(57)【要約】【課題】ネフロパシー、末梢神経炎、白内障および網膜症などの多くの糖尿病合併症は、カンゾウに存在するフラボノイドによって改善されることを示した。この効果は、アルドース還元酵素の阻害、したがって、水晶体、網膜、腎臓、血管、末梢神経および横紋筋を含むいくつかの組織におけるソルビトールの蓄積を避けることによって、グルコースのソルビトールへの変換の防止に起因していることが見出された。【解決手段】その上、発酵によって調製されるカンゾウは、細胞の酵素活性の増加に起因して、糖尿病合併症を改善するアミラーゼに富んでいる。この薬物は、カンゾウを発酵し、その後、塩酸を用いて豊富なグリセリジンを得ることによって調製されるが、酵素およびフラボノイドの破壊の恐れのために煮沸にはよらない。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）２５０グラムのカンゾウ根および０．２グラムの炭酸ナトリウムを５００ｃｃの温水に添加する工程と、
（２）７５０ｍｌの温水を前記混合物に添加する工程と、
（３）希釈したＨＣｌを添加し、次に、混合物を撹拌し、ろ過する工程と
を含む真性糖尿病合併症を治療するための薬物を製造する方法。
【請求項２】
カンゾウ、炭酸ナトリウムおよび水の混合物（工程１）が、２〜８時間、好ましくは４〜６時間、最も好ましくは６時間保持されることを特徴とする、請求項１に記載の真性糖尿病合併症を治療するための薬物を製造する方法。
【請求項３】
工程２の混合物が、２〜６時間、好ましくは３〜５時間、最も好ましくは４時間保持されることを特徴とする、請求項１に記載の真性糖尿病合併症を治療する薬物を製造する方法。
【請求項４】
６〜１６時間、好ましくは８〜１４時間、最も好ましくは１２時間発酵後のカンゾウ根、炭酸ナトリウム、ＨＣｌおよび水から成る医薬製剤。
【請求項５】
真性糖尿病合併症を治療するために、医薬として請求項４に記載の発酵産物の使用。
【請求項６】
薬物が軟質ゼラチンカプセルまたは硬質カプセルにそれぞれ回転式吸引ポンプによって濃縮されるかまたは凍結乾燥して詰め込まれることを特徴とする真性糖尿病合併症を治療するための医薬組成物を製造する方法。
【請求項７】
請求項４に記載の薬物を有効量投与することを含む、真性糖尿病合併症を治療する方法。
【請求項８】
１２ｍｌ〜２５ｍｌ、好ましくは１５ｍｌ〜２０ｍｌの有効投薬量、または濃縮物もしくは凍結乾燥形態の等価な投薬量が、複数回の服用に分けられる、請求項７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
世界全体で糖尿病患者の総数は、３億人（世界人口の５〜６％）を超えている。糖尿病には２つのタイプがある：
１−（インスリン依存型真性糖尿病）とも呼ばれているＩ型真性糖尿病。これは全糖尿病症例の約１０％に相当し、インスリンのみによって治療されている。
２−（インスリン非依存型真性糖尿病）または成人型とも呼ばれているＩＩ型真性糖尿病。これは全糖尿病症例の約９０％に相当する。血糖値の低下を目的とする経口用抗糖尿病薬によって治療されている。抗糖尿病薬は、主に３つのグループに分類することができる：
Ａ−スルホニルウレア。
Ｂ−メトホルミン。
Ｃ−体細胞においてインスリン受容体を活性化するインスリン抵抗性改善薬。このグループの薬物は、アバンディア（ａｖａｎｄｉａ）のようなロシグリタゾン、グルスチン（ｇｌｕｓｔｉｎ）のようなピオグリタゾンを含むチアゾリジンジオンと呼ばれている。
【０００２】
従来技術の欠点
糖尿病患者の当面の問題は、治療しているにもかかわらずに時間とともに合併症が増え、これが続くことにある。これは、現在使用されている全ての薬物が、
Ａ−インスリン注射
Ｂ−膵臓のβ細胞によるインスリン分泌の刺激（スルホニルウレアの作用）
Ｃ−解糖の直接的な刺激を介した血糖の低下、腸におけるグルコース吸収の減速、肝臓における糖新生の減少（ビグアニドの作用）
Ｄ−インスリン抵抗性改善薬（グルスチンのようなピオグリタゾンおよびアバンディアのようなロシグリタゾンを含むチアゾリジンジオンの作用）
を通じて血糖レベルを下げることを目的としているためである。しかし、糖尿病患者の主要な問題は、−高血糖症の他に−、血糖調節が上手くいっても、時間とともに増え、より重篤になる重症な複数の糖尿病合併症である。
【０００３】
糖尿病の最も重大な合併症は、下記の通りである：
１−視力減退を引き起こす可能性のある白内障および網膜症。
２−結果として腎不全になる場合があるネフロパシー。真性糖尿病は、腎不全の最も重大な原因の１つである。
３−疼痛、麻痺および感覚喪失を引き起こすかもしれない末梢神経炎。これがあると、脚に外傷を負っても気付かないことがあり、さらに真性糖尿病に共通して見られる末梢動脈炎および脚への血液供給不足があると、結果として脚の壊疽をもたらす可能性があるので重大な合併症である。
４−末梢動脈炎。
５−脳血管疾患。
６−高血圧症。
７−冠状動脈不全。
８−血中尿酸濃度の上昇。
９−アテローム性動脈硬化症および異常脂質血症。
１０−過剰な血液凝固性。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
全ての真性糖尿病合併症は、高血糖症を定期的に追跡し治療していても、持続し、時間とともに悪化し、これらの合併症に利用可能な全ての治療は、症状に基づくものに過ぎない。これは、これらの合併症の病因、ひいては、今日用いられているような症状に基づく治療ではなく病因論的な治療を探し出さなければならない大きな課題である。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
新規薬物の利点
この薬物は、非常に一般的な真性糖尿病合併症を治療することを目的とする。それらは、血糖レベルの調節にもかかわらずに、持続し、時間とともに悪化する。これらの合併症は、真性糖尿病の最も深刻な問題である。これらの合併症を防ぐことができる薬物を探求するためには、生体内の代謝反応の主な役割を調査する必要がある。これは、酵素欠乏とあらゆる糖尿病合併症を引き起こす代謝障害との間には、厳密な関係があるからである。これは、下記の事実によって明らかにされている。
【０００６】
第１：
生体における全ての代謝活性は、連鎖的な酵素反応で行われる。特定の代謝酵素の欠損によって、異常な代謝作用が引き起こされる（非特許文献６−２２）。糖尿病合併症に関する調査によれば、これらの合併症は、糖尿病患者の細胞および組織内のグルコース代謝作用の障害によって開始することが示されている。通常、グルコースの異化作用は、細胞プロセスの主要なエネルギー源である。糖尿病患者では、細胞におけるグルコースの代謝の障害が同時に起こり、下記により悪化する：
Ａ−肝臓グリコーゲンが枯渇する（非特許文献５）。
Ｂ−タンパク質が唯一の重要なエネルギー源となる。これは、タンパク質の異化作用の大幅な増加となり、結果として筋衰弱をもたらす筋内でのタンパク質合成の減少を引き起こす。
Ｃ−異常脂質血症が原因となる数種の合併症を引き起こす脂肪の異化作用の大幅な増加。したがって、全てのこれらの合併症を引き起こす主な問題は、−言及されるように−酵素反応の様式で−特定の代謝酵素によって行われる細胞内のグルコース代謝の障害である。
【０００７】
第２：
肝臓学における最近の調査では、真性糖尿病合併症は、肝細胞内のミトコンドリアの機能障害と関連していることが示されている。肝細胞のミトコンドリアは、これらの細胞が正常な代謝機能を行うことができるネルギー産生の場所である。ミトコンドリアは、また、主な３つの代謝経路、糖質、脂質およびタンパク質の交差道路の役割を担っている。したがって、それらは、必要とされる代謝バランスを実現するために、肝臓を他の代謝経路を支持して１つの代謝経路に方向付けるようにさせる。ミトコンドリアの障害の程度と糖尿病合併症の程度との間の関係は、非常に重要である（非特許文献１４、１５、１６）。
【０００８】
第３：
最近になって、（消化酵素）と呼ばれるものの役割は、消化だけではなく、それらが腸で吸収され、肝臓および全ての生体組織の代謝反応において重要な役割を果たす肝臓に運搬されることが見出されている（非特許文献６、８、９、１７、１８、１９）。
【０００９】
膵アミラーゼは、−消化の役割の他に−、腸で吸収され、肝臓に到達することが検証されている。この循環は、腸−肝循環および腸−膵循環と呼ばれている（非特許文献６）。
【００１０】
さらに、調査によって、食品用酵素の摂取不足は、消化酵素を補うために膵臓および唾液腺の肥大をもたらし、この肥大は、十分量のこれらの酵素の経口的な補給によって軽減することが示されている。長期のダイエットでこれらの酵素が欠乏すると、生体内で代謝活性不足が起る場合がある（非特許文献６）。
【００１１】
したがって、本出願人は、生体内で正常な代謝を回復するために、正常な酵素活性に必要な十分量の酵素を患者に供給することによって、当面の真性糖尿病を徐々に治療し、更なる合併症および悪化を防ぐことができる薬物を探索した。使用される酵素については、アミラーゼ酵素は糖質代謝に関係している酵素であるため、本出願人は、アミラーゼ酵素を率先して取り扱った。また、肝細胞は、この酵素を識別し、肝細胞表面に見られるマンノース受容体と呼ばれる特異的な受容体を介して血液からそれを取り入れる（非特許文献１３）。
【００１２】
さらに、アミラーゼ酵素は、肝臓のグリコーゲンに高親和性である（非特許文献１）。上述した全ての事実は、全ての生体機能に影響を及ぼす糖質の代謝作用および肝臓の代謝作用においてアミラーゼの重要な役割を裏付けている。
【００１３】
また、本出願人は、酵素に富んでいる一般的な植物を調査した。本出願人は、容易には吸収されない可能性のある合成薬物または未知の物質を避けようとした。今では、栄養素は、化学的および電気的勾配に対して栄養素を移動させる能動的な輸送によって、腸細胞を介して吸収されることは周知であり、このプロセスは能動輸送と呼ばれる（非特許文献２４）。酵素の吸収は、数種の因子によって影響されている；非常に重要な因子は酵素（複数）を含む混合物である（非特許文献６）。
