(57)【要約】【課題】癌の予防または治療用組成物の提供。【解決手段】実質的に未変性のホエータンパク質濃縮物を含んでなる、治療の必要な患者における癌の治療用組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
実質的に未変性のホエータンパク質濃縮物を含んでなる、治療の必要な患者における癌の治療用医薬組成物（但し、実質的に未変性のホエータンパク質濃縮物の一日投与量レベルが８〜４０ｇの範囲である場合を除く）。
【請求項２】
実質的に未変性のホエータンパク質濃縮物が、グルタミルシステイン基およびジスルフィド結合を有する、原料乳の実質上すべての熱に不安定なホエータンパク質を含んでなる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
実質的に未変性のホエータンパク質濃縮物が、グルタミルシステイン基およびジスルフィド結合を有する、原料乳の実質上すべての熱に不安定なホエータンパク質を、使い尽くされた細胞内グルタチオンを補給し、免疫応答を増強し、そして抗癌効果を及ぼすために十分な量含んでなる、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
実質的に未変性のホエータンパク質濃縮物が、グルタミルシステイン基およびジスルフィド結合を有する、原料乳の実質上すべての熱に不安定なホエータンパク質を、リンパ球を増加させるために十分な量含んでなる、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項５】
実質的に未変性のホエータンパク質濃縮物が、グルタミルシステイン基およびジスルフィド結合を有する、原料乳の実質上すべての熱に不安定なホエータンパク質を、癌を有する患者のＧ／Ｌ（顆粒球／リンパ球）比を減少させるために十分な量含んでなる、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項６】
実質的に未変性のホエータンパク質濃縮物が、１００ｇタンパク質あたり少なくとも２．４ｇシステインを含んでなる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
実質的に未変性のホエータンパク質濃縮物を含んでなる、ジメチルヒドラジンにより誘導される種類の損傷を有する治療の必要な患者における癌の治療用医薬組成物（但し、実質的に未変性のホエータンパク質濃縮物の一日投与量レベルが８〜４０ｇの範囲である場合を除く）。
【請求項８】
実質的に未変性のホエータンパク質濃縮物が、グルタミルシステイン基およびジスルフィド結合を有する、原料乳の実質上すべての熱に不安定なホエータンパク質を含んでなる、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
実質的に未変性のホエータンパク質濃縮物が、グルタミルシステイン基およびジスルフィド結合を有する、原料乳の実質上すべての熱に不安定なホエータンパク質を、使い尽くされた細胞内グルタチオンを補給し、免疫応答を増強し、そして抗癌効果を及ぼすために十分な量含んでなる、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
セレンが未変性ホエータンパク質濃縮物６０ｇ当たり４０〜６０ｍｃｇ（セレンメチオニンとして計算）の量含まれる、請求項１または７に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ビタミンＢ１が未変性ホエータンパク質濃縮物６０ｇ当たり１．５〜２．０ｍｇの量含まれる、請求項１または７に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
ビタミンＢ２が未変性ホエータンパク質濃縮物６０ｇ当たり１．７〜２．２ｍｇの量含まれる、請求項１または７に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
未変性ホエータンパク質濃縮物６０ｇ当たり下記成分が含まれる、請求項１または７に記載の医薬組成物：
ビタミンＢ１  １．５〜２．０ｍｇ
ビタミンＢ２  １．７〜２．２ｍｇ
セレン  ４０〜６０ｍｃｇ（セレンメチオニンとして計算）。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
本発明は、未変性ホエータンパク質濃縮物が高い免疫学的効果を有するという意外な発見に基づいている。更に具体的には、この発明は、化学的に誘導された癌の成長に対するホスト耐性における、未変性ホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）の経口投与の効果、および癌の阻害に対するこのような経口投与の効果にも関する。
【０００２】
米国出願第２９８，９７１号および第４１７，２４６号明細書および Bounousら“食餌ホエータンパク質はジメチルヒドラジン誘導性悪性腫瘍の成長を阻害する”(1) において、我々は、食餌中ＷＰＣの連続給餌が、２４週間ジメチルヒドラジン（ＤＭＨ）で処理されたマウスの結腸において、成長（腫瘍の数および大きさ）を阻害することを示す実験を記載した。この抗腫瘍効果は、発癌物質に対する標的細胞の耐性増加および／または癌細胞におけるＷＰＣの直接阻害効果に起因していた。動物に最初２０週間のＤＭＨの際Purina食餌を与え、残り８週間のＤＭＨ処理の際ＷＰＣ食餌に切り換えた、その後の一連の実験(2) では、癌細胞におけるＷＰＣ給餌の阻害効果が示唆された。
【０００３】
つい最近(3) 、フランスの科学者らはヒト癌細胞に対するＷＰＣの直接阻害効果をインビトロで確認している。事実、ヒト乳癌細胞によるインビトロの類似の研究では、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）が癌細胞複製の阻害因子であることが示されている(4) 。
【０００４】
我々は、ＷＰＣのこの活性がＷＰＣのＢＳＡ分画中に存在するグルタミルシステイン基（ＧＳＨ合成の基質）に特に依存していることも示している（米国出願第５６３，７９４号）。興味あることに、システインデリバリー系オゾチアゾリジン‐４‐カルボキシレート（ＯＴＺ）（オゾチアゾリジン‐４‐カルボキシレート）の導入は、正常細胞でグルタチオン（ＧＳＨ）レベルを高めるが、ヒト腫瘍細胞でＧＳＨサイクルのフィードバック阻害を起こすことがわかった(5) 。ＯＴＺのこの差異のある効果は最近インビボで確認されている(6) 。したがって以前に記載されたＷＰＣ(3) 、更に具体的にはＢＳＡ(4) の直接阻害効果は、グルタミルシステインのような強力なシステインデリバリー系のインキュベート時における放出により説明することができた。
