(57)【要約】      （修正有）【課題】水素生産微生物のスクリーニング方法の提供。【解決手段】微生物を含む試料を、金属ナノ粒子、アゾ化合物、イミン化合物、及びキノン化合物から選ばれる少なくとも１種の色素、及び微生物が利用可能な基質を含有する培地に接種して培養し、アゾ化合物、イミン化合物、及びキノン化合物から選ばれる少なくとも１種の色素の脱色の有無を指標として水素生産微生物を選択することを特徴とする、水素生産微生物のスクリーニング方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
微生物を含む試料を、金属ナノ粒子及び色素の存在下で培養し、色素の脱色の有無を指標として水素生産微生物を選択することを特徴とする、水素生産微生物のスクリーニング方法。
【請求項２】
培養は、微生物が利用可能な基質をさらに含有する条件下で行なわれるものである請求項１に記載の方法。
【請求項３】
微生物を含む試料を、金属ナノ粒子及び色素の存在下で培養し、色素の脱色の有無を指標として水素生産微生物を検出することを特徴とする、水素生産微生物の検出方法。
【請求項４】
培養は、微生物が利用可能な基質をさらに含有する条件下で行なわれるものである請求項３に記載の方法。
【請求項５】
色素がアゾ化合物、イミン化合物及びキノン化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種である請求項１〜４のいずれか1項に記載の方法。
【請求項６】
基質濃度を減少させても色素を脱色し得る量の水素を生産することができる微生物を選択することを特徴とする請求項２又は４に記載の方法。
【請求項７】
色素濃度を増加させても色素を脱色し得る量の水素を生産することができる微生物を選択することを特徴とする請求項１〜４のいずれか1項に記載の方法。
【請求項８】
金属ナノ粒子濃度を減少させても色素を脱色し得る量の水素を生産することができる微生物を選択することを特徴とする請求項１〜４のいずれか1項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、金属ナノ粒子を用いて高効率で水素を生産することができる微生物を検出する方法及びスクリーニングする方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
自然界に生息する多くの微生物は、水素を生産することが知られている。一般に、水素生産菌のスクリーニングは、そのスクリーニング源から発生したガスを捕集し、ガス中の水素濃度をガスクロマトグラフィー等によって測定し、水素発生量が最も多いものについて調べるという手法を採用している。しかしながら、この手法では発生したガスの測定が必要である点で手間がかかり、スクリーニングにとって最も重要と考えられる多くの検体を調べるという作業は極めて困難である。
【０００３】
上記スクリーニング法に代わる手法として、Katsudaらの方法が知られている（化学工学シンポジウムシリーズ No. 57, 81-85 (1997)：非特許文献１）。この方法は、発生した水素による色素の還元を水素化触媒であるスルホン化により可溶化したウィルキンソン触媒により行なうというものであり、水素による色素の還元作用（脱色）によって、水素発生の有無を視覚的に判別することができる。従って、色素の脱色原理をスクリーニングに適用することは、スクリーニング効率を高めるための理想的な手段となる。
【０００４】
しかしながら、ウィルキンソン触媒は、水素化能が十分でないため、色素の脱色まで2日以上の時間を要する。また、Katsudaらの手法は感度が低いため、水素発生量に極端な差がなければ脱色の程度に差を出すことが困難である。従って、Katsudaらの手法をスクリーニングに利用することは事実上困難である。
【非特許文献１】Katsuda et al., 化学工学シンポジウムシリーズ No. 57, 81-85 (1997)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、水素生産微生物をスクリーニングする方法又は検出する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、上記課題を解決するため鋭意研究を行った結果、微生物が含まれる試料を、金属ナノ粒子及び色素を含有する培地（好ましくは、微生物が利用可能な基質を含む培地）で培養することにより、色素の脱色を指標として高効率で水素を生産する微生物を検出及びスクリーニングし得ることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、微生物を含む試料を、金属ナノ粒子及び色素の存在下で培養し、色素の脱色の有無を指標として水素生産微生物を選択することを特徴とする、水素生産微生物のスクリーニング方法である。
