(57)【要約】【課題】  医薬として有用なＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドの安定した品質の結晶を提供する。【解決手段】  粉末Ｘ線回折パターンおよび／または示差走査熱量分析サーモグラムで特徴付けられ、優れた熱安定性を有する、Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドのα型結晶、γ型結晶およびδ型結晶。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記(a1)および(b1)で示される物理化学的性質のうちのいずれか一つまたは両方の性質を有するＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドのα型結晶：
(a1)ピーク角度２θ（エネルギー：１０ＫｅＶ）で表して、ほぼ、４.１４°、７.０７°、１４.９７°、１６.６４°、１９.９６°および２２.８４°に特徴的なピークを有する粉末Ｘ線回折パターンを示す;
(b1)昇温速度が１０℃／ｍｉｎの示差走査熱量サーモグラムにおいて、ほぼ、１２０℃、１６１℃および１６７℃にピークが観測される。
【請求項２】
下記(a2)および(b2)で示される物理化学的性質のうちのいずれか一つまたは両方の性質を有するＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドのγ型結晶：
(a2)ピーク角度２θ（エネルギー：１０ＫｅＶ）で表して、ほぼ、４.０７°、７.４１°、８.１５°、８.２１°、１４.１１°、１４.２９°および１８.６３°に特徴的なピークを有する粉末Ｘ線回折パターンを示す；
(b2)昇温速度が１０℃／ｍｉｎの示差走査熱量サーモグラムにおいて、ほぼ１６２℃にピークが観測される。
【請求項３】
下記(a3)および(b3)で示される物理化学的性質のうちのいずれか一つまたは両方の性質を有するＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドのδ型結晶：
(a3)ピーク角度２θ（エネルギー：１０ＫｅＶ）で表して、ほぼ、４.１６°、７.８１°、１０.１９°、１１.７１°、１３.６４°、１４.６２°、１９.２８°および２０.８９°に特徴的なピークを有する粉末Ｘ線回折パターンを示す；
(b3)昇温速度が１０℃／ｍｉｎの示差走査熱量サーモグラムにおいて、ほぼ１６７℃にピークが観測される。
【請求項４】
請求項１に記載の結晶の製造方法であって、Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドを含むＣ３−５アルコール溶液から該化合物を結晶化させることからなる製造方法。
【請求項５】
請求項１に記載の結晶の製造方法であって、Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドをエタノールに加熱溶解し、該エタノール溶液を−２１〜５℃で急速に冷却し、結晶化させることからなる製造方法。
【請求項６】
請求項２に記載の結晶の製造方法であって、Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドを含むメタノール、Ｃ１−５アルキルアセタート、Ｃ３−６ケトンまたはジメチルスルホキシド溶液から該化合物を結晶化させることからなる製造方法。
【請求項７】
Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドを含むＣ３−６ケトン溶液からＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドを結晶化させることからなる請求項６に記載の製造方法。
【請求項８】
請求項３に記載の結晶の製造方法であって、Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドの結晶を１３０℃以上１６２℃未満の温度で加熱してδ型結晶に変化させることからなる製造方法。
【請求項９】
請求項１に記載のα型結晶、請求項２に記載のγ型結晶または請求項３に記載のδ型結晶からなるＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドの原薬。
【請求項１０】
請求項３に記載のＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドのδ型結晶を含有する医薬。
【請求項１１】
請求項９に記載の原薬を含有する医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドの新規結晶、その製造方法およびそれを含有する医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＩＣＨ（The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use：日米ＥＵ医薬品規制調和国際会議）ガイドラインのトピックＱ６Ａ「新医薬品の規格及び試験方法の設定について（Specifications: Test Procedures and Acceptance Criteria for New Drug Substances and New Drug Products: Chemical Substances）」（非特許文献１）では、原薬の結晶多形について、「新原薬の中には、物理的性質の異なる２つ以上の結晶形で存在するものがある。結晶多形には、溶媒和物あるいは水和物（擬多形とも呼ばれる）や無晶形も含まれる。こうした固体状態の違いが、新製剤の品質や機能に影響を及ぼすことがある。そうした違いが、製剤機能、バイオアベイラビリティあるいは安定性に影響を及ぼすような場合には、新原薬の規格に適切な存在形を規定すべきである。」と述べている。そして、新医薬品の開発では、原薬の結晶多形の存在の有無を確認し、結晶多形が存在する場合は各結晶形の溶解度や安定性、融点に相違がないか調べ、相違がある場合は製剤の安全性や機能性、有効性が結晶形の影響を受けるか否かを調べるべきとしている。