【００１４】
下記の理由でアミラーゼ酵素の豊富な供給源としてカンゾウが選択された：
１−それは植物起源の天然供給源であり、数百年またはさらに数千年以来、発酵した後、一般飲料としてエジプトで用いられている。調製したカンゾウに大量のアミラーゼを得るために、今回の調製物は、伝統的な方法で調製した調製物と比べて８０倍に濃縮されている。
【００１５】
２−カンゾウはフラボノイド（５０種を超える物質）も非常に豊富であることが見出された（非特許文献１、２９）。フラボノイドは、非常に重要な抗酸化剤であり、正常な代謝の回復に役立ち、糖尿病合併症を治療する。最近の調査では、フラボノイドはアルドース還元酵素を阻害し、したがって、過剰なグルコースのソルビトールへの変換を妨げることが確かめられている。（水晶体、網膜、腎組織、血管、横紋筋、末梢神経などにおける）ソルビトールの蓄積は、真性糖尿病合併症の原因となる（非特許文献２、３、４、２８）。研究者の中には、アルドース還元酵素の阻害剤は、糖尿病合併症の予防に強力な試薬となると述べる者もいる（非特許文献２７）。他の研究者は、フラボノイドが、糖尿病合併症の予防および治療に最も有望な化合物であると述べている（非特許文献２６）。多くの専門家は、カンゾウのフラボノイドには、下記の真性糖尿病合併症に対して重要な治療効果があることを示している。
【００１６】
Ａ−白内障（非特許文献１）。
Ｂ−末梢神経炎（非特許文献１）。
Ｃ−ネフロパシー（非特許文献１）。
Ｄ−網膜症（非特許文献１）。
【００１７】
以前には明らかにされていなかったが、網膜症とネフロパシーとの間に密接な関係があるという点については触れておく価値がある。これらの２つの合併症は、疾患の発症から約１０〜１５年後に同時に発症し、ほぼ同じ速度で強さが徐々に増す。それらのうちの１つの発症は他方の発症の前触れとなり、ほぼ同じ強さである。実験研究は、すでに述べたように、カンゾウに存在するフラボノイドが、網膜および網膜組織、並びにいくつかの他の重篤な糖尿病合併症に関与する他の組織におけるソルビトールの蓄積を防ぐことでこれらの２つの合併症をともに治癒することを検証している。
【００１８】
Ｅ−血小板凝集阻害剤を介した血管内の血液凝固の予防（非特許文献３０、３１）。
Ｆ−カンゾウの数種のフラボノイドによるアテローム性動脈硬化症の予防。最も強力なフラボノイドは、ポリフェノール性フラボノイドである（非特許文献３２、３３、３４、３５）。
【００１９】
Ｇ−低密度リポタンパク質の過酸化および損傷の防止による高コレステロール血症の保護（非特許文献３２、３５）。したがって、低密度リポタンパク質の破壊の結果として発生する高コレステロール血症の予防。これらのリポタンパク質は、それらの変性および過酸化のために、小食細胞によって破壊される。
【００２０】
Ｈ−血漿脂質濃度の減少（非特許文献３２）。
Ｉ−最高血圧の低下（非特許文献３２）。
【００２１】
Ｊ−肝臓代謝の改善：これは、糖尿病患者の肝臓における代謝障害の存在を指示する、健常人より糖尿病において高くなるシトクローム酸化酵素ｐ４５０酵素の阻害によって明らかにされている（非特許文献７、１０）。フラボノイドは、シトクローム酵素ｐ４５０の強力な阻害剤であることが示されている（非特許文献７）。フラボノイドの使用による糖尿病患者の肝細胞の代謝改善が、異常脂質血症、凝固性亢進アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患および他のものなどの破壊された肝臓代謝のために、多くの重大な糖尿病合併症の治療にこれらのフラボノイドの成功を明示している点に触れることは価値がある。肝臓専門医による最近の調査では、これらの合併症は、非アルコール性脂肪性肝炎として始まる破壊された肝代謝の出現の開始を伴う糖尿病患者に発症することが明らかにされている。これらの合併症の強度は、肝細胞のミトコンドリア機能の低下とともに増加する（非特許文献１２、１４）。
【００２２】
様々な生体組織においてフラボノイドは糖尿病合併症をどのように防ぐのか？
多くの調査は、最近、フラボノイドが、様々な生体組織におけるソルビトールの蓄積を防ぐことによって、糖尿病合併症の治療および予防に役立つことを明らかにしている。これは、結果としてグルコースのソルビトールへの変換をもたらす正常レベルを超える組織中のグルコース濃度の上昇の結果として発生するポリオール経路の第１段階を開始するアルドース還元酵素の抑制によって達成される（非特許文献２５、２６、２７、２８）。
【００２３】
肝細胞の正常な活力および機能をフラボノイドはどのように回復させるのか？
フラボノイドは、抗酸化剤として作用する。それらは、ミトコンドリア内の代謝活性の副産物を生じる活性酸素種（ＲＯＳ：ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ）の蓄積を防ぐことによって、肝細胞内の正常な酵素活性を回復する（非特許文献３６）。これらのミトコンドリア内では、ＡＴＰシンターゼ、シトクロムｃオキシダーゼ、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ：ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ  ａｄｅｎｉｎｅ  ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）およびフラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ：ｆｌａｖｉｎｅ  ａｄｅｎｉｎｅ  ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）などの数種の重要な酵素および補酵素の手助けによって、ＡＴＰの形体でエネルギーを産生することを目的として、酸化還元反応が起こる。これらの連続的な酵素反応中に、少量の活性酸素種（ＲＯＳ）が生じ、細胞構成要素を破壊する恐れがある。ＮＡＤおよびＦＡＤの中には、破壊から細胞の内容物を保護するように、これらの少量のＲＯＳに対処するものもある（非特許文献１６、２３）。他のＮＡＤおよびＦＡＤは、細胞内の正常な代謝およびエネルギー生産のプロセスに関与している。真性糖尿病では、代謝異常によって、対処するためには大量のＮＡＤおよびＦＡＤを必要とする大量のＲＯＳの蓄積がもたらされ、結果として、この異常な経路および異常な消費量に起因して、肝細胞内のＮＡＤおよびＦＡＤの機能並びにエネルギー生産および正常な代謝における作用を低下させている。フラボノイドは過剰なＲＯＳを処理して破壊し、このように肝細胞内でエネルギー産生及び正常な代謝において正常な活性を発揮するようにＮＡＤ及びＦＡＤを抑えることで、肝臓がその正常な活力および機能を回復する（非特許文献３６）。
【００２４】
【非特許文献１】キャロル・Ａ．ニューウォール（Ｃａｒｏｌ  Ａ．Ｎｅｗａｌｌ）、リンダ・Ａ．アンダーソン（Ｌｉｎｄａ  Ａ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ）およびデビッド・Ｊ．（Ｄａｖｉｄ  Ｊ．）（１９９６）：ハーバル・メディスンズ（Ｈｅｒｂａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ）、ヘルスケアの専門家のためのガイド（Ａ  ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｈｅａｌｔｈ  ｃａｒｅ  ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌｓ）、ロンドン、ザ・ファーマシューティカル・プレス（Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ）。
【非特許文献２】アイダ・Ｋ．Ｅ．ら（Ａｉｄａ  Ｋ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．）（１９９０）：イソリキリチゲニン：カンゾウ由来の新規アルドース還元酵素阻害剤（Ｉｓｏｌｉｑｕｉｒｉｔｉｇｅｎｉｎ：Ａ  Ｎｅｗ  Ａｌｄｏｓｅ  Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｆｒｏｍ  Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ  Ｒａｄｉｘ）、プランタ・メディカ（Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄ）、５６：２５４−８。
【非特許文献３】ユン−ピン・Ｚ．（Ｙｕｎ−Ｐｉｎｇ  Ｚ．）、チャ−キン・Ｚ．（Ｊｉａ−Ｑｉｎｇ  Ｚ．）（１９８９）：経口バイカリンおよびカンゾウの液体抽出物は糖尿病ラットの赤血球におけるソルビトールレベルを減少させる（Ｏｒａｌ  ｂａｉｃａｌｉｎ  ａｎｄ  ｌｉｑｕｉｄ  ｅｘｔｒａｃｔ  ｏｆ  ｌｉｃｏｒｉｃｅ  ｒｅｄｕｃｅ  ｓｏｒｂｉｔｏｌ  ｌｅｂｅｌｓ  ｉｎ  ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌｓ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒａｔｓ）、チャイニーズ・メディカル・ジャーナル（Ｃｈｉｎ  Ｍｅｄ  Ｊ）、１０２：２０３−６。
