(57)【要約】【課題】  本発明は、カルシウム非依存性の血管の異常収縮を特異的に抑制可能であり、かつ注射薬として利用可能な水溶性の薬剤組成物を提供することを目的とする。【解決手段】  上記課題の解決のため、本発明は、Ｎ−｛２−［４−（２，２−ｄｉｍｅｔｈｙｌｐｒｏｐｙｏｎｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌａｍｉｎｏ］ｂｅｎｚｏｙｌ｝ａｍｉｎｏａｃｅｔａｔｅまたはその薬理学上許容可能な誘導体を有効成分とする、血管異常収縮の抑制剤を提供する。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で示される化合物またはその薬理学上許容可能な誘導体を有効成分とする、血管異常収縮の抑制剤。
【化１】
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【請求項２】
薬理学上許容可能な誘導体が、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩のうち少なくとも１種より選択される、請求項１に記載の血管異常収縮抑制剤。
【請求項３】
誘導体がナトリウム塩である、請求項２に記載の血管異常収縮抑制剤。
【請求項４】
血管異常収縮が、カルシウム非依存性の異常収縮であることを特徴とする、請求項１から請求項３のうちいずれか１項に記載の血管異常収縮抑制剤。
【請求項５】
投与形態が注射薬である、請求項１から請求項４のうちいずれか１項に記載の血管異常収縮抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血管の異常収縮に起因する疾患の治療剤に関し、より詳しくは、カルシウム非依存性の血管異常収縮を抑制可能な化合物を有効成分とする血管上収縮の抑制剤に関する。
【０００２】
本明細書において、以下の用語は次の様に定義される。血管の異常収縮とは、血管平滑筋の異常収縮（攣縮ともいう）、特に細胞質内カルシウムイオン（Ｃａ２＋）濃度の増加に依存しない、すなわちＣａ２＋非依存性の収縮を指す。メンブレンラフト（ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｒａｆｔ）とは、血管表面に形成されるコレステロールおよびスフィンゴ脂質に富んだ細胞膜上の構造を指し、血管病のシグナル伝達の場として重要であり、コレステロールの除去により消失するという特徴を有す。
【背景技術】
【０００３】
血管の異常収縮とそれに伴う突発的な血行障害は、脳梗塞、狭心症、心筋梗塞などを引き起こし、これらの疾患による突然死の死亡者数が毎年６万人を数えるなど、社会的にも重大な問題となっている。特に、くも膜下出血後に高頻度で起こる「脳血管スパズム」は、脳の血管の大部分が攣縮して広範囲にわたり脳が梗塞状態に陥る疾患であり、くも膜下出血の手術が成功したにもかかわらず患者さんの命が救えないといった、深刻な事態を引き起こしている。
【０００４】
血管の収縮にはＣａ２＋に依存した「正常収縮」と、上記定義に示す「異常収縮」が知られており、正常収縮についてはその機構を含めかなりの部分が明らかになってきている。しかるに異常収縮については、その機構や対処方法がほとんどわかっていない。そのため、脳梗塞、狭心症、心筋梗塞などのうち血管が異常収縮することにより生じるものに対しては、従来、機構の明らかな正常収縮を抑制する手段、すなわちＣａ２＋チャンネルの阻害による治療として、カルシウム拮抗薬等が実際の医療現場では用いられている（特許文献１，２）。
しかしながら、上記疾患の真の原因は血管の異常収縮にあり、正常収縮を抑制するという対処法は結果として、血管の収縮現象全体から見れば収縮量を減ずるという点で応急的効果は期待しうるものの、本質的な治療法とは言えないのが現状であった。そこで、血管の異常収縮自体を特異的に抑制可能な治療方法が切望されていた。
【特許文献１】特開２００４−４３３７４  カルシウムチャンネル阻害剤
