(57)【要約】【課題】体内吸収性に優れて物性の改良が図られた牡蠣エキスを提供する。【解決手段】牡蠣エキスは、牡蠣肉の粉砕溶液に、バチルス属に属する微生物が産生するアルカリ性プロテアーゼを添加して酵素反応を行うことにより、牡蠣肉中の蛋白質を低分子化して調製される。この牡蠣エキスは、ゲルろ過クロマトグラフィーによって測定される分子量分布において分子量９３００〜４００００の中分子量領域にピークを有する。したがって、体内への消化吸収性が良好となり、物性の改良を図ることができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
バチルス属に属する微生物が産生するアルカリ性プロテアーゼによって牡蠣肉の蛋白質を低分子化して調製され、
ゲルろ過クロマトグラフィーによって測定される分子量分布において、少なくとも、分子量９３００〜４００００の領域にピークを有することを特徴とする牡蠣エキス。
【請求項２】
牡蠣肉の粉砕溶液に、バチルス属に属する微生物が産生するアルカリ性プロテアーゼを添加して酵素反応を行う反応工程と、
加熱によって前記酵素を失活させた後、固液分離を行い、固相をフィルタープレスによって圧搾処理し、得られた圧搾液を液相と合わせて清澄液として採取する抽出工程と、
前記清澄液をスプレードライによって粉末化する粉末工程とを含むことを特徴とする牡蠣エキスの製造方法。
【請求項３】
前記反応工程において、前記アルカリ性プロテアーゼの添加を複数回に分けて行うことを特徴とする請求項２に記載の牡蠣エキスの製造方法。
【請求項４】
前記アルカリ性プロテアーゼの添加を２回に分けて行い、初回添加後、全反応時間の半分が経過する時に、初回添加量と同量の添加量で２回目の添加を行うことを特徴とする請求項３に記載の牡蠣エキスの製造方法。
【請求項５】
前記反応工程では、液温を５０〜７０℃に調製して、前記アルカリ性プロテアーゼを前記牡蠣肉に対して０．２〜０．５重量％の割合で添加することを特徴とする請求項２ないし請求項４のいずれかに記載の牡蠣エキスの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、牡蠣肉に含まれる蛋白質を低分子化して調製される牡蠣エキス及び牡蠣エキスの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
牡蠣は、亜鉛、タウリン、各種アミノ酸等の有益物質を豊富に含む食材であり、ここから、免疫増強、肝機能及び心機能の強化、精子形成、味覚障害の改善、血糖及び血圧の上昇抑制、脂肪燃焼等の諸作用が発現されることを期待して種々の牡蠣エキスが調製され、更にこうした牡蠣エキスを含む健康志向品がいくつか市販されている。なかでも、特許文献１に記載の牡蠣エキスは、牡蠣に含まれる亜鉛の結合ペプタイドを高濃度で含有する処理がなされたものであり、中性領域蛋白分解酵素による酵素反応によって体内への消化吸収性が良好となることが認められる。
【０００３】
【特許文献１】特許第２８１２８８９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ところで、上記牡蠣エキスによれば、中性領域蛋白分解酵素による酵素反応を行っていることに起因し、ゲルろ過クラマトグラフィーにより測定される分子量分布において低分子量領域の割合が高くなる一方で、分子量２００万を超えるような高分子量領域も少なからず含まれていた。そうすると、体内への消化吸収性に難をあらわすことが多少とも予想され、高い消費者ニーズに応えるには体内吸収率の更なる向上が求められていた。
【０００５】
また、上記牡蠣エキスによれば、蛋白質の分解が進みすぎる嫌いがあり、ゲルろ過カラムによる分子量分布において９３００〜４００００の中分子量領域に全くピークを示さなかった。しかし、分子量分布が高分子と低分子の２つに分かれるのではなく上記した中分子量領域をも含むようにすれば、これまで以上の機能の発現が期待され、また用途の開発も見込まれることから、かかる中分子量領域をも採取できるようにすることが求められていた。
