(57)【要約】【課題】  カロテノイド生産性が従来の菌株より優れた菌株およびこれを用いたカロテノイドの製造方法を提供する。【解決の手段】  海洋細菌ＴＳＮ１８Ｅ７株を変異原物質で処理することにより得られ、アスタキサンチン、リコペン、β−カロテン、β−クリプトキサンチン、３−ヒドロキシエキネノン、シス−アドニキンサンチン、カンタキサンチン、アドニルビン、ゼアキサンチンおよびアドニキサンチンからなる群より選ばれる１種又は複数種のカロテノイドを菌体内に蓄積する微生物であって、培養によりＴＳＮ１８Ｅ７株よりもカロテノイドを高収量生産する微生物およびこれを用いたカロテノイドの製造方法を用いる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
海洋細菌ＴＳＮ１８Ｅ７株（受託番号：ＦＥＲＭ  Ｐ−１９７４６）を変異原物質で処理することにより得られ、アスタキサンチン、リコペン、β−カロテン、β−クリプトキサンチン、３−ヒドロキシエキネノン、シス−アドニキンサンチン、カンタキサンチン、アドニルビン、ゼアキサンチンおよびアドニキサンチンからなる群より選ばれる１種又は複数種のカロテノイドを菌体内に蓄積する微生物であって、培養により前記ＴＳＮ１８Ｅ７株よりもカロテノイドを高収量生産する微生物。
【請求項２】
微生物が、ＴＳＧＮ１４６００６株（受託番号：ＦＥＲＭ  Ｐ−２０５６５）である請求項１に記載の微生物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の微生物を培養して、アスタキサンチン、リコペン、β−カロテン、β−クリプトキサンチン、３−ヒドロキシエキネノン、シス−アドニキンサンチン、カンタキサンチン、アドニルビン、ゼアキサンチンおよびアドニキサンチンからなる群より選ばれる１種又は複数種のカロテノイドを生産する、カロテノイドの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は飼料・食品用色素、抗酸化剤として有用なカロテノイド、特にアスタキサンチンの製造に有用となる新規微生物に関し、さらに詳しくは、海洋細菌ＴＳＮ１８Ｅ７株の育種により得られたカロテノイド生産性、特にアスタキサンチン生産性が向上した微生物に関する。
【背景技術】
【０００２】
β‐カロテン、リコペンなどに代表されるカロテノイドのうちアスタキサンチン（以下「Ａｘ」と略記する。）は、オキアミ、カニ、エビなどの甲殻類やマダイ、サケ、マスなどの魚類、フラミンゴなどの鳥類、藻類や微生物等に広く分布する天然の化合物である。近年はＡｘがサケやマス、マダイ等の養殖魚の色揚げ剤や鶏卵の色調改善剤として需要が増加している。またＡｘには抗酸化活性や抗癌活性などの様々な生理的作用が確認され、医薬品や健康補助食品としての利用も注目されている。
【０００３】
Ａｘの製造方法としては、化学合成法、天然物からの抽出法、微生物による発酵生産法などがあるが、現在は主に価格等の要因から化学合成法による製品が広く流通している。しかし、化学合成法では原料に臭素および塩素を含むハロゲン系化合物や重金属類を使用するため安全性に懸念があり（例えば、特許文献１参照）、消費者の自然、天然志向にともない天然物由来のＡｘへの要求が強くなっている。
【０００４】
天然物からの抽出法としてはオキアミ等からの抽出する方法があるが、これらは含量が低く、採取、抽出、精製などに多大な労力を要し、コスト的に問題があった。
【０００５】
微生物を利用した製法としては、酵母ではファフィア・ロドチーマ（Ｐｈａｆｆｉａ  ｒｈｏｄｏｚｙｍａ）（例えば、非特許文献１参照）、藻類ではヘマトコッカス・プルビアリス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｌｕｖｉａｌｉｓ）（例えば、非特許文献２参照）の報告がある。しかしながらファフィア酵母は増殖速度が遅いため培養日数が長く、細胞壁が強固なために抽出効率が低く、含量が少ないためコスト高である。またヘマトコッカス藻類は増殖速度が非常に遅いために非常に培養日数が長く、光を必要とするため立地条件や設備などに制約がある他、クロロフィルなどの夾雑物の除去が必要になりコスト高である。
