(57)【要約】【課題】            高いアルギナーゼ活性促進効果を有するアルギナーゼ活性促進剤を提供する。【解決手段】        アルニカ、コガネバナ、キイチゴ属植物、グレープフルーツ、リンドウ属植物、クワ属植物、タチジャコウソウ、トウキンセンカ、ハマメリス、モモ、ペパーミント、ボダイジュ、マロニエ、アスパラサス・リネアリス、レモンから選択される１種又は２種以上を有効成分とする、アルギナーゼ活性促進剤。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルニカ、コガネバナ、キイチゴ属植物、グレープフルーツ、リンドウ属植物、クワ属植物、タチジャコウソウ、トウキンセンカ、ハマメリス、モモ、ペパーミント、ボダイジュ、マロニエ、アスパラサス・リネアリス、レモンから選択される１種又は２種以上を有効成分とする、アルギナーゼ活性促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルギナーゼ活性促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚特に角質層は生体の最外層に位置しているため、生体内部に比べ、極めて乾燥した外部環境にさらされている。そうした環境の中で、角質層には適度な水分を保持し、生体内部の水分が失われないようにする機能が備わっている（非特許文献１参照）。しかしながら、乾燥・紫外線等の外的要因や加齢による老化やストレス等の内的要因による皮膚の角質水分量の減少が、皮膚バリア能の低下をもたらし、更に、ドライスキン、肌荒れ、アトピー性皮膚炎等を惹き起こすことが知られている。従って、化粧品分野や皮膚科領域においては、角質水分量を維持する保湿剤の開発が不可欠とされている。
【０００３】
保湿効果を目的とした皮膚外用剤として、尿素を有効成分とする皮膚外用剤が知られている（特許文献１参照）。尿素は高い保湿能だけでなく、角質溶解剥離作用や角質柔軟化作用を有する点でも好ましいものであるが、その反面、水と反応して分解し易く、分解するとアンモニアと炭酸ガスを生じることから、臭気や安全性の点で問題を生じ易く、また、尿素を配合した皮膚外用剤は特有の刺激感を有する為、使用部位が限定されるという欠点があった。
【０００４】
アルギナーゼは、アルギニンをオルニチンと尿素に分解する酵素であり、表皮角質層、肝臓、赤血球などに存在することが確認されている。表皮細胞におけるアルギナーゼ活性を促進することにより、角質層内に尿素が産生され、水分保持能が向上する向上することが知られている。かかるアルギナーゼ活性を促進させる成分として、例えば、木通抽出物によるもの（特許文献２）、桔梗抽出物によるもの（特許文献３）、呉茱萸抽出物によるもの（特許文献４）及び麦門冬抽出物によるもの（特許文献５）、アンズ果汁によるもの（特許文献６）等が知られているが、これらの抽出物によるアルギナーゼの活性促進効果は充分に高いとは言い難く、より高いアルギナーゼの活性促進効果が得られるアルギナーゼ活性促進剤が望まれている。
【０００５】
【特許文献１】特開２００５−３１４３６７号公報
【特許文献２】特開平１０−７５８１号公報
【特許文献３】特開２００２−２９９８３号公報
【特許文献４】特開２００２−２９９９１号公報
【特許文献５】特開２００３−２７７２８５号公報
【特許文献６】特開２００６−１４３６０８号公報
【非特許文献１】光井武雄編、「新化粧品学」、第２版、南山堂、２００１年１月１８日、ｐ．２０−２２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、高いアルギナーゼ活性促進効果を有するアルギナーゼ活性促進剤を提供することを目的とした。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、アルニカ、コガネバナ、キイチゴ属植物、グレープフルーツ、リンドウ属植物、クワ属植物、タチジャコウソウ、トウキンセンカ、ハマメリス、モモ、ペパーミント、ボダイジュ、マロニエ、アスパラサス・リネアリス、レモンから選択される１種又は２種以上を有効成分とする、アルギナーゼ活性促進剤である。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、アルギナーゼ活性促進作用に優れたアルギナーゼ活性促進剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明は、アルニカ、コガネバナ、キイチゴ属植物、グレープフルーツ、リンドウ属植物、クワ属植物、タチジャコウソウ、トウキンセンカ、ハマメリス、モモ、ペパーミント、ボダイジュ、マロニエ、アスパラサス・リネアリス、レモンから選択される１種又は２種以上を有効成分とする、アルギナーゼ活性促進剤に関する。
