(57)【要約】【課題】副作用が少なく安全性の高い、癌の予防、治療または改善に有用な組成物を提供することを課題とする。【解決手段】パパイヤ（Carica papaya）の葉などの部分からの水溶性抽出成分および白花蛇舌草（Hedyotis Diffusa）の葉などの部分からの水溶性抽出成分を組み合わせることにより、例えば胃癌、肺癌、膵臓癌、大腸癌などの固形癌の予防、治療または改善を有効に達成でき、この組み合わせはは副作用の少ない安全性の高いものであり、その意義は極めて高いのもである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
パパイヤ（Carica papaya）の水溶性抽出成分および白花蛇舌草（Hedyotis Diffusa）の水溶性抽出成分を有効成分として含有する、癌の予防、治療または改善のための組成物。
【請求項２】
パパイヤの水溶性抽出成分が、パパイヤの葉を熱湯で煎じることにより抽出した成分である請求項１の組成物。
【請求項３】
白花蛇舌草の水溶性抽出成分が、白花蛇舌草の葉を熱湯で煎じることにより抽出した成分である請求項１または２の組成物。
【請求項４】
固型癌を予防、治療または改善するための請求項１から３のいずれかの組成物。
【請求項５】
固型癌が、肺大細胞癌、肺腺癌、肺臓癌、乳癌、子宮頸癌、肺中皮癌または膵臓癌である請求項４の組成物。
【請求項６】
医薬用組成物である請求項１から５のいずれかの組成物。
【請求項７】
食品用組成物である請求項１から５のいずれかの組成物。
【請求項８】
健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品または経腸栄養食品である請求項７の組成物。
【請求項９】
ドリンク剤、散剤または錠剤の形態にある請求項７または８の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、パパイヤおよび白花蛇舌草の水溶性抽出成分を含む癌の予防、治療または改善のための組成物に関する。更に詳細には、パパイヤおよび白花蛇舌草の葉を熱湯で煎じることにより抽出した成分を含有し、両者の成分の免疫賦活作用を維持しつつ、抗腫瘍活性において相乗効果を発揮する、癌の予防、治療または改善のための組成物であって、医薬用および食品用に使用できる組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
特に悪性腫瘍の場合、術後の寛解の保証を得るまではもちろん、外科手術だけでは腫瘍の切除が不可能であるとき、あるいは手術そのものが遂行困難なときに化学療法は必須である。しかし、化学療法において腫瘍特異性を高める事は難しく、自己の正常細胞に対する副作用が必ず付随するのが現状である。消耗した体力で副作用に直面することは心身ともに大きなダメージであることは容易に想像がつくが、いかに艱苦をともなう治療であろうとも、罹患者や周辺の人々はあらゆる苦痛や困難に対峙し、快方への望みを繋ぐのは当然である。
一方、社会には様々な代替療法の情報が氾濫している。その中には信憑性の乏しいもの、経済的な負担を強いるもの、継続的な摂取が難しいもの等も多く存在し、たとえ非現実的な情報であっても信じたくならざるを得ない状況があるのも事実である。しかしながら、本来の代替療法とはいわゆる近代医学で解明し得ないメカニズムでの疾患の治療を目指すものであり、経験則の上に、科学的考察が常に存在しなければ、その意義を認識することは難しく、快復への希望にはなりえない。
【０００３】
古来より伝わる植物由来の抽出物には、ある種の疾患に効果的なものが存在する事が経験的に知られている。漢方薬として長い歴史をもつ白花蛇舌草（Hedyotis Diffusa、和名：フタバムグラ)は、あかね科の一年草で我が国にも自生する植物であり、民間療法薬としての情報は比較的多い。マウスへの経口投与による、抗腫瘍効果、抗ウイルス効果、ＩｇＥ産生抑制、抗寄生虫効果、などが報告されている（非特許文献１、２、３および４）。また、抗腫瘍効果を発揮する漢方薬として、半枝蓮（はんしれん、シソ科、Scutellaria Barbatae）が知られており、白花蛇舌草と半枝蓮とを組み合わせた場合の抗腫瘍効果も検討されている（非特許文献５および６）。
