(57)【要約】【課題】機能性物質の生体細胞への吸収を促進する、古細菌由来のエーテル型脂質に代表されるエーテル結合を有するエーテル型脂質を含む吸収促進剤の提供【解決手段】機能性物質の生体細胞への吸収を促進する、エーテル型脂質を含む吸収促進剤であって、エーテル型脂質が下記の一般式（II）で表される請求項１〜６のいずれか１項に記載のエーテル型脂質を含む吸収促進剤。【化１】2008247876.tif 000009[式中、R1及びR2は、分岐鎖を有していてもよい、飽和又は不飽和炭化水素であり、R1及びR2は同じであっても、異なっていてもよく、Ｚは、極性基である。]【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
機能性物質の生体細胞への吸収を促進する、エーテル型脂質を含む吸収促進剤。
【請求項２】
エーテル型脂質がグリセロールと炭化水素鎖が結合した基本骨格構造を有し、グリセロールと炭化水素鎖の結合の少なくとも１つがエーテル結合であるエーテル型脂質である、請求項１記載のエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
【請求項３】
エーテル型脂質が極性頭部を有し、該極性頭部が水酸基、リン酸基、アミノ基、四級アンモニウムイオン、カルボキシル基、硫酸基、糖若しくはその誘導体、並びにアミノ酸若しくはその誘導体からなる群から選ばれる極性部のうち、少なくとも１つ以上の極性部を含んでなるエーテル型脂質である、請求項１又は２に記載のエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
【請求項４】
機能性物質が脂溶性物質である請求項１〜３のいずれか１項に記載のエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
【請求項５】
吸収が経粘膜吸収、経腸吸収又は経皮膚吸収である請求項１〜４のいずれか１項に記載のエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
【請求項６】
吸収が経腸吸収であり、エーテル型脂質が機能性物質を可溶化したミセルを形成する請求項１〜５のいずれか１項に記載のエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
【請求項７】
エーテル型脂質が下記の一般式（II）で表される請求項１〜６のいずれか１項に記載のエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
【化１】
2008247876.tif 000008
[式中、R1及びR2は、分岐鎖を有していてもよい、飽和又は不飽和炭化水素であり、R1及びR2は同じであっても、異なっていてもよく、Ｚは、極性基である。]
【請求項８】
エーテル型脂質が古細菌由来のジエーテル型脂質である請求項１〜７のいずれか１項に記載のエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
【請求項９】
ジエーテル型脂質が古細菌由来のアーキチジルグルコシルイノシトール又はアーキチジルイノシトールである請求項８記載のエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
【請求項１０】
機能性物質がビタミン、色素物質、脂質、多不飽和脂肪酸、ホルモン、タンニン酸、アミノ酸、テルペン、ポリフェノール、殺菌剤物質からなる群から選択される脂溶性物質である請求項１〜９のいずれか１項に記載のエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のエーテル型脂質を含む吸収促進剤と機能性物質とを含む、前記機能性物質の生体細胞への吸収を促進する組成物。
【請求項１２】
吸収が経粘膜吸収、経腸吸収又は経皮膚吸収である請求項１１記載の機能性物質の生体細胞への吸収を促進する組成物。
【請求項１３】
吸収が経腸吸収である、請求項１２記載の機能性物質の生体細胞への吸収を促進する組成物。
【請求項１４】
組成物がミセル組成物である請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の機能性物質の生体細胞への吸収を促進する組成物。
【請求項１５】
機能性物質がビタミン、色素物質、脂質、多不飽和脂肪酸、ホルモン、タンニン酸、アミノ酸、テルペン、ポリフェノール、殺菌剤物質からなる群から選択される脂溶性物質である請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の機能性物質の生体細胞への吸収を促進する組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体内で一定の機能を発揮し得る機能性物質の吸収促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
