(57)【要約】【課題】細胞に対する賦活化および抗老化効果に優れ、長期にわたる使用に十分に耐えうる安全性を備えた賦活化剤および抗老化剤を提供し、これらを有効成分とした化粧品・医薬部外品、医薬品、飲食品を提供する。【解決手段】バイオサーファクタント、特にマンノシルエリスリトールリピッド（ＭＥＬ）、マンノシルマンニトールリピッド（ＭＭＬ）、マンノシルエリスリトールリピッド（ＭＥＬ）のトリアシル体およびマンノシルマンニトールリピッド（ＭＭＬ）のトリアシル体からなる群より選択された少なくとも１種を有効成分として配合する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
バイオサーファクタントを有効成分として含有することを特徴とする賦活化剤。
【請求項２】
上記バイオサーファクタントが、マンノシルエリスリトールリピッド（ＭＥＬ）、マンノシルマンニトールリピッド（ＭＭＬ）、マンノシルエリスリトールリピッド（ＭＥＬ）のトリアシル体およびマンノシルマンニトールリピッド（ＭＭＬ）のトリアシル体からなる群より選択された少なくとも１種であることを特徴とする請求項１に記載の賦活化剤。
【請求項３】
請求項１または２に記載の賦活化剤を有効成分として含有することを特徴とする抗老化剤。
【請求項４】
請求項１または２に記載の賦活化剤を有効成分として含有することを特徴とする育毛剤。
【請求項５】
請求項１または２に記載の賦活化剤、請求項３に記載の抗老化剤、または請求項４に記載の育毛剤を有効成分として含有することを特徴とする外用剤。
【請求項６】
請求項１または２に記載の賦活化剤、請求項３に記載の抗老化剤、または請求項４に記載の育毛剤を有効成分として含有することを特徴とする化粧品。
【請求項７】
請求項１または２に記載の賦活化剤、請求項３に記載の抗老化剤、または請求項４に記載の育毛剤を有効成分として含有することを特徴とする医薬部外品。
【請求項８】
請求項１または２に記載の賦活化剤、請求項３に記載の抗老化剤、または請求項４に記載の育毛剤を有効成分として含有することを特徴とする医薬品。
【請求項９】
請求項１または２に記載の賦活化剤、請求項３に記載の抗老化剤、または請求項４に記載の育毛剤を有効成分として含有することを特徴とする飲食品類。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バイオサーファクタントを有効成分とする賦活化剤に関するものであり、特に、各種細胞を賦活化し、老化防止や発毛・脱毛防止に有効なバイオサーファクタントを含有する化粧品、医薬部外品、医薬品、飲食品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
個体老化やこれに伴って発生する各種の疾患などは、分裂するすべての細胞の老化（分裂速度の低下、細胞機能の低下）と深く関わっている。例えば皮膚は、表皮細胞、繊維芽細胞、およびこれら細胞外の皮膚構造を支持するエラスチン、コラーゲン等の細胞外マトリックスによって構成されている。若い皮膚においては、これらの皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことによって水分保持、柔軟性、弾力性が確保され、肌は外観的にも張りと艶があり、みずみずしい状態に維持される。ところが、加齢や紫外線、乾燥、ストレスなどによって特に細胞外マトリックスや繊維芽細胞の機能低下が引き起こされ、その結果、皮膚の柔軟性、保湿機能は低下し、肌は張りや艶を失い、荒れ、しわ、くすみなどの老化症状が発生する。
【０００３】
細胞レベルで老化防止や抑制を目的に賦活化剤、抗老化剤の探索が行われている。例えば動物由来の賦活化剤としては、結合組織加水分解物（特許文献１）、胸腺・脾臓由来水溶性蛋白（特許文献２）、牛胎盤エキス（特許文献３）などが知られている。植物由来の賦活化剤としては、ゴマ、サンヤク、トウガラシ、トウキ、ドクダミ、バクモンドウ（特許文献４）、アーモンド、セイヨウタンポポ、セイヨウニワトコ、センキュウ、センブリ、ソウハクヒ、トウニン、ニンジン、ホップ、ムクゲ、ヨクイニン（特許文献５、特許文献６）、ショウガ科ウコン属（特許文献７）、ハナヤスリ科ハナヤスリ属（特許文献８）の抽出物などが知られている。これらの一部は賦活化剤、抗老化剤として医薬部外品や化粧品に利用されているが、満足すべき作用効果を発揮する賦活化剤や抗老化剤は得られていない。
【０００４】
マンノシルエリスリトールリピッド(ＭＥＬ)は酵母が作る天然系の界面活性剤であり種々の生理作用が報告されている（非特許文献１）。また最近ではエリスリトールがマンニトールに代わったマンノシルマンニトールリピッド（ＭＭＬ）が見出されている（特許文献９）。外用剤や化粧品としての用途としては、抗炎症剤および抗アレルギー剤（特許文献１０）、養毛・育毛剤（特許文献１１）としての有用性や、抗菌作用（特許文献１２）や表面張力低下作用（特許文献１３）が知られている。
【０００５】
しかし、ＭＥＬの細胞に対する賦活化作用については全く知られていなかった。また、特許文献１１に記載の育毛作用は動物を用いて効果が確認されたものであり、ヒト頭髪毛乳頭細胞を賦活化させることは報告されていなかった。
【特許文献１】特開昭６２−８４０２４号公報
【特許文献２】特開昭６３−１８８６９７号公報
【特許文献３】特開平０３−１４１２９９号公報
【特許文献４】特開平１０−４５６１５号公報
【特許文献５】特開平１０−０３６２７９号公報
【特許文献６】特開平１０−３６２７９号公報
【特許文献７】特開２００４−７５６３２号公報
【特許文献８】特開２００５−８９３７５号公報
【特許文献９】特開２００５−１０４８３７号公報
【特許文献１０】特開２００５−６８０１５号公報
【特許文献１１】特開２００３−２６１４２４号公報
【特許文献１２】特開昭５７−１４５８９６号公報
【特許文献１３】特開昭６１−２０５４５０号公報
【非特許文献１】ジャーナル  オブ  バイオサイエンス  アンド  バイオエンジニアリング、９４，１８７（２００２）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
哺乳類、特にヒトに対して賦活化や抗老化を付与することは極めて重要な課題であり、動物由来、植物由来の賦活物質や抗老化剤は各種見つかっているが、実際には産業上利用可能な程度に十分かつ安定した効果は得られておらず、新規な賦活化剤や抗老化剤が探索されているのが現状である。従って、本発明の目的は、細胞に対する賦活化および抗老化効果に優れ、長期にわたる使用に十分に耐え得る安全性を備えた賦活化剤および抗老化剤を提供し、これらを有効成分とした化粧品・医薬部外品、医薬品、飲食品を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは上記の目的を達成すべく鋭意努力した結果、ＭＥＬおよびトリアシルＭＥＬが細胞の賦活化に有効であることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、以下の発明を包含する。
【０００８】
（１）バイオサーファクタントを有効成分として含有することを特徴とする賦活化剤。
【０００９】
（２）上記バイオサーファクタントが、マンノシルエリスリトールリピッド（ＭＥＬ）、マンノシルマンニトールリピッド（ＭＭＬ）、マンノシルエリスリトールリピッド（ＭＥＬ）のトリアシル体およびマンノシルマンニトールリピッド（ＭＭＬ）のトリアシル体からなる群より選択された少なくとも１種であることを特徴とする（１）に記載の賦活化剤。
【００１０】
（３）上記（１）または（２）に記載の賦活化剤を有効成分として含有することを特徴とする抗老化剤。
【００１１】
（４）上記（１）または（２）に記載の賦活化剤を有効成分として含有することを特徴とする育毛剤。
【００１２】
（５）上記（１）または（２）に記載の賦活化剤、（３）に記載の抗老化剤、または（４）に記載の育毛剤を有効成分として含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【００１３】
（６）上記（１）または（２）に記載の賦活化剤、（３）に記載の抗老化剤、または（４）に記載の育毛剤を有効成分として含有することを特徴とする化粧品。
【００１４】
（７）上記（１）または（２）に記載の賦活化剤、（３）に記載の抗老化剤、または（４）に記載の育毛剤を有効成分として含有することを特徴とする医薬部外品。
【００１５】
（８）上記（１）または（２）に記載の賦活化剤、（３）に記載の抗老化剤、または（４）に記載の育毛剤を有効成分として含有することを特徴とする医薬品。
【発明の効果】
【００１６】
本発明に係る賦活化剤の有効成分として用いるバイオサーファクタントは、各種細胞に対して顕著な賦活作用を有している。したがって、本発明に係る賦活化剤は、抗老化剤や育毛剤として優れた効果を発揮する。また、バイオサーファクタントは生物由来の天然界面活性剤であるため安全性に優れており、本発明に係る賦活化剤は長期にわたる使用に十分に耐え得るという効果を奏する。さらに、バイオサーファクタントは、微生物の培養により製造できるため原料コストが安価であり、大量生産可能である。したがって、本発明係る賦活化剤は低価格で提供できるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
