(57)【要約】【課題】イネ内穎褐変病の防除剤を提供する。【解決手段】イネに非病原性の新規微生物、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株を含有する。【選択図】    無し【特許請求の範囲】
【請求項１】
エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）CTB1206菌株（FERM AP-21274）。
【請求項２】
エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）CTB1206菌株（FERM AP-21274）を有効成分として含有する、イネ内穎褐変病の防除剤。
【請求項３】
請求項２に記載のイネ内穎褐変病の防除剤を含む水溶液を、イネに噴霧する、イネ内穎褐変病の防除方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エルビニア（Erwinia）属の新菌株、イネ内穎褐変病の防除剤及びイネ内穎褐変病の防除方法に関し、特に、イネ内穎褐変病の防除に有効な、非病原性のエルビニア属の新菌株、非病原性のエルビニア属の新菌株を含有するイネ内穎褐変病の防除剤、及び、非病原性のエルビニア属の新菌株を含有するイネ内穎褐変病の防除剤を用いたイネ内穎褐変病の防除方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
イネ内穎褐変病は、籾を変色させて、玄米やイネ種子の品質低下を引き起こす病気であり、近年、主に、関東以西でその発生の増加が問題となっている病気である。
【０００３】
イネ内穎褐変病の病原菌（Erwinia ananas）は、自然界において、イネに存在していることが、明らかになっている。
【０００４】
イネ内穎褐変病菌（Erwinia ananas）は、イネの発病籾をはじめ、栽培中のイネの枯死組織（部位）、出穂後の葯、及び、収穫後の切り株から分離されており、それ以外の部位あるは植物から分離されたという報告はない。
【０００５】
一般に、イネ内穎褐変病菌（Erwinia ananas）は、腐生性の強い細菌であり、環境条件が揃った時に病原性イネ内穎褐変病菌（Erwinia ananas）が増殖し、発病に至ると考えられる。
【０００６】
従来、イネ内穎褐変病菌（Erwinia ananas）の防除には、例えば、オキソリニック酸粉剤、オキソリニック酸水和剤（商品名：「スターナ水和剤」（「スターナ」（登録商標）、住友化学株式会社）や、フェリムゾン・フサライド粉剤（商品名：「ブラシン粉剤DL」（「ブラシン」（登録商標、住化武田農薬株式会社）や、カスガマイシン・フラサイド粉剤（商品名：「カスラブサイド３DL」（「カスラブサイド」（登録商標、株式会社クレハ）等が用いられている。
【０００７】
しかしながら、オキソリニック酸粉剤や、オキソリニック酸水和剤や、フェリムゾン・フサライド粉剤や、カスガマイシン・フラサイド粉剤等の化学農薬（殺菌剤）には、薬剤耐性菌の出現により、防除効果が低下するといった問題や、長期連用により、耕地生態系の単純化や環境への影響が懸念されている。
【０００８】
近年、このような背景から、化学農薬に代わる新たな防除技術として、環境への安全性が高いと想定される、自然界に存在する微生物を用いた生物防除技術、即ち、生物農薬（微生物農薬）を用いた防除技術が注目されている。
【０００９】
そのような技術として、例えば、イネばか苗病、イネごま葉枯病及びイネいもち病の防除を目的として、イネに対して弱病原性のフザリウム・モニリフォルメ（Fusarium moniliforme）をイネの種子に処理する技術（特許文献１を参照。）や、シュードモナス・エスピー（Pseudomonas sp.）CAB-02菌株を有効成分として含有するイネ苗の立枯性病害防除剤（特許文献２を参照。）や、トリコデルマ・アトロビリデ（Trichoderma atroviride）ＳＫＴ−１菌株、ＳＫＴ−２菌株又はＳＫＴ−３菌株を含有するイネいもち病、イネ苗立枯細菌病等の防除剤（特許文献３を参照。）や、イネの育苗時期に病害を引き起こす病原菌（イネばか苗病菌（Gibberella fujikuroi）、イネいもち病菌（Magnaporthe grisea）、イネごま葉枯病菌（Cochliobolus miyabeanus）、イネもみ枯細菌病菌（Burkfolderia glumae）、イネ苗立枯細菌病菌（Burkfolderia plantarii）、イネ褐条病菌（Burkfolderia avenae）、イネ苗立枯病菌であるフザリウム（Fusarium）属菌、ピシウム（Pythium）属菌、リゾプス（Rhizopus）属菌、トリコデルマ（Trichoderma）属菌のうちの少なくとも１つ）に対して、拮抗作用を有するタラロマイセス属（Talaromyces）に属する糸状菌（タラロマイセス・フラバス（Talaromyces flavus））を含有する、イネの育苗時期に発生する病害の防除剤（特許文献４を参照。）等が、既に、提案されている。
【００１０】
しかしながら、イネ内穎褐変病菌（Erwinia ananas）に有効な生物農薬（微生物農薬）は、本発明者の知る限り、非病原性エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）NR97菌株（１９８０年岡山県農試送付の健全玄米由来株）以外、これまで報告されていない。
【００１１】
また、オキソリニック酸水和剤は、イネ内穎褐変病菌（Erwinia ananas）に有効であるが、カスガマイシン・フラサイド粉剤や、フェリムゾン・フサライド粉剤は、イネいもち病菌（Magnaporthe grisea）には有効であるが、イネ内穎褐変病菌（Erwinia ananas）には、あまり効果がなく、イネ内穎褐変病菌（Erwinia ananas）に対して、有効で、安全な且つ薬剤耐性菌の出現の無い、新たな農薬の開発が長年望まれていた。
【００１２】
