(57)【要約】      （修正有）【課題】低分子、非ペプチド性のグアニル酸シクラーゼ受容体Aの作動剤の提供。【解決手段】次式（Ｉａ）又は（ＩＩａ）のイミダゾロン化合物。2008137897.tif 000020（R１〜R９は、水素原子、Ｃ１〜Ｃ6アルキル基等を表し、Ｘは、ＮＨ基等を表し、Ｚは、フェニル基等を表す）【選択図】図３
2008137897.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉａ）：
【化１】
2008137897.tif 000018
（式中、
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、（１）Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基、又は（３）水素原子を表し、
Ｒ３は、（１）Ｃ１〜Ｃ１０のアルキル基、（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基、又は（３）水素原子を表し、
Ｘは、ＮＨ基又は酸素原子を表し、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、同一又は異なって、（１）Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基、又は（３）水素原子を表す）
で示される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物。
【請求項２】
一般式（ＩＩａ）：
【化２】
2008137897.tif 000019
（式中、
R１、R２、R８及びＲ９は、同一又は異なって、（１）Ｃ１〜Ｃ6のアルキル基、（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基、又は（３）水素原子を表し、
Ｘは、ＮＨ基又は酸素原子を表し、
Ｚは、（１）Ｃ１〜Ｃ10の直鎖あるいは環状アルキル基又は（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基を表すか、或いは（４）２つのＸ基と共に炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子および酸素原子から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含む５〜８員環の芳香族複素環基を形成する［ここで前記Ｚの基は、任意にハロゲン原子、ニトロ基、１〜３個のハロゲン原子で置換された、または非置換の直鎖あるいは環状Ｃ１〜Ｃ１０のアルキル基、１〜３個のハロゲン原子で置換された、または非置換のＣ２〜Ｃ１０のアルケニル基、１〜３個のハロゲン原子で置換された、または非置換のＣ２〜Ｃ10のアルキニル基、Ｃ６〜Ｃ１０のアラアルキル基、Ｃ６〜Ｃ１０のアリルーカルボニル基、カルボキシル基から選ばれる１〜５個の基で置換されていてもよい］
示される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物。
【請求項３】
前記式（Ｉａ）の化合物において、Ｒ１とＲ２が同時に水素原子ではない請求項１記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物。
【請求項４】
前記式（Ｉａ）の化合物において、Ｒ３がフェニル基である請求項１記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物。
【請求項５】
前記式（Ｉａ）の化合物において、ＸがＮＨ基である請求項１記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物。
【請求項６】
前記式（Ｉａ）の化合物において、R４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７が共に水素原子又はＣ１〜Ｃ6のアルキル基である請求項１記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物。
【請求項７】
前記式（ＩＩａ）の化合物において、Ｒ１とＲ２が同時に水素原子ではなく、且つ、Ｒ８とＲ９が同時に水素原子ではない請求項２記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物。
【請求項８】
前記式（ＩＩａ）の化合物において、ＸがＮＨ基である請求項２記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物。
【請求項９】
前記式（ＩＩａ）の化合物において、Ｚがフェニル基またはシクロヘキシル基である請求項２記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物。
【請求項１０】
前記式（ＩＩａ）の化合物が、以下の群からなる化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である請求項２に記載の化合物。
Ｎ，Ｎ’−（１，４−フェニレン−ジ｛イミノ［６−（２−アミノ−５−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１，３，５−トリアジン−４，２−ジイル］｝）ジグアニジン；
Ｎ，Ｎ’−（１，４−フェニレン−ジ｛イミノ［６−（２−アミノ−５−ブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１，３，５−トリアジン−４，２−ジイル］｝）ジグアニジン；
Ｎ，Ｎ’−（１，４−シクロヘキサン−ジ｛イミノ［６−（２−アミノ−５−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１，３，５−トリアジン−４，２−ジイル］｝）ジグアニジン；
Ｎ−［６−（２−アミノ−５−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル−４−グアニジノ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−Ｎ’−［６−（２−アミノ−５−メチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジノ−１，３，５−トリアジン−２−イル］−１，４−フェニレンジアミン；
Ｎ−［６−（２−アミノ−（５Ｒ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル］−Ｎ’−［６−（２−アミノ−（５Ｓ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル］−１，４−シクロヘキサンジアミン；
Ｎ−［６−（２−アミノ−（５Ｒ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル］−Ｎ’−［６−（２−アミノ−（５Ｒ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル］−１，４−シクロヘキサンジアミンと、Ｎ−［６−（２−アミノー（５Ｓ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジルー１，３，５−トリアジン−２−イル］−Ｎ’−［６−（２−アミノ−（５Ｓ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル］−１，４−シクロヘキサンジアミンの混合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グアニル酸シクラーゼ受容体Ａの作動作用を有する新規なイミダゾロン化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ナトリウム利尿ペプチドは、類似した構造をもつ３種のペプチドであるＡＮＰ（心房性ナトリウム利尿ペプチド）、ＢＮＰ（脳性ナトリウム利尿ペプチド）及びＣＮＰ（Ｃ型ナトリウムペプチド）から構成されている。これらのリガンドに対する受容体として、膜結合型グアニル酸シクラーゼである、ＧＣ−Ａ（グアニル酸シクラーゼＡ）、ＧＣ−Ｂ（グアニル酸シクラーゼＢ）と、グアニル酸シクラーゼドメインを持たないＣ受容体の3種が同定されている。今までの研究で、ＧＣ−ＡはＡＮＰ及びＢＮＰに対する特異的受容体であり、ＧＣ−ＢはＣＮＰの特異的受容体であることが判明している。また、Ｃ受容体はこれらのリガンドの代謝クリアランスに関与するとされており、クリアランス受容体と呼ばれている。
【０００３】
ＡＮＰ及びＢＮＰはＧＣ−Ａに結合し、グアニル酸シクラーゼを活性化して、細胞内のｃＧＭＰを増加させることにより、動・静脈血管拡張作用、尿量及び尿中ナトリウム排泄増加作用を発現する。また、レニン−アンジオテンシン−アルドステロン（ＲＡＡ）系やバゾプレッシン系、交感神経系に拮抗する作用を有する。これらの作用は、総合的に血圧の低下や、体液量の低減などの心臓の負担を軽減する方向に働くことから、ヒト型ＡＮＰ及びＢＮＰは既に急性心不全の治療薬として臨床で用いられている。
一方、最近の研究により、ＡＮＰまたはＢＮＰが、心肥大や線維化を抑制することや、抗炎症作用を持つことなども判明し、これらのペプチドが慢性心不全や、慢性腎不全あるいは閉塞性動脈硬化症など、種々の循環器系疾患治療に有用である可能性が示唆されている（非特許文献１、２）。
【０００４】
しかしながら、ＡＮＰ及びＢＮＰはペプチドであり、医薬品として用いた場合、注射剤に限定されること、また、生体内での分解が速く、作用持続時間が短いため、急性期の適応に留まっているという課題がある（非特許文献１）。
また、ＡＮＰ抗体、ＡＮＰ受容体アンタゴニスト（拮抗薬）及びＡＮＰ合成阻害剤を用いた、糖尿病における腎及び全身の血管拡張をコントロールし、糖尿病及びその合併症の治療に用いる方法が開示され、ＡＮＰ受容体アンタゴニストの医薬としての有用性については記載されている。しかしながら、ＡＮＰ受容体アゴニストの医薬品としての利用及びＡＮＰ受容体アゴニストそのものについては、なんら具体的に開示されていない（特許文献１）。
【０００５】
一方、非ペプチド系のグアニル酸シクラーゼ受容体に作用する物質としては、オーレオバシディウム属に属する微生物の培養物中から発見された、高分子多糖類のＨＳ−１４２−１が唯一見出されているに過ぎない（特許文献２）。さらにＨＳ−１４２−１は、ＧＣ−Ａ及びＧＣ−Ｂに対するアンタゴニストである。このように、受容体アゴニストで低分子化合物のものは今までに見出されていなかった。そこで、グアニル酸シクラーゼ受容体Ａアゴニストであり、慢性疾患への適応可能な薬剤としての、非ペプチド且つ低分子の化合物の開発が望まれていた。
【０００６】
そこで、本発明者等は、グアニル酸シクラーゼ受容体Ａの高発現株（非特許文献２）を用いて、グアニル酸シクラーゼ受容体Ａアゴニスト作用を有する化合物を、保有する化合物ライブラリーからスクリーニングした。
【０００７】
その結果、これらの化合物の中に弱いアゴニスト作用を示す化合物を見出し、その化合物から想定される活性を示す骨格について、様々な合成展開をしたところ、強いグアニル酸シクラーゼ受容体Ａアゴニスト作用を有する化合物を創製するに至った。
【特許文献１】ＷＯ  ８９／００４２８号公報
【特許文献２】特開平３−２９２３０２号公報
【非特許文献１】「ANP系の薬理作用と受容体アゴニスト」古谷真優美、Heart View, p463-468, Vol. 10, No. 4, 2006
【非特許文献２】「Production and characterization of monoclonal antibodies against human natriuretic peptide receptor-A or -B」 K. Kitano et al, Immunology Letters, p215-222, Vol. 47, No. 3, 1995
【非特許文献３】W. Traube and R. Ascher, Chem. Ber., 46,2077 (1913).
