(57)【要約】      （修正有）【課題】神経因性疼痛の治療剤及び／又は予防剤として、安全、且つ、速効性の優れた鎮痛作用を有するカルシトニンの徐放性製剤の提供。【解決手段】カルシトニン、特にエルカトニンを有効成分として含有し、生体内分解性ポリマーである乳酸／グリコール酸の重合比が５０／５０〜７５／２５、分子量が５０００〜２００００の乳酸・グリコール酸共重合体を適切な比率の処方にて作製したマイクロスフェアで、神経因性疼痛治療剤及び／又は予防剤として有用な溶出パターンを示す徐放性製剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カルシトニンを有効成分として含有し、生体内分解性ポリマーから形成されるマイクロスフェアであり、該マイクロスフェアを６６．７ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中に懸濁させ、３７℃にて毎分５５〜６５回の振とう条件で溶出試験を実施した際に、溶出率が溶出試験開始から１時間後の時点で約３０％以下であり、且つ、溶出試験開始から１週間後の時点で約７０％以上を示すことを特徴とする徐放性製剤。
【請求項２】
生体内分解性ポリマーが、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、及び乳酸・グリコール酸共重合体からなる群から選ばれる１種又は２種以上である請求項１に記載の徐放性製剤。
【請求項３】
生体内分解性ポリマーが乳酸・グリコール酸共重合体であり、その組成が、乳酸／グリコール酸の重合比が約５０／５０、分子量が約２００００の乳酸・グリコール酸共重合体と乳酸／グリコール酸の重合比が約７５／２５、分子量が約２００００の乳酸・グリコール酸共重合体の組成比が約４：１〜約１：４である請求項２に記載の徐放性製剤。
【請求項４】
生体内分解性ポリマーが乳酸・グリコール酸共重合体であり、その組成が、乳酸／グリコール酸の重合比が約７５／２５、分子量が約５０００の乳酸・グリコール酸共重合体と乳酸／グリコール酸の重合比が約７５／２５、分子量が約２００００の乳酸・グリコール酸共重合体の組成比が約４：１〜約１：４である請求項２に記載の徐放性製剤。
【請求項５】
カルシトニンがエルカトニンである請求項１〜４に記載の徐放性製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経因性疼痛の治療剤及び／又は予防剤として、安全、且つ、速効性の優れた鎮痛作用を有するカルシトニンの徐放性製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
神経因性疼痛（ニューロパシックペインまたは神経障害性疼痛とも呼ばれるが、以下、本願明細書では神経因性疼痛と呼ぶ。）とは、末梢または中枢神経系の機能異常の結果として生じる難治性疼痛である。神経因性疼痛は外傷、感染、癌、虚血、糖尿病などの代謝障害等によって引き起こされる神経障害により発症する。発症のメカニズムは不明な点が多いが、知覚神経の異常な持続的発火等が原因と考えられている。神経因性疼痛の代表的な症状には、アロディニア、痛覚過敏又は知覚過敏などがある。これらの症状は、“焼け付くような”、“針で刺されるような”又は”電気ショックのような”等と表現される特徴的な痛みを呈する。神経因性疼痛には通常の侵害受容性疼痛に有効である鎮痛剤、特に麻薬性鎮痛薬等は効きにくいことが知られている（非特許文献１）。
【０００３】
この神経因性疼痛に対して、カルシトニン、特に［ＡＳＵ１−７］ウナギカルシトニン（特許文献１に記載の化学名１−ブチル酸−７−（Ｌ−２−アミノブチル酸）−２６−Ｌ−アスパラギン酸−２７−Ｌ−バリン−２９−Ｌ−アラニンカルシトニン；以下「エルカトニン」と称することもある）を持続投与すると速効性の強い鎮痛作用を示すこと、さらには血清カルシウムを変動させない用量の持続投与でも同様の効果を示すことが報告され、さらに、持続投与時間としては、８時間以上が好ましく、１２時間以上がさらに好ましく、１６時間以上が特に好ましく、投与期間としては１か月以下が好ましく、２週間以下がさらに好ましいことが報告されている（特許文献２）。
【０００４】
近年医薬品の製剤技術に関する研究領域において、生体内分解性高分子を基剤としたコントロールリリース製剤などの研究が数多くなされている。そのうち、すでにかなりの技術が積み重ねられているものに、マイクロスフェア（マイクロカプセルと称されることもある）と称されるものがあり、注射剤や経口剤などでの利用が試みられている。
【０００５】
