(57)【要約】【課題】  貴重な生物由来試料から、不純物を混入させることなく、ＤＮＡを簡便かつ効率よく採取するのに用いられる複数の液を提供する。【解決手段】ＤＮＡ採取に用いられる複数の液は、硬組織からなる生物由来試料を丸ごと用いまたは切断若しくは砕いて用いる断片化操作の後に脱灰操作を施すためにそこに添加されるエチレンジアミン四酢酸含有水溶液（ＥＤＴＡ）、前記ＥＤＴＡに濃度を０．１〜０．５重量％となるように含有させるために加えられる界面活性剤、生物由来試料の中のＤＮＡ−タンパク質の複合体を溶解させる可溶化剤緩衝液、前記ＤＮＡ−タンパク質の複合体の溶解液を調製するために加えられるタンパク質分解酵素液、除タンパク質をするために前記複合体の溶解液に加えられる飽和トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩のフェノール緩衝液またはヨウ化ナトリウム−イソプロパノール含有水溶液を、有する。【選択図】    図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１−１）硬組織からなる生物由来試料を、丸ごと用い、または切断若しくは砕いて用いる断片化操作の後に、脱灰操作を施すために、そこに添加されるエチレンジアミン四酢酸含有水溶液（ＥＤＴＡ）、および
（１−２）前記ＥＤＴＡに、濃度を０．１〜０．５重量％となるように含有させるために加えられる界面活性剤と、
（２−１）生物由来試料の中のＤＮＡ−タンパク質の複合体を溶解させる可溶化剤緩衝液、および
（２−２）前記ＤＮＡ−タンパク質の複合体の溶解液を調製するために加えられるタンパク質分解酵素液と、
（３）除タンパク質をするために前記複合体の溶解液に加えられる飽和トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩のフェノール緩衝液、またはヨウ化ナトリウム−イソプロパノール含有水溶液とを、
有することを特徴とするＤＮＡ採取に用いられる複数の液。
【請求項２】
前記界面活性剤が、イオン界面活性剤であることを特徴とする請求項１に記載のＤＮＡ採取に用いられる複数の液。
【請求項３】
前記イオン界面活性剤が、ドデシル硫酸ナトリウムであることを特徴とする請求項１に記載のＤＮＡ採取に用いられる複数の液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、法医学的なＤＮＡ（デオキシリボ核酸）鑑定の際や、生物学的な遺伝子研究の際に行なわれるもので、生物由来試料からのＤＮＡ採取に用いられる複数の液に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
親子・兄弟の血縁関係を生体組織を用いて鑑定したり、事件・事故の死亡者の組織や戦没者の古い遺骨のような遺体組織から身元を確認したり、犯罪現場での毛髪や体液や体液斑等の遺留品から犯人を特定する証拠を収集したりするために、法医学的なＤＮＡ鑑定が行なわれる。また、ヒト、動植物に関する遺伝子配列決定、遺伝子工学、分子生物学のような生物学的な遺伝子研究のために、ＤＮＡ解析が行なわれる。
【０００３】
このようなＤＮＡ鑑定等の際に、生存または非生存のヒトの歯牙・骨・爪等の硬組織、体毛・皮膚・筋肉・内臓・脈管等の軟組織、血液・リンパ液・唾液・精液・尿等の体液、体液斑、生存または非生存の動植物の組織のような生物由来試料から、ＤＮＡが採取される。
【０００４】
従来、例えば歯牙や骨からＤＮＡを採取する場合、歯牙や骨を次亜塩素ソーダ水溶液、水、次いでエタノールで洗浄することにより、表面に付着している汚染物質や異物を除去する。その後乾燥させ、粉砕してから長時間エチレンジアミン四酢酸水溶液（ＥＤＴＡ）で脱灰する。脱灰の後、溶解液とタンパク質分解酵素で試料を溶解させ、ＤＮＡをフェノール・クロロホルム・イソアミルアルコールの混合物で抽出し、水層からエタノール沈殿させることによりＤＮＡを精製して採取するという方法がとられていた。
