(57)【要約】      （修正有）【課題】合成が容易な新規プロテアソーム阻害剤を提供する。【解決手段】以下の式（３）等で表わされる化合物。2008094836.tif 000066【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（Ｉ）で表わされる化合物を有効成分として含有することを特徴とする、プロテアソーム阻害剤。
【化１】
2008094836.tif 000053
【請求項２】
以下の式（３）で表わされる化合物。
【化２】
2008094836.tif 000054
【請求項３】
以下の式（４）で表わされる化合物。
【化３】
2008094836.tif 000055
【請求項４】
以下の式（５）で表わされる化合物。
【化４】
2008094836.tif 000056
【請求項５】
以下の式（６）で表わされる化合物。
【化５】
2008094836.tif 000057
【請求項６】
以下の一般式（III）で表わされる化合物。
【化６】
2008094836.tif 000058
（但し、式中Ｒ１及びＲ２は、水素、又はそれぞれ同一あるいは異なるアルキル基を表わし、また、Ｒ１とＲ２は、一緒になってそれらを有する窒素原子と共に、あるいはさらに酸素原子、硫黄原子及び窒素原子のいずれか１種以上と共に、単環式複素環を形成してもよい。また、ｎは０を含む整数を表わす。）
【請求項７】
以下の式（７）で表わされる化合物。
【化７】
2008094836.tif 000059
【請求項８】
以下の式（８）で表わされる化合物。
【化８】
2008094836.tif 000060
【請求項９】
以下の式（９）で表わされる化合物。
【化９】
2008094836.tif 000061
【請求項１０】
以下の式（１０）で表わされる化合物。
【化１０】
2008094836.tif 000062
【請求項１１】
以下の式（１１）で表わされる化合物。
【化１１】
2008094836.tif 000063
【請求項１２】
以下の式（１２）で表わされる化合物。
【化１２】
2008094836.tif 000064
【請求項１３】
以下の式（１３）で表わされる化合物。
【化１３】
2008094836.tif 000065
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タモキシフェン類縁体を有効成分として含有するプロテアソーム阻害剤及び新規タモキシフェン類縁体に関する。
【背景技術】
【０００２】
タモキシフェンは、以下の構造を有する化合物であり、ホルモン依存性乳ガンの治療薬として用いられてきた。
【０００３】
【化１】
2008094836.tif 000002
タモキシフェンは、組織特異的にエストロゲン性、あるいは抗エストロゲン性作用を有し、乳房細胞においては、抗エストロゲン作用を有することが知られている。
エストロゲンは、特に乳ガン細胞のエストロゲン受容体に結合し、ガン細胞の増殖を促進するが、タモキシフェンは、エストロゲンと競合的にエストロゲン受容体と結合することにより、エストロゲンとエストロゲン受容体の結合を阻止し、ガン細胞の増殖を抑制する。
このような作用を有するタモキシフェンにおいては、現在まで様々な類縁体が合成されており、これら類縁体を例示すると、４−ヒドロキシタモキシフェン、４−ブロモタモキシフェン、３−ヨードタモキシフェン、イドキシフェン等が挙げられる。
【０００４】
また、これらタモキシフェン類縁体を合成するための製法についても、様々なものが提案され、本発明者等も、オレフィン部位を有するタモキシフェン類縁体の前駆体を、異性化触媒として酸性物質あるいはアルカリ性物質を使用して転移させることにより、安価かつ効率的にタモキシフェン類縁体を合成する方法を開発している（特許文献１）。また、本発明者等は、このような新規合成方法を使用して得られた新規タモキシフェン類縁体が、抗ガン作用を有することも明らかにしている（特許文献２）。
一方、細胞内の選択的タンパク分解系として重要な役割を果たしているものとして、ユビキチン−プロテアソームシステムがあり、該システムは、細胞周期、転写、シグナル伝達、アポトーシス、代謝、抗原提示等様々な生命活動に関与していることが明らかになってきている。このプロテアソームは、ユビキチンが数個連なって付加された標的タンパク質をＡＴＰ依存的に分解する作用を有し、トリプシン様、キモトリプシン様及びカスパーゼ様の３種類の活性部位を有する。近年、プロテアソームのガン細胞内での働きを抑制することにより、ガン細胞内で異常タンパク質を蓄積させガン細胞を死滅させる抗ガン剤の開発が行われており、アメリカにおいて、プロテアソーム阻害剤の一種であるBortezomib(Velcade；登録商標)が、難治性多発性骨髄腫治療薬として認可されている（２００３年）。
このようなプロテアソーム阻害剤は、ガンばかりでなく、種々の炎症あるいは免疫疾患の治療薬としても期待されているものである。
さらに、上記細胞内での異常タンパク質の蓄積は、アルツハイマー病、パーキンソン病、プリオン病等の様々な神経変性疾患の共通な発症機構としても提唱されており、このような神経変性疾患の原因解明あるいはその治療薬の開発研究においても、プロテアソーム阻害剤は有用である。
【０００５】
【特許文献１】特開２００４−２６６６４号公報
【特許文献２】特開２００６−１１７６４８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、合成が容易な新規プロテアソーム阻害剤を提供することにあり、ガン、炎症あるいは免疫疾患に対する治療、あるいはアルツハイマー病、パーキンソン病、プリオン病等の様々な神経変性疾患についての研究開発に貢献しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、以下の式（Ｉ）で表わされる種々のタモキシフェン類縁体を合成し、その新規作用を探索中、該タモキシフェン類縁体がプロテアソーム阻害作用を有するとともに、該タモキシフェン誘導体の構造状の特徴により合成に有利であると共に、既存のプロテアソーム阻害剤に類似構造のものが無く、このためプロテアソーム阻害剤としてリード化合物になり得ると確信して、本発明を完成するに至ったものである。
すなわち、本発明は、以下の（１）〜（１３）に示されるとおりである。
【０００８】
（１）：以下の一般式（Ｉ）で表わされる化合物を有効成分として含有することを特徴とする、プロテアソーム阻害剤。
【０００９】
【化２】
2008094836.tif 000003
（２）：以下の式（３）で表わされる化合物。
【００１０】
【化３】
2008094836.tif 000004
（３）：以下の式（４）で表わされる化合物。
【００１１】
【化４】
2008094836.tif 000005
（４）：以下の式（５）で表わされる化合物。
【００１２】
【化５】
2008094836.tif 000006
（５）：以下の式（６）で表わされる化合物。
【００１３】
【化６】
2008094836.tif 000007
（６）：以下の一般式（III）で表わされる化合物。
【００１４】
【化７】
2008094836.tif 000008
（但し、式中Ｒ１及びＲ２は、水素、又はそれぞれ同一あるいは異なるアルキル基を表わし、また、Ｒ１とＲ２は、一緒になってそれらを有する窒素原子と共に、あるいはさらに酸素原子、硫黄原子及び窒素原子のいずれか１種以上と共に、単環式複素環を形成してもよい。また、ｎは０を含む整数を表わす。）
（７）：以下の式（７）で表わされる化合物。
【００１５】
【化８】
2008094836.tif 000009
（８）：以下の式（８）で表わされる化合物。
【００１６】
【化９】
2008094836.tif 000010
（９）：以下の式（９）で表わされる化合物。
【００１７】
【化１０】
2008094836.tif 000011
（１０）：以下の式（１０）で表わされる化合物。
【００１８】
【化１１】
2008094836.tif 000012
（１１）：以下の式（１１）で表わされる化合物。
【００１９】
【化１２】
2008094836.tif 000013
（１２）：以下の式（１２）で表わされる化合物。
【００２０】
【化１３】
2008094836.tif 000014
（１３）：以下の式（１３）で表わされる化合物。
【００２１】
【化１４】
2008094836.tif 000015
【発明の効果】
【００２２】
