(57)【要約】【課題】遷延化しがちな難治性の角膜障害を含む角膜障害症の治癒を効果的に促進する、安全性の高い治癒促進剤を提供する。【解決手段】グリコサミンもしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩を有効成分として含有することを特徴とする角膜障害症治癒促進剤、及び硫酸基を有するグリコサミン又はその誘導体を構成単糖として有する糖鎖もしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩を有効成分として含有することを特徴とする角膜障害症治癒促進剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
硫酸基を有するグリコサミンもしくはその誘導体を構成単糖として有する糖鎖もしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩を有効成分として含有することを特徴とする角膜障害症治癒促進剤。
【請求項２】
硫酸基を有するグリコサミンもしくはその誘導体を構成単糖として有する糖鎖が、Ｎ−硫酸化グリコサミンを構成単糖とする糖鎖であることを特徴とする請求項１記載の角膜障害症治癒促進剤。
【請求項３】
Ｎ−硫酸化グリコサミンを構成単糖とする糖鎖が、ヘパラン硫酸である、請求項２記載の角膜障害症治癒促進剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項記載の角膜障害症治癒促進剤を有効成分として含有する医薬組成物。
【請求項５】
角膜障害症治癒促進剤の効力増強作用を有する物質として更にフィブロネクチンを含む、請求項４記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、角膜障害症治癒促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
角膜は、上皮細胞層、ボーマン膜、実質層、デスメ膜、及び内皮細胞層の５層からなる。角膜の上皮細胞層が、角膜ヘルペス、外傷、酸、アルカリ等により傷害を受けて、上皮細胞層が欠損することがある。このような場合通常は、感染や乾燥を防止して外部の刺激から防御することにより自然治癒を期待するという消極的な治療法が行われてきたにすぎない。しかし、角膜障害が遷延化する症例も多く、そのような症例に対してはフィブロネクチンや角膜障害症治癒促進効果を示すヒアルロン酸塩の点眼（特公平７−２３３１７号公報）による治療が試みられてきた。しかし、フィブロネクチンは不安定であるため、その効果を持続することが困難であった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
上記の理由から、難治性角膜障害症を含む角膜障害症の治癒を効果的に促進する、安全性の高い角膜障害症治癒促進剤の開発が期待されている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、グリコサミノグリカンを構成するグリコサミン及びその誘導体に角膜の障害症の治癒を促進する効果を認めるに至った。また、グリコサミン又はその誘導体にウロン酸等の物質を添加すると、その角膜障害症治癒促進効果が増強されることも見い出した。更に、硫酸基を有するグリコサミン又はその誘導体である単糖を構成単糖として有する糖鎖を角膜障害症に適用したところ、角膜障害症に対する顕著な治癒促進効果が認められた。更にまた、グリコサミン又はその誘導体の細胞増殖・伸展促進活性は、該物質が高濃度であっても低下することがなく、有効濃度範囲が広いため、投与時の条件（涙液分泌量等）による活性の変化が少ないことも認められ、本発明を完成した。
【０００５】
すなわち、本発明の第一の要旨は、グリコサミンもしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩を有効成分として含有する角膜障害症治癒促進剤（以降、角膜障害症治癒促進剤１とする）であり、特にＮ−アシルグリコサミン又はその誘導体を有効成分として含有し、角膜細胞の細胞増殖・伸展を促進する角膜障害症治癒促進剤である。これに治癒促進効果増強物質としてウロン酸等を添加することにより、グリコサミンもしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩が有する治癒促進効果が更に増強された角膜障害症治癒促進剤が提供される。
