(57)【要約】【課題】炎症に媒介される血管病変によって引き起こされる疾患を予防、処置、回復するための方法を提供する。【解決手段】炎症に媒介される血管病変によって引き起こされる疾患を予防し、処置し、回復させる方法は、ＦＫＢＰ１２に結合し、ｍＴＯＲカスケードを阻害する薬剤を利用することができる。【選択図】図１
2008208116.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症に媒介される血管病変によって引き起こされる疾患を予防するための方法において、
変質した血管組織の部位に近接する炎症細胞の浸潤および／または蓄積のうち少なくともひとつを実質的に阻害する薬剤を、治療用量で投与する工程、
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【開示の内容】
【０００１】
〔関連出願のクロスリファレンス〕
本出願は、２００７年７月１７日出願の米国特許仮出願番号第６０／８８５３３０号の利益を主張する。
【０００２】
〔発明の背景〕
１．発明の分野
本発明は、医療的介入の方法論に、さら詳細には、炎症に媒介される血管病変（inflammation mediated vascular lesions）によって引き起こされる疾患を予防し、処置し（managing）、回復させる（reversing）ための方法に関する。
【０００３】
２．関連技術の論考
医療用具および／または治療薬の有効性の決定には、初期に動物実験を必要とし、動物は、ヒトに見出される病状特性と同一または近似の病状特性を有することが好ましい。ヒトの病状特性は、一般的に動物に見出されることは無い。したがって、それらの病状特性は、遺伝子操作、食餌、薬物療法、および／またはそれらの種々の組み合わせを含む、種々の方法によって動物中に誘発することができる。これらの誘発方法を正確に制御することによって、研究者には多くのヒトの病状特性を近似する機会が与えられる。
【０００４】
〔発明の概要〕
一態様によれば、本発明は、変質した血管組織の部位に近接する炎症細胞の浸潤および蓄積のうち少なくともひとつを実質的に阻害する薬剤の、治療用量での投与を含む、炎症に媒介される血管病変によって引き起こされる疾患を処置するための方法を対象とする。
【０００５】
別の態様によれば、本発明は、変質した血管組織の部位に近接する炎症細胞の浸潤および蓄積のうち少なくともひとつを実質的に阻害する薬剤の、治療用量での投与を含む、炎症に媒介される血管病変によって引き起こされる疾患を予防するための方法を対象とする。
【０００６】
別の態様によれば、本発明は、変質した血管組織の部位に近接する炎症細胞の浸潤および蓄積のうち少なくともひとつを実質的に阻害する薬剤の、治療用量での投与を含む、炎症に媒介される血管病変によって引き起こされる疾患を回復させるための方法を対象とする。
【０００７】
本発明の前述および他の特徴と利点は、添付の図面に図示されるように、以下の本発明の好ましい実施形態のより詳細な記述から明らかであろう。
【０００８】
〔好ましい実施形態の詳細な説明〕
本発明は、哺乳動物に疾病状態を創出してこれらの疾病状態の治療の有効性を決定するためのモデルを対象とする。さらに具体的には、本発明では、食餌およびアンジオテンシンＩＩの組み合わせを利用して、アポＥ欠損マウス（apoE-/- mice）にアテローム性動脈硬化症（artheriosclerosis）および大動脈病変が創出される。一旦病変状態が創出されれば、種々の治療が利用できる。例示するこの実施形態では、治療賦形剤としてラパマイシンが利用される。生成されたデータに関しては、ラパマイシンを用いた治療が、アテローム硬化性病変を減少させ、炎症性マクロファージの浸潤を遅延させ（これは、脂質沈着の減少に繋がる泡沫細胞形成の減少の原因となる）、そして外膜病変の発生率を減少させることが見られる。
【０００９】
本明細書で使用されるように、ラパマイシンは、ラパマイシン、シロリムス、エベロリムスおよび全ての類似体、ＦＫＢＰ１２に結合する誘導体および抱合体（conjugates）、ならびに他のイムノフィリンを含み、ｍＴＯＲ（哺乳類ラパマイシン標的タンパク質）の阻害を含むラパマイシンと同様の薬理学的性質を有している。
