(57)【要約】      （修正有）【課題】新規なＡＧＥ形成阻害剤を提供すること。【解決手段】次の一般式（１）2008266174.tif 000006（式中、Ａ環はＣ３−Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ６−Ｃ１０アリール基又は５〜１０員のヘテロ環基を示し、Ｂは単結合又はＣ１−Ｃ６アルキレン基を示し、Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、アミノＣ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アシルアミノＣ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルキルオキシ基、Ｃ１−Ｃ６アシルオキシ基、水酸基又はアミノ基を示し、Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子又はＣ１−Ｃ６アルキル基を示す）で表される化合物、若しくはその塩又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＡＧＥ形成阻害剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（１）
【化１】
2008266174.tif 000005
（式中、Ａ環はＣ３−Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ６−Ｃ１０アリール基又は５〜１０員のヘテロ環基を示し、Ｂは単結合又はＣ１−Ｃ６アルキレン基を示し、Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、アミノＣ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アシルアミノＣ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルキルオキシ基、Ｃ１−Ｃ６アシルオキシ基、水酸基又はアミノ基を示し、Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子又はＣ１−Ｃ６アルキル基を示す）で表されるアミジノフェノール誘導体、若しくはその塩又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＡＧＥ形成阻害剤。
【請求項２】
一般式（１）で表されるアミジノフェノール誘導体、若しくはその塩又はそれらの溶媒和物が、４’−アミジノフェニル  インドール−３−アセテート、４’−アミジノフェニル  トランス−４−ホルミルアミノメチルシクロヘキサンカルボキシレート、４’−アミジノフェニル  トランス−４−アセチルアミノメチルシクロヘキサンカルボキシレート、及び４’−アミジノフェニル  ２−アセチロキシベンゾエートからなる群から選択されるアミジノフェノール誘導体、若しくはその塩又はそれらの溶媒和物である請求項１記載のＡＧＥ形成阻害剤。
【請求項３】
請求項１又は２記載のＡＧＥ形成阻害剤を有効成分とする糸球体疾患の予防及び／又は治療剤。
【請求項４】
糸球体疾患が、糖尿病性腎症である請求項３記載の予防及び／又は治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は糸球体病変における不可逆的蛋白修飾による糖尿病性腎症の発症又は進展に対する予防及び／又は治療に有用な薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、本邦では糖尿病患者、糖尿病が疑われる患者及び糖尿病予備群が約２千万人存在するといわれている。糖尿病を起因とした合併症のうち、糖尿病性腎症の発症率は年々増加の推移をたどり、すでに慢性糸球体腎炎の発症率を上回り第一位となっている。
【０００３】
糖尿病性腎症が発症した場合における最大の問題点は、末期腎不全即ち透析への移行率が、非常に高いことにある。また、糖尿病性腎症による透析への移行は医療費高騰の要因等の社会的に大きな問題となっている。そこで、糖尿病性腎症に関わる治療剤、又は予防を期待できる薬剤が強く望まれている。
【０００４】
