(57)【要約】【課題】            本発明は、優れた保湿作用、抗老化作用、美白作用、抗炎症作用、及び抗酸化作用を有する有効成分を見出し、皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用が可能な保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、及び抗酸化剤を提供することを目的とする。【解決手段】        サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の抽出物を保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、あるいは抗酸化剤として用いる。また、サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の抽出物を皮膚外用剤や食品等の組成物に配合することにより、優れた保湿作用、抗老化作用、美白作用、抗炎症作用、及び抗酸化作用を発揮する様々な組成物を提供することができる。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする保湿剤。
【請求項２】
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする抗老化剤。
【請求項３】
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする美白剤。
【請求項４】
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする抗炎症剤。
【請求項５】
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする抗酸化剤。
【請求項６】
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を含有する皮膚外用剤。
【請求項７】
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を含有する食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、及び抗酸化剤に関する。さらに詳しくは、サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、及び抗酸化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
加齢に伴う皮膚の弾性低下及びシワ、シミといった老化症状の要因として、細胞機能低下、コラーゲン等の細胞外マトリックス成分の減少や変性、紫外線によるメラニン産生や色素沈着及び細胞の酸化傷害等が挙げられる。このような老化症状を防止・改善するために、従来、様々な有効成分の検索及び配合検討がなされてきた。細胞賦活剤としては、ポンカンのエッセンス（特許文献１参照）、コラゲナーゼ阻害剤としては、ジカルボン酸（特許文献２参照）、コラーゲン産生促進剤としては、ブナ科ブナ属植物の木の芽からの抽出物（特許文献３参照）、美白剤としては、白鶴霊芝の水及び／又は有機溶媒抽出物（特許文献４参照）、抗酸化剤としては、サルオガセ科サルオガセ属植物の抽出物（特許文献５参照）、抗炎症剤としては、茶ポリフェノール類（特許文献６参照）、アロマターゼ活性促進剤としては、クロレラの抽出物（特許文献７参照）が知られている。
【０００３】
【特許文献１】特開２００１−１３１０４５号公報
【特許文献２】特開平９−１２４４７２号公報
【特許文献２】特開平１０−２０３９５２号公報
【特許文献３】特開２００３−８９６３０号公報
【特許文献４】特開平１０−１８２４１３号公報
【特許文献５】特開平６−９３９１号公報
【特許文献６】特開２００４−１８９６０９号公報
【特許文献７】特開２００３−２２６６１３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
天然由来成分は、様々な薬理作用や美容効果を有することが知られ、これまでにも多数の植物や菌類などが皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用されている。しかし、天然由来成分の中には未だその効果が知られていないものも数多く存在し、優れた保湿作用、抗老化作用、抗炎症作用、あるいは抗酸化作用を有する有効成分の開発が期待されていた。本発明は、このような有効成分を見出すためになされたものであり、皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用が可能な保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、及び抗酸化剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記の課題を解決するために、保湿作用、抗老化作用、美白作用、抗炎症作用、及び抗酸化作用に関して、天然由来の種々の物質について検討を行った。その結果、サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物に優れた保湿作用、抗老化作用、美白作用、抗炎症作用、及び抗酸化作用を見出し、さらに検討を重ね、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は、サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、及び抗酸化剤に関する。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、優れた効果を有する保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、及び抗酸化剤を提供することができる。また、これらを皮膚外用剤や食品に配合することにより、シワ，タルミ，肌のハリの低下，シミ，クスミ，小ジワ，乾燥など様々な皮膚症状の防止・改善に優れた効果を発揮する組成物を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明の原料として用いられる植物は、サガリバナ科（Ｌｅｃｙｔｈｉｄａｃｅａｅ）サガリバナ属（Ｂａｒｒｉｎｇｔｏｎｉａ）もしくはホウガンノキ属（Ｃｏｕｒｏｕｐｉｔａ）の植物であればよい。サガリバナ属植物としては、サガリバナ（Ｂａｒｒｉｎｇｔｏｎｉａ ｒａｃｅｍｏｓａ）、コバンノアシ（Ｂａｒｒｉｎｇｔｏｎｉａ ａｓｉａｔｉｃａ）などが知られている。ホウガンノキ属の植物としては、ホウガンノキ（Ｃｏｕｒｏｕｐｉｔａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ）などが知られている。