【特許文献２】特開平９−１７６００５  オメガ−３系のポリ不飽和脂肪酸を併用するＬ−カルニチンまたはアルカノイル  Ｌ−カルニチン含有医薬組成物
【特許文献３】特開２００１−２６１５５６  平滑筋異常収縮の抑制剤
【非特許文献１】月刊バイオインダストリー２００３年１１月号「エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）による血管攣縮の予防効果」
【非特許文献２】Ｎａｋａｏ  Ｆ，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．２００２．Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．９１：９５３−９６０．
【非特許文献３】Ｓｈｉｒａｏ  Ｓ，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．２００２．Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．９１：１１２−１１９．
【非特許文献４】Ｓｏｍｌｙｏ  Ａ．Ｖ．２００２．Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．９１：８３−８４（Ｅｄｉｔｏｒｉａｌｓ）．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記の現状に鑑み、本発明は、血管の異常収縮を特異的に抑制可能であり、かつ、即効性を必要とする症状に対処するための手段として、注射薬として利用可能な水溶性の薬剤組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記課題の解決のため、本発明者らは哺乳動物の血管収縮モデルやマウスの血管攣縮モデルなどを用いて解析を進め、血管攣縮にはスフィンゴ脂質の一種であるスフィンゴシルフォスフォリルコリン(ｓｐｈｉｎｇｏｓｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｈｏｌｉｎｅ、以下ＳＰＣと略す)が重要な役割を持つこと、ＳＰＣはＲｈｏ  ｋｉｎａｓｅの活性化を介してＣａ２＋非依存的に血管平滑筋を収縮させること、更にはＳＰＣによりＦｙｎという別のタンパク質が活性化され、これが血管平滑筋細胞膜壁上のメンブレンラフトと呼ばれる構造に結合することがＲｈｏ  ｋｉｎａｓｅの活性化に重要な役割を果たしていることを明らかにした。これらの事実は、ＳＰＣの刺激による一連のＲｈｏ  ｋｉｎａｓｅ活性化過程をどこかで阻害することができれば、血管の正常な収縮を阻害することなく血管攣縮を治療できる可能性を示唆した（非特許文献１−４）。この予測の基に種々の化合物について検討を重ね、これまでに魚類などに含まれる高度不飽和脂肪酸の一種であるエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を経口投与することで実際に血管の異常収縮を予防できうることを見いだしている（特許文献３）。しかしながらＥＰＡは脂肪酸であり、注射薬としては不向きであることから、より即効性が高く、かつ注射薬として利用可能な化合物を探索し、下記化学式（Ｉ）で示される化合物、すなわちＮ−｛２−［４−（２，２−ｄｉｍｅｔｈｙｌｐｒｏｐｙｏｎｙｌｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌａｍｉｎｏ］ｂｅｎｚｏｙｌ｝ａｍｉｎｏａｃｅｔａｔｅ（薬品名：シベレスタット）に、高い血管異常収縮の抑制効果が存在することを見出し、本発明を完成させた。
【化２】
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【０００７】
