(57)【要約】【課題】唾液中に存在する、特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出する技術を提供すること【解決手段】本発明は、サンプル中のＩｇＥを測定するための基材を提供する。この基材は、表面上に固定化された、該ＩｇＥに結合する能力を有する抗原を含む。本発明はまた、被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出するための診断用基材セットを提供する。この基材セットは、Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；およびＡ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材；を含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプル中のＩｇＥを測定するための基材であって、表面上に固定化された、該ＩｇＥに結合する能力を有する抗原を含む、基材。
【請求項２】
前記抗原が、ＩｇＥを認識する抗体である、請求項１に記載の基材。
【請求項３】
前記ＩｇＥを認識する抗体がヒト由来である、請求項２に記載の基材。
【請求項４】
前記抗原が、アレルゲンである、請求項１に記載の基材。
【請求項５】
前記アレルゲンが、ヤケヒョウヒダニ、コナヒョウヒダニ、アシブトコナダニ、サヤアシニクダニおよびケナガコナダニから選択されるダニ由来アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミ、ブラジルナッツ、アーモンド、トマト、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、イチゴ、ニンニク、タマネギ、リンゴ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、マスタード、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カキ、ヤマイモ、スイカおよびオオバコから選択される植物由来アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウおよびスズメノヒエから選択される花粉アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミ、ブラジルナッツ、アーモンド、トマト、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、イチゴ、ニンニク、タマネギ、リンゴ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、マスタード、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カキ、ヤマイモ、スイカおよびオオバコから選択される種子アレルゲン；ペニシリウム、クラドスポリウム、アスペルギルス、ムコール、カンジダ、アルテルナリア、ヘルミンドスポリウム、ピティロスポリウム、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、トリコフィトンおよびビール酵母から選択されるカビ・酵母由来アレルゲン；ミツバチ、スズメバチ、アシナガバチ、ゴキブリ、ユスリカ、ガ、ヤブカおよびカイコから選択される昆虫由来アレルゲン；蛔虫、包虫およびアニサキスから選択される寄生虫由来アレルゲン；ネコ皮膚、イヌ上膚、ウマ皮膚、ウシ皮膚、イヌ皮膚、モルモット上皮、ハトのふん、ガチョウの羽毛、セキセイインコのふん、セキセイインコの羽毛、セキセイイン血清蛋白、ヤギ上皮、ヒツジ上皮、家兎上皮、ブタ上皮、ハムスター上皮、ニワトリ羽毛、アヒル羽毛ならびにラット、マウス、タラ、カニ、エビ、ムラサキガイ、マグロ、サケ、サバ、イカ、タコ、アジ、イワシ、ロブスター、カレイ、イクラ、タラコ、アサリ、カキおよびホタテ由来のアレルゲンから選択される動物由来アレルゲン；卵白、牛乳、タラ、コムギ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミの実、ブラジルナッツ、アーモンド、カニ、エビ、トマト、豚肉、牛肉、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、ムラサキガイ、マグロ、サケ、イチゴ、ビール酵母、ニンニク、タマネギ、リンゴ、サバ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、イカ、タコ、アジ、イワシ、黄卵、α−ラクトアルブミン、β−ラクトグロブリン、カゼイン、グルテン、ロブスター、チーズ、モールドチーズ、チェダーチーズ、鶏肉、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、羊肉、マスタード、麦芽、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カレイ、イクラ、タラコ、アサリ、カキ、ホタテ、ヤマイモ、クルミ、スイカおよびゼラチンから選択される食餌性アレルゲン；綿および絹から選択される繊維性アレルゲン；ヒトインスリン、ゼラチン、トリレンジイソシアネート（イソシアネートＴＤＩ）、ジフェニルメタンジイソシアネート（イソシアネートＭＤＩ）、ヘキサメチレンジイソシアネート（イソシアネートＨＤＩ）、エチレンオキサイド、無水フタル酸、ラテックスおよびホルマリンから選択される薬品性アレルゲン；オオバコ種子、絹、トリレンジイソシアネート（イソシアネートＴＤＩ）、ジフェニルメタンジイソシアネート（イソシアネートＭＤＩ）、ヘキサメチレンジイソシアネート（イソシアネートＨＤＩ）、エチレンオキサイド、無水フタル酸、ラテックスおよびホルマリンから選択される職業性アレルゲン；およびハウスダストならびにこれらの混合物からなる群より選択される少なくとも１つの抗原である、請求項１に記載の基材。
【請求項６】
前記基材が、樹脂、ガラス、セルロイドおよび紙からなる群より選択される材料を含む、請求項１に記載の基材。
【請求項７】
被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出するための診断用基材セットであって、
Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；および
Ａ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材；
を含む、診断用基材セット。
【請求項８】
前記特定のアレルゲンの前記被験体のＩｇＥ抗体に対する比率を求め、該比率が一定比率を超えることを指標として、該特定のアレルゲンに対するアレルギー特質が決定される、請求項７に記載の診断用基材セット。
【請求項９】
前記特定のアレルゲンが、ヤケヒョウヒダニ、コナヒョウヒダニ、アシブトコナダニ、サヤアシニクダニおよびケナガコナダニから選択されるダニ由来アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミ、ブラジルナッツ、アーモンド、トマト、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、イチゴ、ニンニク、タマネギ、リンゴ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、マスタード、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カキ、ヤマイモ、スイカおよびオオバコから選択される植物由来アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウおよびスズメノヒエから選択される花粉アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミ、ブラジルナッツ、アーモンド、トマト、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、イチゴ、ニンニク、タマネギ、リンゴ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、マスタード、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カキ、ヤマイモ、スイカおよびオオバコから選択される種子アレルゲン；ペニシリウム、クラドスポリウム、アスペルギルス、ムコール、カンジダ、アルテルナリア、ヘルミンドスポリウム、ピティロスポリウム、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、トリコフィトンおよびビール酵母から選択されるカビ・酵母由来アレルゲン；ミツバチ、スズメバチ、アシナガバチ、ゴキブリ、ユスリカ、ガ、ヤブカおよびカイコから選択される昆虫由来アレルゲン；蛔虫、包虫およびアニサキスから選択される寄生虫由来アレルゲン；ネコ皮膚、イヌ上膚、ウマ皮膚、ウシ皮膚、イヌ皮膚、モルモット上皮、ハトのふん、ガチョウの羽毛、セキセイインコのふん、セキセイインコの羽毛、セキセイイン血清蛋白、ヤギ上皮、ヒツジ上皮、家兎上皮、ブタ上皮、ハムスター上皮、ニワトリ羽毛、アヒル羽毛ならびにラット、マウス、タラ、カニ、エビ、ムラサキガイ、マグロ、サケ、サバ、イカ、タコ、アジ、イワシ、ロブスター、カレイ、イクラ、タラコ、アサリ、カキおよびホタテ由来のアレルゲンから選択される動物由来アレルゲン；卵白、牛乳、タラ、コムギ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミの実、ブラジルナッツ、アーモンド、カニ、エビ、トマト、豚肉、牛肉、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、ムラサキガイ、マグロ、サケ、イチゴ、ビール酵母、ニンニク、タマネギ、リンゴ、サバ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、イカ、タコ、アジ、イワシ、黄卵、α−ラクトアルブミン、β−ラクトグロブリン、カゼイン、グルテン、ロブスター、チーズ、モールドチーズ、チェダーチーズ、鶏肉、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、羊肉、マスタード、麦芽、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カレイ、イクラ、タラコ、アサリ、カキ、ホタテ、ヤマイモ、クルミ、スイカおよびゼラチンから選択される食餌性アレルゲン；綿および絹から選択される繊維性アレルゲン；ヒトインスリン、ゼラチン、トリレンジイソシアネート（イソシアネートＴＤＩ）、ジフェニルメタンジイソシアネート（イソシアネートＭＤＩ）、ヘキサメチレンジイソシアネート（イソシアネートＨＤＩ）、エチレンオキサイド、無水フタル酸、ラテックスおよびホルマリンから選択される薬品性アレルゲン；オオバコ種子、絹、トリレンジイソシアネート（イソシアネートＴＤＩ）、ジフェニルメタンジイソシアネート（イソシアネートＭＤＩ）、ヘキサメチレンジイソシアネート（イソシアネートＨＤＩ）、エチレンオキサイド、無水フタル酸、ラテックスおよびホルマリンから選択される職業性アレルゲン；およびハウスダストならびにこれらの混合物からなる群より選択される、請求項７に記載の診断用基材セット。
【請求項１０】
サンプル中のＩｇＥを測定するためのキットであって、
Ａ）該ＩｇＥに結合する能力を有する抗原が固定化された基材；および
Ｂ）標識された抗ＩｇＥ抗体
を含む、キット。
【請求項１１】
前記標識が、酵素性、蛍光性、放射性、発光性または発色性を有する、請求項１０に記載のキット。
【請求項１２】
被験体中の唾液中のＩｇＥ全量を測定するためのキットであって、
Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；および
Ｂ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体
を含む、キット。
【請求項１３】