【特許文献１】米国特許第５６３，７９４号
【発明の概要】
【０００５】
したがって、我々は下記結論に到達した：
１）ＢＳＡは、我々がＷＰＣのＧＳＨ促進活性に主に関与していることを見い出した、ＷＰＣのタンパク質分画である。我々がＷＰＣの免疫増強および抗発癌効果の基礎であると考えているこの活性は、ＷＰＣのＢＳＡ分画中に存在するグルタミルシステイン基（ＧＳＨ合成の基質）に特に依存している。
２）ＢＳＡの分子量は６６，２６７であり、このためVilladsen に特許された抗癌因子のＭＷ（ＭＷ５００〜２０，０００）と全く異なる。
３）我々の初期の発見(1,2) は下記のように説明できる：ＤＭＨ処理時に、ＷＰＣ給餌は細胞ＧＳＨを増加させることにより、発癌物質の作用から標的細胞を保護している。加えて、ＧＳＨ合成用基質の利用性が増加すれば、形成された癌細胞の複製を阻害することができる。
４）我々は、今般、ＧＳＨ合成用基質を提供する上で、ＷＰＣにおける高レベルの血清アルブミン（ＢＳＡ）の重要性について立証した。我々は１０％以上のＢＳＡを含有した未変性形の食餌ホエータンパク質濃縮物が抗腫瘍効果を発揮すると結論付けることができる。
【発明の具体的な説明】
【０００６】
定義
(a)ホエータンパク質
ホエータンパク質とは、ｐＨ４．６および２０℃でカゼインの沈降後に“乳清”またはホエー中に溶解している、乳タンパク質の群である。牛乳中の主要ホエータンパク質はβ‐ラクトグロブリン（βＬ）、α‐ラクトアルブミン（αＬ）、免疫グロブリンおよび血清アルブミン（ＳＡ）である。
ホエーからこのタンパク質混合物の工業分離産物は“ホエータンパク質濃縮物”（ＷＰＣ）または単離物と呼ばれる。我々の初期実験のほとんどで用いられたＷＰＣは牛乳("Danmark Protein A.S." のLacprodan-80) 由来である。その未変性状態での使用はU-Lacpと示され、その変性状態での使用はD-Lacpと示される。ラクトアルブミン（Ｌ）はＷＰＣを表すために伝統的に用いられてきた用語である。
(b)Ｃ＝カゼイン
(c)ＳＲＢＣ＝羊赤血球
(d)ＰＦＣ＝プラーク形成細胞（脾臓）：脾臓中ＰＦＣの計数はＳＲＢＣ注射に対する体液性免疫応答を評価するために用いられる。
(e)ＧＳＨ＝グルタチオン（Ｌ‐γ‐グルタミル‐Ｌ‐システイニルグリシン）
(f)ＤＭＨ＝１，２‐ジメチルヒドラジン
(g)試験された規定処方食餌はタンパク質の種類のみが異なる。
(h)牛乳のホエーはタンパク質約６g/ｌ、ラクトースのほとんど、ミネラルおよび水溶性ビタミンを含有している。
【０００７】
これらの研究で用いられる食餌：下記表３参照
食餌は下記のように調製した：選択された純粋なタンパク質２０ｇ；コーンシロップ、コーン油、タピオカデンプン、ビタミンおよびミネラルを含有した製品８００５６無タンパク質食餌粉末５６ｇ(Mead-Johnson Co.Inc.,U.S.A.);コーンスターチ１８ｇ；小麦フスマ２ｇ；Nutramigenビタミン‐鉄プレミックス(Bristol-Myers,Ontario,Canada)０．０５ｇ；ＫＣｌ  ２．６５ｇ；ＮａＣ ｌ  ０．８４ｇ。我々の処方食餌の炭水化物および脂質成分は同一である。様々な精製食餌で唯一の変えた要素はタンパク質のそのタイプであった（タンパク質２０ｇ／食餌１００ｇ）。食餌中におけるこの濃度で、試験されたすべての異なるタンパク質は成長マウスに必須アミノ酸の１日要求量を供給した(8) 。ビタミンおよびミネラルは各組の実験で同一であり、成長マウスに１日要求量を供給するために必要な量で加えた(9,10)。下記表１は、マウス食餌で提示されるビタミン要求量と、我々の処方の一部におけるそれらの含量に関する変動範囲について示している。したがって、我々の実験で用いられるすべての処方食餌は正常体成長、血清タンパク質(9) 、および脱毛、皮膚炎、白内障、運動失調、脂肪肝等の不存在で明らかになるように、十分な栄養を供給するように考えられた。後者の症状は非常に高齢のマウスに勿論存在し、老化プロセスと関係していた。
【表１】
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【０００８】
プラーク分析用の免疫
給餌マウスをInstitut Armand-Frappier,Laval des Rapides,Quebec,Canadaから毎週得られる５×１０６洗浄羊赤血球の静脈内注射により免疫した。
【０００９】
プラーク形成細胞（ＰＦＣ）アッセイ
ＩｇＭプラーク形成細胞を調べるために用いられた方法は、わずかな変更を加えたこと以外、本質的にCunninghamおよびSzenberg(11)により記載された方法であった。脾臓細胞懸濁液は、５０メッシュステンレススチールスクリーンに脾臓を静かに詰め込み、１０％熱不活化子牛血清(Grand Island Biological Company,Montreal,Quebec,Canada)で補充された平衡塩溶液（ＢＳＳ）において細胞を集めることにより調製した。脾臓細胞を洗浄し、ＢＳＳで１５mlに調整した。羊赤血球を２回洗浄し、２０％濃度に調整した。補体源としてのモルモット血清(Grand Island Biological Company,Montreal,Quebec,Canada)をＢＳＳで１／１５希釈した。すべてのストック溶液を使用時まで氷水上に保った。試験では脾臓細胞０．０５ml、羊赤血球０．１５mlおよび補体溶液０．７５mlを試験管中３７℃で混合した。全混合液を直ちに取出し、スライド室にいれ、加温パラフィンロウでシールし、３７℃で４５〜６０分間インキュベートした。プラーク形成細胞の数をカウントし、脾臓当たりのそれらの総数は各サンプル（脾臓細胞０．０５ml）中におけるプラーク形成細胞の数に３００を掛けて見積もった。値は１０６当たりの脾臓細胞よりもむしろ全器官当たりで表示するが、その理由はこの方が脾臓自体の機能状態をより正確に反映すると思われるからである。
【００１０】
マウスは、通常では免疫後応答がピークにある５日目に、または動態研究では免疫後３、４、５および６日目に、羊赤血球に対するプラーク形成細胞応答についてアッセイがなされた。
【００１１】
統計
平均プラーク形成細胞値を食餌群の中で比較したが、２群を比較する場合にはStudent´s 検定または３群以上の場合には分散の分析(ANOVA) を用いた。各群間の分散の不均一のために、Brown およびForsytheにより示された調整法を用いた。
【００１２】
脾臓グルタチオン含量
