(57)【要約】【課題】本発明は、簡便に、糖及び類縁アルデヒド化合物の絶対配置を決定する方法の提供を目的とする。【解決手段】式（ＩＩ）で表される光学活性なアルデヒドを、式（ＩＩＩ）で表されるシステイン誘導体又はその塩と反応させ、次いで式（ＩＶ）で表される化合物と反応させることによって得られる、式（Ｉ）で表される化合物を高速液体クロマトグラフィーに付すことにより、式（ＩＩ）で表される光学活性なアルデヒドの絶対配置を決定する。2008032684.tif 000047［式中の各記号は、明細書中と同義を示す］【選択図】図１
2008032684.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2008032684.tif 000032
［式中、
Ｒ１は、置換されていてもよい炭化水素基を示し、
Ｒ２は、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基又は蛍光基を示し、
Ｚは、有機残基を示す］
で表される化合物を高速液体クロマトグラフィーに付すことを特徴とする、式（ＩＩ）：
【化２】
2008032684.tif 000033
［式中、Ｚは、前記と同義を示す］
で表される光学活性なアルデヒドの絶対配置を決定する方法。
【請求項２】
式（ＩＩ）：
【化３】
2008032684.tif 000034
［式中、Ｚは、請求項１と同義を示す］
で表される光学活性なアルデヒドを、式（ＩＩＩ）：
【化４】
2008032684.tif 000035
［式中、Ｒ１は、請求項１と同義を示す］
で表されるＬ−又はＤ−システイン誘導体又はその塩と反応させ、次いで、式（ＩＶ）：
【化５】
2008032684.tif 000036
［式中、Ｒ２は、請求項１と同義を示す］
で表される化合物と反応させることにより得られる、式（Ｉ）：
【化６】
2008032684.tif 000037
［式中、各記号は、請求項１と同義を示す］
で表される化合物を高速液体クロマトグラフィーに付すことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｌ−又はＤ−システイン誘導体が、式（Ｖ）：
【化７】
2008032684.tif 000038
［式中、Ｒ１は、請求項１と同義を示す］
で表されるＬ−又はＤ−シスチン誘導体又はその塩及びジチオスレイトールを用いて生成される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
Ｚが、式：
【化８】
2008032684.tif 000039
［式中、
Ｒ３は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されたアミノ基、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ３’は、水素原子、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ４は、式：−ＣＨ２Ｒ５（Ｒ５は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基又は置換されたアミノ基を示す）で表される基、又はカルボキシル基を示し、
ｎは、１〜４の整数を示す
（但し、ｎ個のＲ３、Ｒ３’及びＲ５の全てが水素原子であるものは除く）］
で表される基である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
Ｒ１が、アルキル基を示し、
Ｒ２が、置換されていてもよいアリール基、又は置換されていてもよいアラルキル基を示す、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
式（Ｉ）：
【化９】
2008032684.tif 000040
［式中、
Ｒ１は、置換されていてもよい炭化水素基を示し、
Ｒ２は、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基又は蛍光基を示し、
Ｚは、有機残基を示す］
で表される化合物。
【請求項７】
Ｚが、式：
【化１０】
2008032684.tif 000041
［式中、
Ｒ３は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されたアミノ基、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ３’は、水素原子、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ４は、式：−ＣＨ２Ｒ５（Ｒ５は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基又は置換されたアミノ基を示す）で表される基、又はカルボキシル基を示し、
ｎは、１〜４の整数を示す
（但し、ｎ個のＲ３、Ｒ３’及びＲ５の全てが水素原子であるものは除く）］
で表される基である、請求項５記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１が、アルキル基を示し、
Ｒ２が、置換されていてもよいアリール基、又は置換されていてもよいアラルキル基を示す、請求項５又は６記載の化合物。
【請求項９】
（ａ）式（ＩＩＩ）：
【化１１】
2008032684.tif 000042
［式中、Ｒ１は、置換されていてもよい炭化水素基を示す］
で表されるＬ−又はＤ−システイン誘導体又はその塩、及び
（ｂ）式（ＩＶ）：
【化１２】
2008032684.tif 000043
［式中、Ｒ２は、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基又は蛍光基を示す］
で表される化合物を含む、光学活性なアルデヒドの分析用キット。
【請求項１０】
Ｌ−又はＤ−システイン誘導体が、式（Ｖ）：
【化１３】
2008032684.tif 000044
［式中、Ｒ１は、請求項９と同義を示す］
で表されるＬ−又はＤ−シスチン誘導体又はその塩およびジチオスレイトールを用いて生成される、請求項９に記載のキット。
【請求項１１】
（ｃ）式（Ｉ）：
【化１４】
2008032684.tif 000045
［式中、
Ｒ１は、置換されていてもよい炭化水素基を示し、
Ｒ２は、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基又は蛍光基を示し、
Ｚは、有機残基を示す］
で表される化合物をさらに含む、請求項９又は１０記載のキット。
【請求項１２】
Ｚが、式：
【化１５】
2008032684.tif 000046
［式中、
Ｒ３は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されたアミノ基、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ３’は、水素原子、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ４は、式：−ＣＨ２Ｒ５（Ｒ５は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基又は置換されたアミノ基を示す）で表される基、又はカルボキシル基を示し、
ｎは、１〜４の整数を示す
（但し、ｎ個のＲ３、Ｒ３’及びＲ５の全てが水素原子であるものは除く）］
で表される基である、請求項１１記載のキット。
【請求項１３】
Ｒ１が、アルキル基を示し、
Ｒ２が、置換されていてもよいアリール基、又は置換されていてもよいアラルキル基を示す、請求項９〜１２のいずれか一項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖及び類縁アルデヒド化合物の絶対配置の決定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
生物由来の化合物には配糖体等の糖残基を有するものが多く、糖の絶対配置の決定は重要である。
