(57)【要約】【課題】  ＭＲＩ造影剤を安定に標的部位へデリバリーするためのキャリヤーの提供【解決手段】  非荷電性親水性ポリマー鎖セグメントと側鎖にカルボキシラートイオン基を有する繰り返し単位を含むポリマー鎖セグメントを含んでなるブロック共重合体、カルシウムイオン（Ｃａ２＋）、リン酸イオン（ＰＯ４３−）もしくは炭酸イオン（ＣＯ３２−）またはこれらのアニオンの混合物、および造影剤を必須成分として含んでなる有機−無機ハイブリッド型粒子、が提供される。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
ポリ（ｈｐｈ）−ｂｌｏｃｋ−ポリ（ｃａｒｂｏ）          （Ｉ）
（式中、ポリ（ｈｐｈ）は非荷電性親水性ポリマー鎖セグメントを示し、そしてポリ（ｃａｒｂｏ）は側鎖にカルボキシラートイオン基を有する繰り返し単位を含むポリマー鎖セグメントを示す）
で表される構造を含んでなるブロック共重合体、カルシウムイオン（Ｃａ２＋）、リン酸イオン（ＰＯ４３−）もしくは炭酸イオン（ＣＯ３２−）またはこれらのアニオンの混合物、および造影剤を必須成分として含んでなる有機−無機ハイブリッド型粒子。
【請求項２】
一般式（Ｉ）
ポリ（ｈｐｈ）−ｂｌｏｃｋ−ポリ（ｃａｒｂｏ）          （Ｉ）
（式中、ポリ（ｈｐｈ）は非荷電性親水性ポリマー鎖セグメントを示し、そしてポリ（ｃａｒｂｏ）は側鎖にカルボキシラートイオン基を有する繰り返し単位を含むポリマー鎖セグメントを示す）
で表される構造を含んでなるブロック共重合体、カルシウムイオン（Ｃａ２＋）、および炭酸イオン（ＣＯ３２−）または炭酸イオンとリン酸イオンの混合物を必須成分として含んでなる造影剤を担持するための有機−無機ハイブリッド型粒子。
【請求項３】
ポリ（ｈｐｈ）がポリエチレングリコール、２−メチル−２−ポリオキサゾリン、２−エチル−２−ポリオキサゾリン、２−イソプロピル−２−ポリオキサゾリン、ポリ（アクリルアミド）、ポリ（メタクリルアミド）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（アクリル酸ヒドロキシエチル）およびポリ（メタクリル酸ヒドロキシエチル）からなる群より選ばれる水溶性ポリマーに由来し、そしてポリ（ｃａｒｂｏ）がポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、ポリ（メタクリル酸）、ポリ（アクリル酸）およびポリ（リンゴ酸）からなる群より選ばれるアニオン性ポリマーに由来する請求項１または２記載のハイブリッド型粒子。
【請求項４】
ポリ（ｈｐｈ）がポリエチレングリコールに由来し、そしてポリ（ｃａｒｂｏ）がポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、ポリ（メタクリル酸）、ポリ（アクリル酸）およびポリ（リンゴ酸）からなる群より選ばれるアニオン性ポリマーに由来する請求項１または２記載のハイブリッド型粒子。
【請求項５】
造影剤がガドリニウム（Ｇｄ）、ユーロピウム（Ｅｕ）、マンガン（Ｍｎ）、鉄（Ｆｅ）および銅（Ｃｕ）からなる群より選ばれる金属である請求項１または２記載のハイブリッド型粒子。
【請求項６】
造影剤がガドリニウム（Ｇｄ）、ユーロピウム（Ｅｕ）、マンガン（Ｍｎ）、鉄（Ｆｅ）および銅（Ｃｕ）からなる群より選ばれる金属であり、かつ、多座配位子との金属キレートの形態にある請求項１または２記載のハイブリッド型粒子。
【請求項７】
造影剤がガドリニウム（Ｇｄ）、ユーロピウム（Ｅｕ）、マンガン（Ｍｎ）、鉄（Ｆｅ）および銅（Ｃｕ）からなる群より選ばれる金属であって、かつ、アミノカルボン酸もしくはリン酸系、ポルフィリン系およびデフェリオックスアミンＢ系から選ばれる多座配位子との金属キレートの形態にある請求項１または２記載のハイブリッド型粒子。
【請求項８】
多座配位子がアミノカルボン酸もしくはリン酸系である請求項７記載のハイブリッド型粒子。
【請求項９】
アミノカルボン酸もしくはリン酸系多座配位子がエチレンジアミン四酢酸、ジエチレントリアミン五酢酸、トリエキレンテトラミン六酢酸、エチレングリコールテトラミン四酢酸、テトラアザシクロドデカン四酢酸、テトラアザシクロドデカン三酢酸およびテトラアザシクロドデカン四リン酸からなる群より選ばれる請求項８記載のハイブリッド型粒子。
【請求項１０】
請求項１または２記載のハイブリッド型粒子であって、該粒子の水性分散体中における平均粒子径が動的光散乱測定により１０〜１０００ｎｍである、上記ハイブリッド型粒子。
【請求項１１】
一般式（Ｉ）
ポリ（ｈｐｈ）−ｂｌｏｃｋ−ポリ（ｃａｒｂｏ）          （Ｉ）
（式中、ポリ（ｈｐｈ）は非荷電性親水性ポリマー鎖セグメントを示し、そしてポリ（ｃａｒｂｏ）は側鎖にカルボキシラートイオン基を有する繰り返し単位を含むポリマー鎖セグメントを示す）
で表される構造を含んでなるブロック共重合体、カルシウムイオン（Ｃａ２＋）および炭酸イオン（ＣＯ３２−）または炭酸イオンとリン酸イオン（ＰＯ４３−）の混合物を必須成分として含んでなる有機−無機ハイブリッド型粒子。
【請求項１２】
ブロック共重合体が、下記式（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）および（ＩＶ）で表されるブロック共重合体から選ばれる請求項１１記載の有機−無機ハイブリッド型粒子：
【化１】
2008143805.tif 000004
上記式中、各記号はそれぞれ独立した意味を有し、そして
Ａは水素原子または置換もしくは未置換の炭素原子１２個までのアルキル基を表し、
Ｌは直接結合または二価の連結基を表し、
Ｔは水素原子、ヒドロキシル基または−ＺＲであって、ここでＺは単結合、ＣＯ、ＯもしくはＮＨを表し、Ｒは置換もしくは未置換の炭素原子１２個までの炭化水素基を表し、
ｍは４〜２５００の整数であり、
ｎは５〜１００００、好ましくは、１０〜３０００、より好ましくは１０〜５００の整数であり、そして
ｘ＋ｙまたはｚは５〜１０００、好ましくは１０〜３０００、より好ましくは１０〜５００の整数であるが、但し、存在するカルボキシラートイオンは５０％までが上記のアルカリ金属由来の対イオン有するかまたはカルボキシエステル残基を形成することができる。
【請求項１３】
Ｌが連結基を表し、かつ、Ｏ、ＮＨ、ＣＯおよびＸ（ＣＨ２）ｐＹからなる群より選ばれ、ここでＸはＯＣＯ、ＯＣＯＮＨ、ＮＨＣＯ、ＮＨＣＯＯ、ＮＨＣＯＮＨ、ＣＯＮＨも
