(57)【要約】【課題】好ましい物理化学的特性を有する、新規かつ有用なコンブレタスタチンＡ−４プロドラッグ塩を提供すること。【解決手段】本発明によって、新規かつ有用なコンブレタスタチンＡ−４ホスフェートプロドラッグのモノ−およびジ−有機アミン塩、モノ−およびジ−アミノ酸塩、ならびにモノ−およびジ−アミノ酸エステル塩が提供され、これはコンブレタスタチンＡ−４の溶解度を増加し、正常な生理学的条件下で、インビボでコンブレタスタチンＡ−４を容易に再生し、そしてこれはコンブレタスタチンＡ−４の再生の結果として生理学的に許容されるプロドラッグを生成する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本実施例に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、米国出願番号第６０／２３２，５６８号（２０００年９月１４日出願）および米国出願番号第６０／２５１，６２１号（２０００年１２月７日出願）に優先権を主張する（これら仮出願の両方は、本明細書中でその全体が参考として援用される）。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、新規かつ有用なコンブレタスタチンＡ−４（ＣＡ４）ホスフェートプロドラッグモノおよびジアミン塩、モノおよびジアミノ酸塩、およびモノおよびジアミノ酸エステル塩に関し、これらの塩は、ネイティブなコンブレタスタチンＡ−４より大きな溶解度を有し、そして生理学的条件下でコンブレタスタチンＡ−４を迅速に再生する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
癌は、重篤かつ拡張する疾患である。Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅは、米国のみにおいて、３人のうちの１人が、その生涯の間に癌に罹患すると推定している。さらに、癌に罹患した人々の約５０％〜６０％が、最終的にこの疾患により死亡する。従って、１９７０年代初期のＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅの設立以来、癌研究に向かう資金の量が劇的に増加した。
【０００４】
癌は、単一の疾患であると一般に考えられるが、これは実質的に、疾患のファミリーを含み、ここで、正常な細胞分化が、それが異常でかつ制御されないように改変されている。その結果、これらの悪性細胞は、急速に増殖する。最終的に、細胞は、それらの起源から広がりまたは転移し、そして他の組織に定着し、最終的に宿主を殺す。現在観察される広範な種々の癌に起因して、種々のストラテジーが、身体内の癌を破壊するために、開発されている．１つのこのような方法は、細胞傷害性化学療法剤を使用する。これらの化合物は、悪性細胞を破壊する目的で癌患者に投与されるが、正常な健康な細胞には影響を及ぼさない。このような化合物の特定の例としては、５−フルオロウラシル、シスプラチン、およびメトトレキサートが挙げられる。
【０００５】
コンブレタスタチンＡ−４は、最初に、アフリカ木ｃｏｍｂｒｅｔｕｍ  ｃａｆｆｒｕｍ（Ｃｏｍｂｒｅｔａｃｅａｃ）の茎木材から単離され、そしてミクロブロブリンアセンブリの強力なインヒビターであることが見出された。さらに、コンブレタスタチンＡ−４は、米国Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＣＩ）のマウスＬ１２１０およびＰ３３８リンパ性白血病細胞株に対して有意に活性であることが見出された。さらに、コンブレタスタチンＡ−４は、コンブレタスタチンＡ−１（チューブリンに結合するコルヒチンのインヒビターとして、ｃｏｍｂｒｅｔｕｍ  ｃａｆｆｒｕｍから単離された別の化合物）と競合することが見出された。これはまた、ＶｏＬｏ、ＤＬＤ−１およびＨＣＴ−１５ヒト結腸癌（ＥＤ50＜０．０１（μｇ／ｍｌ））細胞系列を強力に抑制し、そしてＣｏｍｂｒｅｔｕｍ  ｃａｆｆｒｕｍ成分の中から見出された強力な抗有糸分裂薬の１つであることが決定された（米国特許第４，９９６，２３７号）。
【０００６】
その結果、種々のヒト癌を治療する際の化学治療剤としてのコンブレタスタチンＡ−４の効力を決定するために、研究が、実施された。不運にも、コンブレタスタチンＡ−４は、実質的に水中で不溶性である。この特性は、コンブレタスタチンＡ−４を含む薬学的組成物の開発を有意に妨害する。その溶解度およびその効力を増加させるために、生理学的条件でコンブレタスタチンＡ−４を再生するコンブレタスタチンＡ−４のプロドラッグ誘導体を生成するための努力がなされている。例えばＫｏｊｉ  Ｏｈｓｕｍｉらは、コンブレタスタチンアナログのアミノ酸ＨＣｌプロドラッグの合成を記述し、ここで、アミノ酸塩は、塩基性アミノ基を含むコンブレタスタチン誘導体のアミノ基に結合される［これらの誘導体は、Ｏｈｓｕｍｉら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，１４，５３９−５４８（１９９９）に記述される］。このようなプロドラッグは、ネイティブなコンブレタスタチンＡ−４と比較して増加した溶解度を有し得るが、それらは、コンブレタスタチンＡ−４の再生がこのプロドラッグが投与される被験体の血液中の内因性アミノペプチダーゼに依存するという固有の制限を有する。
【０００７】
コンブレタスタチンＡ−４ホスフェートの遊離酸（「ＣＡＰ遊離酸」）は以下の構造：
【０００８】
【化１５】
2008195740.tif 000002
を有し、油状塊として存在する。このＣＡ４Ｐ遊離酸は、元来、水中で２５℃で非常に少ししか溶解せず（ＵＳＰの規定による）、水での溶解度は、ｐＨの増加と共に増加する。これは、２つの酸性基（１．２および６．２のｐＫaを有する）を有し、これらは、塩形成を可能にする。その物理的状態に起因して、ＣＡ４Ｐ遊離酸を取り扱う実際的な問題が存在するので、この化合物の結晶状態の、安定な塩形態の同定が所望される。
【０００９】
コンブレタスタチンＡ−４を誘導体化する際の試みは、コンブレタスタチンＡ−４ホスフェートの塩誘導体（「ＣＡ４Ｐ」の塩誘導体）を形成することに関係する。このような塩の特定の例は、特許文献１に記載される。これらのプロドラッグ塩は、ネイティブのコンブレタスタチンＡ−４より大きな溶解度を有するが、これらはまた、吸湿性のような固有の欠点を有し得る。
【００１０】
吸湿性は、塩の選択におけるいくつかの重要な基準の１つである。Ｋ．Ｍｏｒｒｉｓら、「Ａｎ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｏｐｔｉｍａｌ  Ｓａｌｔ  Ｆｏｒｍ  ｆｏｒ  ａ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｎｄｉｄａｔｅ」Ｉｎｔ．Ｊ  Ｐｈａｒｍ．，１０５，２０９−２１７（１９９４）を参照のこと。任意の薬物物質についての吸湿性の程度は、その取り扱いおよび薬物の寿命にわたる安定性に対する有意な影響を有する。
【特許文献１】米国特許第５，５６１，１２２号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
従って、必要とされるのは、好ましい物理化学的特性を有する、新規かつ有用なコンブレタスタチンＡ−４プロドラッグ塩であり、そしてこれは、広範な種々の腫瘍性障害を処置する際の、コンブレタスタチンＡ−４の溶解度、好ましくは効力を増加させる。
【００１２】
また必要とされるのは、インビボでネイティブなコンブレタスタチンＡ−４を容易に再生し、そして再生を受ける場合に、所望されないまたは潜在的に有害な副産物を生成しない、新規で有用なコンブレタスタチンＡ−４プロドラッグ塩である。
【００１３】
本明細書中の任意の参考文献の引用は、このような参考文献が、本願発明に対する「先行技術」として利用可能であるという承認として解釈されるべきではない。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
（発明の要旨）
本発明に従って、新規かつ有用なコンブレタスタチンＡ−４ホスフェートプロドラッグのモノ−およびジ−有機アミン塩、モノ−およびジ−アミノ酸塩、ならびにモノ−およびジ−アミノ酸エステル塩が提供され、これらの塩は、ネイティブなコンブレタスタチンＡ−４よりも大きな溶解度を有し、そしてコンブレタスタチンＡ−４をインビボで容易に再生する。本発明はまた、従来公知のコンブレタスタチンＡ−４プロドラッグ塩よりも有意に低吸湿性（例えば、温度および湿度の環境条件下で、物理的形態における有意な変化を起こさない）で、改善された取り扱いおよび安定性を有する化合物を提供し、そしてこの化合物は、注入部位での痛みを最小化または排除するｐＨで溶液を形成し得る。従って、本発明の化合物は、薬学的使用について相当な利点を提供する。
【００１５】
本発明は、以下を提供する。
（項目１）  式Ｉ：
【化１】
2008195740.tif 000003
の一般構造を有する化合物であって、ここで：
−ＯＲ1または−ＯＲ2のうち１つは−Ｏ-ＱＨ+であり、もう１つはヒドロキシルまたは−Ｏ-ＱＨ+であり；そして
Ｑは、
（Ａ）プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する少なくとも１つの窒素原子を含む有機アミン；
（Ｂ）少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であって、該窒素原子の１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、アミノ酸；または
（Ｃ）１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であって、ここで該窒素原子のうちの１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、該アミノ酸の全てのカルボン酸基がエステルの形態である、アミノ酸、
である、化合物。
（項目２）  Ｑが、少なくとも１つの窒素原子を含む有機アミンであり、該窒素原子が、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、項目１に記載の化合物。
（項目３）  前記式Ｉにおいて前記四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成するＱの窒素が、必要に応じて置換された脂肪族基に結合した一級アミン、または必要に応じて置換された２つの脂肪族基に結合した二級アミンであり、ここで、該任意の置換基は、１つ以上のヒドロキシルまたはアミノ基である、項目２に記載の化合物。
（項目４）  前記有機アミンが、トロメタミン、ジエタノールアミン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、エチレンジアミン、または２−（４−イミダゾリル）エチルアミンである、項目２に記載の化合物。
（項目５）  前記化合物が、式Ｉａ：
【化２】
2008195740.tif 000004
の構造を有する、項目２に記載の化合物。
（項目６）  Ｑが、少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であり、ここで該窒素原子のうちの１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、項目１に記載の化合物。
（項目７）  前記アミノ酸がヒスチジンである、項目６に記載の化合物。
（項目８）  前記アミノ酸がリジンである、項目６に記載の化合物。
（項目９）  前記アミノ酸がアルギニンである、項目６に記載の化合物。
（項目１０）  前記アミノ酸がトリプトファンである、項目６に記載の化合物。
（項目１１）  前記アミノ酸がオルニチンである、項目６に記載の化合物。
（項目１２）  前記化合物が、式Ｉｃ：
【化３】
2008195740.tif 000005
の構造を有する、項目６に記載の化合物。
（項目１３）  前記化合物が、式Ｉｄ：
【化４】
2008195740.tif 000006
の構造を有する、項目６に記載の化合物。
（項目１４）  Ｑが、１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であり、ここで、該窒素原子の１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、該アミノ酸の全てのカルボン酸基がエステル形態である、項目１に記載の化合物。
（項目１５）  Ｑが、グリシンＣ1-6アルキルエステルである、項目１４に記載の化合物。
（項目１６）  薬学的組成物であって、以下：
（ａ）式Ｉ：
【化５】
2008195740.tif 000007
の一般構造を有する化合物であって、ここで：
−ＯＲ1または−ＯＲ2のうち１つは−Ｏ-ＱＨ+であり、もう１つはヒドロキシルまたは−Ｏ-ＱＨ+であり；そして
Ｑは、
（Ａ）プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する少なくとも１つの窒素原子を含む有機アミン；
（Ｂ）少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であって、該窒素原子の１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、アミノ酸；または
（Ｃ）１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であって、ここで該窒素原子のうちの１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、該アミノ酸の全てのカルボン酸基がエステルの形態である、アミノ酸、
である化合物、および
（ｂ）その薬学的に受容可能なキャリア、
を含む、薬学的組成物。
（項目１７）  Ｑが、少なくとも１つの窒素原子を含む有機アミンであり、該窒素原子が、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、項目１６に記載の薬学的組成物。
（項目１８）  前記式Ｉにおいて四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する前記Ｑの窒素が、必要に応じて置換された脂肪族基に結合した一級アミン、または必要に応じて置換された２つの脂肪族基に結合した二級アミンであり、ここで、該必要に応じた置換基は、１つ以上のヒドロキシルまたはアミノ基である、項目１７に記載の薬学的組成物。
（項目１９）  前記有機アミンが、トロメタミン、ジエタノールアミン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、エチレンジアミン、または２−（４−イミダゾリル）エチルアミンである、項目１７に記載の薬学的組成物。
（項目２０）  前記式Ｉの化合物が、以下の式Ｉａの構造：
【化６】
2008195740.tif 000008
を有する、項目１７に記載の薬学的組成物。
（項目２１）  ｐＨが、水酸化ナトリウム以外の薬剤で調整される、項目１７に記載の薬学的組成物。
（項目２２）  Ｑが、少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であり、ここで該窒素原子のうちの１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、項目１６に記載の薬学的組成物。
（項目２３）  前記アミノ酸がヒスチジンである、項目２２に記載の薬学的組成物。
（項目２４）  前記アミノ酸がリジンである、項目２２に記載の薬学的組成物。
（項目２５）  前記アミノ酸がアルギニンである、項目２２に記載の薬学的組成物。
（項目２６）  前記アミノ酸がトリプトファンである、項目２２に記載の薬学的組成物。
（項目２７）  前記アミノ酸がオルニチンである、項目２２に記載の薬学的組成物。
（項目２８）  前記式Ｉの化合物が、以下のＩｃの構造：
【化７】
2008195740.tif 000009
を有する、項目２２に記載の薬学的組成物。
（項目２９）  前記式Ｉの化合物が、以下のＩｄの構造：
【化８】
2008195740.tif 000010
を有する、項目２２に記載の薬学的組成物。
（項目３０）  Ｑが、１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であり、ここで、該窒素原子の１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、該アミノ酸の全てのカルボン酸基がエステル形態である、項目１６に記載の薬学的組成物。
（項目３１）  Ｑが、グリシンＣ1-6アルキルエステルである、項目３０に記載の薬学的組成物。
（項目３２）  動物における腫瘍の増殖または転移を調節する方法であって、該方法は、以下の式Ｉ：
【化９】
2008195740.tif 000011
の一般構造を有する化合物の該調節のための有効量を投与する工程を包含し、ここで：
−ＯＲ1または−ＯＲ2のうち１つは−Ｏ-ＱＨ+であり、もう１つはヒドロキシルまたは−Ｏ-ＱＨ+であり；そして
Ｑは、
（Ａ）プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する少なくとも１つの窒素原子を含む有機アミン；
（Ｂ）少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であって、該窒素原子の１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、アミノ酸；または
（Ｃ）１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であって、ここで該窒素原子のうちの１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、該アミノ酸の全てのカルボン酸基がエステルの形態である、アミノ酸、
である、方法。
（項目３３）  Ｑが、少なくとも１つの窒素原子を含む有機アミンであり、該窒素原子が、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、項目３２に記載の方法。
（項目３４）  前記式Ｉにおいて四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する前記Ｑの窒素が、必要に応じて置換された脂肪族基に結合した一級アミン、または必要に応じて置換された２つの脂肪族基に結合した二級アミンであり、ここで、該必要に応じた置換基は、１つ以上のヒドロキシルまたはアミノ基である、項目３３に記載の方法。
（項目３５）  前記有機アミンが、トロメタミン、ジエタノールアミン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、エチレンジアミン、または２−（４−イミダゾリル）エチルアミンである、項目３３に記載の方法。
（項目３６）  前記式Ｉの化合物が、以下の式Ｉａの構造：
【化１０】
2008195740.tif 000012
を有する、項目３３に記載の方法。
（項目３７）  Ｑが、少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であり、ここで該窒素原子のうちの１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、項目３２に記載の方法。
（項目３８）  前記アミノ酸がヒスチジンである、項目３７に記載の方法。
（項目３９）  前記アミノ酸がリジンである、項目３７に記載の方法。
（項目４０）  前記アミノ酸がアルギニンである、項目３７に記載の方法。
（項目４１）  前記アミノ酸がトリプトファンである、項目３７に記載の方法。
（項目４２）  前記アミノ酸がオルニチンである、項目３７に記載の方法。
（項目４３）  Ｑが、１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であり、ここで、該窒素原子の１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、該アミノ酸の全てのカルボン酸基がエステル形態である、項目３２に記載の方法。
（項目４４）  Ｑが、グリシンＣ1-6アルキルエステルである、項目４３に記載の方法。
（項目４５）  組成物であって、以下：
（ａ）以下の構造：
【化１１】
2008195740.tif 000013
を有するＣＡ４Ｐ遊離酸；および
