(57)【要約】 【課題】農薬を使用して栽培した農作物の残留農薬を分解或いは資化する乳酸菌を有効成分として含有するステビア濃縮発酵液を提供する。【解決手段】ステビアの茎の乾燥粉末とステビア葉の乾燥粉末とを、重量にして９：１〜６：４の割合に配合した原末を煮沸抽出し、得られた抽出液を２．５リットル／ｋｇ原末以下になるまで濃縮した水溶液を冷却し、発生ガスを放出できる密封容器に移して常温で１０か月以上熟成させて得られたステビア濃縮発酵液であって、上記熟成過程において、ステビア抽出液を濃縮後、冷却工程及び発酵容器に移す工程で混入した浮遊菌及び落下菌であって当該緩衝で生存し得た乳酸菌を有効成分として含有する農作物の残留農薬低減剤及びこの残留農薬低減剤を育成している農作物の施用することにより、残留農薬を除去或いは低減する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ステビアの茎の乾燥粉末とステビア葉の乾燥粉末とを、重量にして９：１〜６：４の割合に配合した原末を煮沸抽出し、得られた抽出液を２．５リットル／ｋｇ原末以下になるまで濃縮した水溶液を冷却し、発生ガスを放出できる密封容器に移して常温で１０か月以上熟成させて得られたステビア濃縮発酵液であって、上記熟成過程において、生存し得た乳酸菌を有効成分として含有する農作物の残留農薬低減剤。
【請求項２】
ステビア濃縮発酵液が、ステビア抽出液を濃縮後、冷却工程及び発酵容器に移す工程で混入した浮遊菌及び落下菌により発酵熟成し、発酵が極めて緩徐になったステビア濃縮発酵液であることを特徴とする請求項１記載の農作物の残留農薬低減剤。
【請求項３】
ステビア濃縮発酵液が、ステビアの茎及び葉に付着した芽胞菌により発酵したことを特徴とする請求項１又は２に記載する農作物の残留農薬低減剤。
【請求項４】
ステビアの茎の乾燥粉末とステビア葉の乾燥粉末とを、重量にして９：１〜６：４の割合に配合した原末を煮沸抽出し、得られた抽出液を２．５リットル／ｋｇ原末以下になるまで濃縮した水溶液を冷却し、発生ガスを放出できる密封容器に移して常温で１０か月以上熟成させて得られたステビア濃縮発酵液を、３００倍〜５０００倍に希釈して農作物に噴霧し、ステビア濃縮発酵液の環境下で生存した乳酸菌により農作物の残留農薬を低減する方法。
【請求項５】
請求項４の農作物への付与が、前記希釈水溶液への苗の浸漬、前記希釈水溶液の葉面散布、及び前記希釈水溶液を用いた苗定植後における灌水処理の中から選択される一種以上である、農作物の残留農薬の低減方法。
【請求項６】
前記乳酸菌が配列表の配列番号１に記載した配列を有する乳酸菌である請求項４記載の農作物の残留農薬を低減する方法。
【請求項７】
前記乳酸菌が配列表の配列番号２に記載した配列を有する乳酸菌である請求項４記載の農作物の残留農薬を低減する方法。
【請求項８】
配列表の配列番号１に記載した配列を有する新規乳酸菌。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
農作物の栽培にあたって、農薬を使用した結果、残留した農薬を分解或いは資化する乳酸菌を有効成分として含有するステビア濃縮発酵液及びこれを用いた農作物の残留農薬を除去或いは低減する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
平成１８年５月２９日より、改正食品衛生法による残留農薬等ポジティブリスト制度が施行され、食品に残留する農薬等の限度量に関する規制が厳しくなった。この改正法の施行により、残留基準を超える量の農薬等が検出された農作物は出荷することができなくなった。
