(57)【要約】【課題】神経変性疾患、特にアルツハイマー病(ＡＤ)の処置用の潜在的治療剤を試験するのに有用なアミロイド前駆体タンパク質の遺伝子導入(トランスジェニック)操作に関する動物モデルを提供すること。【解決手段】Ｔhy−１プロモーターエレメントに機能的に連結したスウェーデン変異を含むヒトＡＰＰポリペプチドをコードするポリヌクレオチドからなる組換えＤＮＡ構築物を使用して動物モデルを作成することにより解決される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
スウェーデン変異がＡＰＰポリペプチドに存在する唯一の変異であるとき、Ｔhy−１プロモーターエレメントは、齧歯類、例えばマウスのＴhy−１プロモーターエレメントであるという条件で、Ｔhy−１プロモーターエレメントに機能的に連結した、スウェーデン変異を含むヒトＡＰＰポリペプチドをコードするポリヌクレオチドからなる組換えＤＮＡ構築物。
【請求項２】
ＡＰＰポリペプチドが更にロンドン変異を含む、請求の範囲第１項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項３】
Ｔhy−１プロモーターエレメントがヒトＴhy−１プロモーターエレメントである、請求の範囲第１項または第２項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項４】
ＡＤ病状のＡＰＰとtauの両方に関連する特徴や、好ましくは、ＡＤの行動変化も示す、ヒト以外のトランスジェニック動物およびそれらのトランスジェニック細胞。
【請求項５】
スウェーデン変異のみを含む変異ヒトＡＰＰをコードするＤＮＡが、トランスジーンｍＲＮＡの量が内生メッセージの約５倍以上を上回るようなレベルで発現される、ヒト以外のトランスジェニック動物細胞。
【請求項６】
変異を２つ含む変異ヒトＡＰＰをコードするＤＮＡが、トランスジーンｍＲＮＡの量が内生メッセージの約２倍を上回るようなレベルで発現される、ヒト以外のトランスジェニック動物細胞。
【請求項７】
２つの変異が、スウェーデン変異およびロンドン変異である、請求の範囲第６項に記載のヒト以外のトランスジェニック動物細胞。
【請求項８】
変異を３つ以上含む変異ヒトＡＰＰをコードするＤＮＡが、トランスジーンｍＲＮＡの量が内生メッセージの約２倍以上を上回るようなレベルで発現される、ヒト以外のトランスジェニック動物細胞。
【請求項９】
スウェーデン変異がＡＰＰポリペプチドに存在する唯一の変異であるとき、Ｔhy−１プロモーターエレメントは、齧歯類、例えばマウスのＴhy−１プロモーターエレメントであるという条件で、スウェーデン変異を含む変異ヒトＡＰＰポリペプチドをコードするＤＮＡが、Ｔhy−１プロモーターエレメントの転写制御下で発現される、ヒト以外のトランスジェニック動物細胞。
【請求項１０】
ヒトＡＰＰポリペプチドが更にロンドン変異を含む、請求の範囲第９項に記載のヒト以外のトランスジェニック動物細胞。
【請求項１１】
Ｔhy−１プロモーターエレメントがヒトＴhy−１プロモーターエレメントである、請求の範囲第１０項に記載のヒト以外のトランスジェニック動物細胞。
【請求項１２】
細胞中で、スウェーデン変異のみを持つヒトＡＰＰをコードするＤＮＡが、トランスジーンｍＲＮＡの量が内生メッセージの５倍以上を上回るようなレベルで発現される、ヒト以外のトランスジェニック動物。
【請求項１３】
細胞中で、変異を２つ持つヒトＡＰＰをコードするＤＮＡが、トランスジーンｍＲＮＡの量が内生メッセージの約２倍を上回るようなレベルで発現される、ヒト以外のトランスジェニック動物。
【請求項１４】
２つの変異が、スウェーデン変異およびロンドン変異である、請求の範囲第１３項に記載のヒト以外のトランスジェニック動物細胞。
【請求項１５】
細胞中で、スウェーデン変異がＡＰＰポリペプチドに存在する唯一の変異であるとき、Ｔhy−１プロモーターエレメントは、齧歯類、例えばマウスのＴhy−１プロモーターエレメントであるという条件で、スウェーデン変異を含むヒトＡＰＰポリペプチドをコードするＤＮＡが、Ｔhy−１プロモーターエレメントの転写制御下で発現される、ヒト以外のトランスジェニック動物。
