(57)【要約】      （修正有）【課題】血液や骨髄液等の生理的流体の各成分の簡便な分別方法の提供。【解決手段】生理的流体の細胞の密度ないし形状を変更するために該流体に１つ又は複数の化学物質が加えられ、これによって所望の細胞の沈降速度が得られる。好ましい具体例において、加えられる化学物質は、好ましくはＡＣＤなどの抗凝固剤である。【選択図】図１
2008231095.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生理的流体の成分の沈降速度を調整するための方法であって、低張又は高張の材料の有効量を前記生理的流体に加えるステップを備えてなる方法。
【請求項２】
前記生理的流体は、骨髄吸出物質である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
抗凝固剤としてヘパリンを加えるステップを更に備えてなる請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記低張又は高張の材料は、低張の材料でＡＣＤを含んでなる請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記生理的流体の容量は約５４mlであり、ＡＣＤの容量は約８mlから約１０mlである請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記生理的流体は血液である請求項１に記載の方法。
【請求項７】
抗凝固剤としてＡＣＤを加えるステップを更に備えてなる請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記低張又は高張の材料は、低張の材料でＡＣＤを含んでなる請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記生理的流体の容量は約５４mlであり、前記ＡＣＤの容量は約８mlから約１０mlである請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
骨髄吸出物質の分別に使用するキットであり、６０mlのサンプルを受入れる２室処理ユニットと、骨髄吸出物質を引出す容器と、前記骨髄吸出物質の抗凝固剤としてのヘパリンと、該吸出物質の成分の沈降速度を調整する８〜１０mlのＡＣＤとよりなるキット。
【請求項１１】
全血の分別のためのキットであって、６０mlのサンプルを受入れる２室処理ユニットと、全血を引出す注射器と、前記骨髄吸出物質の抗凝固剤としての６mlのＡＣＤと、該吸出物質の成分の沈降速度を調整する８〜１０mlのＡＣＤとよりなるキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液や骨髄液などの生理的流体の成分の分別に関する。
【背景技術】
【０００２】
比重分離によって生理的流体を分別することは公知である。この代表例は遠心分離機を用いるもので、これにより比重分離に要する時間を減少させる。公知のシステムないし装置において用いられる処理ユニットは、２つのチャンバないし室を備え、この間で流体の流通が行われるように接続されている。ここにおいて、遠心分離作用後に１つのチャンバ内のより軽い成分は他方のチャンバへと移注、すなわちデカントされる。好ましくは、生理的流体に浮かぶ分離部材が第１のチャンバ内に設けられ、これが分離すべき成分の間に自動的に位置づけられるとともに、より軽い成分の移注操作（デカント操作）の間において、より重い成分の移注を阻止し、第１のチャンバ内に留める作用を果す。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら、異なる初期成分を有する生理的流体に適合した分離部材を設計することが困難であることが認められている。特にこの問題は、血液用に設計された遠心分離の動作仕様や処理ユニットを他の異なる生理用流体、例えば骨髄吸出物質用として用いたい場合に発生する。又、他の問題は、種々の血液成分の沈殿ないし沈降に影響する型の血液疾患を有する患者から得られたサンプルについて同じ遠心分離の動作仕様を用いる場合に発生する。
【０００４】
多血小板血漿を得る代表的な動作仕様において、例えば、全血が処理ユニットの第１のチャンバに入れられて遠心分離に付される。遠心分離動作は、一定時間経過後に停止されるとともに処理ユニットが傾けられて多血小板血漿が第２のチャンバへ注がれる。そして、多血小板血漿は再び遠心分離に付されて更なる処理のために血漿から血小板が分離される。
