(57)【要約】【課題】多発性骨髄腫（「ＭＭ」）ならびに他の血液腫瘍または血液悪性腫瘍を有する個体を処置するための、チェックポイント制御を調節する治療剤を同定すること。【解決手段】  被験体の多発性骨髄腫（「ＭＭ」）ならびに他の血液腫瘍または血液悪性腫瘍を処置するための方法であって、該方法は、Ｇ１および／もしくはＳ期薬物（これは有利には、β−ラパコンである）、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量を該被験体に投与する工程を包含する、方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液腫瘍および血液癌を処置する方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（発明の背景）
多発性骨髄腫（「ＭＭ」）は、単一のクローンに由来する形質細胞の悪性増殖を表す。多発性骨髄腫および骨髄腫という用語は、同じ状態をいうために、交換可能に使用される。骨髄腫瘍、その産物、およびそれに対する宿主の応答は、骨の痛みまたは骨折、腎不全、感染に対する感受性増加、貧血、低カルシウム血症、そして時として凝固異常、神経学的症状、および血管の過粘稠度症状発現といった、多数の器官の機能不全および症状を生じさせる。Ｄ．Ｌｏｎｇｏ、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第１４版、７１３頁（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９８）を参照のこと。ヒト多発性骨髄腫は依然として、米国において毎年新たに１４，４００の個体に発症する不治の血液悪性腫瘍である（Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．ら、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２６：１（１９９９）を参照のこと）。ＭＭについての有効な長期処置は、現在存在していない。ＭＭは、蛋白過剰血症、貧血、腎機能不全、骨の病変および免疫欠損として発現される、形質細胞の悪性腫瘍である。ＭＭは、初期に診断することが難しい。なぜなら、初期段階では症状が存在しない場合があるからである。この疾患は、全く処置がなされない場合には生存期間の中央値が６ヶ月間という、進行性の経過を有する。体系的な化学療法が主な処置である。そして化学療法での現在の生存中央値は約３年間であるが、５％未満は、１０年間よりも長く生存する（Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．ら、Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｒｅｐｏｒｔ  １９９９．Ｒｅｃｅｎｔ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｍｙｅｌｏｍａ（１９９９）を参照のこと）。
【０００２】
多発性骨髄腫は、薬物に感受性の疾患であると考えられているが、最初に化学療法に応答したＭＭを有するほぼすべての患者は、最終的に再発する（Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．ら、Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｒｅｐｏｒｔ  １９９９．Ｒｅｃｅｎｔ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｍｙｅｌｏｍａ（１９９９）を参照のこと）。ＭＭに対するメルファランおよびプレドニゾンでの処置の導入以来、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、およびニトロソ尿素に基づく処置を含む多数の多剤化学療法が試験された（Ｃａｓｅ，ＤＣら、（１９７７）Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ  ６３：８９７−９０３を参照のこと）。しかし、ここ３０年間にわたって、いまだ結果においてほとんど改善はみられていない（Ｃａｓｅ，ＤＣら、（１９７７）Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ  ６３：８９７−９０３；Ｏｔｓｕｋｉ，Ｔ．ら、（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：１を参照のこと）。従って、化学療法剤に対する耐性の逆転が、重要な研究領域である。従って、化学療法の薬物または組み合わせのような新たな処置方法が、ＭＭの処置のために緊急に必要とされている。
【０００３】
本発明者らは以前に、β−ラパコン（ｌａｐａｃｈｏｎｅ）が、適度な用量のＴａｘｏｌ（登録商標）（パクリタキセル；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏ．、Ｎ．Ｙ．、Ｎ．Ｙ．）と組み合わされる場合に、ヌードマウスにおけるヒトの卵巣癌、前立腺癌および乳癌の異種移植モデルにおいて、有効な抗腫瘍活性を有することを発見した。このマウスに対する毒性の徴候は観察されず、そして処置後に続く２ヶ月間の間に体重の減少は記録されず、この２ヶ月間の間、腫瘍は再発しなかった（Ｌｉ，ＣＪら（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６：１３３６９−１３３７４を参照のこと）。しかし、このような状態はＭＭとは異なり、そして現在の処置様式とも異なる。
【０００４】
β−ラパコン（３，４−ジヒドロ−２，２−ジメチル−２Ｈ−ナフト［１，２−ｂ］ピラン−５，６−ジオン）（単純な非水溶性オルトナフトキノン）は元々、１８８２年にＰａｔｅｒｎｏによって、ラパーチョの木の心材から単離された（Ｈｏｏｋｅｒ，ＳＣ（１９３６）Ｉ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．５８：１１８１−１１９０；Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ  ｄｅ  Ｌｉｍａ，Ｏ．ら、（１９６２）Ｒｅｖ．Ｉｎｓｔ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．Ｕｎｉｖ．Ｒｅｃｉｆｅ．４：３−１７を参照のこと）。β−ラパコンの構造は、１８９６年にＨｏｏｋｅｒによって確証付けられ、そしてその構造は、１９２７年にＦｉｅｓｅｒによって最初に合成された（Ｈｏｏｋｅｒ，ＳＣ（１９３６）Ｉ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．５８：１１８１−１１９０）。β−ラパコンは、主にブラジルで生育しているＴａｂｅｂｕｉａ  ａｖｅｌｌｅｎｅｄａｅから容易に単離される天然に存在するラパコールを、単純に硫酸で処理することによって入手され得るか、またはオーストラリアで生育しているロマーチャ（ｌｏｍａｔｉａ）の種子から容易に合成される（Ｌｉ，ＣＪら、（１９９３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２２４６３−３３４６４）。
【０００５】
β−ラパコンは、種々の薬理学的作用を有することが示されている。多数の誘導体が合成され、そして抗ウイルス剤および抗寄生生物剤として試験された。そしてβ−ラパコンは、抗トリパノソーマ作用を有することが示された（Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ，ＡＭら（１９８０）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ  １：１６７−１７６；Ｓｃｈａｆｆｎｅｒ−Ｓａｂｂａ，Ｋ．ら（１９８４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７：９９０−９９４；Ｌｉ，ＣＪら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：１８３９−１８４２を参照のこと）。β−ラパコンは、おそらく逆転写酵素の阻害を介して、ラウシャー白血病ウイルスに感染したマウスの生存を有意に延長させる（Ｓｃｈａｆｆｎｅｒ−Ｓａｂｂａ，Ｋ．ら（１９８４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７．９９０−９９４；Ｓｃｈｕｅｒｃｈ，ＡＲら（１９７８  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．８４：１９７−２０５））。本発明者らは、β−ラパコンが、ヒト免疫不全ウイルスＩ型の長末端反復（ＬＴＲ）によって指示されるウイルスの複製および遺伝子発現を阻害することを実証した（Ｌｉ，ＣＪら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：１８３９−１８４２）。
【０００６】
β−ラパコンは、電離放射線およびＤＮＡ損傷剤に対して細胞を感作する、新規かつ強力なＤＮＡ修復インヒビターとして研究された（Ｂｏｏｒｓｔｅｉｎ，ＲＪら（１９８４）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１１８：８２８−８３４；Ｂｏｏｔｈｍａｎら（１９８９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４９：６０５−６１２）。本発明者らは、β−ラパコンおよびその誘導体が、カンプトテシンとは異なる機構を介して真核生物トポイソメラーゼＩを阻害し、これが、分割可能な複合体の安定化ではなく、トポイソメラーゼＩとβ−ラパコンとの直接的な相互作用によって媒介され得ることを報告した（Ｌｉ，ＣＪら（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２２４６３−２２４６８）。本発明者らおよび他の研究者らは、β−ラパコンが、ヒトの前立腺癌細胞において細胞死を誘導することを報告した（Ｌｉ，ＣＪら、Ｉ（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５：３７１２−３７１５を参照のこと）。さらに、本発明者らは、β−ラパコンが、ヒトの乳癌細胞において壊死を誘導し、そしてカスパーゼの誘導を介して、卵巣癌細胞、結腸癌細胞および膵臓癌細胞においてアポトーシスを誘導することを見出した（Ｌｉ，ＹＺら（１９９９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ５：２３２−２３９）。
【０００７】
（発明の要旨）
複数のチェックポイントが、細胞がＤＮＡ損傷を修復するかまたは細胞死を起こすことが確約されている細胞増殖周期の機構の中に組み込まれている。正常な細胞とは異なり、癌細胞はチェックポイント制御を欠損し、そして制御されていない増殖駆動を有する。ＤＮＡ複製における不可避な誤りならびに紫外線および突然変異原への曝露と合わせて、ヒトの寿命における約１０１６個の細胞増殖は、チェックポイント機能の必要性を強調する。主要なチェックポイントは、Ｇ１／Ｓ期およびＧ２／Ｍ期での転移において存在し、ここで細胞は、ＤＮＡを修復することかまたはアポトーシスを起こすことを確約する。細胞は一般的に、ＤＮＡ損傷が修繕不可能である場合にアポトーシスを起こすと考えられている（Ｌｉ，ＣＪら（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６：１３３６９−１３３７４）。チェックポイント制御を調節する治療剤の同定は、癌の処置を改善し得る。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、ここにおいて、β−ラパコンが、ＭＭならびに他の血液腫瘍または血液悪性腫瘍を有する個体を処置するにおいて有効であることを発見した。例えば、β−ラパコンは、ＭＭ細胞において典型的なアポトーシスを誘発することによって、細胞の生存および増殖を抑制する。β−ラパコンによる細胞死の誘導は、Ｇ２／Ｍ転移で細胞を停止させる大半のＤＮＡ損傷剤とは異なり、Ｇ１および／もしくはＳ期での細胞周期遅延と関連付けられることが実証された。この人為的に課せられた、β−ラパコンによるＧ１／Ｓチェックポイント遅延は、インビトロにおける種々のヒト癌腫細胞におけるｐ５３非依存性（Ｌｉ，ＣＪら（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６：１３３６９−１３３７４）のアポトーシス性細胞死または壊死性細胞死に先行する。β−ラパコンによって誘導されるアポトーシス性細胞死および壊死性細胞死の両方は、シトクロムＣの急速な放出（次いで、壊死性細胞死においてではなくアポトーシス性細胞死においては、カスパーゼ−３の活性化）により先行される（Ｌｉ，ＹＺら（１９９９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ５：２３２−２３９）。重要なことに、β−ラパコンのアポトーシス作用は、薬物感受性の細胞（例えば、ＡＲＨ−７７、ＨＳ  ＳｕｌｔａｎおよびＭＭ．１Ｓ）、および患者から新たに得られたＭＭ細胞、ならびに、ＭＭ細胞株ＭＭ．１Ｒ、ＤＯＸ．４０、およびＭＲ．２０（これらはそれぞれ、照射、ドキソルビシン、およびミトザントロンに対して耐性である）において観察された。アポトーシスは、正常な末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）においては検出されなかった。ＭＭ細胞においてβ−ラパコンによって誘導されるアポトーシスは、シトクロムＣの急速な放出と、次ぐカスパーゼの活性化およびポリ（ＡＤＰリボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）切断によって先行される。β−ラパコンに対する感受性は、骨髄腫細胞における薬物耐性の重要なメディエイタであるＢｃｌ−２の発現によって影響を受けなかった（Ｔｕ，Ｙ．ら（１９９６）Ｂｌｏｏｄ  ８８：１８０５−１２；Ｂｌｏｅｍ，Ａ．ら、（１９９９）Ｐａｔｈｏｌ  Ｂｉｏ（Ｐａｒｉｓ）４７：２１６−２２０）。ＭＭ細胞についての重要な抗アポトーシス因子である（１６）、外因性インターロイキン−６（ＩＬ−６）は、β−ラパコンのアポトーシス作用を低下させなかった。従って、これらの知見は、β−ラパコンがまた、ヒト多発性骨髄腫を処置するための有望な薬物であることを示す。
