(57)【要約】【課題】  大型化することなく、バックグラウンドの上昇が防止されたイムノクロマトグラフ検体分析用具を提供する。【解決手段】  展開層１２と展開液受取パッド１３とを有し、前記展開層１２表面上の一端側に前記展開液受取パッド１３が配置され、前記展開層１２表面の他端側に抗体が固定化された固定化抗体部１８が形成され、前記展開層１２表面の前記固定化抗体部１８と前記展開液受取パッド１３との間に検体供給部１７が形成され、前記展開液受取パッド１３の表面に展開液供給部１４が形成され、前記展開液受取パッド１３が基質を含むイムノクロマトグラフ検体分析用具１０において、前記展開層１２表面上の一端側に、液体非透過性層１９を配置し、前記液体非透過性層１９の上に前記展開液受取パッド１３を配置する。【選択図】  図１
2008116235.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
展開層と展開液受取パッドとを有し、前記展開層表面上の一端側に前記展開液受取パッドが配置され、前記展開層表面の他端側に抗体が固定化された固定化抗体部が形成され、前記展開層表面の前記固定化抗体部と前記展開液受取パッドとの間に検体供給部が形成され、前記展開液受取パッドの表面に展開液供給部が形成され、前記展開液受取パッドが基質を含み、検体と酵素標識抗体とを含む検体液を前記検体供給部から供給して前記検体液を前記展開層中を移動させて前記固定化抗体部に導入し、前記固定化抗体、前記検体中の被測定物質および前記酵素標識抗体の複合体を形成させ、前記展開液供給部から展開液を供給して前記基質を前記展開液と共に前記展開層中を移動させて前記固定化抗体部に導入し、前記酵素標識抗体の酵素と前記基質との反応による発色および発光の少なくとも一方を検出することにより、前記被測定物質を検出するイムノクロマトグラフ検体分析用具において、前記展開層表面上の一端側に、液体非透過性層が配置され、前記液体非透過性層の上に前記展開液受取パッドが配置されていることを特徴とするイムノクロマトグラフ検体分析用具。
【請求項２】
前記展開層表面と前記展開液受取パッドの前記検体供給部側の底部との間に、前記液体非透過性層が配置され、前記展開層表面と前記展開液受取パッドの前記検体供給部側と反対側の底部との間には、前記液体非透過性層が配置されていない請求項１記載のイムノクロマトグラフ検体分析用具。
【請求項３】
前記液体非透過性層が、ポリエチレンテレフタレートフィルムから形成されている請求項１または２記載のイムノクロマトグラフ検体分析用具。
【請求項４】
前記展開液受取パッド中に基質含浸部を有し、前記基質含浸部に基質が配置されている請求項１から３のいずれか一項に記載のイムノクロマトグラフ検体分析用具。
【請求項５】
さらに、支持体を有し、前記支持体の上に前記展開層が配置されている請求項１から４のいずれか一項に記載のイムノクロマトグラフ検体分析用具。
【請求項６】
さらに、廃液吸収パッドを有し、前記廃液吸収パッドが、前記展開層表面の前記固定化抗体部よりもさらに他端側に配置されている請求項１から５のいずれか一項に記載のイムノクロマトグラフ検体分析用具。
【請求項７】
前記固定化抗体部は、前記被測定物質を捕捉する抗体が固定化されている固定化捕捉抗体部と、対照用の抗体が固定化されている固定化対照抗体部とを有し、前記固定化対照抗体部よりも、前記固定化捕捉抗体部が、前記検体供給部側に配置されている請求項１から６のいずれか一項に記載のイムノクロマトグラフ検体分析用具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イムノクロマトグラフ検体分析用具に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から、生化学検査や臨床検査等において、検体分析用具が汎用されている。近年では、検体中の様々な物質の検出、定性分析または定量分析にイムノクロマトグラフ法（Ｉｍｍｕｎｏ−Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ  Ａｓｓａｙ；ＩＣＡ）を利用したイムノクロマトグラフ検体分析用具が使用されている（例えば、特許文献１参照）。ここで、ＩＣＡとは、免疫反応（抗原−抗体反応）を利用した測定方法である。
【０００３】
図９に、従来のイムノクロマトグラフ検体分析用具を示す。図示のとおり、このイムノクロマトグラフ検体分析用具９０は、支持体９１上に前記支持体９１より長さの短い展開層９２が配置され、この展開層９２表面の一端（同図において右側端部）側に展開液受取パッド９３が配置され、前記展開層９２表面の他端（同図において左側端部）側に抗体が固定化された固定化抗体部９８が形成されている。また、前記展開層９２表面の前記固定化抗体部９８と前記展開液受取パッド９３との間に検体供給部９７が形成されている。そして、前記展開液受取パッド９３の表面には、展開液供給部９４および基質含浸部９５が形成されている。さらに、前記展開層９２表面の前記固定化抗体部９８よりもさらに他端（同図において左側端部）側には、廃液吸収パッド９６が配置されている。前記展開液受取パッド９３の一端（同図において右側端部）側は、前記展開層９２表面の一端（同図において右側端部）から前記支持体９１上へと垂らされ、前記支持体９１の一端（同図において右側端部）に固定されている。また、前記廃液吸収パッド９６の一端（同図において左側端部）側は、前記展開層９２表面の他端（同図において左側端部）から前記支持体９１上へと垂らされ、前記支持体９１の他端（同図において左側端部）に固定されている。