【０００５】
日本の特開２００４−２０１５２５号公報に簡便な採取方法として、粉砕した生体試料へＤＮＡ抽出試薬を添加した後、エタノール沈殿により精製し、ＤＮＡを回収するという方法が記載されている。
【０００６】
Forensic  Sciences  44(3):  264-272,  2003には、米国での２００１年９月１１日のワールド・トレード・センタービルのテロ事件の犠牲者の身元確認の際に用いた劣化したＤＮＡからＳＴＲ１３ローカスを、従来法のとおり骨や歯牙を粉砕してからＤＮＡ検出した例について、記載されている。
【０００７】
一般に、試料を粉砕すると他組織のＤＮＡが混入し、ＥＤＴＡで長時間脱灰するとＤＮＡが分解してしまう。また除タンパク質処理をしなかったり試料が古かったりするとＤＮＡ鑑定を阻害するタンパク質等の不純物が混入してしまう。さらにＤＮＡをエタノール沈殿させると貴重なＤＮＡが損失してしまう。
【０００８】
【特許文献１】特開２００４−２０１５２５号公報
【非特許文献１】Forensic  Sciences  44(3):  264-272,  2003
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は前記の課題を解決するためになされたもので、貴重な生物由来試料から、不純物を混入させることなく、ＤＮＡを簡便かつ効率よく採取するのに用いられる複数の液を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
前記の目的を達成するためになされたＤＮＡ採取に用いられる複数の液は、
（１−１）硬組織からなる生物由来試料を、丸ごと用い、または切断若しくは砕いて用いる断片化操作の後に、脱灰操作を施すために、そこに添加されるエチレンジアミン四酢酸含有水溶液（ＥＤＴＡ）、および
（１−２）前記ＥＤＴＡに、濃度を０．１〜０．５重量％となるように含有させるために加えられる界面活性剤と、
（２−１）生物由来試料の中のＤＮＡ−タンパク質の複合体を溶解させる可溶化剤緩衝液、および
（２−２）前記ＤＮＡ−タンパク質の複合体の溶解液を調製するために加えられるタンパク質分解酵素液と、
（３）除タンパク質をするために前記複合体の溶解液に加えられる飽和トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩のフェノール緩衝液、またはヨウ化ナトリウム−イソプロパノール含有水溶液とを、
有することを特徴とする。
【００１１】
ＤＮＡ採取に用いられる複数の液は、前記界面活性剤が、イオン界面活性剤であると、好ましい。
【００１２】
ＤＮＡ採取に用いられる複数の液は、前記イオン界面活性剤が、ドデシル硫酸ナトリウムであると、好ましい。
【００１３】
ＤＮＡ採取方法は、前記のＤＮＡ採取に用いられる複数の液を用いて行われるもので、
(1)  硬組織からなる生物由来試料を、丸ごと用い、または切断若しくは砕いて用いる断片化操作と、
その後に、そこにＥＤＴＡを添加する脱灰操作とを施す前処理工程、
(2)  (1)へ、生物由来試料の中のＤＮＡ−タンパク質の複合体を溶解する可溶化剤緩衝液とタンパク質分解酵素を加えてＤＮＡ−タンパク質の複合体を溶解する溶解工程、
(3)  (2)の複合体溶解液に、飽和トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩のフェノール緩衝液、またはヨウ化ナトリウム−イソプロパノール含有水溶液を加えて除タンパク質を施した後、ＤＮＡ抽出液を分取する抽出工程、
(4)  (3)のＤＮＡ抽出液を、カラムに通し、ＤＮＡを精製する精製工程
の順で行なわれる。
【００１４】
この方法によれば、生物由来試料を丸ごと用い、または粉末よりも遥かに大きく切断したり砕いたりした断片を用いる。そのため、この方法は、試料を完全に粉末にする従来法よりも、所望の生物由来試料のＤＮＡのみを効率よく採取し精度よくＤＮＡを検出することができる。
