(57)【要約】【課題】  酸性下で加熱殺菌を施されているにも拘わらず、ヒアルロン酸および／またはその塩に由来する白濁が防止され、透明性に優れたヒアルロン酸および／またはその塩を配合した酸性飲料を提供する。【解決手段】  酸性下で加熱殺菌を施された酸性飲料であって、平均分子量２万以下のヒアルロン酸および／またはその塩を含有されてなる酸性飲料。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
酸性下で加熱殺菌を施された酸性飲料であって、平均分子量２万以下のヒアルロン酸および／またはその塩を含有することを特徴とする酸性飲料。
【請求項２】
ヒアルロン酸および／またはその塩の分子量分布が、分子量１万以下の成分の割合が４０％以上でかつ分子量５万以上の成分の割合が５％以下である請求項１記載の酸性飲料。
【請求項３】
ｐＨ２．０〜４．５の酸性下で加熱殺菌を施した請求項１又は２に記載の酸性飲料。
【請求項４】
品温が８０℃以上となるように加熱殺菌を施した請求項１乃至３のいずれかに記載の酸性飲料。
【請求項５】
ヒアルロン酸および／またはその塩の配合量が、０．０１〜２％である請求項１乃至４のいずれかに記載の酸性飲料。
【請求項６】
酸性飲料がリンゴジュースである請求項１乃至５のいずれかに記載の酸性飲料。
【請求項７】
酸性飲料が酢飲料である請求項１乃至５のいずれかに記載の酸性飲料。
【請求項８】
酸性飲料がクエン酸飲料である請求項１乃至５のいずれかに記載の酸性飲料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酸性下で加熱殺菌を施されているにも拘わらず、ヒアルロン酸および／またはその塩に由来する白濁が防止され、透明性に優れたヒアルロン酸および／またはその塩を配合した酸性飲料に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒアルロン酸は生体、特に皮下組織に存在するムコ多糖類であり、その高い保湿機能によりヒアルロン酸またはその塩として、化粧料の原料に広く利用されてきた。また、ヒアルロン酸またはその塩を経口摂取することにより、生体本来の持つヒアルロン酸含量の低下を補い、肌の保湿、弾力性、および柔軟性を改善する効果が認められている。
【０００３】
このため、ヒアルロン酸およびその塩を配合した美容健康食品も数多く開発されており、例えば、特開２００１−３３３６９３号公報（特許文献１）には、平均分子量が６０万〜１００万程度の高分子ヒアルロン酸およびヒアルロン酸塩から選ばれた１種以上と茶成分とを含む飲料が記載されている。
【０００４】
一方、ヒアルロン酸を含む飲料等の食品は美容を訴求しているため、透明性を重視した商品が消費者のイメージに合致しやすく好まれる。また、ヒアルロン酸および／またはその塩等の糖類を配合した飲料は、細菌的問題が発生しやすいため加熱殺菌する必要がある。そこで、発明者は、特許文献１に記載されている高分子ヒアルロン酸およびヒアルロン酸塩を配合し、加熱殺菌を施した飲料を製したところ、透明性が低く、消費者のイメージに合致しないものであった。
【０００５】
【特許文献１】特開２００１−３３３６９３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明の目的は、酸性下で加熱殺菌を施されているにも拘わらず、ヒアルロン酸および／またはその塩に由来する白濁が防止され透明性に優れた酸性飲料を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記目的を達成すべく、ヒアルロン酸について鋭意研究を重ねた結果、平均分子量が特定以下のヒアルロン酸および／またはその塩を配合するならば、意外にも、酸性下で加熱殺菌を施された酸性飲料であっても白濁が防止され、透明性に優れることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、
（１）酸性下で加熱殺菌を施された酸性飲料であって、平均分子量２万以下のヒアルロン酸および／またはその塩を含有することを特徴とする酸性飲料、
（２）ヒアルロン酸および／またはその塩の分子量分布が、分子量１万以下の成分の割合が４０％以上でかつ分子量５万以上の成分の割合が５％以下である（１）の酸性飲料、
（３）ｐＨ２．０〜４．５の酸性下で加熱殺菌を施した（１）又は（２）の酸性飲料、
