(57)【要約】【課題】ローヤルゼリー蛋白加水分解物の化粧品用途、特に、美白化粧料、スキンケア化粧料、抗老化化粧料、美肌化粧料シワ改善／シワ予防用化粧料を提供することを目的とする。また、本発明は、ヒアルロン酸産生促進剤を提供することを目的とする。【解決手段】ローヤルゼリー素材の蛋白加水分解物を含むヒアルロン酸産生促進剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ローヤルゼリー素材の蛋白加水分解物を含むヒアルロン酸産生促進剤。
【請求項２】
請求項１に記載のヒアルロン酸産生促進剤を含む美白化粧料。
【請求項３】
請求項１に記載のヒアルロン酸産生促進剤を含むスキンケア化粧料。
【請求項４】
請求項１に記載のヒアルロン酸産生促進剤を含む抗老化化粧料。
【請求項５】
請求項１に記載のヒアルロン酸産生促進剤を含む美肌化粧料。
【請求項６】
請求項１に記載のヒアルロン酸産生促進剤を含むシワを改善ないし予防する化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒアルロン酸産生促進剤を含む化粧料に関し、詳しくは美白、スキンケア、抗老化、美肌、シワ改善／シワ予防、ヒアルロン酸産生促進などの用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在ローヤルゼリーは健康食品、医薬品、化粧品など世界中で広く利用されており、血管拡張、血圧降下、抗菌作用など種々の薬理作用および栄養生理的作用が報告されている。ローヤルゼリーは蜜蜂の唾液腺で合成され、頭部にある下咽頭腺及び大腮腺から分泌されるミルク状の物質で、女王蜂幼虫用の巣房に入れられた幼虫蜂に対して働き蜂が女王蜂を作るために与えるものである。ローヤルゼリーは蛋白質やビタミン、ミネラルをバランスよく含んでおり、これを一生食べ続ける女王蜂は、働き蜂の４０倍の寿命と、１日２０００個の産卵能力を持つ。このローヤルゼリーの有効成分の研究は、10-ヒドロキシ-2-デセン酸を代表とする脂肪酸、アミノ酸、ビタミンなどの低分子化合物を中心になされてきた。
【０００３】
一方、ローヤルゼリーには通常１０％以上の蛋白質が含まれているが、この蛋白質の分子構造や生理作用に関する研究は遅れている。また、ローヤルゼリー配合のドリンク剤などの製造時には、アルコール抽出が行われ、蛋白質は沈殿物として分離されるが、この蛋白質の有効利用は図られていないのが現状である。
【０００４】
ローヤルゼリー蛋白質のプロテアーゼ処理物については、カルシウム吸収促進作用（非特許文献１）、血糖値低下作用（非特許文献２）が知られ、抗酸化作用（非特許文献３）、コラーゲン産生促進作用(特許文献１)、降圧作用(特許文献２)についても報告されている。
【特許文献１】特開２００３−１７１２５８
【特許文献２】特開２００５−２５５６７０
【非特許文献１】仲佐輝子、食品と開発、３４，５（１９９９）
【非特許文献２】上田修一郎、Ｆｏｏｄ Ｓｔｙｌｅ ２１，６，５（２００２）
【非特許文献３】（社）全国ローヤルゼリー公正取引協議会「ローヤルゼリー(Royal Jelly)に関する研究」平成１３年度研究報告書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、ローヤルゼリー蛋白加水分解物の化粧品用途、特に、美白化粧料、スキンケア化粧料、抗老化化粧料、美肌化粧料、シワ改善／シワ予防用化粧料を提供することを目的とする。
【０００６】
また、本発明は、ヒアルロン酸産生促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記課題に鑑み検討を重ねた結果、ローヤルゼリー素材の蛋白加水分解物が強力なヒアルロン酸産生促進作用を有し、このヒアルロン酸促進作用に基づきスキンケア、美白、抗老化(アンチエージング)、美肌、シワ改善／シワ予防などの種々の効果を有する化粧料が得られることを見出した。
【０００８】
本発明は、以下のヒアルロン酸産生促進剤、美白化粧料、スキンケア化粧料、抗老化化粧料、美肌化粧料、シワ改善／シワ予防化粧料を提供するものである。
１．  ローヤルゼリー素材の蛋白加水分解物を含むヒアルロン酸産生促進剤。
２．  項１に記載のヒアルロン酸産生促進剤を含む美白化粧料。
３．  項１に記載のヒアルロン酸産生促進剤を含むスキンケア化粧料。
４．  項１に記載のヒアルロン酸産生促進剤を含む抗老化化粧料。
５．  項１に記載のヒアルロン酸産生促進剤を含む美肌化粧料。
６．  項１に記載のヒアルロン酸産生促進剤を含むシワを改善ないし予防する化粧料。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、ローヤルゼリー蛋白加水分解物を含む化粧料を肌に適用することで、しみ、くすみ、肌荒れ、しみ、たるみなどの肌に関するトラブルを解決することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明において、蛋白質の原料となるローヤルゼリー素材としては、ローヤルゼリーの蛋白質を含む素材を意味するものであり、この要件を満たしていれば特に限定されず、例えば生ローヤルゼリー、乾燥ローヤルゼリー、ローヤルゼリーをエタノール沈殿、硫安処理、加熱処理等の蛋白変性処理を行って得られた蛋白沈殿物（エタノール沈殿物を含む）、或いは、ローヤルゼリーを抽出、濾過、遠心分離、クロマトグラフィー等の種々の手段により分画後の蛋白質を含む素材を意味する。
