(57)【要約】【課題】新規の骨分化を調節する組成物を提供することを本発明の課題とする。また、骨分化状態を測定する組成物もまた求められている。従って、本発明が解決しようとする課題は、新規の骨分化状態を測定する組成物および骨分化を調節する組成物を提供することも本発明の課題とする。【解決手段】DNAマイクロアレイを用いた遺伝子の発現レベルの変化の解析から、MSC培養系で骨、軟骨あるいは脂肪分化によりより亢進する遺伝子に注目し、その中から特に骨分化に関わる転写因子を選定した。さらに骨分化誘導開始から24時間以内に発現が亢進した転写因子を網羅的に明らかにし、これら転写因子の発現を抑制することにより骨分化に影響を与える転写因子をコードする遺伝子を同定することによって、上記課題が解決された。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
間葉系幹細胞の骨分化状態を測定するためのマーカーであって、以下：
配列番号１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号１に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号３に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号５に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号７に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号７に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号７に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号９に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号９に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号９に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号１１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号１１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号１１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号１１に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号１３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号１３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号１３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号１３に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号１４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号１５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号１５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、および
配列番号１５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号１５に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成阻害活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号１７に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号１７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号１７に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号１７に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号５１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号５１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号５１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号５１に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号５２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号５３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号５３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号５３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号５３に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号５４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号５５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号５５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号５５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号５５に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号５６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号５７に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号５７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号５７に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号５７に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号５８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号５９に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号５９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号５９に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号５９に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号６０に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号６１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号６１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号６１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号６１に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号６２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号６３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号６３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号６３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号６３に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号６４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号６５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号６５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号６５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号６５に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号６６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号６７に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号６７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号６７に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号６７に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号６８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号６９に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号６９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号６９に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号６９に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号７０に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号７１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号７１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号７１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号７１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号７１に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号７２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号７３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号７３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号７３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号７３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号７３に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号７４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号７５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号７５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号７５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号７５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号７５に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、および
配列番号７６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
からなる群から選択される核酸または抗体を含有する、マーカー。
【請求項２】
請求項１に記載のマーカーであって、以下、
配列番号１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号３に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号７に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号９に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号１１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号１３に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号１５に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号１７に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５３に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５５に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５７に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５９に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６３に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６５に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６７に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６９に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号７１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号７３に記載の核酸配列を含む核酸、および
配列番号７５に記載の核酸配列を含む核酸
からなる群から選択される核酸を含有する、マーカー。
【請求項３】
請求項１に記載のマーカーであって、以下、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６０に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号７０に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号７２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号７４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、および
配列番号７６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体
からなる群から選択される抗体を含有する、マーカー。
【請求項４】
間葉系幹細胞の骨分化を調節する組成物であって、以下：
配列番号１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であり、骨形成阻害活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成阻害活性を有するポリペプチドをコードする核酸
配列番号５１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、および
配列番号７５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
からなる群から選択される核酸を含有する、組成物。
【請求項５】
請求項４に記載の組成物であって、以下、
配列番号１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号３に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号７に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号９に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号１１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号１３に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号１５に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号１７に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５３に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５５に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５７に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５９に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６３に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６５に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６７に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６９に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号７１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号７３に記載の核酸配列を含む核酸、および
配列番号７５に記載の核酸配列を含む核酸
からなる群から選択される核酸を含有する、組成物。
【請求項６】
間葉系幹細胞の骨分化を調節する組成物であって、以下：
