(57)【要約】      （修正有）【課題】検体と試薬との反応を微量な検体および微量な試薬で段階的に（多段階で）自動で行え、結果的に検体や試薬にかかる費用を効果的に削減することができると共に、当該反応を繰り返し行う場合における実験者の作業負担を軽減することができる検体反応方法を提供する。【解決手段】親水性領域と撥水性領域とをその表面に設けた基板を用いて、検体と試薬との反応を行う方法。具体的には、検体と試薬とを親水性領域で混合し、混合した検体および試薬からなる検体溶液をシーリングオイルで覆い、検体溶液を所定の温度条件の下で反応させ、親水性領域から反応産物を取り除き、取り除いた反応産物と試薬とを他の親水性領域で混合し、混合した反応産物および試薬からなる反応溶液をシーリングオイルで覆い、反応溶液を所定の温度条件の下で反応させる。【選択図】図５
2008161142.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
検体と水溶性反応液とを混合する検体混合工程と、前記検体混合工程で混合した前記検体および前記水溶性反応液からなる検体溶液を、蒸散を防ぎつつ所定の温度条件の下で反応させる検体溶液反応工程とを実行する検体反応方法において、
親水性の領域である少なくとも１つの親水性領域が表面に設けられている基板を少なくとも１つ用い、
前記検体混合工程では、前記検体と前記水溶性反応液とを前記親水性領域で混合し、
前記検体溶液反応工程では、前記検体溶液を非水溶性液で覆い、前記所定の温度条件の下で反応させ、
前記検体溶液反応工程を実行した後に、
前記親水性領域から、前記反応に因る産物である反応産物を取り除く反応産物除去工程と、
前記反応産物除去工程で取り除いた前記反応産物のうち所定量の前記反応産物と前記検体混合工程で混合した前記水溶性反応液と同じまたは異なる水溶性反応液とを、前記基板に設けられた他の前記親水性領域または他の前記基板に設けられた前記親水性領域で混合する反応産物混合工程と、
前記反応産物混合工程で混合した前記反応産物および前記水溶性反応液からなる反応溶液を前記非水溶性液で覆い、前記所定の温度条件の下で反応させる反応溶液反応工程と、
を１回以上繰り返し実行すること
を特徴とする検体反応方法。
【請求項２】
前記所定量は、前記親水性領域で保持する液の総量の１〜１０％であること
を特徴とする請求項１に記載の検体反応方法。
【請求項３】
検体と水溶性反応液とを混合する検体混合工程と、前記検体混合工程で混合した前記検体および前記水溶性反応液からなる検体溶液を、蒸散を防ぎつつ所定の温度条件の下で反応させる検体溶液反応工程とを実行する検体反応方法において、
親水性の領域である親水性領域が表面に設けられている基板を用い、
前記検体混合工程では、前記検体と前記水溶性反応液とを前記親水性領域で混合し、
前記検体溶液反応工程では、前記検体溶液を非水溶性液で覆い、前記所定の温度条件の下で反応させ、
前記検体溶液反応工程を実行した後に、
前記親水性領域に、前記反応に因る産物である反応産物を所定量残す反応産物残留工程と、
前記反応産物残留工程で残した前記所定量の前記反応産物と前記検体混合工程で混合した前記水溶性反応液と同じまたは異なる水溶性反応液とを前記親水性領域で混合する反応産物混合工程と、
前記反応産物混合工程で混合した前記反応産物および前記水溶性反応液からなる反応溶液を前記非水溶性液で覆い、前記所定の温度条件の下で反応させる反応溶液反応工程と、
を１回以上繰り返し実行すること
を特徴とする検体反応方法。
【請求項４】
前記親水性領域は、くぼんだ領域である凹領域を設けていること
を特徴とする請求項３に記載の検体反応方法。
【請求項５】
前記親水性領域は、親水性の物体を設けていること
を特徴とする請求項３に記載の検体反応方法。
【請求項６】
前記所定量は、前記親水性領域で保持する液の総量の１〜１０％であること
を特徴とする請求項３から５のいずれか１つに記載の検体反応方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、検体および試薬を用いて、ＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ）や等温増幅反応やライゲーション等のような検体と試薬との反応を行う検体反応方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、バイオテクノロジーの分野では、ＰＣＲが広く利用されている。ＰＣＲは、目的とするＤＮＡ領域を挟んでプライマーを結合し、ＤＮＡポリメラーゼ反応でＤＮＡ合成反応を繰り返すことによって、目的のＤＮＡ（鋳型ＤＮＡ）断片を数十万倍にも増幅することができる方法である。
【０００３】
ここで、ＰＣＲの他、等温増幅反応やライゲーション等のような検体と試薬との反応を行う実験において、当該実験に用いる検体や試薬にかかる費用は決して安価ではないので、コストの削減が求められている。具体的には、一般的なＰＣＲ専用のチューブを反応容器として用いた場合（特許文献１参照）、反応液の量は約３０μｌ（マイクロリットル）必要であるので、検体や試薬にかかる費用の削減が求められている。
【０００４】
そのため、ＰＣＲや等温増幅反応やライゲーション等のような検体と試薬との反応を、微量の検体および微量の試薬で段階的に行うための技術が求められている。ここで、微量な検体を保持したり混合したりする等の操作を行うことができる試料ハンドリングツールに関する技術が特許文献２に開示されている。特許文献２によれば、疎水性の面上に微小な親水性領域を配置することが提案されている。
【０００５】
しかし、例えば、微量の検体および微量の試薬でＰＣＲを行うと、一回のＰＣＲでは増幅量が不足する場合が想定される。
【０００６】
そこで、一回のＰＣＲで増幅量が不足した場合は、ＰＣＲを複数回繰り返し行うことが考えられる。
【０００７】
【特許文献１】特開平５−２４４９５０号公報
【特許文献２】特開平１１−３０４６６６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、上述したＰＣＲ専用のチューブには内容物の蒸発を防止するための蓋が設けられているので、当該チューブでＰＣＲを繰り返し行う（段階的に行う）場合には、それに蓋が設けられているが故に、次のＰＣＲを行う際に実験者に作業負担を強いてしまうという問題点やＰＣＲの自動化を困難にしてしまうという問題点があった。
【０００９】
本発明は、上記問題点に鑑みてなされたものであって、ＰＣＲや等温増幅やライゲーション等のような検体と試薬との反応を微量な検体および微量な試薬で段階的に（多段階で）自動で行え、結果的に検体や試薬にかかる費用を効果的に削減することができると共に、当該反応を繰り返し行う（段階的に行う）場合における実験者の作業負担を軽減することができる検体反応方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上述した課題を解決し、目的を達成するために、本発明にかかる請求項１に記載の検体反応方法は、検体と水溶性反応液とを混合する検体混合工程と、前記検体混合工程で混合した前記検体および前記水溶性反応液からなる検体溶液を、蒸散を防ぎつつ所定の温度条件の下で反応させる検体溶液反応工程とを実行する検体反応方法において、親水性の領域である少なくとも１つの親水性領域が表面に設けられている基板を少なくとも１つ用い、前記検体混合工程では、前記検体と前記水溶性反応液とを前記親水性領域で混合し、前記検体溶液反応工程では、前記検体溶液を非水溶性液で覆い、前記所定の温度条件の下で反応させ、前記検体溶液反応工程を実行した後に、前記親水性領域から、前記反応に因る産物である反応産物を取り除く反応産物除去工程と、前記反応産物除去工程で取り除いた前記反応産物のうち所定量の前記反応産物と前記検体混合工程で混合した前記水溶性反応液と同じまたは異なる水溶性反応液とを、前記基板に設けられた他の前記親水性領域または他の前記基板に設けられた前記親水性領域で混合する反応産物混合工程と、前記反応産物混合工程で混合した前記反応産物および前記水溶性反応液からなる反応溶液を前記非水溶性液で覆い、前記所定の温度条件の下で反応させる反応溶液反応工程と、を１回以上繰り返し実行することを特徴とする。
【００１１】
また、本発明にかかる請求項２に記載の検体反応方法は、請求項１に記載の検体反応方法において、前記所定量は、前記親水性領域で保持する液の総量の１〜１０％であることを特徴とする。
【００１２】
また、本発明にかかる請求項３に記載の検体反応方法は、検体と水溶性反応液とを混合する検体混合工程と、前記検体混合工程で混合した前記検体および前記水溶性反応液からなる検体溶液を、蒸散を防ぎつつ所定の温度条件の下で反応させる検体溶液反応工程とを実行する検体反応方法において、親水性の領域である親水性領域が表面に設けられている基板を用い、前記検体混合工程では、前記検体と前記水溶性反応液とを前記親水性領域で混合し、前記検体溶液反応工程では、前記検体溶液を非水溶性液で覆い、前記所定の温度条件の下で反応させ、前記検体溶液反応工程を実行した後に、前記親水性領域に、前記反応に因る産物である反応産物を所定量残す反応産物残留工程と、前記反応産物残留工程で残した前記所定量の前記反応産物と前記検体混合工程で混合した前記水溶性反応液と同じまたは異なる水溶性反応液とを前記親水性領域で混合する反応産物混合工程と、前記反応産物混合工程で混合した前記反応産物および前記水溶性反応液からなる反応溶液を前記非水溶性液で覆い、前記所定の温度条件の下で反応させる反応溶液反応工程と、を１回以上繰り返し実行することを特徴とする。
【００１３】
また、本発明にかかる請求項４に記載の検体反応方法は、請求項３に記載の検体反応方法において、前記親水性領域は、くぼんだ領域である凹領域を設けていることを特徴とする。
【００１４】