【０００６】
これらの問題を解決する方法として、細菌によるカロテノイド生産法が提案されている。例えば海洋性アグロバクテリウム属細菌Ｎ‐８１１０６株（受託番号：ＦＥＲＭ  Ｐ‐１２７８２）の培養により得る方法が開示されている（例えば、特許文献２参照）。藻類や酵母に比べて細菌は一般的に増殖が速く、また細胞壁が脆弱であり、藻類とことなりクロロフィルなどのカロテノイド以外の色素を含まず、酵母のように副生成物の多糖類を生産しないという利点があるためである。当該発明によればＡｘを含有した菌体が迅速に得られ、さらに菌体を回収した後、アセトンなどの有機溶媒と菌体を混和・攪拌するだけで容易にＡｘを抽出できるという利点がある。
【０００７】
当初当該微生物はアスタキサンチンの生産菌として特許出願されたが、さらに研究が進められた結果、アスタキサンチンの他にもリコペン、β−カロテン、β−クリプトキサンチン、３−ヒドロキシエキネノン、シス−アドニキンサンチン、カンタキサンチン、アドニルビン、ゼアキサンチン、アドニキサンチン等の多様なカロテノイドを製造することが明らかにされた（例えば、非特許文献３参照）。そのため、アスタキサンチンのみならず、様々なカロテノイドの生産においても有用なものと期待されている。
【０００８】
なお、この微生物は後に１６ｓリボゾーマルＲＮＡ遺伝子の配列解析が行われた結果、パラコッカス属細菌と再同定された。海洋バイオテクノロジー研究所においてＭＢＩＣ０１１４３としても登録され、その諸性質に関する情報の概略は国立遺伝学研究所日本ＤＮＡデータバンク（ＤＤＢＪ）や米国ＮＩＨのデーターベース（ＮＣＢＩ）より入手することができる（例えば、非特許文献４〜６参照）。
【０００９】
また該微生物を用いて変異育種を行ない、Ａｘの生産能が向上したＴＳＵＧ１Ｃ１１株（受託番号：ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４１６）の取得やＴＳＮ１８Ｅ７株（受託番号：ＦＥＲＭ  Ｐ−１９７４６）が報告されている（例えば、特許文献３参照）。
【００１０】
これらの発明によりカロテノイド、特にアスタキサンチンを従来より効率よく製造する技術が提供されるに至った。しかしながら、さらなる効率化のため、より生産性に優れた微生物菌株の提供が望まれていた。
【００１１】
【特許文献１】米国特許第４２８３５５９号明細書
【特許文献２】特許第３５７０７４１号公報
【特許文献３】特開２００５−５８２１６号公報
【非特許文献１】Ａｎｄｒｅｗｅｓ，Ａ．Ｇ．ら、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１５，１００３，１９７６年
【非特許文献２】Ｒｅｎｓｔｒｏｍ，Ｂら、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０，２５６１，１９８１年
【非特許文献３】Ｙｏｋｏｙａｍａ，ＡとＭｉｋｉ，Ｗ．、ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．，１２８，１３９，１９９５年
【非特許文献４】国立遺伝学研究所日本ＤＮＡデータバンクホームページ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｄｂｊ．ｎｉｇ．ａｃ．ｊｐ／）
【非特許文献５】米国Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎホームページ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）
【非特許文献６】Ｃｈｏｉ，Ｓ．Ｋ．ら、Ｍａｒｉｎｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，７，５１５，２００５年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、カロテノイド生産性微生物、好ましくは海洋細菌Ｎ８１１０６株の変異株、さらに好ましくはＮ８１１０６株の変異株の一つであるＴＳＮ１８Ｅ７株を改変し、カロテノイド生産性が従来の菌株より優れた菌株およびこれを用いたカロテノイドの製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