マウス脾臓９０mgをMettler PM-300計量器で秤量したが、各サンプルは９０mgから５mg（５％）以内の範囲内にある。次いでサンプルを５‐スルホサリチル酸（５％w/v)中でホモゲナイズした。ホモゲネートを遠心機において１０，０００×ｇで５分間遠心した。アッセイはAnderson(12)の方法に従い同日に上澄を用いて行った。値はμmol/湿潤組織ｇとして表示する。
【００１３】
組織グルタチオンアッセイ
マウス心臓または肝臓９０mgを５‐スルホサリチル酸（５％w/w)中でホモゲナイズした。ホモゲネートを遠心機において１０，０００×ｇで５分間遠心する。アッセイはAnderson(12)の方法に従い同日に上澄を用いて行う。値はμmol/湿潤組織ｇとして表示する。
【００１４】
１７月齢目にいずれかの食餌を始めてから３月後においてＧＳＨ含量は、D-Lacp（変性ホエータンパク質Lacprodan-80）、カゼイン、卵白タンパク質またはPurina食給餌対照群と比較してU-Lacp（未変性ホエータンパク質Lacprodan-80）給餌マウスの肝臓および心臓で高いことがわかった（図１および図２）。Purina実験食給餌マウスの心臓および肝臓におけるＧＳＨ値は１０週、１７、２０、２１月齢目に類似していた。U-Lacp食餌は３および４月間の連続給餌後に、心臓および肝臓のＧＳＨ含量を“正常”値よりも高めるらしい（図１および２）。
【００１５】
加えて、U-Lacp食餌で３週間後において脾臓ＧＳＨ含量は、D-Lacp、カゼインまたは卵白タンパク質食給餌コントロールでの減少と比較して、若い成熟C3H/HeN マウスでリンパ球の抗原誘導性クローン拡張（expansion ）中において増加している。老C57BL/6NIAマウスでは、U-Lacp食餌の長期給餌が肝臓および心臓ＧＳＨレベルで中度だが持続的な増加を起こす（図１および図２）。ＷＰＣのＧＳＨ増加活性はその未変性形(U-Lacp)に限定される。
【表２】
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*Danmark Protein A/S,Copenhagen,Denmark,1986 のLacprodan-80；これらの実験で使用
**"Amino Acid Content of Foods",U.S.D.A.,1957 から計算された値。使用サンプルについてSigma により分析されたシステインからの値＝２．３８g/タンパク質100gおよび我々の研究所＝２．４g/タンパク質100g
【００１６】
この性質は単にＷＰＣの高システイン含量によるものではない。その理由は、類似システインを含むもう１つのタンパク質源（卵白）（表２参照）がこの生物学的活性を示さないからである。U-Lacpのこの性質は体重、血清タンパク質および食物消費量で評価したところでは、その栄養効力に特に依存しておらず、その天然形におけるタンパク質の一次、二次および三次構造に依存しているようである。
【００１７】
以前に議論され、グルタチオン濃度の細胞内レベルを増加させる方法の一部は、グルタチオン枯渇の初期相に関連した危険性のために、毒性(13)があるかまたは危険である(14,15) 。γ‐グルタミルシステイン(16)、アチアゾリジン(17)、またはグルタチオンエステル(18)を使用する方法（米国特許第４，７８４，６８５号）では短期的治療に興味ある可能性を与える。しかしながら、細胞グルタチオンの持続的な上昇を起こすそれらの長期有効性は示されず、それらの長期使用の毒性可能性も反証されなかった。実際に、グルタチオンおよびグルタチオンジスルフィドは発癌性および変異誘発性に関して最も一般的に用いられる短期試験で陽性であることがわかった(13)。生合成酵素活性の減少よりも、むしろＧＳＨ前駆体、システインの欠如が、老化動物でみられるＧＳＨの欠乏に関与していることをとりわけ示す最近のデータは、我々の発明に関係してくるものである(19)。同様に、長期エタノール給餌ラットの肝臓におけるサイトゾルＧＳＨの減少は、γ‐グルタミルシステインシンテターゼ活性の能力の制限に起因していないようである(20)。
【００１８】
図１および２のデータは、コントロールPurina給餌マウスにおける肝臓および心臓グルタチオンの濃度が経時的に非常に安定していることを示す。他方、組織ＧＳＨの中度だが持続的な上昇が、栄養上同等のホエータンパク質(U-Lacp)食で給餌されたマウスでみられた。微量のグルタチオンだけが尿中に排出され、グルタチオンから容易に生じうる分解産物は排出されない(21)。達しうる細胞グルタチオン濃度の変化の大きさはかなり制限されるが、これはこの分子の臨界的重要性とそれに付随する厳格な調節コントロールをおそらく反映している。グルタチオン自体はＧＳＨ合成酵素で負のフィードバックとして働き、ＧＳＨ濃度を増加させる細胞能力を明らかに制限する(22)。グルタチオンレダクターゼはその主要な還元型でＧＳＨを維持する（≧９０％）。これは、還元グルタチオン（ＧＳＨ）が膜を通過できないことからこの機能状態を維持し、かつ細胞濃度をコントロールするように働くが、酸化型（ＧＳＳＧ）は流入でき、かつ流入して全グルタチオンを減少させる。これらの酵素以外にも、γ‐グルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）はＧＳＨ代謝にとって重要である。ＧＧＴは細胞膜レベルでグルタミル部分の再利用経路として働き、ＧＳＨ合成で用いられるようにそれらをサイトゾル中に戻す。この酵素の活性増加はいくつかの細胞系および悪性組織におけるＧＳＨ濃度上昇と関連していた(23,24) 。
【００１９】
ＧＳＨ上昇を起こすビタミンＢ１（チアミン）を食餌中に含有させることが有利である。チアミンはＮＡＤＰＨを生じるペントースリン酸分路のトランスケトラーゼ反応に関与している（ＧＳＳＧはＮＡＰＰＨ；ＧＳＨレダクターゼによりＧＳＨに逆還元される）。
【００２０】
ビタミンＢ２（リボフラビン）も、また、有利な添加物である。フラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）およびフラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）はリボフラビンから連続的に合成され、ＧＳＨレダクターゼに関与している。
【００２１】
一部の乳、特にニュージーランド産の乳はセレンが少ない。セレンはＧＳＨペルオキシダーゼ中に含まれている。セレンが欠乏している哺乳動物は、ペルオキシダーゼ活性が著しく減少している。したがって、その抗癌効果にとり有利なグルタチオン形成には十分なレベルのセレンを要する。
【００２２】
我々が１日摂取量として未変性ホエータンパク質６０ｇの投与量レベルを想定するならば、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２およびセレンの推奨レベルは下記のとおりである：