【００１０】
本発明において用いるアルニカ（Ａｒｎｉｃａ ｍｏｎｔａｎａ  Ｌ．）は、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）に属する多年草で、葉、茎、花、根等の各部位及び全草を用いることができるが、根及び頭花から選択される１種又は２種の部位を用いることが好まし
い。
【００１１】
本発明において用いるコガネバナ（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ  Ｇｅｏｒｇ．）は、シソ科（Ｌａｂｉａｔａｅ）に属する植物である。本発明においては、コガネバナの根を乾燥した生薬オウゴン（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａｅ Ｒａｄｉｘ）を用いることが好ましい。
【００１２】
本発明において用いるキイチゴ属植物としては野生種、栽培種など特に限定されず、ブラックベリー（Ｒｕｂｕｓ ｕｌｍｉｆｏｒｍｉｓ  ；Ｒｕｂｕｓ ｌａｃｉｎｉａｔｕｓ  ；Ｒｕｂｕｓ ａｌｌｅｇｈｅｎｉｅｎｓｉｓ  ；Ｒｕｂｕｓ ａｒｇｕｔｕｓ  ；Ｒｕｂｕｓ ｆｒｏｎｄｏｓｕｓ  Ｂｉｇｅｌ．）、マウンテンブラックベリー（Ｒｕｂｕｓ ａｌｌｅｇｈｅｎｉｅｎｓｉｓ  Ｐｏｒｔ．  ；Ｒｕｂｕｓ ｎｉｇｒｏｂａｃｃｕｓ  Ｂａｉｌｅｙ）、チシマイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ａｒｃｔｉｃｕｓ  Ｌ．）、フユイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｂｕｅｒｇｅｒｉ  Ｍｉｑ．）、ヨーロピアンダウベリー（Ｒｕｂｕｓ ｃａｅｓｉｕｓ  Ｌ．）、アメリカンダウベリー（Ｒｕｂｕｓ ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ  Ｌ．  ；Ｒｕｂｕｓ ｆｌａｇｅｌｌａｒｉｓ  Ｗｉｌｌｄ．）、ホロムイイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｃｈａｍａｅｍｏｒｕｓ  Ｌ．）、ゴショイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｃｈｉｎｇｉｉ  Ｈｕ）、クマイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｃｒａｔａｅｇｉｆｏｌｉｕｓ  Ｂｕｎｇｅ）、オニイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｅｌｌｉｐｔｉｃｕｓ  Ｓｍ．  ；Ｒｕｂｕｓ ｆｌａｖｕｓ  Ｈａｍ．）、セイヨウヤブイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｆｒｕｔｉｃｏｓｕｓ  Ｌ．）、ヒメフユイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｈａｙａｔａ−ｋｏｉｄｚｕｍｉｉ  Ｎａｒｕｈａｓｈｉ）、クサイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｈｉｒｓｕｔｕｓ  Ｔｈｕｎｂ．  ；Ｒｕｂｕｓ ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ  Ｓｉｅｂ．  ｅｔ  Ｚｕｃｃ．）、ヨーロッパキイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ  Ｌ．  ；Ｒｕｂｕｓ ｓｔｒｉｇｏｓｕｓ  Ｍｉｃｈｘ．  ；Ｒｕｂｕｓ ｘａｎｔｈｏｃａｒｐｕｓ  ；Ｒｕｂｕｓ ｕｒｓｉｎｕｓ）およびその変種であるオオヨーロッパキイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ  Ｌ．  ｓｕｂｓｐ．  ｖｕｌｇａｔｕｓ）、アメリカミキイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ  Ｌ．  ｓｕｂｓｐ．  ｓｔｒｉｇｏｓｕｓ）、シベリアキイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ  Ｌ．  ｓｕｂｓｐ．  ｍｅｌａｎｏｌａｓｉａ  Ｆｏｃｋｅ）、サハリンキイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ  Ｌ．  ｓｕｂｓｐ．  ｓａｃｈａｌｉｎｅｎｓｉｓ  Ｌｅｖｅｉｌｌｅ）、カムチャッカキイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ  Ｌ．  ｓｕｂｓｐ．  ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ）、バライチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｉｌｌｅｃｅｂｒｏｓｕｓ  Ｆｏｃｋｅ）、エバーグリーン（Ｒｕｂｕｓ ｌａｃｉｎｉａｔｕｓ  Ｗｉｌｌｄ．）およびその変種であるオレゴンエバーグリン、ソーレンスエバーグリーン、ローガンベリー（Ｒｕｂｕｓ ｌｏｇａｎｏｂａｃｃｕｓ  Ｂａｉｌｅｙ）およびその２倍体、ニガイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｓ  Ｌ．  ｆ．  ；Ｒｕｂｕｓ ｉｎｃｉｓｕｓ  Ｔｈｕｎｂ．）、ナンヨウキイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｍｏｌｕｃｃａｎｕｓ  Ｌ．）、ラズベリー（Ｒｕｂｕｓ ｎｅｇｌｅｃｔｕｓ  Ｐｅｃｋ．  ；Ｒｕｂｕｓ ｎｉｖｅｕｓ  Ｔｈｕｎｂ．  ；Ｒｕｂｕｓ ａｌｂｅｓｃｅｎｓ  Ｒｏｘｂ．）、クロミキイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ  Ｌ．）、モミジイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｐａｌｍａｔｕｓ  Ｌ．）、ナワシロイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｐａｒｂｉｆｏｌｉｕｓ  Ｌ．）、コガネイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｐｅｄａｔｕｓ  Ｊ．  Ｅ．  Ｓｍｉｔｈ．）、エビガライチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｐｈｏｅｎｉｃｏｌａｓｉｕｓ  Ｍａｘｉｍ．）、バラ���キイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｒｏｓａｅｆｏｌｉｕｓ  Ｓｍｉｔｈ．）およびその変種であるトキンイバラ（Ｒｕｂｕｓ ｒｏｓａｅｆｏｌｉｕｓ  Ｓｍｉｔｈ．  ｖａｒ．  ｏｒｏｎａｒｉｕｓ  Ｓｍｉｔｈ．  ；Ｒｕｂｕｓ ｃｏｍｍｅｒｓｏｎｉｉ  Ｐｏｉｒ．  ；Ｒｕｂｕｓ ｉｌｌｅｃｅｂｒｏｓｕｓ  Ｆｏｃｋｅ  ｆｏｒｍａ  ｔｏｋｉｎｉｂａｒａ  Ｈａｒａ）、ホウロクイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｓｉｅｂｏｌｄｉｉ  Ｂｌ．）、サーモンベリー（Ｒｕｂｕｓ ｓｐｅｃｔａｂｉｌｌｉｓ  Ｐｕｒｓｈ．）、カジイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｔｒｉｆｉｄｕｓ  Ｔｈｕｎｂ．）、パシフィックダウベリー（Ｒｕｂｕｓ ｕｒｓｉｎｕｓ  Ｃｈａｍ．  ｅｔ  Ｓｃｈｌｅｃｈｔ）、ベニバナイチゴ（Ｒｕｂｕｓ ｖｅｒｎｕｓ  Ｆｏｃｋｅ）などが例示される。これらのキイチゴ属植物の中でも、ヨーロッパキイチゴ及びその亜種から選択される１種又は２種以上を用いることが、アルギナーゼ活性促進効果の点から特に好ましい。キイチゴ属植物を用いる際の使用部位は、全草、葉、花、果実など特に限定されないが、その効果および原料の入手しやすさの点から、果実を用いることが好ましい。
