(57)【要約】【課題】禿げの改善や毛髪の成長また傷害された皮膚組織や支持組織の改善修復のために新たな有効な製剤や治療法を開発すること。【解決手段】ペプチドホルモンであるＡＮＰファミリー分子群を含有する製剤を、生体組織の修復もしくは再生に、さらには発毛育毛増毛用製剤および／またはじょく創，肌荒れ、火傷、壊死、乾癬等皮膚粘膜と皮下組織傷害の改善修復用に使用することによる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
心房利尿ホルモン（ＡＮＰ）、脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、Ｃタイプ利尿ホルモン（ＣＮＰ）、ウロジラチン（Ｐ−Ｕｒｏ）およびこれらの前駆体と派生物質、またはこれらの組み合わせを活性成分として含有し、薬剤学上通常用いられる希釈液、賦形剤、充填剤または助剤を含有していてもよい組成物を含有する組織器官の修復再生製剤。
【請求項２】
生物組織器官の修復再生への、請求項１の使用。
【請求項３】
前記組成物を非経口投与、保護薬剤とともに非経口、局所、経皮、皮下、エーロゾルなどの投与、静脈注入または静脈内ボーラス投与、または吸入によって投与することを特徴とする、請求項１または２の方法。
【請求項４】
請求項１に記載される活性成分のいずれか、またはこれらの組み合わせを含む前記組成物を、一回毎体重１Ｋｇあたり１ｎｇから１００μｇ投与することを特徴とする請求項１−３のいずれかの使用。
【請求項５】
請求項１に記載される活性成分のいずれか、またはこれらの組み合わせを含む前記組成物を、一局所あたり１０ｎｇから１０μｇ投与することを特徴とする請求項４の使用。
【請求項６】
請求項１に記載される活性成分のいずれか、またはこれらの組み合わせを含有し、薬剤学上通常用いられる希釈液、賦形剤、充填剤または助剤を含有していてもよい組織器官の修復再生用医薬組成物、および修復再生用製剤の製造への使用。
【請求項７】
経皮膚または経粘膜または経皮下組織による非経口投与または吸入による投与が可能な薬剤を調製することを特徴とする請求項６または７の使用。
【請求項８】
請求項１に記載される活性成分のいずれか、またはこれらの組み合わせを、体重１ｋｇあたり１ｎｇから１００μｇ含有する薬剤の単位用量を投与することを特徴とする請求項６−８のいずれかの使用。
【請求項９】
請求項１に記載される活性成分のいずれか、またはこれらの組み合わせを、体重１Ｋｇあたり１０ｎｇから１０μｇ含有する薬剤の単位用量を投与することを特徴とする請求項９の使用。
【請求項１０】
請求項１に記載される活性成分のいずれか、またはこれらの組み合わせを含有し、薬剤学上通常用いられる希釈液、賦形剤、充填剤または助剤を含有していてもよい医薬組成物を、投与することを特徴とする組織器官の修復再生用製剤および／または組織器官の修復治療用製剤による治療方法。
【請求項１１】
生体組織傷害を治療するための請求項１１の方法。
【請求項１２】
前記組成物を生体局所に非経口投与によって投与することを特徴とする請求項１０または１１の方法。
【請求項１３】
請求項１に記載される活性成分のいずれか、またはこれらの組み合わせを含有する前記組成物を、体重１ｋｇあたり５ｎｇから１０００μｇ投与することを特徴とする請求項１０−１３のいずれかの方法。
【請求項１４】
ＮＰファミリー分子群以外の細胞増殖因子または組織修復因子及び／又は細胞組織成長促進剤を更に含むことを特徴とする請求項１−１４記載の組織器官の修復再生用製剤。
【請求項１５】
ニュートラルエンドペプチダーゼ阻害剤、抗心房利尿ホルモンファミリー分子抗体、または心房利尿ホルモン作用修飾剤を更に含むことを特徴とする請求項１記載の生体組織修復再生用製剤
【請求項１６】
心房利尿ホルモン（ＡＮＰ）、脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、Ｃタイプ利尿ホルモン（ＣＮＰ）、リン酸化ウロジラチン（Ｐ−Ｕｒｏ）およびこれらの前駆体と派生物質のいずれかを発現するヌクレオチド配列を含む遺伝子およびベクター、またはこれらの組み合わせを活性成分として含有し、薬剤学上通常用いられる希釈液、賦形剤、充填剤または助剤を含有していてもよい組成物を含有する組織器官の修復再生製剤。
【請求項１７】
心房利尿ホルモン（ＡＮＰ）、脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、Ｃタイプ利尿ホルモン（ＣＮＰ）、リン酸化ウロジラチン（Ｐ−Ｕｒｏ）およびこれらの前駆体と派生物質、またはこれらの組み合わせを活性成分として含有し、薬剤学上通常用いられる希釈液、賦形剤、充填剤または助剤を含有していてもよい組成物を含有する発毛育毛増毛用製剤および／またはじょく創，肌荒れ、火傷等皮膚粘膜と皮下組織傷害の改善修復用製剤。
【請求項１８】
毛髪、皮膚、粘膜および皮下組織の再生への、請求項１７の使用。
【請求項１９】
前記組成物を非経口投与、保護薬剤とともに非経口投与、局所投与、経皮投与、皮下投与、エーロゾルとして投与、静脈注入または静脈内ボーラス投与、または吸入によって投与することを特徴とする、請求項１７または１８の方法。
【請求項２０】
請求項１７に記載される活性成分のいずれか、またはこれらの組み合わせを含む前記組成物を、一回毎体重１Ｋｇあたり１ｎｇから１００μｇ投与することを特徴とする請求項１７−１９のいずれかの使用。
【請求項２１】
請求項１７に記載される活性成分のいずれか、またはこれらの組み合わせを含む前記組成物を、一局所あたり１０ｎｇから１０μｇ投与することを特徴とする請求項２０の使用。
【請求項２２】
