(57)【要約】【課題】  明確なアポＢ分泌抑制活性を有しており、なおかつ安全性の高い食品由来のアポＢ分泌抑制剤およびその製造方法を提供とすることを課題とする。【解決手段】  シソの濃度６０〜９９．９容量％エタノール水溶液による抽出物を有効成分とするアポリポプロテインＢ分泌抑制剤。好ましくは、シソの濃度６０〜９９．９容量％エタノール水溶液による抽出物を、順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した際に最初に溶出される成分であって、カラムに供した抽出物の量に対して７５重量％に達するまでに溶出されてくる画分に含有されるシソ成分を有効成分とするアポリポプロテインＢ分泌抑制剤。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シソの濃度６０〜９９．９容量％エタノール水溶液による抽出物を有効成分とするアポリポプロテインＢ分泌抑制剤。
【請求項２】
シソが、赤シソ、チリメンジソ、チリメンカタジソ、およびカタメンジソからなる群から選ばれる１種以上であることを特徴とする請求項１記載のアポリポプロテインＢ分泌抑制剤。
【請求項３】
シソの濃度６０〜９９．９容量％エタノール水溶液による抽出物を、順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した際に最初に溶出される成分であって、カラムに供した抽出物の量に対して７５重量％に達するまでに溶出されてくる画分に含有されるシソ成分。
【請求項４】
順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーで使用される溶出溶媒がクロロホルムであることを特徴とする請求項３記載のシソ成分。
【請求項５】
シソの濃度６０〜９９．９容量％エタノール水溶液による抽出物に含有される成分であって、シリカゲル薄層クロマトグラフィーを使用し、クロロホルム−メタノール（容量比１９：１）で展開したときのＲｆ値が０．１８〜１．０の範囲となるシソ成分。
【請求項６】
シソが、赤シソ、チリメンジソ、チリメンカタジソ、およびカタメンジソからなる群から選ばれる１種以上であることを特徴とする請求項３〜５いずれか１項記載のシソ成分。
【請求項７】
請求項３〜６いずれか１項記載のシソ成分を、有効成分として含有するアポリポプロテインＢ分泌抑制剤。
【請求項８】
請求項１、２または７記載のアポリポプロテインＢ分泌抑制剤を含有するＶＬＤＬおよび／またはカイロミクロン分泌抑制剤。
【請求項９】
医薬用または動物薬用である請求項１、２、７または８記載の分泌抑制剤。
【請求項１０】
飲食用である請求項１、２、７または８記載の分泌抑制剤。
【請求項１１】
医薬部外品用である請求項１、２、７または８記載の分泌抑制剤。
【請求項１２】
シソを、濃度６０〜９９．９容量％エタノール水溶液で抽出することを特徴とするアポリポプロテインＢ分泌抑制剤の製造方法。
【請求項１３】
シソを、濃度６０〜９９．９容量％エタノール水溶液で抽出し、得られた抽出物を、順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、水、有機溶媒またはそれらの混合液によって溶出し、最初に溶出される画分のうち、カラムに供した抽出物の量の７５重量％に達するまでの画分を分取することを特徴とするアポリポプロテインＢ分泌抑制剤の製造方法。
【請求項１４】
溶出溶媒としてクロロホルムを使用する請求項１３記載のアポリポプロテインＢ分泌抑制剤の製造方法。
【請求項１５】
シソが、赤シソ、チリメンジソ、チリメンカタジソ、およびカタメンジソからなる群から選ばれる１種以上であることを特徴とする請求項１２〜１４いずれか１項記載のアポリポプロテインＢ分泌抑制剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アポリポプロテインＢの分泌を抑制することを特徴とするシソ抽出物あるいはシソ成分、および、その製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