本発明の式（Ｉ）で表わされるタモキシフェン類縁体は、プロテアソーム阻害作用を有する。これに対して、従来のタモキシフェン類縁体にはそのような作用についての報告はない。一方、従来のタモキシフェン類縁体には、幾何異性体としてＺ体、Ｅ体が存在し、このうちＺ体のみが有効であるため、Ｚ体を分離する必要があったが、本発明のタモキフェン類縁体には幾何異性体が存在しないため、このような分離操作は必要が無い。しかも、プロテアソーム阻害剤として知られている従来の化合物においても異性体が存在するものが多く、このためやはり合成上の問題がある。これに対して、本発明のタモキシフェン類縁体は、異性体が存在せず合成が容易かつ効率的であるとともに、従来のプロテアソーム阻害剤においても類似する構造を有するものはない。したがって、本発明のタモキシフェン誘導体はプロテアソーム阻害剤としてそれ自体有用であるというばかりでなく、プロテアソーム阻害剤の新規開発のためのリード化合物となり得るものであって、ガン、炎症あるいは免疫疾患に対する治療、あるいはアルツハイマー病、パーキンソン病、プリオン病等の様々な神経変性疾患についての研究開発に大いに資するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
本発明においてプロテアソーム阻害剤として使用するタモキシフェン誘導体は、以下の式（Ｉ）で表わされる。
【００２４】
【化１５】
2008094836.tif 000016
【００２５】
上記式（Ｉ）の化合物において、Ｒ１とＲ２が形成する単環式複素環式基としては、５〜７員環が望ましく、例えばピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ジアザシクロヘキシル基等が挙げられる。
また、上記式（Ｉ）中、ｎは、例えば１〜３０、好ましくは１〜１０、より好ましくは１〜５である。
【００２６】
その化学構造上の特徴は、ブテンの末端２重結合又は単結合の炭素原子に２つの同一置換基を有するフェニル基が置換されている点にあり、これにより幾何異性体が存在しない点にある。
これに対して、上記式（ａ）で表わされるタモキシフェンは、ブテンの末端２重結合の炭素原子に、互いに置換基の異なるフェニル基が置換しているため、幾何異性体が存在する。タモキシフェンの活性はそのうちのＺ体にあるので、このＺ体を得るための工程を必要としていた。この点は、以下に示される従来のタモキシフェン類縁体も幾何異性体が存在する点で同様である。
【００２７】
【化１６】
2008094836.tif 000017
また、従来、プロテアソーム阻害剤として知られている化合物の代表例として、Bortezomib、Lactacystin及びMg132等を挙げることができるが、これらはオリゴペプチド型の化合物でありしかも異性体が存在するものである。
【００２８】
これに対して、本発明の式（Ｉ）で表わされるタモキシフェン類縁体は、オリゴペプチド型とは全く化学構造を異にするほか、その製法において異性体分離手段を有せず製造できる。
本発明の式（Ｉ）のプロテアソーム阻害剤として使用する化合物としては、１，１−ビス置換フェニル−２−フェニル−１−ブテン化合物と４，４−ビス置換フェニル−３−フェニル−１−ブテン化合物とが含まれ、１，１−ビス置換フェニル−２−フェニル−１−ブテン化合物は、以下の一般式（II）で表わされる。
【００２９】
【化１７】
2008094836.tif 000018
（但し、式中Ｒ１及びＲ２は、水素、又はそれぞれ同一あるいは異なるアルキル基を表わし、また、Ｒ１とＲ２は、一緒になってそれらを有する窒素原子と共に、あるいはさらに酸素原子、硫黄原子及び窒素原子のいずれか１種以上と共に、単環式複素環を形成してもよい。また、ｎは０を含む整数を表わす。）
この一般式（II）に含まれる具体的な化合物としては、例えば、以下のものが挙げられる。
【００３０】
【化１８】
2008094836.tif 000019
【００３１】
【化１９】
2008094836.tif 000020
【００３２】
【化２０】
2008094836.tif 000021
【００３３】
【化２１】
2008094836.tif 000022
【００３４】
【化２２】
2008094836.tif 000023
【００３５】
【化２３】
2008094836.tif 000024
このうち、式（１）及び（２）の化合物は公知化合物であるが（特開２００６−１１７６４８号公報）、式（３）〜（６）の化合物は文献未記載の新規化合物である。
また、４，４−ビス置換フェニル−３−フェニル−１−ブテン化合物は、以下の一般式（III）で表わされ、その具体的な化合物を例示すると、以下に示されるとおりである。
【００３６】
【化２４】
2008094836.tif 000025
（但し、式中Ｒ１及びＲ２は、水素、又はそれぞれ同一あるいは異なるアルキル基を表わし、また、Ｒ１とＲ２は、一緒になってそれらを有する窒素原子と共に、あるいはさらに酸素原子、硫黄原子及び窒素原子のいずれか１種以上と共に、単環式複素環を形成してもよい。また、ｎは０を含む整数を表わす。）
【００３７】
【化２５】
2008094836.tif 000026
【００３８】
【化２６】
2008094836.tif 000027
【００３９】
【化２７】
2008094836.tif 000028
【００４０】
【化２８】
2008094836.tif 000029
【００４１】
【化２９】
2008094836.tif 000030
【００４２】
【化３０】
2008094836.tif 000031
【００４３】
【化３１】
2008094836.tif 000032
これらの例示化合物は、いずれも文献未記載の新規化合物である。
【００４４】
上記一般式（II）で表わされる化合物の製法は、上記特開２００６−１１７６４８号公報に示されるが、図１を参照して以下に説明する。
〔工程１〕
４−ピバロイルオキシベンズアルデヒド等の４位の水酸基がアルカノイル基等で保護された式（２１）の化合物、アニソール等の式（２３）の化合物、及び１−フェニル−３−トリメチルシリル−１−プロペン（式（２２）の化合物）を、例えば、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルフォネート（ＴＭＳＯＴｆ）等を触媒としてＨｆＣｌ４等のルイス酸あるいはプロトン酸等の存在下、反応させ、式（２４）の化合物を生成させる。この工程においては、触媒として上記ＴＭＳＯＴｆの他トリメチルシリルクロリド等も使用でき、ルイス酸としては上記の他、Ｈｆ（ＯＴｆ）４，ＴｉＣｌ４，ＴｉＣｌ２（ＯＴｆ）２等の第４属金属塩、ＡｌＣｌ３，ＢＣｌ３，Ｓｃ（ＯＴｆ）３等の第３属金属塩、ＳｎＣｌ２，Ｓｎ（ＯＴｆ）２等の第２属金属塩等が使用できる。またプロトン酸としては塩酸、硫酸、硝酸、臭化水素酸、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸等も使用可能である。これらは１種単独で使用してもよく、また２種以上併用してもよい。
【００４５】
〔工程２〕
ついで、式（２４）の化合物を、例えばジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等の溶媒の存在下、触媒として、例えば、カリウム第３級ブトキシド等の塩基性化合物を使用して加水分解し、一般式（２５）の化合物を得る。
この加水分解工程において使用する触媒としては、塩基性化合物に限らず、酸性化合物及び遷移金属触媒も使用できる。
触媒として使用する塩基性化合物としては、例えば、アルカリ金属あるいはアルカリ金属塩等が挙げられ、酸性化合物としては、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、臭化水素酸、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、あるいは上記の各種ルイス酸が挙げられる。また、遷移金属触媒としては各種遷移金属塩等が挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用しても良い。
また、使用する溶媒としては、上記ＤＭＳＯの他、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン等の極性溶媒であってもよく、また、ヘキサン、ベンゼン、ジクロロメタン等の非極性溶媒も用いることができる。これらは１種単独で使用してもよく、また２種以上併用してもよい。
【００４６】
〔工程３〕
式（２５）の化合物に対して、溶媒として、例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の存在下、触媒としてより多量のカリウム第３級ブトキシド等を使用して、２重結合の転移反応（マイグレーション）を行ない、一般式（２６）の化合物を得る。