【０００３】
このガイドラインを原薬製造の観点から見ると、原薬に結晶多形が存在する場合は、原薬の結晶形を単一にするか、あるいは複数の結晶形の原薬中の存在比を一定にコントロールすることが求められていると理解される。しかし、原薬の結晶多形が存在することを見つけることは必ずしも容易ではなく、通常は試行錯誤が必要である。また、結晶多形の存在が確認された場合、通常、単一の結晶からなる原薬、あるいは複数の結晶形の存在比が一定にコントロールされた原薬を製造することは容易に達成されることではなく、鋭意検討を必要とする。
【０００４】
下記式（Ｉ）で表されるＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミド
【０００５】
【化１】
2008120683.tif 000002
【０００６】
は、末梢型ベンゾジアゼピン受容体に対して選択的かつ顕著な親和性を示すと共に、優れた抗不安作用を示すので、不安関連疾患、うつ病、てんかんなどの中枢性疾患、多発性硬化症などの免疫性神経疾患、狭心症、高血圧症などの循環器系疾患の治療薬および予防薬として有用な化合物であることが後記特許文献１および特許文献２に記載されている。
【０００７】
特許文献１の実施例１４６および特許文献２の製造例１４６には、式（Ｉ）の化合物がエタノールから再結晶され、その結晶の融点が１６３−１６４℃であったことが記載されているが、式（Ｉ）の化合物の結晶多形に関する記載は全くない。
【０００８】
【特許文献１】国際公報第９９／２８３２０号パンフレット
【０００９】
【特許文献２】特開２００１−４８８８２号公報
【００１０】
【非特許文献１】ＩＣＨガイドライン、トピックＱ６Ａ「新医薬品の規格及び試験方法の設定について」
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドの安定した品質の結晶を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、前記特許文献１および特許文献２の記載に準じて式（Ｉ）の化合物を繰り返し製造したところ、得られた結晶の粉末Ｘ線回折パターンが製造ロットごとにそれぞれ異なること、すなわち、式（Ｉ）の化合物の結晶多形が存在する可能性があることに気づいた。そこで、本発明者らは、式（Ｉ）の化合物の結晶多形について鋭意検討を行った結果、４種類の結晶（以下、これらの４種類の結晶を、「α型結晶」、「β型結晶」、「γ型結晶」および「δ型結晶」と称す。）を見出すと共に、そのうちの３種類の結晶（「α型結晶」、「γ型結晶」および「δ型結晶」）が室温で安定な結晶として存在し得ることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち、本発明は、Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドのα型結晶、γ型結晶並びにδ型結晶、具体的には以下の結晶を提供するものである。
【００１４】
下記(a1)および(b1)で示される物理化学的性質のうちのいずれか一つまたは両方の性質を有するＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドのα型結晶：
(a1)ピーク角度２θ（エネルギー：１０ＫｅＶ）で表して、ほぼ、４.１４°、７.０７°、１４.９７°、１６.６４°、１９.９６°および２２.８４°に特徴的なピークを有する粉末Ｘ線回折パターンを示す;
(b1)昇温速度が１０℃／ｍｉｎの示差走査熱量サーモグラムにおいて、ほぼ、１２０℃、１６１℃および１６７℃にピークが観測される。
【００１５】
下記(a2)および(b2)で示される物理化学的性質のうちのいずれか一つまたは両方の性質を有するＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドのγ型結晶：
(a2)ピーク角度２θ（エネルギー：１０ＫｅＶ）で表して、ほぼ、４.０７°、７.４１°、８.１５°、８.２１°、１４.１１°、１４.２９°および１８.６３°に特徴的なピークを有する粉末Ｘ線回折パターンを示す；
(b2)昇温速度が１０℃／ｍｉｎの示差走査熱量サーモグラムにおいて、ほぼ１６２℃にピークが観測される。
【００１６】
下記(a3)および(b3)で示される物理化学的性質のうちのいずれか一つまたは両方の性質を有するＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドのδ型結晶：
(a3)ピーク角度２θ（エネルギー：１０ＫｅＶ）で表して、ほぼ、４.１６°、７.８１°、１０.１９°、１１.７１°、１３.６４°、１４.６２°、１９.２８°および２０.８９°に特徴的なピークを有する粉末Ｘ線回折パターンを示す；
(b3)昇温速度が１０℃／ｍｉｎの示差走査熱量サーモグラムにおいて、ほぼ１６７℃にピークが観測される。