配列番号１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号１１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号１３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号１５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号１７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成阻害活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号５１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号５３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号５５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号５７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号５９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号６１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号６３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号６５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号６７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号６９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号７１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸、
配列番号７３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸、および
配列番号７５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
からなる群から選択される核酸を含有する、組成物。
【請求項７】
間葉系幹細胞の骨分化を調節する組成物であって、以下：
少なくとも２１塩基の長さである配列番号１に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号１に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号３に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号３に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号５に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号５に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号７に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号７に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号９に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号９に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号１１に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号１１に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号１３に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号１３に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号１５に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号１５に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号１７に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号１７に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号５１に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号５１に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号５３に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号５３に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号５５に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号５５に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号５７に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号５７に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号５９に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号５９に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号６１に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号６１に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号６３に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号６３に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号６５に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号６５に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号６７に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号６７に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号６９に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号６９に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号７１に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号７１に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号７３に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号７３に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、および
少なくとも２１塩基の長さである配列番号７５に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号７５に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
からなる群から選択される核酸フラグメントの対を含有する、組成物。
【請求項８】
間葉系幹細胞の骨分化を調節する組成物であって、以下：
配列番号１９の核酸配列を含む核酸と、配列番号２０の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号２１の核酸配列を含む核酸と、配列番号２２の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号２３の核酸配列を含む核酸と、配列番号２４の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号２５の核酸配列を含む核酸と、配列番号２６の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号２７の核酸配列を含む核酸と、配列番号２８の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号２９の核酸配列を含む核酸と、配列番号３０の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号３１の核酸配列を含む核酸と、配列番号３２の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号３３の核酸配列を含む核酸と、配列番号３４の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号３５の核酸配列を含む核酸と、配列番号３６の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号３７の核酸配列を含む核酸と、配列番号３８の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号３９の核酸配列を含む核酸と、配列番号４０の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号４１の核酸配列を含む核酸と、配列番号４２の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号４３の核酸配列を含む核酸と、配列番号４４の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号４５の核酸配列を含む核酸と、配列番号４６の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号４７の核酸配列を含む核酸と、配列番号４８の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１０９の核酸配列を含む核酸と、配列番号１１０の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１１１の核酸配列を含む核酸と、配列番号１１２の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１１３の核酸配列を含む核酸と、配列番号１１４の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１１５の核酸配列を含む核酸と、配列番号１１６の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１１７の核酸配列を含む核酸と、配列番号１１８の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１１９の核酸配列を含む核酸と、配列番号１２０の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１２１の核酸配列を含む核酸と、配列番号１２２の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１２３の核酸配列を含む核酸と、配列番号１２４の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１２５の核酸配列を含む核酸と、配列番号１２６の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１２７の核酸配列を含む核酸と、配列番号１２８の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１２９の核酸配列を含む核酸と、配列番号１３０の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１３１の核酸配列を含む核酸と、配列番号１３２の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１３３の核酸配列を含む核酸と、配列番号１３４の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１３５の核酸配列を含む核酸と、配列番号１３６の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１３７の核酸配列を含む核酸と、配列番号１３８の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１３９の核酸配列を含む核酸と、配列番号１４０の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１４１の核酸配列を含む核酸と、配列番号１４２の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１４３の核酸配列を含む核酸と、配列番号１４４の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１４５の核酸配列を含む核酸と、配列番号１４６の核酸配列とを含む核酸の対、および、
配列番号１４７の核酸配列を含む核酸と、配列番号１４８の核酸配列とを含む核酸の対、
からなる群から選択される核酸フラグメントの対を含有する、組成物。
【請求項９】
間葉系幹細胞の骨分化を調節する組成物であって、以下：
配列番号１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号２に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号４に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号８に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１０に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１２に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１４に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１６に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１８に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号５２に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号５４に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号５６に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号５８に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６０に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６０に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６２に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６４に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６６に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６８に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７０に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号７０に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号７２に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号７４に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、および
配列番号７６に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
からなる群から選択されるポリペプチドを含有する、組成物。
【請求項１０】
請求項９に記載の組成物であって、以下、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号５２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号５４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号５６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号５８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６０に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号７０に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号７４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、および
配列番号７６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
からなる群から選択されるポリペプチドを含有する、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、骨分化状態の測定および診断の分野に関する。また、本発明は、骨分化状態の調節の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
骨髄間葉系幹細胞（以下MSC）は骨、軟骨、脂肪細胞などへ多分化能を持つ（非特許文献１）。またMSCは骨髄からのアスピレーションによる採取が容易であり、しかもinvitroにて大量に培養することができるため（非特許文献２）、適当な担体と組み合わせて移植することにより、骨、軟骨、脂肪などさまざまな組織の再生を促すことができる（非特許文献３−６）。
【０００３】
生体内に移植した後、迅速に骨を修復・再生させるためにはMSCを未分化のまま移植するよりも、in vitroで骨分化させてから移植したほうが骨形成が早いと報告されている（非特許文献７、８）。
【０００４】
これまでに、invivo及びin vitroでMSCの骨分化を促進する因子としてbone morphogenic protein2（以下BMP-2）、transforminggrowthfactor-β（TGF-β）、platelet derived growth factor（PDGF）、insulin-like growthfactor（IGF-Ｉ）などのサイトカイン（非特許文献９−１１）やProstaglandinE（PGE）（非特許文献１２）やスタチン（非特許文献１３）といった化合物が研究されている．しかし再生医療において、これらの因子の安全性、有効性、コストが理想的であるとはいえない。
【非特許文献１】Pittenger, M. F., Mackay, A. M., Beck, S. C., Jaiswal, R. K.,Douglas,R., Mosca, J. D., Moorman, M. A., Simonetti, D. W., Craig, S., andMarshak, D.R. (1999). Multilineage potential of adult human mesenchymal stemcells. Science284, 143-7