【請求項１６】
ＡＰＰポリペプチドが更にロンドン変異を含む、請求の範囲第１５項に記載のヒト以外のトランスジェニック動物。
【請求項１７】
マウスである、請求の範囲第１２項ないし１６項に記載のヒト以外のトランスジェニック動物。
【請求項１８】
該動物が、請求の範囲第１項に記載の組換えＤＮＡ構築物をそのゲノムに組込むことにより作られる、ヒト以外のトランスジェニック動物の製法。
【請求項１９】
請求の範囲第１項に記載の組換えＤＮＡ構築物から得られた転写単位をヒト以外の動物胚の前核に注入し、そうして得られた初代トランスジェニック動物を繁殖させることを含む、神経変性疾患病状を発症できるヒト以外のトランスジェニック動物の製法。
【請求項２０】
請求の範囲第１２項ないし１７項のいずれか１項に記載のトランスジェニック動物を使用する、または請求の範囲第５項ないし１１項に記載の細胞を標的細胞として使用する、特定症状に対する潜在的治療剤の試験法。
【請求項２１】
該治療剤を請求の範囲第１８項または１９項に従い製造したヒト以外のトランスジェニック動物に投与する、請求の範囲第２０項に記載の方法。
【請求項２２】
該症状が神経変性疾患である、請求の範囲第２０項に記載の方法。
【請求項２３】
該症状がアルツハイマー病である、請求の範囲第２０項に記載の方法。
【請求項２４】
薬剤を請求の範囲第１２項ないし１７項のいずれか１項に記載のトランスジェニック動物に投与するか、または請求の範囲第５項ないし１１項に記載の細胞と接触させ、そして、βＡ４沈積および／またはtauの過リン酸化を測定する、特定症状に対する潜在的治療剤の試験法。
【請求項２５】
請求の範囲第２１項ないし２４項のいずれか１項に記載の方法からなる、または含む、スクリーニングまたは特性化アッセイ。
【請求項２６】
請求の範囲第５項ないし１１項のいずれか１項に記載の細胞を含む、スクリーニングアッセイキット。
【請求項２７】
請求の範囲第２５項または２６項に記載のアッセイまたはアッセイキットを用いて同定された、神経変性疾患の処置に使用する化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経変性疾患、特にアルツハイマー病(ＡＤ)の処置用の潜在的治療剤を試験するのに有用な動物モデルに関する。
【０００２】
より具体的には、本発明は、アミロイド前駆体タンパク質(ＡＰＰ)の遺伝子導入(トランスジェニック)操作に関する動物モデルに関する。
【背景技術】
【０００３】
ＡＤの病理学的機構を表す実験動物モデルの不足は、基礎研究と薬剤開発の両方にとって大きな障害である。このようなモデルに対する１つのアプローチとして、老人性斑などの特徴的な病変、神経原繊維性病理および海馬および皮質のある領域における細胞損失の再現を試みることができる。しかしながら、今のところ、これらの病変がこの病気の原因なのか結果なのかは不明である。モデル作製のための別のアプローチは、この病気を導くことが知られている要因の使用である。近年、遺伝子研究により、５０または６０代の初期発症家族型ＡＤとは共分離(cosegregate)し、および常染色体優性遺伝パターンに従う、ＡＰＰの突然変異が明らかになった。３つの別個のミスセンス変異は、ＡＰＰのコドン７１７(ポリペプチド中、Ｖ７１７→Ｉ{以降、ロンドン変異と呼ぶ}、Ｖ７１７→ＧおよびＶ７１７→Ｆという変化)に影響を及ぼし、一方、スウェーデンＡＤ系統のＡＰＰ遺伝子では、コドン６７０/６７１(ポリペプチド中、Ｋ６７０→ＮおよびＭ６７１→Ｌという変化、以降、スウェーデン変異と呼ぶ)が変化している(ＡＰＰ７７０に準ずる数字)。これらの変異は、ＡＤ患者の脳の斑に沈積したフィラメントの主要成分であるβＡ４を生むＡＰＰの一部にフランクしている。インビトロの研究では、スウェーデン変異は溶性形態βＡ４の形成増加を導くのに対し、ＡＰＰ７１７変異はフィラメント形成を助長する長いβＡ４変種を高い割合で生じることが示されている。このことは、フィラメント状βＡ４がインビトロにおいて有毒であるという事実と共に、ＡＰＰ変異がβＡ４に関する機構を介してＡＤを導き得ることを示唆しているが、その他の機構も排除できない。
【０００４】
