(57)【要約】【課題】Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドを特異的に、かつ簡便、迅速、安価に分解する方法及びＮ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドを特異的に、かつ簡便、迅速に分解することができる安価な分解剤を提供すること。【解決手段】Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドと、２価の遷移金属イオンとを共存させるステップを少なくとも含む、当該糖ヌクレオチドの分解方法である。また当該糖ヌクレオチドがＵＤＰ糖であることが好ましく、Ｎ−アセチル基を保持しないＵＤＰ糖が、ＵＤＰ−グルクロン酸、ＵＤＰ−ガラクトース及びＵＤＰ−グルコースからなる群から選ばれる１又は２以上のＵＤＰ糖であることがさらに好ましい。また２価の遷移金属塩を成分とする、Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドの分解剤である。また当該糖ヌクレオチドがＵＤＰ糖であることが好ましい。【選択図】  図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドと、２価の遷移金属イオンとを共存させるステップを少なくとも含む、当該糖ヌクレオチドの分解方法。
【請求項２】
糖ヌクレオチドが、ＵＤＰ糖である、請求項１に記載の分解方法。
【請求項３】
Ｎ−アセチル基を保持しないＵＤＰ糖が、ＵＤＰ−グルクロン酸、ＵＤＰ−ガラクトース及びＵＤＰ−グルコースからなる群から選ばれる１又は２以上のＵＤＰ糖である、請求項２に記載の分解方法。
【請求項４】
２価の遷移金属イオンが、Ｍｎ２＋、Ｃｄ２＋、Ｃｏ２＋及びＣｕ２＋からなる群から選ばれる１又は２以上のイオンである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の分解方法。
【請求項５】
共存が、ｐＨ６以上の条件下で行われる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の分解方法。
【請求項６】
２価の遷移金属塩を成分とする、Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドの分解剤。
【請求項７】
糖ヌクレオチドが、ＵＤＰ糖である、請求項６に記載の分解剤。
【請求項８】
Ｎ−アセチル基を保持しないＵＤＰ糖が、ＵＤＰ−グルクロン酸、ＵＤＰ−ガラクトース及びＵＤＰ−グルコースからなる群から選ばれる１又は２以上のＵＤＰ糖である、請求項７に記載の分解剤。
【請求項９】
２価の遷移金属塩が、マンガン、カドミウム、コバルト及び銅からなる群から選ばれる１又は２以上の金属の塩である、請求項６〜８のいずれか１項に記載の分解剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖ヌクレオチドの分解方法及び分解剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
まず、本出願書類において用いる略号を説明する。
ＡＤＰ：アデノシン５'−ジリン酸
ＣＤＰ：シチジン５'−ジリン酸
ｄＴＤＰ：デオキシチミジン５'−ジリン酸
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸
Ｇａｌ：ガラクトース
ＧａｌＮＡｃ：Ｎ−アセチルガラクトサミン
ＧＤＰ：グアノシン５'−ジリン酸
Ｇｌｃ：グルコース
ＧｌｃＮＡｃ：Ｎ−アセチルグルコサミン
ＧｌｃＵＡ：グルクロン酸
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＵＤＰ：ウリジン５'−ジリン酸
ＵＭＰ：ウリジン５'−モノリン酸
細菌及び哺乳類等の細胞中にはＡＤＰ−ＧｌｃやＵＤＰ−Ｇｌｃ等の様な糖ヌクレオチドを加水分解する事のできる酵素があることが知られている。例えばＡＤＰ−Ｇｌｃホスホジエステラーゼとも呼ばれる酵素は、生体検体中の糖ヌクレオチドの分析による診断やトランスジェニック植物の製造等に応用されている（特許文献１）。ホスホジエステラーゼはリン酸ジエステルを加水分解してリン酸モノエステルとする酵素の総称である。しかしながら、上記ホスホジエステラーゼの様な酵素を含まず、Ｍｎ２＋を単独で糖ヌクレオチドと共存させることにより糖ヌクレオチドを選択的に分解する事は知られていない。