【００１０】
アポＥ欠損マウス（Ｃ５７ＢＬ／６背景に１０世代戻し交配を行った）は、ジャクソン・ラボラトリー（The Jackson Laboratory）から購入した。マウスは到着と同時に１２時間明／１２時間暗の規制（regimen）を維持された。全ての動物実験は、ＡＡＡＬＡＣ（実験動物管理公認協会）の指針にしたがって、コンシューマー・アンド・パーソナル・ワールドワイド（Consumer & Personal Product Worldwide）のＩＡＣＵＣ（動物実験委員会）によって承認を得た。８週齢の雄のアポＥ欠損マウスは、４週間にわたるアテローム発生促進性の高脂肪、高コレステロールの食餌（pro-atherogenic high fat, high cholesterol, diet）（「ウェスタンダイエット（Western diet）」、脂肪２１％、コレステロール０．２％、食餌番号８８１３７、ハーラン−テクラド社（Harlan-Teklad）、ウィスコンシン州マディソン）に切り換える前に、通常のマウスの食餌（normal mouse-chow diet）（ＲＰ５００１、ＰＭＩフィーズ・インコーポレイティッド（PMI Feeds Inc.）、ミズーリ州セントルイス）を与えられ、１週間に渡って順応された。
【００１１】
アテローム発生促進性の食餌の開始と同時に、アルゼット（Alzet）浸透圧ミニポンプ（２００４年モデル、ＡＬＺＡサイエンティフィック・プロダクツ社（ALZA Scientific Products）、カリフォルニア州マウンテンビュー）がアポＥ欠損マウスの皮下に植え込まれた。ミニポンプには、１，０００ｎｇ／分／ｋｇの送達速度で２８日間分のアンジオテンシンＩＩ（ＥＭＤバイオサイエンス（EMD Biosciences）、カリフォルニア州サンディエゴ）が入れられた。マウスはミニポンプの植え込みのためにイソフルランを用いて麻酔された。後頸下部が小さく切開され、ミニポンプがマウスの皮下間隙に挿入された。続いて、切開部は滅菌ステープラーを使用して閉じられた。手術後、各々の切開部に三種の抗生物質を含む軟膏（triple antibiotic ointment）が塗布された。高脂肪、高コレステロールの食餌を与えられたマウスは、以下で詳細に説明するように、ミニポンプを植え込んでから２８日後に二酸化炭素吸入によって屠殺された。
【００１２】
アテローム発生促進性の食餌の開始、および浸透圧ミニポンプの植え込みと同時に、マウスは無作為に４つの群、すなわち、賦形剤対照、ラパマイシンまたはシロリムス０．５ｍｇ／ｋｇ体重、シロリムス１．０ｍｇ／ｋｇ体重、およびシロリムス４．０ｍｇ／ｋｇ体重、に割り当てられた。所定の量のシロリムスがエタノールに溶解され、０．２％のカルボキシメチルセルロースナトリウムおよび０．２５％のTween80を含む賦形剤中に入れられ、マウスに投与された（腹腔内注射、毎日）。
【００１３】
シロリムスは、液−液抽出および逆相液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）を使用して定量された。簡単に言えば、１００μＬのマウス全血試料が、内部標準のアスコマイシン（ascomycin）を含む５％メタノール／硫酸亜鉛溶液と共にタンパク質沈殿にかけられた。得られた溶液を遠心分離した後、液体混合物は１−クロロブタンを用いた液−液抽出を続けた。合わせた有機抽出液はその後乾燥され、５０：５０のメタノール：２０ｍＭ酢酸アンモニウム溶液を用いて戻された（reconstituted）。試料は、ＡＰＩ−５０００上で、多重反応モニタリング（ＭＲＭ）モードでＣ１８逆相クロマトグラフィーを使用し、大気圧化学イオン化（ＡｐＣＩ）法を用いて分析された。マウス全血中のシロリムスに関する較正基準曲線の結果は、０．９９８の相関係数で、０．５ｎｇ／ｍＬ〜１００００ｎｇ／ｍＬまで許容できるものであった。較正基準についてのバイアス率は、約１０．９％〜約８．０％の範囲であった。
【００１４】