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、本発明は、グアニル酸シクラーゼ受容体Ａの作動剤（アゴニスト）であり、非ペプチド性であり、且つ低分子である新規なイミダゾロン化合物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記の課題を解決するための本発明の基本的態様は、イミダゾロン骨格と同時にグアニジン若しくはそれと類似の部分構造を有することを化学構造上の特徴とする、次式（Ｉａ）：
【００１０】
【化１】
2008137897.tif 000003
【００１１】
（式中、
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、（１）Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基、又は（３）水素原子を表し、
Ｒ３は、（１）Ｃ１〜Ｃ１０のアルキル基、（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基、又は（３）水素原子を表し、
Ｘは、ＮＨ基又は酸素原子を表し、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、同一又は異なって、（１）Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基、又は（３）水素原子を表す）
で示される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である。
【００１２】
また本発明は、別の基本的態様として、次式（ＩＩａ）：
【００１３】
【化２】
2008137897.tif 000004
【００１４】
（式中、
R１、R２、R８及びＲ９は、同一又は異なって、（１）Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基、又は（３）水素原子を表し、
Ｘは、ＮＨ基又は酸素原子を表し、
Ｚは、（１）Ｃ１〜Ｃ１０の直鎖あるいは環状アルキル基又は（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基を表すか、或いは（３）２つのＸ基と共に炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子および酸素原子から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含む５〜８員環の複素環基を形成する［ここで前記Ｚの基は、任意にハロゲン原子、ニトロ基、１〜３個のハロゲン原子で置換された、または非置換の直鎖あるいは環状Ｃ１〜Ｃ１０のアルキル基、１〜３個のハロゲン原子で置換された、または非置換のＣ２〜Ｃ１０のアルケニル基、１〜３個のハロゲン原子で置換された、または非置換のＣ２〜Ｃ１０のアルキニル基、Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基、炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子又は酸素原子から選ばれる１から4個のヘテロ原始を含む５から８員環の芳香族複素環基、Ｃ６〜Ｃ１０のアラルキル基、Ｃ６〜Ｃ１０のアリールカルボニル基、カルボキシル基又はアミノ基から選ばれる１〜５個の基で置換されていてもよい］
で示される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である。
【００１５】
また、本発明は、前記式（Ｉａ）で示される化合物、更には式（ＩＩａ）で示される化合物若しくはその薬理学的に許容される塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする医薬組成物、並びに前記式（Ｉａ）及び（ＩＩａ）で示される化合物若しくはその薬理学的に許容される塩、又はそれらの溶媒和物を含有するＧＣ−Ａ受容体作動剤を提供する。
【００１６】
化合物（Ｉａ）及びに化合物（ＩＩａ）において、R１及びR２で示される（１）Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基としては、直鎖状又は分枝状のアルキル基として、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、イソブチル、イソペンチル、イソヘキシル、ネオペンチル、２，２−ジメチルブチル、２−メチルブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、１−メチルペンチル、ｔ−ペンチル基などが挙げられる。
【００１７】
R１及びR２で示される（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基としては、フェニル、ナフチル、ベンジル、フェネチル、スチリル、トリル、キシリル基などが挙げられる。
【００１８】
また、Ｒ１とＲ２は、（１）Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基、又は、（３）水素原子であり、Ｒ１とＲ２は同一または異なるものであるが、特に好ましくはＲ１とＲ２が同時に水素原子ではない化合物が挙げられる。
【００１９】
化合物（Ｉａ）において、Ｒ３で示される（１）Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基としては、直鎖状又は分枝状のアルキル基として、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、イソブチル、イソペンチル、イソヘキシル、ネオペンチル、２，２−ジメチルブチル、２−メチルブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、１−メチルペンチル、ｔ−ペンチル基などが挙げられる。
【００２０】
Ｒ３で示される（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基としては、フェニル、ナフチル、ベンジル、フェネチル、スチリル、トリル、キシリル基などが挙げられる。
【００２１】
また、Ｒ３は、（１）Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基、又は、（３）水素原子であり、特に好ましくはＲ３がフェニル基である化合物が挙げられる。
【００２２】
化合物（Ｉａ）及びに化合物（ＩＩａ）において、Ｘは、ＮＨ基または酸素原子を示し、特に好ましくはＸがＮＨ基である化合物が挙げられる。
【００２３】
化合物（Ｉａ）において、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７で示される（１）Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基としては、直鎖状又は分枝状のアルキル基として、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、イソブチル、イソペンチル、イソヘキシル、ネオペンチル、２，２−ジメチルブチル、２−メチルブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、１−メチルペンチル、ｔ−ペンチル基などが挙げられる。
【００２４】
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７で示される（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基としては、フェニル、ナフチル、ベンジル、フェネチル、スチリル、トリル、キシリル基などが挙げられる。
【００２５】
また、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、（１）Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基、又は、（３）水素原子であり、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は同一または異なるものであるが、特に好ましくはＣ１〜Ｃ６のアルキル基又は水素原子である化合物が挙げられる。
【００２６】
化合物（ＩＩａ）において、Ｒ８及びＲ９で示される（１）Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基としては、直鎖状又は分枝状のアルキル基として、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、イソブチル、イソペンチル、イソヘキシル、ネオペンチル、２，２−ジメチルブチル、２−メチルブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、１−メチルペンチル、ｔ−ペンチル基などが挙げられる。
【００２７】
Ｒ８及びＲ９で示される（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基としては、フェニル、ナフチル、ベンジル、フェネチル、スチリル、トリル、キシリル基などが挙げられる。
【００２８】
また、Ｒ８及びＲ９は、（１）Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、（２）Ｃ６〜Ｃ１４の芳香族炭化水素基、又は、（３）水素原子であり、Ｒ８及びＲ９は同一または異なるものであるが、特に好ましくはＲ８及びＲ９が同時に水素原子ではない化合物が挙げられる。
【００２９】
特に好ましい化合物としては、以下の群からなる化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である。
なお、［］内は、後記実施例における化合物Ｎｏ．である。
【００３０】
Ｎ，Ｎ’−（１，４−フェニレン−ジ｛イミノ［６−（２−アミノ−５−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１，３，５−トリアジン−４，２−ジイル］｝）ジグアニジン［化合物６］；
【００３１】
Ｎ，Ｎ’−（１，４−フェニレン−ジ｛イミノ［６−（２−アミノ−５−ブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１，３，５−トリアジン−４，２−ジイル］｝）ジグアニジン［化合物１０］；
【００３２】
Ｎ，Ｎ’−（１，４−シクロヘキサン−ジ｛イミノ［６−（２−アミノ−５−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１，３，５−トリアジン−４，２−ジイル］｝）ジグアニジン［化合物１２］；
【００３３】
Ｎ−［６−（２−アミノ−５−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル−４−グアニジノ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−Ｎ’−［６−（２−アミノ−５−メチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジノ−１，３，５−トリアジン−２−イル］−１，４−フェニレンジアミン［化合物８］；
【００３４】
Ｎ−［６−（２−アミノ−（５Ｒ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル］−Ｎ’−［６−（２−アミノ−（５Ｓ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル］−１，４−シクロヘキサンジアミン［化合物１２ｃ］；
【００３５】
Ｎ−［６−（２−アミノ−（５Ｒ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル］−Ｎ’−［６−（２−アミノ−（５Ｒ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル］−１，４−シクロヘキサンジアミンと、Ｎ−［６−（２−アミノー（５Ｓ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジルー１，３，５−トリアジン−２−イル］−Ｎ’−［６−（２−アミノ−（５Ｓ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル］−１，４−シクロヘキサンジアミンの混合物［化合物１２ｄ］
【００３６】
さらに本発明は、前記式（Ｉａ）および（ＩＩａ）で示される化合物若しくはその薬理学的に許容される塩、又はそれらの溶媒和物の合成法をも提供する。
【発明の効果】
【００３７】
本発明が提供する上記化合物は、非ペプチド性の低分子化合物であり、グアニル酸シクラーゼ受容体Ａアゴニスト作用を示す新規イミダゾロン化合物である。これらの化合物には利尿作用もあることも確認され、急性心不全の治療薬等の医薬品としての使用も検討される医療上極めて重要な化合物である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３８】
以下に本発明の詳細を、具体的な製造例を説明することにより説明していく。
本発明の式（Ｉａ）及び（ＩＩａ）の一つの基本的な製造工程を示せば、以下の化学反応式に示すことができる。
なお、ここに示す工程は、一つの製造例であって、種々の変形が可能であることはいうまでもない。
【００３９】
（Ａ）本発明の式（Ｉａ）で示される化合物は、具体的には以下の製造工程により製造することができる。
【００４０】
【化３】
2008137897.tif 000005
【００４１】
（式中、各置換基の定義は前記定義と同一である。またＹは、メチル、エチルなどのアルキル基、ベンジル基、ｐ−メトシキベンジル基などのアラルキル基で表される保護基、又は水素原子を示し、Ｗはテトラメチルグアニジンのようなグアニジン等価体や、グアニジンとの反応によってグアニジン類似体となるアミノ酸エステルのような置換基を示す）
【００４２】
（Ｂ）本発明の式（ＩＩａ）で示される化合物は、具体的には以下の製造工程により製造することができる。
