(57)【要約】【課題】γ線滅菌がされた少数の器具で実施できる多血小板血漿分離方法及び多血小板血漿分離装置を提供する。【解決手段】多血小板血漿分離装置は、採血針が取付可能な排出口１１を有するシリンジ筒１２と、排出口１１に着脱可能なキャップ１３と、シリンジ筒１２を液密に封止してシリンジ筒１２内を往復動されるガスケット１４と、ガスケット１４に着脱可能に設けられたプランジャ１５とを具備する。この多血小板血漿分離装置によれば、採血に使用したシリンジを用いて遠心分離を行って、多血小板血漿を得ることができる。これにより、γ線滅菌を施した少数の器具で多血小板血漿の分離を実現できる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
排出口を有するシリンジ筒と、該シリンジ筒を液密に封止してシリンジ筒内を往復動されるガスケットと、該ガスケットに設けられたプランジャと、を具備するシリンジを用いた多血小板血漿分離方法であって、
採血された血液が満たされた上記シリンジ筒の排出口を封止する第１ステップと、
上記シリンジ筒の排出口側を遠心移動方向として、上記シリンジ筒内の血液を、赤血球を含む第１区分と血小板及び血漿を含む第２区分とに遠心分離する第２ステップと、
上記シリンジ筒内のガスケットを移動させて、上記第１区分を上記排出口から排出する第３ステップと、
上記シリンジ筒内のガスケットを移動させて、遠心分離された上記第２区分から多血小板血漿を上記排出口から排出する最終ステップと、を含む多血小板血漿分離方法。
【請求項２】
上記最終ステップは、遠心分離された上記第２区分から上記排出口側の所定量を多血小板血漿として排出する請求項１に記載の多血小板血漿分離方法。
【請求項３】
上記第２ステップにおける遠心分離が弱遠心であり、
上記第３ステップの後、さらに、
上記第２区分が満たされた上記シリンジ筒の排出口を封止する第４ステップと、
上記シリンジ筒の排出口側を遠心移動方向として、上記シリンジ筒内の第２区分に対して強遠心を行う第５ステップと、を含む請求項１又は２に記載の多血小板血漿分離方法。
【請求項４】
上記プランジャは、上記ガスケットに着脱可能に設けられたものであり、
上記第２ステップ及び上記第５ステップにおいて、上記プランジャを上記ガスケットから取り外して遠心分離を行い、
上記第３ステップ及び上記最終ステップにおいて、上記プランジャを上記ガスケットに取り付けて該ガスケットを移動させる請求項３に記載の多血小板血漿分離方法。
【請求項５】
上記第２ステップにおける遠心分離が強遠心である請求項１又は２に記載の多血小板血漿分離方法。
【請求項６】
上記プランジャは、上記ガスケットに着脱可能に設けられたものであり、
上記第２ステップにおいて、上記プランジャを上記ガスケットから取り外して遠心分離を行い、
上記第３ステップ及び上記最終ステップにおいて、上記プランジャを上記ガスケットに取り付けて該ガスケットを移動させる請求項５に記載の多血小板血漿分離方法。
【請求項７】
請求項１から６のいずれかに記載の多血小板血漿分離方法により得られた多血小板血漿。
【請求項８】
採血針が取付可能な排出口を有するシリンジ筒と、
上記排出口に着脱可能なキャップと、
上記シリンジ筒を液密に封止してシリンジ筒内を往復動されるガスケットと、
上記ガスケットに着脱可能に設けられたプランジャと、を具備する多血小板血漿分離装置。
【請求項９】
上記プランジャは、ねじ込み式により上記ガスケットに対して着脱可能である請求項８に記載の多血小板血漿分離装置。
【請求項１０】
上記シリンジ筒、上記キャップ、上記ガスケット及び上記プランジャが滅菌袋に密封されたものである請求項８又は９に記載の多血小板血漿分離装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シリンジを用いた多血小板血漿分離方法及び多血小板血漿分離装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
多血小板血漿（以下、「ＰＲＰ」と称されることがある。）とは、血小板を多く含む血漿である。血球成分を含む全血においては、赤血球が約９５％、白血球が３％、血小板が約１％の割合で含まれる。これに対し、多血小板血漿においては、血小板が高い割合で含まれる。ＰＲＰにおける血小板の割合は特に定義がない。一般に、全血における血漿の割合が約５５％であることを考慮すると、血球成分が除去された血漿に含まれる血小板の割合は約２％程度と考えられる。この約２％程度より明らかに高い割合の血小板が、ＰＲＰに含まれる。
