(57)【要約】【課題】  皮膚を保護する新規で安全な皮膚外用剤を提供する。【解決手段】  羅漢果配糖体を含有することにより、表皮細胞賦活効果、線維芽細胞賦活効果、コラーゲン合成促進効果、過酸化脂質の細胞毒性抑制効果、および紫外線に対する皮膚保護効果を著しく増強することが可能となった。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
羅漢果配糖体を含有する皮膚外用剤。
【請求項２】
表皮細胞賦活効果、線維芽細胞賦活効果、コラーゲン合成促進効果、過酸化脂質の細胞毒性抑制効果、紫外線に対する皮膚保護効果のうちひとつ以上を有することを特徴とする請求項１記載の皮膚外用剤。
【請求項３】
前記の羅漢果配糖体は以下の一般式を有する。組成物：
【化１】
2008120781.tif 000007
ここで、Ｒ１およびＲ２は、独立して、直鎖状もしくは分枝状に連結された糖残基およびその修飾物であって、修飾物はシクロアルキル、ハロゲン化されていてもよいアルキル、ハロゲン化されていてもよいアルケニル、ハロゲン化されていてもよいアルキニル、ハロゲン化もしくはアルキル化されていてもよいアリールアルキル、ハロゲン化されていてもよいアリールアルケニル、ハロゲン化されていてもよいアリールアルキニル、ハロゲン、アミノ、ホルミル、およびＨからなる群から選択される；ただし、Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも一方は糖残基またはその修飾物である；また、Ｒ３はヒドロキシ基またはケトン基から選択される。
【請求項４】
前記の羅漢果配糖体がモグロサイドＩＶ、モグロサイドＶ、シアメノサイドＩ、および１１−オキソーモグロサイドＶなどの配糖体の１種あるいは２種以上の混合物を含み、さらにモグロサイドＩＶ、モグロサイドＶ、シアメノサイドＩ、および１１−オキソーモグロサイドＶの合計含有量が３３重量％以上、好ましくは３５重量％以上とする羅漢果からの抽出物である。また、モグロサイドＩＶ、モグロサイドＶ、シアメノサイドＩ、および１１−オキソーモグロサイドＶは下表に示す。組成物：
【表１】
2008120781.tif 000008
【請求項５】
羅漢果配糖体０．００００１重量％〜１０重量％含む、請求項１、２の皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、羅漢果配糖体を含有する新規で安全な皮膚外用剤を提供するものであって、表皮細胞賦活効果、線維芽細胞賦活効果、コラーゲン合成促進効果、過酸化脂質の細胞毒性抑制効果、紫外線に対する皮膚保護効果を有するものである。
【背景技術】
【０００２】  洗剤中の界面活性剤や紫外線等の外来ストレスまたは加齢によって表皮ターンオーバーの異常や真皮の線維芽細胞の機能低下やマトリックス線維の減少または変性を生じ、シワの発生および皮膚弾性の低下などの皮膚老化現象をもたらす（非特許文献１、非特許文献２参照）。従って、皮膚の老化防止、改善作用を有する皮膚外用剤には、表皮細胞や線維芽細胞の賦活作用あるいはマトリックス線維であるコラーゲンの合成促進作用を有する肌荒れ改善成分や、紫外線障害から皮膚を保護する成分が配合されていることが有用とされている（非特許文献３参照）。【０００３】  例えば、細胞賦活化剤として、アブラナ科ブラシカ属の抽出物（特許文献１参照）、ショウガ科ウコン属植物の抽出物（特許文献２参照）；コラーゲン合成促進剤として、Ｌ−アスコルビン酸およびその誘導体（特許文献３参照）、グリコサミンおよびその誘導体（特許文献４参照）；過酸化脂質や紫外線に対する細胞毒性抑制剤として、セイヨウスノキ抽出物（特許文献５参照）、ダイオウ抽出物（特許文献６参照）、グラブリジン（特許文献７参照）、セリシン（特許文献８参照）などが開示されている。また、紫外線の影響を抑制するために、酸化チタンや酸化亜鉛などの紫外線遮蔽剤や有機紫外線吸収剤を含んだサンスクリーン剤などが用いられてきた（非特許文献４、非特許文献５参照）。【０００４】  しかしながら，上記開示されている成分の中には、作用が弱く、または、有効な効果を得るためにかなりの量を含有させなければならなかったり、中には、安定性が悪いものも存在するなどの問題点が多い。さらに、酸化チタンや酸化亜鉛などの紫外線遮蔽剤や有機紫外線吸収剤を含むサンスクリーン剤は、紫外線により二次的に活性酸素を発生させたり、紫外線吸収剤自体に皮膚刺激性があるなどの問題があることから、安全で、効果の高い皮膚外用剤の開発が望まれている。