他方、パパイヤ（Carica Papaya)は、現在では熱帯全域に分布し、その葉には抗酸化作用のあるビタミンＣ、タンニンをはじめ、ビタミンＡ、Ｅ、Ｋ、サポニン、鉄分などが含まれ、消化補助、抗炎症効果、寄生虫駆除効果などが報告されている（非特許文献７）。更に、パパイヤの葉の抽出液成分には、抗腫瘍効果を有することも報告されている（特許文献１）。
【非特許文献１】Yoshida Y, Wang MQ, Liu JN, Shan BE, Yamashita U. Immunomodulating activity of chinese medicinal herbs and oldenlandia diffusa in particular.Int J Immunopharmacol 1997; 19(7): 359-70
【非特許文献２】Shan BE, Yoshida Y, Sugiura T, Yamashita U. Stimulating activity of chinese medicinal herbs on human lymphocytes in vitro. Int J Immunopharmacol 1999; 21(3): 149-59
【非特許文献３】Lin CC, Ng LT, Yang JJ, Hsu YF. Anti-inflammatory and hepatoprotective activity of peh-hue-juwa-chi-cao in male rats. Am J Chin Med 2002; 30(2-3): 225-34
【非特許文献４】Lin CC, Ng LT, Yang JJ. Antioxidant activity of extracts of peh-hue-juwa-chi-cao in a cell free system. Am J Chin Med 2004; 32(3): 339-49
【非特許文献５】Wong BY, Lau BH, Wan CP, Oldenlandia diffusa and Scutellaria barbata augment macrophage oxidative burst and inhibit tumor growth, Cancer Biother Radiopharm 1996; 11(1): 51-56
【非特許文献６】Yoshida Y, Wang MQ, Liu JN, Sha Yamashita U., Imunomodulating activity of Chinese medicinal herbs and Oldenlandia diffusa in particular, Int J Immunopharmacol 1997: 19(7): 359-370
【非特許文献７】Hsu S. Green tea and the skin. J Am Acad Dermatol 2005; 52(6): 1049-59
【特許文献１】国際公開第ＷＯ２００６／００４２２６Ａ１号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
古来より伝わる植物由来の抽出物には、ある種の疾患に効果的なものが存在する事が経験的に知られているが、その科学的根拠は乏しく、効果の機序についても未解明な部分が多い。長期間、人間が摂取してきた植物由来抽出物は、単に経験的な知恵のみに留まらず、今後の医薬品開発に向けて重大な可能性を秘めている筈である。また、白花蛇舌草、半枝蓮、パパイヤなどから得られる抽出物が有効な薬効を発揮するものであれば、元来これら植物は食用であることから、副作用が少なく安全性の高い治療薬として期待できるものである。
従って、本発明の課題は、植物由来の抽出物を有効成分とする、癌の予防、治療または改善効果が高くかつ副作用が少なく安全性の高い組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、漢方薬として長い歴史をもつ白花蛇舌草および熱帯アメリカ原産のパパイヤ由来の水溶性抽出成分に着目し、これらの抽出物に対して、免疫学的解析を行ったところ、二者間で比較すると主に白花蛇舌草の水溶性抽出成分に免疫賦活効果が、パパイヤの水溶性抽出成分に細胞傷害活性が、有意に亢進される可能性が示された。更に、この可能性の詳細を検討した上で、両者を混合する事による補足的あるいは相乗的な効果が得られる事を期待し、解析を行った結果、両者の混合は、免疫賦活作用を維持しつつ、腫瘍細胞株に対する相乗的な傷害活性が誘導される事が確認された。本発明は、このような知見に基づいて完成されたものである。
