(57)【要約】      （修正有）【課題】種々の疾患、障害および病気の有害な影響を改善する方法を提供する。【解決手段】式（Ａ）によって表される誘導体である、インドロカルバゾールＫ２５２ａの環置換誘導体を利用する治療的方法。該化合物は、末梢性神経障害、中枢ニューロン変性およびサイトカイン過剰産生を治療するのに有用である。前記に関連する典型的な疾患は、末梢性神経障害、アルツハイマー病、パーキンソン病ならびに自己免疫疾患およびアレルギー疾患である。式（Ａ）2008189676.tif 000017【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物における腫瘍壊死因子アルファの過剰産生の阻害用の医薬を製造するための式：
【化１】
2008189676.tif 000009
によって表される化合物Ａの使用。
【請求項２】
哺乳動物における腫瘍壊死因子アルファの過剰産生の有害な効果の改善用の医薬を製造するための式：
【化２】
2008189676.tif 000010
によって表される化合物Ａの使用。
【請求項３】
哺乳動物におけるインターロイキン-１ベータの過剰産生の阻害用の医薬を製造するための式：
【化３】
2008189676.tif 000011
によって表される化合物Ａの使用。
【請求項４】
哺乳動物におけるインターロイキン-１ベータの過剰産生の有害な効果の改善用の医薬を製造するための式：
【化４】
2008189676.tif 000012
によって表される化合物Ａの使用。
【請求項５】
該有害な効果が、敗血性ショック、慢性関節リウマチ、変形性関節症、喘息、気管支炎、慢性閉塞性気道疾患、乾癬、アレルギー性鼻炎、皮膚炎および炎症性腸疾患よりなる群から選択される請求項２記載の使用。
【請求項６】
該有害な効果が、自己免疫疾患である請求項２記載の使用。
【請求項７】
治療上有効量の式：
【化５】
2008189676.tif 000013
によって表される化合物Ａを含む、哺乳動物における腫瘍壊死因子アルファの過剰産生を阻害するための医薬組成物。
【請求項８】
治療上有効量の式：
【化６】
2008189676.tif 000014
によって表される化合物Ａを含む、哺乳動物における腫瘍壊死因子アルファの過剰産生の有害な効果を改善するための医薬組成物。
【請求項９】
治療上有効量の式：
【化７】
2008189676.tif 000015
によって表される化合物Ａを含む、哺乳動物におけるインターロイキン-１ベータの過剰産生を阻害するための医薬組成物。
【請求項１０】
治療上有効量の式：
【化８】
2008189676.tif 000016
によって表される化合物Ａを含む、哺乳動物におけるインターロイキン-１ベータの過剰産生の有害な効果を改善するための医薬組成物。
【請求項１１】
該有害な効果が、敗血性ショック、慢性関節リウマチ、変形性関節症、喘息、気管支炎、慢性閉塞性気道疾患、乾癬、アレルギー性鼻炎、皮膚炎および炎症性腸疾患よりなる群から選択される請求項８記載の医薬組成物。
【請求項１２】
該有害な効果が、自己免疫疾患である請求項８記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、種々の疾患、障害および病気の有害な影響を改善するのに向けられた方法で使用するＫ−２５２ａの環置換誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｉ．インドロカルバゾールＫ−２５２ａ
Ｋ−２５２ａは、式Ｉ中に示される立体化学を有するインドロカルバゾール骨格［特開昭６０−４１４８９号（米国第４５５５４０２号）］を有する化合物である。
【０００３】
【化１】
2008189676.tif 000002
【０００４】
Ｋ−２５２ａは、細胞機能を調節するのに主要な役割を演ずるプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）を強力に阻害し、平滑筋収縮を阻害する作用（Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４３(ｓｕｐｐｌ．):２８４、１９８７）、セロトニン分泌を阻害する作用（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１４４:３５、１９８７）、神経軸索の伸長を阻害する作用（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、８:７１５、１９８８）、ヒスタミン遊離を阻害する作用（Ａｌｌｅｒｇｙ、４３:１００、１９８８）、平滑筋ＭＬＣＫを阻害する作用（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６３：６２１５、１９８８）、抗炎症作用（Ａｃｔａ Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｈｕｎｇ．、８０:４２３、１９９２）、および細胞延命活性（Ｊ． Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、６４：１５０２，１９９５）のごとき種々の活性を有することが報告されて来ている。また、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９３：１７５〜１８２，１９９１には、Ｋ−２５２ａがＩＬ-２産生を阻害する活性を有することが開示されている。
【０００５】
さらに、Ｋ−２５２ａの誘導体は、ＰＫＣ阻害活性、ヒスタミン遊離を阻害する活性（特開昭６３−２９５５８８号）、抗腫瘍活性［特開昭６４−１６８６８９号（米国第４,８７７,７７６号）、ＷＯ第８８/０７０４５号（米国第４,９２３,９８６号）、ＷＯ第９４/０４５４１号］、血小板を増加する作用［ＷＯ第９４/０６７９９号（欧州特許第６３０８９８Ａ号）、降圧活性（特開昭６２−１２０３８８号）、コリン作動性ニューロン機能を促進する作用［ＷＯ第９４/０２４８８号（米国第５,４６１,１４６号および米国第５,６２１,１００号）］、および前立腺癌に対する治療効果［ＷＯ第９４/２７９８２号（米国第５,５１６,７７１号）］を持つことが報告されて来ている。選択されたアミノ含有トリンデン化合物は、対応するスタウロスポリン（ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ）オキシム類（ＷＯ第９７/０５１４０号）のベックマン転位によって調製された。
【０００６】
インドロカルバゾール類は、一般的に脂溶性である。この特徴のため、インドロカルバゾール類は、蛋白質に比較して相対的に容易に生体膜を通過できる。また、インドロカルバゾール類は、一般的に蛋白質よりｉｎ ｖｉｖｏ半減期が長い。
【０００７】
Ｋ−２５２ａそれ自体に加えて、Ｋ−２５２ａの種々の誘導体が合成され、生物学的活性について試験されている。生物学的活性を有することが示されたＫ−２５２ａ誘導体の中には、Ｌｅｗｉｓら、米国特許第５,４６１,１４６号および第５,６２１,１００号、およびＰＣＴ公開ＷＯ第９４/０２４８８号に開示された化合物があり、「化合物 II−５１」として命名されている。化合物 II−５１は、コリン作動性ニューロン、線条体ニューロン、感覚ニューロンの機能を増強することが示されている。
【０００８】
II．神経変性疾患および障害