【００４３】
【化４】
2008137897.tif 000006
【００４４】
（式中、各置換基の定義は前記定義と同一である。またＺは、エチレン、ブチレン、シクロへキサンなどのような直鎖あるいは環状アルキル基又はフェニレンなどのような芳香族炭化水素基を表すか、或いはピペラジンのような隣り合う２つのＸ基と共に複素環基を形成する）
【００４５】
以下に、上記の製造工程Ａ、Ｂにしたがって、本発明を詳細に説明する。
（１）合成出発化合物（Ｖ）の製造について：
上記に示した製造工程（Ａ）及び（Ｂ）の両者において、製造出発化合物は、式（Ｖ）で示される化合物である。
この化合物は、以下の化学反応式に示す方法で製造することができる。
【００４６】
【化５】
2008137897.tif 000007
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＹは、前記定義と同一である）
【００４７】
合成出発化合物である式（Ｖ）で示される化合物は、市販品の化合物または公知の化合物から製造することができる。例えば、市販品の塩化シアヌル（ＩＩＩ）と化合物（ＩＶ）で表される市販品またはアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、ノルロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、シクロヘキシルアラニンなどの疎水性側鎖を有する公知のα−アミノ酸エステル誘導体とを縮合させることにより製造することができる。
【００４８】
本反応は、通常塩基の存在下で反応させるのが好ましく、そのような塩基としては、例えばトリエチルアミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどのアルキルアミン；ピリジン、ルチジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンなどの含窒素塩基性芳香族炭化水素などを挙げることができるが、好ましくはアルキルアミンであり、最も好ましくはジイソプロピルエチルアミンを用いるのがよい。
【００４９】
本反応は溶媒の存在下に行うのがよく、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルエーテルなどのエーテル類；ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどのアミド類；塩化メチレン、クロロホルム、二塩化エチレンなどのハロゲン化炭化水素類などの不活性溶媒、又はこれらの混合溶媒中で行うことができる。
【００５０】
本反応においては、塩化シアヌル（ＩＩＩ）１モルに対して化合物（ＩＶ）及び塩基を各々１〜５モル量程度、好ましくは１モル量を用いるのが好ましい。ただし、化合物（ＩＶ）としてその酸性塩を用いる場合には、その塩を中和する量の塩基を追加して用いるのが好ましい。
反応温度及び反応時間は一概に限定できないが、約−１００℃〜室温程度、好ましくは−２０℃〜０℃であり、５分〜２４時間程度、好ましくは５〜３０分程度で反応は完結する。
【００５１】
上記の方法により製造した本発明の合成出発化合物（Ｖ）は、単離・精製することなくそのまま次の反応段階に用いることもできるが、公知の手段、例えば溶媒抽出、液性変換、転溶、塩析、再結晶、クロマトグラフィーなどによって精製することもできる。
【００５２】
ただし、反応条件によっては１分子の塩化シアヌル（ＩＩＩ）が２分子以上の化合物（ＩＶ）と縮合する副生成物、または塩化シアヌル（ＩＩＩ）と塩基が縮合する副生成物を生じる場合があるので、確実に副生成物が生成しない条件、若しくは前記の副生成物を次の段階までに除去精製しておくことが好ましい。
【００５３】
（２）合成中間体化合物（ＶＩＩ）の製造について：
【００５４】
【化６】
2008137897.tif 000008
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＹは前記定義と同一であり、Ｘは窒素原子、酸素原子、または硫黄原子を示す）
【００５５】
合成中間体化合物（ＶＩＩ）は、上記の方法により製造した化合物（Ｖ）と、市販の化合物又は公知の化合物から製造することができる。
具体的には、例えば、化合物（Ｖ）と、市販品又は公知の方法で合成された、アミン、アルコール、チオールなどの反応性水素を有する置換基を分子内に有する化合物（ＶＩ）を縮合させることにより製造することができる。
【００５６】
本反応は、通常塩基の存在下で反応させるのが好ましく、塩基としては、例えばトリエチルアミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどのアルキルアミン；ピリジン、ルチジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンなどの含窒素塩基性芳香族炭化水素；水素化ナトリウム、水素化カリウムなどの水素化アルカリ金属；ｎ−ブチルリチウムなどの有機アルカリ金属；リチウムジイソプロプルアミドなどのアルカリ金属アミド；カリウム  ｔ−ブトキシドなどのアルカリ金属アルコキシドなどが用いられる。
【００５７】
本反応は、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルエーテルなどのエーテル類；ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどのアミド類；塩化メチレン、クロロホルム、二塩化エチレンなどのハロゲン化炭化水素類などの不活性溶媒またはこれらの混合溶媒中で行うことができる。
【００５８】
本反応において、化合物（Ｖ）１モルに対して化合物（ＶＩ）および塩基を各々１〜５モル程度、好ましくは１モル量を用いるのがよい。
ただし、化合物（ＶＩ）の酸性塩を用いる場合には、その塩を中和する量の塩基を追加して用いるのが好ましい。
反応温度は、約−１００℃〜室温程度、好ましくは−２０℃〜０℃であり、反応時間は５分〜２４時間程度、好ましくは５〜３０分程度である。
【００５９】
上記の方法により製造した合成中間体化合物（ＶＩＩ）は、単離・精製することなくそのまま次の反応段階に用いることもできるが、公知の手段、例えば、溶媒抽出、液性変換、転溶、塩析、再結晶、クロマトグラフィーなどによって精製することもできる。
【００６０】
なお、合成中間体化合物（ＶＩＩ）の製造において、Ｘが酸素原子または硫黄原子の場合、あるいはＲ３が嵩高い置換基であるなど、その反応性が比較的低い場合には、以下に示す別の方法で製造することもできる。
【００６１】
【化７】
2008137897.tif 000009
（式中、各置換基の定義は上記定義と同一である）
【００６２】
例えば、Ｘが酸素原子または硫黄原子の場合、あるいはＲ３が嵩高い置換基である化合物（ＶＩＩＩ）の製造は、第一ステップとして、市販品の塩化シアヌル（ＩＩＩ）と化合物（ＶＩ）で表される市販品、又は、アミン、アルコール、チオールなどの反応性水素を有する置換基を分子内に有する公知の方法で製造された化合物（ＶＩ）を縮合させることにより、式（ＶＩＩＩ）の化合物を製造する。
【００６３】
この反応は、通常塩基の存在下で反応させるのが好ましく、そのような塩基としては、例えばトリエチルアミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどのアルキルアミン；ピリジン、ルチジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンなどの含窒素塩基性芳香族炭化水素；水素化ナトリウム、水素化カリウムなどの水素化アルカリ金属；ｎ−ブチルリチウムなどの有機アルカリ金属；リチウムジイソプロプルアミドなどのアルカリ金属アミド；カリウム  ｔ−ブトキシドなどのアルカリ金属アルコキシドなどが用いられる。
【００６４】
本反応は、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルエーテルなどのエーテル類；ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどのアミド類；塩化メチレン、クロロホルム、二塩化エチレンなどのハロゲン化炭化水素類などの不活性溶媒、又はこれらの混合溶媒中で行うことができる。
【００６５】
本反応においては、塩化シアヌル（ＩＩＩ）１モルに対して化合物（ＶＩ）および塩基を、各々１〜５モル程度、好ましくは１モル量を用いるのがよい。
ただし、化合物（ＶＩ）が酸性塩である場合には、その塩を中和する量の塩基を追加して用いるのが好ましい。
反応温度、反応時間は一概に限定できないが、約−１００℃〜室温程度であり、５分〜２４時間程度で反応は完了する。
【００６６】
上記の方法により製造した化合物（ＶＩＩＩ）は、単離・精製することなくそのまま次の反応段階に用いることもできるが、公知の手段、例えば溶媒抽出、液性変換、転溶、塩析、再結晶、クロマトグラフィーなどによって精製することもできる。
【００６７】
ただし、反応条件によっては１分子の塩化シアヌル（ＩＩＩ）が２分子以上の化合物（ＶＩ）と縮合する副生成物、または塩化シアヌル（ＩＩＩ）と塩基が縮合する副生成物を生じる場合があるので、確実に副生成物が生成しない条件で行うか、若しくは前記の副生成物を次の段階までに除去精製しておくことが好ましい。
【００６８】
次いで、第二ステップとして、上記の方法によって製造した化合物（ＶＩＩＩ）を、化合物（ＩＶ）で表される市販品、又はアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、ノルロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、シクロヘキシルアラニンなどの疎水性側鎖を有する公知のα−アミノ酸エステル誘導体と縮合させることにより、目的とするＸが酸素原子または硫黄原子の場合、あるいはＲ３が嵩高い置換基である式（ＶＩＩ）で示される合成中間体化合物を製造することができる。
【００６９】
本反応は、通常塩基の存在下で反応させるのが好ましく、塩基としては、例えばトリエチルアミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどのアルキルアミン；ピリジン、ルチジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンなどの含窒素塩基性芳香族炭化水素などが挙げられ、好ましくはアルキルアミンを用いるのがよい。
【００７０】
本反応は溶媒の存在下に行うのがよく、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテルｔ−ブチルエーテルなどのエーテル類；ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどのアミド類；塩化メチレン、クロロホルム、二塩化エチレンなどのハロゲン化炭化水素類などの不活性溶媒またはこれらの混合溶媒中で行うことができる。
【００７１】
本反応においては、化合物（ＶＩＩＩ）１モルに対して化合物（ＩＶ）および塩基を、各々１〜５モル程度、好ましくは１モル量を用いるのが好ましい。
ただし、化合物（ＩＶ）としてその酸性塩を用いる場合には、その塩を中和する量の塩基を追加して用いるのが好ましい。
反応温度は、約０℃〜１００℃程度、好ましくは室温で行うのがよい。また、反応時間は一概に限定できないが、５分〜２４時間で反応は完結する。
【００７２】
上記の方法により製造した本発明の合成中間体化合物（ＶＩＩ）は、単離・精製することなくそのまま次の反応段階に用いることができるが、公知の手段、例えば溶媒抽出、液性変換、転溶、塩析、再結晶、クロマトグラフィーなどによって精製することもできる。
【００７３】
Ａ：本発明の化合物（Ｉ）及び（Ｉａ）の合成
公知のW. Traubeらの方法（非特許文献３）のαアミノ酸エステル保護体とグアニジンを反応させることでイミダゾロン誘導体を形成する方法にならえば、化合物（Iａ）のうち、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７が水素原子である化合物（Ｉ）を、上記の各方法で製造した合成中間体化合物（ＶＩＩ）に、グアニジンを縮合させる下式の方法により製造することができる。
【００７４】
【化８】
2008137897.tif 000010
（式中、各置換基の定義は上記定義と同一である）
【００７５】
本反応は、グアニジン単独若しくは塩基の共在下で反応させてもよく、塩基としては、例えば水素化ナトリウム、水素化カリウムなどの水素化アルカリ金属；ｎ−ブチルリチウムなどの有機アルカリ金属；リチウムジイソプロプルアミドなどのアルカリ金属アミド；カリウム  ｔ−ブトキシドなどのアルカリ金属アルコキシドなどを用いることができる。
【００７６】
本反応は溶媒の存在下に行うのがよく、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルエーテルなどのエーテル類；ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；塩化メチレン、クロロホルム、二塩化エチレンなどのハロゲン化炭化水素類などの不活性溶媒、又はこれらの混合溶媒中で行うことができる。
【００７７】
本反応においては、化合物（ＶＩＩ）１モルに対してグアニジン（ＩＸ）を２〜１０モル程度、好ましくは３〜５モル程度用いるのが好ましい。
ただし、塩基を追加して用いる場合には、１〜３モル量を用いるのが好ましい。
反応温度、反応時間は一概に限定し得ないが、室温〜２００℃程度、好ましくは５０℃〜１００℃で、５分〜１時間、好ましくは１５分〜３０分程度で反応は完結する。
【００７８】
なお本反応において、グアニジンは市販の塩酸グアニジンを、水またはエチルアルコールなどのアルコール溶媒若しくはそれらの混合溶媒中で、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどの水酸化アルカリ金属；水素化ナトリウム、水素化カリウムなどの水素化アルカリ金属などで中和した後、生じる塩を除去して製造して得た、純粋なグアニジンを用いることが好ましい。
【００７９】