アポリポプロテインは、リポタンパクを構成する血漿タンパク質であり、脂質を血液中に可溶化して各臓器へ運搬する機能を有している。アポリポプロテインにはアポリポプロテインＡ、アポリポプロテインＢ、アポリポプロテインＣなどがあり、そのうちアポＢ（以下、アポＢと略称する）は、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、カイロミクロンといったリポタンパクの主要な構成タンパク質である。ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、カイロミクロンといったリポタンパクには、１粒子あたり１分子のアポＢが含まれ、リポタンパク粒子の構造維持あるいはＬＤＬ受容体と結合に重要な機能を果たしている（非特許文献１）。
【０００３】
また、肝臓または小腸のミクロソーム画分の内腔に存在するＭＴＰ（ミクロソームトリグリセリド転送タンパク質；microsomal triglyceride transfer protein）がアポＢにトリグリセリド（ＴＧ）やコレステロールエステル（ＣＥ）を組み込むことによって、ＶＬＤＬおよびカイロミクロンが形成され、血液中に分泌される（非特許文献２）。
【０００４】
従って、アポＢ分泌が抑制されると、ＶＬＤＬやカイロミクロンの形成・分泌が抑制されることから、アポＢ分泌抑制剤は、血中の中性脂肪を低減し、動脈硬化を予防する効果が期待できる。
【０００５】
共役トリエン酸系脂肪酸、その塩、その誘導体が、α−リノレン酸と比較してアポＢの分泌を阻害する作用を有していることが開示されている（特許文献１）。しかし、実際には、共役トリエン酸系脂肪酸がα−リノレン酸を添加した時と比較してアポＢ分泌が抑制されたというだけであり、活性の面で充分満足といえる結果が得られていない。また、ＣＰ−３４６０８６といったＭＴＰ阻害剤の投与によってアポＢの分泌が抑制されるが、肝細胞内に脂質を蓄積させるといった副作用も報告されている（非特許文献３）。このため、明確なアポＢ分泌抑制活性を有しており、なおかつ安全性の高いアポＢ分泌抑制剤の開発が望まれていた。
【０００６】
シソはシソ科シソ属の植物であり、赤シソ、青ジソ、チリメンジソ、チリメンカタジソ、カタメンジソなどの品種が存在し、薬味、天ぷら、シソ巻き、菓子原料として広く用いられている。また、防腐、抗菌、解毒、健胃、解熱、鎮静、咳止め、発汗、利尿、整腸作用など様々な効能があることが知られており、古くから民間薬としてだけでなく、半夏厚朴湯、香蘇散など漢方薬の主剤の１つとして用いられている（非特許文献４）。また、シソの抽出物がα−グルコシダーゼ阻害活性を有していること（特許文献２）、および、シソの熱水抽出物が抗アレルギー作用を有していること（特許文献３）が知られている。シソを細断後直ちに、−１９〜５℃でアルコール性溶媒を用いて抽出し、溶媒除去することを特徴とするシソエキスの製造方法が開示されている（特許文献４）。さらに、ロスマリンを高含有するエキスを得るための方法として、シソを酸性条件下で抽出する方法が開示されている（特許文献５）。
【特許文献１】特開２００２−２６５９８５
【特許文献２】特開２０００−１０２３８３
【特許文献３】特許第３０７１６６９号
【特許文献４】特開２００４−９７１０８
【特許文献５】ＷＯ２００２／０６２３６５
【非特許文献１】日本臨牀、２００１年、５９巻  増刊号２、１０９−１１３頁
【非特許文献２】日本臨牀、２００１年、５９巻  増刊号２、２２６−２３５頁
【非特許文献３】Journal of Lipid Research Volume 44, 2003, 1887-1901
【非特許文献４】月刊フードケミカル、２０００年、７巻、３７−４２頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記を鑑み、明確なアポＢ分泌抑制活性を有しており、なおかつ安全性の高い、食品由来のアポＢ分泌抑制剤およびその製造方法を提供とすることを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記実情に鑑み鋭意研究を行った結果、シソを濃度６０〜９９．５容量％エタノール水溶液で抽出して得られる抽出物が、アポＢ分泌抑制活性を有していることを見いだした。
【０００９】
すなわち本発明が提供するのは以下の通りである。
（１）  シソの濃度６０〜９９．９容量％エタノール水溶液による抽出物を有効成分とするアポリポプロテインＢ分泌抑制剤。
（２）  シソが、赤シソ、チリメンジソ、チリメンカタジソ、およびカタメンジソからなる群から選ばれる１種以上であることを特徴とする（１）のアポリポプロテインＢ分泌抑制剤。
