(57)【要約】  【課題】    ヒト癌抗原蛋白質（C10orf3, C20orf42, Lengsin）の発現を検出可能な３種類のモノクローナル抗体を提供する。  【解決手段】    尿素変性リコンビナント蛋白質をマウスに免疫して、変性C10orf3蛋白質、変性C20orf42蛋白質又は変性Lengsin蛋白質とそれぞれ特異的に反応する３種類のマウスモノクローナル抗体を樹立した。これらのいずれかのモノクローナル抗体を主成分とする検査薬は、ヒト癌抗原蛋白質、特に変性ヒト癌抗原蛋白質を検出することができる。そのため手術摘出標本や過去のホルマリン固定パラフィン包埋標本を用いた癌抗原蛋白質の検出を組織レベルで可能にする。  【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトC10orf3抗原と特異的に結合し、受領番号ＦＥＲＭ ＡＰ−２１０３１を有するハイブリドーマにより産出される抗体と同一の抗原認識部位を有するモノクローナル抗体。
【請求項２】
ヒトC20orf42抗原と特異的に結合し、受領番号ＦＥＲＭ ＡＰ−２１０３２を有するハイブリドーマにより産出される抗体と同一の抗原認識部位を有するモノクローナル抗体。
【請求項３】
ヒトLengsin抗原と特異的に結合し、受領番号ＦＥＲＭ ＡＰ−２１０３３を有するハイブリドーマにより産出される抗体と同一の抗原認識部位を有するモノクローナル抗体。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体を主成分とするヒト癌抗原蛋白質を検出するための検査薬。
【請求項６】
前記ヒト癌抗原蛋白質が変性されている請求項５に記載の検査薬。
【請求項７】
前記検査薬がヒト組織からヒト癌抗原蛋白質を検出するための検査薬であって、該ヒト組織がホルマリン固定標本である請求項５又は６に記載の検査薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、３種類のヒト癌抗原(C10orf3, C20orf42, Lengsin)と、それぞれ特異的に結合する３種類のモノクローナル抗体、及びこれらの抗体を含むヒト癌抗原蛋白質の検査薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの癌組織にはさまざまな癌抗原蛋白質が発現していることが知られている。癌抗原蛋白質とは、ヒト成人正常組織には低レベルの発現しか認められないが、癌組織において高レベルに発現している蛋白質で、担癌患者の免疫系によって癌抗原として認識されうる蛋白質のことである。癌抗原蛋白質は癌の診断や治療に有用で、例えば、癌抗原蛋白質を特異的に認識するモノクローナル抗体を含んだ検査薬は癌の細胞組織診断、血清診断、尿診断等に応用できる。また、癌抗原蛋白質を特異的に認識するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの免疫グロブリン遺伝子情報を使用して、癌抗原蛋白質を標的とした分子標的治療薬を作成することも技術的には可能である。したがって、癌抗原蛋白質を特異的に認識する単クローン抗体とそれを産生するハイブリドーマは、癌医療に多大な貢献をもたらしうる重要な発明である。
一方、過去数十年にわたり、世界中で大部分の臨床組織検体は10%〜20%ホルマリン固定液等によって保存されてきたが、ホルマリンのような固定液は組織中の蛋白質を高度に変性させるため、固定された標本中の抗原蛋白質を特異抗体によって検出するためには変性蛋白質を認識できる抗体が必要である。しかし、従来使用されている癌抗原特異抗体は、変性した抗原蛋白質を認識できないため、ホルマリン等で固定した組織中の抗原蛋白質を免疫染色法によって検出することはできなかった。したがって、変性した抗原蛋白質と特異的に結合するモノクローナル抗体は、癌組織を用いた組織診断に極めて有用である。
【０００３】
C10orf3, C20orf42, Lengsinの３種類の癌抗原は、ヒト成人正常組織には発現が低く、癌組織で高レベルに発現している癌抗原である（非特許文献１〜３）。これらの癌抗原を特異的に認識できるモノクローナル抗体としては、現在のところマウスモノクローナル抗C10orf3抗体Clone 1B12-1A3（Novus Biological社, Abnova社）しか存在しないが、この抗体は変性した癌抗原を認識できないため、ホルマリン固定標本の免疫染色には適用できない(非特許文献４)。このようにホルマリン等で固定した標本のような変性ヒト組織を材料として、上記３種類の癌抗原を検出可能なモノクローナル抗体はこれまでに報告されていなかった。
【０００４】
【非特許文献１】Oncogene. 19: 480-486, 2006.