農作物の栽培にあたっては、農薬を使用しないことが望ましい。しかしながら、現実の問題として、各種のウイルス、細菌、カビ、昆虫等による被害は著しく、農薬を使用せずに農作物を栽培することは極度に困難である。更に、消費者は美味しく、形良く、農薬の残留しない、日持ちのする作物を要求する。この要求に応えるには品種を改良し、時には病虫害に弱い品種を栽培することもある。
【０００３】
農薬を使用しない或いは使用量を低減させるために、化学肥料で衰えた土壌の改良をかねて有機堆肥を使用し、病虫害に強い農作物を栽培する試みもある。しかしながら、現実の問題として、病虫害が発生すれば或いは当然発生が予測される場合には、先立って速やかに農薬を用いて駆除しなければ病虫害は更に蔓延する。現実の対策としては、植物が元気に生育するように堆肥等を多用して土地を肥やす方法が採用されている。
【０００４】
特許文献１には、ステビアの茎と葉の抽出液を濃縮し、発酵させたステビア液を５００〜１５００倍に水で希釈し、農作物に噴霧することにより果実や野菜の自然の甘味が増大する技術が開示されている。特許文献２には上記ステビア濃縮発酵液を植物に散布することにより、果実の生育途中における果樹からの落下を防止し、農作物の根張りを促進し、日持ちを向上させる技術が開示されている。
【特許文献１】特開平３−２２０１０９号公報
【特許文献２】特開２０００−５３５１５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ステビア抽出液の発酵液を農作物に散布する方法は、この液自体が肥料ではないため、しかるべき時に施肥、灌水を行い、充分に管理された農作物に施用しなければ、満足すべき効果は得られない。近時、ステビア抽出発酵液の顕著な作用に着眼してステビア農法を採用する意欲的な農家が増加しつつある。そしてステビア農法による野菜や穀物は、品質が優れるため市場において高価に販売されている。
【０００６】
ステビアの葉又は茎の煮沸抽出液はそのまま放置すると腐敗する。この抽出液を更に濃縮し、原料粉体１ｋｇあたり１．５〜２．５リットル程度に濃縮し、腐敗菌が繁殖できない環境にすると腐敗を防止できる。腐敗菌は濃縮後の放冷期間や発酵容器に移し変える時に混入した空中の浮遊菌や落下菌に由来すると考えられる。腐敗菌をはじめ、一般細菌が繁殖しがたい環境下であっても特定の乳酸菌は生存することができる。そしてこの濃縮液を密栓して常温で熟成させると盛んに発酵し、炭酸ガスを放出する。したがって保存容器としては、密栓し、ガス圧が一定値に上昇したときに密封力に抗してガスを放出し、直ちに密封される特殊密封栓を有する容器に入れて保存する。
ステビア濃縮液は、最初は激しく発酵するが、次第に緩やかになり、半年熟成後には炭酸ガスの放出はきわめて緩徐になるが、商品として供給するには１０か月以上熟成させたものが安定している。
【０００７】
乳酸菌の培養は通常糖濃度１％で行う。糖濃度３％でも生育するが、５％以上では生育し難いと一般に考えられている。糖度１０％にも達する濃厚液の中では一般の乳酸菌も生存できない。本発明者らは、腐敗菌は増殖できず、順調に発酵し、良質なステビア濃縮発酵液を得ているが、このこの糖度１０〜１１％の濃縮液の中で生存する菌の分離を図ったところ、特殊な乳酸菌が存在することが判明した。