脂溶性物質は、消化管内で胆汁や脂質加水分解物の働きで分散され、さらにタウロコール酸等の複合胆汁酸とともにミセルを形成し、小腸上皮細胞へ吸収される。この際、複合胆汁酸は極性部分と非極性部分を有し、リン脂質等の脂質とともに、脂溶性物質を内部に溶解させた形でミセルを形成する。リン脂質としては、フォスファチジルコリン（PC)、リゾフォスファチジルコリン(リゾPC)等のエステル結合を有するリン脂質が利用される。
【０００３】
古細菌は、生物誕生初期に真正細菌や真核細胞生物から分かれたと考えられている生物群であり、死海や海底熱水噴出孔など、極めて過酷な環境に生育可能であることが知られている。厳しい環境への適応により、古細菌は他の生物には認められない独自の特徴を有し、有用な遺伝子資源として期待されている。古細菌に含まれるエーテル型脂質をワクチン組成物として用いること（特許文献１及び２を参照）、エーテル型脂質を癌等の治療に用いること（特許文献３を参照）は報告されていたが、エーテル型脂質の薬物成分としての利用に関する研究は少ない。
【０００４】
【特許文献１】特表2000-502087号公報
【特許文献２】特表2003-511421号公報
【特許文献３】特表平10-507450号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、機能性物質の生体細胞への吸収を促進する、古細菌由来のエーテル型脂質に代表されるエーテル結合を有するエーテル型脂質を含む吸収促進剤の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、古細菌含有成分の新たな機能性の探索を行い、高熱環境に生息する古細菌由来の膜脂質の、消化管からの脂溶性物質の吸収に与える影響を検討した。本発明者らは海底熱水噴出孔に生息する超高熱性古細菌であるエアロパイラム・カミニ(Aeropyrum camini)及びエアロパイラム・ペルニクス(Aeropyrum pernix)K1株の細胞膜画分から脂質を抽出し、脂質成分を分析するとともに得られた膜脂質を用いて、コレステロールや海洋生物に特有のカロテノイドであるフコキサンチン等をミセル化し、Caco-2を用いた消化管吸収モデル実験を行い、対照としてリゾPCを用いたミセルの場合と比較した。
【０００７】
エアロパイラム・カミニ(Aeropyrum camini)とエアロパイラム・ペルニクス(Aeropyrum pernix)K1株の膜脂質の主成分は、いずれもエーテル結合を有するエーテル型脂質であるアーキチジルグルコシルイノシトール（archaetidyl glucosyl inositol)とアーキチジルイノシトール（archaetidyl inositol)であった。Caco-2細胞を用いた消化管吸収モデル実験の結果から、古細菌由来の膜脂質を用いたミセルには、リゾPCを用いたものと比べ、コレステロールとフコキサンチンの吸収をさらに促進する作用が認められた。
【０００８】
以上のように本発明者らは、エーテル型脂質が脂溶性物質等の機能性物質の吸収を促進することを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は以下のとおりである。
[１]  機能性物質の生体細胞への吸収を促進する、エーテル型脂質を含む吸収促進剤。
[２]  エーテル型脂質がグリセロールと炭化水素鎖が結合した基本骨格構造を有し、グリセロールと炭化水素鎖の結合の少なくとも１つがエーテル結合であるエーテル型脂質である、[１]のエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
[３]  エーテル型脂質が極性頭部を有し、該極性頭部が水酸基、リン酸基、アミノ基、四級アンモニウムイオン、カルボキシル基、硫酸基、糖若しくはその誘導体、並びにアミノ酸若しくはその誘導体から選ばれる極性部のうち、少なくとも１つ以上の極性部を含んでなるエーテル型脂質である、[１]又は[２]のエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
[４]  機能性物質が脂溶性物質である[１]〜[３]のいずれかのエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
[５]  吸収が経粘膜吸収、経腸吸収又は経皮膚吸収である[１]〜[４]のいずれかのエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