【０００９】
本発明に用いられる原料となる植物は、サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物であれば特に限定されないが、入手が比較的容易なことや有効性などの理由から、コバンノアシ（Ｂａｒｒｉｎｇｔｏｎｉａ ａｓｉａｔｉｃａ）を用いることが有効性の点から特に好ましい。
【００１０】
本発明におけるサガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の抽出物には、サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の原体や乾燥物も抽出物に含まれるが、各種溶媒を用いて抽出した抽出物を用いるのが好ましい。抽出には、サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の葉、花、種子、根、樹皮、芽などのいずれの部位を用いても構わないが、簡便に利用するには、葉、茎、種子を用いるとよく、有効性の点からは種子を用いるとよい。抽出の際は、生のまま用いてもよいが、抽出効率を考えると、細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。抽出は、抽出溶媒に浸漬するか、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効率を上げるため、撹拌や抽出溶媒中でホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
【００１１】
抽出溶媒としては、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール、１、３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール、エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類、アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類などの溶媒を用いることができ、これらより１種又は２種以上を選択して用いる。また、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニアなどの１種又は２種以上の超臨界流体や亜臨界流体を用いてもよい。
【００１２】
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の上記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができるが、濃縮、乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解して使用することもでき、これらの生理作用を損なわない範囲で脱色、脱臭、脱塩等の精製処理やカラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の前記抽出物やその処理物及び分画物は、各処理及び分画後に凍結乾燥し、用時に溶解して用いることもできる。
【００１３】
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の抽出物を有効成分とする保湿剤は、皮膚や毛髪に対して優れた保湿作用を発揮し、特に皮膚に対する保湿効果が高い。
【００１４】
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の抽出物を有効成分とする抗老化剤は、優れた細胞賦活効果、コラーゲン産生作用、およびアロマターゼ活性促進作用を有し、老化症状の防止改善に優れた効果を発揮する。アロマターゼは、エストロゲンを産生する際に働く酵素であり、アロマターゼ活性促進作用によりエストロゲンの産生が促進されると、女性ホルモンによる美肌効果や抗老化効果が期待できる。
【００１５】
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の抽出物を有効成分とする美白剤は、シミ・ソバカスといった色素沈着症状の改善に効果を発揮し、特にチロシナーゼ活性の阻害やメラニンの産生抑制に対して優れた効果を発揮する。
【００１６】
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の抽出物を有効成分とする抗炎症剤は、優れたヒアルロニダーゼ阻害効果を有し、皮膚の炎症を抑え優れた抗炎症作用を発揮する。
【００１７】
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の抽出物を有効成分とする抗酸化剤は、優れたフリーラジカル消去効果、およびスーパーオキサイドアニオンの消去効果を有し、皮膚の光老化等を防止して、優れた抗酸化作用を発揮する。
【００１８】
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の抽出物は、優れた保湿作用、抗老化作用、美白作用、抗炎症作用、及び抗酸化作用を有し、保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、及び抗酸化剤として利用することができる。また、サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の抽出物を有効成分とする保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、及び抗酸化剤は、皮膚に外用する外用組成物だけではなく、毛髪に利用することや経口摂取も可能であり、食品、飲料、あるいは医薬品など幅広く応用することが可能である。
【００１９】
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の抽出物を皮膚外用剤や食品に配合する際の配合量は、皮膚外用剤や食品の種類や使用目的等によって調整することができるが、効果や安定性などの点から、全量に対して、０．０００１〜５０．０重量％が好ましく、より好ましくは、０．００１〜２０．０重量％である。
【００２０】
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の抽出物を配合する皮膚外用剤の剤型は任意であり、例えば、ローションなどの可溶化系、クリームや乳液などの乳化系，カラミンローション等の分散系として提供することができる。さらに、噴射剤と共に充填したエアゾール，リップスティック，ファンデーションなどの種々の剤型で提供することもできる。
【００２１】
