつ前記生分解性高分子をクロロホルムに０．５ｗｔ％から１ｗｔ％の濃度範囲内で溶解させた後、２５℃から３０℃の温度範囲内で測定した固有粘度が０．４ｄＬ／ｇ以上、０．７ｄＬ／ｇ以下であることが好ましい。このようなステントを構成することにより、有効な薬剤量をできるだけ少ない重量の生分解性高分子を用いてコーティングすることが可能となる。尚、１ｄＬ＝１００ｃｍ３である。
【００７４】
前記ステントの軸方向単位長さあたりの前記生分解性高分子重量が２３μｇ／ｍｍ未満、特に１３μｇ／ｍｍ未満の場合、有効な薬剤量をコーティングするためには前記生分解性高分子重量に対して前記薬剤重量を高めに設定する必要がある。この場合、前記薬剤は前記ステントから極めて速く溶出してしまい好ましくない。また、前記生分解性高分子重量に対して前記薬剤重量を低めに設定することにより前記薬剤の溶出に徐放性を付与できるが、有効な薬剤量をコーティングすることができず好ましくない。
【００７５】
一方、前記ステントの軸方向単位長さあたりの前記生分解性高分子重量が２５μｇ／ｍｍを超える場合、特に４０μｇ／ｍｍを超える場合は、前記生分解性高分子の生分解による炎症反応が強く惹起され、前記薬剤による再狭窄抑制効果を上回るため再狭窄が生じやすく好ましくない。
【００７６】
生分解性高分子を含む一般的な高分子溶液の粘度から、当該高分子の分子量に関する情報が得られることが知られている。ウベローデ型、オストワルド型などの粘度形を用いることで高分子溶液の粘度が測定可能であり、ＡＳＴＭ  Ｄ２８５７−９５、ＡＳＴＭ  Ｄ５２２５−９８、ＡＳＴＭ  Ｄ４４５−９７、ＩＳＯ  １６２８−１などの国際規格で粘度の測定方法が定められている。
【００７７】
このように測定した高分子溶液の粘度をη、溶媒の粘度をη０とする場合、η／η０で定義される相対粘度から１を引いた値が比粘度ηｓｐと呼ばれ、（η−η０）／η０と表される。比粘度は溶媒に高分子を溶解させたことによる粘度の増加分に相当する。また、比粘度は溶解させた高分子の濃度の関数であり、比粘度を濃度ゼロに外挿して得られる値が固有粘度と呼ばれる。固有粘度は溶液中に溶解した高分子の粒径や分子量と関係付けられる値であり、固有粘度が大きいほど分子量は大きいと考えられる。
【００７８】
一般に、生分解性高分子を構成するモノマー種類および構成比率が等しい場合、分子量が大きいほど生分解速度は遅くなることが知られている。
【００７９】
本発明にかかるステントで使用される生分解性高分子はクロロホルムに０．５ｗｔ％から１ｗｔ％の濃度範囲内で溶解させた後、２５℃から３０℃の温度範囲内で測定した固有粘度が０．４ｄＬ／ｇ以上、０．７ｄＬ／ｇ以下であることが好ましい。前記固有粘度が０．４ｄＬ／ｇを下回る場合、前記生分解性高分子の分子量は比較的小さいため、前記生分解性高分子の分解速度がやや早くなる。結果として前記薬剤の溶出が比較的早くなり好ましくない。また、前記固有粘度が０．７ｄＬ／ｇを超える場合、前記生分解性高分子の分子量は比較的大きくなり、前記生分解性高分子の柔軟性が低下する。柔軟性の低下はステントの拡張に伴うコーティング層の割れや剥がれの原因となるため好ましくない。
【００８０】
５−４．生分解性高分子（重合体の例）
生分解性を示す高分子（生分解性高分子）の種類は多岐にわたるが、本発明にかかる生分解性高分子は、生分解性高分子自体の生体適合性、分解産物の安全性を考慮すると、乳酸、グリコール酸、γ−ブチロラクトン、δ−バレロラクトン、ε−カプロラクトン、テトラメチレンカーボネート、ジオキサノンのいずれかからなる重合体であることが好ましい。
【００８１】
ステントを拡張した際のコーティング層の割れや剥がれを防止する観点を考慮すると、前記重合体はポリ乳酸であることがより好ましい。
【００８２】
ポリ乳酸には、Ｄ−体の乳酸のみから構成されるポリ−Ｄ−乳酸、Ｌ−体の乳酸のみから構成されるポリ−Ｌ−乳酸、Ｄ−体の乳酸とＬ−体の乳酸から構成されるポリ−Ｄ，Ｌ−乳酸の３種類があるが、本発明の目的を達成するにはいずれのポリ乳酸でも構わない。
【００８３】