これらのなかには、薬物として黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨ−ＲＨ）の誘導体である酢酸リュープロレリンを含み、高分子として生体内分解性ポリマーである乳酸・グリコール酸共重合体を用いたもので（非特許文献２）、既に医薬品として利用されているものもある。
【０００６】
乳酸・グリコール酸共重合体を用いたマイクロスフェアの溶出特性の問題として、溶出初期に急激な薬物放出が生じる初期バーストが挙げられ、初期バーストが起こると血中濃度が上昇し、副作用を生じる恐れがあることが報告されている（特許文献３）。
【特許文献１】特公昭５３−４１６７７号公報
【特許文献２】国際公開ＷＯ２００６／１３２２６１号パンフレット
【特許文献３】特開平９−１１０６７８号公報
【非特許文献１】Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ  ３５３，１９５９−１９６６，１９９９
【非特許文献２】Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，ｖｏｌ．３６，１０９５−１１０３，（１９８８）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、神経因性疼痛の治療剤及び／又は予防剤として、安全、且つ、速効性の優れた鎮痛作用を有するカルシトニンの徐放性製剤を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、目的とする溶出性を示す製剤処方を見いだし、本発明を完成した。
【０００９】
すなわち、本発明は、
（１）カルシトニンを有効成分として含有し、生体内分解性ポリマーから形成されるマイクロスフェアであり、該マイクロスフェアを６６．７ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中に懸濁させ、３７℃にて毎分５５〜６５回の振とう条件で溶出試験を実施した際に、溶出率が溶出試験開始から１時間後の時点で約３０％以下であり、且つ、溶出試験開始から１週間後の時点で約７０％以上を示すことを特徴とする徐放性製剤、
（２）生体内分解性ポリマーが、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、及び乳酸・グリコール酸共重合体からなる群から選ばれる１種又は２種以上である前記（１）に記載の徐放性製剤、
（３）生体内分解性ポリマーが乳酸・グリコール酸共重合体であり、その組成が、乳酸／グリコール酸の重合比が約５０／５０、分子量が約２００００の乳酸・グリコール酸共重合体と乳酸／グリコール酸の重合比が約７５／２５、分子量が約２００００の乳酸・グリコール酸共重合体の組成比が約４：１〜約１：４である前記（２）に記載の徐放性製剤、
（４）生体内分解性ポリマーが乳酸・グリコール酸共重合体であり、その組成が、乳酸／グリコール酸の重合比が約７５／２５、分子量が約５０００の乳酸・グリコール酸共重合体と乳酸／グリコール酸の重合比が約７５／２５、分子量が約２００００の乳酸・グリコール酸共重合体の組成比が約４：１〜約１：４である前記（２）に記載の徐放性製剤、
（５）カルシトニンがエルカトニンである前記（１）〜（４）に記載の徐放性製剤、
に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、薬剤投与による患者への負担や、副作用が軽減でき、より効果の高い速攻性のある神経因性疼痛治療剤及び／又は予防剤であるカルシトニンの徐放性製剤を提供することが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本願発明について具体的に説明する。
【００１２】
本発明の神経因性疼痛治療剤及び／又は予防剤の有効成分として有用なカルシトニンとしては、種々の天然型カルシトニン、またはそのペプチド類似体等が挙げられる。天然型カルシトニンの例としては、ニワトリカルシトニン、ウナギカルシトニン、ヒトカルシトニン、サケカルシトニン、またはブタカルシトニン等が挙げられ、ウナギカルシトニン、サケカルシトニン（Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ（１９６９），５２（７），１７８９−９５）が好ましい例として挙げられ、ウナギカルシトニンが特に好ましい例として挙げられる。また、別の態様としては、サケカルシトニンが好ましい場合もある。
【００１３】
天然型カルシトニンのペプチド類似体の例としては、前述の天然型カルシトニンの構造に基づいて、その１，７位のジスルフィド結合を化学的に修飾した化合物等が挙げられ、具体的には［ＡＳＵ１−７］ニワトリカルシトニン、［ＡＳＵ１−７］ウナギカルシトニン等が好ましい例として挙げられ、［ＡＳＵ１−７］ウナギカルシトニン（エルカトニン）が特に好ましい例として挙げられる。