【０００６】
また、本発明の第二の要旨は、硫酸基を有するグリコサミンもしくはその誘導体を構成単糖として有する糖鎖もしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩を有効成分として含有する角膜障害症治癒促進剤（以降、角膜障害症治癒促進剤２とする）であり、例えば硫酸基を有するグリコサミン又はその誘導体を構成単糖として含み、ウロン酸又はガラクトース等を他の構成単糖として含む、ケラタン硫酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパリン又はヘパラン硫酸もしくはそれらの誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩を有効成分として含有する角膜障害症治癒促進剤である。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の角膜障害症治癒促進剤により、難治性角膜障害症を含む角膜障害症の治癒を、効果的かつ安全に促進することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
以下に本発明の角膜障害症治癒促進剤について詳細に記載する。
（１）角膜障害症治癒促進剤１
本発明の角膜障害症治癒促進剤１は、グリコサミンもしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩を有効成分として含有する。更にウロン酸等の治癒促進効果増強物質を含有していてもよい。
【０００９】
１．グリコサミン又はその誘導体
本発明の角膜障害症治癒促進剤１に含まれるグリコサミンもしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩は、非修飾のグリコサミン又はアミノ基、水酸基等の官能基が修飾されたグリコサミンあるいはそれらの塩であり、グリコサミノグリカン（以下ＧＡＧとも記載する）を構成するグリコサミンもしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩であれば限定はされない。グリコサミンとしては例えばグルコサミン、ガラクトサミン、マンノサミン等が挙げられるが、その中でも特にグルコサミンが好ましい。誘導体としての修飾の形態としては、グリコサミンがＮ位に有するアミノ基が修飾されたものが好ましく、Ｎ−アシルグリコサミン、Ｎ−硫酸化グリコサミン等が好ましい。Ｎ−アシルグリコサミンとしては、炭素数１〜６の低級アシル基で修飾されたグリコサミンが好ましく、Ｎ−アセチルグリコサミンが特に好ましい。例えば、グリコサミンの好ましい形態であるグルコサミンの例えばＮ位にアセチル基が結合して修飾されたＮ−アセチルグルコサミン（以下ＧｌｃＮＡｃとも記載する）が、グリコサミン誘導体として好ましい。グリコサミンの塩としては、上記の物質の塩酸塩、硫酸塩が挙げられ、特に塩酸塩が好ましい。
【００１０】
２．角膜障害症治癒促進剤１の添加物
本発明の角膜障害症治癒促進剤１は、グリコサミンもしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩のほか、その角膜障害症治癒促進効果を増強する物質として、ウロン酸もしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩を含むのが好ましい。ウロン酸としてはヘキスロン酸が好ましく、例えばＧＡＧを構成するヘキスロン酸であるＤ−グルクロン酸、Ｌ−イズロン酸等が挙げられるが、Ｄ−グルクロン酸（以下ＧｌｃＡとも記載する）が特に好ましいが、これに限定はされない。また、ウロン酸誘導体の修飾形態としては、硫酸化されたウロン酸等が挙げられ、例えば２−Ｏ−硫酸化ヘキスロン酸、３−Ｏ−硫酸化ヘキスロン酸等が挙げられる。更に、薬理学的に許容されうる塩としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、バリウム塩、マグネシウム塩等が挙げられるが、好ましくはナトリウム塩であり、Ｄ−グルクロン酸ナトリウムが最も好ましい。
【００１１】
（２）角膜障害症治癒促進剤２
本発明の角膜障害症治癒促進剤２は、硫酸基を有するグリコサミンもしくはその誘導体（グリコサミンもしくはその誘導体は前記と同義）を構成単糖として有する糖鎖もしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩を有効成分として含有する。
