(57)【要約】      （修正有）【課題】採血や複数回の透析排液の回収が不要であり、簡便に腹膜機能を判定するための、間接的なＤ／Ｐクレアチニンの決定方法を提供する。【解決手段】腹膜透析により得られる透析排液を準備し、前記透析排液に含まれるプレアルブミン、ハプトグロビン、α１−ミクログロブリン、Ｃ４および総タンパク質からなる群から選択された少なくとも一つのタンパク質マーカーを測定し、予め作成したＤ／Ｐクレアチニン値とマーカー濃度との関係を示す相関式から間接的にＤ／Ｐクレアチニンを決定する。さらに、間接的に求めたＤ／Ｐクレアチニンから従来の基準に基づいてＰＥＴカテゴリーを間接的に決定する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
プレアルブミン、ハプトグロビン、α１−ミクログロブリン、Ｃ４および総タンパク質からなる群から選択された少なくとも一つのタンパク質を含むことを特徴とするＤ／Ｐクレアチニンのマーカー。
【請求項２】
前記マーカーが、タンパク質量が相対的に高い程、Ｄ／Ｐクレアチニンが相対的に高いことを示すマーカーである、請求項１記載のマーカー。
【請求項３】
前記マーカーが、α１−ミクログロブリンである、請求項１または２記載のマーカー。
【請求項４】
前記タンパク質が、腹膜透析の排液中のタンパク質である、請求項１から３のいずれか一項に記載のマーカー。
【請求項５】
Ｄ／Ｐクレアチニンの決定方法であって、
下記（ａ）〜（ｃ）工程を含むことを特徴とするＤ／Ｐクレアチニン決定方法。
（ａ）  被検体の腹膜透析の排液を準備する工程
（ｂ）  前記排液における請求項１記載のＤ／Ｐクレアチニンマーカーを測定する工程
（ｃ）  Ｄ／Ｐクレアチニンの値とＤ／Ｐクレアチニンマーカーの量との関係を示す相関式に基づいて、前記（ｂ）工程におけるマーカーの測定値からＤ／Ｐクレアチニンを算出する工程
【請求項６】
前記相関式が、複数の透析患者のＤ／Ｐクレアチニンの値と、前記複数の透析患者のＤ／Ｐクレアチニンマーカーの測定値とから作成された相関式である、請求項５記載のＤ／Ｐクレアチニン決定方法。
【請求項７】
前記複数の透析患者のＤ／Ｐクレアチニン値が、腹膜透析開始後２〜４時間の排液についての値である、請求項６記載のＤ／Ｐクレアチニン決定方法。
【請求項８】
前記複数の透析患者のＤ／Ｐクレアチニンマーカーの測定値が、腹膜透析開始後８〜１２時間の排液における値である、請求項６または７記載のＤ／Ｐクレアチニン決定方法。
【請求項９】
前記（ａ）工程において、被検体の腹膜透析の排液が、腹膜透析開始後８〜１２時間の排液である、請求項８記載のＤ／Ｐクレアチニン決定方法。
【請求項１０】
前記マーカーの測定方法が、免疫学的手法および電気泳動法の少なくとも一方を用いた方法である、請求項５から９のいずれか一項に記載のＤ／Ｐクレアチニン決定方法。
【請求項１１】
ＰＥＴカテゴリーの判定方法であって、
下記（Ａ）工程および（Ｂ）工程を含むことを特徴とするＰＥＴカテゴリー判定方法。
（Ａ）  請求項５記載のＤ／Ｐクレアチニン決定方法により、Ｄ／Ｐクレアチニンを決定する工程
（Ｂ）  決定したＤ／ＰクレアチニンからＰＥＴカテゴリーを判定する工程
【請求項１２】
Ｈｉｇｈ  ＡｖｅｒａｇｅカテゴリーとＨｉｇｈカテゴリーとを判別する、請求項１１記載のＰＥＴカテゴリー判定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腹膜機能の判断基準であるＤ／Ｐクレアチニンの指標となるマーカー、Ｄ／Ｐクレアチニンの間接的な決定方法およびその用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
腎不全の治療法である腹膜透析を長期に行った場合、その刺激によって患者の腹膜機能が低下する傾向にあることが知られている。そして、これが原因となって腹膜透過能が亢進し、結果として透析効果が低下すると共に、被嚢性腹膜硬化症（ＥＰＳ）を発症する危険性もある。
【０００３】
このため透析医療の分野においては、透析患者の腹膜機能の低下を早期に診断する必要がある。現在、腹膜機能の検査方法として、ＰＥＴ（腹膜平衡試験：Ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  Ｅｑｕｉｌｉｂｒａｔｉｏｎ  Ｔｅｓｔ）が採用されている（非特許文献１参照）。ＰＥＴは、腹膜機能を４段階（４つのカテゴリー）で評価する方法である。この方法では、一般的に、患者の腹膜に透析液を貯留し、透析液中ならびに血液中のクレアチニン濃度およびブドウ糖濃度を経時的に測定する。そして、透析期間内におけるクレアチン濃度およびブドウ糖濃度の変動から腹膜の除水能や老廃物除去能を評価し、その評価結果から腹膜機能を表すカテゴリーへの分類が行われる。クレアチニン濃度の変動は老廃物除去能の指標となり、ブドウ糖濃度の変動は除水能の指標となる。具体的に、腹膜機能をクレアチニン変動により分類する場合には、「Ｄ／Ｐクレアチニン」の値が使用される。