また、本発明にかかる請求項５に記載の検体反応方法は、請求項３に記載の検体反応方法において、前記親水性領域は、親水性の物体を設けていることを特徴とする。
【００１５】
また、本発明にかかる請求項６に記載の検体反応方法は、請求項３から５のいずれか１つに記載の検体反応方法において、前記所定量は、前記親水性領域で保持する液の総量の１〜１０％であることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、親水性の領域である少なくとも１つの親水性領域が表面に設けられている基板を少なくとも１つ用いて、検体と水溶性反応液との反応を行う。具体的には、本発明によれば、（Ａ１）検体と水溶性反応液とを親水性領域で混合し、（Ｂ１）混合した検体および水溶性反応液からなる検体溶液を非水溶性液で覆い、所定の温度条件の下で反応させ、（Ｃ１）親水性領域から、反応に因る産物である反応産物を取り除き、（Ｄ１）取り除いた反応産物のうち所定量の反応産物と（Ａ１）で混合した水溶性反応液と同じまたは異なる水溶性反応液とを、基板に設けられた他の親水性領域または他の基板に設けられた親水性領域で混合し、（Ｅ１）混合した反応産物および水溶性反応液からなる反応溶液を非水溶性液で覆い、所定の温度条件の下で反応させる。そして、本発明によれば、（Ｃ１）、（Ｄ１）および（Ｅ１）を１回以上繰り返し実行する。これにより、ＰＣＲや等温増幅反応やライゲーション等のような検体と試薬との反応を微量な検体および微量な試薬で段階的に自動で行え、結果的に検体や試薬にかかる費用を効果的に削減することができると共に、当該反応を繰り返し行う（段階的に行う）場合における実験者の作業負担を軽減することができるという効果を奏する。
【００１７】
また、本発明によれば、親水性の領域である親水性領域が表面に設けられている基板を用いて、検体と水溶性反応液との反応を行う。具体的には、本発明によれば、（Ａ２）検体と水溶性反応液とを親水性領域で混合し、（Ｂ２）混合した検体および水溶性反応液からなる検体溶液を非水溶性液で覆い、所定の温度条件の下で反応させ、（Ｃ２）親水性領域に、反応に因る産物である反応産物を所定量残し、（Ｄ２）残した所定量の反応産物と（Ａ２）で混合した水溶性反応液と同じまたは異なる水溶性反応液とを親水性領域で混合し、（Ｅ２）混合した反応産物および水溶性反応液からなる反応溶液を非水溶性液で覆い、所定の温度条件の下で反応させる。そして、本発明によれば、（Ｃ２）、（Ｄ２）および（Ｅ２）を１回以上繰り返し実行する。これにより、ＰＣＲや等温増幅反応やライゲーション等のような検体と試薬との反応を微量な検体および微量な試薬で段階的に自動で行え、結果的に検体や試薬にかかる費用を効果的に削減することができると共に、当該反応を繰り返し行う（段階的に行う）場合における実験者の作業負担を軽減することができるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
以下に、本発明にかかる検体反応方法の実施の形態を、図面に基づいて詳細に説明する。なお、本実施の形態により本発明が限定されるものではない。
【００１９】
〔１．システム構成〕
まず、本実施の形態にかかる検体反応方法を実施するための装置群である検体反応システム１００の構成について、図１を参照して説明する。図１は、本実施の形態にかかる検体反応システム１００の構成の一例を示す図である。図１に示すように、検体反応システム１００は、基板１０２と、マイクロタイタープレート１０４と、分注装置１０６と、サーマルサイクラー１０８と、吐出装置１１０と、吐出ヘッド洗浄装置１１２と、制御装置１１４と、で構成されている。
【００２０】
基板１０２は、具体的には、例えばスライドガラスであり、検体を含む水溶性反応液や非水溶性液などの液体を保持するために、その表面に、親水性の領域である親水性領域１０２ａを少なくとも１つ設けている。
【００２１】
ここで、検体は、例えば核酸を含むものである。また、水溶性反応液は、例えばＰＣＲ試薬や等温増幅反応試薬などである。なお、ＰＣＲ試薬としては、ＡＢＩ社製の「Ａｍｐｌｉ  Ｔａｑ  Ｇｏｌｄ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ」などがあり、等温増幅反応試薬としては、栄研化学社製の「Ｌｏｏｐａｍｐ  ＤＮＡ増幅試薬キット  マスターミックス」などがある。また、非水溶性液は、例えばミネラルオイルやシリコンオイルなどのシーリングオイルである。なお、ミネラルオイルとしてはシグマアルドリッチ社製のミネラルオイル「Ｍ５９０４」などがあり、シリコンオイルとしてはインビトロジェン社製のＰＣＲ用シリコンオイル「１０８９０−０１０」などがある。
【００２２】
図１の説明に戻り、本実施の形態にかかる基板１０２の一例について、図２、図３および図４を参照して説明する。図２、図３および図４は、本実施の形態にかかる基板１０２の一例を示す図である。
【００２３】
まず、図２に示す基板１０２は、その面が全体的に撥水性を有し、その面上に部分的に複数の親水性領域１０２ａを設けている。基板１０２の表面には、１６個の親水性領域１０２ａが２行８列で等間隔に配列している。親水性領域１０２ａの形状は、直径１．６ｍｍ（ミリメートル）の円形である。
【００２４】
ここで、図２に示す基板１０２の作製方法の一例を説明する。まず、市販の顕微鏡用スライドガラス（例えば松浪硝子工業社製の顕微鏡用スライドガラスなど）を５％ウシ血清アルブミン水溶液に浸漬し、浸漬した当該スライドガラスを乾燥することで、当該スライドガラスの表面を全体的に親水化する。つぎに、親水化したスライドガラスの表面に、親水性領域１０２ａに対応する円形の穴が１６個設けられているポリフルオロカーボン（テフロン（登録商標））をスクリーン印刷することで、当該１６個の円形の部分を除いて当該スライドガラスの表面を撥水化する。これにより、スライドガラス表面は全体的に撥水性を有し、その表面に１６個の円形の親水性領域１０２ａが形成される。
【００２５】
つぎに、図３に示す基板１０２は、その面が全体的に撥水性を有し、その面上に部分的に複数の親水性領域１０２ａを設けている。基板１０２の表面には、１６個の親水性領域１０２ａが２行８列で等間隔に配列している。親水性領域１０２ａの形状は、直径１．６ｍｍの円形である。親水性領域１０２ａは、本発明にかかる凹領域（くぼんだ領域）に相当する液体保持溝１０２ａ１を、図示の如く十文字に設けている。液体保持溝１０２ａ１は、液体を保持するための溝である。
【００２６】
ここで、図３に示す基板１０２の作製方法の一例を説明する。まず、市販の顕微鏡用スライドガラス（例えば松浪硝子工業社製の顕微鏡用スライドガラスなど）にダイヤモンドカッターで、図３に示すように十文字の切り込みを１６個入れ、１６個の液体保持溝１０２ａ１を設ける。つぎに、液体保持溝１０２ａ１を設けたスライドガラスを５％ウシ血清アルブミン水溶液に浸漬し、浸漬した当該スライドガラスを乾燥することで、当該スライドガラスの表面を全体的に親水化する。つぎに、親水化したスライドガラスの表面に、親水性領域１０２ａに対応する円形の穴が１６個設けられているポリフルオロカーボン（テフロン（登録商標））をスクリーン印刷することで、当該１６個の円形の部分を除いて当該スライドガラスの表面を撥水化する。これにより、スライドガラス表面は全体的に撥水性を有し、その表面に、十文字の液体保持溝１０２ａ１が設けられた１６個の円形の親水性領域１０２ａが形成される。なお、図３においては液体保持溝１０２ａ１を視覚的に識別し易くするために液体保持溝１０２ａ１には模様を付してないが、実際には液体保持溝１０２ａ１も親水性領域１０２ａと同様に親水化されている。
【００２７】
つぎに、図４に示す基板１０２は、その面が全体的に撥水性を有し、その面上に部分的に複数の親水性領域１０２ａを設けている。基板１０２の表面には、１６個の親水性領域１０２ａが２行８列で等間隔に配列している。親水性領域１０２ａの形状は、直径１．６ｍｍの円形である。親水性領域１０２ａは、本発明にかかる親水性の物体に相当する親水性ビーズ１０２ａ２を１つ以上（図４では２つ）設けている。親水性ビーズ１０２ａ２は、親水性のビーズであり、液体を保持するためのものである。
【００２８】
ここで、図４に示す基板１０２の作製方法の一例を説明する。まず、市販の顕微鏡用スライドガラス（例えば松浪硝子工業社製の顕微鏡用スライドガラスなど）を５％ウシ血清アルブミン水溶液に浸漬し、浸漬した当該スライドガラスを乾燥することで、当該スライドガラスの表面を全体的に親水化する。つぎに、親水化したスライドガラスの表面に、親水性領域１０２ａに対応する円形の穴が１６個設けられているポリフルオロカーボン（テフロン（登録商標））をスクリーン印刷することで、当該１６個の円形の部分を除いて当該スライドガラスの表面を撥水化する。つぎに、スライドガラスにおける親水性領域１０２ａとしての１６個の円形の部分にそれぞれ、親水性の中空粒子（親水性ビーズ１０２ａ２）を１つ以上（図４では２つ）配置する。これにより、スライドガラス表面は全体的に撥水性を有し、その表面に、親水性ビーズ１０２ａ２が１つ以上配置された１６個の円形の親水性領域１０２ａが形成される。なお、当該中空粒子の径は、後述する吐出装置１１０が備える吐出ヘッド１１０ａの径より大きい。
【００２９】
