(57)【要約】【課題】迅速な検査が可能であり且つ時間が経過しても血液中の血球がクロマトグラフ担体を侵食することがないクロマトグラフィー用試験具を提供する。【解決手段】本発明のクロマトグラフィー用試験具は、血球成分及び液体成分を含む試料の展開方向の上流側から順に第１血球分離部材、第２血球分離部材及びクロマトグラフ担体を備え、第１血球分離部材は、第１血球分離部材中での前記液体成分の移動速度が前記血球成分よりも速いことに基づいて前記血球成分と前記液体成分を分離するように構成され、第２血球分離部材は、前記血球成分を捕捉し且つ前記液体成分を通過させることに基づいて前記血球成分と前記液体成分を分離するように構成され、前記クロマトグラフ担体は、被検出物と特異的に結合する捕捉物質を担持する。【選択図】図１
2008249606.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血球成分及び液体成分を含む試料の展開方向の上流側から順に第１血球分離部材、第２血球分離部材及びクロマトグラフ担体を備え、
第１血球分離部材は、第１血球分離部材中での前記液体成分の移動速度が前記血球成分よりも速いことに基づいて前記血球成分と前記液体成分を分離するように構成され、
第２血球分離部材は、前記血球成分を捕捉し且つ前記液体成分を通過させることに基づいて前記血球成分と前記液体成分を分離するように構成され、
前記クロマトグラフ担体は、被検出物と特異的に結合する捕捉物質を担持するクロマトグラフィー用試験具。
【請求項２】
第１血球分離部材は、前記試料を試料展開方向に分離するように構成され、
第２血球分離部材は、前記試料を試料展開方向に垂直な方向に分離するように構成される請求項１に記載の試験具。
【請求項３】
第２血球分離部材の試料展開方向上流側の端部に、第１血球分離部材から第２血球分離部材への前記試料の進入を防ぐためのシール部材をさらに備える請求項２に記載の試験具。
【請求項４】
第１血球分離部材は、第２血球分離部材と重なっていない領域に試料添加部を有する請求項２又は３に記載の試験具。
【請求項５】
前記第１血球分離部材が、前記第２血球分離部材の試料展開方向上流側から少なくとも一部が重なるように配置され、
前記第２血球分離部材が、前記クロマトグラフ担体の試料展開方向上流側から少なくとも一部が重なるように配置される請求項２〜４の何れか１つに記載の試験具。
【請求項６】
前記第２血球分離部材が、第１血球分離部材と重ならない領域を試料展開方向下流側に備える請求項５に記載の試験具。
【請求項７】
第２血球分離部材と前記クロマトグラフ担体との間に標識保持部材を有し、
前記標識保持部材は、前記被検出物と特異的に結合し且つ標識されている標識物質を有する請求項１〜６の何れか１つに記載の試験具。
【請求項８】
前記標識物質は、有色の粒子で標識されている請求項７に記載の試験具。
【請求項９】
第２血球分離部材は、前記試料を試料展開方向に垂直な方向に分離するように構成され且つ多孔質部材からなり、前記多孔質部材中の細孔のサイズは、前記多孔質部材の上面から下面に向かって小さくなる請求項１〜８の何れか１つに記載の試験具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クロマトグラフィー用試験具に関する。
【背景技術】
【０００２】
被検出物に特異的に結合する物質を用いて、試料中の被検出物を検出する試験具としてクロマトグラフィー用試験具が挙げられる。クロマトグラフィー用試験具を用いて血液中の被検出物を検出する際に、血液中の赤血球に由来する色により検出結果を正確に読み取ることが困難になることが知られている。ゆえに、赤血球などの血球を含む試料を使用する場合は、試料から血球（特に赤血球）を分離するための分離膜を備えたクロマトグラフィー用試験具が使用される。
【０００３】
血球を分離するための分離膜を備えたクロマトグラフィー用試験具としては、以下のようなものが知られている。
【０００４】
特許文献１のｐ３１には、赤血球などの細胞成分を除くための多孔性分離マトリックスを備えたクロマトグラフィー用試験具が知られている。また、多孔性分離マトリックスとして、膜内で細孔サイズが減少する勾配を有するように構成されている非対称の膜が使用できることが記載されている。
【０００５】
特許文献２の段落８〜９には、赤血球などの細胞成分を除くためのサンプルフィルターを備えたクロマトグラフィー用試験具が記載されている。
【０００６】
特許文献３のｐ８には、赤血球などの細胞成分をクロマトグラフ的に分離する多孔質膜を備えたクロマトグラフィー用試験具が記載されている。この膜において、赤血球細胞は全血から濾過されるのではなくクロマトグラフ的に血漿から分離されることが記載されている。
