(57)【要約】【課題】破骨細胞の分化・増殖を阻害し、骨吸収を抑制することにより、十分な骨粗鬆症の予防・治療改善効果が期待でき、飲食品、医薬品、化粧品の原料として用いることができる新規化合物、及び破骨細胞分化・増殖阻害組成剤を提供する。【解決手段】下式（１）で示される新規化合物。この新規化合物は、破骨細胞分化・増殖阻害剤として有効であり、更には、飲食品、医薬品、化粧品の原料として用いることができる。2008007453.tif 000020【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式（１）で示される新規化合物。
【化１】
2008007453.tif 000016
【請求項２】
飲食品、医薬品又は化粧品の原料として用いられる請求項１記載の新規化合物。
【請求項３】
下記化学式（１）で示される化合物及び／又は下記化学式（２）で示される化合物を有効成分として含有することを特徴とする破骨細胞分化・増殖阻害剤。
【化２】
2008007453.tif 000017
【化３】
2008007453.tif 000018
【請求項４】
更に、下記化学式（３）で示される化合物を有効成分として含有する請求項３記載の破骨細胞分化・増殖阻害剤。
【化４】
2008007453.tif 000019
【請求項５】
マコモタケの有機溶媒抽出物から調製された組成物を含有する請求項３又は４記載の破骨細胞分化・増殖阻害剤。
【請求項６】
マコモタケの菌えい部の有機溶媒抽出物から調製された組成物を含有する請求項５記載の破骨細胞分化・増殖阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば、飲食品、医薬品、化粧品の原料として用いることができる新規化合物、及び破骨細胞分化・増殖阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
高齢化が年々進んでいる日本の現代社会においては、老化に伴う様々な疾患に悩む人々が増加している。例えば、老化に伴う疾患の一つである骨粗鬆症は、骨量が減少して骨が非常に脆くなる症状をいう。
【０００３】
正常な骨では、古くなった骨の部分を破骨細胞が分解する骨吸収と、骨吸収されたところに骨芽細胞が新しい骨を作り出す骨形成がバランスよく行われて、一定の骨量に保たれている。しかし、カルシウムの摂取不足、カルシウム吸収能力の低下、ホルモンバランスの乱れ等により、骨の代謝回転のバランスが崩れて骨吸収が骨形成を上回ることによって骨粗鬆症を招きやすくなる。特に、閉経後の女性は、ホルモンバランスの乱れにより、骨粗鬆症になりやすい。
【０００４】
したがって、骨粗鬆症に対しては、骨吸収を抑制するか、又は骨形成を促進することが必要であると考えられている。
【０００５】
そのため、従来の骨粗鬆症の治療薬としては、活性型ビタミンＤ３製剤、ビタミンＫ２製剤、エストロゲン製剤、カルシトシン製剤、カルシウム製剤、ビスホスホネート製剤等が用いられているが、これらの治療薬には以下のような副作用の問題があった。
【０００６】
１）活性型ビタミンＤ３製剤：血中カルシウム量の増え過ぎによる食欲不振、倦怠感、腎不全等。
２）ビタミンＫ２製剤：心筋梗塞の場合などに服用するワーファリンという薬の効果低下。
３）エストロゲン製剤：心筋梗塞や脳卒中の危険性拡大、乳癌及び子宮体癌の発症率拡大等。
４）カルシトシン製剤：吐き気、顔面紅潮等。
５）カルシウム製剤：胃腸障害。
６）ビスホスホネート製剤：消化器症状、特に食道潰瘍。
７）活性型ビタミンＤ３製剤とカルシウム製剤の併用による副作用の相乗効果。
【０００７】
そのため、長期間摂取しても副作用の問題がなく、より安全性の高い骨粗鬆症治療剤の開発も進められており、例えば、下記特許文献１には、乳由来の塩基性タンパク質画分を有効成分とする骨強化剤が開示されている。
【０００８】
下記特許文献２には、乳由来の塩基性タンパク質画分、特にラクトフェリンを有効成分とする破骨細胞分化抑制因子産生促進剤が開示されている。
【０００９】
下記特許文献３には、カゼインホスホペプチド及びゲニステインを有効成分とする骨強化剤が開示されている。
【００１０】
下記特許文献４には、コラーゲン又はコラーゲンの酵素分解物を有効成分とする骨粗鬆症予防・治療剤が開示されている。
【００１１】
下記特許文献５には、イソフラボンを主たる有効成分とする骨形成促進及び骨塩量減少防止用組成物が開示されている。
【特許文献１】特許第３１１２６３７号公報
【特許文献２】特開２００４−１１５５０９号公報
【特許文献３】特開２００１−３０２５３９号公報
【特許文献４】特開平１１−１２１９２号公報