この値は、透析治療中の任意時間における透析液（透析排液）のクレアチニン濃度（Ｄ）と血液のクレアチニン濃度（Ｐ）との比を示す。Ｄ／Ｐクレアチニンの値とＰＥＴの各カテゴリーとの関係は、例えば、非特許文献２に開示されており、Ｄ／Ｐクレアチニン値の高い方、すなわち、透過能の高い方から、「Ｈｉｇｈ」、「Ｈｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅ」、「Ｌｏｗ  Ａｖｅｒａｇｅ」および「Ｌｏｗ」という４つのカテゴリーに分類されている。したがって、測定した透析患者のＤ／Ｐクレアチニン値に基づいて前記４つのカテゴリーへの分類を行えば、その分類結果に応じて、透析液の浸透圧の調整、透析頻度、血液透析との併用や血液透析への移行等を決定することができる。このように、ＰＥＴによるカテゴリー分類は、前述のような合併症の併発防止に役立てられている。なお、ＰＥＴの４つのカテゴリーをより詳細に説明すると、透過能が高い「Ｈｉｇｈ」は、相対的に老廃物除去能が高く除水能が低く、透過能がやや高い「Ｈｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅ」は、相対的に老廃物除去能が普通であり除水能がやや低く、透過能がやや低い「Ｌｏｗ  Ａｖｅｒａｇｅ」は、相対的に老廃物除去能がやや低く除水能が普通であり、透過能が低い「Ｌｏｗ」は、相対的に老廃物除去能が低く除水能が高いという評価になる。
【０００４】
しかしながら、前述のようにＤ／Ｐクレアチニンを測定してＰＥＴカテゴリーの分類を行うためには、透析開始後、数回にわたって（例えば、開始後０時間、２時間および４時間）透析液を排液させる必要がある。そして、さらに、血液の採取も必須である。このため、患者は、所定時間の排液回収のために時間を拘束され、さらに、採血の苦痛を伴う。また、在宅での検体採取が困難であるため病院へ出向くことが必須となり、患者および医師の双方に労力がかかるという問題がある。さらに、オリジナルＰＥＴ法を簡易化したｆａｓｔ  ＰＥＴ法であっても、患者が透析液回収のために拘束される時間は同じであり、少なくとも経時的に排液させた透析排液３種類および血液の合計４種類についてクレアチニン濃度を測定する必要があるため、測定自体に手間もかかる。
【非特許文献１】Twardowski  ZJ,  et  al.  Peritoneal  equilibration  test.  Perit  Dial  Bull  1987;  7:  138-47.
【非特許文献２】「よくわかる腹膜透析の基礎」、東京医学社、山下明泰、１９９８年１０月１日発行
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
そこで、本発明の目的は、採血や複数回の透析排液の回収が不要であり、簡便に腹膜機能を判定することができる、新たなマーカーの提供である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明のマーカーは、Ｄ／Ｐクレアチニンのマーカー（以下、「Ｄ／Ｐクレアチニンマーカー」という）であり、プレアルブミン、ハプトグロビン、α１−ミクログロブリン、Ｃ４および総タンパク質からなる群から選択された少なくとも一つのタンパク質を含むことを特徴とする。
【０００７】
また、本発明のＤ／Ｐクレアチニンの決定方法は、下記（ａ）〜（ｃ）工程を含むことを特徴とする。
（ａ）  被検体の腹膜透析の排液を準備する工程
（ｂ）  前記排液における本発明のＤ／Ｐクレアチニンマーカーを測定する工程
（ｃ）  Ｄ／Ｐクレアチニンの値とＤ／Ｐクレアチニンマーカーの量との関係を示す相関式に基づいて、前記（ｂ）工程におけるマーカーの測定値からＤ／Ｐクレアチニンを算出する工程
【０００８】
本発明のＰＥＴカテゴリーの判定方法は、下記（Ａ）工程および（Ｂ）工程を含むことを特徴とする。
（Ａ）  本発明のＤ／Ｐクレアチニン決定方法により、Ｄ／Ｐクレアチニンを決定する工程
（Ｂ）  決定したＤ／ＰクレアチニンからＰＥＴカテゴリーを判定する工程
【発明の効果】
【０００９】
本発明者らは、鋭意研究の結果、腹膜透析患者の腹膜機能（腹膜透過能）に依存して、腹膜透析排液においてある一群のタンパク質の含有量が変動することを見出した。すなわち、腹膜透過能が高い患者の腹膜透析排液と腹膜透過能が低い患者の腹膜透析排液とにおいて、プレアルブミン、ハプトグロビン、α１−ミクログロブリン、および、総タンパク質の計５種類のタンパク質について、含有量の変動が見られた。そして、さらに検討を行った結果、腹膜透析排液におけるこれらのタンパク質量とＤ／Ｐクレアチニンとが相関関係を示すことをつきとめた。このため、本発明のように、これらのタンパク質をＤ／Ｐクレアチニンのマーカーとし、腹膜透析排液における量を測定すれば、この結果に基づいて腹膜透析患者のＤ／Ｐクレアチニンを間接的に決定できる。そして、さらに、その決定結果からＰＥＴカテゴリーへの分類も行うことができる。