(57)【要約】      （修正有）【課題】製造コストが低く、かつ反応開始まで安定に液状試薬を保持できると共に、容易な操作で免疫検定を開始できる免疫検定用試験器具を提供する。【解決手段】免疫クロマトグラフ法を用いた検定に用いられる免疫検定用試験器具１０であって、長手方向に延伸した吸水性基材からなる固定相２０と、この固定相の長手方向の一端部近傍に配置されてなり、内部に液体を収容し、少なくともその一部が破断可能なフィルム材により構成される液体収容容器３０と、前記固定相と液体収容容器とを収容してなるケーシング４０であって、その上面に試料滴下窓４３と判定窓４４とを有し、かつ前記液体収容容器と係合可能な位置に開口部４５を有するケーシング本体４１と、前記開口部に滑動自在に取り付けられた、前記液体容器に対する破断手段を備えた滑動子４２とからなるケーシングとを有することを特徴とする免疫検定用試験器具。【選択図】図１
2008164333.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫クロマトグラフ法を用いた検定に用いられる免疫検定用試験器具であって、
長手方向に延伸した吸水性基材からなる固定相と、
この固定相の長手方向の一端部近傍に配置されてなり、内部に液体を収容し、少なくともその一部が破断可能なフィルム材により構成される液体収容容器と、
前記固定相と液体収容容器とを収容してなるケーシングであって、その上面に試料滴下窓と判定窓とを有し、かつ前記液体収容容器と係合可能な位置に開口部を有するケーシング本体と、前記開口部に滑動自在に取り付けられた、前記液体容器に対する破断手段を備えた滑動子とからなるケーシングと
を有することを特徴とする免疫検定用試験器具。
【請求項２】
前記固定相は、前記判定窓下に、試料中の被検物質に特異的に反応する第１免疫性物質を固定化してなる検出ラインを有し、また前記試料滴下窓下に、被検物質と結合し得る、酵素標識化された第２免疫性物質を乾燥状態で含有してなるコンジュゲートパッドを有し、さらに前記液体容器中には、前記第２免疫性物質を標識化した標識酵素に対する発色性基質を含んでなる展開液が収容されていることを特徴とする請求項１に記載の免疫検定用試験器具。
【請求項３】
前記固定相は、前記判定窓下に、さらに第２免疫性物質と反応し得る別の免疫性物質を固定化してなる確認用ラインを有することを特徴とする請求項３に記載の免疫検定用試験器具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば、酵素標識免疫クロマトグラフ法等の免疫クロマトグラフ法を用いた検定に用いられる免疫検定用試験器具に関するものである。詳しく述べると本発明は、製造コストが低く、かつ反応開始まで安定に液状試薬を保持できると共に、容易な操作で免疫検定を開始できる免疫検定用試験器具に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、試料中の種々の物質を抗体抗原反応といった免疫学的反応を用いて簡便に検出することができる免疫クロマトグラフ法が、臨床診断を初めとする広い分野において着目されている。
【０００３】
例えば、酵素標識免疫クロマトグラフ法においては、吸水性基材からなる固定相に、試料中の被検物質、例えば、抗原に特異的に反応する第１免疫性物質、例えば、抗体を固定化しておき、この固定部よりも上流において、被検物質を含む試料を滴下し、この被検物質に結合可能な酵素標識化された第２免疫性物質、例えば、標識化抗体との複合体を形成させ、標識酵素に対する発色基質を含む展開液をさらに上流側より流すことによって、複合体を前記固定化第１免疫性物質の位置まで、展開、移動させ、第１免疫性物質と結合させることにより、免疫検定が行われる。
【０００４】
ところで、上記免疫クロマトグラフ法のような検査に必要とされる薬剤、試薬等をコンパクトな筐体中に納め、簡便かつ迅速に検査を開始することのできるディスポーサブルな試験器具は、臨床診断等の分野において有用であり、従来より各種のものが開発されている。
【０００５】
例えば、特許文献１には、長手方向に延伸した吸水性基材からなる固定相と、この固定相を収容するケースであって、その上面に、検体滴下窓と判定窓とを有するケースと、該ケース中に収容された被覆部材で覆われた液体収容容器とを有し、この液体収容容器の上部に位置するケースの部位を、前記被覆部材破断するため突起を内面に有し、かつ当該突起を被覆部材へと押圧することができるように変形可能なものとしてなる試験器具が開示されている。
【０００６】