【００１４】
本発明の神経因性疼痛治療剤及び／又は予防剤の有効成分として有用なカルシトニンとしては、エルカトニン、又はサケカルシトニンが特に好ましく、エルカトニンが最も好ましい。
【００１５】
本発明に用いられる生体内分解性ポリマーとは、下記の溶出性を示すマイクロスフェアを形成し、生体内で分解・消失される性質を有する高分子重合物であれば、特に限定されない。例えば、乳酸、グリコール酸、リンゴ酸およびヒドロキシ酪酸などからなる群から選ばれる一種の重合物でもよく、２種以上の共重合物でもよい。これらの中で、好ましくはポリ乳酸、ポリグリコール酸、及び乳酸・グリコール酸共重合体からなる群から選ばれる１種又は２種以上が好ましく、より好ましくはポリ乳酸、ポリグリコール酸、又は乳酸・グリコール酸共重合体が挙げられ、さらに好ましくは乳酸・グリコール酸共重合体が挙げられる。
【００１６】
例えば、乳酸・グリコール酸共重合体の処方としては、乳酸／グリコール酸の重合比が約５０／５０、分子量が約２００００の乳酸・グリコール酸共重合体（＝ＰＬＧＡ５０２０）と、乳酸とグリコール酸の重合比が約７５／２５、分子量が約２００００の乳酸・グリコール酸共重合体（＝ＰＬＧＡ７５２０）を用いて、ＰＬＧＡ５０２０とＰＬＧＡ７５２０の組成比率が約４：１〜約１：４、好ましくは約３：１〜約１：３、さらに好ましくは約２：１〜１：２、特に好ましくは、約１：２である。又、約１：１が好ましい別の態様もある。さらには、約２：３が好ましい別の態様もある。また別の例としては、乳酸／グリコール酸の重合比が約７５／２５、分子量が約５０００の乳酸・グリコール酸共重合体（＝ＰＬＧＡ７５０５）と、乳酸／グリコール酸の重合比が約７５／２５、分子量が約２００００の乳酸・グリコール酸共重合体（＝ＰＬＧＡ７５２０）を用いて、ＰＬＧＡ７５０５とＰＬＧＡ７５２０の組成比率が、約４：１〜約１：４、好ましくは約３：１〜約１：３、さらに好ましくは約２：１〜１：２、特に好ましくは、約１：２である。又、約１：１が好ましい別の態様もある。さらには、約２：３が好ましい別の態様もある。
【００１７】
本発明のマイクロスフェアの溶出性としては、該マイクロスフェアを６６．７ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中に懸濁させ、３７℃にて毎分５５〜６５回の振とう条件で溶出試験を実施した際に、溶出試験開始から１時間後の時点での溶出率が約３０％以下であれば、実質的に初期バーストは抑制されていると判断できるが、好ましくは約２０％以下であり、さらに好ましくは約１０％以下である。また、本発明のマイクロスフェアの溶出性としては、該溶出試験開始から１週間後ではなく、２週間後の時点での溶出率が実質的に１００％となる様にコントロールされることが好ましい。該溶出試験開始から１週間後の時点での溶出率としては、７０％以上であることが好ましく、７２％〜９５％であることがより好ましく、７３％〜９０％であることがさらに好ましく、７５％〜８５％であることが特に好ましい。そして、該溶出試験開始から２週間後の時点での溶出率としては７８％以上が好ましく、８０％以上がより好ましく、８４％以上がさらに好ましく、９０％以上が特に好ましく、９５％以上が特に大変好ましい。すなわち、溶出試験開始から１時間後の時点での溶出率が約３０％以下、好ましくは約２０％以下、さらに好ましくは約１０％以下であり、且つ、溶出試験開始から１週間後の時点での溶出率が約７０％以上を示す溶出性が好適な例として挙げられ、溶出試験開始から１週間後の時点での溶出率が７２％〜９５％を示す溶出性がより好ましく、溶出試験開始から１週間後の時点での溶出率が７３％〜９０％を示す溶出性がさらに好ましく、溶出試験開始から１週間後の時点での溶出率が７５％〜８５％を示す溶出性が特に好ましい例として挙げられる。
【００１８】
本発明のマイクロスフェアの基本的な調製法の例として、「油中エマルション溶媒拡散法」の概略を以下に示すが、本発明のマイクロフェアーの調製法として、この方法のみにとらわれるものではない。
【００１９】
「油中エマルション溶媒拡散法」では、まず、脂肪酸グリセリドなどの脂質、ｎ−ヘキサンなどの第１の有機溶媒、及び第１の乳化剤を混合し、溶解した外相＜Ａ＞を調製する。一方、生体内分解性ポリマー、カルシトニン、及び第２の乳化剤を第２の有機溶媒に溶解した内相＜Ｂ＞を調製する。外相＜Ａ＞中に攪拌下、内相＜Ｂ＞をペリスターポンプなどを用いて、ゆっくりと滴下する。次に、加温減圧下、数時間にわたり攪拌を続け、マイクロスフェアを生成させる。得られたマイクロスフェアの懸濁液について、必要に応じ第１の有機溶媒を加えたのち、遠心分離を行い、上澄み液を除去する。さらに必要に応じ、粒子表面の脂質を除去するために第１の有機溶媒を加えて再懸濁し、遠心分離後、上澄み液を除去する操作を繰り返す。
