(57)【要約】【課題】対象遺伝子の差異を、簡易にまたは迅速に検出する。【解決手段】対象遺伝子ＵＣＰ１（β２、β３）に対し、「ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）を含むプローブ（緑発光）と「ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）を含むプローブ（赤発光）が結合され、このプローブには発色する成分が予め混合・結合・標識されていて発色される。これが加熱されて、上記プローブが上記対象遺伝子から剥がれると、発色が低下し、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異「ａａ型」「ｇｇ型」「ａｇ型」が検出される。【選択図】図１
2008048671.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
増幅した対象遺伝子に対して、
少なくとも「ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
及び少なくとも「ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
またはこれらのプローブの塩基配列と相補的な塩基配列、この塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
を混合して結合させ、
これらの各プローブに対して、結合することによって発色する成分をそれぞれ結合させて発色させ、
上記混合物を加熱することによって、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がし、これにより上記発色する成分による発色を低下させ、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異を検出することを特徴とする遺伝子検査方法。
【請求項２】
上記対象遺伝子は、
少なくとも「ｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａ」の塩基配列（１９ｍｅｒ乃至２３ｍｅｒ）を含むプライマー、
及び少なくとも「ｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーによって増幅されることを特徴とする請求項１記載の遺伝子検査方法。
【請求項３】
上記増幅のアニーリング温度は６４℃乃至７０℃、望ましくは６５℃乃至６９℃、より望ましくは６６℃乃至６８℃、さらに望ましくは約６７℃であることを特徴とする請求項２記載の遺伝子検査方法。
【請求項４】
増幅した対象遺伝子に対して、
少なくとも「ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａ」または「ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａ」の塩基配列（１４ｍｅｒ乃至１８ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
及び少なくとも「ｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
またはこれらのプローブの塩基配列と相補的な塩基配列、この塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
を混合して結合させ、
これらの各プローブに対して、結合することによって発色する成分をそれぞれ結合させて発色させ、
上記混合物を加熱することによって、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がし、これにより上記発色する成分による発色を低下させ、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異を検出することを特徴とする遺伝子検査方法。
【請求項５】
上記対象遺伝子は、
少なくとも「ｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａ」の塩基配列（１７ｍｅｒ乃至２１ｍｅｒ）を含むプライマー、
及び少なくとも「ａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーによって増幅されることを特徴とする請求項４記載の遺伝子検査方法。
【請求項６】
上記増幅のアニーリング温度は６１℃乃至６７℃、望ましくは６２℃乃至６６℃、より望ましくは６３℃乃至６５℃、さらに望ましくは約６４℃であることを特徴とする請求項５記載の遺伝子検査方法。
【請求項７】
増幅した対象遺伝子に対して、
少なくとも「ｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ」の塩基配列（３１ｍｅｒ乃至３９ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
及び少なくとも「ａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇ」または「ａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
またはこれらのプローブの塩基配列と相補的な塩基配列、この塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、
を混合して結合させ、
これらの各プローブに対して、結合することによって発色する成分をそれぞれ結合させて発色させ、
上記混合物を加熱することによって、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がし、これにより上記発色する成分による発色を低下させ、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異を検出することを特徴とする遺伝子検査方法。
【請求項８】
上記対象遺伝子は、
少なくとも「ｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマー、
及び少なくとも「ｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーによって増幅されることを特徴とする請求項７記載の遺伝子検査方法。
【請求項９】
上記増幅のアニーリング温度は６５℃乃至７１℃、望ましくは６６℃乃至７０℃、より望ましくは６７℃乃至６９℃、さらに望ましくは約６８℃であることを特徴とする請求項８記載の遺伝子検査方法。
【請求項１０】
上記プローブを上記対象遺伝子から剥がすときの加熱は、約４０℃から約８０℃に向かって、約０．０１℃／秒乃至０．５℃／秒の割合で加熱であることを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８または９記載の遺伝子検査方法。
【請求項１１】
上記発色する成分の発色の低下特性を微分し、この微分特性に基づいて上記対象遺伝子の差異を検出することを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０記載の遺伝子検査方法。
【請求項１２】
請求項１、２または３の遺伝子検査方法と、請求項４、５または６の遺伝子検査方法と、請求項７、８または９の遺伝子検査方法とを、共に行なって、複数の対象遺伝子の差異を同時に多重的に検出することを特徴とする遺伝子検査方法。
【請求項１３】
上記増幅した対象遺伝子に結合した各プローブの間隔塩基数は０乃至１５であることを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２記載の遺伝子検査方法。
【請求項１４】
上記請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２または１３記載の遺伝子検査方法に使用される上記プローブ及び上記発色する成分または上記プライマーのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、遺伝子検査方法及び遺伝子検査方法に使用されるキットに関し、特に対象遺伝子の差異を検出する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、対象遺伝子（ＤＮＡ）の差異を検査することが考えられてきている。このような対象遺伝子としては、例えば肥満関連遺伝子などが考えられる。このような肥満関連遺伝子は、人によって差異が認められ、この差異によって、腹の周囲に脂肪が付き易いタイプか、大腿部または尻の周囲に脂肪が付き易いタイプか、安静時代謝量（基礎代謝量）が大きく太りにくいタイプか、などがわかる。
【０００３】
一方、対象遺伝子（ＤＮＡ）の差異を検査するにあたって、プローブに対して発色する成分を混合・結合して蛍光標識させ、対象遺伝子（目的の変異箇所）及びその周辺にこの蛍光標識したプローブを結合（ハイブリダイゼーション。以下以上同じ）させて発色させ、この発色内容の差異によって、対象遺伝子（ＤＮＡ）の差異を検査することも考えられている。
【０００４】
【特許文献１】特開平１０−１２７２８２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本件発明は、上述の従来の対象遺伝子の差異の検出をさらに発展させて、対象遺伝子（ＤＮＡ。以下以上同じ）の差異を、簡易にまたは迅速に検出できるようにすることにある。
【０００６】
上記目的を達成するため、本発明の遺伝子検査方法は、増幅した対象遺伝子に対して、  少なくとも「ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、  及び少なくとも「ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、  またはこれらのプローブの塩基配列と相補的な塩基配列、この塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、を混合して結合させ、  これらの各プローブに対して、結合することによって発色する成分をそれぞれ結合させて発色させ、  上記混合物を加熱することによって、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がし、これにより上記発色する成分による発色を低下させ、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異を検出するようにした。
【発明の効果】
【０００７】
このような検査方法によれば、加熱するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異を検出するから、一連の一回の温度上昇の中で差異を検出でき、対象遺伝子（ＤＮＡを含む。以下以上同じ）の差異を、簡易にまたは迅速に検出できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
（１）本発明の遺伝子検査方法の原理
図１及び図２は、本発明の遺伝子検査方法の原理を示す。対象遺伝子ＵＣＰ１（脱共役蛋白質 Uncoupling Protein 1）、β２ＡＤＲ（β２アドレナリン受容体 β２-adrenergic receptor gene）、β３ＡＤＲ（β３アドレナリン受容体 β３-adrenergic receptor gene）に対し、緑発光する緑標識プローブと赤発光する赤標識プローブが混合され結合される。これらのプローブに事前に発色（励起光・発光・蛍光も含む。以下以上同じ）する成分が混合されて結合されており、レーザー光が照射されると、蛍光共鳴エネルギー転移によって緑及び赤の発光（蛍光）が発生する。
【０００９】
これが加熱されて、上記プローブが上記対象遺伝子から剥がれると、上記発色が低下し、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異が検出される。変異が無いまたは有る配列と相補的となる塩基配列を有するプローブを用いた場合及びその他の場合、変異があれば、発色低下温度は低く、変異がなければ、発色低下温度は高く、これらの変異がヘテロ型（中間型）であれば、発色低下温度の特性は両者の中間特性となる。
【００１０】
対象遺伝子ＵＣＰ１であれば、「ａａ型」「ｇｇ型」「ａｇ型」が検出され、対象遺伝子β２ＡＤＲであれば、「ｃｃ型」「ｇｇ型」「ｃｇ型」が検出され、対象遺伝子β３ＡＤＲであれば、「ｔｔ型」「ｃｃ型」「ｔｃ型」が検出される。
【００１１】
なお、人間の染色体は、２３対４６本存在するので、上記対象遺伝子ＵＣＰ１、対象遺伝子β２ＡＤＲ、対象遺伝子β３ＡＤＲは一対ずつ存在する。この一対の対象遺伝子が両方とも変異、片方のみ変異、両方とも変異していない、の３つの状態に応じて上記３つの型が検出される。
【００１２】
遺伝子ＤＮＡにおいて、「アッパー」（フォーワード／センス）側とは、図１乃至図４の遺伝子ＤＮＡの二本の鎖の上側をいい、「ロワー」（リバース／アンチセンス）側とは、図１乃至図４の遺伝子ＤＮＡの二本の鎖の下側をいう。この上側の鎖は、左から右に向かって「５′−…−３′」の配列となっており、下側の鎖は、左から右に向かって「３′−…−５′」の配列となっている。
【００１３】
通常、プライマーは糖３′にリン酸を経由して糖５′が付くというかたちで、糖の５′から糖３′の方向に伸びていく。しかし、糖５′から少し離れた箇所で糖５′から糖３′の方向に伸び、さらにここから少し離れた箇所でまた糖５′から糖３′の方向に伸びていくというかたち、つまり後ずさりするようにして、糖の３′から糖５′の方向に伸びていくことも可能である。このような後ずさりによって後述する相補的／逆相補的なプライマーでも対象遺伝子ＤＮＡを複製・増幅することは可能である。
【００１４】
したがって、本件対象遺伝子ＤＮＡ、プローブ、プライマーのセットは、図３及び図４に示すように、相補的／逆相補的にそっくり置き換えることが可能であり、これらの対象遺伝子ＤＮＡ、プローブ、プライマーはこの相補的／逆相補的な両方が示されている。
【００１５】
「相補（的）」というのは、遺伝子ＤＮＡ、プローブ、プライマーなどの各塩基の「ａ」（アデニン）と「ｔ」（チミン）、「ｃ」（シトシン）と「ｇ」（グアニン）とを入れ換えた状態を指す。「逆」というのは、遺伝子ＤＮＡ、プローブ、プライマーなどの塩基配列の向きを逆にして、「−３′」側と、「５′−」側と入れ換える、または塩基配列部分の両端の「５′−」と「−３′」と入れ換えて「３′−」と「−５′」との形にすることをいう。「逆相補（的）」は、これらの両方をともに行うことをいう。
【００１６】
（２）対象遺伝子（ＤＮＡ）配列番号１〜６
図５、図６、図７は変異・差異を検出する対象遺伝子を含む塩基配列を示し、これらの塩基配列は米国ＮＣＢＩ（National Center for Biotechnology Information）のAccession No. X72861、No.J02960、No.HSU28479より引用したものである。この図５、図６、図７の対象遺伝子（ＤＮＡ）は人の遺伝子の一部の配列であって、それぞれのアクセッション（Accession）ナンバー（ヒト遺伝子）の１番目から４７２番目、１１４１番目から１５６０番目、４８１番目から９６０番目までの塩基配列（遺伝子配列、ＤＮＡ配列）である。
【００１７】
上記のうち、上記対象遺伝子はＵＣＰ１遺伝子、β２ＡＤＲ遺伝子、β３ＡＤＲ遺伝子と呼ばれ、それぞれ２９２番目の「ａ」の塩基、１３４２番目の「ｃ」の塩基、８２７番目の「ｔ」の塩基を指す。これらの塩基が「ａ」から「ｇ」に変異すると肥満になり易く、「ｃ」から「ｇ」に変異すると肥満になり難く、「ｔ」から「ｃ」に変異すると肥満になり易くなる。本件発明の差異の検出では、これらの「ａ」から「ｇ」、「ｃ」から「ｇ」、「ｔ」から「ｃ」の変異、野生（無変異、非変異）いずれも検出される。
【００１８】
上記図５、図６、図７の対象遺伝子（ＤＮＡ）につき、この対象遺伝子（ＤＮＡ）と結合する相補的／逆相補的な遺伝子も本対象遺伝子に含まれる。この相補的／逆相補的な対象遺伝子は、図５、図６、図７のａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、図８、図９、図１０に示される。
【００１９】
上記対象遺伝子のＵＣＰ１遺伝子、β２ＡＤＲ遺伝子、β３ＡＤＲ遺伝子の相補的／逆相補的な塩基も、同様に相補的ＵＣＰ１遺伝子、相補的β２ＡＤＲ遺伝子、相補的β３ＡＤＲ遺伝子とされ、それぞれ２９２番目の「ｔ」の塩基、１３４２番目の「ｇ」の塩基、８２７番目の「ａ」の塩基が該当する。これらの塩基が「ｔ」から「ｃ」、「ｇ」から「ｃ」、「ａ」から「ｇ」に変異すると、肥満になり易いことになる。本件発明の差異の検出では、これらの「ｔ」から「ｃ」、「ｇ」から「ｃ」、「ａ」から「ｇ」の変異、野生（無変異、非変異）、いずれも検出される。
【００２０】
上記ＵＣＰ１遺伝子が「ａ→ｇ」に変異していると、一日あたりの安静時代謝量が所定量例えば８０〜１００ｋｃａｌほど低くなり、臀部や下腹部に脂肪が蓄積され易くなり、洋ナシ型肥満になり易くなる。上記β２ＡＤＲ遺伝子が「ｃ→ｇ」に変異していると、一日あたりの安静時代謝量が所定量例えば２００ｋｃａｌほど高くなり、痩せ易くなり、筋肉が付きにくく、バナナ型肥満になり易くなる。上記β３ＡＤＲ遺伝子が「ｔ→ｃ」に変異していると、一日あたりの安静時代謝量が所定量例えば２００ｋｃａｌほど低くなり、腹部に脂肪が蓄積され易くなり、リンゴ型肥満になり易くなる。
【００２１】
（３）プローブ（ＵＣＰ１）
（ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１）配列番号７〜２４、２１７〜２３４
上記ＵＣＰ１遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの一方、つまりＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１の塩基配列は以下の通りである。この緑標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺に結合するセンサープローブである。ＦＩＴＣはフルオレセインイソシアネートを意味する。このＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１は、少なくとも「ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）を含むプローブである。
【００２２】
「ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基はＵＣＰ１遺伝子が変異していない場合におけるもので、「ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基はＵＣＰ１遺伝子が変異している場合におけるものである。配列番号２１７〜２３４は配列番号７〜２４の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
【００２３】
５′−    ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ    −３′（１５ｍｅｒ）
５′−  ｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ    −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ    −３′（１７ｍｅｒ）
【００２４】
５′−    ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔ  −３′（１６ｍｅｒ）
５′−  ｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔ  −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔ  −３′（１８ｍｅｒ）
【００２５】
５′−    ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′−  ｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′（１９ｍｅｒ）
【００２６】
５′−    ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ    −３′（１５ｍｅｒ）
５′−  ｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ    −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ    −３′（１７ｍｅｒ）
【００２７】
５′−    ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔ  −３′（１６ｍｅｒ）
５′−  ｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔ  −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔ  −３′（１８ｍｅｒ）
【００２８】
５′−    ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′−  ｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′（１９ｍｅｒ）
【００２９】
この５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′または５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇｔｇ−３′のプローブの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２３ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図５の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
【００３０】
上述のＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１の塩基配列のうち、１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられても良い。これを変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブという。例えば以下のように、上記プローブの１つの「ｔ」を「ｃ」に置き換えてもよい。このように置き換えられた塩基のみは、上記対象遺伝子の対応する塩基に結合していないことになる。このように意図的に塩基を置き換えて一部結合しないようにすると、プローブが剥がれ易くなり、プローブが剥がれる温度が低くなり、対象遺伝子の変異の検出が早くなって容易になるし、後述するプローブが剥がれる温度のピーク特性がより明確になる。
【００３１】
（変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２）配列番号２５〜５１、２３５〜２６１
上記ＵＣＰ１遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの一方、つまり変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２の塩基配列は以下の通りである。この赤標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺に結合するセンサープローブである。この変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２は、少なくとも「ｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）を含むプローブである。
【００３２】
「ｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇ」の塩基はＵＣＰ１遺伝子が変異していない場合におけるもので、「ｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇ」の塩基はＵＣＰ１遺伝子が変異している場合におけるものである。配列番号２３５〜２６１は配列番号２５〜５１の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
【００３３】
５′−    ｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇ    −３′（１５ｍｅｒ）
５′−  ｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇ    −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇ    −３′（１７ｍｅｒ）
【００３４】
５′−    ｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔ  −３′（１６ｍｅｒ）
５′−  ｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔ  −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔ  −３′（１８ｍｅｒ）
【００３５】
５′−    ｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′−  ｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′（１９ｍｅｒ）
【００３６】
５′−    ｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇ    −３′（１５ｍｅｒ）
５′−  ｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇ    −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇ    −３′（１７ｍｅｒ）
【００３７】
５′−    ｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔ  −３′（１６ｍｅｒ）
５′−  ｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔ  −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔ  −３′（１８ｍｅｒ）
【００３８】
５′−    ｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′−  ｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′（１９ｍｅｒ）
【００３９】
この５′−ｔｇｃａｃｔｔｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′または５′−ｔｇｃａｃｔｃｇａｔｃａａａｃｔｇｔｇ−３′のプローブの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２３ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図５の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
【００４０】
上述のＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１または変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２につき、図１に対して図３に示すように、各塩基配列を相補的／逆相補的にしたプローブも含まれる。この相補的／逆相補的な置き換えは、緑標識プローブ及び赤標識プローブの両方のプローブにつき行なわれてもよいし、片方のプローブにつき行なわれてもよい。この場合、発色成分（発光成分を含む。以下以上同じ）は、緑標識プローブ及び赤標識プローブに蛍光共鳴エネルギー転移の相関性のないものが用いられる。
