(57)【要約】【課題】細胞接着および細胞接着媒介性の病状の阻害および予防に対して有用な新規の化合物を提供すること。【解決手段】本発明は、細胞接着および細胞接着媒介性の病状の阻害および予防に対して有用な新規の化合物に関する。本発明はまた、これらの化合物を包含する薬学的処方物ならびに細胞接着および細胞接着媒介性の病状の阻害および予防に対してこれらの化合物を使用する方法に関する。本発明の化合物および薬学的組成物は治療および予防薬剤として使用し得る。これらは特に多くの炎症および自己免疫疾患の処置に対して非常に適切である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書中に記載の細胞接着インヒビター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願と重複する参照
本出願は、米国特許出願第08/376,372（1995年１月23日提出）の一部継続出願であり、現在継続中である。
【０００２】
発明の技術分野
本発明は、細胞接着および細胞接着媒介性の病状の阻害および予防に対して有用である新規の化合物に関する。本発明はまた、これらの化合物を含有する薬学的処方物、ならびに細胞接着および細胞接着媒介性の病状の阻害および予防に対してこれらを使用する方法に関連する。本発明の化合物および薬学的組成物は治療剤または予防剤として使用され得る。これらは特に、多くの炎症性疾患および自己免疫疾患の処置に対して非常に適切である。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
細胞接着は、細胞が互いに結合し、特定の標的に向かって移動するかまたは細胞外マトリックス内に局在することによりプロセスされる。このように、細胞接着は多数の生物学的現象の基礎となる基本的な機構の１つを構成する。例えば、細胞接着は、造血細胞の内皮細胞への接着を担い、およびその後の造血細胞の血管外への移動および損傷部位への移動を担う。このように、細胞接着は哺乳動物における炎症および免疫応答のような病状において役割を果たす。
【０００４】
細胞接着に対する分子ベースでの研究により、種々の細胞表面高分子（細胞接着分子またはレセプターとして集合的に知られている）が、細胞-細胞および細胞-マトリクス相互作用を媒介することが示された。例えば、「インテグリン」と呼ばれるタンパク質のスーパーファミリーは、造血細胞とそれらの微環境との間の接着相互作用において重要な媒介物である（非特許文献１)。インテグリンは、αおよびβと呼ばれる２つのサブユニットからなる非共有ヘテロダイマー複合体である。少なくとも12の異なるαサブユニット（α１〜α６、α-Ｌ、α-Ｍ、α-Ｘ、α-IIB、α-Ｖ、およびα-Ｅ）が存在し、および少なくとも９の異なるβサブユニット（β１〜β９）が存在する。αおよびβサブユニット成分のタイプに基づいて、各インテグリン分子はサブファミリーに類別される。
【０００５】
α4β1インテグリンは、超遅延型(varyrate)抗原-４（「VLA-4」）、CD49d/CD29としてもまた知られており、広範に多様な細胞-細胞および細胞-マトリックス接着相互作用の両方に関与する白血球細胞表面レセプターである（非特許文献２）。これはサイトカイン誘導性内皮細胞表面タンパク質、血管細胞接着分子-１（「VCAM-1」）、ならびに細胞外マトリックスタンパク質フィブロネクチン（「FN」）に対するレセプターとして作用する（非特許文献３;非特許文献４;非特許文献５;非特許文献６)。抗-VLA4モノクローナル抗体(「mAb」）は、インビトロおよびインビボの両方において、VLA4依存性接着相互作用を阻害することが示されている（非特許文献７;非特許文献８)。インビボ実験の結果は、VLA4依存性細胞接着のこの阻害がいくつかの炎症性病状および自己免疫疾患を予防または阻害し得ることを示唆する（非特許文献９)。
【０００６】
VLA-4に結合するために必要な最少の活性アミノ酸配列を同定するために、フィブロネクチンの特定の種のCS-1領域（VLA-4結合ドメイン）のアミノ酸配列に基づいて多様な重複ペプチドが合成された（非特許文献１０)。彼らは８アミノ酸ペプチド（Glu-Ile-Leu-Asp-Val-Pro-Ser-Thr（配列番号１））、ならびに２つの小さい重複ペンタペプチド（Glu-Ile-Leu-Asp-Val（配列番号２）およびLeu-Asp-Val-Pro-Ser（配列番号３））を同定し、これらはFN-依存性細胞接着に対して阻害活性を有した。これらの結果は、Leu-Asp-Valのトリペプチドが細胞接着活性に対する最少配列であることを示唆した。Leu-Asp-ValがVLA-4の活性型を発現するリンパ球に対してのみ結合することが最近示さた。従って、インビボでのこのようなペプチドの有用性の問題が生じた（非特許文献１１)。しかし、LDV配列を含有するある大きなペプチドは、インビボにおいて活性となることが続いて示された（非特許文献１２;および非特許文献１３)。
【０００７】
環状ペンタペプチドであるArg-Cys-Asp-TPro-Cys(ここで、TProは4-チオプロリンを示す）がまた記載されており、FNに対するVLA-4およびVLA-5の接着の両方を阻害し得る（非特許文献１４;およびPCT国際出願PCT/US91/04862)。このペプチドは、いくつかの細胞外マトリックスタンパク質に対する認識部位内の共通モチーフとして知られているFN由来のArg-Gly-Aspのトリペプチド配列に基づいた。
【非特許文献１】M.E.Hemler,「インテグリンファミリーにおけるVLAタンパク質：白血球における構造、機能およびその役割。」., Ann.Rev.Immunol.,8,365頁(1990)
【非特許文献２】M.E.Hemler, Ann.Rev.Immunol.,(1990)8,365頁
【非特許文献３】Rueggら、J.Cell Biol.,(1991)177,179頁
【非特許文献４】Waynerら、J.Cell Biol.,(1987)105,1873頁
【非特許文献５】Kramerら、J.Biol.Chem.,(1989)264,4684頁
【非特許文献６】Gehlsenら、Science,(1988)24,1228頁
【非特許文献７】Fergusonら、Proc.Natl.Acad.Sci.,(1991)88,8072頁
【非特許文献８】Fergusonら、J.Immunol.,(1993)150,1172頁
【非特許文献９】R.L.Lobbら、「インビボにおけるα-4インテグリンの病態生理学的な役割」,J.Clin.Invest.,（1994)94,1722-28頁
【非特許文献１０】Komoriyaら、「フィブロネクチンの別のスプライスされたタイプIII関連セグメントドメイン内の主要な細胞タイプ特異的接着部位(CS1)に対する最少の必須配列はロイシン-アスパラギン酸-バリンである」J.Biol.Chem.,(1991)266(23),15075-79頁
【非特許文献１１】E.A.Waynerら、「フィブロネクチンのＶ領域におけるLDV配列の、造血細胞による認識に依存する活性化」J.Cell.Biol.,(1992)116(2),489-497頁
【非特許文献１２】T.A.Fergusonら、「２つのインテグリン結合ペプチドはインビボにおいてＴ細胞媒介性免疫応答を排除する」Proc.Natl.Acad.Sci.USA,(1991)88,8072-76頁
【非特許文献１３】S.M.Wahlら、「合成フィブロネクチンペプチドは白血球接着および再発を妨害することによりラットにおける関節炎を抑制する」J.Clin.Invest.,(1994)94,655-62頁
【非特許文献１４】D.M.Nowlinら、α4β1およびα5β1インテグリン媒介性細胞接着は新規な環状ペンタペプチドを阻害する」J.Biol.Chem.,(1993)268(27)20352-59頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
これらの進歩にもかかわらず、VLA-4依存性細胞接着の小さな、特異的な阻害の必要性は残ったままである。理想的には、このようなインヒビターは、経口投与し得るように半ペプチドまたは非ペプチドであり得る。このような化合物は、細胞接着およびVLA-4結合により媒介される種々の病状の処置、予防または抑制のために有用な薬剤を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
発明の要旨
本発明は、VLA-4に対するリガンドの結合を特異的に阻害する新規な非ペプチド化合物を提供することにより、この問題を解決する。これらの化合物は、VLA-4媒介性細胞接着およびこの接着と関連する病状（例えば、炎症および免疫応答）の阻害、予防および抑制に有用である。本発明の化合物は、単独で、または細胞接着を阻害、予防または抑制するための他の治療剤または予防剤と組み合わせて使用され得る。本発明はまた、これらのVLA-4媒介性細胞接着インヒビターを含有する薬学的処方物および細胞接着の阻害のための本発明の化合物および組成物を用いる方法を提供する。
【００１０】
本発明の実施態様に従って、これらの新規な化合物、組成物および方法は、炎症および免疫疾患の処置に対して有用に使用される。本発明はまた、本発明の化合物の調製方法およびこれらの方法において有用な中間物を提供する。
【００１１】
本発明は、例えば、さらに以下を提供する。
（項目１）以下の式（I）の化合物および式（I）の薬学的に受容可能な誘導体より選択される、細胞接着阻害化合物：
【００１２】
【化１】
2008013574.tif 000002
ここで：
Xは、-ＣＯ2Ｈ、-ＰＯ-3Ｈ、-ＳＯ2Ｒ5、-ＳＯ3Ｈ、-ＯＰＯ-3Ｈ、-ＣＯ2Ｒ4、および-Ｃ(Ｏ)Ｎ(Ｒ4)2からなる群より選択され；
ここでＲ5は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アリール置換アルキル、およびアリール置換アルケニルまたはアリール置換アルキニルからなる群より選択される；
Ｙは、-ＣＯ-、-ＳＯ2-、および-ＰＯ2-からなる群より選択される；
Ｒ1は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキニル、アリール縮合シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アラルキル、アリール置換アルケニルまたはアリール置換アルキニル、シクロアルキル置換アルキル、シクロアルケニル置換シクロアルキル、ビアリール、アルコキシ、アルケノキシ、アルキノキシ、アラルコキシ、アリール置換アルケノキシまたはアリール置換アルキノキシ、アルキルアミノ、アルケニルアミノまたはアルキニルアミノ、アリール置換アルキルアミノ、アリール置換アルケニルアミノまたはアリール置換アルキニルアミノ、アリールオキシ、アリールアミノ、N-アルキルウレア置換アルキル、N-アリールウレア置換アルキル、アルキルカルボニルアミノ置換アルキル、アミノカルボニル置換アルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリル置換アルキル、ヘテロシクリル置換アミノ、カルボキシアルキル置換アラルキル、オキソカルボシクリル縮合アリール、およびヘテロシクリルアルキルからなる群より選択される；
Ｒ2は、水素、アリール、アルキル、アルケニルまたはアルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール置換アルキルからなる群より選択され、ここでＲ2およびＲ3は、それらが結合する原子と一緒になって、複素環を形成し得る；
Ｒ3は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アラルキル、アリール置換アルケニルまたはアリール置換アルキニル、ヒドロキシ置換アルキル、アルコキシ置換アルキル、アラルコキシ置換アルキル、アミノ置換アルキル、(アリール置換アルキルオキシカルボニルアミノ）置換アルキル、チオール置換アルキル、アルキルスルホニル置換アルキル、（ヒドロキシ置換アルキルチオ）置換アルキル、チオアルコキシ置換アルキル、アシルアミノ置換アルキル、アルキルスルホニルアミノ置換アルキル、アリールスルホニルアミノ置換アルキル、モルホリノアルキル、チオモルホリノアルキル、モルホリノカルボニル置換アルキル、チオモルホリノカルボニル置換アルキル、[N-(アルキル、アルケニルまたはアルキニル)-またはN,N-[ジアルキル、ジアルケニル、ジアルキニルまたは（アルキル、アルケニル）-アミノ]カルボニル置換アルキル、カルボキシル置換アルキル、ジアルキルアミノ置換アシルアミノアルキルおよびアルギニン、アスパラギン、グルタミン、S-メチルシステイン、メチオニンおよびその対応するスルホキシドならびにスルホン誘導体、グリシン、ロイシン、イソロイシン、アロイソロイシン、tert-ロイシン、ノルロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、プロリン、アラニン、オルニチン、ヒスチジン、グルタミン、バリン、トレオニン、セリン、アスパラギン酸、β-シアノアラニン、およびアロトレオニンから選択されたアミノ酸側鎖からなる群より選択され、ここでＲ2およびＲ3は、それらが結合する原子と一緒になって、複素環を形成し得る；
Ｒ4は、アリール、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル置換アルキルおよびアリール置換アルキル、水素、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルカルボニル、アミノカルボニル、アミド、モノアルキルアミノカルボニルまたはジアルキルアミノカルボニル、モノアリールアミノカルボニルまたはジアリールアミノカルボニル、アルキルアリールアミノカルボニル、ジアリールアミノカルボニル、モノアシルアミノカルボニルまたはジアシルアミノカルボニル、芳香族アシルまたは脂肪族アシル、必要に応じてアミノ、カルボキシ、ヒドロキシ、メルカプト、モノアルキルアミノまたはジアルキルアミノ、モノアリールアミノまたはジアリールアミノ、アルキルアリールアミノ、ジアリールアミノ、モノアシルアミノまたはジアシルアミノ、アルコキシ、アルケノキシ、アリールオキシ、チオアルコキシ、チオアルケノキシ、チオアルキノキシ、チオアリールオキシ、およびヘテロシクリルからなる群より選択される置換基により置換されるアルキル、からなる群より選択され；そして
ｎは０、１、または２である。
（項目２）以下の式（I）の化合物および（I）の薬学的に受容可能な誘導体より選択される、項目１に記載の化合物：
【００１３】
【化２】
2008013574.tif 000003
ここで：
Xは、-ＣＯ2Ｈ、-ＰＯ-3Ｈ、-ＳＯ2Ｒ5、-ＳＯ3Ｈ、および-ＯＰＯ-3Ｈからなる群より選択され；
ここでＲ5は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アリール置換アルキル、およびアリール置換アルケニルまたはアリール置換アルキニルからなる群より選択される；
Ｙは、-ＣＯ-、-ＳＯ2-、および-ＰＯ2-からなる群より選択される；
Ｒ1は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール縮合シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アリール置換アルキル（「アラルキル」）、アリール置換アルケニルまたはアリール置換アルキニル、シクロアルキル置換アルキル、シクロアルケニル置換シクロアルキル、ビアリール、アルコキシ、アルケノキシ、アルキノキシ、アリール置換アルコキシ、（「アラルコキシ」）、アリール置換アルケノキシまたはアリール置換アルキノキシ、アルキルアミノ、アルケニルアミノまたはアルキニルアミノ、アリール置換アルキルアミノ、アリール置換アルケニルアミノまたはアリール置換アルキニルアミノ、アリールオキシ、アリールアミノ、N-アルキルウレア置換アルキル、N-アリールウレア置換アルキル、アルキルカルボニルアミノ置換アルキル、およびアミノカルボニル置換アルキルからなる群より選択される；
Ｒ2は、水素、アリール、アルキル、アルケニルまたはアルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、およびアリール置換アルキルからなる群より選択される；
Ｒ3は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アラルキル、アリール置換アルケニルまたはアリール置換アルキニル、ヒドロキシ置換アルキル、アルコキシ置換アルキル、アラルコキシ置換アルキル、アミノ置換アルキル、(アリール置換アルキルオキシカルボニルアミノ）置換アルキル、チオール置換アルキル、アルキルスルホニル置換アルキル、（ヒドロキシ置換アルキルチオ）置換アルキル、チオアルコキシ置換アルキル、アシルアミノ置換アルキル、アルキルスルホニルアミノ置換アルキル、アリールスルホニルアミノ置換アルキル、モルホリノアルキル、チオモルホリノアルキル、モルホリノカルボニル置換アルキル、チオモルホリノカルボニル置換アルキル、[N-(アルキル、アルケニルまたはアルキニル)-またはN,N-[ジアルキル、ジアルケニル、ジアルキニルまたは（アルキル、アルケニル）-アミノ]カルボニル置換アルキル、カルボキシル置換アルキル、およびアルギニン、アスパラギン、グルタミン、S-メチルシステイン、メチオニンおよびその対応するスルホキシドならびにスルホン誘導体、グリシン、ロイシン、イソロイシン、アロイソロイシン、tert-ロイシン、ノルロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、プロリン、アラニン、オルニチン、ヒスチジン、グルタミン、バリン、トレオニン、セリン、アスパラギン酸、β-シアノアラニン、およびアロトレオニンから選択されたアミノ酸側鎖からなる群より選択される；
Ｒ4は、アリール、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル置換アルキルおよびアリール置換アルキルからなる群より選択され；そして
nは０、１、または２である。
（項目３）Ｘが-ＣＯ２Ｈである、項目１または２に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目４）Ｒ１が、アリール置換Ｃ１-Ｃ４アルキル基である、項目１または２に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目５）Ｒ１が（Ｎ-Ar’ウレア）-パラ-置換アリールアルキル基である、項目４に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目６）Ｒ１が（Ｎ-Ar’ウレア）-パラ-置換フェニルメチル基である、項目５に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目７）Ｒ１が以下からなる群より選択される、項目１または２に記載の細胞接着阻害化合物：ベンジルオキシ、シアノメチル、シクロヘキシルメチル、メチル、n-ヘキシル、N-フェニルアミノ、フェニル、フェニルカルボニル、フェニルメチル、t-ブトキシ、ｔ−ブチルアミノ、l-インダニル、l-ナフチルメチル、l-フェニルシクロプロピル、２-(４-ヒドロキシル-フェニル)エチル、２-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)フェニルメチル、２-(ビス(フェニルスルホニル)アミノ)フェニルメチル、２-(N’-フェニルウレア)フェニルメチル、２-アミノフェニルメチル、２-ベンズアミドフェニルメチル、２-ブロモ-４-ヒドロキシ-５-メトキシフェニルメチル、２-ヒドロキシフェニルメチル、２-ナフチルメチル、２-フェニルエチル、２-ピリジルメチル、２-キノリニル、２-[４-(N’-フェニルウレア)フェニル]エチル、３-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)フェニルメチル、３-(N’-フェニルウレア)フェニルメチル、３-(N’-フェニルウレア)プロピル、３-(フェニルスルホンアミド)フェニルメチル、３-アセトアミドフェニルメチル、３-アミノフェニルメチル、３-ベンズアミドフェニルメチル、３-ヒドロキシ-４-(N’-フェニルウレア)フェニルメチル、３-ヒドロキシフェニルメチル、３-インドリル、３-メトキシ-４-(N’-フェニルウレア)フェニルメチル、３-メトキシ-４-(N’-(２-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、３-メチル-４-(N’-フェニルウレア)-フェニルメチル、３-ニトロフェニルメチル、３-フェニルプロピル、３-ピリジルメチル、４-(２-アミノベンズアミド）フェニルメチル、４-(ベンズアミド)フェニルメチル、４-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)フェニルメチル、４-(モルホリノカルボニルアミノ)フェニルメチル、４-(N’-(２-クロロフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-クロロフェニル）ウレア）-３-メトキシフェニルメチル、４-(N’-(２-エチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-イソプロピルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-メトキシフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-メチル−３−ピリジル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-ニトロフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-ピリジル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-t-ブチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-チアゾリル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(３-クロロフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(３-メトキシフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(３-ピリジル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(４-ピリジル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(３-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-ベンジルウレア）フェニルメチル、４-(N’-シクロヘキシルウレア）フェニルメチル、４-(N’-エチルウレア）フェニルメチル、４-(N’-イソプロピルウレア）フェニルメチル、４-(N’-メチルウレア）フェニルメチル、４-(N’-p-トルイルウレア）フェニルメチル、４-(N’-フェニルウレア）フェニル、４-(N’-フェニルウレア）フェニルアミノ、４-(N’-フェニルウレア）フェニルメチル、４-(N’-t-ブチルウレア）フェニルメチル、４-(フェニルアミノカルボニルアミノメチル）フェニル、４-(フェニルスルホンアミド)��ェニルメチル、４-(t-ブトキシカルボニルアミノ）フェニルメチル、４-アセトアミドフェニルメチル、４-アミノフェニルアミノ、４-アミノフェニルメチル、４-ベンズアミドフェニルメチル、４-クロロフェニルメチル、４-ヒドロキシ-３-ニトロフェニルメチル、４-ヒドロキシフェニルメチル、４-メトキシフェニルメチル、４-ニトロフェニルアミノ、４-ニトロフェニルメチル、４−フェナセトアミドフェニルメチル、４-フェニルフェニルメチル、４−ピリジルメチル、４-トリフルオロメチルフェニルメチル、４-[２-(N’-メチルウレア）ベンズアミド]フェニルメチル、４-(N’-(２-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-フェニル-N’’-メチルグアニジノ）フェニルメチル、５-(N’-フェニルウレア）ペンチル、５-(N’-t-ブチルウレア）ペンチル、2,2-ジメチルプロピル、2,2-ジフェニルメチル、2,3-ベンゾシクロブチル、3,4-ジヒドロキシフェニルメチル、3,5-ジメトキシ-４-ヒドロキシ-フェニルメチル、４-(１-インドールカルボキシルアミノ）フェニルメチル、６-メトキシ-５-(N’-(２-メチルフェニル）ウレア）-２-ピリジルメチル、４-(1,3-ベンゾオキサゾール-２-イルアミノ）-フェニルメチル、４-（1,3-イミダゾール-２-イルアミノ）-フェニルメチル、３-カルボキシ-1-フェニルプロピル；３-ヒドロキシ-４-(２-メチルフェニル）ウレアフェニルメチル；３-ヒドロキシ-４-(２-クロロフェニル）ウレアフェニルメチル；６-(フェニルウレア）ヘプチル、４-フェニルウレア）ブチル；２-チエニルメチル；４-(2,6-ジメチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-ヒドロキシフェニルウレア）フェニルメチル；３-ブトキシ-４-(２-メチルフェニル）ウレアフェニルメチル；３-ブトキシ-４-(フェニルウレア）フェニルメチル、４-(N-２-ピラジニルウレア）フェニルメチル；２-フェニルエチニル；５-フェニルウレア-２-ピリジルメチル；５-(２-メチルフェニルウレア）-２-ピリジルメチル；４-(３-メチル-２-ピリジルウレア）フェニルメチル；３-ニトロ-４-(フェニルウレア）フェニルメチル；３-アシルアミノ-４-(フェニルウレア）フェニルメチル；４-(N,N-フェニルメチルウレア）フェニルメチル；４-(３-ヒドロキシフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-アセチルアミノフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-プロピオニルアミノフェニルウレア）フェニルメチル；４-(３-ベンジルオキシ-２-ピリジルウレア）フェニルメチル；４-(３-メチル-２-ピリジルウレア）フェニルメチル；４-(インドリルカルボニルアミノ）フェニルメチル；２-(４-(フェニルウレア）フェニル）オキシラニル；４-(N,N’-フェニルメチルウレア）フェニルメチル；４-(２-ジメチルアミノフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-ベンズイミダゾリルアミノ）フェニルメチル；４-(２-ベンズオキサゾリルアミノ）フェニルメチル；４-(２-ベンズチアゾリルアミノ）フェニルメチル；４-(テトラヒドロキノリニルカルボニルアミノ）フェニルメチル；1,3-ジメチル-３-(フェニルウレア）ブチル；ヒドロキシエチルチオメチル；４-(フェニルウレア）フェニルエテニル；３-アミノ-４-(フェニルウレア）フェニルメチル；４-(４-ヒドロキシフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-アミノフェニルウレア）フェニルメチル；４-((２-メチルウレア）フェニルウレア）フェニル���４-(２-ヒドロキシフェニルウレア）-３-メトキシフェニルメチル；４-(２-メチルスルホニルメチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-メチルフェニルウレア）テトラヒドロ−２−ピリミドニルメチル；３-メトキシ-４-(フェニルウレア）-２-ピリジルメチル；４-(２-トリフルオロメチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(３-メチル-２-ピリジルウレア）フェニルメチル；４-(2,4,(1H,3H)-キナゾリンジオニル）フェニルメチル；４-チオウレアフェニルメチル；４-(フェニルチオウレア）フェニルメチル；４-(ピロリジニルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(２-ベンズオキサゾリノニルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(ベンジルオキシウレア）フェニルメチル；４-(チアゾリジニルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-ベンゾイルウレアフェニルメチル；ヒドロキシルウレアフェニルメチル；N’,N’-メチルヒドロキシルウレアフェニルメチル；４-(N’-アリルウレア）フェニルメチル；４-(３-ピロリジニルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(１-ピロリルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(２-ピロリルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(プロピルウレア）フェニルメチル；４-(メトキシウレア）フェニルメチル；４-(ジメチルウレア）フェニルメチル；４-(２-キナゾリニルアミノ）フェニルメチル；４-(２-フラノイルアミノ）フェニルメチル；４-(２-ヒドロキシ-６-メチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-ピリジルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(３-ヒドロキシ-２-メチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-フルオロフェニルウレア）フェニルメチル；４-(３-フルオロフェニルウレア）フェニルメチル；４-(４-フルオロフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-キノリニルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(イソキノリニルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(2,3-ジメチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(2,5-ジメチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-メチル-４-フルオロフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-メチル-３-フルオロフェニルウレア）フェニルメチル；３-カルボキシ-３-フェニルプロピル；４-(５-ヒドロキシ-２-メチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(４-ヒドロキシ-２-メチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(2,4-ジフルオロフェニルウレア）フェニルメチル；３-ジベンソフラニルカルボニル；４-(フェノキシカルボニルアミノ）フェニルメチル；３-フェニルウレアプロピル；４-(フェニルアミノカルボニルオキシ）フェニルメチル；４-シンナモイルフェニルメチル；ジベンゾフラニルメチル；４-(２-メチルフェニルアミノカルボニルオキシ）フェニルメチル；（メチルフェニルウレア）フェニルアミノ；４-(３-インドリルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(フェニルアミノカルボニル）フェニルメチル；４-フェニルアルキニルフェニルメチル；４-(３-ピロリルカルボニルアミノ）フェニルメチル；５-ニトロベンゾフラン-２-イル；５-(２-メチルフェニルウレア）ベンゾフラン-２-イル；３-カルボキシ-３-フェニルプロピル；２-(３-ピリジル）-チアゾール-４-イル；２-(４-ピリジル)-チアゾール−４−イル；２-オキソ-4,5,6,7-テトラヒドロベンゾ[b]フラン-３-イルおよび４-オキソ-4,5,6,7-テトラヒドロベンゾ[b]フラン-３-イル；３-メトキシ-４-(フェニルカルバモイルオキシ）フェニルメチル；５-アミノ-ベンゾフラン-２-イル；ベンジリルアミノフェニルメチルおよび４-[N-２-カルボキシエチル-１-(1,3-ベンゾジオキソリル-５-イル）アミノ-N-ロイシニルアセトアミジルフェニルウレア]フェニルメチル。