【０００４】
つぎに、このイムノクロマトグラフ検体分析用具９０を用いた特定物質（被測定物質）の測定について説明する。まず、検体供給部９７に、検体と酵素標識抗体とを含む検体液を供給する。このとき、検体中に被測定物質が含まれていれば、抗原−抗体反応により、被測定物質（抗原）と酵素標識抗体とが結合する。つぎに、展開液供給部９４に展開液を供給する。すると、前記展開液が基質含浸部９５に含浸された基質を溶解し、この溶液が展開層９２へと展開される。前記溶液は、図９の矢印ｄに示すように、毛細管作用により、検体供給部９７に供給された前記検体液とともに固定化抗体部９８へと運ばれる。ここで、検体中に被測定物質が含まれていれば、抗原−抗体反応により、酵素標識抗体が結合した被測定物質（抗原）と固定化抗体部９８に固定化された抗体とが結合する。ついで、固定化抗体部９８において、酵素標識抗体の酵素と基質との反応による発色または発光を測定することにより、被測定物質の検出、定性分析または定量分析を行うことができる。
【０００５】
【特許文献１】特開２００５−６１９１０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、前記イムノクロマトグラフ検体分析用具９０では、展開層９２で起こる毛細管作用が一方向に限られないため、検体供給部９７に供給された検体液が、図９の矢印ｅに示すように、展開液受取パッド９３の側にも運ばれてしまう。この結果、展開層９２の展開液受取パッド９３側や、展開液受取パッド９３でも酵素と基質との反応による発色または発光が起こってしまい、この結果、バックグラウンドが上がってしまう。バックグラウンドが上がってしまうと、固定化抗体部９８における発色または発光の測定において、十分なシグナルが得られないという問題があった。また、この問題を回避するために、検体供給部９７と展開液受取パッド９３との間の距離を長くしたり、幅を広くしたりするという方法がある。しかし、この方法では、イムノクロマトグラフ検体分析用具９０全体が大きくなってしまうという問題があった。
【０００７】
そこで、本発明は、大型化することなく、バックグラウンドの上昇が防止されたイムノクロマトグラフ検体分析用具を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
前記目的を達成するために、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具は、展開層と展開液受取パッドとを有し、前記展開層表面上の一端側に前記展開液受取パッドが配置され、前記展開層表面の他端側に抗体が固定化された固定化抗体部が形成され、前記展開層表面の前記固定化抗体部と前記展開液受取パッドとの間に検体供給部が形成され、前記展開液受取パッドの表面に展開液供給部が形成され、前記展開液受取パッドが基質を含み、検体と酵素標識抗体とを含む検体液を前記検体供給部から供給して前記検体液を前記展開層中を移動させて前記固定化抗体部に導入し、前記固定化抗体、前記検体中の被測定物質および前記酵素標識抗体の複合体を形成させ、前記展開液供給部から展開液を供給して前記基質を前記展開液と共に前記展開層中を移動させて前記固定化抗体部に導入し、前記酵素標識抗体の酵素と前記基質との反応による発色および発光の少なくとも一方を検出することにより、前記被測定物質を検出するイムノクロマトグラフ検体分析用具において、前記展開層表面上の一端側に、液体非透過性層が配置され、前記液体非透過性層の上に前記展開液受取パッドが配置されていることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００９】
このように、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具では、展開層と展開液受取パッドとの間に液体非透過性層が配置されている。このため、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具では、従来のイムノクロマトグラフ検体分析用具のように、展開層の展開液受取パッド側や、展開液受取パッドで酵素と基質とが反応することを防止できる。この結果、イムノクロマトグラフ検体分析用具を大型化することなく、展開層の展開液受取パッド側や、展開液受取パッドの発色または発光によるバックグラウンドの上昇を防止することができる。したがって、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具は、小型化が可能で、高精度で信頼性に優れた分析を実施することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明において、「被測定物質の検出」とは、被測定物質の定性分析および定量分析をも含む概念である。
【００１１】
本発明において、「酵素標識抗体」とは、酵素で標識化された抗体を意味する。
【００１２】