【００１５】
ＤＮＡ採取方法において、前記硬組織は、例えば歯牙または骨である。
【００１６】
前記断片化操作が、歯牙の場合に丸ごと用い、または歯牙若しくは骨の場合に厚さ０．１〜０．５ｃｍの切断片にし若しくは少なくとも砕いた幅５ｍｍ程度の粒を用い、粉末を含まない断片を得るものであることが好ましい。
【００１７】
前記前処理工程中、前記ＥＤＴＡが、界面活性剤を含有してもよい。
【００１８】
ＥＤＴＡによって脱灰が施されるとともに、その水溶液に含有された界面活性剤によって脱灰が促進されることで、短時間で前処理工程が完了し、ＤＮＡのみを十分かつ効率よく採取できるようになる。
【００１９】
前記界面活性剤が、イオン界面活性剤であることが好ましい。
【００２０】
中でも、前記イオン界面活性剤が、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）であると一層好ましい。
【００２１】
前記前処理工程中、前記ＥＤＴＡ中、前記界面活性剤の濃度が、０．１〜０．５重量％であることが好ましい。
【００２２】
前記前処理工程中、前記ＥＤＴＡに、２０〜６０℃で、２時間〜２日間浸漬させて、前記脱灰操作を行なうと、一層好ましい。
【００２３】
前記前処理工程中、前記界面活性剤を含有する前記ＥＤＴＡに、３７〜６０℃で、２時間〜２日間浸漬させて、前記脱灰操作を行なうと、なお一層好ましい。
【００２４】
前記前処理工程中、前記生物由来試料が、清浄操作により清浄されたものであってもよい。
【００２５】
前記前処理工程中、前記清浄操作が、前記生物由来試料を中性洗剤水溶液、水、エタノールによりその順で洗浄後、乾燥するものであることが好ましい。
【００２６】
前記溶解工程中、前記複合体の溶解液に、前記タンパク質分解酵素を加え３７〜６５℃で、０．５〜６時間維持して、前記ＤＮＡ溶液を調製することが好ましい。
【００２７】
前記抽出工程中、前記フェノール緩衝液を加えた後、上清水層部を分離し、容量が多い場合は限外ろ過で濃縮して、前記ＤＮＡ抽出液を分取することが好ましい。
【００２８】
前記精製工程中、前記カラムが、シリカメンブレンカラム、シリカビーズ充填カラムまたはヨウ化ナトリウム遠心操作であることが好ましい。
【発明の効果】
【００２９】
本発明のＤＮＡ採取に用いられる複数の液を用いたＤＮＡ採取方法によれば、生体由来試料に付着した異物やＤＮＡ鑑定を阻害してしまうタンパク質等の不純物を混入させることなく、しかもＤＮＡの損失が大きいエタノール沈殿を行なうことなく、ＤＮＡを簡便に、再現性よく、かつ効率的に採取できる。この方法は、熟練を要さず、少量から大量にわたる広範な試料であっても、また多数の試料であっても、確実にＤＮＡを採取できる。
【００３０】
前記のForensic  Sciences  44(3):  264-272,  2003のように、従来法のとおり骨や歯牙を粉砕して、劣化したＤＮＡからＳＴＲ１３ローカスを検出すると、全てのローカスを検出できたのが２７．２％であると、記載されている。
【００３１】
それに対し、本発明によれば、戦没者遺骨の歯牙から採取した６０年前のＤＮＡで、約７０％もの全ローカス検出率が得られ、一部欠損を含めると約８０％以上もの検出率が得られる。したがって、骨や歯牙を粉砕する従来の方法よりも、格段に優れたＤＮＡ採取方法とすることができる。
【００３２】
しかも、粉末の生物由来試料を一切用いないから、粉末の生物由来試料に起因する分解物や不純物の混入がなく、得られたＤＮＡは、純度が高い。
【００３３】
劣化試料の脱灰の際に、界面活性剤を含有するＥＤＴＡを用いると、ＥＤＴＡだけの脱灰に比べて、作業時間が一層短くなるとともに、ＤＮＡの採取効率が一層向上する。
【００３４】
また、貴重で僅かな生物由来試料から良質なＤＮＡが得られるため、ＤＮＡ鑑定の際に、誤認を生じない。
