(57)【要約】【課題】従来に比べて、操作性が向上するだけでなく、十分な接着強度及び生体組織接着に適合する柔軟性を付与する２液型接着剤を提供する。【解決手段】本発明は、主剤と架橋剤からなる２液型接着剤であって、主剤がアルブミンおよび、多価フェノール化合物またはポリフェノール化合物を主成分とし、架橋剤がアルデヒドを主成分としてなる２液型接着剤である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
主剤と架橋剤からなる２液型接着剤であって、主剤がアルブミンおよび多価フェノール化合物および／またはポリフェノール化合物を主成分とし、架橋剤がアルデヒドを主成分としてなる２液型接着剤。
【請求項２】
主剤が添加剤を含む請求項１に記載の２液型接着剤。
【請求項３】
該添加剤が有機酸のナトリウム塩である請求項２に記載の２液型接着剤。
【請求項４】
該添加剤が安息香酸ナトリウムである請求項２または３に記載の２液型接着剤。
【請求項５】
該多価フェノール化合物がレゾルシンまたはβ−レゾルシルアルデヒド（２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド）である請求項１に記載の２液型接着剤。
【請求項６】
該ポリフェノール化合物がフラボノイド類である請求項１に記載の２液型接着剤。
【請求項７】
主剤中の多価フェノール化合物および／またはポリフェノール化合物含量が０．０１〜２０重量％である請求項１〜６いずれか記載の２液型接着剤。
【請求項８】
主剤中の添加剤含量が０．００１〜２０重量％である請求項１〜７いずれか記載の２液型接着剤。
【請求項９】
該アルブミンが、ヒト血清アルブミンである請求項１に記載の２液型接着剤。
【請求項１０】
主剤中のアルブミン含量が５〜４５重量％である請求項１〜９いずれかに記載の２液型接着剤。
【請求項１１】
該アルデヒドが、アルキレンアルデヒドおよび／または糖アルデヒドからなる請求項１に記載の２液型接着剤。
【請求項１２】
該アルキレンアルデヒドがホルムアルデヒド、グリオキサール、スクシンアルデヒド、グルタルアルデヒド、マレアルデヒドからなる群から選ばれる１種以上のアルキレンアルデヒドからなる請求項１１に記載の２液型接着剤。
【請求項１３】
架橋剤中のアルキレンアルデヒド含量が０〜３０重量％である請求項１１または１２に記載の２液型接着剤。
【請求項１４】
該糖アルデヒドが繰り返し単位１〜１，０００の糖を酸化して得られるものである請求項１１に記載の２液型接着剤。
【請求項１５】
該糖アルデヒドが単糖、二糖、三糖、四糖を酸化して得られるものから選ばれる１種以上である請求項１１または１４に記載の2液型接着剤。
【請求項１６】
架橋剤中の糖アルデヒド含量が０〜３０重量％である請求項１１または１４または１５に記載の２液型接着剤。
【請求項１７】
架橋剤中のアルデヒド含量が０．００１〜３０重量％である請求項１〜１６いずれかに記載の２液型接着剤。
【請求項１８】
主剤と架橋剤とを１００：１〜１００：１００の重量比で混合する請求項１〜１７いずれか記載の２液型接着剤。
【請求項１９】
止血用または生体組織用の接着剤である請求項１〜１８いずれか記載の２液型接着剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体組織用２液型接着剤に関するものである。より詳細には、アルブミン、多価フェノール化合物および／またはポリフェノール化合物、場合によって添加剤からなる主剤と糖アルデヒド及び／またはアルキレンアルデヒドを含む架橋剤とからなる柔軟性および接着性能に優れ、生体吸収性で且つ優れた安全性を有する生体組織用２液型接着剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
種々の外科用組織接着剤が医療用途に用いられている。それらのうちシアノアクリレート、ゼラチン−ホルムアルデヒド組成物及びフィブリン系接着剤の三種が最も注目を受けてきた。例えば、フィブリン（血液凝固生体由来物質）及びゼラチン−ホルムアルデヒドはそれぞれ、シアノアクリレートと同様に、手術用接着剤用途に使用されてきた。これらの接着剤が特定の用途に限定して用いられているのは、下記に示されるように欠点を有するからである。
【０００３】
シアノアクリレートが手術用使用のために研究されてきた。例えば、あるイソブチルシアノアクリレート配合物は家畜治療への使用のために許可されてきた。典型的には、モノマー及び／又はモノマーの混合物が接着部位に塗布され、急速に重合して固体となる。シアノアクリレート接着剤の欠点の一つは、患部が乾燥している必要があることである。もう1つは、重合により得られる固体が体内に吸収されないことであり、これらの理由により、生体内に用いる場合はこの接着剤の有用性が低下する。また、重合は発熱を伴い、組織適合性が不良となった例も報告されている。（非特許文献１〜３参照）。
【非特許文献１】Bonutti, P. et al., Clinical Orthopedics and Related Research, Vol. 229, pages 241−248（1988）
【非特許文献２】Nelson, R. et al., Arch. Surg. Vol, 100, pages 295−298（1970）
【非特許文献３】Celik, H., et al., “Nonsuture closure of arterial defect by vein graft using isobutyl-2-cyanoacrylates as a tissue adhesive”, Journal of Nearosurgical Sciences Vol. 35, No. 2（April-June 1991）