【００１２】
１．糖鎖
本発明の角膜障害症治癒促進剤２に含まれる糖鎖は、硫酸基を有するグリコサミン又はその誘導体を構成単糖として有するので、ヒアルロン酸の糖鎖とは明確に区別される。糖鎖に含有される硫酸基を有するグリコサミン誘導体としては、Ｎ−硫酸化グリコサミンが好ましく、この様な物質としては、Ｎ−硫酸化ガラクトサミン、Ｎ−硫酸化グルコサミン等が挙げられる。これらを構成単糖として含有する糖鎖としては、ヘパラン硫酸やヘパリンのほか、ケラタン硫酸、コンドロイチン硫酸又はデルマタン硫酸を脱Ｎ−アセチル化後にＮ−硫酸化して得られるＮ−硫酸化ケラタン硫酸、Ｎ−硫酸化コンドロイチン硫酸又はＮ−硫酸化デルマタン硫酸が挙げられる。上記糖鎖を脱Ｎ−アセチル化する方法としては、例えばMagnus H., Johan R., and Ulf L., Anal. Biochem., 119, 236-245(1982) の方法を応用した方法が挙げられ、また、この様にして得られた脱Ｎアセチル化糖鎖を例えば、Lynn A. and Arther S. P., Carbohydrate Res., 145, 267-277(1986) の方法を応用した方法によりＮ−硫酸化してＮ−硫酸化糖鎖を得ることができる。この様な糖鎖の中でも特にヘパラン硫酸が好ましい。
【００１３】
該糖鎖の誘導体としては、例えばその一部の硫酸基を脱硫酸化した糖鎖、硫酸基を付加して過硫酸化した糖鎖、特定の官能基を修飾した糖鎖等が挙げられるが、一部の硫酸基を脱硫酸化して得た糖鎖が好ましい。また更に、これらの糖鎖の薬理学的に許容されうる塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、バリウム塩、マグネシウム塩等が挙げられ、中でもナトリウム塩が好ましい。
【００１４】
本発明の角膜障害症治癒促進剤２に含まれる糖鎖の平均分子量は、好ましくは、１０，０００以上、より好ましくは２０，０００〜４０，０００、最も好ましくは２５，０００〜３５，０００である。
【００１５】
（３）添加物
本発明の上記の角膜障害症治癒促進剤１及び２は、有効成分のほか、薬理効果を増強する目的で有効成分と同様の薬理効果を有する物質、有効成分と共存することにより該有効成分の効力増強作用を示す物質、あるいは製剤学的に通常使用される物質と共に医薬組成物とすることができる。例えば、ヘパラン硫酸と共存することによりその効力増強作用を示す物質としては、成長因子である線維芽細胞増殖因子やフィブロネクチン等が挙げられる。その他の添加物として、例えば塩類、保存剤、抗生物質、抗炎症剤、成長因子の混合又は組み合わせ投与も可能である。塩類としては、例えば硫酸ナトリウム、塩化ナトリウム、リン酸水素ナトリウム等、保存剤としては、例えばパラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸プロピル、塩化ベンザルコニウム等、抗生物質としては、例えばオキシテトラサイクリン等、抗炎症剤としては、例えばジクロフェナック等が挙げられる。また、本発明の角膜障害症治癒促進剤１及び２はその物自体が安定性の高い物質であるため、通常の医薬組成物を製造する際に使用する賦形剤、安定化剤等の製剤補助剤も何ら支障無く使用することができる。
【００１６】
（４）剤型
本発明の上記の角膜障害症治癒促進剤１及び２は、本発明の目的に適合する限り、眼科用の医薬品製剤として、眼部に外用的に適用しうる剤型の製剤として使用される。例えば点眼剤、眼軟膏剤等の剤型で用いることができるが、好ましくは有効成分のみ、又は有効成分の治癒促進効果を増強するための物質（前述のウロン酸等）を添加した水溶液等として直接点眼する点眼剤、又は当該水溶液を患部装着剤に含有させて用いることができる。水溶液として使用する際のグリコサミンもしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩の濃度は、好ましくは０．１〜５０mg/mlであり、更にウロン酸もしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩を含有する場合は、その濃度は、好ましくは０．１〜５０mg/mlである。有効成分が糖鎖である場合は、その濃度は、好ましくは０．１〜１０mg/mlである。点眼剤として使用する際は、１日１〜１０回、１回当たり１〜３滴（およそ０．