(57)【要約】【課題】浮遊細胞の活性状態を判定すること。【解決手段】カメラ１０４は、細胞培養容器Ａ内で培養されている浮遊細胞を観察するための位相差顕微鏡を用いて観察した細胞培養容器Ａ内の画像（位相差画像）を撮像して取得する。制御装置１０５は、取得した位相差画像に対して二次微分フィルタを適用してエッジを抽出し、抽出したエッジが構成する円の面積が最大のもの、またはエッジが構成する円の輪郭が最長のものを浮遊細胞の形状として抽出する。そして、抽出した浮遊細胞の形状に基づいて、浮遊細胞の活性状態を判定する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞培養容器内で培養されている浮遊細胞を観察するための位相差顕微鏡と、
前記位相差顕微鏡を用いて観察した前記細胞培養容器内の画像（位相差画像）を撮像して取得する撮像手段と、
前記撮像手段で取得した前記位相差画像に対して二次微分フィルタを適用してエッジを抽出するエッジ抽出手段と、
前記エッジ抽出手段で抽出したエッジが構成する図形の面積が最大のもの、またはエッジが構成する図形の輪郭が最長のものを前記浮遊細胞の形状として抽出する形状抽出手段と、
前記形状抽出手段で抽出した前記浮遊細胞の形状に基づいて、前記浮遊細胞の活性状態を判定する判定手段とを備えることを特徴とする細胞状態判定装置。
【請求項２】
請求項１に記載の細胞状態判定装置において、
前記判定手段は、前記浮遊細胞の形状の円形度合いに基づいて、前記浮遊細胞の活性状態を判定する判定手段とを備えることを特徴とする細胞状態判定装置。
【請求項３】
請求項２に記載の細胞状態判定装置において、
前記判定手段は、（１）前記エッジの持つ共分散行列の固有値を用いて算出される前記浮遊細胞の形状の楕円度、（２）前記浮遊細胞の形状の重心からエッジまでの距離の最大値−最小値、または前記距離の分散により算出される前記浮遊細胞の形状の真円度、（３）前記浮遊細胞の形状の周囲長の２乗／面積により算出される前記浮遊細胞の形状の複雑度、および（４）４π×前記浮遊細胞の形状の面積／前記浮遊細胞の形状の周囲長の２乗により算出される前記浮遊細胞の形状の円形度の少なくとも１つを前記浮遊細胞の形状の円形度合いを表す指標として用い、これらの指標に基づいて、前記浮遊細胞の活性状態を判定することを特徴とする細胞状態判定装置。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞状態判定装置において、
前記判定手段による判定結果を所定時間間隔で取得し、前記浮遊細胞の活性状態の時系列変化を観察する観察手段をさらに備えることを特徴とする細胞状態判定装置。
【請求項５】
細胞培養容器内で培養されている浮遊細胞を観察するための位相差顕微鏡を用いて観察した前記細胞培養容器内の画像（位相差画像）を撮像して取得し、
取得した前記位相差画像に対して二次微分フィルタを適用してエッジを抽出し、
抽出したエッジが構成する図形の面積が最大のもの、またはエッジが構成する図形の輪郭が最長のものを前記浮遊細胞の形状として抽出し、
前記浮遊細胞の形状に基づいて、前記浮遊細胞の活性状態を判定することを特徴とする細胞状態判定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、浮遊細胞の状態を判定するための細胞状態判定装置、および細胞状態判定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
次のような細胞画像解析方法が知られている。この細胞画像解析方法は、培養した細胞を染色などの前処理を行って可視化し、細胞の画像を取得する。そして、取得した画像に対して画像処理を行なって、画像内に含まれる個々の細胞を認識するものである（例えば、特許文献１）。
【０００３】
【特許文献１】特開２００６−７９１９６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、従来の細胞画像解析方法では、画像を取得するための前準備として細胞を染色する必要があり、一旦染色した細胞は、再利用して培養することができなかった。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、細胞培養容器内で培養されている浮遊細胞を観察するための位相差顕微鏡を用いて観察した前記細胞培養容器内の画像（位相差画像）を撮像して取得し、取得した位相差画像に対して二次微分フィルタを適用してエッジを抽出し、抽出したエッジが構成する図形の面積が最大のもの、またはエッジが構成する図形の輪郭が最長のものを浮遊細胞の形状として抽出し、浮遊細胞の形状に基づいて、浮遊細胞の活性状態を判定することを特徴とする。