上で述べたように、マウスは二酸化炭素吸入によって屠殺され、腹部大静脈から脱血された。大動脈は灌流固定され、４％パラホルムアルデヒドで後固定された。アテローム性動脈硬化症の定量は２つの独立した方法、「正面（en face）」表面病変分析および大動脈起始部分析を用いて評価された。大動脈弓および胸大動脈（最終助間動脈上部と定義）に、「正面（en face）」分析が行われた。簡単に言えば、主要分枝を有する大動脈（左総頸動脈、右総頸動脈、左鎖骨下動脈）が切開された。動脈内壁の脂質沈着は、スダンＩＶ（Sudan IV）緩衝液中で染色された。スダンＩＶ染色された大動脈の画像はビデオカメラで撮影され、イメージプロ６．０（Image-Pro 6.0）分析ソフトウェア（メディア・サイバネティクス・インコーポレイティッド（Media Cybernetics, Inc.）、カリフォルニア州カールスバッド）を使用して形態計測画像処理が行われた。アテローム性動脈硬化症の程度は、病変によって覆われた大動脈の表面積の割合として表現される。大動脈起始部分析は、アテローム性動脈硬化症の定量を検証する第２の方法を提供した。簡単に言えば、大動脈洞から始まる、近位大動脈の３００μｍに渡る互い違いの８μｍの凍結切片が、アテローム硬化性病変についてオイルレッドＯ（oil red O）で染色された。オイルレッドＯ染色された大動脈起始部切片の画像が撮影され、イメージプロ６．０分析ソフトウェアを使用して分析された。全ての試料は、１人の研究者によって符号化され、符号についてまったく知らない別の研究者によって分析された。
【００１５】
腹部大動脈は、腹部大動脈外膜病変分析にかけられた。５０％より大きい大動脈直径の肥大を有するマウスは、外膜病変を有すると考えられた。外膜病変に冒された組織は、２人の観察者によって独立して分類された。外膜病変の分類は、ドーアティー（Daugherty）らによって報告された大動脈の肉眼的外観に基づく等級にしたがって決定された。簡単に言えば、Ｉ：血栓を有さない大動脈の副腎領域の拡張した管腔、ＩＩ：頻繁に血栓を含む副腎領域の再構築された組織、ＩＩＩ：血栓を含むＩＩ型の顕著な球根状形態、ＩＶ：大動脈の副腎領域の、いくつかは重複した、血栓を含む複数の外膜病変のある形態、である。
【００１６】
外膜病変領域を覆うパラホルムアルデヒドで灌流された大動脈は、パラフィン中に包埋された。腹部大動脈の切片（１ｍｍ）は、ヘマトキシン・エオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色され、エラスチンについてはヴァーヘフ染色およびヴァン・ギーソン染色（Verhoeff's and Van Gisson staining）で、マクロファージについてはＣＤ６８（ＦＡ−１１、セロテック社（Serotec Ltd.）、イギリスキドリントン）で、内皮細胞に対してはＣＤ３１（サンタ・クルズ・バイオテクノロジー（Santa Cruz Biotechnology）、カリフォルニア州サンタクルズ）で染色された。大動脈起始部のマクロファージ組成は、新鮮凍結組織において、抗ＣＤ６８一次抗体を使用した免疫組織化学によって分析された。二次抗体は、ＨＲＰ共役ロバ抗ウサギ、ＨＲＰ共役ロバ抗ラット（ジャクソン・イムノリサーチ・ラボラトリーズ（Jackson Immunoresearch Laboratories）、ペンシルベニア州ウェストグローブ）であった。
【００１７】
血漿のトリグリセリドおよび総コレステロール量は、自動化酵素技術（イコール・ダイアグノスティック・インコーポレイティッド（Equal Diagnostic Inc.）、ペンシルベニア州エクストン）を通して決定された。マウスリポタンパク質は、２つのスーパーロース６（Superose 6）カラムを連結して使用する血漿の高速タンパク質液体クロマトグラフィー（FPLC）分析（ファルマシア・バイオテック・インコーポレイティッド（Pharmacia Biotech Inc.）、ニュージャージー州ピスカタウェイ）によって分離された。一定分量（１００μＬ）のマウス血漿がカラムに注入され、０．１５ＭのＮａＣｌ、０．０１ＭのＮａ２ＨＰＯ４、および、０．１ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ７．５）を含む緩衝液を用いて０．５ｍＬ／分の流速で分離され、脂質について分析された。