また、従来のＰＥＴは、前述のように透析排液と血液との両方を試料として採取する必要があるが、本発明の方法によれば透析排液を採取するのみで足りるため、患者の苦痛も低減できる。さらに、本発明の方法によれば、腹膜機能の検査に使用する試料は一種類の透析排液で足りる。このため、複数回にわたる排液の回収が不要であり、また、測定も一種類の透析排液に対して行うのみで足りる。したがって、従来のＰＥＴよりも操作自体が極めて簡便となる。特に、従来のＰＥＴは、その工程の煩雑さや患者や医師の負担の大きさから、通常、年１回程度の実施に留まるが、本発明の方法は、極めて簡便であることから高頻度に実施可能である。したがって、本発明のマーカーを対象としてＤ／ＰクレアチニンやＰＥＴを決定すれば、患者および医師の双方の労力を低減して、腹膜機能の検査を簡便に行うことができる。また、高頻度に実施が可能であることから、ＰＥＴカテゴリーの移行を早期に検出することができる。これにより、例えば、特に重要視されている「Ｈｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅ」から「Ｈｉｇｈ」へのＰＥＴカテゴリーの移行期を早期に検出することもできる。このため、本発明は、例えば、腎不全の治療において、腹膜症状に応じた透析条件の変更、長期腹膜透析による腹膜炎の発症防止等に極めて有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
＜Ｄ／Ｐクレアチニンマーカー＞
本発明のＤ／Ｐクレアチニンマーカーは、前述のように、プレアルブミン、ハプトグロビン、α１−ミクログロブリン、Ｃ４および総タンパク質からなる群から選択された少なくとも一つのタンパク質を含むことを特徴とする。
【００１１】
これらのタンパク質は、全て、腹膜透析排液における濃度が相対的に高い程、Ｄ／Ｐクレアチニンが相対的に高いことを示すマーカーであり、換言すると、腹膜透過能が相対的に高いことを示すマーカーである。具体的には、Ｄ／Ｐクレアチニン値が相対的に高い（透過能が相対的に高い）透析排液の場合、Ｄ／Ｐクレアチニン値が相対的に低い（透過能が相対的に低い）排液と比べて、例えば、透析排液における前記マーカー濃度は高くなる。したがって、後述するように、透析排液におけるこれらのマーカーの測定によって、その濃度や量が相対的に高ければ、相対的にＤ／Ｐクレアチニンが高く、腹膜透過能が高いと判断できる。なお、具体的な判断方法については後述する。これらのマーカーの中でも、α１−ミクログロブリン、プレアルブミン、総タンパク質が好ましく、特にＤ／Ｐクレアチニンと最も高い相関関係を示すことから、α１−ミクログロブリンが好ましい。
【００１２】
＜Ｄ／Ｐクレアチニン決定方法＞
つぎに、本発明のＤ／Ｐクレアチニンの決定方法は、前述のように、下記（ａ）〜（ｃ）工程を含むことを特徴とする。
（ａ）  被検体の腹膜透析の排液を準備する工程
（ｂ）  前記排液における本発明のＤ／Ｐクレアチニンマーカーを測定する工程
（ｃ）  Ｄ／Ｐクレアチニンの値とＤ／Ｐクレアチニンマーカーの量との関係を示す相関式に基づいて、前記（ｂ）工程におけるマーカーの測定値からＤ／Ｐクレアチニンを算出する工程
【００１３】
本発明のＤ／Ｐクレアチニン決定方法の一例を以下に示すが、本発明は、これには限定されない。
【００１４】
まず、患者の腹膜に貯留している透析液を排液させる。貯留の時間は、特に制限されないが、例えば、患者間や分析毎の条件を一定させることが好ましい。具体例としては、例えば、予め腹腔に８〜１２時間貯留した透析液を排液したものを分析試料とする。
【００１５】
続いて、得られた分析試料について、本発明のＤ／Ｐクレアチニンマーカーの測定（定性または定量）を行う。本発明においては、Ｄ／Ｐクレアチニンマーカーとして、プレアルブミン、ハプトグロビン、α１−ミクログロブリン、Ｃ４および総タンパク質のいずれを測定してもよい。マーカーの測定方法は、特に制限されず、タンパク質を測定するための従来公知の検出方法が採用できる。また、前述のタンパク質自体は公知タンパク質であることから、例えば、各タンパク質についての従来公知の検出方法を採用することもできる。なお、これらのタンパク質自体は公知であっても、これらがＤ／Ｐクレアチニンのマーカーとなること、腹膜透析排液中の量や濃度を測定することでＤ／Ｐクレアチニンを間接的に決定できることは、本発明者らが初めて見出したことである。
【００１６】
前記検出方法の具体例としては、例えば、酵素法、免疫学的手法、電気泳動法等があげられる。前記免疫学的手法としては、抗原抗体反応を利用する従来公知の方法があげられ、例えば、ＥＬＩＳＡ法（Ｅｎｚｙｍｅ-Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｓｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ）、ウエスタンブロッティング法、ラテックス凝集比濁法等の免疫比濁法、金コロイド凝集法、免疫比朧法（ネフェロメトリー法）等が採用できる。この方法に使用する抗体は、例えば、市販の抗体でもよいし、自家調製したモノクローナル抗体やポリクローナル抗体であってもよい。