すなわち本発明は、海洋細菌ＴＳＮ１８Ｅ７（特許生物寄託センターの受託番号：ＦＥＲＭ  Ｐ−１９７４６）を変異原物質で処理することにより得られ、アスタキサンチン、リコペン、β−カロテン、β−クリプトキサンチン、３−ヒドロキシエキネノン、シス−アドニキンサンチン、カンタキサンチン、アドニルビン、ゼアキサンチンおよびアドニキサンチンからなる群より選ばれる１種又は複数種のカロテノイドを菌体内に蓄積する微生物であって、培養によりＴＳＮ１８Ｅ７株よりもカロテノイドを高収量生産する微生物である。
【００１４】
また本発明は、微生物が、ＴＳＧＮ１４６００６株（特許生物寄託センターの受託番号：ＦＥＲＭ  Ｐ−２０５６５）である上記記載の微生物である。
【００１５】
また本発明は、上記記載の微生物を培養して、アスタキサンチン、リコペン、β−カロテン、β−クリプトキサンチン、３−ヒドロキシエキネノン、シス−アドニキンサンチン、カンタキサンチン、アドニルビン、ゼアキサンチンおよびアドニキサンチンからなる群より選ばれる１種又は複数種のカロテノイドを生産する、カロテノイドの製造方法である。以下本発明をさらに詳細に説明する。
【００１６】
本発明は海洋細菌Ｎ−８１１０６株を育種して得られたＴＳＮ１８Ｅ７株（例えば、特開２００５−５８２１６号公報参照）をさらに育種することで得られたカロテノイド、特にアスタキサンチン生産性が向上した新規微生物及びそれを利用したアスタキサンチン等のカロテノイドの製造法に関する。
【００１７】
本発明の微生物は海洋細菌Ｎ−８１１０６株を育種して得られたＴＳＮ１８Ｅ７株（例えば、特開２００５−５８２１６号公報参照）の育種により誘導された微生物である。
【００１８】
一般的に微生物の育種方法としては、自然突然変異により派生した優良菌株を選別していく方法などの他に、変異原物質や紫外線で細胞を処理することによって変異を加速させたのちに生産性が向上した菌株を選別していく方法や、以上の様な方法で得られた性質の異なる菌株同士を細胞融合させる方法など様々な方法を行なうことが出来る。この内、本発明の微生物はＴＳＮ１８Ｅ７株を変異原物質で処理することにより得られ、変異原物質を用いる方法は短期間に有用な菌株を得る方法として好ましい。
【００１９】
変異原物質としてはＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、メタンスルホン酸エチル等の化合物が知られている。予め培養して得たＴＳＮ１８Ｅ７株の菌体をこれらの化合物の水溶液に懸濁して一定時間放置した後に遠心分離などの方法で菌体を回収して変異原物質を除去した後に平板培地上で培養し、優良菌株のコロニーを選択する。
【００２０】
コロニーの選択法については特に制限はなく、コロニーを目視した際のカロテノイドに由来する赤色の強度による方法や、任意に多数のコロニーを選択、分離して、液体培養を行ない、回収した菌体からカロテノイドを溶媒抽出し、抽出液の４８０ｎｍ付近の吸光度を測定することで行われる。後者の方法では９６穴プレートや３８４穴プレートを用いて液体培養や抽出・比色定量することで、効率よく選択を行うことが出来る。この様にして一次選抜を行ない、次いで抽出液の組成をＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）などで分析してアスタキサンチン等のカロテノイド生産性の向上した菌株を絞り込むことにより優良な菌株を得る。
【００２１】
また、当該操作により得られた菌株に対し、同様な操作を複数回繰り返すことにより、生産性をさらに向上していくことが可能である。
【００２２】
菌株の保存方法については特に限定はなく、任意の培地に継代培養することで菌の活性を維持した状態で保存される他、凍結法や凍結乾燥法により保存される。継代培養による場合には菌が活発に増殖している状態で新たな培地に継代していくことが好ましい。
【００２３】