この工程の触媒としては、上記カリウム第３級ブトキシドの他、例えば、アルカリ金属あるいはアルカリ金属塩等の塩基性化合物、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、臭化水素酸、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、あるいは上記の各種ルイス酸等の酸性化合物、および各種遷移金属塩等の遷移金属触媒が用いられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用しても良い。
また、使用する溶媒としては、上記ＤＭＳＯの他、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１，２−ジメトキシエタン等の極性溶媒であってもよく、また、ヘキサン、ベンゼン、ジクロロメタン等の非極性溶媒も用いることができる。これらは１種単独で使用してもよくまた２種以上併用してもよい。
この工程３の反応系は触媒の使用量及び反応温度をのぞいて、工程２の反応系と同様であり、工程２において、あらかじめ触媒量を多くし、反応温度を高めに設定（例えば５０℃）すれば、工程２と工程３を同時に行なうことができる。
なお、式（２６）の化合物においては、幾何異性体として、Ｚ体、Ｅ体が存在するが、本発明においてはこれらを分離することなく、次工程の原料化合物としてそのまま使用できる。
【００４７】
〔工程４〕
図１中、一般式（２６）の化合物を例えば、ジクロロメタン等からなる溶媒中で、触媒として臭素化硼素等のルイス酸の存在下、アルコキシ基のアルキル基を脱離させ、式（２７）の化合物を得る。
工程４における触媒としては、上記臭素化硼素の他、上記各種ルイス酸等が使用できるが、さらに、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、臭化水素酸、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸等の酸性化合物、あるいはアルカリ金属、アルカリ金属塩等の塩基性化合物、遷移金属塩等の遷移金属触媒も用いることができる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
また、反応溶媒としては、上記ジクロロメタン等の非極性溶媒の他、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）、ＤＭＥ（１，２−ジメトキシエタン）等の極性溶媒が用いられる。また、他の非極性溶媒としては、ヘキサン、ベンゼン等が挙げられる。これら溶媒は１種単独で使用してもよく、２種以上を併用しても良い。
【００４８】
〔工程５〕
次いで、式（２７）の化合物（１，１−ビス（４−ヒドロキシフェニル）−２−フェニル−１−ブテンと、一般式（２８）の化合物をそれぞれＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等の極性溶媒からなる反応溶媒中において、触媒として、例えば、水素化ナトリウム等の塩基性化合物の存在下反応せしめることにより、式（II）の化合物が得られる。
【００４９】
本発明の上記式（１）〜（６）で表わされる化合物も、これら〔工程１〕〜〔工程５〕を経て製造される。
【００５０】
一方、一般式（III）で表わされる化合物は、図２に示す以下の工程を経て製造される。
〔工程１〕
上記一般式（II）で表わされる化合物の製造における工程１と同様にして、式（２４）の化合物を得る。
【００５１】
〔工程２〕
ついで、式（２４）の化合物を例えば、ジクロロメタン等からなる溶媒中で、触媒として臭素化硼素等のルイス酸の存在下、アルコキシ基のアルキル基を脱離させ、式（３５）の化合物を得る。
工程２における触媒としては、上記臭素化硼素の他、上記各種ルイス酸等が使用できるが、さらに、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、臭化水素酸、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸等の酸性化合物、あるいはアルカリ金属、アルカリ金属塩等の塩基性化合物、遷移金属塩等の遷移金属触媒も用いることができる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
また、反応溶媒としては、上記ジクロロメタン等の非極性溶媒の他、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）、ＤＭＥ（１，２−ジメトキシエタン）等の極性溶媒が用いられる。また、他の非極性溶媒としては、ヘキサン、ベンゼン等が挙げられる。これら溶媒は１種単独で使用してもよく、２種以上を併用しても良い。
【００５２】
〔工程３〕
上記工程２で得られた式（３５）の化合物（１，１−ビス（４−ヒドロキシフェニル）−２−フェニル−１−ブテンと、式（２８）の化合物をそれぞれＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等の極性溶媒からなる反応溶媒中において、触媒として、例えば、水素化ナトリウム等の塩基性化合物の存在下反応せしめることにより、一般式（III）の化合物が得られる。
【００５３】
本発明の式（Ｉ）で表わされるタモキシフェン類縁体においてプロテアソーム阻害活性が認められたのは本発明において初めてであり、上記合成の容易さ及び効率性を加味すれば、本発明の技術的意義は極めて高い。
【実施例】
【００５４】
以下に本発明の実施例を示すが、本発明はこれら実施例により限定されるものではない。なお、以下の実施例１２〜１９における実験は、本発明者が、文部科学省がん特定領域研究  化学療法基盤情報支援班に依頼した結果に基づく。
【００５５】
〔実施例１〕
１，１−ビス〔４−（２−モルホリン-１−イル−エトキシ）フェニル〕−２−フェニルブテン（式（３）の化合物；リダイフェンＤ）の製造
（１）：反応容器に、酸触媒としてＨｆＣｌ４を８０．１ｍｇ（１当量）を加えて０℃に維持しながら、アニソール０．５ｍｌ、アニソール１ｍｌにトリメチルシリルトリフルオロメタンスルフォネート（ＴＭＳＯＴｆ）２７．８ｍｇ（０．５当量）を溶解した溶液、４−ピバロイルオキシベンズアルデヒド５１．６ｍｇ（０．２５ｍＭ）、及びアニソール１ｍｌに１−フェニル−３−トリメチルシリル−１−プロペン５７．１ｍｇ（１．２当量）を溶解した溶液を順次加えた。なお、アニソールの合計使用量は２．５ｍｌである。ついで、室温で反応を行ない２時間経過後、反応生成物の一部に対し、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）（展開溶媒；ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１）を行なって原料化合物が検出されなくなったことを確認した後、反応系を０℃に冷却するとともに、ＮａＨＣＯ３水溶液を加えて反応を終了させた。
この後、反応生成物をエーテルで抽出した後、有機層を水および飽和食塩水で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層を濃縮後、分取薄層クロマトグラフィー（展開溶媒；ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１）による精製を行ない、４−（４−ピバロイルオキシフェニル）−４−（４−メトキシフェニル）−３−フェニル−１−ブテンを６４．７ｍｇ得た。収率は６２％であった。
【００５６】
（２）：反応容器に上記工程（１）において得られた、４−（４−ピバロイルオキシフェニル）−４−（４−メトキシフェニル）−３−フェニル−１−ブテン５７．２ｍｇ（０．１３８ｍＭ）、カリウム第３級ブトキシド（ｔＢｕＯＫ）１５．５ｍｇ、及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）０．６９ｍｌ（０．２Ｍ）を加えて、室温で１５分反応させ、ピバロイル基を加水分解した。次いで、反応系を０℃に冷却するとともに塩化アンモニウム水溶液を加え反応を終了させた。
反応生成物を酢酸エチルで抽出した後、有機層を水および飽和食塩水で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層を濃縮後、分取薄層クロマトグラフィー（展開溶媒；ヘキサン／酢酸エチル＝３／１）による精製を行ない、４−（４−ヒドロキシフェニル）−４−（４−メトキシフェニル）−３−フェニル−１−ブテン４６．７ｍｇ得た。収率は定量的であった。
【００５７】