【０００３】
【特許文献１】特願２００１−５５８０１１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドを特異的に、かつ簡便、迅速、安価に分解する方法及びＮ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドを特異的に、かつ簡便、迅速に分解することができる安価な分解剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の発明者らは上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、驚くべきことに２価の遷移金属塩がＮ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドを特異的に分解することを見出し、さらにこれにより当該糖ヌクレオチドを簡便、迅速かつ安価に分解することができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち本発明は、Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドと、２価の遷移金属イオンとを共存させるステップを少なくとも含む、当該糖ヌクレオチドの分解方法（以下、「本発明方法」という。）を提供する。
【０００７】
ここにいう糖ヌクレオチドは、ＵＤＰ糖であることが好ましい。またここにいうＮ−アセチル基を保持しないＵＤＰ糖は、ＵＤＰ−グルクロン酸、ＵＤＰ−ガラクトース及びＵＤＰ−グルコースからなる群から選ばれる１又は２以上のＵＤＰ糖であることが好ましい。またここにいう２価の遷移金属イオンは、Ｍｎ２＋、Ｃｄ２＋、Ｃｏ２＋及びＣｕ２＋からなる群から選ばれる１又は２以上のイオンであることが好ましい。また前記の「共存」は、ｐＨ６以上の条件下で行われることが好ましい。
【０００８】
また本発明は、２価の遷移金属塩を成分とする、Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドの分解剤（以下、「本発明の剤」という。）を提供する。
【０００９】
ここにいう糖ヌクレオチドは、ＵＤＰ糖であることが好ましい。またここにいうＮ−アセチル基を保持しないＵＤＰ糖は、ＵＤＰ−グルクロン酸、ＵＤＰ−ガラクトース及びＵＤＰ−グルコースからなる群から選ばれる１又は２以上のＵＤＰ糖であることが好ましい。またここにいう２価の遷移金属塩は、マンガン、カドミウム、コバルト及び銅からなる群から選ばれる１又は２以上の金属の塩であることが好ましい。
【発明の効果】
【００１０】
本発明方法は、Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドを特異的に、かつ簡便、迅速、安価に分解することができ、極めて有用である。また本発明の剤は、Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドを特異的に、かつ簡便、迅速に分解することができ、しかも非常に安価であることから極めて有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、発明を実施するための最良の形態により本発明を詳説する。
＜１＞本発明方法
本発明方法は、Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドと、２価の遷移金属イオンとを共存させるステップを少なくとも含む、当該糖ヌクレオチドの分解方法である。
【００１２】
ここにいう「Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチド」は、糖ヌクレオチドにおける糖残基部分が、Ｎ−アセチル基（ＮＡｃ）を保持しない糖からなっている糖ヌクレオチドである限りにおいて特に限定されない。この「Ｎ−アセチル基（ＮＡｃ）を保持しない糖」は、単糖、オリゴ糖、多糖のいずれであってもよい。なかでも単糖が好ましい。
【００１３】
またここにいう「糖ヌクレオチド」も、ＡＤＰ糖、ＣＤＰ糖、ＧＤＰ糖、ＵＤＰ糖、ｄＴＤＰ糖のいずれであってもよい。これらのなかでもＵＤＰ糖が好ましい。
【００１４】
