(57)【要約】【課題】原生動物に対する感染を防御できる組成物を提供する。【解決手段】腐植土の水性溶媒抽出物を有効成分として含む、原生動物、ことにトリパノソーマ・ブルセイに対する感染防御用組成物により、上記の課題を解決する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
腐植土の水性溶媒抽出物を有効成分として含む、原生動物、ことにトリパノソーマ・ブルセイに対する感染防御用組成物。
【請求項２】
前記トリパノソーマ・ブルセイが、トリパノソーマ・ブルセイ・ブルセイ又はトリパノソーマ・ブルセイ・ガンビエンセである請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
腐植土の水性溶媒抽出物が、ｐＨ２．０〜３．０であり、ミネラルとしてカルシウム、鉄、ナトリウム、マグネシウム、アルミニウムおよびケイ素を含有し、硫黄を１０００〜１２００ｐｐｍ含有する請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
腐植土の水性溶媒抽出物が、
（１）腐植土と水性溶媒の混合物を、ｐＨが２．８以下、電気伝導度が４００ｍＶ以上になるまで攪拌および静置を繰り返し、
（２）固形物を除去し、
（３）得られた上清を周囲温度で長期間静置する
工程により得られるものである請求項１〜３のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項５】
組成物に対して、１〜２０重量％の腐植土の水性溶媒抽出物を含有する請求項１〜４のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１つに記載の組成物をヒト以外の動物に投与することからなる、原生動物、ことにトリパノソーマ・ブルセイに対する感染防御方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、原生動物、ことにトリパノソーマ・ブルセイに対する感染防御用組成物、及びトリパノソーマ・ブルセイに対する感染防御方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
腐植土とよばれる土壌は、湿地帯や海底から得られ、動植物プランクトンの遺体などが堆積し、その組織的形状がみられない状態まで腐植されたものであることが知られている。腐植土にはフルボ酸、フミン酸や各種のミネラルが多く含まれている。また、腐植土から抽出された抽出物は殺菌作用を有することが知られており、従来、殺菌消臭剤などとして用いられていた（例えば、特許文献１〜６）。
【０００３】
また、腐植土の水性溶媒抽出物を含む組成物は、抗癌性を有すること（特許文献７）や魚類の細菌病、真菌病及びウイルス病に対する感染防御を増強できること（特許文献８）が知られている。
【特許文献１】特開平７−４９２号公報
【特許文献２】特開平１０−５９８６１号公報
【特許文献３】特開平１１−２９４２３号公報
【特許文献４】特開平５−１９２６６６号公報
【特許文献５】特開平６−８７７５２号公報
【特許文献６】特開昭６３−８４６１８号公報
【特許文献７】特開２００６−１１１５３７号公報
【特許文献８】特開２００６−１０９７０９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明者らは、今回、腐植土の水性溶媒抽出物を含む組成物をマウスに投与した後に、マウスを原生動物、ことにトリパノソーマ・ブルセイ（Trypanosoma brucei）で攻撃しても、マウスが該原生動物に感染しないことを見出し、本発明を完成した。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
よって、本発明は、腐植土の水性溶媒抽出物を有効成分として含む、原生動物、ことにトリパノソーマ・ブルセイに対する感染防御用組成物を提供する。
また、本発明は、上記の組成物をヒト以外の動物に投与することからなる、原生動物、ことにトリパノソーマ・ブルセイに対する感染防御方法を提供する。
【発明の効果】
