(57)【要約】【課題】蛋白質類等の親水性物質を精度良く分離することができる電気泳動法に用いられるキャピラリー、及び、このキャピラリーを用いた電気泳動法を提供する。更に、この電気泳動法を用いたヘモグロビン類、特に糖尿病の診断指標となる安定型ヘモグロビンＡ１ｃの測定を、短時間で高精度に行うことができるヘモグロビン類の測定方法を提供する。【解決手段】電気泳動法に用いられるキャピラリーであって、内面上に非イオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層が固定化されており、前記非イオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層上にイオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層が固定化されている電気泳動用キャピラリー。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
電気泳動法に用いられるキャピラリーであって、内面上に非イオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層が固定化されており、前記非イオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層上にイオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層が固定化されていることを特徴とする電気泳動用キャピラリー。
【請求項２】
請求項１記載の電気泳動用キャピラリーを用いることを特徴とする電気泳動法。
【請求項３】
請求項２記載の電気泳動法を用いることを特徴とするヘモグロビン類の測定方法。
【請求項４】
アニオン性基を有する水溶性ポリマーを含有する緩衝液を用いることを特徴とする請求項３記載のヘモグロビン類の測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、蛋白質類等の親水性物質を精度良く分離することができる電気泳動法に用いられるキャピラリー、及び、このキャピラリーを用いた電気泳動法に関する。更に、この電気泳動法を用いたヘモグロビン類、特に糖尿病の診断指標となる安定型ヘモグロビンＡ１ｃの測定を、短時間で高精度に行うことができるヘモグロビン類の測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
キャピラリー電気泳動法は、電気泳動の原理に基づいて分析を行なう測定方法であり、従来のゲル電気泳動法に比べて短時間で高精度の測定が可能な分析手法として汎用されている。キャピラリー電気泳動法に用いられるキャピラリーとしては、ガラス製や樹脂製のものが知られているが、フューズドシリカ製のものが最もよく使用されている。
【０００３】
このようなキャピラリー電気泳動法は、イオン分析等の低分子物質の分析においては、優れた性能を示すことが知られている。一方、キャピラリーを構成する素材が有する疎水性やイオン性に起因して、親水性物質、特に蛋白質類のような高分子量の親水性物質の測定時には、非特異吸着現象が生じるため、これらの物質の測定が非常に困難であるという欠点を有している。また、キャピラリー内面のイオン性に起因して、電気浸透流が発生するため、強度の電気浸透流が発生する場合には、分離性能の低下が起こることも懸念される。
【０００４】
これらの欠点を解消するために、キャピラリー内面に様々なコーティングを施すことによって、非特異吸着現象や、電気浸透流の発生の抑制を試みる技術が開示されている。
例えば、特許文献１には、イオン性を有するキャピラリー内面に、該キャピラリー内面と逆の荷電を有するポリマーを静電気的結合によってコーティングする方法が開示されている。特許文献２には、特許文献１と同様に、逆の荷電を有するポリマー同士を交互に繰り返しコーティングする方法が開示されている。特許文献３には、キャピラリー内面をポリヒドロキシポリマーで被覆する技術が開示されている。
【０００５】
特許文献１〜３に開示された技術を含む従来公知のコーティング技術は、キャピラリー内面を親水性ポリマーでコーティングする技術である。しかしながら、このように内面をコーティングしたキャピラリーは、繰り返し使用しているとコーティング層が剥離することによって、疎水性が大きいコーティング下層、又は、コーティング層と逆の荷電を有するコーティング下層、すなわちキャピラリー内面の素材が露出してしまう。そのため、電気泳動による測定時に、測定試料中の測定成分が露出した部分への非特異吸着現象が発生したり、電気浸透流が大きく変化したりして、分離性能が悪化すること等の問題があった。
【０００６】
一方、電気泳動法の測定対象となる高分子量の親水性物質の一例としては、例えば、ヘモグロビン（Ｈｂ）類が挙げられる。ヘモグロビン類のなかでも、糖化ヘモグロビン類の一種であるヘモグロビンＡ１ｃ（以下、ＨｂＡ１ｃという）は、過去１〜２カ月間の血液中の平均的な糖濃度を反映しているため、糖尿病のスクリーニング検査や糖尿病患者の血糖管理状態を把握するための検査項目として広く利用されている。
【０００７】
従来、ＨｂＡ１ｃの測定方法としては、ＨＰＬＣ法、免疫法、電気泳動法等が用いられている。このうち、臨床検査分野で多く用いられているＨＰＬＣ法では、１試料当たり１〜２分での測定が可能であり、また、同時再現性試験のＣＶ値が１．０％程度の測定精度が実現されている。糖尿病患者の血糖管理状態を把握するための測定方法としては、このレベルの性能が必要とされている。
【０００８】
これに対して、電気泳動法は、装置構成が簡便なため、マイクロチップ電気泳動のような安価で小型なシステムを作製することが可能な技術であり、電気泳動法におけるＨｂＡ１ｃの高精度測定技術の臨床検査への適用は、コスト面において非常に有益な効果が期待できる。
電気泳動法によるＨｂ類の測定は、通常とは異なるアミノ酸配列を有する異常Ｈｂ類の分離方法として古くから用いられているが、ＨｂＡ１ｃの分離は非常に困難であり、ゲル電気泳動の手法では３０分以上の時間が必要であった。このように電気泳動法は、臨床検査分野に応用した場合、測定時間及び測定精度の点で問題があるため、現在では糖尿病診断への応用はほとんど行われていなかった。
【０００９】