上記高分子の分子量は単分散ではなく分布があるため、分子量を表す指標として数平均分子量、重量平均分子量、Ｚ−平均分子量、粘度平均分子量など複数の指標が存在し、複数の測定法が存在する。一例を挙げると、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）で測定される分子量分布から標準ポリマー換算値として数平均分子量、重量平均分子量、Ｚ−平均分子量が求められる。希薄溶液の粘度測定からは粘度平均分子量が求められる。また、光散乱法、沈降速度法（超遠心法）では重量平均分子量が求められる。
【００８４】
前記ポリ乳酸の重量平均分子量はゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）で測定する場合、標準ポリスチレン換算値として４０，０００以上、１００，０００以下であることが好ましい。４０，０００以上、１００，０００以下のポリ乳酸を使用することで、目的とする分解特性を好適に達成できる。
【００８５】
４０，０００未満の場合は、浸漬後６週間から１２週間の期間のいずれかの時点において重量が浸漬前の５０％より少なくなるだけでなく、浸漬後１４週間から１８週間の期間のいずれかの時点において重量が浸漬前の１０％より少なくなるため好ましくない。また、浸漬２１日後までの重量減少率が１日あたり２．０％を超えてしまい、生分解性高分子の分解に起因する炎症反応の惹起が大きくなるため好ましくない。
【００８６】
１００，０００を超える場合は、浸漬後６週間から１２週間の期間のいずれかの時点において重量が浸漬前の５０％まで減少しないだけでなく、浸漬後１４週間から１８週間の期間のいずれかの時点において重量が浸漬前の１０％まで減少しないため好ましくない。また、浸漬２１日後までの重量減少率が１日あたり２．０％を超えないものの、ステントの拡張に伴うコーティング層の割れや剥離が生じやすくなり好ましくない。
【００８７】
５−５．生分解性高分子（共重合体の例）
また、本発明にかかる生分解性高分子は、生分解性高分子自体の生体適合性、分解産物の安全性を考慮すると、乳酸、グリコール酸、γ−ブチロラクトン、δ−バレロラクトン、ε−カプロラクトン、テトラメチレンカーボネート、ジオキサノンのうち、少なくとも２種類からなる共重合体であることが好ましい。
【００８８】
ステントを拡張した際のコーティング層の割れや剥がれを防止する観点を考慮すると、前記共重合体は乳酸−グリコール酸共重合体であることが好ましい。前記乳酸−グリコール酸共重合体に含まれる乳酸は、Ｄ−体の乳酸のみの場合、Ｌ−体の乳酸のみの場合、Ｄ−体の乳酸とＬ−体の乳酸の両方を含む場合があるが、本発明の目的を達成するにはいずれの乳酸を含む共重合体であってもよい。
【００８９】
前記乳酸−グリコール酸共重合体の重量平均分子量はゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）で測定する場合、標準ポリスチレン換算値として８０，０００以上、１００，０００以下であることが好ましく、且つ、前記乳酸−グリコール酸共重合体に乳酸が８０ｍｏｌ％以上、９０ｍｏｌ％以下含まれ、グリコール酸が１０ｍｏｌ％以上、２０ｍｏｌ％以下含まれることが好ましい。このような乳酸−グリコール酸共重合体を使用することで、目的とする重量変化特性を好適に達成できる。尚、前記組成は共重合体中に含まれる単量体のモル％を示す。共重合体中に含まれる単量体のモル％は１Ｈ  ＮＭＲ法を用いて測定することが可能である。
【００９０】
乳酸−グリコール酸共重合体の生分解挙動は、重量平均分子量と乳酸及びグリコール酸のモル比率によって決定される。重量平均分子量が一定の場合、乳酸が５０ｍｏｌ％、グリコール酸が５０ｍｏｌ％含まれる場合に最も分解速度が速くなり、乳酸が増加するほど、あるいはグリコール酸が増加するほど分解速度は遅くなる。また、乳酸及びグリコール酸のモル比が一定の場合、重量平均分子量が大きいほど分解速度は遅くなる。
【００９１】
乳酸−グリコール酸共重合体の重量平均分子量がゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）で測定する場合、標準ポリスチレン換算値として８０，０００以上、１００，０００以下であっても、乳酸が９０ｍｏｌ％よりも多く、グリコール酸が１０ｍｏｌ％より少ない場合には、浸漬後６週間から１２週間の期間のいずれかの時点において重量が浸漬前の５０％まで減少しないだけでなく、浸漬後１４週間から１８週間の期間のいずれかの時点において重量が浸漬前の１０％まで減少しないため好ましくない。
