(57)【要約】【課題】  ヒアルロン酸量の低下に伴っておこるシワやタルミを予防、緩和、改善することのできるヒアルロン酸の産生促進剤及び該ヒアルロン酸産生促進剤を含有する皮膚外用剤、浴用剤及び飲食物を提供する。【解決手段】  イトヒメハギエキス、クララエキス、ケイヒエキス、シャクヤクエキス、カキエキス、タンジンエキス、ツボクサエキス、プーアルエキス、アルブチン、アスコルビン酸又はアルギン酸オリゴ糖類から選ばれる１種又は２種以上を含有するヒアルロン酸産生促進剤及び該ヒアルロン酸産生促進剤を含有する皮膚外用剤、浴用剤及び飲食物を提供する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
イトヒメハギエキス、クララエキス、ケイヒエキス、シャクヤクエキス、カキエキス、タンジンエキス、ツボクサエキス、プーアルエキス、アルブチン、アスコルビン酸又はアルギン酸オリゴ糖類から選ばれる１種又は２種以上を含有するヒアルロン酸産生促進剤。
【請求項２】
請求項１に記載のヒアルロン酸産生促進剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項３】
請求項１に記載のヒアルロン酸産生促進剤を含有することを特徴とする浴用剤。
【請求項４】
請求項１に記載のヒアルロン酸産生促進剤を含有することを特徴とする飲食物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚の弾力、張り、潤いに重要な役割を担うヒアルロン酸の産生促進剤に関する。更には、ヒアルロン酸産生促進剤を含有する皮膚外用剤、浴用剤及び飲食物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、高齢化社会や女性の社会進出に伴い、美容に対する意識が向上している。しかし、皮膚の機能は年齢とともに低下し、加齢により弾力や張りを失いシワが生じてくる。この原因として、皮膚中に存在する線維芽細胞が産生するコラーゲンとヒアルロン酸の量の低下が挙げられる。
【０００３】
皮膚は皮下組織、真皮、表皮の三層から成っていて、皮膚の弾力など皮膚機能に最も影響を与えるのが真皮であり、この真皮にはコラーゲンとヒアルロン酸が多く含まれている。これらコラーゲンやヒアルロン酸は、真皮中に存在する線維芽細胞が産生することが知られており、皮膚の弾力性の保持に重要な役割を担っている。
【０００４】
人間の体は、いくつかの細胞が結合して組織や器官を形成している。これらの器官を一定の形状に保持するための組織を結合組織というが、これは、細胞と細胞の間がヒアルロン酸などのムコ多糖類やコラーゲンなどで構成される物質で埋め尽くされているため各器官が一定の形状を保持することが可能となっている。同時に、生体の運動を円滑にしたり、関節の衝撃吸収に役立つなどの重要な働きを持っている。
【０００５】
また、細胞と細胞を結び付けている組織を細胞外マトリックス（Ｅｘｔｒａ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｍａｔｒｉｘ：ＥＣＭ）といい、これらは単に細胞と細胞を結合させるだけでなく、細胞に必要な成分・栄養分を補給したり、細胞からの不要物質（二酸化炭素や老廃物など）を運搬したり、更には細胞間における重要な調節機能を営んでいる。この細胞外マトリックスの中でも、ムコ多糖と呼ばれる多糖類が大切な役割をしている。このムコ多糖の代表がヒアルロン酸であり、ヒアルロン酸は、皮膚、関節液、大動脈、腎臓、大脳、心臓など、体の重要な臓器や器官の全てに存在していることが判っている。
【０００６】
しかし、加齢による皮膚機能の低下に起因して、ヒアルロン酸産生量は減少する。ヒアルロン酸量の減少により水分の保持能力が低下し、それによって皮膚の潤いが失われて肌の乾燥やくすみが生じ、あるいは弾力や張りが失われることによって生じるシワやタルミなどは老化現象の表面化である。
【０００７】
さらに上記のとおりヒアルロン酸は、関節の衝撃吸収などに重要な役割を果たすことが知られていることから、線維芽細胞などの細胞におけるヒアルロン酸産生量を調節することによる、関節炎（リウマチ）などの治療、予防、血漿蛋白の組織漏出の制御、細菌侵入に対する生体防御作用への応用が期待されている。
【０００８】
従来、これらヒアルロン酸量の減少を防ぎ肌に潤いを与える薬剤、方法が知られており、例えば、特許文献１には、ヒアルロニダーゼ活性阻害剤を含有する保湿化粧料が開示されている。特許文献１に記載の化粧料は、ヒアルロニダーゼによるヒアルロン酸分解抑制作用を有するものであり、ヒアルロン酸の産生促進作用を有するものでないことから、現状を維持すること以上の効果は期待できない。