【００１３】
本発明において用いるグレープフルーツ（Citrus paradisi Macf.）は、ミカン科ミカン属（Citrus L.）に属する双子葉植物で、花、茎、葉、根、果実、果皮、果汁、種子等の各部位から選択される１種または２種以上を用いるが、本発明の効果の点から        を用いることが好ましい。
【００１４】
本発明において用いるリンドウ属植物は、リンドウ科（Ｇｅｎｔｉａｎａｃｅａｅ）に属する双子葉植物であり、特にその種類は問わないが、トウヤクリンドウ（Ｇｅｎｔｉａｎａ ａｌｇｉｄａ  Ｐａｌｌ．），インディアンゲンチアン（Ｇｅｎｔｉａｎａ ｋｕｒｒｏｏ  Ｒｏｙｌｅ），ゲンチアナ（Ｇｅｎｔｉａｎａ ｌｕｔｅａ  Ｌ．），リンドウ（Ｇｅｎｔｉａｎａ ｓｃａｂｒａ  Ｂｕｎｇｅ  ｖａｒ．  ｂｕｅｒｇｅｒｉ  （Ｍｉｑ．）  Ｍａｘｉｍ．  ｓｕｂｖａｒ．  ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ  （Ｈａｒａ）  Ｔｏｙｏｋｕｎｉ），エゾリンドウ（Ｇｅｎｔｉａｎａ ｔｒｉｆｌｏｒａ  Ｐａｌｌａｓ．  ｖａｒ．  Ｊａｐｏｎｉｃａ  （Ｋｕｓｎ．）  Ｈａｒａ），三花竜胆（Ｇｅｎｔｉａｎａ ｔｒｉｆｌｏｒａ  Ｐａｌｌａｓ．  ｖａｒ．  ｔｒｉｆｌｏｒａ）等が用いられ、その効果の点からゲンチアナが特に好ましい。また、リンドウ属植物から抽出物を得る際の使用部位は特に限定されないが、その効果の点から根又は根茎を用いることが好ましい。
【００１５】
本発明において用いるクワ属（Ｍｏｒｕｓ  Ｌ．）に属する植物はクワ科（Ｍｏｒａｃｅａｅ）クワ属（Ｍｏｒｕｓ  Ｌ．）に属する植物で、マグワ（Ｍｏｒｕｓ ａｌｂａ  Ｌ．）、シマグワ（Ｍｏｒｕｓ ａｕｓｔｒａｌｉｓ  Ｐｏｉｒ．）等が用いられる。クワ属に属する植物体の葉、茎、根皮、根、種子など各種部位を用いることができるが、好ましくはその根皮を用いる。クワ属植物の根皮を乾燥させたものはソウハクヒと呼ばれる生薬であり、かかる生薬を用いることもできる。
【００１６】
本発明において用いるタチジャコウソウ（Ｔｈｙｍｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ  Ｌ．  ；Ｔｈｙｍｕｓ ｓｅｒｐｙｌｌｕｍ  Ｌ．）は、シソ科（Ｌａｂｉａｔａｅ）タイム属（Ｔｈｙｍｕｓ  Ｌ．）に属する植物で、全草もしくは、花、葉、茎、根等の各部位を用いることができるが、全草もしくは葉を用いることが好ましく、これらの抽出物を用いることが特に好ましい。
【００１７】
本発明において用いるトウキンセンカ（Ｃａｌｅｎｄｕｌａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓＬ．）は、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）に属する一年生或いは二年生草本で、近縁種のキンセンカ（Ｃａｌｅｎｄｕｌａ ａｒｖｅｎｓｉｓ  Ｌ．）を用いることもできる。花，葉，茎等各部位を用いることができるが、花を用いることが特に好ましい。
【００１８】
本発明において用いるハマメリス（Ｈａｍａｍｅｌｉｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ  Ｌ．）は、マンサク科（Ｈａｍａｍｅｌｉｄａｃｅａｅ）に属する１年草で、葉，茎，花，果実，根等の各部位及び全草を用いることができるが、葉を用いることが好ましい。
【００１９】