【００１７】
免疫学的手法によるマーカーの測定は、従来公知の手法を利用した検査用具によって、さらに簡便に検出することも可能である。ＥＬＩＳＡ法によるＤ／Ｐクレアチニンマーカー測定用の検査用具としては、例えば、多孔質構造または毛細管構造を有する基板に、前記マーカーに対する試薬が配置された試験片があげられる。前記試薬としては、例えば、Ｄ／Ｐクレアチニンマーカーに対する抗体や、抗原（マーカー）があげられる。前記試薬として抗Ｄ／Ｐクレアチニン抗体を固定化した試験片の場合、まず、腹膜透析排液を滴下して、前記固定化抗体と前記腹膜透析排液中の抗原（Ｄ／Ｐクレアチニンマーカー）との抗原反応を行う。そして、さらに、標識化した抗Ｄ／Ｐクレアチニン抗体を添加して、前記固定化抗体に結合したＤ／Ｐクレアチニンマーカーとの抗原抗体反応を行う。そして、前記Ｄ／Ｐクレアチニンマーカーと結合した標識化抗体の標識を検出することによって、前記排液中のＤ／Ｐクレアチニンマーカーを測定できる。また、抗Ｄ／Ｐクレアチニン抗体を固定化した試験片に、Ｄ／Ｐクレアチニンマーカーを含む腹膜透析排液と、標識化したＤ／Ｐクレアチニンマーカーとを添加して、非標識化マーカーと標識化マーカーとを抗体に競合結合させてもよい。この場合、前記固定化抗体に結合した標識化マーカーの標識を検出することによって、前記排液中の抗原Ｄ／Ｐクレアチニンマーカーを測定することができる。
【００１８】
前記基板としては、制限されず、前記試薬を担持（例えば、固定化）でき、また、腹膜排液を展開可能な材質（例えば、吸水性に優れる材質）または構造であることが好ましい。前記基板としては、例えば、ろ紙、クロマトグラフィー紙、不織布があげられる。この他にも、高分子製多孔質体があげられる。前記多孔質体の材質は、制限されず、例えば、セルロース、セルロースアセテート、ニトロセルロース等のセルロース系ポリマー、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリアミド系樹脂（例えば、ナイロン）、ポリエステル、アクリロニトリルを原料とする樹脂、ポリテトラフルオロエチレン等の樹脂があげられる。また、試験片を用いる場合、例えば、測定感度、測定精度、一連の操作性を向上するために、従来公知の方法を適宜採用することができる。
【００１９】
前記電気泳動法としては、例えば、一次元電気泳動や二次元電気泳動等があげられる。これらの手法によれば、例えば、１回の電気泳動（一次元および二次元の電気泳動）によって、全てのマーカーの分離が可能である。このため、泳動後のゲルにおけるマーカーのスポットの有無や、前記スポットの濃淡から、一度に全てマーカーの測定を行うこともできる。電気泳動の条件や電気泳動に供する試料の全タンパク質量等は、試料間で一定にすることが好ましい。染色方法は、特に制限されず、例えば、銀染色、クーマシーブリリアントブルー（ＣＢＢ）染色や、ＳＹＰＲＯ  Ｒｕｂｙ染色（商品名）等の蛍光染色があげられる。
【００２０】
プレアルブミン、ハプトグロビン、α１−ミクログロブリン、Ｃ４および総タンパク質は、前述のように公知のタンパク質であり、それぞれ、血液の生化学検査項目として知られている。したがって、公知の測定方法を利用して、腹膜透析排液における濃度や量を測定してもよい。プレアルブミンの測定方法としては、例えば、比濁法、ハプトグロビンやＣ４の測定方法としては、例えば、免疫比濁法、α１−ミクログロブリンの測定方法としては、例えば、ラテックス凝集免疫法、総タンパク質の測定方法としては、例えば、ビューレット法等が一般的である。
【００２１】
そして、例えば、前記Ｄ／ＰクレアチニンマーカーとＤ／Ｐクレアチニンとの相関関係を示す相関式に基づき、前記測定値からＤ／Ｐクレアチニンを間接的に算出すればよい。以下、本発明により間接的に算出するＤ／Ｐクレアチニンを「推定Ｄ／Ｐクレアチニン」といい、従来法により、血中濃度と透析排液中濃度とから直接的に算出するＤ／Ｐクレアチニンを「真のＤ／Ｐクレアチニン」という。この相関式は、例えば、予め、複数の透析患者の真のＤ／Ｐクレアチニンを従来法により測定し、他方、同じ透析患者らの腹膜透析排液中のＤ／Ｐクレアチニンマーカーを測定し、両者の測定結果を解析することにより作成できる。そして、この相関式に、被検者の透析排液におけるＤ／Ｐクレアチニンマーカーの測定値を代入することによって、間接的に推定Ｄ／Ｐクレアチニンを決定することができる。なお、相関式の作成にあたって、真のＤ／Ｐクレアチニンの測定に使用する透析排液の採取時間（透析液の貯留時間）は、特に制限されないが、測定する複数の透析排液間で統一されていることが好ましく、例えば、２〜４時間であり、好ましくは４時間である。他方、Ｄ／Ｐクレアチニンマーカーを測定するため（推定Ｄ／Ｐクレアチニンを算出するため）の透析排液の採取時間（透析液の貯留時間）は、特に制限されないが、例えば、６〜１４時間であり、好ましくは８〜１２時間であり、より好ましくは８時間である。また、被検者の透析排液の採取時間も、同様であることが好ましい。