【非特許文献２】Biochim. Biophys. Acta 1637: 207-216, 2003.
【非特許文献３】Mol Vis. 15:171-184, 2002.
【非特許文献４】Novus Biologicals, Inc. Catalog number H00055165-M01
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
癌抗原蛋白質を特異的に認識するモノクローナル抗体の樹立は、癌の診断薬や治療薬の開発に貢献する。特に、ホルマリン等によって固定され保存されているヒト病理組織検体は、すべての組織蛋白質が変性しているため、モノクローナル抗体によって固定組織中の蛋白質を検出しようとする場合、変性蛋白質であっても認識することのできる抗体を用いる必要がある。これまで、C10orf3, C20orf42, Lengsinの３種類の癌抗原をそれぞれ特異的に認識し、かつホルマリン固定組織の免疫組織染色にも有用なモノクローナル抗体は存在せず、通常の病理組織標本を用いてこれら３種類の癌抗原を認識するモノクローナル抗体が求められていた。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者等は、尿素変性させたC10orf3, C20orf42, Lengsin、３種類のリコンビナント癌抗原蛋白質をそれぞれマウスに免疫することによって、３種類の変性癌抗原蛋白質とそれぞれ優先的に結合するマウスモノクローナル抗体を樹立できることを見出し、本発明を完成した。
即ち、本発明は、ヒトC10orf3抗原と特異的に結合し、受領番号ＦＥＲＭ ＡＰ−２１０３１を有するハイブリドーマにより産出される抗体と同一の抗原認識部位を有するモノクローナル抗体、ヒトC20orf42抗原と特異的に結合し、受領番号ＦＥＲＭ ＡＰ−２１０３２を有するハイブリドーマにより産出される抗体と同一の抗原認識部位を有するモノクローナル抗体、又はヒトLengsin抗原と特異的に結合し、受領番号ＦＥＲＭ ＡＰ−２１０３３を有するハイブリドーマにより産出される抗体と同一の抗原認識部位を有するモノクローナル抗体である。
また本発明は、これらのいずれかのモノクローナル抗体を主成分とするヒト癌抗原蛋白質を検出するための検査薬である。
【発明の効果】
【０００７】
本発明のモノクローナル抗体により、ホルマリン等で固定したパラフィン包埋切片における３種類の癌抗原蛋白質（C10orf3, C20orf42, Lengsin）の免疫組織染色が可能となった。これにより、日常臨床の場で手術摘出標本や生検標本として提出されるホルマリン等で固定した病理組織検体を用いた３種類の癌抗原蛋白質の検出を組織レベルで可能にするばかりでなく、過去に保存されたホルマリン固定パラフィン包埋標本に関しても、さかのぼって３種類の癌抗原を検索することが可能になった。
本抗体を用いたウエスタンブロッティング法や免疫組織染色法は、癌の質的診断や個性診断、又は癌抗原を標的とした免疫療法の適応決定診断法として有用である。
また、本発明のモノクローナル抗体は、癌細胞を選択的に標識したり傷害したりする抗体として機能するものと考えられるため、ヒトの癌の検査薬として機能するだけでなく、これらの癌の予防薬や治療薬の主成分として用いることができると考えられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
C10orf3抗原は、ヒトの第10染色体上に存在する遺伝子によってコードされる分子量55kDの蛋白質であり（非特許文献１）、胆道癌（胆管細胞癌、胆嚢癌）、乳癌、膵臓癌、食道癌、胃癌、大腸癌、肝臓癌、肺癌、喉頭癌、口腔癌、咽頭癌、甲状腺癌、子宮癌、卵巣癌、腎細胞癌、前立腺癌、膀胱癌、絨毛癌、精巣腫瘍、悪性リンパ腫、白血病細胞、悪性黒色腫、皮膚癌、脳腫瘍、肉腫などさまざまなヒトの癌組織に高レベルに発現するが、主に大腸癌、乳癌、肺癌組織に高レベルに発現する。