【特許文献１】特開２００３−１２４８９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、ヒアルロン酸の産生を促進することによって皮膚中のヒアルロン酸量の低下を防止し、ヒアルロン酸量の低下に伴っておこるシワやタルミを予防、緩和、改善することのできるヒアルロン酸の産生促進剤及び該ヒアルロン酸産生促進剤を含有する皮膚外用剤、浴用剤及び飲食物を提供することを目的としてなされたものである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者等は、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、特定の植物エキス、有機酸、糖類がヒアルロン酸の産生を促進する作用を有することを見出し、この知見に基づき本発明を完成させた。
【００１１】
すなわち、本発明は、イトヒメハギエキス、クララエキス、ケイヒエキス、シャクヤクエキス、カキエキス、タンジンエキス、ツボクサエキス、プーアルエキス、アルブチン、アスコルビン酸又はアルギン酸オリゴ糖類から選ばれる１種又は２種以上を含有するヒアルロン酸産生促進剤を提供する。
また本発明は、前記ヒアルロン酸産生促進剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤、浴用剤又は飲食物を提供する。
【発明の効果】
【００１２】
イトヒメハギエキス、クララエキス、ケイヒエキス、シャクヤクエキス、カキエキス、タンジンエキス、ツボクサエキス、プーアルエキス、アルブチン、アスコルビン酸又はアルギン酸オリゴ糖類は、線維芽細胞からヒアルロン酸の産生を促進する効果があり、皮膚の老化防止など様々な用途に利用できるヒアルロン酸産生促進剤として有用である。またこれらのヒアルロン酸産生促進剤は、化粧品をはじめとする各種皮膚外用剤や浴用剤さらには飲食物に配合することができ、ヒアルロン酸量の低下に起因する皮膚表面の変化、例えば、シワ、タルミの予防、緩和、改善をすることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明のヒアルロン酸産生促進剤は、イトヒメハギエキス、クララエキス、ケイヒエキス、シャクヤクエキス、カキエキス、タンジンエキス、ツボクサエキス、プーアルエキス、アルブチン、アスコルビン酸又はアルギン酸オリゴ糖類から選ばれる１種又は２種以上を含有することを特徴とするものである。
【００１４】
また、前記植物エキス、アルブチン、アスコルビン酸、アルギン酸オリゴ糖類から選ばれる２種以上含有する本発明のヒアルロン酸産生促進剤としては、
アルギン酸オリゴ糖類とイトヒメハギエキス、クララエキス、シャクヤクエキス、又はツボクサエキスとの組み合わせ；
イトヒメハギエキスとクララエキス、タンジンエキス、又はプーアルエキスとの組み合わせ；
アルギン酸オリゴ糖類とクララエキスとイトヒメハギエキスとの組み合わせ；
アルギン酸オリゴ糖類とクララエキスとカキエキスとの組み合わせ；
から選ばれる組み合わせを含有するものが、皮膚のシワ、タルミの予防、緩和、改善作用に特に優れることから好ましい。
【００１５】
本発明で使用するイトヒメハギエキスとは、ヒトハギ科植物のイトヒメハギの根を用いて抽出するが、地上部さらに同属植物を用いて抽出することができる。
【００１６】
本発明で使用するクララエキスとは、マメ科植物のクララの根を用いて抽出するが、地上部さらに同属植物を用いて抽出することができる。
【００１７】
本発明で使用するケイヒエキスとは、クスノキ科植物のシナニッケイの樹皮を用いて抽出するが、地上部さらに同属植物を用いて抽出することができる。
【００１８】
本発明で使用するシャクヤクエキスとは、ボタン科植物のシャクヤクの根の外皮を除去したものを用いて抽出するが、地上部さらに同属植物を用いて抽出することができる。
【００１９】
本発明で使用するカキエキスとは、カキノキ科植物のカキの葉を用いて抽出するが、地上部さらに同属植物を用いて抽出することができる。
【００２０】
本発明で使用するタンジンエキスとは、シソ科植物のタンジンの根を用いて抽出するが、地上部さらに同属植物を用いて抽出することができる。
【００２１】
本発明で使用するツボクサエキスとは、セリ科植物のツボクサの全草を用いて抽出するが、同属植物を用いて抽出することができる。
【００２２】
本発明で使用するプーアルエキスとは、ツバキ科植物のチャの葉を黒麹菌などで後発酵させたもの、いわゆるプーアルの葉を用いて抽出する。