【０００９】
１つの実施形態では、本発明は、治療有効量のＧ１および／もしくはＳ期薬物（これは有利には、β−ラパコンである）、またはその誘導体もしくはアナログを投与することによって、ヒト多発性骨髄腫を処置する方法に関する。
【００１０】
別の実施形態では、Ｇ２／Ｍ期薬物（タキサン（ｔａｘａｎｅ）、その誘導体およびアナログが挙げられるが、これらに限定されない）と、Ｇ１および／もしくはＳ期薬物（好ましくは、β−ラパコン、またはその誘導体もしくはアナログであるが、これらに限定されない）との組み合わせを、ＭＭならびに他の血液腫瘍および／または血液悪性腫瘍の処置のために投与し得る。
【００１１】
多発性骨髄腫の処置に加えて、β−ラパコン、ならびにＧ２／Ｍ期薬物と組み合わせたβ−ラパコン、またはその誘導体もしくはアナログの組み合わせを使用して、他の血液腫瘍および／または血液悪性腫瘍（例えば、小児期白血病および小児期リンパ腫、ホジキン病、リンパ球起源のリンパ腫および皮膚起源のリンパ腫、急性白血病および慢性白血病（例えば、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、または慢性骨髄性白血病）、形質細胞新生物、リンパ系新生物およびＡＩＤＳと関連する癌）を処置し得る。
【００１２】
代表的な化合物のリストを、下記の表１に記載する。本発明の組み合わせは、多発性骨髄腫を有する患者の処置において特に有益である。本発明のこの方法は、Ｇ２／Ｍ薬物と組み合わせて、有効量のＧ１および／もしくはＳ期薬物を組み合わせて、患者に投与する工程を包含する。好ましくは、この組み合わせは、（１）β−ラパコン、またはその誘導体もしくはアナログのようなトポイソメラーゼＩインヒビター（Ｇ１および／もしくはＳ期薬物）、ならびに（２）タキサン、その誘導体またはアナログ（Ｇ２／Ｍ薬物）、およびそれらの薬学的に受容可能な塩である。
【００１３】
本明細書中で使用される場合、句「タキサン」または「タキサン誘導体」は、その抗腫瘍特性に起因して、癌の化学療法において使用されるかまたは使用され得る任意のタキサンを意味する。Ｔａｘｏｌ（登録商標）は、好ましいタキサン誘導体である。
【００１４】
さらに、本明細書中で使用される場合、句「β−ラパコン」は、３，４−ジヒドロ−２，２−ジメチル−２Ｈ−ナフト［１，２−ｂ］ピラン−５，６−ジオンならびにその誘導体およびアナログをいい、そして、以下の化学構造を有する：
【００１５】
【化１】
2008110995.tif 000002
【００１６】
。好ましい誘導体およびアナログを、以下で考察する。
・本発明はさらに、以下を提供する：
・（項目１）  被験体の血液腫瘍または血液悪性腫瘍を処置する方法であって、上記方法は、Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量を上記被験体に投与する工程を包含する、方法。
・（項目２）  Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量を投与する工程をさらに包含する、項目１に記載の方法。
・（項目３）  上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物が、β−ラパコン、またはその誘導体もしくはアナログである、項目１に記載の方法。
・（項目４）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、微小管標的化薬物およびトポイソメラーゼ有害薬物からなる群より選択される、項目２に記載の方法。
・（項目５）  項目４に記載の方法であって、上記微小管標的化薬物が、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロンおよびナベルビンからなる群より選択される、方法。
・（項目６）  項目４に記載の方法であって、上記トポイソメラーゼ有害薬物が、テニポシド、エトポシド、アドリアマイシン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン、エピルビシン、およびイダルビシンからなる群より選択される、方法。
・（項目７）  項目１に記載の方法であって、上記血液腫瘍または血液悪性腫瘍が、多発性骨髄腫、小児期白血病および小児期リンパ腫、ホジキン病、リンパ球起源のリンパ腫および皮膚起源のリンパ腫、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、形質細胞新生物、リンパ系新生物およびＡＩＤＳと関連する癌からなる群より選択される、方法。
・（項目８）  上記血液腫瘍または血液悪性腫瘍が、多発性骨髄腫である、項目７に記載の方法。
・（項目９）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物がタキサン誘導体である、項目２に記載の方法。
・（項目１０）  上記タキサン誘導体がパクリタキセルである、項目９に記載の方法。
・（項目１１）  項目２に記載の方法であって、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログと、上記Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログとが、静脈内投与される、方法。
・（項目１２）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与と同時に投与されるか、または上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与後に投与される、項目２に記載の方法。
・（項目１３）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与後に投与される、項目２に記載の方法。
・（項目１４）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与後２４時間以内に投与される、項目２に記載の方法。
・（項目１５）  項目２に記載の方法であって、ここで、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量が第１のバイアルに含まれ、そして上記Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量が第２のバイアルに含まれ、上記第１のバイアルの内容物および上記第２のバイアルの内容物が、上記被験体に同時にかまたは連続して投与される、方法。
・（項目１６）  項目１５に記載の方法であって、ここで、上記第１のバイアル中の上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物が、β−ラパコンまたはその誘導体もしくはアナログであり、そして上記第２のバイアル中の上記Ｇ２／Ｍ期薬物がパクリタキセルである、方法。
・（項目１７）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、約１３５ｍｇ／ｍ２〜約３００ｍｇ／ｍ２の投薬量で静脈内投与される、項目２に記載の方法。
・（項目１８）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、約１７５ｍｇ／ｍ２の投薬量で静脈内投与される、項目１７に記載の方法。
・（項目１９）  項目１または２に記載の方法であって、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログ、ならびに上記Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログが、薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、方法。
・（項目２０）  項目１９に記載の方法であって、上記薬学的に受容可能なキャリアが、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ、Ｐｏｖｉｄｏｎｅ  Ｋ１７、Ｐｏｖｉｄｏｎｅ  Ｋ１２、Ｔｗｅｅｎ  ８０、エタノール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ／エタノール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００、プロピレングリコール、Ｔｒａｐｐｓｏｌ、α−シクロデキストリンまたはそのアナログ、β−シクロデキストリンまたはそのアナログ、およびγ−シクロデキストリンまたはそのアナログからなる群より選択される水溶性キャリア分子である、方法。
・（項目２１）  上記被験体がヒトである、項目１に記載の方法。
・（項目２２）  被験体の血液腫瘍または血液悪性腫瘍を処置するためのキットであって、上記キットは、β−ラパコンまたはその誘導体もしくはアナログと、タキサン誘導体とを別々に含むバイアルと、β−ラパコンを最初に投与することについての指示書を含む、キット。
・（項目２３）  上記タキサン誘導体がパクリタキセルである、項目２２に記載のキット。
・（項目２４）  上記血液腫瘍または血液悪性腫瘍が、多発性骨髄腫である、項目２２に記載のキット。
・（項目２５）  被験体の血液腫瘍または血液悪性腫瘍を処置する方法であって、上記方法は、以下：
ａ）Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量と、薬学的に受容可能なキャリアとを、上記被験体に投与する工程；
ｂ）Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量を上記被験体に投与する工程であって、上記Ｇ２／Ｍ期薬物は、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物と同時に投与されるか、または上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の後に投与される、工程
を包含する、方法。
・（項目２６）  上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物が、β−ラパコン、またはその誘導体もしくはアナログである、項目２５に記載の方法。
・（項目２７）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、微小管標的化薬物およびトポイソメラーゼ有害薬物からなる群より選択される、項目２５に記載の方法。
・（項目２８）  項目２７に記載の方法であって、上記微小管標的化薬物が、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロンおよびナベルビンからなる群より選択される、方法。
・（項目２９）  項目２７に記載の方法であって、上記トポイソメラーゼ有害薬物が、テニポシド、エトポシド、アドリアマイシン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン、エピルビシン、およびイダルビシンからなる群より選択される、方法。
・（項目３０）  項目２５に記載の方法であって、上記血液腫瘍または血液悪性腫瘍が、多発性骨髄腫、小児期白血病および小児期リンパ腫、ホジキン病、リンパ球起源のリンパ腫および皮膚起源のリンパ腫、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、形質細胞新生物、リンパ系新生物およびＡＩＤＳと関連する癌からなる群より選択される、方法。