本発明において用いるモモ（Ｐｒｕｎｕｓ ｐｅｒｓｉｃａ  （Ｌ．）  Ｂａｔｓｃｈ．）は、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）に属する高木で、葉，枝，幹，樹皮，根，花，果実，種子等の各部位を用いることができるが、葉を用いることが好ましい。また、モモの種子は、「トウニン」と呼ばれる生薬の一種であり、かかる生薬を用いることもできる。
【００２０】
本発明において用いるペパーミント（Ｍｅｎｔｈａ ａｒｖｅｎｓｉｓ  Ｌ．  ｖａｒ．  ｐｉｐｅｒａｓｃｅｎｓ  Ｍａｌｉｎ．）は、シソ科（Ｌａｂｉａｔａｅ）に属する多年草で、その同属植物である、セイヨウハッカ（Ｍｅｎｔｈａ ｐｉｐｅｒｉｔａ  Ｌ．）、ミドリハッカ（Ｍｅｎｔｈａ ｖｉｒｉｄｉｓ  Ｌ．）を用いることもできる。ペパーミントは、葉，茎，花等各部位を用いることができるが、地上部の全体若しくは葉を用いることが好ましい。
【００２１】
本発明において用いるボダイジュは、シナノキ属（Ｔｉｌｉａ  Ｌ．）植物の総称であり、ナツボダイジュ（Ｔｉｌｉａ ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌｏｓ  Ｓｃｏｐｏｌｉ，；Ｔｉｌｉａ ｇｒａｎｄｉｆｏｌｉａ  Ｅｈｒｈ．）、フユボダイジュ（Ｔｉｌｉａ ｃｏｒｄａｔａ  Ｍｉｌｌ．  ；Ｔｉｌｉａ ｕｌｍｉｆｏｌｉａ  Ｓｃｏｐｏｌｉ  ；Ｔｉｌｉａ ｐａｒｖｉｆｏｌｉａ  Ｅｈｒｈ．）、セイヨウシナノキ（Ｔｉｌｉａ ｅｕｒｏｐａｅａ）、ギンヨウボダイジュ（Ｔｉｌｉａ ｔｏｍｅｎｔｏｓａ  Ｍｏｅｎｃｈ．  ；Ｔｉｌｉａ ａｒｇｅｎｔｅａ  Ｄｅｓｆｏｕｔａｉｎｅｓ）、ボダイジュ（Ｔｉｌｉａ ｍｉｑｕｅｌｉａｎａ  Ｍａｘｉｍ．），シナノキ（Ｔｉｌｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｓｉｍｏｎｋａｉ  ；Ｔｉｌｉａ ｃｏｒｄａｔａ  Ｍｉｌｌ．  ｖａｒ．  ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｍｉｑ．）、オオバボダイジュ（Ｔｉｌｉａ ｍｘｉｍｏｗｉｃｚｉａｎａ  Ｓｈｉｒａｓ．）、ヘラノキ（Ｔｉｌｉａ ｋｉｕｓｉａｎａ  Ｍａｋｉｎｏ）等が挙げられる。これらの植物の中でもナツボダイジュ，フユボダイジュ，セイヨウシナノキから選ばれる１種又は２種以上の植物が、効果の面から最も好ましい。ボダイジュは、花，葉，樹皮，根皮，種子部分を用いることが好ましい。
【００２２】
本発明において用いるマロニエ（Ａｅｓｃｕｌｕｓ ｔｕｒｂｉｎａｔａ  Ｂｌｕｍｅ；Ａｅｓｃｕｌｕｓ ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎｕｍ  Ｌ．）は、トチノキ科（Ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎａｃｅａｅ）に属する高木で、葉，枝，樹皮，花，果実等の各部位及び全木を用いることができるが、葉，樹皮又は果実を用いることが好ましい。
【００２３】
本発明において用いるアスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ ｌｉｎｅａｌｉｓ）は、マメ科の植物で葉を用いることが好ましい。また、アスパラサス・リネアリスの葉を加工して得られるルイボスティーを用いることもできる。
【００２４】
本発明において用いるレモン（Ｃｉｔｒｕｓ ｌｉｍｏｎ  Ｂｕｒｍ．）は、ミカン科ミカン属（Ｃｉｔｒｕｓ  Ｌ．）に属する双子葉植物で、花、茎、葉、根、果実、果皮、果汁、種子等の各部位から選択される１種または２種以上を用いるが、本発明の効果の点から果実を用いることが好ましい。
【００２５】
本発明においては、上記の植物をそのまま用いてもよいが、その溶媒抽出物を用いてもよい。抽出溶媒としては、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール、１、３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール、エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類、アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類などの溶媒を用いることができ、これらより１種又は２種以上を選択して用いる。また、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニアなどの１種又は２種以上の超臨界流体や亜臨界流体を用いてもよい。また、オートクレーブなどを用いて、加圧下で抽出することも可能である。
