(57)【要約】【課題】シュードモナス属細菌や大腸菌が生成する揮発性硫黄臭に対する消臭防臭が高く、家庭内の不快臭成分である揮発性硫黄化合物の生成を持続的に抑制することのできる製剤の提供。【解決手段】炭素数６から12の飽和脂肪族アルデヒド、ウンデセナール、テルペン系アルデヒド、芳香族アルデヒド、５員環又は６員環の脂環式アルデヒド、５員環又は６員環の脂環式ケトン、炭素数15から17の大環状ケトン、ヌートカトン、炭素数15から16の大環状ラクトン、メチルジヒドロジャスモネート、ネロリドール及びフェニルアセトアルデヒドジメチルアセタールから選ばれる香料の少なくとも１種を有効成分とする、揮発性硫黄化合物生成抑制剤、並びに上記の揮発性硫黄化合物生成抑制剤又は酵素の阻害剤を有効量含有するハウスホールド製品。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
炭素数６から12の飽和脂肪族アルデヒド、ウンデセナール、テルペン系アルデヒド、芳香族アルデヒド、５員環又は６員環の脂環式アルデヒド、５員環又は６員環の脂環式ケトン、炭素数15から17の大環状ケトン、ヌートカトン、炭素数15から16の大環状ラクトン、メチルジヒドロジャスモネート、ネロリドール及びフェニルアセトアルデヒドジメチルアセタールから選ばれる香料の少なくとも１種を有効成分とする、揮発性硫黄化合物生成抑制剤。
【請求項２】
炭素数６から12の飽和脂肪族アルデヒド、ウンデセナール、テルペン系アルデヒド、芳香族アルデヒド、５員環又は６員環の脂環式アルデヒド、５員環又は６員環の脂環式ケトン、炭素数15から17の大環状ケトン、ヌートカトン、炭素数15から16の大環状ラクトン、メチルジヒドロジャスモネート、ネロリドール及びフェニルアセトアルデヒドジメチルアセタールから選ばれる香料の少なくとも１種を有効成分とする、システインから硫化水素を生成する酵素の阻害剤。
【請求項３】
炭素数６から12の飽和脂肪族アルデヒド、ウンデセナール、テルペン系アルデヒド、芳香族アルデヒド、５員環又は６員環の脂環式アルデヒド、５員環又は６員環の脂環式ケトン、炭素数15から17の大環状ケトン、ヌートカトン、炭素数15から16の大環状ラクトン、メチルジヒドロジャスモネート、ネロリドール及びフェニルアセトアルデヒドジメチルアセタールから選ばれる香料の少なくとも１種を有効成分とする、メチオニンからメチルメルカプタンを生成する酵素の阻害剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の剤を有効量含有するハウスホールド製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、家庭環境内における不快なニオイ成分の一つである揮発性硫黄化合物の生成抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
揮発性硫黄化合物である硫化水素やメチルメルカプタンは、低濃度でも腐敗臭が感じられる不快成分である。これらの成分は中性化合物であり、比較的安定な化合物であることから化学的吸着や化学的分解による消臭が困難であるため、有効な消臭防臭技術が求められていた。
【０００３】
従来、殺菌剤や防腐剤として、食品分野、医療分野、外用剤、家庭用製剤などの処理対象に応じて、様々な化学物質や植物由来の物質が使用されてきている。ただ、最近では台所周りあるいは人間の肌に触れる製品に対しては、安全性の見地から植物などの天然物由来のものに人気が出てきている。
【０００４】
精油や合成芳香物質のような従来の多くの香料成分は、種々の微生物に対し抗菌性を示すことが知られている。しかしながら、これら殺菌・抗菌性の試験においては、対象の菌種によりその効果も大きく異なることが示されている。従って、所期の消臭防臭効果を得るためには、目的にあった菌種の選択と新たな探索が必要であった。
【０００５】