糖尿病性腎症の成因には、（１）遺伝的素因をはじめとして、（２）糸球体血行動態変化、（３）グリケ−ションの亢進やカルボニル・酸化ストレスにより生じた糖化最終産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  Ｅｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（以下、「ＡＧＥ」と称する））の蓄積、（４）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｃの活性化や、（５）ポリオ−ル代謝の亢進など、様々な因子の関与が考えられている（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４、非特許文献５）。
【０００５】
現在、糖尿病性腎症の治療現場では、糸球体血行動態の改善を主目的としたアンジオテンシン変換酵素阻害剤（以下、「ＡＣＥ阻害剤」と称する）やアンジオテンシンＩＩの１型受容体拮抗剤（以下、「ＡＲＢ」と称する）が汎用されており、基礎のみならず臨床的なＥｖｉｄｅｎｃｅが報告されている（非特許文献６、非特許文献７）。  しかしながら、これらの多くは血圧降下剤として認可されており、糖尿病性腎症の治療剤としての認可はほとんどなされていない。単に、糖尿病性腎症の患者の多くは高血圧であることから、これらが汎用されているに過ぎない。なお、ＡＣＥ阻害剤のタナトリル錠（塩酸イミダプリル）はＩ型糖尿病性腎症の治療剤として初めて認可されたものの、糖尿病性腎症に対する治療又は予防的作用を有する薬剤はほとんどなく、新規な薬剤の登場が切望されている。
【０００６】
そこで新たな糖尿病性腎症の治療剤として、ＡＧＥ形成阻害剤が注目を浴びている。ＡＧＥで修飾されたタンパクは腎循環動態、腎糸球体基底膜の濾過機構等、多数の腎機能に悪影響を及ぼし、また、ＡＧＥ自身がメサンギウム細胞等の腎構成細胞に多数存在するＡＧＥ関連受容体（例えば、Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ＡＧＥ：ＲＡＧＥ）に作用して、サイトカインや増殖因子等の障害因子を産生させることが報告されている（非特許文献８）。従って、ＡＧＥの形成を抑制することは、糖尿病性腎症の進展抑制に繋がると考えられる。
【０００７】
アミノグアニジンは、反応性カルボニル化合物（３−デオキシグルコソン、メチルグリオキサ−ルなど）の捕捉作用、酸素ラジカル（特に、ヒドロキシラジカル）の捕捉作用及び金属キレ−ト形成作用により、ＡＧＥの形成を阻害すると考えられており、ＡＧＥ阻害に基づく糖尿病性腎症の治療剤として、最初に本格的な研究がなされた化合物である。しかし、これはすでに臨床治験も終了したが、いまだ実用化には至っていない。（非特許文献９、非特許文献１０、非特許文献１１）。
【０００８】
また、その他のＡＧＥ形成阻害剤としてはアミノグアニジンの誘導体であるＯＰＢ−９１９５、ＬＲ−９０、ＡＬＴ−９４６、天然化合物及びその類縁体であるチアミン（ビタミンＢ１）、チアミンピロリン酸、ベンフォチアミンなど幾つかの化合物が知られている（非特許文献１２）が、いずれも実用化には至っていない。
その一方で下記一般式（１）で示されるようなアミジノフェノールを骨格として持つＡＧＥ形成阻害剤は知られていなかった。
【０００９】
【化１】
2008266174.tif 000002
【００１０】
（式中、Ａ環はＣ３−Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ６−Ｃ１０アリール基又は５〜１０員のヘテロ環基を示し、Ｂは単結合又はＣ１−Ｃ６アルキレン基を示し、Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、アミノＣ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アシルアミノＣ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルキルオキシ基、Ｃ１−Ｃ６アシルオキシ基、水酸基又はアミノ基を示し、Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子又はＣ１−Ｃ６アルキル基を示す）
【００１１】
【非特許文献１】Ｃｏｏｐｅｒ，ＭＥ.ｅｔ  ａｌ．；Ｌａｎｃｅｔ，３５２，２１３−２１９，１９９８.