上記の方法により製造した本発明の化合物（Ｉ）は、公知の手段、例えば溶媒抽出、液性変換、転溶、塩析、再結晶、クロマトグラフィーなどによって精製することもできる。
【００８０】
また、Ｒ１若しくはＲ２のいずれかが水素原子の場合には、最終段階においてイミダゾロンの５位の部分がラセミ化する場合があり、生成した化合物（Ｉ）が光学異性体の混合物である場合がある。そのような場合、公知の手段、例えば再結晶、クロマトグラフィーなどによって光学異性体を分離精製することもできる。
また、上記の方法により製造した本発明の化合物（Ｉ）は、その薬理学的に許容される塩、又はそれらの溶媒和物に変換することができる。
【００８１】
一方、本発明の化合物である（Ｉａ）で示される化合物は、前記の合成中間体化合物（ＶＩＩ）から、複数の工程を経る方法により製造することができる。
その第一の工程としては、以下の工程である。
【００８２】
【化９】
2008137897.tif 000011
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ、Ｙ及びWは前記定義と同一である）
【００８３】
すなわち、合成中間体化合物（Ｖ）に、テトラメチルグアニジンのようなグアニジン様の化合物、若しくはグアニジンとの反応によってグアニジン類似構造の前駆体となるグリシンエステルのような分子種である化合物（ＶＩａ）を反応させ、次いで化合物（ＶＩ）を縮合し、（Ｘ）で示される化合物へ誘導する。
【００８４】
本反応は、塩基の存在下行われ、そのような塩基としては、例えばトリエチルアミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどのアルキルアミン；ピリジン、ルチジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンなどの含窒素塩基性芳香族炭化水素；水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどの水酸化アルカリ金属；水素化ナトリウム、水素化カリウムなどの水素化アルカリ金属；カリウム  ｔ−ブトキシドなどのアルカリ金属アルコキシドなどを挙げることができる。
【００８５】
反応は溶媒の存在下に行うのがよく、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルエーテルなどのエーテル類；ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどのアミド類；塩化メチレン、クロロホルム、二塩化エチレンなどのハロゲン化炭化水素類などの不活性溶媒またはこれらの混合溶媒中で行うことができる。
【００８６】
上記の方法により製造した化合物（Ｘ）は、単離精製することなくそのまま次の反応段階に用いることもできるが、公知の手段、例えば溶媒抽出、液性変換、転溶、塩析、再結晶、クロマトグラフィーなどによって精製することもできる。
【００８７】
次いで、第二の工程として、得られた式（Ｘ）で示される化合物に、グアニジンを反応させ、本発明の式（Ｉａ）で示される目的化合物へ誘導する。
【００８８】
【化１０】
2008137897.tif 000012
（式中、各置換基の定義は前記定義と同一である）
【００８９】
すなわち、式（Ｘ）で示される化合物に、グアニジン（ＩＸ）を反応させるか、または必要に応じてグアニジン前駆体様の構造に適当な変換を加えることにより、製造することができる。
【００９０】
本反応は、塩基の共在下で反応させてもよく、そのような塩基としては、例えば水素化ナトリウム、水素化カリウムなどの水素化アルカリ金属；ｎ−ブチルリチウムなどの有機アルカリ金属；リチウムジイソプロプルアミドなどのアルカリ金属アミド；カリウム  ｔ−ブトキシドなどのアルカリ金属アルコキシドなどを挙げることができる。
【００９１】
反応は溶媒の存在下に行うのがよく、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルエーテルなどのエーテル類；ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどのアミド類；塩化メチレン、クロロホルム、二塩化エチレンなどのハロゲン化炭化水素類などの不活性溶媒、またはこれらの混合溶媒中で行うことができる。
【００９２】
本反応においては、化合物（Ｘ）１モルに対してグアニジン（ＩＸ）を１〜３モル程度、好ましくは１モル量を用いるのが好ましい。反応温度は、室温〜２００℃程度、好ましくは５０〜１００℃程度であり、反応時間は５分〜２４時間程度である。
【００９３】
なお、本反応において、グアニジンは市販の塩酸グアニジンを、水またはエチルアルコールなどのアルコール溶媒若しくはそれらの混合溶媒中で、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどの水酸化アルカリ金属；水素化ナトリウム、水素化カリウムなどの水素化アルカリ金属などで中和した後、生じる塩を除去して製造して得た純粋なグアニジンを用いることが好ましい。
【００９４】
上記の方法により製造した本発明の式（Ｉａ）で示される化合物は、公知の手段、例えば溶媒抽出、液性変換、転溶、塩析、再結晶、クロマトグラフィーなどによって精製することもできる。
【００９５】
また、Ｒ１若しくはＲ２のいずれかが水素原子の場合には、最終段階においてイミダゾロンの５位の部分がラセミ化する場合があり、また精製した化合物（Ｉａ）が光学異性体の混合物である場合がある。そのような場合、公知の手段、例えば再結晶、クロマトグラフィーなどによって光学異性体を分離精製することもできる。
また、上記の方法により製造した本発明の化合物（Ｉａ）は、その薬理学的に許容される塩、又はそれらの溶媒和物に変換することができる。
【００９６】
Ｂ：本発明の化合物（ＩＩａ）の合成
本発明の目的化合物である式（ＩＩａ）で示される化合物は、以下の方法により製造することができる。
【００９７】
（３）合成中間体化合物（ＸＩＩ）の製造
すなわち、前記した方法により製造した合成出発化合物（Ｖ）と、式（ＸＩ）で示される市販品、または公知の方法で合成された、アミン、アルコール、チオールなどの反応性水素を有する置換基を１分子内に２箇所以上有するものを縮合させて、式（ＸＩＩ）で示される化合物へ誘導する。
【００９８】
【化１１】
2008137897.tif 000013
（式中、各置換基の定義は前記定義と同一である）
【００９９】
本反応は、通常塩基の存在下で反応させるのが好ましく、そのような塩基としては、例えばトリエチルアミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどのアルキルアミン；ピリジン、ルチジン、Ｎ．Ｎ−ジメチルアミノピリジンなどの含窒素塩基性芳香族炭化水素；水素化ナトリウム、水素化カリウムなどの水素化アルカリ金属；ｎ−ブチルリチウムなどの有機アルカリ金属；リチウムジイソプロプルアミドなどのアルカリ金属アミド；カリウム  ｔ−ブトキシドなどのアルカリ金属アルコキシドなどが用いられる。
【０１００】
反応は溶媒の存在下に行うのがよく、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルエーテルなどのエーテル類；ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどのアミド類；塩化メチレン、クロロホルム、二塩化エチレンなどのハロゲン化炭化水素類などの不活性溶媒、又はこれらの混合溶媒中で行うことができる。
【０１０１】
本反応においては、化合物（ＸＩ）１モルに対して化合物（Ｖ）及び塩基を、各々２〜１０モル程度、好ましくは２モル量を用いるのが好ましい。
ただし、化合物（Ｖ）としてその酸性塩を用いる場合には、その塩を中和する量の塩基を追加して用いるのが好ましい。反応温度は、0℃〜１００℃程度、好ましくは室温下に行うのがよい。反応時間は、３０分〜４８時間である。
【０１０２】
上記の方法により製造した本発明の化合物（ＸＩＩ）は、単離精製することなくそのまま次の反応段階に用いることもできるが、公知の手段、例えば溶媒抽出、液性変換、転溶、塩析、再結晶、クロマトグラフィーなどによって精製することもできる。
【０１０３】
次いで、上記で製造した合成中間体化合物（ＸＩＩ）にグアニジンを反応させる方法により、目的とする本発明の式（ＩＩａ）で示される化合物のうち、化合物（ＩＩ）へ誘導される。
【０１０４】
【化１２】
2008137897.tif 000014
（式中、各置換基の定義は前記定義と同一である）
【０１０５】
本反応は、グアニジン単独若しくは塩基の共在下で反応させてもよく、そのような塩基としては、例えば水素化ナトリウム、水素化カリウムなどの水素化アルカリ金属；ｎ−ブチルリチウムなどの有機アルカリ金属；リチウムジイソプロプルアミドなどのアルカリ金属アミド；カリウム  ｔ−ブトキシドなどのアルカリ金属アルコキシドなどを挙げることができる。
【０１０６】
反応は溶媒の存在下に行うのがよく、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルエーテルなどのエーテル類；ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；塩化メチレン、クロロホルム、二塩化エチレンなどのハロゲン化炭化水素類などの不活性溶媒またはこれらの混合溶媒中で行うことができる。
【０１０７】
本反応においては、化合物（ＸＩＩ）１モルに対してグアニジン（ＩＸ）は４〜２０モル程度、好ましくは８〜１０モル量を用いるのが好ましい。
反応温度は一概に限定できないが、室温〜２００℃程度、好ましくは５０℃〜１００℃であり、反応時間としては、５分〜１時間程度、好ましくは１５分〜３０分で反応は完結する。
【０１０８】
なお、本反応において、グアニジンは市販の塩酸グアニジンを、水またはエチルアルコールなどのアルコール溶媒若しくはそれらの混合溶媒中で、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどの水酸化アルカリ金属；水素化ナトリウム、水素化カリウムなどの水素化アルカリ金属などで中和した後、生じる塩を除去して製造して得た純粋なグアニジンを用いることが好ましい。
【０１０９】
上記の方法により製造した本発明の式（ＩＩ）で示される化合物は、公知の手段、例えば溶媒抽出、液性変換、転溶、塩析、再結晶、クロマトグラフィーなどによって精製することもできる。
【０１１０】
また、Ｒ１若しくはＲ２のいずれかが水素原子の場合には、最終段階においてイミダゾロンの５位の部分がラセミ化する場合があり、生成した化合物（ＩＩ）は光学異性体の混合物である場合がある。そのような場合、公知の手段、例えば再結晶、クロマトグラフィーなどによって光学異性体を分離精製することもできる。
また、上記の方法により製造した本発明の化合物（ＩＩ）は、その薬理学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物に変換することができる。
【０１１１】
一方、本発明の目的化合物である式（ＩＩａ）で示される化合物を製造する場合は、異なる部分構造をもった構造単位を別々に調製する手順が必要となる。したがって、前記の方法を参考にした、以下に示すような方法にて製造することができる。
【０１１２】
【化１３】
2008137897.tif 000015
（式中、各置換基の定義は前記定義と同一である）
【０１１３】
すなわち、第一ステップとして、前記した方法で製造した合成出発化合物（Ｖ）とアミン、アルコール、チオールなどの反応性水素を有する置換基を１分子内に２箇所有する化合物（ＸＩ）を１対１のモル比で反応させることにより、モノ置換体（ＸＩＩＩ）を得た後、別部分の構造を構成する別途調製した化合物（Ｖａ）を縮合させることにより、式（ＸＩＩａ）で示される化合物へ誘導する。
【０１１４】
本反応は、通常塩基の存在下で反応させるのが好ましく、そのような塩基としては、例えばトリエチルアミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどのアルキルアミン；ピリジン、ルチジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンなどの含窒素塩基性芳香族炭化水素；水素化ナトリウム、水素化カリウムなどの水素化アルカリ金属；ｎ−ブチルリチウムなどの有機アルカリ金属；リチウムジイソプロプルアミドなどのアルカリ金属アミド；カリウム  ｔ−ブトキシドなどのアルカリ金属アルコキシドなどを挙げることができる。
【０１１５】
また本反応は溶媒の存在下に行うのがよく、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルエーテルなどのエーテル類；ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどのアミド類；塩化メチレン、クロロホルム、二塩化エチレンなどのハロゲン化炭化水素類などの不活性溶媒またはこれらの混合溶媒中で行うことができる。
【０１１６】
本反応において、化合物（ＸＩ）１モルに対して化合物（Ｖ）および塩基を、各々１〜１．２モル程度、好ましくは１モル量を用いるのが好ましい。
ただし、化合物（Ｖ）の酸性塩を用いる場合には、その塩を中和する量の塩基を追加して用いるのが好ましい。
【０１１７】
また、化合物（ＸＩＩＩ）１モルに対して化合物（Ｖａ）および塩基は、各々１〜5モル程度、好ましくは１モル量を用いるのが好ましい。反応温度は、いずれの場合も約０℃〜１００℃程度であり、好ましくは室温である。反応時間は、３０分〜４８時間で充分である。
【０１１８】
上記の方法により製造した化合物（ＸＩＩａ）は、単離精製することなくそのまま次の反応段階に用いることができるが、公知の手段、例えば溶媒抽出、液性変換、転溶、塩析、再結晶、クロマトグラフィーなどによって精製することもできる。
【０１１９】
次いで、上記で製造された化合物（ＸＩＩａ）は、グアニジンとの縮合により本発明の目的化合物である式（ＩＩａ）で示される化合物に誘導される。
【０１２０】
【化１４】
2008137897.tif 000016
（式中、各置換基の定義は上記定義と同一である）
【０１２１】