（４）品温が８０℃以上となるように加熱殺菌を施した（１）乃至（３）のいずれかの酸性飲料、
（５）ヒアルロン酸および／またはその塩の配合量が、０．０１〜２％である（１）乃至（４）のいずれかの酸性飲料、
（６）酸性飲料がリンゴジュースである（１）乃至（５）のいずれかの酸性飲料、
（７）酸性飲料が酢飲料である（１）乃至（５）のいずれかの酸性飲料、
（８）酸性飲料がクエン酸飲料である（１）乃至（５）のいずれかの酸性飲料、
である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、酸性下で加熱殺菌を施されているにも拘わらず、ヒアルロン酸および／またはその塩に由来する白濁が防止され、透明性に優れることから、ヒアルロン酸および／その塩から連想される水々しい透明感のある酸性飲料を提供することができる。したがって、健康飲料市場の更なる拡大が期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下本発明を詳細に説明する。なお、本発明において「％」は「質量％」を意味する。
【００１１】
本発明の酸性飲料は、一般的に清涼飲料、果実飲料、又は医薬部外品の栄養ドリンクと称されるものであり、常温流通が可能なｐＨ４．５以下の飲料である。このような酸性飲料としては、例えば、りんご果汁、オレンジ果汁、レモン果汁、アセロラ果汁、カムカム果汁、ブルーベリー果汁、ぶどう果汁等を含有する果汁飲料、りんご酢、黒酢、もろみ酢、穀物酢、米酢、ダッタンそば酢等を含有する酢飲料、クエン酸又はクエン酸３ナトリウム等のクエン酸塩を含有するクエン酸飲料、ビタミンＢ群、ビタミンC等を含有するビタミン飲料、グルコン酸飲料、ソーダ水、無糖ソーダ水等の炭酸飲料、栄養ドリンク等が挙げられる。
【００１２】
本発明は、これらの酸性飲料において、ヒアルロン酸および／またはその塩を含有し、酸性下で加熱殺菌を施された酸性飲料であって、当該加熱殺菌により生じるヒアルロン酸および／またはその塩に由来する白濁を防止すべく、本願発明は、平均分子量２万以下のヒアルロン酸および／またはその塩を用いることを特徴とする。このように本発明は、白濁を防止することより、上記酸性飲料の中でも、特に透明性に優れた飲料に好適である。このような透明性に優れた飲料としては、例えば、リンゴジュース、酢飲料、クエン酸飲料等が挙げられる。
【００１３】
ここで、本発明の「ヒアルロン酸」とは、グルクロン酸とＮ−アセチルグルコサミンとの二糖からなる繰り返し構成単位を１以上有する多糖類をいう。また、「ヒアルロン酸の塩」としては、特に限定されないが、食品又は薬学上許容しうる塩であることが好ましく、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩等が挙げられる。
【００１４】
本発明に使用するヒアルロン酸またはその塩の平均分子量は、２万以下であり、好ましくは１万５千以下である。ヒアルロン酸またはその塩の平均分子量が前記値より大きいと、白濁が生じ、目的とする透明性に優れた酸性飲料とならないからである。なお、本発明では、平均分子量の下限値を限定していないが、精製度の高いヒアルロン酸またはその塩の工業的生産性を考慮し、平均分子量５千以上が好ましい。
【００１５】
本発明で規定される平均分子量の測定方法について説明する。
【００１６】
本発明で規定される平均分子量は、ヒアルロン酸および／またはその塩の極限粘度から算出された分子量である。ヒアルロン酸および／またはその塩の極限粘度を求めるには、まず、複数のヒアルロン酸および／またはその塩の水溶液を調製し、ウベローデ粘度計（柴田科学器械工業株式会社）におけるヒアルロン酸および／またはその塩の水溶液の流下秒数および溶媒の流下秒数から下記式（１）および式（２）に基づいて比粘度および還元粘度を算出する。この際、流下秒数が２００〜１０００秒になるような係数のウベローデ粘度計を用いる。その際、ヒアルロン酸および／またはその塩の水溶液の濃度は、該測定器に適する濃度を選択する。また、測定は３０℃の恒温水槽中で行ない、温度変化のないようにする。（式１）
ヒアルロン酸および／またはその塩の水溶液の流下秒数
比粘度＝―――――――――――――――――――――――――――  −１
溶媒の流下秒数
（式２）
比粘度
還元粘度＝―――――――――――――――――――――――――――――――――
乾燥物換算のヒアルロン酸および／またはその塩濃度（ｇ／１００ｍＬ）
【００１７】