【非特許文献４】インク・Ｈ．ら（Ｉｎｑｕｅ  Ｈ．ｅｔ  ａｌ．）（１９８７）：グリシルレチン酸誘導体の薬理活性：鎮痛および対抗型アレルギー作用（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｇｌｙｃｅｒｒｈｅｔｉｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ：ａｎａｌｇｅｓｉｃ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ｔｙｐｅ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ）、ケミカル・アンド・ファーマシューティカル・ブレティン（Ｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ）、３５：３８８８−９３。
【非特許文献５】ギャノング・Ｗ．（Ｇａｎｏｎｇ  Ｗ．）（１９９３）：医学生理学の概説（Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ）、第１６版（編集）、プレンティス−ホール・インターナショナル・インコーポレイティド（Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．）（出版社）、（１９）；３１０。
【非特許文献６】ロペス・Ｄ．Ａ．（Ｌｏｐｅｚ  Ｄ．Ａ．）、ウィリアムズ・Ｒ．Ｍ．（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｒ．Ｍ．）およびミールケ・Ｓ．（Ｍｉｅｈｌｋｅ  Ｓ．）（１９９４）：酵素・命の泉（Ｅｎｚｙｍｅｓ  Ｔｈｅ  Ｆｏｕｎｔａｉｎ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ）、初版（編集）、ザ・ネビル・プレス・インコーポレイティド（Ｔｈｅ  Ｎｅｖｉｌｌｅ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．）（出版社）、ミュンヘン、３４−３７。
【非特許文献７】ハムディ・Ａ．Ｍ．（Ｈａｍｄｙ  Ａ．Ｍ．）（２０００）：アロキサン誘導した糖尿病ラットにおけるいくつかのエジプト産ハーブの効果に関する生化学的研究（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｓｔｕｄｙ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｓｏｍｅ  Ｅｇｙｐｔｉａｎ  ｈｅｒｂｓ  ｉｎ  ａｌｌｏｘａｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒａｔｓ）、トキシコロジー（Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ）１７４、１３１−１３９。
【非特許文献８】ローゼンブラム・Ｊ．Ｌ．（Ｒｏｓｅｎｂｌｕｍ  Ｊ．Ｌ．）、ラーブ・Ｂ．Ｋ．（Ｒａａｂ  Ｂ．Ｋ．）およびアルパーズ・Ｄ．Ｈ．（Ａｌｐｅｒｓ  Ｄ．Ｈ．）（１９８２）：循環している膵アミラーゼの肝胆汁および膵臓のクリアランス（Ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ  ａｎｄ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｏｆ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ａｍｙｌａｓｅ）、アメリカン・ジャーナル・オブ・フィジオロジー（Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ）、７月；２４３（１）：２１−７。
【非特許文献９】レイボウ・Ｃ．（Ｌｅｉｂｏｗ  Ｃ．）およびロスマン・Ｓ．Ｓ．（Ｒｏｔｈｍａｎ  Ｓ．Ｓ．）（１９７５）：消化酵素の腸膵臓循環（Ｅｎｔｅｒｏｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ  ｅｎｚｙｍｅｓ）、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、８；１８９（４２０１）：４７２−４。
【非特許文献１０】デッサイレ・Ｄ．（Ｄｅｓｓａｙｒｅ  Ｄ．）、バーソン・Ａ．（Ｂｅｒｓｏｎ  Ａ．）、フロメンティ・Ｂ．（Ｆｒｏｍｅｎｔｙ  Ｂ．）およびマンソウリ・Ａ．（Ｍａｎｓｏｕｒｉ  Ａ．）（２００１）：肝臓脂肪症におけるミトコンドリア機能不全（Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｈｅｐａｔｉｃ  Ｓｔｅａｔｏｓｉｓ）、ロイシュナー・Ｕ（Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ  Ｕ）、ジェームズ・Ｏ（Ｊａｍｅｓ  Ｏ）およびダンシジャー・Ｈ（Ｄａｎｃｙｇｉｅｒ  Ｈ）（編集）、フォーク・シンポジウム（Ｆａｌｋ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ）１２１  脂肪性肝炎（Ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ）（ナッシュ（Ｎａｓｈ）およびアシュ（Ａｓｈ））、クリューワー・アカデミック・パブリッシャー（Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）（出版社）、ロンドン；８０−１００。
【非特許文献１１】コイクマ・Ｉ．Ｋ．（Ｋｏｙｑｍａ  Ｉ．Ｋ．）およびホカリ・Ｓ．（Ｈｏｋａｒｉ  Ｓ．）（２００１）：ラット肝臓におけるαアミラーゼ遺伝子の発現−肝臓特異的アミラーゼはグリコーゲンに高親和性である（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｌｐｈａ  ａｍｙｌａｓｅ  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｒａｔ  ｌｉｖｅｒ：ｌｉｖｅｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｍｙｌａｓｅ  ｈａｓ  ａ  ｈｉｇｈ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｔｏ  ｇｌｙｃｏｇｅｎ）、エレクトロフォレシス（Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）；２２（１）：１２−７。
【非特許文献１２】ロナルド・Ａ．（Ｌｏｎａｒｄｏ  Ａ．）、ロリア・Ｐ．（Ｌｏｒｉａ  Ｐ．）およびカルリ・Ｍ．（Ｃａｒｕｌｌｉ  Ｍ．）（２００１）：非アルコール性脂肪肝疾患におけるインスリン耐性：臨床展望（Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｉｎ  Ｎｏｎ−Ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  Ｆａｔｔｙ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ：Ａ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ）、ロイシュナー・Ｕ（Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ  Ｕ）、ジェームズ・Ｏ（Ｊａｍｅｓ  Ｏ）およびダンシジャー・Ｈ（Ｄａｎｃｙｇｉｅｒ  Ｈ）（編集）、フォーク・シンポジウム（Ｆａｌｋ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ）１２１  脂肪性肝炎（Ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ）（ナッシュ（Ｎａｓｈ）およびアシュ（Ａｓｈ））、クリューワー・アカデミック・パブリッシャー（Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）（出版社）、ロンドン；１０４−１１３。
【非特許文献１３】ニーセン・Ｔ．Ｅ．（Ｎｉｅｓｅｎ  Ｔ．Ｅ．）、アルプレス・Ｄ．Ｈ．（Ａｌｐｒｅｓ  Ｄ．Ｈ．）、ローゼンブルム・Ｊ．Ｌ．（Ｒｏｓｅｎｂｌｕｍ  Ｊ．Ｌ．）（１９８４）：グリコシル化されたヒト唾液アミラーゼの代謝：ラットの肝内皮細胞によるインビボでの血漿クリアランスおよびラットマクロファージによるインビトロでの受容体媒介飲作用（Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｏｆ  ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ  ｈｕｍａｎ  ｓａｌｉｖａｒｙ  ａｍｙｌａｓｅ：ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｐｌａｓｍａ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｂｙ  ｒａｔ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｐｉｎｏｃｙｔｏｓｉｓ  ｂｙ  ｒａｔ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ）、ジャーナル・オブ・リューコサイト・バイオロジー（Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ）；３６（３）：３０７−２０。