本反応は、グアニジン単独若しくは塩基の共在下で反応させてもよく、そのような塩基としては、例えば水素化ナトリウム、水素化カリウムなどの水素化アルカリ金属；ｎ−ブチルリチウムなどの有機アルカリ金属；リチウムジイソプロプルアミドなどのアルカリ金属アミド；カリウム  ｔ−ブトキシドなどのアルカリ金属アルコキシドなどを挙げることができる。
【０１２２】
また本反応は、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルエーテルなどのエーテル類；ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；塩化メチレン、クロロホルム、二塩化エチレンなどのハロゲン化炭化水素類などの不活性溶媒またはこれらの混合溶媒中で行うことができる。
【０１２３】
本反応においては、化合物（ＸＩＩａ）１モルに対してグアニジン（ＩＸ）は４〜２０モル程度、好ましくは８〜１０モル量程度を用いるのが好ましい。反応温度、反応温度は一概に限定できないが、室温〜〜２００℃程度、好ましくは５０℃〜１００℃であり、反応時間は、５分〜１時間、好ましくは１５分〜３０分で反応は完結する。
【０１２４】
なお、本反応において、グアニジンは市販の塩酸グアニジンを、水またはエチルアルコールなどのアルコール溶媒若しくはそれらの混合溶媒中で、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどの水酸化アルカリ金属；水素化ナトリウム、水素化カリウムなどの水素化アルカリ金属などで中和した後、生じる塩を除去して製造して得た純粋なグアニジンを用いることが好ましい。
【０１２５】
上記の方法により製造した本発明の式（ＩＩａ）で示される化合物は、公知の手段、例えば溶媒抽出、液性変換、転溶、塩析、再結晶、クロマトグラフィーなどによって精製することもできる。
また、Ｒ１若しくはＲ２のいずれかが水素原子の場合には、最終段階においてイミダゾロンの５位の部分がラセミ化する場合があり、生成した化合物（ＩＩａ）は光学異性体の混合物である場合がある。そのような場合、公知の手段、例えば再結晶、クロマトグラフィーなどによって光学異性体を分離精製することもできる。
また、上記の方法により製造した本発明の化合物（ＩＩａ）は、その薬理学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物に変換することができる。
【０１２６】
上記の方法により得られた本発明の化合物である式（Ｉ）を含む（Ｉａ）及び（ＩＩ）を含む（ＩＩａ）の化合物、若しくはその薬理学的に許容される塩、又はそれらの溶媒和物は、優れたＧＣ−Ａ作動作用を有している。そして、ＧＣ-Ａアゴニストの作用として期待される腎疾患、心臓疾患の予防および／または治療剤として用いることができる。
【０１２７】
これらの予防または治療剤の投与経路は、経口、非経口投与のいずれでもよく、目的に応じて望ましい製剤に調製される。
具体的には、活性成分として、式（Ｉ）を含む（Ｉａ）及び（ＩＩ）を含む（ＩＩａ）の化合物、で示される化合物若しくはその薬理学的に許容される塩、又はそれらの溶媒和物を含有し、さらにそれ以外の他の医薬成分を含有した製剤として調製される。
【０１２８】
その場合の投与量は一概に限定できないが、目的とする治療に効果を発揮する量であればよく、具体的には、薬学的に許容される担体と配合し、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の固形製剤；またはシロップ剤、注射剤等の液状製剤として経口または非経口的に投与することができる。
【０１２９】
薬学的に許容される担体としては、製剤素材として慣用の各種有機あるいは無機担体物質が用いられ、固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤；液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤などを一緒に配合することができる。また必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤などの製剤添加物を用いることもできる。
【０１３０】
これらの賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等は、製剤学的に汎用されているものを挙げることができ、より具体的には、例えば一例として、賦形剤としては、例えば乳糖、白糖、Ｄ−マンニトール、デンプン、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸などが挙げられる。滑沢剤の好適な例としては、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、コロイドシリカなどが挙げられる。
【０１３１】
また、結合剤の好適な例としては、例えば結晶セルロース、白糖、Ｄ−マンニトール、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。
【０１３２】
崩壊剤の好適な例としては、例えばデンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウムなどが挙げられる。
【０１３３】
これらの製剤形態は当業者に種々知られており、当業者は所望の投与経路に適する製剤形態を適宜選択し、必要に応じて当業界で利用可能な１または２以上の製剤用添加物を用いて、医薬用組成物の形態の製剤を製造することが可能である。
【実施例】
【０１３４】
以下に、参考例、実施例、試験例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
なお、以下の実施例および参考例における目的物を含む画分の検出は、ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）若しくはＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）による観察によった。
ＴＬＣ観察においては、ＴＬＣプレートとしてメルク社製の６０Ｆ２５４を用い、検出法としてＵＶ検出器を用いた。
ＨＰＬＣ観察においては、分析カラムにＹＭＣ ＯＤＳ ＡＭ ４．６×１５０ｍｍ、移動相に５％→９５％アセトニトリル−水（０．１％ＴＦＡ含有）、流速１．０ｍＬ／分を用い、検出法としてＵＶ検出器（２５４ｎｍ）を用いた。
生成物の構造確認には、ＭＳ（質量分析スペクトログラフ）およびＮＭＲ（核磁気共鳴スペクトログラフ）を用いた。ＭＳはＥＳＩ（エレクトロンスプレーイオン化法）を用いて陽イオンの検出を行った。
【０１３５】
参考例１：グアニジン（化合物Ｓ１）
金属ナトリウム（1.33g, 58mmol）をエタノール60mLに溶かしたところに、塩酸グアニジン（5.50g, 58mmol）を加え、室温で２時間撹拌した。不溶物を濾別し、減圧下に溶媒を留去した。残渣を再度エタノール5mLに溶かし、不溶物を濾別し、減圧下に溶媒を留去して標題化合物（3.50g）を無色油状物として得た。
【０１３６】
実施例１：Ｎ−（４−アニリノ−６−クロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−Ｌ−ロイシン  メチルエステル（化合物１）
塩化シアヌリル（1.84g, 10mmol）、Ｌ−ロイシンメチルエステル塩酸塩（1.82g, 10mmol）を塩化メチレン20mLに懸濁させて氷冷したところに、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（3.5mL, 20mmol）を加えて10分間撹拌した。アニリン（0.91mL, 1.0mmol）とＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（18mL, 10.0mmol）を加え、室温で２時間撹拌した。反応溶液を水で１回、１Ｎ塩酸で１回、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で１回、水で２回洗浄し、有機相を硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾別し、減圧下に溶媒を留去して標題化合物（3.42g）を無色固形物として得た。
MS： 350（M+H）＋
1H−NMR (CDCl3) δ：0.92(m, 6H), 1.59(m, 1H), 1.73(m, 2H), 3.31(s, 3H), 4.46(m, 1H), 7.02(s, 1H), 7.30(m, 2H), 7.61(m, 2H), 8.54(s, 4H), 8.55(br, 1H), 10.13(br, 1H).
【０１３７】
実施例２：１−［４−（２−アミノ−５−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−６−アニリノ−１，３，５−トリアジン−２−イル］グアニジン  ジトリフルオロアセテ−ト（化合物２）
上記化合物１（350mg, 1.0mmol）をプロピオニトリル5mLに溶かし、100℃に加温したところにグアニジン（化合物Ｓ１：300mg, 5.0mmol）を加えて30分間撹拌した。放冷後トリフルオロ酢酸2mLと水5mLを加え、冷蔵庫で一晩放置した。析出した結晶を濾取し、少量の水で洗浄し、減圧下に乾燥し、標題化合物（348mg）を無色結晶として得た。
MS： 383（M+H）＋
1H−NMR (DMSO-d6) δ：0.81(m, 6H), 1.85(m, 3H), 3.31(s, 3H), 4.48(m, 1H), 7.19(s, 1H), 7.41(s, 1H), 7.53(m, 1H), 8.49(s, 1H), 9.23(br, 1H), 10.39(br, 1H), 11.03(br, 1H).
【０１３８】
実施例３：Ｎ−（４−アニリノ−６−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’−テトラメチルグアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル）−Ｌ−ロイシン  メチルエステル（化合物３）
上記化合物１（105mg, 0.3mmol）をアセトニトリル2mLに溶かし、80℃に加温したところにテトラメチルグアニジン（0.08mL, 0.6mmol）を加えて10時間撹拌した。減圧下に溶媒を留去し、残渣を塩化メチレンに溶かして水で２回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、乾燥剤を濾別後、減圧下に溶媒を留去して標題化合物（118mg）を無色固形物として得た。
MS： 429（M+H）＋
1H−NMR (CDCl3) δ：0.95(m, 6H), 1.70(br, 6H), 2.85(s, 9H), 3.70(s, 3H), 4.71(br, 1H), 5.23(br, 1H), 6.84(br, 1H), 6.96(s, 1H), 7.29(s, 4H), 7.59 (s, 2H).
【０１３９】
実施例４：６−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’−テトラメチル−１−［４−（２−アミノ−５−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−６−アニリノ−１，３，５−トリアジン−２−イル］グアニジン  トリフルオロアセテ−ト（化合物４）
化合物３（43mg, 0.1mmol）をプロピオニトリル2mLに溶かし、100℃に加温したところにグアニジン（化合物Ｓ１：29mg, 0.5mmol）を加えて30分間撹拌した。放冷後トリフルオロ酢酸１mLと水１mLを加え、分取用HPLC［YMC ODS AMS-5、20mmφ×250mm、10％CH3CN−水〜50％CH3CN（0.05％TFA含有）（10mL/min, 10%/分）］にて精製し、目的の留分を集めて凍結乾燥し、標題化合物（40mg）を無色固形物として得た。
MS： 439（M+H）＋
1H−NMR (DMSO-d6) δ：0.78(m, 6H), 1.64(br, 1H), 1.81(br, 1H), 2.07(s, 1H), 3.12(br, 12H), 4.43(m, 1H), 7.14(br, 1H), 7.38(s, 1H), 7.69(br, 1H), 9.29(br, 2H), 10.30(br, 1H), 10.84(br, 1H).
【０１４０】
実施例５：Ｎ，Ｎ’−ジ｛４−クロロ−６−［（２Ｓ）−メトキシカルボニル−４−イソブチルアミノ］−１，３，５−トリアジン−２−イル｝−１，４−フェニレンジアミン（化合物５）
塩化シアヌリル（184mg, 1.0mmol）とＬ−ロイシンメチルエステル塩酸塩（182mg, 1.0mmol）を塩化メチレン10mLに懸濁させて氷冷したところに、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（3.5mL, 20mmol）を加えて10分間撹拌した。ｐ−フェニレンジアミン（54mg, 0.5mmol）とＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（0.18mL, 1.00mmol）を加え、室温で２時間撹拌した。反応溶液を水で２回、１Ｎ塩酸で１回、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で１回、水で２回洗浄し、有機相を硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾別し、減圧下に溶媒を留去して標題化合物（290mg）を無色固形物として得た。
MS： 621（M+H）＋
1H−NMR (CDCl3) δ：0.88(d, J=7Hz, 6H), 0.91(d, J=7Hz, 6H), 1.26(br, 2H), 1.51(br, 2H), 1.73(br, 4H), 3.33(s, 3H), 3.60(m, 2H), 3.65(s, 3H), 4.37(m, 2H), 7.56(s, 2H), 8.38(br, 1H), 8.58(br, 1H), 10.14(s, 2H). 