これに対して、１９９０年頃に登場したキャピラリー電気泳動法は、一般的に高分離・高精度測定が可能とされており、例えば、特許文献４には、キャピラリー電気泳動法によってＨｂＡ１ｃを分離する方法が開示されている。
しかしながら、特許文献４に開示された方法を用いた場合、測定時間が長いという問題点は解消されず、加えて、使用する緩衝液のｐＨが９〜１２と高く、Ｈｂが変性してしまう可能性があることから、この方法を臨床検査に適用することは困難であった。
【００１０】
また、特許文献５には、キャピラリー電気泳動法において、キャピラリーにカチオン性ポリマーを通液することによって、キャピラリー内面にカチオン性ポリマーを動的にコーティングし、硫酸化多糖類を含む緩衝液を用いる方法が開示されている。この方法によれば、１０分間程度で測定することができ、ゲル電気泳動法と比較して短時間で測定することが可能となる。
【００１１】
しかしながら、このような動的コーティング法は、測定終了後、次検体の測定時に再びコーティングを行う必要がある。そのため、毎測定時に同じコーティング状態とするためには、洗浄操作により一旦コーティング層を剥し、再びコーティング操作をする必要がある。すなわち、連続測定する際には、測定の間に洗浄及びコーティング操作を挿入する必要があり、測定時間の延長を招いていた。また、これらの洗浄及びコーティング操作は、測定誤差発生の要因となりうる。加えて、コーティング用の試薬を測定時に具備する必要があるため、コストの観点からも不利であった。また、連続測定を行わない場合であっても、１０分程度の測定時間はＨＰＬＣ法と比較して非常に長く、臨床検査に適用するには不充分であった。
【００１２】
更に、一般に、糖尿病診断を行う場合は、ＨｂＡ１ｃのなかでも糖尿病の指標となる安定型ＨｂＡ１ｃを分離して、不安定型ＨｂＡ１ｃ、カルバミル化Ｈｂ、アセチル化Ｈｂ等の修飾Ｈｂ類の影響を排除しなければならない。しかしながら、特許文献４及び５に開示された方法によって得られるエレクトロフェログラムでは、分離性能及び測定精度が不充分であり、これらの方法の技術範囲では安定型ＨｂＡ１ｃを分離することは困難であった。
【特許文献１】特表平５−５０３９８９号公報
【特許文献２】特開平１０−２２１３０５号公報
【特許文献３】特表２０００−５１３４４９号公報
【特許文献４】特表平９−５１０７９２号公報
【特許文献５】特開平９−１０５７３９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は、上記現状に鑑み、蛋白質類等の親水性物質を精度良く分離することができる電気泳動法に用いられるキャピラリー、及び、このキャピラリーを用いた電気泳動法に関する。更に、この電気泳動法を用いたヘモグロビン類、特に糖尿病の診断指標となる安定型ヘモグロビンＡ１ｃの測定を、短時間で高精度に行うことができるヘモグロビン類の測定方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、電気泳動法に用いられるキャピラリーであって、内面上に非イオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層が固定化されており、前記非イオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層上にイオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層が固定化されている電気泳動用キャピラリーである。
【００１５】
本発明者らは、鋭意検討した結果、内面に非イオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層を固定化したうえで、前記非イオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層の内面にイオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層を固定化したキャピラリーを用いることによって、電気泳動時における非特異吸着の発生、電気浸透流による分離性能の低下等を効果的に抑制することが可能となることを見出し、本発明を完成させるに至った。
以下に本発明を詳述する。
【００１６】
図１に、本発明の電気泳動用キャピラリーを用いたキャピラリー電気泳動装置の一例を示す。図１に示すように、キャピラリー電気泳動装置１１は、陽極槽１２、陰極槽１３、キャピラリー１４、高圧電源１５、検出器１６及び一対の電極１７、１８からなり、キャピラリー１４の両端は陽極槽１２及び陰極槽３内の緩衝液に浸され、管状のキャピラリー１４の内部は緩衝液で満たされている。また、電極１７及び１８は高圧電源１５と電気的に接続されている。
電気泳動による測定を行う際には、キャピラリー１４の一方より測定試料を注入し、高圧電源１５から所定の電圧を印加することにより、キャピラリー１４内を移動する目的成分を検出器１６を用いて測定する。
【００１７】
本明細書において電気泳動用キャピラリーとは、キャピラリー電気泳動装置におけるキャピラリーを意味するだけでなく、例えば、マイクロチップ電気泳動装置においてマイクロチップ上に形成された流路等、他の電気泳動装置において泳動路としての役割を担う部分を意味する。
【００１８】
本発明の電気泳動用キャピラリーの内面とは、上記キャピラリーの内表面であって、少なくとも、電気泳動が行われる際に、測定試料が注入された部位から、測定試料が移動・分離し、検出器により検出されるまでの部位を意味する。
【００１９】
本発明の電気泳動用キャピラリーを調製するために用いられるキャピラリーの素材としては特に限定されず、例えば、ガラス製、金属製、樹脂製等の従来公知の素材が挙げられる。特に、ガラス製又は樹脂製であることが好ましい。
また、本発明の電気泳動用キャピラリーを調製するために用いられるキャピラリーは、内面に各種の従来公知のコーティング層が形成されたものであってもよい。
更に、本発明の電気泳動用キャピラリーは、内部に充填剤粒子等の固形物質が充填されていてもよいが、内部に充填剤粒子等の固形物質が充填されていないキャピラリーであることが好ましい。
【００２０】
本発明の電気泳動用キャピラリーの長さとしては特に限定されないが、好ましい下限は１０ｍｍ、好ましい上限は８００ｍｍである。１０ｍｍ未満であると、測定試料を充分に分離することができないため、正確な測定をすることができないことがある。８００ｍｍを超えると、測定時間の延長や得られるエレクトロフェログラムにおいてピーク形状の変形が生じることによって、正確な測定をすることができないことがある。
