(57)【要約】【課題】鉄欠乏性貧血症ないし潜在性鉄欠乏性貧血症を軽減、改善又は治療するための組成物を提供すること。【解決手段】本発明により、2mg以上の鉄と、1gより多く12g以下の量のイソロイシン、バリン、ロイシン及びアルギニンからなる群から選ばれる少なくとも１つのアミノ酸とを含有する組成物を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
2mg以上の鉄と、1gより多く12g以下の量のイソロイシン、バリン、ロイシン及びアルギニンからなる群から選ばれる少なくとも１つのアミノ酸とを含有する組成物。
【請求項２】
更に、グルタミンを含有する請求項１記載の組成物。
【請求項３】
アミノ酸が、イソロイシン、バリン及びロイシンである請求項１記載の組成物。
【請求項４】
アミノ酸が、イソロイシン、バリン、ロイシン、アルギニン及びグルタミンであり、イソロイシンが10〜40重量部、バリンが5〜20重量部、ロイシンが10〜35重量部、アルギニンが10〜40重量部、グルタミンが10〜40重量部である請求項２項記載の組成物。
【請求項５】
経口用医薬品、食品、栄養剤またはサプリメントの形態である請求項１〜４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６】
2mg以上の鉄と、イソロイシン、バリン、ロイシン及びアルギニンからなる群から選ばれる少なくとも１つのアミノ酸とを含有する、鉄欠乏性貧血症ないし潜在性鉄欠乏性貧血症を軽減、改善又は治療するための組成物。
【請求項７】
更に、グルタミンを含有する請求項６記載の組成物。
【請求項８】
アミノ酸が、イソロイシン、バリン及びロイシンである請求項６記載の組成物。
【請求項９】
アミノ酸が、イソロイシン、バリン、ロイシン、アルギニン及びグルタミンであり、イソロイシンが10〜40重量部、バリンが5〜20重量部、ロイシンが10〜35重量部、アルギニンが10〜40重量部、グルタミンが10〜40重量部である請求項７項記載の組成物。
【請求項１０】
2mg以上の鉄と、イソロイシン、バリン、ロイシン及びアルギニンからなる群から選ばれる少なくとも１つのアミノ酸との、鉄欠乏性貧血症ないし潜在性鉄欠乏性貧血症を軽減、改善又は治療するための組成物を製造するための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、鉄欠乏性貧血症ないし潜在性鉄欠乏性貧血症を軽減、改善又は治療するための組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
鉄欠乏性貧血症は世界で最も多く発症している栄養素欠乏症で、発展途上国では25〜50％、先進国においても10〜20％の人々が罹患していると言われている。
鉄は生体内では約70％がヘモグロビン（Hb）として存在し、酸素を全身に運搬する機能を有する。このような鉄は機能鉄と呼ばれている。残りの約30％は、肝臓や脾臓などの臓器内に実質的に蓄えられており、貯蔵鉄と呼ばれている。体内の鉄が不足すると、貯蔵鉄を取り崩してHbが作られる。さらに鉄不足の状態が続いて貯蔵鉄が枯渇すると、機能鉄が使用されるようになって潜在性鉄欠乏性貧血症となる。さらに鉄不足の状態が続いて貯蔵鉄も機能鉄も枯渇すると鉄欠乏性貧血症となる。これらの症状の軽減、改善又は治療のためには鉄剤の摂取が必須であるが、鉄を摂取すると、先ず機能鉄の量が増加し、その後に貯蔵鉄の量が増加する。従って、鉄欠乏性貧血症ないし潜在性鉄欠乏性貧血症を軽減、改善又は治療するには、機能鉄だけでなく、貯蔵鉄も十分量体内に存在させることが望まれる。
一方、鉄は吸収が悪いため長期の摂取が必要となる。また、鉄剤摂取は嘔吐や下痢、食欲不振等の消化管障害を引き起こす可能性がある。従って、その摂取期間をできるだけ短くすること、又はその摂取量をできるだけ少なくすることが望まれている。
これまでに、貧血モデルラットに鉄剤とプロリンを併用して投与するとHbの回復が促進すること（非特許文献１）、通常の食事をしたアスリートの血中ヘモグロビン濃度が5種類のアミノ酸（アルギニン、グルタミン、バリン、イソロイシン、ロイシン）摂取により増加すること（特許文献１）、グルタミンまたはバリンが鉄の吸収を促進すること（特許文献２、非特許文献２）、アルギニン摂取により腎性貧血患者の血中ヘモグロビン濃度が増加すること（特許文献３）が報告されている。
【０００３】
【特許文献１】特開2002-3372号公報
【特許文献２】国際特許公開2006/046880 A1
【特許文献３】国際特許公開2005/089743 A1
【非特許文献１】J. Nutr Sci Vitaminol, 49, 7-12, 2003.
