(57)【要約】【課題】保湿作用や細胞賦活作用を有し、浸透性の高い皮膚外用剤を提供する。【解決手段】  アミノ酸類のうち少なくともアルギニンとアスパラギン酸とイソロイシンとロイシンとリジンとスレオニン又はそれらの塩類を含有し、かつ、加水分解シルクを含有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ酸類のうち少なくともアルギニンとアスパラギン酸とイソロイシンとロイシンとリジンとスレオニン又はそれらの塩類を含有し、かつ、加水分解シルクを含有する皮膚外用剤。
【請求項２】
アミノ酸またはそれらの塩の添加量について、アルギニンの添加量が２０〜４００マイクロ重量パーセント、アスパラギン酸の添加量が３〜６０マイクロ重量パーセント、イソロイシンの添加量が３０〜６００マイクロ重量パーセント、ロイシンの添加量が３０〜６００マイクロ重量パーセント、リジンの添加量が３０〜６００マイクロ重量パーセント、スレオニンの添加量が２５〜５００マイクロ重量パーセントである請求項１記載の皮膚外用剤。
【請求項３】
加水分解シルクの添加量が5〜3000マイクロ重量パーセントであることを特徴とする請求項1の皮膚外用剤。
【請求項４】
さらに、アミノ酸類のうちグリシン、ヒスチジン、セリン、バリン、チロシン、システイン、フェニルアラニンおよびそれらの塩類のうちの少なくとも一種を含む請求項１〜３のいずれかに記載の皮膚外用剤。
【請求項５】
ビタミンＢ類を含有する請求項１〜４のいずれかに記載の皮膚外用剤。
【請求項６】
ビタミンＢ類がビタミンＢ１またはビタミンＢ６である請求項５記載の皮膚外用剤。
【請求項７】
ヒアルロン酸またはその塩を含有する請求項１〜６のいずれかに記載の皮膚外用剤。
【請求項８】
皮膚外用剤が化粧品または医薬部外品である請求項１〜７のいずれかに記載の皮膚外用剤。
【請求項９】
皮膚外用剤が化粧水、乳剤、クリーム、養毛剤、パックである請求項８記載の皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬品、医薬部外品、化粧品類（人及びその他の動物用に使用する製剤）等の各種へ適用することが出来る皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は、薄い生物学的防御膜である角層によって覆われており、水分を失うことなく、乾燥した大気中でも生活が出来るのは、外界と接する皮膚すなわち表皮に角層が存在しているからである。角層は、体内からの水分を失わないように保つと同時に、皮膚が正常な状態を保つように種々の調節を行っている。
しかしながら、外傷（火傷、紫外線などさまざまな刺激要因による炎症など）などにより皮膚は障害を受け、硬化し、角層は亀裂、剥落し、正常な状態の皮膚に比較して、大量の水分の喪失が起きてしまう。
【０００３】
また、逆に、角層に必要な柔軟性・伸展性・強さを失わせる原因の一つに皮膚水分量の低下が起因・関与する場合も多い。機能的に欠陥のある角層は、角層自身を柔軟に保ちうるだけの水分結合（保持）力がなく、その結果として、逆に大量の水分の皮膚の通過と喪失を許すこととなる。
一般的には、角層はその乾燥重量の１０％以下に水分含有量が減少すると、それまで保っていた皮膚のしなやかさ、柔らかさを失い、硬くもろくなり、いわゆる、カサカサした、しっとり感のない乾燥肌（皮膚）となってしまうため、非常に皮膚角層の水分量が重要なことが言える。
【０００４】
そこで、従来より、化粧料としては、この点を補うために、皮膚表面の成分とほぼ同様な物質を、皮膚上に再現することが理想とされ、皮膚の代表的成分である水分と油分を主体とするものが多く用いられている。また、近年では、第３の美容成分として、ＮＭＦ（Ｎａｔｕｒａｌ  Ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｉｎｇ  Ｆａｃｔｏｒ）と言われる角層成分が注目を浴び、ＮＭＦ成分であるアミノ酸類およびその誘導体の研究開発が盛んに行われ、化粧品類（保湿・洗浄・紫外線吸収・抗菌作用等）に利用されてきている（特許文献１〜２など）。
【０００５】
天然のたん白を加水分解して得られるオリゴペプチドは表皮中の天然ペプチドと類似の化学構造を有することから、保湿剤などとして広く利用されてきた。例えば、加水分解コラーゲンや、加水分解シルクなどが挙げられる。しかし、アミノ酸と組み合わせ、アミノ酸の皮膚浸透性を向上させ、表皮内部に運ぶ材料としては十分検討されていなかった。
【０００６】
一方、皮膚を健康に保つために細胞賦活剤などもいろいろと提案されてきた。例えば、前述のアミノ酸類が細胞賦活作用を有することが知られている。
しかしながら、細胞賦活剤などについて、化合物単独の賦活作用を考慮するにとどまり、皮膚浸透性を考慮するに至らず、また、添加剤が例えばアミノ酸の場合、アミノ酸の種類は多いのに対し、最適の配合組み合わせなどに課題を残していた。
【０００７】
【特許文献１】特開昭６１−２８９０１６号公報
【特許文献２】特開平６−２７９２２７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
