(57)【要約】【課題】塩素数１〜２のＰＣＢ同族体に高い親和性を有し、かつ極性溶媒存在下においてＰＣＢとの結合性が低下することなく、１塩化ビフェニル及び２塩化ビフェニルを多く含むＰＣＢを高感度で定量することができる抗ＰＣＢモノクローナル抗体、及び該抗ＰＣＢモノクローナル抗体を用いたＰＣＢ測定方法を提供する。【解決手段】  塩素数１〜４のＰＣＢ同族体に対する平衡解離定数Ｋ１と、塩素数５〜７のＰＣＢ同族体に対する平衡解離定数Ｋ２との関係が、次式、Ｋ１＜Ｋ２、を満たす抗ＰＣＢモノクローナル抗体、及び該抗ＰＣＢモノクローナル抗体を用いたＰＣＢ測定方法である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
塩素数１〜４のＰＣＢ同族体に対する平衡解離定数Ｋ１と、塩素数５〜７のＰＣＢ同族体に対する平衡解離定数Ｋ２との関係が、次式、Ｋ１＜Ｋ２、を満たすことを特徴とする抗ＰＣＢモノクローナル抗体。
【請求項２】
平衡解離定数Ｋ２が、４．０ｐｐｂ以上である請求項１に記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体。
【請求項３】
平衡解離定数Ｋ１が、３．０ｐｐｂ以下である請求項１から２のいずれかに記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体。
【請求項４】
塩素数１〜２のＰＣＢ同族体に対する平衡解離定数Ｋ３が、２．０〜３．０ｐｐｂである請求項１から３のいずれかに記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体。
【請求項５】
下記一般式（Ｉ）で表されるビフェニル誘導体から得られた下記一般式（II）で表される化合物を免疫原として動物を免疫し、免疫した前記動物の抗体産生細胞を回収し、該抗体産生細胞とミエローマ細胞とを融合して得たハイブリドーマを培養することにより得られる請求項１から４のいずれかに記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体。
【化１】
2008231009.tif 000016
ただし、前記一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）中、ｎは１の整数を表し、Ｘ及びＹはそれぞれ０〜３の整数を表し、ＸとＹとの和は１〜６の整数を表す。
【化２】
2008231009.tif 000017
ただし、前記一般式（ＩＩ）中、ｎは１の整数を表し、Ｘ及びＹはそれぞれ０〜３の整数を表し、ＸとＹとの和は１〜６であり、Ｚはタンパク質を表す。
【請求項６】
前記一般式（Ｉ）及び前記一般式（II）のいずれかで表される化合物を用いて、スクリーニングしたハイブリドーマ細胞株を培養して得られる請求項５に記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体。
【請求項７】
請求項１から６のいずれかに記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体を産生することを特徴とするハイブリドーマ。
【請求項８】
受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２１１４８のハイブリドーマである請求項７に記載のハイブリドーマ。
【請求項９】
被測定試料に、請求項１から６のいずれかに記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体を添加し、
（１）前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体と結合した前記被測定試料中のＰＣＢ、及び
（２）前記被測定試料中のＰＣＢと結合していない前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体
のいずれかを検出することを含むことを特徴とするＰＣＢ測定方法。
【請求項１０】
被測定試料に、請求項１から６のいずれかに記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体、並びに、前記一般式（Ｉ）及び前記一般式（II）のいずれかで表される化合物をＰＣＢ競合物質として添加し、前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体と結合した前記競合物質を検出することを含むことを特徴とするＰＣＢ測定方法。
【請求項１１】
被測定試料に、請求項１から６のいずれかに記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体を添加し、前記一般式（II）で表される化合物をＰＣＢ競合物質として固定化した担体を用い、前記ＰＣＢ競合物質と前記被測定試料中のＰＣＢとを競争させ、前記被測定試料中のＰＣＢと結合していない前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体を検出することを含むことを特徴とするＰＣＢ測定方法。
【請求項１２】
塩素数１〜２のＰＣＢ同族体を定量する請求項９から１１のいずれかに記載のＰＣＢ測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＰＣＢ廃棄物のＰＣＢ分解処理工程のモニタリングに用いられる抗ＰＣＢモノクローナル抗体、前記抗体を産生するハイブリドーマ及び前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体を用いたＰＣＢ測定方法に関し、特に、塩素数の異なる二種以上のＰＣＢ同族体に対して交差反応性を有し、かつ塩素数１〜２のＰＣＢ同族体に高い親和性を有する抗ＰＣＢモノクローナル抗体、前記抗体を産生するハイブリドーマ、及び前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体を用いたＰＣＢ測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
化学物質による環境汚染問題は、健康問題や社会生活に大きな不安を与えると共に産業活動等にも影響を与えるため、早急に解決すべき重大な課題である。特に、人体や環境への有害性が確認されたＰＣＢｓ（ポリ塩化ビフェニル類、以下、単に「ＰＣＢ」と表すことがある）は過去、コンデンサやトランスの絶縁油、熱媒体、機械油等に多用されるなど地球規模で環境汚染が拡大しており、難分解性であることからその残留性や生物濃縮が問題となっている。
ＰＣＢｓについては、１９７４年に「化学物質の審査及び製造に関する法律」により製造、輸入、及び新たな使用について原則的に禁止措置が取られ、更に、２００１年に「ポリ塩化ビフェニル廃棄物の適正な処理の推進に関する特別措置法(ＰＣＢ特措法)」が施行され、２０１６年までに全てのＰＣＢ廃棄物の適性処理が法的に義務づけられた。これにより、ＰＣＢｓ廃棄物の処理過程でのモニタリングや、処理後のＰＣＢ濃度の測定が重要な課題となっている。
また、ＰＣＢｓを含まないとされていたトランス中の代替絶縁油においても、残留していた微量ＰＣＢｓの混入が明らかになった事より、大量の代替絶縁油やトランス本体のＰＣＢｓ濃度の迅速な分析も急務となっている。
【０００３】
従来のＰＣＢの測定としては、例えば、公定法として、高分解能ガスクロマトグラフィー／マススペクトロメトリー（ＨＲＧＣ／ＨＲＭＳ）や、電子捕獲検出器付きガスクロマトグラフ法（ＧＣ−ＥＣＤ）が用いられて来た。しかしながら、これらの方法は設備投資や分析消耗品等にコストが嵩み、また、煩雑なクリーンアップ操作や分析者の技術習熟等の必要性から、データ取得や解析に多大な時間を要する等の問題があり、分析業務が特定の分析機関に限定される等、大量の試料を処理する方法としては限界があった。
これに対し、特異的抗体を利用する免疫学測定法は、迅速かつ簡便な測定方法として知られ、近年、環境分析の分野にも応用されつつある。
【０００４】
ＰＣＢ類似物質であるダイオキシン類の迅速分析法としても、レセプターバインディングアッセイや免疫測定法が注目されており、特に、免疫測定法では抗体が単一の測定対象物に対し特異的に結合するという性質を利用し、ダイオキシン類の毒性等量と相関を有する特定の同族体量を測定する事により、多数の同族体が存在するダイオキシン類の毒性等量総和（ダイオキシン量）を迅速、簡便に求める方法が開発されている。
【０００５】
さらに、ＰＣＢは水に難溶性であり、分析するための試料を調製するにあたり、両親媒性溶媒存在下にＰＣＢを溶解させる必要があるため、前記免疫学的測定法に用いられる抗ＰＣＢ抗体としては、試料中に存在する両親媒性溶媒に対する耐性が求められる。これに対し、前記免疫学的測定法に用いられる抗ＰＣＢ抗体としては、例えば、５０（ｖ／ｖ）％有機溶媒水溶液中でも抗原認識特性が実質的に低下しない抗モノクローナル抗体（特許文献１参照）等が提案されている。
【０００６】
このように、抗体を用いる免疫学的測定法では、交差反応性が低く、測定対象物に対し高特異性という抗体本来の性質を利用し、特定の物質を測定する事に重点が置かれて来た。
このような考えに基づき、多数の異性体が存在するＰＣＢにおいては、交差反応性が制御された特異性の高い抗ＰＣＢ抗体が求められており、例えば、コプラナーＰＣＢの一つである3,3’,5,5’-四塩化ビフェニル（ＰＣＢ８０）に対して特異性を持つ抗体（特許文献２参照）等が提案されている。