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の構成は、ステビアの茎の乾燥粉末とステビア葉の乾燥粉末とを、重量にして９：１〜６：４の割合に配合した原末を煮沸抽出し、得られた抽出液を２．５リットル／ｋｇ原末以下になるまで濃縮した水溶液を冷却し、発生ガスを放出できる密封容器に移して常温で１０か月以上熟成させて得られたステビア濃縮発酵液であって、上記熟成過程において、ステビア抽出液を濃縮後、冷却工程及び発酵容器に移す工程で混入した浮遊菌及び落下菌であって当該環境下で生存し得た乳酸菌を有効成分として含有する農作物の残留農薬低減剤及びこの残留農薬低減剤を育成している農作物の施用することにより、残留農薬を除去或いは低減することを特徴とする。
【０００９】
本発明は、ステビア濃縮発酵液が、農作物の残留農薬を除去或いは低減させる意外な事実を確認し、更に施用した農薬の効果は確実に得られている事実を確認して完成したものである。
これらの乳酸菌を分離し、その特性を研究すると共に一般農場での農作物の比較栽培を行った。その結果、特殊乳酸菌は農薬が高濃度に存在しても生存できるばかりでなく、逆に増殖が促進されるものもあり、これらの菌が残留農薬の低減に寄与している事実を確認した。ステビア濃縮発酵液を施用した農産物は、糖度も高く品質良好で、必要な農薬を施用しているにもかかわらず公的機関の検査において、すべての項目において農薬が検出されなかった。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、ステビアの濃縮発酵液の水希釈液を散布したり、灌水したりする方法で農作物を育成させれば、高品質の農作物が得られるのみならず、残留農薬が除去或いは低減される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明に係る農作物とは植物を介して得られる食品他は食品材料である。具体的には、米、麦等の穀物類、みかん、りんご等の果実類、きゅうり、白菜等の野菜類、さつま芋、大根等の根茎類等あらゆる種類の農作物を包含する。
【００１２】
本発明のステビアとは南米パラグァイ及びブラジル原産のキク科の多年性植物、学名ステビア・レバウディアナ、ベルトニ(Stevia rebaudiana Bertoni) である。春から秋にかけて充分に生育したステビアを蕾を持つ前に採取する。刈り取ったステビアの葉を茎と分けて乾燥し粉体とする。茎は３〜１０ｃｍに切断し乾燥粉砕して粉体とする。茎と葉のそれぞれの粉体を茎：葉＝９：１〜６：４、好ましくは８：２〜７：３に配合し、ステビア原末とする。茎：葉＝９：１より茎が多いと抽出して得られる抽出液の量が少なく、茎：葉＝６：４より葉が多いとステビア抽出発酵液の品質が低下する。
【００１３】
抽出は次のようにして行う、配合粉体１ｋｇに対し６〜１０リットルの割合で沸騰水を用意し、沸騰水にステビア原末を投入して約１時間煮沸を続ける。煮沸抽出液を遠心分離機にかけて抽出液からカスを分離する。抽出液はそのまま保存すると腐敗菌により腐敗する。腐敗菌の繁殖を抑制するため、得られた抽出液を、減圧下に液量１／３程度になるまで、１．５時間〜２時間かけて濃縮する。原料粉体１ｋｇから１．５〜２．５リットルの濃縮液が得られる。この液体を発生ガス放出性の密封容器に保存する。濃縮液をそのまま通常の密封容器に入れて保管又は輸送すると、その間の発酵により生じた炭酸ガスにより、容器の内圧が危険な程度の高圧に達するため市販に供することができない。
【００１４】