前記のように、アミノ酸類は、化粧料分野における各種の使用法が知られてはいたが、配合に関してはいまだ改善の余地が残されていた。また、皮膚への浸透性を考慮した有用成分の開発には課題が残されていた。
従って、細胞賦活作用を有し、保湿性に優れた、医薬品・医薬部外品・化粧品類に有用で、且つ、安定な添加物質と配合を鋭意研究した。
本発明は、保湿作用や細胞賦活作用を有し、浸透性の高い皮膚外用剤を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
前記の目的は下記の１から７によって達成された。
１．アミノ酸類のうち少なくともアルギニンとアスパラギン酸とイソロイシンとロイシンとリジンとスレオニン、又はそれらの塩類を含有し、かつ、加水分解シルクを含有する皮膚外用剤。
２．アミノ酸またはそれらの塩の添加量について、アルギニンの添加量が２０〜４００マイクロ重量パーセント、アスパラギン酸の添加量が３〜６０マイクロ重量パーセント、イソロイシンの添加量が３０〜６００マイクロ重量パーセント、ロイシンの添加量が３０〜６００マイクロ重量パーセント、リジンの添加量が３０〜６００マイクロ重量パーセント、スレオニンの添加量が２５〜５００マイクロ重量パーセントである１．の皮膚外用剤。
３．加水分解シルクの添加量が5〜3000マイクロ重量パーセントであることを特徴とする１．の皮膚外用剤。
４．さらに、アミノ酸類のうちグリシン、ヒスチジン、セリン、バリン、チロシン、システイン、フェニルアラニンおよびそれらの塩類のうちの少なくとも一種を含む１．〜３．の皮膚外用剤。
５．ビタミンＢ類を含有する１．〜４．の皮膚外用剤。
６．ビタミンＢ類がビタミンＢ１またはビタミンＢ６である５．の皮膚外用剤。
７．ヒアルロン酸またはその塩を含有する１．〜６．の皮膚外用剤。
８．皮膚外用剤が化粧品または医薬部外品である１．〜７．の皮膚外用剤。
９．皮膚外用剤が化粧水、乳剤、クリーム、養毛剤、パックである８．の皮膚外用剤。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば保湿作用や細胞賦活作用を有し、浸透性の高い皮膚外用剤が提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明で必須として用いられるアミノ酸は、アルギニンとアスパラギン酸とイソロイシンとロイシンとリジンとスレオニンであり、光学活性体でもラセミ体でもよいが、すべてＬ体が特に好ましい。
本発明で必須として用いられるアミノ酸の添加量について詳細に説明する。
アルギニンの添加量は２０〜４００マイクロ重量パーセントが好ましく、４０〜２００マイクロ重量パーセントがさらに好ましく、６０〜１２０マイクロ重量パーセントが最も好ましい。
【００１２】
アスパラギン酸の添加量は３〜６０マイクロ重量パーセントが好ましく、８〜３０マイクロ重量パーセントがさらに好ましく、１２〜２０マイクロ重量パーセントが最も好ましい。
イソロイシンの添加量は３０〜６００マイクロ重量パーセントが好ましく、５０〜３００マイクロ重量パーセントがさらに好ましく、８０〜２００マイクロ重量パーセントが最も好ましい。
ロイシンの添加量は３０〜６００マイクロ重量パーセントが好ましく、５０〜３００マイクロ重量パーセントがさらに好ましく、８０〜２００マイクロ重量パーセントが最も好ましい。
【００１３】
リジンの添加量は３０〜６００マイクロ重量パーセントが好ましく、５０〜３００マイクロ重量パーセントがさらに好ましく、８０〜２００マイクロ重量パーセントが最も好ましい。
スレオニンの添加量は２５〜２５０マイクロ重量パーセントが好ましく、４０〜１５０マイクロ重量パーセントがさらに好ましく、６０〜１２０マイクロ重量パーセントが最も好ましい。
【００１４】
本発明で用いられる加水分解シルクは、絹たん白を酸、酵素又は他の方法により加水分解して得られるものであるが、加水分解の方法について特に制限はない。加水分解シルクの添加量は５〜３０００マイクロ重量パーセントが好ましく、１０〜１０００マイクロ重量パーセントがさらに好ましく、２０〜２００マイクロ重量パーセントが最も好ましい。
【００１５】
次に本発明で必須のアミノ酸にさらに添加して用いられるアミノ酸について説明する。さらに添加して用いられるアミノ酸はグリシン、ヒスチジン、セリン、バリン、チロシン、システイン、フェニルアラニンで光学活性体でもラセミ体でもよいが、すべてＬ体が特に好ましい。これらのアミノ酸は少なくとも一種類以上が添加されることが好ましいが、三種類以上が添加されることがさらに好ましく、八種類すべてが添加されることが最も好ましい。
【００１６】
次に本発明でさらに添加して用いられるアミノ酸の添加量について説明する。
グリシンの添加量は６〜１２０マイクロ重量パーセントが好ましく、１６〜６０マイクロ重量パーセントがさらに好ましく、２０〜４０マイクロ重量パーセントが最も好ましい。
ヒスチジンの添加量は８〜１６０マイクロ重量パーセントが好ましく、２０〜９０マイクロ重量パーセントがさらに好ましく、３０〜６０マイクロ重量パーセントが最も好ましい。