【非特許文献１４】サンヤル・ＡＪ（Ｓａｎｙａｌ  ＡＪ）、カンプベル−サルジェント・Ｃ（Ｃａｍｐｂｅｌｌ−Ｓａｒｇｅｎｔ  Ｃ）、ミルシャヒ・Ｆ（Ｍｉｒｓｈａｈｉ  Ｆ）、リッゾ・ＷＢ（Ｒｉｚｚｏ  ＷＢ）、コントス・ＭＪ（Ｃｏｎｔｏｓ  ＭＪ）およびクロレ・Ｊ（Ｃｌｏｒｅ  Ｊ）（２００１）：非アルコール性脂肪性肝炎と関連した肝内および肝外代謝異常（Ｔｈｅ  ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ  ａｎｄ  ｅｘｔｒａｈｅｐａｔｉｃ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ）、ロイシュナー・Ｕ（Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ  Ｕ）、ジェームズ・Ｏ（Ｊａｍｅｓ  Ｏ）およびダンシジャー・Ｈ（Ｄａｎｃｙｇｉｅｒ  Ｈ）（編集）、フォーク・シンポジウム（Ｆａｌｋ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ）１２１  脂肪性肝炎（Ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ）（ナッシュ（Ｎａｓｈ）およびアシュ（Ａｓｈ））、クリューワー・アカデミック・パブリッシャー（Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）（出版社）、ロンドン；１７２−８１。
【非特許文献１５】シャルム・Ｓ．Ｗ．（Ｓｃｈａｌｍ  Ｓ．Ｗ．）およびフォン  フック・Ｂ．（Ｖｏｎ  Ｈｏｅｋ  Ｂ．）（２００１）：非アルコール性脂肪性肝炎の治療：ウルソデオキシコール酸の役割（Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ロイシュナー・Ｕ（Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ  Ｕ）、ジェームズ・Ｏ（Ｊａｍｅｓ  Ｏ）およびダンシジャー・Ｈ（Ｄａｎｃｙｇｉｅｒ  Ｈ）（編集）、フォーク・シンポジウム（Ｆａｌｋ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ）１２１  脂肪性肝炎（Ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ）（ナッシュ（Ｎａｓｈ）およびアシュ（Ａｓｈ））、クリューワー・アカデミック・パブリッシャー（Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）（出版社）、ロンドン；１８５−１８７。
【非特許文献１６】フロメンティ・Ｂ．（Ｆｒｏｍｅｎｔｙ  Ｂ．）、デゴール・Ｆ．（Ｄｅｇｏｕｌ  Ｆ．）、デメイリアース・Ｃ．（Ｄｅｍｅｉｌｌｉｅｒｓ  Ｃ．）、サットン・Ａ．（Ｓｕｔｔｏｎ  Ａ．）、マンソウリ・Ａ．（Ｍａｎｓｏｕｒｉ  Ａ．）およびペッサイレ・Ｄ．（Ｐｅｓｓａｙｒｅ  Ｄ．）（２００１）：アルコールおよびミトコンドリア機能（Ａｌｃｏｈｏｌ  ａｎｄ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ）、ロイシュナー・Ｕ（Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ  Ｕ）、ジェームズ・Ｏ（Ｊａｍｅｓ  Ｏ）およびダンシジャー・Ｈ（Ｄａｎｃｙｇｉｅｒ  Ｈ）（編集）、フォーク・シンポジウム（Ｆａｌｋ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ）１２１  脂肪性肝炎（Ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ）（ナッシュ（Ｎａｓｈ）およびアシュ（Ａｓｈ））、クリューワー・アカデミック・パブリッシャー（Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）（出版社）、ロンドン；２５７−２７５。
【非特許文献１７】マシューズ・Ｄ．Ｍ．（Ｍａｔｔｈｅｗｓ  Ｄ．Ｍ．）（１９９２）：タンパク質吸収（Ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ）、ウィリー−リス（Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ）、ニューヨーク。
【非特許文献１８】シアマーク・Ａ．Ａ．（Ｓｉａｍｋ  Ａ．Ａ．）（１９９７）：ヒトの腸におけるオリゴペプチドトランスポーター（ｐｅｐｔ−１−）：生物学および機能（Ｔｈｅ  ｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ（ｐｅｐｔ−１−）ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ：ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ）、ガストロエンテロロジー（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ）；１１３：３３２−３４０。
【非特許文献１９】カレント・ドラッグ・メタボリズム（Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ）（２００４）；５（１）：８５−９４。
【非特許文献２０】スターリング・Ｍ．Ｒ．（Ｓｔｅｒｌｉｎｇ  Ｍ．Ｒ．）（１９９９）：肝硬変は予防可能か？（Ｃａｎ  ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ  ｂｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｅｄ？）、ニュートリション・サイエンス・ニュース（Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｓｃｅｉｎｃｅ  Ｎｅｗｓ）（１月）の記事。
【非特許文献２１】トム・ブロディー（Ｔｏｍ  Ｂｒｏｄｙ）（２００１）：抗酸化剤（Ａｎｔｉ  ｏｘｉｄａｎｔｓ）、ニュートリショナル・バイオケミストリー（Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第２版、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）。
【非特許文献２２】デュホー・Ｊ．Ｆ．（Ｄｕｆｏｕｒ  Ｊ．Ｆ．）（２００１）：非アルコール性脂肪性肝炎の治療における抗酸化剤（Ａｎｔｉ  ｏｘｉｄａｎｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｏｎ  ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ）、ロイシュナー・Ｕ（Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ  Ｕ）、ジェームズ・Ｏ（Ｊａｍｅｓ  Ｏ）およびダンシジャー・Ｈ（Ｄａｎｃｙｇｉｅｒ  Ｈ）（編集）、フォーク・シンポジウム（Ｆａｌｋ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ）１２１  脂肪性肝炎（Ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ）（Ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ）（ナッシュ（Ｎａｓｈ）およびアシュ（Ａｓｈ））、クリューワー・アカデミック・パブリッシャー（Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）（出版社）、ロンドン；１９７−２０２。
【非特許文献２３】バルツ・Ｆ．（Ｂａｌｚ  Ｆ．）（１９９４）：活性酸素種および抗酸化ビタミン（Ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  ｖｉｔａｍｉｎｓ）、アメリカン・ジャーナル・オブ・メディスン（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）、第９７巻、第３ａ−７ｓ頁、エクサープタ・メディカ（Ｅｘｃｅｒｐｔａ  Ｍｅｄｉｃａ）。
【非特許文献２４】フィリップ・Ｐ・Ｔ．（Ｐｈｉｌｌｉｐ  Ｐ．Ｔ．）（１９９６）：吸収不良（Ｍａｌａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ）、クラウデ・ベネット（Ｃｌａｕｄｅ  Ｂｅｎｎｅｔｔ）およびフレッド・プラム（Ｆｒｅｄ  Ｐｌｕｍ）、セシル・テキストブック・オブ・メディスン（Ｃｅｃｉｌ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）第２０版、Ｗ．Ｂ．サンダーズ・カンパニー（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ）。
【非特許文献２５】ゾウ・Ｙ．（Ｚｈｏｕ  Ｙ．）、チャン・Ｊ．（Ｚｈａｎｇ  Ｊ．）（１９９０）：糖尿病ラットの赤血球におけるソルビトールレベルに対するバイカリンおよびカンゾウの液体抽出物の効果（Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｂａｉｃａｌｌｉｎ  ａｎｄ  ｌｉｑｕｉｄ  ｅｘｔｒａｃｔ  ｏｆ  ｌｉｃｏｒｉｃｅ  ｏｎ  ｓｏｒｂｉｔｏｌ  ｌｅｖｅｌ  ｉｎ  ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌｓ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒａｔｓ）、ゾングオ・ゾング・ヤオ・ザジー（Ｚｈｏｎｇｇｕｏ  Ｚｈｏｎｇ  Ｙａｏ  Ｚａｚｈｉ）；１５（７）：４３３−５、４４８。