本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具において、前記展開層表面と前記展開液受取パッドの前記検体供給部側の底部との間に、前記液体非透過性層が配置され、前記展開層表面と前記展開液受取パッドの前記検体供給部側と反対側の底部との間には、前記液体非透過性層が配置されていなくともよい。
【００１３】
本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具において、前記液体非透過性層は、液体を透過させないものであればいかなるものを用いてもよいが、例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルムであってもよい。
【００１４】
本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具において、前記展開液受取パッド中に基質含浸部を有し、前記基質含浸部に基質が配置されていてもよい。
【００１５】
本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具は、さらに、支持体を有し、前記支持体の上に前記展開層が配置されていてもよい。
【００１６】
本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具は、さらに、廃液吸収パッドを有し、前記廃液吸収パッドが、前記展開層表面の前記固定化抗体部よりもさらに他端側に配置されていてもよい。
【００１７】
本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具において、前記固定化抗体部は、前記被測定物質を捕捉する抗体が固定化されている固定化捕捉抗体部と、対照用の抗体が固定化されている固定化対照抗体部とを有し、前記固定化対照抗体部よりも、前記固定化捕捉抗体部が、前記検体供給部側に配置されていてもよい。
【００１８】
つぎに、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具について例を挙げて説明する。ただし、本発明は、下記の例に制限されるものではない。
【００１９】
（実施形態１）
図１に、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具の一例を示す。図示のように、このイムノクロマトグラフ検体分析用具１０は、支持体１１上に前記支持体１１より長さの短い展開層１２が配置され、この展開層１２表面上の一端（同図において右側端部）側に展開液受取パッド１３が配置され、前記展開層１２表面の他端（同図において左側端部）側に抗体が固定化された固定化抗体部１８が形成されている。また、前記展開層１２表面の前記固定化抗体部１８と前記展開液受取パッド１３との間に検体供給部１７が形成されている。そして、前記展開液受取パッド１３の表面には、展開液供給部１４および基質含浸部１５が形成されている。さらに、前記展開層１２表面の前記固定化抗体部１８よりもさらに他端（同図において左側端部）側には、廃液吸収パッド１６が配置されている。ここで、前記展開層１２表面上の一端（同図において右側端部）側に、液体非透過性層１９が配置され、前記液体非透過性層１９の上に前記展開液受取パッド１３が配置されている。本発明において、前記展開液受取パッド１３は、その全体が前記液体非透過性層１９の上に載った状態であってもよいし、その一部のみが前記液体非透過性層１９の上に載った状態であってもよい。同図においては、前記展開液受取パッド１３の一端（同図において右側端部）側は、前記液体非透過性層１９の端部（同図において右側端部）から前記支持体１１上へと垂らされ、前記支持体１１の一端（同図において右側端部）に固定されている。また、前記廃液吸収パッド１６の一端（同図において左側端部）側は、前記展開層１２表面の他端（同図において左側端部）から前記支持体１１上へと垂らされ、前記支持体１１の他端（同図において左側端部）に固定されている。
【００２０】
前記支持体１１の大きさは、特に制限されないが、例えば、長さ５〜２００ｍｍ、幅１〜５０ｍｍ、厚み０．００５〜０．５ｍｍである。
【００２１】
前記支持体１１としては、例えば、ＰＥＴ、ポリスチレン、ポリエステル、酢酸セルロース等から形成されたものが使用でき、その形状としては、フィルム状、シート状、板状のいずれでもよい。
【００２２】
なお、本発明において、前記支持体１１は、任意の構成要素であり、形成しなくともよいが、形成することが好ましい。
【００２３】
前記展開層１２の形成材料は、毛細管作用を奏するものであれば特に制限されず、例えば、セルロース膜、酢酸セルロースまたはニトロセルロース等のセルロース誘導体膜、ガラスフィルター、濾紙等の多孔質膜が使用できる。前記展開層１２の大きさは、特に制限されないが、例えば、その長さは、４．５〜１９０ｍｍであり（前記支持体１１の長さの５〜９５％であり）、その厚みは、０．０２５〜０．２５ｍｍであり、その幅は、前記支持体１１と同様である。
【００２４】
前記支持体１１上への前記展開層１２の形成は、常法により行うことができ、例えば、支持体１１上に、多孔質膜を両面テープや接着剤を用いて固定すればよい。
【００２５】