請求項１７に記載される活性成分のいずれか、またはこれらの組み合わせを含有し、薬剤学上通常用いられる希釈液、賦形剤、充填剤または助剤を含有していてもよい医薬組成物の、発毛、増毛、育毛用製剤および／または皮膚粘膜皮下組織傷害の治療用製剤の製造への使用。
【請求項２３】
皮膚または粘膜経路による非経口投与または吸入による投与が可能な薬剤を調製することを特徴とする請求項２１または２２の使用。
【請求項２４】
請求項１７に記載される活性成分のいずれか、またはこれらの組み合わせを、体重１ｋｇあたり１ｎｇから１００μｇ含有する薬剤の単位用量を投与することを特徴とする請求項２１−２３のいずれかの使用。
【請求項２５】
請求項１７に記載される活性成分のいずれか、またはこれらの組み合わせを、体重１Ｋｇあたり１０ｎｇから１０μｇ含有する薬剤の単位用量を投与することを特徴とする請求項２４の使用。
【請求項２６】
請求項１７に記載される活性成分のいずれか、またはこれらの組み合わせを含有し、薬剤学上通常用いられる希釈液、賦形剤、充填剤または助剤を含有していてもよい医薬組成物を、投与することを特徴とする発毛、増毛、育毛用製剤および／または皮膚粘膜傷害の治療用製剤による治療方法。
【請求項２７】
皮膚粘膜傷害を治療するための請求項２６の方法。
【請求項２８】
前記組成物を静脈経路に非経口投与または吸入によって投与することを特徴とする請求項２５または２６の方法。
【請求項２９】
請求項１７に記載される活性成分のいずれか、またはこれらの組み合わせを含有する前記組成物を、体重１ｋｇあたり５ｎｇから１０００μｇ投与することを特徴とする請求項２６−２８のいずれかの方法。
【請求項３０】
他の増殖因子及び／又は毛髪成長促進剤を更に含むことを特徴とする請求項１７−２９記載の毛髪成長促進もしくは皮膚と皮下組織の改善修復用製剤。
【請求項３１】
ニュートラルエンドペプチダーゼ阻害剤、抗心房利尿ホルモンファミリー分子抗体、または心房利尿ホルモン作用修飾剤を更に含むことを特徴とする請求項１７−２９記載の毛髪成長促進もしくは皮膚と皮下組織の改善修復用製剤
【請求項３２】
心房利尿ホルモン（ＡＮＰ）、脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、Ｃタイプ利尿ホルモン（ＣＮＰ）、リン酸化ウロジラチン（Ｐ−Ｕｒｏ）およびこれらの前駆体と派生物質、またはこれらの組み合わせをコードする遺伝子群を活性成分として含有し、薬剤学上通常用いられる希釈液、賦形剤、充填剤または助剤を含有していてもよい組成物を含有する組織器官の修復再生製剤。
【請求項３３】
心房利尿ホルモン（ＡＮＰ）、脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、Ｃタイプ利尿ホルモン（ＣＮＰ）、ウロジラチン（Ｐ−Ｕｒｏ）およびこれらの前駆体と派生物質のいずれかを発現するヌクレオチド配列を含む遺伝子およびベクター、またはこれらの組み合わせを活性成分として含有し、薬剤学上通常用いられる希釈液、賦形剤、充填剤または助剤を含有していてもよい組成物を含有する発毛育毛増毛用製剤および／またはじょく創，肌荒れ、火傷等皮膚粘膜と皮下組織傷害の改善修復用製剤。
【請求項３４】
心房利尿ホルモン（ＡＮＰ）、脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、Ｃタイプ利尿ホルモン（ＣＮＰ）、ウロジラチン（Ｐ−Ｕｒｏ）およびこれらの前駆体と派生物質、またはこれらの組み合わせを活性成分として含有し、薬剤学上通常用いられる希釈液、賦形剤、充填剤または助剤を含有していてもよい組成物を含有する組織器官の修復再生製剤の手術時あるいは手術前後の全身もしくは局所投与
【請求項３５】
心房利尿ホルモン（ＡＮＰ）、脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、Ｃタイプ利尿ホルモン（ＣＮＰ）、ウロジラチン（Ｐ−Ｕｒｏ）およびこれらの前駆体と派生物質、またはこれらの組み合わせを活性成分として含有する化粧品類
【請求項３６】
心房利尿ホルモン（ＡＮＰ）、脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、Ｃタイプ利尿ホルモン（ＣＮＰ）、ウロジラチン（Ｐ−Ｕｒｏ）およびこれらの前駆体と派生物質、またはこれらの組み合わせを活性成分として含有し、薬剤学上通常用いられる希釈液、賦形剤、充填剤または助剤を含有していてもよい組成物を含有する製剤の潰瘍性病変に対する投与
【請求項３７】
心房利尿ホルモン（ＡＮＰ）、脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、Ｃタイプ利尿ホルモン（ＣＮＰ）、ウロジラチン（Ｐ−Ｕｒｏ）およびこれらの前駆体と派生物質、またはこれらの組み合わせを活性成分として含有する細胞培養添加剤および培養方法
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】生物生体組織の復元や細胞増殖を促進させる組織再生技術、さらには発毛育毛増毛や皮膚傷害の回復用製剤と改善方法にかかわる。
【背景技術】
