(57)【要約】【課題】  効果が高く安全なアトピー性皮膚炎改善剤と、そのアトピー性皮膚炎改善剤を含有する動物及びヒト用食品を提供する。【解決手段】  酸性キシロオリゴ糖とハタケシメジ抽出物およびビオチンを含有するアトピー性皮膚炎改善剤。前記酸性キシロオリゴ糖が、「リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離して得たもの」である前記アトピー性皮膚炎改善剤。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
酸性キシロオリゴ糖とハタケシメジ抽出物およびビオチンを含有することを特徴とするアトピー性皮膚炎改善剤。
【請求項２】
前記酸性キシロオリゴ糖が、「リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離して得たもの」であることを特徴とする請求項１に記載のアトピー性皮膚炎改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、食品、機能性食品及び医薬品分野に於いて使用されるアトピー性皮膚炎改善剤にする。より詳細には、優れた生理活性を有し、しかも安全性の高いヒト及び動物用の内服用アトピー性皮膚炎改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、気管支喘息、花粉症及びアトピー性皮膚炎等のアレルギー性疾患の患者数が増加し、大きな問題となっている。特に、乳幼児の多くが発症するアトピー性皮膚炎は、第１次成長期の心身の発育に於いて深刻な影響を与える。このようなアトピー性皮膚炎は思春期には完治するが、完治に至らず成人型難治性アトピー性皮膚炎に悪化したり、或いは、成人後初めて発症したりするケ−スもあり、それらは何れも増加傾向にある。
一方、コンパニオンアニマルとしての位置付けにある犬や猫等のペットにおけるアトピー性皮膚炎も決して稀な症例ではなく、動物病院での顕著な増加症例となってきている。
【０００３】
アトピー性皮膚炎発症の原因としては、遺伝的素因に加えて、住環境や食生活の変化、大気汚染や水質汚染及び心理的ストレスの増加等が挙げられているが、決定的な要因が不明であり、予防や治療の為の十分な手立てはない。病態の研究も多くの研究機関でなされているが、未だに解明されてない点が多く、根本的な治療による完治は困難な状況にあり、現状では、対処療法による症状緩和が唯一の治療法となっている。
【０００４】
アトピー性皮膚炎の症状が重篤な場合は、症状の増悪阻止や一時的な治癒を目的として、ステロイド外用剤・非ステロイド系消炎外用剤等の使用、抗アレルギー剤・抗ヒスタミン剤・ステロイド剤等の内服、更には、減感作療法・アレルゲン除去食療法・スキンケア・生活環境の改善等、様々な試みがなされている。しかし、これらの治療によって一時的に異常のない皮膚状態まで改善させることはできても、短期間のうちに症状が再発することが多く、長期にわたる治療期間を必要とすることが多い。更に、長期間の投薬により治療費が嵩む、副作用が懸念される等の問題もある。例えば、抗ヒスタミン剤はある程度の止痒効果はあるものの持続性に欠け、服用後に倦怠感や眠気を生じるものがあり、日常生活に支障を来す場合がある。また、ステロイド剤は皮膚症状の改善に高い効果を示すものの、大量使用による副腎皮質機能不全などの強い副作用があり、使用にあたっては医師の管理による十分な注意が必要で、長期連用は困難とされている。
【０００５】
