(57)【要約】【課題】従来の市販スピントラップ剤であるＰＢＮは結晶性が良いが活性酸素の捕捉が充分ではなかった。またＤＭＰＯ誘導体は活性酸素との親和性が良いが合成が複雑である【解決手段】本特許の試薬は特に活性酸素の捕捉に威力を発揮する。この試薬は合成が容脂溶性も高いため生体物質内での測定も可能である。活性酸素やフリーラジカルは、発がん、老化、生活習慣病といった病気や健康に深く関わっており、信頼性・特異性の高い定量法が求められるスピントラップ剤は、これらの疾病の研究において非常に有用性の高いものである。また、健康食品への関心が高まり、食品の抗酸化能の評価が重要になってきている。本スピントラップ剤によって、食品中の抗酸化成分の分速な定量が可能になる効果を奏する。【選択図】図２
2008050295.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アリールホスホリルアルキリデンＮ−オキシド化合物は、ＰＢＮが活性酸素を細くする能力が低かったのに対しホスフィニル基を有する新規直鎖型スピントラップ剤は活性酸素の捕捉能力が優れている、一般化学式は化１で表される。
【化１】
2008050295.tif 000003
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、活性酸素種と安定な付加体を生成する電子スピン共鳴測定用の直鎖スピン捕捉剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
体内に酸素を取り込んでエネルギーを燃焼させると、必ず活性酸素が発生することはよく知られている。
【０００３】
発生したスーパーオキシドアニオンラジカルは、本来消去できるはずであるが、生体のバランスが崩れることでそれらは、細胞膜やＤＮＡに損傷を与え種々の病気を引き起こすことが知られている。
【０００４】
スーパーオキシドアニオンラジカルは、酸素が一電子還元されることにより発生する活性酸素で、このラジカルの消去能の測定は一般に活性酸素消去能（抗酸化活性）の目安とされる。  
【０００５】
私たちの体を構成している約６０兆個の細胞は、酸素と糖によりエネルギーを生み出すが、このエネルギー代謝の過程から、スーパーオキシドアニオンラジカルが発生する。  
【０００６】
呼吸によって取り込んだ酸素の約２％がスーパーオキシドアニオンラジカルに変化するともいわれる。生体内には特に強いスーパーオキシドアニオンラジカル消去能を持つ酵素スーパーオキシドジスムタ−ゼ（ＳＯＤ）があり、一般的なスーパーオキシドアニオンラジカル消去物質の能力は、このＳＯＤの能力と比較し換算される。  
【０００７】
したがって、スーパーオキシドアニオンラジカル消去能は、ＳＯＤ活性と言われ、単位も酵素単位であるＵＮＩＴ／ｍｌ（ｍｇ）などの単位で表わされる。  
【０００８】
スーパーオキシドアニオンラジカルは、生体内に存在する種々の病気の原因となるラジカルで、動脈硬化や糖尿病などに加え、ガンや老化などのＤＮＡ損傷に大きな役割を果たしているといわれている。  
【０００９】
喫煙などにより活性酸素が体内に多く発生することも知られているこの活性酸素を抑制する抗酸化物質はポリフェノールやビタミンＣ、Ｅ、ベーターカロチンなどがある。
【００１０】
スピントラップ法は、生体内の活性酸素の電子スピン共鳴（ＥＳＲ）測定に広く利用されている（Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  Ｓｔｒｅｓｓ，
Ｈ．Ｓｉｅｓ，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９８５；Ｂ．Ｈａｌｌｉｗｅｌｌ ａｎｄ Ｊ．Ｍ．Ｃ．Ｇｕｔｔｅｒｉｄｇｅ， Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  Ｃｌａｒｅｎｄｏｎ  ＰＲＥＳＳ，
Ｏｘｆｏｒｄ， ２ｎｄ  ｅｄｎ．，１９８９．）。  
【００１１】
スーパーオキシドアニオンラジカルを捕らえるスピントラップ剤として最も良く用いられるのがＤＭＰＯ（５，５−ジメチル−１−ピロリン