〔賦活化剤〕
本明細書において「賦活化」とは、細胞機能や細胞活性を維持または亢進させることが意図される。その結果、細胞機能や細胞活性の低下を抑制、すなわち細胞の老化を抑制することができる。したがって、「賦活化剤」は「細胞賦活剤」と同義であり、「抗老化剤」としての有用性を持つ。
【００１８】
例えば、皮膚細胞における「賦活化、抗老化」とは、加齢や光老化による基低膜の構造変化の蓄積に伴う皮膚細胞の機能低下を小さくすることで、皮膚のしわ、たるみ、硬化等を防止、改善して弾力のある若々しい健康な肌の状態を維持することなどを指している。また、例えば、毛乳頭細胞または毛母細胞においては、加齢、ストレス、ホルモンバランスによる毛乳頭細胞または毛母細胞の機能低下を小さくすることで、ヘアサイクルを維持して脱毛を抑えることなどを指している。
【００１９】
「バイオサーファクタント」とは生物によって生み出される界面活性能力や乳化能力を有する物質の総称であり、優れた界面活性や、高い生分解性を示すばかりでなく、様々な生理作用を有していることから合成界面活性剤とは異なる挙動・機能を発現する可能性がある。なお、バイオサーファクタントは微生物の培養により大量に製造可能であり、プレミックス品として使用してもよい。
【００２０】
「プレミックス品」とは機能性の素材の他に、分散剤などを添加したり、溶媒で化粧品製造時に使いやすいように希釈したりしたものである。
【００２１】
バイオサーファクタントとしては、マンノシルエリスリトールリピッド（ＭＥＬ）、マンノシルマンニトールリピッド（ＭＭＬ）、トレハロースリピッド、ラムノリピッド、ソホロリピッド、サーファクチン、スピクルスポル酸、エマルザンなどが挙げられ、いずれも本発明に係る賦活化剤に使用できる。なかでも、ラメラ構造を形成するバイオサーファクタントを利用するのが好ましく、ＭＥＬ、ＭＭＬが特に好ましい。
【００２２】
ＭＥＬは、マンノースの４位および６位のアセチル基の有無からＭＥＬ−Ａ、ＭＥＬ−Ｂ、ＭＥＬ−ＣおよびＭＥＬ−Ｄの４種類が知られている。式（１）にＭＥＬ−Ａの構造を示す。式（１）中、Ｒ１およびＲ２は炭化水素基を示す。すなわち、ＭＥＬ−Ａは、式（１）中、マンノースの２位、３位に炭素数５〜１９のアルカノイル基を有し、マンノースの４位、６位にアセチル基を有する化合物である。なお、ＭＥＬ−Ｂは式（１）においてマンノースの４位のアセチル基（ＣＨ３ＣＯ）がＨであり、ＭＥＬ−Ｃは式（１）においてマンノースの６位のアセチル基（ＣＨ３ＣＯ）がＨであり、ＭＥＬ−Ｄは式（１）においてマンノースの４位および６位のアセチル基（ＣＨ３ＣＯ）がいずれもＨである。
【００２３】
【化１】
2008044855.tif 000002
【００２４】
ＭＭＬの構造を式（２）に示す。式（２）中、Ｒ１およびＲ２は炭化水素基を示す。また、式（２）中、マンノースの４位、６位のアセチル基（ＣＨ３ＣＯ）のどちらか一方、あるいは両方がＨになっていてもよい。
【００２５】
【化２】
2008044855.tif 000003
【００２６】
本発明に係る賦活化剤に用いられるバイオサーファクタントは、ＭＥＬのトリアシル体およびＭＭＬのトリアシル体でもよい。トリアシル体のバイオサーファクタントは、ＭＥＬやＭＭＬよりもさらに高い疎水性を有する新規構造のバイオサーファクタントである。例えば、ＭＥＬ生産菌の培養液以外から大量に得る時は、酵素を用いてＭＥＬを種々の植物油と反応することによって製造することができる。
【００２７】
ＭＥＬのトリアシル体、すなわちトリアシルマンノシルエリスリトールリピッド（トリアシルＭＥＬと称することがある）は、式（３）のような構造を示す。
【００２８】
【化３】
2008044855.tif 000004
【００２９】
式（３）中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立して炭化水素基または酸素原子含有炭化水素基を示し、マンノースの４位および６位の水酸基のいずれか一方、あるいは両方の水素原子がアセチル基に置換されていてもよい。炭化水素基は飽和結合のみを有していてもよく、不飽和結合を有していてもよい。不飽和結合を有している場合、複数の二重結合を有していてもよい。炭素鎖は直鎖状であってもよく分岐鎖状であってもよい。また、酸素原子含有炭化水素基の場合、含まれる酸素原子の数および位置は限定されない。
【００３０】
式（３）中、Ｒ１、Ｒ２は炭素数が６〜２０であることが好ましく、脂肪族アシル基（ＲＣＯ−）としてマンノースの２位および３位の水酸基とエステル結合をしており、残りの水酸基にはアセチル基がエステル結合していてもよい。Ｒ３は炭素数が６〜２０であることが好ましく、脂肪族アシル基（ＲＣＯ−）としてエリスリトールの一級水酸基とエステル結合をしている。
【００３１】
トリアシルＭＥＬは脂肪酸エステルが付加した構造であり高い疎水性を有することからエモリエント剤として従来のＭＥＬと比べても種々のオイル成分と馴染みやすい点で優れている。
【００３２】
これらのバイオサーファクタントは、単独で使用してもよいが、２種以上のバイオサーファクタントを併用することもできる。
【００３３】
バイオサーファクタントの製造方法は特に制限されるものはないが、公知のバイオサーファクタント生産微生物を用いた発酵方法を任意に選択して行えばよい。例えばＭＥＬの培養生産は、Pseudozyma antarctica NBRC 10736を常法に従って培養することにより生産することができる。ＭＥＬ生産微生物としては、上記以外にCandida  antarctica、Candida  sp.、等を用いることができる。これらの微生物の培養により、容易にＭＥＬが得られることは当業者に周知である。バイオサーファクタント生産微生物は特に限定されず、目的に応じて適宜選択することができる。
【００３４】
バイオサーファクタントを生産するときの発酵培地は、酵母エキス、ペプトン等のＮ源、グルコース、フルクトース等のＣ源、および硝酸ナトリウム、リン酸水素二カリウム、硫酸マグネシウム７水塩等の無機塩類からなる一般的な組成の培地を用いることができ、これにオリーブ油、ダイズ油、ヒマワリ油、トウモロコシ油、キャノーラ油、ココナッツ油等の油脂類、並びに、流動パラフィン、テトラデカン等の炭化水素等の非水溶性基質の単独或いは２種以上を添加したものを使用することができる。
【００３５】
ｐＨや温度等の発酵条件や培養時間等は任意に設定でき、発酵後の培養液をそのまま本発明のバイオサーファクタントとして使用することが可能である。また、発酵後の培養液を必要に応じて濾過、遠心分離、抽出、精製、滅菌等の任意の操作を適宜加えることも可能であり、得られたエキスを希釈、濃縮、乾燥することもできる。
【００３６】
原料とする油脂類としては植物油脂が好ましい。植物油脂は特に限定されず、目的に応じて適宜選定することができる。例えば、大豆油、菜種油、コーン油、ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、パーム油などが挙げられ、これらの中でも、大豆油がバイオサーファクタント（特にＭＥＬ）の生産効率（生産量、生産速度、および収率）を向上させることができる点で特に好ましい。これらは、１種を単独で、または２種以上を併用しても構わない。
【００３７】
無機窒素源としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、硝酸アンモニウム、尿素、硝酸ナトリウム、塩化アンモニウム、硫安等が挙げられる。
【００３８】
バイオサーファクタントの回収、精製方法には特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。例えば、培養液を遠心分離して油分を回収し、酢酸エチル等の有機溶媒で抽出濃縮することにより回収することができる。
【００３９】
抽出溶媒としては、水、アルコール類（例えば、メタノール、無水エタノール、エタノールなどの低級アルコール、またはプロピレングリコール、１，３-ブチレングリコールなどの多価アルコール）、アセトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、ジオキサン、アセトニトリル、酢酸エチルなどのエステル類、キシレン、ベンゼン、クロロホルムなどの有機溶媒を、単独であるいは２種類以上の混液を任意に組み合わせて使用することができ、また、各々の溶媒抽出物が組み合わされたものでも使用することができる。
【００４０】
抽出方法は特に制限されるものはないが、通常、常温から常圧下での溶媒の沸点の範囲であればよく、抽出後は濾過またはイオン交換樹脂を用い、吸着・脱色・精製して溶液状、ペースト状、ゲル状、粉末状とすればよい。多くの場合は、そのままの状態で利用できるが、必要であれば、その効力に影響のない範囲でさらに脱臭、脱色などの精製処理を加えてもよい。脱臭・脱色等の精製処理手段としては、活性炭カラムなどを用いればよく、抽出物質により一般的に適用される通常の手段を任意に選択して行えばよい。必要に応じて、シリカゲルカラムを用いて精製することにより、純度の高いバイオサーファクタントを得ることができる。
【００４１】