【特許文献１】特表平１１−５０５３２７号公報
【特許文献２】特表２００４−５３８４５３号公報
【特許文献３】特表２０００−５０６６１０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記特許文献１及び２のクロマトグラフィー用試験具では、試料中の赤血球などの血球成分を捕捉し且つ液体成分を通過させることによって血球成分を分離するような分離膜が使用されている。このようなクロマトグラフィー用試験具では、分離膜に血液試料を添加すると、血液試料中の血球成分が分離膜に捕捉されることによって分離膜が目詰まりを起こし、血液中の液体成分（例えば血漿など）が分離膜を通過するのに時間がかかり、従って、検査に時間がかかるという問題がある。
また、上記特許文献３のクロマトグラフィー用試験具では、試料中の液体成分の移動速度が赤血球などの血球成分よりも速いことによって血球成分を分離するような分離膜が使用されている。このようなクロマトグラフィー用試験具では、分離膜において血球成分が補足されるわけではないので、検査後の時間経過と共に分離膜から赤血球などが漏れ出てクロマトグラフ担体を侵食し、それによって検査結果の読み取りが困難になる等の問題がある。
【０００８】
本発明はこのような事情に鑑みてなされたものであり、迅速な検査が可能であり且つ時間が経過しても血液中の赤血球などの血球がクロマトグラフ担体を侵食することがないクロマトグラフィー用試験具を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明のクロマトグラフィー用試験具は、血球成分及び液体成分を含む試料の展開方向の上流側から順に第１血球分離部材、第２血球分離部材及びクロマトグラフ担体を備え、第１血球分離部材は、第１血球分離部材中での前記液体成分の移動速度が前記血球成分よりも速いことに基づいて（以下、「クロマトグラフ的に」とも称する。）前記血球成分と前記液体成分を分離するように構成され、第２血球分離部材は、前記血球成分を捕捉し且つ前記液体成分を通過させることに基づいて（以下、「濾過的に」とも称する。）前記血球成分と前記液体成分を分離するように構成され、前記クロマトグラフ担体は、被検出物と特異的に結合する捕捉物質を担持する。
【００１０】
本発明では、試料中の液体成分が最初に第１血球分離部材から排出されて濾過的分離部材である第２血球分離部材を通過する。このため、第２血球分離部材で目詰まりが起こる前に液体成分が第２血球分離部材を通過するので、液体成分の通過がスムーズであり、迅速な検査が可能になる。
【００１１】
また、試料中の血球成分は、液体成分よりも遅れて第１血球部材から排出されて濾過的分離部材である第２血球分離部材に到達する。第２血球分離部材は、赤血球などの血球成分を捕捉して通過させないので、時間経過後も赤血球などの血球成分がクロマトグラフ担体を侵食することがない。従って、時間経過後も検査結果の読み取りが困難になることがない。なお、この時点で第２血球分離部材は目詰まりを起こし得るが、液体成分がすでに第２血球分離部材を通過しているので検査時間には影響を及ぼさない。
なお、第２血球分離部材が赤血球よりサイズの小さい血球成分を捕捉しきれずにサイズの小さい血球成分が第２血球分離部材を通過することもあるが、このような血球成分が第２血球分離部材を通過しても本発明の作用効果に影響を与えないので、このような場合も、「血球成分を捕捉」に該当する。
【００１２】
以下、種々の実施形態を例示する。
【００１３】
第１血球分離部材は、前記試料を試料展開方向に分離するように構成してもよい。一般に、クロマトグラフ的分離は、第１血球分離部材中を試料がクロマトグラフ的に展開する距離（分離距離）が長い方が好ましいが、上記構成の場合、その距離を長くしやすい。なお、分離距離の長さが試料の量に対して長すぎると、被検出物を検出に十分な量の液体成分が第２血球分離部材に到達しない可能性もある。従って、分離距離の長さは、試料の量に応じて適宜選択される。
第２血球分離部材は、前記試料を試料展開方向に垂直な方向に分離するように構成してもよい。一般に、濾過的分離は、分離面積が大きい方が好ましいが、上記構成の場合、濾過的分離の面積を大きくしやすい。なお、分離面積の大きさが試料の量に対して大きすぎると、被検出物を検出に十分な量の液体成分がクロマトグラフ担体に到達しない可能性もある。従って、分離面積の大きさは、試料の量に応じて適宜選択される。
【００１４】