[６]  吸収が経腸吸収であり、エーテル型脂質が機能性物質を可溶化したミセルを形成する[１]〜[５]のいずれかのエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
[７]  エーテル型脂質が下記の一般式（II）で表される[１]〜[６]のいずれかのエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
【化１】
2008247876.tif 000002
[式中、R1及びR2は、分岐鎖を有していてもよい、飽和又は不飽和炭化水素であり、R1及びR2は同じであっても、異なっていてもよく、Ｚは、極性基である。]
[８]  エーテル型脂質が古細菌由来のジエーテル型脂質である[１]〜[７]のいずれかのエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
[９]  ジエーテル型脂質が古細菌由来のアーキチジルグルコシルイノシトール又はアーキチジルイノシトールである[８]のエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
[１０]  機能性物質がビタミン、色素物質、脂質、多不飽和脂肪酸、ホルモン、タンニン酸、アミノ酸、テルペン、ポリフェノール、殺菌剤物質からなる群から選択される脂溶性物質である[１]〜[９]のいずれかのエーテル型脂質を含む吸収促進剤。
[１１]  [１]〜[１０]のいずれかのエーテル型脂質を含む吸収促進剤と機能性物質とを含む、前記機能性物質の生体細胞への吸収を促進する組成物。
[１２]  吸収が経粘膜吸収、経腸吸収又は経皮膚吸収である[１１]の機能性物質の生体細胞への吸収を促進する組成物。
[１３]  吸収が経腸吸収である、[１２]の機能性物質の生体細胞への吸収を促進する組成物。
[１４]  組成物がミセル組成物である[１１]〜[１３]のいずれかの機能性物質の生体細胞への吸収を促進する組成物。
[１５]  機能性物質がビタミン、色素物質、脂質、多不飽和脂肪酸、ホルモン、タンニン酸、アミノ酸、テルペン、ポリフェノール、殺菌剤物質からなる群から選択される脂溶性物質である[１１]〜[１４]のいずれかの機能性物質の生体細胞への吸収を促進する組成物。
【発明の効果】
【００１０】
実施例に示すように、エーテル型脂質は細胞における脂溶性物質等の機能性物質の吸収を促進し、腸等からの機能性物質の吸収促進剤として用いることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１２】
本発明のエーテル型脂質は、少なくとも１つのエーテル結合を有する脂質である。該エーテル型脂質は、グリセロールと少なくとも１つの炭化水素が結合した基本骨格構造を有し、グリセロールと炭化水素鎖の間の結合の少なくとも１つはエーテル結合である。グリセロールに結合した炭化水素鎖は、１、２又は３つである。本発明のエーテル型脂質として、グリセロールと炭化水素鎖の間の結合に関して、エーテル結合を１つ有するモノエーテル型脂質、２つ有するジエーテル型脂質がある。また、エーテル結合とエステル結合の両方を有する、例えば、１つのエーテル結合と１つのエステル結合を有する、ヘテロのものがある。さらに、後述のようにカルドアーキオールも含まれる。
【００１３】
本発明のエーテル型脂質は以下の特徴を有する。
（１）炭化水素鎖とグリセロールの結合は１つ又は２つのエーテル結合を含む。
（２）炭化水素鎖は分岐鎖を有していてもよい、飽和又は不飽和炭化水素鎖である。例えば、置換基を有していてもよいアルキル基、アルキニル基、アルケニル基又はイソプレノイド等である。炭素数は、C10〜C40であり、好ましくはC20〜C25である。
【００１４】
イソプレノイドの場合、C10〜C40であり、好ましくはC20〜C25であり、さらに好ましくは、C20又はC25である。  
本発明のエーテル型脂質には、グリセロールに炭化水素鎖が結合したコア脂質も含まれ、さらに、極性頭部を有していてもよく、極性頭部は、極性基からなり、極性基として水酸基、リン酸基、アミノ基、カルボキシル基、硫酸基などのイオン性基、四級アンモニウムイオンを含む第四級アミン類、糖若しくはその誘導体、並びにアミノ酸若しくはその誘導体から選ばれる極性部が挙げられ、これらの極性部を少なくとも１つ含む。糖は、単糖、二糖以上のオリゴ糖、糖の誘導体を含む。すなわち、本発明のエーテル型脂質は、リン脂質、糖脂質又はリン糖脂質等の極性頭部を有する脂質も含まれる。
【００１５】
上記のように、本発明のエーテル型脂質には、グリセロールに２分子の炭化水素鎖がエーテル結合により結合したジエーテル型脂質が含まれるが、この他、ジエーテル型の脂質が２分子向き合って、イソプレノイド炭化水素同士で結合した構造を有するテトラエーテル型脂質も含まれる。この場合、分子当りのイソプレノイドの炭素数はC20〜C50となる。
【００１６】
