(57)【要約】【課題】高いメラニン産生抑制活性を有する新規メラニン産生抑制剤の提供。【解決手段】Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物抽出物を有効成分とするメラニン産生抑制剤を提供する。該メラニン産生抑制剤は、高い安全性及び優れた皮膚官能性を発揮し得るものであり、加えてメラノーマ細胞に対する脱癌化作用をも発揮する。さらに、該メラニン産生抑制剤を薬理学的に許容され得る添加剤と混成した医薬品組成物及び化粧料組成物、並びに食品原料と混成した食品を提供する。【選択図】図７
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物からの抽出物を有効成分とするメラニン産生抑制剤。
【請求項２】
前記抽出物は、Ｇｅｎｋｗａｄａｐｈｎｉｎ，Ｇｎｉｄｉｃｉｎ，Ｇｎｉｄｉｌａｔｉｄｉｎのいずれかから選択される１以上を含有することを特徴とする請求項１記載のメラニン産生抑制剤。
【請求項３】
前記Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物は、Ｔｈｙｍｅｌａｅａ  ｈｉｒｓｕｔａであることを特徴とする請求項１又は２記載のメラニン産生抑制剤。
【請求項４】
メラノーマ細胞に対する脱癌化作用を有することを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載のメラニン産生抑制剤。
【請求項５】
請求項１から４のいずれか一項に記載のメラニン産生抑制剤と薬理学的に許容され得る添加剤とを含有する美白用医薬品組成物。
【請求項６】
請求項１から４のいずれか一項に記載のメラニン産生抑制剤と薬理学的に許容され得る添加剤とを含有する美白用化粧料組成物。
【請求項７】
請求項１から４のいずれか一項に記載のメラニン産生抑制剤と食品原料とを含有する美白用食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、メラニン産生抑制剤に関する。より詳しくは、Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物から抽出したメラニン産生抑制剤とこれを含有する美白用の医薬品組成物、化粧料組成物、並びに食品などに関する。
【背景技術】
【０００２】
日焼けやシミ、ソバカス等の皮膚の色素沈着は、表皮細胞に存在する細胞メラノサイトが増殖し、増殖したメラノサイトにおいて生成された色素メラニンが隣接細胞に拡散することで生じる。このメラノサイトでのメラニン産生に中心的役割を果たしている酵素チロシナーゼの発現を抑制することにより、あるいは酵素チロシナーゼの活性を阻害することにより、メラニン産生を抑制し美白作用を発揮する薬剤が種々知られている。このような薬剤として代表的なものに、コウジ酸やアルブチンがある。
【０００３】
また、酵素チロシナーゼの作用により生じたドーパやドーパキノンから酵素的または非酵素的酸化作用でメラニンが生成するが、その過程を阻害することでメラニン産生を抑制し美白作用を発揮する薬剤も種々知られている。このような薬剤として代表的なものには、アスコルビン酸、ハイドロキノン等がある。
【０００４】
このうち特に、コウジ酸及びその誘導体はメラニン産生抑制剤として、美白用化粧料組成物や皮膚外用剤に使用されてきた（特許文献１−３参照）。しかし近年になって、コウジ酸が発がん性及び遺伝毒性を有する可能性が指摘され、これに替わる安全なメラニン産生抑制剤が求められている。
【０００５】
さらに、美白用化粧料組成物においては、皮膚に対する低刺激性の要求や天然指向を反映して、植物の抽出物中にメラニン産生抑制作用を有するものを見いだそうとする試みがなされている（特許文献４−６参照）。
【特許文献１】特公昭５６−１８５６９号公報
【特許文献２】特公昭６０−９７２２号公報
【特許文献３】特公昭６０−１０００５号公報
【特許文献４】特公昭６１−１０４４２号公報
【特許文献５】特公平５−２７６０５号公報
【特許文献６】特公平５−８７４８２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、上述のような現状に鑑み、安全性及び皮膚官能性に優れ、高いメラニン産生抑制活性を有する新規メラニン産生抑制剤を提供することを主な目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記課題の解決のため、種々の天然物を探索し、Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物抽出物にメラニン産生抑制作用があることを初めて見出し、本願発明を完成するに至った。