第２血球分離部材が前記試料を試料展開方向に垂直な方向に分離する場合、第２血球分離部材の試料展開方向上流側の端部に、第１血球分離部材から第２血球分離部材への前記試料の進入を防ぐためのシール部材をさらに備えてもよい。この場合、試料が試料展開方向から第２血球分離部材に進入することが防止され、第２血球分離部材が効果的に機能する。
【００１５】
第１血球分離部材は、第２血球分離部材と重なっていない領域に試料添加部を有してもよい。第１血球分離部材と第２血球分離部材が重なっている領域に試料を添加すると、試料が十分に分離される前に第２血球分離部材に到達するおそれがあるが、本実施形態によれば、試料が第１血球分離部材で分離された後に第２血球分離部材に到達する。
【００１６】
第２血球分離部材が試料を試料展開方向に垂直な方向に分離する場合、第１血球分離部材が、第２血球分離部材の試料展開方向上流側から少なくとも一部が重なるように配置され、第２血球分離部材が、クロマトグラフ担体の試料展開方向上流側から少なくとも一部が重なるように配置されるようにしてもよい。このような配置にすることにより、第２血球分離部材の上面側において、第１血球分離部材から排出された試料をより広い面積で受け入れることができる。さらに、第２血球分離部材の下面側において、より広い面積で試料をクロマトグラフ担体へ排出することができる。
この場合、第２血球分離部材の試料展開方向下流側の端が前記第１血球分離部材と重なってしまうと、第１血球分離部材から排出された試料が、第２血球分離部材を通らずクロマトグラフ担体に到達するおそれがある。ゆえに、第２血球分離部材は、第１血球分離部材と重ならない領域を試料展開方向下流側に備える方が好ましい。
【００１７】
第２血球分離部材と前記クロマトグラフ担体との間に標識保持部材を有してもよい。前記標識保持部材は、前記被検出物と特異的に結合し且つ標識されている標識物質を有してもよい。この場合、予め試料中に標識物質を混入させる等の処置を行うことなく検査が可能になる。
【００１８】
前記標識物質は、有色の粒子で標識されていてもよい。この場合、検査結果を目視で容易に確認することができる。
【００１９】
第２血球分離部材は、前記試料を試料展開方向に垂直な方向に分離するように構成され且つ多孔質部材からなっていてもよい。前記多孔質部材中の細孔のサイズは、前記多孔質部材の上面から下面に向かって小さくなってもよい。この場合、前記多孔質部材の上面側では細孔が比較的大きいので試料が広がりやすく、十分に広がった状態で試料が前記多孔質部材の下面側の比較的小さなサイズの細孔に到達し、この細孔によって赤血球などの血球成分が捕捉されるので、効率的な分離が可能である。ここで示した種々の実施形態は、互いに組み合わせることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
以下、本発明の実施形態を図面を用いて説明する。図面や以下の記述中で示す構成は、例示であって、本発明の範囲は、図面や以下の記述中で示すものに限定されない。
【００２１】
１．クロマトグラフィー用試験具の構成
図１は、本発明の一実施形態のクロマトグラフィー用試験具（以下、「試験具」とも呼ぶ。）の構造を示す断面図である。図１に示すように、試験具１は、血球成分及び液体成分を含む試料Ｓの展開方向（矢印Ａの方向）の上流側から順に第１血球分離部材３、第２血球分離部材５及びクロマトグラフ担体７を備える。第１血球分離部材３は、第１血球分離部材３中での液体成分の移動速度が血球成分よりも速いことに基づいて血球成分と液体成分を分離するように構成されている。第２血球分離部材５は、血球成分を捕捉し且つ液体成分を通過させることに基づいて血球成分と液体成分を分離するように構成されている。
クロマトグラフ担体７は、被検出物と特異的に結合する捕捉物質を判定部９に担持する。第１血球分離部材３は、試料Ｓを試料展開方向に分離するように構成されている。第２血球分離部材５は、試料Ｓを試料展開方向に垂直な方向に分離するように構成されている。第１血球分離部材３と第２血球分離部材５は、部分的に重なっている。第１血球分離部材３は、第２血球分離部材５と重なっていない領域に試料添加部４を有する。
【００２２】
なお、一般的にクロマトグラフィー用試験具は、特定の部分（例えば図１の試料添加部４）に試料を添加すると、検出結果が示される部分（例えば図１の判定部９）に向かって試料が展開（移動）するように構成されている。そして、本明細書において「試料の展開方向」とは、検出結果が示される部分に向かって試料が展開（移動）していく方向のことを示す。
【００２３】
第２血球分離部材５の試料展開方向上流側の端部に、第１血球分離部材３から第２血球分離部材５へ試料Ｓの進入を防ぐためのシール部材１０が配置されている。
