(57)【要約】【課題】本発明は、植物由来の成分を有効成分とするするプラスミノーゲン活性化因子(PA)遺伝子発現促進剤を提供することを目的とする。【解決手段】本発明は、ホウセンカ抽出物を有効成分とするPA遺伝子発現促進剤に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホウセンカ抽出物を有効成分とするプラスミノーゲン活性化因子(PA)遺伝子発現促進剤。
【請求項２】
表皮のターンオーバー促進剤、表皮の肥厚化促進剤、皮膚の創傷治癒の促進剤、ニキビの予防又は治療剤、瘢痕の治療剤、血栓溶解により改善されうる血管系疾患の予防又は治療剤、血管新生が関与する疾患の予防又は治療剤、或いは、角膜上皮障害の予防又は治療剤である請求項1記載のPA遺伝子発現促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はプラスミノーゲン活性化因子遺伝子発現促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
プラスミノーゲン活性化因子(Plasminogen Activator) (本明細書では「PA」と略記することがある) は、プラスミノーゲンをプラスミンに変換し、その活性化に関与するタンパク質である。組織型（t-PA）とウロキナーゼ型（u-PA）の二つのサブタイプが存在する。PAは、血栓を溶解する作用があり、心臓を養う血管である冠動脈にできた血栓や末梢血管にできた血栓を溶解除去することが知られている。そしてこの血栓溶解作用により、PAは心筋梗塞や脳卒中などの血管系疾患の治療に有用である。
【０００３】
また、特許文献1には、プロテアーゼ阻害剤やPAなどのタンパクが、血管新生が関与する疾患に有用であることが記載されている。また、特許文献2には、PAが角膜潰瘍、角膜上皮剥離、角膜炎、ドライアイ、乾性角結膜炎、眼球乾燥症、慢性表層角膜炎、角膜びらん、遷延性角膜上皮欠損等の角膜上皮障害の治療剤として有用であることが記載されている。またPAは皮膚組織においては表皮ターンオーバーの促進、創傷治癒の促進、表皮の肥厚化の促進に関与することが知られている。更にまた、PAは、フィブリンの溶解によりニキビの改善に関与することが示唆されている。
【０００４】
【特許文献１】特表2002-539174号公報
【特許文献２】特開2004-51640号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記のように生体内でPAの発現を促進することにより種々の有益な効果が奏される。よってPA遺伝子の発現の促進剤が求められている。当該促進剤が植物由来の成分を有効成分とするものであれば安全性の観点からより一層好ましい。
【０００６】
そこで本発明は、植物由来の成分を有効成分とするPA遺伝子発現促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは鋭意研究の結果、特定の植物抽出物がPA遺伝子発現促進作用を有することを見出し、以下の発明を完成するに至った。
(1) ホウセンカ抽出物を有効成分とするプラスミノーゲン活性化因子(PA)遺伝子発現促進剤。
(2) 表皮のターンオーバー促進剤、表皮の肥厚化促進剤、皮膚の創傷治癒の促進剤、ニキビの予防又は治療剤、瘢痕の治療剤、血栓溶解により改善されうる血管系疾患の予防又は治療剤、血管新生が関与する疾患の予防又は治療剤、或いは、角膜上皮障害の予防又は治療剤である(1)記載のPA遺伝子発現促進剤。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば表皮等において、PA遺伝子の発現促進により改善され得る疾患又は症状を改善、治療又は予防することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
（抽出物）
本発明に用いるホウセンカ抽出物は、ホウセンカ (Impatients balsamina L.) の植物体の全体、植物体の一部又はそれらに由来する材料、好ましくは花（蕾であってもよい）又は植物体の全体（全草）から溶媒により抽出された抽出物である。
【００１０】
これらの植物抽出物を取得するために使用する溶媒としては水、アルコール（メタノール、エタノール、1,3-ブタンジオール等）、又はアセトン、或いはこれらの溶媒の2種以上の混合物が挙げられる。抽出溶媒としては特に水又はアルコールと水との混合物、すなわちアルコール水溶液が好ましく、エタノール水溶液が特に好ましい。エタノール水溶液中のエタノール含量は水溶液全体を基準として10％〜99.5v/v%が好ましい。
【００１１】
抽出しようとするホウセンカ植物体の全体、一部、又はそれらに由来する材料は適宜粉砕又は細切して用いてもよく、また適宜乾燥して用いてもよい。
【００１２】