【００１７】
また、本発明は、Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドのα型結晶、γ型結晶並びにδ型結晶の製造方法を提供する。具体的には以下の製造方法を提供する。
【００１８】
上記のＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドのα型結晶の製造方法であって、Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドを含むＣ３−５アルコール溶液から該化合物を結晶化させることからなる製造方法。
【００１９】
上記のＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドのα型結晶の製造方法であって、Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドをエタノールに加熱溶解し、該エタノール溶液を−２１〜５℃で急速に冷却し、結晶化させることからなる製造方法。
【００２０】
上記のＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドのγ型結晶の製造方法であって、Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドを含むメタノール、Ｃ１−５アルキルアセタート、Ｃ３−６ケトンまたはジメチルスルホキシド溶液から該化合物を結晶化させることからなる製造方法。
【００２１】
前記のγ型結晶の製造方法においては、Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドを含むＣ３−６ケトン溶液から該化合物を結晶化させることからなる製造方法が好ましい。
【００２２】
上記のＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドのδ型結晶の製造方法であって、Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドの結晶を１３０℃以上１６２℃未満の温度で加熱してδ型結晶に変化させることからなる製造方法。
【００２３】
加えて、本発明は、上述のα型結晶、γ型結晶またはδ型結晶からなるＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドの原薬を提供する。
【００２４】
さらに、本発明は、Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドのδ型結晶を含有する医薬を提供する。
【００２５】
また、本発明は、前述のＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドの原薬を含有する医薬を提供する。
【００２６】
本明細書における「α型結晶」、「γ型結晶」および「δ型結晶」とは、通常の粉末Ｘ線回折、示差走査熱量分析等で示される物理化学的性質によって、それぞれ他の結晶および他の結晶との混合物とは区別される結晶を意味する。
【００２７】
「Ｃ３−５アルコール」とは、炭素数が３〜５の直鎖状または分枝鎖状のアルコールを意味し、具体例としては、１−プロパノール、２−プロパノール（イソプロパノール）、１−ブタノール、２−ブタノール、２−メチル−１−プロパノール（イソブチル  アルコール）、１−ペンタノール（アミル  アルコール）、３−メチル−１−ブタノール（イソアミル  アルコール）などが挙げられる。これらのうち、２−プロパノール、２−メチル−１−プロパノールまたは３−メチル−１−ブタノールが好ましい。
【００２８】
「Ｃ１−５アルキルアセタート」とは、炭素数が１〜５の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基を有する酢酸エステルを意味し、具体例としては、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸ｎ−ブチル、酢酸イソブチル、酢酸イソアミルなどが挙げられる。これらのうち、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、酢酸ｎ−ブチルおよび酢酸イソアミルが好ましい。
【００２９】
「Ｃ３−６ケトン」とは、炭素数が３〜６の直鎖状または分枝鎖状のケトンを意味し、具体例としては、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソプロピルケトン、メチルブチルケトン、メチルイソブチルケトンなどが挙げられる。これらのうち、アセトン、メチルエチルケトンまたはメチルイソブチルケトンが好ましく、メチルイソブチルケトンが最も好ましい。
【００３０】
「原薬」とは、ＩＣＨガイドラインのトピックＱ７Ａ「原薬GMPのガイドラインについて」の記載に準じ、医薬品有効成分（ＡＰＩ）とも称される、「医薬品の生産に使用することを目的とする物質で、医薬品の製造に使用された時に医薬品の有効成分となるもの」を意味する。本明細書における「α型結晶からなる原薬」、「γ型結晶からなる原薬」または「δ型結晶からなる原薬」はそれぞれ実質的に他の結晶を含まない、α型結晶、γ型結晶またはδ型結晶であると確認された原薬である。原薬の結晶の確認は、通常、粉末Ｘ線回折および／または示差走査熱量分析が用いられる。
【発明の効果】
【００３１】
