(57)【要約】【課題】コンタミネーションと細胞へのダメージを低減し、簡便な自動操作により目的とする生細胞を回収すること。【解決手段】細胞群の中から所望の生細胞を選択的に分離する細胞分離装置は、培養液８４に浸漬された細胞群８２を保持する内の上記培養液８４に非接触で、例えば液滴吐出ヘッド３６より細胞剥離液１０２を上記細胞群の中の所望の細胞１０４に液滴として吐出することで、その所望の細胞１０４を上記細胞培養容器２０の壁から剥離させ、その剥離された上記所望の細胞１０４を、上記細胞培養容器２０内の上記培養液８４に非接触で、例えばベリスタポンプで培養液貯留タンクの培養液を上記細胞培養容器２０の供給口８６に供給することで供給口８６から排出口８８へ向かう培養液８４の流れを生成することにより、上記細胞群８２から空間的に分離、回収する。【選択図】図６
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
生細胞群の中から所望の生細胞を選択的に分離する細胞分離装置であって、
培養液に浸漬された上記生細胞群を保持する容器と、
上記容器内の上記培養液に非接触で、上記生細胞群の中の所望の生細胞を上記容器の壁表面から剥離させる剥離手段と、
上記剥離手段により剥離された上記所望の生細胞を、上記容器内の上記培養液に非接触で、上記生細胞群から空間的に分離する分離手段と、
を具備することを特徴とする細胞分離装置。
【請求項２】
上記剥離手段は、上記容器内の上記培養液に非接触の位置から剥離液を吐出する吐出ヘッドを含むことを特徴とする請求項１に記載の細胞分離装置。
【請求項３】
上記剥離手段は、上記容器内の上記培養液に非接触の位置から上記培養液に向けて照射する超音波発振子を含むことを特徴とする請求項１に記載の細胞分離装置。
【請求項４】
上記分離手段は、上記容器内の上記培養液中に流れを生成し、上記剥離手段により剥離された上記所望の生細胞を移動させる移動手段を含むことを特徴とする請求項１に記載の細胞分離装置。
【請求項５】
上記移動手段は、与圧した培養液を上記容器に供給するポンプを含むことを特徴とする請求項４に記載の細胞分離装置。
【請求項６】
上記移動手段は、上記容器内の上記培養液中に流れを生成するために、音波を上記培養液に照射する音源を含むことを特徴とする請求項４に記載の細胞分離装置。
【請求項７】
上記音源は、弾性表面波超音波素子を含むことを特徴とする請求項６に記載の細胞分離装置。
【請求項８】
生細胞群の中から所望の生細胞を選択的に分離する細胞分離装置であって、
培養液に浸漬された上記生細胞群を保持する容器と、
上記生細胞群の中に含まれ、上記容器内の上記培養液に対して非接触な手段により上記容器の壁表面から剥離された所望の生細胞を、当該培養液に非接触で上記生細胞群から空間的に分離する分離手段と、
を具備することを特徴とする細胞分離装置。
【請求項９】
培養液及び生細胞群を容器に保持させる工程と、
上記容器内の上記培養液に接触せずに、上記生細胞群の中から所望の生細胞を上記容器の壁表面から剥離させる工程と、
上記容器内の上記培養液に接触せずに、上記剥離された所望の生細胞を上記生細胞群から空間的に分離させる工程と、
を有することを特徴とする細胞分離方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、容器内で培養された生細胞群中の所望の生細胞を該容器から剥離回収する細胞分離装置及び細胞分離方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、標的対象物の探索・回収技術が各種提案されており、例えば、自動的に探索された標的対象物を自動的に回収する自動探索回収装置が、特許文献１に開示されている。
【０００３】
この自動探索回収装置において、ノズルは、径が比較的大きい基端部と、基端部よりも先端側に設けられた小径の先端部とを有している。基端部から先端部にかけて内部を連通する導通口が形成されている。ノズル内に形成される導通口は、標的細胞の剥離液を滴下したり、標的細胞を吸引したりするための通路として機能する。Ｚ方向には、Ｚ方向移動機構により、ノズルの先端部をスライドグラスの一面に近づける。一方、スライドグラスの他の一面には、倒立顕微鏡が配置されている。倒立顕微鏡により、鉛直下からスライドグラスを観察する状態にしておき、スライドグラスの上方からスライドグラスの表面側に向けてノズルを接させ、そのノズルから溶液（剥離液）を滴下して、剥がれた細胞を吸い上げる。ノズル内を正圧又は負圧にするポンプが設けられている。
【０００４】
以上により、検索された標的細胞の回収を簡単に行うことができ、さらに、標的細胞の検索作業と回収作業とを連携させ、１つの装置で自動的に行える技術を提供できると上記特許文献１には示されている。
【特許文献１】特開２００５−２０７９８６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、上記特許文献１に開示されているような回収技術では、細胞の剥離回収時に、ノズルの連続使用によるコンタミネーションの危険性があり、回収された細胞を汚染してしまう可能がある。
【０００６】
即ち、上記特許文献１では、細胞がスライドガラス上に積載されたものを想定しているが、生細胞の場合、ディッシュ等の細胞培養容器の内側底部の壁の表面（培養液の底部）に細胞が播種されている。このような場合には、上記特許文献１の開示の技術では、ノズルが培養液に接触し、コンタミネーションが増加することは言うまでも無く、別のディッシュの細胞を剥離回収しようとする場合、ノズルを洗浄又は交換する必要がある。
【０００７】
また、上記特許文献１に開示の回収技術では、剥離液（トリプシン液：たんぱく分解酵素）をノズル内に充填した内部に、目的とする細胞を収容するため、細胞と剥離液の接触時間が長く、細胞剥離液が細胞にダメージを与える懸念が発生する。
【０００８】
本発明は、上記の点に鑑みてなされたもので、コンタミネーションと細胞へのダメージを低減し、簡便な自動操作により目的とする生細胞を回収することが可能な細胞分離装置及び細胞分離方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の細胞分離装置の一態様は、生細胞群の中から所望の生細胞を選択的に分離する細胞分離装置であって、
培養液に浸漬された上記生細胞群を保持する容器と、
上記容器内の上記培養液に非接触で、上記生細胞群の中の所望の生細胞を上記容器の壁表面から剥離させる剥離手段と、
上記剥離手段により剥離された上記所望の生細胞を、上記容器内の上記培養液に非接触で、上記生細胞群から空間的に分離する分離手段と、
を具備することを特徴とする。
【００１０】
また、本発明の細胞分離装置の別の態様は、生細胞群の中から所望の生細胞を選択的に分離する細胞分離装置であって、