【０００４】
ホルムアルデヒドにより架橋され、ゼラチンに基づく接着剤が1964年以来、主にヨーロッパにおいて実験的に使用されてきた。提案された配合物のうち、”GRF接着剤”（ゼラチン、レゾルシン、ホルムアルデヒド）がよく知られている。ゼラチンの加熱溶液がホルムアルデヒドを主とする溶液からの硬化物とその場で混合される。その混合物は、急速に固化して組織に接着する。GRF接着剤については、主剤として用いるゼラチンは加温下、例えば体温以上の温度で適用する必要がある。さらに、その強度は組織接着性の観点から十分といえるものではなく、組織の剥離の危険性がある。混合及び適用の技法は、GRFの臨床下において厳密には決定されていない。（非特許文献４〜７参照）。
【非特許文献４】Fabiani, et al., Ann. Thorac. Surg. 143-145（1990）
【非特許文献５】Fabiani, et al., Supplement J. Circulation Vol. 80, No. 3（September 1989）
【非特許文献６】Bachet, et al., J. Thorac. Cardiovasc. Surg. Vol. 83（1982）
【非特許文献７】Braunwald, et al., Surgery Vol. 59, No. 6（June 1966）
【０００５】
フィブリン接着剤は、血液凝固系を利用して接着剤またはシーラント組成物を生成する。1種の市販の組成物は、Rugis, Franceから入手できる”Tussicol（登録商標）”である。もう1種は、Osterreichisches Institut for Hasmoderirate, GMBH（Immuno GA, A-1220, Vienna, Austriaの傘下）から入手できる”Fibrin Sealant Kit 1.0”である。フィブリン接着剤を使用した場合、2種類の成分により血液凝集体を形成する。成分の１つは、フィブリノーゲン及び血液凝固因子、例えば第XIII因子の溶液であり、もう1つはトロンビン及びカルシウムイオンの溶液である。フィブリン接着剤の欠点はそれらの引っ張り強さ（一般には50g/cm2以下）及び緩慢な硬化時間である。また、複数のヒトドナーからの血液製剤（フィブリノーゲン及び補助因子）を使用する際に、患者への感染の恐れがある。そのため、フィブリンシーラントを調製するために自己血液を用いる方法が提案されている。（特許文献１参照）。
【特許文献１】特開昭５７−１４９２２９号公報
【０００６】
生体由来物質であるゼラチンが主剤、グルタルアルデヒド等が架橋剤として用いられる生体組織用接着組成物が知られている。（特許文献２参照）。しかし、ゼラチンを主剤として含むため加温しないと使用できないという問題点がある。術野において特別な準備が必要となる結果として適用に時間を要し、手術時間の延長という患者への負荷が増大する問題が生じる恐れがある。
【特許文献２】特開平６−７０９７２号公報
【０００７】
これらの理由より、室温で使用可能な主剤を用いた柔軟かつ接着強度を兼ね備えた医療用接着剤の技術はこれまで確立されていなかった。これらの技術は、主剤及び架橋剤をデバイスにより自動に混合して塗布するような場合の最適組成化において特に有用となる。
【０００８】
主剤の加温溶解操作が不要な接着剤として、遺伝子操作由来タンパク質と多官能性アルデヒドとの生体組織用接着剤が提案されている。（特許文献３参照）。しかし、主剤としてタンパク質のみを使用しているため、ゲル化後の物性が硬く、脆いため皮膜剥がれによる血管梗塞や再出血の危険性がある。
【特許文献３】特開２０００−２８８０７９号公報
【０００９】
また、コラーゲンタンパク部分加水分解物質と水溶性キチン誘導体を主剤、アルキレンアルデヒドを架橋剤として用いる生体組織用接着剤が知られている。（特許文献４参照）。添加剤としての水溶性キチン誘導体は、ゲル化物に十分な柔軟性を付与するには困難を極めるため、上記と同様の懸念がある。
【特許文献４】特開２０００−２９０６３３号公報
【００１０】
さらに、特定のpH範囲内におけるタンパク質を主剤、変性ポリエチレングリコールを架橋剤として用いる接着剤シーラント組成物が知られている。（特許文献５参照）。しかし、使用できるpHが制限されているため、その汎用性が制限される。
【特許文献５】特許第３５９２７１８号公報
【００１１】
加えて、血漿タンパク質を主剤、多官能性アルデヒドを架橋剤とした接着剤組成物が知られている。（特許文献６参照）。本特許文献には、トレハロースから誘導されたアルデヒドを用いた実施例が開示されている。しかし、トレハロースアルデヒド単体を架橋剤として用いていることから、接着硬化するまでの反応時間が1時間を要し、さらに１時間後の引裂強さは高々２４５g／cm2しかなく、手術用の接着剤として実用的ではない。
【特許文献６】特許第３４８３８８２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、従来に比べて、操作性が向上するだけでなく、十分な接着強度及び生体組織接着に適合する柔軟性を付与する２液型接着剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らはアルブミンおよび、多価フェノール化合物および／またはポリフェノール化合物を主成分とする主剤、アルデヒドを主成分とする架橋剤からなる２液型接着剤を用いることにより、従来法のような煩雑な使用形態をとらずに容易に適用できるだけでなく、十分な接着強度及び柔軟性を付与できることを見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明は以下のような構成を有する。
