(57)【要約】【課題】ローヤルゼリーの品質管理の適切な指標、及び最適な移虫時の幼虫の大きさや移虫後の採乳時間を提供する。【解決手段】王台に孵化後２５〜３０時間齢の幼虫を移虫する工程を含む、ローヤルゼリーの製造方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
王台に孵化後２５〜３０時間齢の幼虫を移虫する工程
を含む、ローヤルゼリーの製造方法。
【請求項２】
さらに、移虫から４０、５２又は６８時間後に、王台に分泌されたローヤルゼリーを採乳する工程を含む、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
ローヤルゼリーの品質指標が１．５以上である、請求項１又は２に記載の製造方法で製造されたローヤルゼリー。
【請求項４】
アピシン含有量が１５００ｍＡＵ以上であり、及び／又はアピシン含有量／可溶性タンパク総量比が１５０以上である、請求項１又は２に記載の製造方法で製造されたローヤルゼリー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ローヤルゼリーの製造方法およびその方法によって得られるローヤルゼリーに関する。
【背景技術】
【０００２】
ローヤルゼリーはミツバチから採取される食品で、幼虫の育成のために羽化後３〜１２日齢の働き蜂が下咽頭腺と大腮腺とから分泌する、乳白色をしたペースト状の物質である。働き蜂となる幼虫は、孵化後３日齢を過ぎるとローヤルゼリーに替わって花粉と蜂蜜を餌として与えられるが、３日齢を過ぎてもローヤルゼリーのみを餌として育てられた幼虫は、一日３０００個の卵を産卵する能力を持つ女王蜂へと成長する。働き蜂が産卵から２１日で羽化・出房するのに対し、女王蜂は産卵から１５日で羽化・出房する。
【０００３】
現在のローヤルゼリーの採乳は、一般的に、故井上丹治氏によって開発された人工王台を用いる方法で行われている。
【０００４】
従来の方法は、３日齢の幼虫を人口王台へ移虫させ、移虫後７２時間でローヤルゼリーを採乳するのが、一般的であった。
【０００５】
働き蜂の幼虫への給餌は、３日齢前半までは僅かなローヤルゼリーが与えられるが、３日齢後半時には離乳食にあたら、ハチミツと花粉のミックス食に切り替えられる。ローヤルゼリーが与えられている間は、ローヤルゼリーの全てが吸収され、幼虫の脱糞はないがミックス食に代わると、幼虫は巣房内で脱糞を始め、不純物が混入する。
【０００６】
したがって、育児転換可能日齢の限界は３日齢前半までであって、この間の幼虫であれば、餌をローヤルゼリーに切り替えれば女王蜂に育つのである。それゆえに、３日齢の幼虫が移虫に使用されてきた。
【０００７】
王台は移虫後６８〜７２時間でほぼ満杯になり、ミツロウで蓋をされるので、移虫後７２時間でこれを竹へらなどを用いて回収（採乳）する。
【０００８】
しかし、移虫時の幼虫の大きさや移虫後の採乳時間は、養蜂の手技の便宜で決められてきており、品質管理の観点から検討されたことはなかった。
【０００９】
ローヤルゼリーの化学成分については、働き蜂の生理的状態、ローヤルゼリーの採取条件や保存状態、分析方法等によりかなりの変動が認められるが、生ローヤルゼリーの平均的な成分組成（重量％）は、水分が約６６％、タンパク質が約１３％、糖質が約１４．５％、脂質が約４．５％であり、その他の成分（ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ニコチン酸、葉酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、アセチルコリン、γ−アミノ酪酸など）が約２％である。
【００１０】
ローヤルゼリーには、ラットなどの実験動物を使用した研究から、抗腫瘍作用、体重増加及び成長促進作用、血清コレステロール及び脂質低下作用、血流量増加及び血圧効果作用、創傷治癒促進作用、性ホルモン様作用、性中枢老化防止作用、放射線照射動物の延命効果、抗菌作用、酵素作用などの薬理効果が報告されている。また、ヒトに対する臨床的効果として、高血圧症などの慢性疾患の改善、放射線や化学療法剤の副作用軽減作用、発育促進作用、不定愁訴症候群や自律神経失調症の改善作用などが報告されている。また、ローヤルゼリーを化粧品に利用し美肌法などの美容効果の目的でも使用されている。
【００１１】
ローヤルゼリーの生理活性成分としては、１０−ヒドロキシデセン酸が知られている。従来の採乳方法によるローヤルゼリーは、およそ１．７〜２．２％程度の１０−ヒドロキシデセン酸を含有する。
【００１２】