（ｂ）化合物Ｑであって、ここでＱは、
（Ａ）プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し得る、少なくとも１つの窒素原子を含む有機アミン；
（Ｂ）少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であって、該窒素原子の１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、アミノ酸；または
（Ｃ）１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であって、ここで該窒素原子のうちの１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、該アミノ酸の全てのカルボン酸基がエステルの形態である、アミノ酸、
である、化合物Ｑ、
を含む化合物の混合によって形成される、組成物。
（項目４６）  Ｑが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し得る少なくとも１つの窒素原子を含む有機アミンである、項目４５に記載の組成物。
（項目４７）  薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、項目４６に記載の組成物。
（項目４８）  Ｑがトロメタミンである、項目４６に記載の組成物。
（項目４９）  Ｑが、少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であり、ここで該窒素原子のうちの１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し得る、項目４５に記載の組成物。
（項目５０）  薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、項目４９に記載の組成物。
（項目５１）  Ｑがヒスチジンである、項目４９に記載の組成物。
（項目５２）  Ｑがリジンである、項目４９に記載の組成物。
（項目５３）  Ｑがアルギニンである、項目４９に記載の組成物。
（項目５４）  Ｑがトリプトファンである、項目４９に記載の組成物。
（項目５５）  Ｑがオルニチンである、項目４９に記載の組成物。
（項目５６）  Ｑが、１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であり、ここで、該窒素原子の１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、該アミノ酸の全てのカルボン酸基がエステル形態である、項目４５に記載の組成物。
（項目５７）  薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、項目５６に記載の組成物。
（項目５８）  Ｑが、グリシンＣ1-6アルキルエステルである、項目５６に記載の組成物。
（項目５９）  項目１に記載の化合物を調製するためのプロセスであって、溶媒中で、以下の構造：
【化１２】
2008195740.tif 000014
を有するＣＡ４Ｐ遊離酸を、有機アミンＱと接触させる工程を包含し、ここで、Ｑは、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し得る少なくとも１つの窒素原子を含む有機アミンである、プロセス。
（項目６０）  前記項目１に記載の化合物が、前記溶媒から結晶形態で沈殿する、項目５９に記載のプロセス。
（項目６１）  前記ＣＡ４Ｐ遊離酸が、前記溶媒としての水性イソプロパノール中でトロメタミンと接触され、続いて、該溶媒から結晶形態でＣＡ４Ｐモノトロメタミン塩を回収する、項目５９に記載のプロセス。
（項目６２）  項目１に記載の化合物を調製するためのプロセスであって、溶媒中で、以下の構造：
【化１３】
2008195740.tif 000015
を有するＣＡ４Ｐ遊離酸をアミノ酸Ｑと接触させる工程を包含し、ここで、Ｑが、少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であり、ここで該窒素原子のうちの１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し得る、プロセス。
（項目６３）  前記項目１に記載の化合物が、前記溶媒から結晶形態で沈殿する、項目６２に記載のプロセス。
（項目６４）  前記ＣＡ４Ｐ遊離酸が、前記溶媒としてのイソプロパノール中でヒスチジンと接触され、続いて、該溶媒から結晶形態でＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン塩を回収する、項目６２に記載のプロセス。
（項目６５）  項目１に記載の化合物を調製するためのプロセスであって、溶媒中で、以下の構造：
【化１４】
2008195740.tif 000016
を有するＣＡ４Ｐ遊離酸を化合物Ｑと接触させる工程を包含し、ここで、Ｑが、１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であって、ここで該窒素原子のうちの１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、該アミノ酸の全てのカルボン酸基がエステル形態である、プロセス。
（項目６６）  前記ＣＡ４Ｐ遊離酸が、グリシンＣ1-6アルキルエステルと接触される、項目６５に記載のプロセス。
（項目６７）  化合物ＣＡ４Ｐモノトロメタミン。
（項目６８）  化合物ＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン。
（項目６９）  化合物ＣＡ４ＰグリシンＣ1-6アルキルエステル。
【００１６】
概して、本発明は、以下の式Ｉ：
【００１７】
【化１６】
2008195740.tif 000017
の一般構造を有する化合物まで拡張し、ここで、−ＯＲ1または−ＯＲ2のうち１つは−Ｏ-ＱＨ+であり、もう１つはヒドロキシルまたは−Ｏ-ＱＨ+であり；そしてＱは、
（Ａ）プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する少なくとも１つの窒素原子を含む有機アミン；
（Ｂ）少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であって、この窒素原子の１つは、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、アミノ酸；または
（Ｃ）１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であって、ここでこの窒素原子のうちの１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、このアミノ酸の全てのカルボン酸基がエステルの形態であるアミノ酸、である。
【００１８】
本出願を通して、−ＯＲ1および−ＯＲ2の両方が−Ｏ-ＱＨ+である場合、Ｑは、好ましくは、−ＯＲ1基および−ＯＲ2基の両方において、同一である。
【００１９】
Ｑが定義（Ａ）の場合、本明細書中の用途を有する好ましい有機アミンは、トロメタミンである（すなわち、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、本明細書中では「ＴＲＩＳ」と省略する）。
【００２０】
式Ｉのトロメタミン塩は、以下の式ＩａおよびＩｂ：
【００２１】
【化１７】
2008195740.tif 000018
によって図示され、これらは、それぞれ式Ｉのモノトロメタミン塩およびジトロメタミン塩を表す。式Ｉａのモノトロメタミン塩が好ましい。
【００２２】
Ｑが定義（Ｂ）の場合、少なくとも２つの窒素原子を有する任意のアミノ酸が、本明細書中の用途を有する。このアミノ酸の窒素のいずれか（例えば、このアミノ酸側鎖上の任意の窒素またはα−アミノ基の窒素）が、式Ｉの四級アンモニウムカチオンを形成し得る。本明細書中での用途を有するアミノ酸としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：オルニチン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、トリプトファンなど。
【００２３】
Ｑが定義（Ｂ）の場合、本明細書中の用途を有する好ましいアミノ酸は、ヒスチジンである。例えば、ヒスチジン側鎖のイミダゾール基の窒素、またはヒスチジンのα−アミノ基の窒素のいずれかは、式Ｉの四級アンモニウムカチオンを形成し得る。容易に明らかなように、イミダゾール基の芳香族特性に起因して、このヒスチジン側鎖のイミダゾール基の窒素のいずれかが、式（Ｉ）の構造を形成し得る。式Ｉの好ましいモノヒスチジン構造は、以下の式ＩｃまたはＩｄ：
【００２４】
【化１８】
2008195740.tif 000019
に図示される。
【００２５】
Ｑが定義（Ｃ）の場合、例えば、グリシンが挙げられるがこれらに限定されない任意のアミノ酸が、本明細書中での用途を有する。好ましいエステルは、メチルエステルまたはエチルエステルのようなアルキルエステルである。
【００２６】
さらに、本発明は、以下を含む薬学的組成物まで拡張する：
（ａ）式Ｉ：
【００２７】
【化１９】
2008195740.tif 000020
の一般構造を有する化合物であって、ここで、
−ＯＲ1または−ＯＲ2のうち１つは−Ｏ-ＱＨ+であり、もう１つはヒドロキシルまたは−Ｏ-ＱＨ+であり；そしてＱは、
（Ａ）プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する少なくとも１つの窒素原子を含む有機アミン；
（Ｂ）少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であって、この窒素原子の１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、アミノ酸；または
（Ｃ）１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であって、ここでこの窒素原子のうちの１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、このアミノ酸の全てのカルボン酸基がエステルの形態である、アミノ酸、
である化合物、および
（ｂ）その薬学的に受容可能なキャリア。
【００２８】
このような薬学的組成物において用途を有する本発明の化合物の特定の例は、上記に記載される。さらに、任意の適切な薬学的に受容可能なキャリアは、本発明の薬学的組成物における用途を有する。特定の例は、以下に記載される。本発明の薬学的組成物の特定の実施形態は、有機アミンがトロメタミンである本発明の化合物を含み、そしてこれは、好ましくは、以下の式ＩａまたはＩｂ、最も好ましくはＩａ：
【００２９】
【化２０】
2008195740.tif 000021
の構造を有するトロメタミン塩である。
【００３０】
本発明の薬学的組成物の別の特定の実施形態は、このアミノ酸がヒスチジンである本発明の化合物を含み、そしてこれは、好ましくは以下の式ＩｃまたはＩｄ：
【００３１】
【化２１】
2008195740.tif 000022
の構造を有するモノヒスチジン塩である。
【００３２】
当然、このような薬学的組成物は、その薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む。
【００３３】
加えて、本発明はさらに、本発明の塩を含む組成物まで拡張する。特に、本発明の組成物は、以下を含む化合物の混合によって形成され得る：
（ａ）以下の構造：
【００３４】
【化２２】
2008195740.tif 000023
を有するＣＡ４Ｐ遊離酸；および
（ｂ）化合物Ｑであって、ここでＱは、
（Ａ）プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し得る、少なくとも１つの窒素原子を含む有機アミン；
（Ｂ）少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であって、この窒素原子の１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、アミノ酸；または
（Ｃ）１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であって、ここでこの窒素原子のうちの１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、このアミノ酸の全てのカルボン酸基がエステルの形態である、アミノ酸、
である、化合物Ｑ。
【００３５】
必要に応じて、本発明の組成物は、薬学的に受容可能なキャリアをさらに含み得る。
【００３６】
さらに、Ｑが定義（Ａ）の場合、本明細書中で規定される任意の有機アミンが、本発明の組成物における用途を有する。特定の例として、トロメタミン、ジエタノールアミン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、エチレンジアミン、および２−（４−イミダゾリル）エチルアミンが挙げられるがこれらに限定されない。Ｑが定義（Ｂ）の場合、少なくとも２つの窒素原子を有する任意のアミノ酸が、本発明の組成物における用途を有する。特定の例としては、オルニチン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、トリプトファンなどが挙げられる。Ｑが定義（Ｃ）の場合、本明細書中で規定される任意のアミノ酸エステルが、本発明の組成物における用途を有する。特定の例としては、グリシンが挙げられる。
【００３７】
別の実施形態において、本発明は、動物における腫瘍の増殖または転移を調節する方法まで拡張し、この方法は、以下の一般構造：
【００３８】
【化２３】
2008195740.tif 000024
を有する化合物の、調節に有効な量を投与する工程を包含し、ここで、
−ＯＲ1または−ＯＲ2のうち１つは−Ｏ-ＱＨ+であり、もう１つはヒドロキシルまたは−Ｏ-ＱＨ+であり；そして
Ｑは、
（Ａ）プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する少なくとも１つの窒素原子を含む有機アミン；
（Ｂ）少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であって、この窒素原子の１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、アミノ酸；または
（Ｃ）１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であって、ここでこの窒素原子のうちの１つが、プロトンと一緒になって四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、このアミノ酸の全てのカルボン酸基がエステルの形態である、アミノ酸、
である。
【００３９】
特定の実施形態において、本発明は、動物における腫瘍の増殖または転移を調節する方法まで拡張し、この方法は、この有機アミンがトロメタミンである化合物の、調節に有効な量を投与する工程を包含し、そしてこの化合物は、好ましくは以下の式ＩａまたはＩｂ、最も好ましくはＩａ：
【００４０】
【化２４】
2008195740.tif 000025
の構造を有するトロメタミン塩である。
【００４１】
別の特定の実施形態において、本発明は、動物における腫瘍の増殖または転移を調節する方法まで拡張し、この方法は、このアミノ酸がヒスチジンである化合物の、調節に有効な量を投与する工程を包含し、そしてこの化合物は、好ましくは以下の式ＩｃまたはＩｄ：
【００４２】
【化２５】
2008195740.tif 000026
の構造を有するモノヒスチジン塩である。
【００４３】
従って、本発明は、新規かつ有用なコンブレタスタチンＡ４ホスフェートプロドラッグのモノ−およびジ−有機アミン塩、モノ−およびジ−アミノ酸塩、ならびにモノ−およびジ−アミノ酸エステル塩を提供し、これらの塩は、ネイティブなコンブレタスタチンＡ−４よりも水溶液により可溶性である。従って、この薬物の効果は、増加され得る。
【００４４】
本発明はまた、コンブレタスタチンＡ４ホスフェートプロドラッグのモノ−およびジ−有機アミン塩、モノ−およびジ−アミノ酸塩、ならびにモノ−およびジ−アミノ酸エステル塩を提供し、これらの塩は、インビボでコンブレタスタチンＡ−４を容易に再生し、そしてこれらの塩は、解離の際に、生理学的に許容される副産物として、有機アミン、アミノ酸またはアミノ酸エステルを遊離する。
【００４５】
この最も好ましい実施形態において、本発明は、式Ｉａの構造を有する抗脈管、抗腫瘍剤コンブレタスタチンＡ−４ホスフェートプロドラッグの、新規な結晶性１：１トロメタミン（ＴＲＩＳ）塩を提供する。この化合物は、リン酸エステルプロドラッグ塩であり、ここで、このホスフェート部位は、生理学的条件下で脱リン酸を起こして、活性薬物部分コンブレタスタチンＡ−４を得る（以下に述べるように、コンブレタスタチンＡ−４の核のフェニル部分を架橋するオレフィン基は、ｃｉｓ立体配置である；コンブレタスタチンＡ−４ホスフェートの好ましいモノＴＲＩＳ塩のオレフィン基は、同様にｃｉｓ立体配置である）。ＣＡ４Ｐの１：１（モノ）ＴＲＩＳ塩は、良好な固体状態特性を示し、そしてこれは予想外に、実質的に非吸湿性である。これらおよび他の有利な性質によって、ＣＡ４ＰのＴＲＩＳ塩は、薬学的投薬処方物のための好ましい化合物となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、驚くべきことにかつ予期せず、モノおよびジ有機アミン、モノおよびジアミノ酸、モノおよびジアミノ酸エステル、コンブレタスタチンＡ−４ホスフェートプロドラッグ塩（これは、ネイティブのコンブレタスタチンＡ−４の溶解度に比較してインビボで増加した溶解度を有し、生理学的条件下でコンブレタスタチンＡ−４コンブレタスタチンＡ−４を容易に再生し、そして再生の間に生理学的に許容性の有機アミン、インビボで容易に代謝される生理学的に許容性アミノ酸またはアミノ酸エステルを生成する）が、形成され得るという発見に基づく。
【００４７】
該して、本発明は、以下の一般構造：
【００４８】
【化２６】
2008195740.tif 000027
を有する、化合物に関し、ここで：
−ＯＲ1または−ＯＲ2のうちの１つは、−Ｏ-ＱＨ+であり、そして他方はヒドロキシルまたは−Ｏ-ＱＨ+であり；そしてＱは、
（Ａ）プロトンと一緒になって、四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する少なくとも１つの窒素原子を含む有機アミン；
（Ｂ）少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であって、ここで、窒素原子の１つが、プロトンと一緒になって、四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成するアミノ酸；または
（Ｃ）１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であって、ここで、窒素原子の１つが、プロトンと一緒になって、四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、アミノ酸の全てのカルボン酸基がエステルの形態である、アミノ酸、である。
【００４９】
本発明の全ての異性体（例えば、種々の置換上に不斉炭素に起因して存在し得るもの）（エナンチオマー形態、およびジアステレオマー形態を含む）は、本発明の範囲内で意図される。本発明の化合物の個々の立体異性体は、例えば、他の異性体（例えば、特定の活性を有する純粋なまたは実質的に純粋な光学異性体として）を含まなくてもよいか、またはラセミ化合物として、または他の全てあるいは他の選択された立体異性体と混合されてもよい。本発明のキラル中心は、ＩＵＰＡＣ  １９７４推奨によって規定されるようなＳ配置またはＲ配置を有し得る。ラセミ形態は、物理的な方法（分画結晶化、ジアステレオマー誘導体の分離または結晶化、あるいはキラルクロマトグラフィーによる分離）によって分離される。個々の光学異性体は、任意の適切な方法によってラセミ化合物から、得られ得る。コンブレタスタチンＡ−４コアのフェニル部分を架橋するオレフィン基は、シス配置であり、これは、本発明の化合物について好ましい配置である。本明細書中の化合物の名前としての、または名前に一部としての、用語「コンブレタスタチンＡ−４」または「ＣＡ４」の使用は、このシス配置の化合物を示す。式Ｉの化合物の溶媒和物（例えば、水和物）が、本明細書において意図される。
