(57)【要約】【課題】  安全性の高いＭＭＰ遺伝子発現促進剤、コラーゲン代謝促進剤、化粧料および医薬を提供する。【解決手段】  有効量のアシタバ根部抽出物を含む、ＭＭＰ遺伝子発現促進剤、有効量のアシタバ根部抽出物を含む、コラーゲン代謝促進剤、アシタバ根部抽出物を含む化粧料、および有効量のアシタバ根部抽出物を含む、線維化状態を処置するための医薬、ならびにこれらの製造方法が提供される。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量のセリ科シシウド属植物根部抽出物を含む、ＭＭＰ遺伝子発現促進剤。
【請求項２】
有効量のセリ科シシウド属植物根部抽出物を含む、コラーゲン代謝促進剤。
【請求項３】
セリ科シシウド属植物根部抽出物を含む化粧料。
【請求項４】
有効量のセリ科シシウド属植物根部抽出物を含む、線維化状態を処置するための医薬。
【請求項５】
セリ科シシウド属植物根部と抽出溶剤を接触させ、セリ科シシウド属植物根部抽出液を得るステップを含む、ＭＭＰ遺伝子発現促進剤、コラーゲン代謝促進剤、化粧料、または線維化状態を処置するための医薬の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＭＭＰ遺伝子発現促進剤、コラーゲン代謝促進剤、化粧料および医薬に関し、特に、セリ科シシウド属植物根部抽出物を含むＭＭＰ遺伝子発現促進剤、コラーゲン代謝促進剤、化粧料および医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体内における過剰な線維化および線維成分（コラーゲン）の蓄積は、強皮症、肝硬変、腎硬化症、肺線維症等の膠原病を引き起こす。また、これらの現象は、肩関節炎が進行した四十肩や五十肩などでも観察される。線維化の原因として自己免疫疾患が関与していると考えられているが、詳細はいまだに解明されていない。そのため、これらの疾病患者は数多く存在するにもかかわらず、この膠原病の一種である線維化病態に対しては、これまでに有効な治療法が確立されていなかった。
【０００３】
近年、アデノウイルスを用いてコラーゲン分解に関与する遺伝子（ＭＭＰ１）を細胞に導入する実験的な試みにおいて線維化改善に効果があるとの報告がなされている（非特許文献１：Iimuro）。疾患部におけるコラーゲンの分解とこれによるコラーゲンの代謝促進は、上記の膠原病に対する有効な手段として期待されている。しかしながら、ウイルスを用いた遺伝子治療では、これまでに白血病の発症例が報告されているなど安全性の面で問題が残る。また、我が国では厚生労働省ガイドラインにより遺伝子治療の対象疾患は「生命をおびやかす疾患」でかつ「遺伝子治療臨床研究を実施することによる有効性が十分予測される疾患」に限られている。このため、アデノウイルスを用いた遺伝子治療は適用範囲が狭く汎用性が低い。
【０００４】
ここで、東京特産農作物として、アシタバ等のセリ科シシウド属植物が古来より食用とされている。特許文献１（特開2005-255527）には、パフィア抽出物とアシタバ抽出物の混合物を実験動物に投与することで肉芽形成が促進されること、およびフドロキシプロリンの含有量が増加することが示され、ここから、パフィア抽出物とアシタバ抽出物の混合物がコラーゲン合成促進作用を有するとされている。
【０００５】
【特許文献１】特開2005-255527号公報
【非特許文献１】Iimuro Y, Nishio T, Morimoto T, Nitta T, Stefanovic B, Choi SK, Brenner DA, Yamaoka Y., "Delivery of matrix metalloproteinase-1 attenuates established liver fibrosis in the rat.", Gastroenterology, 2003 Feb;124(2):445-58.