従って、本発明は、パパイヤ（Carica papaya）の水溶性抽出成分および白花蛇舌草（Hedyotis Diffusa）の水溶性抽出成分を有効成分として含有する、癌の予防、治療または改善のための組成物である。
【発明の効果】
【０００６】
パパイヤの水溶性抽出成分および白花蛇舌草の水溶性抽出成分の両者を有効成分とする組成物は、免疫賦活作用が維持され、腫瘍細胞株に対して、相乗的な傷害活性を発揮する。従って、本発明の組成物は、癌の予防、治療または改善効果が高くかつ副作用が少なく安全性の高い医薬品、健康食品等として有用である。また、煮沸により得られる水溶性抽出物は、いわば「煎じ薬」として一般に受け入れられやすく、比較的、病態の程度に関係なく簡便に摂取できるものである。また継続的に摂取しなければならない性格上、安全性や経済性、そして簡便性に優れている点についても有用性が高い。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
以下に本発明を詳細に説明する。
本発明では有効成分として、パパイヤの水溶性抽出成分および白花蛇舌草の水溶性抽出成分の両者を用いる。抽出成分を得るために用いる、パパイヤおよび白花蛇舌草の組織としては、葉、根、茎、果実のいずれでもよいが、特に葉が好ましい。これらのパパイヤおよび白花蛇舌草の組織を乾燥し、得られる乾燥物を水あるいは熱湯に加えて、長時間沸騰させ、得られる煎じ液を有効成分として用いる。また、パパイヤおよび白花蛇舌草の葉などの組織を乾燥させることなく、そのまま水あるいは熱湯に加えて沸騰させて煎じ液を得ることもできる。より具体的には、例えばパパイヤおよび白花蛇舌草の葉を、日光の下で通常１日から２日間放置して乾燥させて乾燥物を得る。この乾燥した葉の５ｇから１００g程度の量を、通常５０ｍｌから１０００ｍｌ、好ましくは１００ｍｌから５００ｍｌの水あるいは熱湯に加えて、通常３０分間から５時間、好ましくは、１時間から２時間沸騰しながら煮るのが好ましい。煮る際に用いる容器は、金属製の容器ではないガラス製、木製、プラスチック製などの容器が好ましい。沸騰させた後は、６０℃から７０℃程度の温度に保ち、５０ｍｌから２５０ｍｌ程度に濃縮するのが好ましい。次いで、濾過して、葉を取り除いた後に、更に、６０℃から７０℃程度の温度に保ち、２５ｍｌから１２５ｍｌ程度に濃縮するのが好ましい。次いで、高速遠心分離機にて遠心分離し、上清を回収して、孔径の異なる複数の無菌濾過フィルターに順次通過させ、最終濃度を１３ｍｌから６３ｍｌ程度に調整して、目的とする水溶性抽出成分を好ましく得ることができる。
【０００８】
かくして得られる、パパイヤの水溶性抽出成分および白花蛇舌草の水溶性抽出成分の両者を混合することにより本発明の組成物を得ることができる。パパイヤの水溶性抽出成分と白花蛇舌草の水溶性抽出成分との混合割合は、体積比で１：４から４：１が好ましく、更には、２：１から４：１が好ましく、特に３：１から４：１が好ましい。なお、この体積比は、パパイヤの水溶性抽出成分および白花蛇舌草の水溶性抽出成分を、それぞれ等量の葉から等量の水を用いて同じ条件で抽出した水溶性抽出成分を基準にした場合の体積比である。
【０００９】
パパイヤの水溶性抽出成分および白花蛇舌草の水溶性抽出成分の両者の混合物をそのまま服用して、癌の予防、治療または改善用の医薬として用いることができる。また、この混合物をドリンク剤用の通常使用される適当な成分と混合してドリンク剤として服用することもできる。あるいは、この混合物を、必要に応じて乾燥させた後に、散剤、錠剤などに通常使用される賦形剤等に加えて常法により散剤、錠剤などの形態にして服用することもできる。
【００１０】
パパイヤの水溶性抽出成分および白花蛇舌草の水溶性抽出成分の両者の混合物は、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品、経腸栄養食品などに用いることもできる。パパイヤの水溶性抽出成分および白花蛇舌草の水溶性抽出成分の両者の混合物に、通常使用される配合物、例えば、安定化剤、保存剤、着色剤、香料、ビタミンなどを添加して、通常の方法により、ドリンク剤、粉末剤、液剤、錠剤、散剤などの形態に加工して、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品、経腸栄養食品などとして用いることができる。
