(57)【要約】      （修正有）【課題】生体利用率の高い式（Ｉ）の化合物。【解決手段】結晶化合物を実質的に伴わない、式（Ｉ）の化合物の非晶質、医薬活性形態を供する。2008056670.tif 000007【選択図】図６
2008056670.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
実質的に結晶化合物を伴わない、非晶質形態における式
【化１】
2008056670.tif 000006
の化合物。
【請求項２】
結晶形態の化合物が２０％を超えない、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
結晶形態の化合物が１０％を超えない、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
請求項１記載の化合物を調製する方法であって、
（ａ）式Ｉの結晶化合物を有機溶媒中に溶かし；そして
（ｂ）段階（ａ）の溶液から式Ｉの所望の非晶質化合物を沈殿させる；
ことを含んで成る方法。
【請求項５】
段階（ａ）において用いられる有機溶媒が、エタノール、メタノール、アセトン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジエチレングリコールエチルエーテル、グリコフラル、プロピレンカーボネート、テトラヒドロフラン、ポリエチレングリコール、及びプロピレングリコールからなる群から選択されている請求項４記載の方法。
【請求項６】
段階（ａ）において用いられる有機溶媒が、ジメチルアセトアミドである、請求項５記載の方法。
【請求項７】
段階（ａ）の溶液を、冷却した水溶液に加えることによって段階（ｂ）における沈殿が行われる、請求項４記載の方法。
【請求項８】
前記水溶液の温度が２℃〜１０℃である、請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記水溶液のpHが、非晶質形態にある式Ｉの化合物が溶解しないものである、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記水溶液のpHが２〜７である、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
請求項１記載の化合物を調製する方法であって、
（ａ）結晶形態にある式Ｉの化合物を有機溶媒中に溶かし；そして、
（ｂ）前記有機溶媒を除去する；
ことを含んで成る方法。
【請求項１２】
前記有機溶媒が、エタノール、メタノール、アセトン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジエチレングリコールエチルエーテル、グリコフラル、プロピレンカーボネート、テトラヒドロフラン、ポリエチレングリコール、及びプロピレングリコールからなる群から選択されている、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
前記有機溶媒が、噴霧乾燥によって除去される請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
前記有機溶媒が、凍結乾燥によって除去される請求項１１記載の方法。
【請求項１５】
請求項１記載の化合物を調製する方法であって、
（ａ）式Ｉの結晶化合物を超臨界流体中に溶かし；そして
（ｂ）前記超臨界流体を除去する；
ことを含んで成る方法。
【請求項１６】
前記超臨界流体が液体窒素又は液体二酸化炭素である、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
請求項１記載の化合物を調製する方法であって、
（ａ）式Ｉの結晶化合物を有機溶媒中に溶かし；そして
（ｂ）段階（ａ）において生じた溶液から超臨界流体により有機溶媒を抽出する；
ことを含んで成る、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
超臨界流体が液体窒素又は液体二酸化炭素である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１記載の化合物を調製する方法であって、
（ａ）式Ｉの結晶化合物を、様々な温度にセットされる温度調節押出し機(temperature−controlled extruder)(熱融解押出し機)に連続的に掛け；そして
（ｂ）段階（ａ）由来の押出し物を急速に冷却する；