パーキンソン病は、黒色線条体経路のドーパミン作動性ニューロンの進行性および選択的損失を含む神経変性障害である（Ａｇｉｄ、Ｌａｎｃｅｔ：３３７：１９９１）。マウスへの 1-メチル-4-フェニル-1,2,3,6-テトラヒドロピリジン（ＭＰＴＰ）の投与は、ドーパミン作動性ニューロン変性に導き、パーキンソン病で観察されるドーパミン作動性ニューロン損失および行動欠損の動物モデルを供する。ＭＰＴＰの末梢投与は、ヒト、サルおよびマウスにおける黒色線条体ドーパミン作動性ニューロン系の高度に選択的な変性に導く（Ｈｅｉｋｋｉｌａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２２４；１４５１〜１４５３、１９８４；Ｂｕｒｎｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０；４５４６〜４５５０、１９８３）。
【０００９】
ＭＰＴＰマウスモデルにおける神経変性は、よく特徴付けられている。ＭＰＴＰの全身投与は、マウス線条体のドーパミン作動性ニューロンにおいてドーパミン含量（および代謝）、チロシンヒドロキシラーゼ活性、ドーパミン取り込み部位の選択的損失を生じさせる（Ｈｅｉｋｋｉｌａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１１；４６７〜４６９、１９８４ａ、ｂ；Ｔｉｐｔｏｎら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．６１：１１９１〜１２０６、１９９３）。この効果は、用量依存的である。最大損失は、障害後３ないし７日の間に生じる（Ｊａｃｋｓｏｎ-Ｌｅｗｉｓら、Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ４：２５７〜２６９、１９９５）。黒質中のドーパミン作動性細胞体は、それらに対応する神経末端よりＭＰＴＰ毒性に対する感受性が低い。高ＭＰＴＰ用量または多回ＭＰＴＰ注入では、黒質におけるＴＨ免疫陽性細胞の実質的な損失が、１週間内に生じる（Ｈｅｉｋｋｉｌａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２４；１４５１〜１４５３、１９８４；Ｊａｃｋｓｏｎ-Ｌｅｗｉｓら、Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ４：２５７〜２６９、１９９５）。低ＭＰＴＰ用量または単回注入では、黒色チロシンヒドロキシラーゼ陽性細胞の損失が、後に生じる（ｔａｔｔｏｎら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓ． ３０：６６６〜６７２、１９９１）。かくして、低ＭＰＴＰ用量にて障害の短時間後に、黒質チロシンヒドロキシラーゼ陽性細胞の喪失がなければ、線条体損傷が観察できる。この神経変性の順序は、疾患において観察されたのと同様である。ＭＰＴＰマウスモデルは、パーキンソン病の研究において認められ、広範に用いられているモデルである。
【００１０】
神経伝達物質としてγ-アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）を使用する非コリン作動性ニューロン（すなわち、ＧＡＢＡ作動性ニューロン）は、脳内に広く散在する。例えば、げっ歯類における基底核大型細胞(ヒト脳内の等価な領域は、マイネルトの基底核と呼ばれる)、注意および記憶機能に重要である前脳基底の領域中に見出される。また、前脳基底内のＧＡＢＡ作動性ニューロンに対する損傷は、アルツハイマー病のごとき神経変性疾患の行動欠損の一因となるかもしれない（Ｄｅｋｋｅｒら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．ａｎｄ  Ｂｉｏｂｅｈａｖ．Ｒｅｖ． １５：２９９〜３１７，１９９１；Ｇａｌｌａｆｈｅｒら、Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、６：３５１〜３５８、１９９４；Ｔｏｒｒｅｓら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、６３：９５〜１２２，１９９４）。
【００１１】
前脳基底内のニューロンは、中枢神経系の種々の疾患、とりわけアルツハイマー病において死滅する（Ａｒｅｎｄｔら、Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．（Ｂｅｒｌ．）６１：１０１〜１０８，１９８３；Ｉｒａｉｚｏｚら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、４１：３３〜４０，１９９１；Ｖｏｇｅｌｓら、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｉｎｇ、１１：３〜１３，１９９０）。かかる神経細胞の死滅における寄与因子は、グルタミン酸毒性刺激すなわち、過剰なグルタミン酸によるニューロンの過剰刺激である（Ｃｈｏｉ、Ｎｅｕｒｏｎ、１：６２３〜６３４、１９８８）。従って、アルツハイマー病のいくつかの動物モデルは、グルタミン酸またはグルタミン酸アナログを用いて、ニューロン死滅が生じる前脳基底の領域、すなわち、基底核において毒性刺激死を生じる（Ｗｅｎｋ、Ｂｅｈ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．、７２：１７〜２４、１９９６）。
【００１２】
アルツハイマー病における神経病理は、最初に内側嗅領皮質で見られ、この領域中のニューロンの損失は、疾患進行につれて重篤になる（Ｂｒａａｋら、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．８２：２３９〜２５９，１９９１；Ｈｙｍａｎら、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ． ２０：４７２〜４８１、１９８６）。内側嗅領皮質の第２層におけるニューロンは、海馬の歯状回に突き出し、このニューロン経路は、記憶形成に重要な役割を演じる（Ｌｅｖｉｓｈｏｎら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．  ５６４：２３０〜２４４、１９９１；Ｏｌｔｏｎら、、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．  １３９：２９５〜３０８、１９７８；Ｓｔｅｗａｒｄら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．Ｂｕｌｌ．  ２：４１〜４８、１９７７）。大脳皮質中の多数の他のニューロンのように、内側嗅領皮質の第２層におけるニューロンは、神経伝達物質としてグルタミン酸を使用する（Ｍａｔｔｓｏｎら、Ｎｅｕｒｏｎ  １；８６５〜８７６，１９８８；Ｗｈｉｔｅら、Ｎａｔｕｒｅ  ２７０：３５６〜３５７、１９７７）。従って、内側嗅領皮質中のグルタミン酸作動性ニューロンの損失は、アルツハイマー病および他の神経性障害において見られる行動欠損の一因となる。
【００１３】
III.  末梢性神経障害