培養液に浸漬された上記生細胞群を保持する容器と、
上記生細胞群の中に含まれ、上記容器内の上記培養液に対して非接触な手段により上記容器の壁表面から剥離された所望の生細胞を、当該培養液に非接触で上記生細胞群から空間的に分離する分離手段と、
を具備することを特徴とする。
【００１１】
本発明の細胞分離方法の一態様は、
培養液及び生細胞群を容器に保持させる工程と、
上記容器内の上記培養液に接触せずに、上記生細胞群の中から所望の生細胞を上記容器の壁表面から剥離させる工程と、
上記容器内の上記培養液に接触せずに、上記剥離された所望の生細胞を上記生細胞群から空間的に分離させる工程と、
を有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、生細胞及び培養液を保持する容器の壁から培養液に対して非接触な手段により剥離された目的とする生細胞を、容器内の培養液に非接触な状態で当該容器内に残る生細胞群と分離することができるので、コンタミネーションと細胞へのダメージを低減し、簡便な自動操作により目的とする生細胞を回収することが可能な細胞分離装置及び細胞分離方法を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下、本発明を実施するための最良の形態を図面を参照して説明する。
【００１４】
［第１実施形態］
図１は、本発明の第１実施形態に係る細胞分離装置の構成を示す図である。
【００１５】
本実施形態に係る細胞分離装置は、ＸＹステージ部１２と吐出部１４が設けられた倒立型の顕微鏡１０と、上記ＸＹステージ部１２及び上記吐出部１４を制御するためのハードウェア及び電動系を制御するためのソフトウェアを実装した制御部（コンピュータ１６）と、を備えている。上記顕微鏡１０から得られた画像は、撮像部（ＣＣＤ１８）によってリアルタイムにコンピュータ１６に送られ、該コンピュータ１６のモニタ上に、その撮像された画像を表示できる。
【００１６】
上記ＸＹステージ部１２には、図２（Ａ）に示すように、ＸＹ面内に走査される少なくとも１個の細胞培養容器（ディッシュ）２０と、ダミー吐出用ガラス２２と、剥離液等の試薬を保持するサンプルカップ２４と、が積載されている。同図では、４箇所の細胞培養容器２０と、１箇所のダミー吐出用ガラス２２と、２箇所のサンプルカップ２４が設置されている状態を示している。サンプルカップ２４は、図２（Ｂ）に示すように、試薬等を収容するためにある程度の深さを持つので、ＸＹステージ部１２に設けられた穴に挿入保持されることが好ましい。また、本実施形態では、これら２つのサンプルカップ２４の内、一方を細胞剥離液を収容するために用い（以下、このサンプルカップ２４を第１サンプルカップと称する）、他方は洗浄水回収用に用いるものとする（以下、このサンプルカップ２４を第２サンプルカップと称する）。
【００１７】
上記ＸＹステージ部１２は、Ｘ，Ｙそれぞれの駆動制御部２６，２８を介して、コンピュータ１６と接続され、コンピュータ１６からの指示により、移動される。また、このＸＹステージ部１２には、観察用の穴が形成され、その中に、顕微鏡１０の対物レンズ３０が配置される。
【００１８】
なお、この対物レンズ３０は、対象物に焦点を合わせるため、Ｚ方向への移動可能とされている。この対物レンズ３０にて観察された像は、顕微鏡光学系（詳細に示さず）を通して上記ＣＣＤ１８にて撮像され、その画像がＣＣＤ制御部３２を介して上記コンピュータ１６に送られる。なお、ＣＣＤ１８の撮影条件設定や撮像タイミング制御は、コンピュータ１６からの指示によりＣＣＤ制御部３２が実施する。
【００１９】
同様に、観察時の図示しないフィルタやランプからの光量の条件などの設定・制御も、顕微鏡制御部３４を介して、コンピュータ１６の指示により実施される。
【００２０】
また、上記吐出部１４は、慣性力を利用した液滴吐出ヘッド３６とＸＺステージ３８とから構成される。
【００２１】
図３は、この液滴吐出ヘッド３６の構成を示す図である。
【００２２】
即ち、この液滴吐出ヘッド３６のノズル４０は、試薬を保持する使い捨て可能な外径φ２ｍｍガラス管４２と、該ガラス管４２の先端にφ２０μｍの穴が設けられた厚さ１００μｍのＳＵＳ製円盤形状板４４とが、接着固定されて形成されている。なお、このノズル４０の外側表面には撥水コーティングが施されている。
【００２３】
液滴吐出ヘッド３６の慣性力発生部は、内部にφ２．６ｍｍの穴が形成された外形５ｍｍの正方断面、長さ３０ｍｍの積層型圧電素子４６により構成されている。そして、この積層型圧電素子４６の内部の穴を貫通してテフロン（登録商標）製配管４８が挿通され、このテフロン製配管４８は、積層型圧電素子４６の一方の端面に接着固定される上記ノズル４０と接続される。積層型圧電素子４６のもう一方の端面には、液滴吐出ヘッド３６を支持するための固定部材５０に固定され、この固定部材５０に空けられた穴を通して、上記テフロン製配管４８は外部に延出される。
【００２４】
このような液滴吐出ヘッド３６が固定された固定部材５０は、ＸＺステージ３８に積載され、ＸＹステージ部１２の上方に配置される。ＸＺステージ３８は、Ｘ，Ｚそれぞれの駆動制御部５２，５４を介して、コンピュータ１６と接続され、コンピュータ１６からの指示により、移動される。
【００２５】
上記積層型圧電素子４６は、駆動電圧発生部５６を介して上記コンピュータ１６と配線接続され、そのコンピュータ１６の指示により、印加タイミングや、所定の電圧波形が印加され、ノズル４０より液滴を吐出する。また、コンピュータ１６の指示により、印加される電圧波形の形状や、大きさ、電圧波形の波数等が変更できる。
【００２６】
上記液滴吐出ヘッド３６に接続されたテフロン製配管４８は、電磁弁５８を介して、シリンジピストンポンプ６０に接続される。さらに、このシリンジピストンポンプ６０から別のテフロン製配管６２が接続され、三方電磁弁６４を介して、大気圧に開放される配管６６と、洗浄水を貯留された洗浄水タンク６８に向かう配管７０とに分かれて、配管経路を構成している。
【００２７】
上記シリンジピストンポンプ６０のピストン７２は、ボールネジ等の機構部品を介してモータ７４の回転動作を直線動作に変換し、シリンジの中の体積をピストン７２にて可変できる。ピストン７２を動作させるモータ７４は、ピストン動作制御部７６を介して、コンピュータ１６に接続され、コンピュータ１６の指示によりピストン７２ストロークや動作タイミングや移動速度が制御される。
【００２８】
電磁弁５８と三方電磁弁６４も同様に各電磁弁制御部７８，８０を介して、コンピュータ１６の指示により、動作タイミングや開閉時間が制御される。特に、三方電磁弁制御部８０は、三方電磁弁６４の流路を閉じたり、大気圧に開放される配管６６に切り替えたり、洗浄水タンク６８につながる配管７０に切り替えたり、というように、流路の経路をコンピュータ１６の指示により変更できる。