ことを含んで成る方法。
【請求項２０】
請求項１記載の化合物及び医薬担体を含んで成る、医薬組成物。
【請求項２１】
形態安定化剤を伴なわない請求項２０記載の医薬組成物。
【請求項２２】
イオン性ポリマーを伴なわない請求項２０記載の医薬組成物。
【請求項２３】
請求項４〜１９のいずれか１項記載の方法により製造される、請求項１記載の化合物。
【請求項２４】
腫瘍を治療する方法であって、請求項１記載の化合物をヒト以外の動物に対して投与することを含んで成る方法。
【請求項２５】
請求項１記載の化合物を含む薬剤。
【請求項２６】
腫瘍の治療の為の、請求項２５に記載の薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、結晶化合物を実質的に伴わない式Ｉ
【化１】
2008056670.tif 000003
の化合物の非晶質の、医薬活性形態を供する。この化合物は、３−（１−メチル−３−インドリル）−４−（１−メチル−６−ニトロ−３−インドリル）−１−Ｈ−ピロール−２，５，−ジオンとしても公知である。本発明は、式Ｉの化合物の非晶質形態、並びにかかる化合物を含有する医薬組成物を製造する為の方法も供する。
【背景技術】
【０００２】
式Ｉの化合物の結晶形態は公知である。米国特許再発行第３６，７３６号を参照のこと。この結晶形態は約２８５℃の融点を持つ（第２２欄，５〜６行を確認のこと）。この化合物は、特に非小細胞肺ガン、乳ガン及び結腸直腸ガンのような充実性腫瘍対する有力な抗ガン治療作用を有する細胞周期阻害物質及びアポトーシス誘導物質の新規分類に属する。米国特許第６，０４８，８８７号及びヨーロッパ特許０  ９８８，８６３号等を参照のこと。式Ｉの化合物は従来公知となっている結晶形態において生理的pH（１．５〜８．０の範囲）で比較的低い水溶性（＜１０μｇ／mL）を有し、それ故に至適生体利用効率を下まわる（イヌにおいて５％未満）。これは治療的作用を有する化合物であるので、従って、溶解／溶出速度及び生体利用効率が向上した式Ｉの化合物の形態を得ることは望ましい。
【０００３】
治療的作用を有する化合物の生体利用効率は一般に、（ｉ）化合物の溶解／溶出速度、及び（ii）対象者の胃腸膜を介する化合物の分配／透過係数によって決定される。治療的作用化合物の生体利用効率が低い主原因は通常、前記化合物の溶解／溶出速度が低いからである。生体利用効率が低いことによって、極度の血圧の変化が伴われ、そして患者による薬剤の異常吸収が原因の予測不可能な投与量／治療的効果も往々にして伴われる。
【０００４】
比較的低い水溶性を有する治療的作用化合物の生体利用効率を向上させる為にいくつかの技術を用いることができる。これらの技術はヨーロッパ特許第０９８８，８６３号の背景の段落で論じられている。ヨーロッパ特許第０９８８，８６３号中の記載は、比較的に低い水溶性を有する治療的作用化合物が、イオン性ポリマー中に組み込まれるか又は分散されることによって、更なる生体利用効率を持ちうることによる新規方法である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ある方法を用いて比較的低い水溶性を有する治療的作用化合物をイオン性のポリマー中に分散させる又は組み込むことは、これらの化合物の生体利用効率を高めうる一方で、これらの方法は面倒であり且つ時間を消費する。かかる方法では治療的作用を化合物が、通常有利でない又は望ましくないポリマーとの組み合わせにおいて患者へと届けられる必要もある。従って、式Ｉの化合物をポリマー中で分散させる必要がないその非晶質形態において当該化合物を製造する為の方法を開発することは望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は結晶形態を実質的に伴わない式Ｉの化合物の非晶質形態に関連する。式Ｉの化合物のこの非晶質（「高エネルギー」とも言及する）形態は、当該化合物の従来公知の結晶形態よりも速い溶出速度を示し、且つ優れた生体利用効率を示す。本発明の化合物の非晶質形態の生体利用効率は、当該化合物の結晶形態よりも有意に高く、従って当該化合物の非晶質形態をガン性の腫瘍の治療又は療法において用いることを可能にする。
【０００７】
本発明の他の観点は、式Ｉの安定な、非晶質化合物に関連する。それはイオン性ポリマーのような形態安定化剤がなくとも前記化合物が適度な棚寿命（例えば、室温で２年）を持つことが可能な時間に渡り安定な非晶質形態を保つ。
【０００８】
本発明の他の観点は、式Ｉの高エネルギー非晶質化合物を製造する方法である。