【特許文献５】特開平１０−１１４６５３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
上記特許文献に記載されている食品由来の成分を有効成分とする様々な骨粗鬆症治療剤は、健康食品等として手軽に摂取でき、副作用の問題も少ないものの、いずれも十分満足できる効果が期待できるとは言えなかった。
【００１３】
したがって、本発明は、例えば、破骨細胞の分化・増殖を阻害し、骨吸収を抑制することにより、十分な骨粗鬆症の予防・治療改善効果が期待でき、飲食品、医薬品、化粧品の原料として用いることができる新規化合物、及び破骨細胞分化・増殖阻害剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
マコモタケは、漢方薬の原料として利用されており、口渇の抑制、解熱、整腸、消化、解毒など様々な生理活性効果が知られている。本発明者らは、豊富な食経験により安全性が確認されているマコモタケのさらなる生理活性を追及したところ、マコモタケの新たな生理活性効果として骨粗鬆症予防・治療効果を見出した。そこで、その生理活性成分について更なる研究を行った結果、本発明を達成するに至った。
【００１５】
すなわち、本発明の新規化合物は、下記化学式（１）で示される。
【００１６】
【化１】
2008007453.tif 000002
【００１７】
本発明の新規化合物は、飲食品、医薬品又は化粧品の原料として用いられることが好ましい。
【００１８】
一方、本発明の破骨細胞分化・増殖阻害剤は、下記化学式（１）で示される化合物及び／又は下記化学式（２）で示される化合物を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１９】
【化２】
2008007453.tif 000003
【００２０】
【化３】
2008007453.tif 000004
【００２１】
また、本発明の破骨細胞分化・増殖阻害剤は、更に、下記化学式（３）で示される化合物を有効成分として含有することが好ましい。
【００２２】
【化４】
2008007453.tif 000005
【００２３】
また、本発明の破骨細胞分化・増殖阻害剤は、マコモタケの有機溶媒抽出物から調製された組成物を含有することが好ましい。
【００２４】
また、本発明の破骨細胞分化・増殖阻害剤は、マコモタケの菌えい部の有機溶媒抽出物から調製された組成物を含有することが好ましい。
【発明の効果】
【００２５】
本発明の新規化合物は、例えば、飲食品、医薬品、化粧品などの原料として用いることができ、骨粗鬆症の予防・治療改善効果が期待できる。
【００２６】
また、本発明の破骨細胞分化・増殖阻害剤は、豊富な食経験により安全性が確認されているマコモタケ由来の成分を有効成分として含有するものであり、安全性が高く、更には十分な骨粗鬆症の予防・治療改善効果が期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
本発明の新規化合物は、下記化学式（１）で表される。
【００２８】
【化５】
2008007453.tif 000006
【００２９】
上記化学式（１）で表す化合物（以下、「化合物（１）」と記す）は、有機溶媒に可溶な化合物であり、例えば、マコモタケの溶媒抽出物を精製することで得られる。
【００３０】
すなわち、まず、抽出原料となるマコモタケを、必要に応じて乾燥あるいは粉砕処理する。なかでも、マコモタケの菌えい部は、上記化合物（１）の含有量が高いことから、マコモタケの菌えい部を抽出原料としてもちいることで、上記化合物（１）の回収率を向上できる。ここで、マコモタケとは、イネ科マコモ属・多年草の水生植物であるマコモの若茎が黒穂菌によって肥大生育したものであり、中国、台湾を中心とした東アジアから東南アジアにかけて栽培されている中国野菜である。近年では日本でも栽培が行われており、これらの市販品を簡単に入手することができる。
【００３１】
次いで、この抽出原料のマコモタケを、抽出溶媒中に室温〜加温下で浸漬して、溶媒抽出物を得る。抽出溶媒としては、特に限定はなく、低級アルコール類（メタノール、エタノールなど）、アセトン、アセトニトリル、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチルなどが挙げられ、これらを、単独、もしくは２種類以上組み合わせて用いることができる。特に好ましい抽出溶媒としては、メタノール、エタノール、クロロホルム、ジクロロメタン及びこれらの混合溶媒が挙げられる。
【００３２】
