(57)【要約】【課題】組織培養、免疫表現系決定、他の診断試験、さらなる精製、および治療的投与のための細胞を効率的に調製するために用いられ得る、細胞を分離するための組成物および方法を提供すること。【解決手段】ａ）デキストラン；ｂ）抗グリコホリンＡ抗体；ｃ）抗ＣＤ１５抗体；ｄ）抗ＣＤ９抗体；ならびにｅ）抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ７２抗体、抗ＣＤ１６抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、および抗ＣＤ２抗体からなる群より選択される抗体、を含む、組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載されるような、組成物および方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、細胞を分離するための組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
多くの慣用的な血液細胞単離手順は、密度勾配沈殿による赤血球成分および顆粒球成分の予備的バルク分離を含む。密度勾配分離は、異なる細胞型の密度の微小な差異（この差異により、これらの細胞は、種々の密度流体培地において異なるレベルで沈殿する）に依存する。これらの細胞型の間の密度の差異は、微小であり得、個々の細胞型は、大きさおよび密度が相同であり得る。最終的に、特定の細胞型は、その密度培地中の別々の領域で正確に沈殿するのではなく、密度勾配培地をとおして分離されるようになり得る。この現象は、所望の細胞の乏しい回収および／または所望されない細胞型での汚染を生じ得る。希少な血液細胞型（例えば、造血祖先細胞）を増やす手順において、密度勾配沈殿は、一般に、乏しい収率しか得られない。例えば、臍帯血から祖先細胞（例えば、ＣＤ３４＋造血幹細胞）を単離するための慣用的な密度勾配法は、所望される幹細胞の有意な損失を生じることが報告されている。例えば、非特許文献１を参照のこと。別の例としては、リンパ球を単離するために慣用的な密度勾配法を用いることは、特定のリンパ球サブセットの選択的な損失を生じることが報告されている。例えば、非特許文献２を参照のこと。
【０００３】
ドナー組織からの希少な細胞型の回収を増加させることは、移植療法および免疫療法（例えば、骨髄移植、幹細胞ベース遺伝子療法、および免疫細胞療法）の成功を劇的に改善し、それらの成功は、明らかに、治療に用いられる細胞の正確な数に関連する。
【非特許文献１】Ｗａｇｎｅｒ，Ｊ．Ｅ．、Ａｍ  Ｊ  Ｐｅｄ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｏｎｃｏｌ（１９９３）１５：１６９
【非特許文献２】Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｄ．Ｐ．、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（２０００）２４３：１２５
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（発明の要旨）
本発明は、細胞を分離するための組成物および方法を提供する。開示される組成物および方法は、例えば、組織培養、免疫表現系決定、他の診断試験、さらなる精製、および治療的投与のための細胞を効率的に調製するために用いられ得る。
【０００５】
本発明の方法は、血液細胞を含むサンプル（例えば、末梢血液サンプル、臍帯サンプル、および骨髄サンプル）と、細胞分離組成物と接触させる工程を包含する。特定の機構に束縛されることなく、本発明の組成物は、細胞表面の抗原との相互作用を介して、および／または細胞−細胞の接着を刺激することによって（例えば、細胞表面の接着因子の増加した発現を介して）、選択的に細胞を凝集し得る。凝集した細胞は、溶液中に残る凝集していない細胞と分離される。凝集相または上清相のいずれかまたは両方から、細胞が回収され得る。
【０００６】
開示される組成物および方法は、種々の細胞型（例えば、Ｔリンパ球、Ｔヘルパー細胞、Ｔサプレッサー細胞、Ｂ細胞、造血幹細胞、循環胚幹細胞、母体循環中の循環胎児細胞、および循環転移腫瘍細胞を含む）を単離および増やすために用いられ得る。開示される組成物および方法は、同種異系および自系の移植に関連して用いられ得る。自系移植に関連して、開示される組成物および方法は、例えば、所望されない細胞（例えば、患者の血液または骨髄由来の転移がん細胞）を除去するために用いられ得る。次いで、所望の細胞（例えば、造血幹細胞）は、生命を脅かす腫瘍細胞を伴わないか、または実質的に伴わずに、患者に戻され得る。開示される組成物および方法は、ヒト、非ヒト脊椎動物、齧歯類、イノシシ、ウシ、およびウマを含む任意の哺乳動物細胞の細胞に適用され得る。
【０００７】
細胞分離組成物は、デキストラン、抗グリコホリン抗体、および細胞表面抗原に対する抗体（例えば、ＣＤ９、ＣＤ１５、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ７２、ＣＤ１６、ＣＤ４１ａ、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２９、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤｗ４９ｄ、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６３、ＣＤ６６、ＣＤ６７、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ９９、ＣＤ１００、Ｌｅｕ−１３、ＴＰＡ−１または表面Ｉｇ）、およびこれらの組み合わせを含み得る。細胞分離組成物は、他の型の細胞の表面抗原（例えば、腫瘍細胞の細胞表面タンパク質）に対する抗体を含み得る。
【０００８】