【００１８】
最初の分析は、スチューデントｔ検定によって行われた。もしデータがこのパラメータ検定の制約に適合しない場合は、データは一元配置分散分析（one-way ANOVA）検定を用いて分析された。Ｐ＜０．０５は有意であると考えられた。プリズム４．０（Prism 4.0）ソフトウェア（グラフパッド・ソフトウェア・インコーポレイティッド（GraphPad Software Inc.）、カリフォルニア州レイクフォレスト）が全ての計算に使用された。全てのデータは平均値±標準誤差で示されている。
【００１９】
シロリムス投与の療法（腹腔内注射、毎日、０．５、１．０、４．０ｍｇ／ｋｇ）は結果として、注射後２４時間以内にアポＥ欠損マウスにおいて全血シロリムス量の有意な増加をもたらす。血中薬物量は、注射後１時間でピーク量に達し、６時間でおよそ３０〜４０％に低下し、２４時間で痕跡程度残留した。この全血薬物動態学的研究では、図１に図示される表形態のデータ（表１）で詳述されるように、明確な薬物投与曲線が観察された。
【００２０】
本研究でのアポＥ欠損マウスの健康状態は、シロリムスの投与によって明白には影響されなかった。体重減少の傾向は３つのシロリムス治療群全てで観察されたが、図２における表形態のデータ（表２）で詳述されるように、統計的有意性に達することは無かった。シロリムスの投与は、図３に図示されるように明確に投与量依存的に、ミニポンプ植え込み手術後の再縫合の発生率の増加と結びついており、この特定の動物モデルでの創傷治癒の遅延においてシロリムスが果たす役割を示唆している。データは群サイズ当たりの手術後再縫合発生率として表わされている。シロリムス投与に応答した、縫合指数（suture index）の明確な増加が、投与量依存的に観察される。
【００２１】
高脂肪、高コレステロールの食餌、およびアンジオテンシンＩＩの注入は、結果として、総コレステロールが〜１０００ｍｇ／ｄＬに近付く顕著な高脂血症を賦形剤対照群にもたらした（図２に図示される表２を参照）。シロリムス投与は、賦形剤対照群と比較して約４４〜５０％の血漿総コレステロール量の増加と結びついていた。ＬＤＬコレステロールは、シロリムスで処置された全てのマウスにおいて、およそ６０％より高く上昇した。シロリムスを投与されているマウスにおいておよそ５５〜８１％のＨＤＬコレステロールの上昇も観察されたことは、注目すべきである。加えて、この免疫抑制剤を投与されているマウスにおいて、使用された投与量に関わらずトリグリセリド上昇傾向が観察された。
【００２２】
アテローム性動脈硬化症の定量は、２つの独立した方法、「正面（en face）」分析および大動脈起始部分析、を使用して評価された。驚くべきことに、高脂肪、高コレステロールの食餌を与えられアンジオテンシンＩＩを注入されたマウスの１３週齢において、図４Ａおよび図４Ｂに図示されるように「en face」分析を使用した有意な（Ｐ＜０．０００１、一元配置分散分析）アテローム硬化性病変の減少が、シロリムスを投与されたマウスにおいて、投与量依存的に見られた。図４Ａは、シロリムス処置または非処置のアポＥ欠損マウス大動脈のスダンＩＶ染色を図示している。図４Ａ中で、各々の大動脈はそれぞれの群の病変割合の平均を代表しており、図４Ｂ中で、各々の点は個々のマウスの全大動脈面積に対応する病変の割合を表わし、棒は平均を表わしている。賦形剤対照群と比較して、シロリムス処置群には有意な差異（Ｐ＜０．０００１、一元配置分散分析）が観察された。このアテローム硬化性病変の減少は、大動脈起始部分析によって確認され、拡大された（extended）。この分析では、図５Ａおよび図５Ｂに図示されるように、腑形剤対照と比較してシロリムス処置群で病変領域が有意に（Ｐ＜０．０５、一元配置分散分析）減少した。図５Ａは、シロリムス処置または非処置のアポＥ欠損マウスでの大動脈起始部のアテローム硬化性病変のオイルレッドＯ染色を表わす。各々の切片はそれぞれの群の病変割合の平均を代表する。図５Ｂは、大動脈起始部のオイルレッドＯ陽性染色領域の定量分析を表わす。賦形剤対照群と比較して、シロリムス処置群には有意な差異（Ｐ＜０．０５、一元配置分散分析）が観察された。