（３）：反応容器に上記工程（２）において得られた、４−（４−ヒドロキシフェニル）−４−（４−メトキシフェニル）−３−フェニル−１−ブテン４５．７ｍｇ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１ｍｌ（０．１３８Ｍ）を加え反応系の温度を５０℃に加温し、さらに、カリウム第３級ブトキシド２８３．９ｍｇ（１８当量）を加えて、２重結合転移反応を行なった。５０℃で３０分維持した後、反応生成物の一部に対し薄層クロマトグラフィー（展開溶媒；ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝３／１）を行なって、上記４−（４−ヒドロキシフェニル）−４−（４−メトキシフェニル）−３−フェニル−１−ブテンに対応するスポットが検出されなくなったことを確認した後、反応系を０℃に冷却するとともに塩化アンモニウム水溶液を加え反応を終了させた。
ついで、反応生成物を酢酸エチルで抽出した後、有機層を水および飽和食塩水で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層を濃縮後、分取薄層クロマトグラフィー（展開溶媒；ヘキサン／酢酸エチル＝３／１）による精製を行ない、１−（４−ヒドロキシフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−２−フェニル−１−ブテンを３７．２ｍｇ得た。収率は８１％であった。
【００５８】
（４）：反応容器に上記工程（３）で得られた、１−（４−ヒドロキシフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−２−フェニル−１−ブテン１４５．２ｍｇ（０．４３９ｍＭ）とジクロロメタン２．２ｍｌを加え、反応系を−７８℃に冷却した。次いで臭素化硼素（ＢＢｒ３）１０当量を含むヘプタン１Ｍ溶液４．３９ｍｌを加え、１時間維持した。次いで反応温度を０℃に上昇させた。さらに３時間経過後、反応生成物の一部に対し、薄層クロマトグラフィー（展開溶媒；ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝３／１）を行なって、上記１−（４−ヒドロキシフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−２−フェニル−１−ブテンに対応するスポットが検出されなくなったことを確認した後、ＮａＨＣＯ３水溶液を加え、反応を終了させた。
反応生成物をジクロロメタンで抽出した後、有機層を水および飽和食塩水で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層を濃縮後、生じた固体を塩化メチレンに溶解し、再結晶させ、１−（４−ヒドロキシフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−２−フェニル−１−ブテン中の結晶６１．４ｍｇを得た。一方、液相を濃縮後、分取薄層クロマトグラフィー（展開溶媒；ヘキサン／酢酸エチル＝３／１）による精製を行ない、中間体１，１−ビス（４−ヒドロキシフェニル）−２−フェニル−１−ブテンを５８．４ｍｇ得た。前者の結晶との合計は１１９．６ｍｇであり、収率は８６％であった。
【００５９】
上記各工程で得られた化合物のＮＭＲ測定結果を以下に示す。
４−（４−ピバロイルオキシフェニル）−４−（４−メトキシフェニル）−３−フェニル−１−ブテン（syn体とanti体の等量混合物）
1H NMR(CDCl3)σ= 7.32-6.75(m, 11H, Ph), 6.57(d, J=8.6Hz, 2H, Ph), 5.94-5.84(m, 1H, 3-H), 4.90-4.80(m, 1H, 4-H), 4.25(d, J=11.6 HZ, 1H, 1-H), 4.06(dd, J=7.1, 9.6 Hz, 1H, 2-H), 3.66(s, 3H, MeO), 1.31(s, 9H, PivO)
【００６０】
１−（４−ヒドロキシフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−２−フェニル−１−ブテン（Ｚ体とＥ体の等量混合物）
1H NMR(CDCl3) σ=7.27-6.45(m, 13H, Ph),3.82 and 3.67(s, 3H, MeO), 2.48(q, J=7.3Hz, 2H, 3-H), 0.93 and 0.92(t, J=7.3Hz, 3H, 4-H)
【００６１】
１，１−ビス（４−ヒドロキシフェニル）−２−フェニル−１−ブテン
1H NMR(CDCl3)σ=7.29-6.45(m, 13H, Ph), 2.48(q, J=7.6Hz, 2H, 3-H), 0.92(t, J=7.6 Hz, 3H, 4-H)
【００６２】
（５）：反応容器に、６０重量％水素化ナトリウム（ＮａＨ）含有オイル５０．４ｍｇ（水素化ナトリウム２０当量）を加え、これを石油エーテルで洗浄した後乾燥させた。次に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）０．６ｍｌ（０．１Ｍ）を投入し、０℃に保った。上記（４）で得られた、１，１−ビス（４−ヒドロキシフェニル）−２−フェニル−１−ブテン２０ｍｇ（０．０６３２ｍＭ）を反応容器に加え、室温で１５分維持した後、０℃に冷却し、１−（２−クロロエチル）−モルホリン塩酸塩１１７ｍｇ（１０当量）を加え、５０℃で６時間反応させた後、反応系を０℃に冷却するとともに、塩化アンモニウム水溶液を加え、反応を終了させた。反応生成物をジクロロメタンで抽出し、有機層を水および飽和食塩水で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層を濃縮後、薄層クロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム／メタノール＝９／１）を行ない、１，１−ビス［４−（２−モルホリン−１−イル−エトキシ）フェニル］−２−フェニル−１−ブテン（リダイフェンＤ）２９ｍｇを得た。収率は８４％であった。
得られた化合物の化学構造及びNMR測定結果は以下のとおりである。
【００６３】
【化３２】
2008094836.tif 000033
1HNMR(CDCl3)σ＝7.20-7.06(m, 13H, Ph), 4.14 and 3.98(t, J＝5.7 Hz, 4H, OCH2), 3.77-3.69(m, 8H, O(CH2)2), 2.83 and 2.73(t, J＝5.7 Hz, 4H, NCH2), 2.63-2.52(m, 8H, N(CH2)2), 2.49(q, J＝7.6 Hz, 2H, 3-H), 0.92(t, J＝7.6 Hz, 3H, 4-H)
【００６４】
〔実施例２〕
実施例１における（５）の工程において、１−（２−クロロエチル）−モルホリン塩酸塩に代えて、２−ジエチルアミノエチルクロライド塩酸塩を使用する他は、実施例１と同様にして１，１−ビス［４−（３−ジエチルアミノエトキシ）フェニル］−２−フェニル−１−ブテン（リダイフェンＥ）を得た。得られた化合物の化学構造及び物性データは以下のとおりである。
【００６５】
【化３３】
2008094836.tif 000034
Colorless oil; 
IR (neat): 3033, 2969, 1606, 1508, 832 cm-1; 
1H NMR (CDCl3) δ = 7.20-7.03 (m, 7H, Ar), 6.93-6.85 (m, 2H, Ar), 6.82-6.75 (m, 2H, Ar), 6.59-6.51 (m, 2H, Ar), 4.06 and 3.90 (t, J=6.3 Hz, 4H, OCH2), 2.89 and 2.78 (t, J=6.3 Hz, 4H, NCH2) 2.65 and 2.58 (q, J=7.2 Hz, 8H, NEt2), 2.51 (q, J = 7.2 Hz, 2H, 3-H), 1.08 and 1.03 (t, J=7.2 Hz, 12H, NEt2), 0.95 (t, J=7.2 Hz, 3H, 4-H); 
13C NMR (CDCl3) δ = 157.3, 156.5, 142.4, 140.6, 137.7, 136.0, 135.5, 131.7, 130.3, 129.4, 127.6, 125.6, 113.7, 113.0, 66.2, 65.9, 51.6, 51.4, 47.6, 47.5, 28.8, 13.4, 11.7, 11.6; 
HR MS (ESI): calcd for C34H47N2O2 [M+H]+ 515.3632, found 515.3611.
