(57)【要約】【課題】経皮投与によっても経口投与と同等以上の効果を得ることができる鮭類卵巣膜抽出成分組成物の製造方法を提供する。【解決手段】鮭類の卵巣膜を、第１のタンパク質分解酵素で処理して第１の成分を抽出する。第１の成分を、第１のタンパク質分解酵素とは異なる第２のタンパク質分解酵素で処理して、第１の成分よりも低分子化された第２の成分を得る。さらに、第２の成分を、超高圧乳化機を用いて、９８０〜２９４０ＭＰａの範囲の圧力下に処理して、平均粒子径２００〜１４００ｎｍの粒子を得る工程を備えてることが好ましい。第２のタンパク質分解酵素は、放線菌の産生する複数のエンドプロテアーゼ及びエクソプロテアーゼの混合物からなるタンパク質分解酵素、パパイン、プロテアーゼＫからなる群から選択される１種のタンパク質分解酵素であり、特に放線菌の産生する複数のエンドプロテアーゼ及びエクソプロテアーゼの混合物からなるタンパク質分解酵素が好ましい。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
鮭類の卵巣膜をタンパク質分解酵素で処理して抽出された鮭類卵巣膜抽出成分を含む組成物の製造方法であって、
鮭類の卵巣膜を、第１のタンパク質分解酵素で処理して第１の成分を抽出する工程と、
第１の成分を、第１のタンパク質分解酵素とは異なる第２のタンパク質分解酵素で処理して、第１の成分よりも低分子化された第２の成分を得る工程とを備えることを特徴とする鮭類卵巣膜抽出成分組成物の製造方法。
【請求項２】
請求項１記載の有用成分組成物の製造方法において、第２の成分を、超高圧乳化機を用いて、９８０〜２９４０ＭＰａの範囲の圧力下に処理して、平均粒子径２００〜１４００ｎｍの粒子を得る工程を備えることを特徴とする鮭類卵巣膜抽出成分組成物の製造方法。
【請求項３】
請求項１または請求項２記載の有用成分組成物の製造方法において、第２のタンパク質分解酵素は、放線菌の産生する複数のエンドプロテアーゼ及びエクソプロテアーゼの混合物からなるタンパク質分解酵素、パパイン、プロテアーゼＫからなる群から選択される１種のタンパク質分解酵素であることを特徴とする鮭類卵巣膜抽出成分組成物の製造方法。
【請求項４】
請求項３記載の有用成分組成物の製造方法において、第２のタンパク質分解酵素は、放線菌の産生する複数のエンドプロテアーゼ及びエクソプロテアーゼの混合物からなるタンパク質分解酵素であることを特徴とする鮭類卵巣膜抽出成分組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、鮭類の卵巣膜をタンパク質分解酵素で処理して抽出された鮭類卵巣膜抽出成分を含む組成物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
鮭類の卵巣膜をタンパク質分解酵素で処理して抽出された成分（以下、鮭類卵巣膜抽出成分と略記する）は、単にタンパク質、アミノ酸を含むのみならず、ビタミン、ミネラル、コンドロイチン硫酸、核酸成分である５’−イノシン酸等の有用成分を含んでいる。そこで、従来、前記鮭類卵巣膜抽出成分は、経口投与による肌荒れ改良剤として用いることが知られている（例えば特許文献１参照）。
【０００３】
前記鮭類卵巣膜抽出成分は、例えば、魚卵から分離された前記卵巣膜をタンパク質分解酵素で処理してタンパク質を抽出した溶液を、濾過し、得られた濾液を乾燥させる方法により製造することができる。
【０００４】
また、前記鮭類卵巣膜抽出成分を経皮投与することにより、皮膚の状態を改善するための化粧料として用いることが検討されている。前記化粧料は、前記鮭類卵巣膜抽出成分を含むことにより、皮膚の細胞を活性化させる効果、メラニンの生成を抑制して皮膚を美白化する効果、ヒスタミンの遊離を抑制してかゆみ止めする効果、コラーゲンの生成を促進して保湿性や、シミ、ソバカス、シワを改良する効果、皮丘及び皮溝を明確にしてキメを細かくする効果等の種々の効果が期待される。
