(57)【要約】【課題】優れた保湿作用、抗老化作用、美白作用等を有する天然由来成分を含む皮膚外用剤および機能性経口用組成物を提供する。【解決手段】  クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を含むことを特徴とする皮膚外用剤、およびクロオコックス科の藍藻植物の抽出物を含むことを特徴とする機能性経口用組成物。このクロオコックス科の藍藻植物は、スイゼンジノリであることが好ましい。【選択図】 なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を含むことを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項２】
前記クロオコックス科の藍藻植物がスイゼンジノリである請求項１記載の皮膚外用剤。
【請求項３】
クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を有効成分とする保湿剤。
【請求項４】
クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を有効成分とする抗老化剤。
【請求項５】
クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を有効成分とする美白剤。
【請求項６】
クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を有効成分とする抗酸化剤。
【請求項７】
クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を有効成分とする抗炎症剤。
【請求項８】
クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を有効成分とする痩身剤。
【請求項９】
クロオコックス科の藍藻植物の抽出物を含むことを特徴とする機能性経口用組成物。
【請求項１０】
機能が保湿、抗老化、美白、抗酸化、抗炎症、または痩身のいずれかである請求項９記載の機能性経口用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然由来成分を有効成分とする皮膚外用剤および機能性経口用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
加齢、紫外線、ストレスなどによるシワ、シミ、皮膚の弾性低下といった皮膚症状の要因として、乾燥、細胞機能低下、紫外線によるメラニン産生や色素沈着、真皮マトリックス成分の減少や変性、紫外線等による細胞の酸化傷害などが挙げられる。このような皮膚症状を防止・改善するために、これまでに様々な天然由来成分の検索および配合検討がなされてきた。
【０００３】
保湿効果と安全性等に優れた保湿剤としては、キク科(Compositae)ハマグルマ属（Wedelia）に属する植物の抽出物（特許文献１）や、アブラナ（Cruciferas）科レピデゥウム（Lepidium）属植物の抽出物（特許文献２）が知られている。
皮膚の老化防止、改善作用を有する皮膚外用剤を得るため、真皮線維芽細胞の賦活あるいは増殖促進作用を有する成分の検索と配合が試みられている。たとえば、ポンカンのエッセンス（特許文献３）、ツリガネニンジン属、クサギ及びそれらの抽出物（特許文献４）、有機溶媒によるクロレラ抽出物（特許文献５）、ビワ抽出物（特許文献６）が開示されている。
【０００４】
美白剤としては、白鶴霊芝の水および／または有機溶媒抽出物（特許文献７）、抗酸化剤としては、サルオガセ科サルオガセ属植物の抽出物（特許文献８）が知られている。
さらに、生体内での脂肪の蓄積を抑制する方法は、体内での脂肪の蓄積を直接的に抑制するため、肥満や疾患の根本的な改善に優れており、日常的な予防方法としても効果的である。このような生体内における脂肪の蓄積を抑制する脂肪蓄積抑制作用を有する成分としては、哺乳動物の乳由来のリン脂質（特許文献９）、褐藻の酵素分解物（特許文献１０）が知られている。
【０００５】
【特許文献１】特開２００２−２０２６２号公報
【特許文献２】特開２００５−２８１２７１号公報
【特許文献３】特開２００１−１３１０４５号公報
【特許文献４】特開２０００−１７８１９８号公報
【特許文献５】特開平１１−３３５２９３号公報
【特許文献６】特公平５−１７２０６号公報
【特許文献７】特開２００３−８９６３０号公報
【特許文献８】特開平１０−１８２４１３号公報
【特許文献９】特開２００１−２７５６１４号公報
【特許文献１０】特開平７−２７８００５号公報
【０００６】
このように、これまでに様々な天然由来成分が応用されている。しかし、天然由来成分の中には未だその効果が知られていないものも数多く存在すると考えられ、より優れた作用を有する保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、痩身剤（中性脂肪蓄積抑制剤）などの開発が期待されている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、優れた保湿作用、抗老化作用、美白作用、抗酸化作用、抗炎症作用、および痩身作用を有する天然由来成分の開発、ならびに、それらの効果を有する皮膚外用剤および機能性経口用組成物を提供することを課題とする。
【０００８】
本発明者らは、天然由来の種々の成分について検討を行った結果、従来その適用や効果が知られていなかったクロオコックス科の藍藻植物に優れた作用が存在することを見出し、さらに検討を重ねて本発明を完成させるに至った。
すなわち、本発明は、クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を含む皮膚外用剤に関する。
別の本発明は、クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を有効成分とする保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、および痩身剤に関する。
さらに別の本発明は、クロオコックス科の藍藻植物の抽出物を含むことを特徴とする機能性経口用組成物に関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を含有することにより、優れた保湿効果、抗老化効果、美白効果、抗酸化効果、抗炎症効果、および痩身効果を発揮する皮膚外用剤および経口用組成物を提供することができる。さらに、クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を有効成分とすることにより、優れた効果を奏する保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、および痩身剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
クロオコックス科の藍藻植物、すなわちクロオコックス科に属する藍藻植物類には、クロオコックス属のクロオコックス（Chroococcus limneticus）、クロオコックス  ディスペルサス（Chroococcus dispersus）；メリスモペディア属のメリスモペディア  エレガンス（Merismopedia elegans）；ミキロキスチス属のアオコ（Microcystis spp.）；アファノカプサ属のアファノカプサ（Aphanocapsa sp.）；スイゼンジノリ属のスイゼンジノリ（Aphanothece sacrum）、アファノテーケ  クラスラータ（Aphanothece clathrata）などがある。これらの任意の属の藍藻植物を用いることができ、複数種の藍藻植物を組み合わせて使用してもよい。このクロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物には、分析しきれないほどの非常に多くの種類の成分が含まれており、これらが総合的に作用して本発明の効果が得られるものと推測される。