【非特許文献２】Robert Visse, Hideaki Nagaseya, "Matrix Metalloproteinases and Tissue Inhibitors of Metalloproteinases", Circulation Research, 2003 May, 92, pp827-839
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、安全性の高いＭＭＰ遺伝子発現促進剤、コラーゲン代謝促進剤、化粧料および医薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の一の側面によると、有効量のセリ科シシウド属植物根部抽出物を含む、ＭＭＰ遺伝子発現促進剤が提供される。本発明の他の側面によると、有効量のセリ科シシウド属植物根部抽出物を含む、コラーゲン代謝促進剤が提供される。本発明の他の側面によると、セリ科シシウド属植物根部抽出物を含む化粧料が提供される。本発明の他の側面によると、有効量のセリ科シシウド属植物根部抽出物を含む、線維化状態を処置するための医薬が提供される。
【０００８】
本発明の他の側面によると、セリ科シシウド属植物根部と抽出溶剤を接触させ、セリ科シシウド属植物根部抽出液を得るステップを含む、ＭＭＰ遺伝子発現促進剤、コラーゲン代謝促進剤、化粧料、または線維化状態を処置するための医薬の製造方法が提供される。
【発明の効果】
【０００９】
以下に詳細に説明するように、本発明によると、生体に優しいセリ科シシウド属植物抽出物由来のＭＭＰ遺伝子発現促進剤、コラーゲン代謝促進剤、化粧料および医薬が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明の実施の形態を説明する。もっとも、以下の記載は、本発明を具体的に説明するためのものであって、本発明の技術的範囲を限定することを意図するものではない。
【００１１】
アシタバ根部抽出物のヒト培養細胞への作用を検討したところ、細胞形態への作用が認められた。そこで、ＤＮＡマイクロアレイを用いて遺伝子レベルでの解析を行った結果、アシタバ根部抽出物により、コラーゲンの分解促進に関与する遺伝子（ＭＭＰ１）が対照区の約５００倍発現していることが確認された（実施例参照）。
【００１２】
上記したように、アデノウイルスを用いてＭＭＰ１遺伝子を細胞に導入する実験的な試みにおいて線維化改善に効果があるとの報告がなされている（非特許文献１：Iimuro）ものの、線維化病態に対する有効な治療法は確立されていないのが現状である。本発明者等は、上記知見に基づき、アシタバ根部抽出物が、ＭＭＰ遺伝子発現促進剤やコラーゲン代謝促進剤に用いることができ、ひいてはコラーゲン代謝促進作用あるいは線維化状態改善作用を有する化粧料や線維化状態を処置するための医薬に用いることができることを見出し本発明に到った。
【００１３】
このように、本発明によると、アシタバ根部抽出物の生理活性を利用して、自己のもつＭＭＰ遺伝子の発現を誘導し、コラーゲンの分解を促すことができる。古来より食用とされているアシタバを原料として用い、また遺伝子導入を伴わないため、本発明は安全性が高くかつ苦痛を伴わない。
【００１４】
本発明において、活性成分としてセリ科シシウド属植物の根部からの抽出物が用いられる。セリ科シシウド属植物として、アシタバ（Angelica keiskei）の他、同様に古来よりその薬効が知られているアマニュウ（Angelica edulis）、イシヅチノダケ（Angelica cryptotaeniaefolia）、イシヅチボウフウ（Angelica saxicola）、イヌトウキ（Angelica shikokiana）、イワニンジン（Angelica hakonensis）、ウバタケニンジン（Angelica ubatakensis）、エゾニュウ（Angelica ursina）、エゾノヨロイグザ（Angelica anomala）、オオウバタケニンジン（Angelica ubatakensis）、オオバセンキュウ（Angelica genuflexa）、カラトウキ（Angelica sinense）、カワゼンゴ（Angelica tenuisecta）、クマノダケ（Angelica