(57)【要約】【課題】癌の診断に用いる指標の基準値をユーザによって変更することでき、常に精度の高い基準値を設定して癌の診断の精度を高めることが可能となる癌の診断支援装置を提供する。【解決手段】被検癌患者から採取した悪性腫瘍を用いて当該患者に対する癌の診断を支援する装着。前記悪性腫瘍から所定の項目を測定する測定手段と、測定値と比較することにより癌の診断支援情報を取得するための基準値を記憶する第１記憶手段と、前記測定手段により得られた測定値と前記第１記憶手段に記憶された基準値とを比較して、癌の診断支援情報を取得する診断情報取得手段と、得られた診断支援情報を出力する第１出力手段と、ユーザから基準値の変更を受け付ける変更手段と、前記第１記憶手段に記憶された基準値を、変更された基準値へ更新する更新手段とを備えている。  【選択図】      図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検癌患者から採取した悪性腫瘍を用いて当該患者に対する癌の診断を支援する装置であって、
前記悪性腫瘍から所定の項目を測定する測定手段と、
測定値と比較することにより癌の診断支援情報を取得するための基準値を記憶する第１記憶手段と、
前記測定手段により得られた測定値と前記第１記憶手段に記憶された基準値とを比較して、癌の診断支援情報を取得する診断支援情報取得手段と、
得られた診断支援情報を出力する第１出力手段と、
ユーザから基準値の変更を受け付ける変更手段と、
前記第１記憶手段に記憶された基準値を、変更された基準値へ更新する更新手段と
を備えることを特徴とする癌の診断支援装置。
【請求項２】
他の癌患者の前記所定の項目の測定値と当該他の癌患者の悪性腫瘍摘出後の臨床情報とが対応付けられたサンプルデータを記憶する第２記憶手段と、
この第２記憶手段に記憶されたサンプルデータを出力する第２出力手段と、
を更に備え、
前記第２出力手段がサンプルデータを出力しているときに前記変更手段が基準値の変更を受け付けるように構成されている請求項１に記載の癌の診断支援装置。
【請求項３】
前記第２出力手段が、前記第２記憶手段に記憶されたサンプルデータの各測定値及び各臨床情報と、前記第１記憶手段に記憶された基準値との関係を示す画面を出力し、且つ
前記変更手段が、前記画面において基準値の変更を受け付けるように構成されている請求項２に記載の癌の診断支援装置。
【請求項４】
前記画面が、前記測定値及び前記臨床情報と、前記基準値との関係を示すグラフを含んでおり、
前記基準値が、前記グラフ上において移動可能な線として表示され、且つ
前記変更手段が、ユーザから前記グラフ上の前記基準値の線の移動指示を受け付けることにより、当該基準値の変更を受け付けるように構成されている請求項３に記載の癌の診断支援装置。
【請求項５】
前記第２記憶手段に記憶されたサンプルデータの各臨床情報を変更するためのデータ変更手段を更に備える請求項２〜４のいずれかに記載の癌の診断支援装置。
【請求項６】
前記第２記憶手段に記憶されたサンプルデータに、前記所定の項目の測定値及び前記臨床情報を新たに追加するためのデータ追加手段を更に備える請求項２〜５のいずれかに記載の癌の診断支援装置。
【請求項７】
前記臨床情報が、再発の有無、抗癌剤感受性及び生存率からなる群より選ばれる少なくとも１つである請求項２〜６のいずれかに記載の癌の診断支援装置。
【請求項８】
前記所定の項目が、細胞周期タンパク質の発現及び／又は活性に関する項目を含む請求項１〜７のいずれかに記載の癌の診断支援装置。
【請求項９】
前記細胞周期タンパク質が、サイクリン依存性キナーゼである請求項８に記載の癌の診断支援装置。
【請求項１０】
前記測定手段が、
悪性腫瘍から第１のサイクリン依存性キナーゼ（第１ＣＤＫ）及び第２のサイクリン依存性キナーゼ（第２ＣＤＫ）の各活性値を測定する活性測定手段と、
悪性腫瘍から前記第１ＣＤＫ及び第２ＣＤＫの各発現量を測定する発現測定手段と、
前記活性測定手段により得られた第１ＣＤＫの活性値と前記発現測定手段により得られた第１ＣＤＫの発現量との比（第１比活性）、及び、前記活性測定手段により得られた第２ＣＤＫの活性値と前記発現測定手段により得られた第２ＣＤＫの発現量との比（第２比活性）を算出する比活性算出手段と、
この比活性算出手段により得られた第１比活性と第２比活性との比（比活性比）を算出する比活性比算出手段とを含んでおり、
前記診断支援情報取得手段が、前記測定手段により得られた比活性比と前記第１記憶手段に記憶された基準値とを比較して癌の診断支援情報を取得するように構成されている請求項９に記載の癌の診断支援装置。
【請求項１１】
前記癌の診断支援情報が、被検癌患者の悪性腫瘍摘出後の再発リスク又は抗癌剤感受性である請求項１〜１０のいずれかに記載の癌の診断支援装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は癌の診断支援装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、癌診断として、血清中の腫瘍マーカーを調べる血清診断や、生検（バイオプシイ）による組織診、細胞診が知られている。しかし、これらは信頼性が低いか、又は個々人の判断や医療機関の判定にバラツキがあることから、近年、診断医によるバラツキが少ない癌の画一的診断方法として、生体で発現される遺伝子やタンパク質に基づく分子診断が検討されている。そして、タンパク質に基づく分子診断としては、例えば、サイクリン依存性キナーゼ（以下、単に「ＣＤＫ」ともいう）を利用した方法が種々提案されている（例えば、特許文献１〜４参照）。
【０００３】
特許文献１には、試料のＣＤＫ１及びＣＤＫ４の発現量、さらには必要に応じてｐ５３の突然変異状態を指標とする診断方法が記載されている。また、特許文献２には、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、サイクリン依存性キナーゼインヒビター（ＣＤＫインヒビター）の過剰発現を指標とする癌及び前癌状態の診断方法が記載されている。さらに、特許文献３には、ＣＤＫの活性値を蛍光を用いて測定する方法、及びその方法を用いて癌を診断する方法が記載されている。また、特許文献４には、ＣＤＫ１及びＣＤＫ２の活性値と発現量との比を指標として癌の悪性度を判定する方法が記載されている。
【０００４】
【特許文献１】特表２００２−５０４６８３号公報
【特許文献２】特表２００２−５１９６８１号公報
【特許文献３】特開２００２−３３５９９７号公報
【特許文献４】国際公開第２００５／１１６２４１号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ＣＤＫの発現量や比活性など、特定の測定値を指標として用いて判定を行なう場合、通常、前記指標に特定の基準値を設定し、この基準値と、患者から採取した試料を測定して得られた測定値との比較に基づいて各種の判定が行われる。
【０００６】
癌の診断の場合は、多数の患者から、前述した指標に係る測定値の情報と、リンパ節転移の有無、術後療法（無治療、ホルモン療法、化学療法など）の内容、再発の有無、癌を摘出してから再発までの日数などの臨床情報とを取得し、これらの情報（サンプルデータ）をライブラリー情報として集積し、このライブラリー情報に基づいて最も精度よく判定できる値が基準値として設定される。
すなわち、前記指標の基準値は必ずしも確定又は固定されているものではなく、ライブラリー情報が更新、追加されることによって、前記基準値を変更する必要が生じる場合もある。
【０００７】
本発明は、このような事情に鑑みてなされたものであり、癌の診断に用いる指標の基準値をユーザによって変更することできる癌の診断支援装置を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の癌の診断支援装置は、被検癌患者から採取した悪性腫瘍を用いて当該患者に対する癌の診断を支援する装置であって、
前記悪性腫瘍から所定の項目を測定する測定手段と、
測定値と比較することにより癌の診断支援情報を取得するための基準値を記憶する第１記憶手段と、
前記測定手段により得られた測定値と前記第１記憶手段に記憶された基準値とを比較して、癌の診断支援情報を取得する診断支援情報取得手段と、
得られた診断支援情報を出力する第１出力手段と、
ユーザから基準値の変更を受け付ける変更手段と、
前記第１記憶手段に記憶された基準値を、変更された基準値へ更新する更新手段と
を備えることを特徴としている。
【０００９】
本発明の癌の診断支援装置は、前記変更手段を用いてユーザ自らが癌の診断支援情報を取得するための基準値の設定を変更することができる。これにより、ユーザは常に精度の高い基準値を設定することが可能になり、その結果、癌の診断の精度を高めることができる。
【００１０】
また、診断支援装置は、他の癌患者の前記所定の項目の測定値と当該他の癌患者の悪性腫瘍摘出後の臨床情報とが対応付けられたサンプルデータを記憶する第２記憶手段と、
この第２記憶手段に記憶されたサンプルデータを出力する第２出力手段と、
を更に備えることができ、
前記第２出力手段がサンプルデータを出力しているときに前記変更手段が基準値の変更を受け付けるように構成することができる。
このような構成の診断支援装置は、複数の癌患者の所定項目の測定値と当該複数の癌患者の悪性腫瘍摘出後の臨床情報とが対応付けられたサンプルデータを蓄積しており、この蓄積されたサンプルデータに基づいて、前記変更手段を用いてユーザが癌の診断支援情報を取得するための基準値の設定を変更することができる。
【００１１】
前記第２出力手段が、前記第２記憶手段に記憶されたサンプルデータの各測定値及び各臨床情報と、前記第１記憶手段に記憶された基準値との関係を示す画面を出力し、且つ
前記変更手段が、前記画面において基準値の変更を受け付けるように構成することができる。
【００１２】
前記画面が、前記測定値及び前記臨床情報と、前記基準値との関係を示すグラフを含んでおり、
前記基準値が、前記グラフ上において移動可能な線として表示され、且つ
前記変更手段が、ユーザから前記グラフ上の前記基準値の線の移動指示を受け付けることにより、当該基準値の変更を受け付けるように構成することができる。
【００１３】
本発明の癌の診断支援装置は、前記第２記憶手段に記憶されたサンプルデータの各臨床情報を変更するためのデータ変更手段を更に備えることができる。また、前記第２記憶手段に記憶されたサンプルデータに、前記所定の項目の測定値及び前記臨床情報を新たに追加するためのデータ追加手段を更に備えることができる。
このような構成の診断支援装置は、追加・変更により更新されたサンプルデータに基づいても、前記変更手段を用いてユーザが基準値の設定を変更することができる。
前記臨床情報を、再発の有無、抗癌剤感受性及び生存率からなる群より選ばれる少なくとも１つとすることができる。
【００１４】
前記所定の項目が、細胞周期タンパク質の発現及び／又は活性に関する項目を含むものとすることができる。また、前記細胞周期タンパク質を、サイクリン依存性キナーゼとすることができる。
【００１５】
前記測定手段が、
悪性腫瘍から第１のサイクリン依存性キナーゼ（第１ＣＤＫ）及び第２のサイクリン依存性キナーゼ（第２ＣＤＫ）の各活性値を測定する活性測定手段と、
悪性腫瘍から前記第１ＣＤＫ及び第２ＣＤＫの各発現量を測定する発現測定手段と、
前記活性測定手段により得られた第１ＣＤＫの活性値と前記発現測定手段により得られた第１ＣＤＫの発現量との比（第１比活性）、及び、前記活性測定手段により得られた第２ＣＤＫの活性値と前記発現測定手段により得られた第２ＣＤＫの発現量との比（第２比活性）を算出する比活性算出手段と、
この比活性算出手段により得られた第１比活性と第２比活性との比（比活性比）を算出する比活性比算出手段とを含んでおり、
前記診断支援情報取得手段が、前記測定手段により得られた比活性比と前記第１記憶手段に記憶された基準値とを比較して癌の診断支援情報を取得するように構成することができる。
【００１６】
前記癌の診断支援情報を、被検癌患者の悪性腫瘍摘出後の再発リスク又は抗癌剤感受性とすることができる。
【発明の効果】
【００１７】
本発明の癌の診断支援装置によれば、癌の診断に用いる指標の基準値をユーザによって変更することでき、常に精度の高い基準値を設定して癌の診断の精度を高めることが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
以下、添付図面を参照しつつ、本発明の癌の診断支援装置（以下、単に「診断支援装置」ともいう）の実施の形態を詳細に説明する。
本実施の形態の診断支援装置は、癌患者から採取した悪性腫瘍を用いて所定の項目を測定し、得られた測定値に基づいて癌の診断支援情報を取得することができる。
悪性腫瘍とは、他の組織に浸潤又は転移し、身体の各所で増大することで生命を脅かす腫瘍である。悪性腫瘍には、上皮組織由来の悪性腫瘍である癌腫、及び非上皮性組織由来の悪性腫瘍である肉腫が含まれる。具体的には、乳、肺、肝臓、胃、大腸、膵臓、子宮、精巣、卵巣、甲状腺、副甲状腺、リンパ系統などの位置にできる悪性腫瘍が挙げられる。また、悪性腫瘍は、乳癌、肺癌、肝臓癌、胃癌、大腸癌、膵臓癌、前立腺癌などの癌患者から採取することができる。
【００１９】
癌の診断支援情報とは、癌の悪性度や抗癌剤の感受性などが挙げられる。癌の悪性度とは、具体的には、転移のしやすさ、再発のしやすさ、予後の悪さなどが挙げられる。
診断支援装置において測定される所定の項目は、悪性腫瘍における遺伝子及び／又はタンパク質に関する測定値であれば特に限定されず、遺伝子やタンパク質の種類及び測定項目の種類は、癌の種類や取得する診断支援情報などによって適宜選択される。
【００２０】
所定の項目としては、例えば、上記で示した特許文献１（特表２００２−５０４６８３号公報）、特許文献２（特表２００２−５１９６８１号公報）、特許文献３（特開２００２−３３５９９７号公報）、特許文献４（国際公開第２００５／１１６２４１号パンフレット）で記載されているＣＤＫに関する測定値が挙げられる。具体的には、ＣＤＫの発現量、ＣＤＫの活性値、ＣＤＫの活性値と発現量との比（比活性比）などが挙げられる。ＣＤＫ以外にも、特開２００５−５８１１３号公報や特開２００６−２２３３０３号公報などで、癌の再発リスクを予測するのに利用される遺伝子の発現量を所定の項目としてもよい。また、国際公開第２００５／００７８４６号パンフレットや特開２００５−３４１８６２号公報などで、抗癌剤の感受性を予測するのに利用されている遺伝子の発現量を所定の項目としてもよい。
【００２１】
以下に、本実施の形態の診断支援装置として、癌患者から採取した悪性腫瘍を用いてＣＤＫの発現量や活性値を測定し、得られた測定値に基づいて癌の悪性度（再発リスクの高さ）の判定を行う診断支援装置を例に挙げて説明する。
当該診断支援装置の説明に先立って、まず、［１］ＣＤＫを用いた癌の悪性度を判定する方法について説明をする。
【００２２】
［１］ＣＤＫを用いた癌の悪性度を判定する方法
癌の悪性度を判定する方法は、悪性腫瘍を含む組織の２種以上のサイクリン依存性キナーゼの発現量及び活性値を測定し、第１のサイクリン依存性キナーゼの活性値と発現量との比及び第２のサイクリン依存性キナーゼの活性値と発現量との比を含むＣＤＫプロファイルに基づいて、当該腫瘍組織の悪性度を判定するものである。腫瘍細胞を含む組織にかかる判定方法を適用することにより、腫瘍細胞を含む組織の性質、癌の悪性度を診断することができる。なお、ＣＤＫプロファイルとは、ある組織が有する少なくとも１種類のＣＤＫの活性値と発現量との比（例えば比活性）及び／又は複数のＣＤＫの活性値、発現量より計算される数値（例えば、第１ＣＤＫの活性値と発現量との比（Ａ１）と、第２ＣＤＫの活性値と発現量との比（Ａ２）との比（例えば、Ａ１／Ａ２又はＡ２／Ａ１）など）を含む情報のことである。
【００２３】
前記判定方法では、上記で示したような悪性腫瘍を用いることができる。また、腫瘍細胞の悪性度とは、具体的には、転移のしやすさ、再発のしやすさ、予後の悪さなどが挙げられる。
【００２４】
ここで、再発とは、悪性腫瘍を摘出するために臓器を部分切除した後、残存臓器に同じ悪性腫瘍が再現する場合、及び原発巣から腫瘍細胞が分離して遠隔組織（遠隔臓器）へ運ばれ、そこで自立的に増殖する場合（転移再発）をいう。一般に５年以内に再発する可能性がある場合に「再発しやすい」という。それは、５年以内に再発が認められる患者の死亡率は高く、ゆえに、摘出手術後５年以内の再発を予測することは臨床的に意義があるからである。また、ステージ分類ではステージＩＩＩは再発率５０％であり、ステージＩＩ（再発率２０％）に比して再発しやすい。予後とは、疾病の経過及び終末を予知することで、５年又は１０年後の死亡率が高い程予後は悪く、例えばステージＩＩＩは死亡率５０％であり、ステージＩＩ（死亡率２０％）よりも予後が悪い。
【００２５】
サイクリン依存性キナーゼとは、サイクリンと結合して活性化される酵素群の総称であり、その種類に応じて、細胞周期の特定時期で機能している。また、ＣＤＫインヒビターとは、サイクリン・ＣＤＫ複合体に結合し、その活性を阻害する因子群の総称である。