本発明によれば、安定した品質のＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドの原薬を供給することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】
本発明者らの研究によって、式（Ｉ）の化合物の結晶には結晶多形が存在し、少なくとも４種類の異なる結晶、α型結晶、β型結晶、γ型結晶およびδ型結晶が存在することが見出された。これらのうち、β型結晶は、α型結晶を１２０℃に加熱すると得られるが、室温ではα型結晶へ転移するため、室温で単離不可能な結晶形だった。したがって、この４種類の結晶のうち、室温で安定に存在し、単離可能な式（Ｉ）の化合物の結晶はα型結晶、γ型結晶およびδ型結晶の３種類（以下、「本発明の結晶」と称することもある）である。
【００３３】
本発明の結晶は、本明細書に記載の物理化学的性質によって特定される。しかし、後記の実施例において、例えば、同一の結晶形の粉末Ｘ線回折を異なるＸ線の波長で測定すると観測されるピーク角度が異なることからも明らかなように、これらの物理化学的性質を示すデータは、測定方法や測定器具によって多少変わるものであるから、本明細書に記載の結晶形を特定する物理化学的性質は厳密に解されるべきではない。
【００３４】
α型結晶の製法：
式（Ｉ）の化合物のα型結晶は、式（Ｉ）の化合物を含むＣ３−５アルコール（例えば、２−プロパノール、２−メチル−１−プロパノール、３−メチル−１−ブタノール）溶液から該化合物を常法に従って結晶化させることによって製造される。具体例を実施例１に示すが、式（Ｉ）の化合物のα型結晶は後述のγ型結晶の製造方法（例えば、実施例４または実施例５の製法）に準じた方法によっても製造することができる。
【００３５】
式（Ｉ）の化合物のα型結晶は、式（Ｉ）の化合物をエタノールに加熱溶解して調製した溶液を５℃以下、好ましくは−２1〜５℃、さらに好ましくは０〜５℃で冷却することからなる該化合物の結晶化によっても製造される。加熱溶解は、通常、エタノール溶液が還流する温度で加熱する。冷却はγ型結晶を析出させないために急速で行う。具体例を実施例２に示す。
【００３６】
γ型結晶の製法：
式（Ｉ）の化合物のγ型結晶は、式（Ｉ）の化合物を含むメタノール、Ｃ１−５アルキルアセタート（例えば、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、酢酸ｎ−ブチル、酢酸イソアミル）、Ｃ３−６ケトン（例えば、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン）またはジメチルスルホキシド溶液から該化合物を結晶化させることによって製造される。この結晶化は常法に従って行うことができ、具体的な製造例を実施例３、実施例４および実施例５に示す。
【００３７】
γ型結晶の製造に用いる溶媒は、前記溶媒の中ではＣ３−６ケトンが好ましく、具体例としてはアセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンが挙げられ、これらの中では、メチルイソブチルケトンが特に好ましい。式（Ｉ）の化合物１ｇの結晶化に用いる溶媒量は、７〜１４ｍｌが好ましく、８〜９ｍｌがさらに好ましい。この場合において、式（Ｉ）の化合物は加熱して溶媒に溶解する。このときの加熱温度は特に限定されないが、通常は、溶媒が還流するまで加熱する。
【００３８】
加熱して溶媒に溶解した式（Ｉ）の化合物は、その溶液を冷却することによって目的の結晶形で結晶化する。結晶化のときに、目的の結晶を種として加えてもよい。溶液の冷却速度は、特に限定されないが、好ましくは０.５〜２℃／ｍｉｎである。溶液中に析出した結晶を濾取し、常法に従って乾燥（好ましくは１２０℃以下で乾燥）すれば、目的の結晶が製造される。
【００３９】
δ型結晶の製法：
式（Ｉ）の化合物のδ型結晶は、溶媒の非存在下または存在下、式（Ｉ）の化合物の結晶（α型結晶とγ型結晶の混合物またはいずれか一方の結晶；これらの結晶は非晶質との混合物であってもよい。）を通常は１３０℃以上１６２℃未満の温度、好ましくは１４０℃以上１６１℃以下、さらに好ましくは好ましくは１５０℃以上１６０℃以下の温度で加熱することによって製造される。具体的な製造例を実施例６に示す。
【００４０】
後記の実施例１〜７から明らかなとおり、γ型結晶はδ型結晶に比して製造が容易であり、γ型結晶はα型結晶に比して安定な結晶である。したがって、Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドの原薬としては、γ型結晶からなる原薬が好ましい。
【００４１】
出発物質の式（Ｉ）の化合物は特許文献１に記載の方法によって製造することができる。
【００４２】
本発明の結晶は、末梢型ベンゾジアゼピン受容体に対して選択的でかつ顕著な親和性を示すと共に優れた抗不安作用を示すので、不安関連疾患(神経症、心身症、不安障害など)、うつ病、てんかんなどの中枢性疾患、多発性硬化症などの免疫性神経疾患、狭心症、高血圧症などの循環器系疾患の治療薬および予防薬として有用である。このことは前記特許文献１に記載の式(Ｉ)の化合物の薬理試験結果から説明される。
【００４３】
本発明の結晶の投与経路としては、経口投与あるいは非経口投与のいずれでもよい。投与量は、化合物の種類、投与方法、患者の症状・年齢等により異なるが、通常０.０１〜５０mg／kg／日、好ましくは０.０３〜５mg／kg／日である。
【００４４】