【非特許文献２６】リム・Ｓ．Ｓ．（Ｌｉｍ  Ｓ．Ｓ．）、ユング・Ｓ．Ｈ．（Ｊｕｎｇ  Ｓ．Ｈ．）、イー・Ｊ．（Ｊｉ  Ｊ．）、シン・Ｋ．Ｈ．（Ｓｈｉｎ  Ｋ．Ｈ．）、ケウム・Ｓ．Ｒ．（Ｋｅｕｍ  Ｓ．Ｒ．）（２００１）：フラボノイドの合成およびアルドース還元酵素に対する効果およびストレプトゾトシン誘導の糖尿病における組織でのソルビトール蓄積（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ａｌｄｏｓｅ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ  ａｎｄ  ｓｏｒｂｉｔｏｌ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ａｔ  ｔｉｓｓｕｅｓ）、ファーマコロジー（Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）；５３（５）：６５３−６８。
【非特許文献２７】ユング・Ｓ．Ｈ．（Ｊｕｎｇ  Ｓ．Ｈ．）、リー・Ｙ．Ｓ．（Ｌｅｅ  Ｙ．Ｓ．）、シム・Ｓ．Ｈ．（Ｓｈｉｍ  Ｓ．Ｈ．）（２００５）：ストレプトゾトシン誘導の糖尿病ラット組織のラット水晶体アルドース還元酵素およびソルビトール蓄積におけるガノダーマ・アプラナタムの阻害効果（Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｐｐｌａｎａｔｕｍ  ｏｎ  ｒａｔ  ｌｅｎｓ  ａｌｄｏｓｅ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ  ａｎｄ  ｓｏｒｂｉｔｏｌ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒａｔ  ｔｉｓｓｕｅｓ）、フィトセラピー・リサーチ（Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ  Ｒｅｓ．）；１９（６）：４７７−８０。
【非特許文献２８】キャメロン・Ｎ．Ｅ．（Ｃａｍｅｒｏｎ  Ｎ．Ｅ．）、コッター・Ｍ．Ａ．（Ｃｏｔｔｅｒ  Ｍ．Ａ．）、バッソ・Ｍ．（Ｂａｓｓｏ  Ｍ．）（１９９７）：ストレプトゾトシン誘導の糖尿病ラットにおける神経血管機能、神経伝導および組織ポリオール経路代謝に対するアルドース還元酵素及びソルビトールデヒドロゲナーゼの阻害剤の効果の比較（Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ａｌｄｏｓｅ  ｒｅｄｕｃａｔａｓｅ  ａｎｄ  ｓｏｒｂｉｔｏｌ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  ｏｎ  ｎｅｕｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｆｕｎｃａｔｉｏｎ，ｎｅｒｖｅ  ｃｏｎｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｉｓｓｕｅ  ｐｏｌｙｏｌ  ｐａｔｈｗａｙ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ  ｉｎ  ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ−ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒａｔｓ）、ダイアベトロジア（Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ）；４０（３）：２７１−８１。
【非特許文献２９】キタガワ・Ｌ．（Ｋｉｔａｇａｗａ  Ｌ．）、チェン・Ｗ．Ｚ．（Ｃｈｅｎ  Ｗ．Ｚ．）、タニヤマ・Ｔ．（Ｔａｎｉｙａｍａ  Ｔ．）、ハラダ・Ｅ．（Ｈａｒａｄａ  Ｅ．）、ホリ・Ｋ．（Ｈｏｒｉ  Ｋ．）、コバヤシ・Ｍ．（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｍ．）、レン・Ｊ．（Ｒｅｎ  Ｊ．）（１９９８）；高速液体クロマトグラフィーを用いた種々のカンゾウ根の構成物の定量的測定（Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ  ｉｎ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｌｉｃｏｒｉｃｅ  ｒｏｏｔｓ  ｂｙ  ｍｅａｎｓ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、薬学雑誌；１１８（１１）：５１９−２８。
【非特許文献３０】チャン・Ｃ．（Ｚｈａｎ  Ｃ．）、ヤング・Ｊ．（Ｙａｎｇ  Ｊ．）（２００６）：ラットの一時的な中大脳動脈閉塞を誘導した局所脳虚血におけるイソリキリチゲニンの保護効果（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｉｓｏｌｉｑｕｉｒｉｔｉｇｅｎｉｎ  ｉｎ  ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  ｍｉｄｄｌｅ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ａｒｔｅｒｙ  ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｆｏｃａｌ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ｉｓｃｈｅｍｉａ  ｉｎ  ｒａｔｓ）、ファーマコロジカル・リサーチ（Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｓ．）；５３（３）：３０３−９。
【非特許文献３１】タワタ・Ｍ．（Ｔａｗａｔａ  Ｍ．）、アイダ・Ｋ．（Ａｉｄａ  Ｋ．）、ノグチ・Ｔ．（Ｎｏｇｕｃｈｉ  Ｔ．）、オザキ・Ｙ．（Ｏｚａｋｉ  Ｙ．）、クメ・Ｓ．（Ｋｕｍｅ  Ｓ．）、ササキ・Ｈ．（Ｓａｓａｋｉ  Ｈ．）、チン・Ｍ．（Ｃｈｉｎ  Ｍ．）、オナヤ・Ｔ．（Ｏｎａｙａ  Ｔ．）（１９９２）：カンゾウにおけるアルドース還元酵素阻害剤であるイソリキリチゲニンの抗血小板作用（Ａｎｔｉ−ｐｌａｔｅｌｅｔ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｓｏｌｉｑｕｉｒｉｔｉｇｅｎｉｎ  ａｎ  ａｌｄｏｓｅ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｉｎ  ｌｉｃｏｒｉｃｅ）、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ）、２５；２１２（１）：８７−９２。
【非特許文献３２】フールマン・Ｂ．（Ｆｕｈｒｍａｎ  Ｂ．）、フォルコヴァ・Ｎ．（Ｖｏｌｋｏｖａ  Ｎ．）、カプラン・Ｍ．（Ｋａｐｌａｎ  Ｍ．）、プレッサー・Ｄ．（Ｐｒｅｓｓｅｒ  Ｄ．）、アティアス・Ｊ．（Ａｔｔｉａｓ  Ｊ．）、ハイエク・Ｔ．（Ｈａｙｅｋ  Ｔ．）、アヴィラム・Ｍ．（Ａｖｉｒａｍ  Ｍ．）（２００２）：高コレステロール血症患者におけるカンゾウ抽出物補給の抗アテローム性動脈硬化作用（Ａｎｔｉ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｌｉｃｏｒｉｃｅ  ｅｘｔｒａｃｔ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉｃ  ｐａｔｉｅｎｔｓ）、ニュートリション（Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）；１８（３）：２６８−７３。
【非特許文献３３】アヴィアム・Ｍ．（Ａｖｉｒａｍ  Ｍ．）、フールマン・Ｂ．（Ｆｕｈｒｍａｎ  Ｂ．）（１９９８）：ポリフェノール性フラボノイドは小食細胞を介したＬＤＬの酸化を阻害し、アテローム性動脈硬化症を軽減する（Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｉｃ  ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｍｉｃｒｏｐｈａｇｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＬＤＬ  ａｎｄ  ａｔｔｅｎｕａｔｅ  ａｔｈｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓ）、アテロスクレローシス（Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、１３７  補遺：４５−５０。
【非特許文献３４】ベリンキィー・Ｐ．Ａ．（Ｂｅｌｉｎｋｙ  Ｐ．Ａ．）、アヴィラム・Ｍ．（Ａｖｉｒａｍ  Ｍ．）、フールマン・Ｂ．（Ｆｕｈｒｍａｎ  Ｂ．）、ローゼンブラト・Ｍ．（Ｒｏｓｅｎｂｌａｔ  Ｍ．）、ヴァーヤ・Ｊ．（Ｖａｙａ  Ｊ．）（１９９８）：酸化アテローム性動脈硬化症におけるＬＤＬの内因性構成物に対するイソフラヴァン・グラブリジンの抗酸化作用（Ｔｈｅ  ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｓｏｆｌａｖａｎ  ｇｌａｂｒｉｄｉｎ  ｏｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ  ｏｆ  ＬＤＬ  ｄｕｒｉｎｇ  ｉｔｓ  ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）；１３７（１）：４９−６１。