【０００２】近年、人体組織や臓器の一部また特定の細胞を再生し、重い疾患にかかったり、あるいは壊滅的な損傷を蒙って機能回復が困難とされた臓器を補完代替する医療技術が試みられている。【０００３】再生医療のほとんどは動物実験の段階にあり、人体における組織の再生のなかで実用化に至っているものは未だ培養皮膚程度に過ぎない。【０００４】現在試みられている組織・臓器の再生方法では、ＥＳ細胞、胚葉性幹細胞、あるいは類似の組織等の再生すべき対象を様々な刺激因子の投与下で、またフィーダー細胞とともに、処理培養する手技が採用される。【０００５】しかしながら、従来技術における問題点は、分化した細胞ほど再生されにくい点にある。すなわち、生体内、特に中枢神経や心臓、腎臓のような分化の進んだ細胞／組織の場合、一度、何らかの傷害を被ったときには、従来の治療では再生が不可能に近い。一方、様々な工夫のなかで、細胞周期の中のＳ期に作用して、ＤＮＡ合成を促進する成長因子が生体組織から単離精製されている。代表的なものに、上皮増殖因子（ＥＧＦ：ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）や肝細胞増殖因子（ＨＧＦ：ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）がＤＮＡ合成促進作用を発揮することが既知である。他に成長因子として、例えばＩＧＦ−１（ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−１），ＩＧＦ−２（ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−２），ＴＧＦ−α（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−α）等が知られており何れも細胞増殖の促進の過程で重要な生化学的作用を担っている。【０００６】ＥＧＦやＨＧＦの様な細胞分裂促進剤は、特異的レセプターに結合しプロテインキナーゼのカスケードを開始させる、即ち、ＭＡＰ（ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）キナーゼのリン酸化及び活性化によりＭＥＫ（ＭＡＰキナーゼキナーゼ＝ＭＡＰＫ−ＥＲＫ  ｋｉｎａｓｅ）に作用して、ＭＥＫが他のＭＡＰキナーゼ：ｐ４４（ＥＲＫ−１：ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄｋｉｎａｓｅ  １）とｐ４２をリン酸化し、活性化する。そしてｐ４２（ＥＲＫ−２）は、細胞質、核へと増殖・分化の信号を送る。例えば、このＭＡＰキナーゼカスケード反応は肝細胞の細胞周期の制御におけるキーシグナリングパスウェイである。成長因子によるＥＲＫｓの活性化は、初代ラット肝細胞培養のＤＮＡ合成を導くことで知られている。フォスファチジルイノシトール３−キナーゼ（Ｐ１３Ｋ）と下流領域のシグナルキナーゼであるプロテインキナーゼＢ（ＰＫＢ，Ａｋｔ）は、成長因子に反応する細胞生存の主要な制御因子である。最近、ＰＫＢセリンースレオニンキナーゼの活性化は、ＢＡＤやｃａｓｐａｓｅ−９の様なプロアポトーシスプロテインのリン酸化や不活性化をすると言われている。この様に、成長因子は細胞増殖と生存の制御に重要な役割をしている。以上のように、成長因子が、細胞の特異的なレセプターに結合し、ＭＡＰキナーゼに始まりプロテインキナーゼのカスケード反応が進み、その結果として、細胞のＤＮＡ合成、細胞周期の制御や細胞再生、代償性肥大等細胞増殖能力の活性化へと誘導す���ことが知られている。【０００７】いっぽう、ＡＮＰは、主に心房から分泌され強力なナトリウム利尿作用、血管拡張および血圧降下作用を呈するペプチド性ホルモンであり、分子量の違いによりα型、β、Ｙ型の３つのタイプに分類される。α型は、２８個のアミノ酸から構成される１本鎖のポリペプチド鎖で、分子内に１個のジスルフィド結合［Ｃｙｓ（７）−Ｃｙｓ（２３）］を有している（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１１８，１３１−１３９，１９８４）。β型は、α型の逆並行２量体であり、Ｙ型は、Ｃ末端領域［９９−１２６］にα型の配列を含む１２６個のアミノ酸で構成される高分子タンパク質で生合成上の前駆体であることが示唆されている（Ｎａｔｕｒｅ，３１３，３９７−４００，１９８５）。【０００８】多臓器に対する多彩なＡＮＰの生理活性を受容体結合反応に関しＡＮＰと競合することにより修飾または抑制させる薬剤の報告には、ラット・ＡＮＰのＮ端、Ｃ端及び環状構造の一部を欠如させた合成リガンドＣ−ＡＮＦ（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３８，６７５−６７８，１９８７）やヒト・ＡＮＰ［７−２８］の逆並行２量体の１組のジスルフィド結合をＬ−α−ａｍｉｎｏｓｕｂｅｒｉｃ  ａｃｉｄで置換したアナログ（Ａｎａｌｏｇ）ＩＩＩ（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，２４８，２８−３４，１９８９）などがある。他方、発明者らによって、ＡＮＰがその生物学的活性として鶏胚心筋細胞増殖促進作用等を有することが見いだされているが、ＡＮＰファミリー分子群の細胞や組織器官の再生修復あるいは皮膚毛髪に対する作用は未だ知られていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】従来の細胞組織修復技術における問題点は、分化した細胞ほど再生されにくい点にある。すなわち、中枢神経や心筋のような特に分化の進んだ細胞／組織の場合、一度、生体内で何らかの傷害を被ったときには、従来の治療では再生が不可能に近い。また、禿げは毛髪の減少した状態を代表し、脱毛、少毛、毛髪の太さや色調、弾性や剛直性などの様々な変化によって特徴づけられる一方、皮膚および皮下組織傷害は、外傷、やけど、化学刺激、アレルギー、炎症、感染症、循環不全、生理的な老化などが原因となる皮膚や皮下組織の脱落、荒れなどであり、表皮や真皮、支持組織の破損がみられる。禿げの改善治療法としてはミノキシジル、アデノシン、ＦＧＦ７を投与する方法が知られているが、現実には未だ著効を示す場合は多くない。じょく創、皮膚組織の傷害の場合は、各種軟膏、血流改善剤、ＦＧＦ、創処置手術、化粧品類など多様な対処法が講じられるが、回復や改善速度には全身の栄養や局所の清潔と修復能力が基本的に影響し、従来法での効果は充分とは言えない。すなわち、従来法による毛髪の成長や皮膚組織の改善には限界があり、新たな有効な製剤や治療法の開発が待たれる。