（項目８）Ｒ１が以下からなる群から選択される、項目１または２に記載の細胞接着阻害化合物：ベンジルオキシ、シアノメチル、シクロヘキシルメチル、メチル、n-ヘキシル、N-フェニルアミノ、フェニル、フェニルカルボニル、フェニルメチル、t-ブトキシ、ｔ−ブチルアミノ、l-インダニル、l-ナフチルメチル、l-フェニルシクロプロピル、２-(４-ヒドロキシ-フェニル)エチル、２-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)フェニルメチル、２-(ビス(フェニルスルホニル)アミノ)フェニルメチル、２-(N’-フェニルウレア)フェニルメチル、２-アミノフェニルメチル、２-ベンズアミドフェニルメチル、２-ブロモ-４-ヒドロキシ-５-メトキシフェニルメチル、２-ヒドロキシフェニルメチル、２-ナフチルメチル、２-フェニルエチル、２-ピリジルメチル、２-キノリニル、２-[４-(N’-フェニルウレア)フェニル]エチル、３-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)フェニルメチル、３-(N’-フェニルウレア)フェニルメチル、３-(N’-フェニルウレア)プロピル、３-(フェニルスルホンアミド)フェニルメチル、３-アセトアミドフェニルメチル、３-アミノフェニルメチル、３-ベンゾアミドフェニルメチル、３-ヒドロキシ-４-(N’フェニルウレア)フェニルメチル、３-ヒドロキシフェニルメチル、３-インドリル、３-メトキシ-４-(N’-フェニルウレア)フェニルメチル、３-メトキシ-４-(N’-(２-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、３-メチル-４-(N’-フェニルウレア)-フェニルメチル、３-ニトロフェニルメチル、３-フェニルプロピル、３-ピリジルメチル、４-(２-アミノベンゾアミド）フェニルメチル、４-(ベンゾアミド)フェニルメチル、４-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)フェニルメチル、４-(モルホリノカルボニルアミノ)フェニルメチル、４-(N’-(２-クロロフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-クロロフェニル）ウレア）-３-メトキシフェニルメチル、４-(N’-(２-エチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-イソプロピルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-メトキシフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-メチル−３−ピリジル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-ニトロフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-ピリジル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-t-ブチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-チアゾリル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(３-クロロフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(３-メトキシフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(３-ピリジル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(４-ピリジル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(３-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-ベンジルウレア）フェニルメチル、４-(N’-シクロヘキシルウレア）フェニルメチル、４-(N’-エチルウレア）フェニルメチル、４-(N’-イソプロピルウレア）フェニルメチル、４-(N’-メチルウレア）フェニルメチル、４-(N’-p-トルイルウレア）フェニルメチル、４-(N’-フェニルウレア）フェニル、４-(N’-フェニルウレア）フェニルアミノ、４-(N’-フェニルウレア）フェニルメチル、４-(N’-t-ブチルウレア）フェニルメチル、４-(フェニルアミノカルボニルアミノメチル）フェニル、４-(フェニルスルホンアミド)フェニルメチル、４-(t-ブトキシカルボニルアミノ）フェニルメチル、４-アセトアミドフェニルメチル、４-アミノフェニルアミノ、４-アミノフェニルメチル、４-ベンズアミドフェニルメチル、４-クロロフェニルメチル、４-ヒドロキシ-３-ニトロフェニルメチル、４-ヒドロキシフェニルメチル、４-メトキシフェニルメチル、４-ニトロフェニルアミノ、４-ニトロフェニルメチル、４−フェナセトアミドフェニルメチル、４-フェニルフェニルメチル、４−ピリジルメチル、４-トリフルオロメチルフェニルメチル、４-[２-(N’-メチルウレア）ベンズアミド]フェニルメチル、４-(N’-(２-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-フェニル-N’’-メチルグアニジノ）フェニルメチル、５-(N’-フェニルウレア）ペンチル、５-(N’-t-ブチルウレア）ペンチル、2,2-ジメチルプロピル、2,2-ジフェニルメチル、2,3-ベンゾシクロブチル、3,4-ジヒドロキシフェニルメチル、3,5-ジメトキシ-４-ヒドロキシ-フェニルメチル、４-(１-インドールカルボキシルアミノ）フェニルメチル、６-メトキシ-５-(N’-(２-メチルフェニル）ウレア）-２-ピリジルメチル、４-(1,3-ベンズオキサゾール-２-イルアミノ）-フェニルメチルおよび４-（1,3-イミダゾール-２-イルアミノ）-フェニルメチル。
（項目９）Ｒ１が、4-ヒドロキシフェニルメチル、３-メトキシ-４-(N’-フェニルウレア）-フェニルメチル、４-（N’-フェニルウレア）-フェニルメチル、４-（N’-（２-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-（N’-(２-ピリジル）ウレア）-フェニルメチル、３-メトキシ-４-（N’-（２-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、６-メトキシ−５-（N’-（２-メチルフェニル）ウレア）-２-ピリジルメチル、４-（N’-３-メチル-２-ピリジルウレア）フェニルメチル、３-メトキシ-4-（N’-3-メチル-２-ピリジルウレア）フェニルメチル、および３-メトキシ-４-（N’-２-ピリジルウレア）フェニルメチルからなる群より選択される、項目７に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目１０）Ｒ１が、４-ヒドロキシフェニルメチル、３-メトキシ-４-(N’-フェニルウレア）-フェニルメチル、４-（N’-フェニルウレア）-フェニルメチル、４-（N’-（２-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-（N’-２-ピリジル）ウレア）-フェニルメチル、３-メトキシ-4-（N’-（２-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、６-メトキシ−５-（N’-（２-メチルフェニル）ウレア）-２-ピリジルメチルからなる群より選択される、項目９に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目１１）Ｙがカルボニル基である、項目１または２に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目１２）Ｒ2が水素、メチル、またはフェナシルである、項目１または２に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目１３）Ｒ2が水素である、項目１２に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目１４）Ｒ3が以下からなる群より選択されるか、あるいはＲ2と一緒になってプロリン、アゼチジン、またはピペコリン環を形成する、項目１または２に記載の細胞接着阻害化合物：２-（メチルスルホニル）-エチル、３-（ヒドロキシプロピルチオ）-メチル、４-（メチルスルホニルアミノ）-ブチル、４-アセチルアミノブチル、アミノメチル、ベンジル、ブチル、ヒドロキシメチル、イソブチル、メチル、メチルチオメチル、フェニルメチル、プロピル、４-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）-ブチル、N,N-（メチルプロパルギル）アミノ、２-（メチルチオ）エチル、２-（モルホリノ-N-カルボニル）エチル、２-(N-モルホリノ）エチル、２-（N,N-ジメチルアミノ）エチル、４-アミノブチル、４−ベンジルオキシフェニルメチル、２-ベンジルチオメチル、t-ブトキシカルボニルアミノメチル、sec-ブチル、t-ブチル、N,N-ジメチルアミノカルボニルメチル、1,1-エタノ、４-ヒドロキシフェニルメチル、l-ヒドロキシエチル、l-メトキシエチル、４-メトキシフェニルメチル、ベンジルオキシメチル、ベンジルチオメチル、カルボニルメチル、２-メチルスルフィニルエチル、モルホリノ-N-カルボニルメチル、チオモルホリノ-N-カルボニルメチル、２-フェニルエチル、アスパラギン側鎖、プロリン側鎖および２-チアゾリルメチル、４-（フェニルウレア）ブチル；４-（メチルウレア）ブチル；モルホリノカルボニルメチルチオメチル；モルホリノエチルチオメチル；３-ピリジルメチル；４-メチルスルホニルアミノブチル；ヒドロキシメチルチオメチル；２-メチルスルホニルエチル、４-プロピオニルアミノブチル；４-エトキシカルボニルアミノブチル；メトキシカルボニルアミノブチル；カルボメトキシメチルチオメチル；４-t-ブチルウレアブチル；カルボキシメチルチオメチル；ジメチルアミドメチルチオメチル；アセチルアミノプロピル；３-メチルウレアプロピル；４-ビオチノイルアミノブチル；２-チエニルメチル；３-ピリジルメチル；４-トリフルオロアセチルアミノブチル；ジメチルアミノメチルチオメチル；ジメチルアミノエチルチオメチル；４-（ジメチルアミノアセチルアミノ）ブチル。
（項目１５）Ｒ３が、２-（メチルスルホニル）-エチル、３-（ヒドロキシプロピルチオ）-メチル、４-（メチルスルホニルアミノ）-ブチル、４-アセチルアミノブチル、アミノメチル、ベンジル、ブチル、ヒドロキシメチル、イソブチル、メチル、メチルチオメチル、フェニルメチル、プロピル、４-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）-ブチル、N,N-（メチルプロパルギル）アミノ、２-（メチルチオ）エチル、２-（モルホリノ-N-カルボニル）エチル、２-(N-モルホリノ）エチル、２-（N,N-ジメチルアミノ）エチル、４-アミノブチル、４−ベンジルオキシフェニルメチル、２-ベンジルチオメチル、t-ブトキシカルボニルアミノメチル、sec-ブチル、t-ブチル、N,N-ジメチルアミノカルボニルメチル、1,1-エタノ、４-ヒドロキシフェニルメチル、l-ヒドロキシエチル、l-メトキシエチル、４-メトキシフェニルメチル、ベンジルオキシメチル、ベンジルチオメチル、カルボニルメチル、２-メチルスルフィニルエチル、モルホリノ-N-カルボニルメチル、チオモルホリノ-N-カルボニルメチル、２-フェニルエチル、アスパラギン側鎖、プロリン側鎖および２-チアゾリルメチルからなる群より選択される、項目１４に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目１６）Ｒ３が、イソブチル、２-（メチルチオ）エチル、３-（ヒドロキシプロピルチオ）メチル、２-（メチルスルホニル）エチル、４-アセチルアミノブチル、４-（メチルスルホニルアミノ）ブチル、および４-（エトキシカルボニルアミノ）ブチルからなる群より選択される、項目１４に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目１７）Ｒ３が、イソブチル、２-（メチルチオ）エチル、３-（ヒドロキシプロピルチオ）メチル、２-（メチルスルホニル）エチル、４-アセチルアミノブチル、および４-（メチルスルホニルアミノ）ブチルからなる群より選択される、項目１６に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目１８）Ｒ４が以下からなる群より選択される、項目１または２に記載の細胞接着阻害化合物：４-カルボメトキシフェニル、４-カルボキシフェニル、４-フルオロフェニル、４-メトキシフェニル、ベンジル、メチル、フェニル、フェニルメチル、フェニルエチル、４-クロロフェニル、3,4-ジフルオロフェニル、3,4-ジメトキシフェニル、２-メトキシフェニル、３-メトキシフェニル、４-メトキシフェニル、２−ニトロフェニル、３-ピリジル、４-フェノキシフェニル；４-エトキシフェニル；４-ニトロフェニル；４-アセチルアミノフェニル；４-メチルウレアフェニル；２-フルオロフェニル；ナフチル；３-フルオロフェニル；３−ニトロフェニル；水素；２-ニトロフェニル；４-シアノフェニル；３-メトキシフェニル；４-メチルスルホニルアミノ；３-シアノフェニル；４-プロピオニルアミノ；４-アミノフェニル；３-アミノフェニル；４-トリフルオロメトキシフェニル；４-メチルフェニル；４-アミノ-３-ニトロフェニル；４-ヒドロキシ−３−メトキシフェニル；４-ヘキシルオキシフェニル；４-メチルチオフェニル、３-フラニル；４−ジメチルアミノフェニル；３-ヒドロキシ−４−ニトロフェニル；n-ペンチル；カルボキシメチル；２-カルボキシエチル；エチニル；２-チエニル；２-プロペニル；２-プロピニル；メチル；およびプロピル。
（項目１９）Ｒ４が、４-カルボメトキシフェニル、４-カルボキシフェニル、４-フルオロフェニル、４-メトキシフェニル、ベンジル、メチル、フェニル、フェニルメチル、フェニルエチル、４-クロロフェニル、3,4-ジフルオロフェニル、3,4-ジメトキシフェニル、２-メトキシフェニル、３-メトキシフェニル、４-メトキシフェニル、２−ニトロフェニル、および３-ピリジルからなる群より選択される、項目１８に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目２０）Ｒ４が、４-メトキシフェニル、3,4-ジメトキシフェニル、４-フルオロフェニル、４-カルボキシフェニル、４-カルボメトキシフェニル、フェニルエチル、フェニルメチル、アリル、エチニル、および3,4-メチレンジオキシフェニルからなる群より選択される、項目１８に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目２１）Ｒ４が、４-メトキシフェニル、3,4-ジメトキシフェニル、４-フルオロフェニル、４-カルボキシフェニル、４-カルボメトキシフェニル、フェニルエチル、およびフェニルメチルからなる群より選択される、項目２０に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目２２）ＹがＣＯ、ＣＨ２、またはＳＯ2である、項目１または２に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目２３）ＹがＣＯである、項目２２に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目２４）ｎが１である、項目１または２に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目２５）BIO-１００６、BIO-１０５６、BIO-１０８９、BIO-１１７９、BIO-１１９４、BIO-１２２１、BIO-１２２４、BIO-１２３８、BIO-１２４５、BIO-１２４６、BIO-１２４８、BIO-１２７０、BIO-１２８２、BIO-１２９４、BIO-１３２１、BIO-１３３６、BIO-１３８２、およびBIO-１４００からなる群から選択される、項目２に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目２６）BIO-１２１８、BIO-１２７２、BIO-１３１１、BIO-１３１９、BIO-１３４５、BIO-１３４７、BIO-１３５８、BIO-１３６１、BIO-１３８８、BIO-１３９０、BIO-１３９３、BIO-１３９６、BIO-１４２９、BIO-１４４４、BIO-１４７４、BIO-１４７５、BIO-１４９０、BIO-１５１５、BIO-１５２５、BIO-１５２６、BIO-１５３６、BIO-１５９４、BIO-１６４８、BIO-１６５５、BIO-１７２１、BIO-１７２５、BIO-１７２６、BIO-１７２７、BIO-１７２８、BIO-１７２９、BIO-１７３０、BIO-１７３１、およびBIO-１７３２からなる群から選択される、項目１に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目２７）BIO-１２１８、BIO-１２７２、BIO-１３１１、BIO-１３４７、BIO-１３９３、BIO-１４２９、BIO-１５１５、BIO-１７２５、BIO-１７２６、BIO-１７２７、BIO-１７２８、BIO-１７２９、BIO-１７３０、BIO-１７３１、およびBIO-１７３２からなる群より選択される、項目１に記載の細胞接着阻害化合物。
（項目２８）細胞接着の予防、阻害、または抑制に有効な量の項目１〜２７のいずれか１つに記載の化合物、および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物。
（項目２９）コルチコステロイド、気管支拡張剤、抗喘息剤、抗炎症剤、抗リウマチ剤、免疫抑制剤、低代謝剤、免疫調節剤、抗乾癬剤、および抗糖尿病剤からなる群より選択される薬剤をさらに含む、項目２８に記載の薬学的組成物。
（項目３０）哺乳動物における細胞接着を予防、阻害、または抑制する方法であって、項目２８または２９に記載の薬学的組成物を該哺乳動物に投与する工程を包含する、方法。
（項目３１）項目３０に記載の方法であって、細胞接着関連炎症を予防、阻害、または抑制するために使用される、方法。
（項目３２）項目３１に記載の方法であって、細胞接着関連免疫応答または自己免疫応答を予防、阻害、または抑制するために使用される、方法。
（項目３３）項目３０に記載の方法であって、喘息、関節炎、乾癬、移植拒絶反応、多発性硬化症、糖尿病、および炎症性腸疾患からなる群より選択される疾患を処置または予防するために使用される、方法。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
発明の詳細な説明
定義
本明細書中で使用されるように、用語「アルキル」は、単独または組合せにおいて、炭素原子を１〜10個、好ましくは１〜６個、さらに好ましくは１〜４個含む直鎖または分岐鎖のアルキル基をいう。このような基の例は、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、イソアミル、ヘキシル、デシル、などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１５】
用語「アルケニル」は、単独または組合せにおいて、炭素原子を２〜10個、好ましくは２〜６個、さらに好ましくは２〜４個含む直鎖または分岐鎖のアルケニル基をいう。このような基の例は、エテニル、E-プロペニル、Z-プロペニル、イソプロペニル、E-ブテニル、Z-ブテニル、E-イソブテニル、Z-イソブテニル、E-ペンテニル、Z-ペンテニル、デセニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１６】
用語「アルキニル」は、単独または組合せにおいて、炭素原子を２〜10個、好ましくは２〜６個、さらに好ましくは２〜４個含む直鎖または分岐鎖のアルキニル基をいう。このような基の例は、エチニル（アセチレニル）、プロピニル、プロパルギル、ブチニル、ヘキシニル、デシニル、などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１７】
用語「シクロアルキル」は、単独または組合せにおいて、炭素原子を３〜８個、好ましくは３〜６個含む環式アルキル基をいう。このようなシクロアルキル基の例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１８】
用語「シクロアルケニル」は、単独または組合せにおいて、炭素原子を４〜８個、好ましくは５〜６個、および１個以上の二重結合を含む環式炭素環をいう。このようなシクロアルケニル基の例は、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロペンタジエニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１９】
用語「アリール」は、フェニル、ナフチル、インデニル、インダニル、アズレニル、フルオレニル、およびアントラセニルからなる群から選択される炭素環式芳香族基；またはフリル、チエニル、ピリジル、ピロリル、オキサゾリル(oxazolyly)、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、２-ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、1,2,3-オキサジアゾリル、1,2,3-トリアゾリル、1,3,4-チアジアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、1,3,5-トリアジニル、1,3,5-トリチアニル、インドリジニル、インドリル、イソインドリル、3H-インドリル、インドリニル、ベンゾ[b]フラニル、2,3-ジヒドロベンゾフラニル、ベンゾ[b]チオフェニル、1H-インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾイル、プリニル、4H-キノリジニル、キノリニル、イソキノリニル、シノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、1,8-ナフチリジニル、プテリジニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、およびフェノキサジニルからなる群から選択される複素環式芳香族基をいう。
【００２０】
本出願において定義される「アリール」基は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シアノ、カルボキシ、カルボアルコキシ、Ar’置換アルキル、Ar’置換アルケニルまたはアルキニル、1,2-ジオキシメチレン、1,2-ジオキシエチレン、アルコキシ、アルケノキシまたはアルキノキシ、Ar’置換アルコキシ、Ar’置換アルケノキシまたはアルキノキシ、アルキルアミノ、アルケニルアミノまたはアルキニルアミノ、Ar’置換アルキルアミノ、Ar’置換アルケニルアミノまたはアルキニルアミノ、Ar’置換カルボニルオキシ、アルキルカルボニルオキシ、脂肪族アシルまたは芳香族アシル、Ar’置換アシル、Ar’置換アルキルカルボニルオキシ、Ar’置換カルボニルアミノ、Ar’置換アミノ、Ar’置換オキシ、Ar’置換カルボニル、アルキルカルボニルアミノ、Ar’置換アルキルカルボニルアミノ、アルコキシカルボニルアミノ、Ar’置換アルコキシカルボニルアミノ、Ar’-オキシカルボニルアミノ、アルキルスルホニルアミノ、モノ（Ar’スルホニル）アミノまたはビス（Ar’スルホニル）アミノ、Ar’置換アルキルスルホニルアミノ、モルホリノカルボニルアミノ、チオモルホリノカルボニルアミノ、N-アルキルグアニジノ、N-Ar’グアニジノ、N-N-（Ar’、アルキル）グアニジノ、N,N-(Ar’,Ar’)グアニジノ、N,N-ジアルキルグアニジノ、N,N,N-トリアルキルグアニジノ、N-アルキルウレア、N,N-ジアルキルウレア、N-Ar’ウレア、N,N-（Ar’,アルキル）ウレアおよびN,N-(Ar’)2ウレア；アシルカルボニルアミノ；Ar’置換アリール、芳香族アシル置換芳香族アシルまたは芳香族アシル置換脂肪族アシル；Ar’置換ヘテロシクリル；Ar’置換シクロアルキルまたはAr’置換シクロアルケニル、ヘテロシクリルアルコキシ、N,N-(Ar’,ヒドロキシル）ウレア；Ar’置換シクロアルキルおよびAr’置換シクロアルケニル；Ar’置換ビアリール；Ar’置換アミノカルボニルアミノ；Ar’-メルカプト置換アルキル；Ar’アミノ置換アリル；Ar’オキシ置換アルキル；Ar’置換アミノシクロアルキルおよびAr’置換シクロアルケニル；アラルキルアミノスルホニル；アラルコキシアルキル；N-Ar’置換チオウレア；N-アラルコキシウレア；N-ヒドロキシルウレア；N-アルケニルウレア；N,N-（アルキル、ヒドロキシル）ウレア；ヘテロシクリル；チオアリールオキシ置換アリール、N,N-（アリール、アルキル）ヒドラジノ；Ar’置換スルホニルヘテロシクリル；アラルキル置換ヘテロシクリル；シクロアルキルおよびシクロアルケニル(cycloakenyl-)置換ヘテロシクリル；シクロアルキル縮合アリール；アリールオキシ置換アルキル；ヘテロシクリルアミノ；Ar’置換アリールアミノスルホニル；チオアリール置換チオキシ；およびAr’置換アルケノイル；脂肪族アシルアミノカルボニルまたは芳香族アシルアミノカルボニル；脂肪族アシル置換アルケニルまたは芳香族アシル置換アルケニル；Ar’置換アミノカルボニルオキシ；Ar’,Ar’二置換アリール；脂肪族アシル置換アシルまたは芳香族アシル置換アシル；ベンゾ縮合ヘテロシクリルカルボニルアミノ；Ar’置換ヒドラジノ；Ar’置換アミノスルホニル；Ar’置換アルキルイミノ；Ar’置換ヘテロシクリル；Ar’,Ar’二置換アシルアミノ；Ar’置換シクロアルケノニルアミノ；ヘテロシクリルアルコキシ；N,N-Ar’,ヒドロキシルウレア；N,N’-Ar’,ヒドロキシルウレア；ヘテロシクリルカルボニルアミノ；Ar’置換アミノカルボニルヘテロシクリル；Ar’置換アミノカルボニル；Ar’置換カルボニルアミノ；Ar’置換アミノスルホニルアミノ；Ar’置換メルカプトアルキル；Ar’-アミノ置換ビアリール；アラルキルアミノアルコキシ；アルキルおよびアリールオキシ置換アルコキシ；ヘテロシクリルカルボニル；Ar’置換スルホニルアルキル；Ar’-アミノカルボシクリル；アラルキルスルホニル；アリール置換アルケニル；ヘテロシクリルアルキルアミノ；ヘテロシクリルアルキルアミノカルボニル；Ar’置換スルホニルアミノアルキル；Ar’置換シクロアルキル；チオアリールオキシアルキル；チオアリールオキシメルカプト；シクロアルキルカルボニルアルキル；シクロアルキル置換アミノ；Ar’置換アリールアミノ；アリールオキシカルボニルアルキル；ホスホロジアミジル酸またはエステル；アリールオキシジメチルシロキシ；1,3-インダンジオニルカルボニルアルキル；1,3,-インダンジオニルカルボニル；オキサミジル；ヘテロシクリルアルキリデニル；ホルムアミジニル；ベンザリジニル；ベンザルヒドラジノ；アリールスルホニルウレア；ベンジリルアミノ；４−（Ｎ−２−カルボキシアルキル-１-(1,3-ベンゾジオキソール-５-イル)-アミノ-N-ロイシニルアルキルアミジルアリールウレア）；Ar’-カルバモイルオキシウレアおよびアルキル置換ウレアならびにアリールオキシ置換ウレア；からなる群から独立して選択される１〜４つの置換基を独立して含み得る。ここで、"Ar’"は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、1,2,-ジオキシメチレン、1,2,-ジオキシエチレン、アルコキシ、アルケノキシ、アルキノキシ、アルキルアミノ、アルケニルアミノまたはアルキニルアミノ、アルキルカルボニルオキシ、脂肪族アシルまたは芳香族アシル、アルキルカルボニルアミノ、アルコキシカルボニルアミノ、アルキルスルホニルアミノ、N-アルキルウレアまたはN,N-ジアルキルウレアからなる群から選択される１〜３個の置換基を有する上記で定義した炭素環式アリール基または複素環式アリール基である。
【００２１】
用語「アルコキシ」は、単独でまたは組合せにおいて、アルキルエーテル基をいい、ここで、用語「アルキル」は、定義した通りである。適切なアルキルエーテル基の例は、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、イソプロポキシ、n-ブトキシ、イソブトキシ、sec-ブトキシ、tert-ブトキシなどが挙げられるがこれらに限定されない。
【００２２】
用語「アルケノキシ」は、単独でまたは組合せにおいて、アルケニル-O-の式の基をいい、ここで、用語「アルケニル」は、上記で定義した通りであり、ただし基はエノールエーテルではない。適切なアルケノキシ基の例は、アリルオキシ、E-３-メチル-２-プロペノキシおよびZ-３-メチル-２-プロペノキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２３】
用語「アルキニルオキシ」は、単独でまたは組合せにおいて、アルキニル-O-の式の基をいい、ここで、用語「アルキニル」は、上記で定義した通りであり、ただし基はイノールエーテルではない。適切なアルキノキシ基の例は、プロパルギルオキシ、２-ブチニルオキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２４】
用語「チオアルコキシ」は、アルキル-S-の式のチオエーテル基をいい、ここで、アルキルは上記で定義した通りである。