【００２１】
本発明の電気泳動用キャピラリーの幅又は直径としては特に限定されないが、好ましい下限は１μｍ、好ましい上限は２００μｍである。１μｍ未満であると、検出器により検出するための光路長が小さく、測定精度が低下することがある。２００μｍを超えると、泳動路内で試料が拡散することにより得られるエレクトロフェログラムにおいてピークがブロードになり、測定精度が低下することがある。
【００２２】
本発明の電気泳動用キャピラリーは、内面上に非イオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層が固定化されている。
本明細書において、非イオン性の親水性ポリマーとイオン性の親水性ポリマーとを総称して、単に親水性ポリマーともいう。
【００２３】
上記非イオン性の親水性ポリマーとしては特に限定されないが、例えば、イオン交換基を有しない親水性ポリマーであることが好ましい。具体的には例えば、構造内にヒドロキシル基、グリコール基、エポキシ基等の非イオン性の親水性官能基有し、かつ、その他にイオン交換基を有しないポリマーであることが好ましい。
【００２４】
上記非イオン性の親水性ポリマーとしては特に限定されず、例えば、非イオン性の多糖類、非イオン性の有機合成高分子等が挙げられる。
上記非イオン性の多糖類としては特に限定されず、例えば、セルロース、デキストラン、アガロース、マンナン、デンプン等の多糖類、これらの誘導体類、及び、混合物が挙げられる。
【００２５】
上記非イオン性の有機合成高分子としては特に限定されず、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン等の水溶性ポリマー；２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、ポリプロピレングリコール（メタ）アクリレート、グリセロール（メタ）アクリレート、グリシジル（メタ）アクリレート等のアクリル系モノマー、並びに、これらの塩類、及び、誘導体類等を重合して得られる重合体及び共重合体が挙げられる。
【００２６】
また、上記非イオン性の親水性ポリマーとしては、上記イオン交換基を有しない非イオン性の親水性ポリマーの他に、実質的にイオン交換能を有しない素材からなるポリマーを用いることもできる。
上記実質的にイオン交換能を有しない素材とは、例えば、上記イオン交換基を有しているが極僅かな量であるため、コーティング時において実質的にイオン交換基を有しない素材として扱うことができる素材；等電点付近のｐＨで取り扱う場合における等電点を有するイオン性の素材；非解離状態となるｐＨで取り扱う場合における弱カチオン性又は弱アニオン性官能基を有する素材等を意味する。
上記実質的にイオン交換能を有しない素材からなるポリマーを用いてコーティングに供する場合には、それぞれの素材に応じて、等電点付近のｐＨで取り扱う場合、非解離状態となるｐＨで取り扱う場合等、それぞれの素材が実質的にイオン交換能を有しない状態で実施する必要がある。
【００２７】
上記等電点付近のｐＨで取り扱う場合における等電点を有するイオン性の素材としては特に限定されず、例えば、等電点付近のｐＨにおいて取り扱う場合における蛋白質、ポリアミノ酸等が挙げられる。具体的には例えば、等電点付近のｐＨにおいて取り扱う場合における各種のアルブミン類、ラクトフェリン、スキムミルク、レクチン、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン等、通常ブロッキング剤として好適に使用される物質；ポリリジン、ポリグルタミン、ポリグリシン等のポリアミノ酸等が挙げられる。
【００２８】
上記非解離状態となるｐＨで取り扱う場合における弱カチオン性官能基を有する素材としては特に限定されず、例えば、ｐＫａ以下のｐＨにおいて非解離状態として取り扱う場合におけるカルボキシル基等の弱カチオン交換基を有する素材、又は、ｐＫａ以上のｐＨにおいて非解離状態として取り扱う場合における２級若しくは３級アミノ基等の弱アニオン交換基を有する素材等が挙げられる。具体的には例えば、ｐＫａ以下のｐＨにおいて非解離状態として取り扱う場合におけるポリ（メタ）アクリル酸；ｐＫａ以上のｐＨにおいて非解離状態として取り扱う場合におけるポリ（２−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレート）；これらの誘導体類、塩類、共重合体類等が挙げられる。
なお、本明細書において、（メタ）アクリル酸とは、アクリル酸又はメタクリル酸を意味し、（メタ）アクリレートとは、アクリレート又はメタクリレートを意味する。
【００２９】
上記非イオン性の親水性ポリマーは、上記素材からなる混合物であってもよく、上記素材からなる共重合体であってもよく、上記素材と上記素材以外の成分とからなる共重合体であってもよい。
【００３０】
本発明の電気泳動用キャピラリーは、上記非イオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層上に、イオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層が固定化されている。
上記イオン性の親水性ポリマーとしては特に限定されず、例えば、イオン性を有する官能基、すなわちアニオン性基又はカチオン性基を有する親水性ポリマーが挙げられる。
上記アニオン性基としては特に限定されず、例えば、カルボキシル基、リン酸基、スルホン酸基等が挙げられる。上記カチオン性基としては特に限定されず、例えば、アミノ基等が挙げられる。
【００３１】
上記アニオン性基又はカチオン性基を有する親水性ポリマーとしては特に限定されず、例えば、アニオン性基又はカチオン性基を有する多糖類、アニオン性基又はカチオン性基を有する有機合成高分子等が挙げられる。
【００３２】
上記アニオン性基を有する多糖類としては特に限定されず、例えば、コンドロイチン硫酸、デキストラン硫酸、ヘパリン、ヘパラン、フコイダン等のスルホン酸基を有する多糖類；アルギン酸、ペクチン酸、ヒアルロン酸等のカルボキシル基を有する多糖類；セルロース、デキストラン、アガロース、マンナン、デンプン等の中性多糖類へのアニオン性基導入化物；及びこれらの多糖類の塩類、誘導体類等が挙げられる。
