(57)【要約】【課題】パラゴムノキなどの植物のin situハイブリダイゼーションのために組織を固定化する方法と品質を確認する方法を開発することが本発明の課題である。【解決手段】本発明は、植物の組織に固定化剤を30分から18時間作用させることにより該組織中のRNAを固定化し、プロテイナーゼを含む緩衝液に該組織を溶解して該溶解液からRNAを抽出し、抽出されたRNAの分子量を測定し、測定された該分子量を指標として該組織中のRNAの分解の程度を評価する工程を含む植物の細胞内遺伝子の分解評価方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物の組織に固定化剤を30分から18時間作用させることにより該組織中のRNAを固定化し、プロテイナーゼを含む緩衝液に該組織を溶解して該溶解液からRNAを抽出し、抽出されたRNAの分子量を測定し、測定された該分子量を指標として該組織中のRNAの分解の程度を評価する工程を含む植物の細胞内遺伝子の分解評価方法。
【請求項２】
前記植物がラテックス産生植物であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記固定化剤を30分から6時間作用させることを特徴とする請求項１又は請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記固定化剤を30分から2時間作用させることを特徴とする請求項３記載の方法。
【請求項５】
前記固定化剤が4％パラホルムアルデヒド（PFA）固定液、ホルマリン/酢酸/アルコール（FAA）固定液、及びホルマリン/プロピオン酸/アルコール（FPA）固定液からなる群から選択された請求項１から請求項４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
前記組織がパラゴムノキの茎、枝、葉又は根から得られたことを特徴とする請求項１から請求項５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
植物の組織から抽出されたRNA中に存在する18SリボソームRNAに対する28SリボソームRNAの量の比を指標としてRNAの分解の程度を評価することを特徴とする請求項１から請求項６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
植物の組織から抽出されたRNA中に存在する18SリボソームRNAに対する28SリボソームRNAの量の比が１以上である場合に、該組織中のRNAの分解程度は低いと評価することを特徴とする請求項７記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はパラゴムノキ（Hevea brasiliensis）などの植物において、組織（in situ）ハイブリダイゼーションを行なう際のサンプルとなる組織の細胞内遺伝子を安定化し、且つその品質を評価する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在分子生物学の分野で汎用されている技術であるin situハイブリダイゼーションは、組織切片上において、該組織切片中のRNAに対して標識プローブをハイブリダイズさせることによって、個々の細胞内でのmRNA発現量を測定することができる手法である。そのin situハイブリダイゼーションの手法を用いることにより、目的とする遺伝子が生体内のどの部位で発現しているか同定することができる。よってこの手法は、in vitroでの解析を越えて、生体内における目的物質の生合成反応を遺伝子レベルで解析できるという利点を有する。
【０００３】
ところで天然ゴムの品質を改善したり、天然ゴムの生産量を増加させる目的で、パラゴムノキの種々の組織において、本発明者らはゴム生合成遺伝子のスクリーニングを試みている。ゴムの生合成に関与している遺伝子を得ることができれば、遺伝子レベルでゴム生合成の機構を解明することが可能となり、ひいては天然ゴムの遺伝子レベルでの改変を行なって性能の優れた天然ゴムを産出させることができるからである。
【０００４】
しかしパラゴムノキにおいて特にラテックス分泌部位の組織固定は困難であったために、パラゴムノキでin situハイブリダイゼーションを行なった例はこれまでに殆ど存在していなかった。そのために、パラゴムノキのin situハイブリダイゼーションに適した条件、中でもin situハイブリダイゼーションを行なう前にパラゴムノキの組織を固定化する条件に関する知見はこれまで存在しなかった。