本発明では、浮遊細胞の形状の円形度合いに基づいて、浮遊細胞の活性状態を判定することが好ましい。このとき、（１）エッジの持つ共分散行列の固有値を用いて算出される浮遊細胞の形状の楕円度、（２）浮遊細胞の形状の重心からエッジまでの距離の最大値−最小値、または当該距離の分散により算出される浮遊細胞の形状の真円度、（３）浮遊細胞の形状の周囲長の２乗／面積により算出される浮遊細胞の形状の複雑度、および（４）４π×浮遊細胞の形状の面積／浮遊細胞の形状の周囲長の２乗により算出される浮遊細胞の形状の円形度の少なくとも１つを浮遊細胞の形状の円形度合いを表す指標として用い、これらの指標に基づいて浮遊細胞の活性状態を判定するようにしてもよい。
また、活性状態の判定結果を所定時間間隔で取得し、浮遊細胞の活性状態の時系列変化を観察するようにしてもよい。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、細胞の状態を観察した後も再利用して培養することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
図１は、本実施の形態における細胞状態判定装置の一実施の形態の構成を示すブロック図である。細胞状態判定装置１００は、インキュベータ１０１と、ステージ１０２と、対物レンズ１０３と、カメラ１０４と、制御装置１０５と、照明装置１０６と、操作スイッチ１０７と、モニタ１０８と、環境制御装置１０９とを備えている。なお、ステージ１０２と、対物レンズ１０３と、カメラ１０４と、制御装置１０５と、照明装置１０６は顕微鏡（位相差顕微鏡）を構成する。
【０００８】
インキュベータ１０１内は密閉されており、その内部環境は、環境制御装置１０９によって細胞の培養に適した環境に維持されている。例えば、インキュベータ１０１内のＣＯ２濃度はＣＯ２混合機１０９ａによって５％に維持され、湿度は湿度調整機１０９ｂによって９５％以上に維持され、温度は温度調整機１０９ｃによって３７℃に維持されている。また、インキュベータ１０１内には、ステージ１０２と、対物レンズ１０３と、カメラ１０４と、照明装置１０６とが設置されている。
【０００９】
ステージ１０１には、後述するように状態を観察する対象となる浮遊細胞が培養されている細胞培養容器Ａが載せられる。ここで細胞培養容器Ａは、例えば３５ｍｍディッシュが使用される。照明装置１０６は、光源として例えばＬＥＤを備えており、このＬＥＤを発光させて細胞培養容器Ａに上部から照明光（透過光）を照射する。
【００１０】
顕微鏡は、対物レンズ１０３を介して、照明装置１０６から照明されている細胞培養容器Ａの透過光により、ステージ１０１上にセットされた細胞培養容器Ａ内の浮遊細胞を位相差観察法によって観察することができる。カメラ１０４は、ＣＣＤなどの撮像素子を備えており、対物レンズ１０３を通して入力される像、すなわち細胞培養容器Ａを透過する光の像を撮像して顕微鏡像を取得する。これによって細胞培養容器Ａ内を撮影した位相差画像を取得することができる。
【００１１】
制御装置１０５は、ＣＰＵ、メモリ、およびその他の周辺回路で構成され、細胞状態判定装置１００全体を制御する。この細胞状態判定装置１００においては、使用者は操作スイッチ１０７を操作することによって制御装置１０５に対する種々の指示を出すことができ、制御装置１０５は、使用者からの指示に応じて種々の処理を実行する。
【００１２】
制御装置１０５は、カメラ１０４で撮影された位相差画像を画像処理して、画像内に含まれる浮遊細胞の活性状態を判定する。浮遊細胞の活性状態は、浮遊細胞の形状に基づいて判定できる。すなわち、浮遊細胞の形状は、細胞の状態がよいほど円に近く、状態が悪くなるにつれて楕円度合いが強くなっていったり、いびつな形状になったりする。このため、浮遊細胞の活性状態を判定するに当たっては、位相差画像内から浮遊細胞の輪郭を抽出し、抽出した浮遊細胞の輪郭がどれだけ円形に近いかを判定する必要がある。
【００１３】
