(57)【要約】【課題】安全性及び生産性が高く、安価で日常的に使用可能でありながら、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用、線維芽細胞増殖作用、あるいはラミニン５産生促進作用を有する天然物由来の抗老化剤を提供する。【解決手段】有効成分として金時草、及びその抽出物の少なくともいずれかを含むことを特徴とする抗老化剤。  前記金時草の抽出物は、水とエタノールの混合溶媒による抽出物であることが好適である。  有効成分として金時草、及びその抽出物の少なくともいずれかを含むことを特徴とするＩ型コラーゲン産生促進剤。  有効成分として金時草、及びその抽出物の少なくともいずれかを含むことを特徴とする線維芽細胞増殖剤。  有効成分として金時草、及びその抽出物の少なくともいずれかを含むことを特徴とするラミニン５産生促進剤。  前記抗老化剤を含む皮膚外用剤。  前記抗老化剤を含む美容用飲食品。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分として金時草、及びその抽出物の少なくともいずれかを含むことを特徴とする抗老化剤。
【請求項２】
金時草の抽出物が、水とエタノールの混合溶媒による抽出物である請求項１に記載の抗老化剤。
【請求項３】
有効成分として金時草、及びその抽出物の少なくともいずれかを含むことを特徴とするＩ型コラーゲン産生促進剤。
【請求項４】
有効成分として金時草、及びその抽出物の少なくともいずれかを含むことを特徴とする線維芽細胞増殖剤。
【請求項５】
有効成分として金時草、及びその抽出物の少なくともいずれかを含むことを特徴とするラミニン５産生促進剤。
【請求項６】
請求項１から２のいずれかに記載の抗老化剤を含む皮膚外用剤。
【請求項７】
請求項１から２のいずれかに記載の抗老化剤を含む美容用飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キク科ギヌラ属のスイゼンジナ（Ｇｙｎｕｒａ  ｂｉｃｏｌｏｒ  ＤＣ．）：金時草（キンジソウ）の抽出物を含有する抗老化剤、並びにこれらを含む皮膚外用剤及び美容用飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は、表皮、基底膜、及び真皮から構成されている。真皮は、線維芽細胞と、該細胞から分泌されるコラーゲン（膠原線維）、エラスチン（弾性線維）、及びヒアルロン酸等の細胞外マトリックスとにより構成されている。基底膜は、表皮と真皮との境界部に存在し、表皮と真皮とを繋ぎ止めるだけでなく、皮膚機能の維持に重要な役割を果たしている（非特許文献１参照）。
若い皮膚においては、線維芽細胞の増殖が活発であり、線維芽細胞やコラーゲン等の皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより、また、基底膜の働きにより、表皮と真皮との相互作用が恒常性を保つことにより、水分保持力、柔軟性、弾力性等が確保され、外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
【０００３】
ところが、紫外線、著しい空気の乾燥、過度の皮膚洗浄、ストレス、喫煙等の外的因子の影響を受けたり、加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンの分解や変質が生じたり、線維芽細胞の増殖が遅くなったり、あるいは基底膜の主要構成成分であるラミニン５が分解や変質を起こして基底膜構造が破壊されたりする（非特許文献２参照）。その結果、皮膚の保湿機能や弾力性が低下し、角質の異常剥離が起こり、皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等が生じる。
従って、コラーゲンの産生や、線維芽細胞の増殖、又はラミニン５の産生を促進することにより皮膚の老化を防止又は改善することができると考えられる。
【０００４】
そこで、コラーゲン産生促進作用、線維芽細胞増殖作用、又はラミニン５産生促進作用を有する物質を、安全性の高い天然物から入手することが望まれている。
これまで、コラーゲン産生促進作用を有するものとしては、例えば、スターフルーツ葉抽出物（特許文献１参照）、クスノハガシワ抽出物（特許文献２参照）等、線維芽細胞増殖作用を有するものとしては、例えば、月桃葉抽出物（特許文献３参照）、オニイチゴ抽出物（特許文献４参照）等、ラミニン５産生促進作用を有するものとしては、例えば、カッコン抽出物、カンゾウ抽出物又はそのフラボノイド画分、ヒオウギ抽出物、ジタノキ抽出物、イボツヅラフジ抽出物、コロハ抽出物、乳清抽出物（以上、特許文献５参照）、オノニス抽出物、メリロート抽出物、モヤシ抽出物、アズキ抽出物（以上、特許文献６参照）、大豆抽出物（特許文献７参照）等が報告されている。
【０００５】
しかしながら、安全性及び生産性が高く、安価で日常的に使用可能でありながら、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用、線維芽細胞増殖作用、あるいはラミニン５産生促進作用を有する天然物由来の製剤は、未だ提供されていないのが現状である。
【特許文献１】特開２００２−２２６３２３号公報
【特許文献２】特開２００３−１４６８３７号公報
【特許文献３】特開２００２−００３３９０号公報
【特許文献４】特開２００３−１３７８０１号公報
【特許文献５】特開２００３−１３７７６７号公報
【特許文献６】特開２００３−１３７７６８号公報
【特許文献７】特開２００４−２１７６１８号公報
【非特許文献１】Ｍａｒｉｎｋｏｖｉｃｈ  ＭＰ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９９２  １９９：６９５−７０３
【非特許文献２】Ｌａｖｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  １９７９  ７３：  ５９−６６
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、前記従来における問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。
即ち、本発明は、安全性及び生産性が高く、安価で日常的に使用可能でありながら、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用、線維芽細胞増殖作用、あるいはラミニン５産生促進作用を有する天然物由来の抗老化剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