本発明は、主剤と架橋剤からなる２液型接着剤であって、主剤がアルブミンおよび、多価フェノール化合物および／またはポリフェノール化合物を主成分とし、架橋剤がアルデヒドを主成分としてなる２液型接着剤である。
本発明において、前記２液型接着剤が、主剤に添加剤を含むことが好ましい。
また、本発明において、該添加剤が有機酸のナトリウム塩であることが好ましい。
また、該添加剤が安息香酸ナトリウムであることが好ましい。
また、該多価フェノール化合物がレゾルシンまたはβ−レゾルシルアルデヒド（２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド）であることが好ましい。
また、該ポリフェノール化合物がフラボノイド類であることが好ましい。
また、主剤中の多価フェノール化合物またはポリフェノール化合物含量が０．０１〜２０重量％であることが好ましい。
また、主剤中の添加剤含量が０．００１〜２０重量％であることが好ましい。
また、該アルブミンが、ヒト血液由来アルブミン、ウシ血液由来アルブミンの主要なフラグメント、及び化学的に改変されたアルブミンからなる群より選択される１種以上のアルブミンを含むことが好ましい。
また、主剤中のアルブミン含量が５〜４５重量％であることが好ましい。
また、該アルデヒドが、アルキレンアルデヒドおよび／または糖アルデヒドからなることが好ましい。
また、該アルキレンアルデヒドがホルムアルデヒド、グリオキサール、スクシンアルデヒド、グルタルアルデヒド、マレアルデヒドからなる群から選ばれる１種以上のアルキレンアルデヒドからなることが好ましい。
また、架橋剤中のアルキレンアルデヒド含量が０〜３０重量％であることが好ましい。
また、該糖アルデヒドが繰り返し単位１〜１，０００の糖を酸化して得られるものであることが好ましい。
また、該糖アルデヒドが単糖、二糖、三糖、四糖を酸化して得られるものから選ばれる１種以上であることが好ましい。
また、架橋剤中の糖アルデヒド含量が０〜３０重量％であることが好ましい。
また、架橋剤中のアルデヒド含量が０．００１〜３０重量％であることが好ましい。
また、主剤と架橋剤とを１００：１〜１００：１００の重量比で混合するのが好ましい。
また、該２液型接着剤は、止血用または生体組織用に用いるのが好ましい。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の２液型接着剤は、従来の接着剤に比べて、主剤の事前加温の必要性がなくなるだけでなく、十分な接着強度と組織に適合する柔軟性を付与した材料を提供することができる。主剤としてアルブミンを用いることにより、従来技術のゼラチンを用いた主剤における事前加温が不要となり、さらには主剤・架橋剤の精密混合を可能とする２液混合デバイス等を用いた生体組織接着の際の接着時間の最適化に特に有効な材料を提供できる。また、十分な強度と適切な柔軟性を自在にコントロール可能な、従来技術を凌駕する材料を提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明において、ゲル化とは主剤である生体由来物質と架橋剤であるアルデヒドとの重合反応により分子量が無限大となり、いかなる溶媒にも不溶な膨潤体となることを意味し、その反応をゲル化反応と呼ぶ。
【００１６】
医学、生物学において、アルデヒド水溶液は生物組織の標本作製のための防腐、
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に広く用いられている。これはアルデヒドが、組織の細胞内外に浸透し、主に組織中の蛋白質に結合することで、蛋白質の立体構造を損なわせ、酵素活性、輸送、分泌などの様々な生物活性を阻害する作用のためであると考えられている。古来よりアルデヒドによる生体組織の固定化が行われ、中でもアルキレンアルデヒドであるグルタルアルデヒド処理は顕微鏡観察を行う標本作製の準備段階として用いられてきた。グルタルアルデヒドに代表されるアルキレンアルデヒドはその反応速度が非常に大きい。水溶液中で高い反応性を示し、分オーダーの接着時間を得るためにはアルキレンアルデヒドの使用が好ましい。
【００１７】
生体組織用接着剤である先述のGRF接着剤の架橋剤としては、ホルムアルデヒド及びグルタルアルデヒドが用いられているが、近年それらの生体毒性が懸念されている。なぜなら、アルキレンアルデヒドがもつアルデヒド基は生体を構成する酵素などのタンパク質と反応してアルキレン基＝疎水基を分子内に導入して酵素活性などを消失する恐れがあり、未反応アルキレンアルデヒドが残存すると先述のように生命活動を阻害するような毒性を招く恐れがあるからである。すなわち、手術時の縫合に生体組織用接着剤を併用する際には出来るだけゲル化時間が短い方が手術時間の短縮および患者負担の軽減といった観点からは好ましいが、アルキレンアルデヒド類は先述したように、未反応物の残存は生体安全性という点で問題がある。そこで、本発明者らは生体組織用接着剤の安全性向上について鋭意検討した結果、人体の生命活動に不可欠である糖類をアルデヒド化して用いることができれば、万が一未反応物が残存しタンパク質分子と反応したとしても、糖の持つ親水構造によりその影響を最大限に緩和できると考えた。また、糖類のアルデヒド化について検討したところ、糖の環構造を酸化分解するのが簡便で収率よく得ることができることを見出した。
【００１８】
先述したGRF接着剤は、主剤がゼラチン及びレゾルシンからなり、架橋剤がホルムアルデヒド及びグルタルアルデヒドからなる２液型接着剤である。その接着メカニズムは、ゼラチンのアミノ基とアルデヒドとが水の脱離を伴いながら重縮合反応が進行しゲル化するものである。ここで、レゾルシンは接着剤に柔軟性を付与するものであり、GRF接着剤の場合、ゼラチンの3分の1程度の量が配合されている。架橋剤である二種類のアルデヒドはその混合比あるいは全体の濃度を増減することにより重合速度を制御することができる。２液混合により得られた接着剤（ゲル化物と称することがある）の物性は組成の大部分を占める主剤の特性に左右される。