こうした背景のもと、香料や合成香料成分により、微生物の代謝酵素を阻害することによってニオイの発生を抑制することが試みられている。特許文献１では香料成分によるイソ吉草酸の生成抑制が提案されている。一方、揮発性硫黄化合物の抑制については、特許文献２に植物抽出物由来のメチオニナーゼ阻害剤が示されている。しかし、文献２に示されたメチオニナーゼ阻害剤はカラホオ、ホオノキ、アカメガシワ、クワ、アイスランドゴケ、グァバ、ホアハウンド、ガラナ、オオバコ、アルカネット、アケビ、クコ、カゴソウ、オレガノ、フェンネル、ハス、キンカン、緑茶及びシソの、香料としては使用されない植物抽出物由来のものであった。更に、特許文献３及び特許文献４には、特定香料成分が口腔内細菌である偏性嫌気性のフゾバクテリウム・ヌクレイタムのメチルメルカプタン産生抑制効果を示すことが報告されている。しかし、特許文献３及び４ではメチオニナーゼ阻害効果については触れられておらず、また、これらの技術は口臭に関わる微生物由来のニオイ抑制に関するものであった。
【０００６】
不快な生ゴミが腐敗臭である揮発性硫黄化合物を発生するのは、それらがバクテリアにより分解されてアンモニア、メチルメルカプタン、硫化水素などの悪臭ガスが産生されることによる。例えば、肉や牛乳から発生する揮発性硫黄臭成分は、環境中の微生物によって生成されることが知られていた（非特許文献１）。また、浴室の壁や排水口のニオイ成分としてジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィドなどが検出され、気になるニオイの原因となっている。非特許文献１によれば、これらの揮発性硫黄臭は、細菌、酵母、黴、単細胞の藻類の作用により生成するものとされている。しかしながら、こと家庭内環境における揮発性硫黄化合物の生成をみると、好気性グラム陰性菌の一種であるシュードモナス属の細菌や通性嫌気性グラム陰性細菌の一種である大腸菌が主な原因菌となっている。
【０００７】
このように、多数の植物抽出物や精油が、殺菌剤や防腐剤、消臭剤として提案されているが、これらの香料成分は、家庭内の揮発性硫黄臭生成に関与する微生物であるシュードモナス属細菌や大腸菌に対する殺菌・抗菌効果は弱いものであった。また、これら微生物の揮発性硫黄化合物生成酵素の阻害に関する効果を示した従来技術はなかった。
【０００８】
【特許文献１】特開2002-255774号公報
【特許文献２】特開2005-162697号公報
【特許文献３】特開2001-348308号公報
【特許文献４】特開2003-26527号公報
【非特許文献１】Annual Review of Microbiology, 16, 127-138, 1972
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
従って本発明は、シュードモナス属細菌や大腸菌が生成する揮発性硫黄化合物臭に対する消臭防臭効果が高く、家庭内の不快臭成分である揮発性硫黄化合物の生成を持続的に抑制することのできる製剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、一般に賦香に用いられる植物由来及び合成香料成分について種々検討した結果、特定のアルデヒド類、特定のケトン類、特定のラクトン類、ヌートカトン、メチルジヒドロジャスモネート、ネロリドール及びフェニルアセトアルデヒドジメチルアセタールから選ばれる香料成分が、通性嫌気性細菌及び好気性細菌によるシステイン又はメチオニンからの揮発性硫黄化合物の生成を抑制し、不快臭を効果的に減少させることを見出した。
【００１１】
本発明は、炭素数６から12の飽和脂肪族アルデヒド、ウンデセナール、テルペン系アルデヒド、芳香族アルデヒド、５員環又は６員環の脂環式アルデヒド、５員環又は６員環の脂環式ケトン、炭素数15から17の大環状ケトン、ヌートカトン、炭素数15から16の大環状ラクトン、メチルジヒドロジャスモネート、ネロリドール及びフェニルアセトアルデヒドジメチルアセタールから選ばれる香料の少なくとも１種を有効成分とする揮発性硫黄化合物生成抑制剤を提供するものである。