【０００３】
ＰＲＰは、全血を遠心分離することにより得られる。詳細に説明すると、まず、全血を弱遠心して赤血球を分離して血漿を得る。この血漿には白血球及び血小板が含まれる。さらに、得られた血漿を強遠心する。これにより、血小板は遠心力が加わる方向（以下、本明細書において遠心分離方向とも称する。）に集中し、上清には血小板がほぼ含まれない。強遠心された血漿から上清を取り除き、或いは遠心分離方向（下側）の所定量のみを取り出して、ＰＲＰを得る（特許文献１参照）。
【０００４】
血小板のα顆粒中には、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ−β、ＩＬＧＦなどの成長因子が存在することが知られている。これら成長因子が創傷治癒や組織再生に効果的な役割を果たすことが着目されている。例えば、歯周組織再生法などの再生医療において、ＰＲＰの利用が期待されている（特許文献２、特許文献３及び非特許文献１参照）。
【０００５】
【特許文献１】特開２００６−７８４２８号公報
【特許文献２】特開２００６−２３２８３４号公報
【特許文献３】特開２００５−２７８９１０号公報
【非特許文献１】多血小板血漿の口腔への応用、ロバート・Ｅ・マルクス著、クィーン・テッセンス出版社出版
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ＰＲＰを再生医療に用いる場合には、安全性の観点から、ＰＲＰを調整する器具はすべてγ線滅菌を施すことが要求される。しかしながら、例えば特許文献１に記載されている真空採血管のように、ゴム栓を使用した容器に対してγ線滅菌を施すと、ゴム栓が劣化するという問題がある。ゴム栓の劣化は、ゴム栓に含まれる添加物の滲出、破断片や砕片の発生を惹起し、これら添加物や破断片などが血液やＰＲＰに混入するおそれがある。
【０００７】
本発明は、これらの事情に問題に鑑みてなされたものであり、γ線滅菌が可能な少数の器具で実施できる多血小板血漿分離方法及び多血小板血漿分離装置を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
(1)  本発明に係る多血小板血漿分離方法は、排出口を有するシリンジ筒と、該シリンジ筒を液密に封止してシリンジ筒内を往復動されるガスケットと、該ガスケットに設けられたプランジャと、を具備するシリンジを用いる。本多血小板血漿分離方法は、採血された血液が満たされた上記シリンジ筒の排出口を封止する第１ステップと、上記シリンジ筒の排出口側を遠心移動方向として、上記シリンジ筒内の血液を、赤血球を含む第１区分と血小板及び血漿を含む第２区分とに遠心分離する第２ステップと、上記シリンジ筒内のガスケットを移動させて、上記第１区分を上記排出口から排出する第３ステップと、上記シリンジ筒内のガスケットを移動させて、遠心分離された上記第２区分から多血小板血漿を上記排出口から排出する最終ステップと、を含む。
【０００９】
シリンジは、採血に使用される。シリンジ筒の排出口には採血針が取り付け可能である。採血針を取り付けたシリンジを用いて、通常の方法で採血が行われる。この採血により、シリンジ筒は血液（全血）で満たされる。第１ステップでは、シリンジの排出口を封止してシリンジ筒を密封状態にする。つまり、採血を行った後、シリンジ筒から採血針を取り外す。そして、シリンジ筒の排出口をキャップで封止する。
【００１０】
第２ステップでは、密封したシリンジを用いて遠心分離を行う。この遠心分離において、シリンジ筒の排出口側を遠心移動方向とする。ここで、「遠心移動方向」とは、遠心分離において遠心力が作用する方向であり、通常は下側である。この遠心分離により、シリンジ筒に密封された血液は、第１区分と第２区分とに分離される。第１区分は、赤血球を含む画分である。第２区分は血小板及び血漿を含む画分である。第１区分は、遠心分離により遠心移動方向、つまり下側に分離される。この遠心分離は、強遠心としても弱遠心としてもよい。強遠心であれば、第２区分において、遠心移動方向に血小板が移動して、多血小板血漿が第１区分との境界付近に生成される。弱遠心であれば、第１区分を排出した後、第２区分に対して再び強遠心を行うことにより、多血小板血漿が生成される。