また、Ｎ−アセチル基を保持しないＵＤＰ糖は、ＵＤＰ糖における糖残基部分が、Ｎ−アセチル基（ＮＡｃ）を保持しない糖からなっているＵＤＰ糖である限りにおいて特に限定されない。この糖も、単糖、オリゴ糖、多糖のいずれであってもよい。なかでも単糖が好ましい。なかでも、ＵＤＰ−グルクロン酸、ＵＤＰ−ガラクトース及びＵＤＰ−グルコースからなる群から選ばれる１又は２以上のＵＤＰ糖が好ましい。
【００１５】
またここにいう「２価の遷移金属イオン」も、元素周期表の３族から１２族までに属する金属のイオンのうち、２価のイオンである限りにおいて特に限定されない。なかでも、Ｍｎ２＋、Ｃｄ２＋、Ｃｏ２＋及びＣｕ２＋からなる群から選ばれる１又は２以上のイオンであることが好ましい。これらのイオンのうち、分解効率が最も高いのはＭｎ２＋である。
【００１６】
Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドと２価の遷移金属イオンとを「共存」させる方法も、両者の分子が相互に接触できる状態となる限りにおいて特に限定されない。この「共存」は水性溶液中で行われるが、その際のｐＨは６以上に設定することが分解効率等の面で好ましい。ｐＨが高いほど、Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチド分解効率も高いことから、これを指標にして、両者を共存させる時間、両者を共存させる際の２価の遷移金属イオンの濃度、両者を共存させる温度、目的とする分解の程度等に応じて当業者が具体的なｐＨを適宜設定することができる。例えば、ｐＨ６以上、ｐＨ６．５以上、ｐＨ７以上、ｐＨ７．５以上、ｐＨ８以上等の条件が例示される。より具体的には、ｐＨ６〜１０の範囲、ｐＨ６．５〜１０の範囲、ｐＨ７〜１０の範囲、ｐＨ７．５〜１０の範囲、ｐＨ８〜１０の範囲等が例示される。
【００１７】
また、両者を共存させる時間も特に限定されない。その時間が長いほど分解の程度を高めることができるので、これを指標にして、両者を共存させる際のｐＨ、両者を共存させる際の２価の遷移金属イオンの濃度、両者を共存させる温度、目的とする分解の程度等に応じて当業者が具体的な時間を適宜設定することができる。例えば、１０分間〜１２時間、１０分間〜６時間、１０分間〜２時間等の範囲を例示することができる。
【００１８】
また、両者を共存させる際の２価の遷移金属イオンの濃度も特に限定されない。その濃度が高いほど分解の程度を高めることができるので、これを指標にして、両者を共存させる際の時間、両者を共存させる際のｐＨ、両者を共存させる温度、目的とする分解の程度等に応じて当業者が具体的な時間を適宜設定することができる。例えば、両者を共存させる際の終濃度として、０．２ｍＭ以上、０．５ｍＭ以上、１ｍＭ以上、２ｍＭ以上、５ｍＭ以上、１０ｍＭ以上、２０ｍＭ以上等の濃度が例示される。より具体的には、０．２ｍＭ〜５００ｍＭ、０．２ｍＭ〜４００ｍＭ、０．２ｍＭ〜３００ｍＭ、０．２ｍＭ〜２００ｍＭ、０．２ｍＭ〜１００ｍＭ、０．５ｍＭ〜５００ｍＭ、０．５ｍＭ〜４００ｍＭ、０．５ｍＭ〜３００ｍＭ、０．５ｍＭ〜２００ｍＭ、０．５ｍＭ〜１００ｍＭ、１ｍＭ〜５００ｍＭ、１ｍＭ〜４００ｍＭ、１ｍＭ〜３００ｍＭ、１ｍＭ〜２００ｍＭ、１ｍＭ〜１００ｍＭ、２ｍＭ〜５００ｍＭ、２ｍＭ〜４００ｍＭ、２ｍＭ〜３００ｍＭ、２ｍＭ〜２００ｍＭ、２ｍＭ〜１００ｍＭ、５ｍＭ〜５００ｍＭ、５ｍＭ〜４００ｍＭ、５ｍＭ〜３００ｍＭ、５ｍＭ〜２００ｍＭ、５ｍＭ〜１００ｍＭ、１０ｍＭ〜５００ｍＭ、１０ｍＭ〜４００ｍＭ、１０ｍＭ〜３００ｍＭ、１０ｍＭ〜２００ｍＭ、１０ｍＭ〜１００ｍＭ、２０ｍＭ〜５００ｍＭ、２０ｍＭ〜４００ｍＭ、２０ｍＭ〜３００ｍＭ、２０ｍＭ〜２００ｍＭ、２０ｍＭ〜１００ｍＭ等の範囲を例示することができる。
【００１９】
また、両者を共存させる際の温度も特に限定されない。その温度が高いほど分解の程度を高めることができるので、これを指標にして、両者を共存させる際のｐＨ、両者を共存させる際の２価の遷移金属イオンの濃度、両者を共存させる時間、目的とする分解の程度等に応じて当業者が具体的な温度を適宜設定することができる。例えば、４℃以上、１５℃以上、３０℃以上、３７℃以上、５０℃以上等の条件が例示される。より具体的には、４℃〜６０℃、１５℃〜６０℃、３０℃〜６０℃、３７℃〜６０℃、５０℃〜６０℃等の範囲が例示される。
【００２０】