mayebarana）、コウライヒメノダケ（Angelica cartilaginomarginata）、シシウド（Angelica pubescens）、シラネセンキュウ（Angelica polymorpha）、ツクシゼリ（Angelica longeradiata）、ツクシトウキ（Angelica pseudo-shikokiana）、トサボウフウ（Angelica yoshinagae）、ニホントウキ（Angelica acutiloba）、ノダケ（Angelica decursiva）、ノダケモドキ（Angelica hakonensis）、ハナビゼリ（Angelica inaequalis）、ハマウド（Angelica japonica）、ヒメノダケ（Angelica cartilagino-marginata）、ヒュガトウキ（Angelica furcijuga）、ホソバトウキ（Angelica stenoloba）、ミヤマシシウド（Angelica matsumurae）、ミヤマトウキ（Angelica acutiloba）、ヤクシマノダケ（Angelica yakusimensis）、ヨロイグサ（Angelica dahurica）、ヨーロッパトウキ（Angelica archangelica）などが挙げられる。特に、セリ科シシウド属植物としてアシタバを用いることが好ましい。
【００１５】
本発明において、抽出物とは、根部から抽出することで直接得られる抽出液のみならず、その希釈液、濃縮液、精製液や、それらの乾燥物等を含む。抽出物は、アシタバ根部を抽出溶媒に接触させ、必要に応じて得られた抽出液を精製し、さらに、必要に応じて得られた抽出液または精製液を希釈、濃縮または乾燥することで得られる。
【００１６】
抽出は、連続式あるいはバッチ式のいずれでも行うことができ、また、攪拌しながら、または静置して行うことができる。抽出には、例えばソックスレー抽出器を用いることができる。抽出には、根部を生植物またはその乾燥物（凍結乾燥物等）を、そのまま、または粉砕もしくは裁断して用いることができる。抽出溶媒として、例えば水（蒸留水やイオン交換水）、親水性有機溶媒（メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノール等のアルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル；ジメチルスルホキシド等）または疎水性有機溶媒（クロロホルム、ジクロロメタン等）を単独でまたは任意の割合で混合して用いることができる。特に、抽出溶媒として酢酸エチルを用いることが好ましい。抽出は室温または加熱下で行うことができ、０〜５０℃で行うことが好ましく、１０〜３０℃で行うことがさらに好ましい。抽出時間は、温度、溶媒の種類や量等に応じて任意に設定することができ、例えば１時間とすることができる。溶媒、溶媒の量、温度、ｐＨ、圧力、抽出時間等の抽出条件は、抽出効率やコスト等の観点から決定することができる。抽出液からは、濾過、圧搾、遠心分離などの慣用される方法により、植物繊維など根部の残渣を除くことが好ましい。
【００１７】
必要に応じて、得られた抽出液を精製し、色素等の不活性成分を除くことが好ましい。精製は、液−液分配抽出や、各種クロマトグラフィー等の慣用された方法により行うことができる。
【００１８】
また、得られた抽出液または精製液は、そのままの形態で用いることができ、必要に応じて、希釈、濃縮または乾燥することもできる。例えば、得られた抽出液または精製液は、水、アルコール等の溶媒で希釈することができ、加熱下および／または減圧下で濃縮することができ、また、減圧乾燥、凍結乾燥や噴霧乾燥等により乾燥することができる。得られた根部抽出物は、さらに用途に応じて添加剤を添加し、所望の組成・形態とすることができる。
【００１９】
上記したように、シシウド属植物根部抽出物は、ＭＭＰ遺伝子発現促進剤およびコラーゲン代謝促進剤に用いることができる。ここで、ＭＭＰ遺伝子は、ＭＭＰ１の他、ＭＭＰ３を含む。ＭＭＰ１（matrix metalloproteinase）は間質性コラゲナーゼ（interstitial collagenase）とも呼ばれ、コラーゲンの分解に関与することが知られている（非特許文献１：Iimuro，非特許文献２：Visse et al.）。ＭＭＰ３（matrix metalloproteinase）はストロムライシン(stromelysin)とも呼ばれ、コラーゲンのほかフィブロネクチンやラミニンなどの分解に関与することが知られている（非特許文献２：Visse et al.）。
