(57)【要約】【課題】コセンダングサ中に含まれ、耐性を有するマラリヤに対しても有効に作用する化合物を単離し、その化学構造を解明して、マラリヤ治療に対して優れた効果を示す治療薬を提供する。【解決手段】一般式2008214260.tif 000007（式中のＲは水素原子又はグルコース基である）で表わされる（Ｒ）‐１，２‐ジヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタイン又はその配糖体を有効成分としてなるマラリヤ治療剤とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式
【化１】
2008214260.tif 000006
（式中のＲは水素原子又はグルコース基である）
で表わされる（Ｒ）‐１，２‐ジヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタイン又はその配糖体を有効成分としてなるマラリヤ治療剤。
【請求項２】
（Ｒ）‐１，２‐ジヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタインを有効成分とする請求項１記載のマラリヤ治療剤。
【請求項３】
２‐β‐Ｄ‐グルコピラノシルオキシ‐１‐ヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタインを有効成分とする請求項１記載のマラリヤ治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリアセチレン誘導体を有効成分とした新規なマラリヤ治療剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
薬剤耐性をもつマラリヤ原虫の出現以来、それを撲滅するための新規なマラリヤ治療剤が緊急に求められている。
すなわち、ＷＨＯの統計によれば、毎年３００万〜５００万人のマラリヤ患者が発生し、１〜３万人の死者が出ているが、これまでマラリヤ特効薬として用いられていたキニーネやクロロキンなどには、耐性原虫が発生し、これらに代るべき特効薬の出現が要望されている。
【０００３】
他方、世界中に広く分布しているキク科植物の１種であるコセンダングサ（Ｂｉｄｅｎｓ  ｐｉｌｏｓａ  Ｌ．）は、解熱剤、解毒剤、流感治療剤、腸炎治療剤、マラリヤ治療剤として知られている（非特許文献１参照）。
そして、このコセンダングサの有効成分についての研究も進められ、この中には、アセチレン類（非特許文献２、非特許文献３参照）、フラボン配糖体（非特許文献４）、シャルコン配糖体（非特許文献５参照）などが含まれていることが報告されている。
【０００４】
また、キク科に属する小花鬼針草、鬼針草などの中にアレルギー疾患に有効なポリアセチレン配糖体が含まれていること（特許文献１参照）、コセンダングサ属植物から分離したＲ‐（−）‐７‐フェニルヘプタ‐４，６‐ジイン‐２‐オールが抗炎症作用を有すること（特許文献２参照）、コセンダングサ中に過酸化抑制効果を発揮する成分としてポリアセチレン化合物誘導体が含まれていること（特許文献３参照）などが知られている。
しかしながら、コセンダングサ中のマラリヤ治療に有効な化合物として、これまでフラボン配糖体を注目しての研究がなされてきたが、いずれも活性が弱く、活性本体としては疑問が持たれてきた。
【０００５】
【非特許文献１】平凡社発行、「世界有用植物」、１９８９年、ｐ．１５１
【非特許文献２】「プランタ・メディカ（Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄｉｃａ）」、第６２巻、１９９６年、ｐ．３５５−３５７
【非特許文献３】「プランタ・メディカ（Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄｉｃａ）」、第６６巻、２０００年、ｐ．８２−８３
【非特許文献４】「フィトケミストリー（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」、第４８巻、１９９８年、ｐ．３９７−３９９
【非特許文献５】「フィトケミストリー（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」、第２８巻、１９８９年、ｐ．２４７−２４９
【非特許文献６】「ファイトテラピー・レサーチ（Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）」、第１８巻、２００４年、ｐ．６３４−６３９