・（項目３１）  上記血液腫瘍または血液悪性腫瘍が、多発性骨髄腫である、項目３０に記載の方法。
・（項目３２）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物がタキサン誘導体である、項目２５に記載の方法。
・（項目３３）  上記タキサン誘導体がパクリタキセルである、項目３２に記載の方法。
・（項目３４）  項目２５に記載の方法であって、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログと、上記Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログとが、静脈内投与される、方法。
・（項目３５）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与と同時に投与されるか、または上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与後に投与される、項目２５に記載の方法。
・（項目３６）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与後に投与される、項目２５に記載の方法。
・（項目３７）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与後２４時間以内に投与される、項目２５に記載の方法。
・（項目３８）  項目２５に記載の方法であって、ここで、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量が第１のバイアルに含まれ、そして上記Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量が第２のバイアルに含まれ、上記第１のバイアルの内容物および上記第２のバイアルの内容物が、上記被験体に同時にかまたは連続して投与される、方法。
・（項目３９）  項目３８に記載の方法であって、ここで、上記第１のバイアル中の上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物が、β−ラパコンまたはその誘導体もしくはアナログであり、そして上記第２のバイアル中の上記Ｇ２／Ｍ期薬物がパクリタキセルである、方法。
・（項目４０）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、約１３５ｍｇ／ｍ２〜約３００ｍｇ／ｍ２の投薬量で静脈内投与される、項目２５に記載の方法。
・（項目４１）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、約１７５ｍｇ／ｍ２の投薬量で静脈内投与される、項目４０に記載の方法。
・（項目４２）  項目２５に記載の方法であって、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログ、ならびに上記Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログが、薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、方法。
・（項目４３）  項目４２に記載の方法であって、上記薬学的に受容可能なキャリアが、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ、Ｐｏｖｉｄｏｎｅ  Ｋ１７、Ｐｏｖｉｄｏｎｅ  Ｋ１２、Ｔｗｅｅｎ  ８０、エタノール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ／エタノール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００、プロピレングリコール、Ｔｒａｐｐｓｏｌ、α−シクロデキストリンまたはそのアナログ、β−シクロデキストリンまたはそのアナログ、およびγ−シクロデキストリンまたはそのアナログからなる群より選択される水溶性キャリア分子である、方法。
・（項目４４）  上記被験体がヒトである、項目２５に記載の方法。
・（項目４５）  被験体の血液腫瘍または血液悪性腫瘍を処置する方法であって、上記方法は、Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量と、Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量との組み合わせを含む薬学的組成物を投与する工程を包含する、方法。
・（項目４６）  上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物が、β−ラパコン、またはその誘導体もしくはアナログである、項目４５に記載の方法。
・（項目４７）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、微小管標的化薬物およびトポイソメラーゼ有害薬物からなる群より選択される、項目４５に記載の方法。
・（項目４８）  項目４５に記載の方法であって、上記微小管標的化薬物が、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロンおよびナベルビンからなる群より選択される、方法。
・（項目４９）  項目４５に記載の方法であって、上記トポイソメラーゼ有害薬物が、テニポシド、エトポシド、アドリアマイシン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン、エピルビシン、およびイダルビシンからなる群より選択される、方法。
・（項目５０）  項目４５に記載の方法であって、上記血液腫瘍または血液悪性腫瘍が、多発性骨髄腫、小児期白血病および小児期リンパ腫、ホジキン病、リンパ球起源のリンパ腫および皮膚起源のリンパ腫、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、形質細胞新生物、リンパ系新生物およびＡＩＤＳと関連する癌からなる群より選択される、方法。
・（項目５１）  上記血液腫瘍または血液悪性腫瘍が、多発性骨髄腫である、項目５０に記載の方法。
・（項目５２）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物がタキサン誘導体である、項目４５に記載の方法。
・（項目５３）  上記タキサン誘導体がパクリタキセルである、項目５２に記載の方法。
・（項目５４）  上記タキサン誘導体が静脈内投与される、項目５２に記載の方法。
・（項目５５）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与と同時に投与されるか、または上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与後に投与される、項目４５に記載の方法。
・（項目５６）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与後に投与される、項目４５に記載の方法。
・（項目５７）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与後２４時間以内に投与される、項目４５に記載の方法。
・（項目５８）  項目４５に記載の方法であって、ここで、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量が第１のバイアルに含まれ、そして上記Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量が第２のバイアルに含まれ、上記第１のバイアルの内容物および上記第２のバイアルの内容物が、上記被験体に同時にかまたは連続して投与される、方法。
・（項目５９）  項目５８に記載の方法であって、ここで、上記第１のバイアル中の上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物が、β−ラパコンまたはその誘導体もしくはアナログであり、そして上記第２のバイアル中の上記Ｇ２／Ｍ期薬物がパクリタキセルである、方法。
・（項目６０）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、約１３５ｍｇ／ｍ２〜約３００ｍｇ／ｍ２の投薬量で静脈内投与される、項目４５に記載の方法。
・（項目６１）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、約１７５ｍｇ／ｍ２の投薬量で静脈内投与される、項目４５に記載の方法。
・（項目６２）  項目４５に記載の方法であって、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログ、ならびに上記Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログが、薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、方法。
・（項目６３）  項目６２に記載の方法であって、上記薬学的に受容可能なキャリアが、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ、Ｐｏｖｉｄｏｎｅ  Ｋ１７、Ｐｏｖｉｄｏｎｅ  Ｋ１２、Ｔｗｅｅｎ  ８０、エタノール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ／エタノール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００、プロピレングリコール、Ｔｒａｐｐｓｏｌ、α−シクロデキストリンまたはそのアナログ、β−シクロデキストリンまたはそのアナログ、およびγ−シクロデキストリンまたはそのアナログからなる群より選択される水溶性キャリア分子である、方法。
・（項目６４）  上記被験体がヒトである、項目４５に記載の方法。
・（項目６５）  血液腫瘍または血液悪性腫瘍を処置するための薬学的組成物であって、上記薬学的組成物は、Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量と、Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量との組み合わせを含む、薬学的組成物。
・（項目６６）  上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物が、β−ラパコン、またはその誘導体もしくはアナログである、項目６５に記載の薬学的組成物。
・（項目６７）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、微小管標的化薬物およびトポイソメラーゼ有害薬物からなる群より選択される、項目６５に記載の薬学的組成物。
・（項目６８）  項目６７に記載の薬学的組成物であって、上記微小管標的化薬物が、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロンおよびナベルビンからなる群より選択される、薬学的組成物。
・（項目６９）  項目６７に記載の薬学的組成物であって、上記トポイソメラーゼ有害薬物が、テニポシド、エトポシド、アドリアマイシン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン、エピルビシン、およびイダルビシンからなる群より選択される、薬学的組成物。
・（項目７０）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物がタキサン誘導体である、項目６５に記載の薬学的組成物。
・（項目７１）  上記タキサン誘導体がパクリタキセルである、項目７０に記載の薬学的組成物。
・（項目７２）  上記タキサン誘導体が静脈内投与される、項目７０に記載の薬学的組成物。
・（項目７３）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与と同時に投与されるか、または上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与後に投与される、項目６５に記載の薬学的組成物。
・（項目７４）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与後２４時間以内に投与される、項目６５に記載の薬学的組成物。
・（項目７５）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与後に投与される、項目６５に記載の薬学的組成物。