なお、本発明にかかる基板は、図２から図４に示す基板１０２に限定されない。例えば、基板１０２はスライドガラスに限定されない。また、親水性領域１０２ａの配列状態およびその数は図２から図４に限定されない。また、親水性領域１０２ａの形状およびその大きさは、上述した直径１．６ｍｍの円形に限定されることなく、例えば直径２０から１０，０００μｍ（マイクロメートル）の略円形（例えば楕円なども含む）やこれら以外のものでもよい。なお、親水性領域１０２ａが直径２０μｍから１０，０００μｍの略円形である場合、親水性領域１０２ａは、その形状およびその直径に因り、２〜２６０ｐｌ（ピコリットル）程度の微量の液滴を概ね半球状に保持することができる。その結果、検体や試薬の量を効果的に減らすことができる。また、液体保持溝１０２ａ１は、図３に示すような十文字のものに限定されない。また、親水性ビーズ１０２ａ２の数は、図４に示す２つに限定されない。また、撥水性領域１０２ｂは、親水性領域１０２ａを囲むように設ければよく、図２から図４に示すように基板１０２の表面の全体的に設けたりする以外にも、親水性領域１０２ａを囲むように基板１０２の表面に部分的に（例えば円環状に）設けてもよい。なお、親水性領域１０２ａは撥水性領域１０２ｂに囲まれているので、検体や水溶性反応液や非水溶性液や反応産物などのような液体を親水性領域１０２ａ内に安定して確実に保持することができる。
【００３０】
また、親水性領域１０２ａ（例えば液体保持溝１０２ａ１や親水性ビーズ１０２ａ２など）で保持する液体（例えば検体を含む水溶性反応液など）の量は、好ましくは０．８〜１．２μｌ（マイクロリットル）であり、さらに好ましくは１μｌである。また、親水性領域１０２ａで保持する液体を覆う非水溶性液の量は、好ましくは４〜６μｌであり、さらに好ましくは５μｌである。
【００３１】
図１に戻り、マイクロタイタープレート１０４は、親水性領域１０２ａに据える検体や水溶性反応液や非水溶性液を、区画を分けて保持する。
【００３２】
分注装置１０６は、液体を吸引したり吐出したりするピペットであるマルチピペッター１０６ａを備えている。分注装置１０６はマルチピペッター１０６ａで、マイクロタイタープレート１０４から検体や水溶性反応液や非水溶性液を吸引したり、吸引した検体や水溶性反応液や非水溶性液を親水性領域１０２ａに吐出（分注）したりする。なお、マルチピペッター１０６ａは、検体や水溶性反応液や非水溶性液を吸引して吐出する度に、新品に交換してもよい。
【００３３】
サーマルサイクラー１０８は、基板１０２全体または各々の親水性領域１０２ａに、ＰＣＲや等温増幅反応やライゲーションなどに必要な温度条件に関するサーマルサイクルを印可する。
【００３４】
吐出装置１１０は、反応産物を吸引したり吐出したりするための吐出ヘッド１１０ａを備えている。吐出装置１１０は、吐出ヘッド１１０ａで、各々の親水性領域１０２ａから反応産物を吸引したり、吸引した反応産物を他の親水性領域１０２ａに吐出したりする。吐出装置１１０には、ピエゾ方式やバブルジェット（登録商標）方式などを採用してもよい。これにより、数ｐＬの吐出が可能になる。吐出ヘッド１１０ａはガラスで構成されるものでもよい。
【００３５】
吐出ヘッド洗浄装置１１２は吐出ヘッド１１０ａを洗浄する。なお、吐出ヘッド１１０ａは反応産物を吸引して吐出する度に、吐出ヘッド洗浄装置１１２で洗浄してもよい。これにより、複数の異なる検体の反応を一度に行った場合、各検体に対応する反応産物を個別に取り分けた際に、取り分けたものの中に、異なる検体に対応する反応産物が混ざることがない。
【００３６】
制御装置１１４は、具体的には市販のパーソナルコンピュータであり、分注装置１０６やサーマルサイクラー１０８や吐出装置１１０や吐出ヘッド洗浄装置１１２と通信可能に接続されており、これらを制御する。
【００３７】
〔２．システムによる処理〕
つぎに、検体反応システム１００で実行する検体反応方法に関する処理（その１、その２、その３、その４、その５）について、図５、図７、図９、図１１、図１３などを参照して説明する。
【００３８】
〔２−１．システムによる処理（その１）〕
まず、図５などを参照して、図２に示す基板１０２が設置された検体反応システム１００を用いてＰＣＲを行う場合の一例について説明する。図５は、検体反応システム１００で実行する検体反応方法の一例を示す図である。ここで、本説明において、検体ＳｍはｇＤＮＡ（５ｎｇ／μＬ（水））であり、水溶性反応液としてのＰＣＲ試薬ＰはＡＢＩ社製の「Ａｍｐｌｉ  Ｔａｑ  Ｇｏｌｄ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ」（Ｆｏｒｗａｒｄ  Ｐｒｉｍｅｒ：０．５μＭ、Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｐｒｉｍｅｒ：０．５μＭ）であり、非水溶性液としてのシーリングオイルＳはシグマアルドリッチ社製のミネラルオイル「Ｍ５９０４」である。
【００３９】
実験者が、検体ＳｍとＰＣＲ試薬ＰとシーリングオイルＳとをマイクロタイタープレート１０４の所定の区画に置き、図２に示す基板１０２を所定の位置に設置し、制御装置１１４のモニタに表示されているスタートメニュー画面に対しキーボードやマウスなどの入力装置を介して各種条件を設定し、スタートメニュー画面のスタートボタンを押すと、検体反応システム１００は、制御装置１１４を中心として図５に示す検体反応方法を実行する。
【００４０】
まず、検体ＳｍとＰＣＲ試薬Ｐとを親水性領域１０２ａで混合する（工程１１：検体混合工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４から検体Ｓｍを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引した検体Ｓｍを、図２に示す基板１０２に設けられている１６箇所の親水性領域１０２ａのうち８箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ１μＬ（マイクロリットル）滴下する。なお、滴下した検体Ｓｍに含まれる水分は約２０分で蒸発し、検体Ｓｍのみが親水性領域１０２ａに保持される。そして、制御装置１１４は引き続き分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４からＰＣＲ試薬Ｐを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したＰＣＲ試薬Ｐを、検体Ｓｍを保持している８箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ１μＬ滴下する。
【００４１】
つぎに、工程１１で検体ＳｍとＰＣＲ試薬Ｐとが混合された検体溶液Ｍ１１を、蒸散を防ぎつつＰＣＲに必要な温度条件の下で反応させる（工程１２：検体溶液反応工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４からシーリングオイルＳを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したシーリングオイルＳを、検体溶液Ｍ１１を覆うように（図６参照）、検体溶液Ｍ１１を保持している８箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ５μＬ滴下する。そして、制御装置１１４は引き続きサーマルサイクラー１０８に指令を出す。そして、サーマルサイクラー１０８は当該指令を受けると、基板１０２全体または８箇所の親水性領域１０２ａに、ＰＣＲに必要なサーマルサイクルを印可する。なお、このサーマルサイクルの一例は、以下の（１１）から（１４）の順で行われるものである。（１１）９５℃を１０分間維持する。（１２）９５℃を３０秒維持し、引き続いて６０℃を３０秒維持し、さらに引き続いて７２℃を３０秒維持する。（１３）（１２）を３５回繰り返す。（１４）７２℃を１０分間維持する。
【００４２】
つぎに、工程１２で得られた反応産物（ＰＣＲ産物）を親水性領域１０２ａから取り除く（工程１３：反応産物除去工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は吐出装置１１０に指令を出す。そして、吐出装置１１０は当該指令を受けると、吐出ヘッド１１０ａで、ＰＣＲ産物を保持している８箇所の親水性領域１０２ａのうち４箇所の親水性領域１０２ａから、ＰＣＲ産物を個別に吸引する。
【００４３】
つぎに、工程１３で取り除いたＰＣＲ産物のうち所定量（例えば親水性領域１０２ａで保持する液の総量の１〜１０％）のＰＣＲ産物とＰＣＲ試薬Ｐとを、他の親水性領域１０２ａで混合する（工程１４：反応産物混合工程）。
具体的には、まず、吐出装置１１０は、工程１３において吐出ヘッド１１０ａで個別に吸引したＰＣＲ産物を、８箇所の未使用の親水性領域１０２ａのうち４箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ１００ｎＬ吐出する。なお、吐出したＰＣＲ産物に含まれる水分は約２分で蒸発し、ＰＣＲ産物のみが親水性領域１０２ａに保持される。そして、制御装置１１４は引き続いて分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４からＰＣＲ試薬Ｐを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したＰＣＲ試薬Ｐを、ＰＣＲ産物が吐出された４箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ１μＬ滴下する。なお、親水性領域１０２ａには例えば親水性領域１０２ａで保持する液の総量の１〜１０％（具体的には０．１μＬ）のＰＣＲ産物を吐出してＰＣＲ試薬Ｒと混合するので、当該ＰＣＲ産物によるＰＣＲを確実に行うことができる。
【００４４】
ここで、制御装置１１４は引き続いて分注装置１０６に指令を出し、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａで、工程１３における８箇所の親水性領域１０２ａのうち残りの４箇所の親水性領域１０２ａからＰＣＲ産物を個別に吸引し、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで個別に吸引したＰＣＲ産物を、予め用意したサンプル保存用チューブに分注する。これにより、サンプル保存用チューブで、１回目のＰＣＲによるＰＣＲ産物を保存する。
【００４５】