細胞表面抗原に対する抗体は、可溶性形態および基材に結合された形態のいずれかまたはそれらの両方で細胞分離組成物中に含められ得る。抗体は、ラテックス微粒子、酸エッチングされたガラス粒子、凝集されたポリペプチド、多糖、アビジン粒子、またはビオチン化アガロースゲル粒子のような基材に結合され得る。細胞分離組成物における抗体は、モノクローナルであり得、そしてＩｇＭ抗体またはＩｇＧ抗体であり得る。いくつかの実施形態において、細胞分離は、抗ヒト抗体を含み得る。細胞分離組成物中の可溶性抗体の濃度は、約０．１ｍｇ／ｌ〜約１５ｍｇ／ｌであり得る。基材結合抗体は、約０．１〜約５０．０×１０９個粒子／ｌの間の濃度で、細胞分離組成物中に含められ得る。
【０００９】
細胞分離組成物はまた、へパリン、二価カチオン（例えば、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋）、およびリン酸緩衝化生理食塩水を含み得る。いくつかの実施形態において、組成物は、６．８〜７．８（例えば、７．２〜７．４の間）の間のｐＨを有する。
【００１０】
本発明はまた、細胞分離組成物の成分および包装材料を含むキットを提供する。キットは、血液収集容器（血液バッグまたは減圧チューブ）を含み得る。
【００１１】
本発明はさらに、以下を提供し得る：
・（項目１）
以下：
ａ）デキストラン；
ｂ）抗グリコホリンＡ抗体；
ｃ）抗ＣＤ１５抗体；
ｄ）抗ＣＤ９抗体；ならびに
ｅ）抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ７２抗体、抗ＣＤ１６抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、および抗ＣＤ２抗体からなる群より選択される抗体、
を含む、組成物。
・（項目２）
ヘパリンをさらに含む、項目１に記載の組成物。
・（項目３）
二価カチオンをさらに含む、項目１に記載の組成物。
・（項目４）
上記二価カチオンが、Ｃａ＋２である、項目３に記載の組成物。
・（項目５）
上記二価カチオンが、Ｍｇ＋２である、項目３に記載の組成物。
・（項目６）
リン酸緩衝化生理食塩水をさらに含む、項目１に記載の組成物。
・（項目７）
上記組成物のｐＨが６．８〜７．８である、項目１に記載の組成物。
・（項目８）
上記組成物のｐＨが７．２〜７．４である、項目１に記載の組成物。
・（項目９）
上記抗グリコホリンＡ抗体がモノクローナルである、項目１に記載の組成物。
・（項目１０）
上記抗グリコホリンＡ抗体がＩｇＭ抗体である、項目１に記載の組成物。
・（項目１１）
上記抗グリコホリンＡ抗体がＩｇＧ抗体である、項目１に記載の組成物。
・（項目１２）
上記抗グリコホリンＡ抗体がヒト抗グリコホリンＡ抗体である、項目１に記載の組成物。
・（項目１３）
上記抗グリコホリンＡ抗体の濃度が約０．１ｍｇ／ｌ〜約１５ｍｇ／ｌである、項目１に記載の組成物。
・（項目１４）
上記抗ＣＤ１５抗体が、モノクローナル抗体である、項目１に記載の組成物。
・（項目１５）
上記抗ＣＤ１５抗体が、ＩｇＭ抗体である、項目１に記載の組成物。
・（項目１６）
上記抗ＣＤ１５抗体が、ＩｇＧ抗体である、項目１に記載の組成物。
・（項目１７）
上記抗ＣＤ１５抗体が、抗ヒトＣＤ１５抗体である、項目１に記載の組成物。
・（項目１８）
上記抗ＣＤ１５抗体の濃度が約０．１ｍｇ／ｌ〜約１５ｍｇ／ｌである、項目１に記載の組成物。
・（項目１９）
上記抗ＣＤ９抗体が、モノクローナル抗体である、項目１に記載の組成物。
・（項目２０）
上記抗ＣＤ９抗体が、ＩｇＭ抗体である、項目１に記載の組成物。
・（項目２１）
上記抗ＣＤ９抗体が、ＩｇＧ抗体である、項目１に記載の組成物。
・（項目２２）
上記抗ＣＤ９抗体が、ヒト抗ＣＤ９抗体である、項目１に記載の組成物。
・（項目２３）
上記抗ＣＤ９抗体の濃度が約０．１ｍｇ／ｌ〜約１５ｍｇ／ｌである、項目１に記載の組成物。
・（項目２４）
血液収集容器および細胞分離組成物を備えるキットであって、当該細胞分離組成物が、以下：
ａ）デキストラン；
ｂ）抗グリコホリンＡ抗体；
ｃ）抗ＣＤ１５抗体；
ｄ）抗ＣＤ９抗体；ならびに
ｅ）抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ７２抗体、抗ＣＤ１６抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、および抗ＣＤ２抗体からなる群より選択される抗体、
を含む、キット。
・（項目２５）
上記血液収集容器が血液バッグである、項目２４に記載のキット。
・（項目２６）
上記血液収集容器が減圧チューブである、項目２４に記載のキット。
・（項目２７）
細胞を分離するための方法であって、当該方法は、以下：
ａ）血液細胞を含むサンプルと組成物を接触させる工程；ならびに
ｂ）当該サンプルを凝集相と上清相とに分離させる工程；ならびに
ｃ）当該細胞を回収する工程、を包含し、
当該組成物が、以下：
ｉ）デキストラン；
ｉｉ）抗グリコホリンＡ抗体；
ｉｉｉ）抗ＣＤ１５抗体；
ｉｖ）抗ＣＤ９抗体；ならびに
ｖ）抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ７２抗体、抗ＣＤ１６抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、および抗ＣＤ２抗体からなる群より選択される抗体、
を含む、方法。
・（項目２８）
上記サンプルが、ヒト由来である、項目２７に記載の方法。
・（項目２９）
上記サンプルが、末梢血液サンプルである、項目２８に記載の方法。
・（項目３０）
上記サンプルが、臍帯サンプルである、項目２８に記載の方法。
・（項目３１）
上記サンプルが、骨髄サンプルである、項目２８に記載の方法。
・（項目３２）
上記細胞が、転移腫瘍細胞である、項目２８に記載の方法。
・（項目３３）
上記細胞が、上記上清相から回収される、項目２８に記載の方法。
・（項目３４）
上記細胞が幹細胞である、項目３３に記載の方法。
・（項目３５）
ａ）デキストラン；
ｂ）抗グリコホリンＡ抗体；および