【００２２】
以下に、具体例として、４時間貯留後に回収した腹膜透析排液と血液とを用いて測定した真のＤ／Ｐクレアチニンと、本発明のＤ／Ｐクレアチニンマーカーとの相関関係を示す。なお、本発明は、これらの相関式には制限されない。
【００２３】
【表１】
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【００２４】
前述のように、腹膜透析を継続していくと、腹膜機能が低下するため、Ｄ／Ｐクレアチニンは増加し、前述のＰＥＴカテゴリーとしては「Ｈｉｇｈ」の方へ移行する。そして、「Ｈｉｇｈ」カテゴリーに至った患者は、例えば、腹膜炎や硬化性被嚢性腹膜炎を発症するリスクが高いことが報告されている。このような腹膜炎の発症を防止するために、腹膜透析治療においては、例えば、腹膜休息期間、透析中止時期や、血液透析との併用または血液透析への移行等の検討が必要となる。一般的に、ＰＥＴカテゴリーが「Ｈｉｇｈ」の前段階「Ｈｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅ」である場合に、最も状態が良く、良好な腹膜透析を実施できることが知られている。したがって、この「Ｈｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅ」から「Ｈｉｇｈ」への移行期を検出すること、特に、「Ｈｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅ」に分類されるＤ／Ｐクレアチニンの数値範囲内で、どのような増加挙動を示すのかを検出することが非常に重要視されている。しかしながら、従来のＰＥＴでは、前述のように採血や、回収時間が設定された複数回にわたる透析液の回収が必要であり、患者の苦痛、患者や医師の多大な労力を伴うため、頻繁に定期的な測定を行うことができなかった。しかし、本発明によれば、採血が不要であり、腹膜透析排液を一度回収するのみでよい。このため、試料を頻繁かつ定期的に回収することが可能であり、また、病院での試料回収に限られず、在宅で回収した試料を病院や検査機関に郵送するのみで足りることから、患者および医師の双方の労力が軽減できる。また、患者自らが在宅で測定キットや簡易測定装置等により本発明のマーカーを測定し、推定Ｄ／Ｐクレアチニンを確認することも可能となる。
【００２５】
＜ＰＥＴカテゴリーの判定方法＞
つづいて、本発明のＰＥＴカテゴリーの判定方法は、前述のように、下記（Ａ）工程および（Ｂ）工程を含むことを特徴とする。
（Ａ）  本発明のＤ／Ｐクレアチニン決定方法により、Ｄ／Ｐクレアチニンを決定する工程
（Ｂ）  決定したＤ／ＰクレアチニンからＰＥＴカテゴリーを判定する工程
【００２６】
腹膜機能の検査で使用されているＰＥＴは、Ｄ／Ｐクレアチニンの数値範囲によって４種類のカテゴリーへの分類を行っている。そして、前述のように、腹膜透析排液における本発明のＤ／Ｐクレアチニンマーカーは、Ｄ／Ｐクレアチニンと相関関係を示す。このため、前述のようなＤ／Ｐクレアチニンマーカーの測定により間接的に推定Ｄ／Ｐクレアチニンを求めれば、この結果に基づいて、間接的にＰＥＴカテゴリーへの分類を行うことができる。
【００２７】
推定Ｄ／Ｐクレアチニンの決定には、前述のような相関式が使用できる。この相関式を作成するにあたり、真のＤ／Ｐクレアチニンの測定に、例えば、透析開始から４時間で排液した試料を使用した場合、相関式から、透析４時間後の排液の推定Ｄ／Ｐクレアチニンが算出できる。この場合、例えば、推定Ｄ／Ｐクレアチニンが約０．８１〜１．０３の範囲であれば「Ｈｉｇｈ」、推定Ｄ／Ｐクレアチニンが約０．６５〜０．８１の範囲であれば「Ｈｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅ」、推定Ｄ／Ｐクレアチニンが約０．５〜０．６５の範囲であれば「Ｌｏｗ  Ａｖｅｒａｇｅ」、推定Ｄ／Ｐクレアチニンが約０．３４〜０．５の範囲であれば「Ｌｏｗ」に、それぞれ分類できる。なお、推定Ｄ／Ｐクレアチニンの値が、例えば、各カテゴリーの境界値である場合等、いずれのカテゴリーであるかを厳密に判断する必要はない。例えば、「Ｈｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅ」に属する値であっても、その上限値に近づく程、「Ｈｉｇｈ」になる危険性または「Ｈｉｇｈ」である可能性が高いと判断できる。したがって、例えば、推定Ｄ／Ｐクレアチニンが０．８１の場合、「Ｈｉｇｈ」と判断してもよいし、極めてＨｉｇｈの危険性が高い「Ｈｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅ」と判断することもできる。これらは一例であって、本発明はこれに制限されない。
【００２８】