【０００５】  一方、羅漢果抽出物については、皮膚外用剤への配合例として、皮脂の酸化を防ぎ、皮膚炎等の皮膚疾患を防ぐ化粧料があるが（特許文献９参照）、皮脂の抗酸化により皮膚を守る効果が実証されていない。また、羅漢果抽出物を含有するストレスによる肌荒れ予防改善も提案されているが（特許文献１０参照）、効果が低い。このように、前記記載の先行技術にある羅漢果抽出物は、天然由来の多成分であるため、紫外線保護効果や肌荒れ改善効果の有する活性成分も含まれるものの、含量が低いか、阻害成分があるかのために、その効果は低い。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】  本発明者らは、羅漢果から濃縮精製した羅漢果配糖体の薬理作用を調べたところ、驚くべきことに細胞賦活作用、コラーゲン合成促進作用、過酸化脂質および紫外線保護作用を発揮することを見出し、本発明を完成するに至った。【０００７】  すなわち、本発明は、羅漢果配糖体を含有し、表皮細胞賦活作用、線維芽細胞賦活作用、コラーゲン合成促進作用、過酸化脂質の細胞毒性抑制作用、紫外線に対する皮膚保護作用を示す多機能性の皮膚外用剤に関するものである。
【発明の効果】
【０００８】  以上記載のごとく、本発明は、表皮細胞賦活作用、線維芽細胞賦活作用、コラーゲン合成作用、過酸化脂質の細胞毒性抑制作用、ＵＶＢの細胞毒性抑制作用を著しく有する多機能性の皮膚外用剤を提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】  羅漢果は、中国広西省の桂林周辺で育つ、ウリ科、ツルレイシ属の植物の果実である。植物の学名はＳｉｒａｉｔｉａ  ｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉ  Ｓｗｉｎｇｌｅという。古代より中国の民間薬として広く利用されており、のどの荒れおよび痛みの緩和、咳き止め、去痰、気管支炎の緩和、扁桃腺炎の緩和、解熱、胃腸の機能促進、ストレス解消、利尿、便秘解消など多数にのぼり、そのほかに高血圧症、糖尿病などを防止する作用、老化防止作用などの効果も有することが知られている。近年ではさらに、羅漢果には、フリーラジカル消去作用および抗過酸化効果を有する成分が含まれていることが明らかになっている（非特許文献６参照）。【００１０】  本発明において羅漢果配糖体とは、以下の一般式を有するものを指す。組成物：
【化１】
2008120781.tif 000002
ここで、Ｒ１およびＲ２は、独立して、直鎖状もしくは分枝状に連結された糖残基およびその修飾物、修飾物はシクロアルキル、ハロゲン化されていてもよいアルキル、ハロゲン化されていてもよいアルケニル、ハロゲン化されていてもよいアルキニル、ハロゲン化もしくはアルキル化されていてもよいアリールアルキル、ハロゲン化されていてもよいアリールアルケニル、ハロゲン化されていてもよいアリールアルキニル、ハロゲン、アミノ、ホルミル、およびＨからなる群から選択される；ただし、Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも一方は糖残基またはその修飾物である；また、Ｒ３はヒドロキシ基またはケトン基から選択される。【００１１】  また、羅漢果配糖体がモグロサイドＩＶ、モグロサイドＶ、シアメノサイドＩ、および１１−オキソーモグロサイドＶなどの配糖体の１種あるいは２種以上の混合物を含み、さらにモグロサイドＩＶ、モグロサイドＶ、シアメノサイドＩ、および１１−オキソーモグロサイドＶの合計含有量が３３重量％以上、好ましくは３５重量％以上とする羅漢果からの抽出物である。また、モグロサイドＩＶ、モグロサイドＶ、シアメノサイドＩ、および１１−オキソーモグロサイドＶは下表に示す。組成物：
【表１】
2008120781.tif 000003
【００１２】  羅漢果配糖体は羅漢果抽出物より匂いが弱く、色も薄いため、化粧品や皮膚外用剤などに配合しやすい。【００１３】  羅漢果配糖体の製造方法は、羅漢果のような天然の羅漢果配糖体含有植物から抽出および単離してもよいし、合成してもよい。具体的には、例えば、羅漢果の果実を洗浄し、粉砕した後、水で抽出して得られた抽出液についてろ過、カラム吸収、カラム分離、回収、濃縮、乾燥などの工程を行なうことにより製造される（特許文献９）。【００１４】
【非特許文献１】正木  仁、フレグランスジャーナル、２６（４）、１８−２６（１９９８）
【非特許文献２】段野  貴一郎、フレグランスジャーナル、２６（４）、１１−１７（１９９８）
【非特許文献３】田中  浩、フレグランスジャーナル、２６（４）、４３−４７（１９９８）