また、イネ内穎褐変病菌（Erwinia ananas）は、人畜無害の安全な細菌として考えられることから、イネ内穎褐変病に対して、非病原性のイネ内穎褐変病菌（Erwinia ananas）を利用できれば、安全性の観点からも望ましい、と考えられる。
【特許文献１】特開平５−６５２０９号公報
【特許文献２】特開平９−１２４４２７号公報
【特許文献３】特開平１１−２２５７４５号公報
【特許文献４】特開２００７−３１２９４号公報
【非特許文献１】畔上耕児等、「非病原性Erwinia ananasとファージによるイネ内穎褐変病菌の発病抑制」、日本植物病理学会報（講演要旨）（（Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ．）、７１（１）、Ｆｅｂｕｒｕａｒｙ、２００４）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は、以上のような観点からなされたものであって、イネに非病原性のエルビニア属の新菌株を提供すること、イネ内穎褐変病に対して防除効果が高く、環境汚染の無い、イネ内穎褐変病の防除剤及び防除方法を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者は、上記課題を解決するために、鋭意努力した結果、イネ内穎褐変病に対して防除効果が高く、環境汚染の無い、イネに非病原性のエルビニア属の新菌株を見出し、本発明を完成するに至った。
【００１５】
請求項１に記載の微生物は、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）CTB1206菌株（FERM AP-21274）である。
【００１６】
請求項１に係る新規微生物：エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）CTB1206菌株は、独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに、平成１９年３月１２日に寄託申請書とともに寄託し、平成１９年３月１６日付の受領書中に、以下の受領番号が付与されている。
【００１７】
Ｅｒｗｉｎｉａ  ａｎａｎａｓ  ＣＴＢ１２０６：ＦＥＲＭ  ＡＰ−２１２７４
請求項２に記載のイネ内穎褐変病の防除剤は、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）CTB1206菌株（FERM AP-21274）を有効成分として含有する。
【００１８】
請求項３に記載のイネ内穎褐変病の防除方法は、請求項２に記載のイネ内穎褐変病の防除剤を含む水溶液を、イネに噴霧する。
【発明の効果】
【００１９】
請求項１に記載のエルビニア・アナナス（Erwinia ananas）CTB1206菌株（FERM AP-21274）は、イネに非病原性であり、イネ内穎褐変病に対して防除効果が高く、環境汚染が無い。
【００２０】
請求項２に記載のイネ内穎褐変病の防除剤は、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）CTB1206菌株（FERM AP-21274）を有効成分として含有しているので、イネ内穎褐変病に対して高い防除効果を発揮する。
【００２１】
請求項３に記載のイネ内穎褐変病の防除方法は、請求項２に記載のイネ内穎褐変病の防除剤を含む水溶液を、イネに噴霧するようにすることで、イネ内穎褐変病に対して高い防除効果を発揮する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
以下、実施例に基づいて、本発明を更に詳しく説明する。
【実施例１】
【００２３】
ここでは、イネ内穎褐変病に対する発病抑制微生物の選抜方法について説明する。
【００２４】
エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）CTB1206菌株（FERM AP-21274）（以下、単に、「エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）CTB1206菌株」という。）の分離は、以下の方法によって行った。
【００２５】
一般に、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）には、イネに病原性を持つタイプと病原性を持たないタイプが存在している。
１．エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）の選択培地の調製
植物体には多くの微生物が常在おり、この中から目的の微生物（実施例１では、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas））を特異的に選択分離するために、選択培地（ＮＳＶＣ培地）を準備した。
【００２６】
エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）選択培地（ＮＳＶＣ培地）の組成及び調整方法は、以下の通りである。
【００２７】
この例では、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）選択培地（ＮＳＶＣ培地）は、まず、酵母エキス５ｇ、ペプトン１０ｇ、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）５０ｇ、寒天１５ｇ、蒸留水１０００ｍｌ、ｐＨ６．８の組成で構成される基礎培地を準備し、この基礎培地を、高圧滅菌（１２１℃、２０分間）した後、シクロヘキシミド１００ｍｇ及びバンコマイシン１００ｍｇを添加することにより作製した。
２．分離菌株の作製
次に、表１に、その植物名、採取した部位、採取時期及び採取場所を示す、植物を採取した。
【００２８】
【表１】
2008245621.tif 000002
次に、表１に示す採集植物の各々（植物１、植物２、植物３、植物４及び植物５の各々）１００ｍｇに、滅菌水５．０ｍｌを加えた後、乳棒及び乳鉢を用いて磨砕したものを、各々、用意した。
【００２９】