つぎに、工程１４でＰＣＲ産物とＰＣＲ試薬Ｐとが混合された反応溶液Ｍ１２を、蒸散を防ぎつつＰＣＲに必要な温度条件の下で反応させる（工程１５：反応混合物反応工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４からシーリングオイルＳを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したシーリングオイルＳを、反応溶液Ｍ１２を覆うように（図６参照）、反応溶液Ｍ１２を保持している４箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ５μＬ滴下する。そして、制御装置１１４は引き続きサーマルサイクラー１０８に指令を出す。そして、サーマルサイクラー１０８は当該指令を受けると、基板１０２全体または４箇所の親水性領域１０２ａに、ＰＣＲに必要なサーマルサイクルを印可する。なお、このサーマルサイクルは、上述した工程１２でのものと同じである。
【００４６】
そして、工程１５で得られたＰＣＲ産物を親水性領域１０２ａから取り除き、取り除いたＰＣＲ産物を保存する。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａで、工程１５で得られたＰＣＲ産物を保持している４箇所の親水性領域１０２ａから、ＰＣＲ産物を個別に吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで個別に吸引したＰＣＲ産物を、予め用意したサンプル保存用チューブに分注する。これにより、サンプル保存用チューブで、２回目のＰＣＲによるＰＣＲ産物を保存する。
【００４７】
以上、図５を参照して説明したように、本実施の形態によれば、検体ＳｍおよびＰＣＲ試薬Ｐを親水性領域１０２ａで混合し、検体溶液Ｍ１１を覆うようにシーリングオイルＳを親水性領域１０２ａに滴下し、シーリングオイルＳが滴下された親水性領域１０２ａで検体溶液Ｍ１１を所定の温度条件の下で反応させ、検体溶液Ｍ１１の反応に因る産物であるＰＣＲ産物を親水性領域１０２ａから取り除き、取り除いたＰＣＲ産物のうち所定量（例えば親水性領域１０２ａで保持する液の総量の１〜１０％）のＰＣＲ産物およびＰＣＲ試薬Ｐを他の親水性領域１０２ａで混合し、反応溶液Ｍ１２を覆うようにシーリングオイルＳを親水性領域１０２ａに滴下し、シーリングオイルＳが滴下された親水性領域１０２ａで反応溶液Ｍ１２を所定の温度条件下で反応させるので、ＰＣＲを微量な検体および微量な試薬で段階的に（多段階で）自動で行え、結果的に検体や試薬にかかる費用を効果的に削減することができると共に、当該反応を繰り返し行う（段階的に行う）場合における実験者の作業負担を軽減することができる。すなわち、微量な検体に含まれる核酸を、親水性領域１０２ａにて簡便且つ容易に増幅することができる。
【００４８】
また、図５に示す検体反応方法を実行する過程において、容器の移し替えの操作や新たな容器を必要とせず、１つの基板１０２のみで核酸の増幅を簡便且つ容易に行うことができた。
【００４９】
また、サンプル保存用チューブに保存した１回目のＰＣＲ産物および２回目のＰＣＲ産物を、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製の「Ａｇｉｌｅｎｔ  ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ」で解析したところ、鋳型ＤＮＡに特異的なバンドが検出され、いずれのＰＣＲ産物に対しても核酸の増幅が確認された。なお、２回目のＰＣＲ産物のほうが、１回目のＰＣＲ産物に比べて核酸が多く増幅されていることが確認された。
【００５０】
また、本実施の形態によれば、図５に示すように、工程１３から工程１５を所定回数繰り返し実行してもよい。これにより、ＰＣＲを、より微量な検体およびより微量な試薬で段階的に（多段階で）自動で行え、結果的に検体や試薬にかかる費用をさらに効果的に削減することができると共に、当該反応を繰り返し行う（段階的に行う）場合における実験者の作業負担を一層軽減することができる。すなわち、より微量な検体に含まれる核酸を、親水性領域１０２ａにて簡便且つ容易に増幅することができる。
【００５１】
〔２−２．システムによる処理（その２）〕
つぎに、図７などを参照して、図２に示す基板１０２が設置された検体反応システム１００を用いて等温増幅反応を行う場合の一例について説明する。図７は、検体反応システム１００で実行する検体反応方法の一例を示す図である。ここで、本説明において、検体ＳｍはｇＤＮＡ（１ｎｇ／μＬ（水））であり、水溶性反応液としての等温増幅反応試薬Ｒは栄研化学社製の「Ｌｏｏｐａｍｐ  ＤＮＡ増幅試薬キット  マスターミックス」であり、非水溶性液としてのシーリングオイルＳはシグマアルドリッチ社製のミネラルオイル「Ｍ５９０４」である。
【００５２】
実験者が、検体Ｓｍと等温増幅反応試薬ＲとシーリングオイルＳとをマイクロタイタープレート１０４の所定の区画に置き、図２に示す基板１０２を所定の位置に設置し、制御装置１１４のモニタに表示されているスタートメニュー画面に対しキーボードやマウスなどの入力装置を介して各種条件を設定し、スタートメニュー画面のスタートボタンを押すと、検体反応システム１００は、制御装置１１４を中心として図７に示す検体反応方法を実行する。
【００５３】
まず、検体Ｓｍと等温増幅反応試薬Ｒとを親水性領域１０２ａで混合する（工程２１：検体混合工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４から検体Ｓｍを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引した検体Ｓｍを、図２に示す基板１０２に設けられている１６箇所の親水性領域１０２ａのうち８箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ１μＬ（マイクロリットル）滴下する。なお、滴下した検体Ｓｍに含まれる水分は約２０分で蒸発し、検体Ｓｍのみが親水性領域１０２ａに保持される。そして、制御装置１１４は引き続き分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４から等温増幅反応試薬Ｒを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引した等温増幅反応試薬Ｒを、検体Ｓｍを保持している８箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ１μＬ滴下する。
【００５４】
つぎに、工程２１で検体Ｓｍと等温増幅反応試薬Ｒとが混合された検体溶液Ｍ２１を、蒸散を防ぎつつ等温増幅反応に必要な温度条件の下で反応させる（工程２２：検体溶液反応工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４からシーリングオイルＳを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したシーリングオイルＳを、検体溶液Ｍ２１を覆うように（図８参照）、検体溶液Ｍ２１を保持している８箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ５μＬ滴下する。そして、制御装置１１４は引き続きサーマルサイクラー１０８に指令を出す。そして、サーマルサイクラー１０８は当該指令を受けると、基板１０２全体または８箇所の親水性領域１０２ａに、等温増幅反応に必要なサーマルサイクルを印可する。なお、このサーマルサイクルの一例は、以下の（２１）および（２２）の順で行われるものである。（２１）６３℃を３０分間維持する。（２２）８０℃を２分維持する。
【００５５】
つぎに、工程２２で得られた反応産物（等温増幅反応産物）を親水性領域１０２ａから取り除く（工程２３：反応産物除去工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は吐出装置１１０に指令を出す。そして、吐出装置１１０は当該指令を受けると、吐出ヘッド１１０ａで、等温増幅反応産物を保持している８箇所の親水性領域１０２ａのうち４箇所の親水性領域１０２ａから、等温増幅反応産物を個別に吸引する。
【００５６】
つぎに、工程２３で取り除いた等温増幅反応産物のうち所定量（例えば親水性領域１０２ａで保持する液の総量の１〜１０％）の等温増幅反応産物と等温増幅反応試薬Ｒとを、他の親水性領域１０２ａで混合する（工程２４：反応産物混合工程）。
具体的には、まず、吐出装置１１０は、工程２３において吐出ヘッド１１０ａで個別に吸引した等温増幅反応産物を、８箇所の未使用の親水性領域１０２ａのうち４箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ１００ｎＬ吐出する。なお、吐出した等温増幅反応産物に含まれる水分は約２分で蒸発し、等温増幅反応産物のみが親水性領域１０２ａに保持される。そして、制御装置１１４は引き続いて分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４から等温増幅反応試薬Ｒを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引した等温増幅反応試薬Ｒを、等温増幅反応産物が吐出された４箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ１μＬ滴下する。なお、親水性領域１０２ａには例えば親水性領域１０２ａで保持する液の総量の１〜１０％（具体的には０．１μＬ）の等温増幅反応産物を吐出して等温増幅反応試薬Ｒと混合するので、当該等温増幅反応による等温増幅反応を確実に行うことができる。
【００５７】