【００１９】
GRF接着剤は、手術用接着剤として広く認知されるに至っているが、先述したようにゼラチンは室温で固体であるため使用前に主剤全体を加温してゼラチンを溶解する必要があるという問題を抱えている。対して、本願発明の主剤はゼラチンに変えてアルブミンを使用するため、流通過程や保管、使用に際して溶液状態を保つことができ、使用前に主剤を加温して溶解させる処理が全く必要ないという優位性がある。
【００２０】
GRF接着剤のゲル化反応のメカニズムとしては、ゼラチンのカルボン酸残基とレゾルンシンとのエステル化反応による主剤内容物の反応がゲル化に大きく寄与している。（非特許文献８参照）。また、先述したようにGRF接着剤において、ゼラチンに対してレゾルシンを１／３程度配合することにより初めてゲルに柔軟性が付与されていたが、アルブミンとレゾルシンとを主剤中に溶解する場合には柔軟性を発現できるほどの量のレゾルシンを添加することができないという問題が発生した。レゾルシン自体は水に対して易溶であり、アルブミン水溶液に対するレゾルシンの溶解性が低い理由はよくわからないが、アルブミンとレゾルシンとの相溶性がよくないために主剤中にレゾルシンを多量に添加することができないのではないかと考えている。
【非特許文献８】河崎任利、加藤治文、會沢勝夫、生体接着剤GRF（gelatin-resorcin-formaldehyde）の抗種瘍剤徐放性基材としての実験的検討、東医大誌５７（５）：４８１〜４９０、１９９９
【００２１】
そこで本発明者らは、主剤であるアルブミン水溶液へのレゾルシン添加量を増大することについて鋭意検討した結果、アルブミンとレゾルシン両者を相溶化できるような添加剤を加えることにより主剤中へのレゾルシンの添加量を増量できるのではないかと考え、さらに検討を進めた。検討の結果、例えば、疎水性（ベンゼン）骨格＋親水性基からなる構造を有するものを添加剤として用いることによりレゾルシン添加量を増大できることがわかった。前記、疎水性（ベンゼン）骨格＋親水性基を有する添加剤を用いることにより、レゾルシン添加量が増大した理由はよくわかっていないが、アルブミンとレゾルシンの両者に対して界面活性作用のようなものが働き、相溶性、溶解性が増大したものと考えている。
【００２２】
また、アルブミン、レゾルシン、添加剤とからなる主剤溶液の化学的分析を行ったところ、予想に反してアルブミンとレゾルシンとの反応によるエステル結合の生成は起きていないことがわかった。一方、先述したようにGRF接着剤においては、主剤中でゼラチンとレゾルシンがゼラチンのカルボン酸残基とレゾルンシンとがエステル化反応により結合しており、この点においても本願発明の接着剤とGRF接着剤とは相違している。すなわち、ゲル自体は架橋しているので分析することはできないが、本願発明の接着剤と従来技術であるGRF接着剤において、主剤と架橋剤との反応で得られるゲルは図１に示すような構造的な違いを有していると考えられる。
【００２３】
本願発明において、レゾルシンはまず、アルブミンと反応するよりも先にアルデヒドと反応し、両末端アルデヒド化レゾルシンが生成し、次に両末端アルデヒド化レゾルシンとアルブミンとが反応することにより、図１右側に示すようにアルデヒド化レゾルシンの両末端にアルブミンが結合してゲルを形成する。このような反応機序および中間生成物を得ることにより、反応性が向上するだけでなく、ゲルの主鎖構造にアルデヒドがスペーサーとして組み込まれることにより、柔軟性が高まったものと考えている。また、本発明の二液型接着剤の安全性は既存技術であるGRF接着剤と同等以下であることも確認した。
【００２４】
以下、本発明をさらに詳細に説明する。
本発明の添加剤としては、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、ペンタン酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、ノナン酸、クロトン酸、乳酸、レブリン酸、ピロ酒石酸、シュウ酸、マロン酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、グルタル酸、リンゴ酸、アジピン酸、クエン酸、安息香酸、フタル酸、イソフタル酸、テレフタル酸、サリチル酸、アセチルサリチル酸、没食子酸からなる有機酸群および／または、これら有機酸のアンモニウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、鉄塩、銅塩、アルミニウム塩からなる有機酸塩群から選ばれる少なくとも１種以上であることが好ましい。安全性、取り扱い性およびコストの面からナトリウム塩がより好ましく、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウムが更に好ましい。
【００２５】
先述したように、水中でアルブミンと多価フェノール化合物を混合した際に、多価フェノール化合物の持つ疎水性のベンゼン環が親水性のアルブミン分子との相溶性を低下させるために両者を混合した際にレゾルシンの溶解不良（沈殿）が生じるのではないかと考えている。この沈殿を回避するためには親水性および疎水性の置換基をもつ、すなわち界面活性作用を有する添加剤を用いることにより、性質の異なる両者を溶解させ均一な水溶液とすることができるのではないかと考えている（図２参照）。