第２血球分離部材５とクロマトグラフ担体７との間には標識保持部材１１が配置されている。第２血球分離部材５と標識保持部材１１、及び標識保持部材１とクロマトグラフ担体７は、それぞれ互いに接触している。標識保持部材１１は、被検出物と特異的に結合し且つ標識されている標識物質を有している。
クロマトグラフ担体７の下流側には、クロマトグラフ担体７と接触するように吸収部材１３が配置されている。上記の各部材は、プラスチック、紙又はガラス等からなる基材１５上に貼り付けられている。
【００２４】
２．クロマトグラフィー用試験具の使用方法等
以下、図１を用いて、試験具１の使用方法と、試験具１を用いれば迅速な検査が可能であり且つ検査後時間が経過してもクロマトグラフ担体７が赤血球などの血球成分に侵食されない作用について説明する。検査時に試験具１を配置する方向は、特に限定されない。試験具１は、水平に配置した状態で使用してもよく、垂直に配置した状態で使用してもよい。以下、試験具１を水平に配置した状態で使用する場合を例にとって説明を進める。
【００２５】
（１）試料Ｓの添加
まず、第１血球分離部材３の試料添加部４に血球成分及び液体成分を含む試料Ｓを添加する。試料Ｓは、試料Ｓ中に被検出物が含まれているかどうかを確認するためのものであり、被検出物が含まれているかどうかはこの時点では不明である。以下、試料Ｓ中に被検出物が含まれている場合を想定して説明を進める。
【００２６】
試料Ｓは、血球成分及び液体成分を含むものであれば、血液自体でもよく、血液を展開溶媒等に希釈したものであってもよく、血液から一部の成分を取り除く等の前処理を行ったものであってもよい。血球成分は、赤血球等の血球からなる。液体成分は、試料Ｓが血液そのものである場合は血液中の血漿からなるが、試料Ｓが血液に展開溶媒を加えたものである場合は血漿と展開溶媒で構成される。試料添加部４は、試験具において試料が添加される部分である。試料添加部４とは、使用説明書、試験具１自体、又は試験具１を収容する容器等に設けられた表示によって試料を添加すべき部位であると指定された部位を意味する。試料添加部４は、できるだけ第２血球分離部材５から離れた位置、例えば試験具１の上流側の端部に設けることが好ましい。この場合、試料Ｓが第１血球分離部材３中を移動する距離が長くなり、分離がより適切になされるからである。
【００２７】
試料添加部４に添加された試料Ｓは、第１血球分離部材３内に染み込み、毛管現象により、第１血球分離部材３、第２血球分離部材５、標識保持部材１１、クロマトグラフ担体７、及び吸収部材１３を順次移動する。従って、これらの部材には、不織布又は多孔質部材等の、毛管現象により試料Ｓを展開可能なものを用いることができる。
【００２８】
（２）第１血球分離部材による分離
試料Ｓは、第１血球分離部材３内ではクロマトグラフ的に分離され、試料Ｓ中の液体成分が最初に第１血球分離部材３から排出される。試料Ｓ中の血球成分は、液体成分よりも後に第１血球分離部材３から排出される。なお、最初に排出される液体成分中に若干の血球成分が含まれ得るが、本実施形態の作用効果には大きな影響を与えないので、以下、最初に排出される液体成分中に血球成分が実質的に含まれていない場合を例にとって説明を進める。
【００２９】
第１血球分離部材３は、第１血球分離部材３中での液体成分の移動速度が赤血球などの血球成分よりも速いことに基づいて血球成分と液体成分を分離するように構成されているものであれば、その構成は限定されない。液体成分の移動速度が血球成分よりも速くなる作用としては、例えば、血球成分と第１血球分離部材３が何らかの相互作用（静電的な相互作用や、立体的な相互作用）をすることによって第１血球分離部材３中での血球成分の移動速度が遅くなるということが例示される。一例では、第１血球分離部材３が多孔質部材からなり、その細孔が血球と同程度か血球よりも僅かに大きい場合、液体成分が細孔をスムーズに移動できるのに対し血球成分は細孔をスムーズに移動できないので、第１血球分離部材３中での血球成分の移動速度が遅くなり、液体成分の移動速度が血球成分よりも速くなる。
なお、血液に含まれる血球はその種類によってサイズも異なる。ゆえに、試料Ｓには、様々なサイズの血球成分が含まれ得る。例えば、試料Ｓがヒトの血液から調製された場合、試料Ｓ中に含まれうる血球とその大きさは次の通りである。白血球のうちリンパ球は６〜１５μｍ、単球は１２〜１８μｍ、好中球は１０〜１２μｍ、好塩基球は１０〜１５μｍ、好酸球は１０〜１５μｍであり、赤血球は７〜８μｍ、血小板は１〜４μｍである。そして、このような試料Ｓに含まれうる血小板などの比較的サイズが小さい血球成分は、赤血球等の比較的サイズが大きい血球成分に比べて、第１血球分離部材３中の移動速度が速くなる可能性があり、場合によっては、液体成分と略同程度の移動速度となる可能性がある。しかしながら、赤血球などの血球成分よりも比較的サイズが小さい血球成分は検出結果に影響を与える可能性が低いことから、第１血球分離部材３中における移動速度が速くなったとしても、本実施形態の作用効果には大きな影響を与えない。