次に、上述したエルビニア・アナナス（Erwinia ananas） 選択培地（ＮＳＶＣ培地）に、以上により作製した磨砕液を１０−２に希釈した希釈液１００μｌを塗沫し、平板希釈法により磨砕液から黄色細菌３６菌株を分離し、凍結保存（−８０℃）した（保護剤の組成：蒸留水に、スキムミルク（Difco）１０％、グルタミン酸ナトリウム（特級）１％、保護剤のpＨ：無調整）。
【００３０】
実施例１では、植物１から７菌株を、植物２から６菌株を、植物３から７菌株を、植物４から８菌株を、及び、植物５から８菌株を分離した。
３．非病原性エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）の選抜
（１）接種源の調製
１）前培養
まず、ＰＳＡ（potato sucrose agar）斜面培地の各々に、上記に示す３６菌株の各々を移植し、２８℃で、２日間、上記に示す３６菌株の各々を増殖した。
【００３１】
この例では、栄養培地として、ＰＳＡ（potato sucrose agar）培地、より具体的に説明すると、じゃがいも２００ｇの煎汁、Ｃａ（Ｃｏ３）２・４Ｈ２Ｏ    ０．５ｇ、Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ    ２．０ｇ、ペプトン    ５．０ｇ、サッカロース    ２０ｇ、寒天    ２０ｇ及び蒸留水    １０００ｍｌ、ｐＨ６．８のＰＳＡ（potato sucrose agar）傾斜培地に、上記に示す３６菌株の各々を移植し、２８℃で、２日間、上記に示す３６菌株の各々を増殖させた。
【００３２】
次に、このようにして培養した３６菌株の各々に滅菌水を加え、菌濃度を約１×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した、３６菌株の懸濁液を準備した。
【００３３】
２）接種用イネ
鳥取県農業試験場内ほ場（中南8号北）で栽培した、出穂期の水稲コシヒカリを使用した。
【００３４】
３）接種
次に、上記１）にて準備した接種源（各細菌懸濁液）120 mlを、コシヒカリ6株（畦畔沿いの３株×２条）に均一に噴霧した。
【００３５】
尚、対照として、鳥取県農業試験場保存のイネ内穎褐変病菌エルビニア・アナナス（Erwinia ananas ）CTB 1061菌株を供試した。
【００３６】
また、無接種区には、滅菌水を噴霧した。
【００３７】
４）発病調査
菌接種コシヒカリの、出穂１４日後に肉眼観察で発病の少ない処理区を選抜した。
【００３８】
また、収穫・自然乾燥後、全穂について内穎褐変籾率を調査し、防除価を算出した。
【００３９】
尚、防除価は、下記（式１）に基づいて算出した。
【００４０】
防除価＝［（無処理区発病苗率−薬剤処理区発病苗率）／無処理区発病苗率］×１００（式１）
（２）分離細菌の発病抑制効果
上記植物からエルビニア・アナナス（Erwinia ananas）選択培地（ＮＳＶＣ培地）で分離した黄色細菌のイネ内穎褐変病発病抑制効果についての試験結果を、図１に示す。
【００４１】
尚、図１中では、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）CTB1206菌株を、ＣＴＢ１２０８と表示している。
【００４２】
図１により、以下のことが、明らかになった。
【００４３】
１）分離細菌の中に、病原性の内穎褐変病菌エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）と推定される菌株が、４菌株存在し（発病籾から２菌株、健全籾から２菌株）、それ以外の３４菌株は、イネ穂に影響を及ぼさない非病原性細菌であった。
【００４４】
２）菌無接種区（自然発生）では、発病籾率８．６％と多発生であった。
【００４５】
３）コシヒカリの出穂後１４日目の肉眼観察では、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）CTB1206菌株が最も高い発病抑制効果を示した。
【００４６】
４）収穫後調査の結果では、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株を含めて１１菌株が防除価８１以上の高い発病抑制効果を示した。
【００４７】
５）以上の結果から、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株を、本発明に係る非病原性のエルビニア・アナナス（Erwinia ananas）として選抜した。
【００４８】
尚、本発明に係る非病原性の新菌株は、グラム反応が陰性で、発酵性、運動性があり、非水溶性黄色色素を産生する点、また、メリビオース、ソルビオース、ソルビトール、セロビオース、ラクトース、グリセロールから酸を産生し、イノシトール、デキストリンを利用せず、インドールを産生し、硝酸塩還元、オキシターゼ活性およびフェニルアラニン・デアミナーゼの活性がない、という科学的性質等に基づいて、分類学上の位置が、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）であることが、確認された。
【実施例２】
【００４９】
ここでは、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の選抜培地について説明する。
【００５０】
まず、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）選択培地（ＮＳＶＣ培地）に、上述した磨砕液を塗沫し、２８℃で６日間培養後に調査した際の、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）及びエルビニア・ハービコーラ（Erwinia herbicola）の集落（コロニー）の一例の性状を、図２に示す。
【００５１】
エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）選択培地（ＮＳＶＣ培地）を用いた場合、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）（病原性のタイプと非病原性のタイプ（この中に、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株も含まれる。）の集落（コロニー）及びエルビニア・ハービコーラ（Erwinia herbicola）の集落（コロニー）のいずれも、円状の黄色コロニーとなる。