末梢性神経障害とは、大抵しばしば、運動、感覚、感覚運動性または自律神経機能不全の１つまたは組合せとして現れる、一般的に末梢神経に影響する障害をいう。末梢性神経障害によって表される広範な各種の形態は、各々に独特の、等しく広範な各種の原因にあるとできる。例えば、末梢性神経障害は、遺伝学的に獲得でき、全身疾患に起因でき、あるいは毒性薬品によって誘導できる。神経毒性を引き起こすいくつかの毒性薬品は、治療剤、抗腫瘍剤、食物または医薬品中の汚染物品、ならびに環境および産業汚染物である。
【００１４】
とりわけ、感覚および/または運動神経障害を惹起することが知られている化学療法剤には、血液学的悪性腫瘍および肉腫を治療するのに使用される抗腫瘍性薬剤であるビンクリスチンを含む。神経毒性は、用量関連性であり、腸運動および末梢性神経障害、特に手および足の末端筋肉、姿勢低血圧および膀胱の緊張減退の減弱を表す。シスプラチン関連神経毒性は神経成長因子（ＮＧＦ）で緩和できるものの（Ａｐｆｅｌら、１９９２、Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ３１：７６〜８０）、同様の問題がタキソール（Ｔａｘｏｌ）およびシスプラチンに関して記載されている（Ｍｏｌｌｍａｎ、１９９０、Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊｏｕｒ．Ｍｅｄ．  ３２２：１２６〜１２７）。神経毒性は、神経毒性薬品の除去後、時折、可逆的であるけれども、回復は非常にゆっくりした過程である（Ｌｅｇｈａ、１９８６、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  １：４２１〜４２７；Ｏｌｅｓｅｎら、１９９１、Ｄｒｕｇ ｓａｆｅｔｙ  ６：３０２〜３１４）。
【００１５】
レフサム病、Ａ−ベータリポタンパク血症、タンジール病、クラッベ病、異染性白質ジストロフィ、ファブリー病、デジェリン症候群等を含む多数の遺伝する末梢性神経障害がある。全ての遺伝する神経障害のうち、はるかに最も一般的なのが、シャルコー・マリー・ツース病である（末梢性神経障害の付加的情報については米国特許第５,４２０,１１２号参照）。
【００１６】
ＩＶ．  サイトカイン
腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ-α）およびインターロイキン-１β（ＩＬ-１β）は、多数の炎症および代謝過程に関与することが知られているポリペプチドである。敗血症性ショックを含む炎症疾患におけるＴＮＦ-αの役割に関係する総説については、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：６２５（１９８０）、およびＣｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｅｐｓｉｓ、Ｓｉｂｂａｌｄ、Ｗ．Ｊ．およびＶｉｎｃｅｎｔ，Ｊ．−Ｌ（Ｅｄｓ.）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ Ｂｅｒｌｉｎ Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ１９９５を参照。ＴＮＦ-αの過剰産生または不適当な産生は、敗血症性ショックを含むいくつかの病的な状態（Ｓｐｏｏｎｅｒら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、６２：ｐ．Ｓ１１（１９９２））および限定されるものではないが慢性関節リウマチ、変形性関節症、喘息、気管支炎、慢性閉塞性気道疾患、乾癬、アレルギー性鼻炎、皮膚炎および炎症性腸疾患、および他の自己免疫疾患を含めた、各種の他のアレルギー性および炎症性状態または疾患に関与することが一般的に受け入れられている。Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｓ．  １０：１２２（１９９１）、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８９６（１９８５）およびＰｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ８９：７３７５（１９９２）。
【特許文献１】米国特許第５,４６１,１４６号明細書
【特許文献２】米国特許第５,６２１,１００号明細書
【特許文献３】ＷＯ第９４/０２４８８号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明は、種々の疾患、障害および病気の有害な影響を改善するのに向けられた方法で使用するＫ−２５２ａの環置換誘導体に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
一般的に、本発明は、治療上有効量の化合物Ａでそれを必要とする対象を治療することによって種々の疾患、障害および状態の有害な影響を改善する方法をその要旨とする。
【００１９】
より詳細には、本発明は、ニューロンを化合物Ａと接触させる工程を含むことを特徴とする哺乳動物のドーパミン作動性、ＧＡＢＡ作動性、またはグルタミン酸作動性ニューロンの機能または生存を増強することによって、該ニューロンを死滅に誘導したりまたは引き起こす、またはその機能の阻害に誘導するまたはそれを引き起こす疾患、障害および状態の有害な影響を改善する方法をその要旨とする。典型的には、ニューロンが見出される哺乳動物はヒトである。典型的には、化合物Ａと接触するドーパミン作動性、ＧＡＢＡ作動性またはグルタミン酸作動性ニューロンは、神経変性疾患のために、機能を障害されているか、死滅の危険性がある。典型的には、当該神経変性疾患は、パーキンソン病またはアルツハイマー病である。
【００２０】
より詳細には、また、本発明は、神経障害低減量の化合物Ａを哺乳動物に投与することを特徴とする、末梢性神経障害を減少させる方法をその要旨とする。
【００２１】
インドロカルバゾール化合物Ｋ−２５２ａは、内毒素投与に起因する致死率を減少させることが報告されている一方で、この能力は、プロテインキナーゼ、とりわけ、プロテインキナーゼＣを阻害するＫ−２５２ａの能力に帰せられている（Ｉｎａｂａら、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｓｕｒｇ ２３：２３４（１９９３）。ＰＫＣに対して阻害活性がほとんど有しないまたは有しない化合物Ａは、ＴＮＦ-α産生およびサイトカインＩＬ-１βの産生の阻害剤として、驚くべきことに良好な活性を供することが予期せず見出された。従って、さらに具体的には、また、本発明は、哺乳動物においてＴＮＦ-αおよびＩＬ-１βの産生を阻害する方法、および限定されるものではないが敗血性ショック、慢性関節リウマチ、変形性関節症、喘息、気管支炎、慢性閉塞性気道疾患、乾癬、アレルギー性鼻炎、皮膚炎および炎症性腸疾患、および他の自己免疫疾患を含めた、炎症状態および疾患を治療または緩和する方法をその要旨とし、当該方法は、医薬上許容される担体と組み合わせて有効量の化合物Ａまたはその医薬上許容される塩を哺乳動物に投与することを含む。
【００２２】
本明細書で用いるごとく、「化合物Ａ」は、その化学構造が以下に示される化合物を意味する。
【００２３】
【化２】
2008189676.tif 000003
【００２４】
また、化合物Ａとは、化合物 II−５１をいう（Ｌｅｗｉｓら、米国特許第５,４６１,１４６号および第５,６２１,１００号；ＷＯ第９４/０２４８８号）。
【００２５】