【非特許文献２】槙野博史；糖尿病性腎症 発症・進展機序と治療：８０−１２１，１９９９年；診断と治療社
【非特許文献３】Ｂｏｈｌｅｎｄｅｒ，  Ｊ.ｅｔ  ａｌ．；Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｒｅｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２８９，Ｆ６４５−Ｆ６５９，２００５
【非特許文献４】Ｄ，  Ｊａｙ.ｅｔ  ａｌ．；Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，４０，１８３−１９２，２００６
【非特許文献５】Ｖｉｎｉｋ，  Ａ．；Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．  Ｄｒｕｇｓ，１４（１２），１５４７−１５５９，２００５
【非特許文献６】Ｍａｓａｋｕｎｉ，Ｎ.ｅｔ  ａｌ．；Ｊｐｎ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，８５：４１６−４２２，２００１
【非特許文献７】Ｒｏｓｓｉｎｇ，  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．；Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ．，２８（９）：２１０６−２１１２，２００５
【非特許文献８】Ｌｏｃａｔｅｌｌｉ，  Ｆ.ｅｔ  ａｌ．；Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．，１８（９）：１７１６−２５，２００３
【非特許文献９】Ｐｒｉｃｅ，ＤＬ．ｅｔ  ａｌ．；Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，２７６，４８９６７−４８９７２，２００１
【非特許文献１０】Ａｂｄｅｌ−Ｒａｈｍａｎ，  Ｅ.ｅｔ  ａｌ．；Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．  Ｄｒｕｇｓ．，１１（４）：５６５−５７４，２００２
【非特許文献１１】Ｍａｒｋ  Ｅ.ｅｔ  ａｌ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｐｏｒｔｓ．，４：４４１−４４６，２００４
【非特許文献１２】今泉勉  ほか；ＡＧＥｓ研究の最前線：２０９−２１７，２００４年；メディカルレビュー社
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、新規なＡＧＥ形成阻害剤を提供することにある。ＡＧＥ形成阻害剤は糸球体病変における不可逆的蛋白修飾による糖尿病性腎症の発症及び進展に対する予防又は治療に有用である。また、原疾患が糖尿病性腎症と診断されていない患者であっても、慢性糸球体腎炎や高血圧性腎症などの糸球体疾患により透析移行している患者の多くは血漿中のＡＧＥが著しく増加しているという周知の事実から、ＡＧＥ形成阻害剤は糖尿病性腎症のみならず、慢性糸球体腎炎や高血圧性腎症なども含めた糸球体疾患に対する予防又は治療に有用である。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
上記実情に鑑み、本発明者らは、ＡＧＥ形成阻害作用を持つ化合物を探索した結果、下記一般式（１）で表される化合物が、ＡＧＥの一種であるペントシジンを指標にしたｉｎ  ｖｉｔｒｏ系での阻害試験において、アミノグアニジンと比較して、同等以上の強いＡＧＥ形成阻害作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１４】
即ち、本発明は以下の通りである。
＜１＞  次の一般式（１）  
【００１５】
【化２】
2008266174.tif 000003
【００１６】
（式中、Ａ環はＣ３−Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ６−Ｃ１０アリール基又は５〜１０員のヘテロ環基を示し、Ｂは単結合又はＣ１−Ｃ６アルキレン基を示し、Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、アミノＣ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アシルアミノＣ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アルキルオキシ基、Ｃ１−Ｃ６アシルオキシ基、水酸基又はアミノ基を示し、Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子又はＣ１−Ｃ６アルキル基を示す）で表されるアミジノフェノール誘導体、若しくはその塩又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＡＧＥ形成阻害剤。