【００２９】
洗浄水タンク６８には、ノズル４０を洗浄するための滅菌水などが貯留される。
【００３０】
次に、上記細胞培養容器２０について説明する。
【００３１】
図４（Ａ）及び（Ｂ）に示すように、細胞培養容器２０には、細胞群８２に培養液８４を供給するための供給口８６と排出するための排出口８８が設けられている。また、細胞培養容器２０の少なくとも底面は、顕微鏡１０による観察に適した光学的に透明な部材（透明な樹脂又はガラスなど）により構成されている。
【００３２】
供給口８６には、培養液貯留タンク９０からベリスタポンプ９２を介して配管９４が接続され、ベリスタポンプ９２により培養液貯留タンク９０内の培養液８４が細胞培養容器２０に供給される。なお、特に図示はしていないが、ベリスタポンプ９２も、上記コンピュータ１６からの指示により、動作タイミング及び動作速度が変更できるようになっている。
【００３３】
また、排出口８８には、回収用細胞培養容器９６に向かう配管９８が接続され、オーバーフローにより、培養液８４が細胞培養容器２０から回収用細胞培養容器９６に流れるように構成される。
【００３４】
以上の説明したような構成の細胞分離装置は、細胞群８２への滅菌性をより向上するために、クリーンベンチ１００等の内部に設置されることが望ましい。または、ヘパフイルタ等のクリーンエアが細胞培養容器２０などが設置されるＸＹステージ部１２の面に向けて、ダウンフローされる環境に設置されることが望ましい。
【００３５】
次に、上記のような構成の細胞分離装置における本実施形態に係る細胞分離方法を、図５に示す動作フローチャートを参照して説明する。
【００３６】
即ち、まず、細胞群８２がその細胞培養容器２０の壁表面（底面または側面）に播種された細胞培養容器２０をＸＹステージ部１２上に設置する。そして、ＸＹステージ部１２を操作し顕微鏡１０により細胞群８２の像を観察し、剥離しようとする細胞付近の領域をＣＣＤ１８により撮像して、コンピュータ１６に画像として記憶する（ステップＳ１０）。
【００３７】
次に、コンピュータ１６により、上記記憶された画像内の剥離しようとする目的の細胞１０４をマーク（選択）し、その座標を計算して、計算した座標値を記憶させる（ステップＳ１２）。
【００３８】
すると、コンピュータ１６の制御により、ＸＹステージ部１２が移動し、液滴吐出ヘッド３６の下方に細胞剥離液が入った第１サンプルカップ２４が設置される。そして、ＸＺステージ３８が移動し、液滴吐出ヘッド３６のノズル４０を、第１サンプルカップ２４内の細胞剥離液内に浸積する。その後、電磁弁５８が開き、三方電磁弁６４が閉じ、シリンジピストンのピストン７２が下方に移動する。これにより、液滴吐出ヘッド３６内にノズル４０の吐出口を経由して細胞剥離液が内部に充填される（ステップＳ１４）。なお、ピストン７２の移動量により、細胞剥離液の充填量が可変できる。
【００３９】
その後、三方電磁弁６４が大気圧に開放された配管６６に切り替えられ、テフロン製配管４８内の圧力が大気圧に戻る。そして、電磁弁５８及び三方電磁弁６４が閉じられ、ＸＺステージ３８により、液滴吐出ヘッド３６を上方に移動する。その後、ＸＹステージ部１２が移動し、液滴吐出ヘッド３６の下方にダミー吐出用ガラス２２が設置される。そして、ＸＺステージ３８が移動し、液滴吐出ヘッド３６が所定の吐出高さまで下降する。ここで、積層型圧電素子４６に電圧が印加され、液滴吐出ヘッド３６のノズル４０の吐出口から細胞剥離液の液滴がダミー吐出用ガラス２２に吐出される（ステップＳ１６）。この細胞剥離液の液滴の吐出後、ＸＺステージ３８が移動し、液滴吐出ヘッド３６が所定の待機高さまで上昇する。
【００４０】
その後、ＸＹステージ部１２が移動し、ダミー吐出用ガラス２２に吐出された液滴を観察し、ＣＣＤ１８により撮像する（ステップＳ１８）。そして、撮像された画像をコンピュータ１６により画像処理計算し、目標吐出位置とのずれ量（ＸＹ方向移動補正量）を算出する（ステップＳ２０）。
【００４１】
こうして、ＸＹ方向移動補正量が求められたならば、ＸＹステージ部１２が移動し、液滴吐出ヘッド３６の下方に細胞培養容器２０が設置される。このときのＸＹステージ部１２の座標は、上記ステップＳ１２で選択された剥離する目的の細胞の座標位置に、上記ステップＳ２０で求められたＸＹ方向移動補正量が加味された、補正後の座標位置とされる。そして、ＸＺステージ３８が移動し、液滴吐出ヘッド３６が培養液８４の上面の所定の吐出高さ（例えば、培養液水面から上方に約１ｍｍの高さ）まで下降する。即ち、このとき、液滴吐出ヘッド３６のノズル４０は、細胞培養容器２０内の培養液８４に接触しておらず、培養液の水面上にある。そして、積層型圧電素子４６に電圧が印加され、図６（Ａ）に示すように、ノズル４０の吐出口より細胞剥離液１０２が液滴として、培養液８４の選択された細胞１０４に向かって吐出される（ステップＳ２２）。
【００４２】
なお、吐出された細胞剥離液１０２の液滴が吐出されるスピードは速く、培養液８４内を通過中に拡散する前に、細胞培養容器２０の壁に播種された細胞群８２に届く。培養液８４と細胞剥離液１０２の組成の違い、比重の違いなどにより、細胞１０４の周辺には約数分の間、細胞剥離液１０２が高い濃度で停留する。このように、選択された細胞１０４の周辺に細胞剥離液１０２が高い濃度で存在するため、細胞１０４にのみ剥離作用が与えられる。
【００４３】
その後、ＸＺステージ３８が移動し、液滴吐出ヘッド３６が所定の待機高さまで上昇する。そして、ＸＹステージ部１２が移動し、液滴吐出ヘッド３６により吐出された液滴が作用された細胞１０４をＣＣＤ１８により観察する（ステップ２４）。
【００４４】
時間の経過に伴って、細胞剥離液１０２の細胞１０４への影響が大きくなり、図６（Ｂ）に示すように、細胞１０４が細胞培養容器２０の壁から剥離される。この剥離が確認されたならば（ステップＳ２６）、ベリスタポンプ９２を動作して培養液８４を供給口８６より細胞培養容器２０内に供給し、図６（Ｃ）に矢印で示すように、培養液の搬送とともに剥離された細胞１０４を搬送し、細胞培養容器２０内の細胞群８２から分離させる（ステップＳ２８）。剥離された細胞１０４（回収すべき細胞１０４）は、排出口８８より、別の細胞培養容器である回収用細胞培養容器９６内に移送、回収される（ステップＳ３０）。
【００４５】