【０００７】
一方、ＰＣＢ分析では、ダイオキシン類分析における「毒性等量」という考え方が無いため、免疫測定法においても、多数のＰＣＢ同族体について可能な限り広く検出し、測定できる事が重要である。しかしながら、特異性の高い単一の抗体を利用した測定系においては、同族体を網羅することが難しく、公定法による分析値との乖離、フォールスネガティブ（偽陰性の判定や見落とし）の危険性、さらに再現性の低さ等が懸念される。
【０００８】
そこで、二種類の特異性の異なる抗体、あるいは測定系を混合し、その結果得られる抗体の特異性を利用して絶縁油中のＰＣＢ濃度を分析する方法が提案されている（非特許文献１参照）。また、ダイオキシン類、ＰＣＢ類を検出する低分子物質検出用器具において、毒性を推定する場合と総量を推定する場合に応じて標的物質の異性体を選択し、該標的物質の抗体を用いることが開示されている（特許文献３参照）。
他方、異性体間において交差反応性が認められる複数種類の抗体を用いて、ダイオキシン類を異性体レベルで検出する方法が提案されている（特許文献４参照）。
【０００９】
しかしながら、特許文献３及び４に記載された抗ＰＣＢ抗体を用いた免疫学的測定方法における測定対象は、コプラナーＰＣＢであり、そこで用いられる抗体は、異なる塩素数群の同族体混合物（例えば、鐘淵化学工業製のカネクロール、及び三菱モンサント（現三菱化学）製のアロクロールなどに由来するＰＣＢ）を、高感度に定量するための抗体としては満足なものではない。
【００１０】
よって、ビフェニル骨格に塩素が付加されたＰＣＢの塩素を除去し、無害なビフェニルに分解するＰＣＢｓ廃棄物の処理過程でのモニタリングや、処理後のＰＣＢ濃度の測定に用いることができる、塩素数の異なる複数のＰＣＢ同族体を高感度に定量できる抗体が求められている。特に、ＰＣＢ分解処理工程では、ＰＣＢから一つ一つ塩素が除去され、塩素数１〜２のＰＣＢ同族体を経て、最終的にビフェニルに分解されるため、塩素数１〜２のＰＣＢ同族体を高感度に定量する抗体が求められている。しかし、塩素数１〜２のＰＣＢ同族体に高い親和性を有し、かつ極性溶媒存在下においてＰＣＢとの結合性が低下することなく、１塩化ビフェニル及び２塩化ビフェニルを多く含むＰＣＢ（例えば、三菱モンサント（現三菱化学）製のアロクロール１２２１（Ａｒ１２２１）などに由来するＰＣＢ）を高感度に定量できる抗ＰＣＢモノクローナル抗体は、未だ満足なものが提供されておらず、改良が求められているのが現状である。
【００１１】
【特許文献１】特開２０００−１９１６９９号公報
【特許文献２】特開２００５−２４７８２２号公報
【特許文献３】特開２００４−１３８５５０号公報
【特許文献４】特開２００２−２２８６６０号公報
【非特許文献１】25th  International  Symposium  on  Halogenated  Environmental  Organic  Pollutant  and  POPs,2005,ID2387
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は従来における前記問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、塩素数の異なる複数のＰＣＢ同族体の混合物、具体的には、油試料に含まれるカネクロール（ＫＣ３００、ＫＣ４００、ＫＣ５００、ＫＣ６００：鐘淵化学工業社製）、及びアロクロール（Ａｒ１２２１：三菱モンサント（現三菱化学）製）中に存在比の高い複数のＰＣＢ同族体に交差反応性を有し、しかも塩素数１〜２のＰＣＢ同族体に高い親和性を有する抗ＰＣＢモノクローナル抗体、前記抗体を産生するハイブリドーマ、及び前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体を用いたＰＣＢ測定方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  塩素数１〜４のＰＣＢ同族体に対する平衡解離定数Ｋ１と、塩素数５〜７のＰＣＢ同族体に対する平衡解離定数Ｋ２との関係が、次式、Ｋ１＜Ｋ２、を満たすことを特徴とする抗ＰＣＢモノクローナル抗体である。
＜２＞  平衡解離定数Ｋ２が、４．０ｐｐｂ以上である前記＜１＞に記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体である。
＜３＞  平衡解離定数Ｋ１が、３．０ｐｐｂ以下である前記＜２＞に記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体である。
＜４＞  塩素数１〜２のＰＣＢ同族体に対する平衡解離定数Ｋ３が、２．０〜３．０ｐｐｂである前記＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体である。
＜５＞  下記一般式（Ｉ）で表されるビフェニル誘導体から得られた下記一般式（II）で表される化合物を免疫原として動物を免疫し、免疫した前記動物の抗体産生細胞を回収し、該抗体産生細胞とミエローマ細胞とを融合して得たハイブリドーマを培養して得られる前記＜１＞から＜４＞のいずれかに記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体である。
【化３】
2008231009.tif 000002
ただし、前記一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）中、ｎは１の整数を表し、Ｘ及びＹはそれぞれ０〜３の整数を表し、ＸとＹとの和は１〜６の整数を表す。
【化４】
2008231009.tif 000003
ただし、前記一般式（ＩＩ）中、ｎは１の整数を表し、Ｘ及びＹはそれぞれ０〜３の整数を表し、ＸとＹとの和は１〜６であり、Ｚはタンパク質を表す。
＜６＞  前記一般式（Ｉ）及び前記一般式（II）のいずれかで表される化合物を用いて、スクリーニングしたハイブリドーマ細胞株を培養して得られる前記＜５＞に記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体である。
＜７＞  前記＜１＞から＜６＞のいずれかに記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体を産生することを特徴とするハイブリドーマである。
＜８＞  受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２１１４８のハイブリドーマである前記＜７＞に記載のハイブリドーマである。
＜９＞  被測定試料に、前記＜１＞から＜６＞のいずれかに記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体を添加し、
（１）前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体と結合した前記被測定試料中のＰＣＢ、及び
（２）前記被測定試料中のＰＣＢと結合していない前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体
のいずれかを検出することを含むことを特徴とするＰＣＢ測定方法である。
＜１０＞  被測定試料に、前記＜１＞から＜６＞のいずれかに記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体、並びに、前記一般式（Ｉ）及び前記一般式（II）のいずれかで表される化合物をＰＣＢ競合物質として添加し、前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体と結合した前記競合物質を検出することを含むことを特徴とするＰＣＢ測定方法である。
＜１１＞  被測定試料に、前記＜１＞から＜６＞のいずれかに記載の抗ＰＣＢモノクローナル抗体を添加し、前記一般式（II）で表される化合物をＰＣＢ競合物質として固定化した担体を用い、前記ＰＣＢ競合物質と前記被測定試料中のＰＣＢとを競争させ、前記被測定試料中のＰＣＢと結合していない前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体を検出することを含むことを特徴とするＰＣＢ測定方法である。
＜１２＞  塩素数１〜２のＰＣＢ同族体を定量する前記＜９＞から＜１１＞のいずれかに記載のＰＣＢ測定方法である。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によると、塩素数の異なる複数のＰＣＢ同族体の混合物、具体的には、油試料に含まれるカネクロール（ＫＣ３００、ＫＣ４００、ＫＣ５００、ＫＣ６００：鐘淵化学工業社製）、及びアロクロール（Ａｒ１２２１：三菱モンサント（現三菱化学）製）中に存在比の高い複数のＰＣＢ同族体に交差反応性を有し、しかも塩素数１〜２のＰＣＢ同族体に高い親和性を有する抗ＰＣＢモノクローナル抗体、前記抗体を産生するハイブリドーマ、及び前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体を用いたＰＣＢ測定方法を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
（抗ＰＣＢモノクローナル抗体）
＜抗ＰＣＢモノクローナル抗体の製造方法＞