【００５２】
次に、このエルビニア・アナナス（Erwinia ananas）選択培地（ＮＳＶＣ培地）の改良を試みた。
【００５３】
即ち、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）選択培地（ＮＳＶＣ培地）の酵素エキスを、ｍｙｏ−イノシトールに代えたものを準備した（以下、この選択培地を、「エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）改良選択培地（ＮＳＶＣ−Ｉｎ培地）」という。）。
【００５４】
エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）改良選択培地（ＮＳＶＣ−Ｉｎ培地）の組成及び調整方法は、以下の通りである。
【００５５】
この例では、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）改良選択培地（ＮＳＶＣ−Ｉｎ培地）は、まず、ｍｙｏ−イノシトール１０ｇ、ペプトン１０ｇ、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）５０ｇ、寒天１５ｇ、蒸留水１０００ｍｌ、ｐＨ６．８の組成で構成される基礎培地を準備し、この基礎培地を、高圧滅菌（１２１℃、２０分間）した後、シクロヘキシミド１００ｍｇ及びバンコマイシン１００ｍｇを添加することにより作製した。
【００５６】
次に、実施例１と同様にして、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）改良選択培地（ＮＳＶＣ−Ｉｎ培地）に、磨砕液の１０−２希釈液１００μｌを塗沫し、２８℃で６日間培養後に調査した際の、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）の集落（コロニー）の性状を観察した。
【００５７】
エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）改良選択培地（ＮＳＶＣ−Ｉｎ培地）に、上述した磨砕液を塗沫し、２８℃で６日間培養後に調査した際の、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）の集落（コロニー）の一例の性状を、図３に示す。
【００５８】
エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）選択培地（ＮＳＶＣ培地）を用いた場合には、黄色細菌が検出され、また、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）改良選択培地（ＮＳＶＣ−Ｉｎ培地）を用いた場合には、乳白色細菌が検出され、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）選択培地（ＮＳＶＣ培地）を用いた場合に検出された黄色細菌数は、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）改良選択培地（ＮＳＶＣ−Ｉｎ培地）を用いた場合に検出された乳白色細菌数の約４〜７０倍であった。
【００５９】
また、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）選択培地（ＮＳＶＣ培地）及びエルビニア・アナナス（Erwinia ananas）改良選択培地（ＮＳＶＣ−Ｉｎ培地）を用いた場合の、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）、エルビニア・ハービコーラ（Erwinia herbicola）及びその他の微生物の培養特性の実験結果を、図４に示す。
【００６０】
尚、図４中では、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株を、非病原性エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）ＣＴＢ１２０８と表示している。
【００６１】
エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）選択培地（ＮＳＶＣ培地）を用いた場合には、多数の微生物（細菌）の中から、主として、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）と、エルビニア・ハービコーラ（Erwinia herbicola）が選択される。
【００６２】
一方、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）改良選択培地（ＮＳＶＣ−Ｉｎ培地）を用いると、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）のみが選択され、この中には、病原性エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）と、一部の非病原性エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）とが含まれ、この非病原性エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）の中には、本発明に係る非病原性のエルビニア・アナナス（Erwinia ananas）である、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株が含まれる。
【００６３】