【非特許文献２】Br. J. Nutr. (1975), 33, 351.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、鉄欠乏性貧血症ないし潜在性鉄欠乏性貧血症を軽減、改善又は治療するための組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、優れた鉄欠乏性貧血症を軽減、改善又は治療するための組成物を見出すべく鋭意検討した結果、特定量の鉄と、イソロイシン、バリン、ロイシン及びアルギニンからなる群から選ばれる少なくとも１つのアミノ酸とを組み合わせると、鉄欠乏性貧血症ないし潜在性鉄欠乏性貧血症の優れた軽減、改善又は治療効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、2mg以上の鉄と、1gより多く12g以下の量のイソロイシン、バリン、ロイシン及びアルギニンからなる群から選ばれる少なくとも１つのアミノ酸とを含有する組成物を提供する。
【０００６】
本発明はまた、2mg以上の鉄と、イソロイシン、バリン、ロイシン及びアルギニンからなる群から選ばれる少なくとも１つのアミノ酸とを含有する、鉄欠乏性貧血症ないし潜在性鉄欠乏性貧血症を軽減、改善又は治療するための組成物を提供する。
本発明はまた、2mg以上の鉄と、イソロイシン、バリン、ロイシン及びアルギニンからなる群から選ばれる少なくとも１つのアミノ酸との、鉄欠乏性貧血症ないし潜在性鉄欠乏性貧血症を軽減、改善又は治療するための組成物を製造するための使用を提供する。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、鉄欠乏性貧血症ないし潜在性鉄欠乏性貧血症の軽減、改善又は治療が可能となり、貧血に伴う労作意欲の低下、易疲労感、息切れ、立ちくらみ、動悸、頭痛、肩こり、冷え性等の臨床症状が改善できる。
本発明によればまた、回復までの鉄の摂取期間を短縮することができ、或いは鉄の摂取量を低減することができるため、鉄の服用に伴う、嘔吐や下痢、食欲不振等の消化管障害といった副作用発現もほとんどなく鉄欠乏性貧血症ないし潜在性鉄欠乏性貧血症を軽減、改善又は治療できる。
さらに、本発明によれば、在宅で毎日簡単に服用できることから、確実に、鉄欠乏性貧血症ないし潜在性鉄欠乏性貧血症の軽減、改善又は治療効果を奏することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
＜鉄（鉄剤）＞
本発明において用いることのできる鉄は、塩酸、硫酸、リン酸などの無機酸との塩、酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、コハク酸等の有機カルボン酸との塩、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機スルホン酸との塩およびＥＤＴＡ、ＤＴＰＡなどのキレート剤またはトランスフェリン、ラクトフェリンなどのタンパク質による鉄錯体の形態をとることができる。
本発明の組成物における鉄の量は、2mg以上、好ましくは3〜10mgである。なお、塩および錯体の形態をとる場合、鉄元素に換算した場合の量が上記範囲内にあることを意味する。鉄の量がこのような範囲にあると、ヒト鉄要求量および鉄摂取による副作用軽減の観点から好ましい。
【０００９】
＜アミノ酸＞
本発明において用いるアミノ酸は、イソロイシン、バリン、ロイシン及びアルギニンからなる群から選ばれる少なくとも１つのアミノ酸である。これらのアミノ酸は、遊離体、塩、及び溶媒和物の何れの形態でも良い。塩としては、例えば、式中のカルボキシル基に対しては、アンモニウム塩、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、アルミニウム塩、亜鉛塩、トリエチルアミン、エタノールアミン等の有機アミンとの塩を、塩基性基に対しては、塩酸、硫酸、リン酸などの無機酸との塩、酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、コハク酸等の有機カルボン酸との塩、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機スルホン酸との塩を挙げることができる。溶媒和物としては、水和物、アルコール付加物等を挙げることが出来る。これらのアミノ酸はまた、Ｌ体、Ｄ体、ＤＬ体およびＬ体とＤ体の任意の比率の混合物のいずれであっても良い。これらのアミノ酸は、上記物質の２種類以上を併用することができることは言うまでもない。