この抽出溶媒には、夾雑物が多量に含まれている場合が多いことから、例えば、マコモタケを低級アルコール類あるいはアセトンなどの水溶性有機溶媒に、室温〜加温下で浸漬して、水溶性溶媒抽出画分を得た後、クロロホルム、ジクロロメタンなどの非水溶性有機溶媒を用いて脂溶性成分と水溶性成分に分離して、非水溶性有機溶媒抽出画分を回収することが好ましい。こうすることで、夾雑物の極めて少ないマコモタケの溶媒抽出物（非水溶性有機溶媒抽出画分）を得ることができる。また、この溶媒抽出物は必要に応じて濃縮してもよく、更に乾燥してもよい。
【００３３】
次いで、この溶媒抽出物を、カラム分離精製、再結晶等により精製することで、上記化合物（１）を得ることができる。
【００３４】
溶媒抽出物の精製処理は、まずクロマトグラフィーを用いて一次精製して得られる粗精製物を、再結晶化、カラムクロマトグラフィー、薄層カラムクロマトグラフィーから選ばれた少なくとも１種以上の方法により二次精製することが好ましい。こうすることで、上記化合物（１）の回収率を向上できる。
【００３５】
上記一次精製に用いるクロマトグラフィーとしては、特に限定はなく、順相カラムクロマトグラフィー、逆相カラムクロマトグラフィー、サイズ排除カラムクロマトグラフィー、イオン交換カラムクロマトグラフィー等の従来一般的なクロマトグラフィーを用いることができる。また、一次精製方法としては、特に限定はなく、例えば、シリカゲルを担体としたクロマトグラフィーを用いた場合、クロロホルム、ジクロロメタン、ベンゼン、酢酸エチル、ヘキサンなどの非水溶性有機溶媒と、その混合溶媒、更にこれらにメタノール、エタノール、アセトンなどの水溶性有機溶媒を適当量加え、その比率を変え順次極性を上げながら溶出する方法が好ましく、ヘキサン／酢酸エチル、クロロホルム／アセトン、クロロホルム／メタノールの混合溶媒を用いる方法が特に好ましい。
【００３６】
上記二次精製に用いるカラムクロマトグラフィーとしては、順相カラムクロマトグラフィー、ジオールカラムクロマトグラフィー、逆相カラムクロマトグラフィー、サイズ排除カラムクロマトグラフィーなどがあり、担体、溶出溶媒等の精製条件は各種クロマトグラフィーに対応して適宜選択することができる。これらカラムクロマトグラフィーを単独または組み合わせて採用することができ、オープンカラム、ＨＰＬＣカラムなどで適宜適用できる。
【００３７】
上記二次精製に用いる薄層クロマトグラフィーとしては、逆相担体または順相担体またはアミンや光学活性体で修飾した化学修飾担体を用いたものが挙げられ、担体、展開溶媒等の精製条件は各種クロマトグラフィーに対応して適宜選択することができる。
【００３８】
本発明の新規化合物（化合物（１））は、豊富な食経験により安全性が確認されているマコモタケ由来の成分であり、安全性は既に立証されており、各種飲食品、医薬品、化粧品の原料として用いることができる。
【００３９】
上記飲食品としては、例えば、（ａ）清涼飲料、炭酸飲料、果実飲料、野菜ジュース、乳酸菌飲料、乳飲料、豆乳、ミネラルウォーター、茶系飲料、コーヒー飲料、スポーツ飲料、アルコール飲料、ゼリー飲料等の飲料類、（ｂ）トマトピューレ、キノコ缶詰、乾燥野菜、漬物等の野菜加工品、（ｃ）乾燥果実、ジャム、フルーツピューレ、果実缶詰等の果実加工品、（ｄ）カレー粉、わさび、ショウガ、スパイスブレンド、シーズニング粉等の香辛料、（ｅ）パスタ、うどん、そば、ラーメン、マカロニ等の麺類（生麺、乾燥麺含む）、（ｆ）食パン、菓子パン、調理パン、ドーナツ等のパン類、（ｇ）アルファー化米、オートミール、麩、バッター粉等、（ｈ）焼菓子、ビスケット、米菓子、キャンデー、チョコレート、チューイングガム、スナック菓子、冷菓、砂糖漬け菓子、和生菓子、洋生菓子、半生菓子、プリン、アイスクリーム等の菓子類、（ｉ）小豆、豆腐、納豆、きな粉、湯葉、煮豆、ピーナッツ等の豆類製品、（ｊ）蜂蜜、ローヤルゼリー加工食品、（ｋ）ハム、ソーセージ、ベーコン等の肉製品、（ｌ）ヨーグルト、プリン、練乳、チーズ、発酵乳、バター、アイスクリーム等の酪農製品、（ｍ）加工卵製品、（ｎ）干物、蒲鉾、ちくわ、魚肉ソーセージ等の加工魚や、乾燥わかめ、昆布、佃煮等の加工海藻や、タラコ、数の子、イクラ、からすみ等の加工魚卵、（ｏ）だしの素、醤油、酢、みりん、コンソメベース、中華ベース、濃縮出汁、ドレッシング、マヨネーズ、ケチャップ、味噌等の調味料や、サラダ油、ゴマ油、リノール油、ジアシルグリセロール、べにばな油等の食用油脂、（ｐ）スープ（粉末、液体含む）等の調理、半調理食品や、惣菜、レトルト食品、チルド食品、半調理食品（例えば、炊き込みご飯の素、カニ玉の素）等が挙げられる。そして、飲食品への添加量としては、有効量が摂取できれば、特に限定されるものではなく、飲食品の味や品質安定性へ損なわないように適宜配合すればよく、例えば５〜５００ｐｐｍ質量、好ましくは１０〜１００ｐｐｍ質量となるように配合すればよい。