また、本発明のＤ／Ｐクレアチニンマーカーの検出により間接的にＰＥＴカテゴリーを判定する方法としては、前述のように、間接的に推定Ｄ／Ｐクレアチニンを決定する方法の他に、例えば、以下のような方法があげられる。なお、本発明は、これらの形態には何ら制限されない。
【００２９】
（第１形態）
被検者の透析排液について電気泳動（例えば、一次または二次）を行い、泳動後のゲルを染色し、染色後の泳動ゲルにおけるＤ／Ｐクレアチニンマーカーのスポットを確認する。ここで、本発明のＤ／Ｐクレアチニンマーカーのスポットが相対的に濃い程、透過能が高い患者、つまり、Ｄ／Ｐクレアチニンが相対的に高く、カテゴリーが相対的に「Ｈｉｇｈ」よりの患者と判断できる。
【００３０】
（第２形態）
予め、評価基準として、ＰＥＴカテゴリーが既知である透析患者の透析排液について、電気泳動（例えば、一次または二次）ならびに泳動ゲルの染色を行う。この電気泳動像を評価基準とする。評価基準としては、４つのＰＥＴカテゴリー患者の排液をそれぞれ用いてもよいし、これらのうち分類したいＰＥＴカテゴリーの患者の排液を用いてもよい。具体例としては、「Ｈｉｇｈ」カテゴリーと「Ｈｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅ」カテゴリー、「Ｈｉｇｈ」カテゴリーと「Ｌｏｗ」カテゴリーまたは「Ｌｏｗ  Ａｖｅｒａｇｅ」カテゴリー等があげられる。他方、被検体の透析廃液について、同様の条件で電気泳動ならびにゲル染色を行う。続いて、評価基準の電気泳動像と被検体の電気泳動像とを照らし合わせ、Ｄ／Ｐクレアチニンマーカーのスポットの有無またはスポットの染色の濃淡を比較する。そして、Ｄ／Ｐクレアチニンマーカーが同様の挙動を示している評価基準のカテゴリーを、被検体のＰＥＴカテゴリーと評価することができる。
【００３１】
（第３形態）
予め、評価基準として、ＰＥＴカテゴリーが既知である透析患者の透析排液について、一定量の全タンパク質あたりの各マーカーの含有割合を測定する。各カテゴリーにおける各マーカーの含有割合を、評価基準とする。評価基準としては、４つのＰＥＴカテゴリー患者の排液をそれぞれ用いてもよいし、これらのうち分類したいＰＥＴカテゴリーの患者の排液を用いてもよい。具体例としては、「Ｈｉｇｈ」カテゴリーと「Ｈｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅ」カテゴリー、「Ｈｉｇｈ」カテゴリーと「Ｌｏｗ」カテゴリーまたは「Ｌｏｗ  Ａｖｅｒａｇｅ」カテゴリー等があげられる。他方、被検体の透析排液について、同様にして、一定量の全タンパク質あたりの各マーカーの含有割合を測定する。そして、被検体の各マーカーの含有割合と評価基準の含有割合とを照らし合わせることにより、同程度の含有割合を示す評価基準のカテゴリーを、被検体のカテゴリーと評価することができる。この方法は、Ｄ／Ｐクレアチニンマーカーとして、プレアルブミン、ハプトグロビン、α１−ミクログロブリン、Ｃ４を採用する際に適している。
【００３２】
（第４形態）
予め、評価基準として、ＰＥＴカテゴリーが既知である透析患者の透析排液について、Ｄ／Ｐクレアチニンマーカーの濃度を測定する。評価基準としては、４つのＰＥＴカテゴリー患者の排液をそれぞれ用いてもよいし、これらのうち分類したいＰＥＴカテゴリーの患者の排液を用いてもよい。具体例としては、「Ｈｉｇｈ」カテゴリーと「Ｈｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅ」カテゴリー、「Ｈｉｇｈ」カテゴリーと「Ｌｏｗ」カテゴリーまたは「Ｌｏｗ  Ａｖｅｒａｇｅ」カテゴリー等があげられる。他方、被検体の透析排液について、同様にしてＤ／Ｐクレアチニンマーカーの濃度を測定する。Ｄ／Ｐクレアチニンマーカー濃度の測定方法は、特に制限されず、例えば、抗マーカー抗体との抗原抗体反応を用いた方法や、ＨＰＬＣを用いた方法等、従来公知のタンパク質検出方法が利用できる。そして、測定した検出対象のマーカー濃度と、評価基準とを照らし合わせることによって、同程度の濃度を示す評価基準のカテゴリーを、被検体のカテゴリーに属すると評価することができる。
【００３３】
また、市販のコンピューターを利用して、推定Ｄ／Ｐクレアチニンと真のＤ／Ｐクレアチニンとの相関関係や、推定Ｄ／ＰクレアチニンとＰＥＴカテゴリーとの相関関係に基づき、推定Ｄ／Ｐクレアチニン、ＰＥＴカテゴリーまたは腹膜機能の判定、さらに今後の透析スケジュールの決定を行うこともできる。具体的には、被検体の透析排液に関するＤ／Ｐクレアチニンマーカーの測定値から、前述の相関式に基づいて推定Ｄ／Ｐクレアチニンを演算し、得られた推定Ｄ／Ｐクレアチニンを、ＰＥＴカテゴリーを判定する真のＤ／Ｐクレアチニンの既存基準値と対比させ、ＰＥＴカテゴリーを判定するシステムが採用できる。そして、これらの一連のステップを実行するプログラムを予めコンピューターに内蔵したデータ処理装置や、前記プログラムを格納したコンピューター読み取り可能な記録媒体等が利用できる。また、患者の腹膜機能の評価の一般的な指標として、各溶質濃度、除水量があり、これらのデータから、腹膜透析の巨視的薬物動力学モデルとして知られるパイル−ポポビッチ（Ｐｙｌｅ−ｐｏｐｏｖｉｃｈ）モデルを適用することにより、溶出除去能、除水能等の腹膜機能を検査する方法が知られている。したがって、この腹膜機能の検査方法と本発明による方法とを組み合わせることで、より詳細な腹膜機能の評価も可能となる。