しくはＣＯＯを表し、ＹはＮＨもしくはＣＯを表し、ｐは１〜６の整数を表す、請求項１２記載の有機−無機ハイブリッド型粒子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は造影剤含有する有機−無機ハイブリッド型粒子に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、がん患者のＱＯＬ向上のためがんの早期発見が重要であることが指摘されている。例えば、胃がんの患者の５年生存率のグラフによると、初期８（１期）に発見された胃がん患者の生存率は９０％であるのに対し、末期（４期）の胃がん患者の生存率は１０％をきっている。このことから、現在のがん治療において患者におけるがんの早期診断は非常に重要である。また、初期がんについては自覚症状がない場合が多いため、上記の早期診断を確実なものにするには、全く健康な人に対してもがんの診断を行う必要がある。そのためには、非侵襲的かつ安全な診断法の開発が求められている。
【０００３】
非侵襲的かつ安全であるとの観点に立てば、磁場やラジオ波を用いるため放射線の被爆などを心配する必要のないＭＲＩ（核磁気共鳴映像法）の利用が考えられる。しかしながら、現在の技術ではＭＲＩで初期のがんを発見できるに至っていない。ＭＲＩの感度を上げるべく大きなコントラストが得られるよう、また、取り扱いの容易な形態にある多種多様な造影剤が提案されている（例えば、非特許文献１、２および３参照）。これらの造影剤の中には広く実用されている、Ｇｄ−ＤＴＰＡ（ガドジアミド）等の優れた造影剤が存在するもの、未だ、さらなる改善が可能であるなら、検討する価値があるかも知れない。
【０００４】
他方、本発明者等は、特定のブロック共重合体等を使用したドラッグデリバリーシステムを開発し、例えば、腫瘍組織選択移行性を高めたある種の抗がん剤を提供することに成功し、臨床試験でも好ましい治療効果が得られることを確認している。
【０００５】
また、本発明者等の一部は、従来、細胞内にＤＮＡを導入する手段として提案されていた、カルシウム水溶液とリン酸水溶液を、過飽和状態になるように混合したときに形成されるリン酸カルシウム（ヒドロキシアパタイト）結晶のＤＮＡと結合する性質を利用して形成した複合体を用いる方法に随伴する短所を改善すべく、当該複合体の形成に際して、親水性で非イオン性であるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）セグメントとカルボキシル基に由来するポリアニオン性セグメントを含んでなる特定のブロック共重合体を共存させることで、リン酸カルシウム粒子をその粒径をコントロールしながら形成しうることを見出した。こうして得られる粒子は、比較的狭い粒度分布を持ち、その上、平均粒径が、必要によりサブミクロンオーダー（数１００ｎｍ）以下にも制御できるとともに、これらの粒子を含有する水性分散系は、周囲条件下では沈殿を生ずることなく、安定に貯蔵できることも確認した。その結果、薬物として、ＤＮＡまたはその他の生物活性物質を担持し、該薬物をがん組織乃至がん細胞にデリバリーすることのできる新規な有機−無機ハイブリッド型粒子系を提案した（特許文献１参照）。
【特許文献１】国際公開第０３／０１８６９０号パンフレット（ＷＯ  ０３／０１８６９０  Ａ１）
【非特許文献１】Ｐｅｔｅｒ  Ｃａｒａｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｇａｄｏｌｉｎｉｕｍ（ＩＩＩ）  Ｃｈｅｌａｔｅｓ  ａｓ  ＭＲＩ  Ｃｏｎｔｒａｓｔ  Ａｇｅｎｔｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｄｙｎａｍｉｃｓ，ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．”Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９９，９９，２２９３−２３５２
【非特許文献２】Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｊａｃｑｕｅｓ，ｅｔ  ａｌ．，“Ｎｅｗ  Ｃｌａｓｓｅｓ  ｏｆ  ＭＲＩ  Ｃｏｎｔｒａｓｔ  Ａｇｅｎｔｓ”Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ）Ｃｏｎｔｒａｓｔ  Ａｇｅｎｔｓ  １  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｗｅｒｎｅｒ  Ｋｒａｕｓｅ，２００２，２２１，１２３−１６４
【非特許文献３】Ｄ．Ｄ．Ｓｃｈｗｅｒｔ，ｅｔ  ａｌ．，“Ｎｏｎ−Ｇａｄｏｌｉｎｉｕｍ−Ｂａｓｅｄ  ＭＲＩ  Ｃｏｎｔｒａｓｔ  Ａｇｅｎｔｓ．”Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ）Ｃｏｎｔｒａｓｔ  Ａｇｅｎｔｓ  １  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｗｅｒｎｅｒ  Ｋｒａｕｓｅ，２００２，２２１，１６５−１９９
【発明の開示】
【０００６】
ここに、上記の特許文献１に記載したような、特定の有機−無機ハイブリッド粒子系では、ＤＮＡまたはＴＧＦ−β、腫瘍壊死因子、インスリン等のポリペプチド系生物活性物質以外にも、特定の造影剤をその粒子内に効果的に内包でき、しかも、上記の有機−無機ハイブリッド粒子は水性溶液中でｐＨ応答性をしめすが、それらのリン酸イオンを炭酸イオンに代えるか、または炭酸イオンとリン酸イオンの混合物を用いる新たに提案する系では、より迅速なｐＨ応答性を有する粒子が提供できることを見出した。
【０００７】
したがって、本発明によれば、一般式（Ｉ）一般式（Ｉ）
ポリ（ｈｐｈ）−ｂｌｏｃｋ−ポリ（ｃａｒｂｏ）          （Ｉ）
（式中、ポリ（ｈｐｈ）は非荷電性親水性ポリマー鎖セグメントを示し、そしてポリ（ｃａｒｂｏ）は側鎖にカルボキシラートイオン基を有する繰り返し単位を含むポリマー鎖セグメントを示す）
で表される構造を含んでなるブロック共重合体、カルシウムイオン（Ｃａ２＋）、リン酸イオン（ＰＯ４３−）もしくは炭酸イオン（ＣＯ３２−）またはこれらのアニオンの混合物、および造影剤を必須成分として含んでなる有機−無機ハイブリッド型粒子が提供される。
【０００８】
さらに好ましい別の態様の発明として、一般式（Ｉ）
ポリ（ｈｐｈ）−ｂｌｏｃｋ−ポリ（ｃａｒｂｏ）          （Ｉ）
（式中、ポリ（ｈｐｈ）は非荷電性ポリマー鎖セグメントを示し、そしてポリ（ｃａｒｂｏ）は側鎖にカルボキシラートイオン基を有する繰り返し単位を含むポリマー鎖セグメントを示す）
で表される構造を含んでなるブロック共重合体、カルシウムイオン（Ｃａ２＋）および炭酸イオン（ＣＯ３２−）または炭酸イオンとリン酸イオン（ＰＯ４３−）の混合物を必須成分として含んでなる有機−無機ハイブリッド型粒子、並びにその使用が提供される。
【０００９】