本発明のヒトC10orf3蛋白質と特異的に結合するマウスモノクローナル抗体は、クローン名EMRC10-11のハイブリドーマ及びそのサブクローンが培養上清中に産生する抗体で、サブクラスIgG1を有すマウスモノクローナル抗体（以下「EMRC10-11抗体」という。）である。このハイブリドーマ（EMRC10-11）は、平成１８年９月２１日に独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託され、受領番号ＦＥＲＭ ＡＰ−２１０３１が付与された。
【０００９】
C20orf42抗原は、ヒトの第20染色体上に存在する遺伝子によってコードされる分子量77kDの蛋白質であり（非特許文献２）、胆道癌（胆管細胞癌、胆嚢癌）、乳癌、膵臓癌、食道癌、胃癌、大腸癌、肝臓癌、肺癌、喉頭癌、口腔癌、咽頭癌、甲状腺癌、子宮癌、卵巣癌、腎細胞癌、前立腺癌、膀胱癌、絨毛癌、精巣腫瘍、悪性リンパ腫、白血病細胞、悪性黒色腫、皮膚癌、脳腫瘍、肉腫などさまざまなヒトの癌組織に高レベルに発現するが、主に大腸癌、乳癌、肺癌組織、膵臓癌に高レベルに発現する。
本発明のヒトC20orf42蛋白質と特異的に結合するマウスモノクローナル抗体は、クローン名EMRC20-2のハイブリドーマ及びそのサブクローンが培養上清中に産生する抗体で、サブクラスIgG1を有すマウスモノクローナル抗体（以下「EMRC20-2抗体」という。）である。このハイブリドーマ（EMRC20-2）は、平成１８年９月２１日に独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託され、受領番号ＦＥＲＭ ＡＰ−２１０３２が付与された。
【００１０】
Lengsin抗原は、ヒトの第10染色体上に存在する遺伝子によってコードされる分子量61kDの蛋白質であり（非特許文献３及び未公表データ）、胆道癌（胆管細胞癌、胆嚢癌）、乳癌、膵臓癌、食道癌、胃癌、大腸癌、肝臓癌、肺癌、喉頭癌、口腔癌、咽頭癌、甲状腺癌、子宮癌、卵巣癌、腎細胞癌、前立腺癌、膀胱癌、絨毛癌、精巣腫瘍、悪性リンパ腫、白血病細胞、悪性黒色腫、皮膚癌、脳腫瘍、肉腫などのヒトの癌組織に発現するが、主に肺癌組織に高レベルに発現する。
本発明のヒトLengsin蛋白質と特異的に結合するマウスモノクローナル抗体は、クローン名EMRL656のハイブリドーマ及びそのサブクローンが培養上清中に産生する抗体で、サブクラスIgG1を有すマウスモノクローナル抗体（以下「EMRL656抗体」という。）である。このハイブリドーマ（EMRL656）は、平成１８年９月２１日に独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託され、受領番号ＦＥＲＭ ＡＰ−２１０３３が付与された。
【００１１】
本発明の３種類のモノクローナル抗体は、上記のそれぞれのハイブリドーマとそのサブクローンの培養上清中に産生される。抗原の検出には培養上清を使用してもよい。また、ハイブリドーマをマウスの腹腔内に移植し、モノクローナル抗体を含む腹水を使用してもよい。更に、ハイブリドーマの免疫グロブリン遺伝子DNA又はRNAを抽出し、その可変領域遺伝子配列を含んだ遺伝子を組み替えて作成したリコンビナント蛋白質を使用してもよい。
【００１２】
本発明で対象とする癌はヒトの癌細胞である。本発明の抗体は、ヒトの上記癌細胞を検出することができるが、特に、EMRC10-11抗体は、乳癌、胃癌、大腸癌、肺癌、膵臓癌及び腎臓癌を、EMRC20-2抗体は、大腸癌、乳癌、肺癌組織及び膵臓癌を、EMRL656抗体は、肺癌を検出するために有効である。
【００１３】
本発明のモノクローナル抗体は、癌細胞に発現する上記抗原に特異的に反応するため、未変性のこれら癌細胞を検出することができるが、特に、変性した癌細胞に反応する点に特徴がある。そのため、変性して保存した癌組織を用いても癌細胞の検出ができるという顕著な効果を有する。
変性手段としては、ホルマリン処理、パラホルムアルデヒド処理、グルタールアルデヒド処理等のアルデヒド処理、アセトン処理、アルコール処理、尿素処理、グアニジン塩酸処理、蟻酸処理、加熱処理等が挙げられ、好ましくはアルデヒド処理、アセトン処理又はアルコール処理が挙げられる