・（項目７６）  項目６５に記載の薬学的組成物であって、上記血液腫瘍または血液悪性腫瘍が、多発性骨髄腫、小児期白血病および小児期リンパ腫、ホジキン病、リンパ球起源のリンパ腫および皮膚起源のリンパ腫、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、形質細胞新生物、リンパ系新生物およびＡＩＤＳと関連する癌からなる群より選択される、薬学的組成物。
・（項目７７）  上記血液腫瘍または血液悪性腫瘍が、多発性骨髄腫である、項目７６に記載の薬学的組成物。
・（項目７８）  上記被験体がヒトである、項目６５に記載の薬学的組成物。
・（項目７９）  項目６５に記載の薬学的組成物であって、ここで、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量が第１のバイアルに含まれ、そして上記Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量が第２のバイアルに含まれ、上記第１のバイアルの内容物および上記第２のバイアルの内容物が、上記被験体に同時にかまたは連続して投与される、薬学的組成物。
・（項目８０）  項目７９に記載の薬学的組成物であって、ここで、上記第１のバイアル中の上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物が、β−ラパコンまたはその誘導体もしくはアナログであり、そして上記第２のバイアル中の上記Ｇ２／Ｍ期薬物がパクリタキセルである、薬学的組成物。
・（項目８１）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、約１３５ｍｇ／ｍ２〜約３００ｍｇ／ｍ２の投薬量で静脈内投与される、項目６５に記載の薬学的組成物。
・（項目８２）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、約１７５ｍｇ／ｍ２の投薬量で静脈内投与される、項目８１に記載の薬学的組成物。
・（項目８３）  項目６５に記載の薬学的組成物であって、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログ、ならびに上記Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログが、薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、薬学的組成物。
・（項目８４）  項目８３に記載の薬学的組成物であって、上記薬学的に受容可能なキャリアが、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ、Ｐｏｖｉｄｏｎｅ  Ｋ１７、Ｐｏｖｉｄｏｎｅ  Ｋ１２、Ｔｗｅｅｎ  ８０、エタノール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ／エタノール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００、プロピレングリコール、Ｔｒａｐｐｓｏｌ、α−シクロデキストリンまたはそのアナログ、β−シクロデキストリンまたはそのアナログ、およびγ−シクロデキストリンまたはそのアナログからなる群より選択される水溶性キャリア分子である、薬学的組成物。
・（項目８５）  β−ラパコン、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量と、タキサン誘導体との組み合わせを含む、血液腫瘍または血液悪性腫瘍を処置するための薬学的組成物。
・（項目８６）  上記タキサン誘導体がパクリタキセルである、項目８５に記載の薬学的組成物。
・（項目８７）  上記タキサン誘導体が、約１３５ｍｇ／ｍ２〜約３００ｍｇ／ｍ２の投薬量で静脈内投与される、項目８５に記載の薬学的組成物。
・（項目８８）  上記タキサン誘導体が、約１７５ｍｇ／ｍ２の投薬量で静脈内投与される、項目８７に記載の薬学的組成物。
・（項目８９）  項目８５に記載の薬学的組成物であって、ここで、上記β−ラパコン、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量が第１のバイアルに含まれ、そして上記タキサン誘導体の治療有効量が第２のバイアルに含まれ、上記第１のバイアルの内容物および上記第２のバイアルの内容物が、上記被験体に同時にかまたは連続して投与される、薬学的組成物。
・（項目９０）  項目８５に記載の薬学的組成物であって、上記β−ラパコン、またはその誘導体もしくはアナログ、ならびに上記タキサン誘導体が、薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、薬学的組成物。
・（項目９１）  項目９０に記載の薬学的組成物であって、上記薬学的に受容可能なキャリアが、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ、Ｐｏｖｉｄｏｎｅ  Ｋ１７、Ｐｏｖｉｄｏｎｅ  Ｋ１２、Ｔｗｅｅｎ  ８０、エタノール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ／エタノール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００、プロピレングリコール、Ｔｒａｐｐｓｏｌ、α−シクロデキストリンまたはそのアナログ、β−シクロデキストリンまたはそのアナログ、およびγ−シクロデキストリンまたはそのアナログからなる群より選択される水溶性キャリア分子である、薬学的組成物。
・（項目９２）  項目８５に記載の薬学的組成物であって、上記血液腫瘍または血液悪性腫瘍が、多発性骨髄腫、小児期白血病および小児期リンパ腫、ホジキン病、リンパ球起源のリンパ腫および皮膚起源のリンパ腫、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、形質細胞新生物、リンパ系新生物およびＡＩＤＳと関連する癌からなる群より選択される、薬学的組成物。
・（項目９３）  上記血液腫瘍または血液悪性腫瘍が、多発性骨髄腫である、項目９２に記載の薬学的組成物。
・（項目９４）  被験体の多発性骨髄腫を処置する方法であって、上記方法は、以下：
ａ）Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量と、薬学的に受容可能なキャリアとを、上記被験体に投与する工程；
ｂ）Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量を上記被験体に投与する工程であって、上記Ｇ２／Ｍ期薬物は、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物と同時に投与されるか、または上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の後に投与される、工程
を包含する、方法。
・（項目９５）  上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物が、β−ラパコン、またはその誘導体もしくはアナログである、項目９４に記載の方法。
・（項目９６）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、微小管標的化薬物およびトポイソメラーゼ有害薬物からなる群より選択される、項目９４に記載の方法。
・（項目９７）  項目９６に記載の方法であって、上記微小管標的化薬物が、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロンおよびナベルビンからなる群より選択される、方法。
・（項目９８）  項目９６に記載の方法であって、上記トポイソメラーゼ有害薬物が、テニポシド、エトポシド、アドリアマイシン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン、エピルビシン、およびイダルビシンからなる群より選択される、方法。
・（項目９９）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物がタキサン誘導体である、項目９４に記載の方法。
・（項目１００）  上記タキサン誘導体がパクリタキセルである、項目９９に記載の方法。
・（項目１０１）  項目９４に記載の方法であって、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログと、上記Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログとが、静脈内投与される、方法。
・（項目１０２）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与と同時に投与されるか、または上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与後に投与される、項目９４に記載の方法。
・（項目１０３）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与後に投与される、項目９４に記載の方法。
・（項目１０４）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物の投与後２４時間以内に投与される、項目９４に記載の方法。
・（項目１０５）  項目９４に記載の方法であって、ここで、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量が第１のバイアルに含まれ、そして上記Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログの治療有効量が第２のバイアルに含まれ、上記第１のバイアルの内容物および上記第２のバイアルの内容物が、上記被験体に同時にかまたは連続して投与される、方法。
・（項目１０６）  項目１０５に記載の方法であって、ここで、上記第１のバイアル中の上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物が、β−ラパコンまたはその誘導体もしくはアナログであり、そして上記第２のバイアル中の上記Ｇ２／Ｍ期薬物がパクリタキセルである、方法。
・（項目１０７）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、約１３５ｍｇ／ｍ２〜約３００ｍｇ／ｍ２の投薬量で静脈内投与される、項目９４に記載の方法。
・（項目１０８）  上記Ｇ２／Ｍ期薬物が、約１７５ｍｇ／ｍ２の投薬量で静脈内投与される、項目１０７に記載の方法。
・（項目１０９）  項目９４に記載の方法であって、上記Ｇ１および／もしくはＳ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログ、ならびに上記Ｇ２／Ｍ期薬物、またはその誘導体もしくはアナログが、薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、方法。
・（項目１１０）  項目１０９に記載の方法であって、上記薬学的に受容可能なキャリアが、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ、Ｐｏｖｉｄｏｎｅ  Ｋ１７、Ｐｏｖｉｄｏｎｅ  Ｋ１２、Ｔｗｅｅｎ  ８０、エタノール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ／エタノール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００、プロピレングリコール、Ｔｒａｐｐｓｏｌ、α−シクロデキストリンまたはそのアナログ、β−シクロデキストリンまたはそのアナログ、およびγ−シクロデキストリンまたはそのアナログからなる群より選択される水溶性キャリア分子である、方法。
・（項目１１１）  上記被験体がヒトである、項目９４に記載の方法。
【００１７】
上記の説明は、以下に続くその詳細な説明が理解され得るように、そして当該分野への本発明の寄与がより良好に理解され得るように、本発明のより重要な特徴を、やや広範に示している。本発明の他の目的および特徴は、添付の図面と合わせて考慮されて、以下の詳細な説明から明らかとなる。しかし、図面は、単なる例示目的のために設計されており、本発明の制限の規定として設計されておらず、本発明の制限の規定についての参照は、添付の特許請求の範囲に対してなされるべきであることが理解されるべきである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
本発明は、ＭＭならびに他の血液腫瘍および／または血液悪性腫瘍に罹患した個体の処置のために提供される。この方法は、Ｇ１および／もしくはＳ期薬物（例えば、β−ラパコン）またはその誘導体もしくはアナログの有効量を、ＭＭに罹患した個体に投与する工程を包含する。別の実施形態では、この方法は、Ｇ２／Ｍ期薬物を伴うＧ１および／もしくはＳ期薬物の投与を利用する方法を使用して、多発性骨髄腫ならびに他の血液腫瘍および／または血液悪性腫瘍を処置するための組み合わせ療法を施す工程を包含する。