【課題を解決するための手段】
【００１０】発明者はペプチドホルモンであるＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰ、ウロジラチンおよびこれらの組み合わせを、さらにはこれらと共通の様式にて機能する製剤を、生体組織の修復もしくは再生に、さらには発毛育毛増毛用製剤および／またはじょく創，肌荒れ、火傷、壊死、乾癬等皮膚粘膜と皮下組織傷害の改善修復用に使用することを発案した。【００１１】我々は、心筋細胞において、初めて、ＡＮＰの細胞増殖作用、細胞種特異的発育誘導作用（Ｋｏｉｄｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ８８，４，Ｉ−１２９，１９９３，Ｋｏｉｄｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，６１，１−１１，１９９６）を見出し、近年になり、他のリニエージの細胞（肝細胞や神経細胞）において、ＡＮＰのアポトーシス阻害作用と保護効果があることが知られてきている。しかしながら、未だ生体や器官へのＡＮＰファミリー分子の利用は利尿作用と血管拡張作用を機序とするもののみが行われるに過ぎず、生体組織や器官の修復や再生におけるＡＮＰファミリー分子の役割が不明であるのみならず、ＡＮＰファミリー分子が生体組織や器官の修復や再生のためにもちいられたこともない。【００１２】本発明では、生体および各種培養細胞をもちいて、まず組織器官の再生や修復に及ぼすＡＮＰファミリー分子の作用を確認した。次には外胚葉系細胞や組織の障害、特に禿げ脱毛および／または皮膚傷害の改善と手術後組織回復と再生のプロセスにおいてＡＮＰファミリー分子の向毛髪発育作用および向皮膚再生改善作用と組織回復効果を検討し、新規製剤および新規製剤による処置方法を試験した。
【発明の効果】
【００１３】本発明の製剤のひ薄心筋に対する活性作用は、数週間で効果が発現し始め、およそ３ヶ月で心筋の厚さが増し始め、収縮性が増加してくるものであり、カテコラミンやレニンーアンギオテンシン系に作用する薬剤、ジギタリス剤などの既知の製剤よりも明らかに有効であるとともに、作用様式が異なる。【００１４】また、本発明の製剤の手術後創部に対する作用は、対照の自然治癒部位と比べて、より早期の創部の盛り上がりと閉鎖治癒およびより少ない瘢痕化にて代表される。ことに潰瘍部位の早期閉鎖は閉塞性動脈硬化症による壊疽や開放性骨折など外傷による組織欠損の修復、また長期臥床によるじょく創の処置に有用である。この作用は培養細胞による成績で示されたことからも、血流依存性とは異なるものであり、直接の標的細胞への修復と増殖効果は各種組織器官の再生修復に有用である。【００１５】本発明の製剤の毛髪に対する生理活性は、数週間で効果が発現し始め、１ヶ月で頭髪が増加することから、ミノキシジルやアデノシンなどの既知の製剤よりも明らかに高い。また、毛髪のしなやかさ、弾力性、太さなども増強してくることから、既存の育毛剤に比べて有用性が高い。皮膚における効果は、水仕事をおこなっても、あかぎれやガサガサ肌が出来にくい、または短期間で治癒するという優れたものであり、皮膚外用剤または化粧品類としての該活性成分の有用性が示された。【００１６】培養細胞を用いた試験では、細胞傷害を加えた細胞群において対照と比べてＡＮＰ投与のときに明らかに修復能力が高かったこと、および細胞コロニーと細胞配列ネットワークの形成がＡＮＰ投与でのみ可能であったことは、ＮＰファミリー分子の組織修復と再生誘導能を実証した。さらに、ＡＮＰがＢＭＰ２など成長因子の発現を修飾したことは既知の成長因子群作用の調節者としてのＡＮＰファミリーの役割を示した。このことは外来性投与では機能を果たせない成長因子群が関わる再生や修復であっても、ＡＮＰファミリー分子が、これら成長因子の内因性産生や機能発現を調整して再生や修復を誘導できることをしめした。また、ＡＮＰファミリーが細胞周期関連因子（サイクリンＤ１）や細胞種特異的蛋白（ＫＲＴ１５）およびエピモルフィンの発現レベルをも高めたことは組織修復および再生を細胞や組織の有すべき本来の姿に加速して誘導できることを示した。実際に、臨床上、ＡＮＰを局所投与したときの皮膚のひび割れや切創手術創の修復が未使用時と比べて迅速であり、皮膚のつや、張り、しっとりさが良好であったことは細胞試験の結果と合致するものであった。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】このＮＰファミリー組成物は、通常、傷口、じょく創、壊疽部位、手術創などに局所投与、特にローションやミスト、またはクリームやゲル貼付剤によって投与したり、局部周辺に注入するのが好ましい。禿や肌荒れの場合、この活性組成物は、経頭皮投与、特にローションやミスト、またはクリームやＯＤＴ貼付剤によって投与するのが好ましい。投与量は、１回あたりＡＮＰでは１０ｎｇから１００μｇであるのが好ましく、１０ｎｇから１μｇであるのが特に好ましい。また、このような投与量で、筋肉投与、皮下投与あるいは保護薬剤とともに非経口投与するのも適当である。【００１８】再生医療等の細胞培養の場合、培養液に添加したり、培養液除去時にＮＰファミリーに曝露してから培養液を加えることが好ましい。【００１９】投与に際しては、有効成分を液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬製剤の形態で投与することができる。このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などの固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤などの液剤、凍結乾燥製剤などが挙げられ、これらの製剤は製剤上の常套手段により使用時に調製することができる。医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングルコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水などが挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤などの慣用の添加剤を適宜添加することもできる。【００２０】ＮＰファミリーのリガンド分子群は、Ａｔｙｐｅ、Ｂｔｙｐｅ、Ｃｔｙｐｅ、の３種類の異なるレセプターによって認識され細胞機能に影響するが、上記のリガンド・レセプターは大なり小なり交差してシグナルを送受信するので、いずれかのリガンド／レセプターが反応すれば他の組み合わせでも大なり小なり活性を発揮することを勘案して用法用量を設定することが好ましい。【００２１】本発明のＮＰは、既知の製剤の代わりに使用することもできるし、既知の製剤と組み合わせて使用することもできる。例えば、増毛育毛においてはミノキシジル、フィナステリド、塩化カルプロニウム、アデノシン、天然物抽出産物、アミノ酸類、馬鬣油、など各種増育毛成分との配合が可能である。【００２２】本発明の、ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰ、ウロジラチンおよびこれらの前駆体もしくは派生産物またはこれらの組み合わせは活性成分として配合され、薬剤学上通常用いられる希釈液、賦形剤、充填剤または助剤を含有していてもよい、さらにはこれらの活性を制御できる薬剤（中性内在蛋白分解酵素阻害薬、各種抗ＮＰファミリー分子抗体やＨＳ２３２などＮＰレセプター結合物質）、既存の増育毛用組成物を配合してもよい。本発明のＮＰファミリー配合量は、対象者の年齢、体重、症状、病変の部位、大きさの程度、投与経路、投与スケジュール、製剤形態などにより、適宜決定することができる。【００２３】また、本発明のＮＰファミリー分子を配合した化粧料素材、化粧料の形態を製造することができる。化粧料には、植物油のような油脂類、高級脂肪酸、高級アル��ール、シリコーン、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤、防腐剤、糖類、金属イオン封鎖剤、水溶性高分子のような高分子、増粘剤、粉体成分、紫外線吸収剤、紫外線遮断剤、ヒアルロン酸のような保湿剤、香料、ｐＨ調整剤等を含有させることができる。ビタミン類、皮膚賦活剤、血行促進剤、常在菌コントロール剤、活性酸素消去剤、抗炎症剤、美白剤、殺菌剤等の他の薬効成分、生理活性成分を含有させることもできる。【００２４】化粧料としては、化粧水、乳液、クリーム、パック等の皮膚化粧料、ヘア頭皮クリーム、ヘア、ボディーローション等の身体用化粧料等、入浴剤、口腔化粧料、毛髪化粧料とすることができる。本発明の方法で得られる、活性成分を有する組成物を含有せしめた化粧料としては、機能面からは、例えば乳液、化粧液、フェイスクリーム、ハンドクリーム、ローション、エッセンスなどが好ましい。【００２５】また、生体内で物質活性を維持したり、外用にて組織移行を高めるためにはリポゾームによる乳化手段を用いることも好ましい。本発明で用いることのできるリポゾームは、例えば、リン脂質、糖脂質又はコレステロールなどの脂質分子から調製されるリポゾームであり、一枚膜リポゾーム又は多重膜リポゾームのいずれも有効である。リポゾームを調製することのできるリン脂質としては、一般的に、例えば、グリセロリン脂質（ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、又はカルジオピン）、あるいはスフィンゴリン脂質（スフィンゴミエリン、セラミドホスホリルエタノールアミン、又はセラミドホスホリルグリセロール）を挙げることができる。また、リポゾームを調製することのできる糖脂質としては、例えば、グリセロ糖脂質（ジガラクトシルジグリセリド、又はセミノリピド）、あるいはスフィンゴ糖脂質（ガラクトシルセラミド、又はラクトシルセラミド）を挙げることができる。【００２６】リポゾームは極性部の電荷の状態により、中性リポゾーム、カチオン性リポゾーム、アニオン性リポゾーム、ｐＨ感受性リポゾームなどを挙げることができる。例えば、カチオン性リポゾームは、カチオン性をもつ頭部（ヘッド）の脂質と、ヘルパー脂質との人工混合物であり、例えば、（１）（ａ）モノカチオン性ヘッド、例えば、ＤＯＴＭＡ｛すなわち、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルアンモニウム｝、ＤＭＲＩＥ｛すなわち、Ｎ−［１−（２，３−ジミリスチルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アンモニウムブロマイド｝、ＤＯＴＡＰ｛すなわち、１，２−ジオレイルオキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン｝、ＤＤＡＢ｛すなわち、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロマイド｝、ＰＣ−コレステロール｛すなわち、３β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール｝、若しくはＤＯＴＩＭ｛すなわち、１−［２−９（Ｚ）−オクタデセノイルオキシ）−エチル−２−（８（Ｚ）−ヘプタデセニル）−３−（２−ヒドロキシエチル