【００３３】
上記アニオン性基を有する有機合成高分子としては特に限定されず、例えば、（メタ）アクリル酸、２−(メタ)アクリロイロキシエチルコハク酸等のカルボキシル基を有する単量体を重合して得られる重合体；（（メタ）アクリロイルオキシエチル）アシッドホスフェート、（２−（メタ）アクリロイルオキシエチル）アシッドホスフェート、（３−（メタ）アクリロイルオキシプロピル）アシッドホスフェート等のリン酸基を有する単量体を重合して得られる重合体；２−（メタ）アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸、（メタ）アクリルアミドプロパンスルホン酸、スルホプロピル（メタ）アクリレート等のスルホン酸基を有する単量体を重合して得られる重合体；これらのアニオン性基を有する単量体構造を含む共重合体；中性有機合成高分子へのアニオン性基導入化物等が挙げられる。
【００３４】
上記カチオン性基を有する多糖類としては特に限定されず、例えば、キチン、キトサン等のキトサン誘導体類；アミノセルロース、Ｎ−メチルアミノセルロース等のＮ−置換セルロースの誘導体類；デキストラン、アガロース、マンナン、デンプン等の中性多糖類へのアミノ基導入化物；及びこれらの多糖類の塩類、誘導体類等が挙げられる。
【００３５】
上記カチオン性基を有する有機合成高分子としては特に限定されず、例えば、ポリエチレンイミン、ポリブレン等のアミノ基含有高分子類；ポリ（２−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレート）等のアミノ基を有する（メタ）アクリレートの重合体；及びこれらの構造を含む共重合体；中性有機合成高分子へのカチオン性基導入化物等が挙げられる。
【００３６】
上記親水性ポリマーの重量平均分子量の好ましい下限は５００である。５００未満であると、電気泳動用キャピラリーの内面を充分に被覆することが困難で、分離性能が不充分になることがある。
【００３７】
本発明の電気泳動用キャピラリーを製造する方法としては特に限定されず、例えば、従来公知のキャピラリーの内面に、上記親水性ポリマーをコーティングする方法が挙げられる。具体的には例えば、まず、キャピラリー内面上に上記非イオン性の親水性ポリマーをコーティングすることによって上記非イオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層を固定化した後、更に、該非イオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層上に上記イオン性の親水性ポリマーをコーティングすることによって上記イオン性の親水性ポリマーからなるコーティング層を固定化する方法が挙げられる。
【００３８】
上記親水性ポリマーを上記従来公知のキャピラリーの内面にコーティングする方法、すなわち上記親水性ポリマーのコーティング層を固定化する方法としては特に限定されず、従来公知の方法を用いることができ、例えば、上記親水性ポリマーを泳動路の内面に接触させて疎水性的又は静電気的な相互作用等を利用して物理的に吸着・固定化させる固定化コーティング法；泳動路の内面及び親水性ポリマーをそれぞれの物質が有する官能基や他の物質等を介して共有結合により結合・固定化させる固定化コーティング法等が挙げられる。上記固定化コーティング法を用いる場合、更に、加熱工程、乾燥工程等を経ることにより、コーティング層が剥離することがないため、繰り返し測定が可能となる。上記固定化コーティング法としては、具体的には例えば、上記泳動路内部に上記親水性ポリマーを含有する溶液を通液し、該泳動路に空気を注入することによって該溶液を追い出した後、乾燥することを繰り返す方法等が挙げられる。
【００３９】
上記固定化コーティング法を用いることによって、いったんコーティングすれば剥離することがなく、測定毎に再びコーティングを行う必要がない。そのため、連続測定等の際には、測定時間の短縮を図ることができる。また、上記非イオン性の親水性ポリマーをコーティングする方法と、上記イオン性の親水性ポリマーをコーティングする方法とを、同一の方法としてもよいし、異なる方法としてもよい。
【００４０】
上記泳動路に上記親水性ポリマーをコーティングする際、上記親水性ポリマーは、その種類やコーティングの方法にもよるが、上記親水性ポリマーを含む溶液としてコーティングに供されることが好ましい。
上記親水性ポリマー溶液の濃度としては、好ましい下限が０．０１％、好ましい上限が２０％である。０．０１％未満であると、固定化が不充分となることがある。２０％を超えると、上記親水性ポリマーからなる層を均一に形成することができず、測定試料の測定途中に剥離し、再現性低下の原因となることがある。
【００４１】
上記非イオン性の親水性ポリマーと、上記イオン性の親水性ポリマーとの種類の組み合わせ、又は、上記非イオン性の親水性ポリマーと、上記イオン性の親水性ポリマーとをコーティングする方法の組み合わせとしては特に限定されず、測定対象により適宜選択することができる。
【００４２】
本発明の電気泳動用キャピラリーを用いたキャピラリー電気泳動装置や、マイクロチップ電気泳動装置等により、電気泳動法による測定を行うことができる。このような本発明の電気泳動用キャピラリーを用いることを特徴とする電気泳動法もまた、本発明の一つである。
【００４３】
本発明の電気泳動法は、本発明の電気泳動用キャピラリーの内部に電解質を満たした後、該キャピラリーの内部に測定試料を導入して、該キャピラリーの両端に電圧を負荷することによって行うことができる。
【００４４】
上記電解質は、電気泳動時に本発明の電気泳動用キャピラリー及び流路の内部に満たされる電解質、電気泳動時に本発明の電気泳動用キャピラリーの両端に設置される陽極槽及び陰極槽に満たされる電解質、本発明の電気泳動用キャピラリーの内部を洗浄する電解質、測定試料を溶解希釈する溶血希釈液等に用いられる。
【００４５】
上記電解質としては特に限定されないが、緩衝液が好ましい。
上記緩衝液としては、緩衝能を有する従来公知の緩衝能成分を含有する溶液であれば特に限定されず、例えば、クエン酸、コハク酸、酒石酸、リンゴ酸等の有機酸、及び、その塩類；グリシン、タウリン、アルギニン等のアミノ酸類；塩酸、硝酸、硫酸、リン酸、ホウ酸、酢酸等の無機酸、及び、その塩類；又は、緩衝能を有するこれらの誘導体類等の緩衝能成分を含有する溶液が挙げられる。