特許文献１に示されるような試験器具を用いれば、別途に用意された検査に必要とされる薬剤、試薬等を反応系に添加するといった操作を必要とすることなく、試験器具中に予め収納されている薬剤、試薬等を収容した液体収容容器を、試験器具外部から容易に破断することで検査を開始することが可能である。
【０００７】
しかしながら、特許文献１に示されるような試験器具においては、上記したような変形可能部位を形成する上で、ケースの壁面の一部を薄肉として成形しなければならず、その成形上で技術的な困難性があり、また、通常、このような変形可能部位を有する試験容器は、使用前においては、何らかの保護材等によって被覆されているであろうが、輸送・保管時において、これら保護材の能力を超えた何らかの外圧が試験容器に加わると、液体収容容器が破断されて、内部に収容された薬剤、試薬等が容器内に漏れてしまい、試験器具はもはや使用不能なものとなってしまうという問題が生じる可能性の高いものであった。
【特許文献１】特開平１０−１０４２３６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
従って、本発明は、上記した従来技術における問題点を解決してなる免疫検定用試験器具を提供することを課題とする。本発明はまた、製造コストが低く、かつ反応開始まで安定に液状試薬を保持できると共に、容易な操作で免疫検定を開始できる免疫検定用試験器具を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
すなわち、上記課題を解決する本発明は、免疫クロマトグラフ法を用いた検定に用いられる免疫検定用試験器具であって、
長手方向に延伸した吸水性基材からなる固定相と、
この固定相の長手方向の一端部近傍に配置されてなり、内部に液体を収容し、少なくともその一部が破断可能なフィルム材により構成される液体収容容器と、
前記固定相と液体収容容器とを収容してなるケーシングであって、その上面に試料滴下窓と判定窓とを有し、かつ前記液体収容容器と係合可能な位置に開口部を有するケーシング本体と、前記開口部に滑動自在に取り付けられた、前記液体容器に対する破断手段を備えた滑動子とからなるケーシングと
を有することを特徴とするものである。
【００１０】
本発明はまた、前記固定相は、前記判定窓下に、試料中の被検物質に特異的に反応する第１免疫性物質を固定化してなる検出ラインを有し、また前記試料滴下窓下に、被検物質と結合し得る、酵素標識化された第２免疫性物質を乾燥状態で含有してなるコンジュゲートパッドを有し、さらに前記液体容器中には、前記第２免疫性物質を標識化した標識酵素に対する発色性基質を含んでなる展開液が収容されていることを特徴とする免疫検定用試験器具を示すものである。
【００１１】
本発明はさらに、前記固定相が、前記判定窓下に、さらに、一連の免疫反応が正常に行われているかを確認するための、第２免疫性物質と反応し得る別の免疫性物質を固定化してなる確認用ライン（以下、コントロールラインと称する。）を有することを特徴とする免疫検定用試験器具を示すものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、免疫検定用試験器具内部に収容された展開液等の試薬等を収納してなる液体容器を、ケーシングに滑動自在に取り付けられた滑動子を移動させることによって、外部より容易に破断し、ケーシング内部において試薬を展開させることによって、免疫検定反応を開始させることができるものであり、かつ前記滑動子およびケーシング本体は、特段薄肉部等を形成するといった成形技術上での困難性もなく製造できるために製造コストが低く、また、かつ滑動子はスライドさせることによって機能するものであって、例えば、製品を収納したパッケージ外部より外力が加わっても誤って作動することが少なく、反応開始まで安定に液状試薬を保持できる。このように本発明の免疫検定用試験器具は、製造コストが低く、かつ反応開始まで安定に液状試薬を保持できると共に、容易な操作で免疫検定を開始できるものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下、本発明を具体的実施の形態に基づき、詳細に説明する。
【００１４】
図１は、本発明に係る免疫検定用試験器具の一実施形態の組み立て工程を示す平面図である。
【００１５】