従来は、１０−ヒドロキシデセン酸の含量がローヤルゼリーの品質の指標として用いられてきた。しかし、粉末ローヤルゼリーの製造の際に網に残った１０−ヒドロキシデセン酸の結晶体を微粒子状の粉末とし、大量生産された劣悪低活性のローヤルゼリー原乳（１０−ヒドロキシデセン酸１．４％以下）に、人工的に作られた１０−ヒドロキシデセン酸粉末を後から添加することによって１０−ヒドロキシデセン酸含有量を２．０％以上にした、紛い物が横行していた。したがって、１０−ヒドロキシデセン酸含量に替わる科学的に信用のおける新たなローヤルゼリーの品質指標が求められていた。
【００１３】
ローヤルゼリーに含まれるタンパク質のうち、約７５％が水溶性であり、残りの約２５％が水不溶性タンパク質である。現在までに性質や構造が明らかにされたタンパク質には、抗菌作用を持つロイヤリシン（分子量５，５００）、培養細胞に対して細胞増殖促進作用を有する糖タンパク質であるアピシン（分子量３５０，０００）及び分子量５５，０００の糖タンパク質（５５ｋ−ＲＪＧＰ）、分子量５７，０００の糖タンパク質であるロイヤラクチンがある。しかし、いずれのタンパク質が品質管理に有用であるかは知られていなかった。
【００１４】
したがって、ローヤルゼリーの品質管理の適切な指標の開発及びその指標に基づく、最適な移虫時の幼虫の大きさや移虫後の採乳時間の決定が待たれていた。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明は、ローヤルゼリーの品質管理の適切な指標、及び最適な移虫時の幼虫の大きさや移虫後の採乳時間を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明の発明者らは、上記課題を解決するために鋭意努力した結果、ローヤルゼリー品質指標（Index of Quality of Royal Jelly:IQR）やアピシン含有量及び／又はアピシン含有量／可溶性タンパク総量比がローヤルゼリーの品質管理の適切な指標であることを見出し、そして、最適な移虫時の幼虫の大きさが４８時間齢であり、最適な移虫後の採乳時間が移虫から４０、５２又は６８時間後であることを見出し、本発明を完成させた。この製造工程は、山口喜久二式自然養蜂と呼ばれる農法の最も重要な工程である。
【００１７】
すなわち、本発明は、下記：
１．王台に孵化後２５〜３０時間齢の幼虫を移虫する工程を含む、ローヤルゼリーの製造方法、
２．さらに、移虫から４０、５２又は６８時間後に、王台に分泌されたローヤルゼリーを採乳する工程を含む、上記１に記載の製造方法、
３．ローヤルゼリーの品質指標が１．５以上である、上記１又は２に記載の製造方法で製造されたローヤルゼリー、
４．アピシン含有量が１５００ｍＡＵ以上であり、及び／又はアピシン含有量／可溶性タンパク総量比が１５０以上である、上記１又は２に記載の製造方法で製造されたローヤルゼリー。
に関する。
【発明の効果】
【００１８】
以上のように、本発明に示すローヤルゼリー製造方法は、高品質なローヤルゼリーの製造に有用であり、この方法を用いて製造されたローヤルゼリーからは高い生理活性が得られる。
【００１９】
本発明において、孵化後２５〜３０時間齢の幼虫とは、孵化した後、２５〜３０時間を経過した幼虫である。従来２日齢と呼ばれていた２５時間齢〜４８時間齢では、得られるローヤルゼリーの品質に顕著な違いがあることが判ったため、移虫用の働き蜂の幼虫を時間齢で規定したものである。このときの幼虫の大きさは１ｍｍ以内である。
【００２０】
本発明の製造方法では、移虫から４０、５２又は６８時間後に、王台に分泌されたローヤルゼリーを採乳する。好ましくは、移虫から４０時間後に、王台に分泌されたローヤルゼリーを採乳する。
【００２１】
従来は、養蜂作業の開始時刻は朝露の無くなる朝９時頃であることから、開始時刻から計算すると移虫後４０時間目は夜の１１時となってしまい、養蜂作業を行うのが不可能な時刻であることから、一般的養蜂家は昼過ぎの、働き蜂が巣箱から飛び立ち、巣内に内勤蜂のみとなっている頃を見計らって移虫作業を行っていた。すなわち、午後１〜３時頃に移虫作業を行い、移虫後４８時間又は７２時間後の午後１〜３時頃に採乳を行っていたのである。これに対して、本発明の方法では、夜中の１２時頃に移虫を行って、４０時間後の午後４時に採乳を行うことになる。
【００２２】
本発明においてローヤルゼリー品質指標とは、ローヤルゼリー中のアピシン含有量（ｍＡＵ）とアルブミン含有量（ｍＡＵ）の比、すなわち、
アピシン含有量／アルブミン含有量
である。
【００２３】
また、本発明においてローヤルゼリー品質指標とは、
ローヤルゼリー中のアピシン含有量（ｍＡＵ）、及び／又はローヤルゼリー中のアピシン含有量（ｍＡＵ）と可溶性タンパク総量（mg/ml）との比、すなわち、アピシン含有量／可溶性タンパク総量
である。
【００２４】
アピシンは、ヒトや動物の培養細胞の増殖を促進し、細胞死を防ぐ作用を有することが知られている（ローヤルゼリー、美容食品の開発と展望、猪居武監修、シーエムシー出版、２００４年、２２１−２３３）。
【００２５】
