(57)【要約】【課題】安全性が高く、粒子径が小さいことにより透明性が高く、且つ、良好な頭皮及び毛包への浸透性を示すタンパク質ナノ粒子を含む頭髪用組成物を提供すること。【解決手段】頭髪有効成分を内包したタンパク質ナノ粒子を含む、頭髪用組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
頭髪有効物質を内包したタンパク質ナノ粒子を含む、頭髪用組成物。
【請求項２】
タンパク質ナノ粒子の平均粒子サイズが１０〜１０００ｎｍである、請求項１に記載の頭髪用組成物。
【請求項３】
タンパク質の重量に対して、０.１〜１００重量％の頭髪有効成分を含有する、請求項１又は２に記載の頭髪用組成物。
【請求項４】
頭髪有効成分が、化粧品用成分、医薬部外品成分、又は医薬品成分からなる群より選ばれる少なくとも一種である、請求項１から３の何れかに記載の頭髪用組成物。
【請求項５】
頭髪有効成分が、イオン性物質または脂溶性物質である、請求項１から４の何れかに記載の頭髪用組成物。
【請求項６】
頭髪有効成分が育毛剤である、請求項１に記載の頭髪用組成物。
【請求項７】
エタノール含有量が２０重量％以下である、請求項１から６の何れかに記載の頭髪用組成物。
【請求項８】
タンパク質がコラーゲン、ゼラチン、酸処理ゼラチン、アルブミン、オバルブミン、カゼイン、トランスフェリン、グロブリン、フィブロイン、フィブリン、ラミニン、フィブロネクチン、又はビトロネクチンからなる群より選ばれる少なくとも一種である、請求項１から７の何れかに記載の頭髪用組成物。
【請求項９】
ナノ粒子の形成中および／又は形成後にタンパク質が架橋処理されている、請求項１から８の何れかに記載の頭髪用組成物。
【請求項１０】
酵素を用いて架橋処理を行う、請求項９に記載の頭髪用組成物。
【請求項１１】
下記の工程（ａ）から（ｃ）によって作製されるカゼインナノ粒子を含む、請求項１から８の何れかに記載の頭髪用組成物。
（ａ）カゼインをpH８以上１１未満の塩基性水性媒体に混合させる工程；
（ｂ）工程（ａ）で得た溶液に少なくとも１種の頭髪有効成分を添加する工程；及び
（ｃ）工程（ｂ）で得た溶液を pH3.5〜7.5の酸性水性媒体に注入する工程：
【請求項１２】
下記の工程（ａ）から（ｃ）によって作製されるカゼインナノ粒子を含む、請求項１から８の何れかに記載の頭髪用組成物。
（ａ）カゼインをpH８以上１１未満の塩基性水性媒体に混合させる工程；
（ｂ）工程（ａ）で得た溶液に少なくとも１種の頭髪有効成分を添加する工程；及び
（ｃ）工程（ｂ）で得た溶液を攪拌しながら、該溶液のpH を等電点からpH1以上離れたpHまで下降させる工程：
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、頭髪有効成分を内包したタンパク質ナノ粒子を含む頭髪用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
微粒子材料は、バイオテクノロジーにおいて幅広い利用が期待されている。特にナノテクノロジーの進展によって生み出されたナノ微粒子材料を食品、化粧品、医薬品等に応用することが活発に検討され、研究成果も数多く報告されるようになってきている。
【０００３】
例えば、化粧品においては、近年、より明確な肌効果が求められるようになってきており、ナノテクノロジーをはじめ様々な新しい技術を取り入れることにより、機能性・使用性の向上、他社品との差別化が計られている。肌は一般的に、角質層がバリアーとして存在するために薬物の皮膚への浸透性が低い。肌効果を十分に発揮させるためには、有効成分の皮膚透過性の改善が不可欠である。また、皮膚に対して高い有効性を持っていても、保存安定性が悪かったり、皮膚に刺激を起こしやすかったりするために製剤化が困難な成分も多い。これらを解決すべく、経皮吸収性の改善および保存安定性の向上、皮膚刺激性の低減など目的とした、様々な微粒子材料の開発が進められている。現在、超微細乳化やリポソームなど各種微粒子材料が研究されている（たとえば、非特許文献１）。
【０００４】
乳化物やリポソームの代わりに高分子材料を用いれば、その構造上、保存安定性や生体内における粒子の安定性の点で、大きく改善されることが予想される。しかし、ほとんどの研究は乳化重合をはじめとする合成高分子を用いたものであり、より安全なキャリアーが求められている。
【０００５】
また、非特許文献２では、リン脂質ポリマーのナノ粒子が、頭髪へ有効成分のリザーバー特性が研究されている。しかし、このような自己組織化ポリマーを設計し、合成することは簡便とはいえず、コスト的にも商品化は困難である。
【０００６】
ところで、頭髪は、紫外線照射および塩素接触などの環境要因、カラーリング、脱色、パーマ、強力な界面活性剤を用いたシャンプーによる洗髪などの化学的要因、高温のドライヤーを過度に使用するなどの物理的要因により、損傷される。
【０００７】
このような損傷によって、キューティクルやタンパク質が失われたり、硬くなったり、脆くなったり、ささくれたりするなどの頭髪に好ましくない状態を引き起こす。
【０００８】
従来から、様々な成分が頭髪損傷の治療及び予防に有効であると言われており、髪の毛を紫外線や乾燥から保護したり、髪にハリやコシを与えたり、抜け毛予防や頭髪の減少を改善したりする目的で用いられている。しかし、これらは有効性の点で不十分であった。
一方、育毛剤においても、育毛成分が優れた作用を有するだけでなく、その活性成分が作用点に的確に到達することが重要である。
【０００９】
また、頭髪用組成物の中には、５０％以上のエタノールを含んでいるものがあり、頭皮への悪影響が懸念されている。育毛剤分野では、疎水性の育毛成分を溶解するために通常５０％以上のエタノールを含んでおり、それによる悪影響が懸念されている。特許文献１では、組成物により、エタノールによる頭皮への刺激が緩和を提案している。
【００１０】
【非特許文献１】西田  光広、フレグランスジャーナル、11月、17（2005）