次いで、各ヒアルロン酸および／またはその塩の水溶液について、得られた還元粘度を縦軸に、乾燥物換算のヒアルロン酸および／またはその塩濃度を横軸にプロットして検量線を作成し、前記ヒアルロン酸および／またはその塩濃度を０に外挿することにより、ヒアルロン酸および／またはその塩の極限粘度を得る。下記式３に基づいて、ヒアルロン酸および／またはその塩の極限粘度から平均分子量Ｍを求めることができる。(式３)
極限粘度（ｄＬ／ｇ）＝Ｋ’Ｍα 
（上記式３において、Ｋ’＝０．０３６、α＝０．７８である。）
【００１８】
ヒアルロン酸に代表されるムコ多糖類は、ＣＰＣ（塩化セチルピリジニウム）と結合して沈殿を起こすことが知られている。そのため、ＣＰＣ沈殿法を用いることにより、酸性飲料にムコ多糖類が含有していることを確認できる。
【００１９】
本発明に使用するヒアルロン酸および／またはその塩は、平均分子量が２万以下であることに加え、その分子量分布において、分子量１万以下の成分の割合が４０％以上で、かつ、分子量５万以上の成分の割合が５％以下であることが好ましい。このような分子量分布のヒアルロン酸および／またはその塩を使用することにより、酸性下で加熱殺菌を施しても、より透明性に優れた酸性飲料となり好ましいからである。
【００２０】
本発明で規定される分子量分布は、ゲル濾過カラムを用いて試料を液体クロマトグラフィー分析することにより得られる。ヒアルロン酸および／またはその塩は、反復構造単位（Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンおよびＤ−グルクロン酸）の数によって異なる分子量を有する複数の成分の混合物である。したがって、ゲル濾過カラムを用いて試料について液体クロマトグラフィー分析を行なうことにより、ヒアルロン酸および／またはその塩を構成する成分を分子サイズにより分離することができる。
【００２１】
本発明におけるヒアルロン酸および／またはその塩の分子量分布は、ＨＰＬＣ分析装置（商品名「アライアンスＰＤＡシステム」、日本ウォーターズ株式会社製）にゲル濾過カラム（商品名「Ｄｉｏｌ−１２０」、株式会社ワイエムシイ製）を接続して、ヒアルロン酸および／またはその塩の０．１％（ｗ／ｖ）水溶液を分析サンプルとして、この分析サンプルを液体クロマトグラフィー分析することにより測定することができる。
【００２２】
液体クロマトグラフィー分析の条件は以下の通りとする。カラム温度：４０℃流速：１ｍＬ／分ヒアルロン酸および／またはその塩の０．１％（ｗ／ｖ）水溶液の注入量：２０μＬ）移動相：０．００３Ｍリン酸バッファー（０．１５Ｍ  ＮａＣｌ含有、ｐＨ７．０）紫外線検出器：λ＝２１０ｎｍで測定本発明に係るゲル濾過カラムを用いた液体クロマトグラフィーでは、保持時間が長いものほど低分子である。保持時間の長い順に、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｄ−グルクロン酸、ヒアルロン酸（二糖：繰り返し構造単位１つ）、ヒアルロン酸（四糖：繰り返し構造単位２つ）、ヒアルロン酸（六糖：繰り返し構造単位３つ）、ヒアルロン酸（八糖：繰り返し構造単位４つ）・・・のピークが得られる。各ピークにおける保持時間および分子量を算出し、この保持時間対分子量の検量線を求める（式４）。
【００２３】
なお、式４において、ｘは保持時間を示し、ｙは分子量を示す。次いで、式４に示される検量線から、所定の分子量（１万または５万）に対応する保持時間を算出し、これらの保持時間によりピークを分割することにより、所定の分子量範囲にある成分の割合を求める。また、各ピークが示す分子量は、分子量が既知のヒアルロン酸および／またはその塩の最小構成単位（二糖）について同様の方法で液体クロマトグラフィー分析して得られたクロマトグラム中のピークと照会することにより同定される。
【００２４】
例えば、分子量１万以下の成分の割合は、式４に示される検量線から分子量１万に対応する保持時間を算出し、この保持時間以降の成分の吸収面積を全吸収面積で除すことにより求めることができる。同様に、分子量５万以上の成分の割合は、式４に示される検量線から分子量５万に対応する保持時間を算出し、この保持時間以前の成分の吸収面積を全吸収面積で除すことにより求めることができる。
【００２５】
一例として、図１に示すクロマトグラムから得られた各分子量成分の繰り返し単位数および保持時間の関係を表１に示す。
【００２６】
【表１】
2008173109.tif 000002