バイオサーファクタントのトリアシル体を得る方法を、ＭＥＬのトリアシル体を製造する方法を例として説明するが、本発明に用いられるバイオサーファクタントのトリアシル体はトリアシルＭＥＬに限定されない。
【００４２】
例えば、トリアシルＭＥＬを得るためには、上記のようにして微生物を発酵して製造した培養液からトリアシルＭＥＬ画分を精製して得ることができる。また、大量に得るためには、ＭＥＬを有機溶媒に溶かし、植物油などの脂肪酸誘導体を添加、加水分解酵素の存在下でエステル化反応またはエステル交換反応を行う。
【００４３】
ＭＥＬのエリスリトール部に導入される脂肪酸は長鎖炭化水素の1価のカルボン酸であればよい。また、飽和脂肪酸であっても不飽和脂肪酸であってもよい。不飽和脂肪酸の場合、複数の二重結合を有していてもよい。炭素鎖は直鎖状であってもよく分岐鎖状であってもよい。さらに、脂肪酸の誘導体である脂肪酸誘導体を本発明に使用してもよいし、脂肪酸と脂肪酸誘導体の混合物を本発明に使用してもよい。ＭＥＬのエリスリトール部に導入される脂肪酸または脂肪酸誘導体は、油類、高級脂肪酸、合成エステル由来であることが好ましい。
【００４４】
「油類」としては、植物油、動物油、鉱物油およびその硬化油であればよい。具体的には、アボカド油、オリーブ油、ゴマ油、ツバキ油、月見草油、タートル油、マカデミアンナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、ナタネ油、卵黄油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、キリ油、ホホバ油、カカオ脂、ヤシ油、馬油、パーム油、パーム核油、牛脂、羊脂、豚脂、ラノリン、鯨ロウ、ミツロウ、カルナウバロウ、モクロウ、キャンデリラロウ、スクワラン等の動植物油およびその硬化油。流動パラフィン、ワセリン等の鉱物油、トリパルミチン酸グリセリン等の合成トリグリセリンが挙げられる。好ましくはアボカド油、オリーブ油、ゴマ油、ツバキ油、月見草油、タートル油、マカデミアンナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、ナタネ油、卵黄油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、より好ましくはオリーブ油、大豆油である。
【００４５】
「高級脂肪酸」としては、例えばカプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、イソステアリン酸、ウンデシン酸、トール酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などが挙げられる。好ましくはラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ステアリン酸、ウンデシレン酸、より好ましくはオレイン酸、リノール酸、ウンデシレン酸である。
【００４６】
「合成エステル」としては、例えば、カプロン酸メチル、カプリル酸メチル、カプリン酸メチル、ラウリン酸メチル、ミリスチン酸メチル、パルミチン酸メチル、オレイン酸メチル、リノール酸メチル、リノレン酸メチル、ステアリン酸メチル、ウンデシン酸メチル、カプロン酸エチル、カプリル酸エチル、カプリン酸エチル、ラウリン酸エチル、ミリスチン酸エチル、パルミチン酸エチル、オレイン酸エチル、リノール酸エチル、リノレン酸エチル、ステアリン酸エチル、ウンデシン酸エチル、カプロン酸ビニル、カプリル酸ビニル、カプリン酸ビニル、ラウリン酸ビニル、ミリスチン酸ビニル、パルミチン酸ビニル、オレイン酸ビニル、リノール酸ビニル、リノレン酸ビニル、ステアリン酸ビニル、ウンデシン酸ビニル、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、オレンイ酸デシル、ジメチルオクタン酸、乳酸セチル、乳酸ミリスチル等が挙げられる。好ましくはラウリン酸メチル、ミリスチン酸メチル、パルミチン酸メチル、オレイン酸メチル、リノール酸メチル、リノレン酸メチル、ステアリン酸メチル、ウンデシレン酸メチル、より好ましくはオレイン酸メチル、リノール酸メチル、ウンデシレン酸メチルである。
【００４７】
トリアシルＭＥＬは、上述のようにＭＥＬを有機溶媒に溶解して反応させることにより生産することができる。有機溶媒としては、ＭＥＬを可溶化できるものであれば限定されない。全部を可溶化できなくても一部を可溶化できるものであればよい。また、有機溶媒は複数の有機溶媒の混合物でもよい。具体的には、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、アセトン、プロパノン、ブタノン、ペンタン−２−オン、１，２−エタンジオール、２，３−ブタンジオール、ジオキサン、アセトニトリル、２−メチル−ブタン−２−オール、第３級ブタノール、２−メチルプロパノール、４−ヒドロキシ−２−メチルペンタノン、テトラヒドロフラン、ヘキサン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ピリジン、メチルエチルケトンなどを挙げることができる。好ましくはアセトン、テトラヒドロフラン、第３級ブタノール、アセトニトリル、ジオキサン、より好ましくはアセトンである。
【００４８】
加水分解酵素としては、リパーゼ、プロテアーゼ、エステラーゼが挙げられる。これらの中から選択される少なくとも１種を用いることが好ましく、複数の加水分解酵素を用いてもよい。好ましくはリパーゼ、エステラーゼ、より好ましくはリパーゼである。
【００４９】
具体的には、例えば、ＭＥＬ生産微生物の培養液から精製したＭＥＬを有機溶媒（例えば、アセトン）に溶解し、これに市販のリパーゼ（例えば、ノボザイム４３５（ノボザイムズ社製）など）および植物油脂を添加する。
【００５０】
この製造方法の場合、反応温度は１０〜１００℃、好ましくは２０〜５０℃、より好ましくは２５〜４０℃で、１日〜７日間攪拌すればよい。また、反応液にモレキュラーシーブスを添加してもよい。この製造方法により、材料として添加したＭＥＬがほぼ定量的にトリアシル体となる。
【００５１】
トリアシルＭＥＬの精製は、上述のＭＥＬの精製に準じて行うことができる。
【００５２】
上述のようにして得られるバイオサーファクタントは、そのまま賦活化剤として利用することも可能であるが、化粧品、医薬部外品、医薬品、食品に配合して利用することが好ましい。バイオサーファクタントを配合する濃度は、吸収程度、作用程度、製品形態、使用頻度などによって適宜選択され、特に限定されるのもではない。細胞賦活化作用を損なわない範囲で配合濃度を選択すればよく、賦活化剤全重量に対し、通常０．００１〜５０質量％が好ましく、０．１〜２０質量％がより好ましく、１〜１５質量％がさらに好ましく３〜１０質量％が特に好ましい。
【００５３】
ここで、賦活化剤に配合するバイオサーファクタントの使用形態は任意である。例えば、バイオサーファクタントを培養液からの抽出物のまま、あるいは精製した高純度品、もしくは水に懸濁し、あるいはエタノール等の有機溶媒に溶かした後使用してもよい。
【００５４】
バイオサーファクタントを用いた本発明に係る賦活化剤の製造方法は、特に限定されるものではないが、
バイオサーファクタントを用いた本発明に係る賦活化剤の製造方法は特に限定されるものではないが、バイオサーファクタントは疎水性が高いため、非イオン性の界面活性剤や低級アルコール、多価アルコール、あるいはオリーブ油、スクワラン、脂肪酸などの天然油脂に溶解して用いることが好ましい。
【００５５】
非イオン界面活性剤としては、例えば、ソルビタン脂肪酸エステル類（例えば、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノイソステアレート、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンセスキオレエート、ソルビタントリオレエート、ペンタ−２−エチルヘキシル酸ジグリセロールソルビタン、テトラ−２−エチルヘキシル酸ジグリセロールソルビタン等）；グリセリンポリグリセリン脂肪酸類（例えば、モノ綿実油脂肪酸グリセリン、モノエルカ酸グリセリン、セスキオレイン酸グリセリン、モノステアリン酸グリセリン、α，α’−オレイン酸ピログルタミン酸グリセリン、モノステアリン酸グリセリンリンゴ酸等）；プロピレングリコール脂肪酸エステル類（例えば、モノステアリン酸プロピレングリコール等）；硬化ヒマシ油誘導体；グリセリンアルキルエーテル等が挙げられる。
【００５６】