【００３０】
第１血球分離部材３には、ペーパークロマトグラフィーや薄相クロマトグラフィーで使用されているような膜を用いることができる。例えば、ニトロセルロース、ナイロン（例えば、カルボキシル基やアルキル基を置換基として有してもよいアミノ基が導入された修飾ナイロン）、ポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）、セルロースアセテートなどの種々の素材の膜を用いることができる。具体的には、MF1（Lateral Flow Type, Whatman社）、LF1（Lateral Flow Type, Whatman社）、FUSION5（Whatman社）などの市販されているものを用いてもよく、特許文献３に記載されているような部材を用いてもよい。第１血球分離部材３は、好ましくは、膜状であり、試料展開方向に試料Ｓを移動させ、試料展開方向に試料Ｓを分離するものであるが、第１血球分離部材３の構成や第１血球分離部材３による試料分離方向は特に限定されない。例えば、第１血球分離部材３は、ブロック状であってもよく、試料展開方向に垂直な方向に試料Ｓを分離するものであってもよい。
【００３１】
第１血球分離部材３から排出された液体成分は、第１血球分離部材３と第２血球分離部材５の接触部を通って第２血球分離部材５に移動する。本実施形態では、第１血球分離部材３と第２血球分離部材５とは直接接触しているが、第１血球分離部材３と第２血球分離部材５の間に、第１血球分離部材３から第２血球分離部材５への試料Ｓの移動を妨げない別の部材を設けてもよい。試料Ｓは、第１血球分離部材３から第２血球分離部材５へ、試料展開方向からも試料展開方向に垂直な方向からも進入可能である。本実施形態では、第２血球分離部材５は、試料Ｓを試料展開方向に垂直な方向に分離するように構成されているものであるので、試料Ｓが試料展開方向に垂直な方向から第２血球分離部材５に進入する方が好ましい。そこで、第２血球分離部材５の試料展開方向上流側の端部には、第１血球分離部材３から第２血球分離部材５への試料Ｓの進入を防ぐためのシール部材１０が設けられている。これによって、試料Ｓが試料展開方向から第２血球分離部材５に進入することを防ぐことができる。シール部材１０は、試料Ｓの進入を防ぐことができるものであれば、その構成や素材は特に限定されない。シール部材としては、具体的には、ARcareシリーズ（Adhesives社）などの市販されているものを用いてもよい。なお、シール部材１０は、図２に示すように、省略することもできる。
【００３２】
（３）第２血球分離部材による分離
第２血球分離部材５に移動した液体成分は、第２血球分離部材５中を試料展開方向に垂直な方向に移動する。第２血球分離部材５は、試料Ｓを濾過的に分離するものであり、赤血球などの血球成分は第２血球分離部材５によって捕捉されるが、液体成分は捕捉されずに第２血球分離部材５から排出される。本実施形態では、液体成分が最初に第２血球分離部材５を通過する。従って、液体成分が通過する前に血球成分が第２血球分離部材５に目詰まりすることがないので、液体成分が第２血球分離部材５をスムーズに通過する。従って、本実施形態によれば、検査を迅速に行うことができる。
【００３３】
第２血球分離部材５は、少なくとも赤血球を捕捉し且つ液体成分を通過させることに基づいて赤血球などの血球成分と液体成分を分離するものであればその構成は限定されない。一例では、第２血球分離部材５は、捕捉対象の血球（例えば、赤血球）よりもサイズが小さい細孔を有する多孔質部材からなる。この場合、捕捉対象の血球は細孔を通り抜けられず、第２血球分離部材５に捕捉される。また、多孔質部材中の細孔のサイズは、前記多孔質部材の上面から下面に向かって小さくなってもよい。この場合、前記多孔質部材の上面側では細孔が比較的大きいので試料が広がりやすく、十分に広がった状態で試料が前記多孔質部材の下面側の比較的小さなサイズの細孔に到達し、この細孔によって血球成分が捕捉されるので、効率的な分離が可能であるという利点がある。
なお、上述したように、試料Ｓには様々なサイズの血球成分が含まれ得る。そして、試料Ｓに含まれる赤血球などの血球成分よりも比較的サイズが小さい血球成分は、第２血球分離部材４中で補足されず、液体成分と共に通過する可能性がある。しかしながら、赤血球などの血球成分よりも比較的サイズが小さい血球成分は検出結果に影響を与える可能性が低いことから、第２血球分離部材４を液体成分と共に通過したとしても、本実施形態の作用効果には大きな影響を与えない。