本明細書で用いるごとく、「改善する」および「改善すること」とは、治療的に改良するおよび/または治療的に減少させるおよび/またはより治療的に寛容にすることを意味する。
本明細書で用いるごとく、「有害な」とは、損傷するおよび/または有害なおよび/または否定的なを意味する。
【００２６】
本明細書で用いるごとく、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βを修飾するのに用いられる場合、「過剰産生」なる語は、例えば、敗血性ショック、アレルギー状態炎症状態等のごとき有害な状態に誘導するＴＮＦ−αおよび/またはＩＬ−１βの産生を意味する。
【００２７】
本明細書で用いるごとく、「阻害する」または「阻害すること」なる語は、化合物Ａの存在が、化合物Ａと接触しない比較物質よりも化合物Ａと接触する物質の産生を減少しおよび/または禁じおよび/または予防することに対して比較上大きな効果を持つことを意味する。
【００２８】
本明細書で用いるごとく、「機能」または「生存」なる用語を修飾するのに用いられた場合、「増強する」または「増強すること」なる語は、化合物Ａの存在が、化合物Ａと接触しない比較ニューロンよりも特定のニューロンの機能および/または生存に対して比較上大きな効果を持つことを意味する。例えば、限定するものではないが、例えば、ドーパミン作動性ニューロンの生存に関して、もし治療された集団が非治療集団よりも比較上機能的な期間が大きければ、化合物Ａは、化合物Ａと共に存在しないドーパミン作動性ニューロン集団と比較される場合、（例えば、損傷、疾患状態、変性状態または自然的進行による）死の危険性にあるドーパミン作動性ニューロン集団の機能の増強を示すであろう。
【００２９】
本明細書で用いるごとく、「ドーパミン作動性ニューロン」は、神経伝達物質としてドーパミンを使用するニューロンを意味する。
本明細書で用いるごとく、「ＧＡＢＡ作動性ニューロン」は、神経伝達物質としてγ-アミノ酪酸を使用するニューロンを意味する。
【００３０】
本明細書で用いるごとく、「グルタミン酸作動性ニューロン」は、神経伝達物質としてグルタミン酸を使用するニューロンを意味する。
本明細書で用いるごとく、「ｎｂｍ」は、基底核大型細胞を意味する。
【００３１】
別な方法で規定しない限りは、本明細書で用いられた全ての技術および科学用語は、本発明の属する当業者によって通常理解されるのと同一の意味を有する。本明細書に記載されたと同様または等価な方法および物質を本発明の実施または試験で使用することができるが、好ましい方法または物質を以下に記載する。本明細書中の全ての刊行物、特許出願、特許および他の文献は、出典明示して本明細者の一部とみなす。争いがある場合には、定義を含む本明細書が支配的であろう。特に断りのない限りは、本明細書中の物質、方法および実施例は、単に例示的であり、限定するものではない。本発明の種々の特徴および利点は、次の詳細な記載および請求の範囲から明白であろう。
【００３２】
（図面の簡単な記載）
図１は、化合物ＡはモノアミンオキシダーゼＡ阻害剤ではないことを示すデータのグラフである。クロルグリシンのＩＣ５０は、２１ｎｍであった。正立した三角形、クロルグリシン；逆三角形、化合物Ａ；四角形、Ｌ-デプレニル。
図２は、化合物ＡはモノアミンオキシダーゼＢ阻害剤ではないことを示すデータのグラフである。クロルグリシンのＩＣ５０は、２１ｎｍであった。正立した三角形、クロルグリシン；逆三角形、化合物Ａ；四角形、Ｌ-デプレニル。
図３は、ビヒクルのみを受けた障害動物（ダーク・バー）に比較して、化合物Ａを受けた動物（ライト・バー）は、障害されたｎｂｍの吻側部分（障害の中点かた４００μｍにわたって）において有意により多くのフルオロ-金標識ニューロンを有したことを示す捧グラフである。Ｎｅｗｍａｎ‐Ｋｅｕｌｓ検定による＊＝Ｐ＜０.０５。
【００３３】
図４は、正常対照動物、シャム手術動物、ビヒクルのみを受けた手術で障害とした動物（「Ｌｅｓ」）、１日４回０.１ｍｇ/ｋｇの用量にて化合物Ａを受けた手術的により障害とした動物（「０.１」）によって、変更する課題が与えられたＴ迷路中で、犯された誤りの総数を示す捧グラフである。各群における動物数をカッコ内に示す。Ｎｅｗｍａｎ‐Ｋｅｕｌｓ検定によるシャムと比較した ＊＝Ｐ＜０.０５、Ｌｅｓと比較した¶¶＝Ｐ＜０.０１。
図５は、アクリルアミド誘導末梢性神経障害に対する化合物Ａの効果を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３４】
一般的に、本発明は、治療上有効量の化合物Ａでそれを必要とする対象を治療することによって種々の病気、障害および疾患の有害な影響を改善する方法をその要旨とする。
本発明は、哺乳類の中枢神経系の特殊な型のニューロンの機能および/または生存を増強することによって、かかる疾患および障害のために死ぬ危険性においてニューロンの機能および/または生存に否定的に影響する病気、障害および疾患の有害な影響を治療する方法を提供する。さらに詳細には、本発明は、以下の化学構造：
【００３５】
【化３】
2008189676.tif 000004
【００３６】
を有する環置換Ｋ−２５２ａ誘導体である化合物Ａを哺乳動物に投与することによって、哺乳動物においてドーパミン作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、およびグルタミン酸作動性ニューロンの機能または生存を増強する方法を提供する。
【００３７】
ドーパミン作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、およびグルタミン酸作動性ニューロンは、哺乳類の中枢神経系に広範に散在する。各々のこれらの３つのニューロン細胞型は、中枢神経系の１以上の神経変性病において、機能の損傷または死さえ受ける。パーキンソン病は、黒質経路のドーパミン作動性ニューロンの進行性喪失を含む。アルツハイマー病は、前脳基底のマイネルトの基底核におけるＧＡＢＡ作動性ニューロンを含む種々の型のニューロンの死を含む。また、アルツハイマー病は、内側嗅領皮質中のグルタミン酸作動性ニューロンの死を含む。
【００３８】
パーキンソン病またはアルツハイマー病を治療する１つの方法は、ドーパミン作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロンまたはグルタミン酸作動性ニューロンの機能または生存を増強する化合物を投与することである。化合物Ａは、ドーパミン作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロンおよびグルタミン酸作動性ニューロンの機能または生存の増強についての生物学的アッセイおよびｉｎ ｖｉｖｏモデルにおいて薬理学的に活性である。従って、本発明は、パーキンソン病またはアルツハイマー病を治療するための有用性を有する。本発明は、しかしながら、それらの疾患の治療に限定されない。また、その機能の損傷または死の危険性が、パーキンソン病またはアルツハイマー病以外の原因から起因するドーパミン作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロンおよびグルタミン酸作動性ニューロンの機能または生存を増強するための化合物Ａの使用は、本発明の範囲内にある。
【００３９】