ＰＯＥ系の親水性非イオン界面活性剤としては、例えば、ＰＯＥ−ソルビタン脂肪酸エステル類（例えば、ＰＯＥ−ソルビタンモノオレエート、ＰＯＥ−ソルビタンモノステアレート、ＰＯＥ−ソルビタンモノオレエート、ＰＯＥ−ソルビタンテトラオレエート等）；ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（例えば、ＰＯＥ−ソルビットモノラウレート、ＰＯＥ−ソルビットモノオレエート、ＰＯＥ−ソルビットペンタオレエート、ＰＯＥ−ソルビットモノステアレート等）；ＰＯＥ−グリセリン脂肪酸エステル類（例えば、ＰＯＥ−グリセリンモノステアレート、ＰＯＥ−グリセリンモノイソステアレート、ＰＯＥ−グリセリントリイソステアレート等のＰＯＥ−モノオレエート等）；ＰＯＥ−脂肪酸エステル類（例えば、ＰＯＥ−ジステアレート、ＰＯＥ−モノジオレエート、ジステアリン酸エチレングリコール等）；ＰＯＥ−アルキルエーテル類（例えば、ＰＯＥ−ラウリルエーテル、ＰＯＥ−オレイルエーテル、ＰＯＥ−ステアリルエーテル、ＰＯＥ−ベヘニルエーテル、ＰＯＥ−２−オクチルドデシルエーテル、ＰＯＥ−コレスタノールエーテル等）；プルロニック型類（例えば、プルロニック等）；ＰＯＥ・ＰＯＰ−アルキルエーテル類（例えば、ＰＯＥ・ＰＯＰ−セチルエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＰ−２−デシルテトラデシルエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＰ−モノブチルエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＰ−水添ラノリン、ＰＯＥ・ＰＯＰ−グリセリンエーテル等）；テトラＰＯＥ・テトラＰＯＰ−エチレンジアミン縮合物類（例えば、テトロニック等）；ＰＯＥ−ヒマシ油硬化ヒマシ油誘導体（例えば、ＰＯＥ−ヒマシ油、ＰＯＥ−硬化ヒマシ油、ＰＯＥ−硬化ヒマシ油モノイソステアレート、ＰＯＥ−硬化ヒマシ油トリイソステアレート、ＰＯＥ−硬化ヒマシ油モノピログルタミン酸モノイソステアリン酸ジエステル、ＰＯＥ−硬化ヒマシ油マレイン酸等）；ＰＯＥ−ミツロウ・ラノリン誘導体（例えば、ＰＯＥ−ソルビットミツロウ等）；アルカノールアミド（例えば、ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド、ラウリン酸モノエタノールアミド、脂肪酸イソプロパノールアミド等）；ＰＯＥ−プロピレングリコール脂肪酸エステル；ＰＯＥ−アルキルアミン；ＰＯＥ−脂肪酸アミド；ショ糖脂肪酸エステル；アルキルエトキシジメチルアミンオキシド；トリオレイルリン酸等が挙げられる。
【００５７】
低級アルコールとしては、例えば、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、イソブチルアルコール、ｔ−ブチルアルコール等が挙げられる。
【００５８】
多価アルコールとしては、例えば、２価のアルコール（例えば、エチレングリコール、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、１，２−ブチレングリコール、１，３−ブチレングリコール、テトラメチレングリコール、２，３−ブチレングリコール、ペンタメチレングリコール、２−ブテン−１，４−ジオール、ヘキシレングリコール、オクチレングリコール等）；３価のアルコール（例えば、グリセリン、トリメチロールプロパン等）；４価アルコール（例えば、１，２，６−ヘキサントリオール等のペンタエリスリトール等）；５価アルコール（例えば、キシリトール等）；６価アルコール（例えば、ソルビトール、マンニトール等）；多価アルコール重合体（例えば、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、テトラエチレングリコール、ジグリセリン、ポリエチレングリコール、トリグリセリン、テトラグリセリン、ポリグリセリン等）；２価のアルコールアルキルエーテル類（例えば、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、エチレングリコールモノフェニルエーテル、エチレングリコールモノヘキシルエーテル、エチレングリコールモノ２−メチルヘキシルエーテル、エチレングリコールイソアミルエーテル、エチレングリコールベンジルエーテル、エチレングリコールイソプロピルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル、エチレングリコールジブチルエーテル等）；２価アルコールアルキルエーテル類（例えば、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ジエチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールジメチルエーテル、ジエチレングリコールジエチルエーテル、ジエチレングリコールブチルエーテル、ジエチレングリコールメチルエチルエーテル、トリエチレングリコールモノメチルエーテル、トリエチレングリコールモノエチルエーテル、プロピレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコールモノエチルエーテル、プロピレングリコールモノブチルエーテル、プロピレングリコールイソプロピルエーテル、ジプロピレングリコールメチルエーテル、ジプロピレングリコールエチルエーテル、ジプロピレングリコールブチルエーテル等）；２価アルコールエーテルエステル（例えば、エチレングリコールモノメチルエーテルアセテート、エチレングリコールモノエチルエーテルアセテート、エチレングリコールモノブチルエーテルアセテート、エチレングリコールモノフェニルエーテルアセテート、エチレングリコールジアジベート、エチレングリコールジサクシネート、ジエチレングリコールモノエチルエーテルアセテート、ジエチレングリコールモノブチルエーテルアセテート、プロピレングリコールモノメチルエーテルアセテート、プロピレングリコールモノエチルエーテルアセテート、プロピレングリコールモノプロピルエーテルアセテート、プロピレングリコールモノフェニルエーテルアセテート等）；グリセ
リンモノアルキルエーテル（例えば、キミルアルコール、セラキルアルコール、バチルアルコール等）；糖アルコール（例えば、ソルビトール、マルチトール、マルトトリオース、マンニトール、ショ糖、エリトリトール、グルコース、フルクトース、デンプン分解糖、マルトース、キシリトース、デンプン分解糖還元アルコール等）；グリソリッド；テトラハイドロフルフリルアルコール；ＰＯＥ−テトラハイドロフルフリルアルコール；ＰＯＰ−ブチルエーテル；ＰＯＰ・ＰＯＥ−ブチルエーテル；トリポリオキシプロピレングリセリンエーテル；ＰＯＰ−グリセリンエーテル；ＰＯＰ−グリセリンエーテルリン酸；ＰＯＰ・ＰＯＥ−ペンタンエリスリトールエーテル、ポリグリセリン等が挙げられる。  
【００５９】
油類としては、アボカド油、オリーブ油、ゴマ油、ツバキ油、月見草油、タートル油、マカデミアンナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、ナタネ油、卵黄油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、キリ油、ホホバ油、カカオ脂、ヤシ油、馬油、パーム油、パーム核油、牛脂、羊脂、豚脂、ラノリン、鯨ロウ、ミツロウ、カルナウバロウ、モクロウ、キャンデリラロウ、スクワラン等の動植物油およびその硬化油。流動パラフィン、ワセリン等の鉱物油、トリパルミチン酸グリセリン等の合成トリグリセリンがある。
【００６０】
高級脂肪酸としては、例えばラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、イソステアリン酸、ウンデシン酸、トール酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などがある。高級アルコールとしては、例えば、ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、ミリスチルアルコール、オレイルアルコール、セトステアリルアルコール、ホホバアルコール、ラノリンアルコール、バチルアルコール、２−デシルテトラテセシノール、コレステロール、フィトステロール、イソステアリルアルコール等がある。合成エステルとしては、例えば、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、オレンイ酸デシル、ジメチルオクタン酸、乳酸セチル、乳酸ミリスチル等がある。シリコーンとしては、例えば、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン等の鎖状ポリシロキサン、デカメチルシクロポリシロキサン等の環状ポリシロキサン、シリコーン樹脂等の三次元網目構造のもの等がある。
【００６１】
上述のように、本発明に係る賦活化剤は、有効成分であるバイオサーファクタントを化粧品、医薬部外品、医薬品、食品に配合して組成物の形態で実施することが好ましい。
【００６２】
化粧品、医薬部外品、医薬品の形態で実施する場合、外用剤とすることが好適である。ただし、バイオサーファクタントは経口摂取も可能であるため、外用剤に限定されず、内用剤、飲食品としてもよい。
【００６３】
本発明に係る賦活化剤を医薬品とする場合は、バイオサーファクタントのヒト頭髪毛乳頭細胞賦活作用が実証されていることから、発毛促進用および脱毛進行予防用医薬品とすることができる。
【００６４】
剤形は限定されず、アンプル、カプセル、粉末、顆粒、丸剤、錠剤、固形剤、液剤、ゲル、気泡、乳液、クリーム、軟膏、シート、ムース、浴用剤など多様なものとすることができる。
【００６５】