これらの緩衝能成分は、単独で用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【００４６】
上記緩衝液は、他に一般に添加される物質、例えば、界面活性剤、カオトロピック化合物、各種ポリマー、親水性の低分子化合物等を適宜添加してもよい。
【００４７】
本発明の電気泳動法を用いることによって、親水性物質の測定を好適に行うことができる。
上記親水性物質としては特に限定されないが、例えば、蛋白質、ペプチド等の分子量が大きい生体試料等を好適に測定することができる。本発明の電気泳動法を用いることによって、生体試料等の測定試料のキャピラリー内面への非特異吸着の発生を抑制することができる。
本発明の電気泳動法では、使用する本発明の電気泳動用キャピラリーの内面をコーティングする上記非イオン性の親水性ポリマー及び上記イオン性の親水性ポリマーの種類を、測定対象に応じて適宜選択することによって、最適なエレクトロフェログラムを得ることができる。
【００４８】
本発明の電気泳動法を用いることによって、糖尿病診断の一項目であるヘモグロビン類、なかでも安定型ＨｂＡ１ｃを測定することができる。
このような本発明の電気泳動法を用いるヘモグロビン類の測定方法もまた、本発明の一つである。
【００４９】
本発明のヘモグロビン類の測定方法では、適宜選択された上記非イオン性の親水性ポリマーとイオン性の親水性ポリマーをコーティングしたキャピラリーを用い、さらに上記緩衝液を適宜選択することにより実施することができる。
本発明のヘモグロビン類の測定方法に用いられる上記緩衝液としては、アニオン性基を有する水溶性ポリマーを含有する緩衝液を用いることが好ましい。
更に、本発明のヘモグロビン類の測定方法に用いられる上記イオン性の親水性ポリマーとしては、上記カチオン性の親水性ポリマーが好ましい。
【００５０】
上記アニオン性基としては特に限定されず、例えば、カルボキシル基、リン酸基、スルホン酸基等の従来公知のアニオン性を有する官能基である。なかでも、スルホン酸基を有することが好ましい。
上記アニオン性基を有する水溶性ポリマーは、分子中に、上記アニオン性基を複数有していてもよく、異なる種類の上記アニオン性基を有していてもよい。上記アニオン性基を有する水溶性ポリマーは、使用時に上記緩衝液に完全に溶解した状態であればよいが、水に対する溶解度の好ましい下限が１ｇ／Ｌである。１ｇ／Ｌ未満であると、アニオン性基を有する水溶性ポリマー低濃度でしか用いることができないため効果が現れにくく、測定精度が不充分となることがある。より好ましい下限が５ｇ／Ｌである。
【００５１】
上記アニオン性基を有する水溶性ポリマーとしては特に限定されず、具体的には例えば、アニオン性基を有する多糖類、及び、アニオン性基を有する水溶性の有機合成ポリマーが好ましい。
【００５２】
上記アニオン性基を有する多糖類としては特に限定されず、例えば、コンドロイチン硫酸、デキストラン硫酸、ヘパリン、ヘパラン、フコイダン等のスルホン酸基含有多糖類；アルギン酸、ペクチン酸等のカルボキシル基含有多糖類；セルロース、デキストラン、アガロース、マンナン、デンプン等の中性多糖類へのアニオン性基導入化物；及びこれらの多糖類の塩類、誘導体類等が挙げられる。
【００５３】
上記アニオン性基を有する有機合成ポリマーとしては、例えば、アニオン性の官能基を含有する水溶性の公知の有機合成ポリマーが挙げられるが、特にアクリル系ポリマー；すなわち、（メタ）アクリル酸及びその誘導体類及びエステル類等を主成分とするポリマー等が好ましい。
具体的には例えば、（メタ）アクリル酸、２−（メタ）アクリロイロキシエチルコハク酸等のカルボキシル基を有するモノマーを重合して得られるアクリル系ポリマー、（（メタ）アクリロイルオキシエチル）アシッドホスフェート、（２−（メタ）アクリロイルオキシエチル）アシッドホスフェート、（３−（メタ）アクリロイルオキシプロピル）アシッドホスフェート等のリン酸基を有するモノマーを重合して得られるアクリル系ポリマー、２−（メタ）アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸、（メタ）アクリルアミドプロパンスルホン酸、スルホプロピル（メタ）アクリレート、（メタ）アクリロイルオキシナフタレンスルホン酸等のスルホン酸基を有するモノマーを重合して得られるアクリル系ポリマー等が挙げられる。
【００５４】
上記アクリル系ポリマーは、アニオン性基を有する（メタ）アクリルモノマーと、アニオン性基を有しない（メタ）アクリルモノマーとの共重合体であってもよい。
上記アニオン性基を有しない（メタ）アクリルモノマーとしては、上記アニオン性基を有する（メタ）アクリルモノマーと共重合が可能な（メタ）アクリルモノマーであれば特に限定されないが、例えば、非イオン性の親水性である（メタ）アクリル酸エステル類であることが好ましい。具体的には、例えば、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート、グリセロール（メタ）アクリレート；グリシジル（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、ポリプロピレングリコール（メタ）アクリレート等が挙げられる。
【００５５】
上記緩衝液の上記アニオン性基を有する水溶性ポリマーの含有量の好ましい下限は０．０１重量％、好ましい上限は１０重量％である。０．０１重量％未満であると、水溶性ポリマーを添加することによる効果が発現しにくく、ヘモグロビン類の測定において、分離等が不充分となることがある。１０重量％を超えると、測定時間の延長や分離不良を引き起こすことがある。
【００５６】
本発明のヘモグロビン類の測定方法において、測定対象となるヘモグロビン類としては特に限定されず、例えば、従来公知のヘモグロビン類が挙げられる。具体的には例えば、ＨｂＡ１ａ、ＨｂＡ１ｂ、ＨｂＦ、不安定型ＨｂＡ１ｃ、安定型ＨｂＡ１ｃ、ＨｂＡ０、ＨｂＡ２；アセチル化Ｈｂ、カルバミル化Ｈｂ等の修飾ヘモグロビン；ＨｂＳ、ＨｂＣ等の異常ヘモグロビン等が挙げられる。なかでも、安定型ＨｂＡ１ｃを好適に測定することが可能である。
【発明の効果】
【００５７】