糖の絶対配置の決定法としては、糖をＬ−システインメチルエステルと反応させた後、トリメチルシリル化し、ガスクロマトグラフィーで測定する方法が知られている（非特許文献１参照）。この方法では、ガスクロマトグラフィーが必要であるが、ガスボンベの搬入、搬出等ガスクロマトグラフィーの維持、管理は大変である。
ガスクロマトグラフィーを使用することなく、糖の絶対配置を決定する方法としては、液体クロマトグラフィーを使用する非特許文献２に記載の方法も知られているが、操作が煩雑であり、熟練が必要である。
従って、簡便な操作で糖の絶対配置を決定する方法の開発が望まれている。
【非特許文献１】Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，３５（２），５０１−５０６，１９８７
【非特許文献２】ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ  ＬＥＴＴＥＲＳ，９４３−９４６，１９８１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、簡便な操作で糖及び類縁アルデヒド化合物の絶対配置を決定する方法、及び当該方法を実施するためのキットを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、鋭意検討した結果、後述する式（Ｉ）で表される化合物を高速液体クロマトグラフィーに付すことにより、簡便な操作で、糖及び類縁アルデヒド化合物の絶対配置を決定することができることを見出し、本発明を完成させるに至った。すなわち、本発明は、以下の通りである。
【０００５】
［１］  式（Ｉ）：
【０００６】
【化１】
2008032684.tif 000003
【０００７】
［式中、
Ｒ１は、置換されていてもよい炭化水素基を示し、
Ｒ２は、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基又は蛍光基を示し、
Ｚは、有機残基を示す］
で表される化合物（以下、「化合物（Ｉ）」ともいう）を高速液体クロマトグラフィーに付すことを特徴とする、式（ＩＩ）：
【０００８】
【化２】
2008032684.tif 000004
【０００９】
［式中、Ｚは、前記と同義を示す］
で表される光学活性なアルデヒド（以下、「光学活性なアルデヒド（ＩＩ）」ともいう）の絶対配置を決定する方法。
［２］  式（ＩＩ）：
【００１０】
【化３】
2008032684.tif 000005
【００１１】
［式中、Ｚは、請求項１と同義を示す］
で表される光学活性なアルデヒドを、式（ＩＩＩ）：
【００１２】
【化４】
2008032684.tif 000006
【００１３】
［式中、Ｒ１は、請求項１と同義を示す］
で表されるＬ−又はＤ−システイン誘導体又はその塩（以下、「システイン誘導体（ＩＩＩ）」ともいう）と反応させ、次いで、式（ＩＶ）：
【００１４】
【化５】
2008032684.tif 000007
【００１５】
［式中、Ｒ２は、請求項１と同義を示す］
で表される化合物（以下、「化合物（ＩＶ）」ともいう）と反応させることにより得られる、式（Ｉ）：
【００１６】
【化６】
2008032684.tif 000008
【００１７】
［式中、各記号は、請求項１と同義を示す］
で表される化合物を高速液体クロマトグラフィーに付すことを特徴とする、［１］に記載の方法。
［３］  Ｌ−又はＤ−システイン誘導体が、式（Ｖ）：
【００１８】
【化７】
2008032684.tif 000009
【００１９】
［式中、Ｒ１は、請求項１と同義を示す］
で表されるＬ−又はＤ−シスチン誘導体又はその塩（以下、「シスチン誘導体（Ｖ）」ともいう）及びジチオスレイトールを用いて生成される、［２］に記載の方法。
［４］  Ｚが、式：
【００２０】
【化８】
2008032684.tif 000010
【００２１】
［式中、
Ｒ３は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されたアミノ基、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ３’は、水素原子、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ４は、式：−ＣＨ２Ｒ５（Ｒ５は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基又は置換されたアミノ基を示す）で表される基、又はカルボキシル基を示し、
ｎは、１〜４の整数を示す
（但し、ｎ個のＲ３、Ｒ３’及びＲ５の全てが水素原子であるものは除く）］
で表される基である、［１］〜［３］のいずれか一項に記載の方法。
［５］  Ｒ１が、アルキル基を示し、
Ｒ２が、置換されていてもよいアリール基、又は置換されていてもよいアラルキル基を示す、［１］〜［４］のいずれか一項に記載の方法。
［６］  式（Ｉ）：
【００２２】
【化９】
2008032684.tif 000011
【００２３】
［式中、
Ｒ１は、置換されていてもよい炭化水素基を示し、
Ｒ２は、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基又は蛍光基を示し、
Ｚは、有機残基を示す］
で表される化合物。
［７］  Ｚが、式：
【００２４】
【化１０】
2008032684.tif 000012
【００２５】
［式中、
Ｒ３は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されたアミノ基、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ３’は、水素原子、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ４は、式：−ＣＨ２Ｒ５（Ｒ５は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基又は置換されたアミノ基を示す）で表される基、又はカルボキシル基を示し、
ｎは、１〜４の整数を示す
（但し、ｎ個のＲ３、Ｒ３’及びＲ５の全てが水素原子であるものは除く）］
で表される基である、［５］記載の化合物。
［８］  Ｒ１が、アルキル基を示し、
Ｒ２が、置換されていてもよいアリール基、又は置換されていてもよいアラルキル基を示す、［５］又は［６］記載の化合物。
［９］  （ａ）式（ＩＩＩ）：
【００２６】
【化１１】
2008032684.tif 000013
【００２７】
［式中、Ｒ１は、置換されていてもよい炭化水素基を示す］
で表されるＬ−又はＤ−システイン誘導体又はその塩、及び
（ｂ）式（ＩＶ）：
【００２８】
【化１２】
2008032684.tif 000014
【００２９】
［式中、Ｒ２は、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基又は蛍光基を示す］
で表される化合物を含む、光学活性なアルデヒドの分析用キット。
［１０］Ｌ−又はＤ−システイン誘導体が、式（Ｖ）：
【００３０】
【化１３】
2008032684.tif 000015
【００３１】
［式中、Ｒ１は、請求項９と同義を示す］
で表されるＬ−又はＤ−シスチン誘導体又はその塩およびジチオスレイトールを用いて生成される、［９］記載のキット。
［１１］  （ｃ）式（Ｉ）：
【００３２】
【化１４】
2008032684.tif 000016
【００３３】
［式中、
Ｒ１は、置換されていてもよい炭化水素基を示し、
Ｒ２は、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基又は蛍光基を示し、
Ｚは、有機残基を示す］
で表される化合物をさらに含む、［９］又は［１０］記載のキット。
［１２］  Ｚが、式：
【００３４】
【化１５】
2008032684.tif 000017
【００３５】
［式中、
Ｒ３は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されたアミノ基、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ３’は、水素原子、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ４は、式：−ＣＨ２Ｒ５（Ｒ５は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基又は置換されたアミノ基を示す）で表される基、又はカルボキシル基を示し、