Ｎ−オキシド）とＰＢＮ（ブチルフェニルニトロン）である（Ｅ．Ｇ．Ｊａｎｚｅｎ，ａｎｄ Ｊ．Ｉ．−Ｐ．Ｌｉｕ，Ｊ．Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．，１９７３，９，５１０；Ｅ．Ｇ．Ｊａｎｚｅｎ，ａｎｄ
Ｄ．Ｌ．Ｈａｉｒｅ  ｉｎ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＪＡＩ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，１９９０，２５３．）。
【００１２】
ポリフェノールやビタミンＣ、Ｅ、ベーターカロチンなどの抗酸化物質を含む食品のスーパーオキシドアニオンラジカル消去活性を調べるのにも用いられる。  
【００１３】
しかしながら、ＤＭＰＯはスーパーオキシドアニオンラジカルを捕らえるものの、その付加体の寿命が短く（半減期は５０秒ほど）、ヒドロキシルラジカルを捕捉したスペクトルに変化する。ＰＢＮに至っては酸素中心ラジカルを捕捉しない。（Ｅ．Ｆｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎ，Ｇ．Ｍ．Ｒｏｓｅｎ，ａｎｄ
Ｅ．Ｊ．Ｒａｕｃｋｍａｎ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９８０，１０２，４９９４．）。  
【００１４】
また、スペクトルの解析が難しく、熟練者でないと解析ができないという欠点がある。さらに、水溶性のものでないと測定できないため、細胞内での測定も困難である。  
【００１５】
従って、脂溶性の物質も測定可能な試薬の開発が強く望まれている。
【００１６】
またＰＢＮは比較的合成法が容易で結晶性も良いがスーパーオキシドアニオンラジカルのみならずヒドロキシルラジカルをも捕捉するのが困難である  
【００１７】
もし、活性酸素種を捕捉し、その化学種によってスペクトルが容易に見分けがつき、しかも得られる付加体の寿命の長い捕捉剤を作ることができればこの難点を解決できる。  
【００１８】
そのために多くの研究者がこれまでに新規スピントラップ剤の開発をしてきたが、構造を複雑にすることで活性酸素捕捉能を獲得したものばかりで、合成が容易な直鎖型スピントラップ剤で、実用化にいたった化合物は存在しない（Ｙ．−Ｋ．Ｘｕ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，  ２００２，６７，７６２４；
Ｈ．Ｋａｒｏｕｉ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９９，６４，１４７１； Ｅ．Ｇ．Ｊａｎｚｅｎ，ａｎｄＹ．−Ｋ．Ｚｈａｎｇ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９５，６０，５４４１；Ｖ．Ｒｏｕｂａｕｄ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．，１９９７，２，１８２７）。
本発明では従来のリン化合物の合成と反応性に関する研究により、これらの問題を解決する新規スピントラップ剤を開発した。
【特許文献１】特開２０００−１２８８９３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
従来の直鎖型スピントラップ剤であるＰＢＮは、幅広い分野で利用されており結晶性も良い。  
【００２０】
しかしながら、ＰＢＮは活性酸素種とのスピンアダクトは不安定でほとんど観測できない。  
【００２１】
この不安定性のためＰＢＮの用途は著しく制限されており、活性酸素と安定なスピンアダクトを形成する直鎖型スピントラップ剤が必要とされている。  
【００２２】
また、ＤＭＰＯを基本骨格とした改良スピントラップ剤は合成方法が複雑である。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明は、上記目的を達成するため、請求項１記載の発明は、アリールホスホリルアルキリデンＮ−オキシド化合物は、ＤＭＰＯ活性酸素との親和性が良く合成が容易である。  
【００２４】
ＤＭＰＯ誘導体の合成は最短で５時間精製の行程を含めると１０時間ほど必要である。  
【００２５】
アリールホスホリルアルキリデンＮ−オキシド化合物の合成に要する時間はＤＭＰＯ誘導体のそれの四分の一程度である。  