なお、上記抽出物を配合する皮膚外用剤には、これらの抽出物の他に必要に応じて、通常医薬品，医薬部外品，皮膚化粧料，毛髪用化粧料及び洗浄料に配合される、油性成分，保湿剤，粉体，色素，乳化剤，可溶化剤，洗浄剤，紫外線吸収剤，増粘剤，薬剤，香料，樹脂，防菌防黴剤，アルコール類等を適宜配合することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲において、他の保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、あるいは抗酸化剤との併用も可能である。
【００２２】
また、サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の抽出物を配合する食品の剤型は任意であるが、粉末剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤などの種々の剤型で提供することもでき、必要に応じて、医薬品・医薬部外品・食品などに配合される、油性成分，保湿剤，粉体，乳化剤，可溶化剤，増粘剤，薬剤，香料，防菌防黴剤，アルコール類，砂糖，練乳，小麦粉，食塩，ブドウ糖，鶏卵，バター，マーガリン，水飴，カルシウム，鉄分，調味料，香辛料、ビタミンＡ及びそれらの誘導体、カロテノイド類、リボフラビン及びその誘導体、ビタミンＢ類及びそれらの塩若しくは誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、コバラミン類、ビタミンＥ及びそれらの誘導体、ビタミンＫ、アデノシン及びその誘導体、フラボノイド類及びタンニン類を配合することもできる。さらに、本発明の効果を損なわない範囲において、他の保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、あるいは抗酸化剤との併用も可能である。
【００２３】
以下に、サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の抽出物の製造例、各作用を評価するための試験、皮膚外用剤や食品としての処方例、使用試験について詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれによってなんら限定されるものではない。
【００２４】
［抽出方法１］
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物を乾燥させて粉砕し、サンプル質量の２０倍量の５０質量％エタノールを加え、室温で撹拌しながら２時間抽出した。得られた抽出液を濾過して不溶物を取り除き、減圧濃縮後、凍結乾燥を行って、抽出物を得た。
【００２５】
［抽出方法２］
サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物を乾燥させて粉砕し、サンプル質量の２０倍量の精製水を加え、オートクレーブにより２０分間、１２０℃に加温して抽出した。得られた抽出液から、温度の高い状態を保ちながら吸引濾過により不溶物を取り除いた後、凍結乾燥を行って、抽出物を得た。
【００２６】
＜真皮線維芽細胞賦活作用の評価＞
上記抽出方法１で得られたエタノール抽出物を試料として、以下のように真皮線維芽細胞賦活作用を評価した。
【００２７】
倉敷紡績（株）製正常ヒト真皮線維芽細胞を、１ウェルあたり２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地により表１に示す各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、さらに４８時間培養した。上清を除いた後、３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ試薬）を４００μｇ／ｍｌ含有する培地に交換し、約２時間培養した。その後、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにより抽出し、マイクロプレートリーダーで５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に、濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。
【００２８】
得られた結果を、試料無添加のコントロールにおける細胞賦活作用を１００としたときの相対値により表１に示す。
【００２９】
【表１】
2008074730.tif 000002
【００３０】
表１より明らかなように、試料を添加した培地では、有意な真皮線維皮芽細胞賦活効果が認められた。
【００３１】
＜表皮細胞賦活作用の評価＞
上記抽出方法１で得られたエタノール抽出物を試料として、以下のように表皮細胞賦活作用を評価した。
【００３２】
ヒト表皮未全角化細胞を、１ウェルあたり２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地により表２に示す各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、さらに２４時間培養した。上清を除いた後、ＭＴＴ試薬を１００μｇ／ｍｌ含有する培地に交換して約２時間培養した。その後、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにより抽出し、マイクロプレートリーダーで５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に、濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。
【００３３】
得られた結果を、試料無添加のコントロールにおける細胞賦活作用を１００としたときの相対値により表２に示す。
【００３４】
【表２】
2008074730.tif 000003
【００３５】
表２より明らかなように、試料を添加した培地では、有意な表皮細胞賦活効果が認められた。
【００３６】
＜真皮繊維芽細胞コラーゲン産生作用の評価＞
上記抽出方法１及び２で得られたエタノール抽出物と熱水抽出物を試料として、以下のように真皮線維芽細胞コラーゲン産生作用を評価した。
【００３７】
正常ヒト真皮繊維芽細胞を、１ウェルあたり２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地により表３に示す試料濃度に調整した培養液に交換し、さらに２４時間培養した。
【００３８】
培養上清中に分泌されたタイプＩ及びタイプШのコラーゲン定量にはＥＬＩＳＡ法を用い、最後は標識されたペルオキシダーゼに対し２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニウム塩（ＡＢＴＳ）および過酸化水素を添加して反応させた後、マイクロプレートリーダーにより４０５ｎｍの吸光度を測定した。
【００３９】
ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔによりタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのタイプＩ及びタイプШコラーゲン産生量を求めた。
【００４０】
得られた結果を、試料無添加のコントロールにおける単位タンパク量あたりのタイプＩタイプＩ及びタイプШのコラーゲン産生量を１００としたときの相対値により表３に示す。
【００４１】
【表３】
2008074730.tif 000004
【００４２】
表３より明らかなように、試料を添加した培地では、有意な真皮繊維芽細胞コラーゲン産生効果が認められた。
【００４３】
＜表皮細胞コラーゲン産生作用の評価＞
上記抽出方法１で得られたエタノール抽出物を試料として、以下のように表皮細胞コラーゲン産生作用を評価した。
【００４４】
ヒト表皮未全角化細胞を、１ウェルあたり２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地により表４に示す各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、さらに５日間培養した。
【００４５】
培養上清中に分泌されたタイプＩＶコラーゲン定量には、ＩＶ型コラーゲンに対するモノクローナル抗体（認識部位：α２鎖）およびビオチン化ポリクローナル抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法を用い、アビジン化ホースラディッシュペルオキシダーゼを添加し、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンにより発色させ、マイクロプレートリーダーにより６５０ｎｍの吸光度を測定した。
【００４６】
ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔによりタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのタイプＩＶコラーゲン産生量を求めた。
【００４７】
得られた結果を、試料無添加のコントロールにおける単位タンパク量あたりのタイプＩＶコラーゲン産生量を１００としたときの相対値により表４に示す。
【００４８】
【表４】
2008074730.tif 000005
【００４９】
表４より明らかなように、試料を添加した培地では、有意な表皮細胞コラーゲン産生効果が認められた。
【００５０】
＜アロマターゼ活性促進作用の評価＞
上記抽出方法１で得られたエタノール抽出物を試料として、以下のようにアロマターゼ活性促進作用を評価した。
【００５１】
表５に示す各試料濃度に調製した試料溶液４μｌに、ＮＡＤＰ＋、ＭｇＣｌ２、グルコース−６−ホスフェート、グルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、およびコントロール昆虫細胞膜タンパクの混合溶液（ＣＰＹ１９／ＭＦＣ  ハイスループット・インヒビター・スクリーニングキット（High Throughput Inhibitor Screening Kit）、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）９６μｌを添加し、１０分間３７℃に加温した。１５ｎＭ  ＣＰＹ１９（アロマターゼ）、５０μＭ  ７−メトキシ−４−トリフルオロメチルクマリン（基質）溶液１００μｌを添加し、３０分間３７℃に加温した。１００ｍＭ トリス塩基７５μｌを添加し、反応を停止させた。
【００５２】
励起波長４０９ｎｍ、発光波長５３０ｎｍにおいて蛍光測定を行った。７−メトキシ−４−トリフルオロメチルクマリンはＣＹＰ１９により分解され、７−ヒドロキシ−４−トリフルオロメチルクマリンが生成して蛍光を生じるため、蛍光測定によりアロマターゼ活性促進能の定量を行った。
【００５３】
得られた結果を、試料無添加のコントロールにおけるアロマターゼ活性促進作用を１００としたときの相対値により、表５に示す。
【００５４】
【表５】
2008074730.tif 000006
【００５５】
表５より明らかなように、試料を添加した場合には、有意なアロマターゼ活性促進作用が認められた。
【００５６】
＜表皮メラニン細胞チロシナーゼ活性阻害作用の評価＞
上記抽出方法１で得られたエタノール抽出物を試料として、以下のように表皮メラニン細胞チロシナーゼ活性阻害作用を評価した。
【００５７】
正常ヒト表皮メラニン細胞を、１ウェルあたり３．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、倉敷紡績（株）製Ｍｅｄｉｕｍ １５４Ｓを用いた。２４時間培養後、Ｍｅｄｉｕｍ  １５４Ｓにより表６に示す各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、さらに４８時間培養した。次に１質量％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘを含有するリン酸緩衝液７５μｌに交換して細胞を完全に溶解させ、内５０μｌを粗酵素液として使用した。粗酵素液に、基質となる０．０５質量％Ｌ−ドーパ含有リン酸緩衝液５０μｌを加え、３７℃で２時間静置した。マイクロプレートリーダーにより、基質添加直後と反応終了時の４０５ｎｍの吸光度を測定し、各測定値を次式に導入して、生成されたドーパメラニン量を求めた。
【００５８】
ドーパメラニン生成量＝
｛（反応後４０５ｎｍ値−反応前４０５ｎｍ値）−２．１６６｝／５．２３８
また、ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔによりタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのメラニン生成量を求めた。得られたメラニン産生量に基づいて試料無添加の場合に対する阻害率を算定し、結果を表６に示す。
【００５９】
【表６】
2008074730.tif 000007
【００６０】
表６より明らかなように、試料を添加した培地では、メラニン産生の低下が認められ、優れたチロシナーゼ活性阻害作用が認められた。
【００６１】
＜ヒアルロニダーゼ阻害作用の評価）＞
上記抽出方法１で得られたエタノール抽出物を試料として、以下のようにヒアルロニダーゼ阻害作用を評価した。
【００６２】
市販のヒアルロン酸カリウム塩（ヒト臍の緒由来）を０．９ｍｇ／ｍｌになるように、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、基質溶液とした。市販のヒアルロニダーゼ（ウシ精巣由来）を５，３００ ｕｎｉｔ／ｍｌとなるように、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、酵素溶液とした。酵素溶液は用時調製とした。