【特許文献１】特開２００１−２３３８８８号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献２】特開２００３−７３３１５号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献３】特開２００４−８３４４２号公報（特許請求の範囲その他）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、コセンダングサ中に含まれ、耐性を有するマラリヤに対しても有効に作用する化合物を単離し、その化学構造を解明して、マラリヤ治療に対して優れた効果を示す治療薬を提供することを目的としてなされたものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、コセンダングサの抽出画分に含まれる成分について、分離精製を行い、その化学構造を解明することにより、マラリヤに対して、どのような化学構造をもつ化合物が有効であるかを確認するために種々研究を重ねた結果、（Ｒ）‐１，２‐ジヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタイン及びその配糖体が、これまでのマラリヤ特効薬として耐性を有するマラリヤ原虫に対しても、従来の治療薬と著しく異なる化合物であるにも係らず、高い治療効果を奏することを見出し、この知見に基づいて本発明をなすに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、一般式
【化１】
2008214260.tif 000002
（式中のＲは水素原子又はグルコース基である）
で表わされる（Ｒ）‐１，２‐ジヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタイン又はその配糖体を有効成分としてなる治療剤を提供するものである。
【０００９】
コセンダングサからは、これまで多数のポリアセチレン誘導体が分離されているにもかかわらず、上記の一般式（Ｉ）で表わされる化合物は知られていない。その理由は、この化合物は原料として新鮮な植物を用いなければ分離できないにもかかわらず、これまでは乾燥物を用いていたため、使用するまでの間に、ほとんど分離してしまったことによる。
しかしながら、これらの化合物は、コセンダングサ以外の植物からは、分離されたことが報告されており公知である。
【００１０】
例えば、１，２‐ジヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタインについては、ビデンス・ロイカンサス・エル（Ｂｉｄｅｎｓ  ｌｅｕｃａｎｔｈｕｓ  Ｌ）から、またその配糖体については、ミクログロッサ・ピリフォリア・ラム（Ｍｉｃｒｏｇｌｏｓｓａ  ｐｙｒｉｆｏｌｉａ  Ｌａｍ．）から、それぞれ分離されたことが報告されている（「テトラヒドロン（Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｎ）」、１９８５年、第４１巻、ｐ５４７−５５１）及び「ヘミッシェ・ベリヒト（Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．）」１９６５年、第９８巻、ｐ．１２２８−１２３２。
しかしながら、これらについては絶対立体配座や生理作用は報告されていない。
【００１１】
本発明マラリヤ治療剤の有効成分である一般式（Ｉ）で表わされる化合物は、例えば以下のようにして得ることができる。
すなわち、採取したばかりの新鮮なコセンダングサの地上部をアセトンで５日間抽出し、抽出液から減圧下アセトンを蒸発除去し、残渣をメチレンジクロリド（ＣＨ2Ｃｌ2）可溶物、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）可溶物及びｓｅｃ‐ブタノール（ｓｅｃ−ＢｕＯＨ）可溶物に分配分離する。
【００１２】
次に、この３種の分離物について抗菌作用を試験したところ、メチレンジクロリド可溶物に強い活性が認められたので、この分離物について、シリカゲル・カラムクロマトグラフィー処理を行う。すなわち、これを吸着したカラムを酢酸エチルの２０％濃度クロロホルムで展開し、流出する部分を捕集し、さらにＹＭＣ・ＧＥＬ（ＯＤＳ−Ａ６０−Ｓ１５０）を用いて逆相クロマトグラフィーを行い、カラムをメタノールで流出し、シリカゲル・プレート上で紫外線ランプの照射により強い蛍光を発する化合物を回収することにより、（Ｒ）‐１，２‐ジヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタインを湿った原料の量に基づき、約０．３質量％の収率で得る。
【００１３】
このものは、同化した状態では徐々に分解するが、メタノール、エタノール、酢酸エチル又はオリーブ油などに溶解した状態では安定な無色、無晶形粉末であり、屈折率［α］D23は−１４．４°（ｃ，０．３８，ＭｅＯＨ）、紫外線吸収スペクトル（メタノール）ｎｍ（ｌｏｇε）のピーク２６２．０（５．２５），２４８．６（５．１９），２３６．４（４．８６），２２６．４（４．４３）を示す。
図１は、このものの赤外線吸収スペクトル、図２は、このものの1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル、図３はこのものの13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル、図４はこのものの紫外線吸収スペクトルである。
【００１４】
このものの化学構造は、1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル、13Ｃ−核磁気共鳴スペクトルを解析し、表１に示すように各炭素と水素の帰属を求め、これらを文献記載の値と比較することにより同定した。