【非特許文献２】Tsutsumi, S., Shimazu, A., Miyazaki, K., Pan, H., Koike, C.,Yoshida,E., Takagishi, K., and Kato, Y. (2001). Retention ofmultilineagedifferentiation potential of mesenchymal cells during proliferationin responseto FGF.Biochem Biophys Res Commun 288, 413-9
【非特許文献３】Friedenstein, A. J., Piatetzky, S., II, and Petrakova, K. V.(1966).Osteogenesis in transplants of bone marrow cells. J Embryol Exp Morphol16,381-90
【非特許文献４】Deans, R. J., and Moseley, A. B. (2000). Mesenchymal stemcells:biology and potential clinical uses. Exp Hematol 28, 875-84
【非特許文献５】Caplan, A. I., and Bruder, S. P. (2001). Mesenchymal stemcells:building blocks for molecular medicine in the 21st century. Trends MolMed 7,259-64
【非特許文献６】Cancedda, R., Bianchi, G., Derubeis, A., and Quarto, R. (2003).Celltherapy for bone disease: a review of current status. Stem Cells 21, 610-9
【非特許文献７】Yoshikawa, T., Ohgushi, H., and Tamai, S. (1996). Immediateboneforming capability of prefabricated osteogenic hydroxyapatite. J BiomedMaterRes 32, 481-92
【非特許文献８】Arinzeh, T. L., Tran, T., McAlary, J., and Daculsi, G. (2005).Acomparative study of biphasic calcium phosphate ceramics for humanmesenchymalstem-cell-induced bone formation. Biomaterials 26, 3631-8
【非特許文献９】Lecanda, F., Avioli, L. V., and Cheng, S. L. (1997). Regulationofbone matrix protein expression and induction of differentiation ofhumanosteoblasts and human bone marrow stromal cells by bonemorphogeneticprotein-2. J Cell Biochem 67, 386-96
【非特許文献１０】Lee, J. Y., Peng, H., Usas, A., Musgrave, D., Cummins, J.,Pelinkovic,D., Jankowski, R., Ziran, B., Robbins, P., and Huard, J. (2002).Enhancement ofbone healing based on ex vivo gene therapy using humanmuscle-derived cellsexpressing bone morphogenetic protein 2. Hum Gene Ther 13,1201-11
【非特許文献１１】Hizuka, N., Takano, K., Asakawa, K., Sukegawa, I., Horikawa,R.,Yoshizawa, Y., Saito, S., and Shizume, K. (1988). Urinary IGF-I measurementandits clinical application. Acta Paediatr Scand Suppl 347, 127-33
【非特許文献１２】Arikawa, T., Omura, K., and Morita, I. (2004). Regulation ofbonemorphogenetic protein-2 expression by endogenous prostaglandin E2 inhumanmesenchymal stem cells. J Cell Physiol 200, 400-6
【非特許文献１３】Mundy, G., Garrett, R., Harris, S., Chan, J., Chen, D., Rossini,G.,Boyce, B., Zhao, M., and Gutierrez, G. (1999). Stimulation of bone formationinvitro and in rodents by statins. Science 286, 1946-9
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
以上より、新規の骨分化を調節する組成物が求められている。また、骨分化状態を測定する組成物もまた求められている。従って、本発明が解決しようとする課題は、新規の骨分化状態を測定する組成物および骨分化を調節する組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、DNAマイクロアレイを用いた遺伝子の発現レベルの変化の解析から、MSC培養系で骨、軟骨あるいは脂肪分化によりより亢進する遺伝子に注目し、その中から特に骨分化に関わる転写因子を選定した。さらに骨分化誘導開始から24時間以内に発現が亢進した転写因子を網羅的に明らかにし、これら転写因子の発現を抑制することにより骨分化に影響を与える転写因子をコードする遺伝子を同定することによって、上記課題が解決された。
【０００７】
従って、本発明に従って、以下が提供される：
（項目１）
間葉系幹細胞の骨分化状態を測定するためのマーカーであって、以下：
配列番号１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号１に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号３に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号５に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号７に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号７に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号７に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号９に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号９に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号９に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号１１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号１１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号１１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号１１に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号１３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号１３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号１３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号１３に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号１４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号１５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号１５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、および
配列番号１５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号１５に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成阻害活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号１７に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号１７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号１７に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号１７に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号５１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号５１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号５１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号５１に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号５２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号５３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号５３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号５３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号５３に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号５４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号５５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号５５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号５５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号５５に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号５６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号５７に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号５７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号５７に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号５７に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号５８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号５９に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号５９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号５９に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号５９に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号６０に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号６１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号６１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号６１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号６１に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号６２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号６３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号６３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号６３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号６３に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号６４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号６５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号６５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号６５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号６５に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号６６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号６７に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号６７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号６７に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号６７に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号６８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号６９に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号６９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号６９に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号６９に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号７０に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号７１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号７１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号７１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号７１に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号７１に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号７２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号７３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号７３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号７３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号７３に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号７３に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、
配列番号７４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号７５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸、
配列番号７５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸であって、少なくとも１５塩基の長さであり、かつ配列番号７５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸、
配列番号７５に記載の核酸配列の部分配列を含む核酸の対であって、少なくとも１０塩基の長さであって、ＰＣＲプライマーとして配列番号７５に記載の核酸配列を増幅できる核酸の対、および
配列番号７６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
からなる群から選択される核酸または抗体を含有する、マーカー。
（項目２）
項目１に記載のマーカーであって、以下、
配列番号１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号３に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号７に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号９に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号１１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号１３に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号１５に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号１７に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５３に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５５に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５７に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５９に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６３に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６５に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６７に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６９に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号７１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号７３に記載の核酸配列を含む核酸、および