【００２７】
（式４）ｙ＝−２１．４ｘ３＋１２９６．２ｘ２−２６７４７．１ｘ＋１８９４２７．１                            
【００２８】
本発明で用いる平均分子量２万以下のヒアルロン酸および／またはその塩の代表的な製造方法を以下に述べる。なお、本発明で用いる平均分子量２万以下のヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法は、これに限定するものではない。
【００２９】
上記平均分子量２万以下のヒアルロン酸および／またはその塩の原料であるヒアルロン酸および／またはその塩（以下、「原料ヒアルロン酸およびその塩」ともいう）は一般に、鶏冠、臍の緒、眼球、皮膚、軟骨等の生物組織、あるいはストレプトコッカス属の微生物等のヒアルロン酸生産微生物を培養して得られる培養液等を原料として、これらの原料から抽出（さらに必要に応じて精製）して得られるものである。例えば、鶏冠より抽出される原料ヒアルロン酸および／またはその塩の分子量は通常２００万から８００万である。
【００３０】
上述したように、平均分子量２万以下のヒアルロン酸および／またはその塩は、酸性含水媒体中に原料ヒアルロン酸および／またはその塩を分散させて、酸性含水媒体を除去して得られた残留物を加熱乾燥することにより製造することができる。ここで、攪拌速度や攪拌時間を調整することにより、低分子化の度合いを調整することができる。また、上述の分散させる工程を、３０〜７０℃で１時間以内の加熱することにより、目的の分子量まで安定に低分子化することができる。より具体的には、粉末状の原料ヒアルロン酸および／またはその塩を、酸性含水媒体中に攪拌しながら添加して得られた分散媒を加熱することができる。あるいは、酸性含水媒体を予め加熱し、これに原料ヒアルロン酸および／またはその塩を添加し、温度を保持してもよい。
【００３１】
上記製造方法において、含水媒体は、水を含む、ヒアルロン酸および／またはその塩の分散媒のことをいう。含水媒体に使用できる媒体は、ヒアルロン酸および／またはその塩の溶解性が低いことが好ましい。含水媒体に使用できる媒体は特に限定されないが、例えば液体であって、水に溶解する性質を有し、かつ、食品または医薬品の製造工程において使用できるものが好ましい。含水媒体に使用できる媒体としては、例えば、アルコール系媒体（例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、２−プロパノールなど）、ケトン系媒体（例えば、アセトン、メチルエチルケトンなど）、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等を挙げることができ、これらを単独でまたは組み合わせて使用することができる。このうち、沸点の低さおよび価格の点で、エタノール、メタノール、およびアセトンから選ばれる少なくとも１種であることが好ましい。含水媒体における含水量は特に規定されないが、含水量が多いと、ヒアルロン酸および／またはその塩が分散状態を維持できず、含水媒体に溶解するため、収益低下を招くおそれがある。したがって、含水媒体の全量に対する水の割合は４０％容量以下が好ましく、３０％容量以下がより好ましい。
【００３２】
また、上記製造方法において、含水媒体を酸性にするために使用するものとしては、例えば、塩酸や硫酸等の酸や酸性陽イオン交換樹脂が挙げられる。
【００３３】
なお、平均分子量２万以下のヒアルロン酸から平均分子量２万以下のヒアルロン酸の塩へと変換する方法、ならびに平均分子量２万以下のヒアルロン酸の塩から平均分子量２万以下のヒアルロン酸へと変換する方法は、特に限定されるわけではない。平均分子量２万以下のヒアルロン酸からヒアルロン酸の塩へと変換する方法としては、例えば、アルカリ水溶液（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、水酸化アンモニウム等の水溶液）を用いて処理する方法が挙げられる。また、平均分子量２万以下のヒアルロン酸の塩から平均分子量２万以下のヒアルロン酸へと変換する方法としては、例えば、酸水溶液（例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸等の水溶液）を用いて処理する方法や、酸性陽イオン交換樹脂を用いる方法が挙げられる。
【００３４】