【００２６】
マイクロ波すなわち電子レンジを用いることで反応時間の大幅な短縮が可能であるまた、反応溶媒を必要としない。  
【００２７】
生体物質内での活性酸素の動向や抗酸化物質の作用を調べる際にこの点はきわめて有用である。  
【００２８】
実際に抗酸化作用をラジカル捕捉という手段で研究を行っている研究者は有機溶媒中でも測定できるスピントラップ剤の開発を待ち望んでいる。
【００２９】
これらの問題を解決するため検討した結果、アリールホスホリル基が直結したアルキリデンＮ−オキシド化合物が最も望ましい物性を持つことが分かった。  
【００３０】
本スピントラップ剤は従来のスピントラップ剤の代表として用いられているＤＭＰＯに比べて、捕捉したラジカルの寿命が長い（ＤＭＰＯの５０秒に対し化合物１ｃは７分程度）、合成が容易でスーパーオキシドアニオンラジカルの付加体とヒドロキシルラジカルのそれのスペクトルを見分けることが容易といった利点を有している。
【発明の効果】
【００３１】
本発明は、活性酸素やフリーラジカルは、発がん、老化、生活習慣病といった病気や健康に深く関わっており、信頼性・特異性の高い定量法が求められている。  
【００３２】
本スピントラップ剤は、これらの疾病の研究において非常に有用性の高いものである。  また、健康食品への関心が高まり、食品の抗酸化能の評価が重要になってきている。  
【００３３】
本スピントラップ剤によって、食品中の抗酸化成分の分速な定量が可能になる効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３４】
一般化学式の化合物１においてＲが、フェニル基、４−クロロフェニル基、プロピル基またはブチル基の化合物。
【実施例】
【００３５】
以下に実施例を挙げ、本発明のジフェニルホスフィニル基をもつ新規直鎖型スピントラップ剤について、図面を参照して詳細に説明する。ＥＳＲスペクトルはＪＥＯＬ  ＴＥＳ−ＲＥ１Ｘを用いて記録し、１Ｈ−及び１３Ｃ
−ＮＭＲスペクトルはＪＥＯＬ ＧＳＸ−４００ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒを用いた。ケミカルシフトはｐｐｍ単位で低領域はテトラメチルシランから得た。ＴＬＣ分析はＭｅｒｃｋ  ｓｉｌｉｃａ
ｇｅｌ ６０ Ｆ２５４  ａｌｕｍｉｎｕｍ ｐｌａｔｅｓ を用いた。
【００３６】
図１は、本発明に係わるＤＭＰＯによるスーパーオキシドアニオンラジカルの捕捉反応の化学式である。
【００３７】
図２は、本発明に係わるジフェニルホスフィニル基をもつ新規直鎖型スピントラップ剤合成経路の化学式である。
【００３８】
図２において、２の合成は、アセトニトリル（１５０ｍＬ）中でクロロジフェニルホスフィン（１００  ｍｍｏｌ，２０
ｍＬ）に水（１ ｍｏｌ，１８ｍＬ）を加え６時間還流した溶媒を留去し、残渣を水（５０ｍＬ）に溶解しジクロロエタンで抽出した（５０ｍＬｘ３）である。
【００３９】
収率９７％の１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．４７−７．５７（ｍ，６．５Ｈ），７．６７−７．７３（ｍ，４Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝４６４Ｈｚ，１Ｈ）．３１Ｐ−ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：２３．３．である。
【００４０】
また、中間体４ａの合成は、アセトン（８０ｍｍｏｌ）とベンジルアミン（２０
ｍｍｏｌ）を混ぜ合わせ、そこにＳｉｌｉｃａ ｇｅｌ（５．０ｇ）を加える。激しく撹拌し、Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌを均一にした後、Ｍｉｃｒｏ ｗａｖｅを１分間照射した。Ｓｉｌｉｃａ
ｇｅｌをジクロロメタンで薄め、吸引ろ過した。ろ液をエバポレーター、オイルポンプで留去すると、４ａを得た。
【００４１】
収率６８％で１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：１．４５（ｄ，６Ｈ，ＪＰ−Ｈ＝１４．８Ｈｚ），３．７８（ｓ，２Ｈ），７．２５−７．３３（ａｒ，５Ｈ），７．４４−７．５２（ａｒ，６Ｈ），８．１１−８．１６（ａｒ，４Ｈ）．１３Ｃ−ＮＭＲ