本発明の組成物におけるアミノ酸の総量、つまりアミノ酸が一種の場合はその量、アミノ酸が二種以上の場合はそれらの合計量である。アミノ酸の総量が2g以上であるのが好ましく、4g以上であるのがより好ましい。アミノ酸の総量の上限は、12g以下であるのが好ましく、10g以下であるのがより好ましい。このような範囲は、後掲実施例でラットの貧血改善効果を示したアミノ酸用量とその際の摂取タンパク質量からヒトでの効果量を推定し設定されたため、十分な貧血改善効果を奏せしめ得る点で好ましい。
本発明の組成物は、更にグルタミンを含有することもできる。このうち、イソロイシン、バリン及びロイシンの３種を含有するのが好ましい。なお、これら３種のアミノ酸をＢＣＡＡ（branched-chain amino acids）ともいう。これら３種のアミノ酸を含有すると、タンパク合成促進の観点で好ましい。イソロイシン、バリン、ロイシン、アルギニン及びグルタミンの５種を含有するもまた好ましい。５種のアミノ酸全てを含有すると、アミノ酸インバランスの危険性を低減させる観点で好ましい。
本発明の組成物において、イソロイシンが10〜40重量部、バリンが5〜20重量部、ロイシンが10〜35重量部、アルギニンが10〜40重量部、グルタミンが10〜40重量部であるのが好ましい。各アミノ酸の量がこのような範囲にあると、アミノ酸インバランスの低減および貧血改善効果発現の観点から好ましい。
【００１０】
本発明の組成物を、成長期の子供、若い女性、特に妊婦、潰瘍又は腫瘍による消化管出血や痔からの出血などによる慢性的な出血が見られる人、胃や十二指腸切除後などの吸収不良の人に、連続的に数十日間投与ないし経口摂取させることにより、鉄欠乏性貧血症ないし潜在性鉄欠乏性貧血症を軽減、改善又は治療することができる。
上記目的のために用いる投与ないし摂取量は、年齢、体重などにより決定されるが、通常成人一日あたりの量として、経口投与ないし摂取の場合、2ｇ〜12ｇ、非経口投与ないし摂取の場合、2ｇ〜6ｇの範囲で所期の効果が期待でき、この範囲で最も優れた効果が得られる量を選択することができる。一回あたりの投与ないし摂取量は、一日あたりの投与ないし摂取量が上記範囲内になるように設定すればよく、例えば、2ｇ〜6ｇとすることができる。
本発明の組成物は、医薬組成物形態の他、上記疾患又は病態の軽減、改善又は治療のために用いられるものである旨の表示を附した食品、健康食品、サプリメント、栄養剤組成物又は飼料等の形態をとることもできる。
【００１１】
医薬組成物形態の場合、医薬的に許容できる担体又は希釈剤、例えばカルボキシメチルセルロース・エチルセルロース等のセルロース誘導体、ポテトスターチ・コーンスターチ等の澱粉類、乳糖・ショ糖等の糖類、ピーナツ油・コーン油・ゴマ油等の植物性油、ポリエチレングリコール、アルギン酸、ゼラチン、タルク等と混合し、錠剤・散剤・丸剤・顆粒剤・カプセル剤・シロップ等の経口剤、皮下注射剤・静脈内注射剤・筋肉内注射剤・硬膜外腔注射剤・くも膜下腔注射剤等の注射剤、経鼻投与製剤・経皮製剤・軟膏剤等の外用剤、直腸坐剤・膣坐剤等の坐剤、点滴剤等の剤形とすることができる。
本発明の医薬組成物は、経口的又は非経口的に、例えば経腸、経静脈投与することができる。
【００１２】
食品形態の場合、適宜の添加剤を使用して常法により調製することもできる。このような添加剤としては味を調整改良する果汁、デキストリン、環状オリゴ糖、糖類（果糖、ブドウ糖、液糖、蔗糖）、酸味料、香料、抹茶粉末、油脂、テクスチャーを改善する乳化剤、コラーゲン、全脂粉乳、増粘多糖類や寒天（ゼリー飲料の場合）など通常健康食品又は栄養機能食品の成分として使用されているものを挙げる事ができる。
本発明の食品は、更に、アミノ酸、ビタミン類、特にビタミンB2、ビタミンＣ、卵殻カルシウムパントテン酸カルシウム、その他のミネラル類、特にカルシウム、ローヤルゼリー、プロポリス、蜂蜜、食物繊維、アガリクス、キチン、キトサン、カプサイシン、ポリフェノール、カロテノイド、脂肪酸、ムコ多糖、補酵素、抗酸化物質などを配合することにより健康食品又は栄養機能食品とすることもできる。これらの量は特に限定されないが、本発明の組成物が栄養機能食品の形態をとる場合、ビタミンB2を0.33〜12mg含有するのが好ましい。本発明の組成物が栄養機能食品の形態をとる場合、ビタミンＣを24〜1000mg含有するのが好ましい。カルシウムの場合、210〜600mg含有するのが好ましい。