【００２０】
得られたペレットを、ポリビニルアルコールを溶解した水系溶液（水溶液、各種の緩衝液溶液）中に分散させる。その後、遠心分離、上澄み液を除去後、ペレットを水に再懸濁する。得られた懸濁液を凍結乾燥することにより、カルシトニンを封入したマイクロスフェアを得ることができる。
【００２１】
外相＜Ａ＞に用いる脂質とは、生体内分解性ポリマー及びカルシトニンを溶かしにくい性質を持つ単純脂質であり、例としては、大豆油、ゴマ油、ヒマシ油、コーン油、綿実油などの植物油、脂肪酸グリセリドなどが挙げられ、脂肪酸グリセリドが好適な例として挙げられるが、前記の例の２種以上を混合して用いてもよい。脂肪酸グリセリドとしては、中鎖脂肪酸トリグリセリドが好ましく、トリ（カプリル・カプリン酸）グリセリンが特に好ましい。また、これらの脂質の代わりに、流動パラフィンやシリコーンオイルを用いてもよい。
【００２２】
第１の有機溶媒とは、用いる脂質を溶かしやすく、且つ生体内分解性ポリマー及びカルシトニンを溶かしにくい溶媒であり、例えば炭化水素系溶媒が好ましく、具体的にはｎ−ヘキサン、ｎ−ヘプタンなどが挙げられ、ｎ−ヘキサンが特に好ましい。
【００２３】
外相＜Ａ＞は、上記の脂質または第１の有機溶媒を単独で用いてもよいが、好ましくは、脂質と第１の有機溶媒を混合して用いた方がよく、さらに好ましくは、中鎖脂肪酸トリグリセリドとｎ−ヘキサンなどを混合して用いるのがよい。
【００２４】
内相＜Ｂ＞に用いる第２の有機溶媒とは、生体内分解性ポリマーおよびカルシトニンを溶かしやすく、第１の有機溶媒に溶け込む性質を持ち、且つ第１の有機溶媒より低沸点の有機溶媒である。該溶媒の沸点としては、約１２０℃以下、好ましくは１００℃以下、さらに好ましくは約３０〜８０℃である。例としては、アセトン、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン等であり、またこれらの２種以上の混合溶媒であってもよい。
【００２５】
第１及び第２の乳化剤は、それぞれの溶媒に溶解するものの中から、適当なものを選ぶことができる。第１の乳化剤は、条件によっては無くてもよい。乳化剤の例としては、ステアリン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウムなどのアニオン性界面活性剤、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体などの非イオン性界面活性剤、レシチンなどが挙げられる。これらの乳化剤は２種以上を混合して用いてもよい。好ましくは、それぞれ非イオン性界面活性剤を用いるのがよく、第２の乳化剤としては、モノオレイン酸ソルビタンが特に好ましい。
【００２６】
外相＜Ａ＞と内相＜Ｂ＞の混合比率は、内相＜Ｂ＞１重量部当たり、外相＜Ａ＞０．５〜１０００重量部、好ましくは１〜１００重量部である。また、生体内分解性ポリマーの内相＜Ｂ＞中の濃度は、ポリマーの種類や分子量、第２の有機溶媒の種類によって異なるが、通常０．０１〜５０％（ｗ／ｗ）、好ましくは０．１〜３０％（ｗ／ｗ）である。また、カルシトニンの生体内分解性ポリマーに対する割合は、例えば、０．０００５〜５０％（ｗ／ｗ）、好ましくは０．０５〜２０％（ｗ／ｗ）である。また、ポリビニルアルコールの水系溶液中の濃度は、通常０．０５〜５％（ｗ／ｗ）であり、好ましくは０．３〜３％（ｗ／ｗ）である。また、乳化剤を使用する際の濃度は、通常０．０１〜２０％（ｗ／ｗ）であり、好ましくは０．０５〜１０％（ｗ／ｗ）である。
【００２７】
攪拌は、通常マグネティックスターラーなど緩和な条件で行うが、必要ならば高速ホモジナイザーなどを用いてもよい。
【００２８】
また、調製したマイクロスフェアの単離は、上記に示したような凍結乾燥の他、超遠心分離や透析などにより行うことができる。
【００２９】
また、上記に示した内相＜Ｂ＞に代えて、例えばＷ／Ｏ型エマルションを内相＜Ｂ＞として用いてマイクロスフェアを調製してもよい。即ち、生体内分解性ポリマーと乳化剤をクロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、トリクロロエタンなどの揮発性有機溶媒に溶解し、これに、カルシトニンを、例えば水溶液、各種緩衝液などの水系溶媒に溶解したものを加え、ホモジナイザーなどを用いてＷ／Ｏ型エマルジョンを調製し、これを上記の内相＜Ｂ＞として用いてもよい。
【００３０】