被験体中の唾液中の特定のアレルゲン特異的ＩｇＥを測定するためのキットであって、
Ａ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材；および
Ｂ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体
を含む、キット。
【請求項１４】
被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出するためのキットであって、
Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；
Ａ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材；および
Ｂ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体
を含む、キット。
【請求項１５】
サンプル中のＩｇＥを測定するためのシステムであって、
Ａ）該ＩｇＥと結合する能力を有する抗原が固定化された基材；
Ｂ）該ＩｇＥに対する標識された抗ＩｇＥ抗体；および
Ｃ）前記該標識の有無を調べる手段、を含む、サンプル中のＩｇＥを測定するためのシステム。
【請求項１６】
前記標識の有無を調べる手段が、酵素結合免疫検定法、ラジオイムノアッセイ、免疫沈降法、蛍光免疫検定法、化学発光検定法、イムノブロット法および凝集反応検定法からなる群より選択される方法を実現する手段である、請求項１５に記載のシステム。
【請求項１７】
唾液中のＩｇＥを測定するための方法であって、該方法は、以下の工程：
Ａ）該ＩｇＥと結合する能力を有する抗原が固定化された基材を提供する工程；
Ｂ）該基材とサンプルとを、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件下で接触させる工程；
Ｃ）該基材を、該抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件下に供する工程；および
Ｄ）該標識された抗ＩｇＥ抗体に由来する標識の有無を検出する工程
を包含する、方法。
【請求項１８】
前記Ｂ）工程において、前記基材と前記ＩｇＥとが、４℃〜４５℃の範囲で、１時間以内にわたり接触される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記Ｃ）工程において、前記抗原−ＩｇＥ複合体と、前記標識された抗ＩｇＥ抗体とが、４℃〜４５℃の範囲で、１時間以内にわたり反応される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記標識の有無を検出する工程が、前記基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定することを包含する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
被験体の特定のアレルゲンに対する特質を検出するための方法であって、該方法は、以下の工程：
Ａ）該被験体の唾液を提供する工程；
Ｂ）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化されたＩｇＥ抗体基材を提供する工程；
Ｃ）該特定のアレルゲンが固定化されたアレルゲン基材を提供する工程；
Ｄ）該基材と該唾液とを、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件下で接触させる工程；
Ｅ）該基材を、該抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件下に供する工程；および
Ｆ）該標識された抗ＩｇＥ抗体に由来する標識の有無を検出し、該特定のアレルゲンの該被験体のＩｇＥ抗体に対する比率を求め、該比率が一定比率を超えることを指標として、該特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を決定する工程
を包含する、方法。
【請求項２２】
前記被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材は：
Ｄ−１）該ＩｇＥ抗体基材と前記唾液とを４℃で一晩にわたり接触させる工程；
Ｅ−１）該ＩｇＥ抗体基材とセイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識された抗ＩｇＥ抗体とを、室温で２時間反応させる工程；および
Ｆ−１）該ＩｇＥ抗体基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定する工程
に供され、
前記特定のアレルゲンが固定化された基材は：
Ｄ−２）該アレルゲン基材と前記唾液とを４℃で一晩にわたり接触させる工程；
Ｅ−２）該アレルゲン基材とセイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識された抗ＩｇＥ抗体とを、室温で２時間反応させる工程；および
Ｆ−２）該アレルゲン基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定する工程
に供される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＩｇＥ抗体基材と前記アレルゲン基材との反応に用いられる標識された抗ＩｇＥ抗体は、それぞれ別の標識で標識されている、請求項２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、サンプル中のＩｇＥを測定する技術に関する。より詳細には、本発明は、ＩｇＥに結合する能力を有する抗原に特異的なＩｇＥ、特に、特定のアレルゲンに特異的なＩｇＥを測定する技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体に異物（抗原）が侵入すると、生体を異物から守るために、その異物を認識して排除しようとする免疫反応が生じる。この免疫反応は生体にとって不可欠な機構である。しかし、免疫反応が生体に対して種々のアレルギー性疾患を引き起こすことがある。
【０００３】
これまで、アレルギー性疾患の診断は、酵素結合免疫検定法（非特許文献１）、ラジノイムノアッセイなどを用いて血中のＩｇＥ量を定量する方法、抗原抗体反応系を用いてアレルゲンを検出する方法などが利用されてきた。しかし、これらの方法では患者の血液を必要とすることから、患者に大きな苦痛を与えるという欠点が存在する。さらに、採血を必要とすることから医療施設などでしか実施することができず、個人レベルで検査をすることはできなかった。しかし、アレルギー性疾患の患者が、個人のレベルで自己のアレルゲンを知っておくことは重要である。
【０００４】
そこで、自己のアレルゲンを個人レベルで特定するための、安全で、かつ簡易な検査方法を確立することが必要とされている。
【非特許文献１】石川栄治著、エンザイムイムノアッセイはこう開発する、生物化学実験法４８、２００３年６月、学会出版センター
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、唾液中に微量に存在するＩｇＥを測定し、特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出する技術を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記の課題を解決するために、本発明者等は鋭意研究の結果、ＩｇＥに結合する能力を有する抗原に特異的なＩｇＥを測定する技術を用い、唾液中のＩｇＥ全量と特定のアレルゲンに特異的なＩｇＥとを測定することによって、特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出する技術を見出し、本発明を完成させるに至ったものである。
【０００７】
上記目的を達成するために、本発明は、例えば、以下の手段を提供する。
【０００８】
１つの局面において、本発明は、サンプル中のＩｇＥを測定するための基材を提供する。この基材は、表面上に固定化された、該ＩｇＥに結合する能力を有する抗原を含む。
【０００９】
１つの実施形態において、本発明の基材において使用される抗原は、ＩｇＥを認識する抗体である。
【００１０】
別の実施形態において、本発明の基材において使用されるＩｇＥを認識する抗体は、ヒト由来である。
【００１１】
別の実施形態において、本発明の基材において使用される抗原は、アレルゲンである。
【００１２】
好ましい実施形態において、本発明の基材において使用されるアレルゲンは、ヤケヒョウヒダニ、コナヒョウヒダニ、アシブトコナダニ、サヤアシニクダニおよびケナガコナダニから選択されるダニ由来アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミ、ブラジルナッツ、アーモンド、トマト、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、イチゴ、ニンニク、タマネギ、リンゴ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、マスタード、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カキ、ヤマイモ、スイカおよびオオバコから選択される植物由来アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウおよびスズメノヒエから選択される花粉アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミ、ブラジルナッツ、アーモンド、トマト、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、イチゴ、ニンニク、タマネギ、リンゴ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、マスタード、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カキ、ヤマイモ、スイカおよびオオバコから選択される種子アレルゲン；ペニシリウム、クラドスポリウム、アスペルギルス、ムコール、カンジダ、アルテルナリア、ヘルミンドスポリウム、ピティロスポリウム、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、トリコフィトンおよびビール酵母から選択されるカビ・酵母由来アレルゲン；ミツバチ、スズメバチ、アシナガバチ、ゴキブリ、ユスリカ、ガ、ヤブカおよびカイコから選択される昆虫由来アレルゲン；蛔虫、包虫およびアニサキスから選択される寄生虫由来アレルゲン；ネコ皮膚、イヌ上膚、ウマ皮膚、ウシ皮膚、イヌ皮膚、モルモット上皮、ハトのふん、ガチョウの羽毛、セキセイインコのふん、セキセイインコの羽毛、セキセイイン血清蛋白、ヤギ上皮、ヒツジ上皮、家兎上皮、ブタ上皮、ハムスター上皮、ニワトリ羽毛、アヒル羽毛ならびにラット、マウス、タラ、カニ、エビ、ムラサキガイ、マグロ、サケ、サバ、イカ、タコ、アジ、イワシ、ロブスター、カレイ、イクラ、タラコ、アサリ、カキおよびホタテ由来のアレルゲンから選択される動物由来アレルゲン；卵白、牛乳、タラ、コムギ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミの実、ブラジルナッツ、アーモンド、カニ、エビ、トマト、豚肉、牛肉、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、ムラサキガイ、マグロ、サケ、イチゴ、ビール酵母、ニンニク、タマネギ、リンゴ、サバ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、イカ、タコ、アジ、イワシ、黄卵、α−ラクトアルブミン、β−ラクトグロブリン、カゼイン、グルテン、ロブスター、チーズ、モールドチーズ、チェダーチーズ、鶏肉、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、羊肉、マスタード、麦芽、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カレイ、イクラ、タラコ、アサリ、カキ、ホタテ、ヤマイモ、クルミ、スイカおよびゼラチンから選択される食餌性アレルゲン；綿および絹から選択される繊維性アレルゲン；ヒトインスリン、ゼラチン、トリレンジイソシアネート（イソシアネートＴＤＩ）、ジフェニルメタンジイソシアネート（イソシアネートＭＤＩ）、ヘキサメチレンジイソシアネート（イソシアネートＨＤＩ）、エチレンオキサイド、無水フタル酸、ラテックスおよびホルマリンから選択される薬品性アレルゲン；オオバコ種子、絹、イソシアネートＴＤＩ、イソシアネートＭＤＩ、イソシアネートＨＤＩ、エチレンオキサイド、無水フタル酸、ラテックスおよびホルマリンから選択される職業性アレルゲン；およびハウスダストならびにこれらの混合物からなる群より選択される少なくとも１つの抗原である。