【非特許文献３５】フールマン・Ｂ．（Ｆｕｈｒｍａｎ  Ｂ．）、ブーフ・Ｓ．（Ｂｕｃｈ  Ｓ．）、ヴァーヤ・Ｊ．（Ｖａｙａ  Ｊ．）、ベリンキィー・Ｐ．Ａ．（Ｂｅｌｉｎｋｙ  Ｐ．Ａ．）、コールマン・Ｒ．（Ｃｏｌｅｍａｎ  Ｒ．）、ハイエク・Ｔ．（Ｈａｙｅｋ  Ｔ．）、アヴィルム・Ｍ．（Ａｖｉｒｍ  Ｍ．）（１９９７）：カンゾウ抽出物およびその主要なポリフェノールグラブリジンは脂質過酸化に対して低密度リポタンパク質を保護する：ヒトおよびアテローム性動脈硬化症アポリポタンパク質Ｅ欠損マウスにおけるインビトロおよびエクスビボにおける研究（Ｌｉｃｏｒｉｃｅ  ｅｘｔｒａｃｔ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｍａｊｙｏｒ  ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ  ｇｌａｂｒｉｄｉｎ  ｐｒｏｔｅｃｔ  ｌｏｗ−ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｌｉｐｉｄ  ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ  ａｎｄ  ｉｎ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅ−ｄｅｆｉｃｉｅｔ  ｍｉｃｅ）、アメリカン・ジャーナル・オブ・クリニカル・ニュートリション（Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ）、６６（２）：２６７−７５。
【非特許文献３６】ハラグチ・Ｈ．（Ｈａｒａｇｕｃｈｉ  Ｈ．）、ヨシダ・Ｎ．（Ｙｏｓｈｉｄａ  Ｎ．）、イシカワ・Ｈ．（Ｉｓｈｉｋａｗａ  Ｈ．）（２０００）：グリシルリザ・グラブラ由来のイソフラバンによる酸化的ストレスに対するミトコンドリア機能の保護（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ａｇａｉｎｔｓ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓｅｓ  ｂｙ  ｉｓｏｆｌａｖａｎｓ  ｆｒｏｍ  ｇｌｙｃｙｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａ）、ジャーナル・オブ・ファーマシー・アンド・ファーマコロジー（Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）；５２（２）  ２１９−２３。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
この薬物は、下記によって特徴付けられる。
ａ−この薬物のカンゾウの調製方法は、カンゾウ根を取り扱う治療目的で用いられるカンゾウの全ての方法とは相違している。この薬物は、（水および炭酸水素ナトリウムを用いて）カンゾウを６時間発酵させることによって調製される。発酵の目的は、グルコースで処理する酵素を大量に生産することである。カンゾウの根は、３０％のスターチ、２％のグルコースおよび５％のスクロースを含む。
【００２６】
ｂ−この薬物におけるグリセリジン（ｇｌｙｃｅｒｉｚｉｎｅ）の抽出方法は、煮沸によって脱グリセリジン化したカンゾウ（ｄｇｌ）を得るために使用される方法とは相違している。ここでは、グリセリジンは、高熱の影響から調製される酵素を保護するために希釈した塩酸を用いて抽出される。それは、これらの酵素が、６０℃を超える温度に晒した場合に破損する可能性があるためである。
【実施例】
【００２７】
下記の材料が薬物の調製に使用される：
１−カンゾウ根。
２−ＨＣｌ（４モル濃度）。
３−炭酸ナトリウム。
【００２８】
シロップ状の薬物の調製：
（１）２５０グラムのカンゾウ根および０．２グラムの炭酸ナトリウムを５００ｃｃの温水に添加する。この混合物を６時間放置する。
（２）７５０ｍｌの温水を混合物に添加し、４時間放置する。
（３）希釈したＨＣｌを添加し、次に、混合物を撹拌し、ろ過する。
（４）ろ過物を薬物として用いる。投薬量は、５ｍｌ（茶さじ１杯）ＴＤＳである。
【００２９】
カプセル状の薬物の調製：
ａ−薬物は、下記の工程に従って、軟質ゼラチンカプセルの形態で調製される。
１−上述した工程に従って、溶液を調製する。
２−含水量の減少は、回転式吸引ポンプによって行う。
３−生成した練り粉を軟質ゼラチンカプセルに詰め込む。各カプセルは、５ｍｌのシロップ形態に等しい投薬量を含む。
【００３０】
ｂ−薬物は、下記のように、硬質カプセルの形態で調製される。
１−上述した工程に従って、溶液を調製する。
２−乾燥は、凍結乾燥によって行う。
３−各カプセルは、５ｍｌのシロップ形態に等しい投薬量を含む。
【００３１】
【表１】
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【００３２】
薬物の使用による反応が劇的であった数例に関する所感：
ａ−症例３：
２０歳の患者は、数分間我慢して歩いたり、１時間を超えて働いたりすることがほとんどできず、その後では、非常に疲れ果てていた。この患者は、３００ｍｇ／ｄｌを超える血糖値であり、入院を必要とする有害レベルまで上昇することが頻繁にあり、１日当り１００ユニットを超える長期作用のインスリン（ミクスタード（ｍｉｘｔａｒｄ））をよく受けていた。手短に言えば、患者の生活は、酷い状態であり、重篤なうつ状態であった。この薬物の使用によって、患者は、２〜３週間以内に著しい改善を示した。患者は、長期間働くことができ、それが非常に楽しいので、大学まで毎日歩いて往復（５キロメートルを超える）し、患者のインスリン要求量は、およそ２５〜３０ｕ／日まで下がり、血糖は許容範囲のレベル（稀に２００ｍｇ／ｄｌを超える）まで下がった。症例８および１６は同等の応答を示した。
【００３３】
ｂ−症例８：
前節で述べた４５歳の男性は、ほぼ凍結肩であり、棘上筋症候群の進行した症例として診断され、麻酔下で筋肉がほぐされたが、患者の状態は改善しなかった。薬物を使用して３週間以内に、この患者は、ほとんど正常な方法で痛みを伴わずに肩を動かすことができるようになった。
【００３４】
ｃ−症例１０：
この４０歳の男性は、衰弱し、頻繁な外科的干渉を必要とする複数の腫れ物および吹き出ものがあり、無能力となり、実際に長期間失業していた。薬物で治療して数週間後には、これは全て消失した。
【００３５】
ｅ−症例４：
この６０歳の患者は、両足の裏の感覚が完全に麻痺し、患者自身の靴を感じることさえできなかった。この症状は３年続いた。４週間未満の治療で、患者は、かなりの感覚を取り戻した。
【００３６】
適用方法：
この薬物は、真性糖尿病合併症の治療に用いられる。
【００３７】
薬物の製造に用いられる材料：
１−カンゾウ根。
２−ＨＣｌ（４モル濃度）
３−炭酸ナトリウム。
【００３８】
シロップ状の薬物の製造：
（１）２５０グラムのカンゾウ根および０．２グラムの炭酸ナトリウムを５００ｃｃの温水に添加する。この混合物を６時間放置する。
（２）７５０ｍｌの温水を混合物に添加し、４時間放置する。
（３）希釈したＨＣｌを添加し、次に、混合物を撹拌し、ろ過する。
（４）ろ過物を薬物として用いる。投薬量は、５ｍｌ（茶さじ１杯）ＴＤＳである。
【００３９】
カプセル状の薬物の調製：
ａ−薬物は、下記の工程に従って、軟質ゼラチンカプセルの形態で調製される：
１−上述した工程に従って、溶液を調製する。
２−含水量の減少は、回転式吸引ポンプによって行う。
３−生成した練り粉を軟質ゼラチンカプセルに詰め込む。各カプセルは、シロップ形体５ｍｌに等しい投薬量を含む。
【００４０】
ｂ−薬物は、下記のように、硬質カプセルの形体で調製される。
１−上述した工程に従って、溶液を調製する。
２−乾燥は、凍結乾燥によって行う。
３−各カプセルは、シロップ形体５ｍｌに等しい投薬量を含む。
【外国語明細書】
Specification
Title of Invention
Drug for treatment of complications of diabetes mellitus
Prior art
The total number of diabetics allover the world is more than 300 millions (5-6% of world population). There are two types of diabetes mellitus:
1- Type one diabetes mellitus which is also called (insulin dependent
diabetes mellitus). It represents about 10% of total diabetic cases and is
treated by insulin only.
2- Type two diabetes mellitus which is also called (non insulin dependent
diabetes mellitus), or adult type. It represents about 90% of total diabetic
cases. It is treated by oral antidiabetics which aim at reducing blood sugar
level. They can be classified into 3 main groups :
A- Sulphonyl ureas.
B- Metformin.
C- Insulin sensitizers which activate insulin receptors in body cells.
This group of drugs is called thiazolidine diones which includes rosiglitazone
as avandia, pioglitazone as glustin.
Disadvantages in previous art
The present problem for diabetic patients is the persistence of complications
which increase by time inspite of treatment, as all drugs used today aim at
lowering the blood sugar level through:
A- Injection of insulin.