【００１１】
第３ステップでは、シリンジ筒から第１区分を排出する。遠心分離を行った後、シリンジ筒からキャップを外して排出口を開封する。その状態で、プランジャを操作してガスケットを排出口側へ移動させる。これにより、シリンジ筒の排出口から第１区分が排出される。シリンジ筒から第１区分を完全に排出した後、ガスケットの移動を中止する。
【００１２】
最終ステップでは、シリンジ筒から多血小板血漿を排出する。第２ステップにおける遠心分離が強遠心であれば、第１区分を完全に排出した後、続いてガスケットを移動させて第２区分に生成された多血小板血漿を排出口から排出する。第２ステップにおける遠心分離が弱遠心であれば、第１区分を排出した後、第２区分に対して強遠心を行った後、ガスケットを移動させて第２区分に生成された多血小板血漿を排出口から排出する。これにより、採血された血液から多血小板血漿が分離される。
【００１３】
(2)  上記最終ステップとして、遠心分離された上記第２区分から上記排出口側の所定量を多血小板血漿として排出することとしてもよい。
【００１４】
(3)  上記第２ステップにおける遠心分離が弱遠心であってもよい。その場合、上記第３ステップの後、さらに、上記第２区分が満たされた上記シリンジ筒の排出口を封止する第４ステップと、上記シリンジ筒の排出口側を遠心移動方向として、上記シリンジ筒内の第２区分に対して強遠心を行う第５ステップと、を含んでもよい。
【００１５】
第２ステップを弱遠心とすることにより、血液（全血）を第１区分及び第２区分に分離することができる。また、第１区分と第２区分との境界付近に血小板が集中することがなく、第１区分の排出に伴う血小板のロスを少なくすることができる。第５ステップを強遠心とすることにより、第２区分から高濃度の多血小板血漿を分離することができる。
【００１６】
上記第２ステップにおける遠心分離が弱遠心であれば、得られた第２区分に対してさらに強遠心を行う。第４ステップでは、シリンジの排出口を封止してシリンジ筒を密封状態にする。シリンジ筒には第２区分のみが残っている。このシリンジ筒の排出口をキャップで封止する。第５ステップでは、密封したシリンジを用いて強遠心を行う。この遠心分離において、シリンジ筒の排出口側を遠心移動方向とする。この遠心分離により、第２区分が遠心分離され、血小板が遠心移動方向、つまり下側に移動する。これにより、第２区分は、上側がほぼ血漿成分のみの上清となり、下側（排出口側）が血小板が多い多血小板血漿となる。したがって、ガスケットの移動により排出口から多血小板血漿が排出される。
【００１７】
(4)  上記プランジャは、上記ガスケットに着脱可能に設けられたものであってもよい。上記第２ステップ及び上記第５ステップにおいて、上記プランジャを上記ガスケットから取り外して遠心分離を行い、上記第３ステップ及び上記最終ステップにおいて、上記プランジャを上記ガスケットに取り付けて該ガスケットを移動させてもよい。
【００１８】
第２ステップ及び第５ステップにおいて、ガスケットからプランジャが取り外されることにより、シリンジ筒からプランジャが突出しないので、遠心分離においてシリンジ筒の取り扱いが容易である。また、プランジャが不用意に操作されることがない。また、遠心分離においてプランジャの重量がガスケットに作用しないので、シリンジ筒からキャップが外れるおそれを軽減できる。一方、第３ステップ及び最終ステップにおいて、ガスケットにプランジャが取り付けられることにより、ガスケットが容易に移動できる。
【００１９】
(5)  上記第２ステップにおける遠心分離は強遠心であってもよい。これにより、１回の遠心分離によって血液から多血小板血漿を分離することができる。
【００２０】
(6)  上記プランジャは、上記ガスケットに着脱可能に設けられたものであってもよい。上記第２ステップにおいて、上記プランジャを上記ガスケットから取り外して遠心分離を行い、上記第３ステップ及び上記最終ステップにおいて、上記プランジャを上記ガスケットに取り付けて該ガスケットを移動させてもよい。
【００２１】