図４から明らかなように、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）改良選択培地（ＮＳＶＣ−Ｉｎ培地）を用いた場合、生育が良好で特徴的な乳白色の大型コロニー（集落直径：６．０ｍｍ以上７．５ｍｍ以下）の中では、病原性エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）の割合は、約７０％で、一方、非病原性エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）（この中に、非病原性のエルビニア・アナナス（Erwinia ananas）である、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株が含まれる。）の割合が、約３０％であった。
【００６４】
また、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）改良選択培地（ＮＳＶＣ−Ｉｎ培地）を用いた場合、特徴的な乳白色或いは黄白色の小型コロニー（集落直径：１．３ｍｍ以上３．８ｍｍ以下）の中に、非病原性エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）が存在したが、この中には、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株が含まれていなかった。
【００６５】
以上より、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）改良選択培地（ＮＳＶＣ−Ｉｎ培地）では、非病原性エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）は、生育が良好なタイプと、不良なタイプとに分けられ、非病原性のエルビニア・アナナス（Erwinia ananas）である、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の生育は良好であることが、判った。
【００６６】
即ち、ｍｙｏ−イノシトール、ペプトン、塩化ナトリウム、寒天、蒸留水、シクロヘキシミド及びバンコマイシンを含有する、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）改良選択培地（ＮＳＶＣ−Ｉｎ培地）は、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の選択培地として用いることができる。
【実施例３】
【００６７】
ここでは、本発明に係る非病原性のエルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株を用いたイネ内穎褐変病の防除方法の好ましい例を例示的に説明する。
【００６８】
まず、凍結乾燥されたエルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株に滅菌水を加えた後、栄養培地（例えば、ＰＳＡ（potato sucrose agar）培地）で増殖させる。
【００６９】
この例では、栄養培地として、ＰＳＡ（potato sucrose agar）培地、より具体的に説明すると、じゃがいも２００ｇの煎汁、Ｃａ（Ｃｏ３）２・４Ｈ２Ｏ  ０．５ｇ、Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ  ２．０ｇ、ペプトン  ５．０ｇ、サッカロース  ２０ｇ、寒天  ２０ｇ及び蒸留水  １０００ｍｌ、ｐＨ６．８のＰＳＡ（potato sucrose agar）傾斜培地に、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株を植菌し、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株を増殖させた。
【００７０】
次に、以上により増殖させた、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株に水を加え、防除剤とした。
【００７１】
このとき、防除剤のエルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度は、特に、以下の場合に限定されることは無いが、例えば、１．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌ以上１．０×１０８ｃｆｕ個／ｍｌ以下の範囲にすることが好ましい。
【００７２】
以上のようにして調製した防除剤を、イネに散布する。
【００７３】
この例では、防除剤として、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整したものを用いた。
【００７４】
次に、イネ内穎褐変病の防除効果試験の方法について説明する。
【００７５】
図５は、２００４年において、自然発生区において、イネ内穎褐変病の防除効果試験の試験方法の一例と、その結果を示す図である。
【００７６】
尚、図５中では、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株を、非病原性エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）ＣＴＢ１２０８と表示している。
【００７７】
この実験では、自然発生区において、以下の６つの群を作製した。
【００７８】
１．エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、１回（出穂期）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を、噴霧した群を作製した。
【００７９】
２．エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂３日後）、各々、１回当たり、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を噴霧した群を作製した。
【００８０】