凍結法の場合には、培地に凍結補助剤を添加した後に凍結する。凍結補助剤にも特に限定はなく、グリセロール、マンニトール、ジメチルスルフォキシド等、通常の微生物の保存に用いられるものを任意に用いることができる。これらの添加量は菌の生存に影響のない範囲で用いられ、例えばグリセロールの場合では培養液容量の１／１０〜１／３容量とされる。凍結の温度にも特に限定はないが、可能な限り低温であることが好ましく、好ましくは−２０℃以下、より好ましくは−８０℃以下である。
【００２４】
凍結乾燥を行う場合にも任意の凍結補助剤を用いて予め可能な限り低温で凍結しそののちに減圧乾燥される。凍結乾燥の場合の凍結補助剤としては上記のものの他にスキムミルクなども用いられる。凍結乾燥後の菌体は室温以下の温度で、好ましくは４℃以下で、さらに好ましくは−２０℃以下で保存される。
【００２５】
本発明における培養方法についても特に限定はなく、通常の液体培地やそれを寒天で固めた固体培地が用いられる。固体培地の形状にも限定はなく、斜面培地や平板培地が用いられる。
【００２６】
培地の組成としては、細菌が増殖しカロテノイドを生産し得るものであればいずれを使用してもよい。炭素源としては、糖蜜、グルコース、フルクトース、マルトース、ショ糖、デンプン、乳糖、グリセロール、酢酸などが用いられる。窒素源としては、酢酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、ペプトン、コーンスティープリカー、酵母エキスなどが用いられる。無機塩としては、リン酸１ナトリウム、リン酸２ナトリウム、リン酸１カリウム、リン酸２カリウム等のリン酸塩や塩化ナトリウムなどが用いられる。金属イオンとしては、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、硫酸第１鉄、硫酸第２鉄、塩化第１鉄、塩化第２鉄、クエン酸鉄、硫酸アンモニウム鉄、塩化カルシウム・２水和物、硫酸カルシウム、硫酸亜鉛、塩化亜鉛、硫酸銅、塩化銅、硫酸マンガン、塩化マンガンなどが用いられる。ビタミン類としては、酵母エキスやビオチン、ニコチン酸、チアミン、リボフラビン、イノシトール、ピリドキシン等が用いられる。なお、固体培地を用いる場合には上記の組成の培地に寒天やジェランガム等の固形化剤を加熱溶解させた後に、培養に用いる試験管やシャーレに分注し、さらに目的の温度まで冷却して固形化して用いられる。
【００２７】
本発明における培養の条件については、細菌が増殖しカロテノイドを生産し得るものであれば特に限定はないが、培養温度は１５〜４０℃が好ましく、ｐＨは６〜８が好ましい。また、培養時間は任意に設定できるが、カロテノイドが十分に生産される時間であることが好ましく、通常は数時間〜２００時間の間に設定される。
【００２８】
本発明におけるカロテノイドの分析方法は、菌体または培養液から安定に効率良く抽出して定量できれば特に限定はなく、例えば抽出溶媒としてはメタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、ジクロロメタン、クロロフォルム、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルフォキシド、超臨界炭酸ガス等が用いられる。抽出されたカロテノイドの定量は抽出液を比色定量することによっても行われるが、各種カロテノイドが分離され定量性に優れる高速液体クロマトグラフィーによる行なうことが好ましい。
【００２９】
本発明により得られたカロテノイドは、飼料、食品、化粧品、医薬品、光学材料等の様々な用途に用いられる。使用の際の形態や純度はその用途により異なり、培養液のまま使用することも可能であり、高度に精製して用いることもでき、またその中間の純度の様々な精製度合いで使用される。
【００３０】
例えば飼料として用いる場合は、培養液をそのまま、或いは培養液を乾燥して用いることもでき、培養液から回収した湿菌体や乾燥菌体として用いることができる。この際、乾燥の方法はカロテノイドの極端な分解が生じなければ公知の何れの方法でも用いることができる。例えば凍結乾燥法や噴霧乾燥法などの方法が利用できる。
【００３１】
また培養液から菌体を回収する際の方法にも特に限定はなく、遠心分離やろ過の方法が用いられる。このような夾雑物が混在する製品には、目的物のカロテノイドの他に培地や菌体に由来するタンパク質・糖質・脂質・ミネラル類・ビタミン類などの様々な夾雑物存在し、これらが栄養源としても働くために、抽出・精製したカロテノイドよりも良好な飼料効果が得られる場合がある。