【非特許文献２】福井  洋樹  高分子、10月、798（2006）
【特許文献１】特開２００６−１７６４４７公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、上記した従来技術の問題点を解消することを解決すべき課題とした。即ち、本発明は、粒子径が小さいことにより透明性が高く、頭髪及び頭皮への浸透性が良く、且つ安全性が高いナノ粒子を、シャンプー、リンス、ヘアコンディショナー、ヘアパック、ヘアリキッド、ヘアトニック、ヘアスプレー等に配合した頭髪用組成物を提供することを解決すべき課題とした。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、頭髪有効成分を内包したタンパク質ナノ粒子を調製したところ、安全性、透明性が高く、且つ、良好な頭髪および頭皮への浸透性が示されることを実証した。本発明はこれらの知見に基づいて完成したものである。
【００１３】
即ち、本発明によれば、頭髪有効成分を内包したタンパク質ナノ粒子を含む、頭髪用組成物が提供される。
好ましくは、０．０１〜５０重量％のタンパク質ナノ粒子を含有する。
好ましくは、タンパク質ナノ粒子の平均粒子サイズは１０〜１０００ｎｍである。
好ましくは、タンパク質の重量に対して、０.１〜１００重量％の頭髪有効成分を含有する。
【００１４】
好ましくは、頭髪有効成分は、化粧品用成分又は医薬品成分からなる群より選ばれる少なくとも一種である。
より好ましくは、頭髪有効成分は、イオン性物質または脂溶性物質である。
さらに好ましくは、頭髪有効成分は育毛剤である。
好ましくは、本発明の頭髪用組成物においては、エタノール含有量は２０重量％以下である。
好ましくは、タンパク質はコラーゲン、ゼラチン、酸処理ゼラチン、アルブミン、オバルブミン、カゼイン、トランスフェリン、グロブリン、フィブロイン、フィブリン、ラミニン、フィブロネクチン、又はビトロネクチンからなる群より選ばれる少なくとも一種である。
【００１５】
好ましくは、ナノ粒子の形成中および／又は形成後にタンパク質が架橋処理されている。
好ましくは、架橋剤は酵素を用いることができる。
酵素としては、タンパク質の架橋作用を有するものであれば特に限定されないが、好ましくはトランスグルタミナーゼを用いることができる。
【００１６】
好ましくは、本発明の頭髪用組成物は、下記の工程（ａ）から（ｃ）によって作製されるカゼインナノ粒子を含む。
（ａ）カゼインをpH８以上１１未満の塩基性水性媒体に混合させる工程；
（ｂ）工程（ａ）で得た溶液に少なくとも１種の頭髪有効成分を添加する工程；及び
（ｃ）工程（ｂ）で得た溶液を pH3.5〜7.5の酸性水性媒体に注入する工程：
【００１７】
好ましくは、本発明の頭髪用組成物は、下記の工程（ａ）から（ｃ）によって作製されるカゼインナノ粒子を含む。
（ａ）カゼインをpH８以上１１未満の塩基性水性媒体に混合させる工程；
（ｂ）工程（ａ）で得た溶液に少なくとも１種の頭髪有効成分を添加する工程；及び
（ｃ）工程（ｂ）で得た溶液を攪拌しながら、該溶液のpH を等電点からpH1以上離れたpHまで下降させる工程：
【発明の効果】
【００１８】
本発明の頭髪用組成物における頭髪有効成分を内包した粒子はナノ粒子であるため、吸収性が高い。また、本発明においては、タンパク質ナノ粒子を用いるため、化学架橋剤や合成界面活性剤を用いることなく製造でき、安全性が高い。さらに、疎水性の頭髪有効成分をナノ粒子分散できるため、多量のエタノールを添加する必要がなく、頭皮へのエタノールによる刺激が少ない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明の実施の形態についてさらに具体的に説明する。
本発明の頭髪用組成物は、頭髪有効成分を内包したタンパク質ナノ粒子を含むことを特徴とする。
【００２０】
本発明で用いる頭髪有効成分の種類は、特に限定されないが、例えば、化粧品用成分、医薬部外品成分、又は医薬品成分から選ぶことができる。本発明において、タンパク質ナノ粒子に内包される頭髪有効成分の具体例としては、保湿剤、紫外線吸収剤、活性酸素除去剤、抗酸化剤、抗炎症剤、血行促進剤、育毛剤、毛髪栄養剤、アンチエイジング剤、コラーゲン合成促進剤、ビタミン剤、ミネラル、又はアミノ酸類などから選ぶことができる。
【００２１】
保湿剤としては、例えば、カンテン、ジグリセリン、ジステアリルジモニウムヘクトライト、ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、へキシレングリコール、ヨクイニンエキス、ワセリン、尿素、ヒアルロン酸、セラミド、リピジュア、イソフラボン、アミノ酸、コラーゲン、ムコ多糖、フコダイン、ラクトフェリン、ソルビトール、キチン・キトサン、リンゴ酸、グルクロン酸、プラセンタエキス、海藻エキス、ボタンピエキス、アマチャエキス、オトギリソウエキス、コレウスエキス、マサキ抽出物、コウカエキス、マイカイ花エキス、チョレイエキス、サンザシエキス、ローズマリーエキス、デュークエキス、カミツレエキス、オドリコソウエキス、レイシエキス、セイヨウノコギリソウエキス、アロエエキス、マロニエエキス、アスナロエキズ、ヒバマタエキス、オスモインエキス、オーツ麦エキス、チューベロースポリサッカライド、冬虫夏草エキス、大麦エキス、オレンジ抽出物、ジオウエキス、サンショウエキス、ヨクイニンエキスなどを挙げることができる。また、カゼインナノ粒子の場合は、カゼイン自体が保湿性を有する。
【００２２】
紫外線防止剤としては、サリチル酸ホモメンチル、４−メトキシケイ皮酸−２−エチルヘキシル、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンスルホン酸、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンスルホン酸ナトリウム、４−ｔ−ブチル−４’−メトキシ−ジベンゾイルメタン、酸化チタンおよび酸化亜鉛等が挙げられる。