【００２３】
炎症性マクロファージの新生内膜への浸潤、およびそれに続く酸化ＬＤＬの取り込みは、アテローム硬化性病変での泡沫細胞の形成に繋がる。この炎症過程の調節にシロリムスが積極的な役割を果たすか否かを決定するために、大動脈起始部で、炎症性マクロファージのマーカーであるＣＤ６８に対する免疫組織化学的分析が行われた。図６Ａおよび図６Ｂに図示されるように、この分析では、ＣＤ６８陽性領域の有意な減少が明確に分かった。これらのデータは、炎症性マクロファージの浸潤の遅延が、泡沫細胞形成の減少の原因となり、これはシロリムスの投与に応答した脂質沈着の減少に繋がることを示唆する。図６Ａは、ＣＤ６８についての免疫組織化学的染色を図示している。シロリムスは、投与量依存的にＣＤ６８陽性信号（茶色）を抑制する。図６Ｂは、大動脈起始部でのＣＤ６８陽性染色の定量分析を図示している。賦形剤対照群と比較して、シロリムス処置群には有意な差異（Ｐ＜０．０５、一元配置分散分析）が観察された。
【００２４】
食餌を与えられているアポＥ欠損マウスに腹部大動脈外膜病変の形成を誘発するために、アンジオテンシンＩＩの注入が行われた。本方法論では、アンジオテンシンＩＩは、高脂肪、高コレステロールの食餌を与えられているアポＥ欠損マウスに注入された。腑形剤対照群の動物では、３０％の発生率の腹部大動脈外膜病変が観察された。シロリムス投与は、賦形剤対照（３０％、１０匹のマウス中３匹が腹部大動脈外膜病変陽性）と比較して、腹部大動脈外膜病変の発生率において顕著な減少（４．５％、２２匹のマウス中１匹）を示した。シロリムス処置および非処置のマウスからの代表的な腹部大動脈が、図７Ａに示されている。腹部大動脈外膜病変は、本明細書に記載した前述の基準を使用して、さらに分類された。シロリムスを投与されている１匹の陽性のマウスでは、腑形剤対照群の中の陽性のマウスよりも、遥かに腹部大動脈外膜病変の進行が少ないことが観察された（図７Ｂ）。図７Ａは、シロリムス処置および非処置のマウスからの代表的な腹部大動脈を図示している。腹部大動脈外膜病変の発生率は、シロリムスを投与されているマウスでは、大動脈対照のマウス（３０％）と比べて減少した（４．５％）。図７Ｂは、シロリムスがアポＥ欠損マウスの腹部大動脈外膜病変の重症度を軽減することを図示している。
【００２５】
大動脈外膜病変をさらに特徴付けるために、図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃおよび図８Ｄに図示されるように、組織学的および免疫組織学的分析が行われた。中膜層（media lamina）およびエラスチンの破壊は、腹部大動脈外膜病変形成の間の主要な病理学的過程として確立されている。腑形剤対照群では、外膜病変組織が中膜層およびエラスチン繊維の完全な破壊を示した一方で、シロリムスを投与されているアポＥ欠損マウスでは、図８Ｂに図示されるように中膜の破壊の程度は明らかに減少した。これらのデータは、生体内でのシロリムスの抗外膜病変能力の根底にある機構の最初の断片（first piece of the mechanism）を提供する。中膜およびエラスチンの破壊への炎症性マクロファージの関与を調査するため、アテローム発生促進性の食餌を与えられたアポＥ欠損マウスへのアンジオテンシンＩＩの注入によって誘発された外膜病変において、マクロファージのマーカーであるＣＤ６８の発現が調べられた。ＣＤ６８＋マクロファージの集団（populations）が、外膜病変中に観察された。興味深いことに、ＣＤ６８の発現は、図８Ｃに図示されるように、大部分が外膜病変の「肩の領域」のエラスチン破壊と共に局在化しており（co-localized）、マクロファージが細胞外基質の破壊に積極的な役割を果たしている可能性を示唆した。外膜病変組織へのマクロファージの浸潤は、マクロファージに対する第２のマーカーであるＦ４／８０を使用して検証された（データは示さず）。特に、シロリムスの投与は、図８Ｃに図示されるように、炎症性マクロファージの肉芽腫への蓄積を阻害する。ヒトでは、外膜病変組織は多数の血管壁血管を含むことが報告されているが、このことは、知りうる限りでは、外膜病変形成のマウスモデルでは文書で証明されたことは無い。大動脈外膜病変組織で、内皮細胞の活性マーカーであるＣＤ３１の発現が調べられた。ＣＤ３１の発現は、予想した通り内膜領域で検出されただけではなく、外膜病変でも検出された。ＣＤ３１＋細胞は、本マウスモデルの血管壁血管を示している小血管型の領域に選択的に蓄積した。シロリムス投与は明らかに、図８Ｄに図示されているように、血管壁でのこの事象を阻害する。