こうして、目的の細胞１０４が回収されたならば、電磁弁５８を閉じ、三方電磁弁６４を洗浄水タンク６８側に切り替え、シリンジピストンポンプ６０のピストン７２を下降させると、シリンジピストンポンプ６０内に洗浄水タンク６８内の滅菌水が吸引される。その後、電磁弁５８を開け、三方電磁弁６４を閉じ、シリンジピストンポンプ６０のピストン７２を上昇させると、液滴吐出ヘッド３６側に滅菌水が移送される。この動作を繰り返すことにより、液滴吐出ヘッド３６の内部を洗浄水にて洗浄することができる（ステップＳ３２）。このとき、ＸＹステージ部１２を動作させ、液滴吐出ヘッド３６を第２サンプルカップ２４内に下降し、洗浄水を回収する。
【００４６】
洗浄後は、液滴吐出ヘッド３６内及びテフロン製配管４８内を空気とするために、洗浄水を供給する動作と逆の動作を、シリンジピストンポンプ６０と電磁弁５８と三方電磁弁６４を切り替えて動作を繰り返す。
【００４７】
なお、図２（Ａ）に示したように、ＸＹステージ部１２上には細胞培養容器２０が合計４個設置されている。本実施形態では、吐出ヘッド３６が培養液に接触することなく細胞を細胞培養容器２０から剥離させ、回収することができるので、細胞剥離液１０２を液滴吐出ヘッド３６内に十分な量を充填しておけば、液滴吐出ヘッド３６を洗浄する前に、他の細胞培養容器２０においても、続けて剥離及び回収することができる。この場合、細胞培養容器２０に対応して、ベリスタポンプ９２と配管９４，９８と回収用細胞培養容器９６を設置する。
【００４８】
即ち、図７に示すように、目的の細胞１０４を回収した後（ステップＳ３０）、別の細胞培養容器２０について剥離しようとする細胞１０４が指定されているか否かを判別する（ステップＳ４０）。但し、複数の細胞培養容器２０について細胞１０４を剥離しようとする場合には、上記ステップＳ１０及びステップＳ１２で、ＸＹステージ部１２を操作して、それぞれの細胞１０４を指定して座標値を記憶させておくことが必要である。
【００４９】
別の細胞培養容器２０に剥離しようとする細胞１０４が無い場合には、液滴吐出ヘッド３６の洗浄を行い（ステップＳ３２）、操作を終了する。これに対して、別の細胞培養容器２０に剥離しようとする細胞１０４が有る場合には、ＸＹステージ部１２が移動して、液滴吐出ヘッド３６の下方に設定された細胞培養容器２０が設置される（ステップＳ４２）。そして、上記ステップＳ２２に戻り、剥離しようとする目的の細胞１０４に対して、細胞培養容器２０内の培養液８４に接触していない位置から、液滴吐出ヘッド３６のノズル４０より細胞剥離液１０２が吐出される。
【００５０】
あるいは、図８に示すように、一つの細胞培養容器２０の剥離しようとする細胞１０４に対する細胞剥離液１０２の吐出を行う毎に（ステップＳ２２）、別の細胞培養容器２０について剥離しようとする細胞１０４が指定されているか否かを判別して（ステップＳ４０）、それが有れば、ＸＹステージ部１２が移動して、液滴吐出ヘッド３６の下方に、その設定された細胞培養容器２０を設置し直して（ステップＳ４２）、細胞剥離液１０２の吐出を行うといようにしても良い。この場合には、設定された全ての細胞培養容器２０への吐出完了後に、全ての細胞培養容器２０の剥離された細胞１０４が回収されるまで（ステップＳ４４）、ＸＹステージ部１２により細胞培養容器２０を移動して（ステップＳ４６）、一つずつ細胞培養容器２０内の剥離しようとする細胞１０４の剥離確認、回収を実施することになる（ステップＳ２４〜Ｓ３０）。
【００５１】
以上のように、本第１実施形態に係る細胞分離装置によれば、液滴吐出ヘッド３６のノズル４０の吐出口は、細胞培養容器２０内の培養液８４に接触しないため、コンタミネーションの影響が少なく、別の細胞培養容器２０に対しても、同じ細胞剥離液１０２を使用することができる。また、異なる細胞種類を培養している（異なる培養液８４にて培養している）細胞培養容器２０に対しても適用することができる。
【００５２】
また、剥離された細胞１０４は、培養液８４の流れにより回収されるため、培養液８４に異物の混入が少なく、剥離された細胞１０４を回収用細胞培養容器９６に搬送することができる。
【００５３】
なお、細胞剥離液１０２は、トリプシン液などが使用される。細胞剥離液１０２が作用した細胞１０４以外の領域では細胞剥離が起きず（細胞剥離液１０２の濃度が薄いため剥離できず）、選択的な細胞剥離が実現できる。時間が長時間経過すると、トリプシン液は培養液８４に拡散し、細胞群８２に対する影響が軽微となり、細胞群８２へのダメージが少ない。
【００５４】
ここで、液滴吐出ヘッド３６の液滴吐出の動作原理を、図９（Ａ）及び（Ｂ）を参照して、簡単に説明しておく。
【００５５】
定常状態（電圧０Ｖ）にてノズル４０及びテフロン製配管４８内に、細胞剥離液１０２を充填する（ｔ０）。
【００５６】
積層型圧電素子４６にプラスの電圧を印加し、積層型圧電素子４６を伸張する。これにより、積層型圧電素子４６の端面に接着されたノズル４０は下降する（ｔ１）。
【００５７】
一定時間、プラス電圧印加を保持後、マイナス電圧値を印加し、急激に積層型圧電素子４６を収縮する。これにより、積層型圧電素子４６の端面に接着されたノズル４０が急激に上昇し、ノズル４０内部の細胞剥離液１０２に慣性力が作用し、ノズル４０の吐出口より液滴として吐出される（ｔ２）。
【００５８】
一定時間、マイナス電圧印加を保持後（ｔ３）、定常状態（電圧０Ｖ）に戻す（ｔ４）。
【００５９】
液滴吐出ヘッド３６の積層型圧電素子４６への電圧値を大きくすると、細胞剥離液１０２は大きな液滴となり、広い範囲の細胞１０４を複数剥離することができる。また、電圧波形の一波の波形周期を長くすると、細胞剥離液１０２は大きな液滴となり、広い範囲の細胞１０４を複数剥離することができる。
【００６０】
接着剤の塗布等に多用される空圧式のディスペンサを用いても、剥離される領域は広くなるが、非接触で細胞剥離液１０２を細胞１０４に対して作用させることができる。
【００６１】
［第１変形例］
本第１実施形態では、目的とする細胞１０４を回収する場合を説明したが、図１０に示すように、目的とする細胞１０４をそのまま残し、不要とする細胞群８２を剥離するようにしても良い。
【００６２】
この場合には、目的とする細胞１０４以外の領域に液滴吐出ヘッド３６より細胞剥離液１０２を複数吐出して、不要な細胞群８２を剥離し、培養液８４の流れにより搬送し、排除する。例えば、図７及び図８に示した動作フローチャートにおいて、ステップＳ４０及びステップ４２の動作を、別の細胞培養容器２０内の細胞１０４ではなくて、同一細胞培養容器２０内の目的とする細胞１０４以外の細胞群８２を対象として、吐出領域１０６が目的とする細胞１０４にかからないように、複数回の吐出を行えば良い。
【００６３】
［第２変形例］
上記第１変形例では、目的とする細胞１０４をそのまま残し、不要とする細胞群８２を全て剥離するようにしたが、図１１に示すように、目的とする細胞１０４（細胞培養容器２０の中心）の周辺のみに限定して、不要とする細胞群８２を排除するようにしても構わない。
【００６４】