前記課題を解決するため、本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、キク科ギヌラ属のスイゼンジナ（Ｇ．ｂｉｃｏｌｏｒ  ＤＣ．）：金時草（キンジソウ）の抽出物が、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用、線維芽細胞増殖作用、及びラミニン５産生促進作用を有する抗老化剤として有用であることを知見した。
【０００８】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段
としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  有効成分として金時草、及びその抽出物の少なくともいずれかを含むことを特徴とする抗老化剤である。
＜２＞  金時草の抽出物が、水とエタノールの混合溶媒による抽出物である前記＜１＞に記載の抗老化剤である。
＜３＞  有効成分として金時草、及びその抽出物の少なくともいずれかを含むことを特徴とするＩ型コラーゲン産生促進剤である。
＜４＞  有効成分として金時草、及びその抽出物の少なくともいずれかを含むことを特徴とする線維芽細胞増殖剤である。
＜５＞  有効成分として金時草、及びその抽出物の少なくともいずれかを含むことを特徴とするラミニン５産生促進剤である。
＜６＞  前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の抗老化剤を含む皮膚外用剤である。
＜７＞  前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の抗老化剤を含む美容用飲食品である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の抗老化剤によると、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用、線維芽細胞増殖作用及びラミニン５産生促進作用の少なくともいずれかを通じて、皮膚の老化、すなわち、シワやくすみ、きめの消失、弾力性の低下等を防止及び改善することができる。
また、本発明の抗老化剤は、安全性及び使用感に優れているので、皮膚外用剤や美容用飲食品に配合するのに好適である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
（抗老化剤）
本発明の抗老化剤は、キク科ギヌラ属のスイゼンジナ（Ｇ．ｂｉｃｏｌｏｒ  ＤＣ．）:金時草（キンジソウ）、又はその抽出物と、更に必要に応じてその他の成分とを含む。
金時草は、熱帯アジア原産の多年草であって、成長すると草丈が３０〜６０ｃｍになり、茎は円柱状、葉腋から盛んに腋芽が伸長して、ほふく状になる。葉は有柄で互生し、披針形、鋸歯縁、短毛を有するが、ほぼ平滑で、光沢を有し、質はやや厚く、表面は濃緑色、裏面は紫色である。金時草は、日本の奄美大島、九州南部に野生していることから容易に入手可能である。
【００１１】
本発明において、金時草は、植物の抽出に一般に用いられている方法により抽出することができる。
抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、葉部、茎部、花部、種子、又はこれらを含む地上部、根部を用いることができるが、最も好適なものは地上部（葉部、茎部花部、種子、又はこれらの混合部位）である。
前記抽出原料である金時草は、乾燥後、そのまま又は粗砕機にて粉砕して溶媒抽出に供することができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。
なお、金時草は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１２】
前記抽出に用いる溶媒としては、水、親水性有機溶媒、又はこれらの混合溶媒が挙げられ、これらを室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１３】
前記親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
なお、前記親水性有機溶媒と水との混合溶媒を使用する場合、低級アルコールの場合には、水１０質量部に対して１〜９０質量部；低級脂肪族ケトンの場合には、水１０質量部に対して１〜４０質量部；多価アルコールの場合には、水１０質量部に対して１〜９０質量部添加することが好ましい。特に、エタノールと水の混合溶媒であることが好ましい。
【００１４】
本発明において、金時草から抗老化作用を有する物質を抽出するにあたっては、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、金時草の地上部を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分間〜２時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥する方法が挙げられる。抽出に使用される溶媒量は、通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０〜９５℃にて１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０〜８０℃にて３０分間〜４時間程度である。
【００１５】
なお、前記金時草の抽出物には、該抽出液の希釈液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。
得られる金時草の抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、溶媒を留去せず、そのまま本発明の抗老化剤として用いることができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。
また、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００１６】
抽出液の乾燥物を得るにあたっては、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、金時草の抽出物の生理活性の低下を招かない範囲で、脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製は、具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００１７】
本発明の抗老化剤は、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、線維芽細胞増殖作用、及びラミニン５産生促進作用の少なくともいずれかを通じて、皮膚のシワや弾力の低下の防止及び改善に有用であると共に、高い安全性を有している。