【００２３】
本発明において、イトヒメハギエキス、クララエキス、ケイヒエキス、シャクヤクエキス、カキエキス、タンジンエキス、ツボクサエキス、プーアルエキスなどの植物エキスとしては、上記の各植物の各種部位を未乾燥のまま又は乾燥させた後そのままに、あるいは、破砕又は粉砕後に搾取して使用することができる。さらに、これらを溶媒で抽出して得られるエキスや、該エキスから抽出溶媒を蒸発又は凍結乾燥して得られる不揮発分を使用することができる。
【００２４】
ここで用いられる抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、１,３−ブチレングリコールなどの低級アルコール類、アセトンなどのケトン類、酢酸エチルなどのエステル類、ジエチルエーテルなどのエーテル類、トルエンなどの芳香族類等の各種の溶媒が挙げられ、単独又は２種以上の溶媒を任意に組み合わせて使用することができる。
【００２５】
本発明で使用するアルブチンとは、コケモモ、ウワウルシ、ナシなどの植物に含まれる天然型（β−グルコシド型）の配糖体であり、化学名が４−ヒドロキシフェニル−β−Ｄ−グルコシピラノシドのものを用いることができる。
【００２６】
本発明で使用するアスコルビン酸とは、ミカン、レモンなどの柑橘類、キウイ、イチゴ、メロンなどの果物や野菜類等に含まれる水溶性のビタミンで、ビタミンＣとも呼ばれる。さらに本発明では、パルミチン酸、ステアリン酸とのモノエステル又はジエステル等の誘導体化したものや、リン酸マグネシウム塩、ナトリウム塩又は配糖体等のアスコルビン酸誘導体も用いることができる。
【００２７】
本発明で使用するアルギン酸オリゴ糖類とは、高分子アルギン酸又は高分子アルギン酸塩（ナトリウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩など）を低分子化し、分子量を２０００〜２００００に調製したものを用いる。そして、その分解方法については、酸又はアルカリ分解、酵素分解、熱分解などの方法で良く、その手法は問わず、また、高分子アルギン酸を低分子アルギン酸とした後、低分子アルギン酸塩にしたものでも良い。
【００２８】
本発明で使用される植物エキスは、医薬又は民間薬、食品、化粧品の成分として一般的に用いられるものであり、その安全性が確認されているものである。
【００２９】
本発明のヒアルロン酸産生促進剤は、前記植物エキス、アルブチン、アスコルビン酸、アルギン酸オリゴ糖類から選ばれる１種又は２種以上を含有し、ヒアルロン酸産生促進剤への総配合量はその剤型によっても異なるものであり、蒸発残分をそのまま使用しても構わないし、目的用途によって適宜、配合量を調整すればよく、また、本発明のヒアルロン酸産生促進剤の使用量にも特に制限はなく、用途や適用により適宜調整することができる。
【００３０】
本発明のヒアルロン酸産生促進剤は、外用、内用、素材への処理など様々な形態に適用できる。また、通常の外用、内用素材への処理などで使用されている薬剤などとも組み合
わせて使用することができ、併用薬剤により本発明の効果がより発現しやすくなる。
【００３１】
本発明のヒアルロン酸産生促進剤は、医薬品、医薬部外品、局所又は全身用の皮膚化粧品、頭皮・頭髪に適用する薬用又は化粧用の製剤類をはじめとする各種の皮膚外用剤、浴用剤、飲食物などに配合することができる。
【００３２】
本発明の皮膚外用剤、浴用剤、飲食物は、前記ヒアルロン酸産生促進剤の１種又は２種以上を含有する。そして前記ヒアルロン酸産生促進剤の皮膚外用剤等への総配合量は、剤型により適宜異なるが、前記皮膚外用剤、浴用剤、飲食物全体の質量に対し、一般的には、前記ヒアルロン酸産生促進剤に含有される植物エキス、アルブチン、アスコルビン酸、アルギン酸オリゴ糖類の配合量に換算して、０.０１質量％〜１０質量％、好ましくは０.０２５質量％〜５質量％、さらに特定すると０.０５質量％〜２.５質量％となるように含有することが望ましい。
【００３３】
また、本発明の浴用剤は、前記ヒアルロン酸産生促進剤の１種又は２種以上を含有し、浴用剤への総配合量は、剤型により適宜異なる。
更に、本発明の飲食物は、前記ヒアルロン酸産生促進剤の１種又は２種以上を含有し、飲食物への総配合量は、剤型により適宜異なる。
【００３４】
本発明の皮膚外用剤及び浴用剤には、前記ヒアルロン酸産生促進剤の他に、通常の皮膚外用剤又は浴用剤において従来から使用されている公知の機能成分、例えば、保湿剤、エモリエント剤、血行促進剤、細胞賦活化剤、抗酸化剤、抗炎症剤、抗菌剤、過酸化物抑制剤などを配合することができる。