具体的には、まず、制御装置１０５は、位相差画像に対してハロを細胞の境界とみなしてラフなセグメンテーションを行う。図２は、位相差画像の具体例を示す図である。この図２に示すように、位相差画像内では、細胞の形状を司るエッジは暗部として現れ、ハロは、細胞の周りの明るい部分（明部）として現れる。制御装置１０５は、この位相差画像内からハロを抽出することで、ラフなセグメンテーションを行う。
【００１４】
位相差画像内におけるハロの抽出方法としては、様々な公知の手法が知られている。例えば、位相差画像内では、楕円も含めた円形状の浮遊細胞の周囲に円形状のハロが含まれていることから、円形状抽出手法などの手法を用いて位相差画像内から円形状のハロを抽出する。なお、円形状抽出手法については、特願２００４−２００８９０号（本願発明者と同一発明者による出願）に記載されているため、詳細な説明は省略する。
【００１５】
以上の処理によって抽出したハロを細胞の境界とみなし、位相差画像上にハロを含む領域を細胞存在領域として設定することによって、位相差画像内における浮遊細胞の大まかな位置と大きさを把握することができる。例えば、制御装置１０５は、図３に示すように、位相差画像内にハロを含む細胞存在領域３ａを設定する。しかしながら、円形状抽出手法によって抽出されるのは、浮遊細胞のラフなセグメンテーションおよび外形でしかないため、浮遊細胞の活性状態を精度高く判定するためには、さらに詳細な細胞形状の抽出を行う必要がある。よって、本実施の形態では、制御装置１０５は、さらに以下の処理を行う。
【００１６】
制御装置１０５は、位相差画像に対して図４に示す３×３の二次微分フィルタを適用して、位相差画像内から浮遊細胞の形状を含むエッジを抽出する。なお、図４に示す二次微分フィルタは、対象となるエッジが１〜２ピクセル程度の勾配を持ち、十分にフォーカスがあった場合に有効となるフィルタである。二次微分フィルタは、画像のエッジの変化が大きい位置で反応するため、図５に示すように、ハロを境界とするエッジを抽出することができる。
【００１７】
この図５に示すように、抽出したハロを境界とするエッジのうち、その内側のエッジのみが浮遊細胞の輪郭を形成している。すなわち、円形の浮遊細胞の周囲に円形のハロがある場合、ハロを境界とするエッジを抽出すると、ハロの外周と内周とがエッジとして抽出されるが、このうち内周から抽出されたエッジが浮遊細胞の輪郭を司るエッジとなる。この浮遊細胞の形状を司るエッジは、二次微分フィルタに最も強く反応することから、十分に明るいエッジとして抽出されている。
【００１８】
よって、制御装置１０５は、二次微分フィルタを適用した後の画像を所定の閾値を用いて二値化し、十分に明るいエッジのみを抽出することで、図６に示すように、浮遊細胞の形状を司るエッジの候補を抽出することができる。なお、ここで抽出したエッジには、浮遊細胞の形状を司るエッジを含むが、それ以外にもノイズや細胞内の核などのエッジも含まれる可能性がある。このため、ここで抽出したエッジを、浮遊細胞の形状を司るエッジと区別するために、「エッジ群」と呼ぶ。
【００１９】
次に、制御装置１０５は、抽出したエッジ群の中から浮遊細胞の形状を司るエッジ、すなわち細胞の内側のエッジのみを選択する。浮遊細胞の形状を司るエッジは、上述したように、二次微分フィルタに最も強く反応して十分に明るいエッジとして抽出されるが、さらに、十分に面積が大きな図形として抽出されているか、あるいは輪郭が十分に長い図形として抽出されているはずである。
【００２０】
このため、制御装置１０５は、上述した円形状抽出手法によって位相差画像から抽出した細胞存在領域３ａと、二次微分フィルタを用いて抽出したエッジ群とを位相差画像内における位置に基づいて対応付ける。そして抽出したエッジ群に対して公知のラベリング処理を行って、各細胞存在領域３ａ内のエッジ群の中からエッジが構成する図形の面積が最大のもの、またはエッジが構成する図形の輪郭の長さが最大のもののみを選択する。
【００２１】
このとき、選択したエッジの中に、細胞の輪郭を司るエッジと共に、その内部に核などの細胞内部の構造から抽出されたエッジが含まれている場合には、制御装置１０５は、最も外側の輪郭のみを選択する。以上の処理によって、図７に示すように、位相差画像内から細胞の内側のエッジのみを選択することができる。
【００２２】