本発明のマイクロスフェアの粒子径としては、該マイクロスフェアを精製水中に懸濁させ、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ３０００ＨＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ，Ｍａｌｖｅｒｎ  ＵＫ）を用いて粒子径を測定し、粒子径の算出方法として、動的光散乱（光子相関法）で求めた自己相関係数よりキュムラント法で行い、その平均粒子径（ＺＡｖｅ）として求めた場合において、４００ｎｍ〜１００００ｎｍが好ましく、５００ｎｍ〜５０００ｎｍがより好ましく、６００ｎｍ〜３０００ｎｍがさらに好ましく、８００ｎｍ〜２０００ｎｍが特に好ましい。
【００３１】
本発明のマイクロスフェアを含有する製剤としては、注射剤、経口投与剤、経鼻投与剤、経肺投与剤、坐剤（例、直腸坐剤、膣坐剤）などが挙げられ、好ましくは注射剤（例えば、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射又は腹腔内注射）が挙げられる。
【００３２】
製剤の投与量は、製剤からの薬物の放出量をもとに、以下の神経因性疼痛に有効な投与量から換算する。神経因性疼痛に有効な投与量は、ヒトにおける下限値として、０．００３ｍＵ／ｋｇ／ｗｅｅｋ以上が好ましく、０．０１ｍＵ／ｋｇ／ｗｅｅｋ以上がより好ましく、０．０３ｍＵ／ｋｇ／ｗｅｅｋ以上がさらに好ましい。ヒトにおける上限値として、血清カルシウム値を変動させない量、すなわち５６Ｕ／ｋｇ／ｗｅｅｋ未満が好ましく、４０Ｕ／ｋｇ／ｗｅｅｋ以下がより好ましく、１８Ｕ／ｋｇ／ｗｅｅｋ以下がさらに好ましく、３Ｕ／ｋｇ／ｗｅｅｋ以下が最も好ましい。
【００３３】
（実施例）
以下に、実施例、参考例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。更に実験例を挙げて、本発明製剤の効果を具体的に示す。なお、以下の実施例において、乳酸・グリコール酸共重合体はＰＬＧＡと略す。
【実施例１】
【００３４】
エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（５０２０：７５２０＝１：１）粉末
ポリリシノレイン酸ヘキサグリセリル（Ｈｅｘａｇｌｙｎ  ＰＲ−１５；日光ケミカルズ社製）を１．２％含有するトリ（カプリル・カプリン酸）グリセリン（トリエスターＦ８１０；日光ケミカルズ社製）６０ｍＬを調製し、さらにｎ−ヘキサン４０ｍＬを混合溶解し外相を調製した。次に、エルカトニン（旭化成ファーマ社製）１ｍｇをメタノール１．５ｍＬに溶解させ、モノオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ８０：ナカライテスク社製）１００ｍｇ、ＰＬＧＡ５０２０（平均分子量２００００、乳酸／グリコール酸重合比＝５０／５０、和光純薬工業社製）５０ｍｇとＰＬＧＡ７５２０（平均分子量２００００、乳酸：グリコール酸重合比＝７５：２５、和光純薬工業社製）５０ｍｇをアセトン３ｍＬに溶解させたものと混合し、これを内相とした。
【００３５】
３５℃に制御した外相を４００ｒｐｍで攪拌下、ペリスタポンプを用いて内相を２ｍＬ／ｍｉｎの速度で滴下した。これを減圧下、３時間攪拌を続け、得られた懸濁液にｎ−ヘキサン２０ｍＬを加え、遠心操作（２００００ｒｐｍ、４℃、１０ｍｉｎ）を行った。上清を除去し、沈殿物の粒子表面のトリ（カプリル・カプリン酸）グリセリンを洗浄するため、沈殿物をｎ−ヘキサン中に再懸濁し、再度遠心操作を行った。この操作を２回行い、沈殿物を１％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ−４０３、クラレ社製）溶液 ２０ｍＬに分散させた。さらに遠心操作した後、上清を除去し、沈殿物を精製水に再懸濁し、これを凍結乾燥し、エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（５０２０：７５２０＝１：１）粉末（エルカトニン含有率：０．６６％）を得た。
【００３６】
粒子径の測定：エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（５０２０：７５２０＝１：１）粉末を精製水中に懸濁させ、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ３０００ＨＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ，Ｍａｌｖｅｒｎ  ＵＫ）を用いて粒子径を測定した。粒子径の算出は、動的光散乱（光子相関法）で求めた自己相関係数よりキュムラント法で行い、その平均粒子径（ＺＡｖｅ）は９９７．０ｎｍであった。
【実施例２】
【００３７】
エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（５０２０：７５２０＝１：２）粉末