【０００８】
そこで、本発明は、Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物抽出物を有効成分とするメラニン産生抑制剤を提供する。この抽出物は、Ｇｅｎｋｗａｄａｐｈｎｉｎ，Ｇｎｉｄｉｃｉｎ，Ｇｎｉｄｉｌａｔｉｄｉｎのいずれかから選択される１以上を含有する。
【０００９】
Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物のうち、特にＴｈｙｍｅｌａｅａ  ｈｉｒｓuｔａからの抽出物は、顕著なメラニン産生抑制活性を有する。
【００１０】
また、これらのメラニン産生抑制剤は、メラノーマ細胞に対する脱癌化作用をも発揮するものである。
【００１１】
Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物抽出物を有効成分とするメラニン産生抑制剤は、薬理学的に許容され得る添加剤と混成して美白用医薬品組成物及び美白用化粧料組成物を得ることができる。また、食品原料と混成して美白用食品とすることも可能である。
【００１２】
これら医薬品組成物、化粧料組成物及び食品には、次のような有利性がある。
【００１３】
本発明に係るメラニン産生抑制剤は植物由来成分であるため、その医薬品組成物は長期にわたって連続的に適用できる可能性が高く、副作用も少ない可能性が高い。また、例えば、本発明に係るメラニン産生抑制剤を化粧料、健康補助食品などとして長期間、連続的に適用することにより、優れた美白効果を得ることが可能と考えられる。
【発明の効果】
【００１４】
本発明により、高いメラニン産生抑制活性を有する新規メラニン産生抑制剤が提供される。また、該メラニン産生抑制剤は高い安全性及び優れた皮膚官能性を発揮し得るものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物は、地中海沿岸一帯に生育する植物である。
【００１６】
Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属に属する植物としては、Ｔｈｙｍｅｌａｅａ  ａｎｔｉａｔｌａｎｔｉｃａ，Ｔ． ｈｙｍｅｌａｅａ ａｕｃｈｅｒｉ，Ｔ． ｂｒｏｔｅｒｉａｎａ， Ｔ． ｃａｌｙｃｉｎａ， Ｔ． ｃｉｌｉｃｉｃａ，Ｔ． ｃｏｒｉｄｉｆｏｌｉａ， Ｔ． ｄｉｏｉｃａ， Ｔ． ｇｒａｎａｔｅｎｓｉｓ， Ｔ． ｇｕｓｓｏｎｅｉ，  Ｔ．ｈｉｒｓuｔａなどの３０種程度がある。
【００１７】
本発明者は、上記のＴｈｙｍｅｌａｅａ属植物からの抽出物がメラニン産生抑制活性を有すること、なかでもＴｈｙｍｅｌａｅａ  ｈｉｒｓｕｔａからの抽出物は特にメラニン産生抑制活性が顕著であることを新規に見出した。Ｔｈｙｍｅｌａｅａ  ｈｉｒｓｕｔａは北アフリカの半乾燥地地域に生息し、当該地域では民間伝承薬として抗炎症薬に用いられている。しかし、これまでＴｈｙｍｅｌａｅａ  ｈｉｒｓｕｔａからの抽出物についてメラニン産生抑制作用や脱癌化作用の検討はなされていない。
【００１８】
以下、本発明を実施するための好適な形態について説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本発明の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これにより本発明の範囲が狭く解釈されることはない。
【００１９】
本発明に係るメラニン産生抑制剤は、各種溶媒を用いてＴｈｙｍｅｌａｅａ属植物の全草を抽出して得ることができる。ここで、Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物の全草とは、葉、花、茎、根のいずれの部分も用いることができることを意味する。また、これらは生の状態で用いてもよく、あるいは乾燥物を用いてもよい。抽出溶媒としては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、アセトン、メチルエチルケトン、酢酸エチル、エーテル類、クロロホルム、及びジクロロメタンのような有機溶媒ならびに水を用いることができる。このうち、本発明においては、メタノール、エタノール、酢酸エチルまたはこれら溶媒と水との組合せが好ましく、毒性が低いという生体内における安全性を考慮すれば、エタノール、または水とエタノールとの混合溶媒がさらに好ましい。好適な抽出方法としては、乾燥したＴｈｙｍｅｌａｅａ属植物の全草を、７０％エタノール中に１週間浸漬した後、孔径０．４５μｍのマイクロフィルターを用いて不溶物を除去することにより得ることができる。