なかでも、入手が比較的容易などの理由から適切なものとして、スイゼンジノリ（Chroococcaceae Aphanothece sacrum）を使用することが好ましい。
【００１１】
クロオコックス科の藍藻植物を使用する際は、乾燥体をそのまま粉砕して使用することもできるが、乾燥粉砕物などからの抽出物を用いることがより好ましい。
抽出は、後述する任意の溶媒を用いて行うことができ、異なる溶媒を用いて抽出された抽出物を２種以上混合して用いてもよい。
抽出の際は、藍藻を生のまま用いてもよいが、抽出効率を考えると、細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。
【００１２】
抽出方法としては、室温、冷却または加温した状態で、任意の抽出溶媒に所定時間浸漬させて抽出する方法、水蒸気蒸留等の蒸留法を用いて抽出する方法、生の藍藻から圧搾して抽出物を得る圧搾法等が例示できる。これらの任意の方法を単独で、または２種以上を組み合わせて、抽出を行うことができる。あるいは、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効率を上げるため、撹拌したり抽出溶媒中でホモジナイズしたりしてもよい。
【００１３】
抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は、抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
抽出の際の藍藻と溶媒との比率は特に限定されるものではないが、藍藻１に対し、溶媒０．５〜１０００質量倍が好ましく、特に抽出操作、効率の点で０．５〜１００質量倍が好ましい。
【００１４】
抽出溶媒としては、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール；エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類；アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類などの溶媒を用いることができる。これらは、単独で用いられるほか、任意の２種以上を組み合わせて用いてもよい。生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニアなどの１種又は２種以上の超臨界液体や亜臨界液体を用いてもよい。
【００１５】
抽出物は、そのままでも使用することができるが、一定期間放置して熟成させて用いてもよいし、濃縮、乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解して使用することもできる。あるいは、これらの生理作用を損なわない範囲で、脱色、脱臭、脱塩等の精製処理や、カラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。得られた抽出物やその処理物および分画物は、各処理および分画後に凍結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００１６】
クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物は、優れた保湿作用、抗老化作用、美白作用、抗酸化作用、抗炎症作用、および痩身作用を有し、これを配合することにより、こうした優れた効果を有する皮膚外用剤、または機能性経口用組成物を提供することができる。
ここで、皮膚外用剤とは、化粧料、医薬部外品、外用医薬品等の、皮膚または毛髪に外用される全ての外用組成物を意味している。機能性経口用組成物についても、医薬品、食品、飲料等の種類を問わず、経口により摂取される全ての組成物を意味する。この経口用組成物の機能は、保湿、抗老化、美白、抗酸化、抗炎症、または痩身のいずれか１以上であることが好ましい。
【００１７】
皮膚外用剤の剤型は任意であり、例えば、ローションなどの可溶化系やカラミンローション等の分散系、クリームや乳液などの乳化系として提供することができる。さらに、噴射剤と共に充填するエアゾール形態、軟膏剤、パップ剤などの種々の剤型で提供することもできる。
具体的には、乳液、クリーム、ローション、化粧水、パック、美容液、洗浄料、メーキャップ化粧料等の各種化粧料；液剤、軟膏、粉末、顆粒、エアゾール剤、貼布剤、パップ剤、等の様々な形態の医薬部外品や外用医薬品などが例示できる。
機能性経口用組成物の形態も任意であり、特に限定されることはない。具体的には、飲料を含む一般食品；錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の健康食品（サプリメント）または機能性食品；錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、エキス等の経口医薬品などが例示できる。
【００１８】
たとえば、クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を、化粧品、外用医薬品、医薬部外品等に配合することにより、シワ、タルミ、皮膚の弾力低下、シミ、くすみといった種々の皮膚症状の防止・改善に優れた効果を発揮する皮膚外用剤を得ることができ、たとえば保湿用皮膚外用剤、抗老化用（老化防止改善用）皮膚外用剤、あるいは美白用皮膚外用剤として用いることができる。さらに、痩身用皮膚外用剤または抗炎症用皮膚外用剤などとしても使用することができる。
【００１９】
皮膚外用剤または機能性経口用組成物には、クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物の他に、その用途および必要に応じて、通常皮膚化粧料、毛髪用化粧料、医薬部外品、医薬品等の製剤に使用される任意の成分が含まれる。そのような成分としては、水、油剤（油性成分）、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、可溶化剤、ゲル化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、増粘剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、キレート剤、薬剤（薬効成分）、香料、樹脂、防菌防黴剤、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、アルコール類等が挙げられる。また、本発明の効果を損なわない範囲において、他の抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、あるいは他の植物またはその抽出物などとの併用も可能である。
飲食品等の経口用組成物の場合も、経口用として通常用いられる各種成分との組合せにおいて、特に限定されるものはない。
【００２０】
皮膚外用剤または機能性経口用組成物中のクロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物の配合量は、外用剤や経口剤の種類や使用目的等によって調整することができる。一般的な配合量としては、効果や安定性などの点から、全量に対して、固形分換算で０．０００１〜１０質量％が好ましく、より好ましくは０．００１〜５質量％であり、さらに好ましくは０．０１〜５質量％であり、一層好ましくは０．１〜５質量％である。
