(57)【要約】【課題】極度に血圧を下げる心配無く、確実に、骨量の低下を予防又は治療することのできる骨粗鬆症の予防・治療剤を提供することである。【解決手段】アンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する物質を含むことを特徴とする、骨粗鬆症の予防又は治療剤である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する物質又はその前駆体を含むことを特徴とする、骨粗鬆症の予防又は治療剤。
【請求項２】
アンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する物質が、下記の（Ａ）乃至（Ｃ）から選択される少なくとも一種以上であることを特徴とする、請求項１記載の骨粗鬆症の予防又は治療剤。
（Ａ）低分子化合物
（Ｂ）ペプチド類
（Ｃ）アンジオテンシン変換酵素遺伝子の発現を抑えるポリヌクレオチド
【請求項３】
低分子化合物が、環状構造を有する化合物である、請求項２記載の骨粗鬆症の予防又は治療剤。
【請求項４】
アンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する物質が、エナラプリル又はその誘導体である、請求項３記載の骨粗鬆症の予防又は治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、骨粗鬆症の予防又は治療剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
血圧を上昇させる調節系には、レニン−アンジオテンシン系が知られており、これは、生命活動にとって重要な系である。腎臓で生成される酵素であるレニンは、血液中でアンジオテシノ−ゲンに作用してアミノ酸１０個からなるペプチドであるアンジオテンシンＩを生成し、このアンジオテンシンＩのＣ末端から、アンジオテンシン変換酵素が、ジペプチドＨｉｓ−Ｌｅｕを遊離させ、アミノ酸８個からなるアンジオテンシンＩＩが生成する。そしてアンジオテンシンＩＩが、血管平滑筋を収縮させて血圧を上昇させ、副腎皮質からアルドステロンを分泌させ、腎臓でナトリウムを再吸収させることによって血圧を上昇させる。
【０００３】
本発明者等は、高血圧症と骨粗鬆症が加齢に伴って発症する二大疾患であり、骨粗鬆症患者の多くが、高血圧をも併発していることに着目し、これらに共通する要因があるのでは無いかと考え、鋭意研究を行った。
【０００４】
その結果、血圧上昇に関連する上記レニン−アンジオテンシン系が、骨粗鬆症の発症にも深く関与していることを見出すに至った。
【０００５】
一方、ラットへのアンジオテンシンIIの投与により、高血圧，破骨細胞の増殖・活性化，及び骨密度の低下が引き起こされ、更に、もともと高血圧のラットに、アンジオテンシンIIの受容体に対する拮抗薬の一種である「オルメサルタン」を投与した際に、破骨細胞の増殖・活性化が抑えられ、骨密度の低下が防止されるという報告があった（非特許文献１）。
【０００６】
アンジオテンシンIIの受容体には、「ＡＴ１受容体」と「ＡＴ２受容体」があり、オルメサルタンは、「ＡＴ１受容体」拮抗薬の一種である。
【０００７】
しかし、本発明者等が、「オルメサルタン」と同じ「ＡＴ１受容体」拮抗薬の一種である「ロサルタン」で、筑波高血圧マウスを用いた異なるアプローチをした結果、骨量が更に低下することが判明した。
【０００８】
これは、ＡＴ１受容体を介するシグナル伝達を阻害しても、ＡＴ２受容体が代替機能を果たす可能性を示唆しており、ＡＴ１受容体の拮抗薬では、骨粗鬆症の予防・治療は、必ずしも十分では無いこと意味している。また、ＡＴ２受容体が代替機能を果たすことによって、狙っていたＡＴ１受容体を介するシグナルは阻害できても、ＡＴ２受容体を介するシグナルを活性化することに繋がり、逆に高血圧を悪化させるという好ましからざる作用を引き起こす危険もある。
【０００９】
一方、レニン−アンジオテンシン系の上流，例えばレニンによるアンジオテンシンＩの生成段階等を阻害することによって、血圧上昇は勿論、骨粗鬆症も予防しうることが考えられるが、本来生命活動にとって必要な系の、あまりにも上流を阻害してしまうことは、他の疾病を引き起こす可能性が高くなることが懸念される。
【００１０】