第２ステップにおいて、ガスケットからプランジャが取り外されることにより、シリンジ筒からプランジャが突出しないので、遠心分離においてシリンジ筒の取り扱いが容易である。また、プランジャが不用意に操作されることがない。また、遠心分離においてプランジャの重量がガスケットに作用しないので、シリンジ筒からキャップが外れるおそれを軽減できる。一方、第３ステップ及び最終ステップにおいて、ガスケットにプランジャが取り付けられることにより、ガスケットが容易に移動できる。
【００２２】
(7)  本発明は、上記多血小板血漿分離方法により得られた多血小板血漿として捉えることができる。
【００２３】
(8)  本発明に係る多血小板血漿分離装置は、採血針が取付可能な排出口を有するシリンジ筒と、上記排出口に着脱可能なキャップと、上記シリンジ筒を液密に封止してシリンジ筒内を往復動されるガスケットと、上記ガスケットに着脱可能に設けられたプランジャと、を具備する。
【００２４】
シリンジ筒は、採血針が取り付けられて採血に使用される。採血によりシリンジ筒には血液（全血）が満たされる。シリンジ筒から採血針が取り外され、排出口がキャップされることにより、シリンジ筒内に血液が密封される。シリンジ筒は、この状態で遠心分離が行われる。遠心分離により、血液が赤血球を含む画分（第１区分）と、白血球、血小板及び血漿を含む画分（第２区分）とに分離される。シリンジ筒の排出口から第１区分が排出されると、シリンジ筒には第２区分が残る。先の遠心分離が強遠心であれば、第２区分には多血小板血漿が生成されている。先の遠心分離が弱遠心であれば、第２区分に対して強遠心が行われることにより、第２区分は、上側がほぼ血漿成分のみの上清となり、下側（排出口側）が血小板が多い多血小板血漿となる。多血小板血漿は、シリンジ筒の排出口から排出される。
【００２５】
シリンジ筒を用いた遠心分離において、ガスケットからプランジャが取り外されることにより、シリンジ筒からプランジャが突出しないので、シリンジ筒の取り扱いが容易である。また、プランジャが不用意に操作されることがない。また、遠心分離においてプランジャの重量がガスケットに作用しないので、シリンジ筒からキャップが外れるおそれを軽減できる。一方、血球成分の排出及び多血小板血漿の排出において、ガスケットにプランジャが取り付けられることにより、ガスケットが容易に移動できる。
【００２６】
(9)  上記プランジャは、ねじ込み式により上記ガスケットに対して着脱可能なものであってもよい。これにより、ガスケットに着脱可能なプランジャが簡易に実現される。また、プランジャをガスケットへ着脱することを繰り返すことができる。
【００２７】
(10)  上記シリンジ筒、上記キャップ、上記ガスケット及び上記プランジャが滅菌袋に密封されたものが考えられる。これらがキットとして１つの滅菌袋に密封されることにより、使い勝手が向上する。
【発明の効果】
【００２８】
本発明に係る多血小板血漿分離方法及び多血小板血漿分離装置によれば、採血に使用したシリンジを用いて遠心分離を行って、多血小板血漿を得ることができる。これにより、γ線滅菌を施した少数の器具で多血小板血漿の分離を実現できる。また、シリンジを用いることにより、第１区分を排出することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
以下、本発明の好ましい実施形態を説明する。なお、本実施形態は本発明の一実施態様にすぎず、本発明の要旨を変更しない範囲で実施態様を変更できることは言うまでもない。
【００３０】
図１は、本発明の実施形態に係る多血小板血漿分離装置１０の外観構成を示す分解斜視図である。図２は、多血小板血漿分離装置１０の内部構成を示す縦断面図である。
【００３１】
図１及び図２に示されるように、多血小板血漿分離装置１０は、採血針が取付可能な排出口１１を有するシリンジ筒１２と、排出口１１に着脱可能なキャップ１３と、シリンジ筒１２内を往復動されるガスケット１４と、ガスケット１４に着脱可能に設けられたプランジャ１５とを具備する。
【００３２】
シリンジ筒１２は、ガスケット１４及びプランジャ１５とともにシリンジを構成する。シリンジ筒１２は、ほぼ円筒形状であり、一方の端部が縮径されて針取付部２０が形成されている。針取付部２０の内部空間は、シリンジ筒１２の内部空間と連続している。針取付部２０により本発明に係る排出口１１が形成されている。針取付部２０には、採血針が取り付け可能である。シリンジ筒１２の他方の端部は、縮径されることなく開口されている。この他方の端部からシリンジ筒１２の内部空間へプランジャ１５が進退される。シリンジ筒１２の他方の端部には、シリンジ筒１２の外周側へ突出する鍔２１が形成されている。鍔２１はハンドリングを向上させるためのものであり、シリンジ筒１２及びプランジャ１５の操作の際に鍔２１に指が掛けられる。