前述のとおり、前記液体非透過性層１９としては、例えば、ＰＥＴフィルムを用いることができるが、それ以外にも、塩化ビニリデン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリエステル、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリアミド等を用いることができる。前記液体非浸透性層１９の大きさは、特に制限されないが、例えば、その長さは、前記展開層１２の長さの５〜９５％であり、その厚みは、０．００５〜０．２５ｍｍであり、その幅は、前記支持体１１と同様である。前記展開層１２上への前記液体非透過性層１９の形成は、常法により行うことができ、例えば、展開層１２上に、ＰＥＴフィルムを両面テープや接着剤を用いて固定すればよい。
【００２６】
前記展開液受取パッド１３は、多孔性の材料からなり、その形成材料としては、例えば、ポリエチレン、グラスファーバー、レーヨン、ナイロン、紙、セルロース等が挙げられる。前記展開液受取パッド１３の大きさは、特に制限されないが、例えば、その長さは、５〜２００ｍｍであり、その厚みは、０．１〜５ｍｍであり、その幅は、前記支持体１１と同様である。
【００２７】
前記展開液受取パッド１３の形成は、例えば、前記支持体１１の一端（図１において右側端部）に前記展開液受取パッド１３の一端（図１において右側端部）を両面テープや接着剤を用いて固定し、前記展開液受取パッド１３の他端（図１において左側端部）側を前記液体非透過性層１９上に重ねることで行うことができる。なお、前記展開液受取パッド１３の他端（図１において左側端部）側を、前記液体非透過性層１９上に両面テープや接着剤を用いて固定してもよい。
【００２８】
前述のとおり、前記展開層１２表面の他端（図１において左側端部）側には、抗体が固定化された固定化抗体部１８が形成されている。
【００２９】
前記固定化抗体部１８に固定化される抗体は、検体中の被測定物質と結合するものであれば特に制限されず、免疫グロブリン(Ｉｇ)Ｇ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤのいずれであってもよい。また、これらの抗体は、ポリクローナルおよびモノクローナルのいずれでもよい。これらの抗体は、マウス、ラット、ヤギ等の動物を用いて、常法により作製できる。
【００３０】
固定化抗体部１８に抗体が固定化されている一例を、図２に示す。図２において、図１と同一部分には同一符号を付している。図示のとおり、固定化抗体部１８に、抗体２１が固定化されている。なお、図２は、模式的に示したものであり、抗体２１の大きさ、数等は、実際とは異なる。
【００３１】
前述のとおり、前記展開層１２表面の前記固定化抗体部１８と前記展開液受取パッド１３との間には、検体供給部１７が形成されている。
【００３２】
前記固定化抗体部１８と前記検体供給部１７との間の距離は、特に制限されないが、例えば、前記展開層１１の長さの０〜９５％の範囲である。
【００３３】
前述のとおり、前記展開液受取パッド１３の表面には、展開液供給部１４と基質含浸部１５とが形成されている。なお、図１においては、前記展開液供給部１４が前記基質含浸部１５よりも前記展開液受取パッド１３表面の一端（同図において右側端部）側に形成されているが、本発明は、これに限定されない。本発明において、例えば、前記展開液供給部１４は、前記基質含浸部１５よりも前記展開液受取パッド１３表面の他端（同図において左側端部）側に形成されていてもよい。また、本発明において、例えば、前記展開液供給部１４と前記基質含浸部１５とは、前記展開液受取パッド１３表面の同じ位置に重なって形成されていてもよい。
【００３４】
前記基質含浸部１５には、後述の酵素標識抗体の酵素に対応した基質（発色基質、蛍光基質、発光基質等）が含浸される。前記基質は、１種類を単独で用いてもよいし、２種類以上を混合して用いてもよい。また、前記基質含浸部１５は、図１に示すように、前記展開液受取パッド１３の表面に１箇所だけ設けてもよいし、用いる基質の種類および量に応じて、前記展開液受取パッド１３上に２箇所以上設けてもよい。なお、本発明において、前記基質含浸部１５は、任意の構成要素であり、前記基質含浸部１５を形成することなく、前記展開液受取パッド１３に基質を含ませてもよい。つぎに、前記基質を例示するが、前記基質は、下記の例に制限されない。
【００３５】
(ａ)発色基質
パーオキシダーゼ用（過酸化水素と組み合わせて）：２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）（ＡＢＴＳ）、３，３’，５，５’−テトラメチルベンチジン（ＴＭＢ）、ジアミノベンチジン（ＤＡＢ）
アルカリホスファターゼ用：５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルリン酸（ＢＣＩＰ）
【００３６】
（ｂ）蛍光基質
アルカリホスファターゼ用：４−メチルウムベリフェニル−ホスフェート（４ＭＵＰ）
β−Ｄ−ガラクトシダーゼ用：４−メチルウムベリフェニル−β−Ｄ−ガラクトシド（４ＭＵＧ）
【００３７】
（ｃ）発光基質
アルカリホスファターゼ用：３−（２’−スピロアダマンタン）−４−メトキシ−４−（３’’−ホスフォリルオキシ）フェニル−１，２−ジオキセタン（ＡＭＧＰＤ）・２ナトリウム塩（ＡＭＰＰＤ）