一方、アトピー性皮膚炎症状が軽度の場合や乳幼児に於いては、薬剤の副作用の問題を避ける為、患部の直接的症状改善を目的として、低濃度の抗炎症剤やステロイド剤等の外用剤が使用されるが、十分な効果は期待出来ない。すなわち、アトピー性皮膚炎初期患者や乳幼児に対しては、適当な内服用剤がないのが現状であり、これはアトピー性皮膚炎が増加傾向にある小動物に於いても同様である。特に、乳幼児やペット用小動物への外用剤の使用は、剤の付着した手や剤の塗布部を直接舐めることによる経口での体内取り込みの危険性及び薬剤の効果低下の問題がある。従って、アトピー性皮膚炎に対する改善効果があり、安全性に問題がなく、日常的且つ簡易に使用可能な内服用のアトピー性皮膚炎改善剤が求められている。
【０００６】
上記の条件に該当するようなアトピー性皮膚炎改善作用を有する天然物として、甜菜由来のオリゴ糖であるラフィノース（特許文献１参照）、ブドウ属植物及びイタドリ科植物からなる組成物（特許文献２参照）、おたね人参水抽出物と牡蠣殻を含有する組成物（特許文献３参照）等の内服用途での提案がなされている。
しかし、ラフィノースは耐酸性が低い為、経口接取に於ける十分な効果は期待できず、また、他の組成物は価格及び安定供給の問題もある。
【０００７】
キシロオリゴ糖には、コーンコブやバガスから酵素処理により製造されるものや、リグノセルロースから酵素処理及びＮＦ膜濃縮により製造されるものがあり、何れも整腸作用については既に開示されている（特許文献４〜５参照）が、その一種である酸性キシロオリゴ糖（非特許文献１参照）に関しては、内服及び外用におけるアトピー性皮膚炎改善剤（特許文献６〜７参照）、美白作用（特許文献８参照）及び抗脂血症改善作用（特許文献９参照）等の多くの生理作用が提案されている。
【０００８】
【特許文献１】特開平１１−２５５６５６号公報
【特許文献２】特開２００２−０４７１９３号公報
【特許文献３】特開２００２−１７３４３４号公報
【特許文献４】特許２６４３３６８号公報
【特許文献５】特開２０００−３３３６９２号公報
【特許文献６】特開２００４−２１０６６４号公報
【特許文献７】特開２００４−２１０６６６号公報
【特許文献８】特開２００３−２２１３０７号公報
【特許文献９】特開２００４−１８２６１５号公報
【特許文献１０】特開平６−３０５９６３号公報
【特許文献１１】特開２０００−３１９１７７号公報
【非特許文献１】セルラーゼ研究会報第  16巻  ｐ17-26  2001年
【非特許文献２】Journal of Bioscience and Bioengineering  Vol90 No1  p98-104  2000年
【非特許文献３】日本食品科学工学会誌  第48巻  第1号  p58-63  2001年
【非特許文献４】日本食品科学工学会誌  第48巻  第7号  p520-525  2001年
【非特許文献５】Biol.  Pharm.  Bull.  Vol25  No9  p1234-1237  2002年
【非特許文献６】小動物臨床  第21巻  第6号  p457-462  2002年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の課題は、安全性が高く、優れた効果をもつアトピー性皮膚炎改善剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは前記課題を解決する為、鋭意研究した結果、ウロン酸残基が付加した酸性キシロオリゴ糖に、ハタケシメジ抽出物とビオチンを併用することにより優れたアトピー性皮膚炎改善効果が得られ、また安全性も優れることより、本発明を完成するに至った。
【００１１】
本発明は以下の構成を採用する。
即ち、本発明の第１は、酸性キシロオリゴ糖とハタケシメジ抽出物およびビオチンを含有するアトピー性皮膚炎改善剤である。
【００１２】
本発明の第２は、本発明の第前記酸性キシロオリゴ糖が、「リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離して得たもの」である本発明の第１に記載のアトピー性皮膚炎改善剤である。