＜２＞  一般式（１）で表されるアミジノフェノール誘導体、若しくはその塩又はそれらの溶媒和物が、４’−アミジノフェニル  インドール−３−アセテート、４’−アミジノフェニル  トランス−４−ホルミルアミノメチルシクロヘキサンカルボキシレート、４’−アミジノフェニル  トランス−４−アセチルアミノメチルシクロヘキサンカルボキシレート、及び４’−アミジノフェニル  ２−アセチロキシベンゾエートからなる群から選択されるアミジノフェノール誘導体、若しくはその塩又はそれらの溶媒和物である＜１＞記載のＡＧＥ形成阻害剤。
＜３＞  ＜１＞又は＜２＞記載のＡＧＥ形成阻害剤を有効成分とする糸球体疾患の予防及び／又は治療剤。
＜４＞  糸球体疾患が、糖尿病性腎症である＜３＞記載の予防及び／又は治療剤。
【発明の効果】
【００１７】
実施例に記載するとおり、血液透析患者の血漿を用い、アミノグアニジン又は各被検薬物を添加した評価において、各被検薬物は、アミノグアニジンに比べ、優れたＡＧＥ形成阻害活性を示した。即ち、血液透析患者の血漿を用い、３７℃、７日間、アミノグアニジン又は各被検薬物を添加した系において認められた主要なＡＧＥの一種であるペントシジンの抑制に対して、各被検薬物の添加は、いずれもアミノグアニジン添加に比べ、同等以上の強いペントシジン生成抑制作用を示した。
このように、一般式（１）で表されるアミジノフェノール誘導体若しくはその塩又はそれらの溶媒和物は、アミノグアニジンと比べ、ＡＧＥ形成阻害作用が強力であり、糖尿病性腎症の予防又は治療剤に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本明細書中において、「Ｃ１−Ｃ６アルキル基」、「アミノＣ１−Ｃ６アルキル基」、「Ｃ１−Ｃ６アシルアミノＣ１−Ｃ６アルキル基」、「Ｃ１−Ｃ６アルキルオキシ基」、における「Ｃ１−Ｃ６アルキル基」部分とは、炭素数１−６の直鎖又は分岐鎖の飽和炭化水素を示し、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、２，２−ジメチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基等が挙げられる。
【００１９】
本明細書中において、「Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基」とは、環状の炭素数３−６の飽和炭化水素を示し、例えばシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロオペンチル基、シクロヘキシル基、シクロプロピルメチル基、シクロブチルメチル基等が挙げられる。
【００２０】
本明細書中において、「ハロゲン原子」としてはフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子があげられる。
【００２１】
本明細書中において、「Ｃ６−Ｃ１０アリール基」とは、炭素数６−１０の単環あるいは多環の芳香族炭化水素環を示し、例えば、フェニル基、ナフチル基、アズレニル基が挙げられる。
【００２２】
本明細書中において、「５〜１０員のヘテロ環基」とは、酸素原子、イオウ原子及び窒素原子から選ばれるヘテロ原子を１から４個含有する５から１０員の単環又は多環式のヘテロ環基を示す。より具体的には、例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジル基、ピリダジニル基、イミダゾリル基、ピロリジル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、チアゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、キノリル基、イソキノリル基、テトラヒドロキノリル基、テトラヒドロイソキノリル基、ピペリジル基、ピペラジニル基、テトラヒドロフラニル基、モルホリニル基、インドリル基、イソインドリル基、インドリニル基、テトラヒドロベンゾイミダゾリル基、テトラヒドロピラニル基、クロマニル基などが挙げられる。
【００２３】
本明細書中において、「Ｃ１−Ｃ６アシルアミノＣ１−Ｃ６アルキル基」、「Ｃ１−Ｃ６アシルオキシ基」における「Ｃ１−Ｃ６アシル基」部分とは、「Ｃ１−Ｃ６アルキル基」の１位に酸素原子が二重結合で結合した基を示し、例えば、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル基、ピバロイル基等が挙げられる。