【００２３】
活性酸素除去剤としては、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、マンニトール、ベータカロチン等のカロテノイド類、アスタキサンチン、ルチン及びその誘導体、ビリルビン、コレステロール、トリプトファン、ヒスチジン、クエルセチン、クエルシトリン、カテキン、カテキン誘導体、没食子酸、没食子酸誘導体、オウゴン抽出物、イチョウ抽出物、ユキノシタ抽出物、メリッサ抽出物、ゲンノショウコ抽出物、ボタンピ抽出物、パセリ抽出物、トルメンチラ抽出物、羅漢果抽出物、海藻抽出物、ヤシャジツ抽出物、ジコッピ抽出物等が挙げられる。
【００２４】
抗酸化剤としては、例えば、カロテン類、レチノイン酸、レチノール、ビタミンＣ及びその誘導体、カイネチン、アスタキサンチン、トレチノイン、ビタミンＥおよびその誘導体、セサミン、α−リポ酸、コエンザイムＱ１０、フラボノイド類、エリソルビン酸、没食子酸プロピル、BHT（ジ-n-ブチルヒドロキシトルエン）、BHA（ブチルヒドロキシアニソール）、コウキエキス、大豆エキス、紅茶エキス、茶エキス、エイジツエキスなどを挙げることができる。
【００２５】
抗炎症剤が、アズレン、グアイアズレン、塩酸ジフェンヒドラミン、酢酸ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、メフェナム酸、フェニルブタゾン、インドメタシン、イブプロフェン及びケトプロフェンから選ばれる化合物並びにそれらの誘導体並びにそれらの塩、オウゴンエキス、カワラヨモギエキス、キキョウエキス、キョウニンエキス、クチナシエキス、クマザサ抽出液、ゲンチアナエキス、コンフリーエキス、シラカバエキス、ゼニアオイエキス、トウニンエキス、桃葉エキス並びにビワ葉エキスから選ばれる植物抽出物から選ばれるもの。
【００２６】
血行促進剤が、ニコチン酸、センブリ抽出物、γ-オキサゾール、アルコキシカルボニルピリジンN-オキシド、塩化カルプロニウム、及びアセチルコリン又はその誘導体から選ばれるもの。
【００２７】
育毛剤が、グリチルレチン酸又はその誘導体、グリチルリチン酸又はその誘導体、ヒノキチオール、ミノキシジルまたはその類縁体、アデノシン、ビタミンE又はその誘導体、ビタミンC誘導体、6-ベンジルアミノプリン、ニコチン酸ベンジル、ニコチン酸トコフェロール、ニコチン酸β-ブトキシエステル、イソプロピルメチルフェノール、ペンタデカン酸又はその誘導体、セファラチン、フィナステリド、t-フラバノン、パントテニルエチルエーテルなどを挙げることができる。特に好ましいのはヒノキチオール、ミノキシジルまたはその類縁体である。
【００２８】
アンチエイジング剤、コラーゲン合成促進剤、ビタミン剤、ミネラル、又はアミノ酸類にも、それぞれ公知の成分を用いることができる。
【００２９】
上記した頭髪有効成分は、単独で使用してもよいし、２種以上を組み合わせて用いることもできる。
【００３０】
本発明においては、脂溶性の頭髪有効成分とカゼイン疎水性部分の相互作用を利用して、カゼインナノ粒子内に頭髪有効成分を内包できることが見出された。さらに、これらの粒子は水溶液中で安定に存在することが見出された。脂溶性の物質としては、好ましくはＣｌｏｇＰが０より大きく、より好ましくはＣｌｏｇＰが１以上である。
【００３１】
また、タンパク質とイオン性多糖または別種のイオン性タンパク質との混合粒子により、イオン性頭髪有効成分を内包することも見出された。
【００３２】
本発明の頭髪用組成物は、０．０１〜５０重量％のタンパク質ナノ粒子を含有することが好ましく、０．１〜１０重量％のタンパク質ナノ粒子を含有することがさらに好ましい。
本発明の頭髪用組成物は、タンパク質の重量に対して、０.１〜１００重量％の頭髪有効成分を含有することが好ましく、タンパク質の重量に対して、０.１〜５０重量％の頭髪有効成分を含有することがさらに好ましい。
【００３３】
本発明において、頭髪有効成分は、タンパク質ナノ粒子の形成時に添加してもよいし、ナノ粒子の作成後に添加してもよい。
【００３４】
さらに本発明の頭髪用組成物は、添加剤としての頭髪有効成分を含有していてもよい。添加剤としての頭髪有効成分の具体例としては、以下のものを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。パントテン酸、パンテノール、カンゾウ抽出物、キンセイソウ抽出物、クジン抽出物、センブリ抽出物、トウガラシ抽出物、トウチャ抽出物、ニンジン抽出物、ホウコウエイ抽出物、ボタン抽出物、ミカン抽出物などを挙げることができる。
【００３５】
本発明で用いるタンパク質ナノ粒子の平均粒子サイズは、通常は１〜１０００ｎｍであり、好ましくは１０〜１０００ｎｍであり、より好ましくは1０〜２００ｎｍであり、さらに好ましくは１０〜１００ｎｍであり、特に好ましくは２０〜５０ｎｍである。
【００３６】
本発明で用いるタンパク質の種類は特に限定されないが、リジン残基およびグルタミン残基を有するタンパクが好ましく、分子量１万から１００万程度のタンパク質を用いることが好ましい。タンパク質の由来は特に限定されないが、ヒト由来のタンパク質を用いることが好ましい。タンパク質として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。コラーゲン、ゼラチン、酸処理ゼラチン、アルブミン、オバルブミン、カゼイン、トランスフェリン、グロブリン、フィブロイン、フィブリン、ラミニン、フィブロネクチン、又はビトロネクチンからなる群より選ばれる少なくとも一種を使用することができる。また、タンパク質の由来は特に限定するものではなく、牛、豚、魚、および遺伝子組み換え体のいずれも用いることができる。遺伝子組み換えゼラチンとしては、例えばEP1014176Ａ２号、米国特許6,992,172号に記載のものを用いることができるがこれらに限定されるものではない。その中で好ましいものは、カゼイン、酸処理ゼラチン、コラーゲン、又はアルブミンであり、最も好ましいものはカゼイン、又は酸処理ゼラチンである。