【発明を実施するための好ましい形態】
【００３５】
以下、本発明のＤＮＡ採取に用いられる複数の液を用いたＤＮＡ採取方法の実施例を詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３６】
実施の一例を示す図１を参照しながら説明する。ＤＮＡは以下の工程(1)〜(4)を経て採取される。
【００３７】
(1)前処理工程
生物由来試料として、生存するヒトの歯牙や骨、または遺骨が用いられる。生物由来試料を、払拭、洗浄等の処理を施して、清浄する。具体的には、中性洗剤の水溶液に浸けたブラシで、歯牙や骨の表面に付着した汚染物を擦り取り、水で中性洗剤を洗い流す。次いでエタノールで洗い、ドライヤーや自然対流により、風乾させる。（図１(1.a)）。
【００３８】
次いで、生物由来試料を、０．５ｃｍ大程度の粒か切断片にして用い、または歯牙の場合は丸ごと用いる。これにより、試料を粉末にする場合と比べ他組織のＤＮＡの混入を防ぐことができる。歯牙の場合、その歯根を０．１〜０．２ｃｍ程度の厚さで、輪切りにすると、一本の歯牙から、約６０〜１２０ｍｇの切片が４〜６枚得られる。一方、骨の場合、骨髄を含むように０．１５〜０．２ｃｍの厚さで０．５ｃｍ四方の程度の大きさに輪切りにすると、約６０〜１２０ｍｇの切片が得られる。いずれも生物由来試料として、１〜４切片を用いれば充分であるので、残余をそのまま保存することができる（図１(1.b)）。
【００３９】
次いで、ＥＤＴＡ水溶液に２０〜６０℃で、２時間〜２日間浸漬させてインキュベートすることにより、カルシウム成分を除去する脱灰を施す。浸漬する温度と時間とは、生物由来試料の容量や形状や新旧の程度に応じ、適宜調整することが好ましく、３７〜６０℃で２４時間以内であると一層好ましい。ＥＤＴＡ水溶液の濃度は、０．２〜０．５Ｍであることが好ましく、０．５Ｍであって、ｐＨ８．０に調製されていると一層好ましい（図１(1.c)）。
【００４０】
(2)溶解工程
脱灰した生物由来試料へ、可溶化剤緩衝液を加え、ＤＮＡ−タンパク質の複合体を溶解させる。可溶化剤緩衝液は、０．５〜２．５重量％のデタージェントを含む緩衝液であり、例えば１００ｍＭ塩化ナトリウムと、１０ｍＭのＴｒｉｓ塩酸塩と、デタージェントとして２重量％ＳＤＳとの水溶液が挙げられる。
【００４１】
次いで、複合体の溶解液にタンパク質分解酵素液を加え３７〜６５℃で、０．５〜６時間、必要に応じ適宜攪拌しながら維持する。複合体中のタンパク質を分解するタンパク質分解酵素液は、限定されないが、特にプロテナーゼＫが好ましい（図１(2.a)）。
【００４２】
(3)抽出工程
(2)の複合体溶解液に、１ｍＭのＥＤＴＡを含有する１０ｍＭのＴｒｉｓ塩酸塩の飽和フェノール緩衝液（ｐＨ８．０）、例えばＴＥ飽和フェノール（ナカライテスク株式会社製；商品名）を加え、タンパク質やそれの分解物を除去する（図１(3.a)）。
【００４３】
次いで、それを遠心分離し、その上清から、ＤＮＡを含有する水層部を分離する。水層部は、容量が多い場合、限外ろ過、例えばセントコリン３０（Ａｍｉｃｏｎ  Ｉｎｃ．製；商品名）を用いた遠心法により濃縮されてもよい。これにより、ＤＮＡ抽出液を分取する（図１(3.b)）。
【００４４】
(4)精製工程
ＤＮＡ抽出液を、シリカメンブレンカラム、例えばＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（株式会社キアゲン製；ＱＩＡａｍｐは登録商標）に添付のシリカメンブレンカラムに通して、精製すると、ＤＮＡが得られる（図１(4.a)）。
【００４５】
なお、前記の(1)前処理工程中で用いたＥＤＴＡ水溶液に代えて、ＳＤＳが含有されたＥＤＴＡ水溶液を、用いてもよい。この場合、ＳＤＳ含有ＥＤＴＡ水溶液に３７〜６０℃で、２時間〜２日間インキュベートさせることにより、カルシウム成分を除去するための脱灰を施すことが好ましい。インキュベートの温度と時間とは、生物由来試料の容量や形状や新旧の程度に応じ、適宜調整することが好ましく、２４時間以内であると一層好ましい。ＥＤＴＡ水溶液の濃度は、０．２〜０．５Ｍであることが好ましく、０．５Ｍであって、ｐＨ８．０に調製されていると一層好ましい。ＳＤＳの濃度は、０．１〜０．５重量％であることが好ましい。（図１(1.c)）