この好ましい態様の粒子は、中性付近より若干低いｐＨの水性溶液において、易崩壊性を示す。例えば、血流中では安定に粒子の形態を保持する滞留性を示すが、一方で、中性付近より若干低いｐＨにある環境下（例えば、一定の腫瘍組織内）では崩壊されて粒子の内包物を放出する性質を示す。このような炭酸イオンを含有する有機−無機ハイブリッド粒子に備わった性質は、特に造影剤として、キレート型のＧｄ錯体を使用する場合には、さらに特有の効果を発揮する。Ｇｄ錯体は、鉄微粒子やＭＲＩ以外の造影剤のように造影剤それ自体の存在が信号を高めるのとは異なり、周りのプロトン（主として、水のプロトン）に影響を及ぼして信号を高める。ＭＲＩにおいて、強力な静磁場のもとパルス波をかけた場合、Ｇｄの周りに水のプロトンの緩和時間が短縮され、信号強度が高まる。したがって、信号を発する場所では当該ハイブリッド粒子から造影剤が放出され、その場の水と接近できることが重要である。
【００１０】
上記の炭酸イオンを含有する有機−無機ハイブリッド粒子は、それらの腫瘍組織指向性とともに、その場での易崩壊性を示すので、Ｇｄ錯体型の造影剤を内包させた場合は、例えば、血流内と腫瘍組織内の間で顕著なコントラストをもたらすことができる。
【００１１】
本願発明によれば、造影剤がさらに担持されるか、不存在であるかにかかわらず、実質的に球形の粒子が提供され、さらに粒子の平均粒径が調節され、かつ粒度の分布の狭い均一な粒子が提供される。このような平均粒径としては、約５〜約５０００ｎｍ、好ましくは約１０〜１０００ｎｍ、より好ましくは約５０〜約６００ｎｍの粒子が提供できる。
【００１２】
＜発明の詳細な記述＞
本発明によれば、リン酸カルシウム（ヒドロキシアパタイト）、特に、炭酸カルシウムを生成する系において、一般式（Ｉ）：
ポリ（ｈｐｈ）−ｂｌｏｃｋ−ポリ（ｃａｒｂｏ）          （Ｉ）
（式中、ポリ（ｈｐｈ）は非荷電性親水性ポリマー鎖セグメントを示し、そしてポリ（ｃａｒｂｏ）は側鎖にカルボキシラートイオン基を有する繰り返し単位を含むポリマー鎖セグメントを示す）で表される構造を含んでなるブロック共重合体を使用することに特徴がある。
【００１３】
上記のごとく、本明細書において「リン酸カルシウム」または「炭酸カルシウム」という場合には、これらを形成するイオンと上記のブロック共重合体が水性媒体中で相互作用することにより、生成されるアモルファス状の微小魂を意味し、完全な結晶質を意味しない。理論により拘束されるものでないが、水性媒体中で、ブロック共重合体は、そのポリカルボキシラート含有鎖セグメントがカルシウムイオン、リン酸イオンもしくは炭酸イオンまたはこれらのアニオンの混合物と相互作用をして、上記微小魂を形成し、一方で非荷電性親水性ポリマー鎖セグメントは、当該微小魂の周りを取り囲む、親水性のシェル状の層を形成すると理解されている。
【００１４】
したがって、上記のブロック共重合体として、上記のように機能し、目的の有機−無機ハイブリッド粒子を形成でき、一般式（Ｉ）について定義した範疇に入る重合体は、いずれかのセグメントが天然物に由来するか、合成ポリマーに由来するか等にかかわりなくいかなる種類の共重合体も使用できる。しかし、限定されるものではないが、具体的な共重合体としては、ポリ（ｈｐｈ）が、ポリエチレングリコール（以下、ＰＥＧという場合あり）、２−メチル−２−ポリオキサゾリン、２−エチル−２−ポリオキサゾリン、２−イソプロピル−２−ポリオキサゾリン、ポリ（アクリルアミド）、ポリ（メタクリルアミド）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（アクリル酸ヒドロキシエチル）およびポリ（メタクリル酸ヒドロキシエチル）からなる群より選ばれるポリマーに由来するポリマー鎖セグメントを含むものを挙げることができる。具体的な共重合体としては、他方、ポリ（ｃａｒｂｏ）が、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）およびポリ（リンゴ酸）、並びにこれらのポリマーを製造するためのモノマー２種以上か製造されるランダムもしくはブロック共重合体からなる群より選ばれるポリマーに由来するポリマー鎖セグメントであることができる。ポリ（ｈｐｈ）とポリ（ｃａｒｂｏ）の、それぞれいずれかの組合せからなる共重合が、本発明で使用できるより具体的な共重合体である。
【００１５】
これらの重合体の一部は市販されているものもあるが、それぞれ当該技術分野で周知の方法化、またはその改変方法により取得できる。例えば、ポリ（ｃａｒｂｏ）がポリ（アスパラギン酸）またはポリ（グルタミン酸）由来のセグメントである場合には、ポリ（オキサゾリン）やポリエレングリコールの片末端をアミン化したものを開始剤に対応するβ−もしくはγ−カルボキシル基が保護されたＮ−カルボキシル酸無水物を開環重合し、その後保護基を加水分解して脱離すればよい（例えば、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  １９９７，３０，４０１３−４０１７参照）。また、例えば、ポリ（ｃａｒｂｏ）が、ポリ（メタクリル酸）またはポリ（アクリル酸）に由来するセグメントを有する場合には、非荷電性セグメントの片末端にラジカルを出すような開始剤を修飾し、各モノマーを重合さ
せればよい。またさらに、アニオンセグメントと非荷電性セグメントを、マイケル付加反応等を利用してカップリングしてもよい。
【００１６】
上記のポリ（ｃａｒｂｏ）は、前記ブロック共重合体の製造方法に応じて、一定のカルボキラートイオンがアルカリ金属（ナトリウム、カリウム、等）由来の対イオンを有するか、またはエステル（例えば、炭素原子６個までの低級アルキル、またはベンジルエステル）の形態にあることができる。かようなエステルの形態の残基は、本発明に従って、リン酸カルシウムまたは炭酸カルシウムへの該ブロック共重合体の取り込みまたは吸着が阻害されない限り、５０％程度まで含まれていてもよいが、好ましくは１０％未満、特に好ましくは０％である。
【００１７】
また、式（Ｉ）で表される「構造を含んでなる」とは、本発明の目的に沿う限り、ポリ（ｈｐｈ）とポリ（ｃａｒｂｏ）との間の連結基、さらにはポリ（もしくはポリ（ｃａｒｂｏ）の末端は如何なる基または部分をも含み得ることを意図している。上記各ポリマーセグメントは、上記の機能を奏する限り、主として、共重合体の製造方法に基き、多種多様な結合様式（またはリンカーを介するか、あるいは介することなく）をとることができる。これらの両セグメントは、通常、炭素、酸素、硫黄および窒素原子から適当に選ばれる、原子１〜２０個が線状に連続して存在しうるリンカーにより結合されていてもよい。
【００１８】
限定されるものではないが、さらに具体的で好ましい共重合体としては、下記式（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）および（ＩＶ）で表されるブロック共重合体を挙げることができる。