（１００  ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： ２２．１８（Ｊｐ−ｃ＝３．８Ｈｚ），４６．４６（Ｊｐ−ｃ＝９．９Ｈｚ）， ５６．１６（Ｊｐ−ｃ＝８５．５Ｈｚ），１２７．２１，１２８．１０，１２８．４３，１２８．５４，１２８．６９，１３０．７４，１３１．６４，１３１．８３，１３１．８６，１３２．９０，１３２．９８，１４０．７９．３１Ｐ−ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：３５．１１．である。
【００４２】
また、１ａの合成は、アセトン２５ ｍＬに４ａ（３．３２ ｍｍｏｌ）を溶かし、炭酸水素ナトリウム（１３．９
ｍｍｏｌ，４．２ ｅｑ）水溶液２５ ｍＬ、Ｏｘｏｎｅ（３．９８ ｍｍｏｌ，１．２ ｅｑ）水溶液２５ ｍＬを滴下し、約９０分撹拌した。その後、１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液を２５
ｍＬ加え、余分なＯｘｏｎｅをクエンチした。エバポレーターを用いて溶媒を留去し、ジクロロメタン（５０ ｍＬ×３回）で抽出した。有機層を、硫酸ナトリウムを用いて乾燥後、エバポレーター・オイルポンプを用いて溶媒を留去し、酢酸エチルを用いて再結晶を行い１ａを得た。
【００４３】
白色結晶の収率４４％の１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：ｄ＝１．８６
（ｄ， ６Ｈ，Ｊｐ−ｈ＝１２．８ Ｈｚ）， ７．３７−７．４９
（ａｒ， １０Ｈ）， ８．０９ （ｄ， １Ｈ，Ｊｐ−ｈ＝１．２ Ｈｚ），． １３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３ １００ＭＨｚ）ｄ＝２３．４，
７５．９（Ｊｐ−ｃ＝７４．９ Ｈｚ）， １２８．４， １２８．５， １２８．７， １２９．２， １２９．３， １３０．２， １３０．４， １３０．９， １３２．２，
１３２．３， １３２．４， １３２．９， １３３．０， １３３．４． ３１Ｐ−ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３ １６２ＭＨｚ）ｄ＝３７．６．である。
【００４４】
また、中間体４ｂの合成は、アセトン（８０ｍｍｏｌ）と４−クロロベンジルアミン（２０
ｍｍｏｌ）を混ぜ合わせ、そこにＳｉｌｉｃａ ｇｅｌ（５．０ｇ）を加える。激しく撹拌し、Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌを均一にした後、Ｍｉｃｒｏ ｗａｖｅを１分間照射した。Ｓｉｌｉｃａ
ｇｅｌをジクロロメタンで薄め、吸引ろ過した。ろ液をエバポレーター、オイルポンプで留去すると、４ｂを得た。  
【００４５】
収率６５％で１Ｈ−ＭＮＲ（ＣＤＣｌ３）：１．４４（ｄ，６Ｈ，Ｊｐ−ｈ＝１４．４Ｈｚ），３．７５（ｓ，２Ｈ），７．１９−７．２１（ａｒ，２Ｈ），７．２７−７．２９（ａｒ，２Ｈ），７．４５−７．５５（ａｒ，６Ｈ），８．０３−８．１３（ａｒ，４Ｈ）．１３Ｃ−ＮＭＲ
（１００  ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： ２２．３２（Ｊｐ−ｃ＝３．８Ｈｚ），４５．８９（Ｊｐ−ｃ＝９．９Ｈｚ）， ５６．２３（Ｊｐ−ｃ＝８４．０Ｈｚ），１２８．４６，  １２８．５７，１２８．７２，１２８．７７，１２８．８１，１２９．０６，１２９．１９，１２９．４６，１３０．６７，１３０．８８，１３０．９９，１３０．５６，１３１．９０，１３２．７９，１３２．８６，１３９．３４．３１Ｐ−ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：３５．３．である。
【００４６】
また、１ｂの合成は、アセトン２５ ｍＬに４ｂ（３．３２ ｍｍｏｌ）を溶かし、炭酸水素ナトリウム（１３．９
ｍｍｏｌ，４．２ｅｑ）水溶液２５ ｍＬ、Ｏｘｏｎｅ（３．９８ ｍｍｏｌ，１．２ ｅｑ）水溶液２５ ｍＬを滴下し、約９０分撹拌した。その後、１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液を２５