ビタミンＢ１       1.5〜2.0mg 
ビタミンＢ２       1.7〜2.2mg 
セレンメチオニン    40〜60mcg 
【００２３】
細胞ＧＳＨの小さな増加効果は予想以上である。例えば、様々な化学療法剤への耐性に関して、インビトロで選択されるヒトおよびネズミ腫瘍細胞系には多くの報告がある。これら細胞系のうちいくつかにおいて、細胞ＧＳＨは、薬物耐性のレベルがしばしばかなり大きい、例えば３０倍も大きい、という事実(24,25,26)にもかかわらず、薬物感受性親細胞系と比較して一律的に２倍に増加している。これらの細胞系において、合成の選択的阻害による細胞ＧＳＨの枯渇は耐性細胞に薬物感受性を回復させる。これはＧＳＨ枯渇が薬物治療期間中ずっと維持されさえすれば有効である。
【００２４】
細胞ＧＳＨが非常に厳格に調節され、２倍の増加が最大のようであり、ＧＳＨの小さな増加効果が様々なＧＳＨ利用酵素（例えば、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオン‐Ｓ‐トランスフェラーゼ）により増幅されうるという事実からすれば、富ホエー食で給餌された動物で観察されるＧＳＨ濃度の再現性ある変化は生物学上重要である。この増加の慢性的性質は、この効果に有意に貢献するであろう。
【００２５】
我々の発見によれば、カゼイン食で給餌されたマウスにおいてＤＭＨ誘導結腸癌腫の数および大きさがPurina給餌コントロールと比較して各々３割および４割減少したことが示されている（下記表３）。しかしながら、類似した栄養効力のホエータンパク質食で給餌されたマウスにおいて、ＤＭＨ誘導結腸癌腫の数および大きさがPurina給餌コントロールと比較して１／４に減少した（下記表３）。ＤＭＨ誘導結腸腫瘍は、損傷の種類および化学療法応答特性に関するかぎり、ヒトでみられる場合と類似していると思われる(27,28) 。
【００２６】
カゼインと比較したホエータンパク質の抗癌効果の優位性は、我々の以前の研究で報告されている(1) 。牛乳中におけるタンパク質の約８０％はカゼインであり、残り２０％はホエータンパク質である(29,30) 。加えて、伝統的なカゼイン調製方法を用いれば、カゼインと一緒に共沈するホエータンパク質の量は、乳中に存在するホエータンパク質の全量の約４０〜６０％である(31)。したがって、カゼインでみられる小さな抗癌効果はそれと共沈する比較的（対カゼイン）少量のホエータンパク質のためであると考えられる。乳製品の抗腫瘍活性がタンパク質分画中、更に具体的には我々の発明が実証しているように、乳のホエータンパク質成分中にあることは、上記研究から明らかである。
【００２７】
この食餌ＷＰＣ補給の有益な効果は、それが他の供給源からの患者タンパク質摂取物の一部または全部に交換される範囲で高められる。
【００２８】
生存率研究：生物活性はＷＰＣの未変性コンホメーションに依存している
（ａ）限定期間中における老齢マウスの生存率：
我々の研究によれば、雄性C57BL/6NIAマウスの５５％が死んだときに終りとする、６〜７月間の限定観察期間中における平均生存時間は、栄養上同等のPurinaマウス食で給餌された“コントロール”と比較して、老化開始時（２１月齢）に未変性ホエータンパク質(U-Lacp)食餌を始めたマウスで約３０％伸びることが示された。Purina給餌マウスの生存曲線はカゼイン食給餌マウスの場合と非常に似ていた。しかしながら、その後の４月間は、マウスの未変性ホエータンパク質食餌を変性ホエータンパク質濃縮物(D-Lacp)食餌に切り換えた。この期間中、残存ホエータンパク質食給餌マウスの死亡時間はそれらのカゼイン食またはPurina給餌対照群の場合と類似するようになった。研究の中で、ＰＦＣ形成の反復バイオアッセイから、図３で示されたように、ホスト免疫増強とＷＰＣの未変性状態との間に相関性を確認した。第二の研究において、生存曲線間の差異が狭まり始めたときに、その栄養性が保存されているにもかかわらずＷＰＣの免疫増強性質は存在しなかった(D-Lacp)。全研究を通じて、有意の群間差異はカロリー摂取量および体重でみられなかった。寿命は個体のゲノムに主に依存しているため、限定期間中における死の遅れが全体の寿命に影響を与えたようではない。
【表３】
2008115194.tif 000004
【００２９】
しかしながら、少くとも食餌の免疫増強効果に関して、この研究は試験(U-Lacp)食餌からコントロール(D-Lacp)食餌への単一方向交差（single direction cross-over ）とみなすことができ、（図３および表１１で示されるように）老齢マウスの生存率に関するＷＰＣの生物活性がその未変性状態に依存して、我々の研究で用いられたＰＦＣアッセイと直接相関していることを示している。
【００３０】
（ｂ）ＤＭＨ誘導結腸癌のあるマウスの短期および長期生存率：
ＤＭＨ処理マウスにおいて、我々は食餌タンパク質の種類に関連して実験の終了までに、２８週間終了までの死亡率と生存時間との間の差異に気づいた。最初の７月間の研究中に、未変性ホエータンパク質(U-Lacp)給餌マウスはカゼインおよびPurina群でこの期間の最後のあたりに観察された死亡率３３％と比較して死亡なしであった。その後の４月間では、ホエータンパク質のマウスに変性ホエータンパク質(D-Lacp)を給餌した。この後の期間中、D-Lacp食餌はカゼイン食餌と比較して生存率に関し好ましい効果を有するようであった（下記表４）。
【００３１】
研究の中で、脾臓ＰＦＣの反復バイオアッセイを行い、以前に報告されたような免疫機能に関する食餌の生理学的効果とこれら効果の安定性について証明した。U-Lacp給餌の免疫増強効果は研究の最初７月間ずっと確認された。しかしながら、その後の４月間(D-Lacp)ではU-Lacp給餌マウスで既に観察された免疫増強効果がなかった。U-Lacp食餌またはD-Lacp給餌に関するＰＦＣ応答の値は図３で示された場合と一致した。したがって、この研究から、腫瘍担持マウスの生存率に関するＷＰＣの生物活性がその未変性状態に依存しており、我々の研究で用いられたＰＦＣアッセイと直接相関しているという仮説を確認できた。
【表４】
2008115194.tif 000005
a)カイ（Chi ）二乗分析による有意性：ホエータンパク質 vs.  Purina vs.カゼイン p<0.05 
b)最初マウス１２匹／群
c)発癌物質の初回投与からの生存時間（週）。ホエータンパク質およびカゼインはPurinaと有意に異なる（Mantel-Cox検定 p<0.01)。
d)未変性ホエータンパク質は３〜２８週目に用いた。変性ホエータンパク質は２８週目から終了時まで用いた。
【００３２】
表３および４にまとめられた上記実験では、未変性ＷＰＣの供給源としてLacprodan 80を用いた：