【００２５】
用語「アルキルアミノ」は、単独でまたは組合せにおいて、モノアルキル置換アミノ基またはジアルキル置換アミノ基（すなわち、アルキル-NH-式または(アルキル)２-N-式の基）をいい、ここで、用語「アルキル」は、上記で定義した通りである。適切なアルキルアミノ基の例は、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、t-ブチルアミノ、N,N-ジエチルアミノなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２６】
用語「アルケニルアミノ」は、単独でまたは組合せにおいて、アルケニル-NH-または(アルケニル)２N-式の基をいい、ここで、用語「アルケニル」は、上記で定義した通りであり、ただし基はエナミンではない。このようなアルケニルアミノ基の例は、アリルアミノ基である。
【００２７】
用語「アルキニルアミノ」は、単独でまたは組合せにおいて、アルキニル-NH-または(アルキニル)２N-式の基をいい、ここで、用語「アルキニル」は、上記で定義した通りであり、基はイナミンではない。このようなアルキニルアミノ基の例は、プロパルギルアミノ基である。
【００２８】
用語「アリールオキシ」は、単独でまたは組合せにおいて、アリール-O-式の基をいい、ここで、アリールは、上記で定義した通りである。アリールオキシ基の例は、フェノキシ、ナフトキシ、ピリジルオキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
用語「アリールアミノ」は、単独でまたは組合せにおいて、アリール-NH-式の基をいい、ここで、アリールは、上記で定義した通りである。アリールアミノ基の例は、フェニルアミノ(アニリド)、ナフチルアミノ、２-ピリジルアミノ、３-ピリジルアミノ、および４-ピリジルアミノなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３０】
用語「ビアリール」は、単独でまたは組合せにおいて、アリール-アリール-式の基をいい、ここで、用語「アリール」は、上記で定義した通りである。
【００３１】
用語「チオアリール」は、単独でまたは組合せにおいて、アリール-S-式の基をいい、ここで、用語「アリール」は、上記で定義した通りである。チオアリール基の例は、チオフェニル基である。
【００３２】
用語「アリール縮合シクロアルキル」は、単独でまたは組合せにおいて、アリール基と２つの隣接原子を共有するシクロアルキル基をいい、ここで、用語「シクロアルキル」および「アリール」は、上記で定義した通りである。アリール縮合シクロアルキル基の例は、ベンゾ縮合シクロブチル基である。
【００３３】
用語「脂肪族アシル」は、単独でまたは組合せにおいて、アルカン、アルケン、またはアルキンカルボン酸から誘導されるアルキル-CO-、アルケニル-CO-、およびアルキニル-CO-式の基をいい、ここで、用語「アルキル」、「アルケニル」、および「アルキニル」は、上記で定義した通りである。このような脂肪族アシル基の例は、アセチル、プロピオニル、ブチリル、バレリル、４-メチルバレリル、アクリロイル、クロチル、プロピオリル、メチルプロピオリルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３４】
用語「芳香族アシル」は、単独でまたは組合せにおいて、アリール-CO-式の基をいい、ここで、用語「アリール」は、上記で定義した通りである。適切な芳香族アシル基の例は、ベンゾイル、４-ハロベンゾイル、４-カルボキシベンゾイル、ナフトイル、ピリジルカルボニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３５】
用語「モルホリノカルボニル」および「チオモルホリノカルボニル」は、単独でまたは他の用語との組合せにおいて、それぞれN-カルボニル化モルホリノ基およびN-カルボニル化チオモルホリノ基をいう。
【００３６】
用語「アルキルカルボニルアミノ」は、単独でまたは組合せにおいて、アルキル-CONH-式の基をいい、ここで、用語「アルキル」は、上記で定義した通りである。
【００３７】
用語「アルコキシカルボニルアミノ」は、単独でまたは組合せにおいて、アルキル-OCONH-式の基をいい、ここで、用語「アルキル」は、上記で定義した通りである。
【００３８】
用語「アルキルスルホニルアミノ」は、単独でまたは組合せにおいて、アルキル-SO２NH-式の基をいい、ここで、用語「アルキル」は、上記で定義した通りである。
【００３９】
用語「アリールスルホニルアミノ」は、単独でまたは組合せにおいて、アリール-SO２NH-式の基をいい、ここで、用語「アリール」は、上記で定義した通りである。
【００４０】
用語「N-アルキルウレア」は、単独でまたは組合せにおいて、アルキル-NH-CO-NH-式の基をいい、ここで、用語「アルキル」は、上記で定義した通りである。
【００４１】
用語「N-アリールウレア」は、単独でまたは組合せにおいて、アリール-NH-CO-NH-式の基をいい、ここで、用語「アリール」は、上記で定義した通りである。
【００４２】
用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素を意味する。
【００４３】
本明細書中、他に定義されない限り、用語「複素環」（および対応する「ヘテロシクリル」基形態）は、安定な３〜７員環の単環式複素環または８〜11員環の二環式不飽和複素環をいい、これらは、必要に応じてベンゾ縮合され得る。各複素環は、１つ以上の炭素原子および窒素、酸素、および硫黄からなる群より選択される１〜４つのヘテロ原子からなる。本明細書中で使用されるように、用語「窒素および硫黄ヘテロ原子」は、窒素および硫黄の任意の酸化形態および任意の塩基性窒素の４級化形態を含む。さらに、任意の環窒素は、必要に応じて、本明細書中の式Iの化合物で定義される置換基R4で置換され得る。複素環は、任意の環内炭素またはヘテロ原子に結合され、その結果安定な構造を構築し得る。好ましい複素環は、５〜７員環の単環式複素環および８〜10員環の二環式複素環を含む。複素環は、必要に応じて、環の１〜３位でオキソ置換され得、そして必要に応じて、上記の「アリール」置換基の群から選択された１〜４の置換基で独立して置換され得る。
【００４４】
用語「脱離基」は、一般に、求核剤（例えば、アミン、およびアルコールまたはチオール求核剤）によって容易に置換され得る基をいう。このような脱離基は周知であり、そしてカルボキシレート、N-ヒドロキシスクシンイミド、N-ヒドロキシベンゾトリアゾール、ハロゲン（ハロゲン化物）、トリフレート、トシレート、メシレート、アルコキシ、チオアルコキシなどを含む。
【００４５】
用語「適切に保護したα-アミノ酸の活性化誘導体」および「活性化置換フェニル酢酸誘導体」は、対応するアシルハロゲン化物（例えば、酸フッ化物、酸塩化物、および酸臭化物）、対応する活性化エステル（例えば、ニトロフェニルエステル、１-ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)のエステル、またはヒドロキシスクシンイミド(HOSu）のエステル、および当該分野の範囲内の従来の他の誘導体をいう。
【００４６】
上記の定義を考慮して、本出願を通して使用した他の化学用語は、当業者によって容易に理解され得る。用語は、単独でまたはそれらの任意の組合せにおいて使用される。好ましいおよびより好ましい基の鎖長は、このような全ての組合せに適用する。
【００４７】
本発明は、レセプターに対するリガンドの結合を阻害することによるVLA-４-媒介細胞接着を阻害し得る化合物を提供する。
【００４８】
これらの化合物は、式(I)：
【００４９】
【化３】
2008013574.tif 000004
およびその薬学的に受容可能な誘導体によって表される。
ここで：
Xは、-CO2H、-PO-3H、-SO2R5、-SO3H、-OPO-3H、-CO2R4、および-C(O)N(R4)2からなる群より選択され；
ここでR5は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アリール置換アルキル、およびアリール置換アルケニルまたはアリール置換アルキニルからなる群より選択される；
Yは、-CO-、-SO2-、および-PO2-からなる群より選択される；
R1は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール縮合シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アリール置換アルキル（「アラルキル」）、アリール置換アルケニルまたはアリール置換アルキニル、シクロアルキル置換アルキル、シクロアルケニル置換シクロアルキル、ビアリール、アルコキシ、アルケノキシ、アルキノキシ、アリール置換アルコキシ、（「アラルコキシ」）、アリール置換アルケノキシまたはアリール置換アルキノキシ、アルキルアミノ、アルケニルアミノまたはアルキニルアミノ、アリール置換アルキルアミノ、アリール置換アルケニルアミノまたはアリール置換アルキニルアミノ、アリールオキシ、アリールアミノ、N-アルキルウレア置換アルキル、N-アリールウレア置換アルキル、アルキルカルボニルアミノ置換アルキル、アミノカルボニル置換アルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリル置換アルキル、ヘテロシクリル置換アミノ、カルボキシアルキル置換アラルキル、オキソカルボシクリル縮合アリール、およびヘテロシクリルアルキルからなる群より選択される；
R2は、水素、アリール、アルキル、アルケニルまたはアルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール置換アルキルからなる群より選択され、ここでR2およびR3は、それらが結合する原子と一緒になって複素環を形成し得る；
R3は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アラルキル、アリール置換アルケニルまたはアリール置換アルキニル、ヒドロキシ置換アルキル、アルコキシ置換アルキル、アラルコキシ置換アルキル、アミノ置換アルキル、(アリール置換アルキルオキシカルボニルアミノ）置換アルキル、チオール置換アルキル、アルキルスルホニル置換アルキル、（ヒドロキシ置換アルキルチオ）置換アルキル、チオアルコキシ置換アルキル、アシルアミノ置換アルキル、アルキルスルホニルアミノ置換アルキル、アリールスルホニルアミノ置換アルキル、モルホリノアルキル、チオモルホリノアルキル、モルホリノカルボニル置換アルキル、チオモルホリノカルボニル置換アルキル、[N-(アルキル、アルケニルまたはアルキニル）-またはN,N-[ジアルキル、ジアルケニル、ジアルキニルまたは（アルキル、アルケニル）-アミノ]カルボニル置換アルキル、カルボキシル置換アルキル、ジアルキルアミノ置換アシルアミノアルキルおよびアルギニン、アスパラギン、グルタミン、S-メチルシステイン、メチオニンおよびその対応するスルホキシドならびにスルホン誘導体、グリシン、ロイシン、イソロイシン、アロイソロイシン、tert-ロイシン、ノルロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、プロリン、アラニン、オルニチン、ヒスチジン、グルタミン、バリン、トレオニン、セリン、アスパラギン酸、β-シアノアラニン、およびアロトレオニンから選択されたアミノ酸側鎖からなる群より選択され、ここでR2およびR3は、それらが結合する原子と一緒になって複素環を形成し得る；
R4は、アリール、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル置換アルキルおよびアリール置換アルキル、水素、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルカルボニル、アミノカルボニル、アミド、モノアルキルアミノカルボニルまたはジアルキルアミノカルボニル、モノアリールアミノカルボニルまたはジアリールアミノカルボニル、アルキルアリールアミノカルボニル、ジアリールアミノカルボニル、モノアシルアミノカルボニルまたはジアシルアミノカルボニル、芳香族アシルまたは脂肪族アシル、必要に応じてアミノ、ヒドロキシ、メルカプト、モノアルキルアミノまたはジアルキルアミノ、モノまたはジアリールアミノ、アルキルアリールアミノ、ジアリールアミノ、モノアシルアミノまたはジアシルアミノ、アルコキシ、アルケノキシ、アリールオキシ、チオアルコキシ、チオアルケノキシ、チオアルキノキシ、チオアリールオキシ、およびヘテロシクリルからなる群より選択される置換基により置換されるアルキルからなる群より選択され；そして
nは０、１、または２である。
【００５０】
「薬学的に受容可能な誘導体」は、本発明の化合物の任意の薬学的に受容可能な塩、エステル、またはこのようなエステルの塩を示す。本発明はまた、患者に対する投与の際、本発明の化合物（例えば、プロドラッグ）を（直接にまたは間接に）投与し得る任意の他の化合物を含む。本発明はまた、細胞接着および細胞接着媒介病状を阻害、予防、または抑制する能力によって特徴づけられた本発明の化合物の代謝物または残渣を包含する。
【００５１】
本発明の別の好ましい実施態様において、R1は、ベンジルオキシ、シアノメチル、シクロヘキシルメチル、メチル、n-ヘキシル、N-フェニルアミノ、フェニル、フェニルカルボニル、フェニルメチル、t-ブトキシ、ｔ−ブチルアミノ、l-インダニル、l-ナフチルメチル、l-フェニルシクロプロピル、２-(４-ヒドロキシル-フェニル)エチル、２-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)フェニルメチル、２-(ビス(フェニルスルホニル)アミノ)フェニルメチル、２-(N’-フェニルウレア)フェニルメチル、２-アミノフェニルメチル、２-ベンズアミドフェニルメチル、２-ブロモ-４-ヒドロキシ-５-メトキシフェニルメチル、２-ヒドロキシフェニルメチル、２-ナフチルメチル、２-フェニルエチル、２-ピリジルメチル、２-キノリニル、２-[４-(N’-フェニルウレア)フェニル]エチル、３-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)フェニルメチル、３-(N’-フェニルウレア)フェニルメチル、３-(N’-フェニルウレア)プロピル、３-(フェニルスルホンアミド)フェニルメチル、３-アセトアミドフェニルメチル、３-アミノフェニルメチル、３-ベンズアミドフェニルメチル、３-ヒドロキシ-４-(N’フェニルウレア)フェニルメチル、３-ヒドロキシフェニルメチル、３-インドリル、３-メチルオキシ(methyoxy)-４-(N’-フェニルウレア)フェニルメチル、３-メトキシ-４-(N’-(２-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、３-メチル-４-(N’-フェニルウレア)-フェニルメチル、３-ニトロフェニルメチル、３-フェニルプロピル、３-ピリジルメチル、４-(２-アミノベンズアミド）フェニルメチル、４-(ベンズアミド)フェニルメチル、４-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)フェニルメチル、４-(モルホリノカルボニルアミノ)フェニルメチル、４-(N’-(２-クロロフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-クロロフェニル）ウレア）-３-メトキシフェニルメチル、４-(N’-(２-エチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-イソプロピルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-メトキシフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-メチル−３−ピリジル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-ニトロフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-ピリジル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-t-ブチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-チアゾリル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(３-クロロフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(３-メトキシフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(３-ピリジル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(４-ピリジル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(３-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-(２-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-ベンジルウレア）フェニルメチル、４-(N’-シクロヘキシルウレア）フェニルメチル、４-(N’-エチルウレア）フェニルメチル、４-(N’-イソプロピルウレア）フェニルメチル、４-(N’-メチルウレア）フェニルメチル、４-(N’-p-トルイルウレア）フェニルメチル、４-(N’-フェニルウレア）フェニル、４-(N’-フェニルウレア）フェニルアミノ、４-(N’-フェニルウレア）フェニルメチル、４-(N’-t-ブチルウレア）フェニルメチル、４-(フェニルアミノカルボニルアミノメチル）フェニル、４-(フェニルスルホンアミド)フェニルメチル、４-(t-ブトキシカルボ��ルアミノ）フェニルメチル、４-アセトアミドフェニルメチル、４-アミノフェニルアミノ、４-アミノフェニルメチル、４-ベンズアミドフェニルメチル、４-クロロフェニルメチル、４-ヒドロキシ-３-ニトロフェニルメチル、４-ヒドロキシフェニルメチル、４-メトキシフェニルメチル、４-ニトロフェニルアミノ、４-ニトロフェニルメチル、４−フェナセトアミドフェニルメチル、４-フェニルフェニルメチル、４−ピリジルメチル、４-トリフルオロメチルフェニルメチル、４-[２-(N’-メチルウレア）ベンズアミド]フェニルメチル、４-(N-’-(２-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-(N’-フェニル-N’’-メチルグアニジノ）フェニルメチル、５-(N’-フェニルウレア）ペンチル、５-(N’-t-ブチルウレア）ペンチル、2,2-ジメチルプロピル、2,2-ジフェニルメチル、2,3-ベンゾシクロブチル、3,4-ジヒドロキシフェニルメチル、3,5-ジメトキシ-４-ヒドロキシ-フェニルメチル、４-(１-インドールカルボキシルアミノ）フェニルメチル、６-メトキシ-５-(N’-(2-メチルフェニル）ウレア）-２-ピリジルメチル、４-(1,3-ベンズオキサゾール-2-イルアミノ）-フェニルメチルおよび４-（1,3-イミダゾール-２-イルアミノ）-フェニルメチル、３-カルボキシ-1-フェニルプロピル；３-ヒドロキシ-４-(２-メチルフェニル）ウレアフェニルメチル；３-ヒドロキシ-４-(２-クロロフェニル）ウレアフェニルメチル；６-(フェニルウレア）ヘプチル、４-フェニルウレア）ブチル；２-チエニルメチル；４-(2,6-ジメチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-ヒドロキシフェニルウレア）フェニルメチル；３-ブトキシ-４-(２-メチルフェニル）ウレアフェニルメチル；３-ブトキシ-４-(フェニルウレア）フェニルメチル、４-(N-２-ピラジニルウレア）フェニルメチル；２-フェニルエチニル；５-フェニルウレア-２-ピリジルメチル；５-(２-メチルフェニルウレア）-２-ピリジルメチル；４-(３-メチル-２-ピリジルウレア）フェニルメチル；３-ニトロ-４-(フェニルウレア）フェニルメチル；３-アシルアミノ-４-(フェニルウレア）フェニルメチル；４-(N,N-フェニルメチルウレア）フェニルメチル；４-(３-ヒドロキシフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-アセチルアミノフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-プロピオニルアミノフェニルウレア）フェニルメチル；４-(３-ベンジルオキシ-２-ピリジルウレア）フェニルメチル；４-(３-メチル-２-ピリジルウレア）フェニルメチル；４-(インドリルカルボニルアミノ）フェニルメチル；２-(４-(フェニルウレア）フェニル）オキシラニル；４-(N,N’-フェニルメチルウレア）フェニルメチル；４-(２-ジメチルアミノフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-ベンズイミダゾリルアミノ）フェニルメチル；４-(２-ベンズオキサゾリルアミノ）フェニルメチル；４-(２-ベンズチアゾリルアミノ）フェニルメチル；４-(テトラヒドロキノリニルカルボニルアミノ）フェニルメチル；1,3-ジメチル-3-(フェニルウレア）ブチル；ヒドロキシエチルチオメチル；４-(フェニルウレア）フェニルエテニル；３-アミノ-４-(フェニルウレア）フェニルメチル；４-(４-ヒドロキシフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-アミノフェニルウレア）フェニルメチル；４-((２-メチルウレア）フェニルウレア）フェニル；４-(２-ヒドロキシフェニルウレア）���-メトキシフェニルメチル；４-(２-メチルスルホニルメチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-メチルフェニルウレア）テトラヒドロ−２−ピリミドニルメチル；３-メトキシ-４-(フェニルウレア）-２-ピリジルメチル；４-(２-トリフルオロメチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(３-メチル-２-ピリジルウレア）フェニルメチル；４-(2,4,(1H,3H)-キナゾリンジオニル）フェニルメチル；４-チオウレアフェニルメチル；４-(フェニルチオウレア）フェニルメチル；４-(ピロリジニルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(２-ベンズオキサゾリノニルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(ベンジルオキシウレア）フェニルメチル；４-(チアゾリジニルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-ベンゾイルウレアフェニルメチル；ヒドロキシルウレアフェニルメチル；N’,N’-メチルヒドロキシルウレアフェニルメチル；４-(N’-アリルウレア）フェニルメチル；４-(３-ピロリジニルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(１-ピロリルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(２-ピロリルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(プロピルウレア）フェニルメチル；４-(メトキシウレア）フェニルメチル；４-(ジメチルウレア）フェニルメチル；４-(２-キナゾリニルアミノ）フェニルメチル；４-(２-フラノイルアミノ）フェニルメチル；４-(２-ヒドロキシ-６-メチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-ピリジルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(３-ヒドロキシ-２-メチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-フルオロフェニルウレア）フェニルメチル；４-(３-フルオロフェニルウレア）フェニルメチル；４-(４-フルオロフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-キノリニルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(イソキノリニルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(2,3-ジメチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(2,5-ジメチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-メチル-４-フルオロフェニルウレア）フェニルメチル；４-(２-メチル-３-フルオロフェニルウレア）フェニルメチル；３-カルボキシ-３-フェニルプロピル；４-(５-ヒドロキシ-２-メチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(４-ヒドロキシ-２-メチルフェニルウレア）フェニルメチル；４-(2,4-ジフルオロフェニルウレア）フェニルメチル；３-ジベンゾフラニルカルボニル；４-(フェノキシカルボニルアミノ）フェニルメチル；３-フェニルウレアプロピル；４-(フェニルアミノカルボニルオキシ）フェニルメチル；４-シンナモイルフェニルメチル；ジベンゾフラニルメチル；４-(2-メチルフェニルアミノカルボニルオキシ）フェニルメチル；（メチルフェニルウレア）フェニルアミノ；４-(３-インドリルカルボニルアミノ）フェニルメチル；４-(フェニルアミノカルボニル）フェニルメチル；４-フェニルアルキニルフェニルメチル；４-(３-ピロリルカルボニルアミノ）フェニルメチル；５-ニトロベンゾフラン-２-イル；５-(２-メチルフェニルウレア）ベンゾフラン-２-イル；３-カルボキシ-３-フェニルプロピル；２-(３-ピリジル）-チアゾール-４-イル；２-(４-ピリジル)-チアゾール−４−イル；２-オキソ-4,5,6,7-テトラヒドロベンゾ[b]フラン-３-イルおよび４-オキソ-4,5,6,7-テトラヒドロベンゾ[b]フラン-３-イル；３-メトキシ-４-(フェニルカルバモイル��キシ）フェニルメチル；５-アミノ-ベンゾフラン-２-イル；ベンジリルアミノフェニルメチルおよび４-[N-２-カルボキシエチル-１-(1,3-ベンゾジオキソリル-５-イル）アミノ-N-ロイシニルアセトアミジルフェニルウレア]フェニルメチルからなる群より選択される。
【００５２】
最も好ましくは、R1は、４-ヒドロキシフェニルメチル、３-メトキシ-４-(N’-フェニルウレア）-フェニルメチル、４-（N’-フェニルウレア）-フェニルメチル、４-（N’-（２-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、４-（N’-２-ピリジル）ウレア）-フェニルメチル、３-メトキシ-４-（N’-（２-メチルフェニル）ウレア）フェニルメチル、６-メトキシ−５-（N’-（２-メチルフェニル）ウレア）-２-ピリジルメチル、４-（N’-３-メチル-２-ピリジルウレア）フェニルメチル、３-メトキシ-４-（N’-３-メチル-２-ピリジルウレア）フェニルメチル、および３-メトキシ-４-（N’-２-ピリジルウレア）フェニルメチルからなる群より選択される。
【００５３】
別の好ましい実施態様において、R1は、アリール置換C1-C4アルキル基である。さらに好ましくは、R1は、（N-Ar’-ウレア）-パラ-置換アリールアルキル基、そして最も好ましくは、（N-Ar’-ウレア）-パラ-置換フェニルメチル基である。
【００５４】
別の好ましい実施態様に従って、R2は、水素、メチル、またはフェナセチルからなる群より選択される。最も好ましくは、R2は水素である。
【００５５】
別の好ましい実施態様に従って、R3は、２-（メチルスルホニル）-エチル、３-（ヒドロキシプロピルチオ）-メチル、４-（メチルスルホニルアミノ）-ブチル、４-アセチルアミノブチル、アミノメチル、ベンジル、ブチル、ヒドロキシメチル、イソブチル、メチル、メチルチオメチル、フェニルメチル、プロピル、４-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）-ブチル、N,N,-（メチルプロパルギル）アミノ、２-（メチルチオ）エチル、２-（モルホリノ-N-カルボニル）エチル、２-(N-モルホリノ）エチル、２-(N,N,-ジメチルアミノ）エチル、４-アミノブチル、４−ベンジルオキシフェニルメチル、２-ベンジルチオメチル、t-ブトキシカルボニルアミノメチル、sec-ブチル、t-ブチル、N,N,-ジメチルアミノカルボニルメチル、1,1-エタノ、★４-ヒドロキシフェニルメチル（★l-アミノシクロプロピルカルボン酸から誘導されるアミノ酸側鎖）、l-ヒドロキシエチル、l-メトキシエチル、４-メトキシフェニルメチル、ベンジルオキシメチル、ベンジルチオメチル、カルボニルメチル、２-メチルスルフィニルエチル、モルホリノ-N-カルボニルメチル、チオモルホリノ-N-カルボニルメチル、２-フェニルエチル、アスパラギン側鎖、プロリン側鎖、２-チアゾリルメチル、４-（フェニルウレア）ブチル、４-（メチルウレア）ブチル；モルホリノカルボニルメチルチオメチル；モルホリノエチルチオメチル；３-ピリジルメチル；４-メチルスルホニルアミノブチル、ヒドロキシメチルチオメチル；２-メチルスルホニルエチル、４-プロピオニルアミノブチル；４-エトキシカルボニルアミノブチル；メトキシカルボニルアミノブチル；カルボメトキシメチルチオメチル；４-t-ブチルウレアブチル；カルボキシメチルチオメチル；ジメチルアミドメチルチオメチル；アセチルアミノプロピル；３-メチルウレアプロピル；４-ビオチノイルアミノブチル；２-チエニルメチル；３-ピリジルメチル；４-トリフルオロアセチルアミノブチル；ジメチルアミノメチルチオメチル；ジメチルアミノエチルチオメチル；４-（ジメチルアミノアセチルアミノ）ブチルからなる群より選択されるか、あるいはR2と一緒になってプロリン、アゼチジン、またはピペコリン環を形成する。
【００５６】
最も好ましくは、R3は、イソブチル、２-（メチルチオ）エチル、３-（ヒドロキシプロピルチオ）メチル、２-（メチルスルホニル）エチル、４-アセチルアミノブチル、４-（メチルスルホニルアミノ）ブチル、および４-（エトキシカルボニルアミノ）ブチルからなる群より選択される。
【００５７】