【００４１】
この相補的／逆相補的なプローブは、上記変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１、変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２のａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、「５′−」と「−３′」との向きが入れ替わり、上記発色成分（蛍光色素）の標識位置が変わり、相補的変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１、相補的変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２と呼ばれる。
【００４２】
「ｍｅｒ」は塩基の数を示す単位である。このプローブには、緑色の発色色素が混合・結合・標識されて発色される。このプローブ、発色色素、増幅（増殖も含む。以上以下同じ）した上記対象遺伝子の混合物が加熱されると、このプローブは、対象遺伝子から剥がれ、蛍光共鳴エネルギー転移による緑色の励起光（発色色素の発色）は消える。上記端の糖「５′−」と「−３′」とは入れ替わって逆向きでもよい。
【００４３】
（ＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブ）配列番号５２〜７６、２６２〜２８６
上記ＵＣＰ１遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの他方、つまりＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの塩基配列は以下の通りである。この赤標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺には結合しないアンカープローブである。
【００４４】
このＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブは、少なくとも「ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）を含むプローブである。配列番号２６２〜２８６は配列番号５２〜７６の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
【００４５】
５′−        ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ        −３′（４５ｍｅｒ）
５′−      ｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ        −３′（４６ｍｅｒ）
５′−    ｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ        −３′（４７ｍｅｒ）
５′−  ｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ        −３′（４８ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ        −３′（４９ｍｅｒ）
【００４６】
５′−        ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃ      −３′（４６ｍｅｒ）
５′−      ｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃ      −３′（４７ｍｅｒ）
５′−    ｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃ      −３′（４８ｍｅｒ）
５′−  ｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃ      −３′（４９ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃ      −３′（５０ｍｅｒ）
【００４７】
５′−        ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａ    −３′（４７ｍｅｒ）
５′−      ｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａ    −３′（４８ｍｅｒ）
５′−    ｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａ    −３′（４９ｍｅｒ）
５′−  ｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａ    −３′（５０ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａ    −３′（５１ｍｅｒ）
【００４８】
５′−        ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔ  −３′（４８ｍｅｒ）
５′−      ｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔ  −３′（４９ｍｅｒ）
５′−    ｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔ  −３′（５０ｍｅｒ）
５′−  ｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔ  −３′（５１ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔ  −３′（５２ｍｅｒ）
【００４９】
５′−        ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔａ−３′（４９ｍｅｒ）
５′−      ｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔａ−３′（５０ｍｅｒ）
５′−    ｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔａ−３′（５１ｍｅｒ）
５′−  ｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔａ−３′（５２ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔａ−３′（５３ｍｅｒ）
【００５０】
この５′−ｔｇｇｔｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔｃａｔａ−３′のプローブの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて５７ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図５の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
【００５１】
上述のＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの塩基配列のうち、１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられても良い。これを変異ＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブという。このように置き換えられた塩基のみは、上記対象遺伝子の対応する塩基に結合していないことになる。このように意図的に塩基を置き換えて一部結合しないようにすると、プローブが剥がれ易くなって、プローブが剥がれる温度が低くなり、対象遺伝子の変異の検出が早くなって容易になるし、後述するプローブが剥がれる温度のピーク特性がより明確になる。
【００５２】
上述のＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブまたは変異ＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブにつき、図１に対して図３に示すように、各塩基配列を相補的／逆相補的にしたプローブも含まれる。この相補的／逆相補的な置き換えは、緑標識プローブ及び赤標識プローブの両方のプローブにつき行なわれてもよいし、片方のプローブにつき行なわれてもよい。発色成分は、緑標識プローブ及び赤標識プローブに蛍光共鳴エネルギー転移の相関性のないものが用いられる。
【００５３】
この相補的／逆相補的なプローブは、ＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブのａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、「５′−」と「−３′」との向きが入れ替わり、上記発色成分（蛍光色素）の標識位置が変わり、相補的ＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブと呼ばれる。
【００５４】
（４）プローブ（β２）
（β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブ）配列番号７７〜９４、２８７〜３０４
上記β２遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの一方、つまりβ２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブの塩基配列は以下の通りである。この緑標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺に結合するセンサープローブである。
【００５５】
このβ２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブは、少なくとも「ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａ」または「ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａ」の塩基配列（１４ｍｅｒ乃至１８ｍｅｒ）を含むプローブである。「ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａ」の塩基はβ２ＡＤＲ遺伝子が変異していない場合におけるもので、「ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａ」の塩基はβ２ＡＤＲ遺伝子が変異している場合におけるものである。配列番号２８７〜３０４は配列番号７７〜９４の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
【００５６】
５′−    ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａ    −３′（１４ｍｅｒ）
５′−  ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａ    −３′（１５ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａ    −３′（１６ｍｅｒ）
【００５７】
５′−    ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇ  −３′（１５ｍｅｒ）
５′−  ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇ  −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇ  −３′（１７ｍｅｒ）
【００５８】
５′−    ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇｇ−３′（１６ｍｅｒ）
５′−  ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇｇ−３′（１８ｍｅｒ）
【００５９】
５′−    ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａ    −３′（１４ｍｅｒ）
５′−  ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａ    −３′（１５ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａ    −３′（１６ｍｅｒ）
【００６０】
５′−    ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇ  −３′（１５ｍｅｒ）
５′−  ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇ  −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇ  −３′（１７ｍｅｒ）
【００６１】
５′−    ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇｇ−３′（１６ｍｅｒ）
５′−  ａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇｇ−３′（１８ｍｅｒ）
【００６２】
このプローブには、緑色の発色色素が混合・結合・標識されて発色される。このプローブ、発色色素、増幅した上記対象遺伝子の混合物が加熱されると、このプローブは、対象遺伝子から剥がれ、蛍光共鳴エネルギー転移による緑色の励起光（発色色素の発色）は消える。上記端の糖「５′−」と「−３′」とは入れ替わって逆向きでもよい。
【００６３】
この５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａｇｇ−３′または５′−ｇａｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａｇｇ−３′のプローブの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２２ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図６の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
【００６４】
上述のβ２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブの塩基配列のうち、１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられても良い。これを変異β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブという。このように置き換えられた塩基のみは、上記対象遺伝子の対応する塩基に結合していないことになる。このように意図的に塩基を置き換えて一部結合しないようにすると、プローブが剥がれ易くなって、プローブが剥がれる温度が低くなり、対象遺伝子の変異の検出が早くなって容易になるし、後述するプローブが剥がれる温度のピーク特性がより明確になる。
【００６５】
上述のβ２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブまたは変異β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブにつき、図１に対して図３に示すように、各塩基配列を相補的／逆相補的にしたプローブも含まれる。この相補的／逆相補的な置き換えは、緑標識プローブ及び赤標識プローブの両方のプローブにつき行なわれてもよいし、片方のプローブにつき行なわれてもよい。この場合、発色成分は、緑標識プローブ及び赤標識プローブに蛍光共鳴エネルギー転移の相関性のないものが用いられる。
【００６６】
この相補的／逆相補的なプローブは、β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブのａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、「５′−」と「−３′」との向きが入れ替わり、上記発色成分（蛍光色素）の標識位置が変わり、相補的β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブと呼ばれる。
【００６７】
（β２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブ）配列番号９５〜１１９、３０５〜３２９
上記β２遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの他方、つまりβ２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの塩基配列は以下の通りである。この赤標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺には結合しないアンカープローブである。
【００６８】
このβ２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブは、少なくとも「ｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）を含むプローブである。配列番号３０５〜３２９は配列番号９５〜１１９の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
【００６９】
５′−        ｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ        −３′（４５ｍｅｒ）
５′−      ａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ        −３′（４６ｍｅｒ）
５′−    ｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ        −３′（４７ｍｅｒ）
５′−  ｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ        −３′（４８ｍｅｒ）
５′−ｇｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ        −３′（４９ｍｅｒ）
【００７０】
５′−        ｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃ      −３′（４６ｍｅｒ）
５′−      ａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃ      −３′（４７ｍｅｒ）
５′−    ｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃ      −３′（４８ｍｅｒ）
５′−  ｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃ      −３′（４９ｍｅｒ）
５′−ｇｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃ      −３′（５０ｍｅｒ）
【００７１】
５′−        ｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃ    −３′（４７ｍｅｒ）
５′−      ａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃ    −３′（４８ｍｅｒ）
５′−    ｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃ    −３′（４９ｍｅｒ）
５′−  ｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃ    −３′（５０ｍｅｒ）
５′−ｇｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃ    −３′（５１ｍｅｒ）
【００７２】
５′−        ｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔ  −３′（４８ｍｅｒ）
５′−      ａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔ  −３′（４９ｍｅｒ）
５′−    ｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔ  −３′（５０ｍｅｒ）
５′−  ｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔ  −３′（５１ｍｅｒ）
５′−ｇｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔ  −３′（５２ｍｅｒ）
【００７３】
５′−        ｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔｇ−３′（４９ｍｅｒ）
５′−      ａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔｇ−３′（５０ｍｅｒ）
５′−    ｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔｇ−３′（５１ｍｅｒ）
５′−  ｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔｇ−３′（５２ｍｅｒ）
５′−ｇｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔｇ−３′（５３ｍｅｒ）
【００７４】
このプローブには、緑色の発色色素が混合・結合・標識されて発色される。このプローブ、発色色素、増幅した上記対象遺伝子の混合物が加熱されると、このプローブは、対象遺伝子から剥がれ、蛍光共鳴エネルギー転移による緑色の励起光（発色色素の発色）は消える。上記端の糖「５′−」と「−３′」とは入れ替わって逆向きでもよい。
【００７５】
この５′−ｇｇｇａｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔｃｃｔｇ−３′のプローブの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて５７ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図６の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
【００７６】
上述のβ２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの塩基配列のうち、１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられても良い。これを変異β２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブという。このように置き換えられた塩基のみは、上記対象遺伝子の対応する塩基に結合していないことになる。このように意図的に塩基を置き換えて一部結合しないようにすると、プローブが剥がれ易くなって、プローブが剥がれる温度が低くなり、対象遺伝子の変異の検出が早くなって容易になるし、後述するプローブが剥がれる温度のピーク特性がより明確になる。
【００７７】
上述のβ２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブまたは変異β２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブにつき、図１に対して図３に示すように、各塩基配列を相補的／逆相補的にしたプローブも含まれる。この相補的／逆相補的な置き換えは、両方のプローブにつき行なわれてもよいし、片方のプローブにつき行なわれてもよい。
【００７８】
このプローブは、β２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブのａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、「５′−」と「−３′」との向きが入れ替わり、上記発色成分（蛍光色素）の標識位置が変わり、相補的β２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブと呼ばれる。
【００７９】
（５）プローブ（β３）
（β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブ）配列番号１２０〜１４４、３３０〜３５４
上記β３遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの一方、つまりβ３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブの塩基配列は以下の通りである。この緑標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺には結合しないアンカープローブである。
【００８０】
このβ３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブは、少なくとも「ｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ」の塩基配列（３１ｍｅｒ乃至３９ｍｅｒ）を含むプローブである。配列番号３３０〜３５４は配列番号１２０〜１４４の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
【００８１】
５′−        ｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ      −３′（３１ｍｅｒ）
５′−      ｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ      −３′（３２ｍｅｒ）
５′−    ｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ      −３′（３３ｍｅｒ）
５′−  ｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ      −３′（３４ｍｅｒ）
５′−ｃｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ      −３′（３５ｍｅｒ）
【００８２】
５′−        ｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇ      −３′（３２ｍｅｒ）
５′−      ｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇ        −３′（３３ｍｅｒ）
５′−    ｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇ      −３′（３４ｍｅｒ）
５′−  ｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇ      −３′（３５ｍｅｒ）