ポリリシノレイン酸ヘキサグリセリル（Ｈｅｘａｇｌｙｎ  ＰＲ−１５；日光ケミカルズ社製）を１．２％含有するトリ（カプリル・カプリン酸）グリセリン（トリエスターＦ８１０；日光ケミカルズ社製）６０ｍＬを調製し、さらにｎ−ヘキサン４０ｍＬを混合溶解し外相を調製した。次に、エルカトニン（旭化成ファーマ社製）１ｍｇをメタノール１．５ｍＬに溶解させ、モノオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ８０：ナカライテスク社製）１００ｍｇ、ＰＬＧＡ５０２０（平均分子量２００００、乳酸／グリコール酸重合比＝５０／５０、和光純薬工業社製）３３．３ｍｇとＰＬＧＡ７５２０（平均分子量２００００、乳酸／グリコール酸重合比＝７５／２５、和光純薬工業社製）６６．７ｍｇをアセトン３ｍＬに溶解させたものと混合し、これを内相とした。
【００３８】
３５℃に制御した外相を４００ｒｐｍで攪拌下、ペリスタポンプを用いて内相を２ｍＬ／ｍｉｎの速度で滴下した。これを減圧下、３時間攪拌を続け、得られた懸濁液にｎ−ヘキサン２０ｍＬを加え、遠心操作（２００００ｒｐｍ、４℃、１０ｍｉｎ）を行った。上清を除去し、沈殿物の粒子表面のトリ（カプリル・カプリン酸）グリセリンを洗浄するため、沈殿物をｎ−ヘキサン中に再懸濁し、再度遠心操作を行った。この操作を２回行い、沈殿物を１％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ−４０３、クラレ社製）溶液 ２０ｍＬに分散させた。さらに遠心操作した後、上清を除去し、沈殿物を精製水に再懸濁し、これを凍結乾燥し、エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（５０２０：７５２０＝１：２）粉末（エルカトニン含有率：０．６３％）を得た。
【００３９】
粒子径の測定：エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（５０２０：７５２０＝１：２）粉末に精製水中に懸濁させ、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ３０００ＨＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ，Ｍａｌｖｅｒｎ  ＵＫ）を用いて粒子径を測定した。粒子径の算出は、動的光散乱（光子相関法）で求めた自己相関係数よりキュムラント法で行い、その平均粒子径（ＺＡｖｅ）は９２９．２ｎｍであった。
【実施例３】
【００４０】
エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（７５０５：７５２０＝１：１）粉末
実施例１のＰＬＧＡ５０２０（平均分子量２００００、乳酸／グリコール酸重合比＝５０／５０、和光純薬工業社製）の代わりにＰＬＧＡ７５０５（平均分子量５０００、乳酸／グリコール酸重合比＝７５／２５、和光純薬工業社製）を用いて同様に調製し、エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（７５０５：７５２０＝１：１）粉末を得ることができる。
【実施例４】
【００４１】
エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（７５０５：７５２０＝１：２）粉末
実施例２のＰＬＧＡ５０２０（平均分子量２００００、乳酸／グリコール酸重合比＝５０／５０、和光純薬工業社製）の代わりにＰＬＧＡ７５０５（平均分子量５０００、乳酸／グリコール酸重合比＝７５／２５、和光純薬工業社製）を用いて同様に調製し、エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（７５０５：７５２０＝１：２）粉末を得ることができる。
【００４２】
［参考例１］
エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（５０２０）粉末
ポリリシノレイン酸ヘキサグリセリル（Ｈｅｘａｇｌｙｎ  ＰＲ−１５；日光ケミカルズ社製）を１．２％含有するトリ（カプリル・カプリン酸）グリセリン（トリエスターＦ８１０；日光ケミカルズ社製）６０ｍＬを調製し、さらにｎ−ヘキサン４０ｍＬを混合溶解し外相を調製した。次に、エルカトニン（旭化成ファーマ社製）２ｍｇをメタノール１．５ｍＬに溶解させ、モノオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ８０：ナカライテスク社製）１００ｍｇ、ＰＬＧＡ５０２０（平均分子量２００００、乳酸／グリコール酸重合比＝５０／５０、和光純薬工業社製）１００ｍｇをアセトン３ｍＬに溶解させたものと混合し、これを内相とした。
【００４３】