セリンの添加量は８〜１６０マイクロ重量パーセントが好ましく、２０〜９０マイクロ重量パーセントがさらに好ましく、３０〜６０マイクロ重量パーセントが最も好ましい。
スレオニンの添加量は３０〜５００マイクロ重量パーセントが好ましく、５０〜２００マイクロ重量パーセントがさらに好ましく、７０〜１５０マイクロ重量パーセントが最も好ましい。
バリンの添加量は３０〜５００マイクロ重量パーセントが好ましく、５０〜２００マイクロ重量パーセントがさらに好ましく、７０〜１５０マイクロ重量パーセントが最も好ましい。
【００１７】
チロシンの添加量は０．０８〜１．６マイクロ重量パーセントが好ましく、０．２〜０．９マイクロ重量パーセントがさらに好ましく、０．３〜０．６マイクロ重量パーセントが最も好ましい。
システインの添加量は１５〜３００マイクロ重量パーセントが好ましく、３０〜１５０マイクロ重量パーセントがさらに好ましく、４０〜８０マイクロ重量パーセントが最も好ましい。
フェニルアラニンの添加量は０．１２〜２．４マイクロ重量パーセントが好ましく、０．２〜１．５マイクロ重量パーセントがさらに好ましく、０．３〜１．０マイクロ重量パーセントが最も好ましい。
【００１８】
ビタミン類はその助酵素活性から種々の皮膚外用剤に用いられてきたが、本発明の皮膚外用剤と組み合わせた場合、ビタミンＢ群に属するビタミン類が特に好ましい。本発明で用いられるビタミンＢ類は具体的にはビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ４、ビタミンＢ５、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＢ１３、ビタミンＢ１５、ビタミンＢ１７、ビタミンＢＴ、ビタミンＢｘ、ビタミンＢｃであり、糖の代謝に関わる、ビタミンＢ１と脂質の代謝に関わるビタミンＢ２とタンパクの代謝に関わるビタミンＢ６が好ましく、ビタミンＢ１とビタミンＢ６がさらに好ましい。
本発明で用いられるビタミンＢ類の添加量は０．８〜１６マイクロ重量パーセントが好ましく、２〜９マイクロ重量パーセントがさらに好ましく、３〜６マイクロ重量パーセントが最も好ましい。
【００１９】
本発明において、皮膚の弾力性を保つためには、ヒアルロン酸を加えることが特に好ましく、そのヒアルロン酸はナトリウム塩でもカリウム塩でもよく、フリーの酸でもよい。本発明の皮膚外用剤が化粧品の場合、ヒアルロン酸の添加は特に好ましい。皮膚外用剤に用いられるヒアルロン酸の添加量は１５０〜３０００マイクロ重量パーセントが好ましく、３００〜１５００マイクロ重量パーセントがさらに好ましく、４００〜８００マイクロ重量パーセントが最も好ましい。
【００２０】
本発明の皮膚外用剤には、種々の薬効剤を添加して併用することができる。そのような薬効剤は、例えば、活性酸素除去剤、抗酸化剤、細胞賦活剤、抗炎症剤、チロシナーゼ活性阻害剤、ＵＶ吸収剤及び保湿剤である。具体的な薬効剤としては、それぞれ以下に示すものが挙げられるが、無論、それらに限定されることは無い。
本発明に使用できる活性酸素除去剤もしくは抗酸化剤は、特に制限が無いが、化学合成により得られたものよりも、天然物から抽出または精製されたものの方が好ましい。
【００２１】
活性酸素除去剤としては、例えば、β−カロチン、α−カロチン、リコピン、ルテイン、アスタキサンチン、カプサンチン、フコキサンチン、ヘテロキサンチン、ロロキサンチン、ルテオキサンチン、リコフィル、リコキサンチン、ネオクロム、ネオキサンチン、ロドピン、ロドピナール、ロドピノール、ロドビブリン、トロリキサンチン、キサントフィル、ゼアキサンチンなどのカロチノイド類、スーパーオキシドディスムターゼ、マンニトール、ルチン及びその誘導体、ビリルビン、コレステロール、トリプトファン、ヒスチジン、クエルセチン、クエルシトリン、カテキン、カテキン誘導体、没食子酸及びその誘導体、グルタチオン及びその誘導体並びにそれらの塩、オウゴン抽出物、イチョウ抽出物、ケイケットウ抽出物、サンザシ抽出物、マイカイカ抽出物、ユキノシタ抽出物、メリッサ抽出物、ゲンノショウコ抽出物、ボタンピ抽出物、パセリ抽出物、トルメンチラ抽出物、羅漢果抽出物、ヤシャジツ抽出物及びジコッピ抽出物等のフラボノイドを含む植物抽出物等が挙げられる。
【００２２】