【非特許文献４】Ｓｈａａｔｈ，Ｎ．Ａ．、Ｃｏｓｍｅｔ．Ｔｏｉｌｅｔ．、１０１（３）、５５−７０（１９８６）
【非特許文献５】黒沢  卓文、フレグランスジャーナル、２９（５）、１４−１９（１９９９）
【非特許文献６】劉ら、基礎と臨床、２７（８）、３１５９−３１６６（１９９３）
【特許文献１】特開２００３−２３８４２９
【特許文献２】特開２００４−７５６３２
【特許文献３】特開２０００−１５９６５６
【特許文献４】特開２００４−８３４３４
【特許文献５】特開２００２−６８９５３
【特許文献６】特開２０００−２８１５２８
【特許文献７】特開２００４−２５０３６８
【特許文献８】特開２００３−２５２７４４
【特許文献９】特開平１１−４６７０１
【特許文献１０】特開平２００１−３２２９３９
【００１５】  本発明は羅漢果配糖体を含む水溶液の他に、必要に応じて保湿剤、防腐剤、界面活性剤、増粘剤、油剤、溶剤、香料、ｐＨ調整剤等を本発明の目的を達成する範囲内で適宜配合することができ、本発明の剤型は例えば、化粧水、ローション類、乳液類、クリーム類、パック類、ゲル等があり、皮膚外用剤として使用することができる。【００１６】  羅漢果配糖体の配合量としては化粧品や皮膚外用剤の全成分組成物中、０．００００１〜１０重量％であり、より好ましくは、０．０１〜１重量％である。この範囲であれば、羅漢果配糖体の表皮細胞賦活効果、線維芽細胞賦活効果、コラーゲン合成促進効果、過酸化脂質の細胞毒性抑制効果、紫外線に対する皮膚保護効果を著しく高めることができ、安全な皮膚外用剤として利用できる。【００１７】  以下、実施例に基づいて本発明を詳説する。また、用いた試験方法については以下に示す。
【実施例１】
【００１８】  ＜表皮細胞賦活試験＞正常ヒト表皮細胞を９６ウエルプレートに２．５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度で播種し、Ｈｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２培地（クラボウ）で７２ｈｒ培養した。組成物１〜４を含む培地に交換し、４８ｈｒ後、０．５ｍｇ／ｍＬＭＴＴ［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）２，５−ジフェニルテトラゾリンブロマイド］（ＳＩＧＭＡ）入り培地に交換した。３ｈｒ処理し、イソプロパノール（ＷＡＫＯ）でホルマザンを抽出し５７０ｎｍの吸光度を測定した。細胞賦活率は式１で求めた。
2008120781.tif 000004
【００１９】  試験物質無添加（０μｇ／ｍＬ）と比較すると、羅漢果配糖体の添加によって正常ヒト表皮細胞において著しい細胞賦活作用が認められ、その効果は化粧品によく用いられている植物抽出物であるアロエ抽出物よりも高かった（図１）。
【実施例２】
【００２０】  ＜線維芽細胞賦活試験＞正常ヒト線維芽細胞を９６ウエルプレートに２×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度で播種し、５％ＦＢＳ（大日本製薬）入りのＤＭＥＭ（日水製薬）で２４ｈｒ培養した。組成物１〜４を１００倍希釈となるように添加した１％ＦＢＳ入り培地に交換し、４８ｈｒ後、１ｍｇ／ｍＬＭＴＴ入り培地に交換した。３ｈｒ処理し、イソプロパノールで色素であるホルマザンを抽出し５７０ｎｍの吸光度を測定した。細胞賦活率は式１で求めた。【００２１】  試験物質無添加（０μｇ／ｍＬ）と比較すると、アロエ抽出物は殆ど細胞賦活効果が認められなかったのに対し、羅漢果配糖体の添加によって正常ヒト線維芽細胞において有意に細胞賦活作用が認められた（図２）。これらのことから、羅漢果配糖体は優れた皮膚細胞賦活効果を有することがわかった。
【実施例３】
【００２２】  ＜コラーゲン合成促進試験＞正常ヒト繊維芽細胞を２×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度で３５ｍｍディッシュに播種し、１０％ＦＢＳ入りのＤＭＥＭ培地で２４ｈｒ培養する。組成物１〜４を１００倍希釈となるように添加した５％ＦＢＳ入りのＤＭＥＭ培地に交換後、６日間培養する。培養上清を取り、ＰＩＰ  ＥＩＡ  Ｋｉｔ（ＴａＫａＲａ）を用いてコラーゲン量を測定し、式２でコラーゲン合成促進率を算出した。
2008120781.tif 000005