本発明の抗老化剤は、上述した抗老化作用（Ｉ型コラーゲン産生促進作用、線維芽細胞増殖作用、及びラミニン５産生促進作用）を有し、使用感と安全性に優れているので、特に、以下の本発明の皮膚外用剤及び美容用飲食品に配合するのに好適なものである。
【００１８】
（皮膚外用剤）
本発明の皮膚外用剤は、本発明の抗老化剤と、必要に応じて適宜選択されたその他の成分とを含む。
ここで、前記皮膚外用剤の形態は、特に制限はなく、各種用途から適宜選択することができるが、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント等が挙げられる。
本発明において前記抗老化剤の皮膚外用剤全体に対する配合量は、目的に応じて適宜調整することができるが、前記金時草の抽出物に換算して０．０００１〜１０質量％であることが好ましく、０．００１〜１質量％であることがより好ましい。
【００１９】
前記皮膚外用剤は、本発明の効果を損なわない範囲で、必要に応じて適宜選択したその他の成分を添加することができる。
前記その他の成分としては、例えば、収斂剤、殺菌剤、抗菌剤、紫外線吸収剤、細胞賦活剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等が挙げられる。これらの成分は、前記金時草の抽出物と共に併用した場合、相乗的に作用して通常期待される以上の優れた作用効果をもたらすことがある。
本発明の皮膚外用剤は、安全性が高く、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用、線維芽細胞増殖作用、及びラミニン５産生促進作用を効果的に発揮して、皮膚のシワや弾力の低下の防止及び改善、乾燥による肌荒れ防止等に有用である。
【００２０】
（美容用飲食品）
本発明の美容用飲食品は、本発明の抗老化剤と、必要に応じて適宜選択したその他の成分とを含む。
本発明において、美容用飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口投与されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品等の区分に制限されるものではなく、例えば、一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品等を幅広く含むものを意味する。
【００２１】
前記美容用飲食品の形態は、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品；種々の形態の健康食品や栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品等が挙げられる。
【００２２】
前記その他の成分としては、美容用飲食品を製造するに当たって通常用いられる補助的原料又は添加物等が挙げられる。
前記原料又は添加物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤等が挙げられる。
【００２３】
本発明において、本発明の前記抗老化剤の美容用飲食品全体に対する配合量は、目的に応じて適宜調整することができ、美容用飲食品本来の味を損なわない範囲とすればよいが、前記金時草の抽出物に換算して、０．００１〜５０質量％であることが好ましく、０．０１〜２０質量％であることがより好ましい。また、顆粒、錠剤又はカプセル形態の美容用飲食品の場合には、０．０１〜１００質量％であることが好ましく、５〜１００質量％であることがより好ましい。なお、金時草の抽出物の摂取量は、成人１日当たり約１〜１０００ｍｇが適当である。
【００２４】
本発明の美容用飲食品は、日常的に経口摂取することが可能であり、有効成分である金時草の抽出物の働きによって、抗老化作用の少なくともいずれかを極めて効果的に発揮させることができる。
なお、本発明の抗老化剤、皮膚外用剤、及び美容用飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００２５】
本発明について、以下に実施例を挙げて更に詳述するが、本発明はこれにより何ら限定されるものではない。
（製造例１）
−金時草の水抽出物の製造−
抽出原料としてキク科ギヌラ属のスイゼンジナ（Ｇ．ｂｉｃｏｌｏｒ  ＤＣ．）：金時草の地上部の粉砕物２００ｇを、水２０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら３時間、８０℃に保った後、ろ過した。ろ液を４０℃で減圧下にて濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して抽出物（粉末状）を得た。
【００２６】
（製造例２）
−金時草の５０質量％エタノール抽出物の製造−
抽出原料としてキク科ギヌラ属のスイゼンジナ（Ｇ．ｂｉｃｏｌｏｒ  ＤＣ．）：金時草の地上部の粉砕物２００ｇを、５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）２０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら３時間、８０℃に保った後、ろ過した。ろ液を４０℃で減圧下にて濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して抽出物（粉末状）を得た。
【００２７】
（製造例３）
−金時草のエタノール抽出物の製造−
抽出原料としてキク科ギヌラ属のスイゼンジナ（Ｇ．ｂｉｃｏｌｏｒ  ＤＣ．）：金時草の地上部の粉砕物２００ｇを、エタノール２０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら３時間、８０℃に保った後、ろ過した。ろ液を４０℃で減圧下にて濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して抽出物（粉末状）を得た。
【００２８】
製造例１〜３で得られた金時草の抽出物の収率（質量％）を表１に示す。
（表１）
製造例            抽出溶媒                収率（質量％）
――――――――――――――――――――――――――――――
１                水                      ９．４
２          ５０％エタノール              ６．９
３            エタノール                  ５．３
――――――――――――――――――――――――――――――
【００２９】
（実施例１）
＜Ｉ型コラーゲン産生促進作用試験＞
被験試料として、製造例１〜３の各抽出物を用い、以下のようにしてＩ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