【０００６】
本発明の組成物を用いることにより、原生動物、ことにトリパノソーマ・ブルセイへの感染、ひいては該原生動物への感染に起因する感染症の発症を抑制できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明の組成物は、原生動物、ことにトリパノソーマ・ブルセイに対する感染防御用組成物である。トリパノソーマ・ブルセイには、トリパノソーマ・ブルセイ・ブルセイ（Trypanosoma brucei brucei）及びトリパノソーマ・ブルセイ・ガンビエンセ（Trypanosoma brucei gambiense）が含まれる。
【０００８】
本発明において、腐植土の水性溶媒抽出物は、腐植土を水性溶媒で抽出して得られるものである。
腐植土とは、動植物プランクトンの遺体が堆積して微生物による分解を受けて生成した腐植物質を主体とするものである。この腐植物質は、微生物による分解、代謝などが繰り返されて形成されたものであり、種々の有機物、ミネラルなどを含むことが知られている。
本発明において用いられる腐植土は特に限定されないが、湿地帯の土壌表面から５〜３０ｍに存在する土壌、海底表面から０．５〜２５０ｍに存在する土壌などを好ましく用いることができる。
【０００９】
上記の水性溶媒としては、水；希塩酸のような酸性水溶液；水性エタノールのような水性アルコールを用いることができる。水は、塩素を除去したものが好ましい。塩素を除去する方法としては特に限定されないが、常温で数日間放置する方法、アスコルビン酸などの還元剤を用いる方法、活性炭などの吸着剤を用いる方法などが挙げられる。水性溶媒のｐＨは特に限定されないが、ｐＨ６．０〜８．０の範囲のものが好ましく、より好ましくはｐＨ６．３〜７．５の範囲である。
【００１０】
腐植土の水性溶媒抽出物を得る方法は特に限定されないが、以下の工程（１）〜（３）を含む方法が好ましい。
（１）腐植土と水性溶媒との混合物を、ｐＨが２．８以下、電気伝導度が４００ｍＶ以上になるまで攪拌および静置を繰り返し、
（２）固形物を除去し、
（３）得られた上清を周囲温度で長期間静置する。
【００１１】
上記の工程（１）では、まず、水槽などの容器中で、腐植土に対して５〜１０倍量（重量比）の水性溶媒を攪拌しながら腐植土に加えて、懸濁物を得る。
次いで、得られた懸濁物を周囲温度で処理する。本明細書において、周囲温度とは、２０〜４５℃、好ましくは２５〜４０℃、より好ましくは２８〜３５℃の温度である。
上記の処理は、攪拌および静置を繰り返すことにより行うのが好ましい。攪拌は、容器の底部に沈殿した腐植土が水性溶媒中に拡散される程度に行えばよく、連続的または断続的のいずれであってもよい。この処理は、懸濁物を静置して得られた上清のｐＨが２．８以下、電気伝導度が約４００ｍＶ以上および温度が２８℃以上の状態が１週間以上続くまで行うことが好ましい。このような状態は、通常、腐植土と水性溶媒とを混合してから約３〜５週間で得ることができる。この工程においては、所望により窒素源、リン源等の栄養源を添加することができる。
【００１２】
工程（２）において固形物を除去する方法としては、腐植土と液体とを分離して腐植土を除去することができる方法であれば特に限定されないが、静置、遠心分離などにより行うことができる。静置する方法は、懸濁物を２５〜３５℃で１５０〜２４０時間程度静置して腐植土を沈殿させた後に、上清だけを取得する。より確実に固形物を除去するために、さらに布などを用いて浮遊物を除去してもよい。このようにして得られる上清は、ｐＨ２．５〜３．０程度である。
【００１３】
工程（３）は、得られた上清を周囲温度で長期間静置することにより行われる。長期間とは、１８０〜５００日間程度であればよく、好ましくは３００〜４００日間程度である。この放置の間、温度は一定であってもよいし、変動してもよい。通常、２５〜３５℃の温度で３０〜６０日保持し、５〜１５℃の温度で３０〜６０日保持すると、ヒト以外の動物用飼料に用いるのにより好ましい腐植土の水性溶媒抽出物を得ることができる。
【００１４】