【００２０】
さらに、シシウド属植物根部抽出物は、化粧料、特にコラーゲン代謝促進作用または線維化状態処置作用を有する化粧料に用いることができる。また、シシウド属植物根部抽出物は、線維化状態を処置するための医薬に用いることができる。本発明によると、コラーゲンの分解を促進することで線維化状態におけるコラーゲン代謝を正常な状態に導くことができる。このように、本発明によると、シシウド属植物根部抽出物によりコラーゲン代謝を促進し、ひいては線維化状態を処置することが可能である。ここで、処置とは、治療、改善、維持（悪化防止）および予防を含む。
【００２１】
本明細書において、線維化状態は線維化病態のみならず、広くコラーゲン蓄積に関連する状態をいい、過剰な線維化が認められる状態や、線維成分が過剰に蓄積された状態を含む。本明細書において、状態とは、疾患、障害および異常状態を含む。より具体的には、線維化状態は、生体内における過剰な線維化および線維成分（コラーゲン）の蓄積によって引き起こる強皮症、肝硬変、肝線維症、腎硬化症、肺線維症、骨髄線維症、膵臓線維化など各臓器・組織の線維症等の膠原病や肩関節炎が進行した四十肩、五十肩等を含む。さらに、線維性結合組織が増生することで線維化巣が形成された瘢痕（火傷、外傷、潰瘍、座瘡の痕等）、ケロイドを含む。なお、本発明は、ヒトを含む哺乳動物に適用することができる。
【００２２】
アシタバ根部抽出物の含有量は、コラーゲンの代謝を促進するのに有効な量および／または線維化状態を処置するのに有効な量である。これらの作用の有無は、非特許文献１（Iimuro）に記載の方法により試験することができる。より具体的には、化粧料として用いる場合、剤型等に応じて設定すべきであるが、一般に、根部抽出物の含有量は、化粧料の総量を基準として、原植物根部換算量として0.01〜10000重量％であることが好ましく、0.1〜6500重量％であることがさらに好ましく、1.0〜5000重量％であることがさらに好ましい。医薬として用いる場合、投与対象、投与対象の年齢、投与ルート、剤型、線維化状態等に応じて設定すべきであるが、一般に、植物根部抽出物の用量は、原植物根部換算量として0.1〜200ｇ／ｋｇ体重／日であることが好ましく、0.1〜100ｇ／ｋｇ体重／日であることがさらに好ましく、0.1〜50ｇ／ｋｇ体重／日であることがさらに好ましい。
【００２３】
本発明の化粧料は、化粧水、乳液、クリーム等の皮膚用化粧料、メイクアップベースローション、メイクアップベースクリーム、液状もしくはクリーム状または軟膏型のファンデーション、アイカラー、チークカラーといったメイクアップ化粧料、シャンプー、リンス、ヘアートリートメント等の毛髪用化粧料、ハンドクリーム、レッグクリーム、ボディローション等の身体用化粧料等とすることができる。また、本発明の医薬は、外用剤とすることが好ましく、特に皮膚外用剤とすることが好ましい。具体的には、本発明の医薬は、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム、軟膏等の剤型の皮膚外用剤とすることができる。また、本発明の医薬は、内用剤とすることもできる。具体的には、本発明の医薬は、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤等の剤型の固体または液体内用剤とすることができる。
【００２４】
本発明の化粧料および医薬は、その用途や剤型等に応じて結合剤、安定剤、乳化剤、懸濁剤、分散剤、潤滑剤、防腐剤、増量剤、界面活性剤、粘剤、粉末、顔料、色剤、殺菌剤、香料、美白剤、紫外線防御剤、酸化防止剤、保湿剤、血行促進剤等をさらに含むことができる。
【００２５】
セリ科シシウド属植物は古来より食用とされており、毒性は認められない。
【実施例】
【００２６】
以下、本発明の実施例を、添付図面を参照しながら説明する。もっとも、以下の記載は、本発明をより具体的に説明するためのものであって、本発明の技術的範囲を限定することを意図するものではない。