【００１９】
【化１】
2008143805.tif 000002
【００２０】
上記式中、各記号はそれぞれ独立した意味を有し、そして
Ａは水素原子または置換もしくは未置換の炭素原子１２個までのアルキル基を表し、
Ｌは直接結合またはニ価の連結基、例えば、Ｏ、ＮＨ、ＣＯまたはＸ（ＣＨ２）ｐＹであって、ここでＸはＯＣＯ、ＯＣＯＮＨ、ＮＨＣＯ、ＮＨＣＯＯ、ＮＨＣＯＮＨ、ＣＯＮＨもしくはＣＯＯを表し、ＹはＮＨもしくはＣＯを表し、ｐは１〜６の整数を表し、
Ｔは水素原子、ヒドロキシル基または−ＺＲであって、ここでＺは単結合、ＣＯ、ＯもしくはＮＨを表し、Ｒは置換もしくは未置換の炭素原子１２個までの炭化水素基を表し、
ｍは４〜２５００の整数であり、
ｎは５〜１００００、好ましくは、１０〜３０００、より好ましくは１０〜５００の整数であり、そして
ｘ＋ｙまたはｚは５〜１０００、好ましくは１０〜３０００、より好ましくは１０〜５００の整数であるが、但し、存在するカルボキシラートイオンは５０％までが上記のアルカリ金属由来の対イオン有するかまたはカルボキシエステル残基を形成することができる。また、上記式（ＩＩ−ａ）および（ＩＩ−ｂ）中のα−アスパラギン酸単位とβ−アスパラギン酸単位との間の「・」は、これらの単位がランダムに存在することを意味する。
【００２１】
上式中の各基または各部分の定義は、より具体的には、次のごとき意味を有する。「炭素原子１２個（以下、Ｃ１２のように略記する場合あり。このような記載様式は、他の炭素原子を有する基を表示する場合にも同様に用いられる。）までのアルキル基」とは、直鎖もしくは分岐鎖であってもよいアルキル基であって、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルおよびｎ−もしくはｉｓｏ−ドデシルを表す。このようなアルキル基の置換基としては、本発明の目的に沿う限り、どのような基であってもよいが、好ましくは、ヒドロキシル基、カルボキシル基、式  Ｒ１Ｒ２ＣＨ−  （ここで、Ｒ１およびＲ２は独立して、Ｃ１−１０アルキルオキシ、アリールオキシもしくはアリール−Ｃ１−３アルキルオキシを表すか、一緒になってＣ１−６アルキルで置換されていてもよいエチレンジオキシ（−Ｏ−ＣＨ（Ｒ′）−ＣＨ−Ｏ−、ここで、Ｒ′は水素原子またはＣ１−６アルキル基である）を表わす）の基、式  Ｒ１′Ｒ２′ＮＣＨ２−  （ここで、Ｒ１′およびＲ２′は独立して、有機シリル型のアミノ保護基、例えばトリアルキルシリル基またはＲ１′およびＲ２′はそれらが結合する窒素原子と一緒になって、４〜７員環のジシラ−アザシクロヘテロ環式環を形成しうる原子団である）の基を挙げることができる。例えば、式  Ｒ１Ｒ２ＣＨ−  の基は、所謂、アセタール部分を示し、緩和な加水分解によって、容易にＯＣＨ−（アルデヒド基）に転化できる。他方、式  Ｒ１′Ｒ２′ＮＣＨ２−  の基は、例えば、テトラアルキルアンモニウムフロリドを含む溶液中で容易にＨ２Ｎ−に転化できる。したがって、このような置換基を有する一般式（Ｉ）、（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）または（ＩＶ）で表されるブロック共重合体は、それらを用いて、本発明に従う有機−無機ハイブリッド型粒子（例えば、ポリマーミセル）を形成した後、通常、該粒子のシェルまたは表面に存在する上記の置換基をアルデヒド基またはアミノ基に転化し、こうして得られた官能基を介して、例えば、ラクトース等の糖残基、抗体等の特異的な結合性を示すポリペプチドを該粒子に共有結合するのに好都合である。こうして該粒子はさらなる標的指向性を付与することもできる。このような置換基を有するポリエチレンセグメントの取得方法は既知であり、例えば、Ｒ１Ｒ２ＣＨ−基の場合は、ＷＯ９６／３３２３３（または対応するＵＳ−Ａ−５，９２５，７２０）を参にすることができる。
【００２２】
こうして取得されるブロック共重合体は、上式（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ａ）および（ＩＩＩ−ｂ）におけるＴまたはそれに相当する末端基は、通常、水素原子またはヒドロキシル基であるが、これらの末端基にそれ自体既知の方法で−ＺＲ基を導入することができる。このようなＲとしては、限定されるものでないが、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、
【００２３】
【化２】
2008143805.tif 000003
【００２４】
等の炭化水素基を挙げることができる。このような基の導入方法も、上記のＵＳ−Ａ−５，９２５，７２０に記載の方法に従って実施できる。
【００２５】
本発明に従い、有機−無機ハイブリッド型粒子に含められる造影剤は、上記微小魂の表面に付着しているか、好ましくは全体が内包されている形態にある。このような造影剤は、本発明の目的に沿うものである限り、どのような種類のものであってもよいが、好ましくは、上記の非特許文献１、非特許文献２または非特許文献３に記載されているものを上げることができる（これらの文献は、引用することにより、それらの内容の全てが本明細書の内容となる）。限定されるものでないが、具体的なものとしては、ガドリニウム（Ｇ
ｄ）、ユーロピウム（Ｅｕ）、マンガン（Ｍｎ）、鉄（Ｆｅ）および銅（Ｃｕ）からなる群より選ばれる金属であることができ、さらにこれらの金属は、多座配位子との金属キレートの形態にあることができる。このような多座配位子としては、アミノカルボン酸もしくはリン酸系、ポルフィリン系およびデフェリオックスアミンＢ系から選ばれる多座配位子であることができる。限定されるものでないが、アミノカルボン酸もしくはリン酸系多座配位子としては、エチレンジアミン四酢酸、ジエチレントリアミン五酢酸、トリエキレンテトラミン六酢酸、エチレングリコールテトラミン四酢酸、テトラアザシクロドデカン四酢酸、テトラアザシクロドデカン三酢酸およびテトラアザシクロドデカン四リン酸等が挙げられ、ポルフィリン系多座配位子としては、ポルフィリン等が挙げられ、デフェリオックスアミン系多座配位子としてはデフェリオックスアミンＢ等が挙げられる。
【００２６】