さらなる別の実施態様に従って、R4は、４-カルボメトキシフェニル、４-カルボキシフェニル、４-フルオロフェニル、４-メトキシフェニル、ベンジル、メチル、フェニル、フェニルメチル、フェニルエチル、４-クロロフェニル、3,4-ジフルオロフェニル、3,4-ジメトキシフェニル、２-メトキシフェニル、３-メトキシフェニル、４-メトキシフェニル、２−ニトロフェニル、３-ピリジル、４-フェノキシフェニル；４-エトキシフェニル；４-ニトロフェニル；４-アセチルアミノフェニル；４-メチルウレアフェニル；２-フルオロフェニル；ナフチル；３-フルオロフェニル；３−ニトロフェニル；水素；２-ニトロフェニル；４-シアノフェニル；３-メトキシフェニル；４-メチルスルホニルアミノ；３-シアノフェニル；４-プロピオニルアミノ；４-アミノフェニル；３-アミノフェニル；４-トリフルオロメトキシフェニル；４-メチルフェニル；４-アミノ-３-ニトロフェニル；４-ヒドロキシ−３−メトキシフェニル；４-ヘキシルオキシフェニル；４-メチルチオフェニル；３-フラニル；４−ジメチルアミノフェニル；３-ヒドロキシ−４−ニトロフェニル；n-ペンチル；カルボキシメチル；２-カルボキシエチル；エチニル；２-チエニル；２-プロペニル；２-プロピニル；メチル；およびプロピルからなる群より選択される。さらに好ましくは、R4は、４-メトキシフェニル、3,4-ジメトキシフェニル、４-フルオロフェニル、４-カルボキシフェニル、４-カルボメトキシフェニル、フェニルエチル、フェニルメチル、アリル、エチニル、および3,4-メチレンジオキシフェニルからなる群より選択される。
【００５８】
別の好ましい実施態様において、YはCO、CH2、またはSO2である。最も好ましくは、YはCOである。
【００５９】
別の好ましい実施態様に従って、式(I)中のXは、COOHである。
【００６０】
さらに別の好ましい実施態様に従って、nは１である。
【００６１】
本発明のいくつかの好ましい化合物（Xはカルボキシル基であり、そしてnは１である）の例を、表１に提供する。
【００６２】
【化４】
2008013574.tif 000005
【００６３】
【化５】
2008013574.tif 000006
【００６４】
【化６】
2008013574.tif 000007
【００６５】
【化７】
2008013574.tif 000008
【００６６】
【化８】
2008013574.tif 000009
【００６７】
【化９】
2008013574.tif 000010
【００６８】
【化１０】
2008013574.tif 000011
【００６９】
【化１１】
2008013574.tif 000012
より好ましい式(I)の化合物は、以下の通りである：BIO-1006、BIO-1056、BIO-1089、BIO-1179、BIO-1194、BIO-1221、BIO-1224、BIO-1238、BIO-1245、BIO-1246、BIO-1248、BIO-1270、BIO-1282、BIO-1294、BIO-1321、BIO-1336、BIO-1382、およびBIO-1400。なおさらに好ましい化合物は、BIO-1218、BIO-1272、BIO-1311、BIO-1319、BIO-1345、BIO-1347、BIO-1358、BIO-1361、BIO-1388、BIO-1390、BIO-1393、BIO-1396、BIO-1429、BIO-1444、BIO-1474、BIO-1475、BIO-1490、BIO-1515、BIO-1525、BIO-1526、BIO-1536、BIO-1594、BIO-1648、BIO-1655、BIO-1721、BIO-1725、BIO-1726、BIO-1727、BIO-1728、BIO-1729、BIO-1730、BIO-1731、およびBIO-1732である。最も好ましくは、BIO-1218、BIO-1272、BIO-1311、BIO-1347、BIO-1393、BIO-1429、BIO-1515、BIO-1725、BIO-1726、BIO-1727、BIO-1728、BIO-1729、BIO-1730、BIO-1731、およびBIO-1732である。
【００７０】
本発明の化合物は、任意の従来の技術を用いて合成され得る。好ましくは、これらの化合物は、容易に入手可能な出発物質（例えば、α-アミノ酸）から化学的に合成される。これらの化合物の合成のためには、係数法および収束法がまた好ましい。例えば、収束アプローチにおいては、最終生成物の大部分は、伸長する分子鎖に小断片を増加的に付加するよりはむしろ、合成の最終段階において寄せ集められる。
【００７１】
１つの実施態様によれば、本発明の化合物は、以下のようにして合成され得る。保護されたキラルなアミンを、α-保護βアミノ酸エステルを生成するために、α、β-不飽和エステルに添加する。適切な脱保護において、β-アミノ酸エステルを、適切に活性化されたエステル部分に結合させる。結合生成物は、適切に機能化されれば、さらに別の活性化エステル部分とさらに反応し得る。この物質は、本発明の所望の化合物を得るためにさらに操作され得る。上記の順序の各工程において、エステルは対応する酸に加水分解されて、本発明の別の化合物を提供し得る。
【００７２】
あるいは、上記の活性化されたエステル部分が、最初に一緒に結合され得、次いで得られた化合物が、β-アミノ酸エステル部に結合させられ得る。この時点で、最後の操作および／または必要な脱保護工程が行われ得る。
【００７３】
あるいは、適切な条件下で、所望の機能性が活性化されたエステル部分の１つにおいて組み込まれ得る（保護される、または保護されない）。次いで、この断片を、β-アミノ酸エステル、または活性化されたエステルに予め結合させたβ-アミノ酸エステルからなる部分に結合させる。次いで、得られた生成物は、必要な場合、本発明の化合物を得るために任意の保護工程に供させられ得る。
【００７４】
あるいは、本発明の化合物の合成において使用されるキラルなβ-アミノ酸エステルは、例えば米国特許第5,344,957号（この開示は、本明細書中で参考として援用される）に記載されるような周知の技術により合成され得る。
【００７５】
本発明の化合物はまた、選択的な生物学的特性を増強するために適切な機能性を付加することにより修飾され得る。このような修飾は当該分野で公知であり、そして所定の生体系（例えば、血液、リンパ系、中枢神経系）への生物学的な浸透力を増大する、経口有効性を増大する、注射による投与を許容できるように可溶性を増大する、代謝を変化させる、および排泄速度を変化させる修飾を包含する。
【００７６】
本出願を通して使用されるように、用語「患者」は、ヒトを含む哺乳動物を示す。そして用語「細胞」は、ヒト細胞を含む哺乳動物細胞を示す。
【００７７】
一旦合成されると、本発明の化合物の活性およびVLA-4特異性は、インビトロおよびインビボのアッセイを用いて決定され得る。
【００７８】
例えば、これらの化合物の細胞接着阻害活性は、VLA-4発現細胞のフィブロネクチン-コートプレートまたはCS-1-コートプレートへの結合をブロックするために必要とされるインヒビターの濃度を決定することにより測定され得る。このアッセイにおいて、マイクロタイターウェルは、フィブロネクチン（CS-1配列を含有する）またはCS-1のいずれかでコートされる。CS-1が用いられる場合、これは、ウェルに結合させるために、キャリアタンパク質（例えばウシ血清アルブミン）に結合されなくてはならない。一旦ウェルがコートされると、次いで多様な濃度の試験化合物が適切に標識されたVLA-4発現細胞とともに添加される。あるいは、試験化合物が最初に添加され得、そして細胞を添加する前に、コートしたウェルとともにインキュベートされ得る。この細胞を、ウェル内で少なくとも30分間インキュベートさせる。インキュベーション後、ウェルを空にし、そして洗浄する。結合の阻害は、種々の各濃度の試験化合物および試験化合物を含まないコントロールのプレートに結合した蛍光または放射能を定量することにより測定される。
【００７９】
このアッセイに利用され得るVLA-4発現細胞は、Ramos細胞、Jurkat細胞、A375メラノーマ細胞、およびヒト末梢血液リンパ球（PBL）を包含する。このアッセイに使用される細胞は、蛍光標識または放射性標識され得る。
【００８０】
直接の結合アッセイはまた、本発明の化合物の阻害活性を定量するために使用され得る。このアッセイにおいて、IgG1分子のヒンジ領域の上に結合したVCAMの最初の２つの免疫グロブリン（globin）ドメイン（D1D2）を含有するVCAM-IgG融合タンパク質（「VCAM2D-IgG」）を、マーカー酵素（例えば、アルカリホスファターゼ(「AP」)）と結合させる。このVCAM-IgG融合物の合成は、PCT公開WO90/13300（この開示は、本明細書中で参考として援用される）に記載される。この融合物のマーカー酵素に対する結合は、当該分野で周知の架橋法により達成される。
【００８１】
次いで、VCAM-IgG酵素結合物を、マルチウェルフィルトレーションプレート（例えば、MilliporeMultiscreen Assay System(Millipore Corp., Bedford, MA)に含まれるプレート）のウェル内に置く。次いで、種々の濃度の試験阻害化合物をウェルに添加し、次いでVLA-4発現細胞を添加する。細胞、化合物、およびVCAM-IgG酵素結合物を共に混合し、そして室温でインキュベートさせる。
【００８２】
インキュベーション後、ウェルを真空排水し、細胞および任意の結合VCAMを後に残す。結合VCAMの量は、VCAM-IgGに結合した酵素に対する適切な比色定量基質を添加し、そして反応生成物の量を決定することにより決定する。反応産物の減少は、細胞接着阻害活性の増大を示す。
【００８３】
本発明の化合物のVLA-4阻害特異性を評価するために、インテグリンの他の主要な群（すなわち、β2およびβ3）、ならびにVLA-5、VLA-6、およびα4β7のような他のβ1インテグリンについてアッセイを行う。これらのアッセイは、上記の接着阻害および直接結合アッセイに類似であり得、適切なインテグリン発現細胞および対応するリガンドを置き換える。例えば、多形核細胞（PMN）は、その表面でβ2インテグリンを発現し、そしてICAMに結合する。β3インテグリンは血小板集合体に関与し、そして阻害は、標準的な血小板集合アッセイにおいて測定され得る。VLA-5は、Arg-Gly-Asp配列に特異的に結合し、一方、VLA-6はラミニンに結合する。α4β7はVLA-4の最近発見されたホモログであり、これはまた、フィブロネクチンおよびVCAMに結合する。α4β7に関する特異性は、上記のVCAM-IgG-酵素マーカー結合物、およびα4β7を発現するが、しかしVLA-4を発現しない細胞株（例えばRPMI-8866細胞）を用いる結合アッセイにおいて決定される。
【００８４】
一旦VLA-4-特異的インヒビターが同定されると、これらはインビボのアッセイにおいてさらに特徴づけられ得る。このようなアッセイの１つは、例えば、P.L.Chisholmら、「インテグリンα-4サブユニットに対するモノクローナル抗体が、マウス接触過敏応答を阻害する」、Eur.J. Immunol., 23, 682-688頁 (1993)および「免疫学における現在のプロトコル」、J. E. Coliganら、編、JohnWiley & Sons、New York, 1、4.2.1〜4.2.5頁、(1991)（これらの開示は、本明細書中で参考として援用される）に記載されるように、動物における接触過敏の阻害を試験する。このアッセイにおいて、動物の皮膚は、刺激物（例えばジニトロフルオロベンゼン）に曝すこと、次いで軽い物理的刺激（例えば、鋭い縁で皮膚を軽く引っかくこと）により敏感化される。回復期間後、動物は同様の手順に従って再敏感化される。敏感化の数日後、動物の一方の耳を化学的刺激に曝し、一方、他方の耳を非刺激コントロール溶液で処置する。耳を処置した直後に、この動物に皮下注射によりVLA-4インヒビターの種々の投与量を与える。細胞接着関連炎症のインビボの阻害は、処置した耳と未処置の耳とにおける動物の耳の膨張する応答を測定することにより評価される。膨張は、カリパス、または耳の厚さを測定するために適切な他の器具を用いて測定する。このようにして、炎症を阻害するために最も適切な本発明のインヒビターを同定し得る。
【００８５】
本発明のインヒビターを試験するために使用され得る他のインビボのアッセイは、ヒツジ喘息アッセイである。このアッセイは、本質的には、W. M. Abrahamら、「α-インテグリンは、ヒツジにおいて抗原誘導後期気道応答および伸長した気道過敏性を媒介する」J.Clin Invest., 93, 776-87頁（1994)（この開示は本明細書中で参考として援用される）において記載されるように行われる。このアッセイは、喘息ヒツジにおけるAscaris抗原-誘導後期気道応答および気道過敏性の阻害を測定する。
【００８６】
本発明の化合物は、無機または有機の酸および塩基より誘導される薬学的に受容可能な塩の形態で使用され得る。このような酸の塩は以下を包含する：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、2-ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモエート（pamoate）、ペクチン酸塩、過硫酸塩、3-フェニル-プロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピルビン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、およびウンデカン酸塩。塩基性塩は、アンモニウム塩、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩およびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩およびマグネシウム塩）、有機塩基を有する塩（例えば、ジシクロヘキシルアミン塩、N-メチル-D-グルカミン）、およびアルギニン、リジンなどのようなアミノ酸を有する塩を包含する。また、塩基性窒素含有基は、低級アルキルハロゲン化物（例えば、メチル、エチル、プロピル、およびブチルの塩化物、臭化物、およびヨウ化物）；ジアルキル硫酸塩（例えば、ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミル硫酸塩）；長鎖ハロゲン化物（例えば、デシル、ラウリル、ミリスチル、およびステアリルの塩化物、臭化物、およびヨウ化物）、アラルキルハロゲン化物（例えば、ベンジル、およびフェネチルの臭化物）などのような試薬を用いて４級化され得る。水溶性または油溶性または分散性の生成物がこれにより得られる。
【００８７】
本発明の化合物は、経口、非経口、吸入スプレーにより、局所的、直腸、鼻腔、口腔、膣、または移植リザーバーを通じて投与され得る薬学的組成物中に処方され得る。本明細書中で用いられる用語「非経口」は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、クモ膜下腔内、肝臓内、病巣内、および頭蓋内注射または注入技術を包含する。
【００８８】
本発明の薬学的組成物は、本発明の任意の化合物またはその薬学的に受容可能な塩、ならびに任意の薬学的に任意の受容可能なキャリアを含有する。本明細書中で用いられる用語「キャリア」は、本明細書中で、受容可能なアジュバントおよびビヒクルを包含する。本発明の薬学的組成物中で使用され得る薬学的に受容可能なキャリアは、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン）、緩衝化物質（例えば、リン酸緩衝液）、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、塩、または電解質（例えば、硫酸プロタミン）、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベース物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸塩、ロウ、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、および羊毛脂を包含するが、これらに限定されない。
【００８９】
本発明によれば、薬学的組成物は、例えば、無菌の注射可能な水溶性または油性の懸濁物のような、無菌の注射可能な調製物の形態であり得る。この懸濁物は、適切な分散剤または湿潤剤、および懸濁剤を用いて当該分野で公知の技術に従って処方され得る。無菌の注射可能な調製物はまた、非毒性の非経口的に受容可能な希釈物あるいは溶媒中の無菌の注射可能な溶液または懸濁物（例えば、1,3-ブタンジオール）であり得る。使用され得る受容可能なビヒクルおよび溶媒は、水、リンゲル溶液、および等張塩化ナトリウム溶液である。さらに、無菌の不揮発油は、溶媒または懸濁培地として従来的に使用され得る。この目的のために、低刺激性の不揮発油は、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含有して使用され得る。オレイン酸またはそのグリセリド誘導体のような脂肪酸は、天然の薬学的に受容可能な油（例えば、オリーブ油またはヒマシ油）と同様に、注射可能物の調製に有用であり、特に、これらのポリオキシエチレン化形態である。これらの油溶液または懸濁物はまた、長鎖アルコール希釈物または分散剤（例えば、Ph.Helvまたは類似のアルコール）を含有し得る。
【００９０】
本発明の薬学的組成物は、カプセル、錠剤、水溶性懸濁物、または溶液を包含するが、これらに限定されない経口的に受容可能な任意の投与形態で、経口投与され得る。経口用途のための錠剤の場合は、共通して使用されるキャリアはラクトースおよびコーンスターチを包含する。潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）もまた、典型的に添加される。カプセル形態における経口投与のために、有用な希釈物は、ラクトースおよび乾燥コーンスターチを包含する。水溶性の懸濁物が経口用途のために必要とされる場合、活性成分が乳化剤および懸濁剤と組み合わされる。所望される場合は、特定の甘味料、香料、または色素剤もまた添加され得る。
【００９１】
あるいは、本発明の薬学的組成物は、直腸投与のための坐薬の形態で投与され得る。これらは、薬剤を適切な非刺激性賦形剤（これは室温で固体であるが、直腸温度においては液体であり、それにより、直腸内で融解して薬物を放出する）と混合することにより調製され得る。このような物質は、ココアバター、密ろう、およびポリエチレングリコールを包含する。
【００９２】
本発明の薬学的組成物はまた、特に処置する標的が、目、皮膚、または腸管下部の疾患を包含する、局所的な適用により容易に接近できる領域または器官を含有する場合に、局所的に投与され得る。適切な局所的処方は、これらの各領域または器官について容易に調製される。
【００９３】
腸管下部のための局所的な適用は、直腸坐薬処方（上記を参照のこと）において、または適切な浣腸剤処方において行われ得る。局所的経皮パッチもまた、使用され得る。
【００９４】
局所適用のために、薬学的組成物は、１つ以上のキャリア中に懸濁または溶解させた活性成分を含有する適切な軟膏において処方され得る。本発明の化合物の局所的な投与のためのキャリアは、鉱油、液状ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ロウ、および水を包含するが、これらに限定されない。あるいは、薬学的組成物は、１つ以上の薬学的に受容可能なキャリア中に懸濁または溶解させた活性成分を含有する適切なローション剤またはクリーム剤において処方され得る。適切なキャリアは、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート60、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、2-オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、および水を包含するが、これらに限定されない。
【００９５】
眼用途のために、薬学的組成物は、等張pH調整滅菌生理食塩溶液中の微粒化懸濁物として、または好ましくは、等張pH調整滅菌生理食塩溶液中の溶液として、塩化ベンジルアルコニウムのような保存剤を用いて、または用いないでのいずれかで処方され得る。あるいは、眼用途のために、薬学的組成物は、例えば、ワセリンのような軟膏において処方され得る。
【００９６】
本発明の薬学的組成物はまた、ネブライザー、乾燥粉末吸入器、または計量投与吸入器の使用を通じて、鼻腔エアロゾルまたは鼻腔吸入により投与され得る。このような組成物は、製剤処方の分野で周知の技術に従って調製され、そして使用されるベンジルアルコールまたは他の適切な保存剤、バイオアベイラビリティを増強するための吸収プロモーター、フルオロカーボン、および／または他の従来の可溶化剤または分散剤を用いて、生理食塩溶液中の溶液として調製され得る。
【００９７】
単回投与形態を生成するためにキャリア物質と組み合わされ得る活性成分の量は、処置される宿主、および特定の投与形態に依存して多様である。しかし、任意の特定の患者のための特定の投与量および処置用法は、使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、通常の健康状態、性別、食餌、投与時間、排泄速度、薬物の組み合わせ、および処置医の判断、ならびに処置中の特定の疾患の重篤度を包含する種々の因子に依存する。活性成分の量はまた、もしあれば、成分が同時投与される治療剤または予防剤に依存し得る。
【００９８】
細胞接着を妨害、抑制、または阻害するために効果的な本発明の化合物の投与量および投与速度は、インヒビターの性質、患者のサイズ、処置の目標、処置される病状の性質、使用される特定の薬学的組成物、および処置医の判断のような種々の因子に依存する。１日あたり約0.001〜約100mg/kg体重の間、好ましくは、１日あたり約0.1〜約10mg/kg体重の活性成分化合物の投与レベルが有用である。
【００９９】
他の実施態様によれば、本発明の化合物を含有する組成物はまた、コルチコステロイド、気管支拡張剤、抗喘息剤（マスト細胞安定剤）、抗炎症剤、抗リウマチ剤、免疫抑制剤、低代謝剤、免疫調節剤、抗乾癬剤、および抗糖尿病剤からなる群より選択される付加的な薬剤を含み得る。これらの各クラス中の特定の化合物は、「Comprehensive Medicinal Chemistry」Pergamon Press, Oxford, England,970-986頁（1990）（この開示は本明細書中で参考として援用される）中の適切な群見出しで列挙される任意の化合物から選択され得る。この群内にはまた、テオフィリン、スルファサラジン、およびアミノサリチル酸塩（抗炎症剤）のような化合物；シクロスポリン、FK-506、およびラパマイシン（免疫抑制剤）；シクロホスファミドおよびメソトレキセート（抗代謝剤）；ならびにインターフェロン（免疫調節剤）のような化合物が含まれる。
【０１００】
他の実施態様によれば、本発明は、細胞接着関連炎症、および細胞接着関連免疫または自己免疫応答を、妨害、阻害、または抑制するための方法を提供する。VLA4関連細胞接着は、種々の炎症、免疫疾患、および自己免疫疾患において中心的な役割を果たす。従って、本発明の化合物による細胞接着の阻害は、炎症、免疫疾患、および自己免疫疾患の処置方法または予防方法において利用され得る。好ましくは、本発明の方法を用いて処置される疾患は、喘息、関節炎、乾癬、移植拒絶反応、多発性硬化症、糖尿病、および炎症性腸疾患から選択される。
【０１０１】
これらの方法は、単治療において、または抗炎症剤または免疫抑制剤との組み合わせにおいて使用され得る。このような組み合わせ療法は、単回投与形態、あるいは同時にまたは異なる時間に投与される複数回投与形態での薬剤の投与を包含する。
【０１０２】
本発明がより十分に理解され得るために、以下の実施例を記載する。これらの実施例は、例示のみの目的のためであり、どのようにも本発明の範囲を限定するように解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１０３】
手順Ａ-桂皮酸エステルの合成
方法Ａ：CH2Cl2(10mＬ)中の桂皮酸または置換された桂皮酸(1.0mmol)に(COCl)2(1.5mmol)をゆっくりと添加した。反応混合物を室温で４時間撹拌し、そして溶媒を真空下で除去し、酸塩化物を得た。メタノールまたはt-ブチルアルコール(５mＬ)を添加し、溶媒の除去後メチルまたはt-ブチルエステルを定量的に得た。
【０１０４】
方法Ｂ：THF(10mＬ)中の適切なアルデヒド(1.0mmol)にt-ブトキシカルボニルメチレントリフェニルホスホラン(1.0mmol,Aldrich)を添加し、そして得られた混合物を室温で16時間撹拌した。反応混合物を石油エーテル(10mＬ)で希釈し、そしてセライトのパッドに通して濾過した。濾液を回収し、そして真空下で濃縮し、所望の生成物を得た。
【０１０５】
【化１２】
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【０１０６】
【化１３】
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【０１０７】
【化１４】
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【０１０８】
【化１５】
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【０１０９】
【化１６】
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手順Ｂ-βアミノ酸の合成
磁気撹拌棒を備え付けた２Lの丸底フラスコを、1000mＬのMeOHで満たし、そしてフラスコの内容物を撹拌(tear)した。無水HCl(11g、0.29mol)をシリンダーから泡立たせた。桂皮酸(0.29mol)を、この溶液にニートで一度に添加した。得られた混合物を、反応がTLC分析により完了したと判断されるまで環流下で加熱した。反応物を室温まで冷却し、次いで一晩冷蔵した。結晶生成物を中程度のフリット(frit)上で吸引濾過により回収し、そして固形物(cake)を冷MeOHで洗浄した。固体をフィルター上で乾燥し、白色または白色に近い生成物を得た。
β-３に対する前駆体：収率：94％；TLC(３:１ヘキサン/EtOAc;UV):Rf＝0.48;mp＝134−136℃;1HNMR(CDCl3,300MHz):7.58(d,1H,J＝15.9Hz),7.00−6.97(m,3H),6.79(d,1H,J＝7.9Hz),6.24(d,1H,J＝15.9Hz),5.98(s,2H),3.77(s,3H);MS(FAB):206。
β-５に対する前駆体：収率：84％；TLC(３:１ヘキサン/EtOAc;UV):Rf＝0.48;mp＝89−91℃;1HNMR(CDCl3,300MHz):7.63(d,1H,J＝15.9Hz),7.46(d,2H,J＝8.7Hz),6.89(d,2H,J＝8.7Hz),6.29(d,1H,J＝15.9Hz),3.82(s,3H),3.77(s,3H);MS(FAB):192。
【０１１０】
メチル4-メトキシシンナメートへの(R)-(+)-N-ベンジル-1-フェニルエチルアミンのマイケル付加
ストッパー、温度計、およびAr導入口を有する250mＬの滴下漏斗を備え付けた１Lの３口丸底フラスコを、（R)-(+)-N-ベンジル-1-フェニルエチルアミン塩酸塩(0.132mol,32.6g,シンナメートに基づいて1.1当量)で満たし、そして器具にArを30分間流した。塩を乾燥THF(200mＬ)中で懸濁し、そして混合物をドライアイス/アセトン浴を用いて-70℃の内部温度まで冷却した。懸濁液に、内部温度が-65℃を超えないような速度で、滴下漏斗からn-BuLi(ヘキサン中で2.5M,0.257mol,103mＬ,アミン塩酸塩に基づいて1.95当量)を添加した。添加に90分を必要とした。添加が完了した後、反応物を-70℃で１時間撹拌した。THF(125mＬ)中のメチル4-メトキシシンナメート(0.120mol,23g,1当量)の溶液を、内部温度が-65℃を超えないような速度で、90分かけて滴下漏斗から添加した。添加完了後、反応物を-70℃で２時間撹拌した。TLC分析は反応が完了したことを示した。反応物を、５％クエン酸(250mＬ)の添加によりクエンチ(quenchcold)し、そして室温で一晩撹拌した。２Lの分液漏斗において、層を分離し、有機物を５％クエン酸（１×125mＬ）で洗浄した。合わせた水溶液を、EtOAc（１×200mＬ)で抽出した。次いで、合わせた有機物を５％NaHCO3（１×150mＬ）およびブライン(１×150mＬ）で洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、そして一定の重量までエバポレートして、粘性オイル（これは放置すると固化した）として粗生成物(50.04g,理論の103％）を得た。純粋な物質を、粗生成物をヘプタン(1.5〜２mＬ/g,75〜100mＬ総体積）で粉砕し、そして室温で一晩撹拌することにより得た。固体を中程度のフリット上で吸引濾過により回収し、そして固形物を冷ヘプタン（２×50mＬ）を注ぐことにより洗浄した。固体をフィルター上で乾燥し、白色粉末として純粋な生成物(28.93g,60%収率）を得た。TLC(４:１ヘキサン/EtOAc）:Rf＝0.50(I2,UV);mp＝87−88℃;1HNMR(CDCl3,300MHz):1.20(d,3H,J＝6.9Hz),2.51(dd,1H,J＝9.4,14.8Hz),2.66(dd,1H,J＝5.7,14.8Hz),3.45(s,3H),3.67(ABq,2H,J＝14.7Hz),3.79(s,3H),3.98(q,1H,J＝6.8Hz),4.37(dd,1H,J＝5.7,9.3Hz),6.86(d,2H,J＝8.6Hz),7.16-7.33(m,10H),7.40(d,2H,J＝7.3Hz);MS(FAB):404。
【０１１１】
ベンジル基の水素添加分解
上記の付加生成物(0.071mol,28g)をMeOH（300mＬ）中に懸濁し、そして撹拌しながらニートで一度に蟻酸(96％,0.179mol,8.25g,6.8mＬ,2.5当量)で処理した。この懸濁液に、DegussaタイプE101NE/W 10％Pd/C（50％wet,0.00179mol,3.81g,0.025当量)を一度に添加した。得られた混合物を、TLC分析により完了したと判断されるまで、還流下で１〜２時間加熱した。混合物を室温まで冷却し、次いでセライトのパッド上で濾過し、フラスコを洗浄し、そしてMeOH(150mＬ)を詰め込んだ。合わせた濾液をエバポレートし、オイルとして粗生成物(15.42g,理論の102％）を得た。粗生成物をi-PrOH(250mＬ)中で溶解し、そして穏やかに還流するまで加熱した。D-酒石酸(0.071mol,約10.76g,1当量)を固体として一度に添加した。加熱を15分間続け、この時間の間、塩は微細な白色固体として沈澱した。混合物を室温まで冷却し、次いで一晩冷蔵した。結晶塩を中程度のフリット上で吸引濾過により回収し、冷i-PrOH(50〜75mＬ)で洗浄し、そしてフィルター上で乾燥し、生成物(23g,79％)を得た。上記の塩を、最小量のH2O(125mＬ)に溶解し、そして水溶液が飽和するまで、固体NaHCO3で溶液を処理することにより遊離の塩基に変換した。これを、EtOAc（３×100mＬ）で抽出した。合わせた有機物を、ブライン(１×100mＬ）で洗浄し、そして乾燥した(MgSO4)。濾過およびエバポレーションにより、ほぼ無色のオイル（これは冷却すると固化した）として純粋な生成物(11.75g,78％）を得た。