【００４０】
上記化粧品としては、化粧水、乳液、ローション、ジェル、ファンデーション、クリーム、洗顔料、身体洗浄料等などが挙げられる。そして、化粧品への添加量としては、５〜５００ｐｐｍ質量が好ましく、１０〜１００ｐｐｍ質量がより好ましい。添加量が、上記範囲より少ないと、十分な生理活性効果が期待できず、上記範囲よりも多いと品質安定性に不具合が生じる場合がある。
【００４１】
上記医薬品としては、例えば、破骨細胞分化・増殖阻害剤、免疫賦活剤、メラニン生成抑制剤等が挙げられる。また、その形態としては、液剤、散剤、錠剤、丸剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、ゼリー、チュアブル、ペースト等の剤型が例示できる。
【００４２】
次に、本発明の破骨細胞分化・増殖阻害剤について説明する。
【００４３】
本発明の破骨細胞分化・増殖阻害剤は、下記化学式（１）で示される化合物及び／又は下記化学式（２）で示される化合物を有効成分として含有するものである。
【００４４】
【化６】
2008007453.tif 000007
【００４５】
【化７】
2008007453.tif 000008
【００４６】
また、本発明の破骨細胞分化・増殖阻害剤は、更に、下記化学式（３）で示される化合物（以下、「化合物（３）」と記す）を有効成分として含有することが好ましい。
【００４７】
【化８】
2008007453.tif 000009
【００４８】
上記化合物（３）は、骨粗鬆症予防・治療効果を有することが報告されており、上記化合物（１）、（２）と併用することで、より優れた骨粗鬆症予防・治療効果が得られる。
【００４９】
そして、本発明の破骨細胞分化・増殖阻害剤は、マコモタケの有機溶媒抽出物から調製された組成物を含有することが好ましく、マコモタケの菌えい部の有機溶媒抽出物から調製された組成物を含有することがより好ましい。
【００５０】
上記化合物（１）〜（３）は、マコモタケに含まれている成分であり、また、有機溶媒に可溶な化合物である。このため、マコモタケの有機溶媒抽出液には、上記化合物（１）〜（３）が含まれており、それぞれの化合物の相乗作用によって、高い骨粗鬆症予防・治療効果が得られる。なかでも、マコモタケの菌えい部の有機溶媒抽出物には、特に上記化合物（１）、（２）が多く含まれていることから、マコモタケの菌えい部の有機溶媒抽出物から調製された組成物を用いることで、有効成分の含有量を向上させることができ、より優れた骨粗鬆症予防・治療効果が得られる。
【００５１】
また、本発明の破骨細胞分化・増殖阻害剤は、更にイソフラボン、コラーゲンペプチド、ラクトフェリン、カゼインホスホペプチド、魚骨カルシウム、貝カルシウムから選ばれた１種以上を含むことが好ましい。これらの成分は、骨粗鬆症予防・治療効果を有することが知られており、相乗効果が期待できる。また、必要に応じて、無機塩類、有機酸類、糖質類、タンパク類、ペプチド類、アミノ酸類、脂質類を適宜配合することができる。
【００５２】
本発明の破骨細胞分化・増殖阻害剤の形態としては、液剤、散剤、錠剤、丸剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、ゼリー、チュアブル、ペースト等の剤型が例示できる。そして、上記化合物（１）又は（２）をそれぞれ単独で摂取する場合、その有効摂取量は、それぞれ、体重１ｋｇ当り、０．０１〜５ｍｇが好ましく、０．０５〜０．５ｍｇがより好ましい。また、上記化合物（１）〜（３）を２種以上併用して摂取する場合、その有効摂取量は、体重１ｋｇ当り、合計量で０．０１〜５ｍｇが好ましく、０．０５〜０．５ｍｇがより好ましい。
【実施例】
【００５３】
以下、本発明の新規化合物及び破骨細胞分化・増殖阻害剤について具体的に説明する。
【００５４】
なお、化合物の同定は、ＦＡＢ−ＭＳスペクトル解析、赤外吸収（ＩＲ）スペクトル解析、核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル解析、ＤＥＰＴスペクトル解析、１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトル解析、ＨＭＱＣスペクトル解析、ＨＭＢＣスペクトル解析にて行った。
【００５５】
ＦＡＢ−ＭＳスペクトル解析は、化合物（１）についてはポジティブ，マトリックスは３−ニトロベンジルアルコール、化合物（２）についてはポジティブ，マトリックスは３−ニトロベンジルアルコール又は２−ニトロフェニルオクチルエーテル、化合物（３）についてはポジティブ，マトリックスは３−ニトロベンジルアルコールの条件で行った。
【００５６】
赤外吸収（ＩＲ）スペクトル解析は、ＫＢｒ法で行った。