【００２７】
［材料および方法］
〔アシタバ根部抽出液等の調製〕
図１に、アシタバ根部抽出液の調製方法の模式的なフローチャートを示す。流水で洗浄したアシタバ根部約１ｋｇを細切して−３０℃で予備凍結させた後、凍結乾燥処理を施した。凍結乾燥したアシタバ根部はサイクロン式ミルで粉砕し１ｍｍメッシュの篩を通した。粉砕したアシタバ根部１ｇに対し５０ｍｌの酢酸エチルを加え室温で１時間抽出を行った。吸引ろ過した抽出液をロータリーエバポレーターで減圧乾固させ、アシタバ根部抽出液を得た。
【００２８】
〔間葉系細胞の分離〕
間葉系細胞は手術で切除された余剰指から分離した。まず、ＰＢＳで洗浄した余剰指から骨質を覆う骨膜をメスで除去し、再びＰＢＳで洗浄した。１０ｃｍシャーレ上で注射器を使ってダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）で余剰指の骨髄を還流（１０回以上）し、シャーレにたまった骨髄を含むＤＭＥＭを４０μｍのセルろ過器を通して試験管に移した。続いて１，０００ｒｐｍで５分間遠心分離器にかけ上清を除いて間葉系細胞を得た。得られた間葉系細胞は実験に使用するまで−１９６℃で凍結保存した。
【００２９】
〔細胞の培養〕
凍結保存した余剰指由来の間葉系細胞を３７℃で手早く解凍し、０．５％非働化牛胎児血清（ＦＢＳ）、インスリンおよびトランスフェリンを添加したＤＭＥＭに懸濁し、１シャーレに１×１０5個ずつの細胞を含むように１０ｃｍシャーレにまき、３７℃、５％ＣＯ2の条件下で培養した。１週間後、培地を除去しＰＢＳで洗浄後、トリプシンを用いて細胞を剥離、回収した。アシタバ根部抽出液および葉部抽出液を０．３〜０．４％含有する培地に、回収した細胞を懸濁させて、各ウェルに０．３×１０4個の細胞と８００μｌの培地を含むように２４ウェルプレートにまいた。培養期間は２週間とし、培地交換は１週間経過した時点で１回行った。
【００３０】
〔全ＲＮＡの抽出〕
RNeasy Plus Mini Kit（Qiagen製）を用いてメーカー推奨プロトコルに準じて、培養したヒト間葉系細胞から全ＲＮＡを採取した。
【００３１】
〔マイクロアレイ解析〕
アシタバ根部抽出液が細胞に与える影響をゲノムワイドに理解するために、ヒトゲノム発現解析用アレイHuman Genome U133A Probe array（Affymetrix製）用いてヒト間葉系細胞で発現している遺伝子の網羅的解析を行った。メーカー推奨プロトコルに従って、上記で得られた全ＲＮＡを用いて実験を行った。得られたデータはGenespring software version5（Silicon Genetics製）を用いて解析し、発現量を相対的な数値として得た。
【００３２】
〔ＲＴ−ＰＣＲ〕
（ｃＤＮＡの合成）
上記で得られた全ＲＮＡ５μｇに１μｌの５０μＭオリゴ−ｄＴプライマーと１μｌの１０ｍＭ  ｄＮＴＰミックスを加えて６５℃で５分間反応させ、氷上で１分間急冷した。その後、４μｌの５ｘ第一鎖反応バッファー、１μｌの０．１Ｍ  ＤＴＴ、RNase out Recombinant Ribonuclease Inhibitor（４０Ｕ／μｌ）、１μｌの逆転写酵素Super ScriptIII（２００Ｕ／μｌ）を加えて穏やかによく混合した。５０℃で１時間、続いて７０℃で１５分間処理した。この後RNase Hを１μｌ加えて３７℃で２０分間処理することでＲＮＡをすべて分解し、ｃＤＮＡを精製した。反応組成液の容量は以下の通りとした。
【００３３】
＜反応組成液＞
（１）全ＲＮＡ  ５μｇ
（２）５０ｎｇ／μｌオリゴ−ｄＴプライマー（invitrogen製）  １μｌ
（３）１０ｍＭ  ｄＮＴＰミックス（invitrogen製）  １μｌ
（１）＋（２）＋（３）＋蒸留水で総量を１３μｌとした。
（４）５ｘ第一鎖反応バッファー（invitrogen製）  ４μｌ
（５）０．１Ｍ  ＤＴＴ（invitrogen製）  １μｌ
（６）RNase out Recombinant RNase Inhibitor（invitrogen製）  １μｌ
（７）酵素Super ScriptIII RT（invitrogen製）
（８）RNase H（invitrogen製）  １μｌ