５′−ｃｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇ      −３′（３６ｍｅｒ）
【００８３】
５′−        ｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇ    −３′（３３ｍｅｒ）
５′−      ｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇ    −３′（３４ｍｅｒ）
５′−    ｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇ    −３′（３５ｍｅｒ）
５′−  ｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇ    −３′（３６ｍｅｒ）
５′−ｃｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇ    −３′（３７ｍｅｒ）
【００８４】
５′−        ｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃ  −３′（３４ｍｅｒ）
５′−      ｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃ  −３′（３５ｍｅｒ）
５′−    ｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃ  −３′（３６ｍｅｒ）
５′−  ｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃ  −３′（３７ｍｅｒ）
５′−ｃｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃ  −３′（３８ｍｅｒ）
【００８５】
５′−        ｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃｃ−３′（３５ｍｅｒ）
５′−      ｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃｃ−３′（３６ｍｅｒ）
５′−    ｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃｃ−３′（３７ｍｅｒ）
５′−  ｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃｃ−３′（３８ｍｅｒ）
５′−ｃｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃｃ−３′（３９ｍｅｒ）
【００８６】
このプローブには、緑色の発色色素が混合・結合・標識されて発色される。このプローブ、発色色素、増幅した上記対象遺伝子の混合物が加熱されると、このプローブは、対象遺伝子から剥がれ、蛍光共鳴エネルギー転移による緑色の励起光（発色色素の発色）は消える。上記端の糖「５′−」と「−３′」とは入れ替わって逆向きでもよい。
【００８７】
この５′−ｃｔｇｇｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔｇｇｃｃ−３′のプローブの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて４３ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図７の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
【００８８】
上述のβ３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブの塩基配列のうち、１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられても良い。これを変異β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブという。このように置き換えられた塩基のみは、上記対象遺伝子の対応する塩基に結合していないことになる。このように意図的に塩基を置き換えて一部結合しないようにすると、プローブが剥がれ易くなって、プローブが剥がれる温度が低くなり、対象遺伝子の変異の検出が早くなって容易になるし、後述するプローブが剥がれる温度のピーク特性がより明確になる。
【００８９】
上述のβ３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブまたは変異β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブにつき、図１に対して図３に示すように、各塩基配列を相補的／逆相補的にしたプローブも含まれる。この相補的／逆相補的な置き換えは、緑標識プローブ及び赤標識プローブの両方のプローブにつき行なわれてもよいし、片方のプローブにつき行なわれてもよい。この場合、発色成分は、緑標識プローブ及び赤標識プローブに蛍光共鳴エネルギー転移の相関性のないものが用いられる。
【００９０】
この相補的／逆相補的なプローブは、β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブのａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、「５′−」と「−３′」との向きが入れ替わり、上記発色成分（蛍光色素）の標識位置が変わり、相補的β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブと呼ばれる。
【００９１】
（β３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブ）配列番号１４５〜１６２、３５５〜３７２
上記β３遺伝子及びその周辺に結合（ハイブリダイゼーション）させられる一対のプローブの他方、つまりβ３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの塩基配列は以下の通りである。この赤標識プローブは対象遺伝子の変異箇所及びその周辺に結合するセンサープローブである。このβ３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブは、少なくとも「ａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇ」または「ａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）を含むプローブである。
【００９２】
「ａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇ」の塩基はβ３ＡＤＲ遺伝子が変異していない場合におけるもので、「ａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇ」の塩基はβ３ＡＤＲ遺伝子が変異している場合におけるものである。配列番号３５５〜３７２は配列番号１４５〜１６２の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
【００９３】
５′−    ａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇ    −３′（１５ｍｅｒ）
５′−  ｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇ    −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇ    −３′（１７ｍｅｒ）
【００９４】
５′−    ａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａ  −３′（１６ｍｅｒ）
５′−  ｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａ  −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａ  −３′（１８ｍｅｒ）
【００９５】
５′−    ａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′−  ｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′（１９ｍｅｒ）
【００９６】
５′−    ａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇ    −３′（１５ｍｅｒ）
５′−  ｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇ    −３′（１６ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇ    −３′（１７ｍｅｒ）
【００９７】
５′−    ａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａ  −３′（１６ｍｅｒ）
５′−  ｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａ  −３′（１７ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａ  −３′（１８ｍｅｒ）
【００９８】
５′−    ａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′（１７ｍｅｒ）
５′−  ｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′（１９ｍｅｒ）
【００９９】
このプローブには、赤色の発色色素が混合・結合・標識されて発色される。このプローブ、発色色素、増幅した上記対象遺伝子の混合物が加熱されると、このプローブは、対象遺伝子から剥がれ、蛍光共鳴エネルギー転移による赤色の励起光（発色色素の発色）は消える。上記端の糖「５′−」と「−３′」とは入れ替わって逆向きでもよい。
【０１００】
この５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′または５′−ｃｃａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇａｇ−３′のプローブの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２３ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図７の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
【０１０１】
上述のβ３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの塩基配列のうち、１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられても良い。これを変異β３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブという。このように置き換えられた塩基のみは、上記対象遺伝子の対応する塩基に結合していないことになる。このように意図的に塩基を置き換えて一部結合しないようにすると、プローブが剥がれ易くなって、プローブが剥がれる温度が低くなり、対象遺伝子の変異の検出が早くなって容易になるし、後述するプローブが剥がれる温度のピーク特性がより明確になる。
【０１０２】
上述のβ３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブまたは変異β３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブにつき、図１に対して図３に示すように、各塩基配列を相補的／逆相補的にしたプローブも含まれる。この相補的／逆相補的な置き換えは、緑標識プローブ及び赤標識プローブの両方のプローブにつき行なわれてもよいし、片方のプローブにつき行なわれてもよい。この場合、発色成分は、緑標識プローブ及び赤標識プローブに蛍光共鳴エネルギー転移の相関性のないものが用いられる。
【０１０３】
この相補的／逆相補的なプローブは、β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブのａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、「５′−」と「−３′」との向きが入れ替わり、上記発色成分（蛍光色素）の標識位置が変わり、相補的β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブと呼ばれる。
【０１０４】
以上のような緑標識プローブと赤標識プローブとの隙間は、塩基数で「０乃至１５」、望ましくは「０乃至１０」、より望ましくは「０乃至５」、さらに望ましくは「０乃至４」、よりさらに望ましくは「１乃至３」、さらにより望ましくは「１乃至２」、またさらにより望ましくは「１」であり、あまり離れない方がよい。この理由は、緑標識プローブと赤標識プローブとの間で蛍光共鳴エネルギー転移を起こす必要があるからである。
【０１０５】
（６）プライマー（ＵＣＰ１）
（ＵＣＰ１フォワードプライマー）配列番号１６３〜１７１、３７３〜３８１
上記対象遺伝子のＵＣＰ１遺伝子は、以下の一対のプライマーの一方、つまりＵＣＰ１フォワードプライマーによって増幅される。このＵＣＰ１フォワードプライマーは、少なくとも「ｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａ」の塩基配列（１９ｍｅｒ乃至２３ｍｅｒ）を含むプライマーである。配列番号３７３〜３８１は配列番号１６３〜１７１の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
【０１０６】
５′−    ｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａ    −３′（１９ｍｅｒ）
５′−  ｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａ    −３′（２０ｍｅｒ）
５′−ｔｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａ    −３′（２１ｍｅｒ）
【０１０７】
５′−    ｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃ  −３′（２０ｍｅｒ）
５′−  ｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃ  −３′（２１ｍｅｒ）
５′−ｔｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃ  −３′（２２ｍｅｒ）
【０１０８】
５′−    ｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃａ−３′（２１ｍｅｒ）
５′−  ｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃａ−３′（２２ｍｅｒ）
５′−ｔｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃａ−３′（２３ｍｅｒ）
【０１０９】
この５′−ｔｔｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａｃａ−３′のプライマーの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２７ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図５の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
【０１１０】
（ＵＣＰ１リバースプライマー）配列番号１７２〜１８０、３８２〜３９０
上記対象遺伝子のＵＣＰ１遺伝子は、以下の一対のプライマーの他方、つまりＵＣＰ１リバースプライマーによって増幅される。このＵＣＰ１リバースプライマーは、少なくとも「ｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーである。配列番号３８２〜３９０は配列番号１７２〜１８０の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
【０１１１】
５′−    ｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇ    −３′（１８ｍｅｒ）
５′−  ｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇ    −３′（１９ｍｅｒ）
５′−ａｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇ    −３′（２０ｍｅｒ）
【０１１２】
５′−    ｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａ  −３′（１９ｍｅｒ）
５′−  ｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａ  −３′（２０ｍｅｒ）
５′−ａｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａ  −３′（２１ｍｅｒ）
【０１１３】
５′−    ｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａｃ−+３′（２０ｍｅｒ）
５′−  ｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａｃ−３′（２１ｍｅｒ）
５′−ａｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａｃ−３′（２２ｍｅｒ）
【０１１４】
この５′−ａｇｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇａｃ−３′のプライマーの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２６ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図５の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
【０１１５】
図１に対して図４に示すように、上述の一対のプライマーにつき、各塩基配列を相補的／逆相補的にした一対のプライマーも含まれる。このプライマーは、上記プライマーのａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、相補的プライマーと呼ばれる。
【０１１６】
（７）プライマー（β２）
（β２ＡＤＲフォワードプライマー）配列番号１８１〜１８９、３９１〜３９９
上記対象遺伝子のβ２ＡＤＲ遺伝子は、以下の一対のプライマーの一方、つまりβ２ＡＤＲフォワードプライマーによって増幅される。このβ２ＡＤＲフォワードプライマーは、少なくとも「ｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａ」の塩基配列（１７ｍｅｒ乃至２１ｍｅｒ）を含むプライマーである。配列番号３９１〜３９９は配列番号１８１〜１８９の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
【０１１７】
５′−    ｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａ    −３′（１７ｍｅｒ）
５′−  ｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａ    −３′（１８ｍｅｒ）
５′−ｃｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａ    −３′（１９ｍｅｒ）
【０１１８】
５′−    ｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔ  −３′（１８ｍｅｒ）
５′−  ｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔ  −３′（１９ｍｅｒ）
５′−ｃｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔ  −３′（２０ｍｅｒ）
【０１１９】
５′−    ｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔｇ−３′（１９ｍｅｒ）
５′−  ｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔｇ−３′（２０ｍｅｒ）
５′−ｃｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔｇ−３′（２１ｍｅｒ）
【０１２０】
この５′−ｃｃｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａｔｇ−３′のプライマーの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２５ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図６の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
【０１２１】
（β２ＡＤＲリバースプライマー）配列番号１９０〜１９８、４００〜４０８
上記対象遺伝子のβ２ＡＤＲ遺伝子は、以下の一対のプライマーの他方、つまりβ２ＡＤＲリバースプライマーによって増幅される。このβ２ＡＤＲリバースプライマーは、少なくとも「ａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーである。配列番号４００〜４０８は配列番号１９０〜１９８の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
【０１２２】
５′−    ａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａ    −３′（１８ｍｅｒ）
５′−  ｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａ    −３′（１９ｍｅｒ）
５′−ａｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａ    −３′（２０ｍｅｒ）
【０１２３】
５′−    ａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａ  −３′（１９ｍｅｒ）
５′−  ｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａ  −３′（２０ｍｅｒ）
５′−ａｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａ  −３′（２１ｍｅｒ）
【０１２４】
５′−    ａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａｇ−３′（２０ｍｅｒ）
５′−  ｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａｇ−３′（２１ｍｅｒ）
５′−ａｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａｇ−３′（２２ｍｅｒ）
【０１２５】
この５′−ａｃａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａａｇ−３′のプライマーの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２６ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図６の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
【０１２６】
図１に対して図４に示すように、上述の一対のプライマーにつき、各塩基配列を相補的／逆相補的にした一対のプライマーも含まれる。このプライマーは、上記プライマーのａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、相補的プライマーと呼ばれる。
【０１２７】
（８）プライマー（β３）配列番号１９９〜２１６、４０９〜４２６
上記対象遺伝子のβ３ＡＤＲ遺伝子は、以下の一対のプライマーの一方、つまりβ３ＡＤＲフォワードプライマーによって増幅される。このβ３ＡＤＲフォワードプライマーは、少なくとも「ｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーである。配列番号４０９〜４２６は配列番号１９９〜２１６の塩基配列を相補的または逆相補的にしたものである。
【０１２８】
５′−    ｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃ    −３′（１８ｍｅｒ）
５′−  ｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃ    −３′（１９ｍｅｒ）
５′−ｔｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃ    −３′（２０ｍｅｒ）
【０１２９】
５′−    ｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇ  −３′（１９ｍｅｒ）
５′−  ｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇ  −３′（２０ｍｅｒ）
５′−ｔｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇ  −３′（２１ｍｅｒ）
【０１３０】
５′−    ｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇｃ−３′（２０ｍｅｒ）
５′−  ｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇｃ−３′（２１ｍｅｒ）
５′−ｔｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇｃ−３′（２２ｍｅｒ）
【０１３１】
この５′−ｔｃｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃｇｃ−３′のプライマーの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２６ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図７の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
【０１３２】
上記対象遺伝子のβ３ＡＤＲ遺伝子は、以下の一対のプライマーの他方、つまりβ３ＡＤＲリバースプライマーによって増幅される。このβ３ＡＤＲリバースプライマーは、少なくとも「ｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーである。
【０１３３】