【００３２】
また、培養液や菌体からカロテノイド類を抽出して使用することもできる。抽出方法に特に限定はなく、上記の分析に用いた溶媒類を使用することが出来る。さらにはお互いに混和しない二種類以上の溶媒を用いた分配法や分別沈殿法などの方法で精製して用いることもできる。
【００３３】
さらにはカラムクロマトグラフィーなどの方法で高度に精製して用いることができる。精製する場合にはカロテノイド以外の成分とカロテノイド類を分離するが複数のカロテノイド、即ちアスタキサンチン、リコペン、β−カロテン、β−クリプトキサンチン、３−ヒドロキシエキネノン、シス−アドニキンサンチン、カンタキサンチン、アドニルビン、ゼアキサンチン、アドニキサンチンは分離せず、これらの混合物として利用することもできる。また、各成分を単一成分に分離・精製してそれぞれを単独で使用することもでき、これらから任意に選ばれる二種類以上の特定の成分の任意な混合物として利用することもできる。
【００３４】
このような精製されたカロテノイドは食品、医薬品、化粧品、光学材料等の原料として利用される。精製カロテノイドに要求される純度はその用途により異なり、それぞれの目的に要求される純度に調整されて利用される。
【発明の効果】
【００３５】
本発明によれば、以下の効果を奏することができる。
【００３６】
本発明によれば、養殖魚類の色揚げ用飼料などとして有用なアスタキサンチンを効率よく製造することが可能になる。
【００３７】
また本発明によれば、アスタキサンチンに加え、抗酸化剤として有用なリコペン、β−カロテン、β−クリプトキサンチン、３−ヒドロキシエキネノン、シス−アドニキンサンチン、カンタキサンチン、アドニルビン、ゼアキサンチン、アドニキサンチン等の多様なカロテノイドの混合物を効率よく得ることができる。
【実施例】
【００３８】
以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。なお本発明は、これらの実施例のみに限定されるものではなく、発明の要旨を逸脱しない範囲で、任意に変更が可能であることは言うまでもない。
【００３９】
（カロテノイドの抽出と定量法）
カロテノイドの定量法は逆送カラムを用いた高速液体クロマトグラフィーにて測定し、以下の操作手順で行った。すなわち培養液１ｍＬを遠心分離して菌体を回収し、２０μＬの純水を加えチューブミキサーにて１０分間懸濁させる。ついで５００μＬのジメチルホルムアミド、５００μＬのアセトンを加えてチューブミキサーで１時間攪拌後、１４０００回転５分間遠心分離を行い、上清を回収し、一部を高速液体クロマトグラフィー（ＴＳＫ−ｇｅｌ  ＯＤＳ−８０ＴＭ、商品名、東ソー（株）製を使用）にて生成したカロテノイドを定量した。なお、アスタキサンチンの分離はＡ溶媒として純水とメチルアルコールの５対９５の混合溶媒、Ｂ溶媒としてメチルアルコールとテトラヒドロフランの７対３の混合溶媒を用い、１ｍＬ／ｍｉｎの流速でＡ溶媒を５分間カラムに通過させた後、同じ流速でＡからＢへ５分間の直線濃度勾配を行ない、さらにＢ溶媒を５分間通過させることによった。アスタキサンチンの定量は４７０ｎｍの吸光度により行ない、既知濃度のアスタキサンチン試薬（シグマ社製）の溶液との吸光度の比較により行なった。その一例を表７に示した。
【００４０】
（実施例１）
表１に示す培地６０ｍＬ入りの１００ｍｌ容バッフル付き三角フラスコに表２のストック液をいれて培地Ａを調製した。次いでＴＳＮ１８Ｅ７株を植菌し、２５℃、１００ｒｐｍで１日間振とう培養を行なった。この培養液のうち１．０ｍｌを１．５ｍｌのエッペンドルフチューブに移し、１５，０００回転、１０分間の遠心分離により菌体を回収した。
【００４１】
この菌体をｐＨ７．０の０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（緩衝液Ａ）１．０ｍｌに懸濁し、次いで３ｍｇ／ｍｌのＮ‐メチル−Ｎ’−ニトロ−ニトロソグアジニジン（以下ＮＴＧと略記する）水溶液１０μｌを加えて３０〜６０分間室温で静置して変異原処理を行った。その後、遠心分離して菌体を回収し緩衝液Ａに再懸濁する操作を２回繰返してＮＴＧを除去した。さらに、回収した菌体を５ｍｌの培地Ａに懸濁して２５℃で一晩振とう培養を行ったのち、培地Ａに１．５重量％の寒天を加えて調製した平板培地上に塗布して、２０℃で数日間静置培養した。