【００３５】
公知の機能成分としてより具体的には、グリセリン、ブチレングリコール、尿素、アミノ酸類などの保湿剤；スクワラン、マカデミアナッツ油、オリーブ油、ホホバ油、シリコン油などのエモリエント剤；ビタミンＥ類、トウガラシチンキなどの血行促進剤；核酸などの細胞賦活化剤、ジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ジブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、酢酸トコフェロールなどの抗酸化剤；グリチルリチン、アラントインなどの抗炎症剤；ヒノキチオール、塩化ベンザルコニウム、クロルヘキシジン塩、パラヒドロキシ安息香酸エステルなどの抗菌剤；スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）などの過酸化物抑制剤など、種々の機能成分を配合することができる。
また、オウゴンエキス、イチョウエキス、胎盤抽出物、乳酸菌培養抽出物などの植物・動物・微生物由来の各種抽出物なども制限なく添加して使用することができる。
【００３６】
本発明の皮膚外用剤とは、外用可能な剤であって、その剤型には特に制限はなく、例えば、ペースト剤、クリーム、ジェル、軟膏、ローション、乳液、パック、パウダー、ハップ剤などが例示できる。
【００３７】
本発明の浴用剤の剤型にも特に制限はなく、例えば、粉末、顆粒状などの固形製剤、乳液、ペースト状などの液体製剤などが例示できる。
本発明の飲食物には、前記ヒアルロン酸産生促進剤の他に、通常食品に使用されている様々な材料を特に制限なく併用することができる。
【００３８】
本発明の飲食物の剤型としては適用可能なあらゆる形態があり、例えば、ビスケット、クッキー、錠剤、カプセル剤、キャンディー、ガム、粉末などの固形製剤、飲料などの液体製剤、ゼリーなどの半固形製剤などが例示できる。
【００３９】
また、本発明の皮膚外用剤、浴用剤及び飲食物には、その剤型化のために界面活性剤、油脂類などの基材成分や、必要に応じて増粘剤、防腐剤、等張化剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、キレート剤、香料、着色料などの種々の添加物を併用できる。
【００４０】
上記の界面活性剤としては特に限定されるものではないが、一般的な非イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤、両性界面活性剤を用いることができる。例えば、高級アルコールのアルキレンオキサイド付加物、高級アルキルアミンのアルキレンオキサイド付加物、高級脂肪酸のアルキレンオキサイド付加物、高級脂肪酸アミドのアルキレンオキサイド付加物、多価アルコールの脂肪酸エステル、硬化ひまし油のアルキレンオキサイド付加物、ポリエチレングリコールソルビタンアルキルエステル、ステロール等のアルキレンオキサイド付加物などの非イオン界面活性剤；アルキル硫酸ナトリウム、アルキロイルメチルタウリンナトリウム、α−オレフィンスルホン酸ナトリウム、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル硫酸ナトリウムなどの陰イオン界面活性剤；塩化アルキルピリジニウム、塩化ジステアリルジメリルアンモニウムなどの陽イオン界面活性剤；アミノプロピオン酸ナトリウム、アルキルポリアミノエチルグリシンなどの両性界面活性剤が挙げられる。そして、これらの界面活性剤は１種又は２種以上を選択して使用することができる。
【００４１】
本発明において使用可能な基材成分として、特に限定されるものではないが、例えば、オリーブ油、ツバキ油、アボカド油、マカデミアナッツ油、杏仁油、ホホバ油、スクワラン、スクワレン、馬油、パラフィン、シリコンなど、一般的に知られている油脂類が挙げられる。
【００４２】
本発明において使用可能な増粘剤として、特に限定されるものではないが、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルアクリルアミド、ポリエチレングリコール、及びこれらの各種誘導体；ヒドロキシアルキルセルロースなどのセルロース類及びその誘導体；デキストラン、ゼラチン、アラビアガム、トラガントガムなどのガム類；カルボキシビニルポリマーなどの水溶性高分子などが挙げられる。
【００４３】
本発明において使用可能な防腐剤として、特に限定されるものではないが、例えば、パラヒドロキシ安息香酸エステル、パラオキシ安息香酸塩とその誘導体、フェノキシエタノール、ヒノキチオール、塩化ベンザルコニウム、クロルヘキシジン塩などが挙げられる。