TLC(９:１CHCl3/MeOH)：Rf＝0.30(I2,UV)；HPLC(逆相；MeCN/H2O/TFA勾配)：96％純粋,Rt＝17.9分；1HNMR(CDCl3,300MHz)：1.87(br s,2H),2.62(d,2H,J＝6.9Hz),3.64(s,3H),3.76(s,3H),4.35(t,1H,J＝6.9Hz),6.84(d,2H,J＝8.6Hz),7.25(d,2H,J＝8.6Hz);MS(FAB):210。
【０１１２】
【化１７】
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【０１１３】
【化１８】
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【０１１４】
【化１９】
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【０１１５】
【化２０】
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β-13アミノ酸を調製するために
【０１１６】
【化２１】
2008013574.tif 000022
CH2Cl2中の１MTMSCl(33mＬ,33mmol)を、(R)-α-メチルベンジルアミン(3.4g,28mmol)の混合物に添加し、そしてTHF(10mＬ)中のEt3N(4g,40mmol)を添加し、そして混合物を室温で１時間撹拌した。固体を濾過により除去した後、溶液を濃縮し、液体を得た。このシリルアミン(2.4g,12.5mmol)をTHF(35mＬ)に溶解し、そして-78℃まで冷却した。この冷却した溶液に、n-BuLi(7.8mＬの1.6Mヘキサン溶液,12.5mmol)をゆっくりと添加した。その温度で0.5時間撹拌した後、反応混合液に、THF(10mＬ)中のt-ブチルトランス-3-(3-ピリジル）アクリレート(2.56g,12.4mmol)の溶液を添加した。撹拌をもう1/2時間続け、そして混合物を飽和NH4Cl(20mＬ)を用いてクエンチし、室温まで加温し、そしてエーテルで抽出した。合わせたエーテル層を乾燥し(K2CO3)、そして濃縮し、オイルを得た。このオイル(500mg)をエタノール(1.5mＬ)に溶解し、t-ブタノール(15mＬ)、蟻酸アンモニウム(1.5g)および10％Pd/C(1.2g)を添加した。得られた混合物を、３時間加熱還流し、この後、酸処理(workup)および塩基処理し、所望のアミンβ-13(300mg)を得た。FAB-MS＝223。
【０１１７】
【化２２】
2008013574.tif 000023
M-1、M-2およびM-3の合成のための一般的手順
０℃に冷却したCH2Cl2(4mＬ)およびMeOH(1mＬ)中の市販のアミノ酸(1.5mmol)の溶液に、塩化チオニル(0.125mＬ,1.65mmol)を添加した。反応物を２時間40℃に加温し、そして真空下で乾燥するまで濃縮し、所望のアミノエステルHCl塩を得た。
【０１１８】
【化２３】
2008013574.tif 000024
手順Ｃ-結合アミノ酸の合成
CH2Cl2(５mＬ)中のエチル3-アミノ-3-フェニル-1-プロパノエート（または手順Ｂで調製した他のβ-アミノ酸エステル）(0.50g,5.25mmol)の溶液に、冷却したBocLeuOSu(1.5g,4.67mmol)(CbzLeuOSuはCbz保護アナログのために使用される）およびEt3N(５滴）を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、CH2Cl2(10mＬ)で希釈し、そして５％クエン酸(５mＬ×２）、５％NaHCO3(５mＬ)および飽和NaCl(５mＬ)で洗浄した。有機層を乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮し、白色固体として1.26g(66％)を得た。
【０１１９】
手順Ｄ-脱保護アミノ酸の合成
０〜５℃の、２mＬのCH2Cl2中の手順Ｃの生成物（Boc-Leu-β-アミノ酸エステル）(41.5mg,0.102mmol)の撹拌溶液に、４mＬのTFAを添加した。混合物を１時間連続して撹拌しながら、室温になるようにした。反応物を真空下で濃縮し、CH2Cl2に再溶解し、２回以上濃縮し、そして高真空下に置いて最後の痕跡量のTFAを取り除いた。HPLCは、より短い保持時間の２つの新しいピークへの完全な変換を示した。残渣をDMF中に取り得、そしてさらなる反応のために調製中にリトマスが塩基性になるまで、撹拌しながらTFAを添加した。
Cbz基は以下の方法を用いて取り除かれる：
触媒量の10％パラジウム炭と共に、MeOH中の手順Ｃ（ここでt-ブチル3-アミノ-3-フェニル-1-プロパノエートおよびCbzLeuOSuを使用した）からの生成物を、40psiにて水素下で一晩撹拌した。反応物をセライト(R)に通して濾過し、そして真空下で濃縮し、透明なオイルとして遊離の塩基LeuBOC β-アミノ酸(87mg,定量的）を得た。1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm):7.30(m,5H),5.33(dd,1H,J＝6,8.82Hz),4.00(m,1H),2.77(dd,1H,J＝9,15Hz),2.90(dd,1H,J＝6,15Hz),1.69(m,2H),1.45(m,1H),1.29(s,9H),0.90(d,6H,J＝6Hz)。
【０１２０】
実施例１
BIO-1002の合成
Ａ．シアノ酢酸（13mg、0.15mmol）、EDC（30mg、0.16mmol）、およびHOBt（30mg、0.20mmol）の撹拌したDMF（0.5mL）溶液を、室温にて、手順Dで調製したアミン（52mg、0.105mmol）およびジイソプロピルエチルアミン（0.30mL、1.7mmol）のDMF（1.0mL）溶液で処理した。この溶液を18時間かけて撹拌した後、反応物を酢酸エチル（15mL）と60%飽和NaHCO3（10mL）に分配した。有機相を60%飽和NaHCO3水溶液（2×10mL）、H2O（5mL）、5%クエン酸（3×10mL）、H2O（5mL）、および飽和NaCl水溶液（10mL）で洗浄した。有機相を乾燥し（MgSO4）、そして真空下で濃縮してBIO1002-OEt（27mg、69%）を泡状物として得た。
【０１２１】
【化２４】
2008013574.tif 000025
Ｂ．BIO1002-OEt（27mg、0.072mmol）の撹拌したメタノール（3mL）溶液を、室温にて、22時間、LiOH水溶液（1.0M、0.25mL、0.25mmol）で処理した。反応物をトリフルオロ酢酸で酸性化し、次いで真空下で濃縮した。粗生成物をHPLCで精製し、BIO-1002A（2.5mg、10%）およびBIO-1002B（4.4mg、18%）を白色固体として得た。
【０１２２】
【化２５】
2008013574.tif 000026
実施例２
BIO-1003の合成
Ａ．実施例1Aに記載の手順を、シクロヘキシル酢酸（22mg、0.15mmol）、EDC（30mg、0.16mmol）、およびHOBt（30mg、0.20mmol）、DMF（1.0mL）中の手順Dからのアミン（52mg、0.105mmol）およびジイソプロピルエチルアミン（0.30mL、1.7mmol）を用いて行い、BIO1003-OEt（32mg、71%）を泡状物として得た。
【０１２３】
【化２６】
2008013574.tif 000027
Ｂ．実施例1Bに記載の手順を、メタノール（3.0mL）中で、BIO1003-OEt（32mg、0.074mmol）およびLiOH水溶液（1.0M、0.25mL、0.25mmol）を用いて行い、BIO-1003A（3.5mg、11%）およびBIO-1003B（5.3mg、18%）を白色固体として得た。
【０１２４】
【化２７】
2008013574.tif 000028
実施例３
BIO-1014の合成
Ａ．メチル3-アミノ-3-フェニル-1-プロパノエートを、手順Cに記載の方法によりBocLeuOSuとカップリングさせた。
【０１２５】
Ｂ．実施例1Aに記載の手順を、インドール-3-カルボン酸（19mg、0.12mmol）、EDC（26mg、0.14mmol）、HOBt（26mg、0.17mmol）、CH2Cl2（5.0mL）中の実施例3Aからのアミン（44mg、0.11mmol）およびジイソプロピルエチルアミン（0.10mL、0.56mmol）を用いて行い、BIO1014-OMe（25mg、52%）を泡状物として得た。
【０１２６】
Ｃ．実施例1Bに記載と同様の手順を、MeOH（5mL）中で、BIO1014-OMe（25mg、0.057mmol）およびLiOH水溶液（1.0M、0.115mL、0.115mmol）を用いて行い、BIO-1014A（5.1mg、21%）およびBIO-1014B（4.7mg、20%）を白色固体として得た。
【０１２７】
【化２８】
2008013574.tif 000029
実施例４
BIO-1017の合成
Ａ．実施例1Aに記載の手順を、1-フェニル-1-シクロプロパンカルボン酸（21mg、0.13mmol）、EDC（26mg、0.14mmol）、HOBt（26mg、0.17mmol）、CH2Cl2（5.0mL）中の実施例3Aからのアミン（44mg、0.11mmol）およびジイソプロピルエチルアミン（0.10mL、0.56mmol）を用いて行い、BIO1017-OMe（39mg、68%）を泡状物として得た。
【０１２８】
Ｂ．実施例1Bに記載の手順を、MeOH（2mL）中で、BIO1017-OMe（39mg、0.089mmol）およびLiOH水溶液（1.0M、0.27mL、0.27mmol）を用いて行い、BIO-1017A（10.3mg、27%）およびBIO-1017B（12.2mg、32%）を白色固体として得た：
【０１２９】
【化２９】
2008013574.tif 000030
実施例５
BIO-1022の合成
Ａ．実施例1Aに記載の手順を、2-ナフチル酢酸（20mg、0.11mmol）、EDC（25mg、0.13mmol）、HOBt（25mg、0.16mmol）、DMF（2.0mL）中の実施例3Aからのアミン（42mg、0.10mmol）およびジイソプロピルエチルアミン（0.10mL、0.56mmol）を用いて行い、BIO1022-OMe（36mg、70%）を泡状物として得た。
【０１３０】
Ｂ．実施例1Bに記載の手順を、MeOH（3mL）中で、BIO1022-OMe（36mg、0.078mmol）およびLiOH水溶液（1.0M、0.50mL、0.50mmol）を用いて行い、BIO-1022A（1.7mg、4.8%）およびBIO-1022B（6.8mg、19%）を白色固体として得た：
【０１３１】
【化３０】
2008013574.tif 000031
実施例６
BIO-1029の合成
Ａ．t-ブチル3-アミノ-3-フェニル-1-プロパノエートを、手順Cに記載の方法を用いてBocLeuOSuとカップリングさせた。この物質を手順D2の条件に供し、所望のアミン塩を得た。
【０１３２】
Ｂ．実施例1Aに記載の手順を、4-（2-アミノベンズアミド）-フェニル酢酸（18mg、0.067mmol）、EDC（13mg、0.067mmol）、およびHOBt（13mg、0.085mmol）、DMF（0.5mL）中の実施例6Aからのアミン（18mg、0.054mmol）およびジイソプロピルエチルアミン（0.048mL、0.27mmol）を用いて行い、NH2-BIO1029-OtBu（32mg、100%）をオイルとして得た：
【０１３３】
【化３１】
2008013574.tif 000032
Ｃ．NH2-BIO1029-OtBu（16mg、0.027mmol）のトリフルオロ酢酸（1mL）溶液を、室温にて45分間撹拌し、次いで濃縮した。粗生成物をHPLCにより精製し、NH2-BIO1029（3.4mg、26%）を白色固体として得た：MS、m/z531。
【０１３４】
Ｄ．NH2-BIO1029（3.4mg、0.0064mmol）、メチルイソシアネート（3滴）、およびジイソプロピルエチルアミン（1滴）のCH2Cl2（0.30mL）溶液を、室温にて18時間撹拌し、次いで真空下で濃縮した。粗生成物をHPLCにより精製し、BIO-1029（2.6mg、69%）を白色固体として得た：
【０１３５】
【化３２】
2008013574.tif 000033
実施例７
BIO-1032の合成
Ａ．実施例1Aに記載の手順を、3-アミノ-フェニル酢酸（29mg、0.19mmol）、EDC（44mg、0.23mmol）、およびHOBt（44mg、0.29mmol）、DMF（1.0mL）中の実施例6Aからのアミン（49mg、0.15mmol）およびジイソプロピルエチルアミン（0.17mL、0.95mmol）を用いて行い、フラッシュクロマトグラフィー（SiO2、60%酢酸エチル-ヘキサン）の後、NH2-BIO1032-OtBu（22mg、31%）を泡状物として得た：
【０１３６】
【化３３】
2008013574.tif 000034
Ｂ．CH2Cl2中で、NH2-BIO1032-OtBu（7.0mg、0.015mmol）、フェニルスルホニルクロリド（1.7μL、0.014mmol）、およびジイソプロピルエチルアミン（5.4μL、0.030mmol）の混合物を、室温にて18時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、そして残渣を酢酸エチルで希釈した。有機溶液を60%飽和NaHCO3（2×）、H2O、5%クエン酸（3×）、H2O、および飽和NaCl水溶液で洗浄し、乾燥し（MgSO4）、そして濃縮した。真空下で濃縮する前に、残渣（9mg）をトリフルオロ酢酸（1mL）中で、室温にて30分間撹拌した。得られた粗生成物をHPLCにより精製し、BIO-1032（3.9mg、47%）を白色固体として得た：
【０１３７】
【化３４】
2008013574.tif 000035
実施例８
BIO-1093の合成
Ａ．2mLのCH2Cl2中、手順CのBoc保護されたアミン生成物（41.5mg、0.102mmol）の撹拌された溶液に、0℃〜5℃にて、4mLのTFAを添加した。この混合物を１時間続けて撹拌し、室温にした。この反応物を真空下で濃縮し、CH2Cl2中に再溶解し、さらに２回濃縮し、そして高減圧下に置いて最後の痕跡量のTFAを除去した。HPLCは、短い保持時間の２つの新しいピークへの完全な変換を示した。
【０１３８】
Ｂ．実施例8Aからの物質を0.75mLのDMFに再溶解し、0℃〜5℃に冷却し、そしてこの混合物がリトマスに対して塩基性となるまでDIEAを添加し、そして氷浴を取り外した。この物質を、実施例1Aに記載の条件下で、4-ニトロフェニル酢酸（16.5mg、0.091mmol）、HOBt（20.4mg、0.151mmol）、およびEDC（19.4mg、0.101mmol）と合わせ、BIO1093-OEt（21.4mg、50%）を透明なオイルとして得た。
【０１３９】
Ｃ．1mLのMeOH中のBIO1093-OEt（21.4mg、0.053mmol）の溶液を、室温にて1N LiOH（130μl、0.13mmol）と共に一晩撹拌した。この混合物をTFAで酸性化（リトマスに対して赤）し、そして真空下で濃縮した。純粋な異性体を分取HPLCにより分離し、続いて凍結乾燥した。50/50（MeOH/CH2Cl2）中への溶解、および真空下での濃縮を繰り返し、続いて高減圧下で24時間後、白色アモルファス固体としてBIO-1093（3mg、13%）の各異性体を得た：
【０１４０】
【化３５】
2008013574.tif 000036
実施例９
BIO-1099の合成
Ａ．実施例3Aからのアミン（50.0mg、0.127mmol）を、DMF中のジフェニル酢酸（25.6mg、0.121mmol）、HOBt（26mg、0.19mmol）、およびEDC（27mg、0.14mmol）を用いて実施例8Bに記載の条件に供し、BIO1099-OMe（49.2mg、83%）を透明の粘稠なオイルとして得た。
【０１４１】
Ｂ．BIO1099-OMe（49mg、0.1mmol）をケン化し、そして実施例8Cに記載のように精製してBIO-1099A（7mg、15%）およびBIO-1099B（5mg、11%）を白色アモルファス固体として得た。
【０１４２】
【化３６】
2008013574.tif 000037
実施例10
BIO-1100の合成
Ａ．実施例6Aに記載のアミン塩（40.5mg、0.093mmolのBoc保護した物質から調製する）を、1.0mLのDMF中に取り、そして撹拌しながらリトマスに対して塩基性となるまでTEAを添加した。
【０１４３】
Ｂ．実施例1Aに記載の方法を、1.0mLのDMF中の2-ブロモ-5-メトキシ-4-ヒドロキシフェニル酢酸（23.1mg、0.089mmol）、HOBt（18.9mg、0.14mmol）、EDC（19.6mg、0.10mmol）、および実施例10Aで調製される遊離アミンを用いて行い、白色固体（49mg、定量）を得た。アリコートを分取逆相HPLC（勾配２）により精製し、凍結乾燥し、そして乾燥し、繰り返して、MeOH/CH2Cl2（50/50）中に溶解し、減圧下濃縮することによりBIO-1100（1.8mg）をアモルファスの白色固体として得た。
【０１４４】
【化３７】
2008013574.tif 000038
実施例11
BIO-1106の合成
Ａ．TEA（1.7mL、11.25mmol）を含有するジオキサン（6mL）および水（6mL）中の、6-アミノヘキサン酸（1.0g、7.6mmol）の溶液に、BOC-ON（2.1g、8.4mmol、Aldrich）を添加した。室温にて3時間の撹拌後、反応物を水（20mL）で希釈し、そして酢酸エチル（10mL）で２回洗浄した。次いで、水相を1NHClでpH＝1〜2に酸性化し、そして水相を酢酸エチルで５回抽出し、Na2SO4で乾燥し、そして濃縮して、1106-1（842mg、51%）を得た。
【０１４５】
【化３８】
2008013574.tif 000039
Ｂ．手順Cに記載のように、t-ブチル3-アミノ-3-フェニル-1-プロパノエートをCbzLeuOSuとカップリングさせた。この物質を手順D2の条件に供し、所望の遊離アミンを得た。
【０１４６】
Ｃ．N-Boc6-アミノヘキサン酸（実施例11Aで調製される）（17.3mg、0.075mmol）、HOBt（15.2mg、0.11mmol）、およびEDC（17.3mg、0.09mmol）を、0.5mLのDMF中で、室温にて1.5時間撹拌した。0.5mLのDMF中の実施例11Bからの遊離アミン（25mg、0.075mmol）を、反応物がリトマスに対して塩基性になるようにTEA（２滴）と共に、活性化エステルの撹拌溶液に添加した。数時間後、HPLCにより反応が完了していないと決定した。次いで、少量のN-Boc-6-アミノヘキサン酸、HOBt、およびEDCを添加し、反応を完了させた。精製（実施例8Cに詳述のように）により、BIO1106 Boc t-ブチルエステル（26mg、63%）を透明の粘稠なオイルとして得た。
【０１４７】
【化３９】
2008013574.tif 000040
BIO 1106Boc t-ブチルエステルのt-ブチル保護基を両方とも、実施例10Aに記載されるように除去した。得られた残渣を、0.5mLのDMF中で撹拌し、2滴のTEAの添加によりリトマスに対して塩基性にし、続いてフェニルイソシアネート（13.6mg、0.3mmol）を添加し、そして一晩撹拌した。反応混合物を、実施例10Bに詳述されたように精製し、BIO-1106（3.5mg、29%）をベージュのアモルファス固体として得た。
【０１４８】
【化４０】
2008013574.tif 000041
実施例12
BIO-1142の合成
(±)-1-ベンゾシクロブテンカルボン酸（16.3mg、0.11mmol）、HOBt（22.4mg、0.165mmol）、およびEDC（23.7mg、0.121mmol）を、0.5mLのDMF中で、室温にて45分間撹拌し、活性化エステルを得た。実施例10Aの生成物（15.3mg、0.055mmol）を活性化エステルに添加し、そしてこの混合物を２時間撹拌した。実施例10Bに記載されるように、濾過および分取HPLC精製によりBIO-1142異性体A（4.4mg、70%）およびBIO-1142異性体B（4.9mg、22%）を白色アモルファス固体として得た。
【０１４９】
【化４１】
2008013574.tif 000042
実施例13
BIO-1189の合成
(±)-1-インダンカルボン酸（6.2mg、0.038mmol）、HOBt（7.7mg、0.057mmol）、およびEDC（8.0mg、0.042mmol）を、0.5mLのDMF中で、室温にて２時間撹拌した。実施例11Bで調製される遊離アミンをTFAで処理し、次いでこの物質（10mg、0.038mmol）を添加し、そしてこの混合物を一晩撹拌した。実施例10Bに記載されるように、濾過および分取HPLC精製によりBIO-1189異性体A（1mg未満）および異性体B（2mg、12%）を白色アモルファス固体として得た。
【０１５０】
【化４２】
2008013574.tif 000043
実施例14
BIO-1006の合成
Ａ．アミンβ-3を手順Cに従ってBocLeuOSu（ジエチルエーテルから再結晶した生成物）とカップリングさせ、そして手順Dに従って脱保護し、所望のTFA-アミン塩を得た。
【０１５１】
【化４３】
2008013574.tif 000044
Ｂ．実施例14AのアミンTFA塩（24mg）のCH2Cl2溶液を、4-ヒドロキシフェニル酢酸スクシンイミジルエステル（14mg、1.1当量）に添加し、そして室温にて約２時間撹拌した。反応混合物を、5%クエン酸（2×）、飽和NaHCO3水溶液（2×）、およびブライン（1×）で洗浄し、乾燥し（Na2SO4）、濾過し、そして濃縮して28mgの粗BIO-1006メチルエステルを得た。
【０１５２】
【化４４】
2008013574.tif 000045
Ｃ．MeOH中の粗BIO-1006メチルエステルを1NLiOHに添加し、そして室温にて約１時間撹拌した。反応混合物をトリフルオロ酢酸で中和し、そしてHPLCにより精製した。きれいな画分を回収し、そして乾燥してBIO-1006を得た。
【０１５３】
【化４５】
2008013574.tif 000046
実施例15
BIO-1050の合成
Ａ．CH2Cl2中の、4-アミノフェニル酢酸（9g、60mmol）およびN-（ベンジルオキシカルボニルオキシ）-スクシンイミド（15g、60mmol）の懸濁液に、均一な溶液を形成するに十分なトリエチルアミンを添加した。この混合物を室温にて30分間撹拌し、次いでCH2Cl2をロータベイパー（rotavapor）により除去した。得られた残渣を水中に溶解し、そして5%HClで酸性化した。このように形成した固体を濾過し、そして5% HCl、水、およびジエチルエーテルで洗浄し、12g（70%）のCbz-アミノフェニル酢酸を褐色がかった粉末として得た。
【０１５４】
【化４６】
2008013574.tif 000047
Ｂ．実施例1Aの方法を、DMF中の実施例15AからのCbz-アミノフェニル酢酸（342mg、1.2mmol）、HOBT（275mg、1.8mmol）、EDC（276mg、1.44mmol）、および実施例14Aで調製される遊離アミン（432mg、0.94mmol）のDMF溶液を用いて行い、カップリング生成物を得、これをさらに精製することなく用いた。
【０１５５】
Ｃ．実施例15Bの生成物を、水素添加に供した（H2、50psi、10%Pd/C、MeOH/H2O、一晩）。この反応混合物をCelite(R)パッドに通過させて濾過し、そして濃縮して0.4g（90%）の遊離アミンを褐色粉末として得た。
【０１５６】
【化４７】
2008013574.tif 000048
Ｄ．実施例15Cからの遊離アミン（22mg）のCH2Cl2溶液に、トリエチレンアミンを１滴加えたフェニルイソシアネート（8mg、1.5当量）を添加した。次いで、この溶液を室温にて２時間撹拌した。酢酸エチル（15mL）で希釈した後、この混合物を、5%クエン酸（2×）、飽和NaHCO3水溶液（2×）およびブライン（1×）で洗浄し、乾燥し（Na2SO4）、濾過し、そして濃縮して粗フェニルウレアメチルエステルを得た。
【０１５７】
Ｅ．粗フェニルウレアメチルエステルをMeOH中に溶解し、そして1N LiOHを0℃にて添加し、そして混合物を室温にて２時間撹拌した。トリフルオロ酢酸による中和後、反応混合物をHPLCにより精製した。純粋な画分を回収し、そして乾燥してBIO-1050を得た。
【０１５８】
【化４８】
2008013574.tif 000049
実施例16
BIO-1068の合成
実施例15Dの手順を、フェニルイソシアネートの代わりにシクロヘキシルイソシアネートを用いて行った。得られた生成物を実施例15Eに記載のように加水分解し、そしてHPLC精製からの純粋な画分を回収し、そして乾燥してBIO-1068を得た。
【０１５９】
【化４９】
2008013574.tif 000050
実施例17
BIO-1079の合成
実施例15Dの手順を、フェニルイソシアネートの代わりに2-メトキシフェニルイソシアネートを用いて行った。得られた生成物を実施例15Eに記載のように加水分解し、そしてHPLC精製からの純粋な画分を回収し、そして乾燥してBio-1079を得た。
【０１６０】
【化５０】
2008013574.tif 000051
実施例18
BIO-1082の合成
Ａ．トリエチルアミンを、0℃にて手順Dで調製されるTFA-アミン塩（43mg）のCH2Cl2溶液に、pHが9.0に達するまで添加し、続いて4-フェニルブチリルクロリド（26mg）の添加を行った。室温にて２時間の撹拌後、反応混合物を酢酸エチル（20mL）で希釈し、次いで5%クエン酸（2×）、飽和NaHCO3水溶液（2×）、およびブライン（1×）で洗浄し、乾燥し（Na2SO4）、濾過し、そして濃縮して所望の生成物をエチルエステルとして得た。
【０１６１】
Ｂ．粗エチルエステルをMeOH中に溶解し、0℃にて1N LiOHを添加し、そしてこの混合物を室温にて２時間撹拌した。トリフルオロ酢酸による中和後、反応混合物をHPLCにより精製した。２つのジアステレオマーを分離し、そして純粋な画分を回収し、乾燥してBio-1082-AおよびBio-1082-Bを得た。
【０１６２】
【化５１】
2008013574.tif 000052
実施例19
BIO-1148の合成
Ａ．アミンβ-13を手順Cに記載の方法を用いてBocLeuOSuとカップリングさせた。この物質を手順D1の条件に供し、所望のアミン塩1148-1を得た。
【０１６３】
Ｂ．4-ヒドロキシフェニル酢酸（3.0g、20mmol）のDMF溶液に、HOBT（3.7g、24mmol）、続いてEDC（4.2g、22mmol）を添加し、そしてこの混合物を室温にて30分間撹拌した。N-ヒドロキシスクシンイミド（2.3g、20mmol）を添加し、そして室温にて一晩撹拌した。得られた混合物を酢酸エチル（150mL）で希釈し、5%クエン酸（2×）、飽和NaHCO3（2×）およびブライン（1×）で抽出し、そして無水Na2SO4で乾燥した。真空下での溶媒の除去後、生成物をCH2Cl2中に溶解し、そしてヘキサンで沈澱させて、4-ヒドロキシフェニル酢酸スクシンイミジルエステル（3.9g、78%）を得た。
【０１６４】
【化５２】
2008013574.tif 000053
Ｃ．アミン塩1148-1をMeOH/LiOH水溶液条件下で加水分解し、酸を得た。この酸、トリエチルアミン、および4-ヒドロキシフェニル酢酸-OSu（実施例19Bで調製される）のCH2Cl2溶液を、室温にて１時間撹拌した。反応混合物をHPLCにより精製し、そして純粋な画分を回収し、乾燥してBio-1148を２つのジアステレオマーの混合物として得た。
【０１６５】
【化５３】
2008013574.tif 000054
実施例20
BIO-1168の合成
実施例15Dに用いた手順を、フェニルイソシアネートの代わりに3-メチルフェニルイソシアネートを用いて行った。得られた生成物を実施例15Eに記載されるように加水分解し、そしてHPLC精製からの純粋な画分を回収し、乾燥してBio-1168を得た。
【０１６６】
【化５４】
2008013574.tif 000055
実施例21
BIO-1179の合成
実施例15Dで用いた手順を、フェニルイソシアネートの代わりに2-メチルフェニルイソシアネートを用いて行った。得られた生成物を、実施例15Eに記載されるように加水分解し、そしてHPLC精製から純粋な画分を回収し、乾燥してBio-1179を得た。
【０１６７】
【化５５】
2008013574.tif 000056
実施例22
BIO-1195の合成
Ａ．アミンβ-9を手順Cに従ってBocLeuOSuとカップリングさせ、所望の生成物を得た。
【０１６８】
【化５６】
2008013574.tif 000057
Ｂ．実施例22Aの生成物を、手順Dに記載されるようにTFAで処理し、対応するTFA-アミン塩1195-2を得た。
【０１６９】
Ｃ．酢酸エチル（100mL）中の4-アミノフェニル酢酸（10.0g、66.1mmol）および98%フェニルイソシアネート（8.27g、68.0mmol）の混合物を、室温にて１時間撹拌し、次いで1.5時間還流した。この混合物を室温まで冷却し、そして生成物を濾過し、酢酸エチル、メタノール、ついでエーテルで洗浄し、フェニルウレアフェニル酢酸1195-3（17.5g、98%）を白色粉末として得た。
【０１７０】
【化５７】
2008013574.tif 000058
Ｄ．フェニルウレアフェニル酢酸1195-3、HOBT、およびEDCのDMF溶液を室温にて30分間撹拌し、次いで実施例22Bの生成物から調製される遊離のアミンおよびTEA処理を添加した。室温にて一晩の撹拌後、反応混合物をHPLCにより精製し、そして純粋な画分を回収し、乾燥してBio-1195を得た。
【０１７１】
【化５８】
2008013574.tif 000059
実施例23
BIO-1198の合成
Ａ．0℃にて、ホスゲンのCH2Cl2溶液に、モルホリンおよびトリエチルアミンのCH2Cl2溶液を滴下した。次いで、反応物を室温にて30分間撹拌し、そして真空下で濃縮して白色固体を得た。この粗生成物をCH2Cl2中に溶解し、そして4-アミノフェニル酢酸t-ブチルエステルを添加した。この混合物を室温にて一晩撹拌し、酢酸エチル（20mL）で希釈し、5%クエン酸（2×）、飽和NaHCO3水溶液（2×）およびブライン（1×）で洗浄し、乾燥し（Na2SO4）、濾過し、そして濃縮してモルホリンウレアt-ブチルエステル1198-1を得た。
【０１７２】
【化５９】
2008013574.tif 000060
Ｂ．モルホリンウレアt-ブチルエステル1198-1をCH2Cl2に溶解し、そしてトリフルオロ酢酸を添加した。この溶液を室温にて３時間撹拌し、そして濃縮して26mgの対応するカルボン酸1198-2を得た。
【０１７３】
Ｃ．実施例1Aに記載の方法を、DMFに溶解したカルボン酸1198-2（26mg）、HOBT、EDC、および実施例14Aで調製されるアミンを用いて行い、27mgの粗メチルエステル1198-3を得た。
【０１７４】
Ｄ．粗メチルエステル1198-3の溶液を実施例14Cに記載のように処理し、Bio-1198を得た。
【０１７５】