【０１４１】
実施例６：Ｎ，Ｎ’−（１，４−フェニレン−ジ｛イミノ［６−（２−アミノ−５−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１，３，５−トリアジン−４，２−ジイル］｝）ジグアニジン  ジ（トリフルオロアセテート）（化合物６）
化合物５（62mg, 0.10mmol）をアセトニトリル2mLに溶かし、80℃に加温したところにグアニジン（化合物Ｓ１：35mg, 0.50mmol）を加えて30分間撹拌した。放冷後アセトニトリル1mLと２％トリフルオロ酢酸水溶液2mLとを加え、分取用HPLC［YMC ODS AMS-5、20mmφ×250mm、10％CH3CN−水〜50％CH3CN（0.05％TFA含有）（10mL/min, 10%/分）］にて精製し、目的の留分を集めて凍結乾燥し、標題化合物（14mg）を無色固形物として得た。
MS： 687（M+H）＋
1H−NMR (DMSO-d6) δ：0.78(m, 12H), 1.64(br, 4H), 1.84(br, 2H), 4.51(m, 2H), 7.59(s, 4H), 8.40(br, 2H), 8.62(s, 4H), 9.04(br, 1H), 9.26(br, 2H), 10.47(br, 1H), 11.29(br, 1H).
【０１４２】
実施例７：Ｎ−｛４−クロロ−６−［（２Ｓ）−メトキシカルボニル−エチルアミノ］−１，３，５−トリアジン−２−イル｝−Ｎ’−｛４−クロロ−６−［（２Ｓ）−メトキシカルボニル−４−メチルブチルアミノ］−１，３，５−トリアジン−２−イル｝−１，４−フェニレンジアミン（化合物７）
Ｌ−ロイシンメチルエステル塩酸塩（91mg, 0.5mmol）を塩化メチレン5mLに懸濁させて氷冷したところにＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（0.09mL, 1.0mmol）を加え、塩化シアヌリル（92mg, 0.5mmol）を加えて30分間撹拌した。氷冷下さらに、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（0.09mL, 1.0mmol）とｐ−フェニレンジアミン（54mg, 0.5mmol）を加え、室温にして１時間撹拌した。反応溶液を水で３回洗浄し、有機相を硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾別し、減圧下に溶媒を留去して無色固形物を得た。
Ｌ−アラニンメチルエステル塩酸塩（70mg, 0.5mmol）を塩化メチレン10mLに懸濁させて氷冷したところにＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（0.18mL, 2.0mmol）を加え、塩化シアヌリル（92mg, 0.5mmol）を加えて30分間撹拌した。さらに、前記の無色固形物を塩化メチレン１mLに溶かした溶液を加え、室温にして終夜撹拌した。反応溶液を水で３回洗浄し、有機相を硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾別し、減圧下に溶媒を留去して標題化合物（291mg）を無色固形物として得た。
MS： 579（M+H）＋
1H−NMR (CDCl3) δ：0.95(m, 6H), 1.35(br, 1H), 1.46(d, J=7Hz, 1H), 1.52(br, 3H), 1.71(br, 3H), 3.63(s, 6H), 3.78(m, 6H), 4.61(m, 1H), 4.82(m, 1H), 6.06(m, 2H), 7.27(br, 2H), 7.49(br, 2H).
【０１４３】
実施例８：Ｎ−［６−（２−アミノ−５−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジノ−１，３，５−トリアジン−２−イル］−Ｎ’−［６−（２−アミノ−５−メチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジノ−１，３，５−トリアジン−２−イル］−１，４−フェニレンジアミン  ジ(トリフルオロアセテート)  （化合物８）
化合物７（58mg, 0.10mmol）をアセトニトリル2mLに溶かし、80℃に加温したところにグアニジン（化合物Ｓ１：45mg, 0.8mmol）を加えて30分間撹拌した。放冷後水1mLとトリフルオロ酢酸0.2mLを加えて溶解し、分取用HPLC［YMC ODS AMS-5、20mmφ×250mm、10％CH3CN−水〜50％CH3CN（0.05％TFA含有）（10mL/min, 10%/分）］にて精製し、目的の留分を集めて凍結乾燥し、標題化合物（37mg）を無色固形物として得た。
MS： 645（M+H）＋
1H−NMR (DMSO-d6) δ：0.81(d, J=7Hz, 3H), 0.88(d, J=7Hz, 3H), 1.48(d, J=8Hz, 3H), 1.86(br, 3H), 3.26(m, 2H), 7.60(s, 3H), 8.62(s, 3H), 9.05(br, 2H), 10.49(s, 1H), 11.30(s, 1H).
【０１４４】
実施例９：Ｎ，Ｎ’−ジ｛４−クロロ−６−［（２Ｓ）−メトキシカルボニル−ペンチルアミノ］−１，３，５−トリアジン−２−イル｝−１，４−フェニレンジアミン（化合物９）
Ｌ−ノルロイシンメチルエステル塩酸塩（7.26g, 40mmol）を塩化メチレン40mLに溶解して氷冷したところに、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（14mL, 80mmol）を加えた。塩化シアヌリル（7.38g, 40mmol）を５分間かけて少量ずつ加え、氷冷下30分間撹拌した。水40mLを加えて分液し、有機層にｐ−フェニレンジアミン（2.16g, 20mmol）を塩化メチレン40mLに溶かした溶液を加え、室温で終夜撹拌した。反応溶液を氷冷し、析出した結晶を濾取し、少量の塩化メチレンで洗浄し、減圧下に乾燥し、標題化合物（7.03g）を無色固形物として得た。
MS： 621（M+H）＋
1H−NMR (CDCl3) δ：0.86(t, J=8Hz, 6H), 1.29(br, 8H), 1.75(br, 2H), 3.65(s, 6H), 4.32(br, 2H), 6.59(br, 1H), 7.25(br, 1H), 7.55(s, 1H), 7.74(br, 1H), 8.56(br, 2H), 10.13(s, 2H).
【０１４５】
実施例１０：Ｎ，Ｎ’−（１，４−フェニレン−ジ｛イミノ［６−（２−アミノ−５−ブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１，３，５−トリアジン−４，２−ジイル］｝）ジグアニジン  ジ（トリフルオロアセテート）（化合物１０）
化合物９（62mg, 0.10mmol）をアセトニトリル２mLに溶かし、80℃に加温したところにグアニジン（化合物Ｓ１：35mg, 0.50mmol）を加えて30分間撹拌した。放冷後水１mLとトリフルオロ酢酸水溶液0.4mLとを加え、分取用HPLC［YMC ODS AMS-5、20mmφ×250mm、10％CH3CN−水〜50％CH3CN（0.05％TFA含有）（10mL/min, 10%/分）］にて精製し、目的の留分を集めて凍結乾燥し、標題化合物（24mg）を無色固形物として得た。
MS： 687（M+H）＋
1H−NMR (DMSO-d6) δ：0.75(t, J=8Hz, 3H), 0.82(t, J=8Hz, 3H), 1.23(br. m, 8H), 1.86(m, 1H), 2.09(m, 1H), 3.12(br, 12H), 4.43(m, 2H), 7.59(br, 2H), 8.57(br, 2H), 9.02(br, 1H), 9.26(br, 2H), 10.51(br, 2H).
【０１４６】
実施例１１：Ｎ，Ｎ’−（１，４−フェニレン−ジ｛イミノ［６−（２−アミノ−５−ブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１，３，５−トリアジン−４，２−ジイル］｝）ジグアニジン  テトラ（トリフルオロアセテート）  ２水和物（化合物１０ａ）
化合物９（1.24g, 2.0mmol）をプロピオニトリル40mLに溶かし、100℃に加温したところにグアニジン（化合物Ｓ１：1.2g, 20mmol）を加えて30分間撹拌した。放冷後水40ｍLとトリフルオロ酢酸15mLとを加え、冷蔵庫で一晩放置した。析出した結晶を濾取し、少量の氷冷水で洗浄し、減圧下に乾燥し、標題化合物（1.62g）を無色結晶として得た。
MS： 687（M+H）＋
1H−NMR（DMSO-d6） δ：0.75(t, J=8Hz, 6H), 1.16(br, 8H), 1.88(br, 2H), 3.62(s, 1H), 4.47(s, 1H), 7.59(s, 4H), 8.54(s, 4H), 9.23(s, 2H), 10.45(s, 2H).
元素分析：
測定値： C;36.5%、H;4.1%、N;23.5%、F;19.2%
計算値： C;36.7%、H;3.9%、N;23.8%、F;19.3%
【０１４７】
実施例１２：Ｎ，Ｎ’−ジ｛４−クロロ−６−［（２Ｓ）−メトキシカルボニル−４−メチルブチルアミノ］−１，３，５−トリアジン−２−イル｝−１，４−シクロヘキサンジアミン（化合物１１）
塩化シアヌリル（3.69g, 20mmol）とＬ−ロイシンメチルエステル塩酸塩（3.63g, 20mmol）を塩化メチレン100mLに懸濁させて氷冷したところに、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（7.0mL, 40mmol）と塩化メチレン10mLの混合溶液を５分間で滴下したのち10分間撹拌した。反応溶液を水で１回、飽和食塩水で１回洗浄し、有機層から減圧下に溶媒を留去した。残渣をアセトニトリル100mLに溶解し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（3.5mL, 20mmol）と１，４−シクロヘキサンジアミン（1.14g, 10mmol）を加え、室温で終夜撹拌した。反応溶液から減圧下に溶媒を留去し、残渣を塩化メチレン100mLに溶かし、水で１回、１Ｎ塩酸で１回、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で１回、飽和食塩水で２回洗浄し、有機層から減圧下に溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（20%酢酸エチル−ヘキサン→50％）で精製し、目的の画分を集め、減圧下に溶媒を留去して標題化合物（2.66g）を無色固形物として得た。
MS： 628（M+H）＋
1H−NMR(CDCl3) δ：0.90(m, 12H), 1.30(br, 4H), 1.50(br, 2H), 1.66(br, 4H), 1.83(m, 4H), 3.63(s, 6H), 3.57(m, 2H), 4.30(m, 1H), 4.45(m, 1H), 7.74(m, 1H), 7.91(m, 1H), 8.05(m, 1H), 8.22(m, 1H), 8.56(br, 1H).
【０１４８】
実施例１３：Ｎ，Ｎ７−（１，４−シクロヘキサン−ジ｛イミノ［６−（２−アミノ−５−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１，３，５−トリアジン−４，２−ジイル］｝）ジグアニジン  ジ（トリフルオロアセテート）（化合物１２）
化合物１１（63ｍg, 0.1mmol）をアセトニトリル２mLに溶かし、80℃に加温したところにグアニジン（化合物Ｓ１：35mg, 0.6mmol）を加えて30分間撹拌した。放冷後水2mLとトリフルオロ酢酸0.04mLとを加え、分取用HPLC［YMC ODS AMS-5、20mmφ×250mm、10％CH3CN−水〜50％CH3CN（0.05％TFA含有）（10mL/min, 10%/分）］にて精製し、目的の留分を集めて凍結乾燥し、標題化合物（35mg）を無色固形物として得た。
MS： 691（M+H）＋
1H−NMR(DMSO-d6) δ： 0.84(d, J=7Hz, 6H), 0.92(d, J=7Hz, 6H), 1.37(br, 3H), 1.88(br. m, 7H), 3.75(br, 2H), 4.45(m, 2H), 8.58(br, 8H), 9.15(s, 1H), 9.36(br, 1H), 9.60(br, 1H), 10.79(br, 1H), 11.17(br. s, 1H).