そこで本発明者等は、アンジオテンシンIからアンジオテンシンIIへの変換を触媒する、アンジオテンシン変換酵素（以下「ＡＣＥ」と言うことがある。）の阻害剤（以下「ＡＣＥＩ」と言うことがある。）が、より確実に、レニン・アンジオテンシン系を抑え（アンジオテンシンIIの受容体を介するシグナル伝達を阻害し）、かつ副作用無く、骨粗鬆症の予防・治療を行えるのでは無いかと考えるに至った。
【００１１】
【非特許文献１】産経新聞 08/09 東京朝刊 総合１面 1頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
従って、本発明の目的とするところは、極度に血圧を下げる心配無く、確実に、骨量の低下を予防又は治療することのできる骨粗鬆症の予防・治療剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
上述の目的は、下記の発明によって達成される。
【００１４】
（第一の発明）
アンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する物質又はその前駆体を含むことを特徴とする、骨粗鬆症の予防又は治療剤。
【００１５】
（第二の発明）
アンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する物質が、下記の（Ａ）乃至（Ｃ）から選択される少なくとも一種以上であることを特徴とする、第一の発明記載の骨粗鬆症の予防又は治療剤。
（Ａ）低分子化合物
（Ｂ）ペプチド類
（Ｃ）アンジオテンシン変換酵素遺伝子の発現を抑えるポリヌクレオチド
【００１６】
（第三の発明）
低分子化合物が、環状構造を有する化合物である、第二の発明記載の骨粗鬆症の予防又は治療剤。
【００１７】
（第四の発明）
アンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する物質が、エナラプリル又はその誘導体である、第三の発明記載の骨粗鬆症の予防又は治療剤。
【発明の効果】
【００１８】
本発明の骨粗鬆症の予防又は治療剤は、一剤で、高血圧と骨粗鬆症の両方を予防又は治療し得る、画期的なものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００２０】
〈本発明の骨粗鬆症の予防又は治療剤〉
（１）有効成分の種類
本発明に用いられるアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する物質（以下、「ＡＣＥＩ」と言うことがある。）としては、あらゆるアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する物質を用いることができ、例えば（Ａ）低分子化合物，（Ｂ）ペプチド類，及び（Ｃ）アンジオテンシン変換酵素遺伝子の発現を抑えるポリヌクレオチド等が挙げられる。
【００２１】
尚、本発明において、「アンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する物質の前駆体」とは、生体内でアンジオテンシン変換酵素作用を有する物質に変換され得る、誘導体や、薬学的に許容される塩等である。
【００２２】
（Ａ）低分子化合物
本発明において、低分子化合物であるＡＣＥＩとしては、アンジオテンシン変換酵素作用を有するものであれば良いが、例えば、分子内に1又は２以上の環状構造を有する化合物が好ましいものとして例示される。環状構造としては、単環，縮合多環，環集合構造が挙げられる。尚、環状構造は、炭素のみからなるものほか、複素環であっても良い。
また、かかる上記化合物の薬学的に許容される塩等の誘導体等、人体で上記化合物に変換され得る前駆体等であっても良い。
【００２３】
具体的には、以下の、公知のアンジオテンシン変換酵素阻害薬（前駆体も含む）等を用いることができる。
【００２４】