上記の静置により得られた液を、さらにろ過してもよい。ろ過は、液中の浮遊物を除去できる程度であればよく、例えば孔径４０〜１００μｍ、および１０〜４０μｍの２種類のメンブレンフィルターを用いて行うことができる。
【００１５】
上記の方法により得られる腐植土の水性溶媒抽出物は、ｐＨ２．０〜３．０、および電気伝導度が３５０〜５００ｍＶの薄茶色の実質的に無臭の液体である。
また、この腐植土の水性溶媒抽出物は、凍結乾燥後の重量が、腐植土の水性溶媒抽出物１００ｍｌあたり０．５〜１ｇであり、ＤＡＸ−８樹脂カラムを通して吸着される成分（フルボ酸）の凍結乾燥後の重量が、腐植土の水性溶媒抽出物１００ｍｌあたり０．００１ｇ以下である。
【００１６】
上記の腐植土の水性溶媒抽出物は、１リットル中に以下の各成分を含有するものが好ましい。
カルシウム            ２００〜３００ｐｐｍ
硫黄              １０００〜１５００ｐｐｍ
鉄                        １０〜５０ｐｐｍ
亜鉛                        １〜８ｐｐｍ
銅                      ０．１〜１ｐｐｍ
ナトリウム              ８０〜１００ｐｐｍ
マンガン                  ５〜１０ｐｐｍ
マグネシウム            ８０〜１００ｐｐｍ
アルミニウム          ３００〜４００ｐｐｍ
ケイ素                    ３０〜４０ｐｐｍ
ニッケル                  ０．１〜１ｐｐｍ
ストロンチウム            ０．５〜５ｐｐｍ
イットリウム              ０．１〜１ｐｐｍ
リチウム                  ０．１〜１ｐｐｍ
【００１７】
さらに、上記の腐植土の水性溶媒抽出物は、ホウ素、ランタン、スカンジウム、セレンなどを微量含むことができる。
これらの各成分は、高周波誘導分析装置（ＩＣＰ）を用いて測定することができる。
【００１８】
上記の腐植土の水性溶媒抽出液は、上記の方法により製造した後、適当な容量になるまで濃縮して用いることができる。濃縮の程度としては、水分が残存していれば特に限定されず、例えば濃縮前の容量の９０％以下、好ましくは８０％以下、より好ましくは７０％以下になるまで濃縮して用いることができる。
【００１９】
上記の腐植土の水性溶媒抽出液は、そのままの状態で、濃縮して、または適当な媒体で希釈して、本発明の組成物とすることができる。希釈に用いる媒体としては、人体に無害であり、本発明の組成物の効果を損なわないものであれば特に限定されず、水を用いることが好ましい。
【００２０】
本発明の組成物には、食品、医薬品などに通常用いられる保存剤（例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル、ソルビン酸）、着色剤、香料などの添加物を添加することができる。
【００２１】
本発明の組成物の摂取量としては、該組成物がヒトを含む動物に対して無害であるので特に限定されないが、該組成物として１日当たり体重１ｋｇ当たり５〜１０ｍＬ程度摂取すれば、原生動物に対する感染を防御し、健康を維持増進することができる。
【００２２】
本発明の組成物を医薬として用いる場合は、そのままの状態で、濃縮して、または適当な媒体で希釈して、液剤の形態で使用することができる。
【００２３】
上記の医薬製剤は通常の医薬液剤に添加される添加剤を含んでいてもよい。そのような添加剤としては、医薬的に許容される添加剤、例えば懸濁化剤（例えばソルビトール、シロップ、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン水添加食用脂）、乳化剤（例えばレシチン、ソルビタンモノオレエートまたはアラビアゴム）、非水性賦形剤（例えばアーモンド油、分画ココヤシ油またはグリセリン、プロピレングリコールまたはエチルアルコールのようなアルコール類の油性エステル）、保存剤、着色剤または香料などが挙げられる。
【００２４】
本発明の組成物を含む食品としては、特に限定されず、通常の食品のほか、通常の食品より積極的な意味での保健、健康維持・増進などを目的とする食品、例えば健康食品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメントまたは特定保健用食品などが挙げられる。