制御装置１０５は、このようにして選択した細胞の内側のエッジを細胞本来の形状と定義し、このエッジの形状に基づいて、浮遊細胞の活性状態を判定する。上述したように、浮遊細胞は、状態が良い場合はほぼ円形状となるが、状態が悪くなった場合には、この円形状が崩れ、楕円やいびつな形状となる。このため、制御装置１０５は、上述した処理で選択した細胞の内側のエッジの形状が、円に近いか否かを判定することによって、浮遊細胞の活性状態を判定する。すなわち、浮遊細胞の形状の円形度合いに基づいて浮遊細胞の活性状態を判定する。
【００２３】
具体的には、制御装置１０５は、エッジのもつ共分散行列の固有値に基づいて、エッジの楕円度を算出し、エッジの形状が円形状か楕円形状かを区別する。なお、楕円度とは、エッジの形状がどれだけ楕円に近いかを表す指標であり、算出された楕円度が１に近いほどエッジの形状は円に近く、楕円度が小さいほど円から離れた楕円形状になっていくことを表す。
【００２４】
まず、制御装置１０５は、画像の位置に対する輝度Ｉ（ｘ，ｙ）上のエッジの持つ共分散行列Σを、モーメント＜＞を使って次式（１）により算出する。なお、モーメント＜＞は、次式（２）で計算される。
【数１】
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【数２】
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【００２５】
オブジェクトモデルとなる楕円の方程式は、次式（３）で表され、式（１）の共分散行列の逆数Σ−１の持つ２つの固有値λ１およびλ２を求めることになる。Σ−１は、次式（４）により算出される。
【数３】
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【数４】
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【００２６】
式（４）において、その行列部分にのみ着目し、２つの固有値λ１およびλ２を次式（５）で表されるλ´とすると、行列部分の方程式は次式（６）に示すようになる。
【数５】
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【数６】
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よって、式（６）より固有値λ´は次式（７）のようになる。すなわち、式（４）に示したΣ−１の２つの固有値λ１（＝λ´１）およびλ２（＝λ´２）は、それぞれ次式（８）および（９）に示すようになる。
【数７】
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【数８】
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【数９】
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【００２７】
楕円の持つ２つの固有値λ１およびλ２の違いが楕円度合いとなるので、円と楕円、すなわち状態の良い細胞とそうでない細胞との判定基準としての楕円度は、次式（１０）に示すように、式（８）および（９）に示した２つの固有値の比として算出される。この式（１０）によって算出される楕円度は、上述したように、その値が１に近いほどエッジの形状は円に近いことを表し、その値が小さいほど円から離れた楕円形状になっていくことを表す指標である。
【数１０】
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【００２８】
よって、制御装置１０５は、算出した楕円度が所定の閾値より大きければ、エッジの形状が円に近いと判定して、そのエッジに対応する浮遊細胞の状態は良いと判定する。これに対して、算出した楕円度が所定の閾値以下であれば、エッジの形状が楕円に近いと判定して、そのエッジに対応する浮遊細胞の状態は悪いと判定する。なお、細胞の活性状態を判定するにあたっての閾値は、使用者があらかじめ経験的に算出した値を使用する。
【００２９】
そして、制御装置１０５は、上述した処理による判断結果をモニタ１０８に出力する。例えば、図８に示すように、位相差画像内から選択した細胞の内側のエッジを、状態が良いと判定された浮遊細胞は白線で明示し、状態が悪いと判定された浮遊細胞は黒線で明示する。これによって、使用者は、モニタ１０８に表示される画像上で、細胞の活性状態を容易に識別することができる。