【００２６】
ここで、細胞が増殖を開始し、ＤＮＡ複製、染色体の分配、核分裂、細胞質分裂などの事象を経て、２つの娘細胞となって出発点に戻るまでのサイクルである細胞周期は、図１３に示されるように、Ｇ１期、Ｓ期、Ｇ２期、Ｍ期の４期に分けられる。Ｓ期はＤＮＡの複製期であり、Ｍ期は分裂期である。Ｇ１期は有糸分裂の完了からＤＮＡ合成の開始までの間で、Ｍ期に入るための準備点検期である。Ｇ１期にある臨界点（動物細胞ではＲ点）を過ぎると、細胞周期は始動し、通常途中で止まることなく、一巡する。Ｇ２期は、ＤＮＡ合成の終了から有糸分裂の開始の間である。細胞周期の主なチェックポイントは、Ｇ１期からＳ期にはいる直前、Ｇ２期から有糸分裂への入り口である。特にＧ１期チェックポイントはＳ期開始の引き金を引くため、重要である。Ｇ１期のある点を過ぎると、細胞は増殖シグナルがなくなっても、増殖を停止することなく、Ｓ→Ｇ２→Ｍ→Ｇ１と細胞周期を進行させるからである。なお、増殖を停止した細胞で、Ｇ１期のＤＮＡ含量をもった休止期（Ｇ０）があり、細胞周期からはずれた状態にある。増殖誘導により細胞周期内のＧ１期よりやや長い時間の後にＳ期へ進行することができる。
【００２７】
前記判定方法で用いられるサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）は、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、サイクリンＡ依存性キナーゼ、サイクリンＢ依存性キナーゼ、、サイクリンＤ依存性キナーゼ、及びサイクリンＥ依存性キナーゼからなる群より選ばれることが好ましい。サイクリンＡ依存性キナーゼとは、サイクリンＡと結合して活性を示すＣＤＫのことで、現在判明しているところでは、ＣＤＫ１及びＣＤＫ２の双方をいう。またサイクリンＢ依存性キナーゼとはサイクリンＢと結合して活性を示すＣＤＫのことで、現在判明しているところではＣＤＫ１が該当する。サイクリンＤ依存性キナーゼとはサイクリンＤと結合して活性を示すＣＤＫのことで、現在判明しているところではＣＤＫ４及びＣＤＫ６の双方が該当する。サイクリンＥ依存性キナーゼとはサイクリンＥと結合して活性を示すＣＤＫのことで、現在判明しているところではＣＤＫ２が該当する。
【００２８】
これらのＣＤＫは、現在判明しているところ、表１に示されるように、それぞれ対応するサイクリンと結合したサイクリン・ＣＤＫ複合体（以下、「活性型ＣＤＫ」ともいう）となって、表１に示されるような細胞周期の特定時期を活性化している。例えば、ＣＤＫ１はサイクリンＡ又はＢと、ＣＤＫ２はサイクリンＡ又はＥと、ＣＤＫ４及びＣＤＫ６はサイクリンＤ１、Ｄ２、又はＤ３と結合して活性型となる。一方、ＣＤＫ活性は表１に示されるようなＣＤＫインヒビターによって活性が阻害されることもある。例えば、ｐ２１はＣＤＫ１，２を阻害、ｐ２７はＣＤＫ２，４，６を阻害、ｐ１６がＣＤＫ４，６を阻害する。
【００２９】
【表１】
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【００３０】
前記ＣＤＫのうち、２種類以上のＣＤＫの発現量と活性値を測定し、各ＣＤＫにおけるこれらの比（すなわち、下記式で表されるＣＤＫ比活性又はその逆数）を求めて、ＣＤＫプロファイルを得る。ＣＤＫの比活性＝ＣＤＫ活性値／ＣＤＫ発現量  従って、ＣＤＫプロファイルとしては、具体的には、例えば、ＣＤＫ比活性を含むプロファイル（ＣＤＫ比活性プロファイル）やＣＤＫ比活性の逆数を含むプロファイル（ＣＤＫ比活性の逆数プロファイル）などが挙げられる。
【００３１】
ＣＤＫ活性値とは、特定のサイクリンと結合して、どれだけの基質（例えば、活性型ＣＤＫ１、活性型ＣＤＫ２はヒストンＨ１、活性型ＣＤＫ４及び活性型ＣＤＫ６はＲｂ（網膜芽細胞腫タンパク、Ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｐｒｏｔｅｉｎ））をリン酸化するかというキナーゼ活性のレベル（単位をＵ（ユニット）で現す）をいい、従来より知られている酵素活性測定方法で測定することができる。具体的には、測定試料の細胞溶解液から活性型ＣＤＫを含む試料を調製し、３２Ｐ標識したＡＴＰ（γ−〔３２Ｐ〕−ＡＴＰ）を用いて、基質タンパク質に３２Ｐを取り込ませ、標識されたリン酸化基質の標識量を測定し、標準品で作成された検量線をもとに定量する方法がある。また放射性物質の標識を用いない方法としては、特開２００２−３３５９９７号公報に開示の方法が挙げられる。この方法は、測定試料の細胞可溶化液から、目的の活性型ＣＤＫを含む試料を調製し、アデノシン５’−Ｏ−（３−チオトリホスフェート）（ＡＴＰ−γＳ）と基質を反応させて、該基質タンパク質のセリン又はスレオニン残基にモノチオリン酸基を導入し、導入されたモノチオリン酸基の硫黄原子に標識蛍光物質又は標識酵素を結合させることによって基質タンパク質を標識し、標識されたチオリン酸基質の標識量（標識蛍光物質を用いた場合には蛍光量）を測定し、標準品で作成された検量線に基づいて定量する方法である。
【００３２】
活性測定に供する試料は、測定対象となる悪性腫瘍を含む組織の可溶化液から目的のＣＤＫを特異的に採取することにより調製する。この場合、目的のＣＤＫに特異的な抗ＣＤＫ抗体を用いて調製してもよいし、特定のサイクリン依存性キナーゼ（例えばサイクリンＡ依存性キナーゼ、サイクリンＢ依存性キナーゼ、サイクリンＥ依存性キナーゼ）の活性測定の場合には、抗サイクリン抗体を用いて調製する。いずれの場合も活性型ＣＤＫ以外のＣＤＫが試料に含まれることになる。例えばサイクリン・ＣＤＫ複合体にＣＤＫインヒビターが結合した複合体も含まれる。また、抗ＣＤＫ抗体を用いた場合には、ＣＤＫ単体、ＣＤＫとサイクリン及び／又はＣＤＫインヒビターの複合体、ＣＤＫとその他の化合物との複合体などが含まれる。従って、活性値は、活性型、不活性型、各種競合反応が混在する状態下で、リン酸化された基質の単位（Ｕ）として測定される。
【００３３】
ＣＤＫ発現量とは、細胞可溶化液から測定される目的のＣＤＫ量（分子個数に対応する単位）であって、タンパク質混合物から目的のタンパク質量を測定する従来公知の方法で測定できる。例えば、ＥＬＩＳＡ法、ウェスタンブロット法などを使用してもよいし、特開２００３−１３０８７１号公報に開示の方法で測定することもできる。目的のタンパク質（ＣＤＫ）は、特異的抗体を用いて捕捉すればよい。例えば、抗ＣＤＫ１抗体を用いることにより、細胞内に存在するＣＤＫ１のすべて（ＣＤＫ単体、ＣＤＫとサイクリン及び／又はＣＤＫインヒビターの複合体、ＣＤＫとその他の化合物との複合体を含む）を捕捉できる。
【００３４】
従って、前記式により算出される比活性は、細胞に存在しているＣＤＫのうち、活性を示すＣＤＫの割合に相当し、判定対象である悪性腫瘍細胞の増殖状態に基づくＣＤＫ活性レベルといえる。このようにして求められるＣＤＫ比活性は、測定試料調製方法に依存しない。特に生検材料から調製される測定試料（細胞可溶化液）は、実際に採取された組織中に含まれる非細胞性組織、例えば細胞外基質の多寡による影響を受けやすい。従って、このような影響を控除した比活性又はその逆数を用いる意義は大きく、従来の単なる活性値と比べて、臨床的性格との相関性が高い。
【００３５】
２種類以上のＣＤＫ比活性又はその逆数を含むＣＤＫプロファイルを知ることにより、いずれのＣＤＫ活性が優位になっているかを知ることができ、これにより細胞周期のいずれの時期にある細胞割合がどの程度であるか、又はいずれの時期の細胞割合が優勢であるかなどを知ることができる。
【００３６】
比活性を測定するＣＤＫの種類は、特に限定されず、適宜選択すればよい。一般に、癌細胞は正常な増殖制御を逸脱して増殖が活発に行われていることから、Ｓ期、Ｇ２期にある細胞割合が多いと考えられ、このような場合に癌化していると考えられる。また、このような癌は、進行が早く、悪性であるといえる。さらに、異数媒体性は、異常なＭ期を経過したか、又はＭ期を経ずにＧ１期へ進んで、Ｓ期に入ったときに起ると考えられているため、Ｍ期に存在する細胞割合が少ないことも悪性であるといえる。従って、第１のサイクリン依存性キナーゼとしてＣＤＫ１、第２のサイクリン依存性キナーゼとしてＣＤＫ２を使用し、ＣＤＫ１比活性の大きさに従い群に分類し、類似したＣＤＫ１比活性を持つ群の中ではＣＤＫ２比活性値がＳ期の細胞比率を反映する値となる。Ｓ期にある細胞が多い場合、当該細胞が構成細胞となっている組織が臨床的に悪性、すなわち転移しやすい予後の悪い悪性の癌であると判定することができる。
【００３７】
なお、ＣＤＫの種類、判明している作用から、２種類以上のＣＤＫ比活性を含むＣＤＫ比活性プロファイルにより細胞周期の特定時期の存在割合を推測し、細胞の悪性度を判定してもよいし、予め対応する正常組織細胞を標準細胞として測定した２種類以上のＣＤＫの比活性プロファイルを求め、正常細胞との比較から悪性度を判定してもよい。  ＣＤＫ比活性プロファイルとして、２種類のサイクリン依存性キナーゼの比活性の比を採用することが好ましい。この場合、２種類のサイクリン依存性キナーゼの比活性の比を、該比に対応する所定の基準値ないしは閾値と比較することにより、悪性度を判定する。
【００３８】
前記判定方法で用いられる基準値は、測定対象の悪性腫瘍の種類などにより適宜決められる。基準値の設定は、癌の悪性度に関する多数の細胞、個体のデータベースと、当該細胞のＣＤＫ比活性のデータベースとから、悪性度に対してボーダーとなる比活性の比の値を選択すればよい。例えば、癌の悪性度について病理医の判定が既知の複数の患者から採取された腫瘍細胞について、相関性があるとされる２種類のＣＤＫの比活性の比をそれぞれ求め、求められた比を小さい順に並べて集団を２等分できる中央値を基準値とすることができる。
【００３９】
［２］診断支援装置
つぎに、前述した［１］ＣＤＫを用いた癌の悪性度を判定する方法を好適に実施することができる、本発明の一実施の形態に係る診断支援装置について説明をする。
【００４０】
図１は本発明の一実施の形態に係る診断支援装置Ａの斜視説明図である。この診断支援装置Ａは、タンパク質（本実施の形態においては、組織に含まれるサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ））の活性値及び発現量の測定を行うものであり、装置本体部２０の前方部分に配設された検出部４、チップセット部１、第１試薬セット部５及び第２試薬セット部６、前記装置本体部２０の後方部分に配設された活性測定ユニット２、廃液を収容するための廃液槽７及びピペットを洗浄するためのピペット洗浄槽８、前記装置本体部２０の上方に配設されており、ピペットを３方向（Ｘ方向、Ｙ方向及びＺ方向）に移動させることができる分注機構部３、前記装置本体部２０の背部に配設された流体部９及び本体制御部１０、並びに本体制御部１０と通信可能に接続されたデータ処理部であるパーソナルコンピュータ１２とで主に構成されている。また、本実施の形態の診断支援装置Ａには、純水タンク１３、洗浄液タンク１４、廃液タンク１５及び空圧源１１が設けられている。純水タンク１３には、測定終了時の流路洗浄用純水が貯留されており、配管２１により流体部９に接続されており、洗浄液タンク１４にはピペットを洗浄する洗浄液が貯留されており、配管２２によりピペット洗浄槽８に接続されており、さらに廃液を収容するための廃液タンク１５は配管２３により廃液槽７に接続されている。さらに、診断支援装置Ａには、生体試料から当該診断支援装置Ａで処理可能な検体を得るための可溶化装置Ｂが並設されている。
以下、可溶化装置Ｂ及び診断支援装置Ａについて順に説明をする。
【００４１】
［可溶化装置］
可溶化装置Ｂは、診断支援装置Ａによる処理に先立って、患者から摘出した組織などの生体試料から、診断支援装置Ａで処理可能な液状の検体を調製するものであり、筐体部３０、この筐体部３０の前面上方に配置された操作部３１、前記生体試料を押し付けたり、すりつぶしたりするための一対のペッスル３４を備えた駆動部３２、及び前記生体試料が収容されるエッペンチューブ３５がセットされる検体セット部３３とで主に構成されている。
【００４２】
前記駆動部３２は、ペッスル３４を上下動させるとともに当該ペッスル３４に回転運動を与えることができ、これによりエッペンチューブ３５内に注入された生体試料が押し付けられたり、すりつぶされたりする。そして、前記筐体部３０内には、かかる駆動部３２の動作を制御する制御部（図示せず）が内蔵されている。
前記操作部３１には、操作ボタン３１ａ、運転ランプ３１ｂ、装置の状態やエラーメッセージなどを表示するための表示部３１ｃが配設されている。また、検体セット部３３内には、図示しない冷却手段が配設されており、当該検体セット部３３上面の凹所にセットされたエッペンチューブ内の生体試料を一定の温度に保っている。
可溶化装置Ｂにより可溶化され、さらに図示しない遠心分離機により遠心分離処理された生体試料の上澄み液は、所定の検体容器に採取されて診断支援装置Ａの第１試薬セット部５にセットされる。
【００４３】
［第１試薬セット部］
第１試薬セット部５内には、前記検体セット部３３と同様に図示しない冷却手段が配設されており、当該第１試薬セット部５上面の凹所にセットされるスクリューキャップなどの容器内の検体や、ＣＤＫ１抗原（キャリブレーション１）、ＣＤＫ２抗原（キャリブレーション２）などの各種抗原や、蛍光標識されたＣＤＫ１抗体、蛍光標識されたＣＤＫ２抗体などの各種蛍光標識化抗体などを一定の温度に保っている。本実施の形態では、縦５列、横４列、合計２０箇所の凹所が設けられており、最大２０個のスクリューキャップなどの容器をセットすることができるようになっている。
【００４４】
［第２試薬セット部］
前記第１試薬セット部５の隣りには、第２試薬セット部６が配設されている。この第２試薬セット部６には、前記第１試薬セット部５と同様に複数の凹所が形成されており、これら凹所内にバッファー、基質溶液、蛍光増強試薬などが入れられた、エッペンチューブやスクリューキャップなどの容器がセットされる。
また、診断支援装置Ａによる処理に先立って、チップセット部１にタンパク固相用チップがセットされるとともに、活性測定ユニット２にカラムがセットされる。
【００４５】
［チップセット部］
チップセット部１は、アルミニウム製のブロックからなっており、図２〜３に示されるように、上面にタンパク固相用チップ１０１を載置するための凹部１０２を有するとともに、底部に３つの吸引口１０３を有している。より詳細には、チップセット部１は、上面に長方形の第１凹部１０２と、この第１凹部１０２の底部に同じく長方形の３つの第２凹部１０４とを備えている。この第２凹部１０４は、隔壁１０５により互いに独立した状態にされており、前記タンパク固相用チップ１０１をチップセット部１に載置したとき、互いに非連通状態になる。前記第１凹部１０２の底面には前記第２凹部１０４の周縁に長方形の枠状のゴム製弾性ガスケット１０６が配設されている。
【００４６】
前記第２凹部１０４は、その底部に、十字形の溝１０７と、底部中心に吸引口１０３とを備え、前記溝１０７の溝底は第２凹部１０４の周縁から中心に向かって深くなるように傾斜している。吸引口１０３は、外部の吸引用空圧源１１へ接続するために設けられたニップル１０８と連通している。このニップル１０８には、一端が前記吸引用空圧源１１側に接続されたチューブ１０９の他端が接続されている。このチューブ１０９には、開閉バルブ１１０が配設されている。
そして、後に詳述するタンパク固相用チップ１０１は、第１凹部１０２の底面ガスケット１０６を介して水平に装填される。タンパク固相用チップ１０１の各ウェルにタンパク含有試料液が注入又は滴下された後、吸引ポンプが作動する。
【００４７】
これにより、タンパク固相用チップ１０１が第１凹部１０２の底面へガスケット１０６を介して気密的に吸着されるとともに、各ウェル内の試料液が後述する多孔質膜を介して吸引され、測定目的のタンパクが当該多孔質膜に固相形成される。なお、図２〜３において、１３０は、タンパク固相用チップ１０１を第１凹部１０２の底面に押し付けて固定するための押付け機構である。この押付け機構１３０は、タンパク固相用チップ１０１が第１凹部１０２上に載置された後、図中矢印方向にスライドさせることにより、その上部がタンパク固相用チップ１０１の上面を押し付けて第１凹部１０２に固定する。
【００４８】
前記タンパク固相用チップ１０１は、図４〜５に示されるように、多孔質膜１１１及びろ紙１１２と、これら多孔質膜１１１及びろ紙１１２を挟持するための上部プレート１１３及び下部プレート１１４とで構成されている。このタンパク固相用チップ１０１が、サイクリン依存性キナーゼの抗体を含む抗体溶液と、生体試料（検体）とを接触させる機能を有している。
【００４９】