【００４４】
本発明において使用可能な等張化剤として、特に限定されるものではないが、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウムなどの無機塩類が挙げられる。
【００４５】
本発明において使用可能な紫外線吸収剤として、特に限定されるものではないが、例えば、パラアミノ安息香酸、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤、ベンゾトリアゾール系紫外線吸収剤などが挙げられる。
【００４６】
本発明において使用可能なキレート剤として、特に限定されるものではないが、例えば、エチレンジアミン四酢酸、フィチン酸、クエン酸及びこれらの水溶性塩などが挙げられる。
【実施例】
【００４７】
以下、本発明を更に詳しく説明するために実施例によって説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら限定されるものではない。
（１）植物エキスの製造方法
植物エキスは、以下の表１に示す各植物の各部位を、５０質量％エタノール水溶液の環流下で１時間かけて抽出後ろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去して各植物エキスを得た。得られた植物エキスを以下に示す実施例に使用した。
【００４８】
【表１】
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【００４９】
（２）アルギン酸オリゴ糖類の製造方法
市販のアルギン酸ナトリウムであるＳＫＡＴ−ＵＬＶ（キミカ社製）１.５ｇ、リン酸アンモニウム０.０５ｇ、酵母エキス０.０１ｇ、塩化ナトリウム２ｇをイオン交換水１００ｇ中に溶解させ、オートクレーブで２.１ａｔｍ、１２１℃、２０分間の滅菌操作を行った。滅菌処理後のアルギン酸溶液に対し、アルギン酸分解菌であるＰｓｅｕｄｏ  ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｈａｌｏｐｌａｎｃｔｉｃ（ＩＴＭ  ２２２）を一白金耳埴菌し、室温下、８時間前培養を行った。
【００５０】
次に、得られた前培溶液１ｍＬを、アルギン酸ナトリウム分解用培地（リン酸アンモニウム０.１５ｇ、酵母エキス０.０１ｇ、アルギン酸ナトリウム（キミカ社製）９.０ｇ、塩化ナトリウム６.０ｇをイオン交換水３００ｇに溶解させ、オートクレーブで２.１ａｔｍ、１２１℃、２０分間の滅菌操作を行ったものを使用）に添加後、室温条件下で４８時間振とう培養を行った。
【００５１】
振とう培養後のアルギン酸ナトリウム分解液から、菌体除去のための遠心分離操作（１００００ｒｐｍ×１０分間）を行い、上澄み液を得た。得られた上澄み液に液量と同量のメタノールを加え、分解後のアルギン酸ナトリウム溶液から高分子量（数万）のアルギン酸ナトリウムを沈降させて濾別し、低分子量のアルギン酸オリゴ糖ナトリウムを含有している濾液を得た。
【００５２】
アルギン酸オリゴ糖ナトリウムを含有している濾液の中から塩化ナトリウムなどの不純物を除去し、精製を行うために、ゲル濾過操作（Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を行った。ゲル濾過操作後、得られた液を濃縮して、凍結乾燥機で乾燥を行い、目的とするアルギン酸オリゴ糖ナトリウム（重量平均分子量約２０００）を５.４ｇ（収率６０％）得た。
【００５３】
また、振とう培養時間を４８時間から８時間に換えた以外は上記と同様に操作して、重量平均分子量約２万のアルギン酸オリゴ糖ナトリウムを得た。
更に、得られた重量平均分子量２０００又は２万のアルギン酸オリゴ糖ナトリウムをイオン交換樹脂（アンバーライト１００６Ｆ  Ｈ、ローム・アンド・ハース・ジャパン社製）と共に操作して、重量平均分子量約２０００又は２万のアルギン酸オリゴ糖を得た。
【００５４】
なお、重量平均分子量の測定は水系ゲルパーミッションクロマトグラフィー（以下ＧＰＣ）装置を用いて測定した。測定条件は、ＧＰＣ装置（東ソー社製ＧＰＣ−８０２０）、カラム（東ソー社製Ｇ３０００→Ｇ５０００を直結） 、カラム温度４０℃、カラム流量
１.０ｍｌ／ｍｉｎ、溶出液０.１Ｍ ＮａＣｌ水溶液、ＲＩ検出であり、重量平均分子量はＰＥＧを標品として換算した値である。
【００５５】
得られたアルギン酸オリゴ糖ナトリウム、アルギン酸オリゴ糖を以下に示す実施例に使用した。
【００５６】
（３）アルブチン