【００３０】
また、制御装置１０５は、浮遊細胞の活性状態の判定結果を所定時間間隔で取得し、浮遊細胞の活性状態の時系列変化を観察するようにしてもよい。浮遊細胞においては、その形状が観察者にとって重要な特徴であるので、制御装置１０５は、画像（視野）内における全細胞に対して本手法を適用し、所定時間間隔、例えば数分おきに浮遊細胞の形状を観察し、その形状を表す特徴量の時系列データをモニタ１０８に自動的に表示するようにしてもよい。例えば、図９に示すように、全細胞に対する円形細胞の占有率の時系列データをグラフ表示してもよい。これによって、使用者は、浮遊細胞の状態の時系列変化を容易に捉えることができるようになる。
【００３１】
そして、この円形細胞の占有率があらかじめ設定された所定の閾値９ａを下回った場合、言い換えれば非円形細胞の占有率が多くなった場合には、培養する上で異常が発生したものとして、アラートを出し、使用者に対して適切な処置を促すようにしてもよい。また、時系列予測を行って、異常が起こる前に使用者に処置を促すことも有効である。なお、閾値９ａは、培養の研究目的に応じて異なるため、使用者によって研究目的に応じた経験的な値が設定される。
【００３２】
図１０は、本実施の形態における細胞状態判定装置１００の処理を示すフローチャートである。図１０に示す処理は、使用者によって操作スイッチ１０７が操作され、ステージ１０１上にセットされた細胞培養容器Ａ内の細胞の活性状態を判定するように指示された場合に起動するプログラムとして制御装置１０５によって実行される。なお、制御装置１０５は、この処理を所定時間間隔、例えば数分おきに実行して、浮遊細胞の活性状態を時系列で判定していく。
【００３３】
ステップＳ１０において、制御装置１０５は、カメラ１０４から細胞培養容器Ａ内の浮遊細胞を撮影した位相差画像が入力されたか否かを判断する。肯定判断した場合には、ステップＳ２０へ進む。ステップＳ２０では、上述したように円形状抽出手法などの手法を用いて位相差画像内から円形状のハロを抽出し、これを細胞の境界とみなすことで、位相差画像内から浮遊細胞が存在する領域、すなわち細胞存在領域３ａを抽出する。その後、ステップＳ３０へ進む。
【００３４】
ステップＳ３０では、位相差画像に対して図４に示した二次微分フィルタを適用し、浮遊細胞の位相差画像内から浮遊細胞の形状を含むエッジを抽出する。その後、ステップＳ４０へ進み、制御装置１０５は、二次微分フィルタを適用した後の画像を所定の閾値を用いて二値化し、十分に明るいエッジのみを抽出することで、位相差画像内から上述したエッジ郡を抽出する。その後、ステップＳ５０へ進む。
【００３５】
ステップＳ５０では、上述したように、円形状抽出手法によって位相差画像から抽出した細胞存在領域３ａと、二次微分フィルタを用いて抽出したエッジ群とを位相差画像内における位置に基づいて対応付ける。そして、抽出したエッジ群に対して公知のラベリング処理を行って、各細胞存在領域３ａ内のエッジ群の中からエッジが構成する図形の面積が最大のもの、またはエッジが構成する図形の輪郭が最長のものを選択する。さらに、選択したエッジの中に核などの細胞内部の構造から抽出されたエッジが含まれている場合には、最も外側の輪郭のみを選択する。これによって、位相差画像内から細胞の内側のエッジのみを選択する。その後、ステップＳ６０へ進む。
【００３６】
ステップＳ６０では、制御装置１０５は、選択した細胞の内側のエッジを細胞本来の形状と定義し、このエッジの形状について上述した楕円度を算出する。その後、ステップＳ７０へ進み、算出した楕円度に基づいて浮遊細胞の活性状態を判定する。すなわち、式（１０）によって算出された楕円度が所定の閾値より大きければ、そのエッジに対応する浮遊細胞の状態は良いと判定する。これに対して、算出した楕円度が所定の閾値以下であれば、そのエッジに対応する浮遊細胞の状態は悪いと判定する。その後、ステップＳ８０へ進み、制御装置１０５は、例えば図９に示したように、浮遊細胞の活性状態の判定結果をモニタ１０８上に出力して、処理を終了する。
【００３７】
以上説明した本実施の形態によれば、以下のような作用効果を得ることができる。
（１）位相差画像に対して二次微分フィルタを適用してエッジを抽出し、抽出したエッジが構成する図形の面積が最大のもの、またはエッジが構成する図形の輪郭が最長のものを浮遊細胞の形状として抽出し、この浮遊細胞の形状に基づいて、浮遊細胞の活性状態を判定するようにした。これによって、位相差画像内から浮遊細胞の形状を正確に抽出し、精度高く活性状態を判定することができる。