【００２１】
次に、クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を有効成分とする保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、および痩身剤（中性脂肪蓄積抑制剤）について説明する。
これらの各剤は、クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を有効成分として含む限り、その形態およびその他の成分の配合の有無等については、何ら制限されない。形態については、液状、ペースト状、ゲル状、固体状、粉末状等の任意の形態を、その用途等に応じて選択でき、その形態とするために必要なビヒクル（賦形剤）、溶剤、その他の一般的な添加剤（酸化防止剤、着色剤、分散剤等）を任意に含むことができる。
これらの各剤は、上述のような皮膚外用剤または経口用組成物に配合して、さまざまな形態の組成物を提供することができるほか、そのまま外用あるいは経口用として使用することができる。
【００２２】
クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を有効成分とする保湿剤は、皮膚や毛髪等に優れた保湿効果を与えるとともに、肌荒れ、小じわ、くすみといった皮膚症状の改善に優れた効果を発揮し、肌のキメを整え、肌の透明感を高めることができる。
【００２３】
クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を有効成分とする抗老化剤は、優れた細胞賦活効果、コラーゲン産生促進作用、およびＡＴＰ産生促進作用、およびアロマターゼ活性促進作用を有し、老化症状の防止改善に優れた効果を発揮する。
【００２４】
クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を有効成分とする美白剤は、優れたメラニン産生抑制効果およびチロシナーゼ活性阻害効果を有し、色素沈着、シミ、そばかす等を予防および改善して、優れた美白作用を発揮する。
【００２５】
クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を有効成分とする抗酸化剤は、優れた過酸化脂質耐性作用を有し、過酸化脂質による細胞障害からの保護作用を発揮する。また、優れたフリーラジカル消去効果、およびスーパーオキサイドアニオンの消去効果を有し、皮膚の光老化等を防止して、優れた抗酸化作用を発揮する。
【００２６】
クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を有効成分とする抗炎症剤は、優れたヒアルロニダーゼ阻害効果、およびホスホリパーゼＡ２活性阻害効果を有し、皮膚の炎症を抑え優れた抗炎症作用を発揮する。
【００２７】
クロオコックス科の藍藻植物またはその抽出物を有効成分とする痩身剤（中性脂肪蓄積抑制剤）は、優れた中性脂肪蓄積抑制効果を有し、優れた痩身作用を発揮する。
【実施例】
【００２８】
以下に、クロオコックス科の藍藻植物抽出物の調製例、各作用を評価するための試験、および皮膚外用剤の処方例についてさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらによりなんら限定されるものではない。
【００２９】
＜抽出方法１：エタノール抽出物＞
クロオコックス科の藍藻植物（スイゼンジノリ；Chroococcaceae  Aphanothece sacrum）の乾燥粉砕物１００ｇを、２．０ｋｇの５０容量％エタノール水溶液に分散させ、撹拌しながら室温にて２時間抽出した。抽出上清を濾別したのち、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物１を得た。
【００３０】
＜抽出方法２：超臨界抽出物＞
クロオコックス科の藍藻植物（スイゼンジノリ；Chroococcaceae  Aphanothece sacrum）の乾燥粉砕物１０ｇを用い、超臨界抽出装置によって４０℃、２５ＭＰａ、二酸化炭素流量５ｍＬ／分となるように調節しながら超臨界状態の二酸化炭素を供給し、抽出物２を得た。
【００３１】
＜ヒト真皮線維芽細胞賦活作用（抗老化作用）の評価＞
上記抽出方法１で得られた抽出物１を用いて、以下のように真皮線維芽細胞賦活作用を評価した。
倉敷紡績（株）製正常ヒト真皮線維芽細胞を、１ウェルあたり２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地により表１に示す各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、さらに４８時間培養した。
上清を除いた後、３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ試薬）を４００μｇ／ｍｌ含有する培地に交換し、約２時間培養した。その後、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにより抽出し、マイクロプレートリーダーで５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に、濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価では、サンプル培養液の他に、ネガティブコントロールとして１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を、ポジティブコントロールとして５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いた。
得られた結果を、ネガティブコントロールにおける細胞賦活作用を１００としたときの相対値として、表１に示す。以下の表中において、ｔ検定における有意確率ｐ値に対し、有意確率５％未満（ｐ＜０．０５）を＊、有意確率１％未満（ｐ＜０．０１）を＊＊で表す。
【００３２】
【表１】
2008201694.tif 000002
【００３３】
＜ヒト真皮繊維芽細胞Ｉ型コラーゲン産生促進作用（抗老化作用）の評価＞
上記抽出方法１で得られた抽出物１を用いて、以下のように真皮線維芽細胞Ｉ型コラーゲン産生促進作用を評価した。
正常ヒト真皮繊維芽細胞を、１ウェルあたり２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地により表２に示す試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、さらに２４時間培養した。
培養上清中に分泌されたタイプＩコラーゲン定量にはＥＬＩＳＡ法を用い、最後は標識されたペルオキシダーゼに対し２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニウム塩（ＡＢＴＳ）および過酸化水素を添加して反応させた後、マイクロプレートリーダーにより４０５ｎｍの吸光度を測定した。評価では、サンプル培養液の他にネガティブコントロールとして０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を、ポジティブコントロールとして５０μＭのＬ−アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩（ＶＣＰＭｇ）を含有する０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いた。
ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔによりタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのタイプＩコラーゲン産生量を求めた。
得られた結果を、ネガティブコントロールにおける単位タンパク量あたりのタイプＩコラーゲン産生量を１００としたときの相対値により表２に示す。
【００３４】
【表２】
2008201694.tif 000003
【００３５】
＜ヒト真皮線維芽細胞ＡＴＰ産生促進作用（抗老化作用）の評価＞
上記抽出方法２で得られた抽出物２を用いて、以下のように真皮線維芽細胞ＡＴＰ産生促進作用を評価した。
正常ヒト真皮繊維芽細胞を、１ウェルあたり４．０×１０４個となるように４８ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地により表３に示す試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、さらに２４時間培養した。
細胞上清を捨てて洗浄し、細胞を超音波処理して細胞中のＡＴＰを溶出させた。その際に細胞内にあるＡＴＰ分解酵素も溶出してしまうため、超音波処理する際に使用するバッファーにＡＴＰ分解酵素阻害剤（和光純薬工業（株）製のセルステインヘキスト３３３４２；Cellstein Hoechst33342）を添加しておいた。
作製した細胞溶解液を試験管に分注し、ルシフェラーゼおよびルシフェリン試薬を添加し、ヤマト科学（株）のコンパクトルミＶＳ５０１を使用して、化学発光強度を測定した。
得られた結果を、試料無添加のコントロールにおける値を１００としたときの相対値により表３に示す。
【００３６】
【表３】
2008201694.tif 000004
【００３７】
＜ヒト表皮細胞賦活作用（抗老化作用）の評価＞
上記抽出方法２で得られた抽出物２を用いて、以下のように表皮細胞賦活作用を評価した。
正常ヒト表皮角化細胞を、１ウェルあたり２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、市販の倉敷紡績（株）製Ｈｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２を用いた。２４時間培養後、Ｈｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２により表４に示す各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、さらに２４時間培養した。
次に、ＭＴＴ試薬を１００μｇ／ｍｌ含有する培地に交換して約２時間培養した。その後、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにより抽出し、マイクロプレートリーダーで５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に、濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。
得られた結果を、試料無添加のコントロールにおける細胞賦活作用を１００としたときの相対値により表４に示す。
【００３８】
【表４】
2008201694.tif 000005
【００３９】
＜ヒト表皮メラニン細胞チロシナーゼ活性阻害作用（美白作用）の評価＞
上記抽出方法１で得られた抽出物１を用いて、以下のように表皮メラニン細胞チロシナーゼ活性阻害作用を評価した。
倉敷紡績（株）製正常ヒト表皮メラニン細胞を、１ウェルあたり３．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、倉敷紡績（株）製Ｍｅｄｉｕｍ １５４Ｓを用いた。２４時間培養後、Ｍｅｄｉｕｍ  １５４Ｓにより表５に示す各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、さらに４８時間培養した。次に１質量％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘを含有するリン酸緩衝液７５μｌに交換して細胞を完全に溶解させ、内５０μｌを粗酵素液として使用した。粗酵素液に、基質となる０．０５質量％Ｌ−ドーパ含有リン酸緩衝液５０μｌを加え、３７℃で２時間静置した。マイクロプレートリーダーにより、基質添加直後と反応終了時の４０５ｎｍの吸光度を測定し、各測定値を次式に導入して、生成されたドーパメラニン量を求めた。
ドーパメラニン生成量＝
｛（反応後４０５ｎｍ値−反応前４０５ｎｍ値）−２．１６６｝／５．２３８
また、ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔによりタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのドーパメラニン生成量を求めた。
得られた結果を、試料無添加のコントロールにおける値を１００としたときの相対値により表５に示す。
【００４０】
【表５】
2008201694.tif 000006
【００４１】
＜ホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）阻害作用（抗炎症作用）の評価＞
上記抽出方法１で得られた抽出物１を用いて、以下のようにホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）阻害作用を評価した。
６０ｎｇ／ｍｌとなるよう調整したホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）、表６に示す各試料濃度に調整したサンプル培養液、および１０ｍＭとなるように調整したＤＴＮＢ（５，５−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）を各１０μＬずつ混合し、室温で１０分間静置した。さらに基質として１．６６ｍＭのジヘプタノイルチオ−ＰＣ（Ｄｉｈｅｐｔａｎｏｙｌ  Ｔｈｉｏ−ＰＣ）を添加し、室温で４５分間反応させた後、４１４ｎｍの吸光度を測定した。また、ＰＬＡ２溶液にかえてバッファーのみを添加した場合の吸光度を測定し、両測定値の差を求めた。試料無添加のコントロールの値を（Ａ）、試料添加時の値を（Ｂ）としたとき、ＰＬＡ２酵素阻害作用は次式に定義される。
阻害率（％）＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００
得られた結果を表６に示す。
【００４２】
【表６】
2008201694.tif 000007
【００４３】
＜ヒアルロニダーゼ阻害作用（抗炎症作用）の評価＞
上記抽出方法１で得られた抽出物１を用いて、以下のようにヒアルロニダーゼ阻害作用を評価した。
市販のヒアルロン酸カリウム塩（ヒト臍の緒由来）を０．９ｍｇ／ｍｌになるように、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、基質溶液とした。市販のヒアルロニダーゼ（ウシ精巣由来）を５，３００ ｕｎｉｔ／ｍｌとなるように、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、酵素溶液とした。酵素溶液は用時調製とした。