【００９２】
さらに、乳酸が８０ｍｏｌ％より少なく、グリコール酸が２０ｍｏｌ％より多い場合には、浸漬後６週間から１２週間の期間のいずれかの時点において重量が浸漬前の５０％より少なくなるだけでなく、浸漬後１４週間から１８週間の期間のいずれかの時点において重量が浸漬前の１０％より少なくなるため好ましくない。また、浸漬２１日後までの重量減少率が１日あたり２．０％を超えてしまい、生分解性高分子の分解に起因する炎症反応の惹起が大きくなるため好ましくない。
【００９３】
また、乳酸−グリコール酸共重合体に含まれる乳酸が８０ｍｏｌ％以上、９０ｍｏｌ％以下であり、グリコール酸が１０ｍｏｌ％以上、２０ｍｏｌ％以下であっても、重量平均分子量がゲル浸透クロマトグラフィーで測定する場合、標準ポリスチレン換算値として８０，０００未満の場合には、浸漬後６週間から１２週間の期間のいずれかの時点において重量が浸漬前の５０％より少なくなるだけでなく、浸漬後１４週間から１８週間の期間のいずれかの時点において重量が浸漬前の１０％より少なくなるため好ましくない。加えて、浸漬２１日後までの重量減少率が１日あたり２．０％を超えてしまい、生分解性高分子の分解に起因する炎症反応の惹起が大きくなるため好ましくない。
【００９４】
さらに、１００，０００を超える場合には、浸漬後６週間から１２週間の期間のいずれかの時点において重量が浸漬前の５０％まで減少しないだけでなく、浸漬後１４週間から１８週間の期間のいずれかの時点において重量が浸漬前の１０％まで減少しないため好ましくない。加えて、ステントの拡張に伴うコーティング層の割れや剥離が生じる危険性が高くなり好ましくない。
【００９５】
６−１．コーティング層（単層構造）
前記コーティング層は、層状構造からなることが好ましい。そして、該層状構造は、以下に述べるように、単層構造、あるいは多層構造とすることができる。
【００９６】
前記コーティング層が単層構造の場合、前記コーティング層に含まれる薬剤の重量を前記コーティング層に含まれる生分解性高分子の重量で割った値として定義される薬剤／生分解性高分子重量比は０．２０以上、０．７０以下であることが好ましい。０．２０を下回る場合、ステントへの薬剤保持量を高くするために必要なコーティング層の厚さが厚くなり、ステントの柔軟性が大きく低下するため好ましくない。また、０．７０を超える場合、ステント拡張時にコーティング層の割れや剥がれが生じやすくなるため好ましくない。
【００９７】
６−２．コーティング層（二層構造）
前記コーティング層は内層および外層から構成される二層構造であってよく、前記内層および前記外層の両方に薬剤を含むとともに、前記内層および前記外層のそれぞれにおいて定義される薬剤／生分解性高分子重量比が前記内層の方が高いことが好ましい。薬剤／生分解性高分子重量比の低い外層のはたらきにより、ステント拡張時のコーティング層の割れや剥がれの発生は効果的に低減される。前記内層と比較して前記外層の薬剤／生分解性高分子重量比が低いため、ステント留置初期には薬剤の溶出が徐放化される。外層の薬剤が溶出し終わった後に内層の薬剤が溶出するため、外層に含まれる生分解性高分子がバリア層の役割を果たし、薬剤／生分解性高分子重量比が比較的高い内層の薬剤に関しても溶出の徐放化が実現される。また、内層の薬剤／生分解性高分子重量比が高いため、ステント全体としての薬剤保持量を高くすることが可能である。
【００９８】
前記内層と前記外層の重量比は目的とするステントの仕様に応じて任意に決定される。例えば、薬剤保持量を高くすることに主眼を置いた仕様の場合は、前記内層の重量を前記外層に比べて高めに設定することが好ましく、薬剤溶出の徐放性付与に主眼を置いた仕様の場合は、前記外層の重量を前記内層に比べて高めに設定することが好ましい。
【００９９】
前記内層および前記外層に含まれる薬剤重量の和を前記内層および前記外層に含まれる生分解性高分子重量の和で割った値として定義される薬剤／生分解性高分子重量比は０．２０以上、０．７０以下であることが好ましい。０．２０を下回る場合、ステントへの薬剤保持量を高くするために必要なコーティング層の厚さが厚くなり、ステントの柔軟性が大きく低下するため好ましくない。また、０．７０を超える場合、ステント拡張時にコーティング層の割れや剥がれが生じやすくなるため好ましくない。