【００５０】
本明細書を通して、基および置換基は、安定な部分および化合物を提供するように選択され得る。
【００５１】
例示または好ましい実施形態として本明細書中で示される実施形態は、例示を意図し、そして限定を意図しない。
【００５２】
別の実施形態において、本発明は、本発明の化合物を含む薬学的組成物、およびその薬学的に受容可能なキャリアに関する。一般に、本発明の化合物は、任意の形態（例えば、固体または溶液（特に水溶液）の形態、以下にさらに記載される）で使用され得る。例えば、この化合物が凍結乾燥形態で得られ得、そして凍結乾燥形態のみ、または適切な添加物ともに使用され得る。
【００５３】
なお別の実施形態において、本発明は、動物における腫瘍増殖または転移を調節する方法に関し、この方法は、式Ｉの一般構造：
【００５４】
【化２７】
2008195740.tif 000028
を有する化合物の有効量の投与を含み、ここで：
−ＯＲ1または−ＯＲ2のうちの１つは、−Ｏ-ＱＨ+であり、そして他方はヒドロキシルまたは−Ｏ-ＱＨ+であり；そしてＱは、
（Ａ）プロトンと一緒になって、四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する少なくとも１つの窒素原子を含む有機アミン；
（Ｂ）少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であって、ここで、窒素原子の１つが、プロトンと一緒になって、四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成するアミノ酸；または
（Ｃ）１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であって、ここで、窒素原子の１つが、プロトンと一緒になって、四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、アミノ酸の全てのカルボン酸基がエステルの形態である、アミノ酸、
である。一般に、本発明の化合物は、単独または薬学的組成物において、投与され得る。
【００５５】
本明細書中で使用される用語または句は、以下に定義され、そして他にそうではないと示されない限り示された定義を有する。
【００５６】
本明細書中で使用される場合、用語「調節する」、「調節（ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ）」または「調節（ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）」は、特定のプロセスが起こる速度を変化させること、特定のプロセスを阻害すること、特定のプロセスを逆転すること、および／または特定のプロセスの開始を妨害することをいう。従って、例えば、特定のプロセスが、腫瘍増殖または転移を含む場合、プロセスの「調節」は、腫瘍増殖および／または転移が起こる速度を減少すること、腫瘍増殖および／または転移を阻害すること、腫瘍増殖および／または転移を逆転すること（腫瘍収縮および／または根絶）、ならびに／または特にこのようなプロセスの傾向がある被験体において、腫瘍増殖および／または転移を妨害することを包含する。
【００５７】
本明細書中において、語句動物に投与される化合物の「有効量」または「そのために有効な量」とは、動物において腫瘍の増殖または転移を調節するに十分な量をいう。当業者は、例えば、慣用的な技術を使用して、動物に投与するべき本発明の化合物の有効量を、容易に決定し得る。成人に対する例示的な投薬量は、１日あたり活性化合物の約０．０５〜約１０００ｍｇ／体重のｋｇであり、これは、単回容量で（例えば、ボーラストしてかまたは最大許容用量以下での経時的な注入として）、あるいは個々の分割された用量の形態で（例えば、最大許容用量未満の連続的な量として）（例えば、１日あたり１〜４回）、投与され得る。任意の特定の被験体に対する特定の用量レベルおよび投薬の頻度は、変動し得、そして使用される特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用の長さ、被験体の種、年齢、体重、一般的健康、性別および食事療法、投与の様式および回数、排出の速度、薬物の組み合わせ、ならびに特定の状態の重篤度を含む種々の因子に依存することが、理解される。
【００５８】
本明細書中において使用される場合に、用語「動物」とは、好ましくは、家畜動物のような被験体を含み、そして最も好ましくは、ヒトを含む。
【００５９】
本明細書中において使用される場合に、用語「プロドラッグ」とは、インビボで代謝活性化を起こして活性薬物を生成する、前駆体化合物をいう。従って、例えば、被験体に投与された本発明の化合物は、代謝活性化を起こして、コンブレタスタチンＡ−４を再生成する。これは、本発明の化合物の、例えば血漿中の内因性非特異的ホスファターゼの作用による、解離に起因する。
【００６０】
本明細書中において使用される場合に、用語「有機アミン」とは、本発明の式Ｉの化合物においてリン酸塩を形成し得る、少なくとも１つの一級（すなわち、−ＮＨ2）、二級（すなわち、−ＮＨ−）または三級（すなわち、
【００６１】
【化２８】
2008195740.tif 000029
）アミン基を含む、有機（すなわち、炭素含有）化合物をいう。１つより多い一級、二級および／または三級アミン基が、この有機アミンにおいて存在する場合には、そのようにし得るような基のいずれかは、式Ｉの四級アンモニウム基ＱＨ+を形成し得る。「有機アミン」のこの定義は、アミノ酸化合物（２０００年９月１４日に米国出願番号６０／２３２，５６８としてＶｅｎｉｔによって出願された、発明の名称「Ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ  Ａ−４  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｍｏｎｏ−  ａｎｄ  Ｄｉ−  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｓａｌｔ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」の仮出願を参照のこと、その全体が本明細書中に参考として援用される）もＷＯ９９／３５１５０に記載されるような特定の化合物（グルコサミン、ピペラジン、ピペリジン、６’−メトキシ−シンコナン−９−オール、シンコナン−９−オール（ｃｉｎｃｈｏｎａｎ−９−ｏｌ）、ピラゾール、ピリジン、テトラサイクリン、イミダゾール、アデノシン、ベラパミル、モルホリン）（その全体が本明細書中に参考として援用される）も含まない。使用される有機アミンは、好ましくは、以下の群より選択される、生理学的に許容可能な化合物である：
（ａ）７以上のｐＫa、より好ましくは８以上のｐＫaを有する有機アミン；
（ｂ）式Ｉにおいて四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成している窒素が、必要に応じて置換されている脂肪族基または必要に応じて置換されている複素環式非芳香族基（あるいは、二級アミンまたは三級アミンの場合には、それぞれ２つまたは３つの、このような必要に応じて置換されている脂肪族基および／または複素環式非芳香族基）に結合している、有機アミン。「脂肪族基」とは、１〜２０個、好ましくは１〜１２個、より好ましくは１〜６個の炭素原子を鎖内に有する、直鎖または分枝鎖の、飽和または不飽和の炭化水素（例えば、アルカン、アルケンまたはアルキン）である。「複素環式非芳香族基」とは、式Ｉにおいて四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成している窒素、ならびに必要に応じて、他のヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｓ、またはさらなるＮ原子）を環内に含む、飽和かまたは部分的に不飽和の環である。「任意の置換基」とは、好ましくは、本発明の式Ｉにおいて使用される場合に、式Ｉのリン酸塩（これは結晶であり、そして実質的に非吸湿性であるか、または非吸湿性である）を生じる有機アミンを提供する、１つ以上の置換基である。好ましい「任意の置換基」としては、ヒドロキシル基、アミノ基（すなわち、−ＮＨ2）、またはアルコキシ（すなわち、−Ｏ−アルキル）基が挙げられ、最も好ましくは、１つ以上のヒドロキシル基である；ならびに／あるいは
（ｃ）式Ｉにおいて四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成している窒素が、必要に応じて置換された脂肪族基に結合した一級アミン、または必要に応じて置換された２つの脂肪族基に結合した二級アミンである、有機アミンであって、ここで、好ましい任意の置換基は、１つ以上のヒドロキシル基またはアミノ基であり、最も好ましくは、ヒドロキシル基である。
【００６２】
もちろん、本発明において使用するために好ましいアミンとして選択された任意の所定の有機アミンは、上記（ａ）〜（ｃ）の２つ以上の群の特性を有し得る（例えば、７以上のｐＫaを有し、かつ（ｃ）に記載されるような必要に応じて置換された脂肪族アミンである）。
【００６３】
そのように規定される任意の有機アミンは、本発明の式Ｉの化合物、ならびに本発明の薬学的組成物および方法における使用に適切である。用語「有機アミン」は、他の酸部分および／または塩基部分（ここで、例えば、１つのアミノ基は式Ｉのリン酸塩を形成し、そして別のアミン基は酸性部分有する塩を形成する）を有する塩の形態の化合物を含む。従って、本発明の化合物内に含まれる有機アミンの残部はまた、塩部分を含み得る。
【００６４】
例示的有機アミンとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：トロメタミン、ジエタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミン、エチレンジアミン、および２−（４−イミダゾリル）エチルアミン。
【００６５】
式ＩのコンブレタスタチンＡ−４ホスフェート「モノ有機アミン」塩は、上記に定義したようなＲ1またはＲ2の一部として１つの有機アミン基Ｑを含み；式ＩのコンブレタスタチンＡ−４ホスフェート「ジ有機アミン」塩は、２つの有機アミン基Ｑ（上記で定義されるようなＲ1の一部およびＲ2の一部を含む）を含む。式Ｉの「モノ有機アミン」塩が好ましい。対応する定義は、「モノアミノ酸」、「ジアミノ酸」、「モノアミノ酸エステル」、および「ジアミノ酸エステル」にあてはまる。
【００６６】
任意の適切なアミノ酸は、本明細書中での適用（これは、本発明の化合物における適用を有する、多数の天然のアミノ酸および非天然のアミノ酸）を有する。特定の例としては、２、３の例を挙げると、オルニチン、ヒスチジン、リシン、アルギニン、およびトリプトファンが挙げられるが、必ずしも限定されない。
【００６７】
本明細書中で用いられる場合、用語「アミノ酸」は、塩基性アミノ基（ＮＨ2）、および酸性カルボン酸基（ＣＯＯＨ）を含む化合物をいい、これは双性イオンの形態（ここで、アミノおよびカルボキシル基は、双生イオンまたは内部塩を共に形成する）、または他の酸部分および／または塩基部分（ここで、例えば、アミノ酸は、α−ＣＯＯＨ基に加えてカルボン酸基を含み、そして前者は、アルカリ金属を有する塩形態である）を有する塩の形態のような化合物を含む。従って、本発明の化合物内に含まれるアミノ酸の残部はまた、塩部分に含まれ得る。用語は、非天然アミノ酸、および天然のアミノ酸（例えば、α−アミノ酸（特にＬ−アミノ酸）（これらの多くは、タンパク質の構築ブロックである））を含む。用語「天然のアミノ酸」は、全てのタンパク質に共通する２０個のアミノ酸（すなわち、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸）をいう。句「非天然のアミノ酸」は、一般に、全てのタンパク質に共通しないアミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン、５−ヒドロキシリジン、Ｎ−メチルリジン、γ−カルボキシグルタメート、セレノシステイン、オルニチン、およびシトルリン）をいう。２つ以上の窒素原子を有するアミノ酸は、Ｑが定義（Ｂ）、ならびに本発明の薬学的組成物および方法を有する場合、本発明の式Ｉの化合物中で使用するのに適切である。
【００６８】
本発明中で用いられる場合、アミノ酸に関する、句「側鎖」は、各アミノ酸について異なるアミノ酸の部分（特に、アミノ酸の−ＮＨ2基および−ＣＯＯＨ基に連結する炭素に結合した基）である。
【００６９】
本明細書中で用いられる場合、用語「実質的に非吸湿性」は、化合物に関して、好ましくは、、以下の条件下で測定される、化合物の重量あたり１％未満（より好ましくは、化合物の重量あたり０．５％未満）の水重量増加を示す：２５℃および０％湿潤条件下での測定に対して、約２５℃の温度、２０％〜９５％までの相対湿度、および平衡状態（すなわち、水分の吸収と放出の比が平衡化された時間で測定される）。本明細書中で用いられる場合、用語「非吸湿性」は、化合物に関して、好ましくは、上記で測定されるような、化合物の重量あたり測定可能な重量増加を示さない。
【００７０】
アミノ酸に関して本明細書中で用いられる場合、用語「エステル」は、−ＣＯＯ（Ｇ）形態（ここで、Ｇは有機部分（例えば、非置換または置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、または複素環式基））であるアミノ酸のカルボン酸基（すなわち、−ＣＯＯＨ基）のことをいう。Ｇ基として好ましいものは、Ｃ1-6アルキル基（例えば、メチルまたはエチル）である。アミノ酸エステルとして最も好ましいものは、グリシンのＣ1-6アルキルエステル（例えば、グリシンメチルエステルまたはグリシンエチルエステル）である。
【００７１】
本明細書中で用いられる場合、用語「塩」は、本発明の化合物のことをいい、この化合物は、イオン性化合物（例えば、有機アミン、アミノ酸またはアミノ酸エステル部分の四級窒素ＱＨ＋とコンブレタスタチンＡ４ホスフェートとの間にイオン結合を有する）である。
【００７２】
本明細書中で用いられる場合、「イオン結合」は、陽イオンと陰イオンとの間、または化学構造間の静電的誘引力により形成される化学結合である。このような結合は、水溶液中で容易に解離（またはイオン化）され得る。溶媒（特に、水性溶媒）中、およびこのような溶液の凍結乾燥物中の本発明の化合物は、本発明により包含される実施形態である。
【００７３】
本明細書中で用いられる場合、有機アミン、アミノ酸またはアミノ酸エステルのような、インビボで存在する化学種を記載さする際の、句「生理学的に許容される」は、化学種の動物を処置する条件下で受容可能ではない副作用を誘導しない能力をいう。好ましくは、「生理学的に許容される」化学種は、有害な副作用を生じない。
【００７４】
上記で説明したように、本発明は、本発明の化合物を用いて、腫瘍（好ましくは、固形腫瘍）の増殖または転移を調節するための方法に関する。本明細書中で用いられる場合、用語「腫瘍」または「腫瘍増殖」は、交換可能に用いられ得、そして細胞の制御されない進行性の増殖を生じかつ生理学的機能に役立たない組織の異常な増殖をいう。固形腫瘍は、悪性（例えば、転移するおよび命にかかわる傾向にある）であり得るか、または良性であり得る。本発明の方法に従って処置され得る固形腫瘍の例は、例えば、以下の肉腫および癌腫が挙げられるが、これらに限定されない：線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、リンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫）、骨原性肉腫、脊索腫、食道癌、血管肉腫、骨肉腫、内皮腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮腫、骨膜腫、滑膜肉腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、膵癌、乳癌（例えば、転移性乳癌）、卵巣癌、精巣癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、結腸および直腸の腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様（ｍｅｄｕｌｌａｒｙ）癌、気管支原生癌、腎細胞癌、肝癌、肝転移、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、甲状腺癌（例えば、退形成型（ａｎａｐｌａｓｔｉｃ）甲状腺癌、髄様（ｍｅｄｕｌｌａｒｙ）甲状腺癌腫、ウィルムス腫瘍、頸部の癌、精巣腫瘍、肺腫瘍（例えば、非小細胞肺癌、小細胞肺癌）、膀胱癌、上皮癌、経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫。
【００７５】
さらに、増殖不全変化を含む腫瘍（例えば、化生および形成異常症）は、上皮組織（例えば、頸部、食道、および肺）中の本発明の化合物または方法を用いて処置または予防され得る。従って、本発明は、公知の状態の処置、あるいは新形成または癌（詳細には、過形成、化生、最も詳細には、異形性からなる、非新形成細胞増殖が生じた場合（このような異常な増殖状態の総説について、ＲｏｂｂｉｎｓおよびＡｎｇｅｌｌ，１９７６，Ｂａｓｉｃ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、第二版、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，６８−７９頁））に対する事前の経過から予想される状態の処置を提供する。過形成は、構造または機能における有意な変化をともなわずに、組織または器官における細胞数を増加させることを伴う制御された細胞増殖の形態である。しかし１つの例の場合、内皮過形成は、しばしば、子宮内膜癌を進行させる。化生は、成体または完全に分化した細胞の１つの型が、別の型の成体細胞に置換する制御された細胞増殖の形態である。化生は、上皮組織細胞または結合組織細胞において生じ得る。異常な化生は、何らかの無秩序な化生上皮を伴う。異形性は、しばしば、癌の前駆体であり、そして上皮中で主に見出される；これは、個々の細胞の均一性および細胞の構造上の配向性の損失を伴う、ほとんどの無秩序な形態の非新形成細胞増殖である。異形性細胞は、しばしば、異常な大きな、濃く染色される核を有し、そして多型性を有する。異形性は、これらが慢性の炎症（ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎまたはｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）場合、特徴的に生じ，そして、しばしば、頸部、気道、口腔、および胆嚢に見出される。このような障害の総説については、Ｆｉｓｈｍａｎら、１９８５，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第二版、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａを参照のこと。
【００７６】
良性で有り得、そして本発明の化合物および方法を用いて処置され得る腫瘍の他の例としては、動静脈（ＡＶ）（詳細には、頭蓋部）の先天奇形、および筋脂肪腫が挙げられる。
【００７７】
本発明の化合物はまた、悪性の脈管増殖障害（例えば、黄斑変性、乾癬および再狭窄）の処置のための方法、ならびに、一般に、脈管増殖により特徴付けられる炎症性疾患の処置に有用である。このような疾患および障害は、ＷＯ  ００／４８６０６（本明細書中でその全体が参考として援用される）に記載される。
【００７８】
（薬学的組成物）