なお、赤血球などの血球の大きさは、動物種によって様々である。例えば、ヒトの赤血球の大きさと比較した場合、イヌの赤血球の大きさは約８０％であり、ネコの赤血球の大きさは約５０％である。ゆえに、例えば、補足対象を赤血球とした場合、第２血球分離部材５は、試料として用いる血液の動物種の赤血球の大きさによって細孔のサイズを適宜選択される。
【００３４】
第２血球分離部材５には市販されている濾過膜を用いてもよく、特許文献１又は２に記載されているような部材を用いてもよい。市販されている濾過膜としては、例えば、BTS SP 100、BTS SP 200、BTS SP 300(Vertical Flow Type, PALL社)などが挙げられる。第２血球分離部材５は、好ましくは、膜状であり、試料展開方向に垂直な方向に試料Ｓを移動させ、試料展開方向に垂直な方向に試料Ｓを分離するものであるが、第２血球分離部材３の構成や第２血球分離部材３による試料分離方向は特に限定されない。例えば、第２血球分離部材３は、ブロック状であってもよく、試料展開方向に試料Ｓを分離するものであってもよい。
【００３５】
第２血球分離部材５から排出された液体成分は、第２血球分離部材５と標識保持部材１１の接触部を通って標識保持部材１１に移動する。本実施形態では、第２血球分離部材５と標識保持部材１１とは直接接触しているが、第２血球分離部材５と標識保持部材１１の間に、第２血球分離部材５から標識保持部材１１への試料Ｓの移動を妨げない別の部材を設けてもよい。
【００３６】
（４）複合体の形成
標識保持部材１１に移動した液体成分は、毛管現象により標識保持部材１１中を移動する。標識保持部材１１は、被検出物と特異的に結合し且つ標識されている標識物質を有している。このため、液体成分中に被検出物が含まれている場合には、被検出物と標識物質とが特異的に結合して複合体が形成される。形成された複合体は、液体成分と共にクロマトグラフ担体７に移動する。なお、複合体を形成していない状態（つまり分離した状態）の被検出物と標識物質も液体成分と共にクロマトグラフ担体７に移動する。
【００３７】
被検出物は、ヒトなどの血液中に含まれるものであり且つ第２血球分離部材５によって濾過されないものであればその種類は特に限定されない。被検出物の例としては、抗原、抗体、ホルモン、ホルモンレセプター、レクチン、レクチン結合性糖質、薬物若しくはその代謝物、薬物レセプター、核酸及びこれらの断片、変異体、組合せ等が挙げられる。被検出物としては、具体的には、細菌、原生生物や真菌などの細胞、ウイルス、タンパク質、多糖類等、例えば、前記インフルエンザウイルスのほか、パラインフルエンザウイルス、ＲＳウイルス、マイコプラズマニューモニエ、ロタウイルス、カルシウイルス、コロナウイルス、アデノウイルス、エンテロウイルス、ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、肝炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群の病原ウイルス、大腸菌、スタフィロコッカスアウレウス、ストレプトコッカスニューモニエ、ストレプトコッカスピヨゲネス、マラリア原虫、その他、消化器系疾患、中枢神経系疾患、出血熱等の様々な疾患の病原体、これらの代謝産物、癌胎児性抗原やシフラなどの腫瘍マーカー、ホルモンなどが例示される。
なおイヌの血液を用いる場合、被検出物としてはさらに、フィラリア成虫抗原が例示される。またネコの血液を用いる場合、被検出物としてはさらに、ネコ白血病ウイルス、ネコ免疫不全ウイルス及びその抗体などが例示される。
【００３８】
標識物質は、上記被検出物と特異的に結合するものであればよい。被検物質と標識物質の特異的な結合としては、例えば、抗原抗体反応による結合やリガンド−レセプター結合等の生物学的親和性に基づく結合が挙げられる。標識物質は、種々の方法で標識することができる。標識物質は、例えば、有色の粒子で標識することができる。この場合、検査結果を目視で確認することができる。有色の粒子としては、例えば、着色されたラテックス粒子、金などの金属コロイドなどが挙げられる。
【００３９】
標識保持部材１１には、グラスファイバー、セルロースファイバーなどの種々の素材のものを用いることができる。標識保持部材１１は、省略することもできる。この場合、標識物質は予め試料Ｓに添加しておくか、第１又は第２血球分離部材３、５等の別の部材に保持させておく。