【０１００】
さらなる薬剤保持量の増加、薬剤溶出の徐放性付与、ステント拡張時のコーティング層の割れや剥がれの抑制等を目的として、前記内層および前記外層以外の層を設けてもよい。一例をあげると、ステント拡張時のコーティング層の割れや剥がれを抑制するために前記内層とステント表面の間に中間層を設けてもよい。
【０１０１】
７．コーティング層の形成方法
前記コーティング層が単層構造である場合、および前記コーティング層が内層および外層から構成される二層構造である場合のいずれであっても、各層を形成する方法は特に制限されない。
【０１０２】
以下、前記コーティング層が内層および外層をから構成される二層構造の場合を例示して詳細に説明する。
【０１０３】
コーティング層を形成する方法の好適な例として、前記内層を構成する薬剤および生分解性高分子を任意の溶媒に溶解し、溶液状態で前記ステント基材表面に付着させ溶媒を除去した後、前記外層を構成する薬剤および生分解性高分子を任意の溶媒に溶解し、溶液状態で前記内層の外面に付着させ溶媒を除去する方法が挙げられる。
【０１０４】
また、前記内層を構成する薬剤および生分解性高分子からなるフィルムを別途作製しステント基材に貼り付けた後、前記外層を構成する薬剤および生分解性高分子からなるフィルムを別途作製し前記内層の外面に貼り付けてもよい。
【０１０５】
もちろん、前記内層を構成する薬剤および生分解性高分子を任意の溶媒に溶解し、溶液状態で前記ステント基材表面に付着させ溶媒を除去した後、前記外層を構成する薬剤および生分解性高分子からなるフィルムを別途作製し前記内層の外面に貼り付けることで形成してもよく、前記内層を構成する薬剤および生分解性高分子からなるフィルムを別途作製しステント基材に貼り付けた後、前記外層を構成する薬剤および生分解性高分子を任意の溶媒に溶解し、溶液状態で前記内層の外面に付着させ溶媒を除去することで形成してもよい。前記内層および前記外層を形成する方法によって本発明の効果は制限されるものではなく、各種の方法が好適に使用できる。
【０１０６】
前記内層および前記外層を構成する生分解性高分子および薬剤を任意の溶媒に溶解し溶液状態で付着させる場合、その方法は本発明の効果を制限するものではない。つまり、各溶液にステント基材をディッピングする方法、各溶液をスプレーによりステント基材に噴霧する方法等の各種の方法が使用可能である。使用する溶媒の種類は特に限定されない。所望の溶解度を有する溶媒が好適に使用可能であり、揮発性等を調整するために２種類以上の溶媒を用いた混合溶媒としてもよい。また、溶質である薬剤や生分解性高分子の濃度も特に制限を受けず、前記内層および前記外層の表面性等を勘案して任意の濃度とすることができる。前記表面性を調整するために、前記内層を構成する薬剤および生分解性高分子を任意の溶媒に溶解し溶液状態で付着させる途中または／および付着させた後、あるいは前記外層を構成する薬剤および生分解性高分子を任意の溶媒に溶解し溶液状態で付着させる途中または／および付着させた後に余剰な溶液を除去してもよい。除去する手段としては、振動、回転、減圧等が挙げられ、これらを複数組み合わせてもよい。
【実施例】
【０１０７】
以下の各実施例および各比較例では、カルシニューリン産生亢進を抑制する薬剤としてタクロリムスを例示して説明する。ただし、タクロリムス以外の上述の薬剤、または免疫抑制剤を使用してもよい。
【０１０８】
（実施例１）
（生分解性高分子：乳酸−グリコール酸共重合体（製品番号：８５ＤＧ０６５、標準ポリスチレン換算重量平均分子量８５，０００、固有粘度０．６ｄＬ／ｇ）、コーティング層：多層）
【０１０９】
ステント基材は、当業者が通常作製する方法と同様に、ステンレス鋼（ＳＵＳ３１６Ｌ）の内径１．５０ｍｍ、外径１．８０ｍｍの筒状チューブをレーザーカットによりクローズドタイプのステントデザインにカットし、電解研磨を施すことで作製した。ステント長さが１３ｍｍ、厚みが１２０μｍ、拡張後の公称径が３．５ｍｍとなるデザインとした。ステント基材の内表面、外表面、側表面を合わせた全表面積は８８．５ｍｍ２である。
