(57)【要約】【課題】本発明は、高血圧、浮腫、腹水、心不全、腎機能障害、バソプレシン分泌異常症候群（ＳＩＡＤＨ）、肝硬変、低ナトリウム血症、低カリウム血症、多発性嚢胞腎、糖尿病、循環不全、心筋梗塞、脳梗塞等の疾患において、格段に高い治療又は予防効果を発現し得る医薬組成物を提供することを課題とする。【解決手段】本発明の医薬組成物は、ベンゾアゼピン化合物又はその塩からなるバソプレシン拮抗薬とアンジオテンシンＩＩ拮抗薬とを含有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）で表されるベンゾアゼピン化合物又はその塩からなるバソプレシン拮抗薬とアンジオテンシンＩＩ拮抗薬とを含有する医薬組成物。
一般式（Ｉ）
【化１】
2008133229.tif 000004
［式中、Ｒ1は、水素原子又はハロゲン原子を示す。Ｒ2は、水酸基又は基−ＮＲ5Ｒ6（Ｒ5及びＲ6は、同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基を示す。）を示す。Ｒ3は、水素原子、ハロゲン原子、低級アルキル基又は低級アルコキシ基を示す。Ｒ4は、ハロゲン原子、低級アルキル基又は低級アルコキシ基を示す。］
【請求項２】
アンジオテンシンＩＩ拮抗薬が、ロサルタン、エプロサルタン、カンデサルタン、シレサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン及びタソサルタンからなる群から選ばれる少なくとも１種である請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
バソプレシン拮抗薬が、トルバプタン、モザバプタン及びモザバプタン塩酸塩からなる群から選ばれる少なくとも１種である請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
バソプレシン拮抗薬が、トルバプタンである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
バソプレシン拮抗薬が、モザバプタンである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
バソプレシン拮抗薬が、モザバプタン塩酸塩である請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がロサルタンである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がエプロサルタンである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がカンデサルタンである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がシレサルタンである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がバルサルタンである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がテルミサルタンである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がイルベサルタンである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がオルメサルタンである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がタソサルタンである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の医薬組成物を有効成分として含有する、高血圧、浮腫、腹水、心不全、腎機能障害、バソプレシン分泌異常症候群（ＳＩＡＤＨ）、肝硬変、低ナトリウム血症、低カリウム血症、多発性嚢胞腎、糖尿病、循環不全、心筋梗塞及び脳梗塞からなる群から選ばれる疾患の予防及び／又は治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アンジオテンシンＩＩは、強力な血管収縮作用、アルドステロン生成作用及び細胞増殖作用を有し、各種循環器系疾患のメデイエータの一つであると考えられている。このアンジオテンシンＩＩとアンジオテンシンＩＩ受容体で拮抗し、アンジオテンシンＩＩの作用を抑制するアンジオテンシン拮抗薬は、高血圧症、心臓疾患（例えば、心不全、心筋梗塞等）、脳卒中、腎炎、動脈硬化等の循環器系疾患の予防・治療に有用であることが知られている（特許文献１）。
【０００３】
一方、バソプレシン拮抗薬は、高血圧、浮腫、腹水、心不全、腎機能障害、バソプレシン分泌異常症候群（ＳＩＡＤＨ）、肝硬変、低ナトリウム血症、低カリウム血症、多発性嚢胞腎、糖尿病、循環不全、心筋梗塞、脳梗塞等の疾患の予防及び／又は治療に有用であることが知られている（特許文献２）。
【０００４】
アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬は、レニン−アンギオテンシン−アルドステロン系を抑制することで心臓疾患（例えば、心不全、心筋梗塞等）を改善するが、アンギオテンシン変換酵素阻害薬（ＡＣＥ阻害薬）やアンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬を長期投与されている患者では、治療前より血中のアルドステロン濃度が上昇することが知られ、アルドステロンブレイクスルー現象と呼ばれている（非特許文献１）。このため、アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬又はＡＣＥ阻害薬のみでは、特に心不全患者におけるレニン−アンギオテンシン−アルドステロン系の抑制が不十分な場合があり、実際、非特許文献２には抗アルドステロン薬の追加投与により重症心不全患者の死亡率を改善できることが報告されている。
【特許文献１】特開平３−６３２６４号公報
【特許文献２】特開平４−１５４７６５号公報
【非特許文献１】Naruse M, Nagata D, Sata K, Tanabe A. Blockade of renin-angiotensin system and aldosterone breakthrough. Nippon Rinsho. 2005;63(Suppl 3):201-205
【非特許文献２】Pitt B, Zannad F, Remme WJ, Cody R, Castaigne A, Perez A, et al. The effect of spironolactone on morbidity and mortality in patients with severe heart failure. Randomized Aldactone Evaluation Study Investigators. N Engl J Med. 1999;341:709-717
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、高血圧、浮腫、腹水、心不全、腎機能障害、バソプレシン分泌異常症候群（ＳＩＡＤＨ）、肝硬変、低ナトリウム血症、低カリウム血症、多発性嚢胞腎、糖尿病、循環不全、心筋梗塞、脳梗塞等の疾患において、格段に高い治療又は予防効果を発現し得る医薬組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題を解決するために、種々の研究を重ねた結果、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬とバソプレシン拮抗薬とを組み合わせることにより、例えば、医薬効果、安全性、投与量、投与形態、使用方法等の医薬として求められる性質において、それぞれの単一薬物投与時には見られなかった格別顕著な効果が発揮されることを見い出した。より具体的には、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬とバソプレシン拮抗薬とを組み合わせることにより、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬単独では、抑制が不十分である、レニン-アンギオテンシン-アルドステロン系を活性化させず、相乗的に血清レニン活性及びアルドステロン濃度をむしろ低下させ得ることを見い出した。本発明は、このような知見に基づき完成されたものである。
【０００７】
本発明は、下記項１〜項１６に示す医薬組成物並びに疾患の治療及び／又は予防剤を提供する。
項１．下記一般式（Ｉ）で表されるベンゾアゼピン化合物又はその塩からなるバソプレシン拮抗薬とアンジオテンシンＩＩ拮抗薬とを含有する医薬組成物。
一般式（Ｉ）
【０００８】
【化１】
2008133229.tif 000002
【０００９】
［式中、Ｒ1は、水素原子又はハロゲン原子を示す。Ｒ2は、水酸基又は基−ＮＲ5Ｒ6（Ｒ5及びＲ6は、同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基を示す。）を示す。Ｒ3は、水素原子、ハロゲン原子、低級アルキル基又は低級アルコキシ基を示す。Ｒ4は、ハロゲン原子、低級アルキル基又は低級アルコキシ基を示す。］
項２．アンジオテンシンＩＩ拮抗薬が、ロサルタン、エプロサルタン、カンデサルタン、シレサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン及びタソサルタンからなる群から選ばれる少なくとも１種である項１に記載の医薬組成物。
項３．バソプレシン拮抗薬が、トルバプタン、モザバプタン及びモザバプタン塩酸塩からなる群から選ばれる少なくとも１種である項１に記載の医薬組成物。
項４．バソプレシン拮抗薬が、トルバプタンである項１に記載の医薬組成物。
項５．バソプレシン拮抗薬が、モザバプタンである項１に記載の医薬組成物。
項６．バソプレシン拮抗薬が、モザバプタン塩酸塩である項１に記載の医薬組成物。