【００３３】
シリンジ筒１２の素材はγ線滅菌が可能なものであれば特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離装置１０がディスポーザル品とされることや、γ線滅菌が施されることを考慮すると、シリンジ筒１２をポリプロピレンの成形品とすることが一般的である。シリンジ筒１２の内部空間に満たされた血液や血漿などを目視確認するために、シリンジ筒１２は、透明ないし半透明であることが好ましい。シリンジ筒１２の容量は特に限定されない。シリンジ筒１２に容量を示す目盛りが付されていると、内部空間に満たされた液体の量などが容易に把握できるので好ましい。
【００３４】
キャップ１３は、シリンジ筒１２の排出口１１を封止する。図１及び図２に示されるように、キャップ１３は、大径部３０及び小径部３１を有する。小径部３１は、大径部３０の内側の空間に配置されている。小径部３１は、シリンジ筒１２の針取付部２０に外嵌可能な管形状である。小径部３１の内部には、シリンジ筒１２の排出口１１に嵌入可能な栓部３２が配設されている。大径部３０は、キャップ１３をシリンジ筒１２に着脱する際の持ち手として機能する。キャップ１３がシリンジ筒１２に取り付けられると、図２に示されるように、小径部３１が針取付部２０の外周面に密着し、栓部３２が排出口１１に嵌入して、排出口１１が液密に封止される。
【００３５】
キャップ１３の素材はγ線滅菌が可能なものであれば特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離装置１０がディスポーザル品とされることや、γ線滅菌が施されることを考慮すると、キャップ１３としてポリプロピレンやエラストマーの成形品が採用されうる。
【００３６】
ガスケット１４は、シリンジ筒１２の内部に挿入されてシリンジ筒１２を液密に封止する。ガスケット１４は、液密状態を維持したまま、シリンジ筒１２内を往復動可能である。ガスケット１４の往復動により、シリンジ筒１２の内部に密封可能な液体の容量が変化する。図１に示されるように、ガスケット１４は、シリンジ筒１２の内径に対応した径の円柱形状である。図２に示されるように、ガスケット１４の一方の端面は円錐形状に突出されている。この端面の形状は、シリンジ筒１２の奥部の形状に対応している。プランジャ１５と接続されるガスケット１４の他方の端面には、取付孔４０が形成されている。取付孔４０はガスケット１４の円形の端面の中心に形成されている。取付孔４０は円孔であり、その内周面に雌ネジ４１が形成されている。
【００３７】
ガスケット１４の素材はγ線滅菌が可能なものであれば特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離装置１０がディスポーザル品とされることや、γ線滅菌が施されることを考慮すると、ガスケット１４としてエラストマーの成形品が採用されうる。
【００３８】
プランジャ１５は、ねじ込み式によりガスケット１４に対して着脱可能なものである。プランジャ１５の全体形状は、シリンジ筒１２の内部空間に挿入可能な外形であって、シリンジ筒１２の軸方向（図１の１点鎖線方向、図２における上下方向）の長さより十分に長い。したがって、ガスケット１４をシリンジ筒１２の奥部（排出口１１側）に押し込んだ状態で、プランジャ１５の一部がシリンジ筒１２の反対側の端部から突出する。
【００３９】
プランジャ１５は、雄ネジ部５０と軸部５１と端板５２とを有する。雄ネジ部５０は、ガスケット１４の取付孔４０にねじ込まれる。取付孔４０の雌ネジ４１と雄ネジ部５０とは噛合する。これにより、プランジャ１５がガスケット１４に対してねじ込み式により着脱される。この着脱は繰り返し行うことができる。
【００４０】