【００１３】
他の実施形態において、本発明の基材において使用され得る基材は、樹脂、ガラス、セルロイドおよび紙からなる群より選択される材料を含む。
【００１４】
別の局面において、本発明は、被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出するための診断用基材セットを提供する。この診断用基材セットは、
Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；および
Ａ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材；
を含む。
【００１５】
１つの実施形態において、本発明の診断用基材セットでは、前記特定のアレルゲンの前記被験体のＩｇＥ抗体に対する比率を求め、該比率が一定比率を超えることを指標として、該特定のアレルゲンに対するアレルギー特質が決定される。
【００１６】
別の実施形態において、本発明の診断用基材セットでは、特定のアレルゲンは、ヤケヒョウヒダニ、コナヒョウヒダニ、アシブトコナダニ、サヤアシニクダニおよびケナガコナダニから選択されるダニ由来アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミ、ブラジルナッツ、アーモンド、トマト、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、イチゴ、ニンニク、タマネギ、リンゴ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、マスタード、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カキ、ヤマイモ、スイカおよびオオバコから選択される植物由来アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウおよびスズメノヒエから選択される花粉アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミ、ブラジルナッツ、アーモンド、トマト、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、イチゴ、ニンニク、タマネギ、リンゴ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、マスタード、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カキ、ヤマイモ、スイカおよびオオバコから選択される種子アレルゲン；ペニシリウム、クラドスポリウム、アスペルギルス、ムコール、カンジダ、アルテルナリア、ヘルミンドスポリウム、ピティロスポリウム、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、トリコフィトンおよびビール酵母から選択されるカビ・酵母由来アレルゲン；ミツバチ、スズメバチ、アシナガバチ、ゴキブリ、ユスリカ、ガ、ヤブカおよびカイコから選択される昆虫由来アレルゲン；蛔虫、包虫およびアニサキスから選択される寄生虫由来アレルゲン；ネコ皮膚、イヌ上膚、ウマ皮膚、ウシ皮膚、イヌ皮膚、モルモット上皮、ハトのふん、ガチョウの羽毛、セキセイインコのふん、セキセイインコの羽毛、セキセイイン血清蛋白、ヤギ上皮、ヒツジ上皮、家兎上皮、ブタ上皮、ハムスター上皮、ニワトリ羽毛、アヒル羽毛ならびにラット、マウス、タラ、カニ、エビ、ムラサキガイ、マグロ、サケ、サバ、イカ、タコ、アジ、イワシ、ロブスター、カレイ、イクラ、タラコ、アサリ、カキおよびホタテ由来のアレルゲンから選択される動物由来アレルゲン；卵白、牛乳、タラ、コムギ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミの実、ブラジルナッツ、アーモンド、カニ、エビ、トマト、豚肉、牛肉、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、ムラサキガイ、マグロ、サケ、イチゴ、ビール酵母、ニンニク、タマネギ、リンゴ、サバ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、イカ、タコ、アジ、イワシ、黄卵、α−ラクトアルブミン、β−ラクトグロブリン、カゼイン、グルテン、ロブスター、チーズ、モールドチーズ、チェダーチーズ、鶏肉、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、羊肉、マスタード、麦芽、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カレイ、イクラ、タラコ、アサリ、カキ、ホタテ、ヤマイモ、クルミ、スイカおよびゼラチンから選択される食餌性アレルゲン；綿および絹から選択される繊維性アレルゲン；ヒトインスリン、ゼラチン、イソシアネートＴＤＩ、イソシアネートＭＤＩ、イソシアネートＨＤＩ、エチレンオキサイド、無水フタル酸、ラテックスおよびホルマリンから選択される薬品性アレルゲン；オオバコ種子、絹、イソシアネートＴＤＩ、イソシアネートＭＤＩ、イソシアネートＨＤＩ、エチレンオキサイド、無水フタル酸、ラテックスおよびホルマリンから選択される職業性アレルゲン；およびハウスダストならびにこれらの混合物からなる群より選択される。
【００１７】
他の局面において、本発明は、サンプル中のＩｇＥを測定するためのキットを提供する。このキットは、
Ａ）該ＩｇＥに結合する能力を有する抗原が固定化された基材；および
Ｂ）標識された抗ＩｇＥ抗体
を含む。
【００１８】
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される標識は、酵素性、蛍光性、放射性、発光性または発色性を有する。
【００１９】
別の局面において、本発明は、被験体中の唾液中のＩｇＥ全量を測定するためのキットを提供する。このキットは、
Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；および
Ｂ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体
を含む。
【００２０】
他の局面において、本発明は、被験体中の唾液中の特定のアレルゲン特異的ＩｇＥを測定するためのキットを提供する。このキットは、
Ａ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材；および
Ｂ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体
を含む。
【００２１】
別の局面において、本発明は、被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出するためのキットを提供する。このキットは、
Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；
Ａ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材；および
Ｂ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体
を含む。
【００２２】
１つの局面において、本発明は、サンプル中のＩｇＥを測定するためのシステムを提供する。このシステムは、
Ａ）該ＩｇＥと結合する能力を有する抗原が固定化された基材；
Ｂ）該ＩｇＥに対する標識された抗ＩｇＥ抗体；および
Ｃ）前記該標識の有無を調べる手段、を含む。
【００２３】
１つの実施形態において、本発明のシステムにおいて使用される標識の有無を調べる手段は、酵素結合免疫検定法、ラジオイムノアッセイ、免疫沈降法、蛍光免疫検定法、化学発光検定法、イムノブロット法および凝集反応検定法からなる群より選択される方法を実現する手段である。
【００２４】
１つの局面において、本発明は、唾液中のＩｇＥを測定するための方法を提供する。この方法は、以下の工程：
Ａ）該ＩｇＥと結合する能力を有する抗原が固定化された基材を提供する工程；
Ｂ）該基材とサンプルとを、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件下で接触させる工程；
Ｃ）該基材を、該抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件下に供する工程；および
Ｄ）該標識された抗ＩｇＥ抗体に由来する標識の有無を検出する工程
を包含する。
【００２５】
１つの実施形態において、本方法の前記Ｂ）工程では、前記基材と前記ＩｇＥとが、４℃〜４５℃の範囲で、１時間以内にわたり接触される。
【００２６】
別の実施形態において、本方法の前記Ｃ）工程では、前記抗原−ＩｇＥ複合体と、前記標識された抗ＩｇＥ抗体とが、４℃〜４５℃の範囲で、１時間以内にわたり反応される。
【００２７】
別の実施形態において、本方法の前記標識の有無を検出する工程は、前記基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定することを包含する。
【００２８】
１つの局面において、本発明は、被験体の特定のアレルゲンに対する特質を検出するための方法を提供する。この方法は、以下の工程：
Ａ）該被験体の唾液を提供する工程；
Ｂ）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化されたＩｇＥ抗体基材を提供する工程；
Ｃ）該特定のアレルゲンが固定化されたアレルゲン基材を提供する工程；
Ｄ）該基材と該唾液とを、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件下で接触させる工程；
Ｅ）該基材を、該抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件下に供する工程；および
Ｆ）該標識された抗ＩｇＥ抗体に由来する標識の有無を検出し、該特定のアレルゲンの該被験体のＩｇＥ抗体に対する比率を求め、該比率が一定比率を超えることを指標として、該特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を決定する工程
を包含する。
【００２９】
１つの局面において、本方法では、
前記被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材は：
Ｄ−１）該ＩｇＥ抗体基材と前記唾液とを４℃で一晩にわたり接触させる工程；
Ｅ−１）該ＩｇＥ抗体基材とセイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識された抗ＩｇＥ抗体とを、室温で２時間反応させる工程；および
Ｆ−１）該ＩｇＥ抗体基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定する工程
に供され、
前記特定のアレルゲンが固定化された基材は：
Ｄ−２）該アレルゲン基材と前記唾液とを４℃で一晩にわたり接触させる工程；
Ｅ−２）該アレルゲン基材とセイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識された抗ＩｇＥ抗体とを、室温で２時間反応させる工程；および