本発明はまた、上記のような本発明の化合物を含む薬学的組成物、およびその薬学的に受容可能なキャリアに関する。句「薬学的に受容可能な」とは、生理学的に許容性であり、そして、好ましくは、ヒトに投与される場合、アレルギー反応または類似の有害反応（例えば、胃の不調（ｇａｓｔｒｉｃ  ｕｐｓｅｔ）、目眩など）を代表的には生じない、分子実体および組成物をいう。好ましくは、本明細書中で用いられる場合、用語「薬学的に受容可能な」は、連邦政府または州政府の管理機関または米国薬局方または他の一般に認識された動物（およびより詳細にはヒト）に使用するための薬局方による認可を意味する。用語「キャリア」は、化合物と共に投与される、希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルをいう。このような薬学的キャリアは、滅菌液（例えば、水および油（石油、動物起源、植物起源、または合成起源（例えば、落花生油、大豆油、鉱物油、胡麻油、アルコール（例えば、エタノール、プロパノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ソルビトール、グリセロールなど）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒなど（これらの混合物を含む））を含む））で有り得る。水または水性生理食塩溶液、および水性デキストロースおよびグリセロール溶液は、好ましくは、キャリア（詳細には、注射可能な溶液）として用いられる。適切な薬学的に受容可能なキャリアは、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載される。
【００７９】
本発明の薬学的組成物は、注射のための投与用、または経口、肺内、経鼻、経皮、眼内、または他の投与の形態のための投与用であり得る。一般に、本発明により理解されるものは、例えば、薬学的に受容可能な希釈剤、保存剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバント、および／または他のキャリアと共に本発明の化合物の有効量を含む薬学的組成物である。このような組成物としては、以下が挙げられる：種々の緩衝液含有物（例えば、ＴＲＩＳまたは他のアミン、カルボネート、ホスフェート、アミノ酸、例えば、グリシンアミドハイドロクロライド（特に、生理学的ｐＨ範囲）、Ｎ−グリシルグリシン、リン酸ナトリウムもしくはリン酸カリウム（二塩基性、三塩基性）など、またはＴＲＩＳ−ＨＣｌもしくはアセテート）、ｐＨおよびイオン強度；界面活性剤および可溶化剤のような添加剤（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリソルベート８０）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ、ポリオール（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなどのような界面活性剤活性剤）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、保存剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベンなど）、ならびにバルキング材料（例えば、スクロース、ラクトース、マンニトールのような糖、ポリビニルピロリドンまたはデキストランのようなポリマーなど）；および／またはこの物質をポリマー化合物（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸など）の粒子状の調製物またはリポソームへの取込み物。ヒアルロン酸もまた用いられ得る。このような組成物は、本発明の化合物の物理学的状態、安定性、インビボ放出の速度、およびインビボクリアランスの速度に影響を与えるために用いられ得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、（１９９０，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ  １８０４２）１４３５−１７１２頁（本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。この組成物は、例えば、液体の形態で調製され得るか、または乾燥粉末（凍結乾燥形態）であり得る。このような組成物の投与の特定の形態は、以下に記載される。
【００８０】
ｐＨ調整を記載されるように行い得る。例えば、本発明の化合物の溶解性を増大させること、これらの化合物を含む薬学的組成物のｐＨを７を超えるｐＨ（より好ましくは、８を超えるｐＨに（例えば、約８．５のｐＨに））に調整することが好ましい。
【００８１】
本発明の式ＩのようなＣＡ４Ｐプロドラッグ塩について、活性な親（ＣＡ４）形成をより低いｐＨで生じる。本発明は、緩衝液／ｐＨ調節剤の添加が、凍結の間のｐＨ低下を防ぎ、このようにして、より安定な凍結乾燥処方物を提供することを見出した。驚くべきことに、本発明の式ＩのようなＣＡ４Ｐプロドラッグの凍結乾燥処方物について、ｐＨ調整剤として水酸化ナトリウムを用いるｐＨ調整は、活性な親（ｃｉｓ）ＣＡ４（これは水に最小限可溶性である、そして水溶液中で望ましくない粒子を形成し得る）形成を生じ得、そして水酸化ナトリウム以外のｐＨ調整剤の使用はＣＡ４形成を緩和させ得るということをさらに見出した。ｐＨ調整剤および緩衝液としてのＴＲＩＳの使用は、例えば、ｐＨ調整のための水酸化ナトリウムの使用に関連して活性な親（ｃｉｓ）ＣＡ４の形成を緩和させる。従って、本発明の組成物の使用に特に好ましい。例えば、観察は、式Ｉの化合物についてなされた。ここで、Ｑは、ＴＲＩＳまたはヒスチジンのいずれかであり、その結果、ｐＨ調整剤としてＮａＯＨを用いて調製された凍結乾燥物は保存の際に親ｃｉｓ−ＣＡ４に対する加水分解を示したが、ＮａＯＨ以外の適切な緩衝剤（例えば、ＴＲＩＳ）を用いるｐＨ調整は、不溶性の親の形成を緩和させた。従って、本発明の別の局面は、薬学的凍結乾燥組成物（好ましくは、ｐＨ調整溶液から調製される）に関し、この組成物は、本発明の化合物および水酸化ナトリウム以外のｐＨ調製剤を含む（好ましくは、ｐＨ調整剤として、有機塩基（例えば、アミノ酸もしくは有機アミン（特に、ＴＲＩＳ））を含む）。従って、水酸化ナトリウムの使用は、本発明の凍結乾燥組成物内に包含され、このような使用は、例えば、固体形成が望ましくない、静脈内投与される薬学的組成物についてあまり好ましくない。
【００８２】
薬学的組成物（例えば、溶液（特に水溶液（例えば、１５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬおよび６０ｍｇ／ｍＬ）））はまた、本発明の化合物および水酸化ナトリウムを含むｐＨ調整剤を含むように、好ましくは、ｐＨ調整剤として、例えば、アルギニン、グリシンのようなアミノ酸、または有機アミン（例えば、エタノールアミン、特にＴＲＩＳ）のような有機塩基、を含むように調整される。処方物のｐＨが、ｐＨ９．０〜ｐＨ１０．５に増加する場合、水溶液安定性は増加する。例えば、ｐＨ１０でｐＨ調整剤としてＮａＯＨを用いる溶液処方物は、ｐＨ８．５で緩衝剤としてＴＲＩＳを用いて調製した凍結乾燥処方物に匹敵する安定性を示し得る。
【００８３】
光からの保護は、好ましくは、本発明の薬学的組成物に用いられる。
【００８４】
（腫瘍増殖または腫瘍転移を調節する方法）
コンブレタスタチンＡ−４は、Ｃｏｍｂｒｅｔｕｍ  ｃａｆｆｒｕｍの樹幹（ｗｏｏｄ  ｓｔｅｍ）に由来する強力な抗有糸分裂剤であり、そして広範な種々のヒト癌細胞株に対する強力な毒性を示す。その結果、本発明の化合物もしくは薬学的組成物の被験体への投与は、被験体における腫瘍増殖および／または転移を減少させ得るか、あるいは、被験体が、検出可能な転移もしくは腫瘍増殖を有さない場合、転移および／または腫瘍増殖を予防する。もちろん、本発明の化合物は、単独または薬学的に受容可能なキャリアと共に投与され得る。
【００８５】
従って、本発明は、とりわけ、有効量の本発明のモノ−もしくはジ−有機アミンコンブレタスタチンＡ−４ホスフェートプロドラッグ塩（これはインビボでコンブレタスタチンＡ−４を急速に再生する）の投与を包含する、腫瘍の増殖もしくは転移を調節するための方法に関する。上記に説明したように、本明細書中で用いられる場合、句「有効量」は、腫瘍の増殖もしくは転移を調節するために（例えば、動物における腫瘍の増殖もしくは転移を減少させるためか、あるいは投与の前に任意の腫瘍形成を欠く動物における腫瘍の増殖の形成を予防するために）十分である、被験体に投与される本発明の化合物の量をいう。当業者は、例えば、慣用的技術を用いる投与のための本発明の化合物の有効量を容易に決定し得る。
【００８６】
さらに、本発明の化合物を投与するための多数の手段が、本発明の方法における適用を有する。特に、本発明の化合物もしくは薬学的組成物は、非経口的、経粘膜（例えば、経口、経鼻、もしくは直腸）的、または経皮的に導入され得る。好ましくは、投与は、非経口（例えば、静脈注射を介して）であり、そして以下もまた含むがこれらに限定されない：細動脈投与、筋肉内投与、真皮内投与、皮下投与、腹腔内投与、心室内投与、および頭蓋内投与。化合物もしくは薬学的組成物は、例えば、処置される腫瘍または腫瘍の周りの組織へと注入により導入され得る。「粘膜浸透エンハンサー」は、本発明の化合物の経粘膜浸透の速度もしくは能力を増大させる試薬のことをいい、例えば、以下が挙げられるが、これらに限定されない：胆汁塩、脂肪酸、界面活性剤もしくはアルコール。特定の実施形態では、浸透エンハンサーは、コール酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロデオキシコール酸、グリココール酸ナトリウム、ジメチルスルホキシド、またはメタノールであり得る。適切な浸透エンハンサーとしてはまた、グリシレチン酸（Ｋｏｗａｒｓｋｉへの米国特許第５，１１２，８０４号）およびポリソルベート８０が挙げられ、後者は、非イオン性界面活性剤（例えば、ノノオキシノール−９、ラウレス（ｌａｕｒｅｔｈ）−９、ポリオキサマー−１２４、オクトオキシノール−９、またはラウリンアミド−ＤＥＡ（Ｓｔｏｌｔｚによる欧州特許第０  ２４２  ６４３号））との組合せに好ましい。
【００８７】
別の実施形態では、本発明の方法に従って、本発明の化合物もしくは薬学的組成物は、小胞（詳細には、リポソーム）中で送達され得る［Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）；Ｔｒｅａｔら、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ−ＢｅｒｅｓｔｅｉｎおよびＦｉｌｄｅｒ（編），Ｌｉｓｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，３５３−３６５頁（１９８９）；Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，同書、３１７−３２７頁を参照のこと；一般に同書を参照のこと］。
【００８８】
なお別の実施形態では、このような化合物もしくは薬学的組成物は、徐放性系（例えば、静脈内インフュージョン、インプラント可能な浸透圧ポンプ、経皮パッチ、リポソーム、または投与の他の方法）において送達され得る。特定の実施形態では、ポンプが用いられ得る［Ｌａｎｇｅｒ，前出；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ
Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄら、Ｓｕｒｇｅｌｙ  ８８：５０７（１９８０）；Ｓａｕｄｅｋら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４（１９８９）を参照のこと］。別の実施形態では、ポリマー材料が用いられ得る［Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ：Ｂｏｃａ  ２６  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌｌ（編），Ｗｉｌｅｙ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）；ＲａｎｇｅｒおよびＰｅｐｐａｓ，Ｊ  Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｎｚｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１（１９８３）を参照のこと；Ｌｅｖｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０（１９８５）；Ｄｕｒｉｎｇら、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１（１９８９）；Ｈｏｗａｒｄら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５（１９８９）もまた参照のこと］。なお別の実施形態では、徐放性系は、被験体の標的組織の近位に配置され得、従って、全身性用量の画分のみを必要とする［例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，前出，第２巻，１１５−１３８頁（１９８４）］。好ましい、徐放性デバイスは、不適切な免疫活性化もしくは腫瘍の部位の近位で、動物に導入される。他の徐放性系は、Ｌａｎｇｅｒ［Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）］による総説において議論される。
【００８９】
（非経口投与）
上記に説明したように、本発明の化合物または薬学的組成物は、被験体に非経口投与され得、従って、被験体の胃腸管を介する投与を回避し得る。本明細書中の適用を有する特定の非経口投与技術としては、いくつか名前を挙げれば以下が挙げられるが、もちろんこれらに限定はされない：静脈（ボーラスまたは注入）注射、腹腔内注射、皮下注射、筋肉内注射、またはカテーテル法。非経口投与のための例示的組成物としては、注射可能な溶液または懸濁液が挙げられ、これらは、例えば、適切な非毒性の、非経口的に受容可能な希釈剤または溶媒（例えば、マンニトール、１，３−ブタンジオール、水、緩衝化水性液系、リンゲル溶液、等張性塩化ナトリウム溶液、または他の適切な分散剤もしくは湿潤剤および懸濁剤（合成のモノグリセリドもしくはジグリセリド、ならびに脂肪酸（オレイン酸、アルコール、および／またはＣｒｅｍｏｐｈｏｒを含む）を含む）を含み得る。ｐＨ調整が、所望されるならば使用され得る。
【００９０】
（経鼻送達）
本発明の化合物または薬学的組成物の経鼻送達もしくは経粘膜送達もまた、意図される。経鼻送達は、この化合物の有効量を鼻に投与した後に、このような化合物が直接血流へと通過することを可能にし、肺での生成物の蓄積が必要ない。経鼻送達のための処方物としては、デキストランまたはシクロデキストリンを用いる送達、ならびに他のポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン、メチルセルロースもしくは他のセルロース）を用いる送達が、挙げられる。
【００９１】
経鼻投与について、有用なデバイスは小さくて硬質なビンであり、これに計測された用量スプレーが添付される。１つの実施形態において、この計測された用量は、本発明の化合物または薬学的組成物を、規定容量のチャンバへと引き込むことによって送達され、このチャンバは、このチャンバ内の液体が加圧される場合にスプレーを形成することによってエアロゾル処方物をエアロゾル化するために寸法決めされた開口部を有する。このチャンバは、この化合物または薬学的組成物を投与するために加圧される。特定の実施形態において、このチャンバは、ピストン配置である。このようなデバイスは、市販されている。
【００９２】
あるいは、エアロゾル処方物をエアロゾル化するように寸法決めされた開口または開口部を有するプラスチック圧搾ビンが使用され得る。エアロゾル化は、このビンが圧搾される場合に起こる。この開口部は、通常このビンの頂部に見出され、そしてこの頂部は、一般に、エアロゾル処方物の効率的な投与のための経鼻通路内に部分的に一致するようにテーパー状である。好ましくは、この経鼻吸入器は、本発明の化合物または薬学的組成物の計測された容量の投与のために、計測された量のエアロゾル処方物を提供する。
【００９３】
経粘膜送達について、浸透エンハンサーの使用がまた意図される。
【００９４】
（肺送達）
本発明の化合物または薬学的組成物の肺送達もまた、本明細書中で意図される。本発明の化合物または薬学的組成物は、吸入の間に動物の肺へと送達され得、そして肺の上皮内層を横切って血流に入る。この他の報告としては、Ａｄｊｅｉら，［Ｐｈａｒｎｉａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７：５６５−５６９（１９９０）；Ａｄｊｅｉら，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ  Ｐｈａｒｉｎａｃｅｕｔｉｅｓ，６３：１３５−１４４（１９９０）（酢酸ロイプロリド）；Ｂｒａｑｕｅｔら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｉｎａｃｏｌｏｇｙ，１３（補遺５）：１４３−１４６（１９８９）（エンドセリン−１）；Ｈｕｂｂａｒｄら，Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ．ＩＩＩ，ｐｐ．２０６−２１２（１９８９）（α１−抗トリプシン）；Ｓｍｉｔｈら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８４：１１４５−１１４６（１９８９）（α−１−プロテイナーゼ）；Ｏｓｗｅｉｎら，「Ａｅｒｏｓｏｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｏｎ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｉｙ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ＩＩ，Ｋｅｙｓｔｏｎｅ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ，Ｍａｒｃｈ，（１９９０）（組換えヒト成長ホルモン）；Ｄｅｂｓら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ：１４０．３４８２−３４８８（１９８８）（インターフェロン−γおよび腫瘍壊死因子α），Ｐｌａｔｚら，米国特許第５，２８４，６５６号（顆粒球コロニー刺激因子）］が挙げられる。全身性効果のための薬物の肺送達のための方法および組成物は、Ｗｏｎｇらに１９９５年９月１９日発行の米国特許第５，４５１，５６９号に記載される。
【００９５】
本発明の実行において使用のため熟慮されることは、治療学的産物の肺送達について設計される広範囲の機械的デバイスである（噴霧器、計測用量吸入器および粉末吸入器（これらの全ては当業者によく知られている）を含むがこれに限定されない）。この送達デバイスの構築に関して、当該分野で公知の任意のエアロゾル適用形態（噴霧瓶、噴霧、微粒化または液体処方物のポンプエアロゾル適用、および乾燥粉末処方物のエアロゾル適用を含むがこれに限定されない）は、本発明の実行において使用され得る。
【００９６】
本発明の実行に適した市販のデバイスのいくつかの特定の例は、Ｕｌｔｒａｖｅｎｔ噴霧器（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉによって製造される）；ＡｃｏｒｎＩＩ噴霧器（Ｍａｒｑｕｅｓｔ
Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｎｇｌｅｗｏｏｄ，Ｃｏｌｏｒａｄｏによって製造される）；Ｖｅｎｔｏｌｉｎ計測用量吸入器（Ｇｌａｘｏ  Ｉｎｃ．，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａによって製造される）；およびＳｐｉｎｈａｌｅｒ粉末吸入器（Ｆｉｓｏｎｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｅｄｆｏｌｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓによって製造される）である。
全ての各デバイスは、本発明の薬学的組成物の調剤に適した処方物の使用を必要とする。代表的に、各処方物は用いられるデバイスの型に対して特異的であり、そして通常の希釈剤、補助剤および／または治療に有用な他のキャリアに加えて、適切な噴霧剤物質の使用を含み得る。また、リポソーム、マイクロカプセルまたは微粒子、封入複合体または他の型のキャリアの使用が熟慮される。化学的に改変される本発明の薬学的組成物はまた、化学的改変の型または用いられるデバイスの型に依存している種々の処方物において調製され得る。
【００９７】