【０００５】
しかしながら、経皮投与は一般に経口投与に比較して吸収されにくく、効果が低減するので、前記鮭類卵巣膜抽出成分を経皮投与する場合に、経口投与と同等以上の効果を得るために、さらに改良が望まれる。
【特許文献１】特許３８９９１１６号公報
【特許文献２】米国特許第４５３３２５４号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、かかる不都合を解消して、経皮投与によっても経口投与と同等以上の効果を得ることができる鮭類卵巣膜抽出成分組成物の製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
かかる目的を達成するために、本発明は、鮭類の卵巣膜をタンパク質分解酵素で処理して抽出された鮭類卵巣膜抽出成分を含む組成物の製造方法であって、鮭類の卵巣膜を、第１のタンパク質分解酵素で処理して第１の成分を抽出する工程と、第１の成分を、第１のタンパク質分解酵素とは異なる第２のタンパク質分解酵素で処理して、第１の成分よりも低分子化された第２の成分を得る工程とを備えることを特徴とする。
【０００８】
本発明の鮭類卵巣膜抽出成分組成物の製造方法によれば、鮭類の卵巣膜を、第１のタンパク質分解酵素で処理して得られた鮭類卵巣膜抽出成分（第１の成分）を、再度、第１のタンパク質分解酵素とは異なる第２のタンパク質分解酵素で処理する。このようにすることにより、第１のタンパク質分解酵素で処理して得られた鮭類卵巣膜抽出成分（第１の成分）が、低分子化された第２の成分を得ることができる。
【０００９】
前記第２の成分は、前記第１の成分に比較して低分子化されているので、経皮的にも吸収されやすく、前記第１の成分を経皮的に用いた場合よりも大きな効果を得ることができる。
【００１０】
本発明の鮭類卵巣膜抽出成分組成物の製造方法は、さらに、前記第２の成分を、超高圧乳化機を用いて、９８０〜２９４０ＭＰａの範囲の圧力下に処理して、平均粒子径２００〜１４００ｎｍの粒子を得る工程を備えることが好ましい。
【００１１】
このようにすると、前記第２の成分が微粒子化され、平均粒子径２００〜１４００ｎｍの粒子を得ることができる。前記粒子によれば、前記範囲の平均粒子径を備えているので、経皮的にさらに吸収されやすく、前記第２の成分を経皮的に用いた場合よりもさらに大きな効果を得ることができる。
【００１２】
前記粒子は、平均粒子径が１４００ｎｍを超えると、前記第２の成分より大きな効果が得られないことがある。また、平均粒子径を２００ｎｍ未満とすることは、前記超高圧乳化機の装置構成の上で困難である。
【００１３】
前記超高圧乳化機による処理において、圧力が９８０ＭＰａ未満では、前記範囲の平均粒子径を得ることができない。また、２９４０ＭＰａを超える圧力とすることは、装置構成の上で困難である。
【００１４】
本発明の鮭類卵巣膜抽出成分組成物の製造方法において、前記第１の成分に比較して低分子化された前記第２の成分を得るために、前記第２のタンパク質分解酵素は、放線菌の産生する複数のエンドプロテアーゼ及びエクソプロテアーゼの混合物からなるタンパク質分解酵素、パパイン、プロテアーゼＫからなる群から選択される１種のタンパク質分解酵素を用いることができる。
【００１５】
前記第２のタンパク質分解酵素は、より低分子化された前記第２の成分を得るために、放線菌の産生する複数のエンドプロテアーゼ及びエクソプロテアーゼの混合物からなるタンパク質分解酵素であることが好ましい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