以上の第１及び第２変形例で説明したように、細胞群８２を剥離する位置はコンピュータ１６による制御で自在に可能である。
【００６５】
従って、目的とする細胞１０４を残すのか、回収するのかを、その細胞１０４の状態等で判断したり、又は、その用途に応じて切り替えて使用することができる。
【００６６】
［第２実施形態］
上記第１実施形態に係る細胞分離装置及び細胞分離方法と異なる部分についてのみ説明する。
【００６７】
本実施形態に係る細胞分離装置では、図１２（Ａ）及び（Ｂ）に示すように、細胞培養容器２０が２つの凹部１０８，１１０に分かれており、それら凹部１０８，１１０間に細胞培養容器２０の底面から所定の段差（流路段差１１２）を有する流路１１４が形成されている。
【００６８】
第１の凹部１０８には培養液８４の供給口８６が形成され、第２の凹部１１０には培養液８４の排出口８８が形成される。第１の凹部１０８の供給口８６には、培養液貯留タンク９０からベリスタポンプ９２を介して配管９４が接続され、供給ベリスタポンプとなるベリスタポンプ９２により培養液貯留タンク９０内の培養液８４を細胞培養容器２０に供給される。また、第２の凹部１１０の排出口８８には、回収用細胞培養容器９６から排出ベリスタポンプ１１６を介して配管９８が接続され、この排出ベリスタポンプ１１６により、培養液８４を回収用細胞培養容器９６へ送液する。
【００６９】
そして、第１の凹部１０８のみ細胞群８２が播種され、底面に貼りついている。培養液８４は、培養液８４の水面（培養液水面１１８）が、第１の凹部１０８と第２の凹部１１０の間の流路段差１１２よりも低くなるように入れられている。
【００７０】
このような構成の細胞分離装置において、上記第１実施形態で説明したような手順により、図１３（Ａ）に示すように、第１の凹部１０８に播種されている目的とする細胞１０４に、液滴吐出ヘッド３６から細胞剥離液１０２を吐出する。
【００７１】
そして、図１３（Ｂ）に示すように目的とする細胞１０４が剥離されたならば、培養液８４をベリスタポンプ９２により供給する。その培養液８４の供給とともに培養液水面１１８は上昇していき、流路段差１１２を超える高さとなると、培養液８４は流路１１４を通って第２の凹部１１０にも供給される。このように、ベリスタポンプ９２が培養液８４の供給を続けることで該第２の凹部１１０内にも培養液８４が貯まっていく。このような第１の凹部１０８から第２の凹部１１０への培養液８４の流れにより、第１の凹部１０８内の剥離された細胞１０４が第２の凹部１１０に搬送される。
【００７２】
このとき、細胞培養容器２０の底面から顕微鏡１０により観察し、図１３（Ｃ）に示すように、第２の凹部１１０に細胞１０４が搬送されたことが確認されたならば、ベリスタポンプ９２の駆動を停止して、培養液８４の供給を停止する。すると、培養液８４の流れが無くなるので、細胞１０４は、第２の凹部１１０の底面に時間経過とともに降下し播種される。その後、排出ベリスタポンプ１１６を駆動して、図１３（Ｄ）に示すように、排出口８８より余分な培養液８４を第２の凹部１１０から排出する。
【００７３】
以上のように、培養液８４の搬送で目的とする細胞１０４を回収する場合、第１実施形態では、回収用細胞培養容器９６へ向かう配管９８内で剥離された細胞１０４が搬送されていることを確認することが容易ではないが、本第２実施形態では、顕微鏡１０により観察しながら、確実に、目的とする細胞１０４を選択的に剥離し分離することができる。
【００７４】
［第３実施形態］
上記第１及び第２実施形態に係る細胞分離装置及び細胞分離方法と異なる部分についてのみ説明する。
【００７５】
本実施形態においては、図１４（Ａ）及び（Ｂ）に示すように、上記第２実施形態と同様、２つの凹部１０８，１１０とそれらの間に流路段差１１２を有する流路１１４が形成された細胞培養容器２０を使用する。そして、第２の凹部１１０の底面に外側表面より弾性表面波超音波素子１２０が配置されている。
【００７６】
この弾性表面波超音波素子１２０は、図１５に示すように、表面に櫛歯状電極１２２が形成され、弾性表面波１２４を励振できるものである。この弾性表面波超音波素子１２０は、厚さ０．５ｍｍ程度のニオブサンリチウム等を材質として構成される。櫛歯状電極１２２は、細胞培養容器２０の外側表面に形成され、対向する２つの櫛歯状電極１２２に、コンピュータ１６からの指示により、図示しない超音波素子制御部から所定周波数の交番電圧が印加される。
【００７７】
本実施形態では、細胞培養容器２０は樹脂製であり、弾性表面波超音波素子１２０の形状に類似した段部を有して、底面の容器厚さ内に弾性表面波超音波素子１２０を埋め込む形態で、弾性表面波超音波素子１２０が接着固定されている。よって、弾性表面波超音波素子１２０は、細胞培養容器２０内の培養液８４には接触していない。
【００７８】
細胞培養容器２０においては、第１の凹部１０８の底面にのみ、細胞群８２が播種されている。培養液水面１１８が流路段差１１２よりも上となるように培養液８４が入れられており、よって培養液８４は第２の凹部１１０にも入れられている。
【００７９】
図１６は、本実施形態に係る細胞分離方法の動作フローチャートを示す図である。
【００８０】
本実施形態においては、上記第１実施形態と同様にして、第１の凹部１０８に播種されている目的とする細胞１０４に、液滴吐出ヘッド３６から細胞剥離液１０２を吐出する（ステップＳ１０〜ステップＳ２２）。
【００８１】
そして、目的とする細胞１０４の剥離が確認されたならば（ステップＳ２４、ステップＳ２６）、弾性表面波超音波素子１２０に交番電圧が印加され、表面に弾性表面波１２４が励振される。この弾性表面波１２４は、細胞培養容器２０の底面の樹脂層に伝播し、培養液８４中に所定の角度を持って照射される。こうして弾性表面波１２４が培養液８４中に照射されると、培養液８４中に流れ（音響流１２６）が形成され、この音響流１２６による培養液８４の流れは、図１４（Ａ）に一点鎖線で示すように、第１の凹部１０８内を循環する２つの流れ１２８となる（ステップＳ５０）。
【００８２】
櫛歯状電極１２２の対向する方向と直交するように培養液８４の流れ１２８は発生するため、第２の凹部１１０をその方向に形成することにより、剥離された細胞１０４が音響流１２６に乗せられて、流路段差１１２を乗り越えて、第２の凹部１１０に搬送される。顕微鏡１０により、目的とする細胞１０４が搬送されたことを確認し（ステップＳ３０）、弾性表面波超音波素子１２０への電圧印加を停止する。
【００８３】
以上のように、本第３実施形態では、外部からの培養液８４の進入が無く、音響流１２６による非接触搬送により、目的とする細胞１０４を移送でき、培養液８４以外の外部部材からのコンタミネーションを防止しつつ、細胞群８２及び細胞１０４へのダメージを低減することができる。
【００８４】
