(57)【要約】【課題】テガフール、ギメラシル及びオテラシルを１：０．４：１のモル比で含有する抗癌剤の適正の経口投与量を決定するための経口投与量決定方法、及び適正に決定された経口投与量で投与される上記抗癌剤を提供する。【解決手段】テガフールとギメラシルとオテラシルとを１：０．４：１のモル比で含有する抗癌剤の投与量決定方法であって、前記抗癌剤の投与量はクレアチニンクリアランスを指標に決定される、抗癌剤の投与量決定方法。また、テガフールとギメラシルとオテラシルとを１：０．４：１のモル比で含有する抗癌剤であって、クレアチニンクリアランスを指標に決定された投与量で投与される、抗癌剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
テガフールとギメラシルとオテラシルとを１：０．４：１のモル比で含有する抗癌剤の経口投与量決定方法であって、前記抗癌剤の経口投与量はクレアチニンクリアランスを指標に決定される、抗癌剤の投与量決定方法。
【請求項２】
テガフールとギメラシルとオテラシルとを１：０．４：１のモル比で含有する抗癌剤であって、クレアチニンクリアランスを指標に決定された経口投与量で投与される、抗癌剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗癌剤及び抗癌剤の経口投与量決定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗癌剤Ｓ−１（ティーエスワン（登録商標）；大鵬薬品工業株式会社）は、テガフール（ＦＴ）、ギメラシル（ＣＤＨＰ）及びオテラシル（Ｏｘａ）を１：０．４：１のモル比で含有する配合剤であり、主に胃がん、結腸・直腸がんなどの腫瘍の治療に用いられている。
【０００３】
Ｓ−１の作用機序は、以下のように考えられている。Ｓ−１が経口投与されると、ＦＴが体内において徐々に抗腫瘍効果を有する５−ＦＵへ変換される。この変換は、ヒト肝における主要な薬物代謝酵素であるＣＹＰ２Ａ６が関与することが知られている（非特許文献１）。一方、ＣＤＨＰは主として肝に多く分布する５−ＦＵ異化代謝酵素のジヒドロピリミジン脱水素酵素（ＤＰＤ）を選択的に拮抗阻害し、５−ＦＵの異化代謝酵素による無毒化を遅延させる（非特許文献２）。これによって、生体内５−ＦＵ濃度が上昇し、腫瘍内において５−ＦＵのリン酸化代謝物である５−フルオロヌクレオチドが高濃度持続され、抗腫瘍効果が増強される。また、Ｏｘａは経口投与により主として消化管組織に分布し、ｏｒｏｔａｔｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅを選択的に拮抗阻害し、５−ＦＵから５−フルオロヌクレオチドへの生成を選択的に抑制する。その結果Ｓ−１投与により５−ＦＵの強い抗腫瘍効果を損なうことなく消化器毒性が軽減されると考えられている（非特許文献３）。
【０００４】
しかしながら、Ｓ−１の経口投与は依然として重大な副作用を伴うものである。このような重大な副作用としては、重篤な肝障害や骨髄抑制、重篤な口内炎及び消化管潰瘍、急性腎不全などが挙げられる。
【０００５】
現在、臨床においてＳ−１の経口投与量は、患者の体表面積（ＢＳＡ）を基準に決定されている（非特許文献４）。すなわち、ＢＳＡが１．２５ｍ２未満の場合、テガフールの初回基準量は４０ｍｇ／回と、ＢＳＡが１．２５ｍ２以上〜１．５ｍ２未満の場合、テガフールの初回基準量は５０ｍｇ／回と、ＢＳＡが１．５ｍ２以上の場合、テガフールの初回基準量は６０ｍｇ／回と決定される。この経口投与量決定方法は、日本の保険医療において認められている唯一の方法である。
【０００６】
【非特許文献１】Ｉｋｅｄａら、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．６，４４０９−４４１５（２０００）
【非特許文献２】Ｔａｔｕｓｍｉら、Ｊｐｎ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．７８，７４８−７５５（１９８７）
【非特許文献３】Ｓｈｉｒａｓａｋａ  Ｔ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  Ｓｅｐ  １；５３（１７）：４００４−９（１９９３）
