(57)【要約】【課題】新生児壊死性腸炎に治療応用できる方法を提供すること。【解決手段】 アンフィレギュリンが腸管上皮細胞増殖活性、特に小腸上皮細胞増殖活性を有することから、新生児壊死性腸炎に治療応用できることが期待されることから、この発明は医薬品の分野、特に治療と予後に有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アンフィレギュリンを腸管上皮細胞に適用することによって腸管上皮細胞を増殖することを特徴とするアンフィレギュリンの腸管上皮細胞増殖方法。
【請求項２】
請求項１に記載するアンフィレギュリンの腸管上皮細胞増殖方法において、前記腸管上皮細胞が小腸上皮細胞であることを特徴とするアンフィレギュリンの腸管上皮細胞増殖方法。
【請求項３】
請求項１または２に記載するアンフィレギュリンの腸管上皮細胞増殖方法において、産後早期の母乳を使用することによって高濃度のアンフィレギュリンを適用することを特徴とするアンフィレギュリンの使用方法。  
【請求項４】
アンフィレギュリンを腸管上皮細胞に適用して腸管上皮細胞を増殖することによって、新生児壊死性腸炎を治療することを特徴とするアンフィレギュリンによる新生児壊死性腸炎の治療方法。
【請求項５】
請求項４に記載のアンフィレギュリンによる新生児壊死性腸炎の使用方法において、産後早期の母乳を与えることによって高濃度のアンフィレギュリンを適用することを特徴とするアンフィレギュリンによる新生児壊死性腸炎の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、アンフィレギュリンを用いた腸管上皮細胞、好ましくは小腸上皮細胞の増殖方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
EGFR
(Epidermal Growth Factor Receptor) は、上皮細胞をはじめ諸種の細胞の修復、増殖に関わる因子として注目されている。そのリカンドであるEGF、アンフィレギュリンならびにTGF-αのノックアウトマウスにおいては、小腸絨毛上皮の再生、増殖能が著しく低下しており、これらのリカンドが小腸絨毛上皮の再生増殖に重要な役割を果たしていることが明らかになった。
一方、新生児壊死性腸炎
(necrotizing enterocolitis: NEC) は、出生体重１０００グラム未満（およそ妊娠２８週未満）の超低出生体重児に好発し、NECに続発する腹膜炎、全身性細菌感染症（敗血症）、栄養障害は新生児死亡の大きな原因となっている。これは小腸上皮細胞の組織障害に対する修復増殖機構が障害されることが主要な原因と考えられている。しかしながら、これらの疾患に対して根本的な治療法が確立していないのが現状である。また、アンフィレギュリンは、腸管上皮細胞の増殖、修復に関わる重要な分子の一つであり、しかも母乳中に高濃度に含まれている。生理活性物質であることが知られている。さらに、母乳、とりわけ産後早期に分泌される母乳を与えた児は、NECの発症が低いことから、母乳中に含まれる諸種の生理的活性因子がNECに対して有用であることが推察されていた。したがって、アンフィレギュリンがNECに対する治療薬として応用可能となれば、超低出生体重児の予後改善に結びつくことが十分期待できる。
【０００３】
そこで、本発明者らは、母体中のＥＧＦＲリカンドの測定から、特に産後早期の母乳には生理的活性を有する高濃度のアンフィレギュリンが存在することを見出したことから（非特許文献１）、アンフィレギュリンは正常新生児のみならず、未熟な低出生体重児においても小腸上皮細胞の増殖因子として働くことを想定した。そこで、本発明者らは、ヒトアンフィレギュリンを添加した培地で、ヒト胎児小腸由来細胞の増殖能を評価したところ、非添加培地に比べて有意に高い増殖能を認めたことから、アンフィレギュリンがヒト胎児小腸上皮細胞に対して高い増殖活性を有することをインビトロ系で証明した。かかる背景で、本発明者らはこの発明を完成した。
【非特許文献１】日本産科婦人科学会雑誌Vol.59 No.2, 679, 2007
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
以上のことから、アンフィレギュリンを腸管上皮細胞、好ましくは小腸上皮細胞に適用することにより、腸管上皮細胞の増殖活性が促進されることから、この発明の主な目的は、アンフィレギュリンを腸管上皮細胞、好ましくは小腸上皮細胞を増殖させることからなるアンフィレギュリンの小腸上皮細胞増殖方法を提供することである。
【０００５】