【００４０】
標識保持部材１１から排出された液体成分は、標識保持部材１１とクロマトグラフ担体７の接触部を通ってクロマトグラフ担体７に移動する。本実施形態では、標識保持部材１１とクロマトグラフ担体７とは直接接触しているが、標識保持部材１１とクロマトグラフ担体７の間に、標識保持部材１１からクロマトグラフ担体７への試料Ｓの移動を妨げない別の部材を設けてもよい。
【００４１】
（５）検査結果の判定
クロマトグラフ担体７に移動した液体成分は、毛管現象によりクロマトグラフ担体７中を移動する。クロマトグラフ担体７は、被検出物と特異的に結合する捕捉物質を判定部９に担持している。このため、液体成分が判定部９に到達すると、液体成分中の被検出物が捕捉物質と特異的に結合して判定部９に固定される。判定部９に固定されている被検出物に標識物質が結合していると、標識物質に施されている標識が判定部９に現れる。例えば、標識物質が有色粒子で標識されていると、その粒子の色が判定部９に現れ、試料Ｓ中に被検出物が存在していることが確認される。なお、被検出物と標識物質が結合した後に被検出物と捕捉物質が結合する場合と、被検出物と捕捉物質が結合した後に被検出物と標識物質が結合する場合の両方があり得る。
捕捉物質は、被検出物と特異的に結合するものであればよい。この被検出物と補足物質の特異的な結合としては、例えば、抗原抗体反応による結合やリガンド−レセプター結合等の生物学的親和性に基づく結合が挙げられる。
例えば被検出物が抗原である場合、抗原に対する抗体を標識物質や補足物質として使用することができる。この場合、標識物質として使用する抗体と補足物質として使用する抗体は、それぞれ抗原の異なる部位（エピトープ）を認識することが好ましい。
例えば被検出物が抗体である場合、抗体に対する抗原を補足物質として使用することができ、抗体に特異的に結合する物質（抗体）を標識物質として使用することができる。
【００４２】
判定部９を通過した液体成分は、クロマトグラフ担体７から排出され、吸収部材１３に吸収される。吸収部材１３が液体成分を吸収することによって液体成分の移動が促進される。吸収部材１３は、省略することもできる。この場合、例えば、クロマトグラフ担体７をより長くする等によって液体成分の移動を促進してもよい。
【００４３】
クロマトグラフ担体７には、ニトロセルロース、ナイロン（例えば、カルボキシル基やアルキル基を置換基として有してもよいアミノ基が導入された修飾ナイロン）、ポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）、セルロースアセテートなどの種々の素材のものを用いることができる。吸収部材１３には、セルロースやグラスファイバーなどの種々の素材のものを用いることができる。
【００４４】
検査を行う際の状況によっては、試料Ｓを試験具１の試料添加部４に添加した後、試験具１をそのまま放置しておき、時間が経過した後に検査結果を確認することがある。このような場合、液体成分よりも後に第１血球分離部材から排出された血球成分が判定部９に到達して判定部９の判定結果に影響を与えてしまうことが懸念される。例えば、赤血球が判定部９に到達すると判定部９が赤く染まり、被検出物の検出の結果として判定部９に現れる色の認識を困難にさせることが懸念される。しかし、本実施形態によれば、第１血球分離部材から排出された血球成分は、濾過的分離部材である第２血球分離部材３によって捕捉されるので、血球成分が判定部９に到達することがなく、検査後に放置しても判定部９が血球成分の影響を受けることがない。
【実施例】
【００４５】
１．実施例１の試験具の作製
図３に示すように、実施例１の試験具を作製した。部材の仕様は、表１の通りにした。部材間の重なりは図３に示した通りである。実施例１の試験具では、保護シート１７と第１血球分離部材３との重なりが小さく、このため、添加された試料の展開速度が比較的大きい。
【００４６】
【表１】
2008249606.tif 000003
【００４７】
２．比較例１の試験具の作製
次に、図４に示すように、比較例１の試験具を作製した。比較例１の試験具は、第２血球分離部材５とシール部材１０を設けていない点を除いては実施例１の試験具と同じ構成である。従って、部材の仕様は、表２の通りになる。部材間の重なりは図４に示した通りである。
【００４８】
【表２】
2008249606.tif 000004
【００４９】
３．実施例２の試験具の作製
図５に示すように、実施例２の試験具を作製した。実施例２の試験具は、実施例１の試験具に類似しているが、保護シート１７のサイズが長く、保護シート１７と第１血球分離部材３との重なりが大きい点が実施例１と異なっている。このため、実施例２の試験具では、添加された試料の展開速度が比較的小さい。