緩衝液で表７に示す各試料濃度に調製したサンプル溶液０．１ｍｌ、および酵素溶液０．０３ｍｌを試験管に入れ、３７℃で２０分間反応させた。次に、活性化剤を０．０６ｍｌ加え、３７℃で２０分間反応させた。さらに、基質溶液を０．１５ｍｌ加え、３７℃で１時間反応させた。０．４ＮのＮａＯＨ水溶液０．０６ｍｌを加えて反応を停止させた後、すぐに氷冷し、ホウ酸緩衝液（ｐＨ９．１）を０．０６ｍｌ添加し、３分間煮沸した後、さらに氷冷した。ｐ−ＤＡＢＡ（ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド）溶液を２．０ｍｌ添加し、３７℃で２０分間反応させた後、反応溶液を各試験管から９６ウェルマイクロプレートに移しかえ、マイクロプレートリーダーを用いて５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。コントロールには、試料無添加の緩衝溶液を用いた。ヒアルロニダーゼの活性が阻害されると、分解産物であるＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）が減少し、ｐ−ＤＡＢＡによる吸光度が低くなることから、ヒアルロニダーゼ阻害作用は、次式に定義される。
阻害率（％）
＝（コントロール吸光度−サンプル吸光度）／コントロール吸光度×１００
結果を表７に示す。
【００４４】
【表７】
2008201694.tif 000008
【００４５】
＜中性脂肪蓄積抑制作用（痩身作用）の評価＞
上記抽出方法１で得られた抽出物１を用いて、以下のように中性脂肪蓄積抑制作用の評価を行った。
皮下脂肪由来正常ヒト前駆脂肪細胞Ｃｒｙｏ・ＨＰＲＡＤ−ＳＱ（三光純薬株式会社）を、１ウェル当り１．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ＰＧＭ培地（１０質量％ウシ胎児血清（ＦＢＳ），２ｍＭ  Ｌ−グルタミン，１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ  ペニシリン，１００μｇ／ｍＬ  ストレプトマイシン含有）を用いた。細胞が飽和状態になる直前に表８に示す濃度の試料を添加したＰＧＭ分化用培地（１０μｇ／ｍＬ  インシュリン，１μＭ  デキサメタゾン（dexamethasone），２００μＭ  インドメタシン，５００μＭ  イソブチルメチルキサンチン含有）に交換し、脂肪細胞への分化誘導を行った。分化誘導開始後、コントロール群が成熟して細胞内に多数の脂肪滴が蓄積されるまで、１０日〜１４日間培養した。細胞を回収後、１０％中性緩衝ホルムアルデヒド液を用いて細胞を固定した。ＰＢＳ（−）にて洗浄の後、０．５ｗ／ｖ％オイルレッドＯ溶液を添加し、３７℃で２時間インキュベートした。ＰＢＳ（−）にて洗浄の後、メタノールを添加し、色素を抽出した。抽出後、マイクロプレートリーダーにより、５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に、濁度として６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差を用いて中性脂肪蓄積量を測定した。
測定結果を、試料無添加の培地を用いたコントロールにおける中性脂肪蓄積量を１００とした相対値により、表８に示す。
【００４６】
【表８】
2008201694.tif 000009
【００４７】
＜ヒト表皮細胞を用いた過酸化脂質耐性作用（抗酸化作用）の評価＞
上記抽出方法１で得られた抽出物１を用いて、以下のように過酸化脂質耐性作用の評価を行った。
ヒト表皮細胞株ＨａＣａＴを１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１０質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間後、１０質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地により表９に示す各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、さらに２４時間培養した。
任意濃度のｔ−ブチルヒドロペルオキシドを添加したＨａｎｋｓ（＋）溶液に交換し、２時間培養した。さらに、１５０μｇ／ｍｌニュートラルレッドを含有するＰＢＳ（−）に交換し、３７℃で２時間培養した。次に１質量％酢酸を含む５０質量％エタノール水溶液に交換し、細胞内に取りこまれたニュートラルレッドを抽出し、抽出液の５４０ｎｍの吸光度を測定した。
得られた結果を、ｔ−ブチルヒドロペルオキシドを添加していないコントロールの細胞生存率を１００としたときの相対値により表９に示す。
【００４８】
【表９】
2008201694.tif 000010
【００４９】
＜保湿作用の評価＞
上記抽出方法１により得られた抽出物１を蒸留水で希釈して、抽出物１を１質量％含むスイゼンジノリエキス水溶液（試料溶液）と、プラセボ水溶液（蒸留水）を調製した。モニターの前腕部の３×４ｃｍ２の範囲における塗布前の角質水分量を測定したのち、各水溶液をそれぞれ２４μＬずつ、同範囲内に塗布した。塗布後、１５、３０、６０、および１２０分後に、電気伝導率を用いた角質水分量の測定を行った。
測定は、各範囲無作為に抽出した５ポイントにおいて行い、その平均角質水分量を算出し、これを各塗布前の角質水分量を１とした場合の相対値で評価した。
上記電気伝導率を用いた角質水分量の測定法は、乾燥、保湿を確認する指標として汎用されている方法であり、その詳細は、『化粧品の有用性  評価技術の進歩と将来展望』（薬事日報社、８２〜１０１頁）など多くの測定法マニュアルに掲載されているとおりである。電気伝導率測定機器として、ＳＫＩＣＯＮ−２００（アイ・ビイ・エス（株））を用いた。
結果を表１０に示す。
【００５０】
【表１０】
2008201694.tif 000011
【００５１】
続いて、上記各調製方法で得られたクロオコックス科の藍藻植物の抽出物を配合した皮膚外用剤および経口用組成物の処方例を示す。
［実施例１］乳液
（１）スクワラン                                      １０．０（質量％）
（２）メチルフェニルポリシロキサン                      ４．０
（３）水素添加パーム核油                                ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質                              ０．１
（５）モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）
１．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン                        １．０
（７）グリセリン                                        ４．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（９）カルボキシビニルポリマー                          ０．１５
（10）精製水                                        １００とする残部
（11）アルギニン（１質量％水溶液）                    ２０．０