【０００６】
更に、上記のような酵素反応液には多量の有益物質が含まれ、これをなるべく無駄なく抽出することが資源の有効利用につながるため、その抽出方法の改善化も求められていた。
【０００７】
本発明は上記のような事情に基づいて完成されたものであって、体内吸収性に優れて物性の改良が図られた牡蠣エキスを提供するとともに、この牡蠣エキスを牡蠣肉からなるべく無駄なく製造することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記の目的を達成するための手段として、請求項１の発明は、バチルス属に属する微生物が産生するアルカリ性プロテアーゼによって牡蠣肉の蛋白質を低分子化して調製され、ゲルろ過クロマトグラフィーによって測定される分子量分布において、少なくとも、分子量９３００〜４００００の領域にピークを有するところに特徴を有する。
【０００９】
請求項２の発明は、牡蠣エキスの製造方法に関するものであって、牡蠣肉の粉砕溶液に、バチルス属に属する微生物が産生するアルカリ性プロテアーゼを添加して酵素反応を行う反応工程と、加熱によって前記酵素を失活させた後、固液分離を行い、固相をフィルタープレスによって圧搾処理し、得られた圧搾液を液相と合わせて清澄液として採取する抽出工程と、前記清澄液をスプレードライによって粉末化する粉末工程とを含むところに特徴を有する。
【００１０】
請求項３の発明は、請求項２に記載のものであって、前記反応工程において、前記アルカリ性プロテアーゼの添加を複数回に分けて行うところに特徴を有する。
請求項４の発明は、請求項３に記載のものにおいて、前記アルカリ性プロテアーゼの添加を２回に分けて行い、初回添加後、全反応時間の半分が経過する時に、初回添加量と同量の添加量で２回目の添加を行うところに特徴を有する。
【００１１】
請求項５の発明は、請求項２ないし請求項４のいずれかに記載のものにおいて、前記反応工程では、液温を５０〜７０℃に調製して、前記アルカリ性プロテアーゼを前記牡蠣肉に対して０．２〜０．５重量％の割合で添加するところに特徴を有する。
【発明の効果】
【００１２】
＜請求項１の発明＞
バチルス属に属する微生物が産生するアルカリ性プロテアーゼによって牡蠣肉の蛋白質を低分子化するから、高分子量の領域を効果的に取り除くことができるとともに、低分子量の領域を大幅に増やすことができる。その結果、体内への消化吸収性が良好となる。また、ゲルろ過クロマトグラフィーによって測定される分子量分布において分子量９３００〜４００００の中分子量の領域にピークを示すため、物性の改良を図ることができる。
【００１３】
＜請求項２の発明＞
バチルス属に属する微生物が産生するアルカリ性プロテアーゼを用いて酵素反応を行うと、高分子量の領域を効果的に取り除くことができるとともに、低分子量の領域を増やすことができ、かつ、中分子量の領域をも含ませることができる。その結果、体内への消化吸収性が良好になるとともに物性の改良を図れた牡蠣エキスを得ることができる。
【００１４】
また、上記アルカリ性プロテアーゼを用いて酵素反応を行うと、固液分離時、固相と液層とに明確に分離され、分離性能が向上する。  
更に、固液分離後の固相に対してフィルタープレスによる圧搾処理を行い、圧搾液を採取して液相と合わせているから、牡蠣に含まれる亜鉛等の有益成分を無駄なく採取することができる。  
更にまた、スプレードライによって粉末化されるから、ここから錠剤等の製品形態に加工し易くなる。
【００１５】
＜請求項４の発明＞
アルカリ性プロテアーゼの添加を複数回に分けて行うから、牡蠣肉の全体に対して偏りなく酵素を作用させることができ、品質の安定した牡蠣エキスを得ることができる。
＜請求項５の発明＞
アルカリ性プロテアーゼの添加を２回に分けて行い、初回添加後、全反応時間の半分が経過する時、初回添加量と同量の添加量で２回目の添加を行うから、酵素反応性及び作業性が良好となる。
【００１６】