和光純薬工業（株）製のアルブチンを以下に示す実施例に使用した。
（４）アスコルビン酸
和光純薬工業（株）製のＬ(＋)−アスコルビン酸を以下に示す実施例に使用した。
【００５７】
（Ｉ）ヒアルロン酸産生促進剤
［実施例１］
アスコルビン酸を１０ｍｇ／ｍＬとなるよう調製し、その後、クリーンベンチ内で０.２μｍのシリンジフィルターを用いて滅菌した。そして、滅菌精製水を加えて２ｍｇ／ｍＬとなるよう調整して、培地に添加するアルブチンの希釈液を作製した。
次に、倉敷紡績(株)製の正常ヒト皮膚線維芽細胞を規定の調製法に基づき、分化、培養を行った。培地には、低血清増殖添加剤（ＬＳＧＳ）を添加した正常ヒト皮膚線維芽細胞増殖用低血清培地（Ｍｅｄｉｕｍ１０６Ｓ）を用いた。
培地に正常ヒト成人線維芽細胞（５０００００ｃｅｌｌ／ｍＬ）の溶液を播種し、３７℃、５％−ＣＯ2、加湿のインキュベーターに入れ、１日おきに培地を交換し、６日間培養した。
【００５８】
６日後、シャーレから細胞をはがし、細胞浮遊液を作成した（１５０００ｃｅｌｌ／ｍＬ）。細胞浮遊液を２４ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに１ｍＬずつ播種し、２日間培養した。培地交換の際、前記アスコルビン酸の希釈液を１０μＬ（最終濃度が２０μｇ／ｍＬとなる）添加し、さらに２日間培養した。２日おきに培地交換等を行い、細胞播種８日目に培地を回収した。回収した培地を生化学工業（株）より販売されているヒアルロン酸測定キットを用いて、その使用法に準じて、培養６日目から８日目までの４８時間培養後の上清中に存在するヒアルロン酸量の測定を行った。この時のヒアルロン酸の量は、ヒアルロン酸産生促進成分（アスコルビン酸）の希釈液の代わりに滅菌精製水を添加して、その他は同様の操作をした比較例１のタンパク質量当たりのヒアルロン酸の量と比較したところ１７６％あり、比較例１に比べて１７６％のヒアルロン酸産生促進能を示したこととなる。
なお、回収した培地のタンパク質量は、Ｌｏｗｒｙ法にて測定した。
【００５９】
［実施例２〜４１］
ヒアルロン酸産生促進成分及び添加した最終濃度を表２のように換えた以外は実施例１と同様の操作をして、得られたヒアルロン酸の量と比較例１のヒアルロン酸の量とを、同様に比較した結果を表２に示す。
【００６０】
【表２】
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【００６１】
表２の実施例１〜４１の結果が示すように、ヒアルロン酸産生促進成分として各種植物
エキス、アルブチン、アスコルビン酸、アルギン酸オリゴ糖類及びその組成物を用いたものは、正常ヒト皮膚線維芽細胞におけるヒアルロン酸産生に対し、有意に産生促進効果を示していることがわかる。
【００６２】
（II）皮膚外用剤の処方例
表３〜１４に示す組成でヒアルロン酸産生促進剤を配合した皮膚外用剤（化粧水、乳液、クリーム、ボディクリーム）の処方を調製した。調製方法は下記の通りである。なお、配合量の単位はｇで、表中の精製水の「残量」とは全量を１００ｇとする量である。
【００６３】
化粧水（実施例４２〜６２、比較例２）
表３〜５のＡ成分、Ｂ成分のそれぞれを８０℃で加温して溶解し、Ｂ成分をＡ成分に撹拌しながら徐々に加えて乳化した。その後撹拌しながら冷却し、４０℃でＣ成分を加えて、３５℃で調製を終了した。
【００６４】
【表３】
2008105985.tif 000004
【００６５】
【表４】
2008105985.tif 000005
【００６６】
【表５】
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【００６７】
乳液（実施例６３〜８３、比較例３）
表６〜８のＤ成分、Ｅ成分のそれぞれを８０℃に加温して溶解し、Ｄ成分をＥ成分に攪拌しながら加え均一とした後、ホモミキサーで乳化した。その後、ハンドルミキサーで攪拌しながら冷却し、４０℃以下でＦ成分を加えて、調製を終了した。
【００６８】
【表６】
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【００６９】
【表７】
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【００７０】
【表８】
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【００７１】
クリーム（実施例８４〜１０４、比較例４）
表９〜１１のＧ成分、Ｈ成分をそれぞれ７５℃に加温して溶解し、Ｇ成分をパドルミキサーで撹拌しながらＨ成分を少量ずつ加えた。その後、撹拌しながら冷却し、４０℃でＩ成分を加えた後、約３５℃で調製を終了した。