【００２０】
本発明に係るメラニン産生抑制剤は、美白用医薬品組成物や美白用化粧料組成物、美白用食品などの適切な形態に加工され得る。
【００２１】
医薬品組成物や化粧料組成物に加工される場合、メラニン産生抑制剤と薬理学的に許容され得る添加剤とが混合される。添加剤の例としては、界面活性剤、賦形剤、着色料、保存料、コーティング助剤ならびにこれらの組合せが挙げられる。これら添加剤は、通常の医薬品製造における添加剤であれば特に限定されず、より具体的な例としては、ラクトース、デキストリン、スクロース、マンニトール、コーンスターチ、ソルビトール、結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、香味料、甘味料及びこれらの組合せが挙げられる。また、油類、アルコール類、保湿剤、紫外線吸収、香料、抗酸化剤、顔料等、一般的な化粧料用原料をも含有させることができる。さらに、必要に応じて他の薬剤との合剤としてもよい。
【００２２】
医薬品組成物は、経口投与または非経口投与のいずれに使用されてもよい。投与剤形も特に限定されず、日本薬局方に従って適切な剤形に製造される。具体的には、経口投与を目的とする場合は、カプセル剤、錠剤、粉剤、除放剤などの剤形に製造される。非経口投与を目的とする場合は、注射剤、輸液剤、外用剤などの剤形に製造される。また、化粧料組成物は、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム、軟膏として、より詳細には、メイクアップベースローション、メイクアップベースクリーム、液状又はクリーム状又は軟膏型のファンデーション等の美白用メイクアップ化粧料、日焼け止めローション，日焼け止めクリーム等の日焼け止め化粧料、ハンドクリーム、レッグクリーム、ボディローション等の美白用身体用化粧料としても提供し得る。
【００２３】
食品に加工される場合、メラニン産生抑制剤と適切な食品原料とが混合される。この適切な食品原料は、一般に食品用材料として使用され得るものである。例としては、米、小麦、トウモロコシ、ジャガイモ、スイートポテト、大豆、昆布、ワカメ、テングサなどの粉類；水飴；乳糖；グルコース；果糖；スクロース；マンニトール；ならびにこれらの組合せが挙げられる。さらに、香辛料、着色料、甘味料、食用油、ビタミンなどを添加してもよい。これら適切な食品原料は単独または組合せて使用される。さらに、必要に応じて水を添加して所望の形状に加工してもよい。このようにして、保健機能食品（特定保健機能食品、栄養機能食品、飲料を含む）や、いわゆる健康食品（飲料を含む）、又は飼料を得ることができる。またこれらの食品は飼料として動物に給餌することも可能である。
【実施例１】
【００２４】
＜Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物からのメラニン産生抑制剤の抽出＞
乾燥させたＴｈｙｍｅｌａｅａ  ｈｉｒｓuｔａの全草１００ｇを、７０％エタノール１０００ｍｌ中に１週間浸漬した後、孔径０．４５μｍのマイクロフィルターを用いて不溶物を除去することにより、以下の実施例で用いるメラニン産生抑制剤（以下、「Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物抽出物」とも表記する）を得た。このＴｈｙｍｅｌａｅａ属植物抽出物をロータリーエバポレーターにより５０℃で減圧乾燥を行い、やや緑色がかった薄い褐色の粉末（以下、Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物抽出乾燥物とも表記する）を得た。その収量は０．８％であった。
【実施例２】
【００２５】
＜メラノーマ細胞を用いたメラニン合成阻害作用の検討＞
実施例１で調製したメラニン産生抑制剤について、Ｂ１６細胞株を用いたメラニン合成阻害試験を行った。Ｂ１６細胞は、マウスのメラノーマ（黒色腫）から樹立された細胞株である。メラニン色素を産生する色素細胞であるため、メラニン合成に関する薬効試験に広く用いられている。
【００２６】
１０％ウシ胎児血清含有のＤＭＥＭ培地１５ｍｌを含む細胞培養用１０ｃｍシャーレに、その細胞密度が１×１０６細胞/シャーレになるように接種し、５％ＣＯ2 下、３７℃にて一昼夜培養後、実施例１で調製したメラニン産生抑制剤を１／１０００濃度になるようにシャーレに添加し（投与群）、さらに同条件下で３日間培養を行った。対照群には、メラニン産生抑制剤を溶解した溶媒のみを添加した。