【００５７】
核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル解析は、Ｈ１−ＮＭＲは５００ＭＨｚ、Ｃ１３−ＮＭＲは１２５ＭＨｚ，溶媒は重クロロホルムの条件で行った。
【００５８】
(製造例１)  ＜新規化合物の製造＞
台湾産マコモタケを葉部と菌えい部に切断した。マコモタケの菌えい部（１６．７ｋｇ）を、エタノール２２Ｌで３回、アセトン１０Ｌで１回順次抽出を行った。得られた抽出物を減圧濃縮し、ジクロロメタンと、エチルアセテートとで溶媒分画を行い、ジクロロメタン可溶部と、エチルアセテート可溶部と、水可溶部とを得た。
【００５９】
得られたジクロロメタン可溶部を、フラッシュクロマトグラフィー（充填剤；シリカゲル、６０Ｎ（２９５ｇ）、４×６０ｃｍ）に供し、下記（I）〜（IV）の溶媒各１．２ｌを用いて溶出を行い、一画分を５０ｍｌとして分画し画分ａ−１〜ａ−１７を得た。
【００６０】
（I）ノルマルヘキサン：エチルアセテート＝９：１
（II）メタノール
（III）ジクロロメタン：アセトン＝８：２
（IV）ジクロロメタン：メタノール＝５：５
【００６１】
上記（III）溶出画分ａ−１１（１．５５０２ｇ）を、ジオールカラムクロマトグラフィー（製品名；Ｄｉｏｌ  ４０Ｄ、５０×３００ｍｍ）に供し、下記（V）〜（VIII）の溶媒各１．２ｌを用いて溶出を行い、一画分を５０ｍｌとして分画し画分ｂ−１〜ｂ−１８を得た。
【００６２】
（V）ノルマルヘキサン：エチルアセテート＝９：１
（VI）ノルマルヘキサン：エチルアセテート＝７：３
（VII）ノルマルヘキサン：エチルアセテート＝５：５
（VIII）メタノール
【００６３】
上記（V）溶出画分ｂ−５を、ＯＤＳカラム（製品名；ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ  Ｃ１８  ＭＧ、２０×２５０ｍｍ）に供し、メタノールで溶出を行い、一画分を２０ｍｌとして分画し画分ｃ−１〜ｃ−１８を得た。
【００６４】
上記画分ｃ−１４とｃ−１６とをまとめ、シリカゲルカラム（製品名；Ｓｅｎｓｈｕ  Ｐａｋ.ＡＱＵＡＳＩＬ、２０×２５０ｍｍ）に供し、ノルマルヘキサン：エチルアセテート＝９：１の混合溶媒で溶出を行い、一画分を２０ｍｌとして分画し画分ｄ−１〜ｄ−７を得た。
【００６５】
また、上記画分ｂ−４とｃ−８とｃ−１３とをまとめ、シリカゲルカラム（製品名；Ｓｅｎｓｈｕ  Ｐａｋ.ＡＱＵＡＳＩＬ、２０×２５０ｍｍ）に供し、ノルマルヘキサン：エチルアセテート＝９：１の混合溶媒で溶出を行い、一画分を２０ｍｌとして分画し画分ｅ−１〜ｅ−５を得た。
【００６６】
上記画分ｄ−２とｅ−２とをまとめ、ＯＤＳカラム（製品名；ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ  Ｃ１８  ＭＧ、２０×２５０ｍｍ）に供し、メタノールで溶出を行い、一画分を２０ｍｌとして分画し画分ｆ−１〜ｆ−８を得た。
【００６７】
上記画分ｆ−７について、ＦＡＢ−ＭＳスペクトル解析、赤外吸収（ＩＲ）スペクトル解析、核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル解析、ＤＥＰＴスペクトル解析、ＣＯＳＹスペクトル解析、ＨＭＱＣスペクトル解析を行ったところ、下記化学式（１）で表す目的の新規化合物であることが確認でき、新規化合物（化合物（１））を１．１ｍｇ単離できた。図１にこの化合物のＦＡＢ−ＭＳスペクトル図、図２にＩＲスペクトル図、図３に１Ｈ−ＮＭＲスペクトル図、図４に１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル図、図５にＤＥＰＴスペクトル（上段）と１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（下段）との対応図、図６に１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトル図、図７にＨＭＱＣスペクトル図、図８にＨＭＢＣスペクトル図をそれぞれ示す。
【００６８】
【化９】
2008007453.tif 000010
【００６９】
・ＦＡＢ−ＭＳスペクトル：ｍ／ｚ  ４７４［Ｍ］＋の分子イオンピークが観測された。
・１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：３．１０δｐｐｍ，３．２０δｐｐｍにメトキシ基由来のシングレット、０．７９δｐｐｍ，０．８１δｐｐｍ，０．９０δｐｐｍにダブレットのメチル基、０．６４δｐｐｍ，０．７２δｐｐｍにシングレットのメチル基、０．８３δｐｐｍにトリプレットのメチル基が観測された。