３５℃に制御した外相を４００ｒｐｍで攪拌下、ペリスタポンプを用いて内相を２ｍＬ／ｍｉｎの速度で滴下した。これを減圧下、3時間攪拌を続け、得られた懸濁液にｎ−ヘキサン２０ｍＬを加え、遠心操作（２００００ｒｐｍ、４℃、１０ｍｉｎ）を行った。上清を除去し、沈殿物の粒子表面のトリ（カプリル・カプリン酸）グリセリンを洗浄するため、沈殿物をｎ−ヘキサン中に再懸濁し、再度遠心操作を行った。この操作を２回行い、沈殿物を１％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ−４０３、クラレ社製）溶液 ２０ｍＬに分散させた。さらに遠心操作した後、上清を除去し、沈殿物を精製水に再懸濁し、これを凍結乾燥し、エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（５０２０）粉末（エルカトニン含有率：１．５４％）を得た。
【００４４】
粒子径の測定：エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（５０２０）粉末に精製水中に懸濁させ、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ３０００ＨＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ，Ｍａｌｖｅｒｎ  ＵＫ）を用いて粒子径を測定した。粒子径の算出は、動的光散乱（光子相関法）で求めた自己相関係数よりキュムラント法で行い、その平均粒子径（ＺＡｖｅ）は６８９．７ｎｍであった。
【００４５】
［参考例２］
エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（７５２０）粉末
ポリリシノレイン酸ヘキサグリセリル（Ｈｅｘａｇｌｙｎ  ＰＲ−１５；日光ケミカルズ社製）を１．２％含有するトリ（カプリル・カプリン酸）グリセリン（トリエスターＦ８１０；日光ケミカルズ社製）６０ｍＬを調製し、さらにｎ−ヘキサン４０ｍＬを混合溶解し外相を調製した。次に、エルカトニン（旭化成ファーマ社製）１ｍｇをメタノール２ｍＬに溶解させ、モノオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ８０：ナカライテスク社製）１００ｍｇ、ＰＬＧＡ７５２０（平均分子量２００００、乳酸：グリコール酸重合比＝５０：５０、和光純薬工業社製）１００ｍｇをアセトン３ｍＬに溶解させたものと混合し、これを内相とした。
【００４６】
３５℃に制御した外相を４００ｒｐｍで攪拌下、ペリスタポンプを用いて内相を２ｍＬ／ｍｉｎの速度で滴下した。これを減圧下、３時間攪拌を続け、得られた懸濁液にｎ−ヘキサン２０ｍＬを加え、遠心操作（２００００ｒｐｍ、４℃、１０ｍｉｎ）を行った。上清を除去し、沈殿物の粒子表面のトリ（カプリル・カプリン酸）グリセリンを洗浄するため、沈殿物をｎ−ヘキサン中に再懸濁し、再度遠心操作を行った。この操作を２回行い、沈殿物を１％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ−４０３、クラレ社製）溶液 ２０ｍＬに分散させた。さらに遠心操作した後、上清を除去し、沈殿物を精製水に再懸濁し、これを凍結乾燥し、エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（７５２０）粉末（エルカトニン含有率：０．６３％）を得た。
【００４７】
粒子径の測定：エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（７５２０）粉末に精製水中に懸濁させ、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ３０００ＨＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ，Ｍａｌｖｅｒｎ  ＵＫ）を用いて粒子径を測定した。粒子径の算出は、動的光散乱（光子相関法）で求めた自己相関係数よりキュムラント法で行い、その平均粒子径（ＺＡｖｅ）は１２６４．９ｎｍであった。
【００４８】
［参考例３］
エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（７５０５）粉末
ポリリシノレイン酸ヘキサグリセリル（Ｈｅｘａｇｌｙｎ  ＰＲ−１５；日光ケミカルズ社製）を１．２％含有するトリ（カプリル・カプリン酸）グリセリン（トリエスターＦ８１０；日光ケミカルズ社製）６０ｍＬを調製し、さらにｎ−ヘキサン４０ｍＬを混合溶解し外相を調製した。次に、エルカトニン（旭化成ファーマ社製）２ｍｇをメタノール２ｍＬに溶解させ、モノオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ８０：ナカライテスク社製）１００ｍｇ、ＰＬＧＡ７５０５（平均分子量５０００、乳酸／グリコール酸重合比＝７５／２５、和光純薬工業社製）１００ｍｇをアセトン３ｍＬに溶解させたものと混合し、これを内相とした。