【０００８】
また、本発明は、微生物を含む試料を、金属ナノ粒子及び色素の存在下で培養し、色素の脱色の有無を指標として水素生産微生物を検出することを特徴とする、水素生産微生物の検出方法である。
本発明の方法において、色素としてはアゾ化合物、イミン化合物、キノン化合物などを使用することができる。
【０００９】
また、本発明において、培養は微生物が利用可能な基質を含有する条件下で行なうものであることが好ましい。
さらに、本発明においては、被験試料に含まれる微生物のうち、以下(a)〜(c)の条件の少なくとも１つの条件を変更させることで、水素収率の高い菌株を選択することが可能となる。
(a) 金属ナノ粒子濃度を減少させる
(b) 色素濃度を増加させる
(c) 基質濃度を減少させる
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、水素生産微生物のスクリーニング方法が提供される。本発明の方法は、水素化触媒に金属ナノ粒子を用いることで水素化速度を著しく速め、例えば1時間以内に色素の脱色反応を終了させることができる。その結果、水素を生産しないにもかかわらず色素を分解してしまう様々な微生物が混在するサンプルであっても、色素の脱色を指標として効率よく水素を生産する微生物を識別することができ、これにより水素を高効率で生産する微生物をスクリーニングすることができるようになった。
【００１１】
また、微生物が利用する基質の濃度、金属ナノ粒子の濃度、あるいは色素の濃度を調整することで、一定収率以上の水素が発生した場合のみ、脱色が起こるような工夫を施したため、水素生産菌のスクリーニングへの適用が可能となった。
以下、本発明を詳細に説明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の方法は、金属ナノ粒子及び色素の存在下で微生物含有試料を培養し、微生物が生産する水素によって色素が脱色されることを利用するものであり、この脱色の有無を観察又は検出することを特徴とする。本発明の好ましい態様において、上記培養は、金属ナノ粒子及び色素を含有する培地が用いられる。例えば、微生物含有試料を金属ナノ粒子及び色素を含有する培地に接種して培養する。その際、微生物が利用可能な基質を培地に含有させる条件にすることが好ましい。
【００１３】
１．微生物含有試料
本発明においてスクリーニングの対象となる微生物としては、各種微生物を例示することができ、また、土壌などから任意の方法で分離した微生物などを用いることができる。
スクリーニングの対象となる微生物の種類は特に限定されるものではなく、真菌、細菌、藍細菌、アーキバクテリアなどを挙げることができる。真菌の分類に属する微生物としては、例えばカンジダ(Candida)属、ピキア(Pichia)属などに属する微生物が挙げられ、細菌の分類に属する微生物としては、例えばクレブシエラ(Klebsiella)属、エンテロバクター(Enterobacter)属、エシェリキア(Escherichia)属、シゲラ(Shigella)属、セラチア(Serratia)属、クロストリジウム(Clostridium)属などに属する微生物が挙げられ、藍細菌の分類に属する微生物としては、例えばアナベナ(Anabaena)属、ミクロキスチス(Microcystis)属などに属する微生物が挙げられ、アーキバクテリアの分類に属する微生物としては、例えばサーモコッカス(Thermococcus)属、スルフォロバス(Sulforobus)属に属する微生物などが挙げられる。上記微生物は、好気性細菌であると嫌気性細菌であるとを問わない。また、微生物の採取源も限定されるものではなく、土壌、河川水、温泉、湖水、海水、一般家庭排水、工業排水、あるいは、植物、昆虫、動物の排泄物などあらゆる資源を使用することができる。
【００１４】
本発明の方法における微生物の培養には、固形培地又は液体培地のいずれを用いてもよい。それぞれの培地には、必要に応じて、微生物の生育や生存に必要な各種の栄養分、例えば、炭素源、窒素源、無機塩類などを添加して用いることができる。