本発明において、用いる添加剤は、溶液のpH変化を小さく抑えることができ、また生体安全性が高いことから有機酸塩、特に有機酸ナトリウムを添加剤として用いることが好ましい。多価フェノール化合物と同様にベンゼン環を有することでアルブミンと多価フェノール化合物との相溶化効果が高いだけでなく、食品添加物への使用という生体安全性に対する実績を持つ安息香酸ナトリウムを添加剤として用いることがより好ましい。
【００２６】
本発明において、多価フェノール化合物が下記一般式（１）で表される２価のフェノール化合物であることが好ましい。疎水性置換基の増大による水溶性の低下が懸念されるため、レゾルシン、β−レゾルシルアルデヒド（２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド）又はγ−レゾルシルアルデヒド（２，６−ジヒドロキシベンズアルデヒド）、４−ジヒドロキシベンジルアルコール、２，６−ジヒドロキシベンジルアルコールがより好ましい。
【化１】
2008104612.tif 000002
(式中Ｘは−ＣＨ3 ，−ＣＨ2 ＯＨ又は−ＣＨＯ基を表し、ｎは０〜３の整数を表し、ｎが２又は３の場合Ｘは同一又は各々異なる基であってもよい。）
【００２７】
本発明において、ポリフェノール化合物が下記一般式（２）で表されるフラボノイド類であることが好ましい。フラボノイド類を使用する場合は、疎水性置換基の増大による水溶性の低下が懸念されるため、レゾルシンなど多価フェノール化合物を用いる場合よりも、界面活性作用を有する添加剤の添加量を高めることが好ましい。
【化２】
2008104612.tif 000003
【００２８】
本発明において、主剤中の多価フェノール化合物および／またはポリフェノール化合物含量は、０．０１〜２０重量％であることが好ましく、含量が低すぎるとその柔軟性付与効果が十分でないため１重量％以上がより好ましく、多すぎると溶解性が低下する可能性があるため１８重量％以下が更に好ましい。
【００２９】
本発明の主剤中の添加剤含量は０．００１〜２０重量％であることが好ましい。多すぎると主剤粘度過度につながるため、１８重量％以下がより好ましく、また少なすぎると十分な相溶効果が期待できないため、０．０１重量％以上がさらに好ましい。
【００３０】
本発明に用いるアルブミンには、ヒト血清アルブミン、遺伝子組み換え技術で製造されたヒト血清アルブミン（以下、組み換えヒト血清アルブミン）、ウシ血清アルブミン等その由来に制限はない。ヒトへの適用を考えた場合、ヒト血清アルブミンまたは組み換えヒト血清アルブミンであることが好ましく、特に入手のしやすさの点からヒト血清アルブミンであることがより好ましい。
【００３１】
本発明において、主剤中のアルブミンおよび、多価フェノールおよび／またはポリフェノール化合物の総含量が３８〜５５重量％であることが好ましい。この範囲であれば、主剤と架橋剤を予め混合したものを適用部位に塗布した際に、適用部位より流れ落ちない程度の粘性を確保できるため好ましい。総含量が高すぎると主剤の粘性が高くなるため架橋剤との混合が困難となることがある。したがって主剤中の該総含量は５０重量％以下がより好ましい。主剤中の該総含量が低すぎると適用部位において接着剤の流延の恐れがあるため４０重量％以上がより好ましい。
【００３２】
本発明において、主剤中のアルブミン含量は５〜４５重量％であることが好ましい。アルブミン含量が低すぎると接着部位から容易に流れ落ちてしまう問題が起こる可能性が生じるため１０重量％以上がより好ましく、１８重量％以上がさらに好ましく、２６重量％以上がさらにより好ましい。また、アルブミン含量が高すぎると流動性が低くなるため取扱い性が低下する可能性がある。したがって、主剤中のアルブミン含量は４３重量%以下がより好ましく、３９重量％以下がさらに好ましく、３５重量％以下がさらにより好ましい。
【００３３】
本発明において、アルデヒドがアルキレンアルデヒド、糖アルデヒドから選ばれる１種以上のアルデヒドであることが好ましい。複数種のアルデヒドを組み合わせることにより、単一なアルデヒドでは得られなかったゲル化時間とゲル化反応率の制御がしやすくなる。
【００３４】
本発明において、アルキレンアルデヒドがホルムアルデヒド、グリオキサール、スクシンアルデヒド、グルタルアルデヒド、マレアルデヒドからなる群から選ばれる１種以上のアルキレンアルデヒドであることが好ましい。ホルムアルデヒドとグルタルアルデヒドを組み合わせることによりゲル化時間の制御がより厳密に行えるため、より好ましい。グリオキサールとグルタルアルデヒドを組み合わせることにより、ホルムアルデヒドの毒性を低減できるため、更に好ましい。
【００３５】
本発明において、架橋剤中のアルキレンアルデヒド含量が０〜３０重量％であることが好ましい。含量が低すぎると十分なゲル化物が得られず、早期溶解による再出血の恐れがあるため、０．５重量％以上がより好ましく、１重量％以上がさらに好ましい。含量が高すぎるとゲル化反応の完了が早すぎて十分な接着が行えない。したがって、アルキレンアルデヒド含量は２５重量％以下がより好ましく、２０重量％以下がさらに好ましく、１５重量％以下がさらにより好ましい。
【００３６】
本発明において、糖アルデヒドの糖鎖部分は繰り返し単位が１〜１０００であることが好ましい。より好ましくは１〜１００、さらに好ましくは１〜１０、よりさらに好ましくは１〜４である。具体的には、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、キシロース、スクロース、ラクトース、マルトース、イソマルトース、セロビオース、トレハロース、ゲンチオビオース、ラミナリビオース、キトビオース、キシロビオース、イヌロビオース、マンノビオース、ヒアロビオウロン酸、コンドロシン、セロビオウロン酸、ラフィノース、ニューラミンラクトース等がある。繰り返し単位が大きすぎると反応性が低下する恐れがある。二糖類のトレハロースは、凍結あるいは乾燥時に細胞や細胞内物質を保護する作用を有しており、医薬、化粧品、食品等の分野で保存、安定剤等としての役割が期待されている物質であるため原料として好ましい。