【０００５】
浮動する分離部材の形状および材料は、血液の沈殿ないし沈降の特性をベースとして選択される。従って、血液に付される遠心力及び遠心分離の付与時間は、しばしば実験ないし経験に基づき決定され、その結果、一方には赤血球が、他方には多血小板血漿となるよう所望の分離がなされる。しかし、通常、血液について決められた動作仕様は、例えば、骨髄吸出物質を骨髄幹細胞の回復のための成分に分離するのは有効でない。従って、公知技術においては、血液や骨髄吸出物質などの異なる生理的流体を処理するのに単一の遠心分離動作仕様や処理ユニットでは不可能であった。
【課題を解決するための手段及び発明の効果】
【０００６】
本願出願人は、異なる流体について得られる結果が相違する主たる理由は異なる生理的流体内の細胞が異なる速度で沈降することにあることを見出した。すなわち、骨髄吸出物質内の細胞の沈降速度は、全血の細胞の沈降速度と異なることであり、これは所定の遠心動作適用後の骨髄吸出物質内の複数の層の密度ないし比重が、同じ遠心動作適用後の血液内におけるそれとは異なることを意味する。このように、異なる生理的流体における密度ないし比重の相違のために、浮動分離部材の位置が相違するともに移注ないしデカントされた流体の成分も相違する。
【０００７】
沈降速度が異なる理由は種々あるが、主たる理由の１つは、細胞の形状と密度ないし比重である。血液は理想的なものではなく、むしろ流体内の複数の粒子の懸濁液である。血漿は一般に密度１．０２０の流体と考えられ、他方、血漿内に懸濁した赤血球の密度は１．０７〜１．０９０で、細胞の年齢に依存し、若い赤血球は密度が低く、又、血液を採取した人の生理的特性にも依存する。血液内の赤血球量の測定は、そのヘマトクリット（Ｈｃｔ）により、それは血液の単位容積当りの赤血球の容積によって規定される。血液の他の成分は血小板であり、その密度は約１．０４０である。又、他の成分は白血球であり、その密度は赤血球と血小板の密度の間にある。
【０００８】
以上の説明とともに複雑なのは、生理的流体が、その流体をドナーから取得するその操作によっても変化することである。例えば、収集中に細胞の損傷があると沈降速度に影響する。沈降に影響する要因は、細胞収集の間に使用される種々の化学物質の作用である。化学物質は細胞により吸収され、それが密度に影響するとともに、その形態を大きくしたり丸くしたりする可能性がある。又、化学物質は細胞を流体から分離させる可能性があり、これが細胞を縮小させたり鋸歯状の形状にしたりする。従って細胞は、より高い密度となり小容積に詰った状態となる。鋸歯状の細胞は、通常の細胞よりも速く沈降する。
【０００９】
生理的流体の収集に通常用いられる化学物質は、抗凝固剤である。本願出願人は、この抗凝固剤が生理的流体の成分の沈降速度に対して顕著な影響を及ぼすことを見出した。この抗凝固剤としては種々の型式のものがある。例えば第１の型として、クエン酸塩型のＡＣＤ及びＣＰＤの抗凝固剤はカルシウムと結合し、凝固を阻止する。これは、カルシウムが凝固カスケードの種々の領域において必要とされるからである。第２の型としての抗凝固剤はヘパリンであり、これはトロンビンへのプロトロンビンの変換を阻害することにより凝固を阻止する。更に他の型の抗凝固剤は、血小板阻害剤として知られており、これは血小板の機能を抑制するとともに血栓症の減少ないし抑止のために多く用いられている。又、抗凝固剤は、流体の貯蔵を助成する。例えば、抗凝固剤にブドウ糖を加えることが細胞に対して栄養を与えることとなるとともに血液バンクにおける貯蔵の間において、より長期の細胞の生存を可能とする。更に又、ＥＤＴＡなどの他の抗凝固剤は、診断的検査を容易にする。
【００１０】
抗凝固剤のＡＣＤは赤血球に対して低張であり、収集された血液に対する効果は、赤血球により細胞壁を介して水を細胞内に通すことであり、これによって細胞が膨張する。その１つの結果として膨張した細胞の密度は小さくなることである。すなわち典型的な赤血球の容積は９０フエムトリッター（１０-15リッター）であり、その密度は１．０８０、質量は９７．２フエムトグラム（１０-15グラム）である。もし、細胞の容積が水（密度１．０００）の吸収により３０％増大すると、赤血球は２７フエムトリッター又は２７フエムトグラムを吸収し、その容積は１１７フエムトリッター、重量は１２４．２フエムトグラムとなるであろう。そこで、赤血球の密度は１．０６２になるであろう。この要件のみでもチャンバ内の、より小さい密度の細胞の最終位置に影響を及ぼすことは明白である。又、膨張した細胞の形状も又、沈降速度を変更させる。