最近、ヒトＡＰＰ ｃＤＮＡの発現を制御する数種のニューロン特異的プロモーターを用いて、コドン７１７および６７０/６７１に変異のあるＡＰＰを発現するトランスジェニックマウスが作られた。内生ＡＰＰの量に近い、あるいはその量を超えるタンパク質レベルが得られているが、このトランスジェニックマウスではＡＤの特徴である組織学的変化の全パターンが観察されていない。
【０００５】
予想外にも、ＡＰＰ発現構築物を適切に選択することにより、内生ＡＰＰメッセージの１０倍を上回る高レベルのトランスジーンｍＲＮＡが得られ、その結果、相対じて高いタンパク質レベルを生むことが分かった。更に、組織学的分析では、かなりのヒトβＡ４ペプチド沈積物が観察される。また更にもっと重要なことに、ＡＤに関連する病理学的表現型である微小管関連タンパク質tauの過リン酸化も達成している。そのうえ、この沈積物は、コリンエステラーゼに集積的に染まり、これはＡＤにおいて典型的に観察されるコリン作用性繊維の局所歪曲に関連するものである。両方の特徴は、これまでのところ、類似のトランスジェニック動物では報告されていない。この病理は、脳の別の領域での選択的ニューロン損失を伴う。
【発明の開示】
【０００６】
従って、本発明の第一の態様では、Ｔhy−１プロモーターエレメントに機能的に連結したスウェーデン変異を含むヒトＡＰＰポリペプチドをコードするポリヌクレオチドからなる組換えＤＮＡ構築物、ただし、スウェーデン変異がＡＰＰポリペプチドに存在する唯一の変異であるとき、Ｔhy−１プロモーターエレメントは、齧歯類、例えばマウスのＴhy−１プロモーターエレメントである、を提供する。
【０００７】
該プロモーターの制御下で該変異ヒトＡＰＰを発現するトランスジェニックマウスは、ＡＤ病理のＡＰＰおよびtau関連特性を合わせることによってGames et al. [Nature 373, 523-527 (1995)]に既に記載されている以外の病理学的表現型を発生することが分かった。更に、このマウスは、ＡＤの特徴である行動変化を表すことが分かり、これも従来のトランスジェニックマウスでは今まで報告されていないことである。
【０００８】
ＡＤ病理を緊密に反映するこのようなマウス並びにそのトランスジェニック細胞が特に有用な疾病モデルであることは評価される。
【０００９】
従って、本発明の別の態様では、ＡＤ病理のＡＰＰとtauの両方に関連する特徴、例えば、組織学的特徴や、好ましくはＡＤの特徴である行動変化も示す、ヒト以外のトランスジェニック動物を提供する。
【００１０】
好適には、このヒト以外のトランスジェニック動物は、スウェーデン変異または１以上の別の変異、特にロンドン変異と共にスウェーデン変異を含むヒトＡＰＰを発現する。好適には、このトランスジェニック動物はまた、１２ヶ月齢前に、好ましくは約６ヶ月齢までにＡＤ病理の特徴を示す。このトランスジェニック動物は、齧歯類、例えば、マウスまたはラットであるのが都合よく、好ましくはマウスである。本発明のこの態様は、ヒト以外のトランスジェニック動物から得られるトランスジェニック細胞を含む。
【００１１】
本発明の一般性に対する偏見なしに、トランスジーンがトランスジェニック動物内で発現されるレベル、例えば、トランスジーンｍＲＮＡのレベルは、その動物においてＡＤ病理を獲得するのに重要な要因であると思われる。
【００１２】
よって、本発明の更なる態様では、１つだけ変異を持つヒトＡＰＰをコードするＤＮＡが、トランスジーンｍＲＮＡの量が内生ＡＰＰメッセージの５倍を上回る、例えば、３から６倍、更には約５から約１０倍であるようなレベルで発現される、ヒト以外のトランスジェニック動物細胞、並びに、細胞中で、１つだけ変異を持つヒトＡＰＰをコードするＤＮＡが、トランスジーンｍＲＮＡの量が内生メッセージの５倍以上を上回るようなレベルで発現される、ヒト以外のトランスジェニック動物、例えば、マウスまたはラット、好ましくはマウスを提供する。
【００１３】
ＡＰＰポリペプチド中に存在する唯一の変異は、スウェーデン変異またはロンドン変異またはアミノ酸７１７位でのその他の変異を含むあらゆるＡＰＰ変異であってよい。好ましくは、唯一の変異は、スウェーデン変異である。
【００１４】