ｃ）細胞表面抗原に対する抗体であって、基材に結合されている抗体、
を含む、組成物。
・（項目３６）
上記基材に結合された抗体が、ラテックス微粒子に結合されている、項目３５に記載の組成物。
・（項目３７）
上記基材に結合された抗体が、酸エッチングされたガラス粒子に結合されている、項目３５に記載の組成物。
・（項目３８）
上記基材に結合された抗体が、凝集したポリペプチドに結合されている、項目３５に記載の組成物。
・（項目３９）
上記基材に結合された抗体が、多糖に結合されている、項目３５に記載の組成物。
・（項目４０）
上記基材に結合された抗体が、アビジン粒子に結合されている、項目３５に記載の組成物。
・（項目４１）
上記基材に結合された抗体が、ビオチン化アガロースゲル粒子に結合されている、項目３５に記載の組成物。
・（項目４２）
上記抗体が抗ＣＤ１５である、項目３５に記載の組成物。
・（項目４３）
上記抗体が抗ＣＤ９である、項目３５に記載の組成物。
・（項目４４）
上記抗体が抗ＣＤ３である、項目３５に記載の組成物。
・（項目４５）
上記抗体が抗ＣＤ７２である、項目３５に記載の組成物。
・（項目４６）
上記抗体が抗ＣＤ１６である、項目３５に記載の組成物。
・（項目４７）
上記抗体が抗ＣＤ４である、項目３５に記載の組成物。
・（項目４８）
上記抗体が抗ＣＤ８である、項目３５に記載の組成物。
・（項目４９）
上記抗体が抗ＣＤ２である、項目３５に記載の組成物。
・（項目５０）
上記抗体が抗ＣＤ３である、項目３５に記載の組成物。
・（項目５１）
ヘパリンをさらに含む、項目３５に記載の組成物。
・（項目５２）
二価カチオンをさらに含む、項目３５に記載の組成物。
・（項目５３）
上記二価カチオンが、Ｃａ＋２である、項目５２に記載の組成物。
・（項目５４）
上記二価カチオンが、Ｍｇ＋２である、項目５２に記載の組成物。
・（項目５５）
リン酸緩衝化生理食塩水をさらに含む、項目３５に記載の組成物。
・（項目５６）
上記組成物のｐＨが６．８〜７．４である、項目３５に記載の組成物。
・（項目５７）
上記組成物のｐＨが７．２〜７．４である、項目３５に記載の組成物。
・（項目５８）
上記抗グリコホリンＡ抗体がモノクローナルである、項目３５に記載の組成物。
・（項目５９）
上記抗グリコホリンＡ抗体がＩｇＭ抗体である、項目３５に記載の組成物。
・（項目６０）
上記抗グリコホリンＡ抗体がＩｇＧ抗体である、項目３５に記載の組成物。
・（項目６１）
上記抗グリコホリンＡ抗体がヒト抗グリコホリンＡ抗体である、項目３５に記載の組成物。
・（項目６２）
上記抗グリコホリンＡ抗体の濃度が約０．１ｍｇ／ｌ〜約１５ｍｇ／ｌである、項目３５に記載の組成物。
・（項目６３）
上記抗グリコホリンＡ抗体が、基材に結合されている、項目３５に記載の組成物。
・（項目６４）
上記抗ＣＤ１５抗体が、モノクローナル抗体である、項目４２に記載の組成物。
・（項目６５）
上記抗ＣＤ１５抗体が、ＩｇＭ抗体である、項目４２に記載の組成物。
・（項目６６）
上記抗ＣＤ１５抗体が、ＩｇＧ抗体である、項目４２に記載の組成物。
・（項目６７）
上記抗ＣＤ１５抗体が、抗ヒトＣＤ１５抗体である、項目４２に記載の組成物。
・（項目６８）
上記抗ＣＤ１５抗体の濃度が約０．１ｍｇ／ｌ〜約１５ｍｇ／ｌである、項目４２に記載の組成物。
・（項目６９）
上記抗ＣＤ１５抗体が、基材に結合されている、項目４２記載の組成物。
・（項目７０）
上記抗ＣＤ９抗体が、モノクローナル抗体である、項目４３に記載の組成物。
・（項目７１）
上記抗ＣＤ９抗体が、ＩｇＭ抗体である、項目４３に記載の組成物。
・（項目７２）
上記抗ＣＤ９抗体が、ＩｇＧ抗体である、項目４３に記載の組成物。
・（項目７３）
上記抗ＣＤ９抗体が、ヒト抗ＣＤ９抗体である、項目４３に記載の組成物。
・（項目７４）
上記抗ＣＤ９抗体の濃度が約０．１ｍｇ／ｌ〜約１５ｍｇ／ｌである、項目４３に記載の組成物。
・（項目７５）
上記抗ＣＤ９抗体が、基材に結合されている、項目４３記載の組成物。
・（項目７６）
血液収集容器および細胞分離組成物を備えるキットであって、当該細胞分離組成物が、以下：
ａ）デキストラン
ｂ）抗グリコホリン抗体；および
ｃ）ヒト細胞の細胞表面抗原に対する抗原であって、基質に結合されている、抗体、
を含む、キット。
・（項目７７）
上記血液収集容器が血液バッグである、項目７６に記載のキット。
・（項目７８）
上記血液収集容器が減圧チューブである、項目７６に記載のキット。
・（項目７９）
細胞を分離するための方法であって、当該方法は、以下：
ａ）血液細胞を含むサンプルと組成物を接触させる工程；ならびに
ｂ）外サンプルを凝集相と上清相とに分離させる工程；ならびに
ｃ）当該細胞を回収する工程、を包含し、
当該組成物が、以下：
ｉ）デキストラン；
ｉｉ）抗グリコホリンＡ抗体；および
ｉｉｉ）細胞表面抗原に対する抗原であって、基質に結合されている、抗体、
を含む、方法。
・（項目８０）
上記サンプルが、ヒト由来である、項目７９に記載の方法。
・（項目８１）
上記サンプルが、末梢血液サンプルである、項目８０に記載の方法。
・（項目８２）
上記サンプルが、臍帯サンプルである、項目８０に記載の方法。
・（項目８３）
上記サンプルが、骨髄サンプルである、項目８０に記載の方法。
・（項目８４）
上記細胞が、転移腫瘍細胞である、項目８０に記載の方法。
・（項目８５）
上記細胞が、上記上清相から回収される、項目８０に記載の方法。
・（項目８６）
上記細胞が幹細胞である、項目８５に記載の方法。
【００１２】
他に規定されない限り、本明細書中に使用される専門用語および科学用語は、本発明が関連する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中に記載される方法および物質に類似するかまたはそれらと等価である方法および物質が、本発明を実施するために用いられ得るが、適切な方法および物質が、以下に記載される。本明細書中に記述される全ての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、それらの全体が、本明細書中に参考として援用される。矛盾する場合、定義を含めて、本明細書が、支配する。さらに、物質、方法、および実施例は、例示的であるのみであり、限定することを意図しない。