B- Stimulation of insulin secretion by beta cells of pancreas (action of
sulphonyly ureas).
C- Lowering blood glucose through direct stimulation of glycolysis, slowing of
absorption of glucose in intestine and reduction of gluconeogenesis in liver
(action of biguanides).
D- Insulin sensitizer (action of thiazolidine diones which include pioglitazone as glustin and rosiglitazone as avandia). But the main problem of diabetes -
besides hyperglycemia - is the severe and multiple
complications of
the disease that increase and become more severe by time even in case of
success in blood sugar control. The most important complications of diabetes
are:
1- Cataract and retinopathy that may cause diminution of vision.
2- Nephropathy that may end in renal failure. Diabetes mellitus is one of the
most important causes of renal failure.
3- Peripheral neuritis which may cause pain, numbness and loss of sensation.
This is a serious complication as it may end in foot gangrene in case of
unnoticed trauma because of the present peripheral arteritis and poor blood
supply of foot which are common in diabetes mellitus.
4- Peripheral arteritis.
5- Cerebral vascular disease.
6- Hypertension.
7- Coronary insufficiency.
8- Rise in serum uric acid.
9- Atherosclerosis and dyslipidemia.
10- Hyper coagulability.
All complications of diabetes mellitus persist and become more intensified by
time inspite of the regular follow up and treatment of hyperglycemia, all
available treatment for these complications are only symptomatic. This is a big problem which necessitates searching for the etiology of these complications
and hence the etiological treatment, other than the symptomatic treatment used
nowadays.
Advantages of the new drug
This drug aims at treatment of complications of diabetes mellitus which are
very common. They persist and become more intensified by time in spite of
control of blood sugar levels. These complications represent the most serious
problem of
diabetes mellitus. To search for a drug that can prevent these complications,
we had to study the main role of enzymes in metabolic reactions allover the
body because
There is a strict relationship between enzymatic deficiency and the metabolic
disturbances which cause all diabetic complications.
This was confirmed by the following facts:
Frist:
All metabolic activities in the body are carried out in the form of chain of
enzymatic reactions. Deficiency of specific metabolic enzymes causes abnormal
metabolism (6-22). Researches concerning diabetic complications showed that
these complications start by disturbance of glucose metabolism inside the cell
and tissues of diabetic patient. Normally glucose catabolism is the major
source energy for cellular processes. In diabetic patient, disturbance of
glucose
metabolism in cells will be accompanied and complicated by the following:
A- Liver glycogen is depleted (5).
B- Protein becomes the only important source of energy. This causes great
increase of protein catabolism, decrease of protein synthesis in muscles which
end in muscle weakness.
C- Great increase of fat catabolism which causes several complications caused
by dyslipidemia. Thus, the main problem that causes all these complications is  the disturbance of glucose metabolism in cells which is carried out - as
mentioned - in the form of enzymatic reactions -by specific metabolic enzymes.
Second:
Recent researches in hepatology showed that complications of diabetes mellitus
are associated with mitochondrial dysfunction in liver cells. Mitochondria in
the liver cells, are the site of energy production which enables these cells to carry out their normal metabolic functions. Mitochondria also represent the
cross roads for the three major metabolic pathways, carbohydrate, lipids and
protein. Thus, they render the liver capable of directing one metabolic pathway in favor of the others in order to attain the metabolic balance required. The
relationship between the degree of mitochondrial disturbance and the degree of
diabetic complications is of great importance (14, 15, 16).
Third:
Recently it was discovered that the role of what is called (digestive enzymes)
is not digestion only, but they are absorbed in the intestine, they are carried to the liver where they have an important role in metabolic reactions in the
liver and all body tissues (6, 8, 9, 17, 18, 19)
It was proved also that pancreatic amylase - besides its role in digestion - is absorbed in the intestine and reaches the liver.  This circulation was called
entero - hepatic circulation and entero - pancreatic circulation (6)
Besides, researches showed that deficiency in food enzymes leads to hypertrophy of pancreas and salivary glands to compensate for digestive enzymes, and this
hypertrophy can be relieved by oral supply of sufficient amounts of these
enzymes. If deficiency of these enzymes in diet for a longer time it may cause
deficiency of metabolic activities all over the body (6)
Accordingly, we searched for a drug that can treat the presenting complications of diabetes mellitus gradually and prevent further complications and
deterioration by supplying the patient with sufficient amounts of enzymes which are necessary for the normal enzymatic activity to regain the normal metabolism allover the body. As for the enzymes to be used we gave the priority to amylase enzyme, as it is the enzyme concerned with carbohydrate metabolism. Also liver
cells identify this enzyme and receive it from the blood through the specific
receptors called mannose receptors which are found on liver cell surfaces (13)
Besides, amylase enzyme has high affinity to liver glycogen (1). All above
mentioned facts confirm the important role of amylase in carbohydrate
metabolism and in liver metabolism which affects all body functions.
Also we searched for a common plant which is rich in enzymes. We tried to
avoid synthetic drugs or strange substances which may not be easily absobed.
It is well known now that nutrients are absorbed through the intestinal
enterocytes by active transport which moves the nutrients against chemical and
electrical gradients, a process called active transport (24). Absorption of
enzymes is affected by several factors; a very important factor is the mixture
containing the enzymes (6).
Licorice was chosen as the rich source of amylase enzyme for the following
reasons:
1- it is a natural source of plant origin, and is used in Egypt as a popular
drink after being fermented since hundreds or even thousands of years. To get a big amount of amylase in the prepared licorice, our preparation was
concentrated 80 times that of the preparation prepared in the traditional way
2- it was discovered that licorice is very rich also in flavonoids (more than
50 substances) (1, 29) which are very important antioxidants and help to regain normal metabolism and treat diabetic complications. Recent researches confirmed that flavonoids inhibit aldose reductase enzyme, thus preventing the conversion of excess glucose to sorbitol. The accumulation of sorbitol (in lens, retina,
renal tissue, blood vessels, striated muscles, peripheral nerves, etc.) Is the
cause of complications of diabetes mellitus (2, 3, 4, 28). Some researchers
stated that inhibitors of aldose reductase would be the potent agents for the
prevention of diabetic complications (27). Others stated that flavonoids are
the most promising compound for the prevention and treatment of diabetic
complications (26). Many experts showed that flavonoids in licorice had
important therapeutic effects for the following complications of diabetes
mellitus:
A- Cataract (1).
B- Peripheral neuritis (1).
C- Nephropathy (1).
D- Retinopathy (1).
It is worth mentioning in that respect that there is a close relation, that has not been clarified before, between retinopathy and nephropathy. These two
complications occur simultaneously after about 10-15 years from the beginning
of the disease and gradually increase in intensity at almost the same rate. The appearance of one of them heralds the appearance of the other and nearly with
the same intensity. Experimental work has proved that flavonoids present in
licorice, as already mentioned , cure these two complications together by
preventing the accumulation of sorbitol in renal and retinal tissues as well as in other tissues which are responsible for some other serious diabetic
complications. 
E- Prevention of intra vascular clotting through anti-platelet aggregation
(30, 31).
F- Prevention of atherosclerosis: by several flavonoids in licorice, the most
potent of which are polyphenolic flavonoids (32, 33, 34, 35).
G- Protection of hypercholesterolemia by preventing the peroxidation and damage of low density lipoprotein (32, 35). Thus preventing hypercholesterolemia which occurs as a result of destruction of low density lipoproteins. These
lipoproteins are being destroyed by microphages due to their denaturation and
peroxidation
H- Reduction of plasma lipids levels (32)
I- Decrease systolic blood pressure (32) 
J- Improving liver metabolism: this was manifested by inhibition of cytochrome
oxidase p450 enzyme which becomes higher in diabetics than in normal person
indicating the presence of impaired metabolism in the liver of diabetic
patients (7,10). Flavonoids have been shown to be potent inhibitors of
cytochrome enzyme p450 (7). It is worth mentioning that the improved metabolism in liver cells in diabetes by the use of flavonoids explains the success of
these flavonoids in treating many important diabetic complications due to
disturbed liver metabolism such as dislipidemia, hypercogulabilty
atherosclerosis, coronary artery disease and others. Recent researches by
hepatologists confirmed that these complications occur in diabetics with the
beginning of appearance of disturbed liver metabolism starting as non-alcoholic steatohepatitis. Intensity of these complications increases with deterioration
of the mitochondrial function in hepatocytes (12,14).
How do flavonoids prevent diabetic complications in different body tissues?