【０００９】
本発明の他の観点は、治療的に有効な量の非晶質形態にある式Ｉの化合物を含む医薬組成物である。
【００１０】
本発明は式Ｉの化合物の、高エネルギー、非晶質性、医薬活性形態を供する。
【化２】
2008056670.tif 000004
【００１１】
本発明に従い調製した場合、式Ｉの化合物の非晶質形態は結晶形態と比較した場合非常に高い（約１５倍超の）生体利用効率を有するので、当該化合物を医薬製品中で用いることが可能になる。前記化合物の非晶質形態は、結晶形態とは対象的に優れた溶出速度及び生体利用効率を示すのみならず、その高いガラス転移温度約１１２℃によって、形態安定化剤がなくともその非晶質特性を維持する。
【００１２】
本発明の式Ｉの化合物の非晶質形態は、その結晶形態においては比較的低い水溶性及び低い生体利用効率を有する医薬活性化合物の、患者への輸送を有意に促す。
【００１３】
本明細書中で用いた場合、下記の用語は以下の意味を持つ。
【００１４】
「非晶質化合物」とは、示差走査熱量測定熱像における典型的な吸熱を示さず、そして粉末Ｘ線解析パターンにおける独特のピークを示さないものをいう。化合物のこの形態を当該化合物の「高エネルギー形態」としても言及する。
【００１５】
「溶出速度」とは特定の溶出媒体中に溶ける特定の化合物が持つ速度である。
【００１６】
「形態安定化剤」とはイオン性ポリマーであり、それは化合物を特定の物理形態（非晶質形態等）に固定化して、当該化合物を環境要因（例えば熱、湿気等）から保護するのに用いることができる。
【００１７】
「患者」とはヒトの対象者を指す。
【００１８】
「比較的低い水溶性」とは、約１０μｇ／mL未満の水溶性を有する特定の化合物又はその形態である。
【００１９】
「結晶化合物を実質的に伴わない」とは、結晶形態の化合物が約２０％を超えず、好ましくは結晶形態の化合物が約１０％を超えないことである。
【００２０】
式Ｉの非晶質化合物の調製方法
式Ｉの化合物の高エネルギー又は非晶質形態は、以下の方法によって調製されうる。
ａ）噴霧乾燥又は凍結乾燥：結晶形態の式Ｉの化合物が、有機溶媒に溶かされる。この方法の為の適切な有機溶媒としては、エタノール、メタノール、アセトン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジエチレングリコール、エチルエーテル、グリコフラル、プロピレンカーボネート、テトラヒドロフラン、ポリエチレングリコール、及びプロピレングリコールが挙げられる。次いで、前記溶媒は噴霧乾燥又は凍結乾燥によって除去され、式Ｉの非晶質化合物が生じる。
【００２１】
ｂ）溶媒調節沈澱（Solvent Controlled Precipitation）：本発明の好適な実施態様において、式Ｉの結晶化合物が有機溶媒中に溶かされる。この方法の為の適切な有機溶媒は、上記ａ）において列挙したものが挙げられる。次いで、好ましくは水溶液中で、そして好ましくは化合物が溶解しないpHで、当該化合物は沈澱する。生じる沈澱物は式Ｉの非晶質化合物であり、そして当業者に公知の手順、例えばろ過、遠心及び洗浄等によって回収される。次いで、回収された沈澱物は（大気、オーブン、又は真空において）乾燥され、そして当業界で公知の手段、例えば、破砕、微粉砕又は微粉化によって生ずる固体は更に加工され微粉にされる。
【００２２】
ｃ）超臨界流体：式Ｉの結晶化合物は、超臨界流体、例えば液体窒素又は液体二酸化炭素に（超臨界温度及び超臨界圧力下で）溶かされる。次いで超臨界流体は蒸発によって除去され、非晶質形態において沈澱した化合物が残る。代わりに、式Ｉの化合物が、上記ａ）に記載の有機溶媒中に溶かされる。超臨界流体は、有機溶媒の抽出の為の抗溶媒として用いられ、有機溶媒から化合物を非晶質形態において沈澱させる。
【００２３】
ｄ）熱溶解抽出：様々な温度変化度にセットされる温度調節押出し機に対して式Ｉの結晶化合物が漸進的に送り込まれる。特に、結晶化合物は熱融解押出し機において押出されて融解され、その後、急速に室温へと冷却され、そして当該化合物は固体化する又は非晶質形態において沈澱する。次いで、生じる押出物は粉砕され微粉になる。
【００２４】