【００１２】
また本発明は、上記香料の少なくとも１種を有効成分とする、システインから硫化水素を生成する酵素の阻害剤、及びメチオニンからメチルメルカプタンを生成する酵素の阻害剤を提供するものである。
【００１３】
更に本発明は、上記の揮発性硫黄化合物生成抑制剤又は酵素の阻害剤を有効量含有するハウスホールド製品を提供するものである。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の揮発性硫黄化合物生成抑制剤は、家庭内の不快臭成分である揮発性硫黄化合物の発生を持続的に抑制できることから、優れた消臭効果と高い安全性を有する洗浄剤、柔軟仕上げ剤、消臭剤等のハウスホールド製品として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
不快臭成分である揮発性硫黄化合物のうち、硫化水素は含硫アミノ酸であるシステインからシステイン脱硫黄酵素により生成され、メチルメルカプタンはメチオニンからメチオニナーゼ（メチオニン-γ-リアーゼ）の作用によって生成される。更にジメチルスルフィド、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィドは、メチルメルカプタンや硫化水素から酵素的、あるいは酸化的に生成される。本発明者らは、これら硫化水素やメチルメルカプタンが、台所流しのゴミかご、浴室、洗濯槽内部などに棲息する微生物により生成されることを明らかにした（参考例１）。加えて、大腸菌（Escherichia coli）NBRC3301、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）NBRC12689、枯草菌（Bacillus subtilis）JCM1465Tが、それらのニオイ成分を生成するとともに、緑膿菌の細胞抽出液によってもシステインから硫化水素を官能的に十分認知できるレベルで生成することを確認した（参考例２，３）。
【００１６】
一方、システインやメチオニンから硫化水素やメチルメルカプタンを生成する酵素の阻害剤としては、ピリドキサルリン酸を補酵素とする酵素の阻害剤として知られるアミノオキシ酢酸の例が知られていたが、ヒトに対する安全性の観点から、その使用は難しい。緑膿菌や大腸菌が有する酵素の阻害について、香料成分ではこれまでに報告された例はなく、本発明において初めて、前述の特定のアルデヒド類及びケトン類から選ばれる香料、およびメチルジヒドロジャスモネートに当該阻害活性があることが見出された（実施例１、２）。更に驚くべきことに、これらの香料は、その抑制濃度において緑膿菌の生育を阻止しなかった（参考例５）。このことは、上記阻害活性は使用した緑膿菌を殺菌したことによる効果ではなく、ニオイ成分の生成に関与する酵素を阻害したことによる効果であることを示しているといえる。ここで重要なことは、殺菌力を示す濃度以下においても十分な消臭効果を示すという重要な知見を得たことであり、ニオイの発生阻害における酵素阻害の有効性を示すものである。さらに、実施例３及び４において揮発性硫黄化合物生成抑制効果が認められた香料に類似する構造を有する香料にも酵素阻害活性が認められた（実施例８）。さらに、予想を超えてアルデヒド類及びケトン類以外のラクトン類、ネロリドール及びフェニルアセトアルデヒドジメチルアセタールにも同様の酵素阻害活性を確認した（実施例８）。
【００１７】
従って、本発明で使用する香料成分は、家庭内に棲息する通性嫌気性微生物及び好気性細菌による揮発性硫黄化合物生成の抑制剤、又はシステインから硫化水素を生成する酵素若しくはメチオニンからメチルメルカプタンを生成する酵素の阻害剤として使用することができ、同時にこれらは家庭環境中の不快臭の発生を抑制する賦香・消臭剤として使用可能である。
【００１８】