【００１３】
サプリメント形態の場合、乳化剤、色素、香料等と混合し、錠剤、カプセル状、リキッド状等の剤型をとることができる。
本発明の組成物は、ブタ、ウシ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、サル等の哺乳動物またはニワトリ、キジ、ダチョウ等の鳥類の飼料としてもよく、例えば、当該技術分野において周知の方法にしたがい、飼料用の固体又は液体の添加剤とすることもできる。
本発明の組成物の製品形態には特別の制限は無く、通常用いられているアミノ酸の摂取できる形態であればいずれの形態でもよい。このような形態としては経口摂取であれば適当な賦形剤を使用した粉末、顆粒、タブレット、液体（飲料、ゼリー飲料）、キャンディ（チョコレート等）、バー状ないしステック状の菓子あるいは上記１種あるいは２種のアミノ酸の単なる混合物を挙げることができる。また静脈投与であれば上記１種あるいは２種のアミノ酸を含有した輸液、水溶液、用時調整のためのアミノ酸粉末を挙げることができる。
【実施例】
【００１４】
以下、本発明を具体的に実施例で説明する。ここで用いた分析項目は、血中ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット値、赤血球数、血清フェリチン濃度であり、これらは、貧血の診断もしくは貧血回復の程度を判断するために一般的に測定され、薬理学および生理学の観点から妥当なものである。今回の全ての結果は平均値±標準誤差で示した。また統計解析には、各測定項目についてＴ検定（鉄剤単独群に対して）またはＴｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒの多重検定を用いて全ての試験群間の平均値の検定を行った。なお、本明細書において、単に「％」と記載した場合は質量％を表す。
【００１５】
試験例１（鉄欠乏性貧血モデルラットに鉄剤と各種アミノ酸を併用して供与した際の貧血指標血中成分の確認）
（１）試験の概要：
（ａ）３週間にわたる鉄欠乏食供与および瀉血により、鉄欠乏状態になり鉄欠乏性貧血モデルラットを作成できることが報告されている（日本栄養学会誌 57, 89-97, 2004）。そこで、この鉄欠乏性貧血モデルラットを対象に、鉄剤とともに５種類の混合アミノ酸（バリン、イソロイシン、ロイシン（以下、3つあわせてＢＣＡＡという）、アルギニン，グルタミンを適宜組み合わせて３週間供与することにより貧血状態の改善が促進され得るかを検討した。
（ｂ）３週齢のＷｉｓｔａｒ系雄ラットを用いて実験を開始した。
（ｃ）ラット４２匹に鉄欠乏食（鉄として２〜３ｍｇ／ｋｇ含有）を３週間供与し、その間に１週間に１回、計３回瀉血を行った（貧血誘導期）。その後、血中ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット値、赤血球数をもとに以下の７群に群分けし、（ｉ）鉄剤単独群：鉄欠乏食＋クエン酸第一鉄  （ｉｉ）プロリン併用群：鉄欠乏食＋クエン酸第一鉄＋プロリン  （ｉｉｉ）アラニン併用群：鉄欠乏食＋クエン酸第一鉄＋アラニン  （ｉｖ）グリシン併用群：鉄欠乏食＋クエン酸第一鉄＋グリシン  （ｖ）３ＡＡ併用群：鉄欠乏食＋クエン酸第一鉄＋プロリン＆アラニン＆グリシン  （ｖｉ）５ＡＡ併用群：鉄欠乏食＋クエン酸第一鉄＋ＢＣＡＡ＆アルギニン＆グルタミン  （ｖｉｉ）ＦＲＴ組成ＡＡ併用群：鉄欠乏食＋クエン酸第一鉄＋フェリチンタンパク質組成アミノ酸それぞれ対応している飼料を供与した（貧血回復期）。３週間経過後採血し、血中ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット値、赤血球数および血清フェリチン濃度を測定した。
【００１６】
（ｄ）アミノ酸をクエン酸第一鉄と併用して添加した群はすべて、鉄剤単独群に比べ血清フェリチン濃度が増加した。特にＢＣＡＡ＆アルギニン＆グルタミンを添加した群ではその増加が著しく、鉄剤単独群に比べ平均値が約３倍まで上昇した（図１参照）。また赤血球数についても、５ＡＡ併用群において鉄剤単独群に比べ有意に増加した（第４表参照）。
