(57)【要約】 【課題】  滑膜肉腫の治療に用いることのできる抗がん剤を提供すること。【解決手段】  Srcファミリーチロシンキナーゼ阻害剤を有効成分とする滑膜肉腫治療剤。本発明は、滑膜肉腫細胞特異的に増殖、浸潤、及び／又は転移を阻害することができ、従来よりも大幅に治療予後を好転させることができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Srcファミリーチロシンキナーゼ阻害剤を有効成分とする滑膜肉腫治療剤。
【請求項２】
さらにSrcファミリーチロシンキナーゼ活性の亢進抑制剤を含む、請求項１に記載の滑膜肉腫治療剤。
【請求項３】
Srcファミリーチロシンキナーゼ活性の亢進抑制剤がCrkファミリー蛋白質によるSrcファミリーチロシンキナーゼ活性の亢進を抑制する薬剤である、請求項２に記載の滑膜肉腫治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Srcファミリーチロシンキナーゼ阻害剤を有効成分とする滑膜肉腫治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
滑膜肉腫は若年者の四肢関節近傍に好発する悪性の軟部腫瘍で、軟部腫瘍の中では悪性線維性組織球腫、脂肪肉腫、横紋筋肉腫に次いで発生頻度が高い腫瘍である。滑膜肉腫の治療には化学療法が施行されており、一般的に３剤併用療法あるいは４剤併用療法が試みられている。３剤併用療法の代表例はMAID療法（Mesna：副作用軽減剤、Adriacin：アドリアマイシン、Ifomide：イフォスファミド、Dacarbazine：ダカルバジン）であり、４剤併用療法の代表例はCyVADIC療法（Cyclophosphamide：シクロフォスファミド、Vincristine：ビンクリスチン、Adriacin：アドリアマイシン、dacarbazine：ダカルバジン）である。これら併用療法で用いられている薬剤の多くはアルキル化剤である。しかしながら、滑膜肉腫細胞は抗がん剤に対する感受性が低く、これらの多剤併用療法をもってしても著効が示されるには至っていない。また、滑膜肉腫に特異的な作用を示す抗腫瘍剤も現在のところ開発されていない。
【０００３】
このように、従来の化学療法の限界から、滑膜肉腫の治療は主に外科的治療に依存している。しかし、外科的治療は患部を含む広範な組織切除を必要とし、四肢の切断等、審美面、機能面、精神面に於いて患者に与える苦痛は著しい。さらに、しばしば滑膜肉腫の局所再発、肺や骨髄への遠隔転移が認められ、５年生存率は３５〜５０％、１０年生存率は１０〜３０％と極めて予後不良である。そのため、滑膜肉腫に対する有効性を示す新たな抗がん剤の開発が切望されている。
【０００４】
滑膜肉腫の発症機序には、受容体型（膜型）チロシンキナーゼであるc-Metの過剰発現と、c-Met結合蛋白質であるGab1のチロシンリン酸化が関与することが確認されており、さらにc-MetのリガンドであるHGF（hepatocyte growth factor）を自己分泌することにより、癌細胞増殖及び癌細胞浸潤が亢進することが示されている（非特許文献１、２）。しかし、さらなる詳細なメカニズムや、治療標的となるべき適切な分子の解明は未だなされていない。
【０００５】
前記受容体型（膜型）チロシンキナーゼであるc-Metとは異なるチロシンキナーゼとして、非受容体型チロシンキナーゼであるSrcファミリーチロシンキナーゼが知られている。Srcファミリーチロシンキナーゼには、哺乳動物のSrc、Fyn、Yes、Fgr、Lyn、Hck、Lck、及びBlkの８つの非受容体型チロシンキナーゼが含まれる。これらは５つの異なる機能ドメインと１つの制御領域からなる共通の構造によって特徴づけられる（非特許文献３）。Srcファミリーチロシンキナーゼ活性の亢進は、結腸癌、乳癌、肝癌、膵癌、B細胞白血病およびリンパ腫等の発症に関連が示されているが（非特許文献４）、滑膜肉腫との関連については不明である。
【０００６】
一方、Crkはトリに肉腫を引き起こす癌遺伝子として同定された（非特許文献５）。細胞内ホモログとしてCrk-I、Crk-II、Crk-Lが報告されており、これらはSH2、SH3領域のみからなるアダプター蛋白質である（非特許文献６）。
【非特許文献１】Watanabeら、2006年、Mol. Cancer Res.、第４巻、第499-510頁
【非特許文献２】Odaら、2000年、Hum. Pathol.、第31巻、第185-195頁