Ｆ−２）該アレルゲン基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定する工程
に供される。
【００３０】
別の実施形態において、本方法において使用される前記ＩｇＥ抗体基材と前記アレルゲン基材との反応に用いられる標識された抗ＩｇＥ抗体は、それぞれ別の標識で標識されている。
【発明の効果】
【００３１】
本発明によって、ＩｇＥに結合する能力を有する抗原に特異的なＩｇＥを測定する技術が提供される。本発明のＩｇＥを測定する技術は、従来の測定技術では測定することができなかった、唾液中に存在する微量のＩｇＥを測定することができる。従って、本発明の技術により、採血等を必要とせず、唾液を利用して簡便にＩｇＥを測定することが可能となった。この測定方法を用いた、特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出する技術も、本発明によって初めて提供されるものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】
以下、本発明を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
【００３３】
（用語の定義）
以下に本明細書において特に使用される用語の定義を列挙する。
【００３４】
本明細書において、「基材」は、抗原を支持するための材料を意味する。基材は、一定の強度を有する。本明細書において、基材は、樹脂、ガラス、セルロイドおよび紙からなる群より選択される材料を含み得る。
【００３５】
本発明において使用され得る基材は、例えば、マイクロウェルであり得る。本発明において使用され得る基材は、抗原を支持することができれば、どのような基材であってもよい。なぜなら、抗原抗体反応ができさえすれば、標識の検出は可能であるからである。
【００３６】
本明細書において、「抗原」（ａｎｔｉｇｅｎ）とは、当該分野において用いられる最も広義の意味として定義され、抗体分子によって特異的に結合され得る任意の基質をいう。
【００３７】
本明細書において、「ＩｇＥ」は、免疫グロブリン分子の一つをであり、分子量約１９００００の分子をいう。この用語はまた、「イムノグロブリンＥ」、「免疫グロブリンＥ」、「ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｅ」と交換可能に使用されうる。この用語は、アレルギー抗体とも称される。ＩｇＥは、アレルギーを起こす抗原（例えば、スギ、ダニ、卵、ハウスダストなど）との接触を繰り返すうちに体内に蓄積される。ＩｇＥの量が一定量を超えるとアレルギーを発症する。
【００３８】
本明細書において、「ＩｇＥ全量」は、対象とするサンプルに含まれるＩｇＥの全量をいう。
【００３９】
本明細書において、「ＩｇＥ抗体基材」は、サンプル中のＩｇＥ全量を測定するための基材をいう。
【００４０】
本明細書において、「ＩｇＥに結合する能力を有する」は、ＩｇＥと特異的に結合し得る能力を有する物質をいう。本明細書において、「ＩｇＥに結合する能力を有する抗原」は、ＩｇＥと特異的に結合し得る能力を有する抗原をいう。これらとしては、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４１】
本明細書において、「特異的に結合する」は、その物質またはその部分に対して、その物質またはその部分以外に対する特異性よりも高い特異性をもって結合することができる能力をいう。
【００４２】
本明細書において、「アレルゲン」は、アレルギー反応の原因となる抗原物質をいう。このアレルゲンが免疫応答を惹起する能力を「アレルゲン性」という。
【００４３】
本明細書において、「特定のアレルゲン」は、ＩｇＥ抗体の産生を誘導する抗原をいう。特定のアレルゲンとしては、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどが挙げられるが、これらに限定されない。本発明において使用され得る特定のアレルゲンは、ＩｇＥ抗体の産生を誘導するかぎり、どのような物質であってもよい。なぜなら、人に対して、なんらかのアレルギー反応を引き起こす物質は、全て特定のアレルゲンとなりうるからである。
【００４４】
本発明において使用される「アレルゲン」としては、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダスト等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４５】
本明細書において「ダニ由来アレルゲン」は、ダニに由来するアレルゲンをいう。これらとしては、例えば、ヤケヒョウヒダニ、コナヒョウヒダニ、アシブトコナダニ、サヤアシニクダニ、ケナガコナダニ等のダニに由来するアレルゲンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４６】
本明細書において「植物由来アレルゲン」は、植物に由来するアレルゲンをいう。これらとしては、例えば、スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミ、ブラジルナッツ、アーモンド、トマト、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、イチゴ、ニンニク、タマネギ、リンゴ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、マスタード、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カキ、ヤマイモ、スイカ、オオバコ等の植物に由来するアレルゲンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４７】
本明細書において「花粉アレルゲン」は、アレルギー反応の原因となる花粉をいう。これらとしては、例えば、スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ等の花粉などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４８】
本明細書において「種子アレルゲン」は、アレルギー反応の原因となる種子をいう。これらとしては、例えば、スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミ、ブラジルナッツ、アーモンド、トマト、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、イチゴ、ニンニク、タマネギ、リンゴ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、マスタード、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カキ、ヤマイモ、スイカ、オオバコ等の植物の種子が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４９】
本明細書において「カビ・酵母由来アレルゲン」は、カビ・酵母に由来するアレルゲンをいう。これらとしては、例えば、ペニシリウム、クラドスポリウム、アスペルギルス、ムコール、カンジダ、アルテルナリア、ヘルミンドスポリウム、ピティロスポリウム（マラセチア）、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、トリコフィトン、ビール酵母等のカビ・酵母に由来するアレルゲンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５０】
本明細書において「昆虫由来アレルゲン」は、昆虫に由来するアレルゲンをいう。これらとしては、ミツバチ、スズメバチ、アシナガバチ、ゴキブリ、ユスリカ、ガ、ヤブカ、カイコ等の昆虫に由来するアレルゲンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５１】
本明細書において「寄生虫由来アレルゲン」は、寄生虫に由来するアレルゲンをいう。例えば、蛔虫、包虫、アニサキス等の寄生虫に由来するアレルゲンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５２】
本明細書において「動物由来アレルゲン」は、動物に由来するアレルゲンをいう。例えば、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、モルモット、ハト、ガチョウ、セキセイインコ、ヤギ、ヒツジ、家兎、ブタ、ハムスター、ニワトリ、アヒル、ラット、マウス、タラ、カニ、エビ、ムラサキガイ、マグロ、サケ、サバ、イカ、タコ、アジ、イワシ、ロブスター、カレイ、イクラ、タラコ、アサリ、カキ、ホタテ等の動物に由来するアレルゲン（例えば、上皮、皮膚、ふん、羽毛、血清蛋白）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５３】
本明細書において「食餌性アレルゲン」は、アレルギー反応の原因となる食餌をいう。これらとしては、例えば、卵白、牛乳、タラ、コムギ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミの実、ブラジルナッツ、アーモンド、カニ、エビ、トマト、豚肉、牛肉、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、ムラサキガイ、マグロ、サケ、イチゴ、ビール酵母、ニンニク、タマネギ、リンゴ、サバ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、イカ、タコ、アジ、イワシ、黄卵、α−ラクトアルブミン、β−ラクトグロブリン、カゼイン、グルテン、ロブスター、チーズ、モールドチーズ、チェダーチーズ、鶏肉、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、羊肉、マスタード、麦芽、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カレイ、イクラ、タラコ、アサリ、カキ、ホタテ、ヤマイモ、クルミ、スイカ、ゼラチン等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５４】
本明細書において「繊維性アレルゲン」は、アレルギー反応の原因となる繊維をいう。例えば、綿、絹等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５５】
本明細書において「薬品性アレルゲン」は、アレルギー反応の原因となる薬品をいう。例えば、ヒトインスリン、ゼラチン、トリレンジイソシアネート（イソシアネートＴＤＩ）、ジフェニルメタンジイソシアネート（イソシアネートＭＤＩ）、ヘキサメチレンジイソシアネート（イソシアネートＨＤＩ）、エチレンオキサイド、無水フタル酸、ラテックス、ホルマリン等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５６】
本明細書において「職業性アレルゲン」は、特定の職業においてアレルギー反応の原因となる物質をいう。これらとしては、例えば、オオバコ種子（これは、植物由来アレルゲンとしても分類され得る）、絹（これは、昆虫由来アレルゲンとしても分類され得る。）、トリレンジイソシアネート（イソシアネートＴＤＩ：これは、薬品性アレルゲンとしても分類され得る。）、ジフェニルメタンジイソシアネート（イソシアネートＭＤＩ：これは、薬品性アレルゲンとしても分類され得る。）、ヘキサメチレンジイソシアネート（イソシアネートＨＤＩ：これは、薬品性アレルゲンとしても分類され得る。）、エチレンオキサイド（これは、薬品性アレルゲンとしても分類され得る。）、無水フタル酸（これは、薬品性アレルゲンとしても分類され得る。）、ラテックス（これは、薬品性アレルゲンとしても分類され得る。）、ホルマリン（これは、薬品性アレルゲンとしても分類され得る。）等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５７】