軸部５１は、横断面（軸方向と直交する方向）が十字形状である。軸部５１の断面形状は成形加工の容易性や強度などを考慮して適宜選択されうる。軸部５１の一方端に雄ネジ部５０が配置され、他方端に端板５２が配置されている。端板５２は、円板形状の平板であり、軸部５１の軸方向に垂直に接続されている。端板５２はプランジャ１５のハンドリングを向上させるためのものであり、プランジャ１５がシリンジ筒１２に対して押し込まれる際に指が押し当てられ、プランジャ１５がシリンジ筒１２から引き出される際に持ち手となる。
【００４１】
プランジャ１５の素材はγ線滅菌が可能なものであれば特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離装置１０がディスポーザル品とされることや、γ線滅菌が施されることを考慮すると、プランジャ１５をポリプロピレンの成形品とすることが一般的である。
【００４２】
再生医療に適した多血小板血漿が得ることを考慮すると、多血小板血漿分離装置１０を構成する各部材のうち、採血された血液と接触する少なくともシリンジ筒１２、キャップ１３、及びガスケット１４は、γ線滅菌される。また、シリンジ筒１２、キャップ１３、ガスケット１４及びプランジャ１５を滅菌袋に密封してキットとすることにより、多血小板血漿分離装置１０の使い勝手が向上する。キットの構成品は、少なくともシリンジ筒１２、キャップ１３、ガスケット１４及びプランジャ１５を各１個含んでいればよいが、例えば、後述される多血小板血漿分離方法における２回の遠心分離において用いるキャップ１３を別品とする場合には、１キットにキャップ１３が２個含まれてもよい。また、本実施形態に係るシリンジ筒１２、キャップ１３、ガスケット１４、及びプランジャ１５の構成は一例であり、本発明の要旨を変更しない範囲において、各部材の構成の一部を他の公知の部材の構成に変更しうる。
【００４３】
以下に、本発明に係る多血小板血漿分離方法が説明される。本実施形態に係る多血小板血漿分離方法は、弱遠心と強遠心との２回の遠心分離を行う態様である。この多血小板血漿分離方法は、上記多血小板血漿分離装置１０を用いて行われ、６つの主要なステップからなる。第１ステップでは、採血された血液が満たされたシリンジ筒１２の排出口１１を封止する。第２ステップでは、シリンジ筒１２の排出口１１側を遠心移動方向として、シリンジ筒１２内の血液を、赤血球を含む第１区分と、白血球、血小板及び血漿を含む第２区分とに遠心分離する。第３ステップでは、シリンジ筒１２内のガスケット１４を移動させて、第１区分を排出口１１から排出する。第４ステップでは、第２区分が満たされたシリンジ筒１２の排出口１１を封止する。第５ステップでは、シリンジ筒１２の排出口１１側を遠心移動方向として、シリンジ筒１２内の第２区分に対して遠心分離を行う。最終ステップでは、シリンジ筒１２内のガスケット１４を移動させて、遠心分離された第２区分から多血小板血漿を排出口１１から排出する。これら各ステップが、図３から図５を用いて以下に詳細に説明される。図３から図５は、多血小板血漿分離方法の各ステップにおける多血小板血漿分離装置１０の状態を示す断面図である。
【００４４】
第１ステップでは、図３（ａ）に示されるように、シリンジ筒１２の排出口１１をキャップ１３で封止してシリンジ筒１２を密封状態にする。シリンジ筒１２、ガスケット１４、及びプランジャ１５からなるシリンジは、採血に使用される。採血する際には、シリンジ筒１２の排出口１１には採血針が取り付けられる。また、プランジャ１５はガスケット１４に取り付けられる。採血は通常の方法であり、詳細な説明は省略される。この採血により、シリンジ筒１２は血液６０で満たされる。血液６０は全血であり、赤血球、白血球、血小板、血漿などを含む。採血後に、シリンジ筒１２の排出口１１から採血針を取り外して、キャップ１３を用いて排出口１１を封止する。これにより、図３（ａ）に示されるように、シリンジ筒１２が密封状態となる。
【００４５】
第２ステップでは、密封したシリンジを用いて１回目の遠心分離を行う。この遠心分離に先だって、図３（ｂ）に示されるように、プランジャ１５をガスケット１４から取り外す。これにより、シリンジ筒１２からプランジャ１５が突出しないので、遠心分離においてシリンジ筒１２の取り扱いが容易である。また、遠心分離において、プランジャ１５が不用意に操作されることがない。さらに、遠心分離においてプランジャ１５の重量がガスケット１４に作用しないので、シリンジ筒１２からキャップ１３が外れるおそれを軽減できる。
【００４６】