なお、図５の動作フローチャートを図７及び図８に示したように変形するのと同様に図１６の動作フローチャートを変形することで、本実施形態においても複数の細胞培養容器２０又は複数の細胞１０４に対応できることは言うまでもない。
【００８５】
［第４実施形態］
上記第１実施形態に係る細胞分離装置及び細胞分離方法と異なる部分についてのみ説明する。
【００８６】
図１７に示すように、本実施形態に係る細胞分離装置には、上記第１実施形態に係る細胞分離装置のような細胞剥離液１０２を吐出する液滴吐出ヘッド３６、ＸＺステージ３８及び細胞剥離液１０２を吸引、洗浄する構成は無い。
【００８７】
その代わりに、本実施形態では、顕微鏡１０の対物レンズ３０の近傍に、超音波発振子１３０が、超音波発振子支持部材１３２の端面に接着固定されている。また、超音波発振子１３０と細胞培養容器２０の間には、振動を伝達するための振動伝達液体１３４（水又はオイル）を供給する他の伝達液体供給ノズル１３６が併設され、該伝達液体供給ノズル１３６は、伝達液体供給ベリスタポンプ１３８を介して、振動伝達液体貯留タンク１４０に配管１４２により接続されている。
【００８８】
上記伝達液体供給ノズル１３６の供給口は、超音波発振子１３０の側面から振動伝達液体１３４を供給できるように配置されている。また、超音波発振子１３０は、対物レンズ３０の焦点位置よりも該超音波発振子１３０の外形が突出しないような高さに配置されている。この超音波発振子１３０が固定される超音波発振子支持部材１３２と、振動伝達液体１３４を供給する伝達液体供給ノズル１３６を固定するノズル支持部材１４４とは、対物レンズ３０の取り付け面に固定され、対物レンズ３０の焦点移動に合わせてＺ軸方向に同時に移動する。
【００８９】
図１８に示されるように、超音波発振子１３０は、チタン酸ジルコン酸鉛（ＰＺＴ）等の材質にて厚み方向に分極処理されている。厚み方向の端面には対向して電極が端面全体に形成されている。そして、コンピュータ１６からの指示により、図示しない超音波発振子制御部から所定周波数の交番電圧が印加されると、端面に直交方向に超音波振動１４６が照射される。
【００９０】
この照射された超音波振動１４６は、振動伝達液体１３４を介して細胞培養容器２０に伝達され、底面に播種されている細胞群８２を励振する。そして、超音波振動１４６の微小な刺激により、細胞１０４の接着力が低下し、超音波照射されている領域の細胞１０４が剥離される。剥離された複数の細胞１０４は、上記第１実施形態と同様にして、回収用細胞培養容器９６に搬送される。
【００９１】
図１９は、本実施形態に係る細胞分離方法の動作フローチャートである。
【００９２】
即ち、本実施形態においても、上記第１実施形態と同様にして、剥離しようとする目的の細胞を指定してその座標値をコンピュータ１６に記憶させる（ステップＳ１０、ステップＳ１２）。
【００９３】
すると、コンピュータ１６の制御により、ＸＹステージ部１２が移動し、細胞培養容器２０の細胞剥離位置が超音波発振子１３０の上方に設置される（ステップＳ６０）。そして、伝達液体供給ベリスタポンプ１３８が駆動されて、振動伝達液体貯留タンク１４０から振動伝達液体１３４が超音波発振子１３０に供給された後（ステップＳ６２）、超音波発振子１３０に所定周波数の交番電圧が印加されて、超音波振動１４６が照射される（ステップＳ６４）。その後、伝達液体供給ベリスタポンプ１３８が逆転駆動されて、超音波発振子１３０の振動伝達液体１３４を排出する（ステップＳ６６）。そして、ＸＹステージ部１２が移動し、超音波振動１４６が照射された領域の細胞１０４をＣＣＤ１８により観察する（ステップ２４）。ここで、剥離が未だなされていないと判別された場合には（ステップＳ２６）、上記ステップＳ６０に戻って、再度、超音波振動１４６を照射することになる。
【００９４】
これに対して、剥離が確認されたならば（ステップＳ２６）、ベリスタポンプ９２を動作して培養液８４を供給口８６より細胞培養容器２０内に供給し（ステップＳ６８）、それによって発生する上記培養液８４の流れにより、剥離された回収すべき細胞１０４は、排出口８８より、別の細胞培養容器である回収用細胞培養容器９６内に移送される（ステップＳ３０）。
【００９５】
なお、図５の動作フローチャートを図７及び図８に示したように変形するのと同様に図１９の動作フローチャートを変形することで、本実施形態においても複数の細胞培養容器２０又は複数の細胞１０４に対応できることは言うまでもない。
【００９６】
［変形例］
図２０に示すように、超音波振動１４６を収束するための音響レンズ１４８を超音波発振子１３０の端面に形成しても良い。
【００９７】
超音波発振子１３０の細胞培養容器２０側には、凹面となる音響レンズ１４８が形成される。音響レンズ１４８は、振動伝達液体１３４との音響マッチングに優れた材質であり、振動損失を界面で生じさせない材質（樹脂）にて形成される。音響レンズ１４８に形成された凹面により、超音波振動１４６が一点に収束される。目的とする細胞１０４の播種位置にその超音波振動収束点１５０を設定することにより、細胞１０４を１個のみ選択的に剥離することができる。
【００９８】
ここで、超音波発振子１３０に形成された音響レンズ１４８の超音波振動収束点１５０と、対物レンズ３０の合焦位置を同一に設定することにより、顕微鏡１０による観察において、剥離する細胞１０４をＣＣＤ１８にて撮像する際に設定されたＺ座標の位置がそのまま、超音波振動１４６が収束する収束Ｚ座標位置となる。
【００９９】
従って、本変形例の超音波振動１４６による剥離では、超音波振動１４６を照射しながら、細胞培養容器２０が積載されているＸＹステージ部１２を操作することにより、細胞１０４の剥離領域を連続的に走査することができ、複数の細胞１０４の高速な剥離が可能となる。
【０１００】
なお、超音波発振子１３０はチタン酸ジルコン酸鉛（ＰＺＴ）等の材質にて厚み方向に分極処理され、厚み方向の端面には対向して電極が端面全体に形成されている。そして、本第４実施形態及びその変形例においては、図２０に示すように、超音波発振子支持部材１３２の端面に超音波発振子１３０を固定する際に、超音波発振子支持部材１３２側に超音波振動１４６が漏れこまないように、ダンピング用のダンピング樹脂層１５２を形成することが好ましい。このダンピング樹脂層１５２は、例えば、エポキシ樹脂にタングステン粉末を充填材として散在したものである。
【０１０１】
以上のように、本第４実施形態及びその変形例においても、上記第１実施形態と同じく、細胞１０４を剥離する際に、培養液８４に外部部材が接触しないため、コンタミネーションの影響は低減される。
【０１０２】
以上実施形態に基づいて本発明を説明したが、本発明は上述した実施形態に限定されるものではなく、本発明の要旨の範囲内で種々の変形や応用が可能なことは勿論である。
【０１０３】