煮沸も濃縮も以後の容器詰めも通常の大気中で行うため、空気中の浮遊菌や落下菌に汚染される。煮沸により、芽胞菌以外は死滅するものと考えられるため、配合粉体に付着している酵母や芽胞菌の胞子がステビア抽出濃縮液の中で発芽発酵すると考えられたが、芽胞菌以外でも冷却工程や容器に詰める工程で混入する菌がある。この中には腐敗菌もあるが、濃縮液中では増殖できずに死滅し、この時点で混入した菌の中で耐高糖度性の乳酸菌が生存し得るのである。
【００１５】
発酵は始めは激しく、半年たつとやや穏やかになるが、できれば１０か月以上熟成させることにより、発酵がほぼ終了し製品が安定する。濃縮終了直後のｐＨは５．６程度であるが、１日〜２日後には激しい発酵により４．７〜４．８に低下する。発酵は次第に緩徐になり熟成完了後のｐＨは３．８〜４．２である。これがビン詰めし、密封して市販できる状態であるが、なお耐高糖度性の菌が生存している。発酵期間を短縮するため、防腐剤等を添加した商品もあるが、自然に熟成させた商品と異なり、農作物の残留農薬低減効果が得られない。
【００１６】
本発明者らは、ステビア濃縮発酵液を炭酸カルシウムを含有する特殊ＧＹＰ培地で培養して得られたコロニーから乳酸菌を分離する作業を繰返して合計３種類の乳酸菌を単離した。ＧＹＰ液体培地は、グルコース３０ｇ、イースト抽出物１５ｇ、バクトペプトン１５ｇ、酢酸ナトリウム・３Ｈ2 Ｏ１５ｇに、塩溶液７．５ｍｌ、ツィーン８０を０．７５ｍｌと水を加えて１５００ｍｌとする。この方法で分離した新規乳酸菌は、１６Ｓ rＤＮＡの全塩基配列は配列表の塩基配列１に示す通りであり、系統樹上、及びＡＰ１５０ＣＨＬによる炭水化物資化性能の結果ではラクトバチラス  ブッケニリ（Lactobacillus buchneri) に近縁であった。この乳酸菌をＦＯＪＢ２０１と命名した。
【００１７】
同様にして、他の実験においては、ラクトバチラス  ジェノモスプ（Lactobacillus jenomosp. ）に近縁で、１６Ｓ rＤＮＡの全塩基配列が配列表の配列番号２に示す新規乳酸菌を分離し、ＦＯＪＢ２０２と命名した。同じくラクトバチラス  エスピー（Lactobacillus sp. ）に近縁で、１６Ｓ rＤＮＡの全塩基配列が配列表の配列番号３に示す新規乳酸菌を分離し、ＦＯＪＢ２０３と命名した。
【００１８】
これらの乳酸菌の農薬耐性の試験を行った。現実に使用される農薬の種類はあまりに多く列挙しかねるが、有機塩素系農薬、有機リン系農薬、合成ピレスロイド系農薬、カーバメイト系農薬から各々１種類を選んだ。
アルドリン、エンドリン、ディルドリン、ジコホール、クロルデン等の有機塩素系農薬から市販のケルセン乳剤（殺ダニ剤、ジコホール乳剤）を使用した。ジクロルボス、ＥＰＮ、エトリホス、パラチオン、フェンチオン、フェントエート、アセフェート、マラチオン等の有機リン系農薬から市販のアセフェート（武田薬品工業社製、オルトラン乳剤）を使用した。アルジカルブ、オキサミル、ピリミカルブ、メソミル、フェノブカルブ等のカーバメイト系農薬から市販のメソミル（ランネート水和剤、メソミル４５％）を、又合成ピレスロイド系農薬としてエトフェンプロックス（トレボン乳剤、２０％）を使用した。
【００１９】
試験例１
１）特殊ＧＹＰ培地を作製した。
２）ケルセン乳剤０．２５５ｍｌを特殊ＧＹＰ液体培地に溶解させ２５０ｍｌにメスアッ  プし、１０２０ｐｐｍ原液を作製した（培養液中最終濃度は１０００ｐｐｍとなる）。３）２）を１０倍希釈法により、培養液中最終濃度が１００ｐｐｍになるもの、１０ｐｐ  ｍになるもの、１ｐｐｍになるもの、０．１ｐｐｍになるものをそれぞれ作製した。ケ  ルセン乳剤０ｐｐｍはＧＹＰ培地のみを使用したものである。