【００１３】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および上記の特許請求の範囲から明らかである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
（詳細な説明）
本発明は、細胞を分離するための組成物および方法を特色とする。本発明の組成物を使用して、血球含有サンプルから細胞を選択的に凝集させ得る。特定の機構によって束縛されることなく、本発明の組成物は、細胞表面抗原との相互作用を介して、および／または細胞表面接着因子（例えば、ＬＦＡ−１（リンパ球機能関連抗原−１、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＡＭ−１（細胞間接着分子−１、ＣＤ５４））の発現を刺激することによって、細胞を凝集し得る。凝集された細胞の部分は、未凝集細胞とは区別され、この未凝集細胞は、溶液中に残る。細胞は、上清からか、または凝集塊から回収され得る。
【００１５】
（細胞分離組成物）
本発明に従う細胞分離組成物は、デキストラン、および細胞表面抗原に対する（すなわち、細胞表面抗原に対して特異的結合親和性を有する）１つ以上の抗体を含み得る。
【００１６】
デキストランは、主にα（１〜６）様式で連結されたグルコースユニットからなる多糖である。デキストランは、赤血球のスタッキング（すなわち、連銭形成）を引き起こし得、これによって、溶液からの赤血球細胞の除去を容易にする。細胞表面抗原に対する抗体は、ホモタイプの凝集（すなわち、同一細胞型の細胞の凝集）および／またはヘテロタイプの凝集（すなわち、異なる細胞型の細胞の凝集）を介した、溶液からの血球の除去を容易にし得る。
【００１７】
細胞分離組成物は、血球表面抗原に対する抗体を含み得、例えば、以下を含む：グリコホリンＡ、ＣＤ１５、ＣＤ９、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ７２、ＣＤ１６、ＣＤ４１ａ、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２９、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤｗ４９ｄ、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６３、ＣＤ６６、ＣＤ６７、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ９９、ＣＤ１００、Ｌｅｕ−１３、ＴＰＡ−１、表面Ｉｇ、および、これらの組合せ。従って、細胞分離組成物は、特定の型の血球を選択的に凝集するために、処方され得る。
【００１８】
いくつかの実施形態において、細胞分離組成物は、グリコホリンＡに対する抗体を含む。抗グリコホリンＡ抗体は、少なくとも２つの機構によって、溶液からの血球細胞の除去を容易にし得る。１番目に、抗グリコホリンＡ抗体は、グリコホリンＡが赤血球上の主要な表面糖タンパク質であるので、赤血球のホモタイプの凝集を引き起こし得る。さらに、抗グリコホリンＡ抗体はまた、デキストラン媒介連銭形成を安定化し得る。例示的なモノクローナル抗グリコホリンＡ抗体としては、１０７ＦＭＮ（マウスＩｇＧ１アイソタイプ）、ＹＴＨ８９．１（ラットＩｇＧ２ｂアイソタイプ）、およびＥ４（マウスＩｇＭアイソタイプ）が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｍ．Ｖａｎｄｅｒｌａａｎら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２０：１３５３（１９８３）；Ｔｅｌｅｎ  Ｍ．Ｊ．およびＢｏｌｋ、Ｔ．Ｋ．，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ２７：３０９（１９８７）；ならびにＯｕｔｒａｍ  Ｓら、Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１２：６５１（１９８８）を参照のこと。
【００１９】
いくつかの実施形態において、細胞分離組成物は、ＣＤ１５に対する抗体を含む。抗ＣＤ１５抗体は、顆粒球の表面上に存在するＣＤ１５分子を架橋することによって、顆粒球のホモタイプの凝集を引き起こし得る。抗ＣＤ１５抗体はまた、単球上、ＮＫ細胞上およびＢ細胞上の接着分子と相互作用する顆粒球の表面上の接着分子（例えば、Ｌ−セレクチンおよびβ−２インテグリン）の発現を刺激することによって、顆粒球と単球、ＮＫ細胞およびＢ細胞とのホモタイプの凝集およびヘテロタイプの凝集を引き起こし得る。これらの細胞型のヘテロタイプの凝集は、血球成分と共に、溶液からのこれらの細胞の除去を容易にし得る。例示的なモノクローナル抗ＣＤ１５抗体としては、ＡＨＮ１．１（マウスＩｇＭアイソタイプ）、ＦＭＣ−１０（マウスＩｇＭアイソタイプ）、ＢＵ−２８（マウスＩｇＭアイソタイプ）、ＭＥＭ−１５７（マウスＩｇＭアイソタイプ）、ＭＥＭ−１５８（マウスＩｇＭアイソタイプ）、ＭＥＭ−１６７（マウスＩｇＭアイソタイプ）が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｔｙｐｉｎｇＩＶ（１９８９）；Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｔｙｐｉｎｇＩＩ（１９８４）；Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｔｙｐｉｎｇＶＩ（１９９５）；Ｓｏｌｔｅｒ  Ｄ．ら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＵＳＡ  ７５：５５６５（１９７８）；Ｋａｎｎａｇｉ  Ｒ．ら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２５７：１４８６５（１９８２）；Ｍａｇｎａｎｉ，Ｊ．Ｌ．ら、Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  ２３３：５０１（１９８４）；Ｅｇｇｅｎｓ  Ｉ．ら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６４：９４７６（１９８９）を参照のこと。