ここで、制御装置１１４は引き続いて分注装置１０６に指令を出し、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａで、工程２３における８箇所の親水性領域１０２ａのうち残りの４箇所の親水性領域１０２ａから、等温増幅反応産物を個別に吸引し、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで個別に吸引した等温増幅反応産物を、予め用意したサンプル保存用チューブに分注する。これにより、サンプル保存用チューブで、１回目の等温増幅反応による等温増幅反応産物を保存する。
【００５８】
つぎに、工程２４で等温増幅反応産物と等温増幅反応試薬Ｒとが混合された反応溶液Ｍ２２を、蒸散を防ぎつつ等温増幅反応に必要な温度条件の下で反応させる（工程２５：反応溶液反応工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４からシーリングオイルＳを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したシーリングオイルＳを、反応溶液Ｍ２２を覆うように（図８参照）、反応溶液Ｍ２２を保持している４箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ５μＬ滴下する。そして、制御装置１１４は引き続きサーマルサイクラー１０８に指令を出す。そして、サーマルサイクラー１０８は当該指令を受けると、基板１０２全体または４箇所の親水性領域１０２ａに、等温増幅反応に必要なサーマルサイクルを印可する。なお、このサーマルサイクルは、上述した工程２２でのものと同じである。
【００５９】
そして、工程２５で得られた等温増幅反応産物を親水性領域１０２ａから除去し、除去した等温増幅反応産物を保存する。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａで、工程２５で得られた等温増幅反応産物を保持している４箇所の親水性領域１０２ａから、等温増幅反応産物を個別に吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで個別に吸引した等温増幅反応産物を、予め用意したサンプル保存用チューブに分注する。これにより、サンプル保存用チューブで、２回目の等温増幅反応による等温増幅反応産物を保存する。
【００６０】
以上、図７を参照して説明したように、本実施の形態によれば、検体Ｓｍおよび等温増幅反応試薬Ｒを親水性領域１０２ａで混合し、検体溶液Ｍ２１を覆うようにシーリングオイルＳを親水性領域１０２ａに滴下し、シーリングオイルＳが滴下された親水性領域１０２ａで検体溶液Ｍ２１を所定の温度条件の下で反応させ、検体溶液Ｍ２１の反応に因る産物である等温増幅反応産物を親水性領域１０２ａから取り除き、取り除いた等温増幅反応産物のうち所定量（例えば親水性領域１０２ａで保持する液の総量の１〜１０％）の等温増幅反応産物および等温増幅反応試薬Ｒを他の親水性領域１０２ａで混合し、反応溶液Ｍ２２を覆うようにシーリングオイルＳを親水性領域１０２ａに滴下し、シーリングオイルＳが滴下された親水性領域１０２ａで反応溶液Ｍ２２を所定の温度条件下で反応させるので、等温増幅反応を微量な検体および微量な試薬で段階的に（多段階で）自動で行え、結果的に検体や試薬にかかる費用を効果的に削減することができると共に、当該反応を繰り返し行う（段階的に行う）場合における実験者の作業負担を軽減することができる。すなわち、微量な検体に含まれる核酸を、親水性領域１０２ａにて簡便且つ容易に増幅することができる。
【００６１】
また、図７に示す検体反応方法を実行する過程において、容器の移し替えの操作や新たな容器を必要とせず、１つの基板１０２のみで核酸の増幅を簡便且つ容易に行うことができる。
【００６２】
また、サンプル保存用チューブに保存した１回目の等温増幅反応産物および２回目の等温増幅反応産物を、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製の「Ａｇｉｌｅｎｔ  ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ」で解析したところ、鋳型ＤＮＡに特異的なバンドが検出され、いずれの等温増幅反応産物に対しても核酸の増幅が確認された。なお、２回目の等温増幅反応産物のほうが、１回目の等温増幅反応産物に比べて核酸が多く増幅されていることが確認された。
【００６３】
また、本実施の形態によれば、図７に示すように、工程２３から工程２５を所定回数繰り返し実行してもよい。これにより、等温増幅反応を、より微量な検体およびより微量な試薬で段階的に（多段階で）自動で行え、結果的に検体や試薬にかかる費用をさらに効果的に削減することができると共に、当該反応を繰り返し行う（段階的に行う）場合における実験者の作業負担を一層軽減することができる。すなわち、より微量な検体に含まれる核酸を、親水性領域１０２ａにて簡便且つ容易に増幅することができる。
【００６４】
さらに、本実施の形態によれば、図５で説明したＰＣＲ、図７で説明した等温増幅反応以外にも、例えばライゲーションなどに好適に用いることができる。
【００６５】
〔２−３．システムによる処理（その３）〕
つぎに、図９などを参照して、図３に示す基板１０２が設置された検体反応システム１００を用いてＰＣＲを行う場合の一例について説明する。図９は、検体反応システム１００で実行する検体反応方法の一例を示す図である。ここで、本説明において、検体ＳｍはｇＤＮＡ（５ｎｇ／μＬ（水））であり、水溶性反応液としてのＰＣＲ試薬ＰはＡＢＩ社製の「Ａｍｐｌｉ  Ｔａｑ  Ｇｏｌｄ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ」（Ｆｏｒｗａｒｄ  Ｐｒｉｍｅｒ：０．５μＭ、Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｐｒｉｍｅｒ：０．５μＭ）であり、非水溶性液としてのシーリングオイルＳはシグマアルドリッチ社製のミネラルオイル「Ｍ５９０４」である。
【００６６】
実験者が、検体ＳｍとＰＣＲ試薬ＰとシーリングオイルＳとをマイクロタイタープレート１０４の所定の区画に置き、図３に示す基板１０２を所定の位置に設置し、制御装置１１４のモニタに表示されているスタートメニュー画面に対しキーボードやマウスなどの入力装置を介して各種条件を設定し、スタートメニュー画面のスタートボタンを押すと、検体反応システム１００は、制御装置１１４を中心として図９に示す検体反応方法を実行する。
【００６７】
まず、検体ＳｍとＰＣＲ試薬Ｐとを親水性領域１０２ａで混合する（工程３１：検体混合工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４から検体Ｓｍを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引した検体Ｓｍを、図３に示す基板１０２に設けられている１６箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ１μＬ（マイクロリットル）滴下する。なお、滴下した検体Ｓｍに含まれる水分は約２０分で蒸発し、検体Ｓｍのみが親水性領域１０２ａに保持される。そして、制御装置１１４は引き続き分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４からＰＣＲ試薬Ｐを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したＰＣＲ試薬Ｐを、検体Ｓｍを保持している１６箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ１μＬ滴下する。
【００６８】
つぎに、工程３１で検体ＳｍとＰＣＲ試薬Ｐとが混合された検体溶液Ｍ３１を、蒸散を防ぎつつＰＣＲに必要な温度条件の下で反応させる（工程３２：検体溶液反応工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４からシーリングオイルＳを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したシーリングオイルＳを、検体溶液Ｍ３１を覆うように（図１０参照）、検体溶液Ｍ３１を保持している１６箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ５μＬ滴下する。そして、制御装置１１４は引き続きサーマルサイクラー１０８に指令を出す。そして、サーマルサイクラー１０８は当該指令を受けると、基板１０２全体または１６箇所の親水性領域１０２ａに、ＰＣＲに必要なサーマルサイクルを印可する。なお、このサーマルサイクルの一例は、以下の（３１）から（３４）の順で行われるものである。（３１）９５℃を１０分間維持する。（３２）９５℃を３０秒維持し、引き続いて６０℃を３０秒維持し、さらに引き続いて７２℃を３０秒維持する。（３３）（３２）を３５回繰り返す。（３４）７２℃を１０分間維持する。
【００６９】
つぎに、工程３２で得られた反応産物（ＰＣＲ産物）が親水性領域１０２ａ（具体的には液体保持溝１０２ａ１）に所定量（例えば親水性領域１０２ａで保持する液の総量の１〜１０％）残るように、親水性領域１０２ａから検体溶液Ｍ３１を取り除く（工程３３：反応産物残留工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａで、少なくとも液体保持溝１０２ａ１に０．１μＬのＰＣＲ産物が残るように１６箇所の親水性領域１０２ａからＰＣＲ産物を個別に吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したＰＣＲ産物を、予め用意したサンプル保存用チューブに分注する。これにより、サンプル保存用チューブで、１回目のＰＣＲによるＰＣＲ産物を保存する。そして、分注装置１０６は引き続き、マルチピペッター１０６ａで、１６箇所の親水性領域１０２ａから、残りの検体溶液Ｍ３１を個別に吸引する。なお、液体保持溝１０２ａ１に残されたＰＣＲ産物に含まれる水分は約２分で蒸発し、ＰＣＲ産物のみが親水性領域１０２ａ（具体的には液体保持溝１０２ａ１）に保持される。また、液体保持溝１０２ａ１には例えば親水性領域１０２ａで保持する液の総量の１〜１０％（具体的には０．１μＬ）のＰＣＲ産物が残るので、当該ＰＣＲ産物によるＰＣＲを確実に行うことができる。