・１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：３１個のシグナルが観測され、２１１．８δｐｐｍにカルボニル由来のピークが観測された。
【００７０】
（製造例２）  ＜化合物（２）の製造＞
製造例１において、画分ｄ−５とｅ−４とをまとめ、ＯＤＳカラム（製品名；ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ  Ｃ１８  ＭＧ、２０×２５０ｍｍ）に供し、メタノールで溶出を行い、一画分を２０ｍｌとして分画し画分ｇ−１〜ｇ−４を得た。
【００７１】
上記画分ｇ−３を、シリカゲルカラム（製品名；Ｓｅｎｓｈｕ  Ｐａｋ.ＡＱＵＡＳＩＬ、２０×２５０ｍｍ）に供し、ノルマルヘキサン：エチルアセテート＝９：１の混合溶媒で溶出を行い、一画分を２０ｍｌとして分画し画分ｈ−１〜ｈ−６を得た。
【００７２】
上記画分ｈ−４について、ＦＡＢ−ＭＳスペクトル解析、赤外吸収（ＩＲ）スペクトル解析、核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル解析、ＤＥＰＴスペクトル解析、ＣＯＳＹスペクトル解析、ＨＭＱＣスペクトル解析を行ったところ、下記化学式（２）で表す化合物であることが確認でき、化合物（２）を２．７ｍｇ単離でできた。図９にこの化合物のＦＡＢ−ＭＳスペクトル図（上段はポジティブ，マトリックスとして３−ニトロベンジルアルコール、下段はポジティブ，マトリックスとして２−ニトロフェニルオクチルエーテル）、図１０にＩＲスペクトル図、図１１に１Ｈ−ＮＭＲスペクトル図、図１２に１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル図、図１３にＤＥＰＴスペクトル（上段）と１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（下段）との対応図、図１４に１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトル図、図１５にＨＭＱＣスペクトル図、図１６にＨＭＢＣスペクトル図をそれぞれ示す。
【００７３】
【化１０】
2008007453.tif 000011
【００７４】
・ＦＡＢ−ＭＳスペクトル：ｍ／ｚ  ４２９［Ｍ＋Ｈ］＋の分子イオンピークが観測された。
・１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：０．７９δｐｐｍ，０．８２δｐｐｍ，０．９１δｐｐｍにダブレットのメチル基、０．６７δｐｐｍ，０．９４δｐｐｍにシングレットのメチル基、０．８３δｐｐｍにトリプレットのメチル基が観測された。
・１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：２９個のシグナルが観測され、２０９．１δｐｐｍ及び２１１．３δｐｐｍにカルボニル由来のピークが観測された。
【００７５】
（製造例３）  ＜化合物（３）の製造＞
台湾産マコモタケを葉部と菌えい部に切断した。マコモタケの葉部（７．９ｋｇ）を、エタノール２４Ｌ、アセトン１０Ｌで順次抽出を行った。得られた抽出物を減圧濃縮し、トリクロロメタンと、エチルアセテートとで溶媒分画を行い、ジクロロメタン可溶部と、エチルアセテート可溶部と、水可溶部とを得た。
【００７６】
上記エチルアセテート可溶部４０８．６ｍｇを、フラッシュクロマトグラフィー（充填剤；シリカゲル、６０Ｎ（８００ｇ）、φ４×６０ｃｍ）に供し、下記（IX）〜（XII）の溶媒各１．２Ｌを用いて溶出を行い、一画分を５０ｍｌとして分画し画分ｉ−１〜ｉ−１２を得た。
【００７７】
（IX）ジクロロメタン：メタノール＝９：１
（X）ジクロロメタン：メタノール＝７：３
（XI）メタノール
（XII）メタノール：水＝９：１
【００７８】
上記画分（XI）溶出画分ｉ−７を、ＯＤＳ  Ｓｅｐ-Ｐａｋに供し、水：メタノール＝６：４の混合溶媒で溶出を行い、一画分を２０ｍｌとして分画し画分ｊ−１〜ｊ−３を得た。  上記画分ｊ−３を、ＯＤＳカラム（製品名；ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ  Ｃ１８  ＭＧ、２０×２５０ｍｍ）に供し、メタノールで溶出を行い、水：メタノール＝６：４の混合溶媒で溶出を行い、一画分を２０ｍｌとして分画し画分ｋ−１〜ｋ−１７を得た。
【００７９】