図４〜５に示されるように、上部プレート１１３は、３つの互いに独立したプレート、すなわち第１上部プレート１１３ａ、第２上部プレート１１３ｂ、及び第３上部プレート１１３ｃから構成されている。各上部プレートは、長方形の板状を呈しており、第１上部プレート１１３ａ及び第２上部プレート１１３ｂは、いずれもマトリックス状に４行３列に配列された１２個の長円形の貫通孔１１５が穿設されており、第３上部プレート１１３ｃは同じくマトリックス状に４行４列に配列された１６個の長円形の貫通孔１１５が穿設されている。各上部プレートは、複数の貫通孔が形成された、試料処理のための互いに独立した領域を有している。また、各上部プレートの底面には、短辺に沿って溝１１６が形成されている。
【００５０】
一方、長方形の板状の下部プレート１１４には、前記上部プレート１１３ａ、１１３ｂ、１１３ｃの各貫通孔１１５に対応する位置にそれぞれマトリックス状に配列された合計４０個の長円形の貫通孔１１７が形成されている。貫通孔１１７は、貫通孔１１５と同じ形状及び断面積を有している。下部プレート１１４は、前記上部プレート１１３ａ、１１３ｂ、１１３ｃの各領域に対応した、複数の貫通孔が形成された領域を有している。
下部プレート１１４の上面には、４０個の貫通孔１１７の周囲を１周する畝状の凸部１１８、及び貫通孔１１７を上部プレート１１３ａ、１１３ｂ、１１３ｃの各領域に対応させて３つの領域に区画する隔壁１１９が形成されている。そして、前記凸部１１８及び隔壁１１９によりその内側に３つの長方形の多孔質膜設置領域が区画される。なお、前記上部プレート１１３及び下部プレート１１４は、例えば塩化ビニル樹脂で作製することができる。
【００５１】
図２〜５に示されるように、下部プレート１１４の多孔質膜設置領域に多孔質膜１１１とろ紙（フィルター）１１２との積層体を載置し、ついで各上部プレート１１３ａ、１１３ｂ、１１３ｃの溝１１６を順次対応する下部プレート１１４の凸部１１８に嵌めるようにして、当該上部プレート１１３ａ、１１３ｂ、１１３ｃを下部プレート１１４に装着することによりタンパク固相用チップ１０１を形成することができる。これにより、各貫通孔１１５と各貫通孔１１７とが互いに同軸となる。
なお、前述したタンパク固相用チップは、上部プレートが３つに分割されており、３つの領域を独立して吸引することができるが、上部プレートの数は２であってもよいし、４以上であってもよく、本発明において特に限定されるものではない。測定項目の数や検体の数を考慮して、適宜選定することができる。
【００５２】
［活性測定用試料調製ユニット］
活性測定用試料調製ユニット２は、図６〜１０に示されるように、それぞれがカラム２０１及び流体マニホールド２１３を備えた複数の試料調製部２１１からなっており、ＣＤＫの活性値を測定するのに用いられる。
【００５３】
図６に示されるカラム２０１は、塩化ビニル樹脂で作製された円筒体からなっており、内部には、液体試料中の目的物質を単離するために用いる担体２０６を保持する担体保持部２０２と、この担体保持部２０２に液体試料を導入する液体試料を受け入れて貯留するための液体貯留部２０４とを有している。前記カラム２０１は、外部から液体試料を注入又は採取可能な開口２０５を液体貯留部２０４の上部に備え、担体保持部２０２の下部に流体マニホールド２１３へ液体試料を導入するとともに、流体マニホールド２１３から液体試料を受け入れる接続流路２０３を有している。前記カラム２０１が、所定の基質を含む基質溶液と、生体試料（検体）とを接触させる手段を構成している。
【００５４】
担体２０６は、円柱形のモノリスシリカゲルからなっており、このモノリスシリカゲルは、粒子担体とは異なり、３次元ネットワーク状の骨格とその空隙が一体となった構造を有している。また、モノリスシリカゲルには、所定のＣＤＫ抗体が固定されている。担体２０６はカラム２０１の下部開口から担体保持部２０２に挿入され、Ｏリング２０７を介して固定用パイプ２０８によって弾性的に押圧されて支持される。なお、前記固定用パイプ２０８は、カラム２０１の下部開口から圧入され、固定用パイプ２０８とＯリング２０７の孔が接続流路２０３を形成する。
【００５５】
また、カラム２０１の下端には当該カラム２０１を前記試料調製部２１１に装填して固定するための装填用フランジ２０９が形成されている。このフランジ２０９は、直径Ｄの円盤状のフランジの両側を幅Ｗ（Ｗ＜Ｄ）になるように平行に切り欠いて形成された長円形のフランジである。
【００５６】
図７は試料調製部２１１の斜視図であり、同図に示されるように、試料調製部２１１は、Ｌ字形の支持プレート２１２を備え、この支持プレート２１２には流体マニホールド２１３と、シリンジポンプ２１４と、減速機付きステッピングモータ２１５とが固定されている。
ステッピングモータ２１５の出力軸にはスクリューシャフト２１６が接続されている。そして、このスクリューシャフト２１６に螺合する駆動アーム２１７がシリンジポンプ２１４のピストン２１８の先端に接続されている。ステッピングモータ２１５によりスクリューシャフト２１６が回転すると、ピストン２１８が上下運動するようになっている。シリンジポンプ２１４と流体マニホールド２１３とは、コネクタ２１９、２２０を介して送液チューブ２５０により接続されている。また、シリンジポンプ２１４は、コネクタ２２０ａを介して送液チューブ２２０ｂにより、流路を満たすための液体（洗浄液）が収容されているチャンバ２３４（図１０参照）と接続されている。
【００５７】
図８〜９に示されるように、流体マニホールド２１３は、前記カラム２０１の下部開口が接続されるカラム接続部２２１を備えている。
流体マニホールド２１３は、内部に流路２２３を備え、下面に、流路２２３とカラム接続部２２１との間を開閉する電磁バルブ２２５を備えている。また、流体マニホールド２１３は、側面にコネクタ２２０を接続するためのコネクタ接続用ねじ穴２２６を有しており、このねじ穴２２６は流路２２３に接続されている。
【００５８】
図１０は試料調製部２１１の流体回路図であり、流体マニホールド２１３にシリンジポンプ２１４がコネクタ２２０を介して接続された状態を示している。そして、シリンジポンプ２１４には、電磁バルブ２３３を介してチャンバ２３４が接続され、当該チャンバ２３４には陽圧源２３５から陽圧が印加されている。
【００５９】
ここで、カラム２０１を流体マニホールド２１３に装填する方法を説明する。
図８〜１０に示されるように、流体マニホールド２１３の上面には、カラム２０１の下端を受け入れるカラム装填用凹部２２７が形成され、この凹部２２７の底部の中心がカラム接続部２２１に貫通するとともに底部の円周にＯリング２２８が装着されている。また、流体マニホールド２１３の上面には２枚の断面Ｌ字形押さえ板２２９、２３０がカラム装填用凹部２２７を中心として前記幅Ｗより広くＤより狭い間隔で平行に固定されている。
【００６０】
流体マニホールド２１３に固定されたカラム２０１内部の担体２０６を通過した検体又は試薬が流体マニホールド２１３内部の流路２２３を満たす液体（洗浄液）と接触して希釈されることを防ぐため、カラム２０１をカラム装填用凹部２２７に固定する前に電磁バルブ２２５を開き（電磁バルブ２３３は閉）、約１６μＬ分だけシリンジポンプ２１４を吸引動作させる。これによって、カラム接続部２２１の液面が下がりエアギャップが形成される。
【００６１】
その後、カラム２０１をカラム装填用凹部２２７に、フランジ２０９が押さえ板２２９、２３０の間を通るように装填し、時計方向又は反時計方向に９０度だけ回転させる。これによって、フランジ２０９の直径Ｄの部分が押さえ板２２９、２３０に係合するとともに、Ｏリング２２８の弾性によりフランジ２０９が押さえ板２２９、２３０により固定される。なお、カラム２０１を除去する場合には、カラム２０１を押さえながら、左右いずれかの方向に９０度だけ回転させればよい。
【００６２】
カラム２０１が試料調製部２１１の流体マニホールド２１３に装填されるとき、気泡混入を防止するため当該流体マニホールド２１３の凹部２２７は手作業又は自動で分注された流体で満たされているが、カラム２０１の先端を凹部２２７に挿入するとその体積によって流体が溢れ出す。この液体が周辺へ流出することを防止するために、カラム装着用凹部２２７の周囲に溢れ液貯留凹部２３１が設けられており、溢れ液貯留凹部２３１の一部にピペットにより溢れ液を吸引排出するための溢れ液排出凹部２３２が設けられている。
各種の検体及び試薬は、ピペットを備えた分注機構部３によって、所定の箇所に、又は所定の箇所から注入又は吸引される。
【００６３】
ここで、カラム２０１の上部開口２０５の検体又は試薬が注入された場合の動作について説明する。開口２０５に検体又は試薬が注入されると、まず電磁バルブ２２５が開き（電磁バルブ２３３は閉）、シリンジポンプが吸引動作する。これによって、エアギャップと検体又は試薬は、電磁バルブ２２５を通過し、シリンジポンプ側に吸引される。つぎにシリンジポンプが吐出動作をする。これによって、検体又は試薬は、電磁バルブ２２５を通過し、カラム２０１内に送液される。
【００６４】
［分注機構部］
分注機構部３は、図１に示されるように、ピペットＸ方向移動用のフレーム３５２と、ピペットＹ方向移動用のフレーム３５３と、ピペットＺ方向移動用のプレート３５４とを備えている。
フレーム３５２は、プレート３５４を矢印Ｘ方向に移動させるためのスクリューシャフト３５５と、プレート３５４を支持して摺動させるためのガイドバー３５６と、スクリューシャフト３５５を回転させるステッピングモータ３５７を備えている。
【００６５】
フレーム３５３は、フレーム３５２を矢印Ｙ方向に移動させるためのスクリューシャフト３５８と、フレーム３５２を支持して摺動させるためのガイドバー３５９と、スクリューシャフト３５８を回転させるステッピングモータ３６１とを備えている。
また、プレート３５４は、ピペット３６２を支持するアーム３６８を矢印Ｚ方向に移動させるためのスクリューシャフト３６７と、アーム３６８を支持して摺動させるためのガイドバー、スクリューシャフト３６７を回転させるステッピングモータ３７０とを備えている。
なお、本実施の形態では、分注機構部３が一対のピペット３６２を備えているので、同時に２つの検体容器に試薬などを注入したり、同時に２つの検体容器から内容物を吸引したりすることができ、測定処理を効率よく行うことができる。
【００６６】
［流体部］
装置本体部２０の背部には、図１に示されるように、前記ピペット３６２を洗浄するためのピペット洗浄槽８及び各試料調製部２１１などに接続されて流体を操作する流体部９が配設されている。この流体部９は、図１０に示されるように、各試料調製部２１１の電磁バルブ２２５、洗浄液チャンバからシリンジ２１４に液体を充填する際に流体を制御する電磁バルブ２３３、ピペット３６２による液体の吸引、吐出の際に流体を制御する電磁バルブ、廃液槽７におけるピペット３６２から廃棄される液体を吸引する際に流体を制御する電磁バルブ、及びピペット洗浄槽８においてピペット３６２を洗浄する際に流体を制御する電磁バルブを備えている。
【００６７】
［検出部］
検出部４は、タンパク固相用チップ１０１の多孔質膜１１１に捕捉されたタンパク量を反映する蛍光物質量及び、リン酸基の量を反映する蛍光物質量を測定するものであり、前記タンパク固相用チップ１０１に励起光を照射し、発生する蛍光を検出し、検出した蛍光の強度に対応する大きさの電気信号を本体制御部１０に出力する。検出部４としては、一般に用いられている、光源部、照明系及び受光系からなるものを適宜採用することができる。
【００６８】
［データ処理部］
図１１は、本実施の形態の診断支援装置Ａの構成を示すブロック図である。データ処理部であるパーソナルコンピュータ１２は、図１１に示されるように、制御部７７と、入力部７８と、表示部７９とを備えている。
【００６９】
制御部７７は、後述する本体制御部１０に装置の動作開始信号を送信するための機能を有している。制御部７７から動作開始の指令が送信されると、本体制御部１０は、各試料調製部２１１のステッピングモータ２１５を駆動するための駆動信号、第１試薬セット部５の温度調節をするための駆動信号、ステッピングモータ３５７、３６１、３７０を駆動するための駆動信号、及び流体部９にある電磁バルブを駆動するための駆動信号を出力する。また、制御部７７は、検出部４で得られた検出結果を分析するための機能を有している。検出部４で得られた検出結果は、本体制御部１０へ送信される。本体制御部１０は、検出部４で得られた検出結果を制御部７７に送信する。制御部７７は、本体制御部１０から送信された検出結果を分析する。
【００７０】
表示部７９は、制御部７７で得られた分析結果などを表示するために設けられている。この表示部７９が、本発明における第１出力手段及び第２出力手段を構成している。
次に、パーソナルコンピュータ１２の構成について詳細に説明する。制御部７７は、図１２に示すように、ＣＰＵ９１ａ、ＲＯＭ９１ｂ、ＲＡＭ９１ｃ、入出力インターフェース９１ｄ、画像出力インターフェース９１ｅ、通信インターフェース９１ｆ、ハードディスク９１ｇから主として構成されている。ＣＰＵ９１ａ、ＲＯＭ９１ｂ、ＲＡＭ９１ｃ、入出力インターフェース９１ｄ、画像出力インターフェース９１ｅ、及び通信インターフェース９１ｆ、ハードディスク９１ｇは、電気信号を通信することが可能であるように電気信号線（バス）で接続されている。
【００７１】
ＣＰＵ９１ａは、ＲＯＭ９１ｂに記憶されているコンピュータプログラムおよびＲＡＭ９１ｃにロードされたコンピュータプログラムを実行することが可能である。そして、後述するようなアプリケーションプログラム９１ｈをＣＰＵ９１ａが実行することにより、パーソナルコンピュータ１２がデータ処理部として機能する。
ＲＯＭ９１ｂは、マスクＲＯＭ、ＰＲＯＭ、ＥＰＲＯＭ、ＥＥＰＲＯＭなどによって構成されており、ＣＰＵ９１ａに実行されるコンピュータプログラムおよびこれに用いるデータなどが記録されている。
【００７２】
ＲＡＭ９１ｃは、ＳＲＡＭまたはＤＲＡＭなどによって構成されている。ＲＡＭ９１ｃは、ＲＯＭ９１ｂおよびハードディスク９１ｇに記録されているコンピュータプログラムの読み出しに用いられる。また、これらのコンピュータプログラムを実行するときに、ＣＰＵ９１ａの作業領域として利用される。
【００７３】
ハードディスク９１ｇは、オペレーティングシステムおよびアプリケーションプログラムなど、ＣＰＵ９１ａに実行させるための種々のコンピュータプログラムおよびそのコンピュータプログラムの実行に用いるデータがインストールされている。本実施形態に係るサイクリン依存性キナーゼの発現量や活性値を取得し、活性値と発現量との比を算出し、
第１のサイクリン依存性キナーゼの当該比と、第２のサイクリン依存性キナーゼの当該比との比（比活性比）を算出し、算出した比や比活性比と、基準値とを比較して癌の診断支援情報を取得するためのアプリケーションプログラム９１ｈも、このハードディスク９１ｇにインストールされている。さらに、前記発現量や活性値を取得するために、前記ハードディスク９１ｇには、蛍光強度を発現量又は活性値に変換するための変換データである検量線が記憶されている。なお、検量線は、発現量又は活性値の測定ごとに求めるようにしてもよい。また、ハードディスク９１ｇは、前記測定値と比較することにより癌の診断支援情報を取得するための基準値を記憶する第１データベース９１ｉを含んでいる。さらに、ハードディスク９１ｇは、癌患者の前記活性値や発現量などの測定値と、当該患者の臨床情報とが対応付けられたサンプルデータを記憶する第２データベース９１ｊを含んでいる。
【００７４】
また、ハードディスク９１ｇには、たとえば、米マイクロソフト社が製造販売するＷｉｎｄｏｗｓ（登録商標）などのグラフィカルユーザインタフェース環境を提供するオペレーティングシステムがインストールされている。以下の説明においては、本実施形態に係るアプリケーションプログラム９１ｈは上記オペレーティングシステム上で動作するものとしている。
【００７５】
入出力インターフェース９１ｄは、たとえば、ＵＳＢ、ＩＥＥＥ１３９４、ＲＳ−２３２Ｃなどのシリアルインタフェース、ＳＣＳＩ、ＩＤＥ、ＩＥＥＥ１２８４などのパラレルインタフェース、およびＤ／Ａ変換器、Ａ／Ｄ変換器などからなるアナログインタフェースなどから構成されている。入出力インターフェース９１ｄには、入力部７８が接続されており、ユーザがその入力部７８を使用することにより、パーソナルコンピュータ１２にデータを入力することが可能である。
【００７６】
通信インターフェース９１ｆは、たとえば、Ｅｔｈｅｒｎｅｔ（登録商標）インターフェースである。パーソナルコンピュータ１２は、その通信インターフェース９１ｆにより、所定の通信プロトコルを使用して本体制御部１０との間でデータの送受信が可能である。
画像出力インターフェース９１ｅは、ＬＣＤまたはＣＲＴなどで構成された表示部７９に接続されており、ＣＰＵ９１ａから与えられた画像データに応じた映像信号を表示部７９に出力するようになっている。表示部７９は、入力された映像信号にしたがって、画像（画面）を表示する。
【００７７】
［本体制御部］
装置本体部２０の背部には、各試料調製部２１１、検出部４、ステッピングモータ３５７、３６１、３７０、流体部９などに接続され、これらを制御するための本体制御部１０が配設されている。
【００７８】