本明細書において「ハウスダスト」は、家の中に存在する、塵、人の身体からでる垢、フケ、毛髪、ペットの毛、カビまたはダニの死骸またはフンなどの総称である。
【００５８】
本明細書において、「アレルゲン基材」は、基材を区別するときに使用され、アレルゲンが配置された基材をいう。
【００５９】
本明細書において、「アレルギー特質」は、被験体が特定のアレルゲンに対してアレルギー反応を起こす性質をいう。特定のアレルゲンに対するアレルギー特質は、特定のアレルゲンの被験体のＩｇＥ抗体に対する比率を求め、この比率が一定比率を超えることを指標として決定することができる。
【００６０】
本明細書において、特定のアレルゲンに対してアレルギー特質を有するかどうかは、その特定のアレルゲンに対する被験体のＩｇＥ抗体の量を求め、その量が、高値の場合に、その特定のアレルゲンに対してアレルギー特質を有すると判定することができる。
【００６１】
本明細書において、用語「抗体」は、免疫原である抗原によって惹起された特異的なアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子をいう。抗体は、Ｂ細胞により生産され、血液、体液中に存在する。抗体は、抗原と特異的に反応するという特徴を有する。抗体は、抗原の呈示による刺激の結果としてではなく自然に存在する場合もあり得る。基本的には、抗体の分子構造は各２本の軽鎖と重鎖とから形成されるが、二量体、三量体、五量体としても存在し得る。これらとしては、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＧ等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６２】
本明細書において、「標識」は、例えば、酵素性、蛍光性、放射性、発光性、発色性などにより付与され得る。標識としては、例えば、酵素性（例えば、セイヨウワサビぺルオキシダーゼ、アルカリフォスフォターゼ）、蛍光性（例えば、蛍光色素（ｃｙ３、ｃｙ５、ｃｙ７、ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ（ＦＩＴＣ）など）、蛍光タンパク質（緑色蛍光タンパク質（Ｇｒｅｅｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ；ＧＦＰ）、（シアン色蛍光タンパク質（ｃｙａｎ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ：ＣＦＰ）、黄色蛍光タンパク質（ｙｅｌｌｏｗ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ：ＹＦＰ）など）、発光酵素（例えば、ルシフェラーゼなど）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６３】
本発明において、標識の有無は、例えば、酵素結合免疫検定法、ラジオイムノアッセイ、免疫沈降法、蛍光免疫検定法、化学発光検定法、イムノブロット法、凝集反応検定法などの方法により実現され得る。この標識の有無を検出する方法は、標識の有無を検出することができる限り、どのような方法であってもよい。好ましくは、この方法は、基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定することを包含する。このような標識の有無を検出する方法は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。
【００６４】
本明細書において、用語「酵素結合免疫検定法」は、試料中に含まれる抗体または抗原の濃度を検出・定量する方法である。この用語はまた、Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ  ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）、エライサまたはエライザとも呼ばれる。
【００６５】
本明細書において、用語「ラジオイムノアッセイ（ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ＲＩＡ）」は、放射線同位元素を用いて、抗体または抗原の濃度を測定する方法をいう。この方法は、放射免疫分析法、放射免疫測定法とも呼ばれる。
【００６６】
本明細書において、用語「免疫沈降法」は、可溶性の抗原と抗体が特異的に反応して不溶化し沈殿する反応を利用して抗原を検出・分離・精製する方法である。
【００６７】
本明細書において、用語「蛍光免疫検定法」は、特定のタンパク質を抗体によって蛍光標識し、その検体に励起光を照射して、標識が発する蛍光を観察することで、目的のタンパク質を検出する方法である。
【００６８】
本明細書において、用語「化学発光検定法」は、特定のタンパク質を一次抗体により標識し、化学発光する酵素で標識した二次抗体を該一次抗体に結合させ、酵素反応による基質の発光・発色により目的のタンパク質を検出する方法である。
【００６９】
本明細書において、用語「イムノブロット法」は、微量の特定のタンパク質を検出する方法の１つである。タンパク質試料をゲル電気泳動によって分画した後、分画されたタンパク質をニトロセルロース膜等に転写し、目的のタンパク質を抗体を用いて検出する方法である。
【００７０】
本明細書において、用語「凝集反応検定法」は、抗血清試薬と試料から得た試料液をスライドグラス状で混ぜ合わせて、反応により塊が形成されるか否かを観察することで目的のタンパク質を検出する方法である。
【００７１】
（好ましい実施形態の説明）
以下に本発明の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は、本発明のよりよい理解のために提供されるものであり、本発明の範囲は以下の記載に限定されるべきでない。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本発明の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。
【００７２】
（サンプル中のＩｇＥを測定するための基材）
１つの局面において、本発明は、サンプル中のＩｇＥを測定するための基材を提供する。この基材は、表面上に固定化された、該ＩｇＥに結合する能力を有する抗原を含み得る。
【００７３】
１つの実施形態において、ＩｇＥに結合する能力を有する抗原は、ＩｇＥを認識する抗体（好ましくは、抗ヒトＩｇＥ抗体）であり得る。
【００７４】
別の実施形態において、ＩｇＥに結合する能力を有する抗原は、アレルゲンであり得る。アレルゲンとしては、例えば、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７５】
１つの実施形態において、本発明の基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等を材料として含んでいてもよい。
【００７６】
（診断用基材セット）
別の局面において、本発明は、被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出するための診断用基材セットを提供する。この診断用基材セットは、Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；およびＡ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材を含む。
【００７７】
好ましい実施形態において、被験体はヒトであり得る。
【００７８】
１つの実施形態において、本発明の診断用基材セットにおいて使用される特定のアレルゲンとしては、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどが挙げれられるが、これらに限定されない。
【００７９】
１つの実施形態において、本発明の診断用基材セットでは、基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等などの材料を含んでいてもよい。
【００８０】
１つの実施形態において、本発明の診断用基材セットでは、特定のアレルゲンの前記被験体のＩｇＥ抗体に対する比率を求め、該比率が一定比率を超えることを指標として、該特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を決定することができる。特定のアレルゲンに対してアレルギー特質を有するかどうかは、その特定のアレルゲンに対する被験体のＩｇＥ抗体の量を求め、その量が、高値の場合に、その特定のアレルゲンに対してアレルギー特質を有すると判定することができる。
【００８１】
（サンプル中のＩｇＥを測定するためのキット）
１つの局面において、本発明は、サンプル中のＩｇＥを測定するためのキットを提供する。このキットは、Ａ）該ＩｇＥに結合する能力を有する抗原が固定化された基材；およびＢ）該ＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体を含みうる。
【００８２】
１つの実施形態において、このＩｇＥに結合する能力を有する抗原は、ＩｇＥを認識する抗体（好ましくは、ヒト由来）であり得る。
【００８３】
別の実施形態において、このＩｇＥに結合する能力を有する抗原は、アレルゲンであり得る。このアレルゲンとしては、例えば、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８４】
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等を材料として含みうる。
【００８５】
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される標識は、例えば、酵素性、蛍光性、放射性、発光性、発色性などにより付与され得る。標識としては、例えば、酵素性（例えば、セイヨウワサビぺルオキシダーゼ、アルカリフォスフォターゼ）、蛍光性（例えば、蛍光色素（ｃｙ３、ｃｙ５、ｃｙ７、ＦＩＴＣなど）、蛍光タンパク質（ＧＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰなど）、発光酵素（例えば、ルシフェラーゼなど）が挙げられるが、これらに限定されない。このような標識は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。
【００８６】
（被験体中の唾液中のＩｇＥ全量を測定するためのキット）
別の局面において、本発明は、被験体中の唾液中のＩｇＥ全量を測定するためのキットを提供する。このキットは、Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；およびＢ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体
が含まれ得る。
【００８７】
１つの実施形態において、被験体はヒトであり得る。
【００８８】
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等を含んでいてもよい。
【００８９】
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される標識は、例えば、酵素性、蛍光性、放射性、発光性、発色性などにより付与され得る。標識としては、例えば、酵素性（例えば、セイヨウワサビぺルオキシダーゼ、アルカリフォスフォターゼ）、蛍光性（例えば、蛍光色素（ｃｙ３、ｃｙ５、ｃｙ７、ＦＩＴＣなど）、蛍光タンパク質（ＧＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰなど）、発光酵素（例えば、ルシフェラーゼなど）が挙げられるが、これらに限定されない。このような標識は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。
【００９０】
（被験体中の唾液中の特定のアレルゲン特異的ＩｇＥを測定するためのキット）
