(57)【要約】【課題】アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜疾患、アレルギー性胃腸炎又は花粉症などのI型アレルギー疾患の治療に有効な医薬を提供する。【解決手段】４糖〜２０糖のヒアルロン酸オリゴ糖もしくはその薬学的に許容される塩の単独又は複数の組み合わせをI型アレルギー疾患治療剤の有効成分とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
４糖〜２０糖のヒアルロン酸オリゴ糖もしくはその薬学的に許容される塩の単独又は複数の組み合わせを有効成分として含有するＩ型アレルギー疾患治療剤。
【請求項２】
I型アレルギー疾患がアレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜疾患、アレルギー性胃腸炎又は花粉症である、請求項１に記載の治療剤。
【請求項３】
I型アレルギー疾患が、アレルギー性結膜炎、アトピー性角結膜炎、春季カタル及び慢性カタル性結膜炎から選択されるアレルギー性結膜疾患である、請求項１に記載の治療剤。
【請求項４】
剤型が、点眼薬、眼軟膏又は点鼻薬である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、４糖〜２０糖のヒアルロン酸オリゴ糖もしくはその薬学的に許容される塩の単独又は複数の組み合わせを有効成分として含有するＩ型アレルギー疾患治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来のアレルギー疾患の治療剤には、ヒスタミン受容体拮抗薬、ケミカルメディエーター遊離抑制薬、非ステロイド系抗炎症剤、ステロイド系抗炎症剤等の局所投与や経口投与が知られている。
ヒアルロン酸を抗アレルギー剤として用いる例はいくつか報告されている。
特許文献１にはヒアルロン酸又はその塩を有効成分とする局所投与用抗アレルギー剤が開示されている。しかしながら、ヒアルロン酸の分子量については記載がなく、ヒアルロン酸のオリゴ糖を使用することについても記載はない。
特許文献２にはヒアルロン酸又はその塩を有効成分とする皮膚のアレルギー疾患治療剤が開示されている。しかしながら、ここで使用されているヒアルロン酸は分子量が１万〜500万であり、ヒアルロン酸のオリゴ糖を使用することについては記載がない。
【０００３】
特許文献３にはヒアルロン酸及び４糖のＩＬ−５遺伝子発現の阻害効果又はｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ発現の抑制効果から、気管支喘息やアレルギー性疾患の治療効果を示唆している。しかしながら、特に気管支喘息には、ＩｇＥ抗体による活性化肥満細胞から放出されるケミカルメディエーターによって引き起こされる即時型喘息反応と、肥満細胞、Ｔｈ２細胞から放出されるＩＬ−５などのサイトカインによる活性化好酸球の関与する遅発型喘息反応が知られている。特許文献３は、ＩＬ−５遺伝子の発現を阻害することから、喘息を含む活性化好酸球の関与するアレルギー性疾患等の治療効果を示唆するものであり、肥満細胞の関与するＩ型アレルギー性疾患の治療については開示されていない。
【特許文献１】特許第２７６９５８４号
【特許文献２】特許第３３１０９９４号
【特許文献３】欧州公開第１７６７２１１号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜疾患、アレルギー性胃腸炎又は花粉症などのI型アレルギー疾患の治療に有効な医薬を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討を行った。その結果、４糖〜２０糖のヒアルロン酸オリゴ糖が高分子のヒアルロン酸と比べて効率よく、I型アレルギー疾患治療効果を発揮することを見出して本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は以下のとおりである。
（１）４糖〜２０糖のヒアルロン酸オリゴ糖もしくはその薬学的に許容される塩の単独又は複数の組み合わせを有効成分として含有するＩ型アレルギー疾患治療剤。
（２）I型アレルギー疾患がアレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜疾患、アレルギー性胃腸炎又は花粉症である、（１）の治療剤。