（３）  シソの濃度６０〜９９．９容量％エタノール水溶液による抽出物を、順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した際に最初に溶出される成分であって、カラムに供した抽出物の量に対して７５重量％に達するまでに溶出されてくる画分に含有されるシソ成分。
（４）  順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーで使用される溶出溶媒がクロロホルムであることを特徴とする（３）のシソ成分。
（５）  シソの濃度６０〜９９．９容量％エタノール水溶液による抽出物に含有される成分であって、シリカゲル薄層クロマトグラフィーを使用し、クロロホルム−メタノール（容量比１９：１）で展開したときのＲｆ値が０．１８〜１．０の範囲となるシソ成分。
（６）  シソが、赤シソ、チリメンジソ、チリメンカタジソ、およびカタメンジソからなる群から選ばれる１種以上であることを特徴とする（３）〜（５）いずれかのシソ成分。
（７）  （３）〜（６）いずれかのシソ成分を、有効成分として含有するアポリポプロテインＢ分泌抑制剤。
（８）  （１）、（２）または（７）のアポリポプロテインＢ分泌抑制剤を含有するＶＬＤＬおよび／またはカイロミクロン分泌抑制剤。
（９）  医薬用または動物薬用である（１）、（２）、（７）または（８）の分泌抑制剤。
（１０）  飲食用である（１）、（２）、（７）または（８）の分泌抑制剤。
（１１）  医薬部外品用である（１）、（２）、（７）または（８）の分泌抑制剤。
（１２）  シソを、濃度６０〜９９．９容量％エタノール水溶液で抽出することを特徴とするアポリポプロテインＢ分泌抑制剤の製造方法。
（１３）  シソを、濃度６０〜９９．９容量％エタノール水溶液で抽出し、得られた抽出物を、順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、水、有機溶媒またはそれらの混合液によって溶出し、最初に溶出される画分のうち、カラムに供した抽出物の量の７５重量％に達するまでの画分を分取することを特徴とするアポリポプロテインＢ分泌抑制剤の製造方法。
（１４）  溶出溶媒としてクロロホルムを使用する（１３）のアポリポプロテインＢ分泌抑制剤の製造方法。
（１５）  シソが、赤シソ、チリメンジソ、チリメンカタジソ、およびカタメンジソからなる群から選ばれる１種以上であることを特徴とする（１２）〜（１４）いずれかのアポリポプロテインＢ分泌抑制剤の製造方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明は、シソの濃度６０〜９９．９容量％エタノール水溶液による抽出物を有効成分とするアポＢ分泌抑制剤を提供する。本発明のアポＢ分泌抑制剤は、明確なアポＢ分泌抑制活性を有しており、安全性の高い食品由来のアポＢ分泌抑制剤である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下に、本発明の実施の形態を詳しく説明する。
【００１２】
本発明のアポＢ分泌抑制剤は、シソを濃度６０〜９９．９容量％エタノール水溶液で抽出することによって得られる抽出物を有効成分とするもので、アポＢ分泌を抑制する作用を有する。
【００１３】
上記アポＢ分泌抑制作用とは、肝細胞および小腸細胞からのアポＢの分泌を抑制する作用を有する組成物である。本発明のアポＢ分泌抑制剤は、アポＢの分泌抑制作用を有するために、ＶＬＤＬやカイロミクロンの分泌を阻害することが期待される。
【００１４】
本発明において用いられるシソは、シソ科シソ属（Perilla frutescens）の植物であれば特に限定されない。具体的には、赤シソ（Perilla frutescens Britton var. acuta Kudo ）、青ジソ（Perilla frutescens Britton var. acuta Kudo forma viridis Makino）、チリメンジソ（Perilla frutescens Britton var. crispa Decaisne forma crispa Makino）、チリメンカタジソ（Perilla frutescens Britton var. crispa Decaisne forma crispi-discolor Makino）、カタメンジソなどが挙げられるが、本発明においては、赤シソ、チリメンジソ、チリメンカタジソ、カタメンジソがより好ましい。上記シソは単独で、あるいは２種以上を組み合わせて用いることもできる。