【００１５】
【表１】
2008214260.tif 000003
【００１６】
次に、前記した粗抽出液の酢酸エチル分配物及びｓｅｃ‐ブタノール分配物を一緒にしてシリカゲル・カラムクロマトグラフィーを行い、クロロホルム：メタノール（体積比８：２）の溶媒で流出させ、さらにＹＭＣ・ＧＥＬ（ＯＤＳ−Ａ６０−Ｓ２５０）を用いて、逆相クロマトグラフィーを行い、カラムよりメタノール／水（体積比４：１）で溶出させたのち、充填剤としてＹＭＣ  ＯＤＳ・ＡＭを用いてＨＰＬＣを行い、メタノール／水（体積比７５：２５）で流出させ、シリカゲル・プレートのＴＬＣ上での紫外線ランプの照射で強い蛍光を発する化合物を集め、配糖体を得た。
【００１７】
この配糖体について、1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル、13Ｃ−核磁気共鳴スペクトルを解析し、表２に示すように各炭素、水素の帰属を求め、これらを文献記載の値と比較することにより化学構造を同定した。
【００１８】
【表２】
2008214260.tif 000004
【００１９】
この配糖体は、固体状態で安定な無色無晶形の粉末で紫外線吸収スペクトル（メタノール中）、ｎｍ（ｌｏｇε）において、３９３．０（２．３０）、３７４．０（２．８７）、３４７．６（３．０６）、３０７．４（２．９８）、２６３．４（５．４４）、２４９．６（５．２９）、２３７．４（４．９７）、２３７．４（４．９７）及び２０７．８（５．８５）のピークを示す。
【００２０】
図５に、このものの赤外線吸収スペクトルを、図６に1Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを、図７に13Ｃ−核磁気共鳴スペクトルを、図８と図９に紫外線吸収スペクトルを示す。
この配糖体は、酵素加水分解により、（Ｒ）‐１，２‐ジヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタインに変換することができる。
【００２１】
本発明マラリヤ治療剤は、経口的又は非経口的に投与される。この場合、一般式（Ｉ）で表わされる有効成分を慣用されている賦形剤、溶剤と混合して、錠剤、糖衣錠、舌下錠、カプセル錠、トローチ錠、液剤、注射薬などに製剤化して用いられる。投与量は、患者の年齢、体重、症状、投与形態などにより必ずしも一定しないが、通常、２４時間当り１〜３回に分け、０．１〜５００ｍｇの範囲で用いる。
【発明の効果】
【００２２】
本発明のマラリヤ治療剤は、強力な抗マラリヤ作用を有する上に、従来広く使用されていたマラリヤ治療剤、例えばキニーネやクロロキンに対して耐性を示すマラリヤ原虫にも全く新規の化合物であるところから有効と考えられる。また、各種のグラム陽性菌、グラム陰性菌、真菌に対しても強い抗菌作用を示すので、これらの微生物に起因する各種疾病の治療にも用いることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
次に、実施例によって本発明を実施するための最良の形態を説明するが、本発明はこれらにより、なんら限定されるものではない。
【００２４】
製造例１
フィジー諸島のコロ島（Ｋｏｒｏ  Ｉｓｌａｎｄｓ）で採取した新鮮なコセンダングサ（Ｂｉｄｅｎｓ  ｐｉｌｏｓａ  Ｌ．）の地上部分約１１ｋｇ（湿った状態）を十分浸る程度の量のアセトンに漬け、室温で５日間抽出処理した。
次いで、アセトン抽出液から、アセトンを減圧留去して、残留物約１１０ｇを得たのち、メチレンジクロリド、酢酸エチル及びｓｅｃ‐ブタノールを用いて順次抽出し、メチレンジクロリド可溶物約３５ｇ、酢酸エチル可溶物約６ｇ及びｓｅｃ‐ブタノール可溶物約２５ｇの画分を得た。
【００２５】
次に、メチレンジクロリド可溶物画分２ｇを分取し、シリカゲル２０ｇのカラムに通してカラムクロマトグラフィーを行い、酢酸エチルの濃度２０％クロロホルム溶液により溶離させたのち、この溶離液を、さらにＹＭＣ・ＧＥＬ（ＯＤＳ−Ａ６０−Ｓ１５０）２０ｇを用いて、逆相カラムクロマトグラフィーを行い、カラムからメタノールを用いて吸着物を溶解させることにより、シリカゲルプレート上で、強い蛍光を発する物質として、１，２‐ジヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタイン約１６０ｍｇを得た。
【００２６】
次に、この化合物のメタノール溶液を１０％Ｐｄ／Ｃの存在下、水素添加を行い、融点６７〜６８℃（ヘキサン）、［α］D25＋８．２（ｃ，０．２８，メタノール）を得た。このようにして得た１，２‐ジヒドロキシトリデカンが文献値［α］D21＋１０．１（ｃ，１．０６，メタノール）とほぼ一致することから、このものは（Ｒ）配座であると同定した。
【００２７】
この物質を、乾固し、固化させると急速に分解するが、メタノール、酢酸エチル又はオリーブ油に溶かして溶液とすると安定である。
このようにして得た（Ｒ）‐１，２‐ジヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタインの赤外吸収スペクトルを図１に、1Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを図２に、13Ｃ−核磁気共鳴スペクトルを図３に、紫外線吸収スペクトルを図４にそれぞれ示す。