【００３７】
本発明でカゼインを用いる場合、カゼインの由来は特に限定されず、乳由来であっても、豆由来であってもよく、α−カゼイン、β−カゼイン、γ−カゼイン、κ−カゼインおよびそれらの混合物を使用することができる。遺伝子組み換え体を使用することもできる。好ましくは、カゼインナトリウムを用いることができる。カゼインは、単独で、または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００３８】
本発明に用いられるタンパク質は、単独で使用してもよいし、２種以上を組み合わせて用いることもできる。
【００３９】
本発明では、ナノ粒子の形成中および／又は形成後にタンパク質を架橋処理することができる。上記した架橋処理は、酵素を用いることができる。酵素としては、タンパクの架橋作用が知られているものであれば特に制限されず、その中で好ましいものはトランスグルタミナーゼである。
【００４０】
トランスグルタミナーゼは、哺乳類由来のものであっても、微生物由来のものであってもよく、遺伝子組み換え体を用いることができる。具体的には、味の素（株）製アクティバシリーズ、試薬として発売されている哺乳類由来のトランスグルタミナーゼ、例えば、オリエンタル酵母工業（株）製、Upstate USA Inc.製、Biodesign International製などのモルモット肝臓由来トランスグルタミナーゼ、ヤギ由来トランスグルタミナーゼ、ウサギ由来トランスグルタミナーゼ、ヒト由来リコンビナントトランスグルタミナーゼなどが挙げられる。
【００４１】
本発明において架橋処理のために用いられる酵素の量は、タンパク質の種類に応じて適宜設定することが出来るが、標準的には、タンパク質の重量に対して、０.１〜１００重量％程度を添加することができ、好ましくは、１〜５０重量％程度を添加することができる。
【００４２】
酵素による架橋反応の時間は、タンパク質の種類、ナノ粒子サイズに応じて適宜設定することができるが、標準的には、１時間から７２時間反応することができ、好ましくは、２時間から２４時間反応することができる。
【００４３】
酵素による架橋反応の温度は、タンパク質の種類、ナノ粒子サイズに応じて適宜設定することができるが、標準的には、０℃から８０℃で反応することができ、好ましくは、２５℃から６０℃で反応することができる。
【００４４】
本発明に用いられる酵素を単独で、または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００４５】
本発明のナノ粒子は、特許文献特開平６−７９１６８号公報、又はC.Coester著、ジャーナル・ミクロカプスレーション、２０００年、１７巻、p.１８７−１９３に記載の方法に準じて作製することができるが、架橋方法としてグルタルアルデヒドの代わりに酵素を用いることが好ましい。
【００４６】
また、本発明においては、酵素架橋処理を有機溶媒中で行うことが好ましい。ここで用いる有機溶媒としては、エタノール、イソプロパノール、アセトン、THFなどの水溶性有機溶媒が好ましい。
さらに、本発明においては、架橋処理後に有機溶媒を留去し、水分散することが好ましい。有機溶媒を留去前に水を加えてもよく、留去後に水を加えても良い。
【００４７】
本発明の頭髪用組成物には、脂質（リン脂質など）、アニオン性多糖、カチオン性多糖、アニオン性タンパク質、カチオンタンパク質、又はシクロデキストリンから選択される１種以上の成分を添加することもできる。脂質（リン脂質など）、アニオン性多糖、カチオン性多糖、アニオン性タンパク質、カチオンタンパク質、及びシクロデキストリンの添加量は特に限定されないが、一般的にはタンパク質の重量に対して０.１〜１００重量％の量で添加することができる。本発明の頭髪用組成物においては、上記成分とタンパク質の比を変えることよって、徐放速度を調整することができる。
【００４８】
本発明に用いることができるリン脂質として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。ホスファチジルコリン（レシチン）、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ジホスファチジルグリセロール、スフィンゴミエリンなどが挙げられる。
【００４９】
本発明に用いることができるアニオン性多糖とはカルボキシル基、硫酸基又はリン酸基等の酸性極性基を有する多糖類である。以下に具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。コンドロイチン硫酸、デキストラン硫酸、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデキストラン、アルギン酸、ペクチン、カラギーナン、フコイダン、アガロペクチン、ポルフィラン、カラヤガム、ジェランガム、キサンタンガム、ヒアルロン酸類等が挙げられる。
【００５０】
本発明に用いることができるカチオン性多糖とは、アミノ基等の塩基性極性基を有する多糖類である。以下に具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。キチン、キトサンなどのグルコサミンやガラクトサミンを構成単糖として含むものなどが挙げられる。
【００５１】
本発明に用いることができるアニオン性タンパク質とは等電点が生理的ｐＨよりも塩基性側にあるタンパク質およびリポタンパク質である。具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、リゾチーム、チトクロムＣ、リボヌクレアーゼ、トリプシノーゲン、キモトリプシノーゲン、α−キモトリプシンなどが挙げられる。
【００５２】