【００６６】
〔実施例３〕
実施例１における（５）の工程において、１−（２−クロロエチル）−モルホリン塩酸塩に代えて、１−（２−クロロエチル）−アザシクロヘプタン塩酸塩を使用する他は、実施例１と同様にして１，１−ビス［４−（２−アザシクロヘプタン−１−イル−エトキシ）フェニル］−２−フェニル−１−ブテン（リダイフェンＦ）を得た。得られた化合物の化学構造及び物性データは以下のとおりである。
【００６７】
【化３４】
2008094836.tif 000035
Colorless crystals: mp 84-85 ℃ (acetonitrile); 
IR (KBr): 3076, 3030, 1605, 1509, 834, 819 cm-1; 
1H NMR (CDCl3) δ = 7.20-7.08 (m, 7H, Ar), 6.92-6.85 (m, 2H, Ar), 6.79-6.73 (m, 2H, Ar), 6.58-6.51 (m, 2H, Ar), 4.09 and 3.93 (t, J=6.3 Hz, 4H, OCH2), 2.97 and 2.87 (t, J = 6.3 Hz, 4H, NCH2), 2.79 and 2.72 (t, J=6.0 Hz, 8H, azepinyl 2-H), 2.49 (q, J=7.2 Hz, 2H, 3-H), 1.67-1.59 (m, 16H, azepinyl 3-H, azepinyl 4-H), 0.93 (t, J=7.2 Hz, 3H, 4-H); 
13C NMR (CDCl3) δ = 157.6, 156.7, 142.6, 140.9, 137.8, 136.2, 135.7, 131.9, 130.5, 129.7, 127.8, 125.8, 114.0, 113.3, 66.3, 66.1, 56.4, 56.3, 55.9, 55.8, 29.0, 27.94, 27.87, 27.02, 27.00, 13.6; 
HR MS (ESI): calcd for C38H51N2O2 [M+H]+ 567.3945, found 567.3945.
【００６８】
〔実施例４〕
実施例１における（５）の工程において、１−（２−クロロエチル）−モルホリン塩酸塩に代えて、３−ジエチルアミノプロピルクロライド塩酸塩を使用する他は、実施例１と同様にして１，１−ビス［４−（３−ジメチルアミノプロピロキシ）フェニル］−２−フェニル−１−ブテン（リダイフェンＧ）を得た。得られた化合物の化学構造及び物性データは以下のとおりである。
【００６９】
【化３５】
2008094836.tif 000036
Colorless crystals: mp 94-95 ℃ (acetonitrile); 
IR (KBr): 3077, 3035, 1607, 1510, 837, 820 cm-1; 
1H NMR (CDCl3) δ = 7.20-7.08 (m, 7H, Ar), 6.91-6.84 (m, 2H, Ar), 6.79-6.72 (m, 2H, Ar), 6.57-6.50 (m, 2H, Ar), 4.03 and 3.87 (t, J=6.3 Hz, 4H, OCH2), 2.52-2.34 (m, 6H, NCH2, 3-H), 2.26 and 2.21 (s, 12H, NMe2), 2.01-1.82 (m, 4H, OCH2CH2), 0.92 (t, J=7.2 Hz, 3H, 4-H); 
13C NMR (CDCl3) δ = 157.7, 156.8, 142.7, 140.8, 137.9, 136.2, 135.7, 131.9, 130.5, 129.7, 127.8, 125.8, 113.9, 113.2, 66.1, 65.9, 56.5, 56.4, 45.55, 45.50, 29.0, 27.6, 27.5, 13.6; 
HR MS (ESI): calcd for C32H43N2O2 [M+H]+ 487.3319, found 487.3313.
【００７０】
〔実施例５〕
（Ａ）反応容器に実施例１における（１）の工程で得られた４−（４−ピバロイルオキシフェニル）−４−（４−メトキシフェニル）−３−フェニル−１−ブテン４８２．７ｍｇ（１．１６４ｍＭ）にジクロロメタン２９ｍｌを加え、反応系を０℃に冷却した。次いで臭素化硼素（ＢＢｒ３）５当量を含むジクロロメタン１Ｍ溶液５．８ｍｌを加えた。１．５時間経過後、反応生成物の一部に対し、薄層クロマトグラフィー（展開溶媒；ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１／１）を行なって、上記４−（４−ピバロイルオキシフェニル）−４−（４−メトキシフェニル）−３−フェニル−１−ブテンに対応するスポットが検出されなくなったことを確認した後、ＮａＨＣＯ３水溶液を加え、反応を終了させた。反応生成物をジクロロメタンおよび酢酸エチルで抽出した後、有機層を水および飽和食塩水で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層を濃縮後、薄層クロマトグラフィー（展開溶媒；ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１／１）を行ない、４，４−ビス（４−ヒドロキシフェニル）−３−フェニル−１−ブテン３３２ｍｇを得た。収率は９０％であった。得られた化合物の化学構造及び物性データは以下のとおりである。
【００７１】
【化３６】
2008094836.tif 000037
1H NMR (CDCl3) δ = 7.30-6.99 (m, 9H, Ar), 6.88-6.83 (m, 2H, Ar), 6.66-6.60 (m, 2H, Ar), 6.07-5.95 (m, 1H, 2-H), 5.03-4.90 (m, 2H, 1-H), 4.27 (d, J=11.6 Hz, 1H, 4-H), 4.18-4.11 (m, 1H, 3-H).
【００７２】
（Ｂ）：反応容器に、６０重量％水素化ナトリウム（ＮａＨ）含有オイル９３．１ｍｇ（水素化ナトリウム６．０当量）を加え、これを石油エーテルで洗浄した後乾燥させた。次に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）４．０ｍｌ（０．１Ｍ）を投入し、０℃に保った。上記（Ａ）の工程で得られた、４，４−ビス（４−ヒドロキシフェニル）−３−フェニル−１−ブテン１２３．８ｍｇ（０．３９１mＭ）を反応容器に加え、室温で１５分維持した後、０℃に冷却し、１−（２−クロロエチル）−モルホリン塩酸塩２４０．５ｍｇ（３．３当量）を加え、５０℃で６時間反応させた後、反応系を０ ℃に冷却するとともに、塩化アンモニウム水溶液を加え、反応を終了させた。反応生成物をジクロロメタンで抽出し、有機層を水および飽和食塩水で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層を濃縮後、薄層クロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム／メタノール＝９／１）を行ない、４，４−ビス［４−（２−モルホリン−１−イル−エトキシ）フェニル］−３−フェニル−１−ブテン（プロリダイフェンＤ）１８７．７ｍｇを得た。収率は８８％であった。
得られた化合物の化学構造及び物性データは以下のとおりである。
【００７３】
【化３７】
2008094836.tif 000038
IR (neat): 2950, 1608, 1509, 1117, 916, 858, 821 cm-1; 
1H NMR (CDCl3) δ = 7.32-6.99 (m, 9H, Ar), 6.90-6.82 (m, 2H, Ar), 6.69-6.62 (m, 2H, Ar), 5.98-5.86 (m, 1H, 2-H), 4.95-4.84 (m, 2H, 1-H), 4.23 (d, J=11.6 Hz, 1H, 4-H), 4.16-4.03 (m, 3H, 3-H, OCH2), 3.95 (t, J=6.0 Hz, 2H, OCH2), 3.77-3.66 (m, 8H, morphorinyl 3-H), 2.78 and 2.69 (t, J=6.0 Hz, 4H, NCH2), 2.62-2.46 (m, 8H, morphorinyl 2-H); 
HR MS (ESI): calcd for C34H43N2O4 [M+H]+ 543.3217, found 543.3229.