本発明のエーテル型脂質は、例えば以下の一般式（I)で表わされる構造を有する。
【００１７】
【化２】
2008247876.tif 000003
【００１８】
一般式（Ｉ）中、Ａ及びＢはエーテル結合（-O-）又はエステル結合（−O-CO-)を表わし、Ａ、Ｂの少なくとも一つはエーテル結合であり、他はエーテル結合であっても、エステル結合であってもよい。Ra及びRbは、分岐鎖を有していてもよい、飽和又は不飽和炭化水素鎖である。例えば、置換基を有していてもよいアルキル基、アルキニル基、アルケニル基又はイソプレノイド等である。炭素数は、C10〜C40であり、好ましくはC20〜C25である。Ra及びRbは、同じであっても、異なっていてもよい。炭素数は、C10〜C40である。例えば、イソプレノイドであり、イソプレノイドは、C10〜C40であり、好ましくはC20〜C25であり、さらに好ましくはC20又はC25である。
【００１９】
Ｚは、極性頭部であり、極性頭部は、極性基からなり、極性基として水酸基、リン酸基、アミノ基、カルボキシル基、硫酸基などのイオン性基、四級アンモニウムイオンを含む第四級アミン類、糖若しくはその誘導体、並びにアミノ酸若しくはその誘導体から選ばれる極性部が挙げられ、これらの極性部を少なくとも１つ含む。糖は、単糖、二糖以上のオリゴ糖、糖の誘導体を含む。例えば、該極性頭部としては、リン酸エステルを介して結合する基、又はグリコシド結合を介して結合する糖鎖がある。すなわち、例えば、Ｚとして、糖、リン酸又はリン酸に糖、セリン、エタノールアミンその他の基が結合したものが挙げられる。
【００２０】
上記のエーテル型脂質の一例として、Ａ及びＢの両方がエーテル結合であるもの、例えば以下の一般式（II）で表されるジエーテル型構造を有するものが挙げられる。
【００２１】
【化３】
2008247876.tif 000004
【００２２】
一般式（II)中、R1及びR2は、分岐鎖を有していてもよい、飽和炭化水素又はポリエン炭化水素等の不飽和炭化水素鎖である。例えば、置換基を有していてもよいアルキル基、アルキニル基、アルケニル基又はイソプレノイド等である。炭素数は、C10〜C40であり、好ましくはC20〜C25である。R1とR2は同じであっても、異なっていてもよい。イソプレノイドは、炭素数５のイソプレン単位(-CH2-CH2=(CH=CH3)-CH2）を基本骨格に持つ化合物であり、イソプレン単位を４から10個有する。イソプレノイドは以下の式（III）で表される。
【００２３】
【化４】
2008247876.tif 000005
【００２４】
例えば、R1とR2の両方がイソプレノイドのものとして、R1とR2の両方がC20のイソプレノイド、R1とR2の両方がC25のイソプレノイド、R1とR2の一方がC20のイソプレノイドで、他方がC25のイソプレノイドであるものが挙げられる。R1とR2は末端で結合し、環状構造を有していてもよい。
【００２５】
Ｚは、極性頭部であり、極性頭部は、極性基からなり、極性基として水酸基、リン酸基、アミノ基、カルボキシル基、硫酸基などのイオン性基、四級アンモニウムイオンを含む第四級アミン類、糖若しくはその誘導体、並びにアミノ酸若しくはその誘導体から選ばれる極性部が挙げられ、これらの極性部を少なくとも１つ含む。糖は、単糖、二糖以上のオリゴ糖、糖の誘導体を含む。例えば、該極性頭部としては、リン酸エステルを介して結合する基、又はグリコシド結合を介して結合する糖鎖がある。すなわち、例えば、Ｚは糖、リン酸又はリン酸に糖、セリン、エタノールアミンその他の基が結合したものが挙げられる。
【００２６】
糖としては、グルコース、ガラクトース、マンノース及びフルクトースからなる群から選択される糖が１〜４分子結合したもの、例えばゲンチオビオース（D-Glc-(β1-6)-D-Glc）等が挙げられる。リン酸エステルを介して結合する基としては、水素、グルコシルミオイノシトール(glucosyl myo-inositol)、ミオイノシトール(myo-inositol)、エタノールアミン(ethanolamine)、セリン(serine)、N-アセチルグルコサミン(N-acetylglucosamine)、グルコサミニルミオイノシトール(glucosaminyl myo-inositol)、ジメチルアミノペンタンテトロール(dimethylaminopentanetetrol)、トリメチルアミノペンタンテトロール(trimethylaminopentanetetrol)、グリセロール(glycerol)、グリセロールフォスフェート(glycerol phosphate)、グリセロールサルフェート(glycerol sulfate)、グリセロール-1,2-サイクリックフォスフェート(glycerol-1,2-cyclic phosphate)、グリセロールフォスフェートモノメチルエステル(glycerolphosphate monomethylester)等が挙げられる。好ましくはＺは、リン酸、リン酸と糖が結合したものであり、この場合本発明のエーテル型脂質は、極性頭部にリン酸を有するエーテル型リン脂質である。