配列番号７５に記載の核酸配列を含む核酸
からなる群から選択される核酸を含有する、マーカー。
（項目３）
項目１に記載のマーカーであって、以下、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号５８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６０に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号６８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号７０に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号７２に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、
配列番号７４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体、および
配列番号７６に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに反応する抗体
からなる群から選択される抗体を含有する、マーカー。
（項目４）
間葉系幹細胞の骨分化を調節する組成物であって、以下：
配列番号１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であり、骨形成阻害活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号１７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成阻害活性を有するポリペプチドをコードする核酸
配列番号５１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号５９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号６９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
配列番号７５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、および
配列番号７５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸、
からなる群から選択される核酸を含有する、組成物。
（項目５）
項目４に記載の組成物であって、以下、
配列番号１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号３に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号７に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号９に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号１１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号１３に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号１５に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号１７に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５３に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５５に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５７に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号５９に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６３に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６５に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６７に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号６９に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号７１に記載の核酸配列を含む核酸、
配列番号７３に記載の核酸配列を含む核酸、および
配列番号７５に記載の核酸配列を含む核酸
からなる群から選択される核酸を含有する、組成物。
（項目６）
間葉系幹細胞の骨分化を調節する組成物であって、以下：
配列番号１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号１１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号１３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号１５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号１７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成阻害活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号５１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号５３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号５５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号５７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号５９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号６１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号６３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号６５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号６７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号６９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
配列番号７１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸、
配列番号７３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸、および
配列番号７５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、骨形成促進活性を有するポリペプチドをコードする核酸の発現を阻害する、核酸
からなる群から選択される核酸を含有する、組成物。
（項目７）
間葉系幹細胞の骨分化を調節する組成物であって、以下：
少なくとも２１塩基の長さである配列番号１に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号１に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号３に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号３に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号５に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号５に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号７に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号７に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号９に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号９に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号１１に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号１１に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号１３に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号１３に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号１５に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号１５に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号１７に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号１７に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号５１に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号５１に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号５３に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号５３に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号５５に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号５５に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号５７に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号５７に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号５９に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号５９に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号６１に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号６１に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号６３に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号６３に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号６５に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号６５に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号６７に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号６７に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号６９に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号６９に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号７１に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号７１に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
少なくとも２１塩基の長さである配列番号７３に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号７３に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、および
少なくとも２１塩基の長さである配列番号７５に記載の核酸配列のフラグメントと、少なくとも２１塩基の長さである配列番号７５に記載の核酸配列の相補鎖のフラグメントの対、
からなる群から選択される核酸フラグメントの対を含有する、組成物。
（項目８）
間葉系幹細胞の骨分化を調節する組成物であって、以下：
配列番号１９の核酸配列を含む核酸と、配列番号２０の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号２１の核酸配列を含む核酸と、配列番号２２の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号２３の核酸配列を含む核酸と、配列番号２４の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号２５の核酸配列を含む核酸と、配列番号２６の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号２７の核酸配列を含む核酸と、配列番号２８の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号２９の核酸配列を含む核酸と、配列番号３０の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号３１の核酸配列を含む核酸と、配列番号３２の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号３３の核酸配列を含む核酸と、配列番号３４の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号３５の核酸配列を含む核酸と、配列番号３６の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号３７の核酸配列を含む核酸と、配列番号３８の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号３９の核酸配列を含む核酸と、配列番号４０の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号４１の核酸配列を含む核酸と、配列番号４２の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号４３の核酸配列を含む核酸と、配列番号４４の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号４５の核酸配列を含む核酸と、配列番号４６の核酸配列とを含む核酸の対、、
配列番号４７の核酸配列を含む核酸と、配列番号４８の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１０９の核酸配列を含む核酸と、配列番号１１０の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１１１の核酸配列を含む核酸と、配列番号１１２の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１１３の核酸配列を含む核酸と、配列番号１１４の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１１５の核酸配列を含む核酸と、配列番号１１６の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１１７の核酸配列を含む核酸と、配列番号１１８の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１１９の核酸配列を含む核酸と、配列番号１２０の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１２１の核酸配列を含む核酸と、配列番号１２２の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１２３の核酸配列を含む核酸と、配列番号１２４の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１２５の核酸配列を含む核酸と、配列番号１２６の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１２７の核酸配列を含む核酸と、配列番号１２８の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１２９の核酸配列を含む核酸と、配列番号１３０の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１３１の核酸配列を含む核酸と、配列番号１３２の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１３３の核酸配列を含む核酸と、配列番号１３４の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１３５の核酸配列を含む核酸と、配列番号１３６の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１３７の核酸配列を含む核酸と、配列番号１３８の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１３９の核酸配列を含む核酸と、配列番号１４０の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１４１の核酸配列を含む核酸と、配列番号１４２の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１４３の核酸配列を含む核酸と、配列番号１４４の核酸配列とを含む核酸の対、
配列番号１４５の核酸配列を含む核酸と、配列番号１４６の核酸配列とを含む核酸の対、および、
配列番号１４７の核酸配列を含む核酸と、配列番号１４８の核酸配列とを含む核酸の対、
からなる群から選択される核酸フラグメントの対を含有する、組成物。
（項目９）
間葉系幹細胞の骨分化を調節する組成物であって、以下：