４）試験管に各濃度のケルセン乳剤添加ＧＹＰ培地を４．９ｍｌずつ分注した後、オート  クレーブで滅菌した。
５）活性化した乳酸菌、ＦＯＪＢ２０１、ＦＯＪＢ２０２及びＦＯＪＢ２０３を、各１０  ｍｌの特殊ＧＹＰ液体培地に植菌し、至適生育温度３０℃で、２４時間培養した。
６）５）の培養液を滅菌生理食塩水１９５ｍｌに５ｍｌ分注（４０倍希釈液）し、これか  ら１００μｌを採り、スターラで撹拌しながら４）の４．９ｍｌのケルセン乳剤添加Ｇ  ＹＰ液体培地に分注し、至適生育温度３０℃で、３日間培養した。これを各乳酸菌と各  濃度のケルセン乳剤添加ＧＹＰ液体培地を用いて行った。
７）培養後１日目から３日間、ＦＯＪＢ２０３培養液のそれぞれの増殖をＯＤ660 で測定  した。ＦＯＪＢ２０２及びＦＯＪＢ２０３については、培養後１、２日目は原液を、３  日目は滅菌生理食塩水で１０倍希釈した希釈液を用いてＯＤ660 で測定した。（いずれ  も３検体以上で試験を行った。）その総合結果を表１に示した。
【００２０】
実験例２
ケルセン乳剤に代えてトレボン乳剤を使用した以外は、試験例１と同様にして試験を行った。その総合結果を表２に示した。
実験例３
ケルセン乳剤に代えてオルトラン乳剤を使用し、希釈倍率を０．４〜４０００ｐｐｍとした以外は、試験例１と同様にして試験を行った。その総合結果を表３に示した。
実験例４
ケルセン乳剤に代えてランネート乳剤を使用した以外は、試験例１と同様にして試験を行った。その総合結果を表４に示した。
【００２１】
【表１】
2008273843.tif 000002
【００２２】
【表２】
2008273843.tif 000003
【００２３】
【表３】
2008273843.tif 000004
【００２４】
【表４】
2008273843.tif 000005
【００２５】
表１ないし表４の結果より、ステビア粉末の煮沸抽出液の濃縮発酵液中には耐高糖度性の各種乳酸菌が生存する。そして、ある乳酸菌はある種の農薬の存在下でより顕著に増殖している。この事実は、ステビア抽出濃縮発酵液に生存し得るある種の乳酸菌は、ある種の農薬を資化していると考えられる。本発明者らが分離同定した乳酸菌はステビア濃縮発酵液の中で生存する乳酸菌の一部に過ぎない。また、これらの乳酸菌がステビア濃縮発酵液のすべてのロットから分離されるとも断言できない。しかしながら、ステビアの濃縮発酵液の中には多くの種類の特殊乳酸菌が生存し、相互に共働して膨大な種類の残留農薬を低減していることは確実である。
【００２６】
試験例２
ＦＯＪＢ２０１株について、培養液中で農薬を減少させている効果を測定した。実験は下記の条件で行った。その結果を表５に示した。
培地：      ＧＹＰ液体培地
農薬濃度：  ５８．７５ｐｐｍ（ケルセン乳剤）及び４０６ｐｐｍ（トレボン乳剤）
培養温度：  ３０℃
培養時間：  ０時間及び２４時間
使用機器：  ＧＣＭＳ−ＱＰ２０１０（島津製作所社製）
分析方法：  農作物ＧＣ／ＭＳ一斉分析法
分析条件：  Column; Inert Cap Pestisides  ３０×０．２５ｍｍ, 
Oven; 50℃( 3min) to 200℃ at 10℃ min => 200 ℃ at 3 ℃/min, 
hold 5 min > 230℃ to 300 ℃ at 5 ℃/min, hold 8 min, 
Carrier; helium 1ml ／2min, Inj; 250℃，Det.; FID 280 ℃  