【００２７】
Ｚが水酸基の場合、上記一般式（I）で表される化合物は、2,3-ジ-o-アルキル sn-グリセロールジエーテルである。
【００２８】
上記一般式（II）で表わされるエーテル型脂質は、グリセロールに対して炭化水素鎖がsn-2、sn-3位に結合している。リン酸を含む場合、sn-グリセロール-1-リン酸型の構造を有する。
【００２９】
本発明のエーテル型脂質は、さらに例えば以下の一般式（IV）又は（V）で表されるテトラエーテル型構造を有する。
【００３０】
【化５】
2008247876.tif 000006
【００３１】
【化６】
2008247876.tif 000007
【００３２】
Ｚが水酸基の場合、上記一般式（I）で表される化合物は、2,3-ジ-o-アルキル sn-グリセロールジエーテルである。
【００３３】
R1、R2及びＺは上記の通りであり、Ｙは、Ｚと同じであり、ＹとＺは同じであっても異なっていてもよい。
【００３４】
本発明は上記のジエーテル型脂質の誘導体をも含み、該誘導体としては、例えばR1及び／又はR2のイソプレノイドのHがOHで置換されたものがある。
【００３５】
本発明のエーテル型脂質として、例えば古細菌由来のものが挙げられる。古細菌は、核を持たない原核生物であり、分子生物学的特徴が真性細菌と異なる直径0.5〜1.5μm、長さ１〜数μmの微生物である。古細菌は、リボソーム小サブユニットRNAの塩基配列に特徴がある。古細菌には、好気性、嫌気性、好熱性、超好熱性、好熱好酸性および好塩性の微生物が含まれている。古細菌については、例えば古賀洋介他編、古細菌の生物学、東京大学出版会、1998年8月24日、等に詳細に記載されている。
【００３６】
古細菌由来のエーテル型脂質は、命名法が提唱されており（Nishihara, M. et al., J.Biochem., 101:1007-1015；古賀洋介他編、古細菌の生物学、東京大学出版会、1998年8月24日）、本発明のエーテル型脂質はその命名法によれば、コア脂質としては上記一般式（II）で表されるジエーテル型脂質であるアーキオール(archaeol)、上記一般式（IV）及び（V）で表されるテトラエーテル型脂質であるカルドアーキオール(caldarchaeol)が含まれる。上記一般式（IV）で表されるものは、イソカルドアーキオールと呼ばれる。さらに、これらに糖鎖がついた糖脂質、リン酸基のみがついたリン脂質、糖鎖とリン酸基の両方がついたリン脂質（リン糖脂質）が含まれる。例えば、糖鎖がついたものは、アーキオール、カルドアーキオールの前に糖鎖の名前を付けて呼ばれる。例えば、グリコシルアーキオール、グリコシルカルドアーキオール等がある。また、１つのリン酸基のみがついたアーキオールやカルドアーキオールのモノリン酸エステルは、アーキチジン酸、カルドアーキチジン酸と呼ばれる。さらに、リン酸基と糖鎖がついたものは、例えば、リン酸基がコア脂質につき、さらにリン酸基に糖鎖がついた場合、すなわちアーキチジン酸、カルドアーキチジン酸にセリン、エタノールアミン、イノシトール、グリセロール等の糖がリン酸ジエステル結合を介して結合した場合、アーキチジルセリン、カルドアーキチジルセリン、アーキチジル-ミオ-イノシトールのように呼ばれる。さらに、カルドアーキオールの２つのグリセロール部分のうち一方のグリセロール部分にリン酸基と糖（例えば、セリン）がつき、他方のグリセロール部分に糖が付いた場合、グルコシルカルドアーキチジルセリンのように呼ばれる。
【００３７】
本発明のエーテル型脂質は例えば、エアロパイラム・ペルニクス(Aeropyrum pernix)、エアロパイラム・カミニ(Aeropyrum camini)、ハロバクテリウム・クチルブルム（Halobacterium cutirubrum）、メタノコッカス・マゼイ(Methanococcus mazei)、メタノスピリラム・フンガテイ(Methanospirillum hungatei)、メタノコッカス・ジャナッシイ（Methanococcus jannaschii）、メタノスフエラ・スタットマネ(Methanosphaera stadtmanae)、メタノブレビバクター・スミシイ（Methanobrevibacter smithii）、メタノコッカス・ボルテ（Methanococcus voltae）、テルモプラズマ・アシドフィラム（Thermoplasma acidophilum）、及びメタノバクテリウム・エスパル（Methanobacterium espanolae）等の古細菌由来のものを用いることができる。
【００３８】