【化６０】
2008013574.tif 000061
実施例24
Bio-1190の合成
Ａ．アミンβ-5を手順Cに記載のようにBocLeuOSuとカップリングさせた。この物質を手順D1の条件に供し、所望のアミン塩を得た。
【０１７６】
Ｂ．実施例1Aに記載のプロトコルを、DMF（2.5mL）中の2-メチルフェニルウレアフェニル酢酸（135mg、0.47mmol）、HOBt（135mg、0.88mmol）、EDC（0.71mmol）、および実施例29Aからのアミン塩（200mg、0.46mmol）（pH10に達するまでEt3Nで処理した）を用いて行い、1190-1（235mg、89%）を白色固体として得た。
【０１７７】
Ｃ．MeOH（3mL）中の1190-1（20mg、0.034mmol）の撹拌溶液に、LiOH水溶液（2Nの3mL）を添加した。室温にて一晩撹拌した後、反応混合物を0℃まで冷却し、そしてpH＝3〜4（pH試験紙）までTFAを添加することにより酸性化した。所望の生成物を単離し、そしてLC（VydacC18カラム；勾配８）により精製し、10mg（0.017mmol; 50%）のBIO-1190を白色固体として得た。
【０１７８】
【化６１】
2008013574.tif 000062
実施例25
Bio-1197の合成
Ａ．アミンβ-1（0.884g、4.0mmol）を手順Cに記載のようにBocLeuOSu（1.32g、4.0mmol）とカップリングさせた。この物質を手順D1の条件に供し、所望のアミン塩（1.42g、85%）を白色固体として得た。
【０１７９】
【化６２】
2008013574.tif 000063
Ｂ．実施例1Aの手順を、Et3Nの存在下で、2-メチルフェニルウレアフェニル酢酸（34mg、0.12mmol）、HOBT（20mg、0.14mmol）、EDC（26mg、0.134mmol）および実施例25Aのアミン塩（30mg、0.079mmol）を用いて行い、15mg（0.028mmol;35%）のBio-1197を白色泡状物として得た：FABMS, m/z 545 (C31H36N4O5のM+1は545を必要とする)。
【０１８０】
実施例26
BIO-1201の合成
Ａ．実施例15Dの手順を、実施例15Cからの遊離アミン（40mg、0.086mmol）および2-ニトロフェニルイソシアネート（28mg、0.172mmol）を用いて行い、50mg（92%）の1201-1を明るい黄色のオイルとして得た。
【０１８１】
【化６３】
2008013574.tif 000064
Ｂ．実施例24Cの手順を、1201-1（50mg、0.079mmol）を用いて行い、17mg（0.027mmol;35%）のBIO-1201を明るい黄色の固体として得た。FABMS, m/z 620 (C31H35N5O9のM+1は620を必要とする)。
【０１８２】
実施例27
Bio-1217の合成
Ａ．アミンβ-4（30mg、0.1mmol）を、実施例25Aに記載されるようにNα-t-Boc-Nε-CBZ-L-リジン-N-ヒドロキシスクシンイミド（50mg、0.1mmol）とカップリングさせ、60mg（93%）の1217-1を白色泡状物として得た。
【０１８３】
【化６４】
2008013574.tif 000065
Ｂ．CH2Cl2（5mL）中の化合物1217-1（60mg、0.09mmol）を、手順D1に記載されるようにトリフルオロ酢酸（0.5mL）で脱保護し、56mg（100%）の1217-2を白色泡状物として得た。
【０１８４】
【化６５】
2008013574.tif 000066
Ｃ．実施例1Aの手順を、2-メチルフェニルウレアフェニル酢酸（40mg、0.14mmol）、HOBT（23mg、0.167）、EDC（30mg、0.158mmol）を用いて行い、そしてEt3Nの存在下、アミン1217-2（56mg、0.093mmol）を添加し、21mg（30%）のBIO-1217を白色泡状物として得た。
【０１８５】
【化６６】
2008013574.tif 000067
実施例28
BIO-1225の合成
Ａ．アミンβ-3（90mg、0.4mmol）を、実施例25Aに記載されるようにNα-t-Boc-Nε-CBZ-L-リジン-N-ヒドロキシスクシンイミド（193mg、0.4mmol）とカップリングさせ、220mg（94%）の1225-1を白色泡状物として得た。
【０１８６】
【化６７】
2008013574.tif 000068
Ｂ．1225-1（170mg、0.29mmol）のBOC保護基を、手順D1に記載されるように除去して100mg（71%）の遊離アミン1225-2を白色泡状物として得た。
【０１８７】
【化６８】
2008013574.tif 000069
Ｃ．実施例1Aの手順を、2-メチルフェニルウレアフェニル酢酸（44mg、0.155mmol）、HOBT（36mg、0.264mmol）、EDC（47mg、0.248mmol）および遊離アミン1225-2（50mg、0.103mmol）を用いて行い、46mg（80%）のBIO-1225-3を白色泡状物として得た。
【０１８８】
【化６９】
2008013574.tif 000070
Ｄ．BIO-1225-3（25mg、0.033mmol）を、実施例24Cに記載されるように処理し、15mg（62%）のBIO-1225を白色固体として得た。FABMS,m/z 738 (C40H43N5O9のM+1は738を必要とする)。
【０１８９】
実施例29
BIO-1036の合成
Ａ．手順Cに記載の方法を、メチル3-アミノ-5-インダニル-1-プロパノエート（エステルM-1、手順Bに記載の調製）（85mg、0.33mmol）を用いて行い、1036-1を黄色泡状物（96mg、0.22mmol、67%）として得、これはさらに精製することなく次の工程で用いた。
【０１９０】
【化７０】
2008013574.tif 000071
Ｂ．化合物1036-1（98mg、0.22mmol）を、手順Dに記載されるように処理し、対応するアミン塩を生成した。実施例1Aに記載の方法を、フェニル酢酸および得られたアミン塩を用いて行い（TEAの存在下）、1036-2を黄色がかった固体（75mg、0.17mmol、77%）として得、これをさらに精製することなく次の工程で用いた。
【０１９１】
【化７１】
2008013574.tif 000072
Ｃ．一般的な上記手順を用いて、少量の化合物1036-2を、実施例1Bに記載されるように加水分解し、HPLCにより精製し、そして純粋な画分を回収し、Bio-1036B（約2mg）m/z＝437（HPLCで98%純度）に加えてBio-1036A（約2mg）m/z＝437（HPLCで98%純度）を白色固体として得た。
【０１９２】
【化７２】
2008013574.tif 000073
実施例30
BIO-1137の合成
Ａ．手順Cに記載の方法を、メチル3-アミノ-3-（2-ニトロフェニル）-1-プロパノエート（エステルM-3、手順Bに記載の調製）（58mg、0.22mmol）を用いて行い、1137-1（106mg、0.22mmol、100%）を濃厚な淡黄色オイルとして得た。
【０１９３】
【化７３】
2008013574.tif 000074
Ｂ．化合物1137-1（106mg、0.22mmol）を、実施例29Bに記載されるように処理し、1137-2（69mg、0.16mmol、73%）を黄色半固体として得た。
【０１９４】
【化７４】
2008013574.tif 000075
Ｃ．少量の化合物1137-1を、実施例1Bに記載されるように加水分解し、HPLCにより精製し、そして純粋な画分を単離し、Bio-1037A（約1mg）m/z＝442（HPLCで97%純度）およびBio-1037B（約2mg）m/z＝442（HPLCで100%純度）を得た。
【０１９５】
実施例31
BIO-1043の合成
Ａ．DMF（3mL）中の市販のN-BOC-1-アミノシクロプロパンカルボン酸（80mg、0.4mmol）を室温にてBOP（221mg、0.5mmol）を用いて活性化した。15分後、メチル3-アミノ-3-フェニル-1-プロパノエートHCl塩（86mg、0.4mmol）（過剰のHunigの塩基（0.15mL、0.8mmol）で中和した）をDMF（1mL）中で添加した。室温にて一晩撹拌後、反応物を酢酸エチル（10mL）で希釈し、60%飽和重炭酸塩（2×10mL）、5%クエン酸（2×5mL）およびブライン（10mL）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濃縮して1043-1を白色泡状物（143mg、0.4mmol、100%）として得た。
【０１９６】
【化７５】
2008013574.tif 000076
Ｂ．少量の化合物1043-1を、実施例1Bに記載されるように加水分解し、そしてHPLCにより精製した。純粋な画分の回収により、Bio-1043（約3mg）m/z＝349（HPLCで100%純度）を白色固体として得、これをバイオアッセイに供した。
【０１９７】
【化７６】
2008013574.tif 000077
実施例32
BIO-1115の合成
Ａ．手順Cに記載の方法を、メチル3-アミノ-3-（4-クロロフェニル）-1-プロパノエートHCl塩（エステルM-1、手順Bに記載の調製）（68mg、0.27mmol）を用いて行い、1115-1（94mg、0.22mmol、82%）を白色泡状物として得た。
【０１９８】
【化７７】
2008013574.tif 000078
Ｂ．化合物1115-1（68mg、0.27mmol）を、実施例29Bに記載されるように処理し、粗1115-2（67mg、0.15mmol、68%）を淡黄色固体として得た。
【０１９９】
【化７８】
2008013574.tif 000079
Ｃ．少量の粗1115-1を加水分解し、LCにより精製し、そして純粋な画分を回収し、Bio-1115B（約2mg）m/z＝431（HPLCで100%純度）と共にBio-1115A（約1mg）m/z＝431（HPLCで100%純度）を白色固体として得た。
【０２００】
【化７９】
2008013574.tif 000080
実施例33
BIO-1129の合成
Ａ．4-（フェニルウレア）フェニル酢酸（540mg、2.0mmol；実施例22Cで調製した）のDMF（5mL）溶液に、EDC（460mg、2.4mmol）を添加した。室温にて15分間保存した後、DMF（3mL）中の、過剰のHunigの塩基（0.7mL、4.0mmol）で中和されたフェニルアラニンt-ブチルエステルHCl塩（515mg、2.0mmol）を添加した。一晩の撹拌後、反応物を酢酸エチル（20mL）で希釈し、そして60%飽和重炭酸塩（2×10mL）、クエン酸（2×10mL）、ブライン（2×10mL）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して粗1129-1（662mg、1.40mmol、70%）を濃厚な淡黄色オイルとして得た。
【０２０１】
【化８０】
2008013574.tif 000081
Ｂ．粗生成物1129-1（662mg、1.40mmol）に、塩化メチレン（5mL）、続いてTFA（1mL）を添加した。一晩の撹拌後、反応物を乾燥するまで濃縮し、そして真空ポンプで乾燥した。少量（21mg、0.05mmol）をDMF（1mL）中に溶解し、そしてHOBt（11mg、0.07mmol）、続いてEDC（14mg、0.06mmol）を添加した。室温にて15分間撹拌した後、アミンβ-3（13mg、0.05mmol）をDMF（0.5mL）中で添加した。
一晩の撹拌後、反応物を酢酸エチル（20mL）で希釈し、飽和重炭酸塩（2×10mL）、クエン酸（10mL）、ブライン（10mL）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濃縮して粗1129-2（26mg、0.04mmol、80%）を明るい黄褐色の固体として得た。
【０２０２】
【化８１】
2008013574.tif 000082
Ｃ．粗1129-2の少量のアリコートを、実施例1Bに記載されるように加水分解し、そしてHPLCにより精製して以下を得た。
【０２０３】
【化８２】
2008013574.tif 000083
実施例34
BIO-1131の合成
Ａ．実施例1Aの方法を、フェニルウレア酢酸（実施例22Cで調製された）およびイソロイシンメチルエステルHCl塩（362mg、2.0mmol）（TEAで処理した）を用いて行い、粗1131-1（344mg、1.0mmol、51%）を透明の濃厚なオイルとして得た。
【０２０４】
【化８３】
2008013574.tif 000084
Ｂ．粗1131-1（344mg、0.95mmol）のメタノール（5mL）溶液に、2NLiOH（2mL）を添加した。一晩の撹拌後、メタノールを除去し、H2O（5mL）を添加し、そしてpHをpH＝1〜2に調整した。水層を酢酸エチル（5×20mL）で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濃縮して1131-2（365mg、0.95mmol、100%）を黄褐色固体として得た。
【０２０５】
【化８４】
2008013574.tif 000085
Ｃ．実施例1Aに記載されるように、1131-2（27mg、0.07mmol）およびアミンβ-3（11mg、0.07mmol）から調製し、粗1131-3（34mg、約89%）を淡褐色がかった固体として得た。
【０２０６】
【化８５】
2008013574.tif 000086
Ｄ．粗1131-3の少量のアリコートを、実施例1Bに記載されるように加水分解し、そしてHPLCにより精製してBio-1131A（約2mg）m/z＝531（100:0ds）（HPLCで100%純度）およびBio-1131B（約3mg）m/z＝531（0:100ds）（HPLCで100%純度）を白色固体として得た。
【０２０７】
【化８６】
2008013574.tif 000087
実施例35
BIO-1136の合成
Ａ．実施例1Aに記載の方法を、市販のN-BOC-S-ベンジル-システイン（25mg、0.08mmol）およびメチル3-アミノ-3-フェニル-1-プロパノエート（17mg、0.09mmol）を用いて行い、粗保護アミン1136-1（42mg、0.08mmol、100%）を得た。
【０２０８】
【化８７】
2008013574.tif 000088
Ｂ．保護アミン1136-1を、手順Dに記載されるように処理し、TFA-アミン塩1136-2を得た。
【０２０９】
Ｃ．実施例22Dに記載の方法を、遊離アミン1136-2（42mg、0.08mmol）を用いて行い（TEA処理）、粗1136-3を得、これをさらに精製することなく加水分解工程に用いた。
【０２１０】
Ｄ．粗1136-3の少量のアリコートを、実施例1Bに記載されるように加水分解し、そしてHPLCにより精製してBio-1136（約4mg）m/z＝611（HPLCで100%純度）を白色固体として得た。
【０２１１】
【化８８】
2008013574.tif 000089
実施例36
BIO-1176の合成
Ａ．市販のN-BOC-アスパラギン酸α-ベンジルエステル（500mg、1.55mmol）のDMF（5mL）溶液に、HOBt（283mg、2.10mol）、続いてEDC（343mg、1.80mmol）を添加した。室温にて15分間撹拌した後、チオモルホリン（500mg、1.54mmol）、続いてHunigの塩基（0.7mL、92mmol）を添加し、そして反応混合物を室温にて一晩撹拌した。反応物を酢酸エチル（25mL）で希釈し、60%飽和重炭酸塩（5mL）、5%クエン酸（5mL）、およびブライン（5mL）で洗浄した。有機相を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濃縮してエステル1176-1を濃厚な橙色のオイル（421mg、1.03mmol、69%）として得た。
【０２１２】
【化８９】
2008013574.tif 000090
Ｂ．エステル1176-1（100mg、0.25mmol）を、実施例1Bに記載されるように処理し、酸1176-2（76mg、0.24mmol、96%）を透明の濃厚なオイルとして得た。
【０２１３】
【化９０】
2008013574.tif 000091
Ｃ．実施例1Aの方法を、DMF中の酸1176-2（32mg、0.10mmol）、HOBT、EDC、およびアミンβ-3を用いて行い、1176-3（36mg、0.07mmol、70%）を淡黄色の濃厚なオイルとして得た。
【０２１４】
【化９１】
2008013574.tif 000092
Ｄ．保護アミン1176-3（36mg、0.07mmol）を、手順Dに記載されるように処理し、TFA-アミン塩1176-4（51mg、0.07mmol、100%）を淡黄色固体として得た。
【０２１５】
Ｅ．実施例22Dに記載の方法を、遊離アミン1176-4（42mg、0.08mmol）（TEA処理後）を用いて行い、粗1176-5を得、これをさらに精製することなく加水分解工程で用いた。
【０２１６】
【化９２】
2008013574.tif 000093
Ｆ．粗1176-5を、実施例1Bに記載されるように加水分解し、HPLCに少量のアリコートを注入してBio-1176（約4mg）m/z＝662（HPLCで>99%の純度）を白色固体として得た。
【０２１７】
【化９３】
2008013574.tif 000094
実施例37
BIO-1177の合成
Ａ．実施例36Aに記載の手順を、チオモルホリンの代わりにメチルプロパルギルアミンを用いて行い、粗1177-1（374mg、0.99mmol、66%）を白色泡状物として得た。
【０２１８】
【化９４】
2008013574.tif 000095
Ｂ．粗1177-1を、実施例1Bに記載されるように処理し、酸1177-2（76mg、0.26mmol、96%）を透明なオイルとして得た。
【０２１９】
【化９５】
2008013574.tif 000096
Ｃ．実施例1Aの方法を、DMF中の酸1177-2（76mg、0.26mmol）、HOBT、EDC、およびアミンβ-3を用いて行い、粗1177-3（78mg、0.15mmol）を白色泡状物として得た。
【０２２０】
【化９６】
2008013574.tif 000097
Ｄ．保護アミン1177-3（78mg、0.15mmol）を、手順Dに記載されるように処理し、TFA-アミン塩1177-4を得た。
【０２２１】
Ｅ．実施例22Dに記載の方法を、遊離アミン1177-4を用いて行い、1177-5（52mg、0.08mmol、77%）を黄褐色固体として得た。
【０２２２】
【化９７】
2008013574.tif 000098
Ｆ．少量の1177-5を、実施例1Bに記載されるように加水分解し、Bio-1177（約2mg）m/z＝628（HPLCで100%の純度）を白色固体として得た。
【０２２３】
【化９８】
2008013574.tif 000099
実施例38
BIO-1214の合成
Ａ．実施例36Aに記載の手順を、N-BOC-アスパラギン酸α-ベンジルエステル（1.60mg、4.9mmol）について、チオモルホリンの代わりにジメチルアミンを用いて行い、エステル1214-1（1.43g、4.1mmol、83%）を無色の濃厚なオイルとして得た。
【０２２４】
【化９９】
2008013574.tif 000100
Ｂ．エステル1214-1（124mg、0.33mmol）を、酢酸エチル（2mL）に溶解し、そして10%Pd/C（約50mg）を添加し、そして混合物を圧力（40psi）下で２時間水素化した。反応物をCelite(R)を通して濾過し、濃縮して酸1214-2（95mg、0.33mmol、100%）を無色のオイルとして得た。
【０２２５】
【化１００】
2008013574.tif 000101
Ｃ．実施例1Aの方法を、酸1214-2（28mg、0.10mmol）、およびアミンβ-3（17mg、0.80mmol）を用いて行い、保護アミン1214-3（55mg、0.10mmol、100%）を白色泡状物として得た。
【０２２６】
【化１０１】
2008013574.tif 000102
Ｄ．保護アミン1214-3（55mg、0.10mmol）を、手順Dに記載されるように処理し、TFA-アミン塩1214-4を得た。
【０２２７】
Ｅ．実施例22Dに記載の方法を、遊離アミン1214-4を用いて行い、1214-5（31mg、0.05mmol、50%）を黄褐色固体として得た。
【０２２８】
【化１０２】
2008013574.tif 000103
Ｆ．少量の1214-5を、実施例1Bに記載されるように加水分解し、BIO-1214（約2mg）m/z＝604（HPLCで100%の純度）を白色固体として得た。
【０２２９】
実施例39
BIO-1215の合成
Ａ．0℃に冷却したアミド1214-1（実施例38Aで調製された）（671mg、1.9mmol）の乾燥テトラヒドロフラン（5mL）溶液に、1NBH3/THF溶液（4.1mL、3.8mmol）を滴下した。反応混合物を室温にて２時間撹拌した後、反応物をメタノール（2mL）でクエンチし、そして乾燥するまで濃縮した。メタノール（5mL）を添加し、そして３回除去して、形成された全ての(MeO)3Bを除去した。高減圧下で乾燥し、アミン1215-1（623mg、1.7mmol、90%）を無色の濃厚なオイルとして得た。
【０２３０】
【化１０３】
2008013574.tif 000104
Ｂ．アミン1215-1（124mg、0.34mmol）を、溶媒としてメタノール／酢酸エチル／酢酸および10%Pd/C（約50mg）を用いる接触水素化に供した。２時間後、反応混合物を濾過し、そして濃縮して酸1215-2（90mg、0.33mmol、97%）を無色の濃厚なオイルとして得た。
【０２３１】
【化１０４】
2008013574.tif 000105
Ｃ．実施例1Aの方法を、酸1215-2（55mg、0.12mmol）およびアミンβ-3（22mg、0.10mmol）を用いて行い、保護アミン1215-3（44mg、0.09mmol、90%）を白色泡状物として得た。
【０２３２】
【化１０５】
2008013574.tif 000106
Ｄ．保護アミン1215-3（44mg、0.09mmol）を、手順Dに記載されるように処理し、TFA-アミン塩1215-4を得た。
【０２３３】
Ｅ．実施例22Dに記載の方法を、遊離アミン1215-4を用いて行い、1215-5（38mg、0.06mmol、70%）を白色固体として得た。
【０２３４】
【化１０６】
2008013574.tif 000107
Ｆ．少量の1214-5を、実施例1Bに記載されるように加水分解し、BIO-1215（約3mg）m/z＝590（HPLCで100%の純度）を白色固体として得た。
【０２３５】
実施例40
BIO-1227の合成
Ａ．市販のBOC-S-メチルシステイン（28mg、0.12mmol）およびアミンβ-３（21mg、0.10mmol）を用いて実施例1Bに記載の通りの方法を行い、保護されたアミン1227-１（32mg、0.07mmol、70%）を白色の泡状物として得た。
【０２３６】
【化１０７】
2008013574.tif 000108
Ｂ．保護されたアミン1227-1（32mg、0.07mmol）を手順Ｄに記載の通りにして処理し、TFA-アミン塩1227-2を得た。
【０２３７】
Ｃ．遊離アミン1227-2および2-メチルフェニルウレアフェニル酢酸（28mg、0.10mmol）を用いて実施例22Ｄに記載の方法を行い、粗製エステル1227-3（29mg、0.047mmol、67%）を淡黄褐色固体として得た。
【０２３８】
【化１０８】
2008013574.tif 000109
Ｄ．粗製エステル1227-3の少量のアリコートを実施例1Bに記載の通りにして加水分解し、BIO-1227（約4mg、m/z=593（HPLCにより、純度＞99%））を白色固体として得た。
【０２３９】
【化１０９】
2008013574.tif 000110
実施例41
BIO-1149の合成
Ａ．手順Ｃで得られた生成物（272mg、0.67mmol）のCH2Cl2（2.5mL）溶液に、TFA（2.5mL）をゆっくりと添加し、そしてその混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を除去してオイルを得た。このオイルをCH2Cl2（2.5mL）中に溶解した。この溶液にEt3Nを添加してpH９とし、次いで、スクシンイミジル2-キノリンカルボン酸（170mg、0.63mmol）を添加した。この混合物を室温で１時間撹拌し、次いで通常の処理（5% クエン酸、5% NaHCO3および飽和NaCl）を行い、エステル1149-1（200mg、76%）を白色固体として得た。
【０２４０】
Ｂ．酸1149-1（200mg、0.43mmol）をメタノール（1.5mL）中に溶解し、そしてこの溶液に１MLiOH水溶液（0.5mL）を添加した。この混合物を室温で３時間撹拌し、そして5%クエン酸で中和してpH３とし、そしてEtOAc（３×５mL）で抽出した。合わせた抽出物を乾燥し（Na2SO4）、そして濃縮し、1149の粗生成物155mg（82.5%）を得た。この粗生成物の少量（30mg）をHPLCで精製し、BIO-1149を得、そしてジアステレオマーを分離した。
HPLC：室温；Ａ：36分；Ｂ：38分。FAB-MS＝434。
【０２４１】
【化１１０】
2008013574.tif 000111
実施例42
BIO-1152の合成
Ａ．CH2Cl2（0.5mL）中の手順D2の生成物（33mg、0.1mmol）の溶液に、2,2-ジメチル酪酸クロライド（14mg、0.1mmol）およびEt3N（50μl）を添加した。この混合物を室温で16時間撹拌した。通常の処理（5%NaHCO3、5% クエン酸および飽和NaCl）を行い、1152-2（37mg、76%）を白色固体として得た。
【０２４２】
【化１１１】
2008013574.tif 000112
Ｂ．エステル1152-2を、CH2Cl2（2.5mL）およびTFA（2.5mL）中に溶解し、そして室温で３時間撹拌し、オイルを得た。このオイルをHPLCによって精製し、純粋なBIO-1152を得た。
【０２４３】
【化１１２】
2008013574.tif 000113
実施例43
BIO-1089の合成
Ａ．アミンβ-６（2.2g、8.76mmol）のCH2Cl2（25mL）溶液に、N-BOC-メチオニンスクシンイミジルエステル（2.77g、8.0mmol）およびEt3N（５滴）を添加し、そしてこの混合物を室温で1.5時間撹拌した。この混合物を5%クエン酸（２×10mL）、5% NaHCO3（２×10mL）および飽和NaCl（15mL）で洗浄し、乾燥（Na2SO4）し、そして濃縮し、1089-1（3.2g、83%）を白色固体として得た。
【０２４４】
【化１１３】
2008013574.tif 000114
Ｂ．1089-1（3.2g、6.64mmol）のEtOAc（15mL）溶液に、１MHCl-EtOAc溶液（40mL）を添加し、そしてこの混合物を室温で4.5時間撹拌した。この反応混合物をH2O（60mL）でクエンチし、水層を集めた。これを固体NaHCO3で中和してpH８とし、そしてEtOAc（２×45mL）で抽出した。合わせた有機抽出物を飽和NaCl（20ml）で洗浄し、乾燥（Na2SO4）し、そして濃縮し、1089-2（1.7g、67%）をオイルとして得た。
【０２４５】
【化１１４】
2008013574.tif 000115
Ｃ．1089-2（1.7g、4.45mmol）を用いて実施例22Dに記載の方法を行い、1089-3（2.3g、81.6%）を固体として得た。この物質を、さらに精製することなく次の工程に用いた。
【０２４６】
【化１１５】
2008013574.tif 000116
Ｄ．化合物1089-3（2.3g、3.63mmol）を４NHCl-ジオキサン（8mL）に溶解し、そしてこの溶液を室温で16時間撹拌した。ジオキサンを除去した後、エーテル（15mL）を添加し、そして混合物を10分間撹拌した。沈殿物を集めて、そしてメタノールから再結晶し、純粋なBIO-1089を薄茶色の固体として得た。FAB-MS＝579。
【０２４７】
【化１１６】
2008013574.tif 000117
実施例44
BIO-1090の合成
Ａ． アミンβ-10（28mg、1.0mmol）を用いて手順Ｃに記載の方法に従って、1090-1（38mg、84%）を白色固体として得た。
【０２４８】
【化１１７】
2008013574.tif 000118
Ｂ．この白色固体の1090-1（38mg、0.77mmol）を手順D1に記載の通りにして処理し、1090-2をオイルとして得た。この化合物を、さらに精製することなく次の工程に使用した。
【０２４９】
【化１１８】
2008013574.tif 000119
Ｃ．アミン1090-2を用いて、実施例22Dの方法を行い、1090の粗生成物（27mg、59%）を得た。粗生成物をHPLCにより精製し、純粋なBIO-1090を白色固体として得た。FAB-MS＝603。
【０２５０】
実施例45
BIO-1194の合成
Ａ．CH2Cl2（200mL）およびEt3N（25mL、18g、178.2mmol）中のp-アミノフェニル酢酸メチル（9.8g、59.4mmol）の十分に撹拌された冷溶液に、COCl2（トルエン中の1.9M溶液、96mL）を添加漏斗（additionalfunnel）を通して１時間で添加した。この反応混合物を０℃でさらに１時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、そしてエーテル：石油エーテル（3:1）（125mL）を添加した。固体を濾過し、濾液を集めた。溶媒を除去し、1194-1の粗生成物を茶色液体として得た。粗生成物を蒸留（118〜120℃／10mm）によって精製し、純粋な1194-1（8.5g、75%）を無色液体として得た。
【０２５１】
【化１１９】
2008013574.tif 000120
Ｂ．1194-1（5.73g、30.0mmol）のCH2Cl2（60mL）溶液に、2-アミノピリジン（2.82g、30mmol）を分割して添加した。この混合物を室温で0.5時間撹拌し、次いで35℃で0.5時間撹拌した。得られた混合物を石油エーテル（60mL）で希釈し、白色固体を形成した。固体を濾過し、純粋な1194-2（8.35g、98%）を白色固体として得た。
【０２５２】
【化１２０】
2008013574.tif 000121
Ｃ．化合物1194-2（5.7g、20.0mmol）をメタノール（20mL）中に溶解し、そしてこの溶液に１NNaOH（40mL）を添加した。この混合物を透明溶液が形成されるまで加熱し、そして室温で16時間加熱した。続いて、１N HClで注意深く中和してpH７とし、次いで、酢酸で中和してpH３とした。こうして形成した白色固体を濾過し、そしてメタノール（15mL）およびエーテル（２×30mL）で洗浄し、1194-3（4.7g、87%）を白色粉末として得た。
【０２５３】
【化１２１】
2008013574.tif 000122
Ｄ．標準手順Ｃに従い、CH2Cl2（25mL）およびEt3N（５滴）中にて、アミンβ-６（2.65g、10.56mmol）とBocLeuOSu（3.28g、10mmol）とをカップリングし、続いて、脱保護（TFA/CH2Cl2）することによって、２回の工程で1194-4（4.5g、83.6%）を得た。
【０２５４】
【化１２２】