【００１１】
他の化学物質は、細胞の形状及び密度に影響を及ぼす。例えば、ＮａＣｌは、固体でも溶液でも濃度に依存して細胞を膨張させるか、あるいは鋸歯状の形状とする。従って、このような化学物質は、所望の結果を得るために抗凝固剤との関連で用いることができる。
【００１２】
本発明の意図するところは、細胞の所望の沈降速度を結果として得るために流体内における細胞の密度ないし形状を変更するように生理流体に対して1つ又は複数の化学物質を加える方法を提案することである。好ましい本発明の具体例では、加えるべき化学物質は、抗凝固剤で、好ましくはＡＣＤである。
【００１３】
本発明の他の意図するところは、処理ユニットと抗凝固剤とを含むキットを提案することである。このキットは骨髄吸出物質の成分を遠心分離により分離するために用いられ、それによって、この遠心分離の動作仕様を、全血等の他の生理流体についても使用し得るものである。
【００１４】
本発明の一実施例において、６０mlの骨髄吸出物質が、抗凝固剤としてのヘパリンを有するバッグ又は注射器内に集められる。バッグは集められた骨髄を検査できるのが望ましい。次いで、８〜１０mlのＡＣＤが集められた吸出物質に加えられ、成分、特に赤血球、の沈降速度を調整する。次いで、吸出物質の混合物は２室処理ユニットの第1のチャンバ内に置かれるとともに米国特許第６，３９８，９７２号に記載された多血小板血漿を生成するために全血を分別するように設定された公知の仕様に従って遠心分離に付される。次いで、上澄み液は第２のチャンバに移注ないしデカントされるとともに多血小板血漿を生成するために血小板を分離するように設定された前記の処理方法に従って遠心分離に付される。第２回目の遠心分離から得られた上澄み液は、１０mlのサンプルをチャンバ内に残して引出される。このサンプルは７．９％Ｈｃｔであり、総核とされた細胞数のカウント（ＴＮＣ）は９０×１０3／μｌである。他方、同じ処理をヘパリンのみで行なった場合、同サンプルは３％Ｈｃｔ，３２．４×１０3／μｌのＴＮＣとなる。
【００１５】
上記の結果は、上述の吸出物質にＡＣＤを加えることにより細胞の沈降速度の改変に帰することができる。同様の結果が沈降に影響する疾患を有する患者からの吸出物質及び正常な吸出物質でも得られる。
【００１６】
多血小板血漿の生成において全血にＡＣＤを更に追加して加えることにより、上記疾患の患者から得た濃縮液サンプルと沈降速度に影響する疾患のない患者から得た濃縮液サンプルとの間の相違が減少することも判明した。従って、第２のサンプルにおいて、５４mlの全血がこれらの患者から採取されるとともに抗凝固剤として６mlのＡＣＤが加えられた。次いで、８〜１０mlのＡＣＤが追加して加えられ、赤血球の沈降速度を低下させ、そして該サンプルが上述の動作仕様に従って遠心分離が施された。その結果、これら濃縮液サンプルからのＨｃｔ及びＴＮＣは顕著な違いは見出せなかった。
【００１７】
図１は、本発明に係るキット２の概略図である。このキット２は注射器（又はバッグ）４、処理ユニット６、所定量の抗凝固剤を収容した第１の容器８及び所定量の低張又は高張材料を収容した第２の容器１０とよりなる。
【００１８】
以上、本発明の実施形態につき説明したが、本発明はこれに限定されるものでなく、種々の変形態様は、本願の特許請求の範囲の技術内容から当業者にとって自明のことである。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】本発明に係る方法を実施するために使用されるキットの概要図である。
【図１】
2008231095.tif 000003
【外国語明細書】
2008231095.tif 000004
2008231095.tif 000005
2008231095.tif 000006
2008231095.tif 000007
2008231095.tif 000008
2008231095.tif 000009
2008231095.tif 000010
2008231095.tif 000011
2008231095.tif 000012
2008231095.tif 000013