【００２０】
いくつかの実施形態において、細胞分離組成物は、ＣＤ９に対する抗体を含む。抗ＣＤ９抗体は、血小板のホモタイプの凝集を引き起こし得る。抗ＣＤ９抗体はまた、顆粒球および単球の表面に接着している血小板を介して、顆粒球および単球のヘテロタイプの凝集を引き起こし得る。ＣＤ９抗体は、血小板１セレクチンの発現を促進し得、この血小板１
セレクチンは、白血球細胞表面への血小板の結合を促進する。従って、抗ＣＤ９抗体は、複数の細胞−細胞連結を促進し得、これによって、凝集および溶液からの除去を促進する。例示的なモノクローナル抗ＣＤ９抗体としては、ＭＥＭ−６１（マウスＩｇＧ１アイソタイプ）、ＭＥＭ−６２（マウスＩｇＧ１アイソタイプ）、ＭＥＭ−１９２（マウスＩｇＭアイソタイプ）、ＦＭＣ−８（マウスＩｇＧ２ａアイソタイプ）、ＳＮ４（マウスＩｇＧ１アイソタイプ）、ＢＵ−１６（マウスＩｇＧ２ａアイソタイプ）が挙げられるが、これらに限定されない。Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｔｙｐｉｎｇＶＩ（１９９５）；Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｔｙｐｉｎｇＩＩ（１９８４）；Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｔｙｐｉｎｇＩＶ（Ｗ．Ｋｎａｐｐ編）ｐｐ．９８９−９２．Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ中のＶｏｎ  ｄｅｍ  Ｂｏｕｒｎｅ  Ａ．Ｅ．Ｇ，Ｋｒ．およびＭｏｄｅｒｍａｎ  Ｐ．Ｎ．（１９８９）；Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｔｙｐｉｎｇ  Ｖ，Ｓ．Ｆ．Ｓｃｈｌｏｓｍａｎｎら編，ｐｐ．１２４９−５１．Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ（１９９５）中のＪｅｎｎｉｎｇｓ，Ｌ．Ｋ．，ら；Ｌａｎｚａ  Ｆ．ら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６６：１０６３８（１９９１）；Ｗｒｉｇｈｔら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  １５：５８８（１９９４）；Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ  Ｅ．ら、Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ  ２１：１０（１９９５）を参照のこと。
【００２１】
いくつかの実施形態において、細胞分離組成物は、ＣＤ４１に対する抗体を含み、これは、選択的に血小板を凝集し得る。いくつかの実施形態において、細胞分離組成物は、ＣＤ３に対する抗体を含み、これは、選択的にＴ細胞を凝集し得る。いくつかの実施形態において、細胞分離組成物は、ＣＤ２に対する抗体を含み、これは、Ｔ細胞およびＮＫ細胞を選択的に凝集し得る。いくつかの実施形態において、細胞分離組成物は、ＣＤ７２に対する抗体を含み得、これは、Ｂ細胞を選択的に凝集し得る。いくつかの実施形態において、細胞分離組成物は、ＣＤ１６に対する抗体を含み、これは、ＮＫ細胞および好中球性顆粒球を選択的に凝集し得る。
【００２２】
上記した通り、細胞分離組成物は、特定の血球を選択的に凝集するために処方され得る。例として、グリコホリンＡ、ＣＤ１５およびＣＤ９に対する抗体を含む細胞分離組成物は、赤血球、顆粒球、ＮＫ細胞、Ｂ細胞および血小板の凝集を容易にし得る。Ｔ細胞、ＮＫ細胞および珍しい前駆体細胞は、次いで、溶液から回収され得る。処方物がまた、ＣＤ３に対する抗体を含む場合、Ｔ細胞はまた凝集され得、そして、ＮＫ細胞および珍しい前駆体は、溶液から回収され得る。
【００２３】
細胞分離組成物は、他の型の細胞の表面抗原（例えば、腫瘍細胞の細胞表面タンパク質）に対する抗体を含み得る。当業者は、慣用的な方法を使用して、血液、ならびに他のヒトおよび他の哺乳動物（例えば、非ヒト霊長類、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギおよびモルモット）、ブタ、ウシおよびウマを含む）由来の細胞の細胞表面抗原に対する抗体を調製し得る。
【００２４】
代表的には、この組成物中で使用される抗体は、モノクローナル抗体で、これは、抗原内に含まれる特定のエピトープに対する、均質な抗体の集団である。適切なモノクローナル抗体は市販されているか、または、標準的なハイブリドーマ技術を使用して調製され得る。特に、モノクローナル抗体は、培養中の連続細胞株による抗体分子の産生を提供する技術によって得られ得、この技術は、以下を含む：Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇら、Ｎａｔｕｒｅ、１９７５，２５６：４９５，ヒトＢ−細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｓｂｏｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２（１９８３）；Ｃｏｌｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：２０２６（１９８３））、およびＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６（１９８３））によって記載される技術。