【００７２】
【表９】
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【００７３】
【表１０】
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【００７４】
【表１１】
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【００７５】
ボディクリーム（実施例１０５〜１２５、比較例５）
表１２〜１４のＪ成分、Ｋ成分をそれぞれ７５℃に加温して、Ｊ成分をパドルミキサーで撹拌しながら、Ｋ成分を少量ずつ加えた。その後、撹拌しながら冷却し、４５℃以下でＬ成分を加えて調製を終了した。
【表１２】
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【００７６】
【表１３】
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【００７７】
【表１４】
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【００７８】
評  価
前記実施例４１〜１２５、比較例２〜５の皮膚外用剤について、加齢による肌のしわやハリ、弾力の低下に悩みを有する女性を対象としたモニター試験を行い、その評価を行った。
皮膚外用剤のそれぞれについて、女性２名ずつの（２２群×４処方）計１７６名に対して毎日、朝と夕の２回、適量を肌に塗布することを１ヶ月間続けるモニター試験を行い、その使用感を調べた。下記の基準にて評価を行った結果を表１５に示す。なお、使用期間中に皮膚の異常を訴えたものはいなかった。
有  効  ：肌のハリ・ツヤ・弾力が増した
やや有効：肌のハリ・ツヤ・弾力がやや増した
効果無し：使用前と変化なし
【００７９】
【表１５】
2008105985.tif 000016
【００８０】
【表１６】
2008105985.tif 000017
【００８１】
本発明のヒアルロン酸産生促進剤を配合した実施例４１〜１２５の皮膚外用剤では、各部位にハリや弾力を感じたといった人が多かった一方で、本発明のヒアルロン酸産生促進剤を配合していない比較例２〜５の皮膚外用剤では変化なしとの評価であったことから、本発明のヒアルロン酸産生促進剤を配合した皮膚外用剤は、肌のハリや弾力の向上に対していずれも有意であった。
【００８２】
（III）浴用剤の処方
次に、表１６〜１８に示す組成でヒアルロン酸産生促進剤を配合した抗老化浴用剤（入浴剤）の処方を調製した。調製法は下記の通りである。なお、配合量の単位はｇで、表中の精製水の「残量」とは全量を１００ｇとする量である。
【００８３】
入浴剤（実施例１２６〜１４６、比較例６）
表１６〜１８のＭ成分とＮ成分をそれぞれ均一になるまで混合した後、Ｍ成分とＮ成分とを混合し、均一になるまで充分混合して調製を終了した。
【００８４】
【表１７】
2008105985.tif 000018
【００８５】
【表１８】
2008105985.tif 000019
【００８６】
【表１９】
2008105985.tif 000020
【００８７】
評  価
前記実施例１２６〜１４６、比較例６の入浴剤について、肌のしわやハリ、弾力の低下に悩みを有する女性を対象としたモニター試験を行い、その評価を行った。
入浴剤のそれぞれについて、女性２名ずつの（２２群）計４４名に対して、毎日の入浴時にお湯１８０Ｌに対して入浴剤３０ｍＬを溶かして入浴すること以外は通常の生活をするモニター試験を１ヶ月間続けた。１ヶ月後、その使用感を下記の基準で評価した結果を表１９に示す。なお、使用期間中に皮膚の異常を訴えたものはいなかった。
有  効  ：使用前に比べて肌のハリや弾力を感じる
やや有効：使用前に比べて肌のハリや弾力をやや感じる
効果無し：使用前と変化なし
【００８８】
【表２０】
2008105985.tif 000021
【００８９】
本発明のヒアルロン酸産生促進剤を配合した実施例１２６〜１４６の入浴剤では、肌にハリや弾力を感じたといった人が多かった一方で、本発明のヒアルロン酸産生促進剤を配合していない比較例６の入浴剤では変化なしとの評価であったことから、本発明のヒアルロン酸産生促進剤を配合した入浴剤は、肌のハリや弾力の向上に対しいずれも有意であった。
【００９０】
（IV）飲食物の処方