【００２８】
製造例２
製造例１で得た酢酸エチル溶解画分１００ｍｇを、シリカゲル２０ｇを用いてカラムクロマトグラフィーを行い、クロロホルム／メタノール（体積比８：２）で溶出し、精製後、この溶出液の中の、さらにシリカゲルプレート上で紫外線ランプの照射で強い蛍光を発する部分を集め、ＹＭＣ・ＧＥＬ（ＯＤＳ−Ａ６０−Ｓ２５０）２０ｇを用いて逆相カラムクロマトグラフィーを行い、次いでメタノール／水（体積比４：１）で溶出し、蛍光を発する部分をさらに充填剤ＹＭＣ  ＯＤＳ・ＡＭを用いて高速液体クロマトグラフィーを用い、カラムからメタノール／水（体積比７５：２５）を用いて溶出させることにより、２‐β‐Ｄ‐グルコピラノシルオキシ‐１‐ヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタイン８．８ｍｇを得た。
このものの赤外吸収スペクトルを図５に、1Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを図６に、13Ｃ−核磁気共鳴スペクトルを図７に、紫外線吸収スペクトルの長波長側を図８に、同じく短波長側を図９にそれぞれ示す。
【実施例１】
【００２９】
製造例１で得た（Ｒ）‐１，２‐ジヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタイン（以下化合物１という）について、以下のとおりｉｎ  ｖｉｔｒｏの抗マラリヤ作用の試験を行った。
熱帯熱マラリヤ原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ  ＦＣＲ−３）をヒトＢ型赤血球、加熱非動化ヒトＢ型血清１０％を含むＲＰＭＩ−１６４０（ＧＩＢＣＯ）中で培養した。培養は１２穴平皿板中で行った。培地に種々の濃度の化合物１を加え、２．５％ヘマトクリット、５％ＣＯ2下、３７℃で４日間培養した。当初の原虫濃度は約０．０４％であった。培地はテスト検体の有無に関わらず２４時間毎に交換した。同時に、原虫を顕微鏡下ギムザ染色した薄層血液フィルムを作成し、１０，０００赤血球当りの原虫感染した赤血球の数を数えて確かめた。熱帯マラリヤ原虫への化合物１の効果の時間推移は図１０に示した。対象コントロールの原虫は４日間で５０倍増加した。この結果をグラフとして図１０に示す。この図から分るように、被検体を含むサンプルでは、３日後に原虫が検出せず、１μｇ／ｍｌで増殖抑制作用が認められた。
【実施例２】
【００３０】
製造例１で得た化合物１について、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗マラリヤ作用の試験を行った。
４−ｄａｙ−ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  ｔｅｓｔに準じて抗マラリヤ作用を検定した。１群３匹のＩＣＲマウス（雌、６週齢）２群全てにプラスモジウム・ベルグヒー  ＮＫ６５（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｂｅｒｇｈｅｉ  ＮＫ６５）１×１０7を腹腔内接種した。原虫接種日をｄａｙ・３までの４日間、１日１回、０，０．２ｍｇ  ｍｇ／ｍｌを０．１ｍｌを尾静脈内投与した。薬剤投与終了の翌日（ｄａｙ・４）に尾静脈から採血して、薄層塗沫標本を作製し、ギムザ染色をして、寄生虫数の増加率を算出した。対象コントロール群は寄生虫数の増加率が３４．１，３５．３，２９．０％に対し、化合物１を２０μｇ／ｍｏｕｓｅ投与した群は寄生虫数の増加率が７．７，２２．７，５．９％であった。これら２群の結果をＷｅｌｃｈのｔ検定で検定したところ、Ｐ＝０．４９５＜０．０５で統計的に有為差が認められた。
【００３１】
参考例
製造例１で得た化合物について、大腸菌Ｉ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＮＩＨＪ）、大腸菌ＩＩ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＡＴＣＣ２６９２２）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＡＴＣＣ７００６３）、セラチア菌（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ  ＡＴＣＣ１３８８０）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＡＴＣＣ２７８５３）、黄色ブドウ球菌Ｉ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ＦＤＡ２０９Ｐ）、黄色ブドウ球菌ＩＩ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ＡＴＣＣ２９２１３）、黄色ブドウ球菌ＩＩＩ［Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  Ｎ３１５（ＭＲＳＡ）］、腸球菌Ｉ（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ  ＡＴＣＣ２９２１２）、腸球菌ＩＩ［Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ  ＮＣＴＣ１２２０１（ＶＲＥ）］、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ＡＴＣＣ６６３３）、真菌（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ  ＡＴＣＣ１０２３１）の菌株を用いて抗菌試験を行った。