噴出または超音波のいずれかの噴霧器での使用に適した処方物は、代表的に化合物、または溶液１ｍＬ当たり２５ｍｇの生物学的活性成分に対して約０．１の濃度で水中に溶解する本発明の薬学的組成物を含有する。この処方物はまた、緩衝液および単糖を含み得る（例えば、本発明の薬学的組成物の浸透圧の安定化および調節のために）。この噴霧器処方物はまた、化合物またはエアロゾルを形成する際の溶液の微粒化によって生じる本発明の薬学的組成物の表面誘導凝集を減少する、または予防するための界面活性剤を含み得る。
【００９８】
計測用量吸入器デバイスでの使用のための処方物は、一般的に例えば、化合物または界面活性剤の補助を有して噴霧剤において懸濁される本発明の薬学的組成物を含む精巧な分包を含有する。この噴霧剤は、この目的のために用いられる任意の適した物質であり得る（例えば、クロロフルオロカーボン、ヒドロクロロフルオロカーボン、ヒドロフルオロカーボンまたは炭化水素（トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノール、および１，１，１，２−テトラフルオロエタンを含む）またはその組み合わせ）。適切な界面活性剤は、ソルビタントリオエートおよびソーヤレシチンを含む。オレイン酸もまた界面活性剤として有用であり得る。
【００９９】
液体エアロゾル処方物は、化合物または本発明の薬学的組成物および生理学的に受容可能な希釈剤における分散剤を含む。本発明の乾燥粉末エアロゾル処方物は、化合物または本発明の薬学的組成物および分散剤の微細に分割された固体形態を含み得る。液体または乾燥粉末エアロゾル処方物のいずれかを有して、処方物はエアロゾル化されるべきである。つまり、エアロゾル化用量が鼻孔または肺の粘膜に実際に到達することを保証するために、処方物は液体粒子または固体粒子に分類されるべきである。用語「エアロゾル粒子」は本明細書中で使用され、鼻投与または肺投与に適した液体粒子または固体粒子（つまり、それが粘膜に到達する）を記載する。他の考慮として、送達デバイスの構築、処方物における添加成分、および粒子特性が挙げられる。薬物の鼻投与または肺投与のこれらの局面は当該分野で周知であり、そして処方物の処置、エアロゾル適用手法および送達デバイスの構築は当業者によって直ちに成し遂げられ得る。
【０１００】
特定の実施形態において、マスメジアン動力学的直径は、薬物粒子が肺胞に到達するのを保証するために５マイクロ計測未満である（Ｗｅａｒｌｅｙ，Ｌ．Ｌ．，１９９１，１９９１，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ８：３３３）。
【０１０１】
上に記述するように、本発明の特定の局面において、エアロゾル適用についてのデバイスは計測用量吸入器である。計測用量吸入器は投与に依存する種々の用量よりもむしろ投与の際に，特定の投薬を供給する。このような計測用量吸入器は、液体または乾燥粉末エアロゾル処方物のいずれかを有して使用され得る。計測用量吸入器は当該分野で周知である。
【０１０２】
しばしば、肺への吸入のための液体または乾燥粉末処方物のエアロゾル適用は噴霧剤を必要とする。この噴霧剤は、一般的に当該分野で使用される任意の噴霧剤であり得る。このような有用な噴霧剤の特定の無制限な例は、クロロフルオロカーボン（ｃｈｌｏｒｏｆｌｏｕｒｏｃａｒｂｏｎ）、ヒドロフルオロカーボン，ヒドロクロロフルオロカーボン（ｈｙｄｏｃｈｌｏｒｏｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ）または炭化水素（トリフルオロメタン（ｔｒｉｆｌｏｕｒｏｍｅｔｈａｎｅ）、ジクロロジフルオロメタン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｄｉｆｌｏｕｒｏｍｅｔｈａｎｅ）、ジクロロテトラフルオロエタノール（ｄｉｃｈｌｏｒｏｔｅｔｒａｆｕｏｒｏｅｔｈａｎｏｌ）、および１，１，１，２−テトラフルオロエタン（１，１，１，２−ｔｅｔｒａｆｌｏｕｒｏｅｔｈａｎｅ）を含む）またはその結合である。
【０１０３】
エアロゾル送達系（例えば、与圧計測用量吸入器および乾燥粉末吸入器）は、Ｎｅｗｍａｎ，Ｓ．Ｐ．，Ａｅｒｏｓｏｌｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｌｕｎｇ，Ｃｌａｒｋｅ，Ｓ．Ｗ．およびＤａｖｉａ，Ｄ．編，１９７−２２頁に開示され、そして本発明に関連して使用され得る。
【０１０４】
（液体エアロゾル処方物）
本発明は、液体エアロゾル処方物および化合物または本発明の薬学的組成物の投薬形態について提供する。一般的に、このような投薬形態は化合物または薬学的受容可能な希釈剤における本発明の薬学的組成物を含む。薬学的受容可能な希釈剤は、滅菌水、生理食塩水、緩衝生理食塩水、ブドウ糖溶液などを含むがこれに限定されない。特定の実施形態において、本発明または本発明の薬学的組成物において使用され得る希釈剤は、ホスフェート緩衝生理食塩水、または一般的にｐＨ７．０〜８．０の範囲内の緩衝生理食塩水溶液、または水である。
【０１０５】
本発明の液体エアロゾル処方物は、任意の成分として、薬学的受容可能なキャリア、希釈剤、可溶性薬剤または乳化剤、界面活性剤および賦形剤を含み得る。
【０１０６】
本実施形態の処方物はまた、ｐＨ維持、溶液安定化について、または浸透圧の調節について有用な他の薬剤を含み得る。薬剤の例は、塩（例えば、塩化ナトリウムまたは塩化カリウム）および炭水化物（例えば、グルコース、ガラクトースまたはマンノース）などを含むがこれに限定されない。
【０１０７】
（エアロゾル乾燥粉末処方物）
本エアロゾル処方物は、乾燥粉末処方物として調製され得ることもまた熟慮され、この乾燥粉末処方物は化合物または本発明の薬学的組成物、および分散剤の精巧な分包形態を包含する。
【０１０８】
粉末吸入器デバイスから調合するための処方物は、化合物または本発明の薬学的組成物を含む精巧な乾燥分包を包含し得、そしてまたバルキング薬剤（例えば、デバイスからの粉末の分散を促進する量（処方物の重さの５０％〜９０％）におけるラクトース、ソルビトール、スクロースまたはマンニトール）を包含し得る。化合物または本発明の薬学的組成物は、最も有効な末端肺への送達について、１０ミクロン、最も好ましくは０．５〜５ミクロン以下の平均粒子サイズを有して粒子形態において最も有利に調製されるべきである。
【０１０９】
他の実施形態において、乾燥粉末処方物は、化合物または本発明の薬学的組成物を含み、薬剤を分散し、そしてまた薬剤をバルキングする精巧な乾燥分包を包含し得る。本処方物を連結する際に有用なバルキング薬剤は、デバイスからの粉末の分散を促進する量におけるラクトース、ソルビトール、スクロースまたはマンニトールのような薬剤を含む。
【０１１０】
（経皮投与）
種々の方法および多数の方法が、薬物の経皮投与に関して（例えば、経皮斑を介して）当該分野で公知である。経皮斑は、例えば、米国特許第５，４０７，７１３号，１９９５年４月１８日発行，Ｒｏｌａｎｄｏら；米国特許第５，３５２，４５６号，１９９４年１０月４日発行，Ｆａｌｌｏｎら；米国特許第５，３３２，２１３号，１９９４年８月９日発行，Ｄ’Ａｎｇｅｌｏら；米国特許第５，３３６，１６８号，１９９４年８月９日発行，Ｓｉｂａｌｉｓ；米国特許第５，２９０，５６１号，１９９４年３月１日発行，Ｆａｒｈａｄｉｅｈら；米国特許第５，２５４，３４６号，１９９３年１０月１９日発行，Ｔｕｃｋｅｒら；米国特許第５，１６４，１８９号，１９９２年１１月１７日発行，Ｂｅｒｇｅｒら；米国特許第５，１６３，８９９号，１９９２年１１月１７日発行，Ｓｉｂａｌｉｓ；米国特許第５，０８８，９７７号および第５，０８７，２４０号，どちらも１９９２年２月１８日発行，Ｓｉｂａｌｉｓ；米国特許第５．００８，１１０号，１９９１年４月１６日発行，Ｂｅｎｅｃｋｅら；および米国特許第４，９２１，４７５号，１９９０年５月１日発行，Ｓｉｂａｌｉｓ。これらのそれぞれの公開は、その全体が参考文献によって本明細書中で援用される。
【０１１１】
投与の経皮経路は、皮膚浸透エンハンサー（例えば、米国特許第５，１６４，１８９号（前出）、米国特許第５，００８，１１０号（前出）、および米国特許第４，８７９，１１９号（Ａｒｕｇａら、１９８９年１１月７日発行（これらの各々の開示は、その全体が本明細書中で参考として援用される）に記載のエンハンサー）の使用によって促進され得ることが容易に理解され得る。
【０１１２】
さらに、本発明の化合物または薬学的組成物は、局所投与され得る。例えば、化合物は、皮膚に塗りつけられ得る組成物を形成する軟膏キャリアと混合され得る。あるいは、本発明の化合物は、皮膚に浸透することが周知である溶媒に溶解され得る。このような溶媒の特定の例は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＳＯ）である。ゲル処方物もまた企図される。
【０１１３】
（経口送達）
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版、１９９０（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．Ｅａｓｔｏｎ
ＰＡ  １８０４２）のチャプタ８９（これは、本明細書中で参考として援用される）に一般的に記載される経口個体投薬形態は、本明細書中で使用するために企図される。個体投薬形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、ピル、トローチまたはロゼンジ、カシェ剤あるいはペレット剤が挙げられる。また、リポソームまたはプロテイノイドのカプセル化が、本発明の化合物または薬学的組成物を処方するために使用され得る（例えば、米国特許第４，９２５，６７３号に報告されるプロテイノイドマイクロスフェア）。リポロームカプセル化が使用され得、そしてこのリポソームは様々なポリマーと共に誘導され得る（例えば、米国特許第５，０１３，５５６）。治療的用途についての可能な個体投薬形態の記載は、Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ｋ．、Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（Ｇ．Ｓ．ＢａｎｋｅｒおよびＣ．Ｔ．Ｒｈｏｄｅｓ編）、チャプタ１０、１９７９（本明細書中で参考として援用される）により示される。処方物は、本発明の化合物または薬学的組成物、ならびに胃環境に対する保護および腸における生物学的活性材料の放出を可能にする不活性成分を含み得る。
【０１１４】
本発明の化合物の経口投薬形態もまた特に企図され、ここでこの化合物は、誘導体の経口送達が有効であるように化学修飾され得る。一般的に、企図される化学修飾は、成分分子自体への少なくとも１つの部分の結合であり、ここで、この部分は、（ａ）タンパク質分解の阻害；（ｂ）胃から腸への血流の取込みを可能にする。本発明の化合物の全体的な安定性の増加、および体内における循環時間の増加もまた所望される。このような部分の例としては、以下が挙げられる：ポリエチレングリコール、エチレングリコールとプロピレングリコールとのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、およびポリプロリン。ＡｂｕｃｈｏｗｓｋｉおよびＤａｖｉｓ，１９８１，「Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒ−Ｅｎｚｙｍｅ  Ａｄｄｕｃｔｓ」、Ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｓ  Ｄｒｕｇｓ，ＨｏｃｅｎｂｅｒｇおよびＲｏｂｅｒｔｓ編、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，３６７〜３８３；Ｎｅｗｍａｒｋら、１９８２、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４：１８５〜１８９。使用され得る他のポリマーは、ポリ−１，３−ジオキソランおよびポリ−１，３，６−チオキソカンである。上記のように、ポリエチレングリコール部分は薬学的用途のために好ましい。
【０１１５】
本発明の化合物について、放出の位置は、胃、小腸（十二指腸、空腸、または回腸）、または大腸であり得る。当業者は、胃で溶解しないが、腸の十二指腸またはその他の場所で本発明の化合物を放出する処方物を調製し得る。好ましくは、この放出は、化合物の保護または胃環境を越える（例えば、腸において）生物学的活性材料の放出のいずれかによって、胃環境の悪影響を回避する。
【０１１６】
十分な胃耐性を保証するために、少なくともｐＨ５．０で不浸透性のコーティングが必須である。腸溶性コーティングとして使用されるより一般的な不活性成分の例は、酢酸トリメリト酸セルロース（ＣＡＴ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、ＨＰＭＣＰ  ５０、ＨＰＭＣＰ  ５５、酢酸フタル酸ポリビニル（ＰＶＡＰ）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ３０Ｄ、Ａｑｕａｔｅｒｉｃ、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ、およびＳｈｅｌｌａｃである。これらのコーティングは、混合フィルムとして使用され得る。
【０１１７】
コーティングまたはコーティングの混合物はまた、錠剤で使用され得、これは胃からの保護を意図していない。これには、糖コーティング、または錠剤のえん下を容易にするコーティングが挙げられ得る。カプセル剤は、乾燥治療薬（すなわち散剤）の送達のための硬質の殻（例えば、ゼラチン）から構成され得、液体形態について、軟質ゼラチン殻が使用され得る。カシェ剤の殻材料は、厚いデンプンまたは他の食用ペーパーであり得る。ピル、ロゼンジ、成形錠剤または錠剤粉薬について、水分凝縮技術（ｍｏｉｓｔ  ｍａｓｓｉｎｇ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）が使用され得る。
【０１１８】
本発明の化合物は、例えば、約１ｍｍの粒径の顆粒またはペレットの形態の微細な多粒子として、処方物に含有され得る。カプセル投与のための材料の処方物はまた、散剤、軽く圧縮したプラグまたはさらに錠剤として存在し得る。また、本発明の化合物または薬学的組成物は、圧縮によって調製され得る。
【０１１９】
着色剤および香味剤は全て含まれ得る。例えば、化合物が処方され（例えば、リポソームカプセル化またはマイクロスフェアカプセル化によって）、次いで、食用製品（例えば着色剤または香味材を含む冷蔵飲料）内にさらに含有される。
【０１２０】
本発明の化合物または不活性材料を含む薬学的組成物の容量を希釈または増加し得る。これらの希釈剤は、炭水化物、特に、マンニトール、α−ラクトース、無水ラクトース、セルロース、スクロース、修飾デキストランおよびデンプンを含み得る。特定の無機塩もまた、三リン酸カルシウム、炭酸マグネシウムおよび塩化ナトリウムを含むフィラーとして使用され得る。いくつかの市販の希釈剤は、Ｆａｓｔ−Ｆｌｏ、Ｅｍｄｅｘ、ＳＴＡ−Ｒｘ  １５００、ＥｍｃｏｍｐｒｅｓｓおよびＡｖｉｃｅｌｌである。
【０１２１】
崩壊剤は、本発明の薬学的組成物の固体投薬形態への処方において含まれ得る。崩壊剤として使用される材料としては、デンプン（デンプンに基づく市販の崩壊剤であるＥｘｐｌｏｔａｂを含む）が挙げられるが、これに限定されない。ナトリウムデンプングリコレート、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ウルトラミロペクチン（ｕｌｔｒａｍｙｌｏｐｅｃｔｉｎ）、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、オレンジピール、酸性カルボキシメチルセルロース、天然スポンジおよびベントナイトは全て使用され得る。別の形態の崩壊剤は、不溶性の陽イオン交換樹脂である。粉砕したゴムは、崩壊剤および結合剤として使用され得、そしてこれらは粉末ゴム（例えば、寒天、Ｋａｒａｙａまたはトラガカント）を含み得る。アルギン酸およびそのナトリウム塩もまた崩壊剤として有用である。
【０１２２】
結合剤は、硬質錠剤を一緒に形成するように、本発明の化合物または薬学的組成物を保持するために使用され得、そして天然産物由来の材料（例えば、アカシア、トラガカント、デンプンおよびゼラチン）を含み得る。他のものとしては、メチルセルロース（ＭＣ）、エチルセルロース（ＥＣ）、およびカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）が挙げられる。ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）の両方は、治療薬を顆粒化するためにアルコール溶液中で使用され得る。
【０１２３】
減摩剤は、処方プロセスの間の固着を防止するために、本発明の薬学的組成物の処方物中に含有され得る。潤滑剤は、治療薬と型壁との間の層として使用され得、これには、ステアリン酸（そのマグネシウム塩およびカルシウム塩を含む）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、流動パラフィン、植物油およびワックスが挙げられるが、これらに限定されない。可溶性潤滑剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、様々な分子量のポリエチレングリコール、Ｃａｒｂｏｗａｘ  ４０００および６０００）もまた使用され得る。
【０１２４】
処方の間に本発明の化合物の流動性を改善し、圧縮の間の再配置を助け得る滑剤が添加され得る。これらの滑剤は、デンプン、タルク、発熱性シリカおよび水和シリコアルミネート（ｓｉｌｉｃｏａｌｕｍｉｎａｔｅ）を含み得る。
【０１２５】
経口投与された本発明の化合物の取込みを潜在的に増大する添加剤は、例えば、脂肪酸のオレイン酸、リノール酸およびリノレン酸である。
【０１２６】
制御放出経口処方物が所望され得る。薬物は、拡散または浸出機構のいずれか（例えば、ゴム）による放出を可能にする不活性マトリクスに組み込まれ得る。ゆっくりと分解するマトリクスはまた、この処方物に組み込まれ得る。いくつかの腸溶性コーティングはまた、遅延放出効果を有する。
【０１２７】
本発明の化合物の制御放出の別の形態は、Ｏｒｏｓ治療システム（Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐ．）に基づく方法による。すなわち、薬剤は、半透性膜（これにより水は浸透圧効果に起因して単一の小さな開口部を通って入りそして薬物を押し出す）に封入される。
【０１２８】
他のコーティングは、処方物のために使用され得る。これには、コーティングパンに適用され得る様々な糖が挙げられる。本発明の化合物はまた、フィルムコーティング錠剤で提供され得、そしてこの場合において使用される材料は、例えば、２グループに分割され得る。第１グループは、非腸溶性材料であり、これには、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、プロビドン（ｐｒｏｖｉｄｏｎｅ）、およびポリエチレングリコールが挙げられる。第２グループは腸溶性材料を含み、これは一般に、フタル酸のエステルである。
【０１２９】
材料の混合物は、最適なフィルムコーティングを提供するために使用され得る。フィルムコーティングは、パンコーターまたは流動床、あるいは圧縮コーティングによって行われ得る。
【０１３０】
（調製方法）
上記の式Ｉの化合物は、任意の適切な方法、例えば、所望の材料Ｑ（特に、有機アミン、アミノ酸またはアミノ酸エステル）を、本発明の式Ｉのモノもしくはジ有機アミン塩、モノもしくはジアミノ酸塩、またはモノもしくはジアミノ酸エステルを得るのに十分な相対量で、以下の構造を有するＡ−４ホスフェート（「ＣＡ４Ｐ遊離酸」）でコーティングすることによって調製され得る（例えば、１：１のモノ有機アミン塩またはモノアミノ酸塩を得るための１：１のモル比、またはジ有機アミン塩を得るための適切な溶媒（例えば、所望のｐＫaについて選択された溶媒）中の過剰モルの有機アミン）：
【０１３１】
【化２９】
2008195740.tif 000030
ＣＡ４Ｐ遊離酸は、例えば、前出の実施例に記載されるように、ＣＡ４Ｐ二ナトリウム塩から得られ得る。化合物Ｑ（例えば、有機アミンまたはアミノ酸）およびＣＡ４Ｐ遊離酸は、例えば、適切な溶媒（好ましくは、イソプロパノールのようなＣ1〜Ｃ6アルコール、またはそれらの水性混合物）中で接触され、好ましくは、続いて、式Ｉの化合物が濾過のような手段によって結晶化化合物として回収される。用語「溶媒」は、単一の溶媒、あるいは混和性または二相の溶媒混合物を形成する２つ以上の溶媒の混合物を含む。所望の場合、化合物Ｑは、塩の形態、好ましくは薬学的に受容可能な塩の形態で、前出の実施例に記載されるように添加され得る。