【非特許文献４】Ｋｉｒａｔａら、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．５，２０００−２００５（１９９９）
【非特許文献５】Ｍａｓｕｔａｎｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｖｏｌ．５０，２５−３２（２００２）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、Ｓ−１の経口投与量を患者の体表面積を基準に決定することの有用性は、必ずしも科学的に検証されていない。また、患者の体表面積を基準に投与量を決定しても、患者によって効果及び副作用の個人差が大きい。
【０００８】
また、上述したように、ＦＴから５−ＦＵへの変換には、薬物代謝酵素であるＣＹＰ２Ａ６が関与しており、ＣＹＰ２Ａ６の遺伝子多型が存在するにもかかわらず、その影響は殆ど考慮されていない。さらに、ＣＤＨＰは主に腎臓によって排泄され、ＣＤＨＰの排泄は、腎機能の低下により遅延し、その結果５−ＦＵの血中濃度が増加したとの報告もある（非特許文献５）。
【０００９】
そこで、本発明は、テガフール、ギメラシル及びオテラシルを１：０．４：１のモル比で含有する抗癌剤の適正の経口投与量を決定するための経口投与量決定方法、及び適正に決定された経口投与量で投与される上記抗癌剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究の結果、５−ＦＵの血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ５−ＦＵ）は、ＣＤＨＰの血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣＣＤＨＰ）と有意に相関すること、また、ＡＵＣ５−ＦＵはＣＹＰ２Ａ６の遺伝子型や体表面積とは相関しないことを見出し、さらに、ＡＵＣ５−ＦＵ及びＡＵＣＣＤＨＰはそれぞれクレアチニンクリアランス（Ｃｃｒ）と有意に相関することを見出し、本発明の完成に至った。
【００１１】
すなわち、本発明の抗癌剤の経口投与量決定方法は、テガフールとギメラシルとオテラシルとを１：０．４：１のモル比で含有する抗癌剤の経口投与量決定方法であって、上記抗癌剤の経口投与量はクレアチニンクリアランスを指標に決定されるものである。
【００１２】
また、本発明の抗癌剤は、テガフールとギメラシルとオテラシルとを１：０．４：１のモル比で含有する抗癌剤であって、クレアチニンクリアランスを指標に決定された経口投与量で投与されるものである。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の抗癌剤の経口投与量決定方法及び本発明の抗癌剤によれば、抗癌剤の経口投与量をクレアチニンクリアランスを指標に決定することにより、所望の５−ＦＵの血漿濃度曲線下面積を得ることができ、それによって抗腫瘍効果を高く維持し、かつ副作用を低く抑えることが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明の好ましい実施形態について説明するが、本発明は以下の実施形態及び実施例に限定されるものではない。
【００１５】
本発明の抗癌剤は、テガフールとギメラシルとオテラシルとを１：０．４：１のモル比で含有する抗癌剤であって、クレアチニンクリアランスを指標に決定された経口投与量で投与されるものである。テガフールとギメラシルとオテラシルとを１：０．４：１のモル比で含有する抗癌剤として、典型的に日本では大鵬薬品工業株式会社のティーエスワン（登録商標）が挙げられる。ここのティーエスワンは配合剤であるが、本発明の抗癌剤は配合剤でなくてもよく、例えば、ガフール、ギメラシル及びオテラシルのそれぞれの単剤を１：０．４：１のモル比で投与する抗癌剤であってもよい。
【００１６】
本発明の抗癌剤は、経口剤である。剤形はとくに限定されず、錠剤やカプセル、散剤、顆粒剤、丸剤などのいずれの剤型であってもよい。
【００１７】
本発明の抗癌剤には、上記の３つの有効成分以外に、各種薬学的に許容できる添加剤が含まれてもよい。このような添加剤は、例えば、上記の製剤の製造において、一般に使用される結合剤、包含剤、賦形剤、滑沢剤、崩壊剤、湿潤剤などの添加剤が挙げられる。
【００１８】