３．フェリムゾン・フサライド粉剤を、その使用方法に従って、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂３日後）、各々、１回当たり、４Ｋｇ／１０アール（ａ）を散布した群を作製した。
【００８１】
４．カスガマイシン・フサライド粉剤を、その使用方法に従って、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂３日後）、各々、１回当たり、４Ｋｇ／１０アール（ａ）を散布した群を作製した。
【００８２】
５．オキソリニック酸粉剤を、その使用方法に従って、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂３日後）、各々、１回当たり、４Ｋｇ／１０アール（ａ）を散布した群を作製した。
【００８３】
６．無処理の群を作製した。
【００８４】
自然発生区において、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、１回（出穂期）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を、噴霧した群、及び、自然発生区において、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂３日後）、各々、１回当たり、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を噴霧した群は、いずれも、自然発生区において、フェリムゾン・フサライド粉剤を、その使用方法に従って、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂３日後）、各々、１回当たり、４Ｋｇ／１０アール（ａ）を散布した群、及び、自然発生区において、カスガマイシン・フサライド粉剤を、その使用方法に従って、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂３日後）、各々、１回当たり、４Ｋｇ／１０アール（ａ）を散布した群に比べ、イネ内穎褐変病に対し、高い防除効果を発揮することが、明らかになった。
【００８５】
また、自然発生区において、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、１回（出穂期）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を、噴霧した群、及び、自然発生区において、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂３日後）、各々、１回当たり、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を噴霧した群は、自然発生区において、オキソリニック酸粉剤を、その使用方法に従って、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂３日後）、各々、１回当たり、４Ｋｇ／１０アール（ａ）を散布した群と、イネ内穎褐変病に対し、概ね同等の防除効果を発揮することが、明らかになった。
【００８６】
また、図６は、２００４年において、病原細菌接種区において、イネ内穎褐変病の防除効果試験の試験方法の他の一例と、その結果を示す図である。
【００８７】
尚、図６中では、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株を、非病原性エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）ＣＴＢ１２０８と表示している。
【００８８】
この実験では、病原細菌接種区において、まず、病原細菌接種区において栽培した、イネ（品種：コシヒカリ）に、病原性エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）を接種した（２００４年７月３０日）。
【００８９】
次に、病原細菌接種区に、以下の６つの群を作製した。
【００９０】
１．エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、1回（出穂期）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を、噴霧した群を作製した。
【００９１】
２．エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂３日後）、各々、１回当たり、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を噴霧した群を作製した。
【００９２】
３．フェリムゾン・フサライド粉剤を、その使用方法に従って、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂３日後）、各々、１回当たり、４Ｋｇ／１０アール（ａ）を散布した群を作製した。
【００９３】
４．カスガマイシン・フサライド粉剤を、その使用方法に従って、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂３日後）、各々、１回当たり、４Ｋｇ／１０アール（ａ）を散布した群を作製した。
【００９４】
５．オキソリニック酸粉剤を、その使用方法に従って、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂３日後）、各々、１回当たり、４Ｋｇ／１０アール（ａ）を散布した群を作製した。
【００９５】
６．無処理の群を作製した。
【００９６】