【００１１】
パパイヤの水溶性抽出成分および白花蛇舌草の水溶性抽出成分の両者を含む本発明の組成物は、特に、固型癌を予防、治療または改善するために有効であり、固型癌としては、例えば、肺大細胞癌、肺腺癌、肺臓癌、乳癌、子宮頸癌、肺中皮癌、膵臓癌でなどが挙げられる。これらの癌の予防、治療または改善のための投与量は、パパイヤの水溶性抽出成分と白花蛇舌草の水溶性抽出成分の混合物を、一日当たり通常１００ｍｌから７５０ｍｌの量を１ヶ月から３ヶ月わたって毎日服用するのが好ましい。また、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品、経腸栄養食品などとして食用する場合にも、同様に、パパイヤの水溶性抽出成分と白花蛇舌草の水溶性抽出成分の混合物を、一日当たり通常１００ｍｌから７５０ｍｌの量を１ヶ月から３ヶ月わたって毎日食用するのが好ましい。
【００１２】
以下に、実施例および試験例を挙げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例および試験例に限定されるものではない。
実施例１
パパイヤおよび白花蛇舌草の葉からの水溶性抽出成分の調製
パパイヤおよび白花蛇舌草の葉からの水溶性抽出液の調製は以下の方法で行った。
工程１：  パパイヤおよび白花蛇舌草のそれぞれの葉を乾燥して得た茶葉２０ｇをそれぞれ４００ｍｌの水にいれ、１時間沸騰させた。
工程２：  ６０−７０℃を保ち、約１００ｍｌ前後に約３時間かけて濃縮した。
工程３：  滅菌ガーゼで濾過し、大きな茶葉を取り除いた後に、６０−７０℃で約５０ｍｌ前後に濃縮した。
工程４：  高速遠心分離機にて、９０００ｒｐｍ、２０分遠心分離を行い、上清を回収した。
工程５：  孔径０．８、０．４５、０．２２・ｍの無菌濾過フィルターに順次通し、最終液量２０ｍｌに調製した。
工程６：  各抽出液を１ｍｌずつ滅菌済み１．５ｍｌチューブに分注し、４℃に保存した。
全工程を通しエンドトキシンの混入を防ぐため、すべてディスポーザブル滅菌器具を用いた。また、２０ｇの茶葉由来の２０ｍｌ濃縮液を標準濃度として、以下の検討に用いた。
【００１３】
試験例１
ヒト末梢血由来単核球の分離とサイトカイン産生の測定
１．方法
健常人由来新鮮末梢血をＬｙｍｐｈｏｐｒｅｐＴＭによる比重分離法により分離した。抗ヒトＣＤ３抗体（ＯＫＴ３，１μｇ／ｍｌ）を固相化した９６ｗｅｌｌ平底プレートに、ＰＢＭＣ（２ｘ１０５／ｗｅｌｌ）を播種した。さらに可溶化抗ヒトＣＤ２８抗体（４Ｂ１０）を最終濃度５μｇ／ｍｌで添加した。培養液は１０％ＦＣＳ（Ｂｉｏｗｅｓｔ）を含むＲＰＭＩ１６４０（Ｓｉｇｍａ）を用いた。茶葉抽出液は、最終濃度２００倍から８００倍になる範囲で希釈し、培地中に添加した。
培養２４時間後の上清を回収し、ＥＬＩＳＡ法（ＯｐｔＥＩＡＴＭ，ＢＤ）によりサイトカイン産生を測定した。また、培養後の細胞生存率は、回収した細胞をＦＩＴＣ−Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ（ＢＤ）および７−ＡＡＤ（Ｐｒｏｍｅｇａ）とで二重染色したのち、フローサイトメトリーにより解析した。
【００１４】
２．結果
末梢血由来リンパ球に対する抽出液の免疫調節作用
（１）健常人ＰＢＭＣに対する細胞死の誘導の有無
茶葉由来成分の直接的な細胞毒性を除外するために、培養後の細胞の生存率について検討した。結果を図１に示した。図１において、Ｈ．Ｄ．は白花蛇舌草の葉からの水溶性抽出成分を、Ｃ．Ｐ．はパパイヤの葉からの水溶性抽出成分を指す。以後、本明細書および図面においては、この略号を用いることもある。
抽出液２００倍から８００倍添加のポイントにおけるＡｎｎｅｘｉｎ  Ｖ陽性細胞は無添加で６５．４％、添加したものについても６５％を下る事はなく、この濃度で２４時間以内であれば生存率に直接影響する事はないものと考え、以後の解析にこの条件を決定した。
【００１５】
（２）サイトカイン産生の解析