５′−    ｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃ    −３′（１８ｍｅｒ）
５′−  ｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃ    −３′（１９ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃ    −３′（２０ｍｅｒ）
【０１３４】
５′−    ｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇ  −３′（１９ｍｅｒ）
５′−  ｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇ  −３′（２０ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇ  −３′（２１ｍｅｒ）
【０１３５】
５′−    ｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇｇ−３′（２０ｍｅｒ）
５′−  ｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇｇ−３′（２１ｍｅｒ）
５′−ｔｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇｇ−３′（２２ｍｅｒ）
【０１３６】
この５′−ｔｇｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃｇｇ−３′のプライマーの塩基配列部分の端に塩基がさらに付加されて２６ｍｅｒまで長くなってもよい。この場合、図７の塩基配列に沿った塩基または相補的に置き換えられた塩基が付加されていく。
【０１３７】
図１に対して図４に示すように、上述の一対のプライマーにつき、各塩基配列を相補的／逆相補的にした一対のプライマーも含まれる。この相補的／逆相補的なプライマーは、上記プライマーのａ（アデニン）、ｔ（チミン）、ｃ（シトシン）、ｇ（グアニン）が、ａ→ｔ、ｔ→ａ、ｃ→ｇ、ｇ→ｃに入れ換えられ、相補的プライマーと呼ばれる。
【０１３８】
（９）反応液と反応条件（ＵＣＰ１）
上記対象遺伝子のＵＣＰ１遺伝子の変異の検出は、以下の反応液で以下の反応条件で実行される。
【０１３９】
（反応液キット）
（Ｕａ）ＤＮＡ溶液                                              ２０〜５０ｎｇ
（Ｕｂ）調整済みライトサイクラーファストスタート反応ミックス        ２．０μＬ
（Ｕｃ）塩化マグネシウム溶液（２５ｍＭ）                            １．６μＬ
（Ｕｄ）ＵＣＰ１フォワードプライマー（１０μＭ）                    １．０μＬ
（Ｕｅ）ＵＣＰ１リバースプライマー（１０μＭ）                      １．０μＬ
（Ｕｆ）ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１（１０μＭ）            ０．２μＬ
（Ｕｇ）ＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブ（１０μＭ）        ０．２μＬ
（Ｕｈ）蒸留水                                                      約１４μＬ
【０１４０】
この反応には、ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社のザライトサイクラーシステム（The Light Cycler System）、ライトサイクラーシステム（Light Cycler System）３３０またはライトサイクラークイックシステム（Light Cycler Quick System）３３０を用い、プログラムとしてライトサイクラーソフトウエア（Light Cycler Software Ver3.30またはVer1.20）を用い、ライトサイクラーファストスタートＤＮＡマスターハイブリダイゼーションプローブを使って、上記（Ｕｂ）の調整済みライトサイクラーファストスタート反応ミックスはこの能書に基づいて作成される。
【０１４１】
上記プローブには、蛍光共鳴エネルギー移動などのための蛍光色素・発色酵素などの発色成分（供与体色素／ドナーフルオレッセン）が予めまたは事前に若しくは後でまたは事後に混合され、この発色成分は上記各プローブに結合・標識される。このような発色成分が結合したプローブまたは発色成分は公知であり、特開２００４−３１３２０号明細書などにも示される。
【０１４２】
このプローブ（センサープローブ）に結合した発色成分にレーザー光線または青色光線が照射されると、対象遺伝子に結合したＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１からは緑の蛍光が発光され、対象遺伝子に結合したＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブからは蛍光共鳴エネルギー転移によって赤の蛍光が発光される。加熱されてこのプローブが対象遺伝子から順次剥れると、この蛍光共鳴エネルギー転移による励起光（蛍光）は減少または消える。
【０１４３】
上記（Ｕａ）のＤＮＡ溶液は、検査する対象遺伝子ＤＮＡのサンプルである。なお、（Ｕｆ）のＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１は、上記変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２に置き換えられても良い。変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２の容量は同じく０．２μＬである。（Ｕｄ）（Ｕｅ）のプライマー、（Ｕｆ）（Ｕｇ）のプローブは上述したとおりである。場合によって塩化マグネシウム溶液はなくてもよい。
【０１４４】
（反応条件）
上記の反応液を、例えばディネイチャーし、ＰＣＲ（遺伝子増幅反応  Polymerase Chain Reaction）を施し、メルティングアナライシスを行い、冷却する。ディネイチャーでは、対象遺伝子のＤＮＡサンプルがほどかれて分離され、例えば約１０分間約９５℃に加熱される。
【０１４５】
上記ＰＣＲでは、例えばディネイチャー→アニーリング→エクステンションのサーマルサイクルが所定回数例えば４０回繰り返され、理論上、対象遺伝子ＤＮＡサンプルが２  40  倍に増幅される。ＰＣＲのディネイチャーでは、上記対象遺伝子のＤＮＡサンプルがほどかれて分離され、例えば約１０秒間約９５℃に加熱される。
【０１４６】
ＰＣＲのアニーリングでは、上記プライマーが上記対象遺伝子に結合され、例えば約１０秒間約６７℃に冷却される。ＰＣＲのエクステンションでは、この結合されたプライマーから上記対象遺伝子ＤＮＡが相補的／逆相補的に複製され、例えば約９秒間約７２℃に加熱される。上記ＰＣＲの増幅のアニーリング温度は６４℃乃至７０℃、望ましくは６５℃乃至６９℃、より望ましくは６６℃乃至６８℃、さらに望ましくは約６７℃である。
【０１４７】
上記メルティングアナライシス（加熱）では、上記遺伝子の変異箇所に結合している上記（Ｕｆ）のＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１が、異なる温度で上記対象遺伝子のＵＣＰ１遺伝子及びその周辺から剥がれ、上記発色成分の発色（励起光）が低下し、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子のＵＣＰ１遺伝子の差異・変異が検出される。
【０１４８】
上記メルティングアナライシスでは、例えば約０．０００１乃至０．０１秒間約９５℃に加熱され、約１２０秒間約４０℃に加温され、毎秒約０．２℃の上昇レートで、キャピラリー内の温度が約８０℃まで上昇され、これが例えば１サイクル行なわれる。上記メルティングアナライシスにおける、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がすときの加熱は、上記約４０℃から上記約８０℃に向かって、０．０１℃／秒乃至０．５℃／秒、例えば約０．１℃／秒の割合で加熱される。
【０１４９】
（１０）反応液と反応条件（β２）
上記対象遺伝子のβ２ＡＤＲ遺伝子の変異の検出は、以下の反応液で以下の反応条件で実行される。
【０１５０】
（反応液キット）
（β２ａ）ＤＮＡ溶液                                            ２０〜５０ｎｇ
（β２ｂ）調整済みライトサイクラーファストスタート反応ミックス      ２．０μＬ
（β２ｃ）塩化マグネシウム溶液（２５ｍＭ）                          １．６μＬ
（β２ｄ）β２ＡＤＲフォワードプライマー（１０μＭ）                １．０μＬ
（β２ｅ）β２ＡＤＲリバースプライマー（１０μＭ）                  １．０μＬ
（β２ｆ）β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブ（１０μＭ）              ０．２μＬ
（β２ｇ）β２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブ（１０μＭ）    ０．２μＬ
（β２ｈ）蒸留水                                                    約１４μＬ
【０１５１】
この反応には、ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社のザライトサイクラーシステム（The Light Cycler System）、ライトサイクラーシステム（Light Cycler System）３３０またはライトサイクラークイックシステム（Light Cycler Quick System）３３０を用い、プログラムとしてライトサイクラーソフトウエア（Light Cycler Software Ver3.30またはVer1.20）を用い、ライトサイクラーファストスタートＤＮＡマスターハイブリダイゼーションプローブを使って、上記（β２ｂ）の調整済みライトサイクラーファストスタート反応ミックスはこの能書に基づいて作成される。
【０１５２】
上記プローブには、蛍光共鳴エネルギー移動などのための蛍光色素・発色酵素などの発色成分（供与体色素／ドナーフルオレッセン）が予めまたは事前に若しくは後でまたは事後に混合され、この発色成分は上記各プローブに結合・標識される。このような発色成分が結合したプローブまたは発色成分は公知であるし、特開２００４−３１３２０号明細書などに示される。
【０１５３】
このプローブ（センサープローブ）に結合した発色成分にレーザー光線または青色光線が照射されると、β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブからは緑の蛍光が発光され、β２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブからは蛍光共鳴エネルギー転移によって赤の蛍光が発光される。加熱されてこのプローブが対象遺伝子から順次剥れると、この蛍光共鳴エネルギー転移による励起光（蛍光）は減少または消える。
【０１５４】
上記（β２ａ）のＤＮＡ溶液は、検査する対象遺伝子ＤＮＡのサンプルである。（β２ｄ）のβ２ＡＤＲフォワードプライマー、（β２ｅ）のβ２ＡＤＲリバースプライマー、（β２ｆ）のβ２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブ、（β２ｇ）のβ２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブは上述したとおりである。場合によって塩化マグネシウム溶液はなくてもよい。
【０１５５】
（反応条件）
上記の反応液を、例えばディネイチャーし、ＰＣＲ（遺伝子増幅反応  Polymerase Chain Reaction）を施し、メルティングアナライシスを行い、冷却する。ディネイチャーでは、対象遺伝子のＤＮＡサンプルがほどかれて分離され、例えば約１０分間約９５℃に加熱される。
【０１５６】
上記ＰＣＲでは、例えばディネイチャー→アニーリング→エクステンションのサーマルサイクルが所定回数例えば４０回繰り返され、理論上、対象遺伝子ＤＮＡサンプルが２  40  倍に増幅される。ＰＣＲのディネイチャーでは、上記対象遺伝子のＤＮＡサンプルがほどかれて分離され、例えば約１０秒間約９５℃に加熱される。
【０１５７】
ＰＣＲのアニーリングでは、上記プライマーが上記対象遺伝子に結合され、例えば約５秒間約６４℃に冷却される。ＰＣＲのエクステンションでは、この結合されたプライマーから上記対象遺伝子ＤＮＡが相補的／逆相補的に複製され、例えば約７秒間約７２℃に加熱される。上記ＰＣＲの増幅のアニーリング温度は６１℃乃至６７℃、望ましくは６２℃乃至６６℃、より望ましくは６３℃乃至６５℃、さらに望ましくは約６４℃である。
【０１５８】
上記メルティングアナライシス（加熱）では、上記遺伝子の変異箇所に結合している上記（β２ｆ）のβ２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブが異なる温度で上記対象遺伝子のβ２ＡＤＲ遺伝子及びその周辺から剥がれ、上記発色成分の発色（励起光）が低下し、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異・変異が検出される。
【０１５９】
上記メルティングアナライシスでは、例えば約０．０００１乃至０．０１秒間約９５℃に加熱され、約１２０秒間約４０℃に加温され、毎秒約０．２℃の上昇レートで、キャピラリー内の温度が約８０℃まで上昇され、これが例えば１サイクル行なわれる。上記メルティングアナライシスにおける、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がすときの加熱は、上記約４０℃から上記約８０℃に向かって、０．０１℃／秒乃至０．５℃／秒、例えば約０．２℃／秒の割合で加熱される。
【０１６０】
（１１）反応液と反応条件（β３）
上記対象遺伝子のβ３ＡＤＲ遺伝子の変異の検出は、以下の反応液で以下の反応条件で実行される。
【０１６１】
（反応液キット）
（β３ａ）ＤＮＡ溶液                                            ２０〜５０ｎｇ
（β３ｂ）調整済みライトサイクラーファストスタート反応ミックス      ２．０μＬ
（β３ｃ）塩化マグネシウム溶液（２５ｍＭ）                          １．６μＬ
（β３ｄ）β３ＡＤＲフォワードプライマー（１０μＭ）                １．０μＬ
（β３ｅ）β３ＡＤＲリバースプライマー（１０μＭ）                  １．０μＬ
（β３ｆ）β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブ（１０μＭ）              ０．２μＬ
（β３ｇ）β３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブ（１０μＭ）    ０．２μＬ
（β３ｈ）蒸留水                                                    約１４μＬ
【０１６２】
この反応には、ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社のザライトサイクラーシステム（The Light Cycler System）、ライトサイクラーシステム（Light Cycler System）３３０またはライトサイクラークイックシステム（Light Cycler Quick System）３３０を用い、プログラムとしてライトサイクラーソフトウエア（Light Cycler Software Ver3.30またはVer1.20）を用い、ライトサイクラーファストスタートＤＮＡマスターハイブリダイゼーションプローブを使って、上記（β３ｂ）の調整済みライトサイクラーファストスタート反応ミックスはこの能書に基づいて作成される。
【０１６３】
上記プローブには、蛍光共鳴エネルギー移動などのための蛍光色素・発色酵素などの発色成分（供与体色素／ドナーフルオレッセン）が予めまたは事前に若しくは後でまたは事後に混合され、この発色成分は上記各プローブに結合・標識される。このような発色成分が結合したプローブまたは発色成分は公知であるし、特開２００４−３１３２０号明細書などに示される。
【０１６４】
このプローブ（センサープローブ）に結合した発色成分にレーザー光線または青色光線が照射されると、β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブからは緑の蛍光が発光され、β３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブからは蛍光共鳴エネルギー転移によって赤の蛍光が発光される。加熱されてこのプローブが対象遺伝子から順次剥れると、この蛍光共鳴エネルギー転移による励起光（蛍光）は減少または消える。
【０１６５】
上記（β３ａ）のＤＮＡ溶液は、検査する対象遺伝子ＤＮＡのサンプルである。（β３ｄ）のβ３ＡＤＲフォワードプライマー、（β３ｅ）のβ３ＡＤＲリバースプライマー、（β３ｆ）のβ３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブ、（β３ｇ）のβ３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブは上述したとおりである。場合によって塩化マグネシウム溶液はなくてもよい。
【０１６６】
（反応条件）
上記の反応液を、例えばディネイチャーし、ＰＣＲ（遺伝子増幅反応  Polymerase Chain Reaction）を施し、メルティングアナライシスを行い、冷却する。ディネイチャーでは、対象遺伝子のＤＮＡサンプルがほどかれて分離され、例えば約１０分間約９５℃に加熱される。
【０１６７】
上記ＰＣＲでは、例えばディネイチャー→アニーリング→エクステンションのサーマルサイクルが所定回数例えば４０回繰り返され、理論上、対象遺伝子ＤＮＡサンプルが２  40  倍に増幅される。ＰＣＲのディネイチャーでは、上記対象遺伝子のＤＮＡサンプルがほどかれて分離され、例えば約１０秒間約９５℃に加熱される。
【０１６８】
ＰＣＲのアニーリングでは、上記プライマーが上記対象遺伝子に結合され、例えば約１０秒間約６８℃に冷却される。ＰＣＲのエクステンションでは、この結合されたプライマーから上記対象遺伝子ＤＮＡが相補的／逆相補的に複製され、例えば約７秒間約７２℃に加熱される。上記ＰＣＲの増幅のアニーリング温度は６５℃乃至７１℃、望ましくは６６℃乃至７０℃、より望ましくは６７℃乃至６９℃、さらに望ましくは約６８℃である。
【０１６９】
上記メルティングアナライシス（加熱）では、上記遺伝子の変異箇所に結合している上記（β３ｇ）のβ３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブが、異なる温度で上記対象遺伝子のβ３ＡＤＲ遺伝子及びその周辺から剥がれ、上記発色成分の発色（励起光）が低下し、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子のβ３ＡＤＲ遺伝子の差異・変異が検出される。
【０１７０】
このメルティングアナライシスでは、例えば約０．０００１乃至０．０１秒間約９５℃に加熱され、約１２０秒間約４０℃に加温され、毎秒約０．２℃の上昇レートで、キャピラリー内の温度が約８０℃まで上昇され、これが例えば１サイクル行なわれる。上記メルティングアナライシスにおける、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がすときの加熱は、上記約４０℃から上記約８０℃に向かって、０．０１℃／秒乃至０．５℃／秒、例えば約０．２℃／秒の割合で加熱される。
【０１７１】
（１２）遺伝子検査結果（ＵＣＰ１Ｎｏ．１）
図１１は、上記ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１を用いたＵＣＰ１遺伝子についての変異の遺伝子検査結果を示す。この遺伝子検査結果は、上記プローブが加熱によって剥れて発色が低下し、この発色の低下特性が微分されたものである。この発色の低下特性の微分特性がピークとなった温度が、上記プローブが剥れた温度となり、この微分特性に基づいて上記対象遺伝子の差異が検出される。
【０１７２】
ＵＣＰ１遺伝子がともに「ａ」「ａ」であってともに変異していなければ、ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１及びＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブは加熱しても剥れにくく、ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１が剥れる温度は４９．０℃付近となる。
【０１７３】
一方、ＵＣＰ１遺伝子がともに「ｇ」「ｇ」であってともに変異していれば、ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１及びＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブが加熱で剥れ易く、ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１が剥れる温度は４５．０℃付近となる。
【０１７４】
他方、ＵＣＰ１遺伝子の一方が「ａ」で、他方が「ｇ」であって、片方のみが変異していれば、ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１及びＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブが剥れる発色の低下特性は、上記両特性のヘテロ特性（中間特性）となって、４９．０℃付近と４５．０℃付近とに二つのピークが表れる。
【０１７５】
検査を受けるサンプルの対象遺伝子につき、図１１のどの特性となるかまたは近似するかによって、検査サンプルのＵＣＰ１遺伝子が、野生型（無変異型）「ａａ型」、変異型「ｇｇ型」、ヘテロ型（中間型）「ａｇ型」のいずれであるかがわかる。
【０１７６】
（１３）遺伝子検査結果（ＵＣＰ１Ｎｏ．２）
図１２は、上記変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２を用いたＵＣＰ１遺伝子についての変異の遺伝子検査結果を示す。この遺伝子検査結果は、上記プローブが加熱によって剥れて発色が低下し、この発色の低下特性が微分されたものである。この発色の低下特性の微分特性がピークとなった温度が、上記プローブが剥れた温度となり、この微分特性に基づいて上記対象遺伝子の差異が検出される。
【０１７７】
ＵＣＰ１遺伝子がともに「ａ」「ａ」であってともに変異していなければ、変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２は加熱しても剥れにくく、変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２が剥れる温度は５６．０℃乃至５７．０℃付近となる。
【０１７８】
一方、ＵＣＰ１遺伝子がともに「ｇ」「ｇ」であってともに変異していれば、変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２は加熱で剥れ易く、変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２が剥れる温度は５２．０℃乃至５３．０℃付近となる。
【０１７９】
他方、ＵＣＰ１遺伝子の一方が「ａ」で、他方が「ｇ」であって、片方のみが変異していれば、変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２が剥れる発色の低下特性は、上記両特性のヘテロ特性（中間特性）となって、５６．０℃乃至５７．０℃付近と５２．０℃乃至５３．０℃付近とに二つのピークが表れる。なお、ＵＣＰ１ＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの剥がれる温度は変異の有無にかかわらずほぼ一定である。
【０１８０】
検査を受けるサンプルの対象遺伝子につき、図１２のどの特性となるかまたは近似するかによって、検査サンプルのＵＣＰ１遺伝子が、野生型（無変異型）「ａａ型」、変異型「ｇｇ型」、ヘテロ型（中間型）「ａｇ型」のいずれであるかがわかる。
【０１８１】
このようにＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２の代わりに、塩基１つを対象遺伝子ＵＣＰ１に結合しない塩基に意図的に置き換えた変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１を使っても、検出温度は上昇するものの、同様にＵＣＰ１遺伝子について、変異を検出することができる。
【０１８２】
（１４）遺伝子検査結果（β２ＡＤＲ）
図１３は、β２ＡＤＲ遺伝子についての変異の遺伝子検査結果を示す。この遺伝子検査結果は、上記プローブが加熱によって剥れて発色が低下し、この発色の低下特性が微分されたものである。この発色の低下特性の微分特性がピークとなった温度が、上記プローブが剥れた温度となり、この微分特性に基づいて上記対象遺伝子の差異が検出される。
【０１８３】
β２ＡＤＲ遺伝子がともに「ｃ」「ｃ」であってともに変異していなければ、β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブは加熱しても剥れにくく、β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブが剥れる温度は５９．０℃付近となる。
【０１８４】
一方、β２ＡＤＲ遺伝子がともに「ｇ」「ｇ」であってともに変異していれば、β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブは加熱で剥れ易く、β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブが剥れる温度は４９．０℃付近となる。
【０１８５】
他方、β２ＡＤＲ遺伝子の一方が「ｃ」で、他方が「ｇ」であって、片方のみが変異していれば、β２ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブが剥れる発色の低下特性は、上記両特性のヘテロ特性（中間特性）となって、５９．０℃付近乃至４９．０℃付近とに二つのピークが表れる。なお、β２ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの剥がれる温度は変異の有無にかかわらずほぼ一定である。
【０１８６】
検査を受けるサンプルの対象遺伝子につき、図１３のどの特性となるかまたは近似するかによって、検査サンプルのβ２ＡＤＲ遺伝子が、野生型（無変異型）「ｃｃ型」、変異型「ｇｇ型」、ヘテロ型（中間型）「ｃｇ型」のいずれであるかがわかる。なお、図１３では、β２ＡＤＲ遺伝子に続く「ａａ」を含めてグルタミン「Ｇｌｎ（ｃａａ）型」かグルタミン酸「Ｇｌｕ（ｇａａ）型」かで示してある。
【０１８７】
（１５）遺伝子検査結果（β３ＡＤＲ）
図１４は、β３ＡＤＲ遺伝子についての変異の遺伝子検査結果を示す。この遺伝子検査結果は、上記プローブが加熱によって剥れて発色が低下し、この発色の低下特性が微分されたものである。この発色の低下特性の微分特性がピークとなった温度が、上記プローブが剥れた温度となり、この微分特性に基づいて上記対象遺伝子の差異が検出される。
【０１８８】
β３ＡＤＲ遺伝子がともに「ｔ」「ｔ」であってともに変異していなければ、β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブは加熱しても剥れにくく、β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブが剥れる温度は５９．０℃付近となる。