β−Ｄ−ガラクトシダーゼ用：３−（２’−スピロアダマンタン）−４−メトキシ−４−（３’’−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）フェニル−１，２−ジオキセタン（ＡＭＧＰＤ）
パーオキシダーゼ用（過酸化水素と組み合わせて）：ルミノール、イソルミノール
【００３８】
前記基質含浸部１５は、例えば、前記基質の水溶液を、前記展開液受取パッド１３に塗布した後、乾燥させることで形成することができる。前記水溶液には、所望により、シグナル増強剤、安定化剤、溶解調節剤等を添加することもできる。前記基質の量は、測定条件により決定することができるが、例えば、イムノクロマトグラフ検体分析用具１個当たり１００〜４００ｍｇである。
【００３９】
前記検体供給部１７と前記展開液受取パッド１３の前記検体供給部１７側の端部との間の距離は、特に制限されないが、例えば、前記展開層１２の長さの５０〜１００％の範囲であり、好ましくは、１０〜２００ｍｍの範囲であり、より好ましくは、２０〜１００ｍｍの範囲である。
【００４０】
前記廃液吸収パッド１６は、展開層１２における毛細管現象を補助するとともに、固定化抗体部１８を通過してきた廃液を回収するためのものである。前記廃液吸収パッド１６には、例えば、濾紙等を使用することができる。なお、本発明において、前記廃液吸収パッド１６は、任意の構成要素であり、形成しなくともよいが、形成することが好ましい。
【００４１】
前記廃液吸収パッド１６の形成は、例えば、前記支持体１１の他端（図１において左側端部）に前記廃液吸収パッド１６の一端（図１において左側端部）を両面テープや接着剤を用いて固定し、前記廃液吸収パッド１６の他端（図１において右側端部）側を前記展開層１２の他端（図１において左側端部）上に重ねることで行うことができる。
【００４２】
つぎに、このイムノクロマトグラフ検体分析用具１０を用いた測定について、図面を参照して説明する。
【００４３】
まず、検体供給部１７に、検体と酵素標識抗体とを含む検体液を供給する。
【００４４】
本発明において、その測定対象となる検体は、液状のものが好ましいが、これに限定されない。検体が固体状のものであっても、緩衝液等の液体中に溶解若しくは分散させれば、展開層に展開可能となるからである。前記検体としては、特に制限されないが、例えば、全血、血清、血漿、唾液、尿、髄液等が挙げられる。
【００４５】
前記酵素標識抗体の抗体は、前記検体中の被測定物質と結合するものであれば特に制限されず、免疫グロブリン(Ｉｇ)Ｇ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤのいずれであってもよい。また、これらの抗体は、ポリクローナルおよびモノクローナルのいずれでもよい。これらの抗体は、マウス、ラット、ヤギ等の動物を用いて、常法により作製できる。前記酵素標識抗体の酵素も、特に制限されず、例えば、パーオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ等が挙げられる。
【００４６】
ここで、検体中に被測定物質が含まれていれば、抗原−抗体反応により、被測定物質（抗原）と酵素標識抗体とが結合する。
【００４７】
つぎに、展開液供給部１４に、展開液を供給する。前記展開液としては、例えば、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液等を用いることができる。前記展開液には、界面活性剤、安定化剤、抗菌剤等を適宜添加してもよい。
【００４８】
図３の断面図に、本実施形態における検体液、展開液の移動の状態を示す。なお、図３において、図１と同一部分には同一符号を付している。同図に示すように、前記展開液供給部１４に展開液が供給されると、前記展開液が前記基質含浸部１５に含浸された基質を溶解し、その溶液が、矢印ａに示すように、前記展開層１２の端部（同図において右側端部）から回りこんで、展開層１２へと展開される。前記溶液は、図３の矢印ｂに示すように、毛細管作用により、検体供給部１７に供給された前記検体液とともに固定化抗体部１８へと運ばれる。ここで、検体中に被測定物質が含まれていれば、抗原−抗体反応により、酵素標識抗体と結合した被測定物質（抗原）と固定化抗体部１８に固定化された抗体とが結合する。一方、検体供給部１７に供給された前記検体液は、展開液受取パッド１３側にも毛細管作用で移動するが、矢印ｃで示すように、液体非透過性層１９があることで、展開層１２の展開液受取パッド１３側や、展開液受取パッド１３での酵素と基質との反応による発色または発光が防止される。この結果、このイムノクロマトグラフ検体分析用具１０によれば、イムノクロマトグラフ検体分析用具１０を大型化することなく、展開層１２の展開液受取パッド１３側や、展開液受取パッド１３の発色または発光によるバックグラウンドの上昇を防止することができる。
【００４９】
図４に、本発明における抗原−抗体反応を模式的に示す。図４において、図１〜３と同一部分には同一符号を付している。図示のとおり、検体中の被測定物質（抗原）４１が、酵素標識抗体２４と結合するとともに、固定化抗体部１８に固定化された抗体２１とも結合し、複合体を形成している。なお、図４において、２２は、酵素標識抗体２４の抗体を示し、２３は、酵素標識抗体２４の酵素を示す。また、図４は、模式的に示したものであり、抗体および標識の大きさ等は、実際とは異なる。