本発明の抗ＰＣＢモノクローナル抗体は、下記一般式（Ｉ）で表されるビフェニル誘導体の異性体混合物（下記一般式（Ｉ）で表される化合物）からなるハプテンを用い、該ビフェニル誘導体から得られた下記一般式（II）で表される化合物を免疫原として動物を免疫し、免疫した前記動物の抗体産生細胞を回収し、該抗体産生細胞とミエローマ細胞とを融合して得たハイブリドーマを培養することにより得られる。
【００１６】
【化５】
2008231009.tif 000004
ただし、前記一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）中、ｎは１の整数を表し、Ｘ及びＹはそれぞれ０〜３の整数を表し、ＸとＹとの和は１〜６の整数を表す。
【００１７】
【化６】
2008231009.tif 000005
ただし、前記一般式（ＩＩ）中、ｎは１の整数を表し、Ｘ及びＹはそれぞれ０〜３の整数を表し、ＸとＹとの和は１〜６であり、Ｚはタンパク質を表す。
【００１８】
前記一般式（Ｉ）で表されるビフェニル誘導体は、例えば、以下の反応式に従い製造することができる。
【００１９】
【化７】
2008231009.tif 000006
ただし、前記反応式中、Ｒは、直鎖状、分岐鎖状で炭素原子数１〜４の低級アルキル基を表し、ただし、前記一般式（Ｉ）中、ｎは１の整数を表し、Ｘ及びＹはそれぞれ０〜３の整数を表し、ＸとＹとの和は１〜６、好ましくは４〜６である。
【００２０】
前記一般式（Ｉ）で表される化合物は、単独では抗原性を持たないため、抗ＰＣＢモノクローナル抗体を作製するために、下記一般式（II）で表される化合物（下記一般式（II）で表されるビフェニル誘導体の異性体混合物）（以下、「コンジュゲート」ということがある）を調製し、これを免疫原（抗原）として用い、前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体を作製することが好ましい。
【００２１】
前記一般式（II）中、Ｚで表されるタンパク質（「キャリアータンパク質」ということがある）としては、免疫原性を有し、かつ前記一般式（Ｉ）で表される化合物とスペーサー部（−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＨ−）を介して連結可能である限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、スカシガイ由来ヘモシアニン（ＫＬＨ）、卵白アルブミン（ＯＶＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒト血清アルブミン、ウサギ血清アルブミン、ヤギ血清アルブミン、ウシガンマグロブリン、ミオグロビン、Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｐｅｐｔｉｄｅ（ＭＡＰ）等が挙げられる。これらの中でも、スカシガイ由来ヘモシアニン（ＫＬＨ）が好ましい。
【００２２】
前記一般式（II）で表される化合物（コンジュゲート）の調製方法としては、特に制限はなく、公知の合成方法により調製することができ、例えば、下記反応式に示すように、前記一般式（Ｉ）で表されるビフェニル誘導体のカルボキシル基を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドなどの縮合反応により活性エステル誘導体に変換し、次いで、該活性エステル誘導体とキャリアータンパク質のアミノ基とを常法に従って結合させる方法などが挙げられる。
【００２３】
【化８】
2008231009.tif 000007
【００２４】
得られた前記一般式（II）で表される化合物（コンジュゲート）は、ゲルクロマトグラフィー等の公知の方法により反応液を生理的リン酸緩衝液などの中性溶液に置換すると共に精製することが好ましい。
【００２５】
前記一般式（II）中、Ｚで表されるタンパク質は、標識物質により標識されていてもよい。前記標識物質としては、例えば、酵素、蛍光色素、放射性同位元素、磁性体、色素封入ポリマー、希土類、補酵素、金コロイド、及び金原子クラスター等の公知の標識物質から適宜選択することができる。
【００２６】
前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体は、例えば、前記一般式（II）で表される化合物を免疫原とし、該免疫原とアジュバントとを乳化させて得た乳化液を用いて動物を免疫し、免疫した前記動物の脾臓細胞を回収し、該脾臓細胞とミエローマ細胞とを融合して得たハイブリドーマを培養することにより製造される。
モノクローナル抗体の製造方法としては、例えば、ケーラーとミルシュタインの方法（Kohler  G,  Milstein  C,  Nature,  256,495-7(1975)）等に準じて行うことが出来る。
【００２７】
免疫する前記動物としては、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ等の哺乳動物が好ましい。
前記動物の免疫方法としては、特に制限はなく、公知の方法から適宜選択することができ、例えば、前記免疫原とアジュバントとを乳化させて得た乳化液を、皮下、静脈内、腹腔内に、注射等により投与する方法などが挙げられる。
前記免疫原は、例えば、マウスの場合、０．０１〜０．５ｇ／匹を、２〜３週間程度の間隔で３〜１５回投与することが好ましい。
前記アジュバントとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、フロイントの完全アジュバント、不完全アジュバント、ＢＣＧ、トレハロースダイマイコレート（ＴＤＭ）、リポ多糖（ＬＰＳ）、ミョウバンアジュバント、シリカアジュバント等が挙げられ、抗体の誘導能、動物への負荷等の関係から、最適なものを選択して使用することが好ましい。
【００２８】
前記免疫原の最後の投与から数日後に、免疫した前記動物から抗体産生細胞を回収する。前記抗体産生細胞としては、例えば、脾臓、リンパ節由来Ｂ細胞等が挙げられる。
前記抗体産生細胞をミエローマ細胞と融合し、その後所望の抗体を産生する融合細胞をスクリーニングすることにより、前記ハイブリドーマが得られる。
【００２９】
前記ミエローマ細胞は、特に限定されず、公知のものを使用できる。例えば、マウス、ラット、ヒト由来の細胞株等から選択することができ、マウス由来細胞であれば、Ｐ３−Ｘ６３／Ａｇ８、Ｘ６３−Ａｇ８．６５３、ＮＳ１／１．Ａｇ  ４  １、Ｓｐ２１０−Ａｇ１４、ＦＯ、ＮＳＯ／Ｕ、ＭＰＣ−１１、ＭＰＣ１１−Ｘ４５−ＧＴＧ  １．７、Ｓ１９４／５ＸＸＯ・Ｂｕｌ等、ラット由来細胞であれば、Ｒ２１０．ＲＣＹ３、Ｙ３−Ａｇ・１．２．３、ＩＲ９８３Ｆ、４Ｂ２１０等が挙げられる。
前記抗体産生細胞とミエローマ細胞との融合方法としては、センダイウイルス法、ポリエチレングリコール法、プロトプラスト法等、当業者に公知の方法で行えばよく、特に限定されないが、ポリエチレングリコール法で融合させる方法が、細胞毒性も比較的少なく、融合操作も簡単であるという理由から好ましい。
【００３０】
前記所望の抗体を産生する融合細胞をスクリーニングする方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、エンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ、ＥＬＩＳＡ）、フルオロイムノアッセイ（ＦＩＡ）などが挙げられる。
例えば、前記一般式（II）で表されるコンジュゲートを固相化し、前記融合細胞（ハイブリドーマ）の培養上清を反応させる事により、該培養上清の抗体価を測定し、抗体価が高いウエルを抗ＰＣＢ抗体産生ウエルとして選択することができる。さらに、抗体価測定時にＰＣＢ代替化合物（例えば、前記一般式（Ｉ）で表されるビフェニル誘導体）やＰＣＢｓ等を共存させる事より、これら共存物質に対し反応性の高いウエルを選択し、限界希釈法にて目的の抗ＰＣＢ抗体産生ハイブリドーマのモノクローン化を行うことができる。
また、前記一般式（II）で表されるコンジュゲート中、Ｚで表されるタンパク質を標識物質により標識し、これを抗ＰＣＢ抗体産生ウエルの抗体価の測定時に共存させ、直接競合反応を行う方法によって抗ＰＣＢ抗体産生ハイブリドーマをスクリーニングすることもできる。
【００３１】
前記抗ＰＣＢ抗体の測定対象であるＰＣＢは水に難溶であるため、両親媒性溶媒に溶解させて測定に供せられる。このため、前記抗ＰＣＢ抗体は、試料中に存在する前記両親媒性溶媒に対する耐性を有することが好ましい。よって、前記抗ＰＣＢ抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングも前記両親媒性溶媒存在下で行うことが好ましい。
前記両親媒性溶液としては、ＤＭＳＯ、メタノール、エタノール等が挙げられる。
前記スクリーニングに用いられる前記両親媒性溶液の濃度としては、５０質量％以下が好ましく、３０質量％以下がより好ましく、５〜２０質量％が特に好ましい。
【００３２】
前記抗ＰＣＢ抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングに用いられるセンサとしては、ＳＰＲ（表面プラズモン）センサ、ＱＣＭ（水晶振動子）センサ、光学的センサ、電気化学的センサ等のトランスデューサーのセンサ官能部へ、前記一般式（Ｉ）で表されるビフェニル誘導体、又は前記一般式（II）で表されるビフェニル誘導体とキャリアータンパク質とのコンジュゲートを固定化したものなどが挙げられる。