＜請求項６の発明＞
液温を５０〜７０℃に調製して、アルカリ性プロテアーゼを牡蠣肉に対して０．２〜０．５重量％の割合で添加して酵素反応を行うことにより、牡蠣エキス中の蛋白質を十分に低分子化することができ、かつ、歩留まりが良好となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下、本発明を具体化した一実施形態について説明する。本実施形態の牡蠣エキスは、牡蠣肉中に含まれる蛋白質を低分子量化して調整されるものであり、低分子化処理のための酵素として、バチルス属に属する微生物が産生するアルカリ性プロテアーゼを用いている。
【００１８】
牡蠣肉（牡蠣のむき身）は、真牡蠣（Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａ  ｇｉｇａｓ）のうち殻の部分を取り除いたものであって、その産地を特に限定するものではないが、三重県の的矢湾産の養殖真牡蠣を用いることで歩留まりが良好となる。また、牡蠣肉は、品質の安定性を担保するため、採取後すぐに凍結処理を施して凍結生牡蠣とするのがよく、更にこれを加水粉砕してスラリー状の粉砕溶液とするのがよい。
【００１９】
本発明において蛋白分解酵素として使用される、バチルス属に属する微生物が産生するアルカリ性プロテアーゼとは、バチルス属に属する微生物が産生するプロテアーゼであって、最適ｐＨがアルカリ性領域にあるものをいう。かかるアルカリ性プロテアーゼは、精製されたものに限らず、粗酵素の状態であってもよく、また、１種類に限らず、２種類以上を組み合わせて用いてもよい。本実施形態においては、最適ｐＨがｐＨ９以上の強アルカリ側にあるアルカリ性プロテアーゼを好適に用いることができ、なかでも、バチルス  サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来のアルカリ性プロテアーゼを特に好適に用いることができる。このような強アルカリ性のプロテアーゼは、蛋白質の部分分解が可能であり、エキスの味質、効能等の改良を図る上で有用である。
【００２０】
上記アルカリ性プロテアーゼによる酵素反応は、牡蠣肉に対して０．１〜１．０重量％、好ましくは牡蠣肉に対して０．２〜０．５重量％の割合で添加され、反応溶液は、温度５０〜７０℃に調整され、反応時間は、０．５〜６時間、好ましくは２〜４時間の条件下で行われる。ｐＨ調整については、別にｐＨ調整剤等を添加する必要はなく、牡蠣肉の粉砕溶液に対してそのままプロテアーゼを添加すればよい。また、アルカリ性プロテアーゼの添加量が牡蠣肉に対して０．２〜０．４重量％の範囲内であれば、牡蠣エキスの収率に特に大きな差異は認められないことが確認されている。
【００２１】
上記アルカリ性プロテアーゼは、粉砕溶液に対し、時間をおいて複数回に分けて添加される。この場合、作業性を考慮すれば、アルカリ性プロテアーゼは２回で添加されるのがよく、また、酵素反応性を考慮すれば、アルカリ性プロテアーゼを２回添加用にそれぞれ半量ずつ分けておき、初回添加後、全反応時間の半分を経過する時点で２回目の添加を行うのが望ましい。ここで、牡蠣肉の粉砕溶液は概ねスラリー状であるため、アルカリ性プロテアーゼを均一に作用させ難いという事情があるが、このように酵素添加回数を複数回に設定することにより、牡蠣肉の略全体に対してアルカリ性プロテアーゼをほぼ均一に作用させることが可能となる。
【００２２】
また上記酵素反応後、牡蠣エキスは、スプレードライ、詳しくは遠心噴霧によるスプレードライによって粉末化される。このスプレードライに際し、必要に応じてデキストリン等の粉末化助剤が添加される。スプレードライ法によれば、大量生産、連続生産が可能であり、また歩留まりも良好となる。
【００２３】