【００２４】
本明細書中において、「Ｃ１−Ｃ６アルキレン基」とは、炭素数１−６の直鎖又は分岐鎖の飽和炭化水素であって、その炭化水素上の２箇所で他の基と置換している基を示し、例えばメチレン基、１，１−エチレン基、１，２−エチレン基、１，１−プロピレン基、１，２−プロピレン基、２，２−プロピレン基、１，３−プロピレン基、１，１−ブチレン基、１，２−ブチレン基、１，３−ブチレン基、２，３−ブチレン基、１，４−ブチレン基等が挙げられる。
【００２５】
一般式（１）中、Ｒ１は水素原子、Ｃ１−Ｃ６アシルアミノＣ１−Ｃ６アルキル基、Ｃ１−Ｃ６アシルオキシ基が好ましい。Ｃ１−Ｃ６アシルアミノＣ１−Ｃ６アルキル基としては、ホルミルアミノメチル基、アセチルアミノメチル基が特に好ましく、Ｃ１−Ｃ６アシルオキシ基としては、アセチルオキシ基が特に好ましい。  
【００２６】
一般式（１）中、Ｒ２は水素原子が好ましい。
【００２７】
一般式（１）中、Ａ環は、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル基としては、シクロヘキシル基が好ましく、Ｃ６−Ｃ１０アリール基としてはフェニル基が好ましく、５〜１０員のヘテロ環基としてはインドリル基が好ましい。
【００２８】
一般式（１）中、Ｂは単結合又はＣ１−Ｃ６アルキレン基が好ましい。Ｃ１−Ｃ６アルキレン基としてはメチレン基が特に好ましい。
【００２９】
一般式（１）中、好ましいアミジノフェノール誘導体として４’−アミジノフェニル  インドール−３−アセテート、４’−アミジノフェニル  トランス−４−ホルミルアミノメチルシクロヘキサンカルボキシレート、４’−アミジノフェニル  トランス−４−アセチルアミノメチルシクロヘキサンカルボキシレート、及び４’−アミジノフェニル  ２−アセチロキシベンゾエートからなる群から選ばれるアミジノフェノール誘導体を挙げることができる。
【００３０】
一般式（１）で表されるアミジノフェノール誘導体は、塩を形成する場合がある。塩の種類は特に限定されないが、例えば、酸付加塩等が挙げられ、生理学的に許容される酸付加塩等が好ましい。塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩のような鉱酸の酸付加塩；安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、又は酢酸塩等の有機酸の酸付加塩；ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩等の金属塩；グリシン塩等のアミノ酸塩等が挙げられるが、これらに限定されることはない。
【００３１】
一般式（１）で表されるアミジノフェノール誘導体若しくはその塩は、水和物に代表される任意の溶媒和物を形成することができ、これらの溶媒和物も本発明に包含される。
【００３２】
一般式（１）で表されるアミジノフェノール誘導体において、Ａ環がＣ３−Ｃ６シクロアルキル基の場合やＲ１又はＲ２が分岐鎖アルキル基の場合等において、不斉炭素に基づく光学異性体が存在するが、全ての光学異性体、及びラセミ体などの混合物は本発明に包含される。また、Ａ環がＣ３−Ｃ６シクロアルキル基の場合等において存在する幾何異性体もすべて本発明に包含される。
【００３３】
本発明の一般式（１）で表されるアミジノフェノール誘導体の中で、Ａ環部分がＣ３−Ｃ６シクロアルキル基の化合物は特開昭５５−１５４９５２号公報に開示の方法あるいは類似の方法により製造することが出来る。また、Ａ環部分が５〜１０員のヘテロ環基の化合物は特開昭５５−１６７２７５号公報に開示の方法あるいは類似の方法により製造することが出来る。さらに、Ａ環部分がＣ６−Ｃ１０アリール基の化合物は特開昭５６−５４５１号公報に開示の方法あるいは類似の方法により製造することが出来る。
【００３４】
本発明の一般式（１）で表されるアミジノフェノール誘導体は、上記方法によって得られるが、さらに必要に応じて再結晶法、カラムクロマトグラフィ−等の通常の精製手段を用いて精製することができる。また必要に応じて、常法によって前記した所望の塩や溶媒和物にすることもできる。
【００３５】
本発明の医薬組成物は、一般式（１）で表されるアミジノフェノール誘導体、若しくはその塩又はそれらの溶媒和物を含有するものであって、単独で用いてよいが、通常は薬学的に許容される担体、添加物等を配合して使用される。医薬組成物の投与形態は、特に限定されず、治療目的に応じて適宜選択できる。斯かる剤形としては、例えば、散剤、顆粒剤、細粒剤、ドライシロップ剤、錠剤、カプセル剤、注射剤等を挙げることができる。
【００３６】