また、本発明は、末梢性神経障害を低下させる方法をその要旨とする。該方法は、哺乳動物に対して神経障害低下量の化合物Ａを投与することを含む。種々の好ましい具体例において、哺乳動物は、例えば、化学療法剤での新生物の治療の結果として、神経障害を発展するヒトまたは農業または家畜哺乳動物である。
化合物Ａは、当業者によって有効と考えられるように投与でき；投与のより好ましい方法は皮下注射である。
【００４０】
本明細書で用いるごとく、「末梢性神経障害」とは、末梢神経系の分節に影響する障害をいう。本発明は、限定されるものではないが胃腸管運動の減少または膀胱の緊張減退のごとき遠心性感覚運動性障害、または自律神経障害を含めた、神経障害を減少させるために化合物Ａを用いることを含む。
化合物Ａで有効に治療できる好ましい神経障害は、全身病、例えば、ポストポリオ症候群に関連する神経障害；遺伝的に獲得した神経障害、例えば、シャルコー・マリー・ツース病：および毒性薬品、例えばアクリルアミド、または化学療法剤、例えば、ビンクリスチンによってひき起こされた神経障害を含む。
【００４１】
化合物Ａが毒性薬品によって誘導された神経障害を治療するのに用いられる場合、毒性薬品の曝露の前後に、またはそれと同時に、または化学療法剤の投与の前後に、またはその間に投与できる。好ましくは、化合物Ａおよび化学療法剤は、治療の重なる期間に、有効な時間間隔にて各々投与される。神経毒性薬品または化学療法剤によって破壊された少なくとも一部の神経機能を修復するために、神経毒性薬品の曝露に続き、または化学療法に続いて化合物Ａを哺乳動物に投与できる。化学療法剤は、ビンクリスチン、タキソール、ジデオキキシイノシンまたはシスプラチンのごとき神経毒性を生じるいずれかの化学療法剤であり得る。
【００４２】
「毒性薬品」または「神経毒性薬品」とは、その化学的作用を通して、神経系構成体の活性を傷害、損傷または阻害する物質を意味する。神経障害をひき起こす神経毒性薬品のリストは長々しく、限定されるものではないがビンクリスチン、ビンブラスチン、シスプラチン、タキソールのごとき腫瘍剤、またはジデオキシ化合物、例えば、ジデオキシイノシン；アルコール；金属類；職業上または環境上の曝露に関与する産業毒物；食物または医薬品の汚染物質；またはビタミン類または化学治療剤、例えば、ペニシリンまたはクロラムフェニコールのごとき抗生物質の過剰用量、またはビタミンＡ、ＤまたはＢ６の大量用量を含む。完全ではないが、神経毒性副作用を有する化学的化合物の広範なリストが表１に見出される。このリストは、神経毒性化合物の例を提供するが、例示する意図のものであり、本発明の範囲を限定するものではない。他の毒性薬品は、神経障害を惹起でき、当業者に知られた方法によって特徴付けができる。「毒性薬品に対する曝露」とは、毒性薬品が本発明の哺乳動物に利用できるまたは接触するようになることを意味する。毒性薬品に対する曝露は、直接的投与によって、例えば、食物、医薬品または例えば、化学療法剤のごとき治療剤の摂取または投与によって、偶発的汚染によって、または例えば大気または水曝露のごとき環境曝露によって起こり得る。
【００４３】
ｉｎ ｖｉｖｏにて末梢性神経障害に帰せられる広範な異種の形態および原因にもかかわらず、出願人は化合物Ａが哺乳動物のかかる神経障害を予防または治療する有効な手段であり得ることを仮説として設けた。
【００４４】
【表１】
2008189676.tif 000005
【００４５】
また、化合物Ａは、ＰＫＣに対して阻害活性をほとんど有しないまたは有しないにもかかわらず、サイトカインＴＮＦ−αの産生を阻害することも示された。また、化合物Ａは、サイトカインＩＬ−１βの産生を阻害する。ＴＮＦ−αの産生は、化合物Ａの使用を介するその阻害が、ＴＮＦ−α産生のかかる阻害を必要とする対象に価値を有益に提供できるように種々の疾患および障害と関連する。
【００４６】
従って、哺乳動物において、および/または治療上有効量の化合物Ａを哺乳動物に投与することを含む、限定されるものではないが、敗血性ショック、慢性関節リウマチ、変形性関節症、喘息、気管支炎、慢性閉塞性気道疾患、乾癬、アレルギー性鼻炎、皮膚炎および炎症性腸疾患、および他の自己免疫疾患を含めた、炎症疾患および病気を治療または緩和する方法において、化合物Ａを利用して、ＴＮＦ-αの産生を阻害することもできる。
【００４７】
本発明で使用するには、化合物Ａは、医薬上許容される毒性のない賦形剤および担体との混合によって医薬組成物に調剤できる。かかる組成物は、種々の経路のいずれかによる投与のために調製できる。投与経路および好ましい投与形態は、以下の：非経口、好ましくは液体溶液剤または懸濁剤形態；経口、好ましくは錠剤またはカプセル剤の形態；経鼻、好ましくはとりわけ粉末剤、点鼻剤またはエアゾール剤；および経皮、例えば経皮パッチを含む。
【００４８】
化合物Ａは、便宜には、単位用量形態で投与でき、Ｒｅｍｉｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＭａｃｋＰｕｂ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９８０）に記載されたごとく、医薬分野でよく知られた方法のいずれかによって調製もできる。非経口投与の製剤は、通常の賦形剤として、滅菌水または生理的食塩水、ポリエチレングリコールのごときポリアルキレングリコール、油および植物由来の水素化ナフタレン等を含有もできる。とりわけ、生体適合性で生物分解性のラクチドポリマー、ラクチド/グリコリド共重合体、またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体は、活性化合物の放出を制御するのに有用な賦形剤である。化合物Ａの他の潜在的に有用な非経口送達システムは、エチレン−酢酸ビニル共重合体粒子、浸透ポンプ、埋め込み注入システムおよびリポソームを含む。吸入投与のための製剤は、賦形剤として例えば、ラクトースを含有し、あるいは例えば、ラクトースを含有する水溶液でもよく、あるいは例えば、ポリオキシエチレン-9-ラウリルエーテル、グリココレートおよびデオキシコール酸塩を含有する水溶液でもよく、あるいは点鼻剤の形態における投与のための油状溶液または経鼻的に適用するゲルでもよい。非経口投与の製剤は、バッカル投与のためのグリココレート、直腸投与のためのサリシレートまたは膣内投与のためのクエン酸を含有してもよい。経皮パッチのための製剤は、好ましくは脂溶性エマルジョンである。
【００４９】
化合物Ａは、医薬組成物中の唯一の有効成分として使用することができる。別法として、他の有効成分、例えば、病気または障害におけるニューロン生存または軸索再生を促進する成長因子と組み合わせて用いることもできる。
【００５０】
治療的組成物中の本発明の実施で使用される化合物Ａの濃度は、変更できる。当該濃度は、投与すべき薬物の総用量および投与経路のごとき因子に依存するであろう。非経口投与について、化合物Ａは、典型的には、約０.１ないし１０％ｗ/ｖを含有する水性生理的緩衝溶液中で提供される。典型的な用量範囲は、１日当たり約１ｍｇ/ｋｇ体重ないし１ｇ/ｋｇ体重であり；好ましい用量範囲は、１日当たり約０.０１ｍｇ/ｋｇ体重ないし１００ｍｇ/ｋｇ体重である。投与すべき化合物Ａの好ましい用量は、病気または障害の進行の型および程度、個々の患者の総合的な健康状態、治療される個々の病気または障害についての化合物Ａの相対的効力、使用される個々の製剤、およびその投与経路のごとき変数に依存するようである。