０５〜０．２ml）を点眼して使用する。患部装着剤としては治療用コンタクトレンズ等が挙げられ、好ましく、治療用コンタクトレンズとしては例えばヒアルロン酸分子どうしを架橋剤等を使用して架橋させた架橋ヒアルロン酸、デルマタン硫酸分子どうしを架橋剤等を使用して架橋させた架橋デルマタン硫酸等の徐放性の素材により作成したものが好ましく、当該治療用コンタクトレンズに上記水溶液状の角膜障害症治癒促進剤を含有させて当該コンタクトレンズを介して患部に角膜障害症治癒促進剤を投与することが可能である。また、本発明の角膜障害症治癒促進剤を眼軟膏等の点眼薬等の液状以外の外用剤として使用する際のグリコサミンもしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩の濃度は、好ましくは０．１〜５０mg/gであり、更にウロン酸もしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩を含有する場合は、その濃度は、好ましくは０．１〜１５mg/gである。有効成分が糖鎖である場合、その濃度は、好ましくは、０．１〜５mg/gである。眼軟膏剤等の点眼薬以外の外用剤として使用する場合は、１日１〜３回に分けて投与することも可能である。
【００１７】
（５）適応症
本発明の上記の角膜障害症治癒促進剤１及び２は、ヒトを含む哺乳動物の角膜障害症、すなわち眼球乾燥症（ドライアイ）、シェーグレン症候群、スティーブンス・ジョンソン症候群、点状表層角膜炎（ＳＰＫ）、角膜上皮びらん、角膜上皮欠損、角膜潰瘍等の角膜の障害症の治癒を促進する薬剤として、疾患部位に局所的に投与する薬剤として使用される。これらの疾患が内因性疾患であっても外因性疾患であっても特に限定はされず、本発明角膜障害症治癒促進剤１及び２を使用することが可能である。また、本発明の角膜障害症治癒促進剤は、眼科手術による術創の早期治癒を促すために、当該分野における手術時に使用する患部洗浄液等へ添加して使用することも可能である。
【００１８】
（６）毒性
本発明の角膜障害症治癒促進剤１の有効成分であるグリコサミンもしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩の毒性は、非常に低い。例えばグルコサミンの塩酸塩であるＧｌｃＮ・ＨＣｌのマウスにおける急性毒性試験によるＬＤ50は、経口投与で１５０，０００mg/kg以上、皮下又は腹腔内投与で６，２００mg/kg以上、静注で１，１００mg/kg以上、また、ガラクトサミンの塩酸塩であるＧａｌＮ・ＨＣｌのラットにおける急性毒性試験によるＬＤ50は、皮下又は腹腔内投与で１３５，０００mg/kg以上、当該物質のマウスにおける急性毒性試験によるＬＤ50は、皮下又は腹腔内投与で２，６６０mg/kg以上であることが知られている。本発明の角膜障害症治癒促進剤１の投与時のこれらの有効成分の濃度は、上記の毒性試験値と比較して極めて低いため、本発明の角膜障害症治癒促進剤１の有効成分であるグリコサミン又はその誘導体の安全性の高いことは明らかである。
【００１９】
本発明の角膜障害症治癒促進剤２の有効成分の糖鎖として例えばヘパリンもしくはその誘導体又は薬理学的に許容されうるそれらの塩を使用した際の安全性も高い。例えばヘパリンのマウスにおける急性毒性試験によるＬＤ50は、経口投与で５，０００mg/kg以上、皮下又は腹腔内投与で２，５００mg/kg以上、静注で１，０００mg/kg程度であることが知られている。ヘパリンを本発明角膜障害症治癒促進剤２の有効成分として使用した際も、その薬剤としての適用時の濃度は上記数値と比較しても極めて低く安全性は高い。ヘパラン硫酸はヘパリンと比較して硫酸化率が低く、その為ヘパリンの持つ抗血液凝固作用が著しく低下しているので、本発明の角膜障害症治癒促進剤２の有効成分としてヘパラン硫酸を使用した際は、更に安全性は高い。また、ヘパラン硫酸又はその誘導体についての安全性（毒性・非炎症性）については既に確認されている（加島ら、基礎と臨床、23, 6121(1989)、井上ら、基礎と臨床、23, 6227(1998)）。これらのことからも本発明角膜障害症治癒促進剤２の好ましい有効成分であるヘパラン硫酸又はその誘導体の安全性の高さは明らかである。
【実施例】
【００２０】
以下に、本発明の実施例を説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２１】
試験例１
Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）とＤ−グルクロン酸（ＧｌｃＡ）の角膜上皮細胞由来培養細胞の増殖に対する作用
９６穴マルチプレートにウサギ角膜上皮細胞を１ウエル当たり１×１０4個の割合で撒き、２４時間培養後、表１に示す濃度のＧｌｃＮＡｃ又はＧｌｃＡを含有する培地と交換し、更に７２時間培養を続けた。その後、ＭＴＴ溶液（２mg/ml)を１ウエル当たり５０μl添加し、５時間のインキュベート後、２−プロパノールでＭＴＴホルマザンを溶解した。５５０nmの吸光度を測定して細胞増殖活性とした（表１、図１、図２）。その結果、ＧｌｃＮＡｃを添加した際に顕著な細胞増殖促進活性が観察された。
【００２２】
【表１】
2008120835.tif 000002
【００２３】
一群８サンプルの５５０nmの吸光度（ＯＤ５５０nm）の平均値±標準誤差（Ｓ．Ｅ．）で示した。
【００２４】
試験例２
ヘパラン硫酸、ＧｌｃＮＡｃ及びＧｌｃＡの角膜上皮修復に対する作用
ヘパラン硫酸、ＧｌｃＮＡｃ及びＧｌｃＡのウサギ角膜上皮創傷の修復に対する影響を調べた。内径８mmのトレパン及びマイクロ剪刀を用いて、ＳＰＦグレードのＪＷ系雌性ウサギ７０匹の角膜の中央部上皮を剥離し、右眼を対照として、左眼に試験物質を１５０μlずつ点眼した。試験物質としては、ヘパラン硫酸（ＨＳ）ナトリウム（牛腎由来：生化学工業（株))１０mg/ml(ＨＳナトリウムに含まれるＧｌｃＮＡｃ、ＧｌｃＡ、及びＮａ2ＳＯ4量は各々約２０mMに対応する）、ＧｌｃＮＡｃ（生化学工業（株))（４．４、８．８、１７．６及び３５．２mg/mlの４濃度（各々２０、４０、８０及び１６０mM))、及びＧｌｃＡ・Ｎａ（Aldrich Chemical Company. Inc.）（Ｎａ塩の水和物として４．６、９．２、１８．４及び３６．８mg/mlの４濃度（各々２０、４０、８０及び１６０mM))を、各々リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）に溶解して使用した。対照薬としてはＰＢＳを使用した。１日目は剥離後１時間より３時間毎に計２回点眼し、２日目は３時間毎に計４回点眼した。３日目は３時間毎に計２回点眼した。剥離１時間後と最終点眼３時間後に、ＰＢＳに溶解した０．２％フルオロセインナトリウムで染色し、紫色灯下で写真撮影した。本方法により撮影した写真を画像解析装置を用いて解析し、上皮欠損部位の面積を測定した。剥離１時間後と最終点眼３時間後の解析結果を比較し、再被覆された修復面積を算出した。左右の眼を比較し、同数から構成される対応あるstudentのｔ−検定で評価を行った（表２、図３）。その結果、ＧｌｃＮＡｃには創傷治癒促進効果が観察され、ＧｌｃＮＡｃとＧｌｃＡを混合して投与した際は、ＧｌｃＮＡｃの創傷治癒促進効果が顕著に増強されたのが観察された。
【００２５】
【表２】
2008120835.tif 000003
【００２６】
一群５〜６匹の検体を用い、促進効果の平均値（％）±標準誤差（Ｓ．Ｅ．）で示した。ただし、１％ヘパラン硫酸（ＨＳ）ナトリウムに含まれるＧｌｃＮＡｃ、ＧｌｃＡ、Ｎａ2ＳＯ4量は各々約２０mMに対応する。
【００２７】
試験例３
ヘパラン硫酸の角膜上皮修復に対する作用
ヘパラン硫酸のウサギ角膜障害の修復に対する影響を調べた。内径８mmのトレパン及びマイクロ剪刀を用いて、ＳＰＦグレードのＪＷ系雌性ウサギ１２匹の角膜の中央部上皮を剥離し、右眼を対照として、左眼に試験物質を１５０μlずつ点眼した。試験物質としては、ヘパラン硫酸（ＨＳ）ナトリウム（牛腎由来：生化学工業（株))１０mg/ml溶液（リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に溶解）を使用した。対照薬としてはＰＢＳを使用した。１日目は剥離後１時間より３時間毎に計４回点眼し、２日目は３時間毎に４回点眼した。３日目は３時間毎に計２回点眼した。剥離１時間後と最終点眼３時間後に、ＰＢＳに溶解した０．２％フルオロセインナトリウムで染色し、紫色灯下で写真撮影した。本方法により撮影した写真を画像解析装置を用いて解析し、上皮欠損部位の面積を測定した。剥離１時間後と最終点眼３時間後の解析結果を比較し、再被覆された面積を算出した。左右の眼を比較しながら、解析結果を比較し、同数から構成される対応あるstudentのｔ−検定で評価を行った（表３、図４）。その結果、ヘパラン硫酸には角膜障害症の治癒促進効果が観察された。