細菌汚染に関する安全性の許容標準に合う最も穏やかな（lenient ）やり方で処理された乳から調製された未変性形のホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）を用いるのが好ましい。極端に高い溶解指数は存在するタンパク質が本質的に未変性であることを示し、このため限外濾過方法が穏やかなものであることを証明した(31)。試験された他の市販源からの濃縮物中に含有されるタンパク質は、濃縮物の比較的高い溶解性で示されるように、ほとんど未変性形であったが、これらの混合物中における血清アルブミンおよび免疫グロブリンの含量は活性レベル以下である(31)。これらの非常に熱不安定なタンパク質は高い低温殺菌温度により変性され、このためホエーから沈降して、部分的に失われる。
【００３３】
我々の研究では、脾臓グルタチオンを半分に減少させるＳ（ｎ‐ブチル）ホモシステインスルホキシイミンの投与がホエータンパク質給餌マウスの体液性免疫応答を有意に減少させることも明らかにした。これは食餌ホエータンパク質の免疫増強効果でグルタチオンの重要な役割に関する別の証拠としてうけとられた(32)。
【００３４】
組織グルタチオン濃度はγ‐グルタミルシステインの投与により増加するであろう。細胞内グルタチオンはマウスにおいて皮下(s.c.)注射の４０〜６０分間後に腎臓で約５０％増加し、２時間後にコントロール値に戻った(33)。投与されたγ‐グルタミルシステインは細胞中にそのまま輸送され、グルタチオンシンテターゼ用の基質として働く(33)。
【００３５】
食物タンパク質のアミノ酸配列決定に関する進歩は、ホエータンパク質中グルタミルシステイン基の存在とグルタチオン促進との関連可能性について我々が研究できるようにした。確かに、牛乳からのホエータンパク質濃縮物は、マウスに給餌されたときに組織グルタチオンを増加させないカゼインとは異なり、実質量のグルタミルシステイン基を含有している(35)。グルタミルシステイン基は血清アルブミン分画中に主に存在している（６基／分子）。グルタミルシステイン基は動物および植物食用タンパク質中で極めてまれである。食用タンパク質のアミノ酸配列決定に関してすべての入手しうるデータの詳細な調査は、ジスルフィド結合のある Gly-Cys基が、ホエータンパク質の一部と、３０，０００モル重量分子中にこれらの基を２つ含んだ卵白のオボムコイド分画とに実際上限定されることを示している(31)。
【００３６】
我々の最近(31)のデータは、最大溶解性（未変性コンホメーション）と、更に重要なことには大きな相対濃度の熱不安定牛血清アルブミン（≧１０％）および免疫グロブリンとを示す食餌ホエータンパク質濃縮物給餌マウスで、体液性免疫応答が最大であることを更に明らかにしている。加えて、この種類のホエータンパク質濃縮物で給餌されたマウスはもっと高レベルの組織ＧＳＨを示す。分子の未変性コンホメーションに関係するようなグルタミルシステイン基（食物タンパク質ではまれ）と特異的な分子内結合が、タンパク質混合物のグルタチオン促進活性で鍵因子であると考えられる。
【００３７】
日本の最近の実験(36)では、我々の未変性ホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）（商標名"Immunocal" が付されている）２５ｇ／食餌１００ｇで４週間給餌されたBALB/c雄性マウスの脾臓細胞が純粋カゼイン２５ｇ／食餌１００ｇの等カロリー食餌で給餌されたマウス（３．６９×１０６±０．５０）よりもインビトロで高い対ＳＲＢＣ免疫応答性と高含量の L3T4+細胞（１２．５８×１０６±１．３６）を有することが明らかにされている。同様に、脾臓L3T4+/LYt-2+比は未変性ＷＰＣ給餌マウスで１．３６±０．０７、カゼイン給餌コントロールで０．５５±０．０７であった(p<0.001) 。逆に、我々のＷＰＣ中における乳の低度の低温殺菌に起因した熱感受性血清アルブミンおよび免疫グロブリンの比較的高い濃度は、原料乳により近いパターンを表している。これらのデータは、未変性コンホメーションの血清アルブミンのような熱不安定 Gly-Cys含有タンパク質が、ホエータンパク質濃縮物の生物活性にとり重大な要素であるという仮説を支持している。
【００３８】
純粋タンパク質含有率７５％（残りのほとんどはラクトース、わずかな脂肪および水分）、溶解指数（ｐＨ４．６）９９．５％を有する適切な牛ホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）は"Service de recherche sur les aliments du Ministere de l´agriculture du Quebec",St-Hyacinthe,Quabec,Canadaにより調製した。ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定された全ホエータンパク質に関するタンパク質組成はβ‐ラクトグロブリン５９．１±４．０、α‐ラクトアルブミン６．６±０．７、血清アルブミン９．７±１．０、免疫グロブリン２４．６±２．６（平均±ＳＤ）であった。溶解指数は好ましくは９９％以上であるべきである。
【００３９】
全ホエータンパク質の約１０％の血清アルブミンは、試験された他の市販ホエータンパク質濃縮物でみられる対応値のほぼ２倍であった。１０％以上の血清アルブミンレベルが免疫系を改善する上で高度に有利であると考えられる。
【００４０】
血清アルブミンは体内グルタチオン合成用の基質であるグルタミルシステインをかなりの量で含有している。グルタチオンの役割は論文"The Biological Activity of Undenatured Dietary Whey Proteins:Role of Glutathione",Clin.Invest.Med.,14:296-309,1991(31) で詳細に記載されており、これはその全体で引用することにより本明細書の開示の一部とされる。
【００４１】
全ホエータンパク質の約２５〜３０％範囲内の免疫グロブリンも重要である。７２℃で１３秒間の低温殺菌で２８±２％の免疫グロブリンレベルになった。我々は７２℃で１３秒間低温殺菌された乳で１４±１％もの高い血清アルブミンレベルに達しうることを発見した。
【００４２】
細菌分析では、ブドウ球菌、サルモネラ、B.cereusまたは大腸菌は、"Service de recherche sur les aliments du Ministere de l´agriculture du Quebec" により調製されたＷＰＣまたは７２℃で１３秒間低温殺菌されたサンプルで単離されなかった。他のサンプルは乳を６３℃で３０分間加熱することにより調製したが、良好な結果であった。