また、予め前記融合細胞の培養上清にＰＣＢ等を添加して反応させたものを、前記センサ官能部に接触させてスクリーニングを行うこともできる。この場合、前記官能部に結合した抗体量を評価することにより、種々のトランスデューサーでのＰＣＢ測定への適用が可能な、高親和性を有する抗ＰＣＢ抗体産生ハイブリドーマを選抜することができる。
【００３３】
前記抗ＰＣＢ抗体産生ハイブリドーマとしては、ＰＣＢを認識する本発明の抗ＰＣＢモノクローナル抗体を産生する限り、特に限定されないが、上記の方法により作製され、樹立されたものが好ましく、具体的には、後述する実施例に示すような、ＥＳ２Ｇ６株が挙げられる。
前記ＥＳ２Ｇ６株は、下記一般式（II）に示す化合物を用いて作製されたハイブリドーマであり、独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに平成１８年１２月２８日付で、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２１１４８として寄託されている。
【００３４】
【化９】
2008231009.tif 000008
ただし、前記一般式（ＩＩ）中、ｎは１の整数を表し、Ｘ及びＹはそれぞれ０〜３の整数を表し、ＸとＹとの和は１〜６であり、Ｚはタンパク質を表す。
【００３５】
―  抗ＰＣＢモノクローナル抗体の産生及び精製  ―
前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体は、例えば、前記抗ＰＣＢ抗体産生ハイブリドーマ細胞株を、予めプリスタン（２，６，１０，１４−テトラメチルペンタデカン）を投与したマウスの腹腔内に移植して培養し、１０〜１４日後に抗ＰＣＢモノクローナル抗体を含む腹水を回収し、得られた腹水から得ることができる。
また、前記ハイブリドーマを、培地（例えば、１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ等）を用いて培養し、得られた培養液の上清を、抗ＰＣＢモノクローナル抗体溶液とすることができる。
前記腹水、又はウシ胎児血清含培地より得た前記抗ＰＣＢ抗体産生ハイブリドーマ細胞株培養液上清から、前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体を精製する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて公知の方法から適宜選択することができ、例えば、限外ろ過、塩析、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー等により精製することができる。
【００３６】
＜抗ＰＣＢモノクローナル抗体の評価＞
本発明の抗ＰＣＢモノクローナル抗体は、前記本発明の抗ＰＣＢモノクローナル抗体の製造方法により製造され、塩素数の異なる二種以上のＰＣＢ同族体に交差反応性を有する。また、前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体は、１〜１０塩素化ＰＣＢ全同族体のうち、塩素数１〜２のＰＣＢ同族体に高い親和性を有することが好ましい。
【００３７】
具体的には、前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体は、塩素数１〜４のＰＣＢ同族体に対する平衡解離定数Ｋ１と、塩素数５〜７の同族体に対する平衡解離定数Ｋ２との関係が、Ｋ１＜Ｋ２を満たす。また、前記平衡解離定数Ｋ２が、４．０ｐｐｂ以上であり、前記平衡解離定数Ｋ１が、３．０ｐｐｂ以下、好ましくは０．５〜３．０ｐｐｂである。
また、特に、塩素数１〜２のＰＣＢ同族体における平衡解離定数Ｋ３が、２．０〜３．０ｐｐｂである。
【００３８】
さらに、前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体は、ビフェニルに対する親和性が非常に低いことが好ましく、ビフェニルに対する平衡解離係数Ｋ４が、５００ｐｐｂ以上であることが好ましい。
【００３９】
前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体の平衡解離定数（親和性）は、例えば、前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体のＰＣＢとの結合を５０％阻害する抗原濃度（ＩＣ５０値）によりもとめる。また、前記ＰＣＢモノクローナル抗体の交差反応性は、例えば、塩素数の異なる二種以上のＰＣＢ同族体について、それぞれのＩＣ５０値を求め、それらの比を求めることにより評価することができる。
【００４０】
前記ＩＣ５０値の算出方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、蛍光光度計による測定データを、下式（１）で表される近似式に当てはめて求めることにより解析することができる。
【００４１】
【数１】
2008231009.tif 000009
前記式（１）中、ｙは、抗原を加えなかったときの蛍光強度の値を１００％とした時の相対的な蛍光強度を表し、ｘは、抗原濃度を表し、Ｐ１とＰ２は、近似のパラメータを表す。
【００４２】
測定データは、抗原を加えなかったときの蛍光強度の値を１００％として相対値に変換した後、グラフ作成ソフトウェア（例えば、Ｏｒｉｇｉｎ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．０（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ製）等）を用いて最適なＰ１及びＰ２を決定する。
このようにして得られた近似式を、前記抗体と前記抗原との結合曲線とし、ｙ＝５０％となるときのｘの値(＝Ｐ１)をＩＣ５０値とする。
なお、ＩＣ５０値に対して抗体濃度が十分に小さい時（例えば、１０分の１以下の時）、ＩＣ５０値と平衡解離定数（Ｋｄ）がほぼ一致することが知られている。
【００４３】
前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体の塩素数の異なるＰＣＢに対する平衡解離定数、すなわち親和性は、例えば、カネクロール（ＫＣ３００、ＫＣ４００、ＫＣ５００、ＫＣ６００：鐘淵化学工業社製）やアロクロール（Ａｒ１２４２、Ａｒ１２４８、Ａｒ１２５４、Ａｒ１２６０、Ａｒ１０１６、Ａｒ１２６２、Ａｒ１２３２、Ａｒ１２２１：三菱モンサント（現三菱化学）製））等を被測定試料として用い、評価することができる。
前記カネクロール及びアロクロールは、それぞれ下記表１及び図１に示す比率で異なる塩素数のＰＣＢを含有しているが、例えば、本発明の抗ＰＣＢモノクローナル抗体は、塩素数の異なる二種以上のＰＣＢ同族体に交差反応性を有し、塩素数１〜４のＰＣＢ同族体の存在比が高いカネクロール（Ｋ３００、Ｋ４００：鐘淵化学工業社製）及びアロクロール（Ａｒ１２２１：三菱モンサント（現三菱化学）製））に対する平衡解離定数Ｋ１と、塩素数５〜７のＰＣＢ同族体の存在比が高いカネクロール（Ｋ５００、Ｋ６００：鐘淵化学工業社製）に対する平衡解離定数Ｋ２との関係が、Ｋ１＜Ｋ２であり、特に、塩素数１〜２のＰＣＢ同属体の存在比が高いアロクロール（Ａｒ１２２１：三菱モンサント（現三菱化学）製））に対する平衡解離定数Ｋ３が、２．０〜３．０ｐｐｂであり、塩素数１〜２のＰＣＢ同族体に高い親和性を示す。
【００４４】
【表１】
2008231009.tif 000010
（出典：高菅卓三ら、「各種クリーンアップ法とＨＲＧＣ／ＨＲＭＳを用いたポリ塩化ビフェニル（ＰＣＢｓ）の全異性体詳細分析方法」，環境化学，Ｖｏｌ．５，Ｎｏ．３，ｐｐ.６４７−６７５，１９９５）
【００４５】
（ＰＣＢ測定方法）
本発明のＰＣＢ測定方法は、本発明の抗ＰＣＢモノクローナル抗体を用いる方法であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体を用い、試料中のＰＣＢを免疫学的に検出、定量する方法、具体的には、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、エンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ、ＥＬＩＳＡ）、フルオロイムノアッセイ（ＦＩＡ）、免疫クロマトグラフィー、化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）、免疫比濁法（ＴＩＡ）、ラテックス免疫比濁法（ＬＴＩＡ）、結合平衡除外法等が挙げられる。
【００４６】
前記ＰＣＢ測定方法としては、非競合法、競合法（間接競合法あるいは直接競合法）、結合平衡除外法等が挙げられ、具体的には、下記（Ｉ）〜（III）の方法等が挙げられる。
（Ｉ）前記被測定試料に、本発明の抗ＰＣＢモノクローナル抗体を添加し、
（１）前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体と結合した前記被測定試料中のＰＣＢ、及び
（２）前記被測定試料中のＰＣＢと結合していない前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体
のいずれかを検出する方法を含むＰＣＢ測定方法。