本発明に用いられるカチオンタンパク質とは等電点が生理的ｐＨよりも酸性側にあるタンパク質およびリポタンパク質である。具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。ポリリジン、ポリアルギニン、ヒストン、プロタミン、オバルブミンなどが挙げられる。
【００５３】
本発明においては、下記の工程（ａ）から（ｃ）によって作製されるカゼインナノ粒子を用いることができる。
（ａ）カゼインをpH８以上１１未満の塩基性水性媒体に混合させる工程；
（ｂ）工程（ａ）で得た溶液に少なくとも１種の頭髪有効成分を添加する工程；及び
（ｃ）工程（ｂ）で得た溶液を pH3.5〜7.5の酸性水性媒体に注入する工程：
【００５４】
さらに本発明においては、下記の工程（ａ）から（ｃ）によって作製されるカゼインナノ粒子を用いることができる。
（ａ）カゼインをpH８以上１１未満の塩基性水性媒体に混合させる工程；
（ｂ）工程（ａ）で得た溶液に少なくとも１種の頭髪有効成分を添加する工程；及び
（ｃ）工程（ｂ）で得た溶液を攪拌しながら、該溶液のpH を等電点からpH1以上離れたpHまで下降させる工程：
【００５５】
本発明においては、所望のサイズのカゼインナノ粒子を作製できる。また、疎水性の頭髪有効成分とカゼイン疎水性部分の相互作用を利用して、カゼインナノ粒子内に頭髪有効成分を内包できる。さらに、これらの粒子は水溶液中で安定に存在することが見出された。
また、カゼインとイオン性多糖または別種のイオン性タンパク質との混合粒子により、イオン性頭髪有効成分を内包することも見出された。
【００５６】
本発明のカゼインナノ粒子の作製方法は、カゼインを塩基性水性媒体液に混合し、塩基性水性媒体中に注入する方法と、カゼインを塩基性水性媒体液に混合し、攪拌しながら、pHを下降させる方法が挙げられる。
【００５７】
カゼインを塩基性水性媒体液に混合し、塩基性水性媒体中に注入する方法としては、シリンジによるのが簡便で好ましいが、注入速度、溶解性、温度、撹拌状態を満足する方法であれば特に限定しない。一般的には、注入速度は、1mL/minから100mL/minで注入することができる。塩基性水性媒体の温度は、適宜設定することができるが、標準的には、０℃から８０℃にすることができ、好ましくは、２５℃から７０℃にすることができる。水性媒体の温度は、適宜設定することができるが、標準的には、０℃から８０℃にすることができ、好ましくは、２５℃から６０℃ですることができる。攪拌速度は、適宜設定することができるが、標準的には、100rpmから3000rpmにすることができ、好ましくは、200rpmから2000rpmである。
【００５８】
カゼインを塩基性水性媒体液に混合し、攪拌しながら、pHを下降させる方法としては、酸を滴下するのが簡便で好ましいが、溶解性、温度、撹拌状態を満足する方法であれば特に限定しない。塩基性水性媒体の温度は、適宜設定することができるが、標準的には、０℃から８０℃にすることができ、好ましくは、２５℃から７０℃にすることができる。攪拌速度は、適宜設定することができるが、標準的には、100rpmから3000rpmにすることができ、好ましくは、200rpmから2000rpmである。
【００５９】
本発明に用いる水性媒体は、有機酸または塩基、無機酸または無機塩基の水溶液、又は緩衝液を用いることができる。
【００６０】
具体的には、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、カルボン酸、酒石酸、コハク酸、酢酸またはフタル酸、トリフルオロ酢酸、モルホリノエタンスルホン酸、2-〔4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジニル〕エタンスルホン酸のような有機酸；トリス（ヒドロキシメチル）、アミノメタン、アンモニアのような有機塩基；塩酸、過塩素酸、炭酸のような無機酸；燐酸ナトリウム、燐酸カリウム、水酸化カルシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化マグネシウムのような無機塩基を用いた水溶液が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００６１】
本発明に用いる水性媒体の濃度は、約10mMから約１Mが好ましい。より好ましくは、約20mMから約200mMである。
【００６２】
本発明に用いる塩基性水性媒体のpHは、８以上が好ましく、８から１２が好ましい。より好ましくはpH１０〜１２である。pHが高すぎると加水分解の懸念や取り扱い上の危険性があるため、上述の範囲が好ましい。
【００６３】
本発明において、カゼインをpH８以上の塩基性水性媒体に混合させる温度は、0〜90℃が好ましく、10〜80℃が好ましい。より好ましくは、20〜70℃である。
【００６４】
本発明に用いる酸性水性媒体のpHは、好ましいpHは3.5〜7.5である。より好ましくはpHは５から６である。前述の範囲外では、粒子サイズが大きくなる傾向が見られる。
【００６５】
本発明の頭髪用組成物はさらに、添加物を含むことができる。添加物としては特に限定することはないが、柔軟剤、経皮吸収促進剤、無痛化剤、防腐剤、酸化防止剤、色素剤、増粘剤、香料、又はpH調整剤から選択される１種以上のものを使用することができる。
【００６６】
本発明で用いることができる柔軟剤として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。グリセリン、ミネラルオイル、エモリエント成分（例えば、イソステアリン酸イソプロピル、イソステアリン酸ポリグリセリル、イソノナン酸イソトリデシル、イソノナン酸オクチル、オレイン酸、オレイン酸グリセリル、カカオ脂、コレステロール、混合脂肪酸トリグリセリド、コハク酸ジオクチル、酢酸ステアリン酸スクロース、シクロペンタシロキサン、ジステアリン酸スクロース、パルミチン酸オクチル、ヒドロキシステアリン酸オクチル、ベヘン酸アラキル、ポリベヘン酸スクロース、ポリメチルシルセスキオキサン、ミリスチルアルコール、ミリスチン酸セチル、ミリスチン酸ミリスチル、ラウリン酸ヘキシルなど）が挙げられる。