【０１１０】
生分解性高分子として乳酸−グリコール酸共重合体（製品番号：８５ＤＧ０６５、Ａｂｓｏｒｂａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社、乳酸／グリコール酸＝８５ｍｏｌ％／１５ｍｏｌ％、標準ポリスチレン換算重量平均分子量８５，０００）、薬剤としてタクロリムス（アステラス製薬株式会社）をクロロホルム（和光純薬株式会社）に溶解させ、薬剤濃度／生分解性高分子濃度＝０．５０ｗｔ％／０．５０ｗｔ％である溶液を作製した。直径１００μｍのステンレス製ワイヤをステントの一端に固定し、他端を直径２ｍｍのステンレス棒に固定した。ステントを接続していない側のステンレス棒端部をモーター攪拌機に接続することでステントを長さ方向に鉛直に保持した。モーター攪拌機を用いてステントを１００ｒｐｍで回転させながら、ノズル径０．３ｍｍのスプレーガンを用いて作製した溶液をステントに吹き付け、溶液をステントに付着させた。スプレーガンのノズルからステントまでの距離は７５ｍｍ、吹き付け時のエアー圧力は０．１５ＭＰａとした。吹き付け後に室温で１時間真空乾燥した。スプレー時間を調整し、ステント１個あたりの生分解性高分子の重量が１６０μｇ、薬剤の重量が１６０μｇの内層（薬剤／生分解性高分子重量比＝１．００）を形成させた。
【０１１１】
生分解性高分子として乳酸−グリコール酸共重合体（製品番号：８５ＤＧ０６５、Ａｂｓｏｒｂａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社、乳酸／グリコール酸＝８５ｍｏｌ％／１５ｍｏｌ％、標準ポリスチレン換算重量平均分子量８５，０００）、薬剤としてタクロリムス（アステラス製薬株式会社）をクロロホルム（和光純薬株式会社）に溶解させ、薬剤濃度／高分子濃度＝０．１３ｗｔ％／０．５０ｗｔ％である溶液を作製した。内層を形成させたステントの一端に直径１００μｍのステンレス製ワイヤを固定し、他端を直径２ｍｍのステンレス棒に固定した。ステントを接続していない側のステンレス棒端部をモーター攪拌機に接続することでステントを長さ方向に鉛直に保持した。モーター攪拌機を用いてステントを１００ｒｐｍで回転させながら、ノズル径０．３ｍｍのスプレーガンを用いて作製した溶液をステントに吹き付け、溶液をステントに付着させた。スプレーガンのノズルからステントまでの距離は７５ｍｍ、吹き付け時のエアー圧力は０．１５ＭＰａとした。吹き付け後に室温で１時間真空乾燥した。スプレー時間を調整し、ステント１個あたりの生分解性高分子の重量が１３９μｇ、薬剤の重量が３６μｇの外層（薬剤／生分解性高分子重量比＝０．２６）を形成させた。
【０１１２】
得られたステント１個あたりの内層と外層を合わせた全体の生分解性高分子の重量は２９９μｇ、薬剤の重量は１９６μｇ（薬剤／生分解性高分子重量比＝０．６６）である。ステントは計５個作製した。
【０１１３】
（実施例２）
（生分解性高分子：乳酸−グリコール酸共重合体（製品番号：８５ＤＧ０６５、標準ポリスチレン換算重量平均分子量８５，０００、固有粘度０．６ｄＬ／ｇ）、コーティング層：単層）
ステント基材は、実施例１と同様に作製した。
【０１１４】
生分解性高分子として乳酸−グリコール酸共重合体（製品番号：８５ＤＧ０６５、Ａｂｓｏｒｂａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社、乳酸／グリコール酸＝８５ｍｏｌ％／１５ｍｏｌ％、標準ポリスチレン換算重量平均分子量８５，０００）、薬剤としてタクロリムス（アステラス製薬株式会社）をクロロホルム（和光純薬株式会社）に溶解させ、薬剤濃度／生分解性高分子濃度＝０．１３ｗｔ％／０．５０ｗｔ％である溶液を作製した。直径１００μｍのステンレス製ワイヤをステントの一端に固定し、他端を直径２ｍｍのステンレス棒に固定した。ステントを接続していない側のステンレス棒端部をモーター攪拌機に接続することでステントを長さ方向に鉛直に保持した。モーター攪拌機を用いてステントを１００ｒｐｍで回転させながら、ノズル径０．３ｍｍのスプレーガンを用いて作製した溶液をステントに吹き付け、溶液をステントに付着させた。スプレーガンのノズルからステントまでの距離は７５ｍｍ、吹き付け時のエアー圧力は０．１５ＭＰａとした。吹き付け後に室温で１時間真空乾燥した。スプレー時間を調整し、ステント１個あたりの生分解性高分子の重量が３２５μｇ、薬剤の重量が８５μｇのコーティング層（薬剤／生分解性高分子重量比＝０．２６）を形成させた。ステントは計５個作製した。