【００３８】
（２）浮遊細胞の形状の円形度合いに基づいて浮遊細胞の活性状態を判定するようにした。これによって、浮遊細胞は、状態が良い場合はほぼ円形状となるが、状態が悪くなった場合には、この円形状が崩れ、楕円やいびつな形状となることを加味して、精度の高い判定を行うことができる。
【００３９】
（３）浮遊細胞の形状の円形度合いは、エッジの持つ共分散行列の固有値を用いて算出される浮遊細胞の形状の楕円度を指標として用いて判定するようにした。これによって、算出された楕円度は、１に近いほどエッジの形状は円に近く、楕円度が小さいほど円から離れた楕円形状になっていくことを表すことから、当該指標を用いることにより、簡易に浮遊細胞の活性状態を判定することができる。
【００４０】
（４）浮遊細胞の活性状態の判定結果を所定時間間隔で取得し、浮遊細胞の活性状態の時系列変化を観察するようにした。これによって、浮遊細胞の状態の時系列変化を把握することが可能となる。
【００４１】
―変形例―
なお、上述した実施の形態の細胞状態判定装置は、以下のように変形することもできる。
（１）上述した実施の形態では、浮遊細胞の形状の円形度合いは、エッジの持つ共分散行列の固有値を用いて算出される浮遊細胞の形状の楕円度を指標として用いて判定する例について説明した。しかしながら、（ａ）浮遊細胞の形状の重心からエッジまでの距離の最大値−最小値、または距離の分散により算出される浮遊細胞の形状の真円度、（ｂ）浮遊細胞の形状の周囲長の２乗／面積により算出される浮遊細胞の形状の複雑度、または（ｃ）４π×浮遊細胞の形状の面積／浮遊細胞の形状の周囲長の２乗により算出される浮遊細胞の形状の円形度を浮遊細胞の形状の円形度合いを表す指標として用いるようにしてもよい。なお、これらは、浮遊細胞の形状が円形に近づけば、真円度＝０，複雑度＝４π，円形度＝１に近づき、形状がいびつになるなど円から外れると真円度と複雑度は大きくなり、円形度は小さくなる。
【００４２】
（２）上述した実施の形態では、所定時間間隔、例えば数分おきに浮遊細胞の形状を観察し、その形状を表す特徴量の時系列データをモニタ１０８に自動的に表示するようにした。しかしながら、これに限定されず、浮遊細胞の活性状態の判定結果を所定時間間隔で取得し、その時系列データを制御装置１０５が備えるメモリ内に記憶するようにしてもよい。そして、使用者から時系列データの表示が指示された場合に、図９に示すグラフをモニタ１０８に表示するようにしてもよい。これによって、使用者は、好みのタイミングで浮遊細胞の状態の時系列変化を把握することができる。
【００４３】
なお、本発明の特徴的な機能を損なわない限り、本発明は、上述した実施の形態における構成に何ら限定されない。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】細胞状態判定装置の一実施の形態の構成を示すブロック図である。
【図２】位相差画像の具体例を示す図である。
【図３】位相差画像内から抽出された細胞存在領域の具体例を示す図である。
【図４】二次微分フィルタの具体例を示す図である。
【図５】二次微分フィルタ適用後の位相差画像の具体例を示す図である。
【図６】位相差画像からのエッジ群の抽出例を示す図である。
【図７】位相差画像内から細胞の内側のエッジのみを選択した場合の具体例を示す図である。
【図８】位相差画像上に細胞の活性状態を明示した場合の具体例を示す図である。
【図９】全細胞に対する円形細胞の占有率を時系列データとして表したグラフの具体例を示す図である。
【図１０】細胞状態判定装置１００の処理を示すフローチャート図である。
【符号の説明】
【００４５】
１００  細胞観察装置、１０１  インキュベータ、１０２  ステージ、１０３  対物レンズ、１０４  カメラ、１０５  制御装置、１０６  照明装置、１０７  操作スイッチ、１０８  モニタ、１０９  環境制御装置、１０９ａ  ＣＯ２混合機、１０９ｂ  湿度調整機、１０９ｃ  温度調整機
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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