【非特許文献３】Kefalasら、1995年、Int. J. Biochem. Cell Biol.、第27巻、第551-563頁
【非特許文献４】Alvarezら、2006年、Cancer、第107巻、第1918-1929頁
【非特許文献５】Mayerら、1988年、Nature、第332巻、第272-275頁
【非特許文献６】Matsudaら、1992年、Mol. Cell Biol.、第12巻、第3482-3489頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、滑膜肉腫の治療に用いることのできる抗がん剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは鋭意研究、検討を重ねた結果、後述するように滑膜肉腫の発症に、Srcファミリーチロシンキナーゼ、特にCrkファミリー蛋白質によるSrcファミリーチロシンキナーゼの活性亢進が関与していること、さらにSrcファミリーチロシンキナーゼ活性の阻害とSrcファミリーチロシンキナーゼの活性亢進の抑制によって、滑膜肉腫細胞内でのSrcファミリーチロシンキナーゼ活性が抑制され、優れた抗腫瘍効果がもたらされることを見出し、下記の各発明を完成させた。
【０００９】
（１）Srcファミリーチロシンキナーゼ阻害剤を有効成分とする滑膜肉腫治療剤。
【００１０】
（２）さらにSrcファミリーチロシンキナーゼ活性の亢進抑制剤を含む、（１）に記載の滑膜肉腫治療剤。
【００１１】
（３）Srcファミリーチロシンキナーゼ活性の亢進抑制剤がCrkファミリー蛋白質によるSrcファミリーチロシンキナーゼ活性の亢進を抑制する薬剤である、（２）に記載の滑膜肉腫治療剤。
【発明の効果】
【００１２】
本発明は、Srcファミリーチロシンキナーゼ阻害剤、及び同阻害剤とSrcファミリーチロシンキナーゼ活性の亢進抑制剤、特にCrkファミリー蛋白質によるSrcファミリーチロシンキナーゼ活性の亢進を抑制する薬剤とを作用させることによって、滑膜肉腫細胞特異的に増殖、浸潤、及び／又は転移を阻害することができ、従来よりも大幅に治療予後を好転させることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
前述のように、Srcファミリーチロシンキナーゼには哺乳動物のSrc、Fyn、Yes、Fgr、Lyn、Hck、Lck、及びBlkの８つのチロシンキナーゼが含まれ、５つの異なる機能ドメインと１つの制御領域からなる共通の構造によって特徴づけられる。本発明で利用可能なSrcファミリーチロシンキナーゼ阻害剤は、これらのSrcファミリーチロシンキナーゼの活性を阻害する機能を有する物質であれば何でも良く、たとえばPP2（Jeffrey H. Hankeら、1996年、J. Biological Chemistry、第271巻第2号、第695-701頁）、米国特許第6,596,746号に記載されている化合物、国際公開第02/092579号パンフレットに記載されている化合物、特表2004-534754に記載されている化合物、特開2005-89352に記載されている化合物、特表2006-528685に記載されている化合物、あるいは特表2006-507292に記載されている化合物などが挙げることができるが、これらには限定されない。
【００１４】
また本発明で利用可能なCrkファミリー蛋白質によるSrcファミリーチロシンキナーゼ活性の亢進を抑制する薬剤としては、たとえば特許2786068号に示される抗体や特開2006-166727に示されるCrk遺伝子発現阻害剤が挙げられるが、これらには限定されない。
【００１５】
本発明の滑膜肉腫治療剤は、Srcファミリーチロシンキナーゼ阻害剤、又はSrcファミリーチロシンキナーゼ阻害剤とSrcファミリーチロシンキナーゼ活性の亢進抑制剤、特にCrkファミリー蛋白質によるSrcファミリーチロシンキナーゼ活性の亢進を抑制する薬剤とを合わせて使用することによって、滑膜肉腫細胞の増殖や浸潤を抑制することができる。
【００１６】