【発明の効果】
【００１３】
本発明により、安全性が高く、優れた効果をもつアトピー性皮膚炎改善剤が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明の構成について詳述する。
本発明のアトピー性皮膚炎改善剤は酸性キシロオリゴ糖を有効成分として含有する。
キシロオリゴ糖とは、キシロースの２量体であるキシロビオース、３量体であるキシロトリオース、あるいは４〜２０量体程度のキシロースの重合体を言う。本発明で使用する酸性キシロオリゴ糖とは、キシロオリゴ糖１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を有するものを言う。
ウロン酸は、天然では、ペクチン、ペクチン酸、アルギン酸、ヒアルロン酸、ヘパリン、コンドロイチン硫酸、デルタマン硫酸等の種々の生理活性を持つ多糖の構成成分として知られている。本発明におけるウロン酸としては特に限定されないが、グルクロン酸もしくは４−Ｏ−メチル−グルクロン酸が好ましい。
なお、酸性キシロオリゴ糖は、他のオリゴ糖やキシロオリゴ糖と比較して、長鎖であっても耐酸性、耐熱性及び水溶性が非常に高いという特徴がある。
【００１５】
なお、本発明で使用する酸性キシロオリゴ糖は、異なる重合度を有する複数の酸性キシロオリゴ糖の混合組成物を含むものとする。酸性キシロオリゴ糖は、一般的には天然物から製造するために、実際にはこのような混合組成物として得られることが多い。
以下、酸性キシロオリゴ糖混合組成物について説明する。
該組成物の平均重合度は、正規分布をとる酸性キシロオリゴ糖のキシロース鎖長の平均値で示され、２．０〜１５．０が好ましく、５．０〜１５．０がより好ましい。
また、キシロース鎖長の上限と下限との差は１５以下が好ましく、１０以下がより好ましい。
【００１６】
酸性キシロオリゴ糖の製造方法としては、（１）木材からキシランを抽出し、それを酵素的に分解する方法〔非特許文献２参照〕と、（２）リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで該複合体を酸加水分解処理してキシロオリゴ糖混合物を得、得られるキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離する方法が挙げられる。
本発明で使用する酸性キシロオリゴ糖の製造方法については、特に限定するものではないが、（２）の製造方法が、５〜１５量体のように比較的高い重合度のものを大量に安価に製造することが可能である点で好ましい。以下にその概要を示す。
【００１７】
酸性キシロオリゴ糖は、化学パルプ由来のリグノセルロース材料を原料とし、加水分解工程、濃縮工程、希酸処理工程、精製工程を経て得ることができる。加水分解工程では、希酸処理、高温高圧の水蒸気（蒸煮・爆砕）処理もしくは、ヘミセルラーゼによってリグノセルロース中のキシランを選択的に加水分解し、キシロオリゴ糖とリグニンからなる高分子量の複合体を中間体として得る。濃縮工程では逆浸透膜等により、キシロオリゴ糖−リグニン様物質複合体が濃縮され、低重合度のオリゴ糖や低分子の夾雑物などを除去することができる。濃縮工程は逆浸透膜を用いることが好ましいが、限外濾過膜、塩析、透析などでも可能である。得られた濃縮液の希酸処理工程により、複合体からリグニン様物質が遊離し、酸性キシロオリゴ糖と中性キシロオリゴ糖を含む希酸処理液を得ることができる。この時、複合体から切り離されたリグニン様物質は酸性下で縮合し沈殿するのでセラミックフィルターや濾紙などを用いたろ過等により除去することができる。希酸処理工程では、酸による加水分解を用いることが好ましいが、リグニン分解酵素などを用いた酵素分解などでも可能である。
【００１８】