配合剤の場合、経口剤中におけるテガフールの含有量が１５〜３０ｍｇの範囲内であることが好ましく、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ及び３０ｍｇであることが特に好ましい。例えば、テガフールが２０ｍｇである場合、ギメラシル及びオテラシルのカリウム塩であるオテラシルカリウムはそれぞれ５．８ｍｇ及び１９．６ｍｇ配合される。
【００１９】
本発明の抗癌剤は、胃がん、結腸・直腸がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、手術不能又は再発乳がん、及び膵がんなどの腫瘍の治療に用いられている。特に、胃がん、結腸・直腸がんの治療に好ましく用いられる。
【００２０】
本発明の抗癌剤の経口投与量は、本発明に係る抗癌剤の経口投与量の決定方法によって決定される。すなわち、本発明の抗癌剤の経口投与量は、クレアチニンクリアランスを指標に決定される。クレアチニンは、腎糸球体からろ過された後、殆ど再吸収されることなく、尿中へ排出される。この特性を利用して、クレアチニンクリアランスや血清中のクレアチニン濃度を測定することによって、腎機能の評価が行われる。クレアチニンクリアランスは、血中及び尿中のクレアチニンの量などの測定値を用いて、算出することができる。このような算出式としては、ＣｏｃｋＣｒｏｆｔ  ＆  Ｇａｕｌｔ式、Ｊｅｌｌｉｆｆｅ式、及びＳａｎａｋａ式などが挙げられ、ＣｏｃｋＣｒｏｆｔ  ＆  Ｇａｕｌｔ式を使用することが好ましい。なお、血清中及び尿中のクレアチニンの量を測定する方法は、一般的に用いられている方法であれば特に限定されない。
【００２１】
クレアチニンクリアランスの正常値は、一般に７０〜１３０ｍＬ／ｍｉｎとされている。腎機能低下の場合には、より低値となるが、妊娠や初期糖尿病の場合には、より高値となる。本発明の抗癌剤を経口投与する場合、ＡＵＣ５−ＦＵ及びＡＵＣＣＤＨＰはＣｃｒと有意に相関がある。腎機能が低下している場合に、正常な腎機能を有するヒトに比べて、ＡＵＣ５−ＦＵ及びＡＵＣＣＤＨＰが高い傾向にある。逆に、腎機能が亢進している場合、正常な腎機能を有するヒトに比べて、ＡＵＣ５−ＦＵ及びＡＵＣＣＤＨＰが低い傾向にある。このため、本発明の抗癌剤の経口投与量は、クレアチニンクリアランスを基準に決定される。
【００２２】
本発明に係る抗癌剤の経口投与量の決定方法は、以下の工程を含む。抗癌剤の投与前に、癌患者のクレアチニンクリアランス（Ｃｃｒ）を測定する測定工程と、癌患者のＣｃｒによって抗癌剤の経口投与量を決定する決定工程とを含む。決定工程においては、癌患者のＣｃｒは正常値の下限もより低い場合、抗癌剤の投与量を減少させる。癌患者のＣｃｒは正常値の上限よりも高い場合、抗癌剤の投与量を増加させる。このように決定された経口投与量で投与すれば、所望のＡＵＣ５−ＦＵ又はＡＵＣＣＤＨＰを得ることができ、それにより抗腫瘍効果を高く維持し、かつ副作用を低く抑えることが可能である。
【実施例】
【００２３】
以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００２４】
（実施例１）  Ｓ−１の臨床投与試験
（患者）
４０名日本人癌患者がＳ−１の臨床投与試験に参加した。これらの患者は、すべて２０歳以上であり、転移性又は再発性固形癌に罹り、かつ以前固形癌と診断されていた。また、これらの患者のＷＨＯ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｓｔａｔｕｓ（ＰＳ）が０〜３であった。Ｓ−１の投与開始前４週間以内に抗癌剤を用いた化学療法又は放射線療法を受けていなかった。
【００２５】
試験開始前に、これらの患者が正常な骨髄、正常な肝機能及び腎機能を有することが確認された。各検査結果は、以下のようになる。好中球数が１．５×１０９／Ｌ以上であり、血小板数は１００×１０９／Ｌ以上であり、血清ビリルビンレベルは３．０ｍｇ／ｄｌ以下であり、アミノ基転移酵素は２．０×上限値以下又は正常であり、血清クレアチニンレベルは２０ｍｇ／ｍＬ以下であった。
【００２６】
（投与）
投与試験は、２００５年９月から２００６年１２月までの間に行われた。投与試験では、患者にＳ−１（ティーエスワン（登録商標））を１日２回、２８日間連続投与した。投与量は、患者の体表面積（ＢＳＡ）によって決定した。ＢＳＡが１ｍ２以下の患者に８０ｍｇ／日の投与量で、ＢＳＡが１ｍ２〜１．２５ｍ２の患者に１００ｍｇ／日の投与量で、ＢＳＡが１．２５ｍ２以上の患者に１００ｍｇ／日の投与量で、１日２回投与した。