【０１１５】
（実施例３）
（生分解性高分子：ポリ−Ｄ，Ｌ−乳酸（製品番号：１００Ｄ０４０、標準ポリスチレン換算重量平均分子量４０，０００、固有粘度０．４ｄＬ／ｇ）、コーティング層：単層）
生分解性高分子としてポリ−Ｄ，Ｌ−乳酸（製品番号：１００Ｄ０４０、Ａｂｓｏｒｂａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社、標準ポリスチレン換算重量平均分子量４０，０００）を使用した以外は実施例２と同様に作製し、ステント１個あたりの生分解性高分子の重量が３１３μｇ、薬剤の重量が８２μｇのコーティング層（薬剤／生分解性高分子重量比＝０．２６）を形成させた。ステントは計５個作製した。
【０１１６】
（実施例４）
（生分解性高分子：ポリ−Ｄ，Ｌ−乳酸（製品番号：１００Ｄ０６５、標準ポリスチレン換算重量平均分子量８６，０００、固有粘度０．７ｄＬ／ｇ）、コーティング層：単層）
生分解性高分子としてポリ−Ｄ，Ｌ−乳酸（製品番号：１００Ｄ０６５、Ａｂｓｏｒｂａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社、標準ポリスチレン換算重量平均分子量８６，０００）を使用した以外は実施例２と同様に作製し、ステント１個あたりの生分解性高分子の重量が３２２μｇ、薬剤の重量が８４μｇのコーティング層（薬剤／生分解性高分子重量比＝０．２６）を形成させた。ステントは計５個作製した。
【０１１７】
（比較例１）
ステント基材のみから構成されるステントを４個用意した。
【０１１８】
（重量変化試験（薬剤なし））
重量変化試験として、以下に説明するように上記の各例で使用した生分解性高分子を用いたステントを作製した。ただし、上記各例とは異なり薬剤は用いていない。
【０１１９】
ステント基材は、実施例１と同様のものを使用した。実施例１から実施例４の作製に使用した３種類の生分解性高分子のそれぞれをクロロホルム（和光純薬株式会社）に溶解させ、生分解性高分子＝０．５０ｗｔ％の溶液を３種類作製した。直径１００μｍのステンレス製ワイヤをステントの一端に固定し、他端を直径２ｍｍのステンレス棒に固定した。ステントを接続していない側のステンレス棒端部をモーター攪拌機に接続することでステントを長さ方向に鉛直に保持した。
【０１２０】
モーター攪拌機を用いてステントを１００ｒｐｍで回転させながら、ノズル径０．３ｍｍのスプレーガンを用いて作製した３種類の溶液をそれぞれ別のステントに吹き付け、溶液をステントに付着させた。スプレーガンのノズルからステントまでの距離は７５ｍｍ、吹き付け時のエアー圧力は０．１５ＭＰａとした。吹き付け後に室温で１時間真空乾燥した。スプレー時間を調整し、ステントに生分解性高分子のみを含むコーティング層を形成させた。
【０１２１】
ステント１個あたりの生分解性高分子の重量は、８５ＤＧ０６５で３０５μｇ、１００Ｄ０４０で４００μｇ、１００Ｄ０６５で４２０μｇである。ステントは各生分解性高分子に対して３個ずつ作製した。
【０１２２】
３５ｖｏｌ％メタノールを含有する酸性リン酸緩衝液（ｐＨ３．４，ＮａＣｌ：６．１ｇ／Ｌ，ＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ：７．１ｇ／Ｌ，Ｈ３ＰＯ４：２６３μＬ／Ｌ）１００ｍＬに各ステント１個を浸漬させ、３７℃水浴中で振盪させた。この浸漬条件下にて、一定時間経過後に緩衝液から各ステントを引き上げ、蒸留水で洗浄した。その後、室温で真空乾燥させ、生分解性高分子の重量を測定した。測定後のサンプルは元の緩衝液に浸漬し、３７℃水浴中での浸漬を継続した。浸漬前の重量と比較して、重量の残存率を算出した。また、任意の測定日における１日あたりの重量減少率も合わせて算出した。結果を表１に示す。なお、重量の残存率測定は振盪開始１日後、３日後、７日後に行い、７日後以降は７日おきに実施し、１日あたりの重量減少率測定は振盪開始から７日ごとに実施した（１週間間隔で測定）。結果を表２に示す。