精製工程は、限外濾過工程、脱色工程、吸着工程からなる。一部のリグニン様物質は可溶性高分子として溶液中に残存するが、限外濾過工程で除去され、着色物質等の夾雑物は活性炭を用いた脱色工程によってそのほとんどが取り除かれる。限外濾過工程は限外濾過膜を用いることが好ましいが、逆浸透膜、塩析、透析などでも可能である。こうして得られた糖液中には酸性キシロオリゴ糖と中性キシロオリゴ糖が溶解している。イオン交換樹脂を用いた吸着工程により、この糖液から酸性キシロオリゴ糖のみを取り出すことができる。糖液をまず強陽イオン交換樹脂にて処理し、糖液中の金属イオンを除去する。ついで強陰イオン交換樹脂を用いて糖液中の硫酸イオンなどを除去する。この工程では、硫酸イオンの除去と同時に弱酸である有機酸の一部と着色成分の除去も同時に行っている。強陰イオン交換樹脂で処理された糖液はもう一度強陽イオン交換樹脂で処理し更に金属イオンを除去する。最後に弱陰イオン交換樹脂で処理し、酸性キシロオリゴ糖を樹脂に吸着させる。
【００１９】
樹脂に吸着した酸性オリゴ糖を、低濃度の塩（ＮａＣｌ、ＣａＣｌ２、ＫＣｌ、ＭｇＣｌ２など）によって溶出させることにより、夾雑物を含まない酸性キシロオリゴ糖溶液を得ることができる。この溶液から、スプレードライや凍結乾燥処理等により、酸性キシロオリゴ糖の白色粉末を得ることができる。
【００２０】
化学パルプ由来のリグノセルロースを原料とし、キシロオリゴ糖とリグニンからなる高分子量の複合体を中間体とした酸性キシロオリゴ糖の上記製造法のメリットは、経済性と、キシロースの平均重合度の高い酸性キシロオリゴ糖が容易に得られる点にある。平均重合度は、例えば、希酸処理条件を調節するか、再度ヘミセルラーゼで処理することによって変えることが可能である。また、弱陰イオン交換樹脂溶出時に用いる溶出液の塩濃度を変化させることによって、１分子あたりに結合するウロン酸残基の数が異なる酸性キシロオリゴ糖を得ることもできる。さらに、適当なキシラナーゼ、ヘミセルラーゼを作用させることによってウロン酸結合部位が末端に限定された酸性キシロオリゴ糖を得ることも可能である。
【００２１】
以下、本発明において使用するハタケシメジ抽出物について説明する。
ハタケシメジ（Lyophyllum decastes Sing.）とは、ホンシメジと同じキシメジ科シメジ属に属する食用キノコである。自然界では、秋に林内や畑地において株状に生え、４〜９ｃｍの褐色から灰褐色のまんじゅう形の傘をつける。近年、人工栽培技術の確立により、食用きのことして販売されている。
【００２２】
このハタケシメジから抽出したハタケシメジ抽出物は、様々な生理的作用効果を有する。その一つとして抗腫瘍作用（非特許文献２参照）が挙げられ、シイタケと同等以上の抗腫瘍活性が知られている。その活性本体はβ−１，６分岐を持つβ−１，３グルカンならびにβ−１，３分岐を持つ酸性β−１，６グルカンであることが明らかになっている。
その他の生理的作用効果としては、アンジオテンシンＩ変換酵素阻害作用（非特許文献３参照）、コレステロール低下作用（非特許文献４参照）、血糖値低下作用（非特許文献５参照）等が開示されている。また、イヌ・ネコに対する皮膚脂漏症改善作用（非特許文献６参照）も報告されている。
【００２３】
前記ハタケシメジ抽出物の製法は、得られる抽出物が前記β−グルカンを含有すればよく、特に限定されない。例えば、前記ハタケシメジの子実体または培養菌糸を原料として、熱水で抽出した抽出物を濃縮して得ることが出来る。
具体的には、ハタケシメジ子実体にイオン交換水を加え、一昼夜加熱抽出、固液分離、抽出液の濃縮後、スプレードライすることで、粉末状のハタケシメジ抽出物を得ることが出来る(特開２００３−３４６４７号公報参照）。
【００２４】
以下、本発明で使用するビオチンについて説明する。