【００４３】
ヘパリン処理血液３０mlを、１０７細胞／試験管となるように調整された血液単核リン酸緩衝液のグルタチオン含量を調べるために用いてよい。遠心後、水９００mlをペレットに加えて、すべての細胞を溶解させる。各部分に１ml中最終濃度３％で３０％スルホサリチル酸を加える。１５分間のインキュベート後、サンプルを遠心し、透明上澄をAnderson(37)の方法による生化学アッセイに用いる。値はナノモル(nMol)ＧＳＨ／１０７細胞として表示する。血液リンパ球部分もフロー細胞測定により調べてよい。
【００４４】
アルブミンおよび免疫グロブリンを含めた全血清タンパク質もビューレット（Biuret）法により調べてよい。免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）および免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）のレベルは免疫比濁分析により測定してよい。
【００４５】
ホエータンパク質濃縮物の血清アルブミン成分中におけるグルタミルシステイン基の存在は、未変性ＷＰＣのタンパク質混合物のグルタチオン促進および免疫増強活性に関する鍵因子であると考えられる。我々の実験室研究は、他の供給元からのホエータンパク質濃縮物が、それらが類似した栄養効力を示したとしても、有意の生物活性を生じなかったことを示している。これら製品の血清アルブミン濃度％は（平均±ＳＤとして）各々Promod（Ross研究所）で４±１、Alacen 855(New Zealand Dairy) で４±１、Lacprodan-80（Danmark Protein により１９８９年から生産されている）で４．８±１、Sapro （Sapro,Montreal）で４±０．１、Savorpro-75(Golden Cheese,CA,USA) で４±１、Bioisolate(Lesueur,Isolates,Minneapolis)［８］で５±１およびPromix(Dumex, Quebec）で４．３±１である。同様に、他の熱不安定タンパク質、免疫グロブリンの含量はこの研究で用いられた未変性ＷＰＣの約半分の値であった。
【００４６】
結果は、未変性ホエータンパク質が、免疫細胞でグルタチオン補給用の特定栄養物を供給することにより他の形の療法に対するアジュバントに相当しうることを示している。
【００４７】
歴史的には今日まで、乳中の細菌および胞子は熱処理（低温殺菌）で減少させた。これを有効とするために、その方法では血清アルブミンおよび免疫グロブリンの最も熱不安定で推定上生物活性な分画の相当量の凝乳で不可避的に変性を、ひいては後に沈降および喪失を生じた。
【００４８】
我々の目的は、細菌含量の許容安全標準に合う原料の場合にできるだけ近い割合およびコンホメーションでタンパク質を含有したホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）を得ることである。今日まで、我々は熱不安定性ホエータンパク質を保存するために乳の最低許容レベルの熱処理を利用してきた。
【００４９】
熱処理の代替法は膜精密濾過（microfiltration ）に基づく方法である。Bactocatch(Alfa-Laval Ltd.,Scarborough,Ontario) を利用して、我々は細菌含有率が原インプットレベルの０．５％以下に減少した脱脂乳の特別な膜精密濾過による透過液を得ることができる。
【００５０】
次いでこの透過液をレンネットで処理し、ホエー上澄中のタンパク質を寛大な操作により濃縮して、望ましい未変性ホエータンパク質濃縮物を得る。膜精密濾過概念は熱不安定ホエータンパク質を保存する適切な方法として乳の加熱処理に代わる方法であるが、技術および装置は時間と共に改良してよい。
【００５１】
表５および６は、我々が商標名「Immunocal 」と呼ぶ改良未変性ＷＰＣを生産する方法を概略的に示している。表７は、ＷＰＣの供給源と比較したImmunocal の特性を示し、かつ、３週間食餌処理の結果をも示した、比較チャートである。
【００５２】
我々は、未変性ホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）が化学誘導癌、典型的にはジメチルヒドラジンのような発癌物質で促進される結腸癌のような癌の予防に有益であることを、我々の研究の結果として結論付けた。このような細胞の複製を阻害することも、化学誘導癌細胞のような癌細胞を有する患者の治療にとり有用である。ヒトの場合の大体の投与量は約８〜４０g/日、好ましくは２０〜４０g/日の範囲内である。３０〜４０g/日を投与することが特に有益である。少くとも１０±１％の濃度で血清アルブミンを有するＷＰＣを用いると特に有利であることが確立された。血清アルブミンは少くとも９％、最も好ましくは少くとも９．５％である。
【００５３】
公開文献が示しているように、マウスで実験上ジメチルヒドラジンにより誘導された結腸の腫瘍は、損傷の種類および化学療法への応答性に関して、ヒトの結腸癌に類似している(27,28) 。
【００５４】
顆粒球／リンパ球（Ｇ／Ｌ）比が末期癌の場合に増加して患者の状態と相関しているという発見(38)は、この重要なパラメーターに影響を与えるかもしれない因子の関心を促した。
【表５】
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【表６】
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【００５５】
例えば、体外循環を用いた顆粒球枯渇はウサギで移植腫瘍の大きさを有意に減少させることが明らかにされた(39)。マウスによる最近の実験研究は、Ｇ／Ｌ式の第二パラメーターが食餌手段により影響をうける可能性を示唆している。天然未変性形の血清アルブミンのような、ホエーの最も熱感受性な分子を保存するように調製されたホエータンパク質濃縮物で給餌されたマウスは、肺炎双球菌感染(40,1)および癌の発癌物質誘導(1) に対する耐性増加によって一部現わされる高い免疫応答を示した(35)。
【００５６】
これは我々が未変性ＷＰＣと呼ぶ産物である。未変性ＷＰＣ給餌マウスの免疫反応増加は、インビトロで移されたナイーブ細胞で持続することがわかった(36)。血清アルブミンは６つのグルタミルシステイン基を含み(31)、このためグルタチオン（ＧＳＨ）合成用の特別な基質を与える(33,34) 。これらの基は食物タンパク質に極めてまれである(31)。
【表７】
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【００５７】