【００３７】
本発明において、糖アルデヒドの調製方法は限定されないが、一例として糖類を酸化分解することによって得ることができる。酸化剤としては塩素、次亜塩素酸、過酸化水素、過マンガン酸カリウム、過硫酸アンモニウム、過ヨウ素酸、硝酸、オゾンなどがあるが、本発明においては取り扱い性の点や優先的にアルデヒドを生成できる点から過ヨウ素酸及びその塩を用いるのが好ましい。
【００３８】
本発明において、架橋剤中の糖アルデヒド含量は０〜３０重量％で用いることが好ましい。糖アルデヒドの含量が高すぎるとゲル化反応の完了が早すぎて十分な接着が行えない恐れがあるため、２５重量％以下がより好ましく、２０重量％以下がさらに好ましく、１５重量％以下がさらにより好ましい。含量が低すぎるとゲル化反応に関与しない恐れがあるため、０．５重量％以上がより好ましく、1重量％以上がさらに好ましい。
【００３９】
本発明において、架橋剤中のアルデヒド含量が０．００１〜３０重量％であることが好ましい。アルデヒド含量が低すぎると十分な接着力が得られない恐れがあるため０．０１重量％以上がより好ましく、０．１重量％以上がさらに好ましく、０．５重量％以上がさらにより好ましい。含量が多すぎるとゲル化反応の完了が早すぎて十分な接着が行えない恐れがあるため、２８重量％以下がより好ましく、２５重量％以下がさらに好ましく、２０重量％以下がさらにより好ましい。
【００４０】
本発明において、架橋剤に含まれるアルデヒドは主剤タンパク質と反応しゲル化をもたらす。該アルデヒドの濃度を増減させることにより、ゲル化の速度をコントロールすることができる。ゲル化の速度は用いるアルデヒドの反応性に大きく左右され、例えばアルキレンアルデヒドであるグルタルアルデヒドを用いると、低分子量体でありかつ二官能性のアルデヒドであることからら速やかな反応完了をもたらすことができ、ホルムアルデヒドを用いた場合は１つのアルデヒド基のみの構造であることから反応速度が遅く、緩やかに反応が進行することになる。さらに、トレハロースアルデヒドを用いた場合は通常のアルキレンアルデヒドよりも分子量が大きいため反応が緩慢であるが、二官能性のアルデヒドであるため架橋点を確実に形成することができるため時間と共にゲル化が確実に進行し、十分な反応率を持ち耐水性能の高いゲルを得ることができるメリットがある。
【００４１】
本発明において、主剤と架橋剤とを混合して得られる接着ゲル化物の特性は主剤の特性によるところが大きいが、架橋剤として用いるアルデヒドが接着ゲル化物の特性に与える影響はゼロではない。すなわち、反応性が高いアルデヒドを用いる場合はゲル化反応が速やかに完了するとともに、より強固なゲルが生じる。一方、アルデヒドの反応性が低くゲル化が緩慢な場合は、より柔軟なゲルが生じることになる。このように、用いるアルデヒドは接着剤としての用途や適応部位、接着時間、接着強度、柔軟性あるいは安全性などを総合的に考慮して適宜選択すればよく、何ら限定されるものではない。例えば、外科手術時の止血用ないしは患部接着用に用いる場合は、接着に要する時間はある程度短く、接着強度および柔軟性に優れ、かつ未反応アルデヒドの安全性が高いものが好ましい。この場合、具体的には糖アルデヒド／アルキレンアルデヒド＝０〜１５重量％／０．００１〜１５重量％を用いるのが好ましい。
【００４２】
本発明において、ゲル化完了時間は３０秒以上１２０秒未満が好ましい。３５秒以上１１０秒未満がより好ましく、４０秒以上１００秒未満がさらに好ましい。ゲル化完了時間が早すぎると適用部位に塗布するまでにゲル化が進行してしまうため接着力が低下したり、消失してしまう可能性がある。ゲル化完了時間が遅すぎると接着までに長時間を要する為、適用部位より流れ落ちてしまったり、手術時間が遅延してしまうことがある。
【００４３】
本発明において、ゲル化反応率は５０％以上が好ましい。５５％以上がより好ましく、６０％以上がさらに好ましい。ゲル化反応率が低すぎると、主剤と架橋剤との混合物が生体内の水分によって速やかに溶解し、その結果として適用部位からの再出血が生じる恐れがある。生理食塩水などによりゲルを抽出することで、水分に不溶な成分＝完全なゲルの重量を求めることができる。
【００４４】
本発明において、主剤と架橋剤とを１００：１〜１００：１００の重量比で混合することが好ましい。架橋剤比が小さすぎると十分なゲル化物を得られない恐れが生じるため１００：５以上がより好ましく、架橋剤比が大きすぎると架橋剤粘度が低いために主剤と架橋剤を混合した直後に混合物の粘度が低下し、ゲル化が完了するまでに適用部位から流れ落ちてしまい、十分な接着力が得られない恐れがあるため、１００：７０以下がさらに好ましい。
【００４５】
本発明の２液型接着剤は、止血及び生体組織接着の際に必要となる柔軟性および接着強度を発揮することができるため、止血用または生体組織用の接着剤として用いることが可能である。その際、主剤と架橋剤を正確な重量比で押出しできる２液型接着剤用のデバイスを使用することにより、主剤と架橋剤とを適正な量混合することが可能となり、未反応架橋剤の残留を抑制できるため好ましい。
【００４６】
本発明において、主剤中のアルブミン／（多価フェノール化合物またはポリフェノール化合物）／添加剤／水の含量は２０〜４５／１〜１５／０．１〜２０／２０〜７８．９の重量比であることが好ましい。アルブミン、多価フェノール化合物またはポリフェノール化合物、添加剤の重量比が大きくなりすぎると主剤の粘度の流動性が低下し、使用の上で支障をきたす恐れがあり、少なすぎるとゲル化する前に適応部位から流れ落ちてしまう恐れがある。そのため、２１〜４４／２〜１４／０．２〜１９／２３〜７６．８の重量比がより好ましく、２２〜４３／３〜１３／０．３〜１８／２６〜７４．７がさらに好ましい。