ｍＬ加え、余分なＯｘｏｎｅをクエンチした。エバポレーターを用いて溶媒を留去し、ジクロロメタン（５０ ｍＬ×３回）で抽出した。有機層を、硫酸ナトリウムを用いて乾燥後、エバポレーター・オイルポンプを用いて溶媒を留去し、酢酸エチルを用いて再結晶を行い１ｂを得た。
【００４７】
白色結晶の収率４７％の１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：ｄ＝１．８５（ｄ，６Ｈ，Ｊｐ−ｈ＝１３．２ Ｈｚ），７．２７−７．４９ （ａｒ，９Ｈ）, ８．０６ （ｂｓ， １Ｈ）， ８．０８−８．１１（ａｒ，５Ｈ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３１００ＭＨｚ）ｄ＝２３．１，
７５．８（Ｊｐ−ｃ＝７３．３ Ｈｚ）， １２８．２， １２８．３， １２８．７，１２８．９， １２９．８， １３０．１， １３２．１，１３２．２，１３２．６，１３２．７，１３６．１．３１Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３１６２ＭＨｚ）ｄ＝３７．４．である。
【００４８】
また、中間体の化合物４ｃの合成は、アセトン（８０ｍｍｏｌ）とｎ−プロピルアミン（２０ ｍｍｏｌ）を混ぜ合わせ、そこにＳｉｌｉｃａ
ｇｅｌ（５．０ｇ）を加える。激しく撹拌し、Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌを均一にした後、Ｍｉｃｒｏ ｗａｖｅを１分間照射した。Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌをジクロロメタンで薄め、吸引ろ過した。ろ液をエバポレーター、オイルポンプで留去すると、４ｃを得た。  
【００４９】
収率６９％で無色オイル状の１Ｈ−ＭＮＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）１．３５（ｄ，６Ｈ，Ｊｐ−ｈ＝１４．８Ｈｚ）１．４０−１．４６（ｍ，２Ｈ），２．５２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．４３−７．５３（ａｒ，６Ｈ），８．０９−８．１４（ａｒ，４Ｈ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．９６，２１．７４，２４．１２，４３．３７（ＪＰ−Ｃ＝９．９Ｈｚ），５５．４９（Ｊｐ−ｃ＝８６．９Ｈｚ），７１．９４（Ｊｐ−ｃ＝９０．７Ｈｚ），１２７．８６，１２８．０３，１２８．１６，１２８．２７，１２８．４９，１２８．６４，１２８．９０，１２９．０３，１３０．５３，１３０．６４，１３０．７６，１３０．８４，１３１．３６，１３１．３９，１３１．４２，１３１．６１，１３１．６４，１３１．６４，１３１．８５，１３２．３２，１３２．４０，１３２．５５，１３２．６３，１３２．７０，１３２．７８．３１Ｐ−ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３ １６２ＭＨｚ） ｄ＝３５．０．である。
【００５０】
また、１ｃの合成は、アセトン２５ ｍＬに４ｃ（３．３２ ｍｍｏｌ）を溶かし、炭酸水素ナトリウム（１３．９
ｍｍｏｌ，４．２ ｅｑ）水溶液２５ ｍＬ、Ｏｘｏｎｅ（３．９８ ｍｍｏｌ，１．２ ｅｑ）水溶液２５ ｍＬを滴下し、約９０分撹拌した。その後、１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液を２５
ｍＬ加え、余分なＯｘｏｎｅをクエンチした。エバポレーターを用いて溶媒を留去し、ジクロロメタン（５０ ｍＬ×３回）で抽出した。有機層を、硫酸ナトリウムを用いて乾燥後、エバポレーター・オイルポンプを用いて溶媒を留去し、酢酸エチルを用いて再結晶を行い１ｃを得た。
【００５１】
白色結晶の収率４６％の１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：ｄ＝０．９１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．６ Ｈｚ）， １．７５