例えば、エアロパイラム・ペルニクス(Aeropyrum pernix)及びエアロパイラム・カミニ(Aeropyrum camini)からは、アーキチジルグルコシルイノシトール(archaetidyl glucosyl inositol)及びアーキチジルイノシトール（archaetidyl inositol)を得ることができ、これらを本発明のエーテル型脂質として好適に用いることができる。
【００３９】
アーキチジルグルコシルイノシトール(archaetidyl glucosyl inositol)及びアーキチジルイノシトール（archaetidyl inositol)の化学式を図２に示す。
【００４０】
本発明のエーテル型脂質は、古細菌から抽出・精製することができ、また化学合成により製造することもできる。古細菌から抽出・精製する場合、例えば古細菌の各種の細胞から全脂質を抽出し、次にその全極性脂質(TPL)を、アセトン不溶性画分として回収することにより得ることができる。さらに、分離用薄層クロマトグラフィーを用いて、精製することができ、例えば、負イオン高速原子衝撃マススペクトロメトリーでその純度を確認することができる。化学合成により製造する場合、例えば、上記の古細菌が有するエーテル型脂質と同じ脂質又は構造的に類似したエーテル型脂質を合成し、本発明のエーテル型脂質として用いることができる。
【００４１】
本発明のエーテル型脂質は、機能性物質の生体細胞への吸収を促進することができる。ここで、機能性物質とは、生体で栄養成分、医薬成分、化粧成分としての機能を発揮し得る物質をいう。機能性物質としては、有機、無機の物質があり、例えばビタミン、医薬、イオン等が挙げられる。また、疎水性物質、脂溶性物質、親油性物質等が挙げられる。吸収は、粘膜や皮膚を通して起こり、粘膜としては、小腸、大腸等の腸粘膜、鼻粘膜等が挙げられる。本発明のエーテル型脂質は、特に腸での吸収促進に効果を有する。これらの機能性物質は、本発明のエーテル型と複合体を形成し、生体細胞へ導入される。この際、本発明のエーテル型脂質は生体細胞内へ入らず、機能性物質のみが生体細胞へ導入されることもあれば、エーテル型脂質と機能性物質が一緒に生体細胞へ導入されることもある。すなわち、エーテル型脂質自体が生体に導入されるか否かにかかわらず、本発明のエーテル型脂質は、機能性物質の生体細胞への吸収を促進する機能を有する。
【００４２】
本発明のエーテル型脂質は、単独で生体細胞への機能性物質の吸収剤として機能することができ、例えば機能性物質とは別に生体に投与してもよい。また、機能性物質と混合して投与してもよい。従って、本発明は本発明のエーテル型脂質を有効成分として含む生体細胞への機能性物質吸収促進剤を含み、さらに、本発明のエーテル型脂質と生体細胞に吸収させようとする機能性物質との混合物も含む。投与方法は限定されないが、例えば経口投与することができ、粘膜や皮膚への塗布、散布、噴霧等によっても投与することもできる。エーテル型脂質を単独で投与に用いる場合、動物の体重１kg当り0.1mg〜1000mgを投与すればよい。
【００４３】
例えば、機能性物質が脂溶性物質の場合、対象となる脂溶性物質は限定されず、動物に対して生理的機能を有するあらゆる脂溶性物質が対象となる。生理的機能としては、栄養成分としての機能、化粧品としての機能、医薬としての機能などが挙げられる。好ましくは、対象となる脂溶性物質は、脂溶性ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ及びＫ等のビタミン；クロロフィル、キサントフィル、カロチノイド（β−カロチン、アスタキサンチン、アポカロテナール、カンタキサンチン、アポエステル、シトラナキサンチン、ゼアキサンチン、フコキサンチン等）などの色素物質；コレステロール等の脂質；アラキドン酸、ドコサヘキサエン酸（DHA)又はエイコサペンタエン酸（EPA)等の多不飽和脂肪酸；ホルモン；タンニン酸；アミノ酸；ジテルペン、トリテルペン、セスキテルペン等のテルペン；ナフトールジアントラセン−ヒペリシン；ポリフェノール（サポニン）；殺菌剤物質（アリシン）；補酵素Q；化粧剤等が挙げられる。
【００４４】