本発明の酸性飲料において、上述した製造方法等により得られた平均分子量２万以下のヒアルロン酸および／またはその塩の配合量は、０．０１〜２％が好ましく、０．０５〜１．５％がより好ましい。ヒアルロン酸および／またはその塩の配合量が、前記範囲より多いと、透明性が失われやすく好ましくなく、一方、前記範囲より少ないと、ヒアルロン酸および／またはその塩の美容効果が現れにくく、商品価値が低くなるので好ましくない。
【００３５】
以下に本発明の酸性飲料の代表的な製造方法を述べる。なお、本発明の酸性飲料の製造方法は、これに限定するものではない。
【００３６】
上述した製造方法等により得られた平均分子量２万以下のヒアルロン酸および／またはその塩を含有する水溶液に、本発明の効果を損なわない範囲で、酸性飲料に一般的に使用されている原料を適宜配合し、混合溶解する。このような原料としては、例えば、砂糖、果糖、異性化糖、ショ糖、フルクトース、パラチノース、トレハロース、ラクトース、キシロース等の糖質、ソルビトール、マルチトール、キシリトール、エリスリトール、還元水飴、還元麦芽糖水飴等の糖アルコール類、スクラロース、アセスルファムＫ、ステビア、アスパルテーム等の高甘味度甘味料、ビタミンＡ、ビタミンＢ類、ビタミンＣ、ビタミンＤ等のビタミン類、コラーゲン、水溶性食物繊維等の美容原料、オレンジフレーバー、りんごフレーバー、レモンフレーバー等の香料等が挙げられる。
【００３７】
次に、酸性飲料のｐＨを酸性に、具体的には好ましくは２．０〜４．５、より好ましくは２．５〜４．５に、調整する。酸性飲料のｐＨが前記範囲より高いと、透明性が失われやすくなり、一方、前記範囲より低いと酸味が強く出るため、飲料としての商品価値が低くなり好ましくない。このようなｐＨ調整には、リンゴ酢、黒酢、もろみ酢、穀物酢、米酢、ダッタンそば酢等の食酢、酢酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸等の有機酸、炭酸、リン酸等の無機酸、クエン酸３ナトリウム、酢酸ナトリウム等の有機酸塩、りんご、オレンジ、レモン、グレープフルーツ、ぶどう、アセロラ、カムカム、ブルーベリー等の果汁を用いると良い。
【００３８】
さらに、酸性下にｐＨ調整したヒアルロン酸および／またはその塩を含有した上記酸性飲料を加熱殺菌する。加熱殺菌は、例えば、プレート殺菌機、チューブラー殺菌機、ホールディングタンク、ホールディングチューブ等の熱交換殺菌機等を用いて行うと良い。また、加熱殺菌の条件は、糖類を配合した他の酸性飲料と同様、細菌的に問題が発生しない条件であれば、特に限定するものではないが、酸性飲料の品温が好ましくは８０℃以上、より好ましくは８５℃以上となるように加熱殺菌を施す。また、加熱殺菌時間は、前記酸性飲料の品温に依るが、２秒間〜１時間が好ましく、５秒間〜３０分間がより好ましい。なお、本発明は、加熱殺菌条件として酸性飲料の品温の上限を規定していないが、糖類を配合した他の酸性飲料と同様、１３０℃程度を上限とすると良い。
【００３９】
そして、得られた加熱殺菌を施した酸性飲料を、ＰＥＴボトル、ガラス瓶等の容器に充填、密封する。なお、充填は、ホットパック充填（品温８０〜９８℃）、あるいは無菌充填等、任意の方法を用いることができる。また、本発明の酸性飲料は必要に応じ、炭酸等を含気させても良い。
【００４０】
以下、本発明で用いる平均分子量２万以下のヒアルロン酸および／またはその塩を用いた酸性飲料について、実施例等に基づき具体的に説明する。なお、本発明は、これらに限定するものではない。
【実施例】
【００４１】
［調製例１］平均分子量９千のヒアルロン酸
本調製例では、原料として、鶏冠より抽出、精製したヒアルロン酸ナトリウム（以下、「ＨＡＮａ」ともいう）微粉末を準備した。この原料ＨＡＮａの平均分子量は約２１０万、純度９７％であった。
【００４２】
まず、攪拌機およびジャケットを装備した３００Ｌ容タンクに、０．５％硫酸含有８０％含水アセトン（酸性含水媒体）１１０Ｌを満たし、攪拌しながら液温が６０℃となるよう加熱した。この処理液のｐＨは１．０８であった。ここで、８０％含水アセトンは、アセトンを８０（Ｗ／Ｗ）％含有し、水を２０（Ｗ／Ｗ）％含有するものであり、０．５％硫酸含有８０％含水アセトンは、硫酸を０．５（Ｗ／Ｗ）％含有し、８０％含水アセトンを９９．５（Ｗ／Ｗ）％含有するものである。６０℃に達温後、攪拌しながら，準備した原料ＨＡＮａ微粉末６ｋｇをタンクに投入した。硫酸含有含水アセトンの温度を６０℃に維持するよう加熱を行ないながら、原料ＨＡＮａ微粉末が分散状態となるように攪拌した。