重量の残存率（％）＝［（浸漬前の重量−真空乾燥後の重量）／（浸漬前の重量）］×１００
１日あたりの重量減少率（％）＝（７日前の重量の残存率−測定日における重量の残存率）／７
【０１２３】
【表１】
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【０１２４】
【表２】
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【０１２５】
表１に示すように本発明にかかる実施例１から実施例４で使用されている生分解性高分子（製品番号：８５ＤＧ０６５、１００Ｄ０４０、１００Ｄ０６５）は浸漬後６週間から１２週間の期間のいずれかの時点において重量が浸漬前の５０％に減少し、浸漬後１４週間から１８週間の期間のいずれかの時点において重量が浸漬前の１０％に減少する特性を有することが示された。
【０１２６】
また、表１および表２を参照すると、本発明にかかる実施例１から実施例４で使用されている生分解性高分子（製品番号：８５ＤＧ０６５、１００Ｄ０４０、１００Ｄ０６５）は、１週間おきに測定した重量から算出した重量減少率が浸漬２１日後まで１日あたり２．０％を超えない特性を有することが示された。さらに、実施例１および実施例２で使用されている生分解性高分子（製品番号：８５ＤＧ０６５）は、重量減少率が、浸漬の開始時から少なくとも１４０日後の期間中、常に、１日あたり２．０％を超えずに重量が浸漬前の１０％に減少する特性を有している。この結果に基づけば、一般的には、生分解性高分子（製品番号：８５ＤＧ０６５）は、その生分解性高分子が完全に分解する時点（残存率０％の時点）までの期間中、常に、重量減少率が１日あたり２．０％を超えないものと推測される。
【０１２７】
（ステント拡張試験）
実施例１から実施例４の各ステントを１個ずつ使用して、ステント拡張試験を実施した。（比較例１は基材のみのステントであるため、試験を実施していない。）３７℃に保持した生理食塩水中で３．５×１５ｍｍのバルーンカテーテルのバルーン部分に保持させたステントを３．５ｍｍになるように拡張した。拡張後にバルーンカテーテルをステントから抜去した。拡張したステントを生理食塩水中から取り出し、蒸留水で洗浄後に真空乾燥させた。走査型電子顕微鏡（Ｓ−３０００Ｎ、株式会社日立ハイテクノロジーズ）を用いて、コーティング層の割れや剥離の有無を評価した。結果を表３に示す。
【０１２８】
【表３】
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【０１２９】
実施例１および実施例２ではコーティング層の割れや剥離は全く認められなかった。また、実施例３および実施例４ではコーティング層の割れがごく軽度に認められたものの、剥離には至らなかった。
【０１３０】
（カルシニューリン発現率および発現抑制率の評価）
後述のミニブタへの留置実験で取得したステント留置冠動脈サンプル（１０％中性緩衝ホルマリン溶液中で浸漬固定済）１個を用いて、パラフィンで包埋したブロックを作製した。当該ブロックより、肉厚５μｍの薄切切片を連続で２枚取得した。取得に際し、ステントを切片から除去した。作製した当該切片の１枚に対して、Ｈ．Ｅ．染色を行い、もう１枚に対してカルシニューリンの抗体を使用した免疫染色を行った。それぞれの染色像をもとに血管内膜または中膜に存在する全細胞数、およびカルシニューリン陽性の細胞数を顕微鏡下でカウントし、発現率を式４から算出した。結果を表４に示す。また、基材のみのステント（比較例１）における発現率をもとに実施例１から４における発現抑制率を式５から算出した。結果を表５に示す。
（式４）  発現率（％）＝［（カルシニューリン陽性細胞数）／（内膜または中膜における全細胞数）］×１００
（式５）  発現抑制率（％）＝［１−｛（各実施例における発現率）／（比較例１における発現率）｝］×１００
【０１３１】
【表４】
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【０１３２】
【表５】