ヒト正常線維芽細胞（Ｄｅｔｒｏｉｔ  ５５１）を培地（１０％ＦＢＳ、１％ＮＥＡＡ、１ｍｍｏｌ／Ｌピルビン酸ナトリウム含ＭＥＭ）を用いて培養後、トリプシン処理により回収した。回収した細胞を上記培地で２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈後、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬ播種し、一晩培養した。
培養終了後、培地を抜き、０．５％ＦＢＳ含有ＭＥＭに溶解した披験試料（１００ｐｐｍ）を各穴に１００μＬ添加し、３日間培養した。その後、各穴の培地中のコラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。
【００３０】
Ｉ型コラーゲン産生促進率は、試料無添加時のＩ型コラーゲン産生量を１００％として算出した。Ｉ型コラーゲン産生促進率の計算方法は以下のとおりである。
Ｉ型コラーゲン産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
Ａ：被験試料添加時のＩ型コラーゲン量
Ｂ：被験試料無添加時のＩ型コラーゲン量
【００３１】
各試料のＩ型コラーゲン産生促進率（％）を表２に示す。
（表２）
抽出溶媒            Ｉ型コラーゲン産生促進率（％）
（試料濃度１００ｐｐｍ）
―――――――――――――――――――――――――――――――――――
実施例１−１            水                          ２１１．３
実施例１−２        水：エタノール（１：１）        ２２５．６
実施例１−３          エタノール                    ２０１．２
―――――――――――――――――――――――――――――――――――
表２の結果から、製造例１〜３の金時草の抽出物が、ヒトの線維芽細胞のＩ型コラーゲン産生促進作用を有することが確認できた。
特に、水とエタノールの混合溶媒により抽出した金時草の抽出物は、Ｉ型コラーゲン産生促進作用が高いことがわかった（実施例１−２）。
【００３２】
（実施例２）
＜線維芽細胞増殖促進作用試験＞
被験試料として、製造例１〜３の各抽出物を用い、以下のようにして線維芽細胞増殖促進作用を試験した。
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭを用いて培養後、トリプシン処理により回収した。回収した細胞を５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで７．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈後、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬ播種し、一晩培養した。
培養終了後、５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭに溶解した被験試料（４００ｐｐｍ）を各穴に１００μＬ添加し、３日間培養した。
皮膚線維芽細胞増殖作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。すなわち、各穴から１００μＬずつ培地を抜き、終濃度５ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴを各穴に２０μＬずつ添加した。４．５時間培養後に、１０％ＳＤＳを溶解した０．０１ｍｏｌ／Ｌ塩酸溶液を各穴に１００μＬ添加し、一晩培養後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
【００３３】
線維芽細胞増殖促進率の計算方法は以下のとおりである。
線維芽細胞増殖促進率（％）＝（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）×１００
Ｓｔ：被験試料を添加した細胞での吸光度
Ｓｂ：被験試料を添加した空試験の吸光度
Ｃｔ：被験試料を添加しない細胞での吸光度
Ｃｂ：被験試料を添加しない空試験の吸光度
【００３４】
各試料の線維芽細胞増殖促進率（％）を表３に示す。
（表３）
抽出溶媒            線維芽細胞増殖促進率（％）
（試料濃度４００ｐｐｍ）
―――――――――――――――――――――――――――――――――――
実施例２−１              水                      １２２．３
実施例２−２        水：エタノール（１：１）      １２７．７
実施例２−３          エタノール                  １２５．３
―――――――――――――――――――――――――――――――――――
表３の結果から、製造例１〜３の金時草の抽出物が、ヒトの線維芽細胞増殖作用を有することが確認できた。
特に、水とエタノールの混合溶媒により抽出した金時草の抽出物は、線維芽細胞増殖作用が高いことがわかった（実施例２−２）。
【００３５】
（実施例３）
＜ラミニン５産生促進作用試験＞
被験試料として、製造例１〜３の各抽出物を用い、以下のようにしてラミニン５産生
促進作用を試験した。
ヒトの角化細胞を２４穴プレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの下にて、各試料添加培地（試料濃度：５０μｇ／ｍＬ）で２４時間培養後、上清１００μＬをエライザプレートに移し換え一晩４℃でプレートに吸着させたのち、溶液を捨て、０．０５質量％Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行った。その後、１質量％ウシ血清アルブミンを含むリン酸生理緩衝液で、ブロッキング操作を行った。溶液を捨て、０．０５質量％Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて洗浄を行い、抗ヒトラミニン５抗体（マウスＩｇＧ、ケミコン社製）を反応させた。溶液を捨て、０．０５質量％Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、ビオチン標識抗体マウスＩｇＧ（アマシャムバイオサイエンス社製）を反応させた。溶液を捨て、０．０５質量％Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて洗浄を行い、アビジン−ビオチン化ペルオキシダーゼ複合体と反応させたのち、同様の洗浄操作を行い、発色反応を行った。
ラミニン５産生促進率は、試料無添加時における吸光度を１００％として算出した。各
試料のラミニン５産生促進率（％）を表４に示す。
【００３６】
（表４）
抽出溶媒                ラミニン５産生促進率（％）
（試料濃度１２．５ｐｐｍ）
――――――――――――――――――――――――――――――――――――