【０１３２】
従って、本発明は、以下の式Ｉの一般構造を有する化合物を調製するためのプロセスに及ぶ：
【０１３３】
【化３０】
2008195740.tif 000031
ここで、−ＯＲ1または−ＯＲ2のうち一方は、−Ｏ-ＱＨ+であり、他方は、ヒドロキシルまたは−Ｏ-ＱＨ+であり、
そしてＱは、
（Ａ）少なくとも１つの窒素を含む有機アミンであって、この窒素はプロトンと一緒になって、四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、有機アミン；
（Ｂ）少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であって、ここでこれらの窒素原子の一方はプロトンと一緒になって、四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、アミノ酸；または
（Ｃ）１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であって、ここでこれらの窒素原子の１つは、プロトンと一緒になって、四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、このアミノ酸の全てのカルボン酸基はエステルの形態である、アミノ酸、である。本発明のこのような方法は、以下の構造を有するＣＡ４Ｐ遊離酸を、溶媒中で、化合物Ｑと接触させる工程を包含する：
【０１３４】
【化３１】
2008195740.tif 000032
ここで、Ｑは、
（Ａ）少なくとも１つの窒素を含む有機アミンであって、この窒素はプロトンと一緒になって、四級カチオンアンモニウムＱＨ+を形成する、有機アミン；
（Ｂ）少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であって、ここでこれらの窒素原子の一方はプロトンと一緒になって、四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、アミノ酸；または
（Ｃ）１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であって、ここでこれらの窒素原子の１つは、プロトンと一緒になって、四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、このアミノ酸の全てのカルボン酸基はエステルの形態である、アミノ酸、である。必要に応じて、本明細書中に記載されるプロセスを用いて精製される本発明の化合物は、溶媒から結晶形態で沈殿され得る。
【０１３５】
さらに、本発明は、以下の式Ｉの一般構造を有する化合物を調製するためのプロセスに及ぶ：
【０１３６】
【化３２】
2008195740.tif 000033
この方法は、上記のように、溶媒中で、ＣＡ４Ｐ遊離酸を好ましい化合物Ｑ（例えば、ヒスチジン、グリシンＣ1-6アルキルエステル、または最も好ましくはトロメタミン）と接触させ、次いで、得られたＣＡ４Ｐヒスチジン、グリシンＣ1-6アルキルエステル、または最も好ましくは、トロメタミン塩を結晶形態で溶媒から回収する工程を包含する。もちろん、上で説明するように、多数の溶媒が本発明のプロセスにおける用途を有する。特定の例としては、Ｃ1-6アルコール（例えば、イソプロパノール）またはそれらの水性混合物が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の好ましい実施形態において、本明細書中に記載されるプロセスは、化合物ＣＡ４Ｐのモノ−トロメタミン（「ＣＡ４Ｐのモノ−ＴＲＩＳ塩」または「ＣＡ４ＰモノＴＲＩＳ塩」）を生成する。本発明の別の好ましい実施形態において、本明細書中で記載されるプロセスは、化合物ＣＡ４ＰモノＬ−ヒスチジンを生成する。
【０１３７】
化合物Ｑ（有機アミン、アミノ酸、またはアミノ酸エステル）およびＣＡ４Ｐ遊離酸の混合物（好ましくは、水溶液のような溶液である）はまた、本発明の実施形態として本明細書中で企図される。従って、本発明は、化合物を混合することによって形成される組成物をさらに提供し、この組成物は、以下：
（ａ）以下の構造を有するＣＡ４Ｐ遊離酸：
【０１３８】
【化３３】
2008195740.tif 000034
および
（ｂ）化合物Ｑ、を含み、
ここで、Ｑは、
（Ａ）少なくとも１つの窒素を含む有機アミンであって、この窒素はプロトンと一緒になって、四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、有機アミン；
（Ｂ）少なくとも２つの窒素原子を含むアミノ酸であって、ここでこれらの窒素原子の一方はプロトンと一緒になって、四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成する、アミノ酸；または
（Ｃ）１つ以上の窒素原子を含むアミノ酸であって、ここでこれらの窒素原子の１つは、プロトンと一緒になって、四級アンモニウムカチオンＱＨ+を形成し、そしてここで、さらに、このアミノ酸の全てのカルボン酸基はエステルの形態である、アミノ酸、である。
【０１３９】
必要に応じて、本発明の組成物は、薬学的に受容可能なキャリアをさらに含み得る。
【０１４０】
本発明は、本発明の例示として示される、以下の非限定的な実施例を参照することによってよりよく理解され得る。以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態をより十分に例示するために示される。しかしこれらは、決して本発明の広範な範囲の限定として解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１４１】
（実施例１）
（ＣＡ４Ｐプロドラッグのモノトロメタミン塩）
本発明の実施形態において、ＣＡ４Ｐモノ−トロメタミン塩は、本発明の化合物の非限定的な例として記載される。本明細書中に記載される情報を使用して、当業者は、例えば、以下に記載される手順と同様の手順（これらの全ては、本発明および添付の特許請求の範囲に包含される）によって、所望の有機アミンをＣＡ４Ｐ遊離酸に添加することによって、様々なＣＡ４Ｐプロドラッグのモノもしくはジ有機アミン塩を容易に生成し得る。
【０１４２】
（試薬および方法）
全ての試薬および化学物質は、市販の供給源から得、そしてさらに精製することなく使用した：トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）（Ａａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．９９．９＋％標識、Ｌｏｔ  ＃０１４０４ＰＵ）、イソプロピルアルコール（Ｂ＆Ｊ  Ｂｒａｎｄ，高純度溶媒等級）。多核ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＲＸ  ４００分光計で記録した。1Ｈおよび13ＣＮＭＲの化学シフトは、テトラメチルシランに対してｐｐｍで報告される。（13Ｃ  ＮＭＲの化学シフトは、メタノール（「ＭｅＯＨ」）を外部標準として使用して決定した）。13Ｃ  ＮＭＲスペクトルは、プロトンデカップル｛1Ｈ｝して得た。２Ｄ  ＮＭＲ実験（ＨＭＱＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ分光法、どの分子の1Ｈが13Ｃ核（または他のＸ核）に結合しているかを決定するための逆化学シフト相関実験）；ならびにＨＭＢＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｂｏｎｄ  Ｃｏｒｒｌａｔｉｏｎ分光法、広範囲の1Ｈ−13Ｃ連結性、ならびに分子の構造および1Ｈおよび13Ｃ帰属を決定するのに適切な改変されたＨＭＱＣの改変バージョン））を、1Ｈおよび13Ｃシグナルを構造に帰属するのを助けるように行なった。「ＣＡ４Ｐ二ナトリウム塩」は、以下の構造を有する化合物である：
【０１４３】
【化３４】
2008195740.tif 000035
（上記の米国特許第５，５６１，１２２号を参照のこと）。
【０１４４】
（ＣＡ４Ｐモノ−トロメタミン塩）
水性ＩＰＡ  ＴＲＩＳ溶液（０．１９Ｍ）：０．１９ＭのＴＲＩＳ溶液を、１．６１ｇのＴＲＩＳ（１３．３ｍｍｏｌ）を７ｍＬの脱イオン水に添加し、そして得られた水溶液に６３ｍＬのイソプロピルアルコール（「ＩＰＡ」）を添加することによって、調製した（ＩＰＡ中１０％水）。
【０１４５】
イソプロピルアルコール中のＣＡ４Ｐ遊離酸ストック溶液（０．１９Ｍ）：ＣＡ４Ｐ二ナトリウム塩（１２．１５ｇ、２７．６ｍｍｏｌ）を、７０ｍＬの脱イオン水に溶解した。酢酸エチル（２５０ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（１５０ｍＬ）を、迅速に撹拌しながら得られた溶液に添加した。白色のケークが形成した。０．５ＮのＨＣｌの溶液（３２５ｍＬ）を滴下して、このケークを溶解した（水層の最終ｐＨは約１であった（ｐＨ試験紙））。有機相を分離した。水層を酢酸エチル（３×２００ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせ、そして無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した。濾過し、そして溶媒をエバポレート（ロータリーエバポレーター、水浴温度＝４０℃）して、ＣＡ４Ｐ遊離酸の厚膜を得、これを１００ｍＬのＩＰＡに溶解した。得られた溶液の濃度は、以下の滴定方法を使用して１Ｈ  ＮＭＲによって０．９Ｍと決定された：４５μＬのＬ−ヒスチジン溶液（０．１７Ｍ）および３０μＬのＣＡ４Ｐ遊離酸溶液を４ｍＬＨＰＬＣバイアルにピペットで添加した。溶媒を、ロータリーエバポレーターを使用して乾固するまでエバポレートした。この固体を、０．７ｍＬのＤ2Ｏに溶解し、そして１Ｈ  ＮＭＲによって分析し、１：０．７５のヒスチジン対ＣＡ４Ｐ遊離塩基の比を得た。全部で１９ｍｍｏｌのＣＡ４Ｐ遊離酸を得た（収率６９％）
ＣＡ４Ｐモノ−ＴＲＩＳ塩：２００ｍＬ丸底フラスコに、上で調製した７０ｍＬのＣＡ４Ｐ遊離酸溶液（０．１９Ｍ、１３．３ｍｍｏｌ）を充填した。上記のように調製した７０ｍＬの水性ＩＰＡ  ＴＲＩＳ溶液（０．１９Ｍ、１３．３ｍｍｏｌ）を、ＣＡ４Ｐ遊離酸溶液に迅速に撹拌しながら滴下した。得られた白色スラリーを室温で１８時間（一晩）撹拌し、続いて３０分間０℃（氷浴）で冷却した。結晶固体をＷｈａｔｍａｎ  ＃  ５４濾紙を通して濾過することによって単利子、冷却したイソプロピルアルコールで洗浄し、そして空気流で５時間乾燥し、次いで減圧下（真空デシケーター）で１１３時間乾燥して、７．０１ｇのＣＡ４Ｐモノ−ＴＲＩＳ塩を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ分析の結果は、最終生成物がＩＰＡ（約０．９重量％）を残留溶媒（１３．４ｍｍｏｌ、定量的収率）として含んでいたことを示した。ＣＡ４Ｐモノ−ＴＲＩＳ塩は、式Ｉａの構造を有し、ここで、コアのフェニル部分に架橋しているオレフィン基は、コンブレタスタチン（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ）Ａ−４ホスフェート出発物質におけるように、シス配置である。
【０１４６】
（ＣＡ４ＰモノＴＲＩＳ塩の特徴付け）
（ＮＭＲおよび元素分析）
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ  ３．５２（ｓ，６Ｈ，Ｃ（１５）Ｈ3およびＣ（１７）Ｈ3），３．５６（ｓ，６Ｈ，Ｃ（２０）Ｈ2，Ｃ（２１）Ｈ2，Ｃ（２２）Ｈ2），３．５９（ｓ，３Ｈ，Ｃ（１６）Ｈ3），３．６７（ｓ，３Ｈ，Ｃ（１８）Ｈ3），６．３８（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ（８）Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ（７）Ｈ，６．４８（ｓ，２Ｈ，Ｃ（１０）ＨおよびＣ（１４）Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ（３）Ｈ），６．８５（ｂｒｏａｄ  ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ（４）Ｈ），７．０６（ｂｒｏａｄ  ｓ，１Ｈ，Ｃ（６）Ｈ）；13Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，｛1Ｈ｝，Ｄ2Ｏ）δ  ５６．９（２Ｃ，Ｃ１５，Ｃ１７），５７．０（Ｃ１８），６０．３（３Ｃ，Ｃ２０，Ｃ２１，Ｃ２２），６２．０（Ｃ１６），６２．４（Ｃ１９），１０７．５（２Ｃ，Ｃ１０，Ｃ１４），１１３．９（Ｃ３），１２２．６（ｄ，Ｊｐｃ＝３．１Ｈｚ，Ｃ６），１２５．９（Ｃ４），１３０．０（Ｃ８），１３０．８（Ｃ７），１３１．２（Ｃ５），１３４．７（Ｃ９），１３６．８（Ｃ１２），１４２．２（ｄ，Ｊｐｃ＝７．７Ｈｚ，Ｃ１），１５０．６（ｄ，Ｊｐｃ＝６．１Ｈｚ，Ｃ２），１５３．２（２Ｃ，Ｃ１１およびＣ１３）。分析（Ｃ22Ｈ32ＮＯ11Ｐ）；計算値：Ｃ，５１．０６；Ｈ，６．２３；Ｎ，２．７０；Ｐ，５．９８。実測値：Ｃ，５１．０７；Ｈ，６．３９；Ｎ，２．５８，Ｐ，５．９３。
【０１４７】
【化３５】
2008195740.tif 000036
（吸湿性）
この実施例のＣＡ４ＰのモノＴＲＩＳ塩は、周囲条件および高湿度条件下で、２５℃で実際的に非吸湿性であることが見出された。これは、予想外の結果である。なぜなら、他の塩形態のＣＡ４Ｐ遊離酸は、同様の条件下で吸湿性であるからである。ＣＡ４ＰのモノＴＲＩＳ塩の水分吸着特性を図１に示す。可変相対湿度−Ｘ線回折（「ＲＨ−ＸＲＤ」）実験は、この粉末パターンは、２５℃の異なる湿度に暴露された場合、変化しないままであることを示した。
【０１４８】
（多型）
本実施例のＣＡ４ＰモノＴＲＩＳ塩の単結晶Ｘ線研究は、これが、アキラルなニート形態（Ｎ−１）であって、任意の溶媒部位を含まないこと、およびこれが、中心対称の単斜結晶構造であることを実証した。擬態粉末パターン（これは、室温で単斜単結晶構造の正確な原子パラメーターから誘導された）は、観測した粉末パターンと一致する。ＩＰＡ／水から調製されたモノＴＲＩＳ塩の数種のロットは、1Ｈ  ＮＭＲ、示差走査熱分析（ＤＳＣ）、示差熱重量分析（ＴＧＡ）および粉末Ｘ線回折（ｐ−ＸＲＤ）に基づいて再現可能であることを見出した。ＣＡ４ＰモノＴＲＩＳ塩を、数種の異なる溶媒（例えば、エタノール、イソプロパノール、アセトン、アセトニトリル、および水）中で、最初に７０〜７５℃で５〜１０分間かけて懸濁し、次いで室温で一晩かけて懸濁した。得られた固相をＤＳＣ、ＴＧＡおよびｐ−ＸＲＤによって分析した。このスラリーサンプルのいずれも、スラリーまたは乾燥状態のいずれかで任意の溶媒の存在を示さなかった。「現状のままの」材料と比較して、任意のこれらのサンプルにおいて、ＤＳＣサーモグラムおよびｐ−ＸＲＤパターンの差異は存在しなかった（図２を参照のこと）。このことは、このＮ−１形態が、比較的安定な単一多型形態であることを示す。
（他の物理化学的特性）
ＣＡ４ＰモノＴＲＩＳ塩のＤＳＣサーモグラムは、１９６℃で単一の融解吸熱を示す（図３）。熱重量分析は、揮発に起因して１５０℃未満で任意の重量ロスを表さなかった。２５℃で、ＣＡ４ＰモノＴＲＩＳ塩の平衡水溶液は、３．３７ｍｇ／ｍＬ（ｐＨ４．８）であると決定された。この水溶液は、ｐＨの増加に伴って増加し、そしてｐＨ８．２で１９１ｍｇ／ｍＬの値に達した。これは、特に、静脈内投与のために、８〜９のｐＨの範囲で、本実施例の化合物の投与形態を調製するのに適切である（これは、患者に「Ｒｅａｄｙ−ｔｏ−Ｕｓｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ」を直接投与される溶液または凍結乾燥のためのバッチング溶液である）。ＣＡ４ＰモノＴＲＩＳ塩のｐＨ溶液プロフィールを、図４に示す。モノＴＲＩＳ塩はまた、温度および湿度の周囲条件および促進条件に曝露した状態で、固体状態の良好な化学的安定性を示した。
【０１４９】
従って、この実施例のＣＡ４ＰのモノＴＲＩＳ塩は、例えば、経口投与または非経口投与のいずれかを意図するような、薬学的処方物の使用のための、良好な物理化学的特性を有する。本明細書中で意図されないＣＡ４Ｐの他の塩形態のようではなく、モノＴＲＩＳ塩は、塩状態、特に、実質的な非吸湿性において予想外の優れた特性を示した。これは、ＴＲＩＳ自体で水溶解度の程度の観点で特に意外であった。
（ＣＡ４Ｐ  モノ−トロメタミン塩（スケールアップ））
（ＣＡ４Ｐの遊離酸溶液（ＩＰＡ中））
１２Ｌの３つ口丸底フラスコに、メカニカルスターラーおよびさらなるロートを備えつけた。ＣＡ４Ｐジナトリウム塩の溶液（９９．９２ｇ、０．２２７ｍｏｌ）（１．５の脱イオン水および２．０Ｌの酢酸エチル）を、フラスコに添加した。塩酸溶液（０．５Ｎ、９５０ｍＬ、０．４７５ｍｏｌ）を、迅速に攪拌しながら添加ロートを介してゆっくり添加した（水相の最終のｐＨが約１（ｐＨ紙）であった）。この有機相を分割した。水相を酢酸エチル（５×１．６Ｌ）で抽出た。合わせた有機相を、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した。酢酸エチルをロータリーエバポレートして、濃厚な油状物を形成し、これをＩＰＡ（８００ｍＬ）に溶解した。（ＣＡ４Ｐモノ−ＴＲＩＳ塩）
ＴＲＩＳ（２５．０ｇ、０．２０６ｍｏｌ）の脱イオン水溶液（８００ｍＬ）を、１２Ｌの３つ口丸底フラスコに充填した。上記のＣＡ４Ｐ遊離酸溶液（ＩＰＡ中）を、迅速に攪拌しながら添加ロートを介してゆっくりと添加した。添加後に、得られた溶液を、ＣＡ４Ｐモノ−ＴＲＩＳ塩でシードし、そしてＲＴで１時間機械で攪拌した。次いで、さらなるＩＰＡ（２．０Ｌ）を、このスラリーに添加し、そしてさらに１時間攪拌し続けた。結晶の白色固体を吸引を伴って濾過し、ＩＰＡ（８００ｍＬ）で洗浄し、そして真空オーブン中で、４日間約４０℃で乾燥して、１０１．５５ｇのＣＡ４Ｐモノ−ＴＲＩＳ塩をえた。最終生成物の1Ｈ  ＮＭＲ分析は、残渣溶媒（０．１８６ｍｏｌ、収率８６％以上）としてＩＰＡ（０．４ｗｔ％）を含むことが示された。Ｃ22Ｈ32ＮＯ11Ｐの分析値：Ｃ，５１．０６；Ｈ，６．２３；Ｎ，２．７０；Ｐ，５．９８。実測値：Ｃ，５０．９５；Ｈ，６，１４；Ｎ，２．６９；Ｐ，５．８２。
【０１５０】
（実施例２）
（ＣＡ４Ｐプロドラックモノ−トロメタン塩ＴＲＩＳ処方物）
実施例１の化合物（ＣＡ４ＰモノＴＲＩＳ塩）の水溶液および凍結乾燥（すなわち、フリーズドライ）薬学的組成物を、以下のように調製した。
【０１５１】
実施例１の化合物の水溶液を、注射用の水（ＵＳＰ）中にこの化合物を溶解することによって得、十分な量のＴＲＩＳ（トロメタミンベース）の添加を伴って６０ｍｇ／ｍＬの濃度にしてｐＨ８．５を得た。この溶解を、遮光して実施した。
【０１５２】
次いで、凍結乾燥物を、以下の手順により得た。上で形成した溶液を、適切な０．２ミクロンの滅菌フィルターを介して濾過し、そして滅菌ガラスバイアル中にアリコートした。この溶液を、２４時間から７２時間の期間にわたって減圧下で３５℃でＶｅｒｔｉｓ  Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｒで凍結乾燥し、次いで、２４時間から４８時間かけて減圧下で５℃でさらに乾燥して、凍結乾燥物を得た。
【０１５３】
実施例１の化合物を含む他の薬学的組成物は、これらの手順に従って調製し得る。例えば、上記のように、バルク試薬（例えば、アルギニンもしくはリジンのようなアミノ酸、スクロース、ラクトース、マンニトールのような糖、ポリビニルピロリドンまたはデキストランのようなポリマーなど）、あるいは他の賦形剤が、上記の溶液に添加され得る。
【０１５４】
例えば、実施例１の化合物の水溶液を、注射用の水（ＵＳＰ）中にこの化合物を溶解することによって得、適切なバルク試薬（例えば、アルギニンもしくはリジンのようなアミノ酸、スクロース、ラクトース、マンニトールのような糖、ポリビニルピロリドンまたはデキストランのようなポリマーなど、あるいはそれらの組合せ）の添加を伴って３０ｍｇ／ｍＬにし、そして十分な量のＴＲＩＳ（トロメタミンベース）の添加を伴って１００ｍｇ／ｍＬの濃度にした。この溶解を、遮光して実施した。
【０１５５】