【００１９】
１つの実施形態では、本発明は、細胞周期におけるＧ１および／もしくはＳ期チェックポイントにある悪性細胞を標的化する薬物または化合物を投与することによって、このような悪性細胞を有する被験体を処置する方法、またはこのような悪性細胞のさらなる増殖を阻害する方法に関する。次いで、細胞周期におけるＧ２／Ｍチェックポイントで作用する第二の薬物または化合物が、Ｇ１および／もしくはＳ期薬物または化合物と同時にか、あるいはＧ１および／もしくはＳ期薬物または化合物の後で投与される。これらの判断基準を満たす個々の化合物は、当業者に公知である。例えば、β−ラパコンおよびその誘導体は、Ｇ１およびＳ期薬物である。一方、Ｔａｘｏｌ（登録商標）およびその誘導体は、Ｇ２／Ｍ薬物である。代表的な化合物のリストを、表１において以下に示す。
【００２０】
【表１】
2008110995.tif 000003
【００２１】
本発明の組み合わせは、β−ラパコンおよびＴａｘｏｌ（登録商標）を使用すると特に有益であり、この場合には相乗的な結果が得られる。複数のチェックポイント（例えば、Ｇ１および／もしくはＳ期ならびにＧ２／Ｍ期）での細胞周期遅延の根底をなす分子変化は、例えば、悪性細胞においてアポトーシスの相乗的誘導を引き起こし得る。理論に束縛されることは望まないが、この相乗的効果は、ｃｄｃ２キナーゼの阻害およびｐ２１のアップレギュレーションによって媒介されると考えられる。ｐ２１は、Ｇ１およびＳ期チェックポイントを制御し（Ｅｌｌｅｄｇｅ，Ｓ．Ｊ．（１９９６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４、１６６４−１６７２）、そしてＧ２／Ｍチェックポイントの調節に関与する（Ｈａｒｔｗｅｌｌ
Ｌ．Ｈ．ら、Ｍ．Ｂ．（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６６、１８２１−１８２８）。細胞周期チェックポイントはまた、ｃｄｃ２キナーゼおよびそれらのインヒビターによって調節される（Ｅｌｌｅｄｇｅ，Ｓ．Ｊ．（１９９６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４、１６６４−１６７２およびＮｕｒｓｅ，Ｐ．（１９９７）Ｃｅｌｌ  ９１、８６５−８６７）。
【００２２】
好ましくは、Ｇ１および／もしくはＳ期化合物は、Ｇ２／Ｍ期チェックポイントで細胞を標的化する化合物よりも前に投与されるか、あるいはＧ２／Ｍ期チェックポイントで細胞を標的化する化合物と同時に投与される。
【００２３】
より好ましくは、Ｇ１および／もしくはＳ期化合物は、Ｇ２／Ｍチェックポイントで細胞を標的化する化合物よりも前に投与される。
【００２４】
好ましいＧ１および／もしくはＳ期チェックポイント標的化化合物としては、Ｇ１および／もしくはＳ期薬物（例えば、β−ラパコン）、Ｇ１期薬物（例えば、ロバスタチン、ミモシン（ｍｉｍｏｓｉｎｅ）、タモキシフェンなど）、およびＳ期薬物（例えば、ゲムシタビン、５−ＦＵ、ＭＴＸなど）が挙げられる。β−ラパコン、その誘導体およびアナログ（式Ｉａ）が最も好ましい。
【００２５】
【化２】
2008110995.tif 000004
【００２６】
さらに、Ｇ１および／もしくはＳ期チェックポイント標的化薬物としては、還元型β−ラパコンの誘導体が挙げられる。好ましいＧ２／Ｍ期チェックポイント標的化化合物としては、以下が挙げられる：微小管標的化薬物（例えば、Ｔａｘｏｌ（登録商標）、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）、ナベルビン（ｎａｖｅｌｂｉｎｅ）など）およびトポイソメラーゼ有害物（例えば、テニポシド、エトポシド、アドリアマイシン、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｉｎｅ）、アムサクリン、エピルビシン、イダルビシンなど）。
【００２７】
エポチロン（エポチロンポリケチド）は、タキソール（ｔａｘｏｌ）と同じ機構によって微小管を安定化する、微小管標的化薬物である（Ｌｉｔａｎｇら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７、６４０−６４２を参照のこと）。エポチロンは、タキソール耐性腫瘍に対して有効であり、そして十分に水溶性であるので、有益である。エポチロンＡおよびエポチロンＢは、天然において最も豊富であり、そして１２，１３−デソキシ−エポチロンＢ（エポチロンＤ）は、最高の治療指数を有する。エポチロン（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄまたはそれらの混合物）は、β−ラパコンと組み合わせて使用され得、そしてこれは、先に記載されたようなβ−ラパコンとＴａｘｏｌ（登録商標）との組み合わせと同様に、悪性細胞においてアポトーシスの相乗的誘導を引き起こし得る。本発明の目的のために、エポチロンは、エポチロンＡ、Ｂ、ＣまたはＤ（デソキシ−エポチロン）をいう。
【００２８】
好ましい組み合わせとしては、以下が挙げられる：
β−ラパコンとＴａｘｏｌ（登録商標）；β−ラパコンとドセタキセル；β−ラパコンとビンクリスチン；β−ラパコンとビンブラスチン；β−ラパコンとノコダゾール；β−ラパコンとテニポシド；β−ラパコンとエトポシド；β−ラパコンとアドリアマイシン；β−ラパコンとエポチロン；β−ラパコンとナベルビン；β−ラパコンとカンプトテシン；β−ラパコンとダウノルビシン；β−ラパコンとダクチノマイシン；β−ラパコンとミトキサントロン；β−ラパコンとアムサクリン；β−ラパコンとエピルビシン；またはβ−ラパコンとイダルビシン。
【００２９】
還元型β−ラパコンとＴａｘｏｌ（登録商標）；還元型β−ラパコンとドセタキセル；還元型β−ラパコンとビンクリスチン；還元型β−ラパコンとビンブラスチン；還元型β−ラパコンとノコダゾール；還元型β−ラパコンとテニポシド；還元型β−ラパコンとエトポシド；還元型β−ラパコンとアドリアマイシン；還元型β−ラパコンとエポチロン；還元型β−ラパコンとナベルビン；還元型β−ラパコンとカンプトテシン；還元型β−ラパコンとダウノルビシン；還元型β−ラパコンとダクチノマイシン；還元型β−ラパコンとミトキサントロン；還元型β−ラパコンとアムサクリン；還元型β−ラパコンとエピルビシン；または還元型β−ラパコンとイダルビシン。
【００３０】
ロバスタチンとＴａｘｏｌ（登録商標）；ロバスタチンとドセタキセル；ロバスタチンとビンクリスチン；ロバスタチンとビンブラスチン；ロバスタチンとノコダゾール；ロバスタチンとテニポシド；ロバスタチンとエトポシド；ロバスタチンとアドリアマイシン；ロバスタチンとエポチロン；ロバスタチンとナベルビン；ロバスタチンとカンプトテシン；ロバスタチンとダウノルビシン；ロバスタチンとダクチノマイシン；ロバスタチンとミトキサントロン；ロバスタチンとアムサクリン；ロバスタチンとエピルビシン；またはロバスタチンとイダルビシン。
【００３１】
ミモシンとＴａｘｏｌ（登録商標）；ミモシンとドセタキセル；ミモシンとビンクリスチン；ミモシンとビンブラスチン；ミモシンとノコダゾール；ミモシンとテニポシド；ミモシンとエトポシド；ミモシンとアドリアマイシン；ミモシンとエポチロン；ミモシンとナベルビン；ミモシンとカンプトテシン；ミモシンとダウノルビシン；ミモシンとダクチノマイシン；ミモシンとミトキサントロン；ミモシンとアムサクリン；ミモシンとエピルビシン；またはミモシンとイダルビシン。
【００３２】
タモキシフェンとＴａｘｏｌ（登録商標）；タモキシフェンとドセタキセル；タモキシフェンとビンクリスチン；タモキシフェンとビンブラスチン；タモキシフェンとノコダゾール；タモキシフェンとテニポシド；タモキシフェンとエトポシド；タモキシフェンとアドリアマイシン；タモキシフェンとエポチロン；タモキシフェンとナベルビン；タモキシフェンとカンプトテシン；タモキシフェンとダウノルビシン；タモキシフェンとダクチノマイシン；タモキシフェンとミトキサントロン；タモキシフェンとアムサクリン；タモキシフェンとエピルビシン；またはタモキシフェンとイダルビシン。
【００３３】
ゲムシタビンとＴａｘｏｌ（登録商標）；ゲムシタビンとドセタキセル；ゲムシタビンとビンクリスチン；ゲムシタビンとビンブラスチン；ゲムシタビンとノコダゾール；ゲムシタビンとテニポシド；ゲムシタビンとエトポシド；ゲムシタビンとアドリアマイシン；ゲムシタビンとエポチロン；ゲムシタビンとナベルビン；ゲムシタビンとカンプトテシン；ゲムシタビンとダウノルビシン；ゲムシタビンとダクチノマイシン；ゲムシタビンとミトキサントロン；ゲムシタビンとアムサクリン；ゲムシタビンとエピルビシン；またはゲムシタビンとイダルビシン。
【００３４】
５−ＦＵとＴａｘｏｌ（登録商標）；５−ＦＵとドセタキセル；５−ＦＵとビンクリスチン；５−ＦＵとビンブラスチン；５−ＦＵとノコダゾール；５−ＦＵとテニポシド；５−ＦＵとエトポシド；５−ＦＵとアドリアマイシン；５−ＦＵとエポチロン；５−ＦＵとナベルビン；５−ＦＵとカンプトテシン；５−ＦＵとダウノルビシン；５−ＦＵとダクチノマイシン；５−ＦＵとミトキサントロン；５−ＦＵとアムサクリン；５−ＦＵとエピルビシン；または５−ＦＵとイダルビシン。
【００３５】
ＭＴＸとＴａｘｏｌ（登録商標）；ＭＴＸとドセタキセル；ＭＴＸとビンクリスチン；ＭＴＸとビンブラスチン；ＭＴＸとノコダゾール；ＭＴＸとテニポシド；ＭＴＸとエトポシド；ＭＴＸとアドリアマイシン；ＭＴＸとエポチロン；ＭＴＸとナベルビン；ＭＴＸとカンプトテシン；ＭＴＸとダウノルビシン；ＭＤＣとダクチノマイシン；ＭＤＣとミトキサントロン；ＭＴＸとアムサクリン；ＭＴＸとエピルビシン；またはＭＤＣとイダルビシン。
【００３６】
本発明の組み合わせは、特に転移性疾患を有する患者において、腫瘍負荷重（ｔｕｍｏｒ  ｂｕｒｄｅｎ  ｌｏａｄ）を減少するにおいて、および／または腫瘍増殖を退行させるにおいて有益な、驚くべき相乗作用を生じる。
【００３７】
好ましくは、処置されるヒト悪性腫瘍は多発性骨髄腫であるが、本発明はこの局面に限定されず、そして他の転移性疾患が、本発明の組み合わせによって処置され得る。
【００３８】
本発明の組み合わせの個々の成分は、以下でより詳細に扱われる。
【００３９】
列挙されたように、記載される組み合わせ療法の１つの好ましい成分は、Ｇ２／Ｍ化合物（これは、好ましくは、タキサン誘導体である）である。タキサンは、もともと太平洋イチイの木（Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｉｌｉａ）に由来する、テルペンのファミリーであり、これには、パクリタキセルおよびドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ、Ｓ．Ａ．、Ｆｒａｎｃｅ）が挙げられるが、これらに限定されない。Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｉｌｉａは、特定の腫瘍（特に、乳癌および卵巣腫瘍）に対して活性を有する。パクリタキセルは、本発明に従って、好ましいタキサン誘導体である。パクリタキセルは、チューブリン二量体からの微小管のアセンブリを促進する微小管阻害剤であると考えられ、そして脱重合化を妨ぐことによって微小管を安定化する。この安定化は、重要な間期および有糸分裂の細胞機能に必須である微小管ネットワークの正常な動的再編成の阻害を引き起こす。用語「パクリタキセル」は、天然に由来する形態および関連形態、ならびに抗新生物特性を有する化学合成化合物またはその誘導体（米国特許第５，４４０，０５６号（本明細書中で参考として援用される）に記載されるような、脱酸素化パクリタキセル化合物、およびＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏ．によってＴＡＸＯＬ（登録商標）として販売されるものを含む）の両方を含む。パクリタキセルの化学式は公知であり、そして米国特許第５，４４０，０５６号において開示されている。ＴＡＸＯＬ（登録商標）に加えて、他の誘導体が周知である（例えば、「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＴＡＸＯＬ（登録商標）ｏｔｈｅｒ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」、Ｄ．Ｇ．Ｉ．Ｋｉｎｇｓｔｏｎら、Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２６巻、表題「Ｎｅｗ  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」（１９８６）、Ａｔｔａ−ｕｒ−Ｒａｈｍａｎ，Ｐ．Ｗ．ｌｅ  Ｑｕｅｅｎｅ編（Ｅｌｖｅｓｉｅｒ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ  １９８６）、２１９−２３５頁において言及されるもの）。さらに他のタキサン誘導体が、当該分野において公知であり、そして例えば、米国特許第５，７７３，４６１号；同第５，７６０，０７２号；同第５，８０７，８８８号；および同第５，８５４，２７８号（この各々が、本明細書中で参考として援用される）に開示されるものが挙げられる。