２価の遷移金属イオンは、それ単独で、糖ヌクレオチドを分解する作用を発揮する。したがって、本発明方法における「Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドと、２価の遷移金属イオンとを共存させるステップ」においては、糖ヌクレオチドを分解する酵素（例えば、ホスホジエステラーゼ）が共存している必要はない。すなわち、本発明方法は、「Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドと２価の遷移金属イオンとを、糖ヌクレオチドを分解する酵素の非存在下で共存させるステップ」を少なくとも含むものであってもよい。
【００２１】
本発明方法は、Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドと２価の遷移金属イオンとを共存させるステップを少なくとも含む限りにおいて、他のステップを更に含んでいてもよい。例えば、当該ステップを行うに先立ち、２価の遷移金属イオンを生ぜしめる物質を添加するステップ等を更に含んでいてもよい。
【００２２】
ここにいう「２価の遷移金属イオンを生ぜしめる物質」も、水性溶液中において２価の遷移金属イオンを生ぜしめるような物質である限りにおいて限定されない。このような物質としては、例えば「２価の遷移金属塩」が例示される。また、このような塩としては、遷移金属塩のハロゲン化物を例示することができる。この「ハロゲン化物」の一例として、塩化物を例示することができる。このような塩化物としては、ＭｎＣｌ２、ＣｄＣｌ２、ＣｏＣｌ２、ＣｕＣｌ２等を例示することができる。
【００２３】
また、Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドと２価の遷移金属イオンとを共存させるステップの後に、分解により生じた産物や分解されなかった糖ヌクレオチドを分離したり、精製したりするステップ等をさらに含んでいてもよい。
【００２４】
本発明方法は、Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドは分解するが、Ｎ−アセチル基を保持する糖ヌクレオチドは分解しないという特異性を有している。したがって、Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドを選択的に分解することが可能である。
【００２５】
なお、本出願書類における「糖ヌクレオチドの分解」とは、糖ヌクレオチドを分解（切断）する意味である。なかでも、糖ヌクレオチドにおけるピロリン酸部分の分解（切断）であることが好ましい。
＜２＞本発明の剤
本発明の剤は、２価の遷移金属塩を成分とする、Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドの分解剤である。
【００２６】
ここにいう「Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチド」については、前記の＜１＞における説明と同じである。したがって、ここにいう「糖ヌクレオチド」はＵＤＰ糖であることが好ましいこととなる。またここにいう「Ｎ−アセチル基を保持しないＵＤＰ糖」も、ＵＤＰ−グルクロン酸、ＵＤＰ−ガラクトース及びＵＤＰ−グルコースからなる群から選ばれる１又は２以上のＵＤＰ糖であることが好ましいこととなる。
【００２７】
本発明の剤の有効成分である「２価の遷移金属塩」は、元素周期表の３族から１２族までに属する金属のうち、２価の金属の塩である限りにおいて特に限定されない。なかでも、マンガン、カドミウム、コバルト及び銅からなる群から選ばれる１又は２以上の金属の塩であることが好ましい。なかでも分解効率の面からすると、マンガンの塩であることが好ましい。また、このような塩としては、２価の遷移金属塩のハロゲン化物を例示することができる。この「ハロゲン化物」の一例として、塩化物を例示することができる。このような塩化物としては、ＭｎＣｌ２、ＣｄＣｌ２、ＣｏＣｌ２、ＣｕＣｌ２等を例示することができる。
【００２８】
本発明の剤は、このような２価の遷移金属塩を少なくとも含有している限りにおいて、さらに他の成分を含有していてもよい。このような他の成分は、本発明の剤に含有される２価の遷移金属塩や、これから生ずる２価の遷移金属イオンに対して悪影響を与えない物質である限りにおいて特に限定されず、当業者がその目的等に応じて適宜選択することができる。もちろん、２価の遷移金属塩を、他の成分を含有させることなくそのまま本発明の剤としてもよい。したがって本発明の剤は、２価の遷移金属塩をそのまま用い、又は更に他の成分を添加することで、当業者が適宜製造することができる。