（ｅ）以上の結果より、ＢＣＡＡ,アルギニン,グルタミンの５種類のアミノ酸を鉄剤と併用摂取することにより、鉄剤単独群に比べ赤血球数及び血清フェリチン濃度を共に有意に増加させることが確認された。赤血球数の増加は機能鉄回復の指標であり、血清フェリチン濃度の増加は、貯蔵鉄の回復を示す。そのため、この結果より、鉄とＢＣＡＡ,アルギニン,グルタミンの５種類のアミノ酸とを併用すると、鉄欠乏性貧血症または鉄欠乏症の回復を促進する効果を有すると考えられる。
【００１７】
（２）実験の詳細
（ａ）各群の構成：下記第１表に示す。
【００１８】
【表１】
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【００１９】
【化１】
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【００２０】
（ｃ）飼料調整：貧血誘導期飼料は、下記第２表に示す鉄欠乏食組成に従って調製した。貧血回復期飼料は、貧血誘導期飼料にクエン酸第一鉄を２８８ｍｇ／ｋｇ（鉄元素として３０ｍｇ／ｋｇ）および各種アミノ酸を２０ｇ／ｋｇ混合し、貧血回復期におけるそれぞれの群の飼料を作成した。
【００２１】
【表２】
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【００２２】
（ｄ）アミノ酸比率：ＢＣＡＡ＆アルギニン＆グルタミンおよびフェリチンタンパク質組成アミノ酸の割合を下記第３表に示す。５ＡＡ併用群およびＦＲＴ組成ＡＡ併用群の貧血回復期における飼料は、このアミノ酸比で飼料中に２０ｇ／ｋｇ添加された。
【００２３】
【表３】
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【００２４】
（ｅ）動物飼育：３週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット４２匹（７試験群×６匹）を日本チャールス・リバーより購入し、１２時間の明暗サイクル（７：００−１９：００）、室温２５℃の動物飼育室で１ケージに２匹ごとを飼育した。１週間の馴化後、鉄欠乏食（鉄として２〜３ｍｇ／ｋｇ含有）を供与し、１週間に１回１ｍｌ程度瀉血を行った（貧血誘導期）。３週間経過時点で、血中ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット値、赤血球数および血清フェリチン濃度が一定になるように７群に群分けし、それぞれの群に鉄欠乏食に（ｉ）クエン酸第一鉄  （ｉｉ）クエン酸第一鉄＋プロリン  （ｉｉｉ）クエン酸第一鉄＋アラニン  （ｉｖ）クエン酸第一鉄＋グリシン  （ｖ）クエン酸第一鉄＋プロリン＆アラニン＆グリシン  （ｖｉ）クエン酸第一鉄＋ＢＣＡＡ＆アルギニン＆グルタミン  （ｖｉｉ）クエン酸第一鉄＋フェリチンタンパク質組成アミノ酸を添加した各種飼料を３週間供与した（貧血回復期）。なおクエン酸第一鉄は飼料中に２８８ｍｇ／ｋｇ（鉄元素として３０ｍｇ／ｋｇ）、また各種アミノ酸は２０ｇ／ｋｇ添加された。
（ｆ）貧血指標血中成分の測定：貧血回復期終了時点に、尾静脈および後大静脈から採血し、その血液を用いて血中ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット値、赤血球数および血清フェリチン濃度を測定した。血中ヘモグロビン濃度は、動物用生化学自動分析装置（富士写真フィルム製  富士ドライケム５５００）を用いて採血後即時に測定された。ヘマトクリット値および赤血球数は、全血を用いて多項目自動血球計数装置（Ｓｙｓｍｅｘ社製）によって分析された。また血清フェリチン濃度は、採取した血液を遠心機（日立社製 ｈｉｍａｃＣＦ１５Ｄ）で遠心し、ラットフェリチン測定キット（パナファーム・ラボラトリーズ）を用いて測定した。
（ｇ）試験結果：鉄剤と各種アミノ酸を３週間併用して供与した後の血中ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット値および赤血球数を下記第４表にまとめた。＊は（ｉ）鉄剤単独群に比べ危険率Ｐ＜０．０５で有意差があることを示す。また血清フェリチン濃度の結果は、図１に示した。
【００２５】
【表４】