抗酸化剤としては、例えば、パルミチン酸レチノール、酢酸レチノール等のレチノール及びその誘導体、レチナール及びその誘導体、デヒドロレチナール等のビタミンＡ類；チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩等のチアミン類、リボフラビン、塩酸ピリドキシン、ピリドキシンジオクタノエート等のピリドキシン類、フラビンアデニンヌクレオチド、シアノコバラミン、葉酸類、ニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等のニコチン酸類、パントテン酸カルシウム、Ｄ−パントテニルアルコール、パントテニルエチルエーテル、アセチルパントテニルエチルエーテル等のパントテン酸類、コリン、イノシトール類等のビタミンＢ類；Ｌ−アスコルビン酸、パルミチン酸Ｌ−アスコルビル、ジパルミチン酸Ｌ−アスコルビル、イソパルミチン酸Ｌ−アスコルビル、ジイソパルミチン酸Ｌ−アスコルビル、テトライソパルミチン酸Ｌ−アスコルビル、ステアリン酸Ｌ−アスコルビル、ジステアリン酸Ｌ−アスコルビル、イソステアリン酸Ｌ−アスコルビル、ジイソステアリン酸Ｌ−アスコルビル、ミリスチン酸Ｌ−アスコルビル、ジミリスチン酸Ｌ−アスコルビル、イソミリスチン酸Ｌ−アスコルビル、ジイソミリスチン酸Ｌ−アスコルビル、オレイン酸Ｌ−アスコルビル、ジオレイン酸Ｌ−アスコルビル、２−エチルヘキサン酸Ｌ−アスコルビル、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルカリウム、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルカルシウム、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルアルミニウム、Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステルカリウム、Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステルカルシウム、Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステルアルミニウム、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸カリウム、Ｌ−アスコルビン酸マグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸カルシウム、Ｌ−アスコルビン酸アルミニウム等のアスコルビン酸及びその誘導体並びにそれらの塩等のビタミンＣ類；エルゴカルシフェロール、コレカルシフェロール、ジヒドロキシスタナール等のビタミンＤ類；ｄｌ−α（β、γ）−トコフェロール、酢酸ｄｌ−α−トコフェロール、ニコチン酸−ｄｌ−α−トコフェロール、リノール酸−ｄｌ−α−トコフェロール、コハク酸ｄｌ−α−トコフェロール等トコフェロール及びその誘導体並びにそれらの塩、ユビキノン類等のビタミンＥ類、ジブチルヒドロキシトルエン及びブチルヒドロキシアニソール等が挙げられる。
【００２３】
上記活性酸素除去剤、抗酸化剤のうち、好ましいものとしては、マンニトール、ベータカロチン、アスタキサンチン、ルチン及びその誘導体、イチョウ抽出物、オウゴン抽出物、ケイケットウ抽出物、ユキノシタ抽出物、メリッサ抽出物、ゲンノショウコ抽出物、エイジツ抽出物、ビタミンＣ類及びそれらの誘導体並びにそれらの塩、ビタミンＥ及びその誘導体並びにそれらの塩が挙げられ、さらに好ましいものとしてはベータカロチン、アスタキサンチン、イチョウ抽出物、ビタミンＣ類及びそれらの誘導体並びにそれらの塩、ビタミンＥ及びその誘導体並びにそれらの塩が挙げられる。
本発明の皮膚外用剤中における活性酸素除去剤もしくは抗酸化剤の濃度は、好ましくは０．００００１〜５０重量％であり、より好ましくは０．０００１〜３０重量％である。但し、植物抽出物を用いる場合には、乾燥固形分が上記の範囲内であれば問題ない。また、活性酸素除去剤もしくは抗酸化剤は一種又は二種以上を組み合わせて用いることができる。
【００２４】
（細胞賦活剤）
細胞賦活剤としては、例えば、デオキシリボ核酸及びその塩、アデノシン三リン酸、アデノシン一リン酸などのアデニル酸誘導体及びそれらの塩、リボ核酸及びその塩、グアニン、キサンチン及びそれらの誘導体並びにそれらの塩などの核酸関連物質；血清除蛋白抽出物、脾臓抽出物、胎盤抽出物、鶏冠抽出物、ローヤルゼリーなどの動物由来の抽出物；酵母抽出物、乳酸発酵抽出物、ビフィズス菌抽出物、霊芝抽出物などの微生物由来の抽出物；ニンジン抽出物、センブリ抽出物、ローズマリー抽出物、オウバク抽出物、ニンニク抽出物、ヒノキチオール、セファランチンなどの植物由来の抽出物；α−又はγ−リノレイン酸、エイコサペンタエン酸及びそれらの誘導体、コハク酸及びその誘導体並びにそれらの塩、エストラジオール及びその誘導体並びにそれらの塩、乳酸、グリコール酸、クエン酸、リンゴ酸、サリチル酸などのα−ヒドロキシ酸及びそれらの誘導体並びにそれらの塩等を挙げることができる。
【００２５】
これら細胞賦活剤のうち、特に好ましいものとしては、デオキシリボ核酸及びその塩、アデノシン三リン酸及びその塩、血清除蛋白抽出物、胎盤抽出物、酵母抽出物、乳酸発酵抽出物、ニンジン抽出物、ヒノキチオール、コハク酸及びその誘導体並びにそれらの塩が挙げられる。
本発明の皮膚外用剤中における細胞賦活剤の濃度は、好ましくは０．０００１〜５重量％であり、より好ましくは０．００１〜３重量％である。但し、植物抽出物を用いる場合には、乾燥固形分が上記の範囲内であれば問題ない。また、細胞賦活剤は一種又は二種以上を組み合わせて用いることができる。
【００２６】
（抗炎症剤）