【００２３】  試験物質無添加（０μｇ／ｍＬ）と比較すると、羅漢果配糖体の添加によって濃度依存的にコラーゲン合成促進作用が認められ、その効果は羅漢果抽出物（羅漢果を水、アルコールなどで抽出後、濃縮したもの）よりもきわめて高かく、低濃度で高い効果を示した（図３）。さらに、コラーゲン合成促進効果を有するアスコルビン酸よりも高かった。従って羅漢果配糖体にはしわやたるみ予防などの抗老化作用を期待されることが示唆された。
【実施例４】
【００２４】  ＜過酸化脂質の細胞毒性抑制試験＞ヒト線維芽細胞を９６ウエルプレートに２×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で播種し、１０％ＦＢＳ入りのＤＭＥＭで培養した。２４ｈｒ後に、過酸化脂質のモデル物質であるｔ−ＢｕＯＯＨ（関東化学）および試験物質を含む１％ＦＢＳ入りのＤＭＥＭに培地を交換した。さらに４８ｈｒ培養後に１ｍｇ／ｍＬＭＴＴ入り培地に交換し３ｈｒ処理した。その後、イソプロパノールでホルマザンを抽出し５７０ｎｍの吸光度を測定した。細胞残存率は式３で求めた。
2008120781.tif 000006
【００２５】  試験物質無添加（０μｇ／ｍＬ）と比較すると、羅漢果配糖体の添加によって濃度依存的に細胞残存率が高くなり、過酸化脂質の細胞毒性が抑制されたことがわかった（図４）。また、羅漢果抽出物よりも効果が高く、さらに、０．５μｇ／ｍＬにおいて過酸化脂質消去効果などの抗酸化作用を有するビタミンＥよりも過酸化脂質の細胞毒性抑制効果が高かった。このことから、羅漢果配糖体にはより過酸化脂質の障害からヒト線維芽細胞を保護する効果を有することがわかった。
【実施例５】
【００２６】  ＜ＵＶＢによる細胞毒性抑制試験＞正常ヒト表皮細胞を９６ウエルプレートに２．５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で播種し、ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２培地で培養した。４８ｈｒ後に、試験物質入りの培地に交換し、さらに２４ｈｒ培養する。ＰＢＳ（−）で洗浄を行い、約５０μＬのＰＢＳ（−）を各ウエルに添加後、ＵＶＢランプ（３１２ｎｍ、コスモバイオ）で照射を行った。照射量の測定は紫外線照度計（マザーツール）を用いて行った。照射後、試験物質を含む培地で２４ｈｒ培養し、０．５ｍｇ／ｍＬＭＴＴ入り培地に交換し３ｈｒ処理した。その後、イソプロパノールでホルマザンを抽出し５７０ｎｍの吸光度を測定した。【００２７】  試験物質無添加（０μｇ／ｍＬ）と比較すると、羅漢果配糖体の添加により濃度依存的にＵＶＢ照射による細胞毒性を抑制することがわかった（図５）。このことから、羅漢果配糖体はＵＶＢ照射に対する保護作用を有することが明らかとなった。【００２８】  羅漢果配糖体を含む皮膚外用剤は以下のように調製した。
【実施例６】
【ローション処方】
【００２９】セタノール  ２．０、プロピレングリコール  ２．０、ミリスチン酸イソプロピル  ３．０、モノステアリン酸ポリエチレングリコール  ２．０、カルボキシビニルポリマー  ０．２、羅漢果配糖体  ０．１、ｐＨ調整剤  適量、防腐剤  適量、精製水  残量  上記の配合でローションを製造した。
【実施例７】
【乳状液】
【００３０】流動パラフィン  ３．０、グリセリ脂肪酸エステル  ３．０、ポリアクリル酸ナトリウム  ０．５、キサンタンガム  ０．１、羅漢果配糖体  ０．０１、ｐＨ調整剤  適量、防腐剤  適量、精製水  残量  上記の配合で乳液を製造した。
【００３１】  上記のことから、羅漢果配糖体を含有する組成物は、表皮細胞賦活作用、線維芽細胞賦活作用、コラーゲン合成促進作用、過酸化脂質の細胞毒性抑制作用およびＵＶＢの細胞毒性抑制作用を有しており、肌荒れ改善効果および紫外線保護効果を著しく発揮することが明らかとなり、化粧品原料や皮膚外用剤としての有用性が期待される。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】表皮細胞賦活作用を示した図である。
【００３３】
【図２】線維芽細胞賦活作用を示した図である。
【００３４】
【図３】コラーゲン合成促進作用を示した図である。
【００３５】
【図４】過酸化脂質の細胞毒性抑制作用を示した図である。
【００３６】
【図５】ＵＶＢ照射による細胞毒性に対する抑制作用を示した図である。
【図１】
2008120781.tif 000009
【図２】
2008120781.tif 000010
【図３】
2008120781.tif 000011
【図４】
2008120781.tif 000012
【図５】
2008120781.tif 000013