（II）前記被測定試料に、本発明の抗ＰＣＢモノクローナル抗体、並びに、前記一般式（Ｉ）及び前記一般式（II）のいずれかで表される化合物をＰＣＢ競合物質として添加し、前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体と結合した前記競合物質を検出することを含むＰＣＢ測定方法。
（III）前記被測定試料に、本発明の抗ＰＣＢモノクローナル抗体を添加し、前記一般式（II）で表される化合物をＰＣＢ競合物質として固定化した担体を用い、前記ＰＣＢ競合物質と前記被測定試料中のＰＣＢとを競争させ、前記被測定試料中のＰＣＢと結合していない前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体を検出することを含むＰＣＢ測定方法。
【００４７】
以下、前記間接競合法及び前記結合平衡除外法の一例をより具体的に説明する。
前記間接競合法及び前記結合平衡除外法において、担体に固定化する抗原（以下、「固定化抗原」という）としては、例えば、前記一般式（Ｉ）で表されるビフェニル誘導体を含む化合物、及び前記一般式（II）で表される化合物等が挙げられる。
前記間接競合法及び前記結合平衡除外法は、前記固定化抗原を前記担体上に固定化し、前記担体の前記固定化抗原が結合していない部分をブロッキング剤でブロッキングする。次いで、該担体に被測定試料と前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体とを加え、前記固定化抗原と前記被測定試料中のＰＣＢとを前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体に対して前記間接競合法においては競合反応させ、前記結合平衡除外法においては結合平衡除外化反応させる。
前記固定化担体と結合しなかった前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体を洗浄除去した後、二次抗体として標識した抗体を加え、前記固定化抗原と結合した抗ＰＣＢモノクローナル抗体と結合させ、洗浄を行った後、前記標識の発色又は発光を測定する。また、二次抗体を使用せず、前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体を直接標識して用いても良い。得られた吸光度や光強度について、試料を添加しない場合の値に対する減少率を求め、これを阻害率とし、既知の濃度のＰＣＢを添加したときの阻害率からあらかじめ求めておいた検量線を用い、前記試料中のＰＣＢ濃度を算出することができる。
【００４８】
前記標識としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、酵素としてペルオキシダーゼを用い、基質に過酸化水素、発色剤にｏ−フェニレンジアミンやテトラメチルベンジジンを使用する場合、及び、酵素としてアルカリフォスファターゼを用い、基質にｐ−ニトロフェニルリン酸を使用する場合には、発色を吸光度で測定することができる。一方、基質の反応生成物が蛍光である場合や、蛍光物質を用いて標識されている場合には、蛍光光度計等を用いて蛍光を測定することができる。また、化学発光物質を用いる場合には、発光を化学発光測定器等により測定することができ、金コロイドを用いる場合には、透過光度等を透過光量測定器等により測定することができる。
【００４９】
前記被測定試料としては、例えば、被験物質中のＰＣＢを、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）やアルコール系溶媒等の極性溶媒で液−液抽出してなる試料、及び前記被験物質中のＰＣＢを極性溶媒で液−液抽出し、抽出された前記ＰＣＢを含む前記極性溶媒を吸着剤で固相抽出し、前記吸着剤に吸着した成分を所望の溶媒に転溶させてなる試料、並びに前記被験物質にノルマルヘキサン、シクロヘキサン、トルエン等の低極性溶媒を加え、前記被験物質中のＰＣＢを親水性溶媒で抽出してなる試料などが挙げられる。
前記液−液抽出において、前記被験物質と前記極性溶媒との混合比（質量比）としては、例えば、（前記被験物質）：（前記極性溶媒）＝１：１〜：１：１０が好ましい。
【００５０】
前記被験物質としては、少なくともＰＣＢを含む可能性がある物質（ＰＣＢ汚染物）であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、絶縁油、絶縁油以外の油（例えば、植物油、動物油、合成油、鉱物油等）、工場排水、土壌、排ガス、動物の血液や体液、絶縁油の処理作業等において使用した部材等の廃棄物などが挙げられる。これらの中でも、絶縁油が好適に挙げられる。
特に、前記被検物質としては、脱塩素化処理等のＰＣＢ分解処理を行った後のＰＣＢｓ廃棄物が好適に挙げられる。
【００５１】
前記被測定試料中の極性溶媒の濃度としては、前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体のＰＣＢに対する前記親和性が著しく劣化しない限り、特に制限はなく、例えば、１〜２０質量％であることが好ましく、１０〜２０質量％であることがより好ましい。
【００５２】
本発明の抗ＰＣＢモノクローナル抗体は、カネクロールやアロクロールに含まれる複数（３〜７）の塩素が置換されたＰＣＢに対して親和性を有し、しかも塩素数が１〜２のＰＣＢ同族体に高い親和性を有するため、環境試料中、工業製品中、生物試験中に含まれるＰＣＢの迅速かつ再現性の良い分析が可能となり、前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体を用いたＰＣＢ測定方法は、ＰＣＢ分解処理工程におけるＰＣＢの迅速なモニタリングや分析技術として好適である。
また、ＳＰＲ（表面プラズモン）センサ、ＱＣＭ（水晶振動子）センサ、光学的センサ、電気化学的センサ等のトランスデューサーを使用した系において、センサ官能部へ、本発明の抗ＰＣＢモノクローナル抗体、又は前記ビフェニル誘導体等を固定化して、免疫センサとして使用することができる。
さらに、本発明の抗ＰＣＢモノクローナル抗体を固定化した担体は、ＰＣＢ分解処理工程におけるモニタリングに適用することができる。
【実施例】
【００５３】
以下、本発明の実施例について説明するが、本発明はこの実施例に何ら限定されるものではなく、本技術分野において行われるこれらに対する通常の改変及び修飾を含むものとする。
【００５４】
（実施例１）
（１）ビフェニル誘導体の異性体混合物、及びコンジュゲートの調製
下記反応式に従い、４−フェニルフェノールに、スペーサー分子を導入したハプテンとしてのビフェニル誘導体（下記反応式中、化合物３）を調製し、さらにキャリアータンパク質と結合させてなるコンジュゲート（下記反応式中、化合物５）を合成した。
【００５５】
【化１０】
2008231009.tif 000011
ただし、化学式１〜５中、ｎは１の整数を表し、Ｘ及びＹはそれぞれ０〜３の整数を表し、ＸとＹとの和は４〜６であり、Ｚは、ＫＬＨである。
【００５６】
４−フェニルフェノール５１１ｍｇ(３．０ｍｍｏｌ)に、トリフルオロ酢酸４ｍＬを加え、氷冷下、用事調製したＮ−クロロモルホリン１．２０ｇ(９．９０ｍｍｏｌ)を滴下した。同温にて３０分間撹拌した後、室温まで昇温し、さらに１時間撹拌した。その後、蒸留水を加え、水酸化ナトリウム水溶液で反応液を中和した。有機層をジクロロメタンで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄後、溶媒を減圧下に留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製(ジクロロメタン：ヘキサン＝１:１０で溶出)し、塩素化異性体混合物として前記反応式中の化合物１を６１９ｍｇ得た。
【００５７】
前記化合物１  ５１５ｍｇを無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解させ、炭酸カリウム３９０ｍｇ(２．８２ｍｍｏｌ)、次いで６−ブロモへキサン酸エチルエステル６３０ｍｇ(２．８２ｍｍｏｌ)を加え、６０℃に加温し、１７時間撹拌した。反応後、室温まで放冷した後、蒸留水を加え、有機層をジクロロメタンで抽出し、飽和食塩水で洗浄後、溶媒を減圧下に留去し、塩素化異性体混合物として前記反応式中の化合物２を得た。前記化合物２は、これ以上精製せずに次の反応に用いた。
【００５８】
前記化合物２を、ジオキサン１０ｍＬ、メタノール１２．５ｍＬに溶解させ、１０Ｎ水酸化ナトリウム水溶液２．５ｍＬを加え、室温にて２時間撹拌した。反応後、６Ｎ塩酸で反応液を弱酸性にし、有機層をジクロロメタンで抽出した。飽和食塩水で洗浄した後、溶媒を減圧下に留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製(ジクロロメタンで溶出)し、塩素化異性体混合物として前記反応式中の化合物３を４８４ｍｇ得た。
【００５９】
次に、前記化合物３  ３８４ｍｇ、及びＮ-ヒドロキシスクシンイミド１３７ｍｇ(１．１９ｍｍｏｌ)を、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２ｍＬに溶解した。この反応液にトリエチルアミン２０７μＬ(１．４９ｍｍｏｌ)、１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)−カルボジイミド塩酸塩２８５ｍｇ(１．４９ｍｍｏｌ)を加え、室温で１４時間撹拌した。反応後、蒸留水を加え、有機層をジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、溶媒を減圧下に留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製(ジクロロメタンで溶出)し、塩素化異性体混合物として、前記反応式中の化合物４を３６１ｍｇ得た。