【００３４】
以下、実施例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００３５】
本発明のＤ／Ｐクレアチニンマーカーと従来法による真のＤ／Ｐクレアチニンとの相関関係の有無を確認した。
【００３６】
３３名の患者について、第１回目の測定として、４時間貯留した腹膜透析液を用いて、従来法による真のＤ／Ｐクレアチニンの測定、ならびに、後述する方法による各種Ｄ／Ｐクレアチニンマーカー濃度の測定を行った。さらに、前述の３３名のうち１３名の患者らについて、第２回目の測定として、第１回目の測定から６〜１２ヶ月後、再度、真のＤ／Ｐクレアチニンの測定、ならびに、各種Ｄ／Ｐクレアチニンマーカー濃度の測定を行った。さらに、前述の１３名のうち３名の患者について、第３回目の測定として、第２回目の測定から６〜１２ヶ月後、同様の方法で、真のＤ／Ｐクレアチニンの測定、ならびに、各種Ｄ／Ｐクレアチニンマーカー濃度の測定を行った。さらに、前記３名のうち１名の患者について、第４回目の測定として、前記第３回目の測定から６〜１２ヶ月後、同様の方法で、真のＤ／Ｐクレアチニンの測定、ならびに、各種Ｄ／Ｐクレアチニンマーカー濃度の測定を行った。Ｄ／Ｐクレアチニンマーカー濃度の測定は、患者に対して、腹腔内に透析液を８〜１２時間貯留させた後、排液を行い、これらの腹膜透析排液を試料として、以下の方法により行った。
【００３７】
（プレアルブミン濃度の測定）
試料３０μＬについて、Ｎ−抗血清プレアルブミン（デイドベーリング株式会社）を用いた免疫比朧法（ネフェロメトリー法）により、プレアルブミンを測定した。
（ハプトグロビン濃度の測定）
試料３０μＬについて、Ｎ−抗血清ハプトグロビン（デイドベーリング株式会社）を用いた免疫比朧法（ネフェロメトリー法）により、ハプトグロビンを測定した。
（α１−ミクログロブリン濃度の測定）
試料８μＬについて、ＬＸ試薬栄研α１−Ｍ−III（商品名、栄研化学株式会社）を用いた免疫比濁法（ラテックス凝集免疫比濁法）により、α１−ミクログロブリンを測定した。
（Ｃ４濃度の測定）
試料５μＬについて、Ｎ−アッセイ  ＴＩＡ  Ｃ４−ＳＨ  ニットーボー（商品名、日東紡績株式会社）を用いた免疫比濁法（ラテックス凝集免疫比濁法）により、Ｃ４を測定した。
（総タンパク質濃度の測定）
試料３５０μＬについて、ビューレット法により、総タンパク質を測定した。
【００３８】
得られた計５０個の真のＤ／Ｐクレアチニンの結果および各マーカー濃度の結果から、真のＤ／Ｐクレアチニンと各マーカーとの相関関係を示す相関式を求めた。これらの結果を下記表に示す。下記表に示すように、４時間貯留した腹膜透析液における真のＤ／Ｐクレアチニンと各マーカーとは、それぞれ相関関係を示した。中でもα１−ミクログロブリンは、真のＤ／Ｐクレアチニンと非常に高い相関関係を示した。以上の結果から、腹膜透析排液におけるＤ／Ｐクレアチニンマーカーを測定すれば、間接的にＤ／Ｐクレアチニンを推定でき、その推定Ｄ／Ｐクレアチニンに基づいて、さらに間接的にＰＥＴカテゴリーを判定可能であることが明らかとなった。なお、３３名の患者は、従来のＰＥＴによりカテゴリーを分類すると、第１回目の測定時において、Ｈｉｇｈが５名、Ｈｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅが１６名、Ｌｏｗ  Ａｖｅｒａｇｅが９名、Ｌｏｗが３名であり、うち１３名は、第２回目の測定時において、Ｈｉｇｈが４名、Ｈｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅが６名、Ｌｏｗ  Ａｖｅｒａｇｅが２名、Ｌｏｗが１名であった。このことから、前述の相関関係は、Ｌｏｗ〜Ｈｉｇｈの全てのカテゴリーの範囲において信頼性あるものといえる。
【００３９】
【表２】
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【実施例２】
【００４０】
前記実施例１において、第１回目の測定から６〜１２ヶ月の期間をおいて第２回目の測定を行った１３名の患者のうち、５名の患者は、真のＤ／Ｐクレアチニンから判定したＰＥＴカテゴリーが変化していた。そこで、これらの各患者について、真のＤ／Ｐクレアチニンの変化に伴って、α１−ミクログロブリン濃度が変化しているか否かを確認した。
【００４１】