更に、トランスジェニック動物において導入されるβＡ４の産生に影響する遺伝的病変の数は、その動物においてＡＤ病理を獲得するための別の重要な要因であると思われる。
【００１５】
本発明はまた、変異を２つ持つヒトＡＰＰをコードするＤＮＡが、トランスジーンｍＲＮＡの量が内生ＡＰＰメッセージの約２倍を上回る、例えば１.５から３倍であるようなレベルで発現される、ヒト以外のトランスジェニック動物細胞、並びに、細胞中で、ヒトＡＰＰをコードするＤＮＡが、トランスジーンｍＲＮＡの量が内生メッセージの約２倍を上回るようなレベルで発現される、ヒト以外のトランスジェニック動物、例えば、マウスまたはラット、好ましくはマウスを提供する。
【００１６】
更に本発明は、変異を３つ以上持つヒトＡＰＰをコードするＤＮＡが、トランスジーンｍＲＮＡの量が内生ＡＰＰメッセージの約２倍弱を上回る、例えば約１から２倍であるようなレベルで発現される、ヒト以外のトランスジェニック動物細胞、並びに、細胞中で、ヒトＡＰＰをコードするＤＮＡが、トランスジーンｍＲＮＡの量が内生メッセージの２倍弱を上回るようなレベルで発現される、ヒト以外のトランスジェニック動物、例えば、マウスまたはラット、好ましくはマウスを提供する。
【００１７】
２つの変異または３つ以上の変異は、２つまたは３つ以上のＡＰＰ変異のいかなる組み合わせであってもよい。しかしながら、好ましくは、このような多重変異は、スウェーデン変異およびロンドン変異の組み合わせからなる。
【００１８】
ヒトＡＰＰをコードするＤＮＡは、ｃＤＮＡおよび／またはゲノムＤＮＡからなることもでき、都合のよいのは、ｃＤＮＡである。
【００１９】
より具体的には、本発明は、スウェーデン変異を含むヒトＡＰＰポリペプチドをコードするＤＮＡが、Ｔhy−１プロモーターエレメントの転写制御下で発現される、ヒト以外のトランスジェニック動物細胞、並びに、細胞中で、スウェーデン変異を含むヒトＡＰＰポリペプチドをコードするＤＮＡが、Ｔhy−１プロモーターエレメントの転写制御下で発現される、ヒト以外のトランスジェニック動物、例えば、マウスまたはラット、好ましくはマウス、ただし、スウェーデン変異がＡＰＰポリペプチドに存在する唯一の変異であるとき、Ｔhy−１プロモーターエレメントは、齧歯類、例えばマウスのＴhy−１プロモーターエレメントである、を提供する。
【００２０】
本発明のトランスジェニック動物は、構築物が直接導入されている動物、並びに、その構築物を発現する能力を保持する当該動物の後代を含む。
【００２１】
本発明に従い操作した細胞は、既知のトランスフェクション技術によって調製できる。そのＤＮＡ配列は、直接遺伝子操作により、またはその細胞の初期発生期に導入することができる。このようにして、トランスジェニック動物から細胞を入手でき、これをインビトロで培養できる。
【００２２】
トランスジェニック動物はまた、胚操作などの十分に確立された方法、例えば、胚性幹細胞への遺伝子導入、初期胚のレトロウイルス感染、または前核マイクロインジェクションによっても作製できる。
【００２３】
前核マイクロインジェクション技術は好ましい。本発明の組換えＤＮＡ構築物から得られる転写単位を動物胚の前核に注入し、得られた初代トランスジェニック体を繁殖させる。
【００２４】
子孫で得られた結果は、当分野でよく知られた様々な技術を用いて分析できる。例えば、トランスジーンＡＰＰｍＲＮＡ発現はＲＮＡブロッティングによって分析し、脳におけるトランスジーンの発現パターンはイン・シツ ハイブリダイゼーションによって測定し、脳におけるＡＰＰの検出はイムノブロッティング技術(ウェスタンブロット分析)を用いて実施でき、その発現効果は組織学および免疫組織学によって研究される。
【００２５】
本発明の細胞および動物に基づくモデルは、例えば、神経変性疾患、特にβＡ４ペプチドが沈積され、および／または微小管関連タンパク質tauが過リン酸化される疾患、より具体的にはＡＤにおける潜在的治療剤としての効果を同定および評価するのに使用できる。特に、このようなモデルは、βＡ４沈積および／またはtauの過リン酸化を阻止できるような作用物質を検出するためのスクリーニングまたは特性化アッセイに使用することもできる。