（ｄ，６Ｈ，Ｊｐ−ｈ＝１２．８Ｈｚ）， ６．６９ （ｍ，１Ｈ）， ７．４４−７．５４ （ａｒ，６Ｈ）， ８．１４１−８．１８９
（ａｒ，４Ｈ）．１３Ｃ−ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３ １００ＭＨｚ）ｄ＝１０．０， ２０．１， ２３．１， ７４．３ （Ｊｐ−ｃ＝７５．６ Ｈｚ），１２８．３，１２８．４，１２９．３，１３０．３， １３２．２， １３３．０，
１３３．１ １３９．５（Ｊｐ−ｃ＝５．０ Ｈｚ）．３１Ｐ−ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３１６２ＭＨｚ）ｄ＝３７．９．である。
【００５２】
また、中間体の化合物４ｄの合成は、アセトン（８０ｍｍｏｌ）とｎ−ブチルアミン（２０ ｍｍｏｌ）を混ぜ合わせ、そこにＳｉｌｉｃａ
ｇｅｌ（５．０ｇ）を加える。激しく撹拌し、Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌを均一にした後、Ｍｉｃｒｏ ｗａｖｅを１分間照射した。Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌをジクロロメタンで薄め、吸引ろ過した。ろ液をエバポレーター、オイルポンプで留去すると、４ｄを得た。
【００５３】
収率６３％で無色オイル状の１Ｈ−ＭＮＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）１．３５（ｄ，６Ｈ，Ｊｐ−ｈ＝１４．８Ｈｚ）１．２７−１．４１（ｍ，４Ｈ），２．５５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．４３−７．５４（ａｒ，６Ｈ），８．０９−８．１４（ａｒ，４Ｈ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１３．８９，２０．９７（Ｊｐ−ｃ＝１２７．５ Ｈｚ），３２．９５，４１．０２（Ｊｐ−ｃ＝９．９ Ｈｚ），５５．３７（Ｊｐ−ｃ＝８７．０ Ｈｚ），７１．７２（Ｊｐ−ｃ＝９０．９ Ｈｚ），１２７．８２，１２７．９３，１２８．０２，１２８．１３，１２８．２５，１３０．５３，１３０．５７，１３１．４２，１３１．４７，１３１．４９，１３２．４５，１３２．５５，１３２．６３．３１Ｐ−ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３ １６２ＭＨｚ）３４．８８である。  
【００５４】
また、１ｄの合成は、アセトン２５ ｍＬに４ｄ（３．３２ ｍｍｏｌ）を溶かし、炭酸水素ナトリウム（１３．９
ｍｍｏｌ，４．２ ｅｑ）水溶液２５ ｍＬ、Ｏｘｏｎｅ（３．９８ ｍｍｏｌ，１．２ ｅｑ）水溶液２５ ｍＬを滴下し、約９０分撹拌した。その後、１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液を２５
ｍＬ加え、余分なＯｘｏｎｅをクエンチした。エバポレーターを用いて溶媒を留去し、ジクロロメタン（５０ ｍＬ×３回）で抽出した。有機層を、硫酸ナトリウムを用いて乾燥後、エバポレーター・オイルポンプを用いて溶媒を留去し、酢酸エチルを用いて再結晶を行い１ｄを得た。
【００５５】
収率３４％で無色オイル状の１Ｈ−ＭＮＲ（ＣＤＣｌ３）：ｄ＝０．８３（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２
Ｈｚ），１．３２−１．３７（ｍ，２Ｈ），１．７５（ｄ，６Ｈ，Ｊｐ−ｈ＝１３．２ Ｈｚ），６．７３（ｍ，１Ｈ）７．４４−７．５４（ａｒ，６Ｈ），８．１４− ８．１９（ａｒ
４Ｈ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：ｄ＝１４．２，１９．０，２３．２，２９．４，７４．４
（Ｊｐ−ｃ＝７６．４ Ｈｚ），１２８．３，１２８．４，１２９．３，１３０．３，１３２．１，１３２．２，１３３．０，１３３．１，１３８．４．３１Ｐ−ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３１６２ＭＨｚ）ｄ＝３７．９である。
【００５６】