【００２７】
【表５】
2008273843.tif 000006
【実施例１】
【００２８】
（ステビア濃縮発酵液の製造）
春にステビアの株苗を定植し、蕾を持つ前に地上部を刈り取った。刈り取り後、葉と茎に分け、それぞれ７５±３℃で乾燥させた。粉砕機により効率的に抽出が行われる粒度、径１００μｍ以下の大きさとなるように粉砕した。得られたステビア茎粉末とステビア葉粉末を８：２の割合（重量比）で混合し、原末とした。
湯釜に水を張り沸騰させた。水８リットルに対してステビア原末１ｋｇの割合となるように、湯釜にステビア原末を投入し、１時間沸騰させた。加熱を止め、抽出液冷却後、遠心分離機にかけてカスと抽出液を分離した。
【００２９】
抽出液を、減圧下で液量が約１／３となるまで、約２時間かけて濃縮を行った。この結果、ステビア原末１ｋｇ当たり約１．９リットルの濃縮水溶液が得られた。
この濃縮水溶液を、貯蔵タンクに入れ、九州において、常温で約１年間、自然醗酵させた。なお、内圧が一定値を越えると一部開口して内圧を逃がすパッキン付きの蓋を有する容器に入れて熟成した。このようにして得られたステビア濃縮醗酵液は、ｐＨ４．１であり、ブリックス濃度は１１％であった。
【実施例２】
【００３０】
（水稲の栽培と米の残留農薬）
約２０ａの田んぼで後述する従来の方法で稲作を行っていた。今回、この田んぼを１０ａずつに２分し、一方を試験区とし、実施例１で製造したステビア濃縮発酵液を用いて稲作を行った。ステビア濃縮発酵液は箱苗への灌水に用い、中干しの時及び開花後に葉面に散布した。同一条件の他方では慣行区として従来法による稲作を続けた。
共に約６００ｋｇの米を収穫したが、試験区の味がはるかに優れていた。試験区と慣行区の米と土を、鹿児島県環境技術協会に持参し、それぞれの１８１種類の残留農薬の試験に供したが、試験区の土及び試験区で収穫された米からはいずれの農薬も検出されなかった。
【００３１】
一方、慣行区で収穫された米からは、フェノカルブが存在の可能性が高い化合物として検出された。慣行区の田の土からは、エスプロカルブが存在の可能性が極めて高い化合物として検出され、フェノブカルブが存在の可能性の高い化合物として検出された。
試験区及び慣行区において使用した農薬の種類及び時期、更に、ステビア濃縮発酵液使用の量及び回数を表６に示した。
表６より、ステビア濃縮発酵液を噴霧するのみで農作物の残留農薬が除去される事実が、稲作において立証された。
【００３２】
【表６】
2008273843.tif 000007
【実施例３】
【００３３】
（苺の栽培と残留農薬）
苺（さちのか）を用いて栽培を行った。苺栽培においては苗作りが重要であり、良い苗とはクラウンが太く、葉柄が短く葉が大きく分厚く艶のある苗である。このような苗を作るため、春先に苺の親株から伸びる蔓からランナー取りをして、１８０ｍｌのポットに子苗を分けつしていく。置肥は行わず、ステビア濃縮発酵液の８００倍希釈液に液肥を混ぜて少量ずつを回数多く散布して育成した。以後、ステビア濃縮発酵液の散布はユニパケーミン（研光通商社製、海藻液肥、強力なキレート効果によりリン酸の利用を促進する）と珪酸を配合した溶液で４００倍から５０００倍に薄めて使用した。
【００３４】
葉数２〜３枚に調整した良好な苗を栽培した。苺の品質は苗によって決まるため慎重に栽培した。蔓の切り離しは最後に取った鉢から根が出た時とする。８月以降はポットの小苗に、ステビア濃縮発酵液の８００倍希釈液を小まめに散布した。