この遠心分離において、シリンジ筒１２の排出口１１側を遠心移動方向とする。ここで、「遠心移動方向」とは、遠心分離において遠心力が作用する方向であり、通常は下側である。また、第２ステップにおける遠心分離は、弱遠心である。弱遠心とは、血液の遠心分離において慣用されており、一般に、「全血を赤血球とその他（白血球、血小板、血漿）に分離する遠心分離」（非特許文献１参照）と定義される。具体的には、遠心分離条件が約５００〜２５００ｒｐｍの範囲における遠心分離が弱遠心とされる。遠心分離に用いられる遠心分離装置は一般的なものなので、詳細な説明は省略される。
【００４７】
この遠心分離により、シリンジ筒１２に密封された血液６０は、第１区分６１と第２区分６２とに分離される。第１区分６１は、赤血球画分６１である。第２区分６２は、白血球、血小板及び血漿を含む画分である。図３（ｃ）に示されるように、第１区分６１は、遠心分離により遠心移動方向、つまりシリンジ筒１２の下側に分離される。
【００４８】
第３ステップでは、シリンジ筒１２から第１区分６１を排出する。遠心分離を終了した後、図４（ａ）に示されるように、プランジャ１５をガスケット１４に取り付ける。これにより、ガスケット１４が容易に移動できる。そして、図４（ｂ）に示されるように、シリンジ筒１２からキャップ１３を外して排出口１１を開封する。その状態で、プランジャ１５を操作してガスケット１４を排出口１１側へ移動させる。これにより、シリンジ筒１２の排出口１１から第１区分６１が排出される。シリンジ筒１２から第１区分６１を完全に排出した後、ガスケット１４の移動を中止する。これにより、シリンジ筒１２には第２区分６２のみが残る。排出された第１区分６１は廃棄するか、別目的に使用する。
【００４９】
第２ステップにおける遠心分離を弱遠心とすることにより、血液６０を第１区分６１と第２区分６２とに分離するとともに、第２区分６２においては血小板をほぼ均等に分散させることができる。つまり、第１区分６１との境界付近に血小板が集中することがなく、第１区分６１の完全な排出のために、第２区分６２をも若干排出することに伴う血小板のロスを少なくすることができる。
【００５０】
第４ステップでは、シリンジ筒１２の排出口１１をキャップ１３で封止してシリンジ筒１２を密封状態にする。図４に示されるように、シリンジ筒１２には第２区分６２のみが残っている。このシリンジ筒１２の排出口１１をキャップ１３で封止する。この際、キャップ１３は、第１ステップで使用したものと同じものを使用してもよいが、キャップに付着した血液によるコンタミネーションを避けるためには、別品を使用することが好ましい。
【００５１】
第５ステップでは、密封したシリンジ筒１２を用いて２回目の遠心分離を行う。この遠心分離に先だって、図５（ａ）に示されるように、プランジャ１５をガスケット１４から取り外す。これにより、シリンジ筒１２からプランジャ１５が突出しないので、遠心分離においてシリンジ筒１２の取り扱いが容易である。また、遠心分離において、プランジャ１５が不用意に操作されることがない。さらに、遠心分離においてプランジャ１５の重量がガスケット１４に作用しないので、シリンジ筒１２からキャップ１３が外れるおそれを軽減できる。
【００５２】
この遠心分離において、シリンジ筒１２の排出口１１側を遠心移動方向とする。また、第５ステップにおける遠心分離は、強遠心である。強遠心とは、血液の遠心分離において慣用されており、一般に、「血小板、白血球と残留赤血球を血漿から分離する遠心分離」（非特許文献１参照）と定義される。本発明では、第２区分の下方に血小板を濃縮する遠心分離を強遠心という。具体的には、遠心分離条件が約３０００〜４０００ｒｐｍの範囲における遠心分離が強遠心とされる。この遠心分離により、図５（ｂ）に示されるように、第２区分６２が遠心分離され、血小板が遠心移動方向、つまりシリンジ筒１２の下側に移動する。また、この遠心分離を強遠心とすることにより、第２区分６２から高濃度のＰＲＰ６３を分離することができる。なお、図５（ｂ）において、第２区分６２中に示された横線の密度が高いほど、血小板濃度が高いことが示されている。実際には、遠心分離された第２区分６２において、上側から下側へ向けて形成されるほぼ透明から濃い黄色へのグラデーションにより、血小板が下側に移動したことが目視により確認できる。
【００５３】