【００５１】
本発明で使用される化合物Ａは、好ましくは、Ｌｅｗｉｓら、米国特許第５,４６１,１４６号に記載された方法に従って得られる。
本発明は、以下の実施例によってさらに示されるであろう。これらの実施例は、本発明の範囲およびここに添付された請求の範囲を限定として解釈するものではない。
【実施例】
【００５２】
実施例１
ドーパミン作動性ニューロンに対する薬理学的活性
実験は、マウスのＭＰＴＰ障害ドーパミン作動性ニューロン（ＭＰＴＰマウスモデル）において化合物Ａを用いて行った。Ｃ５７黒色マウスに供されたＭＰＴＰの単回ｓ.ｃ.用量（２０ｍｇ/ｋｇ）は、線条体チロシンヒドロキシラーゼ活性のおおよそ６０％喪失を生じた。０.０１ないし１０ｍｇ/ｋｇ（ｓ.ｃ.）の範囲の日用量にて、かかるＭＰＴＰ処置マウスに対して化合物Ａを投与すると、線条体チロシンヒドロキシラーゼ活性の喪失を減少させた。これらのデータを表２に示す。
【００５３】
【表２】
2008189676.tif 000006
【００５４】
マウスは、最初の化合物Ａ注射の４〜６時間後に、ＭＰＴＰ（２０ｍｇ/ｋｇ；ｓ.ｃ.）で処理された。次いで、化合物Ａを７日間の期間である実験の終了まで毎日注射した。線条体は、チロシンヒドロキシキナーゼ酵素活性について評価された。星印は、ＭＰＴＰ−ビヒクル処置動物からの統計学的有意差（ｐ＜０.０５）を示す。
【００５５】
個々の実験において、化合物Ａの活性は、高用量ＭＰＴＰマウスモデルで評価された。ＭＰＴＰの単回４０ｍｇ/ｋｇ注射は、注射７日後線条体チロシンヒドロキシラーゼ酵素活性において９５％涸渇を生じた。化合物Ａの投与は、０.０３ないし３.０ｍｇ/ｋｇの間の日用量にて、用量依存的に障害の大きさを減少させた。これらのデータを表３に示す。
【００５６】
【表３】
2008189676.tif 000007
【００５７】
マウスは、最初の化合物Ａ注射の４〜６時間後に、ＭＰＴＰ（４０ｍｇ/ｋｇ；ｓ.ｃ.）で処理された。次いで、化合物Ａを７日間の期間である実験の終了まで毎日注射した。線条体は、チロシンヒドロキシキナーゼ酵素活性について評価された。星印は、ＭＰＴＰ−ビヒクル処置動物からの統計学的有意差（ｐ＜０.０５）を示す。
【００５８】
ＭＰＴＰ媒介ドーパミン作動性毒性は、ＭＰＴＰのＭＰＰ＋（1-メチル-4-フェニルピリジニウムイオン）への転化を媒介するＭＡＯ、およびドーパミン作動性ニューロン内へＭＰＰ＋の取り込みに依存する。ＭＰＴＰマウスモデルにおいて活性があると見出された化合物は、ＭＡＯまたはドーパミンの取り込みの阻害剤でないことを決定すべきである。化合物Ａは、ｉｎ ｖｉｔｒｏにてモノアミンオキシダーゼＡまたはＢを阻害しないか（図１および２）、あるいは神経末端内のカテコールアミンの取り込みも遮断しないことが見出され、これは、この化合物がＭＰＴＰのＭＰＰ＋への代謝的変換を妨げないか、またはドーパミン作動性ニューロン内へのＭＰＰ＋の活性取り込みを阻害しないことを示す。
ＭＰＴＰマウスドーパミン作動性障害モデルにおける化合物Ａの効力を示すこれらのデータは、パーキンソン病のごとき神経変性障害の治療において化合物Ａの有用性を示す。
【００５９】
実施例２
ＧＡＢＡ作動性ニューロンに対する薬理学的活性
よく確立されたイボテン酸（ibotenic acid）障害モデルを用いて、基底核大型細胞中のＧＡＢＡ作動性ニューロンの涸渇（例えば、生存を高める）を予防する能力について、化合物Ａを試験した。興奮毒性であるイボテン酸は、ｎｂｍ領域においてＧＡＢＡ発現ニューロンの数を減少させることが知られている（Ｌｉｎｄｅｆｏｒｓら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．１３５：２６２〜２６４、１９９２：Ｓｈａｕｇｎｅｓｓｙら、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．、６３７：１５〜１６、１９９４）
成体雄性スプレーグ・ドーリーラットは、ｎｂｍの片側にイボテン酸（５.０ｇ）の注射を受けた。次いで、ラットには、障害１８時間後に開始して皮下注射を介して化合物Ａ（０.０３ｍｇ/ｋｇ）が投与され、障害後１８日まで１日４回にて続けた。次いで、組織切片を、ｎｂｍの吻側−尾側にわたり集め、加工してＧＡＢＡの生合成に必要とされる酵素であるグルタミン酸デカルボキシラーゼを検出した。次いで、基底核大型細胞中の吻側−尾側にわたりグルタミン酸デカルボキシラーゼ発現ニューロン数をカウントし、この領域では、ｎｂｍのグルタミン酸デカルボキシラーゼ発現ニューロンが隣接した構造（淡蒼球に対して内側および腹側の白色物）中のグルタミン酸デカルボキシラーゼ発現ニューロンと容易に区別される。結果は、反対の非障害側の数に対して、障害側での百分率グルタミン酸デカルボキシラーゼ発現ニューロンとして表した。また、結果は、吻側ｎｂｍ、中間ｎｂｍおよび尾側ｎｂｍについて、個別に計算した。
【００６０】
グルタミン酸デカルボキシラーゼ発現ニューロンの平均７８（±１６平均誤差）％は、化合物Ａを受けた動物の吻側ｎｂｍでカウントし、ビヒクルのみを受けた動物における３４（±１９平均誤差）％と比較し、ｔ−検定によって統計学的に有意差（ｐ＜０.０５）があった。化合物Ａ処置動物およびビヒクルのみ（対照）動物間には統計学的な有意差は、中間ｎｂｍまたは尾側ｎｂｍで見られなかった。
これらの結果は、化合物Ａが興奮毒性障害から起因するＧＡＢＡ作動性ニューロン喪失に対して保護する、従ってそのニューロン集団に対して神経親和性効果を有することを示す。
【００６１】
実施例３
ｎｂｍニューロンに対する薬理学的活性
興奮毒性ニューロン死を予防する化合物Ａの能力を直接的に試験するために、成体雄スプレーグ・ドーリーラットのｎｂｍニューロンを、まず、長持続性マーカーで標識した。これは、神経末端に取り込まれ、細胞体に逆輸送されるニューロントレーサーであるフルオロ−金（ＦＧ）を、前頭皮質および壁側皮質中のｎｂｍニューロンの標的領域内に注入することによってなされた（Ｂｏｏｋら、Ｊ.Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ．Ｅｘｐ. Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、５３：９５〜１０２、１９９４）。７〜１０日後、動物にはイボテン酸の５μｇを用いて、ｎｂｍの障害を片側に受けさせた。この障害の１８時間後に開始し、動物には皮下注射を介して、障害後１８日間まで一日おきに、化合物Ａ（０.０３ｍｇ/ｋｇ）を受けさせた。組織切片は、脳の両側においてｎｂｍの全吻側−尾側にわたり集め、ＦＧ標識を有するｎｂｍニューロン数をカウントした。カウントは、標準的手順を用いてサイズ差について修正し、結果を脳の反対側の非障害側でのｎｂｍ中の標識ニューロン数に対する各動物の障害領域のｎｂｍ中の標識ニューロンの百分率として表した。
【００６２】
化合物Ａを受けた動物は、ビヒクルのみを受けた障害動物と比較して、障害されたｎｂｍの吻側部分（障害の中点から４００μｍにわたって）に有意により多くのＦＧ標識ニューロンを有した（図３）。障害の中点および尾部では、化合物Ａは、下降効果を有した。
これらの結果は、化合物Ａが興奮毒性損傷に起因するｎｂｍ中の予め標識したニューロンの喪失を予防できることを直接的に示す。
【００６３】
実施例４
化合物Ａを用いた短期間投与に対する長持続性機能改善