シベレスタット自体は公知の化合物であり、これまでに肺気腫や慢性関節リウマチの治療剤として既に利用されてきている。その作用効果としては体内の炎症性反応に作用するエラスターゼ（好中球エラスターゼ）を特異的に阻害することによって、エラスターゼが過剰に作用して生じる疾患、例えば肺気腫やリウマチ性関節炎、アテローム性動脈硬化などを治療するというものである。本発明者らは、エラスターゼ阻害というこれまでに知られている効果とは全く異なる視点から血管の異常収縮の治療薬として本物質を検討し、既に安全性などが確認されているシベレスタットのナトリウム塩その他の可溶性塩類が、エラスターゼの特異的な阻害効果という従来知られた効果とは根本的に異なる作用効果を有しておりかつ注射薬として利用可能であるという事実を見いだしたものである。
【０００８】
本発明の第１の態様は、上記化学式（Ｉ）で示される化合物またはその薬理学上許容可能な誘導体を有効成分とする、血管異常収縮の抑制剤を提供する。
【０００９】
本発明の第２の態様は、薬理学上許容可能な誘導体が、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩のうち少なくとも１種より選択される、第１の態様に記載の血管異常収縮抑制剤を提供する。
【００１０】
本発明の第３の態様は、誘導体がナトリウム塩である、第２の態様に記載の血管異常収縮抑制剤を提供する。
【００１１】
本発明の第４の態様は、血管異常収縮が、カルシウム非依存性の異常収縮であることを特徴とする、第１から第３の態様のうちいずれか１つに記載の血管異常収縮抑制剤を提供する。
【００１２】
本発明の第５の態様は、投与形態が注射薬である、第１から第４の態様のうちいずれか１つに記載の血管異常収縮抑制剤を提供する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の提供する血管異常収縮の抑制剤を利用することにより、これまで全く治療法が確立されていなかったカルシウム非依存性の血管異常収縮に、即効性のある注射可能な治療用薬剤を提供することが可能となる。本発明の提供する化合物（シベレスタット）は、肺炎の治療薬としてこれまでに安全性などが確認されており、きわめて速やかに新規な治療薬として利用可能であると期待される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下に本発明を実施するための最良の形態を述べる。本発明の第１の態様は、前記化学式（Ｉ）に示される化合物、すなわちシベレスタットまたはその薬理学上許容可能な誘導体を有効成分とする、血管異常収縮の抑制剤を提供する。薬理学上許容可能な誘導体とは、好ましくはアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩のから選択される少なくとも１種の誘導体であって、より好ましくはナトリウム塩である。また水和物であっても良い。本明細書においては、前記式（Ｉ）に示される化合物及びその薬理学上許容可能な誘導体を総称して、シベレスタットとも称する。本発明者らはこれまでに、血管の異常収縮に対しては魚類などに含まれる不飽和脂肪酸の一種エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）が特異的な効果を有することを世界に先駆けて発見しているが、その解析の過程でＥＰＡの特定の立体構造が血管異常収縮に対しては必要であることを見いだしており、脂肪酸であるため注射薬としては利用できないＥＰＡに代わる候補物質をその立体構造に注目して探索し、その過程でシベレスタットにたどり着いたものである。図１に示すとおり、ＥＰＡとシベレスタットは全く異なる構造式を有しているが、本発明者らがその構造について分子力学的最適化を行ったところ、図２で示すように末端が炭化水素リッチなＵ字型構造をとることが予想され、この予想の下、下記実施例に示すようにシベレスタットを血管異常収縮モデルに適用したところ、血管平滑筋のカルシウム非依存性収縮を特異的に阻害することが明らかとなったのである。
【００１５】