（３）I型アレルギー疾患が、アレルギー性結膜炎、アトピー性角結膜炎、春季カタル及び慢性カタル性結膜炎から選択されるアレルギー性結膜疾患である、（１）の治療剤。
（４）剤型が、点眼薬、眼軟膏又は点鼻薬である、（１）〜（３）のいずれかの治療剤。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の薬剤を使用することにより効率よくI型アレルギー疾患を治療することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
Ｉ型アレルギー反応は、免疫グロブリンＥ (ＩｇＥ)が関与する反応で、即時型、ＩｇＥ依存型、あるいはアナフィラキシー型と呼ばれており、その原因としてハウスダスト、ダニ、花粉、真菌、動物の毛垢などの抗原が知られている。体内に侵入した抗原の刺激によりＩｇＥを介して肥満細胞が活性化され、ヒスタミン、プロスタグランジン類、トロンボキサン、ロイコトリエン類、血小板活性化因子（ＰＡＦ）などのケミカルメディエーターが放出される。これらのケミカルメディエーターの働きによりアレルギー症状が生じる。
【０００９】
Ｉ型アレルギー性疾患としては、例えば、アレルギー性結膜炎、アトピー性角結膜炎、春季カタル及び慢性カタル性結膜炎などのアレルギー性結膜疾患、強膜炎、アレルギー性鼻炎、気管支喘息及び小児喘息などの即時型喘息反応による喘息、花粉症、枯草熱、食餌アレルギー、急性湿疹、慢性湿疹、アトピー性皮膚炎、急性じん麻疹、慢性じん麻疹、皮膚そう痒症、薬疹、自己免疫性溶血性貧血、アレルギー性紫斑病、アレルギー性顆粒球減少症、アレルギー性胃腸炎、アレルギー性偏頭炎、薬物アレルギーなどが挙げられる。
【００１０】
本発明のＩ型アレルギー疾患治療剤は４糖〜２０糖のヒアルロン酸オリゴ糖又はその薬学的に許容される塩の単独又は２種以上を組み合わせた混合物でもよい。本発明治療剤に用いるヒアルロン酸オリゴ糖は４〜２０糖であるが、４糖〜１０糖が好ましく、４糖がさらに好ましい。本発明において、「Ｉ型アレルギー疾患治療剤」とは、Ｉ型アレルギー疾患の症状を軽減又は悪化防止するための医薬のみならず、Ｉ型アレルギー疾患の症状出現を防止又は予防するための医薬も含む。
また、本発明治療剤において用いることができるヒアルロン酸オリゴ糖の由来は特に限定されない。例えば、鶏冠、臍帯、ヒアルロン酸を産生する微生物等から分離、精製された高分子ヒアルロン酸を分解する方法（例えば酵素分解法、化学分解法、加熱処理法、超音波処理法等）や、ヒアルロン酸オリゴ糖を直接合成する方法（例えば化学合成法や酵素合成法）によって４糖〜２０糖のヒアルロン酸オリゴ糖を得ることができる。
【００１１】
酵素分解法としては、ヒアルロニダーゼ（睾丸由来）、ヒアルロニダーゼ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ由来）、ヒアルロニダーゼＳＤ、コンドロイチナーゼＡＣＩ、コンドロイチナーゼＡＣＩＩ、コンドロイチナーゼＡＣＩＩＩ、コンドロイチナーゼＡＢＣなどの、ヒアルロン酸を分解できる酵素を高分子ヒアルロン酸に作用させる方法が挙げられる（新生化学実験講座「糖質ＩＩ−プロテオグリカンとグリコサミノグリカン−」ｐ２４４−２４８、１９９１年発行、東京化学同人、又はＧｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ、１２、ｐ４２１−４２６、２００２）。
【００１２】
化学分解法としては、アルカリ分解法やＤＭＳＯ法等が挙げられる。アルカリ分解法は、例えば、高分子ヒアルロン酸の溶液に１Ｎ程度の水酸化ナトリウム等の塩基を加え、数時間加温して低分子化させた後、塩酸等の酸を加えて中和することにより行うことができる。ＤＭＳＯ法としてはＮａｇａｓａｗａらの方法（Ｃａｒｂｏｈｙｄ．Ｒｅｓ．，１４１、ｐ９９−１１０、１９８５）が挙げられる。超音波処理法としてはＢｉｏｃｈｅｍ．，３３、ｐ６５０３−６５０７、１９９４）等に記載された方法が挙げられる。
【００１３】
合成による製造方法としてはＧｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｊ．，ｐ４５３−４３９