【００２７】
（ＣＹＰ２Ａ６の遺伝子型）
患者のＣＹＰ２Ａ６の遺伝子型を分析した。患者から末梢血を採取し、ＱＩＡａｍｐ  Ｂｌｏｏｄ  Ｋｉｔを用いてゲノムＤＮＡを精製し、分析があるまで−８０℃にて保存した。
【００２８】
ＣＹＰ２Ａ６＊４（ＣＹＰ２Ａ６＊４及びＣＹＰ２Ａ６＊４Ｄ）は、Ｎａｋａｊｉｍａら（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ５６９：７５〜８１（２００４））に記載のＰＣＲ−ＲＦＬＰ法にしたがって分析した。ＰＣＲプライマーとして、センス：５’−ＴＴＴＧＴＧＴＣＡＧＧＡＧＡＡＴＣＡＡＡＣ−３’（配列番号１）及び、アンチセンス：５’−ＡＡＡＡＴＧＧＧＣＡＴＧＡＡＣＧＣＣＣ−３’（配列番号２）を使用した。ＰＣＲ反応は、５０ｎｇのゲノムＤＮＡを鋳型として、１．０  ＵのＡｍｐｌｉＴａｑ  Ｇｏｌｄ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、並びに終濃度として、０．４μＭずつのプライマー、０．２５ｍＭのｄＮＴＰｓ、１．５ｍＭのＭｇＣｌ２、及び１×ＧｅｎｅＡｍｐ  ＰＣＲバッファーを含む５０μＬのＰＣＲ反応液を用いて行った。最初の変性を９４℃にて１５分行った後、９４℃にて３０秒の変性、５３℃にて３０秒のアニーリング、及び７２℃にて２分の伸長を３０サイクル行い、最後に７２℃にて５分伸長させた。
【００２９】
ＣＹＰ２Ａ６＊７はＡｒｉｙｏｓｈｉら（Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２８１：８１０−８１４（２００１））に記載の対立遺伝子特異的ＰＣＲ法にしたがって分析した。第１のＰＣＲでは、プライマーとして、センス：５’−ＣＡＣＣＧＡＡＧＴＧＴＴＣＣＣＴＡＴＧＣＴＧ−３’（配列番号３）、及び、アンチセンス：５’−ＴＧＴＡＡＡＡＴＧＧＧＣＡＴＧＡＡＣＧＣＣＣ−３’（配列番号４）を使用した。第１のＰＣＲ反応は、５０ｎｇのゲノムＤＮＡを鋳型として、１．０  ＵのＬＡ  Ｔａｑ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、並びに終濃度として、０．２μＭずつのプライマー、０．４ｍＭのｄＮＴＰｓ、２．５ｍＭのＭｇＣｌ２、及び１×ＬＡ  ＰＣＲバッファーＩＩを含む２５μＬのＰＣＲ反応液を用いて行った。最初の変性を９４℃にて３分行った後、９４℃にて１分の変性、５６℃にて１分のアニーリング、及び７２℃にて２分の伸長を３０サイクル行った。第２のＰＣＲでは、プライマーとして、センス：５’−ＣＴＣＣＣＡＧＴＣＡＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＴ−３’（配列番号５）、及びアンチセン：５’−ＣＴＣＣＣＡＧＴＣＡＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣ−３’（配列番号６）を使用した。第１のＰＣＲ産物を１０倍希釈して、第２のＰＣＲ反応に適用した。第２のＰＣＲ反応は、１μＬの第１のＰＣＲ産物の希釈液を鋳型として、１．０  ＵのＡｍｐｌｉＴａｑ  Ｇｏｌｄ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、並びに終濃度として、０．２５μＭずつのプライマー、０．２５ｍＭのｄＮＴＰｓ、１．０ｍＭのＭｇＣｌ２、及び１×ＧｅｎｅＡｍｐ  ＰＣＲバッファーを含む２５μＬのＰＣＲ反応液を用いて行った。最初の変性を９４℃にて１５分行った後、９４℃にて２０秒の変性、６０℃にて２０秒のアニーリング、及び７２℃にて４５秒の伸長を１３サイクル行った。
【００３０】
ＣＹＰ２Ａ６＊９はＹｏｓｈｉｄａら（Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ  ７４：６９−７６（２００３））に記載の対立遺伝子特異的ＰＣＲ法にしたがって分析した。ＰＣＲプライマーとして、センス：５’−ＧＡＴＴＣＣＴＣＴＣＣＣＣＴＧＧＡＡＣ−３’（配列番号７）、及び、アンチセンス：５’−ＧＧＣＴＧＧＧＧＴＧＧＴＴＴＧＣＣＴＴＴＡ−３’（配列番号８）を使用した。ＰＣＲ反応は、５０ｎｇのゲノムＤＮＡを鋳型として、１．０  ＵのＡｍｐｌｉＴａｑ  Ｇｏｌｄ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、並びに終濃度として、０．４μＭずつのプライマー、０．２５ｍＭのｄＮＴＰｓ、２ｍＭのＭｇＣｌ２、及び１×ＧｅｎｅＡｍｐ  ＰＣＲバッファーを含む２５μＬのＰＣＲ反応液を用いて行った。最初の変性を９４℃にて１５分行った後、９４℃にて３０秒の変性、６４℃にて３０秒のアニーリング、及び７２℃にて２５秒の伸長を２５サイクル行った。