ローヤルゼリー品質指標は、０．５以上であることが好ましく、より好ましくは、１．０以上であり、さらに好ましくは、１．５以上である。したがって、ローヤルゼリー品質指標０．５未満は、等外であり、０．５以上〜１未満が三級であり、１以上〜１．５未満が二級であり、１．５以上が一級であるというように評価することができる。
【００２６】
また、ローヤルゼリー品質指標は、アピシン含有量５００ｍＡＵ以上かつアピシン含有量／可溶性タンパク総量比７５以上であることが好ましく、より好ましくは、１０００ｍＡＵ以上かつ１００以上であり、さらに好ましくは、１５００ｍＡＵ以上かつ１５０以上である。したがって、アピシン含有量５００ｍＡＵ以上かつアピシン含有量／可溶性タンパク総量比７５未満は、等外であり、アピシン含有量５００ｍＡＵ以上かつアピシン含有量／可溶性タンパク総量比７５以上〜１００未満が三級であり、アピシン含有量１０００ｍＡＵ以上かつアピシン含有量／可溶性タンパク総量比１００以上〜１５０未満が二級であり、アピシン含有量１５００ｍＡＵ以上かつアピシン含有量／可溶性タンパク総量比１５０以上が一級であるというように評価することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
本発明を下記の実施例により詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるわけではない。
【実施例】
【００２８】
ローヤルゼリー品質指標を以下のように評価した。
実験材料および実験方法
１．人工王台を利用した自然養蜂を単一の菜の花畑を利用して実験養蜂を行った。使用した蜂は西洋蜂である。人工王台に西洋蜂の幼虫（４８時間齢または７２時間齢）を移虫し、移虫後２４時間から７２時間まで４時間ごとに人工王台に蓄積されたローヤルゼリーを採取し、可溶性タンパクを抽出し、ゲルろ過、陰イオン交換ＨＰＬＣによって分画・精製し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、２次元電気泳動パターンを分析した。さらにＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＴＯＦ  ＭＳによって質量分析を行った。
２．ＨＰＬＣを使用して、山口喜久二養蜂によって採乳された原乳ローヤルゼリーおよび山口喜久二養蜂ではない方法（非山口喜久二養蜂）によって採乳された市販の原乳ローヤルゼリー（アスケン株式会社、株式会社ウェルネスジャパン、ミナミヘルシーフーズ株式会社、株式会社サクラ印はちみつ、森川健康堂株式会社、株式会社山田養蜂場、株式会社神州及び松本等の１２社の製品）の可溶性タンパクを比較検討した。
【００２９】
実験結果
１．人工王台から経時的に採取したローヤルゼリーの可溶性タンパクはゲルろ過によって普遍的に５つのピークが検出された。特にピーク２は、Major Royal Jelly Protein 1 (アピシン)単独のピークであると同定された。
【００３０】
２．ピーク２（アピシン）はＨＰＬＣによってその量をｍＡＵとして定量的に示すことが可能であるが、人工王台の中で成長する幼虫がアピシンを特異的に消費していることが明らかとなった。消費すなわちアピシン減少パターンは時間的に変動があるが、その時間的推移は一定であり、２４時間から４０時間までの間に一回目の大きな減少、次に４０時間から５２時間までの間に２回目の大きな減少、次に５２時間から６８時間までの３回目の大きな減少、最後に６８時間から７２時間までの大きな減少が認められた。従って、王台中のローヤルゼリーのアピシンル量は移虫後２４時間、４０時間、５２時間、６８時間目に豊富に存在する一方、それ以外の時間帯では幼虫によって急速に消費されていることが明らかとなった。
【００３１】
３．７２時間齢を移虫した王台中のローヤルゼリーに含まれるアピシン量を４８時間齢を移虫した場合と比較した結果、アピシン含有量は４８時間齢に比べて半分以下で有意に低値であった。
【００３２】
４  製品化されたローヤルゼリーの原乳ローヤルゼリー中のアピシン含有量を山口喜久二養蜂と非山口喜久二養蜂において比較した結果、山口喜久二養蜂による原乳（５ロット）では平均１８２８ｍＡＵ（１５４３〜２００６ｍＡＵ）であるのに対し、非山口喜久二養蜂における原乳（１２ロット）では平均４２８ｍＡＵ（２７〜１２２５ｍＡＵ）と有意に低値であった。また、ローヤルゼリー品質保証の一つであるアピシン含有量／可溶性タンパク総量比でも比較した結果、山口喜久二養蜂では平均１５８（１３４〜１７３）であったが、非山口喜久二養蜂では平均４０（２.５〜１１４）と有意に低値であった。
また、ＩＱＲについても、山口喜久二養蜂では１．５１１であったが、非山口喜久二養蜂では０．１２４〜１．２０３と有意に低値であった。
【産業上の利用可能性】
【００３３】
本発明のローヤルゼリーの製造方法は、高品質のローヤルゼリーの製造のために有用である。