ビオチンとは、ビタミンＨとして知られる補酵素の１種であり、生体内の４種のカルボキシラーゼの必須の補酵素として作用していることが知られている。
ビオチンは２００３年より食品添加物に指定され、保健機能食品に限り、食品への使用が認められた。栄養機能食品の規格基準では、１０〜５００μｇの範囲の添加で、「ビオチンは皮膚や粘膜の健康維持を助ける栄養素です」と表示することが認められている。
また、このビオチンを有効成分とする疲労改善剤やストレス改善剤が開示されている（特許文献１０〜１１参照）。
本発明者らは、このビオチンと前述した酸性キシロオリゴ糖とハタケシメジ抽出物とを併用することによって、優れたアトピー性皮膚炎改善剤が得られるという知見を得ることによって、本発明を完成させたものである。
【００２５】
前記ビオチンは、一般的に粉末形態や液状等の形態で市販されており、任意の形態のものが使用可能である。ＤＳＭニュートリションジャパン、田辺製薬などで、含有量１〜１００％のものが市販されており、それらを目的に応じて任意に選択して使用可能である。
【００２６】
例えば、以上述べた酸性キシロオリゴ糖粉末、ハタケシメジ抽出物粉末、ビオチン粉末を、適当な比率で混合して得られた混合粉末を本発明の内服用アトピー性皮膚炎改善剤として使用することが出来る。
ハタケシメジ抽出物粉末、酸性キシロオリゴ糖粉末、ビオチン粉末の混合比率は１００：１００：１〜１００００：１００００：１が好ましく、２０００：２０００：１がより好ましい。
また、酸性キシロオリゴ糖の精製後の水溶液にハタケシメジ抽出物とビオチンを添加したものを使用することができる。
いずれにしても、酸性キシロオリゴ糖、ハタケシメジ抽出物、ビオチンの三成分を含有するものであれば、その形態や混合方法を問わず、本発明のアトピー性皮膚炎改善剤として使用することができる。
【００２７】
本発明のアトピー性皮膚炎改善剤は、粉末状、顆粒状、液状等の任意の形態とすることができ、また、粉末を打錠して錠剤としてもよい。さらに水溶性カプセル等に封入してカプセル状としてもよい。このような形としたアトピー性皮膚炎改善剤を直接摂取することができる。
また、上記のアトピー性皮膚炎改善剤を、各種飲料や食品に添加して摂取することも出来る。
【００２８】
本発明における酸性キシロオリゴ糖、ハタケシメジ抽出物およびビオチンを配合したアトピー性皮膚炎改善剤は、他の食品、経腸栄養剤、他の栄養成分、或いは医薬品と混合して医療用食品として使用することが出来る。また、一般的に医薬部外品や医薬品に使用される成分と混合し、医薬部外品や医薬品としても提供することも出来る。
なお、上述の食品、医療用食品及び医薬品の対象としては、ヒトだけではなく、犬や猫などのペット用の食品や機能性食品としても用いることが可能である。
【実施例】
【００２９】
以下、本発明を実施例により詳細に説明する。
【００３０】
以下、本発明のアトピー性皮膚炎改善剤の製造方法の一例を示す。
（１）酸性キシロオリゴ糖の調製
混合広葉樹チップ（国内産広葉樹70％、ユーカリ30％）を原料として、クラフト蒸解及び酸素脱リグニン工程により、酸素脱リグニンパルプスラリー（カッパー価９．６、パルプ粘度２５．1ｃｐｓ）を得た。スラリーからパルプを濾別、洗浄した後、パルプ濃度１０％、ｐＨ８に調製したパルプスラリーを用いて、以下のキシラナーゼによる酵素処理を行った。
バチルスｓｐ．Ｓ−２１１３株（独立行政法人産業技術総合研究所特許微生物寄託センター、寄託菌株ＦＥＲＭ  ＢＰ−５２６４）の生産するキシラナーゼを１単位／パルプｇとなるように添加した後、６０℃で１２０分間処理した。その後、濾過によりパルプ残渣を除去し、酵素処理液１０５０Ｌを得た。