【０１８９】
一方、β３ＡＤＲ遺伝子がともに「ｃ」「ｃ」であってともに変異していれば、β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブは加熱で剥れ易く、β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブが剥れる温度は４９．０℃付近となる。
【０１９０】
他方、β３ＡＤＲ遺伝子の一方が「ｔ」で、他方が「ｃ」であって、片方のみが変異していれば、β３ＡＤＲＦＩＴＣ緑標識プローブが剥れる発色の低下特性は、上記両特性のヘテロ特性（中間特性）となる。なお、β３ＡＤＲＬＣ−Ｒｅｄ６４０赤標識プローブの剥がれる温度は変異の有無にかかわらずほぼ一定である。
【０１９１】
検査を受けるサンプルの対象遺伝子につき、図１４のどの特性となるかまたは近似するかによって、検査サンプルのβ３ＡＤＲ遺伝子が、野生型（無変異型）「ｔｔ型」、変異型「ｃｃ型」、ヘテロ型（中間型）「ｔｃ型」のいずれであるかがわかる。なお、図１４では、β３ＡＤＲ遺伝子に続く「ｇｇ」を含めてトリプトファン「Ｔｒｐ（ｔｇｇ）型」かアルギニン「Ａｒｇ（ｃｇｇ）型」かで示してある。
【０１９２】
（１６）遺伝子検査結果（３つの対象遺伝子の同時多重）
上記ＵＣＰ１遺伝子、β２ＡＤＲ遺伝子、β３ＡＤＲ遺伝子の遺伝子検査結果によって、以下のことがわかる。
【０１９３】
ＵＣＰ１遺伝子が「ａ→ｇ」に変異していると、一日あたりの安静時代謝量が所定量例えば８０〜１００ｋｃａｌほど低くなり、臀部や下腹部に脂肪が蓄積され易くなり、洋ナシ型肥満になり易くなる。
β２ＡＤＲ遺伝子が「ｃ→ｇ」に変異していると、一日あたりの安静時代謝量が所定量例えば２００ｋｃａｌほど高くなり、痩せ易くなり、筋肉が付きにくく、バナナ型肥満になり易くなる。
β３ＡＤＲ遺伝子が「ｔ→ｃ」に変異していると、一日あたりの安静時代謝量が所定量例えば２００ｋｃａｌほど低くなり、腹部に脂肪が蓄積され易くなり、リンゴ型肥満になり易くなる。
【０１９４】
以上の３つの対象遺伝子の差異を同時に多重的に検出すると、肥満対策を総合的に行なうことができる。
ＵＣＰ１遺伝子が変異し、β２ＡＤＲ遺伝子が変異していなければ、脂肪分より炭水化物・糖分の摂取を減らすのがよいことになる。β３ＡＤＲ遺伝子が変異し、β２ＡＤＲ遺伝子が変異していなければ、炭水化物・糖分より脂肪分の摂取を減らすのがよいことになる。ＵＣＰ１遺伝子及びβ３ＡＤＲ遺伝子が変異していれば、炭水化物・糖分及び脂肪分の両方の摂取を減らすのがよいことになる。
【０１９５】
ＵＣＰ１遺伝子及びβ２ＡＤＲ遺伝子が変異していれば、運動を増やし、脂肪分より炭水化物・糖分の摂取を減らすのがよいことになる。β３ＡＤＲ遺伝子及びβ２ＡＤＲ遺伝子が変異していなければ、運動を増やし、炭水化物・糖分より脂肪分の摂取を減らすのがよいことになる。ＵＣＰ１遺伝子、β３ＡＤＲ遺伝子及びβ２ＡＤＲ遺伝子が変異していれば、運動を増やし、炭水化物・糖分及び脂肪分の両方の摂取を減らすのがよいことになる。
【０１９６】
（１７）プライマーまたはプローブの塩基数の増減
上述の各プライマーまたは各プローブの塩基数を増減すると、上述の各プライマーのアニーリング温度、各プローブの剥がれる温度は変化する。塩基数が１つ増えると、各プライマーのアニーリング温度または各プローブの剥がれる温度は０．１℃乃至２．０℃ほど上昇し、塩基数が１つ減ると、各プライマーのアニーリング温度または各プローブの剥がれる温度は０．１℃乃至２．０℃ほど下降する。
【０１９７】
また、上記各プローブの塩基配列のうち、１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に結合しないように置き換えられると、この塩基のみは上記対象遺伝子ＤＮＡに結合しないので、上述の塩基数が減ったときと同様の温度変化が起きる。塩基数が１つ結合しないように置き換えられると、各プライマーのアニーリング温度または各プローブの剥がれる温度は０．１℃乃至２．０℃ほど下降する。
【０１９８】
（１８）遺伝子検査の技術的効果及び留意事項
本発明の遺伝子検査方法及びＰＣＲ法では、上述の検査実験より、上述の問題点はなく、かつ、従来の方法と比較・検討し優れた結果が得られた。特に肥満関連遺伝子の変異・差異の検出時間がかなり短くなった。そして、蛍光変化も客観的かつ容易に判断できた。このことより、上記プローブ及びプライマーを設計するにあたり一般的な留意事項において、本発明のプローブ及びプライマーは問題ないといえる。
【０１９９】
本件発明のプローブ及びプライマーおよび反応条件は多くの実験を経た上で最適化されている。上述の実験で検証していない別発明の配列のプローブまたはプライマーを用いて、本件発明の遺伝子検査方法及びＰＣＲ法と同等あるいはそれ以上の結果が得られるという可能性を完全に否定できるものではないが、対象とする試料、反応液キット、前提となる遺伝子変異箇所周辺の配列状況という測定条件からすると、本件発明の遺伝子検査方法及びプローブ並びにＰＣＲ法及びプライマーは極めて完成度が高いといえる。
【０２００】
なお、上記対象遺伝子に結合したときの緑標識プローブと同じく対象遺伝子に結合したときの赤標識プローブとの間隔塩基数は「１」が最も望ましい。これは、蛍光共鳴エネルギー転移が最も有効に発揮できるのは、間隔塩基数「１」だからである。しかし、緑と赤の発色が弱く薄くても増幅処理／増感処理または照射光を強くするなどによって、発色の変化を検出できれば、間隔塩基数が「２」「３」「４」「５」「０」でもよいし、両プローブの端が重なっていてもよい。よって、両プローブの間隔塩基数は「０乃至１５」、望ましくは「０乃至１０」、より望ましくは「０乃至５」、さらに望ましくは「０乃至４」、よりさらに望ましくは「１乃至３」、さらにより望ましくは「１乃至２」、またさらにより望ましくは「１」となる。
【０２０１】
上記一対の赤標識プローブと緑標識プローブのうち、上記対象遺伝子から剥がれる温度が変化するのは、遺伝子の変異箇所に結合するプローブのほうで、遺伝子の変異箇所以外に結合するプローブの剥がれる温度は変化しない。したがって、この剥がれる温度の変化しないプローブが剥がれる温度を基準として、剥がれる温度の変化するプローブが剥がれる温度の変化を正確に判別できる。なお、場合によって、この遺伝子の変異箇所以外に結合するプローブを省略することもできる。
【０２０２】
また、上記プローブまたはプライマーを設計するにあたり一般的な留意事項として、その配列は対象となるＤＮＡの塩基配列から特異性の高い箇所を選択する必要がある。プローブまたはプライマーの配列と相補的／逆相補的／同じかまたはこれと類似の箇所が遺伝子ＤＮＡの別の箇所にあると、遺伝子検査の結果、誤った検査結果が得られてしまい、ＰＣＲの結果、目的の反応産物以外に複数の産物が形成されてしまい、十分なメルティングカーブ（特性）が得られず、誤った検査結果となってしまうからである。
【０２０３】
したがって、上記プローブまたはプライマーを短くしての塩基数を少なくすると、遺伝子ＤＮＡの他の塩基配列箇所に同じ塩基配列箇所が現れる可能性は高くなり、遺伝子ＤＮＡの変異の検出に誤差／不正確さが生じる可能性がある。
【０２０４】
上記プローブまたはプライマーの塩基配列、各対象遺伝子ＤＮＡの部分配列は、正確な変異検出に必要な最低限の配列長であり、これらの各対象遺伝子ＤＮＡの両側の塩基または相補的塩基をさらに含む事は可能である。この場合、対象遺伝子ＤＮＡの変異検出のための検査時間／実験時間／反応時間は長くなる可能性があるが、遺伝子ＤＮＡの他の塩基配列箇所に同じ塩基配列箇所が現れる可能性は低くなり、変異の検出の誤差／不正確さが少なくなり、変異検出／変異検査がより正確になる。ただし、あまり長くなると、プローブまたはプライマーが自分自身に結合してしまう恐れがでてくるので、あまり長くしない方がよい。
【０２０５】
また、プローブまたはプライマーの設計においてＧ（グアニン）とＣ（シトシン）の含有割合が高すぎる場合、プローブまたはプライマー同士が結合してしまうか、またはプローブまたはプライマー自体が立体構造を作ってしまうと、十分な反応が得られないため、ＧとＣの含有割合の低いプローブまたはプライマー、望ましくはＧとＣの含有率が４０乃至６０％のプローブまたはプライマーが選ばれる。
【０２０６】
以上のような遺伝子検査によって、個々人の遺伝子の差異に応じた、診断及び治療を行なうことができ、画一的な診断／治療ではなく、個人差に応じたオーダーメイドな診断／治療が可能となる。これは肥満関連遺伝子検査でも同様で、個々人の肥満関連遺伝子の差異に応じたオーダーメイドな肥満診断／肥満治療が可能となる。特に最近注目を集めるメタボリックシンドロームに対する、個々人の遺伝子の差異に応じたオーダーメイドな診断／治療が可能となる。
【０２０７】
（１９）他の実施の形態
本発明は、上記実施例に限定されず、種々変更可能である。例えば、上記相補的／逆相補的なプローブ、相補的／逆相補的なプライマーと、相補的／逆相補的でないプローブ、相補的／逆相補的でないプライマーとは、両方が共に加えられ使用されてもよい。これにより、対象遺伝子ＤＮＡの変異検出のための検査時間／実験時間／反応時間は短くなる。
【０２０８】
また、上記のプライマーのセット、及び／または上記プローブのセットは、これらのプライマーまたはプローブの塩基配列と相補的または逆相補的なものとしてもよい。これでも同様に、対象遺伝子ＤＮＡの事前複製・事前増幅・変異検出・差異検出を行うことができる。
【０２０９】
上記緑と赤の発色成分は、上記結合するプローブがそれぞれ入れ換えられて、緑と赤の標識が逆にされ、上記各一対のプローブの他方のプローブに付け替えられてもよい。これでも、緑の発光特性と赤の発光特性が入れ替わるが、同様の検出が可能となる。またこのような発色成分として、ＦＩＴＣによる緑やＬＣＲｅｄ６４０による赤以外に、ＬＣＲｅｄ７０５による赤、その他、青、黄、橙、紫などの発色成分が使用されてもよい。この場合、センサープローブとアンカープローブとは入れ替わらない。
【０２１０】
本発明のＰＣＲ法によって検出される対象遺伝子ＤＮＡの変異は、塩基の欠損、挿入、置換、ＳＮＰ（一塩基多型）など、遺伝子ＤＮＡの異常と正常との違いまたは正常であっても個人差による違いであってもよい。
【０２１１】
また、本発明のＰＣＲ法によって検出される遺伝子ＤＮＡはヒトのものであるが、家畜その他の動物・植物・菌・微生物におけるものであってもよい。さらに、本発明の遺伝子検査方法またはＰＣＲ法によって検出される対象遺伝子ＤＮＡは、対象遺伝子ＤＮＡの情報が写し取られたｍＲＮＡでもよいし、ＲＮＡであってもよい。
【０２１２】
（２０）他の発明の効果
［１］増幅した対象遺伝子に対して、  少なくとも「ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、  及び少なくとも「ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、  またはこれらのプローブの塩基配列と相補的／逆相補的な塩基配列、この塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、を混合して結合させ、  これらの各プローブに対して、結合することによって発色する成分をそれぞれして結合させて発色させ、  上記混合物を加熱することによって、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がし、これにより上記発色する成分による発色を低下させ、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異を検出することを特徴とする遺伝子検査方法。
【０２１３】
[２]上記対象遺伝子は、  少なくとも「ｇａｔｔｃｔｔｃｔｇｔｃａｔｔｔｇｃａ」の塩基配列（１９ｍｅｒ乃至２３ｍｅｒ）を含むプライマー、  及び少なくとも「ｇｇｃａａｃｔｇａｃｃｃｔｔｔａｔｇ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーによって増幅されることを特徴とする請求項１記載の遺伝子検査方法。これにより、対象遺伝子ＤＮＡの周辺だけを他の遺伝子ＤＮＡ部分に比べてプライマーで十分に複製・増幅しておき、遺伝子ＤＮＡの野生／変異／正常／異常を正確に識別することができる。
【０２１４】
[３]上記増幅のアニーリング温度は６４℃乃至７０℃、望ましくは６５℃乃至６９℃、より望ましくは６６℃乃至６８℃、さらに望ましくは約６７℃であることを特徴とする請求項２記載の遺伝子検査方法。これにより、加熱速度が速くなれば対象遺伝子の増幅速度が速くなって遺伝子検査時間が短くなり、加熱速度が遅くなれば対象遺伝子の差異がより明確になり遺伝子検査がより正確になる。
【０２１５】
[４]増幅した対象遺伝子に対して、  少なくとも「ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｃａａａ」または「ｃｇｔｃａｃｇｃａｇｇａａａ」の塩基配列（１４ｍｅｒ乃至１８ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、  及び少なくとも「ｃｇａｇｇｔｇｔｇｇｇｔｇｇｔｇｇｇｃａｔｇｇｇｃａｔｃｇｔｃａｔｇｔｃｔｃｔｃａｔｃｇｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、  またはこれらのプローブの塩基配列と相補的／逆相補的な塩基配列、この塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、を混合して結合させ、  これらの各プローブに対して、結合することによって発色する成分をそれぞれして結合させて発色させ、  上記混合物を加熱することによって、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がし、これにより上記発色する成分による発色を低下させ、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異を検出することを特徴とする遺伝子検査方法。
【０２１６】
[５]上記対象遺伝子は、  少なくとも「ｔｔｃｔｔｇｃｔｇｇｃａｃｃｃａａ」の塩基配列（１７ｍｅｒ乃至２１ｍｅｒ）を含むプライマー、  及び少なくとも「ａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｔｇａｔｇａ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーによって増幅されることを特徴とする請求項４記載の遺伝子検査方法。これにより、対象遺伝子ＤＮＡの周辺だけを他の遺伝子ＤＮＡ部分に比べてプライマーで十分に複製・増幅しておき、遺伝子ＤＮＡの野生／変異／正常／異常を正確に識別することができる。
【０２１７】
[６]上記増幅のアニーリング温度は６１℃乃至６７℃、望ましくは６２℃乃至６６℃、より望ましくは６３℃乃至６５℃、さらに望ましくは約６４℃であることを特徴とする請求項５記載の遺伝子検査方法。これにより、加熱速度が速くなれば対象遺伝子の増幅速度が速くなって遺伝子検査時間が短くなり、加熱速度が遅くなれば対象遺伝子の差異がより明確になり遺伝子検査がより正確になる。
【０２１８】
[７]増幅した対象遺伝子に対して、  少なくとも「ｃｃａｃｃｇｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｇｔ」の塩基配列（３１ｍｅｒ乃至３９ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、  及び少なくとも「ａｔｃｇｃｃｔｇｇａｃｔｃｃｇ」または「ａｔｃｇｃｃｃｇｇａｃｔｃｃｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）またはこれらの塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、  またはこれらのプローブの塩基配列と相補的／逆相補的な塩基配列、この塩基配列のうち１つ、２つまたは３つの塩基が別の異なる塩基に置き換えられた塩基配列を含むプローブ、を混合して結合させ、  これらの各プローブに対して、結合することによって発色する成分をそれぞれして結合させて発色させ、  上記混合物を加熱することによって、上記プローブを上記対象遺伝子から剥がし、これにより上記発色する成分による発色を低下させ、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異を検出することを特徴とする遺伝子検査方法。
【０２１９】
[８]上記対象遺伝子は、  少なくとも「ｃｔｔｃｃｔｔｃｔｔｔｃｃｃｔａｃｃ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマー、  及び少なくとも「ｇｔｃａｔｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｃｔｃ」の塩基配列（１８ｍｅｒ乃至２２ｍｅｒ）を含むプライマーによって増幅されることを特徴とする請求項７記載の遺伝子検査方法。これにより、対象遺伝子ＤＮＡの周辺だけを他の遺伝子ＤＮＡ部分に比べてプライマーで十分に複製・増幅しておき、遺伝子ＤＮＡの野生／変異／正常／異常を正確に識別することができる。
【０２２０】
[９]上記増幅のアニーリング温度は６５℃乃至７１℃、望ましくは６６℃乃至７０℃、より望ましくは６７℃乃至６９℃、さらに望ましくは約６８℃であることを特徴とする請求項８記載の遺伝子検査方法。これにより、加熱速度が速くなれば対象遺伝子の増幅速度が速くなって遺伝子検査時間が短くなり、加熱速度が遅くなれば対象遺伝子の差異がより明確になり遺伝子検査がより正確になる。
【０２２１】
[１０]上記プローブを上記対象遺伝子から剥がすときの加熱は、約４０℃から約８０℃に向かって、約０．０１℃／秒乃至０．５℃／秒の割合で加熱であることを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８または９記載の遺伝子検査方法。これにより、加熱速度が速くなれば遺伝子検査時間が短くなり、加熱速度が遅くなれば対象遺伝子の差異がより明確になり遺伝子検査がより正確になる。
【０２２２】
[１１]上記発色する成分の発色の低下特性を微分し、この微分特性に基づいて上記対象遺伝子の差異を検出することを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０記載の遺伝子検査方法。これにより、発色する成分の発色の低下部分でピーク特性、凸特性または凹特性を得ることができ、遺伝子検査がし易くなる。
【０２２３】
[１２]請求項１、２または３の遺伝子検査方法と、請求項４、５または６の遺伝子検査方法と、請求項７、８または９の遺伝子検査方法とを、共に行なって、複数の対象遺伝子の差異を同時に多重的に検出することを特徴とする遺伝子検査方法。複数の対象遺伝子の差異を同時に多重的に検出すると、治療対策・健康対策を抜けなく総合的に行なうことができる。
【０２２４】
[１３]上記増幅した対象遺伝子に結合した各プローブの間隔塩基数は０乃至１５であることを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２記載の遺伝子検査方法。これにより、緑標識プローブ及び赤標識プローブの間に蛍光共鳴エネルギー転移が円滑に行なわれる。
【０２２５】
[１４] 上記請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２または１３記載の遺伝子検査方法に使用される上記プローブ及び上記発色する成分または上記プライマーのキット。これにより、遺伝子検査の準備でキットを用意すればよく、遺伝子検査の準備が容易になる。
【産業上の利用可能性】
【０２２６】
対象遺伝子の差異を、簡易にまたは迅速に検出する。対象遺伝子ＵＣＰ１（β２、β３）に対し、「ｃａｃｔｔｇａｔｔａａａｃｔｇ」または「ｃａｃｔｃｇａｔｔａａａｃｔｇ」の塩基配列（１５ｍｅｒ乃至１９ｍｅｒ）を含むプローブ（緑発光）と「ｃａａｔｃａｇａａａｔｃｇｃｔｇｃａｃａａａａｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔａａａｔａａａａａｔ」の塩基配列（４５ｍｅｒ乃至５３ｍｅｒ）を含むプローブ（赤発光）が結合され、このプローブには発色する成分が予め混合・結合・標識されていて発色される。
【０２２７】
これが加熱されて、上記プローブが上記対象遺伝子から剥がれると、発色が低下し、この低下するときの温度の違いに基づいて、上記対象遺伝子の差異「ａａ型」「ｇｇ型」「ａｇ型」が検出される。
【０２２８】
（２１）配列表
SEQUENCE LISTING
Iryo-hojin Daiyukai
Genetic checking method and Kit
P9G-109
JP 2006-000000
2006-08-24
426
【０２２９】
1
477
DNA
Human
1
cttgggtagt  gacaaagtat  taatttatta      30
ggtgaagtat  atgctttttt  attagtgata      60
ataaatatat  cctctctccc  attataaaag      90
tttgtatttc  ttcttttaga  aattgattct     120
tctgtcattt  gcacatttat  ctgtataatt     150
ataacagggt  atttcccagt  ggtggctaat     180
gagagaatta  tgggaaagta  tagaacacta     210
ttcaaatgca  aagcactgta  tgatttttat     240
ttaataggaa  gacattttgt  gcagcgattt     270
ctgattgacc  acagtttgat  caagtgcatt     300
tgttaatgtg  ttctacattt  tcaaaaagga     330
aaggagaatt  tgttacattc  agaacttgct     360
gccactcctt  tgctacgtca  taaagggtca     390
gttgcccttg  ctcatactga  cctattcttt     420
accctctctg  cttcttcttt  gtgccagaag     450
agtagaaatc  tgaccctttg  gg             477
【０２３０】
2
420
DNA
Human
2
acacccacac  cacagccgct  gaatgaggct      30
tccaggcgtc  cgctcgcggc  ccgcagagcc      60
ccgccgtggg  tccgcctgct  gaggcgcccc      90
cagccagtgc  gcttacctgc  cagactgcgc     120
gccatggggc  aacccgggaa  cggcagcgcc     150
ttcttgctgg  cacccaatgg  aagccatgcg     180
ccggaccacg  acgtcacgca  gcaaagggac     210
gaggtgtggg  tggtgggcat  gggcatcgtc     240
atgtctctca  tcgtcctggc  catcgtgttt     270
ggcaatgtgc  tggtcatcac  agccattgcc     300
aagttcgagc  gtctgcagac  ggtcaccaac     330
tacttcatca  cttcactggc  ctgtgctgat     360
ctggtcatgg  gcctagcagt  ggtgcccttt     390
ggggccgccc  atattcttat  gaaaatgtgg     420
【０２３１】
3
480
DNA
Human
3
ggtgggggga  ggctgagcgc  tctggctggg      30
acagctagag  aagatggccc  aggctgggga      60
agtcgctctc  atgccttgct  gtcccctccc      90
ctgagccagg  tgatttggga  gaccccctcc     120
ttccttcttt  ccctaccgcc  ccacgcgcga     150
cccggggatg  gctccgtggc  ctcacgagaa     180
cagctctctt  gccccatggc  cggacctccc     210
caccctggcg  cccaataccg  ccaacaccag     240
tgggctgcca  ggggttccgt  gggaggcggc     270
cctagccggg  gccctgctgg  cgctggcggt     300
gctggccacc  gtgggaggca  acctgctggt     330
catcgtggcc  atcgcctgga  ctccgagact     360
ccagaccatg  accaacgtgt  tcgtgacttc     390
gctggccgca  gccgacctgg  tgatgggact     420
cctggtggtg  ccgccggcgg  ccaccttggc     450
gctgactggc  cactggccgt  tgggcgccac     480
【０２３２】
4
477
DNA
Human
4
gaacccatca  ctgtttcata  attaaataat      30
ccacttcata  tacgaaaaaa  taatcactat      60
tatttatata  ggagagaggg  taatattttc      90
aaacataaag  aagaaaatct  ttaactaaga     120
agacagtaaa  cgtgtaaata  gacatattaa     150
tattgtccca  taaagggtca  ccaccgatta     180
ctctcttaat  accctttcat  atcttgtgat     210
aagtttacgt  ttcgtgacat  actaaaaata     240
aattatcctt  ctgtaaaaca  cgtcgctaaa     270
gactaactgg  tgtcaaacta  gttcacgtaa     300
acaattacac  aagatgtaaa  agtttttcct     330
ttcctcttaa  acaatgtaag  tcttgaacga     360
cggtgaggaa  acgatgcagt  atttcccagt     390
caacgggaac  gagtatgact  ggataagaaa     420
tgggagagac  gaagaagaaa  cacggtcttc     450
tcatctttag  actgggaaac  cc             477
【０２３３】
5
420
DNA
Human
5
tgtgggtgtg  gtgtcggcga  cttactccga      30
aggtccgcag  gcgagcgccg  ggcgtctcgg      60
ggcggcaccc  aggcggacga  ctccgcgggg      90
gtcggtcacg  cgaatggacg  gtctgacgcg     120
cggtaccccg  ttgggccctt  gccgtcgcgg     150
aagaacgacc  gtgggttacc  ttcggtacgc     180
ggcctggtgc  tgcagtgcgt  cgtttccctg     210
ctccacaccc  accacccgta  cccgtagcag     240
tacagagagt  agcaggaccg  gtagcacaaa     270
ccgttacacg  accagtagtg  tcggtaacgg     300
ttcaagctcg  cagacgtctg  ccagtggttg     330