抗炎症剤としては、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、メフェナム酸、フェニルブタゾン、インドメタシン、イブプロフェン、ケトプロフェン、アラントイン、グアイアズレン及びそれらの誘導体並びにそれらの塩、ε−アミノカプロン酸、酸化亜鉛、ジクロフェナクナトリウム、アロエ抽出物、サルビア抽出物、アルニカ抽出物、カミツレ抽出物、シラカバ抽出物、オトギリソウ抽出物、ユーカリ抽出物、ムクロジ抽出物等が挙げられる。
これらの抗炎症剤のうち、特に好ましいものは、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、グアイアズレン及びそれらの誘導体並びにそれらの塩、ε−アミノカプロン酸、アロエ抽出物、カミツレ抽出物である。
抗炎症剤の濃度は、組成物中に、一般には０．０００１〜１％、好ましくは０．０１〜０．５％である。但し、植物抽出物を用いる場合には、乾燥固形分が上記の範囲内であれば問題ない。また、抗炎症剤はそれぞれ一種又は二種以上を組み合わせて用いることができる。
【００２７】
（チロシナーゼ活性阻害剤）
チロシナーゼ活性阻害剤としては、システイン及びその誘導体（例えばＮ，Ｎ’−ジアセチルシスチンジメチル等）並びにその塩、センプクカ抽出物、ケイケットウ抽出物、サンペンズ抽出物、ソウハクヒ抽出物、トウキ抽出物、イブキトラノオ抽出物、クララ抽出物、サンザシ抽出物、シラユリ抽出物、ホップ抽出物、ノイバラ抽出物、ヨクイニン抽出物等が挙げられる。
チロシナーゼ活性阻害剤の濃度は、０．０００１〜２％が好ましく、特に０．００１〜０．５％が好ましい。但し、植物抽出物を用いる場合には、乾燥固形分が上記の範囲内であれば問題ない。なお、これらは、一種又は二種以上を組み合わせて用いることができる。
【００２８】
（保湿剤）
保湿剤としては、尿素など合成化合物はもちろんのこと、天然保湿因子として知られているアミノ酸類、ピロリドンカルボン酸、乳酸塩などの低分子化合物を用いることができる。また、皮膚の構成成分であり、従来から化粧料に配合されているムコ多糖類及び／又はタンパク質が利用できる。
このうち、アミノ酸としては、「新有用性化粧品の開発」鈴木正人／監修、シーエムシー出版、２００４年９月発行、１６頁から１９頁に記載のアミノ酸が挙げられる。
また、ムコ多糖類としては、例えばヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパラン硫酸、ヘパリン及びケラタン硫酸並びにこれらの塩類が挙げられ、特にヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸及びこれらの塩類を好適に用いることができる。
また、タンパク質としては、例えばコラーゲン、エラスチン、ケラチン及びこれらの誘導体並びにその塩類を挙げることができ、特にコラーゲンが好ましい。これらの各成分は、その起源について特に制約はなく、動物由来、微生物由来、合成品のいずれであってもよい。天然起源の場合の抽出方法、精製処理方法についても特に制約はない。
これら、保湿成分については、一種類でもよく、また、適宜、二種類以上を同時に添加して使用することができる。
更にまた、保湿剤配合量は、その成分の組み合わせによっても異なるが、一般には０．０００１〜５％が好ましく、０．００１〜３％がさらに好ましい。
【００２９】
本発明のアミノ酸又はそれらの塩類からなるアミノ酸とビタミンＢと加水分解シルクの組成物は、常法に従い、通常の外用組成物として知られる種々の形態の基剤に配合して調製することができる。すなわち、油剤（天然動植物油脂、半合成油脂、炭化水素油、高級脂肪酸、エステル油、シリコーン油、フッソ系油剤等）、ゲル化剤、金属セッケン、界面活性剤（アニオン性、カチオン性、両性、粉体（無機粉体、有機粉体、顔料等）、アルコール類（高級アルコール、多価アルコール、ステロール等）、水溶性高分子（動植物系、微生物系、合成系）、皮膜形成剤、樹脂、防腐剤、抗菌剤、香料、精油、塩類、水（精製水、温泉水及び深層水）、ＰＨ調整剤、清涼剤、肌荒れ改善剤、血行促進剤、皮膚収斂剤、抗脂漏剤、アミノ酸類、核酸関連物質、酵素、ホルモン類、包接化合物、植物抽出物、動物及び微生物由来の抽出物、紫外線散乱剤等を添加することができる。
【００３０】
本発明で必須として用いられるアミノ酸、加水分解シルク、さらに添加して用いられるアミノ酸、ビタミンB類、ヒアルロン酸について、本発明の添加量の上限を超えた使用量は特にマイナスの生理学的効能をもたらさないが、本発明で提示した上限量付近でプラスの効果は飽和し、添加量増加の利益を生まない。また、本発明の上限を超えた添加は、べたつき感などの使用環悪化につながることがある。
【実施例】
【００３１】
以下に、実施例に基づき、本発明を詳細に述べるが、本発明がこれらに限定されるものではないことは言うまでもない。
【００３２】
実施例１（皮膚透過性試験）
透過試験用皮膚
１０〜２０週齢のマウス雄ヘアレスマウス（九動（株））の腹部皮膚を摘出し、皮下脂肪を除去して用いた。
【００３３】