Many researches have recently proved that flavonoids help in treatment and
prevention of diabetic complications by preventing the accumulation of sorbitol in different body tissues. This is achieved by suppression of aldose reductase
enzyme which initiates the first step in polyol pathway which occurs as a
result of elevation of glucose concentration in tissues above normal levels
which ends up in transformation of glucose into sorbitol (25,26,27,28).
How do flavonoids regain normal vitality and functions of hepatocytes?
Flavonoids act as antioxidants. They regain normal enzymatic activity within
hepatocytes by preventing accumulation of reactive oxygen species (ROS) that
result as by- product of metabolic activity within the mitochondria (36).
Inside theses mitochondria oxidative reduction reactions take place aiming at
production of energy in form of ATP by the help of some important enzymes and
coenzymes such as ATP synthase , cytochrome c oxidase, nicotinamide adenine
dinucleotide (NAD) and flavine adenine dinucleotide (FAD). During these
continuous enzymatic reactions small amount of reactive oxygen species (ROS)
results which threatens to destroy cellular constituents. Some of NAD and FAD
deal with these small amounts of ROS to protect cellular contents from
destruction (16,23). The rest of NAD and FAD play their role in the process of
normal metabolism and energy production inside cells. In diabetes mellitus,
abnormal metabolism will result in accumulation of big amounts of ROS needing
big amounts of NAD and FAD to deal with, with consequent deterioration in
functions of NAD and FAD and their role in energy production and normal
metabolism inside liver cells due to this abnormal pathway and abnormal
consumption. Flavonoids deal and destroy excess ROS, thus sparing NAD and FAD
to perform their normal activity in energy production and normal metabolism
inside liver cells so liver regains its normal vitality and functions (36).
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Detailed Description
This drug is characterized by the following:
a- Mode of preparation of licorice in this drug differs from that of all
preparations of licorice used for therapeutic purposes which deal with
licorice root. This drug is prepared by fermentation of licorice for 6 hours
(using water and sodium bicarbonate). The aim of fermentation is the
production of large amounts of enzymes that treat with glucose. Root of
licorice contains 30% starch, 2% glucose and 5% sucrose 
b- Mode of exclusion of glycerizine in this drug differs from that used for
getting deglycerizinized licorice (dgl) by boiling. here glycerizine is
excluded by using diluted hydrochloric acid to protect the prepared enzymes
from the effect of hyperthermia, as these enzymes may be damaged if exposed
to temperature above 60c.
The following materials are used for preparation of the drug:
1- Licorice root.
2- HCl (4 molar).
3- Sodium carbonate.
Preparation of the drug in the form of syrup:
1- 250 gram of licorice root & 0.2 gram of sodium carbonate are added to
500 c.c. of warm water. the mixture is left for 6 hours.
2- 750 ml of warm water is added to the mixture and left for 4 hours.
3- Diluted HCl is added then the mixture is stirred and filtered.
4- The filtrate is used as a drug. the dose is 5 ml (one tea spoonful) TDS.
Preparation of the drug in the form of capsules:
a- The drug is prepared in the form of soft gelatinous capsules according to
the following steps:
1- The solution is prepared according to the above mentioned steps.
2- Reduction of water content is done by rotary suction pump.
3- The produced dough is packed in soft gelatinous capsules. 
Each capsule contains a dose equivalent to 5ml of syrup form.
b- The drug is prepared in the form of hard capsules as follows:
1- The solution is prepared according to the above mentioned steps.
2- Dryness is done by lyophilization.
3- Each capsule contains a dose equivalent to 5 ml syrup form.
The effect of drug on some complications of diabetes in 62 patients
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Comments on a few cases whose response with the use of the drug was dramatic:
a-case 3:
a 20 years old patient could hardly tolerate walking for a few minutes or
working over one hour after which she got extremely exhausted. This patient
used to receive over 100 units of long acting insulin (mixtard) per day with
a blood sugar level over 300 mg/dl rising frequently to deleterious levels
requiring hospitalization. In short her life was miserable and she was severely depressed. With the use of the drug, this patient showed marked improvement
within 2-3 wks. She could work for long hours and she was so happy about it
that she walked to collage and back daily (over 5 kilometers) her insulin
requirements dropped to around 25-30 u / day and her blood sugar dropped to
acceptable levels (rarely exceeding 200 mg/ dl. Case 8 &16 showed an
equivalent response.
b- case 8:
A 45 yrs old male that was referred to in the previous section had a near
frozen shoulder and was diagnosed as an advanced case of supra spinatous
syndrome and was subjected to manipulation under anesthesia which failed to
improve his condition within 3 wks of the use of the drug, this patient could
move his shoulder painlessly in a more or less normal way.
c- case 10:
This 40 years old male was emaciated and presented with multiple boils and
carbuncles which required frequent surgical interference and that was
incapacitating and practically put him out of work for long periods. all this
disappeared after treatment with the drug for a few weeks.
e-case 4:
This 60 years old patient suffered from complete loss of sensation in both
soles and could not even feel his own shoes. This symptom lasted 3 yrs. In less than 4 wks of treatment he recovered a good deal of his sensation.
Mode of application:
This drug is used for treatment of complications of diabetes mellitus.
Materials used for preparation of the drug::
1- Licorice root.
2- HCl (4 molar).
3- Sodium carbonate.
Preparation of the drug in the form of syrup:
1- 250 gram of licorice root & 0.2 gram of sodium carbonate are added to
500 c.c. of warm water. the mixture is left for 6 hours.
2- 750 ml of warm water is added to the mixture and left for 4 hours.
3- Diluted HCl is added then the mixture is stirred and filtered.
4- The filtrate is used as a drug. The dose is 5 ml (one tea spoonful) TDS.
Preparation of the drug in the form of capsules:
a- The drug is prepared in the form of soft gelatinous capsules according to
the following steps:
1- The solution is prepared according to the above mentioned steps.
2- Reduction of water content is done by rotary suction pump.
3- The produced dough is packed in soft gelatinous capsules. each capsule
contains a dose equivalent to 5ml of syrup form.
b- The drug is prepared in the form of hard capsules as follows:
1- The solution is prepared according to the above mentioned steps.
2- Dryness is done by lyophilization.
3- Each capsule contains a dose equivalent to 5 ml syrup form
Claims
1 - Method of preparing a drug for treatment of diabetes mellitus
complications comprises :
1- 250 gram of licorice root & 0.2 gram of sodium carbonate are added to
500 c.c. of warm water.
2- 750 ml of warm water is added to the mixture.
3- Diluted HCl is added then the mixture is stirred and filtered.
2 - Method of preparing a drug for treatment of diabetes mellitus complications
comprises according to claim 1 characterized in that the mixture of licorice,
sodium carbonate and water ( step 1 ) is kept for a period ranging from 2-8
hours , preferably from 4 to 6 hours and most preferably for 6 hours.
3 - Method of preparing a drug for treatment of diabetes mellitus complications
comprises according to claim 1 characterized in that the mixture of step 2 is
kept for a period ranging from 2-6 hours , preferably from 3 to 5 hours and
most preferably for 4 hours.
4 - Medicament formulation consists of licorice root, sodium carbonate, HCl and
water after fermentation for a period ranging from 6 to 16 hours preferably
from 8 to 14 hours and most preferably for 12 hours.
5 - Use of fermentation product according to claim 4 as a Medicament for
treatment of complications of diabetes mellitus.
6 - Method of preparing a pharmaceutical composition for treatment of
complications of diabetes mellitus characterized in that the drug is
concentrated by a rotary suction pump or lyophilized and packed in soft
gelatinous capsules or
hard capsules respectively.
7 - Method for treatment of complications of diabetes mellitus comprises
administering an effective amount from drug according to claim 4 .
8 - Method according to claim 7 whereas the effective dose ranging from 12ml to
25ml preferably from 15ml to 20ml, or equivalent doses of the concentrate or
lyophilized form, divided into multiple doses.
Abstract
Many diabetic complications such as nephropathy, peripheral neuritis, cataract
and retinopathy  have shown  improvement with flavonoids present in licorice.
This effect was found to be due to prevention of transformation of glucose to
sorbitol by inhibiting aldose reductase enzyme, thus avoiding the accumulation
of sorbitol in several tissues including lens, retina, kidney, blood vessels,
peripheral nerves and striated muscles.
Besides, licorice prepared by fermentation is rich in amylase which improves
diabetic complications due to increase of cellular enzymatic activity. This
drug was prepared by fermentation of licorice followed by getting rid of
glycerizine using hydrochloric acid and not by boiling for fear of destruction
of enzymes and flavonoids.