実施例３−１            水                            １３１．３
実施例３−２      水：エタノール（１：１）            １３７．０
実施例３−３        エタノール                        １２９．１
――――――――――――――――――――――――――――――――――――
表４の結果から、製造例１〜３の金時草の抽出物が、角化細胞のラミニン５産生促進作用を有することが確認できた。
特に、水とエタノールの混合溶媒により抽出した金時草の抽出物は、ラミニン５産生促進作用が高いことがわかった（実施例３−２）。
【００３７】
（実施例４）
＜乳液＞
下記組成の乳液を常法により製造した。
（質量％）
本発明の金時草の抽出物                                ０．０１
ホホバオイル                                          ４．０
プラセンタエキス                                      ０．１
オリーブオイル                                        ２．０
スクワラン                                            ２．０
セタノール                                            ２．０
モノステアリン酸グリセリル                            ２．０
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）        ２．５
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）  ２．０
グリチルレチン酸ステアリル                            ０．１
１，３−ブチレングリコール                            ３．０
ヒノキチオール                                        ０．１５
香料                                                  ０．０５
精製水                                                  残部
【００３８】
（実施例５）
＜クリーム＞
下記組成のクリームを常法により製造した。
（質量％）
本発明の金時草の抽出物                                  ０．０５
アロエエキス                                            ０．１
流動パラフィン                                          ５．０
サラシミツロウ                                          ４．０
スクワラン                                            １０．０
セタノール                                              ３．０
ラノリン                                                ２．０
ステアリン酸                                            １．０
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）    １．５
モノステアリン酸グリセリル                              ３．０
油溶性甘草エキス                                        ０．１
１，３−ブチレングリコール                              ６．０
パラオキシ安息香酸メチル                                １．５
香料                                                    ０．１
精製水                                                  残部
【００３９】
（実施例６）
＜クリーム＞
下記組成のクリームを常法により製造した。
（質量％）
本発明の金時草の抽出物                      ０．０５
エイジツエキス                              ０．１
モノステアリン酸ポリエチレングリコール      ２．０
自己乳化型モノステアリン酸グリセリン        ５．０
ステアリン酸                                ２．０
セタノール                                  ２．０
スクワラン                                １２．０
マカダミアナッツ油                          ３．０
メチルポリシロキサン                        ０．２
香料                                        ０．０１
防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）          ０．１５
油溶性甘草エキス                            ０．１
１，３−ブチレングリコール                  ７．０
キサンタンガム                              ０．２
精製水                                      残部
【００４０】
（実施例７）
＜美容液＞
下記組成の美容液を常法により製造した。
（質量％）
本発明の金時草の抽出物                  ０．０１
カミツレエキス                          ０．１
キサンタンガム                          ０．３
ヒドロキシエチルセルロース              ０．１
カルボキシビニルポリマー                ０．１
１，３−ブチレングリコール              ４．０
グリチルリチン酸ジカリウム              ０．１
グリセリン                              ２．０
水酸化カリウム                          ０．２５
香料                                    ０．０１