前記本体制御部１０は、図１３に示されるように、ＣＰＵ３０１ａと、ＲＯＭ３０１ｂと、ＲＡＭ３０１ｃと、通信インターフェース３０１ｄと、回路部３０１ｅとを備えている。
ＣＰＵ３０１ａは、ＲＯＭ３０１ｂに記憶されているコンピュータプログラムおよびＲＡＭ３０１ｃに読み出されたコンピュータプログラムを実行することが可能である。
ＲＯＭ３０１ｂは、ＣＰＵ３０１ａに実行させるためのコンピュータプログラム及び当該コンピュータプログラムの実行に用いるデータ等を記憶している。
【００７９】
ＲＡＭ３０１ｃは、ＲＯＭ３０１ｂに記憶しているコンピュータプログラムの読み出しに用いられる。また、これらのコンピュータプログラムを実行するときに、ＣＰＵ３０１ａの作業領域として利用される。
通信インターフェース３０１ｄは、たとえば、Ｅｔｈｅｒｎｅｔ（登録商標）インターフェースである。本体制御部１０は、その通信インターフェース３０１ｄにより、所定の通信プロトコルを使用してパーソナルコンピュータ１２との間でデータの送受信が可能である。
【００８０】
回路部３０１ｅは、複数の駆動回路と信号処理回路とを備えている（図示せず）。駆動回路は、試料調製部２１１、第１試薬セット部５、検出部４、ステッピングモータ３５７，３６１，３７０、流体部９にそれぞれ対応して設けられている。各駆動回路は、ＣＰＵ３０１ａから与えられる指示データに応じて、対応するユニット（試料調製部２１１に対応する駆動回路であれば、試料調製部２１１）を制御するための制御信号（駆動信号）を生成し、上記ユニットへ制御信号を送信する。また、ユニットに設けられたセンサの出力信号が駆動回路に与えられ、駆動回路はこの出力信号をデジタル信号に変換してＣＰＵ３０１ａへと与える。ＣＰＵ３０１ａは、与えられたセンサの出力信号に基づいて上述の指示データを生成する。
【００８１】
信号処理回路は、検出部４に接続されている。検出部４からは、蛍光強度を示す検出信号が出力され、この検出信号が信号処理回路に与えられる。信号処理回路は、検出信号に対してノイズ除去処理、増幅処理、及びＡ／Ｄ変換処理等の信号処理を実行する。信号処理の結果得られた検出結果のデータは、ＣＰＵ３０１ａに与えられる。
【００８２】
［３］癌の診断支援
つぎに、本実施の形態に係る診断支援装置Ａを用いてヒトの癌細胞の悪性度（再発リスクの高さ）を判定する場合の一例を説明する。
（１）可溶化装置Ｂによる前処理
診断支援装置Ａによる処理に先立って、可溶化装置Ｂを用いて癌患者から摘出した悪性腫瘍を含むから液状の検体を採取する。その手順としては、まず、前記組織がピンセットを用いてエッペンチューブに投入される。ついで、このエッペンチューブがを図１に示される可溶化装置Ｂの検体セット部３３にセットされ、操作部３１のスタートボタンが押されると、ペッスル３４が所定位置まで下降し、エッペンチューブ内の組織を当該エッペンチューブの底部に押し付ける。
【００８３】
この状態で、界面活性剤及びタンパク質分解酵素阻害剤などを含有する緩衝液などの可溶化液が自動又はマニュアルでエッペンチューブ内に注入される。その後、ペッスル３４の回転により前記組織がすりつぶされる。所定時間経過後にペッスル３４の駆動を停止させ、さらに当該ペッスル３４を上方に移動させた後にエッペンチューブが検体セット部３３から取り出される。ついで、可溶化されたエッペンチューブ内の内容物が遠心分離機にかられ、得られる上澄み液が検体としてマニュアルで採取される。
【００８４】
（２）診断支援装置Ａへの検体などのセッティング
前記上澄み液を２つの検体容器に入れ、互いに異なる希釈倍率で希釈した後に、当該検体容器を第１試薬セット部５の所定位置にセットする。２つの検体のうち、一方は発現量測定用の検体であり、他方は活性値測定用の検体である。
また、前記タンパク固相用チップ１０１がチップセット部１にセットされるとともに、８つのカラム２０１が活性測定ユニット２の試料調製部２１１にそれぞれにセットされる。
【００８５】
（３）診断支援装置Ａによる処理の全体フロー（実施の形態１）
診断支援装置Ａによる実施の形態１に係る処理の全体のフローを図１５、１６及び１７に示す。なお、以下のフローチャート中の判断において、「Ｙｅｓ」及び「Ｎｏ」を図示しない場合は、下がＹｅｓ、右（左）がＮｏである。また、以下に説明する処理は、制御部７７及び本体制御部１０によって制御される処理である。
【００８６】
まず、装置本体２０の電源が投入されると、本体制御部１０の初期化が行われる（ステップＳ１）。この初期化動作では、プログラムの初期化や装置本体２０の駆動部分の原位置復帰などが行われる。
【００８７】
パーソナルコンピュータ１２の電源が投入されると、制御部７７の初期化が行われる（ステップＳ２０１）。この初期化動作では、プログラムの初期化などが行われる。初期化が完了すると、入力用画面の表示を指示するための入力画面表示ボタンを含むメニュー画面（図示せず）が表示部７９に表示される。ユーザは、入力部７８を操作することによって、メニュー画面の入力用画面の表示を指示するための入力画面ボタンを選択することができる。
【００８８】
ついでステップＳ２０２において、制御部７７によって、入力用画面が表示中であるか否かの判断が行われる。制御部７７は、入力用画面が表示中であると判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ２０５へ処理を進め、入力用画面が表示中でないと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ２０３へ処理を進める。
ついでステップＳ２０３において、制御部７７によって、入力用画面の表示指示が行われたか否か（メニュー画面の入力用画面の表示を指示するための入力画面ボタンが選択されたか否か）が判断される。制御部７７は、入力用画面の表示指示が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ２０４へ処理を進め、入力用画面の表示指示が行われなかったと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ２０９へ処理を進める。
【００８９】
ついでステップＳ２０４において、制御部７７によって、入力用画面が表示部７９に表示される。ここでは、ユーザが入力部７８を操作することによって、検体番号などの測定に関する情報が入力される。そして、ユーザが入力部７８を操作して入力用画面に表示されたスタートボタンを選択することにより、測定開始の指示が行われる。
【００９０】
ついでステップＳ２０５において、制御部７７によって、測定開始の指示が行われたか否かが判断される。制御部７７は、測定開始の指示が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ２０６へ処理を進め、測定開始の指示が行われなかったと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ２０９へ処理を進める。そして、ステップＳ２０６において、測定開始信号が制御部７７から本体制御部１０へ送信される。
ついでステップＳ２において、本体制御部１０によって測定開始信号の受信が行われたか否かの判断をする。本体制御部１０が、測定開始信号の受信が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ３へ処理を進め、測定開始信号の受信が行われなかったと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ８へ処理を進める。
【００９１】
ついでステップＳ３において、発現量測定用の試料が調製される。ここでは、第１試薬セット部５にセットした検体容器から検体が吸引される。そして、吸引された検体に所定の処理が施されて、発現量測定用の試料が調製される。
さらに、ステップＳ４において、活性値測定用の試料が調製される。ここでは、第１試薬セット部５にセットした検体容器から検体が吸引される。そして、吸引された検体に所定の処理が施されて、活性値測定用の試料が調製される。
【００９２】
ついでステップＳ５において、発現量測定用の試料及び活性値測定用の試料を含むタンパク固相用チップ１０１がセットされたチップセット部１が、図１に示される位置から検出部４の中に移動する。
ついでステップＳ６において、タンパク固相用チップ１０１の各ウェルに励起光が照射され、前記各試料から放射される蛍光が検出される。
そしてステップＳ７において、検出された検出結果が、本体制御部１０から制御部７７に送信される。
【００９３】
つぎにステップＳ２０７において、制御部７７によって、検出結果の受信が行われたか否かが判断される。制御部７７は、検出結果の受信が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ２０８に処理を進める。一方、検出結果の受信が行われなかった場合には、制御部７７は再びステップＳ２０７の処理を実行する。
【００９４】
そして、ステップＳ２０８において、制御部７７によって、取得した検出結果から解析処理が実行され、解析結果が出力される。
ついでステップＳ２０９において、制御部７７によって、サンプルデータ更新画面が表示中であるか否かの判断が行われる。制御部７７は、サンプルデータ更新画面が表示中であると判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ２１３へ処理を進め、サンプルデータ更新画面が表示中でないと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ２１０へ処理を進める。
【００９５】
ついでステップＳ２１０において、制御部７７によって、サンプルデータ更新画面の表示指示が行われたか否かが判断される。制御部７７は、サンプルデータ更新画面の表示指示が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ２１１へ処理を進め、サンプルデータ更新画面の表示指示が行われなかったと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ２１５へ処理を進める。
ついでステップＳ２１１において、制御部７７のＲＡＭ９１ｇが、ハードディスク９１ｇの第２データベース９１ｊに記憶されているサンプルデータを読み出す。
【００９６】
そして、ステップＳ２１２において、読み出されたサンプルデータを含むサンプルデータ更新画面が表示部７９に表示される。ここでは、ユーザが入力部７８を操作することによって、変更する項目が選択され、選択された項目について変更後の情報が入力される。
サンプルデータ更新画面は、第２データベース９１ｊにサンプルデータとして記憶されている患者の測定値や臨床情報などを、例えば図２５〜２６に示されるような一覧形式で表示することができるように構成されている。その際、患者に対して蓄積されている全ての測定値や臨床情報を表示してもよいが、項目が多くなりすぎると見にくくなったり、操作しにくくなることから、前記ステップＳ２１０においてサンプル更新画面の表示指示が行われた後に、ユーザ（オペレータ）が表示する項目を選択できるように、表示項目選択用の画面を表示するようにしてもよい。本実施の形態の場合、表示する項目の例としては、リンパ節転移の有無、再発の有無、術後から再発するまでの日数、ＣＤＫ１、２の各発現量、活性値及び比活性、比活性比をあげることができる。
【００９７】
ついでステップＳ２１３において、制御部７７によって、新たなサンプルデータの入力が行われたか否かが判断される。制御部７７は、新たなサンプルデータの入力が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ２１４へ処理を進め、新たなサンプルデータの入力が行われなかったと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ２１５へ処理を進める。
ついでステップＳ２１４において、入力された新たなサンプルデータがハードディスク９１ｇの第２データベース９１ｊに記憶される。
【００９８】
ついでステップＳ２１５において、制御部７７によって、基準値更新画面が表示中であるか否かの判断が行われる。制御部７７は、基準値更新画面が表示中であると判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ２１９へ処理を進め、基準値更新画面が表示中でないと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ２１６へ処理を進める。
ついでステップＳ２１６において、制御部７７によって、基準値更新画面の表示指示が行われたか否かが判断される。制御部７７は、基準値更新画面の表示指示が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ２１７へ処理を進め、基準値更新画面の表示指示が行われなかったと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ２２１へ処理を進める。
【００９９】
ついでステップＳ２１７において、制御部７７のＲＡＭ９１ｇが、ハードディスク９１ｇの第２データベース９１ｊに記憶されているサンプルデータ及び第１データベース９１ｉに記憶されている基準値を読み出す。
そして、ステップＳ２１８において、読み出されたサンプルデータ及び基準値に基づき作成されたグラフを含む基準値更新画面が表示部７９に表示される。
【０１００】
図２３は、このような基準値変更画面（変更前）の例を示している。この例では、ＣＤＫ１の比活性、及びＣＤＫ１の比活性とＣＤＫ２の比活性の比が再発リスク判定のための基準として選定されている。また、ＣＤＫ１の比活性について、低位基準値である第２基準値（＝６）及び高位基準値である第３基準値（＝９０）が設定され、また比活性の比の基準値（第１基準値）は「５．０」に設定されている。そして、これら３つの基準値により区分けされる６つの領域が、図２３の左下に示されるように、「高（Ｈ）」又は「低（Ｌ）」の領域に設定されている。
【０１０１】
図２３の左上のグラフＰは、横軸を術後日数、縦軸を非再発率（単位は％）とした生存曲線であり、前記「高」領域及び「低」領域の再発率を示している。上側の曲線が再発リスク「低」領域の再発率を示し、下側の曲線が再発リスク「高」領域の再発率を示している。このグラフは、例えば、次のようにして作成される。
前述したようにして、基準値の設定、及び領域の設定（「高」領域又は「低」領域の設定）が行われると、領域毎に非再発率の演算が制御部７７にて行われる。サンプルデータには、再発の有無、及び摘出手術をしてから再発するまでの日数（再発していない患者にとっては、術後の経過日数）に関する情報（履歴情報）が含まれている。そこで、各領域に含まれるすべてのサンプルデータを母集団として、手術後の日数を変数として、非再発率の演算を行い、その結果をグラフ化する。例えば、簡単のために、「低」領域内のサンプル数を１００として、サンプル１、サンプル２、サンプル３がそれぞれ術後６００日、９００日、１２００日で再発し、残りのサンプルは術後５年間（約１８２６日）再発しなかったと仮定する。この場合、術後６００日までの非再発率は１００（％）であり、術後６００日の時点で９９（％）となり、さらに術後９００日までは９９（％）のままである。そして、術後９００日の時点で９８（％）となり、さらに術後１２００日までは９８（％）のままである。そして、術後１２００日の時点で９７（％）となり、さらに術後１８２６日までは９７（％）のままである。すなわち、術後５年間の再発リスクは３％となる。なお、術後に癌を再発することなく、当該癌以外の理由で患者が死亡した場合は、死亡した時点でサンプルデータの母集団から削除される。また、摘出手術をしてから再発するまでの日数について、再発をした患者の場合は来院して検診及び検査をすることで、かかる日数を把握することができる。一方、それ以外の患者については、病院の方から患者に対し定期的にフォローアップの連絡をし、これに対し「異常なし」の回答をした患者は、その日までは「再発なし」と判断する。フォローアップに対し回答のない患者、又はフォローアップをしなくなった患者については、サンプルデータの母集団から削除される。したがって、術後の日数が経過するにつれて、母集団の数は次第に少なくなっていき、１人の患者が再発したことによる前記非再発率の低下割合は大きくなる。
【０１０２】
ここで、前記基準値の変更は、ユーザが入力部７８を操作することによって、グラフにおいて基準値を表す直線にポインタを合わせてドラッグすることで行うようにしてもよいし、また画面中にスクロールバーやボタン（図示せず）を設け、これらを操作することで変更するようにしてもよい。
【０１０３】