【００２５】
抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびそれらの任意のサブクラスを含む、任意の免疫グロブリンクラスの抗体であり得る。ＩｇＧおよびＩｇＭアイソタイプの抗体は、特に、本発明の細胞分離組成物中で有用である。五量体のＩｇＭ抗体は、ＩｇＧ抗体よりも多くの抗原結合部位を含み、そして、いくつかの場合（例えば、抗グリコホリンＡおよび抗ＣＤ１５）では、細胞分離試薬にとって特に有用である。他の場合（例えば、抗ＣＤ９抗体）において、ＩｇＧアイソタイプの抗体は、ホモタイプの凝集および／またはヘテロタイプの凝集を刺激するのに特に有用である。
【００２６】
細胞表面抗原に対する抗体は、液相中で（すなわち、可溶性で）提供され得る。液相抗体は、代表的には、約０．１ｍｇ／ｌ〜約１５ｍｇ／ｌの間（例えば、０．２５〜１０ｍｇ／ｌの間、０．２５〜１ｍｇ／ｌの間、０．５〜２ｍｇ／ｌの間、１〜２ｍｇ／ｌの間、４〜８ｍｇ／ｌの間、５〜１０ｍｇ／ｌの間）の濃度で、細胞分離組成物中に提供される。
【００２７】
細胞表面抗原に対する抗体もまた、固相に結合（すなわち、基質結合）して提供され得る。異なる細胞表面抗原に対する抗体は、細胞表面分子の架橋および細胞表面接着分子の活性化の促進のために、固相に共有結合され得る。基質結合抗体の使用は、（例えば、粒子が凝集化細胞に寄与する質量によってか、または、精製に有用な特性によって）細胞分離を容易にし得る。
【００２８】
いくつかの実施形態において、基質結合抗体が結合される固相は、微粒子である。いくつかの実施形態において、抗体は、（例えば、ビオチン−アビジン結合、ポリスチレンビーズ上のＣＯＯ基への共有結合、または改変ビーズ上のＮＨ２基への共有結合を介して）ラテックス微粒子（例えば、常磁性ビーズ）に結合される。いくつかの実施形態において、抗体は、（例えば、ビオチン−アビジン結合を介して）酸エッチングしたガラス粒子に結合される。いくつかの実施形態において、抗体は、（ビオチン−アビジン結合、または、ポリペプチドのＣＯＯ基またはＮＨ２基への共有結合を介して）凝集化ウシ血清アルブミンのような凝集化ポリペプチドに結合される。いくつかの実施形態において、抗体は、高分子量（例えば、約１，０００，０００Ｍｒより大きい）のデキストランサルフェートのような多糖に共有結合される。いくつかの実施形態において、ビオチン化抗体は、アビジン粒子に結合され、アビジン分子あたり４つの抗体分子を有する、四量体複合体を作製する。いくつかの実施形態において、抗体は、ビオチン−アビジン−ビオチン化抗体結合を介して、ビオチン化アガロースゲル粒子（Ｏｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，Ｕ．Ｓ．Ａ）に結合される。このような粒子は、代表的に、約３００〜５００ミクロンの大きさであり、そして、超音波水浴においてか、または、迅速な混合水浴において、作製され得る。
【００２９】
細胞−基質粒子（すなわち、細胞および基質結合抗体を含む粒子）は、凝集塊として、溶液から沈澱し得る。細胞−基質粒子はまた、例えば、粒子が常磁性ビーズである場合のように、適用された磁場によって、溶液から回収され得る。基質−結合抗体は、代表的には、細胞分離組成物中で、約０．１〜約５０．０×１０９粒子／ｌの間（例えば、０．２５〜１０．０×１０９粒子／ｌの間、１〜２０．０×１０９粒子／ｌの間、２〜１０．０×１０９粒子／ｌの間、０．５〜２×１０９粒子／ｌの間、２〜５×１０９粒子／ｌの間、５〜１０×１０９粒子／ｌの間、および１０〜３０×１０９粒子／ｌの間）の濃度にて、細胞分離組成物中で提供される。ここで、粒子は、そこに結合された抗体を有する固相粒子をいう。
【００３０】
細胞分離組成物はまた、二価カチオン（例えば、Ｃａ２＋およびＭｇ２＋）を含み得る。二価カチオンは、例えば、平衡塩類溶液（例えば、ハンクス平衡塩類溶液）によって、提供され得る。Ｃａ２＋イオンは、報告によれば、セレクチン媒介細胞−細胞接着およびインテグリン媒介細胞−細胞接着に重要である。
【００３１】
本発明の細胞分離組成物はまた、ヘパリンのような抗凝固剤を含み得る。ヘパリンは、血餅、および高カルシウム環境における血餅に関連する非特異的細胞消失を防ぎ得る。ヘパリンはまた、血小板凝集化を促進し得る。凝集された血小板は、顆粒球および単球に接着し得、これによって、単一血小板よりもヘテロタイプの凝集を増強する。ヘパリンは、ヘパリン塩（例えば、ヘパリンナトリウム、ヘパリンリチウム、または、ヘパリンカリウム）として供給され得る。
【００３２】
（細胞分離方法）
開示された組成物は、例えば、組織培養、免疫表現型の特徴付け、他の診断試験、さらなる精製、および治療的投与のための細胞を効率的に調製するために、使用され得る。特定の機構に束縛されることなく、本発明の組成物は、細胞表面抗原との相互作用を介して、および／または、細胞−細胞接着を刺激することによって（例えば、細胞表面接着因子の発現を増大することによって）、選択的に細胞を凝集し得る。凝集された細胞の部分は、凝集されていない細胞（これは、溶液中に残る）とは区別される。
【００３３】
凝集の後、凝集されていない細胞は、溶液相から回収され得る。細胞はまた、凝集塊から回収され得る。凝集された細胞は、例えば、二価カチオンキレート剤（例えば、ＥＤＴＡまたはＥＧＴＡ）を含む緩衝液に、この細胞を移すことによって、分離され得る。凝集塊から回収された細胞は、細胞表面抗原に対する抗体を用いることによって、さらに分離され得る。細胞はこの凝集塊を融点をちょうど超える温度まで加熱することによって、ゲル微粒子−抗体−細胞凝集物から回収され得る。
【００３４】