他の局面において、本発明は、被験体中の唾液中の特定のアレルゲン特異的ＩｇＥを測定するためのキットを提供する。このキットは、Ａ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材；およびＢ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体を含み得る。
【００９１】
１つの実施形態において、被験体はヒトであり得る。
【００９２】
別の実施形態において、本発明のキットでは、ＩｇＥに結合する能力を有する抗原は、アレルゲンであり得る。このアレルゲンとしては、例えば、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９３】
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等を含んでいてもよい。
【００９４】
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される標識は、例えば、酵素性、蛍光性、放射性、発光性、発色性などにより付与され得る。標識としては、例えば、酵素性（例えば、セイヨウワサビぺルオキシダーゼ、アルカリフォスフォターゼ）、蛍光性（例えば、蛍光色素（ｃｙ３、ｃｙ５、ｃｙ７、ＦＩＴＣなど）、蛍光タンパク質（ＧＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰなど）、発光酵素（例えば、ルシフェラーゼなど）が挙げられるが、これらに限定されない。このような標識は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。
【００９５】
（被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出するためのキット）
他の局面において、本発明は、被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出するためのキットを提供する。このキットは、Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；Ａ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材；およびＢ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体を含み得る。
【００９６】
１つの実施形態において、被験体はヒトであり得る。
【００９７】
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用されるアレルゲンとしては、例えば、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９８】
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等を材料として含んでいてもよい。
【００９９】
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される標識は、例えば、酵素性、蛍光性、放射性、発光性、発色性などにより付与され得る。標識としては、例えば、酵素性（例えば、セイヨウワサビぺルオキシダーゼ、アルカリフォスフォターゼ）、蛍光性（例えば、蛍光色素（ｃｙ３、ｃｙ５、ｃｙ７、ＦＩＴＣなど）、蛍光タンパク質（ＧＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰなど）、発光酵素（例えば、ルシフェラーゼなど）が挙げられるが、これらに限定されない。このような標識は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。
【０１００】
（サンプル中のＩｇＥを測定するためのシステム）
１つの局面において、本発明は、サンプル中のＩｇＥを測定するためのシステムを提供する。このシステムは、Ａ）該ＩｇＥと結合する能力を有する抗原が固定化された基材；
Ｂ）該ＩｇＥに対する標識された抗ＩｇＥ抗体；およびＣ）前記該標識の有無を調べる手段、を含み得る。
【０１０１】
１つの実施形態において、本発明のシステムにおいて使用される、ＩｇＥに結合する能力を有する抗原は、ＩｇＥを認識する抗体（好ましくは、抗ヒトＩｇＥ抗体）であり得る。
【０１０２】
別の実施形態において、このＩｇＥに結合する能力を有する抗原は、アレルゲンであり得る。アレルゲンとしては、例えば、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどであり得るが、これらに限定されない。
【０１０３】
１つの実施形態において、本発明のシステムにおいて使用される基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等を材料として含みうる。
【０１０４】
別の実施形態において、本発明において使用される標識の有無を調べる手段は、酵素結合免疫検定法、ラジオイムノアッセイ、免疫沈降法、蛍光免疫検定法、化学発光検定法、イムノブロット法および凝集反応検定法等からなる群より選択される方法を実現する手段であり得る。この標識の有無を調べる手段は、標識の有無を検出することができる限り、どのような手段であってもよい。このような標識の有無を調べる手段は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。
【０１０５】
（唾液中のＩｇＥを測定するための方法）
１つの局面において、本発明は、唾液中のＩｇＥを測定するための方法を提供する。この方法は、以下の工程：Ａ）該ＩｇＥと結合する能力を有する抗原が固定化された基材を提供する工程；Ｂ）該基材とサンプルとを、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件下で接触させる工程；Ｃ）該基材を、該抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件下に供する工程；およびＤ）該標識された抗ＩｇＥ抗体に由来する標識の有無を検出する工程を包含する。
【０１０６】
１つの実施形態において、本発明の方法では、ＩｇＥと結合する能力を有する抗原は、ＩｇＥを認識する抗体（好ましくは、抗ヒトＩｇＥ抗体）であり得る。
【０１０７】
別の実施形態において、本発明の方法では、ＩｇＥと結合する能力を有する抗原は、アレルゲンであり得る。好ましくは、アレルゲンは、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどであり得るが、これらに限定されない。
【０１０８】
１つの実施形態において、本発明の方法において使用される基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等を材料として含みうる。
【０１０９】
別の実施形態において、本方法のＢ）該基材とサンプルとを、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件下で接触させる工程では、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件と、４℃〜４５℃の範囲で、１時間以内であり得る。より好ましくは、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件は、４℃にて、一晩にわたる接触であり得る。
【０１１０】
本方法において、Ｃ）基材を、該抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件下に供する工程では、この条件は、４℃〜４５℃の範囲で、１時間以内であり得る。より好ましくは、この条件は、室温にて２時間にわたる反応であり得る。
【０１１１】
１つの実施形態において、本方法において使用される標識は、例えば、酵素性、蛍光性、放射性、発光性、発色性などにより付与され得る。標識としては、例えば、酵素性（例えば、セイヨウワサビぺルオキシダーゼ、アルカリフォスフォターゼ）、蛍光性（例えば、蛍光色素（ｃｙ３、ｃｙ５、ｃｙ７、ＦＩＴＣなど）、蛍光タンパク質（ＧＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰなど）、発光酵素（例えば、ルシフェラーゼなど）が挙げられるが、これらに限定されない。このような標識は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。
【０１１２】
本発明の唾液中のＩｇＥを測定するための方法では、標識の有無を検出する工程は、例えば、酵素結合免疫検定法、ラジオイムノアッセイ、免疫沈降法、蛍光免疫検定法、化学発光検定法、イムノブロット法、凝集反応検定法等により実現され得る。この標識の有無を検出する工程において使用される方法は、標識の有無を検出することができる限り、どのような方法であってもよい。好ましくは、標識の有無を検出する工程は、基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定することを包含する。このような標識の有無を検出する方法は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。
【０１１３】
（被験体の特定のアレルゲンに対する特質を検出するための方法）
別の局面において、本発明は、被験体の特定のアレルゲンに対する特質を検出するための方法を提供する。この方法は、以下の工程：Ａ）該被験体の唾液を提供する工程；Ｂ）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化されたＩｇＥ抗体基材を提供する工程；Ｃ）該特定のアレルゲンが固定化されたアレルゲン基材を提供する工程；Ｄ）該基材と該唾液とを、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件下で接触させる工程；Ｅ）該基材を、該抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件下に供する工程；およびＦ）該標識された抗ＩｇＥ抗体に由来する標識の有無を検出し、該特定のアレルゲンの該被験体のＩｇＥ抗体に対する比率を求め、該比率が一定比率を超えることを指標として、該特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を決定する工程、を包含する。
【０１１４】
１つの実施形態において、被験体はヒトがあってもよい。
【０１１５】
別の実施形態において、本発明の方法において使用される特定のアレルゲンは、例えば、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどであり得るが、これらに限定されない。
【０１１６】
１つの実施形態において、本方法において使用される基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等であり得るが、これらに限定されない。
【０１１７】
１つの実施形態において、本発明のＢ）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化されたＩｇＥ抗体基材を提供する工程では、この条件は、４℃〜４５℃の範囲で、１時間以内であり得る。より好ましくは、この条件は、４℃にて、一晩にわたる接触であり得る。
【０１１８】
別の実施形態において、本発明のＣ）該特定のアレルゲンが固定化されたアレルゲン基材を提供する工程では、抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件と、４℃〜４５℃の範囲で、１時間以内であり得る。より好ましくは、抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件は、室温にて２時間にわたる反応であり得る。
【０１１９】
１つの実施形態において、抗ＩｇＥ抗体を標識した標識は、例えば、酵素性、蛍光性、放射性、発光性、発色性などにより付与され得る。標識としては、例えば、酵素性（例えば、セイヨウワサビぺルオキシダーゼ、アルカリフォスフォターゼ）、蛍光性（例えば、蛍光色素（ｃｙ３、ｃｙ５、ｃｙ７、ＦＩＴＣなど）、蛍光タンパク質（ＧＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰなど）、発光酵素（例えば、ルシフェラーゼなど）が挙げられるが、これらに限定されない。このような標識は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。