ｎは、１〜４の整数を示す
（但し、ｎ個のＲ３、Ｒ３’及びＲ５の全てが水素原子であるものは除く）］
で表される基である、［１１］記載のキット。
［１３］  Ｒ１が、アルキル基を示し、
Ｒ２が、置換されていてもよいアリール基、又は置換されていてもよいアラルキル基を示す、［９］〜［１２］のいずれか一項に記載のキット。
【発明の効果】
【００３６】
本発明の方法により、簡便な操作で糖及び類縁アルデヒド化合物の絶対配置を決定することができる。
【００３７】
また、本発明の方法により、簡便な操作で糖及び類縁アルデヒド化合物の混合物のモル比を推測することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３８】
本明細書において使用する各基及び各記号の定義は次の通りである。
【００３９】
「ハロゲン原子」としては、例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素が挙げられる。
「アルキル基」としては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル等の直鎖又は分枝鎖のＣ１−６アルキル基が挙げられる。
「アルケニル基」としては、例えば、ビニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、１−ペンテニル、１−ヘキセニル等の直鎖又は分枝鎖のＣ２−６アルケニル基が挙げられる。
「アルキニル基」としては、例えば、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、３−ブチニル、１−ペンチニル、１−ヘキシニル等の直鎖又は分枝鎖のＣ２−６アルキニル基が挙げられる。
「シクロアルキル基」としては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等のＣ３−６シクロアルキル基が挙げられる。
「アリール基」としては、例えば、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、アンスリル等のＣ６−１４アリール基が挙げられる。
「アラルキル基」としては、ベンジル、１−フェニルエチル、２−フェニルエチル、ナフチルメチル等のＣ７−１４アラルキル基が挙げられる。
「アルコキシ基」としては、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ等の直鎖又は分枝鎖のＣ１−６アルコキシ基が挙げられる。
【００４０】
Ｒ１は、置換されていてもよい炭化水素基を示す。
Ｒ１で示される「置換されていてもよい炭化水素基」の「炭化水素基」としては、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、アラルキル基等が挙げられる。
【００４１】
Ｒ１で示される「置換されていてもよい炭化水素基」の「炭化水素基」が有していてもよい置換基としては、例えば
（１）ハロゲン原子、
（２）ヒドロキシ基
等が挙げられる。置換基の数は、例えば、１〜５、好ましくは１〜３であり、置換基の数が２以上の場合、各置換基は同一又は異なっていてもよい。
【００４２】
Ｒ１としては、置換されていてもよいアルキル基が好ましく、Ｃ１−６アルキル基がより好ましく、メチル基、エチル基が特に好ましい。
【００４３】
Ｒ２は、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基又は蛍光基を示す。
Ｒ２で示される「置換されていてもよいアリール基」の「アリール基」、「置換されていてもよいアラルキル基」の「アラルキル基」がそれぞれ有していてもよい置換基としては、
（１）ハロゲン原子、
（２）ヒドロキシ基、
（３）アルキル基（好ましくは、メチル基等）、
（４）アルコキシ基（好ましくは、メトキシ基等）
等が挙げられる。置換基の数は、例えば、１〜５、好ましくは１〜３であり、置換基の数が２以上の場合、各置換基は同一又は異なっていてもよい。
【００４４】
Ｒ２で示される「蛍光基」としては、蛍光を発する限り、特に限定されないが、例えば、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノスルホニル）−２，１，３−ベンズオキサジアゾール−７−イル基等の蛍光基が挙げられる。
【００４５】
Ｒ２としては、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基が好ましく、Ｃ１−６アルキル基及びＣ１−６アルコキシ基から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよいＣ６−１４アリール基、Ｃ７−１４アラルキル基がより好ましい。中でも、フェニル基、ｐ−トリル基、ｏ−トリル基、３，４−ジメトキシフェニル基、ベンジル基、２−フェニルエチル基が特に好ましい。
【００４６】
Ｚで示される「有機残基」としては、式（ＩＩ）で表されるアルデヒドが光学活性なアルデヒドとなる限り、特に限定されないが、例えば、それぞれ置換されていてもよい、アルキル基、シクロアルキル基、複素環基等が挙げられる。
【００４７】
ここで、「複素環基」としては、炭素原子以外に、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選択される１〜５個のヘテロ原子を含有する３〜７員の複素環基が挙げられ、例えば、ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ピリジル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、キヌクリジニル等が挙げられる。
【００４８】
Ｚで示される「有機残基」として例示した「アルキル基」が有していてもよい置換基としては、例えば、
（１）置換されていてもよいヒドロキシ基、
（２）置換されたアミノ基、
（３）カルボキシル基、
（４）ハロゲン原子
等が挙げられる。置換基の数は、例えば、１〜５、好ましくは１〜３であり、置換基の数が２以上の場合、各置換基は同一又は異なっていてもよい。
上記「置換されていてもよいヒドロキシ基」としては、例えば、アルキル−カルボニル基（例、アセチル、プロピオニル等のＣ１−６アルキル−カルボニル基）等で置換されていてもよいヒドロキシ基が挙げられる。
また、「置換されていてもよいヒドロキシ基」の２つが一緒になって、
【００４９】
【化１６】
2008032684.tif 000018
【００５０】
等を形成していてもよい。
【００５１】
上記「置換されたアミノ基」としては、例えば、アルキル基、アルキル−カルボニル基（例、アセチル、プロピオニル等のＣ１−６アルキル−カルボニル基）等でモノ−又はジ置換されたアミノ基が挙げられる。
【００５２】
Ｚで示される「有機残基」として例示した「シクロアルキル基」又は「複素環基」が有していてもよい置換基としては、Ｒ２で示される「置換されていてもよいアリール基」の「アリール基」が有していてもよい置換基と同様のものが挙げられる。置換基の数は、例えば、１〜５、好ましくは１〜３であり、置換基の数が２以上の場合、各置換基は同一又は異なっていてもよい。
【００５３】
Ｚで示される「有機残基」のうち、置換されていてもよいアルキル基が好ましく、中でも、式：
【００５４】
【化１７】
2008032684.tif 000019
【００５５】
［式中、
Ｒ３は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されたアミノ基、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ３’は、水素原子、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ４は、式：−ＣＨ２Ｒ５（Ｒ５は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基又は置換されたアミノ基を示す）で表される基、又はカルボキシル基を示し、