例示すると、アラセプリル（大日本住友製薬（株）製「セタプリル」等），デアセチルアラセプリル，アノアラセプリル（ano-alacepril），塩酸イミダプリル（田辺製薬（株）製「タナトリル」等），イミダプリル，イミダプリラート，インダラプリル（indalapril），インドラプリル（indolapril），マレイン酸エナラプリル（万有製薬（株）製「レニベース」等），エナラプリル(enalapril)，エナラプリラート，カプトプリル(captopril，第一三共（株）製「カプトリル」等)，塩酸キナプリル（三菱ウェルファーマ（株）製「コナン」等），キナプリル，キナプリラート，クリアザプリル（cliazapril），シラザプリル，スピラプリル，ゼフェノプリル（zefenopril），塩酸テモカプリル（第一三共（株）製「エースコール」等），テモカプリル，テモカプリラート，塩酸デラプリル（武田薬品工業（株）製「アデカット」等），トランドラプリル（中外製薬（株）製「プレラン」等），トランドラプリラート，ピバルプリル（pivalpril），フェンチアプリル（fentiapril），フォシノプリル，フシノプリル（fusinopril），ペリンドプリルエルブミン，ペリンドプリル，ペリンドプリラート，ベナザプリル，塩酸ベナゼプリル（ノバルティスファーマ（株）製「チバセン」等），ベナゼプリル，ベナゼプリラート，ベンザプリル，ベンゼプリル（benzepril），ペントプリル(pentopril) ，モエキシプリル，ラミプリル，リシノプリル(lisinopril)（塩野義製薬（株）製「ロンゲス」等） ，及び（Ｒ）−３−［（Ｓ）−１−カルボキシ−５−（４−ピペリジル）−ペンチル］−アミノ−４−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン−５−酢酸，特開平09-067252に記載の、ローヤルゼリーから分離されたトランス−１０−ヒドロキシ−デセン酸等が挙げられる。
【００２５】
（Ｂ）ペプチド類
また、このほか、ペプチド類であるＡＣＥＩとしては、例えばタンパク質由来ペプチドである、アンジオテンシン変換酵素を用いることもできるが、これらは、化学的に，あるいは、公知のバイオテクノロジー手法を用いて、人工的に合成したものであっても良い。
【００２６】
具体的には、例えば
特開平２−２４００２７号公報記載の、トウモロコシタンパク質由来のペプチド，
特開平３−８１２９１号公報記載の、ナンキョクオキアミ組織由来のペプチド
特公昭６１−５１５６４号公報記載の牛由来カゼインペプチドであるペプチド
特開平２−２４００２８号公報記載の、α−ゼインまたはグルテンミールを酵素分解し、分子量１００００以下の画分をゲル濾過や限外濾過により得られるペプチド混合物
特開平２−２８２３９４号公報記載のいちじく由来の分子量１００００以下の物質を含有する液
特開昭６２−２８３７０号公報記載の魚肉タンパク質を加水分解して分子量分画して得られる画分
特開平６−１０７６８６号公報に記載のペプチド
特開平２−２４００２７号公報に記載のトウモロコシタンパク質由来のペプチド
特開平３−８１２９１号公報記載のナンキョクオキアミ組織由来のペプチド
特公昭６１−５１５６４号公報記載の牛カゼイン由来のペプチド
特開昭６２−１６９７３２号公報に記載の、バチルス属のセリンプロテアーゼ，バチルス属のエンドプロテアーゼ，あるいは植物由来のチオールプロテアーゼで魚肉または大豆を分解して得たペプチド混合物
特開平４−３０４８９６号公報に記載のバチルス・サブチルスの中性プロテアーゼ，アスペルギルス・ニガーの酸性プロテアーゼ，リゾープス・デレマーの酸性プロテアーゼによる鰹や鰹節由来物質分解物
特開平８−２６９０８８号公報に記載の、κカゼイングリコマクロペプチドのアミノ酸配列２０〜２５残基に相当するペプチド
等が挙げられる。
【００２７】
（Ｃ）アンジオテンシン変換酵素遺伝子の発現を抑えるポリヌクレオチド
アンジオテンシン変換酵素遺伝子の発現を抑えるポリヌクレオチドとしては、アンジオテンシン変換酵素ＤＮＡに対するアンチセンスＤＮＡ，又はアンジオテンシン変換酵素のｍＲＮＡに対するＲＮＡ干渉作用を有する二本鎖又は一本鎖のＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ，ｓｈＲＮＡ，マイクロＲＮＡ等）等が挙げられる。
また、ポリヌクレオチドは、ＤＮＡとＲＮＡの、ハイブリッドであっても良い。
【００２８】
更に、アンジオテンシン変換酵素遺伝子の発現を抑えるポリヌクレオチドには、上記のポリヌクレオチドの他、アンジオテンシン変換酵素遺伝子の発現阻害作用に影響を及ぼさない範囲で、これらのポリヌクレオチド配列のうち、１個又は数個のヌクレオチドが、欠失・置換・付加・挿入されたものも含まれる。
これらポリヌクレオチドは、ＤＮＡ，ＲＮＡのまま、あるいは、プラスミド，ウイルスベクター等として使用可能である。
【００２９】
（２）その他の成分