このような保健、健康維持・増進などを目的とする食品としては、例えば液体または半固形もしくは固形の製品、具体的には散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤などの形態が挙げられるが、特に液体の形態が好ましい。
【００２５】
通常の食品としては、例えば飲料類（コーヒー、ジュース、茶飲料のような清涼飲料、
乳飲料、乳酸菌飲料、炭酸飲料など）；発酵食品類（パン、味噌など）；麺類（うどん、パスタなど）；菓子類（ゼリー、ようかん、ヨーグルトなど）；加工品類（スープ、カレー、牛丼、雑炊、味噌汁など）；調味料類（ドレッシング、旨味調味料など）が挙げられる。
本発明の組成物を含む通常の食品は、上記のような食品の製造工程において、あるいは最終製品に、本発明の組成物を混合または塗布、噴霧などにより添加して製造することができる。
【００２６】
本発明の組成物は、動物に投与することにより、原生動物、ことにトリパノソーマ・ブルセイに対する感染を防御することができる。よって、上記の組成物を動物に投与することからなる、原生動物、ことにトリパノソーマ・ブルセイに対する感染防御方法も、本発明の一つである。
上記の組成物を投与する方法としては、経口投与、腹腔内投与などが挙げられ、経口投与が好ましい。
【００２７】
本発明の方法において、動物とは、ヒトを含む哺乳類（例えばヒト、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ウマ、ウシ、イヌ、ネコなど）、鳥類及び魚類を意味することを意図する。
【００２８】
上記の方法において、上記の組成物は、例えば体重１ｋｇ当たり５〜１０ｍＬ／日程度投与することが好ましい。
【実施例】
【００２９】
＜腐植土の水性溶媒抽出液の製造方法＞
長崎県の土壌表面から２０ｍの地点で採取した腐植土に、ｐＨ６．５の脱塩素水を攪拌しながら添加し、周囲温度で３０日間、１日に２回攪拌しながら放置した。その後、この懸濁物を静置して上清を得て、これを布でろ過して浮遊物を除き、周囲温度で３６５日間静置した。なお、この期間の周囲温度の最高温度は３０℃、最低温度は１０℃であった。得られた上清を孔径５０μｍおよび２５μｍのハウジング式フィルター（キュノ社製）でろ過して、腐植土の水性溶媒抽出液を得た。得られた腐植土の水性溶媒抽出液のｐＨは２．８±０．０５（堀場製作所社製のｐＨ計９６２０型で測定）であり、電気伝導度は４００ｍＶ以上（堀場製作所社製の電気伝導度測定計９３８２−１０Ｄ型で測定）であった。また、得られた腐植土の水性溶媒抽出液１００ｍｌ当たりの凍結乾燥重量は０．６５ｇであり、ＤＡＸ−８樹脂カラム（スペルコ社製）に吸着した成分の凍結乾燥後の重量は、０．０００２ｇであった。
この腐植土の水性溶媒抽出液を高周波誘導分析装置（ＩＣＰ、パーキンエルマー社製）により測定した結果を、表１に示す。
【００３０】
【表１】
2008195668.tif 000002
【００３１】
実施例１
上記のようにして得られた腐植土の水性溶媒抽出液（以下、腐植土抽出液という）を、塩素除去水道水中にそれぞれ１、２、３、４又は６容量％となるように希釈する。対照として、腐植土抽出液を添加しない塩素除去水道水（水道水）を用いた。
８週齢のＢＡＬＢ／ｃマウス（１群に６〜２０匹のマウス、雌雄同数、平均体重２０ｇ）に、腐植土抽出液の希釈液又は水道水を自由に摂取させ、２１日間飼育した。
各群のマウスに、Trypanosoma brucei bruceiを１０匹（１．０×１０1／０．１ｍＬ−リン酸生理食塩ショ糖（ＰＳＧ）緩衝液）、腹腔内注射して攻撃した。各群のマウスの生死を２０日間観察した。なお、観察期間中も、腐植土抽出液の希釈液又は水道水を自由に摂取させた。
【００３２】
トリパノソーマで攻撃してから２０日後の各群のマウスの生存率を、図１に示す。対照群と、各濃度の腐植土抽出液希釈液投与群との有意差を、カイ二乗検定により算出した。