2008050277.tif 000007
【００２６】
試験例２（鉄欠乏性貧血モデルラットに鉄剤と各種アミノ酸を併用して供与した際の貯蔵鉄量の確認）
（１）試験の概要：
（ａ）試験例１と同様に貧血を誘発させたラットにアルギニン、グルタミン、イソロイシン、ロイシン、バリンまたはこれら５種類のアミノ酸混合を鉄剤とともに２週間供与することにより脾臓および肝臓中の鉄含量が増加するかを検討した。
（ｂ）試験１と同様に３週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラットに鉄欠乏食を３週間供与して貧血モデルラットを作成し、６群に群分けした。それぞれの群に、クエン酸第一鉄単独もしくはクエン酸第一鉄＋アミノ酸（アルギニン、グルタミン、イソロイシン、ロイシン、バリンまたはこれら５種類のアミノ酸混合）を2週間供与し、脾臓および肝臓中の鉄含量を測定した。
【００２７】
（ｃ）アミノ酸を供与された群は、鉄剤単独群に比べ脾臓中の鉄含量が増加することが確認された。中でも特に５種類アミノ酸混合を供与した群において脾臓中の鉄含量が増加した（第６表参照）。しかし本試験では肝臓中の鉄含量はアミノ酸供与によって特に変化しなかった。
（ｄ）以上の結果より、ＢＣＡＡ,アルギニン,グルタミンの５種類のアミノ酸を鉄剤と併用摂取することにより、鉄剤単独群に比べ貯蔵鉄が増加することが確認された。そのためこの結果より、鉄剤とＢＣＡＡ,アルギニン,グルタミンの５種類のアミノ酸との併用は、鉄剤単独摂取に比べて鉄欠乏性貧血症または鉄欠乏症からの回復を促進することが示された。
【００２８】
（２）実験の詳細
（ａ）各群の構成：下記第５表に示す。
【００２９】
【表５】
2008050277.tif 000008
【００３０】
【化２】
2008050277.tif 000009
【００３１】
（ｃ）飼料調整：試験１と同様に飼料を調整した（第２表参照）。なおクエン酸第一鉄および各種アミノ酸も試験１と同様の添加量とした。
【００３２】
（ｄ）アミノ酸比率：ＢＣＡＡ＆アルギニン＆グルタミンのアミノ酸比率は試験１と同様に調整された（第３表参照）。
【００３３】
（ｅ）動物飼育：３週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット２８匹（7試験群×４匹）を日本チャールス・リバーより購入し、試験１と同条件で飼育を開始した。１週間の馴化後、試験１と同様にラットに貧血を誘導させた。３週間経過時点で、血中ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット値、赤血球数および血清フェリチン濃度が一定になるように７群に群分けし、それぞれの群に鉄欠乏食に（ｉ）クエン酸第一鉄  （ｉｉ）クエン酸第一鉄＋アルギニン  （ｉｉｉ）クエン酸第一鉄＋グルタミン  （ｉｖ）クエン酸第一鉄＋イソロイシン  （ｖ）クエン酸第一鉄＋ロイシン  （ｖｉ）クエン酸第一鉄＋バリン  （ｖｉｉ）クエン酸第一鉄＋ＢＣＡＡ＆アルギニン＆グルタミンを添加した各種飼料を２週間供与した（貧血回復期）。
（ｆ）脾臓及び肝臓中鉄含量の測定：貧血回復期終了時点に、過麻酔下でラットから脾臓および肝臓を摘出し、重量を測定した。それらを凍結乾燥機を用いて乾燥後、めのう乳鉢を用いて粉砕した。硝酸および過塩素酸によって粉砕したサンプルから鉄を抽出し、原子吸光光度計を用いて鉄イオン濃度を測定した。
（ｇ）試験結果：鉄剤と各種アミノ酸を２週間併用して供与した後の脾臓中の鉄含量を第６表にまとめた。＊は（ｉ）鉄剤単独群に比べ危険率Ｐ＜０．１で有意差があることを示す。なお肝臓中の鉄含量は本試験ではアミノ酸添加によって変化しなかった。
【００３４】
【表６】
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【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】図１は、試験１の貧血回復期終了時点における血清フェリチン濃度を示す図である。血清フェリチン濃度は貯蔵鉄量と正の相関を有することが知られており、貯蔵鉄量の推定に用いられる。＊鉄剤単独群に比べ、危険率Ｐ＜０．０５で有意差があることを示す。
【図１】
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