このようにして得られた最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）（μｇ／ｍｌ）を表３に示す。
【００３２】
この表の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）は、クリニカル・アンド・ラボラトリー・スタンダーズ・インスティテュート（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）のガイドラインに依拠した微量液体希釈法により求めた。
すなわち、ミューラー・ヒントン液体培地に２倍希釈系列で試験液を調製し、最終菌量が５×１０5ｃｆｕ／ｍｌになるように細菌を接種した後、３５℃で２０時間培養し、細菌の増殖を完全に阻止する試験液の最低濃度を最小発育阻止濃度とした。この際の溶媒には、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を用いた。
【００３３】
【表３】
2008214260.tif 000005
【００３４】
この表から分るように、化合物１は肺炎桿菌以外の各種グラム陽性菌、グラム陰性菌及び真菌に対し、強い抗菌作用を示す。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明のマラリヤ治療剤は、マラリヤ患者の治療用医薬として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】（Ｒ）‐１，２‐ジヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタイン赤外線吸収スペクトル図。
【図２】同1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル図。
【図３】同13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル図。
【図４】同紫外線吸収スペクトル図。
【図５】２‐β‐Ｄ‐グルコピラノシルオキシ‐１‐ヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタインの赤外吸収スペクトル
【図６】同1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル図。
【図７】同13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル図。
【図８】同紫外線吸収スペクトル図（長波長側）。
【図９】同紫外線吸収スペクトル図（短波長側）。
【図１０】寄生虫数の増加率を示すグラフ。
【図１】
2008214260.tif 000008
【図２】
2008214260.tif 000009
【図３】
2008214260.tif 000010
【図４】
2008214260.tif 000011
【図５】
2008214260.tif 000012
【図６】
2008214260.tif 000013
【図７】
2008214260.tif 000014
【図８】
2008214260.tif 000015
【図９】
2008214260.tif 000016
【図１０】
2008214260.tif 000017
【手続補正書】
【提出日】平成19年10月23日(2007.10.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
コセンダングサからは、これまで多数のポリアセチレン誘導体が分離されているにもかかわらず、上記の一般式（Ｉ）で表わされる化合物は知られていない。その理由は、この化合物は原料として新鮮な植物を用いなければ分離できないにもかかわらず、これまでは乾燥物を用いていたため、使用するまでの間に、ほとんど分解してしまったことによる。
しかしながら、これらの化合物は、コセンダングサ以外の植物からは、分離されたことが報告されており公知である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