【００６３】
緩衝液で表７に示す各試料濃度に調製した溶液０．１ｍｌ、および酵素溶液０．０３ｍｌを試験管に入れ、３７℃で２０分間反応させた。次に、活性化剤を０．０６ｍｌ加え、３７℃で２０分間反応させた。さらに、基質溶液を０．１５ｍｌ加え、３７℃で１時間反応させた。０．４ＮのＮａＯＨ水溶液０．０６ｍｌを加えて反応を停止させた後、すぐに氷冷し、ホウ酸緩衝液（ｐＨ９．１）を０．０６ｍｌ添加し、３分間煮沸した後、さらに氷冷した。ｐ−ＤＡＢＡ（ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド）溶液を２．０ｍｌ添加し、３７℃で２０分間反応させた後、各試験管から９６ウェルマイクロプレートに移しかえ、マイクロプレートリーダーを用いて５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。コントロールには、サンプル無添加の緩衝溶液を用いた。ヒアルロニダーゼの活性が阻害されると、分解産物であるＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）が減少し、ｐ−ＤＡＢＡによる吸光度が低くなる。ヒアルロニダーゼ阻害作用は、次式に定義される。
【００６４】
阻害率（％）
＝（コントロール吸光度−サンプル吸光度）／コントロール吸光度×１００
結果を表７に示す。
【００６５】
【表７】
2008074730.tif 000008
【００６６】
表７より明らかなように、試料を添加した場合には、優れたヒアルロニダーゼ活性の阻害作用が認められた。
【００６７】
＜ＤＰＰＨラジカル消去による抗酸化作用の評価＞
上記抽出方法１もしくは抽出方法２で得られた抽出物を試料として、以下のようにＤＰＰＨラジカル消去による抗酸化作用を評価した。
【００６８】
５０質量％エタノールを用いて、表８に示す各試料濃度となるように試料溶液を調整し、９６ウェルマイクロプレートに１００μｌずつ添加した。そこへ、０．２ｍＭの１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）エタノール溶液を１００μｌずつ添加し、よく混合後、室温、暗所にて２４時間静置した。最後に、ＤＰＰＨラジカルに由来する５１６ｎｍの吸光度を測定した。
【００６９】
試料を添加しなかった場合の吸光度を（Ａ）、試料を添加した場合の吸光度を（Ｂ）としたとき、ＤＰＰＨラジカルの消去率を次式より求めた。
【００７０】
ラジカル消去率＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００
結果を表８に示す。
【００７１】
【表８】
2008074730.tif 000009
【００７２】
表８より明らかなように、試料を添加した場合には、優れたＤＰＰＨラジカル消去効果が認められた。
【００７３】
＜ＳＯＤ様活性評価（スーパーオキサイドアニオン消去能の評価）＞
上記抽出方法２で得られた熱水抽出物を試料として、以下のようにＳＯＤ様活性を評価した。
【００７４】
０．２５ｍＭ  ＷＳＴ−１および１ｍＭ  Ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅを含むＨＡＮＫ’Ｓ（＋）溶液７５μｌに、ＨＡＮＫ’Ｓ（＋）溶液により表９に示す各試料濃度に調製したサンプル溶液２５μｌを添加した。さらに、キサンチンオキシダーゼ２５μｌ（０．００７５ Ｕｎｉｔｓ）を添加し、３７℃、１５分間反応させた後、４５０ｎｍの吸光度を測定した。サンプル溶液に代えてＨＡＮＫ’Ｓ（＋）溶液のみを添加した場合の吸光度を（Ａ）、サンプル溶液を添加した場合の吸光度を（Ｂ）としたとき、スーパーオキサイドアニオン消去率は次式に定義される。
【００７５】
消去率（％）＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００
得られた結果を表９に示す。
【００７６】
【表９】
2008074730.tif 000010
【００７７】
表９より明らかなように、試料を添加した場合には、優れたスーパーオキサイドアニオン消去効果が認められた。
【００７８】
続いて、本発明に係るサガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の抽出物を配合した組成物として、皮膚外用剤と食品の処方例を示す。
【００７９】
［処方例１］乳液
（１）スクワラン                                      １０．０（重量％）
（２）メチルフェニルポリシロキサン                      ４．０
（３）水素添加パーム核油                                ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質                              ０．１
（５）モノステアリン酸ポリオキシエチレン
ソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）    １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン                        １．０
（７）グリセリン                                        ４．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（９）カルボキシビニルポリマー                          ０．１５
（10）精製水                                          ５３．８５
（11）アルギニン（１重量％水溶液）                    ２０．０
（12）コバンノアシ抽出物（葉）［抽出方法１］            ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、冷却を開始し、（11）と（12）を順次加え、均一に混合する。
【００８０】
［処方例２］化粧水
（１）エタノール                                      １５．０（重量％）
（２）ポリオキシエチレン（４０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油    ０．３
（３）香料                                              ０．１
（４）精製水                                          ７８．３８
（５）クエン酸                                          ０．０２