atgaagtagt  gaagtgaccg  gacacgacta     360
gaccagtacc  cggatcgtca  ccacgggaaa     390
ccccggcggg  tataagaata  cttttacacc     420
【０２３４】
6
450
DNA
Human
6
ccacccccct  ccgactcgcg  agaccgaccc      30
tgtcgatctc  ttctaccggg  tccgacccct      60
tcagcgagag  tacggaacga  caggggaggg      90
gactcggtcc  actaaaccct  ctgggggagg     120
aaggaagaaa  gggatggcgg  ggtgcgcgct     150
gggcccctac  cgaggcaccg  gagtgctctt     180
gtcgagagaa  cggggtaccg  gcctggaggg     210
gtgggaccgc  gggttatggc  ggttgtggtc     240
acccgacggt  ccccaaggca  ccctccgccg     270
ggatcggccc  cgggacgacc  gcgaccgcca     300
cgaccggtgg  caccctccgt  tggacgacca     330
gtagcaccgg  tagcggacct  gaggctctga     360
ggtctggtac  tggttgcaca  agcactgaag     390
cgaccggcgt  cggctggacc  actaccctga     420
ggaccaccac  ggcggccgcc  ggtggaaccg     450
【０２３５】
7
15
Probe
Artificial sequence
7
cacttgattaaactg      15
【０２３６】
8
16
Probe
Artificial sequence
8
gcacttgattaaactg      16
【０２３７】
9
17
Probe
Artificial sequence
9
tgcacttgattaaactg      17
【０２３８】
10
16
Probe
Artificial sequence
10
cacttgattaaactgt      16
【０２３９】
11
17
Probe
Artificial sequence
11
gcacttgattaaactgt      17
【０２４０】
12
18
Probe
Artificial sequence
12
tgcacttgattaaactgt      18
【０２４１】
13
17
Probe
Artificial sequence
13
cacttgattaaactgtg      17
【０２４２】
14
18
Probe
Artificial sequence
14
gcacttgattaaactgtg      18
【０２４３】
15
19
Probe
Artificial sequence
15
tgcacttgattaaactgtg      19
【０２４４】
16
15
Probe
Artificial sequence
16
cactcgattaaactg      15
【０２４５】
17
16
Probe
Artificial sequence
17
gcactcgattaaactg      16
【０２４６】
18
17
Probe
Artificial sequence
18
tgcactcgattaaactg      17
【０２４７】
19
16
Probe
Artificial sequence
19
cactcgattaaactgt      16
【０２４８】
20
17
Probe
Artificial sequence
20
gcactcgattaaactgt      17
【０２４９】
21
18
Probe
Artificial sequence
21
tgcactcgattaaactgt     18
【０２５０】
22
17
Probe
Artificial sequence
22
cactcgattaaactgtg      17
【０２５１】
23
18
Probe
Artificial sequence
23
gcactcgattaaactgtg      18
【０２５２】
24
19
Probe
Artificial sequence
24
tgcactcgattaaactgtg      19
【０２５３】
25
15
Probe
Artificial sequence
25
cacttgatcaaactg      15
【０２５４】
26
16
Probe
Artificial sequence
26
gcacttgatcaaactg      16
【０２５５】
27
17
Probe
Artificial sequence
27
tgcacttgatcaaactg      17  
【０２５６】
28
16
Probe
Artificial sequence
28
cacttgatcaaactgt      16  
【０２５７】
29
17
Probe
Artificial sequence
29
gcacttgatcaaactgt      17
【０２５８】
30
18
Probe
Artificial sequence
30
tgcacttgatcaaactgt      18
【０２５９】
31
17
Probe
Artificial sequence
31
cacttgatcaaactgtg      17
【０２６０】
32
18
Probe
Artificial sequence
32
gcacttgatcaaactgtg      18
【０２６１】
33
19
Probe
Artificial sequence
33
tgcacttgatcaaactgtg      19
【０２６２】
34
15
Probe
Artificial sequence
34
cactcgatcaaactg      15
【０２６３】
35
16
Probe
Artificial sequence
35
gcactcgatcaaactg      16  
【０２６４】
36
17
Probe
Artificial sequence
36
tgcactcgatcaaactg      17
【０２６５】
37
16
Probe
Artificial sequence
37
cactcgatcaaactgt      16
【０２６６】
38
17
Probe
Artificial sequence
38
gcactcgatcaaactgt      17
【０２６７】
39
18
Probe
Artificial sequence
39
tgcactcgatcaaactgt      18
【０２６８】
40
17
Probe
Artificial sequence
40
cacttgatcaaactgtg      17
【０２６９】
41
18
Probe
Artificial sequence
41
gcacttgatcaaactgtg      18
【０２７０】
42
19
Probe
Artificial sequence
42
tgcacttgatcaaactgtg      19
【０２７１】
43
15
Probe
Artificial sequence
43
cactcgatcaaactg      15
【０２７２】
44
16
Probe
Artificial sequence
44
gcactcgatcaaactg      16  
【０２７３】
45
17
Probe
Artificial sequence
45
tgcactcgatcaaactg      17
【０２７４】
46
16
Probe
Artificial sequence
46
cactcgatcaaactgt      16  
【０２７５】
47
17
Probe
Artificial sequence
47
gcactcgatcaaactgt      17
【０２７６】
48
18
Probe
Artificial sequence
48
tgcactcgatcaaactgt      18
【０２７７】
49
17
Probe
Artificial sequence
49
cactcgatcaaactgtg      17
【０２７８】
50
18
Probe
Artificial sequence
50
gcactcgatcaaactgtg      18
【０２７９】
51
19
Probe
Artificial sequence
51
tgcactcgatcaaactgtg      19
【０２８０】
52
45
Probe
Artificial sequence
52
caatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaat      45
【０２８１】
53
46
Probe
Artificial sequence
53
tcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaat      46
【０２８２】
54
47
Probe
Artificial sequence
54
gtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaat      47
【０２８３】
55
48
Probe
Artificial sequence
55
ggtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaat      48
【０２８４】
56
49
Probe
Artificial sequence
56
tggtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaat      49
【０２８５】
57
46
Probe
Artificial sequence
57
caatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatc      46
【０２８６】
58
47
Probe
Artificial sequence
58
tcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatc      47
【０２８７】
59
48
Probe
Artificial sequence
59
gtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatc      48
【０２８８】
60
49
Probe
Artificial sequence
60
ggtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatc      49  
【０２８９】
61
50
Probe
Artificial sequence
61
tggtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatc      50
【０２９０】
62
47
Probe
Artificial sequence
62
caatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatca      47
【０２９１】
63
48
Probe
Artificial sequence
63
tcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatca      48  
【０２９２】
64
49
Probe
Artificial sequence
64
gtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatca      49  
【０２９３】
65
50
Probe
Artificial sequence
65
ggtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatca      50  
【０２９４】
66
51
Probe
Artificial sequence
66
tggtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatca      51
【０２９５】
67
48
Probe
Artificial sequence
67
caatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcat      48
【０２９６】
68
49
Probe
Artificial sequence
68
tcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcat      49  
【０２９７】
69
50
Probe
Artificial sequence
69
gtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcat      50
【０２９８】
70
51
Probe
Artificial sequence
70
ggtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcat      51
【０２９９】
71
52
Probe
Artificial sequence
71
tggtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcat      52
【０３００】
72
49
Probe
Artificial sequence
72
caatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcata      49
【０３０１】
73
50
Probe
Artificial sequence
73
tcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcata      50
【０３０２】
74
51
Probe
Artificial sequence
74
gtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcata      51
【０３０３】
75
52
Probe
Artificial sequence
75
ggtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcata      52
【０３０４】
76
53
Probe
Artificial sequence
76
tggtcaatcagaaatcgctgcacaaaatgtcttcctattaaataaaaatcata      53
【０３０５】
77
14
Probe
Artificial sequence
77
cgtcacgcagcaaa      14
【０３０６】
78
15
Probe
Artificial sequence
78
acgtcacgcagcaaa      15
【０３０７】
79
16
Probe
Artificial sequence
79
gacgtcacgcagcaaa      16
【０３０８】
80
15
Probe
Artificial sequence
80
cgtcacgcagcaaag      15
【０３０９】
81
16
Probe
Artificial sequence
81
acgtcacgcagcaaag      16
【０３１０】
82
17
Probe
Artificial sequence
82
gacgtcacgcagcaaag      17  
【０３１１】
83
16
Probe
Artificial sequence
83
cgtcacgcagcaaagg      16
【０３１２】
84
17
Probe
Artificial sequence
84
acgtcacgcagcaaagg      17
【０３１３】
85
18
Probe
Artificial sequence
85
gacgtcacgcagcaaagg      18
【０３１４】
86
14
Probe
Artificial sequence
86
cgtcacgcaggaaa      14
【０３１５】
87
15
Probe
Artificial sequence
87
acgtcacgcaggaaa      15
【０３１６】
88
16
Probe
Artificial sequence
88
gacgtcacgcaggaaa      16
【０３１７】
89
15
Probe
Artificial sequence
89
cgtcacgcaggaaag      15
【０３１８】
90
16
Probe
Artificial sequence
90
acgtcacgcaggaaag      16
【０３１９】
91
17
Probe
Artificial sequence
91
gacgtcacgcaggaaag      17
【０３２０】
92
16
Probe
Artificial sequence
92
cgtcacgcaggaaagg      16
【０３２１】
93
17
Probe
Artificial sequence
93
acgtcacgcaggaaagg      17
【０３２２】
94
18
Probe
Artificial sequence
94
gacgtcacgcaggaaagg      18
【０３２３】
95
45
Probe
Artificial sequence
95
cgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgt      45
【０３２４】
96
46
Probe
Artificial sequence
96
acgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgt      46
【０３２５】
97
47
Probe
Artificial sequence
97
gacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgt      47
【０３２６】
98
48
Probe
Artificial sequence
98
ggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgt      48
【０３２７】
99
49
Probe
Artificial sequence
99
gggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgt      49
【０３２８】
100
46
Probe
Artificial sequence
100
cgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtc      46
【０３２９】
101
47
Probe
Artificial sequence
101
acgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtc      47
【０３３０】
102
48
Probe
Artificial sequence
102
gacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtc      48
【０３３１】
103
49
Probe
Artificial sequence
103
ggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtc      49
【０３３２】
104
50
Probe
Artificial sequence
104
gggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtc      50
【０３３３】
105
47
Probe
Artificial sequence
105
cgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcc      47  
【０３３４】
106
48
Probe
Artificial sequence
106
acgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcc      48  
【０３３５】
107
49
Probe
Artificial sequence
107
gacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcc      49
【０３３６】
108
50
Probe
Artificial sequence
108
ggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcc      50
【０３３７】
109
51
Probe
Artificial sequence
109
gggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcc      51
【０３３８】
110
48
Probe
Artificial sequence
110
cgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcct      48
【０３３９】
111
49
Probe
Artificial sequence
111
acgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcct      49
【０３４０】
112
50
Probe
Artificial sequence
112
gacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcct      50
【０３４１】
113
51
Probe
Artificial sequence
113
ggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcct      51
【０３４２】
114
52
Probe
Artificial sequence
114
gggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcct      52
【０３４３】
115
49
Probe
Artificial sequence
115
cgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcctg      49
【０３４４】
116
50
Probe
Artificial sequence
116
acgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcctg      50
【０３４５】
117
51
Probe
Artificial sequence
117
gacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcctg      51
【０３４６】
118
52
Probe
Artificial sequence
118
ggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcctg      52
【０３４７】
119
53
Probe
Artificial sequence
119
gggacgaggtgtgggtggtgggcatgggcatcgtcatgtctctcatcgtcctg      53
【０３４８】
120
31
Probe
Artificial sequence
120
ccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgt      31
【０３４９】
121
32
Probe
Artificial sequence
121
gccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgt      32  
【０３５０】
122
33
Probe
Artificial sequence
122
ggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgt      33
【０３５１】
123
34
Probe
Artificial sequence
123
tggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgt      34
【０３５２】
124
35
Probe
Artificial sequence
124
ctggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgt      35
【０３５３】
125
32
Probe
Artificial sequence
125
ccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtg      32    
【０３５４】
126
33
Probe
Artificial sequence
126
gccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtg      33
【０３５５】
127
34
Probe
Artificial sequence
127
ggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtg      34
【０３５６】
128
35
Probe
Artificial sequence
128
tggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtg      35
【０３５７】
129
36
Probe
Artificial sequence
129
ctggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtg      36
【０３５８】
130
33
Probe
Artificial sequence
130
ccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtgg      33  
【０３５９】
131
34
Probe
Artificial sequence
131
gccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtgg      34  
【０３６０】
132
35
Probe
Artificial sequence
132
ggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtgg      35
【０３６１】
133
36
Probe
Artificial sequence
133
tggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtgg      36  
【０３６２】
134
37
Probe
Artificial sequence
134
ctggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtgg      37
【０３６３】
135
34
Probe
Artificial sequence
135
ccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggc      34
【０３６４】
136
35
Probe
Artificial sequence
136
gccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggc      35
【０３６５】
137
36