【００６０】
前記化合物４を、ジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)に溶解し、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）に溶解したＢＳＡ溶液、又はＫＬＨ溶液に氷冷撹拌下に滴下し、室温にて一晩撹拌した。反応液をＰＢＳ(−)で平衡化したセファデックスカラムに添加し、同緩衝液で展開して、キャリアータンパク質を分離し、コンジュゲート（前記反応式中の化合物５）を精製した。
【００６１】
（２）マウスの免疫
得られたコンジュゲートを免疫原として、マウスを免疫した。
前記化合物５と、アジュバントＲＡＳ  Ｒ−７００(ＲＩＢＩ社)とを１：１容量に混合して十分に乳化させ、得られた乳化液をＢＡＬＢ／ｃマウス（６〜８週齢、雌）の腹腔内に２００μＬ投与する事によりマウスを免疫感作した。
追加免疫は、約２〜３週間間隔で行い、追加免疫から１週間経過後に尾静脈より採血し、ＥＬＩＳＡ法により血中抗体価を測定して抗体価の推移を観察した。
【００６２】
（３）ハイブリドーマの作製
血中に免疫原に対する高い抗体産生が認められたマウス尾静脈内に、さらに免疫原を投与して最終免疫を行った。最終免疫から３日後に、免疫した前記マウスより脾臓を摘出し、脾臓細胞を調製し、対数増殖期にあるミエローマ細胞（Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８．６５３あるいはＳｐ２／Ｏ）と脾臓細胞を１：５になるように混合し、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）法にて細胞融合を行った。融合後の細胞を、ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジン）添加の１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地中に懸濁させ、脾臓細胞数で１〜２×１０5細胞／ウエルになるように９６ウエル培養プレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。
【００６３】
（４）抗体産生ハイブリドーマのスクリーニング及びクローニング
細胞融合より７〜１０日後に、クローンの増殖が見られたウエルの培養上清を用いてＥＬＩＳＡ法にて抗体価を測定した。
【００６４】
（５）抗体産生ハイブリドーマのスクリーニング（抗体価の測定）
マイクロタイタープレート（ＣＯＲＮＩＮＧ社製）の各ウエルに、０．２５〜１μｇ／ｍＬの各免疫原のＰＢＳ(−)希釈溶液（５０μＬ）を加え、室温で１時間静置して固相化した。また、前記コンジュゲート中のキャリアータンパク質に対する抗体産生クローンを除外する為に、ＢＳＡ又はＫＬＨを固定化したウエルを対照として用いた。
０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０を含むＰＢＳ(−)（洗浄液）３００μＬで各ウエルを３回洗浄した後、ブロックエース粉末（雪印社製、ＵＫ−Ｂ８０）４ｇを１００ｍＬの精製水にて溶解させたのち精製水で４倍希釈して調製した溶液（３００μＬ）をウエルに添加し、室温で２時間静置してブロッキングを行った。ウエルを洗浄液（３００μＬ）で３回洗浄後、２５μＬの２０％ＤＭＳＯ、０．０１％Ｔｉｔｏｎ−Ｘ１００、及び１次抗体を含む培養上清（２５μＬ）を各ウエルに添加して混和した後、室温条件下で１０〜３０分間静置して抗原抗体反応を行わせた。
次いで、洗浄液（３００μＬ）で各ウエルを３回洗浄した後、固相化した各免疫原に結合した１次抗体を検出するために、精製水で１０倍希釈したブロックエース溶液にて３，０００倍希釈に調製した西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ（γ鎖認識）（ＫＰＬ社製）を２次抗体溶液として加えて（５０μＬ）、室温で１時間反応させた。ウエルを洗浄液３００μＬで同様に３回洗浄した後、３，３'，５，５'−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）溶液（ＫＰＬ社製）を各ウエルに加え、室温条件下にて発色反応を行った。
５〜１５分間後に１Ｍリン酸５０μＬを加えて反応停止し、マイクロプレートリーダー（マルチスキャンＭＳ、Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ社製）にて直ちに５４０ｎｍの吸光度を測定した。
各免疫原を固定化したウエルと対照ウエルとの吸光度差を、前記免疫原に対する抗体の結合活性とした。
【００６５】
（６）間接競合法による特異抗体産生クローンの選抜
前記（５）に従い、マイクロタイタープレートの各ウエルに各免疫原を固相化し、洗浄ののち精製水で４倍希釈したブロックエース溶液３００μＬをウエルに添加し、室温で２時間静置してブロッキングを行った。ウエルを洗浄液３００μＬで３回洗浄した。
次いで、いずれも溶媒終濃度が０．０１％Ｔｉｔｏｎ−Ｘ１００含有２０％ＤＭＳＯとなるように調製した(i)各免疫原、(ii)個々のＰＣＢ同族体、(iii)４種類のカネクロール（ＫＣ３００、ＫＣ４００、ＫＣ５００、ＫＣ６００）及び１種類のアロクロール（Ａｒ１２２１）、(iv)４種類のカネクロール及び１種類のアロクロールの等量混合物（ＫＣ−Ｍｉｘ）、及び（ｖ）対照（２０％ＤＭＳＯ及び０．０１％Ｔｉｔｏｎ−Ｘ１００）を用意し、各々２５μＬを、免疫原固相化プレートの各ウエルに加えた。
次に、ハイブリドーマ培養上清（２５μＬ）ウエル内に添加して混和した後、室温条件下で１０〜３０分間静置して抗原抗体反応を行わせた。
洗浄液３００μＬで各ウエルを３回洗浄した後、固相化免疫原に結合した１次抗体を検出するために精製水で１０倍希釈したブロックエースにて３，０００倍希釈に調製した西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ（γ鎖認識）を２次抗体溶液として５０μＬ加え、室温条件下で１時間反応させた。
ウエルを洗浄液３００μＬで同様に３回洗浄したのち、ＴＭＢ溶液を各ウエルに加えて室温で発色反応を行った。５〜１５分間後に１Ｍリン酸５０μＬを加えて反応停止し、マイクロプレートリーダー（マルチスキャンＭＳ、Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ社製）にて直ちに４５０ｎｍの吸光度を測定した。対照ウエルの吸光度値（コントロールＯＤ；Ｂ０）に対するＰＣＢ、カネクロール等共存下のウエル吸光度値(Ｂ)の割合（Ｂ／Ｂ０）を算出し、共存物質に対する抗体の反応性を判断した。ＰＣＢに対する結合活性が高く、かつ継続的に高い抗体産生が確認されたウエルのハイブリドーマを選抜し、限界希釈法によるクローニングに供した。
【００６６】
（７）トランスデューサーへの適応性可能性を有するクローンの選抜
前記（６）にて選抜した前記ハイブリドーマのうち、１回以上クローニングを実施したハイブリドーマを、更に蛍光分析に基づくイムノセンサ（ＫｉｎＥｘＡ  ３０００，Ｓａｐｉｄｙｎｅ製）を用いて選抜を行った。
拡大培養したクローン培養上清を、予め５％ＤＭＳＯ、０．１ｗ／ｖ％ＢＳＡ含有ＰＢＳ(−)の溶媒中でＣｙ５標識抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ社製）と室温条件下で２時間以上反応させたのち、４〜８００倍の範囲に希釈し、トランスデューサーに供した。
センサ官能部に固定化した前記化合物５に対し、Ｃｙ５で標識された抗体を含むハイブリドーマ培養上清を０．７５ｍＬ／分の流速で約０．５ｍＬ通過させた。
非特異的に結合した抗体や夾雑物質を５％ＤＭＳＯ、０．１ｗ／ｖ％ＢＳＡ含有ＰＢＳ(−)溶液にて洗浄後、得られたＣｙ５由来の蛍光強度をセンサ官能部に結合した抗体量として検出した。
さらに、ＰＣＢ共存下にクローン培養上清をＣｙ５標識抗マウスＩｇＧと反応させた後、同様に前記センサ官能部へ送液した場合に検出される蛍光強度を基に、ＰＣＢへの高親和性を示す抗体産生クローンを取得した。
【００６７】
以上により、塩素数の異なる複数のＰＣＢ同族体に親和性を有するとともに、塩素数が１〜２のＰＣＢ同族体に高い親和性を示す抗ＰＣＢモノクローナル抗体を産生する安定なハイブリドーマが得られ、これをＥＳ２Ｇ６株とした。前記ＥＳ２Ｇ６株細胞は、メチルセルロース培地を用いて単一の細胞に由来するコロニーを形成させた後、該コロニーを液体培地に移し、培養を続けた。なお、このハイブリドーマＥＳ２Ｇ６は、平成１８年１２月２８日に、独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに寄託され、受託番号としてＦＥＲＭ  Ｐ−２１１４８を取得している。
【００６８】
（８）抗ＰＣＢモノクローナル抗体の作製