【０００５】
なおChyeらは、in situハイブリダイゼーションにより3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル-コエンザイムA還元酵素（HMGR）の遺伝子ファミリーに属するhmg1とhmg3について発現を比較し、hmg3は特定の細胞において発現していることはないが、hmg1は主として乳管細胞において発現していることを示している（非特許文献１）。これまでにパラゴムノキをサンプルとして用いてin situハイブリダイゼーションを行なっている先行技術は非特許文献１のみであるが、この文献においては固定化の条件についての詳細な検討は行なわれていない。
【０００６】
【非特許文献１】Mee-Len Chye et al., Plant Molecular Biology 19 (1992) p473-484
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
よってパラゴムノキなどの植物においてin situハイブリダイゼーションの実験の信頼性を向上させるために、該植物のin situハイブリダイゼーションに先立って該植物の組織切片をRNAの分解を防いで固定化する方法と、パラゴムノキなどの植物の組織切片中においてRNA分解を評価することにより該組織切片サンプルの品質を確認する方法を開発することが本発明の課題である。それによってパラゴムノキなどの植物におけるin situハイブリダイゼーションの信頼性を増すことができる。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するために本発明者らは、パラゴムノキの固定化条件について鋭意検討を行い、パラゴムノキの組織切片を4%PFA、FAA又はホルマリンで30分から18時間処理することにより、該組織切片中のRNAが分解することなく固定化できることができるため、in situハイブリダイゼーション用のサンプルとして品質が良好なものを得られることを見出した。
【０００９】
よって本発明は、以下の(1)から(8)の発明を提供するものである。
(1)植物の組織に固定化剤を30分から18時間作用させることにより該組織中のRNAを固定化し、プロテイナーゼを含む緩衝液に該組織を溶解して該溶解液からRNAを抽出し、抽出されたRNAの分子量を測定し、測定された該分子量を指標として該組織中のRNAの分解の程度を評価する工程を含む植物の細胞内遺伝子の分解評価方法。
(2)前記植物がラテックス産生植物であることを特徴とする上記(1)記載の方法。
(3)前記固定化剤を30分から6時間作用させることを特徴とする上記(1)又は(2)記載の方法。
(4)前記固定化剤を30分から2時間作用させることを特徴とする上記(3)記載の方法。
(5)前記固定化剤が4％パラホルムアルデヒド（PFA）固定液、ホルマリン/酢酸/アルコール（FAA）固定液、及びホルマリン/プロピオン酸/アルコール（FPA）からなる群から選択された上記(1)から(4)のいずれか１記載の方法。
(6)前記組織がパラゴムノキの茎、枝、葉又は根から得られたことを特徴とする上記(1)から(5)のいずれか１記載の方法。
(7)植物の組織から抽出されたRNA中の18SリボソームRNAに対する28SリボソームRNAの量の比を指標としてRNAの分解の程度を評価することを特徴とする上記(1)から(6)のいずれか１記載の方法。
(8)植物の組織から抽出されたRNA中の18SリボソームRNAに対する28SリボソームRNAの量の比が１以上である場合に、該組織中のRNAの分解程度は低いと評価することを特徴とする上記(7)記載の方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明はパラゴムノキなどの植物の組織切片のRNAが分解することなく固定化することを可能とすると共に、該組織切片中のRNAの品質を評価することを可能とするものである。本発明の方法を用いることにより、in situハイブリダイゼーション法の信頼性を向上させることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