したがって本発明の提供する血管異常収縮の抑制剤は、好ましくは通常の血管収縮として知られる血管収縮では無い、いわゆる「カルシウム非依存性の血管収縮」、すなわち体内においてはＧタンパク質結合型アゴニスト、例えばトロンボキサンや、ＳＰＣの刺激に起因する血管異常収縮、より好ましくはＳＰＣの刺激により血管細胞膜上のメンブレンラフトにおいてＲｈｏキナーゼ−Ｆｙｎタンパク質の活性化によって引き起こされる血管異常収縮に適用可能である。本発明者らがこれまでに明らかにしたＥＰＡによる血管異常収縮の抑制は、ＥＰＡがメンブレンラフトに存在するＲｈｏキナーゼ−Ｆｙｎタンパク質シグナル伝達系の活性化を抑制するというものである。シベレスタットもＥＰＡと同様、図２に示すように末端が炭化水素リッチな立体構造を取るため、おそらくＥＰＡと同様にメンブレンラフトに入り込み、異常収縮を抑制するのだと考えられる。
【００１６】
本発明の提供する血管異常収縮の抑制剤は、血管の異常収縮に起因する種々の疾患に対して治療薬として利用可能である。その投与形態などは患者さんの状態によって適宜変更すれば良く、本発明を限定するものではないが、例えば注射薬や経口薬の形で投与するのが良く、特に重篤な症状を示す場合には経口的な投与が難しいため、即効性のある注射薬として投与するのが好適である。シベレスタットの濃度、抑制剤に含まれる他の補助成分などについては疾患の状態や種類によって創薬の目的に応じ適宜使い分ければ良く、本発明を限定するものではないが、例えばシベレスタットの有効濃度として、下記実施例で示すとおり０．１ｍＭ−１ｍＭの範囲内、より好ましくは０．２−０．３ｍＭの範囲内の濃度が有効である。以下に本発明の実施例を示すが、本発明は実施例にのみ限定されるものではない。
【実施例】
【００１７】
（ブタ冠動脈標本の調整）本実施例の動物実験は全て、関係法令・規則その他に従って行われた。食肉処理場にて処理されたブタの心臓より、以下の方法で冠動脈を摘出した。冠動脈の起始部から２−３ｃｍの左前下行枝を摘出し、すぐに冷却したクレブス液（１２３ｍＭ  ＮａＣｌ、４．７ｍＭ  ＫＣｌ、１．２５ｍＭ  ＣａＣｌ２、１．２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１２ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、１５．５ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、１１．５ｍＭ  グルコース、９５％Ｏ２＋５％ＣＯ２でバブリング）中に浸して保存した。血管周囲の結合組織と血管外膜を丁寧に取り除いた後、１×４ｍｍの条片を作成した。血管内皮細胞を除去した実験では、条片の内皮面を綿棒で静かに拭い、１μＭのブラジキニンで血管弛緩反応のないことを確認した。
【００１８】
（等尺性張力測定）作成した冠動脈平滑筋条片を５ｍｌのオーガンチャンバー（３７℃のクレブス液で満たす）に懸垂し、一端を固定し、もう一端をトランスデューサー（ＴＢ−６１２Ｔ、日本光電）に連結して、等尺性張力を測定した。条片にはおよそ３００ｍｇの静止張力を負荷し、発生した張力はクレブス液中での静止張力を０％、Ｇタンパク質結合型アゴニストであり、血管壁の収縮を引き起こすトロンボキサンのアナログであるＵ４６６１９（０．１μＭ，Ｃａｙｍａｎ  ｃｈｅｍｉｃａｌ）投与時の張力を１００％として表し、これを血管収縮モデルとした。シベレスタットナトリウム（小野薬品工業）はクレブス液への溶解性が低く、ＤＭＳＯへ溶解の上０．３ｍＭを投与濃度の上限とした。
上記の血管収縮モデルを用い、シベレスタットの血管平滑筋収縮に対する影響を検討した。図３で示すように、シベレスタットナトリウムは濃度依存的にＵ４６６１９で前収縮させた冠動脈平滑筋を弛緩させた。図３Ａ，Ｂ，Ｃにおいて、グラフ横軸は時間を表し、また下の白抜ボックスはＵ４６６１９（Ａ，Ｂ）及びカリウム溶液（Ｃ）を反応させている期間を示す。グラフ縦軸は血管平滑筋の張力の相対値を示している。図中グラフ上に示す矢印はシベレスタットの投与時点を表し、付随した数字はシベレスタットの濃度（Ｍ）を表す。図３Ａは、内皮組織を除去した血管平滑筋に対する結果であり、シベレスタットを０．１−０．３ｍＭ作用させると、明瞭な弛緩反応が観察された。図３Ｂは内皮組織が付着した状態の平滑筋条片を供した結果であり、図３Ａ同様に明瞭なシベレスタットの弛緩効果が見られた。図３Ａ，Ｂの結果より、内皮組織の有無に関係なく、シベレスタットが血管平滑筋の収縮に対してこれを抑制する効果があることが示された。他方、高濃度カリウムイオン（Ｋ＋）脱分極刺激による前収縮（正常な収縮のモデル）においては、Ｕ４６６１９による前収縮と比較し、シベレスタットによる弛緩効果が見られなかった（図３Ｃ）。図３Ａ，ＢとＣとの対比から、シベレスタットは異常収縮に対してのみ、弛緩効果を示し、正常収縮には作用しないことが明らかとなった。