、１９９３）、国際公開ＷＯ９３／２０８２７等に記載された方法が挙げられる。
【００１４】
以上のような方法によってヒアルロン酸オリゴ糖を含む画分が得られるが、この画分は通常の糖鎖の分離、精製の手法によってさらに精製することができる。例えば、吸着クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過法、ゲル浸透クロマトグラフィー、濾紙電気泳動法、濾紙クロマトグラフィー、塩析、有機溶媒による分画、あるいはこれらの組み合わせ等の操作によって精製することができる（Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ、１２、ｐ４２１−４２６、２００２）が、これらに限定されるものではない。
このような方法によって画分中のヒアルロン酸オリゴ糖の含有率を高めることができ、また医薬として混入が許されない物質を排除することもできる。
【００１５】
ヒアルロン酸オリゴ糖の薬学的に許容される塩としては薬学的に許容されるものであればよいが、例えば、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、リチウム塩、カリウム塩等）、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩等の無機塩基との塩、又はジエタノールアミン塩、シクロヘキシルアミン塩、アミノ酸塩等の有機塩基との塩が挙げられる。なかでもナトリウム塩であることが好ましい。
【００１６】
本発明に用いられるヒアルロン酸オリゴ糖は、高純度に精製され、医薬として混入が許されない物質を実質的に含まないものが好ましい。
なお、本発明治療剤に使用されるヒアルロン酸オリゴ糖又はその薬学的に許容される塩中のエンドトキシン濃度は、本発明治療剤を液剤とした場合において０．３ＥＵ／ｍＬ以下、液剤以外の剤とした場合においては前記液剤のエンドトキシン含量に相当する量以下であることが好ましい。本発明治療剤中のエンドトキシン濃度は、当業者に周知慣用のエンドトキシンの測定法を用いて測定することができるが、カブトガニ・アメボサイト・ライセート成分を用いるリムルス試験法が好ましい。なお、ＥＵ（エンドトキシン単位）は、日本工業規格生化学試薬通則（ＪＩＳ  Ｋ８００８）に従って測定・算出できる。また、鉄含量は２０ｐｐｍ以下であることが好ましい。
【００１７】
本発明治療剤の投与は経口的、非経口的又は局所的に行うことができるが、特に投与の簡便さから、点眼（眼軟膏の局所投与を含む）、点鼻等の局所投与が推奨される。その投与量は症状の軽重、年齢、体重、投与経路、性別、医師の判断等に応じて適宜選択することができるが、成人の場合、通常、有効成分として０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日を１日に１回又は数回に分けて投与し得る。
投与に際しては、その投与経路に応じて、例えば、錠剤、カプセル剤、液剤、顆粒剤、散剤、リポ化剤等の経口投与製剤、注射剤、点滴剤、坐剤等の非経口投与製剤、点眼剤、点鼻剤、眼軟膏などの軟膏剤、硬膏剤、クリーム剤、ローション剤、パスタ剤、貼付剤、ゲル剤、外用散剤、スプレー剤、吸入散剤等の外用局所製剤の剤型に製剤化することができ、これらは常法に従って製剤化を行うことができる。
また、本発明治療剤は、本発明の効果を損なわない範囲で他の成分を配合することができる。それらの成分としては、各種薬物、緩衝剤、溶解補助剤、等張化剤、安定化剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、保湿剤、矯味剤等が挙げられる。なお、これらの成分は通常使用量で使用することができる。
【実施例】
【００１８】
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明する。ただし、本発明は以下の実施例の態様に限定されない。
【００１９】
試験方法
I型アレルギー疾患のモデルであるマウスＰＣＡ (受動皮膚アナフィラキシー)反応試験で試験を行った。（Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｐｐｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８１，ｐ５８−６２，１９８６）