次に、この３種の分離物について抗菌作用を試験したところ、メチレンジクロリド可溶物に強い活性が認められたので、この分離物について、シリカゲル・カラムクロマトグラフィー処理を行う。すなわち、これを吸着したカラムを酢酸エチルの２０％濃度クロロホルムで展開し、流出する部分を捕集し、さらにＹＭＣ・ＧＥＬ（ＯＤＳ−Ａ６０−Ｓ１５０）を用いて逆相クロマトグラフィーを行い、カラムをメタノールで流出し、シリカゲル・プレート上で紫外線ランプの照射により強い吸収を示す化合物を回収することにより、（Ｒ）‐１，２‐ジヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタインを湿った原料の量に基づき、約０．０３質量％の収率で得る。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
次に、前記した粗抽出液の酢酸エチル分配物及びｓｅｃ‐ブタノール分配物を一緒にしてシリカゲル・カラムクロマトグラフィーを行い、クロロホルム：メタノール（体積比８：２）の溶媒で流出させ、さらにＹＭＣ・ＧＥＬ（ＯＤＳ−Ａ６０−Ｓ２５０）を用いて、逆相クロマトグラフィーを行い、カラムよりメタノール／水（体積比４：１）で溶出させたのち、充填剤としてＹＭＣ  ＯＤＳ・ＡＭを用いてＨＰＬＣを行い、メタノール／水（体積比７５：２５）で流出させ、シリカゲル・プレートのＴＬＣ上での紫外線ランプの照射で強い吸収を示す化合物を集め、配糖体を得た。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
製造例２
製造例１で得た酢酸エチル溶解画分１００ｍｇを、シリカゲル２０ｇを用いてカラムクロマトグラフィーを行い、クロロホルム／メタノール（体積比８：２）で溶出し、精製後、この溶出液の中の、さらにシリカゲルプレート上で紫外線ランプの照射で強い吸収を示す部分を集め、ＹＭＣ・ＧＥＬ（ＯＤＳ−Ａ６０−Ｓ２５０）２０ｇを用いて逆相カラムクロマトグラフィーを行い、次いでメタノール／水（体積比４：１）で溶出し、蛍光を発する部分をさらに充填剤ＹＭＣ  ＯＤＳ・ＡＭを用いて高速液体クロマトグラフィーを用い、カラムからメタノール／水（体積比７５：２５）を用いて溶出させることにより、２‐β‐Ｄ‐グルコピラノシルオキシ‐１‐ヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタイン８．８ｍｇを得た。
このものの赤外吸収スペクトルを図５に、1Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを図６に、13Ｃ−核磁気共鳴スペクトルを図７に、紫外線吸収スペクトルの長波長側を図８に、同じく短波長側を図９にそれぞれ示す。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
製造例１で得た化合物１について、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗マラリヤ作用の試験を行った。
４−ｄａｙ−ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  ｔｅｓｔに準じて抗マラリヤ作用を検定した。１群３匹のＩＣＲマウス（雌、６週齢）２群全てにプラスモジウム・ベルグヒー  ＮＫ６５（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｂｅｒｇｈｅｉ  ＮＫ６５）１×１０7を腹腔内接種した。原虫接種日をｄａｙ・３までの４日間、１日１回、０，０．２ｍｇ／ｍｌを０．１ｍｌを尾静脈内投与した。薬剤投与終了の翌日（ｄａｙ・４）に尾静脈から採血して、薄層塗沫標本を作製し、ギムザ染色をして、原虫の寄生率を算出した。対象コントロール群は原虫の寄生率が３４．１，３５．３，２９．０％に対し、化合物１を２０μｇ／ｍｏｕｓｅ投与した群は寄生虫数の増加率が７．７，２２．７，５．９％であった。これら２群の結果をＷｅｌｃｈのｔ検定で検定したところ、Ｐ＝０．４９５＜０．０５で統計的に有為差が認められた。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
【図１】（Ｒ）‐１，２‐ジヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタイン赤外線吸収スペクトル図。
【図２】同１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル図。
【図３】同１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル図。
【図４】同紫外線吸収スペクトル図。
【図５】２‐β‐Ｄ‐グルコピラノシルオキシ‐１‐ヒドロキシトリデカ‐３，５，７，９，１１‐ペンタインの赤外吸収スペクトル
【図６】同１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル図。
【図７】同１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル図。
【図８】同紫外線吸収スペクトル図（長波長側）。
【図９】同紫外線吸収スペクトル図（短波長側）。
【図１０】原虫の寄生率を示すグラフ。
【手続補正７】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１０】
2008214260.tif 000018