成体雄スプレーグ・ドーリーラットを、まず、標準的Ｔ迷路変更課題で応答を変更するために慣らした（Ｈｅｐｌｅｒら、Ｊ.Ｎｅｕｒｏｓｃｉ.、５：８６６〜８７３、１９８５）。次いで動物には、Ｔ迷路課題中に効率を損なうように基底核大型細胞の両側障害を受けさせた（例えば、Ｓａｌａｍｏｎｅら、Ｂｅｈａｖ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．、１３：６３〜７０、１９８４）。障害後１８時間に開始して、障害後１２日まで一日おきに、皮下注射（０.１ｍｇ/ｋｇ）を介して化合物Ａを動物に摂取させた。最終注射の２４時間後に全動物は、それらの改変効率が所定のレベルに達するまで、概して３ないし１０日間かかるが、１日１回Ｔ迷路に入れた。基準に達した後、動物は８から１０日週間さらに試験しなかった。その時点で、所定の効率に達するまで１日１回動物を再度Ｔ迷路に入れた。この試験の間、動物が犯した誤りの総回数を図４に示す。ビヒクルのみを受けた障害動物は、非手術の正常または偽手術のいずれよりも有意に多い誤りを犯したが、先に化合物Ａを１０〜１２週間摂取した障害動物は、正常なものと違いは無かった。
これらの結果は、化合物Ａが注意または記憶の改善を反映する行動の長期の改善を、投薬を中止した後数カ月、生じることを示す。
【００６４】
実施例５
内側嗅領皮質障害モデルにおける化合物Ａの効力
内側嗅領皮質の第２層におけるグルタミン酸含有ニューロンは、歯状回顆粒細胞の樹状突起上のシナプスを形成する歯状回の分子層に突き出す。障害は、興奮毒性  N-メチル-Ｄ-アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）の定位の注入によって内側嗅領皮質の第２層において引き起せた。ペントバルビタールナトリウム麻酔下、ラットには内側嗅領皮質中の各２部位でＮＭＤＡ（１５ｎｍｏlｓ/位置）の注入を受けさせた。２週間後、５０ｍＭ硫化ナトリウム溶液を用いラットを犠牲にし、潅流した。脳を取り出し、４０μｍの厚さの水平面で薄片に切り、クレシルバイオレットまたはＴｉｍｍ’ｓの染液のいずれかで染色した。内側嗅領皮質の第２層中のニューロンの生存を、クレシルバイオレット染色切片中で評価し、一方歯状回の分子層中のそれらの軸索末端の完全さは、Ｔｉｍｍ’ｓの染液で染色された別の切片で測定した。
【００６５】
ＮＭＤＡの注入は、内嗅領第２層の６２±１１％（標準誤差）を破壊し、歯状回の中央分子層の面積を１９±６％（標準誤差）だけ減少させた。ＮＭＤＡの注入後に直ちに与えた初回注入にての化合物Ａ（１ｍｇ/ｋｇ、皮下）での毎日の処置は、内嗅領第２層ニューロンの喪失を２２±１０％（標準誤差）まで減少させ（ｐ＜０.０５、「ｔ」検定）、中央分子層の面積の減少を防げた（ｐ＜０.０５、「ｔ」検定）。従って、化合物Ａは、興奮毒性障害から内側嗅領皮質中のニューロンを保護し、歯状回中のそれらの軸索末端の完全さを維持させた。
【００６６】
これらのデータは、内側嗅領皮質のグルタミン酸作動性ニューロンを保護することにおける化合物Ａの効力を示す。動物モデルにおけるの内側嗅領皮質の障害は記憶欠損を生じることが示されており、アルツハイマー病において、これらのニューロンの重篤な変性が起こる。これは、化合物Ａがグルタミン酸作動性ニューロンおよび大脳皮質ニューロンの損失またはそれに対する損傷を伴う神経学的障害を治療するのに有用であるという立場を支持する。
【００６７】
実施例６
アクリルアミド誘導末梢性神経障害に対する化合物Ａの効果
アクリルアミドは、ヒトおよび動物において「ｄｙｉｎｇ ｂａｃｋ」中枢−末梢性遠位神経障害を生じる。該障害は、ヒトの薄弱、不安感および失調によって特徴付けられる混合した感覚/運動の神経障害である。動物において、アクリルアミドは、習性（感覚、運動および固有受容）、組織病理学、電気生理学および体重減少に変化を生じる。末梢の大直径の長い軸索において、Ａｂ繊維は、アクリルアミドによって優先的に影響される。ラットにおいて、アクリルアミド投与は、固有受容の尺度であるｌａｎｄｉｎｇ ｆｏｏｔ ｓｐｒｅａｄ（ＬＦＳ）によって測定されるごとくに軸索障害を生じる。
【００６８】
アクリルアミド誘導神経障害は、化学的に誘導される毒性のモデルである。持続が比較的短く（３週間）、動物が比較的健康である点で、他の化学的に誘導される（化学療法剤モデルのごとき）モデルとは異なる。アクリルアミドは、顕著な全身毒性を生じない。
【００６９】
実験開始時に体重２５０グラムの雄スプレーグ・ドーリーラットを使用した。アクリルアミド（５０ｍｇ/ｋｇ、腹腔内）を３週間の間、３回/週で投与した。動物は、３０ｃｍの高さから落下させ、後ろ足間の距離を記録した（Ｅｄｗａｒｄｓ、Ｐ.Ｍ.およびＰａｒｋｅｒ、Ｖ.Ｈ.（１９７７）「Ａ ｓｉｍｐｌｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ａｎｄ ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｅａｒｌｙ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ ｉｎ  ｒａｔｓ」、Ｔｏｘｉｃｏｌ Ａｐｐｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、４０：５８９〜５９１）。化合物Ａ（５％ソルトール（ｓｏｌｕｔｏｌ）中で０.１、０.３または１.０ｍｇ/ｋｇ、皮下）を、実験の期間中毎日１回投与した。
【００７０】
アクリルアミド処理動物は、ビヒクル処理動物よりもＬＦＳにおいて大きな距離を有していた。化合物Ａ（０.３ｍｇ/ｋｇ/日）は、アクリルアミドによって生じたＬＦＳの増加の大きさを減少させた（図５）。
これらのデータは、化合物Ａが末梢性神経障害の治療に有用であることを示す。
【００７１】
実施例７
化合物Ａはｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてプロテインキナーゼＣを阻害しないこと
プロテインキナーゼＣアッセイおよびＫ−２５２ａによるプロテインキナーゼＣの阻害は、米国特許第４,９２３,９８６号およびＫａｓｅ、Ｈら、（ｃｄｓ.）Ｊａｐａｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｃｓ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｋｙｏ、ｐｐ２９３〜２９６（１９８８）に開示されている。本質的に同様なアッセイ手段によって、Ｋ−２５２ａはプロテインキナーゼＣを０.０２８μＭのＩＣ５０で阻害し、一方、化合物ＡのＩＣ５０は１６μＭであり、すなわち５７０倍低い活性であることが見出された。化合物Ａは、ＴＮＦ−αの産生の阻害剤として１３９ｎＭのＩＣ５０およびＩＬ−１βの産生の阻害剤として２６１ｎＭのＩＣ５０値（化合物ＡがプロテインキナーゼＣの阻害剤として不活性である濃度）を有する。
【００７２】
実施例８
化合物ＡによるＴＮＦ−αおよびＩＬ−１β産生のｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害
ＴＮＦ−αの誘導を阻害する化合物Ａの能力を以下に記載した標準的ｉｎ ｖｉｔｒｏ薬理学的試験手順の使用によって示した。