例えば、第１乃至第４実施形態では、非接触剥離として、（１）細胞剥離液１０２の液滴吐出により、培養液８４に対して非接触剥離を行う方法、（２）細胞１０４に超音波振動１４６を照射することにより、培養液８４に対して非接触剥離を行う方法を説明し、また、非接触分離（回収）としては、（３）培養液８４の供給流れにより、外部部材（ピペットや注射針等）によらない非接触分離を行う方法、（４）培養液８４に弾性表面波１２４の照射による音響流１２６を発生させ、外部部材（ピペットや注射針等）によらない非接触分離を行う方法を説明したが、これらの非接触剥離と非接触分離は組合せにより、自由に構成されることは言うまでも無く、目的細胞１０４を細胞培養容器２０に残留するために不要な細胞群８２を剥離搬送する観点も、各実施形態に適用できることはいうまでもなく、コンタミネーションを防止しつつ、細胞群８２及び細胞１０４へのダメージを低減する効果を有する。
【０１０４】
（付記）
前記の具体的実施形態から、以下のような構成の発明を抽出することができる。
【０１０５】
（１）  生細胞群の中から所望の生細胞を選択的に分離する細胞分離装置であって、
培養液に浸漬された上記生細胞群を保持する容器と、
上記容器内の上記培養液に非接触で、上記生細胞群の中の所望の生細胞を上記容器の壁表面（底面または側面）から剥離させる剥離手段と、
上記剥離手段により剥離された上記所望の生細胞を、上記容器内の上記培養液に非接触で、上記生細胞群から空間的に分離（回収）する分離（回収）手段と、
を具備することを特徴とする細胞分離装置。
【０１０６】
（対応する実施形態）
この（１）に記載の細胞分離装置に関する実施形態は、第１乃至第４実施形態が対応する。それらの実施形態において、細胞群８２が上記生細胞群に、培養液８４が上記培養液に、細胞培養容器２０が上記容器に、液滴吐出ヘッド３６、超音波発振子１３０、等が上記剥離手段に、ベリスタポンプ９２、弾性表面波超音波素子１２０、等が上記分離（回収）手段に、それぞれ対応する。
【０１０７】
（作用効果）
この（１）に記載の細胞分離装置によれば、容器内の培養液に非接触で所望の生細胞を剥離及び分離できるので、コンタミネーションと細胞へのダメージを低減し、簡便な自動操作により目的とする生細胞を回収することが可能となる。
【０１０８】
（２）  上記剥離手段は、上記容器内の上記培養液に非接触の位置から剥離液を吐出する吐出ヘッドを含むことを特徴とする（１）に記載の細胞分離装置。
【０１０９】
（対応する実施形態）
この（２）に記載の細胞分離装置に関する実施形態は、第１乃至第３実施形態が対応する。それらの実施形態において、細胞剥離液１０２が上記剥離液に、液滴吐出ヘッド３６が上記吐出ヘッドに、それぞれ対応する。
【０１１０】
（作用効果）
この（２）に記載の細胞分離装置によれば、吐出ヘッドは培養液に接触しないためコンタミネーションの影響が少なく、別の容器に対しても同じ剥離液を使用することができる。また、異なる細胞種類を培養している（異なる培養液にて培養している）容器に対しても適用することができる。
【０１１１】
（３）  上記剥離手段は、上記容器内の上記培養液に非接触の位置から上記培養液に向けて照射する超音波発振子を含むことを特徴とする（１）に記載の細胞分離装置。
【０１１２】
（対応する実施形態）
この（３）に記載の細胞分離装置に関する実施形態は、第４実施形態が対応する。その実施形態において、超音波発振子１３０が上記超音波発振子に対応する。
【０１１３】
（作用効果）
この（３）に記載の細胞分離装置によれば、所望の生細胞を剥離する際に、培養液に外部部材が接触しないため、コンタミネーションの影響は低減される。また、剥離液を使用せずに剥離ができるので、剥離液による生細胞へのダメージはない。
【０１１４】
（４）  上記分離手段は、上記容器内の上記培養液中に流れを生成し、上記剥離手段により剥離された上記所望の生細胞を移動（搬送）させる移動（搬送）手段を含むことを特徴とする（１）に記載の細胞分離装置。
【０１１５】
（対応する実施形態）
この（４）に記載の細胞分離装置に関する実施形態は、第１乃至第４実施形態が対応する。それらの実施形態において、ベリスタポンプ９２、弾性表面波超音波素子１２０、等が上記移動（搬送）手段に対応する。
【０１１６】
（作用効果）
この（４）に記載の細胞分離装置によれば、剥離された所望の生細胞は、培養液の流れにより移動（搬送）されるため、培養液に異物の混入が少なく、剥離された生細胞を移動（搬送）することができる。
【０１１７】
（５）  上記移動（搬送）手段は、与圧した培養液を上記容器に供給するポンプを含むことを特徴とする（４）に記載の細胞分離装置。
【０１１８】
（対応する実施形態）
この（５）に記載の細胞分離装置に関する実施形態は、第１、第２、及び第４実施形態が対応する。それらの実施形態において、ベリスタポンプ９２が上記ポンプに対応する。
【０１１９】
（作用効果）
この（５）に記載の細胞分離装置によれば、ポンプにより培養液の流量を調整して、剥離した生細胞にダメージを与えることなく移動（搬送）することができる。
【０１２０】
（６）  上記移動（搬送）手段は、上記容器内の上記培養液中に流れを生成するために、音波を上記培養液に照射する音源を含むことを特徴とする（４）に記載の細胞分離装置。
【０１２１】
（対応する実施形態）
この（６）に記載の細胞分離装置に関する実施形態は、第３実施形態が対応する。その実施形態において、音響流１２６が上記音波に、弾性表面波超音波素子１２０が上記音源に、それぞれ対応する。
【０１２２】
（作用効果）
この（６）に記載の細胞分離装置によれば、ポンプ等の大がかりな機構を必要とせずに、剥離した生細胞にダメージを与えることなく移動（搬送）することができる。
【０１２３】
（７）  上記音源は、弾性表面波超音波素子を含むことを特徴とする（６）に記載の細胞分離装置。
【０１２４】
（対応する実施形態）
この（７）に記載の細胞分離装置に関する実施形態は、第３実施形態が対応する。その実施形態において、弾性表面波超音波素子１２０が上記弾性表面波超音波素子に対応する。
【０１２５】
（作用効果）
この（７）に記載の細胞分離装置によれば、容器内の培養液中に流れを生成するための音波を簡単に照射することができる。
【０１２６】
（８）  生細胞群の中から所望の生細胞を選択的に分離する細胞分離装置であって、
培養液に浸漬された上記生細胞群を保持する容器と、
上記生細胞群の中に含まれ、上記容器内の上記培養液に対して非接触な手段により上記容器の壁表面（底面または側面）から剥離された所望の生細胞を、当該培養液に非接触で上記生細胞群から空間的に分離（回収）する分離（回収）手段と、
を具備することを特徴とする細胞分離装置。
【０１２７】
（対応する実施形態）