Probe
Artificial sequence
137
ggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggc      36
【０３６６】
138
37
Probe
Artificial sequence
138
tggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggc      37
【０３６７】
139
38
Probe
Artificial sequence
139
ctggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggc      38
【０３６８】
140
35
Probe
Artificial sequence
140
ccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggcc      35
【０３６９】
141
36
Probe
Artificial sequence
141
gccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggcc      36
【０３７０】
142
37
Probe
Artificial sequence
142
ggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggcc      37
【０３７１】
143
38
Probe
Artificial sequence
143
tggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggcc      38
【０３７２】
144
39
Probe
Artificial sequence
144
ctggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggcc      39
【０３７３】
145
15
Probe
Artificial sequence
145
atcgcctggactccg      15            
【０３７４】
146
16
Probe
Artificial sequence
146
catcgcctggactccg      16            
【０３７５】
147
17
Probe
Artificial sequence
147
ccatcgcctggactccg      17            
【０３７６】
148
16
Probe
Artificial sequence
148
atcgcctggactccga      16  
【０３７７】
149
17
Probe
Artificial sequence
149
catcgcctggactccga       17
【０３７８】
150
18
Probe
Artificial sequence
150
ccatcgcctggactccga      18 
【０３７９】
151
17
Probe
Artificial sequence
151
atcgcctggactccgag      17
【０３８０】
152
18
Probe
Artificial sequence
152
catcgcctggactccgag      18
【０３８１】
153
19
Probe
Artificial sequence
153
ccatcgcctggactccgag      19
【０３８２】
154
15
Probe
Artificial sequence
154
atcgcccggactccg      15
【０３８３】
155
16
Probe
Artificial sequence
155
catcgcccggactccg      16
【０３８４】
156
17
Probe
Artificial sequence
156
ccatcgcccggactccg      17
【０３８５】
157
16
Probe
Artificial sequence
157
atcgcccggactccga      16
【０３８６】
158
17
Probe
Artificial sequence
158
catcgcccggactccga      17
【０３８７】
159
18
Probe
Artificial sequence
159
ccatcgcccggactccga      18
【０３８８】
160
17
Probe
Artificial sequence
160
atcgcccggactccgag      17
【０３８９】
161
18
Probe
Artificial sequence
161
catcgcccggactccgag      18
【０３９０】
162
19
Probe
Artificial sequence
162
ccatcgcccggactccgag      19
【０３９１】
163
19
Primer
Artificial sequence
163
gattcttctgtcatttgca      19  
【０３９２】
164
20
Primer
Artificial sequence
164
tgattcttctgtcatttgca      20
【０３９３】
165
21
Primer
Artificial sequence
165
ttgattcttctgtcatttgca      21
【０３９４】
166
20
Primer
Artificial sequence
166
gattcttctgtcatttgcac      20
【０３９５】
167
21
Primer
Artificial sequence
167
tgattcttctgtcatttgcac      21
【０３９６】
168
22
Primer
Artificial sequence
168
ttgattcttctgtcatttgcac      22  
【０３９７】
169
21
Primer
Artificial sequence
169
gattcttctgtcatttgcaca      21 
【０３９８】
170
22
Primer
Artificial sequence
170
tgattcttctgtcatttgcaca      22  
【０３９９】
171
23
Primer
Artificial sequence
171
ttgattcttctgtcatttgcaca      23
【０４００】
172
18
Primer
Artificial sequence
172
ggcaactgaccctttatg      18
【０４０１】
173
19
Primer
Artificial sequence
173
gggcaactgaccctttatg      19
【０４０２】
174
20
Primer
Artificial sequence
174
agggcaactgaccctttatg      20  
【０４０３】
175
19
Primer
Artificial sequence
175
ggcaactgaccctttatga      19
【０４０４】
176
20
Primer
Artificial sequence
176
gggcaactgaccctttatga      20
【０４０５】
177
21
Primer
Artificial sequence
177
agggcaactgaccctttatga      21
【０４０６】
178
20
Primer
Artificial sequence
178
ggcaactgaccctttatgac      20
【０４０７】
179
21
Primer
Artificial sequence
179
gggcaactgaccctttatgac      21
【０４０８】
180
22
Primer
Artificial sequence
180
agggcaactgaccctttatgac      22
【０４０９】
181
17
Primer
Artificial sequence
181
ttcttgctggcacccaa      17
【０４１０】
182
18
Primer
Artificial sequence
182
cttcttgctggcacccaa      18
【０４１１】
183
19
Primer
Artificial sequence
183
ccttcttgctggcacccaa      19  
【０４１２】
184
18
Primer
Artificial sequence
184
ttcttgctggcacccaat      18  
【０４１３】
185
19
Primer
Artificial sequence
185
cttcttgctggcacccaat      19
【０４１４】
186
20
Primer
Artificial sequence
186
ccttcttgctggcacccaat      20
【０４１５】
187
19
Primer
Artificial sequence
187
ttcttgctggcacccaatg      19
【０４１６】
188
20
Primer
Artificial sequence
188
cttcttgctggcacccaatg      20
【０４１７】
189
21
Primer
Artificial sequence
189
ccttcttgctggcacccaatg      21
【０４１８】
190
18
Primer
Artificial sequence
190
aggccagtgaagtgatga      18
【０４１９】
191
19
Primer
Artificial sequence
191
caggccagtgaagtgatga      19
【０４２０】
192
20
Primer
Artificial sequence
192
acaggccagtgaagtgatga      20
【０４２１】
193
19
Primer
Artificial sequence
193
aggccagtgaagtgatgaa      19
【０４２２】
194
20
Primer
Artificial sequence
194
caggccagtgaagtgatgaa      20
【０４２３】
195
21
Primer
Artificial sequence
195
acaggccagtgaagtgatgaa      21
【０４２４】
196
20
Primer
Artificial sequence
196
aggccagtgaagtgatgaag      20
【０４２５】
197
21
Primer
Artificial sequence
197
caggccagtgaagtgatgaag      21
【０４２６】
198
22
Primer
Artificial sequence
198
acaggccagtgaagtgatgaag      22
【０４２７】
199
18
Primer
Artificial sequence
199
cttccttctttccctacc      18
【０４２８】
200
19
Primer
Artificial sequence
200
ccttccttctttccctacc      19
【０４２９】
201
20
Primer
Artificial sequence
201
tccttccttctttccctacc      20  
【０４３０】
202
19
Primer
Artificial sequence
202
cttccttctttccctaccg      19
【０４３１】
203
20
Primer
Artificial sequence
203
ccttccttctttccctaccg      20
【０４３２】
204
21
Primer
Artificial sequence
204
tccttccttctttccctaccg      21
【０４３３】
205
20
Primer
Artificial sequence
205
cttccttctttccctaccgc      20
【０４３４】
206
21
Primer
Artificial sequence
206
ccttccttctttccctaccgc      21
【０４３５】
207
22
Primer
Artificial sequence
207
tccttccttctttccctaccgc      22
【０４３６】
208
18
Primer
Artificial sequence
208
gtcatggtctggagtctc      18
【０４３７】
209
19
Primer
Artificial sequence
209
ggtcatggtctggagtctc      19
【０４３８】
210
20
Primer
Artificial sequence
210
tggtcatggtctggagtctc      20
【０４３９】
211
19
Primer
Artificial sequence
211
gtcatggtctggagtctcg      19
【０４４０】
212
20
Primer
Artificial sequence
212
ggtcatggtctggagtctcg      20
【０４４１】
213
21
Primer
Artificial sequence
213
tggtcatggtctggagtctcg      21
【０４４２】
214
20
Primer
Artificial sequence
214
gtcatggtctggagtctcgg      20
【０４４３】
215
21
Primer
Artificial sequence
215
ggtcatggtctggagtctcgg      21
【０４４４】
216
22
Primer
Artificial sequence
216
tggtcatggtctggagtctcgg      22
【０４４５】
217
15
Probe
Artificial sequence
217
gtgaactaatttgac      15
【０４４６】
218
16
Probe
Artificial sequence
218
cgtgaactaatttgac      16
【０４４７】
219
17
Probe
Artificial sequence
219
acgtgaactaatttgac      17
【０４４８】
220
16
Probe
Artificial sequence
220
gtgaactaatttgaca      16
【０４４９】
221
17
Probe
Artificial sequence
221
cgtgaactaatttgaca      17
【０４５０】
222
18
Probe
Artificial sequence
222
acgtgaactaatttgaca      18
【０４５１】
223
17
Probe
Artificial sequence 
223
gtgaactaatttgacac      17
【０４５２】
224
18
Probe
Artificial sequence
224
cgtgaactaatttgacac      18
【０４５３】
225
19
Probe
Artificial sequence
225
acgtgaactaatttgacac      19
【０４５４】
226
15
Probe
Artificial sequence
226
gtgagctaatttgac      15
【０４５５】
227
16
Probe
Artificial sequence
227
cgtgagctaatttgac      16
【０４５６】
228
17
Probe
Artificial sequence
228
acgtgagctaatttgac      17
【０４５７】
229
16
Probe
Artificial sequence
229
gtgagctaatttgaca      16
【０４５８】
230
17
Probe
Artificial sequence
230
cgtgagctaatttgaca      17
【０４５９】
231
18
Probe
Artificial sequence
231
acgtgagctaatttgaca     18
【０４６０】
232
17
Probe
Artificial sequence
232
gtgagctaatttgacac      17
【０４６１】
233
18
Probe
Artificial sequence
233
cgtgagctaatttgacac      18
【０４６２】
234
19
Probe
Artificial sequence
234
acgtgagctaatttgacac      19
【０４６３】
235
15
Probe
Artificial sequence
235
gtgaactagtttgac      15
【０４６４】
236
16
Probe
Artificial sequence
236
cgtgaactagtttgac      16
【０４６５】
237
17
Probe
Artificial sequence
237
acgtgaactagtttgac      17  
【０４６６】
238
16
Probe
Artificial sequence
238
gtgaactagtttgaca      16  
【０４６７】
239
17
Probe
Artificial sequence
239
cgtgaactagtttgaca      17
【０４６８】
240
18
Probe
Artificial sequence
240
acgtgaactagtttgaca      18
【０４６９】
241
17
Probe
Artificial sequence
241
gtgaactagtttgacac      17
【０４７０】
242
18
Probe
Artificial sequence
242
cgtgaactagtttgacac      18
【０４７１】
243
19
Probe
Artificial sequence
243
acgtgaactagtttgacac      19
【０４７２】
244
15
Probe
Artificial sequence
244
gtgagctagtttgac      15
【０４７３】
245
16
Probe
Artificial sequence
245
cgtgagctagtttgac      16  
【０４７４】
246
17
Probe
Artificial sequence
246
acgtgagctagtttgac      17
【０４７５】
247
16
Probe
Artificial sequence
247
gtgagctagtttgaca      16
【０４７６】
248
17
Probe
Artificial sequence
248
cgtgagctagtttgaca      17
【０４７７】
249
18
Probe
Artificial sequence
249
acgtgagctagtttgaca      18
【０４７８】
250
17
Probe
Artificial sequence
250
gtgaactagtttgacac      17
【０４７９】
251
18
Probe
Artificial sequence
251
cgtgaactagtttgacac      18
【０４８０】
252
19
Probe
Artificial sequence
252
acgtgaactagtttgacac      19
【０４８１】
253
15
Probe
Artificial sequence
253
gtgagctagtttgac      15
【０４８２】
254
16
Probe
Artificial sequence
254
cgtgagctagtttgac      16  
【０４８３】
255
17
Probe
Artificial sequence
255
acgtgagctagtttgac      17
【０４８４】
256
16
Probe
Artificial sequence
256
gtgagctagtttgaca      16  
【０４８５】
257
17
Probe
Artificial sequence
257
cgtgagctagtttgaca      17
【０４８６】
258
18
Probe
Artificial sequence
258
acgtgagctagtttgaca      18
【０４８７】
259
17
Probe
Artificial sequence
259
gtgagctagtttgacac      17
【０４８８】
260
18
Probe
Artificial sequence
260
cgtgagctagtttgacac      18
【０４８９】
261
19
Probe
Artificial sequence
261
acgtgagctagtttgacac      19
【０４９０】
262
45
Probe
Artificial sequence
262
gttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttattttta      45
【０４９１】
263
46
Probe
Artificial sequence
263
agttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttattttta      46
【０４９２】
264
47
Probe
Artificial sequence
264
cagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttattttta      47
【０４９３】
265
48
Probe
Artificial sequence
265
ccagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttattttta      48
【０４９４】
266
49
Probe
Artificial sequence
266
accagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttattttta      49
【０４９５】
267
46
Probe
Artificial sequence
267
gttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttag      46
【０４９６】
268
47
Probe
Artificial sequence
268
agttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttag      47
【０４９７】
269
48
Probe
Artificial sequence
269
cagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttag      48
【０４９８】
270
49
Probe
Artificial sequence
270
ccagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttag      49  
【０４９９】
271
50
Probe
Artificial sequence
271
accagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttag      50
【０５００】
272
47
Probe
Artificial sequence
272
gttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagt      47
【０５０１】
273
48
Probe
Artificial sequence
273
agttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagt      48  
【０５０２】
274
49
Probe
Artificial sequence
274
cagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagt      49  
【０５０３】
275
50
Probe
Artificial sequence
275
ccagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagt      50  
【０５０４】
276
51
Probe
Artificial sequence
276
accagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagt      51
【０５０５】
277
48
Probe
Artificial sequence
277
gttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagta      48
【０５０６】
278
49
Probe
Artificial sequence
278
agttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagta      49  
【０５０７】
279
50
Probe
Artificial sequence
279
cagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagta      50
【０５０８】
280
51
Probe
Artificial sequence
280
ccagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagta      51
【０５０９】
281
52
Probe
Artificial sequence
281
accagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagta      52
【０５１０】
282
49
Probe
Artificial sequence
282
gttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagtat      49
【０５１１】
283
50
Probe
Artificial sequence
283
agttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagtat      50
【０５１２】
284
51
Probe
Artificial sequence
284
cagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagtat      51
【０５１３】
285
52
Probe
Artificial sequence
285
ccagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagtat      52
【０５１４】
286
53
Probe
Artificial sequence
286
accagttagtctttagcgacgtgttttacagaaggataatttatttttagtat      53
【０５１５】
287
14
Probe
Artificial sequence
287
gcagtgcgtcgttt      14
【０５１６】
288
15
Probe
Artificial sequence
288
tgcagtgcgtcgttt      15
【０５１７】
289
16
Probe
Artificial sequence
289
ctgcagtgcgtcgttt      16
【０５１８】
290
15
Probe
Artificial sequence
290
gcagtgcgtcgtttc      15
【０５１９】
291
16
Probe
Artificial sequence