また、シソ抽出物を得るために用いる植物部位は、特に限定されないが、本発明においては葉が好ましい。上記シソの形態は、原型、ブレンダー等により粉砕したもの、切断したもの又は粉末のいずれを用いてもよい。また、本発明におけるシソは、乾燥物の状態で用いられることが好ましく、該シソ乾燥物は水分含量２５％以下のものがより好ましく、水分含量１５％以下のものがさらに好ましく、水分含量８％以下が最も好ましい。水分含量が多いシソ乾燥物では、原料の保管の際に腐敗する可能性があり、また、抽出時に原料のシソ中の水分が溶媒へ移行して抽出溶媒のエタノール濃度が低下し、得られる抽出物のアポＢ分泌抑制作用が低下することがある。
【００１５】
本発明のアポＢ分泌抑制剤は、上記シソを、濃度６０〜９９．９容量％のエタノール水溶液で抽出することによって得られる抽出物を有効成分とする。該抽出物を得る方法は特に限定されないが、例えば、上記のシソを抽出溶媒に浸し、常圧下で攪拌又は放置し、静置分離、濾過又は遠心分離などを行うことにより、得ることができる。本発明で用いられる抽出溶媒は、濃度６０〜９９．９容量％のエタノール水溶液である必要がある。６０容量％未満のエタノール水溶液で得られる抽出物では、十分なアポＢ分泌抑制作用を示さない。アポＢ分泌抑制作用の点において、抽出溶媒のエタノール濃度の上限は特に限定されないが、実用的観点から、その上限としては９９．９容量％が妥当である。アポＢ分泌抑制作用の点において、エタノール濃度は７０容量％以上であるのが好ましい。また、抽出温度は、一般に−２０〜１００℃、普通１〜９０℃、好ましくは１〜７０℃で実施できる。抽出時間は、普通０．１時間〜１ヶ月、好ましくは０．５時間〜７日間で実施できる。また、抽出溶媒量はシソ重量に対して１倍重量以上５０倍重量以下が好ましく、３倍重量以上２０倍重量以下がより好ましい。１倍重量未満ではシソが充分に溶媒に浸らず抽出物の回収率が低くなり、５０倍重量以上では抽出に用いる抽出タンク等の容器が大きくなり、溶媒除去に必要となるエネルギーが極めて大きく製造コストが高くなる傾向がある。
【００１６】
本発明において、シソ抽出物の形態は、抽出液の形態でもよいし、溶媒を除去したものでもよい。さらに、他の適切な溶媒に溶解、懸濁した形態であってもよい。また、これらのシソ抽出物には、アポＢ分泌抑制剤として、その活性を失わない範囲内で、脱臭、精製などの操作を加えることができる。さらに、当該シソ抽出物は、飲食品や医薬品として不適当な不純物を含有しない限り、抽出液のまま、又は粗抽出物あるいは半精製抽出物として本発明に使用できる。
【００１７】
さらに、得られた抽出物から、アポＢ分泌抑制活性を有している画分をクロマトグラフィーなどによって濃縮・精製することも可能である。
【００１８】
上記クロマトグラフィーに用いる担体としては、特に限定されない。具体的には、シリカゲルカラムが好ましく使用できるが、順相シリカゲルカラムがより好ましい。カラムのサイズは、特に限定されないが、カラムに供される抽出物とカラム樹脂量の容量比が、１：１ 〜１：３００ 、好ましくは、１：２〜１：１５０の範囲内となるように適宜選択することができる。該カラムに、上記得られたシソ抽出物を吸着後、溶媒によって溶出されるフラクションのうち、アポＢ分泌抑制活性を有している画分を分取し、濃縮することでより純度の高いアポＢ分泌抑制剤を得ることが出来る。溶出溶媒としては、特に限定されず、順層シリカゲルカラムクロマトグラフィーの場合、水、有機溶媒またはそれらの混液が用いられるが、クロロホルム、または、クロロホルムとメタノールの混合溶媒が好ましく、クロロホルムがより好ましい。用いる溶出溶媒の量は、特に限定されず、目的とする画分が得られる量を使用すればよい。順層シリカゲルカラムクロマトグラフィーの場合、アポＢ分泌抑制活性を有している画分は、最初に溶出されてくる。具体的には、カラムより溶出されてきたフラクションに含まれる成分の重量（すなわち、フラクションより溶出溶媒を除去して得られる成分の重量）が、カラムに供した抽出物の量に対して、７５重量％に達するまでに溶出されてくる画分に、アポＢ分泌抑制活性が認められるので、該画分を分取するのが好ましい。これら分取において、カラムより溶出される最初のフラクションから、カラムに供した抽出物の量に対して７５重量％に達するまでに溶出されてくる画分の全量を分取しても良いし、その一部でも良い。また該フラクション以外の画分が若干（例えば５重量％程度）混入していても良い。これら画分（シソの濃度６０〜９９．９容量％エタノール水溶液による抽出物を、順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した際に最初に溶出される成分であって、カラムに供した抽出物の量に対して７５重量％に達するまでに溶出されてくる画分）に含有されるシソ成分は、アポＢ分泌抑制剤以外の用途、例えば、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体リガンド剤、血中中性脂肪上昇抑制剤、リパーゼ阻害剤、血糖値上昇抑制剤などにも好適に使用することができる。