次いで、凍結乾燥物を、以下の手順により得た。上で形成した溶液を、適切な０．２ミクロンの滅菌フィルターを介して濾過し、そして滅菌ガラスバイアル中にアリコートした。この溶液を、２４時間から７２時間の期間にわたって減圧下で−１０℃でＶｅｒｔｉｓ  Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｒで凍結乾燥し、次いで、２４時間から４８時間かけて減圧下で５℃でさらに乾燥して、凍結乾燥物を得た。
【０１５６】
上記で説明されるように、ジエタノールアミン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、エチレンジアミン、および２−（４−イミダゾリル）エチルアミンが挙げられるが、これらに限定されない、任意の適切な有機アミンは、上記の実施例のトロメタミンと容易に置換され、本発明の化合物または組成物を得る。Ｑが式Ｉ内の他の規定を有する組成物が、同様に形成され得る。
【０１５７】
（実施例３）
（ＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン塩プロドラック）
本発明の実施形態において、ＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン塩は、本発明の化合物の非限定的な例として記載される。本明細書中に記載される情報により、当業者は、種々のＣＡ４Ｐモノまたはジ−アミノ酸塩プロドラックを、例えば、上記と同様の手順により、所望のアミノ酸をＣＡ４Ｐ遊離酸に添加することによって生成する（これらの全ては、本発明および添付の特許請求の範囲によって包含される）。
【０１５８】
（試薬および方法）
以下の試薬および化学物質は、市販の供給源から得られ、そしてさらなる精製なしで使用した：Ｌ−ヒスチジン（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．９８％標識，Ｌｏｔ  ＃  ０４８２１ＪＲ）、メタノールおよびイソプロピルアルコール（Ｂ＆Ｂ  Ｂｒａｎｄ，Ｈｉｇｈ  ｐｕｒｉｔｙ  ｓｏｌｖｅｎｔ  ｇｒａｄｅ）。「ＣＡ４Ｐジナトリウム塩」は、以下の構造を有する化合物である（上記の米国特許第５，５６１，１２２号を参照のこと）：
【０１５９】
【化３６】
2008195740.tif 000037
多重核ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｃｋｅｒ  ＤＰＸ３００およびＤＲＸ４００スペクトルで記録した。1Ｈおよび13Ｃ  ＮＭＲ化学シフトを、テトラメチルシランと比較したｐｐｍで報告する（この13Ｃ  ＮＭＲ化学シフトを、外部基準としてメタノールを使用して決定した）。この31Ｐ  ＮＭＲの化学シフトを、８５％のＨ3ＰＯ4（外部標準）と比較したｐｐｍで報告する。この13Ｃおよび31Ｐ
ＮＭＲスペクトルを、プロトンデカップリング｛1Ｈ｝を用いて獲得した。この２Ｄ  ＮＭＲ実験（ＨＭＱＣおよびＨＭＢＣ）を、この構造に対する1Ｈおよび13Ｃ  ＮＭＲシグナルのアサイメントを助けるために処理した。ＤＳＣを、ＣＳＣ／２９２０  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ，ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓを用いて実施した。
【０１６０】
（ＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン水和物塩）
（Ｌ−ヒスチジン水性ストック溶液（０．２Ｍ））
Ｌ−ヒスチジン（０．３１６７ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの脱イオン化水に溶解し、０．２Ｍの溶液を形成した。
【０１６１】
（メタノール（０．６Ｍ）中のＣＡ４Ｐの遊離酸ストック溶液）
ＣＡ４Ｐジナトリウム塩（１．９１９４ｇ）を、５ｍＬの脱イオン化水に溶解した。塩化ナトリウム飽和水溶液（４０ｍＬ）を、得られた溶液に添加した。白色固体を沈殿させた。酢酸エチル（５０ｍＬ）を添加し、そして得られたスラリーを機械で攪拌し、そして２層の混合物が透明となるまで、０．５Ｎの塩酸溶液で酸性化した（水相は、酸性であった（ｐＨ紙））。この有機相を分割した。この水相を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせて、そしてＮａ2ＳＯ4で乾燥した。濾過し、そして溶媒をエバポレート（ロータリーエバポレーター、水浴の温度＝３７℃）して、ＣＡ４Ｐ遊離酸の厚手のフィルムを得、これを、１０ｍＬのメタノールで溶解した。このメタノールを、ロータリーエバポレーターにかけて（３７℃）、オフホワイトの泡状物（１．５２ｇ）を得、これをＭｅＯＨ（４．７９ｍＬ）に再溶解し、予想された０．８Ｍの濃度を有する溶液を得た。
【０１６２】
上記で決定した濃度を、２５μＬのＣＡ４Ｐ遊離溶液を含む０．２Ｍのヒスチジン溶液（２０μｍｏｌ）（１００μＬ）を混合することによって確認した。得られた溶液の溶媒を、ロータリーエバポレートして、乾燥した。この固体を、１：０．７５のモル比のヒスチジン：ＣＡ４Ｐ遊離酸を示すために1Ｈ  ＮＭＲによって分析した。従って、ＣＡ４Ｐ遊離酸の濃度は、０．６Ｍと示された。（この結果を、ＣＡ４Ｐ遊離酸の泡状物が溶媒を含むことを示す）。
【０１６３】
（ＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン水和物塩）
４ｍＬのＨＰＬＣバイアルに、Ｌ−ヒスチジン（９００μＬ、０．２Ｍ、１８０μｍｏｌ）、ＣＡ４Ｐ遊離酸（３００μＬ、０．６Ｍ、１８０μＬ）、およびイソプロピルアルコール（１．０ｍＬ）を添加した。得られた溶媒を、ロータリーエバポレート（水浴の温度＝３９〜４０℃）して、減圧下で約１．５ｍＬまで減少させた。イソプロピルアルコールの別の１．０ｍＬを添加して、そしてこの体積を約１．５ｍＬまでさらに減少させた。少量の結晶体を、溶媒中で得た。エバポレーションプロセスを止め、そしてこのバイアルをキャップし、周囲温度で５時間静置させた。この結晶固体を、吸引を伴って、Ｗｈａｔｍａｎ  ＃  ５４フィルター紙を介して濾過することによって単離し、イソプロピルアルコール（約２ｍＬ）で洗浄し、そして窒素気流下で一晩かけて乾燥し、８２．７ｍｇのＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジンを白色固体として得た。得られたＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン塩プロドラックは、結晶固体であった；固体のＫａｒｌ  Ｆｉｓｈｅｒ分析により、この水内容物が４．６６％であったことを示した。これは、１つの塩分子当たり１．５個の水分子を有する水和物の結晶固体として計算した（１４３μｍｏｌ，７９％の収率）：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ  ３．３３（ｄ，Ｊ＝６．５９Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（２１）Ｈ2），３．６７（ｓ，６Ｈ，Ｃ（１５）Ｈ3およびＣ（１７）Ｈ3），３．７４（ｓ，３Ｈ，Ｃ（１６）Ｈ3），３．８２（ｓ，３Ｈ，Ｃ（１８）Ｈ3），４．０１（ｔ，Ｊ＝６．５０Ｈｚ，ＩＨ，Ｃ（２０）Ｈ），６．５３（ｄ，Ｊ＝１２．２５Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ（８）Ｈ），６．６２（ｄ，Ｊ＝１２．２５Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ（７）Ｈ），６．６２（ｓ，２Ｈ，Ｃ（１０）ＨおよびＣ（１４）Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝８．００Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ（３）Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝８．００Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ（４）Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ，Ｃ（６）Ｈ），７．３７（ｓ，１Ｈ，Ｃ（２３）Ｈ，８．６３（ｓ，１Ｈ，Ｃ（２４）Ｈ）；13Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，｛1Ｈ｝，Ｄ2Ｏ）δ  ２６．１２（Ｃ２１），５３．９３（Ｃ２０），５６．２６（２Ｃ，Ｃ１５，Ｃ１７），５６．３５（Ｃｌ８），６１．３２（Ｃ１６），１０６．８６（２Ｃ，Ｃ１０，Ｃ１４），１１３．２６（Ｃ３），１１８．０３（Ｃ２３），１２２．０４（ｄ，ＪPC＝２．３Ｈｚ，Ｃ６），１２５．５２（Ｃ４），１２７．８０（Ｃ２２），１２９．４０（Ｃ８），１３０．０５（Ｃ７），１３０．５７（Ｃ５），１３３．９９（Ｃ９），１３４．３４（Ｃ２４），１３６．１８（Ｃ１２），１４１．３７（ｄ，ＪPC＝６．９０Ｈｚ，Ｃｌ），１５０．０１（ｄ，ＪPC＝４．６０Ｈｚ，Ｃ２），１５２．５２（２Ｃ，Ｃ１１およびＣ１３），１７２．８７（Ｃ１９）；31Ｐ  ＮＭＲ（１２１ＭＨｚ，｛１Ｈ），Ｄ2Ｏ）δ−２．６１（ｓ）。Ｃ24Ｈ30Ｎ3Ｏ10Ｐ・１．５  Ｈ2Ｏの計算値：Ｃ，４９．８３；Ｈ，５．７５；Ｎ，７．２６。実測値：Ｃ，５０．１３；Ｈ，５．７８；Ｎ，７．２６。
【０１６４】
この手順の生成物のＫａｒｌ  Ｆｉｓｈｅｒおよび元素分析により、結晶塩がセスクイハイドレートであることを示した。このＤＳＣ分析は、１５８．６ｄｅｇＣに融解吸熱を有する１つのメジャーな結晶形態を示した（図５を参照のこと）。この材料に関して得られた粉末Ｘ線データを、図８（トップパターン）に示した。
【０１６５】
多型の差異を、結晶混合物の全体積に関してＣＡ４Ｐ遊離酸のｍｍｏｌの関数として室温において観測した。上の手順において、結晶混合物の全体積の１ｍｌ当たり、０．２ｍｍｏｌのＣＡ４Ｐ遊離酸を使用した。結晶混合物の全体積の１ｍｌ当たり０．０３ｍｍｏｌのＣＡ４Ｐ遊離酸が使用されるような、上記手順の改良により、塩の１分子当たり１．８の水分子を有するＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン塩形態を提供した（図６を参照のこと、試料サイズ３，８５００ｍｇ；このＤＳＣ分析により、１８４．９ｄｅｃＣにおいて融解吸熱を有する１種の結晶形態を示し、そして1Ｈ  ＮＭＲ分析により、ＣＡ４Ｐ：ヒスチジン＝１：１の比を示した）。この材料に関して得られた粉末Ｘ線データが、図８（ボトムパターン）に示される。結晶混合物の全体積の１ｍｌ当たり０．０７ｍｍｏｌのＣＡ４Ｐ遊離酸が使用されるような、上記手順の改良により、ＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン塩形態の混合物を提供し、一方は、塩の１分子当たり１．５の水分子を有し、そして他方は、塩の１分子当たり１．８の水分子を有した（図７を参照のこと、試料サイズ４，４５００ｍｇ）。この混合物のＫａｒｌ  Ｆｉｓｈｅｒおよび元素分析により、結晶塩がセスクイハイドレートであることが示された。このＤＳＣ分析は、２つの結晶形態を例示する。この吸熱は、それぞれ図５および６のものと類似していた。この材料から得られた粉末Ｘ線データを、図９に示す。このＤＳＣおよび粉末Ｘ線データは、上記の１．５：１および１．８：１（水：塩）形態は、２種類の異なる結晶形態であることを示した。上記のように、これらの形態の混合物は、容易に形成される。シーティング（ｓｅｅｄｉｎｇ）により、各形態は、純粋な状態で作製された。
【０１６６】
ヘミヘプタハイドレートＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン塩形態はまた、水の存在下で得られ得る。しかし、この形態は、セスクイハイドレートＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン塩形態に変換する。
【０１６７】
上記で説明されるように、オルニチン、リジン、アルギニン、およびトリプトファンが挙げられるが、これらに限定されない種々の天然または非天然のアミノ酸は、上記のヒスチジンと容易に置換され得、本発明の化合物を生成する。
【０１６８】
（ＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン水和物塩（スケールアップ））
（Ｌ−ヒスチジン水性ストック溶液（０．２Ｍ））
Ｌ−ヒスチジン（１．９０ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）を、脱イオン化水（６０ｍＬ）中に溶解し、０．２Ｍの溶液を形成する。（この溶液をまた、インサイチュで調製し得る）。
【０１６９】
（イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）中のＣＡ４Ｐ遊離酸ストック溶液（０．１７Ｍ））
ＣＡ４Ｐ遊離酸を、以下の手順で調製し得る。酸性等価物を、２．１まで下げ、塩化ナトリウムの添加は、必要ではない。以下の手順は例示であり：ＣＡ４Ｐジナトリウム塩（８．９４ｇ、２０．３ｍｍｏｌ）を、イオン化水（５０ｍＬ）中に溶解した。酢酸エチル（２００ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）を、迅速に攪拌した状態の得られた溶液に添加した。白色のケークを形成した。０．５Ｎの塩酸溶液（２２０ｍＬ）を、滴下添加し、このケークを溶解した（水相の最終ｐＨは、約１（ｐＨ紙）であった）。有機相を分配した。この水相を酢酸エチル（１×２００ｍＬ、次いで、２×１５０ｍＬ）で抽出した。この有機相を合わせて、そしてＮａ2ＳＯ4で乾燥した。濾過し、そして溶媒をエバポレート（ロータリーエバポレーター、水浴の温度＝４０℃）して、ＣＡ４Ｐ遊離酸の厚手のフィルムを得、これを、１００ｍＬのＩＰＡに溶解した。得られた溶液の濃度は、1Ｈ  ＮＭＲにより０．１７であると決定した。
【０１７０】
上記で決定した濃度を確認するために、６０μＬのヒスチジン溶液（０．２Ｍ）および７０μＬのＣＡ４Ｐの遊離酸溶液を、４ｍＬのＨＰＬＣバイアル中にピペットした。この溶媒をロータリーエバポレートして、乾固させた。この固体を、０．７ｍＬのＤ2Ｏ中に溶解し、そして1Ｈ  ＮＭＲによって分析し、１：１のヒスチジン：ＣＡ４Ｐの遊離酸を得た。ＣＡ４Ｐの遊離酸の全部で１．７ｍｍｏｌが、得られた（８４％の収率）。
【０１７１】
（ＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン水和物塩（スケールアップ））
２５０ｍＬの丸底フラスコを、７０．４ｍＬのＣＡ４Ｐ遊離酸溶液（０．１７Ｍ、１２．０ｍｍｏｌ）および５０ｍＬのＩＰＡで充填した。Ｌ−ヒスチジンの溶液（６０ｍＬ、０．２Ｍ、１２．０ｍｍｏｌ）を、迅速に攪拌するＣＡ４Ｐ遊離酸溶液に滴下添加した。得られた白色のスラリーを、４０℃で３０分間、周囲温度で３時間攪拌し、続いて、１時間０℃まで冷却した（氷浴）。結晶固体を、吸引を伴う、Ｗｈａｔｍａｎ  ＃  ５４濾紙を介する濾過により単離し、冷却イソプロピルアルコールで洗浄し、そして減圧下（真空デシケータ）で８８時間乾燥して、白色固体として６．０７ｇのＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジンを得た。固体のＫａｒｌ  Ｆｉｓｈｅｒ分析により、水内容物が４．４８％であることを示した。１つの塩分子当たり１．５個の水分子を有する水和物の結晶固体として計算した（１０．５ｍｍｏｌ、８７％収率）：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ  ３．３２（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（２１）Ｈ２），３．６８（ｓ，６Ｈ，Ｃ（１５）Ｈ3およびＣ（１７）Ｈ3），３．７４（ｓ，３Ｈ，Ｃ（１６）Ｈ3），３．８２（ｓ，３Ｈ，Ｃ（１８）Ｈ3），４．００（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ（２０）Ｈ），６．５３（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ（８）Ｈ），６．６２（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ（７）Ｈ），６．６４（ｓ，２Ｈ，Ｃ（１０）ＨおよびＣ（１４）Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ（３）Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ（４）Ｈ），７．２０（ブロード，ｌＨ，Ｃ（６）Ｈ），７．３６（ブロード，１Ｈ，Ｃ（２３）Ｈ，８．６２（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ（２４）Ｈ）；13ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，｛1Ｈ｝，Ｄ2Ｏ）δ  ２６．１１（Ｃ２１），５３．９２（Ｃ２０），５６．２２（２Ｃ，Ｃ１５，Ｃ１７），５６．３２（Ｃ１８），６１．２８（Ｃ１６），１０６．８２（２Ｃ，Ｃ１０，Ｃ１４），１１３．２０（Ｃ３），１１８．０３（Ｃ２３），１２２．０１（ｄｑ，ＪPC＝２．３Ｈｚ，Ｃ６），１２５．４８（Ｃ４），１２７．７８（Ｃ２２），１２９．３８（Ｃ８），１２９．９７（Ｃ７），１３０．５４（Ｃ５），１３３．９２（Ｃ９），１３４．３１（Ｃ２４），１３６．１６（Ｃ１２），１４１．３８（ｄ，ＪPC＝６．１Ｈｚ，Ｃ１），１４９．９８（ｄ，ＪPC＝５．４Ｈｚ，Ｃ２），１５２．４８（２Ｃ，Ｃ１１およびＣ１３），１７２．８６（Ｃ１９）。Ｃ24Ｈ30Ｎ3Ｏ10Ｐ・１．５Ｈ2Ｏの計算値：Ｃ，４９．８２；Ｈ，５．７５；Ｎ，７．２６；Ｐ，５．３５。実測値：Ｃ，４９．９２；Ｈ，５．８４；Ｎ，７．２６；Ｐ，５．８４。さらに、示差走査熱量計を使用して、得られた化合物が、１５８℃に大量に吸熱を有し、そして１７４℃に少量の吸熱を有することが決定された。
【０１７２】
任意の適切な天然または非天然のアミノ酸は、本発明の他の化合物を産生するための手順に容易に置換され得る。
【０１７３】
ＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン塩を室温で結晶化させて、水和物が一般に得られる。上記の室温よりも高い温度（特に、７０℃よりも高い温度）で、結晶化プロセスを実施し、無水物塩が得られる。ヒドラジン塩水和物は、例えば、溶媒（例えば、エタノール、メタノール、イソプロパノール、またはアセトン）中でハイドレート形態を、４０℃のような温度で（例えば、２日間かけて）、スラリーすることによって、無水結晶形態に（特に、２１０℃で溶融して）変換し、続いて、濾過し、洗浄し、そして４５℃のような温度で（例えば、一晩かけて）、減圧乾燥した。この無水形態（特に、非吸湿性）が好ましい。
【０１７４】
（ＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン無水物塩）