炭素源としては、微生物の生育に利用され得るものであれば特に制限はされないが、例えば、グルコースなどを用いることができる。窒素源や無機塩類なども、微生物の生育や生存に悪影響を及ぼすものでない限り、特に制限なく使用することができる。
【００１５】
本発明においては、単離された微生物（例えば市販品）の中から水素を生産する微生物をスクリーニングすることが可能であるが、土壌などの自然界のスクリーニング源からスクリーニングすることも可能である。土壌などの自然界のスクリーニング源には無数の微生物が混合されているため、まず、多くの菌が混在している状態で脱色の有無を調べ、次に、脱色の強いサンプルを個々の菌に分離し、各々について脱色の強弱を調べる手法を採用することができる。
【００１６】
２．金属ナノ粒子
(1) 種類及び形態
本発明において、金属ナノ粒子とは、ナノサイズの金属微粒子を意味し、水素化触媒、自動車排ガス浄化触媒、燃焼触媒、水和化反応の触媒などに利用される。その形状は限定されるものではないが、球状であることが好ましい。
【００１７】
上記金属微粒子の金属種としては、チタン(Ti)、クロム(Cr)、鉄(Fe)、コバルト(Co)、ニッケル(Ni)、銅(Cu)、亜鉛(Zn)、ルテニウム(Ru)、ロジウム(Rh)、パラジウム(Pd)、銀(Ａg)、インジウム(In)、スズ(Sn)、タンタル(Ta)、タングステン(W)、オスミウム(Os)、イリジウム(Ir)、白金(Pt)、金(Au)、バリウム（Ba）、ランタン（La）、セリウム（Ce）、ジルコニウム（Zr）、モリブデン（Mo）などが挙げられ、これらの金属の１種類又は２種類以上から選ばれる金属又はその合金などを使用することができる。
【００１８】
本発明においては、イリジウム、白金、ロジウム、ルテニウム若しくはパラジウム、又はこれらの合金が好ましい。
上記金属粒子のサイズは小さければ小さいほど好ましいが、本発明においては、例えば球状の粒子の場合は直径が0.5 nm〜100 nm、好ましくは0.5 nm〜3 nmであり、金属の種類に応じて適宜設定することができる。
【００１９】
上記金属粒子は、金属の塊を機械的破砕や加熱蒸発などで微粒子化し分散（物理的方法）、または金属イオンを還元し金属原子とした後、凝集を制御（化学的方法）することにより得ることができる。あるいは市販のもの（例えば田中貴金属工業株式会社製）を使用してもよい。
【００２０】
化学的手法においては、金属ナノ粒子に高分子を結合させて金属ナノ粒子-高分子複合体を形成することにより安定化させることができる。「安定化」とは、水溶液中に金属ナノ粒子が均質に分散された状態を維持することを意味する。ナノ粒子は凝集して塊になり易いため、物理的手法で製造した場合、塩などが加わると凝集・沈殿することがある。高分子による安定化は、金属ナノ粒子の水溶液での凝集を防止し得る点で好ましい。
【００２１】
本発明で用いられる金属ナノ粒子-高分子複合体において、金属ナノ粒子を保護する作用を有する高分子として、窒素原子、カルボキシル基等を含有する親水性の高分子が好ましい。含窒素高分子の具体例としては、ポリビニルピロリドン(PVP)、ポリエチレンイミン(PEI)、トリメチルアンモニウム(TMA)、ポリアニリン等が挙げられる。特に含窒素高分子は、PVPであることがさらに好ましい。また、カルボキシル基を含有するモノマーとしてアクリル酸、メタクリル酸等が挙げられ、これらの重合体、例えばポリアクリル酸(PAA)等を使用することができる。
【００２２】
上記以外の高分子の原料モノマーとしては、メタクリル酸メチル、メタクリル酸エチル、スチレン、酢酸ビニル等が挙げられる。また、各種樹脂、例えばアクリル樹脂、ポリエステル樹脂、アルキド樹脂、ウレタン樹脂、シリコーン樹脂、フッ素樹脂、エポキシ樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリ塩化ビニル樹脂、ポリビニルアルコール等を使用することも可能である。
本発明で用いられる金属ナノ粒子-高分子複合体において、金属粒子と高分子との組み合わせの好ましい態様は以下の通りである。
【００２３】
ロジウムとポリビニルピロリドン（PVP-Rh）
イリジウムとポリビニルピロリドン（PVP-Ir）
白金とポリビニルピロリドン（PVP-Pt）
ロジウムとトリメチルアンモニウム（TMA-Rh）
イリジウムとトリメチルアンモニウム（TMA-Ir）