本発明の揮発性硫黄化合物生成抑制剤又は酵素の阻害剤として用いられる香料は、炭素数６から12の飽和脂肪族アルデヒド、ウンデセナール、テルペン系アルデヒド、芳香族アルデヒド、５員環又は６員環の脂環式アルデヒド、５員環又は６員環の脂環式ケトン、炭素数15から17の大環状ケトン、ヌートカトン、炭素数15から16の大環状ラクトン、メチルジヒドロジャスモネート、ネロリドール及びフェニルアセトアルデヒドジメチルアセタールから選ばれる香料である。
炭素数６から12の飽和脂肪族アルデヒドとしては、ヘキサナール、ヘプタナール、オクタナール、ノナナール、デカナール、ウンデカナール、ドデカナール、メチルノニルアセトアルデヒド等が挙げられる。
テルペン系アルデヒドとしては、シトラール、シトロネラール、ヒドロキシシトロネラール等が挙げられる。
芳香族アルデヒドとしては、炭素数７から15、とりわけ炭素数８から15のものが好ましく、ベンズアルデヒド、ヘリオトロピン、フェニルプロピルアルデヒド、アニスアルデヒド、バニリン、シクラメンアルデヒド、エチルバニリン、2-メチル-3-（3,4-メチレンジオキシフェニル）-プロパナール（IFF社；ヘリオナール）、フェニルアセトアルデヒド、シンナミックアルデヒド、アミルシンナミックアルデヒド、ヘキシルシンナミックアルデヒド等が挙げられる。
５員環又は６員環の脂環式アルデヒドとしては、炭素数９から14、とりわけ炭素数13から14のものが好ましく、4-(4-ヒドロキシ-4-メチルペンチル)-3-シクロヘキセン-1-カルボキシアルデヒド（IFF社：リラール）、4-(4-メチル-3-ペンテニル)-3-シクロヘキセン-1-カルボキシアルデヒド（IFF社：マイラックアルデヒド）、4-トリシクロ[5.2.1.02,6]デシリデン-8）-ブテナール（IFF社：デュピカール）、ジメチル テトラヒドロベンズアルデヒド（IFF社：トリプラール、Quest社：リグストラールなど）等が挙げられる。
５員環又は６員環の脂環式ケトンとしては、炭素数が11から14のものが好ましく、α−イオノン、β−イオノン、α−ダマスコン、β−ダマスコン、α−メチルイオノン、γ−メチルイオノン、シスージャスモン等が挙げられる。
炭素数15から17の大環状ケトンとしては、４-シクロペンタデセノン（Firmenich社：エグザルテノン）、８-シクロヘキサデセン-1-オン（Symrise社：グロバノン）、９-シクロヘプタデセン-1-オン（シベトン）等が挙げられる。
炭素数15から16の大環状ラクトンとしては、１０-オキサ-１６-ヘキサデセノライド（オキサライド）、７-シクロヘキサデセノライド（アンブレットライド）等が挙げられる。
【００１９】
これらの香料化合物は、精油から単離したものを用いてもよいし、化学的に合成したものを使用してもよい。さらには、これらの香料化合物を含有する精油、例えば、レモングラス油、レモン油、オレンジ油、シナモン油、グレープフルーツ油等をそのまま用いてもよい。これらの香料化合物又は精油は、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００２０】
本発明の揮発性硫黄化合物生成抑制剤は、家庭用及び施設用などのハウスホールド製品中に有効量含有させることにより、家庭内の不快なニオイに対し、高い消臭・防臭効果を有する製品とすることができる。ハウスホールド製品の例としては、台所や浴室などの住居用洗浄剤、住居用消臭剤、衣料用洗剤、衣料用柔軟剤、衣料用消臭剤、食器洗浄剤、洗濯槽の洗浄剤等が挙げられる。またいくつかの使用方法を併用することも可能である。
【００２１】
洗浄剤、柔軟剤、消臭剤として使用する場合、揮発性硫黄化合物生成抑制剤の含有量は、一般的に0.0001〜３重量％とするのが好ましく、更には0.001〜１重量％、特に0.005〜0.5重量％とするのが好ましい。
【００２２】