（６）クエン酸ナトリウム                                ０．１
（７）グリセリン                                        １．０
（８）ヒドロキシエチルセルロース                        ０．１
（９）コバンノアシ抽出物（葉）［抽出方法１］            ５．０
製法：（１）に（２）及び（３）を溶解する。溶解後、（４）〜（８）を順次添加した後、十分に攪拌し、（９）を加え、均一に混合する。
【００８１】
［処方例３］クリーム
（１）スクワラン                                      １０．０（重量％）
（２）ステアリン酸                                      ２．０
（３）水素添加パーム核油                                ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質                              ０．１
（５）セタノール                                        ３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン                  ２．０
（７）グリセリン                                      １０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（９）アルギニン（２０重量％水溶液）                  １５．０
（10）精製水                                          ３６．７
（11）カルボキシビニルポリマー（１重量％水溶液）      １５．０
（12）コバンノアシ抽出物（葉）［抽出方法１］            ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、（11）を加え、冷却を開始し、４０℃にて（12）を加え、均一に混合する。
【００８２】
［処方例４］美容液
（１）精製水                                          ２７．４５(重量％)
（２）グリセリン                                      １０．０
（３）ショ糖脂肪酸エステル                              １．３
（４）カルボキシビニルポリマー（１重量％水溶液）      １７．５
（５）アルギン酸ナトリウム(１重量％水溶液)            １５．０
（６）モノラウリン酸ポリグリセリル                      １．０
（７）マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル            ３．０
（８）N-ラウロイル-L-グルタミン酸
ジ（フィトステリル−２−オクチルドデシル）          ２．０
（９）硬化パーム油                                      ２．０
（10）スクワラン（オリーブ由来）                        １．０
（11）ベヘニルアルコール                                ０．７５
（12）ミツロウ                                          １．０
（13）ホホバ油                                          １．０
（14）１、３−ブチレングリコール                      １０．０
（15）Ｌ−アルギニン（１０重量％水溶液）                ２．０
（16）コバンノアシ抽出物（葉）［抽出方法１］            ５．０
製法：（１）〜（６）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（14）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、５０℃にて（15）を加える。さらに４０℃まで冷却し、（16）を加え、均一に混合する。
【００８３】
［処方例５］水性ジェル
（１）カルボキシビニルポリマー                          ０．５（重量％）
（２）精製水                                          ７８．７
（３）水酸化ナトリウム（１０重量％水溶液）              ０．５
（４）エタノール                                      １０．０
（５）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（６）香料                                              ０．１
（７）コバンノアシ抽出物（葉）［抽出方法１］          １０．０
（８）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油    ０．１
製法：（１）を（２）に加え、均一に攪拌した後、（３）を加える。均一に攪拌した後、（４）に予め溶解した（５）を加える。均一に攪拌した後、予め混合しておいた（６）〜（８）を加え、均一に攪拌混合する。
【００８４】
［処方例６］クレンジング料
（１）スクワラン                                      ７７．０（重量％）
（２）イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル    １５．０
（３）精製水                                            ３．０
（４）コバンノアシ抽出物（葉）［抽出方法１］            ５．０
製法：（１）と（２）を均一に溶解する。これに、（３）と（４）を順次加え、均一に混合する。
【００８５】
［処方例７］洗顔フォーム
（１）ステアリン酸                                    １６．０（重量％）
（２）ミリスチン酸                                    １６．０
（３）親油型モノステアリン酸グリセリン                  ２．０
（４）グリセリン                                      ２０．０
（５）水酸化ナトリウム                                  ７．５