白金とトリメチルアンモニウム（TMA-Pt）
【００２４】
(2) 各種金属と高分子との組み合わせと水素生産との関係
(2-1) 白金と高分子との関係
本発明において、例えば白金(Pt)について、PVP、TMA、PAA又はPEIとの複合体を作製し、水素検出能を検討することができる。このような組み合わせの複合体とすることにより、金属ナノ粒子の安定化という効果を得ることができる。本発明においては、PVP-Pt、TMA-Ptなどが好ましい。
上記態様において、PEIで安定化させた金属ナノ粒子の粒径は例えば3〜5nmであり、他の物質で安定化させた金属ナノ粒子の粒径は例えば2nmである。
【００２５】
(2-2) 高分子をPVPとしたときの各種金属との関係
複合体を形成する高分子としてPVPを用い、各種金属について水素産生能を検討すると、本発明において好ましく使用できる金属として以下のものが挙げられる。
Ir、Pt、Rh、Pt/Ru、Pt/Rh、Pd/Rh、Pt/Pd、Ru、Pd(直径2nm)及びPd(直径5nm)
上記金属の中でも、Ir、Pt、Rh、Pt/Rhなどが好ましい。
【００２６】
なお、「Pt/Ru」は、PtのまわりをRuが覆っている構造、すなわち外側の金属Ruが内側の金属Ptを取り囲んでいる二元系ナノ粒子の構造を示す。
コアとなる金属上に金属を覆う方法、すなわち金属ナノ粒子のコア/シェル構造を作製する方法は、例えばコア/シェル構造の金属のモル比を6:4とし、二種類の金属塩を溶かした溶液を高分子の存在下で加熱還流すればよい。この際、シェルになり易い金属となり難い金属を使用する場合において、シェルになり易い金属をコアに、シェルになり難い金属をシェルにするときは、コアとなる金属ナノ粒子を作製した後、核の表面にヒドリドを作り、シェルとなる金属イオンを反応系に入れて還元をする（犠牲水素法）ことで調製することが可能である。
【００２７】
なお、二種類の金属ナノ粒子の場合、コア/シェル構造以外にクラスター-イン-クラスター構造（大きな金属粒子の中に小さな金属粒子が分布している構造）もしくは合金構造のものを用いることができる。
【００２８】
(2-3) 物理的に作成した金属ナノ粒子
「物理的に作成した金属ナノ粒子」とは、金属塊を機械的破砕や加熱蒸発などで微粒子化し分散する方法により作成したナノ粒子を意味し、電荷を乗せてその反発で凝集を防ぐ粒子である。
本発明において好ましく利用できる金属ナノ粒子として、Pt、Ir、などを挙げることが出来る。
【００２９】
(2-4)まとめ
各種金属ナノ粒子について水素産生能を検討すると、本発明において使用し得る金属ナノ粒子は、例えばPVP-Rh、PVP-Ir、PVP-Pt、PVP-Rd/Rh、PVP-Pt/Ru、PVP-Pt/Pd、PVP-Pt/Rhである。
【００３０】
(3) 金属ナノ粒子の含有量
本発明において、培地に含有させる金属ナノ粒子の含有量は、金属の種類に応じて適宜設定することができる。例えば以下の含有量（濃度）を挙げることができる。
PVP-Ptの場合：5μM〜200μM、好ましくは10μM〜50μM
PVP-Rhの場合：10μM〜200μM、好ましくは30μM〜50μM
PVP-Irの場合：5μM〜200μM、好ましくは10μM〜50μM
【００３１】
３．色素
本発明において使用される色素は、培地中に含めることが可能であって水素が存在しない環境又は低水素濃度の環境では着色しているが、還元作用によって脱色され得るものをいう。このような性質を有する限り、種類は特に限定されるものではなく、アゾ化合物、イミン化合物、キノン化合物などを挙げることができる。
【００３２】
アゾ化合物としては、例えば、スーダンブラックB、メチルオレンジ、エバンスブルー、メチルレッドなどが挙げられる。
イミン化合物としては、例えば、フクシン、マラカイトグリーン、ジメチルフェノサフラニン、メチルグリーン、クリスタルバイオレット、ポアリエブルーC4B、ニュートラルレッド、メチレンブルーなどが挙げられる。
キノン化合物としては、例えばローズベンガル、フルオレセイン、エオシンYなどが挙げられる。
【００３３】
上記色素および金属ナノ粒子を加えた培地で菌が水素を発生すると、アゾ化合物ではアゾ基が水素に還元され、色が消失して培地が透明になるか、又は色が微弱になり培地がほぼ透明になる。このように色素が消失又は微弱になることを「脱色」といい、脱色の有無を検出することにより、水素生産微生物の存在を確認することができる。