【００７０】
つぎに、工程３３で残した所定量のＰＣＲ産物とＰＣＲ試薬Ｐとを、ＰＣＲ産物が残されている親水性領域１０２ａで混合する（工程３４：反応産物混合工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４からＰＣＲ試薬Ｐを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したＰＣＲ試薬Ｐを、ＰＣＲ産物が残されている１６箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ１μＬ滴下する。
【００７１】
つぎに、工程３４でＰＣＲ産物とＰＣＲ試薬Ｐとが混合された反応溶液Ｍ３２を、蒸散を防ぎつつＰＣＲに必要な温度条件の下で反応させる（工程３５：反応混合物反応工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４からシーリングオイルＳを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したシーリングオイルＳを、反応溶液Ｍ３２を覆うように（図１０参照）、反応溶液Ｍ３２を保持している１６箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ５μＬ滴下する。そして、制御装置１１４は引き続きサーマルサイクラー１０８に指令を出す。そして、サーマルサイクラー１０８は当該指令を受けると、基板１０２全体または１６箇所の親水性領域１０２ａに、ＰＣＲに必要なサーマルサイクルを印可する。なお、このサーマルサイクルは、上述した工程３２でのものと同じである。
【００７２】
そして、工程３５で得られたＰＣＲ産物を親水性領域１０２ａから除去し、除去したＰＣＲ産物を保存する。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａで、工程３５で得られたＰＣＲ産物を保持している１６箇所の親水性領域１０２ａから、ＰＣＲ産物を個別に吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで個別に吸引したＰＣＲ産物を、予め用意したサンプル保存用チューブに分注する。これにより、サンプル保存用チューブで、２回目のＰＣＲによるＰＣＲ産物を保存する。
【００７３】
以上、図９を参照して説明したように、本実施の形態によれば、検体ＳｍおよびＰＣＲ試薬Ｐを親水性領域１０２ａで混合し、検体溶液Ｍ３１を覆うようにシーリングオイルＳを親水性領域１０２ａに滴下し、シーリングオイルＳが滴下された親水性領域１０２ａで検体溶液Ｍ３１を所定の温度条件の下で反応させ、検体溶液Ｍ３１の反応に因る産物であるＰＣＲ産物が所定量（例えば親水性領域１０２ａで保持する液の総量の１〜１０％）だけ液体保持溝１０２ａ１に残るように親水性領域１０２ａから検体溶液Ｍ３１を取り除き、残した所定量のＰＣＲ産物およびＰＣＲ試薬Ｐを当該ＰＣＲ産物が残されている親水性領域１０２ａで混合し、反応溶液Ｍ３２を覆うようにシーリングオイルＳを親水性領域１０２ａに滴下し、シーリングオイルＳが滴下された親水性領域１０２ａで反応溶液Ｍ３２を所定の温度条件下で反応させるので、ＰＣＲを微量な検体および微量な試薬で段階的に（多段階で）自動で行え、結果的に検体や試薬にかかる費用を効果的に削減することができると共に、当該反応を繰り返し行う（段階的に行う）場合における実験者の作業負担を軽減することができる。すなわち、微量な検体に含まれる核酸を、親水性領域１０２ａにて簡便且つ容易に増幅することができる。
【００７４】
また、図９に示す検体反応方法を実行する過程において、容器の移し替えの操作や新たな容器を必要とせず、１つの基板１０２のみで核酸の増幅を簡便且つ容易に行うことができた。
【００７５】
また、サンプル保存用チューブに保存した１回目のＰＣＲ産物および２回目のＰＣＲ産物を、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製の「Ａｇｉｌｅｎｔ  ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ」で解析したところ、鋳型ＤＮＡに特異的なバンドが検出され、いずれのＰＣＲ産物に対しても核酸の増幅が確認された。なお、２回目のＰＣＲ産物のほうが、１回目のＰＣＲ産物に比べて核酸が多く増幅されていることが確認された。
【００７６】
また、本実施の形態によれば、図９に示すように、工程３３から工程３５を所定回数繰り返し実行してもよい。これにより、ＰＣＲを、より微量な検体およびより微量な試薬で段階的に（多段階で）自動で行え、結果的に検体や試薬にかかる費用をさらに効果的に削減することができると共に、当該反応を繰り返し行う（段階的に行う）場合における実験者の作業負担を一層軽減することができる。すなわち、より微量な検体に含まれる核酸を、親水性領域１０２ａにて簡便且つ容易に増幅することができる。
【００７７】
また、本実施の形態によれば、親水性領域１０２ａは、液体保持溝１０２ａ１を設けているので、反応産物を所定量だけ、親水性領域１０２ａ内に確実に保持することができる。
【００７８】
さらに、本実施の形態によれば、図９で説明したＰＣＲ以外にも、例えば等温増幅反応やライゲーションなどに好適に用いることができる。
【００７９】
〔２−４．システムによる処理（その４）〕
つぎに、図１１などを参照して、図４に示す基板１０２が設置された検体反応システム１００を用いてＰＣＲを行う場合の一例について説明する。図１１は、検体反応システム１００で実行する検体反応方法の一例を示す図である。ここで、本説明において、検体ＳｍはｇＤＮＡ（５ｎｇ／μＬ（水））であり、水溶性反応液としてのＰＣＲ試薬ＰはＡＢＩ社製の「Ａｍｐｌｉ  Ｔａｑ  Ｇｏｌｄ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ」（Ｆｏｒｗａｒｄ  Ｐｒｉｍｅｒ：０．５μＭ、Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｐｒｉｍｅｒ：０．５μＭ）であり、非水溶性液としてのシーリングオイルＳはシグマアルドリッチ社製のミネラルオイル「Ｍ５９０４」である。
【００８０】
実験者が、検体ＳｍとＰＣＲ試薬ＰとシーリングオイルＳとをマイクロタイタープレート１０４の所定の区画に置き、図４に示す基板１０２を所定の位置に設置し、制御装置１１４のモニタに表示されているスタートメニュー画面に対しキーボードやマウスなどの入力装置を介して各種条件を設定し、スタートメニュー画面のスタートボタンを押すと、検体反応システム１００は、制御装置１１４を中心として図１１に示す検体反応方法を実行する。
【００８１】
まず、検体ＳｍとＰＣＲ試薬Ｐとを親水性領域１０２ａで混合する（工程４１：検体混合工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４から検体Ｓｍを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引した検体Ｓｍを、図４に示す基板１０２に設けられている１６箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ１μＬ（マイクロリットル）滴下する。なお、滴下した検体Ｓｍに含まれる水分は約２０分で蒸発し、検体Ｓｍのみが親水性領域１０２ａに保持される。そして、制御装置１１４は引き続き分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４からＰＣＲ試薬Ｐを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したＰＣＲ試薬Ｐを、検体Ｓｍを保持している１６箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ１μＬ滴下する。
【００８２】
つぎに、工程４１で検体ＳｍとＰＣＲ試薬Ｐとが混合された検体溶液Ｍ４１を、蒸散を防ぎつつＰＣＲに必要な温度条件の下で反応させる（工程４２：検体溶液反応工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４からシーリングオイルＳを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したシーリングオイルＳを、検体溶液Ｍ４１を覆うように（図１２参照）、検体溶液Ｍ４１を保持している１６箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ５μＬ滴下する。そして、制御装置１１４は引き続きサーマルサイクラー１０８に指令を出す。そして、サーマルサイクラー１０８は当該指令を受けると、基板１０２全体または１６箇所の親水性領域１０２ａに、ＰＣＲに必要なサーマルサイクルを印可する。なお、このサーマルサイクルの一例は、以下の（４１）から（４４）の順で行われるものである。（４１）９５℃を１０分間維持する。（４２）９５℃を３０秒維持し、引き続いて６０℃を３０秒維持し、さらに引き続いて７２℃を３０秒維持する。（４３）（４２）を３５回繰り返す。（４４）７２℃を１０分間維持する。
【００８３】