これらの製剤は、その剤形に応じて製剤学上使用される賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、希釈剤、緩衝剤、等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤等の医薬品添加物と適宜混合、希釈又は溶解し、常法に従い製造することができる。
【００３７】
例えば、散剤の場合は、必須成分のほかに、必要に応じて適当な賦形剤、滑沢剤等を加えよく混和して調製すればよい。錠剤の場合は、必要に応じて適当な賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤等を加え、常法に従い打錠して調製すればよい。また錠剤は必要に応じてコ−ティングを施し、フィルムコ−ト錠、糖衣錠等にすることができる。
【００３８】
また、注射剤の場合は、液剤（無菌水又は非水溶液）、乳剤及び懸濁剤の形態とすることができる。これらに用いられる非水担体、希釈剤、溶媒又はビヒクルとしては、例えばプロピレングリコ−ル、ポリエチレングリコ−ル、オリ−ブ油等の植物油、オレイン酸エチル等の注射可能な有機酸エステルが挙げられる。また、該組成物には防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤等の補助剤を適宜配合することができる。
【００３９】
本発明の一般式（１）で表される化合物の投与量は年齢、体重、症状、投与形態及び投与回数等によって異なるが、通常は成人に対して１日１〜１０００ｍｇを、１回又は数回に分けて経口投与又は非経口投与するのが好ましい。
【実施例】
【００４０】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明する。本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００４１】
［実施例１］
血液透析患者の血漿を用いてのＡＧＥ形成阻害作用
血液透析患者の血漿中ＡＧＥ（指標：ペントシジン）の測定はＭｉｙａｔａらの報告に従って実施した（Ｍｉｙａｔａ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ：Ｊ  ＡＭ  ＳＯＣ  ＮＥＰＨＲＯＬ，１３，２４７８−２４８７，２００２）。血液透析患者の血漿０．９ｍＬをアミノグアニジン又は各被検薬物の存在下（添加量は０．１ｍＬ）で、３７℃で７日間反応した。アミノグアニジン及び各被検薬物の最終濃度は５．０ｍＭとした。なお、アミノグアニジン又は各被検薬物はジメチルスルフォキシド（ＤＭＳＯ）に溶解して使用した。ＤＭＳＯの最終濃度は反応溶液１ｍＬ中、反応時における酸化反応に影響しない１０％とした。７日間の反応後に、アミノグアニジン又は各被検薬物を添加した血漿中のペントシジンの濃度を以下に示す方法で測定した。
【００４２】
反応溶液０．０５ｍＬに等量の１０％トリクロロ酢酸（以下、「ＴＣＡ」と称する）を加え、５０００×ｇ、５分間遠心した。上清を除去し、沈殿物を５％ＴＣＡ  ０．３ｍＬで洗い、その後凍結乾燥し乾燥させた。次いで、窒素条件下で１１０℃、１６時間６Ｎ塩酸  ０．１ｍＬ添加し、乾燥物を加水分解した。引き続き、５Ｎ水酸化ナトリウム  ０．１ｍＬと０．５Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ７．４）  ０．２ｍＬを添加し中和した。中和溶液は、口径０．５μＭのフイルタ−をとおし、リン酸緩衝液で希釈し、ペントシジン測定用サンプルを調整した。ペントシジン濃度の測定はＭｉｙａｔａらの方法に従って実施した。
【００４３】
また、各被検薬物は下記公報記載の製造法に従って製造したものを使用した。
被検薬物１（特開昭５５−１６７２７５号公報の実施例８）
被検薬物２（特開昭５５−１５４９５２号公報の実施例３）
被検薬物３（特開昭５５−１５４９５２号公報の実施例４）
被検薬物４（特開昭５６−５４５１号公報の実施例１１）
【００４４】
表１に、各被検薬物によるペントシジン形成阻害強度を、アミノグアニジンによる形成阻害強度を１．０とした場合における相対値として表した（形成阻害強度はコントロ−ル群を対照においた。コントロ−ル群にはＤＭＳＯのみ添加した）。
相対値＝（被検薬物の形成阻害率）÷（アミノグアニジンの形成阻害率）
アミノグアニジン及び各被検薬物の反応中における最終濃度は５．０ｍＭに固定した。
各被検薬物の相対値は、それぞれ１．９８、１．９４、２．１４及び１．７７と算出され、いずれもアミノグアニジンによるペントシジン形成阻害強度と同等以上であった。以上から、一般式（１）で表される本発明の化合物は、アミノグアニジンよりも強力なＡＧＥ形成阻害作用を有し、さらに強力な治療剤としての可能性が本実験結果より明らかとなった。
【００４５】
【表１】
2008266174.tif 000004