本発明によれば、測定試料中の測定成分の非特異吸着等が抑制されることによって、試料中の親水性物質を短時間で高精度に測定することができる。具体的には、簡易かつ低コストである電気泳動法によって、特に安定型ＨｂＡ１ｃの測定において、１試料当たり数分という短時間に、同時再現性を示すＣＶ値が１．０％程度という高精度で測定することができる。そのため、電気泳動法によって糖尿病患者のＨｂＡ１ｃの数値の管理を好適に行うことが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５８】
以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。
【００５９】
（実施例１）
（１）キャピラリー内面のコーティング
フューズドシリカ製キャピラリー（ＧＬサイエンス社製、内径７５μｍ×全長５０ｃｍ）をキャピラリー電気泳動装置（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ社製、ＰＡＣ／Ｅ  ＭＤＱ）にセットした。０．２ＮのＮａＯＨ、イオン交換水、０．５ＮのＨＣｌをこの順で通液してキャピラリー内を洗浄した後、１．０重量％のポリビニルアルコール（日本合成化学社製、ゴーセノールＧＨ−２０、非イオン性の親水性ポリマー）水溶液を２０分間通液した。その後、空気をキャピラリー内に注入して上述のポリビニルアルコール水溶液を追い出した後、４０℃の乾燥機内で１２時間乾燥させた。その後、再び上述のポリビニルアルコール水溶液の注入、空気の注入及び乾燥を５回繰り返すことによって、キャピラリー内面に非イオン性の親水性ポリマーをコーティングした。
【００６０】
次いで、上述の１．０重量％のポリビニルアルコールを用いた代わりに、５．０重量％のポリブレン（和光純薬社製、イオン性の親水性ポリマー）水溶液を用いた以外は、上述の方法と同様の方法により、通液、空気の注入及び乾燥を５回繰り返し、キャピラリー内面に更にイオン性ポリマーをコーティングした。
【００６１】
（２）測定試料の調製
リゾチーム、リボヌクレアーゼＡ、α−キモトリプシノーゲン（いずれも和光純薬社製）を２５ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）に溶解して測定試料を調製した。
【００６２】
（３）電気泳動による測定
上述のキャピラリーを用いて、上述の測定試料である蛋白質類の測定を行なった。電気泳動用緩衝液として２５ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）を用い、キャピラリーの一方より調製した測定試料を注入して、２５ｋＶの電圧により電気泳動を行い、２８０ｎｍにおける吸光度測定により測定を行なった。
【００６３】
図２は、実施例１において得られたエレクトロフェログラムである。図２中、ピーク１はリボヌクレアーゼＡ、ピーク２はα−キモトリプシノーゲン、ピーク３はリゾチームを示す。各測定試料は良好に分離された。
【００６４】
（実施例２）
（１）キャピラリー内面のコーティング
実施例１と同様の方法により、キャピラリー内面を非イオン性の親水性ポリマー及びイオン性の親水性ポリマーでコーティングした。
【００６５】
（２）測定試料の調製
測定試料として、健常人血よりヘパリン採血した健常人全血７０μＬに、０．０１重量％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００（和光純薬社製）を含有するクエン酸緩衝液（ｐＨ６．０）２００μＬを添加して溶血希釈したものを健常人血試料として用いた。
また、健常人血よりヘパリン採血した健常人全血７０μＬに、グルコースを２５００ｍｇ／ｄＬとなるように添加し、３７℃で３時間加温して得られた、修飾Ｈｂの一種である不安定型ＨｂＡ１ｃを多量に含む測定試料を人為的に調製し、修飾Ｈｂ含有試料として用いた。
【００６６】
（３）電気泳動による測定
上述のキャピラリーを用いて、調製した健常人血試料及び修飾Ｈｂ含有試料の測定を行なった。電気泳動用緩衝液として、２．０重量％のコンドロイチン硫酸（和光純薬社製、アニオン性基を有する水溶性ポリマー）を含有する２００ｍＭのクエン酸緩衝液（ｐＨ５．０）を用い、キャピラリーの一方より上述の測定試料を注入して、２２ｋＶの電圧により電気泳動を行い、４１５ｎｍにおける吸光度測定により測定を行なった。
【００６７】
図３は、実施例２において、健常人血試料の測定によって得られたエレクトロフェログラムである。図３中、ピーク４は安定型ＨｂＡ１ｃ、ピーク５はＨｂＡ０を示す。図３に示すように、安定型ＨｂＡ１ｃのピークは良好に分離された。
図４は、実施例２において、修飾Ｈｂ含有試料の測定によって得られたエレクトロフェログラムである。図４中、ピーク４は安定型ＨｂＡ１ｃ、ピーク５はＨｂＡ０、ピーク６は修飾Ｈｂ（不安定型ＨｂＡ１ｃ）を示す。図４に示すように、安定型ＨｂＡ１ｃと修飾Ｈｂである不安定型ＨｂＡ１ｃとが良好に分離された。
【００６８】
（実施例３）
（１）キャピラリー内面のコーティング
フューズドシリカ製のマイクロチップ（７ｃｍ×５ｃｍ）に、幅１００μｍのダブルＴ型の電気泳動用流路（キャピラリー）を作製した。このマイクロチップ内のキャピラリーに０．１ＮのＮａＯＨ、イオン交換水、０．２ＮのＨＣｌをこの順で通液してキャピラリー内を洗浄した後、１．０重量％のポリビニルピロリドン（日本触媒社製、ＰＶＰ−Ｋ−９０Ｗ、非イオン性の親水性ポリマー）水溶液を２０分間通液した。その後、空気をキャピラリー内に注入して上述のポリビニルピロリドン水溶液を追い出した後、４０℃の乾燥機内で１２時間乾燥させた。その後、再びポリビニルピロリドン水溶液の注入、空気の注入及び乾燥を５回繰り返すことによって、キャピラリー内面に非イオン性の親水性ポリマーをコーティングした。
【００６９】
次いで、上述の１．０重量％のポリビニルピロリドン水溶液を用いた代わりに、２．０重量％のキトサン（和光純薬社製、イオン性の親水性ポリマー）を含有する０．２Ｎの塩酸を用いた以外は、上述の方法と同様の方法により、通液、空気の注入及び乾燥を５回繰り返し、キャピラリー内面に更にイオン性ポリマーをコーティングした。
【００７０】
（２）測定試料の調製
実施例２と同様の方法により、健常人血試料及び修飾Ｈｂ含有試料を調製した。
【００７１】
（３）電気泳動による測定