次に、得られた酵素処理液を濃縮工程、希酸処理工程、精製工程の順に供した。濃縮工程では、逆浸透膜（日東電工（株）製、ＲＯ  ＮＴＲ−７４１０）を用いて濃縮液（４０倍濃縮）を調製した。希酸処理工程では、得られた濃縮液のｐＨを３．５に調製した後、１２１℃で６０分間加熱処理し、リグニン等の高分子夾雑物の沈殿を形成させた。さらに、この沈殿をセラミックフィルター濾過で取り除くことにより、希酸処理溶液を得た。
精製工程では、限外濾過・脱色工程、吸着工程の順に供した。限外濾過・脱色工程では、希酸処理溶液を限外濾過膜（オスモニクス社製、分画分子量８０００）に通過させた後、活性炭（和光純薬（株）製）７７０ｇの添加及びセラミックフィルター濾過により脱色処理液を得た。吸着工程では、脱色処理液を強陽イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＰＫ218）、強陰イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＰＡ４０８）、強陽イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＰＫ２１８）各１００ｋｇを充填したカラムに順次通過させた後、弱陰イオン交換樹脂（三菱化学（株）製ＷＡ３０）１００ｋｇを充填したカラムに供した。この弱陰イオン交換樹脂充填カラムから７５ｍＭ  ＮａＣｌ溶液によって溶出した溶液をスプレードライ処理することによって、酸性キシロオリゴ糖の粉末（全糖量３５３ｇ、回収率１３．１％）を得た。
なお、上記で得た酸性キシロオリゴ糖は、ＵＸ１０は平均重合度１０．３、キシロース鎖長の上限と下限との差は２０、酸性キシロオリゴ糖１分子あたりウロン酸残基を１．２個含むものであった。測定方法は以下の通りである。
【００３１】
＜酸性キシロオリゴ糖の測定法＞
１：全糖量の定量
全糖量は検量線をＤ−キシロース（和光純薬工業（株）製）を用いて作製し、フェノール硫酸法（還元糖の定量法、学会出版センター発行）にて定量した。
【００３２】
２：還元糖量の定量
還元糖量は検量線をＤ−キシロース（和光純薬工業（株）製）を用いて作製、ソモジ−ネルソン法（還元糖の定量法、学会出版センター発行）にて定量した。
【００３３】
３：ウロン酸量の定量
ウロン酸は検量線をＤ−グルクロン酸（和光純薬工業（株）製）を用いて作製、カルバゾール硫酸法（還元糖の定量法、学会出版センター発行）にて定量した。
【００３４】
４：平均重合度の決定法
サンプル糖液を５０℃に保ち１５０００ｒｐｍにて１５分遠心分離し不溶物を除去し上清液の全糖量を還元糖量（共にキシロース換算）で割って平均重合度を求めた。
【００３５】
５：酸性キシロオリゴ糖の分析方法
オリゴ糖鎖の分布はイオンクロマトグラフ（ダイオネクス社製、分析用カラム：Ｃａｒｂｏ  Ｐａｃ  ＰＡ−１０）を用いて分析した。分離溶媒には１００ｍＭ  ＮａＯＨ溶液を用い、溶出溶媒には前述の分離溶媒に酢酸ナトリウムを５００ｍＭとなるように添加し、溶液比で、分離溶媒：溶出溶媒＝１０：０〜４：6となるような直線勾配を組み分離した。得られたクロマトグラムより、キシロース鎖長の上限と下限との差を求めた。
【００３６】
６：オリゴ糖１分子あたりのウロン酸残基数の決定法
サンプル糖液を５０℃に保ち１５０００ｒｐｍにて１５分遠心分離し不溶物を除去し上清液のウロン酸量（Ｄ−グルクロン酸換算）を還元糖量（キシロース換算）で割ってオリゴ糖１分子あたりのウロン酸残基数を求めた。
【００３７】
７：酵素力価の定義
酵素として用いたキシラナーゼの活性測定にはカバキシラン（シグマ社製）を用いた。酵素力価の定義はキシラナーゼがキシランを分解することで得られる還元糖の還元力をＤＮＳ法（還元糖の定量法、学会出版センター発行）を用いて測定し、１分間に1マイクロモルのキシロースに相当する還元力を生成させる酵素量を１ユニットとした。
【００３８】
（２）酸性キシロオリゴ糖溶液の調製
上記（１）で得た酸性キシロオリゴ糖を１５ｍｇ/ｍｌの割合で蒸留水に溶解し、酸性キシロオリゴ糖溶液を調製した。