病原細菌接種区において、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、１回（出穂期）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を、噴霧した群、及び、自然発生区において、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂３日後）、各々、１回当たり、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を噴霧した群は、いずれも、病原細菌接種区において、フェリムゾン・フサライド粉剤を、その使用方法に従って、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂３日後）、各々、１回当たり、４Ｋｇ／１０アール（ａ）を散布した群、病原細菌接種区において、カスガマイシン・フサライド粉剤を、その使用方法に従って、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂３日後）、各々、１回当たり、４Ｋｇ／１０アール（ａ）を散布した群、及び、病原細菌接種区において、オキソリニック酸粉剤を、その使用方法に従って、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂３日後）、各々、１回当たり、４Ｋｇ／１０アール（ａ）を散布した群に比べ、イネ内穎褐変病に対し、高い防除効果を発揮することが、明らかになった。
【００９７】
また、図７は、２００５年において、自然発生区において、イネ内穎褐変病の防除効果試験の試験方法の他の一例と、その結果を示す図である。
【００９８】
尚、図７中では、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株を、非病原性エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）ＣＴＢ１２０８と表示している。
【００９９】
この実験では、自然発生区において、以下の７つの群を作製した。
【０１００】
１．エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、１回（出穂２日前）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を、噴霧した群を作製した。
【０１０１】
２．エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、１回（出穂期）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を、噴霧するという群を作製した。
【０１０２】
３．エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、１回（出穂２日後）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を、噴霧するという群を作製した。
【０１０３】
４．エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、１回（出穂４日後）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を、噴霧するという群を作製した。
【０１０４】
５．エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、２回（出穂前日及び出穂４日後）、各々、１回当たり、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を噴霧した群を作製した。
【０１０５】
６．オキソリニック酸水和剤を、その使用方法に従って、１０００倍希釈のオキソリニック酸水和剤（オキソリニック酸水和剤１ｇを１リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）の水に溶かしたもの）を、イネ（品種：コシヒカリ）に、１回（出穂期）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を噴霧した群を作製した。
【０１０６】
７．無処理の群を作製した。
【０１０７】
自然発生区において、  エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、１回（出穂期）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を、噴霧するという群、自然発生区において、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、１回（出穂２日後）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を、噴霧した群、及び、自然発生区において、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、１回（出穂４日後）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を、噴霧するという群は、いずれも、自然発生区において、オキソリニック酸水和剤を、その使用方法に従って、１０００倍希釈のオキソリニック酸水和剤（オキソリニック酸水和剤１ｇを１リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）の水に溶かしたもの）を、１回（出穂期）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を噴霧した群に比べ、イネ内穎褐変病に対し、概ね同等の防除効果を発揮することが、明らかになった。
【０１０８】
また、図８は、２００５年において、自然発生区において、イネ内穎褐変病の防除効果試験の試験方法の他の一例と、その結果を示す図である。
【０１０９】
この実験では、自然発生区において、以下の３つの群を作製した。
【０１１０】
１．エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調製した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、１回（出穂期）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を、噴霧するという群を作製した。
【０１１１】