上記スプレードライによる噴霧工程に先立ち、牡蠣肉の酵素反応溶液は、加熱によって酵素が失活され（殺菌を兼ねる）、更に冷蔵庫等の中で冷却保存される。１〜７日、好ましくは１〜４日静置されると、容器内底の固相に沈下物が沈下される。ここから、まずは上澄み液が採取され、更に、残った沈下物が取り出されてフィルタープレスによって圧搾される。すると、沈下物から新たにエキスが搾り出されるから、これが先の上澄み液と合わされて清澄液として一体化され、この清澄液がスプレードライ機に導入される。なお、上記固液分離を行うに際して、遠心分離機による遠心処理法を採用することも可能であり、遠心処理法によれば、作業時間の短縮化を図れる。
【００２４】
かく得られる牡蠣エキスは、後述するように、ゲルろ過カラムの分析による分子量分布において２００万以上の高分子量領域が全ピーク面積のうち２０％以下の割合で含まれ、更に、９３００〜４００００の中分子量領域が全ピーク面積のうち１０〜２０％の割合で含まれ、１８０〜９３００未満の低分子量領域が全ピーク面積のうちの残りを占める構成となる。
【００２５】
かかる牡蠣エキスは、粉末状態のまま単独で使用されてもよいが、摂取形態の利便性を考慮して、他の添加剤等とともに牡蠣エキス組成物として調整されてもよい。牡蠣エキス組成物としては、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品、及び機能性食品；栄養飲料、清涼飲料等の飲料；アイスクリーム等の冷菓；チョコレート、ビスケット、スナック菓子、飴等の菓子類；うどん、中華麺等の麺類、かまぼこ、ハム等の水産・畜産加工食品；サラダ油、マヨネーズ等の油脂・油脂加工食品；ソース等の調味料など、牡蠣肉に含まれる有益物質の摂取を主目的または副次的な目的とする健康志向品が挙げられる。特に、本発明の牡蠣エキスは、スプレードライによって粉末化されているため、上記健康志向品への加工特性に優れている。
【実施例】
【００２６】
次に、本発明の実施例を示す。なお、本発明の範囲は以下に限定されるものではない。
【００２７】
＜実施例１＞
凍結状態にある牡蠣肉１ｋｇ（三重県の的矢湾産の養殖真牡蠣）を流水で解凍した後、水５００ｍｌを加えてミキサーで粉砕した。続いて、この粉砕液に水２Ｌを加え、反応容器中、６０℃の恒温槽内で加温した。液温が６０℃近くまで上昇したら、この粉砕溶液に、バチルス属に属する微生物から産生されるアルカリ性プロテアーゼ（天野製薬（株）製、商品名；プロレザーＦＧ−Ｆ）２．５ｇを水１００ｍｌに溶解させた状態から添加し、液温を６０℃に保ちつつ間欠的に２時間撹拌した。次いで、同じく、上記アルカリ性プロテアーゼ２．５ｇを水１００ｍｌに溶解させた状態から添加し、液温を６０℃に保ちつつ間欠的に２時間撹拌した。その後、酵素の失活及び殺菌を目的として、この酵素反応溶液を沸騰水中で間欠的に１時間撹拌した。
【００２８】
次に、上記反応容器を水冷し、水冷後、冷蔵庫の中に静置状態で保管した。それから４日間静置し、液相の上澄み液と固相の沈下物とに分離した。続いて、上澄み液を採取して別の容器に移し、残渣の沈下物についてはフィルタープレスによる圧搾処理を行った。これによって得られた圧搾液を上記容器に入れて上澄み液と合わせ、もって清澄液とした。なお、反応容器を冷蔵庫の中で静置保存して上澄み液と沈下物とに分離する工程は、既述した遠心処理法によって置換することが可能である。
【００２９】
次に、上記清澄液にデキストリン（松谷化学工業（株）製、商品名；パインデックス）を１ｋｇ添加して、スプレードライ（噴霧乾燥）を行った。運転条件は、回転数２００００ｒｐｍ、入口温度１６０℃、出口温度８０℃、サイクロンΔＰ１．３ｋＰａに設定した。デキストリンは牡蠣肉との合算量に対して５０重量％の割合で添加すると、凝集性が高くて粒子形状の良好なエキスとして粉末化されることが確認された。
これにより、牡蠣エキス２４２ｇ（デキストリンを含む）を得た。牡蠣肉からの収率は、１２．１％であった。
【００３０】
＜比較例１＞
広島産の養殖真牡蠣の牡蠣肉１ｋｇから、特許公報第２８１２８８９（発明の名称；微量金属を高濃度に含有する魚介類エキスの製造方法、出願日；平成７年（１９９５）３月１日、出願人；常盤薬品工業株式会社）の段落番号００１７〜００２１に記載の手法に準じて比較用牡蠣エキスを調製した。