【００１９】
（平滑筋細胞膜電位測定）シベレスタット処理による弛緩効果が、収縮を抑制したため見られたものか、それともカリウムチャネルを介した筋肉自体の弛緩を引き起こした結果生じたものかを確認するため、シベレスタット処理時における静止膜電位を計測した。内皮細胞を除去した平滑筋条片を３ｍｌのオーガンチャンバー内に内皮側を上に向けて固定した。チャンバー内は３７℃のクレブス液を３ｍｌ／分の流速で潅流し、３ＭのＫＣｌで満たした極小ガラス電極（先端の電気抵抗＝５０−８０ＭΩ）を内皮側から挿入し、膜電位を測定した。電気信号はアンプ（Ｉｎｔｒａ７６７、Ｗｏｒｌｄ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）で増幅し、電位変化はオシロスコープ（ＳＳ７８０２、ＩＷＡＴＳＵ）で経時的に観察した。
図４にその結果を示す。図４Ａはシベレスタットと、カリウムチャネルを活性化し過分極を誘導するＬｅｖｃｒｏｍａｋａｌｉｍ（１０μＭ）処理による電位の経時変化を示したもので、グラフ中Ｌｅｖｃｒｏｍａｋａｌｉｍ処理を示すボックスの範囲では電位が変化しているのに対してシベレスタット処理を示すボックスの範囲では電位が変動しておらず、シベレスタット処理は静止膜電位には影響を与えない、すなわちシベレスタットが血管平滑筋に存在するカリウムチャネルを活性化して筋弛緩を起こしているのでは無いことが明らかとなった。図４Ｂは各処理における電位の平衡値を示しており、Ｌｅｖｃｒｏｍａｋａｌｉｍが−７０ｍＶ付近であるのに対しシベレスタットは無処理と同様の−５０ｍＶ付近であり、図４Ａの結果を裏付けた。
【００２０】
（張力と細胞内カルシウム濃度の同時測定）内皮細胞を除去した平滑筋条片にＣａ２＋感受性蛍光色素であるＦｕｒａ−２を負荷し、等尺性張力測定と細胞内カルシウムイオン濃度［Ｃａ２＋］ｉの同時測定を行った。脂溶性のアセトキシメチルエステル（ＡＭ）基を付けたＡＭ体のＦｕｒａ−２ＡＭ（Ｄｏｊｉｎｄｏ）を１２．５μＭ含んだクレブス液中に条片を入れ、３７℃で４時間インキュベートした（９５％Ｏ２＋５％ＣＯ２でバブリング）。石英製オーガンチャンバー内で等尺性張力測定を行いながら、蛍光光度計（ＣＡＭ−２３０、日本分光）を用いて３４０ｎｍと３８０ｎｍの２波長励起を行った。３４０ｎｍ励起光と３８０ｎｍ励起光それぞれの５００ｎｍにおける蛍光を計測し、その比（Ｆ３４０／Ｆ３８０）を［Ｃａ２＋］ｉとして測定した。張力と［Ｃａ２＋］ｉの変化はクレブス液中での値を０％、１１８ｍＭＫ＋溶液（前記クレブス液のＫ＋濃度とＮａ＋濃度を逆転させたもの）中での値を１００％として表した。
図５にこれらの結果を示す。図５Ａ上のグラフは［Ｃａ２＋］ｉの経時変化を示しており、図５Ａ下のグラフ（張力測定の結果）と時間軸は一致している。Ｕ４６６１９にて［Ｃａ２＋］ｉを上昇させて収縮させた平滑筋条片にシベレスタットを投与すると、［Ｃａ２＋］ｉを低下させることなく（上のグラフで変化無し）平滑筋を弛緩させることが明らかとなった。また、図５Ｂに示すとおり、Ｕ４６６１９と高濃度Ｋ＋存在下でＣａ２＋を累積投与して［Ｃａ２＋］−張力カーブを描くと、高濃度K＋のみの場合（グラフ◇）と比べてＵ４６６１９処理によってこのグラフが左側にシフトし（グラフ○）、これは低濃度のカルシウムで収縮がおこる「高感受性」となる事を示しているが、反対にＵ４６６１９処理後にシベレスタット処理を行うと、このカーブを右方・下方に偏移させ（グラフ●）、シベレスタットがＵ４６６１９によるカルシウム感受性の増加を抑制していることが示された。本発明者らが非特許文献３で明らかにしてきた様に、カルシウム感受性の増大はＳＰＣ刺激によって引き起こされる血管異常収縮で特徴的に見られる現象であり、シベレスタットがこれを抑制したことは血管異常収縮の抑制剤としての有効性を示している。