（６）ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン                １．０
（７）精製水                                          ３１．５
（８）コバンノアシ抽出物（葉）［抽出方法１］            ６．０
製法：（１）〜（４）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（５）〜（７）の水相成分を８０℃にて加熱溶解し、油相成分と均一に混合撹拌する。冷却を開始し、４０℃にて（８）を加え、均一に混合する。
【００８６】
［処方例８］メイクアップベースクリーム
（１）スクワラン                                      １０．２(重量％)
（２）セタノール                                        ２．０
（３）グリセリントリ−２−エチルヘキサン酸エステル      ２．５
（４）親油型モノステアリン酸グリセリル                  １．０
（５）プロピレングリコール                            １１．０
（６）ショ糖脂肪酸エステル                              １．３
（７）精製水                                          ６５．４
（８）酸化チタン                                        １．０
（９）ベンガラ                                          ０．１
（10）黄酸化鉄                                          ０．４
（11）香料                                              ０．１
（12）コバンノアシ抽出物（葉）［抽出方法１］            ５．０
製法：（１）〜（４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（５）〜（７）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（８）〜（10）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（11）と（12）の成分を加え、均一に混合する。
【００８７】
［処方例９］乳液状ファンデーション
（１）メチルポリシロキサン                              ２．０(重量％)
（２）スクワラン                                        ５．０
（３）ミリスチン酸オクチルドデシル                      ５．０
（４）セタノール                                        １．０
（５）ポリオキシエチレン(２０Ｅ．Ｏ．)
ソルビタンモノステアリン酸エステル              １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン                        ０．７
（７）１、３−ブチレングリコール                        ８．０
（８）キサンタンガム                                    ０．１
（９）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（10）精製水                                          ５３．４
（11）酸化チタン                                        ９．０
（12）タルク                                            ７．４
（13）ベンガラ                                          ０．５
（14）黄酸化鉄                                          １．１
（15）黒酸化鉄                                          ０．１
（16）香料                                              ０．１
（17）コバンノアシ抽出物（葉）［抽出方法１］            ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（10）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（11）〜（15）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散する。油相成分を加え、乳化を行う。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（16）と（17）の成分を順次加え、均一に混合する。
【００８８】
［処方例１０］油中水型エモリエントクリーム
（１）流動パラフィン                                  ３０．０(重量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス                      ２．０
（３）ワセリン                                          ５．０
（４）ジグリセリンオレイン酸エステル                    ５．０
（５）塩化ナトリウム                                    １．３
（６）塩化カリウム                                      ０．１
（７）プロピレングリコール                              ３．０
（８）１、３−ブチレングリコール                        ５．０
（９）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（10）コバンノアシ抽出物（葉）［抽出方法１］            ５．０
（11）精製水                                          ４３．４
（12）香料                                              ０．１