２．オキソリニック酸水和剤を、その使用方法に従って、１０００倍希釈のオキソリニック酸水和剤（オキソリニック酸水和剤１ｇを１リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）の水に溶かしたもの）を、イネ（品種：コシヒカリ）に、１回（出穂期）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を噴霧した群を作製した。
【０１１２】
３．無処理の群を作製した。
【０１１３】
自然発生区において、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株の菌濃度を、５．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整した防除剤を、イネ（品種：コシヒカリ）に、１回（出穂期）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を、噴霧した群は、自然発生区において、オキソリニック酸水和剤を、その使用方法に従って、１０００倍希釈のオキソリニック酸水和剤（オキソリニック酸水和剤１ｇを１リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）の水に溶かしたもの）を、イネ（品種：コシヒカリ）に、１回（出穂期）、１２０リットル（Ｌｉｔｔｅｒ）／１０アール（ａ）を噴霧した群に比べ、イネ内穎褐変病に対し、概ね同等の防除効果を発揮することが、明らかになった。
【０１１４】
以上の実験結果から、この防除剤は、イネの出穂期からイネの出穂後４日までの間に、１回、噴霧すれば、イネ内穎褐変病に対し、オキソリニック酸粉剤や、オキソリニック酸水和剤と同等又は同等以上の防除効果が得られる、ということが、明らかになった。
【０１１５】
以上、詳細に説明したとおり、本発明に係るエルビニア・アナナス（Erwinia ananas）CTB1206菌株は、イネに非病原性であり、イネ内穎褐変病に対して防除効果が高く、環境汚染が無い。
【０１１６】
また、本発明に係るイネ内穎褐変病の防除剤は、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）CTB1206菌株を含有しているので、イネ内穎褐変病に対して高い防除効果を発揮する。
【０１１７】
また、本発明に係るイネ内穎褐変病の防除剤は、生物農薬であるので、化学農薬にみられるような薬剤耐性菌の出現により、防除効果が低下するといった問題や、長期連用により、耕地生態系の単純化や環境への影響が、少ない。
【０１１８】
また、本発明に係るイネ内穎褐変病の防除剤は、自然界に存在する、非病原性のエルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株を用いているので、安全性に優れている。
【０１１９】
また、本発明に係るイネ内穎褐変病の防除方法は、イネ内穎褐変病に対して高い防除効果を発揮する。
【０１２０】
また、本発明に係るイネ内穎褐変病の防除剤及び本発明に係るイネ内穎褐変病の防除方法を用いれば、イネ内穎褐変病の防除ができるので、変色の無いきれいな籾を得ることができ、玄米やイネ種子の品質低下が生じない。
【産業上の利用可能性】
【０１２１】
本発明に係るエルビニア・アナナス（Erwinia ananas）  CTB1206菌株は、イネに非病原性であり、イネ内穎褐変病に対して防除効果が高く、環境汚染が無いので、イネ内穎褐変病の防除剤として、また、イネ内穎褐変病の防除方法に適用できる。
【図面の簡単な説明】
【０１２２】
【図１】数種の植物からエルビニア・アナナス（Erwinia ananas）選択培地（ＮＳＶＣ培地）で分離した黄色細菌のイネ内穎褐変病発病抑制効果についての試験結果を示す図である。
【図２】エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）選択培地（ＮＳＶＣ培地）に、上述した磨砕液を塗沫し、２８℃で６日間培養後に調査した際の、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）の集落（コロニー）の一例の性状の写真である。
【図３】エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）選択培地（ＮＳＶＣ−Ｉｎ改良選択培地）に、上述した磨砕液を塗沫し、２８℃で６日間培養後に調査した際の、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）の集落（コロニー）の一例の性状の写真である。
【図４】エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）選択培地（ＮＳＶＣ培地）及びエルビニア・アナナス（Erwinia ananas）選択培地（ＮＳＶＣ−Ｉｎ改良選択培地）を用いた場合の、エルビニア・アナナス（Erwinia ananas）、エルビニア・ハービコーラ（Erwinia herbicola）及びその他の微生物の培養特性の実験結果を示す図である。
【図５】自然発生区において、イネ内穎褐変病の防除効果試験の試験方法の一例と、その結果を示す図である。
【図６】病原細菌接種区において、イネ内穎褐変病の防除効果試験の試験方法の他の一例と、その結果を示す図である。
【図７】自然発生区において、イネ内穎褐変病の防除効果試験の試験方法の他の一例と、その結果を示す図である。
【図８】自然発生区において、イネ内穎褐変病の防除効果試験の試験方法の他の一例と、その結果を示す図である。
【図１】
2008245621.tif 000003
【図２】
2008245621.tif 000004
【図３】
2008245621.tif 000005
【図４】
2008245621.tif 000006
【図５】
2008245621.tif 000007
【図６】
2008245621.tif 000008
【図７】
2008245621.tif 000009
【図８】
2008245621.tif 000010