【００２１】
（スキンド法）内皮細胞を除去した平滑筋条片をβ−ｅｓｃｉｎ（片山化学）処理することにより、細胞膜の情報伝達機構を温存したまま細胞膜に小孔を空けた。１５０−２００ｍｍ×２ｍｍの条片を３０ｍＭのβ−ｅｓｃｉｎを含む細胞内液（７４．１ｍＭ  Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ、２ｍＭ  Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ、４．５ｍＭ  ＭｇＡＴＰ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、１０ｍＭ  クレアチンリン酸、３０ｍＭ  ＰＩＰＥＳ、１μＭ  ＦＣＣＰ、１μＭ  ロイペプチン、１μＭ  カルモジュリン）でインキュベートし、ｐＣａ６．３溶液（１０ｍＭ  ＥＧＴＡで緩衝させた低濃度Ｃａ２＋を含む細胞内液）に対する収縮反応を観察した。スキンド標本では、ｐＣａ４．５で最大収縮が得られた。このスキンド標本を用い、シベレスタットの効果を確認した。
図６にこれらの結果を示す。図６Ａにおいて、Ｕ４６６１９＋ＧＴＰのボックスで示す範囲で見られた収縮反応（上側への盛り上がり）は、シベレスタット処理（黒塗りボックス）によって完全に抑制された。図６Ｂはこれを棒グラフで示したものであり、Ｕ４６６１９＋ＧＴＰの刺激により誘導される収縮（左側）はシベレスタット処理（右側）によってほとんど０にまで抑えられたことを示している。図６Ｃは上記実験系においてＵ４６６１９＋ＧＴＰの処理無しでシベレスタットを処理した結果を示しており、ここでは何の収縮抑制効果も見られないことから、シベレスタットの影響は血管そのものの収縮を抑制するのではなく、Ｕ４６６１９など特定の刺激によって引き起こされる収縮を抑制するものであることが示された。すなわち、ｐＣａ６．３溶液中でＵ４６６１９（３０ｎＭ）とＧＴＰ（１０μＭ）を投与して得られた収縮（カルシウム非依存製収縮）を、０．３ｍＭのシベレスタットは完全に抑制し、反対に、カルシウム依存性の収縮（ｐＣａ６．３溶液中）に対しては、シベレスタットは影響を与えない事が示された。
【産業上の利用可能性】
【００２２】
上記実施例で明らかにされた通り、本発明の提供するシベレスタットを主成分とする薬剤は血管の異常収縮を特異的に、通常の収縮に影響することなく抑制することが期待され、これは血管異常収縮に起因する種々の疾患に対する治療薬として、医療産業上利用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】シベレスタットとエイコサペンタエン酸の化学構造を比較して示す。
【図２】シベレスタットとエイコサペンタエン酸の化学構造を、その立体構造に着目し比較して示す。
【図３】Ｕ４６６１９（トロンボキサンのアナログ）投与（Ａ，Ｂ）及び高濃度カリウム溶液処理（Ｃ）によって引き起こされる血管収縮に対する、シベレスタットの効果を示す。（Ａ）内皮を取り除いた血管平滑筋での測定結果を示す。（Ｂ）内皮が付着したままの血管平滑筋での測定結果を示す。（Ｃ）高濃度カリウム溶液前処理での測定結果を示す。
【図４】シベレスタット処理の静止膜電位への影響を示す。
【図５】（Ａ）Ｕ４６６１９存在下でシベレスタット処理を行った標本における、細胞内カルシウム濃度及び張力の経時変化を示す。（Ｂ）Ｕ４６６１９処理によって引き起こされるカルシウム感受性の上昇に対する、シベレスタット処理の影響を示す。
【図６】スキンド法を用いた、Ｕ４６６１９存在下における血管平滑筋収縮に対するシベレスタット処理の影響を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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