培地への色素の含有割合（濃度）は以下の通りであるが、これに限定されるものではなく、当業者は、色素の種類によって至適濃度を適宜設定することができる。
【００３４】
(1) アゾ化合物
スーダンブラックBの場合：20μM〜500μM、好ましくは30μM〜200μM
エバンスブルーの場合：5μM〜300μM、好ましくは10μM〜150μM
(2) イミン化合物
ポアリエブルーC4Bの場合：30μM〜300μM、好ましくは30μM〜200μM
クリスタルバイオレットの場合：10μM〜300μM、好ましくは20μM〜200μM
(3) キノン化合物
エオシンYの場合：10μM〜400μM、好ましくは20μM〜200μM
【００３５】
４．基質
本発明において、「基質」とは、微生物が自らの体を形成するために利用可能な炭素源となり得るものをいう。このような基質は、水素生産微生物が利用可能な有機・無機化合を使用することができ、例えばグルコース、サッカロース、キシロース等の糖類、乳酸、酢酸、酪酸などの有機酸類を挙げることができる。また、炭酸カルシウム等の無機炭素などを挙げることができる。これらの炭素源の培地中への添加量は特に限定されるものではなく、適宜設定することができる。
【００３６】
培地への基質の含有割合（濃度）は、菌の種類（絶対嫌気性菌、通性嫌気性菌など）によって変わるため、当業者が適宜設定することができる。
【００３７】
５．検出及び選択
上記金属、色素及び基質を含有する培地を用いて水素生産微生物を検出又は選択するには、例えば次のようにして行うことができる。
【００３８】
微生物を含む試料を蒸留水又は生理食塩水に懸濁し、この懸濁液を蒸留水又は生理食塩水で1倍〜100倍に希釈し、試験サンプルとする。この試験サンプルの1〜50μLを、滅菌した所定の組成の培地100〜1,500μLに接種し、目的とする微生物の生育する温度、例えば100℃以下、具体的には20〜80℃で0.5〜48時間、好ましくは6〜24時間、嫌気または好気条件で静置培養する。
【００３９】
例えば、中温性の細菌をスクリーニングすることを目的とする場合は、固形培地で12〜24時間、液体培地で6〜24時間程度培養することが好ましい。培養温度は、30〜45℃、好ましくは35〜40℃である。本発明において、検出系は通常の菌の生育範囲（0℃以上100℃以下）であれば温度に影響されない。従って、生育温度は、目的とする菌の成長しやすい温度として当業者が適宜設定することができる。
【００４０】
培養後、培養液の色調の変化（脱色の有無）を観察することにより、水素が生産されたか否かを判定する。色素が脱色すれば、試験に供した微生物は、一定収率以上の水素を生産するものと判定することができる。
【００４１】
ここで、本発明の目的は、自然界において無数に存在する微生物の中から高効率で水素を生産する微生物をスクリーニングすることである。そのためには、スクリーニングされる微生物は、与えられた条件に対して水素の発生量が多いものが好ましい。すなわち、培地に含有させる金属ナノ粒子、基質の含有割合を減少させる、あるいは色素の割合を増加させることで、水素検出感度を低下させ、その条件でも水素生産を検出される微生物は、高効率で水素を生産することができるといえる。
【００４２】
そこで本発明においては、以下の(a)〜(c)の３つの条件を単独で又は適宜組み合わせて使用することにより、効率よく水素を生産する微生物を選択することとする。
(a) 金属ナノ粒子濃度を減少させる
(b) 色素濃度を増加させる
(c) 基質濃度を減少させる
以下、それぞれの条件について説明する。
【００４３】
(a)金属ナノ粒子濃度を減少させる。
触媒の量を減らせば、還元効率が低下する。それにもかかわらず水素の生産を検出される微生物は、効率のよい水素生産微生物として選択することができる。
【００４４】
「金属ナノ粒子濃度を減少させる」とは、上記2項において説明した金属ナノ粒子の試験サンプル中における含有量（濃度）を減らすことをいう。金属ナノ粒子の濃度を減少させる前の試験系と濃度を減少させた後の試験系を比較して、濃度を減少させた後でも色素を脱色することができる微生物、すなわち水素を多く生産することができる微生物を選択する。金属ナノ粒子濃度を減少させる前の試験系には、対照として標準菌株を使用することができる。標準菌株が脱色しないレベルまで金属ナノ粒子濃度を減少させた場合においても、脱色の認められる菌株は、標準菌株よりも水素収率が高い菌株として選別できる。「標準菌株」とは、スクリーニングに利用する菌株と同じ基質を利用し、水素収率を把握している菌株を意味する。