【００２６】
植物の上記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができるが、濃縮、乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解して使用することもでき、これらの生理作用を損なわない範囲で脱色、脱臭、脱塩等の精製処理やカラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。植物の前記抽出物やその処理物及び分画物は、各処理及び分画後に凍結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることもできる。
【００２７】
本発明のアルギナーゼ活性促進剤は、皮膚に外用、経口摂取等の手段で投与することが可能であり、化粧料、食品、飲料、あるいは医薬品などに応用することが可能である。
【実施例】
【００２８】
以下に本発明の詳細を実施例を用いて説明するが、本発明の技術的範囲はこれによってなんら限定されるものではない。
【００２９】
各植物抽出物の製造例を表１にまとめる。抽出方法を次に示す。
【００３０】
［抽出方法］
植物の乾燥粉砕物１００ｇを、２．０ｋｇの５０容量％エタノール水溶液に、分散させ、撹拌しながら室温にて２時間抽出した。抽出上清を濾別したのち、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物を得た。
【００３１】
【表１】
2008031111.tif 000002
【００３２】
上記実施例を用いて、アルギナーゼ活性促進作用の評価を行った。
【００３３】
［アルギナーゼ活性促進作用］
ヒト皮膚角化細胞を１ウェル当たり２．０×１０4個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）にウシ胎児血清（ＦＢＳ）を５％添加したものを用いた。２４時間後１．２ｍＭＣａＣｌ2を含む５％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地によって、各濃度に調整したサンプル液に交換しさらに９日間培養した。培地は３日に１回交換した。培養終了後、培養上清を採取し、アルギナーゼ活性促進能の評価を行った。アルギナーゼはアルギニンを加水分解し、オルニチンと尿素を生成する。尿素はウレアーゼによってアンモニアに分解され、アンモニアはペンタシアノニトロシル鉄（ＩＩＩ）酸ナトリウム二水和物（ニトロプルシッドナトリウム）存在下でサリチル酸、次亜塩素酸と反応し、インドフェノールが生成する。アルカリ性条件下でインドフェノールの吸収（５７０ｎｍ）を測定し、尿素濃度を求め、アルギナーゼ活性の定量を行った。尿素定量のため、和光純薬社製尿素窒素Ｂ−テストワコーを用いて同様の測定を行い、検量線を作成した。また、ＢＣＡＰｒｏｔｅｉｎＡｓｓａｙＫｉｔにて、各ウェルのタンパク量を測定し、単位タンパク量あたりのアルギナーゼ活性促進能を求めた。サンプルを添加しないブランクの値を１００とした時の相対値により、アルギナーゼ活性促進能を評価した。また、ブランクとの有意差検定（ｔ検定）を行い、表中の*及び**にて示した。有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を*で、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を**でそれぞれ表した。
【００３４】
【表２】
2008031111.tif 000003
【００３５】
表２より明らかなように、本発明のアルギナーゼ活性促進剤は、ヒト皮膚角化細胞において、有意なアルギナーゼ活性促進効果を発揮していた。