図２４は基準値変更後の画面を示しており、この例では、第１基準値（比活性の比）を５．０から２．８に変更している。基準値を変更することにより、再発リスクの「高」領域及び「低」領域も変動するが、本実施の形態では、基準値を変更させると、変更後の基準値により区分けされる領域内に含まれるサンプルデータに基づいて、制御部７７が前述した生存曲線を作成し、表示部７９に表示する。したがって、ユーザは、この生存曲線を見ながら、５年経過時における再発率が所定の範囲内の値になるように、適宜基準値を変更させることができ、その結果、判定精度の高い基準値を設定することができる。図２４において生存曲線を示すグラフＰでは、再発リスク「高」領域の再発率を示す曲線しか存在していないように見える。これは、基準値を変更した結果、再発リスク「低」領域の患者に再発した事例が含まれなくなり、再発リスク「低」領域の非再発率が１００％のままとなり、横軸の１００％を示す線と重なったことによるものであり、現実には２本の曲線が表示されている。なお、図２４に示される例では、第１基準値だけ変更させたが、第２基準値及び／又は第３基準値を変更させることもできる。
【０１０４】
ついでステップＳ２１９において、制御部７７によって、基準値を変更する入力が行われたか否かが判断される。制御部７７は、新たな基準値の入力が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ２２０へ処理を進め、新たな基準値の入力が行われなかったと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ２２１へ処理を進める。
ついでステップＳ２２０において、入力された新たな基準値がハードディスク９１ｇの第１データベース９１ｉに記憶される。
【０１０５】
ついでステップＳ２２１において、制御部７７によって、シャットダウンする指示を受け付けているか否かが判断される。制御部７７は、シャットダウンする指示を受け付けていると判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ２２２に処理を進め、シャットダウンする指示を受け付けていないと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ２０２に戻る。そして、ステップＳ２２２において、シャットダウン信号が制御部７７から本体制御部１０へ送信される。ついで、ステップＳ２２３において、制御部７７によりパーソナルコンピュータ１２のシャットダウンの処理が行われ、処理が完了する。
【０１０６】
また、ステップＳ８において、本体制御部１０によって、シャットダウン信号の受信が行われたか否かの判断が行われる。本体制御部１０は、シャットダウン信号の受信が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ９に処理を進め、シャットダウン信号の受信が行われていないと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ２に戻る。そして、ステップＳ９において、本体制御部１０により、装置本体２０のシャットダウンが行われ、処理が終了する。
【０１０７】
（４）発現量測定用試料の調製処理
前記ステップＳ３における発現量測定用試料の調製処理のフローを図１８に示す。
まず、ステップＳ２１において、タンパク固相用チップの各ウェルに予め貯留している保存液が排出され、各ウェル内が洗浄される。洗浄は、分注機構部３のピペットを介して洗浄液を上方から各ウェルに注入し、ついでタンパク固相用チップの下方から陰圧により注入された洗浄液を多孔質膜を通して吸引することによって行われる。以下の洗浄工程も同様である。
【０１０８】
つぎに、第１試薬セット部５にセットされた検体容器から発現量測定用の検体がピペットで吸引され、この検体は所定の複数のウェルに注入され、ついで検体がタンパク固相用チップの下方から陰圧により吸引される。これにより、タンパク固相用チップの多孔質膜にタンパク質が固相化される（ステップＳ２２）。
ついで、ステップＳ２１と同様にして前記所定のウェル内が洗浄液で洗浄される。これによって、タンパク質以外の成分がタンパク固相用チップの多孔質膜から取り除かれる（ステップＳ２３）。
【０１０９】
その後、ブロッキング液が前記所定のウェル内に注入され、１５分以上（例えば、３０分間）放置された後にウェル内に残っているブロッキング液が排出される（ステップＳ２４）。これにより、タンパク質が固相化されていない多孔質膜の部位に蛍光標識されたＣＤＫ１抗体（蛍光標識ＣＤＫ１抗体）、及び蛍光標識されたＣＤＫ２抗体（蛍光標識ＣＤＫ２抗体）が固相化するのを防止することができる。なお、蛍光標識ＣＤＫ１抗体、及び蛍光標識ＣＤＫ２抗体としては、市販品を使用することができる。
【０１１０】
つぎに、蛍光標識ＣＤＫ１抗体及び蛍光標識ＣＤＫ２抗体がそれぞれ所定のウェルに注入される。その際、それぞれの蛍光標識抗体について、２つのウェルに注入される。２０〜３０分経過して、蛍光標識抗体と多孔質膜に固相化されたタンパク質（ＣＤＫ１、又はＣＤＫ２）との反応が終了した後に注入した蛍光標識が排出される（ステップＳ２５）。
最後に、ステップＳ２３と同様にして、前記所定のウェル内が洗浄液で洗浄される（ステップＳ２６）。
【０１１１】
（５）活性値測定用試料の調製処理
前記ステップＳ４における活性値測定用試料の調製処理のフローを図１９に示す。なお、この活性値測定用試料の調製処理においては、図１に示される活性測定ユニット２として、図中手前側に４つの試料調製部２１１を備え、図中奥側にも４つの試料調製部２１１を備えたものが用いられる。この活性測定ユニット２の各試料調製部２１１を、図中奥側の左から第１試料調製部（Ａｃ１）、第２試料調製部（Ａｃ２）、第３試料調製部（Ａｃ３）、第４試料調製部（Ａｃ４）とし、また、図中手前の左から第５試料調製部（Ａｃ５）、第６試料調製部（Ａｃ６）、第７試料調製部（Ａｃ７）、第８試料調製部（Ａｃ８）とする。
【０１１２】
まず、第１〜第８試料調製部（Ａｃ１〜Ａｃ８）のそれぞれについて、開口２０５に、分注機構部３のピペットで洗浄用の試薬であるバッファーが注入される。そして、第１〜第８試料調製部（Ａｃ１〜Ａｃ８）のそれぞれについて、シリンジポンプ２１４及び電磁バルブ２２５が前述したように動作することにより、液体貯留部２０４のバッファーは、担体２０６を通過し流路２２３へ引き込まれた後、再び担体２０６を通過して液体貯留部２０４へ戻される。全てのカラム２０１中の液体貯留部２０４へ戻されたバッファーは、分注機構部３のピペットで吸引され廃棄される（ステップＳ３１）。
【０１１３】
つぎに、免疫沈降（抗体とＣＤＫの反応）をさせる（ステップＳ３２）。まず、第１試薬セット部５にセットされた１つの検体容器から、活性値測定用の検体１が一方のピペットで、活性値測定用の検体２が他方のピペットで吸引される。
そして、検体容器から吸引された活性値測定用の検体１は、図２０に示されるように、まず、第１試料調製部（Ａｃ１）の液体貯留部２０４に注入される。そして、検体１は、シリンジポンプ２１４及び電磁バルブ２２５が前述したように動作することにより、第１試料調製部（Ａｃ１）の担体２０６に送液される。その際、ピストン２１８を上下に１往復（吸引→排出）させることにより、検体１は、カラム２０１の担体２０６を１往復する。
【０１１４】
一方、検体容器から吸引された活性値測定用の検体２は、まず、第５試料調製部（Ａｃ５）の液体貯留部２０４に注入される。そして、検体２は、前記と同様に、第５試料調製部（Ａｃ５）の担体２０６に送液される。
第１試料調製部（Ａｃ１）及び第５試料調製部（Ａｃ５）のカラム２０１の担体２０６には、ＣＤＫ１の抗体もＣＤＫ２の抗体も固定されていない。従って、第１試料調製部（Ａｃ１）及び第５試料調製部（Ａｃ５）では、ＣＤＫ１及びＣＤＫ２は固相化されず、第１試料調製部（Ａｃ１）のカラム２０１には、ＣＤＫ１及びＣＤＫ２を含む検体１が貯留され、第５試料調製部（Ａｃ５）のカラム２０１には、ＣＤＫ１及びＣＤＫ２を含む検体２が貯留される。
【０１１５】
つぎに、第１試料調製部（Ａｃ１）のカラム２０１に貯留された検体１は、ピペットによって吸引され、第３試料調製部（Ａｃ３）の液体貯留部２０４に注入される。そして、検体１は、前記と同様に、第３試料調製部（Ａｃ３）の担体２０６に送液される。
一方、第５試料調製部（Ａｃ５）のカラム２０１に貯留された検体２は、ピペットによって吸引され、第４試料調製部（Ａｃ４）の液体貯留部２０４に注入される。そして、検体２は、前記と同様に、第４試料調製部（Ａｃ４）の担体２０６に送液される。
【０１１６】
第３試料調製部（Ａｃ３）及び第４試料調製部（Ａｃ４）のカラム２０１の担体２０６には、ＣＤＫ１の抗体が固定されている。従って、第３試料調製部（Ａｃ３）及び第４試料調製部（Ａｃ４）では、ＣＤＫ１は固相化されるが、ＣＤＫ２は固相化されず、第３試料調製部（Ａｃ３）のカラム２０１には、ＣＤＫ１を含まずＣＤＫ２を含む検体１が貯留され、第４試料調製部（Ａｃ４）のカラム２０１には、ＣＤＫ１を含まずＣＤＫ２を含む検体２が貯留される。
【０１１７】
つぎに、第３試料調製部（Ａｃ３）のカラム２０１に貯留された検体１は、ピペットによって吸引され、第７試料調製部（Ａｃ７）の液体貯留部２０４に注入される。そして、検体１は、前記と同様に、第７試料調製部（Ａｃ７）の担体２０６に送液される。
【０１１８】
一方、第４試料調製部（Ａｃ４）のカラム２０１に貯留された検体２は、ピペットによって吸引され、第８試料調製部（Ａｃ８）の液体貯留部２０４に注入される。そして、検体２は、前記と同様に、第８試料調製部（Ａｃ８）の担体２０６に送液される。
第７試料調製部（Ａｃ７）及び第８試料調製部（Ａｃ８）のカラム２０１の担体２０６には、ＣＤＫ２の抗体が固定されている。従って、第７試料調製部（Ａｃ７）及び第８試料調製部（Ａｃ８）では、ＣＤＫ２が固相化されるので、第７試料調製部（Ａｃ７）のカラム２０１には、ＣＤＫ１もＣＤＫ２も含まない検体１が貯留され、第８試料調製部（Ａｃ８）のカラム２０１には、ＣＤＫ１もＣＤＫ２も含まない検体２が貯留される。
【０１１９】
第７試料調製部（Ａｃ７）及び第８試料調製部（Ａｃ８）のカラム２０１に貯留された検体１及び検体２は、それぞれピペットによって吸引され、廃液槽７に廃棄される。
そして、第１試料調製部（Ａｃ１）及び第５試料調製部（Ａｃ５）は、バックグラウンドの活性測定用に、第３試料調製部（Ａｃ３）及び第４試料調製部（Ａｃ４）は、ＣＤＫ１の活性測定用に、第７試料調製部（Ａｃ７）及び第８試料調製部（Ａｃ８）は、ＣＤＫ２の活性測定用に使用される。
【０１２０】
このように、カラム内に残った検体を他のカラムに注入することによって、少ない検体量で、バックグラウンド活性測定、ＣＤＫ１活性測定及びＣＤＫ２活性測定が可能となる。
ついで、検体中の不要成分を洗浄して取り除くために、バッファー１がカラム２０１に送液される（ステップＳ３３）。
【０１２１】
その後、前記バッファー１はステップＳ２５で実行される酵素反応に影響を与えることから、かかる酵素反応のためのコンディションを作ることを主目的に、バッファー２がカラム２０１に送液されて、前記バッファー１の成分が洗い流される（ステップＳ３４）。
つぎに、基質ＨｉｓｔｏｎＨ１とＡＴＰγＳを含む基質反応液がカラム２０１に注入され、ピストン２１９が１往復させられる（ステップＳ３５）。カラム２０１中にカラム２０１の下側から押し出された液は、そのまま貯留される。このステップによって、ＣＤＫ１又はＣＤＫ２を酵素として、ＨｉｓｔｏｎＨ１にリン酸基が導入される。そして、このリン酸基の量は、ＣＤＫ１又はＣＤＫ２の酵素として働きの強さ（すなわち活性値）に左右されることから、前記リン酸基の量を測定することによって、ＣＤＫ１又はＣＤＫ２の活性値を求めることができる。なお、図２０に示される第１試料調製部（Ａｃ１）及び第５試料調製部（Ａｃ５）を使用して求められるバックグラウンド活性値は、後述するように、バックグラウンド補正をするために用いられる。
【０１２２】
ついで、蛍光標識化試薬が、ピペットを用いてカラム２０１の上方より直接カラム２０１内に分注され、ＨｉｓｔｏｎＨ１に導入されたリン酸基に蛍光標識が結合させられる（ステップＳ３６）。その際、ピペットが、所定の時間、カラム内の液体の吸入及び吐出を繰り返すことにより、カラム２０１内の液体が撹拌される。
ステップＳ２６の開始から所定時間（例えば、２０分間）経過後に反応停止液が前記蛍光標識化試薬と同様にカラム２０１に直接分注される。そして、ステップＳ２６と同じく所定の時間、カラム内の液体の吸入及び吐出を繰り返すことによりカラム２０１内の液体が撹拌される（ステップＳ３７）。これにより、蛍光標識の結合が停止する。
【０１２３】
つぎに、第１試料調製部（Ａｃ１），第３試料調製部（Ａｃ３），第４試料調製部（Ａｃ４），第５試料調製部（Ａｃ５），第７試料調製部（Ａｃ７）、及び第８試料調製部（Ａｃ８）のカラム２０１内の液体が、それぞれ、タンパク固相用チップ１０１の６つのウェルに分注された後に当該タンパク固相用チップ１０１が下方から吸引される（ステップＳ３８）。これによって、蛍光標識が結合したリン酸基を有するＨｉｓｔｏｎＨ１がタンパク固相用チップ１０１の多孔質膜に固相化される。
【０１２４】
ついで、前記発現量測定用試料の調製処理におけるステップＳ２１と同様にしてウェルの洗浄が行なわれる（ステップＳ３９）。
最後に、ＨｉｓｔｏｎＨ１に導入されたリン酸基に結合しなかった蛍光標識を消光（バックグラウンド消光）させるための消光用試薬がウェルに分注され、排出する操作が６回繰り返される（ステップＳ４０）。
【０１２５】
（６）解析処理
解析処理のステップ（ステップＳ２０８）では、図２１に示されるように、検出部で得られた蛍光強度から解析がなされ、その解析結果が表示部７９に出力される。
まず、制御部７７は、検出部４の受光系から本体制御部１０を介して、ＣＤＫ１の活性、ＣＤＫ１の発現、ＣＤＫ２の活性、ＣＤＫ２の発現、バックグラウンドの活性、及びバックグラウンドの発現のそれぞれについて、２つずつ蛍光強度が取得する（ステップＳ５１）。
【０１２６】
ついで、制御部７７は、各項目について２つずつ得られた蛍光強度の平均値を算出する（ステップＳ５２）。
つぎに、ＣＤＫ１活性の蛍光強度（平均値）からバックグラウンド活性（平均値）を引くとともに、ＣＤＫ２活性の蛍光強度（平均値）からバックグラウンド活性（平均値）を引くことにより、ＣＤＫ１活性及びＣＤＫ２活性についてバックグラウンド補正が行なわれる。ＣＤＫ１発現及びＣＤＫ２発現についても同様にしてバックグラウンド補正が行なわれる（ステップＳ５３）。
【０１２７】
ついで、それぞれの項目について、検量線を用いて発現量及び活性値が取得される（ステップＳ５４）。なお、この検量線は、蛍光強度を発現量又は活性値に変換するためのデータであり、試薬のロットが変更されたときに、発現量又は活性値が既知である２種類以上の検体を用いて予め作成され、制御部７７のハードディスク９１ｇに記憶される。
つぎに、以下の式に従い、ＣＤＫ１比活性及びＣＤＫ２比活性が算出される（ステップＳ５５）。
ＣＤＫ１比活性＝ＣＤＫ１活性値／ＣＤＫ１発現量
ＣＤＫ２比活性＝ＣＤＫ２活性値／ＣＤＫ２発現量
【０１２８】
また、以下の式に従いＣＤＫ１比活性とＣＤＫ２比活性との比が算出される（ステップＳ５６）。
ＣＤＫ１比活性とＣＤＫ２比活性との比＝ＣＤＫ２比活性／ＣＤＫ１比活性
ついで、前記ＣＤＫ１比活性とＣＤＫ２比活性との比が第１基準値以上であるか否かが判断され（ステップＳ５７）、Ｙｅｓの場合はステップＳ５８に進み、ＣＤＫ１比活性が第２基準値以上であるか否かが判断され、一方、Ｎｏの場合はステップＳ５９に進み、ＣＤＫ１比活性が第３基準値以上であるか否かが判断される。
【０１２９】
ステップＳ５８では、ＣＤＫ１比活性が第２基準値以上であるか否かが判断され、Ｙｅｓの場合は再発リスクが「高」であると判断され、一方、Ｎｏの場合は再発リスクが「低」であると判定される。
また、ステップＳ５９では、ＣＤＫ１比活性が第３基準値以上であるか否かが判断され、Ｙｅｓの場合は、再発リスクが「高」であると判定され、一方、Ｎｏの場合は再発リスクが「低」であると判定される。
【０１３０】
そして、図２２に示されるように、再発リスクの大きさを判定する根拠となるＣＤＫ１比活性及びＣＤＫ２比活性がグラフ上にプロットされて表示（図中、★印で表示している）されるとともに、再発リスクの判定結果が表示される（ステップＳ６０）。図２２に示されるグラフは、横軸にＣＤＫ１比活性をログ（ｌｏｇ）表示し、縦軸にＣＤＫ２比活性をログ（ｌｏｇ）表示している。また、直線Ｌ１、直線Ｌ２及び直線Ｌ３は、それぞれ第１〜第３基準値を示している。なお、図２２に示される例では、参考のために、再発リスクを判定するのに用いたサンプルデータを薄く表示している。
【０１３１】
１）基準値設定方法
ここで、再発リスクの「高」又は「低」を判定するための前記第１〜第３基準値の設定方法について説明する。
［サンプルデータの蓄積］
まず、癌再発の可能性の高低、特定の抗癌剤に対する感受性（有効性）の高低などの癌の診断支援情報を取得するための基準値を求めるには、多数の癌患者の所定の項目（前記ＣＤＫ１比活性など）の測定値と、当該癌患者の悪性腫瘍摘出後の臨床情報とが対応付けられたサンプルデータを蓄積する必要がある。かかるサンプルデータは、制御部７７のハードディスク９１ｇの第２データベース９１ｊに記憶される。