また、アンフィレギュリンの有する腸管上皮細胞増殖活性を臨床応用することによって、NECの治療効果、特に新生児壊死性腸炎に対する治療効果が期待されることから、この発明の別の目的は、新生児壊死性腸炎の治療へのアンフィレギュリンの使用方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するために、この発明は、アンフィレギュリンを腸管上皮細胞、好ましくは小腸上皮細胞に適用することによって腸管上皮細胞を増殖することからなるアンフィレギュリンの腸管上皮細胞増殖方法を提供する。
【０００７】
また、この発明は、アンフィレギュリンを腸管上皮細胞に適用して腸管上皮細胞を増殖することによって、新生児壊死性腸炎を治療することからなるアンフィレギュリンによる新生児壊死性腸炎の治療方法を提供する。
【発明の効果】
【０００８】
この発明は、アンフィレギュリンを腸管上皮細胞、好ましくは小腸上皮細胞に適用して腸管上皮細胞を増殖させることができることから、新生児壊死性腸炎の治療応用に効果が期待される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
この発明に係るだアンフィレギュリンの腸管上皮細胞増殖方法は、アンフィレギュリンを小腸上皮細胞などの腸管上皮細胞に適用することによって腸管上皮細胞を増殖することからなる。
本発明者らは、アンフィレギュリンが、産後早期の母乳、特に初乳に高濃度に含有されていることを見いだした(図１）。したがって、通常は、高濃度のアンフィレギュリンを含む産後早期の母乳を新生児に授乳したり、ほ乳することによって、新生児が壊死性腸炎に罹患することを予防することができる。しかし、母乳の他に、母乳より抽出精製した天然のアンフィレギュリンや遺伝子組換え操作で作成されたアンフィレギュリンなどのいずれのアンフィレギュリンであっても使用することができる。
【００１０】
この発明において、アンフィレギュリンは、母乳とともに使用することができるとともに、水溶液または人工乳として投与するのがよい。アンフィレギュリンの投与量は、特に限定されるものではないが、例えば、0.3μg/kg体重〜1.8μg/kg体重の範囲であるのがよい。
【実施例１】
【００１１】
（母乳中に含まれるフィレグリンの定量）
妊娠３４週以降に分娩した正常産婦１６例を対象とした。初乳（産後１日目および２日目）、移行乳（産後５日〜６日）、成乳（産後３０日）を採取後、３０００回転／分にて遠心分離し、アンフィレギュリン濃度をELISA法で測定した。図１に示すように、アンフィレギュリン濃度は、産後１日目の初乳では８．２±２．５（ｍｅａｎ±SEM）ｎｇ／ｍｌ、２日目では４．６±１．８ｎｇ／ｍｌと生理的活性を有する高濃度で存在し、移行乳では１１９．４±３２．４ｐｇ／ｍｌと激減した。
【実施例２】
【００１２】
（アンフィレギュリンのヒト胎児小腸上皮細胞の増殖活性）
ヒト胎児小腸上皮由来細胞（FHs
74Int) を培地に１０４個播種し、培地に、１）アンフィレギュリン１ｎｇ／ｍｌ、２）アンフィレギュリン１００ｎｇ／ｍｌ、３）１０％ウシ胎仔血清、４）１０％ウシ胎仔血清＋アンフィレギュリン１ｇ／ｍｌ、５）１０％ウシ胎仔血清＋アンフィレギュリン１００ｎｇ／ｍｌをそれぞれ添加した場合と、コントロールの６つの条件下で９６時間細胞培養を行い、WST‐１アッセイによって、細胞増殖活性を定量的に評価した。その結果、図２に示すように、細胞増殖活性は、アンフィレギュリン１ｎｇ／ｍｌを添加した場合では０．７６±０．０２、アンフィレギュリン１００ｎｇ／ｍｌを添加した場合では０．７６±０．０２であったのに対して、コントロールでは０．６８±０．０２であったので、アンフィレギュリンの添加により、細胞増殖活性はコントロールの場合より有意に増加した。また、１０％ウシ胎仔血清＋アンフィレギュリン１ｇ／ｍｌの場合では０．９８±０．０４、また１０％ウシ胎仔血清＋アンフィレギュリン１００ｎｇ／ｍｌの場合では１．１０±０．０６であったのに対して、１０％ウシ胎仔血清の場合では０．８１±０．０３であったことから、アンフィレギュリンにウシ胎仔血清を添加すると、％ウシ胎仔血清の場合より細胞増殖活性は有意に増加した（図２）。
【産業上の利用可能性】
【００１３】
アンフィレギュリンが腸管上皮細胞増殖活性、特に小腸上皮細胞増殖活性を有することから、新生児壊死性腸炎に治療応用できることが期待されることから、この発明は医薬品の分野、特に治療と予後に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】母乳中に含まれるアンフィレギュリンの定量を示す図。
【図２】アンフィレギュリンのヒト胎児小腸上皮細胞の増殖活性を示す図。
【図１】
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【図２】
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