【００６７】
本発明で用いることができる経皮吸収促進剤として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。エタノール、ミリスチン酸イソプロピル、クエン酸、スクワラン、オレイン酸、メントール、N-メチル-2-ピロリドン、アジピン酸ジエチル、アジピン酸ジイソプロピル、セバシン酸ジエチル、セバシン酸ジイソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸イソプロピル、オレイン酸オクチルドデシル、イソステアリルアルコール、2-オクチルドデカノール、尿素、植物油、動物油が挙げられる。
【００６８】
本発明で用いることができる無痛化剤として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。ベンジルアルコール、塩酸プロカイン、塩酸キシロカイン、 クロロブタノールなどが挙げられる。
【００６９】
本発明で用いることができる防腐剤として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラベン、エチルパラベン、メチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、ソルビン酸カリウム、ソルビン酸ナトリウム、ソルビン酸、デヒドロ酢酸ナトリウム、過酸化水素、ギ酸、ギ酸エチル、ジ亜塩素酸ナトリウム、プロピオン酸、プロピオン酸ナトリウム、プロピオン酸カルシウム、ペクチン分解物、ポリリジン、フェノール、イソプロピルメチルフェノール、オルトフェニルフェノール、フェノキシエタノール、レゾルシン、ジブチルヒドロキシトルエン（BHT）、チモール、チラム、ティートリー油、ヒノキチオール、グリセリン、ジプロピレングリコール、1.3-ブチレングリコール、1.4-ブチレングリコール、１，２ペンタンジオール、２−メチル−２，４ペンタンジオール、が挙げられる。
【００７０】
本発明で用いることができる酸化防止剤として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。ビタミンA、レチノイン酸、レチノール、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール、レチニルアセテート、レチニルパルミテート、レチノイン酸トコフェリル、ビタミンＣおよびその誘導体、カイネチン、β−カロテン、アスタキサンチン、ルテイン、リコピン、トレチノイン、ビタミンＥ、α−リポ酸、コエンザイムＱ１０、ポリフェノール、ＳＯＤ、フィチン酸などが挙げられる。
【００７１】
本発明で用いることができる色素剤として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。オキアミ色素、オレンジ色素、カカオ色素、カオリン、カルミン類、グンジョウ、コチニール色素、酸化クロム、酸化鉄、二酸化チタン、タール色素、クロロフィルなどが挙げられる。
【００７２】
本発明で用いることができる増粘剤として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。クインスシード、カラギーナン、アラビアガム、カラヤガム、キサンタンガム、ジェランガム、タマリンドガム、ローカストビーンガム、トラガントガム、ペクチン、デンプン、シクロデキストリン、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、ポリアクリル酸ナトリウムなどが挙げられる。
【００７３】
本発明で用いることができる香料として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。ジャコウ、アカシア油、アニス油、イランイラン油、シナモン油、ジャスミン油、スウィートオレンジ油、スペアミント油、ゼラニウム油、タイム油、ネロリ油、ハッカ油、ヒノキ油、フェンネル油、ペパーミント油、ベルガモット油、ライム油、ラベンダー油、レモン油、レモングラス油、ローズ油、ローズウッド油、アニスアルデヒド、ゲラニオール、シトラール、シベトン、ムスコン、リモネン、バニリンなどが挙げられる。
【００７４】
本発明で用いることができるpH調整剤として具体例を列挙するが、本発明においてはこれらの化合物に限定されるものではない。クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、リン酸、コハク酸が挙げられる。
【００７５】
本発明の頭髪用組成物の剤型は特に限定されないが、例えば、外用液剤、湿布剤、塗布剤、清拭剤、浴剤、消毒剤、軟膏剤、ゲル剤、クリーム剤、泥膏剤、パップ剤、硬膏剤、創面被覆剤、創面被覆剤-ガーゼ型、止血剤、接着剤、粘着テープ剤、経皮吸収型粘着テープ、創傷保護剤、エアゾール剤、ローション剤、トニック剤、リニメント剤、乳剤、懸濁剤、飽和剤、チンキ剤、粉剤、泡剤、化粧水、マッサージクリーム、栄養クリーム、パック、シート状外用剤、メーキャップ化粧料、皮膚着色用外用剤、皮膚粘着タイプの化粧料、シャンプー、リンス、ヘアコンディショナー、ヘアパック、ヘアリキッド、ヘアトニック、ヘアスプレー、パーマネントウエーブ用組成物、染毛剤、ボディーソープ、石鹸、浴用剤、サンケア(サンスクリーン、サンオイル、アフターサンローション)、フレグランスなどを挙げることができる。
【００７６】
本発明の頭髪用組成物の投与方法は特に限定されないが、例えば、頭皮に直接塗布して投与することができる。
【００７７】
本発明の頭髪用組成物の投与量は、頭髪有効成分の種類及び使用量、使用者の体重、状態などに応じて適宜設定することができるが、一般的には、１回の投与につき、１μｇ〜５０ｍｇ／ｃｍ2程度を投与することができ、好ましくは２．５μｇ〜１０ｍｇ／ｃｍ2程度を投与することができる。