【００２０】
被験物質
高分子ヒアルロン酸（９００ｋＤａ（重量平均分子量；以下、同様）、生化学工業）又はヒアルロン酸４糖（８００Ｄａ、生化学工業）を用いた。これらを生理食塩液（以下、「生食」とも記載する。大塚製薬工場）に０．０１及び１ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解し投与用薬液とした。
【００２１】
感作用抗体溶液
マウス・モノクローナル抗ＤＮＰ−ＩｇＥ抗体（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｔｉ−ＤＮＰ  ＩｇＥ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）（１ｍｇ／ｍＬ  ＩｇＥ  ｉｎ  ＰＢＳ、生化学工業）を生食にて１μｇ／ｍＬの濃度に希釈し感作用抗体溶液とした。
【００２２】
抗原色素混液
ウシ血清アルブミン（以下、「ＢＳＡ」とも記載する。Ｔｒａｃｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＮＺ）を生食に溶解し、Ｎａ2ＣＯ3（和光純薬工業）にてｐＨを調整後、２，４−ジニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム（ＤＮＢＳ、Ａｖｏｃａｄｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を加えて反応（ＢＳＡへの２，４−ｄｉｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ（ＤＮＰ）基導入）させ、ＤＮＰ−ＢＳＡ生理食塩水溶液を調製した。２５ｍｇ／ｍＬ
ＤＮＰ−ＢＳＡ生理食塩水溶液を生食にて２ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈し、１ｗ／ｖ％Ｅｖａｎｓ  Ｂｌｕｅ生理食塩水溶液を等量混合し、抗原色素混液（１ｍｇ／ｍＬ  ＤＮＰ−ＢＳＡ  ０．５ｗ／ｖ％Ｅｖａｎｓ  Ｂｌｕｅ生理食塩水溶液）とした。
【００２３】
実験方法
７週齢ＢＡＬＢ／ｃ系雌性マウス(日本チャールス・リバー)を、感作実施当日あるいは前日に測定した体重を指標に群分けした。
除毛した背部２ヶ所に感作用抗体溶液を２０μＬ（２０ｎｇ  ＩｇＥ）ずつ皮内投与した。なお、非感作群には生食のみを同様に皮内投与した。約２４時間後、体重１ｋｇ当たり１０ｍＬの容量で、上記各被験物質の投与用薬液を腹腔内投与した。非感作群及び対照群には生食を同様に腹腔内投与した。その１時間後、抗原色素混液を体重１ｋｇ当たり１０ｍＬの容量で尾静脈内に投与した。３０分後、背部皮膚を摘出し、色素漏出部位（感作用抗体溶液あるいは生食皮下投与部位）をＢｉｏｐｓｙ  Ｐｕｎｃｈを用いて直径８ｍｍの円形に打ち抜いた。打ち抜いた組織に１Ｎ  ＫＯＨ水溶液を０．２５ｍＬ加え３７℃で約２４時間インキュベートし、さらに０．６Ｎ  Ｈ3ＰＯ4水溶液とアセトンの混液（５：１３）を１．５ｍＬ加え、組織中の色素を抽出した。この抽出液の６２０ｎｍにおける吸光度を測定し、色素量を定量し、各群の平均色素量を算出した。
非感作群及び対照群の色素漏出抑制率（％）をそれぞれ１００及び０とし、各被検物質の色素漏出抑制率（％）を算出した。
【００２４】
統計処理
得られた数値データについては、試験群ごとに平均及び標準誤差をそれぞれ算出した。また、ＳＡＳ前臨床パッケージＶ５．０ソフトウェア（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｊａｐａｎ）を用い、パラメトリックＤｕｎｎｅｔｔ型多重比較検定を行った。有意水準は両側５％とした。
【００２５】
結果
試験結果を表１に示す。
【００２６】
【表１】
2008290998.tif 000002
【００２７】
ＰＣＡ反応において、高分子ヒアルロン酸に有意な抑制作用は認められなかった。一方、ヒアルロン酸４糖は ０．１及び１０ｍｇ／ｋｇの投与量において用量依存的に有意な抑制作用が認められた。
ＰＣＡ反応の抑制作用は高分子ヒアルロン酸には認められずヒアルロン酸オリゴ糖に効果が認められたことから、抗Ｉ型アレルギー作用はヒアルロン酸オリゴ糖に特異的な効果と考えられた。