【００１１】
ローヤルゼリーは、いかなるものであってもよく、女王蜂を育てるために蜜蜂が分泌するものを広く用いることができる。具体的には、ローヤルゼリーは、蜜蜂のうち働き蜂が下咽頭腺及び大腮腺から分泌する分泌物を混合してつくる乳白色のゼリー状物質である。
ローヤルゼリー由来の蛋白質分画としては、ローヤルゼリーをアルコール沈殿して採取した蛋白分画を好適に用いることができる。特にローヤルゼリー飲料の製造時に水不溶性蛋白として副生するローヤルゼリーのエタノール変性蛋白質を使用するのが好ましい。エタノール変性蛋白質は、５０〜１００容量％程度のエタノールを使用してローヤルゼリーからデセン酸等の飲料用の生理活性物質を抽出した残渣の水に対する溶解度が小さい蛋白質として得ることができる。
【００１２】
本発明のローヤルゼリー素材の加水分解物は、蛋白質分解酵素により加水分解を行うことにより得ることができる。蛋白質分解酵素には、エンドペプチダーゼとエキソペプチダーゼが含まれ、これらの１種または２種以上を使用することができる。
【００１３】
本発明で使用する蛋白質分解酵素としては、動物由来（例えば、トリプシン、キモトリプシン、ペプシン、パンクレアチン等）、植物由来（例えば、パパイン等）、又は微生物由来（例えば、乳酸菌、酵母、カビ、枯草菌、放線菌等）のエンドペプチダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、アミノペプチダーゼ、若しくは微生物由来（例えば、乳酸菌、アスペルギルス属菌、リゾープス属菌等）等のエキソペプチダーゼを例示することができる。
【００１４】
蛋白質分解酵素の好ましい例としては、例えばストレプトマイセス・グリセウス（Streptomyces griseus）産生ペプチダーゼ（商品名：アクチナーゼAS）、アスペルギルス・オリゼー（Aspergillus oryzae）産生ペプチダーゼ（商品名：プロテアーゼA、フレーバーザイム）、アスペルギルス・メレウス（Aspergillus melleus）産生ペプチダーゼ（商品名：プロテアーゼP）、アスペルギルス・オリゼー（Aspergillus oryzae）産生ペプチダーゼ（商品名：ウマミザイムG、Promod 192P、Promod 194P、スミチームFLAP）、アスペルギルス・ソーエ（Aspergillus sojae）産生ペプチダーゼ（商品名：Sternzyme B15024）、アスペルギルス属産生ペプチダーゼ（商品名：コクラーゼP）、リゾプス・オリゼー（Rhizopus oryzae）産生ペプチダーゼ（商品名：ペプチダーゼR）、バチルス・サブチリス（Bacillus subtilis）産生ペプチダーゼ（商品名：オリエンターゼ22BF、ヌクレイシン）、バチルス・リシェニフォルミス（Bacillus licheniformis）産生ペプチダーゼ（商品名：アルカラーゼ）、バチルス・ステアロサーモフィラス（Bacillus stearothermophilus）産生ペプチダーゼ（商品名：プロテアーゼS）、バチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）産生ペプチダーゼ（商品名：ニュートラーゼ）、バチルス属産生ペプチダーゼ（商品名：プロタメックス）を挙げることができる。
【００１５】
さらに、蛋白質分解酵素に１以上のアミノ酸を置換、付加、欠失、挿入等により改変した変異型酵素を使用してもよい。このような変異型蛋白質分解酵素も本発明のローヤルゼリー素材の酵素分解に使用される。
【００１６】
ローヤルゼリー素材を蛋白質分解酵素で処理する条件としては、例えば、水性溶媒中約１５℃から約６０℃、好ましくは約２０℃から約５０℃、特に３７℃前後で、１〜７２時間程度、好ましくは３〜４８時間程度処理することにより好ましく実施することができる。蛋白質分解酵素の使用量は、例えば蛋白質１００ｇ当たり０．０１〜３ｇ程度、好ましくは０．０５〜１ｇ程度である。蛋白質分解酵素は遊離の酵素を用いてもよく、担体に固定化した酵素を使用してもよい。
【００１７】
反応液は水を好適に使用できるが、少量のエタノール等の水混和性有機溶媒を含む、含水エタノール等の水性溶媒中で行ってもよい。
【００１８】
酵素分解物の反応液は、加熱処理、必要に応じてさらに遠心分離、濾過、抽出、脱塩、凍結乾燥やスプレードライ（または、噴霧乾燥）などの後処理を行い、蛋白分解物を得ることができる。例えば、ローヤルゼリー素材として生ローヤルゼリー或いは乾燥ローヤルゼリーを使用した場合、ローヤルゼリー由来の糖質等の成分を除去することもできる。
【００１９】
本発明の好ましい実施形態の１つにおいて、本発明のローヤルゼリー素材の蛋白分解物は、ゲル濾過カラムにより測定された平均分子量が３００〜７０００程度、特に５００〜６０００程度を有する。
【００２０】
本発明の蛋白分解物は、酵素処理後に必要に応じて脱塩処理をして製造してもよく、さらにカラムなどの処理によりヒアルロン酸産生促進作用がより強い分画を集めることも可能である。
【００２１】