抽出の際は、抽出しようとするホウセンカ植物体の全体、一部、又はそれらに由来する材料に対して上記抽出溶媒を3〜20重量／容量倍 （例えば生薬1kgに溶媒10Lを加えると10重量／容量倍）加えることが好ましい。
【００１３】
抽出は5℃〜70℃の温度条件下で行うことが好ましい。抽出時間は抽出温度によっても相違するが1時間〜2ヶ月間行うことが好ましい。抽出中は適宜撹拌を行ってもよい。
【００１４】
抽出後、植物体残渣と抽出液とをろ過などの常法により分離する。得られた抽出液から減圧濃縮などの常法により溶媒を除去したものを本発明における植物抽出物として使用することが好ましい。
【００１５】
（用途）
ホウセンカ抽出物がヒト等の哺乳動物の細胞に投与されると、当該細胞においてPA遺伝子の発現が促進される。ここで「PA遺伝子の発現が促進される」とは、PAをコードするDNAから転写されるmRNAの細胞中での存在量が、植物抽出物不存在下における存在量と比較して有意に増大することを意味する。PAには組織型PA(本明細書では「t-PA」と略記する場合がある)とウロキナーゼ型PA（本明細書では「u-PA」と略記する場合がある)の2つのサブタイプが存在する。ホウセンカ抽出物によればt-PA及びu-PAのどちらも発現促進され得るが、なかでもt-PAの発現の促進が著しい。
【００１６】
本発明のPA遺伝子発現促進剤をヒト等の哺乳動物に投与することにより、PA遺伝子の発現が促進され、PA遺伝子の発現により改善されうる疾患又は状態を改善、治療又は予防することができる。
【００１７】
本発明のPA遺伝子発現促進剤が作用しうる細胞としては上皮細胞、内皮細胞、線維芽細胞、神経細胞等が挙げられる。ここで「上皮細胞」とは広義の意味であり、動物の体の内外の遊離面を覆う細胞であれば特に限定されないが、典型的には皮膚の表皮細胞（ケラチノサイト）、角膜上皮細胞、肺上皮細胞、角膜上皮細胞、腎上皮細胞、乳腺上皮細胞、子宮内膜上皮細胞等が挙げられる。
【００１８】
本発明のPA遺伝子発現促進剤を皮膚に作用させることにより表皮のターンオーバーが促進される。本発明のPA遺伝子発現促進剤を皮膚に作用させることにより表皮の肥厚化が促進される。本発明のPA遺伝子発現促進剤を皮膚の創傷部に作用させることにより、創傷の治癒が促進される。本発明のPA遺伝子発現促進剤を瘢痕組織に作用させると、瘢痕が治療されうる。これら用途のためには本発明のPA遺伝子発現促進剤は皮膚外用剤の形態であることが好ましい。
【００１９】
本発明のPA遺伝子発現促進剤を投与すると血中においてt-PA量が増加しフィブリンが溶解されてニキビの予防又は治療が可能となる。この用途のためには本発明のPA遺伝子発現促進剤は皮膚外用剤、経口投与剤又は非経口投与剤の形態であることが好ましい。
【００２０】
本発明のPA遺伝子発現促進剤はまた、血栓溶解により改善されうる血管系疾患の予防又は治療剤としても有用である。「血栓溶解により改善されうる血管系疾患」としては心筋梗塞、脳卒中等が挙げられる。この用途のためには、本発明のPA遺伝子発現促進剤は前記疾患の治療又は予防を必要とする血管組織の部位に送達されるように投与される。この用途のためには本発明のPA遺伝子発現促進剤は経口投与剤又は非経口投与剤の形態であることが好ましい。
【００２１】
本発明のPA遺伝子発現促進剤はまた、血管新生が関与する疾患の予防又は治療剤としても有用である。「血管新生が関与する疾患」としては癌、関節炎、黄斑変性症、糖尿病性網膜症等が挙げられる。この用途のためには、本発明のPA遺伝子発現促進剤は前記疾患の治療又は予防を必要とする部位に送達されるように投与される。この用途のためには本発明のPA遺伝子発現促進剤は経口投与剤又は非経口投与剤の形態であることが好ましい。
【００２２】
本発明のPA遺伝子発現促進剤はまた、角膜上皮障害の予防又は治療剤としても有用である。「角膜上皮障害」としては、角膜潰瘍、角膜上皮剥離、角膜炎、ドライアイ、乾性角結膜炎、眼球乾燥症、慢性表層角膜炎、角膜びらん、遷延性角膜上皮欠損等が挙げられる。この用途のためには、本発明のPA遺伝子発現促進剤は前記障害の治療又は予防を必要とする角膜上皮の部位に送達されるように投与される。この用途のためには本発明のPA遺伝子発現促進剤は経口投与剤又は非経口投与剤（例えば点眼剤）の形態であることが好ましい。
【００２３】
（PA遺伝子発現促進剤の形態）
本発明のPA遺伝子発現促進剤はホウセンカ抽出物を含んでいる限りどのような形態であってもよいが典型的には以下の形態が挙げられる。
【００２４】