上記画分ｋ−１２について、ＦＡＢ−ＭＳスペクトル解析、赤外吸収（ＩＲ）スペクトル解析、核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル解析、ＤＥＰＴスペクトル解析、ＣＯＳＹスペクトル解析、ＨＭＱＣスペクトル解析を行ったところ、下記化学式（３）で表す化合物であることが確認でき、化合物（３）を１．９ｍｇ単離でできた。図１７にこの化合物のＦＡＢ−ＭＳスペクトル図、図１８にＩＲスペクトル図、図１９に１Ｈ−ＮＭＲスペクトル図、図２０に１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル図、図２１にＤＥＰＴスペクトル（上段）と１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（下段）との対応図、図２２に１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトル図、図２３にＨＭＱＣスペクトル図、図２４にＨＭＢＣスペクトル図をそれぞれ示す。
【００８０】
【化１１】
2008007453.tif 000012
【００８１】
・ＦＡＢ−ＭＳスペクトル：ｍ／ｚ  ５４３［Ｍ＋Ｎａ］＋の分子イオンピークが観測された。
・１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：３．８５δｐｐｍ，３．８６ｐｐｍにメトキシ基由来のシングレット、３．３９〜３．５０δｐｐｍの領域及び４．８７δｐｐｍに糖由来のシグナルが観測された。
・１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：２６個のシグナルが観測された。また、１１１．０〜１５１．０δｐｐｍの領域に芳香族由来のシグナルが１２個観測され、ＤＥＰＴスペクトル解析により、このうち６個のシグナルが４級炭素であり、６個のシグナルがメチン炭素であった。
【００８２】
（試験例１）
［破骨細胞の分化・増殖阻害活性評価］
上記化合物（１）及び（２）を試験標品として用い、破骨細胞の分化・増殖阻害活性を評価した。なお、試験標品は、それぞれ１００ｍｇ／ｍｌとなるようにメタノールに溶解した後、培養液（１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭ）で希釈して、０．２μｇ／ｍｌ、０．４μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌ、３．２μｇ／ｍｌ、６．３μｇ／ｍｌ、１２．５μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌに調製したものを用いた。
５〜７週齢の雌マウスの脛骨及び大腿骨から採取した骨髄細胞１．３×１０８ｃｅｌｌと、頭蓋骨から採取し培養した骨芽細胞様間質細胞１×１０６ｃｅｌｌとを、培養液（１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭ）７．２ｍｌに懸濁し、４８穴プレートに１５０μｌ／ｗｅｌｌで分注した。そして、各濃度のサンプル溶液５０μｌを、１，２５（ＯＨ）２ＶＤ３(２０ｎｇ／ｍｌ)５０μｌと共に培養液に添加して、全量を２５０μｌ／ｗｅｌｌとした。次いで、ＣＯ２インキュベータを用いて培養（３７℃、ＣＯ２濃度５．０％）した。培養開始３日目に各ｗｅｌｌの上澄み液１００μｌを除去し、初日の添加濃度の２倍の試験標品と、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３(４０ｎｇ／ｍｌ)を各５０μｌ添加し、更に１週間培養した。
共存培養後、培養液を除去し、ＰＢＳ（リン酸緩衝液）で洗浄後、１０％ホルマリン含有ＰＢＳ溶液を０．５ｍｌ／ｗｅｌｌ加え、１０分間固定した。次に、エタノールを０．５ｍｌ／ｗｅｌｌ添加し、1分間再固定した。その後乾燥させ、ＴＲＡＰ反応液を０．３ｍｌ／ｗｅｌｌ加え、室温で３０分間染色した。染色後は、蒸留水（０．５ｍｌ／ｗｅｌｌ）で洗浄し、乾燥した。ＴＲＡＰ反応は陽性であり、核を２個以上有する細胞をＴＲＡＰ陽性多核細胞として、１ｗｅｌｌ当たりの個数をカウントした。なお、ＴＲＡＰ反応液は、１．５ｍｇのＮａｐｈｔｈｏｌ  ａｓ−ｍｘ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅと、１５０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアルデヒドと、１５ｍｌのｂｕｆｆｅｒ（５０ｍＭの酒石酸Ｎａを含む０．１Ｍの酢酸Na緩衝液  ｐＨ＝５．０）と、９ｍｇのｆａｓｔ  ｒｅｄ  ｖｉｏｌｅｔ  ｌｂ  ｓａｌｔの混合溶液を用いた。
【００８３】
上記化合物（１）は、図２５に示すように、２５〜５０μｇ／ｍｌの範囲において、破骨細胞の形成を特異的に抑制することができた。