【００４２】
生じたコロニーのうち赤色の強いものを選別し、表１に示す組成の培地で２０℃、１００ｒｐｍで５日間振とう培養を行った。この培養液より経時にカロテノイドを定量し、カロテノイド、特にアスタキサンチン生産性が向上した菌株の選定を行なった。
【００４３】
そのうち最も高い生産性を示した菌株に対し、同様の操作を４回繰り返し、最も生産性の高い菌株としてＴＳＧＮ１４６００６株を作製した。同菌株を培地Ａで培養し、得られた培養液７ｍｌに滅菌したグリセロールを３ｍｌ加えてよく混合し、予め滅菌したサンプル瓶（容量２ｍｌ）に１ｍｌづつ分注して−８０℃で凍結保存した。
【００４４】
また、凍結乾燥菌体を次のように調製した。すなわち、培地Ａの平板培地上に植菌して２０℃で静置培養し、出現したコロニーを２０％スキムミルク溶液で懸濁した。次いで、アンプル管に数１００μｌづつ分注して、液体窒素中で凍結したのちに凍結乾燥機で乾燥し、減圧を保ったまま封管した。凍結乾燥菌体は特許生物寄託センターに受託番号：ＦＥＲＭ  Ｐ−２０５６５株として寄託した。
【００４５】
（実施例２）
表１に示す培地３００ｍＬ入りの５００ｍｌ容バッフル付き三角フラスコに表２のストック液をいれ、次いでＴＳＧＮ１４６００６株を植菌し、２５℃、１００ｒｐｍで１日間振盪培養を行なった培養液を前々培養液とした。
【００４６】
表３に示した組成の培地１００ｍＬを５００ｍＬ容の三角フラスコにいれ、表４のストック液をいれ前々培養液３ｍｌを植菌し、２５℃、１００ｒｐｍで１日間振盪培養を行なった培養液を前培養液とした。表５に示した培地を２Ｌ容醗酵槽にいれ１２１℃、２０分間滅菌後、あらかじめ滅菌しておいた表６のストック液と４０ｍＬの前培養液を植菌した。培養条件は温度２２℃、攪拌数４５０回転、ｐＨ７．０〜７．２、通気は空気にて１ＶＶＭで制御し、１２０時間培養した。ｐＨの調整には培養８時間後までは２Ｍ−水酸化ナトリウム水溶液を使用し、その後５％アンモニアをｐＨ指標にして流加した。グルコースはＹＳＩ社製グルコースセンサー（２７００ＳＥＬＥＣＴ）を用いて測定し、５０％グルコース水溶液を適宜追加した。培養終了後の６６０ｎｍの濁度（以下、ＯＤと略記する。）とカロテノイド含量を表７、図１に示す。
【００４７】
本菌株の菌体収量は比較例１に示す元株であるＴＳＮ１８Ｅ７より増加し、培地１リットルあたり１２５ｍｇのアスタキサンチン、２５７ｍｇ総カロテノイドを生産した。
【００４８】
【表１】
2008011824.tif 000002
【００４９】
【表２】
2008011824.tif 000003
【００５０】
【表３】
2008011824.tif 000004
【００５１】
【表４】
2008011824.tif 000005
【００５２】
【表５】
2008011824.tif 000006
【００５３】
【表６】
2008011824.tif 000007
【００５４】
【表７】
2008011824.tif 000008
（比較例１）
ＴＳＮ１８Ｅ７株を用いて実施例１と同様に培養及びアスタキサンチンの定量を行なった。その結果を表２に示したが、実施例１に示す菌株の元株を用いた本培養では培地１リットルあたり８７ｍｇのアスタキサンチン、１９２ｍｇ総カロテノイドをしか生産しなかった。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】本発明の新菌株（ＴＳＧＮ１４６０００６株）と従来株（ＴＳＮ８Ｅ７株）によるカロテノイド類産生量を示す図であり、図中、Ｘ軸（横軸）は各菌株を示し、Ｙ軸（縦軸）は各々の菌株ごとに、左から、ＯＤ（Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｄｅｎｓｉｔｙ、単位は６６０ｎｍにおける吸光度：任意単位）、アスタキサンチンの量（単位はｍｇ／Ｌ）、総カロテノイドの量（単位はｍｇ／Ｌ）、それぞれ、を示す。
【図１】
2008011824.tif 000009