後述の実施例において、本発明のモノクローナル抗体は、尿素処理（実施例１）、ホルマリン処理（実施例３）や加熱処理（実施例２）などの強度の変性を行った癌組織においても癌細胞を検出することができているため、これらの変性以外のより弱い変性（例えば、パラホルムアルデヒド処理、グルタールアルデヒド処理、アセトン処理、アルコール処理）やほぼ同等の変性（例えば、グアニジン塩酸処理、蟻酸処理）を行った組織に於ても機能するものと考えられる。
【００１４】
本発明の抗体を使用して、ホルマリン等で固定したパラフィン包埋切片の組織中に発現している変性した３種類の癌抗原蛋白質（C10orf3, C20orf42, Lengsin）を免疫組織染色法やウエスタンブロッティング法によって検出することができる。したがって、本発明の抗体は、臨床検査試薬、組織染色試薬として使用することができる。
例えば、ホルマリンやパラホルムアルデヒドなどの化学物質によって固定されたヒト癌組織や各種ヒト疾患の病理組織における抗原蛋白質の発現レベル解析や細胞内局在部位の検出に応用される。
【００１５】
本発明の抗体を抗原検出試薬として使用する場合、本発明の抗体はそれ自身で又は他の抗体と共に使用することができ、更に抗体を直接蛍光標識したり、酵素標識したりすることができる。
この抗原抗体反応を検知する方法に特に制限はないが、イムノブロット法、ドットブロット法、ELISA法等が挙げられ、ELISA法を用いることが好ましい。
検査方法の一例として，本発明の抗体を、検体中に存在するHLAと反応させ、更にこの抗体を認識するプローブを反応させる。このプローブとしては、抗ヒトIgG抗体、プロテインＧ、プロテインＡ、プロテインＬなどが挙げられる。このプローブには通常標識を付す。この標識としては、放射性同位元素（１２５Ｉ）、酵素（ペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ）、蛍光物質、発光物質等が挙げられる。酵素抗体を用いた場合には、基質を反応させてその変化（着色等）を観察すればよい。
以下、実施例にて本発明を例証するが本発明を限定することを意図するものではない。
【実施例１】
【００１６】
本実施例では、大腸菌発現ベクター（vector pQE-30, QIAGEN社）に３種類の癌抗原蛋白質（C10orf3, C20orf42, Lengsin）それぞれをコードするcDNA（C10orf3: 配列番号１、C20orf42: 配列番号２、Lengsin: 配列番号３）を挿入し、大腸菌にHistidineタグ融合リコンビナント蛋白質（C10orf3蛋白質、C20orf42蛋白質、Lengsin蛋白質）を産生させた。
大腸菌を超音波によって破砕し、尿素HEPESバッファーに溶解させた。ニッケルNTAアガロースカラムにHisタグ融合リコンビナント蛋白質を結合させた後、イミダゾール添加尿素HEPESバッファーで溶出させた。この溶液をPBSで一晩透析し、変性凝集したリコンビナント蛋白質浮遊液を得た。
【００１７】
この蛋白浮遊液（約1 mg相当のリコンビナント蛋白質）と完全フロイドアジュバントとをエマルジョンにし、BALB/c miceの皮下に免疫した。２回目以後は不完全フロイドアジュバントとのエマルジョンを１週間おきに全８回免疫した。最終免疫の５日後、マウスの脾臓を摘出し、脾細胞をマウスミエローマ細胞株NS-1と細胞融合させた。HAT選択培養液の中で約１ヶ月培養し、ハイブリドーマコロニーを得た。これらの培養上清を回収し、１次スクリーニングを行った。
１次スクリーニングはELISA法によって、尿素変性リコンビナント蛋白質に反応するハイブリドーマを選択した。具体的には、ELISAプレートに尿素変性リコンビナント蛋白質を固相化し、ハイブリドーマ培養上清を添加。２時間後、洗浄した後に、ペルオキシダーゼ標識抗マウス免疫グロブリン抗体を反応させ、洗浄した後にペルオキシダーゼ基質液で発色させた。得られた陽性ハイブリドーマについて２次スクリーニングを行った。