【００４３】
次に、１５分間攪拌してから静置した後、上澄みの硫酸含有含水アセトンをデカンテーションにより除去することにより、沈殿物を得た。得られた沈殿物に、予め６０℃に加熱した０．５％硫酸含有８０％含水アセトン１１０Ｌを加え、同様に６０℃に加熱しながら攪拌を１５分間行ない、この操作を合計３回繰り返した。
【００４４】
次いで、硫酸含有含水アセトンを除去した後に得られた沈殿物に８０％含水アセトン１１０Ｌを加え、硫酸除去の目的で攪拌を１５分間行なった。硫酸の残留がなくなるまでこの操作を繰り返した。
【００４５】
さらに、含水アセトンをデカンテーションにより除去して残留物を得た。この残留物について遠心分離処理を行なうことにより含水アセトンをさらに除去した後、真空乾燥機を用いて７０℃にて減圧で１２時間加熱乾燥した。
【００４６】
以上の工程により、白色微粉末のヒアルロン酸５．３ｋｇ（収率約８８％）を得た。このヒアルロン酸は、極限粘度より換算した平均分子量が９千であり、分子量分布において、分子量１万以下の成分の割合が４９％以上でかつ分子量５万以上の成分の割合が０．５％であった。
【００４７】
［調製例２］平均分子量６千のヒアルロン酸
本調製例では、原料として、調製例１で用いたＨＡＮａ微粉末を準備した。
【００４８】
まず、攪拌機およびジャケットを装備した３００Ｌ容タンクに、２％塩酸含有７３％含水エタノール（酸性含水媒体）１１０Ｌを満たし、攪拌しながら液温が５０℃となるよう加熱した。この処理液のｐＨは０．７０であった。ここで、７３％含水エタノールは、エタノールを７３（Ｗ／Ｗ）％含有し、水を２７（Ｗ／Ｗ）％含有するものであり、２％塩酸含有７３％含水エタノールは、塩酸を２（Ｗ／Ｗ）％含有し、７３％含水エタノールを９８（Ｗ／Ｗ）％含有するものである。５０℃に達温後、攪拌しながら、準備した原料ＨＡＮａ微粉末６ｋｇをタンクに投入した。塩酸含有含水エタノールの温度を６０℃に維持するように加熱を行ないながら、原料ＨＡＮａ微粉末が分散状態となるように攪拌した。
【００４９】
次に、１５分間攪拌してから静置した後、上澄みの塩酸含有含水エタノールをデカンテーションにより除去することにより、沈殿物を得た。得られた沈殿物に、予め５０℃に加熱した２％塩酸含有７３％含水エタノール１１０Ｌを加え、同様に５０℃に加熱しながら攪拌を１５分間行ない、この操作を合計３回繰り返した。
【００５０】
次いで、塩酸含有含水エタノールを除去した後に得られた沈殿物に７３％含水エタノール１１０Ｌを加え、塩酸除去の目的で１５分間の攪拌を行なった。塩酸の残留がなくなるまでこの操作を繰り返した。
【００５１】
さらに、含水エタノールをデカンテーションにより除去して残留物を得た。この残留物について遠心分離処理を行なうことにより含水エタノールをさらに除去した後、真空乾燥機を用いて８０℃にて減圧で２４時間加熱乾燥した。
【００５２】
以上の工程により、白色微粉末のヒアルロン酸５．５ｋｇ（収率約９２％）を得た。このヒアルロン酸は、極限粘度より換算した平均分子量が６千であり、分子量分布において、分子量１万以下の成分の割合が５８％以上でかつ分子量５万以上の成分の割合が０．２％であった。
【００５３】
［実施例１］
下記配合のりんご果汁１００％のリンゴジュースを製した。つまり、調製例１で得られた平均分子量が９千で、その分子量分布が分子量１万以下の成分の割合が４９％以上で分子量５万以上の成分の割合が０．５％であるヒアルロン酸と、下記の配合割合を示す他の原料を撹拌・混合し、９５℃で１５分の加熱殺菌後、３５０ｍＬＰＥＴボトルに充填、密封した。このリンゴジュースのｐＨは３．８であった。また、加熱殺菌直後の品温は、９５℃であった。
【００５４】
＜リンゴジュースの配合割合＞
５倍濃縮りんご透明果汁            ２０％
ヒアルロン酸（平均分子量：９千）    ０．２％
清水                              ７９．８％
――――――――――――――――――――――――
合計                            １００％
【００５５】
［実施例２］
実施例１のヒアルロン酸０．２％配合を、平均分子量が９千でその分子量分布が分子量１万以下の成分の割合が４９％以上で分子量５万以上の成分の割合が０．５％であるヒアルロン酸ナトリウム０．２％配合に変更した以外は、実施例１と同様の方法でリンゴジュースを製した。このリンゴジュースのｐＨは４．０であった。