（12）抽出物１                                          ３．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、冷却を開始し、（11）と（12）を順次加え、均一に混合する。
【００５２】
［実施例２］化粧水
（１）エタノール                                      １５．０（質量％）
（２）ポリオキシエチレン（４０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油    ０．３
（３）香料                                              ０．１
（４）精製水                                        １００とする残部
（５）クエン酸                                          ０．０２
（６）クエン酸ナトリウム                                ０．１
（７）グリセリン                                        １．０
（８）ヒドロキシエチルセルロース                        ０．１
（９）抽出物２                                          ５．０
製法：（１）に（２）及び（３）を溶解する。溶解後、（４）〜（８）を順次添加した後、十分に攪拌し、（９）を加え、均一に混合する。
【００５３】
［実施例３］クリーム
（１）スクワラン                                      １０．０（質量％）
（２）ステアリン酸                                      ２．０
（３）水素添加パーム核油                                ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質                              ０．１
（５）セタノール                                        ３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン                  ２．０
（７）グリセリン                                      １０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（９）アルギニン（２０質量％水溶液）                  １５．０
（10）精製水                                        １００とする残部
（11）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液）      １５．０
（12）抽出物１                                          ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、（11）を加え、冷却を開始し、４０℃にて（12）を加え、均一に混合する。
【００５４】
［実施例４］美容液
（１）精製水                                        １００とする残部(質量％)
（２）グリセリン                                      １０．０
（３）ショ糖脂肪酸エステル                              １．３
（４）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液）      １７．５
（５）アルギン酸ナトリウム(１質量％水溶液)            １５．０
（６）モノラウリン酸ポリグリセリル                      １．０
（７）マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル            ３．０
（８）N-ラウロイル-L-グルタミン酸ジ（フィトステリル−２−オクチルドデシル）
２．０
（９）硬化パーム油                                      ２．０
（10）スクワラン（オリーブ由来）                        １．０
（11）ベヘニルアルコール                                ０．７５
（12）ミツロウ                                          １．０
（13）ホホバ油                                          １．０
（14）１、３−ブチレングリコール                      １０．０
（15）Ｌ−アルギニン（１０質量％水溶液）                ２．０
（16）抽出物２                                          ５．０
製法：（１）〜（６）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（13）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、５０℃にて（14）と（15）を加える。さらに４０℃まで冷却し、（16）を加え、均一に混合する。
【００５５】
［実施例５］水性ジェル
（１）カルボキシビニルポリマー                          ０．５（質量％）
（２）精製水                                        １００とする残部
（３）水酸化ナトリウム（１０質量％水溶液）              ０．５
（４）エタノール                                      １０．０
（５）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（６）香料                                              ０．１
（７）抽出物２                                          ３．０
（８）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油    １．０
製法：（１）を（２）に加え、均一に攪拌した後、（３）を加える。均一に攪拌した後、（４）に予め溶解させた（５）を加える。均一に攪拌した後、予め混合しておいた（６）〜（８）を加え、均一に攪拌混合する。
【００５６】
［実施例６］クレンジング料
（１）スクワラン                                      ８１．０（質量％）
（２）イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル    １５．０
（３）精製水                                        １００とする残部
（４）抽出物１                                          ４．０
製法：（１）と（２）を均一に溶解する。これに、（３）と（４）を順次加え、均一に混合する。
【００５７】
［実施例７］洗顔フォーム
（１）ステアリン酸                                    １６．０（質量％）