【００１８】
２次スクリーニングはウエスタンブロッティングによって行った。ヒト細胞株293T細胞と、３種類の癌抗原蛋白質（C10orf3, C20orf42, Lengsin）それぞれをコードする遺伝子（配列番号１〜３）を導入した細胞株(293T-C10, 293T-C20, 293T-Len)の細胞溶解液を作成した。SDS電気泳動後、PVDF膜に転写した。この蛋白転写膜にハイブリドーマ培養上清を添加した。洗浄後、ペルオキシダーゼ標識抗マウス免疫グロブリン抗体を反応させ、洗浄した後にペルオキシダーゼ基質液で発色させた。陽性対照として免疫原であるリコンビナント蛋白質を泳動した。リコンビナント蛋白質及び抗原遺伝子導入293T細胞溶解液に抗原蛋白質の特異的なバンドが検出されたものを陽性と判定した。
【００１９】
３次スクリーニングはホルマリン固定パラフィン包埋切片のヒト病理組織の免疫組織染色によって行った。ヒト癌組織薄切標本にハイブリドーマ培養上清をそれぞれ添加。洗浄後、ペルオキシダーゼ標識抗マウス免疫グロブリン抗体を反応させ、洗浄した後にペルオキシダーゼ基質液で発色させた。癌細胞が染色されたものを陽性とした。
以上３段階のスクリーニングによって、３種類のハイブリドーマ(EMRC10-11, EMRC20-2, EMRL656)が陽性と判断され、選択した。
【００２０】
このハイブリドーマを限界希釈法によってクローニングし、サブクローンを得た。これらサブクローンの培養上清については、上記の２次スクリーニングと３次スクリーニングを再検し、変性した３種類の癌抗原蛋白質をそれぞれ特異的に認識することを確認した。
本発明の３種類のマウスモノクローナル抗体は、いずれもサブクラスIgG1のモノクローナル抗体であった。
【実施例２】
【００２１】
本実施例では、本発明の抗体を用いてウエスタンブロッティングを行った。その手順を以下に示す。
（１）1×106の細胞を100 microLの細胞溶解液（RIPA buffer）に溶解し、可溶性分画をライゼートとして回収する。ライゼートにSDS sample bufferを加え、100℃５分間加熱処理した。
（２）リコンビナント蛋白質の場合は、実施例１で免疫原として用いたUrea buffer溶解リコンビナント蛋白質（C10orf3蛋白質、C20orf42蛋白質、Lengsin蛋白質）を用いた。試料にSDS sample bufferを加え、100℃で５分間加熱処理した。
（３）蛋白試料を7.5% SDSポリアクリルアミドゲルにロードし、電気泳動した。
（４）ゲル中の蛋白質をPVDF膜に転写した。
（５）転写膜を5%スキムミルク・PBSに浸し、約１時間ブロッキングした。
（６）転写膜を一次抗体ハイブリドーマ培養上清に浸し、室温で１時間インキュベーションした。
（７）転写膜を洗浄液PBS-T (0.05% Tween 20/PBS、pH 7.4)で３回洗浄した。
（８）転写膜を二次抗体ペルオキシダーゼ標識抗マウスIgG抗体に浸し、室温で１時間インキュベーションした。
（９）転写膜を洗浄液PBS-T (0.05% Tween 20/PBS、pH 7.4)で３回洗浄した。
（１０）転写膜を過酸化水素水添加DAB発色試薬に浸し、約１分間発色反応させた。
【００２２】
図１に、ウエスタンブロッティング法による３種類の各モノクローナル抗体とそれぞれに特異的なリコンビナント蛋白質（免疫原）、及び遺伝子導入細胞株溶解液との反応性検査結果を示す。
EMRC10-11抗体（パネルA）, EMRC20-2抗体（パネルB）、EMRL656抗体（パネルC）のいずれも、遺伝子導入293T細胞株(293T-C10, 293T-C20, 293T-Len)の細胞溶解液及びリコンビナント蛋白質（C10orf3蛋白質、C20orf42蛋白質、Lengsin蛋白質）とに反応しているが、遺伝子を導入していない293T細胞溶解液とは反応していない。すなわち、これら３種類のモノクローナル抗体は、ヒト細胞内で発現している３種類の癌抗原蛋白質をそれぞれウエスタンブロッティングにおいて認識することを示している。