【００２９】
本発明の剤は、前記＜１＞に記載の方法で使用することができる。すなわち、本発明方法における「Ｎ−アセチル基を保持しない糖ヌクレオチドと２価の遷移金属イオンとを共存させるステップ」を行うに先立ち、本発明の剤を添加すればよい。
【実施例】
【００３０】
以下、本発明を実施例により具体的に詳説する。
【００３１】
本実施例で用いた糖ヌクレオチド（UDP-GlcUA及びUDP-GalNAc）はいずれもシグマ社より購入した。また、Hydrospher C18カラムはYMC社より購入した。
【００３２】
糖ヌクレオチド（UDP-GalNAC及びUDP-GlcUA）の定量及び安定性は、逆相ＨＰＬＣを用いることによって解析した。具体的には、次の方法によって解析した。
【００３３】
50 mM Tris-HCl（pH 7.2）、0.15 M NaCl及び種々の濃度のMnCl2を含有する溶液１０μｌ中で、UDP-GlcUA、UDP-GalNAcその他の糖ヌクレオチド（終濃度３ｎＭ）を、種々の温度（４〜５０℃）や種々の時間（０〜１８時間）でインキュベートした。また、ｐＨ（５〜９）や、金属イオン（塩）の種類（Ca、Mg、Ba、Cd、Co、Cu、EDTA）等の反応条件も種々変化させて解析した。
【００３４】
糖ヌクレオチド類の分離・定量は、Hydrosher C18 カラム（4.6 ｘ 150 cm；YMC社製）を用いた逆相ＨＰＬＣを用いて行った。具体的には、試料溶液10μlをカラムにアプライし、１％アセトニトリル（CH3CN）を含有する20 mM トリエチルアミン−酢酸緩衝液（pH 5.7）を溶媒として流速 0.7 ml/分で流し、溶出液について波長262 nmにおける吸光度を測定することにより行った。標準品を同条件で解析した結果、溶出時間はそれぞれ、UDP-GlcUAが15.95分、UDP-GalNAcが11.47分、UDPが9.58分、UMPが7.91分であった。
【００３５】
糖ヌクレオチドを、20 mM MnCl2の存在下又は非存在下、３０℃で種々の時間インキュベートした結果を図１に示す。図１中、黒丸は20 mM MnCl2の存在下でUDP-GlcUAをインキュベートした結果を、黒四角は20 mM MnCl2の存在下でUDP-GalNAcをインキュベートした結果を、白丸はMnCl2の非存在下でUDP-GlcUAをインキュベートした結果をそれぞれ示す。また図１の縦軸は、インキュベート前の溶液中の糖ヌクレオチド濃度を１００％としたときの、インキュベート後の溶液中の糖ヌクレオチド濃度の割合を示す。また横軸は、インキュベート時間を示す。
【００３６】
図１より、Mn2+によってUDP-GlcUAが分解されることが示され、６時間インキュベートするとほとんど消失することが明らかになった。一方、UDP-GalNAcは、Mn2+の存在下で１２時間インキュベートしても分解されなかった。
【００３７】
UDP-GlcUAを、種々の濃度（0.002mM〜20mM）のMnCl2の存在下、３０℃で種々の時間インキュベートした結果を図２に示す。図２中、白丸は２時間、黒四角は６時間それぞれインキュベートした結果を示す。また図２の縦軸は、インキュベート前の溶液中のUDP-GlcUA濃度を１００％としたときの、インキュベート後の溶液中のUDP-GlcUA濃度の割合を示す。また横軸は、MnCl2の濃度を示す。
【００３８】
図２より、Mn2+によるUDP-GlcUAの分解は濃度依存的であることが示された。Mn2+濃度が低下するとUDP-GlcUAの分解は抑制され、Mn2+が0.2mM以下の場合には６時間インキュベートしてもほとんど分解されなかった。
【００３９】
UDP-GlcUAを、種々の温度で、20mM MnCl2の存在下又は非存在下、種々の時間インキュベートした結果を図３に示す。図３中、白丸は20mM MnCl2の存在下で２時間、黒丸は20mM MnCl2の存在下で６時間、白四角は20mM MnCl2の非存在下で２時間、黒四角は20mM MnCl2の非存在下で６時間それぞれインキュベートした結果を示す。また図３の縦軸は、インキュベート前の溶液中のUDP-GlcUA濃度を１００％としたときの、インキュベート後の溶液中のUDP-GlcUA濃度の割合を示す。また横軸はインキュベート時の温度を示す。