2008013574.tif 000123
Ｅ．実施例1Aの方法に従って、酸1194-3（1.36g、5.0mmol）およびアミン1194-4を用い、BIO-1194の粗生成物（2.1g、78%）を白色固体として得た。純粋な生成物（純度＞97.5%）をメタノールからの結晶化によって得た。
【０２５５】
【化１２３】
2008013574.tif 000124
実施例46
BIO-1180の合成
Ａ．実施例45Aに記載の方法に従い、p-アミノフェニル酢酸t-ブチルを用い、1180-1を94%収率で得た。FAB-MS＝234。
【０２５６】
【化１２４】
2008013574.tif 000125
Ｂ．CH2Cl2（5mL）中のイソシアネート1180-1（233mg、1.0mmol）の溶液に、2-アミノチアゾール（100mg、1.0mmol）を添加した。次いで、透明溶液が形成されるまでこの混合物を加熱し、そして室温で１時間撹拌した。溶媒を除去し、1180-2（335mg）を黄褐色固体として得た。この固体をCH2Cl2（2.5mL）中に溶解し、そしてこの溶液にTFA（2.5mL）を添加した。この混合物を室温で1.5時間撹拌し、濃縮して1180-3（300mg）を黄色固体として得た。FAB-MS＝278。
【０２５７】
Ｃ．1180-3（28mg、0.1mmol）のDMF（0.25mL）溶液に、EDC（60mg、0.31mmol）およびDMAP（55mg）を添加した。この混合物を室温で10分間撹拌し、そしてアミン-TFA塩β-３（23mg、0.051mmol）を添加した。得られた反応混合物を室温で16時間撹拌した。通常の処理（5%クエン酸、5% NaHCO3、飽和NaCl）を行い、乾燥（Na2SO4）し、そして濃縮し、1180-4の粗生成物（22mg、72%）を得た。FAB-MS＝596。
【０２５８】
Ｄ．1180-4の粗生成物を、実施例1Bに記載の通りにして加水分解し、Bio-1180の粗生成物を得た。HPLCによって、この粗生成物を精製し、純粋なBIO1180を得た。HPLC：室温；26.3分；純度＞99%。
【０２５９】
【化１２５】
2008013574.tif 000126
実施例47
BIO-1199の合成
DMSO（1.0mL）、H2O（2mL）中のBIO-1089（15mg）の溶液に、Oxone(R)（20mg）を添加し、そしてこの混合物を室温で撹拌した。HPLCトレースは、Bio-1089（室温＝20分）が消失し、新しいピーク（保持時間＝16.9分）を形成したことを示した。室温での16時間の撹拌後には、出発物質であるBio-1089はほぼ全て消費された。Bio-1199（室温＝16.9分）をHPLCによって単離すると、純度＞99%であった。FAB-MS＝595。
【０２６０】
実施例48
BIO-1207の合成
Ａ．アミンβ-５（220mg、1.053mmol）を用いて、手順Ｃを行い、次いで、この生成物を手順D1に記載の条件に供し、1207-1（383mg、２回の工程に対して88%）を得た。
【０２６１】
Ｂ．実施例1Aの方法に従い、p-Cbz-アミノフェニル酢酸（260mg、0.91mmol）およびアミン1207-1（Et3Nで処理したもの）（375mg、0.86mmol）を用いて、1207-2（415mg、82%）を薄茶色固体を得た。
【０２６２】
Ｃ．化合物1207-2（390mg、0.66mmol）を手順D2に記載の通りにして脱保護し、1207-3（140mg、47%）を薄い茶色固体として得た。
【０２６３】
Ｄ．2-イソプロピルアニリン（135mg、1.0mmol）のCH2Cl2（2mL）およびEt3N（0.5mL）の溶液に、COCl2溶液（トルエン中の1.9M溶液、1.6mL、3.0mmol）を０℃でゆっくりと添加し、そして得られた混合物を室温で１時間撹拌し、そしてエーテル（15mL）で希釈した。このようにして形成した固体および溶媒を除去し、1207-4（165mg）を茶色液体として得た。
【０２６４】
【化１２６】
2008013574.tif 000127
Ｅ．1207-4（12mg、0.074mmol）のDMF（0.12mL）溶液に、１滴のEt3Nおよび1207-3（28mg、0.062mmol）を添加した。得られた混合物を１時間撹拌し（FAB-MS＝617）、そしてメタノール（2mL）および2MLiOH（0.25mL）に添加した。この混合物を室温で16時間撹拌し、そしてHPLCに供した。純粋な画分を集め、そして濃縮し、BIO-1207を白色固体として得た。FAB-MS＝603。HPLC：室温＝31.2分；純度＞98.5%。
【０２６５】
実施例49
BIO-1210の合成
2-メチルフェニルウレアフェニル酢酸、および実施例44Bで調製したTFA-アミン塩の遊離アミン（65mg）を用いて、実施例22Dに記載の手順を行った。得られた生成物をHPLCに供した。純粋な画分を集め、濃縮して、BIO-1210を白色固体として得た。FAB-MS＝603。HPLC：室温＝28.6分；純度＞99%。
【０２６６】
実施例50
BIO-1224の合成
Ａ．アミンβ-４（48mg、0.2mmol）を用い、手順Ｃを行い、1224-1（82mg、91%）を白色固体として得た。
【０２６７】
【化１２７】
2008013574.tif 000128
Ｂ．化合物1224-1（60mg、0.13mmol）をCH2Cl2（1.5mL）およびTFA（1.5mL）に溶解した。混合物を室温で５時間撹拌し、溶媒を除去して、1224-2をTFAの塩として得た。この化合物を、精製することなく次の工程に用いた。
【０２６８】
【化１２８】
2008013574.tif 000129
Ｃ．2-メチルフェニルウレアフェニル酢酸（37mg、0.13mmol）およびアミン1224-2（60mg、0.13mmol）を用い、実施例22Dに記載の方法を行った。得られた生成物をHPLCに供した。純粋な画分を集め、そして乾燥し、BIO-1224（22mg、22%）を白色固体として得た。FAB-MS＝623。HPLC：室温＝23.8分、純度＞99%。
【０２６９】
【化１２９】
2008013574.tif 000130
実施例51
化合物BIO-1056の合成
Ａ．3-メトキシ-4-ニトロ安息香酸（2.01g、10.2mmol）と塩化チオニル（2.3mL、31.5mmol）との混合物を80℃〜90℃で1.5時間撹拌した。反応物を濃縮し、そし残渣をエーテルで希釈した。有機溶液を飽和NaHCO3水溶液（２回）、H2O、次いで飽和NaCl水溶液で洗浄し、乾燥（MgSO4）し、そして濃縮し、3-メトキシ-4-ニトロベンゾイルクロライド（1.92g、87%）を白色固体として得た。
【０２７０】
【化１３０】
2008013574.tif 000131
Ｂ．TMSCHN2（ヘキサン中２M、1.5mL、3.0mmol）およびトリエチルアミン（420μL、3.0mmol）の冷（０℃）溶液に、3-メトキシ-4-ニトロベンゾイルクロライド（0.52g、2.4mmol）のアセトニトリル（8.5mL）溶液を添加した。反応物を０℃で24時間撹拌し、次いで濃縮した。残渣を飽和NaHCO3水溶液でスラリー化し、そして混合物をエーテルで抽出した（３回）。合わせたエーテル洗浄物を水、次いで飽和NaCl水溶液で洗浄し、乾燥（MgSO4）し、そして濃縮し、ω-ジアゾ-3-メトキシ-4-ニトロアセトフェノン（0.53g、100%）を黄色の泡状物として得た。
【０２７１】
【化１３１】
2008013574.tif 000132
Ｃ．tBuOH（100mL）中のω-ジアゾ-3-メトキシ-4-ニトロアセトフェノン（7.95g、35.9mmol）の還流溶液に、トリエチルアミン（15mL）中の安息香酸銀（2.50g、10.9mmol）の濾過溶液を１時間にわたって滴下した。45分間の還流の後、脱色炭を添加し、そして熱い混合物をセライトのパッドを通して濾過した。濾液を濃縮し、そして残渣を酢酸エチルで希釈した。有機溶液を、5%NaHCO3水溶液（２回）、H2O、5% クエン酸水溶液、H2O、次いで飽和NaCl水溶液で洗浄し、乾燥（MgSO4）し、そして濃縮して3-メトキシ-4-ニトロフェニル酢酸t-ブチル（8.92g、93%）を褐色オイルとして得た。
【０２７２】
【化１３２】
2008013574.tif 000133
Ｄ．酢酸エチル（８mL）およびメタノール（２mL）中の3-メトキシ-4-ニトロフェニル酢酸 t-ブチル（0.144g、0.539mmol）と炭素担持10%Pd（0.155g）との混合物をH2（40〜60psi）下で２時間撹拌した。混合物をセライトを通して濾過し、そして濾液を濃縮して4-アミノ-3-メトキシフェニル酢酸t-ブチル（0.123g、96%）を淡黄色オイルとして得た。
【０２７３】
【化１３３】
2008013574.tif 000134
Ｅ．塩化メチレン（2.0mL）中の4-アミノ-3-メトキシフェニル酢酸 t-ブチル（0.123g、0.52mmol）の溶液に、フェニルイソシアネート（60μL、0.55mmol）を添加した。反応物を45分間撹拌し、次いで濃縮し、3-メトキシ-4-フェニルウレイドフェニル酢酸t-ブチル（0.190g，100%）を薄黄色の泡状物として得た。
【０２７４】
【化１３４】
2008013574.tif 000135
Ｆ．トリフルオロ酢酸（5.0mL）中の3-メトキシ-4-フェニルウレイドフェニル酢酸 t-ブチル（0.108g，0.303mmol）の溶液を30分間撹拌した。この反応物を濃縮し、そして残渣を塩化メチレンと共エバポレート（coevaporate）し（２回）、次いで、エーテルと共エバポレートして、3-メトキシ-4-フェニルウレイドフェニル酢酸（0.090g、99%）を白色の泡状物として得た。
【０２７５】
【化１３５】
2008013574.tif 000136
Ｇ．3-メトキシ-4-フェニルウレイドフェニル酢酸（0.33g、0.88mmol）、手順ＣおよびＤを用いて調製されたLeu-β-２（0.27g、0.90mmol）、BOP（0.39g、0.90mmol）およびDIPEA（0.77mL、4.4mmol）のDMF（５mL）溶液を、18時間撹拌した。この反応物を、酢酸エチルで希釈し、そして60%の飽和NaHCO3水溶液（３回）、H2O、5%クエン酸水溶液（３回）、H2O、次いで飽和NaCl水溶液で洗浄し、乾燥（MgSO4）し、そして濃縮して、粗生成物（0.49g）を得た。この粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサンー酢酸エチル（1:4））により精製し、BIO1056t-ブチルエステル（0.35g、60%）を白色の泡状物として得た。
【０２７６】
【化１３６】
2008013574.tif 000137
Ｈ．塩化メチレン（5.0mL）中のBIO1056 t-ブチルエステル（0.35g、0.53mmol）の冷（０℃）溶液に、トリフルオロ酢酸（5.0mL）を添加した。反応物を室温まで加温し、そして１時間撹拌し、次いで、濃縮して、BIO1056の粗生成物（0.315g）を得た。この粗生成物をHPLCによって２回に分けて精製し、BIO1056（0.16g、50%）を白色固体として得た。
【０２７７】
【化１３７】
2008013574.tif 000138
HPLC（勾配Ａ）、35.2分、（勾配Ｂ）、19.4分；MS、m/z605。
【０２７８】
実施例52
化合物BIO-1221の合成
Ａ．塩化メチレン（2.0mL）中の4-アミノ-3-メトキシフェニル酢酸 t-ブチル（0.024g、0.10mmol）の溶液に、o-トリルイソシアネート（15μl、0.12mmol）を添加した。反応物を２時間撹拌し、次いで、濃縮して、3-メトキシ-4-o-トリルウレイドフェニル酢酸t-ブチル（0.036g、97%）を黄褐色の泡状物として得た。
【０２７９】
【化１３８】
2008013574.tif 000139
Ｂ．トリフルオロ酢酸（1.0mL）中の3-メトキシ-4-o-トリルウレイドフェニル酢酸 t-ブチル（0.016g、0.043mmol）の溶液を１時間撹拌した。この反応物を濃縮し、そして残渣を塩化メチレンと共エバポレートし（２回）、次いで、エーテルと共エバポレートし、3-メトキシ-4-o-トリルウレイドフェニル酢酸（0.0135g、100%）を白色残渣として得た。
【０２８０】
Ｃ．3-メトキシ-4-o-トリルウレイドフェニル酢酸（0.0135g、0.043mmol）と手順ＣおよびＤとを用いてβ-３から調製したアミン塩（0.0185g、0.041mmol）とを用いて、実施例51Gに記載の手順を行い、BIO1221メチルエステル（0.016g、60%）を白色の泡状物として得た。
【０２８１】
【化１３９】
2008013574.tif 000140
Ｄ．BIO1221メチルエステル（0.016g、0.025mmol）を実施例1Bに記載の方法を用いて加水分解し、BIO-1221（0.0087g、56%）を白色粉末として得た。
【０２８２】
【化１４０】
2008013574.tif 000141
HPLC（勾配Ａ）、35.2分；MS、m/z619。
【０２８３】
実施例53
化合物BIO-1238の合成
Ａ．アミンβ-５を用い、実施例43Aに記載の手順を行って、1238-1を得た。収率：92%。
【０２８４】
【化１４１】
2008013574.tif 000142
Boc基をTFA/CH2Cl2で取り除き、TFA塩1238-1を得た。
【０２８５】
【化１４２】
2008013574.tif 000143
Ｂ．2-メチルフェニルウレアフェニル酢酸（20mg、0.7mmol）およびTFA塩1238-1（30mg、0.7mmol）を用いて、実施例1Aに記載の手順を行い、1238-2（35mg、83%）を白色固体として得た。
【０２８６】
【化１４３】
2008013574.tif 000144
Ｃ．MeOH（３mL）およびLiOH水溶液（２N、３mL）中の1238-2（20mg、0.033mmol）の溶液を室温で一晩撹拌し、反応混合物を０℃まで冷却し、そしてTFAを添加し、pH＝３〜４（pH試験紙）まで酸性化した。所望の生成物を単離し、そしてLC（VydacC18カラム；勾配８）によって精製し、12mg（0.017mmol；61%）のBIO-1238を白色固体として得た：FAB-MS＝595。
【０２８７】
実施例54
化合物BIO-1245の合成
Ａ．実施例1Aに記載の方法を用いて、市販のN-BOC-メチオニンスルホン（562mg、2.0mmol）およびβ-３（470mg、2.10mmol）から1245-1を調製し、1245-1（962mg、1.90mmol、95%）の粗生成物を白色の泡状物として得た。これをさらに精製することなく用いた。
【０２８８】
【化１４４】
2008013574.tif 000145
Ｂ．化合物1245-1（962mg、1.90mmol）を、試薬として4NHCl/ジオキサンで処理した。濃縮して塩酸塩1245-2（800mg、1.89mg、1.89mmol、99%）を白色固体として得た。これをさらに精製することなく用いた。
【０２８９】
【化１４５】
2008013574.tif 000146
Ｃ．化合物1245-2（800mg、1.89mmol）およびo-メチルフェニルウレアフェニル酢酸（543mg、1.89mmol）を用いて、実施例22Dに記載の手順を行い、1245-3の粗生成物（1.15g、1.76mmol、93%）を白色固体として得た。これをさらに精製することなく用いた。
【０２９０】
【化１４６】
2008013574.tif 000147
Ｄ．化合物1245-3（1.1g、1.7mmol）を実施例1Bに記載の通りにして加水分解し、BIO-1245の粗生成物（490mg、0.77mmol、45%）を白色固体として得、HPLCにより純度＞90%とした。少量（約150mg）を分取HPLCで精製し、純粋なBIO-1245（81mg、回収率54%）を白色固体として得た。m/z＝639（HPLCによる純度100%）。
【０２９１】
【化１４７】
2008013574.tif 000148
実施例55
BIO-1246の合成
Ａ．メタノール（８mL）中のL-システイン（1.5g、12.4mmol）の懸濁液に、過剰のナトリウムメトキシド（2.0g、37.2mmol）を添加し、続いて、触媒量のヨウ化ナトリウム（約100mg）を添加した。室温で30分間撹拌後、1-ブロモ-2-プロパノール（1.7g、12.4mmol）を添加し、そして反応物を一晩撹拌した。次いで、反応混合物を中和してpH約７にし、水（20mL）で希釈し、そして濃縮してメタノールを除去した。次いで、この溶液をジオキサン（20mL）で希釈し、そしてトリエチルアミン（7.0mL、50mmol）を添加し、続いてBOCON（3.1g、12.4mmol）を添加した。次いで、反応物を室温で３時間撹拌した。この反応物を、水（20mL）で希釈し、そして酢酸エチル（３×25mL）で抽出することによって処理した。有機抽出物を捨て、そして水溶液を1NHClでpH１まで酸性化した。この水溶液を酢酸エチル（４×30mL）で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濃縮して、1246-1（2.87g、10.4mmol、83%、２工程）を高粘度の薄黄色のシロップとして得た。
【０２９２】
【化１４８】
2008013574.tif 000149
Ｂ．1246-1（33mg、0.11mmol）およびアミンβ-３（22mg、0.10mmol）を用いて、実施例1Aの手順を行い、1246-2（39mg、0.08mmol、80%）を薄黄色の泡状物として得た。これを精製することなく次の工程で用いた。
【０２９３】
【化１４９】
2008013574.tif 000150
Ｃ．化合物1246-2（39mg、0.08mmol）をTFAで処理し、1246-2の対応するアミン-TFA塩を得た。これを実施例54Cに記載の条件に供し、白色固体を得た。この白色固体を、実施例1Bに記載の通りにして直接加水分解し、遊離酸を得た。少量のアリコートをHPLCで精製した。清浄な画分を集め、BIO-1246（約３mg、M/Z＝637（HPLCによる純度100%））を白色固体として得た。
【０２９４】
【化１５０】
2008013574.tif 000151
実施例56
BIO-1248の合成
Ａ．エタノール（100mL）中における、4-フルオロベンズアルデヒド（2.48g、20mmol）、マロン酸（2.5g、24mmol）および酢酸アンモニウム（2.16g、28mmol）の混合物をアルゴン下で一晩還流した。室温まで冷却後、固体の沈殿物を濾過によって集め、そしてエタノールで洗浄（３×30mL）し、真空下で乾燥し、1.0g（27%）の白色固体を得た。この白色固体をさらに精製することなく用いた。
【０２９５】
メタノール中のこの白色固体（1.0g、9.4mmol）の懸濁液に、SOCl2（6.01mmol；CH2Cl2中２M溶液の5.2mL）を添加した。得られた溶液を室温で一晩撹拌した。過剰の溶媒を除去後、残渣をEtOAcに溶解し、飽和NaHCO3を用いて塩基性化し、そしてNa2SO4で乾燥した。有機溶液を減圧下で濃縮し、900mg（84%）のアミン1248-1を淡黄色のオイルとして得た。
【０２９６】
【化１５１】
2008013574.tif 000152
Ｂ．手順Ｃに記載の方法を用いて、アミン1248-1（300mg、1.52mmol）をNα-t-Boc-Nε-leu-N-ヒドロキシスクシンイミド（300mg、1.52mmol）に結合させた。得られた付加物を、トリフルオロ酢酸で脱保護し、次いで、手順D1に記載の通りにしてEt3Nを用いて塩基性化し、アミン1248-2を84%で得た。
【０２９７】
【化１５２】
2008013574.tif 000153
Ｃ．実施例22Dに記載の方法を用いて、2-メチルフェニルウレアフェニル酢酸（77mg、0.27mmol）をアミン1248-2（70mg、0.23mmol）に結合させ、1248-3を収率61%で得た。
【０２９８】
【化１５３】
2008013574.tif 000154
HPLC（勾配１＊＊）21.2分および21.5分（1:24）；FABMS、m/z577（C33H37N4O5FのM++1は577を必要とする）。
【０２９９】
Ｄ．DMSO（1mL）およびMeOH（2mL）中の1248-3（22mg、0.038mmol）の溶液を、実施例1Bに記載の通りに、LiOH水溶液を用いて加水分解した。生成物を、Vydac逆相C18カラム（22mm×25cm）上で、15%CH3CN/H2O（0.1%TFA）から40%CH3CN/H2O（0.1% TFA）までの直線勾配（linear gradient）を用い、流速10mL/分で精製し、BIO-1248を単離収率29%で得た。
【０３００】
【化１５４】
2008013574.tif 000155
HPLC（勾配１）18.7分および19.3分（1:24）；FABMS、m/z563 （C31H35N4O5FのM++1は563を必要とする）。
【０３０１】
実施例57
BIO-1270の合成
Ａ．手順Ｃを用いて、アミンβ-３（500mg、2.24mmol）をNα-Cbz-Nε-t-Boc-L-Lys -N-ヒドロキシスクシンイミド（1.0g、2.1mmol）と結合させ、結合付加物1270-1（1.1g、82%）を得た。この付加物をトリフルオロ酢酸を用いて脱保護し、そして手順Ｄにおいて先に記載した通りにしてEt3Nで塩基性化し、1270-2を収率54%で得た。
【０３０２】
【化１５５】
2008013574.tif 000156
Ｂ．CH2Cl2中における、1270-2（15.5mg、0.032mmol）およびピリジン（10.1mg、0.128mmol）の室温での撹拌溶液に、塩化アセチル（7.5mg、0.096mmol）を添加する。３時間撹拌後、反応物を濃縮し、そして逆相クロマトグラフィーにかけ、1270-3（16.3mg、95%）を白色の泡状物として得た。
【０３０３】
【化１５６】
2008013574.tif 000157
Ｃ．1270-3（反応の進行をHPLCより追跡した）を用いて手順D2を行い、化合物1270-4（14.1mg、定量的収率）を透明オイルとして得、粗製物質として使用した。
【０３０４】
Ｄ．実施例54Cの手順を1270-4（14.1mg、0.036mmol）を用いて行った。精製を分取HPLCによって行い、そしてBio1270-OMe（9.1mg、38%）を白色固体として得た。
【０３０５】
【化１５７】
2008013574.tif 000158
Ｅ．DMSOD6（1mL、NMRサンプル）中のBio1270-OMe（9.1mg、0.016）に、20μlの２N LiOH（0.041mmol）を添加し、そして反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を３滴のTFAで酸性化（リトマス紙を赤く）し、分取HPLCで精製した。これより、BIO-1270（6.2mg、60%）を白色固体として得た。
【０３０６】
【化１５８】
2008013574.tif 000159
MS、m/z 646；HPLC（勾配１）19.73分。100%。
【０３０７】
勾配３  15%B−65% B        50分。
【０３０８】
勾配１  20%B−70% B        50分。
【０３０９】
実施例58
BIO-1282の合成
Ａ．32%過酢酸（10mL）中の3-ピリジル酢酸エチル（1.65g、9.90mmol）の溶液を80℃〜90℃で２時間撹拌した。反応物を濃縮し、そして残渣をメタノールと共エバポレート（２回）し、次いで塩化メチレンと共エバポレートし、3-ピリジル酢酸エチルN-オキシド（1.80g、100％）を白色固体として得た。
【０３１０】
【化１５９】
2008013574.tif 000160
Ｂ．アセトン（40mL）中のサリチルアミド（4.14g、30.2mmol）および濃硫酸（３滴）の溶液を５時間還流した。反応物を濃縮し、そして残渣を酢酸エチルに取り込んだ。有機溶液を１NNaOH（２回）、１N HCl（２回）、H2O、次いで飽和NaCl水溶液で洗浄し、乾燥（MgSO4）し、そして濃縮し、2,2-ジメチル-4-ケト-1,3-ベンゾキサジン（2.50g、47%）を白色固体として得た。
【０３１１】
【化１６０】
2008013574.tif 000161
Ｃ．POCl3（3.0mL）中の2,2-ジメチル-4-ケト-1,3-ベンゾキサジン（1.77g、10.0mmol）およびPCl5（2.09g、10.0mmol）を室温で１時間撹拌し、次いで、50℃〜60℃で２時間撹拌した。反応物を濃縮し、そして生成物を蒸留し（90〜95℃/２〜３mmHg）、4-クロロ-2,2-ジメチル-3H-1,3-ベンゾキサジン（0.496g、25%）を透明オイルとして得た。
【０３１２】
【化１６１】
2008013574.tif 000162
Ｄ．塩化メチレン（5.0mL）中における、4-クロロ-2,2-ジメチル-3H-1,3-ベンゾキサジン（0.145g、0.741mmol）と3-ピリジル酢酸エチルN-オキシド（0.270g、1.49mmol）との混合物を20時間還流した。反応物を濃縮し、残渣を酢酸エチルに取った。有機混合物を60%飽和NaHCO3水溶液（２回）、H2O、飽和NaCl水溶液で洗浄し、乾燥（MgSO4）し、そして濃縮し、オイル状残渣（0.148g）を得た。
【０３１３】
濃HCl（10mL）中のこの未精製のオイル状残渣（0.148g）を18時間還流した。反応物を濃縮し、そして残渣をH2Oおよび塩化メチレン中で分配した。水溶液を塩化メチレンで洗浄し（２回）、次いで、濃縮して白色固体を得た（0.105g）。
【０３１４】
メタノール（5.0mL）中のこの白色固体（0.105g）の溶液を塩化チオニル（0.5mL、7mmol）を30分にわたって滴下して処理した。反応物を２時間撹拌し、次いで濃縮した。残渣を5%NH4OH水溶液中に取り、そして塩化メチレンで抽出した（３回）。有機抽出物を乾燥（MgSO4）し、濃縮し、5-(2-アミノピリジル)酢酸メチル（0.012g、３回の工程に対して10%）を白色固体として得た。
【０３１５】
【化１６２】
2008013574.tif 000163
Ｅ．塩化メチレン（1.0mL）中の5-(2-アミノピリジル)酢酸メチル（0.012g、0.072mmol）の溶液に、o-トリルイソシアネート（10μl、0.081mmol）を添加した。反応物を１時間撹拌し、次いで、濃縮し、5-(2-o-トリルウレイド)ピリジル酢酸メチルを含有する白色の残渣（0.020g）を得た。
【０３１６】
Ｆ．メタノール（1.0mL）中の粗製の5-(2-o-トリルウレイド)ピリジル酢酸メチル（0.020g）の溶液を２MLiOH（100μl、0.20mmol）で処理した。反応物を18時間撹拌し、次いで濃縮した。粗生成物をHPLCで精製し、5-(2-o-トリルウレイド)ピリジル酢酸（0.013g、65%）を白色粉末として得た。
【０３１７】
【化１６３】
2008013574.tif 000164
Ｇ．5-(2-o-トリルウレイド)ピリジル酢酸（0.013g、0.045mmol）および実施例14Aで調製したアミン（0.022g、0.049mmol）を用いて、実施例1Aに記載の手順を行って、BIO1282メチルエステル（0.020g、60%）を得た。
【０３１８】
【化１６４】
2008013574.tif 000165
Ｈ．メタノール（02.0mL）中のBIO1282メチルエステル（0.020g、0.033mmol）の混合物に2.0MLiOH（200μl、0.40mmol）を添加した。反応物を20時間撹拌し、次いで濃縮した。残渣（BIO1282と出発エステルとの混合物（4:5）を含有する）をDMF（0.5mL）およびメタノール（0.5mL）中に溶解し、次いでさらに28時間撹拌した。反応物をトリフルオロ酢酸で酸性化し、そして濃縮した。粗生成物をHPLCで精製し、BIO-1282（0.0056g、24%）を白色粉末として得た。
【０３１９】
【化１６５】
2008013574.tif 000166
HPLC（勾配Ａ）、27.0分；MS、m/z590。
【０３２０】
実施例59
BIO-1294の合成
Ａ． CH2Cl2（20）中の実施例57Aで調製されたアミン（102mg、0.21mmol）の撹拌溶液に、CH3SO2Cl（48mg、32μl、0.42mmol）およびEt3N（50μl）を添加した。得られる混合物を室温で18時間撹拌した。反応混合物をCH2Cl2（40mL）で希釈し、5%クエン酸（20mL）、H2O（10mL）、飽和NaHCO3（20mL）、飽和NaCl（20mL）で洗浄し、そしてNa2SO4で乾燥した。有機溶液を減圧下で濃縮し、110mg（92%）の1294-1を白色固体として得た。
【０３２１】
【化１６６】
2008013574.tif 000167
Ｂ．メタノール（10mL）中に溶解させた化合物1294-1（110mg、0.195mmol）の溶液に、酢酸（0.2mL）およびPd(OH)2（110mg）を添加した。得られる混合物を室温で48時間水素化した（H2、50psi）。標準的な後処理後、1294-2（35mg、42%）を無色オイルとして得た。
【０３２２】
【化１６７】
2008013574.tif 000168
HPLC（勾配８）12分。
【０３２３】
Ｃ．実施例1Aに記載の通りにして、2-メチルフェニルウレアフェニル酢酸（35mg、0.12mmol）をアミン1294-2（35mg、0.08mmol）に結合させ、化合物1294-3を88%で得た。
【０３２４】
【化１６８】
2008013574.tif 000169
HPLC（勾配８）31分；FABMS、m/z696（C34H41N5O9SのM++1は696を必要とする）。
【０３２５】
Ｄ．MeOH（3mL）の化合物1294-3（50mg、0.07mmol）の溶液を、前述の通りにしてLiOH水溶液で加水分解した。生成物をVydac逆相C18カラム（22mm×25cm）上で、15%CH3CN/H2O（0.1%TFA）から40%CH3CN/H2O（0.1% TFA）までの直線勾配を用い、流速10mL/分で精製し、BIO-1294を単離収率41%で得た。
【０３２６】
【化１６９】
2008013574.tif 000170
HPLC（勾配８）27分；FABMS、m/z682（C33H39N5O9SのM++1は682を必要とする）。
【０３２７】
実施例60
BIO-1321の合成
Ａ．エタノール（100mL）中における、4-ホルミル安息香酸メチル（3.48g、20mmol）、マロン酸（2.5g、24mmol）および酢酸アンモニウム（2.16g、28mmol）の混合物をアルゴン下で一晩還流した。室温まで冷却後、固体沈殿物を濾過によって集め、そしてエタノール（３×30mL）で洗浄した。白色固体を真空下で一晩乾燥し、2.8g（63%）の1321-1を得た。
【０３２８】
Ｂ．メタノール（50mL）中の化合物1321-1（1.0g、4.48mmol）の懸濁液に、SOCl2（5.4mmol；CH2Cl2中２M、2.7mL）を添加した。得られた溶液を室温で一晩撹拌した。過剰の溶媒の除去後、残渣をEtOAc中に溶解し、飽和NaHCO3で塩基性化し、そしてNa2SO4で乾燥した。有機溶液を減圧下で濃縮し、780mg（53%）のアミン1321-2を淡黄色オイルとして得た。
【０３２９】
【化１７０】
2008013574.tif 000171