【００３１】
ＣＹＰ２Ａ６＊１×２は、Ｓｃｈｏｅｄｅｌら（Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  １４：６１５−６２６（２００４））に記載の方法にしたがって分析した。第１のＰＣＲでは、ＰＣＲプライマーとして、センス：５’−ＧＧＣＣＡＡＣＡＴＧＣＣＣＴＡＣＡＴＧ−３’（配列番号９）、及び、アンチセンス：５’−ＧＣＡＣＴＴＡＴＧＴＴＴＴＧＴＧＡＧＡＣＡＴＣＡＧＡＴＡＧＡＧ−３’（配列番号１０）を使用した。第１のＰＣＲ反応は、５０ｎｇのゲノムＤＮＡを鋳型として、１．０  ＵのＡｍｐｌｉＴａｑ  Ｇｏｌｄ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、並びに終濃度として、０．２５μＭずつのプライマー、０．２ｍＭのｄＮＴＰｓ、１．２ｍＭのＭｇＣｌ２、及び１×ＧｅｎｅＡｍｐ  ＰＣＲバッファーを含む２５μＬのＰＣＲ反応液を用いて行った。最初の変性を９５℃にて１分行った後、９５℃にて１５秒の変性、６０℃にて２０秒のアニーリング、及び７２℃にて３分の伸長を３５サイクル行い、最後に７２℃にて７分伸長させた。第２のＰＣＲでは、プライマーとして、センス：５’−ＣＡＴＴＴＣＣＴＧＧＡＴＧＡＣ−３’（配列番号１１）、及び、アンチセンス：５’−ＡＡＡＡＴＧＧＧＣＡＴＧＡＡＣＧＣＴＴ−３’（配列番号１２）を使用した。第２のＰＣＲ反応は、５０ｎｇのゲノムＤＮＡを鋳型として、１．０  ＵのＡｍｐｌｉＴａｑ  Ｇｏｌｄ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、並びに終濃度として、０．２５μＭずつのプライマー、０．２ｍＭのｄＮＴＰｓ、１．２ｍＭのＭｇＣｌ２、及び１×ＧｅｎｅＡｍｐ  ＰＣＲバッファーを含む２５μＬのＰＣＲ反応液を用いて行った。最初の変性を９５℃にて１分行った後、９５℃にて１５秒の変性、４４℃にて２０秒のアニーリング、及び７２℃にて４分半の伸長を１５サイクル行、最後に７２℃にて１０分伸長させた。
【００３２】
（ＤＰＹＤの遺伝子型）
ＤＰＹＤ＊２及びＤＰＹＤ＊３は、Ｒｉｄｇｅら（Ｂｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ４６：１５１−１５６（１９９８））に記載の方法にしたがって分析した。ＤＰＹＤ＊２用のＰＣＲプライマーとして、センス：５’−ＧＡＡＣＣＡＣＣＴＣＴＧＧＣＣＣＣＡＣＧＴＡＴＧ−３’（配列番号１３）、及び５’−ＣＡＧＣＡＡＡＧＣＡＡＣＴＧＧＣＡＧＡＴＴＣ−３’（配列番号１４）を使用し、また、ＤＰＹＤ＊３用プライマーとして、センス：５’−ＧＡＡＣＣＡＣＣＴＣＴＧＧＣＣＣＣＡＣＧＴＡＴＧ−３’（配列番号１５）、及び、アンチセンス：５’−ＴＧＴＴＡＡＡＴＣＡＣＡＣＴＴＡＣＧＴＴＧＴＣＣＧ−３’（配列番号１６）を使用した。ＰＣＲ反応は、５０ｎｇのゲノムＤＮＡを鋳型として、１．２５  ＵのＡｍｐｌｉＴａｑ  Ｇｏｌｄ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、並びに終濃度として、０．２μＭずつのプライマー、０．２ｍＭのｄＮＴＰｓ、２．０ｍＭのＭｇＣｌ２、及び１×ＧｅｎｅＡｍｐ  ＰＣＲバッファーを含む２５μＬのＰＣＲ反応液を用いて行った。最初の変性を９５℃にて１５分行った後、９５℃にて１分の変性、５８℃にて１分のアニーリング、及び７２℃にて２分の伸長を３１サイクル行い、最後に７２℃にて３分の伸長を行った。
【００３３】