上記で述べたように本発明は、in situハイブリダイゼーションを行なうパラゴムノキなどの植物のサンプルにおいて、RNAが分解を防いで該植物の組織切片を固定化する方法と、RNAが固定化されたパラゴムノキなどの植物の組織切片中のRNA分解を評価することにより該組織切片のin situハイブリダイゼーションのサンプルとしての品質を評価する方法を提供するものである。本発明の方法は以下の過程からなる。なお本発明の方法は種々の植物に適用することができるが、ラテックス産生植物に適用することは好適であり、パラゴムノキに適用することは最も好適である。よって以下においてパラコムノキにおける実施形態を説明する。
【００１２】
（１）サンプリング
本発明においてはまずパラゴムノキの組織切片のサンプリングを行なう。サンプリングに用いる木は、それに限定されるものではないが、実生苗、樹齢3年以上の成木を用いるが、成木を用いることが好ましい。なお樹齢5年以上で、周長が46cm以上のものは更に好ましい。ここで、剪定ハサミ、打ち抜きポンチ、コルクボーラー、ピンセットなどのサンプリングに用いる器具は、RNA分解酵素を除いたものを用いる。器具に存在するRNA分解酵素により、サンプル中のRNAが分解することを防ぐためである。なお使用する器具をDEPC（ジエチルピロカーボネート）水に1時間浸漬してオートクレーブ（121℃、20分）することにより、又は240℃で8時間処理することにより、RNA分解酵素を除去することができる。サンプリング時は手袋を着用する。
【００１３】
サンプリンされる組織として、パラゴムノキの幹（茎）、枝、葉、根などが挙げられるが、それらに限定されるものではない。実生苗の茎、枝、葉、根は剪定ハサミでカットする。大きさは茎、枝、根は長さ5cm程度、葉は葉身と葉柄に分け、葉身を長さ5cm程度、葉柄も長さ5cm程度にする。成木の幹、根は打ち抜きボンチ、コルクボーラーで組織を抜き出す。大きさは径4〜10mm×10mmの円柱状にする。
【００１４】
（２）固定化
組織をサンプリングした後、該組織を直ちに固定液中に浸漬する。例えば、4％パラホルムアルデヒド、又はFAA（ホルマリン：酢酸：50％エタノール＝1：1：18）が入ったRNA分解酵素除去済の遠沈管、ビーカーなどの容器に組織を入れる。組織が入った容器は冷蔵保存（4℃〜8℃）する。固定化剤として用いる固定液として4%PFA固定液、FAA固定液及びホルマリンなどを使用することができるが、それらに限定されるものではない。実験の目的に応じて適宜他の固定化剤を使用することができる。
【００１５】
植物組織の固定に一般的に使用されている固定液としては、以下のものが挙げられる。そしてこれらの固定液の中から、サンプル組織の性質や実験の目的に応じて、最も適切な固定液を適宜選択して使用することができる。
（1）4％パラホルムアルデヒド（PFA）固定液
8％パラホルムアルデヒド水溶液と0.2Mリン酸緩衝液（組成：リン酸2水素カリウム、リン酸水素2ナトリウム）を等量混合した固定液である。
（2）ホルマリン/酢酸/アルコール（FAA）固定液
基本組成比は、ホルマリン：氷酢酸：50％エタノール＝1：1：18である。
（3）ホルマリン/プロピオン酸/アルコール（FPA）固定液
基本組成比は、ホルマリン：プロピオン酸：95％エタノール＝2：1：10である。
（4）ボウインズ（Bouin’s）固定液
基本組成比は、ホルマリン：ピクリン酸：氷酢酸＝2：10：1である。
（5）アレンズ（Allen’s）固定液
基本組成は、ホルマリン（15ml）、氷酢酸（10ml）、ピクリン酸（1g）、尿素（1g）、クロム酸(1g)、水（75ml）である。
（6）フレミングズ（Flemming’s）固定液
基本組成は、1％酢酸(10ml)、1％クロム酸(25ml)、脱イオン水（55ml）、2％オスミウム酸(10ml)である。
（7）ベーカーズ（Baker’s）固定液
基本組成Ｉは、ホルマリン（10ml）、10％塩化カルシウム（10ml）、脱イオン水（80m）である。基本組成IIは、ホルマリン（10ml）、酢酸カルシウム−水和物（2g）、脱イオン水（90ml）である。
（8）カモイズ（Camoy’s）固定液
基本組成は、100％エタノール（60ml）、氷酢酸（10ml）、クロロホルム（30ml）である。
（9）ファマーズ（Famer’s）固定液
基本組成は、100％エタノール（75ml）、氷酢酸（25ml）である。
【００１６】
固定液で浸漬した組織を容器から取り出し、4％パラホルムアルデヒド固定液、又はFAA固定液などが入った滅菌シャーレの中に置く。実生苗の茎、根を滅菌したメスで長さ5mm程度に切断する。葉については、葉柄は長さ5mm程度に、葉身は10mm四方に切断する。成木の幹、根は径4〜10mm×lOmmの円柱状の状態にカットし、葉は実生苗と同様に切断する。