例えば、本発明のエーテル型脂質は、上記の脂溶性物質を含んだミセルを形成し、脂溶性物質の経粘膜、経腸又は経皮膚吸収を促進する。ミセルの形態としては、球状ミセル、円筒状ミセル、屈曲性２分子層、ベシクル、平面状２分子層、逆ミセル等があり、リポソームを形成してもよい。例えば、極性脂質が極性原子団を外側にして、２分子層状ミセルを形成し、又は該ミセルが球状の小胞に閉じて、リポソームを形成する。この際、脂溶性物質は、ミセル中に溶かされ、可溶化する。ミセル形成は、本発明のエーテル型脂質及び脂溶性物質に加えて、胆汁酸又はその共役体（例えば、タウリン又はグリシンとの共役体）、胆汁酸塩又は半合成又は合成の類似体、好ましくは、タウロコール酸、ウルソデオキシコール酸、デオキシコール酸ナトリウム、タウロ−デオキシコール酸塩、グリコ−デオキシコール酸塩、ウルソデオキシコール酸ナトリウム、グリコ−ウルソデオキシコール酸塩又はタウロ−ウルソデオキシコール酸塩等の存在化に形成される。さらに、オレイン酸等の脂肪酸、モノオレオイルグリセロール等のモノアシルグリセロール、リン脂質、フォスファチジルコリン類などを含んでいてもよい。特にリゾホスファチジルコリン（J. Lipid Res. 39, 1197, 1998）を含んでいてもよい。例えば、本発明のエーテル型脂質、脂溶性物質、タウロコール酸ナトリウム、1-モノオレイン及びオレイン酸を混合し、脂溶性物質を可溶化したミセルを得ることができる。
【００４５】
従って、あらかじめ吸収させ投与しようとする脂溶性物質を本発明のエーテル型脂質を構成成分として含むミセルに含ませる形態でミセルを形成させた後に該ミセルを投与してもよい。また、脂溶性物質、本発明のエーテル型脂質及びその他のミセル形成成分を別々に投与してもよい。すなわち、本発明のエーテル型脂質は、脂溶性物質と混合した組成物の形で脂溶性物質吸収促進組成物として用いることも、単独で脂溶性物質の吸収促進剤として用いることもできる。また、リゾホスファチジルコリン（J. Lipid Res. 39, 1197, 1998）と組み合わせて脂溶物質の吸収促進剤として用いてもよい。
【００４６】
また、小腸内では、吸収の際に腸内に存在するミセル形成成分が会合して、ミセルが形成されるので、吸収させようとする脂溶性物質と本発明のエーテル型脂質を混合し、又は別々に投与してもよい。
【００４７】
例えば、本発明のエーテル型脂質と脂溶性物質及びその他のミセル形成成分を混合するか、又は有機溶媒、例えば塩化メチレン、エタノール及び／又はメタノールなどの有機溶媒に溶解し、次いでロータリーエバポレーター等で溶媒を留去し、残留物を、水又は緩衝剤若しくは等張化剤のような製薬学的添加剤の水溶液に溶解することによりミセルを形成させることができる。
【００４８】
ミセルを形成させる場合の各成分の混合比は限定されないが、例えばエーテル型脂質５〜３０％（重量％）を含む。一例として、エーテル型脂質（終濃度200μM）、脂溶性物質（終濃度100μM）、タウロコール酸ナトリウム（終濃度5mM）、1-モノオレイン（終濃度500μM）、オレイン酸（終濃度500μM）の混合物が挙げられる。また、エーテル型脂質を単独で投与に用いる場合、動物の体重１kg当り0.1mg〜1000mgを投与すればよい。
【００４９】
本発明のエーテル型脂質は、経腸栄養剤の成分や医薬品の吸収を促進する添加物として用いることができる。
【実施例】
【００５０】
本発明を以下の実施例によって具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【００５１】
コレステロール吸収実験
エアロパイラム・ペルニクス（Aeropyrum pernix）またはエアロパイラム・カミニ（Aeropyrum camini）の細胞膜脂質画分より、Blight-Dyer法によりクロロホルム/メタノール（2:1,v/v）で膜脂質を抽出した。HPTLCプレート上で二次元展開を行い、脂質を分析した。TLCは、２次元展開を行い、１回目の縦方向の展開に用いた展開液は、クロロホルム/メタノール/7Ｍアンモニア水（60：35：8）であり、２回目の横方向の展開に用いた展開液はクロロホルム/メタノール/酢酸/水（80：25：10：5）であった。ＴＬＣは25HPTLC Plates 10x10 Silicagel60（MERCK）を用いた。TLC展開図を図１に示す。図１Aが、エアロパイラム・ペルニクス由来の脂質、図１Bがエアロパイラム・カミニ由来の脂質のTLC展開図である。いずれもアーキチジルグルコシルイノシトール（AGI）及びアーキチジルイノシトール（AI）を主に含んでいた。脂質の同定は、Biochim Biophys. Acta 1436, 426-436, 1999を参考に行った。図２A及び図２Bに、それぞれアーキチジルグルコシルイノシトール（AGI）及びアーキチジルイノシトール（AI）の構造式を示す。以下、上記細胞膜脂質画分を古細菌膜脂質として用いた。古細菌膜脂質は、Bartlett法（J. Biol. Chem., 234, 466, 1959）により、リン酸量を定量して実験に用いた。
【００５２】