２００ｍＬの丸底フラスコを、Ｌ−ヒスチジン（０．２６２０ｇ、１．６５ｍｍｏｌ）および１６．５ｍＬのイオン化水で充填した。得られた溶液を、７４〜７６℃（油浴温度）でマグネチックスターラーを用いて加熱した。ＣＡ４Ｐ遊離酸の溶液（８．７ｍＬ、０．１９Ｍ（ＩＰＡ中）、１．６５ｍｍｏｌ）を添加して、続いて、イソプロピルアルコール（９０ｍＬ）を添加した。得られた溶液を、約１分間で乳状にした。７５〜７６℃で２時間攪拌し続けて、次いで、周囲温度で１時間攪拌した。針結晶固体を、吸引を伴って、Ｗｈａｔｍａｎｎ  ＃４濾紙を介して濾過することによって単離し、そして空気（吸引）の気流かで一晩（１９．５時間）乾燥し、真空デシケーター中で２４時間乾燥し、白色固体として０．７７８８ｇのＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジンを白色固体として得た（１．４１ｍｍｏｌ，８６％収率）：ｍｐ  ２１１．４９℃（ＤＳＣ）；1Ｈ  ＮＭＲ（４０ＯＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ  ３．３０（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ、Ｈ−２１），３．６５（ｓ，６Ｈ，Ｈ−１５およびＨ−１７），３．７２（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１６），３．８０（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），３．９９（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−２０），６．５０（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−８）、６．５９（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），６．６０（ｓ，２Ｈ，Ｈ−１０およびＨ−１４），６．９２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３），６．９７（ブロードｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．１９（ブロードｓ，１Ｈ，Ｈ−６），７．３３（ブロードｓ，１Ｈ，Ｈ−２３），８．５８（ブロードｓ，１Ｈ，Ｈ−２４）；13Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，｛1Ｈ｝，Ｄ2Ｏ）δ  ２７．１１（Ｃ−２１），５４．８８（Ｃ−２０），５７．１７（２Ｃ，Ｃ−１５およびＣ−１７），５７．２４（Ｃ−１８），６２．２４（Ｃ−１６），１０７．７７（２Ｃ，Ｃ−１０およびＣ−１４），１１４．１７（Ｃ−３），１１８．９０（Ｃ−２３），１２２．９３（ｄ，ＪPC＝２．３Ｈｚ，Ｃ−６），１２６．４０（Ｃ４），１２８．８８（Ｃ−２２），１３０．２９（Ｃ−８），１３１．００（Ｃ−７），１３１．４７（Ｃ−５），１３４．９３（Ｃ−９），１３５．３２（Ｃ−２４），１３７．０８（Ｃ−１２），１４２．３１（ｄ，ＪPC＝６．１Ｈｚ，Ｃ−１），１５０．９１（ｄ，ＪPC＝４．６Ｈｚ，Ｃ−２），１５３．４５（２Ｃ，Ｃ１１およびＣ−１３），１７３．８４（Ｃ−１９）。Ｃ24Ｈ30Ｎ3Ｏ10Ｐの計算値：Ｃ，５２．２７；Ｈ，５．４８；Ｎ，７．６２；Ｐ，５．６１。実測値：Ｃ，５２．０３；Ｈ，５．４３；Ｎ，７．５７；Ｐ，５．５７。
【０１７５】
（ＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン無水物（スケールアップ））
２０００ｍＬの３つ口丸底フラスコは、マグネチックスターラー、５００ｍＬの添加ロート、およびサーモカップルを備え、このサーモカップルは、加熱マントルを制御するＴｈｅｒｍ−Ｏ−Ｗａｔｈｃｈ  Ｌ７−１１００ＳＡ／２８Ｔに連結した。Ｌ−ヒスチジン（３．４２ｇ、２１．６ｍｍｏｌ）をフラスコに添加し、続いて、２１６ｍＬの脱イオン化水に添加した。得られた溶液を、攪拌しながら７４〜８０℃に加熱した。ＣＡ４Ｐ遊離酸（１２０ｍＬ、０．１８Ｍ（ＩＰＡ），２１．６ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、添加ロートを介して溶液の温度を７３〜７４℃を維持するような速度で添加した（１４分必要とした）。ＩＰＡの添加後に、得られた透明な溶液を、ＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン無水物塩（トレース量）でシードした。この溶液の温度を８０℃まで上昇させ、そしてシードの約３分後に結晶化が起こった。この温度を３０分かけて７４℃までゆっくりと下げ、そしてさらに１．５時間７３〜７４℃に維持した。この反応混合物を、３．５時間で３１℃にゆっくりと冷却した。針結晶固体を、吸引を伴ってＷｈａｔｍａｎ＃４濾紙で濾過紙、ＩＰＡ（１００ｍＬ）を用いて洗浄し、そして空気（吸引）下で一晩（１６時間）かけて乾燥し、そして真空デシケーター中で２１．５時間乾燥し、１０．１１ｇのＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン無水物塩を白色固体（１８．３ｍｍｏｌ、８５％収率）を得た：ｍｐ  ２１３．６５℃（ＤＳＣ）；1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ  ３．３０（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ−２１），３．６５（ｓ，６Ｈ，Ｈ−１５およびＨ−１７），３．７２（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１６），３．８０（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），３．９９（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−２０），６．４９（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−８），６．５８（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），６．５９（ｓ，２１１，Ｈ−１０およびＨ−１４），６．９１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３），６．９７（ｄｄ，Ｊ＝８．３，１．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．１９（ブロードｔ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），７．３４（ブロードｓ，１Ｈ，Ｈ−２３），８．６０（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−２４）；13Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，｛1Ｈ｝，Ｄ2Ｏ）δ  ２７．０７（Ｃ−２１），５４．８６（Ｃ−２０），５７．１８（２Ｃ，Ｃ−１５およびＣ−１７），５７．２６（Ｃ−１８），６２．２４（Ｃ−１６），１０７．７８（２Ｃ，Ｃ−１０およびＣ−１４），１１４．１８（Ｃ−３），１１８．９４（Ｃ−２３），１２２．９５（ｄ，ＪPC＝２．３Ｈｚ，Ｃ−６），１２６．４３（Ｃ−４），１２８．７９（Ｃ−２２），１３０．３１（Ｃ−８），１３０．９８（Ｃ−７），１３１．４９（Ｃ−５），１３４．９１（Ｃ−９），１３５．２９（Ｃ−２４），１３７．１０（Ｃ−１２），１４２．３１（ｄ，ＪPC＝６．９Ｈｚ，Ｃ−１），１５０．９２（ｄ，ＪPC＝４．６Ｈｚ，Ｃ−２），１５３．４５（２Ｃ，Ｃ−１１およびＣ−１３），１７３．８２（Ｃ−１９）。Ｃ24Ｈ30Ｎ3Ｏ10Ｐの計算値：Ｃ，５２．２７；Ｈ，５．４８；Ｎ，７．６２；Ｐ，５．６１。実測値：Ｃ，５２．２３；Ｈ，５．３５；Ｎ，７．６０；Ｐ，５．５５。
【０１７６】
ＣＡ４Ｐモノ−Ｌ−ヒスチジン無水物塩を、単結晶形態として再現可能に作製した。図１０は、ＤＳＣ（サンプルサイズ２．３６００ｍｇ）を示し；図１１は、この材料の粉末Ｘ線データを示す。
【０１７７】
【化３７】
2008195740.tif 000038
（実施例４）
（シスＣＡ４Ｐモノグリシンメチルエステルの調製）
ＣＡ４ＰジナトリウムからＣＡ４Ｐモノグリシンメチルエステルを調製するための以下の手順は、有用である。この手順は、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でグリシンメチルエステルヒドロクロリドを直接使用することで、グリシンメチルエステル遊離塩基を使用する調製と比較して増強した安定性を提供する。さらに、ＣＡ４Ｐ遊離酸の調製が有意に改良され、濃縮した硫酸（例えば、希塩酸ではない）は、中和に使用される（例えば、抽出のための酢酸エチルを使用し、次いでエバポレーションにより除去される）。このトランス−ＣＡ４Ｐの形成は、この改良手順において避けられる。
【０１７８】
（試薬および方法）
以下の試薬および化学物質は、市販の供給源から得られ、そしてさらなる精製なしで使用された：イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）（Ｂ＆Ｊ  Ｂｒａｎｄ，高度の精製溶媒グレード）、硫酸（ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，９５〜９８％，Ｌｏｔ  ＃  ３５３１０）、グリシンメチルエステルヒドロクロリド（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．９９％標識，Ｌｏｔ  ＃  ０３２１４ＭＵ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．９９．５％標識、Ｌｏｔ  ＃  ０２８１９  ＥＲ）。多重核ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｃｋｅｒ  ＤＲＸ４００スペクトルで記録した。1Ｈおよび13Ｃ  ＮＭＲ化学シフトを、テトラメチルシランと比較したｐｐｍで報告する（この13Ｃ
ＮＭＲ化学シフトを、外部基準としてメタノールを使用して決定した）。この２Ｄ  ＮＭＲ実験（ＨＭＱＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ
Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）、どの分子の1Ｈが、どの13Ｃ核（または他のＸ核）に結合するかを決定する逆化学シフト相関実験）］；およびＨＭＢＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｂｏｎｄ  Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）長い範囲の1Ｈ−13Ｈの相関、ならびに分子の構造、1Ｈおよび13Ｃのアサイメントを決定するのに適した、改良されたＨＭＱＣのバージョン）を、この構造に対する1Ｈおよび13Ｃ  ＮＭＲシグナルのアサイメントを助けるために処理した。示差走査熱分析（ＤＳＣ）を、ＣＳＣ／２９２０  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ，ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓを用いて実施した。
【０１７９】
（シスＣＡ４Ｐモノグリシンメチルエステル塩）
１００ｍＬの丸底フラスコを、シスＣＡ４Ｐジナトリウム塩（２．８６６ｇ、６．５１ｍｍｏｌ）およびＩＰＡ（３０ｍＬ）で充填した。得られたスラリーを、周囲温度で機械で攪拌した。硫酸（０．３６５ｍＬ、６．５１ｍｍｏｌ）のＩＰＡ溶液（６０ｍＬ）を、このスラリーに滴下添加した。この混合物を、連続的に約１０分間攪拌し、そしてＷｈａｔｍａｎ  ＃１濾紙を使用して、吸引を伴って濾過した。この固体（ＩＰＡに溶解されるＮａ2ＳＯ4）を、ＩＰＡ（１０ｍＬ）で洗浄した。濾過しそして洗浄し、ＣＡ４Ｐ遊離酸を含むものを、別の１００ｍＬの丸底フラスコに合わせた。グリシンメチルエステルヒドロクロリド（０．８２６ｇ、６．５１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．２５４ｍＬ、７．１６ｍｍｏｌ）を、合わせた溶液に添加した。得られた混合物を、機械で攪拌しながら油浴中で加熱した。６０℃で、この混合物は、透明な液体となった。６５℃で、この溶液は、スラリーとなった。７８℃で、このスラリーは溶解し、透明な溶液を形成した。加熱をストップし、そしてこの溶液を油浴中でゆっくりと冷却させた。６０℃で、シスＣＡ４Ｐモノグリシルメチルエステル塩のシードを、溶液に添加して、スラリーを形成した。６０℃〜周囲温度まで約１時間かけて攪拌し続け、次いで、周囲温度で一晩攪拌した。この白色の結晶固体を、Ｗｈａｔｍａｎ  ＃１濾紙を使用して吸引を伴って濾過することによって単離し、そしてＩＰＡ（３×１０ｍＬ）で洗浄し、そして６時間空気の流れで乾燥し、２．６０９ｇのシスＣＡ４Ｐモノグリシンメチルエステル塩（５．３８ｍｍｏｌ，８２．６％収率）を得た：ＨＰＬＣ分析，１００％のシス−ＣＡ４Ｐ；ｍｐ  １３６．４０℃（ＤＳＣ）；1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ
３．５２（ｓ，６Ｈ，Ｈ１５およびＨ−１７），３．６１（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１６），３．７１（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），３．７７（ｓ，３Ｈ，Ｈ−２１），３．８７（ｓ，２Ｈ，Ｈ−２０），６．２６（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−８），６．４２（ｓ，２Ｈ，Ｈ−１０およびＨ−１４），６．４３（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），６．７０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３），６．７９（ブロードｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．１６（ブロードｓ，１Ｈ，Ｈ−６）；13ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，｛1Ｈ｝，Ｄ2Ｏ）δ  ４１．２７（Ｃ−２０），５４．５８（Ｃ−２１），５６．９９（２Ｃ，Ｃ−１５およびＣ−１７），５７．２１（Ｃ−１８），６２．０９（Ｃ−１６），１０７．６０（Ｗ，Ｃ−１０およびＣ−１４），１１３．８９（Ｃ−３），１２２．９８（Ｃ−６），１２６．２２（Ｃ−４），１３０．２５（Ｃ−８），１３０．６９（Ｃ−７），１３１．３７（Ｃ−５），１３４．６１（Ｃ−９），１３７．０９（Ｃ−１２），１４２．４２（ｄ，2ＪPC＝６．９Ｈｚ，Ｃ−１），１５０．８９（ｄ，3ＪPC＝４．６Ｈｚ，Ｃ−２），１５３．３３（２Ｃ，Ｃ−１１およびＣ−１３），１６９．９５（Ｃ−１９）。Ｃ21Ｈ28ＮＯ10Ｐ：Ｃ，５１．９６；Ｈ，５．８１；Ｎ，２．８８；Ｐ，６．３８の計算値。実測値：Ｃ，５１．７４；Ｈ，５．７９；Ｎ，２．８７；Ｐ，６．３０。
【０１８０】
【化３８】
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（注記：上記の番号付けシステム（このような番号付けシステムが、本明細書中で記載される場合はいつでも）は、便宜のためだけであり、ＩＵＰＡＣの命名法とは一致しないかもしれない）。
【０１８１】
シスＣＡ４Ｐモノグリシルメチルエステル塩（サンプルサイズ：３．７４００ｍｇ）のＤＳＣは、図１２に示され；図１３は、この材料の粉末Ｘ線データを示す。
【０１８２】
（実施例５）
（ＣＡ４Ｐ遊離酸のグリシンエチルエステル塩の調製）
酢酸エチル（２ｍＬ）、ＣＡ４Ｐイソプロパノール溶液（０．４２Ｍの溶液（１５０μＬ）、６３μｍｏｌ）およびグリシンエステルｔｅｒｔ−ブチルエステル溶液（０．０８Ｍの溶液（８００μＬ）、６４μｍｏｌ）を、ＨＰＬＣバイアルに添加し、約３分間激しく攪拌した。得られた透明な溶液を、別の実験からのスラリーの滴でシードし、そしてこの混合物を、周囲温度で一晩放置した。結晶ではない、形成された白色の固体は、顕微鏡実験に基づいており、この混合物は、３日間以上、周囲温度で放置した。メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１ｍＬ）を添加し、そしてこの混合物を約１０分間攪拌した。得られた混合物の顕微鏡実験は、この固体が結晶針に変えられることを示した。この針状物を減圧濾過によって単離し、そして乾燥してＣＡ４Ｐのグリシンエチルエステル塩（２２．４ｍｇ、６６Ｍ％収率）を得た。プロトンＮＭＲ分析は、グリシンエステルエーテル：ＣＡ４Ｐの比が１．７：１であることを示した。ＣＡ４Ｐグリシンエチルエステルの1Ｈ  ＮＭＲデータ：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ  １．２０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ3），３．６０（ｓ，６Ｈ，Ｈ−１５およびＨ１７），３．６６（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１６），３．７４（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），３．７９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2Ｎ），４．２１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＨ3），６．４４（ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−８），６．５５（ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），６．５７（ｓ，２Ｈ，Ｈ−１０およびＨ−１４），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３），６．８５（ブロードｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．２３（ブロードｓ，１Ｈ，Ｈ−６）。
【０１８３】
本発明は、本明細書中に記載される特定の実施形態によって範囲を限定されない。さらに、本明細書中に記載されるものに加えて、本発明の種々の改変は、上記の記載から当業者に明らかとなる。このような改変は、添付の特許請求の範囲内に入ると意図される。
【０１８４】
種々の刊行物および特許文献は、本明細書中で引用される、これらの開示は、本明細書中でその全体が参考として援用される。
【図面の簡単な説明】
【０１８５】
【図１】図１は、ＣＡ４ＰのモノＴＲＩＳ塩（実施例１において調製された）の、２５℃での水分の吸着／脱離プロフィールを示す。このデータは、ＶＴＩ  Ｍｏｄｅｌ  ＭＢ−３０ＯＷ  Ｍｏｉｓｔｕｒｅバランスを使用して、１０％の増分で１０％〜９０％の相対湿度レベルで得た。各湿度での最大平衡時間を、４時間に設定した。
【図２】図２は、ＣＡ４ＰのモノＴＲＩＳ塩（実施例１で調製した）のサンプルの粉末Ｘ線回折パターンを示し、このサンプルは、異なる溶媒（水、イソプロパノール、エタノール、アセトニトリルおよびアセトン）中で、最初に７０〜７５℃で５〜１０分間、次いで室温で一晩スラリーにした。このＸ線回折図を、Ｒｉｇａｋｕ  Ｍｏｄｅｌ  Ｍｉｎｉｆｌｅｘ  Ｘ線回折計を使用して、１分当たり１°の走査速度で２°〜４０°２θでＣｕ−Ｋα源を用いて記録した。
【図３】図３は、１分当たり１０℃の加熱速度で窒素流下で得られた、ＣＡ４ＰモノＴＲＩＳ塩（実施例１で調製した）の示差走査熱分析（ＤＳＱ自記温度記録図（Ｍｏｄｅｌ  ＤＳＣ  ２９１０，ＴＡ機器）を示す。
【図４】図４は、ＣＡ４１モノＴＲＩＳ塩（実施例１で調製した）の、２５℃でのｐＨ−溶解度プロフィールを示す。このｐＨは、水酸化ナトリウムを用いて調整した。
【図５】図５は、ＣＡ４Ｐのモノ−Ｌ−ヒスチジン塩（実施例３で調製した）（２．０９００ｍｇのサンプルサイズ）の示差走査熱分析（ＤＳＣ）の自記温度記録図を示す。
【図６】図６は、ＣＡ４Ｐのモノ−Ｌ−ヒスチジン塩（実施例３で調製した）の示差走査熱分析（ＤＳＣ）の自記温度記録図を示す。
【図７】図７は、ＣＡ４Ｐのモノ−Ｌ−ヒスチジン塩（実施例３で調製した）の示差走査熱分析（ＤＳＣ）の自記温度記録図を示す。
【図８】図８は、ＣＡ４Ｐのモノ−Ｌ−ヒスチジン塩（実施例３で調製した）の粉末Ｘ線回折パターンを示す。
【図９】図９は、ＣＡ４Ｐのモノ−Ｌ−ヒスチジン塩（実施例３で調製した）の粉末Ｘ線回折パターンを示す。
【図１０】図１０は、ＣＡ４Ｐのモノ−Ｌ−ヒスチジン無水物塩（実施例３で調製した）の示差走査熱分析（ＤＳＣ）の自記温度記録図を示す。
【図１１】図１１は、ＣＡ４Ｐのモノ−Ｌ−ヒスチジン無水物塩（実施例３で調製した）の粉末Ｘ線回折パターンを示す。
【図１２】図１２は、ＣＡ４Ｐモノグリシンメチルエステル塩（実施例４で調製した）の示差走査熱分析（ＤＳＣ）の自記温度記録図を示す。
【図１３】図１３は、ＣＡ４Ｐモノグリシンメチルエステル塩（実施例４で調製した）の粉末Ｘ線回折パターンを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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