開示された組成物は、種々のサンプル（末梢血液（例えば、静脈穿刺によって得られる）、臍帯血（例えば、妊娠後得る）、および、骨髄（例えば、吸引から）を含む）から細胞を分離するために使用され得る。血球含有サンプルを細胞分離組成物と接触させ、特定の型の細胞の凝集を引き起こし得る。例えば、赤血球および分化骨髄性血液成分は、抗体を含む細胞分離組成物を使用して、これらの細胞の表面抗原に選択的に凝集され得る。開示される組成物および方法は、種々の細胞型（例えば、Ｔリンパ球、Ｔヘルパー細胞、Ｔサプレッサー細胞、Ｂ細胞、造血幹細胞、循環胚幹細胞、母系循環中の循環胎児細胞、および循環転移性腫瘍細胞を含む）を単離および濃縮するために使用され得る。開示された組成物は、任意の哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類、ブタ、ウシおよびウマ）の細胞を凝集するために使用され得る。
【００３５】
開示される組成物および方法は、同種異系移植および自系移植との関連で使用され得る。自系移植に関連して、開示される組成物および方法が、例えば、患者の血液または骨髄から所望されない細胞（例えば、転移性癌細胞）を除去するために使用され得る。所望の細胞（例えば、造血幹細胞）は、次いで、生命に関わる腫瘍細胞なしでか、または、これらの細胞がない状態で、患者に戻され得る。
【００３６】
腫瘍細胞の細胞表面タンパク質に対する抗体を含む細胞分離組成物は、患者の血液または骨髄から腫瘍細胞を取り除くために、使用され得る。このような組成物をまた、診断手順のために使用して、例えば、凝集塊中の腫瘍細胞を取得および検出し得、ここで、これらの腫瘍細胞は濃縮され、これによって、循環血液または骨髄中よりも容易に検出可能である。上皮成長因子のためのレセプターに対する抗体を含む細胞分離組成物は、上皮腫瘍（例えば、頭頸腫瘍）由来の腫瘍細胞を凝集するために使用され得る。エストロゲンレセ
プターに対する抗体を含む細胞分離組成物は、乳癌および卵巣癌由来の腫瘍細胞を凝集するために使用され得る。表面免疫グロブリンに対する抗体を含む細胞分離組成物は、慢性リンパ性白血病、プラスマ細胞腫および多発骨髄腫に関連する腫瘍細胞を凝集するために使用され得る。乳癌細胞は、その細胞表面上でＣＤ１５を発現し、そして、ＣＤ１５に対する抗体を含む細胞分離物を使用して、骨髄から取り除かれ得る。他の処方物を、細胞型および細胞表面タンパク質に基づいて作製し、患者の血液または骨髄からの他の癌（例えば、赤白血病、内皮癌および胃腸癌）由来の転移性腫瘍細胞を取得し得るか、または除去し得る。
【００３７】
（細胞分離キット）
細胞分離組成物は、包装材料と組合せられ得、そして、キットとして販売され得る。細胞分離組成物の成分は、個々にか、または、互いに組み合わされて包装され得る。いくつかの実施形態において、包装材料は、血液回収容器（例えば、血液バッグ、真空チューブ）を含む。キット中に含まれる包装材料は、代表的に、細胞分離組成物をどのように使用して特定の型の細胞を凝集し得るかを記載する使用説明書かまたはラベルを含む。このようなキットを産生するための成分および方法は、周知である。
【００３８】
本発明はさらに、以下の実施例中で記載され、これらの実施例は、特許請求の範囲中に記載の本発明の範囲を限定しない。
【実施例】
【００３９】
（実施例）
（実施例１：血球の分離）
本実施例は、以下に記載の細胞分離試薬を使用して細胞を分離する一般的な方法を記載する。等容量の細胞分離試薬（すなわち２５ｍｌ）を、５０ｍｌのコニカルチューブ中で、等容量のＥＤＴＡ抗結合体化ヘパリン化末梢血液サンプル（すなわち、２５ｍｌ）と合わせた。２０×１０６細胞／ｍｌより多い白血球数を含むサンプルを、血液の１部と、細胞分離試薬の２部で合わせた。チューブを、室温で、３０〜４５分間、ロッカープラットホーム上で穏やかに混合した。チューブを、３０〜５０分間、ラック中に真っ直ぐに立て、凝集した細胞と凝集していない細胞（この細胞は、溶液中に残る）とを区別した。凝集塊を捨てることなく、ピペットを使用して、上清から凝集していない細胞を除去した。回収した細胞を、２５ｍｌのＰＢＳで洗浄し、５００×ｇで７分間、遠心分離した。細胞ペレットを、４ｍｌのＰＢＳ中に再懸濁した。
【００４０】
細胞をまた、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）およびエチレングリコール−ビス（２−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラ酢酸（ＥＧＴＡ）を含む低張性溶解溶液を使用して、凝集塊から回収した。凝集した細胞を、２５ｍｌのＶｉｔａＬｙｓｅＴＭ（ＢｉｏＥｒｇｏｎｏｍｉｃｓ，Ｓｔ，Ｐａｕｌ，ＭＮ）で処理し、そして、ボルテックスした。１０分後、細胞を、印加磁場に曝露して、常磁性ビーズに結合する抗体に結合した細胞を回収するか、または、５００×ｇで７分間遠心分離して、上清を除去するかのどちらかをした。いずれの場合でも、細胞を、４ｍｌのＰＢＳに再懸濁した。
【００４１】
赤血球、白血球、リンパ球、単球、顆粒球、Ｔ細胞、Ｂ細胞およびＮＫ細胞の回収を、フローサイトメトリーおよび免疫表現型の決定によって、決定した。フローサイトメトリーの前に、白血球回収（すなわち、白血球細胞数）を、Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｏｎｙｘ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ａｎａｌｙｚｅｒで決定し、そして、サンプルを、ＰＢＳを用いて、１×１０７細胞／ｍｌの細胞数に調整した。容積を調整したサンプルの１００μｌアリコートを、ＦＩＴＣ標識化抗ＣＤ３抗体（Ｔ細胞反応性）か、ＰＥ標識化抗ＣＤ１９抗体（Ｂ細胞反応性）か、またはＰＥ標識化抗ＣＤ１６抗体（ＮＫ細胞反応性）のいずれかで、１５〜３０分間、暗中で室温にて染色した。２ｍｌのＰＢＳを各サンプルに添加し、次いで、このサンプルをボルテックスして、そして遠心分離して細胞をペレット化した。上清を捨てて、そして細胞ペレットをボルテックスし、そして０．５ｍｌのＰＢＳ中に再懸濁した。染色細胞および非染色細胞を、Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＸＬフローサイトメータ−を使用して、フローサイトメトリーにより分析した。赤血球、白血球、リンパ球、単球、顆粒球および血小板を、診断的な前進光散乱特性および側光散乱特性に基づいて、同定した。Ｂ細胞、Ｔ細胞、およびＮＫ細胞を、標識化抗体による光散乱および染色に基づいて同定した。