本発明の結晶は通常、製剤用担体と混合して調製した製剤の形で投与される。製剤用担体としては、製剤分野において常用され、かつ本発明の結晶と反応しない物質が用いられる。
【００４５】
剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、注射剤等が挙げられる。これらの製剤は常法に従って調製され、例えば、ＷＯ９９／２８３２０に記載の製剤例をそのまま具体例として挙げることができる。これらの製剤は、本発明の結晶を０．０１％以上、好ましくは０．１〜７０％の割合で含有することができる。これらの製剤はまた、治療上有効な他の成分を含有していてもよい。
【実施例】
【００４６】
以下、参考例および実施例を挙げて本発明の新規な結晶について説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。また、実施例に記載のデータは、通常、同じ実験を繰り返しても数値が多少変わるものであるから、厳密に解されるべきではない。参考例および実施例で得られた結晶は以下の方法で同定した。
【００４７】
（１）高輝度放射光施設SPring-8 BL24XU Hutch Bを用いた粉末Ｘ線回折：BL24XU Hutch Bに設置された小型回折計を用い、エネルギー１０ＫｅＶ、ステップ０.００６°（２θ）、０.５ｍｍφ石英キャピラリー、測定時間１.０ｓｅｃ／ｓｔｅｐ、入射スリット０.４×１.０ｍｍ、受光スリット（１）０.１ｍｍ（垂直）、受光スリット（２）０.３ｍｍ（垂直）、受光スリット間距離６３０ｍｍで透過法により測定した。
【００４８】
（２）スペクトリス社製X’Pert Alpha1 system用いた粉末Ｘ線回折：Ｃｕ Ｋα１線、ステップ０.００８４°（２θ）、測定時間１０００ｓｅｃ／ｓｔｅｐ、入射スリット１５ｍｍ（オート）、発散防止スリット１５ｍｍ（オート）、検出器X’Celeratorで集中法により測定した。
【００４９】
（３）理学社製RINT2000 Ultima+を用いた粉末Ｘ線回折：Ｃｕ Ｋα１，２線、スキャン速度２°／ｍｉｎで集中法により測定した。
【００５０】
（４）昇温粉末Ｘ線回折：理学社製RINT2000 Ultima+を用い、水平試料板にヤナコ社製融点測定器MP型のヒートシンクを密着させ、昇温しながら、Ｃｕ Ｋα１，２線、スキャン速度１０°／ｍｉｎで集中法により測定した。
【００５１】
（５）示差走査熱量分析：パーキンエルマー社製Pyrislを用い、昇温速度１０℃／ｍｉｎ、窒素雰囲気下２０ｍＬ／ｍｉｎで測定した。温度校正は、水（０℃）、インジウム（１５６.６℃）、亜鉛（４１９.５℃）を用い、熱量校正にはインジウム（２８.４５Ｊ／ｇ）を用いた。２〜５ｍｇの式（Ｉ）の化合物の結晶をアルミニウムパンにいれ、アルミニウムカバーでクリンプした後、測定に供した。
【００５２】
（６）熱重量分析：パーキンエルマー社製TGA7を用い、昇温速度５℃／ｍｉｎ、窒素雰囲気下、サンプル流量５０ｍＬ／ｍｉｎ、バランス流量２０ｍＬ／ｍｉｎで測定した。温度校正は、アルメル（alumel）（１５４.２℃）、ニッケル（３５５.３℃）を用いた。２〜５ｍｇの式（Ｉ）の化合物の結晶をプラチナパンにいれ、測定に供した。
【００５３】
（７）ホットステージ顕微鏡：オリンパス光学社製実体顕微鏡SZH型の光軸と、ヤナコ社製融点測定器MP型のヒートシンク中央の光軸を合わせ、ヒートシンク下方向からオリンパス光学社製LGPS光源を用いて偏光を照射し、昇温速度約５℃／ｍｉｎで昇温しながら結晶の変化、偏光の消失等を観察した。
【００５４】
参考例１  Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミド［式（Ｉ）の化合物］の製造：
本参考例はＷＯ９９／２８３２０の実施例１４６に記載の化合物［式（Ｉ）の化合物］の製法（ＷＯ９９／２８３２０の実施例１０６の製法に準じる製法）に準じて行った。但し、本参考例では６０％水素化ナトリウムに替えて炭酸カリウムを用いた。
具体的には、ＷＯ９９／２８３２０に記載の製法に準じて製造したＮ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミド（ＷＯ９９／２８３２０の実施例９１の化合物）７.７５gと炭酸カリウム４.１５gをジメチルホルムアミド１００mlに懸濁させ、これにヨウ化メチル４.２６gを加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧で濃縮し、残留物に水およびクロロホルムを加えてクロロホルム層を分取し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルムで溶出・精製し、エタノールから再結晶して目的物４.４６gを得た。融点は１６５〜１６６℃（未補正）だった。
同様の製法で式（Ｉ）の化合物の製造を数回繰り返したが、得られた結晶についてRINT2000 Ultima+で粉末Ｘ線回折を測定し、それぞれのパターンを比較するとピークの現れ方に差異が見られた。
【００５５】
実施例１  α型結晶の製造（１）：
参考例１の式（Ｉ）の化合物１ｇを１００ｍＬナスフラスコに入れ、これに２−プロパノール（イソプロパノール）４０ｍＬを加えて栓をした後、水浴（１００℃）上で振騰して参考例１の化合物を溶解した。この溶液を室温で一昼夜放置した後、析出した結晶を濾取し、室温で減圧下１時間乾燥してα型結晶を得た。α型結晶のSPring-8 BL24XU Hutch Bを用いて得られたパターン（１０ＫｅＶ）、X’Pert Alpha1 systemを用いて得られたパターン（Ｃｕ Ｋα１線）および示差走査熱量サーモグラムをそれぞれ図１、図２および図３に示す。