つぎに、工程４２で得られた反応産物（ＰＣＲ産物）が親水性領域１０２ａ（具体的には親水性ビーズ１０２ａ２）に所定量（例えば親水性領域１０２ａで保持する液の総量の１〜１０％）残るように、親水性領域１０２ａから検体溶液Ｍ４１を取り除く（工程４３：反応産物残留工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａで、少なくとも親水性ビーズ１０２ａ２に０．１μＬのＰＣＲ産物が残るように１６箇所の親水性領域１０２ａからＰＣＲ産物を個別に吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したＰＣＲ産物を、予め用意したサンプル保存用チューブに分注する。これにより、サンプル保存用チューブで、１回目のＰＣＲによるＰＣＲ産物を保存する。そして、分注装置１０６は引き続き、マルチピペッター１０６ａで、１６箇所の親水性領域１０２ａから、残りの検体溶液Ｍ４１を個別に吸引する。なお、親水性ビーズ１０２ａ２に残されたＰＣＲ産物に含まれる水分は約２分で蒸発し、ＰＣＲ産物のみが親水性領域１０２ａ（具体的には親水性ビーズ１０２ａ２）に保持される。また、親水性ビーズ１０２ａ２には例えば親水性領域１０２ａで保持する液の総量の１〜１０％（具体的には０．１μＬ）のＰＣＲ産物が残るので、当該ＰＣＲ産物によるＰＣＲを確実に行うことができる。
【００８４】
つぎに、工程４３で残した所定量のＰＣＲ産物とＰＣＲ試薬Ｐとを、ＰＣＲ産物が残されている親水性領域１０２ａで混合する（工程４４：反応産物混合工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４からＰＣＲ試薬Ｐを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したＰＣＲ試薬Ｐを、ＰＣＲ産物が残されている１６箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ１μＬ滴下する。
【００８５】
つぎに、工程４４でＰＣＲ産物とＰＣＲ試薬Ｐとが混合された反応溶液Ｍ４２を、蒸散を防ぎつつＰＣＲに必要な温度条件の下で反応させる（工程４５：反応混合物反応工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４からシーリングオイルＳを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したシーリングオイルＳを、反応溶液Ｍ４２を覆うように（図１２参照）、反応溶液Ｍ４２を保持している１６箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ５μＬ滴下する。そして、制御装置１１４は引き続きサーマルサイクラー１０８に指令を出す。そして、サーマルサイクラー１０８は当該指令を受けると、基板１０２全体または１６箇所の親水性領域１０２ａに、ＰＣＲに必要なサーマルサイクルを印可する。なお、このサーマルサイクルは、上述した工程４２でのものと同じである。
【００８６】
そして、工程４５で得られたＰＣＲ産物を親水性領域１０２ａから除去し、除去したＰＣＲ産物を保存する。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａで、工程４５で得られたＰＣＲ産物を保持している１６箇所の親水性領域１０２ａから、ＰＣＲ産物を個別に吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで個別に吸引したＰＣＲ産物を、予め用意したサンプル保存用チューブに分注する。これにより、サンプル保存用チューブで、２回目のＰＣＲによるＰＣＲ産物を保存する。
【００８７】
以上、図１１を参照して説明したように、本実施の形態によれば、検体ＳｍおよびＰＣＲ試薬Ｐを親水性領域１０２ａで混合し、検体溶液Ｍ４１を覆うようにシーリングオイルＳを親水性領域１０２ａに滴下し、シーリングオイルＳが滴下された親水性領域１０２ａで検体溶液Ｍ４１を所定の温度条件の下で反応させ、検体溶液Ｍ４１の反応に因る産物であるＰＣＲ産物が所定量（例えば親水性領域１０２ａで保持する液の総量の１〜１０％）だけ親水性ビーズ１０２ａ２に残るように親水性領域１０２ａから検体溶液Ｍ４１を取り除き、残した所定量のＰＣＲ産物およびＰＣＲ試薬Ｐを当該ＰＣＲ産物が残されている親水性領域１０２ａで混合し、反応溶液Ｍ４２を覆うようにシーリングオイルＳを親水性領域１０２ａに滴下し、シーリングオイルＳが滴下された親水性領域１０２ａで反応溶液Ｍ４２を所定の温度条件下で反応させるので、ＰＣＲを微量な検体および微量な試薬で段階的に（多段階で）自動で行え、結果的に検体や試薬にかかる費用を効果的に削減することができると共に、当該反応を繰り返し行う（段階的に行う）場合における実験者の作業負担を軽減することができる。すなわち、微量な検体に含まれる核酸を、親水性領域１０２ａにて簡便且つ容易に増幅することができる。
【００８８】
また、図１１に示す検体反応方法を実行する過程において、容器の移し替えの操作や新たな容器を必要とせず、１つの基板１０２のみで核酸の増幅を簡便且つ容易に行うことができた。
【００８９】
また、サンプル保存用チューブに保存した１回目のＰＣＲ産物および２回目のＰＣＲ産物を、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製の「Ａｇｉｌｅｎｔ  ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ」で解析したところ、鋳型ＤＮＡに特異的なバンドが検出され、いずれのＰＣＲ産物に対しても核酸の増幅が確認された。なお、２回目のＰＣＲ産物のほうが、１回目のＰＣＲ産物に比べて核酸が多く増幅されていることが確認された。
【００９０】
また、本実施の形態によれば、図１１に示すように、工程４３から工程４５を所定回数繰り返し実行してもよい。これにより、ＰＣＲを、より微量な検体およびより微量な試薬で段階的に（多段階で）自動で行え、結果的に検体や試薬にかかる費用をさらに効果的に削減することができると共に、当該反応を繰り返し行う（段階的に行う）場合における実験者の作業負担を一層軽減することができる。すなわち、より微量な検体に含まれる核酸を、親水性領域１０２ａにて簡便且つ容易に増幅することができる。
【００９１】
また、本実施の形態によれば、親水性領域１０２ａは、親水性ビーズ１０２ａ２を設けているので、反応産物を所定量だけ、親水性領域１０２ａ内に確実に保持することができる。
【００９２】
さらに、本実施の形態によれば、図１１で説明したＰＣＲ以外にも、例えば等温増幅反応やライゲーションなどに好適に用いることができる。
【００９３】
〔２−５．システムによる処理（その５）〕
つぎに、図１３などを参照して、図２に示す基板１０２が設置された検体反応システム１００を用いてＷＧＡ（Ｗｈｏｌｅ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）反応およびＰＣＲを行う場合の一例について説明する。図１３は、検体反応システム１００で実行する検体反応方法の一例を示す図である。ここで、本説明において、検体ＳｍはｇＤＮＡ（５ｎｇ／μＬ（水））であり、水溶性反応液としてのＰＣＲ試薬ＰはＡＢＩ社製の「Ａｍｐｌｉ  Ｔａｑ  Ｇｏｌｄ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ」（Ｆｏｒｗａｒｄ  Ｐｒｉｍｅｒ：０．５μＭ、Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｐｒｉｍｅｒ：０．５μＭ）であり、非水溶性液としてのシーリングオイルＳはシグマアルドリッチ社製のミネラルオイル「Ｍ５９０４」である。また、水溶性反応液としてのＷＧＡバッファーＢはＱＩＡＧＥＮ社製の「ＲＥＬＩ−ｇ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ」を用いて調整したものであり、その組成比はＢｕｆｆｅｒＤ１が２．５μＬ、ＢｕｆｆｅｒＮ１が５μＬ、マスターミックスが４０μＬ、ＴＥバッファーが２．５μＬである。
【００９４】
実験者が、検体ＳｍとＷＧＡバッファーＢと１０種類の異なるＰＣＲ試薬ＰとシーリングオイルＳとをマイクロタイタープレート１０４の所定の区画に置き、図２に示す基板１０２を所定の位置に設置し、制御装置１１４のモニタに表示されているスタートメニュー画面に対しキーボードやマウスなどの入力装置を介して各種条件を設定し、スタートメニュー画面のスタートボタンを押すと、検体反応システム１００は、制御装置１１４を中心として図１３に示す検体反応方法を実行する。
【００９５】
まず、検体ＳｍとＷＧＡバッファーＢとを親水性領域１０２ａで混合する（工程５１：検体混合工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４から検体Ｓｍを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引した検体Ｓｍを、図２に示す基板１０２に設けられている１６箇所の親水性領域１０２ａのうち１箇所の親水性領域１０２ａに１μＬ滴下する。なお、滴下した検体Ｓｍに含まれる水分は約１０分で蒸発し、検体Ｓｍのみが親水性領域１０２ａに保持される。そして、制御装置１１４は引き続き分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４からＷＧＡバッファーＢを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したＷＧＡバッファーＢを、検体Ｓｍを保持している１箇所の親水性領域１０２ａに１μＬ滴下する。
【００９６】