ｎは、１〜４の整数を示す
（但し、ｎ個のＲ３、Ｒ３’及びＲ５の全てが水素原子であるものは除く）］
で表される基がより好ましい。
【００５６】
Ｒ３又はＲ５で示される「置換されていてもよいヒドロキシ基」の置換基としては、Ｚで示される「有機残基」として例示した「置換されていてもよいアルキル基」の「アルキル基」の置換基として例示したものが挙げられる。
【００５７】
Ｒ３又はＲ５で示される「置換されたアミノ基」の置換基としては、Ｚで示される「有機残基」として例示した「置換されていてもよいアルキル基」の「アルキル基」の置換基として例示したものが挙げられる。
【００５８】
Ｒ３又はＲ３’で示される「置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基」としては、上記「置換されていてもよいヒドロキシ基」、上記「置換されたアミノ基」で置換されたアルキル基が挙げられる。具体的には、ヒドロキシメチル基、アセチルオキシメチル基、プロピオニルオキシメチル基、アセチルアミノメチル基等が挙げられる。
【００５９】
また、Ｒ３又はＲ５で示される「置換されていてもよいヒドロキシ基」、及びＲ３又はＲ３’で示される「置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基」のアルキル基の置換基である「置換されていてもよいヒドロキシ基」のいずれか２つが一緒になって、
【００６０】
【化１８】
2008032684.tif 000020
【００６１】
等を形成していてもよい。
【００６２】
本発明の化合物（Ｉ）としては、
Ｚが、
【００６３】
【化１９】
2008032684.tif 000021
【００６４】
［式中、
Ｒ３は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されたアミノ基、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ３’は、水素原子、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ４は、式：−ＣＨ２Ｒ５（Ｒ５は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基又は置換されたアミノ基を示す）で表される基、又はカルボキシル基を示し、
ｎは、１〜４の整数を示す
（但し、ｎ個のＲ３、Ｒ３’及びＲ５の全てが水素原子であるものは除く）］
で表される基である化合物（Ｉ）が好ましい。
【００６５】
また、Ｒ１が、アルキル基であり、
Ｒ２が、置換されていてもよいアリール基、又は置換されていてもよいアラルキル基である化合物（Ｉ）も好ましい。
【００６６】
中でも、
Ｒ１が、Ｃ１−６アルキル基であり、
Ｒ２が、Ｃ１−６アルキル基及びＣ１−６アルコキシ基から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよいＣ６−１４アリール基、又はＣ７−１４アラルキル基であり、
Ｚが、式：
【００６７】
【化２０】
2008032684.tif 000022
【００６８】
［式中、
Ｒ３が、水素原子、ヒドロキシ基、アセチルアミノ基又はヒドロキシメチル基を示し、
Ｒ３’が、水素原子であり、
Ｒ４が、式：−ＣＨ２Ｒ５（Ｒ５が、水素原子又はヒドロキシ基を示す）で表される基、又はカルボキシル基を示し、
ｎは、１〜４の整数を示す
（但し、ｎ個のＲ３、及びＲ５の全てが水素原子であるものは除く）］
で表される基である、化合物（Ｉ）が特に好ましい。
【００６９】
本発明は、化合物（Ｉ）を高速液体クロマトグラフィーに付すことにより、光学活性なアルデヒド（ＩＩ）の絶対配置を決定する方法を提供する。
具体的には、本発明の絶対配置を決定する方法は、
（ａ）光学活性なアルデヒド（ＩＩ）から、化合物（Ｉ）を得る工程、
（ｂ）得られた化合物（Ｉ）を高速液体クロマトグラフィーに付す工程、及び
（ｃ）化合物（Ｉ）の保持時間と、標準品の保持時間を比較する工程
を含む。
【００７０】
工程（ａ）は、光学活性なアルデヒド（ＩＩ）から、化合物（Ｉ）を得る工程である。本工程は、光学活性なアルデヒド（ＩＩ）から、化合物（Ｉ）が得られる限り特に限定されないが、例えば、光学活性なアルデヒド（ＩＩ）をシステイン誘導体（ＩＩＩ）と反応させ、次いで化合物（ＩＶ）と反応させることにより、化合物（Ｉ）を得る方法が挙げられる。
【００７１】
光学活性なアルデヒド（ＩＩ）と、システイン誘導体（ＩＩＩ）との反応は、通常、溶媒中で行われる。使用可能な溶媒としては、反応が進行する限り特に限定されないが、例えば、ピリジン等が挙げられる。システイン誘導体（ＩＩＩ）の使用量は、光学活性なアルデヒド（ＩＩ）１モルに対して、通常１モル〜２０モル、好ましくは１モル〜５モルである。反応温度は、通常、２０℃〜１００℃、好ましくは、４０℃〜７０℃である。反応時間は、使用する試薬や溶媒の量、反応温度によっても異なるが、通常、０．１時間〜２時間、好ましくは、０．５時間〜１時間である。本反応で得られる化合物は、自体公知の方法により単離することもできるが、単離することなくそのまま化合物（ＩＶ）と反応させてもよい。
【００７２】
次いで、得られた化合物を、溶媒中、化合物（ＩＶ）と反応させることにより、化合物（Ｉ）を得る。使用可能な溶媒としては、反応が進行する限り特に限定されないが、例えば、ピリジン等が挙げられる。化合物（ＩＶ）の使用量は、光学活性なアルデヒド（ＩＩ）１モルに対して、通常１モル〜２０モル、好ましくは１モル〜５モルである。反応温度は、通常、２０℃〜１００℃、好ましくは、４０℃〜７０℃である。反応時間は、使用する試薬や溶媒の量、反応温度によっても異なるが、通常、０．１時間〜２時間、好ましくは、０．５時間〜１時間である。
【００７３】
光学活性なアルデヒド（ＩＩ）としては、光学活性体であれば特に限定はないが、例えば、Ｚが、それぞれ置換されていてもよい、アルキル基、シクロアルキル基、複素環基等であるものが挙げられる。このうち、式（ＩＩ’）：
【００７４】
【化２１】
2008032684.tif 000023
【００７５】
［式中、
Ｒ３は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されたアミノ基、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ３’は、水素原子、又は置換されていてもよいヒドロキシ基及び置換されたアミノ基から選択される置換基で置換されたアルキル基を示し、
Ｒ４は、式：−ＣＨ２Ｒ５（Ｒ５は、水素原子、置換されていてもよいヒドロキシ基又は置換されたアミノ基を示す）で表される基、又はカルボキシル基を示し、
ｎは、１〜４の整数を示す
（但し、ｎ個のＲ３、Ｒ３’及びＲ５の全てが水素原子であるものは除く）］
で表されるアルドース又はその誘導体（以下、「アルドース又はその誘導体（ＩＩ’）」ともいう）が好ましく使用できる。
【００７６】
アルドース又はその誘導体（ＩＩ’）としては、具体的な名称が知られているものもあり、例えば、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、アラビノース、キシロース、ラムノース、グルクロン酸、アロース、アルトロース、アピオース、ハマメロース等が挙げられる。
【００７７】
なお、アルドース又はその誘導体（ＩＩ’）は、式（ＩＩ’）で表されるようなアルデヒド体ではなく、Ｃ−１位がヘミアセタール結合して環を形成している形態で存在する場合があり、このような環状体もアルドース又はその誘導体（ＩＩ’）に含まれる。
【００７８】
システイン誘導体（ＩＩＩ）は、Ｌ体、Ｄ体のどちらも使用可能である。システイン誘導体（ＩＩＩ）の光学純度は、９９％ｅｅ以上であるものが好ましい。なお、システイン誘導体（ＩＩＩ）としては、原料の入手が容易である、合成が容易である等の観点から、Ｌ−システインメチルエステル、Ｌ−システインエチルエステルが好ましく、Ｌ−システインメチルエステルが特に好ましい。システイン誘導体（ＩＩＩ）の塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩などの酸付加塩が挙げられる。