291
tgcagtgcgtcgtttc      16
【０５２０】
292
17
Probe
Artificial sequence
292
ctgcagtgcgtcgtttc      17  
【０５２１】
293
16
Probe
Artificial sequence
293
gcagtgcgtcgtttcc      16
【０５２２】
294
17
Probe
Artificial sequence
294
tgcagtgcgtcgtttcc      17
【０５２３】
295
18
Probe
Artificial sequence
295
ctgcagtgcgtcgtttcc      18
【０５２４】
296
14
Probe
Artificial sequence
296
gcagtgcgtccttt      14
【０５２５】
297
15
Probe
Artificial sequence
297
tgcagtgcgtccttt      15
【０５２６】
298
16
Probe
Artificial sequence
298
ctgcagtgcgtccttt      16
【０５２７】
299
15
Probe
Artificial sequence
299
gcagtgcgtcctttc      15
【０５２８】
300
16
Probe
Artificial sequence
300
tgcagtgcgtcctttc      16
【０５２９】
301
17
Probe
Artificial sequence
301
ctgcagtgcgtcctttc      17
【０５３０】
302
16
Probe
Artificial sequence
302
gcagtgcgtcctttcc      16
【０５３１】
303
17
Probe
Artificial sequence
303
tgcagtgcgtcctttcc      17
【０５３２】
304
18
Probe
Artificial sequence
304
ctgcagtgcgtcctttcc      18
【０５３３】
305
45
Probe
Artificial sequence
305
gctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagca      45
【０５３４】
306
46
Probe
Artificial sequence
306
tgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagca      46
【０５３５】
307
47
Probe
Artificial sequence
307
ctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagca      47
【０５３６】
308
48
Probe
Artificial sequence
308
cctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagca      48
【０５３７】
309
49
Probe
Artificial sequence
309
ccctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagca      49
【０５３８】
310
46
Probe
Artificial sequence
310
gctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcag      46
【０５３９】
311
47
Probe
Artificial sequence
311
tgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcag      47
【０５４０】
312
48
Probe
Artificial sequence
312
ctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcag      48
【０５４１】
313
49
Probe
Artificial sequence
313
cctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcag      49
【０５４２】
314
50
Probe
Artificial sequence
314
ccctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcag      50
【０５４３】
315
47
Probe
Artificial sequence
315
gctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcagg      47  
【０５４４】
316
48
Probe
Artificial sequence
316
tgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcagg      48  
【０５４５】
317
49
Probe
Artificial sequence
317
ctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcagg      49
【０５４６】
318
50
Probe
Artificial sequence
318
cctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcagg      50
【０５４７】
319
51
Probe
Artificial sequence
319
ccctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcagg      51
【０５４８】
320
48
Probe
Artificial sequence
320
gctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcagga      48
【０５４９】
321
49
Probe
Artificial sequence
321
tgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcagga      49
【０５５０】
322
50
Probe
Artificial sequence
322
ctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcagga      50
【０５５１】
323
51
Probe
Artificial sequence
323
cctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcagga      51
【０５５２】
324
52
Probe
Artificial sequence
324
ccctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcagga      52
【０５５３】
325
49
Probe
Artificial sequence
325
gctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcaggac      49
【０５５４】
326
50
Probe
Artificial sequence
326
tgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcaggac      50
【０５５５】
327
51
Probe
Artificial sequence
327
ctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcaggac      51
【０５５６】
328
52
Probe
Artificial sequence
328
cctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcaggac      52
【０５５７】
329
53
Probe
Artificial sequence
329
ccctgctccacacccaccacccgtacccgtagcagtacagagagtagcaggac      53
【０５５８】
330
31
Probe
Artificial sequence
330
ggtggcaccctccgttggacgaccagtagca      31
【０５５９】
331
32
Probe
Artificial sequence
331
cggtggcaccctccgttggacgaccagtagca      32  
【０５６０】
332
33
Probe
Artificial sequence
332
ccggtggcaccctccgttggacgaccagtagca      33
【０５６１】
333
34
Probe
Artificial sequence
333
accggtggcaccctccgttggacgaccagtagca      34
【０５６２】
334
35
Probe
Artificial sequence
334
gaccggtggcaccctccgttggacgaccagtagca      35
【０５６３】
335
32
Probe
Artificial sequence
335
ggtggcaccctccgttggacgaccagtagcac      32    
【０５６４】
336
33
Probe
Artificial sequence
336
cggtggcaccctccgttggacgaccagtagcac      33
【０５６５】
337
34
Probe
Artificial sequence
337
ccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcac      34
【０５６６】
338
35
Probe
Artificial sequence
338
accggtggcaccctccgttggacgaccagtagcac      35
【０５６７】
339
36
Probe
Artificial sequence
339
gaccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcac      36
【０５６８】
340
33
Probe
Artificial sequence
340
ggtggcaccctccgttggacgaccagtagcacc      33  
【０５６９】
341
34
Probe
Artificial sequence
341
cggtggcaccctccgttggacgaccagtagcacc      34  
【０５７０】
342
35
Probe
Artificial sequence
342
ccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcacc      35
【０５７１】
343
36
Probe
Artificial sequence
343
accggtggcaccctccgttggacgaccagtagcacc      36  
【０５７２】
344
37
Probe
Artificial sequence
344
gaccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcacc      37
【０５７３】
345
34
Probe
Artificial sequence
345
ggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccg      34
【０５７４】
346
35
Probe
Artificial sequence
346
cggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccg      35
【０５７５】
347
36
Probe
Artificial sequence
347
ccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccg      36
【０５７６】
348
37
Probe
Artificial sequence
348
accggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccg      37
【０５７７】
349
38
Probe
Artificial sequence
349
gaccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccg      38
【０５７８】
350
35
Probe
Artificial sequence
350
ggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccgg      35
【０５７９】
351
36
Probe
Artificial sequence
351
cggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccgg      36
【０５８０】
352
37
Probe
Artificial sequence
352
ccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccgg      37
【０５８１】
353
38
Probe
Artificial sequence
353
accggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccgg      38
【０５８２】
354
39
Probe
Artificial sequence
354
gaccggtggcaccctccgttggacgaccagtagcaccgg      39
【０５８３】
355
15
Probe
Artificial sequence
355
tagcggacctgaggc      15            
【０５８４】
356
16
Probe
Artificial sequence
356
gtagcggacctgaggc      16            
【０５８５】
357
17
Probe
Artificial sequence
357
ggtagcggacctgaggc      17            
【０５８６】
358
16
Probe
Artificial sequence
358
tagcggacctgaggct      16  
【０５８７】
359
17
Probe
Artificial sequence
359
gtagcggacctgaggct       17
【０５８８】
360
18
Probe
Artificial sequence
360
ggtagcggacctgaggct      18 
【０５８９】
361
17
Probe
Artificial sequence
361
tagcggacctgaggctc      17
【０５９０】
362
18
Probe
Artificial sequence
362
gtagcggacctgaggctc      18
【０５９１】
363
19
Probe
Artificial sequence
363
ggtagcggacctgaggctc      19
【０５９２】
364
15
Probe
Artificial sequence
364
tagcgggcctgaggc      15
【０５９３】
365
16
Probe
Artificial sequence
365
gtagcgggcctgaggc      16
【０５９４】
366
17
Probe
Artificial sequence
366
ggtagcgggcctgaggc      17
【０５９５】
367
16
Probe
Artificial sequence
367
tagcgggcctgaggct      16
【０５９６】
368
17
Probe
Artificial sequence
368
gtagcgggcctgaggct      17
【０５９７】
369
18
Probe
Artificial sequence
369
ggtagcgggcctgaggct      18
【０５９８】
370
17
Probe
Artificial sequence
370
tagcgggcctgaggctc      17
【０５９９】
371
18
Probe
Artificial sequence
371
gtagcgggcctgaggctc      18
【０６００】
372
19
Probe
Artificial sequence
372
ggtagcgggcctgaggctc      19
【０６０１】
373
19
Primer
Artificial sequence
373
ctaagaagacagtaaacgt      19  
【０６０２】
374
20
Primer
Artificial sequence
374
actaagaagacagtaaacgt      20
【０６０３】
375
21
Primer
Artificial sequence
375
aactaagaagacagtaaacgt      21
【０６０４】
376
20
Primer
Artificial sequence
376
ctaagaagacagtaaacgtg      20
【０６０５】
377
21
Primer
Artificial sequence
377
actaagaagacagtaaacgtg      21
【０６０６】
378
22
Primer
Artificial sequence
378
aactaagaagacagtaaacgtg      22
【０６０７】
379
21
Primer
Artificial sequence
379
ctaagaagacagtaaacgtgt      21 
【０６０８】
380
22
Primer
Artificial sequence
380
actaagaagacagtaaacgtgt      22  
【０６０９】
381
23
Primer
Artificial sequence
381
aactaagaagacagtaaacgtgt      23
【０６１０】
382
18
Primer
Artificial sequence
382
ccgttgactgggaaatac      18
【０６１１】
383
19
Primer
Artificial sequence
383
cccgttgactgggaaatac      19
【０６１２】
384
20
Primer
Artificial sequence
384
tcccgttgactgggaaatac      20  
【０６１３】
385
19
Primer
Artificial sequence
385
ccgttgactgggaaatact      19
【０６１４】
386
20
Primer
Artificial sequence
386
cccgttgactgggaaatact      20
【０６１５】
387
21
Primer
Artificial sequence
387
tcccgttgactgggaaatact      21
【０６１６】
388
20
Primer
Artificial sequence
388
ccgttgactgggaaatactg      20
【０６１７】
389
21
Primer
Artificial sequence
389
cccgttgactgggaaatactg      21
【０６１８】
390
22
Primer
Artificial sequence
390
tcccgttgactgggaaatactg      22
【０６１９】
391
17
Primer
Artificial sequence
391
aagaacgaccgtgggtt      17
【０６２０】
392
18
Primer
Artificial sequence
392
gaagaacgaccgtgggtt      18
【０６２１】
393
19
Primer
Artificial sequence
393
ggaagaacgaccgtgggtt      19  
【０６２２】
394
18
Primer
Artificial sequence
394
aagaacgaccgtgggtta      18  
【０６２３】
395
19
Primer
Artificial sequence
395
gaagaacgaccgtgggtta      19
【０６２４】
396
20
Primer
Artificial sequence
396
ggaagaacgaccgtgggtta      20
【０６２５】
397
19
Primer
Artificial sequence
397
aagaacgaccgtgggttac      19
【０６２６】
398
20
Primer
Artificial sequence
398
gaagaacgaccgtgggttac      20
【０６２７】
399
21
Primer
Artificial sequence
399
ggaagaacgaccgtgggttac      21
【０６２８】
400
18
Primer
Artificial sequence
400
tccggtcacttcactact      18
【０６２９】
401
19
Primer
Artificial sequence
401
gtccggtcacttcactact      19
【０６３０】
402
20
Primer
Artificial sequence
402
tgtccggtcacttcactact      20
【０６３１】
403
19
Primer
Artificial sequence
403
tccggtcacttcactactt      19
【０６３２】
404
20
Primer
Artificial sequence
404
gtccggtcacttcactactt      20
【０６３３】
405
21
Primer
Artificial sequence
405
tgtccggtcacttcactactt      21
【０６３４】
406
20
Primer
Artificial sequence
406
tccggtcacttcactacttc      20
【０６３５】
407
21
Primer
Artificial sequence
407
gtccggtcacttcactacttc      21
【０６３６】
408
22
Primer
Artificial sequence
408
tgtccggtcacttcactacttc      22
【０６３７】
409
18
Primer
Artificial sequence
409
gaaggaagaaagggatgg      18
【０６３８】
410
19
Primer
Artificial sequence
410
ggaaggaagaaagggatgg      19
【０６３９】
411
20
Primer
Artificial sequence
411
aggaaggaagaaagggatgg      20  
【０６４０】
412
19
Primer
Artificial sequence
412
gaaggaagaaagggatggc      19
【０６４１】
413
20
Primer
Artificial sequence
413
ggaaggaagaaagggatggc      20
【０６４２】
414
21
Primer
Artificial sequence
414
aggaaggaagaaagggatggc      21
【０６４３】
415
20
Primer
Artificial sequence
415
gaaggaagaaagggatggcg      20
【０６４４】
416
21
Primer
Artificial sequence
416
ggaaggaagaaagggatggcg      21
【０６４５】
417
22
Primer
Artificial sequence
417
aggaaggaagaaagggatggcg      22
【０６４６】
418
18
Primer
Artificial sequence
418
cagtaccagacctcagag      18
【０６４７】
419
19
Primer
Artificial sequence
419
ccagtaccagacctcagag      19
【０６４８】
420
20
Primer
Artificial sequence
420
accagtaccagacctcagag      20
【０６４９】
421
19
Primer
Artificial sequence
421
cagtaccagacctcagagc      19
【０６５０】
422
20
Primer
Artificial sequence
422
ccagtaccagacctcagagc      20
【０６５１】
423
21
Primer
Artificial sequence
423
accagtaccagacctcagagc      21
【０６５２】
424
20
Primer
Artificial sequence
424
cagtaccagacctcagagcc      20
【０６５３】
425
21
Primer
Artificial sequence
425
ccagtaccagacctcagagcc      21
【０６５４】
426
22
Primer
Artificial sequence
426
accagtaccagacctcagagcc      22
【図面の簡単な説明】
【０６５５】
【図１】本件発明の遺伝子検査の原理を示す。
【図２】本件発明の遺伝子検査の原理を示す。
【図３】本件発明の遺伝子検査でのプローブの相補例を示す。
【図４】本件発明の遺伝子検査でのＰＣＲの相補例を示す。
【図５】変異・差異を検出する対象遺伝子ＵＣＰ１を含む塩基配列を示す。
【図６】変異・差異を検出する対象遺伝子β２ＡＤＲを含む塩基配列を示す。
【図７】変異・差異を検出する対象遺伝子β３ＡＤＲを含む塩基配列を示す。
【図８】変異・差異を検出する対象遺伝子ＵＣＰ１を含む塩基配列（相補側）を示す。
【図９】変異・差異を検出する対象遺伝子β２ＡＤＲを含む塩基配列（相補側）を示す。
【図１０】変異・差異を検出する対象遺伝子β３ＡＤＲを含む塩基配列（相補側）を示す。
【図１１】ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ１を用いたＵＣＰ１遺伝子についての変異の遺伝子検査結果を示す。
【図１２】変異ＵＣＰ１ＦＩＴＣ緑標識プローブＮｏ２を用いたＵＣＰ１遺伝子についての変異の遺伝子検査結果を示す。
【図１３】β２ＡＤＲ遺伝子についての変異の遺伝子検査結果を示す。
【図１４】β３ＡＤＲ遺伝子についての変異の遺伝子検査結果を示す。
【図１】
2008048671.tif 000003
【図２】
2008048671.tif 000004
【図３】
2008048671.tif 000005
【図４】
2008048671.tif 000006
【図５】
2008048671.tif 000007
【図６】
2008048671.tif 000008
【図７】
2008048671.tif 000009
【図８】
2008048671.tif 000010
【図９】
2008048671.tif 000011
【図１０】
2008048671.tif 000012
【図１１】
2008048671.tif 000013
【図１２】
2008048671.tif 000014
【図１３】
2008048671.tif 000015
【図１４】
2008048671.tif 000016