【０１３２】
前記所定の項目としては、例えば第１のサイクリン依存性キナーゼ（第１ＣＤＫ）及び第２のサイクリン依存性キナーゼ（第２ＣＤＫ）の各活性値、第１ＣＤＫ及び第２ＣＤＫの各発現量、第１ＣＤＫの活性値と当該第１ＣＤＫの発現量との比（第１比活性）、第１ＣＤＫの活性値と当該第２ＣＤＫの発現量との比（第２比活性）、前記第１比活性と第２比活性との比（比活性比）などを挙げることができ、これらは前述した本発明の診断支援装置を用いて測定することができる。
また、臨床情報とは、悪性腫瘍を摘出した癌患者の治療内容や術後の経過などを含む情報であり、例えばリンパ節転移の有無、術後療法（無治療、ホルモン療法、化学療法など）、再発の有無、摘出してから再発までの日数、抗癌剤に対する感受性（有効性）、生存率などの情報を挙げることができる。
【０１３３】
図２５〜２６は、乳癌の摘出手術を受けた患者から収集したサンプルデータの例の一部を表で示している。表において、「Ｎｏ．」は患者を識別するための検体番号、患者番号などの番号であり、「Ａｇｅ」及び「Ｍｅｎｓ」はそれぞれ患者の年齢及び閉経の前後を示している。また、「Ｔ」は摘出した腫瘍の大きさを示しており、表記が数字の場合、単位は「ｍｍ」であり、表記がローマ字の場合、「ａ」が２ｃｍ以下、「ｂ」が２〜５ｃｍ、「ｃ」が５ｃｍ以上を表している。なお、前記サンプルデータに、測定対象となる検体の採取量や血液混入度などの検体に関する情報を適宜含ませることもできる。
【０１３４】
図２５〜２６において、Ｍで示す部分が測定項目であり、Ｃで示す部分が臨床情報である。各測定項目の内容は、以下のとおりである。
ＣＤＫ１Ａ：ＣＤＫ１の活性値
ＣＤＫ２Ａ：ＣＤＫ２の活性値
ＣＤＫ１Ｅ：ＣＤＫ１の発現量
ＣＤＫ２Ｅ：ＣＤＫ２の発現量
ＣＤＫ１ＳＡ：ＣＤＫ１の比活性
ＣＤＫ２ＳＡ：ＣＤＫ２の比活性
ＣＤＫ２／１：ＣＤＫ１の比活性とＣＤＫ２の比活性の比
【０１３５】
また、各臨床情報の内容は、以下のとおりである。
術後補助：摘出手術後に行われた療法の情報であり、術後補助１がホルモン療法、術後補助２が化学療法を示す。ホルモン療法の場合は、治療で使用したホルモン剤の種類が記載されている。
ＴＡＭ；タモキシフェン
ＴＯＲ；トレミフェン 
ＺＯＬ；ゾラデックス 
Ａｒｏｍａｃｉｎ；Ａｒｏｍａｔａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
Ａｒｉｍｉｄｅｘ；Ａｒｏｍａｔａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
【０１３６】
また、化学療法の場合は、抗癌剤の種類が記載されている。
ＣＭＦ；Ｃｙｃｌｏ−ｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ、Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ
ＣＥＦ；Ｃｙｃｌｏ−ｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ、Ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ（アンスラサイクリン系抗生物質）、Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ
ＣＥ；Ｃｙｃｌｏ−ｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ、Ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ
なお、「０」は実施無しを示す。
再発：再発の有無を示し、「１」が再発無、「０」が再発有である。
ＤＦＳ：摘出手術から再発までの日数
【０１３７】
さらに、図２５には示していないが、サンプルデータが以下のような臨床情報を含んでもよい。
ＬＮ：リンパ節転移の有無（０：無、１：有）
ＥＲ、ＰＲ：ホルモン療法の有効性の判定であり、ＥＲがＥｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒの有無、ＰＲがＰｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒの有無を示す。それぞれ「１」が有、「０」が無である。
ＨＧ：病理学的悪性度を１〜３の３段階で示し、「３」が最も悪い。
ＨＥＲ２：ＨＥＲ２の発現量又は遺伝子数
以上のようなサンプルデータは、乳癌に限らず、胃癌、肺癌など各種の癌に対応して、それぞれ作成することができる。その際、前記臨床情報は、癌の種類に応じて適宜選定することができる。
【０１３８】
［基準値の設定］
癌の再発のリスクと相関関係があると考えられる測定項目を選定し、この測定項目に関する情報を指標ないしはパラメータとする。例えば、ある種の癌の再発リスクとＣＤＫ１の比活性との間に強い相関関係があり、ＣＤＫ１の比活性が大きくなると癌再発のリスクが大きくなると判断される場合、このＣＤＫ１の比活性を指標とし、かかる比活性のある値を基準値とし、この値より大きいケースを再発リスク「高」とし、前記値より小さいケースを再発リスク「低」とする。前記基準値としては、例えば術後５年間における再発の可能性が５０％以上を「高」とし、５０％未満を「低」とするように選定することができる。なお、再発リスクの区分けとしては、「高」と「低」の２段階だけでなく、「高」、「中」及び「低」の３段階、又はそれ以上とすることができ、本発明において特に限定されるものではない。
【０１３９】
癌の再発リスクと相関関係のある指標としては、１つに限らず、２以上を選定することができる。例えば、前記ＣＤＫ１の比活性に加えて、ＣＤＫ２の比活性、及びＣＤＫ１の比活性とＣＤＫ２の比活性の比（比活性比）を、基準値を設定する測定項目とすることができる。なお、本明細書において、「測定項目」とは、測定装置によって直接値を得ることができる、前記ＣＤＫの活性値や発現量以外に、この活性値や発現量を基に算出される比活性や、比活性比なども含む概念である。また、ＣＤＫに関する項目以外に、例えばＨＥＲ２なども含まれる。
【０１４０】
前記サンプルデータを用いて、癌の再発リスクと測定項目との関係をグラフ化することができる。図２３の右上に示される図は、乳癌の患者のうち、リンパ節転移がなく、且つホルモン療法のみの患者について、以下の情報を利用して作成した散布図である。
再発：再発の有無
ＣＤＫ１ＳＡ：ＣＤＫ１の比活性
ＣＤＫ２ＳＡ：ＣＤＫ２の比活性
ＣＤＫ２／１：ＣＤＫ１の比活性とＣＤＫ２の比活性の比
【０１４１】
散布図の縦軸はＣＤＫ２の比活性のｌｏｇ値（分かり易くするためにｌｏｇ値としている）、横軸はＣＤＫ１の比活性のｌｏｇ値である。リスク判定に使用する基準値として、以下の３つを設定している。
第１基準値：比活性の比が５．０
第２基準値：ＣＤＫ１の比活性が６
第３基準値：ＣＤＫ１の比活性が９０
【０１４２】
乳癌の場合、一般に、ホルモン療法のみ行ったときに術後５年間の再発率が５％以下となることが予測されるケースを再発リスクが低いと判定し、同様に術後５年間の再発率が１５％を超えることが予測されるケースを再発リスクが高いと判定していることから、術後５年以内に再発した事例が前記所定の割合となるように、前記第１〜３基準値が設定される。図２３に示される散布図では、ＣＤＫ１の比活性がある値よりも小さくなると再発例がなく、また、比活性の比がある値よりも大きくなると再発例が増え、さらに、ＣＤＫ１の比活性がある値よりも大きくなると、比活性の比の値にかかわらず再発例が存在することから、サンプルデータを６つの領域に分け、図２３の左下に示されるように「高（Ｈ）」領域、及び「低（Ｌ）」領域を設定している。そして、「低」領域内に含まれるサンプルデータの術後５年以内に再発した割合が５％以下となり、「高」領域に含まれるサンプルデータの術後５年以内に再発した割合が１５％を超えた値（約２０％）となるように、３つの基準値を設定している。前記図２３の左下に示される図において、各領域に対応してボタンが設けられており、このボタンをクリックすることにより、「高」又は「低」を設定することができる。図２３に示されるような散布図は、癌の種類に応じて作成することができ、また、特定の療法（無治療を含む）毎に作成することができる。例えば、同じ乳癌の患者であっても、特定の化学療法を行った患者群に対して、ＣＤＫ１の比活性、ＣＤＫ２の比活性、及びＣＤＫ１の比活性とＣＤＫ２の比活性の比を指標とした同様の散布図を作成することができる。
【０１４３】
（９）診断支援装置Ａによる処理の全体フロー（実施の形態２）
つぎに、診断支援装置Ａによる実施の形態２に係る処理の全体のフローを図２７〜２９に示す。この実施の形態２に係る処理は、検体番号などの情報の入力が受け付けられた後に、ユーザが、単に測定及び解析を行う判定モードと、測定及び解析した結果を新たなサンプルデータとして装置の記憶部に蓄積するサンプルデータ更新モードとの何れかを選択する工程を含む点が、実施の形態１に係る処理と主に異なっている。
【０１４４】
まず、装置本体２０の電源が投入されると、本体制御部１０の初期化が行われる（ステップＳ３０１）。この初期化動作では、プログラムの初期化や装置本体２０の駆動部分の原位置復帰などが行われる。
パーソナルコンピュータ１２の電源が投入されると、制御部７７の初期化が行われる（ステップＳ５０１）。この初期化動作では、プログラムの初期化などが行われる。初期化が完了すると、入力用画面の表示を指示するための入力画面表示ボタンを含むメニュー画面（図示せず）が表示部７９に表示される。ユーザは、入力部７８を操作することによって、メニュー画面の入力用画面の表示を指示するための入力画面ボタンを選択することができる。
【０１４５】
ついでステップＳ５０２において、制御部７７によって、入力用画面が表示中であるか否かの判断が行われる。制御部７７は、入力用画面が表示中であると判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ５０４−２へ処理を進め、入力用画面が表示中でないと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ５０３へ処理を進める。
ついでステップＳ５０３において、制御部７７によって、入力用画面の表示指示が行われたか否か（メニュー画面の入力用画面の表示を指示するための入力画面ボタンが選択されたか否か）が判断される。制御部７７は、入力用画面の表示指示が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ５０４−１へ処理を進め、入力用画面の表示指示が行われなかったと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ５０９へ処理を進める。
【０１４６】
ついでステップＳ５０４−１において、制御部７７によって、入力用画面が表示部７９に表示される。ここでは、ユーザが入力部７８を操作することによって、検体番号などの測定に関する情報が入力される。さらに、ユーザが入力部７８を操作することによって、判定モード（単に測定及び解析を行うモード）及びサンプルデータ更新モード（測定及び解析した結果を新たなサンプルデータとして装置の記憶部に蓄積するモード）のいずれかのモードが選択される。具体的には、パーソナルコンピュータ１２の表示部７９に、２つのモードの入力ボタンが表示される。オペレータ（ユーザ）は入力部７８を操作して希望するモードの入力ボタンを選択する。また、ユーザが入力部７８を操作して入力用画面に表示されたスタートボタンを選択することにより、測定開始の指示が行われる。
そして、ユーザが入力部７８を操作して入力用画面に表示されたスタートボタンを選択することにより、測定開始の指示が行われる。
【０１４７】
ついで、ステップＳ５０４−２において、制御部７７によって、判定モードが選択されたか否かの判断が行われる。制御部７７は、判定モードが選択されたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ５０５−１へ処理を進め、判定モードが選択されなかったと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ５０５−２へ処理を進める。
【０１４８】
ステップＳ５０４−２において判定モードが選択されたと判断された場合、ついでステップＳ５０５−１において、制御部７７によって、測定開始の指示が行われたか否かが判断される。制御部７７は、測定開始の指示が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ５０６−１へ処理を進め、測定開始の指示が行われなかったと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ５０９へ処理を進める。そして、ステップＳ５０６−１において、測定開始信号が制御部７７から本体制御部１０へ送信される。
【０１４９】
ついでステップＳ３０２において、本体制御部１０によって測定開始信号の受信が行われたか否かの判断をする。本体制御部１０が、測定開始信号の受信が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ３０３へ処理を進め、測定開始信号の受信が行われなかったと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ３０８へ処理を進める。
ついでステップＳ３０３において、発現量測定用の試料が調製される。ここでは、第１試薬セット部５にセットした検体容器から検体が吸引される。そして、吸引された検体に所定の処理が施されて、発現量測定用の試料が調製される。
【０１５０】
さらに、ステップＳ３０４において、活性値測定用の試料が調製される。ここでは、第１試薬セット部５にセットした検体容器から検体が吸引される。そして、吸引された検体に所定の処理が施されて、活性値測定用の試料が調製される。
なお、ステップＳ３０３における発現量測定用試料の調製、及びステップＳ３０４における活性値測定用試料が調製の詳細は、それぞれ実施の形態１におけるステップＳ３（図１８）及びステップＳ４（図１９）と同様であるので、その説明を省略する。
【０１５１】
ついでステップＳ３０５において、発現量測定用の試料及び活性値測定用の試料を含むタンパク固相用チップ１０１がセットされたチップセット部１が、図１に示される位置から検出部４の中に移動する。
ついでステップＳ３０６において、タンパク固相用チップ１０１の各ウェルに励起光が照射され、前記各試料から放射される蛍光が検出される。
そしてステップＳ３０７において、検出された検出結果が、本体制御部１０から制御部７７に送信される。
【０１５２】
つぎにステップＳ５０７−１において、制御部７７によって、検出結果の受信が行われたか否かが判断される。制御部７７は、検出結果の受信が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ５０８−１に処理を進める。一方、検出結果の受信が行われなかった場合には、制御部７７は再びステップＳ５０７−１の処理を実行する。
そして、ステップＳ５０８−１において、制御部７７によって、取得した検出結果から解析処理（解析処理Ａ）が実行され、解析結果が出力される。
【０１５３】
一方、サンプルデータ蓄積モードが選択されたためにステップＳ５０４−２において判定モードが選択されなかったと判断された場合、ついでステップＳ５０５−２において、制御部７７によって、測定開始の指示が行われたか否かが判断される。このステップＳ５０５−２からステップＳ５０７−２に至る処理は、前記ステップＳ５０５−１からステップＳ５０７−１と同様であるので、説明を省略する。  
そして、ステップＳ５０８−２において、制御部７７によって、取得した検出結果から解析処理（解析処理Ｂ）が実行され、解析結果が出力される。
【０１５４】
ついでステップＳ５０９において、制御部７７によって、サンプルデータ更新画面が表示中であるか否かの判断が行われる。制御部７７は、サンプルデータ更新画面が表示中であると判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ５１３へ処理を進め、サンプルデータ更新画面が表示中でないと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ５１０へ処理を進める。
ついでステップＳ５１０において、制御部７７によって、サンプルデータ更新画面の表示指示が行われたか否かが判断される。制御部７７は、サンプルデータ更新画面の表示指示が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ５１１へ処理を進め、サンプルデータ更新画面の表示指示が行われなかったと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ５１５へ処理を進める。
【０１５５】