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【０１３３】
表４に示すように、実施例１から４におけるカルシニューリン発現率は内膜において２３％以下、中膜において２５％以下であるのに対し、基材のみのステントである比較例１では内膜において９８％、中膜において７８％と高い値を示した。また、表５に示すように実施例１から４におけるカルシニューリン発現抑制率は内膜において７６％以上、中膜において６８％以上の値を示した。実施例１から４における低いカルシニューリン発現率および高いカルシニューリン発現抑制率はタクロリムスの効果によりカルシニューリンの産生亢進が抑制されているためと考えられる。
【０１３４】
（ミニブタへの留置実験）
実施例１から実施例４および比較例１の各ステントを用いて、ミニブタ（クラウン、雌、月齢８から１２ヶ月）へのステント留置実験を実施し、血管閉塞率の評価を行った。全てのステントはあらかじめバルーンサイズが３．５×１５ｍｍのバルーンカテーテルのバルーン部分に保持させた状態でＥＯＧ滅菌を行った。
【０１３５】
麻酔下でミニブタの右大腿動脈に６Ｆｒのシースイントロデューサーを挿入し、シースから挿入した６Ｆｒのガイディングカテーテルの先端を左冠状動脈入口部にエンゲージさせた。ガイディングカテーテル経由で左冠状動脈前下行枝および左冠状動脈回旋枝へとステントをデリバリーした後、拡張・留置した。ガイディングカテーテルおよびシースを抜去した後、右大腿動脈を結紮し止血した。ステントを留置する部分は血管径が約２．８０ｍｍの部位とし、ステント拡張径を３．５０ｍｍとすることで留置部分におけるステント径／血管径の比を約１．２５とした。血管径２．８０ｍｍの部位が選定できない場合には、ステントを拡張・留置する際のバルーンの拡張圧力を変化させ、ステント径／血管径の比を約１．２５とするように調整した。本実験においては、ステントの内径をステント拡張径と定義した。血管径および血管走行上の問題により、左冠状動脈前下行枝あるいは左冠状動脈回旋枝にステントの拡張・留置が困難と判断された場合にはその部分へのステント留置を取りやめ、追加的に右冠状動脈に留置した。実施例および比較例のいずれもｎ＝４で留置実験を行った。ミニブタは１０頭使用し、１頭あたり２個のステントを留置した。
【０１３６】
留置実験を実施する前日より剖検日まで、アスピリン３３０ｍｇ／ｄａｙ、チクロピジン２５０ｍｇ／ｄａｙを混餌投与した。留置３ヶ月後にミニブタを安楽死させ心臓を摘出した。ステントを留置した冠状動脈を心臓より摘出し、１０％中性緩衝ホルマリン溶液中で浸漬固定した。固定した標本のうち３つについてポリメタクリル酸メチル系の樹脂を用い、樹脂包埋を行った。引き続いて、ミクロトームを用いて各ステントの中央部の薄切切片を作製し、Ｈ．Ｅ．染色（ヘマトキシリン・エオジン染色）、およびＥ．Ｖ．Ｇ．染色（エラスチカ・ワン・ギーソン染色）を行い、拡大観察を実施した。なお、切片作製時にはステントごと薄切し、ステントを切片から除去しなかった。評価項目として、各ステント断面の血管内腔面積（ＬＡ：Ｌｕｍｅｎ  Ａｒｅａ）、血管内弾性板内側面積（ＩＥＬＡ：Ａｒｅａ  ｗｉｔｈｉｎ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｅｌａｓｔｉｃ  Ｌａｍｉｎａ）を測定した。血管内腔面積（ＬＡ）および血管内弾性板内側面積（ＩＥＬＡ）を用いて各サンプルの血管閉塞率を次式に従い算出した。ｎ＝３の閉塞率の平均値を測定値とした。結果を表６に示す。
血管閉塞率（％）＝［１−（ＬＡ／ＩＥＬＡ）］×１００
【０１３７】
【表６】
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【０１３８】
表６に示すように実施例１から４では、血管閉塞率が４０％を下回っており、良好な開存性が認められた。染色切片を詳細に検討した結果、生分解性高分子の分解に起因すると判断される炎症を示唆する所見は認められなかった。
【０１３９】
また、表４および表６より、カルシニューリン発現率と血管閉塞率、カルシニューリン発現抑制率と血管閉塞率の間に相関が見られることから、ステント留置後の再狭窄においてもカルシニューリンの産生亢進が重要な役割を担っていることが強く示唆された。