次に、本発明の実施の形態についてさらに詳しく説明する。
【００１７】
本実施形態の製造方法では、まず、鮭類の卵巣膜を水洗する。前記鮭類に属する魚類としては、例えば、白ザケ、紅ザケ、銀ザケ、ニジマス、サクラマス、マスノスケ等を挙げることができ、本実施形態の製造方法では、前記魚類のいずれの卵巣膜を用いてもよい。前記卵巣膜は、前記鮭類の魚類の卵巣から魚卵を採取した後の魚卵外皮である。
【００１８】
次に、前記卵巣膜に対して水を卵巣膜：水＝１：１〜１：３の重量比で加えて撹拌、混合し、さらに第１のタンパク質分解酵素を卵巣膜の全量に対して１〜３重量％の範囲の量で添加し、４５〜５５℃の温度で３０分間〜５時間、好ましくは２時間加熱する。前記第１のタンパク質分解酵素としては、例えば、アロアーゼ、パンチターゼ等を挙げることができる。
【００１９】
次に、前記水溶液に含まれている前記第１のタンパク質分解酵素を失活する。前記失活は、例えば、前記水溶液を９０℃の温度で５分間加熱することにより行うことができる。
【００２０】
このようにすると、前記卵巣膜の成分のうち、前記第１のタンパク分解酵素で分解された第１の成分が水中に溶出し、該第１の成分の水溶液が得られる。前記第１の成分は、前記第１のタンパク質分解酵素として何を用いるかにもよるが、例えば、３５０００程度の数平均分子量を備えている。
【００２１】
次に、前記第１の成分を含む水溶液に、第２のタンパク質分解酵素を、前記原料としての卵巣膜の全量に対して０．５〜５．０重量％の範囲となる量で添加し、４５〜５０℃の温度に加熱し、３０分間〜５時間、好ましくは２時間振盪する。前記第２のタンパク質分解酵素は、前記第２のタンパク質分解酵素とは異なる酵素である。前記第２のタンパク質分解酵素としては、放線菌の産生する複数のエンドプロテアーゼ及びエクソプロテアーゼの混合物からなるタンパク質分解酵素（プロナーゼ）、パパイン、プロテアーゼＫからなる群から選択される１種のタンパク質分解酵素を用いることができるが、特にプロナーゼを用いることが好ましい。前記プロナーゼは、例えば、ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社製の同名のタンパク質分解酵素を用いることができる。
【００２２】
次に、前記水溶液に含まれている前記第２のタンパク質分解酵素を失活する。前記失活は、例えば、前記水溶液を９０℃の温度で５分間加熱することにより行うことができる。
【００２３】
このようにすると、前記水溶液中の第１の成分が、さらに、前記第２のタンパク分解酵素で分解され、第１の成分よりも低分子化された第２の成分を含む水溶液が得られる。前記第２の成分は、前記第２のタンパク質分解酵素として何を用いるかにもよるが、例えば、前記第１の成分の分子量の約１／１０に低分子化され、８００〜４０００の範囲の数平均分子量を備えている。
【００２４】
次に、前記第２の成分の水溶液を３０メッシュ程度の金網で簡易濾過し、未分解の卵巣膜等の粗大物を除去する。そして、得られた濾液に活性炭を添加して、該濾液の脱臭、脱色、脱脂を行う。前記濾液の脱臭、脱色、脱脂は、前記原料としての卵巣膜の全量に対して２〜４重量％の範囲の量の活性炭を該濾液に添加し、例えば６０℃の温度で３０分間加熱することにより行うことができる。
【００２５】
前記活性炭による脱臭、脱色、脱脂処理後、前記濾液を例えばフィルタープレスにより濾過し、得られた濾液を、減圧下、例えば６０℃の温度で濃縮した後、例えば８０℃の温度に１０分間維持して滅菌する。そして、滅菌後の前記濾液をスプレードライにて乾燥させることにより、鮭類卵巣膜抽出成分を得ることができる。