【実施例】
【００４７】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらのよって限定されるものではない。
【００４８】
（ゲル化完了時間測定）
動的粘弾性測定機（HAAKE社ＲＳ１）を用いて行った。ディスポーザブルパラレルプレートセンサーシステムを用い、応力；１００ Pa、周波数；1 Hz、測定温度；２０℃、ギャップ；1 mmの条件下で実施した。測定サンプルは以下のように調製した。実施例に示す濃度の主剤；０．２ｇをパラレルプレート上に添加し、その上に架橋剤；０．０２gを実施例に示す分量加えた。それをスパチュラで５秒間混合した直後に測定を開始した。ゲル化時間は弾性項（G’）と粘性項（G’’）が交差する位置（G’=G’’）、すなわちゲルポイントで評価した。ゲルポイントが３０秒以上１２０秒未満を良好とし、３０秒未満および１２０秒以上を不良とした。
【００４９】
（ゲル化反応率測定）
３０ mL容のガラス製バイアル内に実施例に示す濃度の主剤；１ｇ、架橋剤；０．１ｇを加えてスパチュラにて10分間両者の混合を継続した。混合によって得られたゲルに生理食塩水；２０mgを加え、３７℃にて振とうインキュベートを２４時間実施した。インキュベート後のゲルを取り出し−５℃で２４時間かけて凍結を行い、減圧乾燥機にて４８時間の凍結乾燥を実施した。凍結乾燥後の乾燥重量を、混合前の主剤と架橋剤の理論乾燥重量の和で割ることによりゲル化反応率を算出した。このゲル化反応率が５０重量％以上を良好とし、５０重量％未満の場合は不良とした。
【００５０】
（主剤粘度の測定）
動的粘弾性測定機（HAAKE社ＲＳ１）を用いて行った。ディスポーザブルパラレルプレートセンサーシステムを用い、回転制御にて回転速度１０（1/s）、測定温度；２０℃、ギャップ；1 mmの条件下で実施した。測定サンプルは以下のように調製した。実施例に示す濃度の主剤；０．２ｇをパラレルプレート上に添加し測定を開始した。測定開始後１８０秒後の粘度を主剤粘度として記録し、粘度が２０以上８０Pa・s未満を良好とし、それ以外の粘度を不良とした。粘度が２０Pa・s未満であると組織から流出の恐れが起こるので好ましくなく、８０Pa・s以上であると高粘性のために架橋剤との混合が困難となり、ゲル化が不均一に起こる恐れがある。
【００５１】
（引張強度測定）
直径60mmのプラスチック製シャーレ内に実施例に示す濃度の主剤0.1 g、続いて架橋剤0.01ｇを実施例に示す分量添加し、それらを5秒間混合した後、羊毛試験片（0.3×10×50mm）の末端10×10mmの範囲内に塗布し、別の試験片の先端と接着した後50gの錘で2分間押圧した。その後引っ張り試験機による評価を行った。引張試験機はオートグラフAGS-50NJ形（島津製作所）を用いて行った。試験条件は以下のとおりである。ロードセルは5kgのものを用い、クロスヘッドスピードは30mm/min、チャック間距離は7cmで実施した。平均値（n=5）をデータとして用いた。最大試験力を引張強度とし、１．０〜２．０kgfを良好とした。弾性率は0.2および0.4 kgfの２点を結ぶ接線の傾きより算出し、弾性率１１０kgf／mm2以下を良好とした。
【００５２】
（トレハロースアルデヒド（TA）の合成）
６０℃（矢沢製作所製ウォーターバスを使用）にて２mmHg（島津製作所製真空ポンプＧＤＨ−６０を使用）の条件で２時間減圧乾燥したα，α−トレハロース二水和物（エンドトキシンフリー）（Hayashibara）；１９．２７ｇをイオン交換水（キシダ化学）；２００mLに溶解し、２L四つ口フラスコに仕込んだ。過ヨウ素酸二水和物（Ａｌｄｒｉｃｈ）；４８．７５ｇをイオン交換水（キシダ化学）；４００mＬに溶解し、上記四つ口フラスコに仕込んだ。上記四つ口フラスコにイオン交換水（キシダ化学）；２００mＬを仕込んだ。上記四つ口フラスコを遮光下に攪拌（野中理科器製攪拌器ＰＣ−３０を使用）しつつ、２１℃（東京理科器械製低温恒温槽ＣＡ−１１１１を使用）で２２時間保持した。イオン交換樹脂（Amberlite IRA96SB：オルガノ）；１Ｌをイオン交換水（キシダ化学）；５００ｍＬで３回洗浄した。反応液を２Lビーカーに移し、攪拌（アドバンテック製マグネティックスターラーＳＲＳ７１０ＡＡを使用）しつつ、イオン交換樹脂（Amberlite IRA96SB：オルガノ）を添加した。イオン交換樹脂（Amberlite IRA96SB：オルガノ）；６００mＬを添加し、水層のｐＨ（アドバンテック製試験紙ＵＮＩＶ）が中性であることを確認した。イオン交換樹脂（Amberlite IRA96SB：オルガノ）を濾別（アドバンテック製濾紙Ｎｏ．２）するとともにイオン交換水（キシダ化学）；４００ｍＬで４回洗浄した。上記濾液および洗浄液をナス型フラスコに移し、３５から４０℃（矢沢製作所製ウォーターバスを使用）にて２mmHg（島津製作所製真空ポンプＧＤＨ−６０）で減圧濃縮・乾燥することによりトレハロースアルデヒド（TA）；１６．６１ｇを得た。
【００５３】
（架橋剤濃度の調整）
前記TAを注射用蒸留水（大塚製薬）に溶解することによって調整した。グルタルアルデヒド（GA）（グルタルアルデヒド水溶液  和光純薬工業）、ホルムアルデヒド（FA）（ホルムアルデヒド液  和光純薬工業）、およびグリオキサール（GL）（Glyoxal  Aldrich）を混合した架橋剤の希釈は、注射用蒸留水（大塚製薬）を用いて行った。実施例において、二種以上の架橋剤を混合して用いる場合、例えば、「TA/GA=10/4」という表記は架橋剤水溶液中に１０重量％のTAと４重量％GAが共存することを意味する。
【００５４】
（主剤の調整−凍結乾燥）