【００４０】
Ｇ２／Ｍ化合物（例えば、タキサン誘導体）は、パクリタキセルについてＰｈｙｓｉｃｉａｎ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ、第５３版（１９９９）、発行元Ｅｄｗａｒｄ  Ｒ．Ｂａｒｎｈａｒｔ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ（「ＰＤＲ」）に記載されたように、一般的に認められる有効用量範囲で、臨床医によって適切と見出される任意の様式で投与され得る。
【００４１】
一般的に、Ｇ２／Ｍ期薬物または化合物（例えば、タキサン誘導体）は、約１３５ｍｇ／ｍ２〜約３００ｍｇ／ｍ２、好ましくは、約１３５ｍｇ／ｍ２〜約１７５ｍｇ／ｍ２、そして最も好ましくは、約１７５ｍｇ／ｍ２の投薬量で静脈内投与される。投薬量は、約１時間〜約２４時間の期間にわたって、そして代表的には、約３時間の期間にわたって投与されることが好ましい。投薬量は、１週間〜約４週間またはそれより長く、好ましくは、約２週間〜約３週間、反復され得る。
【００４２】
上記のように、このＧ２／Ｍ期薬物（例えば、タキサン誘導体）は、Ｇ１および／またはＳ期薬物（例えば、β−ラパコンまたはその誘導体もしくはそのアナログ）と類似したレジメンで投与されるが、その量は、好ましくは、通常投与される量から減少される。例えば、そのタキサン誘導体は、β−ラパコンが患者に投与されるのと同時にかまたはその後で投与されることが、好ましい。そのタキサン誘導体がβ−ラパコンの後で投与される場合、そのタキサン誘導体は、そのβ−ラパコンが投与された約２４時間後に、有利に投与される。
【００４３】
このＧ２／Ｍ期薬物またはＧ２／Ｍ期化合物と組み合わせるための併用療法のもう一方の成分は、Ｇ１および／またはＳ期薬物であり、好ましくは、このＧ１および／またはＳ期薬物は、β−ラパコンまたはその誘導体もしくはそのアナログである。
【００４４】
β−ラパコン（３，４−ジヒドロ−２，２−ジメチル−２Ｈ−ナフト［１，２−ｂ］ピラン−５，６−ジオン）は、現在使用される抗癌剤とは異なる化学構造を有する、単純な植物産物である。このβ−ラパコンは、天然に存在するラパコールの硫酸処置によって得られ、天然に存在するラパコールは、主にブラジルにて成長するＴａｂｅｂｕｉａ  ａｖｅｌｌａｎｅｄａｅから容易に単離される。このβ−ラパコンはまた、ロマチオールから容易に合成され得、ロマチオールは、オーストラリアにて成長するロマチア（ｌｏｍａｔｉａ）の種子から単離される（Ｈｏｏｋｅｒ，Ｓ．ら（１９３６）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．５８：１１８１〜１１９０；Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ  ｄｅ  Ｌｉｍａ，Ｏ．ら（１９６２）Ｒｅｖ．Ｉｎｓｔ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．Ｕｎｉｖ．Ｒｅｃｉｆｅ．，４：３〜１７）。
【００４５】
β−ラパコンは、種々の薬理学的効果を有することが示されている。β−ラパコンは、トポイソメラーゼＩインヒビターであるが、カンプトセシンとは異なる機構により作用する（Ｌｉ，Ｃ．Ｊ．ら（１９９３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２２４６３〜２２４６８）。多数のβ−ラパコン誘導体が合成されており、そして抗ウイルス剤および抗寄生生物剤として試験されている（Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ，Ａ．Ｍ．ら（１９８０）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ  １：１６７〜１７６；Ｓｃｈａｆｆｎｅｒ−Ｓａｂｂａ，Ｋ．ら（１９８４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７：９９０〜９９４；Ｌｉ，Ｃ．ら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：１８４２）。β−ラパコンおよびその誘導体（例えば、３−アリル−β−ラパコン）は、抗トリパノソーマ効果を示し（Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ，Ａ．Ｍ．ら（前出））、その機構は、現時点では不明である。β−ラパコンはまた、ＤＮＡ損傷因子に対して細胞を感受性にする、ＤＮＡ修復インヒビターであることも示されている（Ｂｏｏｒｓｔｅｉｎ，Ｒ．Ｊ．ら（１９８４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１１８：８２８〜８３４；Ｂｏｏｔｈｍａｎ，Ｄ．Ａ．ら（１９８９）Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４９：６０５〜６１２）。β−ラパコンは、イヌ、ラット、マウス、およびニワトリにおいて、十分に許容される。許容される最大用量は、１ヶ月の間毎日ｐ．ｏ．投与される場合は、ラットにおいては２００ｍｇ／ｋｇであり、そしてイヌにおいては１００ｍｇ／ｋｇである。好ましくは、β−ラパコンまたはその誘導体もしくはそのアナログのような化合物は、１日あたりレシピエントの体重１ｋｇにつき１０〜５００，０００μｇの範囲で、より好ましくは、１日あたりレシピエントの体重１ｋｇにつき１０００〜５０，０００μｇの範囲で、最も好ましくは、１日あたりレシピエントの体重１ｋｇにつき５０００〜２５，０００μｇの範囲で、少なくとも１用量で、患者に投与される。その望ましい用量は、１回、適切に投与されるか、あるいは、いくつかのより部分的な用量が、その日を通して適切な間隔でかまたは他の適切なスケジュールで、投与される。これらの部分用量は、例えば、１〜２０，０００μｇ／単位投薬形態、好ましくは、１０〜１０，０００μｇ／単位投薬形態を含む、単位投薬形態として投与され得る。
【００４６】
β−ラパコンの誘導体およびアナログは、当該分野で公知であり、例えば、米国特許第５，８２８，７００号；ＷＯ９７／０８１６２；および米国特許第５，７６３，６２５号に開示される。好ましい誘導体およびアナログとしては、以下の式ＩおよびＩＩ
【００４７】
【化３】
2008110995.tif 000005
【００４８】
【化４】
2008110995.tif 000006
【００４９】
の化合物が挙げられ、ここで、ＲおよびＲ１は各々、水素、ヒドロキシ、チオ（ＳＨ）、ハロゲン（例えば、フルオロ、クロロ、およびブロモ）、置換アリールおよび非置換アリール、置換アルケニルおよび非置換アルケニル、置換アルキルおよび非置換アルキル、および置換アルコキシおよび非置換アルコキシ、ならびにそれらの塩からなる群より独立して選択され、ＲおよびＲ１が結合された環炭素の間の点線を引かれた二重結合は、必要に応じた環二重結合を示す。このアルキル基は、好ましくは、１個〜約１５個の炭素原子、より好ましくは、１個〜約１０個の炭素原子、なおより好ましくは、１個〜約６個の炭素原子を有する。本明細書中にて使用される場合、用語アルキルとは、他のように改変されない限り、環状基および非環状基の両方を指すが、当然、環状基は、環のメンバーである少なくとも３つの炭素を含む。直鎖または分枝鎖の非環状アルキル基が、一般的には環状基よりも好ましい。直鎖アルキル基は、一般的には分枝型よりも好ましい。このアルケニル基は、好ましくは、２個〜約１５個の炭素原子、より好ましくは、２個〜約１０個の炭素原子、なおより好ましくは、２個〜約６個の炭素原子を有する。特に好ましいアルケニル基は、３つの炭素原子を有し（すなわち、１−プロペニルまたは２−プロペニル）、そのアリル部分が、特に好ましい。フェニルおよびナフチルは、一般的に好ましいアリール基である。アルコキシ基としては、１個以上の酸素結合を有するアルコキシ基が挙げられ、好ましくは、１個〜１５個の炭素原子、より好ましくは１個〜約６個炭素原子を有する。この置換Ｒ基および置換Ｒ１基は、１つ以上の適切な基（例えば、１個〜１０個の炭素原子または１個〜６個の炭素原子を有するアルキル基のような、アルキル基；２個〜１０個の炭素原子または２個〜６個の炭素原子を有するアルケニル基のような、アルケニル基；６個〜１０個の炭素原子を有する、アリール基；フルオロ、クロロ、およびブロモのような、ハロゲン；ならびにＮ、Ｏ、およびＳ）によって１つ以上の利用可能な位置で置換され得、この適切な基としては、ヘテロアルキル（例えば、１つ以上のヘテロ原子結合（従って、アルコキシ、アミノアルキル、およびチオアルキルを含む）および１個〜１０個の炭素原子または１個〜６個の炭素原子を有する、ヘテロアルキル）も挙げられる。
【００５０】
式Ｉおよび式ＩＩの化合物は、容易に作製または入手され得る（Ｐａｒｄｅｅ，Ａ．ら（１９８９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４９，１〜８；Ｓｃｈａｆｆｎｅｒ−Ｓａｂｂａ，Ｋ．ら（１９８４）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７：８，９９０〜９９４；Ｈｏｏｋｅｒ，ＳＣ（１９３６）Ｉ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．５８：１１８１〜１１９０を参照のこと）。
【００５１】
式Ｉの好ましい化合物としては、β−ラパコン、３−アリル−β−ラパコン、３−ブロモ−β−ラパコンおよび３−ＯＨ−β−ラパコンが挙げられる。式Ｉのより好ましい化合物は、３−アリル−β−ラパコンおよび３−ブロモ−β−ラパコンである。
【００５２】
式ＩＩの好ましい化合物としては、３−ブロモ−α−ラパコンが挙げられる。
【００５３】
下に示される式ＩＩＩ
【００５４】
【化５】
2008110995.tif 000007
【００５５】
のβ−ラパコンアナログもまた、本発明の組成物および方法において使用され得、ここで、Ｒは（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１であり、ｎは、０〜１０の整数であり、そしてＲ１は、水素、アルキル、アリール、ヘテロ芳香族、複素環式、脂肪族、アルコキシ、ヒドロキシ、アミン、チオール、アミド、またはハロゲン側基である。
【００５６】
式ＩＩＩの好ましいアナログとしては、３−エトキシカルボニルメチル−β−ラパコン、３−（２’−ヒドロキシエチル）−β−ラパコン、３−メチル−β−ラパコン、３−（２’−アミノエチル）−β−ラパコン、３−メトキシ−β−ラパコン、３−ベンジルオキシ−β−ラパコン−エトキシカルボニルメトキシ−β−ラパコン、および３−アリルオキシ−β−ラパコンが、挙げられる。
【００５７】
式ＩＩＩのアナログは、米国特許第５，７６３，６２５号（本明細書中に参考として援用される）に開示される方法によって、作製され得る。
【００５８】
下に示される式ＩＶおよび式Ｖ
【００５９】
【化６】
2008110995.tif 000008
【００６０】
【化７】
2008110995.tif 000009
【００６１】
のβ−ラパコン誘導体は、本発明の組成物および方法において使用され得、ここで、Ｒ１〜Ｒ６は各々、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルケニル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル、−（ＣＨ２）ｎ−アリール、（ＣＨ２  からなる群より独立して選択される。
【００６２】
式ＩＶおよび式Ｖの好ましいアナログとしては、３−（β−アラニル）−β−ラパコンおよび３−マロニル−β−ラパコンが、挙げられる。
【００６３】
式ＩＶおよび式Ｖのアナログは、米国特許第５，８２４，７００号（本明細書中に参考として援用される）に開示される方法によって、作製され得る。
【００６４】
他の化学療法剤を使用する場合と同様に、個々の患者は、主治医によって適切であると見なされる様式でモニターされる。重篤な好中球減少または重篤な末梢神経障害が生じる場合、あるいはグレード２以上のレベルの粘膜炎（ｍｕｃｏｓｉｔｉｓ）が観察される場合は、Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅを使用して、投薬量もまた、減少され得る。
【００６５】