【００１９】
上記クロマトグラフィーによって精製されたアポＢ分泌抑制剤は、シリカゲル薄層クロマトグラフィーを使用し、クロロホルム−メタノール（容量比１９：１）で展開したときのＲｆ値が０．１８〜１．０の範囲となるシソ成分を含有している。従って、他の精製方法を用いて、Ｒｆ値が上記範囲にあるシソ成分を濃縮しても構わない。
【００２０】
アポＢ分泌抑制作用は、被験物質を哺乳動物に投与或いは摂取させる方法、或いは培養肝細胞に被験物質を作用させる事により評価可能であるが、培養肝細胞を用いた方法が、感度、再現性、簡便性において優れており、通常この方法が用いられる。培養肝細胞を用いる方法の場合、例えば、予めヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）を２４穴プレート中に植え込み２４時間培養し、更に被験物質を含む１％牛血清アルブミン含有ＤＭＥＭ培地に交換し２４時間培養を行った後、培養液を採取し、培養液中に含有されるアポＢをサンドイッチ法ＥＬＩＳＡ（エンザイムリンクドイムノソーベントアッセイ）により定量することができる（T.Yanagita et.al., Current Therapeutic Reserch., 60(8), 423,1999）。またアポＢの抗体を用いてウエスタンブロッティング法で定量することも可能である。この評価系において、溶媒対照と比較して統計的有意差をもってアポＢの分泌量が減少したサンプルを「アポＢ分泌抑制活性あり」と判定する。
【００２１】
本発明のアポＢ分泌抑制剤は、ＶＬＤＬ分泌抑制剤および／またはカイロミクロン分泌抑制剤としても使用できる。本発明のアポＢ分泌抑制剤、ＶＬＤＬ分泌抑制剤および／またはカイロミクロン分泌抑制剤（以降、「分泌抑制剤」と総称する）は、これを含有する組成物とすることで、医薬用、動物薬用、飲食用、医薬部外品用として利用することができる。飲食用としては、例えば、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）、健康食品、栄養補助食品なども含まれるし、医薬用としてはOTCなども含まれる。
【００２２】
上記組成物における、本発明の分泌抑制剤の含有量は、特に限定されないが、シソ抽出物の量として、組成物重量に対し好ましくは０．００１〜１００重量％、より好ましくは０．０１〜９９．９９９重量％、さらに好ましくは０．１〜９９．９重量％、特に好ましくは１０〜９０重量％の範囲である。
【００２３】
本発明のアポＢ分泌抑制剤や、これを含有する組成物は、そのまま直接摂取することもできるし、また、公知の担体や助剤などの添加剤を使用して、カプセル剤、錠剤、顆粒剤など服用しやすい形態に成型して摂取することもできる。また、栄養強化を目的として、ビタミンA、C、D、Eなどの各種ビタミン類を添加、併用して用いることもできる。さらに、飲食物材料に混合して、チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ビスケット、クラッカーなどの菓子類；アイスクリーム、氷菓などの冷菓類；茶、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンクなどの飲料；うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類；蒲鉾、竹輪、はんぺんなどの練り製品；ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料；マーガリン、バター、サラダ油などの油脂類；パン、ハム、スープ、レトルト食品、冷凍食品など、すべての飲食物に使用することができる。これら飲食用の組成物を摂取する場合、その摂取量は有効成分であるシソ抽出物の量に換算して成人一人一日当たり、好ましくは０．０１〜１０００mg／kg体重、より好ましくは１〜３００mg／kg体重である。