【００５０】
ついで、固定化抗体部１８を通過した廃液が、廃液吸収パッド１６によって回収される。
【００５１】
所定時間（特に制限されないが、例えば、１０〜２０分）経過後、固定化抗体部１８における、酵素標識抗体の酵素と基質との反応による発色または発光を測定することにより、被測定物質の検出、定性分析または定量分析を行うことができる。前記測定は、目視による判定や、比色計、蛍光光度計、フォトンカウンター、感光フィルム等の測定装置を用いることで実施することができる。
【００５２】
（実施形態２）
図５に、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具のその他の例を示す。図５において、図１および図３と同一部分には同一符号を付している。図示のとおり、このイムノクロマトグラフ検体分析用具１０は、液体非透過性層１９の配置位置が異なること以外、図１および図３に示した実施形態１のイムノクロマトグラフ検体分析用具と同様の構成である。また、このイムノクロマトグラフ検体分析用具を用いた測定方法も、実施形態１と同様である。
【００５３】
同図に示すように、本実施形態のイムノクロマトグラフ検体分析用具１０では、液体非透過性層１９を、検体供給部１７側に突き出した（ずらした）形態で配置しており、展開層１２表面と展開液受取パッド１３の検体供給部１７側の底部との間に、液体非透過性層１９が配置され、前記展開層１２表面と前記展開液受取パッド１３の前記検体供給部１７と反対側の底部との間には、前記液体非透過性層１９が配置されていない構成となっている。このような構成としても、基質を含む展開液が、矢印ａに示すように、前記展開層１２の端部（同図において右側端部）から回り込んで、展開層１２へと展開される。また、矢印ｃに示すように、展開液受取パッド１３への検体液の浸入が防止される。この結果、イムノクロマトグラフ検体分析用具１０を大型化することなく、展開液受取パッド１３の発色または発光によるバックグラウンドの上昇を防止することができる。
【００５４】
（実施形態３）
図６に、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具のさらにその他の例を示す。図６において、図１および図３と同一部分には同一符号を付している。図示のとおり、このイムノクロマトグラフ検体分析用具１０では、液体非透過性層１９の長さを図１および図３に示したイムノクロマトグラフ検体分析用具のそれよりも短くしている。それ以外は、図１および図３に示した実施形態１のイムノクロマトグラフ検体分析用具と同様の構成である。また、このイムノクロマトグラフ検体分析用具を用いた測定方法も、実施形態１と同様である。
【００５５】
同図に示すように、本実施形態のイムノクロマトグラフ検体分析用具１０では、液体非透過性層１９として、図１および図３に示したイムノクロマトグラフ検体分析用具のそれよりも長さが短いものを使用し、検体供給部１７側の端部を前記展開液受取パッド１３の端部とそろえた状態で配置しており、その結果、前記展開液受取パッド１３の前記検体供給部１７と反対側の底部と、展開層１２表面との間には、前記液体非透過性層１９が配置されていない状態となっている。このような構成としても、基質を含む展開液が、矢印ａに示すように、前記展開層１２の端部（同図において右側端部）から回り込んで、展開層１２へと展開される。また、矢印ｃに示すように、展開液受取パッド１３への検体液の浸入が防止される。この結果、イムノクロマトグラフ検体分析用具１０を大型化することなく、展開液受取パッド１３の発色または発光によるバックグラウンドの上昇を防止することができる。
【００５６】
（実施形態４）
図７に、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具のさらにその他の例を示す。図７において、図１および図３と同一部分には同一符号を付している。図示のとおり、このイムノクロマトグラフ検体分析用具１０でも、液体非透過性層１９の長さを図１および図３に示したイムノクロマトグラフ検体分析用具のそれよりも短くしている。それ以外は、図１および図３に示した実施形態１のイムノクロマトグラフ検体分析用具と同様の構成である。また、このイムノクロマトグラフ検体分析用具を用いた測定方法も、実施形態１と同様である。
【００５７】
同図に示すように、本実施形態のイムノクロマトグラフ検体分析用具１０では、液体非透過性層１９として、図１および図３に示したイムノクロマトグラフ検体分析用具のそれよりも長さが短いものを使用し、前記液体非透過性層１９の両端が、前記展開液受取パッド１３の両端よりも内側にひっこんだ状態で配置されている。その結果、展開層１２表面と前記展開液受取パッド１３の前記検体供給部１７側の底部との間、および前記展開層１２表面と前記展開液受取パッド１３の前記検体供給部１７側と反対側の底部との間の双方において、前記液体非透過性層が配置されていない構成となっている。このような構成としても、基質を含む展開液が、矢印ａに示すように、前記展開層１２の端部（同図において右側端部）から回り込んで、展開層１２へと展開される。また、矢印ｃに示すように、展開液受取パッド１３への検体液の浸入が防止される。この結果、イムノクロマトグラフ検体分析用具１０を大型化することなく、展開液受取パッド１３の発色または発光によるバックグラウンドの上昇を防止することができる。