【００７４】
〔実施例６〕
実施例５の（Ｂ）の工程において１−（２−クロロエチル）−モルホリン塩酸塩に代えて、２−ジメチルアミノエチルクロライド塩酸塩を使用した他は、実施例５と同様にして、４，４−ビス［４−（２−ジメチルアミノエトキシ）フェニル］−３−フェニル−１−ブテン（プロリダイフェンＡ）を得た。
該化合物の化学構造及び物性データは以下のとおりである。
【００７５】
【化３８】
2008094836.tif 000039
IR (neat): 2943, 1609, 1509, 962, 913, 819 cm-1; 
1H NMR (CDCl3) δ = 7.34-6.99 (m, 9H, Ar), 6.93-6.84 (m, 2H, Ar), 6.70-6.64 (m, 2H, Ar), 6.01-5.90 (m, 1H, 2-H), 4.98-4.84 (m, 2H, 1-H), 4.24 (d, J=11.2 Hz, 1H, 4-H), 4.14-4.03 (m, 3H, 3-H, OCH2), 3.94 (t, J=6.0 Hz, 2H, OCH2), 2.74 and 2.66 (t, J=6.0 Hz, 4H, NCH2), 2.36 and 2.31 (s, 12H, NMe2);
HR MS (ESI): calcd for C30H39N2O2 [M+H]+ 459.3006, found 459.3010.
【００７６】
〔実施例７〕
実施例５の（Ｂ）の工程において１−（２−クロロエチル）−モルホリン塩酸塩に代えて、１−（２−クロロエチル）−ピロリジン塩酸塩を使用した他は、実施例５と同様にして、４，４−ビス［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）フェニル］−３−フェニル−１−ブテン（プロリダイフェンＢ）を得た。
該化合物の化学構造及び物性データは以下のとおりである。
【００７７】
【化３９】
2008094836.tif 000040
IR (neat): 2962, 1608, 1509, 918, 820 cm-1; 
1H NMR (CDCl3) δ = 7.30-6.98 (m, 9H, Ar), 6.92-6.84 (m, 2H, Ar), 6.70-6.64 (m, 2H, Ar), 6.01-5.90 (m, 1H, 2-H), 4.98-4.84 (m, 2H, 1-H), 4.25 (d, J=11.6 Hz, 1H, 4-H), 4.15-4.07 (m, 3H, 3-H, OCH2), 3.98 (t, J=6.0 Hz, 2H, OCH2), 2.90 and 2.82 (t, J=6.0 Hz, 4H, NCH2), 2.69-2.53 (m, 8H, pyrroridinyl 2-H), 1.88-1.74 (m, 8H, pyrroridinyl 3-H);
HR MS (ESI): calcd for C34H43N2O2 [M+H]+ 511.3319, found 511.3307.
【００７８】
〔実施例８〕
実施例５の（Ｂ）の工程において１−（２−クロロエチル）−モルホリン塩酸塩に代えて、１−（２−クロロエチル）−ピペリジン塩酸塩を使用した他は、実施例５と同様にして、４，４−ビス［４−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）フェニル］−３−フェニル−１−ブテン（プロリダイフェンＣ）を得た。
該化合物の化学構造及び物性データは以下のとおりである。
【００７９】
【化４０】
2008094836.tif 000041
IR (neat): 2933, 1609, 1509, 996, 821 cm-1; 
1H NMR (CDCl3) δ = 7.31-6.99 (m, 9H, Ar), 6.91-6.83 (m, 2H, Ar), 6.70-6.63 (m, 2H, Ar), 6.01-5.90 (m, 1H, 2-H), 4.98-4.84 (m, 2H, 1-H), 4.25 (d, J=11.6 Hz, 1H, 4-H), 4.15-4.07 (m, 3H, 3-H, OCH2), 3.97 (t, J=6.0 Hz, 2H, OCH2), 2.78 and 2.70 (t, J=6.0 Hz, 4H, NCH2), 2.59-2.42 (m, 8H, piperidinyl 2-H), 1.69-1.56 (m, 8H, piperidinyl 3-H), 1.53-1.41 (m, 4H, piperidinyl 4-H);
HR MS (ESI): calcd for C36H47N2O2 [M+H]+ 539.3632, found 539.3628.
【００８０】
〔実施例９〕
実施例５の（Ｂ）の工程において１−（２−クロロエチル）−モルホリン塩酸塩に代えて、２−ジエチルアミノエチルクロライド塩酸塩を使用した他は、実施例５と同様にして、４，４−ビス［４−（２−ジエチルアミノエトキシ）フェニル］−３−フェニル−１−ブテン（プロリダイフェンＥ）を得た。
該化合物の化学構造及び物性データは以下のとおりである。
【００８１】
【化４１】
2008094836.tif 000042
IR (neat): 2969, 1609, 1509, 913, 819 cm-1;
1H NMR (CDCl3) δ = 7.31-6.98 (m, 9H, Ar), 6.92-6.83 (m, 2H, Ar), 6.70-6.62 (m, 2H, Ar), 6.01-5.90 (m, 1H, 2-H), 4.99-4.84 (m, 2H, 1-H), 4.25 (d, J=11.2 Hz, 1H, 4-H), 4.15-4.02 (m, 3H, 3-H, OCH2), 3.94 (t, J=6.4 Hz, 2H, OCH2), 2.90 and 2.82 (t, J=6.4 Hz, 4H, NCH2), 2.72-2.58 (m, 8H, NEt2), 1.11 and 1.07 (t, J=7.2 Hz, 12H, NEt2); 
HR MS (ESI): calcd for C34H47N2O2 [M+H]+ 515.3632, found 515.3619.
【００８２】
〔実施例１０〕
実施例５の（Ｂ）の工程において１−（２−クロロエチル）−モルホリン塩酸塩に代えて、１−（２−クロロエチル）−アザシクロヘプタン塩酸塩を使用した他は、実施例５と同様にして、４，４−ビス［４−（２−アザシクロヘプタン−１−イル−エトキシ）フェニル］−３−フェニル−１−ブテン（プロリダイフェンＦ）を得た。
該化合物の化学構造及び物性データは以下のとおりである。
【００８３】
【化４２】
2008094836.tif 000043
IR (neat): 2924, 1609, 1509, 914, 820 cm-1; 
1H NMR (CDCl3) δ = 7.32-6.98 (m, 9H, Ar), 6.92-6.83 (m, 2H, Ar), 6.70-6.63 (m, 2H, Ar), 6.01-5.90 (m, 1H, 2-H), 4.98-4.85 (m, 2H, 1-H), 4.25 (d, J=11.2 Hz, 1H, 4-H), 4.15-4.04 (m, 3H, 3-H, OCH2), 3.96 (t, J=6.0 Hz, 2H, OCH2), 2.98 and 2.90 (t, J=6.0 Hz, 4H, NCH2), 2.81 and 2.76 (t, J=5.6 Hz, 8H, azepinyl 2-H), 1.75-1.58 (m, 16H, azepinyl 3-H, azepinyl 4-H); 
HR MS (ESI): calcd for C38H51N2O2 [M+H]+ 567.3945, found 567.3937.
【００８４】
〔実施例１１〕
実施例５の（Ｂ）の工程において１−（２−クロロエチル）−モルホリン塩酸塩に代えて、３−ジメチルアミノプロピルクロライド塩酸塩を使用した他は、実施例５と同様にして、４，４−ビス［４−（３−ジメチルアミノプロピロキシ）フェニル］−３−フェニル−１−ブテン（プロリダイフェンＧ）を得た。
該化合物の化学構造及び物性データは以下のとおりである。
【００８５】
【化４３】
2008094836.tif 000044
IR (neat): 3029, 2946, 1609, 1509, 955, 914, 822 cm-1; 
1H NMR (CDCl3) δ = 7.30-7.00 (m, 9H, Ar), 6.90-6.83 (m, 2H, Ar), 6.68-6.62 (m, 2H, Ar), 6.02-5.90 (m, 1H, 2-H), 4.98-4.84 (m, 2H, 1-H), 4.22 (d, J=11.6 Hz, 1H, 4-H), 4.15-4.12 (m, 1H, 3-H), 4.00 and 3.88 (t, J=6.4 Hz, 4H, OCH2), 2.47 and 2.40 (t, J=7.2 Hz, 4H, NCH2) 2.33-2.21 (m, 12H, NMe2), 2.01-1.84 (m, 4H, OCH2CH2);
HR MS (ESI): calcd for C32H43N2O2 [M+H]+ 487.3319, found 487.3305.