配列番号１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号２に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号４に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号８に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１０に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１２に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１４に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１６に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１８に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号５２に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号５４に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号５６に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号５８に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号５９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６０に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６０に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６２に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６４に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６６に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６７に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６７に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６８に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６９に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号６９に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７０に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号７０に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７１に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７１に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号７２に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７３に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７３に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号７４に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７５に記載の核酸配列を含む核酸の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７５に記載の核酸配列と少なくとも７０％相同な配列を含む核酸にコードされるポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
配列番号７６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、および
配列番号７６に記載のアミノ酸配列に１または数個の欠失、付加、または、置換を有するポリペプチドであって、骨形成促進活性を有するポリペプチド、
からなる群から選択されるポリペプチドを含有する、組成物。
（項目１０）
項目９に記載の組成物であって、以下、
配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号５２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号５４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号５６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号５８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６０に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号６８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号７０に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
配列番号７４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、および
配列番号７６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
からなる群から選択されるポリペプチドを含有する、組成物。
【発明の効果】
【０００８】
本発明に従って、骨分化状態を測定する組成物および骨分化を調節する組成物が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下、本発明を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念も含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
【００１０】
本明細書において使用する場合、用語「分化」とは、ある細胞が特殊化した細胞になることをいう。また、本明細書において使用する場合、用語「骨分化」とは、細胞が骨の特徴を有する特殊化した細胞になることをいう。
【００１１】
例えば、骨分化の誘導は、ＭＳＣ細胞を骨分化誘導培地で培養することによって行うことが可能である。骨分化誘導培地としては、例えば、1%Antibiotic-Antimycotic、10-8M
デキサメタゾン（以下Dex）（SIGMA）、10mMα-グリセロホスフェート（SIGMA）、および50μg/ml アスコルビン酸 2-ホスフェート（SIGMA）、10%FBSを添加したミニマルエッセンシャルα培地（以下α-MEM）（GIBCOBRL）が挙げられるが、これに限定されない。培養条件としては、３日ごとに培地交換を行いながら37℃で5%CO2気相下にて培養する条件が挙げられるが、これに限定されない。
【００１２】
例えば、骨分化の指標としては、アリザリンレッド染色、カルシウム定量、および、ELISA法による培養上清中のosteocalcinタンパク濃度の測定が挙げられるが、これに限定されない。
【００１３】
（１．アリザリンレッド染色）
例えば、アリザリンレッド染色は、以下のように行うことが可能である：
直径10mmの48穴培養皿（BDBiosciences）から培地を除いた後、細胞層を200μlの0.9% NaCl含有の10mM トリス塩酸緩衝液（pH7.6）で細胞層を2回洗浄し、200μlの95%エタノールで1時間以上固定する。染色液にはアリザリンスルホン酸ナトリウム（Chroma-Gesellschaft  Schmid  GMBH&Co.,Kongen, Germany）をイオン交換水で溶解し、アンモニア水でpH6.36-6.40に調整した1%アリザリンレッドS溶液を用いる。固定された細胞を200μlの１%アリザリンレッドＳ溶液で常温、遮光下にて５分間染色しイオン交換水で洗浄する。その後写真に取り込み、染色の程度を分化の指標とする。
【００１４】
（２．カルシウム定量）
例えば、カルシウム定量は、以下のように行うことが可能である：
48穴培養皿から培地を除いた後、細胞層を200μlのPBSで2回洗浄し、200μl の10%トリクロロ酢酸溶液（Katayama ChemicalIndustries Co.,Ltd., Osaka, Japan）を添加し、Vibracell（登録商標）（Sonics&Materials,Inc., Newtown, CT）にて10秒間超音波処理し、細胞および細胞外基質を分散させる。分散させた抽出液を10,000rpmで5分間遠心後、上清を用いてorth-cresolphtaleincomplexonemethod （OCPC法）を利用したカルシウム測定キット（Ca C-test Wako kit）（Wako Pure ChemicalIndustries,Ltd. , Osaka, Japan）とマルチウェル分光光度計（Immuno Mini NJ-2300）（Nalge NuncInternational，Rochester,NY）を用いて波長 570 nmにて、カルシウム濃度を測定し、1穴あたりの細胞・基質層中のカルシウム量を算出する。
【００１５】
（３．ELISA法による培養上清中のosteocalcinタンパク濃度の測定）
例えば、ELISA法による培養上清中のosteocalcinタンパク濃度の測定は、以下のように行うことが可能である：
T175ティッシュカルチャーフラスコ（BDBiosciences）にMSCを5,000個/cm2で播種し、1%Antibiotic-Antimycoticおよび10% FBS含有DMEMで90%コンフルエントまで培養する。骨分化誘導開始24時間前に1%Antibiotic-Antimycoticのみを含むフェノールレッド不含DMEMに交換する。24時間培養後に培養上清を回収し、骨分化誘導培地に交換して骨分化誘導を開始する。MSCをConA（8μg/ml）存在下あるいは非存在下で骨分化誘導を行い、2、5、8、13、20日目に1%Antibiotic-Antimycoticのみを含むフェノールレッド不含DMEMに交換し24時間培養後、培養上清を回収する。回収した培養上清は測定まで-30℃で冷凍保存する。測定時には冷凍保存状態の培養上清を解凍し、氷上で保存しながらAmicon（登録商標）Ultra-4（MilliporeCorporation, Billerica, MA） （10,000 NMWL）を用いて4,000gで遠心濃縮を行う。その後ProteinQuantificationKit-Rapid（Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japan）を用いたBradford法により濃縮液中の総タンパク量を測定する。さらにGla-typeOsteocalcinEIA kit（TaKaRa Bio Inc, Shiga, Japan）を用いたELISA法により、一定タンパク量あたりのosteocalcinタンパク量を定量し、総タンパク量をもとに培養上清中のosteocalcinタンパク濃度を算出する。
【００１６】
（４．検定法）
統計処理には、コントロールとの比較にはStudent’s-t検定を行い、多群間の比較にはANOVA後Tukey法にて多重比較を行うことができる。
【００１７】
本明細書において遺伝子（例えば、核酸配列、アミノ酸配列など）の「相同性」とは、２以上の遺伝子配列の、互いに対する同一性の程度をいう。また、本明細書において配列（核酸配列、アミノ酸配列など）の同一性とは、２以上の対比可能な配列の、互いに対する同一の配列（個々の核酸、アミノ酸など）の程度をいう。従って、ある２つの遺伝子の相同性が高いほど、それらの配列の同一性または類似性は高い。２種類の遺伝子が相同性を有するか否かは、配列の直接の比較、または核酸の場合ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーション法によって調べられ得る。２つの遺伝子配列を直接比較する場合、その遺伝子配列間でＤＮＡ配列が、代表的には少なくとも５０％同一である場合、好ましくは少なくとも７０％同一である場合、より好ましくは少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である場合、それらの遺伝子は相同性を有する。本明細書において、遺伝子（例えば、核酸配列、アミノ酸配列など）の「類似性」とは、上記相同性において、保存的置換をポジティブ（同一）とみなした場合の、２以上の遺伝子配列の、互いに対する同一性の程度をいう。従って、保存的置換がある場合は、その保存的置換の存在に応じて相同性と類似性とは異なる。また、保存的置換がない場合は、相同性と類似性とは同じ数値を示す。
【００１８】
本明細書では、アミノ酸配列および塩基配列の類似性、同一性および相同性の比較は、配列分析用ツールであるＦＡＳＴＡを用い、デフォルトパラメータを用いて算出される。
【００１９】
本明細書において「フラグメント」とは、全長のポリペプチドまたはポリヌクレオチド（長さがｎ）に対して、１〜ｎ−１までの配列長さを有するポリペプチドまたはポリヌクレオチドをいう。フラグメントの長さは、その目的に応じて、適宜変更することができ、例えば、その長さの下限としては、ポリペプチドの場合、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０およびそれ以上のアミノ酸が挙げられ、ここの具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、１１など）もまた、下限として適切であり得る。また、ポリヌクレオチドの場合、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、７５、１００およびそれ以上のヌクレオチドが挙げられ、ここの具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、１１など）もまた、下限として適切であり得る。本明細書において、ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの長さは、上述のようにそれぞれアミノ酸または核酸の個数で表すことができるが、上述の個数は絶対的なものではなく、同じ機能を有する限り、上限または下限としての上述の個数は、その個数の上下数個（または例えば上下１０％）のものも含むことが意図される。そのような意図を表現するために、本明細書では、個数の前に「約」を付けて表現することがある。しかし、本明細書では、「約」のあるなしはその数値の解釈に影響を与えないことが理解されるべきである。本明細書において有用なフラグメントの長さは、そのフラグメントの基準となる全長タンパク質の機能のうち少なくとも１つの機能が保持されているかどうかによって決定され得る。
【００２０】
本明細書において「単離された」生物学的因子（例えば、核酸またはタンパク質など）とは、その生物学的因子が天然に存在する生物体の細胞内の他の生物学的因子（例えば、核酸である場合、核酸以外の因子および目的とする核酸以外の核酸配列を含む核酸；タンパク質である場合、タンパク質以外の因子および目的とするタンパク質以外のアミノ酸配列を含むタンパク質など）から実質的に分離または精製されたものをいう。「単離された」核酸およびタンパク質には、標準的な精製方法によって精製された核酸およびタンパク質が含まれる。したがって、単離された核酸およびタンパク質は、化学的に合成した核酸およびタンパク質を包含する。
【００２１】
本明細書において「精製された」生物学的因子（例えば、核酸またはタンパク質など）とは、その生物学的因子に天然に随伴する因子の少なくとも一部が除去されたものをいう。したがって、通常、精製された生物学的因子におけるその生物学的因子の純度は、その生物学的因子が通常存在する状態よりも高い（すなわち濃縮されている）。
【００２２】
本明細書中で使用される用語「精製された」および「単離された」は、好ましくは少なくとも７５重量％、より好ましくは少なくとも８５重量％、よりさらに好ましくは少なくとも９５重量％、そして最も好ましくは少なくとも９８重量％の、同型の生物学的因子が存在することを意味する。
【００２３】
本明細書において配列（アミノ酸または核酸など）の「同一性」、「相同性」および「類似性」のパーセンテージは、比較ウィンドウで最適な状態に整列された配列２つを比較することによって求められる。ここで、ポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列の比較ウィンドウ内の部分には、２つの配列の最適なアライメントについての基準配列(他の配列に付加が含まれていればギャップが生じることもあるが、ここでの基準配列は付加も欠失もないものとする)と比較したときに、付加または欠失(すなわちギャップ)が含まれる場合がある。同一の核酸塩基またはアミノ酸残基がどちらの配列にも認められる位置の数を求めることによって、マッチ位置の数を求め、マッチ位置の数を比較ウィンドウ内の総位置数で割り、得られた結果に１００を掛けて同一性のパーセンテージを算出する。検索において使用される場合、相同性については、従来技術において周知のさまざまな配列比較アルゴリズムおよびプログラムの中から、適当なものを用いて評価する。このようなアルゴリズムおよびプログラムとしては、ＴＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＰ、ＦＡＳＴＡ、ＴＦＡＳＴＡおよびＣＬＵＳＴＡＬＷ（Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５（８）：２４４４−２４４８、  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５（３）：４０３−４１０、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２（２）：４６７３−４６８０、Ｈｉｇｇｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：３８３−４０２、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５（３）：４０３−４１０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３：２６６−２７２）があげられるが、何らこれに限定されるものではない。特に好ましい実施形態では、従来技術において周知のＢａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）（たとえば、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６７−２２６８、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３：２６６−２７２、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２を参照のこと）を用いてタンパク質および核酸配列の相同性を評価する。特に、５つの専用ＢＬＡＳＴプログラムを用いて以下の作業を実施することによって比較または検索が達成され得る。
【００２４】
（１）  ＢＬＡＳＴＰおよびＢＬＡＳＴ３でアミノ酸のクエリー配列をタンパク質配列データベースと比較；
（２）  ＢＬＡＳＴＮでヌクレオチドのクエリー配列をヌクレオチド配列データベースと比較；
（３）  ＢＬＡＳＴＸでヌクレオチドのクエリー配列（両方の鎖）を６つの読み枠で変換した概念的翻訳産物をタンパク質配列データベースと比較；
（４）  ＴＢＬＡＳＴＮでタンパク質のクエリー配列を６つの読み枠（両方の鎖）すべてで変換したヌクレオチド配列データベースと比較；
（５）  ＴＢＬＡＳＴＸでヌクレオチドのクエリ配列を６つの読み枠で変換したものを、６つの読み枠で変換したヌクレオチド配列データベースと比較。
【００２５】