ＩＬ−２、ＩＬ−４は８００倍のポイントより濃度依存的に産生が低下し、２００倍で７０％以上抑制された（図２）。これら細胞増殖因子の産生低下がみられた事から、細胞死という現象はまだ起きてはいないものの、ＰＢＭＣ中のＣＤ３／Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）複合体を介した活性化に対して、ごく早期の段階より抑制が誘導されている可能性が考えられた。
ＩＬ−１２ｐ４０はどちらの抽出物とも８００倍のポイントで最も産生の亢進が認められ、その後濃度依存的に減少した（図３）。ＩＬ−１２ｐ７０も同様であるが、Ｃ．Ｐ．よりもＨ．Ｄ．添加のほうが、若干誘導能が高い。ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０も同様の傾向が認められた（図４）。これにより、抽出成分に由来する何らかの物質が、増殖亢進には貢献しないにも拘わらず、細胞機能を亢進させる免疫賦活作用がある可能性が考えられた。これらの結果はＨ．Ｄ．およびＣ．Ｐ．両抽出物とも単独でも、混合の状態でも認められた。
【００１６】
試験例２
ヒト腫瘍細胞株の培養および増殖能の測定
１．方法
固形腫瘍株として、Ｌｕ９９（肺大細胞癌）、Ａ５４９、ＰＣ１４（肺腺癌）ＨｅｐＧ２、Ｈｕｈ−７（肝臓癌）、ＭＣＦ−７（乳癌）、Ｈｅｌａ（子宮頸癌）、Ｈ２４５２、ＪＭＮ、ＭＥＳＯ−４（肺中皮腫）、ＣａＰａｎ１、Ｐａｎｃ１（膵臓癌）を用いた。
それぞれの細胞株は１０％  ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０あるいはＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ）にて培養した。
各腫瘍細胞株を１Ｘ１０４／Ｗｅｌｌで９６ｗｅｌｌ  平底プレートに播種し、付着細胞に関しては十分に底面に付着させた。その後、５０倍から４００倍に希釈した抽出液を添加し、２４時間培養した。増殖能の測定は培養終了までの１８時間、［３Ｈ］−チミジンによる標識を行い放射活性を測定した。
【００１７】
２．結果
Ａ５４９、Ｌｕ９９に関しては［３Ｈ］−チミジンの取り込みが低く、有意な結果が得られなかったため、この解析方法は適していないと考えられた。一方、取り込みの高いその他の細胞株（子宮頸がん、乳がん、肺腺がん、肺中皮腫、肝がん、膵臓がん）に関してはいずれも高濃度（５０倍）で細胞増殖阻害が示されるのはもちろん、４００倍の濃度に至るまでＨ．Ｄ．あるいはＣ．Ｐ．ともに増殖抑制効果が認められた（図５）。いずれの細胞株においても、Ｈ．Ｄ．よりもＣ．Ｐ．の方が抑制効果は高い傾向にあった。
混合添加では単独添加同様に増殖抑制を示した。最も希釈倍率の高い４００倍のポイントで、単独添加と数種の比率の混合添加を比較したところ、混合する事により、子宮頸癌（図６Ａ）、乳癌（図６Ｂ）、肝臓癌（図６Ｃ）、肺腺癌（図６Ｄ）、肺中皮腫（図６Ｅ）、膵臓癌（図６Ｆ）において相乗的に抗腫瘍効果が認められた。膵臓癌に関してはＰａｎｃ−１という他の細胞株についても同様の傾向が認められたが、相乗効果の有無に言及するには［３Ｈ］−Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅの取り込みそのものが他の細胞株と比較して低く（図５）、適切ではないと判断した。
混合する事による相乗効果は、Ｈ．Ｄ．：Ｃ．Ｐ．比が１：３−１：４の比率で用いたときに最も高く認められた。
【産業上の利用可能性】
【００１８】
１．抽出液の免疫賦活作用について
活性化ＰＢＭＣの増殖因子の抑制と細胞機能の亢進のみられた８００倍から４００倍希釈のポイントは、細胞毒性が発現する閾値を僅かに下回る濃度であったと考えられる。その濃度を上回ると、おそらく細胞に直接ダメージを与えてしまうおそれがあるであろう。しかしこれらの抽出液は経口摂取が基本であるために、生理的に高濃度で血中に存在する事は不可能である故、ここで得られた結果は整合性があり、非常に興味深いものである。