）−イミダゾリニウムクロライド｝、又は（ｂ）ポリカチオン性ヘッド、例えば、ＤＯＧＳ｛すなわち、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン｝若しくはＤＯＳＰＡ｛すなわち、２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２−（スペミンカルボキサミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアンモニウムトリフルオロアセテート｝と、（２）ヘルパー脂質、例えば、ＤＯＰＥ｛すなわち、ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン｝若しくはＤＯＰＣ｛すなわち、ジオレイルホスファチジルクロライン｝とからなるカチオン性リポゾームを用いることができる。【００２７】本発明による組織修復また増育毛剤においては、前記の活性成分とリポゾームとが同時に複合体（ｃｏｍｐｌｅｘ）の形で含有されていれば、それらの存在形態は特に限定されるものではない。前記の複合体としては、例えば、前記の活性成分とリポゾームとの混合物、リポゾームによるＮＰファミリー分子の包埋体若しくはカプセル化物等の形態を挙げることができ、包埋体が好ましい。【００２８】前記の包埋体は、例えば、ＮＰファミリー分子をリポゾーム内に封入した形とする方法で調製することができる。すなわち、ホスファチジルセリン等の脂質類を用いて、ボルテックスミキサー等で多重層のリポゾームを調製し、次に超音波処理して一枚膜のリポゾームを調製する。得られた一枚膜リポゾームに活性成分を加え、軽くボルテックスミキサー等にかけた後、凍結乾燥して再水和することによって調製することができる。前記のカプセル化物も公知の方法によって調製することができる。【００２９】本発明の組織修復また増育毛剤は、前記活性成分と前記リポゾームとの複合体を有効成分として含有し、所望により、製剤学的若しくは獣医学的に許容することのできる通常の担体を含有することができる。リポゾームの投与剤型としては、特に限定がなく、例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、エキス剤、若しくは丸剤等の経口剤、又は注射剤、外用液剤、軟膏剤、坐剤、局所投与のクリーム、若しくは点眼薬などの非経口剤を挙げることができ、特に、作用局所に投与する薬剤（例えば、注射剤又は徐放性ペレットなど）が好ましい。【００３０】また、本発明の組織修復また増育毛剤は、徐放性ポリマー、シクロデキストリンなどを用いた徐放性製剤の手法を用いて投与することができる。例えば、本発明のＡＮＰファミリー分子をエチレンビニル酢酸ポリマーのペレットに取り込ませて、このペレットを治療すべき組織中に外科的に移植することができる。【００３１】シクロデキストリンを含んでいてもよいＡＮＰファミリー、またはＡＮＰファミリーシクロデキストリン包接化合物を含んでなる製剤であって、凍結乾燥品、さらにマルトースまたトレハロースを含む凍結乾燥品、１重量部の活性成分に対して、マルトースまたはトレハロースが約１０〜約１００００重量部である凍結乾燥品が好ましい。【００３２】脂肪乳剤に使用する油脂成分としては、植物油脂、動物油脂、鉱物油脂等の油脂基剤であれば、特に限定の必要はないが、植物性油脂が好ましい。植物性油脂の例としては、オリーブ油、大豆油、ゴマ油、ヒマシ油、トウモロコシ油、紅花油、菜種油、ユーカリ油等があげられ、また、動物油の例としては、肝油、アザラシ油、イワシ油、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸等が、鉱物油の例としては、流動パラフィン等が挙げられる。とくに、オリブ油、大豆油、ゴマ油が好ましい。【００３３】更に、リン脂質としては天然由来のリン脂質をそのままあるいは更に精製したものを用いることができる。具体的には、卵黄レシチン、大豆レシチン等を用いることができる。なお、天然由来のリン脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、フォスファチジルイノシトール、フォスファチジルセエリン、スフィンゴエミリン等を含有するものである。【００３４】該脂肪乳剤には、上記各成分と水のほか、脂肪酸を配合することができる。この脂肪酸は乳化補助剤としての働きをするもので、本発明のＮＰファミリー含有乳剤に優れた乳化安定性を与えるものである。この脂肪酸としては、天然、合成のいずれでもよく、飽和酸、不飽和酸のいずれでもよいが、不飽和中鎖脂肪酸が好ましく、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸等が上げられる。オレイン酸を脂肪酸として使用する場合は、その純度が９９％以上であることが好ましい。【００３５】該脂肪乳剤は、５〜５０質量％、好ましくは１０〜２０質量％の油脂、０．０５〜１０質量％、好ましくは０．５〜５質量％のリン脂質、０〜１質量％、好ましくは０．２〜０．５質量％の脂肪酸と残部の水を用い、常法により乳化することによって製造することができる。【００３６】本発明のＮＰファミリー含有乳剤は、直接生体に注入投与または局所投与する場合もあるため、乳化は得られる脂肪粒の最大粒子径が１μｍ以上とならないように行うことが好ましく、最大粒子径が０．７μｍを超えないように行うことがより好ましい。最大粒径が、例えば１μｍである場合は、末梢血管閉鎖等の問題が生じる恐れがある。例えば、ポリエチレングリコール結合リン脂質およびレシチンを乳化剤として、ＡＮＰをＯ／Ｗ型脂肪乳剤に配合すること、などが好ましい。