本発明のハウスホールド製品は、ハウスホールド製品に通常用いられる各種成分、例えば油分、界面活性剤、アルコール類、キレート剤、pH調整剤、防腐剤、増粘剤、色素類、香料等のほか、保湿剤、柔軟剤、角質保護剤、薬効剤、酸化防止剤、溶剤等の成分を任意に組み合わせ配合して製剤化することができる。
【００２３】
本発明のハウスホールド製品、揮発性硫黄化合物生成抑制剤は、台所の生ゴミ、食器洗浄用のスポンジ、浴室の壁、洗濯槽、あるいは洗濯衣類など不快臭の発生しやすい箇所に局所的に適用することにより、不快臭の発生を制御することができる。更には、衣料用洗剤や衣料用柔軟剤に配合することによって、洗濯後の衣類からの不快臭を抑制することができる。これらの製剤の使用量は、有効成分の含有量により異なるが、例えば液状製剤の場合、スプレーにて１プッシュから20プッシュ塗布することが好ましい。
【実施例】
【００２４】
参考例１  家庭からのサンプリング菌による揮発性硫黄化合物の生成
（1）菌のサンプリング方法
３家庭のシンク（ゴミかご）周辺、浴室の壁タイル目地、浴室の排水口周辺、洗濯機の洗濯槽内部をBBLカルチャースワブEZ（ベクトンディッキンソン社）で擦ることによって微生物を採取した。採取したサンプルは室温にて実験室に輸送した。採取サンプルの先端のウレタン部を70％エタノールで殺菌した鋏で切り取り、0.5mLの生理食塩水（大塚薬品社）を分注した1.5mL容遠心チューブに入れ、振とう機（CUTE MIXER C-1000：EYLA社）を用い1200rpmで10分間攪拌した。攪拌後、ウレタン部を除き採取菌液とした。
【００２５】
（2）揮発性硫黄化合物の測定
滅菌バイアル瓶（５mL容）中、ミュラー・ヒントン培地（ベクトンディッキンソン社）0.01mL、50mMシステイン溶液又は50mMメチオニン溶液0.1mL及び滅菌イオン交換水0.07mLを混合した試験液に、上記採取菌液0.02mLを混合し、30℃の恒温槽に静置した。１日後、バイアル瓶上部のヘッドスペースガス中の揮発性硫黄化合物を測定した。測定にはOralChroma（ABILIT社）を用いた。コントロールに対する揮発性硫黄化合物の生成量を表１に示す。
【００２６】
【表１】
2008173441.tif 000002
【００２７】
表１に示したように、いずれの家庭の台所流しのゴミかご周辺から採取したサンプルにおいても、システインからの硫化水素又はメチルメルカプタンの生成が認められ、メチオニンからの硫化水素、メチルメルカプタン又はジメチルスルフィドの生成が確認された。また、全てのサンプルにおいて、メチオニンからのメチルメルカプタンの生成が確認された。
加えて、測定後のバイアル瓶のニオイを官能評価した結果、明らかに認知されるレベルで揮発性硫黄臭が認められた。このことから、家庭内の台所流し、浴室、洗濯槽内には揮発性硫黄化合物を生成する微生物が棲息していることが確認された。
【００２８】
参考例２  標準菌による揮発性硫黄化合物の生成
大腸菌NBRC3301、緑膿菌NBRC12689及び枯草菌JCM1465TをSCDプレートにて１日培養後、培養菌体１ループを生理食塩水１mLに懸濁した。この懸濁液を参考例１における家庭からの採取菌液の代わりに使用し、参考例１（2）と同様にして揮発性硫黄化合物の生成を確認した。
その結果、図１に示すように、大腸菌NBRC3301、緑膿菌NBRC12689、枯草菌JCM1465Tによるシステインからの硫化水素の生成、メチオニンからのメチルメルカプタンの生成が確認された。
【００２９】
参考例３  菌体抽出液による揮発性硫黄化合物の生成
（1）菌体抽出液の調製
15mMメチオニン添加ミュラー・ヒントン培地20mLを入れた50mL容遠心管４本に、SCDプレートで１日培養した緑膿菌NBRC12689をそれぞれ１ループ植菌し、振とうして１日間培養を行った。培養後、3000rpm、20分間遠心分離（日立製作所社）を行い、上清を除去した。氷冷した0.8重量％食塩添加リン酸バッファー（pH7.2）20mLを加えて菌体を懸濁した後、懸濁液の遠心分離を行った。遠心分離後、上清を完全に除去し菌体を回収した。４本分の回収菌体約0.4ｇ（湿潤重量）は−20℃にて凍結保存した。