次いで、本発明に従い調製された式Ｉの化合物の非晶質形態は、適切な医薬的に許容できる賦形剤と組み合わされ、患者に対して投与される医薬製剤が生み出される。これらの賦形剤には、限定ではないが、無機又は有機担体、充填剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、防腐剤、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、香料添加剤、浸透圧を変える為の塩、緩衝剤、被覆剤、酸化防止剤及び放出調節剤（control release agents）が挙げられ、その全ては当業界で公知である。
【００２５】
上記ａ）〜ｄ）の方法より生ずる製品は、医薬製剤に組み込む為の当業界で公知の方法によって更に加工される。
【００２６】
本発明は、治療上有効な量の式Ｉの化合物を非晶質形態において含む医薬製剤をも熟考する。治療上有効な量とは、所望の治療成果を遂げるのに必要な、投与量及び時間による量である。更に、かかる量は、全般的に治療上有利な作用が全ての毒性又は望ましくはない副作用に勝るものでなければならない。化合物の治療上有効な量は、治療を受ける患者の病期、年齢及び体重により往々にして変化する。従って、投薬計画は各特定の場合において各々の必要量に一般的に調節され、それらは当業界で知られている。
【００２７】
体重約７０kgのヒトの成人に対する非晶質形態にある式Ｉの化合物を経口投与する為の適切な日々の投与量は、約１００mg〜約１，５００mg、好ましくは、約４００mg〜約８００mgであるが、上限は指示された場合は超えても良い。日々の経口投与量は、単回投与もしくは分割投与として投与されて良く、又は非経口投与の為に持続注入（continuous infusion）として与えられて良い。
【００２８】
本発明は、化合物をイオン性のポリマー中で分散させることなく式Ｉの非晶質化合物を調製する方法をも熟考する。
【００２９】
本発明は、式Ｉの化合物を調製する方法を熟考する。この方法において（ａ）式Ｉの結晶化合物が有機溶媒中に溶かされ、そして（ｂ）段階（ａ）の溶液から式Ｉの所望の非晶質化合物が沈澱される。
【００３０】
上記方法において用いられる有機溶媒は、エタノール、メタノール、アセトン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジエチレングリコールエチルエーテル、グリコフラル、プロピレンカーボネート、テトラヒドロフラン、ポリエチレングリコール、及びプロピレングリコールからなる群から選択されるのが好ましい。前記溶媒はジメチルアセトアミドであるのが一層好ましい。
【００３１】
沈澱は、段階（ａ）の溶液が冷却された水溶液に添加されることによって行われるのが好ましい。
【００３２】
本発明の上記方法において、水溶液の温度は約２℃〜約１０℃であり且つそのpHは、非晶質形態の式Ｉの化合物が溶解しないpHである。前記水溶液のpHは約２〜約７であるのが好ましい。
【００３３】
本発明は、式Ｉの化合物を調製する他の方法も熟考する。この方法において、結晶形態の式Ｉの化合物が有機溶媒中に溶かされ；そして当該有機溶媒は除去される。前記有機溶媒は噴霧乾燥又は凍結乾燥によって除去されて良い。
【００３４】
有機溶媒は、エタノール、メタノール、アセトン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジエチレングリコールエチルエーテル、グリコフラル、プロピレンカーボネート、テトラヒドロフラン、ポリエチレングリコール、及びプロピレングリコールからなる群から選択されるのが好ましい。前記有機溶媒は除去されるのが一層好ましい。
【００３５】
本発明は式Ｉの化合物を調製する方法にも関連する。この方法において、式Ｉの結晶化合物が超臨界流体中に溶かされ；そして当該超臨界流体は除去される。
【００３６】
前記超臨界流体は液体窒素又は液体二酸化炭素であるのが好ましい。
【００３７】
本発明は、式Ｉの化合物を調製する方法にも関連する。この方法において、式Ｉの結晶化合物は有機溶媒中に溶かされ；そして当該有機溶媒は、液体窒素又は液体二酸化炭素のような超臨界流体により当該溶液から抽出される。
【００３８】
本発明は、式Ｉの化合物を調製する方法にも関連する。この方法において、式Ｉの結晶化合物は、様々な温度変化度にセットされる温度調節押出し機（temperature−controlled extruder)（熱融解押出し機（hot melt extruder））に連続的に掛けられ、そして押出し物は急冷される。
【００３９】
本発明は、腫瘍を治療する為の式（Ｉ）の化合物及び医薬担体を含んで成る医薬組成物をも供給する。この医薬組成物は安定化剤を伴わないのが好ましい。
【００４０】
この医薬組成物はイオン性のポリマーを伴わないのが好ましい。
【００４１】