【００３７】本発明のＮＰファミリー含有乳剤で乳化剤の１種として用いるポリエチレングリコール結合リン脂質は、リン脂質にポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖が結合したものであり、ＰＥＧ鎖のＰＥＧの分子量が１０００〜１００００のものが好ましく、１０００〜５０００のものが特に好ましい。ＰＥＧの分子量が１０００未満であると乳剤が生成しにくくなり、１００００を越えると脂肪乳剤の粘度が高くなることから注射剤として投与しにくくなるからである。ポリエチレングリコール結合リン脂質のＰＥＧ鎖の、リン脂質と結合していない側の末端は水酸基、アルコキシ基、カルボキシル基など、いずれのものも使用できる。【００３８】また、ポリエチレングリコール結合リン脂質におけるＰＥＧ鎖が結合するリン脂質としてはレシチン、ホスファチジルコリン、水素添加ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリンおよびそれらの誘導体などがあげられるが、特にジステアロイルホスファチジルエタノールアミンが好ましい。【００３９】本発明のＮＰファミリー含有乳剤で乳化剤の他の１種として用いるレシチンは卵黄レシチンおよび大豆レシチンを用いることができるが卵黄レシチンが特に好ましい。卵黄レシチンは、注射剤にすることからホスファチジルコリンが７０％程度以上の含有量になるまで精製したものが好ましい。ここで、脂肪乳剤の安定性の点からはレシチンを他のグリセロリン脂質に代えることも可能と考えられるが、注射剤とする場合では現在のところ代替できるものはない。【００４０】該脂肪乳剤に用いる乳化剤はポリエチレングリコール結合リン脂質およびレシチンを必須成分とするが、注射剤に使用可能な他のグリセロリン脂質を混合して用いることもできる。それら乳化剤の配合量は、製剤全体の１〜３０Ｗ／Ｖ％となる量が好ましい。【００４１】該脂肪乳剤に用いる脂肪油は、一般的に注射剤に用いることができるものが使用でき、具体的には大豆油、ゴマ油、紅花油、オリーブ油などをあげることができる。脂肪油の配合量は製剤全体の１〜３０Ｗ／Ｖ％となる量が好ましい。
【実施例】
【００４２】本発明は以下の実施例により、さらに具体的に説明されるが、これらは本発明の範囲を限定するものではなく、機能的に均等な方法及び成分は本発明の範囲に含まれる。実施例１【００４３】拡張型心筋症と診断された慢性心不全症例４４才男性において、経静脈にて週１回１ｍｇ／４時間の少量間歇ＡＮＰ投与をおこなった。ＡＮＰ投与開始前に１９％であった左室収縮率は６ヶ月後に４０％まで改善し、治療前にはＮＹＨＡＩＶであった体動能力はＮＹＨＡＩＩにまで改善した。超音波上で誹薄繊維化がみられた心筋は厚みが増して正常心筋内部における顆粒状の瘢痕と判定されるようになった。週１回の投与継続により、２年後にはＮＹＨＡＩとなり、既存療法による場合で半年と推定された予後は１０年以上通常の家庭生活を過ごせるまでになった。この経過中、心筋壁厚と収縮能とも良好である。実施例２【００４４】顔面全域の黒子多数をレーザー法にて切除した４９才女性において、左顔面の処置創と周辺にＡＮＰ０．１から５μｇ（等張水溶液０．０１ｍｌから０．５ｍｌ）を一日２回洗面後に局所投与し、右顔面処置創を対照とした。この結果、右側創よりも左側創では明らかに早期に皮下組織が再形成され、投与１週間後ではＡＮＰ投与により左側創は大部分塞がったのに対し、右側創は未だクレーターが残存して赤みがかった皮下組織が直視された（図１）。くわえてＡＮＰ投与では痕跡がより盛り上がりにくく目立ちにくく治癒した。さらには、右に比べ左顔面全体に皮膚に張りが出て、しっとりと滑々してきた。実施例３【００４５】５４歳と８９歳の頭髪の薄い男性を用いて、１日２回洗髪後に頭皮にＡＮＰを０．５から５μｇ（等張水溶液０．５ｍｌ）を塗布投与した。投与前と投与後において、頭皮と毛嚢、毛髪、毛髪全体像を観察した。また、投与前と４０日と６０日後に頭髪評価をおこなった。両者とも、ｈＡＮＰ投与１週間にて、前頭部に産毛様の発毛を認め、抜け毛のあとに黒い毛乳頭が見える部位が出始めた。２−３週間後には頭髪総体として弾力性と剛直性の増強が見られた。１ヵ月後では、使用前に透けて見えていた頭皮が明らかにみづらくなった。後退していた頭髪の最前列は前進し、出始めた新しい毛髪は５−７ｍｍに達した。さらに長い１本毛の脇から２本目の短い発毛が発見された。４０日後には、全体像からみて、毛髪全体に腰が強くなり、太さも増した。また、毛嚢部皮下には渦巻状の黒々した毛髪が透けて見えるようになった。この毛髪が体外に突出してくるときには当初は渦巻いたままであるので直立した時点ではすでに３−４ｍｍの長さを示した。６０日後には頭皮全体に見えにくくなり、殆どの毛嚢で毛根が見られるとともに、投与前に最も薄かったつむじ周辺およびその前部でも発毛が増加してきた。実施例４【００４６】毎日水泥仕事に携わる陶芸家の両手平と手背に１日２回０．５から５μｇのＡＮＰを塗布した。この結果、以前から毎冬には必ずヒビ割れや皮膚の荒れが顕著であったがＡＮＰを塗布した後ではヒビ割れと皮膚の荒れの両者とも改善した。実施例５【００４７】ヒト正常角化細胞株ＨａＣａＴを５ｘ１０２ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ（Ａ−）及び１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ（Ｂ−）、２ｘ１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ（Ｃ−）となるようにファルコン平底９６ｗｅｌｌディッシュ（＃３０７２）に蒔き、３日後及び１日後からＨＡＮＰ（カルペリチド／第一製薬）を１μＭ（ＰＢＳ希釈）となるように毎日添加し、４日後（Ａ）および３日後（Ｂ，Ｃ）、細胞増殖測定試薬ＷＳＴ−１（Ｒｏｃｈｅ）を加え、３７℃、２時間後、マイクロプレートリーダーＭＴＰ−１２０（コロナ電機）によりＯＤ４５０を測定し、生細胞数を比較した。