ＤＰＹＤ＊１１及びＤＰＹＤ＊１２は、Ｋｏｕｗａｋｉら（Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ４：２９９９−３００４（１９９８））に記載の方法にしたがって分析した。ＤＰＹＤ＊１１用プライマーとして、センス：５’−ＧＴＧＣＧＣＣＴＧＴＣＡＣＴＣＴＣＣＡＴ−３’（配列番号１７）、及び５’−ＴＴＴＡＣＣＴＣＣＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＣ−３’（配列番号１８）を使用し、また、ＤＰＹＤ＊１２用プライマーとして、センス５’−ＴＴＴＡＧＡＧＴＡＴＣＣＴＧＧＣＴＴＴＡ−３’（配列番号１９）、及び、アンチセンス：３’−ＴＧＧＴＡＣＴＴＡＣＡＡＡＧＣＡＧＴＴＣ−３’（配列番号２０）、或いは、センス：５’−ＴＡＧＡＴＧＧＡＡＣＴＴＧＣＴＡＡＧＧＡ−３’（配列番号２１）、及び、アンチセンス：５’−ＧＡＡＣＴＧＡＡＣＣＡＡＡＡＧＧＣＡＣＴＧ−３’（配列番号２２）を使用した。ＰＣＲ反応は、５０ｎｇのゲノムＤＮＡを鋳型として、０．１３  ＵのＡｍｐｌｉＴａｑ  Ｇｏｌｄ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、０．２μＭずつのプライマー、０．２ｍＭのｄＮＴＰｓ、３．０ｍＭのＭｇＣｌ２、及び１×ＧｅｎｅＡｍｐ  ＰＣＲバッファーを含む２５μＬのＰＣＲ反応液を用いて行った。ＰＣＲ増幅の条件は上記のＤＰＹＤ＊２及びＤＰＹＤ＊３のときと同じであった。
【００３４】
（薬物動態）
薬物動態を評価するための採血はＳ−１投与初日に行われた。また、初日の２回目の投与はしなかった。採血は、Ｓ−１投与直前、投与後０．５、１、２、４、８及び２４時間後にそれぞれ行われた。血液は採血直後に遠心分離し、血漿サンプルは分析があるまで−８０℃にて保存した。
【００３５】
ＦＴ及び５−ＦＵの血漿濃度は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて測定した。標準品のＦＴ及び５−ＦＵは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈより入手した。２５０μＬの血漿サンプル、１００μＬの０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）、及び１００μＬの１００μＭブロモウラシル（内部標準）を混合した後、さらに４ｍＬの酢酸エチルを加え、１０分間振とうし、２３００ｇで１０分間遠心分離した。有機相は、別の試験管に移し、上記の抽出をもう一度行った。有機層を合わせ、濃縮・乾燥し、残渣を０．３ｍＬの２０ｍＭのＮａＣｌＯ４緩衝液（ｐＨ２．５）に溶かし、２，０００ｇで１０分間遠心分離した。１０μＬの上清を取り、Ｃａｐｃｅｌｌ  Ｐａｋ  Ｃ１８  ＳＧ  １２０分析カラム（４．６×２５０ｍｍ；５μｍ；資生堂）を装着したＨＰＬＣシステム（日立モデル７０００シリーズ）に投入した。
【００３６】
ＨＰＬＣの条件は以下の通りである。
Ａ液：２０ｍＭ  ＮａＣｌＯ４緩衝液（ｐＨ２．５）
Ｂ液：アセトニトリル
温度：３５℃
流速：０．８ｍＬ／分
グラジエント：Ａ／Ｂ＝１００／０〜８７．５／１２．５で２０分溶出
検出波長：２７０ｎｍ
【００３７】
ＦＴ及び５−ＦＵの定量は、クロマトグラフィーにおけるそれぞれのピークの面積と内部標準であるブロモウラシル（和光純薬工業株式会社）のピーク面積とを比較することによって行った。ＦＴ及び５−ＦＵの定量の下限値は、それぞれ５０ｎｇ／ｍＬ（０．２５μＭ）及び１６ｎｇ／ｍＬ（０．１２５μＭ）であった。ＦＴ及び５−ＦＵのｉｎｔｒａ−ａｓｓａｙ及びｉｎｔｅｒ−ａｓｓａｙの変動変数は１０％未満であった。
【００３８】
ＣＤＨＰの血漿濃度は、Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａら（Ｊ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  Ｂ  ６９１：９５−１０４（１９９７））に記載の方法にしたがい、ＧＣ−ＭＳシステムを用いて測定した。水で１０倍に希釈した血漿サンプル０．２５ｍＬに、０．１ｍＬの０．２Ｍリン酸緩衝液及び０．１ｍＬの内部標準物質である［１８Ｏ２］−ＣＤＨＰ（５００ｎｇ／ｍＬ）を加え、さらに４ｍＬのジクロロメタンを加えた後、１０分間振とうし、２，０００ｇで５分間遠心分離した。有機層を別の試験管に取り、上記抽出をさらに２回行った。水層に０．４ｍＬのリン酸二水素カリウム及び４ｍＬの酢酸エチルを加えた後、１０分間振とうし、２，０００ｇで５分間遠心分離した。酢酸エチル相を別の試験管に取り、上記抽出をもう一度行った。酢酸エチル相を合わせて、４０℃にて窒素ガスを吹き付けながら蒸発乾固させた。残渣を３０μＬのアセトニトリルに溶解し、さらに１０μＬのペンタフルオロベンジルブロマイド及び１０μＬのトリエチルアミンを加えた。室温に３０分放置した後、０．０５ｍＬの酢酸エチル及び０．５ｍＬのｎ−ヘキサンを順に加え、ボルテックスで混合し、遠心分離した。分離した上層液を窒素ガスを吹き付けながら蒸発乾固させ、残渣を０．２ｍＬの酢酸エチルに溶解し、そのうちの１μＬをＧＣ／ＭＳシステムに投入した。