本発明におけるローヤルゼリー蛋白加水分解物の配合量は、化粧料全量中、乾燥物として０．０００５〜２０．０重量％、好ましくは０．００１〜１０．０重量％である。０．０００５重量％未満であると、本発明の効果が十分に発揮されず、２０．０重量％を超えると製剤化が難しいので好ましくない。また、１０．０重量％以上配合してもさほど大きな効果の向上はみられない。さらに、ローヤルゼリーの蛋白加水分解物は０．０１〜０．１重量％の濃度で肌に適用するのが特に好ましい。
【００２２】
ヒアルロン酸は、真皮繊維芽細胞の膜に存在するヒアルロン酸合成酵素（HAS）によって合成される酸性ムコ多糖である（Y. Sugiyama ら  J. Invest. Dermatol., 110, 116(1998)）。ヒアルロン酸は細胞間隙への水分の保持、組織内にゼリー状のマトリックスを形成することに基づく細胞の保持、組織の潤滑性と柔軟性の保持に寄与している（BIOINDUSTRY  Vol8, 346(1991)）。ヒアルロン酸は加齢に伴い減少（K. Matsuokaら  Aging, 1, 47(1989)）、あるいは変性することが報告されており（L.A.M.Meyer ら  J. Invest. Dermatol., 102, 385(1994)）、このような変化が肌の乾燥、シワ、たるみなどを引き起こす一因となっているといわれている。
【００２３】
本発明に用いられるローヤルゼリー蛋白加水分解物は、いずれもヒトの肌に対して優れたヒアルロン酸産生促進作用を有するので、該加水分解物が配合された化粧料は、肌にはりと潤いを与え、肌の老化を防ぎ、シワをなくし若しくは軽減し、肌をみずみずしくしてシミやくすみを目立たなくし、美肌効果を有し、健康な肌を維持できるため、美白化粧料、抗老化化粧料、美肌化粧料、スキンケア化粧料、シワを改善／予防用化粧料などとして有用である。
【００２４】
本発明の化粧料には、ローヤルゼリー蛋白加水分解物以外に、通常化粧品に用いられる成分、例えば、美白剤、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色材、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００２５】
本発明の化粧料の剤型は、水溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、油液系、ゲル系、軟膏系、エアゾール系、水−油２層系、水−油−粉末３層系等、幅広い剤型を採り得る。例えば基礎化粧品であれば、洗顔料、化粧水、乳液、クリーム、ジェル、エッセンス、美容液、パック、マスク等が挙げられ、メークアップ化粧品であれば、ファンデーション、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラなどが挙げられ、その他、洗顔料、マッサージ用剤、クレンジング用剤、アフターシェーブローション、プレシェーブローション、シェービングクリーム、ボディソープ、石けん、シャンプー、リンス、ヘアートリートメント、整髪料、ヘアートニック剤、育毛剤、制汗剤、衛生用品等が挙げられる。
【実施例】
【００２６】
以下、本発明を実施例により説明するが、本実施例によって本発明が限定されるものではない。
製造例１
生ローヤルゼリー250gを500mLのビーカーに量りとり、イオン交換水20mLを加え、均一になるまで攪拌した。2N NaOHを47mL添加し、pH8.7に調整した。酵素BP (SternzymeBP14202; SternEnzyme社製 Bacillus subtilis由来のbacillolysin)2.5gを添加し、さらにイオン交換水33mLを加え均一になるまで攪拌した。ビーカーを恒温水槽に浸け、ローヤルゼリー液をスリーワンモーターで攪拌しながら、45℃にて15時間反応させた。恒温水槽の温度を上げ、ローヤルゼリー液をスリーワンモーターで攪拌しながら加熱し、80℃に到達後直ちに水冷し、凍結乾燥して、ローヤルゼリー蛋白加水分解物を凍結乾燥物として得た。
【００２７】
実施例1：ヒアルロン酸産生促進(in vitro)
ヒト正常線維芽細胞樹立株WI-38細胞を10％FCS(ウシ胎児血清)含有RPMI-1640培地で、1×105細胞/mlに調整し(細胞懸濁液)、1ウェル当たり細胞懸濁液100μlを加えた。次いで、このプレートを37℃で終夜、5％CO2-95％空気中で培養し、RPMI-1640培地150μlとPBS(-)40μlの混合物で培地交換し、製造例1で得たローヤルゼリー蛋白加水分解物を100μg/mL(最終濃度)になるように各ウェルに添加し、37℃で48時間、5％CO2-95％空気中で培養した。培養物を1500rpmで15分間遠心し、上清を得た。得られた上清中のヒアルロン酸量を市販のヒアルロン酸測定キット(生化学工業製)を用いて測定した。
【００２８】
また、製造例1で得たローヤルゼリー蛋白加水分解物に代えて未処理の生ローヤルゼリー凍結乾燥物、あるいはこれらのコントロール群についても同様に、上清中のヒアルロン酸濃度を測定した。ヒアルロン酸産生促進率は、サンプルの代わりに水を0.01ml添加した場合のヒアルロン酸量を100として算出した。結果を表1に示す。
【００２９】
【表１】
2008110927.tif 000002
【００３０】
表１の結果から、本発明のローヤルゼリー蛋白加水分解物は、ヒト細胞について優れたヒアルロン酸産生促進作用を有することが明らかになった。
【００３１】
実施例２：ヒアルロン酸産生促進(in vivo)