ＨＡＮＰは、対照としたラット平滑筋細胞株Ａ１０において細胞増殖を抑制したのに対して、ＨａＣａＴにおいて３−１０％の細胞増殖作用が示した（図２）。実施例６【００４８】ヒト正常角化細胞株ＨａＣａＴを２ｘ１０４ｃｅｌｌｓ／ｄｉｓｈとなるように３．５ｃｍファルコンディッシュ（３００１）に蒔き、３日後、ＨＡＮＰを１μＭとなるように添加し、０、３０分、４時間後の細胞から、ＲＮｅａｓｙ  ｐｌｕｓ（キアゲン）を用いてＲＮＡを回収した。ＲＮＡ０．２μｇからＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてｃＤＮＡを合成し、ＰＣＲ用テンプレートとした。ＧＡＰＤＨを内部コントロールとして、ＰＣＲ後、アガロースゲル電気泳動し、Ｃｙｂｅｒ  Ｓａｆｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色後、ＵＶトランスイルミネーター上にて泳動像をデジタルカメラ（Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ｃ５０８０ＷＺ）で撮影し、各バンドの濃さをＩｍａｇｅ  Ｊ（デンシトメーター解析）を用いて測定した。角化細胞分化マーカーのＫＲＴ１５、Ｉｎｖｏｒｃｕｌｉｎ、アポトーシス抑制因子Ｂｃｌ−２、アポトーシス関連分子ＨＳＰＣＯ１６、ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ関連分子ＣｙｃｌｉｎＤ１及び増殖分化調節因子ＢＭＰ−２の発現量の変化を解析したところ、基底層及び毛母幹細胞マーカーであるＫＲＴ１５はＨＡＮＰ処理３０分では２０％程の一過性の発現増加が認められた。また、ＢＭＰ−２はＨＡＮＰ処理４時間後に、無処理に比べて１．５倍程の発現増加が認められた。ＣｙｃｌｉｎＤ１は３０分でコントロールに一過性の発現低下がみられたがその後回復するのに対してＨＡＮＰ処理では発現量が１／３まで低下した（図３）。角化細胞の増殖抑制、分化促進作用をもつＢＭＰ−２が増加し、細胞分裂促進に働くＣｙｃｌｉｎＤ１が減少することから、角化細胞の分化の促進に働いていることが考えられた。実施例７【００４９】ヒト正常角化細胞株ＨａＣａＴを２ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｄｉｓｈとなるように６ｗｅｌｌファルコンディッシュ（３０４６）に蒔き、３日後、ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ状態の細胞にピペットマンチップの先で直線上の傷を付け、ＰＢＳで２回洗浄後、ＨＡＮＰを１μＭ（ｉｎ  Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ  ｓｅｒｕｍ  ｆｒｅｅ）となるように添加し、２４時間後の細胞挙動を観察した（図４）。ＨＡＮＰ処理では、傷端の細胞群でｒｏｕｎｄｉｎｇ様のものが多く観察された。実施例８【００５０】ヒト正常角化細胞株ＨａＣａＴを５ｘ１０４ｃｅｌｌｓ／２０μｌ  ｄｒｏｐ及び２ｘ１０４ｃｅｌｌｓ／１０μｌｄｒｏｐとなるようにファルコンディッシュ上にスポットし、ＨＡＮＰ１μＭ存在下での細胞コロニー形成能を比較した。１０μｌのｄｒｏｐではコロニーの形成が見られないのに対して、ＨＡＮＰ処理では細胞同士が脚を延ばしコロニーを形成しているのが観察された（図５）。実施例９【００５１】ＨａＣａＴにおけるＮＰＰ−ＮＰＲシグナル分子を明らかにするため、レセプターＮＰＲ−１，２，３及びリガンドＮＰＰＡ，Ｂ，Ｃ遺伝子の発現をＲＴ−ＰＣＲにより解析したところ、ＮＰＲ２のみが検出された（図６）。
【産業上の利用可能性】本発明は従来は血管に作用すると考えられていた心房利尿ペプチド群が再生医療や禿げ、皮膚傷害を含む様々な組織の回復改善に有用であることを開示した。この利用により、医学生物学の分野で従来は実現されなかった手技、製剤の開発が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】ＡＮＰを塗布した領域ではレーザー手術後の手術創の回復が遥かに促進される。
【図２】ＨＡＮＰは、対照としたラット平滑筋細胞株Ａ１０において細胞増殖を抑制したのに対して、ＨａＣａＴにおいて３?１０％の細胞増殖作用が示した。
【図３】ＢＭＰ?２はＨＡＮＰ処理４時間後に、無処理に比べて１．５倍程の発現増加が認められた。ＣｙｃｌｉｎＤ１は３０分でコントロールに一過性の発現低下がみられたがその後回復するのに対してＨＡＮＰ処理では発現量が１／３まで低下した。
【図４】ＨＡＮＰ処理では、傷端の細胞群でｒｏｕｎｄｉｎｇ様のものが多く観察された。すなわちＨａＣａＴのｃｅｌｌ  ｍｏｔｉｌｉｔｙが上昇し、傷修復に優位に働いている。
【図５】ＨＡＮＰ処理では細胞同士が脚を延ばしコロニーを形成しているのが観察された。このことから、ストレスに対して保護作用と細胞背着および配列形成作用が働いたといえる。
【図６】ＮＰＲ２が主体で発現しており、ＮＰファミリー分子から?ＮＰＲ２パラクラインシグナルの優勢のもとに、分化の促進に働くと考えられる。
【その他】
【００５３】［要約］心房利尿ホルモンファミリー分子群は、組織器官の修復再生製剤および組織器官の修復再生方法において有用であり、かつ毛髪減少、脱毛、皮膚および皮下組織傷害に対して、従来の物質／手法では得られない改善効果を発揮する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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