【００５８】
（実施形態５）
図８に、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具のさらにその他の例を示す。図８において、図１と同一部分には同一符号を付している。図示のとおり、このイムノクロマトグラフ検体分析用具１０は、固定化抗体部１８の構成が異なること以外、図１に示した実施形態１のイムノクロマト検体分析用具と同様の構成である。
【００５９】
同図に示すとおり、本実施形態のイムノクロマトグラフ検体分析用具１０では、固定化抗体部１８が、検体中の被測定物質を捕捉する抗体が固定化されている固定化捕捉抗体部８１と、対照用の抗体が固定化されている固定化対照抗体部８２とを有し、前記固定化対照抗体部８２よりも、前記固定化捕捉抗体部８１が、検体供給部１７側に配置されている。前記固定化捕捉抗体部８１に固定化される抗体としては、実施形態１の固定化抗体部１８に固定化される抗体と同様である。また、前記固定化対照抗体部８２に固定化される対照用の抗体としては、例えば、抗マウス抗体、抗ヤギ抗体、抗ウサギ抗体、抗アルカリホスファターゼ抗体、抗ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）抗体等が挙げられる。このイムノクロマトグラフ検体分析用具１０を用いた測定は、実施形態１と同様にして行うことができる。ここで、前記固定化捕捉抗体部８１が、実施形態１における固定化抗体部１８と同じ働きをする。また、本実施形態では、固定化対照抗体部８２に固定化されている対照用の抗体が、酵素標識抗体と結合して発色または発光することで、前記固定化捕捉抗体部８１での複合体の形成が完了したことを知ることができる。
【実施例】
【００６０】
［実施例１］
下記の手順により、図８に示す構成のイムノクロマトグラフ検体分析用具を得た。ただし、本例のイムノクロマトグラフ検体分析用具において、液体非透過性層は、図８に示したイムノクロマトグラフ検体分析用具のそれよりも長さが短い。その結果、本例のイムノクロマトグラフ検体分析用具では、展開層表面と展開液受取パッドの検体供給部と反対側の底部との間には、前記液体非透過性層が配置されていない状態となっている。
【００６１】
（１）展開層の作製
ニトロセルロース膜（ミリポア社製、商品名「ＨＡ１８０」）を、長さ５０ｍｍ、幅４ｍｍに切断し、これを展開層１２とした。前記展開層１２の一端（図８において右側端部）から３１ｍｍ、３５ｍｍの位置に、それぞれ、卵白アレルゲン抽出蛋白質水溶液（１ｍｇ／ｍＬ（５ｍｍｏｌ／Ｌ）ホウ酸緩衝液（ｐＨ８．５）で希釈後、透析した水溶液）と、抗ヤギＩｇＧマウスモノクローナル抗体（０．１ｍｇ／ｍＬ（５ｍｍｏｌ／Ｌ）ホウ酸緩衝液（ｐＨ８．５）で希釈後、透析した水溶液）とを、幅１ｍｍとなるように塗布した。このようにして、前記展開層１２表面に、固定化捕捉抗体部８１および固定化対照抗体部８２を形成した。なお、前記固定化捕捉抗体部８１の形成においては、前記展開層１２を３７℃で１時間放置して、前記卵白アレルゲン抽出蛋白質を固定化した後、固定化した膜をブロッキングした。
【００６２】
（２）展開液受取パッドの作製
セルロースパッド（ミリポア社製、商品名「ＡＰ２５」）を、長さ２０ｍｍ、幅４ｍｍに切断し、これを展開液受取パッド１３とした。前記展開液受取パッド１３の一端（図８において右側端部）から３ｍｍの位置に、基質として、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルリン酸（２０ｍｇ／ｍＬ、ベーリンガーマンハイム社製、商品名「ＢＣＩＰ」）５μＬを塗布し、３７℃で１時間放置して乾燥させた。
【００６３】
（３）廃液吸収パッドの作製
セルロースパッド（ミリポア社製、商品名「ＡＰ２５」）を、長さ３０ｍｍ、幅４ｍｍに切断し、これを廃液吸収パッド１６とした。
【００６４】
（４）支持体の作製
バッキングシート（Ｂｉｏ  Ｄｏｔ製）を、長さ８０ｍｍ、幅５ｍｍに切断し、これを支持体１１とした。
【００６５】
（５）液体非透過性層の作製
ＰＥＴフィルムを、長さ１０ｍｍ、幅４ｍｍに切断し、これを液体非透過性層１９とした。
【００６６】
（６）イムノクロマトグラフ検体分析用具の作製
前記支持体１１の一端（図８において右側端部）から１０ｍｍの位置に前記展開層１２を貼り付け、前記展開層１２の一端（図８において右側端部）から５ｍｍの位置に前記液体非透過性層１９を貼り付けた。つぎに、前記展開液受取パッド１３の一端（図８において右側端部）を前記支持体１１の一端（図８において右側端部）に固定し、前記展開液受取パッド１３の他端（図８において左側端部）側を前記液体非透過性層１９上に重ねた。つぎに、前記廃液吸収パッド１６の一端（図１において左側端部）を前記支持体１１の他端（図８において右側端部）に固定し、前記廃液吸収パッド１６の他端（図８において右側端部）側を前記展開層１２の他端（図１において左側端部）上に重ねた。このようにして、本例のイムノクロマトグラフ検体分析用具１０を得た。