【００２４】
医薬品として用いる場合は、その剤形は特に限定されず、例えば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、注射剤、座薬、貼付剤などが挙げられる。製剤化においては、薬剤学的に許容される他の製剤素材、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などを適宜添加して調製することができる。これら製剤の投与量としては、シソ抽出物の量に換算して、成人一人一日当たり、好ましくは０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を１回ないし数回に分けて投与する。
【００２５】
医薬部外品として用いる場合は、必要に応じて他の添加剤などを添加して、例えば、軟膏、リニメント剤、エアゾール剤、クリーム、石鹸、洗顔料、全身洗浄料、化粧水、ローション、入浴剤などに使用することができ、局所的に用いることができる。
【実施例】
【００２６】
以下、実施例により本発明を更に詳しく説明するが、本発明はかかる実施例に限定されるものではない。
【００２７】
（実施例１）＜シソ９９．５％エタノール抽出物の製造＞
チリメンカタジソ（新和物産株式会社より購入）２０００ｇを、９９．５容量％エタノール水溶液５Ｌに浸し、常圧下、４５℃にて６時間、抽出した後、濾過により抽出液を得た。その抽出液を減圧濃縮して溶媒を除去し、半固形状のシソ抽出物１３１．２ｇを得た。
【００２８】
（実施例２）＜シソ７０％エタノール抽出物の製造＞
チリメンカタジソ（新和物産株式会社より購入）１０００ｇを、７０容量％エタノール水溶液５Ｌに浸し、常圧下、４５℃にて６時間、抽出した後、濾過により抽出液を得た。その抽出液を減圧濃縮して溶媒を除去し、粉末状のシソ７０％エタノール抽出物９３．０ｇを得た。
【００２９】
（比較例１）＜シソ５０％エタノール抽出物の製造＞
チリメンカタジソ（新和物産株式会社より購入）１０００ｇを、５０容量％エタノール水溶液５Ｌに浸し、常圧下、４５℃にて６時間、抽出した後、濾過により抽出液を得た。その抽出液を減圧濃縮して溶媒を除去し、粉末状のシソ５０％エタノール抽出物８５．０ｇを得た。
【００３０】
（実施例３）＜アポＢ分泌抑制活性の測定＞
Hep-G2細胞（ヒト肝癌由来培養細胞）を２４穴培養プレートに１×１０6cells/wellとなるように植え込み、３７℃、５％CO2条件下で２４時間培養した。培地には、１０％FBS（ウシ胎児血清）、１０ｍL／Lペニシリン・ストレプトマイシン溶液（それぞれ５０００IU/mL、５０００μg/mL、Invitrogen社）、３７mg/Lアスコルビン酸（和光純薬工業株式会社）を含むDMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium、Invitrogen社）を用いた。被検物質を含む１％ウシ血清アルブミン（Sigma社）含有DMEMに交換し、２４時間培養した。溶媒対照（コントロール）としてDMSOを用い、0.1%となるように添加した。コントロールおよび被検物質で処理した際に培地中の分泌されたアポＢ量は、ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（CaldioCHEK社）にて測定した。コントロールのアポＢ分泌量を１００％として被検物質のアポＢ分泌量を算出した。
【００３１】
それぞれ、実施例１、２で得られたシソ９９．５％エタノール抽出物、シソ７０％エタノール抽出物、比較例１で得られたシソ５０％エタノール抽出物（いずれも５０μg/mL）で処理した際のアポＢ分泌量を表１に示す。
【００３２】
【表１】
2008100928.tif 000002
表１から明らかなように、実施例１および２で得られたシソ９９．５％エタノール抽出物およびシソ７０％エタノール抽出物は有意なアポＢ分泌抑制活性を示した。
【００３３】
しかしながら、比較例１で得られたシソ５０％エタノール抽出物はアポＢ分泌抑制活性を示さなかった。
【００３４】
（実施例４）＜細胞内ＴＧへの影響＞