動物実験における未変性ＷＰＣの好ましい効果は、組織グルタチオンレベルの持続的上昇と関係していた(41)。しかしながら、この効果はリンパ球プールの抗原性クローン拡張時に脾臓細胞においてより明白なところはどこもなかった(32)：これらの実験は、免疫増強活性、即ち食餌未変性ＷＰＣのリンパ球増殖増大、が類似抗原攻撃時にカゼイン給餌コントロールでみられる現実のＧＳＨ減少と比較してリンパ球で観察されるＧＳＨの産生量増大と関係していることを明らかに示している(32)。ＧＳＨ、事実上すべての細胞でみられるトリペプチドチオール、が主要なフリーラジカル酸素スカベンジャーである(42)。更に具体的には、リンパ球のＧＳＨ含量はそれらの増殖を調節するオキシダントおよびチオールの能力と相関しているらしい(43)。この意味で、細胞内ＧＳＨの調節は免疫応答性に影響を与えるようである(44,45) 。
【００５８】
これらの実験は、活性増殖のための抗原刺激が存在するときに、リンパ球における食餌ホエータンパク質の増強効果が特に明らかであることを更に示している。
【００５９】
しかしながら、食餌未変性ＷＰＣとリンパ球産生との間のこの独特な関係は正常非免疫マウスでも明らかである。３週間の食餌処理後に、未変性ＷＰＣ２０または３０ｇ／食餌１００ｇで給餌されたマウスの脾臓重量と脾臓重量：体重比は、カゼイン、大豆タンパク質または魚タンパク質２０または３０ｇ／食餌１００ｇを含有した栄養上同等の食餌で給餌されたマウスの対応値よりも適度に高かった(46)。更に具体的には、脾臓当たりの細胞数は等量のカゼイン、小麦、大豆および魚タンパク質で給餌されたマウスの対応値よりも未変性ＷＰＣ給餌マウスで高かった(35)。
【００６０】
更に詳細な研究では、２５％未変性ＷＰＣ食給餌マウスの脾臓における有核細胞の数がコントロール２５％カゼイン食給餌マウスの対応値よりも有意に高いことを示した。興味あることに、観察された変化はＴ細胞集団の倍加と特に関係しており、特にL3T4+ 部分集団は４倍に増加したが、Ｂ細胞の数は未変化であった(36)。この後者の発見は、未変性ＷＰＣの効果が骨髄における一次Ｂリンパ球産生の速度に中心的に発揮されず、免疫増強効果が特にＴ細胞依存性抗原に応答してみられることを示す他の研究と一致している(47)。
【００６１】
リンパ球における未変性ＷＰＣの上記効果は、実験腫瘍においてこの形の食餌法で観察される阻害効果をよく説明している。最近の実験は、食餌中未変性ＷＰＣの連続給餌が２４週間ジメチルヒドラジン（ＤＭＨ）処理したマウスの結腸で腫瘍の成長（数および大きさ）を阻害することを示した(1) 。この抗腫瘍効果は、発癌物質に対する標的細胞の耐性増加および／または腫瘍増殖に対する食餌未変性ＷＰＣの直接阻害効果に起因していた。動物にＤＭＨの最初２０週間は標準実験食で給餌し、その後ＤＭＨ処理の残り８週間は未変性ＷＰＣ食に切り換えるその後の一連の実験(2) では、癌細胞についての未変性ＷＰＣ給餌の阻害効果を明らかに示している。
【００６２】
正常動物の末梢リンパ組織における未変性ＷＰＣの増強効果は、血中リンパ球総数の有意な変化と関連していないことが注目される(36,46) 。循環リンパ球の総数に関する変動の不在は健常人でもみられた（大塚製薬）。
【００６３】
未変性ＷＰＣのグルタミルシステイン基による細胞ＧＳＨ合成の誘導は、癌患者でこの産物の他の興味深い効果を示すかもしれない。確かに、システイン送達系ＯＴＺ（オゾチアゾリジン‐４‐カルボキシレート）の導入は、正常細胞でＧＳＨレベルを高めるが、ヒト腫瘍細胞でＧＳＨサイクルのフィードバック阻害を起こすことがわかった(5) 。
【００６４】
臨床試験は日本で大塚製薬により準備された。臨床チームはマサカズ・アダチ博士により指揮されていた。臨床試験は進行段階の末期癌を有する患者５例に行なわれた。その要約レポートは下記表８に再現され、血球およびグルタチオンレベルの実験データは患者４例に関して表９で示されている。各患者の投与量レベルは３０g/日であった。
【００６５】
表８で示されたように、全患者のリンパ球数は、未変性ホエータンパク質濃縮物の投与時に増加した。進行段階にある他の患者２例は消化の問題のために試験から外した。以前の研究では、リンパ球数が癌患者で下がると、正常レベルへのリンパ球数の回復が不可能であるかもしれないと報告していた。リンパ球数の増加はＧ／Ｌ比を改善する能力ゆえに重要である。
【００６６】
表８および９で示された結果は健常者と対照的であり、彼らは（１４例の試験に基づくと）０．３４±０．０２のグルタチオンＰＭＮレベル、０．０６６±０．００６のグルタチオンＲＢＣレベル、６６４０±１７００のＷＢＣ、２２００±４６０のリンパ球数、１．８５±０．４５のＧ／Ｌ比および２５．４±３．３のＰｌｔを通常有する。
【００６７】
表１０は表８および９で記載された試験で用いられた未変性ＷＰＣの細菌分析、並びにタンパク質分布および溶解度について示す。
【００６８】
結論として、癌患者へのＷＰＣの投与は血中リンパ球の数を増加させ、Ｇ／Ｌ比を減少させるらしい。リンパ球濃度は、初めは非常に低いが、正常値に戻る傾向がある。以前に記載された実験的証拠(38,39) に基づくと、ＷＰＣで観察された効果は癌細胞増殖の阻害を示唆している。
【００６９】
表８および９で記載された試験に続く未変性ＷＰＣの試験では、下記観察をした：
（１）患者Ｆは医者の検査で確認しえた固形腫瘍を腹部に有し、彼女は化学療法をうけた。彼女は未変性ＷＰＣを使うことが困難であり、治療から離脱しかかっていた。しかしながら、彼女が未変性ＷＰＣを摂取しているかぎり、彼女のリンパ球数は増加し、腫瘍マーカー数の増加でさえも減少の徴候を示すことがわかった。
【表８】
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【表９】
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【表１０】
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【表１１】
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【００７０】
（２）患者Ｇは照射後に癌の局部再発のため治療した。彼女は１９９２年１１月に放射線治療をうけた。未変性ＷＰＣの投与は１２月４日に始めた。彼女のリンパ球は１２月３日〜１９９３年１月２０日の間に９６０から１３１０に改善した。２月３日現在、再発はなく、彼女のリンパ球は１３７０、Ｇ／Ｌは３．１であった。
【００７１】
（３）患者Ｈは局部腫瘍のため放射線療法をうけた。未変性ＷＰＣの投与は１９９２年１２月１６日に始めた。そのとき、試験結果は下記のとおりであった：