皮膚透過試験
皮膚試料をＫｅｓｈａｎｙ−Ｃｈｉｅｎ型拡散セルに装着した。試験液（後述）をドナー相に１ｍｌ加え、その上部をパラフィルムで密閉した。レセプター相には０．０１ｍｏｌ／ｌリン酸緩衝生理食塩水（和光純薬）を加えて撹拌し、３２℃でインキューベートし、２４時間後にＨＰＬＣ法でアミノ酸量を定量し、透過率を計算した。
【００３４】
アミノ酸定量法
島津製作所のＨＰＬＣアミノ酸分析システム（Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ）を用い、ＯＰＡ（オルトフタルアルデヒド）を反応試薬に用いるポストカラム蛍光検出法によって定量した。
【００３５】
試験液
２０種類のアミノ酸（和光純薬：バリン、ロイシン、イソロイシン、アラニン、アルギニン、グルタミン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、プロリン、システイン、スレオニン、メチオニン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アスパラギン、グリシン、セリン）をそれぞれ０．１重量％になる量と、１，３−ブチレングリコール（和光純薬）１重量％になる量と、添加物として加水分解シルク（成和化成：プロモイスシルク）１重量％になる量と０．０１ｍｏｌ／ｌリン酸緩衝生理食塩水（和光純薬）を混合し、試験液１を調製した。
【００３６】
加水分解シルクの代わりにそれぞれ、グルコース（和光純薬）、トレハロース（和光純薬）、海洋性コラーゲン（新田ゼラチン、Ｍａｒｉｎｇｅｎ  Ｓ−０６）、海洋性コラーゲン（新田ゼラチン、Ｍａｒｉｎｇｅｎ  ＳＰ−０３）、ブタ真皮由来コラーゲン（新田ゼラチン、Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｐ）を同様に混合し、試験液２、３、４、５、６を調製した。
【００３７】
試験液を前述の皮膚透過試験法で試験し、透過した全アミノ酸の透過率を測定した結果を表１に示した。
【００３８】
【表１】
2008056568.tif 000002
【００３９】
本発明の加水分解シルクは、グルコース、トレハロースの糖類より優れた透過促進効果を示し、かつ、他の加水分解ペプチドより優れた透過促進効果を示した。
本発明の添加物が加水分解シルクの場合の各アミノ酸の透過率を表２に示した。
【００４０】
【表２】
2008056568.tif 000003
【００４１】
ロイシンとイソロイシンとアルギニンとリジンとアスパラギン酸とスレオニンは加水分解シルク存在下、本試験条件で優れた皮膚透過性を示し、このことは、これらのアミノ酸と加水分解シルクとの相乗効果によって細胞内部へ浸透させられる可能性を示唆している。
【００４２】
実施例２（ヒト正常角化細胞増殖試験）
精製ＩＶ型コラーゲン−酢酸溶液の調製
以下のプロトコール（１）〜（１６）に従い、原料であるブタ眼球から精製高分子ＩＶ型コラーゲンを８ｍｇ得た。以下のプロトコールは４℃で行った。
【００４３】
（１）眼球からハサミを用いて角膜を除き、レンズを眼球内部より取り出す。
（２）レンズに付着する硝子体などの不溶部位をハサミなどで出来る限り取り除く。
（３）冷ＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ）５０ｍｌにコンプリート  プロテアーゼインヒビターカクテル１錠（ロシュ社）を加え溶解後、レンズカプセルを入れ、２時間撹拌する。
（４）遠心分離（２０００ｇ、１０分、４℃）し、上清に存在する不要部位を除去する。
（５）沈殿をコンプリート  プロテアーゼインヒビターカクテル半錠（ロシュ社）を溶解した０．５Ｍ酢酸２５ｍｌに懸濁する。
（６）ホモジナイザー（ＩＫＡ）を用いて細かく破砕する。
（７）細かく破砕したレンズカプセルを３日間撹拌し、ＩＶ型コラーゲンの抽出を行う。
（８）遠心分離（２０００ｇ、１０分、４℃）し、上清（酢酸可溶性コラーゲン）と沈殿を分離する。
（９）この撹拌による抽出と遠心分離をもう一度繰り返す。
（１０）遠心分離により得られた上清に終濃度１．７Ｍになるように乳鉢で可能な限り結晶をすり潰したＮａＣｌを添加する。
（１１）一晩撹拌しコラーゲンを沈殿させる。
（１２）遠心分離（５０００ｇ、３０分、４℃）し、沈殿物を回収する。
（１３）沈殿物に０．５Ｍ酢酸を加え、十分に溶解する。
（１４）コラーゲン酸性水溶液を透析チューブ（三光純薬）に入れ、０．５Ｍ酢酸を用いて透析を行う。
（１５）さらに、２ｍＭ塩酸で透析を行う。
（１６）透析後のコラーゲン溶液を回収し、精製ＩＶ型コラーゲン溶液を得る。
【００４４】
コラーゲン・フィルム上培養操作手順
１．前述のＩＶ型コラーゲン−酢酸溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を滅菌した超純水で１０倍に希釈して、４８穴培養皿又はプレートに１平方センチ当たり５０〜１００μｌ注ぐ。
２．培養面全体に広がるように薄く引き延ばす。
３．クリーンベンチ内で培養皿又はプレートの蓋を開けて、２５℃以下で乾燥させる。