【００２６】
別の例示的な実施形態によれば、本発明は、炎症に媒介される血管病変によって引き起こされる疾患を、予防し、処置し、回復させるための方法に関する。シロリムスは、動物モデルおよびヒトで移植血管傷害（transplant vasculopathy）および新生内膜過形成を顕著に減衰させる、ｍＴＯＲキナーゼのマクロライド系阻害剤である。アテローム硬化性病変および腹部大動脈瘤（ＡＡＡ）の形成に対するシロリムスの効果には、さらなる特性化が必要である。血管の病状を促進するために高脂肪食餌を与えられ、アンジオテンシンＩＩ（angII）を注入されたアポリポタンパク質Ｅ欠損（アポE-/-）マウスにおける、アテローム硬化性病変の発生およびＡＡＡの形成に対するシロリムスの効果が、上に詳細に記載したように調査された。上に記載したように、雄のアポＥ欠損マウスが、４週の間アテローム発生促進性の食餌を与えられ、浸透圧ミニポンプを通してアンジオテンシンＩＩの継続的な注入（１μｇ／ｋｇ／分）を受けた。シロリムス（０．５、１．０、４．０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内注射）、または賦形剤（カルボキシメチルセルロースおよびTween80）が、４週の間、１日に１回投与された。第２の研究では、アポＥ欠損マウスは、アンジオテンシンＩＩの注入およびアテローム発生促進性の食餌を８週の間受けた。４週の誘発の後、病変の退行の可能性を評価するために、残りの４週の間、シロリムス（１．０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内注射）または賦形剤が１日に１回与えられた。アテローム硬化性病変領域および組織診断、ＡＡＡ特性化、ならびに、血漿サイトカイン量が評価された。研究結果は、毎日のシロリムスの腹腔内注射が、４週の時点で投与量依存にアテローム硬化性プラーク領域（正面（en face）分析）を有意に減少させ（賦形剤：１２．９±１．８％に対してシロリムス：１．０ｍｇ／ｋｇで３．１±０．４％、Ｐ＜０．０００５）、８週の時点で、確立された病変の進行を有意に減衰させる（賦形剤：３７．６±２．７％に対してシロリムス：１８．４±２．３％、Ｐ＜０．０００１）ことを示した。シロリムスは、大動脈直径（賦形剤：１．３８±０．２５ｍｍに対してシロリムス：０．７４±０．０２ｍｍ、Ｐ＜０．００５）によって決定されたところによると、ＡＡＡの発生率（賦形剤：３２％に対してシロリムス：０％、Ｐ＜０．００５）および重症度を顕著に減少させた。シロリムスは、エラスチンの破壊を防止し、動脈瘤組織へのＣＤ６８＋炎症細胞の浸潤を減少させた。これらの効果は、生体内のＴｈ１／Ｔｈ２サイトカインプロファイルの変化と関連があった。このデータは、シロリムスが、アンジオテンシンＩＩを注入されたアポＥマウスにおけるアテローム硬化性病変およびＡＡＡの進行を減少させ、炎症性血管疾患、または、さらに具体的には、炎症に媒介される血管病変の重症度を調節するのに有効であることを立証し得ることを示唆している。
【００２７】
以上の実験結果によって示唆されるように、本発明は全ての炎症に媒介される血管病変の治療に容易に適合できることを想定することができる。例えば、動脈瘤疾患は、最終的に全血管系の再形成に繋がる、外膜組織への炎症性細胞の浸潤によって引き起こされる可能性がある。別の例は、ｍＴＯＲ提示マクロファージ（mTOR presenting macrophages）等の炎症細胞の濃縮と、それに続く脂質の取り込みおよび泡沫細胞の形成である。したがって、ＦＫＢＰ１２に結合してｍＴＯＲ経路を阻害するどのような薬物も、炎症に媒介される血管病変を予防し、処置し、回復させるために利用してよい。