【００７９】
化合物（ＩＶ）は、使用する高速液体クロマトグラフィーの検出器に合わせて選択すればよい。例えば、紫外可視分光検出器（以下、ＵＶ検出器という）を使用する場合は、Ｒ２が置換されていてもよいアリール基（好ましくは、フェニル、ｐ−トリル、ｏ−トリル、３，４−ジメトキシフェニル等）又はアラルキル基（好ましくは、ベンジル、２−フェニルエチル等）である化合物（ＩＶ）を選択すればよく、蛍光検出器を使用する場合は、Ｒ２が蛍光基である化合物（ＩＶ）を選択すればよい。
【００８０】
システイン誘導体（ＩＩＩ）は、自体公知の方法により合成することができ、市販品がある場合は市販品をそのまま使用してもよいが、シスチン誘導体（Ｖ）およびジチオスレイトールを用いて生成することも可能である。
【００８１】
シスチン誘導体（Ｖ）は、Ｌ体、Ｄ体のどちらも使用可能である。シスチン誘導体（Ｖ）の光学純度は、９９％ｅｅ以上であるものが好ましい。なお、シスチン誘導体（Ｖ）としては、原料の入手が容易である、合成が容易である等の観点から、Ｄ−シスチンジメチルエステル、Ｄ−シスチンジエチルエステル、Ｌ−シスチンジメチルエステル、Ｌ−シスチンジエチルエステルが好ましく、Ｄ−シスチンジメチルエステル、Ｌ−シスチンジメチルエステルが特に好ましい。シスチン誘導体（Ｖ）の塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩などの酸付加塩が挙げられる。
【００８２】
シスチン誘導体（Ｖ）とジチオスレイトールとの反応は、対応するシステイン誘導体（ＩＩＩ）が得られる限り特に限定されないが、通常、溶媒中で行われる。使用可能な溶媒としては、反応が進行する限り特に限定されないが、例えば、ピリジンなどが挙げられる。シスチン誘導体（Ｖ）およびジチオスレイトールの使用量は、光学活性なアルデヒド（ＩＩ）１モルに対して、それぞれ通常１モル〜１００００モル、好ましくはそれぞれ１モル〜１０００モル、より好ましくはそれぞれ１モル〜１００モル、最も好ましくはそれぞれ１モル〜１０モルである。反応温度は、通常、通常、２０℃〜１００℃、好ましくは、４０℃〜７０℃である。反応時間は、使用する試薬や溶媒の量、反応温度によっても異なるが、通常、０．１時間〜２時間、好ましくは、０．５時間〜１時間である。本反応で得られるシステイン誘導体（ＩＩＩ）は、自体公知の方法により単離することもできるが、単離することなくそのまま光学活性なアルデヒド（ＩＩ）と反応させてもよい。
【００８３】
また、シスチン誘導体（Ｖ）とジチオスレイトールとの反応は、上記した光学活性なアルデヒド（ＩＩ）とシステイン誘導体（ＩＩＩ）との反応と同様の条件で行うことも可能である。従って、光学活性なアルデヒド（ＩＩ）、シスチン誘導体（Ｖ）およびジチオスレイトールを混合して、上記条件にて反応させることで両反応を同時に行うことが可能である。
【００８４】
化合物（ＩＶ）は、自体公知の方法により合成することができ、市販品がある場合は市販品をそのまま使用してもよい。
【００８５】
工程（ｂ）は、得られた化合物（Ｉ）を高速液体クロマトグラフィーに付す工程である。工程（ａ）で得られた化合物（Ｉ）は単離する必要はなく、反応液のまま、高速液体クロマトグラフィーで測定することができる。
【００８６】
高速液体クロマトグラフィーの測定において、試料のチャージ量、分離用カラムの種類、分離用カラムの直径及び長さ、分離用カラムの温度、移動相の組成、移動相流量等の条件は、適宜選択することができ、化合物（Ｉ）の分離に最も適した条件を選択すればよい。このような条件としては、化合物（Ｉ）の各異性体の保持時間の差が、約０．５分以上（好ましくは１分以上）となるような条件が好ましい。
なお、分離用カラムとしては、光学異性体分離用のカラムを使用する必要はなく、通常使用されるカラム、例えば、オクタデシルシリカゲル、フェニルシリカゲル、オクチルシリカゲル等を充填したカラム等が使用できる。
【００８７】
工程（ｃ）は、工程（ｂ）で測定された化合物（Ｉ）の保持時間と、標準品の保持時間とを比較することにより、光学活性なアルデヒド（ＩＩ）の絶対配置を決定する工程である。
ここで「標準品」とは、絶対配置が既知の光学活性なアルデヒド（ＩＩ）から誘導された化合物（Ｉ）である。
【００８８】
本法により、簡便に光学活性なアルデヒド、特にアルドース又はその誘導体の絶対配置を決定することができる。
【００８９】
なお、化合物（Ｉ）の保持時間と、標準品の保持時間とを比較することにより、光学活性なアルデヒド（ＩＩ）の同定（絶対配置も含む）を行うことも可能である。
【００９０】
ところで、化合物（Ｉ）の鏡像体は、高速液体クロマトグラフィーでは保持時間が同一となる。従って、このことを利用して、片方の絶対配置を有する光学活性なアルデヒド（ＩＩ）から誘導した標準品しか入手できない場合でも、両方の保持時間を知ることが可能である。
【００９１】
例えば、絶対配置がＤ型である光学活性なアルデヒド（ＩＩ）しか入手できない場合でも、これから誘導された標準品のうち、システイン誘導体（ＩＩＩ）としてＤ−システインメチルエステル（Ｄ−シスチンジメチルエステルおよびジチオスレイトールから生成したものであってもよい）を用いて誘導される標準品〔以下、「Ｄ（ＩＩ）−Ｄ（ＩＩＩ）標準品」ともいう〕と、絶対配置がＬ型である光学活性なアルデヒド（ＩＩ）からＬ−システインメチルエステルを用いて誘導される化合物（Ｉ）〔以下、「Ｌ（ＩＩ）−Ｌ（ＩＩＩ）標準品」ともいう〕の保持時間は同一である。従って、標準品として誘導される、Ｄ（ＩＩ）−Ｄ（ＩＩＩ）標準品の保持時間（これは、Ｌ（ＩＩ）−Ｌ（ＩＩＩ）標準品の保持時間に等しい）およびＤ（ＩＩ）−Ｌ（ＩＩＩ）標準品の保持時間と、化合物（Ｉ）の保持時間とを比較することによって、光学活性なアルデヒド（ＩＩ）の同定（絶対配置も含む）を行うことが可能となる。
【００９２】
また、光学活性なアルデヒド（ＩＩ）が光学異性体の混合物である場合、検出器からの出力結果に基づくクロマトグラムにおける化合物（Ｉ）の各異性体のピーク面積又は高さ等を求めることにより、光学純度を測定することも可能である。
【００９３】
さらに、光学活性なアルデヒド（ＩＩ）が光学異性体の混合物である場合、検出器からの出力結果に基づくクロマトグラムにおける化合物（Ｉ）の各異性体のピーク面積比を求めることにより、混合物のモル比を推測することが可能である。
【００９４】
本発明は、
（ａ）システイン誘導体（ＩＩＩ）、及び
（ｂ）化合物（ＩＶ）
を含む、光学活性なアルデヒドの絶対配置の決定用のキットを提供する。
【００９５】
本発明のキットに含まれるシステイン誘導体（ＩＩＩ）は、Ｌ体、Ｄ体のどちらも使用可能である。システイン誘導体（ＩＩＩ）の光学純度は、９９％ｅｅ以上であるものが好ましい。なお、システイン誘導体（ＩＩＩ）としては、原料の入手が容易である、合成が容易である等の観点から、Ｌ−システインメチルエステル、Ｌ−システインエチルエステルが好ましく、Ｌ−システインメチルエステルが特に好ましい。
【００９６】
また、本発明のキットに含まれるシステイン誘導体（ＩＩＩ）は、Ｌ体又はＤ体のシスチン誘導体（Ｖ）およびジチオスレイトールを用いて生成することができる。シスチン誘導体（Ｖ）の光学純度は、９９％ｅｅ以上であるものが好ましい。なお、シスチン誘導体（Ｖ）としては、原料の入手が容易である、合成が容易である等の観点から、Ｄ−シスチンジメチルエステル、Ｄ−シスチンジエチルエステルが好ましく、Ｄ−シスチンジメチルエステルが特に好ましい。シスチン誘導体（Ｖ）の塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩などの酸付加塩が挙げられる。
【００９７】
従って、本発明は、
（ａ）シスチン誘導体（Ｖ）又はその塩及びジチオスレイトール、並びに
（ｂ）化合物（ＩＶ）
を含む、光学活性なアルデヒドの絶対配置の決定用のキットを提供する。
【００９８】