【００４２】
（実施例２：赤血球凝集）
表１に記載の試薬を使用して、実施例１に記載の方法に従って細胞を分離した。
【００４３】
【表１】
2008289506.tif 000002
【００４４】
分離の結果を表２に示す。赤血球を、上清から９９．７％除去した。リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞およびＮＫ細胞）は、単球および顆粒球に対して、上清中で濃縮された。
【００４５】
【表２】
2008289506.tif 000003
【００４６】
（実施例３：赤血球およびＣＤ２＋細胞の凝集）
表３に記載する試薬を使用して、実施例１に記載する方法に従って、細胞を分離した。
【００４７】
【表３】
2008289506.tif 000004
【００４８】
分離の結果を表４に示す。上清中においては、赤血球を９９．７％除去し、Ｔ細胞を９５．１％除去し、そしてＮＫ細胞を６９．１％除去した。Ｂ細胞は他の細胞と比べて、上清中に多く含まれた。
【００４９】
【表４】
2008289506.tif 000005
【００５０】
（実施例４：赤血球およびＣＤ７２＋細胞の凝集）
表５に記載する試薬を使用して、実施例１に記載する方法に従って、細胞を分離した。
【００５１】
【表５】
2008289506.tif 000006
【００５２】
分離の結果を表６に示す。上清中においては、赤血球を９９．５％除去し、そしてＢ細胞を８１．６％除去した。
【００５３】
【表６】
2008289506.tif 000007
【００５４】
（実施例５：赤血球、ＣＤ１５＋細胞およびＣＤ９＋細胞の凝集）
表７に記載する試薬を使用して、実施例１に記載する方法に従って細胞を分離した。
【００５５】
【表７】
2008289506.tif 000008
【００５６】
分離の結果を表８に示す。上清中においては、赤血球を９９．９％除去し、単球および顆粒球を９９．８％除去し、Ｂ細胞を７４％除去し、そしてＮＫ細胞を６４．９％除去した。さらに、分離前には２２６×１０６個／ｍｌで上清中に存在した血小板を、９９．４％除去し、１．４×１０６個／ｍｌまでに除去した。
【００５７】
【表８】
2008289506.tif 000009
【００５８】
（実施例６：赤血球、ＣＤ１５＋細胞、ＣＤ９＋細胞およびＣＤ２＋細胞の凝集）
表９に記載する試薬を使用して、実施例１に記載する方法に従って、細胞を分離した。
【００５９】
【表９】
2008289506.tif 000010
【００６０】
分離の結果を表１０に示す。上清中においては、赤血球を９９．９％除去し、単球および顆粒球を９９．９％除去し、Ｂ細胞を１６．８％除去し、ＮＫ細胞を２９％除去し、そしてＴ細胞を９１．５％除去した。さらに、分離前には２２６×１０６個／ｍｌで上清中に存在した血小板を、９９．９％除去し、０．３×１０６個／ｍｌまでに除去した。
【００６１】
【表１０】
2008289506.tif 000011
【００６２】
（実施例７：赤血球、ＣＤ１５＋細胞、ＣＤ９＋細胞およびＣＤ７２＋細胞の凝集）
表１１に記載する試薬を使用して、実施例１に記載する方法に従って、細胞を分離した。
【００６３】
【表１１】
2008289506.tif 000012
【００６４】
分離の結果を表１２に示す。上清中においては、赤血球を９９．９％除去し、単球を検出限界を越えて除去し、顆粒球を９９．９７％除去し、Ｂ細胞を９７．２％除去し、ＮＫ細胞を５４．９％除去した。さらに、分離前には２２６×１０６個／ｍｌで上清中に存在した血小板を、９９．９６％除去し、０．１×１０６個／ｍｌまでに除去した。
【００６５】
【表１２】
2008289506.tif 000013
【００６６】
（実施例８：赤血球、ＣＤ１５＋細胞、ＣＤ９＋細胞、ＣＤ１９＋細胞およびＣＤ１６＋細胞の凝集）
表１３に記載する試薬を使用して、実施例１に記載する方法に従って、細胞を分離した。Ｔ細胞およびＣＤ３＋細胞を上清から回収した。Ｂ細胞および顆粒球を凝集物から回収する。
【００６７】
【表１３】
2008289506.tif 000014
【００６８】
（実施例９：赤血球、ＣＤ１５＋細胞、ＣＤ９＋細胞、ＣＤ１９＋細胞、ＣＤ１６＋細胞およびＣＤ４＋細胞の凝集）
表１４に記載する試薬を使用して、実施例１に記載する方法に従って、細胞を分離した。ＣＤ８＋細胞を上清から回収した。
【００６９】
【表１４】
2008289506.tif 000015
【００７０】
（実施例１０：赤血球、ＣＤ１５＋細胞、ＣＤ９＋細胞、ＣＤ１９＋細胞、ＣＤ１６＋細胞およびＣＤ８＋細胞の凝集）
表１５に記載する試薬を使用して、実施例１に記載する方法に従って、細胞を分離する
。ＣＤ４＋細胞を上清から回収する。
【００７１】
【表１５】
2008289506.tif 000016
【００７２】
（実施例１１：赤血球、ＣＤ１５＋細胞、ＣＤ９＋細胞、ＣＤ１９＋細胞およびＣＤ２＋細胞の凝集）
表１６に記載する試薬を使用して、実施例１に記載する方法に従って、細胞を分離した。ＣＤ３４＋細胞を、＞５０％の純度かつ＞８０％の収率で上清から回収した。
【００７３】
【表１６】
2008289506.tif 000017
【００７４】
（実施例１２：赤血球、ＣＤ１５＋細胞、ＣＤ９＋細胞、ＣＤ２＋細胞およびＣＤ１６＋細胞の凝集）
表１７に記載する試薬を使用して、実施例１に記載する方法に従って、細胞を分離した。Ｂ細胞を上清から回収した。
【００７５】
【表１７】
2008289506.tif 000018
【００７６】
（他の実施形態）
本発明は、先に記載した説明および実施例と組み合せて記載されているものの、先の記載および実施例は、添付の特許請求の範囲において規定される、本発明の範囲を例示することが意図され、これを限定することは意図されない。他の局面、利点および改変は、この特許請求の範囲の範囲内である。