本発明は腫瘍を治療する方法をも供する。この方法において、式（Ｉ）の化合物がヒト又は動物に対して投与される。
【００４２】
最後に、本発明は、腫瘍の治療の為の薬剤を製造する為の式Ｉの化合物の使用を供する。
【００４３】
以下の例は、本発明の非晶質化合物並びに前記非晶質化合物を組み込む医薬製剤を製造する方法を説明する。これらの例は本発明を説明し、そして限定することを意図しない。
【００４４】
実施例
実施例Ｉ：非晶質化合物の一般的な調製
式Ｉの結晶化合物をジメチルアセトアミド中に溶かした。次いで、生じる溶液をpH２〜７の冷却した（２°〜１０℃）水溶液に加えた。これにより生じた化合物を、非晶質化合物として沈澱させた。沈澱を残留ジメチルアセトアミドが０．３％未満になる迄冷水（２°〜１０℃）で数回洗浄した。沈澱を乾かし、そして粉砕して所望の粒度にした。
【００４５】
実施例II：式Ｉの非晶質化合物を含有する医薬製剤の調製
次いで、実施例Ｉに従い調製した非晶質化合物の粉末形態を様々な医薬賦形剤と混ぜ合わせ、以下の医薬製剤を生産した。
【００４６】
実施例IIＡ
製剤 ％（ｗ／ｗ）
式Ｉの非晶質化合物                  ５０
無水ラクトース                      ５０
【００４７】
製剤の調製方法
１．実施例Ｉに従い調製した（レーザー光線散乱装置によって特定された８ミクロンの平均粒度を有する）式Ｉの非晶質化合物を、無水ラクトースと共にミキサー中で１０分に渡り混合した。
２．段階１の由来の粉末混合物をカプセル中に封入した。
【００４８】
実施例IIＢ
製剤 ％（ｗ／ｗ）
式Ｉの非晶質化合物                  ５０
メトセル（Methocel）K100LV          ４０
微結晶性セルロース                    ７
タルク                                ２
ステアリン酸マグネシウム              １
【００４９】
製剤の調製方法：
１．実施例Ｉに従い調製した（レーザー光線散乱装置によって特定された８ミクロンの平均粒度を有する）式Ｉの非晶質化合物をメトセルＫ１００ＬＶ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース；Dow Chemicals, MI ）と共にミキサー中で１０分に渡り混合した。
２．段階１由来の粉末混合物を均一な顆粒が得られる迄純水により粒状化した。
３．段階２由来の顆粒を９０℃で操作した乾燥装置による損失により特定した場合、含水率が２％未満になる迄５０℃のオーブンで乾かした。
４．段階３由来の乾燥顆粒を粉砕して微粉にした。
５．段階４由来の粉砕した顆粒を微結晶性セルロース、タルク及びステアリン酸マグネシウムと共に５分に渡り混合した。
６．段階５由来の粉末混合物をタブレット成形機を用いて圧縮して錠剤にした。
【００５０】
実施例IIＣ
製剤 ％（ｗ／ｗ）
式Ｉの非晶質化合物                  ５０
トウモロコシデンプン                １０
ラクトース                          ３９
タルク                                １
【００５１】
製剤の調製方法：
１．実施例１に従い調製した（レーザー光線散乱装置によって特定された８ミクロンの平均粒度を有する）式Ｉの非晶質化合物を、トウモロコシデンプン、ラクトース及びタルクと共にミキサー中で１０分に渡り混合した。
２．段階Ｉの由来の粉末混合物をカプセル中に封入した。
【００５２】
実施例IIＤ
製剤 ％（ｗ／ｗ）
式Ｉの非晶質化合物                  ５０
クルセル（Klucel）ＬＦ              ４５
タルクカム（Talcum）                  ３
ステアリン酸マグネシウム              ２
【００５３】
製剤の調製方法
１．実施例Ｉに従い調製した（レーザー光線散乱装置によって特定された８ミクロンの平均粒度を有する）式Ｉの非晶質化合物クルセルＬＦ（ヒドロキシプロピルセルロース；Hercules Inc., NJ ）と共にミキサー中で１０分に渡り混合した。
２．段階１由来の粉末混合物を均一な顆粒が得られる迄純水により粒状化した。
３．段階２由来の顆粒を９０℃で操作した乾燥装置による損失により特定した場合含水率が２％未満になる迄５０℃のオーブンで乾かした。
４．段階３由来の乾燥顆粒を粉砕して微粉にした。