本発明のキットに含まれる化合物（ＩＶ）は、使用する高速液体クロマトグラフィーの検出器に合わせて選択すればよい。例えば、ＵＶ検出器を使用する場合は、Ｒ２が置換されていてもよいアリール基（好ましくは、フェニル、ｐ−トリル、ｏ−トリル、３，４−ジメトキシフェニル等）又はアラルキル基（好ましくは、ベンジル、２−フェニルエチル等）である化合物（ＩＶ）を選択すればよく、蛍光検出器を使用する場合は、Ｒ２が蛍光基である化合物（ＩＶ）を選択すればよい。
【００９９】
また、本発明のキットは、標準品として、絶対配置が既知の光学活性なアルデヒド（ＩＩ）から誘導された化合物（Ｉ）を更に含んでいてもよい。
また、本発明のキットは、光学活性なアルデヒド（ＩＩ）とシステイン誘導体（ＩＩＩ）の反応や、化合物（ＩＶ）との反応に使用する溶媒（例えば、ピリジン等）、当該キットの使用方法等を記載した記載物、反応容器等を更に含んでいてもよい。
【実施例】
【０１００】
以下に、実施例および参考例を示し、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。
【０１０１】
実施例１
Ｄ−グルコース７２０ｍｇ（４．０×１０−３ｍｏｌ）及びＬ―システインメチルエステル塩酸塩９００ｍｇを２０ｍＬスクリューキャップ付き試験管中で無水ピリジン５ｍｌに溶解し、水浴上６０℃で６０分反応させた。一旦室温に戻した後、フェニルイソチオシアネート９００μｌを加え、さらに６０℃で６０分反応させた。ロータリーエバポレーターでピリジンを留去した後、少量のトルエンを加えて再度エバポレートする操作を２回繰り返した。残留物を少量のＭｅＯＨに溶かし、クロロホルム：メタノール：水（９０：１０：１、８５：１５：１、８０：２０：２各２００ｍＬを順次段階的にグラジエント溶離）を溶媒として、シリカゲルカラム（内径３ｃｍ×長さ２５ｃｍ）にて分離を行った。溶離液はフラクションコレクタで１５ｍＬずつ分画し、薄層クロマトグラフィー（プレート：シリカゲル６０  Ｆ２５４、展開溶媒：クロロホルム：メタノール：水（８０：２０：２）、検出：２％硫酸噴霧後加熱）で分析して生成物のみを含む部分を合わせ、ロータリーエバポレーターで濃縮、真空乾燥機で乾燥して、Ｄ−グルコース誘導体（Ａ）６９７．８ｍｇ（１．６×１０−３ｍｏｌ，収率４０％）を単離した。
Ｌ−グルコース３００ｍｇ（１．７×１０−３ｍｏｌ）及びＬ―システインメチルエステル塩酸塩３７５ｍｇを、無水ピリジン３ｍｌに溶解し、上記と同様の操作を行い、Ｌ−グルコース誘導体（Ｂ）９８．８ｍｇ（２．３×１０−４ｍｏｌ，収率１４％）を得た。
【０１０２】
Ｌ−グルコース誘導体（Ａ）及びＬ−グルコース誘導体（Ｂ）は、いずれもＦＡＢ−ＭＳにおいて［Ｍ＋Ｈ］＋イオンピークをｍ／ｚ４３３に示した。
それぞれの誘導体について１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＨＰＬＣ測定を行った。
【０１０３】
Ｄ−グルコース誘導体（Ａ）
【０１０４】
【化２２】
2008032684.tif 000024
【０１０５】
ＵＶ  λｍａｘ  ２５１ｎｍ  （ＨＰＬＣフォトダイオードアレイ検出器）．
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ｐｙｒｉｄｉｎｅ−ｄ５）δ：１１．３６  （１Ｈ，  ｓ，  Ｈ−７”），  ７．５９  （２Ｈ，  ｂｒ  ｄ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ，  Ｈ−２”，  ６”），  ７．２０  （２Ｈ，  ｂｒ  ｔ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ，  Ｈ−３”，５”），  ７．０３  （１Ｈ，  ｂｒ  ｔ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ，  Ｈ−４”），  ６．５３  （１Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ，  Ｈ−２’），  ６．３３  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１０．０  Ｈｚ，  Ｈ−１），  ５．０３  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝３．０，  １．５  Ｈｚ，  Ｈ−３），  ４．８２  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１０．０，  １．５  Ｈｚ，  Ｈ−２），  ４．６３（１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝８．０，  ３．０  Ｈｚ，  Ｈ−４），  ４．５８  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ＝８．０，  ５．３，  ３．８  Ｈｚ，  Ｈ−５），  ４．５２  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．０，  ３．８  Ｈｚ，  Ｈ−６ａ），  ４．３７  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．０，  ５．３  Ｈｚ，  Ｈ−６ｂ），  ３．５３  （３Ｈ，  ｓ，  ＯＭｅ），  ３．４４（１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１２．０，  ７．５  Ｈｚ，  Ｈ−３’ａ），  ３．４２（１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１２．０，  ７．５  Ｈｚ，  Ｈ−３’ｂ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，  ｐｙｒｉｄｉｎｅ−ｄ５）δ：１８３．８  （Ｃ−８”），  １７１．６  （Ｃ−１’），  １４１．０  （Ｃ−１”），  １２８．６  （Ｃ−３”，５”），  １２４．７  （Ｃ−４”），  １２４．３  （Ｃ−２”，６”），  ７８．６，  ７５．７，  ７３．２，  ７０．９，  ６９．９，  ６８．６，  ６４．９  （ｇｌｕｃｏｓｅ−Ｃ，  Ｃ−２’），  ５２．４  （ＯＭｅ），  ３１．９  （Ｃ−３’）．
【０１０６】
Ｌ−グルコース誘導体（Ｂ）
【０１０７】
【化２３】
2008032684.tif 000025
【０１０８】
ＵＶ  λｍａｘ  ２４４ｎｍ  （ＨＰＬＣフォトダイオードアレイ検出器）．
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，  ｐｙｒｉｄｉｎｅ−ｄ５）δ：１１．４５  （１Ｈ，  ｓ，  Ｈ−７”），  ７．８０  （２Ｈ，  ｂｒ  ｄ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ，  Ｈ−２”，６”），  ７．２２  （２Ｈ，  ｂｒ  ｔ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ，  Ｈ−３”，５”），  ７．０７  （１Ｈ，  ｂｒ  ｔ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ，  Ｈ−４”），  ６．６６  （１Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝８．０  Ｈｚ，  Ｈ−２’），  ６．１５  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝９．２  Ｈｚ，  Ｈ−１），  ５．１８  （１Ｈ，  ｂｒ  ｓ，  Ｈ−３），  ４．６４  （２Ｈ，  ｂｒ  ｓ，  Ｈ−４，  ５），  ４．６０  （１Ｈ，  ｂｒ  ｄ，  Ｊ＝９．２  Ｈｚ，  Ｈ−２），  ４．５６（１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．０，  ２．７  Ｈｚ，  Ｈ−６ａ），  ４．３８（１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．０，  ５．１  Ｈｚ，  Ｈ−６ｂ），  ３．６０  （５Ｈ，  ｍ，  ＯＭｅ，  Ｈ−３ａ，  ３ｂ）