本発明のPA遺伝子発現促進剤はヒト等の哺乳動物のための皮膚外用剤として用いることができる。この実施形態では、上記植物抽出物のほかに、上記植物抽出物の活性を損なわない範囲で、化粧品又は医薬品として許容される各種担体、賦形剤、他の活性成分等を組み合わせて皮膚外用組成物とすることができる。皮膚外用組成物には化粧品組成物も医薬品組成物も包含される。皮膚外用組成物に配合できる成分としては、例えば油分、顔料、界面活性剤、保湿剤、紫外線吸収剤、抗炎症剤、殺菌剤、色素等が挙げられる。皮膚外用組成物の形態は特に限定されないが、典型的には、化粧水、皮膚塗布用、浴用又は洗浄用等のクリーム、乳液、ジェル、スティック、シート、パップ、粉末、液体、顆粒等が挙げられる。皮膚外用組成物中の植物抽出物の配合量は皮膚への適用時にPA遺伝子発現を有意に増大させることが可能な量である限り特に限定されないが、典型的には0.0001〜20重量％である。
【００２５】
本発明のPA遺伝子発現促進剤はヒト等の哺乳動物に経口摂取される形態であってもよい。この実施形態では、上記植物抽出物のほかに、上記植物抽出物の活性を損なわない範囲で、飲食品又は医薬品として許容される各種担体、賦形剤、他の活性成分等を組み合わせて経口摂取用組成物とすることができる。経口摂取用組成物には飲食品用組成物も経口用医薬製剤も包含される。経口摂取用組成物に配合できる成分としては、例えば賦型剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、食品添加物、調味料等が挙げられる。経口摂取用組成物の形態は特に限定されないが、典型的には、錠剤、丸剤、糖衣錠、粉末状、顆粒状、茶状、ティバッグ状、ハードカプセル剤、ソフトカプセル剤、チューインガム、チョコレート、キャンディ、グミゼリー、飲料、スープ、アイスクリーム、麺類、ベーカリー食品等が挙げられる。当該経口摂取用組成物が飲食品組成物である場合、その本体、包装、説明書、宣伝物又は宣伝用電子的情報に効能の表示、例えばPA遺伝子の発現を促進する旨の表示、表皮のターンオーバーを促進する旨の表示等が付されたものであってもよい。経口摂取用組成物中の植物抽出物の配合量は経口摂取時にPA遺伝子発現を有意に増大させることが可能な量である限り特に限定されないが、典型的には0.0001〜10重量％である。
【００２６】
本発明のPA遺伝子発現促進剤は注射剤（例えば皮下、筋肉内及び静脈内用注射剤）、直腸投与剤、吸入剤、点眼剤等の非経口投与剤の形態に製剤化されてもよい。これらの非経口投与剤は上記植物抽出物に加えて、医薬品として許容される賦形剤、担体等を適宜含有し得る。
【実施例】
【００２７】
以下に実施例に基づいて本発明を説明するが、実施例は本発明の一実施形態を示すものであり、本発明の範囲は実施例の範囲には限定されない。
【００２８】
1. エキスの製造法
以下の方法により、ホウセンカの抽出物を得た。
（抽出物１）
ホウセンカの花15gを細切し、50%エタノール100mLを加え、室温で7日間抽出後、濾過して抽出液を得た（収量80mL、蒸発残分2.18w/v%）。
（抽出物２）
ホウセンカの花15gを細切し、95%エタノール100mLを加え、室温で7日間抽出後、濾過して抽出液を得た（収量80mL、蒸発残分0.73w/v%）。
【００２９】
2. ケラチノサイトにおける遺伝子発現解析
正常ヒト新生児包皮由来ケラチノサイト（品名：凍結NHEK（F））はクラボウ(株)より入手した。培地にはHuMedia-KG2（クラボウ社製）を使用した。細胞は37℃・5％CO2インキュベーター中で培養した。細胞を12ウェルの培養プレートに0.4×105 cells/ml/wellで播き、24時間後に培地添加剤hEGF及びBPEを含まない培地に交換し、24時間処理した。終濃度0.1％でエキスを添加し（N=2）、24時間後にTRIzol(登録商標) Reagent（Invitrogen）を用いてTotal RNAを抽出した。1μgのTotal RNAを鋳型とし、Super script III first strand system（Invitrogen）による逆転写反応を行いcDNAを合成した。定量的RT-PCR法によりt-PA及びu-PA並びに内部標準RPLP0（Ribosomal Protein Large P0）の遺伝子発現量を解析した。各遺伝子の特異的プローブ及びプライマーには、アプライドバイオシステムズ(株)のTaqMan(登録商標) Gene Expression Assayを使用した（t-PA: Assay ID Hs00263492_m1、u-PA: Assay ID Hs00170182、RPLP0: Assay ID Hs99999902_m1）。PCR反応試薬には、TaqMan(登録商標) Universal PCR Master Mixを使用し、PCR反応及び解析には、7500 Real-time PCR Systemを用いた。各遺伝子について検量線法による絶対定量を行い、得られた発現量は、内部標準遺伝子RPLP0（Ribosomal Protein Large P0）の発現量により補正した。陰性対照（コントロール）の発現量を1として算出した相対発現量を表1に示す。
【００３０】
【表１】
2008266158.tif 000002