項７．バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がロサルタンである項１に記載の医薬組成物。
項８．バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がエプロサルタンである項１に記載の医薬組成物。
項９．バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がカンデサルタンである項１に記載の医薬組成物。
項１０．バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がシレサルタンである項１に記載の医薬組成物。
項１１．バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がバルサルタンである項１に記載の医薬組成物。
項１２．バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がテルミサルタンである項１に記載の医薬組成物。
項１３．バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がイルベサルタンである項１に記載の医薬組成物。
項１４．バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がオルメサルタンである項１に記載の医薬組成物。
項１５．バソプレシン拮抗薬がトルバプタンであり、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬がタソサルタンである項１に記載の医薬組成物。
項１６．項１〜１５のいずれか一項に記載の医薬組成物を有効成分として含有する、高血圧、浮腫、腹水、心不全、腎機能障害、バソプレシン分泌異常症候群（ＳＩＡＤＨ）、肝硬変、低ナトリウム血症、低カリウム血症、多発性嚢胞腎、糖尿病、循環不全、心筋梗塞及び脳梗塞からなる群から選ばれる疾患の予防及び／又は治療剤。
【００１０】
本明細書におけるアンジオテンシンＩＩ拮抗薬が有するアンジオテンシンＩＩ拮抗作用とは、細胞膜上のアンジオテンシンＩＩ受容体へのアンジオテンシンＩＩの結合を競合的又は非競合的に阻害し、アンジオテンシンＩＩにより誘導される強い血管収縮作用や血管平滑筋増殖作用を減弱し、高血圧の症状を緩和させる作用のことをいう。
【００１１】
本発明で用いられるアンジオテンシンＩＩ拮抗薬は、ペプチド性及び非ペプチド性のいずれでもよいが、非ペプチド性の拮抗作用を有する化合物が好ましい。非ペプチド性のアンジオテンシンII拮抗作用を有する化合物としては、アンジオテンシンII拮抗作用を有する非ペプチド性化合物であれば、いずれを用いてもよい。これらの中でも、ロサルタン（Losartan (DuP753)）、ロサルタンカリウム、エプロサルタン（Eprosartan (SK&F108566)）、カンデサルタン シレキセチル（Candesartan cilexetil (TCV−116)）、バルサルタン（Valsartan (CGP−48933)）、テルミサルタン（Telmisartan (BIBR277)）、イルベサルタン（Irbesartan (SR47436)）、タソサルタン（Tasosartan (ANA−756)）、オルメサルタンメドキソミル及びこれらの代謝活性物質（カンデサルタン、オルメサルタン等）等が好ましい。
【００１２】
本発明で用いられるバソプレシン拮抗薬としては、一般式（１）で表されるベンゾアゼピン化合物又はその塩が挙げられる。
【００１３】
【化２】
2008133229.tif 000003
【００１４】
［式中、Ｒ1は、水素原子又はハロゲン原子を示す。Ｒ2は、水酸基又は基−ＮＲ5Ｒ6（Ｒ5及びＲ6は、同一又は異なって水素原子又は低級アルキル基を示す。）を示す。Ｒ3は、水素原子、ハロゲン原子、低級アルキル基又は低級アルコキシ基を示す。Ｒ4は、ハロゲン原子、低級アルキル基又は低級アルコキシ基を示す。］
上記一般式（１）で表されるベンゾアゼピン化合物及びその塩は、アルギニンバソプレシン（ＡＶＰ）タイプ１Ａ（Ｖ１Ａ）受容体及びタイプ２（Ｖ２）受容体へのバソプレシンの結合を競合的又は非競合的に阻害する作用（すなわちＶ１／Ｖ２）、或いはＶ２受容体へのバソプレシンの結合を選択的に競合的又は非競合的に阻害する作用を有する。
【００１５】
上記一般式（１）において示される各基は、より具体的にはそれぞれ次の通りである。
【００１６】
ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子及びヨウ素原子を示す。
【００１７】
低級アルキル基は、炭素数１〜６の直鎖状又は分岐鎖状アルキル基を含み、その具体例として、メチル、エチル、ｎ−プロピル，イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、３−メチルペンチル基等を挙げることができる。
【００１８】