本発明によれば、かようなブロック共重合体、ならびにカルシウムイオンおよびリン酸イオン、炭酸イオンまたはこれらのイオンの混合物（特に、炭酸イオン）を必須の成分として含んでなる上記の造影剤を含む有機−無機ハイブリッド型粒子を形成するための水性分散組成物も提供される。ここにいう「水性分散組成物」または後述する「水性分散体」とは、水を主たる溶媒とし、場合によって、水と混和性の有機溶媒（例えば、メタノール、エタノール、アセトン等）を本発明の目的を達成する上で悪影響を及ぼさない範囲内で少量含んでもよい溶媒系からなる溶液、分散液、懸濁液を意味する。これらの液には、ｐＨを６．０〜８．０に調節することのできる緩衝剤が含まれていることが好ましい。これらの液に含まれるカルシウムイオンおよびリン酸イオンまたは炭酸イオンは、それぞれ相当する水溶性の塩に由来するものであることができ、典型的には、前者は塩化カルシウムから、そして後者はリン酸水素二ナトリウムまたは炭酸水素ナトリウムから誘導される。
【００２７】
カルシウムイオンとリン酸イオンまたは炭酸イオンの含有割合は、本発明においては、かなり重要であり、両者が反応して上記のリン酸カルシウムまたは炭酸カルシウムを生成するのに必要な当量より、通常、過剰な量でカルシウムイオンが存在することが必要である。具体的には、Ｃａ２−対ＰＯ４３−またはＣＯ３２−は、モル濃度で、１〜１０００対１であることができる。このような割合でカルシウムイオンとリン酸イオンがまたは炭酸イオンが存在すると、これらと前記ブロック共重合体が都合よく相互作用しうる。
【００２８】
さらにまた、前記水性組成物中において、Ｃａ２−は、限定されるものでないが、１０ｍＭ〜１０００ｍＭで、そしてＰＯ４３−またはＣＯ３２−は、限定されるものでないが、０．４ｍＭ〜１０ｍＭで存在できる。またこのような割合は、本発明に従う、前記水性組成物に造影剤を含め、かような造影剤を担持もしくは内包する有機−無機ハイブリッド型粒子を含んでなる水性分散体を提供するにも好適である。
【００２９】
他方、前記水性組成物中で、ブロック共重合体は、限定されるものでないが、１０μｇ／ｍｌ〜１０００μｇ／ｍｌで存在することができる。前記水性組成物中の上述のＣａ２−およびＰＯ４３−またはＣＯ３２−の濃度と、直前に記載したブロック共重合体の濃度は、該水性組成物中で形成される有機−無機ハイブリッド型粒子（造影剤不含）または、水性分散体における有機−無機ハイブリッド型粒子（造影剤含有）を水性液中で一般的に安定に分散させておくのに好都合である。しかし、上述の濃度を超える濃度で各成分を用いても、本発明の目的に沿う水性組成物または水性分散体を提供できる。また、このような水性分散体は、常法により、例えば、凍結乾燥法により乾燥形態にすることができる。このような乾燥形態の組成物は水性媒体で、再度、安定な水分散体に構成することもできる。また、乾燥形態のまま、必要により他の結合剤等を用いて、他の形態の製剤に調製することもできる。
【００３０】
すでに、部分的には上記で言及してきた本発明に従う水性分散体は、上述の水性組成物に生物活性物質を共存させることにより調製できる。より具体的には、限定されるもので
ないが、（Ａ）造影剤、カルシウムイオンおよび必要により緩衝剤を含む第一の水溶液を調製し、独立して、（Ｂ）  一般的（Ｉ）
ポリ（ｈｐｈ）−ｂｌｏｃｋ−ポリ（ｃａｒｂｏ）          （Ｉ）
（式中、ポリ（ｈｐｈ）およびポリ（ｃａｒｂｏ）は上記の意味を有する）
で表される構造を含んでなるブロック共重合体、炭酸イオンまたはリン酸イオンおよび必要により緩衝剤を含む第二の水溶液を調製し、そして
（Ｃ）  前記第一の水溶液と第二の水溶液を、炭酸カルシウムまたはリン酸カルシウムが生成するのに十分な条件下で混合することにより調製できる。なお、第二の水溶液には塩化ナトリウムなどの塩を含めることができ、使用する場合の緩衝剤は、最終分散液のｐＨを６．０〜８．０に調節することができるように選ぶのがよい。
【００３１】
このような調製方法に限定されるものでないが、本発明に従う、水性分散体に含まれる粒子は、上述したブロック共重合体、カルシウムイオン、炭酸イオンまたはリン酸イオンおよび造影剤から生成される造影剤を担持する粒子であって、分散体の動的光散乱測定による場合には、平均粒子径が５〜２０００の範囲内で容易に調節できる。本発明の上記調製方法によれば、例えば、ブロック共重合体濃度を選ぶことにより、粒子径が５０〜６００ｎｍのいずれかの大きさをもち、多分散度が０．１以下の極めて均一の粒子を含んでなる水性分散体を提供できる。勿論、必要があれば、調製時間を延長することにより６００ｎｍを越え数μｍオーダーの粒子を形成することもできる。これらの水性分散体は、周囲条件下（例えば、室温など）において、数日間〜１ケ月間実質的に沈殿もしくは相分離を起こすことなく貯蔵できるので、そのまま、必要により、余剰のイオン低分子化合物などを透析もしくは限外濾過することにより除去し、注射用組成物として用いることも可能である。
【００３２】
限定されるものでないが、本発明に従う有機−無機ハイブリッド型粒子は、例えば次の各成分のばあいには、重量比で、ブロック共重合体：ＣａＣＯ３：Ｇｄ−ＤＴＰＡ＝０．２〜１．６：０．３：０．０５〜０．１またはブロック共重合体：Ｃａ３（ＰＯ４）２：Ｇｄ−ＤＴＰＡ＝０．２〜１．６：０．４６５：０．０５〜０．１であることができる。
【００３３】
本発明に従う有機−無機ハイブリッド型粒子は、中性ｐＨ付近の生物学的流体、例えば、血液では安定に維持乃至保存でき、しかも腫瘍組織指向性がある。特に、無機アニオンとして、炭酸イオンまたは炭酸イオンとリン酸イオンの混合物を含むハイブリッド型粒子は、中性より若干低いｐＨを有する環境下で、容易に崩壊し得るとのｐＨ感受性を示す。したがって、当該粒子は、腫瘍組織内では、容易に崩壊し得るものと理解できる。
【００３４】
以下、本発明を、具体例を挙げてさらに具体的に説明するが、本発明をこれらの例に限定することを意図するものではない。
【００３５】
例１．Ｇｄ錯体とリン酸カルシウムの複合体粒子の粒径制御
この実験は、リン酸カルシウム（以下、ＣａＰと略記する）の沈殿形成の阻害またはある一定以下の粒径の粒子にコントロールされた生成に、特定のブロック共重合体が有効であることを示すものである。
【００３６】
＜実験方法＞
（１）以下の水溶液を調製した。
溶液Ａ：２５０ｍＭ  Ｃａ２＋（ＣａＣｌ２を用いる）
１ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．６）
ＰＥＧ−ｂｌｏｃｋ−ポリ（メタクリル酸）（以下、ＰＥＧ−ＰＭＡと略
記する。）
４００−３２００μｇ／ｍｌ
溶液Ｂ：６ｍＭ  ＰＯ４３−（Ｎａ２ＨＰＯ４を用いる）
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ６．６または  ７．１）
１４０ｍＭ  ＮａＣｌ
１ｍＭ  ガドリニウム-ジエチレントリアミン五酢酸（Ｇｄ−ＤＴＰＡと
略記する。（Ｍａｇｎｅｖｉｓｔ（Ｒ））シェーリングより入手。）
上記でＰＥＧ−ＰＭＡ（Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｏｕｒｃｅより入手）は、
次式、