【００２７】
培養終了後、ＰＢＳ（−）緩衝液１０ｍｌで２回洗浄し、０．２５％トリプシン処理にて細胞を収集し、その後０．１％トライトンＸ１００含有ＰＢＳ（−）にて膜を溶解後、トリクロロ酢酸にてメラニンを抽出・精製、水酸化ナトリウムにメラニンを溶解した溶解液を図１に示す。また、既存の方法により、メラニン含有量（μｇ）を測定した結果を図２に示す。
【００２８】
図１及び図２中、符号Ｓで示される投与群では、符号Ｃで示される対照群に比して細胞懸濁液の顕著な白化が認められた（図１参照）。また、細胞内におけるメラニン合成量は、対照群では９２．８１μｇであったのに対して、投与群では５１．８９μｇと、有意な低下が確認された（図２参照）。この結果は、本発明に係るメラニン産生抑制剤が、Ｂ１６細胞に対する白色化作用を有し、色素細胞中のメラニン色素産生を抑制することを示している。
【００２９】
次に、これらの細胞において、ＭＡＰキナーゼカスケードに属するＥＲＫ1／２のリン酸化状態を検討した。従来、ＭＡＰキナーゼカスケードの活性化により、ＥＲＫ1／２がリン酸化するとメラニン合成が抑制されることが知られている。
【００３０】
投与群、対照群の細胞から、定法によりタンパクを抽出し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離後、メンブレンにブロットし、ＥＲＫ1／２及びリン酸化（ｐ−ＥＲＫ1／２）を認識する抗体（SIGMA社）を用いてウェスタンブロットを行なった。結果を図３に示す。符号Ｓは投与群、符号Ｃは対照群を表す。
【００３１】
投与群において、ｐ−ＥＲＫ1／２の顕著な増加が認められ、ＭＡＰキナーゼカスケードの活性化に伴うメラニン合成抑制が起きていることが確認された。
【００３２】
次に、同様にメラニン産生抑制剤を処置した投与群と対照群において、処置後４８時間の細胞生存率をフローサイトメトリー法により測定した。
【００３３】
フローサイトメトリー法は、死細胞を染色する蛍光色素（ＰＭ２）と核内DNAを染色する蛍光色素（ＰＭ１）を用いて細胞を染色し、さらに前方散乱光の大きさにより凝集性細胞、アポトーシス細胞、ネクローシス細胞を区別して、生細胞と死細胞を判別する方法である。したがって、ＰＭ２染色が低く、かつＰＭ１染色が強いものから、凝集細胞を除いたものをカウントすることにより、細胞生存率を測定することが可能である。
【００３４】
結果を図４に示す。符号Ｓは投与群、符号Ｃは対照群を表す。
【００３５】
投与群における細胞生存率は９４．６％であり、対照群における細胞生存率９８．３％と同等であった。このことは、本発明に係るメラニン産生抑制剤が、細胞毒性を有しないことを示している。
【実施例３】
【００３６】
＜メラノーマ細胞を用いた脱癌化作用の検討＞
次に、同様にメラニン産生抑制剤を処置した投与群と対照群において、処置後４８時間〜７２時間の細胞形態を観察した。
【００３７】
結果を図５に示す。符号Ｓは投与群、符号Ｃは対照群を表す。
【００３８】
対照群のB１６細胞は、繊維芽細胞様の錐体形を呈し、豊富なメラニン色素顆粒を有する細胞が散見される。これに対して、投与群では、細胞は上皮細胞様の形態へ変化し、細胞内にメラニン色素顆粒は認められない。すなわち、本発明に係るメラニン産生抑制剤は、B１６細胞の形質転換を誘導し、メラノーマ細胞に対する脱癌化作用を発揮することが分かる。
【００３９】
以上は、本発明に係るメラニン産生抑制剤が、メラノーマ細胞の脱癌化を促進させる作用により、メラノーマ（黒色腫）治療薬としても適用できる可能性があることを強く示唆するものである。
【実施例４】
【００４０】
＜Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物抽出物中の有効成分の同定＞
実施例１と同様の方法により、Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物抽出物を調製した。ただし、本実施例においては、抽出にはメタノールを用いた。この抽出物を、酢酸エチルと水で分配した。次に、酢酸エチル可溶部及び水可溶部のそれぞれについて、実施例２と同様の方法によりＢ１６細胞株を用いたメラニン合成阻害試験を行なった。その結果、酢酸エチル可溶部に、投与量に依存したメラニン合成阻害作用が認められた。
【００４１】