５．段階４由来の粉砕した顆粒をタルク及びステアリン酸マグネシウムと共に５分に渡り混合した。
６．段階５由来の粉末混合物をタブレット成形機を用いて圧縮して錠剤にした。
【００５４】
実施例III：式Ｉの結晶化合物を含有する医薬製剤の調製
実施例IIIＡ
製剤 ％（ｗ／ｗ）
式Ｉの結晶化合物                    ５０
無水ラクトース                      ５０
【００５５】
製剤の調製方法：
１．米国特許再発行第３６，７３６号に教示された方法により調製した（レーザー光線散乱装置によって特定された９ミクロンの平均粒度を有する）式Ｉの結晶化合物を無水ラクトースと共にミキサー中で１０分に渡り混合した。
【００５６】
実施例IIIＢ
製剤 ％（ｗ／ｗ）
式Ｉの結晶化合物（微粉）              ４
メトセル（Methocel）Ｋ３              ４
純水                                ９２
【００５７】
製剤の調製方法：
１．メトセルＫ３（ヒドロキシプロピルメチルセルロース；Dow Chemicals, MI ）を２０％（ｗ／ｗ）の濃度で純水に少量ずつ加え、そして均一な分散が得られる迄十分混合した。
２．（米国特許再発行第３６，７３６号に教示された方法により調製し、そして５ミクロンの平均粒度を有した）式Ｉの結晶化合物を段階１由来の分散に加えそして均一な懸濁が得られる迄十分に混合した。
３．残りの純水を段階２由来の懸濁に添加し、そして十分に混合した。
【００５８】
実施例IIIＣ
製剤 ％（ｗ／ｗ）
式Ｉの結晶化合物（ナノサイズ）        ４
メトセルＫ３                          ４
純水                                ９２
【００５９】
製剤の調製方法：
１．メトセルＫ３（ヒドロキシプロピルメチルセルロース；Dow Chemicals, MI ）を２０％（ｗ／ｗ）の濃度で純水中に分散させ、そして均一な分散が得られる迄十分混合した。
２．（米国特許再発行第３６，７３６号に教示された方法により調製し、そして５ミクロンの平均粒度を有した）式Ｉの結晶化合物を段階１由来の分散に加え、そして均一な懸濁が得られる迄十分に混合した。
３．粉砕媒体として（平均直径０．２〜０．５mmの）ガラスビースを含有するＤＹＮＯＭＩＬに段階２由来の懸濁を通して、式Ｉの化合物を３００〜４００nmの範囲の平均粒度において獲得した。
【００６０】
実施例IV：式Ｉの非晶質及び結晶化合物の物理特性の比較
様々な試験を行い、米国特許再発行第３６，７３６号に教示された方法により調製した式Ｉの結晶化合物と本発明の式Ｉの非晶質化合物との比較を行った。比較したパラメーターは、結晶性、ガラス転移温度、溶出速度及び生体利用効率が挙げられる。比較の結果を下に記載し、そして添付の図に描いている。
【００６１】
図１における粉末Ｘ線回折パターンによって示されるように、米国特許再発行第３６，７３６号に教示された方法により調製した式Ｉの化合物は、著しい結晶性を示した。
【００６２】
図２における粉末Ｘ線回折パターンによって示されるように、本明細書中で教示した方法により調製した式Ｉの化合物は、明らかに非晶質性である。
【００６３】
図３における示差走査熱量測定熱像によって示されるように、米国特許再発行第３６，７３６号において教示された方法により調製した式Ｉの化合物は、２８７℃の温度で明らかな吸熱を持ち、そして結晶性である。
【００６４】
図４における示差走査熱量測定熱像によって示されるように、本明細書中で教示した方法により調製した式Ｉの化合物は、約１１２℃のガラス転移温度を有し、そして非晶質性である。
【００６５】
図５における粉末Ｘ線解折パターンによって示されるように、本明細書中で教示した方法により調製した式Ｉの非晶質化合物は、促進条件下での保存でさえもその非晶質特性を維持した。このことは、本発明により調製した化合物は安定でありそして医薬製剤中への組み込みに適切であることを意図する。
【００６６】
式Ｉの結晶化合物を含有する実施例IIIＡ の製剤（実施例IIIＡ ）及び式Ｉの非晶質化合物を含有する製剤（実施例IIIＡ ）を、二段階（２つの溶出媒体）溶出法（touo-stuge dissolution method ）によって溶出度を評価した。段階Ｉでは、７５rpm のパドルを用いることで３７°±０．５℃の３００mLの脱イオン水を使用した。段階IIでは、０．０１５Ｍのリン酸バッファー中６％（ｗ／ｗ）のラウリル硫酸ナトリウム６００ml、pH６．８、３７℃±０．５℃で平衡を、段階Ｉの解離が始まった２５分後に、溶出が起こる容器に慎重に添加した。等量の試料を様々な時間で採取してＵＶ分光測光法によって分析した。