防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）      ０．１５
エタノール                              ２．０
精製水                                  残部
【００４１】
（実施例８）
＜美容液＞
下記組成の美容液を常法により製造した。
（質量％）
本発明の金時草の抽出物                  ０．０５
クワエキス                              ０．１
カルボキシビニルポリマー                ０．２
キサンタンガム                          ０．２
ヒアルロン酸ナトリウム                  ０．１
ポリエチレングリコール                  ３．０
グリセリン                              ６．０
１，３−ブチレングリコール              ３．０
グリチルリチン酸ジカリウム              ０．１
防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）      ０．１５
Ｌ−アルギニン                          ０．１５
精製水                                  残部
【００４２】
（実施例９）
＜パック＞
下記組成のパックを常法により製造した。
（質量％）
本発明の金時草の抽出物          ０．０５
ヨクイニンエキス                ０．１
ポリビニルアルコール          １５．０
ポリエチレングリコール          ３．０
プロピレングリコール            ７．０
エタノール                    １０．０
パラオキシ安息香酸メチル        ０．０５
グリチルリチン酸ジカリウム      ０．１
香料                            ０．０５
精製水                          残部
【００４３】
（実施例１０）
＜洗浄用化粧水＞
下記組成の洗浄用化粧水を常法により製造した。
（質量％）
本発明の金時草の抽出物                        ０．０５
ラベンダーエキス                              ０．１
１，３−ブチレングリコール                    ４．０
グリセリン                                    ４．０
ジプロピレングリコール                        ２．０
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン        ０．７
デシルテトラデシルエーテル
エタノール                                    ３．０
グリチルリチン酸ジカリウム                    ０．１
香料                                          ０．００１
防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）            ０．１５
精製水                                        残部
【００４４】
（実施例１１）
＜乳液＞
下記組成の乳液を常法により製造した。
（質量％）
本発明の金時草の抽出物                            ０．０５
ローズマリーエキス                                ０．１
モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン      １．０
テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット      １．５
親油型モノステアリン酸グリセリン                  １．０
ステアリン酸                                      ０．５
ベヘニルアルコール                                １．５
パルミチン酸セチル                                ０．５
スクワラン                                      １０．０
メチルポリシロキサン                              ０．５
香料                                              適量
１，３−ブチレングリコール                        ７．０
グリチルレチン酸ステアリル                        ０．１
キサンタンガム                                    ０．１
精製水                                            残部
【００４５】
（実施例１２）
＜錠剤状栄養補助食品＞
下記の混合物を打錠して、錠剤状栄養補助食品を製造した。
本発明の金時草の抽出物          ５０ｇ
粉糖（ショ糖）                １７８ｇ
ソルビット                      １０ｇ
グリセリン脂肪酸エステル        １２ｇ
【００４６】
（実施例１３）
＜顆粒状栄養補助食品＞
下記の混合物を顆粒状に形成して栄養補助食品を製造した。
本発明の金時草の抽出物          ３４ｇ
ビートオリゴ糖              １０００ｇ
ビタミンＣ                    １６７ｇ
グリセリン脂肪酸エステル        １２ｇ
ステビア抽出物                  １０ｇ
【産業上の利用可能性】
【００４７】
本発明の抗老化剤は、安全性及び生産性が高く、安価で日常的に使用可能でありながら、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用、線維芽細胞増殖作用、あるいはラミニン５産生促進作用を有する。
本発明の抗老化剤を配合した皮膚外用剤は、皮膚のシワや弾力の低下の防止及び改善、肌荒れの予防、肌荒れの防止に有用であり、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント等に幅広く用いられる。
また、本発明の抗老化剤を添加した美容用飲食品は、経口摂取によっても優れた抗酸化作用及び抗老化作用を有し、安全性にも優れているので、例えば、健康食品、栄養補助食品等の各種美容用飲食品に幅広く用いられる。