製法：（５）と（６）を（11）の一部に溶解して５０℃とし、５０℃に加熱した（４）に撹拌しながら徐々に加える。これを混合した後、７０℃にて加熱溶解した（１）〜（３）に均一に分散する。これに（７）〜（10）を（11）の残部に７０℃にて加熱溶解したものを撹拌しながら加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（12）を加え、均一に混合する。
【００８９】
［処方例１１］パック
（１）精製水                                          ５８．９(重量％)
（２）ポリビニルアルコール                            １２．０
（３）エタノール                                      １７．０
（４）グリセリン                                        ５．０
（５）ポリエチレングリコール（平均分子量１０００）      ２．０
（６）コバンノアシ抽出物（葉）［抽出方法１］            ５．０
（７）香料                                              ０．１
製法：（２）と（３）を混合し、８０℃に加温した後、８０℃に加温した（１）に溶解する。均一に溶解した後、（４）と（５）を加え、攪拌しながら冷却を開始する。４０℃まで冷却し、（６）と（７）を加え、均一に混合する。
【００９０】
［処方例１２］入浴剤
（１）香料                                              ０．３(重量％)
（２）コバンノアシ抽出物（葉）［抽出方法１］                ５．０
（３）炭酸水素ナトリウム                              ４６．０
（４）硫酸ナトリウム                                  ４８．７
製法：（１）〜（４）を均一に混合する。
【００９１】
［処方例１３］ヘアーワックス
（１）ステアリン酸                                      ３．０(重量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス                      ２．０
（３）セチルアルコール                                  ３．０
（４）高重合メチルポリシロキサン                        ２．０
（５）メチルポリシロキサン                              ５．０
（６）ポリ（オキシエチレン・オキシプロピレン）
メチルポリシロキサン共重合体              １．０
（７）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（８）１、３−ブチレングリコール                        ７．５
（９）アルギニン                                        ０．７
（10）精製水                                          ７０．６
（11）コバンノアシ抽出物（葉）［抽出方法２］            ５．０
（12）香料                                              ０．１
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解後する。一方、（７）〜（10）の水相成分を７５℃にて加熱溶解し、前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（11）と（12）の成分を加え、均一に混合する。
【００９２】
［処方例１４］ヘアートニック
（１）エタノール                                      ４６．０(重量％)
（２）精製水                                          ４８．９
（３）コバンノアシ抽出物（葉）［抽出方法１］                ５．０
（４）香料                                              ０．１
製法：（１）〜（４）の成分を混合、均一化する。
【００９３】
［処方例１５］飲料
（１）コバンノアシ抽出物（葉）［抽出方法１］            ８．０(重量％)
（２）エリスリトール                                    １．０
（３）クエン酸                                          ０．１
（４）ステビア                                          ０．０１
（５）精製水                                          ９０．８９
製法：（１）〜（５）を均一に混合する。
【００９４】
［処方例１６］錠剤
（１）コバンノアシ抽出物（葉）［抽出方法２］            ０．３０（重量部）
（２）還元麦芽糖水飴                                    ０．５３
（３）トウモロコシデンプン                              ０．１５
（４）グリセリン脂肪酸エステル                          ０．０２
製法：（１）〜（３）を篩過して混合し、さらに（４）を添加して混合した。打錠機にて打錠を行い、全量３００ｍｇの錠剤を得た。
【００９５】
次に、サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の抽出物を配合した処方を用いて使用試験を行い、乾燥による肌荒れについて改善効果を評価した。その際、処方例１に示した乳液の処方に表１０に記載する試料をそれぞれ配合し、実施例１〜３として使用試験を行った。また、試料を精製水に代替し、比較例１として同時に使用試験を行った。
【００９６】
【表１０】
2008074730.tif 000011
【００９７】
各試料について、肌荒れ症状が顕著に認められる３０〜５０才代の乾燥肌の女性パネラー２０名をそれぞれ一群とし、ブラインドにて１週間使用させ、使用前後の皮膚状態の変化を観察して評価した。皮膚症状の指標として、乾燥による肌荒れについて、「改善」、「やや改善」、「変化なし」の三段階で評価し、表１１に各評価を得たパネラー数にて示した。
【００９８】
【表１１】
2008074730.tif 000012
【００９９】
表１１より、試料を配合した実施例使用群においては、明確な肌荒れの改善が認められた。このことから、サガリバナ属植物もしくはホウガンノキ属植物の抽出物は優れた保湿効果を有することが明らかとなった。