前記（７）で樹立したハイブリドーマＥＳ２Ｇ６株のコロニーを、２４穴プレート上のＲＰＭＩ１６４０培地を基本とするＨＡＴ培地に移し４日間培養した後、培養液の一部を１０ｍｌの前記ＨＡＴ培地を入れた５０ｍｌの角形フラスコに移し、コンフルエントに達する直前まで培養し、ＥＳ２Ｇ６株によって分泌された抗体を培養上清からプロテインＡを用いたアフィニティクロマトグラフィーによって精製し、抗ＰＣＢモノクローナル抗体（以下、「ＥＳ２Ｇ６抗体」という）を得た。
【００６９】
（８）モノクローナル抗体の大量調製と精製
８週齢を超えるＢＡＬＢ／ｃマウスの腹腔内へ、プリスタン［２，６，１０，１４−テトラメチルペンタデカン（和光純薬）］（０．５ｍＬ）を投与し、２〜３週間飼育した。予め、対数増殖期に維持しておいた抗ＰＣＢモノクローナル抗体産生ハイブリドーマＷＲ３Ｆ６の培養液を回収し、遠心分離にて培養上清を除いたのち、ＦＣＳ不含のＲＰＭＩ１６４０にて沈査を１×１０６細胞／０．５ｍＬになるよう細胞液を調製した。
この細胞液をプリスタン前投与のＢＡＬＢ／ｃマウス腹腔中に移植し、１０〜１４日後に腹腔内に漏出した腹水を腹部より２５Ｇのシリンジを装着した注射器で回収した。
採取した腹水を、ポアサイズ０．２２μｍ径のフィルターを用いてろ過後、得られたろ液をプロテインＧ−セファロースカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｎｓｉｅｎｓ社製）を用いたアフィニティクロマトグラフィーによって精製し、前記抗ＰＣＢモノクローナル抗体を得た。
【００７０】
（比較例１）
樹立したハイブリドーマＷＲ３Ｆ６株（平成１８年１０月２６日に、独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに寄託され、受託番号としてＦＥＲＭ  Ｐ−２１０７３を取得）から産生された抗ＰＣＢモノクローナル抗体（以下、「ＷＲ３Ｆ６抗体」という）について、前記ＥＳ２Ｇ６抗体と同様に、モノクローナル抗体の大量調製と精製を行った。
【００７１】
（抗ＰＣＢモノクローナル抗体の評価）
実施例１で得た抗ＰＣＢモノクローナル抗体（ＥＳ２Ｇ６抗体）、及び比較例１で得た抗ＰＣＢモノクローナル抗体（ＷＲ３Ｆ６抗体）について、塩素数の異なるＰＣＢ同族体及びビフェニルに対する親和性及び交差反応性を評価した。
【００７２】
＜実験例１：ＥＳ２Ｇ６抗体を用いたＰＣＢ同族体の測定（検量線の作成）＞
前記ＥＳ２Ｇ６抗体を用い、油試料に含まれるカネクロール（ＫＣ３００、ＫＣ４００、ＫＣ５００、ＫＣ６００：鐘淵化学工業社製）、及びアロクロール（Ａｒ１２２１：三菱モンサント（現三菱化学）製）中に存在比の高いＰＣＢ同族体の測定を行い、検量線を作成した。また、前記ＥＳ２Ｇ６抗体を用い、油試料に含まれるビフェニルの測定を行い、検量線を作成した。なお、測定装置として、蛍光分析に基づくイムノセンサ（ＫｉｎＥｘＡ  ３０００）を使用した。
【００７３】
―  測定試料の調整  ―
濃度の異なるカネクロール（ＫＣ３００、ＫＣ４００、ＫＣ５００及びＫＣ６００）を含む各油試料、濃度の異なるアロクロール（Ａｒ１２２１）を含む各油試料、及び濃度の異なるビフェニルを含む各油試料に対し、前記ＥＳ２Ｇ６抗体を混合し、最終的に、前記カネクロール、アロクロール及びビフェニルの各濃度が１００倍希釈となり、かつ前記ＥＳ２Ｇ６抗体の濃度が０．２ｎＭとなるように、各測定試料を調整した。
なお、前記ＥＳ２Ｇ６抗体を混合した後、室温で１０分間放置することによって、前記各測定試料に含まれる抗原（カネクロール、アロクロール及びビフェニル）に対して前記ＥＳ２Ｇ６抗体を反応させ、抗原と抗体の結合反応が平衡状態に達するようにした。
【００７４】
―  測定  ―
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル基が導入されたアガロースビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）に、前記化合物５（ビフェニル誘導体とキャリアータンパク質とのコンジュゲート）を共有結合にて結合させ、ＢＳＡ溶液でブロッキングを行い、抗体結合用担体とした。
前記ＥＳ２Ｇ６抗体を反応させた前記測定試料を、前記抗体結合用担体に流速０．２５ｍＬ／分で作用させた。その後、蛍光物質Ｃｙ５（登録商標）で標識された２次抗体（ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体、ＩｍｍｕｎｏＲｅｓａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）を抗体結合担体へ流速０．２５ｍＬ／分で作用させた。
次いで、５％ＤＭＳＯ，０．１ｗ／ｖ％ＢＳＡ含有ＰＢＳ(−)を流速０．２５ｍＬ／分で通過させ、担体への非特異的結合を排除したのち、蛍光光度計（Ｓａｐｉｄｙｎｅ社製、ＫｉｎＥｘＡ  ３０００）を用いて、前記抗体結合担体の蛍光強度を測定し、前記担体に結合したＥＳ２Ｇ６抗体の量を測定した。なお、前記各測定試料の測定（反応）は、すべて室温で行った。
上述した蛍光分析に基づくイムノセンサ（ＫｉｎＥｘＡ  ３０００）による測定では、カネクロール、アロクロール及びビフェニルのいずれも添加しない抗体溶液を測定した際に示す蛍光量をコントロール（Ｂ０）値とし、Ｂ０値に対するカネクロール、アロクロール及びビフェニルの添加により低下した蛍光量(Ｂ)の割合（Ｂ／Ｂ０）が、シグナル強度（％）として出力される。この得られた値から、前記ＥＳ２Ｇ６抗体における、前記測定試料中の抗原（Ｋ３００、Ｋ４００、Ｋ５００、Ｋ６００、Ａｒ１２２１及びビフェニル）に対する親和性及び交差反応性を求めたり、前記測定試料中の抗原濃度を定量することができる。
なお、蛍光標識以外の標識由来の信号強度を測定することによっても、得られた値から親和性及び交差反応性を求め、定量することができる。
具体的には、前記標識が金コロイドの場合には、前記担体の透過光量を信号強度とし、透過光量測定装置（例えば、柴田科学社製、Ｉｍｎｙ等）を用いて測定することができる。
【００７５】
―  検量線の作成  ―
蛍光分析に基づくイムノセンサ（ＫｉｎＥｘＡ  ３０００）により測定した値（シグナル強度（％））を、各測定試料中のカネクロール、アロクロール及びビフェニルの濃度に対してそれぞれプロットし、検量線を作成した。結果を図２に示す。
図２において、横軸は、測定試料中のカネクロール、アロクロール及びビフェニルの濃度（油試料を１００倍希釈した濃度）であり、縦軸は、ＫｉｎＥｘＡ  ３０００で測定したシグナル強度（％）である。
【００７６】
図２の検量線に示すように、前記ＥＳ２Ｇ６抗体は、塩素数３〜７のＰＣＢ同族体（Ｋ３００、ＫＣ４００、ＫＣ５００、ＫＣ６００）だけでなく、塩素数１〜２のＰＣＢ同族体に対して、極めて高感度な抗体であり、前記ＥＳ２Ｇ６抗体を用いることにより、油試料中に含まれる０．０５ｐｐｍ（測定試料中の濃度は、０．５ｐｐｂ）のＡｒ１２２１を定量できること（検出下限値(ＩＣ８５)）が確認された。
【００７７】
＜実験例２：ＷＲ３Ｆ６抗体を用いたＰＣＢ同族体の測定＞
前記ＷＲ３Ｆ６抗体を用い、油試料に含まれるアロクロール（Ａｒ１２４２、Ａｒ１０１６、Ａｒ１２４８、Ａｒ１２６２、Ａｒ１２５４、Ａｒ１２３２、Ａｒ１２６０及びＡｒ１２２１：三菱モンサント（現三菱化学）製）中に存在比の高いＰＣＢ同族体の測定を行い、検量線を作成した。なお、実験例１と同様に、測定装置として、蛍光分析に基づくイムノセンサ（ＫｉｎＥｘＡ  ３０００）を使用した。
【００７８】
―  測定試料の調整  ―
濃度の異なるアロクロール（Ａｒ１２４２、Ａｒ１０１６、Ａｒ１２４８、Ａｒ１２６２、Ａｒ１２５４、Ａｒ１２３２、Ａｒ１２６０及びＡｒ１２２１）を含む各油試料に対し、前記ＷＲ３Ｆ６抗体を混合し、最終的に、前記アロクロールの各濃度が１００倍希釈となり、かつ前記ＷＲ３Ｆ６抗体の濃度が０．２ｎＭとなるように、各測定試料を調整した。
なお、前記ＷＲ３Ｆ６抗体を混合した後、室温で１０分間放置することにより、各測定試料に含まれる抗原（アロクロール）に対して前記ＷＲ３Ｆ６抗体を反応させ、抗原と抗体の結合反応が平衡状態に達するようにした。
【００７９】
―  測定及び検量線の作成  ―
上記測定試料を用いた以外は、実験例１と同様に、測定及び検量線の作成を行った。結果を図３に示す。
図３において、横軸は、測定試料中のアロクロール濃度（油試料を１００倍希釈した濃度）であり、縦軸は、ＫｉｎＥｘＡ  ３０００で測定したシグナル強度（％）である。
【００８０】
図３に示すように、前記ＷＲ３Ｆ６抗体は、塩素数３〜７のＰＣＢ同族体（Ａｒ１２４２、Ａｒ１０１６、Ａｒ１２４８、Ａｒ１２６２、Ａｒ１２５４、Ａｒ１２３２、Ａｒ１２６０）に対して高感度に定量できるものの、塩素数１〜２のＰＣＢ同族体（Ａｒ１２２１）に対して、定量性が低いことが確認された。
【００８１】
＜実験例３：親和性及び交差反応性の評価＞
前記ＥＳ２Ｇ６抗体及びＷＲ３Ｆ６抗体について、塩素数１〜７のＰＣＢ同族体（ＫＣ３００、ＫＣ４００、ＫＣ５００、ＫＣ６００及びＡｒ１２２１）に対する親和性及び交差反応性を評価した。また、前記ＥＳ２Ｇ６抗体について、ビフェニルに対する親和性及び交差反応性を評価した。
なお、実験例１と同様にして、各測定試料の調製及び測定を行った。
【００８２】
（i）平衡解離定数の測定
前記ＥＳ２Ｇ６抗体及びＷＲ３Ｆ６抗体について、カネクロール（ＫＣ３００、ＫＣ４００、ＫＣ５００及びＫＣ６００）、アロクロール（Ａｒ１２２１）及びビフェニルに対する平均解離定数（Ｋｄ）を求め、親和性を評価した。