低級アルコキシ基は、炭素数１〜６の直鎖又は分枝鎖状アルコキシ基を含み、その具体例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ネオペンチルオキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、イソヘキシルオキシ、３−メチルペンチルオキシ基等を挙げることができる。
【００１９】
上記一般式（１）で表されるベンゾアゼピン化合物及びその塩の中でも、トルバプタン、モザバプタン及びモザバプタン塩酸塩が好ましく、トルバプタンがより好ましい。
【００２０】
一般式（１）で表されるベンゾアゼピン化合物及びその塩は、例えば、ＷＯ９１／０５５４９号公報、ＵＳＰ５２５８５１０明細書、ＵＳＰ５７５３６７７明細書、特開平４−１５４７６５号公報、特開平６−８０６４１号公報等に記載の方法で容易に製造される。
【００２１】
本発明の一般式（１）で表されるベンゾアゼピン化合物は、立体異性体及び光学異性体を包含する。
【００２２】
本発明の一般式（１）で表されるベンゾアゼピン化合物のうち塩基性基を有する化合物は、通常の薬理的に許容される酸と容易に塩を形成し得る。斯かる酸としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸等の無機酸及びメタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、安息香酸、蓚酸、クエン酸、酒石酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸等の有機酸が挙げられる。
【００２３】
本発明の一般式（１）で表されるベンゾアゼピン化合物のうち酸性基を有する化合物は、医薬的に許容される塩基性化合物を作用させることにより容易に塩を形成し得る。斯かる塩基性化合物としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化リチウム等の金属水酸化物；炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等のアルカリ金属炭酸類；ナトリウムメチラート、カリウムメチラート等のアルカリ金属アルコラート類等を挙げることができる。
【００２４】
更に、溶媒和物（例えば、水和物、エタノール和物等）形態の化合物も、一般式（１）のベンゾアゼピン化合物に含まれる。
【００２５】
アンジオテンシンＩＩ拮抗薬及びバソプレシン拮抗薬は、同時に製剤化し、同一の製剤中に含有してもよく、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬及びバソプレシン拮抗薬を別々に製剤化してもよい。
【００２６】
上記医療製剤は、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬及び／又はバソプレシン拮抗薬を通常の医療製剤の形態に製剤したものであって、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤等の希釈剤及び／又は賦形剤を用いて調製される。
【００２７】
このような医療製剤としては、治療目的に応じて種々の形態の中から選択でき、その代表的なものとして錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤等）等が挙げられる。
【００２８】
錠剤の形態に成形する際に用いられる担体としては、公知のものを広く使用でき、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、寒天末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤、第４級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等が挙げられる。
【００２９】
更に、錠剤は、必要に応じて通常の被覆物質を用いて被覆し、例えば、糖衣剤、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二重錠、多層錠とすることができる。
【００３０】
丸剤の形態に成形する際に用いられる担体としては、公知のものを広く使用でき、例えば、ブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤、ラミナラン、寒天等の崩壊剤等が挙げられる。
【００３１】
坐剤の形態に成形する際に用いられる担体としては、公知のものを広く使用でき、例えば、ポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセライド等が挙げられる。
【００３２】