１３Ｃ−ＮＭＲ  （１００ＭＨｚ，  ｐｙｒｉｄｉｎｅ−ｄ５）δ：１８３．０  （Ｃ−８”），  １７１．７  （Ｃ−１’），  １４１．４  （Ｃ−１”），  １２８．５  （Ｃ−３”，５”），  １２５．１  （Ｃ−２”，６”），  １２５．０  （Ｃ−４”），  ７５．９，  ７５．９，  ７２．７，  ７０．７，  ７０．３，  ６８．５，  ６５．０  （ｇｌｕｃｏｓｅ−Ｃ，  Ｃ−２’），  ５２．６  （ＯＭｅ），  ３１．４  （Ｃ−３’）
【０１０９】
上記誘導体Ａ及びＢはピリジン中では比較的安定であるが、分離精製を行う過程で脱メタノール反応を起こし、それぞれフェニルチオヒダントイン誘導体Ａ’、Ｂ’に変化した。特にＬ−グルコース誘導体で著しかった。それらのＨＰＬＣでの保持時間はＤ−グルコース由来のものが８．８７ｍｉｎ、Ｌ−グルコース由来のものが９．２９ｍｉｎであり、Ａ、Ｂの溶出順序とは逆であった。これらは，誘導体合成後のピリジン反応溶液中にもわずかながら検出された。
【０１１０】
Ｄ−グルコースチオヒダントイン誘導体（Ａ’）及びＬ−グルコースチオヒダントイン誘導体（Ｂ’）
【０１１１】
【化２４】
2008032684.tif 000026
【０１１２】
Ｌ−グルコースチオヒダントイン誘導体（Ｂ’）のスペクトルデータ
【０１１３】
ＵＶ  λｍａｘ  ２５５ｎｍ  （ＨＰＬＣフォトダイオードアレイ検出器）．
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ４０１［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，  ｐｙｒｉｄｉｎｅ−ｄ５）δ：  ７．３０−７．４０  （５Ｈ，  ｍ，  ｐｈｅｎｙｌ−Ｈ），  ６．７０  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝４．８  Ｈｚ，  Ｈ−１），  ５．４２  （１Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝８．３  Ｈｚ，  Ｈ−３），  ５．００  （Ｈ−２，  Ｈ−４，  ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ  ｗｉｔｈ  ＨＯＤ  ｓｉｇｎａｌ），  ４．６７  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−５），  ４．５３  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝９．３，  ７．８  Ｈｚ，  Ｈ−２’），  ４．５１  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１０．３，
３．９  Ｈｚ，  Ｈ−６ａ），  ４．３７  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１０．３，  ５．４  Ｈｚ，  Ｈ−６ｂ），  ３．５３（１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝９．３，  ７．８  Ｈｚ，  Ｈ−３’ａ），  ３．３６（１Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝９．３  Ｈｚ，  Ｈ−３’ｂ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，  ｐｙｒｉｄｉｎｅ−ｄ５）δ：１８６．３  （Ｃ−８”），  １７２．２  （Ｃ−１’），  １３４．３  （Ｃ−１”），  １２９．２，
１２８．９，  １２４．３  （Ｃ−２”，  ３”，  ４”，  ５”，  ６”），  ７８．１，  ７４．２，  ７３．４，  ７１．０，  ６７．５，  ６６．３，  ６５．１  （ｇｌｕｃｏｓｅ−Ｃ，  Ｃ−２’），  ３２．２  （Ｃ−３’）
【０１１４】
実施例２
グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、フルクトース、アラビノース、キシロースのそれぞれＤ体及びＬ体、Ｌ−ラムノース、Ｄ―グルクロン酸の標準試料５ｍｇをそれぞれ１０ｍＬのスクリューキャップ試験管に入れ、５ｍｇのＬ―システインメチルエステル塩酸塩を含むピリジン１ｍＬを加えて６０℃で１時間加熱した後、反応液に５ｍｇのフェニルイシチオシアネートを含むピリジン０．５ｍＬを加え、さらに６０℃で１時間加熱した。反応液は室温に戻した後、２μＬをＨＰＬＣで分析した。
【０１１５】
ＨＰＬＣ分析条件
カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ  ５Ｃ１８  ＡＲＩＩ（ナカライテスク社製、４．６×２５０ｍｍ）、
カラム温度：３５℃、
移動相：Ａ；２５％ＣＨ３ＣＮを含む５０ｍＭリン酸水溶液、
流速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ、
検出：フォトダイオードアレイ検出（Ｍａｘ  ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ）
【０１１６】
Ｄ−グルコース誘導体及びＬ−グルコース誘導体をＨＰＬＣで分析した結果を図１に示す。また、その他の糖を含めた各誘導体の保持時間を表１に示す。
【０１１７】
【表１】
2008032684.tif 000027
注１  ケトースであるフルクトースには適用できない。
注２  標準品がないため測定できなかった。
【０１１８】
グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、アラビノース、キシロースにおいて、Ｄ体とＬ体が良好に分離されることがわかった。また、ケトースであるフルクトースでは誘導体が生成しなかった。ラムノースとグルクロン酸については鏡像体の標品が市販されておらず比較が出来なかった。
【０１１９】
実施例３  
フェニルイソチオシアネートの代わりに、ベンジルイソチオシアネート、ベンゾイルイソチオシアネート、３，４−ジメトキシフェニルイソチオシアネート、２−フェニルエチルイシチオシアネート、ｐ−トリルイソチオシアネート、ｏ−トリルイソチオシアネートを用いて誘導体化反応を行い、Ｄ−グルコースとＬ−グルコースの識別を行った。反応条件及び分析条件は実施例２と同じである。
【０１２０】
Ｄ−グルコース誘導体及びＬ−グルコース誘導体をＨＰＬＣで分析した結果得られた各誘導体の保持時間を表２に示す。
【０１２１】
【表２】
2008032684.tif 000028
注１  Ｈ：チオヒダントイン誘導体（Ａ’，Ｂ’），Ｔ：テトラヒドロチアゾール誘導体
（Ａ，Ｂ）
注２  ２１１ｎｍを極大とする吸収の肩として観察された。
【０１２２】
実施例３で用いたイソチオシアネート類のうち、ベンゾイルイソチオシアネートは目的の誘導体が生成しなかった。ｏ−トリルイソチオシアネート以外のすべての試料でチオヒダントイン誘導体の生成が認められ、特に３，４−ジメトキシフェニルと２−フェニルエチル誘導体で著しかった。ｏ−トリルイソチオシアネートでチオヒダントイン誘導体が生成しにくい理由は、トリル基中のメチル基の立体障害により、窒素原子のエステルカルボニルへの攻撃が起こりにくいことによるものと考えられた。
【０１２３】
実施例４
グルコース、マンノース、ガラクトース、キシロース、フコース及びアラビノースのそれぞれＤ体及びＬ体、Ｌ−ラムノース、Ｄ―グルクロン酸の標準試料１ｍｇをそれぞれ５ｍＬのスクリューキャップ試験管に入れ、１ｍｇのＬ―システインメチルエステル塩酸塩を含むピリジン１ｍＬを加えて６０℃で１時間加熱した後、反応液に１ｍｇのｏ−トリルイソチオシアネートを含むピリジン０．１ｍＬを加え、さらに６０℃で１時間加熱した。反応液は室温に戻した後、２μＬをＨＰＬＣで分析した。ＨＰＬＣの条件は実施例２と同じである。各誘導体の保持時間を表３に示す。