【００１７】
このように細断した試料を新鮮な固定液が入った容器に移して浸漬する。容器を真空デシケーターに入れ、真空中で10分間組織内の空気を脱気する。大気圧に戻したときに固定液が入った容器の底に組織が沈むまで繰り返し行う。十分に固定液が浸透した試料は底に沈むので、5回以上繰り返しても固定液中で浮いた状態の組織は取り出す。沈んだ段階から1時間以上室温で固定する。
【００１８】
固定後、直ちに使用しない場合は冷暗所に保存するが、組織の劣化を防ぐため保存期間は半年以内、好ましくは3ケ月以内にする。ただし、固定後にパラフィンまたは樹脂で包埋した組織は1年以上保管してもよい。
【００１９】
（３）パラゴムノキからのRNA単離
RNA単離を行なうにあたりプロテイナーゼ、好ましくはプロテイナーゼKを含むSDS緩衝液に組織切片を加えてインキュベーションすることにより、該組織切片を溶解する。なおプロテイナーゼKは、in situハイブリダイゼーション用の組織切片の調製に一般的に使用されているセリンプロテアーゼである。
【００２０】
組織の形態の保持ならびに標的とする核酸分子（DNA, RNA）の不動化を目的として固定が行われるが、固定により細胞内のRNAと周囲の蛋白質が架橋して該RNAが不動化される。これによりRNA分解酵素による分解を受けることなく、組織内でRNAを保存することができる。RNAの分解を評価するために固定化した試料からRNAを抽出するにあたり、固定化された試料では周囲の蛋白質とRNAが架橋しているので、通常の方法ではRNAは抽出されない。そこでプロテイナーゼ、好ましくはプロテイナーゼKで蛋白質を分解し、蛋白質とRNAの架橋を外してRNAを遊離させることによりRNAの抽出が可能となる。
【００２１】
更にその組織切片の溶解液からRNAを単離する。そのために使用できる種々のRNAの単離方法が本技術分野で知られており、実験の目的に最も適した手法を選択することができる。
【００２２】
採取した組織切片の溶解液からRNAを単離する。本技術分野において種々のRNAの単離方法が知られており、実験の目的に最も適した手法を選択することができる。利用できる手法として、キアゲン社から市販されているRNA精製用キット（RNeasy）を使用する方法、フェノールによりRNAを抽出する方法（フェノール／SDS・LiCl法）、及びCTAB法、hot-borate法などを挙げることができるがそれらに限定されるものではない。なおこれらの手法を、パラゴムノキに適するように改変して適宜用いることができる。
【００２３】
なおキアゲン社のキットを用いるプロトコールの例を下記のＡに、フェノール／SDS・LiCl法）を用いるプロトコールを下記のＢにそれぞれ示す。ＡとＢ共に、（1）〜（4）の工程はパラゴムノキ用にアレンジしたものである。
【００２４】
Ａ.キアゲン社キットを用いる方法
（1）ゴムノキの葉、茎を100mg秤量する。サンプルがラテックスの場合には風袋重量を測定した氷上のエッペンドルフチューブに直接受け、重量を測定して（3）のプロテイナーゼK処理をする。
（2）葉と茎をメスで細かく切断し、液体窒素中、乳鉢で摩砕する。速やかに300μ1のRLTバッファーを加えて磨砕し、氷上の2mlエッペンドルフチューブに入れる。
（3）20μg／mLのプロテイナーゼ Kを含む、250μlのSDSバッファーを加えて緩やかに混和する。
（4）37℃で1時間インキュベートする。
（5）さらに150μ1のRLTバッファーで乳鉢を洗いこみ、全て回収し、ボルテックスミキサーでよく混和する。なおサンプルがラテックスの場合は重量の4から5倍の450μlのRLTバッファーを加える。以降は葉のプロトコールと同じように処理する。
（6）QIAシュレッダーカラムに溶解液を移し、15,000rpmで2分間遠心分離する。残渣が入らないように気をつけながら、フロースルーの上清部分のみを新しい1.5mlエッペンドルフチューブに移し、1/2量のエタノールを加える。
（7）サンプル全量をRNeasy miniカラムに移し、10,000回転で15秒遠心分離し、フロースルーを捨てる。
（8）700mLのRW1バッファーをカラムに入れ10,000回転で15秒遠心分離しカラムを洗浄する。
（9）RNeasy mimiカラムを新しい2mlチューブに移し、500μ1のPREバッファーをカラムに入れ、10,000回転で2分間遠心分離しフロースルーを捨て、再度10,000回転で1分間遠心分離する。