ＢＬＡＳＴプログラムは、アミノ酸のクエリ配列または核酸のクエリ配列と、好ましくはタンパク質配列データベースまたは核酸配列データベースから得られた被検配列との間で、「ハイスコアセグメント対」と呼ばれる類似のセグメントを特定することによって相同配列を同定するものである。ハイスコアセグメント対は、多くのものが従来技術において周知のスコアリングマトリックスによって同定（すなわち整列化）されると好ましい。好ましくは、スコアリングマトリックスとしてＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス（Ｇｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３−１４４５、Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，１９９３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  １７：４９−６１）を使用する。このマトリックスほど好ましいものではないが、ＰＡＭまたはＰＡＭ２５０マトリックスも使用できる（たとえば、Ｓｃｈｗａｒｔｚ  ａｎｄ  Ｄａｙｈｏｆｆ，ｅｄｓ．，１９７８，Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  Ｄｉｓｔａｎｃｅ  Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ：  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ：  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎを参照のこと）。ＢＬＡＳＴプログラムは、同定されたすべてのハイスコアセグメント対の統計的な有意性を評価し、好ましくはユーザー固有の相同率などのユーザーが独自に定める有意性の閾値レベルを満たすセグメントを選択する。統計的な有意性を求めるＫａｒｌｉｎの式を用いてハイスコアセグメント対の統計的な有意性を評価すると好ましい（Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６７−２２６８参照のこと）。
【００２６】
本明細書において、「ストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチド」とは、当該分野で慣用される周知の条件をいう。本発明のポリヌクレオチド中から選択されたポリヌクレオチドをプローブとして、コロニー・ハイブリダイゼーション法、プラーク・ハイブリダイゼーション法あるいはサザンブロットハイブリダイゼーション法等を用いることにより、そのようなポリヌクレオチドを得ることができる。具体的には、コロニーあるいはプラーク由来のＤＮＡを固定化したフィルターを用いて、０．７〜１．０ＭのＮａＣｌ存在下、６５℃でハイブリダイゼーションを行った後、０．１〜２倍濃度のＳＳＣ（ｓａｌｉｎｅ−ｓｏｄｉｕｍ  ｃｉｔｒａｔｅ）溶液（１倍濃度のＳＳＣ溶液の組成は、１５０ｍＭ  塩化ナトリウム、１５ｍＭ  クエン酸ナトリウムである）を用い、６５℃条件下でフィルターを洗浄することにより同定できるポリヌクレオチドを意味する。ハイブリダイゼーションは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ２ｎｄ  ｅｄ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １〜３８、ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  １：Ｃｏｒｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９９５）等の実験書に記載されている方法に準じて行うことができる。ここで、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列からは、好ましくは、Ａ配列のみまたはＴ配列のみを含む配列が除外される。「ハイブリダイズ可能なポリヌクレオチド」とは、上記ハイブリダイズ条件下で別のポリヌクレオチドにハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドをいう。ハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドとして具体的には、本発明で具体的に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列と少なくとも６０％以上の相同性を有するポリヌクレオチド、好ましくは８０％以上の相同性を有するポリヌクレオチド、さらに好ましくは９５％以上の相同性を有するポリヌクレオチドを挙げることができる。
【００２７】
本明細書において「作動可能に連結された（る）」とは、所望の配列の発現（作動）がある転写翻訳調節配列（例えば、プロモーター、エンハンサーなど）または翻訳調節配列の制御下に配置されることをいう。プロモーターが遺伝子に作動可能に連結されるためには、通常、その遺伝子のすぐ上流にプロモーターが配置されるが、必ずしも隣接して配置される必要はない。
【００２８】
本明細書において、核酸分子を細胞に導入する技術は、どのような技術でもよく、例えば、形質転換、形質導入、トランスフェクションなどが挙げられる。  そのような核酸分子の導入技術は、当該分野において周知であり、かつ、慣用されるものであり、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  Ｆ．Ａ．ら編（１９８８）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊら（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄ．およびその第三版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、別冊実験医学「遺伝子導入＆発現解析実験法」羊土社、１９９７などに記載される。遺伝子の導入は、ノーザンブロット、ウェスタンブロット分析のような本明細書に記載される方法または他の周知慣用技術を用いて確認することができる。
【００２９】
また、ベクターの導入方法としては、細胞にＤＮＡを導入する上述のような方法であればいずれも用いることができ、例えば、トランスフェクション、形質導入、形質転換など（例えば、リン酸カルシウム法、リポソーム法、ＤＥＡＥデキストラン法、エレクトロポレーション法、パーティクルガン（遺伝子銃）を用いる方法など）が挙げられる。
【００３０】
本明細書において使用される場合、「キット」とは、複数の容器、および製造業者の指示書を含み、そして各々の容器が、本発明の薬学的組成物、その他の薬剤、およびキャリアを含む製品をいう。
【００３１】
本明細書において「薬学的に受容可能なキャリア」は、医薬または動物薬のような農薬を製造するときに使用される物質であり、有効成分に有害な影響を与えないものをいう。そのような薬学的に受容可能なキャリアとしては、例えば、以下が挙げられるがそれらに限定されない：抗酸化剤、保存剤、着色料、風味料、および希釈剤、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、フィラー、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクル、賦形剤および／または薬学的アジュバント。
【００３２】
本発明の処置方法において使用される薬剤の種類および量は、本発明の方法によって得られた情報（例えば、疾患に関する情報）を元に、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、投与される被検体の部位の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。本発明のモニタリング方法を被検体（または患者）に対して施す頻度もまた、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、および治療経過などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。疾患状態をモニタリングする頻度としては、例えば、毎日−数ヶ月に１回（例えば、１週間に１回−１ヶ月に１回）のモニタリングが挙げられる。１週間−１ヶ月に１回のモニタリングを、経過を見ながら施すことが好ましい。
【００３３】
必要に応じて、本発明の治療では、２種類以上の薬剤が使用され得る。２種類以上の薬剤を使用する場合、類似の性質または由来の物質を使用してもよく、異なる性質または由来の薬剤を使用してもよい。このような２種類以上の薬剤を投与する方法のための疾患レベルに関する情報も、本発明の方法によって入手することができる。
【００３４】
（薬学的組成物）
本発明のポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含む発現ベクターは、進行性化骨性繊維異形成症（Ｆｉｂｒｏｄｙｓｐｌａｓｉｓ  Ｏｓｓｉｆｉｃａｎｓ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖａ  （ＦＯＰ））；後縦靭帯骨化症（ＯＰＬＬ）；外傷、腫瘍摘出後の骨欠損の治療；先天性骨格疾患（例えば、口蓋裂、短指症、先天性の脛骨欠損および大腿骨形成不全）；歯周病または歯牙喪失による歯槽堤退縮へのインプラント埋入前の骨増生治療、ならびに加齢による骨の脆弱化（骨粗鬆症または骨折予防）などの治療および／または予防のための薬学的組成物の成分としても使用することが可能である。
【００３５】
本明細書において薬剤の「有効量」とは、その薬剤が目的とする薬効が発揮することができる量をいう。本明細書において、そのような有効量のうち、最小の濃度を最小有効量ということがある。そのような最小有効量は、当該分野において周知であり、通常、薬剤の最小有効量は当業者によって決定されているか、または当業者は適宜決定することができる。そのような有効量の決定には、実際の投与のほか、動物モデルなどを用いることも可能である。本発明はまた、このような有効量を決定する際に有用である。
【００３６】
本明細書において「薬学的に受容可能なキャリア」は、医薬または動物薬のような農薬を製造するときに使用される物質であり、有効成分に有害な影響を与えないものをいう。そのような薬学的に受容可能なキャリアとしては、例えば、以下が挙げられるがそれらに限定されない：抗酸化剤、保存剤、着色料、風味料、および希釈剤、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、フィラー、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクル、賦形剤および／または農学的もしくは薬学的アジュバント。
【００３７】
本発明の処置方法において使用される薬剤の種類および量は、本発明の方法によって得られた情報（例えば、疾患に関する情報）を元に、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、投与される被検体の部位の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。本発明のモニタリング方法を被検体（または患者）に対して施す頻度もまた、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、および治療経過などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。疾患状態をモニタリングする頻度としては、例えば、毎日−数ヶ月に１回（例えば、１週間に１回−１ヶ月に１回）のモニタリングが挙げられる。１週間−１ヶ月に１回のモニタリングを、経過を見ながら施すことが好ましい。
【００３８】
必要に応じて、本発明の治療では、２種類以上の薬剤が使用され得る。２種類以上の薬剤を使用する場合、類似の性質または由来の物質を使用してもよく、異なる性質または由来の薬剤を使用してもよい。このような２種類以上の薬剤を投与する方法のための疾患レベルに関する情報も、本発明の方法によって入手することができる。
【００３９】
本発明では、いったん類似の種類（例えば、ヒトに対するマウスなど）の生物、培養細胞、組織などに関し、ある特定の糖鎖構造の分析結果と、疾患レベルとが相関付けられた場合、対応する糖鎖構造の分析結果と、疾患レベルとが相関付けることができることは、当業者は容易に理解する。そのような事項は、例えば、動物培養細胞マニュアル、瀬野ら編著、共立出版、１９９３年などに記載され支持されており、本明細書においてこのすべての記載を援用する。
【００４０】
本明細書において使用する場合、骨分化の「調節」とは、骨分化の促進、誘導、阻害、および抑制のいずれか少なくとも１つをいう。
【００４１】
本発明の遺伝子は、ｓｉＲＮＡを用いてその発現をノックダウンすることが可能である。所定の遺伝子からｓｉＲＮＡを調製する方法は周知であり、例えば、基本的にはUi-Tei
やReynoldらのデザイン方法に沿って設計されるsiDirectというweb上のソフトウエアか
ら提案される配列を用いることができる。具体的なｓｉＲＮＡの設計は、例えば、以下のように行われるが、これに限定されない：
（１）開始コドンから７５塩基以上下流のＡＡを見つける；
（２）ＡＡに続く約１９ヌクレオチド（ＡＡ−（Ｎ１９））を記録する；
（３）ＡＡ−（Ｎ１９）の配列のＧＣ含量が約３０％〜約７０％（好ましくは、約４０％から約６０％）であることを確認する；
（４）選択した塩基配列について相同性検索（例えば、ＮＣＢＩデータベースのＢＬＡＳＴによる）を行い、その配列が目的遺伝子に対して特異的であることを確認する。その選択した塩基配列が他の遺伝子にも相同性を有している場合は、（１）に戻ってさらに下流のＡＡを選択する。
【００４２】
さらに、（１）Gor Cが連続して４つ以上存在しない、（２）Ａ or Tが連続して４つ以上存在しない、（３）ＧあるいはCが9塩基以上存在しない、などの条件を加えてもよい。ｓｉＲＮＡの設計については、例えば、AlistairM.Chalkら、「Improved and automated prediction of effective siRNA」、CenterforGenomics and Bioinformatics, Karolinska Institutet, Berzelius  vag 35, S-17177,Stockholm, Sweden等を参照のこと。以上のように設計したｓｉＲＮＡを、当該分野で公知のｓｉＲＮＡ提供業者（株式会社  ニッポンイージーティー、富山、日本、または日本バイオサービス、埼玉、日本など）から入手することができる。
【００４３】
以下に実施例等により本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００４４】
（実施例１：DNAマイクロアレイを用いた転写因子の選定）
（細胞培養）
ヒト腸骨由来MSCは、3人から分離・培養され、骨、軟骨、脂肪細胞への分化が確認されたものを用いた．これらは1%Antibiotic-Antimycoticおよび10%FBS含有DMEMを用いて、90 mm径のプラスチック培養皿に5,000個/cm2で播種して37℃で5%CO2気相下にて培養した．実験には継代数4〜9のものを使用した。また歯肉由来の線維芽細胞2株、およびIWAKI&CO.,LTD,（Tokyo,Japan）より購入した皮膚線維芽細胞1株を、MSCと同様に1%Antibiotic-Antimycoticおよび10% FBS含有DMEMを用いて、90mm径のプラスチック培養皿に5000個/cm2で播種して37℃で5%CO2気相下にて培養した．実験には継代数5〜7のものを使用した．
（軟骨分化）
軟骨分化誘導には1%Antibiotic-Antimycotic，2mM L-glutamine（SIGMA），10-7M Dex，50μg/mlAscorbate2-phosphate，4.5g/l D-(+)-glucose（SIGMA），100μg/ml sodium pyruvate（WakoPureChemical Industries, Ltd.），1% ITS-plus（insulin 6.25μg/ml，transferin 6.25μg/ml，selenousacid6.25μ/ml，linoleic acid 5.33μg/ml，bovine serum albumim 1.25mg/ml）（BDbiosciences），および10ng/mlTGF-β3（BD biosciences）を添加したα-MEMを使用した．2ml用の試験管（ドルフィンチューブ,NIPPON GeneticsCo.,Ltd, Tokyo, Japan）に2.5×105個のMSCを播種し、1,200rpmで5分間遠心後、軟骨誘導培地0.5mlを加えて培養した．培養2日後より1.0mlの軟骨誘導培地で3日ごとに培地交換を行いながら28日間培養した．
（脂肪分化）
脂肪分化誘導培地としては、 1% Antibiotic-Antimycotic，10% FBS，2mM L-glutamine，10-6MDex，0.2mMindomethacin（Wako Pure Chemical Industries, Ltd），0.01mg/ml insulin（WakoPureChemical Industries, Ltd），0.5mM 3-isobutyl-1-methylxanthine（Wako PureChemicalIndustries, Ltd）を添加したDMEMを用いた．脂肪分化維持培地としては、1% Antibiotic-Antimycotic，10%FBS，2mML-glutamine，0.01mg/ml Insulinを添加したDMEMを用いた．コンフルエントまで培養したMSCを脂肪分化誘導培地で3日間培養後、脂肪分化維持培地に交換し2日間培養した．以降この2種類の培地を交互に交換する操作を繰り返しながら28日間培養した．
（ＤＮＡアレイ）
上記の方法で培養した3種のMSCを用いて、(1)未分化状態のMSC、(2)24時間骨分化誘導後のMSC、(3)骨、軟骨あるいは脂肪分化誘導後の28日目のMSC、(4)3人から採取した線維芽細胞からトータルRNAを抽出した．DNAマイクロアレイ解析は、GeneChip（登録商標）GenomeU133 plus 2.0 Array : 54,000プローブ（Affimetrix, Santa Clara, CA）を用いてKuraboIndustries,Ltd.（Osaka, Japan）に委託した．
（結果）
（１．骨、軟骨、脂肪分化特異的遺伝子の選定）
未分化状態のMSC、線維芽細胞、28日間軟骨、脂肪分化誘導後のMSCと比較して、28日間骨分化誘導後でのみ発現が2倍以上亢進した遺伝子を骨特異的遺伝子として368個選定した．同様に未分化状態のMSC、線維芽細胞、28日間骨、脂肪分化誘導後のMSCと比較して、28日間軟骨分化誘導後でのみ発現が2倍以上亢進した遺伝子を軟骨特異的遺伝子として811個選定した．さらに未分化状態のMSC、線維芽細胞、28日間骨、軟骨分化誘導後と比較して、28日間脂肪分化誘導後でのみ発現が2倍以上亢進した遺伝子を脂肪特異的遺伝子として1,113個選定した．
（２．骨分化に関連する転写因子の選定）
本発明の転写因子をコードする遺伝子を、以下の２つの方法に従って単離した。
【００４５】
まず骨分化特異的に発現の亢進のあった368個の中から骨分化誘導24時間後で未分化状態のMSCと比較して発現が2倍以上亢進した遺伝子156個をIngenuityPathwayAnalysis（以下IPA）およびDatabase for annotation, Visualization andIntegratedDiscovery（以下DAVID）のデータベース検索により転写因子にのみ絞り、5つの遺伝子を選定した．その中でMSCの骨分化に関連した報告のない2遺伝子（hypotheticalproteinDKFZp566J091（以下LBH）およびzinc finger homeodomain 4（以下ZFHX4）を選定した（表１）。