【０１２４】
【表３】
2008032684.tif 000029
【０１２５】
実施例５
グルコース、ガラクトース、及びアラビノースのそれぞれＤ体及びＬ体の標準試料１ｍｇをそれぞれ５ｍＬのスクリューキャップ試験管に入れ、１ｍｇのＬ−システインエチルエステル塩酸塩を含むピリジン１ｍＬを加えて６０℃で１時間加熱した後、反応液に１ｍｇのｏ−トリルイソチオシアネートを含むピリジン０．１ｍＬを加え、さらに６０℃で１時間加熱した。反応液は室温に戻した後、２μＬをＨＰＬＣで分析した。ＨＰＬＣの条件は実施例２と同じである。各誘導体の保持時間を表４に示す。
【０１２６】
【表４】
2008032684.tif 000030
【０１２７】
実施例６：応用例
糖の絶対配置が不明の配糖体４−アリル−１，２−ジヒドロキシベンゼン  ２−Ｏ−（６’−Ｏ−α−アラビノフラノシル）−β−グルコピラノシド０．５ｍｇを０．３ｍＬスクリューキャップバイアルに入れ５０μＬの０．５Ｎ塩酸に溶かして密栓し、９０℃で２時間加熱して加水分解した。室温まで冷却した後、陽イオン交換樹脂ＩＲＡ４００（希水酸化ナトリウム水溶液で処理後、精製水で十分洗浄したもの）を加えて酸を中和した。反応液を精製水０．１ｍＬで１ｍＬスクリューキャップバイアルに移し、窒素気流を吹き付けて水を留去後、真空デシケータ中で３時間乾燥した。残留物をＬ−システインメチルエステル塩酸塩１ｍｇを含むピリジン５０μＬと共に６０℃で１時間加熱し、フェニルイソチオシアネート２μＬを加え、さらに１時間加熱した。反応液を室温まで冷却後、２μＬをＨＰＬＣで分析した。分析条件は実施例２と同じである。観察された２本のピークの保持時間はそれぞれＤ−グルコース及びＬ−アラビノースのものと一致したことから、グルコースはＤ体、アラビノースはＬ体であることが明らかになった。わずか０．５ｍｇの未知配糖体でＨＰＬＣ上では非常に大きいピークが観察されたことから、配糖体０．１ｍｇ程度でも判別は充分可能である。
【０１２８】
実施例７：応用例
種々の機器分析により平面構造が確定しているが糖の絶対配置が不明であったその他の４種の配糖体、２−アリル−４，５−メチレンジオキシフェノール  １−Ｏ−β−グルコピラノシド（１）、２−アリル−４，５−メチレンジオキシフェノール  １−Ｏ−（６’−Ｏ−α−キシロピラノシル）−β−グルコピラノシド（２）、２−アリル−４，５−メチレンジオキシフェノール  １−Ｏ−（６’−Ｏ−α−アラビノピラノシル）−β−グルコピラノシド（３）、及び１，２−ジヒドロキシ−３−メトキシ−５−アリルベンゼン  １−Ｏ−β−グルコピラノシド（４）について、ｏ−トリルイソチオシアネートを用いて糖の絶対配置決定を行った。フェニルイソチオシアネートの代わりにｏ−トリルイソチオシアネートを用いた以外は、加水分解、誘導体化反応及び分析条件は、実施例５と全く同様である。
【０１２９】
各化合物から得られた誘導体の保持時間と糖の絶対配置を表５に示す。
【０１３０】
【表５】
2008032684.tif 000031
【０１３１】
参考例
キシロースのＤ体及びＬ体の標準試料１ｍｇをそれぞれ５ｍＬのスクリューキャップ試験管に入れ、１ｍｇのＤ−シスチンジメチルエステル塩酸塩および２ｍｇのジチオスレイトールを含むピリジン１ｍＬを加えて６０℃で１時間加熱した後、反応液に１ｍｇのｏ−トリルイソチオシアネートを含むピリジン０．１ｍＬを加え、さらに６０℃で１時間加熱した。反応液を室温に戻した後、２μＬをＨＰＬＣで分析した。ＨＰＬＣの条件は実施例２と同じである。その結果、Ｄ−キシロースから得られた誘導体の保持時間は１９．１分であり、これはＬ−システインメチルエステルを用いたときのＬ−キシロース誘導体の保持時間と一致した。一方、Ｌ−キシロースから得られた誘導体の保持時間は２０．５分であり、これはＬ−システインメチルエステルを用いたときのＤ−キシロース誘導体の保持時間と一致した。
これは、反応中に生じたＤ−システインメチルエステルがＤ−及びＬ−キシロースと反応して生成する誘導体は、それぞれＬ−システインメチルエステルがＬ−及びＤ−キシロースと反応して生成する誘導体の鏡像体となるが、通常のＨＰＬＣでは、これらの鏡像体の区別が出来ないことを示している。
このことを利用して、Ｄ−システインメチルエステルを単独で、もしくはＤ−シスチンジメチルエステルとジチオスレイトールとを合わせて用いることによって、糖の標準品としてＤ−あるいはＬ−体のどちらか一つがあれば、Ｌ−システインメチルエステルを用いた場合の結果と比較することにより、光学異性体の一方が入手できない光学活性なアルデヒド（ＩＩ）であっても、両方の光学活性体に由来する誘導体の保持時間を求めることが出来る。
【０１３２】
実施例８：応用例
ラムノースはＬ体が市販されているものの、Ｄ体は入手することや合成することが困難である。Ｌ−ラムノースの標準試料２ｍｇ、Ｄ−シスチンジメチルエステル塩酸塩４．６ｍｇおよびジチオスレイトール６．２ｍｇを５ｍＬのスクリューキャップ試験管に入れ、ピリジン１．２ｍＬを加えて溶かし、６０℃で１時間加熱した。反応液に２．４ｍｇのｏ−トリルイソチオシアネートを含むピリジン０．２４ｍＬを加え、さらに６０℃で１時間加熱した。反応液は室温に戻した後、２μＬをＨＰＬＣで分析した。ＨＰＬＣの条件は実施例２と同じである。ＨＰＬＣでは１５．８分にピークが検出された。
ここで得られた誘導体は、Ｌ−システインメチルエステルとＤ−ラムノースから得られる誘導体の鏡像体であり、その保持時間はＤ−ラムノースをＬ−システインメチルエステルを用いて誘導体化したときの保持時間と一致する。一方、Ｌ−システインメチルエステルを用いて実施例２と同様の方法でＬ−ラムノース誘導体の保持時間を測定したところ２９．４分であった。従って、両保持時間と比較することによりＬ−およびＤ−ラムノースの判別をすることが可能となった。
【０１３３】
実施例９：応用例（定量性（１））
Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−キシロース、Ｄ−アラビノースおよびＤ−フコースそれぞれの０．０５モル／リットルのピリジン溶液１００μｌを１ｍｌスクリューキャップバイアルに入れ、それぞれに０．０５モル／リットルのＬ−システインメチルエステル塩酸塩ピリジン溶液を１００μｌ加え、６０℃で１時間加熱した。反応液に１０ｍｇ／ｍｌの濃度のｏ−トリルイソチオシアネートピリジン溶液２００μｌを加え、さらに６０℃で１時間加熱した。反応液はＨＰＬＣで分析し（分析条件は実施例２と同じである。）、２５１ｎｍでのピーク面積を比較した。それぞれ３回繰り返して平均した。その結果、マンノース以外は、ほぼ同じピーク面積を示し、ピーク面積比から構成糖のモル比を推測できることが分かった。（図２）マンノースについてはヒダントイン誘導体の生成が多いため、ピーク面積が小さくなった。
【０１３４】
実施例１０：応用例（定量性（２））
Ｄ−グルコース１０ｍｇ／ｍｌピリジン溶液を２、５、１０、５０倍にピリジンで希釈して糖溶液を調整した。各糖溶液１００μｌを１ｍｌスクリューキャップバイアルにいれ、Ｌ−システインメチルエステル塩酸塩１０ｍｇ／ｍｌピリジン溶液２００μｌを加え、６０℃で１時間加熱した。反応液に１０ｍｇ／ｍｌの濃度のｏ−トリルイソチオシアネートピリジン溶液２００μｌを加えさらに６０℃で１時間加熱した。反応液はＨＰＬＣで分析し（分析条件は実施例２と同じである。）、２５１ｎｍでのピーク面積を比較した。その結果、グルコース濃度とピーク面積は定量的な増加を示した。
【産業上の利用可能性】
【０１３５】
本発明によれば、簡便な操作で糖及び類縁アルデヒド化合物の絶対配置を決定することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１３６】
【図１】Ｄ−グルコース誘導体及びＬ−グルコース誘導体のクロマトグラム。
【図２】各糖誘導体が示すクロマトグラムのピーク面積を比較したグラフ。
【図３】グルコース濃度とグルコース誘導体が示すクロマトグラムのピーク面積とを比較したグラフ。
【図１】
2008032684.tif 000048
【図２】
2008032684.tif 000049
【図３】
2008032684.tif 000050