【００３９】
ＦＴ、５−ＦＵ及びＣＤＨＰのＡＵＣ（μＭ−ｈ）は、台形法（血漿濃度のピークまで）、及びＬｉｎｅａｒ／Ｌｏｇ台形法（最後の検出可能な濃度まで）によって、コンピュータプログラム（ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ５．１  ｓｏｆｔｗａｒｅ；Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いて算出した。ＦＴの０から無限大時間までのＡＵＣ（ＡＵＣ０−∞）は、０．５、１、２、４、８及び２４時間の測定値に基づいて評価した。ＦＴの経口投与クリアランス（ＣＬ／Ｆ、ｌ／ｈ）は、ＡＵＣ０−∞及び投与量によって算出した。５−ＦＵの０から８時間までのＡＵＣ（ＡＵＣ０−８）は、０．５、１、２、４及び８時間の測定値に基づいて評価した。ＣＤＨＰの０から無限大時間までのＡＵＣ（ＡＵＣ０−∞）は、０．５、２、４、８及び２４時間の測定値に基づいて評価した。ＣＤＨＰの定量の下限値は、２ｎｇ／ｍＬ（１３．８ｎＭ）であり、ｉｎｔｒａ−ａｓｓａｙ及びｉｎｔｅｒ−ａｓｓａｙの変動変数は１０％未満であった。
【００４０】
（統計解析）
ＦＴの経口投与クリアランス又は５−ＦＵのＡＵＣ０−８と、他の潜在的なファクターと相関性について、連続変数を求めるためにＡＮＯＶＡ解析を、名義変数を求めるためにＷｉｌｃｏｘｏｎ（Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ）解析を行った。両側検定のＰ値が０．０５未満である場合、有意な相関があると判断した。
【００４１】
また、ＦＴの経口投与クリアランス又は５−ＦＵのＡＵＣ０−８と、他の潜在的なファクターとの間に相関性について、最小二乗を用いて多変量線性解析を行った。このモデルでは、ＡＮＯＶＡにおいて両側検定のＰ値が０．０５未満であるとき、有意な相関があると判断した。効果試験において０．０５未満の両側検定のＰ値が得られる場合、モデルに含まれるファクターは変数と統計的に相関すると判断した。
【００４２】
（結果）
１．患者
患者の内訳及び生理検査結果は下記の表１に示した。
【００４３】
【表１】
2008260710.tif 000002
【００４４】
２．ＣＹＰ２Ａ６及びＤＰＹＤの遺伝子型
ＣＹＰ２Ａ６＊１、ＣＹＰ２Ａ６＊４、ＣＹＰ２Ａ６＊７、及びＣＹＰ２Ａ６＊９の対立遺伝子頻度は、それぞれ４０％、２２．５％、２２．５％及び１５％であった。ＮａｋａｊｉｍａらによればすべてのＣＹＰ２Ａ６＊４はＣＹＰ２Ａ６＊４Ａである。本試験の患者において、ＣＹＰ２Ａ６＊１、ＣＹＰ２Ａ６＊４、及びＣＹＰ２Ａ６＊９の対立遺伝子頻度は、従来の報告とほぼ同程度であったが、ＣＹＰ２Ａ６＊７の対立遺伝子頻度は報告のものよりも少し高かった。また、少なくとも一つのＣＹＰ２Ａ６＊１型を有する患者に、遺伝子の複製（ＣＹＰ２Ａ６＊１×２）は認められなかった。ＣＹＰ２Ａ６遺伝子型の分布は、以下の通りであった。＊１／＊１、２２．５％；＊１／＊４、１５％；＊１／＊７、１０％；＊４／＊４、７．５％；＊４／＊７、１０％；＊４／＊９、５％；＊７／＊７、７．５％；＊７／＊９、１０％；＊９／＊９、２．５％。
【００４５】
ＤＰＹＤ＊２、ＤＰＹＤ＊３、ＤＰＹＤ＊１１又はＤＰＹＤ＊１２などのＤＰＹＤ多型は、本試験に参加した患者に認めなかった。
【００４６】
３．ＦＴ及び５−ＦＵの薬物動態に影響を及ぼすファクター
ＦＴの経口投与クリアランス又は５−ＦＵのＡＵＣ０−８と、他の潜在的なファクター（ＣＹＰ２Ａ６遺伝子型、ＣＤＨＰのＡＵＣ０−∞、年齢、性別、体表面積（ＢＳＡ）及び総ビリルビン）との間に相関性について解析した。解析結果を以下の表２に示した。
【００４７】