（２）ミリスチン酸                                    １６．０
（３）親油型モノステアリン酸グリセリン                  ２．０
（４）グリセリン                                      ２５．０
（５）水酸化ナトリウム                                  ７．５
（６）ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン                １．０
（７）精製水                                        １００とする残部
（８）抽出物２                                          ５．０
製法：（１）〜（４）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（５）〜（７）の水相成分を８０℃にて加熱溶解し、油相成分と均一に混合撹拌する。冷却を開始し、４０℃にて（８）を加え、均一に混合する。
【００５８】
［実施例８］メイクアップベースクリーム
（１）スクワラン                                      １０．２(質量％)
（２）セタノール                                        ２．０
（３）グリセリントリ−２−エチルヘキサン酸エステル      ２．５
（４）親油型モノステアリン酸グリセリル                  １．０
（５）プロピレングリコール                            １１．０
（６）ショ糖脂肪酸エステル                              １．３
（７）精製水                                        １００とする残部
（８）酸化チタン                                        １．０
（９）ベンガラ                                          ０．１
（10）黄酸化鉄                                          ０．４
（11）香料                                              ０．１
（12）抽出物２                                          ３．０
製法：（１）〜（４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（５）〜（７）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（８）〜（10）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（11）と（12）の成分を加え、均一に混合する。
【００５９】
［実施例９］乳液状ファンデーション
（１）メチルポリシロキサン                              ２．０(質量％)
（２）スクワラン                                        ５．０
（３）ミリスチン酸オクチルドデシル                      ５．０
（４）セタノール                                        １．０
（５）ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）ソルビタンモノステアリン酸エステル
１．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン                        ０．７
（７）１、３−ブチレングリコール                        ８．０
（８）キサンタンガム                                    ０．１
（９）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（10）精製水                                        １００とする残部
（11）酸化チタン                                        ９．０
（12）タルク                                            ７．４
（13）ベンガラ                                          ０．５
（14）黄酸化鉄                                          １．１
（15）黒酸化鉄                                          ０．１
（16）香料                                              ０．１
（17）抽出物１                                          ４．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（10）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（11）〜（15）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散する。油相成分を加え、乳化を行う。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（16）と（17）の成分を順次加え、均一に混合する。
【００６０】
［実施例１０］油中水型エモリエントクリーム
（１）流動パラフィン                                  ３４．０(質量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス                      ２．０
（３）ワセリン                                          ５．０
（４）ジグリセリンオレイン酸エステル                    ５．０
（５）塩化ナトリウム                                    １．３
（６）塩化カリウム                                      ０．１
（７）プロピレングリコール                              ３．０
（８）１、３−ブチレングリコール                        ５．０
（９）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（10）抽出物１                                          ３．０
（11）精製水                                        １００とする残部
（12）香料                                              ０．１