１日後、凍結菌体をCelLytic B Plus（SIGMA社）にて溶菌処理を行った。即ち、菌体0.4ｇ（湿潤重量）に溶解液４mLを加え室温にて20分間振とうした。振とう後、10000rpm、20分間遠心分離を行い、溶け残った残渣を除去した。菌体溶解液（以下、「菌体抽出液」と呼ぶ）は0.22μmのフィルター（ミリポア社、マイレックスGV）にて除菌操作を行った。除菌した菌体抽出液２mLに対して氷冷した20μMのピリドキサルリン酸を添加した100mMのリン酸バッファー（pH7.2）18mLを加え、VIVA SCIENCE社のVIVASPIN20（分画分子量10000）にて遠心濃縮を行った。１mLまで濃縮後、更に同バッファー９mLを加え再度遠心濃縮を行い、バッファー交換を行った。上記操作によって、最終的に２mLの菌体抽出液を得た。
【００３０】
（2）揮発性硫黄化合物の測定
滅菌バイアル瓶（５mL容）中、ミュラー・ヒントン培地0.02mL、100mMシステイン溶液0.05mL及び滅菌イオン交換水0.305mLを混合した試験液に、上記菌体抽出液0.025mLを混合し、30℃の恒温槽に静置した。
１日後、バイアル瓶上部のヘッドスペースガス中の揮発性硫黄化合物をOralChroma（ABILIT社）にて測定した。その結果、菌体抽出液の添加による、即ち酵素反応による硫化水素の生成を確認した。加えて、反応液のニオイを評価した結果、十分認知できるレベルで硫化水素のニオイが感じられた。
【００３１】
参考例４  市販メチオニン-γ-リアーゼによる揮発性硫黄化合物の生成
市販のシュードモナス・オバリス由来のメチオニン-γ-リアーゼ（和光純薬社）を用いてメチオニンからのメチルメルカプタン生成を確認した。即ち、市販のメチオニン-γ-リアーゼ１mgを、１mLの20μMのピリドキサルリン酸を添加した100mMリン酸バッファー（pH7.2）に溶解し、酵素溶液とした。滅菌バイアル瓶（５mL容）中、１ＭのpH８に調製したリン酸バッファー0.05mL、10mMピリドキサルリン酸溶液0.001mL、100mMメチオニン溶液0.125mL及び滅菌イオン交換水0.365mLを混合した試験液に、酵素溶液0.005mLを混合して30℃の恒温槽に静置した。
１日後、バイアル瓶上部のヘッドスペースガス中の揮発性硫黄化合物をOralChroma（ABILIT社）にて測定した。その結果、メチルメルカプタンの生成を確認した。加えて、反応液のニオイを評価した結果、十分認知できるレベルでメチルメルカプタンのニオイが感じられた。
【００３２】
実施例１  菌体抽出液の揮発性硫黄化合物生成活性の特定香料による抑制
0.5Ｍホウ酸バッファー（pH8.5）２mL、10mMピリドキサルリン酸溶液0.02mL、50mMシステイン溶液２mL及び滅菌イオン交換水５mLを混合し、基質溶液Ａを調製した。本基質溶液Ａをアミコンウルトラ-4（MILLIPORE社）の下層容器に0.36mL分注し、ジプロピレングリコール（DPG）に溶解した10重量％香料溶液をそれぞれ0.02mL又は0.004mL添加した後、参考例３で調製した菌体抽出液0.04mLを混合した。上部ろ過器を装着後、上部容器に２mM 5,5'-ジチオビス（2-ニトロベンソイックアシッド）0.25Mリン酸バッファー（pH7.2）溶液0.4mLを分注し、30℃の恒温槽に静置した。香料の添加量が0.02mLの場合の最終香料濃度は0.5重量％であり、0.004mLの場合は0.1重量％となる。香料の代わりにDPGを0.02mL添加したものをコントロールとし、菌体抽出液の代わりに100mMリン酸バッファー（pH7.2）を添加したものをブランクとした。
反応後、上部に添加した溶液0.2mLを96穴マイクロプレートに分注して412nmの吸光度を測定した。得られた測定値より、次式（1）に従って、揮発性硫黄化合物生成の相対阻害活性を求めた。
【００３３】
【数１】
2008173441.tif 000003