【００４０】
図３より、Mn2+によるUDP-GlcUAの分解は温度にも依存的であり、温度が高くなるほど分解が激しくなることが示された。一方、Mn2+の非存在下では、５０℃でインキュベートしても分解は見られなかった。
【００４１】
UDP-GlcUAを、種々のｐＨで、20mM MnCl2の存在下又は非存在下、３０℃で種々の時間インキュベートした結果を図４に示す。ｐＨ5.0及び6.0についてはいずれも50mM 酢酸ナトリウム緩衝液中で、ｐＨ7.0、7.5、8.0及び9.0についてはいずれも50mM Tris-HCl緩衝液中でインキュベートした。図４中、白丸は20mM MnCl2の存在下で２時間、黒丸は20mM MnCl2の存在下で６時間、白四角は20mM MnCl2の非存在下で２時間、黒四角は20mM MnCl2の非存在下で６時間それぞれインキュベートした結果を示す。また図４の縦軸は、インキュベート前の溶液中のUDP-GlcUA濃度を１００％としたときの、インキュベート後の溶液中のUDP-GlcUA濃度の割合を示す。また横軸はインキュベート時のｐＨを示す。
【００４２】
図４より、中性から塩基性になるほど（ｐＨ６〜７以上で）UDP-GlcUAの分解は激しくなった。
【００４３】
なお、図１〜図４における値は、それぞれ独立に３回実験した際の「平均値±Ｓ．Ｄ．」で示した。
【００４４】
また、種々の糖ヌクレオチド（UDP-GalNAc、UDP-GlcNAc、UDP-GlcUA、UDP-Gal、UDP-Glc）を用いて、同様にMnCl2による影響を調べた。結果を表１に示す。なお、MnCl2の濃度は20mMとし、インキュベート温度は３０℃、インキュベート時間は２時間とした。また実験はそれぞれ独立に３回行い、表１中にその平均値とＳ．Ｄ．を示した。
【００４５】
【表１】
2008031073.tif 000003
【００４６】
表１より、UDP-GlcNAcはUDP-GalNAcと同様にMn2+に対して安定であることが示された。一方、UDP-Glc及びUDP-Galは、Mn2+イオン存在下でUDP-GlcUAと同様に分解された。また、逆相ＨＰＬＣの解析から、UDP-GlcUA分解後にはUMPのピークが現れたことから、UDP-GlcUAのピロリン酸部分が切断されていることが示された。
【００４７】
また、Mn2+（MnCl2）に代えて、他の種々の金属イオン（塩）の存在下でUDP-GlcUAをインキュベートした結果を表２に示す。それぞれの金属イオン（塩）の濃度を20mMとし、インキュベート温度は３０℃、インキュベート時間は６時間とした。また実験はそれぞれ独立に３回行い、表１中にその平均値とＳ．Ｄ．を示した。なお、実験に用いた金属塩は、MnCl2、CaCl2、MgCl2、BaCl2、CdCl2、CoCl2、CuCl2である。
【００４８】
【表２】
2008031073.tif 000004
【００４９】
表２より、Mn2+と同じ二価イオンでもアルカリ土類金属（Ca2+、Mg2+、Ba2+）は実質的に分解には影響せず、遷移金属であるCd2+、Co2+、Cu2+はUDP-GlcUAを分解した。しかし、Mn2+が最も分解作用が強い金属イオンであった。金属キレートであるEDTAをMn2+を含有する溶液に添加すると、Mn2+による分解は完全に阻害された。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】糖ヌクレオチドを、20 mM MnCl2の存在下又は非存在下、３０℃で種々の時間インキュベートした結果を示す図である。
【図２】UDP-GlcUAを、種々の濃度のMnCl2の存在下、３０℃で種々の時間インキュベートした結果を示す図である。
【図３】UDP-GlcUAを、種々の温度で、20mM MnCl2の存在下又は非存在下、種々の時間インキュベートした結果を示す図である。
【図４】UDP-GlcUAを、種々のｐＨで、20mM MnCl2の存在下又は非存在下、３０℃で、種々の時間インキュベートした結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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