ＣＹＰ２Ａ６遺伝子型についての分析は、まず、ＣＹＰ２Ａ６遺伝子型を３つのグループに分けた：野生型グループ（＊１／＊１）、一つの変異型対立遺伝子グループ（＊１／＊４、＊１／＊７及び＊１／＊９）、二つの変異型対立遺伝子グループ（＊４／＊４、＊４／＊７、＊４／＊９、＊７／＊７、＊７／＊９、＊９／＊９）。下記の表２から、ＦＴの経口投与クリアランスはＣＹＰ２Ａ６遺伝子型とは有意に相関することが分かった（Ｐ＝０．００００２５６、Ｋｒａｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定）（図１）。ＦＴの経口投与クリアランスは個別のＣＹＰ２Ａ６遺伝子型との相関についても、解析した（図２）。これらの１０のＣＹＰ２Ａ６遺伝子型について、Ｋｒａｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定を行ったところ、Ｐ値が０．００１０１であった。また、＊４／＊４、＊７／＊７、＊７／＊９、＊１／＊４、及び＊１／＊７の遺伝子型を有する患者において、＊１／＊１の遺伝子型を有する患者に比べて、ＦＴの経口投与クリアランスが有意に低かった（Ｐ＝０．０１２４、０．０１２４、０．００５４、０．００３２及び０．０４３７；Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定）（表２）。
【００４８】
一方、５−ＦＵのＡＵＣ０−８は、ＣＤＨＰのＡＵＣ０−∞のみと有意に相関することが分かった（表２、図２）。一方、他の潜在的なファクターは５−ＦＵのＡＵＣ０−８とは相関はなかった（表２）。
【００４９】
【表２】
2008260710.tif 000003
【００５０】
ＦＴの経口投与クリアランスについて最小二乗を用いて多変量線性解析を行った結果、ＣＹＰ２Ａ６遺伝子型はＦＴの経口投与クリアランスの有意な予測であることが証明された（ＡＮＯＶＡ、Ｐ＝０．０００８９、Ｒ２＝５１．２％）（表３）。効果試験において得られたＣＹＰ２Ａ６遺伝子型のＰ値は、０．０００１３３であった（ＡＮＯＶＡ）（表３）。一方、他の潜在的なファクターはＦＴの経口投与クリアランスとは有意な相関はなかった（Ｐ＞０．０５）。
【００５１】
また、５−ＦＵのＡＵＣ０−８について最小二乗を用いて多変量線性解析を行った結果、ＣＤＨＰのＡＵＣ０−∞は５−ＦＵのＡＵＣ０−８の有意な予測であることが証明された（ＡＮＯＶＡ、Ｐ＝０．００５７９、Ｒ２＝４４％）。また、効果試験において得られたＣＤＨＰのＡＵＣ０−∞のＰ値は、０．０００２３３であった（ＡＮＯＶＡ）（表３）。一方、他のファクターは５−ＦＵのＡＵＣ０−８とは有意な相関はなかった（Ｐ＞０．０５）。
【００５２】
すなわち、ＦＴ及び５−ＦＵの薬物動態は、ＣＹＰ２Ａ６遺伝子型及びＣＤＨＰの血漿中の露出量と有意な相関があった。
【００５３】
【表３】
2008260710.tif 000004

【００５４】
４．５−ＦＵ又はＣＤＨＰの薬物動態とクレアチニンクリアランス（Ｃｃｒ）との関係
５−ＦＵのＡＵＣ０−８又はＣＤＨＰのＡＵＣ０−∞とクレアチニンクリアランス（Ｃｃｒ）との相関についても解析した。図３に示したように、５−ＦＵのＡＵＣ０−８はＣｃｒと逆相関することが分かった（ＡＮＯＶＡ、Ｐ＝０．０１６、Ｒ２＝１４．３％）。また、ＣＤＨＰのＡＵＣ０−∞とＣｃｒとの逆相関も認められた（ＡＮＯＶＡ、Ｐ＝０．０００５６、Ｒ２＝２７．２％）。
【００５５】
この試験において、最も高い５−ＦＵのＡＵＣ０−８及びＣＤＨＰのＡＵＣ０−∞を示した患者は、同時に最も低いＣｃｒも示した。この患者は、致死的な（グレード５）の口内炎となり、死亡した。これは、恐らくＳ−１の投与に関係すると予想される。
【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１】テガフールの全身クリアランスとＣＹＰ２Ａ６遺伝子型（グループ別）との相関を示す図である。
【図２】テガフールの全身クリアランスと個別のＣＹＰ２Ａ６遺伝子型との相関を示す図である。
【図３】５−ＦＵのＡＵＣ０−８とＣＤＨＰのＡＵＣ０−８との相関を示す図である。
【図４】５−ＦＵのＡＵＣ０−８とＣｃｒとの相関を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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