【００８４】
また、上記化合物（２）は、図２６に示すように、１２．５〜５０μｇ／ｍｌの範囲において破骨細胞の形成を特異的に抑制することができた。
【００８５】
（製造例４）
表１に示す配合で調合した組成物を常法にしたがってハードカプセルに２３０ｍｇ／カプセルで充填して、ハードカプセル剤を製造した。魚骨カルシウムは商品名「焼成ボニカル」（焼津水産化学工業株式会社製）を使用した。このカプセル剤を1日に１０カプセルを摂取することにより、化合物（１）を１０ｍｇ摂取することが可能である。
【００８６】
【表１】
2008007453.tif 000013
【００８７】
（製造例５）
表２に示す配合で常法にしたがってゼリー飲料を製造した。このゼリー飲料は製造上の問題点は特になく、品質、風味に関しても問題なく、美味しく食することができた。このゼリー飲料を1日に１本を摂取することにより、化合物（１）、化合物（２）をそれぞれ５ｍｇずつ摂取することが可能である。
【００８８】
【表２】
2008007453.tif 000014
【００８９】
（製造例６）
表３に示す配合で常法にしたがって乳飲料を製造した。この乳飲料は製造上の問題点は特になく、沈殿等の品質、風味に関しても問題なく、美味しく食することができた。この乳飲料を1日に１本を摂取することにより、化合物（１）を４ｍｇ、化合物（２）、化合物（３）をそれぞれ３ｍｇずつ摂取することが可能である。
【００９０】
【表３】
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【産業上の利用可能性】
【００９１】
本発明の新規化合物は、飲食品、医薬品、化粧品等の原料として用いることができる。
また、本発明の破骨細胞分化・増殖阻害剤は、そのまま、或いは飲食品、医薬品、化粧品等に配合して摂取することにより、骨粗鬆症の予防・治療改善に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００９２】
【図１】化合物（１）のＦＡＢ−ＭＳスペクトル図である。
【図２】同ＩＲスペクトル図である。
【図３】同１Ｈ−ＮＭＲスペクトル図である。
【図４】同１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル図である。
【図５】同ＤＥＰＴスペクトル（上段）と１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（下段）との対応図である。
【図６】同１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトル図である。
【図７】同ＨＭＱＣスペクトル図である。
【図８】同ＨＭＢＣスペクトル図である。
【図９】化合物（２）のＦＡＢ−ＭＳスペクトル図である。
【図１０】同ＩＲスペクトル図である。
【図１１】同１Ｈ−ＮＭＲスペクトル図である。
【図１２】同１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル図である。
【図１３】同ＤＥＰＴスペクトル（上段）と１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（下段）との対応図である。
【図１４】同１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトル図である。
【図１５】同ＨＭＱＣスペクトル図である。
【図１６】同ＨＭＢＣスペクトル図である。
【図１７】化合物（３）のＦＡＢ−ＭＳスペクトル図である。
【図１８】同ＩＲスペクトル図である。
【図１９】同１Ｈ−ＮＭＲスペクトル図である。
【図２０】同１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル図である。
【図２１】同ＤＥＰＴスペクトル（上段）と１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（下段）との対応図である。
【図２２】同１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトル図である。
【図２３】同ＨＭＱＣスペクトル図である。
【図２４】同ＨＭＢＣスペクトル図である。
【図２５】化合物（１）による破骨細胞の分化・増殖阻害活性を示す図表である。
【図２６】化合物（２）による破骨細胞の分化・増殖阻害活性を示す図表である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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