本発明の頭髪用組成物はエタノール含有量は２０重量％以下であることが好ましく、さらに好ましくは１０％以下、実質的には含まれないことが最も好ましい。
以下の実施例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００７８】
実施例１：
カゼイン（乳由来・和光純薬製）１００ｍｇを、pH１０、５０mMリン酸バッファー１０ｍLに混合させる。クマリン６（和光純薬製）0.015ｍｇをエタノール0.1mLに溶解させる。この２種の溶液を混合し、塩酸を加えpHを７.5に調整したところ、カゼインナノ粒子が得られた。
上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー（株）製ナノトラックを用い測定したところ、２９nmであった。
【００７９】
実施例２：
カゼインNa（乳由来・和光純薬製）10ｍｇをpH９、５０mMリン酸バッファー1ｍLに混合させる。グリチルレチン酸（和光純薬製）1.7ｍｇをエタノール0.25mLに溶解させる。カゼイン溶液に攪拌下、グリチルレチン酸溶液を滴下し、この混合液を、外設４０℃、８００rpmの攪拌条件で、１mLをマイクロシリンジを用いて、pH5、２００mMのリン酸バッファー水１０ｍL中に注入したところ、グリチルレチン酸を内包したカゼインナノ粒子の水分散液が得られた。上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー（株）製マイクロトラックを用い測定したところ、83nmであった。
【００８０】
実施例３：
カゼインNa（乳由来・和光純薬製）10ｍｇをpH９、５０mMリン酸バッファー1ｍLに混合させる。ヒノキチオール（和光純薬製）1.7ｍｇをエタノール0.25mLに溶解させる。カゼイン溶液に攪拌下、ヒノキチオール溶液を滴下し、この混合液を、外設４０℃、８００rpmの攪拌条件で、１mLをマイクロシリンジを用いて、pH5、２００mMのリン酸バッファー水１０ｍL中に注入したところ、ヒノキチオールを内包したカゼインナノ粒子の水分散液が得られた。上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー（株）製マイクロトラックを用い測定したところ、57nmであった。
【００８１】
実施例４：
カゼインNa（乳由来・和光純薬製）10ｍｇをpH９、５０mMリン酸バッファー1ｍLに混合させる。酢酸トコフェロール1.7ｍｇをエタノール0.25mLに溶解させる。カゼイン溶液に攪拌下、酢酸トコフェロール溶液を滴下し、この混合液を、外設４０℃、８００rpmの攪拌条件で、カゼイン溶液１mLをマイクロシリンジを用いて、２００mMのリン酸バッファー水１０ｍL中に注入したところ、酢酸トコフェロールを内包したカゼインナノ粒子の水分散液が得られた。上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー（株）製マイクロトラックを用い測定したところ、124nmであった。
【００８２】
実施例５：
カゼインNa（乳由来・和光純薬製）10ｍｇをpH９、５０mMリン酸バッファー1ｍLに混合させる。外設４０℃、８００rpmの攪拌条件で、カゼイン溶液１mLをマイクロシリンジを用いて、ミノキシジル1.7ｍｇを溶解したpH5、２００mMのリン酸バッファー水１０ｍL中に注入したところ、ミノキシジルを内包したカゼインナノ粒子の水分散液が得られた。上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー（株）製マイクロトラックを用い測定したところ、55nmであった。
【００８３】
実施例６：
酸処理ゼラチン10ｍｇ、TG-S（味の素製）5ｍｇを水1ｍLに溶解させる。外設４０℃、８００rpmの攪拌条件で、ゼラチン溶液１mLをマイクロシリンジを用いて、グリチルレチン酸1.7ｍｇを溶解したエタノール１０ｍL中に注入したところ、ゼラチンナノ粒子が得られた。外設55℃で5時間静置し、ゼラチンナノ粒子を酵素架橋する。上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー（株）製マイクロトラックを用い測定したところ、80nmであった。
【００８４】
得られたゼラチンナノ粒子分散液に水５ｍLを加え、ロータリーエバポレーターにて、エタノールを除去し、グリチルレチン酸を内包したゼラチンナノ粒子の水分散液が得られた。
上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー（株）製マイクロトラックを用い測定したところ、201nmであった。
【００８５】
実施例７：
カゼイン（乳由来・和光純薬製）１００ｍｇを、pH１０、５０mMリン酸バッファー１０ｍLに混合させる。この溶液にヒアルロン酸（和光純薬製）1ｍｇを溶解し、塩酸を加えpHを７に調整したところ、カゼインナノ粒子が得られた。
上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー（株）製ナノトラックを用い測定したところ、23nmであった。
【００８６】
実施例８：
カゼイン（乳由来・和光純薬製）１００ｍｇを、pH１０、５０mMリン酸バッファー１０ｍLに混合させる。パルミトイルアスコルビン酸（和光純薬製）1ｍｇをエタノール0.２mLに溶解させる。この２種の溶液を混合し、塩酸を加えpHを７に調整したところ、カゼインナノ粒子が得られた。
上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー（株）製ナノトラックを用い測定したところ、30nmであった。
【００８７】
実施例９：
酸処理ゼラチン10ｍｇ、TG-S（味の素製）5ｍｇを水1ｍLに溶解させる。外設４０℃、８００rpmの攪拌条件で、ゼラチン溶液１mLをマイクロシリンジを用いて、トコフェロール1.7ｍｇを溶解したエタノール１０ｍL中に注入したところ、ゼラチンナノ粒子が得られた。外設55℃で5時間静置し、ゼラチンナノ粒子を酵素架橋する。