また24時間骨分化誘導後で未分化状態のMSCと比較して発現が2倍以上亢進した1,526個の遺伝子の中から軟骨特異的あるいは脂肪特異的遺伝子に含まれた遺伝子を省いた130個の転写因子を選定した．その中から24時間骨分化誘導後で発現の亢進の程度が大きい順で、かつMSCの骨分化に関連した報告のない7遺伝子、LAG1longevityassurance homolog 5 （S. cerevisiae）  （以下LASS5），melanoma antigen familyD （MAGED1,NRAGE）  （以下DLXIN-1）Glucocorticoid-induced leucine Zipper  （以下GILZ），elongationfactor RNA polymeraseII  （以下ELL2），activating transcription factor 7 interactingprotein  （以下ATF7IP），forkheadbox O3A  （以下FOXO3A），mastermind-like 2 （Drosophila）  （以下MAML2）を選定した（表１）．なおこれらの7遺伝子は骨分化関連転写因子の中心的役割を果たすとされるRUNX2よりも発現が大きく亢進していた．
（表１  骨分化誘導の24時間後に発現が亢進する転写因子の選定）
【００４６】
【表１】
2008289476.tif 000002
（実施例２：選定した転写因子のMSCへの影響の検討）
選定した9個の転写因子とRUNX2を含めた10遺伝子に特異的なsmallinterfering RNA（以下si RNA）を作製しMSCに導入後、それぞれのsiRNA導入がMSCの増殖および骨分化に及ぼす影響を検討した。
【００４７】
（材料および方法）
（１：siRNA）
選定した9個の転写因子とRUNX2を含めた10遺伝子に対するsiRNAをUi-TeiやReynoldらの報告[59-62]に従いsiDirenct（登録商標）を用いて設計した（表２）。直径11mmの12穴培養皿に3.5〜4.5×104個のMSCを播種し、Antibiotic-Antimycotic無添加の10%FBS含有DMEMで40〜70%コンフルエントの状態まで24時間培養した。
【００４８】
RNaseフリーの1.5mlエッペンチューブ（QIAGEN）中で1.25μlの各遺伝子特異的siRNA（最終濃度25nM）および98.75μl のOpti-MEM（GIBCOBRL）を混和した．さらに別の1.5mlエッペンチューブ中で2μl のLipofectamine 2000（Invitrogen）と98μlのOpti-MEMを混和し、室温で5分間静置して、導入試薬を調整した．その後、各溶液を混和し、20分間室温で静置した．次いで、MSC培養系を12.5%FBSのみ含有のDMEMに交換し、導入試薬を添加後24時間培養した．その後、1%Antibiotic-Antimycoticおよび10% FBS含有DMEMに交換した。
【００４９】
siPerfect（登録商標）TranscriptionFactorライブラリー（RNAi co.,Ltd../ Tokyo, Japan）においてターゲット遺伝子のノックダウンが保証されている配列を各1対購入し、保証のないものは新規に2対設計した。
（表２：設計したsiRNAの配列）
【００５０】
【表２】
2008289476.tif 000003
（２：リアルタイムRT-PCR法）
選定した9個の転写因子とRUNX2を含めた10遺伝子について、各転写因子に特異的なプライマー、プローブセットTaqMan（登録商標）GeneExpressionAssays（Applied Biosystems）を用いて（表３）、リアルタイムRT-PCR法 （第２章参照） にて各転写因子の骨分化誘導時の発現レベルの変化を検討した。
（表３：TaqMan（登録商標）GeneExpression Assaysで用いたプライマー、プローブセットのID番号）
【００５１】
【表３】
2008289476.tif 000004
（３：ＤＮＡ定量）
培養細胞層を生理食塩水にて2回洗浄し、次いで 350mM 2-amino-2-methyl-1-propanol（SIGMA）、1mM zincsulfate（WakoPure Chemical Industries, Ltd.），2mM magnesium sulfate（KATAYAMACHEMICALINDUSTRIES Co.,Ltd.），2mM EDTA（SIGMA）を含む水溶液（pH 10.4）を加え，Vibracell（登録商標） （Sonics&Materials,Inc., Newtown, CT）にて10秒間超音波処理し、抽出液を10,000rpmで5分間遠心後、蛍光測定用96穴プレート（NalgeNuncInternational, Rochester, NY）で50μlの上清あるいは50μlの標準DNA液と50μl のPicoGreen（登録商標）Reagent （PicoGreen（登録商標）dsDNA Quantitaion Kit）（Molecular Probes, Inc）を混和し、蛍光プレートリーダー（ARVOSXMultilabel counter） （PerkinElmer, Inc., Wellesley, MA）を用いて蛍光を測定した（励起波長480nm，蛍光波長520nm）。
【００５２】
（４：ＡＬＰ活性）
ALPの抽出にはDNA定量と同じ溶液を用いた．96穴培養皿で50μlのサンプルを50μlの抽出液で希釈し、10μlの16mMPPNP（SIGMA FASTTMp-NITROPHENYL PHOSPHATE TABLET SETS ）（SIGMA）を加えた後、37℃で反応させた．次いで100μlの1NNaOHで反応を止め、マルチウェル分光光度計（ImmunoMini NJ-2300）を用いて吸光度（測定波長405nm）と反応時間からALP活性を算出した。
【００５３】
（５：アリザリンレッド染色）
12穴培養皿から培地を除いた後、500μlの0.9% NaCl含有の10mM トリス塩酸緩衝液（pH 7.6）で細胞層を2回洗浄し、500μlの95%エタノールで1時間以上固定した．固定された細胞を500μlの１%アリザリンレッドＳ溶液で常温、遮光下にて５分間染色しイオン交換水で洗浄した．その後写真に取り込み、染色の検討を行った。
【００５４】
（６：カルシウム定量）
12穴培養皿から培地を除いた後、細胞層をPBSにて2回洗浄し、500μlの10%トリクロロ酢酸溶液を添加し、Vibracell（登録商標）にて10秒間超音波処理し、細胞および細胞外基質を分散させた．そして抽出液を10,000rpmで5分間遠心後、CaC-test Wako kitを用いてマルチウェル分光光度計で波長 570 nmの吸光度から上清のカルシウム濃度を測定した
。
【００５５】
（結果）
（１．リアルタイムRT-PCR法による転写因子の発現レベルの変化の解析）
DNAマイクロアレイ解析では、選定した全ての転写因子は骨誘導時24時間から発現が亢進していた（図1）．一方、リアルタイムRT-PCR法による検討では、GILZ，LBH，ELL2，FOXO3A，ZFHX4，RUNX2は骨分化誘導後1〜4日後に発現が亢進したが、他の転写因子は発現レベルに変化が検出されなかった（図２）。
【００５６】
図１においては、MSCを一定期間骨分化培養後、選定した遺伝子の発現レベルの変化をDNAマイクロアレイにより解析した結果である。縦軸は未分化状態の発現量を１とした未分化状態、骨分化誘導24時間および、28日間での各遺伝子の発現レベルを３培養系の平均値で示す。
【００５７】
図２においては、MSCを骨分化誘導後、経時的にトータルRNAを抽出し、逆転写反応後、リアルタイムRT-PCR法を用いて、選定した遺伝子の発現レベルの変化を解析した結果である。縦軸は未分化状態を１とした各転写因子の発現レベルを3培養系での平均値で示す。横軸は培養日数を示す。
【００５８】
（２．siRNA導入によるターゲット遺伝子の発現レベルの変化）
設計したsiRNAを導入後ターゲット遺伝子の発現レベルの変化をリアルタイムRT-PCR法により経時的に検討した。その結果、選定した全ての転写因子に対して少なくとも1対のsiRNAが導入2〜4日後にターゲット遺伝子の発現を有意に抑制した（図3）。
【００５９】
図３は、MSC培養系にsiRNAを導入後、経時的にトータルRNAを抽出し、逆転写反応後、リアルタイムRT-PCT法を用いて、ターゲット遺伝子の発現レベルの変化を検討した結果である。縦軸はMSC培養系へコントロールsiRNAを導入後の各転写因子の発現量を1.0（赤線）とした実験群での発現レベルを表示する．数値は3培養系の平均値±SDを示す。
【００６０】
（３．MSCの増殖に及ぼす転写因子に対するsiRNA導入の影響）
MSCの増殖に及ぼすsiRNA導入の影響を位相差顕微鏡による観察およびDNA定量により検討した。位相差顕微鏡による観察では、GILZとMAML2に対するsiRNAはMSCの増殖を明らかに抑制した（図4）。DNA定量でもGILZとMAML2に対するsiRNAはコントロールに比べてMSCの増殖を有意に抑制した（図５）。
【００６１】
図４は、40%コンフルエントMSC培養系にsiRNAを導入してDMEM中で4日間培養後、位相差顕微鏡により細胞増殖を観察した結果である。
【００６２】
図５は、40%コンフルエントMSC培養系にsiRNAを導入してDMEM中で4日間培養後、DNA定量により細胞数を算出した結果である。縦軸は1ウェルあたりの細胞数を示す．数値は3培養系の平均値±SDを示す。
【００６３】
（４．MSCの骨分化に及ぼす転写因子に対するsiRNA導入の影響）
本実験では各siRNA導入２日後に骨分化誘導を開始した。そして骨分化誘導開始から8日後にアリザリンレッド染色およびカルシウム定量を行った。その結果、LBH，DLXIN-1，GILZ，ELL2，ATF7IP，MAML2，およびRUNX2に対するsiRNAはMSC培養系のアリザリンレッド染色をコントロールと比較して低下させた。一方、LASS5siRNAはMSC培養系のアリザリンレッド染色を増加させた（図6）。したがって、LBH，DLXIN-1，GILZ，ELL2，ATF7IP，MAML2，およびRUNX2に対するsiRNAはMSCの細胞・基質層中のカルシウム量を低下させた。一方、LASS5siRNAはカルシウム量を増加させた（図7）。また骨分化誘導開始から4日後にALP活性を測定した。その結果、LASS5以外の転写因子のsiRNAはMSCのALP活性を有意に減少させた（図8）。さらに骨分化マーカーとしてMSCの骨分化の初期に発現するALPおよびtype1collagen（以下COL1A1）の特異的プローブおよびプライマーを作製して（表４）、各siRNAのMSCの骨分化への影響を検討した．その結果、検討した全ての転写因子のsiRNAはALPの遺伝子発現をコントロールsiRNAと比較して有意に抑制した．一方これらのsiRNAはCOL1A1の遺伝子発現には明らかな影響を示さなかった（図9）。
（表４：TaqMan（登録商標）プローブおよびプライマー配列）
【００６４】
【表４】
2008289476.tif 000005
図６は、70%コンフルエントMSC培養系にsiRNA導入して2日後に骨分化誘導を開始し、8日間骨分化誘導後に染色した結果である。
【００６５】
図７は、MSC培養系にsiRNA導入し2日後に骨分化誘導を開始し、8日間骨分化誘導後にカルシウム定量およびDNA定量を行い、DNAあたりの細胞・基質層中のカルシウム量を測定した結果である。数値は3培養系の平均値±SDを示す。
【００６６】
図８は、MSC培養系にsiRNAを導入して2日後に骨分化誘導を開始し、4日間骨分化誘導後ALP活性およびDNA定量を行い、DNAあたりのALP活性を測定した。数値は3培養系の平均値±SDを示す結果である。
【００６７】
図９は、siRNA導入2日後に骨分化誘導を開始した。骨分化誘導後、リアルタイムRT-PCT法によりALPおよびCOL1A1の経時的な発現レベルの変化を検討した。縦軸はコントロールsiRNAを導入したMSCの骨分化誘導開始前の各遺伝子発現量を1として骨分化3および6日後のALPおよびCOL1A1遺伝子発現レベルを示す。数値は3培養系の平均値±SDを示す。横軸は培養日数を示す結果である。
【００６８】
（５．各転写因子の発現レベルの変化およびsiRNAの影響（骨関連転写因子のグループ化））
これまでの結果を以下に要約した。また発現レベルの変化と作用の特徴から骨関連転写因子を分類した。
（表５．骨分化過程のMSC培養系での各転写因子の発現レベルの変化およびsiRNAの作用）
【００６９】
【表５】
2008289476.tif 000006
GILZ遺伝子の発現は骨分化誘導時に亢進し、しかもGILZに対するsiRNAはMSCの増殖および骨分化を抑制した（表５グループA）。
【００７０】
RUNX2、LBHおよびELL2遺伝子の発現は骨分化誘導時に亢進した。またRUNX2、LBHおよびELL2に対するsiRNAはMSCの増殖には影響しなかったが、骨分化（ALPおよび石灰化）を抑制した（表５グループB）。
【００７１】
FOXO3AおよびZFHX4遺伝子の発現は骨分化誘導時に亢進した。またFOXO3AおよびZFHX4に対するsiRNAはMSCの増殖および石灰化に影響しなかったが、骨分化の初期マーカーであるALP活性およびALP遺伝子の発現を抑制した（表５グループC）。
【００７２】
MAML2遺伝子の発現は骨分化誘導時に顕著には変化しなかったが、MAML2に対するsiRNAはMSCの増殖および骨分化を抑制した（表５グループD）。
【００７３】
DLXIN-1およびATF7IP遺伝子の発現レベルは骨分化誘導時に顕著には変化しなかった。しかしDLXIN-1およびATF7IPに対するsiRNAはMSCの増殖に影響しなかったが、骨分化を抑制した（表５グループE）。
【００７４】
LASS5遺伝子の発現は骨分化誘導時に顕著には変化しなかった。またLASS5に対するsiRNAはMSCの増殖およびALPには影響しなかったが、石灰化を促進した（表５グループF）。
【００７５】
以上より、ＬＢＨ、ＺＦＨＸ４、ＤＬＸＩＮ−１、ＧＩＬＺ、ＥＬＬ２、ＡＴＦ７ＩＰ、ＦＯＸＯ３Ａ、ＭＡＭＬ２、および、ＬＡＳＳ５のいずれもが、骨分化状態を測定する組成物として利用可能であることが明らかとなった。さらに、ＬＢＨ、ＺＦＨＸ４、ＤＬＸＩＮ−１、ＧＩＬＺ、ＥＬＬ２、ＡＴＦ７ＩＰ、ＦＯＸＯ３Ａ、および、ＭＡＭＬ２については、発現を抑制することによって、骨分化を阻害することが判明した。従って、これら遺伝子の発現量を上昇させることによって、骨分化が誘導できる。また、ＬＡＳＳ５については、発現を抑制することによって、骨分化を誘導することが判明した。従って、これら遺伝子の発現量を上昇させることによって、骨分化が阻害できる。
【００７６】
（実施例３：骨分化に関連する転写因子のさらなる選定）
上述の実施例１と同様の手順により、さらに以下の表６に示す１３個の転写因子を選定した。選定条件としては、上述の基準に加えて、骨分化誘導２４時間後では上昇するが、脂肪分化２４時間後と軟骨分化２４時間後では上昇しないことを条件とした。
（表６．骨分化誘導の24時間後に発現が亢進する、さらなる転写因子の選定）
【００７７】
【表６】
2008289476.tif 000007
これらの中から、ＢＡＲＤ１、ＫＬＦ６、ＰＲＲＸ２、ＲＡＤ５１、ＫＬＦ５、ＺＢＴＢ７Ａ、ＴＨＲＡＰ６、ＳＳＢＰ３（ｖａｒｉａｎｔ３）、ＴＣＥＢ２、およびＺＨＸ３の１０個の遺伝子について、前述の９つの遺伝子について実施例２で行った評価と同様の評価を行った。
（１：ｓｉＲＮＡ）
以下の表に記載のｓｉＲＮＡを調製し、実施例２に記載の方法によって、ノックダウン実験を行った。
【表７】
2008289476.tif 000008
（２：リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ）
各転写因子に結合するユバーサルプローブをUniversal Probe Library assayシステム（Roche社製）によって選択し、そして、各転写因子に対する特異的プライマーを設計した。具体的なプライマーの配列および使用したプローブの番号は以下のとおりである。
【表８】
2008289476.tif 000009
実施例２において用いたリアルタイムＰＣＲ法を用いて、各転写因子の骨分化誘導時の発現レベルの変化を検討した。
（３：他の実験手順）
ＤＮＡ定量、ＡＬＰ活性測定、アリザリンレッド染色、およびカルシウム定量は、実施例２と同様に行った。
（結果）
（１．リアルタイムRT-PCR法による転写因子の発現レベルの変化の解析）
リアルタイムRT-PCRによる検討では、KLF6, TCEB2, PPRX2, RAD51, KLF5, ZBTB7A, THRAP6, ZHX3の８つは骨分化誘導後２４時間までに発現が亢進したが、BARD1,SSBP3は発現レベルに変化が検出されなかった（図１０）。
図１１においては、MSCを一定期間骨分化培養後、選定した遺伝子の発現レベルの変化をDNAマイクロアレイにより解析した結果である。縦軸は未分化状態の発現量を１とした未分化状態、骨分化誘導24時間および、28日間での各遺伝子の発現レベルを３培養系の平均値で示す。
図１０においては、MSCを骨分化誘導後、経時的にトータルRNAを抽出し、逆転写反応後、リアルタイムRT-PCR法を用いて、選定した遺伝子の発現レベルの変化を解析した結果である。縦軸は未分化状態を１とした各転写因子の発現レベルを3培養系での平均値で示す。横軸は培養時間を示す。
（２．siRNA導入によるターゲット遺伝子の発現レベルの変化）
設計したsiRNAを導入後ターゲット遺伝子の発現レベルの変化をリアルタイムRT-PCR法により経時的に検討した。その結果、選定した全ての転写因子に対して少なくとも1対のsiRNAが導入2〜7日後にターゲット遺伝子の発現を有意に抑制した（図１２）。
図１２は、MSC培養系にsiRNAを導入後、経時的にトータルRNAを抽出し、逆転写反応後、リアルタイムRT-PCT法を用いて、ターゲット遺伝子の発現レベルの変化を検討した結果である。縦軸はMSC培養系へコントロールsiRNAを導入後の各転写因子の発現量を1.0（点線）とした実験群での発現レベルを表示する．数値は3培養系の平均値±SDを示す。
（３．MSCの増殖に及ぼす転写因子に対するsiRNA導入の影響）
MSCの増殖に及ぼすsiRNA導入の影響を位相差顕微鏡による観察およびDNA定量により検討した。位相差顕微鏡による観察では、いずれの遺伝子に対するsiRNAもMSCの増殖には明らかな変化を示さなかった（図１３）。DNA定量でもいずれの遺伝子に対するsiRNAもMSCの増殖には明らかな変化を示さなかった（図１４）。
図１３は、40%コンフルエントMSC培養系にsiRNAを導入してDMEM中で4日間培養後、位相差顕微鏡により細胞増殖を観察した結果である。
図１４は、40%コンフルエントMSC培養系にsiRNAを導入してDMEM中で4日間培養後、DNA定量により細胞数を算出した結果である。縦軸は1ウェルあたりの細胞数を示す．数値は3培養系の平均値±SDを示す。
（４．MSCの骨分化に及ぼす転写因子に対するsiRNA導入の影響）
本実験では各siRNA導入２日後に骨分化誘導を開始した。そして骨分化誘導開始から８日後にアリザリンレッド染色およびカルシウム定量を行った。その結果、BARD1,PPRX2, RAD51, KLF5, ZHX3, TCEB2, およびRUNX2に対するsiRNAはMSC培養系のアリザリンレッド染色をコントロールと比較して低下させた。一方、SSBP3siRNAはMSC培養系のアリザリンレッド染色を増加させた(図１５)。KLF6, ZBTB7A, THRAP6 のsiRNAはMSC培養系のアリザリンレッド染色性に変化を示さなかった。同様にBARD1,PPRX2, RAD51, KLF5, ZHX3, TCEB2, およびRUNX2に対するsiRNAはMSCの細胞・基質層中のカルシウム量を低下させた。一方、SSBP3siRNAはカルシウム量を増加させた（図１６）。また骨分化誘導開始から４日後にALP活性を測定した。その結果、KLF6, ZBTB7A, THRAP6,SSBP3 のsiRNAはMSCのALP活性を有意に増加させる一方、BARD1, RAD51, KLF5, ZHX3, TCEB2,およびRUNX2siRNAはMSCのALP活性を有意に減少させた(図１７)。さらに、ALPとI型コラーゲン遺伝子発現を検討すると、４日の段階で、BARD1, PPRX2,RAD51, KLF5, THRAP6, ZHX3, TCEB2, およびRUNX2 siRNAはALP遺伝子発現をコントロールsiRNAと比較して有意に抑制したが、KLF6,ZBTB7A, SSBP3  siRNAはALP遺伝子発現をコントロールsiRNAと比較して有意に促進した（図１８）。一方、I型コラーゲン遺伝子発現については、４日の段階で、BARD1,PPRX2, RAD51, ZBTB7A, THRAP6, ZHX3, TCEB2,およびRUNX2 siRNAはこれを有意に抑制したが、SSBP3siRNAはこれを有意に促進した(図１９)。