具体的には、化粧品、医薬部外品、医薬品としては、例えば内用・外用薬用製剤、化粧水、乳液、クリーム、軟膏、ローション、オイル、パックなどの基礎化粧料、洗顔料や皮膚洗浄料、シャンプー、リンス、ヘアートリートメント、ヘアクリーム、ポマード、ヘアスプレー、整髪料、パーマ剤、ヘアートニック、染毛料、育毛・養毛料などの頭髪化粧料、ファンデーション、白粉、おしろい、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラ、眉墨、まつ毛などのメークアップ化粧料、美爪料などの仕上げ用化粧料、香水類、浴用剤、その他、歯磨き類、口中清涼剤・含嗽剤、液臭・防臭防止剤、衛生用品、衛生綿類、ウエットティシュなどが挙げられる。
【００６６】
具体的には、飲食品としては、例えば清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料、アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓、そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類、飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類、カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物、かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品、加工乳、発酵乳等の乳製品、サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂および油脂加工食品、ソース、たれ等の調味料、カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品、種々の形態の健康・栄養補助食品、保健機能食品、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチなどが挙げられる。
【００６７】
本発明に係る賦活化剤はヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が期待できる限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【００６８】
本発明に係る賦活化剤は、有効成分であるバイオサーファクタントに加え、必要に応じて本発明の効果を損なわない範囲内で、化粧品、医薬部外品、医薬品、飲食品に使用される成分や添加剤を併用して配合することができる。
【００６９】
例えば、油脂類としては、アボガド油、アルモンド油、ウイキョウ油、エゴマ油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラファー油、ゴマ油、カカオ脂、カミツレ油、カロット油、キューカンバー油、牛脂、牛脂脂肪酸、ククイナッツ油、サフラワー油、大豆油、ツバキ油、トウモロコシ油、ナタネ油、パーシック油、ヒマシ油、綿実油、落花生油、タートル油、ミンク油、卵黄油、カカオ脂、パーム油、パーム核油、モクロウ、ヤシ油、牛脂、豚脂、硬化油、硬化ヒマシ油などが挙げられる。
【００７０】
例えば、ロウ類としては、ミツロウ、カルナバロウ、鯨ロウ、ラノリン、液状ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、カンデリラロウ、モンタンロウ、セラックロウなどが挙げられる。
【００７１】
例えば、鉱物油としては、流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、オゾケライド、セレシン、マイクロクリスタンワックス、ポリエチレン末、スクワレン、スクワラン、プリスタンなどが挙げられる。
【００７２】
例えば、脂肪酸類としては、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、１２-ヒドロキシステアリン酸、ウンデシレン酸、トール油、ラノリン脂肪酸などの天然脂肪酸、イソノナン酸、カプロン酸、２−エチルブタン酸、イソペンタン酸、２−メチルペンタン酸、２−エチルヘキサン酸、イソペンタン酸などの合成脂肪酸が挙げられる。
【００７３】
例えば、アルコール類としては、エタノール、イソピロパノール、ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロールなどの天然アルコール、２−ヘキシルデカノール、イソステアリルアルコール、２−オクチルドデカノールなどの合成アルコール、酸化エチレン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ポリエチレングリコール、酸化プロピレン、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、バチルアルコール、ペンタエリトリトール、ソルビトール、マンニトール、ブドウ糖、ショ糖などの多価アルコール類などが挙げられる。
【００７４】
例えば、エステル類としては、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸オレイル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、酢酸ラノリン、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸プロピレングリコール、ジオレイン酸プロピレングリコールなどが挙げられる。
【００７５】
例えば、金属セッケンとしては、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸カルシウム、パルミチン酸亜鉛、ミリスチン酸マグネシウム、ラウリン酸亜鉛、ウンデシレン酸亜鉛などが挙げられる。
【００７６】
例えば、ガム質および水溶性高分子化合物としては、アラビアゴム、ベンゾインゴム、ダンマルゴム、グアヤク脂、アイルランド苔、カラヤゴム、トラガントゴム、キャロブゴム、クインシード、寒天、カゼイン、デキストリン、ゼラチン、ペクチン、デンプン、カラギーナン、カルボキシアルキルキチン、キトサン、ヒドロキシアルキルキチン、低分子キトサン、キトサン塩、硫酸化キチン、リン酸化キチン、アルギン酸およびその塩、ヒアルロン酸およびその塩、コンドロイチン硫酸、ヘパリン、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、カルボキシエチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ニトロセルロース、結晶セルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメタアクリレート、ポリアクリル酸塩、ポリエチレンオキサイドやポリプロピレンオキサイド等のポリアルキレンオキサイドまたはその架橋重合物、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレンイミンなどが挙げられる。
【００７７】
例えば、界面活性剤としては、アニオン界面活性剤（カルボン酸塩、スルホン酸塩、硫酸エステル塩、リン酸エステル塩）、カチオン界面活性剤（アミン塩、四級アンモニウム塩）、両性界面活性剤（カルボン酸型両性界面活性剤、硫酸エステル型両性界面活性剤、スルホン酸型両性界面活性剤、リン酸エステル型両性界面活性剤）、非イオン界面活性剤（エーテル型非イオン界面活性剤、エーテルエステル型非イオン界面活性剤、エステル型非イオン界面活性剤、ブロックポリマー型非イオン界面活性剤、含窒素型非イオン界面活性剤）、その他の界面活性剤（天然界面活性剤、タンパク質加水分解物の誘導体、高分子界面活性剤、チタン・ケイ素を含む界面活性剤、フッ化炭素系界面活性剤などが挙げられる。
【００７８】
例えば、ビタミン類としては、ビタミンＡ群ではレチノール、レチナール（ビタミンＡ1）、デヒドロレチナール（ビタミンＡ2）、カロチン、リコピン（プロビタミンＡ）、ビタミンＢ群では、チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩（ビタミンＢ1）、リボフラビン（ビタミンＢ2）、ピリドキシン（ビタミンＢ6）、シアノコバラミン（ビタミンＢ12）、葉酸類、ニコチン酸類、パントテン酸類、ビオチン類、コリン、イノシトール類、ビタミンＣ群では、アスコルビン酸およびその誘導体、ビタミンＤ群では、エルゴカルシフェロール（ビタミンＤ2）、コレカルシフェロール（ビタミンＤ3）、ジヒドロタキステロール、ビタミンＥ群では、トコフェロールおよびその誘導体、ユビキノン類、ビタミンＫ群では、フィトナジオン（ビタミンＫ1）、メナキノン（ビタミンＫ2）、メナジオン（ビタミンＫ3）、メナジオール（ビタミンＫ4）などが挙げられる。
【００７９】
例えば、アミノ酸としては、バリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシリジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジンなどや、それらの硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、クエン酸塩、あるいはピロリドンカルボン酸の如きアミノ酸誘導体などが挙げられる。
【００８０】