【００４６】
シリカメンブレンカラムに代えて、シリカビーズ充填カラム例えば磁性シリカビーズを用いたＭａｇＥｘｔｒａｃｔｏｒ（東洋紡績株式会社製：登録商標）を用いてもよい。収率が多少低下するが、フェノール−クロロホルム法であってもよい。
【００４７】
ＤＮＡ採取方法には、
（１−１）硬組織からなる生物由来試料を、丸ごと用い、または切断若しくは砕いて用いる断片化操作の後に、脱灰操作を施すために、そこに添加されるエチレンジアミン四酢酸含有水溶液（ＥＤＴＡ）、および
（１−２）前記ＥＤＴＡに、濃度を０．１〜０．５重量％となるように含有させるために加えられる界面活性剤と、
（２−１）生物由来試料の中のＤＮＡ−タンパク質の複合体を溶解させる可溶化剤緩衝液、および
（２−２）前記ＤＮＡ−タンパク質の複合体の溶解液を調製するために加えられるタンパク質分解酵素液と、
（３）除タンパク質をするために前記複合体の溶解液に加えられる飽和トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩のフェノール緩衝液、またはヨウ化ナトリウム−イソプロパノール含有水溶液とを、
有する複数の液が、用いられることが好ましい。
【００４８】
前記界面活性剤が、イオン界面活性剤であることが好ましい。
【００４９】
前記イオン界面活性剤が、ドデシル硫酸ナトリウムであることが好ましい。
【実施例】
【００５０】
以下に、生物由来試料から、ＤＮＡを実際に採取した例について説明する。
【００５１】
（実施例１）
中性洗剤に浸けたブラシで、歯牙表面に付着した汚染物を擦り取り、歯牙に滅菌蒸留水をかけて中性洗剤を洗い流し、エタノールを歯牙にかけ、ドライヤーで素早く風乾させた。
【００５２】
一辺約３ｃｍの立方体の木片の台座に歯牙を付け歯牙と台座との間の隙間に、アロンアルファ（東亞合成株式会社製；登録商標）を１〜２滴垂らして、両者を固定した。透明なビニール袋中で、歯科用のディスク盤状グラインダーにより、歯根部分を厚さ０．１ｃｍ以上に輪切りにして、円板状の断片として１〜６切片を切出した。切片を持上げて揺すって落とすと、粉末を含まない切片が得られる。
【００５３】
この１〜６切片を、５０ｍＬの培養チューブに入れ、０．５ＭのＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）水溶液（和光純薬工業株式会社製；商品名）を３０〜５０ｍＬとＳＤＳを加え０．１重量％とし、３７〜５０℃で、１２時間インキュベートして、脱灰させた。歯牙を、２ｍＬの培養チューブに移し取り、０．５ＭのＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）水溶液７００μＬで洗浄した。培養チューブ内のＥＤＴＡ水溶液をピペットで吸い出した。
【００５４】
培養チューブの歯牙に、可溶化剤緩衝液として溶解液（１０ｍＭのＴｒｉｓ塩酸塩、１００ｍＭの塩化ナトリウム、２重量％ＳＤＳ）１００〜２００μＬと、タンパク質分解酵素液として２０ｍｇ／ｍＬのプロテナーゼＫ溶液（和光純薬工業株式会社製；商品名）の２０〜４０μＬとを加え、５０℃で１〜２時間攪拌しインキュベートし、さらにプロテナーゼＫ溶液を２０〜３０μＬ加え５０℃で１〜２時間攪拌しインキュベートした。
【００５５】
培養チューブ中で、歯牙の各切片が夫々、半分以上可溶化したことを確認後、それと同量のＴＥ飽和フェノール（和光純薬工業株式会社製；商品名）を加え、１０〜２０回穏やかに転倒混和した。その後、１３,０００ｒ.ｐ.ｍ.で５分間遠心分離を行い、上清水層部を、別な２ｍＬ培養チューブに移した。水層部の容量が多い場合、セントリコン３０（Ａｍｉｃｏｎ  Ｉｎｃ.社製；商品名）を用いた限外ろ過で１００〜３００μＬに濃縮し、ＤＮＡ抽出液を得た。