【００６７】
（評価）
１０μＬの卵白特異ＩｇＧ陽性血清と６０μＬのアルカリホスファターゼ標識抗体（１０μｇ、ヤギ由来）を混合したものを検体液として用いた。前記検体液を検体供給部１７（前記展開層１２の一端（図８において右側端部）から２０ｍｍの位置）に１０μＬ点着した。つぎに、前記展開液受取パッド１３に８０μＬの展開液を滴下した。滴下から２０分後、前記固定化捕捉抗体部８１（１ｍｍ幅）および前記展開層１２全体の発色の度合いを目視により判定した。
【００６８】
［比較例１］
前記液体非透過性層を用いず、前記展開層表面の一端側の上に直接前記展開液受取パッドを配置したこと以外は、実施例１と同様にして、本例のイムノクロマトグラフ検体分析用具を得た。このイムノクロマトグラフ検体分析用具を、実施例１と同様にして評価した。
【００６９】
実施例１および比較例１の評価結果を、下記表１に示す。なお、下記表１においては、発色が鮮明に観察されたものを＋、発色がかろうじて観察されたものを±、発色が観察されなかったものを−とした。
【００７０】
（表１）
固定化捕捉抗体部    展開層全体  
実施例１           ＋               −
比較例１           ±               ＋
【００７１】
上記表１に示すとおり、実施例１では、展開層全体からは発色が確認されず、固定化捕捉抗体部の発色が鮮明に観察された。一方、比較例１では、展開層全体が発色していたため、固定化捕捉抗体部の発色が検出しにくくなっていた。このように、実施例１のイムノクロマトグラフ検体分析用具では、展開層の展開液受取パッド側や、展開液受取パッドでの酵素と基質との反応が防止され、バックグラウンドの上昇が防止されていた。
【産業上の利用可能性】
【００７２】
本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具は、大型化することなく、バックグラウンドの上昇が防止されたものである。したがって、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具は、例えば、全血、血清、血漿、唾液、尿、髄液等に含まれる特定物質の検出、定性分析または定量分析に好適に使用でき、臨床検査、生化学検査などの分野に使用できるが、その用途は制限されず、広い分野に適用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１】図１は、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具の一例の構成を示す斜視図である。
【図２】図２は、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具の一例における固定化抗体部に固定化された抗体について説明する模式図である。
【図３】図３は、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具の一例における検体液、展開液の移動の状態を説明する断面図である。
【図４】図４は、本発明のイムノクロマトグラム検体分析用具の一例における抗原−抗体反応の状態を説明する模式図である。
【図５】図５は、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具のその他の例の構成を示す断面図である。
【図６】図６は、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具のさらにその他の例の構成を示す断面図である。
【図７】図７は、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具のさらにその他の例の構成を示す断面図である。
【図８】図８は、本発明のイムノクロマトグラフ検体分析用具のさらにその他の例の構成を示す斜視図である。
【図９】図９は、従来のイムノクロマトグラフ検体分析用具の一例の構成を示す斜視図である。
【符号の説明】
【００７４】
１０、９０    イムノクロマトグラフ検体分析用具
１１、９１    支持体
１２、９２    展開層
１３、９３    展開液受取パッド
１４、９４    展開液供給部
１５、９５    基質含浸部
１６、９６    廃液回収パッド
１７、９７    検体供給部
１８、９８    固定化抗体部
１９    液体非透過性層
２１、２２    抗体
２３    酵素
２４    酵素標識抗体
４１    被測定物質（抗原）
８１    固定化捕捉抗体部
８２    固定化対照抗体部
ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ    矢印
【図１】
2008116235.tif 000003
【図２】
2008116235.tif 000004
【図３】
2008116235.tif 000005
【図４】
2008116235.tif 000006
【図５】
2008116235.tif 000007
【図６】
2008116235.tif 000008
【図７】
2008116235.tif 000009
【図８】
2008116235.tif 000010
【図９】
2008116235.tif 000011