ＣＨ３Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＯＯＨ））ｍＨ
で表され、ＰＥＧセグメントの分子量が約７８００、ＰＭＡセグメントの分子量が
約２０００のブロック共重合体（７８００−２０００と略記する）と、ＰＥＧセグ
メントの分子量が約７５００、ＰＭＡセグメントの分子量が約１５５００のブロッ
ク共重合体（７５００−１５５００と略記する）をＮａ塩にして使用した。
（２）溶液Ａと溶液Ｂを３７℃で混合し、に４時間以上３７℃で静置した後、分散体の動
的光散乱測定（ＤＬＳ）により粒径を評価した。測定装置としては、Ｍａｌｖｅｒ
ｎ社のＺｅｔａｓｉｚｅｒ  ＮａｎｏＺＳを用いた。ヘリウムネオンレーザーの波
長６３３ｎｍの光を入射光として使用し、測定は３７℃で行った。入射光に対する
角度１７３°方向の散乱光を検出し、その強度変化の時間依存性をキュムラント法
により粒子の拡散係数を求めた。得られた拡散係数は、Ｓｔｏｋｅｓ−Ｅｉｎｓｔ
ｅｉｎの下記式により、粒径へと変換した。
Ｒ ＝ ｋＴ ／ （６πηＤ）
式中、Ｒ＝粒径、ｋ＝ボルツマン係数、Ｔ＝温度、η＝粘性係数、Ｄ＝拡散係数
また、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）を用いてＣａＰ粒子像も撮像した。用いたＴＥ
Ｍは、ＨｉｔａｃｈｉのＨ−７０００で加速電圧は７５ｋＶである。
【００３７】
＜結果＞
作製したミセルの粒径に対する仕込みのｐＨ、ポリマー鎖長、濃度の影響を図１に示す。ＰＥＧ−ＰＭＡ（７８００−２０００）を使用した場合、ポリマー濃度０．４ｍｇ／ｍｌ以上で粒径制御（多分散度が０．２以下）できており、その粒径はｐＨ６．６で約１００ｎｍ、ｐＨ７．１で２００ｎｍ前後であった。ＰＥＧ−ＰＭＡ（７５００−１５５００）を使用した場合、ポリマー濃度０．８ｍｇ／ｍｌ以上で粒径制御できており、ポリマー濃度１．６ｍｇ／ｍｌではｐＨ６．６、ｐＨ７．１共に粒径が約１００ｎｍであった。ＴＥＭ画像（図２）に示されるように、コアがＣａＰ粒子、シェルがポリマーでできている粒計１００ｎｍ前後の単分散粒子ができていることが確認できる。粒径制御に対するｐＨの影響は７８００−２０００では大きく出ているが、７５００−１５５００ではほとんど出なかった。また、ポリマー濃度が濃いほど粒径制御されやすい傾向が出ており、ＰＥＧが粒径に及ぼす影響が非常に強いと考えられる。
【００３８】
例２．ＣａＰ粒子中に取り込まれている（または内包された）Ｇｄ−ＤＴＰＡ量の決定
ＣａＰ粒子は例１にしたがって調製した。調製したミセル溶液１ｍｌを１５０００Ｇ  ３０ｍｉｎかけて遠心分離を行い、上澄み１００μｌを取る。０．１Ｍ  ＨＣｌ溶液４．９ｍｌで５０倍希釈したのち、誘導結合プラズマ質量分析装置（ＩＣＰ−ＭＳ）にて溶液中のＧｄ濃度を測定する。これにより、リン酸カルシウムに内包されていないＧｄ−ＤＴＰＡ濃度が分かり、Ｇｄ−ＤＴＰＡ内包率を計算し、定量化した。結果を図３に示す。内包量はポリマーの種類・濃度によって多少違ったが、基本的には仕込み量（１ｍＭ  Ｇｄ−ＤＴＰＡ）の１０−２０％程度内包することが分かった。
【００３９】
例３．ＣａＰ粒子の安定性評価
ｐＨに応答して粒子が壊れるかどうかを評価するために、ｐＨ５．５とｐＨ７．４での安定性評価を行った。
【００４０】
＜実験方法＞
サンプルは例１にしたがって、ＰＥＧ−ＰＭＡ（７５００−１５５００）３．２ｍｇ／ｍｌ  ｐＨ６．６の条件で作製したものを使用した。次に、細胞外溶液（２ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ）と重ｍＭ
ＰＢＳ、＆１４０ｍＭ  ＮａＣｌ溶液をそれぞれｐＨ７．４と５．５にあらかじめ調製しておき、サンプル溶液２００μｌと用意した溶液８００μｌを混和し、動的光散乱測定を１２時間測定し続け、粒径変化を見る。以下に用意した溶液を記す。
細胞外ｐＨ７．４：２ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．４）、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ
細胞外ｐＨ５．５：２ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ５．５）、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ
重ｍＭ  ＰＢＳ  ｐＨ７．４：１０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．４）、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ
１０ｍＭ  ＰＢＳ  ｐＨ５．５：１０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ５．５）、１４０ｍＭ
ＮａＣｌ
【００４１】
＜結果＞
結果を図４に示す。ＣａＰ粒子は、リン酸濃度によって大きく安定性が変化する。例えば、ｐＨ７．４の状態でリン酸濃度を１０ｍＭ以上にすると瞬時に凝集する。一方で、ｐＨ５．５にすると、リン酸カルシウムが少し溶け出している様子が伺えるものの、そのｐＨ応答性はそれほどない。
【００４２】
例４．Ｇｄ錯体と炭酸カルシウムの複合体粒子の粒径制御
この実験は、炭酸カルシウム（以下、ＣａＣＯ３と略記する）の沈殿形成の阻害またはある一定以下の粒径の粒子にコントロールされた生成に、特定のブロック共重合体が有効であることを示すものである。
【００４３】
＜実験方法＞
（１）以下の水溶液を調製した。
溶液Ａ：２５０ｍＭ  Ｃａ２＋（ＣａＣｌ２を用いる）
１ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．６）
ＰＥＧ−ＰＭＡ  ４００−３２００μｇ／ｍｌ
溶液Ｂ：６ｍＭ  ＣＯ３２−（ＮａＨＣＯ３を用いる）
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ６．６  または  ７．１）
１４０ｍＭ  ＮａＣｌ
１ｍＭ  Ｇｄ−ＤＴＰＡ
上記のＰＥＧ−ＰＭＡは、７８００−２０００と７５００−１５５００をＮａ塩に
して使用した。
（２）溶液Ａと溶液Ｂを３７℃で混合し、２４時間以上３７℃で静置した後、例１と同様
に分散体の動的光散乱測定（ＤＬＳ）により粒径を評価した。
【００４４】
＜結果＞
作製したミセルの粒径に対する仕込みのｐＨ、ポリマーの鎖長、濃度の影響を図８に示す。ＰＥＧ−ＰＭＡ（７８００−２０００）を使用した場合、一見ポリマー濃度やｐＨによって差があるものの、多分散度が０．２以上あるため、ほとんど粒径制御ができていないことが分かった。ＰＥＧ−ＰＭＡ（７５００−１５５００）を使用した場合、ポリマー濃度、ｐＨに関係なく粒径制御できており、粒径が約１００ｎｍ、多分散度が０．１以下であった。このことから、炭酸カルシウムの粒径制御はアニオンセグメントの長さが粒径