本明細書中に記載される併用療法剤は、１つずつおよび連続して投与され得るか、または両方の薬剤を含むかもしくはその薬剤のうちの１つと他の治療剤とを含むカクテルもしくは組み合わせで投与され得、この他の治療剤としては、免疫抑制剤、増強剤、および副作用軽減剤が挙げられるが、これらに限定されない。上記のように、この治療剤の組み合わせは、連続して投与される場合は、タキサン誘導体の前にβ−ラパコン成分が投与されたときに、より効果的である。この治療剤は、好ましくは、静脈内投与されるか、または筋肉内注射、皮下注射、髄腔内注射、もしくは腹腔内注射により全身投与される。
【００６６】
この組み合わせ療法の一部として提供される本発明の薬学的組成物は、投薬形態で、固体、半固体、または液体（例えば、懸濁物、エアロゾルなど）として、存在し得る。好ましくは、この組成物は、正確な投薬量の単回投与に適切な単位投薬形態で、投与される。この組成物はまた、所望される処方物に依存して、薬学的に受容可能な非毒性キャリアまたは薬学的に受容可能な非毒性賦形剤を含み得、このキャリアまたは賦形剤は、動物またはヒトへの投与のための薬学的組成物を処方するために一般的に使用されるビヒクルとして、規定される。この希釈剤は、その組み合わせの生物学的活性に影響しないように選択される。このような希釈剤の例は、滅菌水、生理学的食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液、およびハンクス溶液である。β−ラパコンの可溶化のための好ましいキャリアは、ヒドロキシプロピルβシクロデキストリン、水可溶化キャリア分子である。β−ラパコンおよび／またはタキサン誘導体と混合するための他の水可溶化薬剤（例えば、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ、Ｐｏｖｉｄｏｎｅ  Ｋ１７、Ｐｏｖｉｄｏｎｅ
Ｋ１２、Ｔｗｅｅｎ  ８０、エタノール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ／エタノール、ポリエチレングリコール４００、プロピレングリコールおよびＴｒａｐｐｓｏｌ）が、企図される。さらに、本発明は、水可溶化剤に限定されず、そして油ベースの可溶化剤（例えば、リピドールおよび落花生油）もまた、使用され得る。
【００６７】
さらに、この薬学的組成物または処方物はまた、他のキャリア、アジュバント、または非毒性の非治療性非免疫原性安定化剤などを含み得る。このような希釈剤またはキャリアの有効量は、成分の溶解度、または生物学的活性などの観点から、薬学的に受容可能な処方物を得るために有効な量である。リポソーム処方物もまた、本発明により企図される。リポソーム処方物は、例えば、米国特許第５，４２４，０７３号（本明細書中に参考として援用される）に記載されている。
【００６８】
本発明の目的のために、本明細書中に記載されるＧ１および／またはＳ期薬物もしくはＧ１および／またはＳ期化合物、あるいはその誘導体またはそのアナログ、ならびにＧ２／Ｍ薬物もしくはＧ２／Ｍ化合物、あるいはその誘導体またはそのアナログは、その薬理学的に受容可能な塩（好ましくは、ナトリウム塩）；ハロゲン置換（好ましくは、塩素またはフッ素）を含むアナログ；アンモニウム塩または置換アンモニウム塩（好ましくは、二級アンモニウム塩または三級アンモニウム塩）を含むアナログ；アルキル、アルケニル、アリールまたはそれらのアルキル置換誘導体、アルケニル置換誘導体、アリール置換誘導体、ハロ置換誘導体、アルコキシ置換誘導体、アルケニルオキシ置換誘導体（好ましくは、メチル、メトキシ、エトキシ、またはフェニルアセテート）を含む、アナログ；および天然のアナログ（例えば、ナフチルアセテート）を含む。さらに、本明細書中に記載されるＧ１および／またはＳ期化合物、あるいはその誘導体またはそのアナログ、ならびにＧ２／Ｍ期化合物、あるいはその誘導体またはそのアナログは、水溶性ポリマーと結合体化され得るか、または水溶性キレート剤または放射性核種で誘導体化され得る。水溶性ポリマーの例は、ポリグルタミン酸ポリマー；以下とのコポリマー：ポリカプロラクトン、ポリグリコール酸、ポリ乳酸（ｐｏｌｙａｃｔｉｃ  ａｃｉｄ）、ポリアクリル酸、ポリ（２−ヒドロキシエチル１−グルタミン）、カルボキシメチルデキストラン、ヒアルロン酸、ヒト血清アルブミン、ポリアルギン酸；またはこれらの組み合わせであるが、これらに限定されない。水溶性キレート剤の例は、ＤＩＰＡ（ジエチレントリアミンペンタ酢酸）、ＥＤＴＡ、ＤＴＴＰ、ＤＯＴＡ、またはこれらの水溶性塩などであるが、これらに限定されない。放射性核種の例は、１１１Ｉｎ、９０Ｙ、１６６Ｈｏ、６８Ｇａ、９９ｍＴｃなどであるが、これらに限定されない。
【００６９】
上記のように静脈内投与が好ましいが、本発明は、この局面に限定されることは意図されず、そしてその化合物は、当該分野で公知の任意の手段により投与され得る。そのような様式としては、経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与（口内投与および舌下投与を含む）または非経口投与（皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与および皮内投与を含む）が挙げられる。
【００７０】
投与の容易さおよび患者に対する快適さのために、経口投与が一般的に好ましい。しかし、経口投与は、代表的には、静脈内投与より高用量の投与を必要とする。従って、状況に依存して、当業者は、特定の場合においてどの投与形態が最良であるかを決定しなければならない−１月の投与あたりの回数に対して必要とされる用量を考慮することが、必要である。
【００７１】
Ｇ１および／またはＳ期化合物（例えば、β−ラパコン）を投与する際、そのような化合物の通常の用量が、下記のように個別に利用される。しかし、併用療法が使用される場合、より低用量−代表的には個別量の７５％以下、より好ましくは、５０％以下、なおより好ましくは、４０％以下−を使用することが、好ましい。
【００７２】
治療適用において、本発明に従って使用される薬剤の投薬量は、選択される投薬量に影響を与える要因の中でも、レシピエント患者の年齢、体重、および臨床状態、ならびに治療を施す臨床家または実施者の経験および判断に依存して、変化する。一般的には、その用量は、腫瘍の増殖の遅延（好ましくは、後退）を生じるに十分であるべきであり、そしてまた好ましくは癌の完全な後退を引き起こすに十分であるべきである。薬学的因子の有効量は、臨床家または他の適格な監視者により気付かれるような客観的に同定可能な改善を提供する、量である。患者における腫瘍の後退は、代表的には、腫瘍の直径に対して測定される。腫瘍の直径の減少は、後退を示す。後退はまた、処置が停止された後に腫瘍が再発しないことによっても、示される。
【００７３】
本発明はさらに、上記に提供されるようなタキサン誘導体と一定用量のβ−ラパコンまたはその誘導体もしくはそのアナログとを含む、薬物の組み合わせを包含し、そして、癌患者の処置のためのキットを包含し、このキットは、上記に提供されるような用量の、タキサン誘導体のバイアルとβ−ラパコンまたはその誘導体もしくはそのアナログのバイアルとを含む。好ましくは、このキットは、それらの用途を記載する指示書をともに含む。
【００７４】
本発明は、以下の実施例を参照することによってさらに規定される。前述の詳細な説明および以下の実施例は、本発明を例示するだけであり、本発明の範囲に対する限定として受け取られるべきではないことが、理解される。本発明の目的および関心から逸脱することなく、材料および方法の両方に対する多くの改変が実施され得ることは、当業者に明らかである。さらに、本明細書中に引用されるすべての特許、特許出願、および刊行物は、本明細書中に参考として援用される。
【実施例】
【００７５】
（実施例）
（化学物質）  β−ラパコンを、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に２０ｍＭの濃度で溶解し、等分し、そして細胞培養用に−２０℃で貯蔵した。
【００７６】
（細胞培養物）  本研究において使用した細胞株は、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｄｕｌｔ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｄａｎａ−Ｆａｒｂｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡにより提供された。ＡＲＨ−７７、ＭＭ．１ＳおよびＨＳスルタン（ｓｕｌｔａｎ）は、ＭＭ細胞株である；ｍｍ．ＡｓはＭＭ患者の細胞である；ＭＭ．１Ｒ、ＤＯＸ．４０およびＭＲ．２０は、それぞれ、照射、ドキソルビシン、およびミトキサントロンに耐性である。
細胞を、５％  ＣＯ２、１００％湿度中で３７℃にて維持し、そして１０％  ＦＣＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを補充したＲＰＭＩ１６４０培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）中にて培養した。
【００７７】
（コロニー形成アッセイ）  対数増殖中の細胞を、６ウェルプレート中に２０００細胞／ウェルで播種し、そして４８時間接着させた。５μｌ未満の濃縮溶液（最終ＤＭＳＯ濃度０．１％未満に対応する）で、薬物を直接添加した。コントロールプレートには、同容量のＤＭＳＯのみを与えた。２４時間後、細胞をリンスし、そして新しい培地を添加した。１０〜２０日の間、毎日、培養物を観察し、その後、固定し、そして改変ライト−ギムザ染料（Ｓｉｇｍａ）を用いて染色した。３０個より細胞が多いコロニーを、生存体として計数した。
【００７８】
（細胞増殖アッセイ）  細胞増殖を、３Ｈ−チミジン取り込みアッセイおよび３［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（Ｔｈｉａｚｏｌｙｌ  ｂｌｕｅ、ＭＴＴ）アッセイ（Ｓｉｇｍａ
Ｃｏ．）によって測定した。生細胞のミトコンドリアデヒドロゲナーゼによる可溶性黄色色素から不溶性紫色ホルマザンへの変換を、細胞増殖の測定のために使用した（Ｍｏｓｍａｎｎ，Ｔ．（１９８３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６５：５５−６３）。簡単に述べると、９６ウェルプレート中に２０，０００細胞／ウェルで細胞をプレーティングし、完全増殖培地中で４８時間培養し、その後、β−ラパコンで２４時間処理した。ＭＴＴ溶液（５ｍｇ／ｍｉ）を、この完全培地に培養物容量の１／１０添加し、３〜４時間後、変換した色素を、酸性イソプロパノールで可溶化させ、そして波長５７０ｎｍにてＥＬＩＳＡリーダーを用いて光学密度を読み取り、６３０〜６９０ｎｍにてバックグラウンドを差し引いた（１７）。３Ｈ−チミジン取り込みアッセイについて、薬物処理の後で、１日培養のうちの最後の６時間の間、細胞を３Ｈ−ＴｄＲ（Ｄｕｐｏｎｔ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ；０．５μＣｉ／ウェル）でパルスし、ＨＡＲＶＥＳＴＡＲ  ９６  ＭＡＣＨ  ＩＩ（Ｔｏｍｔｅｃ，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＴ）細胞採取器の使用によってガラスフィルター上に採取し、そして１２０５  Ｂｅｔａｐｌａｔｅ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）シンチレーション計数管にて計数した（Ｔｒｅｏｎ，ＳＰら（１９９８）Ｂｌｏｏｄ  ９２：１７４９−５７を参照のこと）。
【００７９】
（アポトーシスアッセイ）  ３つの独立したアッセイによって、アポトーシスを測定した。１つのアッセイは、以前に記載された（１３，１９，２０，２２）ように、核のヨウ化プロピジウム染色によるｓｕｂ−Ｇ１画分を測定した。第２のアッセイは、ホスファチジルセリンの外部移行により決定される、膜変化（１３，２１）を測定した。簡単に述べると、細胞を、β−ラパコンで２４時間処理し、収集し、ＰＢＳ中で洗浄し、結合緩衝液中に再懸濁し、アネキシンＶ−ＦＩＴＣとともにインキュベートし、そしてフローサイトメトリーにより分析した。ＤＮＡラダー形成による第３のアッセイは、記載された（１９，２０，２２）ように実行した。
【００８０】
（ウェスタンブロット分析）  全細胞溶解物およびＳ−１００画分を、対数増殖中の細胞から調製した。ＥＣＬアッセイ系を使用して、Ｂｃｌ−２レベルおよびミトコンドリアから放出されたシトクロムＣ（Ｓ−１００画分）を検出し、ＰＡＲＰイムノブロット分析もまた使用した。簡単に述べると、細胞溶解物タンパク質サンプルを、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動し、その後、ニトロセルロース膜に電気泳動的に移した。そのブロットをブロックし、洗浄し、そしてＢｃｌ−２抗体（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）とともにインキュベートするか、または抗ＰＡＲＰモノクローナル抗体（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を１：１０００希釈で使用した。その後、そのフィルターを、西洋ワサビペルオキシダーゼと結合体化した第２の抗体とともにインキュベートした。最後に、そのフィルターを、検出試薬（ＲＰＮ  ２１０９；Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いて発色させ、そしてｈｙｐｅｒｆｉｌｍ−ＥＣＬ（ＲＰＮ  ２１０３）に曝した。このシトクロムＣ放出は、記載された（Ｌｉ，ＹＺら（１９９９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ５：２３２−２３９）ように実行した。