最終ステップでは、シリンジ筒１２からＰＲＰを排出する。遠心分離を終了した後、図５（ｃ）に示されるように、プランジャ１５をガスケット１４に取り付ける。これにより、ガスケット１４が容易に移動できる。そして、シリンジ筒１２からキャップ１３を外して排出口１１を開封する。その状態で、プランジャ１５を操作してガスケット１４を排出口１１側へ移動させる。２回目の遠心分離により第２区分６２中の血小板が遠心移動して、第２区分６２は、上側がほぼ血漿成分のみの上清となり、下側（排出口１１側）が血小板が多いＰＲＰ６３となる。したがって、ガスケット１４の移動により排出口１１からＰＲＰ６３が排出される。排出されたＰＲＰ６３は、滅菌された容器７０で受け取る。これにより、採血された血液６０からＰＲＰ６３が分離される。
【００５４】
ＰＲＰ６３における血小板の濃度は必ずしも明確に定義されていないが、例えば、１ｍＬにおける血小板数を血小板の濃度とした場合、採取された全血における血小板の濃度に対して３〜７倍に濃縮されたものがＰＲＰ６３とされる。また、本発明に係る多血小板血漿分離方法においては、最終ステップにおいて遠心分離された第２区分６２のうちの排出口１１側の所定量をＰＲＰ６３とすることが考えられる。本実施形態に係る多血小板血漿分離方法によれば、例えば、約１０ｍＬの血液６０から約１ｍＬのＰＲＰ６３を得ることができる。
【００５５】
なお、本実施形態では、第３ステップにおける第１区分６１の排出、及び最終ステップにおけるＰＲＰ６３の排出を、シリンジ筒１２の排出口１１から容器７０などに直接排出することとしたが、これらの廃棄の容易や感染防止を考慮して、シリンジ筒１２の排出口にチューブ及び三方活栓などを接続して、排出される第１区分６１やＰＲＰ６３を別のシリンジ内に吸引してもよい。
【００５６】
また、本実施形態では、本発明に係る多血小板血漿分離方法として、弱遠心と強遠心との２回の遠心分離を行う態様が説明されているが、本発明に係る多血小板血漿分離方法は、必ずしも２回の遠心分離を必要とせず、１回の遠心分離のみで行うこともできる。具体的には、第１ステップを行った後、第２ステップにおいて、シリンジ筒１２の排出口１１側を遠心移動方向として、シリンジ筒１２内の血液６０を強遠心する。これにより、血液６０は、赤血球を含む第１区分６１と、バフィーコート及び血漿を含む第２区分６２とに分離される。第２区分６２においては、血小板は第１区分６１の境界付近に濃縮される。したがって、第３ステップにおいて、シリンジ筒１２内のガスケット１４を移動させて、第１区分６１を排出口１１から排出する。続いて、前述された第４ステップ及び第５ステップは行わずに、最終ステップにおいて、シリンジ筒１２内のガスケット１４を移動させて、第２区分６２からＰＲＰ６３を排出口１１から排出する。この場合、ＰＲＰ６３にはバフィーコートが含まれる。また、ＰＲＰ６３に若干の赤血球が含まれることがある。
【００５７】
このように、本発明に係る多血小板血漿分離方法によれば、採血に使用したシリンジ筒１２を用いて遠心分離を行い、血液６０からＰＲＰ６３を得ることができる。これにより、γ線滅菌が可能な少数の器具でＰＲＰ６３の分離を実現できる。また、シリンジ筒１２を用いることにより、第１区分６１を排出することができる。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】図１は、本発明の実施形態に係る多血小板血漿分離装置１０の外観構成を示す分解斜視図である。
【図２】図２は、多血小板血漿分離装置１０の内部構成を示す縦断面図である。
【図３】図３は、多血小板血漿分離方法の各ステップにおける多血小板血漿分離装置１０の状態を示す断面図である。
【図４】図４は、多血小板血漿分離方法の各ステップにおける多血小板血漿分離装置１０の状態を示す断面図である。
【図５】図５は、多血小板血漿分離方法の各ステップにおける多血小板血漿分離装置１０の状態を示す断面図である。である。
【符号の説明】
【００５９】
１０・・・多血小板血漿分離装置
１１・・・排出口
１２・・・シリンジ筒
１３・・・キャップ
１４・・・ガスケット
１５・・・プランジャ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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