【００２８】
示され記述されたのは、最も実用的で好ましい実施形態であると考えられるものであるが、記述され示された特定の設計および方法からの逸脱は、当業者にとっては容易に考えられるものであり、本発明の精神および範囲から逸脱すること無く使用することができることは明らかである。本発明は、記述され例示された特定の構成に限定されるものでは無いが、添付された請求項の範囲内に収めることが可能な全ての変更と首尾一貫するように構成されるべきである。
【００２９】
〔実施の態様〕
（１）炎症に媒介される血管病変によって引き起こされる疾患を予防するための方法において、
変質した血管組織の部位に近接する炎症細胞の浸潤および／または蓄積のうち少なくともひとつを実質的に阻害する薬剤を、治療用量で投与する工程、
を含む、方法。
（２）炎症に媒介される血管病変によって引き起こされる疾患を処置するための方法において、
変質した血管組織の部位に近接する炎症細胞の浸潤および蓄積のうち少なくともひとつを実質的に阻害する薬剤を、治療用量で投与する工程、
を含む、方法。
（３）炎症に媒介される血管病変によって引き起こされる疾患を回復させるための方法において、
変質した血管組織の部位に近接する炎症細胞の浸潤および蓄積のうち少なくともひとつを実質的に阻害する薬剤を、治療用量で投与する工程、
を含む、方法。
（４）実施態様１に記載される、炎症に媒介される血管病変によって引き起こされる疾患を予防するための方法において、
前記薬剤が、ＦＫＢＰ結合およびｍＴＯＲ阻害能力を有する薬剤を含む、方法。
（５）実施態様２に記載される、炎症に媒介される血管病変によって引き起こされる疾患を処置するための方法において、
前記薬剤が、ＦＫＢＰ結合およびｍＴＯＲ阻害能力を有する薬剤を含む、方法。
（６）実施態様３に記載される、炎症に媒介される血管病変によって引き起こされる疾患を回復させるための方法において、
前記薬剤が、ＦＫＢＰ結合およびｍＴＯＲ阻害能力を有する薬剤を含む、方法。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】図１は、本発明に係るアポＥ欠損マウスにおけるシロリムス薬物動態を表により表したものである。
【図２】図２は、本発明に係るアポＥ欠損マウスの体重、血漿総コレステロール、トリグリセリド、ＬＤＬコレステロール、および、ＨＤＬコレステロールを表により表したものである。
【図３】図３は、本発明に係るアポＥ欠損マウスの手術後の再縫合の発生率をグラフにより表したものである。
【図４Ａ】図４Ａは、本発明に係るアポＥ欠損マウスの大動脈の第１の画像である。
【図４Ｂ】図４Ｂは、本発明に係るアポＥ欠損マウスの全大動脈領域に対する病変領域の割合をグラフにより表したものである。
【図５Ａ】図５Ａは、本発明に係るアポＥ欠損マウスの大動脈の第２の画像である。
【図５Ｂ】図５Ｂは、本発明に係るアポＥ欠損マウスの大動脈起始部でのオイルレッドＯ陽性染色領域の定量分析をグラフにより表したものである。
【図６Ａ】図６Ａは、本発明に係るアポＥ欠損マウスの大動脈の第３の画像である。
【図６Ｂ】図６Ｂは、本発明に係るアポＥ欠損マウスの大動脈起始部でのＣＤ６８陽性染色の定量分析をグラフにより表したものである。
【図７Ａ】図７Ａは、本発明に係るアポＥ欠損マウスの大動脈の第３の画像である。
【図７Ｂ】図７Ｂは、本発明に係るアポＥ欠損マウスの腹部大動脈外膜病変の重症度をグラフにより表したものである。
【図８Ａ】図８Ａは、本発明に係るアポＥ欠損マウスの外膜病変の組織学的および免疫組織化学的画像である。
【図８Ｂ】図８Ｂは、本発明に係るアポＥ欠損マウスの外膜病変の組織学的および免疫組織化学的画像である
【図８Ｃ】図８Ｃは、本発明に係るアポＥ欠損マウスの外膜病変の組織学的および免疫組織化学的画像である
【図８Ｄ】図８Ｄは、本発明に係るアポＥ欠損マウスの外膜病変の組織学的および免疫組織化学的画像である
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【外国語明細書】
2008208116000001.pdf