上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー（株）製マイクロトラックを用い測定したところ、95nmであった。
【００８８】
実施例１０：
カゼイン（乳由来・和光純薬製）１００ｍｇを、pH１０、５０mMリン酸バッファー１０ｍLに混合させる。パントテニルエチルエーテル400ｍｇをエタノール0.8mLに溶解させる。この２種の溶液を混合し、塩酸を加えpHを6に調整したところ、カゼインナノ粒子が得られた。
上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、マルバーン（株）製Nano-ZSを用い測定したところ、24nmであった。
【００８９】
試験例１：
実施例２から６に記載の頭髪有効物質内包ナノ粒子分散液を室温にて１ヶ月保存後、ニッキソー（株）製マイクロトラックを用い平均粒経を測定した。
比較例１として、合成ポリマー（ＰＬＧＡ）のナノ粒子分散液であるナノインパクト（ホソカワミクロン製）
試験例１の測定結果を表１に示す。
【００９０】
【表１】
2008201767.tif 000002
【００９１】
試験例２：ヘアレスラット摘出皮膚試験
実施例１で作製したカゼインナノ粒子分散液４００μＬを染み込ませた2cm角の不織布をヘアレスラット摘出皮膚に貼付し、30分間静置した。この皮膚をOCTコンパウンド（サクラファインテック（株）製）で包埋し、液体窒素で凍結した。これをカールツァイス（株）製クリオスタット（cryostat）を用いて凍結切片を作製し、DAPI入り封入剤でプレパラートガラス上に固定・封入したのち、蛍光顕微鏡観察した。
【００９２】
比較例２：未貼付
比較例３：
以下のものについても試験例２と同様に蛍光顕微鏡観察を行った。
カゼイン（乳由来・和光純薬製）１００ｍｇを、蒸留水１０ｍLに混合させる。クマリン６（和光純薬製）0.015ｍｇをエタノール0.1mLに溶解させる。この２種の溶液を混合して得られた分散液。
【００９３】
比較例４：
以下のものについても試験例２と同様に蛍光顕微鏡観察を行った。
エタノール50％水溶液に0.15ｍｇ/ｍＬ濃度のクマリン６を溶解した液。
【００９４】
試験例３：SDラットin vivo試験
SDラットに麻酔注射後、実施例１で作製したカゼインナノ粒子分散液４００μＬを染み込ませた2cm角の不織布を腹部皮膚に貼付し、60分間静置した。この皮膚をOCTコンパウンド（サクラファインテック（株）製）で包埋し、液体窒素で凍結した。これをカールツァイス（株）製クリオスタット（cryostat）を用いて凍結切片を作製し、DAPI入り封入剤でプレパラートガラス上に固定・封入したのち、蛍光顕微鏡観察した。
【００９５】
比較例５：
以下のものについても試験例３と同様に蛍光顕微鏡観察を行った。
エタノール50％水溶液に0.15ｍｇ/ｍＬ濃度のクマリン６を溶解した溶液。
【００９６】
比較例２、３、４、５及び試験例２、３のヘアレスラット摘出皮膚およびＳＤラット皮膚切片の蛍光顕微鏡写真を図１ａ〜６ａに示す。図１ｂ〜６ｂは、図１a〜６aと同一視野でのDAPI染色による組織の写真を示す。
【００９７】
試験例４：
発毛か休止期にあるC3Hマウスの背部の毛をバリカンで刈り取り、翌日シェーバーで剃毛し、一日一回剃毛部全体に実施例２から５で作製した、育毛剤内包タンパクナノ粒子の水分散液を塗布し、マウス背部皮膚毛胞を成長期に移行させる能力の多寡を調べたところ、育毛は促進され、休止期から成長期への毛周期変換活性を示した。
【００９８】
試験例５：
実施例１およびエタノール50％水溶液に0.15ｍｇ/ｍＬ濃度のクマリン６を溶解した溶液を２５℃で山羊毛に適用し、３０分間の作用時間を置いて山羊毛を洗浄し、乾燥した。得られた染色毛の色調を観察した結果、実施例１は良好な浸透を示した。実施例１の山羊毛表面の蛍光顕微鏡写真を図７a、山羊毛断面の蛍光顕微鏡写真を図７b、エタノール溶液の山羊毛表面の蛍光顕微鏡写真を図８a、山羊毛断面の蛍光顕微鏡写真を図８bに示す。
【００９９】
試験例６：
（官能評価）
長さ１５ｃｍ、幅１ｃｍ、重さ１ｇの人毛毛束を、実施例１０の組成物５ｍLに約３０秒間浸した後、よく乾かした。この毛束を被験毛、未処理の毛束を基準毛として、毛束のすべり感、弾力性、ハリ・コシ、まとまりを、表２の基準に従って５段階で官能評価した。評価は５人で行い、その評価の平均値を表２に示す。
【０１００】
【表２】
2008201767.tif 000003
【０１０１】
【表３】
2008201767.tif 000004
【図面の簡単な説明】
【０１０２】
【図１】図１は、比較例２の蛍光顕微鏡観察の結果を示す。
【図２】図２は、比較例３の蛍光顕微鏡観察の結果を示す。
【図３】図３は、比較例４の蛍光顕微鏡観察の結果を示す。
【図４】図４は、試験例２の蛍光顕微鏡観察の結果を示す。
【図５】図５は、比較例５の蛍光顕微鏡観察の結果を示す。
【図６】図６は、試験例３の蛍光顕微鏡観察の結果を示す。
【図７】図７は、試験例５の蛍光顕微鏡観察の結果を示す。
【図８】図８は、試験例５の蛍光顕微鏡観察の結果を示す。
【図１】
2008201767.tif 000005
【図２】
2008201767.tif 000006
【図３】
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【図４】
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【図５】
2008201767.tif 000009
【図６】
2008201767.tif 000010
【図７】
2008201767.tif 000011
【図８】
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