本発明の免疫検定用試験器具１０は、免疫クロマトグラフ法を用いた検定に用いられる免疫検定用試験器具であって、図１に示すように、長手方向に延伸した吸水性基材からなる固定相２０と、この固定相の長手方向の一端部近傍に配置されてなり、内部に液体を収容し、少なくともその一部が破断可能なフィルム材により構成される液体収容容器３０と、前記固定相と液体収容容器とを収容してなるケーシング４０とを有する。
【００１６】
この実施形態において、ケーシング４０は、一対の嵌合可能な上部ケーシング４１ａと下部ケーシング４１ｂとからなるケーシング本体４１と、前記ケーシング４１ａの上面に滑動自在に取り付けられた滑動子４２とを有するものである。
【００１７】
上部ケーシング４１ａの上面には、その長手方向の略中央部に試料滴下窓４３が開口されており、また、長手方向の一端部近傍には、判定窓４４が、さらに他端部近傍部には、前記滑動子４２を取り付けるための開口部４５が設けられている。前記滑動子４２は、例えば、この開口部４５の長手方向の両側壁に対して、滑動自在に嵌合し得る溝部を有し、これら部材を樹脂材のような可撓性材料により構成することによって、開口部４５に取り付け可能とされている。
【００１８】
また滑動子４２は、滑動し、液体収容容器３０に当接した際に、液体収容容器３０の破断可能な部位を破断することができる、例えば、爪等の比較的鋭利な押圧部（図示せず）を容器内部側に備えている。
【００１９】
このようなケーシング内部に収納される、固定相２０を構成する吸水性基材としては、毛管作用を示す多孔質材料や繊維材料であれば特に限定されず、例えばニトロセルロース、セルロース、ガラス繊維等を含むろ紙を用いることができる。
【００２０】
また、固定相２０は、一体の吸水性基材によって構成する必要はなく、例えば、図１に示す実施形態においては、液体収容容器側（上流側）から配置された、吸収性ろ紙２１、コンジュゲートパッド２２、ニトロセルロースフィルム２３を、裏打ちシート２４に貼り付けて形成し、さらに、液体収容容器の配置位置とは、反対側（下流側）の端面部に、展開されてきた溶液を完全に吸収するための吸収パッド２５を載置してなるものとされている。
【００２１】
前記コンジュゲートパッド２２は、上部ケーシング４１ａの上面に設けられた試料滴下窓４３の直下に位置するものであり、滴下された試料中に含まれる被検物質と結合し得る、酵素標識化された第２免疫性物質を乾燥状態で含有してなる。
【００２２】
また、上部ケーシング４１ａの上面に設けられた判定窓４４の直下において、固定相２０（ニトロセルロースフィルム２３）には、試料中の被検物質に特異的に反応する第１免疫性物質を固定化してなる検出ライン（図示せず）および、必要に応じて、その下流側に、酵素標識化された第２免疫性物質と反応し得る別の免疫性物質を固定化してなるコントロールライン（図示せず）を形成する。
【００２３】
さらに必要に応じて、固定相２０上には、例えば、第２免疫性物質に標識化されている酵素と発色基質との反応を促進させるための活性化剤、あるいは上流より供給される基質と反応して当該活性化剤を生成し得る酵素等を塗布してなる部位等を設けることが可能である。
【００２４】
次に、本発明に係る免疫検定用試験器具を用いた測定原理を、フィブリンの分解物であるＤdimerを検出する場合を一例として、説明する。
【００２５】
まず、試験器具内における、基本配置としては、図２(ａ)に示すように、固定相２０上に、上流側から液体収容容器３０に収容された基質溶液、コンジュゲートパッド２２、グルコースオキシダーゼ２６、抗Ｄ dimerモノクローナル抗体を固定化してなる検出ライン２７、および抗マウス抗体を固定化してなるコントロールライン２８、および吸収パッド２５が配置されてなる。ここで、基質溶液は、グルコースオキシダーゼの基質となるグルコースと、ペルオキシダーゼの発色性基質となるテトラメチルベンジジン等のベンジジン誘導体を含む水溶液からなり、またコンジュケートパッドには、ペルオキシダーゼ標識化抗Ｄ dimerモノクローナル抗体が乾燥状態で配置されている。
【００２６】
検定は、まず、図１に示すようなケーシング４０の上面に設けられた試料滴下窓４３から、試料（血漿）を滴下した後、直ちにケーシング４０外部から、滑動子４２を滑動させることによって、液体収容容器３０を破断し、内部に収容されていた基質溶液を展開させる。試料滴下窓４３から滴下された試料中に含まれる標的物質Ｄ dimerは、図２（ｂ）に示すように、試料滴下窓直下に位置するコンジュゲートパッド２２中で、ペルオキシダーゼ標識化抗Ｄ dimerモノクローナル抗体と反応を開始し、固定相２０（ニトロセルロースフィルム２３）上に浸透し始める。そして、上流（図中左側）より浸透してくる基質溶液によって、コンジュゲートパッド２２上の試料とペルオキシダーゼ標識化抗Ｄ dimerモノクローナル抗体の混合物が下流側（図中右側）に向かって洗い流されていく。