【００３４】
結果を図２に示した。この結果より、供した香料サンプルは、菌体抽出液による揮発性硫黄化合物の生成を阻害したことがわかる。
【００３５】
実施例２  メチオニン-γ-リアーゼの揮発性硫黄化合物生成活性の特定香料による抑制
１Ｍリン酸バッファー（pH8.0）１mL、10mMピリドキサルリン酸溶液0.02mL、50mMメチオニン溶液２mL及び滅菌イオン交換水6.5mLを混合し、基質溶液Ｂを調製した。本基質溶液Ｂをアミコンウルトラ-4の下層容器に0.38mL分注し、DPGに溶解した10重量％香料溶液をそれぞれ0.004mL添加後、参考例４の酵素溶液0.02mLを混合した。上部ろ過器を装着後、上部容器に２mM 5,5'-ジチオビス（2-ニトロベンソイックアシッド） 0.25Mリン酸バッファー（pH7.2）溶液0.4mLを分注し、30℃の恒温槽に静置した。供した最終香料濃度は0.1重量％である。香料の代わりにDPGを0.004mL添加したものをコントロールとし、酵素溶液の代わりに100mMリン酸バッファー（pH7.2）を添加したものをブランクとした。
反応後、上部に添加した溶液0.2mLを96穴マイクロプレートに分注して412nmの吸光度を測定した。揮発性硫黄化合物生成の相対阻害率は（1）式により求めた。
結果を図３に示した。この結果より、供した香料サンプルは、市販メチオニン-γ-リアーゼによるメチオニンからの揮発性硫黄化合物の生成を阻害したことがわかる。
【００３６】
実施例３  菌体の硫化水素臭生成活性の特定香料による抑制
15mMメチオニン添加ミュラー・ヒントン培地20mLを入れた50mL容遠心管に、SCDプレートで１日培養した緑膿菌NBRC12689を１ループ植菌し、振とうして１日間培養を行った。一方、滅菌したミュラー・ヒントン培地１mL、ろ過滅菌した50mMシステイン４mL及び滅菌イオン交換水14mLを混合し、基質溶液Ｃを調製した。本基質溶液Ｃを1.5mL容遠心チューブに0.475mL分注し、10重量％香料DPG溶液を0.0025mL添加後、前記の緑膿菌培養液0.025mLを添加混合し、30℃の恒温槽に静置した。香料の代わりにDPGを0.0025mL添加したものをコントロールとした。供した香料の最終濃度は0.05重量％である。
24時間培養後、培養サンプルの硫化水素のニオイ評価を、臭気判定士３名を含む５名で行った。ニオイ評価のスコアは、硫化水素のニオイが、「０」感じられない、「１」僅かに感じられる、「２」はっきりわかる、「３」強く感じられる、を示す。なお、検定はコントロールに対してウィルコクソンの符号付順位和検定により行った。この結果を表２に示す。
【００３７】
【表２】
2008173441.tif 000004
【００３８】
表２に示した結果より、供した全ての香料で、官能的にも硫化水素臭の低下が認められ、特にヘキサナール、デカナール、ベンズアルデヒド、シトラール、シトロネラール、β-イオノン、メチルジヒドロジャスモネート、シス−ジャスモン、リラール及びヌートカトンは、コントロールに対して優位に、緑膿菌によるシステインからの硫化水素臭の生成を抑制した。
【００３９】
実施例４  菌体のメチルメルカプタン臭生成活性の特定香料による抑制
15mMメチオニン添加ミュラー・ヒントン培地20mLを入れた50mL容遠心管にSCDプレートで１日培養した緑膿菌NBRC12689を１ループ植菌し、振とうして１日間培養を行った。一方、滅菌したミュラー・ヒントン培地1mL、ろ過滅菌した50mMメチオニン４mL及び滅菌イオン交換水14mLを混合し、基質溶液Ｄを調製した。本基質溶液Ｄを1.5mL容遠心チューブに0.475mL分注し、10重量％香料DPG溶液0.0025mLを添加後、前記の緑膿菌培養液0.025mLを添加混合し、30℃の恒温槽に静置した。香料の代わりにDPGを0.0025mL添加したものをコントロールとした。供した香料の最終濃度は0.05重量％である。
【００４０】