次に、表２０〜２３、表２５〜２６に示す組成でヒアルロン酸産生促進剤を配合した抗老化飲食物（パン、ゼリー、サプリメント(錠剤)）の処方を調製した。調製法は下記の通りである。なお、配合量の単位はｇで、表中の精製水の「残量」とは全量を１００ｇとする量である。
【００９１】
パン（実施例１４７〜１５８、比較例７）
表２０〜２１のＯ成分全部を混ぜ合わせたものに、４０℃に加温したＰ成分とＱ成分を混ぜ合わせたもの加えて、均一になった時点でよくこねた。３５℃で４０分間一次発酵させ、空気を抜くように再度こねた。４０℃で４０分間二次発酵後、１８０℃で２５分間焼いた。
【００９２】
【表２１】
2008105985.tif 000022
【００９３】
【表２２】
2008105985.tif 000023
【００９４】
ゼリー（実施例１５９〜１７０、比較例８）
表２２〜２３のＴ成分にＳ成分を溶解した８０℃のお湯にＲ成分を溶かし、よく混ぜ合わせた。型に１０ｇずつ流し入れた後、冷蔵庫で固めて調製を終了した。
【００９５】
【表２３】
2008105985.tif 000024
【００９６】
【表２４】
2008105985.tif 000025
【００９７】
評  価
前記実施例１４７〜１７０、比較例７、８の飲食物について、肌のしわやハリ、弾力の低下に悩みを有する女性を対象としたモニター試験を行い、その評価を行った。
飲食物のそれぞれについて、女性２名ずつの（１２群×２処方）計４８名に対して、パンについては、毎日の朝食時に前記実施例又は比較例のパンを主食として９０ｇ食べること、ゼリーについては、毎日の夕食後に前記実施例又は比較例のゼリーを５０ｇ摂取すること以外は通常の生活をするモニター試験を１ヶ月間続けた。１ヶ月後、その使用感を下記の基準で評価した結果を表２４に示す。なお、使用期間中に皮膚の異常を訴えたものはいなかった。
有  効  ：使用前に比べて肌のハリや弾力を感じる
やや有効：使用前に比べて肌のハリや弾力をやや感じる
効果無し：使用前と変化なし
【００９８】
【表２５】
2008105985.tif 000026
【００９９】
本発明のヒアルロン酸産生促進剤を配合した実施例１４７〜１７０の飲食物では、肌にハリや弾力を感じたといった人が多かった一方で、本発明のヒアルロン酸産生促進剤を配合していない比較例７、８の飲食物では変化なしとの評価であったことから、本発明のヒアルロン酸産生促進剤を配合した飲食物は、肌のハリや弾力の向上に対しいずれも有意であった。
【０１００】
サプリメント(錠剤)（実施例１７１〜１８２、比較例９）
表２５〜２６のＵ成分とＶ成分を良く混ぜ合わせたものを、打錠機を用いてタブレット状に押し固め、錠剤（０.３ｇ）を形成した。
【０１０１】
【表２６】
2008105985.tif 000027
【０１０２】
【表２７】
2008105985.tif 000028
【０１０３】
評  価
前記実施例１７１〜１８２、比較例９のサプリメント(錠剤)について、肌のしわやハリ、弾力の低下に悩みを有する女性を対象としたモニター試験を行い、その評価を行った。
サプリメント(錠剤)のそれぞれについて、女性２名ずつの（１２群）計２４名に対して、毎日の３回の食事後に前記実施例又は比較例のサプリメント(錠剤)を５錠（１.５ｇ）摂取すること以外は通常の生活をするモニター試験を１ヶ月間続けた。１ヶ月後、その使用感を下記の基準で評価した結果を表２７に示す。なお、使用期間中に皮膚の異常を訴えたものはいなかった。
有  効  ：使用前に比べて肌のハリや弾力を感じる
やや有効：使用前に比べて肌のハリや弾力をやや感じる
効果無し：使用前と変化なし
【０１０４】
【表２８】
2008105985.tif 000029
【０１０５】
本発明のヒアルロン酸産生促進剤を配合した実施例１７１〜１８２のサプリメント（錠剤）では、肌にハリや弾力を感じたといった人が多かった一方で、本発明のヒアルロン酸産生促進剤を配合していない比較例９のサプリメント（錠剤）では変化なしとの評価であったことから、本発明のヒアルロン酸産生促進剤を配合したサプリメント（錠剤）は、肌のハリや弾力の向上に対しいずれも有意であった。
【産業上の利用可能性】
【０１０６】
クララエキス、イトヒメハギエキス、カキエキス、タンジンエキス、シャクヤクエキス、プーアルエキス、アルブチン又はアルギン酸オリゴ糖類及びこれらの混合物はヒアルロン酸産生を促進させる作用があり、ヒアルロン酸産生促進剤として有用である。本発明のヒアルロン酸産生促進剤は、線維芽細胞において産生されるヒアルロン酸の量を増大させるので、その結果として、シワ、タルミの予防、緩和、改善がなされて、老化現象の防止、改善を目的とした化粧品をはじめとする各種の皮膚外用剤、浴用剤、飲食物などへの利用が可能となる。