WBC     2700
Lym.     480
G/L      4.6
P/t      9.5
１２月２４日の結果：
CEA     11.0
WBC     4320
Lym.     910
G/L      3.7
P/t     10.7
１月２０日の結果：
CEA      7.1
WBC     3420
Lym.     830
P/t     11.5
２月３日の結果：
CEA      5.2
WBC     33.3
Lym.    86.0
G/L      2.5
P/t     11.5
患者の経過は良好である。
【００７２】
（４）患者“Ｉ”は縦隔、頸および全脳で放射線療法をうけた。未変性ＷＰＣの投与は１９９２年１２月１日に開始した。彼のリンパ球は１１月２６日の３４０から１月１３日の９３０まで増加した。彼のＧ／Ｌ比は１２．１から４．４に減少し、ＷＢＣは４５００から５１００に増加した。
【００７３】
本発明を例示すると以下の通りである。
（１）リンパ球数を増加させるために十分な量の、少くとも９％の血清アルブミンを含有した未変性ホエータンパク質濃縮物を患者へ投与することを含んでなる、治療の必要な患者における癌の治療法。
（２）血清アルブミンが少くとも９．５％である、（１）に記載の方法。
（３）Ｇ／Ｌ比を低下させる、（２）に記載の方法。
（４）１日投与量レベルが８〜４０ｇの範囲である、（１）に記載の方法。
（５）１日投与量レベルが２０〜４０ｇの範囲である、（２）に記載の方法。
（６）１日投与量レベルが３０〜４０ｇの範囲である、（５）に記載の方法。
（７）未変性ホエータンパク質濃縮物が乳中に存在する実質上すべてのタンパク質を未変性状態で含有している、（２）に記載の方法。
（８）ジメチルヒドラジンにより誘導される種類の結腸の損傷を有する患者における癌の治療法であって、リンパ球数を増加させるために十分な量の少くとも９．５％の血清アルブミンを含有した未変性ホエータンパク質濃縮物を上記患者へ投与することを含んでなる方法。
（９）未変性ホエータンパク質濃縮物が約１０％以上のレベルで血清アルブミンを含有している、（８）に記載の方法。
（１０）損傷が、ジメチルヒドラジンにより促進される場合と類似した結腸の損傷である、（８）に記載の方法。
（１１）セレンが未変性ホエータンパク質濃縮物６０ｇ当たり約４０〜６０mcg(セレンメチオニンとして計算）の量で投与される、（８）に記載の方法。
（１２）ビタミンＢ１が未変性ホエータンパク質濃縮物６０ｇ当たり約１．５〜２．０mgの量で投与される、（８）に記載の方法。
（１３）ビタミンＢ２が未変性ホエータンパク質濃縮物６０ｇ当たり約１．７〜２．２mgの量で投与される、（８）に記載の方法。
（１４）下記：
ビタミンＢ１約１．５〜２．０mg
ビタミンＢ２約１．７〜２．２mg
セレン約４０〜６０mcg(セレンメチオニンとして計算）が未変性ホエータンパク質濃縮物６０ｇ当たりで投与される、（８）に記載の方法。
（１５）８〜４０ｇ範囲の１日投与量で、少くとも９．５％の血清アルブミンを含有した未変性ホエータンパク質濃縮物を患者へ投与することを含んでなる、哺乳動物でジメチルヒドラジンにより誘導される種類の結腸癌の予防法。
（１６）癌を有する患者のリンパ球数を増加させるために十分な量の、少くとも９．５％の血清アルブミンを含有した未変性ホエータンパク質濃縮物の使用。
（１７）癌を有する患者のＧ／Ｌ比を減少させるために十分な量の、少くとも９．５％の血清アルブミンを含有した未変性ホエータンパク質濃縮物の使用。
（１８）癌を有する患者の治療用薬剤の製造に関する、リンパ球数を増加させるために十分な量の、少くとも９．５％の血清アルブミンを含有した未変性ホエータンパク質濃縮物の使用。
（１９）癌を有する患者のＧ／Ｌ比を減少させるために十分な量の、少くとも９．５％の血清アルブミンを含有した未変性ホエータンパク質濃縮物の使用。
（２０）１日の投与量レベルが２０〜４０ｇの範囲である、（１６）〜（１９）のいずれか一項に記載の使用。
（２１）１日の投与量レベルが約３０ｇである、（１６）〜（１９）のいずれか一項に記載の使用。
（２２）未変性ホエータンパク質濃縮物が乳から製造され、原料乳中に存在する実質上すべてのタンパク質を含有している、（１６）〜（２１）のいずれか一項に記載の使用。
（２３）未変性ホエータンパク質濃縮物６０ｇ当たり約１．５〜２．０mgの量のビタミンＢ１を更に含有している、（１６）〜（２２）のいずれか一項に記載の使用。
（２４）未変性ホエータンパク質濃縮物６０ｇ当たり約１．７〜２．２mgの量のＢ２を更に含有している、（１６）〜（２３）のいずれか一項に記載の使用。
（２５）少くとも９．５％の血清アルブミンおよび原料乳中に存在する実質上すべてのタンパク質を含有している、乳から製造された未変性ホエータンパク質濃縮物２０〜４０ｇを含んでなる、癌を有する患者のリンパ球数を増加させ、かつ、Ｇ／Ｌ比を減少させるための癌患者投与用組成物。
（２６）最終製品の少くとも９．５％の血清アルブミン含有率を留め、かつ、ブドウ球菌、サルモネラ、B.cereusおよび大腸菌を実質上含まないように、十分低い温度および十分短い時間で脱脂乳を低温殺菌し、次いで濾過および濃縮して未変性ホエータンパク質濃縮物粉末を得る工程を含んでなる、患者のリンパ球数を増加させ、かつ、Ｇ／Ｌ比を減少させるための癌患者投与用組成物の製造法。
【参考文献】
【００７４】
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2008115194.tif 000014
2008115194.tif 000015
2008115194.tif 000016
2008115194.tif 000017
【図面の簡単な説明】
【００７５】
【図１】１０週、２７、２０および２１月齢目における未変性ホエータンパク質(U-Lacp)給餌雄性マウスC57BL/6NIA、変性ホエータンパク質(D-Lacp)、カゼイン、卵白タンパク質またはPurina食給餌対照群の肝臓グルタチオン含量について示す。
【図２】１０週、１７、２０および２１月齢目における未変性ホエータンパク質(U-Lacp)給餌雄性マウスC57BL/6NIA、変性ホエータンパク質(D-Lacp)、カゼイン、卵白タンパク質またはPurina食給餌対照群の心臓グルタチオン含量について示す。
【図３】マウスでの５×１０６ＳＲＢＣへの脾臓ＰＦＣ応答に関する様々な供給源のホエータンパク質濃縮物およびカゼイン（２０ｇ／食餌１００ｇ）の効果について示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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