４．乾燥後、ＩＶ型コラーゲンフィルムから酸を除くため、培地で３回洗浄する。
５．ヒト正常角化細胞（三光純薬ＣＣ−２５０３−ＮＺ）を１平方センチ当たり３５００個播種する。
６．ＣＯ２インキュベーターにＩＶコラーゲンプレートを入れ、培養を開始する。
７．２日毎に培地を交換し、８日間培養する。
【００４５】
皮膚細胞増殖試験
増殖試験はＭＴＴ  Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔを用いて行った。
試薬Ａ：ＭＴＴ、（３−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ  ｔｅｔｒａｓｏｄｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ）、５０ｍｇ／ｖｉａｌ．
試薬Ｂ：ＰＢＳ  ｐＨ７．４、１５ｍＬ
試薬Ｃ：Ｃｏｌｏｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ｉｓｏｐｒｏｐａｎｏｌ  ｗｉｔｈ  ０．０４Ｎ  ＨＣｌ）、１００ｍＬ
試薬Ａに試薬Ｂ  １０ｍｌを加えてよく混合する。
冷暗所で一晩静置する。
ＡＢ試薬を０．２２μｍのフィルターでろ過滅菌を行う。
ＡＢ試薬を１ｃｍ２あたり３０μｌ加えて、軽く混合する。
ＣＯ２インキュベーターで４時間培養する。
培養後、培養上清をチューブに移す。
試薬Ｃを１ｃｍ２当たり３００μｌ加える。
混合後、培養上清を入れたチューブに移す。
１時間以内に吸光度（５７０ｎｍ）を測定する。
【００４６】
試験培地
各添加物（和光純薬）を表３−１５の濃度になるように、ブレットキットＫＧＭ−２培地（表皮角化細胞用増殖培地）三光純薬ＣＣ−１３０７−ＮＺに添加して、試験培地とした。なお、表１３の試験培地は公知の特開昭６１−２８９０１６の実施例で示されたものと類似の組成である。
【００４７】
【表３】
2008056568.tif 000004
【００４８】
【表４】
2008056568.tif 000005
【００４９】
【表５】
2008056568.tif 000006
【００５０】
【表６】
2008056568.tif 000007
【００５１】
【表７】
2008056568.tif 000008
【００５２】
【表８】
2008056568.tif 000009
【００５３】
【表９】
2008056568.tif 000010
【００５４】
【表１０】
2008056568.tif 000011
【００５５】
【表１１】
2008056568.tif 000012
【００５６】
【表１２】
2008056568.tif 000013
【００５７】
【表１３】
2008056568.tif 000014
【００５８】
【表１４】
2008056568.tif 000015
【００５９】
【表１５】
2008056568.tif 000016
【００６０】
皮膚細胞増殖試験結果
無添加の際の吸光度を１００とし、それに対する相対濃度を表１６および１７に示した。
【００６１】
【表１６】
2008056568.tif 000017
【００６２】
【表１７】
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【００６３】
本発明組成物２−１はＩＶ型コラーゲンプレート上のヒト表皮角化細胞の増殖を促進し、ビタミンＢ６とビタミンＢ１によってその効果が増進され（本発明組成物２−２）、さらに、いくつかのアミノ酸添加によって増進された（本発明組成物２−３）。
各アミノ酸の濃度による影響を本発明組成物２−４から２−１３に示した。各アミノ酸について示した上限量で実質的に細胞増殖効果は飽和した。加水分解シルクの量は5μg/mlでは増殖効果がある（本発明組成物２−１４）が、3μグラム/mlまで減少すると効果が失われ（比較組成物２−1）、ビタミンＢ類やアミノ酸類を添加しても増殖効果は無い（比較組成物２−１）。
本発明のアミノ酸を加えない場合、細胞増殖効果はまったく得られなかった（比較例２−３から２−８）。
公知のアミノ酸の組み合わせだけではヒト表皮細胞増殖効果は認められなかった（比較例２−９から２−１１）。
【００６４】
（化粧品試験）
参考例１
以下の組成でスキンケアローションを試作した。
以下の表１８の濃度になるように各成分を７０℃で混合し、水溶液とした後、室温に冷却した。
【００６５】
【表１８】
2008056568.tif 000019
【００６６】
参考例２
以下の組成でスキンケア用乳剤を試作した。
Ａ液
表１９の組成になるように各成分を７０℃で混合し、水溶液とした。
【００６７】
【表１９】
2008056568.tif 000020
【００６８】
Ｂ液
表２０の組成比になるように各成分を７０℃で混合した。
【００６９】
【表２０】
2008056568.tif 000021
【００７０】
製法
Ａ液６５ｍｌとＢ液１５ｇを７０℃で混合し、キサンタンガム（２％水溶液）２０ｍｌを加えて、均一になるまで７０℃で混合した。その後、室温に冷却した。