【００６７】
図６に示されるように、上記溶出評価の結果によって明らかに示されることは、式Ｉの非晶質化合物を含有する製剤（実施例IIＡ）の溶出特性は、式Ｉの結晶化合物を含有する製剤（実施例IIIＡ ）よりも速く且つ完全なものであるということだ。
【００６８】
加えて、式Ｉの結晶化合物を含有する製剤（実施例IIIＢ及びIIIＣ）並びに式Ｉの非晶質化合物（実施例IIＡ）を含有する製剤の生体利用効率を体重約１０kgのビーグル犬において評価した。各イヌには式Ｉの化合物９０mgを含有する製剤を与えた。投与の前（０時間）及び投与の０．５、１、２、４、６、８、１２、２４、３６及び４８時間後に各イヌから血液試料を回収した。ＥＤＴＡを抗凝血剤として用いた。各血しょう試料を冷遠心（cold centrifugation ）後分離し、そして分析する前に、琥珀色のバイアル中で最低の−６０℃で凍らせた。式Ｉの化合物を血しょうから抽出し、そして式Ｉの化合物の濃度を陽イオンTurbuIonspray ＬＣ−ＭＳ／ＭＳアッセイ〔ＨＰ１１００ＬＣ系、Hewlet-Packard Inc. を用いるＨＰＬＣ（Agilent Technologies, Wilminton, DE）及び PE-Sciex API-3+(Perkin-Zlmer Instruments, Wilton CT）、イオン化モード：Turbulonspray, 500C、陽イオンを用いる質量分析計〕を用いて決定した。１００μｌの血しょう試料を用いての校正の幅は１〜１，０００ng／mLだった。
【００６９】
見積もった関連する薬物動態学パラメーターは、式Ｉの化合物に関する最大血しょう濃度（Ｃmax）、Ｃmax に至る時間（Ｔmax）、時間０−∞の血しょう濃度時間曲線下の領域（ＡＵＣ0-∞）、投与量（mg／kg）、正規化Ｃmax（Ｃmax／投与量）及び投与量正規化ＡＵＣ（ＡＵＣ／投与量）であった。観察されたＣmax及びＴmaxは各動物の濃度−時間特性から直接得られた。ＡＵＣ0-∞をＷｉｎ Ｎｏｕｌｉｎｅ（登録商標）（Professional Zdition version 1.5, Pharsight Corporation, Mountain View, CA）による一次台形公式（linear trapezoidal rule）を用いて計算した。
【００７０】
この生体利用効率の結果を下の表Ｉに示している。非晶質形態の式Ｉの化合物（実施例IIＡ）のイヌにおける生体利用効率は、化合物の結晶形態（実施例IIIＢ及びIIIＣ）が常用の投与形態（微粉及びナノ化懸濁等）において動物に対して投与される場合よりも高ことが表Ｉにおいて報告したデータにより示される。
【表１】
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【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１】従来の公知の方法により調製した式Ｉの化合物の粉末Ｘ線回折パターンであり、当該化合物の著しい結晶性を示している。
【図２】本発明により調製した式Ｉの化合物の粉末Ｘ線回折パターンであり、当該化合物の非晶質特性を示している。
【図３】従来の公知の方法により調製した式Ｉの化合物の示差走査熱量測定熱像であり、当該化合物は結晶形態にあることを裏づける前記化合物の明らかな吸熱を示す。
【図４】本発明に従い調製した式Ｉの化合物の示差走査熱量測定熱像であり、当該化合物は非晶質形態にあることを裏づける約１１２℃のガラス転移温度を示す。
【図５】本発明により調製した式Ｉの化合物の粉末Ｘ線回折パターンであり、当該化合物は促進保存条件（４０℃／７５％ＲＨ、６ヶ月に渡るガラスバイアルでの保存）にさらされた場合でさえも、安定化剤を伴わずにその非晶質形態を保つことを示す。
【図６】従来公知の方法により生産した式Ｉの化合物（実施例IIIＡ ）を含有する製剤及び本発明により生産した化合物（実施例IIＡ）を含有する製剤の溶出特性である。この図では、本発明の化合物（非晶質形態）は従来入手可能な結晶形態の化合物よりもより一層可溶性であることを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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