本発明の滑膜肉腫治療剤は、Srcファミリーチロシンキナーゼ阻害剤、又はSrcファミリーチロシンキナーゼ阻害剤とSrcファミリーチロシンキナーゼ活性の亢進抑制剤の組み合わせをそれぞれ単独で用いてもよく、また薬学的に許容される各種の担体や他の有効成分と組み合わせてなる滑膜肉腫治療用医薬組成物として用いてもよい。組成物を構成する担体等の不活性成分は、医薬組成物として利用可能な担体や添加剤その他の成分であれば特に制限はなく、剤型に応じて適当な成分を適宜選択して使用すればよい。また、Srcファミリーチロシンキナーゼ阻害剤及びSrcファミリーチロシンキナーゼ活性の亢進抑制剤以外の有効成分としては、医薬として利用可能な成分であればいずれも利用可能であるが、滑膜肉腫の様な固形癌に対して有効な他の抗がん剤、抗がん剤との併用によって効果を奏する抗がん剤以外の医薬成分などの利用が特に好ましい。
【００１７】
また本発明の滑膜肉腫治療剤又は滑膜肉腫治療用医薬組成物の投与方法は、静脈投与、腹腔内投与、皮下投与、経鼻投与又は経口投与等のいずれも選択可能であるが、これらには限定されない。
【００１８】
以下に非限定的な実施例を挙げて本発明を詳細に説明する。
【実施例】
【００１９】
実施例１  
１０％仔牛胎児血清（SIGMA社）及び10μMのSrcファミリーチロシンキナーゼ活性阻害剤であるPP2（前記Jeffrey H. Hankeら）を含むDulbecco’s modified Eagle’s medium培地（SIGMA社）で、ヒト滑膜肉腫細胞株SYO-1（Kawaiら、Cancer Lett.、2004年、第204巻、第105-113頁）を30時間培養し、該細胞の運動能及び細胞増殖を経時的に計測した。また、PP2に代えてPP3（Calbiochem社）を用いた実験を陰性コントロールとした。PP3は、PP2の類似化合物であるが、Srcファミリーチロシンキナーゼ活性に対する阻害能を欠いた化合物である。
【００２０】
Wound healing assay法（Manninoら、J. Cell Biol.、1981年、第91巻、第855-859頁）によりSYO-1細胞の運動能を計測したところ、図１ａ及び図１ｂに示されるように、PP2を添加した場合において、陰性コントロールに対して明らかな滑膜肉腫細胞株の運動能の低下が認められた。また図２に示されるように、PP2を添加した場合において、明らかな滑膜肉腫細胞株の増殖抑制が認められた。
【００２１】
実施例２  
GAGTTTGATTCATTGCCTGよりなるヌクレオチド鎖及びこれに相補的なヌクレオチド鎖を含むCrkの2本鎖siRNA（small interference RNA）（Watanabeら、2006年、Mol. Cancer Res.、第4巻、第499-510頁）を、Crk遺伝子発現阻害剤としてヒト滑膜肉腫細胞株SYO-1に導入し、該細胞の運動能及び細胞増殖を経時的に計測した。また、同siRNAを導入したSYO-1細胞にさらにPP2を添加して、同様にSYO-1細胞の運動能及び細胞増殖を経時的に計測した。その結果、図３及び図４に示されるように、CrkのsiRNAを導入したSYO-1細胞及びさらにPP2を添加したSYO-1細胞では、コントロールに対して明らかな運動能の低下及び増殖抑制が認められた。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１ａ】図１ａは、wound healing assay法によるSrcファミリーチロシンキナーゼの活性阻害剤の添加による滑膜肉腫細胞株の運動を示す。
【図１ｂ】図１ｂは、wound healing assay法によるSrcファミリーチロシンキナーゼの活性阻害剤の添加による滑膜肉腫細胞株の運動量を数値化して得られるグラフを示す。
【図２】図２は、Srcファミリーチロシンキナーゼの活性阻害剤の添加による滑膜肉腫細胞株の増殖抑制を示す。
【図３】図３は、wound healing assay法による、Crk遺伝子発現阻害剤及び／又はSrcファミリーチロシンキナーゼ阻害剤を添加したときの滑膜肉腫細胞株の運動量を数値化して得られるグラフを示す。図中、●はコントロール、▲はCrk遺伝子発現阻害剤であるCrk-siRNA、■はPP2、○はCrk遺伝子発現阻害剤であるCrk-siRNAとPP2、をそれぞれ表す。
【図４】図４は、Srcファミリーチロシンキナーゼ活性阻害剤（PP2）及びSrcファミリーチロシンキナーゼ活性の亢進抑制剤であるCrk遺伝子発現阻害剤（Crk-siRNA）を添加したときの滑膜肉腫細胞株の増殖を示す。図中、◆はPP2を、■はPP3を、◇はPP2とCrk-siRNAを、□はPP3とCrk-siRNAをそれぞれ表す。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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