例えば、美白剤としては、アスコルビン酸またはその誘導体、イオウ、胎盤加水分解物、エラグ酸またはその誘導体、コウジ酸またはその誘導体、グルコサミンまたはその誘導体、アルブチンまたはその誘導体、ヒドロキシケイヒ酸またはその誘導体、グルタチオン、アルニカエキス、オウゴンエキス、ソウハクヒエキス、サイコエキス、ボウフウエキス、マンネンタケ菌糸体培養物またはその抽出物、シナノキエキス、モモ葉エキス、エイジツエキス、クジンエキス、ジユエキス、トウキエキス、ヨクイニンエキス、カキ葉エキス、ダイオウエキス、ボタンピエキス、ハマメリスエキス、マロニエエキス、オトギリソウエキス、油溶性カンゾウエキスなどが挙げられる。
【００８１】
例えば、保湿剤としては、ヒアルロン酸、ポリグルタミン酸、セリン、グリシン、スレオニン、アラニン、コラーゲン、加水分解コラーゲン、ヒドロネクチン、フィブロネクチン、ケラチン、エラスチン、ローヤルゼリー、コンドロイチン硫酸ヘパリン、グリセロリン脂質、グリセロ糖脂質、スフィンゴリン脂質、スフィンゴ糖脂質、リノール酸またはそのエステル類、エイコサペンタエン酸またはそのエステル類、ペクチン、ビフィズス菌発酵物、乳酸発酵物、酵母抽出物、レイシ菌糸体培養物またはその抽出物、小麦胚芽油、アボガド油、米胚芽油、ホホバ油、ダイズリン脂質、γ−オリザノール、ビロウドアオイエキス、ヨクイニンエキス、ジオウエキス、タイソウエキス、カイソウエキス、キダチアロエエキス、ゴボウエキス、マンネンロウエキス、アルニカエキス、小麦フスマなどが挙げられる。
【００８２】
例えば、育毛剤としては、ペンタデカン酸グリセリド、コレウスエキス、ゲンチアナエキス、マツカサエキス、ローヤルゼリーエキス、クマザサエキス、ｔ-フラバノン、6-ベンジルアミノプリン、センブリエキス、塩化カルプロニウム、ミノキシジル、フィナステリド、アデノシン、ニコチン酸アミド、桑の根エキス、ジオウエキス、5-アミノレブリン酸などが挙げられる。
【００８３】
例えば、動物あるいは植物、生薬の抽出物やエキスとしては、アセンヤク（阿仙薬）、アシタバ、アセロラ、アルテア、アルニカ、アボカド、アマチャ（甘茶）、アロエ、アロエベラ、イラクサ、イチョウ（銀杏葉、銀杏）、ウイキョウ（茴香）、ウコン（鬱金）、ウスバサイシン（細辛）、ウメ（烏梅）、ウラジロガシ、ウワウルシ、ノイバラ（営実）、ヒキオコシ（延命草）、オウギ（黄耆）、コガネバナ（オウゴン）、ヤマザクラ（桜皮）、キハダ（黄柏）、オウレン（黄連）、オタネニンジン（人参）、オトギリソウ（弟切草）、オドリコソウ、オランダガラシ、オレンジ、イトヒメハギ（遠志）、ウツボグサ（夏枯草）、ツルドクダミ（何首烏）、エンジュ（槐花）、ヨモギ（ガイ葉）、ガジュツ（莪朮）、クズ（葛根）、カノコソウ（吉草根）、カミツレ、キカラスウリ（瓜呂根）、カワラヨモギ（茵チン蒿）、カンゾウ（甘草）、フキタンポポ（款冬花、款冬葉）、キイチゴ、キウイ果実、キキョウ（桔梗）、キク（菊花）、キササゲ（梓実）、ミカン属植物果実（枳実）、タチバナ(橘皮)、キュウリ、ウドまたはシシウド（羌活、独活）、アンズ（杏仁）、クコ（地骨皮、枸杞子、枸杞葉）、クララ（苦参）、クスノキ、クマザサ、グレープフルーツ果実、ニッケイ（桂皮）、ケイガイ（ケイガイ）、エビスグサ（決明子）、マルバアサガオまたはアサガオ（ケン牛子）、ベニバナ（紅花）、ゴバイシ（五倍子）、コンフリー、コパイバ、クチナシ（山梔子）、ゲンチアナ、ホオノキ（厚朴）、ヒナタイノコズチ（牛膝）、ゴシュユ（呉茱萸）、ゴボウ、チョウセンゴミシ（五味子）、米、米ぬか、コムギ、ミシマサイコ（柴胡）、サフラン、サボンソウ、サンザシ（山ザ子）、サンショウ（山椒）、サルビア、サンシチニンジン（三七人参）、シイタケ（椎茸）、ジオウ（地黄）、シクンシ（使君子）、ムラサキ(紫根)、シソ（紫蘇葉、紫蘇子）、カキ（柿蒂）、シャクヤク（芍薬）、オオバコ（車前子、車前草）、ショウガ（生姜）、ショウブ（菖蒲）、トウネズミモチ（女貞子）、シモツケソウ、シラカバ、スイカズラ（金銀花、忍冬）、セイヨウキヅタ、セイヨウノコギリソウ、セイヨウニワトコ、アズキ（赤小豆）、ニワトコ（接骨木）、ゼニアオイ、センキュウ（川キュウ）、センブリ（当薬）、クワ（桑白皮、桑葉）、ナツメ（大棗）、ダイズ、タラノキ、チクセツニンジン（竹節人参）、ハナスゲ（知母）、ワレモコウ（地楡）、ドクダミ（十薬）、フユムシナツクサタケ（冬虫夏草）、トウガラシ、ホオズキ（登呂根）、タチジャコウソウ、リョクチャ（緑茶）、コウチャ（紅茶）、チョウジ（丁子）、ウンシュウミカン（陳皮）、ツバキ、ツボクサ、トウガラシ（番椒）、トウキ（当帰）、トウキンセンカ、ダイダイ（橙皮）、ワレモコウ（地楡）、トウモロコシ（南蛮毛）、トチュウ（杜仲、杜仲葉）、トマト、ナンテン（南天実）、ニンニク（大サン）、オオムギ（麦芽）、ハクセン（白蘚皮）、ジャノヒゲ（麦門冬）、パセリ、バタタ、ハッカ（薄荷）、ハマメリス、バラ、ビワ葉（枇杷葉）、マツホド（茯リョウ）、ブドウまたはその葉、ヘチマ、ボダイジュ、ボタン（牡丹皮）、ホップ、マイカイ（マイ瑰花）、松葉、マロニエ、マンネンロウ、ムクロジ、メリッサ、メリロート、ボ��（木瓜）、モヤシ、モモ（桃仁、桃葉）、ヒオウギ（射干）、ビンロウジュ（檳ロウ子）、メハジキ（益母草）、ヤグルマギク、ユキノシタ（虎耳草）、ヤマモモ（楊梅皮）、ヤシャブシ（矢車）、ハトムギ（ヨクイニン）、モウコヨモギ、ヤマヨモギ、ラベンダー、リンゴ果実、マンネンタケ（霊芝）、レモン果実、レンギョウ（連翹）、レンゲソウ、ゲンノショウコ（老鸛草）、ハシリドコロ（ロート根）、鶏トサカ、牛・人の胎盤抽出物、豚・牛の胃、十二指腸、或いは腸の抽出物若しくはその分解物、水溶性コラーゲン、水溶性コラーゲン誘導体、コラーゲン加水分解物、エラスチン、エラスチン加水分解物、水溶性エラスチン誘導体、シルク蛋白、シルク蛋白分解物、牛血球蛋白分解物などが挙げられる。
【００８４】
例えば、微生物培養代謝物としては、酵母エキス、亜鉛含有酵母エキス、ゲルマニウム含有酵母エキス、セレン含有酵母エキス、マグネシウム含有酵母エキス、米醗酵エキス、ユーグレナ抽出物、脱脂粉乳の乳酸発酵物などが挙げられる。
【００８５】
例えば、α−ヒドロキシ酸としては、グリコール酸、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、乳酸などが挙げられる。
【００８６】
例えば、無機顔料としては、無水ケイ酸、ケイ酸マグネシウム、タルク、カオリン、ベントナイト、マイカ、雲母チタン、オキシ塩化ビスマス、酸化ジルコニウム、酸化マグネシウム、酸化亜鉛、酸化チタン、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、黄酸化鉄、ベンガラ、黒酸化鉄、グンジョウ、酸化クロム、水酸化クロム、カーボンブラック、カラミンなどが挙げられる。
【００８７】
例えば、紫外線吸収剤としては、ｐ−アミノ安息香酸誘導体、サルチル酸誘導体、アントラニル酸誘導体、クマリン誘導体、アミノ酸系化合物、ベンゾトリアゾール誘導体、テトラゾール誘導体、イミダゾリン誘導体、ピリミジン誘導体、ジオキサン誘導体、カンファー誘導体、フラン誘導体、ピロン誘導体、核酸誘導体、アラントイン誘導体、ニコチン酸誘導体、ビタミンＢ6誘導体、オキシベンゾン、ベンゾフェノン、グアイアズレン、シコニン、バイカリン、バイカレイン、ベルベリンなどが挙げられる。
【００８８】
例えば、収斂剤としては、乳酸、酒石酸、コハク酸、クエン酸、アラントイン、塩化亜鉛、硫酸亜鉛、酸化亜鉛、カラミン、ｐ−フェノールスルホン酸亜鉛、硫酸アルミニウムカリウム、レソルシン、塩化第二鉄、タンニン酸などが挙げられる。
【００８９】
例えば、抗酸化剤としては、アスコルビン酸およびその塩、ステアリン酸エステル、トコフェロールおよびそのエステル誘導体、ノルジヒドログアセレテン酸、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、パラヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル、セサモール、セサモリン、ゴシポールなどが挙げられる。
【００９０】
例えば、抗炎症剤としては、イクタモール、インドメタシン、カオリン、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、サリチル酸メチル、アセチルサリチル酸、塩酸ジフェンヒドラミン、ｄまたはｄｌ−カンフル、ヒドロコルチゾン、グアイアズレン、カマズレン、マレイン酸クロルフェニラミン、グリチルリチン酸およびその塩、グリチルレチン酸およびその塩などが挙げられる。
【００９１】
例えば、殺菌・消毒薬としては、アクリノール、イオウ、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化メチルロザニリン、クレゾール、グルコン酸カルシウム、グルコン酸クロルヘキシジン、スルファミン、マーキュロクロム、ラクトフェリンまたはその加水分解物などが挙げられる。
【００９２】
例えば、頭髪用剤としては、二硫化セレン、臭化アルキルイソキノリニウム液、ジンクピリチオン、ビフェナミン、チアントール、カスタリチンキ、ショウキョウチンキ、トウガラシチンキ、塩酸キニーネ、強アンモニア水、臭素酸カリウム、臭素酸ナトリウム、チオグリコール酸などが挙げられる。
【００９３】