（10）新しい新しい1.5mlエッペンドルフチューブにカラムを移し、RNA分解酵素を含まない水を50μl入れ、10,000回転で1分間遠心分離し、RNAを得る。得られたRNAにつき、RNAの定量を行うと共にその品質を調べる。
【００２５】
Ｂ.フェノール／SDS・LiCl法
（1）ゴムノキの葉、茎を100mg秤量する。サンプルがラテックスの場合には風袋重量を測定した氷上のエッペンドルフチューブに直接受け、重量を測定して（3）のプロテイナーゼK処理にかける。
（2）葉、茎をメスで細かく切断し、液体窒素中乳鉢で摩砕し、氷上の2mlエッペンドルフチューブに入れる。
（3）200μg／mLのプロテイナーゼKを含む、25μlのSDSバッファーを加えて緩やかに混和する。
（4）37℃で1時間インキュベートする。
（5）葉、茎の場合は乳鉢内で300μlの1×抽出バッファー加えてさらに磨砕する。ラテックスの場合はエッペンチューブに当量の2×抽出バッファーを加えてボルテックスミキサーで混ぜる。
（6）抽出溶液と等量の水飽和フェノールを加えてボルテックスミキサーでよく撹拌する。
（7）フェノールと等量のクロロフォルム／イソアミルアルコール（24：1）を加えボルテックスクスミキサーでよく攪拌し、4℃、12,000回転で10分間遠心分離する。
（8）上層を新しいエッペンドルフチューブに移し、等量のフェノール／クロロフォルム／イソアミルアルコール（25：24：1）溶液加えてボルテックスミキサーでよく攪拌し、4℃、12,000回転で10分間遠心分離する。
（9）上層を新しいエッペンドルフチューブに移し、1/3量の10mL LiClを加えてゆるやかに混和した後、−20℃で1時間以上静置し、4℃、15,000回転で30分間遠心分離する。
（10）沈殿に300μlの2M LiCl溶液加えて白色の沈殿を完全に溶かし、4℃、15,000回転で10分間遠心分離する。この操作は白色沈殿がなくなるまで繰り返す。
（11）沈殿をTEバッファーに再溶解し、1/10容量の3M NaOAc（pH5.2）、2.5倍容量のエタノールを加えて攪拌した後、4℃、15,000回転で10分間遠心分離する。
（12）上清を捨て、70％エタノールで洗浄し、真空乾燥機で乾燥後、DEPC処理水に再溶解し、以下に示すようにRNAの定量と品質を調べる。なお、必要に応じてRNA分解酵素阻害剤を加える。
【００２６】
（４）RNAの定量
種々の公知の方法を用いてRNAを定量することができるが、簡便には260nmにおける吸光度を測定することによりRNAを定量することができる。
【００２７】
（５）品質評価
例えばAgilent社のバイオアナライザー2100で電気泳動することにより、抽出したRNAの分子量を測定し、その結果を基にしてRNAの品質を評価することができる。その一態様として、28SリボソームRNAのバンドピークと、18SリボソームRNAのバンドピークを比較することにより、抽出したRNAの品質評価をすることができる。真核生物のRNAの大サブユニットには28S、5.8S、5SrRNAが存在し、小サブユニットには18SrRNAが存在する。28Sは18Sの約２倍の分子量なので、電気泳動を行うことにより分子量で明確に分離することができる。更に細胞内に存在している28Sと18Sの分子数は同程度であるので、28Sと18Sを指標にし、その比を求めることにより定量的にRNAの分解度を評価することができる。
【００２８】
また下記の実施例においては、28S/18SリボソームRNAの強度比が1.0以上であることを評価基準とし、その値より大きければ抽出されたRNAの品質は合格であると判定した。これは米国のBioChain社が行っている受託分析の規格を採用したものであり、その基準に従うと、28S/18SリボソームRNAの強度比が1.0以上ならば品質合格、28S/18Sが2に近いならば高純度、28S/18S<0.5ならば分解が進行していると評価される。しかし本発明で行なわれる評価の基準は上記のものに限定されるものではなく、実験の目的に合わせて評価の基準を適切に設定することができる。
【００２９】
なおAgilent社のバイオアナライザー2100は生化学実験をチップ上で行なえるようにデザインされているので、分析からデータ解析までを自動で行うことが可能であり、それによって作業の効率化と再現性の向上を実現している。具体的にはこの装置を用いて電気泳動実験を行なって解析を行う際に、１検体あたりに必要とされる分析時間は45秒から120秒であり、チップ上の11検体全ての分析時間は20分程度である。よって従来のゲル電気泳動では１回の泳動に45分から1時間を要したことを考えると、Agilent社のバイオアナライザー2100により顕著な高速化が達成されている。更にこの装置は、分析に用いるRNAが5ngから200pgの超微量でも分析が可能であるという利点も有する。