【００３１】
（成分の分析)
実施例１における牡蠣エキス１００ｇ中の成分含量を分析した結果は表１の通りであった。なお、デキストリンが５０重量％含まれるため、牡蠣エキスの実質的な成分含量は以下の数値の２倍になる。
【００３２】
【表１】
2008142032.tif 000002
表１から牡蠣エキスは亜鉛、タウリン、グリコーゲン等の有益物質を豊富に含むことが認められた。
【００３３】
(分子量分布の測定)
上記した牡蠣エキス及び比較用牡蠣エキスについて、ゲルろ過クロマトグラフィーにより分子量分布の測定を行った。なお、測定にあたり、スプレードライを行う前の清澄液をサンプルとして用いた。  ＨＰＬＣの条件は以下の通りであった。  
【００３４】
−ＨＰＬＣの条件−
カラム；Ａｓａｈｉｐａｋ  ＧＦ−３１０ＨＱ
移動相；１００ｍＭ  過塩素酸ナトリウム水溶液
カラム温度；４０℃
流速；０．５ｍＬ
検出器；示唆屈折
サンプル濃度；１６ｍｇ／ｍｌ
サンプル注入量；２０μｌ
標準試料；分子量１８０（グルコース）、９３００、４００００、２００００００（デキストラン）
【００３５】
上記条件下、標準試料と測定対象試料（牡蠣エキス及び比較用牡蠣エキス）との溶出容量の比較に基づいて、測定対象試料のクロマトグラムのピークを分子量別に分け、全ピーク面積との比較により測定対象試料の分子量分布を推計した。結果を表２に示す。
【００３６】
【表２】
2008142032.tif 000003
表２から牡蠣エキス及び比較用牡蠣エキスは分子量分布における分子量９３００〜４００００の中分子量の領域で顕著な差異を認めた。すなわち、分子量９３００〜４００００の範囲において、牡蠣エキスは全ピーク面積の１６．２３％であるのに対し、比較用牡蠣エキスはここに全くピークを示さなかった。また、表中に示していないが、牡蠣肉から酵素反応を行わずに熱水抽出して調製されたものも、分子量９３００〜４００００の領域にピークを示さなかったことが上記条件下の分析によって確認された。
【００３７】
分子量９３００〜４００００の中分子量の領域内では蛋白質に結合していた亜鉛等の微量金属がどのような形態になっているのか興味が持たれるところであり、ここに含まれる成分を精査することで医薬等の新規分野への応用が期待される。そして、牡蠣エキスが、比較用牡蠣エキス等にないこうした中分子量領域を含むことにより、牡蠣エキスの物性の改良を図ることができる。
【００３８】
また、分子量２００万以上の高分子量の領域において、牡蠣エキスは全ピーク面積の１６．２２％であるのに対し、比較用牡蠣エキスは全ピーク面積の２４．７２％であった。つまり、牡蠣エキスは、比較用牡蠣エキスに比べ、分子量２００万以上の高分子領域のピーク面積が相対的に小さくなっていた。また、分子量１８０〜９３００の低分子量の領域内では、牡蠣エキスが全ピーク面積の６７．５５％であり、比較用牡蠣エキスが全ピーク面積の７５．２８％であった。したがって、牡蠣エキスは、アルカリ性プロテアーゼによる蛋白質の低分子化の進行によって牡蠣肉中の高分子量領域が有効に取り除かれるとともに低分子量領域が有意に増加しており、人体内への消化吸収性に優れることが示唆された。
＜他の実施形態＞
本発明は上記記述及び図面によって説明した実施形態に限定されるものではなく、例えば次のような実施形態も本発明の技術的範囲に含まれる。
【００３９】
（１）上記実施形態では、牡蠣エキスの原料として真牡蠣（Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａ  ｇｉｇａｓ）を用いたが、岩牡蠣（Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａ  ｎｉｐｐｏｎａ）を用いても構わない。
（２）反応工程において、アルカリ性プロテアーゼの添加は、１回または３回以上であってもよい。また、添加の時期及び添加量も状況に応じて任意に決定することができる。