制御に大きく影響していることが分かった。これらの粒径制御は仕込みのＧｄ−ＤＴＰＡの濃度に全く影響されないことも確認した。
【００４５】
例５．ＣａＣＯ３粒子中に取り込まれている（または内包された）Ｇｄ−ＤＴＰＡ量の決定
ＣａＣＯ３粒子は例１にしたがって調製したＣａＣＯ３粒子を、例２に記載したのと同様にＧｄ−ＤＴＰＡの内包量について定量した。結果を図６に示す。内包量はｐＨ７．１で作製したＣａＰ粒子のものとほぼ同一である。
【００４６】
例６．ＣａＣＯ３粒子の安定性評価
ｐＨに応答して粒子が壊れるかどうかを評価するために、ｐＨ５．５とｐＨ７．４での安定性評価を行った。
【００４７】
＜実験方法＞
サンプルは例１にしたがって、ＰＥＧ−ＰＭＡ（７５００−１５５００）３．２ｍｇ／ｍｌ  ｐＨ６．６の条件で作製したものを使用した。次に、細胞外溶液（２ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ）と１０ｍＭ  ＰＢＳ、＆１４０ｍＭ  ＮａＣｌ溶液をそれぞれｐＨ７．４と５．５にあらかじめ調製しておき、サンプル溶液２００μｌと用意した溶液８００μｌを混和し、動的光散乱測定を１２時間測定し続け、粒径変化を見る。以下に用意した溶液を記す。
１０ｍＭ  ＰＢＳ  ｐＨ７．４：１０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．４）、１４０ｍＭ
ＮａＣｌ
１０ｍＭ  ＰＢＳ  ｐＨ５．５：１０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ５．５）、１４０ｍＭ
ＮａＣｌ
【００４８】
＜結果＞
結果を図７に示す。ｐＨ７．４では、少し粒径や散乱強度の増加が見られるものの、基本的に１２時間以上、安定に存在できることを確認した。一方、ｐＨ５．５では、一瞬にして粒径及び散乱強度が極端に減少していることが分かる。これは、ＣａＣＯ３粒子がｐＨ５．５では不安定で一瞬にして溶けてしまったことが考えられる。
【００４９】
例７．Ｇｄ錯体とＣａＰ＆ＣａＣＯ３ハイブリッド化複合体粒子の粒径制御（その１）
例１、４では、共重合体の濃度やポリマー鎖長を変化させることにより複合体粒子の粒径を調節することを示したが、本例では、共重合体の濃度やポリマーの種類やリン酸と炭酸の比率を変えることにより、該粒径がさらに調節できることを示す。
【００５０】
＜実験方法＞
（１）以下の水溶液を調製した。
溶液Ａ：２５０ｍＭ  Ｃａ２＋（ＣａＣｌ２を用いる）
１ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．６）
ＰＥＧ−ＰＭＡ（７５００−１５５００）  または  ＰＥＧ−ポリアスパ
ラギン酸（ＰＥＧ−ＰＡｓｐと略記する。）４００−３２００μｇ／ｍｌ
溶液Ｂ：６ｍＭ  ＰＯ４３−（Ｎａ２ＨＰＯ４を用いる）
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．１）
１４０ｍＭ  ＮａＣｌ
１ｍＭ  Ｇｄ−ＤＴＰＡ
溶液Ｃ：６ｍＭ  ＣＯ３２―（ＮａＨＣＯ３を用いる）
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．１）
１４０ｍＭ  ＮａＣｌ
１ｍＭ  Ｇｄ−ＤＴＰＡ
上記でＰＥＧ−ＰＡｓｐは、
次式、
ＣＨ３Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＯＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯ−）ＮＨ）ｘ・
（ＣＯ  ＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯ−）ＮＨ）ｙＨ
で表され、ＰＥＧセグメントの分子量が約１２０００、ＰＡｓｐセグメントの重合
度（ｘ＋ｙ）が８７と３８であるものとを製造して用いた（１２−８７、１２−３
８と略記する）。上記の溶液ＢとＣをそれぞれ１００：０、８０：２０、６０：４
０、４０：６０、２０：８０、０：１００の比に混和し、溶液Ｄを作製する。
（２）溶液Ａと溶液Ｄを３７℃で混合し、２４時間以上３７℃で静置した後、例１と同様
に分散体の動的光散乱測定（ＤＬＳ）により粒径を評価した。
【００５１】
＜結果＞
作製したミセルの粒径に対する仕込みのリン酸塩対炭酸塩の比率、ポリマーの種類、濃度の影響を図８に示す。ＰＥＧ−ＰＭＡ（７５００−１５５００）を使用した場合、ポリマー濃度３．２ｍｇ／ｍｌのときは、リン酸塩対炭酸塩の比率関係なく粒径が変化しないことが分かった。多分散度が０．２以下であることから、この濃度では粒径制御が可能であることが分かった。また、リン酸塩対炭酸塩の比率がリン酸側に偏ると、ポリマー濃度が低くなるほど凝集する傾向になることも分かった。一方、ＰＥＧ−ＰＡｓｐ（１２−８７）を使用した場合、粒径制御できるポリマー濃度がＰＥＧ−ＰＭＡ（７５００−１５５００）に比べ、狭い範囲になっていることが分かった。ＣａＣＯ３  １００％の時は、低ポリマー濃度に粒径制御ができる濃度範囲があるが、リン酸塩の比率が上がってくると、その粒径制御の範囲は広がり、高ポリマー濃度側にシフトしていき、高ポリマー濃度＆高リン酸濃度のほうが、粒径が小さくなる傾向が出た。ＰＥＧ−ＰＡｓｐ（１２−３８）を使用した場合、ＣａＰ粒子は広い濃度範囲で粒径制御が可能であるが、ＣａＣＯ３粒子は全く形成されない。ＣａＰとＣａＣＯ３のハイブリッドタイプにすると、リン酸塩の比率が４０−１００％の時は広い濃度範囲で粒径制御が可能になった。
【００５２】
例８．Ｇｄ錯体とＣａＰ＆ＣａＣＯ３ハイブリッド化複合体粒子の粒径制御（その２）
例７では、共重合体の濃度やポリマーの種類やリン酸と炭酸の比率を変えることにより複合体粒子の粒径を調節することを示したが、本例では、例７（（［Ｃａ２＋］＝２５０ｍＭ）と違うＣａ濃度（［Ｃａ２＋］＝２５ｍＭ）で、該粒径がさらに調節できることを示す。
【００５３】
＜実験方法＞
（１）以下の水溶液を調製した。
溶液Ａ：２５ｍＭ  Ｃａ２＋（ＣａＣｌ２を用いる）
１ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．６）
ＰＥＧ−ＰＭＡ（７８００−２０００、７５００−１５５００）  または
ＰＥＧ−ＰＡｓｐ（１２−８７、１２−３８）４００−３２００μｇ／ｍ
ｌ
溶液Ｂ：６ｍＭ  ＰＯ４３−（Ｎａ２ＨＰＯ４を用いる）
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．１）
１４０ｍＭ  ＮａＣｌ