注射剤として調製される場合は、液剤、乳剤及び懸濁剤は殺菌され、かつ血液と等張であるのが好ましい。これらの液剤、乳剤及び懸濁剤の形態に成形する際に用いられる希釈剤としては、公知のものを広く用いられているものを使用することができ、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルベタン脂肪酸エステル類等が挙げられる。この場合、等張性の溶液を調製するのに十分な量の食塩、ブドウ糖或いはグリセリンを医薬製剤中に含有させてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を、更に必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等、及び／又は他の医薬品を含有させてもよい。
【００３３】
医療製剤に含有される有効成分（アンジオテンシンＩＩ拮抗薬及びバソプレシン拮抗薬）の量は、特に限定されず広い範囲内から適宜選択することができるが、通常、医療製剤医薬組成物中に有効成分を０．１〜９５重量％程度、好ましくは１〜７０重量％程度含有させるのが好ましい。
【００３４】
本発明に係る医療製剤の投与方法としては特に制限はなく、各種製剤形態、患者の年齢、性別、疾患の状態、その他の条件に応じた方法で投与される。例えば、錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤及びカプセル剤の場合には経口投与される。また、注射剤の場合には、単独で或いはブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内に投与したり、更には必要に応じて単独で筋肉内、皮内、皮下もしくは腹腔内に投与することができる。坐剤の場合には、直腸内に投与される。
【００３５】
本明細書で使用される「有効量」は、高血圧等の循環器系疾患の臨床治療において日常的に使用されているアンジオテンシンＩＩ拮抗薬及びバソプレシン拮抗薬の量のことである。一般的な有効量は、成人一人１日あたり（body per day）、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬が０．１〜２５００ｍｇ程度、好ましくは２〜８００ｍｇ程度、バソプレシン拮抗薬が０．０５〜５０００ｍｇ程度、好ましくは０．０５〜２５００ｍｇ程度である。
【００３６】
上記医療製剤の投与量は、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度、その他の条件に応じて適宜選択すればよく、通常、成人一人１日あたり（body per day）に対して０．１〜１０００ｍｇ程度、好ましくは０．５〜５００ｍｇ程度、より好ましくは１ｍｇ〜１００ｍｇを１回〜数回に分けて投与される。
【００３７】
上記投与量は、種々の条件で変動するので、上記範囲より少ない投与量で充分な場合もあるし、また上記範囲を超えた投与量が必要な場合もある。
【００３８】
本発明の２成分、すなわち、アンジオテンシンＩＩ拮抗薬及びバソプレシン拮抗薬は、同時にあるいは時間差をおいて別々に、同一経路あるいは別経路にて、同一対象に投与してもいい。また、これら２成分を同一の製剤中に含有し、単一の製剤として投与してもよい。
【発明の効果】
【００３９】
本発明の医薬組成物は、高血圧、浮腫、腹水、心不全、腎機能障害、バソプレシン分泌異常症候群（ＳＩＡＤＨ）、肝硬変、低ナトリウム血症、低カリウム血症、多発性嚢胞腎、糖尿病、循環不全、心筋梗塞及び脳梗塞からなる群から選ばれる疾患の予防及び／又は治療剤として有用である。アンジオテンシンＩＩ拮抗薬とバソプレシン拮抗薬とを組み合わせることにより、それぞれの単一薬物投与時には見られなかった格別顕著な効果が発現される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４０】
以下に実施例を掲げて、本発明をより一層明らかにする。
【００４１】
薬理試験（レニン-アンジオテンシン系に対する抑制作用）
１．試験方法
雄性ＳＤラット（７週齢）をトルバプタン投与群（１０ｍｇ／ｋｇ）、ロサルタン投与群（１０ｍｇ／ｋｇ）、両剤併用群（１０ｍｇ／ｋｇ＋１０ｍｇ／ｋｇ）及びコントロール群の４群に分ける。被験薬は１％ＨＰＭＣ溶液に懸濁し、ラット用経口ゾンデ針（夏目製作所）を用いて、１日１回２８日間反復経口投与する。コントロール群は１％ＨＰＭＣ溶液を１ｍｌ／ｋｇの容量で経口投与する。２８日間の投与終了後にラットに断頭採血を行い、血液を採取する。血液は、血清分離剤入採血管（セパラピット採血管、積水化学工業）に取り、遠心分離（日立ＣＦ７Ｄ；３０００ｒｐｍ，１０分）し，その上清（血清）を用いて、血清レニン活性及びアルドステロン濃度を測定する。血清レニン活性の測定は、市販のキット（レニン・リアビーズ及びスパック−Ｓアルドステロンキットを用いてラジオイムノアッセイにより測定する。
２．試験結果
上記試験の結果、次のことが判明する。
(1)トルバプタンの反復投与により、血清レニン活性及びアルドステロン濃度が低下する。(2)ロサルタンの反復投与により、血清レニン活性が上昇し、アルドステロン濃度が低下する。
(3)両剤併用群においては、血清アルドステロン濃度の低下は増強され、ロサルタンによる血清レニン活性の上昇も抑制される。