ヘアレスマウス(Hos:hr-1)の皮膚にローヤルゼリー蛋白質加水分解物の水溶液並びに基剤（水、コントロール）を２週間、１００μｌ／５ｃｍ2 ／匹／日で塗布し、最終塗布２４時間後に皮膚を採取した。採取したヘアレスマウスの皮膚を以下に示す方法で処理することにより、皮膚中のヒアルロン酸の定量を行った。
【００３２】
ヒアルロン酸の定量は、以下のように行った。
【００３３】
アセトンで脱脂したマウス皮膚を細切した後、アルカリ処理、中和、プロナーゼＥ（シグマ）処理、さらに、トリクロロ酢酸処理および透析（Ｓｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ１、分画分子量６０００〜８０００、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ社製）を行い、ヒアルロン酸の定量用のサンプルを調製した。ヒアルロン酸の定量は、ビオチン標識ヒアルロン酸結合性蛋白（生化学工業社製）を用いたＥＬＩＳＡ法（Ａ．Ｊ．Ｆｏｓａｎｇｅｔ ａｌ．，Ｍａｔｒｉｘ，１０，３０６−３１３，１９９０）で行った。なお、皮膚のヒアルロン酸含量の指標として、コントロールに対する乾燥皮膚重量あたりのヒアルロン酸含量（相対値％）を用いた。
【００３４】
上記の試験の結果、ローヤルゼリー蛋白質加水分解物は皮膚のヒアルロン酸産生を促進し、特に１０〜１００μｇ／ｍｌの濃度で高い効果を得られることが明らかとなった。
処方例1：化粧水
化粧水を以下の処方に基づき、常法によって調製した。なお、ローヤルゼリー蛋白加水分解物としては、上記の製造例１で調製されたものを用いた。
化粧水の処方
組成                                 配合量（％）
エタノール                             １０．００
ソルビット液                             ５．００
メチルパラベン                           ０．０５
トリポリオキシエチレンエーテルリン酸     ０．４０
ローヤルゼリー蛋白加水分解物             ０．０１
クエン酸                                 ０．０２
クエン酸ナトリウム                       ０．０５
精製水                                     残量  
（合計）                            １００．００
【００３５】
処方例２：美容液
美容液を以下の処方に基づき、常法によって調製した。なお、ローヤルゼリー蛋白加水分解物としては、上記の製造例１で調製されたものを用いた。
美容液の処方
組成                                     配合量（％）
エタノール                               ８．００
１，３ブチレングリコール                 ５．００
メチルパラベン                           ０．１０
ポリオキシエチレンセチルエーテル         ０．２０
ローヤルゼリー蛋白加水分解物             ０．０５
キサンタンガム                           ０．０５
ヒドロキシエチルセルロース               ０．１０
エデト酸２ナトリウム                     ０．０１
精製水                                     残量  
（合計）                            １００．００
【００３６】
処方例３：シャンプー
シャンプーを以下の処方に基づき、常法によって調製した。なお、ローヤルゼリー蛋白加水分解物としては、上記の製造例１で調製されたものを用いた。
組成                                                      配合量（％）
ラウリル硫酸トリエタノールアミン                           ２０．００
ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸ナトリウム           １０．００
アルキル硫酸ナトリウム液                                   １０．００
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン液                       １０．００
ポリオキシエチレンラウリルエーテル                           １．００
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド                               ３．００
ヤシ油脂肪酸モノエタノールアミド                             ０．４５
ジステアリン酸エチレングリコール                             ０．５０
メチルパラベン                                               ０．１０
グリセリン                                                   ５．００