【００７１】
参考例３
以下の組成でスキンケア用クリームを試作した。
Ａ液
表２１の組成になるように各成分を７０℃で混合し、水溶液とした。
【００７２】
【表２１】
2008056568.tif 000022
【００７３】
Ｂ液
表２２の組成比になるように各成分を７０℃で混合した。
【００７４】
【表２２】
2008056568.tif 000023
【００７５】
製法
Ａ液５１ｍｌとＢ液４０ｇを７０℃で混合し、トリエタノールアミン１．０ｇを加えて、乳化均一になるまで７０℃で混合した。その後、室温に冷却した。
【００７６】
実施例３
スキンケアローション
評価方法
被験パネル
年齢２７−３５歳の健常女性１０人で、平均年齢３４．２歳
場所
温度約２４℃、湿度約５５パーセントの室内。
評価方法
洗浄後の前腕内側の無作為な位置に塗布し、使用感（官能感）を試験
官能試験結果を次の基準で点数化した。
【００７７】
４  とてもよく感じられる
３  まあ、よく感じられる
２  あまり感じられない
１  感じられない
【００７８】
そして、１０人のパネラーの評価点の平均を求め、以下のようにランク付けした。
【００７９】
Ａ  ３．２以上
Ｂ  ２．７以上３．２未満
Ｃ  ２．２以上２．７未満
Ｄ  １．７以上２．２未満
Ｅ  １．７未満
【００８０】
スキンケアローション
表１８の組成を本発明とし、加水分解シルクを除いたものを比較例３−１、加水分解シルクを海洋性コラーゲン（新田ゼラチン、Ｍａｒｉｎｇｅｎ  ＳＰ−０３）に代替したものを比較例３−２、ブタ真皮由来コラーゲン（新田ゼラチン、Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｐ）に代替したものを比較例３−３とした。
【００８１】
【表２３】
2008056568.tif 000024
【００８２】
十分塗り込むように塗布した後、約５分後に感想を尋ねた結果を以下に示す。
【００８３】
【表２４】
2008056568.tif 000025
【００８４】
表から明らかなように、本発明の加水分解シルクを併用したアミノ酸ローションは浸透感を強く感じ、しっとり感と伸び感に優れて総合的にも優れた化粧品である。
【００８５】
実施例４（保湿効果）
評価パネルは前と同様で、平均年齢３２．７歳。
保湿効果は高周波インピーダンス法によって角質水分量を測定することによって評価した。（アサヒバイオメッド社製  高感度角層膜厚水分計ＡＳＡ−ＭＸを用い、ダブル周波数位相差振幅検出方式）
スキンケア用乳剤
表１９の加水分解シルクを除いたものを比較例４−１、加水分解シルクを海洋性コラーゲン（新田ゼラチン、Ｍａｒｉｎｇｅｎ  ＳＰ−０３）に代替したものを比較例４−２、ブタ真皮由来コラーゲン（新田ゼラチン、Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｐ）に代替したものを比較例４−３とした。
【００８６】
【表２５】
2008056568.tif 000026
【００８７】
十分塗り込むように塗布した後、約１８時間後に皮膚伝導度を測定し、塗布後の増加率を求めた。
【００８８】
【表２６】
2008056568.tif 000027
【００８９】
表から明らかに、本発明組成物は優れた保湿性を示した。
【００９０】
実施例５
評価方法
評価パネルは前と同様で、平均年齢３６．４歳。
毎日、朝と昼の二回、両手洗浄後、手甲部に塗付し、２週間連用することにより、使用効果試験を実施した。
試験結果を次の基準で点数化した。
皮膚賦活効果
【００９１】
４  肌の張り、つやの改善がとても感じられる
３  まあ、感じられる
２  あまり感じられない
１  感じられない
【００９２】
そして、１０人のパネラーの評価点の平均を求め、以下のようにランク付けした。
【００９３】
Ａ  ３．２以上
Ｂ  ２．７以上３．２未満
Ｃ  ２．２以上２．７未満
Ｄ  １．７以上２．２未満
Ｅ  １．７未満
【００９４】
肌荒れ抑制効果
【００９５】
４  肌のかさつき、肌荒れの改善がとても感じられる
３  まあ、感じられる
２  あまり感じられない
１  感じられない
【００９６】
そして、１０人のパネラーの評価点の平均を求め、以下のようにランク付けした。
【００９７】
Ａ  ３．２以上
Ｂ  ２．７以上３．２未満
Ｃ  ２．２以上２．７未満
Ｄ  １．７以上２．２未満
Ｅ  １．７未満
【００９８】
表２１の組成を本発明とし、加水分解シルクを除いたものを比較例５−１、加水分解シルクを海洋性コラーゲン（新田ゼラチン、Ｍａｒｉｎｇｅｎ  ＳＰ−０３）に代替したものを比較例５−２、ブタ真皮由来コラーゲン（新田ゼラチン、Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｐ）に代替したものを比較例５−３とした。
【００９９】
【表２７】
2008056568.tif 000028
【０１００】
【表２８】
2008056568.tif 000029
【０１０１】
表から明らかに、本発明組成物は優れた皮膚賦活と肌荒れ抑制効果を示した。