【００８６】
〔実施例１２〕
１，１−ビス〔４−（２−ジメチルアミノエトキシ）フェニル〕−２−フェニルブテン（式（１）の化合物；リダイフェンＡ）のトキシプロテアソーム阻害活性を以下のように測定した。
【００８７】
〔キモトリプシン様活性阻害試験〕
１）２０Ｓプロテアソームに１０μＭの濃度に調製したリダイフェンＡを添加し、３０℃で１０分間インキュベートした。
２）上記試験系に２０Ｓプロテアソーム切断配列を含む蛍光標識化したキモトリプシンを加え、３０℃で１時間反応させた。
３）上記反応により遊離した蛍光物質（ＡＭＣ）を３６０ｎｍ光で励起し４６０ｎｍ光で定量した。
４）リダイフェンＡを添加しない試験系を（１）〜（３）と同様に測定し、リダイフェンＡを用いた際の酵素活性を測定した。
５）リダイフェンＡを含む段階的な希釈溶液を調整し、（１）〜（４）と同様な評価を行なった後に５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を決定した。
６）阻害活性の陽性対照として既知のプロテアソーム阻害剤Clasto-Lactacystin β-Lactone（Lactacystin活性体）およびＭＧＩ３２を（１）〜（５）の工程に付し評価した。
【００８８】
〔カスパーゼ様活性阻害試験〕
１）２０Ｓプロテアソームに１０μＭの濃度に調製したリダイフェンＡを添加し、３０℃で１０分間インキュベートした。
２）上記試験系に２０Ｓプロテアソーム切断配列を含む蛍光標識化したカスパーゼを加え、３０℃で１時間反応させた。
３）上記反応により遊離した蛍光物質（ＡＭＣ）を３６０ｎｍ光で励起し４６０ｎｍ光で定量した。
４）リダイフェンＡを添加しない試験系を（１）〜（３）と同様に測定し、リダイフェンＡを用いた際の酵素活性を測定した。
５）リダイフェンＡを含む段階的な希釈溶液を調整し、（１）〜（４）と同様な評価を行なった後に５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を決定した。
６）阻害活性の陽性対照として既知のプロテアソーム阻害剤Clasto-Lactacystin β-Lactone（Lactacystin活性体）およびＭＧＩ３２を（１）〜（５）の工程に付し評価した。
【００８９】
〔トリプシン様活性阻害試験〕
１）２０Ｓプロテアソームに１０μＭの濃度に調製したリダイフェンＡを添加し、３０℃で１０分間インキュベートした。
２）上記試験系に２０Ｓプロテアソーム切断配列を含む蛍光標識化したトリプシンを加え、３０℃で１時間反応させた。
３）上記反応により遊離した蛍光物質（ＡＭＣ）を３６０ｎｍ光で励起し４６０ｎｍ光で定量した。
４）リダイフェンＡを添加しない試験系を（１）〜（３）と同様に測定し、リダイフェンＡを用いた際の酵素活性を測定した。
５）リダイフェンＡを含む段階的な希釈溶液を調整し、（１）〜（４）と同様な評価を行なった後に５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を決定した。
６）阻害活性の陽性対照として既知のプロテアソーム阻害剤Clasto-Lactacystin β-Lactone（Lactacystin活性体）およびＭＧＩ３２を（１）〜（５）の工程に付し評価した。
【００９０】
〔カテプシン様活性阻害試験〕
１）２０Ｓプロテアソームに１０μＭの濃度に調製したリダイフェンＡを添加し、３０℃で１０分間インキュベートした。
２）上記試験系に２０Ｓプロテアソーム切断配列を含む蛍光標識化したカテプシンＢを加え、３０℃で１時間反応させた。
３）上記反応により遊離した蛍光物質（ＡＭＣ）を３６０ｎｍ光で励起し４６０ｎｍ光で定量した。
４）リダイフェンＡを添加しない試験系を（１）〜（３）と同様に測定し、リダイフェンＡを用いた際の酵素活性を測定した。
５）リダイフェンＡを含む段階的な希釈溶液を調整し、（１）〜（４）と同様な評価を行なった後に５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を決定した。
６）阻害活性の陽性対照として既知のプロテアソーム阻害剤Clasto-Lactacystin β-Lactone（Lactacystin活性体）およびＭＧＩ３２を（１）〜（５）の工程に付し評価した。
【００９１】
〔α−キモトリプシン様活性阻害試験〕
１）２０Ｓプロテアソームに１０μＭの濃度に調製したリダイフェンＡを添加し、３０℃で１０分間インキュベートした。
２）上記試験系に２０Ｓプロテアソーム切断配列を含む蛍光標識化したα−キモトリプシンを加え、３０℃で１時間反応させた。
３）上記反応により遊離した蛍光物質（ＡＭＣ）を３６０ｎｍ光で励起し４６０ｎｍ光で定量した。
４）リダイフェンＡを添加しない試験系を（１）〜（３）と同様に測定し、リダイフェンＡを用いた際の酵素活性を測定した。
５）リダイフェンＡを含む段階的な希釈溶液を調整し、（１）〜（４）と同様な評価を行なった後に５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を決定した。
６）阻害活性の陽性対照として既知のプロテアソーム阻害剤Clasto-Lactacystin β-Lactone（Lactacystin活性体）およびＭＧＩ３２を（１）〜（５）の工程に付し評価した。
【００９２】
結果を以下に示す。
［判定基準］
ＩＣ５０＜０．１μＭ：    ＋＋＋（非常に強い活性）
ＩＣ５０＝０．１〜１μＭ：＋＋（強い活性）
ＩＣ５０＝１〜１０μＭ：  ＋（比較的強い活性）
ＩＣ５０＞１０μＭ：      ±（弱い活性、あるいは活性無し）
［結果］
2008094836.tif 000045
カテプシンＢの阻害：（無）
α−キモトリプシンの阻害：（無）
［判定］
キモトリプシン様活性：（ＩＣ５０＝３．４）
カスパーゼ様活性：（ＩＣ５０＝４．１）
トリプシン様活性：（ＩＣ５０＞１０）
プロテアソーム選択性：（有）
評価はPositiveであり、リダイフェンＡは、２０Ｓプロテアソームキモトリプシン様活性のＩＣ５０が比較的強い活性を示した。
【００９３】
〔実施例１３〕
実施例１２と同様にして、１，１−ビス〔４−（２−ピロリジン-１−イル−エトキシ）フェニル〕−２−フェニルブテン（式（２）の化合物；リダイフェンＢ）のプロテアソーム阻害活性を測定した。
【００９４】
結果を以下に示す。
［判定基準］
ＩＣ５０＜０．１μＭ：    ＋＋＋（非常に強い活性）
ＩＣ５０＝０．１〜１μＭ：＋＋（強い活性）
ＩＣ５０＝１〜１０μＭ：  ＋（比較的強い活性）
ＩＣ５０＞１０μＭ：      ±（弱い活性、あるいは活性無し）
［結果］
2008094836.tif 000046
カテプシンＢの阻害：（無）
α−キモトリプシンの阻害：（無）
［判定］
キモトリプシン様活性：（ＩＣ５０＝６．４）
カスパーゼ様活性：（ＩＣ５０＝６．１）