【００２６】
従って、本発明の更なる態様では、本発明の細胞を標的細胞として用いる、特定症状、特に神経変性疾患、好ましくはＡＤに対する治療剤としての可能性を試験する方法を含む。より具体的には、本発明のヒト以外のトランスジェニック動物にその薬剤を投与するような試験法を含む。更に、本発明は、かかる方法からなる、またはかかる方法を含むスクリーニングまたは特性化アッセイ、並びに、本発明の細胞を含むスクリーニングアッセイキットを含む。
【００２７】
細胞系列または動物を用いて潜在的治療剤をスクリーニングする方法は、当分野でよく知られている。本発明の細胞および動物も、同様の方法に使用できる。
【００２８】
例えば、組換え細胞を、潜在的治療剤と、また典型的な老人性斑および広汎性斑中のβＡ４アミロイドを認識する抗体および／またはアルツハイマー脳の神経原繊維錯綜を染色するtau抗体と共にインキュベーションできる。トランスジェニック動物自身を使用する方法では、潜在的治療剤の効果は、動物を屠殺後に様々な検査を実施して測定できる。また、潜在的治療剤の投与後、トランスジェニック動物に行動試験を施して、認識機能を監視することができる。
【００２９】
ウェスタンブロット分析を含むβＡ４およびタンパク質tauの検出技術やそのために使用される抗体もまた十分に報告されている。
【００３０】
上記のようなアッセイまたはアッセイキットを用いて同定されている神経変性疾患の処置に使用する化合物もまた、本発明の一部である。
【実施例】
【００３１】
下記の実施例により本発明を例示説明する。
【００３２】
発現構築
スウェーデン二重変異を持つヒトＡＰＰ７５１ｃＤＮＡを５'末端で修飾して、最適翻訳開始配列(ＧＣＣ ＧＣＣ ＡＴＧ Ｇ)を再構築する。
【００３３】
上記配列から始まりヌクレオチド３０２６(ＨindIII部位)まで伸びるこのｃＤＮＡを、マウスＴhy−１.２遺伝子を含む８.１kb ＥcoＲＩフラグメントを含有するｐＵＣ１８ベースのベクターのＸhoＩクローニング部位へ挿入する[Vidal et al. (1990) EMBO J. 9, 833-840]。このベクターを、エクソン３とフランキング介在配列を持つ１.５kb ＢanＩ−ＸhoＩフラグメントがユニークＸhoＩ認識部位をコードするリンカー配列と置き換わるように修飾する[Moechars et al. (1996) EMBO J. 15, 1265-1274]。転写単位は、ＮotＩ/ＰvuＩ消化により解離させる。
【００３４】
K. Andrea et al., Neurobiology of Aging, Vol. 17, No. 2, 183-190 (1996)に記載の発現構築物ＡＰＰ１４は、６００bp ＢglII/ＳpeＩフラグメントをロンドン変異Ｖ７１７→Ｉを持つヒトＡＰＰ７５１ｃＤＮＡの対応するフラグメントと置換することにより、修飾する。転写単位は、ＮotＩ消化により解離させる。
【００３５】
トランスジェニックマウスの作製
単離した転写単位をＢ６Ｄ２Ｆ１×Ｂ６Ｄ２Ｆ１胚の前核に注入して、初代トランスジェニック動物を作製する。
【００３６】
ノーザンブロット分析、イン・シツハイブリダイゼーション、ウェスタンブロット分析、組織学および免疫組織学
K. Andrea et al., Neurobiology of Aging, Vol. 17, No. 2, 183-190 (1996)に記載の方法に従い実施する。
【００３７】
結果
初代トランスジェニック動物の子は、イン・シツハイブリダイゼーションにより示されているように、脳構造全体においてヒトＡＰＰｍＲＮＡを高い量で発現する。測定したトランスジーン誘導タンパク質の量は、内生ＡＰＰ量の５倍ないし１０倍を上回る。６ヶ月齢で、これらのマウスは、大脳皮質におけるヒトβＡ４ペプチドの細胞外沈積と海馬状隆起形成を示す。これらの沈積物は、メテナミン銀透浸、チオフラビンＳ染色およびコンゴ・レッド複屈折に陽性である。これらは、反応性星状細胞およびジストロフィー性神経突起に囲まれている。更に、斑は、ＡＤ患者の脳に見られるような過リン酸化した微小管関連タンパク質tauに特異的な抗血清と免疫反応性であり、このことは、類似のトランスジェニック動物についてはこれまで報告されていなかった。