【０１２０】
本発明唾液中のＩｇＥを測定するための方法では、標識の有無を検出する工程は、例えば、酵素結合免疫検定法、ラジオイムノアッセイ、免疫沈降法、蛍光免疫検定法、化学発光検定法、イムノブロット法、凝集反応検定法等により実現され得る。この標識の有無を検出する工程において使用される方法は、標識の有無を検出することができる限り、どのような方法であってもよい。好ましくは、標識の有無を検出する工程は、基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定することを包含する。このような標識の有無を検出する方法は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。
【０１２１】
好ましい実施形態において、本発明の方法では、前記被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材は：Ｄ−１）該ＩｇＥ抗体基材と前記唾液とを４℃で一晩にわたり接触させる工程；Ｅ−１）該ＩｇＥ抗体基材とセイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識された抗ＩｇＥ抗体とを、室温で２時間反応させる工程；およびＦ−１）該ＩｇＥ抗体基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定する工程に供され、前記特定のアレルゲンが固定化された基材は：Ｄ−２）該アレルゲン基材と前記唾液とを４℃で一晩にわたり接触させる工程；Ｅ−２）該アレルゲン基材とセイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識された抗ＩｇＥ抗体とを、室温で２時間反応させる工程；および
Ｆ−２）該アレルゲン基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定する工程に供される。
【０１２２】
他の実施形態において、本発明の方法において使用されるＩｇＥ抗体基材とアレルゲン基材との反応に用いられる標識された抗ＩｇＥ抗体は、それぞれ別の標識で標識されていてもよい。このような別の標識の組合わせは、本明細書において使用され得る標識のうち波長が異なる物質において、そのすべての組合わせが可能である。この実施形態では、ＩｇＥ全体を測定する標識とアレルゲンを測定する標識とについて異なる標識を用いることにより、一挙に複数のアレルゲンを求めることができる。
【０１２３】
以下、実施例により、本発明の構成をより詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。以下において使用した試薬類は、特に言及した場合を除いて、市販されているものを使用した。
【実施例】
【０１２４】
（実施例１．唾液中のＩｇＥ全量の測定）
（ＩｇＥ全量を測定するための基材（ＩｇＥ抗体基材）の作製）
抗原として、抗ヒトＩｇＥ抗体（Ａｎｔｉ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＥ−ＨＲＰ（ＫＰＬ  Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）を用いる。抗ヒトＩｇＥ抗体を、抗原希釈液（０．１Ｍ  ＮａＨＣＯ３（ｐＨ  ９．５））で１μｇ／ｍｌに希釈する。この抗ヒトＩｇＥ抗体を１００μｌ／ウェルの密度で９６穴プレートに希釈し、４℃で一晩、インキュベートする。リン酸緩衝化生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ，ＰＢＳ）（ｐＨ  ７．４）で３回洗浄する。ブロッキングバッファー（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ＰＢＳ／０．１％ＢＳＡ、０．０５％ＮａＮ３、５％Ｄ−ｓｏｌｂｉｔｏｌ（ｐＨ  ７．４））を１ウェルあたり３５０μｌ添加し、室温で１時間反応させる。次いで、ブロッキングバッファーを除去し、このプレートを室温で一晩乾燥させて、ＩｇＥ抗体基材を作製する。
【０１２５】
（ＩｇＥの測定）
サンプルとして、被験体（社内ボランティアＮＫ  男性  ５０歳）から唾液を採取する。採取した唾液（５０μｌ）と、アッセイバッファー（０．１Ｍ  ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ  ７．４））５０μｌを混合して、本実施例において作製したＩｇＥ抗体基材に入れ、４℃にて一晩反応させる。洗浄溶液（０．９％Ｓａｌｉｎｅ，０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄する。次いで、セイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識した抗ヒトＩｇＥ抗体（ＫＰＬ  Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）（ＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体）を、サンプル希釈バッファー（０．１Ｍ  ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ  ７．４））で２００００倍に希釈してＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を調製する。このＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液１００μｌを、ＩｇＥ抗体基材に添加し、室温で２時間反応させる。洗浄溶液にて３回洗浄し、発色基質としてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）１００μｌを添加して、室温で２０分間反応させる。次いで、停止溶液（２Ｎ−Ｈ２ＳＯ４）１００μｌを添加し、バイオラッド社  Ｍｏｄｅｌ  ６８０を用いてＯＤ４５０ｎｍの吸光度を測定する。
【０１２６】
本実施例において作製された基材を用いて、唾液サンプル中に含まれるＩｇＥの全量を測定することができる。
【０１２７】
（比較例１．血清中のＩｇＥ全量の測定）
実施例１において作製したＩｇＥ抗体基材をもちいる。
【０１２８】
（ＩｇＥの測定）
サンプルとして、実施例１と同じ被験体から血清を採取する。採取した血清と、アッセイバッファー（０．１Ｍ  ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ  ７．４））を混合して、実施例１において作製したＩｇＥ抗体基材に入れ、４℃にて一晩反応させる。洗浄溶液（０．９％Ｓａｌｉｎｅ，０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄する。次いで、セイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識した抗ヒトＩｇＥ抗体（ＫＰＬ  Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）（ＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体）を、サンプル希釈バッファー（０．１Ｍ  ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ  ７．４））で希釈してＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を調製する。このＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を、ＩｇＥ抗体基材に添加し、室温で２時間反応させる。洗浄溶液にて３回洗浄し、発色基質としてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を添加して、室温で２０分間反応させる。次いで、停止溶液（２Ｎ−Ｈ２ＳＯ４）を添加し、バイオラッド社  Ｍｏｄｅｌ  ６８０を用いてＯＤ４５０ｎｍの吸光度を測定する。
【０１２９】
（実施例１と比較例１のまとめ）
実施例１および比較例１の結果から、サンプルとして唾液をもちいても、血清と同様にアレルゲンの測定が可能なことが確認できる。本実施例において作製されたＩｇＥ抗体基材は、唾液中に微量にしか存在しないＩｇＥ全量を測定することが可能であることが確認された。
【０１３０】
（実施例２．サンプル中の特定のアレルゲンに特異的なＩｇＥの測定）
（特定のアレルゲンに特異的なＩｇＥを測定するための基材（アレルゲン基材）の作製）
抗原として、ニホンスギ、ダニ（ケナガコナダニ、コナヒョウヒダニおよびヤケヒョウヒダニ）、Ａｎｔｉ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＥ−ＨＲＰ（ＫＰＬ  Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）を用いた。これらの抗原を、抗原希釈液（０．１Ｍ  ＰＢＳ，０．０５％ＮａＮ３（ｐＨ  ７．４））で、５０μｇ／ｍｌに希釈（１倍希釈、３倍希釈、１０倍希釈、３０倍希釈、１００倍希釈）した。コントロールとして、抗原を添加していない抗原希釈液を用いた。抗原を１００μｌ／ウェルの密度で９６穴プレートに希釈し、４℃で一晩、インキュベートした。リン酸緩衝化生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ，ＰＢＳ）（ｐＨ  ７．４）で３回洗浄した。ブロッキングバッファー（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ＰＢＳ／０．１％ＢＳＡ、０．０５％ＮａＮ３、５％Ｄ−ｓｏｌｂｉｔｏｌ（ｐＨ  ７．４））を１ウェルあたり３５０μｌ添加し、室温で１時間反応させた。次いで、ブロッキングバッファーを除去し、このプレートを室温で一晩乾燥させて、アレルゲン基材を作製した。
【０１３１】
（ＩｇＥの測定）
サンプルとして、被験体（社内ボランティアＹＴ  男性  ２７歳および社内ボランティアＮＫ  男性  ５０歳）から唾液を採取した。採取した唾液（５０μｌ）と、アッセイバッファー（０．１Ｍ  ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ  ７．４））５０μｌを混合して、本実施例において作製したアレルゲン基材に入れ、４℃にて一晩反応させた。洗浄溶液（０．９％Ｓａｌｉｎｅ，０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄した。次いで、ＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体（ＫＰＬ  Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）を、サンプル希釈バッファー（０．１Ｍ  ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ  ７．４））で２００００倍に希釈してＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を調製した。このＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液１００μｌを、アレルゲン基材に添加し、室温で２時間反応させた。洗浄溶液にて３回洗浄し、発色基質としてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）１００μｌを添加して、室温で２０分間反応させた。次いで、停止溶液（２Ｎ−Ｈ２ＳＯ４）１００μｌを添加し、バイオラッド社  Ｍｏｄｅｌ  ６８０を用いてＯＤ４５０ｎｍの吸光度を測定した。
【０１３２】