ＩＬ−１２ｐ７０のサブユニットであるｐ４０は、主に抗原提示細胞（ＡＰＣ）より産生されるサイトカインであり、ＡＰＣの活性化により飛躍的に産生が亢進することが知られている（Brombacher F, Kastelein RA, Alber G. Novel il-12 family members shed light on the orchestration of th1 responses. Trends Immunol 2003; 24(4): 207-12）。一方、ｐ３５は広範なリンパ球より産生されることが報告されているが（Watford WT, Moriguchi M, Morinobu A, O'Shea JJ. The biology of il-12: Coordinating innate and adaptive immune responses. Cytokine Growth Factor Rev 2003; 14(5): 361-8）、これらのサブユニット同士が二量体を形成しｐ７０として機能するためにはＣＤ４０−４０Ｌを介する刺激が必須である事がＣＤ４０Ｌ欠損マウスにより報告されている（Cella M, Scheidegger D, Palmer-Lehmann K, Lane P, Lanzavecchia A, Alber G. Ligation of cd40 on dendritic cells triggers production of high levels of interleukin-12 and enhances t cell stimulatory capacity: T-t help via apc activation. J Exp Med 1996; 184(2): 747-52）。
しかしながら、いわば「未精製」の状態の抽出液由来成分は、天然由来の様々な物質が含まれており、単なる「異物」として自然免疫応答で認識される可能性は捨て難い。「異物」として直接ＡＰＣに刺激を入れた結果、ｐ４０の産生を上昇させる事は十分に考えられ、その可能性を排除するために精製法、あるいは希釈倍率などに十分な考慮をした。その結果、ｐ４０産生とｐ７０産生が相関して上昇する結果が得られ、ＡＰＣの活性化のみならずＴ−ＡＰＣ、あるいはＴ−Ｂ細胞間の獲得免疫応答の修飾に関与している可能性がここで示された。さらに、ＴＮＦ−αやＩＦＮ−γ等の炎症性サイトカインも、後に続く免疫応答を修飾していく重要な因子である。特に、これらのサイトカインのもつ抗腫瘍効果に期待したい。また、ＩＬ−１２ｐ７０に相関してＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αが誘導されている点より、Ｔｈ１誘導能を有する物質の関与も予測できた。
【００１９】
２．抽出液の抗腫瘍効果について
固形腫瘍細胞株にみられた増殖抑制は、適切な解析方法はなかったものの、検鏡により細胞死の誘導が一因であると判断された。そして、これらの細胞株を用いた場合に、図８に示したように混合液による相乗効果が認められ、細胞傷害を誘導する何らかの因子が混合する事により増強する可能性が考えられた。
また付着細胞の場合、抽出液が培養プレート底面への接着を直接阻害する事をさけるために、完全に接着させた後に添加することが必須であった。抽出液による接着阻害効果そのものも、細胞−細胞間、あるいは細胞−細胞外基質間との接着を抑制し、ｉｎ  ｖｉｖｏで期待される腫瘍の増大や転移を抑制する抗腫瘍効果の一因として貢献する可能性も考えられた。
【００２０】
３．まとめ
本試験例によりＨ．Ｄ．およびＣ．Ｐが単独でも細胞増殖抑制作用と免疫賦活効果を持っている事、さらにその効果は混合液にした場合、相殺されることなく、相乗的に機能することが明示された。本試験例の解析では固形腫瘍細胞株に対する細胞傷害活性に二液を混合する有用性が認められた。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】抗ＣＤ３抗体（１μｇ／ｍｌ）を固相化した９６穴平底プレートに２ｘ１０５  ｃｅｌｌ／ウェルの濃度でＰＢＭＣを播種し、可溶化抗ＣＤ２８抗体（５μｇ／ｍｌ）を添加した。培養開始時にＨ．Ｄ．、Ｃ．Ｐ．単独、あるいはＨ．Ｄ．＋Ｃ．Ｐ．の混合液（Ｈ．Ｄ．：Ｃ．Ｐ．＝１：１，１：４，４：１）を添加した。２４時間後に細胞を回収し、ＦＩＴＣ−ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖと７−ＡＡＤとで二重染色し、フローサイトメトリーで解析した。Ｘ軸は各抽出液の希釈濃度（無添加および、８００倍から２００倍）、Ｙ軸はＦＩＴＣ−ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ陽性細胞のパーセンテージを示したものである。