24時間培養後、培養サンプルのメチルメルカプタンのニオイ評価を臭気判定士３名を含む５名で行った。ニオイ評価のスコアは、メチルメルカプタンのニオイが、「０」感じられない、「１」僅かに感じられる、「２」はっきりわかる、「３」強く感じられる、を示す。この結果を表３に示す。
【００４１】
【表３】
2008173441.tif 000005
【００４２】
表３に示した結果より、供した全ての香料で、官能的にもメチルメルカプタン臭の低下が認められ、特にヘキサナール、オクタナール、デカナール、シトラール、シトロネラール、β-イオノン、シス−ジャスモン、リラール及びメチルジヒドロジャスモネートは、優位に緑膿菌によるメチオニンからのメチルメルカプタン臭生成を抑制した。
【００４３】
参考例５  特定香料の緑膿菌に対する抗菌性試験
15mMメチオニン添加ミュラー・ヒントン培地20mLを入れた50mL容遠心管にSCDプレートで１日培養した緑膿菌NBRC12689を１ループ植菌し、振とうして１日間培養を行った。滅菌したミュラー・ヒントン培地１mLを1.5mL容遠心チューブに分注後、10重量％香料DPG溶液を0.01mL添加し、前記の緑膿菌培養液を0.005mL添加した。混合液200μLを96穴マイクロプレートにそれぞれ２穴に分注した。分注後、ガス透過性シール（AGgene社）でマイクロプレートをシールした。マイクロプレートをキュートミキサーにて1200rpm、18時間培養後、600nmによる濁度を測定した。その結果、試験したいずれの香料0.1重量％によっても、菌体の生育が認められた。
【００４４】
実施例５  スプレー型消臭剤組成物
表４に示す組成（質量％）の本発明に係る消臭剤を配合した消臭剤組成物を調製し、トリガースプレー容器に入れ、スプレー型消臭剤組成物を調製した。
【００４５】
【表４】
2008173441.tif 000006
【００４６】
実施例６  食器用洗浄剤組成物
表５に示す組成（質量％）の本発明に係る消臭剤を配合した食器用洗浄剤組成物を調製した。
【００４７】
【表５】
2008173441.tif 000007
【００４８】
実施例７  柔軟剤組成物
表６に示す組成（質量％）の本発明に係る消臭剤を配合した柔軟剤組成物（pH４）を調製した。
【００４９】
【表６】
2008173441.tif 000008
【００５０】
実施例８  揮発性硫黄化合物生成活性の特定香料による抑制
実施例１における50mMシステイン溶液の代わりに10mMシステイン溶液を、また実施例２における50mMメチオニン溶液の代わりに10mMメチオニン溶液をそれぞれ使用したこと以外は、実施例１又は２と同様の方法により、表７に示す香料による揮発性硫黄化合物生成の相対阻害率を求めた。なお、供した香料の最終濃度は、ともに0.1重量％である。結果を表７に示した。
【００５１】
【表７】
2008173441.tif 000009
【００５２】
表７に示した結果より、供した香料サンプルは、緑膿菌によるシステインからの揮発性硫黄化合物の生成を阻害し、またメチオニン-γ-リアーゼによるメチオニンからの揮発性硫黄化合物の生成を阻害することが確認された。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】標準菌によるシステイン又はメチオニンを基質とする揮発性硫黄化合物の生成を示した図である。
【図２】緑膿菌の菌体抽出液によるシステインからの揮発性硫黄化合物生成に対する、特定香料による阻害効果を示した図である。
【図３】市販メチオニン-γ-リアーゼによるメチオニンからの揮発性硫黄化合物生成に対する、特定香料による阻害効果を示した図である。
【図１】
2008173441.tif 000010
【図２】
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【図３】
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