その結果、アレルゲンとしてケナガコナダニ、コナヒョウヒダニおよびヤケヒョウヒダニを用いた場合の吸光度は、アレルゲンを添加していないブランクの吸光度よりも高い値であった（表１および図１Ａ〜１Ｃを参照のこと。）。アレルゲンとしてニホンスギを添加した場合、希釈倍率が低いときの吸光度は、アレルゲンを添加していないブランクの吸光度よりも高い値であった（表１および図１Ｄを参照のこと。）
【０１３３】
（表１．アレルゲンを添加した場合の吸光度）
【０１３４】
【表１】
2008164523.tif 000002
ｂｌ：抗原を添加していない抗原希釈液（コントロール）
本実施例において作製された基材を用いて、唾液サンプル中に含まれる、特定のアレルゲンに特異的なＩｇＥを測定することができた。抗原として、卵、ハウスダストを用いても同様の結果が確認できる。
【０１３５】
（比較例２．特定のアレルゲンに特異的なＩｇＥの測定）
実施例２において作製したアレルゲン基材をもちいる。
【０１３６】
（ＩｇＥの測定）
サンプルとして、被験体から血清を採取する。採取した血清と、アッセイバッファー（０．１Ｍ  ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ  ７．４））を混合して、実施例１において作製したＩｇＥ抗体基材に入れ、４℃にて一晩反応させる。洗浄溶液（０．９％Ｓａｌｉｎｅ，０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄する。次いで、セイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識した抗ヒトＩｇＥ抗体（ＫＰＬ  Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）（ＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体）を、サンプル希釈バッファー（０．１Ｍ  ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ  ７．４））で希釈してＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を調製する。このＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を、ＩｇＥ抗体基材に添加し、室温で２時間反応させる。洗浄溶液にて３回洗浄し、発色基質としてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を添加して、室温で２０分間反応させる。次いで、停止溶液（２Ｎ−Ｈ２ＳＯ４）を添加し、バイオラッド社  Ｍｏｄｅｌ  ６８０を用いてＯＤ４５０ｎｍの吸光度を測定する。
【０１３７】
（実施例２と比較例２のまとめ）
実施例２および比較例２の結果から、サンプルとして唾液をもちいても、血清と同様にアレルゲンの測定が可能なことが確認できる。本実施例において作製されたＩｇＥ抗体基材は、唾液中に微量にしか存在しないＩｇＥ全量を測定することが可能であることが確認された。
【０１３８】
（実施例３．唾液を用いた、被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質の検出）
本実施例では、実施例１において作製したＩｇＥ抗体基材、および実施例２において作製したアレルゲン基材を用いる。
【０１３９】
サンプルとして、被験体から唾液を採取する。採取した唾液（５０μｌ）と、アッセイバッファー（０．１Ｍ  ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ  ７．４））５０μｌを混合して、ＩｇＥ抗体基材およびアレルゲン基材のそれぞれに入れ、４℃にて一晩反応させる。洗浄溶液（０．９％Ｓａｌｉｎｅ，０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄する。次いで、ＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体（ＫＰＬ  Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）を、サンプル希釈バッファー（０．１Ｍ  ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ  ７．４））で２００００倍に希釈してＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を調製する。このＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液１００μｌを、ＩｇＥ抗体基材およびアレルゲン基材それぞれに添加し、室温で２時間反応させる。洗浄溶液にて３回洗浄し、発色基質としてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）１００μｌを添加して、室温で２０分間反応させる。次いで、停止溶液（２Ｎ−Ｈ２ＳＯ４）１００μｌを添加し、バイオラッド社  Ｍｏｄｅｌ  ６８０を用いてＯＤ４５０ｎｍの吸光度を測定する。
【０１４０】
（アレルギー特質の検討）
アレルギー特質は、特定のアレルゲンの被験体のＩｇＥ抗体に対する比率を求め、この比率が一定比率を超えることを指標として決定することができる。
【０１４１】
（比較例３．血清を用いた、被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質の検出）
本比較例では、実施例１において作製したＩｇＥ抗体基材、および実施例２において作製したアレルゲン基材を用いる。
【０１４２】
サンプルとして、被験体から血清を採取する。採取した血清と、アッセイバッファー（０．１Ｍ  ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ  ７．４））を混合して、ＩｇＥ抗体基材およびアレルゲン基材のそれぞれに入れ、４℃にて一晩反応させる。洗浄溶液（０．９％Ｓａｌｉｎｅ，０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄する。次いで、ＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体（ＫＰＬ  Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）を、サンプル希釈バッファー（０．１Ｍ  ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ  ７．４））で希釈してＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を調製する。このＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を、ＩｇＥ抗体基材およびアレルゲン基材それぞれに添加し、室温で２時間反応させる。洗浄溶液にて３回洗浄し、発色基質としてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を添加して、室温で２０分間反応させる。次いで、停止溶液（２Ｎ−Ｈ２ＳＯ４）１００μｌを添加し、バイオラッド社  Ｍｏｄｅｌ  ６８０を用いてＯＤ４５０ｎｍの吸光度を測定する。
【０１４３】
（アレルギー特質の検討）
アレルギー特質は、特定のアレルゲンの被験体のＩｇＥ抗体に対する比率を求め、この比率が一定比率を超えることを指標として決定することができる。
【０１４４】
（実施例３および比較例３のまとめ）
実施例３および比較例３の結果から、サンプルとして唾液をもちいても、血清と同様の結果が確認できる。本方法によると、ＩｇＥが微量にしか存在しない唾液を用いて、被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質が検出することが可能となる。
【０１４５】
（実施例４．ＩｇＥ抗体基材とアレルゲン基材との反応に用いられる標識された抗ＩｇＥ抗体をそれぞれ別の標識で標識したときのＩｇＥ測定）
本実施例では、実施例１において作製したＩｇＥ抗体基材、および実施例２において作製したアレルゲン基材を用いる。
【０１４６】
サンプルとして、被験体から唾液を採取する。採取した唾液（５０μｌ）と、アッセイバッファー（０．１Ｍ  ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ  ７．４））５０μｌを混合して、ＩｇＥ抗体基材およびアレルゲン基材のそれぞれに入れ、４℃にて一晩反応させる。洗浄溶液（０．９％Ｓａｌｉｎｅ，０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄する。
【０１４７】
（ＩｇＥの測定）
ＩｇＥ抗体基材には、セイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識した抗ヒトＩｇＥ抗体（ＫＰＬ  Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）を用いる。アレルゲン基材には、セイヨウワサビぺルオキシダーゼとは波長の異なる標識で標識した抗ヒトＩｇＥ抗体（ＫＰＬ  Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）を用いる。これらの標識化抗ヒトＩｇＥ抗体を、サンプル希釈バッファー（０．１Ｍ  ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ  ７．４））で２００００倍に希釈して、標識化抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を調製する。各標識化抗ヒトＩｇＥ抗体溶液１００μｌを、各々のプレートに添加し、室温で２時間反応させる。次いで、洗浄溶液にて３回洗浄する。
【０１４８】
ＩｇＥ抗体基材には、発色基質としてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）１００μｌを添加する。この基材を、室温で２０分間反応させる。次いで、停止溶液（２Ｎ−Ｈ２ＳＯ４）１００μｌを添加し、ＯＤ４５０ｎｍの吸光度を測定する。
【０１４９】
アレルゲン基材に、基質を添加し、反応させる。次いで、停止溶液を添加し、吸光度を測定する。
【０１５０】
その結果、ＩｇＥ全体を測定する標識とアレルゲンを測定する標識とについて異なる標識を用いて、一挙に複数のアレルゲンを求めることができる。
【０１５１】
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
【産業上の利用可能性】
【０１５２】
本発明は、唾液中に存在する、ＩｇＥに結合する能力を有する抗原に特異的なＩｇＥを測定ことができるという有用性を有する。従って、本発明は、唾液を用いて、特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出することができる有用性を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０１５３】
【図１Ａ】図１Ａは、ケナガコナダニアレルゲンに特異的な抗ＩｇＥ滴定曲線を示す。ｂｌは、アレルゲンを添加していないコントロールを示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、コナヒョウヒダニアレルゲンに特異的な抗ＩｇＥ滴定曲線を示す。ｂｌは、アレルゲンを添加していないコントロールを示す。
【図１Ｃ】図１Ｃは、ヤケヒョウヒダニアレルゲンに特異的な抗ＩｇＥ滴定曲線を示す。ｂｌは、アレルゲンを添加していないコントロールを示す。
【図１Ｄ】図１Ｄは、ニホンスギアレルゲンに特異的な抗ＩｇＥ滴定曲線を示す。ｂｌは、アレルゲンを添加していないコントロールを示す。
【図１Ａ】
2008164523.tif 000003
【図１Ｂ】
2008164523.tif 000004
【図１Ｃ】
2008164523.tif 000005
【図１Ｄ】
2008164523.tif 000006