実施例１の測定結果に基づき、ＰＥＴカテゴリーが変化した患者について、真のＤ／Ｐクレアチニンの変化と、同患者のα１−ミクログロブリン（α１Ｍ）濃度の変化との関係を、図１のグラフに示す。同図（Ａ）は、ＰＥＴカテゴリーがＨｉｇｈ  ＡｖｅｒａｇｅからＨｉｇｈに移行した結果であり、同図（Ｂ）は、ＰＥＴカテゴリーがＨｉｇｈからＨｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅに移行した結果である。両図において矢印は、同一患者についてのカテゴリーの移行方向を示し、グラフ中の太線は、上から、ＨｉｇｈとＨｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅとの境界、Ｈｉｇｈ  ＡｖｅｒａｇｅとＬｏｗ  Ａｖｅｒａｇｅとの境界を示すＤ／Ｐクレアチニンの値である。
【００４２】
同図に示すように、ＰＥＴカテゴリーの分類の基準となる真のＤ／Ｐクレアチニンの増加に伴ってα１−ミクログロブリン濃度が増加し、真のＤ／Ｐクレアチニンの減少に伴ってα１−ミクログロブリン濃度が減少することが確認できた。
【００４３】
（参考例１）
排液中α１−ミクログロブリンと残腎機能との間における相関関係の有無を確認した。
【００４４】
（１）残腎機能との相関関係
残腎機能がある患者（尿量１００ｍＬ以上）１４人について、前記実施例２と同様にして、排液中のα１−ミクログロブリン濃度を測定した。また、同じ患者のクレアチニンクリアランス（腎臓によって１分間にどの程度の量の液体がろ過されるか）を常法により調べた。そして、排液中のα１−ミクログロブリン濃度と患者の尿量との相関関係、排液中のα１−ミクログロブリン濃度とクレアチニンクリアランスとの相関関係を確認した。その結果、排液中のα１−ミクログロブリン濃度は、尿量およびクレアチニンクリアランスのいずれに対しても相関関係は示さなかった。つまり、排液中のα１−ミクログロブリン濃度は、患者の残腎機能との相関関係は見られなかった。
【００４５】
（２）残腎機能別患者のα１−ミクログロブリンとＤ／Ｐクレアチニンとの相関関係
前記実施例２と同様にして回収した排液試料を、残腎機能がある患者（尿量１００ｍＬ以上：３６名）の試料群と、残腎機能がない患者（尿量１００ｍＬ未満：１４名）の試料群に分類し、各試料におけるα１−ミクログロブリン濃度を測定した。また、これらの患者について、前記実施例２と同様にして常法によりＤ／Ｐクレアチニンを測定した。そして、残腎機能がある患者と、残腎機能が無い患者のそれぞれについて、α１−ミクログロブリンとＤ／Ｐクレアチニンとの相関関係を確認した。その結果、以下に示すように、残腎機能の有無にかかわらず、α１−ミクログロブリンとＤ／Ｐクレアチニンとの間に相関関係が確認された。
【００４６】
【表３】
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【００４７】
前記（１）に示すように、排液中のα１−ミクログロブリンと残腎機能との間には相関関係がなく、また、前記（２）に示すように、排液中のα１−ミクログロブリンは、残腎機能の有無に関係なく、ＰＥＴカテゴリーの根拠となるＤ／Ｐクレアチニンと相関関係を有していた。したがって、透析排液中のα１−ミクログロブリンをマーカーとする分析方法によれば、患者の残腎機能の有無に影響を受けることなく、あらゆる腹膜透析患者のＤ／ＰクレアチニンおよびＰＥＴカテゴリーを予測することが可能といえる。
【産業上の利用可能性】
【００４８】
このように、腹膜透析排液における本発明のマーカーの量を測定すれば、患者のＤ／Ｐクレアチニンを間接的に決定でき、さらに、その決定結果からＰＥＴカテゴリーへの分類も可能である。また、従来のＰＥＴと異なり、透析排液を採取するのみで足りるため、患者の苦痛も低減でき、検査も簡便となる。特に、従来のＰＥＴは、その工程の煩雑さや患者や医師の負担の大きさから、通常、年１回程度の実施に留まるが、このように本発明の方法は、極めて簡便であることから高頻度に行うことができる。したがって、本発明のマーカーを対象として本発明のＤ／ＰクレアチニンならびにＰＥＴの判定方法を利用すれば、患者および医師の双方の労力を低減して、腹膜機能の検査を簡便に行うことができる。特に、「Ｈｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅ」から「Ｈｉｇｈ」へのＰＥＴカテゴリーの移行期を早期に検出できることから、例えば、治療方法の変更による長期腹膜透析による腹膜炎の発症の防止等に極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】図１は、本発明の実施例１において、同一患者における真のＤ／Ｐクレアチニンの変化とα１−ミクログロブリンの変化との相関関係を示すグラフであり、（Ａ）は、Ｈｉｇｈ  ＡｖｅｒａｇｅからＨｉｇｈにカテゴリーが変化した患者の結果であり、（Ｂ）は、ＨｉｇｈからＨｉｇｈ  Ａｖｅｒａｇｅにカテゴリーが変化した患者の結果である。
【図１】
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