上述のキャピラリーを用いて、調製した健常人試料及び修飾Ｈｂ含有試料の測定を行なった。電気泳動用緩衝液として、１．５重量％のデキストラン硫酸（和光純薬社製、アニオン性基を有する水溶性ポリマー）を含む２５０ｍＭのコハク酸緩衝液（ｐＨ５．２）を用い、キャピラリーの一方より上述の測定試料を注入して、０．８ｋＶの電圧により電気泳動を行い、４１５ｎｍにおける吸光度測定により測定を行なった。健常人血の測定では、図３と同様のエレクトロフェログラムが得られた。修飾Ｈｂを含む試料の測定では、図４と同様のエレクトロフェログラムが得られた。
【００７２】
（実施例４）
（１）キャピラリー内面のコーティング
ポリジメチルシロキサン製のマイクロチップ（７ｃｍ×５ｃｍ）に、幅８０μｍのダブルＴ型の電気泳動用流路（キャピラリー）を作製した。このマイクロチップ内のキャピラリーに０．１ＮのＮａＯＨ、イオン交換水、０．２ＮのＨＣｌをこの順で通液してキャピラリー内を洗浄した後、１．０重量％の２−ヒドロキシエチルメタクリレート（和光純薬社製）共重合体（非イオン性の親水性ポリマー）を含有するポリマー水溶液を２０分間通液した。その後、空気をキャピラリー内に注入して、上述のポリマー水溶液を追い出した後、４０℃の乾燥機内で１２時間乾燥させた。その後、再び、上述のポリマー水溶液の注入、空気の注入及び乾燥を５回繰り返し、非イオン性の親水性ポリマーをコーティングした。
【００７３】
次いで、１．０重量％の２−ヒドロキシエチルメタクリレート共重合体を含有するポリマー水溶液を用いた代わりに、２．０重量％のキトサン（和光純薬社製、イオン性の親水性ポリマー）を含有する０．２Ｎの塩酸を用いた以外は、上述の方法と同様の方法により、通液、空気の注入及び乾燥を５回繰り返し、キャピラリー内面に更にイオン性ポリマーをコーティングした。
【００７４】
（２）測定試料の調製
実施例２と同様の方法により、健常人血試料及び修飾Ｈｂ含有試料を調製した。
【００７５】
（３）電気泳動による測定
上述のキャピラリーを用いて、調製した健常人試料及び修飾Ｈｂ含有試料の測定を行なった。電気泳動用緩衝液として、１．７重量％の２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸（東亞合成化学社製）共重合体（アニオン性基を有する水溶性ポリマー）を含有する３００ｍＭリンゴ酸緩衝液（ｐＨ５．２）を用い、キャピラリーの一方より上述の測定試料を注入して、１．０ｋＶの電圧により電気泳動を行い、４１５ｎｍにおける吸光度測定により測定を行なった。健常人血の測定では、図３と同様のエレクトロフェログラムが得られた。修飾Ｈｂを含む試料の測定では、図４と同様のエレクトロフェログラムが得られた。
【００７６】
（比較例１）
（１）キャピラリー内面のコーティング
フューズドシリカ製キャピラリー（ＧＬサイエンス社製：内径２５μｍ×全長３０ｃｍ）をキャピラリー電気泳動装置（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ社製、ＰＡＣ／Ｅ  ＭＤＱ）にセットし、０．２ＮのＮａＯＨ、イオン交換水、０．５ＮのＨＣｌの順で通液してキャピラリー内を洗浄した後、０．５重量％の牛血清アルブミン（和光純薬社製）を含有する２４０ｍＭリンゴ酸緩衝液（ｐＨ４．７）を０．５分間通液することによって、イオン性を有する親水性ポリマーを動的コーティングした。
【００７７】
（２）測定試料
実施例２と同様の方法により、修飾Ｈｂ含有試料を調製した。
【００７８】
（３）電気泳動による測定
電気泳動用緩衝液として、０．２重量％のコンドロイチン硫酸（和光純薬社製）を含有する３５０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ４．７）を用い、キャピラリーの一方より上述の測定試料を注入して、８．５ｋＶの電圧により電気泳動を行い、４１５ｎｍにおける吸光度測定により測定を行なった。
図５は、比較例１において、修飾Ｈｂ含有試料の測定によって得られたエレクトロフェログラムである。図５中、ピーク４は安定型ＨｂＡ１ｃ、ピーク５はＨｂＡ０、ピーク６は修飾Ｈｂ（不安定型ＨｂＡ１ｃ）を示す。
図５において、安定型ＨｂＡ１ｃと修飾Ｈｂは充分に分離されなかった。イオン性を有する親水性ポリマーのみをコーティングしたキャピラリーを用いた場合は、非イオン性を有する親水性ポリマー及びイオン性を有する親水性ポリマーをコーティングしたキャピラリーに比べて分離性能が不充分となることがわかった。
【００７９】
（比較例２）
（１）キャピラリー内面のコーティング
フューズドシリカ製キャピラリー（ＧＬサイエンス社製：内径７５μｍ×全長５０ｃｍ）をキャピラリー電気泳動装置（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ社製、ＰＡＣ／Ｅ  ＭＤＱ）にセットした。０．２ＮのＮａＯＨ、イオン交換水、０．５ＮのＨＣｌをこの順で通液してキャピラリー内を洗浄した後、５．０重量％のポリブレン（和光純薬社製、イオン性の親水性ポリマー）水溶液を２０分間通液した。その後、空気をキャピラリー内に注入して上述のポリブレン水溶液を追い出した後、４０℃の乾燥機内で１２時間乾燥させた。その後、再び上述のポリブレン水溶液の注入、空気の注入及び乾燥を５回繰り返すことによって、キャピラリー内面にイオン性の親水性ポリマーをコーティングした。
【００８０】
（２）測定試料の調製
実施例２と同様の健常人試料及び修飾Ｈｂ含有試料を用いた。
【００８１】
（３）電気泳動による測定
電気泳動用緩衝液として、０．２重量％のコンドロイチン硫酸（和光純薬社製）を含む３５０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ４．７）を用い、キャピラリーの一方より上述の測定試料を注入して、１８ｋＶの電圧により電気泳動を行い、４１５ｎｍにおける吸光度測定により測定を行なった。健常人血の測定では、図３と同様のエレクトロフェログラムが得られた。修飾Ｈｂを含む試料の測定では、図４と同様のエレクトロフェログラムが得られた。
【００８２】
（比較例３）
（１）キャピラリー内面のコーティング
比較例２で得られた内面にイオン性の親水性ポリマーをコーティングしたキャピラリーに、更に、同様の方法で、１．０重量％のポリビニルアルコール（日本合成化学社製、ゴーセノールＧＨ−２０、非イオン性の親水性ポリマー）水溶液を２０分間通液した。その後、空気をキャピラリー内に注入して上述のポリビニルアルコール水溶液を追い出した後、４０℃の乾燥機内で１２時間乾燥させた。その後、再び上述のポリビニルアルコール水溶液の注入、空気の注入及び乾燥を５回繰り返すことによって、キャピラリー内面に非イオン性の親水性ポリマーをコーティングした。