本発明の骨粗鬆症の予防又は治療剤には、その阻害効果や予防又は治療効果を阻害しない範囲で、他の成分を含有させることができ、例えば薬学的に許容される担体として、賦形剤，滑沢剤，結合剤，崩壊剤，安定剤，矯味矯臭剤，希釈剤，界面活性剤，乳化剤，可溶化剤，吸収促進剤，保湿剤，吸着剤，充填剤，増量剤，付湿剤，防腐剤等の添加剤を用いて周知の方法で製剤化することができる。
ここに、賦形剤としては、有機系賦形剤及び無機系賦形剤等が挙げられる。
【００３０】
本発明の骨粗鬆症の予防又は治療剤は、従来知られている骨粗鬆症の予防又は治療成分との合剤としても良い。
【００３１】
（３）剤形
本発明の骨粗鬆症の予防又は治療剤の剤形は、例えば錠剤，カプセル剤，顆粒剤，散剤，丸剤，トローチ，もしくはシロップ剤，注射剤等の形態が挙げられる。
【００３２】
（４）投与方法
本発明の骨粗鬆症の予防又は治療剤の投与方法としては、経口投与，静注等の静脈投与，筋肉内投与,  経皮投与，経鼻投与，皮内投与，皮下投与，腹腔内投与，直腸内投与，粘膜投与、吸入等が挙げられる。
有効成分であるアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する物質が、低分子化合物やぺプチド類である場合は、簡便である等の点からは、経口投与が好ましく、安全かつ血中濃度を一定に保つという点では静注等の静脈投与が好ましく、患部に確実に届く点では、筋肉注射等の筋肉内投与が好ましい。
【００３３】
尚、有効成分であるアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する物質が、ポリヌクレオチドの場合、発現プラスミドを直接筋肉内に投与する方法（ＤＮＡワクチン法），リポソーム法，リポフェクチン法，マイクロインジェクション法，リン酸カルシウム法，エレクトロポレーション法等が挙げられ、特にＤＮＡワクチン法、リポソーム法が好ましい。
【００３４】
ウイルスベクターを用いる場合、（日経サイエンス，１９９４年４月号，２０−４５頁、月刊薬事，３６（１），２３−４８（１９９４）、実験医学増刊，１２（１５），（１９９４）、およびこれらの引用文献等）等に記載されているように、ウイルスに、目的とする遺伝子を組み込むことによって行うことができる。
【００３５】
ウイルスベクターに用いるウイルスとしては、例えばレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、ポリオウイルス、シンビスウイルス等のＤＮＡウイルス又はＲＮＡウイルスが挙げられる。
ウイルスの中では、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ワクシニアウイルス等が好ましく、特にアデノウイルスが好ましい。
【００３６】
遺伝子を実際に医薬として作用させるには、当該遺伝子を直接体内に導入する「ｉｎ  ｖｉｖｏ法」の他、ヒトかから採集した細胞に当該遺伝子を導入し、その後、遺伝子導入細胞を体内に戻すという、「ｅｘ  ｖｉｖｏ法」等がある［日経サイエンス，１９９４年４月号，２０−４５頁、月刊薬事，３６（１），２３−４８（１９９４）、実験医学増刊，１２（１５），（１９９４）、およびこれらの引用文献等］が、ｉｎ  ｖｉｖｏ法は費用や手間が少なく、簡便である点で好ましく、ｅｘ  ｖｉｖｏ法は、遺伝子の細胞内への導入効率が良いという点で好ましい。
【００３７】
「ｉｎ  ｖｉｖｏ法」により投与する場合は、治療目的の疾患、症状等に応じた適当な投与経路を選択することができる。投与経路としては、例えば、静脈、動脈、皮下、皮内、筋肉内等が挙げられる。
【００３８】
「ｉｎ  ｖｉｖｏ法」によって投与する場合は、例えば、液剤等の製剤形態をとることができる。一般的には遺伝子を含有する注射剤等の形態が好ましく、必要に応じて、注射剤等に常用されている各種の成分等を加えることもできる。
【００３９】
また、遺伝子を含有するリポソームまたは膜融合リポソーム（センダイウイルス（ＨＶＪ）−リポソーム等）においては、懸濁剤、凍結剤、遠心分離濃縮凍結剤等のリポソーム製剤の形態として用いることができる。
【００４０】
（５）有効成分の含有量