トリプシン様活性：（ＩＣ５０＞１０）
プロテアソーム選択性：（有）
評価は、Positiveであり、リダイフェンＢは、２０Ｓプロテアソームキモトリプシン様活性のＩＣ５０が比較的強い活性を示した。
【００９５】
〔実施例１４〕
実施例１２と同様にして、１，１−ビス〔４−（２−モルホリン-１−イル−エトキシ）フェニル〕−２−フェニルブテン（式（３）の化合物；リダイフェンＤ）のシプロテアソーム阻害活性を測定した。
【００９６】
結果を以下に示す。
［判定基準］
ＩＣ５０＜０．１μＭ：    ＋＋＋（非常に強い活性）
ＩＣ５０＝０．１〜１μＭ：＋＋（強い活性）
ＩＣ５０＝１〜１０μＭ：  ＋（比較的強い活性）
ＩＣ５０＞１０μＭ：      ±（弱い活性、あるいは活性無し）
［結果］
2008094836.tif 000047
カテプシンＢの阻害：（無）
α−キモトリプシンの阻害：（無）
［判定］
キモトリプシン様活性：（ＩＣ５０＝６．４）
カスパーゼ様活性：（ＩＣ５０＝７．５）
トリプシン様活性：（ＩＣ５０＞１０）
プロテアソーム選択性：（有）
評価は、Positiveであり、リダイフェンＤは、２０Ｓプロテアソームキモトリプシン様活性のＩＣ５０が比較的強い活性を示した。
【００９７】
〔実施例１５〕
実施例１２と同様にして、１，１−ビス〔４−（２−アザシクロヘプタン-１−イル−エトキシ）フェニル〕−２−フェニルブテン（式（５）の化合物；リダイフェンＦ）のプロテアソーム阻害活性を測定した。
【００９８】
結果を以下に示す。
［判定基準］
ＩＣ５０＜０．１μＭ：    ＋＋＋（非常に強い活性）
ＩＣ５０＝０．１〜１μＭ：＋＋（強い活性）
ＩＣ５０＝１〜１０μＭ：  ＋（比較的強い活性）
ＩＣ５０＞１０μＭ：      ±（弱い活性、あるいは活性無し）
［結果］
2008094836.tif 000048
キモトリプシン様活性：（ＩＣ５０＝２．３）
カスパーゼ様活性：（ＩＣ５０＝０．７６）
トリプシン様活性：（ＩＣ５０＞１０）
プロテアソーム選択性：（有）
評価は、Positiveであり、リダイフェンＦは、２０Ｓプロテアソームキモトリプシン様活性のＩＣ５０が比較的強い活性を示し、特に、２０Ｓプロテアソームカスパーゼ様活性に対し強い阻害作用を示した。
【００９９】
〔実施例１６〕
実施例１２と同様にして、４，４−ビス［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）フェニル］−３−フェニル−１−ブテン（式（８）の化合物；プロリダイフェンＢ）のプロテアソーム阻害活性を測定した。
【０１００】
結果を以下に示す。
［判定基準］
ＩＣ５０＜０．１μＭ：    ＋＋＋（非常に強い活性）
ＩＣ５０＝０．１〜１μＭ：＋＋（強い活性）
ＩＣ５０＝１〜１０μＭ：  ＋（比較的強い活性）
ＩＣ５０＞１０μＭ：      ±（弱い活性、あるいは活性無し）
［結果］
2008094836.tif 000049
カテプシンＢの阻害：（無）
α−キモトリプシンの阻害：（無）
［判定］
キモトリプシン様活性：（ＩＣ５０＝４．４）
カスパーゼ様活性：（ＩＣ５０＝２．５）
トリプシン様活性：（ＩＣ５０＞１０）
プロテアソーム選択性：（有）
評価は、Positiveであり、プロリダイフェンＢは、２０Ｓプロテアソームキモトリプシン様活性及び２０Ｓプロテアソームカスパーゼ様活性を比較的強く阻害した。
【０１０１】
〔実施例１７〕
実施例１２と同様にして、４，４−ビス［４−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）フェニル］−３−フェニル−１−ブテン（式（９）の化合物；プロリダイフェンＣ）のプロテアソーム阻害活性を測定した。
【０１０２】
結果を以下に示す。
［判定基準］
ＩＣ５０＜０．１μＭ：    ＋＋＋（非常に強い活性）
ＩＣ５０＝０．１〜１μＭ：＋＋（強い活性）
ＩＣ５０＝１〜１０μＭ：  ＋（比較的強い活性）
ＩＣ５０＞１０μＭ：      ±（弱い活性、あるいは活性無し）
［結果］
2008094836.tif 000050
カテプシンＢの阻害：（無）
α−キモトリプシンの阻害：（無）
［判定］
キモトリプシン様活性：（ＩＣ５０＝２．３）
カスパーゼ様活性：（ＩＣ５０＝２．２）
トリプシン様活性：（ＩＣ５０＞１０）
プロテアソーム選択性：（有）
評価は、Positiveであり、プロリダイフェンＣは、２０Ｓプロテアソームキモトリプシン様活性及び２０Ｓプロテアソームカスパーゼ様活性を比較的強く阻害した。
【０１０３】
〔実施例１８〕
実施例１２と同様にして、４，４−ビス［４−（２−ジエチルアミノエトキシ）フェニル］−３−フェニル−１−ブテン（式（１１）の化合物；プロリダイフェンＥ）のプロテアソーム阻害活性を測定した。
【０１０４】
結果を以下に示す。
［判定基準］
ＩＣ５０＜０．１μＭ：    ＋＋＋（非常に強い活性）
ＩＣ５０＝０．１〜１μＭ：＋＋（強い活性）
ＩＣ５０＝１〜１０μＭ：  ＋（比較的強い活性）
ＩＣ５０＞１０μＭ：      ±（弱い活性、あるいは活性無し）
［結果］
2008094836.tif 000051
［判定］
キモトリプシン様活性：（ＩＣ５０＝３．２）
カスパーゼ様活性：（ＩＣ５０＝３．２）
トリプシン様活性：（ＩＣ５０＞１０）
プロテアソーム選択性：（有）
評価は、Positiveであり、プロリダイフェンＣは、２０Ｓプロテアソームキモトリプシン様活性及び２０Ｓプロテアソームカスパーゼ様活性を比較的強く阻害した。
【０１０５】
〔実施例１９〕
実施例１２と同様にして、４，４−ビス［４−（２−アザシクロヘプタン−１−イル−エトキシ）フェニル］−３−フェニル−１−ブテン（式（１２）の化合物；プロリダイフェンＦ）のプロテアソーム阻害活性を測定した。
【０１０６】
結果を以下に示す。
［判定基準］
ＩＣ５０＜０．１μＭ：    ＋＋＋（非常に強い活性）
ＩＣ５０＝０．１〜１μＭ：＋＋（強い活性）
ＩＣ５０＝１〜１０μＭ：  ＋（比較的強い活性）
ＩＣ５０＞１０μＭ：      ±（弱い活性、あるいは活性無し）
［結果］
2008094836.tif 000052
［判定］
キモトリプシン様活性：（ＩＣ５０＝１．９）
カスパーゼ様活性：（ＩＣ５０＝１．４）
トリプシン様活性：（ＩＣ５０＞１０）
プロテアソーム選択性：（有）
評価は、Positiveであり、プロリダイフェンＦは、２０Ｓプロテアソームキモトリプシン様活性及び２０Ｓプロテアソームカスパーゼ様活性を比較的強く阻害した。
【図面の簡単な説明】
【０１０７】
【図１】本発明の一般式（II）で表わされる化合物製造の各工程を示す模式図である。
【図２】本発明の一般式（III）で表わされる化合物製造の各工程を示す模式図である。
【図１】
2008094836.tif 000067
【図２】
2008094836.tif 000068