【００５６】
SPring-8 BL24XU Hutch Bを用いて得られたα型結晶の粉末Ｘ線回折のピーク角度（１０ＫｅＶ）とその相対強度（図１のピーク角度とその相対強度）を表１に示す。これらのうち、α型結晶に特徴的なピーク角度（１０ＫｅＶ）は4.14°、7.07°、14.97°、16.64°、19.96°および22.84°だった。
【００５７】
【表１】
2008120683.tif 000003
【００５８】
X’Pert Alpha1 systemを用いて得られたα型結晶の粉末Ｘ線回折のピーク角度（Ｃｕ Ｋα１線）（図２のピーク角度）は、ピーク角度２θで表して、5.11°、8.74°、9.11°、9.95°、10.26°、13.17°、13.81°、15.05°、16.27°、17.42°、18.10°、18.54°、18.71°、19.07°、19.98°、20.62°、21.33°、21.74°、22.06°、22.98°、23.31°、24.03°、24.77°、25.63°、26.05°、26.96°、27.37°、27.71°、28.05°、28.35°、28.93°、29.40°、29.95°、30.47°、31.24°、31.75°、32.34°、33.17°、33.63°、34.58°、35.15°、35.72°、36.29°、36.60°、37.15°、37.65°、38.07°、38.74°、40.08°、40.66°、41.38°、42.34°、42.79°、43.18°、43.86°、44.74°、45.29°、46.22°および46.70°だった。これらのうち、α型結晶に特徴的なピーク角度は5.11°、8.74°、18.54°、20.62°、24.77°および28.35°だった。
【００５９】
α型結晶は、昇温粉末Ｘ線回折の測定において、１２５℃からβ型特有の回折ピークが現われ始め、１４０℃でα型からβ型への完全な転移が観測され、１６５℃でδ型への転移に伴うピークが観測された。
【００６０】
α型結晶の示差走査熱量サーモグラム（図３）では、１２０℃でβ型への転移に伴う吸熱ピーク、１６１℃で転移体（β型結晶）の融解およびδ型への転移に伴う吸発熱ピーク、１６７℃に転移体（δ型結晶）の融解に伴う吸熱ピークが観測された。
【００６１】
α型結晶について熱重量分析を行った結果、重量変化は観測されなかった。
【００６２】
ホットステージ顕微鏡でα型結晶を観察すると、昇温過程と降温過程のいずれにおいてもα型−β型間の転移は融解を伴わず固体状態で転移した。β型からδ型への転移では結晶の融解を伴っていた。
【００６３】
実施例２  α型結晶の製造（２）：
参考例１の化合物２５ｍｇを１５ｍＬガラススピッツに入れ、これにエタノール１ｍＬを加えて栓をした後、水浴（１００℃）上で振騰して参考例１の化合物を溶解した。この溶液を５℃に設定した恒温槽に入れ、析出した結晶を濾取し、室温で減圧下１時間乾燥してα型結晶を得た。この結晶の結晶形は粉末Ｘ線回折で確認した。
【００６４】
参考例２  エタノール再結晶から得られた結晶：
実施例２の恒温槽の温度を２０℃または５０〜３０℃（５０℃から３０℃まで−５℃／ｈで冷却）に設定して参考例１の化合物の結晶を得た。これらの結晶について理学社製RINT2000 Ultima+を用いて粉末Ｘ線回折を測定すると、いずれの結晶もα型結晶とγ型結晶の混合物であることを示すピークが観測された。
【００６５】
参考例３  β型結晶：
α型結晶の昇温粉末Ｘ線回折を測定した結果、α型結晶を１４０℃に加熱するとβ型に転移したが、冷却すると１２０℃でα型に転移した。
【００６６】
SPring-8 BL24XU Hutch Bを用いて得られたβ型結晶の粉末Ｘ線回折のピーク角度（１０ＫｅＶ）とその相対強度（図１０のピーク角度とその相対強度）を表２に示す。これらのうち、α型と比較してβ型に特徴的なピーク角度（１０ＫｅＶ）は4.00°、7.11°、13.96°、19.20°および21.84°だった。
【００６７】
【表２】
2008120683.tif 000004
【００６８】
昇温粉末Ｘ線回折の測定において、α型を１４０℃に加熱するとβ型固有の回折ピークを示しβ型に転移したが、冷却すると１２０℃でα型と同じ回折パターンを示し、α型に転移した。
【００６９】
α型を１４０℃まで加熱、冷却、再加熱した時の示差走査熱量サーモグラムは１２０℃でそれぞれ吸熱（昇温）、発熱（降温）、吸熱（再昇温）パターンを示した。それらの熱量は同じであったことから、α型とβ型の転移は可逆的であった。
【００７０】
実施例３  γ型結晶の製造（１）：
参考例１の化合物１ｇを５０ｍＬナスフラスコに入れ、これにメチルイソブチルケトン８ｍＬを加えて栓をした後、水浴（１００℃）上で振騰して参考例１の化合物を溶解した。この溶液を室温で一昼夜放置した後、析出した結晶を濾取し、室温で減圧下１時間乾燥してγ型結晶を得た。γ型結晶のSPring-8 BL24XU Hutch Bを用いて得られた粉末Ｘ線回折パターン（１０ＫｅＶ）、X’Pert Alpha1 systemを用いて得られたパターン（Ｃｕ Ｋα１線）および示差走査熱量サーモグラムをそれぞれ図４、図５および図６に示す。
【００７１】
SPring-8 BL24XU Hutch Bを用いて得られたγ型結晶の粉末Ｘ線回折のピーク角度（１０ＫｅＶ）とその相対強度（図４のピーク角度とその相対強度）を表３に示す。これらのうち、γ型結晶に特徴的なピーク角度（１０ＫｅＶ）は4.07°、7.41°、8.15°、8.21°、14.11°、14.29°および18.63°だった。