【００４９】
３５℃に制御した外相を４００ｒｐｍで攪拌下、ペリスタポンプを用いて内相を２ｍＬ／ｍｉｎの速度で滴下した。これを減圧下、３時間攪拌を続け、得られた懸濁液にｎ−ヘキサン２０ｍＬを加え、遠心操作（２００００ｒｐｍ、４℃、１０ｍｉｎ）を行った。上清を除去し、沈殿物の粒子表面のトリ（カプリル・カプリン酸）グリセリンを洗浄するため、沈殿物をｎ−ヘキサン中に再懸濁し、再度遠心操作を行った。この操作を２回行い、沈殿物を１％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ−４０３、クラレ社製）溶液 ２０ｍＬに分散させた。さらに遠心操作した後、上清を除去し、沈殿物を精製水に再懸濁し、これを凍結乾燥し、エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（５０２０）粉末（エルカトニン含有率：１．０５％）を得た。
【００５０】
粒子径の測定：エルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア（５０２０）粉末に精製水中に懸濁させ、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ３０００ＨＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ，Ｍａｌｖｅｒｎ  ＵＫ）を用いて粒子径を測定した。粒子径の算出は、動的光散乱（光子相関法）で求めた自己相関係数よりキュムラント法で行い、その平均粒子径（ＺＡｖｅ）は１１０８．８ｎｍであった。
【００５１】
［試験例１］
溶出試験
実施例１、実施例２、参考例１、参考例２、参考例３で調製したエルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア３ｍｇを６６．７ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）５ｍＬ中に懸濁させ、３７℃の恒温槽にて毎分５５〜６５回で振とうし、経時的に採取し、遠心操作（２００００ｒｐｍ、４℃、１０ｍｉｎ）した。上清を除去し、沈殿物にアセトニトリル１ｍＬを加えポリマーを溶解し、続いて６６．７ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）４ｍＬを加えエルカトニンを溶解させた。析出したポリマーを遠心操作（２００００ｒｐｍ、４℃、１０ｍｉｎ）し、その上清中の薬物濃度をＨＰＬＣにより定量した。
【００５２】
その結果、参考例１及び参考例３のエルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェアでは、溶出試験開始後１時間時点において、エルカトニンの溶出率がそれぞれ３６％及び４８％であり、初期バーストが観察された。また、参考例２のエルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェアでは、初期バーストは抑制されるものの、溶出試験開始後１週間時点において、エルカトニンの溶出率が６７％であり、２週間では完全には溶出しないことが予測された。それに対して、実施例１及び実施例２のエルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェアでは、溶出試験開始後１時間時点において、エルカトニンの溶出率がそれぞれ１０％及び２５％で、初期バーストを抑制し、かつ、溶出試験開始後１週間時点において、エルカトニンの溶出率がそれぞれ７８％及び８４％の溶出率を示し、目的とする溶出率をコントロールできる処方であることが確認できた。
【００５３】
以上から、神経因性疼痛の治療剤及び／又は予防剤として、安全、且つ、速効性の優れた鎮痛作用を有するカルシトニンの徐放性製剤であることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００５４】
本発明は、神経因性疼痛に対して有効な作用を示し、医薬用として好適である。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】図１は実施例１、実施例２、参考例１、参考例２、参考例３で得られるエルカトニン封入ＰＬＧＡマイクロスフェア粉末の薬物溶出曲線を示す。
【図１】
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