【００４５】
(b) 色素濃度を増加させる。
色素は、水素の発生にともなってその発色が消失する。従って、色素の量を多くすると、水素が多く発生しなければ色が消失しないこととなる。そこで本発明においては、色素の量を多くしても脱色させることができる量の水素を生産し得る微生物を選択する。
【００４６】
「色素濃度を増加させる」とは、上記3項において説明した色素の試験サンプル中における量（濃度）を増加させることを意味する。色素濃度を増加させる前の試験系と増加させた後の試験系を比較して、濃度を増加させた後でも色素を脱色することができる微生物、すなわち水素を多く生産することができる微生物を選択する。色素濃度を増加させる前の試験系には、対照として標準菌株を使用することができる。この場合は、標準菌株が脱色し得る濃度で色素を含有させればよい。
【００４７】
(c) 基質濃度を減少させる。
基質は、微生物の水素発生（例えば資化）に供されるものである。例えば、微生物はグルコースを分解し、その一部が水素となって発生する。従って、基質濃度が減少すれば微生物が発生する水素量は低下する。そこで本発明においては、基質の量が減少しても脱色させることができる量の水素を生産し得る微生物を選択する。
【００４８】
「基質濃度を減少させる」とは、上記4項において説明した基質の試験サンプル中における量（濃度）を減少させることを意味する。基質濃度を減少させる前の試験系と減少させた後の試験系を比較して、濃度を減少させた後でも色素を脱色することができる微生物、すなわち水素を多く生産することができる微生物を選択する。基質濃度を減少させる前の試験系には対照として標準菌株を使用することができる。この場合は、標準菌株が脱色し得る濃度で基質を含有させればよい。
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。但し、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００４９】
本実施例は、水素収率による選別に分譲株を使用し、水素化能のある金属ナノ粒子としてロジウムナノ粒子コロイド、色素としてポアリエブルーC4B（イミン化合物）、基質としてグルコースを用い、基質となるグルコース濃度を8.0〜0.5g/Lまで2倍ずつ希釈して用いた、水素を発生する菌の水素収率による選別の例である。
【００５０】
具体的には、下記表1及び表2に示す組成の検出液150μlに菌体懸濁液10μlを加え、37℃で12時間培養した。なお、菌体懸濁液には、Enterobacter aerogenes NBRC No. 13534株、Enterobacter cloacae NBRC No. 13535株を用いた。
【００５１】
その結果、本実施例では、Enterobacter aerogenes NBRC No. 13534株ではグルコース濃度が1.0g/Lの溶液でも脱色が認められたのに対し、Enterobacter cloacae NBRC No. 13535株では、グルコース濃度4.0g/Lの濃度でも脱色が認められなかった。
【００５２】
表３に、これらの菌株について、グルコースからの水素収率をガスクロマトグラフィーにより測定した結果を示すが、グルコース濃度が低くても脱色が認められたEnterobacter aerogenes NBRC No. 13534株は、グルコース濃度が高い領域でしか脱色が認められなかったEnterobacter cloacae NBRC No. 13535株よりも水素収率が高かった。
以上の結果から、金属ナノ粒子と色素を組み合わせ、基質の濃度を変えることによって、水素を高い収率で生産する菌を、選別可能なことが実証された。
【表１】
2008048611.tif 000002
【００５３】
【表２】
2008048611.tif 000003
【００５４】
【表３】
2008048611.tif 000004
【００５５】
〔比較例1〕
本比較例1では、表1及び2に示した組成においてロジウムナノ粒子コロイドを除いた培地組成とした以外は、実施例と同様にEnterobacter aerogenes NBRC No. 13534株及びEnterobacter cloacae NBRC No. 13535株を培養した。
その結果、培養後には脱色は認められず、水素生産微生物をスクリーニングできないことが示された。