前記蛍光光度計（ＫｉｎＥｘＡ  ３０００）による測定データを近似式に当てはめ、ＩＣ５０値を求めた。前記近似式として、下式（１）を用いた。
【００８３】
【数２】
2008231009.tif 000012
前記式（１）中、ｙは、試料中に抗原（ＰＣＢ）を加えなかったときの蛍光強度の値を１００％とした時の相対的な蛍光強度を表し、ｘは、抗原濃度を表し、Ｐ１とＰ２は、近似のパラメータを表す。
【００８４】
なお、ＩＣ５０値に対して抗体濃度が十分に小さい時（例えば、１０分の１以下の時）、ＩＣ５０値と平衡解離定数（Ｋｄ）とがほぼ一致することが知られているため、親和性の評価として、前記平衡解離定数（Ｋｄ）を用いた。結果を下記表２に示す。
【００８５】
（ii）交差反応性
交差反応性は、それぞれ、下式（２）及び（３）により算出した。ＥＳ２Ｇ６抗体におけるＡｒ１２２１のＩＣ５０値を基準にして算出した値（％）である。結果を下記表２に示す。
ＥＳ２Ｇ６抗体の交差反応性（％）＝（Ａｒ１２２１のＩＣ５０値／試料のＩＣ５０値）
…式（２）
ＷＲ３Ｆ６抗体の交差反応性（％）＝（Ａｒ１２２１のＩＣ５０値／試料のＩＣ５０値）
…式（３）
【００８６】
【表２】
2008231009.tif 000013
【００８７】
表２に示すように、比較例１のＷＲ３Ｆ６抗体は、塩素数３〜７のＰＣＢ同族体（ＫＣ３００、ＫＣ４００、ＫＣ５００及びＫＣ６００）に対する平衡解離定数は、いずれも３．０ｐｐｂ以下であるが、塩素数１〜２のＰＣＢ同族体（Ａｒ１２２１）に対する平衡解離定数は、１４．０ｐｐｂ以上であり、塩素数１〜２の同族体に対する親和性が非常に低い。
これに対し、実施例１のＥＳ２Ｇ６抗体は、塩素数１〜４のＰＣＢ同族体（Ａｒ１２２１、ＫＣ３００及びＫＣ４００）に対する平衡解離定数Ｋ１と、塩素数５〜７のＰＣＢ同族体（ＫＣ５００及びＫＣ６００）に対する平衡解離定数Ｋ２との関係が、Ｋ１＜Ｋ２であり、前記平衡解離定数Ｋ２が、４．０ｐｐｂ以上であり、前記衡解離定数Ｋ１が、３．０ｐｐｂ以下である。特に、塩素数１〜２のＰＣＢ同族体（Ａｒ１２２１）に対する平衡解離定数Ｋ３が、２．０〜３．０ｐｐｂであり、塩素数１〜２の同族対に対して高い親和性を有する。
【００８８】
また、交差反応性について、比較例１のＷＲ３Ｆ６抗体は、塩素数１〜２のＰＣＢ同族体（Ａｒ１２２１）に対する交差反応性が低いのに対し、実施例１のＥＳ２Ｇ６抗体は、塩素数１〜２のＰＣＢ同族体（Ａｒ１２２１）に対して高い交差反応性を有していた。
【００８９】
これらの結果から、本発明の抗ＰＣＢモノクローナル抗体（ＥＳ２Ｇ６抗体）は、従来の抗ＰＣＢ抗体において検出が困難であった、塩素数１〜２のＰＣＢ同族体ＰＣＢを高感度に定量することができ、ＰＣＢｓ廃棄物のＰＣＢ分解処理工程のモニタリングにおいて有用であることがわかった。
【００９０】
（ＥＳ２Ｇ６抗体を用いたＰＣＢ分解処理工程のモニタリング）
実施例１のＥＳ２Ｇ６抗体を用いたＰＣＢ分解処理工程のモニタリングについて、実験例１で作成した、塩素数の異なるＰＣＢ同族体に対する前記ＥＳ２Ｇ６抗体の検量線に基づいて説明する（図４を参照）。
図４の検量線に示すように、前記ＥＳ２Ｇ６抗体は、塩素数３〜４のＰＣＢ同族体（ＫＣ３００、ＫＣ４００）に対する検出感度と同様に、塩素数１〜２のＰＣＢ同族体（Ａｒ１２２１）に対する検出感度が非常に高い。
下記の表３は、前記ＥＳ２Ｇ６抗体を用いた測定において、油試料に含まれる塩素数４のＰＣＢ同族体、塩素数３のＰＣＢ同族体、塩素数１〜２の同族体及びビフェニルの濃度が、０．０５ｐｐｍ及び０．１０ｐｐｍ（測定試料中の濃度が、０．５ｐｐｂ及び１．０ｐｐｂ）であるときの、それぞれのシグナルの強度を示すものである。なお、シグナル強度が大きいほど、油試料中のＰＣＢ同族体と抗体との親和性が低いことを示し、シグナル強度８５％を、ＰＣＢの定量の検出下限値（ＩＣ８５値）とした。
【００９１】
【表３】
2008231009.tif 000014
【００９２】
図４及び表３に示すように、例えば、濃度０．０５ｐｐｍの４塩化ビフェニル（例えば、Ｋｒ４００）を含む油試料について脱塩素化処理を行った場合、前記ＥＳ２Ｇ６抗体は、油試料中に含まれる塩素数４〜３のＰＣＢ同族体について、濃度０．０５ｐｐｍ及び０．１０ｐｐｍをそれぞれ定量でき、更には、油試料中に含まれる塩素数１〜２のＰＣＢ同族体について、濃度０．０５ｐｐｍ及び０．１０ｐｐｍをそれぞれ定量できる。よって、前記ＥＳ２Ｇ６抗体を用いることにより、ＰＣＢから全ての塩素が除去され、ビフェニル（無害）に分解されるまで、ＰＣＢ分解処理工程をモニタリングすることができる。
【００９３】
（ＷＲ３Ｆ６抗体を用いたＰＣＢ分解処理工程のモニタリング）
比較例１のＷＲ３Ｆ６抗体を用いたＰＣＢ分解処理工程のモニタリングについて、実験例２で作成した、塩素数の異なるＰＣＢ同族体に対する前記ＷＲ３Ｆ６抗体の検量線に基づいて説明する（図５参照）。
図５の検量線に示すように、前記ＷＲ３Ｆ６抗体は、塩素数３〜７のＰＣＢ同族体に対する検出感度に比べ、塩素数１〜２のＰＣＢ同族体（Ａｒ１２２１）に対する検出感度が非常に低い。
下記の表４は、前記ＷＲ３Ｆ６抗体を用いた測定において、油試料に含まれる塩素数４のＰＣＢ同族体、塩素数３のＰＣＢ同族体、塩素数１〜２の同族体及びビフェニルの濃度が、０．０５ｐｐｍ及び０．１０ｐｐｍであるときの（測定試料中の濃度が、０．５ｐｐｂ及び１．０ｐｐｂであるのときの）、それぞれのシグナルの強度を示すものである。なお、シグナル強度が大きいほど、油試料中のＰＣＢ同族体と抗体との親和性が低いことを示し、シグナル強度８５％を、ＰＣＢの定量の検出下限値（ＩＣ８５値）とした。
【００９４】
【表４】
2008231009.tif 000015
【００９５】
図５及び表４に示すように、例えば、濃度０．０５ｐｐｍ及び濃度０．１０ｐｐｍの４塩化ビフェニル（Ａｒ１２４８）を含む油試料について脱塩素化処理を行った場合、前記ＷＲ３Ｆ６抗体は、油試料中に含まれる塩素数４〜３のＰＣＢ同族体について、濃度０．０５ｐｐｍ及び０．１０ｐｐｍをそれぞれ定量できるが、油試料中に含まれる塩素数１〜２のＰＣＢ同族体について、濃度０．０５ｐｐｍ及び０．１０ｐｐｍのいずれも定量できない。つまり、前記ＷＲ３Ｆ６抗体では、塩素数１〜２のＰＣＢ同族体の検出感度が低く、ＰＣＢから全ての塩素が除去され、ビフェニル（無害）に分解される最終工程まで、ＰＣＢ分解処理工程をモニタリングすることができない。
【産業上の利用可能性】
【００９６】
本発明の抗ＰＣＢモノクローナル抗体は、塩素数１〜２のＰＣＢ同族体に高い親和性を有し、かつ極性溶媒存在下においてＰＣＢとの結合性が低下することなく、１塩化ビフェニル及び２塩化ビフェニルを多く含むＰＣＢ（例えば、三菱モンサント（現三菱化学）製のアロクロール１２２１（Ａｒ１２２１）などに由来するＰＣＢ）を高感度で定量であるため、組成が未知の絶縁油等、特に塩素数の少ないＰＣＢ同族体を多量に含有する可能性のある検査対象を、最小限の誤差で高感度に検出、定量することができ、廃棄物処理後のＰＣＢ残留濃度、環境中のＰＣＢ濃度等の検査に好適に使用する
ことができる。
【図面の簡単な説明】
【００９７】
【図１】図１は、アロクロールのＰＣＢ同族体組成を示す図である（出典：廃棄物処理法新基準に基づくＰＣＢ処理技術ガイドブック、編集：財団法人産業廃棄物処理事業振興財団、発行：株式会社ぎょうせい、平成１７年８月１日刊）。
【図２】図２は、実施例１のＥＳ２Ｇ抗体における、塩素数の異なるＰＣＢ（Ａｒ１２２１、ＫＣ３００、ＫＣ４００、ＫＣ５００及びＫＣ６００）及びビフェニルの検量線である。図３中、「■」はＡｒ１２２１、「●」はＫＣ３００、「▲」はＫＣ４００、「▼」はＫＣ５００、「◆」はＫＣ６００、及び「△」はビフェニルの結果をそれぞれ示す
【図３】図３は、比較例１のＷＲ３Ｆ６抗体における、塩素数の異なるＰＣＢ（Ａｒ１２４２、Ａｒ１０１６、Ａｒ１２２１、Ａｒ１２４８、Ａｒ１２６２、Ａｒ１２５４、Ａｒ１２３２、Ａｒ１２６０及びＡｒ１２２１）及びビフェニルの検量線である。図３中、「●」はＡｒ１２４２、「○」はＡｒ１０１６、「▲」はＡｒ１２４８、「△」はＡｒ１２６１、「■」はＡｒ１２５４、「□」はＡｒ１２３２、「◆」はＡｒ１２６０、「◇」はＡｒ１２２１の結果をそれぞれ示す。
【図４】図４は、実施例１のＥＳ２Ｇ６抗体における、塩素数の異なるＰＣＢ（Ａｒ１２２１、ＫＣ３００、ＫＣ４００、ＫＣ５００及びＫＣ６００）及びビフェニルの検量線であり、ＰＣＢ分解処理工程のモニタリングを示す図である。図３中、「■」はＡｒ１２２１、「●」はＫＣ３００、「▲」はＫＣ４００、「▼」はＫＣ５００、「◆」はＫＣ６００、及び「△」はビフェニルの結果をそれぞれ示す。
【図５】図５は、比較例１のＷＲ３Ｆ６抗体における、塩素数の異なるＰＣＢ（Ａｒ１２４２、Ａｒ１０１６、Ａｒ１２２１、Ａｒ１２４８、Ａｒ１２６２、Ａｒ１２５４、Ａｒ１２３２、Ａｒ１２６０及びＡｒ１２２１）及びビフェニルの検量線であり、ＰＣＢ分解処理工程のモニタリングを示す図である。図３中、「●」はＡｒ１２４２、「○」はＡｒ１０１６、「▲」はＡｒ１２４８、「△」はＡｒ１２６１、「■」はＡｒ１２５４、「□」はＡｒ１２３２、「◆」はＡｒ１２６０、「◇」はＡｒ１２２１の結果をそれぞれ示す。
【図１】
2008231009.tif 000018
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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