例えば、香料としては、ジャコウ、シベット、カストリウム、アンバーグリスなどの天然動物性香料、アニス精油、アンゲリカ精油、イラン精油、イリス精油、ウイキョウ精油、オレンジ精油、カナンガ精油、カラウェー精油、カルダモン精油、グアヤクウッド精油、クミン精油、黒文字精油、ケイ皮精油、シンナモン精油、ゲラニウム精油、コパイババルサム精油、コリアンデル精油、シソ精油、シダーウッド精油、シトロネラ精油、ジャスミン精油、ジンジャーグラス精油、杉精油、スペアミント精油、西洋ハッカ精油、大茴香精油、チュベローズ精油、丁字精油、橙花精油、冬緑精油、トルーバルサム精油、バチュリー精油、バラ精油、パルマローザ精油、檜精油、ヒバ精油、白檀精油、プチグレン精油、ベイ精油、ベチバ精油、ベルガモット精油、ペルーバルサム精油、ボアドローズ精油、芳樟精油、マンダリン精油、ユーカリ精油、ライム精油、ラベンダー精油、リナロエ精油、レモングラス精油、レモン精油、ローズマリー精油、和種ハッカ精油などの植物性香料、その他合成香料などが挙げられる。
【００９４】
例えば、色素・着色剤としては、赤キャベツ色素、赤米色素、アカネ色素、アナトー色素、イカスミ色素、ウコン色素、エンジュ色素、オキアミ色素、柿色素、カラメル、金、銀、クチナシ色素、コーン色素、タマネギ色素、タマリンド色素、スピルリナ色素、ソバ全草色素、チェリー色素、海苔色素、ハイビスカス色素、ブドウ果汁色素、マリーゴールド色素、紫イモ色素、紫ヤマイモ色素、ラック色素、ルチンなどが挙げられる。
【００９５】
例えば、甘味料としては、砂糖、甘茶、果糖、アラビノース、ガラクトース、キシロース、マンノース、麦芽糖、蜂蜜、ブドウ糖、ミラクリン、モネリンなどが挙げられる。
【００９６】
例えば、栄養強化剤としては、貝殻焼成カルシウム、シアノコラバミン、酵母、小麦胚芽、大豆胚芽、卵黄粉末、ヘミセルロース、ヘム鉄などが挙げられる。
【００９７】
その他、ホルモン類、金属イオン封鎖剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、防腐・防バイ剤、清涼剤、安定化剤、乳化剤、動・植物性蛋白質およびその分解物、動・植物性多糖類およびその分解物、動・植物性糖蛋白質およびその分解物、血流促進剤、消炎剤・抗アレルギー剤、細胞賦活剤、角質溶解剤、創傷治療剤、増泡剤、増粘剤、口腔用剤、消臭・脱臭剤、苦味料、調味料、酵素などが挙げられる。
【００９８】
〔抗老化方法〕
本発明に係る賦活化剤の有効成分であるバイオサーファクタントを用いることにより、抗老化方法を提供することができる。すなわち、本発明には、バイオサーファクタントを用いる抗老化方法が含まれる。
【００９９】
本発明に係る抗老化方法は、（ｉ）バイオサーファクタントを動物に接触させる工程を含むことを特徴としている。バイオサーファクタントとしては、マンノシルエリスリトールリピッド（ＭＥＬ）、マンノシルマンニトールリピッド（ＭＭＬ）、マンノシルエリスリトールリピッド（ＭＥＬ）のトリアシル体およびマンノシルマンニトールリピッド（ＭＭＬ）のトリアシル体からなる群より選択された少なくとも１種であることが好ましい。
【０１００】
動物としては、バイオサーファクタントの抗老化効果が期待できる限り特に限定されないが、哺乳動物が好ましく、ヒトが特に好ましい。
【０１０１】
「動物に接触させる」とは、動物の皮膚、粘膜など、外用剤が適用される範囲にバイオサーファクタントを接触させることが意図される。
【０１０２】
本発明に係る抗老化方法は、さらに（ｉｉ）バイオサーファクタントで細胞を賦活させる工程を含むことを特徴としている。細胞賦活作用を有するバイオサーファクタントで細胞を賦活させることにより、例えば、皮膚のしわ、たるみ、硬化等を防止、改善して弾力のある若々しい健康な肌の状態を維持することなどの抗老化効果を発揮することが可能となる。
【０１０３】
なお、発明を実施するための最良の形態の項においてなした具体的な実施態様および以下の実施例は、あくまでも、本発明の技術内容を明らかにするものであって、そのような具体例にのみ限定して狭義に解釈されるべきものではなく、当業者は、本発明の精神および添付の特許請求の範囲内で変更して実施することができる。
【実施例】
【０１０４】
以下に実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、これらは単なる例示であって、本発明の範囲を何ら限定するものではない。
【０１０５】
〔実施例１：正常ヒト皮膚繊維芽細胞を用いたＭＥＬの細胞賦活作用〕
正常ヒト皮膚繊維芽細胞トータルキット（ＣＡ１０６Ｋ０５、製造元：セルアプリケイションズインク  ＵＳＡ、輸入販売元：東洋紡績株式会社）を用いて、常法により正常ヒト皮膚繊維芽細胞を培養した。
【０１０６】
正常ヒト皮膚繊維芽細胞を１ウェル当たり２．０×１０４個となるように４８穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１０％のウシ胎児血清を添加したものを用いた。３７℃、二酸化炭素濃度５ｖｏｌ％中にて２４時間培養後、終濃度１ｎｇ／ｍｌ〜０．０１ｍｇ／ｍｌのＭＥＬ−Ａを添加した試験培地に交換し、さらに４８時間培養した。なお、ＭＥＬ−Ａはエタノールに溶解後、エタノールで段階希釈し、エタノールの終濃度がすべて０．５％となるように各培地に添加した。溶媒対照として、エタノール群（終濃度０．５％）を設けた。また、細胞毒性物質により細胞増殖が阻害されることを確認するためにＳＤＳ添加群（終濃度０．１％）を設けた。次いで３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を１００μｇ／ｍＬ含有する培地に交換して３時間培養し、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。
【０１０７】
評価結果を、エタノール群（溶媒対照群）における細胞賦活作用を１００とした相対値にて図１に示した。
【０１０８】
図１から明らかなように、ＭＥＬ−Ａ添加群では、いずれの濃度においても正常ヒト皮膚繊維芽細胞に対してエタノール群より高い細胞賦活作用を示した。特に、終濃度１ｎｇ／ｍｌのＭＥＬ−Ａを添加した場合には、エタノール群と比較して、６５％以上の有意な細胞賦活作用が認められた。この結果から、ＭＥＬは、優れた細胞賦活作用を有することが明らかとなり、ＭＥＬを肌に適用することにより、極めて優れた老化防止効果を発揮し、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のしわ、たるみ等を効果的に改善できることが示唆された。
【０１０９】
〔実施例２：ヒト頭髪毛乳頭細胞を用いたＭＥＬの細胞賦活作用〕
（１）ヒト頭髪毛乳頭細胞の培養方法
ヒト頭髪毛乳頭細胞（ＴＨＰＣ−００１）トータルキット（ＨＤＰＣトータルキット：ＴＨＰＣＫ−００１、製造元：セルアプリケイションズインク  ＵＳＡ、輸入販売元：東洋紡績株式会社）を用いて、常法によりヒト毛乳頭細胞を培養した。なお、ヒト頭髪毛乳頭細胞は育毛剤の薬効評価に広く用いられている細胞である（例えば、特開２００６−８３０８４、特開２００３−８１７９３、特開２０００−１５９６４０を参照）。
【０１１０】
具体的には、解凍した細胞を懸濁するためのＰＣＧＭ培地を１０ｍＬ、１５ｍＬ遠心チューブに分注し、氷冷しておく。凍結したヒト頭髪毛乳頭細胞（ＴＨＰＣ−００１）の入ったバイアル瓶を３７℃の恒温槽で急速に融解する。このバイアル瓶にＰＣＧＭ培地を１ｍＬ程度徐々に滴下しＤＭＳＯを希釈後、全量をＰＣＧＭ培地が入った遠心チューブに移し懸濁させる。浮遊細胞を冷却低速遠心機で４℃、１０００ｒｐｍ、５分間遠心分離する。沈殿した細胞を吸わないように注意しながら上清を吸引し、１ｍＬＰＣＧＭ培地に再懸濁させる。この全量を、コラーゲン液でコートしたＴ−７５フラスコに植え込み、加湿下で、二酸化炭素濃度５ｖｏｌ％、３７℃に保たれたインキュベーターに入れ静置培養を行う。１日後、培地の交換を行う。以後、１日おきに培地の交換を行い継代培養する。
【０１１１】
なお、ＰＣＧＭ培地として、１％ＦＢＳを含有するＰＣＧＭ基礎培地２５０ｍＬに牛下垂体抽出液（ＢＰＥ）１００倍希釈液を２．５ｍＬ、牛胎児血清（ＦＣＳ）１００倍希釈液を２．５ｍＬ、インシュリン・トランスフェリン・トリヨードサイロニン溶液（ＩＴＴ）２００倍希釈液を１．２５ｍＬ、およびサイロプロテイン溶液（Ｃｙｐ）２００倍希釈液を１．２５ｍＬ添加したものを用いた。
【０１１２】
（２）ヒト頭髪毛乳頭細胞賦活作用の評価
ヒト頭髪毛乳頭細胞を１ウェル当たり２．０×１０４個となるように４８穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１０％のウシ胎児血清を添加したものを用いた。２４時間培養後、終濃度１ｎｇ／ｍｌ〜０．０１ｍｇ／ｍｌのＭＥＬ−Ａを添加した試験培地に交換し、さらに４８時間培養した。なお、ＭＥＬ−Ａはエタノールに溶解後、エタノールで段階希釈し、エタノールの終濃度がすべて０．５％となるように各培地に添加した。溶媒対照として、エタノール群（終濃度０．５％）を設けた。次いで３−(４,５−ジメチル−２−チアゾリル)−２,５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を１００μｇ／ｍＬ含有する培地に交換して３時間培養し、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。