【０１４９】
実施例１４：Ｎ，Ｎ’−（１，４−シクロヘキサン−ジ｛イミノ［６−（２−アミノ−５−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１，３，５−トリアジン−４，２−ジイル］｝）ジグアニジン  テトラ（トリフルオロアセテート）（化合物１２ａ）
化合物１１（1.25g, 2.0mmol）をプロピオニトリル20mLに溶かし、100℃に加温したところにグアニジン（化合物Ｓ１：1.18g, 20mmol）を加えて30分間撹拌した。放冷後水12mLとトリフルオロ酢酸8mLとを加え、冷蔵庫で一晩放置した。析出した結晶を濾取し、少量の氷冷水で洗浄し、減圧下に乾燥し、標題化合物（1.15g）を無色結晶として得た。
MS： 691（M+H）＋
1H-NMR(DMSO-d6) δ： 0.84(t, J=7Hz, 6H), 0.93(t, J=7Hz, 6H), 1.37(br, 4H), 1.90(br, 4H), 2.04(br, 8H), 3.75(br, 2H), 4.52(s, 2H), 8.46(s, 2H), 8.69(s, 6H), 9.29(s, 1H), 9.60(br, 2H), 11.40(s, 2H).
【０１５０】
実施例１５：Ｎ−［６−（２−アミノ−５−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジルー１，３，５−トリアジン−２−イル］−Ｎ’−［６−（２−アミノ−５−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル］−１，４−シクロヘキサンジアミン  テトラ（メタンスルホネート）（化合物１２ｂ）
化合物１２ａの120mgをギ酸3mLに溶かしてメンブランフィルター（0.45um）でろ過後、メタンスルホン酸1.0mLと水5mLを加えて室温で放置した。析出した結晶を濾取し、少量の水で洗浄し、減圧下に乾燥し、標題化合物（25mg）を無色結晶として得た。
1H-NMR(DMSO-d6) δ： 0.84(d, J=6.6Hz, 6H), 0.94(d, J=6.6Hz, 6H), 1.37(m, 4H), 1.91(br, 4H), 2.03(br, 8H), 2.37(s, 12H), 3.75(br, 2H), 4.54(br, 2H), 8.51(br, 10H), 9.44(br, 2H), 9.75(br, 2H), 10.70(br, 1H), 11.03(s, 2H). 
元素分析：
測定値： C;35.76%、H;5.55%、N;25.80%
計算値： C;35.68%、H;5.61%、N;26.01%
Ｘ線結晶構造解析においてはメソ体とラセミ体の混合物と示唆された。
【０１５１】
実施例１６：Ｎ−［６−（２−アミノ−（５Ｒ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル］−Ｎ’−［６−（２−アミノ−（５Ｓ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル］−１，４−シクロヘキサンジアミン  テトラ（メタンスルホネート）（化合物１２ｃ）
化合物１２ａの40mgをギ酸2mLに溶かし、分取用HPLC［Develosil ODS 10/20、50mmφ×300mm、15％CH3CN−水〜35％CH3CN（25mL/min, 0.4%/分）（0.05％TFA含有）］にて精製した。上記の操作を繰り返し、HPLC上単一画分を集めて凍結乾燥した。
凍結乾燥によって得られた粉末状物質の50mgをギ酸1.75mLに溶かしてメンブランフィルター（0.45um）でろ過後、メタンスルホン酸0.75mLと水5mLを加えて室温で終夜放置した。析出した結晶を濾取し、少量の水で洗浄し、減圧下に乾燥して標題化合物（42mg）を無色結晶として得た。
1H-NMR(DMSO-d6) δ： 0.85(d, J=6.6Hz, 6H), 0.93(d, J=6.6Hz, 6H), 1.37(m, 4H), 1.90(br, 4H), 2.03(br, 8H), 2.09(s, 12H), 4.49(br, 2H), 8.47(br, 8H), 9.27(br, 1H), 9.39(br, 1H), 9.52(br, 1H), 10.95(s, 2H).
元素分析：
測定値： C;35.68%、H;5.61%、N;25.74%
計算値： C;35.68%、H;5.61%、N;26.01%
Ｘ線結晶構造解析においてメソ体と確定した。
【０１５２】
実施例１７：Ｎ−［６−（２−アミノ−（５Ｒ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル］−Ｎ’−［６−（２−アミノ−（５Ｒ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル］−１，４−シクロヘキサンジアミン  テトラ（メタンスルホネート）２水和物、及び、Ｎ−［６−（２−アミノ−（５Ｓ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル］−Ｎ’−［６−（２−アミノ−（５Ｓ）−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−４−グアニジル−１，３，５−トリアジン−２−イル］−１，４−シクロヘキサンジアミン  テトラ（メタンスルホネート）２水和物のラセミ混合物（化合物１２ｄ）
【０１５３】
化合物１２ａの10mgをギ酸0.5mLに溶かし、分取用HPLC［YMC ODS AMS-5、20mmφ×250mm、10％CH3CN−水〜30％CH3CN（10mL/min, 0.5%/分）（0.05％TFA含有）］にて精製した。上記の操作を繰り返し、HPLC上単一画分を集めて凍結乾燥した。
凍結乾燥によって得られた粉末状物質の30mgをギ酸1.0mLに溶かしてメンブランフィルター（0.45um）でろ過後、メタンスルホン酸0.5mLと水2.25mLを加えて室温で終夜放置した。析出した結晶を濾取し、少量の水で洗浄し、減圧下に乾燥し、標題化合物（21mg）を無色結晶として得た。
1H-NMR (DMSO-d6) δ： 0.83(d, J=6.6Hz, 6H), 0.92(d, J=6.6Hz, 6H), 1.38(m, 4H), 1.90(br, 4H), 2.04(br, 8H), 2.35(s, 12H), 4.01(br, 2H), 4.50(br, 2H), 8.47(br, 8H), 9.28(br, 1H), 9.32(br, 1H), 9.52(br, 1H), 10.98(br, 2H).
元素分析：
測定値： C;34.82%、H;5.62%、N;25.01%
計算値： C;34.52%、H;5.79%、N;25.16%
Ｘ線結晶構造解析においてラセミ体（ＲＲ体とＳＳ体の混合物）と確定した。
【０１５４】
実施例１８：Ｎ−｛４−（２−アミノ−５−イソブチル−４−オキソ−４，５−-ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−６−［（４−｛［４−（２−ブチル−３−オキソ−１−ピペラジニル−２−ピリミジニル）アミノ］シクロヘキシル｝アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル］グアニジン  トリフルオロアセテート（化合物１３）
既知の方法にて合成した４−｛２−［（４−アミノシクロヘキシル）アミノ］−６−クロロピリミジン−４−イル｝−３−ブチルピペラジン−２−オン（72.2mg, 0.189mmol）とＮ−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−Ｌ−ロイシンメチルエステル（60.9g, 0.208mmol）をアセトニトリル3ｍLに懸濁させ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（0.039mL, 0.227mmol）を加えて室温で２時間撹拌した。反応溶液にテトラヒドロフラン10mLを加えたのち酢酸エチルと水を加えて分液し、有機層を水で１回、飽和食塩水で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾別後、減圧下に溶媒を留去し、無色固形物を得た。
上記固形物（66.2mg, 0.10mmol）をアセトニトリル2mLに溶かし、80℃に加温したところにグアニジン（化合物Ｓ１： 36.8mg, 0.62mmol）を加えて２時間撹拌した。放冷後水1mLとトリフルオロ酢酸水溶液0.4mLとを加え、分取用HPLC［YMC ODS AMS-5、20mmφ×250mm、10％CH3CN−水〜50％CH3CN（0.05％TFA含有）（10mL/min, 10%/分）］にて精製し、目的の留分を集めて凍結乾燥し、標題化合物（29mg）を無色固形物として得た。
MS： 670（M+H）＋
1H−NMR(CDCl3) δ： 0.84(m, 9H), 1.31(m, 9H), 1.88(m, 8H), 3.22(m, 4H), 4.47(m, 1H), 4.90(br, 1H), 6.10(s, 1H), 7.19(br, 1H), 7.95(s, 1H), 8.40(m, 1H), 8.58(s, 2H), 9.22(s, 1H), 9.47(br, 1H), 11.20(s, 1H).
【０１５５】
実施例１９：Ｎ−｛４−（２−アミノ−５−イソブチル−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−６−［（４−｛［４−（２−ブチル−３−オキソ−１−ピペラジニル）−２−ピリミジニル］アミノ｝シクロヘキシル）アミノ］−１，３，５−トリアジン−２−イル｝グアニジン  トリフルオロアセテート（化合物１４）
化合物１３（11mg, 0.014mmol）をメタノール2mLに溶かし、10％パラジウム炭素3mgを加え、水素気流下室温で4時間撹拌した。触媒を濾去して、溶媒を減圧下に留去し、残渣を水0.5mL、とトリフルオロ酢酸水溶液0.4mLに溶かし、分取用HPLC［YMC ODS AMS-5、20mmφ×250mm、10％CH3CN−水〜50％CH3CN（0.05％TFA含有）（10mL/min, 10%/分）］にて精製し、目的の留分を集めて凍結乾燥して、標題化合物（3.2mg）を無色固形物として得た。
MS： 636（M+H）＋
1H−NMR(CDCl3) δ： 0.85(m, 9H), 1.39(m, 9H), 1.87(br, 4H), 2.00(br, 4H), 3.74(m, 1H), 4.42(m, 1H), 5.01(m, 1H), 6.55(br, 1H), 7.88(br, 1H), 8.18(br, 1H), 8.37(m, 1H), 8.53(s, 2H), 9.02(s, 1H), 9.16(s, 1H), 11.06(s, 1H).