１ｍＭ  Ｇｄ−ＤＴＰＡ
溶液Ｃ：６ｍＭ  ＣＯ３２−（ＮａＨＣＯ３を用いる）
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．１）
１４０ｍＭ  ＮａＣｌ
１ｍＭ  Ｇｄ−ＤＴＰＡ
上記の溶液ＢとＣをそれぞれ１００：０、８０：２０、６０：４０、４０：６０、
２０：８０、０：１００の比に混和し、溶液Ｄを作製する。
（２）溶液Ａと溶液Ｄを３７℃で混合し、２４時間以上３７℃で静置した後、例１と同様
に分散体の動的光散乱測定（ＤＬＳ）により粒径を評価した。
【００５４】
＜結果＞
作製したミセルの粒径に対する仕込みのリン酸塩対炭酸塩の比率、ポリマーの種類、濃度の影響を図９に示す。ＰＥＧ−ＰＭＡ（７８００−２０００）を使用した場合、ＣａＣＯ３はほとんど粒子形成がされなかったが、リン酸塩が２０％以上はいると広い濃度範囲で粒子形成が行われること分かった。ＰＥＧ−ＰＭＡ（７５００−１５５００）を使用した場合、Ｃａ濃度が低くなったためか、ある限られたポリマー濃度範囲でしかＣａＣＯ３粒子が形成されないことが確認された。また、リン酸塩比率が大きくなると粒子形成がしやすくなるものの、ポリマー濃度範囲も高濃度側にシフトしていく様子が見えた。ＰＥＧ−ＰＡｓｐ（１２−８７）を使用した場合、粒径制御できるポリマー濃度が狭い範囲になっていることが分かった。しかし、ポリマー濃度が０．４ｍｇ／ｍｌのときはリン酸塩比率に関係なく粒子形成が行われていた。ＰＥＧ−ＰＡｓｐ（１２−３８）を使用した場合、ＣａＰ粒子は広い濃度範囲で粒径制御が可能であるが、ＣａＣＯ３粒子は全く形成されない。ＣａＰとＣａＣＯ３のハイブリッドタイプにすると、リン酸塩の比率が４０−１００％の時は広い濃度範囲で粒径制御が可能になった。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】動的光散乱測定によるＣａＰ粒子の粒径測定の結果を示すグラフである。（ａ）は、ＰＥＧ−ＰＭＡ（７８００−２０００）濃度に対するＣａＰ粒子の粒径のグラフである（（△）ｐＨ７．１の溶液Ｂ、（◇）ｐＨ６．６の溶液Ｂ）。（ｂ）は、ＰＥＧ−ＰＭＡ（７５００−１５５００）濃度に対するＣａＰ粒子の粒径のグラフである（（△）ｐＨ７．１の溶液Ｂ、（◇）ｐＨ６．６の溶液Ｂ）。
【図２】ＣａＰ粒子の図面に代わるＴＥＭ画像写真である。サンプルは、溶液Ａが３．２ｍｇ／ｍｌ  ＰＥＧ−ＰＭＡ（７５００−１５５００）、溶液ＢがｐＨ７．１のときのものである。ここでは、コアがＣａＰ粒子、シェルがポリマー等の有機分子層の有機無機ハイブリッドミセルができている様子が観察される。
【図３】ＩＣＰ−ＭＳによるＣａＰ粒子に内包されたＧｄ−ＤＴＰＡの定量結果を示すグラフ。（ａ）は、ＰＥＧ−ＰＭＡ（７８００−２０００）濃度に対するＣａＰ粒子のＧｄ内包量のグラフである（（△）ｐＨ７．１の溶液Ｂ、（◇）ｐＨ６．６の溶液Ｂ）。（ｂ）は、ＰＥＧ−ＰＭＡ（７５００−１５５００）濃度に対するＣａＰ粒子のＧｄ内包量のグラフである（（△）ｐＨ７．１の溶液Ｂ、（◇）ｐＨ６．６の溶液Ｂ）。
【図４】動的光散乱測定によるＣａＰ粒子（ＰＥＧ−ＰＭＡ（７５００−１５５００）３．２ｍｇ／ｍｌ  ｐＨ６．６）が粒径の経時変化を示すグラフである。ここでは、環境に応答してＣａＰ粒子が壊れていく様子が見える。（（□）細胞外液（ｐＨ７．４）、（◇）細胞外液（ｐＨ５．５）、（△）１０ｍＭ  ＰＢＳ（ｐＨ７．４）＆１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、（○）１０ｍＭ  ＰＢＳ（ｐＨ５．５）＆１４０ｍＭ  ＮａＣｌ）
【図５】動的光散乱測定によるＣａＣＯ３粒子の粒径測定の結果を示すグラフである。（ａ）は、ＰＥＧ−ＰＭＡ（７８００−２０００）濃度に対するＣａＣＯ３粒子の粒径のグラフである（（△）ｐＨ７．１の溶液Ｂ、（◇）ｐＨ６．６の溶液Ｂ）。（Ｂ）は、ＰＥＧ−ＰＭＡ（７５００−１５５００）濃度に対するＣａＣＯ３粒子の粒径のグラフである（（△）ｐＨ７．１の溶液Ｂ、（◇）ｐＨ６．６の溶液Ｂ）。
【図６】ＩＣＰ−ＭＳによるＣａＣＯ３粒子に内包されたＧｄ−ＤＴＰＡの定量結果を示すグラフ。ＰＥＧ−ＰＭＡ（７５００−１５５００）濃度に対するＣａＣＯ３粒子のＧｄ内包量のグラフである（（◇）ｐＨ７．１の溶液Ｂ）。
【図７】動的光散乱測定によるＣａＣＯ３粒子（ＰＥＧ−ＰＭＡ（７５００−１５５００）３．２ｍｇ／ｍｌ  ｐＨ７．１）の粒径の経時変化を示すグラフである。ここでは、環境に応答してＣａＣＯ３粒子が壊れていく様子が見える。（（△）１０ｍＭ  ＰＢＳ（ｐＨ７．４）＆１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、（○）１０ｍＭ  ＰＢＳ（ｐＨ５．５）＆１４０ｍＭ  ＮａＣｌ）
【図８】動的光散乱測定によるＣａＰ＆ＣａＣＯ３ハイブリッド粒子（（Ｃａ２＋）＝２５０ｍＭ）の粒径測定の結果を示すグラフである。（ａ）は、ＰＥＧ−ＰＭＡ（７５００−１５５００）濃度及び、ＣａＰ：ＣａＣＯ３比率に対するＣａＰ＆ＣａＣＯ３ハイブリッド粒子の粒径のグラフ、（ｂ）は、ＰＥＧ−ＰＡｓｐ（１２−３８）濃度及び、ＣａＰ：ＣａＣＯ３比率に対するＣａＰ＆ＣａＣＯ３ハイブリッド粒子の粒径のグラフ、（ｃ）はＰＥＧ−ＰＡｓｐ（１２−８７）濃度及び、ＣａＰ：ＣａＣＯ３比率に対するＣａＰ＆ＣａＣＯ３ハイブリッド粒子の粒径のグラフ、（ｄ）はＰＥＧ−ＰＡｓｐ（１２−３８）濃度及び、ＣａＰ：ＣａＣＯ３比率に対するＣａＰ＆ＣａＣＯ３ハイブリッド粒子の粒径のグラフである（（◇）１．６ｍｇ／ｍｌ、（□）０．８ｍｇ／ｍｌ、（△）０．４ｍｇ／ｍｌ、（×）０．２ｍｇ／ｍｌ）。
【図９】動的光散乱測定によるＣａＰ＆ＣａＣＯ３ハイブリッド粒子（（Ｃａ２＋）＝２５ｍＭ）の粒径測定の結果を示すグラフである。（ａ）は、ＰＥＧ−ＰＭＡ（７８００−２０００）濃度及び、ＣａＰ：ＣａＣＯ３比率に対するＣａＰ＆ＣａＣＯ３ハイブリッド粒子の粒径のグラフ、（ｂ）は、ＰＥＧ−ＰＭＡ（７５００−１５５００）濃度及び、ＣａＰ：ＣａＣＯ３比率に対するＣａＰ＆ＣａＣＯ３ハイブリッド粒子の粒径のグラフ、（ｃ）はＰＥＧ−ＰＡｓｐ（１２−３８）濃度及び、ＣａＰ：ＣａＣＯ３比率に対するＣａＰ＆ＣａＣＯ３ハイブリッド粒子の粒径のグラフ、（ｄ）はＰＥＧ−ＰＡｓｐ（１２−８７）濃度及び、ＣａＰ：ＣａＣＯ３比率に対するＣａＰ＆ＣａＣＯ３ハイブリッド粒子の粒径のグラフである（（◇）１．６ｍｇ／ｍｌ、（□）０．８ｍｇ／ｍｌ、（△）０．４ｍｇ／ｍｌ、（×）０．２ｍｇ／ｍｌ）。
【図１】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図２】
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