酢酸エチル可溶部を順相カラムクロマトグラフィー（シリカゲルカラム：φ2.2×33cm、溶媒：ヘキサン／酢酸エチル5：1，2：1，クロロホルム／メタノール8：1，0：100）を用いてフラクション化し、１７分画（Th-EtOAc-1〜17）を得た。各分画について、実施例２と同様の方法によりＢ１６細胞株を用いたメラニン合成阻害試験を行なった結果、Th-EtOAc-11分画に最も強いメラニン合成阻害作用が認められた。
【００４２】
Th-EtOAc-11分画をC18 Sep-Pakカートリッジ（溶媒：メタノール／水50：50，100：0，クロロホルム／メタノール1：6，100：0，水）を用いてフラクション化し、６分画（Th-EtOAc-11-1〜6）を得た。各分画について、実施例２と同様の方法によりＢ１６細胞株を用いたメラニン合成阻害試験を行なった結果、Th-EtOAc-11-3分画に最も強いメラニン合成阻害作用が認められた。
【００４３】
Th-EtOAc-11-3分画をさらにC18逆相カラム（Intersil ODS3：φ1.0×25cm、溶媒：アセトニトリル／水65：35、流速：2.0ml/mis）を用い、高速液体クロマトグラフ（HPLC）により精製し、３化合物（Th-EtOAc-11-3-6，Th-EtOAc-11-3-8，Th-EtOAc-11-3-14）を得た。
【００４４】
Th-EtOAc-11-3-6，Th-EtOAc-11-3-8，Th-EtOAc-11-3-14の３化合物について、1H NMRスペクトル及びEIMSスペクトルの測定を行った。測定には、それぞれBrucker AVANCE 500 spectrometer及びMS-6890を用いた。
【００４５】
1H NMRスペクトルでは、5.12ppm及び4.92ppmのオキシメチンシグナル、5.02ppmのメチレンシグナルが観測された。３化合物についての詳細な測定データは以下の通りである。
（１）Th-EtOAc-11-3-6
EIMS m/z 602 (M+), 1H NMR (CDCl3, 500MHz): δ7.60-7.75 (m, aromatic-H), 7.50 (s, 1H), 5.28 (s, 1H), 5.05 (s, 2H), 4.95 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 4.25 (s,1H), 3.90 (m, 1H), 3.85 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 3.63 (br s, 1H), 2.63 (q, J = 7.3 Hz, 1H), 1.88 (s, 3H), 1.75 (d, J = 2.6 Hz, 3H), 1 and 0.88 (m, 3H).
（２）Th-EtOAc-11-3-8
EIMS m/z 628 (M+), 1HNMR (CDCl3, 500MHz): δ7.60-7.75 (m, aromatic-H), 7.50 (s, 1-H), 6.37 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 5.18 (s, 1H), 5.05 (s, 2H), 4.95 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 4.25 (s, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.85 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 3.63 (br s, 1H), 2.52 (q, J = 7.3 Hz, 1H), 1.88 (s, 3H), 1.75 (d, J = 2.6 Hz, 3H), and 0.88(m, 3H).
（３）Th-EtOAc-11-3-14
ESIMS m/z 671(M + Na+); 1H NMR(CDCl3, 500MHz, TMS): δ7.90-7.40 (5H, m, aromatic-H), 7.50 (1H, s, ), 6.76-5.53(4H, m, olefinic-H), 5.21 (1H, s), 5.01 (2H, s), 4.90(1H, d, J = 2.50), 4.16(1H, s), 3.90(1H, s), 3.85(2H, br s), 3.63(1H, s), 3.60(1H, d, J = 2.46), 2.55(1H, q, J = 7.34 Hz), 1.88(3H, s), 1.75(3H,br s), 1.36 (3H, d, J = 7.26Hz), 1.33 (3H,m), 0.88(3H, m) ppm.