【００２７】
次に、図２（ｃ）に示すように、固定相２０上を流れてきたグルコースは、グルコースオキシダーゼ２６の基質となり、活性酸素（過酸化水素）を生成する。また、標的物質Ｄ dimerおよびペルオキシダーゼ標識化抗Ｄ dimerモノクローナル抗体と反応した標的物質Ｄ dimerは、検出ライン２７上に固定された抗Ｄ dimerモノクローナル抗体によって捕捉される。また、未反応のペルオキシダーゼ標識化抗Ｄ dimerモノクローナル抗体は、より下流側に位置するコントロールライン２８上に固定された抗マウス抗体によって捕捉される。さらに、余分な成分はより下流側に位置する吸収パッド２５に吸収される。
【００２８】
そして、図２（ｄ）に示すように、検出ラインおよびコントロールライン上に捕捉されたペルオキシダーゼ標識化抗Ｄ dimerモノクローナル抗体は、ペルオキシダーゼの作用により基質溶液中に含まれるベンジジン誘導体と、グルコースオキシダーゼにより発生した過酸化水素を用いて、青色の不溶性着色物質を生成させる。この発色状態を、図１に示すようなケーシング４０の外部より判定窓４４を介して観察することにより、検定結果を目視する。なお、検出ライン上での青色の発色は、試料中に標的物質が存在することを示し、コントロールライン上での青色の発色は、反応系自体が適切に進行したことを示す。
【００２９】
すなわち、検出ラインとコントロールラインの両方に着色が見られた場合に、標的物質について陽性と、コントロールラインのみが着色した場合に、陰性と判断される。検出ラインのみに着色した場合、２ラインとも着色しない場合には何らかの不具合が生じたことを示す。
【００３０】
以上、本発明に係る免疫検定用試験器具を用いた測定原理を一例を挙げて説明したが、本発明に係る免疫検定用試験器具は、上記一例におけるような免疫系に何ら限定されることなく、各種の免疫検定に応用することが可能である。例えば、酵素免疫検定方法としてもサンドイッチ法、競合法のいずれの方法を用いることができる。また、さらに、標識化された被検物質（例えば、抗原）を、固定化された免疫性物質（例えば、抗体）と結合させる上で、被検物質を直接結合させるのではなく、被検物質に予め免疫性物質（例えば、一次抗体）を反応させておき、この免疫性物質に特異的に結合する免疫性物質（例えば、二次抗体）を固定化しておき、間接的に被検物質を結合させる二重ないし多重サンドイッチ法、二重ないし多重競合法を用いることも可能である。また、被検物質としても、上述したようなサンドイッチ法、競合法により検出可能なものであれば特に制限されない。例えば、血栓症を検出する上でのフィブリン分解産物、急性白血病、重症肝疾患などを検出する上でのα２−プラスミンインヒビター・プラスミン複合体（ＰＩＣ）、ビタミンＫ欠乏性蛋白−II（ＰＩＶＫＡII）（ビタミンK欠乏を伴う疾患や肝癌のマーカーでもある）；大腸菌Ｏ−１５７、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌、サルモネラ菌、腸炎ビブリオ菌、ヘリコバクター・ピロリ菌、クラミジア・トリコマティス菌等の病原性細菌およびその構成成分；ベロトキシン、ストレプトリシンＯ等の細菌が産生する毒素；例えば、ヒトトランスフェリン、ヒトアルブミン、ヒト免疫グロブリン、マイクログロブリンおよびＣ反応性タンパク質等のタンパク質；Ｂ型肝炎ウイルスのＨＢｓ、ＨＢｃ、ＨＢｅ抗原ならびに抗体、Ｃ型肝炎ウイルス抗原および抗体、ヒト免疫不全ウイルス抗原および抗体、ロタウイルス抗原および抗体ならびにアデノウイルス抗原および抗体などのウイルス抗原および抗体；および、その他の酵母、かびなどの微生物またはそれらに対する抗体などの広範な種類のものを対象とすることが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】本発明に係る免疫検定用試験器具の一実施形態の組み立て工程を示す平面図である。
【図２】本発明に係る免疫検定用試験器具を用いた測定原理を模式的に示す工程図である。
【符号の説明】
【００３２】
１０  免疫検定用試験器具
２０  固定相
３０  液体収容容器
４０  ケーシング
４１  ケーシング本体
４２  滑動子。
４３  試料滴下窓
４４  判定窓
【図１】
2008164333.tif 000003
【図２】
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