塩化Ｏ−［２−ヒドロキシ−３−（トリメチルアンモニオ）
プロピル］ヒドロキシエチルセルロース                         ０．２０
ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体             ０．１０
ローヤルゼリー蛋白加水分解物                                 ０．０５
精製水                                                         残量  
（合計）                                                  １００．００
【００３７】
処方例４：乳液
乳液を以下の処方に基づき、常法によって調製した。なお、ローヤルゼリー蛋白加水分解物としては、上記の製造例１で調製されたものを用いた。
組成                                                      配合量（％）
軟質ラノリン脂肪酸コレステリル                             １０．００
ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノステアレート                     １．８０
モノステアリン酸グリセリン                                   １．２０
ローヤルゼリー蛋白加水分解物                                 ０．１０
グリセリン                                                   ３．００
メチルパラベン                                               ０．１０
エチルパラベン                                               ０．１０
香料                                                         適 量
精製水                                                       残 量  
(合計)                                                    １００．００
【００３８】
処方例５：クリーム
クリームを以下の処方に基づき、常法によって調製した。なお、ローヤルゼリー蛋白加水分解物としては、上記の製造例１で調製されたものを用いた。
組成                                                      配合量（％）
マカデミアンナッツ油脂肪酸コレステリル                     １０．００
ステアリン酸                                                 ７．５０
セトステアリルアルコール                                     １．５０
トリイソオクタン酸グリセリン                               １２．００
ラノリン                                                     ３．００
パルミチン酸セチル                                           ４．００
モノステアリン酸ＰＥＧ(40)                                   ２．００
モノステアリン酸グリセリン                                   ５．００
ローヤルゼリー蛋白加水分解物                                 ０．１０
防腐剤                                                        適量
酸化防止剤                                                    適量
香料                                                          適量
精製水                                                        残量    
(合計)                                                    １００．００
【００３９】
試験例
処方例１で得た化粧水(本発明)と、ローヤルゼリー蛋白加水分解物を含まない以外は同一の組成を有する化粧水(コントロール)について、パネラー10名により、保湿作用(しっとり感)、美白作用（くすみの改善）、抗老化（しわの改善）、美肌作用（肌のはり、つや）の４項目について試験した。
【００４０】
その結果、ローヤルゼリー蛋白加水分解物を含む本発明の化粧水は、該加水分解物を含まないコントロールの化粧水と比較して、全ての項目について高い評価を得た。
【００４１】
また、データは示さないが、上記４項目の評価の向上は、パネラーにおけるヒアルロン酸量の増加と関係があり、これらの評価の向上は、ヒアルロン酸産生促進作用に基づくことが明らかになった。