【図２】Ｈ．Ｄ．またはＣ．Ｐ．あるいはそれらの混合液存在下での上清中のサイトカインを（Ａ）ＩＬ−２、（Ｂ）ＩＬ−４についてＥＬＩＳＡ法により検討した。Ｘ軸は各抽出液の希釈濃度（無添加および、８００倍から２００倍希釈）、Ｙ軸はサイトカイン濃度を示したものである。データは代表的な２ドナーについての結果を示した。
【図３】Ｈ．Ｄ．またはＣ．Ｐ．あるいはそれらの混合液存在下での上清中のサイトカインを（Ａ）ＩＬ−１２ｐ４０、（Ｂ）ＩＬ−１２ｐ７０についてＥＬＩＳＡ法により検討した。Ａに示した上段のデータは無刺激のＰＢＭＣ、下段のデータはＣＤ３＋ＣＤ２８刺激存在下で、抽出液添加を行っている。Ｘ軸は各抽出液の希釈濃度（無添加および、８００倍から２００倍希釈）、Ｙ軸はサイトカイン濃度を示したものである。データは代表的な２ドナーについての結果を示した。
【図４】Ｈ．Ｄ．またはＣ．Ｐ．あるいはそれらの混合液存在下での上清中のサイトカインを（Ａ）ＩＦＮ−γ、（Ｂ）ＴＮＦ−α（Ｃ）ＩＬ−１０についてＥＬＩＳＡ法により検討した。ＢおよびＣに示した上段のデータは無刺激のＰＢＭＣ、下段のデータはＣＤ３＋ＣＤ２８刺激存在下で、抽出液添加を行っている。Ｘ軸は各抽出液の希釈濃度（無添加および、８００倍から２００倍希釈）、Ｙ軸はサイトカイン濃度を示したものである。データは代表的な２ドナーについての結果を示した。
【図５】Ｈ．Ｄ．またはＣ．Ｐ．抽出液存在下での組織由来腫瘍細胞株の２４時間培養後の３［Ｈ］−チミジンの取り込みを検討した。Ｘ軸は各抽出液の希釈濃度（無添加および、４００倍から５０倍希釈）、Ｙ軸は放射活性を示したものである。データは三回の実験より、代表的な一例についての結果を示した。
【図６Ａ】Ｈ．Ｄ．またはＣ．Ｐ．の４００倍希釈の抽出液存在下における組織由来腫瘍細胞株の２４時間培養後の３［Ｈ］−チミジンの取り込みを無添加、単独添加、混合添加で比較した。グラフの数値は放射活性を示している。子宮頸癌（Ｈｅｌａ）の腫瘍細胞株を用いた。データは三回の実験より、代表的な例についての結果を示した。
【図６Ｂ】Ｈ．Ｄ．またはＣ．Ｐ．の４００倍希釈の抽出液存在下における組織由来腫瘍細胞株の２４時間培養後の３［Ｈ］−チミジンの取り込みを無添加、単独添加、混合添加で比較した。グラフの数値は放射活性を示している。乳癌（ＭＣＦ−７）の腫瘍細胞株を用いた。データは三回の実験より、代表的な例についての結果を示した。
【図６Ｃ】Ｈ．Ｄ．またはＣ．Ｐ．の４００倍希釈の抽出液存在下における組織由来腫瘍細胞株の２４時間培養後の３［Ｈ］−チミジンの取り込みを無添加、単独添加、混合添加で比較した。グラフの数値は放射活性を示している。肝臓癌（ＨｅｐＧ２，Ｈｕｈ−７）の腫瘍細胞株を用いた。データは三回の実験より、代表的な例についての結果を示した。
【図６Ｄ】Ｈ．Ｄ．またはＣ．Ｐ．の４００倍希釈の抽出液存在下における組織由来腫瘍細胞株の２４時間培養後の３［Ｈ］−チミジンの取り込みを無添加、単独添加、混合添加で比較した。グラフの数値は放射活性を示している。肺腺癌（ＰＣ−１４）の腫瘍細胞株を用いた。データは三回の実験より、代表的な例についての結果を示した。
【図６Ｅ】Ｈ．Ｄ．またはＣ．Ｐ．の４００倍希釈の抽出液存在下における組織由来腫瘍細胞株の２４時間培養後の３［Ｈ］−チミジンの取り込みを無添加、単独添加、混合添加で比較した。グラフの数値は放射活性を示している。肺中皮腫（ＪＭＮ，Ｈ２４５２）の腫瘍細胞株を用いた。データは三回の実験より、代表的な例についての結果を示した。
【図６Ｆ】Ｈ．Ｄ．またはＣ．Ｐ．の４００倍希釈の抽出液存在下における組織由来腫瘍細胞株の２４時間培養後の３［Ｈ］−チミジンの取り込みを無添加、単独添加、混合添加で比較した。グラフの数値は放射活性を示している。膵臓癌（ＣａＰａｎ−１）の腫瘍細胞株を用いた。データは三回の実験より、代表的な例についての結果を示した。
【図１】
2008214299.tif 000002
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
2008214299.tif 000008
【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図６Ｆ】
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