【０１１３】
評価結果を、エタノール群（溶媒対照群）における細胞賦活作用を１００とした相対値にて図２に示した。
【０１１４】
図２から明らかなように、ＭＥＬ−Ａ添加群では、１ｎｇ／ｍｌ〜１μｇ／ｍｌの範囲でヒト頭髪毛乳頭細胞に対してエタノール群より高い細胞賦活作用を示した。特に、終濃度１ｎｇ／ｍｌのＭＥＬ−Ａを添加した場合には、エタノール群と比較して、５０％以上の有意な細胞賦活作用が認められた。この結果から、ＭＥＬを頭皮に適用することにより、きわめて優れた毛乳頭細胞賦活作用を発揮し、育毛効果が記載できることが示唆された。
【０１１５】
〔実施例３：正常ヒト皮膚繊維芽細胞を用いたトリアシルＭＥＬの細胞賦活作用〕
トリアシルＭＥＬとして、Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ＮＢＲＣ １０７３６を、大豆油を添加した培地（３％ 大豆油、０．０２％ ＭｇＳＯ４・Ｈ２Ｏ、０．０２％ ＫＨ２ＰＯ４、０．１％ ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ）で培養して得られたＭＥＬ−Ａのエリスリトール部の水酸基にオレイン酸を付加したもの（ＯＬ−ＭＥＬ（ＳＢ））を用いた。
【０１１６】
正常ヒト皮膚繊維芽細胞トータルキット（ＣＡ１０６Ｋ０５、製造元：セルアプリケイションズインク  ＵＳＡ、輸入販売元：東洋紡績株式会社）を用いて、常法により正常ヒト皮膚繊維芽細胞を培養した。
【０１１７】
正常ヒト皮膚繊維芽細胞を１ウェル当たり２．０×１０４個となるように４８穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１０％のウシ胎児血清を添加したものを用いた。３７℃、二酸化炭素濃度５ｖｏｌ％中にて２４時間培養後、終濃度０．０１ｎｇ／ｍｌ〜０．０１ｍｇ／ｍｌのトリアシルＭＥＬ（ＯＬ−ＭＥＬ（ＳＢ））を添加した試験培地に交換し、さらに４８時間培養した。なお、トリアシルＭＥＬはエタノールに溶解後、エタノールで段階希釈し、エタノールの終濃度がすべて０．５％となるように各培地に添加した。溶媒対照として、エタノール群（終濃度０．５％）を設けた。また、細胞毒性物質により細胞増殖が阻害されることを確認するためにＳＤＳ添加群（終濃度０．１％）を設けた。次いで３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を１００μｇ／ｍＬ含有する培地に交換して３時間培養し、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。
【０１１８】
評価結果を、エタノール群（溶媒対照群）における細胞賦活作用を１００とした相対値にて図３に示した。
【０１１９】
図３から明らかなように、トリアシルＭＥＬ添加群では、いずれの濃度においても正常ヒト皮膚繊維芽細胞に対してエタノール群より高い細胞賦活作用を示した。特に、終濃度１ｎｇ／ｍｌのトリアシルＭＥＬを添加した場合には、エタノール群と比較して、５０％程度の有意な細胞賦活・抗老化作用が認められた。この結果から、トリアシルＭＥＬは、ＭＥＬ−Ａ同様に優れた細胞賦活作用を有することが明らかとなり、トリアシルＭＥＬを肌に適用することにより、極めて優れた老化防止効果を発揮し、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のしわ、たるみ等を効果的に改善できることが示唆された。
【０１２０】
以下に、種々の剤型の本発明に係る細胞賦活剤の処方例を実施例４〜６に示す。
【０１２１】
〔実施例４：美容液〕
以下に示す組成の美容液を常法により製造した。
（組成）                                                     （重量％）
ソルビット                                                    ４．０
ジプロピレングリコール                                        ６．０
ポリエチレングリコール  １５００                              ５．０
ＰＯＥ（２０）オレイルアルコールエーテル                      ０．５
ショ糖脂肪酸エステル                                          ０．２
メチルセルロース                                              ０．２
ＭＥＬ                                                        １．０
精製水                                                   全体で１００となる量
〔実施例５：乳液〕
以下に示す組成の乳液を常法により製造した。
（組成）                                                    （重量％）
グリセリルエーテル                                            １．５
ショ糖脂肪酸エステル                                          １．５
モノステアリン酸ソルビタン                                    １．０
スクワラン                                                    ７．５
ジプロピレングリコール                                        ５．０
ＭＥＬ                                                        １．０
精製水                                                   全体で１００となる量
〔実施例６：クリーム〕
以下に示す組成のクリームを常法により製造した。
（組成）                                                   （重量％）
プロピレングリコール                                          ６．０
フタル酸ジブチル                                            １９．０
ステアリン酸                                                  ５．０
モノステアリン酸グリセリン                                    ５．０
モノステアリン酸ソルビタン                                  １２．０
モノステアリン酸ポリエチレンソルビタン                      ３８．０
エデト酸ナトリウム                                            ０．０３
ＭＥＬ                                                        １．０
精製水                                                   全体で１００となる量
〔実施例７：官能評価〕
上記実施例４〜６を用いて官能評価を行った。なお、バイオサーファクタントを含まない比較例も同時に評価した。官能評価は、シワ等の老化症状の気になる２６〜４８歳のパネラー６人を１群として実施例および比較例をそれぞれ１日２回、３カ月間連続使用してもらい、３カ月後の肌状態についてアンケート調査をして行った。
【０１２２】
官能評価の結果として、各項目における評価者数を表１に示した。バイオサーファクタントを含まない比較例より実施例のほうが、７割以上のパネラーが皮膚の弾力性が向上し、シワの改善が認められたと回答しており、顕著な皮膚の老化症状の回復効果があることが示された。
【０１２３】
【表１】
2008044855.tif 000005
【産業上の利用可能性】
【０１２４】
本発明により、バイオサーファクタント由来の安全性に優れた細胞賦活作用、抗老化作用が期待でき、細胞賦活および抗老化成分を有効成分とした化粧品・医薬部外品（皮膚外用剤、浴用剤、育毛剤等）、飲食品、医薬品を提供することできることからも、産業界に大きく寄与することが期待される。
【図面の簡単な説明】
【０１２５】
【図１】正常ヒト皮膚繊維芽細胞を用いたＭＥＬの細胞賦活作用を検討した結果を示すグラフである。
【図２】ヒト頭髪毛乳頭細胞を用いたＭＥＬの細胞賦活作用を検討した結果を示すグラフである。
【図３】正常ヒト皮膚繊維芽細胞を用いたトリアシルＭＥＬの細胞賦活作用を検討した結果を示すグラフである。
【図１】
2008044855.tif 000006
【図２】
2008044855.tif 000007
【図３】
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