【００５６】
［実施例３］
実施例１のリンゴジュースで使用したヒアルロン酸０．２％配合を３％配合に変更した以外は、実施例１と同様の方法でリンゴジュースを製した。このリンゴジュースのｐＨは、２．７であった。
【００５７】
［実施例４］
実施例１のリンゴジュースで使用したヒアルロン酸を、平均分子量の異なる２種類のヒアルロン酸（調製例２の平均分子量６千のものと、平均分子量５万のもの）をブレンドし、その平均分子量が１万５千になるように調整したヒアルロン酸を用いた以外は、実施例１と同様の方法でリンゴジュースを製した。ブレンドしたヒアルロン酸の分子量分布は、分子量１万以下の成分の割合が４６％以上で、分子量５万以上の成分の割合が１０％であった。また、このリンゴジュースのｐＨは３．８であった。
【００５８】
＜リンゴジュースの配合割合＞
５倍濃縮りんご透明果汁              ２０％
ヒアルロン酸（平均分子量：６千）      ０．４％
ヒアルロン酸（平均分子量：５万）      ０．１％
清水                                ７９．５％
―――――――――――――――――――――――――――
合計                              １００％
【００５９】
［比較例１］
実施例１のリンゴジュースで使用した平均分子量９千のヒアルロン酸を、平均分子量８０万のヒアルロン酸ナトリウムに変更した以外は、実施例１と同様の方法でリンゴジュースを製した。このリンゴジュースのｐＨは、４．０であった。
【００６０】
［比較例２］
実施例１のリンゴジュースで使用した平均分子量９千のヒアルロン酸を、平均分子量４万のヒアルロン酸に変更した以外は、実施例１と同様の方法でリンゴジュースを製した。このリンゴジュースのｐＨは、３．８であった。
【００６１】
［比較例３］
実施例１のリンゴジュースの配合割合に、クエン酸３ナトリウムを０．７％添加した以外は、実施例１と同様の方法でリンゴジュースを製した。このリンゴジュースのｐＨは、５．０であった。
【００６２】
＜リンゴジュースの配合割合＞
５倍濃縮りんご透明果汁              ２０％
クエン酸３ナトリウム                  ０．７％
ヒアルロン酸（平均分子量：９千）      ０．２％
清水                                ７９．１％
――――――――――――――――――――――――
合計                              １００％
【００６３】
［試験例１］
実施例１〜４並びに比較例１又は２で得られた酸性飲料を２５℃で１日保存した後、外観の目視検査を行った。結果を表２に示す。
【００６４】
【表２】
2008173109.tif 000003
【００６５】
本発明の平均分子量２万以下のヒアルロン酸および／またはその塩を配合した実施例１〜４の酸性飲料は、平均分子量が２万超のヒアルロン酸および／またはその塩を配合した比較例１及び比較例２よりも透明性に優れていることが理解される。さらに、ヒアルロン酸および／またはその塩の分子量分布が分子量１万以下の成分の割合が４０％以上で、かつ、分子量５万以上の成分の割合が５％以下である実施例１〜３は、分子量５万以上の成分の割合が５％超である実施例４よりも透明性に優れていることが理解される。さらに、ヒアルロン酸および／またはその塩の配合量が０．０１〜２％である実施例１又は実施例２は、ヒアルロン酸の配合量が２％超である実施例３よりも透明性に優れていることが理解される。
【００６６】
また、表２には示していないが、比較例３の評価結果は、やや透明性に優れる「△」という結果であった。これより、酸性下で加熱殺菌を施す時のｐＨが２．０〜４．５である実施例１は、加熱殺菌を施す時のｐＨが４．５超である比較例３よりも透明性に優れていることが理解できる。なお、比較例３の飲料は、ｐＨが４．５超であることから、常温流通ができず、本発明の酸性飲料に該当しない。
【００６７】
［実施例５］
下記配合の酢飲料を製した。つまり、調製例１で得られた平均分子量が９千で、その分子量分布が分子量１万以下の成分の割合が４９％以上で分子量５万以上の成分の割合が０．５％であるヒアルロン酸と、下記の配合割合に示す他の原料を撹拌・混合し、９０℃で１５分の加熱殺菌後、３００ｍＬガラス瓶に充填、密封した。この酢飲料のｐＨは、３．１であった。また、加熱殺菌直後の品温は、９０℃であった。