【００２６】
次に、前記第１の成分を前記第２のタンパク質分解酵素で処理しなかった以外は、上述の製造方法と全く同一にして得られた鮭類卵巣膜抽出成分（比較例）と、本実施形態の製造方法で得られた鮭類卵巣膜抽出成分とについて、高速液体クロマトグラフィーによる分子ふるいクロマトグラフィーを用いて数平均分子量を測定した。本実施形態の製造方法で得られた鮭類卵巣膜抽出成分は、前記第２のタンパク質分解酵素として、それぞれプロナーゼ（実施例１）、パパイン（実施例２）、プロテアーゼＫ（実施例３）を用いて得られた鮭類卵巣膜抽出成分である。
【００２７】
従って、前記比較例の鮭類卵巣膜抽出成分は、前記第１の成分からなるものであり、前記実施例１〜３の鮭類卵巣膜抽出成分は、前記第１の成分からなるものである。結果を表１に示す。
【００２８】
【表１】
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【００２９】
表１から、第１の成分を前記第２のタンパク質分解酵素で処理しなかった以外は上述の製造方法と全く同一にして得られた鮭類卵巣膜抽出成分（比較例）に比較して、本実施形態の製造方法で得られた鮭類卵巣膜抽出成分（実施例１〜３）によれば、数平均分子量が約１／１０になっており、低分子化されていることが明らかである。また、本実施形態の製造方法で得られた鮭類卵巣膜抽出成分では、特に実施例１の前記第２のタンパク質分解酵素としてプロナーゼを用いたものが、低分子化の程度が大きいことが明らかである。
【００３０】
本実施形態の製造方法で得られた鮭類卵巣膜抽出成分は、前述のように第１の成分を前記第２のタンパク質分解酵素で処理しなかった場合に比較して、低分子化されているので、このまま皮膚状態改善用化粧料等の原料としてもよい。しかし、さらに大きな効果を望む場合には、本実施形態の製造方法で得られた鮭類卵巣膜抽出成分をさらに、超高圧乳化機で処理することが好ましい。
【００３１】
前記超高圧乳化機は、マイクロフルイダイザー（商品名）として公知である（例えば、特許文献２参照）。
【００３２】
前記超高圧乳化機により処理するときには、まず、本実施形態の製造方法で得られた前記第２の成分の水溶液を、３０メッシュ程度の金網で簡易濾過し、未分解の卵巣膜等の粗大物を除去する。そして、得られた濾液に活性炭を添加して、該濾液の脱臭、脱色、脱脂を行う。前記濾液の脱臭、脱色、脱脂は、上述の方法と全く同一にして行うことができる。
【００３３】
前記濾液を前記超高圧乳化機により処理するときには、該濾液は前記範囲の圧力により高温に加熱されて滅菌されるので、前記活性炭による脱臭、脱色、脱脂処理後、特に滅菌を行う必要がない。従って、前記第２の成分を含む濃縮された濾液は、前記活性炭による脱臭、脱色、脱脂処理後、直ちに、例えばフィルタープレスにより濾過し、得られた濾液を、減圧下、例えば６０℃の温度で濃縮する。
【００３４】
次に、前記濃縮された濾液を、前記超高圧乳化機により９８０〜２９４０ＭＰａの範囲の圧力下に処理することにより、該第２の成分を平均粒子径が２００〜１４００ｎｍの範囲の微粒子とすることができる。そして、前記超高圧乳化機で処理された濾液をスプレードライにて乾燥させることにより、前記微粒子化された鮭類卵巣膜抽出成分を得ることができる。
【００３５】
前記微粒子化された鮭類卵巣膜抽出成分は、皮膚状態改善用化粧料等の原料として用いることができる。尚、前記実施形態では、前記超高圧乳化機で処理された濾液をスプレードライにて乾燥させているが、該濾液に含まれる前記鮭類卵巣膜抽出成分は既に微粒子化されているので、該濾液をそのまま前記皮膚状態改善用化粧料等の原料として用いてもよい。