ついでステップＳ５１１において、制御部７７のＲＡＭ９１ｇが、ハードディスク９１ｇの第２データベース９１ｊに記憶されているサンプルデータを読み出す。
そして、ステップＳ５１２において、読み出されたサンプルデータを含むサンプルデータ更新画面が表示部７９に表示される。ここでは、実施の形態１と同様にして、ユーザが入力部７８を操作することによって、変更する項目が選択され、選択された項目について変更後の情報が入力される。
【０１５６】
ついでステップＳ５１３において、制御部７７によって、新たなサンプルデータの入力が行われたか否かが判断される。制御部７７は、新たなサンプルデータの入力が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ５１４へ処理を進め、新たなサンプルデータの入力が行われなかったと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ５１５へ処理を進める。
ついでステップＳ５１４において、入力された新たなサンプルデータがハードディスク９１ｇの第２データベース９１ｊに記憶される。
【０１５７】
ついでステップＳ５１５において、制御部７７によって、基準値更新画面が表示中であるか否かの判断が行われる。制御部７７は、基準値更新画面が表示中であると判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ５１９へ処理を進め、基準値更新画面が表示中でないと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ５１６へ処理を進める。
ついでステップＳ５１６において、制御部７７によって、基準値更新画面の表示指示が行われたか否かが判断される。制御部７７は、基準値更新画面の表示指示が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ５１７へ処理を進め、基準値更新画面の表示指示が行われなかったと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ５２１へ処理を進める。
【０１５８】
ついでステップＳ５１７において、制御部７７のＲＡＭ９１ｇが、ハードディスク９１ｇの第２データベース９１ｊに記憶されているサンプルデータ及び第１データベース９１ｉに記憶されている基準値を読み出す。
そして、ステップＳ５１８において、読み出されたサンプルデータ及び基準値に基づき作成されたグラフを含む基準値更新画面（実施の形態１に関連して説明をした図２３〜２４参照）が表示部７９に表示される。
【０１５９】
ついでステップＳ５１９において、制御部７７によって、基準値を変更する入力が行われたか否かが判断される。制御部７７は、新たな基準値の入力が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ５２０へ処理を進め、新たな基準値の入力が行われなかったと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ５２１へ処理を進める。
ついでステップＳ５２０において、入力された新たな基準値がハードディスク９１ｇの第１データベース９１ｉに記憶される。
【０１６０】
ついでステップＳ５２１において、制御部７７によって、シャットダウンする指示を受け付けているか否かが判断される。制御部７７は、シャットダウンする指示を受け付けていると判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ５２２に処理を進め、シャットダウンする指示を受け付けていないと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ５０２に戻る。そして、ステップＳ５２２において、シャットダウン信号が制御部７７から本体制御部１０へ送信される。ついで、ステップＳ５２３において、制御部７７によりパーソナルコンピュータ１２のシャットダウンの処理が行われ、処理が完了する。
【０１６１】
また、ステップＳ３０８において、本体制御部１０によって、シャットダウン信号の受信が行われたか否かの判断が行われる。本体制御部１０は、シャットダウン信号の受信が行われたと判断した場合（Ｙｅｓ）にはステップＳ３０９に処理を進め、シャットダウン信号の受信が行われていないと判断した場合（Ｎｏ）にはステップＳ３０２に戻る。そして、ステップＳ３０９において、本体制御部１０により、装置本体２０のシャットダウンが行われ、処理が終了する。
【０１６２】
（１０）解析処理Ａ（ステップＳ５０８−１）
図３０に示されるように、検出部で得られた蛍光強度から解析がなされ、その解析結果が出力される。この処理は、図２１に示される解析処理と同様である。
【０１６３】
まず、制御部７７は、検出部４の受光系から本体制御部１０を介して、ＣＤＫ１の活性、ＣＤＫ１の発現、ＣＤＫ２の活性、ＣＤＫ２の発現、バックグラウンドの活性、及びバックグラウンドの発現のそれぞれについて、２つずつ蛍光強度を取得する（ステップＳ３５１）。
【０１６４】
ついで、制御部７７は、各項目について２つずつ得られた蛍光強度の平均値を算出する（ステップＳ３５２）。
つぎに、ＣＤＫ１活性の蛍光強度（平均値）からバックグラウンド活性（平均値）を引くとともに、ＣＤＫ２活性の蛍光強度（平均値）からバックグラウンド活性（平均値）を引くことにより、ＣＤＫ１活性及びＣＤＫ２活性についてバックグラウンド補正が行なわれる。ＣＤＫ１発現及びＣＤＫ２発現についても同様にしてバックグラウンド補正が行なわれる（ステップＳ３５３）。
【０１６５】
ついで、それぞれの項目について、検量線を用いて発現量及び活性値が取得される（ステップＳ３５４）。なお、この検量線は、蛍光強度を発現量又は活性値に変換するためのデータであり、試薬のロットが変更されたときに、発現量又は活性値が既知である２種類以上の検体を用いて予め作成され、制御部７７のハードディスク９１ｇに記憶される。
つぎに、以下の式に従い、ＣＤＫ１比活性及びＣＤＫ２比活性が算出される（ステップＳ３５５）。
ＣＤＫ１比活性＝ＣＤＫ１活性値／ＣＤＫ１発現量
ＣＤＫ２比活性＝ＣＤＫ２活性値／ＣＤＫ２発現量
【０１６６】
また、以下の式に従いＣＤＫ１比活性とＣＤＫ２比活性との比が算出される（ステップＳ３５６）。
ＣＤＫ１比活性とＣＤＫ２比活性との比＝ＣＤＫ２比活性／ＣＤＫ１比活性
ついで、前記ＣＤＫ１比活性とＣＤＫ２比活性との比が第１基準値以上であるか否かが判断され（ステップＳ３５７）、Ｙｅｓの場合はステップＳ５８に進み、ＣＤＫ１比活性が第２基準値以上であるか否かが判断され、一方、Ｎｏの場合はステップＳ３５９に進み、ＣＤＫ１比活性が第３基準値以上であるか否かが判断される。
【０１６７】
ステップＳ３５８では、ＣＤＫ１比活性が第２基準値以上であるか否かが判断され、Ｙｅｓの場合は再発リスクが「高」であると判断され、一方、Ｎｏの場合は再発リスクが「低」であると判定される。
また、ステップＳ３５９では、ＣＤＫ１比活性が第３基準値以上であるか否かが判断され、Ｙｅｓの場合は、再発リスクが「高」であると判定され、一方、Ｎｏの場合は再発リスクが「低」であると判定される。
【０１６８】
そして、図２２に示されるように、再発リスクの大きさを判定する根拠となるＣＤＫ１比活性及びＣＤＫ２比活性がグラフ上にプロットされて表示（図中、★印で表示している）されるとともに、再発リスクの判定結果が表示される（ステップＳ３６０）。図２２に示されるグラフは、横軸にＣＤＫ１比活性をログ（ｌｏｇ）表示し、縦軸にＣＤＫ２比活性をログ（ｌｏｇ）表示している。また、直線Ｌ１、直線Ｌ２及び直線Ｌ３は、それぞれ第１〜第３基準値を示している。なお、図２２に示される例では、参考のために、再発リスクを判定するのに用いたサンプルデータを薄く表示している。
【０１６９】
（１１）解析処理Ｂ（ステップＳ５０８−２）
図３１に示されるように、検出部で得られた蛍光強度から解析がなされ、その解析結果が出力される。この解析処理Ｂにおいて、蛍光強度を取得するステップＳ４５１からＣＤＫ１の比活性と第３基準値とを比較するステップＳ４５９までは、前記解析処理ＡにおけるステップＳ３５１〜３５９までと全く同様であるので、それらについての説明は省略する。
【０１７０】
解析処理Ｂでは、再発リスクの判定が行われた後に、検体の測定値及び解析結果（判定結果を含む）がサンプルデータに追加される、換言すれば制御部７７のハードディスク９１ｇに蓄積される（ステップＳ４６０）。
そして、図２２に示されるように、再発リスクの大きさを判定する根拠となるＣＤＫ１比活性及びＣＤＫ２比活性をグラフ上にプロットして表示するとともに、再発リスクの判定結果を表示する（ステップＳ４６１）。
【０１７１】
なお、実施の形態１及び２では、再発リスクを「高」又は「低」と判定しているが、前述したように、判定の区分けは２つだけでなく、３以上とすることもできる。図３２は、判定領域を「高」、「中」及び「低」の３つとした基準値変更画面の例を示している。この例は、ＣＤＫ１の比活性、及びＣＤＫ１の比活性とＣＤＫ２の比活性との比（比活性比）を再発リスク判定のための指標としている点は、図２３に示される例と同じである。ただし、図３２に示される例では、ＣＤＫ１の比活性について、低位基準値（＝５）及び高位基準値（＝９０）に加え、中位基準値（＝２０）を設定し、前記比活性比を含めて４つの基準値を採用している。
【０１７２】
そして、前記４つの基準値により区分けされる８つの領域を、再発リスク「高」、再発リスク「中」又は再発リスク「低」にいずれかに設定している。具体的には、前記比活性比に係る基準値よりも大きく、且つ中位基準値よりも大きい領域を「高」領域としている。また、前記比活性比に係る基準値よりも大きく、中位基準値よりも小さく、且つ低位基準値よりも大きい領域を「中」領域としている。さらに、前記比活性比に係る基準値よりも大きく、且つ低位基準値よりも小さい領域を「低」領域としている。
【０１７３】
一方、前記比活性比に係る基準値よりも小さい領域については、高位基準値よりも大きい領域を「高」領域とし、当該高位基準値よりも小さい領域を「低」領域としている。
この例においても、グラフにおいて基準値を表す直線にポインタを合わせてドラッグすることで、又は、画面中にスクロールバーやボタン（図示せず）を設け、これらを操作することで、基準値を変更することができる。また、図３２に示される例では、リスクの高中低に対応して３種類の生存曲線が作成され、表示される。この例でも、基準値を変更させると、変更後の基準値により区分けされる領域内に含まれるサンプルデータに基づいて前述した生存曲線が新たに作成され、表示される。したがって、ユーザは、この生存曲線を見ながら、５年経過時における再発率が所定の範囲内の値になるように、適宜基準値を変更させることができ、その結果、判定精度の高い基準値を設定することができる。
【０１７４】
また、前述した実施の形態では、ＣＤＫ１及びＣＤＫ２の活性値や発現量から算出される値を再発リスク判定用の指標としているが、本発明は、これに限定されるものではなく、前記ＣＤＫ１及びＣＤＫ２の活性値や発現量から算出される値とは異なる指標を用いることもでき、さらには前記ＣＤＫ１及びＣＤＫ２の活性値や発現量から算出される値と他の指標を組み合わせて用いることもできる。
【０１７５】
図３３は、ＣＤＫ１の比活性とＣＤＫ２の比活性との比（比活性比）と、ＨＥＲ２の発現量とを組み合わせて再発リスクの判定を行う場合の基準値変更画面の例を示している。
この例では、ＨＥＲ２の発現量の基準値を０．７に設定しており、ＨＥＲ２の発現量が０．７以上の場合を「Ｈｉｇｈ」とし、０．７未満の場合を「Ｌｏｗ」としている。また、前記比活性比（ＣＤＫ２／１）の基準値を５．０に設定しており、ＣＤＫ２／１が５．０以上を「Ｈｉｇｈ」とし、５．０未満の場合を「Ｌｏｗ」としている。
【０１７６】
図３３において、Ｘで示されるグラフは、各患者検体のＨＥＲ２発現量を示しており、黒く塗りつぶされている検体番号は、ＣＤＫ２／１が「Ｈｉｇｈ」であることを表している。
この例では、例えばつぎのようにして、再発リスクの高中低が判定される。比活性比及びＨＥＲ２発現量がともに「Ｌｏｗ」の場合は、再発リスクは「低」であると判定する。また、両方とも「Ｈｉｇｈ」である場合は、再発リスクは「高」であると判定する。さらに、一方が「Ｈｉｇｈ」で、他方がＬｏｗ」の場合は、再発リスクは「中」であると判定する。
なお、この図３３に示される例においても、実施の形態１及び２、並びに図３２に示される例と同様の方法で基準値を変更することができ、また基準値の変更により新たな生存曲線が作成され、表示される。
【０１７７】
また、前述した実施の形態では、癌の悪性度（再発リスク）の判定を行う診断支援装置を例に挙げて説明しているが、本発明は、これに限定されるものではない。本発明は、抗癌剤の有効性（感受性）の判定を行う診断支援装置に適用することもできる。
【０１７８】
ＣＤＫを用いた抗癌剤の感受性を予測する方法について説明をする。
抗癌剤の感受性を予測する方法は、患者から採取した悪性腫瘍細胞のサイクリン依存性キナーゼの活性値、発現量、及び活性値と発現量との比からなる群より選択される少なくとも１つのパラメータと、選択されたパラメータに対応する基準値とを比較する工程；及び前記比較工程の結果に基づいて、前記患者の抗癌剤の感受性を予測する工程を含んでいる。
【０１７９】
前記予測方法で抗癌剤の感受性が高いと予測された場合、術前であれば、原発巣が存在する状態で抗癌剤を投与し続けた結果、原発巣が縮小ないし消失する可能性が高いと考えられる。また、術後であれば、腫瘍の摘出手術を行なった後に抗癌剤を投与することにより癌が再発しない可能性が高いと考えられる。
逆に、前記予測方法で抗癌剤の感受性が低いと予測された場合、術前であれば、原発巣が存在する状態で抗癌剤を投与し続けた結果、原発巣が縮小ないし消失する可能性が低いと考えられる。また、術後であれば、腫瘍の摘出手術を行なった後に抗癌剤を投与し続けても癌が再発する可能性が高いと考えられる。
【０１８０】
前記予測方法に用いられる試料となる組織は、患者から採取した悪性腫瘍細胞を含む組織である。術後療法の場合、癌の摘出手術によりこれらの組織を入手できるので、これを利用することができる。術前療法の場合には、患者の腫瘍組織から生検した組織（バイオプシー）などを用いることができる。
前記予測方法で用いられるサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）としては、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、サイクリンＡ依存性キナーゼ、サイクリンＢ依存性キナーゼ、サイクリンＤ依存性キナーゼ、及びサイクリンＥ依存性キナーゼなどが挙げられ、癌の種類、抗癌剤の種類に応じて適宜選択される。つまり、癌には種々の種類があり、各患者の癌細胞がもっている細胞周期に関連する性格が、抗癌剤の感受性に大いに関係するからである。
【０１８１】
癌の種類としては、乳癌、胃癌、大腸癌、食道癌、卵巣癌、前立腺癌などが挙げられる。また、抗癌剤としては、乳癌に対しては、例えばＣＭＦ群（シクロフォスファミド、メトトレキシエート、フルオロウラシルの３剤を併用して投与する療法）、ドセタキセル、パクリタキセルなどのタキサン系抗癌剤、ＣＥ（シクロフォスファミド、エピルビシンの２剤を併用して投与する療法）、ＡＣ（ドキソルビシン、シクロフォスファミドの２剤を併用して投与する療法）、ＣＡＦ（フルオロウラシル、ドキソルビシン、シクロフォスファミドの３剤を併用して投与する療法）、ＦＥＣ(フルオロウラシル、エピルビシン、シクロフォスファミドの３剤を併用して投与する療法)、トラスツズマブとパクリタキセルの２剤を併用して投与する療法、カペシタビンなどが挙げられ、胃癌に対しては、例えばＦＡＭ（フルオロウラシル、ドキソルビシン、マイトマイシンＣの３剤を併用して投与する療法）、ＦＡＰ（フルオロウラシル、ドキソルビシン、シスプラチンの３剤を併用して投与する療法）、ＥＣＦ（エピルビシン、シスプラチン、フルオロウラシルの３剤を併用して投与する療法）、マイトマイシンＣとテガフールの２剤を併用して投与する療法、フルオロウラシルとカルムスチンの２剤を併用して投与する療法などが挙げられ、大腸癌に対しては、例えばフルオロウラシルとロイコボリンの２剤を併用して投与する療法、マイトマイシンとフルオロウラシルの２剤を併用して投与する療法などが挙げられ、卵巣癌に対しては、例えばＴＰ（パクリタキセル、シスプラチンの２剤を併用して投与する療法）、ＴＪ（パクリタキセル、カルボプラチンの２剤を併用して投与する療法）、ＣＰ（シクロフォスファミド、シスプラチンの２剤を併用して投与する療法）、ＣＪ（シクロフォスファミド、カルボプラチンの２剤を併用して投与する療法）などが挙げられる。
【０１８２】
抗癌剤の感受性を予測する際に指標とするのは、ＣＤＫの活性値、発現量、及び活性値と発現量との比から選択される１つ又は２つのパラメータである。活性値と発現量との比は、ＣＤＫ活性値／ＣＤＫ発現量で示されるＣＤＫ比活性であってもよいし、ＣＤＫ発現量／ＣＤＫ活性値で示される値（ＣＤＫ比活性の逆数）であってもよい。