真空凍結乾燥機（型式；ＴＦ５−８０MTN、（株）宝製作所）を用いて行った。アルブミン水溶液（ブミネート２５％、バクスター）1本をディスポシャーレ（９ｃｍφ、二プロ）1枚に流し入れた。−４２℃にて５時間かけて完全に凍結させた後、１時間かけて０．０１Torrまで減圧し、引き続き２５℃にて６０時間乾燥を行い常圧に戻すことで、アルブミン粉末（HSA）；１３．２９ｇを得た。
【００５５】
（主剤の調整−HSA水溶液の調整）
HSAに所定量の注射用蒸留水（大塚製薬株式会社）を加えることにより調整した。以下、45重量％HSA（HSA=45）の調整方法を具体例として示す。５０ｍＬ遠沈管（ポリプロピレン製、IWAKI）内に凍結乾燥によって得られたＨＳＡ；５．４０ｇと注射用蒸留水（大塚製薬）；６．６３ｇとを順番に秤りいれ、時折手で振り混ぜつつ５℃の冷蔵庫内で1週間静置し、目視にて溶解を確認した。
【００５６】
（主剤の調整−レゾルシンまたはカテキンの添加）
レゾルシン（R）（レソルシノール  和光純薬工業）、β−レゾルシルアルデヒド（RA）（2,4-Dihydroxybenzaldehyde  Aldrich）またはカテキン（カテキン混合物、緑茶由来  和光純薬工業）、および安息香酸ナトリウム（SB）（和光純薬工業）を注射用蒸留水（大塚製薬）に溶解したことを確認した後、上記HSAを添加し、溶解することにより調整した。主剤の組成表記について例えば、「HSA／R／SB＝３４／８／３」とは、主剤水溶液中にHSA、R、SBをそれぞれ３４、８、３重量％含有することを示す。以下、（HSA／R／SB＝３４／８／３）の調整方法を具体例として示す。５０ｍＬ遠沈管（ポリプロピレン製、IWAKI）内にＲ；０．９６ｇ、ＳＢ；０．３６ｇを秤りいれ、注射用蒸留水（大塚製薬）；６．６０ｇを加え振り混ぜることにより完全に溶解させた後、凍結乾燥によって得られたＨＳＡ；４．０８ｇを加え、時折手で振り混ぜつつ５℃の冷蔵庫内にて1週間静置し、目視にて溶解を確認した。
【００５７】
（実施例１）
主剤（HSA／R／SB＝３４／８／３）、架橋剤（FA／GA=５．６／０．８）を用い各種測定を実施した。結果を表１に示す。
【００５８】
（実施例２）
主剤（HSA／R／SB＝３４／８／３）、架橋剤（GL／GA=５／３．１）を用い各種測定を実施した。結果を表１に示す。
【００５９】
（実施例３）
主剤（HSA／R／SB＝３４／８／３）、架橋剤（TA／GA=２／１０．５）を用い各種測定を実施した。結果を表１に示す。
【００６０】
（実施例４）
主剤（HSA／カテキン／SB＝３０／９／９）、架橋剤（TA／GA=１２．５／５）を用い各種測定を実施した。結果を表１に示す。
【００６１】
（実施例５）
主剤（HSA／カテキン／SB＝３０／９／１０）、架橋剤（GA=５）を用い各種測定を実施した。結果を表１に示す。
【００６２】
（実施例６）
主剤（HSA／R＝３４／８）、架橋剤（FA／GA=5.6／0.8）を用い各種測定を実施した。結果を表１に示す。
【００６３】
（実施例７）
主剤（HSA／R／SB＝３４／２５／３）、架橋剤（FA／GA=5.6／0.8）を用い各種測定を実施した。結果を表２に示す。
【００６４】
（実施例８）
主剤（HSA／R／SB＝３４／０．００１／３）、架橋剤（FA／GA=5.6／0.8）を用い各種測定を実施した。結果を表２に示す。
【００６５】
（実施例９）
主剤（HSA／R／SB＝３０／１０／２１）、架橋剤（FA／GA=5.6／0.8）を用い各種測定を実施した。結果を表２に示す。
【００６６】
（実施例１０）
主剤（HSA／R／SB＝３０／１０／０．０００１）、架橋剤（FA／GA=5.6／0.8）を用い各種測定を実施した。結果を表２に示す。
【００６７】
（実施例１１）
主剤（HSA／RA／SB＝３０／８／３）、架橋剤（FA／GA=5.6／0.8）を用い各種測定を実施した。結果を表２に示す。
【００６８】
（比較例１）
主剤（ゼラチン／R＝３７．５／１２．５）、架橋剤（FA／GA=１８．５／２．５）を用い各種測定を実施した。結果を表２に示す。
【００６９】
（比較例２）
主剤（HSA＝４５）、架橋剤（TA／GA=４／２１）を用い各種測定を実施した。結果を表２に示す。
【００７０】
表１および２に示すように、適切な濃度および組成をもつ主剤および架橋剤を用いることにより、適切な主剤粘度、反応速度、反応率、ゲル柔軟性およびゲル強度をもつ2液型接着剤が得られることがわかった。
【００７１】
【表１】
2008104612.tif 000004
【００７２】
【表２】
2008104612.tif 000005
【００７３】
本発明において、アルブミン、多価フェノール化合物またはポリフェノール化合物、添加剤を混合した主剤に、アルデヒドを組み合わせた架橋剤を用いることにより、標的部位への適用が容易となる主剤粘度を持ち、従来技術ではなしえない良好なゲルが得られることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００７４】
本発明の２液型接着剤は、従来の接着剤に比べて事前加温という特別な処置が不必要になるだけでなく、適切な主剤粘度をもち接着時間やゲル化反応率といった接着性能が向上し、生体組織に適した柔軟なゲル化物が得られることを意味する。さらには主剤・架橋剤の精密混合を可能とする２液混合デバイス等用いた生体組織接着の際の接着時間の最適化に特に有効な材料を提供できる。したがって、産業の発展に寄与することが大である。
【図面の簡単な説明】
【００７５】
【図１】本発明の接着剤（ゲル化物）とGRF接着剤（ゲル化物）の構造の違いを示す模式図である。
【図２】本発明の接着剤の主剤中の各成分の存在状態を示す模式図である。
【図１】
2008104612.tif 000006
【図２】
2008104612.tif 000007