Ｃ．手順Ｃに記載の通りにして、アミン1321-2（500mg、1.11mmol）をNα-t-Boc-Nε-ロイシン-N-ヒドロキシスクシンイミド（380mg、1.0mmol）に結合させた物質を、トリフルオロ酢酸で脱保護し、次いで、手順D1に記載の通りにEt3Nで塩基性化し、アミン1321-3を収率70%で得た。
【０３３０】
【化１７１】
2008013574.tif 000172
Ｄ．実施例22Dに記載の方法を用いて、2-メチルフェニルウレアフェニル酢酸（54mg、0.19mmol）をアミン1321-3（70mg、0.23mmol）を結合させ、1321-4を収率87%で得た。
【０３３１】
【化１７２】
2008013574.tif 000173
HPLC（勾配８）40分（1:1）；FABMS、m/z617（C33H40N4O7のM++1は617を必要とする）。
【０３３２】
Ｅ．DMSO（1mL）およびMeOH（2mL）中の1321-4（70mg、0.11mmol）の溶液を実施例1Bに記載の通りにしてLiOH水溶液で加水分解した。生成物をVydac逆相C18カラム（22mm×25cm）上で、15%CH3CN/H2O（0.1%TFA）から40%CH3CN/H2O（0.1% TFA）までの直線勾配を用い、流速10mL/分で精製し、BIO-1321（22mg、単離収率34%）で得た。
【０３３３】
【化１７３】
2008013574.tif 000174
HPLC（勾配８）27.8分および28.1分（1:1）；FABMS、m/z589（C31H36N4O7のM++1は589を必要とする）。
【０３３４】
実施例  61
化合物  1336の合成
Ａ．メタノール（100mL）中の2,6-ジクロロ-3-ニトロピリジン（92％、9.9g、47mmol）およびK2CO3粉末（6.5g、47mmol）のスラリーを、室温で１週間撹拌した。反応物を濾過し、そして濃縮した。残渣を酢酸エチルおよびNaHCO3の60％飽和水溶液に分配した。有機溶液をNaHCO3の60％飽和水溶液（２回）、H2O、次いで飽和NaCl水溶液で洗浄し、MgSO4で乾燥し、そして濃縮して2-クロロ-6-メトキシ-5-ニトロピリジンおよび2-クロロ-6-メトキシ-3-ニトロピリジン（8.9g、100％）を、明るい黄色の固体として得た：
【０３３５】
【化１７４】
2008013574.tif 000175
Ｂ．THF（250mL）中の2-クロロ-6-メトキシ-5-ニトロピリジンおよび2-クロロ-6-メトキシ-3-ニトロピリジン（8.9g、47mmol）、マロン酸t-ブチルメチル（10mL、60mmol）、およびNaH（95％、3.1g、120mmol）の混合物を、室温で24時間撹拌した。反応物を濃縮し、そして残渣をトリフルオロ酢酸（200mL）で２時間処理した。反応物を濃縮し、そして生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、95:5のヘキサン-酢酸エチル）で分離し、メチル6-(2-メトキシ-3-ニトロ）ピリジルアセテート（3.3g、62％）を、黄色のオイルとして得た：
【０３３６】
【化１７５】
2008013574.tif 000176
Ｃ．メチル6-(2-メトキシ-3-ニトロ）ピリジルアセテート（0.047g、0.21mmol）および酢酸エチル（2mL）中の10％Pd（炭素担持）（0.063g）、ならびにエタノール（1mL）を、H2下（40〜50psi）で６時間撹拌した。混合物をセライトを通して濾過し、そして濾液を濃縮して、メチル6-(3-アミノ-2-メトキシ）ピリジルアセテート（0.041g、100％）を明るい黄色のオイルとして得た：
【０３３７】
【化１７６】
2008013574.tif 000177
Ｄ．塩化メチレン（1.0mL）中のメチル6-(3-アミノ-2-メトキシ）ピリジルアセテート（0.078g、0.33mmol）およびトリエチルアミン（50mL、0.36mmol）の溶液に、O-トリルイソシアネート（41μL、0.36mmol）を添加した。反応物を４時間撹拌し、次いで濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、3:2ヘキサン-酢酸エチル）で精製し、メチル6-(2-メトキシ-3-O-トリルウレイド）ピリジルアセテート（0.060g、55％）を白色粉末として得た：
【０３３８】
【化１７７】
2008013574.tif 000178
Ｅ．メタノール（1.0mL）中のメチル6-(2-メトキシ-3-O-トリルウレイド）ピリジルアセテート（0.023g、0.070mol）の溶液を2MLiOH（90μL、0.18mmol）で処理した。反応物を18時間撹拌し、水（5.0mL）で希釈し、そしてエーテルで２回洗浄した。次いで、水溶液を５％クエン酸水溶液で酸性化した。生成物を濾過し、そして水で洗浄し、次いでエーテルで洗浄して、6-(2-メトキシ-3-O-トリルウレイド）ピリジル酢酸（0.014g、64％）を、白色固体として得た：
【０３３９】
【化１７８】
2008013574.tif 000179
Ｆ．手順Ｃを、アミンβ-2を使用して行った。得られた生成物を、手順D1に記載の条件に供し、TFA-アミン塩1336-1を得た。
【０３４０】
Ｇ．実施例1Aに記載の手順を、6-(2-メトキシ-3-O-トリルウレイド）ピリジル酢酸（0.014g、0.044mmol）およびアミンTFA塩1336-1（0.017g、0.045mmol）を使用して行い、BIO1336t-ブチルエステル（0.024g、79％）を、白色の泡状物として得た：
【０３４１】
【化１７９】
2008013574.tif 000180
Ｈ．塩化メチレン（3.0mL）中のBIO1336 t-ブチルエステル（0.024g、0.035mmol）の溶液に、トリフルオロ酢酸（3.0mL）を添加した。反応物を２時間撹拌し、次いで濃縮した。粗生成物をHPLCにより精製し、BIO-1336（0.011g、50％）を白色粉末として得た：
【０３４２】
【化１８０】
2008013574.tif 000181
実施例  62
BIO-1382の合成
Ａ．CH2Cl2（5mL）中のメチル-6-アミノ-2(S)-N-BOC-アミノヘキサノエート塩酸塩（200mg、0.60mmol）およびTEA（リトマスで塩基性を示す）に、メタンスルホニルクロリド（76.2mg、0.67mmol）を、室温にて２分間にわたって滴下した。１時間の撹拌の後、反応物をCH2Cl2（10mL）で希釈し、５％クエン酸（0.5mLで３回）、水（1mLで１回）、ブライン（1mLで１回）で３回分配し、そしてMgSO4で乾燥した。有機相を真空中で濃縮して、1382-1（230mg、100％）を透明なオイルとして得た。
【０３４３】
【化１８１】
2008013574.tif 000182
Ｂ．10mLのMeOH中の1382-1（225mg、0.60mmol）を室温で撹拌しながら、2NLiOH（0.91mL、1.8mmol）を２分間にわたって滴下した。撹拌を一晩続けた。反応溶液をTFAで酸性化（リトマスで赤色を示す）し、そして真空中で濃縮した。透明な粗ゴム状物をEtOAc（20mL）中に取り、そして実施例62Aに記載のように処理して、1382-2（122mg、57％）を透明なゴム状物として得た。
【０３４４】
【化１８２】
2008013574.tif 000183
Ｃ．実施例1Aに記載の手順を、1382-2（48mg、0.13mmol）およびアミンβ-14（25mg、0.09mmol）を用いて行い、1382-3（51mg、62％）を得た。
【０３４５】
【化１８３】
2008013574.tif 000184
Ｄ．化合物1382-3のCBZ保護基を、手順D2に記載のように、接触水素化の条件下で除去し、生成物1382-4（13.2mg、35％）を得た。
【０３４６】
【化１８４】
2008013574.tif 000185
Ｅ．実施例49に記載の方法を、1382-4（15.5mg、0.05mmol）を用いて行い、Bio1382 t-ブチルエステル（22.6mg、111％）を白色固体として得た。
【０３４７】
【化１８５】
2008013574.tif 000186
Ｆ．Bio1382 t-ブチルエステル（27.6mg、0.027mol）を、５℃においてCH2Cl2（1mL）中で撹拌した。TFA（1.0mL）を１度に添加した；氷浴を取り去り、そして撹拌を２時間続けた。反応混合物を真空中で濃縮し、そして分取HPLC精製にかけて、BIO-1382（14mg、75％）を白色固体として得た。
【０３４８】
【化１８６】
2008013574.tif 000187
実施例  63
BIO-1400の合成
Ａ．室温で、4-フェニル-1-ブテン(3.47g、3.94mL、26mmol）に、クロロスルホニルイソシアネート（3.54g、2.17mL、25mmol）を、アルゴン下で添加した。得られた混合物を、一晩撹拌した。反応混合物を、０℃において、速く撹拌しているNaHCO3（5g）、NaHSO3（1.5g）、およびH2O/CH2Cl2（15mL/10mL）に滴下した。１時間後、溶液を減圧下で濃縮し、そして残渣をEtOAc（50mLで２回）で抽出した。分離の後、有機層を飽和NaCl溶液（30mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、そして減圧下で濃縮することにより、β-ラクタム1400-1600mg（14％）を、淡黄色のオイルとして得た：
【０３４９】
【化１８７】
2008013574.tif 000188
Ｂ．β-ラクタム1400-1（500mg、2.86mmol）、MeOH（25mL）、およびHCl（33％を1mL）の溶液を、室温で18時間撹拌した。反応混合物をEtOAc（100mL）で希釈し、そしてpHが９〜10（pH試験紙）になるまで、Et3Nで塩基性化した。得られた溶液をH2O（10mL）、飽和NaHCO3（30mL）、飽和NaCl（30mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、そして減圧下で濃縮して、270mg（52％）のアミン1400-2を、黄色オイルとして得た：
【０３５０】
【化１８８】
2008013574.tif 000189
Ｃ．遊離アミン1400-2（100mg、0.55mmol）を、手順Ｃに記載のようにNα-t-Boc-Nε-leu-N-ヒドロキシスクシンイミド（163mg、1.52mmol）と結合させ、トリフルオロ酢酸（0.5mL）で脱保護された材料を得た。次いで、これを手順D1に記載のようにEt3Nで塩基性化し、アミン1400-3を95％の収率で得た：
【０３５１】
【化１８９】
2008013574.tif 000190
Ｄ．2-メチルフェニルウレアフェニル酢酸（64mg、0.24mmol）を、実施例49に記載のように遊離アミン1400-3（64mg、0.20mmol）と結合させて、化合物1400-4を60％得た：
【０３５２】
【化１９０】
2008013574.tif 000191
Ｅ．DMSO（1mL）およびMeOH（2mL）中の化合物1400-4（70mg、0.119mmol）を、実施例1Bに記載のように、LiOH水溶液で加水分解した。生成物をVydac逆相C18カラム（22mm×25cm）上で、10mL/分の流速で、20％CH3CN/H2O（0.1％TFA）から50％CH3CN/H2O（0.1％TFA）の直線勾配を用いて精製し、22％の単離収量でBIO-1400を得た：
【０３５３】
【化１９１】
2008013574.tif 000192
分析HPLC条件：
勾配１：20％CH3CN/H2O（0.1％TFA）から70％CH3CN/H2O（0.1％ TFA）までの直線勾配。
勾配８：15％CH3CN/H2O（0.1％TFA）から40％CH3CN/H2O（0.1％ TFA）までの直線勾配。
【０３５４】
実施例  64
BIO1051の合成
Ａ．CH2Cl2中の4-アミノ安息香酸（420mg、3.1mmol）を、室温においてフェニルイソシアネート（340μl、3.1mmol）で処理した。反応物を20分間撹拌し、次いで濃縮した。残渣を1NHClで洗浄し、次いで過剰のエーテルで洗浄して、生成物（98mg、12％）を白色粉末として得た。
【０３５５】
【化１９２】
2008013574.tif 000193
Ｂ．DMF中の実施例6Aのアミン（15mg、0.045mmol）および実施例64Aの生成物（12mg、0.047mmol）溶液を、室温において、DIPEA（40μl、0.22mmol）およびBOP（20mg、0.045）で処理した。反応物を一晩撹拌した後、これを実施例1Aのように処理して、BIO-1051-OtBu（18mg、69％）を泡状物として得た。
【０３５６】
Ｃ．BIO-1051-OtBu（19mg、0.031mmol）を、室温で30分間、TFA（2mL)で処理し、次いで濃縮した。粗生成物をHPLCにより精製して、BIO-1051（6.3mg、39％）を白色粉末として得た：HPLC（勾配Ａ）19.2分、FAB：517（M+H）、MW516.3。
【０３５７】
実施例  65
BIO-1110の合成
Ａ．CH2Cl2中の実施例6Aのアミン（49mg、0.15mmol）を、室温においてTFA（10mL）で処理した。反応物を３時間撹拌し、そして濃縮した。残渣をDMF中に溶解させ、そして室温においてトリエチルアミンで中和した。続いて4-ニトロフェニルフェニルイソシアネート（26.5mg、0.16mmol）を添加し、そして室温で１時間撹拌した。HPLCによる精製によって、62mgのベージュ色の固体を得た。
【０３５８】
【化１９３】
2008013574.tif 000194
Ｂ．実施例65Aの生成物（55mg、0.12mmol）を、40psiの水素ガス下で撹拌しながら、MeOH中の10％Pd/Cで還元した。反応混合物をCelite545を通して濾過し、そして濃縮して、ベージュ色の固体49mgを得た。
【０３５９】
【化１９４】
2008013574.tif 000195
Ｃ．DMF中の実施例65Bの生成物（5mg、0.012mmol）およびトリエチルアミンを、フェニルイソシアネート（1.4mg、0.12mmol）で処理した。一晩撹拌した後、材料をHPLCにより精製した。
【０３６０】
【化１９５】
2008013574.tif 000196
実施例66
BIO-1527の合成
Ａ．アミンβ-3（１当量）のCH2Cl2溶液に、BOC-Pro-OSu（１当量）を添加し、次いで室温で一晩撹拌した。得られた混合物を、酢酸エチルで希釈し、次いで５％クエン酸（２回）、飽和NaHCO3（２回）およびブライン（１回）で洗浄し、乾燥し（Na2SO4）、濾過し、そして濃縮して、粗生成物を白色の泡状物として得た。上記の粗生成物をCH2Cl2に溶解し、そして０℃においてTFAを添加した。混合物を室温で１時間撹拌し、そして濃縮して、アミンをTFA塩として得た。
【０３６１】
Ｂ．DMF中の2-メチルフェニルウレアフェニル酢酸の溶液に、HOBT（1.5当量）およびEDC（1.2当量）、続いて、実施例66Aの遊離アミンを添加し、次いで室温で一晩撹拌した。得られた混合物を、酢酸エチルで希釈し、次いで５％クエン酸（２回）、飽和NaHCO3（２回）およびブライン（１回）で洗浄し、乾燥（Na2SO4）し、濾過し、そして濃縮してメチルエステルを得た。得られたメチルエステルを、メタノールに溶解し、次いで、1NLiOH（水溶液）で処理した。最終生成物（カルボン酸）を、HPLCにより精製した。 HPLC精製による純粋な画分を回収し、そして乾燥して、Bio-1527を得た。
質量スペクトル：573（M+1）、595（M+Na）。
【０３６２】
実施例67
BSA-CS1に対するVLA4依存性接着の阻害
このアッセイは、本発明のVLA4-指向型阻害化合物の有効性を評価するために用いられた。
【０３６３】
１．BSAに対するCS1の結合
本発明者らは、10mg/mLの濃度で、水にBSA-SMCC(PierceChemical,Rockford,IL;カタログ番号77115)を溶解した。（配列番号４）：Cys-Tyr-Asp-Glu-Leu-Pro-Gln-Leu-Val-Thr-Leu-Pro-His-Pro-Asn-Leu-His-Gly-Pro-Glu-Ile-Leu-Asp-Val-Pro-Ser-Thr(「Cys-Tyr-CS1ペプチド」）を、従来の固相化学により合成し、そしてHPLCにより精製した。これをまた、10mg/mLの濃度で10mMHEPES(pH 5)、50mM NaClおよび0.1mM EDTAに溶解した。次いで、500μLのBSA-SMCC、250μLのCys-Tyr-CS1ペプチドおよび75μLの1mMHEPES(pH 7.5)を混合し、そして進行するために結合反応を30分間行った。１μLのβ-メルカプトエタノールを添加することにより反応を停止した。サンプルをSDS-PAGEによる架橋で分析した。この反応により、各BSA分子に対するCys-Tyr-CS1ペプチド結合物の複合分子を作製した。
【０３６４】
２．接着アッセイのためのプレートの調製
0.05MNaHCO3(15mM NaHCO3,35mM Na2CO3)(pH9.2)中１μg/mLに希釈した100μLの上記のBSA-CS1溶液で、Linbroタイターテックポリスチレン96ウェル平底プレート（FlowLaboratories,Maclean,VA;カタログ番号76-231-05)をコートした。いくつかのウェルは、非特異的細胞結合（NSB)を評価するためにCS1でコートしなかった。次いで、プレートを４℃で一晩インキュベートした。
【０３６５】
インキュベーションの後、ウェルの内容物を、プレートを逆さにするおよびブロットすることにより除去した。次いで、すべてのウェルを、室温で最低１時間、100μLのPBS中の１％BSAを含むPBS、0.02％NaN3でブロックした。
【０３６６】
３．蛍光標識Ramos細胞の調製
Ramos細胞を、１％BSA含有RPMI1640培地中で増殖させ、維持し、そして標識した。アッセイを行う直前に、2’,7’-ビス-(2-カルボキシエチル）-5(および-6)カルボキシフルオレセインアセトキシメチルエステル（「BCECF-AM」;MolecularProbes Inc.,Eugene,Oregon;カタログ番号B-1150)をRamos細胞の培養物（４×106細胞/mL)に最終濃度２μMになるように添加した。細胞を37℃で20分間インキュベートした。
【０３６７】
標識した後、細胞をアッセイ緩衝液（24mM TRIS、137mM NaCl、2.7mM KCl(pH 7.4)、0.1% BSAおよび２mM グルコース含有）中で２回洗浄し、培養培地由来のすべてのカチオンを除去した。次いで、細胞を４×106細胞/mLになるようにアッセイ緩衝液中で再懸濁し、そして2mMMnCl2を添加して細胞表面上のVLA4をアップレギュレートした。
【０３６８】
４．アッセイの実行
アッセイを行う直前に、BSAブロッキング溶液を96ウェルプレートから除去し、100μLのアッセイ緩衝液でウェルを洗浄した。次いで、各ウェルに２×最終濃度の25μLの試験化合物および25μLの標識Ramos細胞を添加した。最終濃度を予想されたIC50の範囲（通常は0.01nM〜10μMの間である）にわたって選択した。化合物の各濃度を３連で試験した。化合物および細胞を室温で30分間インキュベートさせる。
【０３６９】
次いで、プレートの内容物を空にし、そしてアッセイ緩衝液で４回ウェルを洗浄した。光学顕微鏡を用いて、NSBウェルを調べた。これらのウェルに２、３個を超える細胞が結合する場合、もう一度プレートを洗浄し、過剰な非特異的結合細胞を除去した。
【０３７０】
CS1ペプチドでコートしたウェルに対するRamos細胞の結合は、各ウェルに100μLのアッセイ緩衝液を添加し、485nm励磁および530nm放射にセットしたMilliporeCytofluor 2300 System platereaderで蛍光定量計測することにより測定した。結合はIC50（50%のコントロールの結合が生じるインヒビターの濃度）として表わされた。結合パーセントは以下の式で算定される。
[(FTB-FNS)-(FI-FNS)]/[FTB-FNS)]×100＝結合％、
ここで、FTBはインヒビター未添加のCS1含有ウェルに対する総蛍光結合である；FNSはCS1非含有ウェルにおける蛍光結合である；およびFIは本発明のインヒビター含有ウェルにおける蛍光結合である。
【０３７１】
本発明の他の化合物を同様にアッセイした。これらの化合物の各々についてのIC50を以下の表に示す：
【０３７２】
【化１９６】
2008013574.tif 000197
【０３７３】
【化１９７】
2008013574.tif 000198
【０３７４】
【化１９８】
2008013574.tif 000199
実施例68
VCAM-IgGに対するVLA4提示細胞の直接結合
次に、VCAM-IgG-アルカリホスファターゼ結合物を利用して、本発明の化合物のVCAM/VL4結合を阻害する能力を試験した。このアッセイを実行するために、MilliporeMultiscreen Assay System(Millipore Corp.,Bedford,MA)を用いて細胞を効率よく洗浄した。
【０３７５】
１．VCAM-IgG-AP結合物の調製
VCAM2D-IgG発現ベクターの構築、これらの構築物を用いたCHO細胞のトランスフェクション、および得られた発現産物の精製は、PCT出願WO 90/13300(これは本明細書に参考として援用される）に記載されている。
【０３７６】
1.2mLの精製VCAM2D-IgG(10mM HEPES(pH 7.5)中の5mg/mL）を、44μlのTraut’s試薬（2-イミノチオラン、水中の20mg/mL；PierceChemical,Rockford,IL)で室温にて30分間反応させた。サンプルを、100mM NaCl,10mM MES(pH 5.0)で平衡化した15mLSephadex G-25カラムで脱塩した。１mLの画分を回収し、そして280nmの吸光度を測定した。２つのピーク画分をプールした。
【０３７７】
１mLの仔ウシ腸アルカリホスファターゼ（19mg/mL）;PierceChemical,Rockford,IL)を100μLのスルホ-SMCC(水中の30mg/mL)および100μLの1M HEPES(pH 7.5)と、35分間室温にて反応させた。反応混合物を、150mMのNaCl、10mMHEPES（pH 6.0）で平衡化した12mL Sephadex G-25カラムで脱塩した。１mL画分を回収し、吸光度280nmで測定した。２つのピーク画分をプールし、そして氷上で保存した。
アルカリホスファターゼ-SMCCとVCAM 2D-IgG-イミノチレン付加生成物とを、室温での30分間のインキュベーションにより、Tris-HCl (pH7.5)中２：１のモル比で架橋した。架橋の程度をSDS-PAGEにより決定した。架橋産物を、2mM MgCl2および0.25nMZnCl2の添加により安定化し、そして４℃で保存した。
【０３７８】
２．結合アッセイ
まず、96ウェル濾過プレートを、0.1%のTween20および２％BSAを含む275μLのPBS(「ブロッキング緩衝液」)を各ウェルに添加し、そして室温にて１時間インキュベートしてブロックした。次いで、このプレートを真空のマニホールド上に置き、そしてブロッキング緩衝液を濾過ウェルの底から廃物回収トレーに排水した。次いで、0.1%BSA、2mMグルコースおよび1mM HEPES(pH 7.5)含有200〜250μLのTris緩衝化生理食塩水（「アッセイ緩衝液」）でウェルを３回洗浄し、残りの全てのブロッキング緩衝液を洗浄して除いた。次いで、プレートを排水し、そしてペーパータオルにそれをブロットしてプレート下部の緩衝液を除去した。
【０３７９】
次いで、VCAM-IgG-APのストック溶液（アッセイ緩衝液中の4μg/mL）を調製し、0.2μの低分子タンパク質結合シリンジフィルター（GelmanSciences,Ann Arbor,MI番号4454）を通して濾過した。次いで、この溶液をアッセイ緩衝液で１：10に希釈し、そして洗浄したプレートの全てのウェルに25μLを添加した。
【０３８０】
試験した細胞接着インヒビターをアッセイ緩衝液中で２×最終濃度に希釈し、そしてプレート内の３連のウェルに25μLの各希釈物を添加した。使用した最終濃度は、0.01nM〜10μMの範囲であった。総結合および非特異的結合についてのコントロールウェルには、インヒビターの代わりに25μLのアッセイ緩衝液を添加した。すべての結合ウェルはアッセイ緩衝液中に細胞およびVCAM-IgG-APを含有した。非特異的結合ウェルは、アッセイ緩衝液中にVCAM-IgG-APのみを含有した。
【０３８１】
Jurkat細胞をアッセイ緩衝液中で１度洗浄し、増殖培地を除去し、そして２mMMnCl2含有アッセイ緩衝液中に８×106/mLで再懸濁した。非特異的結合ウェルを除いて、50μLのJurkat細胞を各ウェルに添加した。このウェルには、最終アッセイ容量をウェル当たり100μLを維持するために50μLのアッセイ緩衝液を添加した。プレートの側部を叩いてウェルの内容物を穏やかに混合した。次いで、このプレートを室温で60分間平静にインキュベートさせた。
【０３８２】
60分間のインキュベーションの終了後、プレートを真空のマニホールド上に置いてウェルを排水した。１mMMnCl2含有アッセイ緩衝液（洗浄緩衝液）100μLを、底部の細胞を破壊しないように各ウェルに慎重に添加した。洗浄緩衝液を真空により除去し、そしてプレートを150μlの洗浄緩衝液で再度洗浄し、プレートの底部をペーパータオルにブロットした。
【０３８３】
次に、0.1Mグリシン、1mMZnCl2（pH 10.5）中の4-ニトロフェニルホスフェートの10mg/mL溶液(基質緩衝液)を調製し、そして直ちに100μLを添加した。このプレートを室温で30分間インキュベートし、比色反応を進行させた。各ウェルに100μLの3NNaOHを添加することにより反応を停止した。
【０３８４】
次いで、96ウェル濾過プレートの内容物を、真空のマニホールドを用いて直接96ウェル平底プレートに移した。このプレートを405nmの波長で読み取り、細胞に対して結合したVCAM結合物の量を測定した。結合パーセントは以下の式で算定される：
[(ATB-ANS)-(AI-ANS)]/[ATB-ANS]×100＝結合％、
ここで、ATBはインヒビター未添加のCS1含有ウェルの405nmでの吸収である；ANSはCS1非含有ウェルにおける405nmでの吸収である；そしてAIは本発明のインヒビター含有ウェルにおける405nmでの吸収である。
【０３８５】
同じアッセイで本発明の他の化合物をアッセイした。IC50値は先の実施例に記載したCS1結合アッセイ由来のIC50値と比較可能であったが、ある化合物は先のアッセイよりも本アッセイにおいて10倍まで優れたことを示した。
【０３８６】
実施例69
マウス接触過敏症の阻害
20gの雌Balb/cマウス（Jackson Laboratories,BarHarbor,ME)を、ペントバルビタールナトリウム(90mg/kg、i.p.)で麻酔した。次いで、腹部皮膚の３cm3パッチを下皮をほぼ剃ることにより曝露した。次いで、この皮膚を70%エタノールで洗浄し、続いて４：１v/vのアセトン：オリーブオイル中の0.5%DNFBの25μLを裸の腹部皮膚に塗布した。次いで、アプライピペットチップで皮膚を軽く引っ掻き、緩慢な炎症を引き起こした。最初の感作の24時間後、同じ腹部皮膚の場所で、25μLの0.5%DNFBを用いてマウスを感作した。続いて再びピペットチップで軽く引っ掻いた。２回目の感作を行ったが、非麻酔マウスでは行わなかった。
【０３８７】
５日目（最初の感作から120時間後）、90:10 mg/kgのケタミン：キシラジンを用いて、i.p.で麻酔し、そして10μLの0.2% DNFBの刺激をおこさない（sub-ittitant)用量を、左耳の背面表面に塗布した。右耳は、４：１v/vのアセトン：オリーブオイルビヒクルの同様の塗布を受けた。
【０３８８】
免疫応答をチャレンジした４時間後、本発明の種々の濃度のインヒビター、100μLの0.5%リン酸ナトリウム緩衝液（pH 8.8)、および３％v/v DMSO中でを皮下(s.c.)注射により投与した。可溶性に乏しいインヒビターは、必要に応じて、30%（試験した最も高い濃度である）までのDMSOを必要とした。８匹のマウスの群を試験した各処置について使用した。陽性コントロール(PS2抗マウスVLA-4抗体、８mg/kg、i.v.)および陰性コントロール（リン酸緩衝化生理学的食塩水、PBS、100μL i.v.;PBS中のDMSO、100μLs.c.)群を、試験化合物のアッセイの一部としての対照のために、日常的に試験した。
【０３８９】
チャレンジの24時間後、マウスを再度ケタミン：キシラジンで麻酔し、そして両耳の耳の厚さを、10-4インチの精度まで技術者のマイクロメーターで測定した。各マウスに対する耳の膨張反応は、コントロールでチャレンジしたの耳の厚さとDNFBでチャレンジした耳の厚さとの間で異なった。代表的な阻害されなかった耳の膨張反応は65〜75×10-4インチであった。耳の膨張反応の阻害を、処置群とそれらの陰性コントロール群とを比較することにより判定した。阻害パーセントは以下のように算定した：
（陰性コントロール群の耳の膨張の平均値）−（試験群の耳の膨張の平均値）・１００
陰性コントロール群の耳の膨張の平均値                
処置群の間の統計的に優位な差異を、分散の一方向解析を、その後のp<0.05を用いるTukey-Kramer Honestly Significant Difference(JMP,SASInstitute)の計算法により評価した。
【０３９０】
本発明のインヒビターは、DNFB処置マウス耳の膨張反応において、阻害されなかったコントロールのマウスと比較して、統計学的に有意な減少を生じた。
【０３９１】
実施例70
アレルギー性ヒツジにおけるAdcaris抗原誘導後期気管感受性の阻害
Ascarissuum抗原に対して、初期および後期の両方の気管支応答を発症することが依然に示されたヒツジを本研究で用いた。本実験で用いたプロトコルは、３〜４mlの50%水溶性のエタノールに溶解し、エアゾールスプレーにより送達して本発明のVLA-4インヒビターを動物に投与したこと以外は、W.M.Abrahamら、J.Clin.Invest.,93,776-87頁（1994)に記載されたものである。
【０３９２】
結果は、本発明の全てのVLA-4インヒビターが、Ascaris suum抗原の投与と関連する気管応答を阻害するということ示した。
【０３９３】
本発明の多くの実施態様を上記に示したが、本発明者らの基礎的な構成物を改変して、他の化合物および本発明の化合物を利用する方法が提供され得ることが明らかである。従って、本発明の範囲は、実施例の方法により上記に示された特定の実施態様よりも本明細書に添付された請求の範囲により規定されることが認識される。
【０３９４】
【化１９９】
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【０３９５】
【化２００】
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【０３９６】
【化２０１】
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【０３９７】
【化２０２】
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