前記パラメータを所定の基準値と比較することにより細胞の抗癌剤に対する感受性を予測することができる。ここで活性値、発現量、及び活性値と発現量との比から選択されるパラメータとは、抗癌剤の種類、癌の種類により適宜選択されるパラメータである。このパラメータは、過去に抗癌剤治療が行われ、その結果が判明している癌患者から抗癌剤治療の前に摘出されて保存されていた腫瘍細胞について、ＣＤＫの活性値と発現量を測定し、それぞれのパラメータについて、抗癌剤治療結果を解析し、抗癌剤治療結果と相関のあるパラメータを抗癌剤の感受性予測に用いるパラメータとして選択したものである。
【０１８３】
基準値と比較するパラメータは、所定のＣＤＫにおける１つのパラメータであってもよいし、２つのパラメータの組合せであってもよい。２つのパラメータを選択する場合、それぞれにおけるパラメータをそれぞれの基準値と比較する。
判定の指標となるＣＤＫは、１種類であってもよいし（第１の感受性予測方法）、２種類以上であってもよい（第２の感受性予測方法）。
【０１８４】
２種類以上のＣＤＫを採用する場合、複数のＣＤＫについて、それぞれにおけるパラメータをそれぞれの基準値と比較し、各キナーゼの比較結果の組み合わせにより、有効性を予測してもよい（第２−１の感受性予測方法）。この場合、基準値と比較するパラメータの種類は、複数のＣＤＫにおいて、同じ種類のパラメータ（例えば発現量）を用いてもよいし、異なる種類のパラメータ（例えば、一方のＣＤＫについては発現量を比較し、他方のＣＤＫについては活性値を比較する）を用いてもよい。
【０１８５】
また、複数種類のＣＤＫを採用する場合において、まず第１の感受性予測方法で、第１のＣＤＫに基づいて予測し、第１の感受性予測方法で感受性が低いと予測された腫瘍細胞に関して、第１のＣＤＫとは異なるＣＤＫについて、活性値、発現量、及び活性値と発現量との比から選択されるパラメータと、該パラメータに対応する基準値と比較することによって、感受性を予測してもよい（第２−２の感受性予測方法）。第２−２の感受性予測方法で、第１ＣＤＫと異なるＣＤＫは、１種類のＣＤＫ（第２ＣＤＫ）であってもよいし、複数種類のＣＤＫ（第３、第４・・・ＣＤＫ）を用いてもよい。複数種類のＣＤＫを用いる場合、それぞれのＣＤＫについて、各ＣＤＫの活性値、発現量、及び活性値と発現量との比からなる群より選択される少なくとも１つのパラメータと、該パラメータに対応する基準値とを比較し、これらの比較結果の組み合わせに基づいて、前記患者の抗癌剤の感受性を予測する。
【０１８６】
第２のＣＤＫについて、感受性の予測に用いるパラメータは、前述した群から選ばれる。パラメータは１つだけ選択してもよいし、２つのパラメータを選択して、それぞれの基準値と比較してもよい。また、異なるＣＤＫとして複数種類のＣＤＫ、すなわち第２、さらには第３、第４のＣＤＫについて測定する場合、判定に使用するパラメータは、全て同種のパラメータ（例えば発現量）を用いてもよいし、異なる種類のパラメータ（例えば、第２のＣＤＫは発現量とし、第３のＣＤＫは活性値とするなどの組み合わせ）を用いてもよい。
【０１８７】
前記第２の感受性予測方法は、予測の正答率を上げる点で有効である。さらに第２−２の感受性予測方法により、第１の感受性予測方法で感受性が低いと予測された場合であっても、抗癌剤が有効に作用する場合が少なくないので、第２の感受性予測方法を採用する意義がある。
また、抗癌剤の効き方にも、さらに病状が悪化することを防止するレベルと、腫瘍を縮小させて、病状を快方に向かわせることができるレベルとに分類することができ、第２の感受性予測方法、特に第２−２の感受性予測方法により、抗癌剤の効き方のレベルを加味した予測を行なうこともできる。
【０１８８】
前記予測方法は、ＣＤＫだけでなく、さらにサイクリン依存性キナーゼインヒビター（ＣＤＫインヒビター）の発現量を、対応する基準値と比較し、前記ＣＤＫの比較結果と、前記ＣＤＫインヒビターの比較結果との組み合わせに基づいて、前記患者の抗癌剤の感受性を予測してもよい（第３の感受性予測方法）。ＣＤＫインヒビターは、サイクリン・ＣＤＫ複合体に結合し、その活性を阻害する因子群で、ＩＮＫ４ファミリーとＣＩＰ／ＫＩＰファミリーに分類される。前記感受性予測方法では、ＣＩＰ／ＫＩＰファミリーが好ましく用いられ、特にｐ２１が好ましく用いられる。ｐ２１は、細胞増殖サイクルにおけるＧ１期及びＧ２期チェックポイントの双方で進行を阻害するインヒビターで、損傷したＤＮＡの修復のための時間を与えることができる。
【０１８９】
第３の感受性予測方法は、ＣＤＫを所定パラメータについて基準値と比較した結果と、ＣＤＫインヒビターの発現量を基準値と比較した結果の組み合わせに基づいて、抗癌剤の感受性を予測してもよいし、第１段階でＣＤＫを所定パラメータについて基準値と比較し、感受性を予測判定した（第１の感受性予測方法）後、感受性が低いと予測された腫瘍細胞について、第２段階でＣＤＫインヒビターの発現量を基準値と比較し、感受性が高いものを選び出すようにしてもよい。
【０１９０】
なお、ＣＭＦ投与群の治療有効性予測因子として、ＨＥＲ２やｐ２１が報告されている。Ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ（ＩＢＣＳＧ）のトライアルでは、ＨＥＲ２が過剰発現している乳癌患者に対してＣＭＦ投与が無効であることが示され、ｐ２１に関しては、ｐ２１高発現患者群における無病生存率が、低発現患者群よりも有意に悪いことが報告されている。しかし、ＨＥＲ２，ｐ２１ともにＣＭＦ療法に対する効果の低い患者群に予測する因子であり、積極的に治療効果のある患者群を予測する因子の報告例はない。一方、前記予測方法は、抗癌剤の治療が有効であることを積極的に示すことができるもので、しかも基準値を厳格にすることで、１００％に近い有効性を期待できる場合を提示することができる。
【０１９１】
前記予測方法において、基準値は、抗癌剤の種類、癌の種類により適宜設定される値である。具体的には、所定の癌患者に対して所定の抗癌剤を投与した抗癌剤治療結果と前記のパラメータとの関係を、多くの抗癌剤治療結果について調べ、多数の抗癌剤治療結果と相関のあるパラメータに関して、その抗癌剤治療結果が有効であった場合を選択できるように設定された値である。好ましくは抗癌剤治療結果が全て有効であった場合のみを選択できるように基準値を設定する。なお、癌患者における抗癌剤治療の結果は、その癌患者の腫瘍細胞の抗癌剤に対する感受性を反映している。ゆえに、癌患者における抗癌剤治療結果が有効であった場合、その癌患者の腫瘍細胞の抗癌剤に対する感受性は高いといえる。このように、実際の臨床治療結果に基づいて基準値の設定が行われるため、確度の高い感受性の予測が可能となる。基準値の設定に用いる臨床治療結果の数を増加させることにより、感受性予測の確度を向上させることができる。なお、抗癌剤治療結果としては、所定の抗癌剤治療を続けることにより生じた腫瘍サイズの変化や、抗癌剤投与を５〜６年続けて再発の有無を調べた結果などがあげられる。
【０１９２】
なお、ＣＤＫ活性値／ＣＤＫ発現量で算出されるＣＤＫ比活性は、細胞に存在しているＣＤＫのうち、活性を示すＣＤＫの割合に相当し、測定対象である悪性腫瘍細胞の増殖状態に基づくＣＤＫ活性レベルといえる。このようにして求められるＣＤＫ比活性は、測定に供する試料の調製方法に依存しない。測定試料調製方法、特に生検材料から調製される細胞可溶化液は、実際に採取された組織中に含まれる非細胞性組織、例えば細胞外基質の多寡による影響を受けやすい。従って、ＣＤＫ比活性又はその逆数を用いることにより、測定試料調製時に不可避の影響を控除することができ、タンパク質に着目した判定方法であっても、高精度に感受性を予測することができる。
【０１９３】
ＣＤＫインヒビター発現量とは、細胞可溶化液から測定される目的のＣＤＫインヒビター量（分子個数に対応する単位）であって、タンパク質混合物から目的の蛋白質量を測定する従来公知の方法で測定できる。例えば、ＥＬＩＳＡ法、ウェスタンブロット法などを使用してもよい。目的の蛋白質（ＣＤＫインヒビター）は、特異的抗体を用いて捕捉すればよい。目的のタンパク質と特異的に結合できるものであれば、モノクローナル抗体であっても、ポリクローナル抗体であってもよい。例えば、ｐ２１を捕捉する場合、抗ｐ２１モノクローナル抗体、抗ｐ２１ポリクローナル抗体のいずれも用いることができる。
【０１９４】
抗癌剤の感受性を判定する診断支援装置としては、上述したような第１の感受性予測方法を用いて抗癌剤の感受性を判定する構成とすることもできるし、第２の感受性予測方法又は第３の感受性予測方法を用いて抗癌剤の感受性を判定する構成とすることもできる。ここでは、第３の感受性予測方法として、ＣＤＫ２とｐ２１とを用いてＴａｘａｎｅの感受性を判定する診断支援装置を例に挙げて、抗癌剤の感受性判定に用いられる基準値を変更する構成について説明する。この診断支援装置では、試料を分析することによりＣＤＫ２の比活性と、ｐ２１の発現量とを取得する。取得されたＣＤＫ２の比活性とｐ２１の発現量とが所定の基準値と比較され、これによって患者のＴａｘａｎｅに対する感受性が判定される。この診断支援装置では、Ｔａｘａｎｅ感受性判定に用いられるＣＤＫ２の基準値と、ｐ２１の基準値とがハードディスク等の記憶部に記憶されている。これらのＣＤＫ２の基準値と、ｐ２１の基準値とは、それぞれ画面上で変更することが可能となっている。
図３４は、ＣＤＫ２の比活性とｐ２１の発現量とを組み合わせて抗癌剤であるＴａｘａｎｅの感受性の予測を行う場合の基準値変更画面の例を示している。この例では、ＣＤＫ２の比活性の基準値を４００に設定しており、ＣＤＫ２の比活性が４００以上の場合を「Ｈｉｇｈ」とし、４００未満の場合を「Ｌｏｗ」としている。また、ｐ２１の発現量の基準値を８と設定しており、ｐ２１の発現量が８以上の場合は「Ｈｉｇｈ」とし、ｐ２１の発現量が８未満の場合は「Ｌｏｗ」としている。
【０１９５】
図３４において示されるグラフは、縦軸にｐ２１の発現量をとり横軸にＣＤＫ２の比活性をとった場合の散布図を示している。図中において、Ｔａｘａｎｅの感受性が高いタイプＩの患者から得られたデータは丸で示されており、Ｔａｘａｎｅの感受性が中位であるタイプＩＩの患者から得られたデータは四角で示されており、Ｔａｘａｎｅの感受性が低いタイプＩＩＩの患者から得られたデータは三角で示されている。
この例では、例えばつぎのようにして、再発リスクの高中低が判定される。ＣＤＫ２比活性が「Ｈｉｇｈ」の場合には、感受性が高いタイプＩであると判定する。また、ＣＤＫ２比活性が「Ｌｏｗ」でありｐ２１発現量が「Ｈｉｇｈ」の場合には、感受性が低いタイプＩＩＩと判定する。さらに、ＣＤＫ２比活性及びｐ２１発現量が共に「Ｌｏｗ」の場合には、感受性が中位であるタイプＩＩと判定する。
なお、この図３４に示される例においても、グラフにおいて基準値を表す直線にポインタを合わせてドラッグすることで、又は、画面中にスクロールバーやボタン（図示せず）を設け、これらを操作することで、基準値を変更することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１９６】
【図１】本発明の診断支援装置の一実施の形態の斜視説明図である。
【図２】図１に示される診断支援装置におけるチップセット部及びタンパク固相用チップの斜視説明図である。
【図３】図１に示される診断支援装置におけるチップセット部及びタンパク固相用チップの断面説明図である。
【図４】タンパク固相用チップの上部プレート及び下部プレートの分解説明図である。
【図５】上部プレートを下部プレートに装着した状態のタンパク固相用チップの斜視説明図である。
【図６】図１に示される診断支援装置における活性測定ユニットの試料調製部のカラムの断面説明図である。
【図７】図１に示される診断支援装置における活性測定ユニットの試料調製部の斜視図である。
【図８】図７に示される試料調製部の流体マニホールドの上面図である。
【図９】図８のＤ−Ｄ矢視断面図である。
【図１０】図７に示される試料調製部の流体回路図である。
【図１１】診断支援装置を制御する制御系を示すブロック図である。
【図１２】データ処理部のハードウェア構成を示すブロック図である。
【図１３】本体制御部のハードウェア構成を示すブロック図である。
【図１４】細胞周期を説明するための図である。
【図１５】診断支援装置による処理の一例の全体フローを示す図である。
【図１６】診断支援装置による処理の一例の全体フローを示す図である。
【図１７】診断支援装置による処理の一例の全体フローを示す図である。
【図１８】発現量測定用試料の調製処理のフローを示す図である。
【図１９】活性測定用試料の調製処理のフローを示す図である。
【図２０】診断支援装置における検体などの利用手順を示す説明図である。
【図２１】診断支援装置による解析処理の一例の全体フローを示す図である。
【図２２】診断支援情報表示画面の例を示す図である。
【図２３】基準値変更画面（変更前）の例を示す図である。
【図２４】基準値変更画面（変更後）の例を示す図である。
【図２５】サンプルデータの例を示す図である。
【図２６】サンプルデータの例を示す図である。
【図２７】診断支援装置による処理の他の例の全体フローを示す図である。
【図２８】診断支援装置による処理の他の例の全体フローを示す図である。
【図２９】診断支援装置による処理の他の例の全体フローを示す図である。
【図３０】診断支援装置による解析処理の他の例の全体フローを示す図である。
【図３１】診断支援装置による解析処理のさらに他の例の全体フローを示す図である。
【図３２】３段階の判定を行う場合の基準値変更画面の例を示す図である。
【図３３】ＣＤＫ１及びＣＤＫ２以外にＨＥＲ２を指標として用いた基準値変更画面の例を示す図である。
【図３４】ＣＤＫ２とｐ２１を指標として用いた基準値変更画面の例を示す図である。
【符号の説明】
【０１９７】
１チップセット部
２活性測定ユニット
３分注機構部
４検出部
５第１試薬セット部
６第２試薬セット部
７廃液槽
８ピペット洗浄槽
９流体部
１０本体制御部
１１空圧源
１２パーソナルコンピュータ（データ処理部）
１３純水タンク
１４洗浄液タンク
１５廃液タンク
２０装置本体部
３０筐体部
３１操作部
３２駆動部
３３検体セット部
３４ペッスル
７７制御部
７８入力部
７９表示部
９１ａＣＰＵ
９１ｂＲＯＭ
９１ｃＲＡＭ
９１ｄ入力出力インターフェース
９１ｅ画像出力インターフェース
９１ｆ通信インターフェース
９１ｇハードディスク
１０１タンパク固相用チップ
１１１多孔質膜
１１２ろ紙
１１３上部プレート
１１４下部プレート
１１５貫通孔
１１７貫通孔
２０１カラム
２０２担体保持部
２０６担体
２１１試料調製部
２１３流体マニホールド
３０１ａＣＰＵ
３０１ｂＲＯＭ
３０１ｃＲＡＭ
３０１ｄ通信インターフェース
３０１ｅ回路部
Ａ測定装置
Ｂ可溶化装置
Ｌ１第１基準値
Ｌ２第２基準値
Ｌ３第３基準値
【図１】
2008220299.tif 000004
【図２】
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【図３】
2008220299.tif 000006
【図４】
2008220299.tif 000007
【図５】
2008220299.tif 000008
【図６】
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【図７】
2008220299.tif 000010
【図８】
2008220299.tif 000011
【図９】
2008220299.tif 000012
【図１０】
2008220299.tif 000013
【図１１】
2008220299.tif 000014
【図１２】
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【図１３】
2008220299.tif 000016
【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
2008220299.tif 000019
【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
2008220299.tif 000029
【図３０】
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【図３１】
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【図３４】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図３２】
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【図３３】
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