Hep-G2細胞（ヒト肝癌由来培養細胞）を１２穴培養プレートに２×１０6cells/wellとなるように植え込み、３７℃、５％CO2条件下で２４時間培養した。培地には、１０％FBS（ウシ胎児血清）、１０ｍL／Lペニシリン・ストレプトマイシン溶液（それぞれ５０００IU/mL、５０００μg/mL、Invitrogen社）、３７mg/Lアスコルビン酸（和光純薬工業株式会社）を含むDMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium、Invitrogen社）を用いた。被検物質を含む培地に交換し（N=3）、２４時間培養した。溶媒対照（コントロール）としてDMSOを用い、0.1%となるように添加した。コントロールおよび被検物質で処理した後、リン酸緩衝食塩水で２度洗浄し、ヘキサン−メタノール混液（３：２）を用いて細胞内脂質を抽出した。抽出液は試験管濃縮機で溶媒を除去し、得られた脂質をTritonX-100に再溶解し、トリグリセライド量を測定した。また、このときの細胞を０．１ＮのＮａＯＨで処理することによって、細胞を回収し、Ｌｏｗｒｙ法によってタンパク量を求めた。細胞内のトリグリセライド量は、各細胞のタンパク量で補正を行い、コントロールの細胞内トリグリセライド量を１００％として被検物質の細胞内トリグリセライド量を算出した。
った。
【００３５】
実施例１で得られたシソ９９．５％エタノール抽出物（５０μg/mL）で処理した際の細胞内トリグリセライド量を表２に示す。
【００３６】
【表２】
2008100928.tif 000003
表２から明らかなように、実施例１で得られたシソ抽出物は細胞内のトリグリセライド量に影響を及ぼさなかった。このことから、シソ抽出物は従来のＭＴＰ阻害剤とは異なり、肝細胞に脂質の蓄積を引き起こすことなく、安全であると考えられる。
【００３７】
（実施例５）＜シソ抽出物の分画＞
実施例１で得られたシソ抽出物７３．１５ｇを、内径７５ｍｍ、長さ３００ｍｍの順相シリカゲルカラム（カラムクロマトグラフィー用シリカゲルBW-300（富士シリシア化学））に保持させた。その後、３００ｍＬのクロロホルムで１５回溶出を行い、それぞれ溶出液（フラクション１〜１５）を得た。次に、３００ｍＬのクロロホルム−メタノール混液（９：１）で１５回溶出を行い、それぞれ溶出液（フラクション１６〜３０）を得た。さらに、３００ｍＬのクロロホルム−メタノール混液（２：１）で１５回溶出を行い、それぞれ溶出液（フラクション３１〜４５）を得た。最後に、３００ｍＬのメタノールで１０回溶出を行い、それぞれ溶出液（フラクション４６〜５５）を得た。
【００３８】
さらに、得られた１〜５５のフラクションを、４種の展開溶媒（クロロホルム−メタノール混液（１９：１または９：１）、クロロホルム−メタノール−水混液（４０：１０：１または２０：１０：１））を用いて、それぞれＴＬＣ展開を行った。その結果、８つのＴＬＣパターンが得られたので、それぞれのパターンごとにまとめ画分１〜８とした。それぞれの画分に対応するフラクションおよび各画分の収量（溶媒留去後の重量）を表３に示す。また、画分１〜４のＴＬＣパターンの１例（展開溶媒：クロロホルム−メタノール混液（１９：１）の場合）を図１に示す。
【００３９】
【表３】
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ここで、画分１〜４の収量の合計はカラムに供した抽出物の約７５重量％である。また、画分１〜４は実質クロロホルムで溶出された画分に相当する。
【００４０】
（実施例６）＜アポＢ分泌抑制活性の測定＞
実施例３と同様の方法により、実施例５で得られた画分１〜８（それぞれ５０μg/mL）について、それぞれのアポＢ分泌抑制活性を測定した。その結果を表４に示す。
【００４１】
【表４】
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表４から明らかな様に、画分１〜４に有意なアポＢ分泌抑制活性があることが分かった。すなわち、順相シリカゲルクロマトグラフィーにおいて先ず溶出される画分であり、カラムに供した抽出物の量に対して７５重量％に達するまでに溶出されてくる画分にアポＢ分泌抑制活性があることが確認された。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】実施例５で得られた画分１〜４のＴＬＣパターンの１例（展開溶媒：クロロホルム−メタノール混液（１９：１））
【符号の説明】
【００４３】
１    画分１
２    画分２
３    画分３
４    画分４
【図１】
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