従って、これらのマウスの脳における上記沈積は、ＡＤ患者で見られる老人性斑に非常によく似ている。アセチルコリンエステラーゼで染色すると、斑の強力な標識化とコリン作用性繊維網の局所歪曲が観察される。斑は、増大したジストロフィー性神経突起に似た構造においてアセチルコリンエステラーゼ活性を含有する。このコリン作用性神経突起の変性は、ＡＤに関連してよく知られた別の特徴である。更に、斑付近のニューロンの局所変性が海馬ＣＡ１などのＡＤにおいて典型的に影響を受ける領域にて観察される。ここで、ニューロン損失は斑負担に反比例して、２０％程度に及んだ。
【００３８】
本発明のＡＰＰトランスジェニックマウスにおけるtau過リン酸化、コリンエステラーゼ染色およびニューロン損失は、図１に例示する。トランスジェニックマウス脳の矢状遊走切片に対する、tauのリン酸化Ｓer２０２およびＴhr２０５を認識するtau抗体ＡＴ８での斑の染色は、Ａおよび高倍率のＤに示す。６ヶ月齢(２)および１５ヶ月齢(４)および同腹子対照(１、３)のトランスジェニックマウスの脳抽出物のウェスタンブロットは、ＢおよびＣに示す。各ブロットは、リン酸化従属法および非従属法にてそれぞれtauを認識する抗体ＡＴ８(Ｂ)およびＮ−tau７(Ｃ)で染色した。数字は、マーカータンパク質の分子量ｋＤａを示す。Ｅは、トランスジェニックマウスにおけるアセチルコリンエステラーゼ染色を示す。斑付近におけるコリン作用性繊維の局所歪曲は、注目できる。ＣＡ３領域のＡβ沈積物付近における尖塔状ニューロンの損失は、トルイジン・ブルー染色によりＦに示す。
【００３９】
行動試験
上記のようにして得られたトランスジェニックマウスは、Mega et al. (1996) Neurology 46, 130-135に報告されたようなＡＤ罹病患者で観察される変化に対応する顕著な非認知性行動変化を示す。
【００４０】
例えば、Kaesermann (1986) Psychopharmacol. 89, 31-37の修飾法による半囲い昇降台試験(Half-Enclosed Platform test)では、非トランスジェニック同腹子と比べて、半分の開いている部分を避ける動物や、ＡＤ患者について報告されている心的動揺、脱抑制および興奮性の指標である診査行動的運動や姿勢の増大、例えば、移動や頭上げが観察された。
【００４１】
認知試験
更に、マウスは、顕著な認知障害を示す。
例えば、Morris et al. (1982) Nature 297, 681-683の水迷路では、非トランスジェニック同腹子と比べて、昇降台の前の位置にある環形を横断した動物は顕著に少なく(２.５±０.５対４.４±０.７；ｐ＜０.０５、２−テイル マン−ホイットニーＵ試験)、またこれらのマウスが環形を含む四分円の中で過ごした時間の割合も顕著に低かった(２０.８±３.８対３３.１±３.２；ｐ＜０．０５、２−テイル マン−ホイットニーＵ試験)。
【００４２】
配列表
(１)一般的情報：
(ｉ)出願人：
(Ａ)名称：ノバルティス・アクチエンゲゼルシャフト
(Ｂ)通り：シュバルツバルトアレー215
(Ｃ)都市：バーゼル
(Ｅ)国：スイス
(Ｆ)郵便番号(ZIP)： CH-4058
(ii)発明の名称：トランスジェニック動物
(iii)配列の数：１
(iv)コンピューター読解可能形式：
(Ａ)媒介タイプ：フロッピーディスク
(Ｂ)コンピューター：IBM PC互換性
(Ｃ)オペレーティングシステム： PC-DOS/MS-DOS
(Ｄ)ソフトウェア：PatentIn Release #1.0, Version #1.30 (EPO)
(２)配列番号１の情報：
(ｉ)配列の特徴：
(Ａ)配列の長さ：１０塩基対
(Ｂ)配列の型：核酸
(Ｃ)鎖の数：二本鎖
(Ｄ)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ｃＤＮＡ
(xi)配列の記載：配列番号１：
gccgccatgg                                                          10
【配列表】
2008054678000001.app