【００３９】
（３）ハタケシメジ抽出物溶液の調製
乾燥させたハタケシメジ子実体約５０ｋｇに、５ｋＬのイオン交換水を加えて、一昼夜加熱抽出後、固液分離、抽出液を濃縮した。得られた濃縮液に３３質量％のデキストリンを添加し、スプレードライヤーで粉末化し、２０ｋｇの粉末状ハタケシメジ抽出物を得た。
このハタケシメジ抽出物を、１５ｍｇ/ｍｌの割合で蒸留水に溶解した。
【００４０】
（４）ビオチン溶液の調製
市販の１％ビオチン粉末（ＤＳＭニュートリションジャパン製）を７．５ｍｇ/ｍｌの割合で蒸留水に溶解した。
【００４１】
前述の（１）〜（３）で得られた酸性キシロオリゴ糖溶液、ハタケシメジ抽出物溶液、ビオチン溶液を使用し、動物実験により、本発明のアトピー性皮膚炎改善用食品の評価を行なった。その方法を以下に示す。
【００４２】
＜動物実験＞
１）日本チャールズリバー社より購入したＮＣ／Ｎｇａマウス（雄、５週齢、ＳＰＦグレード）を購入し、１週間予備飼育した。餌と水は自由摂取とし、餌はＭＦ固形飼料（オリエンタル酵母工業（株）製）、水は水道水を与えた。
なお、飼育時の餌と水については予備飼育期間から試験終了までの全飼育期間で、同一の条件とした。
２）予備飼育後、マウスの腹部を毛刈りし、５％濃度となるようにアセトン／エタノール溶液（１：４）に溶解した２，４，６−トリニトロクロロベンゼン（以下ＰｉＣｌ）を塗布した（試験開始第１日目とする）。
試験開始日から第１週間目〜試験終了日まで１週間ごとに、マウスの背部を毛刈りし、０．８％濃度となるようにオリーブ油に溶解した０．８％ＰｉＣｌ溶液を塗布し、アトピー性皮膚炎症状を誘発させた。
試験開始第６週目に、マウス背皮の皮膚炎のスコアを文献（日薬理誌ｖｏｌ．１２４，２７１，２００４）に記載されている方法で５項目（（1）掻痒症、(2)発赤・出血の症状、(3)耳介の浮腫、(4)擦傷・組織欠損の症状、(5)痂皮形成・乾燥の症状）について４段階で測定し、合計のスコアを算出した。又、マウスの尾静脈より採血し血清中のＩｇＥ濃度を測定した。
上記の皮膚炎スコアとＩｇＥ濃度について、各試験区間で値が均一になるようにマウスを５群（ｎ＝７）に群分けした。
３）上記で分けた各群マウスに、以下に示す１〜５の被検物質（数値は体重当りの投与量を示す）を１日１回、試験終了日まで毎日、胃ゾンデを用いて経口投与した。
各群のマウスについて、被検物質を投与開始から１週間毎に皮膚炎スコアを測定した。
また、投与開始日から２週間毎に血清ＩｇＥ濃度を測定した。
このようにして各群マウスを６週間飼育し、試験を終了した。
測定した各群の皮膚炎スコアを表１に、血清中のＩｇＥ濃度を表２に示す。
尚、群間の有意差検定は、Kruskal  Wallisの多重比較検定法を用いた。
＜被検物質＞
１：蒸留水（対照）
２：ハタケシメジ抽出物溶液（100mg/kg）
３：ビオチン溶液（500μｇ/kg）
４：ハタケシメジ抽出物溶液（100mg/kg）＋ビオチン溶液（500μg/kg）
５：ハタケシメジ抽出物溶液（100mg/kg）＋ビオチン溶液（500μg/kg）＋酸性キシロオリゴ糖溶液（100mg/kg）
【００４３】
【表１】
2008303192.tif 000002
【００４４】
【表２】
2008303192.tif 000003
【００４５】
＜実験結果＞
表１及び表２により、ハタケシメジ抽出物単独投与群、ビオチン単独投与群は、対照群と比較すると、皮膚炎スコアの低下（皮膚炎の改善）、及び血清中のＩｇＥ濃度の低下が認められた。
また、ハタケシメジ抽出物、酸性キシロオリゴ糖、ビオチンの３成分併用投与群においては、各単独投与群と比較して、さらに皮膚炎スコアの低下（皮膚炎の改善）、及び血清ＩｇＥ濃度の低下（投与後２週目、６週目：対照と比較し有意差ありP<0.05）が認められた。