（５．各転写因子の発現レベルの変化およびsiRNAの影響（骨関連転写因子のグループ化））
これまでの結果を以下の表に要約した。また発現レベルの変化と作用の特徴から骨関連転写因子を分類した。「Real time COL1A1」は、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによるＩ型コラゲナーゼ遺伝子発現レベルを示す。「Real time ALP」は、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによるＡＬＰ遺伝子発現レベルを示す。
【表９】
2008289476.tif 000010
BARD1,RAD51, KLF5, ZHX3, TCEB2遺伝子の発現は骨分化誘導時に亢進し、またBARD1, RAD51, KLF5, ZHX3, TCEB2遺伝子のsiRNAはMSCの増殖、石灰化やALP活性を抑制した（表９  グループＡ）。
PRRX2およびコントロールとして用いたRUNX2遺伝子の発現は骨分化誘導時に亢進し、またPRRX2,RUNX2遺伝子のsiRNAはMSCの石灰化やALP活性を若干抑制した（表９  グループＢ）。
KLF6,THRAP6遺伝子の発現は骨分化誘導時に若干亢進し、またKLF6, THRAP6遺伝子のsiRNAは細胞増殖を抑制するが、ALP活性を若干増加させた（表９  グループＣ）。
ZBTB7AとSSBP3遺伝子の発現は骨分化誘導時に亢進し、ZBTB7AとSSBP3に対するsiRNAはMSCの増殖には影響しなかったが、石灰化やALP活性を促進した（表９  グループＤ）。
以上より、BARD1,PPRX2, RAD51, KLF5, THRAP6, ZHX3, TCEB2, KLF6, ZBTB7AおよびSSBP3のいずれもが骨分化状態を測定する組成物として利用可能であることが明らかとなった。さらに、BARD1,RAD51, KLF5, ZHX3, TCEB2, PRRX2については発現を抑制することによって、骨分化を阻害することが判明した。従って、これらの遺伝子の発現量を上昇させることによって、骨分化が誘導できる。また、ZBTB7A,SSBP3, KLF6, THRAP6については発現を抑制することによって、骨分化を誘導することが判明した。従って、これら遺伝子の発現量を上昇させることによって、骨分化が阻害できる。
【００７８】
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、この実施形態に限定して解釈されるべきものではない。本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。当業者は、本発明の具体的な好ましい実施形態の記載から、本発明の記載および技術常識に基づいて等価な範囲を実施することができることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
【産業上の利用可能性】
【００７９】
本発明に従って、新規の骨分化を調節する組成物が提供される。また、骨分化状態を測定する組成物もまた提供される。さらに、本発明に従って、新規の骨分化状態を測定する組成物および骨分化を調節する組成物が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００８０】
【図１】図１は、選定した遺伝子のDNAマイクロアレイ解析での骨分化誘導時の各転写因子の遺伝子発現レベルの変化を示す図である。
【図２】図２は、骨分化誘導時の各転写因子の遺伝子発現レベルの変化を示す図である。
【図３】図３は、siRNAによるターゲット遺伝子のノックダウンを示す図である。
【図４】図４は、MSCの増殖に及ぼすsiRNAの影響（位相差顕微鏡像）を示す図である。
【図５】図５は、MSC培養系でのsiRNA導入4日後の細胞数を示す図である。
【図６】図６は、骨分化8日目でのアリザリンレッド染色に及ぼすsiRNAの影響を示す図である。
【図７】図７は、骨分化8日後の細胞・基質層中のカルシウム量に及ぼすsiRNAの影響を示す図である。
【図８】図８は、MSC培養系での骨分化誘導したMSC培養系のALP活性に及ぼすsiRNAの影響を示す図である。
【図９】図９は、骨分化誘導過程のMSC培養系でsiRNAがALPおよびCOL1A1mRNA発現レベルに及ぼす影響を示す図である。
【図１０】図１０は、骨分化誘導時の各転写因子の遺伝子発現レベルの変化を示す図である。
【図１１】図１１は、選定した遺伝子のDNAマイクロアレイ解析での骨分化誘導時の各転写因子の遺伝子発現レベルの変化を示す図である。
【図１２】図１２は、siRNAによるターゲット遺伝子のノックダウンを示す図である。
【図１３】図１３は、MSCの増殖に及ぼすsiRNAの影響（位相差顕微鏡像）を示す図である。
【図１４】図１４は、MSC培養系でのsiRNA導入４日後の細胞数を示す図である。
【図１５】図１５は、骨分化８日目でのアリザリンレッド染色に及ぼすsiRNAの影響を示す図である。
【図１６】図１６は、骨分化８日後の細胞・基質層中のカルシウム量に及ぼすsiRNAの影響を示す図である。
【図１７】図１７は、MSC培養系での骨分化誘導したMSC培養系のALP活性に及ぼすsiRNAの影響を示す図である。
【図１８】図１８は、骨分化誘導過程のMSC培養系でsiRNAがALP  mRNA発現レベルに及ぼす影響を示す図である。
【図１９】図１９は、骨分化誘導過程のMSC培養系でsiRNAがCOL1A1  mRNA発現レベルに及ぼす影響を示す図である。
【配列表フリーテキスト】
【００８１】
配列番号１＝ＬＢＨの核酸配列
配列番号２＝ＬＢＨのアミノ酸配列
配列番号３＝ＺＦＨＸ４の核酸配列
配列番号４＝ＺＦＨＸ４のアミノ酸配列
配列番号５＝ＤＬＸＩＮ−１の核酸配列
配列番号６＝ＤＬＸＩＮ−１のアミノ酸配列
配列番号７＝ＧＩＬＺの核酸配列
配列番号８＝ＧＩＬＺのアミノ酸配列
配列番号９＝ＥＬＬ２の核酸配列
配列番号１０＝ＥＬＬ２のアミノ酸配列
配列番号１１＝ＡＴＦ７ＩＰの核酸配列
配列番号１２＝ＡＴＦ７ＩＰのアミノ酸配列
配列番号１３＝ＦＯＸＯ３Ａの核酸配列
配列番号１４＝ＦＯＸＯ３Ａのアミノ酸配列
配列番号１５＝ＭＡＭＬ２の核酸配列
配列番号１６＝ＭＡＭＬ２のアミノ酸配列
配列番号１７＝ＬＡＳＳ５の核酸配列
配列番号１８＝ＬＡＳＳ５のアミノ酸配列
配列番号１９＝ＬＢＨ用ｓｉＲＮＡのセンス鎖核酸配列
配列番号２０＝ＬＢＨ用ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖核酸配列
配列番号２１＝ＬＢＨ用ｓｉＲＮＡのセンス鎖核酸配列
配列番号２２＝ＬＢＨ用ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖核酸配列
配列番号２３＝ＺＦＨＸ４用ｓｉＲＮＡのセンス鎖核酸配列
配列番号２４＝ＺＦＨＸ４用ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖核酸配列
配列番号２５＝ＬＡＳＳ５用ｓｉＲＮＡのセンス鎖核酸配列
配列番号２６＝ＬＡＳＳ５用ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖核酸配列
配列番号２７＝ＬＡＳＳ５用ｓｉＲＮＡのセンス鎖核酸配列
配列番号２８＝ＬＡＳＳ５用ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖核酸配列
配列番号２９＝ＤＬＸＩＮ−１用ｓｉＲＮＡのセンス鎖核酸配列
配列番号３０＝ＤＬＸＩＮ−１用ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖核酸配列
配列番号３１＝ＤＬＸＩＮ−１用ｓｉＲＮＡのセンス鎖核酸配列
配列番号３２＝ＤＬＸＩＮ−１用ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖核酸配列
配列番号３３＝ＧＩＬＺ用ｓｉＲＮＡのセンス鎖核酸配列
配列番号３４＝ＧＩＬＺ用ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖核酸配列
配列番号３５＝ＥＬＬ２用ｓｉＲＮＡのセンス鎖核酸配列
配列番号３６＝ＥＬＬ２用ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖核酸配列
配列番号３７＝ＡＴＦ７ＩＰ用ｓｉＲＮＡのセンス鎖核酸配列
配列番号３８＝ＡＴＦ７ＩＰ用ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖核酸配列
配列番号３９＝ＡＴＦ７ＩＰ用ｓｉＲＮＡのセンス鎖核酸配列
配列番号４０＝ＡＴＦ７ＩＰ用ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖核酸配列
配列番号４１＝ＦＯＸＯ３Ａ用ｓｉＲＮＡのセンス鎖核酸配列
配列番号４２＝ＦＯＸＯ３Ａ用ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖核酸配列
配列番号４３＝ＭＡＭＬ２用ｓｉＲＮＡのセンス鎖核酸配列
配列番号４４＝ＭＡＭＬ２用ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖核酸配列
配列番号４５＝ＭＡＭＬ２用ｓｉＲＮＡのセンス鎖核酸配列
配列番号４６＝ＭＡＭＬ２用ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖核酸配列
配列番号４７＝ＲＵＮＸ２用ｓｉＲＮＡのセンス鎖核酸配列
配列番号４８＝ＲＵＮＸ２用ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖核酸配列
配列番号４９＝コントロール用ｓｉＲＮＡのセンス鎖核酸配列
配列番号５０＝コントロール用ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖核酸配列
配列番号５１＝ＢＡＲＤ１の核酸配列
配列番号５２＝ＢＡＲＤ１のアミノ酸配列
配列番号５３＝ＫＬＦ６の核酸配列
配列番号５４＝ＫＬＦ６のアミノ酸配列
配列番号５５＝ＰＲＲＸ２の核酸配列
配列番号５６＝ＰＲＲＸ２のアミノ酸配列
配列番号５７＝ＲＡＤ５１の核酸配列
配列番号５８＝ＲＡＤ５１のアミノ酸配列
配列番号５９＝ＫＬＦ５の核酸配列
配列番号６０＝ＫＬＦ５のアミノ酸配列
配列番号６１＝ＺＢＴＢ７Ａの核酸配列
配列番号６２＝ＺＢＴＢ７Ａのアミノ酸配列
配列番号６３＝ＳＰ１１０の核酸配列
配列番号６４＝ＳＰ１１０のアミノ酸配列
配列番号６５＝ＴＨＲＡＰ６の核酸配列
配列番号６６＝ＴＨＲＡＰ６のアミノ酸配列
配列番号６７＝ＧＬＩ２の核酸配列
配列番号６８＝ＧＬＩ２のアミノ酸配列
配列番号６９＝ＳＳＢＰ３（ｖａｒｉａｎｔ３）の核酸配列
配列番号７０＝ＳＳＢＰ３（ｖａｒｉａｎｔ３）のアミノ酸配列
配列番号７１＝ＡＴＢＦ１の核酸配列
配列番号７２＝ＡＴＢＦ１のアミノ酸配列
配列番号７３＝ＴＣＥＢ２の核酸配列
配列番号７４＝ＴＣＥＢ２のアミノ酸配列
配列番号７５＝ＺＨＸ３の核酸配列
配列番号７６＝ＺＨＸ３のアミノ酸配列
配列番号７７＝ＢＡＲＤ１のフォワードプライマー
配列番号７８＝ＢＡＲＤ１のリバースプライマー
配列番号７９＝ＫＬＦ６のフォワードプライマー
配列番号８０＝ＫＬＦ６のリバースプライマー
配列番号８１＝ＰＲＲＸ２のフォワードプライマー
配列番号８２＝ＰＲＲＸ２のリバースプライマー
配列番号８３＝ＲＡＤ５１のフォワードプライマー
配列番号８４＝ＲＡＤ５１のリバースプライマー
配列番号８５＝ＫＬＦ５のフォワードプライマー
配列番号８６＝ＫＬＦ５のリバースプライマー
配列番号８７＝ＺＢＴＢ７Ａのフォワードプライマー
配列番号８８＝ＺＢＴＢ７Ａのリバースプライマー
配列番号８９＝ＳＰ１１０のフォワードプライマー
配列番号９０＝ＳＰ１１０のリバースプライマー
配列番号９１＝ＴＨＲＡＰ６のフォワードプライマー
配列番号９２＝ＴＨＲＡＰ６のリバースプライマー
配列番号９３＝ＧＬＩ２のフォワードプライマー
配列番号９４＝ＧＬＩ２のリバースプライマー
配列番号９５＝ＳＳＢＰ３（ｖａｒｉａｎｔ３）のフォワードプライマー
配列番号９６＝ＳＳＢＰ３（ｖａｒｉａｎｔ３）のリバースプライマー
配列番号９７＝ＡＴＢＦ１のフォワードプライマー
配列番号９８＝ＡＴＢＦ１のリバースプライマー
配列番号９９＝ＴＣＥＢ２のフォワードプライマー
配列番号１００＝ＴＣＥＢ２のリバースプライマー
配列番号１０１＝ＺＨＸ３のフォワードプライマー
配列番号１０２＝ＺＨＸ３のリバースプライマー
配列番号１０３＝ＡＬＰのフォワードプライマー
配列番号１０４＝ＡＬＰのリバースプライマー
配列番号１０５＝ＡＬＰのプローブ
配列番号１０６＝ＣＯＬ１Ａ１のフォワードプライマー
配列番号１０７＝ＣＯＬ１Ａ１のリバースプライマー
配列番号１０８＝ＣＯＬ１Ａ１のプローブ
配列番号１０９＝ＢＡＲＤ１のｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー
配列番号１１０＝ＢＡＲＤ１のｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー
配列番号１１１＝ＢＡＲＤ１のｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー（２）
配列番号１１２＝ＢＡＲＤ１のｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー（２）
配列番号１１３＝ＫＬＦ６のｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー
配列番号１１４＝ＫＬＦ６のｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー
配列番号１１５＝ＫＬＦ６のｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー（２）
配列番号１１６＝ＫＬＦ６のｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー（２）
配列番号１１７＝ＰＲＲＸ２のｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー
配列番号１１８＝ＰＲＲＸ２のｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー
配列番号１１９＝ＰＲＲＸ２のｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー（２）
配列番号１２０＝ＰＲＲＸ２のｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー（２）
配列番号１２１＝ＲＡＤ５１のｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー
配列番号１２２＝ＲＡＤ５１のｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー
配列番号１２３＝ＲＡＤ５１のｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー（２）
配列番号１２４＝ＲＡＤ５１のｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー（２）
配列番号１２５＝ＫＬＦ５のｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー
配列番号１２６＝ＫＬＦ５のｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー
配列番号１２７＝ＫＬＦ５のｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー（２）
配列番号１２８＝ＫＬＦ５のｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー（２）
配列番号１２９＝ＺＢＴＢ７ＡのｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー
配列番号１３０＝ＺＢＴＢ７ＡのｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー
配列番号１３１＝ＺＢＴＢ７ＡのｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー（２）
配列番号１３２＝ＺＢＴＢ７ＡのｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー（２）
配列番号１３３＝ＴＨＲＡＰ６のｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー
配列番号１３４＝ＴＨＲＡＰ６のｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー
配列番号１３５＝ＳＳＢＰ３のｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー
配列番号１３６＝ＳＳＢＰ３のｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー
配列番号１３７＝ＺＨＸ３のｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー
配列番号１３８＝ＺＨＸ３のｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー
配列番号１３９＝ＺＨＸ３のｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー（２）
配列番号１４０＝ＺＨＸ３のｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー（２）
配列番号１４１＝ＴＣＥＢ２のｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー
配列番号１４２＝ＴＣＥＢ２のｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー
配列番号１４３＝ＴＣＥＢ２のｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー（２）
配列番号１４４＝ＴＣＥＢ２のｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー（２）
配列番号１４５＝ＧＩＬＺのｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー
配列番号１４６＝ＧＩＬＺのｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー
配列番号１４７＝ＲＵＮＸ２のｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー
配列番号１４８＝ＲＵＮＸ２のｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー
配列番号１４９＝コントロールｓｉＲＮＡセンス鎖２１マー
配列番号１５０＝コントロールｓｉＲＮＡアンチセンス鎖２１マー
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図５】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図４】
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【図６】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【配列表】
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