【実施例３】
【００２３】
本実施例では、実施例１で得た３種類のモノクローナル抗体を用いてホルマリン固定ヒト組織の免疫組織染色を行った。その手順を以下に示す。
（１）20%ホルマリン固定液で固定されたヒト癌組織（ヒト乳癌組織、ヒト大腸癌組織、ヒト肺癌組織）のパラフィン包埋切片（いずれの組織も札幌医大病院病理部より入手）をエチルアルコールによって脱パラフィン処理した。
（２）抗原賦活化処理として、切片を0.01 mol/Lクエン酸buffer (pH6.0)に浸して、オートクレーブ処理（110℃、5分）した。
（３）一次抗体としてハイブリドーマ培養上清を0.5 ml切片上に滴下し、室温で１時間インキュベーションした。
（４）洗浄液PBS-T (0.05% Tween 20/PBS、pH 7.4)で３回洗浄した。
（５）二次抗体ペルオキシダーゼ標識抗マウスIgG抗体（シンプルステインMAX-PO、NICHIREI）を切片上に滴下し、室温で30分間インキュベーションした。
（６）洗浄液PBS-T (0.05% Tween 20/PBS、pH 7.4)で３回洗浄した。
（７）切片を過酸化水素水とDAB基質の混合液（シンプルステインMAX-PO、NICHIREI）に浸し、１〜２分間発色反応させた。
（８）切片を流水で１分間洗浄した。
（９）Hematoxylin核染色(1〜2分)を行った。
【００２４】
図２に、ホルマリン固定された各種ヒト癌組織標本パラフィン包埋切片の免疫染色例を示す。パネルAは、EMRC10-11抗体によって乳癌組織に発現しているC10orf3抗原蛋白質が茶色に染色されていることを示している。パネルBは、EMRC20-2抗体によって大腸癌組織に発現しているC20orf42抗原蛋白質が茶色に染色されていることを示している。パネルCは、EMRL656抗体によって肺癌組織に発現しているLengsin抗原蛋白質が茶色に染色されていることを示している。すなわち、本発明の３種類のモノクローナル抗体を用いた免疫組織染色法によって、ホルマリン固定された通常の病理組織標本においてヒト癌組織に発現する３種類の抗原蛋白質をそれぞれ特異的に検出できることを示している。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】ウエスタンブロッティング法によるEMRC10-11抗体、EMRC20-2抗体、EMRL656抗体のそれぞれと、３種類の癌抗原遺伝子導入293T細胞（293T-C10, 293T-C20, 293T-Len）細胞溶解液及び遺伝子非導入293T細胞溶解液、及びリコンビナント蛋白質（C10orf3, C20orf42, Lengsin）との反応性検査結果を示す図である。（A）はEMRC10-11抗体がC10orf3遺伝子導入293T細胞に発現する抗原蛋白質（右矢印）及び免疫原として使用したリコンビナントC10orf3蛋白質（左矢印）と反応していることを示す。（B）はEMRC20-2抗体がC20orf42遺伝子導入293T細胞に発現する抗原蛋白質（右矢印）及び免疫原として使用したリコンビナントC20orf42蛋白質（左矢印）と反応していることを示す。（C）はEMRL656抗体がLengsin遺伝子導入293T細胞に発現する抗原蛋白質（右矢印）及び免疫原として使用したリコンビナントLengsin蛋白質（左矢印）と反応していることを示す。
【図２】ホルマリン固定された各種ヒト癌組織標本パラフィン包埋切片の免疫染色例を示す図である。（A）は乳癌組織におけるC10orf3抗原蛋白質陽性例、（B）は大腸癌組織におけるC20orf42抗原蛋白質陽性例（上方３分の１は抗原蛋白質陰性の正常大腸組織）、（C）は肺癌組織におけるLengsin抗原蛋白質陽性例である。
【図１】
2008081414.tif 000002
【図２】
2008081414.tif 000003
【配列表】
2008081414000001.app