【００６８】
＜酢飲料の配合割合＞
りんご酢                            ５％
上白糖                              ３％
ヒアルロン酸（平均分子量：９千）    ０．２％
香料                                ０．１％
清水                              ９１．７％
―――――――――――――――――――――――
合計                            １００％
【００６９】
［実施例６］
下記配合のクエン酸飲料を製した。つまり、調製例１で得られた平均分子量が９千で、その分子量分布が分子量１万以下の成分の割合が４９％以上で分子量５万以上の成分の割合が０．５％であるヒアルロン酸と、下記の配合割合に示す他の原料を撹拌・混合し、９０℃で２０分の加熱殺菌後、３５０ｍＬペットボトルに充填、密封した。このクエン酸飲料のｐＨは、３．４であった。また、加熱殺菌直後の品温は、９０℃であった。
【００７０】
＜クエン酸飲料の配合割合＞
上白糖                            １０％
ヒアルロン酸（平均分子量：９千）    ０．５％
クエン酸３ナトリウム                ０．０７％
清水                              ８９．４３％
――――――――――――――――――――――――
合計                            １００％
【００７１】
［実施例７］
下記配合のみかん果汁１００％のオレンジジュースを製した。つまり、調製例１で得られた平均分子量９千で、その分子量分布が、分子量１万以下の成分の割合が４９％以上で、分子量５万以上の成分の割合が０．５％であるヒアルロン酸と、下記の配合割合に示す他の原料を撹拌・混合し、９５℃で２０分の加熱殺菌後、３５０ｍＬガラス瓶に充填、密封した。このオレンジジュースのｐＨは３．６であった。また、加熱殺菌直後の品温は、９５℃であった。
【００７２】
＜オレンジジュースの配合割合＞
６倍濃縮みかん果汁                １６．７％
ヒアルロン酸（平均分子量：９千）    ０．２％
香料                                ０．２％
清水                              ８２．９％
―――――――――――――――――――――――
合計                            １００％
【００７３】
［比較例４］
実施例５の酢飲料で使用した平均分子量９千のヒアルロン酸を、平均分子量８０万のヒアルロン酸ナトリウムに変更した以外は、実施例５と同様の方法で酢飲料を製した。この酢飲料のｐＨは、３．２であった。
【００７４】
［比較例５］
実施例６のクエン酸飲料で使用した平均分子量９千のヒアルロン酸を、平均分子量８０万のヒアルロン酸ナトリウムに変更した以外は、実施例６と同様の方法でクエン酸飲料を製した。このクエン酸飲料のｐＨは、３．５であった。
【００７５】
［比較例６］
実施例７のオレンジジュースで使用した平均分子量９千のヒアルロン酸を、平均分子量８０万のヒアルロン酸ナトリウムに変更した以外は、実施例７と同様の方法でオレンジジュースを製した。このオレンジジュースのｐＨは、３．７であった。
【００７６】
［試験例２］
実施例１及び実施例５〜７、並びに比較例１及び比較例４〜６で得られた酸性飲料を２５℃で１日保存した後、外観の目視検査を行った。結果を表３に示す。
【００７７】
【表３】
2008173109.tif 000004
【００７８】
本発明の平均分子量２万以下のヒアルロン酸および／またはその塩を配合した実施例１のリンゴジュース、実施例５の酢飲料、実施例６のクエン酸飲料及び実施例７のオレンジジュースは、平均分子量が２万超のヒアルロン酸および／またはその塩を配合した比較例１のリンゴジュース、比較例４の酢飲料、比較例５のクエン酸飲料及び比較例６のオレンジジュースよりも透明性に優れていることが理解される。さらに、実施例１のリンゴジュース、実施例５の酢飲料及び実施例６のクエン酸飲料は、実施例７のオレンジジュースよりも、透明性に優れた飲料であることが理解される。
【図面の簡単な説明】
【００７９】
【図１】図１は、調製例２で得られたヒアルロン酸のクロマトグラムを示す。
【図１】
2008173109.tif 000005