定植は９月初旬に行い、ポットから取り出した苗の根をステビア濃縮発酵液の１０００倍〜２０００倍液に浸漬した後定植した。定植時３枚だった葉は定植後、週に１枚の割りで葉数が増え、４枚程増えた後花芽がくる。花は頂花が先ず咲き、次にえき花が更に２番花、３番花……と順次開花していく。開花後３０日で結実する。定植後は頻繁にステビア濃縮発酵液を散水した。
【００３５】
１１月２５日から収穫が始まり、７月１０日まで続いた。直径４ｃｍもある大玉の苺が得られ、総収量は４トン／１０ａであった。
５月に殺菌剤を３日に１回、防ダニ剤を３日に１回散布し、ステビア濃縮発酵液も３日に１回散布していた。市場流通している苺について、公的期間で検査した結果、５８項目の残留農薬検査ですべて検出されなかった。なお、検出限界は０．０１ｐｐｍである。ちなみに、この苺は農薬散布後、ステビア濃縮発酵液を散布することなく収穫したものであった。
この事実からステビア濃縮発酵液を散布して栽培していると、農薬を使用しても、農薬の効果を削減することなく、残留農薬は除去されるものと推量する。
【実施例４】
【００３６】
（レモンの栽培及び残留農薬の測定）
常法により、レモンをビニールハウス内で栽培した。具体的には、１２月にビニールを被せ、ステビア堆肥をやり、また、オマイト（有効成分としてＢＰＰＳ（プロパルギット）を含有する亜硫酸エステル系殺虫剤）、モレスタン（有効成分としてキノキサリン系化合物を含有する殺虫剤）及び木酢液を散布した。３月には、実施例１で製造されたステビア濃縮醗酵液の希釈水溶液を、４月にはケルセンと木酢液を、５月にはモスピラン（有効成分としてアセタミプリドを含有するネオニコチノイド系殺虫剤）と木酢液を散布した。７月にビニールを除去し、実施例１で製造されたステビア濃縮醗酵液の希釈水溶液とマイトコーネ（有効成分としてビフェナゼートを含有する殺ダニ剤）を散布した。８月に収穫を開始した。また、９月にも、実施例１で製造されたステビア濃縮発酵液の希釈水溶液を散布した。なお、ステビア堆肥とは、牛糞にステビアの茎乾燥物と葉乾燥物を加えて調製した堆肥である。
【００３７】
収穫されたレモンに残留した農薬の量を測定したところ、塩素系農薬、カーバメイト系農薬、キャプタン系農薬、有機リン系農薬、防黴剤であるオルトフェニルフェノール、ジフェニール、チアペンタゾール及びイマザリルの何れもが不検出であった。
また、各農薬の検出限界は０．０１ｐｐｍ、オルトフェニルフェノールの検出限界は０．０００５ｇ／ｋｇ、ジフェニールの検出限界は０．００１ｇ／ｋｇ、チアペンタゾールとイマザリルの検出限界は０．０００１ｇ／ｋｇであった。
【実施例５】
【００３８】
（大葉の栽培及び残留農薬の測定）
常法により大葉を栽培した。大葉は一般に病害虫に弱く、多種大量の農薬を使用しなければ市場に供することができない。本実施例においては、葉が展開した後、週に２回の割合で実施例１で製造されたステビア濃縮醗酵液の１，０００倍希釈水溶液を葉面に散布した以外は、従来通りの方法で育成し、葉を摘み取った。
【００３９】
摘み取った葉に残留した農薬の量を測定したところ、プロミシドン（ジカルボキシイミド系殺菌剤）、ジェトフェンカルブ（Ｎ−フェニルカーバメート系殺菌剤）、マラチオン（有機リン系殺虫剤）、フェノブカルブ（カーバメイト系殺虫殺菌剤）、クロルピリホス（有機リン系殺虫剤）、ジベルメトリンの何れもが不検出であった。
なお、各農薬の検出限界は、フェノブカルブが０．０１μｇ／ｍｌ、クロルピリホスが０．０５ｐｐｍで、それ以外は０．０１ｐｐｍであった。
【配列表】
2008273843000001.app