コレステロールを細胞に添加するためにミセル化した。1OmLの遠沈管にそれぞれの保存溶液（メタノールまたはクロロホルムに溶解）をコレステロール（終濃度100μM）、タウロコール酸ナトリウム（終濃度5mM）、1-モノオレイン（終濃度500μM）、オレイン酸（終濃度500μM）となるように加えた。さらにコレステロールの吸収促進効果の知られているリゾホスファチジルコリン（J. Lipid Res. 39, 1197, 1998）または古細菌膜脂質を終濃度200μMとなるように加え、N2ガスによって溶媒を除去した。乾固したものに0.7％ウシ血清アルブミンを含むダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）を加え、Vortexミキサーで撹拌してミセル化させた。ミセル溶液は0.22μmのフィルターを通して滅菌した後に細胞に添加した。
【００５３】
Caco-2細胞（理研ジーンバンク）は10cmディッシュ（NUNC）を用いて10％FCSと0.1mmol/L非必須アミノ酸、1OOunits/mLペニシリンと1OOμg/mLストレプトマイシンを含むDMEMで5％CO2、37℃の環境下で培養し、70％コンフルエントに達したらトリプシン処理によって継代し維持した。Caco-2細胞を12-wellプレートに1.2×105cells/mLの濃度で1mL/wellとなるように播き、5％C02、37℃の環境下で21日間培養した。培地は2〜3日ごとに交換した。培養後、1we11につき無血清培地1mLで細胞を2回洗浄し、ミセル化したコレステロールを含む無血清培地をそれぞれのwe11につき1mL添加した。24時間インキユベート後、細胞表面に付着したコレステロールまたはカロテノイドを取り除くために10mmol/Lタウロコール酸ナトリウムを含むPBS溶液で細胞を洗浄し、更にPBSで２回の洗浄を行った。細胞は1mLのPBSで回収し、1000×g、4℃で5分間遠心して上清を取り除いた。残った細胞ペレットにO.5mLのPBSを加えて超音波ホモジナイズして細胞を破砕した。ホモジネートの一部を用いてLowry法（J. Biol. Chem., 193, 265, 1951）により、タンパク質量を定量した。残りのホモジネートにクロロホルムとメタノールを加え脂質を抽出し、コレステロール量をコレステロールE-テストワコー（和光純薬）を用いて定量した。得られた値はタンパク質量で補正し、未処理細胞のコレステロール量を差し引くことで細胞内に取り込まれたコレステロール量を算出した。
【００５４】
図３及び４に、それぞれエアロパイラム・ペルニクス（Aeropyrum pernix）及びエアロパイラム・カミニ（Aeropyrum camini）由来の膜脂質画分を用いた場合の算出したコレステロール量を示す。縦軸は、nmol/mgタンパク質である。図３及び４に示すように、古細菌膜脂質画分をミセルに混合した場合に、コレステロールの吸収が促進された。
【００５５】
フコキサンチンの吸収実験
コレステロールの方法に準じ、フコキサンチン（終濃度5μM）をミセル化した。エアロパイラム・カミニ（Aeropyrum camini）由来の膜脂質画分を用いた。上記と同様に細胞に取り込ませた後、回収した細胞からジクロロメタン/メタノール溶液（2:1,v/v）を用いてフコキサンチンを抽出した。細胞内に取り込まれたフコキサンチンとフコキサンチンから生成したフコキサンチノールの含有量についてHPLCを用いて定量した（J. Nutr. 132, 946, 2002）。
【００５６】
HPLC分析条件は以下のとおりであった。
・流速  1.OmL/min
・カラム温度  40℃
・移動相  アセトニトリル：メタノール：水＝75:15:10（v/v/v, 0.1％酢酸アンモニウムを含む）
・検出  444nm
図５に結果を示す。縦軸は、nmol/mgタンパク質である。図５の結果は、フコキサンチンとフコキサンチノールの合計量を示す。図５に示すように、古細菌膜脂質画分をミセルに混合した場合に、フコキサンチンの吸収が促進された。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】エアロパイラム・ペルニクス（Aeropyrum pernix）（図１Ａ）またはエアロパイラム・カミニ（Aeropyrum camini）（図１Ｂ）の細胞膜脂質画分のTLC展開の結果を示す図である。
【図２】アーキチジルグルコシルイノシトール（AGI）（図２Ａ）及びアーキチジルイノシトール（AI）（図２Ｂ）の構造式を示す図である。
【図３】Caco-2細胞におけるエアロパイラム・ペルニクス由来の古細菌膜脂質存在下でのコレステロールの吸収を示す図である。
【図４】Caco-2細胞におけるエアロパイラム・カミニ由来の古細菌膜脂質存在下でのコレステロールの吸収を示す図である。
【図５】Caco-2細胞におけるエアロパイラム・カミニ由来の古細菌膜脂質存在下でのフコキサンチンの吸収を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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