【００７２】
【表３】
2008120683.tif 000005
【００７３】
X’Pert Alpha1 systemを用いて得られたγ型結晶の粉末Ｘ線回折のピーク角度（Ｃｕ Ｋα１線）（図５のピーク角度）は、ピーク角度２θで表して、5.08°、9.20°、10.15°、11.66°、13.46°、15.47°、16.36°、16.72°、17.52°、17.73°、17.92°、18.47°、18.95°、19.33°、19.89°、20.35°、21.54°、21.85°、22.22°、23.15°、23.38°、24.60°、24.93°、25.51°、26.86°、27.03°、27.86°、28.67°、29.44°、30.73°、31.96°、32.88°、33.21°、33.90°、35.73°、36.05°、36.72°、42.68°、43.51°および45.68°だった。これらのうち、γ型結晶に特徴的なピーク角度は5.08°、9.20°、10.15°、11.66°、17.52°、17.73°および23.15°だった。
【００７４】
γ型結晶は、昇温粉末Ｘ線回折の測定において、１７０℃からδ型に由来する回折ピークが認められるようになり、１７４℃で完全にδ型結晶に転移した。
【００７５】
γ型結晶の示差走査熱量サーモグラム（図６）では、１６２℃に融解による吸熱ピークが観測された。示差走査熱量分析の昇温速度を５℃／ｍｉｎにすると、１６７℃に転移体（δ型結晶）の融解に伴う吸熱ピークが観測された。
【００７６】
γ型結晶について熱重量分析を行った結果、重量変化は観測されなかった。
【００７７】
実施例４  γ型結晶の製造（２）：
参考例１の化合物１０ｇをメチルイソブチルケトン８０ｍＬで攪拌下加熱溶解した。この溶液を濾過し、続いて容器を洗浄したメチルイソブチルケトン１０ｍＬを濾過し、両濾液を合わせた溶液を加熱して析出した結晶を溶解した。この溶液を８０℃まで冷却し、その後１℃／ｍｉｎの冷却速度で５℃以下に冷却し、５℃以下で１.５時間保った。析出した結晶を濾取し、メチルイソブチルケトン１０ｍＬで洗浄した後、６０℃で１６時間送風乾燥し、γ型結晶９.４３ｇを得た。この結晶の結晶形は粉末Ｘ線回折と示差走査熱量分析で確認した。また、粉末Ｘ線回折でγ型結晶の含有率が９５％以上であることを確認した。この試料の化学純度をＨＰＬＣで測定した結果は９９.９９０％だった。
【００７８】
実施例５  γ型結晶の製造（３）：
参考例１の化合物１０ｇをメチルイソブチルケトン６０ｍＬで攪拌下加熱溶解した。この溶液を濾過し、続いて容器を洗浄したメチルイソブチルケトン１０ｍＬを濾過し、両濾液を合わせた溶液を加熱して析出した結晶を溶解した。この溶液を８０℃まで冷却し、γ型結晶５ｍｇを加えて８０℃で３０分保った。その後１℃／ｍｉｎの冷却速度で５℃以下に冷却し、５℃以下で１.５時間保った。析出した結晶を濾取し、メチルイソブチルケトン１０ｍＬで洗浄した後、６０℃で１６時間送風乾燥し、γ型結晶９.４３ｇを得た。この結晶の結晶形は粉末Ｘ線回折と示差走査熱量分析で確認した。また、粉末Ｘ線回折でγ型結晶の含有率が９５％以上であることを確認した。この試料の化学純度をＨＰＬＣで測定した結果は９９.９９３％だった。
【００７９】
実施例６  δ型結晶の製造：
参考例１の化合物を密栓ガラス容器に入れ、１５０℃のオーブンで２４時間加熱し、δ型結晶を得た。δ型結晶のSPring-8 BL24XU Hutch Bを用いて得られたパターン（１０ＫｅＶ）、X’Pert Alpha1 systemを用いて得られたパターン（Ｃｕ Ｋα１線）および示差走査熱量サーモグラムをそれぞれ図７、図８および図９に示す。
【００８０】
SPring-8 BL24XU Hutch Bを用いて得られたδ型結晶の粉末Ｘ線回折のピーク角度（１０ＫｅＶ）とその相対強度（図７のピーク角度とその相対強度）を表４に示す。これらのうち、δ型結晶に特徴的なピーク角度（１０ＫｅＶ）は4.16°、7.81°、10.19°、11.71°、13.64°、14.62°、19.28°および20.89°だった。
【００８１】
【表４】
2008120683.tif 000006
【００８２】
X’Pert Alpha1 systemを用いて得られたδ型結晶の粉末Ｘ線回折のピーク角度（Ｃｕ Ｋα１線）（図８のピーク角度）は、ピーク角度２θで表して、5.19°、9.04°、9.70°、10.35°、12.65°、14.52°、14.80°、14.98°、15.55°、16.11°、16.28°、16.92°、17.36°、17.84°、18.14°、18.64°、19.23°、19.48°、19.80°、19.90°、20.49°、20.80°、20.99°、21.36°、22.22°、23.04°、23.21°、23.67°、24.00°、25.42°、25.98°、26.57°、27.23°、27.39°、28.03°、28.99°、29.39°、30.39°、30.86°、31.37°、32.25°、33.07°、34.14°、34.84°、35.20°、35.45°、35.89°、36.46°、37.14°、37.76°、38.07°、39.24°、40.17°、41.11°、41.90°、43.09°、43.46°、44.08°、44.39°、44.99°、45.29°、45.94°、46.74°、47.50°、48.40°、48.91°および49.19°だった。これらのうち、δ型結晶に特徴的なピーク角度は5.19°、9.70°、12.65°、14.52°、16.92°、18.14°、24.00°および25.98°だった。