【００３４】
（ＰＣＲ反応）
５００ｎｇのｃＤＮＡに２μｌの１０×Ex Tag Buffer（２０ｍＭ  Mg2+ plus）、１μｌのｄＮＴＰミックス（各２．５ｍＭ）、０．５μｌの１０μＭセンスプライマー、０．５μｌの１０μＭアンチセンスプライマー、０．１μｌのTaKaRa Ex Taq Polymerase（５Ｕ／μｌ）を加えたものを反応液とした。反応条件、反応組成液およびプライマー配列は下記の通りとした。
【００３５】
＜反応条件＞
ＭＭＰ−１；９４℃３０秒、５７℃１分、７２℃１分を３０サイクル
１８ＳリボソームＲＮＡ；９４℃３０秒、５０℃１分、７２℃１分を３０サイクル
【００３６】
＜反応組成液＞
（１）ｃＤＮＡ  ５００ｎｇ
（２）１０×Ex Tag Buffer（タカラバイオ製）  ２μｌ
（３）ｄＮＴＰミックス  １μｌ、
（４）１０ｍＭセンスプライマー  ０．５μｌ
（５）１０ｍＭアンチセンスプライマー  ０．５μｌ
（６）TaKaRa Ex Taq Polymerase（５Ｕ／μｌ）（タカラバイオ製）  ０．１μｌ
【００３７】
＜プライマー配列＞
ＭＭＰ−１−センス  CTGAAGGTGATGAAGCAGCC
ＭＭＰ−１−アンチセンス    AGTCCAAGAGAATGGCCGAG
【００３８】
（電気泳動）
１μｇ／ｍｌの濃度でエチヂウムブロマイドを含む０．８％アガロースゲルを用いて、１０μｌのＰＣＲ産物を電気泳動した。使用したマーカーは下記の通りである。
【００３９】
＜電気泳動マーカー＞
φX174DNA Hae lll Digest（５０ｎｇ／μｌ）（BioLabs製）
OneSTEP Ladder 50（０．０５−２ｋｂｐ）（ニッポンジーン製）
OneSTEP Ladder 100（０．１−２ｋｂｐ）（ニッポンジーン製）
【００４０】
［結果］
〔マイクロアレイ解析について〕
図２に、マイクロアレイによる発現解析の結果を、ＭＭＰ１遺伝子の発現について示す。図２に示すように、培養２週間後の無添加区、ＤＭＳＯ添加区、ＤＭＳＯ溶解アシタバ葉部抽出液添加区のヒト間葉系細胞におけるＭＭＰ−１発現量はそれぞれ５０．２、６、８．１であったのに対し、ＤＭＳＯ溶解アシタバ根部抽出液を添加して培養した区では２８０１．３となり、ＤＭＳＯのみを添加した場合の約５００倍に相当する値であった。このように、アシタバ根部抽出物をヒト培養細胞に添加することで、細胞における遺伝子ＭＭＰ１の著しい発現が誘導されることが確認された。
【００４１】
図３に、マイクロアレイによる発現解析の結果を、ＭＭＰ３遺伝子の発現について示す。図３に示すように、培養２週間後の無添加区、ＤＭＳＯ添加区、ＤＭＳＯ溶解アシタバ葉部抽出液添加区のヒト間葉系細胞におけるＭＭＰ−３発現量はそれぞれ８４、７５、５６であったのに対し、ＤＭＳＯ溶解アシタバ根部抽出液を添加して培養した区では７１４となり、ＤＭＳＯのみを添加した場合の約１０倍に相当する値であった。このように、アシタバ根部抽出物をヒト培養細胞に添加することで、細胞における遺伝子ＭＭＰ３の著しい発現が誘導されることが確認された。
【００４２】
〔ＲＴ−ＰＣＲについて〕
図４に、電気泳動による発現解析の結果を示す。図３に示すように、電気泳動の結果、ＭＭＰ−１プライマーセットで４２８ｂｐ、１８ＳリボソームＲＮＡプライマーセットで１８６ｂｐのバンドを得た。ＤＭＳＯ溶解アシタバ根部抽出液添加区において４２８ｂｐに明瞭なバンドが現れ、遺伝子ＭＭＰ−１が発現していることが確認された。その他の無添加区においては、遺伝子ＭＭＰ−１の発現は確認されなかった。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】図１に、アシタバ根部抽出液の調製方法の模式的なフローチャートを示す。
【図２】図２に、マイクロアレイによる発現解析の結果を、ＭＭＰ１遺伝子の発現について示す。
【図３】図３に、マイクロアレイによる発現解析の結果を、ＭＭＰ３遺伝子の発現について示す。
【図４】図４に、電気泳動による発現解析の結果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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