製法：（５）と（６）を（11）の一部に溶解して５０℃とし、５０℃に加熱した（４）に撹拌しながら徐々に加える。これを混合した後、７０℃にて加熱溶解した（１）〜（３）に均一に分散する。これに、（７）〜（10）を（11）の残部に７０℃にて加熱溶解したものを撹拌しながら加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（12）を加え、均一に混合する。
【００６１】
［実施例１１］パック
（１）精製水                                        １００とする残部(質量％)
（２）ポリビニルアルコール                            １２．０
（３）エタノール                                      １７．０
（４）グリセリン                                        ９．０
（５）ポリエチレングリコール（平均分子量１０００）      ２．０
（６）抽出物２                                          ５．０
（７）香料                                              ０．１
製法：（２）と（３）を混合し、８０℃に加温した後、８０℃に加温した（１）に溶解する。均一に溶解した後、（４）と（５）を加え、攪拌しながら冷却を開始する。４０℃まで冷却し、（６）と（７）を加え、均一に混合する。
【００６２】
［実施例１２］入浴剤
（１）香料                                              ０．３(質量％)
（２）抽出物１                                          ３．０
（３）炭酸水素ナトリウム                              ５０．０
（４）硫酸ナトリウム                                  ４６．７
製法：（１）〜（４）を均一に混合する。
【００６３】
［実施例１３］ヘアーワックス
（１）ステアリン酸                                      ３．０(質量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス                      ２．０
（３）セチルアルコール                                  ３．０
（４）高重合メチルポリシロキサン                        ２．０
（５）メチルポリシロキサン                              ５．０
（６）ポリ（オキシエチレン・オキシプロピレン）メチルポリシロキサン共重合体
１．０
（７）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（８）１、３−ブチレングリコール                        ７．５
（９）アルギニン                                        ０．７
（10）精製水                                        １００とする残部
（11）抽出物２                                          ４．０
（12）香料                                              ０．１
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解後する。一方、（７）〜（10）の水相成分を７５℃にて加熱溶解し、前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（11）と（12）の成分を加え、均一に混合する。
【００６４】
［実施例１４］ヘアートニック
（１）エタノール                                      ５０．０(質量％)
（２）精製水                                        １００とする残部
（３）抽出物１                                          ３．０
（４）香料                                              ０．１
製法：（１）〜（４）の成分を混合、均一化する。
【００６５】
［実施例１５］錠剤
（１）コーンスターチ                                  ４４．０(質量％)
（２）結晶セルロース                                  ４０．０
（３）カルボキシメチルセルロースカルシウム              ５．０
（４）無水ケイ酸                                        ０．５
（５）ステアリン酸マグネシウム                          ０．５
（６）抽出物１                                        １０．０
製法：（１）〜（６）を均一に混合し、打錠機にて圧縮成型して、１錠２００ｍｇの錠剤を得る。
【００６６】
［実施例１６］散剤
（１）ケイ酸アルミン酸マグネシウム                    ９５．３(質量％)
（２）カルボキシメチルセルロースカルシウム              ４．５
（３）抽出物１                                          ０．２
製法：（１）〜（３）の粉体を混合後、粉砕機にて粉砕し、均一に分散する。
【００６７】
［実施例１７］キャンデー
（１）白糖                                             ６０．０(質量％)
（２）水飴                                             ３９．５
（３）抽出物２                                           ０．４
（４）香料                                               ０．１
製法：（１）と（２）を加熱混合・均一化した後冷却し、７０℃で成分（３）と（４）を添加し、混合均一化した後成型する。
【００６８】
［実施例１８］ドリンク剤
（１）アミノエチルスルホン酸                        １０００ｍｇ
（２）硝酸チアミン                                      １０ｍｇ
（３）リン酸リボフラビンナトリウム                        ５ｍｇ
（４）塩酸ピリドキシン                                  １０ｍｇ
（５）無水カフェイン                                    ５０ｍｇ
（６）クエン酸                                        ２５０ｍｇ
（７）Ｄ−ソルビトール液                                  ８ｇ
（８）抽出物２                                          １０ｍｇ
（９）香料                                                微量
（10）精製水                            全体を１００ｍＬとする量
製法：（１）〜（９）を順次（10）に添加し、均質化する。