【００８３】
（２）測定試料の調製
実施例２と同様の健常人試料及び修飾Ｈｂ含有試料を用いた。
【００８４】
（３）電気泳動による測定
電気泳動用緩衝液として、比較例２と同様の緩衝液を用い、キャピラリーの一方より上述の測定試料を注入して、２０ｋＶの電圧により電気泳動を行い、４１５ｎｍにおける吸光度測定により測定を行なった。健常人血及び修飾Ｈｂ含有試料、いずれの測定試料においても、ヘモグロビンのピークは認められなかった。
【００８５】
（評価）
（１）修飾Ｈｂ類の分離性能確認
実施例１〜４及び比較例１、２の測定条件について、健常人血試料と、同一健常人血を元に調製した修飾Ｈｂ含有試料、すなわちヘパリン採血して得られた健常人血試料にグルコースを２５００ｍｇ／ｄＬとなるように添加して得られた不安定型ＨｂＡ１ｃ含有試料と、更に、他の修飾Ｈｂ含有試料、すなわち該健常人血にアセトアルデヒドを５０ｍｇ／ｄＬとなるように添加して得られたアセチル化Ｈｂ含有試料、シアン酸ナトリウムを５０ｍｇ／ｄＬとなるように添加して得られたカルバミル化Ｈｂ含有試料を調製し、各試料における安定型ＨｂＡ１ｃ値を求めた。
なお、各試料の安定型ＨｂＡ１ｃ値は、全ヘモグロビンピークの面積に対する安定型ＨｂＡ１ｃピークの面積の比率（％）を求めることにより算出した。
得られた各修飾Ｈｂ含有試料の安定型ＨｂＡ１ｃ値から、得られた健常人血試料の安定型ＨｂＡ１ｃ値を差し引いた値（ΔＨｂＡ１ｃ値）を求めた。
結果を表１に示した。
【００８６】
【表１】
2008256460.tif 000002
【００８７】
実施例１〜４の測定条件においては、修飾Ｈｂ含有試料と修飾Ｈｂを含まない健常人血試料の安定型ＨｂＡ１ｃの測定値の差はほとんどなく、測定値差は０．２％以下であり、修飾Ｈｂ類の存在下においても、安定型ＨｂＡ１ｃが正確に測定できることがわかった。
一方、比較例１の測定条件では、修飾Ｈｂ類と安定型ＨｂＡ１ｃの分離が不充分なため、安定型ＨｂＡ１ｃ値が大きく変動し、正確な測定ができないことがわかった。比較例２の測定条件では、比較例１よりは良好に分離されたが、実施例１〜４について得られた結果と比較すると測定値の変動が見られる試料があった。
【００８８】
（２）同時再現性試験
実施例１〜４及び比較例１、２の測定条件を用いて、健常人血試料の同一試料を１０回連続して得られた安定型ＨｂＡ１ｃ値のＣＶ値を算出した。
また、比較例１では、１回の測定が終了した時点で、０．２ＮのＮａＯＨを０．３分間通液し、０．２重量％のコンドロイチン硫酸（和光純薬社製）を含有する３５０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ４．７）を１．８分間通液してキャピラリー内を洗浄した後、再びイオン性の親水性ポリマーとして０．５重量％の牛血清アルブミン（和光純薬社製）を含有する２４０ｍＭリンゴ酸緩衝液（ｐＨ４．７）を０．５分間通液して、動的コーティングを施した後、次検体を測定し、測定を繰り返し行うことによって同時再現性試験を行った。
結果を表２に示した。
【００８９】
（３）耐久性試験
実施例１〜４及び比較例１、２の測定条件を用いて、健常人血試料の同一試料を１００回連続して測定して得られた安定型ＨｂＡ１ｃ値の最大値と最小値との差（Ｒ値）を算出した。
結果を表２に示した。
【００９０】
【表２】
2008256460.tif 000003
【００９１】
表２に示すように、実施例１〜４では、同時再現性試験において、バラツキ度合いを示すＣＶ値が１％前後であり良好な結果であった。また、耐久性試験における連続１００試料測定時のバラツキ幅についても、０．２％程度と非常に小さく、大量検体の連続測定においても精度良く安定型ＨｂＡ１ｃを測定できることがわかった。
一方、比較例１については、同時再現性試験におけるＣＶ値が４％以上と大きく、また耐久性試験時のバラツキ幅も最大０．６％程度であり、糖尿病患者のＨｂＡ１ｃ値を管理する上で全く不充分な値となっていた。また、比較例２については、上述の通り、修飾Ｈｂの分離は可能であったが、繰り返し測定時には徐々に測定値が変化し、最終的に大きなＣＶ値及びバラツキ幅を示した。
【００９２】
以上のように、実施例で得られたキャピラリーを用いた場合には、蛋白質類やヘモグロビン類を良好に分離できることが分かった。特にヘモグロビン類の測定においては、短時間に高精度の分離をすることができ、繰り返し測定時においても安定した性能を示すことができることがわかった。
一方、比較例で得られたキャピラリーを用いた場合には、分離性能が不充分であったり、分離はできるものの繰り返し測定時において性能の劣化が激しかったりして、安定した測定をすることができないことがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００９３】
本発明によれば、蛋白質類等の親水性物質を精度良く分離することができる電気泳動法に用いられるキャピラリー、及び、このキャピラリーを用いた電気泳動法を提供することができる。更に、この電気泳動法を用いたヘモグロビン類、特に糖尿病の診断指標となる安定型ヘモグロビンＡ１ｃの測定を、短時間で高精度に行うことができるヘモグロビン類の測定方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００９４】
【図１】キャピラリー電気泳動装置の一例を示す模式図である。
【図２】実施例１において、蛋白質類の測定によって得られたエレクトロフェログラムである。
【図３】実施例２、３、４、比較例２において、健常人血の測定によって得られたエレクトロフェログラムである。
【図４】実施例２、３、４、比較例２において、修飾Ｈｂを含む試料の測定によって得られたエレクトロフェログラムである。
【図５】比較例１において、修飾Ｈｂを含む試料の測定によって得られたエレクトロフェログラムである。
【図１】
2008256460.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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