【０１５６】
試験例１  ヒトGC-Aレセプターへの作動活性の測定
本発明の化合物のヒトGC-Aレセプターに対する作動活性は、Kitanoらの方法に従って単離した高発現クローン株CHO細胞［CHO/humanGCA(4A)：K. Kitano et al, Immunol. Lett. 47, 215-222 (1995)］を用い、以下の方法によって測定した。
【０１５７】
高発現クローン株CHO細胞の培養
細胞培養用粉末培地（Minimum Essential Medium-α without ribonucleosides and deoxynucleosides：Gibco BRL社）を1000mLの蒸留水に溶かし、炭酸水素ナトリウム2.2gを加えて溶かした。5mLのペニシリン-ストレプトマイシン溶液（Gibco BRL社、cat.No.15140-122）をこの溶液に加え攪拌後、２本の500mL Filter System（CORNING社）にて滅菌濾過した。50mLの fetal bovine serum dialyzed（Gibco BRL社cat. No.26300-061）を500mLの滅菌濾過した培地に加え、攪拌し、4℃冷蔵庫に保管した。10% fetal bovine serumを含む上記MEMα（−）培地中で、CHO/humanGCA(4A)細胞株を5%炭酸ガス下37℃にて増殖させ、0.25% trypsinを用いて剥離、分散して継代培養した。
【０１５８】
ｃＧＭＰ産生能の測定
（１）CHO/humanGCA(4A)細胞を1×10４ cells/wellの密度で96-ウェルプレート(COSTER社、cat.No.3595)に植え継ぎ、5%炭酸ガス下37℃にて１日間培養した。
（２）細胞培養用培地を除いた後、細胞を75μL/well のHanks-BSA-HEPES buffer(20mM HEPES,0.1% BSAを含むHanks平衡塩類緩衝液, pH 7.4)で２回洗浄した。各種濃度の被験化合物およびhANP（陽性対照）の100μL/well）を、0.5mM 1-methyl-3-isobutylxanthine(MIX)（SIGMA社）存在下で37℃、30分インキュベートした。
【０１５９】
（３）反応液を除去し、Hanks-BSA-HEPES buffer 75μL/wellで1回洗浄した。氷冷下、50μL/well の０．１Ｎ塩酸を加え、細胞を破壊すると同時に細胞内cGMPを抽出した。
(4) cGMP RIA kit（ヤマサ醤油社）を用い、30μL（あるいは1μLサンプル＋29μLの水）の細胞内ｃＧＭＰ抽出液に15μLのスクシニル化試薬を加え、攪拌後、室温にて10分間放置し、サンプル中に含まれるcGMPをスクシニル化した。0.3Mイミダゾールバッファー105μLを加えて反応を停止し、氷上においた。このスクシニル化サンプル20μLに20μLの抗スクシニルcGMP抗体および20μLの 125 I-succinyl-cGMPを加えて攪拌後、4℃にて18時間放置後150μLの活性炭溶液を加え、氷上5〜30分後2000rpm,4℃にて5分間遠心分離した。この上清100μLの放射能量をγ−カウンター（WIZARD 1470-020）にて測定した。
【０１６０】
ｃＧＭＰ産生能cGMP産生能EC50値の算出
hANP（陽性対照）による放射線量をcGMP最大産生量とし、その50%のcGMP産生量を各被験化合物において産生する50％有効濃度（EC50値）を算出した。代表化合物について、そのEC50値を表１に示した
【０１６１】
【表１】
2008137897.tif 000017
【０１６２】
試験例２  麻酔ラットにおける利尿作用
本発明の化合物の麻酔ラットにおける利尿作用を以下の方法によって検討した。
【０１６３】
尿量測定方法
8〜9週齢のSprague-Dawley系雄性ラット（日本チャールス・リバー株式会社）を500mg/kg  ウレタン、100mg/kg  α-クロラロースで麻酔し、仰臥位に固定した。シリコンチューブを膀胱内に留置し、流出する尿を経時的に試験管に採取し、尿の重量を測定した。尿排泄量は尿の比重を１とみなして重量から換算した。なお、尿量を一定に保つために、大腿静脈に挿入したカテーテルよりリンゲル液を40μL/minの速度で持続注入した。リンゲル液の注入開始後、尿量が安定するまで約2 時間ラットを放置した後、反対側の大腿静脈に留置したカテーテルより薬物を投与した。hANP（10μg/kg）は5%グルコースで希釈し、化合物１０ａ（0.1, 0.3, 1 mg/kg）、化合物１２ａ（0.3, 1mg/kg）は0.5%ジメチルスルホキシド、10%  2-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンで希釈し、1mL/kgの割合で投与した。尿排泄量は投与前値に対する変化率を算出し、平均値±SEMで表した。溶媒群と薬物投与群の差は、hANPについてはStudentのt検定で、化合物１０ａ、化合物１２ａについてはDunnettの多重比較検定で評価した。
【０１６４】
結果
麻酔ラットにおけるhANPの利尿作用については溶媒群とは有意な差異を認めなかったが、投与後15分まで増加傾向が見られた（図１）。その増加傾向は、投与後0〜5分で最大であり、以降は漸減傾向を示した。
麻酔ラットにおける化合物１０ａの利尿作用は、1mg/kg投与群において溶媒群に対して全ての時点で有意な尿量の増加を認めた（図２）。0.3mg/kg投与群では有意な差異は見られなかったが、投与後0〜20分で増加傾向を示した。いずれの用量においても、投与後5〜10分で最大値を示し、その後は漸減した。hANPの利尿傾向は15分以内に消失したが、化合物10aの1.0mg/kg投与群では投与後45〜60分においても利尿作用が維持されていた。
化合物１２ａの利尿作用は、0.3及び1mg/kg投与群において有意な尿量の増加が見られた（図３）。
有意な差異が認められなかった時点においても化合物１２ａ投与群は高値を示しており、持続的な利尿活性を有すると考えられた。
【０１６５】
試験例３  腎臓、肺、血漿中のcGMP濃度増加作用
腎臓、肺においてGC-A受容体が高発現している、さらには血管内皮細胞においてもGC-A受容体を発現していることから、腎臓、肺、血漿中cGMP濃度に対する化合物１０ａ、化合物１２ａ投与による作用を検討した。
【０１６６】
cGMP濃度測定方法
Sprague-Dawley系雄性ラット(体重180〜220g、日本チャールス・リバー株式会社)を500 mg/kg ウレタン、100 mg/kg α-クロラロースで麻酔し、仰臥位に固定した。頸静脈に挿入したカテーテルより薬物を30分間持続静脈内投与した。薬物は0.5% ジメチルスルホキシド、10% 2-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンで希釈した。薬物はhANP(0.1, 0.3, 1 μg/kg/min)、化合物10a (10, 30 μg/kg/min)、化合物12a (1, 10, 30 μg/kg/min)について評価した。投与終了後、頸動脈に挿入したカテーテルより、10％エチレンジアミン四酢酸水溶液20μLを入れた2.5mL注射筒で2mL採血し、直ちに遠心分離し、得られた血漿を凍結保存した。また、あらかじめ液体窒素で冷却したペンチで腎臓、肺を挟み瞬間的に凍結し、ドライアイス上で粉砕後、凍結保存した。
【０１６７】
凍結組織サンプル（約500mg）に6％過塩素酸を10mL加えホモジナイズした。遠心分離(3000rpm, 10min)後、上清を1mL採取し100μL の60％水酸化カリウム水溶液を加えてさらに遠心分離(3000rpm, 10min)した。上清を採取し、YAMASA Cyclic GMP Assay Kit(ヤマサ醤油株式会社)によりcGMP濃度を測定した。１回目の遠心分離後の沈殿に0.5N 水酸化ナトリウムを2mL加えて撹拌し一晩4℃で放置した。この組織溶解液について、BCA protein assay kit(Pierce Biotechnology, Inc.)を用いてタンパク質濃度を測定した。cGMP濃度をタンパク質当量に補正した。
血漿は5mM エチレンジアミン四酢酸(pH7.4)で5倍希釈し、YAMASA Cyclic GMP Assay Kitにより cGMP濃度を測定した。
cGMP濃度は平均値±SEMで表した。溶媒群と薬物投与群の差はDunnettの多重比較検定で評価した。
【０１６８】
結果
腎臓においては、hANP、化合物１０ａ、化合物１２ａの用量に依存して組織中cGMP濃度が有意に上昇した（図４、７）。hANP  1μg/kg/min投与群と化合物１０ａ、化合物１２ａ  30μg/kg/min投与群が同程度の作用を示した。
肺においても、ANP、化合物１０ａ、化合物１２ａの用量に依存して組織中cGMP濃度が有意に上昇した（図５、８）。化合物１０ａ、化合物１２ａ  30μg/kg/min投与群ともに、hANP  1μg/kg/min投与群よりも強いcGMP産生活性を示した。
血漿中cGMP濃度においては、化合物１２ａ  30μg/kg/min投与群でのみ有意な上昇を示したが、hANP、化合物１０ａ投与群においても上昇傾向が認められた（図６、９）。
以上の結果より、化合物１０ａ、化合物１２ａは腎臓、肺でのcGMP産生、血漿中cGMP濃度を増加させることが示された。これらの結果は、化合物１０ａ及び化合物１２ａが腎臓、肺や血管内皮細胞に発現するGC-A受容体に作用し、cGMP産生を亢進させたことを示す。
【産業上の利用可能性】
【０１６９】
本発明は、グアニル酸シクラーゼ受容体Ａアゴニスト作用を示す新規なイミダゾロン化合物である非ペプチド性の低分子化合物を提供するものであり、アゴニストとして機能することより利尿作用があることも確認され、慢性／急性心不全あるいはうっ血性心不全等の治療薬等の医薬品として期待されるものである。
【図面の簡単な説明】
【０１７０】
【図１】麻酔ラットでの利尿作用を示した図である。
【図２】麻酔ラットでの利尿作用を示した図である。
【図３】麻酔ラットでの利尿作用を示した図である。  図１はhANP（ANP）、図２は化合物１０ａ、図３は化合物１２ａによる結果を示す。  「vehicle」は、図１においては5%  グルコース投与群を、図２及び図３においては0.5%  ジメチルスルホキシド、10%  ２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン投与群を示す。  図１においては各群とも４例、図２においては溶媒群５例、化合物１０ａ  0.3mg/kg群５例、1mg/kg投与群４例、図３においては各群５例である。  各群における数値は平均値±SEMを示す。また、*はP<0.05、**はP<0.01であることを示す。
【０１７１】
【図４】ラット組織中のcGMP量、及び血漿中cGMP濃度を示した図である。
【図５】ラット組織中のcGMP量、及び血漿中cGMP濃度を示した図である。
【図６】ラット組織中のcGMP量、及び血漿中cGMP濃度を示した図である。
【図７】ラット組織中のcGMP量、及び血漿中cGMP濃度を示した図である。
【図８】ラット組織中のcGMP量、及び血漿中cGMP濃度を示した図である。
【図９】ラット組織中のcGMP量、及び血漿中cGMP濃度を示した図である。  図４、７は腎臓組織中cGMP量、図５、８は肺組織中cGMP量、図６、９は血漿中cGMP濃度を示す。  「vehicle」は0.5%  ジメチルスルホキシド、10%  ２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン投与群、「１０ａ」は化合物１０ａ投与群、「１２ａ」は化合物１２ａ投与群を示す。  「γ」はμg/kg/minを示す。２Ａ〜２Ｃにおいて、溶媒群、hANP（ANP）1μg/kg/min群は７例、hANP（ANP）0.3μg/kg/min群、化合物１０ａ  10μg/kg/min群は７例、化合物１２ａ  30μg/kg/min群は５例である。  図７〜図９において、hANP（ANP）0.1μg/kg/min群は４例、他の群は各５例である。  各群における数値は平均値±SEMを示す。また、*はP<0.05、**はP<0.01であることを示す。
【図１】
2008137897.tif 000021
【図２】
2008137897.tif 000022
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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