図３において、化合物１ａによるスーパーオキシドアニオンラジカルの捕捉は、キサンチン（１ｍＭ）のリン酸バッファー溶液（１００ｍＭ、ｐＨ７．２）、２ｍＭ
ＤＴＰＡ、およびキサンチンオキシダーゼ（０．５ｕｎｉｔ／ｍＬ）によって発生したスーパーオキシドアニオンラジカルを化合物１ａ（１０ｍＭ）４０％ＤＭＳＯ溶液によって捕捉し、ＥＳＲは以下のセッティングで測定した図である。  
【００５７】
ｍｉｃｒｏｗａｖｅ  ｐｏｗｅｒ  １０ｍＷ，ｆｉｅｌｄ  ３３５±５ｍＴ，ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ０．１ｍＴ，ｔｉｍｅ  ｃｏｎｓｔａｎｔ  ０．１ｓｅｃ，ｓｗｅｅｐ  ｔｉｍｅ  ８ｍｉｎである。
【００５８】
図４において、化合物１ｂによるスーパーオキシドアニオンの捕捉は、化合物1ａと同様の条件で測定した図である。
【００５９】
図５において、化合物１ｃによるスーパーオキシドアニオンラジカルの捕捉は、キサンチン（１ｍＭ）のリン酸バッファー溶液（１００ｍＭ、ｐＨ７．２）、２ｍＭ
ＤＴＰＡ、およびキサンチンオキシダーゼ（０．５ｕｎｉｔ／ｍＬ）によって発生したスーパーオキシドアニオンラジカルを化合物１ｃ（１０ｍＭ）によって捕捉し、ＥＳＲは以下のセッティングで測定した図である。
【００６０】
図６において、化合物１ｄによるスーパーオキシドアニオンの捕捉は、化合物1ｃと同様の条件で測定した図である。
【００６１】
図７において、化合物1ｃによるヒドロキシルラジカルの捕捉は、ＦｅＳＯ４（１ｍＭ）を１００ｍＭ
リン酸緩衝溶液（ｐＨ７．２）、１０ｍＭ Ｈ２Ｏ２、２ｍＭ ＤＴＰＡ、そして化合物１ｃ（１０ｍＭ）を含んでいる溶液に加え、そのスピンアダクトのＥＳＲスペクトルを測定した図である。ＥＳＲは以下のセッティングで測定した。
【００６２】
ｍｉｃｒｏｗａｖｅ  ｐｏｗｅｒ  １０ｍＷ，
ｆｉｅｌｄ  ３３６．０±１０ｍＴ，ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ０．１ｍＴ，ｔｉｍｅ  ｃｏｎｓｔａｎｔ  ０．３ｓｅｃ，ｓｗｅｅｐ  ｔｉｍｅ  ８ｍｉｎである。
【００６３】
図８において、化合物１ｄによるヒドロキシルラジカルの捕捉は化合物1ｃと同様の条件で測定した図である。
【産業上の利用可能性】
【００６４】
植物の中に含まれる抗酸化物質の測定には、いろいろな方法があるが，その中でも有力な方法が電子スピン共鳴（ＥＳＲ）を用いたラジカル捕捉法である。これは植物の中に含まれるポリフェノールや，ビタミンＣ，ベーターカロチンなどの抗酸化能を測定するための受託機関が数多くある。その中で現在，スピン捕捉剤としての用途に適用する。医療研究機関での検査薬としての用途にも適用する
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】本発明に係わるホスフィニル基を有する新規スピントラップ剤のＤＭＰＯによるスーパーオキシドアニオンラジカルの捕捉反応の化学式である。
【図２】本発明に係わるホスフィニル基を有する新規スピントラップ剤の合成経路の化学式である。
【図３】本発明に係わるホスフィニル基を有する新規スピントラップ剤の化合物１ａとスーパーオキシドアニオンラジカルとの付加体のＥＳＲスペクトルである。
【図４】本発明に係わるホスフィニル基を有する新規スピントラップ剤の化合物１ｂとスーパーオキシドアニオンラジカルとの付加体のＥＳＲスペクトルである。
【図５】本発明に係わるホスフィニル基を有する新規スピントラップ剤の化合物１ｃとスーパーオキシドアニオンとの付加体のＥＳＲスペクトルである。
【図６】本発明に係わるホスフィニル基を有する新規スピントラップ剤の化合物１ｄとスーパーオキシドアニオンとの付加体のＥＳＲスペクトルである。
【図７】本発明に係わるホスフィニル基を有する新規スピントラップ剤の化合物１ｃとヒドロキシルラジカルとの付加体のＥＳＲスペクトルである。
【図８】本発明に係わるホスフィニル基を有する新規スピントラップ剤の化合物１ｄとヒドロキシルラジカルとの付加体のＥＳＲスペクトルである。
【図８】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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