１００％ＤＭＳＯ中の４ｍＭの化合物Ａよりなる貯蔵溶液を４℃で保存した。細胞培養基ＲＰＭＩ １６４０（Ｍｅｄｉａ Ｔｅｃｈ、Ｈｅｒｎｄｏｎ、Ｖａ）および胎仔ウシ血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）は、試験培養基を構成した。トリクロロ酢酸で抽出されたＥ．Ｃｏｌｉ血清型０１１１：Ｂ４からのリポ多糖類（ＬＰＳ）（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を使用した。ＬＰＳの貯蔵溶液を調製し、リン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）中で４℃にて保存した。腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）およびＩＬ−１βのアッセイ用ＥＬＩＳＡキットはＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−ｍａｎｎｈｅｉｍ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）から購入し、製造業者の使用説明書に従って使用した。ヒト単球由来細胞ラインであるＴＨＰ−１細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ ＴＩＢ ２０２）から得た。３７℃にて５％ＣＯ２：９５％空気の湿潤雰囲気で、細胞を１０％胎仔ウシ血清を含有するＲＰＭＩ １６４０（培養基）中で増殖させた。実験は、培養基の１ｍｌ中に５×１０５ＴＨＰ−１細胞を有する２４ウェル培養プレート（Ｎｕｎｃ）中で行った。細胞は、ＴＮＦ−αを誘導するために２μｇ/ｍｌのＬＰＳにてインキュベートした。３時間のインキュベーションの後、細胞および培養基を５分間１０００×ｇにて遠心し、得られた上清液を直ちにＴＮＦ−αについてアッセイするかまたは−７０℃にて保存した後にアッセイした。培養基試料は、ＥｌｉｓａアッセイによってＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βの含量につき測定した。
【００７３】
ＴＮＦ−αの誘導を阻害する能力について化合物Ａを試験するために、細胞をＬＰＳの添加に先立って、１時間化合物Ａの濃度を変更させつつインキュベートした。ＤＭＳＯが０.１％より高濃度にて細胞培養基中に存在しないように化合物を希釈した。ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１β産生を阻害する能力について前記したごとく、化合物Ａを試験し、アッセイした。
【００７４】
実施例９
マウス血清中でのＬＰＳ誘導ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βの阻害
６０匹の雌Ｃ５７ＢＬマウス（４〜６週齢）を各１０匹の６群に分けた。３群（１、３、５）は、腹腔内（ｉｐ）投与を介して２００μｌ/マウスでビヒクル（０.１％ＴＥＡ（テトラエチルアンモニウム塩酸塩）を含有するＰＢＳ）のみを受けた。他の３群（２、４、６）は、ビヒクル（12-ヒドロキシステアリン酸のエチルエステル：ソルトールの１０％を含有するＰＢＳ）の化合物Ａ（２００μｌ中に３０ｍｇ/ｋｇ、ｉｐ）を受けた。２時間後、動物はｉｐ投与によって、ＬＰＳの０.１ｍｇ/ｋｇ（群１および２）、ＬＰＳの０.５ｍｇ/ｋｇ（群３および４）およびＬＰＳの１.０ｍｇ/ｋｇ（群５および６）を受けた。ＬＰＳ投与２時間後、全ての動物を犠牲にし、血漿試料を得、それらのＴＮＦ−αおよびＩＬ−１β含量につきアッセイした。アッセイは、実施例８に記載のごとく行った。
データを表４にまとめた。（  ）中の数は、前記のごとき群番号である。Ｎは、血漿測定がなされた動物数を示す。ＮＤ＝実施せず。
【００７５】
【表４】
2008189676.tif 000008
【００７６】
表４に示したごとく、マウスに対するＬＰＳ投与は、それらのマウスによってＴＮＦ−αの産生をひき起こし、産生したＴＮＦ−αの量は、化合物Ａでの２時間前処理によって顕著に阻害された。化合物Ａでの前処理は、ＬＰＳの１.０ｍｇ/ｋｇの投与に対する応答において生じたＩＬ−1βの産生もまた顕著に阻害した。
【００７７】
実施例１０
マウスにおけるＬＰＳ誘導死の予防
４０匹のマウスを１０匹のマウスよりなる２群および２０匹のマウスよりなる１群の３群に分けた。ビヒクル、ＬＰＳおよび化合物Ａの投与は、腹腔内であった。第１群（ｎ＝１０）マウスは、ゼロ時点にてビヒクル（ＬＰＳのリン酸緩衝生理的食塩水、２００μｌ/マウス）および２時間後に化合物Ａのビヒクル（２００μｌ/マウス）を受けた。第２群（ｎ＝１０）マウスは、ゼロ時点にて化合物Ａのビヒクル（２００μｌ/マウス）および２時間後にＬＰＳ（２００μｌ/マウス中に２ｍｇ）を受けた。第３群（ｎ＝２０）は、ゼロ時点にて化合物Ａ（ビヒクルの２００μｌ中に３０ｍｇ/ｋｇ）および２時間後にＬＰＳ（２００μｌ/マウス中に２ｍｇ）を受けた。
【００７８】
ＬＰＳの投与は、投与後２０時間以内に９０％の死亡率を、４２時間までに１００％の死亡率を生じた。ＬＰＳを受けるのに先立って２時間前に化合物Ａを受けた動物群では、ＬＰＳ投与後２０時間にて２５％の死亡率、ＬＰＳ後４２時間にて７５％の死亡率、ＬＰＳ投与後１週間では８０％の死亡率であった。ビヒクル処理は、よく認容され、死は生じなかった。
【００７９】
当業者は、多数の変化および修飾が本発明の好ましい具体例に対してなされ、かかる変化および修飾は、本発明の範囲からはずれるものではないことを正しく認識するであろう。従って、添付された請求の範囲は、本発明の真の精神および範囲内にある等価な変形を含む傾向にある。本明細書の開示を通して示された文献を出典明示して本明細書の一部とみなす。
【図面の簡単な説明】
【００８０】
【図１】図１は、化合物ＡはモノアミンオキシダーゼＡ阻害剤ではないことを示すデータのグラフである。クロルグリシンのＩＣ５０は、２１ｎｍであった。正立した三角形、クロルグリシン；逆三角形、化合物Ａ；四角形、Ｌ-デプレニル。
【図２】図２は、化合物ＡはモノアミンオキシダーゼＢ阻害剤ではないことを示すデータのグラフである。クロルグリシンのＩＣ５０は、２１ｎｍであった。正立した三角形、クロルグリシン；逆三角形、化合物Ａ；四角形、Ｌ-デプレニル。
【図３】図３は、ビヒクルのみを受けた障害動物（ダーク・バー）に比較して、化合物Ａを受けた動物（ライト・バー）は、障害されたｎｂｍの吻側部分（障害の中点かた４００μｍにわたって）において有意により多くのフルオロ-金標識ニューロンを有したことを示す捧グラフである。Ｎｅｗｍａｎ‐Ｋｅｕｌｓ検定による＊＝Ｐ＜０.０５。
【図４】図４は、正常対照動物、シャム手術動物、ビヒクルのみを受けた手術で障害とした動物（「Ｌｅｓ」）、１日４回０.１ｍｇ/ｋｇの用量にて化合物Ａを受けた手術的により障害とした動物（「０.１」）によって、変更する課題が与えられたＴ迷路中で、犯された誤りの総数を示す捧グラフである。各群における動物数をカッコ内に示す。Ｎｅｗｍａｎ‐Ｋｅｕｌｓ検定によるシャムと比較した ＊＝Ｐ＜０.０５、Ｌｅｓと比較した¶¶＝Ｐ＜０.０１。
【図５】図５は、アクリルアミド誘導末梢性神経障害に対する化合物Ａの効果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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