【００２８】
【表３】
2008120835.tif 000004
【００２９】
一群６匹の検体を用い、その平均値（mm2)±標準誤差（Ｓ．Ｅ.)で示した。
【００３０】
試験例４
ヘパラン硫酸とフィブロネクチンの共存下における細胞増殖作用
フィブロネクチンによるヘパラン硫酸の細胞増殖促進作用の変化を調べた。フィブロネクチン溶液（３０μg/ml）５０μl／ウエルにより一晩コートした９６穴マルチプレートと、非コートの９６穴マルチプレートに、正常ウサギ角膜上皮細胞（Lot No. ３５：国際試薬）を１ウエル当たり１×１０4個の割合で撒き、２４時間後に、培地をヘパラン硫酸（牛腎由来：生化学工業（株))０、１、１０、１００、又は１，０００μg/mlを含む培地と交換し、更に４８時間培養を続けた。その後、〔６−3Ｈ〕−チミジン０．５μCi／ウエルにより５時間標識し、細胞を０．５NのＮａＯＨに溶解し、得られた溶液をガラス繊維紙に吸着させ、該紙を５％トリクロロ酢酸及びエタノールで洗浄し、ＡＣＳ−II（アマシャム）を添加し、液体シンチレーションカウンターで放射活性を測定した。フィブロネクチンコートあるいは非コートのヘパラン硫酸非添加群を対照群とし、Ｆ−検定により分布に一様性が認められた場合にはstudentのｔ−検定を、一様性が認められなかった場合にはcochran のｔ−検定を用いて統計処理を行い、有意差検定を行った（図５）。その結果、フィブロネクチン非コート条件下では、１０μg/ml以上のヘパラン硫酸濃度で、角膜上皮細胞の増殖が促進された。また、フィブロネクチンコートを施した条件下では、１μg/ml以上のヘパラン硫酸濃度で細胞増殖が促進され、当該活性は非コート条件下よりも顕著であった。
【００３１】
製剤例
（１）点眼剤
（ａ）塩化ナトリウム９００mg、パラオキシ安息香酸メチル２６mg及びパラオキシ安息香酸プロピル１４mgに滅菌精製水８０mlを加え、加熱溶解し、当該溶液を室温に戻した後に、ＧｌｃＮＡｃ３，０００mgを加えて溶解し、滅菌精製水を加えて全量を１００mlとした。これを１０mlずつ容器に分注して点眼剤を製造した。
（ｂ）上記（ａ）の点眼剤のＧｌｃＮＡｃ量を５００mgとし、更にＧｌｃＡ５００mgを添加して点眼剤を製造した。
（ｃ）上記（ａ）の点眼剤のＧｌｃＮＡｃをヘパラン硫酸ナトリウム１００mgに変更して点眼剤を製造した。
（ｄ）上記（ａ）の点眼剤のＧｌｃＮＡｃをヘパラン硫酸ナトリウム１００mgに変更して、更にフィブロネクチン１０μgを添加して点眼剤を製造した。
（ｅ）上記（ａ）の点眼剤のＧｌｃＮＡｃをヘパラン硫酸ナトリウム１００mgに変更して、更に線維芽細胞増殖因子１０μgを添加して点眼剤を製造した。
【００３２】
（２）眼軟膏剤
（ａ）精製ラノリン１０ｇ及び黄色ワセリン８０ｇを合わせて加熱融解し、流動パラフィン適量を加えて１００ｇとし、熱混合物を保温漏斗を用いてろ紙で濾過し、１５０℃で１時間滅菌した。当該混合物を室温に戻した後、ＧｌｃＮＡｃ３，０００mg及び保存剤としてパラオキシ安息香酸メチル１００mgを添加して均一になるように混合した。当該混合物を１０ｇずつ容器に充填して軟膏剤を製造した。
（ｂ）上記（ａ）の軟膏剤のＧｌｃＮＡｃ量を５００mgとし、更にＧｌｃＡ５００mgを添加して軟膏剤を製造した。
（ｃ）上記（ａ）の軟膏剤のＧｌｃＮＡｃをヘパラン硫酸ナトリウム１００mgに変更して軟膏剤を製造した。
（ｄ）上記（ａ）の軟膏剤のＧｌｃＮＡｃをヘパラン硫酸ナトリウム１００mgに変更して、更にフィブロネクチン１０μgを添加して軟膏剤を製造した。
（ｅ）上記（ａ）の軟膏剤のＧｌｃＮＡｃをヘパラン硫酸ナトリウム１００mgに変更して、更に線維芽細胞増殖因子１０μgを添加して軟膏剤を製造した。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】ＭＴＴ試験法による培養細胞の増殖に対するＧｌｃＮＡｃの影響を示す。
【図２】ＭＴＴ試験法による培養細胞の増殖に対するＧｌｃＡの影響を示す。
【図３】ヘパラン硫酸、並びにＧｌｃＮＡｃ及びＧｌｃＡの角膜障害症治癒促進効果を示す。
【図４】ヘパラン硫酸による修復面積に対する影響を示す。
【図５】ヘパラン硫酸の細胞増殖促進効果に対するフィブロネクチンの影響を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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