【００４６】
以上の測定データより、Th-EtOAc-11-3-6はGenkwadaphnin（Kasai R, et al. Genkwadaphnin, a potent antileukemicditerpene from Daphne genkwa. Phytochemistry 1981: 20: 2592-2593.参照）と同定された。また、Th-EtOAc-11-3-8は、Gnidicin（Brooks G, et al. Daphnanediterpenes of T. hirsuta. Phytochemistry1990: 29: 2235-2237.参照）、Th-EtOAc-11-3-14はGnidilatidin（Borris RP, et al. Studies of the ThymelaeaceaeII. Antineoplastic principles of Gnidiakraussiana. Journal of Natural Products. 1984: 47: 270-278）と同定された。Genkwadaphnin，Gnidicin，Gnidilatidinはdaphnane骨格を有する化合物である。それぞれの構造式を、図６（Ａ）〜（Ｃ）に示す。
【実施例５】
【００４７】
＜メラノーマ細胞を用いたメラニン合成阻害作用の検討２＞
Genkwadaphnin，Gnidicin，Gnidilatidinについて、Ｂ１６細胞株を用いたメラニン合成阻害試験を行なった。
【００４８】
上述の方法により、Ｂ１６細胞株をシャーレに接種し、５％ＣＯ2 下、３７℃にて一昼夜培養後、実施例４で精製したGenkwadaphnin，Gnidicin，Gnidilatidinを、それぞれ0.1μM, 0.3μM, 1μMの濃度でシャーレに添加し（投与群）、さらに２日間培養を行った。対照群には、エタノールのみを添加した。
【００４９】
培養終了後、実施例２と同様の方法により、メラニン含有量及び細胞生存率を測定した結果を図７に示す。図７（Ａ）〜（Ｃ）は、それぞれGenkwadaphnin，Gnidicin，Gnidilatidinの結果を示す。なお、メラニン含有量及び細胞生存率は対照群を１００として示した。
【００５０】
Genkwadaphnin，Gnidicin，Gnidilatidinのいずれにおいても、各投与濃度で細胞内におけるメラニン合成量の顕著な低下が確認された。Genkwadaphnin，Gnidicinでは対照群の６０％前後、Gnidilatidinでは４０％前後にまでメラニン合成が抑制された。また、Genkwadaphnin，Gnidicin，Gnidilatidinのいずれにおいても、細胞生存率の低下は認めらなかった。これらの結果は、Genkwadaphnin，Gnidicin，Gnidilatidinが、Ｂ１６細胞に対する白色化作用を有し、色素細胞中のメラニン色素産生を抑制すること、なおかつ細胞毒性は有しないことを示している。
【００５１】
以上の実験により、本発明に係るメラニン産生抑制剤が、顕著なメラニン合成阻害活性を有し、優れた美白作用を発揮するものであることが証明された。また、細胞毒性が認められなかったことから、安全性の高いメラニン産生抑制剤であると考えられた。
【実施例６】
【００５２】
次に本発明のメラニン産生抑制剤を含む医薬品組成物の処方実施例を詳細に説明する。表１に示す配合組成にしたがって、Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物抽出物を含有する医薬品組成物の一例として、軟膏（処方実施例）を調製した。
【００５３】
【表１】
2008179598.tif 000003
【実施例７】
【００５４】
次に本発明のメラニン産生抑制剤を含む化粧料の処方実施例を詳細に説明する。表２に示す配合組成にしたがって、Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物抽出物を含有する化粧水（処方実施例）を調製した。
【００５５】
【表２】
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また、表３に示す配合組成にしたがって、Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物抽出物を含有する乳液（処方実施例）を調製した。
【００５６】
【表３】
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（注１）日本油脂株式会社製「Lipidure-PMB」
【実施例８】
【００５７】
次に本発明のメラニン産生抑制剤を含む食品の処方実施例を詳細に説明する。表４に示す配合組成にしたがって、Ｔｈｙｍｅｌａｅａ属植物抽出乾燥物を含有するチューンガム（処方実施例）を調製した。
【００５８】
【表４】
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また、表５及び６に示す配合組成にしたがって、それぞれＴｈｙｍｅｌａｅａ属植物抽出乾燥物を含有するクッキー及び清涼飲料水（処方実施例）を調整した。
【００５９】
【表５】
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【００６０】
【表６】
2008179598.tif 000008
【産業上の利用可能性】
【００６１】
本発明に係るＴｈｙｍｅｌａｅａ属植物抽出物を有効成分とするメラニン産生抑制剤は、日焼けやシミ、ソバカス等の皮膚の色素沈着を防止するための美白用の医薬品組成物、化粧料組成物、並びに食品などとして好適に利用することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】本発明に係るメラニン産生抑制剤を処置したB１６細胞の細胞懸濁液の白化を示す図である。
【図２】本発明に係るメラニン産生抑制剤を処置したB１６細胞のメラニン合成量の減少を示す図である。
【図３】本発明に係るメラニン産生抑制剤を処置したB１６細胞におけるＭＡＰキナーゼカスケードの活性化を示す図である。
【図４】本発明に係るメラニン産生抑制剤を処置したB１６細胞の細胞生存率を示す図である。
【図５】本発明に係るメラニン産生抑制剤の脱癌化作用を示す図である。
【図６】Genkwadaphnin（Ａ），Gnidicin（Ｂ），Gnidilatidin（Ｃ）の構造式を示す図である。
【図７】Genkwadaphnin（Ａ），Gnidicin（Ｂ），Gnidilatidin（Ｃ）を処置したB１６細胞のメラニン合成量の減少及び細胞生存率を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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