本発明の骨粗鬆症の予防又は治療剤中の、有効成分であるアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する物質又はその前駆体の含有量は、剤形によって様々であり、一概に限定できず、各種剤形化が可能な範囲で、投与量との関係で適宜選択すれば良いが、例えば液剤の場合、好ましくは０．０００１〜１０（ｗ／ｖ％），より好ましくは０．００１〜５（ｗ／ｖ％），特に注射剤の場合、好ましくは０．０００２〜０．２（ｗ／ｖ％），より好ましくは０．００１〜０．１（ｗ／ｖ％），固形剤の場合、好ましくは０．０１〜５０（ｗ／ｗ％），より好ましくは０．０２〜２０（ｗ／ｗ％）等として調製できるが、必ずしもこの範囲に限定されるものでは無い。
【００４１】
（６）骨粗鬆症の予防又は治療剤の投与量（有効成分換算）
本発明の骨粗鬆症の予防又は治療剤の投与量は、投与経路，症状，標的とする組織や器官，年齢，体重，予防又は治療剤の形態等によって異なるが、例えば、有効成分であるアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する物質が、低分子化合物，ペプチド類等である場合、予防又は治療剤中の有効成分の量が、処置を必要としている対象体重１ｋｇ当たり好ましくは０．００５〜５００ｍｇ，より好ましくは、０．１〜１００ｍｇ，但し、成人に対して１日あたり、下限として好ましくは０．０１ｍｇ（より好ましくは０．１ｍｇ），上限として、好ましくは２０ｇ（より好ましくは２０００ｍｇ，更に好ましくは５００ｍｇ，特に好ましくは１００ｍｇ）となるように、１回又は数回に分けて、症状に応じて投与することが望ましい。
【００４２】
有効成分であるアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する物質がポリヌクレオチドの場合の投与量も、症状，標的とする組織や器官，年齢，体重等によって適宜調節すべきであるが、一般に、ポリヌクレオチドとして、好ましくは０．０００１〜１００ｍｇ，更に好ましくは０．００１〜１０ｍｇを、数日又は数ヶ月に一回の割合で投与することが好ましい。
【実施例】
【００４３】
以下、実施例において、本発明を詳細に説明するが、それに先だって、実施例の骨粗鬆症予防治療薬の効果を確認するために用いた、高血圧マウスについて説明する。
高血圧モデルマウスは、公知の「筑波高血圧マウス」を用いた。
この「筑波高血圧マウス」は、ヒト・レニン遺伝子を導入したトランスジェニックマウスと、ヒト・アンジオテンシノーゲン遺伝子を導入したトランスジェニックマウスを交配することにより得られる、ヒトのレニン・アンジオテンシン系依存的な、ダブルトランスジェニック高血圧マウスである。
【００４４】
また、予防又は治療剤の効果の確認には、BV/TV (bone volume/tissue volume)×１００，すなわち骨量を組織総量で割った、骨量フラクション（３次元の骨量（％））という値で評価した。
骨量の測定は、マイクロCT（スキャンコメディカル（株）（SCANCO Medical AG）製，micro CT-40）によって行った。
【００４５】
実施例１
（ＡＣＥＩ：マレイン酸エナラプリル）
２ヶ月齢の雄の高血圧マウス群を、公知のＡＣＥＩ（ＡＣＥ阻害薬）であるマレイン酸エナラプリルを含む飲料水（33 mg/L）で、１ヶ月間飼育した後、マイクロCTスキャンによって、脛骨の海綿骨部の骨量を測定した。対照例として、血圧の正常なマウス群，及び、マレイン酸エナラプリルを投与しないで飼育した高血圧マウス群を用いた（１群４−５匹）。
【００４６】
結果を、図１に示す。尚、図１のデータは、それぞれの群の３次元骨量の平均を表す。
【００４７】
図１から分かる通り、マレイン酸エナラプリルを投与した群は、明らかに、骨粗鬆症が是正されていた。
【００４８】
比較例１
（ＡＴ１受容体拮抗薬：ロサルタン）
ＡＴ１受容体拮抗薬であるロサルタンを含む飲料水（170 mg/L）を用い、実施例１と同様の方法で、試験を行った結果を、図２に示す。
【００４９】
図２から分かる通り、ロサルタンを投与した群は、むしろ骨粗鬆症を悪化させた。
【産業上の利用可能性】
【００５０】
本発明の骨粗鬆症の予防又は治療剤は、一剤で、高血圧と骨粗鬆症の両方を予防又は治療し得る、画期的なものである。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】マレイン酸エナラプリル（ＡＣＥ阻害薬）投与による、骨量の変化を表す図である。
【図２】ロサルタン（ＡＴ１受容体拮抗薬）投与による、骨量の変化を表す図である。
【図１】
2008162931.tif 000002
【図２】
2008162931.tif 000003