この（８）に記載の細胞分離装置に関する実施形態は、第１乃至第４実施形態が対応する。それらの実施形態において、細胞群８２が上記生細胞群に、培養液８４が上記培養液に、細胞培養容器２０が上記容器に、ベリスタポンプ９２、弾性表面波超音波素子１２０、等が上記分離（回収）手段に、それぞれ対応する。
【０１２８】
（作用効果）
この（８）に記載の細胞分離装置によれば、剥離した所望の生細胞を容器内の培養液に非接触で分離できるので、コンタミネーションと細胞へのダメージを低減し、簡便な自動操作により目的とする生細胞を回収することが可能となる。
【０１２９】
（９）  培養液及び生細胞群を容器に保持させる工程と、
上記容器内の上記培養液に接触せずに、上記生細胞群の中から所望の生細胞を上記容器の壁表面（底面または側面）から剥離させる工程と、
上記容器内の上記培養液に接触せずに、上記剥離された所望の生細胞を上記生細胞群から空間的に分離させる工程と、
を有することを特徴とする細胞分離方法。
【０１３０】
（対応する実施形態）
この（９）に記載の細胞分離方法に関する実施形態は、第１乃至第４実施形態が対応する。それらの実施形態において、ステップＳ２２、ステップＳ６４、等が上記剥離させる工程に、ステップＳ２８及びステップＳ３０、ステップＳ５０及びステップＳ３０、ステップＳ６８及びステップＳ３０、等が上記分離させる工程に、それぞれ対応する。
【０１３１】
（作用効果）
この（９）に記載の細胞分離方法によれば、容器内の培養液に非接触で所望の生細胞を剥離及び分離できるので、コンタミネーションと細胞へのダメージを低減し、簡便な自動操作により目的とする生細胞を回収することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【０１３２】
【図１】図１は、本発明の第１実施形態に係る細胞分離装置の構成を示す図である。
【図２】図２（Ａ）は、ＸＹステージ部に積載された細胞培養容器とダミー吐出用ガラスとサンプルカップとを示す平面図であり、図２（Ｂ）は、サンプルカップの正面図である。
【図３】図３は、液滴吐出ヘッドの構成を示す図である。
【図４】図４（Ａ）は、細胞培養容器の平面図であり、図４（Ｂ）は、剥離した細胞の分離機構を示す図である。
【図５】図５は、本発明の第１実施形態に係る細胞分離方法の動作フローチャートを示す図である。
【図６】図６（Ａ）は、細胞剥離液が液滴として吐出された状態を示す図であり、図６（Ｂ）は、細胞が細胞培養容器の壁から剥離された状態を示す図であり、図６（Ｃ）は、剥離された細胞の搬送状態を示す図である。
【図７】図７は、複数の細胞培養容器に対応する場合の細胞分離方法の動作フローチャートを示す図である。
【図８】図８は、複数の細胞培養容器に対応する場合の細胞分離方法の別の例の動作フローチャートを示す図である。
【図９】図９（Ａ）及び（Ｂ）はそれぞれ液滴吐出ヘッドの液滴吐出の動作原理を説明するための図、特に、図９（Ａ）は液滴吐出ヘッドの積層型圧電素子への印加電圧の変化を示す波形図であり、図９（Ｂ）は液滴吐出ヘッドの状態遷移を示す図である。
【図１０】図１０は、目的とする細胞をそのまま残し、不要とする細胞を剥離する本発明の第１実施形態の第１変形例を説明するための細胞培養容器の平面図である。
【図１１】図１１は、目的とする細胞の周辺のみに限定して不要とする細胞を排除する本発明の第１実施形態の第２変形例を説明するための細胞培養容器の平面図である。
【図１２】図１２（Ａ）は、本発明の第２実施形態に係る細胞分離装置における細胞培養容器の平面図であり、図１２（Ｂ）は、剥離した細胞の分離機構を示す図である。
【図１３】図１３（Ａ）は、細胞剥離液が液滴として吐出された状態を示す図であり、図１３（Ｂ）は、細胞が細胞培養容器の壁から剥離された状態を示す図であり、図１３（Ｃ）は、剥離された細胞が第２の凹部に搬送された状態を示す図であり、図１３（Ｄ）は、排出口より余分な培養液を第２の凹部から排出した状態を示す図である。
【図１４】図１４（Ａ）は、本発明の第３実施形態に係る細胞分離装置における細胞培養容器の平面図であり、図１４（Ｂ）は、剥離した細胞の分離機構を示す図である。
【図１５】図１５は、弾性表面波超音波素子の平面図である。
【図１６】図１６は、本発明の第３実施形態に係る細胞分離方法の動作フローチャートを示す図である。
【図１７】図１７、本発明の第４実施形態に係る細胞分離装置の構成を示す図である。
【図１８】図１８は、細胞の分離機構を示す図である。
【図１９】図１９は、本発明の第４実施形態に係る細胞分離方法の動作フローチャートを示す図である。
【図２０】図２０は、本発明の第４実施形態の変形例における細胞の分離機構を示す図である。
【符号の説明】
【０１３３】
１０…顕微鏡、  １２…ＸＹステージ部、  １４…吐出部、  １６…コンピュータ、  １８…ＣＣＤ、  ２０…細胞培養容器、  ２２…ダミー吐出用ガラス、  ２４…サンプルカップ、  ２６，２８…駆動制御部、  ３０…対物レンズ、  ３２…ＣＣＤ制御部、  ３４…顕微鏡制御部、  ３６…液滴吐出ヘッド、  ３８…ＸＺステージ、  ４０…ノズル、  ４２…ガラス管、  ４４…円盤形状板、  ４６…積層型圧電素子、  ４８，６２，６６，７０，９４，９８，１４２…配管、  ５０…固定部材、  ５２，５４…駆動制御部、  ５６…駆動電圧発生部、  ５８…電磁弁、  ６０…シリンジピストンポンプ、  ６４…三方電磁弁、  ６８…洗浄水タンク、  ７２…ピストン、  ７４…モータ、  ７６…ピストン動作制御部、  ７８…電磁弁制御部、  ８０…三方電磁弁制御部、  ８２…細胞群、  ８４…培養液、  ８６…供給口、  ８８…排出口、  ９０…培養液貯留タンク、  ９２…ベリスタポンプ、  ９６…回収用細胞培養容器、  １００…クリーンベンチ、  １０２…細胞剥離液、  １０４…細胞、  １０６…吐出領域、  １０８…第１の凹部、  １１０…第２の凹部、  １１２…流路段差、  １１４…流路、  １１６…排出ベリスタポンプ、  １１８…培養液水面、  １２０…弾性表面波超音波素子、  １２２…櫛歯状電極、  １２４…弾性表面波、  １２６…音響流、  １３０…超音波発振子、  １３２…超音波発振子支持部材、  １３４…振動伝達液体、  １３６…伝達液体供給ノズル、  １３８…伝達液体供給ベリスタポンプ、  １４０…振動伝達液体貯留タンク、  １４４…ノズル支持部材、  １４６…超音波振動、  １４８…音響レンズ、  １５０…超音波振動収束点、  １５２…ダンピング樹脂層。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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