また、対照群及び各濃度の腐植土抽出液希釈液投与群のマウスの平均死亡日数を次の表２に示す。
【００３３】
【表２】
2008195668.tif 000003
【００３４】
図１及び表1の結果から、腐植土抽出液の希釈液を投与することにより、マウスにおけるTrypanosoma brucei bruceiへの感染を防ぐことができたことがわかる。
【００３５】
比較例１
腐植土の一成分であることが知られているフルボ酸をマウスに投与したときに、Trypanosoma brucei bruceiへの感染を防ぐことができるかについて調べた。
リン酸緩衝食塩水に溶解した精製フルボ酸（佐賀大学理工学部  宮島教授調製）を、１回の投与当たり２００μｇで、８週齢のＢＡＬＢ／ｃマウス（１群に８匹のマウス、雌雄同数、平均体重２０ｇ）に腹腔内注射により与えた。
精製フルボ酸の投与は、１０匹のTrypanosoma brucei brucei（１．０×１０1／０．１ｍＬ−ＰＳＧ緩衝液）を腹腔内注射することによる攻撃の６日前と２日前、及び攻撃後２日目と６日目に行った（図２）。対照群のマウス（ｎ＝１０）には、フルボ酸を加えていないリン酸緩衝食塩水を同様にして投与した。
【００３６】
Trypanosoma brucei bruceiでの攻撃後、各群のマウスの生死を観察した。生存率を算出した結果を図３に示す。
この結果から、精製フルボ酸を投与しても、マウスにおけるTrypanosoma brucei bruceiへの感染を防ぐ効果が見られないことがわかる。
【００３７】
実施例２
実施例１と同様の実験を、攻撃する原生動物としてTrypanosoma brucei gambienseを用いて行った。すなわち、実施例１の実験と同様に、腐植土抽出液の３％希釈液をマウス（ｎ＝６、雌雄同数）に２１日間摂取させた。対照群のマウス（ｎ＝６）には、水道水を与えた。次いで、１０匹のTrypanosoma brucei gambiense（１．０×１０1／０．１ｍＬ−ＰＳＧ緩衝液）を腹腔内注射することによりマウスを攻撃した。
【００３８】
トリパノソーマで攻撃した後の各群のマウスの生存率を、図４に示す。腐植土抽出液の３％希釈液を与えたマウスの平均死亡日数は２２．４日（対照群に対してｐ＜０．０１）であり、対照群のマウスの平均死亡日数は７．３日であった。
【００３９】
実施例３
腐植土抽出液の希釈液をマウスに与える期間がマウスの生存率に与える影響を調べるために、次の実験を行った。
実施例１において、Trypanosoma brucei bruceiの腹腔内注射による攻撃の２１日前、１０日前、５日前又は０日前に腐植土抽出液の３％希釈液をマウスに与える以外は実施例１と同様にして実験を行った。対照群のマウスには、Trypanosoma brucei bruceiの腹腔内注射による攻撃の２１日前から水道水を与えた。
【００４０】
これらの各群のマウスの生存率を図５に示す。腐植土抽出液の３％希釈液を、攻撃の２１日前から与えたマウスの生存率が最も高かったことがわかる。
【００４１】
以上のことから、腐植土抽出液を含む組成物を動物に投与することにより、トリパノソーマへの感染を防ぐことができることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】腐植土抽出液又は水道水を２１日間投与したマウス（ｎ＝６〜２０）の、トリパノソーマでの攻撃後２１日の生存率を示すグラフである。
【図２】比較例１の精製フルボ酸の投与実験における投与計画である。
【図３】精製フルボ酸（ｎ＝８）又は水道水（ｎ＝１０）を投与したマウスの、トリパノソーマでの攻撃後１２日間の生存率を示すグラフである。
【図４】腐植土抽出液又は水道水を２１日間投与したマウス（ｎ＝６）の、トリパノソーマでの攻撃後２０日間での生存率を示すグラフである。
【図５】トリパノソーマでの攻撃前にマウスに腐植土抽出液を与える期間が、マウスの生存率に与える影響を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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