【００５０】
４．比較例２の試験具の作製
図６に示すように、比較例２の試験具を作製した。比較例２の試験具は、比較例１の試験具に類似しているが、保護シート１７のサイズが長く、保護シート１７と第１血球分離部材３との重なりが大きい点が比較例１と異なっている。また、比較例２の試験具は、実施例２の試験具から第２血球分離部材５とシール部材１０を取り除いた構成になっている。
【００５１】
５．効果確認試験
次に、以下の方法で、本発明の効果を実証するための試験を行った。
【００５２】
５−１．実施例１の試験具と比較例１の試験具の比較
実施例１の試験具と比較例１の試験具の試料添加部４にそれぞれ全血１００μＬを添加して展開させた場合の、時間経過ごとに血球が漏れた長さを観測及び測定した。その結果を表３及び図７に示す。図７は、実施例１及び比較例１の試験具についての時間経過ごと試料の展開状況を示す写真である。図７の写真中には、標識保持部材１１の試料展開方向下流側の端を矢印で表示した。この矢印よりも右側の部分の長さを血球が漏れた長さとした。また、クロマトグラフ担体７のうち標識保持部材１１と吸収部材１３の何れとも重なっていない部分の長さに対する血球が漏れた長さの割合を占有率として表３に示した。
【００５３】
【表３】
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【００５４】
表３によると、実施例１の試験具では２０分が経過しても血球が全く漏れ出していないのに対し、比較例１の試験具では３０秒の時点で既に漏れが生じており、１５分経過時点では判定部９に到達して判定部９を着色し、検査結果の判定を困難にしていることが分かる。これによって、本発明の実施例の試験具によれば、検査後の時間経過しても血液中の血球がクロマトグラフ担体７を侵食することがないことが実証された。
【００５５】
５−２．実施例２の試験具と比較例２の試験具の比較
実施例２の試験具と比較例２の試験具の試料添加部４にそれぞれ全血１００μＬを添加して展開させた場合の、時間経過ごとに血球が漏れた長さを観測及び測定した。その結果を表４及び図８に示す。図８は、実施例２及び比較例２の試験具についての時間経過ごとの試料の展開状況を示す写真である。図８の写真中には、標識保持部材１１の試料展開方向下流側の端を矢印で表示した。この矢印よりも右側の部分の長さを血球が漏れた長さとした。また、クロマトグラフ担体７のうち標識保持部材１１と吸収部材１３の何れとも重なっていない部分の長さに対する血球が漏れた長さの割合を占有率として表４に示した。
【００５６】
【表４】
2008249606.tif 000006
【００５７】
表４によると、実施例２の試験具では３０分が経過しても血球が全く漏れ出していないのに対し、比較例２の試験具では３０分経過時点で血球の漏れが生じていることが分かる。実施例２の試験具と比較例２の試験具では、実施例１の試験具と比較例１の試験具と比べて、試料の移動速度が遅いが、この場合でも、本発明の実施例の試験具によれば、検査後の時間経過しても血液中の血球がクロマトグラフ担体７を侵食することがないことが実証された。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】本発明の一実施形態のクロマトグラフィー用試験具の構造を示す断面図である。
【図２】図１のクロマトグラフィー用試験具の変形例を示す断面図である。
【図３】本発明の実施例１のクロマトグラフィー用試験具の構造を示す断面図である。
【図４】比較例１のクロマトグラフィー用試験具の構造を示す断面図である。
【図５】本発明の実施例２のクロマトグラフィー用試験具の構造を示す断面図である。
【図６】比較例１のクロマトグラフィー用試験具の構造を示す断面図である。
【図７】本発明の実施例１と、比較例１のクロマトグラフィー用試験具に試料を添加した場合の経過時間ごとの試料の展開状況を示す写真である。
【図８】本発明の実施例２と、比較例２のクロマトグラフィー用試験具に試料を添加した場合の経過時間ごとの試料の展開状況を示す写真である。
【符号の説明】
【００５９】
１：クロマトグラフィー用試験具  ３：第１血球分離部材  ４：試料添加部  ５：第２血球分離部材  ７：クロマトグラフ担体  ９：判例部  １１：標識保持部材  １３：吸収部材  １５：基材  １７：保護シート  Ｓ：試料
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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