【００５６】
ＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（株式会社キアゲン製；商品名、ＱＩＡａｍｐは登録商標）を用い、その操作手順にしたがって、ＤＮＡ抽出液から、ＤＮＡを精製した。なお、最終的なＤＮＡの溶出には、ＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（株式会社キアゲン製；商品名）に添付のＡＥバッファー５０μＬを用いた。得られたＤＮＡについて、ＰＣＲと電気泳動を行なったところ、不純物が認められなかった。
【００５７】
（実施例２）
中性洗剤に浸けたブラシで、歯牙表面に付着した汚染物を擦り取り、歯牙に滅菌蒸留水をかけて中性洗剤を洗い流し、エタノールを歯牙にかけ、ドライヤーで素早く風乾させた。
【００５８】
丸ごとの歯牙を、５０ｍＬの培養チューブに入れ、０．５ＭのＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）水溶液（和光純薬工業株式会社製；商品名）を３０〜５０ｍＬとＳＤＳを加え０．１重量％とし、３７〜５０℃で、１２時間インキュベートして、脱灰させた。歯牙を、２ｍＬの培養チューブに移し取り、０．５ＭのＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）水溶液７００μＬで洗浄した。培養チューブ内のＥＤＴＡ水溶液をピペットで吸い出した。
【００５９】
培養チューブの歯牙に、可溶化剤緩衝液として溶解液（１０ｍＭのＴｒｉｓ塩酸塩、１００ｍＭの塩化ナトリウム、２重量％ＳＤＳ）１００〜２００μＬと、タンパク質分解酵素液として２０ｍｇ／ｍＬのプロテナーゼＫ溶液（和光純薬工業株式会社製；商品名）の２０〜４０μＬとを加え、５０℃で１〜２時間攪拌しインキュベートし、さらにプロテナーゼＫ溶液を２０〜３０μＬ加え５０℃で１〜２時間攪拌しインキュベートした。
【００６０】
培養チューブ中で、溶液の色がうす黄色になり歯牙が可溶化したことを確認後、それと同量のＴＥ飽和フェノール（和光純薬工業株式会社製；商品名）を加え、１０〜２０回穏やかに転倒混和した。その後、１３,０００ｒ.ｐ.ｍ.で５分間遠心分離を行い、上清水層部を、別な２ｍＬ培養チューブに移した。水層部の容量が多い場合、セントリコン３０（Ａｍｉｃｏｎ  Ｉｎｃ.社製；商品名）を用いた限外ろ過で１００〜３００μＬに濃縮し、ＤＮＡ抽出液を得た。
【００６１】
ＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（株式会社キアゲン製；商品名、ＱＩＡａｍｐは登録商標）を用い、その操作手順にしたがって、ＤＮＡ抽出液から、ＤＮＡを精製した。なお、最終的なＤＮＡの溶出には、ＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（株式会社キアゲン製；商品名）に添付のＡＥバッファー５０μＬを用いた。得られたＤＮＡについて、ＰＣＲと電気泳動を行なったところ、不純物が認められなかった。
【産業上の利用可能性】
【００６２】
本発明のＤＮＡ採取に用いられる複数の液を用いたＤＮＡの採取方法は、戦没者遺骨、古代遺跡の遺骨、災害時の遺体、行方不明者の遺体等から得られる硬組織である歯牙や骨から、ＤＮＡを抽出する際に利用される。本発明を用いると、良質なＤＮＡを抽出することができるので、法医学的なＤＮＡ鑑定や生物学的な遺伝解析で正確なデータを得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】本発明を適用するＤＮＡ採取に用いられる複数の液を用いたＤＮＡ採取方法の手順の一例を示す図である。
【図１】
2008220386.tif 000003