【００３０】
通常のゲル電気泳動を用いてRNAの品質チェックを行うためには大量のRNAサンプルが必要であり、またRnase Freeの処理が面倒であるという問題もあるために、これまでパラゴムノキの品質チェックをゲル電気泳動で行うことはなった。しかしAgilent社バイオアナライザー2100を用いることによって上記で述べたような高速・高感度の分析が可能となり、初めてパラゴムノキのRNAの品質チェックが可能となった。しかし本発明の態様はその装置を用いたものに限定されるものではなく、同等の機能を有する他の装置によっても本発明の目的を達成することができる。そのような他の装置の例として、例えばBiorad社Experionなどを挙げることができる。なお本発明の方法はパラゴムノキに限らず、他の生物のRNA品質をチェックする目的で使用することが可能だと思われる。
【００３１】
このようにしてパラゴムノキの細胞内遺伝子の分解を検討することにより品質を評価し、品質が優良であることを確認したうえで組織切片を作製してin situハイブリダイゼーションを実施することにより、細胞内の遺伝子発現に関して信頼性が高い実験結果を得ることができる。なおin situハイブリダイゼーションの実験を行なうにより、パラゴムノキにおいてゴム生合成候補遺伝子の局在を知ることが可能であり、かかる知見をゴム生合成機構の解明や優良品種の作出に資することができる。
【実施例】
【００３２】
以下に実施例を用いて本発明を説明するが、本発明はこの範囲に限定されるものではない。
【００３３】
パラゴムノキの実生苗から茎を約100mgサンプリングして組織切片となし、そのサンプルを直ちに4％パラホルムアルデヒド（PFA）の固定液中で1時間、6時間、18時間固定した。プロテイナーゼKを含むSDS緩衝液に固定化した組織切片を溶解してプロテイナーゼK処理をした。その後上記に述べたフェノール／SDS・LiCl法のプロトコールに従ってRNAを抽出した。
【００３４】
分光光度計（Nano drop）で260nmにおける吸光度（A260）を基にして抽出されたRNAを定量した。Agilent社のバイオアナライザー2100で電気泳動することにより、抽出したRNAの分子量を測定した。図１に固定化試料においてRNA分析を行なったチャートを示す。そして図１の結果から求めた固定化試料における28S/18SのリボソームRNAの強度比のグラフを図２と表１に示す。固定時間は1時間、6時間、18時間で比較した。
【００３５】
【表１】
2008022741.tif 000002
【００３６】
28S/18SのリボソームRNAの強度比を求め、1.0以上の場合にその組織切片のRNAの分解は起こっておらず、品質は良好であると判定した。表１と図２に示した結果より、パラゴムノキの組織固定の時間が1時間以上（1時間、6時間、18時間）であると、28S/18SのリボソームRNAの強度比は基準として設定した1.0以上となった。なおデータは示さないが、組織固定の時間を30分としたところ、RNAが分解して低分子化したピークが多数認められ、18Sと28SのリボソームRNAのピークは認められなかった。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
パラゴムノキの細胞内遺伝子の固定化方法を検討した結果、本発明により、パラゴムノキなどの植物の組織切片を良好な品質で固定化することが可能となった。RNAの分解が少ない品質の良い組織切片を使用することにより、in situハイブリダイゼーション法の信頼性を向上させることができる。そしてパラゴムノキの種々の組織においてin situハイブリダイゼーション法でゴム生合成遺伝子のスクリーニングを行うことにより、遺伝子レベルでゴム生合成の機構を解明することが可能となり、ひいては天然ゴムの遺伝子レベルでの改変を行ない、性能の優れた天然ゴムを産出させるように改変することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】図１は、パラゴムムノキのサンプルにおいて測定された28S/18SのリボソームRNAの強度比を、4％パラホルムアルデヒドによる固定時間により経時的に示したグラフである。
【図１】
2008022741.tif 000003