つぎに、工程５１で検体ＳｍとＷＧＡバッファーＢとが混合された検体溶液Ｍ５１を、蒸散を防ぎつつＷＧＡ反応に必要な温度条件の下で反応させる（工程５２：検体溶液反応工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４からシーリングオイルＳを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したシーリングオイルＳを、検体溶液Ｍ５１を覆うように（図１４参照）、検体溶液Ｍ５１を保持している１箇所の親水性領域１０２ａに５μＬ滴下する。そして、制御装置１１４は引き続きサーマルサイクラー１０８に指令を出す。そして、サーマルサイクラー１０８は当該指令を受けると、基板１０２全体または１箇所の親水性領域１０２ａに、ＷＧＡ反応に必要なサーマルサイクルを印可する（例えば３０℃で１０時間インキュベートする）。
【００９７】
つぎに、工程５２で得られた反応産物（ＷＧＡ産物）を親水性領域１０２ａから取り除く（工程５３：反応産物除去工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は吐出装置１１０に指令を出す。そして、吐出装置１１０は当該指令を受けると、吐出ヘッド１１０ａで、ＷＧＡ産物を保持している１箇所の親水性領域１０２ａから、ＷＧＡ産物を吸引する。
【００９８】
つぎに、工程５３で取り除いたＷＧＡ産物のうち所定量（例えば親水性領域１０２ａで保持する液の総量の１〜１０％）のＷＧＡ産物とＰＣＲ試薬Ｐとを、他の親水性領域１０２ａで混合する（工程５４：反応産物混合工程）。
具体的には、まず、吐出装置１１０は、工程５３において吐出ヘッド１１０ａで吸引したＷＧＡ産物を、１０箇所の未使用の親水性領域１０２ａ（例えば、新たに設置した未使用の基板１０２における１０箇所の親水性領域１０２ａ）に、それぞれ１００ｎＬ吐出する。なお、吐出したＷＧＡ産物に含まれる水分は約２分で蒸発し、ＷＧＡ産物のみが親水性領域１０２ａに保持される。そして、制御装置１１４は引き続いて分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４から１０種類の異なるＰＣＲ試薬Ｐを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引した１０種類の異なるＰＣＲ試薬Ｐを、ＷＧＡ産物が吐出された１０箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ１μＬ滴下する。なお、親水性領域１０２ａには例えば親水性領域１０２ａで保持する液の総量の１〜１０％（具体的には０．１μＬ）のＷＧＡ産物を吐出してＰＣＲ試薬Ｒと混合するので、当該ＷＧＡ産物によるＰＣＲを確実に行うことができる。
【００９９】
つぎに、工程５４でＷＧＡ産物とＰＣＲ試薬Ｐとが混合された反応溶液Ｍ５２を、蒸散を防ぎつつＰＣＲに必要な温度条件の下で反応させる（工程５５：反応混合物反応工程）。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａでマイクロタイタープレート１０４からシーリングオイルＳを吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで吸引したシーリングオイルＳを、反応溶液Ｍ５２を覆うように（図１４参照）、反応溶液Ｍ５２を保持している１０箇所の親水性領域１０２ａに、それぞれ５μＬ滴下する。そして、制御装置１１４は引き続きサーマルサイクラー１０８に指令を出す。そして、サーマルサイクラー１０８は当該指令を受けると、基板１０２全体または１０箇所の親水性領域１０２ａに、ＰＣＲに必要なサーマルサイクルを印可する。なお、このサーマルサイクルの一例は、以下の（５１）から（５４）の順で行われるものである。（５１）９５℃を１０分間維持する。（５２）９５℃を３０秒維持し、引き続いて６０℃を３０秒維持し、さらに引き続いて７２℃を３０秒維持する。（５３）（５２）を３５回繰り返す。（５４）７２℃を１０分間維持する。
【０１００】
そして、工程５５で得られたＰＣＲ産物を親水性領域１０２ａから取り除き、取り除いたＰＣＲ産物を保存する。
具体的には、まず、制御装置１１４は分注装置１０６に指令を出す。そして、分注装置１０６は当該指令を受けると、マルチピペッター１０６ａで、工程５５で得られたＰＣＲ産物を保持している１０箇所の親水性領域１０２ａから、ＰＣＲ産物を個別に吸引する。そして、分注装置１０６は、マルチピペッター１０６ａで個別に吸引したＰＣＲ産物を、予め用意したサンプル保存用チューブに分注する。これにより、サンプル保存用チューブで、ＰＣＲによるＰＣＲ産物を保存する。
【０１０１】
以上、図１３を参照して説明したように、本実施の形態によれば、検体ＳｍおよびＷＧＡバッファーＢを親水性領域１０２ａで混合し、検体溶液Ｍ５１を覆うようにシーリングオイルＳを親水性領域１０２ａに滴下し、シーリングオイルＳが滴下された親水性領域１０２ａで検体溶液Ｍ５１をＷＧＡ反応に必要な所定の温度条件の下で反応させ、検体溶液Ｍ５１の反応に因る産物であるＷＧＡ産物を親水性領域１０２ａから取り除き、取り除いたＷＧＡ産物のうち所定量（例えば親水性領域１０２ａで保持する液の総量の１〜１０％）のＷＧＡ産物およびＰＣＲ試薬Ｐを他の親水性領域１０２ａで混合し、反応溶液Ｍ５２を覆うようにシーリングオイルＳを親水性領域１０２ａに滴下し、シーリングオイルＳが滴下された親水性領域１０２ａで反応溶液Ｍ５２をＰＣＲに必要な所定の温度条件下で反応させるので、ＷＧＡ反応およびＰＣＲを微量な検体および微量な試薬で段階的に（多段階で）自動で行え、結果的に検体や試薬にかかる費用を効果的に削減することができると共に、当該反応を繰り返し行う（段階的に行う）場合における実験者の作業負担を軽減することができる。すなわち、微量な検体に含まれる核酸を、親水性領域１０２ａにて簡便且つ容易に増幅することができる。
【０１０２】
また、サンプル保存用チューブに保存したＰＣＲ産物を、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製の「Ａｇｉｌｅｎｔ  ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ」で解析したところ、鋳型ＤＮＡに特異的なバンドが検出され、ＰＣＲ産物に対して核酸の増幅が確認された。
【０１０３】
また、本実施の形態によれば、図１３に示すように、工程５３から工程５５を所定回数繰り返し実行してもよい。これによりＰＣＲを、より微量な検体およびより微量な試薬で段階的に（多段階で）自動で行え、結果的に検体や試薬にかかる費用をさらに効果的に削減することができると共に、当該反応を繰り返し行う（段階的に行う）場合における実験者の作業負担を一層軽減することができる。すなわち、より微量な検体に含まれる核酸を、親水性領域１０２ａにて簡便且つ容易に増幅することができる。
【０１０４】
さらに、本実施の形態によれば、図１３で説明したＷＧＡ反応とＰＣＲとの組み合わせ以外にも、例えばＷＧＡ反応と等温増幅反応との組み合わせやＷＧＡ反応とライゲーションとの組み合わせなどに好適に用いることができる。
【産業上の利用可能性】
【０１０５】
以上のように、本発明にかかる検体反応方法は、バイオや製薬、医療など様々な産業上の分野において好適に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【０１０６】
【図１】本実施の形態にかかる検体反応システム１００の構成の一例を示す図である。
【図２】本実施の形態にかかる基板１０２の一例を示す図である。
【図３】本実施の形態にかかる基板１０２の一例を示す図である。
【図４】本実施の形態にかかる基板１０２の一例を示す図である。
【図５】検体反応システム１００で実行する検体反応方法の一例を示す図である。
【図６】基板１０２の親水性領域１０２ａでの検体、ＰＣＲ試薬およびシーリングオイルの保持の状態の一例を示す図である。
【図７】検体反応システム１００で実行する検体反応方法の一例を示す図である。
【図８】基板１０２の親水性領域１０２ａでの検体、等温増幅反応試薬およびシーリングオイルの保持の状態の一例を示す図である。
【図９】検体反応システム１００で実行する検体反応方法の一例を示す図である。
【図１０】基板１０２の親水性領域１０２ａでの検体、ＰＣＲ試薬およびシーリングオイルの保持の状態の一例を示す図である。
【図１１】検体反応システム１００で実行する検体反応方法の一例を示す図である。
【図１２】基板１０２の親水性領域１０２ａでの検体、ＰＣＲ試薬およびシーリングオイルの保持の状態の一例を示す図である。
【図１３】検体反応システム１００で実行する検体反応方法の一例を示す図である。
【図１４】基板１０２の親水性領域１０２ａでの検体、ＷＧＡバッファー、ＰＣＲ試薬およびシーリングオイルの保持の状態の一例を示す図である。
【符号の説明】
【０１０７】
１００  検体反応システム
１０２  基板
１０２ａ  親水性領域
１０２ｂ  撥水性領域
１０４  マイクロタイタープレート
１０６  分注装置
１０６ａ  マルチピペッター
１０８  サーマルサイクラー
１１０  吐出装置
１１０ａ  吐出ヘッド
１１２  吐出ヘッド洗浄装置
１１４  制御装置
【図１】
2008161142.tif 000003
【図２】
2008161142.tif 000004
【図３】
2008161142.tif 000005
【図４】
2008161142.tif 000006
【図５】
2008161142.tif 000007
【図６】
2008161142.tif 000008
【図７】
2008161142.tif 000009
【図８】
2008161142.tif 000010
【図９】
2008161142.tif 000011
【図１０】
2008161142.tif 000012
【図１１】
2008161142.tif 000013
【図１２】
2008161142.tif 000014
【図１３】
2008161142.tif 000015
【図１４】
2008161142.tif 000016