【００８３】
δ型結晶は、昇温粉末Ｘ線回折の測定において、１７８℃で融解するまで結晶の変化はなかった。
【００８４】
δ型結晶の示差走査熱量サーモグラム（図９）では、１６７℃に融解による吸熱ピークが認められた。
【００８５】
δ型結晶について熱重量分析を行った結果、重量変化は観測されなかった。
【００８６】
昇温粉末Ｘ線回折および示差走査熱量分析の結果では、Ｎ−ベンジル−Ｎ−エチル−２−（７−メチル−８−オキソ−２−フェニル−７,８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）アセトアミドの結晶多形において最も安定な結晶はδ型結晶だった。
【００８７】
実施例７  種々の溶媒を用いたα型結晶またはγ型結晶の製造：
実施例１の２−プロパノールに代えて各種溶媒（例えば、酢酸エチル０.４ｍＬ）を用い、実施例１と同様に操作をして式（Ｉ）の化合物の結晶を得た。結晶化に用いた溶媒とその溶媒を用いて得られた結晶を表５に示す。
【００８８】
【表５】
2008120683.tif 000007
【００８９】
平衡吸湿性試験：
無機飽和塩で調湿したデシケーター（２５℃，１５〜９３％ＲＨ；ＲＨは相対湿度を意味する）にα型、γ型、δ型の各結晶約１００ｍｇを入れ、１ヶ月間経時的に重量変化を測定した結果、いずれの結晶も０.１％以上の重量変化は観測されなかった。
【００９０】
固体安定性試験：
α型、γ型、δ型の各結晶約１ｍｇを精密に１０ｍＬアンプルまたはバイアルに量り込み、表６に示す条件下に保存した。４５日後の残存量をＨＰＬＣを用いて定量した。各測定時点における標準品は、同様に秤量して別途４℃で保存したα型、γ型、δ型の各結晶を用いた。いずれの結晶も、HPLCクロマトグラム上に類縁物質ピークの増加は認められず、残存量はほぼ100%(99.8-100.1%)と安定であった。試験結果を表６に示す。
【００９１】
【表６】
2008120683.tif 000008
【００９２】
溶解度：
α型、γ型、δ型の各結晶の適量と蒸留水をミクロテストチューブにいれ、タイテック社製ミクロインキュベータM-36を用いて、３７℃、２０００ｒ／ｍｉｎで約５時間振騰し飽和させた。振騰後、フィルター（アドバンテックDISMIC-13HP:0.2μm）で濾過し、水溶液中濃度をＨＰＬＣで定量した。α型、γ型、δ型の各結晶の溶解度はそれぞれ１.７μｇ／ｍＬ、１.８μｇ／ｍＬ、１.７μｇ／ｍＬだった。
【００９３】
溶解試験（パドル法）：
α型、γ型、δ型の各結晶１ｍｇにトウモロコシデンプン４ｍｇを加え、メノウ乳鉢でよく混合して試料を調製した。日本薬局方溶出試験器を用い、第二液(ｐＨ６.８)、９００ｍＬ、３７℃、パドル１００回転／ｍｉｎで溶解させた。経時的にフィルター（アドバンテックDISMIC-13HP：0.2μm）で濾過し、溶解液をとり、ＨＰＬＣを用いて溶解液中濃度を定量した。α型、γ型、δ型の各結晶のそれぞれの溶解曲線にはほとんど差が認められず、α型、γ型、δ型の各結晶の溶解性はほぼ同等だった。
【００９４】
溶解試験（回転ディスク法）：
α型、γ型、δ型の各結晶約１２０ｍｇをＩＲ用ＫＢｒ錠剤成形器を用いて圧縮成形（２０００ｋｇ／ｃｍ２、１０秒）し、直径１３ｍｍの円盤試料を調製した。円盤試料を円盤固定ホルダー（溶解面積：０.７０８５ｃｍ２）に固定し、水９００ｍＬ、３７℃、１００ｒｐｍで溶解させた。経時的に溶解液をとり、ＨＰＬＣを用いて溶解液中濃度を定量した。α型、γ型、δ型の各結晶の溶解速度はそれぞれ０.０１８ｍｇ／ｈｒ／ｃｍ２、０.０１６ｍｇ／ｈｒ／ｃｍ２、０.０１５ｍｇ／ｈｒ／ｃｍ２であった。
【産業上の利用可能性】
【００９５】
本発明の結晶は、医薬［不安関連疾患(神経症、心身症、不安障害など)、うつ病、てんかんなどの中枢性疾患、多発性硬化症などの免疫性神経疾患、狭心症、高血圧症などの循環器系疾患の治療薬および予防薬］に用いる安定した品質の原薬となり得る。
【図面の簡単な説明】
【００９６】
【図１】SPring-8 BL24XU Hutch Bを用いて得られた本発明のα型結晶の粉末Ｘ線回折パターンである。
【図２】X’Pert Alpha1 systemを用いて得られた本発明のα型結晶の粉末Ｘ線回折パターンである。
【図３】本発明のα型結晶の示差走査熱量サーモグラムである。
【図４】SPring-8 BL24XU Hutch Bを用いて得られた本発明のγ型結晶の粉末Ｘ線回折パターンである。
【図５】X’Pert Alpha1 systemを用いて得られた本発明のγ型結晶の粉末Ｘ線回折パターンである。
【図６】本発明のγ型結晶の示差走査熱量サーモグラムである。
【図７】SPring-8 BL24XU Hutch Bを用いて得られた本発明のδ型結晶の粉末Ｘ線回折パターンである。
【図８】X’Pert Alpha1 systemを用いて得られた本発明のδ型結晶の粉末Ｘ線回折パターンである。
【図９】本発明のδ型結晶の示差走査熱量サーモグラムである。
【図１０】SPring-8 BL24XU Hutch Bを用いて得られたβ型結晶の粉末Ｘ線回折パターンである。
【図１】
2008120683.tif 000009
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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