【００８１】
（β−ラパコンによるヒトＭＭ細胞中のコロニーの除去）  β−ラパコンの抗生存効果を試験するために、薬物感受性ヒトＭＭ細胞株ＡＲＨ−７７およびＤＯＸ−４０ドキソルビシン耐性細胞を、インビトロでβ−ラパコンで処理した。細胞生存を、コロニー形成アッセイによって決定した。β−ラパコンは、両方の細胞株における細胞生存を減少させ、ＩＣ１００は４μｍであった（図１）。
【００８２】
（正常なＰＢＭＣに対するＭＭ細胞の増殖に対するβ−ラパコンの差次的効果）  抗増殖活性を介してコロニー形成の差次的阻害が生じるか否かを決定するために、β−ラパコンの非存在下またはβ−ラパコン（２μＭ、４μＭ、８μＭおよび２０μＭ）の存在下で２４時間培養したＭＭ細胞の増殖を、ＭＴＴアッセイによって測定した。濃度４μＭにて、培養物中のＭＴＴを評価し、そしてこのＭＴＴが、７つすべてのＭＭ細胞株において有意に減少されたことを見出した（図２）。患者のＭＭ細胞（ｍｍ．Ａｓ）および薬物耐性ＭＭ細胞（ｍｍｌ．Ｒ、ＤＯＸ−４０、ＭＲ．２０）の増殖において、劇的な減少が存在した。交差耐性は観察されなかった。同じ結果が、３Ｈ−チミジン取り込みアッセイにより観察され得た（データは、示さない）。
【００８３】
ヒトＰＢＭＣに対するβ−ラパコンの細胞毒性を調査するために、この細胞を、抗凝固剤処理した血液から単離した。増殖性ＰＢＭＣを、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）２μｇ／ｍｌとともに７２時間インキュベートすることによって生成した（Ｃａｓｅ，ＤＣ  Ｊｒ．ら（１９７７）Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．６３：８９７−９０３）。β−ラパコンの非存在下またはβ−ラパコン（０．５μＭ、２μＭ、４μＭ、および８μＭ）の存在下で２４時間培養した細胞の増殖を、ＭＴＴにより測定した。新鮮かつ増殖性のＰＢＭＣの増殖は、減少しなかった。ＭＭ細胞と比較して、細胞毒性は観察されなかった（図２）。
【００８４】
（β−ラパコンによるアポトーシスの誘導）  β−ラパコンによる処理の後に増殖中のヒトＭＭ細胞において観察される大規模な細胞死がアポトーシスまたは壊死によるか否かを決定するために、独立した３つのアッセイを実施した。第１のアッセイは、薬物曝露の２４時間後に、細胞のゲノムＤＮＡをゲル電気泳動に供した。図３に示されるように、β−ラパコンは、アポトーシスによくあるＤＮＡラダー形成を誘導した。第２のアッセイでは、本発明者らは、ＰＩ染色手順を使用して、アポトーシスについての試験としてｓｕｂ−ＧＩ画分を測定した。図４（Ａ）に示されるように、ｓｕｂ−Ｇ１細胞が、検出された。第３のアッセイにおいて、本発明者らは、これらの細胞のアネキシン−Ｖ染色により測定される、ホスファチジルセリンの外部移行を測定した（図４（Ｂ））。アネキシン−Ｖ陽性細胞の割合は、ｓｕｂ−Ｇ１画分と相関関係にあった。これらの結果すべてが、これらの細胞のアポトーシス死をβ−ラパコンが誘導したことを示す。
【００８５】
（β−ラパコンによる誘導されるアポトーシスは、Ｂｃｌ−２の発現とは無関係であり、そしてシトクロムＣ放出の後に生じ、そしてこのアポトーシスの後に、ＰＡＲＰ切断が続く）  Ｂｃｌ−２の発現は、化学療法剤に対する癌細胞（ＭＭを含む）の耐性と関係付けられている（１４，１５）。ＭＭ細胞におけるアポトーシスがＢｃｌ−２発現の欠如または変化に起因するか否かを決定するために、本発明者らは、ウェスタンブロットアッセイによってＢｃｌ−２を測定した。Ｂｃｌ−２は、ＡＲＨ．７７細胞およびｍｍｌ．Ｒ細胞において発現され、β−ラパコンにより変化されなかった（データは、示さない）。このことは、β−ラパコン誘導性アポトーシスに対するこれらの細胞の感受性とは相関関係がない。ミトコンドリアから細胞質ゾルへのシトクロムＣの放出は、アポトーシスにおける重要な段階として関係付けられている。β−ラパコンがシトクロムＣ放出を誘発するか否かを決定するために、薬物処理後２時間目に、細胞質のシトクロムＣについて細胞を分析した。図５Ａに示されるように、トリパンブルー排除およびＭＴＴアッセイにより細胞が完全に生存性である場合に、β−ラパコン処理のすぐ後に、シトクロムＣが細胞質に放出された。このことは、シトクロムＣ放出が、ＭＭ細胞におけるβ−ラパコン誘導性アポトーシスにおける、初期事象であることを示唆する。次いで、本発明者らは、β−ラパコンが、ＰＡＲＰ切断を誘導するか否かを試験した。このＰＡＲＰ切断は、カスパーゼの活性化を示す、アポトーシスの特徴である。予期されたように、残存するインタクトなＰＡＲＰタンパク質（１１６ＫＤａ）に対応する２つのフラグメント、および代表的な８５ＫＤａのアポトーシスフラグメントが、可視化された（図５Ｂ）。
【００８６】
上述の発明は、理解を明確にするために例示および例によっていくらか詳細に記載されてきたが、添付された特許請求の範囲の趣旨および範囲から逸脱することなく、特定の変更および改変が実施され得ることを、当業者は容易に確認する。
【００８７】
本明細書中に記載されるすべての参考文献は、参考として援用される。
【図面の簡単な説明】
【００８８】
【図１】図１は、ヒトＭＭ細胞におけるβ−ラパコンによるコロニー形成（細胞生存）の阻害を示す（ＡＲＨ−７７（白四角）；Ｄｏｘ．４０（黒丸））。
【図２Ａ】図２は、正常なＰＢＭＣに対する、ＭＭ細胞の増殖に対するβ−ラパコンの示差的効果を示す。β−ラパコンの非存在下、または０．５μＭ、２μＭ、４μＭ、８μＭもしくは２０μＭのβ−ラパコン濃度で２４時間培養された、ＭＭ細胞、休止ＰＢＭＣ、増殖性ＰＢＭＣの増殖を、ＭＴＴアッセイによって測定した。使用した細胞は、以下を含む：（Ａ）においては、ＡＲＨ−７７、ＭＭ．１ＳおよびＨＳ  ｓｕｌｔａｎ（感受性ＭＭ細胞株）；（Ｂ）においては、ｍｍ．Ａｓ（ＭＭ患者細胞）；（Ｃ）においては、ＭＭ．１Ｒ、ＤＯＸ．４０、およびＭＲ．２０（耐性細胞株）；（Ｄ）においては、休止ＰＢＭＣ；（Ｅ）においては、増殖しているＰＢＭＣ（２μｇ／ｍｌのＰＨＡと共に７２時間インキュベーションすることによって生成された）。β−ラパコンの非存在下では、細胞を、等量のＤＭＳＯで処理した。
【図２Ｂ】図２は、正常なＰＢＭＣに対する、ＭＭ細胞の増殖に対するβ−ラパコンの示差的効果を示す。β−ラパコンの非存在下、または０．５μＭ、２μＭ、４μＭ、８μＭもしくは２０μＭの濃度のβ−ラパコン下で２４時間培養された、ＭＭ細胞、休止ＰＢＭＣ、増殖性ＰＢＭＣの増殖を、ＭＴＴアッセイによって測定した。使用した細胞は、以下を含む：（Ａ）においては、ＡＲＨ−７７、ＭＭ．１ＳおよびＨＳ  ｓｕｌｔａｎ（感受性ＭＭ細胞株）；（Ｂ）においては、ｍｍ．Ａｓ（ＭＭ患者細胞）；（Ｃ）においては、ＭＭ．１Ｒ、ＤＯＸ．４０、およびＭＲ．２０（耐性細胞株）；（Ｄ）においては、休止ＰＢＭＣ；（Ｅ）においては、増殖しているＰＢＭＣ（２μｇ／ｍｌのＰＨＡと共に７２時間インキュベーションすることによって生成された）。β−ラパコンの非存在下では、細胞を、等量のＤＭＳＯで処理した。
【図２Ｃ】図２は、正常なＰＢＭＣに対する、ＭＭ細胞の増殖に対するβ−ラパコンの示差的効果を示す。β−ラパコンの非存在下、または０．５μＭ、２μＭ、４μＭ、８μＭもしくは２０μＭの濃度のβ−ラパコン下で２４時間培養された、ＭＭ細胞、休止ＰＢＭＣ、増殖性ＰＢＭＣの増殖を、ＭＴＴアッセイによって測定した。使用した細胞は、以下を含む：（Ａ）においては、ＡＲＨ−７７、ＭＭ．１ＳおよびＨＳ  ｓｕｌｔａｎ（感受性ＭＭ細胞株）；（Ｂ）においては、ｍｍ．Ａｓ（ＭＭ患者細胞）；（Ｃ）においては、ＭＭ．１Ｒ、ＤＯＸ．４０、およびＭＲ．２０（耐性細胞株）；（Ｄ）においては、休止ＰＢＭＣ；（Ｅ）においては、増殖しているＰＢＭＣ（２μｇ／ｍｌのＰＨＡと共に７２時間インキュベーションすることによって生成された）。β−ラパコンの非存在下では、細胞を、等量のＤＭＳＯで処理した。
【図２Ｄ】図２は、正常なＰＢＭＣに対する、ＭＭ細胞の増殖に対するβ−ラパコンの示差的効果を示す。β−ラパコンの非存在下、または０．５μＭ、２μＭ、４μＭ、８μＭもしくは２０μＭの濃度のβ−ラパコン下で２４時間培養された、ＭＭ細胞、休止ＰＢＭＣ、増殖性ＰＢＭＣの増殖を、ＭＴＴアッセイによって測定した。使用した細胞は、以下を含む：（Ａ）においては、ＡＲＨ−７７、ＭＭ．１ＳおよびＨＳ  ｓｕｌｔａｎ（感受性ＭＭ細胞株）；（Ｂ）においては、ｍｍ．Ａｓ（ＭＭ患者細胞）；（Ｃ）においては、ＭＭ．１Ｒ、ＤＯＸ．４０、およびＭＲ．２０（耐性細胞株）；（Ｄ）においては、休止ＰＢＭＣ；（Ｅ）においては、増殖しているＰＢＭＣ（２μｇ／ｍｌのＰＨＡと共に７２時間インキュベーションすることによって生成された）。β−ラパコンの非存在下では、細胞を、等量のＤＭＳＯで処理した。
【図２Ｅ】図２は、正常なＰＢＭＣに対する、ＭＭ細胞の増殖に対するβ−ラパコンの示差的効果を示す。β−ラパコンの非存在下、または０．５μＭ、２μＭ、４μＭ、８μＭもしくは２０μＭの濃度のβ−ラパコン下で２４時間培養された、ＭＭ細胞、休止ＰＢＭＣ、増殖性ＰＢＭＣの増殖を、ＭＴＴアッセイによって測定した。使用した細胞は、以下を含む：（Ａ）においては、ＡＲＨ−７７、ＭＭ．１ＳおよびＨＳ  ｓｕｌｔａｎ（感受性ＭＭ細胞株）；（Ｂ）においては、ｍｍ．Ａｓ（ＭＭ患者細胞）；（Ｃ）においては、ＭＭ．１Ｒ、ＤＯＸ．４０、およびＭＲ．２０（耐性細胞株）；（Ｄ）においては、休止ＰＢＭＣ；（Ｅ）においては、増殖しているＰＢＭＣ（２μｇ／ｍｌのＰＨＡと共に７２時間インキュベーションすることによって生成された）。β−ラパコンの非存在下では、細胞を、等量のＤＭＳＯで処理した。
【図３】図３は、ヒトＭＭ細胞におけるβ−ラパコンによるＤＮＡ断片化の誘導を示す。ＤＮＡラダー形成（ｌａｄｄｅｒｉｎｇ）（アポトーシスの代表的な特徴）を、以下において誘導した；（Ａ）β−ラパコン（０μＭ、２μＭ、４μＭ、８μＭ）で処理されたＡＲＨ−７７；（Ｂ）ＤＯＸ−４０；（Ｃ）ｍｍ．Ａｓ；（Ｄ）β−ラパコンで処理されたｍｍ．１Ｒ。薬物に２４時間曝露した後、ゲノムＤＮＡを抽出し、そしてアガロースゲル電気泳動に供した。
【図４Ａ】図４は、ヒトＭＭ細胞におけるβ−ラパコンによるアポトーシスの誘導を示す。ヒトＡＲＨ−７７、ｍｍ．１Ｓ、およびｍｍ．１Ｒ細胞を、β−ラパコン（０μＭ（ＤＭＳＯ）、２μＭまたは４μＭ）で２４時間処理し、次いで、サブＧ１画分を定量するために（Ａ）か、またはアネキシン（Ａｎｉｎｅｘｉｎ）Ｖ染色によって測定されるようなホスファチジルセリンの客観化分析のために（Ｂ）、ヨウ化プロピジウム（Ｐ１）で染色した後に、フローサイトメトリー分析に供した。ＤＯＸ−４０（白四角）、ＡＲＨ−７７（白丸）、ｍｍ．Ａｓ（黒四角）。
【図４Ｂ】図４は、ヒトＭＭ細胞におけるβ−ラパコンによるアポトーシスの誘導を示す。ヒトＡＲＨ−７７、ｍｍ．１Ｓ、およびｍｍ．１Ｒ細胞を、β−ラパコン（０μＭ（ＤＭＳＯ）、２μＭまたは４μＭ）で２４時間処理し、次いで、サブＧ１画分を定量するために（Ａ）か、またはアネキシン（Ａｎｉｎｅｘｉｎ）Ｖ染色によって測定されるようなホスファチジルセリンの客観化分析のために（Ｂ）、ヨウ化プロピジウム（Ｐ１）で染色した後に、フローサイトメトリー分析に供した。ＤＯＸ−４０（白四角）、ＡＲＨ−７７（白丸）、ｍｍ．Ａｓ（黒四角）。
【図５】図５は、β−ラパコンによって誘導されるアポトーシスが、ミトコンドリアのシトクロムＣ放出およびＰＡＲＰ切断によって達成されることを示す。Ａでは、ＡＲＨ−７７細胞を、ＤＭＳＯ（レーン１）または４μＭのβ−ラパコンで０．５時間（レーン２）、２時間（レーン３）、４時間（レーン４）で処理した。ミトコンドリアのシトクロムＣ放出を、材料および方法に記載のように、ウェスタンブロットアッセイによって決定した。Ｂでは、ＡＲＨ−７７細胞を、ＤＭＳＯ（レーン１）または２μＭのβ−ラパコンで２時間（レーン２）、６時間（レーン３）、１２時間（レーン４）、２４時間（レーン５）、４８時間（レーン６）で処理した。溶解産物のイムノブロットアッセイを、抗ＰＡＲＰ抗体を用いて実施した。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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